HU229255B1 - Vaccines - Google Patents

Vaccines Download PDF

Info

Publication number
HU229255B1
HU229255B1 HU0200815A HUP0200815A HU229255B1 HU 229255 B1 HU229255 B1 HU 229255B1 HU 0200815 A HU0200815 A HU 0200815A HU P0200815 A HUP0200815 A HU P0200815A HU 229255 B1 HU229255 B1 HU 229255B1
Authority
HU
Hungary
Prior art keywords
saponin
antigen
adjuvant
cpg
vaccine
Prior art date
Application number
HU0200815A
Other languages
English (en)
Inventor
Martin Friede
Nathalie Garcon
Philippe Hermand
Original Assignee
Smithkline Beecham Biolog
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Family has litigation
First worldwide family litigation filed litigation Critical https://patents.darts-ip.com/?family=26315432&utm_source=google_patent&utm_medium=platform_link&utm_campaign=public_patent_search&patent=HU229255(B1) "Global patent litigation dataset” by Darts-ip is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.
Priority claimed from GBGB9908885.8A external-priority patent/GB9908885D0/en
Priority claimed from US09/301,829 external-priority patent/US6558670B1/en
Application filed by Smithkline Beecham Biolog filed Critical Smithkline Beecham Biolog
Publication of HUP0200815A2 publication Critical patent/HUP0200815A2/hu
Publication of HUP0200815A3 publication Critical patent/HUP0200815A3/hu
Publication of HU229255B1 publication Critical patent/HU229255B1/hu

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/39—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the immunostimulating additives, e.g. chemical adjuvants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/0005—Vertebrate antigens
    • A61K39/0011—Cancer antigens
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/0005—Vertebrate antigens
    • A61K39/0011—Cancer antigens
    • A61K39/001184—Cancer testis antigens, e.g. SSX, BAGE, GAGE or SAGE
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/0005—Vertebrate antigens
    • A61K39/0011—Cancer antigens
    • A61K39/001184—Cancer testis antigens, e.g. SSX, BAGE, GAGE or SAGE
    • A61K39/001186—MAGE
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/0005—Vertebrate antigens
    • A61K39/0011—Cancer antigens
    • A61K39/001184—Cancer testis antigens, e.g. SSX, BAGE, GAGE or SAGE
    • A61K39/001189—PRAME
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/0005—Vertebrate antigens
    • A61K39/0011—Cancer antigens
    • A61K39/00119—Melanoma antigens
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/28—Drugs for disorders of the nervous system for treating neurodegenerative disorders of the central nervous system, e.g. nootropic agents, cognition enhancers, drugs for treating Alzheimer's disease or other forms of dementia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/04—Antibacterial agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
    • A61P31/16—Antivirals for RNA viruses for influenza or rhinoviruses
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/20—Antivirals for DNA viruses
    • A61P31/22—Antivirals for DNA viruses for herpes viruses
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P33/00—Antiparasitic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P33/00—Antiparasitic agents
    • A61P33/02—Antiprotozoals, e.g. for leishmaniasis, trichomoniasis, toxoplasmosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P33/00—Antiparasitic agents
    • A61P33/02—Antiprotozoals, e.g. for leishmaniasis, trichomoniasis, toxoplasmosis
    • A61P33/06—Antimalarials
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A61P37/04—Immunostimulants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/08—Antiallergic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/10—Drugs for disorders of the cardiovascular system for treating ischaemic or atherosclerotic diseases, e.g. antianginal drugs, coronary vasodilators, drugs for myocardial infarction, retinopathy, cerebrovascula insufficiency, renal arteriosclerosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
    • A61K2039/55505—Inorganic adjuvants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
    • A61K2039/55511—Organic adjuvants
    • A61K2039/55555—Liposomes; Vesicles, e.g. nanoparticles; Spheres, e.g. nanospheres; Polymers
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
    • A61K2039/55511—Organic adjuvants
    • A61K2039/55561—CpG containing adjuvants; Oligonucleotide containing adjuvants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
    • A61K2039/55511—Organic adjuvants
    • A61K2039/55566—Emulsions, e.g. Freund's adjuvant, MF59
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
    • A61K2039/55511—Organic adjuvants
    • A61K2039/55577—Saponins; Quil A; QS21; ISCOMS
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
    • A61K2039/55511—Organic adjuvants
    • A61K2039/55583—Polysaccharides
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/60—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characteristics by the carrier linked to the antigen
    • A61K2039/6031—Proteins
    • A61K2039/6068—Other bacterial proteins, e.g. OMP
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
    • Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
    • Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Neurosurgery (AREA)
  • Neurology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Pulmonology (AREA)
  • Vascular Medicine (AREA)
  • Heart & Thoracic Surgery (AREA)
  • Cardiology (AREA)
  • Hospice & Palliative Care (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Psychiatry (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)

Description

Λ 7é3 /οί-
PO20008 1 5 HEGABÁS .«APJÁUL V « «* « V* « 0 ♦ »4 V *
SZOLGÁLÓ VÁLTOZAT ♦ 4 Φ Φ Φ A 4 4 * A «ί 4 4 « 4 4 *
χί VAKCINA KÉSSIIMÉNYSK
A találmány vakcinákban alkalmazható adjuváns készitmé-
nyekre vonatkozik. . A találmány szerinti aőjuváns készítmény
közelebbről szaponinbór, immunstimuláns hatású oligonukleotidhői, valamint adott esetben valamely hordozóból álló elegy. A találmány továbbá olyan vakcinára vonatkozik, amely a találmány szerinti adjuváns mellett legalább egy antigént is tartaimaz, A találmány tárgya ezen túlmenően eljárás a szóban forgó adjuváns és vakcina előállítására és a gyógyászatban való alkalmazására. A találmány szerinti megoldás gyógykezelési eljárást tesz lehetővé, melynek során valamely betegség iránt fogékony vagy abban szenvedő szervezetbe a találmány szerinti vakcinát parenterálisan vagy a nyálkahártyán át juttatjuk be.
A metilezetlen CpG dinukleotidokat („CpG) tartalmazó, immunstimuláns hatású oligonukieotidok a szakterületen ismert adjuvánsok, melyekkel a kezelés szisztémásán vagy nyálkahártyán át egyaránt elvégezhető fWO 96/02555, PP 468520, Davis et ál,, a. .nnmunol., 160(2), 870-876 (1998); McCluskie & Davis, <T. iiaunoi., 161(9), 4463-4466 {1398)), A CpG a DDS-ben jelenlévő citozin-guanozin dinukieotid motívumok rövidítése. Régen felismerték, hogy a BCG baktérium. DNS frakciója tumorellenes hatással rendelkezik. A további vizsgálatok során kimutatták, hogy a BCG baktérium génszekvenciáiból származtatható szintetikus öligonukleotidők képesek immunétImoláns hatást kiváltani fin vitro és in vivő egyaránt) , A kutatók arra a következtetésre jutottak, hogy ez az aktivitás bizonyos palindrom. szekvenciákhoz, köztük a centrális CG motívumhoz köthető, Később felderítették a CG motívumnak az izumrastímurációban játszott
X Ο Φ * * ««♦ V * *« Φ χ < * > φ * « * »'» <« ** Φ* központi szerepét (Krieg# Natúré, 374, S46 {1995}]. A részletes elemzés során kiderült# hogy a CG motívumnak egy bizonyos szekvenciakörnyezetben keli előfordulnia, és ezek a szekvenciák meglehetősen gyakoriak a bakteriális DNS-ben# de ritkák a gerincesek DNS-ében, Az immunstimuláns szekvencia gyakran: purin# purin, C, G, pírimidin# pirímidín; ahol a CG motívum ne® metiiezett, de más, immunstimuláns hatású metílezetlen CpG szekvenciák is ismeretesek# és felhasználhatók a jelen, találmány értelmében,
A hat nukleotid bizonyos kombinációja esetén palindrom. szekvencia áll elő. Ezen motívumok közül több# akár egyetlen motívum ismétlődéseként# akár különböző motívumok kombinációjaként jelen lehet ugyanabban az oligonukieotidban. Az ilyen# egy vagy több immunstimuláns szekvenciát tartalmazó oligonukleotidoknak a jelenléte képes aktiválni az immunrendszer különböző elemeit# igy például az NK sejteket (melyek γ-interferont termelnek és citolitikus aktivitásúak)# valamint a makrofágokat [Wooldrige et al,# 89(8} (1377)]. Emellett egyéb# metílezetlen CpG tartalmú# de a megadott konszenzus szekvenciát nem tartalmazó szekvenciákról is kiderült, hogy rendelkeznek immunmoduláló hatással.
Vakcina készítése során a CpG általában alkalmazható oldatban# szabad állapotban, ugyancsak szabad állapotú antigénnel együtt (WO 96/02555#· McCluskie f Davis, J. Immunoi., 161(9}# 4463-4466 (1998)], kovalensen kötött antigén konjugá· tűmként (WO 98/16247] vagy hordozó, például alumínium-hidroxld (Hepatitis felületi antigén} alkalmazásával (Davis efc al,#
e. Immunoid, 150(2), 870-875 (1998}; Br&zolot-Milián et al. # .Rroo, hadd árad, Scá, Cdh 95(26}, 15553-15558 (1998} ] .
A szaponinok korántsem ismeretlen vegyületek [LaeaíIIe™
Dubois, M, & Wagner, Hr A revieu of the bioiogical and pharmacologica.l activities of saponinsz Phybomedlclne, 2,
363-386 (1996)]» A szapon.in.ok szteroid vagy tri törpén glikozidok, melyek széles körben előfordulnak a növényekben és a tengeri állatokban, Nevezetes tulajdonságuk, hogy a vízben rázás hatására habzó kolloid oldatokat képeznek, és kicsapják a koleszterint, A. sejtmembránok közeiébe kerülve a szaponinok pérusszerű képieteket hoznak létre a membránban, aad. a membrán felhasadásához vezet. Ennek a jelenségnek a példája az erítrooiták hemolizi.se, ami bizonyos - jóllehet nem az összes szaponinok jellemző hatása,
A szaponinok a szisztémás kezelésre szolgáié vakcinákban ismert adjnvánsok, Az egyes szaponinok adjnváns és hemolitikus aktivitását alaposan tanulmányozták [Lacailie~-Dúbois M. & Wagner Η», Ahy temedé ciné, 2, 363-386 (1996) ] » Ismeretes például a Quil-.A (a Dél-Amerlkában honos QuiUaga áaponaria Abl.i.na fa kérgének származéka) és frakcióinak alkalmazhatósága (US 5 057 540; Kensz! C.R,: Saponins as vaccine adjuvants, Crit, nem. Ther. Drug Carrier Syst.z 12(1-2), 1-55 (1996);
EP 0 362 279 31),
A Quil-A. frakcióiból származó, immunétimuiáiö komplexeknek (XSCOMS) nevezett egyes szerkezetek hemolitikus hatásúak, és alkalmazzák őket vakcinák előállítása során [Morein B.? EP 0 109 942 Bl] . A. közlemények. szerint ezek a szerkezetek adjutáns hatással rendelkeznek [EP 0 109 942 Bl; WO 96/117111,
A hemolitikus hatású Q321 és Q317 szaponinokat (a Quil-A HPI.C technikával tisztított frakciói) hatékony szisztémás adjutánsként Írják le, és eiőáliitásuk módja is ismeretes [US 5 057 540; EP 0 362 279 31 ] . Ugyanezekben a közleményekben szerepel a Q37 (a Quii-A egy nem-hemolitikus frakciója) hatékony szisztémás adguvánsként történő alkalmazása vakcinákban. A Q521 alkalmazására további adatok is vannak [Kensíl et al,z J, I/íimonology, 146, 431-437 (19.91)]. Ismeretes továbbá a QS21 kombinált alkalmazása poliszorbáttal vagy ciklodextrinnel [WO 99/10008], A Quil-Ά frakcióiból, így a QS21 és Q7 frakcióból álló konkrét adjuváns rendszerekre vonatkozik a WO 96/33739 és a WO 96/11711 számú dokumentum.
Más szapónínok között, melyek alkalmazást nyertek a szisztémás vakcinálás tanulmányozása során, megtalálhatjuk a további növényekből, így például Gypsophiia és Saponaria fajokból származó vegyületeket is (Bomford et al., Uaccine, 10(9), 572-577 (1992)].
Ismeretes az is, hogy a szaponinokat nyálkahártyán keresztül végzett vakcinálás! vizsgálatokban is kipróbálták az immunválasz előidézésére - váltakozó sikerrel. Kimutatták korábban, hogy a Quil-A sz apón in hatástalan volt az ixrenunválasz előidézése tekintetében, midőn az antigén bevitele intranazálisan történt [Gizurarson et al. , Uaccine Aesoarc?;, 3, 25-29 (1994)]. Más szerzek azonban a szóban forgó adjuváns sikeres alkalmazásáról tudósítanak [Maharaj et al., Can. J. Miorobioi., 32(5), 414-420 (1936); Chavaii & Campbell, Immanabioiogy, 174(3), 347-359]. A Quil-A szaponin tartalmú ISCOM anyagokat gyomron vagy orron át adható vakcina készítése során alkalmazva adjuváns aktivitást tapasztaltak [Mcl Mowat et ai.z Immunoiogy, 72, 317-322 (1991); Mcl Mowat & Donachie, Immunéiogy Today, 12, 383-585 (?)]>
A QS21, a Quil-A nem toxikus frakciója, szintén alkalmazásra került már orális# illetve intranazálls adjuvánsként
ÍSumino et al.# J, kiről.# 72{S}# 4931-4931 (1998);
WO 98/584X5].
Egyéb szaponinok alkalmazna,tőségét is vizsgálták íntra™ nazális vakcináiás céljára. A Cbengpodi s.m gsiooa szaponinjait például felhasználták adud orron át# mind pedig gyomron át adható vakcinákban (Estrada et ai,z Comp, .bmsnnoJ, édcrobiol. Infsct. öis.# 21 (3)# 22S-238 (1998)].
A jelen találmány alapja az a meglepd felismerés# hogy az immanstimuláns hatású oügonukieofcidok (CpG) és a szaponinok kombinációja révén rendkívül erőteljes adjuváns hatás érhető el. Ennek megfelelően a találmány szaponin és immunstimuláns hatású oligonukleotid kombinációjával, előállított adjuváns készítményt biztosit. A találmány szerinti adjuváns készítmény előnyősön valamely hordozót is tartalmaz. A találmány szerinti megoldás egy előnyös kiviteli alakjában a szaponínt éa oligonukleotídokat tartalmazó adjuváns# valamint a vakcina készítmény szinergetikusan működik az antigénspacifikus antitest képződés índukálásában# és hatásos azon immunválaszok előidézésében# melyek hagyományosan a Tál típusú immunrendszerrel kapcsolatosak. Mindezek alapján az adjuvánskombinációk nem csupán a betegségek megelőzésére# hanem - meglepő módon - azok izztnn terápiás kezelésére is alkalmasak# olyan esetekben# midén virális# bakteriális vagy parazita fertőzés áll fenn# avagy krónikus rendellenességről# például rákos állapotról van sző.
A találmány érteimében előnyösén olyan oiigonnkleotidokat alkalmazunk az adjuváns- vagy vakcina-készítményben# amelyek előnyösen két vagy több CpG dinnklectid. motívumot tartalmaznak# melyeket egymástól legalább három# még előnyösebben legalábfa hat vagy több nukleotid választ el egymástól. A találmány szerinti oligonukiéotidok jellemzően dezoxinukleotidok. A találmány értelmében az oligonukleotídoxban lévő internukleotid kötések előnyösen fosztoro-ditioát vagy - még előnyösebben foszforo-tioát kötések., de foszt odiészter vagy más internukleotid kötések, szintén a találmány tárgykörébe tartoznak, csakúgy, mint azok az oligonukiéotidok, melyek vegyesen tartalmazzák a különböző internukleotid kötéseket. Foszfor©-tioát vagy foszforo-diti.oát kötéseket tartalmazó oligonukiéotidok előállítására szolgáló módszereket ismertet az US 5 666 153, US 5 278 302, valamint a WO '95/26204 számú dokumentum.
A találmány értelmében előnyösen alkalmazható oligonukleotidok szekvenciáját a következőkben adjuk meg. A szekvenciák előnyösen foszforé-tioát módos!tású internukleotid. kötéseket tartalmaznak:
OL1GÖ 1 (SEQ ID NO: 1!: TCC Λ,’Γΰ ACc TTC CTG AGG TT (CpG 1326)
OLIGO 2 (SEQ ID NO: 2): TCT C o a.. AG o GTG CCC CAT (CpG 1758)
ÖLICO 3 (SSQ ID NO:3): ACC GAT GAC G .i o GCC GcT tjAC aijt ACC A.cc
OLIGO á (SEQ ID NO:4) : TOG TCG TTT TGT CG? ' TTT GTC GTT (CpG
2006)
OLIGO 5 (SEQ ID NO:6:: TCC ATG AGG TTC CTG ATG CT {CpG 166 8)
Egyéb alkalmas CpG oligonukiéotidok azok, amelyek a fenti, előnyös szekvenciákat tartalmazzák, de bennük nem következetes deléciók, illetve addícíók fordulnak elő. A jelen találmány értelmében felhasználható CpG oligonukiéotidok bármely ismert módon szintetizálhatok [pl. EP 468520]. Ezeknek az oiigonukleotídoknak a szintetikus előállítása. legkényelmesebben automata szintetizátorral történhet.
A jelen találmány szerinti oligonukiéotidok jellemzően *7 dezoxinukieotidok. A találmány érteimében as oligonukleotidokban lévő internukleotid kötések előnyösen foszforo-ditioát vagy - még előnyösebben - foszforo-tioát kötések, de a 'foszfodiészter kötéseket tartalmazó olígonukleotidok szintén a találmány tárgykörébe tartoznak. Ideértendők továbbá azok az olígonukleotidok is, amelyek más internukleotid kötéseket, például foszforé-tioát és foszfodiészter kötéseket keverten tartalmaznak. A szóban forgó oligonuleot.ido.kban egyéb, a molekulát stabilizáló ínternukleotíd kötések is alkalmazhatók.
A találmány szerinti kombinált adjuváns készítményekben felhasználható szaponinok közé tartoznak a OviJlaja Saponaria áíoJlna kérgéből származó Quii-A, és annak frakciói [US 5 057 540; Kensil, C.R.: Saponins as vaccine adjuvants, Crit. Aev. TA er. D.rug Carrier Syst., 12(1-2), 1-55 (1096) ; EP 0 362 279 Bl] . Különösen előnyös Quii-A. frakciók a QS21, QS7 és QS17.
A β-escin egy további hemolitikus hatású szaponin, mely előnyösen alkalmazható a jelen találmány szerinti adjuváns készítményben. A Merck index (I2t!í ad; 3737 szám} szerint az esőin a vadgesztenye (Aeseulus Aippocastanum) termésében előforduló szaponinok keveréke. Kinyerése és tisztítása kromatográfiás módszerrel (Fiedler, Arzneímúttel-ForscA., 4, 213 (1953)1 vagy ioncserélő gyanták alkalmazásával [Erbing et al., US 3 238 190] egyaránt megoldható. Az esoint a és β frakcióra szétválasztva, és a frakciókat megtisztítva kimutatták biológiai aktivitásukat (Yoshíkawa M. et al., CAem. Pharm. Bull. (Tokyo), 44(8), 1454-1464 (1996)]. A β-escin aescin néven is ismeretes.
A jelen találmány érteimében előnyösen alkalmazható .< <φφ* φ* ·φ* * Α .♦ Φ · *
ΧΦΦ < * Φ χ Φ < # φ Φ Φ
ΦΦ ΦΦ ·>* ** hemolitikns hatású sraponin ezen kívül a dígitonin is. A digi™ tonin a Merck index (12m ed; 320< szám) szerint a Ólgdtafia pprpuree magjából származó szaponin, mely islert módon tisrtithatö [Gisvold at al.z dl ám, cümrm, ássoc,, 23, ááá (1934); kuhenstroth-Bansr, Ahysiol, Chem,, 301 , 321 (1955)}♦ A szakirodalom. szerint a digitonin a koleszterin meghatározására szolgáló klinikai reagensként használható,
A jelen találmány ezerinti adjuváns kombináció fentieken tűi vivóanyagot is tartalmazhat, oly módon, hogy ez alkalmazott szaporán, Illetve CpG egyike vagy mindegyike szemcsés hordozóhoz kapcsolódhat, fokozva ezáltal az elegy adjuváns hatását. A különösen előnyős szisztémás vakcinák például tartalmaznak ilyen vivöenyagot,
A találmány szerinti adjuváns előnyben alkalmazott CpG lehet szabad formában, oldatban vagy valamely szemcsés hordozóval - Így ásványi sókkal (például egyebek között alumínium vagy kalcium, sókkal}, ilposzómákkal, 1SCCM molekulákkal, emulziókkal (olaj-a-vizben, viz-az-oiajban, illetve viz-az-olejhan-a-vizben), polimerekkel (például egyebek között polilaktat, poiiglikolát, poiifoszfazin, poliaminosav, alginát vagy kifőzde), valamint mikrorészecskékkel - alkotott komplex formájában, A szóban forgó vívőanyagok előnyösen kationon jellegnek, A találmány szerinti vakcinák tartalmaznak továbbá valamely antigént, amely asszociálódhat a CpG-vivóanyag komplexhez, de éppúgy lehet nem asszociált állapotban is. Utóbbi esetben az antigén lehet szabad formában, szuszpenzioban vagy kólón hordozóval asszociált állapotban.
A találmány részét képező szaponinok lehetnek elkülönült mioellák alakjában vagy nagyobb, rendezett szerkezetek forrnáφ φ
jában, amilyenek például az XSCOM molekulák [EP 0 109 942 Bl] vagy koleszterinnel és lipid.ekk.el alkotott liposzőmák (WO 96/33739], illetve ólaj-a-vízben típusú emulziókként [WO 95/17210], A szaponinok előnyösen fémsókkal, így például aiumínium-hidroxiddal vagy alumínium-foszfáttal asszociált állapotban lehetnek, A szaponinok továbbá szemcsés hordozókhoz, például kitozánhoz is asszocíálódhatnak. Ezen kívül a szaponinok lehetnek száraz állapotban, például por formájában. A kiszerelt készítmény végleges, a kezelendő szervezet nyálkahártyáján alkalmazandó alakjában előnyösen hemolitikus természetű. A szaponin lehet szabad állapotban vagy fizikailag asszociálődva az antigénhez, akár közvetlen kapcsolódással, akár ugyanahhoz a szemcsés hordozóhoz hozzákapcsolódva [GB 9822712.7/ WO 98/16247]. A. találmány szerinti adjuvánsban vagy vakcinában a CpG és a szaponin lehet egymástól független, vagy egymással asszociálődott állapotban, A. CpG és a szaponin például lehet szabad állapotban, szuszpenzióban vagy vivőanyag közvetítésével, még előnyösebben szemcsés hordozó, például alumínium-hidroxid vagy kationos liposzóma, illetve ISCOM molekulák révén.
A találmány szerinti előnyös adjuváns kombináció egy vagy több, a benne lévő két szomszédos CG motívum között legalább 3, előnyösen 6 nukleotidot tartalmazó CpG olígonukleotidből, QS21 szaponinböl és szemcsés hordozóból áll, mely utóbbi lehet valamely olaj-a-vízben típusú emulzió vagy DQ. Legelőnyösebben az adjuváns kombináció CpG 2006 (SEQ XD 540:4;, CpG 1758 (SJSQ TD KO: 2} vagy CpG 182 6 [SEQ 1D Ν0.Ί] és QS2.1. keverékét és - valamely olaj-a-vizben típusú emulzió vagy DQ - szemcsés vivőanyagot tartalmaz. Fentiekkel összhangban a különösen előft « nyös vakcinák a szóban forgó adjuváns kombinációkból és valamely antigénből állnak. A találmány szerinti előnyös vakcina szisztémás kezelés után az adott szervezetben szisztémás immunválasz előidézésére használatos.
A találmány szerinti adjuváns kombinációk mind szisztémás, mind pedig nyálkahártyán át történő kezelésre felhasználhatók. A találmány szerinti készítmény egy konkrét kiviteli alakjában szisztémás vakcina, amellyel szisztémás vagy párén-terális, igy például intramuszkuláris, intradermális, transzdermális, szubkután, intraperítoneális vagy intravénás kezelés végezhető. A kezelés előnyösen transzdermális úton, például tapasz alkalmazásával történhet.
A találmány szerinti szisztémás vakcina készítmények alkalmazhatók egy adott betegségben szenvedő vagy az iránt fogékony emlős szervezet kezelésére, illetve megvédésére, oly módon, hogy a szóban forgó vakcinát intramuszkulárisan, intraperitoneálisan, intradermálisan, transzdermálisan, intravénásán vagy szubkután kezeléssel juttatjuk a szervezetbe. A vakcina készítmények szisztémás alkalmazásának módszerei során felhasználhatók hagyományos eszközök például a fecskendők és tűk, valamint szilárd vakcinák ballisztikus célba juttatására kialakított készülékek [WO 99/27961}, tűmentes folyadékbelövő készülékek [US 4 596 556; US 5 933 412] és transzdermális tapaszok [WO 97/48440; WO 98/230371. A találmány szerinti megoldás arra is felhasználható, hogy a bőrön át alkalmazott antigének immunogenicitását fokozzuk {transzdermális vagy transzkután kezelés [WO 98/20734; WO 93/280371). Mindezek alapján a találmány tárgyához tartozik a találmány szerinti vakcina vagy adjuváns készítménnyel töltött, szisztémás alkalmazásra szol*«ί* φφ gáló célba juttató eszköz is.
Ezen túlmenően a találmány módszert biztosit immunválasz előidézésére valamely szervezetben, melynek során a szóban forgó szervezetet parenterálísan vagy szisztémásán olyan vakcinával kezeljük# amely antigént,· immunstímuláns hatású oligonukleotidőt, szaponint és vivőanyagot tartalmaz. Az immunválasz előidézésére szolgáló előnyős módszer során a kezelést olyan vakcinával végezzük, amely a SBQ ID KO: 1, 2, 2, 4 vagy 5 szekvenciának megfelelő oligonukleotídből# Quíl-A eredetű, például QS2.1 szaponinbél és vivőanyagból, például olaj-a-vizben tipusü emulzióból, koleszterin tartalmú líposzómából vagy timsóből áll.
Más megoldást alkalmazva, a találmány szerinti vakcina készítmények felhasználhatók egy adott betegségben szenvedő vagy az iránt fogékony emlős szervezet kezelésére, illetve megvédésére, oly mődon, hogy a szóban forgó vakcinát nyálkahártyán át, például orálisan vagy nazálisán juttatjuk a szervezetbe. Egyéb, nyálkahártyán keresztül történő alkalmazás lehet es intravaginális vagy intrarektálís kezelés. A nyálkahártyán át történő kezelést előnyösen íntranazális vakcínáláenak nevezett módszerrel, orron át végezzük. Az Íntranazális vakcináláe módszerei, igy a cseppek, porlasztóét folyadékok és száraz porok bejuttatása az immunizálandó szervezet orr-garat járatába, jól ismertek a szakterületen. A találmány részét képezik a vakcinákból előállított ködök és aeroszolok is. Ezen túlmenően az enterális készítmények, igy az orális alkalmazásra szánt, bélben oldódó kapszulák és granulák, valamint a rektális vagy vagínális alkalmazásra szánt kúpok is a találmány részét képezik.
ÍV
-·<- £ «00.« «0 χ 0 0 X *
0 χ 0 0 0 « * 0
Φ *00000 ¢0 0V Ο*
A találmány szerinti adjuváns kombinációk emberi szervezetben történő alkalmazásra megfelelő, nyálkahártyán át bejuttatható készítmények, melyekkel a szisztémás vakcinálás helyett nyálkahártyán át végezhető el a vakcínálás, A találmány szerinti megoldás egy előnyös kiviteli alakjának megfelelően tiszta szaponlnok, igy például Quil-A ée származékai, escin, digitonin, GypsopAlia vagy Che.oppodium gninoa szaponinok és immunétimuláns hatású oligonukleotidok kombinációja adjuvánsként eredményesen, felhasználható antigének nyálkahártyán át történő alkalmazása során, szisztémás immunválasz előidézésére,
A találmány szerinti adjuváns kombinációk felhasználhatók olyan vakcina készítmények előállítása során, amelyek szisztémásán vagy nyálkahártyán át alkalmazhatok. Abban az esetben, midőn a vakcinákat nyálkahártyán át történő alkalmazásra szánjuk, az adjuváns kombináció előnyösen hamui it ikus hatású szaponlnt tartalmas.
Nyálkahártyán át történő alkalmazás esetében a találmány szerinti készítmény előnyösen hemolitikus hatású szaponlnt tartalmaz, A hemolitikus hatású szaponin vagy szaponin készítmény találmány érteimében, a következő vizsgálattal határozható meg:
1. TengerimsXacből származó friss vért asztali centrifugán háromszor mosunk foszfátpuffaros sooldattal (FBS), Ezután az eredeti térfogatban, szuszpendált vért BBS oldattal tízszeresére hígítjuk,
2, A vérszuszpenziö 50 pl térfogatú mintáját 800 pl térfogatú, a vizsgálandó felületaktív anyagot vagy szaponlnt kétszeres hígításban, tartalmazó BBS oldathoz adjuk.
ν ς· * ν * ' ♦ ί * 4 * $ * * # ν ν * ' Λ <ί .· ·.. *\· <**
3. 8 óra elteltével a hemolizist vizuálisan vagy a foiniósző optikai denzitásának mérésével kiértékeljük. A vörös színű, 570 nm huXlámhosszos fényt abszorbeáló felmászó jelzi a hemolízis bekövetkeztét.
4. Az eredményt az első olyan szaponin hígításnak megfelelő koncentrációként adjuk meg, amelynél mái- nem következik be hemolízis.
A találmány céljainak megfelelően a szaponin adjuváns készítmény bemol.it ikus hatásúnak tekinthető# amennyiben 0,1 térf.% alatti koncentrációban is képes előidézni az erítrociták lizisét. Referenciaként a Quil-A# QSsl, QS7, digitonín és β-escin mindegyike hemolítikus szaponin a fenti vizsgálat szerint. Az ilyen biológiai mérések jellegéből fakadó kísérleti variabilitást is figyelembe véve a találmány szerinti szaponlnok hemolitikus aktivitása előnyösen kb, 0#5 és 0,00001 térf.% közötti# előnyösebben 0,05 és 0,00001 térf.% közötti# még előnyösebben 0,005 és 0,00001 térf.% közötti# legelőnyösebben pedig 0,001 és 0,0004 térf.% közötti. Ideális esetben a szóban forgó szaponlnok hemolítikus aktivitása hasonló (tízszeres különbségen belüli) a QS22 aktivitásához.
A találmány szerinti vakcinák orálisan is alkalmazhatók. Ebben az esetben a gyógyszerészetileg elfogadható adalékok között szerepelhetnek lúgos püfferek vagy bélben oldódó kapszulák és mikrogrannlák. A találmány szerinti vakcinák vaginalisan is alkalmazhatók. Ebben az esetben a gyógyszerészetileg elfogadható adalékok között szerepelhetnek emulgeátorok, polimerek# igy például a Carbopol*# és egyéb, a vaginái is kenőcsökben és kúpokban szokásos stabilizátorok. A találmány szerinti vakcinák rektálisan is alkalmazhatók. Ebben az esetben a gyógyszerészetileg elfogadható adalékok között, szerepelhetnek a rektális kúpokban, szokásos viaszok és polimerek.
A találmány szerinti adjuváns készítmények egynél több szaporánk is tartalmazhatnak. Ilyenek például azok a kombinációk, amelyek legalább kettőt tartalmaznak a QS21, QS7, QuilA, β-escin és digitonin közül. Ezen túlmenően a találmány szerinti készítmények egynél több ísonstimuláns hatású oligonukleotid kombinációját is tartaliaazhatják.
A. találmány egy további, hasonló kiviteli alakja szerint a szisztémás, illetve nyálkahártyán át történő alkalmazásra szánt CpG/szaponin kombinációk tovább kombinálhatok más adjuvámsakkal, amilyen például a monofoszforii-Ldpíd-A, valamint nem-toxikus származéka, a 3-dezoxi-aci1-monofoszforii-nipíd-A. Más módon eljárva, a szaponin készítmények kombinálhatok vakcina vivőanyagokkal, amilyenek például a kítozán és más katíonos polimerek, a polilaktíd és a polilaktíd-ko-glíkolid. részecskék, a poli-N-acetíl-giükózamín alapú polimerek, a poliszacharidokfoól vagy kémiailag módosított poliszacharidokbói álló részecskék, a liposzőmák és más iípid alapú részecskék, a glicerin-monoészter alapú részecskék stb. A szaponinok koleszterin jelenlétében is formulálhafcók, miáltal részecske jellegű szerkezetek hozhatok létre, amilyenek például a liposzőmák vagy az ISCOM molekulák, A szaponinok formulálása továbbá poliozí-etilén-éterekkel vagy -észterekkel is történhet, aminek eredménye valódi oldat vagy részecske jellegű, szerkezet lehet, amilyen például a paucimieelláris liposzóma vagy az I3C0M, A szaponinok ezen túlmenően más adalékokkal is formulálhatók, igy például CarbopoP polimerrel a viszkozitás növelésére, vagy pedig laktözzal száraz porkészítmény előáll!15 tusa céljából,
A 3-dezoxi-acil-monofoszforil-Lipid-A közismert arijuváns, melyet a Ribí Xmmunochem (Montana, USA) cég gyárt. A vegyület előállítható a GB 21222048 számú dokumentumban Ismertetett módon. A 3-dezoxi-acil-Lipíd-A előnyösen kicsi, 0,2 pm-nél kisebb átmérő részecskékből álló emulzió formájában kerül felhasználásra (EB 0 609 454 BX) ♦ Különösen előnyös adjuvánsok a 3D-MPL és QS21 elegy (HP 0 671 948 Sl), a 3D-MRL és QS21 olaj a vízben típusú emulzió formájában (UÖ 95/17210; EO 98/56414], valamint a 2D-MBL más vivcanyagokkal formuláivá (EP 0 609 454 81].
A találmány szerinti vakcina készítmények előnyösen tartalmaznak olyan antigént vagy antigén elegyet, amely képes immunválaszt kiváltani valamely humán patogén ellen. A szóban forgó antigén vagy antigén elegy közelebbről a kővetkező vírusokból származik; KlV-1 (például tat# nef, gpllö vagy gplőO), humán herpeszvirusok (például gb, ennek származékai vagy a közvetlen korai fehérje, például a 8571 vagy HSV2 1CB27 fehérjéje), cífomegalovírus# különösen humán (például gS vagy ennek származékai), rotavirus (ideértve az élő, attenuált vírusokat is), Eppsteín-Barr vírus (például gp350 vagy ennek származékai), Varícella zoster vírus (például gpX, 11 és 1E03), hepatitisz vírus, igy a Hepatitis B vírus (például Hepatitis 8 felületi antigén vagy ennek származékai), Hepatitis A vírus. Hepatitis C vírus és Hepatitis E vírus. A szóban forgó antigén származhat más patogén vírusokból is, amilyenek például a paramyxovírusok; az RSV (például az F és G fehérjék vagy ezek származékai), parainfluenza vírus, kanyaró vírus, mumus vírus, humán papilloma vírusok (például HFV6, 11, 16, 18, , flavívirusok (például sárgaláz vírus, Dengue vírus, kullancs * * i ο ♦♦*#♦** # φ 5» < .* * φ * φ φ * $ # φ
S Φ * Φ> Φ φ φ φ φ φ φ φ φφ «ί φ enkefalitisz vírus, japán enkefaiitisz vírus) vagy influenza vírus (tojáson, vagy MDCK sejtokon tenyésztett teljes élő vagy inaktivált vírus, hasított influenza vírus vagy teljes influenza viroszómák [Ginek, k., vauéira, 10, 915-020 (1992)1, valamint ezek tisztított vagy takombináns fehérjéi, Így a HA, HP, NA agy H fehérjék, illetve ezek kombinációi) , Az antigének ezen túlmenően származhatnak bakteriális natogénekhől is, amilyenek például a NOisseris fajok, így a Ai gonorzjes és a N. meningitidis (például ezek tokpoliszacharidjai vagy azok kenjugáturnéi, transzferrin kötő fehérjék, laktoferrin kérő fehérjék, 811C, adhezinek? ih pyogeres (például H fehérjék és ezek fragmensei, C5A proteáz, lipoteiehoinsavak), ih agalactiaa, 5. .mutáns, Bi deerayi, éforameiia fajok, igy a fi. cafsrrhslis, mely Branhameiia catar.rhal.ia néven is ismeretes (például nagy és kis molekulatömege edhezinek és invazinok); Sordetelle fajok, Így a Sordetella pertussis (például pertaktin, pertuszszisz teáin vagy ennek származékai, fonalas hemaggiutinin, adenilát-cikláz, fimbriák), B. parapertussis és B, bronch.Isept.ics; éiycobaefcerium fajok, így a éh hubercvlosis (például ESAT6, S5A, -8 és ™C antigének), éh bocin, áh lepra®, éh aviam, M, paratuherculosis, éh smegmatis; begionelia fajok, igy a 1. pneumgphila; Escherichis fajok, igy az enterotoxikus 8, coli (például koionizáuiós faktorok, hőérzékeny taxin és származékai, hőstabil tavin és származékai), anterohemerrhágiás fh coli, enteropatogán B. coli (például a shiga-toxinhoz hasonló taxin és ennek származékai); Xticrio fajok, igy a Xi cbolexa (például koierafcoxin és ennek származékai), Shigeila fajok, Így a ói soméi, éh dysenteriae, S. .flexnerii; fersi.nia fajok, igy a Ii erterocoiitice (például kap fehérje), ii pesA * * Φ * * * κ ΦΦ
Φ φ φ φ *
X ΦΦ Μ Χ*Φ Φ * φφφ * * φ φ φ ΦΧ ΦΦ φ\· »·* fis, 7, pseudotybercnHocus; Cazspy.lob«cter fajok, igy a C, jejani (például toxinok, adhezinek és invszinok) és Cl coli; BaimoneJia fajok, igy a 5» typüi, S. paratyphi, 3. chozersesuzs, 3. enteritidis; Biatoria fajok, igy a £. mo.nocyfogsnes; ffollcohscfar fajok, igy a Bt pyzori (például ureás, kataiáz, vakuolálő toxin.) ; Pssaoomonaa fajok, igy a B. aoragznoza; Btaphyiococcus fajok, igy a 31 aarecs és 3. epide midi sí .Snfcerococcns fajok, igy az S. faecaiis és £1 faecium; Czostrzdiam fajok, igy a Cl főtana (például tetanotoxin és származékai), Cl boislznum (például botulotoxin és származékai), Cl di/ficiie (például A és B kioszt!idium toxin és ezek származékai); Baoizzas fajok, igy a 3, anthraozs (például botulotoxin. és származékai); Coryznefeacteriam fajok, igy a
C. diphtoriae (például diftériatoxin és származékai); Bőrrelia fajok, igy a B. bargdorf'eri (például OspA, OspC, DbpA és DbpB) , 3, ysZ'inii (például öspA, OspC, DbpA és DbpB), 3.
afzozzi (például OspA, OspC, DbpA és DbpB) , .3, ande.rsonii (például OspA,. OspC, DbpA és DbpB), B. hormszi; Bnrlichia fajok, igy az 3. agai és a humán granuloeitás ehriichidzis; Biukettsia fajok, igy a B. ricksttsii; Chi&mydia fajok, igy a
C. trachomatia (például MOMP, heparin kötő fehérjék), C. pneumoniae (például Mödr, heparin kötő fehérjék), 01 psitfsci; feptospira fajok, igy a 3. iz:terzogsns; Treponema fajok, igy a T. paliídum (például a ritka külső membrán, fehérjék), 21 denticoia, A hyodyssnteriae, Az antigének származhatnak továbbá parazitákból is, amilyenek a Bzasmodiam fajok, igy a P, faieiperum; Toropiasma fajok, igy a T. gonosz (például SAG2, SÁGI, Tg34); BPCamoebs fajok, igy az 3. histoiytioa; Babesza fajok, igy ő, mieroii; Trypsnosoma fajok, igy a 11 erezi;
φφ* -ί Φφφ Φ Φ φ φ φ « φ φ φ
ΦΦ Φ* Φ« νΦ
Giardia fajok, igy a 6\ !emb!la, Xei.shmsnis fajok, igy a .0, major; .Pneemogystir fajok, igy a Xk csrinü; Ir.ichomo.naa fajok, igy a 37 veginaüe; Rcnieostorna fajok, igy a S. mansonl, valamint származhatnak élesztőkből, amilyenek például a Csudádé fajok, igy a C. albioana; és a CrypSococcue fajok, Így például a C< neofbzmsns.
Más előnyős M. t abs.rca!osás antigének például a Tb Rali, Tfc HS, Tfo Ea3S, Tb38-1, árd lé, DPV, MTI, MSL, mTTC2, hlCCl (WO 99/51748]. A M, tobereuloaio fehérjék közé tartoznak a fúziós fehérjék és azok variánsai is, melyekben legalább két, de előnyösen bárom fb táboron!ooio polípeptidet kapcsolunk össze egy nagyobb méretű fehérjévé, Előnyös fúziós fehérjék az Ral2~M9™Rs3S, Erdl4-DPV-M7X, ÓFR-MTI-Máb, ErdX4-DPV~MTI-M8L™ mlCC2, Erdl4-DFV~MTX-MSn, DPV~MTX~bSL~mTCC2, ?bH9~DPV~M?I (WO 99/5X74$].
Ά legelőnyösebb öblarnydia antigének közé tartoznak a nagy móltömegű fehérje (MP) [WO 99/17741], az 0RF3 (EP 305 412], valamint a vélt membrán fehér jék (.Pmps) ♦ Mas, vakcina készítés során felhasználható Ch!amydia antigének választhatók a WO 99/28475 számú dokumentumban megadott csoportból.
A bakteriális vakcinák előnyösen őfrepfococeuo fajokból. Így például 57 pneomoniae fajból származó antigéneket {például a tokpoliszachariöjai vagy azok konjugátnmai, FsaA, PspA, sztreptclizin, koilnkötö fehérjék), és a pneumulizin protein antigént (Aioehem Bábpbyzn hete, 57, 1007 (1989); Rubiné et a! <, .Mlörob/al Aatbogonss/s, 2.5, 337-342], valamint ennek öetorikáXt mutáns származékaié (WO 90/86951; WO 99/03884] tartalmazzák. Egyéb előnyös vakolnák állíthatók elő baemopbilea fajokból származó antigének felhasználásával, amilyenek példá.λ X «»*« φ.0 φχ * * χ φ φ <·χ* Λ «.*·« Φ Φ
Φ ΦΧφ φφφ >« ΦΦ φΦ φφ
u.l a B-fípuaű Η. influenzáé FBF fehérjéje és annak komjugatúrnál, a nem tipizálható Bl inflnenzae OMF26 fehérjéje, nagy molekulátömegü adhezinjei, PS, P6 és D fehérjéi, D lipoproteinje, fimbtinje és annak peptidszárm.azékai (US 5 «43 464], valamint többpéldányű variánsaik és fúziós termékeik,
A Hepatitis B felületi antigénjének származékai közismertek a szakirodalomban, és közéjük tartoznak egyebek között a FreSl és PreS2 S antigének, melyeket az HP A 414 374, BF A. 0304 578 és pp 198 474 dokumentumok ismertetnek, A találmány szerinti vakcina készítmény egy előnyös kiviteli alakja a gp!20 H.IV-X antigént, különösen pedig annak CHO sejtekben expresszált alakját tartalmazza, agy további kiviteli alak esetében a találmány szerinti vakcina készítmény a fentiekben definiált gD2t antigént tartalmazza.
A találmány szerinti, a találmányban ismertetett adjutánst tartalmazó vakcina antigén komponense előnyösen a genitáiis szemölcsökért felelősnek tartott humán pap.illoma vírusból (HPV 6, HPV li és mások), illetve a máhnyakrákért felelés HPV vírusokból (HPV 16, HPV 18 és mások) származik.
Különösen előnyös alakja a genitális szemölcs elleni profllaktikus vagy terápiás vakcinának, amelyben LI részecskék vagy káoszoménak, valamint fúziós fehérjék szerepeinek, mely utóbbiak egy vagy több olyan antigént tartalmaznak, amelyeket a HPV 6 és HPV II vírusok B6, B7, LI és L2 fehérjéi közül választunk ki.
Fúziós fehérjeként legelőnyösebben az L2B7 [KO 96/262771 és a Ö(l/3)-E7 [GB 9717953.5 (PCT BP 98/052851 fehérjék alkalma zható k.
A HPV eredetű méhnyakfertözés vagy -rák megelőzésére, ilψ * « φ « *** * <“ « ·> * « * * « <>' * X ->> S* 4>* ietve kezelésére szolgáló előnyös vakolna készítmény HkV 10 vagy HFV IS antigéneket tartalmazhat. Ilyen antigének lehetnek például az LI vagy L2 antigén monomerek, az hl és L2 antigének együttesen, virussaerü részecskeként (VLa) prezentálva, illetve az LI fehérje egyedin, VLP formájában vagy káoszomét' szerkezetben prezentálva. Az ilyen antigének, virasszerű részecskék és kapszomerek önmagukban .ismertek (WO 94/00152; WO 94/20137; WO 94/05792 és WO 93/02194].
További korai fehérjék, Így például az E7, az S2 vagy előnyösen az ES is felhasználhatók egyedül vagy fúziós fehérjeként, Ennek egy különösen előnyős megvalósítási módja az L1E7 fúziós fehérjét tartalmazó VLP alkalmazása (WO 96/11272}.
A különösen előnyös 8PV 10 antigének közé tartoznak az S0 és B? korai fehérjék D fehérjéhez kapcsolva, létrehozva ezáltal a D~fehérje - ES vagy S7 HÉV fúziós fehérjét vagy ezek kombinációit; valamint az ES és E? fehérjék kombinációi L2-vei [WO 95/20277] ,
Más megoldásként a HPV 10 vagy HÉV IS ES és E7 korai fehérjéjét egyetlen, molekulaként, D-fehérje - ES/E7 fúziós fehérje formájában alkalmazzuk. Az ilyen vakcina kívánt esetben az ES és E7 fehérjék egyikét vagy mindegyikét tartalmazhatja, előnyösen D~fehérje - E0 vagy D-fehérje - E7 fúziós fehérjeként, illetve D-fehérje - E6/E? fúziós fehérjeként,
A találmány szerinti vakcina más HÉV törzsekből, előnyösen a hPV 31 vagy HPV 33 törzsekből származó antigéneket is tartalmazhat.
A találmány szerinti vakcina olyan antigéneket is tartalmazhat , amelyek a maláriát okozó parazitákból származnak. Elasmodium íaloipa.ram fajból származó előnyös antigének példaφ.φ φ
Φ φ 'φ X * * ΦΦ Φ Φ Φ φ * X φ * * V X φ Φ < « Φ» <·# Φ* ul az RTS, S és TPAP molekulák. Az PTS olyan hibrid fehérje, amely a Plasmodium faiciparirn CS fehérjéjének lényegében teljes C-termin.áiis részét tartalmazza, melyet a Hepatitis B felületi antigén preS2 részének négy aminosava kapcsol a Hepatitis .8 felületi antigénhez. A molekula teljes szerkezetét a PCT/EP 92/02591 számú nemzetközi szabadalmi bejelentés ismerteti, melyet WO 93/10152 számon hoztak nyilvánosságra, és amely a GB 9124390.'? számú elsőbbségi iraton alapul. Élesztőben expresszáiva az RTS lipoprotein részecskeként keletkezik, ha pedig KBV eredetű S antigénnel koexpresszáljuk, úgy RTS,S kevert részecskét kapunk. A TRAP antigéneket a PCT/G3 89/00895 számú nemzetközi szabadalmi bejelentés ismerteti, melyet WO 90/01496 számon hoztak nyilvánosságra. A találmány egyik előnyös kiviteli alakja olyan malária vakcina, amelynek antigén komponense az RT3,S és a TRAP antigének kombinációja. Más, a többlépcsős malária vakcinában történő felhasználásra esélyes antigén, komponensek közé tartoznak a P. falo.íparum MSP'i, AKAI, M.SP3, EBA, GLURP, RABI, RAP2, szekvesztrin, PfEMPl, P£332, LSA1, LSA3, STARP, SALSA, PfSXPl, Pfs25, Pfs28, PFS27/25, Pfslő, Pfs48/45, Pfs230 és analógjaik a Plasmodium fajok körében.
A találmány szerinti készítmények antitumor antigéneket is tartalmazhatnak, és alkalmasak lehetnek rákos megbetegedések immunterápiás gyógykezelésére. Az adjuváns készítmények például alkalmazhatók, tumorelleni antigénekkel kombinálva a prosztata, az emlő, a vastag- és végnél, a tüdő, a hasnyálmirigy és a vese rákos betegségeinek, valamint melanömás elváltozások kezelése során. Ilyen antigének például a MAGÉ 1, a MAGÉ 3 és más MAGÉ antigének (melanóma kezelésére), valamint a
PR&ME, BAGE és GAGE antigének (Robbins & Kawakaiai, Current Opinions in Α;νίη;ηο1οσν, 8, 628-636 (1996) ; Van den. Eynde et ai. , Interna ti onal Journal of C'linical &' Laboréi to.ry Research (1997); Correale et al.# Journal of the hátiénál Cancer Jnstitute, 89, 293 (19.97) J . Székéé az antigéneket ténylegesen expr esszéi j a. a tumoros sejtek széles köre, például a melanoma, a tüdőrák és szarkóma, valamint a hólyagrák esetében. Egyéb# a találmány szerinti adjuvánssal együtt alkalmazható antigének, például egyebek között a tumorspecifikus ganglic-zidok, a prosztataspecifikus antigén (FSA) vagy Her-2/neu, a EGA (GA733) , a PAP, a maxnmaglobin, a MUC-1 és a karcinoembrionális antigén (CEA) .
A fentiek alapján a találmány egyrészt olyan vakcinára vonatkozik, amely a találmány szerinti adjuváns készitményt és valamely tumor elutasító antigént tartalmaz.
A tumor antigént tartalmazó vakcinák a találmány szerinti megoldás különösen előnyős kiviteli alakját jelentik. Az ilyen vakcinák meglepő módon hatásosnak mutatkoznak a rákos betegségek, igy például prosztata, az emlő, a vastag- és végbél, a tüdő, a hasnyálmirigy, a vese és a petefészek rákos betegségeinek, valamint melanőmás elváltozásoknak a gyógykezelésében. Ennek megfelelően a készítmények tumor-asszociált antigéneket, és tumor-támogató mechanizmusokkal (pl. angiogenezis, tumorinvázió) kapcsolatos antigéneket egyaránt tartalmazhatnak. Ezen túlmenően a rákterápiás vakcinákban különösen releváns antigének közé tartozik a prosztataspecifikus membránantigén (BSMA; , a prosztata-őssejtantigén (PSCA) , a tirozinás, a. survivin., a NY-ESOÍ, a prosztáz, a PS103 ídO 9S/S0567], valamint a RAGÉ, LAGE és HAGE antigének. A szóban forgó antigén lehet
Φ Φ » Λ Φ ΦΦΦ Φ ΦΦΧ χ χ· * Φ Φ Φ φ « Φ Φ φ χ Φ φϊΦ φφ továbbá peptid önhormon, igy például a teljes hosszúságú gonadotropin hormon elválasztó hormon (GnRH) [WO 95/20600], egy rövid, 10 aminosav hosszúságú peptid, amely alkalmas sokféle rákbetegség kezelésére, valamint immunkasztrálásra.
Sióra látható, hogy a találmány szerinti készítmények felhasználásra kerülnek majd Borrelza fajokból származó antigént tartalmazó vakcinák előállítására is. Az antigének közé tartoznak például, nukleinsavak, patogén eredetű antigének vagy antigén preparátumok, rekombináns módon előállított fehérjék vagy peptldek, valamint kiméra fúziós fehérjék. Közelebbről az antigén OspA. Az OspA lehet a gazdasejtben (tk coli) lipiddel kapcsolt formában lévő, teljes, érett fehérje (Lipo-OspA) vagy lipiddel nem. kapcsolt származék. Az ilyen, lipiddel nem kapcsolt származékok közé tartozik a lipiddel nem kapcsolt W$lOspA fúziós fehérje, amely az influenzavírus nem strukturális fehérjéjének (BDi) első 81 N-terminália aminosavából és a teljes OspA fehérjéből áll, valamint az hDP-OspA fehérje, amely az OspA lipiddel nem kapcsolt alakja, melyhez az N™terminális végen 3 további aminosav kapcsolódik.
A találmány szerinti vakolnék alkalmazhatók az allergia profilaxisában, illetve kezelésében. Az ilyen vakcinák alier™ génspecifikns (például Dér pl) vagy allergénre nem specifikus (például humán igh eredetű peptldek, igy egyebek között a St&nmcrth dekapeptid) antigéneket tartalmazhatnak [KB ö 477 231 Bl],
A találmány szerinti vakcinák alkalmazhatók az allergiától, a ráktól és a fertőző betegségektől eltérő más krónikus rendellenességek profilaxisában, illetve kezeléséhez; is. Ilyen krónikus rendellenességek például az arterioszklerőzia és az φ φφφ* ΦΦ φ * φ φφφ φ φφφ ¢, φφφ# <· φ φ φ φ*
Alrheimar-kör.
A neurodegeneratív Alzheimer-kór iránt fogékony vagy abban szenvedő páciensek védelme, illetve kezelése szempontjából releváns antigének közé tartoznak különösen sz árollóid prekurzor fehérje 39-43 ^-terminális amlnosavát tartalmazó (Ab), valamint a kisebb íragmensek. Ezt az antigént Ismerteti a WO 99/27944 számú dokumentum (Athena Neurosciences) .
A vakcinadózisok esetében az alkalmazott fehérje mennyiségét oly mődon választjuk meg, hogy az elegendő legyen az íromunprotektiv válasz kiváltására, anélkül azonban, hogy számottevő mértékű előnytelen mellékhatást idézne elő az átlagos vakcináltaknál. Ez a mennyiség változhat, attól függően, hogy milyen specifikus ímmunogént alkalmazunk, és ezt milyen mődon tesszük. Általánosságban az várható, hogy az egyes dózisok 1 ng és 1000 ng közötti, előnyösen '1 pg és 50ö pg közötti, még előnyösebben 1 yg és 100 yg közötti, legelőnyösebben pedig 1 pg és 50 yg közötti mennyiségű fehérjét fog tartalmazni. Egy adott vakcinában alkalmazott optimális mennyiség pontos meghatározásához el kell végezni a szokásos vizsgálatokat, melyek magukban foglalják a vakcináit páciensekben előidézett megfelelő mértékű immunválasz megfigyelését is. A kezdeti vakcinái ást. követően a páciensek megfelelő időközökkel részesülhetnek további egy vagy több megerősítő immunizálásban is. Ezek a vakcina készítmények a kezelendő emlős szervezet nyálkahártyáján át alkalmazhatók mind az első immunizálás, mind pedig a megerősítés alkalmával; vagy más módon eljárva, a kezelés szisztémásán is történhet, például transzdermális, szubkután vagy intramuszkuláris úton.
A CpG, illetve az immunttírouiáns hatású oligönukleotid φ φ * φ φφφ φ φ φ * Φ Φ X Φ Φ φφ φφ φ» φ* mennyisége a találmány szerinti adjuvánsban vagy vakcinában rendszerint kicsi, de a vakcina készítménytől függően dózisonként az '1 μα és 1000 ug közötti, előnyösen 1 pg és 500 pg közötti, még előnyösebben pedig 1 pg és 100 pg közötti tartományban lehet.
A találmány szerinti adjuvánsban alkalmazott szaponin mennyisége dózisonként az 1 ug és 1000 pg közötti, előnyösen 1 ug és 500 pg közötti, még előnyösebben 1 pg és 250 pg közötti, legelőnyösebben pedig 1 pg és 100 pg közötti tartományban lehet. Ennek megfelelően a CpG:szaponin tömegarány az 1:1000 és 1000:1 közötti, jellemzően 1:100 és 100:1 közötti, előnyösen 1:10 és 1:1, illetve 1:1 és 10:1 közötti tartományban, legelőnyösebben pedig 1:1, 4:1 vagy 10:1 lesz.
A. találmány szerinti készítmények alkalmasak mind profilaktikus, mind pedig terápiás célú felhasználásra. Ennek megfelelően a találmány biztosítja a szaponint és CpG molekulát tartalmazó elegy felhasználhatóságát olyan vakcinák előállítása során, melyek virális, bakteriális vagy parazita fertőzések, allergia, rákbetegség és más, nem krónikus betegségek megelőzésére vagy kezelésére szolgálnak. Ezzel összhangban, a találmány módszert biztosít fertőző betegségben, rákbetegségben, allergiában vagy autoimmun betegségben szenvedő, illetve az iránt fogékony emlős szervezetek kezelésére. A találmány továbbá olyan, szaponinból ss CpG molekulából álló, vakcina vagy adjuváns elegyet biztosit, ameiy gyógyászati készítményként alkalmazható. A vakcinakészítés általános módszereit a „New Trends and Development in Vaccínes' [Voller et aJ., üniversity Park Press, Baltimore, Maryiand, USA, 1978) című könyv ismerteti.
φ φφφφ φφ •Φ ♦ * φ #
ΦΦ ΦΦ
Előrelátható, hogy a találmány alkalmazást nyer sokféle forrásból származó antigéneket tartalmazó vakcinák előállítása során. Az ilyen antigének közé tartoznak például a humán, bakteriális vagy virális nnkleinsavak, a patogén eredetű antigének vagy antigén preparátumok,· a tumor eredetű antigének vagy antigén preparátumok, a gazdaszervezetből származó antigének, köztük az XgE eredetű peptidek, igy a XgE hisztamin elválasztásért felelős dekapeptidje (mely Stanworth peptid néven ismeretes), a rekombináns módszerrel előállított fehérjék vagy peptidek, valamint a kiméra fúziós fehérjék*
A találmány szisztémás vakcina készítményt biztosit, mely antigénből, szaponinból és immunstísmláns hatású oiigonnkleotídbői áll. Ennek megfelelően a találmány módszert biztosit valamely betegségben szenvedő vagy az iránt fogékony szervezet kezelésére, melyet az itt lényegében leírt készítménnyel, szisztémásán végzünk, Ezen túlmenően a találmány módszert biztosit valamely szervezet megvédésére olyan betegséggel szemben, amelyet a fertőző bakteriális és virális betegségek, parazitás betegségek, a prosztata, az emlő, a vastag- és végből, a tüdő, a hasnyálmirigy, a vese ás a petefészek rákos megbetegedései és a melanőma által alkotott csoportból; illetve a nem rákos krónikus betegségek, igy az allergia, az Alzheimer-kór, az sterioszklerózís által alkotott csoportból választunk ki, oly módon, hogy a szóban forgó szervezetet az itt lényegében leirt készítménnyel., szisztémásán kezeljük.
A találmány szerinti megoldás egy másik kiviteli alakja nyálkahártyán át alkalmazható vakcinára vonatkozik# amely antigénből és hemolitíkus hatású szaponinból áll. Ennek megfelelően a találmány módszert biztosít valamely betegségben szénvédő vagy az iránt fogékony szervezet kezelésére, melyet az itt lényegében leírt készítménnyel, nyálkahártya felületén át végzünk.
Ezen túlmenően a jelen leírásba emlős szervezetben szisztémás, antigénspeoi£ikus immunválasz előidézésére alkalmas módszert is ismertetünk, melynek során a szóban forgó emlős szervezetet nyálkahártya felületén át kezeljük antigént és hemolitikus hatású szaponint tartalmazó készítménnyel. A találmány módszert biztosit továbbá vakolna vagy adjnváns előállítására, melynek során szaponint és CpG molekulát elegyítünk valamely antigénnel,
A találmány szerinti készítményekben alkalmazható, gyógyszerészetileg elfogadható, megfelelő adalékok közé tartoznak a víz, a foszfátpufferes söoldat, valamint az izotöniás pufféról da tok .
A találmány szerinti megoldást a mellékelt ábrákkal szemléltetjük, ahol az 1, ábrán a 14 nappal az orron át végzett megerősítő immunizálás után mért OspA. specifikus ÍgG litereket ábrázoltuk;
a 2, ábrán a 14 nappal az orron át végzett megerősítő immunizálás után mért OspA specifikus LA2 titereket ábrázoltuk;
a 3. ábrán a 14 nappal az orron át végzett megerősítő immunizálás után mért szérum. Fin törzs-specifikus ÍgG títereket ábrázoltuk;
a 4. ábrán a 14 nappal az orron át végzett megerősítő immunizálás után mért szérum influenza törzs-specifikus szérum hemaggíutináciő gátlási (HM) ti tereket ábr ázoltuk;
az 5. ábrán az egérben mért OspA specifikus L.A2 titereket ábrázoltuk;
a 6. ábrán az immunizált egérből származó lépsejtek gpl20 specifikus iimfoproliferáeiős aktivitását mutatjuk be; az antigén specifikus aktivitást SI-ben adtuk meg a különböző antigén koncentrációknál, mind a négy kísérleti csoport esetében;
a 7. ábrán az immunizált egérből, származó .1 épsejtek HBsAg specifikus CTL aktivitását mutatjuk be; az effektor sejtek aktivitására a P315 sejtek (üres kör),· illetve az s-trsnszfektált P815 sejtek (telt kör.) lCr kibocsátása alapján következtettünk;
a 3. ábra a HBsAg specifikus antitest válasz mutatja immunizált egérben; a specifikus antigén literek (SU/ml) és az ízotipns profilok kiértékelése ELISA technikával történt; a táblázatban a gyűjtött szérum adatai szerepelnek, az izotípus eloszlásokat grafikusan is ábrázoltuk;
a 9. ábrán az immunizált egérből származó lépsejtek HBsAg és gpl20 specifikus límfoproliferáciös aktivitása látható; az antigén specifikus aktivitást Sí-ben adtuk meg a különböző antigén koncentrációknál, mind a négy kísérleti csoport esetében;
a lö. ábrán az immunizált egérből származó lépsejtek HBsAg és gpl20 specifikus CTL aktivitása látható; az effektor sejtek aktivitására a. kontroll P815 sejtek (üres jelek), illetve az s-transzfektáit P815 sejtek (telt jelek) wCr kibocsátása alapján következtettünk;
a 11. ábrán a gpl2G és HBsAg specifikus antitest válasz látható, immunizált egérben; a specifikus antigén titerek (ug/mi, 11A ábra) és az izotípus profilok kiértékelése ELISA
X » Φ sX ·$·
Φ ΦΧχ X * * ·* φ Φ χχ * *Φ **ϊ Χχ» XV technikával történt; η táblázatban e gyűjtött szérum, adatai szerepelnek, az izotípus eloszlásokat grafikusan is ábrázoltuk; a 11B ábra a gplzü specifikus antitestek izotóp mintázatát mutatja;
a 12, ábra az átlagos tumornövekedés alakulását mutatja az idő függvényében, csoportonként 10 állatban.
A következő példák a találmány jobb megértését szolgálják, anélkül azonban, hogy annak tárgykörét csapán ezekre kívánnánk korlátozni.
1.példa: Q821 és CpG alkalmazása Bipo-OspA elleni azisstémás antitest válasz előidézésére intranazális megerősítő iwBuniséi ássál
Ebben példában azt vizsgáltak mag, hogy a lítikus hatású szaponinok, igy a QS21 és az immunstimulánsok, igy a CpG képesek-e szinergetikus módón fokozni az intranazális megerősítő vakuinálásra adott szisztémás immunválaszt egérben.
Nyolchetes nőstény Salb/c egereket (csoportonként 5 állat} intramnsakulárisan immunizáltunk timsöval (50 gg) formuláit Lipo-OspA (1 pg) alkalmazásával. Három hónap elteltével az egereket érzéstelenítés mellett intranazális megerősítő kezelésben részesítettük, A kezelést 10 pl térfogatú oldattal (orrlyukanként 5 pl, pipettával becseppentve), mely 5 pg LipoQspA. antigént tartalmazott a következő összetétel mellett: A; FBS; B: 20 pg CpG 1001 (TCC ATG AGC TTC CTC ACC TT, Hrieg 1826); C: 5 ug QB21 (Cambridge Bioteoh, GCA); D; 20 ug CpG iOöl e 5 ug QS21; illetve H; timsérs (50 ug) abszorbeált 1 pg Idpo-OspA intramuszkalárisán injektálva. Az 1. és 2, ábra mutatja az ösp.A specifikus IgG illetve LA2 litereket 14 nappal az orron át végzett megerősítő immunizálás után.
η.
<59
S 9 9
Abdaterek
A z QspA spéci .f .1 kos A^ÉFrfLA/ff mérése egérben Bú ISA t e eh « i k á va J
Mexisorp Munc mlkrotlter lemezeket bevonattal .látunk el, 4 *C hőmérsékleten, egy éjetekén át kezelve őket mélyedésenként 50 pl térfogatú, 1 ug/ml koncentrációjú# BBS pufíerrel készitett QspA oldattal <a lemet S - H soraiban)# illetve mélyedésenként 50 μΐ térfogatú, 5 jig/ml koncentrációjú, FBS oldattal készített egér elleni kecske IgG (Boehringer) oldattal Ca lemet A sorában)< A lemet szabad helyeit 1 téri.5 BSA, 0,1 tériké poiioxi-etilén-szorbitán-monoiaurát (Tween 20) és 4 tértté normái marhaszérum (NBS) tartalmú BBS telítés! puffer alkalmazásával <1 éra, 37 *C) blokkoljuk» £rután kétszeres sororathigitást készítünk az IgG elegyekből, a telítési puffer felhasználásával (50 pl/mélyedés). Standard sorozatként a lemet A. sorát (monoklónális egér IgGl, IgGza és lgG2b keveréke, Sigma, 200 ng/ml koncentrációval kezdve) használjuk, a szérum mintákat a B ~ n sorokba mérjük be (1/100 hígítástól kezdve) . A lemezeket másfél órán ét 3? *C-on ínkubáljuk. Ezután a lemezeket mosőpnfferrel. (0,1 térf,% poiioxi-etilén-szorbitán-mono· 1 aurát (Tusén 20] tartalmú BBS) háromszor mossuk, majd a mélyedésekbe 50 ul térfogatú, telítési, pufíerrel 1/5000 arányban hígított# biotinizált, egér elleni kecske IgG oldatot mérünk, A lemezt másfél érán át 3? S!C-on Ínkubáljuk, majd háromszor mossuk, és sztreptevidin-torma peroxidáz konjugátumot (Amersham) adunk hozzá. Ezután a lemezeket ötször mossuk# majd mélyedésenként 50 pl térfogatú előhívó pufíerrel (0,4 mg/ml ÓBBA (Sigma) és 0,03 tdm.% n/A, 50 mM pKM,5 eitrátpufferben) 20 percen át szobahőmérsékleten inkúbáljnk, At előhívást 2 n kénsav (50 pl/mélyedés) hozzáadásával leállítjuk, és az optikai denzitást 492 és 630 run hullámhosszon, Biorad 3550 készülék segítségével leolvassuk. Az antitest titereket SoftMaxPro szoftver alkalmazásával, a négyparaméteres matematikai módszerrel számítjuk' ki.
A szérum £-A2-szeri?, Llpo-OspA elleni antitest ti terének mérése inhibiciős mégha tárcsással
A vakcináit szervezetekben mérhető antitest titereket vizsgáltuk, LA2-szerö spécitírásukat illetően. Az LA2 egy monoklonális egér antitest, amely felismeri a konformációs OspA epitopot a baktériumsejtek felszínén, és kimutatták, hogy in vitro képes elpusztítani a Sorrelia óurgdorferí sejteket, valamint alkalmas arra, hogy megvédje az egereket laboratőriumban tenyésztett spirochétákkal szemben [Schaible, U.E. et ai,, Proc. kata. Acad. Sci, dSA, 87, 3768-3772 (1390}], Ezen túlmenően azt is kimutatták, hogy a LA2 mab korrelációt mutat a baktericid antitestekkel, sőt humán szérummal végzett kísérletek so ráír az is megállapítást nyert, hogy jő korreláció van a teljes anti-OspA IgG bitet és a LA2 ti tér között (ELISA mérések) ,
Maxisorp Nunc míkrotiter lemezeket bevonattal látunk el, °C hőmérsékleten, egy éjszakán át kezelve őket mélyedésenként 50 pl térfogatú, 0, 5 pg/mi koncentrációjú, PBS pufferrei készített OspA oldattal. A. lemez szabad helyeit 1 tér.f.% BSA, 0,1 térf.% polioxi-etilén-szorbítán-monoiaurát (Tween 20} és 4 térf,% normái marhaszérum (NBS) tartalmú PBS telítési puffér alkalmazásával· (100 ul/mélyedés, 1 óra, 37 °C) blokkoljuk. Ezután kétszeres sorozathígítást készítünk a LA2 monoklonális antitestből (mAb) a telítési puffér felhasználásával (50 pl/mélyedés), 4 ug/ml koncentrációtól kiindulva, hogy standard gör-
bét vegyünk fel, A vakcináltaknől származó szérum mintákat {1/10 hígítástól kezdve} is bemérjük, majd a lemezeket 2 órán át 37 ®C~on inkubáljuk. Ezután a lenieteket mosópufferrel {0,1 tértié polioxi-etiién-szörbitán-monoiaurát (Tuson 20] tartalmú BBS) háromszor mossuk, majd a mélyedésekbe 50 ul térfogatú, telítési pufferrel 1/10000 arányban hígított, XA2 mAb-perosídáz konjugátumot mérünk. A lemezeket egy órán át 37 ®C~on inkubáljuk, majd ötször mossuk, és mélyedésenként 50 pl térfogatú előhívó pufferrel (0,4 mg/ml ΟΒΠΑ (Sigmaj és 0,03 töm.% H2Oj, 50 sál pH™4,5 citráfcpufferben) 20 percen át szobahőmérsékleten {sötétben} inkubáljuk. A reakciót és szlnképzoöést 2 n kénsav hozzáadásával leállítjuk, és az optikai denzitást 492 nm és 530 nm hullámhosszon, Biorad 3550 készülék segítségével leolvassuk, A Lhá-szerú antitest főtereket SoftMaxP.ro szoftver alkalmazásával, a négyparaméteres matematikai módszerrel számítjuk ki, h XAk-szerú antitest titereket a standardgörbével Összehasonlítva határozzuk meg.
nrerérények
Mind a Cpó, mind pedig a QS21 jelentős mértékben fokozza az intranazáiis megerősítő vakcinálás hatására bekövetkező, Lipo-OspA elleni szisztémás antitest választ. Ezen túlmenően sikerült világosan bebizonyítani, hogy a két adjuváns kombinálása szinergetikue hatást eredményez az immunválaszokban, különösen a 1A2 antitesteket illetően, A humorális immunválasz előidézése jelentősen erőteljesebb QS21 és CpG alkalmazásakor, mint a parenteráiísan végzett megerősítő immunizálás esetén. Mindezek az eredmények egyértelműen megmutatják a lítikus hatású szaponin és az immunstimuláns kombináeiőjábői áiiő intranazális készítmény hatékonyságát.
2.. pcUdap S^ínergetikus hatású QS21 ás CpG kombináció az intranazáXis megerősítő wkcináXás eredményeképpen bekővetkeaő, influenzavírus elleni azisztémás antitest válasz fokozására
Ebben példában azt vizsgáltuk mag# hogy a hemolitikus hatású szaponínok# igy a QS21 és az immunstímulánaok# igy a CpG képesek-e szi.nerget.ikus mődon fokozni az intranszális megerősítő vekcinélásra adott szisztémás immunválaszt olyan egérben# amelynek első immunizálását intranazálisan végeztük, teljes influenzavírussal.
Nyolchetes nőstény Balb/c egereket (csoportonként lö állat) insranazállsan immunizáltunk β-propiolaktonnal inakti.vált trivalens teljes influenzavírus {A/Beijin.g/2Sz/S5; A/Johannesburg/33/94; B/Panama/éa/Bö; S pg HA/törzs) alkalmazásával, hogy imitáljuk az embereknél előforduló természetes első immunizálást. 28 nap elteltével ar egereket érzéstelenítés mellett intranazália megerősítő kezelésben részesítettük. A kezelést 20 pl térfogatú oldattal (orrlyukanként lö pl, pipettával becseppentve), mely 1,5 pg BA/törzs β-propíolaktonnai inaktivált trivalens teljes influenzavírust (ugyanazok a törzsek, mint az első immunizálás során) tartalmazott a. következő Összetétel mellett: A: PBS; B: 50 ug CpÖ (TCC TCG TTT TGT CGT TTT GTC GTT, Krieg 2006); C: 4# 5 pg QS21 (Cambridge Bioteeh, USA); D: 50 p.g CpG e 4,5 pg QSzl; illetve E: 1,5 ug BA/törzs trivalees hasított influenzavírus (ugyanazok a törzsek, mint az elad immunizálás során) intramuszkulárisan injektálva. Az influenza antigének az BSD GmbH. (Breaden, Bametórazág) termékei.
A 3, és 4. ábra mutatja a szérűmben mért influenzetörzs specifikus lgG, illetve hemagglnbináeiőt gátlás! (HAH fcltereφ φ φ φ φφ φφ »'* φφ két 14 nappal az orron át végzett megerősítő immunizálás után. Módszerek
Az «nti -in/Ί qenza_ IgG mérése egérben EfISA technikával •fexisorp Nőne mikrotiter lemezeket bevonattal látunk el, °C hőmérsékleten, egy éjszakán át kezelve őket lyukanként 50 pl térfogatú, 1 pg/ml koncentrációjú, PBS pufferrel készített teljes influenzavírus antigénnel (a lemez 3 - H soraiban) , illetve mélyedésenként 50 pl térfogatú, 5 pg/ml koncentrációjú, PBS oldattal készített egér elleni kecske IgG (Boehringer) oldattal (a lemez A sorában). A lemez szabad helyeit 1 térf.% BSA, 0,1 térf.% polioxi-eti lén-szorbi tánmonolaurát (Tween 20) és 4 térf.% normál marhaszérum (NBS) tartalmú PBS telítési puffer alkalmazásával (1 óra, 37 °C) blokkoljuk. Ezután kétszeres sorozathígítást készítünk az IgG elegyekből, a telítési puffer felhasználásával (50 p.1/mélyedés) . Standard sorozatként a lemez A sorát (monoklonális egér IgGl, IgGla és IgG2b keveréke, Sigma, 200 ng/ml koncentrációval kezdve) használjuk, a szérum mintákat a B - H sorokba mérjük be (1/100 hígítástól kezdve). A lemezeket másfél órán át 3? °C--on inkubáljuk. Ezután a lemezeket mosópufferrel (0,1 térf.% poiioxí-etilén-szorbitán-monolaurát [Tween 20) tartalmú PBS) háromszor mossuk, majd a mélyedésekbe 50 pl térfogatú, telítési pufferrel 1/5000 arányban hígított, biofcínizált, egér elleni kecske IgG oldatot mérünk. A lemezt másfél órán át 37 °C-on inkubáljuk, majd háromszor mossuk, és sztreptavídin-torma peroxidáz konjugátumot (Amersham) adunk hozzá. Ezután a lemezeket ötször mossuk, majd mélyedésenként 50 pl térfogatú előhivő pufferrel (0,4 mg/ml ΟΡΠΑ (Sigma) és 0,03 töm.% HjO?., 50 mM pH-4,5 citrátpufferben) 20 percen át
X Φ » * X» Ψ *
X * ♦ X
χ. ♦ ί> > * *
X X « « * * s* *
X* *Χ Ψ* ♦» szobahőmérsékleten inkubáljuk. Az előhívást 2 n kénsav (50 pl/mélyedés) hozzáadásával leállítjuk, és az optikai denzitást 492 és 630 nm hullámhosszon, Biorad 3550 készülék segítségével leolvassuk. Az antitest titereket SoftMaxPro szoftver alkalmazásával, a négyparaméteres matematikai módszerrel számítjuk ki. A bevonat készítése során használt, 5™propiöiaktonnal inaktivált teljes influenzavírus (Λ/Be.ijing/ /202/05 törzs) az SSD GmbH. (Dresden, Németország) terméke.
Az iníluenzaspéciAlkus.hemaggJufclnác.iöt gátiö ak t i vi t á aa egér szer umban
A szérumot (25 pl) először 20 percen át szobahőmérsékleten 100 pl térfogatú 0,5 M borátpuffarral (ph~:9) és 125 gl kaolinnal (forgalmaző; Dada Behring) kezeljük. Centrifugáién (30 perc, 3000 rpm vagy 860 gj után a feiüiúsxőboi (mely a szérum 1/10 arányú hígításának felel meg) 100 pl térfogatú mintát veszünk, melyet 0,5 térf.% töménységű csirke vörösvérsejt szuszpenzlóval 1 érán át 4 *C hőmérsékleten inkubálunk. Ezután az elegyet 10 percen át centrifugáljuk (3200 rpm vagy 070 g) , majd a felüiűszőt elválasztjuk. Mindkét műveletet a szérumban lévé természetes hemagglufcinálő faktorok eltávolítása érdekében végezzük el. Ezután a kezelt szérum feiűlüszőjábél 25 pl térfogatú mintát veszünk, melyből 25 pl BBS oldattal kétszeres sorozathigitást készítünk (1/20 hígítástól indulva) 96 mélyedésen mikrotiter lemezbe mérve. A mélyedésekbe 25 pl térfogatú, 4 hemaggintinációs egységnek megfelelő mennyiségű β-propiolektonnal inaktivált teljes influenzavírust mérünk be (vagyis olyan hígításban, amely négyszer megelőzi az utolsó, a vdrösvérsajtek agglutinációját még előidéző hígítást), majd keverés közben 30 percen át szobahőmérsékleten inkubáljuk.
Ezután csirke vörösvérsejteket adunk hurrá (25 μΙ/mélyedés}, és az inkubáláet további X órán át folytatjuk. Végül a leolvasás alött az elegyet egy éjszakán át 4 ®C hőmérsékleten tartjuk. A KAI fciter as utolsó olyan széruuhigitásnsk felel meg, amely még gátolja a vírusindukált hemagglutináciőt.
essuluéryeá
Sem. a CpG, sem pedig a QS21 nem fokozza az intranazális megerősítő vakcináiás hatására bekövetkező, influenzavírus törzsek elleni IgG vagy HA.1 antitest választ. Abban az esetben azonban,· midőn a két aőjnvánst kombináltuk# egyértelműen kimutatható volt a fenti immunválaszokra gyakorolt szinergetikns hatás. Sőt a QSzl és CpG jelenlétében előidézett HM válaszok hasonlóak a parenterális megerősítő immunizáláskor tapasztalhatókhoz. Ezek az eredmények igazolják a hemolitikus hatású szaponin és az immun stimuláns kombinációjából, állő intranazái.is készítmény hatékonyságát. Az eredmények arról is tanúságot tesznek, hogy több CpG szekvencia is hatásos lehet ebben a tekintetben (Krieg 2006 ebben a példában, Krieg 1826 a 3. és 5. példában).
Ezlnergetikua hatású β-escin és CpG kombináció az intranazális megerősítő vnkclnálás eredményeképp bekövetkező, bipe-OepA. elleni szisztémám antitest válasz fokozására.
Ebben a példában azt vizsgáltuk meg, hogy létezik-e a QS2X és a CpG között megfigyeithez hasonló szinergizmus más hemolitlkns hatású szaponinok, igy például a Ú-escin esetében is. A glioirrhizinsavafc, egy nem hemoiitikas hatású szaponint is kipróbáltunk.
Nyolchetes nőstény Salb/c egereket (csoportonként á állat) inttamusskulárisan immunizáltunk timsőval (50 pg) formuláit Lipo-OspA {1 ng} alkalmazásával. Három hónap elteltével az egereket érzéstelenítés mellett intrsnazális megerősítő kezelésken részesítettük, A kezelést 10 ul térfogatú oldattal (orrlyukanként 5 pl, pipettával becseppentve), mely 5 pg LipoOspA antigént tartalmazott a következő összetétel mellett: A: PBS; Βί 50 pg CpG 1001 (TCC ATG ACC TTC CTG ACG TT, Krleg
1820)? C :; 5 pg β-escin (Sigma) ; D: 50 pg CpG 1001 z 5 gg
β-escxn; E ? 5 μ g giicirrhízinsav; F; 50 pg CpG 1001 ·;· 5 pg
giicirrhízinsav; isietve G: timsőra (50 adsz orbeált 1 pg
Lipo-OspA íntramuszkuiárisan injektálva. Az 5. ábra matatja az OspA specifikus LA2 titereket 14 nappal az orron át végzett megerősítő Immunizálás után.
Módszerek
Az alkalmazott mérési módszereket az 1. példa részletesen ismerteti.
eredmények
A β-escin és a CpG ssínergetikusan működnek as íntranazális megerősítő immunizálás által kiváltott szisztémás LA2 antitest válaszreakció fokozásában, Sz a kombináció nagyobb mértékű antitest Ixamunváiaszt idéz elő, mint a parenterálís megerősítő immunizálás. Másrészről viszont ilyen szinergízmus nem volt megfigyelhető a CpG és a giicirrhízinsav kombinált alkalmazása esetén.
Szaki as a korábbi példákban kapott adatok azt mutatták, hogy a CpG és különböző hemolitikus hatása szepesinek kombinációja képes adjuváns ként szinergetikus módon fokozni az iísmunválaszt.
β * * φ φ * * X Φ χ X Φ » * * > φ» ΦΧ X « «
Λ * φ 5 < > » '
4. példa£ Insnunogenitásí vizsgálatok CpG és/vagy DQS21 fölhasználásával formuláit P. falciparuta RTS,S és HIV-1 gp!20 alkalmazásával
Két immunogenitási kísérletet végeztünk egereken annak érdekében, hogy kiértékeljük a CpG oligonukleotidok (CpG; és a QS2I potenciális additív vagy szinergetikus hatását. Az egyes csoportokba tartozó egereket CpG és QS21 külön-külön, illetve ezek kombinált alkalmazásával formuláit RTS, 5 és gpi20 antigénekkel immunizáltunk. Ezeket az adjuváns kombinációkat aluminium-hidroxid hordozó, illetve olaj-a--vízben típusú emulzió jelenlétében is kipróbáltuk.
A készítmények immunogenicitását két parenterális immunizálás után vizsgáltuk. A kezeit állatok szérumában mértük az antigén specifikus antitestek jelenlétét, valamint az antigén ízotípusok eloszlását. A sejtek által közvetített immunválasz kiértékelésére lépsejteket használtunk. Ezek között a sejtek között megvizsgáltuk a citotoxikus T-limfociták (CTL; és a límfoproliferatív sejtek jelenlétét.
1. táblázat: Egerek csoportosítása az 1. kísérletben
Csoport Antigén Adjuváns
1 RTS,S/gpl20 CpG/DQS21
RTS,S/gpT20 DQS21
3 RTS,S/gpl20 CpG/DQS21/Al(OH;3
4 RTS, 5/gp'120 CpG/ΑΙ(OH)3
2. táblázat: Egerek csoportosítása az 2. kísérletben
Csoport Antigén Adjuváns
1 RTS,S/gpl20 CpG
··) RTS,S/gpl20 CpG/DQS2I
3 RTS,S/gpl20 CpG/QS21/o/v emulzió
Készítmények
K kísérlet
A készítményeket a felhasználás előtt három nappal készítettük el, valamennyi injektálás esetében. Szükség esetén az RTS,S (10 μα) és a gpl20 (10 pg) antigéneket 100 pg alumíníumhidroxidon adszorbeáltattuk, Szükség esetén MPL (5 pg) adjutánst adtunk hozzá, és 30 percen át Ínkubáltuk a puffer hozzáadása előtt, mely tízszeres töménységű BBS (pH™7,4) és víz elegyéből állt. Kivételt jelent ez alól a DQ -nélküli csoport, melynél a felhasznált puffer Pö«, Kati 10/150 (pH~6,8) volt. 30 perc elteltével, szükség esetén 5 pg QS2.1 szaponint adtunk a készítményhez líposzőmákkal keverve (QS2X/koleszierín 1/5 tömegarányban, jelzése DQ) . 30 perccel később az oligonukleotidos készítményekhez 100 pg CpG oligonukleotidot adtunk, majd újabb 30 perc múlva 50 pg/ml tiomerzál konzerválőszer hozzáadáséval stabilizáltuk a készítményt.
At(öH)s -f RTS,S t gpl2() ló - MPL ~ 30p ~ premix ~30p ~~ DQ - 30p -· CpG - 30p - Tio
Vei amennyi inkubálást keverés közben, szobahőmérsékleten végeztük.
2. ki s érdet
A készítményeket mindkét injektáláshoz egyszerre állítottuk elő. Az egyes egerekbe injektált térfogat 100 pl volt. Konzerváiösserként tiomerzált alkalmaztunk, 50 pg/ml koncentrációban.
1« csoport: Az RTS,S (10 pg) és gpX20 (10 pg) antigéneket vízzel ás PBS (pH:«6,8) oldattal izotóniásra hígítottunk. öt perc várakozás után a készítményt CpG 1856 olígonukleotidon (100 pg) adszorbeáltattuk.
2. csoport: Az RTS,S (10 pg) és gpl20 (10 pg; antigéneket vízzel és PE3 (pH:-7, 4) oldattal izotóniásra hígítottunk. 30 perc elteltével az RTS,S es gpl2C; antigéneket DQ (5 pg) líposzómán adszorbeáltattuk. 30 perc várakozás után a készítményt CpG 1856 oligonukieotidon (100 pg) adszorbeáltattuk.
3. csoport: Az RTS,5 (10 pg; és gpl20 (10 pg) antigéneket vízzel és PBS ípH-6,8; oldattal izotóniásra hígítottunk. 5 perc elteltével a készítményt olaj a vízben típusú emulzión adszorbeáltattuk, majd újabb 5 perc várakozás után a készítményt QS21 szaponinon (5 pg) adszorbeáltattuk, végül hozzáadtuk a CpG oligöPPkleotidot (100 pg)„ immunológiai jpdózerek
Csoportonként kilenc (Baifo/c x C57B1/6) Fi egeret immunizáltunk a hátsó lábuk talprészébe adott 2 x 50 pl vakcinával, a kezelések között kéthetes intervallumot hagyva. Két hét elteltével az állatok szérumából mintát vettünk az antitest válaszreakció értékelésére, lépsejtjeiket pedig a sejtek által közvetített immunválasz meghatározására használtuk fel.
A 1imfoproliferáciős analízishez a sejteket négy párhuzamosban 36 mélyedéses gömbölyű fenekű mikrotiter lemezre vittük 2 x 10‘Vml koncentrációban. A sejteket 72 vagy 96 órán át antibiotikumokkal, glutaminnai és 1 térf.% normái egérszérummal, kiegészített RPMI-1640 tápközegben tenyésztettük, különböző koncentrációjú R?S,S, illetve gp!20 antigén jelenlétében. A kontroll sejteket antigén nélkül tenyésztettük. Ezután a sejteket egy éjszakán át 1 pCi/lyuk aktivitású [3H]-timidinnel púi zártuk, majd kinyertük, és a beépült radioaktivitást bétaszámláló segítségévei meghatároztuk. Az eredményt percenkénti átlagos beütésben (cpm) fejeztük ki.
A CTL analízishez a sejteket 7 napon át 6 mélyedéssé lemezen 10 pg/ml koncentrációjú pCMl'003 szintetikus peptid (l'PQ SLDSWWTSL} , amely megfelel egy HBsAg CTL epitöpnak íSchirmbeck et ai. , 1995], vagy pCM'1'00? peptid (GTHTGPGBAFYAARK) , amely egy gp!2O CTL epitopot reprezentál [Caseroent et ai ., 1995], jelenlétében tenyésztettük, A tenyésztés befejeztével az effektor sejteket HBsAg specifikus eltolitikus aktivitásuk alapján, a standard [‘uCr]-kibocsátásos technikával, kontroll, illetve S-transzfektált P815 sejtek felhasználásával, két párhuzamosban meghatároztuk, A gpl20 specifikus citotoxícitást kezeletlen, illetve pali007 pepiiddel 1 órán át pulzáltat ?815 célsejtek felhasználásával határoztuk meg, A minimális és maximális mértékű kibocsátást az efíektorsejtek nélküli célsejtek esetében, illetve 3 térf.% Triton X-100 hozzáadása esetén mértük, Az eredményeket %-os [51Cr]-kibocsátásként adtuk meg: (kísérleti tenyészet cpm - spontán kibocsátás cpmj/(maximális kibocsátás cpm - spontán kibocsátás cpmj.
A gyűjtött szérum títrálását és izotipizálását standard enzimkapcsolt inununcszorbens kimutatással (ELISA) végeztük, HBsAg antigénnel bevont mikrotiter lemezek felhasználásával, A szérumot PBS/BSA oldattal hígítottuk, 1:400 aránnyal kezdve. A megkötött antitestek kimutatását biotinizáit Ig-re vagy IgGl, IgG2a és IgG2b izotipusokra specifikus másodlagos antitesttel, majd torma peroxidáz-sztreptavidin konjugátummal végeztük. Az EL1SA- litereket referencia alapján, SoftmaxPro szoftver segítségével számítottuk ki, és EL1SA egységben (EU/ral) adtuk meg, A gpl20 specifikus antitest titereket standard EL1SA technikával, gpl20 antigénnel· bevont mikrotiter lemezek felhasználásával vettük fel. A szérumot PBS/Tween 2Q/3SA oldattal hígítóttűk, 1:100 aránnyal, kezdve. A megkötött antitestek kimutatását bíotínisált lg~vel vagy I'gGl, lgG2a és IgG2b specifikus másodlagos antitesttel, majd torma peroxidáz-sztreptavidin konjugátummal vettük fel. A Litereket egér ímmunogiobulin standardra vonatkoztatva számítottuk ki, és ug/ol egységben adtuk meg. Eredmények
Ar első kísérletben a limfoproliferációs analízis nem mutatott ki semmilyen szignifikáns eltérést ar RTS,S antigénnel szembeni reaktivitásban az egyes csoportok körött. Ezzel ellentétben, az 1. és 3. csoport, melyeknél a kezelést CpG és DQS21 kombinációjával végeztük, jobb gp!20 specifikus limíoproliferációs válaszreakciót adtak, mint a CpG olígonukleotóddal, illetve DQS21 szaponinnal külön kezelt csoportok (6. ábra) ,
Ebben a kísérletben csak a HBsAg specifikus CTL mérésére került sor, A CTL indukció tekintetében nem volt hangsúlyos különbség az 1, és 3. csoport, amelyek CpG és DQS21 kombinációt kaptak, illetve a 2. és 4. csoport között, melyek csak a két adjuváns komponens egyikét kapták. Érdekes módon a CpG és DQS21 kombinációjával kezeit 1. csoportnál megfigyelt CTL aktivitás alumínium-hidroxid jelenlétében, elenyészett (7. ábra;. Látható volt mindenesetre egy olyan trend, mely szerint a CpG és DQS21 kombináció jobb volt, mint a DQS21 egyedül, és a kombináció nagyobb CTL aktivitást idézett elő alumínium-hidroxid jelenétében, mint a CpG egyedül alkalmazva (7. ábra).
Az egerek humoráiis immunválaszát illetően csak a HBsAg specifikus antitestek jelenlétet vizsgáltuk. A Literek hasonlók voltak valamennyi csoportban, kivéve a 3. csoportot, amely mintegy háromszoros emelkedést mutatott, igazolva ezáltal, hogy as aiuminium-hidroxid. jelenlétében a CpG és DQS21 kombinációja immunogénebfo, mint a CpG egyedül alkalmazva (8. ábra). Az izotípus eloszlás hasonló volt as alumínium-hidroxidot tartalmazó készítménnyel kezelt 3. és 4. csoportban, míg as alumínium-hidroxidot nem tartalmazó készítménnyel, kezeit csoportoknál a CpG és DQS21 kombináció erőteljesebb Tm-szerű ízotípus mintázatot, idézett elő, mint a DQS21 egyedül alkalmazva (8. ábra}.
A második kísérletben as RTS,S és gpí.20 antigénekre adott specifikus limfoproliferációs válasz nagyon hasonló volt. Az adatok azt jelzik, hogy a DQS21 szaponin alkalmazása (akár egyedül, akár olaj-a-vízben típusú emulzióval együtt adva) mindkét antigén esetében fokozza a limfoproliferációs választ •9, ábra).
A CTL válaszokat mind HBsAg, mind pedig gp!20 CTL epitóp peptid alkalmazásával értékeltük. Mindkét esetben kimutatható volt CTL az immunizálás után. az 1, csoportnál, melyet egyedül CpG oligonnkleotid adjutánssal kezeltünk (10. ábra). A DQS21 hozzáadása viszont a CTL számottevő emelkedését eredményezte mindkét antigén esetében (10. ábra). Az olaj-a-vizben típusú emulzió jelenléte vagy közömbösítette a DQS21 (gpi20s pozitív hatását, vagy pedig növelte az in vitro vizsgálati módszer hátterét (HBsAg).
A HBsAg és gpl2Ö antigénre adott antitest válasz fokozódott, midőn a CpG adjuvánshoz DQS21. szaponint adtunk (HA ábra) . További emelkedést figyeltünk meg, amikor olaj-a-vízben típusú emulzió is jelen volt a készítményben (11A ábra). A DQS21 szaponint hozzáadva a CpG olíqonukleotidhoz a gpl20 izotípus eloszlás eltolódását tapasztaltuk hangsúlyozottabb T$n » · ρ* **>e * ·> * fc o * .$· > * * * «•fc Sxfc «-fc irányba Í11B ábra)# rnig a HBsAg izotípus profilokra gyakorolt hatás kevésbé volt jelentős ebben, a kísérletben,.
Következtetések
A példában ismertetett két kísérlet adatai alapján megái lapítható, hogy a CpG olígonakleotid és DQS21 ssáponin kombinációjával formuláit RTS#S és gplkö antigénekkel végzett immunizálás erős antigén, specifikus immunválaszt eredményez. A CpG és DQS21 adjuváns komponensek kombinációja az egyedi komponensek alkalmazásához képest « erősiti a 1imfoproliferációs választ;
♦ növeli a CTI aktivitást; és • fokozza az antitest títert és a izotípus mintázatot,
S, példa: A CpG és/vagy DQS21 készítmények terápiás hatékonysága TCX tumormodal Xban
- lő CS7bl/8 egeret négy csoportba osztottunk# és 10* (200 pl) TCl sejttel. (S7 expresszáiő tumorsejtj kezeltük szubkután# a tarokba adva. Ezután 14 illetve 21 nappal az egereket immunizáltuk a talpukba injektált# 5 μα PD1/3E7 BPV16 antigént tartalmazó készítménnyel,
A kísérleti csoportok:
1. Nem vakcináit
2. PD1/3E7 é CpG (10 pg GDh 2006)
3. FD1/3E7 e DQS2I (0#5 pg)
4. PD1/3S7 + CpG v DQS21
A tumornovokedést valamennyi kísérleti állatnál hetente kétszer megmértük.
Késnitmények
A készítményeket az injektálás- napján állítottuk elő. Az injektált térfogat az egyes egereknel 100 pl volt. Szükség ü b % ί* esetén a BD1/3C7 antigént vízzel és BBS (pü-7,4) oldattal. izotöniásra hígítottuk, öt perc elteltével, szükség esetén, llposzómákkal kevert 0,5 pg QSzl szaponlnt adtunk a készítményhez, QS21/koIeszterin 1/5 tömegarányban (jelzése DQ) . 30 perccel kesébb az olígonukleotidos készítményekhez 10 gg CpG (Óbb 2005} olígonukXeotidot adtunk, majd újabb 30 perc múlva 1 ug/ml tlomerzál konzerválészer hozzáadásával stabilizáltuk a készt tményt.
IpO a PBS(pn-7,4) e Pbl/3£7 - 5p s DQ - 3Öp é CpG - 30p - Tle .gredtieryak á 10 állatot tartalmasé csoportokban megfigyelt átlagos tumorai? ve kedés időbeli alakulása a 12« ábrán látható. A 100 TC1 tumoraejttel kezeit állatok 100%-ában progresszív tumornövekedés indult meg. A 35. napra elpusztult azoknak az állatoknak a 70 - 80t-a, amelyek nem részesültek vakcinaiáéban, illetve £7 a DQG21 vafcoináiast kaptak. A PQS21 adjnvánssal formuláit E? fehérjével végzett két vakcinálás szinte teljesen hatástalan volt a ttmornövekedésre. Ezzel ellentétben a CpG adjnvánssal formuláit D-fehérje(1/3) £7 HPVIO antigénnel végzett kétszeri. (14, éa 21. nap} IFr vakcinálás a már kialakult tumor visszafejlodését idézte elé, és megóvta az egereket a pusztulástólí a 35. napon az igy kezeit állatok 70 - OOá-a még életben volt, a kétféle irnrnunstímuláns, a CpG és BQS21 kombinációja egy árnyalattal, kedvezőbb hatású volt, mint a CpG egyedül alkalmazva.
SBEKVENCIALTSTA
ΧΦ.χφ φφ- ΦΨ ' * * *· *
X- Λ,Φφί Α ψ φ χ- χ χ * *
-φφ φφ φβφ <ΧΧδ> Frieds,· HartXn
Garssw# a&ath&Xie
A.Av^A'ÍA&Í' «Χ2δ» .Adísmtat fssrwl&fcíon
«Χ30» B4SXSX
.·>ί ίΟ Λ'ίφ. $£
χ*
«270» Fa»€M0 £'ο« M&dow versien 3. δ «
«2X0» X
«2ΧΧ» 20
,$-; Φ?» Α. Φ··>· OAA
«2X3» Oexscn
«400» X
tccatg&egfc tcset^aegfet 30
«2X0» «ί·
«2 XX» 10
«2X2» 0«.
«2X3» H'zsian
«400» ”φ Αν
tet «2X0» 3 «2X2» 30 «2X3» Oesssa «400» 3 asx^stgacg tegccsggtga eggeace «2Xö> 4 «2X1» 24 «2X2» 88&
«2X3» StM&n «400» 4 φν .v,.'svsv Λ·ΛΚφ.·.Λ>-·^φΛ ZvA* \*Χ .ν\·9>' Φ* ί* Φ1 ,ΦΧ »*φ·ί* -ί·iX^^k.Sí^VrVXs V. Φ# >Φ*Φ»\$ Χ-Λ-^\ί >
«2X0» S
V \V .φ φ, <' «2X2» 20 cm
«2X3» 8uSi.;s.n
«400» Sj
tccMgacgfc fcctg&tgst

Claims (20)

1, Adjuváns készítmény, amely szaponint és immunétimuláns hatású oligonnkleotidofc tartalmaz, ahol a szaponin ISCOM, vagy pedig koleszterinnel és lipiddel formuláit liposzóma vagy olaj-aVízben típusú emulzió formájában, vagy pedig fémsóval vagy chitosannal asszociált formában van jelen.
2, Az 1. igénypont szerinti adjuváns készítmény, amelyben az immunstimuláns hatású oligonukleotld egy purin, purin, C, G, pirimidin, pirimidín szekvenciát tartalmaz.
3« Az 1. igénypont szerinti adjuváns készítmény, amelyben az immunstimuláns hatású oligonukleotld a következő szekvenciák valamelyikével rendelkezik; TCC ATG ACG TTC CTG ACG TT (SSQ ID NO;1}? TCT CCC AGC GTG CGC CAT (SSQ ID NO;2} ? ACC GAT GAC GTC GCC GGT GAG GGC ACC ACG (SGQ ID NO;3} ; TCG TCG TTT TGT CGT TTT GTC GTT (SEQ ID N0;4); TCC ATG ACG TTC CTG ATG CT (SCQ ID NO;5}.
4. Az Ι. igénypont szerinti adjuváns készítmény, amelyben az immunstimuláns hatású olyan oligonukleotld legalább két metilezetlen CG ismétlődést tartalmaz, melyeket legalább 3 nukleotid választ el egymástól.
5. A 4> igénypont szerinti adjuváns készítmény, amelyben az ímmunstimuláns hatású oligonukleotid legalább két metilerétién CG ismétlődést tartalmaz, melyeket legalább
6 nukleotid 'választ el egymástól.
S. Az l5v igénypontok bármelyike szerinti adjuváns készítmény, amelyben a szaponin qullA-származék.
7. A ú< igénypont szerinti adjuváns készítmény, amelyben a quilA QS2X-származék.
8. Az I. igénypont szerinti adjuváns készítmény, amely szaponint és egy Immunstimuláns .hatású, metilezetlen. CpG dinukleotidőt magában foglaló oliggnukleotidot tartalmaz, amelyben a szaponin egy liposzóma formájában van,
9. he l. igénypont ezerinti adjuváns készítmény, amely szaponint és egy immunétimuláns hatású, metilezetlen CpG dinukleotidot magában foglaló olígonukleotidőt tartalma®, amelyben a szaponin olaj-a~vízben típusú emulzió formájában van.
10. Az 1. igénypont ezerinti adjuváns készítmény, amely még féosó részecskéket is tartalmaz.
11. A 10. igénypont szerinti adjuváns készítmény, 'amely fémső részecskékként alumíníum-hídroridot vagy alumínium-foszfátot tartalmaz.
12. Vakolna készítmény, amely valamely az 1-11. igénypontok bármelyike szerinti adjuváns készítményt, továbbá antigént tartalmaz.
13. A 12. igénypont szerinti vakcina készítmény, amely antigén komponensként a kővetkező organizmusból származó anyagot tartalmaz; humán inssunodefioienoía vírus, Varicella zoetsr vírus, Herpoe sizplex vírus 1. típus, Herpes simplex vírus 2. típus, Humán cítomegalovírus, Dengue vírus, Hepatitis A, B, C vagy B, SSV, Humán papilloma vírus, Influenza vírus, Hib, Meningitio vírus, Salmonella, Heisseria, Bőrrella, Chlamydia, Hordetella, Streptocoocus, Hycoplasma, Myoobacterium, Haemophílus, klaamodium ée Toxoplasma fajok; Stanaorth dekapeptid; vagy pedig a kővetkező tumorral asszociált antigének (TAA) valamelyikét tartalmazza? MAGB, BASB, GAöH, MHC-X, Her-2 nen, CBA, PSA, KBA, PRAMB? vagy peptid saját peptid hormont vagy GnBH-t tartalmaz.
14. A 12. igénypont szerinti vakcina készítmény, amely antigén komponensként a kővetkezők valamelyikét tartalmazza? (a) ΡΗΜΑ., PSCA, tirozináz, survivin, ΗΪ-ΗΗΟί, prosztáz, FSIOS, RAGB, IAGB, HAGH tumorral asszociált antigének,* (b) az amiloid prekurzor fehérje N-terminális 39-43 aminosavat tartalmazd fragmense <Ap>; (c) aterioszklerózissal kapcsolatos antigének.
15. A 12-14. igénypontok bármelyiké szerinti vakcina készítmény szisztémás kezelés során történd alkalmazásra.
Iá. A 12-14. igénypontok bármelyike szerinti vakcina készítmény nyálkahártyán át történő kezelés sorén való alkalma-S φ
sásra,
17, A 16, igénypont szerinti vakcina készítmény, amely az adjuváne készítmény komponenseként hemolítikns hatású szaponint tartalmaz,
18, A 12-14. igénypontok bármelyike szerinti vakcina készítmény gyógyszerként történő felhasználásra»
18, Szaponin ás CpG molekula valamely, a 12-18, igénypontok bármelyike szerinti kombinációjának alkalmazása virálie, bakteriális ás parazita fertőzések, valamint allergia, rákbetegség és egyéb krónikus rendellenességek megelőzésére és gyógykezelésére szolgáló vakcina előállítására,
20. Eljárás valamely, a 12-18, igénypontok bármelyike szerinti vakcina készítmény előállítására, azzal jellemezve, bogy szaponint, íntrunsfimuiáns hatású oligonukleotidot és antigént elegyítünk, ahol a szaponint ISCOM vagy egy, koleszterinnel éa lipiddel formuláit líposzőma formájábanr vagy pedig olaj-a-vízben típusú emulzió formájában, vegy pedig férneóval vagy chitosarnal asszociált formában alkalmazzuk.
21. A 20, igénypont szerinti eljárás vakcina készítmény előállítására, azzal jellemezve, bogy (a) szaponint, (b) immunstimuláns hatású oligonukleotidot és (c) antigént elegyítünk, ahol a szaponint líposzőma formájában alkalmazzuk, és cligonukleot iáként egy metilezetlen CpG dinukleotidot magában foglaló oligonukleotidot alkalmazunk,
22. A 28, igénypont szerinti eljárás vakcina készítmény előállítására, azzal jellemezve, hegy (a) szaponint, (h) .immunstimuláns hatású oligonukleotidot ás (c) antigént elegyítünk, ahol a szaponint olaj-a-vízben típusú emulzió formájában alkalmazzuk, és oligonukieotidként egy metilezetlen CpG dinukleetidet magában foglaló oligonukleotidot alkalmazunk.
HU0200815A 1999-04-19 2000-04-04 Vaccines HU229255B1 (en)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
GBGB9908885.8A GB9908885D0 (en) 1999-04-19 1999-04-19 Vccine
US09/301,829 US6558670B1 (en) 1999-04-19 1999-04-29 Vaccine adjuvants
PCT/EP2000/002920 WO2000062800A2 (en) 1999-04-19 2000-04-04 Adjuvant composition comprising saponin and an immunostimulatory oligonucleotide

Publications (3)

Publication Number Publication Date
HUP0200815A2 HUP0200815A2 (en) 2002-08-28
HUP0200815A3 HUP0200815A3 (en) 2004-07-28
HU229255B1 true HU229255B1 (en) 2013-10-28

Family

ID=26315432

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
HU0200815A HU229255B1 (en) 1999-04-19 2000-04-04 Vaccines

Country Status (22)

Country Link
US (4) US6544518B1 (hu)
EP (2) EP1187629B1 (hu)
JP (3) JP2002542203A (hu)
KR (1) KR100922031B1 (hu)
CN (1) CN1227030C (hu)
AT (1) ATE276758T1 (hu)
AU (1) AU764969B2 (hu)
BR (1) BRPI0010612B8 (hu)
CA (1) CA2370697C (hu)
CZ (1) CZ303515B6 (hu)
DE (1) DE60014076T2 (hu)
DK (1) DK1187629T3 (hu)
ES (1) ES2228497T3 (hu)
HK (1) HK1044484B (hu)
HU (1) HU229255B1 (hu)
IL (1) IL145982A0 (hu)
NO (1) NO331688B1 (hu)
PL (1) PL203951B1 (hu)
PT (1) PT1187629E (hu)
TR (1) TR200103018T2 (hu)
TW (1) TWI232753B (hu)
WO (1) WO2000062800A2 (hu)

Families Citing this family (279)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5849719A (en) * 1993-08-26 1998-12-15 The Regents Of The University Of California Method for treating allergic lung disease
US6207646B1 (en) 1994-07-15 2001-03-27 University Of Iowa Research Foundation Immunostimulatory nucleic acid molecules
US20030026782A1 (en) * 1995-02-07 2003-02-06 Arthur M. Krieg Immunomodulatory oligonucleotides
US6429199B1 (en) * 1994-07-15 2002-08-06 University Of Iowa Research Foundation Immunostimulatory nucleic acid molecules for activating dendritic cells
GB2324093A (en) 1996-01-04 1998-10-14 Rican Limited Helicobacter pylori bacterioferritin
US20030078223A1 (en) * 1996-01-30 2003-04-24 Eyal Raz Compositions and methods for modulating an immune response
US6406705B1 (en) * 1997-03-10 2002-06-18 University Of Iowa Research Foundation Use of nucleic acids containing unmethylated CpG dinucleotide as an adjuvant
SI1077722T1 (sl) * 1998-05-22 2007-02-28 Ottawa Health Research Inst Metode in produkti za induciranje sluznicne imunosti
US6693086B1 (en) * 1998-06-25 2004-02-17 National Jewish Medical And Research Center Systemic immune activation method using nucleic acid-lipid complexes
US20030022854A1 (en) 1998-06-25 2003-01-30 Dow Steven W. Vaccines using nucleic acid-lipid complexes
US7049302B1 (en) 1998-08-10 2006-05-23 Antigenics Inc. Compositions of CPG and saponin adjuvants and uses thereof
NZ513935A (en) 1999-02-17 2004-02-27 Csl Ltd Immunogenic complexes and methods relating thereto
EP1154790B1 (en) * 1999-02-26 2004-10-20 Chiron S.r.l. Enhancement of bactericidal activity of neisseria antigens with oligonucleotides containing cg motifs
KR100922031B1 (ko) * 1999-04-19 2009-10-19 글락소스미스클라인 바이오로지칼즈 에스.에이. 백신
US20050002958A1 (en) * 1999-06-29 2005-01-06 Smithkline Beecham Biologicals Sa Vaccines
GB9915204D0 (en) * 1999-06-29 1999-09-01 Smithkline Beecham Biolog Vaccine
ATE306938T1 (de) * 1999-06-29 2005-11-15 Glaxosmithkline Biolog Sa Verwendung von cpg als adjuvans für hivimpstoff
UA77152C2 (en) * 1999-09-25 2006-11-15 Method for stimulation of immune response using nucleic acid-containing immunostimulating compositions, method for treatment of cancer and method for treatment or prophylaxis of allergy or asthma
US6949520B1 (en) * 1999-09-27 2005-09-27 Coley Pharmaceutical Group, Inc. Methods related to immunostimulatory nucleic acid-induced interferon
WO2001051083A2 (en) * 2000-01-13 2001-07-19 Antigenics Inc. Innate immunity-stimulating compositions of cpg and saponin and methods thereof
CA2396871A1 (en) * 2000-01-20 2001-12-20 Ottawa Health Research Institute Immunostimulatory nucleic acids for inducing a th2 immune response
KR100879810B1 (ko) * 2000-02-21 2009-01-22 하. 룬드벡 아크티에셀스카브 아밀로이드의 하향-조절을 위한 신규한 방법
JP5025871B2 (ja) * 2000-02-21 2012-09-12 エイチ．リュンドベック エイ／エス アミロイドの新規なダウン−レギュレート方法
US7129222B2 (en) * 2000-03-10 2006-10-31 Dynavax Technologies Corporation Immunomodulatory formulations and methods for use thereof
US20030129251A1 (en) 2000-03-10 2003-07-10 Gary Van Nest Biodegradable immunomodulatory formulations and methods for use thereof
ES2362715T3 (es) * 2000-03-30 2011-07-12 Dendreon Corporation Composiciones y métodos para inmunoterapia a base de células dendríticas.
CA2420499A1 (en) * 2000-08-25 2002-02-28 Yeda Research And Development Co. Ltd. Methods of treatment or prevention of autoimmune diseases with cpg-containing polynucleotide
HU229642B1 (en) * 2000-10-18 2014-03-28 Glaxosmithkline Beecham Biolog S A Vaccines against cancers
KR100831139B1 (ko) * 2000-10-18 2008-05-20 글락소스미스클라인 바이오로지칼즈 에스.에이. 백신
GB0025577D0 (en) * 2000-10-18 2000-12-06 Smithkline Beecham Biolog Vaccine
EP2189473A3 (en) 2000-10-27 2010-08-11 Novartis Vaccines and Diagnostics S.r.l. Nucleic and proteins from streptococcus groups A & B
WO2002046477A2 (en) 2000-12-07 2002-06-13 Chiron Corporation Endogenous retroviruses up-regulated in prostate cancer
AU2002248185A1 (en) * 2000-12-14 2002-07-16 Coley Pharmaceutical Group, Inc. Inhibition of angiogenesis by nucleic acids
US20040081655A1 (en) * 2001-01-05 2004-04-29 Karen Lingnau Methods and compositions comprising polycationic compounds
WO2002053184A2 (en) * 2001-01-05 2002-07-11 Intercell Ag Uses for polycationic compounds as vaccine adjuvants
US7244438B2 (en) 2001-01-05 2007-07-17 Intercell Ag Uses for polycationic compounds
EP1347776A2 (en) * 2001-01-05 2003-10-01 Intercell Biomedizinische Forschungs- und Entwicklungs AG Anti-inflammatory use of polycationic compounds
CA2434546C (en) * 2001-01-12 2012-09-11 Chiron Corporation Induction of immune response by a replication-defective venezuelan equine encephalitis-sindbis chimeric virus replicon particle encoding an antigen
US7713942B2 (en) 2001-04-04 2010-05-11 Nordic Vaccine Technology A/S Cage-like microparticle complexes comprising sterols and saponins for delivery of polynucleotides
US20100221284A1 (en) * 2001-05-30 2010-09-02 Saech-Sisches Serumwerk Dresden Novel vaccine composition
TWI228420B (en) * 2001-05-30 2005-03-01 Smithkline Beecham Pharma Gmbh Novel vaccine composition
GB0115176D0 (en) 2001-06-20 2001-08-15 Chiron Spa Capular polysaccharide solubilisation and combination vaccines
US8481043B2 (en) 2001-06-22 2013-07-09 Cpex Pharmaceuticals, Inc. Nasal immunization
EP1572124A4 (en) 2001-06-29 2007-11-28 Novartis Vaccines & Diagnostic HCV E1E2 VACCINE COMPOSITIONS
GB0118249D0 (en) 2001-07-26 2001-09-19 Chiron Spa Histidine vaccines
GB0121591D0 (en) 2001-09-06 2001-10-24 Chiron Spa Hybrid and tandem expression of neisserial proteins
US20030138434A1 (en) * 2001-08-13 2003-07-24 Campbell Robert L. Agents for enhancing the immune response
MY144532A (en) * 2001-08-20 2011-09-30 Lundbeck & Co As H Novel method for down-regulation of amyloid
DE60234375D1 (de) 2001-09-14 2009-12-24 Cytos Biotechnology Ag VERPACKUNG VON IMMUNSTIMULIERENDEM CpG IN VIRUSÄHNLICHEN PARTIKELN: HERSTELLUNGSVERFAHREN UND VERWENDUNG
CA2492823A1 (en) * 2001-09-14 2003-03-27 Martin F. Bachmann In vivo activation of antigen presenting cells for enhancement of immune responses induced by virus like particles
GB0123580D0 (en) * 2001-10-01 2001-11-21 Glaxosmithkline Biolog Sa Vaccine
AR045702A1 (es) 2001-10-03 2005-11-09 Chiron Corp Composiciones de adyuvantes.
US20050238660A1 (en) * 2001-10-06 2005-10-27 Babiuk Lorne A Cpg formulations and related methods
AU2006200116B2 (en) * 2001-11-27 2009-03-19 Schering Corporation Methods for treating cancer using a combination of a tumor-derived dendritic cell inhibitory factor antagonist and a toll-like receptor agonist
TW200303759A (en) * 2001-11-27 2003-09-16 Schering Corp Methods for treating cancer
EP1467755A1 (en) 2001-12-21 2004-10-20 Antigenics Inc. Compositions comprising immunoreactive reagents and saponins, and methods of use thereof
EP1531796B1 (en) 2002-02-20 2016-09-28 GlaxoSmithKline Biologicals SA Microparticles with adsorbed polypeptide-containing molecules
CA2388049A1 (en) 2002-05-30 2003-11-30 Immunotech S.A. Immunostimulatory oligonucleotides and uses thereof
EP1532161B1 (en) 2002-06-13 2012-02-15 Novartis Vaccines and Diagnostics, Inc. Vectors for expression of hml-2 polypeptides
US20040053880A1 (en) 2002-07-03 2004-03-18 Coley Pharmaceutical Group, Inc. Nucleic acid compositions for stimulating immune responses
US7807803B2 (en) 2002-07-03 2010-10-05 Coley Pharmaceutical Group, Inc. Nucleic acid compositions for stimulating immune responses
CA2494911A1 (en) 2002-08-12 2004-02-19 Dynavax Technologies Corporation Immunomodulatory compositions, methods of making, and methods of use thereof
GB0220194D0 (en) 2002-08-30 2002-10-09 Chiron Spa Improved vesicles
DE60332477D1 (de) 2002-11-15 2010-06-17 Novartis Vaccines & Diagnostic Unerwartete oberflächenproteine in neisseria meningitidis
GB0227346D0 (en) 2002-11-22 2002-12-31 Chiron Spa 741
AU2003300831A1 (en) * 2002-12-11 2004-06-30 Hawaii Biotech, Inc. Recombinant vaccine against flavivirus infection
CA2502015A1 (en) 2002-12-11 2004-06-24 Coley Pharmaceutical Group, Inc. 5' cpg nucleic acids and methods of use
CA2511512C (en) 2002-12-27 2013-10-29 Chiron Corporation Immunogenic compositions containing phospholipid
WO2004084938A1 (en) * 2003-03-24 2004-10-07 Intercell Ag Improved vaccines
RU2351362C2 (ru) 2003-03-26 2009-04-10 Цитос Байотекнолоджи Аг КОНЪЮГАТЫ ПЕПТИДА Melan-A, АНАЛОГА ВИРУСОПОДОБНОЙ ЧАСТИЦЫ
US7537767B2 (en) 2003-03-26 2009-05-26 Cytis Biotechnology Ag Melan-A- carrier conjugates
EP2258365B1 (en) 2003-03-28 2013-05-29 Novartis Vaccines and Diagnostics, Inc. Use of organic compounds for immunopotentiation
US20040235770A1 (en) * 2003-04-02 2004-11-25 Coley Pharmaceutical Group, Ltd. Immunostimulatory nucleic acid oil-in-water formulations and related methods of use
GB0308198D0 (en) 2003-04-09 2003-05-14 Chiron Srl ADP-ribosylating bacterial toxin
NZ543467A (en) 2003-04-10 2008-07-31 Novartis Vaccines & Diagnostic The severe acute respiratory syndrome coronavirus
PT1631264E (pt) 2003-06-02 2009-11-03 Novartis Vaccines & Diagnostic Composições imunogénicas à base de micropartículas biodegradáveis que compreendem um toxóide de difteria e do tétano
US20060035242A1 (en) 2004-08-13 2006-02-16 Michelitsch Melissa D Prion-specific peptide reagents
EP1670507A4 (en) * 2003-09-12 2007-10-17 Antigenics Inc VACCINE FOR THE TREATMENT AND PREVENTION OF INFECTION CAUSED BY HERPES SIMPLEX VIRUS
GB0323965D0 (en) * 2003-10-13 2003-11-19 Glaxosmithkline Biolog Sa Immunogenic compositions
GB0323968D0 (en) * 2003-10-13 2003-11-19 Glaxosmithkline Biolog Sa Immunogenic compositions
US20050239733A1 (en) * 2003-10-31 2005-10-27 Coley Pharmaceutical Gmbh Sequence requirements for inhibitory oligonucleotides
WO2005063286A1 (en) 2003-12-23 2005-07-14 Arbor Vita Corporation Antibodies for oncogenic strains of hpv and methods of their use
EP1550458A1 (en) * 2003-12-23 2005-07-06 Vectron Therapeutics AG Synergistic liposomal adjuvants
TWI235440B (en) * 2004-03-31 2005-07-01 Advanced Semiconductor Eng Method for making leadless semiconductor package
KR20070008625A (ko) * 2004-04-05 2007-01-17 화이자 프로덕츠 인코포레이티드 미세유체화된 수중유 유화액 및 백신 조성물
GB0411411D0 (en) * 2004-05-21 2004-06-23 Glaxosmithkline Biolog Sa Vaccines
WO2005117958A1 (en) 2004-05-28 2005-12-15 Glaxosmithkline Biologicals S.A. Vaccine compositions comprising virosomes and a saponin adjuvant
WO2006002422A2 (en) 2004-06-24 2006-01-05 Novartis Vaccines And Diagnostics Inc. Compounds for immunopotentiation
AU2005333126A1 (en) * 2004-07-18 2006-12-21 Csl Limited Methods and compositions for inducing innate immune responses
EP1781325A2 (en) * 2004-07-18 2007-05-09 CSL Limited Immuno stimulating complex and oligonucleotide formulations for inducing enhanced interferon-gamma responses
DE102004038535B4 (de) * 2004-08-06 2012-10-04 Universitätsklinikum Schleswig-Holstein Zelluläre Einschleusung von Nukleinsäurewirkstoffen
WO2006076678A2 (en) * 2005-01-13 2006-07-20 The Johns Hopkins University Prostate stem cell antigen vaccines and uses thereof
NZ555937A (en) 2005-01-27 2009-05-31 Childrens Hosp & Res Ct Oak GNA1870-based vesicle vaccines for broad spectrum protection against diseases caused by Neisseria meningitidis
MX2007014390A (es) * 2005-05-19 2008-02-12 Glaxosmithkline Biolog Sa Composicion de vacuna que comprende subunidad b de termo toxina e. coli y antigeno y adyuvante.
US8703095B2 (en) * 2005-07-07 2014-04-22 Sanofi Pasteur S.A. Immuno-adjuvant emulsion
AR054822A1 (es) * 2005-07-07 2007-07-18 Sanofi Pasteur Emulsion inmuno adyuvante
FR2888117B1 (fr) * 2005-07-07 2009-10-09 Sanofi Pasteur Sa Composition vaccinale comprenant une emulsion thermoreversible
DK1909830T3 (da) * 2005-08-02 2011-12-19 Novartis Vaccines & Diagnostic Formindskelse af interferens mellem olieholdige adjuvanser og antigener indeholdende overfladeaktivt middel
US20090087456A1 (en) * 2005-09-07 2009-04-02 James Edward Eyles Adjuvanted vaccine
KR20080066712A (ko) * 2005-09-30 2008-07-16 티티아이 엘뷰 가부시키가이샤 관능화된 미세바늘 경피 약물 전달 시스템, 장치 및 방법
US20070078376A1 (en) * 2005-09-30 2007-04-05 Smith Gregory A Functionalized microneedles transdermal drug delivery systems, devices, and methods
US20070083186A1 (en) * 2005-09-30 2007-04-12 Darrick Carter Transdermal drug delivery systems, devices, and methods employing novel pharmaceutical vehicles
WO2007052163A2 (en) * 2005-11-01 2007-05-10 Novartis Vaccines And Diagnostics Gmbh & Co Kg Cell-derived viral vaccines with low levels of residual cell dna by beta-propiolactone treatment
US11707520B2 (en) 2005-11-03 2023-07-25 Seqirus UK Limited Adjuvanted vaccines with non-virion antigens prepared from influenza viruses grown in cell culture
EP2368572B1 (en) 2005-11-04 2020-03-04 Seqirus UK Limited Adjuvanted vaccines with non-virion antigens prepared from influenza viruses grown in cell culture
EP1951300B1 (en) * 2005-11-04 2011-06-22 Novartis Vaccines and Diagnostics S.r.l. Changing th1/th2 balance in split influenza vaccines with adjuvants
US20110180430A1 (en) * 2005-11-04 2011-07-28 Novartis Vaccines And Diagnostics Srl Adjuvanted influenza vaccines including cytokine-inducing agents
GB0524408D0 (en) * 2005-11-30 2006-01-11 Glaxosmithkline Biolog Sa Vaccines
GB0524409D0 (en) * 2005-11-30 2006-01-11 Glaxosmithkline Biolog Sa Vaccines
TWI457133B (zh) 2005-12-13 2014-10-21 Glaxosmithkline Biolog Sa 新穎組合物
EP1973608A1 (en) 2005-12-14 2008-10-01 Cytos Biotechnology AG Immunostimulatory nucleic acid packaged particles for the treatment of hypersensitivity
GB0607088D0 (en) 2006-04-07 2006-05-17 Glaxosmithkline Biolog Sa Vaccine
EP1973564B1 (en) 2005-12-22 2016-11-09 GlaxoSmithKline Biologicals S.A. Vaccine comprising streptococcus pneumoniae capsular polysaccharide conjugates
WO2007079190A2 (en) * 2005-12-29 2007-07-12 Tti Ellebeau, Inc. Device and method for enhancing immune response by electrical stimulation
FR2896162B1 (fr) * 2006-01-13 2008-02-15 Sanofi Pasteur Sa Emulsion huile dans eau thermoreversible
KR101541383B1 (ko) 2006-03-30 2015-08-03 글락소스미스클라인 바이오로지칼즈 에스.에이. 면역원성 조성물
SG173336A1 (en) 2006-03-31 2011-08-29 Novartis Ag Combined mucosal and parenteral immunization against hiv
EP2390358A1 (en) 2006-06-02 2011-11-30 GlaxoSmithKline Biologicals S.A. Method for identifying whether a patient will be responder or not to immunotherapy based on the differential expression of the GZMK gene
WO2007144150A1 (en) 2006-06-12 2007-12-21 Cytos Biotechnology Ag Processes for packaging oligonucleotides into virus-like particles of rna bacteriophages
US9364525B2 (en) 2006-07-18 2016-06-14 Glaxosmithkline Biologicals Sa Vaccines for malaria
WO2008012538A2 (en) 2006-07-25 2008-01-31 The Secretary Of State For Defence Live vaccine strains of francisella
US20090181078A1 (en) * 2006-09-26 2009-07-16 Infectious Disease Research Institute Vaccine composition containing synthetic adjuvant
ES2657392T3 (es) 2006-09-26 2018-03-05 Infectious Disease Research Institute Composición de vacuna que contiene un adyuvante sintético
WO2008057529A2 (en) * 2006-11-06 2008-05-15 Coley Pharmaceutical Group, Inc. Peptide-based vaccine compositions to endogenous cholesteryl ester transfer protein (cetp)
CN101563090B (zh) * 2006-11-20 2013-01-02 杜科姆公司 包含南美皂皮树皂苷的含脂质颗粒用于治疗癌症的用途
WO2008112125A1 (en) * 2007-03-09 2008-09-18 Merck & Co., Inc. Papillomavirus vaccine compositions
US8518903B2 (en) 2007-04-19 2013-08-27 University of Pittsburgh—of the Commonwealth System of Higher Education Use of toll-like receptor-9 agonists
KR20100010509A (ko) * 2007-05-17 2010-02-01 콜레이 파마시티컬 그룹, 인코포레이티드 면역자극 효과를 갖는 ａ 클래스 올리고뉴클레오타이드
US20100183662A1 (en) 2007-06-26 2010-07-22 Ralph Leon Biemans Vaccine comprising streptococcus pneumoniae capsular polysaccharide conjugates
WO2009027105A2 (en) 2007-08-31 2009-03-05 Neurimmune Therapeutics Ag Method of providing patient specific immune response in amyloidoses and protein aggregation disorders
EP2034022A1 (en) * 2007-09-10 2009-03-11 Universite Libre De Bruxelles Leukotriene B4 binding soluble lipocalin receptor from ixodes ricinus
PL2198007T3 (pl) 2007-09-14 2018-03-30 Sanofi Pasteur Biologics, Llc Kompozycje farmaceutyczne zawierające toksoidy A i B Clostridium difficile
CA2699853A1 (en) 2007-09-17 2009-03-26 Oncomethylome Sciences Sa Improved detection of mage-a expression
EP2197497B1 (en) 2007-09-27 2016-06-01 ImmunoVaccine Technologies Inc. Use of liposomes in a carrier comprising a continuous hydrophobic phase for delivery of polynucleotides in vivo
EP2045263A1 (en) 2007-10-02 2009-04-08 Universite Libre De Bruxelles Identification and molecular characterisation of salivary metalloproteases expressed in the tick salivary glands
US20100209452A1 (en) * 2007-10-03 2010-08-19 Immunovaccine Technologies, Inc Compositions comprising an antigen, an amphipathic compound and a hydrophobic carrier, and uses thereof
EP2244695A1 (en) 2007-12-07 2010-11-03 Novartis AG Compositions for inducing immune responses
WO2009105641A2 (en) 2008-02-20 2009-08-27 New York University Preventing and treating amyloid-beta deposition by stimulation of innate immunity
ES2557282T3 (es) 2008-03-10 2016-01-25 Children's Hospital & Research Center At Oakland Proteínas quiméricas de unión al factor H (fHBP) que contienen un dominio B heterólogo, y métodos de uso
EP2296696B1 (en) 2008-06-05 2014-08-27 ImmunoVaccine Technologies Inc. Compositions comprising liposomes, an antigen, a polynucleotide and a carrier comprising a continuous phase of a hydrophobic substance
JP5659332B2 (ja) 2008-06-27 2015-01-28 ゾエティス・エルエルシー 新規なアジュバント組成物
AU2012258478B2 (en) * 2008-06-27 2013-10-03 Zoetis Services Llc Novel adjuvant compositions
WO2010036293A1 (en) * 2008-09-24 2010-04-01 The Johns Hokins University Malaria vaccine
WO2010041143A2 (en) * 2008-10-08 2010-04-15 Immune Solutions Limited Oral vaccines for producing mucosal immunity
CN102245198B (zh) 2008-12-09 2016-08-17 辉瑞疫苗有限责任公司 IgE CH3肽疫苗
GB0901411D0 (en) 2009-01-29 2009-03-11 Secr Defence Treatment
GB0901423D0 (en) 2009-01-29 2009-03-11 Secr Defence Treatment
KR101825697B1 (ko) 2009-02-10 2018-02-05 노파르티스 아게 감소된 양의 스쿠알렌을 포함하는 인플루엔자 백신
SG2014014385A (en) * 2009-02-17 2014-04-28 Glaxosmithkline Biolog Sa Inactivated dengue virus vaccine with aluminium-free adjuvant
AU2014200047C1 (en) * 2009-02-17 2017-01-19 Glaxosmithkline Biologicals S.A. Inactivated dengue virus vaccine with aluminium-free adjuvant
KR20120002534A (ko) 2009-03-17 2012-01-05 엠디엑스헬스 에스에이 유전자 발현의 향상된 검출
GB0906234D0 (en) 2009-04-14 2009-05-20 Secr Defence Vaccine
PT2437753T (pt) 2009-06-05 2016-11-23 Infectious Disease Res Inst Adjuvantes lipídicos de glucopiranosilo sintéticos e composições de vacina contendo os mesmos
RU2518291C2 (ru) 2009-07-30 2014-06-10 Пфайзер Вэксинс ЭлЭлСи Антигенные tau-пептиды и их применения
GB0913681D0 (en) 2009-08-05 2009-09-16 Glaxosmithkline Biolog Sa Immunogenic composition
GB0913680D0 (en) 2009-08-05 2009-09-16 Glaxosmithkline Biolog Sa Immunogenic composition
AU2010293059B2 (en) * 2009-08-26 2017-03-16 Selecta Biosciences, Inc. Compositions that induce T cell help
SG178447A1 (en) 2009-09-03 2012-03-29 Pfizer Vaccines Llc Pcsk9 vaccine
GB0917457D0 (en) 2009-10-06 2009-11-18 Glaxosmithkline Biolog Sa Method
US9234037B2 (en) 2009-10-27 2016-01-12 Ucb Biopharma Sprl Method to generate antibodies to ion channels
GB0922434D0 (en) 2009-12-22 2010-02-03 Ucb Pharma Sa antibodies and fragments thereof
CN102781963B (zh) 2009-10-27 2018-02-16 Ucb医药有限公司 功能修饰性NAv1.7抗体
US20130034573A1 (en) 2009-12-22 2013-02-07 Celldex Therapeutics, Inc. Vaccine compositions
WO2012020326A1 (en) * 2010-03-18 2012-02-16 Novartis Ag Adjuvanted vaccines for serogroup b meningococcus
WO2011126863A1 (en) 2010-03-30 2011-10-13 Children's Hospital & Research Center Oakland Factor h binding proteins (fhbp) with altered properties and methods of use thereof
EA201500857A1 (ru) 2010-05-26 2016-06-30 Селекта Байосайенсиз, Инк. Комбинированные вакцины с синтетическими наноносителями
EP2942061A3 (en) 2010-06-07 2016-01-13 Pfizer Vaccines LLC Ige ch3 peptide vaccine
WO2011154863A1 (en) 2010-06-07 2011-12-15 Pfizer Inc. Her-2 peptides and vaccines
US20130259948A1 (en) 2010-09-21 2013-10-03 National Institute Of Immunology Spray dried powder formulation for vaccines entrapping alum and the antigen in biodegradable polymer particles
US9072760B2 (en) 2010-09-24 2015-07-07 University of Pittsburgh—of the Commonwealth System of Higher Education TLR4 inhibitors for the treatment of human infectious and inflammatory disorders
US10668092B2 (en) 2010-09-24 2020-06-02 The John Hopkins University Compositions and methods for treatment of inflammatory disorders
EP2637687B1 (en) 2010-11-08 2021-01-06 Infectious Disease Research Institute Vaccines comprising non-specific nucleoside hydrolase and sterol 24-c-methyltransferase (smt) polypeptides for the treatment and diagnosis of leishmaniasis
WO2012088425A2 (en) 2010-12-22 2012-06-28 University Of Pittsburgh - Of The Commonwealth System Of Higher Education Gap junction-enhancing agents for treatment of necrotizing enterocolitis and inflammatory bowel disease
GB201022007D0 (en) 2010-12-24 2011-02-02 Imp Innovations Ltd DNA-sensor
CA2826920A1 (en) 2011-02-15 2012-08-23 Immune Design Corp. Methods for enhancing immunogen specific immune responses by vectored vaccines
WO2012131504A1 (en) 2011-03-02 2012-10-04 Pfizer Inc. Pcsk9 vaccine
MX350795B (es) 2011-04-08 2017-09-19 Inmune Design Corp Composiciones inmunogenicas y metodos para utilizar las composiciones para inducir respuestas inmunes humorales y celulares.
PL3505531T3 (pl) 2011-04-22 2024-03-11 Wyeth Llc Kompozycje związane ze zmutowaną toksyną Clostridium difficile i sposoby ich wytwarzania
AU2012257771C1 (en) 2011-05-17 2015-12-03 Glaxosmithkline Biologicals S.A. Vaccine against Streptococcus pneumoniae
EA201490381A1 (ru) 2011-07-29 2014-06-30 Селекта Байосайенсиз, Инк. Синтетические наноносители, которые стимулируют формирование гуморального иммунного ответа и иммунного ответа, опосредованного цитотоксическими т-лимфоцитами (ctl)
GB201113570D0 (en) 2011-08-05 2011-09-21 Glaxosmithkline Biolog Sa Vaccine
CN103998058B (zh) 2011-10-06 2021-11-05 免疫疫苗技术有限公司 包括激活或增加tlr2活性的佐剂的脂质体组合物及其应用
MY184576A (en) 2011-11-23 2021-04-06 In3Bio Ltd Recombinant proteins and their therapeutic uses
LT2811981T (lt) 2012-02-07 2019-06-10 Infectious Disease Research Institute Pagerintos adjuvanto kompozicijos, apimančios tlr4 agonistus, ir jų panaudojimo būdai
EP2659906A1 (en) 2012-05-01 2013-11-06 Affiris AG Compositions
SG10201603896RA (en) 2012-05-04 2016-07-28 Pfizer Prostate-associated antigens and vaccine-based immunotherapy regimens
LT2850431T (lt) 2012-05-16 2018-06-25 Immune Design Corp. Vakcinos, skirtos hsv-2
US9562066B2 (en) * 2012-09-25 2017-02-07 University Of Pittsburgh-Of The Commonwealth System Of Higher Education Oral therapy of necrotizing enterocolitis
BR122016023101B1 (pt) 2012-10-21 2022-03-22 Pfizer Inc Polipeptídeo, composição imunogênica que o compreende, bem como célula recombinante derivada de clostridium difficile
JP2016502995A (ja) * 2012-12-17 2016-02-01 ユーロシネ ヴァクシンズ アクチエボラーグ 鼻腔内予防接種投薬レジメン
DK2961388T3 (da) * 2013-03-01 2019-07-08 Astex Pharmaceuticals Inc Kombinationer af lægemidler
BR112015023402A2 (pt) 2013-03-15 2017-08-22 Bioven 3 Ltd Proteínas sintéticas de automontagem
EP4059450A1 (en) * 2013-03-15 2022-09-21 Corium, Inc. Microstructure array for delivery of active agents
WO2014160987A2 (en) 2013-03-28 2014-10-02 Infectious Disease Research Institute Vaccines comprising leishmania polypeptides for the treatment and diagnosis of leishmaniasis
JP6426706B2 (ja) 2013-04-18 2018-11-21 イミューン デザイン コーポレイション がん処置で使用するためのｇｌａ単剤療法
AU2014385320B2 (en) 2013-05-15 2019-10-10 The Governors Of The University Of Alberta E1E2 HCV vaccines and methods of use
US9463198B2 (en) 2013-06-04 2016-10-11 Infectious Disease Research Institute Compositions and methods for reducing or preventing metastasis
CA2924526A1 (en) * 2013-09-19 2015-03-26 Paul Joseph Dominowski Water-in-oil emulsions comprising immunostimulatory oligonucleotides
KR102411781B1 (ko) 2013-12-31 2022-06-22 인펙셔스 디지즈 리서치 인스티튜트 (아이디알아이) 단일 바이알 백신 제형
NZ755769A (en) 2014-01-21 2023-06-30 Pfizer Immunogenic compositions comprising conjugated capsular saccharide antigens and uses thereof
US11160855B2 (en) 2014-01-21 2021-11-02 Pfizer Inc. Immunogenic compositions comprising conjugated capsular saccharide antigens and uses thereof
EP3104877B1 (en) 2014-02-11 2020-01-22 The USA, as represented by The Secretary, Department of Health and Human Services Pcsk9 vaccine and methods of using the same
CA2955015A1 (en) 2014-07-15 2016-01-21 Immune Design Corp. Prime-boost regimens with a tlr4 agonist adjuvant and a lentiviral vector
JP6796057B2 (ja) 2014-07-23 2020-12-02 チルドレンズ ホスピタル アンド リサーチ センター アット オークランド Ｈ因子結合タンパク質変異体及びその使用方法
IL252915B2 (en) 2015-01-15 2024-04-01 Pfizer Immunogenic preparations for use in pneumococcal vaccines
AR103427A1 (es) 2015-01-16 2017-05-10 Zoetis Services Llc Vacuna contra la fiebre aftosa
CN104857511B (zh) * 2015-02-13 2018-03-30 浙江大学 含人参皂甙的疫苗稀释剂
EP3078381A1 (en) * 2015-04-10 2016-10-12 Warszawski Uniwersytet Medyczny Horse chestnut extract or escins for the treatment of alzheimer's disease
AU2016271857B2 (en) 2015-06-03 2020-05-28 Affiris Ag IL-23-P19 vaccines
WO2017005851A1 (en) 2015-07-07 2017-01-12 Affiris Ag Vaccines for the treatment and prevention of ige mediated diseases
TWI756893B (zh) 2015-07-21 2022-03-01 美商輝瑞股份有限公司 包含經共軛之莢膜糖抗原的致免疫性組成物、包含該致免疫性組成物之套組及彼等之用途
JP6884145B2 (ja) 2015-11-20 2021-06-09 ファイザー・インク 肺炎連鎖球菌ワクチンにおいて用いるための免疫原性組成物
JP6820935B2 (ja) 2016-01-19 2021-01-27 ファイザー・インク がんワクチン
CN105770887A (zh) * 2016-03-04 2016-07-20 邓招红 一种用于hbv疫苗的佐剂及其制备方法
US11162945B2 (en) 2016-04-11 2021-11-02 Board Of Regents, The University Of Texas System Methods and compositions for detecting single T cell receptor affinity and sequence
JP7195147B2 (ja) 2016-05-16 2022-12-23 アクセス ツー アドバンスト ヘルス インスティチュート Ｐｅｇ化リポソームおよび使用方法
DK3458475T3 (da) 2016-05-16 2022-09-12 Access To Advanced Health Inst Formulering, der indeholder tlr-agonist, og anvendelsesfremgangsmåder
IL298227B2 (en) 2016-06-01 2024-09-01 Access To Advanced Health Inst Nanoalum particles containing a fixing factor
CA3036218A1 (en) 2016-09-16 2018-03-22 Infectious Disease Research Institute Vaccines comprising mycobacterium leprae polypeptides for the prevention, treatment, and diagnosis of leprosy
WO2018134693A1 (en) 2017-01-20 2018-07-26 Pfizer Inc. Immunogenic compositions for use in pneumococcal vaccines
SG11201909331UA (en) 2017-04-18 2019-11-28 Fujifilm Cellular Dynamics Inc Antigen-specific immune effector cells
JP2020524143A (ja) 2017-06-15 2020-08-13 インフェクシャス ディズィーズ リサーチ インスティチュート ナノ構造脂質担体、安定エマルジョン、およびその使用
MX2020000636A (es) 2017-07-18 2020-08-20 In3Bio Ltd Proteinas sinteticas y usos terapeuticos de las mismas.
EP3678695A1 (en) 2017-09-08 2020-07-15 Infectious Disease Research Institute Liposomal formulations comprising saponin and methods of use
US20200254081A1 (en) 2017-09-28 2020-08-13 Pfizer Inc. Compositions and methods for eliciting an immune response against clostridium difficile
US11633471B2 (en) 2018-03-06 2023-04-25 Unm Rainforest Innovations Compositions and methods for reducing serum triglycerides
US11260119B2 (en) 2018-08-24 2022-03-01 Pfizer Inc. Escherichia coli compositions and methods thereof
EP3856241A4 (en) * 2018-09-27 2022-10-05 Genocea Biosciences, Inc. TREATMENT PROCESSES
JP2022513076A (ja) 2018-11-19 2022-02-07 ボード オブ リージェンツ，ザ ユニバーシティ オブ テキサス システム Ｃａｒおよびｔｃｒ形質導入用のモジュール式ポリシストロニックベクター
AU2019386140A1 (en) 2018-11-28 2021-06-24 Board Of Regents, The University Of Texas System Multiplex genome editing of immune cells to enhance functionality and resistance to suppressive environment
BR112021010248A2 (pt) 2018-11-29 2021-08-17 Board Of Regents, The University Of Texas System métodos para expansão ex vivo de células naturais killer e uso dos mesmos
US20220016229A1 (en) 2018-12-12 2022-01-20 Pfizer Inc. Immunogenic Multiple Hetero-Antigen Polysaccharide-Protein Conjugates and uses thereof
GB201901608D0 (en) 2019-02-06 2019-03-27 Vib Vzw Vaccine adjuvant conjugates
JP7239509B6 (ja) 2019-02-22 2023-03-28 ファイザー・インク 細菌多糖類を精製するための方法
WO2020201985A1 (en) 2019-04-01 2020-10-08 Pfizer Inc. Compositions and methods for eliciting an immune response against clostridium difficile
US20220184199A1 (en) 2019-04-10 2022-06-16 Pfizer Inc. Immunogenic compositions comprising conjugated capsular saccharide antigens, kits comprising the same and uses thereof
WO2020232407A1 (en) * 2019-05-16 2020-11-19 Trustees Of Tufts College Peptide antibiotics and methods of use thereof
JP2022532944A (ja) 2019-05-25 2022-07-20 アクセス ツー アドバンスト ヘルス インスティチュート アジュバントワクチンエマルジョンを噴霧乾燥するための組成物および方法
EP3990010A1 (en) 2019-06-25 2022-05-04 In3Bio Ltd. Stabilized chimeric synthetic proteins and therapeutic uses thereof
CA3159573A1 (en) 2019-11-01 2021-05-06 Pfizer Inc. Escherichia coli compositions and methods thereof
US20220396797A1 (en) 2019-11-15 2022-12-15 Infectious Disease Research Institute Rig-i agonist and adjuvant formulation for tumor treatment
CN112972672B (zh) * 2019-12-13 2024-04-19 远大赛威信生命科学(南京)有限公司 药物组合物及其用途
CN111057738A (zh) * 2020-01-02 2020-04-24 浙江大学 C2c12细胞在疫苗佐剂机制研究中的用途和研究分析方法
CA3168337A1 (en) 2020-02-17 2021-08-26 Marie-Andree Forget Methods for expansion of tumor infiltrating lymphocytes and use thereof
WO2021165847A1 (en) 2020-02-21 2021-08-26 Pfizer Inc. Purification of saccharides
IL295632A (en) 2020-02-23 2022-10-01 Pfizer Escherichia coli preparations and their methods
AU2021252164A1 (en) 2020-04-09 2022-12-15 Finncure Oy Mimetic nanoparticles for preventing the spreading and lowering the infection rate of novel coronaviruses
EP4168032A2 (en) 2020-06-19 2023-04-26 Pfizer Inc. Immunogenic compositions against clostridioides (clostridium) difficile and methods thereof
EP4000603A4 (en) * 2020-06-30 2023-08-09 Eyegene, Inc. SAPONIN-INDUCED HEMOLYSIS INHIBITION COMPOSITION CONTAINING A CATIONIC LIPOSOME
US20230310569A1 (en) 2020-09-04 2023-10-05 Access To Advanced Health Institute Genetically-adjuvanted rna vaccines
CA3174411A1 (en) 2020-09-04 2022-03-10 Ryan M. Kramer Co-lyophilized rna and nanostructured lipid carrier
TW202227467A (zh) 2020-10-27 2022-07-16 美商輝瑞大藥廠 大腸桿菌組合物及其方法
IL302413A (en) 2020-11-04 2023-06-01 Pfizer Immunogenic preparations for use in pneumococcal vaccines
CA3200968A1 (en) 2020-11-10 2022-05-19 Pfizer Inc. Immunogenic compositions comprising conjugated capsular saccharide antigens and uses thereof
CA3201499A1 (en) 2020-11-13 2022-05-19 Catamaran Bio, Inc. Genetically modified natural killer cells and methods of use thereof
US20220162288A1 (en) 2020-11-25 2022-05-26 Catamaran Bio, Inc. Cellular therapeutics engineered with signal modulators and methods of use thereof
US20220202923A1 (en) 2020-12-23 2022-06-30 Pfizer Inc. E. coli fimh mutants and uses thereof
MX2023007648A (es) 2020-12-23 2023-08-29 Access To Advanced Health Inst Adyuvantes de vacuna de solanesol y métodos para prepararlos.
CA3211240A1 (en) 2021-02-19 2022-08-25 Sanofi Pasteur Inc. Meningococcal b recombinant vaccine
PE20240090A1 (es) 2021-05-28 2024-01-16 Pfizer Composiciones inmunogenas que comprenden antigenos de sacarido capsular conjugados y sus usos
EP4346893A2 (en) 2021-05-28 2024-04-10 Pfizer Inc. Immunogenic compositions comprising conjugated capsular saccharide antigens and uses thereof
CA3228262A1 (en) 2021-08-04 2023-02-09 The Regents Of The University Of Colorado, A Body Corporate Lat activating chimeric antigen receptor t cells and methods of use thereof
CN113797329A (zh) * 2021-10-19 2021-12-17 启锰生物科技(江苏)有限公司 一种二价锰佐剂和CpG佐剂的疫苗佐剂组合物及其制作方法
EP4433080A1 (en) 2021-11-18 2024-09-25 Matrivax, Inc. Immunogenic fusion protein compositions and methods of use thereof
WO2023089556A1 (en) 2021-11-22 2023-05-25 Pfizer Inc. Reducing risk of antigen mimicry in immunogenic medicaments
CN116212012A (zh) * 2021-12-02 2023-06-06 上海泽润生物科技有限公司 复合佐剂以及包含它的疫苗制剂
KR20240128715A (ko) 2022-01-13 2024-08-26 화이자 인코포레이티드 접합된 피막 사카라이드 항원을 포함하는 면역원성 조성물 및 그의 용도
WO2023161817A1 (en) 2022-02-25 2023-08-31 Pfizer Inc. Methods for incorporating azido groups in bacterial capsular polysaccharides
WO2023211972A1 (en) 2022-04-28 2023-11-02 Medical University Of South Carolina Chimeric antigen receptor modified regulatory t cells for treating cancer
WO2023218322A1 (en) 2022-05-11 2023-11-16 Pfizer Inc. Process for producing of vaccine formulations with preservatives
WO2024052882A1 (en) 2022-09-09 2024-03-14 Access To Advanced Health Institute Immunogenic vaccine composition incorporating a saponin
WO2024110827A1 (en) 2022-11-21 2024-05-30 Pfizer Inc. Methods for preparing conjugated capsular saccharide antigens and uses thereof
US20240181028A1 (en) 2022-11-22 2024-06-06 Pfizer Inc. Immunogenic compositions comprising conjugated capsular saccharide antigens and uses thereof
WO2024116096A1 (en) 2022-12-01 2024-06-06 Pfizer Inc. Pneumococcal conjugate vaccine formulations
US20240189410A1 (en) 2022-12-13 2024-06-13 Pfizer Inc. Immunogenic compositions and methods for eliciting an immune response against clostridioides (clostridium) difficile
CN116159134A (zh) * 2023-01-31 2023-05-26 四川大学 七叶皂苷和/或其盐化合物作为佐剂在疫苗中的应用
WO2024166008A1 (en) 2023-02-10 2024-08-15 Pfizer Inc. Immunogenic compositions comprising conjugated capsular saccharide antigens and uses thereof
WO2024201324A2 (en) 2023-03-30 2024-10-03 Pfizer Inc. Immunogenic compositions comprising conjugated capsular saccharide antigens and uses thereof
WO2024214016A1 (en) 2023-04-14 2024-10-17 Pfizer Inc. Immunogenic compositions comprising conjugated capsular saccharide antigens and uses thereof

Family Cites Families (38)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4436727A (en) 1982-05-26 1984-03-13 Ribi Immunochem Research, Inc. Refined detoxified endotoxin product
SE8205892D0 (sv) 1982-10-18 1982-10-18 Bror Morein Immunogent membranproteinkomplex, sett for framstellning och anvendning derav som immunstimulerande medel och sasom vaccin
US4806350A (en) * 1986-04-18 1989-02-21 Norden Laboratories, Inc. Vaccine formulation
CA1331443C (en) 1987-05-29 1994-08-16 Charlotte A. Kensil Saponin adjuvant
US5057540A (en) 1987-05-29 1991-10-15 Cambridge Biotech Corporation Saponin adjuvant
EP0468520A3 (en) 1990-07-27 1992-07-01 Mitsui Toatsu Chemicals, Inc. Immunostimulatory remedies containing palindromic dna sequences
UA40597C2 (uk) 1992-06-25 2001-08-15 Смітклайн Бічем Байолоджікалс С.А. Вакцинна композиція,спосіб лікування ссавців, що страждають або сприйнятливі до інфекції, спосіб лікування ссавців, що страждають на рак, спосіб одержання вакцинної композиції, композиція ад'ювантів
ES2162139T5 (es) 1993-03-23 2008-05-16 Smithkline Beecham Biologicals S.A. Composiciones de vacuna que contienen monofosforil-lipido a 3-o-desacilado.
GB9326253D0 (en) * 1993-12-23 1994-02-23 Smithkline Beecham Biolog Vaccines
CA2194761C (en) 1994-07-15 2006-12-19 Arthur M. Krieg Immunomodulatory oligonucleotides
US6207646B1 (en) * 1994-07-15 2001-03-27 University Of Iowa Research Foundation Immunostimulatory nucleic acid molecules
AUPM873294A0 (en) 1994-10-12 1994-11-03 Csl Limited Saponin preparations and use thereof in iscoms
GB9503863D0 (en) 1995-02-25 1995-04-19 Smithkline Beecham Biolog Vaccine compositions
GB9620795D0 (en) 1996-10-05 1996-11-20 Smithkline Beecham Plc Vaccines
UA56132C2 (uk) * 1995-04-25 2003-05-15 Смітклайн Бічем Байолоджікалс С.А. Композиція вакцини (варіанти), спосіб стабілізації qs21 відносно гідролізу (варіанти), спосіб приготування композиції вакцини
US6251405B1 (en) 1995-06-07 2001-06-26 Connaught Laboratories, Inc. Immunological combination compositions and methods
ES2241042T3 (es) 1996-10-11 2005-10-16 The Regents Of The University Of California Conjugados de polinucleotido inmunoestimulador/ molecula inmunomoduladora.
US5980898A (en) 1996-11-14 1999-11-09 The United States Of America As Represented By The U.S. Army Medical Research & Material Command Adjuvant for transcutaneous immunization
US6231859B1 (en) * 1996-12-02 2001-05-15 Aquila Biopharmaceuticals, Inc. Saponin adjuvant compositions
JP4153999B2 (ja) 1996-12-20 2008-09-24 アルザ・コーポレーション 経皮作用剤流量を強化するための組成物と方法
EP0855184A1 (en) * 1997-01-23 1998-07-29 Grayson B. Dr. Lipford Pharmaceutical composition comprising a polynucleotide and an antigen especially for vaccination
JP2001513776A (ja) * 1997-02-28 2001-09-04 ユニバーシティ オブ アイオワ リサーチ ファウンデーション ＬＰＳ関連障害の処置における非メチル化ＣｐＧジヌクレオチドを含む核酸の使用
US6406705B1 (en) 1997-03-10 2002-06-18 University Of Iowa Research Foundation Use of nucleic acids containing unmethylated CpG dinucleotide as an adjuvant
AU753688B2 (en) 1997-03-10 2002-10-24 Ottawa Civic Loeb Research Institute Use of nucleic acids containing unmethylated CpG dinucleotide as an adjuvant
US6627198B2 (en) * 1997-03-13 2003-09-30 Corixa Corporation Fusion proteins of Mycobacterium tuberculosis antigens and their uses
US6589940B1 (en) * 1997-06-06 2003-07-08 Dynavax Technologies Corporation Immunostimulatory oligonucleotides, compositions thereof and methods of use thereof
AU753172B2 (en) 1997-06-06 2002-10-10 Dynavax Technologies Corporation Immunostimulatory oligonucleotides, compositions thereof and methods of use thereof
GB9711990D0 (en) 1997-06-11 1997-08-06 Smithkline Beecham Biolog Vaccine
EP0988053A1 (en) * 1997-06-11 2000-03-29 Aquila Biopharmaceuticals, Inc. Purified saponins as oral adjuvants
CA2654522C (en) 1997-08-29 2014-01-28 Antigenics Inc. Compositions comprising the adjuvant qs-21 and polysorbate or cyclodextrin as exipient
GB9718901D0 (en) * 1997-09-05 1997-11-12 Smithkline Beecham Biolog Vaccine
GB9727262D0 (en) * 1997-12-24 1998-02-25 Smithkline Beecham Biolog Vaccine
SI1077722T1 (sl) * 1998-05-22 2007-02-28 Ottawa Health Research Inst Metode in produkti za induciranje sluznicne imunosti
US6562798B1 (en) 1998-06-05 2003-05-13 Dynavax Technologies Corp. Immunostimulatory oligonucleotides with modified bases and methods of use thereof
US7049302B1 (en) * 1998-08-10 2006-05-23 Antigenics Inc. Compositions of CPG and saponin adjuvants and uses thereof
KR100922031B1 (ko) * 1999-04-19 2009-10-19 글락소스미스클라인 바이오로지칼즈 에스.에이. 백신
WO2001051083A2 (en) * 2000-01-13 2001-07-19 Antigenics Inc. Innate immunity-stimulating compositions of cpg and saponin and methods thereof
CA2396871A1 (en) * 2000-01-20 2001-12-20 Ottawa Health Research Institute Immunostimulatory nucleic acids for inducing a th2 immune response

Also Published As

Publication number Publication date
US20030161834A1 (en) 2003-08-28
EP1187629A2 (en) 2002-03-20
CZ20013774A3 (cs) 2002-03-13
ES2228497T3 (es) 2005-04-16
NO20015073D0 (no) 2001-10-18
TR200103018T2 (tr) 2002-02-21
CN1372473A (zh) 2002-10-02
US6544518B1 (en) 2003-04-08
IL145982A0 (en) 2002-07-25
WO2000062800A3 (en) 2001-01-11
KR100922031B1 (ko) 2009-10-19
HK1044484B (zh) 2005-07-29
CA2370697C (en) 2012-03-06
JP2008063342A (ja) 2008-03-21
JP4897547B2 (ja) 2012-03-14
AU764969B2 (en) 2003-09-04
ATE276758T1 (de) 2004-10-15
PL203951B1 (pl) 2009-11-30
TWI232753B (en) 2005-05-21
DE60014076T2 (de) 2005-10-13
BR0010612B1 (pt) 2014-02-18
JP2007191491A (ja) 2007-08-02
NO331688B1 (no) 2012-02-27
PT1187629E (pt) 2005-02-28
US7399472B2 (en) 2008-07-15
JP2002542203A (ja) 2002-12-10
NO20015073L (no) 2001-11-22
DE60014076D1 (de) 2004-10-28
EP1187629B1 (en) 2004-09-22
US20080095788A1 (en) 2008-04-24
KR20070114854A (ko) 2007-12-04
AU4114900A (en) 2000-11-02
CZ303515B6 (cs) 2012-11-07
PL351893A1 (en) 2003-06-30
BRPI0010612B8 (pt) 2021-05-25
US20080311156A1 (en) 2008-12-18
DK1187629T3 (da) 2005-01-17
HUP0200815A3 (en) 2004-07-28
JP4805242B2 (ja) 2011-11-02
BR0010612A (pt) 2002-02-13
EP2322210A1 (en) 2011-05-18
CA2370697A1 (en) 2000-10-26
HUP0200815A2 (en) 2002-08-28
WO2000062800A2 (en) 2000-10-26
CN1227030C (zh) 2005-11-16
HK1044484A1 (en) 2002-10-25

Similar Documents

Publication Publication Date Title
HU229255B1 (en) Vaccines
ES2295229T3 (es) Vacunas contra canceres.
US8557247B2 (en) Lyophilised antigen composition
JP2007508272A (ja) インターロイキン１８およびサポニンアジュバント系を含むワクチン組成物
JP2004511529A (ja) 免疫刺激性オリゴヌクレオチドおよびトコールを含むアジュバント組成物
JP2008285487A (ja) ワクチン
JP5307859B2 (ja) ワクチン
MXPA01010654A (en) Vaccines
ZA200302885B (en) Vaccines.