NO322476B1 - Rekombinant MVA-virus og anvendelser derav - Google Patents
Rekombinant MVA-virus og anvendelser derav Download PDFInfo
- Publication number
- NO322476B1 NO322476B1 NO19980026A NO980026A NO322476B1 NO 322476 B1 NO322476 B1 NO 322476B1 NO 19980026 A NO19980026 A NO 19980026A NO 980026 A NO980026 A NO 980026A NO 322476 B1 NO322476 B1 NO 322476B1
- Authority
- NO
- Norway
- Prior art keywords
- virus
- stated
- recombinant mva
- gene
- recombinant
- Prior art date
Links
- 241001183012 Modified Vaccinia Ankara virus Species 0.000 title claims description 174
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims abstract description 112
- 241000700605 Viruses Species 0.000 claims abstract description 64
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 claims abstract description 48
- 238000012217 deletion Methods 0.000 claims abstract description 32
- 230000037430 deletion Effects 0.000 claims abstract description 32
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims abstract description 25
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims abstract description 22
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 claims abstract description 21
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 claims abstract description 21
- 239000013603 viral vector Substances 0.000 claims abstract description 10
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims abstract description 7
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 claims abstract description 5
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims description 93
- 241000700618 Vaccinia virus Species 0.000 claims description 42
- 239000013598 vector Substances 0.000 claims description 41
- 101710137500 T7 RNA polymerase Proteins 0.000 claims description 40
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 claims description 29
- 239000000427 antigen Substances 0.000 claims description 26
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 claims description 26
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 claims description 26
- 239000002245 particle Substances 0.000 claims description 26
- 101000606090 Homo sapiens Tyrosinase Proteins 0.000 claims description 21
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 claims description 19
- 230000001177 retroviral effect Effects 0.000 claims description 19
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 claims description 18
- 230000022532 regulation of transcription, DNA-dependent Effects 0.000 claims description 18
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 claims description 16
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 claims description 14
- 239000003550 marker Substances 0.000 claims description 13
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 claims description 11
- 241000725303 Human immunodeficiency virus Species 0.000 claims description 9
- 201000001441 melanoma Diseases 0.000 claims description 7
- 208000030507 AIDS Diseases 0.000 claims description 6
- 108010084873 Human Immunodeficiency Virus nef Gene Products Proteins 0.000 claims description 6
- 210000003527 eukaryotic cell Anatomy 0.000 claims description 6
- 238000002649 immunization Methods 0.000 claims description 6
- 230000003053 immunization Effects 0.000 claims description 6
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 claims description 5
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 claims description 5
- 238000011282 treatment Methods 0.000 claims description 5
- 208000031886 HIV Infections Diseases 0.000 claims description 4
- 108700005077 Viral Genes Proteins 0.000 claims description 4
- 238000012258 culturing Methods 0.000 claims description 4
- 244000045947 parasite Species 0.000 claims description 4
- 230000002265 prevention Effects 0.000 claims description 4
- 238000013518 transcription Methods 0.000 claims description 4
- 230000035897 transcription Effects 0.000 claims description 4
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 claims description 3
- 208000037357 HIV infectious disease Diseases 0.000 claims description 3
- 210000005260 human cell Anatomy 0.000 claims description 3
- 208000033519 human immunodeficiency virus infectious disease Diseases 0.000 claims description 3
- 244000005700 microbiome Species 0.000 claims description 3
- 230000003362 replicative effect Effects 0.000 claims description 3
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 claims description 3
- 241000712461 unidentified influenza virus Species 0.000 claims description 3
- 241000223960 Plasmodium falciparum Species 0.000 claims description 2
- 208000006454 hepatitis Diseases 0.000 claims description 2
- 231100000283 hepatitis Toxicity 0.000 claims description 2
- 238000002955 isolation Methods 0.000 claims description 2
- 241001529453 unidentified herpesvirus Species 0.000 claims description 2
- 238000001415 gene therapy Methods 0.000 abstract description 4
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 34
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 32
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 18
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 11
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 10
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 10
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 9
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 9
- 241000700647 Variola virus Species 0.000 description 8
- 108020005202 Viral DNA Proteins 0.000 description 8
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 8
- 230000037431 insertion Effects 0.000 description 8
- 238000000034 method Methods 0.000 description 8
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 8
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 8
- 238000002255 vaccination Methods 0.000 description 8
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 7
- 108060008724 Tyrosinase Proteins 0.000 description 7
- 206010046865 Vaccinia virus infection Diseases 0.000 description 7
- 108010067390 Viral Proteins Proteins 0.000 description 7
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 7
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 7
- 208000007089 vaccinia Diseases 0.000 description 7
- 108010035563 Chloramphenicol O-acetyltransferase Proteins 0.000 description 6
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 6
- 241000713772 Human immunodeficiency virus 1 Species 0.000 description 6
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 6
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 6
- 230000002458 infectious effect Effects 0.000 description 6
- 108700004028 nef Genes Proteins 0.000 description 6
- 101150023385 nef gene Proteins 0.000 description 6
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 6
- 108091008146 restriction endonucleases Proteins 0.000 description 6
- QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;hydron;chloride Chemical compound Cl.OCC(N)(CO)CO QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 102000003425 Tyrosinase Human genes 0.000 description 5
- 102000005936 beta-Galactosidase Human genes 0.000 description 5
- 108010005774 beta-Galactosidase Proteins 0.000 description 5
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 5
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 5
- -1 5-bromo-4-chloro-3-indolyl Chemical group 0.000 description 4
- 101000686777 Escherichia phage T7 T7 RNA polymerase Proteins 0.000 description 4
- 102000007056 Recombinant Fusion Proteins Human genes 0.000 description 4
- 108010008281 Recombinant Fusion Proteins Proteins 0.000 description 4
- 238000002105 Southern blotting Methods 0.000 description 4
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 4
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 4
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 4
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 4
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 4
- 230000008029 eradication Effects 0.000 description 4
- 230000000644 propagated effect Effects 0.000 description 4
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 4
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 4
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 4
- 238000001890 transfection Methods 0.000 description 4
- 102000016928 DNA-directed DNA polymerase Human genes 0.000 description 3
- 108010014303 DNA-directed DNA polymerase Proteins 0.000 description 3
- 241000287828 Gallus gallus Species 0.000 description 3
- FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N L-methionine Chemical compound CSCC[C@H](N)C(O)=O FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 3
- 241000712079 Measles morbillivirus Species 0.000 description 3
- 239000003708 ampul Substances 0.000 description 3
- 230000002238 attenuated effect Effects 0.000 description 3
- 230000029087 digestion Effects 0.000 description 3
- 230000036541 health Effects 0.000 description 3
- 230000006801 homologous recombination Effects 0.000 description 3
- 238000002744 homologous recombination Methods 0.000 description 3
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 3
- 230000010354 integration Effects 0.000 description 3
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 description 3
- 238000004806 packaging method and process Methods 0.000 description 3
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 description 3
- 239000008188 pellet Substances 0.000 description 3
- 239000013600 plasmid vector Substances 0.000 description 3
- 230000010076 replication Effects 0.000 description 3
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 3
- 239000013049 sediment Substances 0.000 description 3
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 3
- 230000010474 transient expression Effects 0.000 description 3
- 241001430294 unidentified retrovirus Species 0.000 description 3
- 241000271566 Aves Species 0.000 description 2
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 2
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 2
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 2
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 206010027476 Metastases Diseases 0.000 description 2
- 101710192141 Protein Nef Proteins 0.000 description 2
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 2
- 230000003127 anti-melanomic effect Effects 0.000 description 2
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 2
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 2
- 239000001506 calcium phosphate Substances 0.000 description 2
- 229910000389 calcium phosphate Inorganic materials 0.000 description 2
- 235000011010 calcium phosphates Nutrition 0.000 description 2
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 2
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 2
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 2
- 230000008859 change Effects 0.000 description 2
- WIIZWVCIJKGZOK-RKDXNWHRSA-N chloramphenicol Chemical compound ClC(Cl)C(=O)N[C@H](CO)[C@H](O)C1=CC=C([N+]([O-])=O)C=C1 WIIZWVCIJKGZOK-RKDXNWHRSA-N 0.000 description 2
- 229960005091 chloramphenicol Drugs 0.000 description 2
- 210000000805 cytoplasm Anatomy 0.000 description 2
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 2
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 2
- 210000002257 embryonic structure Anatomy 0.000 description 2
- 108700004025 env Genes Proteins 0.000 description 2
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 2
- 239000012894 fetal calf serum Substances 0.000 description 2
- 210000002950 fibroblast Anatomy 0.000 description 2
- 108700004026 gag Genes Proteins 0.000 description 2
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 2
- 238000009169 immunotherapy Methods 0.000 description 2
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 2
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 2
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 2
- 239000006166 lysate Substances 0.000 description 2
- 210000001161 mammalian embryo Anatomy 0.000 description 2
- 239000000463 material Substances 0.000 description 2
- 238000001466 metabolic labeling Methods 0.000 description 2
- 230000009401 metastasis Effects 0.000 description 2
- 229930182817 methionine Natural products 0.000 description 2
- 229940126619 mouse monoclonal antibody Drugs 0.000 description 2
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 2
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 2
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 2
- 108700004029 pol Genes Proteins 0.000 description 2
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 2
- 238000011321 prophylaxis Methods 0.000 description 2
- 239000003531 protein hydrolysate Substances 0.000 description 2
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 2
- 238000012552 review Methods 0.000 description 2
- 238000002415 sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 2
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 2
- UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N streptomycin Chemical compound CN[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@](C=O)(O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@H]1O UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N 0.000 description 2
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 2
- QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H tricalcium bis(phosphate) Chemical compound [Ca+2].[Ca+2].[Ca+2].[O-]P([O-])([O-])=O.[O-]P([O-])([O-])=O QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H 0.000 description 2
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000002604 ultrasonography Methods 0.000 description 2
- 108700026220 vif Genes Proteins 0.000 description 2
- 230000006648 viral gene expression Effects 0.000 description 2
- 230000029812 viral genome replication Effects 0.000 description 2
- 238000001262 western blot Methods 0.000 description 2
- GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N Alpha-Lactose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)O[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N 0.000 description 1
- 108091028026 C-DNA Proteins 0.000 description 1
- 101100275473 Caenorhabditis elegans ctc-3 gene Proteins 0.000 description 1
- 241000282693 Cercopithecidae Species 0.000 description 1
- 108020004638 Circular DNA Proteins 0.000 description 1
- 108091026890 Coding region Proteins 0.000 description 1
- 208000035473 Communicable disease Diseases 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N D-Mannitol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N 0.000 description 1
- 238000012270 DNA recombination Methods 0.000 description 1
- 108090000626 DNA-directed RNA polymerases Proteins 0.000 description 1
- 102000004163 DNA-directed RNA polymerases Human genes 0.000 description 1
- 229920002307 Dextran Polymers 0.000 description 1
- 101100004352 Escherichia coli lacZ gene Proteins 0.000 description 1
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 1
- 108091006905 Human Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- 102000008100 Human Serum Albumin Human genes 0.000 description 1
- 108700020134 Human immunodeficiency virus 1 nef Proteins 0.000 description 1
- 241000713340 Human immunodeficiency virus 2 Species 0.000 description 1
- 102000014150 Interferons Human genes 0.000 description 1
- 108010050904 Interferons Proteins 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 description 1
- 241000713666 Lentivirus Species 0.000 description 1
- 241001289721 Lethe Species 0.000 description 1
- 229930195725 Mannitol Natural products 0.000 description 1
- 241001529936 Murinae Species 0.000 description 1
- 108700026244 Open Reading Frames Proteins 0.000 description 1
- 241000700629 Orthopoxvirus Species 0.000 description 1
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 1
- 229930182555 Penicillin Natural products 0.000 description 1
- JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N Penicillin G Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N 0.000 description 1
- 239000001888 Peptone Substances 0.000 description 1
- 108010080698 Peptones Proteins 0.000 description 1
- 241000224016 Plasmodium Species 0.000 description 1
- 241000700625 Poxviridae Species 0.000 description 1
- 208000005585 Poxviridae Infections Diseases 0.000 description 1
- 241000288906 Primates Species 0.000 description 1
- 241001068263 Replication competent viruses Species 0.000 description 1
- 108700008625 Reporter Genes Proteins 0.000 description 1
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 101150003725 TK gene Proteins 0.000 description 1
- 108700019146 Transgenes Proteins 0.000 description 1
- 102000004142 Trypsin Human genes 0.000 description 1
- 108090000631 Trypsin Proteins 0.000 description 1
- 235000010724 Wisteria floribunda Nutrition 0.000 description 1
- 108020002494 acetyltransferase Proteins 0.000 description 1
- 102000005421 acetyltransferase Human genes 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 210000004102 animal cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 1
- 230000000259 anti-tumor effect Effects 0.000 description 1
- 239000003963 antioxidant agent Substances 0.000 description 1
- 230000005975 antitumor immune response Effects 0.000 description 1
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 1
- 101150036080 at gene Proteins 0.000 description 1
- 238000000376 autoradiography Methods 0.000 description 1
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 1
- 230000033228 biological regulation Effects 0.000 description 1
- 101150055766 cat gene Proteins 0.000 description 1
- 230000034303 cell budding Effects 0.000 description 1
- 239000013553 cell monolayer Substances 0.000 description 1
- 210000003855 cell nucleus Anatomy 0.000 description 1
- 238000012761 co-transfection Methods 0.000 description 1
- 230000001461 cytolytic effect Effects 0.000 description 1
- 230000000120 cytopathologic effect Effects 0.000 description 1
- 230000001086 cytosolic effect Effects 0.000 description 1
- 238000013016 damping Methods 0.000 description 1
- 230000007547 defect Effects 0.000 description 1
- 230000001934 delay Effects 0.000 description 1
- 238000013461 design Methods 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- 231100000676 disease causative agent Toxicity 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 235000013601 eggs Nutrition 0.000 description 1
- 238000004520 electroporation Methods 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 1
- 230000030279 gene silencing Effects 0.000 description 1
- 238000010353 genetic engineering Methods 0.000 description 1
- ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N glutamine Natural products OC(=O)C(N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000010191 image analysis Methods 0.000 description 1
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 1
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 description 1
- 230000005847 immunogenicity Effects 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 1
- 229940079322 interferon Drugs 0.000 description 1
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 description 1
- 210000003292 kidney cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000002372 labelling Methods 0.000 description 1
- 239000008101 lactose Substances 0.000 description 1
- 239000002502 liposome Substances 0.000 description 1
- 239000012139 lysis buffer Substances 0.000 description 1
- 239000000594 mannitol Substances 0.000 description 1
- 235000010355 mannitol Nutrition 0.000 description 1
- 210000002752 melanocyte Anatomy 0.000 description 1
- 229940115256 melanoma vaccine Drugs 0.000 description 1
- MYWUZJCMWCOHBA-VIFPVBQESA-N methamphetamine Chemical compound CN[C@@H](C)CC1=CC=CC=C1 MYWUZJCMWCOHBA-VIFPVBQESA-N 0.000 description 1
- 238000000520 microinjection Methods 0.000 description 1
- 230000009456 molecular mechanism Effects 0.000 description 1
- LWGJTAZLEJHCPA-UHFFFAOYSA-N n-(2-chloroethyl)-n-nitrosomorpholine-4-carboxamide Chemical compound ClCCN(N=O)C(=O)N1CCOCC1 LWGJTAZLEJHCPA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 231100000957 no side effect Toxicity 0.000 description 1
- 210000004940 nucleus Anatomy 0.000 description 1
- 230000008520 organization Effects 0.000 description 1
- 238000007911 parenteral administration Methods 0.000 description 1
- 230000008506 pathogenesis Effects 0.000 description 1
- 230000007918 pathogenicity Effects 0.000 description 1
- 230000009589 pathological growth Effects 0.000 description 1
- 229940049954 penicillin Drugs 0.000 description 1
- 235000019319 peptone Nutrition 0.000 description 1
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 1
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 description 1
- 230000007505 plaque formation Effects 0.000 description 1
- 239000001267 polyvinylpyrrolidone Substances 0.000 description 1
- 235000013855 polyvinylpyrrolidone Nutrition 0.000 description 1
- 229920000036 polyvinylpyrrolidone Polymers 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 239000000047 product Substances 0.000 description 1
- 230000000069 prophylactic effect Effects 0.000 description 1
- 229940021993 prophylactic vaccine Drugs 0.000 description 1
- 230000005180 public health Effects 0.000 description 1
- 238000010188 recombinant method Methods 0.000 description 1
- 238000007790 scraping Methods 0.000 description 1
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 1
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 1
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 1
- 239000011550 stock solution Substances 0.000 description 1
- 229960005322 streptomycin Drugs 0.000 description 1
- 238000001356 surgical procedure Methods 0.000 description 1
- 230000008685 targeting Effects 0.000 description 1
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 1
- 239000003104 tissue culture media Substances 0.000 description 1
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 1
- 230000001131 transforming effect Effects 0.000 description 1
- 230000001052 transient effect Effects 0.000 description 1
- 238000003146 transient transfection Methods 0.000 description 1
- 239000012588 trypsin Substances 0.000 description 1
- 201000008827 tuberculosis Diseases 0.000 description 1
- 230000017613 viral reproduction Effects 0.000 description 1
- 210000002845 virion Anatomy 0.000 description 1
- 230000001018 virulence Effects 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
- C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
- C12N15/85—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for animal cells
- C12N15/86—Viral vectors
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K48/00—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy
- A61K48/0091—Purification or manufacturing processes for gene therapy compositions
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
- A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
- A61P31/16—Antivirals for RNA viruses for influenza or rhinoviruses
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
- A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
- A61P31/18—Antivirals for RNA viruses for HIV
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
- A61P31/20—Antivirals for DNA viruses
- A61P31/22—Antivirals for DNA viruses for herpes viruses
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/02—Immunomodulators
- A61P37/04—Immunostimulants
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/005—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from viruses
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
- C12N15/52—Genes encoding for enzymes or proenzymes
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N7/00—Viruses; Bacteriophages; Compositions thereof; Preparation or purification thereof
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/0004—Oxidoreductases (1.)
- C12N9/0055—Oxidoreductases (1.) acting on diphenols and related substances as donors (1.10)
- C12N9/0057—Oxidoreductases (1.) acting on diphenols and related substances as donors (1.10) with oxygen as acceptor (1.10.3)
- C12N9/0059—Catechol oxidase (1.10.3.1), i.e. tyrosinase
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/10—Transferases (2.)
- C12N9/12—Transferases (2.) transferring phosphorus containing groups, e.g. kinases (2.7)
- C12N9/1241—Nucleotidyltransferases (2.7.7)
- C12N9/1247—DNA-directed RNA polymerase (2.7.7.6)
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/51—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising whole cells, viruses or DNA/RNA
- A61K2039/525—Virus
- A61K2039/5256—Virus expressing foreign proteins
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2710/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA dsDNA viruses
- C12N2710/00011—Details
- C12N2710/24011—Poxviridae
- C12N2710/24111—Orthopoxvirus, e.g. vaccinia virus, variola
- C12N2710/24141—Use of virus, viral particle or viral elements as a vector
- C12N2710/24143—Use of virus, viral particle or viral elements as a vector viral genome or elements thereof as genetic vector
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2740/00—Reverse transcribing RNA viruses
- C12N2740/00011—Details
- C12N2740/10011—Retroviridae
- C12N2740/16011—Human Immunodeficiency Virus, HIV
- C12N2740/16311—Human Immunodeficiency Virus, HIV concerning HIV regulatory proteins
- C12N2740/16322—New viral proteins or individual genes, new structural or functional aspects of known viral proteins or genes
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
- Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
- Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Virology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Public Health (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Oncology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Manufacturing & Machinery (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Pulmonology (AREA)
- AIDS & HIV (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
Description
Den foreliggende oppfinnelse angår rekombinante vaccinia vira avledet fra modifisert vaccinia virus Ankara (MVA) og inneholder, og er i stand til å uttrykke fremmede gener som er innskutt på setet til en naturlig fore-kommende delesjon i MVA-genomet, og anvendelser av slike rekombinante MVA-vira for fremstilling av polypeptider, for eksempel antigener eller terapeutiske midler, eller virale vektorer for genterapi, og anvendelse av slike rekombinante MVA-vira som koder antigener som vaksiner.
Vaccinia virus, et medlem av slekten Orthopoxvirus i familien til Poxviridae ble brukt som levende vaksine for å immunisere mot menneskelig koppesykdom. Vellykket verdensomspennende vaksinering med vaccinia virus kuliminerte i utsletting av variola-virus, det forårsakende agens for kopper (The global eradication of smallpox. Final report of the global commision for the certification of smallpox eradication. History of Public Health, No. 4, Geneva: World Health Organization, 1980). Siden WHO erklæringen, har vaksinering universelt blitt avbrutt untagen for folk som har høy risiko for poxvirus infeksjoner (for eksempel 1 aboratoriearbeidere).
Mer nylig er vaccina vira også blitt brukt til å konstruere virale vektorer for rekombinant genekspresjon og for den potensielle anvendelse som rekombinante levende vaksiner (Mackett, M., Smith, G.L. og Moss, B. [1982] P.N.A.S. USA 79, 7415-7419; Smith, G.L., Mackett, M. og Moss, B. [1984] Biotechnology and Genetic Engineering Reviews 2, 383-407). Dette medfører DNA-sekvenser (gener) som koder for fremmede antigener som blir innført, ved hjelp av DNA rekombinante teknikker, inn i genomet til vaccinia vira. Hvis genet blir integrert pi et sete i det virale DNA som ikke er essensielt for livssyklusen for virus, er det mulig for den nyproduserte rekombinante vaccinia virus å være infeksiøs, det vil si være i stand til å infisere fremmede celler og således uttrykke den integrerte DNA-sekvens (EP patent søknader nr. 83,286 og nr. 110,385). De rekombinante vaccinia vira fremstillt på denne måte kan anvendes, på den ene siden som levende vaksinei for profylakse av infeksiøse sykdommer, på den andre side for fremstilling av heterologiske proteiner i eukaryote celler.
Rekombinant vaccinia virus som uttrykker bakteriofag T7 RNA polymerase genet tillot etablering av bredt utnyttbare ekspresjonssystemer for syntese av rekombinante proteiner i pattedyrceller (Moss, B., Elroy-Stein, O., Mizukami, T., Alexander, W.A., og Fuerst T.R. [1990] Nature 348, 91-92.). I alle protokoller avhenger rekombinant geneekspresjon av syntese av T7 RNA polymerase i cytoplasma til eukaryote celler. Mest populær ble en protokoll for transientekspresjon (Fuerst, T.R., Niles, E.G., Studier, F.W. og Moss, B. [1986] Proe. Nati. Acad. Sei. USA 83, 8122-8126 og US patentsøknad 7.648.971). Først blir et fremmed gen av interesse innskudd i et plasmid under kontroll av T7 RNA polymerase promoter. I det følgende blir plasmidet innført i cytoplasma til celler infisert med en rekombinant vaccinia virus som produserer T7 RNA polymerase ved å bruke standard trans-feksjonsprosedyrer.
Denne transfeksjonsprotokollen er enkel fordi ingen nye rekombinante vira behøver å bli produsert, og meget effektiv med større enn 80% av cellene som uttrykker genet av interesse (Elroy-Stein, O. og Moss, B. [1990] Proe. Nati. Acad. Sei. USA 87, 6743-6747). Fordelen av vaccinia virus / T7 RNA polymerase hybrid systemet over andre transiente ekspresjonssystemer er mest sannsynlig dets uavhengighet av transport av plasmidene til den cellulære kjernen. I fortid har systemet vært ekstremt nyttig for analytiske hensikter i virulogi og cellebiologi (Buonocore, L. og Rose, J.K. [1990] Nature 345, 625-628, Pattnaik, A.K. og Wertz, G.W. [1991] Proe. Nati. Sei. USA 88, 1379-1383, Karschin, A., Aiyar, J., Gouin, A., Davidson, N. og Lester, H.A. [1991] FEBS Lett. 278, 229-233, Ho, B.Y., Karschin, A., Raymond, J., Brandchek, T., Lester, H.A. og Davidson, N. [1992] FEBS Lett. 301, 303-306, Buchholz, C.J., Retzler C, Homann, H.E., og Neubert, W.J. [1994] Virology 204, 770-776). Imidlertid kan viktige fremtidige anvendelser av vaccinia virus / T7 RNA polymerase hybrid systemet, som for eksempel å danne rekombinante proteiner eller rekombinante viruspartikler for nye terapeutiske eller profylaktiske tilnærminger hos mennesker, hindre den produktive replikasjon av rekombinant vaccinia vektor.
Vaccinia virus er infeksiøs for mennesker og under kampanjen for utsletting av kopper ble det observert enkelte alvorlige komplikasjoner. Det beste oversikt over komplikasjonsinsidensen er gitt av en nasjonal undersøkelse i USA som overvåket vaksinasjonen av ca. 12 millioner mennesker med en vaksine basert på New York City Board of Health stamme av vaccinia virus (Lane, J., Ruben, F., Neff, J. og Millar, J. [1969] New Engl. J. Med. 281, 1201-1208). Derfor har det mest spennende mulighet til å bruke vaccinia virus som vektor for utvikling av rekombinante levende vaksiner blitt påvirket av sikkerhetsvurderinger og reguleringer. Videre er mesteparten av de rekombinante vaccinia vira beskrevet i litteraturen basert på Western Reserve stamme av vaksinia virus. På den annen side er det kjent at denne stammen har en høy nevrovirulens og således dårlig egnet for anvendelse i mennesker og dyr (Morita et al., Vaccine 5, 65-70 [1987]).
For vektoranvendelser ville helserisiko bli forminsket ved anvendelse av en i stor grad svekket stamme av vaccinia virus. Flere slike stammer av vaccinia virus ble spesielt utviklet for å undgå uønskede bivirkninger av koppevaksinering. Således har den modiserte vaccinia virus Ankara (MVA) blitt dannet ved langtids seriepassasjer av Ankara-stammen til vaccinia virus (CVA) på fibroblaster fra kyllingembryo (for oversikt se Mayr, A., Hochstein-Mintzel, V. og Stickl, H.
[1975] Infection 3, 6-14; Sveitsisk patent søknad nr. 568,392). MVA-virus ble deponert i overensstemmelse med kravene i Budapest avtalen ved CNCM (Institut Pasteur, Collection Nationale de Cultures de Microorganisms, 25, rue du Doctor Roux, 75724 Paris Cedex 15) den 15. desember 1987 under Deposisjons nr.I-721. MVA er adskilt ved sin sterke dempning, det vil si nedsatt virulens eller infeksiøsitet mens den opprettholder god immunigenisitet. MVA virus er blitt analysert for å bestemme forandringene i genomet relativt til vill-type CVA stamme. Seks viktige delesjoner i genomisk DNA (delesjon I, II, III, IV, V og VI) totalt 31000 basepar er blitt identifisert (Meyer, H., Sutter, G. og Mayr, A. [1991] J. Gen. Virol. 72, 1031-1038). Det resulterende MVA virus ble alvorlig vertcelle-restriktert til fugleceller. Videre er MVA kjennetegnet ved dens ekstreme dempning. Når den blir testet i et utvalg av dyremodeller har MVA vist seg å være avvirulent til og med i immunoundertrykkede dyr. Mer viktig er de utmerkede egenskapene til MV A-stammen blitt demonstrert i utstrakte kliniske utprøvninger (Mayr et al., Zbl. Bakt. Hyg. I, Abt. Org- B 167, 375-390 [1987], Stickl et al., Dtch. med. Wschr. 99, 2386-2392 [1974]). I disse undersøkelsene av over 120000 mennesker, inkludert høy-risiko pasienter, ble ingen bivirkninger assosiert med anvendelse av MVA-vaksinen.
MVA-replikasjon i humane celler ble funnet å være blokkert sent i infeksjonen, som hindrer ansamling til modne infeksiøse virioner. Ikke desto mindre var MVA i stand til å uttrykke virale og rekombinante gener på høyt nivå til og med i ikke-permissive celler og ble foreslått å tjene som en effektiv og eksepsjonell sikker geneekspresjonsvektor (Sutter, G. og Moss, B. [1992] Proe. Nati. Acad. Sei. USA 89, 10847-10851). Nylig ble nye vaccinia vektorsystemer etablert på basis av MVA, som har fremmede DNA-sekvenser innskutt på setet til delesjon III i MVA genomet eller i TK-genet (Sutter, G. og Moss, B. [1995] Dev. Biol. Stand. Basel, Karger 84, 195-200 og US patent 5.185.146).
Det er derfor en hensikt med foreliggende oppfinnelse å tilveiebringe en rekombinant MVA-virus som kan tjene som en effektiv og eksepsjonelt sikker ekspresj onsvektor.
En annen hensikt med foreliggende oppfinnelse er å tilveiebringe et ekspresjonssystem basert på en rekombinant MVA-virus som uttrykker T7 RNA polymerase, og anvendelse av dette for fremstilling av polypeptidene, for eksempel antigener eller terapeutiske midler, eller for å danne virale vektorer for genterapi eller vaksiner.
Disse hensikter er oppnådd med foreliggende oppfinnelse, kjennetegnet ved det som fremgår av de vedlagte krav.
For videre å utforske anvendelse av MVA er det blitt søkt etter en ny mulig måte å introdusere fremmede gener ved DNA rekombinasjon MV A-stammen til vaccinia virus. Siden hensikten ikke var å forandre MVA virus genomet var det nødvendig å bruke en fremgangsmåte som er overensstemmende med dette kravet. I henhold til foreliggende oppfinnelse ble en fremmed DNA-sekvens rekombinert inn i viralt DNA presist på setet til en naturlig forekommende delesjon i MVA-genomet.
Den foreliggende oppfinnelse omfatter således blant annet det følgende, alene eller i kombinasjon: Et rekombinant MVA-virus som inneholder og er i stand til å uttrykke minst ett fremmed gen innskutt i setet til en naturlig forekommende delesjon i MVA-genomet;
Et rekombinant MVA-virus som ovenfor som inneholder og er i stand til å uttrykke minst ett fremmed gen innskutt i setet til delesjon II i MVA-genomet;
Et rekombinant MVA-virus som ovenfor hvori det fremmede gen koder for en markør, et terapeutisk gen eller en anti-gen determinant;
Et rekombinant MVA-virus som ovenfor hvori det fremmede gen koder for en antigen determinant fra et patogent virus, en bakterie, eller en annen mikroorganisme, eller fra en parasitt eller en tumorcelle;
Et rekombinant MVA-virus som ovenfor hvori det fremmede gen koder for en antigen determinant fra et Plasmodium falciparium, Mycobakteria, Herpes virus, influensa virus, hepatitt eller human immunosvikt virus;
En rekombinant MVA-virus som ovenfor hvori antigen determinanten er HIVnef eller human tyrosinase;
Et rekombinant MVA-virus som ovenfor som er HIV-LAInef eller MVA-hTYR;
Et rekombinant MVA-virus som ovenfor hvori det fremmede genet koder for T7 RNA polymerase;
Et rekombinant MVA-virus som ovenfor som er MVA-T7 pol;
Et rekombinant MVA-virus som inneholder og er i stand til å uttrykke et gen som koder for et humant tyrosinase antigen eller antigen determinant, hvor nevnte gen er innskutt i MVA-genet.
Et rekombinant MVA-virus som inneholder og er i stand til å uttrykke et gen som koder for et HIVnef antigen eller antigen determinant, hvor nevnte gen er innskutt i MVA genomet.
Et rekombinant MVA-virus som ovenfor hvori det fremmede gen er under transkripsjonen kontroll av vaksinia virus tidlig/sent promoter P7.5;
Rekombinante MVA-vira som ovenfor, essentielt fri for vira som er i stand til å replikeres i humane celler;
Anvendelse av et rekombinant MVA-virus som ovenfor for transkripsjon av DNA-sekvenser under transkripsjonen kontroll av en T7 RNA polymerase promoter;
Eneukaryot celle infisert med et rekombinant MVA-virus, som ethvert ovenfor;
En celle infisert med et rekombinant MVA-virus som ovenfor, hvori det fremmede gen koder for T7 RNA polymerase, som i tillegg inneholder en eller flere ekspresjonsvektorer som bærer en eller flere fremmede gener under transkripsjonen kontroll av en T7 RNA polymerase promoter;
Anvendelse av celler som ovenfor for fremstilling av polypeptider kodet av nevnte fremmede gen, som omfatter:
a) å dyrke nevnte celler under egnede betingelser, og
b) å isolere polypeptidene kodet av nevnte fremmede gener;
En celle av et rekombinant MVA-virus som ovenfor, hvori det fremmede gen koder
for T7 RNA polymerase, i tillegg som inneholder ekspresjonsvektorer som bærer virale deler, og/eller en viral vektor-konstruksjon som koder genomet til en viral vektor under transkripsjonen kontroll av en T7 RNA polymerase promoter;
Anvendelse av en celle som ovenfor for fremstilling av virale partikler som omfatter;
a) å dyrke nevnte celler under egnede betingelser, og
b) å isolere virale partikler;
En celle infisert av et rekombinant MVA-virus som ovenfor, hvori det fremmede
genet koder for T7 RNA polymerase, og i tillegg inneholder
a) en ekspresjonsvektor som bærer en retroviral vektor-konstruksjon som er i stand til å infisere og styre ekspresjonen i målceller for en eller
flere fremmede gener båret av nevnte retro virale vektor-konstruksjon,
og
b) en eller flere ekspresjonsvektorer som bærer genene som koder polypeptidene, nødvendig for genomet til nevnte retrovirale vektor-konstruksjon for å bli pakket under transkripsjonen kontroll av en T7 RNA polymerase promoter;
Anvendelse av celler som ovenfor for fremstilling av retrovirale partikler som omfatter
a) å dyrke celler under egnede betingelser, og
b) å isolere de retrovirale partikler;
En vaksine som inneholder en rekombinant MVA-virus som ovenfor, hvori det
fremmede gen koder for en antigen determinant i en fysiologisk aksepabel bærer;
Anvendelse av et rekombinant MVA-virus som ovenfor, hvori det fremmede gen koder for et antigen-determinantpreparat av en vaksine, til fremstilling av en vaksine.
Rekombinant MVA-virus og/eller vaksine som nevnt ovenfor for immunisering av en levende dyrekropp, inkludert et menneske, som omfatter inokulering av nevnte levende dyrekropp inkludert et menneske, med vaksinen og/eller med det rekombinante MVA virus.
Vaksine som inneholder rekombinant MVA inkludert HIVnef-genet for forhindring eller behandling av HIV infeksjon eller AIDS.
Vaksine som inneholder MVA inkludert det humane tyrosinase genet for forhindring eller behandling av melanom.
En vaksine som omfatter som en første komponent, en rekombinant MVA-virus som ovenfor, hvori det fremmede gen koder for T7 RNA polymerase i en fysiologisk akseptabel bærer, og som en andre komponent en DNA-sekvens som bærer en antigen determinant under transkriptsjonell kontroll av en T7 RNA polymerase promoter i en fysiologisk akseptabel bærer, hvor de to komponenter blir holdt sammen eller adskilt;
Vaksine som ovenfor for immunisering av en levende dyrekropp, inkludert et menneske, som omfatter inokulering av nevnte levende dyrekropp, inkludert et menneske, med den første og andre komponent av vaksinen, enten samtidig eller med en tidsforsinkelse ved å bruke det samme inokuleringssete; og anvendelse av rekombinant MVA virus for fremstilling av en vaksine.
Anvendelse av en rekombinant MVA-virus som angitt ovenfor til fremstilling av en vaksine.
Betegnelsen "gen" betyr enhver DNA-sekvens som koder for et protein eller peptid. Betegnelsen "fremmed gen" betyr et gen innskutt i en DNA-sekvens i hvilken det normalt ikke finnes.
Det fremmede gen kan være et markørgen, et terapeutisk gen, et gen som koder en antigen determinant eller et viralt gen. Slike gener er velkjente på området.
Modifisert vaccinia virus Ankara (MVA), en områdebegrenset og meget dempet vaccinia virus vertsstamme, er ikke i stand til å formere seg hos mennesker og mesteparten av andre pattedyrcellelinjer undersøkt. Men siden viral genekspressjon er upåvirket i ikke-permissive celler kan de rekombinante MVA-vira i henhold til oppfinnelsen benyttes som eksepsjonelt sikre og effektive ekspresjonsvektorer.
Rekombinante MVA vira som koder en antigen determinant.
I en utforming angår den foreliggende oppfinnelse rekombinante MVA vaccinia vira som inneholder et gen som koder for et fremmed antigen, fortrinnsvis et patogent agens, og vaksiner som inneholder et slikt virus i en fysiologisk akseptabel form. Oppfinnelsen angår også fremgangsmåter til fremstilling av slike rekombinante MVA vaccinia vira eller vaksiner, og til anvendelse av disse vaksiner for profylakse av infeksjoner forårsaket av slike patogene agens.
En foretrukket utførelse av oppfinnelsen er det fremmede gen innskutt i MVA-viruset et gen som koder HIV-nef.
Vi har konstruert rekombinante MVA-vira som tillater ekspresjon av HIV-lnef genet under kontroll av vaccinia virus tidlig/sen promoter P7.5. Det regulerbare Nef protein fra primat lentivirus blir syntetisert tidlig i den virale replikasjonssyklus og er blitt vist å være essensielt for virus replikasjon med høy titer og sykdomsinduksjon in vivo. Dette foreslår at HIV nef kan spille en avgjørende rolle i AIDS patogenese. Den (de) molekylær(e) mekanisme(r) med hvilke nef bidrar til øket viral infeksiøsitet og til HIV patogenitet har behov for å bli ytterligere utredet. Nef er imidlertid immunogen og nef-spesifikt antigen kan brukes som en vaksine mot HIV-infeksjon og AIDS.
I denne sammenheng kan det rekombinante MVA-virus som uttrykker HIV nef genet anvendes for immunisering av mennesker, på en side som en profylaktisk vaksine mot human HIV, og på den annen side for immunoterapi for HIV-infiserte eller AIDS pasienter. Videre kan det rekombinante MVA-virus som uttrykker HIV nef genet anvendes for fremstilling av rekombinant HIV nef protein.
I en annen foretrukken utforming i henhold til oppfinnelsen er det fremmede gen innskutt i MVA-virus et gen som koder for human tyrosinase.
Vi har konstruert rekombinante MVA-vira som tillater ekspresjon av det humane tyrosinase gen under kontroll av vaccinia virus tidlig/sen promoter P7.5. Nylig ble human tyrosinase identifisert som et melanom-spesifikt tumor antigen som tillater dannelse av anti-tumor cytolytiske T-lymfocytter (Brichard, V., et al. [1993] J. Exp. Med. 178, 489-495). Siden blant normale celler synes bare melanocyter å uttrykke tyrosinase genet, er tyrosinase et nyttig måleantigen for immunterapi av melanom. Derfor kan det rekombinante MVA-virus som uttrykker det humane tyrosinase gen bli brukt hos melanom-pasienter for å indusere immunresponser som påvirker tumoravstøtning eller forhindrer metastase. Rekombinant MVA-virus som uttrykker det humane tyrosinase gen kan anvendes direkte som en anti-melanom vaksine, eller viruset kan brukes til å fremstille anti-melanom vaksiner. I et eksempel kan det rekombinante MVA-virus som uttrykker det humane tyrosinase gen anvendes for fremstilling av rekombinant tyrosinase protein som blir brukt som antigen i vaksinepreparater. I et annet eksempel kan, ved å bruke det rekombinante MVA-virus som uttrykker det humane tyrosinase gen som ekspresjonsvektor, celler avledet fra en tumor-pasient modifiseres in vitro for å uttrykke tyrosinase og deretter overføres tilbake til pasienten for å indusere anti-tumor immunresponser. En vaksine fremstillt på basis av rekombinant MVA som uttrykker det humane tyrosinase gen kan anvendes enten parenteralt eller lokalt på tumorstedet, for å forhindre tumor metastase eller for fenotypisk å forandre tumor, for eksempel i størrelse, fasong, konsistens, vaskularisering eller andre trekk. En vaksine fremstillt på basis av rekombinant MVA som uttrykker det humane tyrosinase gen kan anvendes før, under og etter kirurgisk fjerning av tumoren.
For fremstilling av vaksiner blir MVA vaccinia vira i henhold til oppfinnelsen konvertert til en fysiologisk akseptabel form. Dette kan gjøres basert på erfaring med fremstilling av MV A-vaksiner brukt for vaksinasjon mot kopper (som beskrevet av Stickl, H. et al. [1974] Dtsch. med. Wschr. 99, 2386-2392). Typisk er ca. IO<6->IO<8> partikler av det rekombinante MVA frysetørket i 100 ml fosfatbufret saltoppløsning (PBS) i nærvær av 2% pepton og 1% humant albumin i en ampulle, fortrinnsvis en glassampulle. Lyofilisatet kan inneholde utvidelsesstoffer (så som mannitol, dextran, sukker, glycin, laktose eller polyvinylpyrrolidon) eller andre hjelpemidler (så som antioksidanter, stabilisatorer etc.) egnet for parenteral administrasjon. Glassampullen ble deretter forseglet og kan lagres, fortrinnsvis ved temperaturer under -20°C i flere måneder.
For vaksinasjon eller terapi kan lyofilisatet oppløses i 0,1 til 0,5 ml av en vandig oppløsning, fortrinnsvis fysiologisk saltoppløsning og administreres enten parenteralt, for eksempel ved intramuskulær inokulering eller lokalt, for eksempel ved inokulering i en tumor eller på et tumorsted. Vaksiner eller terapeutiske midler i henhold til oppfinnelsen blir fortrinnsvis injisert intramuskulært (Mayr, A. et al.
[1978] Zbl. Bakt. Hyg., I. Abt. Orig. B 167, 375-390). Administrasjonsmåten, dosen og antall administrasjoner kan optimaliseres på en kjent måte av de som har kunnskap på området. Det er formålstjenlig hvor det passer å administrere vaksinen flere ganger over en lang periode for å oppnå egnede immunresponser mot det fremmede antigen.
Anvendelse av rekombinante MVA- vira for produksjon av heterologe polypeptider De rekombinante MVA vaccinia vira i henhold til oppfinnelsen kan også anvendes til å fremstille heterologe polypeptider i eukaryote celler. Dette medfører at celler blir infisert med de rekombinante MVA vaccinia vira. Genet som koder for det fremmede polypeptid blir uttrykt i cellene, og det uttrykte heterologe polypeptid blir isolert. Fremgangsmåten som anvendes for fremstilling av slike heterologe polypeptider er generelt kjent for de med kunnskaper på området (EP-A-206, 920 og EP-A-205, 939). Polypeptidene produsert ved hjelp av de rekombinante MVA-vira er, på grunn av de spesielle egenskaper hos MVA-vira, mer egnet for bruk som medikamenter til mennesker og dyr.
Rekombinante MVA- vira som koder T7 RNA polymerase og anvendelse derav for ekspresjon av DNA- sekvenser under transkripsjonen kontroll av en T7 RNA polymerase promoter
I en ytterligere utforming i henhold til foreliggende oppfinnelse har vi konstruert rekombinante MVA-vira som tillater ekspresjon av bakteriofag T7 RNA polymerase gen under kontroll av vaccinia virus tidlig/sen promoter P7.5. Anvendbarheten til MVA-T7pol rekombinante vira som ekspresjon-system er blitt testet i transiente transfeksjonsassayer for å indusere ekspresjon av antigener under kontroll av T7 RNA polymerase promoter. Ved å bruke E.coli kloramfenicol acetyltransferase (AT) gen som et rapportgen fant vi at MVA-T7pol induserte AT geneekspresjon like effektivt som et vaccinia/T7pol rekombinant virus avledet fra den replikasjons-kompetente WR stamme av vaccinia virus.
MVA/T7 polymerase hybrid system i henhold til oppfinnelsen kan således anvendes som et enkelt, effektivt og sikkert pattedyr ekspresjonssystem for fremstilling av polypeptider i fravær av produktiv vaccinia virus replikasjon.
Dette ekspresjonssytem kan også anvendes for å danne rekombinante viruspartikler for vaksinasjon eller genterapi ved transformasjon av cellelinjer infisert med rekombinant MVA som uttrykker T7 RNA polymerase, med DNA-konstruksjoner som inneholder alle eller noen av genene, og genomet eller rekombinant genom nødvendig for å danne viruspartikler, for eksempel MVA-partikler eller retrovirale partikler, under transkripsjonen kontroll av en T7 RNA polymerase promoter.
Retrovirale vektor systemer som består av to komponenter:
1) Den retrovirale vektor i seg selv er en modifisert retrovirus (vektor plasmid) i hvilken genene som koder for de virale proteiner er blitt erstattet av terapeutiske gener og markørgener som skal overføres til målcellen. Siden erstatningen av genene som koder for de virale proteiner effektivt forkrøpler virus må den reddes av den andre komponent i systemet som tilveiebringer de manglende virale proteiner til den modifiserte retrovirus.
Den andre komponent er:
2) En cellelinje som produserer store mengder av de virale proteiner, men som imidlertid mangler evnen til å produsere replikasjonskompetent virus. Denne cellelinje er kjent som pakkecellelinje og består av en cellelinje transfektert med en eller flere plasmider som bærer genene (genene som koder gag, pol og env polypeptider) som gjør det mulig for den modifiserte retrovirale vektor å bli pakket.
For å danne den pakkede vektor blir vektorplasmidet transfektert inn i pakke-cellelinjen. Under disse betingelser blir det modifiserte retrovirale genom, som inkluderer de inskutte terapeutiske gener og markørgener, transkribert fra vektorplasmidet og pakket inn i de modifiserte retrovirale partikler (rekombinante virale partikler). Denne rekombinante virus ble deretter brukt for å infisere målceller, i hvilke vektorgenomet og enhver båret markør eller terapeutiske gener ble integrert inn i målcellens DNA. En celle infisert med en slik rekombinant viruspartikkel kan ikke produsere nye vektor virus siden ingen virale proteiner er tilstede i disse celler. Imidlertid blir DNA i vektoren som bærer de terapeutiske gener og markørgener integrert i cellens DNA og kan nå uttrykkes i den infiserte celle.
Den rekombinante MVA-virus i henhold til oppfinnelsen som uttrykker
T7 RNA polymerase kan bli brukt til å produsere de proteiner som er nødvendig for å pakke retrovirale vektorer. For å gjøre dette blir gag, pol og env gener til et retrovirus (for eksempel Murin Leukamia Virus (MLV)) plassert under transkriptsjonell kontroll av en T7 RNA polymerase promoter i en eller flere ekspresjonsvektorer (for eksempel plasmider). Ekspresjons-vektorene ble deretter innført i cellene infisert med det rekombinante MVA-virus som uttrykker T7 RNA polymerase, sammen med en ekspresjonsvektor som bærer en retro viral vektorkonstruksjon, eventuelt under transkriptsjonell kontroll av en T7 RNA polymerase promoter.
Wo 94/29437, WO 89/11539 og WO 96/07748 beskriver forskjellige typer av retrovirale vektorkonstruksjoner som kan pakkes ved å bruke pakkesystem beskrevet ovenfor.
En ytterligere anvendelse av den rekombinante MVA-virus som uttrykker
T7 RNA polymerase er å danne rekombinante proteiner, ikke-infeksiøse viruspartikler eller infeksiøse mutante viruspartikler for produksjon av vaksiner eller terapeutika (Buckholz et al., Virology, 204, 770-776 (1994) og EP-B1-356695). For å gjøre disse blir virale gener (for eksempel gag, pol og env gener i HIV-1) plassert under transkripsjonen kontroll av T7 promotoren i en ekspresjons vektor (for eksempel plasmid eller en annen rekombinant MVA-virus). Denne konstruksjonen ble deretter innført i cellene infisert med det rekombinante MVA-virus som uttrykker T7 RNA polymerase. De rekombinante virale gener blir deretter transkribert med høy virkningsgrad, rekombinante proteiner blir produsert i store mengder og kan renses. I tillegg kan uttrykte rekombinante virale proteiner (for eksempel HIV-1 env, gag) bygges sammen til virale pseudo-partikler som knopper seg ifra cellen og kan isoleres fra vevskulturmediet. I en annen utforming kan virale proteiner (fra eksempel HIV, SIV, meslingvirus) uttrykt ved MVA-T7pol systemet redde et ytterligere introdusert mutant virus (avledet fra for eksempel HIV, SIV, meslingsvirus) ved å overvinne en defekt i tilfesting og infeksjon, fjerning av kappen, nukleinsyrereplikasjon, viral genekspresjon, sammenkobling, knoppskyting eller et annet trinn i viral formering for å tillate produksjon og rensing av nevnte mutante virus.
MVA-T7pol kan også brukes sammen med DNA-sekvenser som bærer genet til et antigen av interesse (for eksempel genet HIV, nef, tat, gag, pol, eller env eller andre) for immunisering. Først blir en kodende sekvens til et gitt antigen (for eksempel HIV, HSV, HPV, HSV, meslingvirus, influensavirus eller andre) klonet under kontroll av en T7 RNA polymerase promoter, fortrinnsvis i en plasmidvektor og den resulterende DNA-konstruksjon blir omformert og renset ved å bruke standard laboratoriefremgangsmåter. Dernest blir vektor DNA inokulert samtidig eller med passende tidsforsinkelser sammen med MVA-T7pol. På inokulasjonssetet blir det rekombinante gen av interesse uttrykt forbigående i celler som inneholder både vektor DNA og MVA-T7pol og tilsvarende antigen blir presentert for vertsimmunsystemet og stimulerer en antigenspesifikk immunrespons. Denne protokoll som bruker ikke-replikasjon vaccinia vektor MVA-T7pol representerer en lovende ny tilnærming til nukleinsyrevaksinasjon som tillater effektiv forbigående ekspresjon av et gitt antigen, men unngår den potensielle risk for konstitutiv geneekspresjon.
De rekombinante MVA vaccinia vira kan fremstilles som fremsatt heretter.
En DNA-konstruksjon som inneholder en DNA-sekvens som koder for et fremmed polypeptid flankert av MVA DNA-sekvenser tilstøtende til en naturlig forekommende delesjon, for eksempel delesjon II, i MVA genomet, blir innført i celler infisert med MVA for å tillate homolog rekombinasjon. Når DNA-konstruksjonen er blitt innført i den eukaryote celle og det fremmede DNA er rekombinert med det virale DNA, er det mulig å isolere den ønskede rekombinante vaccinia virus på en måte som er kjent i seg selv, fortrinnsvis ved hjelp av en markør (sammenlign Nakano et al., Proe. Nati. Acad. Sei. USA 79, 1593-1596
[1982], Franke et al., Mol. Cell. Biol. 1918-1924 [1985], Chakrabarti et al., Mol. Cell. Biol. 3403-3409 [1985], Fathi et al., Virology 97-105 [1986]).
DNA-konstruksjonen som skal innskytes kan være lineær eller sirkulær. En sirkulær DNA er foretrukket, spesielt et plasmid. DNA-konstruksjonen inne-holder sekvenser som flankerer den venstre og den høyre side av en naturlig forekommende delesjon, for eksempel delesjon II, i MVA-genomet (Altenburger, W., Suter, CP. og Altenburger J. [1989] Arch. Virol. 105, 15-27). Det fremmede DNA-sekvens blir innskutt mellom sekvensene som flankerer den naturlige forekommende delesjon. Den fremmede DNA-sekvens kan være et gen som koder for et terapeutisk polypeptid, for eksempel t-PA eller interferon eller en antigen determinant fra et patologisk agens. Patologiske agens kan være virus, bakterier og parasitter som kan forårsake en sykdom, såvel som tumorceller som kan dele seg uhindret i en organisme og kan således føre til patologiske vekster. Eksempelet på slike patologiske agens er beskrevet i Davis, B.D. et al. (Microbiology, tredje utgave, Harper International Edition). Foretrukne antigener til patogene agens er de fra human immunodefektvirus (for eksempel HIV-1 og HIV-2), fra Mycobakteria som forårsaker tuberkolose, fra parasitten Plasmodium falciparum og fra melanom-celler.
For ekspresjon av en DNA-sekvens eller gen, er det nødvendig at regulatoriske sekvenser, som er krevet for transkripsjon av genet, er tilstede i DNA. Slike regulatoriske sekvenser (kalt promotere) er kjent for de med kunnskap på området og inkluderer for eksempel vaccinia 11 kDa genet som er beskrevet i EP-A-198, 328 og de fra 7.5 kDa genet (EP-A-110, 385).
DNA-konstruksjonen kan innføres i MVA-infiserte celler ved transfeksjon, for eksempel ved hjelp av kalsiumfosfat utfelling (Graham et al., Virol. 52, 456-467
[1973]; Wigoler et al., Cell 777-785 [1979] ved hjelp av elektroporering (Neumann et al., EMBO J. 1, 841-845 [1982]), ved mikroinjeksjon (Greassmann et al., Meth. Enzymology 101, 482-492 [1983]), ved hjelp av liposomer (Straubinger et al., Methods in Enzymology 101, 512-527 (1983)), ved hjelp av sferoplaster (Schaffner, Proe. Nati. Acad. Sei. USA 77, 2163-2167 (1980)) eller ved hjelp av andre fremgangsmåter kjent for de med kunnskap på området. Transfeksjon ved hjelp av kalsiumfosfatutfelling er foretrukket.
De detaljerte eksempler som følger er ment å bidra til en bedre forståelse av foreliggende oppfinnelse. Figur 1: Skjematisk kart over genomet til MVA og plasmid til innskyting av fremmed DNA ved homolog rekombinasjon: Hindlll restriksjonsseter i genomet til MVA er angitt på toppen. 900-bp Hindlll-Hindlll N fragment som overlapper sammenkoplingen av delesjon II i MVA-genomet er vist. MVA DNA-sekvenser tilstøtende delesjon II (flankl og flank2) ble oppformert ved PCR og brukt for konstruksjon av innskuddsplasmid pUC II LZ.
Figur 2: pUC II LZP7.5: MVA vektor plasmid for innskyting i delesjon
II som inneholder Pl 1-LacZ ekspressjonskassett og vaccinia virus tidlig/sen promoter P7.5 for å uttrykke gener av interesse som kan klones inn i Smal setet til plasmidet. Figur 3: pUCII Lzdel P7.5: MVA vektor plasmid for innskyting av fremmede gener i setet til delesjon II i MVA genomet, som inneholder en selv-deleterende Pl 1-LacZ ekspresjonskassett og vaccinia virus tidlig/sent promoter P7.5 for å uttrykke gener av interesse som kan klones inn i Smal / Noti kloningssetet til plasmidet. Figur 4: Konstruksjon av rekombinant virus MVA-T7pol: skjematiske kart over MVA genomet (Hindlll restriksjonsendenukleasesete) og vektor plasmid pUC II LZ T7pol som tillater innskyting av T7 RNA polymerase gen i setet til delesjon II i Hindlllfrag-mentet til MVA genomet.
Figur 5: Southern blot analyse av MVA-T7pol virus DNA.
Figur 6: Metabolsk merking av proteiner ved å bruke [<35>S] metionin.
SDS PAGE analyse. Felt 1: MVA T7pol, felt 2: MVA, felt 3:
CV-1 celler.
Figur 7: CAT assay: CV-1 celler transfektert med plasmid som inneholder CAT gen under kontroll av T7 RNA polymerase promoter og infisert med MVA-T/pol eller WR-T7pol. Lysater ble testet for CAT aktivitet. C betyr kloramfenicol og 1-AcC og 3-AcC betyr mono- og tri-acetylerte former av kloramfenicol.
CAT aktivitet er uttrykt som prosentandel av acetylert produkt dannet i 60 min.
Figur 8: Konstruksjon av MVA-LAlnef: skjematiske kart av MVA
genomet (Hindlll restriksjonsendonuklease seter) og vektor plasmid pUC II LZdel P7.5-LAlnef som tillater innskyting av nef genet fra HIV-1 Lal i setet til delesjon II med Hindlll N fragmentet til MVA genomet.
Figur 9: Konstruksjon av MVA-hTYR: skjematiske kart av MVA
genomet (Hindlll restriksjons endonuklease setet) og vektor plasmidet pUC II LZdel P7.5-TYR som tillater innskyting av det humane tyrosinasegenet i setet til delesjon II i Hindlll N fragmentet til MVA genomet.
Eksempler
1. Dyrking og rensing av vira
1.1 Dyrking av MVA virus
MVA virus er en i stor grad svekket vaccinia virus avledet fra vaccinia virus stamme Ankara (CVA) ved lang tids serie passasjer på primær kylling embryo fibroblast (CEF) kulturer. For generell oversikt over produksjons-historien, egenskaper og anvendelse av MVA stammen kan det refereres til oversikten publisert av Mayr et al. i Infektion 3, 6-14 [1975]. På grunn av demping i CEF replikerer MVA virus i høye titere i denne fuglevertcellen. I pattedyrceller er imidlertid MVA meget sterkt vekstrestriktert, og typisk plakkdannelse av virus er ikke detekterbart. Derfor ble MVA virus dyrket på CEF celler. For å fremstille CEF celler ble 11-dager gamle embryoer isolert fra inkuberte hønseegg, ektremitetene ble fjernet og embryoene ble hakket opp og dissosiert i en oppløsning sammensatt av 0,25% trypsin ved 37°C i 20 minutter. Den resulterende cellesuspensjon ble filtrert og cellene ble sentrifugert ved sentrifugering på 2000 rpm i en Sorvall RC-3B sentrifuge ved romtemperatur i 5 minutter, resuspendert i 10 volum av medium A (MEM Eagle, foreksempel oppnåelig fra Life Technologies GmbH, Eggenstein, Tyskland), og sedimentert igjen ved sentrifugering på 2000 rpm i en Sorvall RC-3B sentrifuge ved romtemperatur i 5 minutter. Cellepelleten ble rekonstituert i medium A som inneholder 10% fetalt kalveserum (FCS), penicillin (100 enheter/ml) streptomycin (100 mg/ml) og 2 mM glutamin for å oppnå en cellesuspensjon som inneholder 500 000 celler/ml. CEF celler oppnådd på denne måte ble spredd ut på celle-kulturskåler. De ble satt til dyrking i medium A i en CO2 inkubator ved 37°C
i 1-2 dager, avhengig av den ønskede celletetthet og ble brukt for infeksjon enten direkte eller etter en ytterligere cellepassasje. Detaljert beskrivelse av preparering
av primære kulturen kan finnes i boken av R. I. Freshney, "Culture of animal cell", Alan R. Liss Verlag, NewYork [1983] kapittel 11, side 99 og påfølgende.
MVA vira ble brukt for infeksjon som følger. CEF celler ble dyrket i 175 cm<2 >celledyrkingsflasker. Ved 90-100% konfluense ble mediet fjernet og cellene ble inkubert i 1 time med en MVA virus suspensjon (0,01 infeksiøse enheter (IU) per celle, 0,02 ml/cm ) i medium A. Deretter ble mer medium A tilsatt (0,2 ml/cm ) og flaskene ble inkubert ved 37°C i 2-3 dager (inntil ca. 90 % av cellene viser cytopatogen virkning). Rå viruslagre ble preparert ved å skrape cellemonolag i mediet og pelletering av cellematerialet ved sentrifugering på 3000 rpm i en Sorvall RC-3B sentrifuge ved 4°C i 5 minutter. Det rå viruspreparat ble lagret ved
-20°C før videre prosessering (for eksempel virus rensing).
1.2 Rensing av vira
Rensetrinnene som må foretas for å oppnå et viruspreparat som var så rent som mulig og fri for komponenter spesifikk for vertcellen, var like de som er beskrevet av Joklik (Virology 18, 9-18 [1962]). Lageret av råvirus som var blitt lagret ved - 20°C ble tint og suspendert i PBS (10-20 ganger volumet av sedimentet), og suspensjonen ble sentrifugert som ovenfor. Det nye sediment ble suspendert i 10 ganger volumet av Tris buffer 1 (lOmM Tris-HCL pH 9,0), og suspensjonen ble kort behandlet med ultralyd (Labsonic L., B. Braun Biotech International, Melsungen Tyskland; 2x10 sekunder ved 60 watt og værelsestemperatur) for ytterligere å desintegrere celleavfallet og frigjøre viruspartikler fra cellematerialet. Cellekjernen og det større celleafall ble fjernet i den påfølgende korte sentrifugering av suspensjonen (Sorvall GSA rotor oppnåelig fra DuPont Co., D-6353 Bad Nauheim, FRG; 3 minutter ved 3000 rpm og 10°C). Sedimentet ble igjen suspendert i Tris buffer 1, behandlet med ultralyd og sentrifugert som beskrevet ovenfor. De oppsamlede supernatanter som inneholder de frie viruspartikler ble kombinert og lagt i lag over en pute av 10 ml 36% sucrose i 10 mM Tris-HCL, pH verdi 9,0, og sentrifugert i en Beckman SW 27/SW 28 rotor i 80 minutter med 13500 rpm ved 4°C. Supernatanten ble kastet og sedimentet som inneholder viruspartiklene tatt opp i 10 ml 1 mM Tris-HCL, pH verdi 9,0, homogenisert ved kort behandling med ultralyd (2x10 sekunder ved romtemperatur, apparat som beskrevet ovenfor) og applisert på en 20-40% sukrose gradient (sukrose i ImM Tris-HCL, pH verdi 9,0) for videre rensing. Gradienten ble sentrifugert i Beckman SW 41 rotor ved 13500 rpm i 50 minutter 4°C. Etter sentri-fugering ble adskilte bånd som inneholder viruspartikler høstet ved pipettering etter aspirering av volumet over båndet. Den oppnådde sukroseløsning ble fortynnet med 3 volumer PBS og viruspartiklene ble igjen sedimentert ved sentrifugering (Beckman SW 27/28, 60 minutter ved 13.500 rpm, 4°C). Pelleten som nå besto for det meste av rene viruspartikler, ble resuspendert i PBS og ekvilibrert til virus konsentrasjoner som tilsvarer i gjennomsnitt l-5xl0<9> IU/ml. Den rensede lageroppløsning ble lagret ved -80°C og brukt enten direkte eller fortynnet med PBS for påfølgende eksperi-menter.
1.3. Kloning av MVA-virus
For å danne homogene lagervirus-preparater ble MVA virus oppnådd fra professor Anton Mayr klonet ved begrenset fortynning gjennom 3 påfølgende passasjer i CEF kulturer på 96-brønners vevskulturplater. MVA klon F6 ble selektert og oppformert i CEF for å oppnå arbeidslagre av virus som tjente som utgangsmateriale for dannelsen av rekombinante MVA vira beskrevet i foreliggende patentsøknad, så vel som for dannelsen av rekombinante MVA vira beskrevet tidligere (Sutter, G. og Moss, B. [1992] Proe. Nati. Acad. Sei. USA 89, 10847-10851; Sutter, C, Wyatt, L., Foley, P., Bennink, J. og Moss, B. [1994] Vaccine 12, 1032-1040; Hirsch, V., Fuerst, T., Sutter, G., Caroll, M., Yang, L., Goldstein, S., Piatak, M., Elkins, W., Alvord, G., Montefiori, D., Moss, B. og Lifson, J. [1996] J. Virol. 70, 3741-3752).
2. Konstruksjon og karakterisering av rekombinante MVA vira 2.1 Konstruksjon av vektor plasmider
For å tillate dannelsen av rekombinante MVA vira ble nye vektor plasmider konstruert. Innskudd av fremmede gener i MVA genomet ble målrettet presist til setet for den naturlige forekommende delesjon II i MVA genomet. Sekvenser av MVA DNA flankerende setet til en 2500-bp delesjon i Hindlll N fragmentet av MVA genomet (Altenburger, W., Sutter, CP. og Altenburger, J. [1989], J. Arch. Virol. 105, 15-27) ble oppformert ved PCR og klonet inn i det multible kloningssetet til plasmid pUC18. Primerne for den venstre 600-bp DNA flanke var
5'-CAG CAG GGT ACC CTC ATC GTA CAG GAC GTT CTC-3' og 5'-CAG CAG
CCC GGG TAT TCG ATG ATT ATT TTT AAC AAA ATA ACA-3' (seter for restriksjonsensymene Kpnl og Smal er understreket). Primere for den høyre 550-bp DNA flanke var 5<*->CAG CAG CTG CAG GAA TCA TCC ATT CCA CTG AAT AGC-3' og 5<*->CAG CAG GCA TGC CGA CGA ACA AGG AAC TGT AGC AGA-3' (seter for restriksjonsenzymer Pstl og Sphl er understreket). Mellom disse flankeringer av MVA DNA innskutt i pUC18, ble Escherichia coli lacZgenet under kontroll av vaccinia virus sen promoter Pl 1 (fremstilt ved restriksjons-fordøyelse frapIII LZ, Sutter, G. og Moss, B. [1992] PNAS USA 89. 10847-10851) innskutt ved å bruke BamHI setet, for å danne MVA innskuddsvektor pUCII LZ (figur 1). I det følgende ble et 289 bp fragment som inneholder vaccinia virus tidlig/sen promoter P7.5 sammen med en Smal setet for kloning (fremstillt ved restriksjonsfordøyelse med EcoRI og Xbal fra plasmidvektoren pSCl 1 [Chakrabarti et al. 1985, Molecular and Cellular Biology 5, 3403-3409] innskutt i Smal setet i pUCII LZ for å gi MVA vektor pUCII LZ P7.5 [Figur 2]. For å konstruere et vektor plasmid som tillater isolering av rekombinante MVA vira via forbigående syntese av rapportørenzymet P-galactosidase ble et 330 bp DNA fragment fra 3'-enden av E-coli LacZ åpen leseramme oppformert med PCR (primere var 5'-CAG CAG GTC
GAC CCC GAC CGC CGT ACT GCC GCC-3' og 5'-GGG GGG CTG CAG ATG
GTA GCG ACC GGC GCT CAG-3') og klonet inn i Sali og Pstl setene i pUC II LZ P7.5 for å oppnå MVA vektoren pUC II Lzdel P7.5 [Figur 3]. Ved å bruke Smal setet kan vektor plasmidet brukes til å innskyte DNA-sekvenser som koder for et fremmed gen under transkriptsjonell kontroll av vaccinia virus promoter P7.5 i MVA genomet. Etter at det ønskede rekombinante virus er blitt isolert ved screening for ekspressjon av P-galactosidase aktivitet fører ytterligere formering av den rekombinante virus til selv delesjon av den rekonstruerte Pl 1-LacZ ekspressjonskassett ved homolog rekombinasjon.
2.2 Konstruksjon og karakterisering av rekombinant virus
MVA T7pol
Et 3.1 kbp DNA fragment som inneholder hele genet til bakteriofag T7 RNA polymerase under kontroll av vakccnia virus tidlig/sen promoter P7.5 ble kuttet ut med EcoRI fra plasmid pTF7-s (Fuerst, T.R., Niles, E.G., Studier, F.W. og Moss, B., 1986, P. N. A. S USA 83, 8122-8126), modifisert ved inkubasjon med Klenow DNA polymerase for å danne avrundede ender og klonet inn i et unikt Smal restriksjonssete til pUCII LZ for å lage plasmid overføringsvektor pUCII LZ T7pol [Figur 4]. Som transkripsjonen regulator for ekspresjonen av T7 RNA polymerase genet ble vaccinia virus tidlig/sen promoter P7.5 valgt. I motsetning til sterkere vaksinia virus tillater sene promotere ( for eksempel Pil) dette promotersystem ekspresjon av rekombinante gener øyeblikkelig etter infeksjon av målceller. Plasmidet pUCII LZ T7pol som styrer innskudd av fremmede gener i setet til delesjon II i MVA genomet brukt til å danne den rekombinante virus MVA T7pol.
CEF celler infisert med MVA med et flertall av 0.05 TCID50 per celle ble transfektert med DNA fra plasmid pUCII LZ T7pol som beskrevet tidligere (Sutter, G. Wyatt, L., Foley, P., Bennink, J. og Moss, B. (1994) Vaccine 12, 1032-1040). Rekombinant MVA virus som uttrykker T7 RNA polymerase og samuttrykker P-D-galactosidase (MVA P7.5-T7pol) ble utvalgt ved 5 påfølgende runder av plakkrensing i CEF celler farget med 5-brom-4-klor-3-indolyl P-D-galactosidase (300 jj.g/ml). I det påfølgende ble de rekombinante vira oppformert ved infeksjon av CEF monolag og DNA ble analysert ved PCR for å konfirmere genetisk homogenitet til viruslagre. Southern blot analyse av MVA T7pol viralt DNA demonstrerte stabil integrasjon av rekombinante gener på setet til delesjon II
i MVA genomet [Figur 5]. For å overvåke ekspressjon av T7 RNA polymerase ved rekombinant MVA T7pol ble [ S] metionin-merkede polypeptider fra virus-infisert
vevskultur analysert. Monolag av apenyrecellelinje CV-1 dyrket i 12-brønners plater ble infisert med virus ved et flertall 20 TCID50 per celle. Ved 3-5 timer etter infeksjonen ble mediet fjernet og kulturen ble vasket en gang med 1 ml metionin-fritt medium. Til hver brønn ble 0,2 ml med metionin-fritt medium suplementert med 50 uCi av [<35>S] metionin tilsatt og inkubert i 30 minutter ved 37°C. Cytoplasma ekstrakter av infiserte celler ble fremstillt ved å inkubere hver brønn i 0,2 ml 0,5% Nonidet P-40 lysebuffer i 10 minutter ved 37°C og prøver ble analysert ved SDS-PAGE. Metabolsk merking av CV-1 celler med MVA T7pol tilkjennega syntese av 2 ytterligere polypeptider (i) et protein på cirka 116000 Da som representerer E.coli P-galactosidase samuttrykket for å tillate screening for rekombinant virus og (ii) et 98000 Da protein med den forventede størrelse til bakteriofag T7 RNA polymerase [Figur 6]. Den store mengde av p-galactosidase laget ved MVA T7pol er bemerkelsesverdig. Resultatene fra in vivo merkings-eksprementene demonstrerer en meget sterk ekspressjon av Pl 1-LacZ gene-konstruksjonen når den innskytes i MVA genomet i setet til delesjon II som angir at rekombinante gener i MVA vektor vira kan uttrykkes mer effektivt når det innskytes i dette locus av MVA genomet.
Nyttigheten til MVA-T7pol rekombinante vira som ekspresjonssystem sammenlignet med WR-T7pol rekombinante vira vTF7-3 (Fuerst et a. 1986) ble testet ved samtransfeksjon av DNA fra en plasmidvektor som er avledet fra pTMl (Moss, B., Elroy-Stein, O., Mizukami, T., Alexander, W.A., og Fuerst T.R. (1990) Nature 348, 91-92) og inneholder (klonet inn i Ncol og BamHl seter til pTMl multippel kloningssete) E.coli kloramfenicol acetyltransferase (CAT) genet under kontroll av en T7 RNA polymerase promoter (PT7). Transfekterte og infiserte CV-1 celler ble suspendert i 0,2 ml 0,25 M Tris-HCL (pH 7.5). Etter tre fryste/tine sykler ble lysatet klaret ved sentrifugering, proteininnholdet i supermatanten ble bestemt og prøvene som inneholder 0,5, 0,25, 0,1 ug totalprotein ble assayet for enzymaktivitet, som beskrevet av Mackett, M., Smith, G.L. og Moss, B. (1984) J. Virol. 49, 857-864. Etter autoradiografi ble merkede flekker kvantifisert ved å bruke Fuji billedanalysesystem.
Resultatene demonstrerer at ved å bruke en i stor grad svekket vaccinia vektor MVA er det mulig å utnytte vaccinia virus-T7 RNA polymerase system så effektivt som ved å bruke et fullt replikasjons-kompetent vaccinia virus rekombinant [Figur 7]-
2.3 Konstruksjon og karakterisering av rekombinante virus
MVA-LAlnef
Et 648 bp DNA fragment som inneholder hele nef genet til HIV-1 LAI ble fremstillt ved PCR fra plasmid DNA (pTGl 166, vennligst tilveiebrakt av M.-P.
Kieny, Transgene S.A., Strasbourg; PCR primere var 5<*->CAG CAG GGA TCC
ATG GGT GGC AAG TGG TCA AAA AGT AGT-3' og 5'-CAG CAG GGA TCC
ATG TCA GCA GTT CTT GAA GTA CTC CGG-3'), fordøyd med restriksjons endonuklease BamHI, modifisert ved inkubasjon med Klenow DNA polymerase for å danne butte ender og klonet inn i Smal setet til pUC II Lzdel P7.5 for å lage vektoren pUC II LZdelP7.5-LAnef [Figur 8]. Dette plasmid kunne anvendes for å konstruere MVA rekombinant virus som uttrykker nef genet til HIV-1 LAI under kontroll av vaccinia virus tidlig/sen promoter P7.5.
CEF celler infisert med MVA i flertall med 0,05 TCID50 per celle ble transfektert med DNA fra plasmid pUC II LZdel P7.5-LALnef som beskrevet tidligere (Sutter, G, Wyatt, L., Foley, P., Bennink, J. og Moss, B. [1994] Vaccine 12, 1032-1040). Rekombinante MVA vira som inneholder nef genet og forbigående samuttrykker E.coli LacZ markør-gen ble utvalgt ved påfølgende runder av plakkrensing i CEF celler farget med 5-brom-4-klor-3-indolyl P-D-galactosidase (300 ug/ml). I det følgende ble rekombinant MVA vira som inneholder nef genet og som har deletert LacZ markør-genet isolert ved 3 ytterligere konsekutive runder av plakkrensing for ikke-fargede virale foki i CEF, celler i nærvær av 5-brom-4-klor-3-indolyl P-D-galactosidase (300 ug/ml). I det påfølgende ble rekombinante vira oppformert ved infek-sjon av CEF monolag og MVA-LAlnef viralt DNA ble analysert ved PCR for å konfirmere genetisk homogenitet med viruslagre. Southern blot analyse av viralt DNA komfirmerte genetisk stabilititet for MVA-LAlnef og demonstrerte presist integrering av nef genet og delesjon av E.coli LacZ markør-gen på setet til delesjon II i det virale genom.
Effektiv ekspressjon av rekombinant Nef protein ble komfirmert ved Western blot analyse av protein lysatet fra CEF celler infisert med MVA-LAlnef ved å bruke mus monoklonale antistoffer rettet mot HIV-1 Nef (vennligst tilveiebrakt av K. Krohn og brukt som beskrevet av Ovod, V., Lagerstedt, A., Ranki, A., Gombert, F., Spohn, R., Tahtinen, M., Jung, G., og Krohn, K. [1992] AIDS 6, 25-34).
2.4 Konstruksjon og karakterisering av rekombinante virus
MVA-hTYR
Et 1,9 kb DNA fragment som inneholder hele genet som koder for humant tyrosinase [Tyrosinase c-DNA klon 123.B2 isolert fra melanom cellelinjen SK29-MEL fra pasient SK 29 (AV), GenBank Acc.no. U01873; Brichard, V., Van Pel, A., Wolfel, T.,W6lfel, C, De Plaen. E., Lethe, B., Coulie, P., og Boon, B. (1993), J. Exp.Med.178, 489-495] ble fremstillt fra plasmid pcDNA/Amp-Tyr [Wolfel, T., Van Pel, A., Brichard, V., Schneider, J., Seliger, B., Meyer zum Buschenfelde, K. og Boon, T. (1994) Eur. J. Immunol 24, 759-764] ved EcoRi fordøyelse, modifisert ved Klenow DNA polymerase for å danne butte ender og klonet inn i Smal sete i pUC II LZdel P7.5 for å lage vektoren pUC II LZdel P7.5-TYR [Figur 9]. Plasmidet kunne anvendes for å konstruere MVA rekombinant virus som uttrykker det humane tyrosinase gen under kontroll av vaccinia virus tidlig/sen promoter P7.5.
CEF celler infisert med MVA med et flertall av 0.05 TCID50 per celle ble transfektert med DNA fra plasmid pUC II LZdel P7.5-TYR som beskrevet tidligere (Sutter, G, Wyatt, L., Foley, P., Bennink, J. og Moss, B. (1994) Vaccine 12, 1032-1040). Rekombinant MVA virus som stabilt uttrykte genet for humant tyrosinase og forbigående som uttrykker E.coli LacZ genet ble selektert ved påfølgende runder av plakkrensing i CEF celler farget med
5-brom-4-klor-3-indolyl P-D-galactosidase (300 ug/ml). I det følgende ble rekombinant MVA virus som uttrykker genet som koder for humant tyrosinase og som har deletert LacZ markør-genet isolert ved 3 ytterligere påfølgende runder av plakkrense-screening for ikke-fargende virale foki i CEF celler i nærvær av 5'-brom-4-klor-3-indolyl P-D-galactosidase (300 ug/ml). Påfølgende ble rekombinante vira oppformert ved infeksjon av CEF monolag og MVA-hTYR viralt DNA ble analysert ved PCR for å konfirmere genetisk homogenitet i viruslageret. Southern blot analyse av viral DNA konfirmerte genetisk stabilitet for MVA-hTYR og demonstrerte presist integrasjon av det rekombinante tyrosinase gen og delesjon av E.coli LacZ markør-gen på setet for delesjon II i det virale genom. Effektiv ekspresjon av rekombinant humant tyrosinase ble komfirmert ved Western blot analyse av protein lysatet fra CEL celler infisert med MVA-hTYR ved å bruke kanin polyklonale antistoffer (vennligst tilveiebrakt av V. Hearing og brukt som beskrevet av Jimenez, M., Kameyama, K., Maloy, L., Tomita, Y. og Hearing, V. [1988] P.N.A.S. USA 85, 3830-3834) eller musemonoklonale antistoffer (vennligst tilveiebrakt av L. Old og brukt som beskrevet av Chen, Y., Stockert, E., Tsang, S., Coplan, K. og Old, L. [1995] P.N.A.S. USA 92, 8125-8129) rettet mot tyrosinase.
Claims (29)
1. Rekombinant MVA virus,
karakterisert ved at det inneholder og er i stand til å uttrykke minst ett fremmed gen innskutt i setet til enhver av de naturlige forekommende dele-sjonssetene I, II, IV, V eller VI i MVA-genomet.
2. Rekombinant MVA virus som angitt i krav 1,
karakterisert ved at det inneholder og er i stand til å uttrykke minst ett fremmed gen innskutt i setet til delesjon II i MVA genomet.
3. Rekombinant MVA virus som angitt i krav 1 eller 2, karakterisert ved at det fremmede genet koder for en markør, et terapeutisk middel, et antigen eller en antigen determinant.
4. Rekombinant MVA virus som angitt i krav 3,
karakterisert ved at det fremmede gen koder for et antigen eller en antigen determinant fra en patogen virus, en bakterie eller annen mikroorganisme eller fra en parasitt eller en tumorcelle.
5. Rekombinant MVA virus som angitt i krav 4,
karakterisert ved at det fremmede gen koder for et antigen eller en antigen determinant fra Plasmodium falciparum, Mycobakteria, Herpes virus, influensa virus, hepatitt eller humane immunosviktvira.
6. Rekombinant MVA virus som angitt i krav 4 til 5,
karakterisert ved at antigenet eller den antigene determinant er HIV nef eller human tyrosinase.
7. Rekombinant MVA virus som angitt i krav 6,
karakterisert ved at det er MVA-LAlnef eller MVA-hTYR.
8. Rekombinant MVA virus som angitt i krav 1 til 2,
karakterisert ved at det fremmede gen koder for T7 RNA polymerase.
9. Rekombinant MVA virus som angitt i krav 8,
karakterisert ved at det er MVA-T7 pol.
10. Rekombinant MVA virus,
karakterisert ved at den inneholder og er i stand til å uttrykke et gen som koder for et humant tyrosinase antigen eller antigen determinant, hvor nevnte gen er innskutt i MVA-genet.
11. Rekombinant MVA virus,
karakterisert ved at den inneholder og er i stand til å uttrykke et gen som koder for et HIVnef antigen eller antigen determinant, hvor nevnte gen er innskutt i MVA genomet.
12. Rekombinant MVA virus som angitt krav 1 til 11,
karakterisert ved at det fremmede gen er under transkripsjonen kontroll av vaccinia virus tidlig/sen promoter P7.5.
13. Rekombinant MVA vira som angitt i krav 1 til 12,
karakterisert ved at det er essensielt fri for virus som er i stand til å replikere i humane celler.
14. Anvendelse ay det rekombinante MVA virus som angitt i krav 8 til 9 for transkripsjon av DNA sekvenser under transkripsjonen kontroll av T7 RNA polymerase promoter.
15. Eukaryot celle,
karakterisert ved at den er infisert av en rekombinant MVA virus som angitt i et av kravene 1 til 13.
16. Celle som angitt i krav 15,
karakterisert ved at den i tillegg inneholder en eller flere ekspresjonsvektorer som bærer en eller flere fremmede gener under transkripsjonen kontroll av et T7 RNA polymerase promoter.
17. Anvendelse av cellen som angitt i krav 15 eller 16 for fremstilling av polypeptider kodet av nevnte fremmede gen som omfatter: a) dyrking av nevnte celler under egnede betingelser, og b) isolering av polypeptidene kodet av nevnte fremmede gener.
18. Celle som angitt i krav 5 eller 16,
karakterisert ved at den ytterligere inneholder en ekspresjons- vektor som bærer virale gener og / eller et viralt vektorkonstrukt som koder for genomet til en viral vektor under transkripsjonen kontroll av en T7 RNA polymerase promoter.
19. Anvendelse av cellen som angitt i krav 18 til fremstilling av virale partikler som omfatter; a) å dyrke nevnte celler under egnede betingelser, og b) å isolere de virale partikler.
20. Celle som angitt i krav 15 eller 16,
karakterisert ved at den ytterligere inneholder: a) en ekspresjonsvektor som bærer en retroviral vektorkonstruksjon som er i stand til å infisere og styre ekspresjonen i målceller av en eller flere fremmede gener båret av nevnte retrovirale vektorkonstruksjon,
og b) en eller flere ekspresjonsvektorer som bærer genene som koder for polypeptidene nødvendig for genomet til nevnte retrovirale vektor-konstruksjon for å pakkes under transkripsjonen kontroll av en T7 RNA polymerase promoter.
21. Anvendelse av cellen som angitt i krav 20 for fremstilling av retrovirale partikler som omfatter: a) å dyrke nevnte celler under egnede betingelser, og b) å isolere de retrovirale partikler.
22. Vaksine som inneholder en rekombinant MVA virus som angitt i krav 1 til 13 i en fysiologisk akseptabel bærer.
23. Anvendelse av det rekombinante MVA virus som angitt i krav 1 til 13 for fremstilling av en vaksine.
24. Rekombinant MVA virus som angitt i ethvert av de foregående krav 1-13, og/eller vaksinen som angitt i krav 22 for immunisering av en levende dyrekropp, inkludert et menneske, som omfatter inokulering av nevnte levende dyrekropp inkludert et menneske, med vaksinen og/eller med det rekombinante MVA virus.
25. Vaksine som angitt i krav 22 eller 24 som inneholder rekombinant MVA inkludert HlVnef-genet for forhindring eller behandling av HIV infeksjon eller AIDS.
26. Vaksine som angitt i krav 22 eller 24 som inneholder MVA inkludert det humane tyrosinase genet for forhindring eller behandling av melanom.
27. Vaksine,
karakterisert ved at den omfatter som den første komponent et rekombinant MVA virus som angitt i krav 8 til 9 i en fysiologisk akseptabel bærer, og som en andre komponent en DNA sekvens som bærer et angigen eller en antigen determinant under transkripsjonen kontroll av en T7 RNA polymerase promoter i en fysiologisk akseptabel bærer, hvor de to komponentene er holdt sammen eller separat.
28. Vaksine som angitt i krav 27 for immunisering av en levende dyrekropp, inkludert et menneske, som omfatter inokulering av nevnte levende dyrekropp, inkludert et menneske, med den første og andre komponent av vaksinen, enten samtidig eller med en tidsforsinkelse hvor begge bruker det samme inokulseringssetet.
29. Anvendelse av rekombinant MVA virus som angitt i krav 8 til 9 for fremstilling av en vaksine som angitt i krav 27 eller 28.
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DK78295 | 1995-07-04 | ||
| PCT/EP1996/002926 WO1997002355A1 (en) | 1995-07-04 | 1996-07-03 | Recombinant mva virus, and the use thereof |
Publications (3)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| NO980026L NO980026L (no) | 1998-01-02 |
| NO980026D0 NO980026D0 (no) | 1998-01-02 |
| NO322476B1 true NO322476B1 (no) | 2006-10-09 |
Family
ID=8097499
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| NO19980026A NO322476B1 (no) | 1995-07-04 | 1998-01-02 | Rekombinant MVA-virus og anvendelser derav |
Country Status (27)
| Country | Link |
|---|---|
| US (6) | US6440422B1 (no) |
| EP (3) | EP1312678B1 (no) |
| JP (3) | JP4312260B2 (no) |
| KR (1) | KR19990028617A (no) |
| CN (3) | CN1554764B (no) |
| AT (3) | ATE304057T1 (no) |
| AU (1) | AU721735B2 (no) |
| BR (1) | BR9609303B8 (no) |
| CA (3) | CA2225278C (no) |
| CZ (1) | CZ292460B6 (no) |
| DE (3) | DE69635173T2 (no) |
| DK (3) | DK1312679T3 (no) |
| EE (3) | EE04199B1 (no) |
| ES (3) | ES2249647T3 (no) |
| HK (2) | HK1009830A1 (no) |
| HU (2) | HU229261B1 (no) |
| IL (5) | IL122120A (no) |
| MX (1) | MX9800025A (no) |
| NO (1) | NO322476B1 (no) |
| NZ (1) | NZ313597A (no) |
| PL (1) | PL186857B1 (no) |
| PT (1) | PT836648E (no) |
| RU (1) | RU2198217C2 (no) |
| SI (3) | SI1312678T1 (no) |
| TW (2) | TW575664B (no) |
| UA (3) | UA68327C2 (no) |
| WO (1) | WO1997002355A1 (no) |
Families Citing this family (120)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| UA68327C2 (en) * | 1995-07-04 | 2004-08-16 | Gsf Forschungszentrum Fur Unwe | A recombinant mva virus, an isolated eukaryotic cell, infected with recombinant mva virus, a method for production in vitro of polypeptides with use of said cell, a method for production in vitro of virus parts (variants), vaccine containing the recombinant mva virus, a method for immunization of animals |
| US7118754B1 (en) * | 1996-07-30 | 2006-10-10 | Transgene S.A. | Pharmaceutical composition for treating papillomavirus tumors and infection |
| EP0951555A2 (en) * | 1996-09-24 | 1999-10-27 | Bavarian Nordic Research Institute A/S | Recombinant mva virus expressing dengue virus antigens, and the use thereof in vaccines |
| MY119381A (en) * | 1996-12-24 | 2005-05-31 | Gsf Forschungszentrum Umwelt | Recombinant mva virus, and the use thereof |
| US6969609B1 (en) * | 1998-12-09 | 2005-11-29 | The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Serivces | Recombinant vector expressing multiple costimulatory molecules and uses thereof |
| FR2784997A1 (fr) * | 1998-10-22 | 2000-04-28 | Transgene Sa | Materiel biologique pour la preparation de compositions pharmaceutiques destinees au traitement de mammiferes |
| US20040265324A1 (en) * | 1999-03-23 | 2004-12-30 | Cardosa Mary Jane | Recombinant MVA virus expressing dengue virus antigens, and the use thereof in vaccines |
| US6682742B1 (en) | 1999-05-28 | 2004-01-27 | Gsf Forschungszentrum Fur Unwelt Und Gesundheit Gmbh | Vector for integration of heterologous sequences into poxviral genomes |
| US20150231227A1 (en) * | 2000-03-02 | 2015-08-20 | Emory University | Compositions and methods for generating an immune response |
| SI1263936T1 (sl) | 2000-03-14 | 2006-06-30 | Bavarian Nordic As | Spremenjen sev modificiranega virusa vakcinacije Ankara (MVA) |
| DE10042598A1 (de) * | 2000-08-30 | 2002-03-28 | Gsf Forschungszentrum Umwelt | Rekombinantes MVA mit der Fähigkeit zur Expression des HER-2/Neu-GENS |
| WO2002031168A2 (en) * | 2000-10-10 | 2002-04-18 | Genstar Therapeutics | Minimal adenoviral vector and recombinant vaccines based thereon |
| US7445924B2 (en) | 2000-11-23 | 2008-11-04 | Bavarian Nordic A/S | Modified Vaccinia Ankara virus variant and cultivation method |
| US7628980B2 (en) | 2000-11-23 | 2009-12-08 | Bavarian Nordic A/S | Modified vaccinia virus ankara for the vaccination of neonates |
| CN101676389A (zh) | 2000-11-23 | 2010-03-24 | 巴法里安诺迪克有限公司 | 改良安卡拉痘苗病毒变体 |
| US7740863B2 (en) | 2001-04-06 | 2010-06-22 | Merial | Recombinant vaccine against West Nile Virus |
| DE10143490C2 (de) * | 2001-09-05 | 2003-12-11 | Gsf Forschungszentrum Umwelt | Rekombinantes MVA mit der Fähigkeit zur Expression von HCV Struktur-Antigenen |
| DE10144664B4 (de) * | 2001-09-11 | 2005-06-09 | GSF-Forschungszentrum für Umwelt und Gesundheit GmbH | Vacciniavirus MVA-E3L-Knock-Out-Mutanten und Verwendung hiervon |
| EP2345665A3 (en) | 2001-12-04 | 2012-02-15 | Bavarian Nordic A/S | Flavivirus NS1 subunit vaccine |
| CN1289663C (zh) * | 2001-12-20 | 2006-12-13 | 巴法里安诺迪克有限公司 | 从感染细胞中回收和纯化痘病毒的方法 |
| DE60314823T3 (de) | 2002-04-19 | 2017-11-16 | Bavarian Nordic A/S | Modifizierte variante des vaccinia ankara virus als impfstoff für neugeborene |
| US7501127B2 (en) | 2002-05-16 | 2009-03-10 | Bavarian Nordic A/S | Intergenic regions as novel sites for insertion of HIV DNA sequences in the genome of Modified Vaccinia virus Ankara |
| AU2003236646B2 (en) | 2002-05-16 | 2009-01-15 | Bavarian Nordic A/S | Recombinant poxvirus expressing homologous genes inserted into the poxviral genome |
| PL372091A1 (en) * | 2002-05-16 | 2005-07-11 | Bavarian Nordic A/S | Expression of genes in modified vaccinia virus ankara by using the cowpox ati promoter |
| DK1434858T4 (en) | 2002-09-05 | 2019-04-01 | Bavarian Nordic As | PROCEDURE FOR AMPLIFICATION OF A POXVIRUS UNDER SERUM-FREE CONDITIONS |
| DE10249390A1 (de) * | 2002-10-23 | 2004-05-13 | Ruprecht-Karls-Universität Heidelberg | Rekombinante MVA-Stämme als potentielle Impfstoffe gegen P.falciparum-Malaria |
| CN1717488A (zh) | 2002-11-25 | 2006-01-04 | 巴法里安诺迪克有限公司 | 包含至少两个牛痘ati启动子的重组痘病毒 |
| DK1594970T3 (da) * | 2003-02-18 | 2008-11-17 | Helmholtz Zentrum Muenchen | Fremgangsmåde til generering af rekombinant MVA |
| US7638134B2 (en) * | 2003-02-20 | 2009-12-29 | The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Department Of Health And Human Services | Insertion sites in fowlpox vectors |
| ES2319424T3 (es) | 2003-03-27 | 2009-05-07 | Ottawa Health Research Institute | Virus mutantes de la estomatitis vesivular y sus usos. |
| US7731974B2 (en) * | 2003-03-27 | 2010-06-08 | Ottawa Hospital Research Institute | Mutant vesicular stomatitis viruses and uses thereof |
| WO2004093905A1 (en) * | 2003-04-16 | 2004-11-04 | City Of Hope | Human cytomegalovirus antigens expressed in mva and methods of use |
| GB2402391A (en) * | 2003-06-04 | 2004-12-08 | Oxxon Pharmaccines Ltd | Fowlpox recombinant genome |
| AU2004263274B2 (en) | 2003-07-21 | 2009-11-05 | Transgene S.A. | Novel multifunctional cytokines |
| US20100189747A1 (en) * | 2003-07-31 | 2010-07-29 | Raymond Weinstein | Compositions and methods for treating or preventing hiv infection |
| EP1518932A1 (en) * | 2003-09-29 | 2005-03-30 | GSF-Forschungszentrum für Umwelt und Gesundheit GmbH | Modified vaccinia virus Ankara (MVA) mutant and use thereof |
| DE602004027767D1 (de) | 2003-11-24 | 2010-07-29 | Bavarian Nordic As | Promotoren zur Expression in modifiziertem Vaccinia Virus Ankara |
| US7638132B2 (en) | 2003-12-05 | 2009-12-29 | National University Corporation Hokkaido University | Highly safe smallpox vaccine virus and vaccinia virus vector |
| EP1683870A1 (en) * | 2005-01-24 | 2006-07-26 | GSF-Forschungszentrum für Umwelt und Gesundheit GmbH | Vaccines based on the use of MVA |
| US20090269365A1 (en) * | 2005-04-20 | 2009-10-29 | University Of Washington | Immunogenic vaccinia peptides and methods of using same |
| US20090060947A1 (en) * | 2006-05-19 | 2009-03-05 | Sanofi Pasteur, Inc. | Immunological compositions |
| RU2489486C2 (ru) * | 2006-06-20 | 2013-08-10 | Трансжене С.А. | Процесс получения поксвирусов и композиции поксвирусов |
| US7972605B2 (en) * | 2006-09-08 | 2011-07-05 | Duke University | Modified vaccinia ankara virus vaccine |
| JP5606067B2 (ja) | 2006-09-15 | 2014-10-15 | オタワ ホスピタル リサーチ インスティテュート | 腫瘍崩壊性ラブドウイルス |
| EP2073837B1 (en) | 2006-10-06 | 2014-06-25 | Bavarian Nordic Inc. | Recombinant modified vaccinia ankara virus encoding a her-2 antigen in combination with a taxane for use in treating cancer |
| US20080241139A1 (en) * | 2006-10-31 | 2008-10-02 | Regents Of The University Of Colorado | Adjuvant combinations comprising a microbial tlr agonist, a cd40 or 4-1bb agonist, and optionally an antigen and the use thereof for inducing a synergistic enhancement in cellular immunity |
| JP2010516772A (ja) * | 2007-01-26 | 2010-05-20 | ザ リージェンツ オブ ザ ユニバーシティ オブ コロラド | 免疫機能を調節する方法 |
| EP2152736B1 (en) | 2007-05-03 | 2017-07-05 | Lysomab GmbH | Complement factor h-derived short consensus repeat-antibody constructs |
| JP2010526546A (ja) * | 2007-05-14 | 2010-08-05 | バヴァリアン・ノルディック・アクティーゼルスカブ | ワクシニアウイルス系及び組換えワクシニアウイルス系ワクチンの精製 |
| US8003363B2 (en) | 2007-05-14 | 2011-08-23 | Bavarian Nordic A/S | Purification of vaccinia virus- and recombinant vaccinia virus-based vaccines |
| US8003364B2 (en) | 2007-05-14 | 2011-08-23 | Bavarian Nordic A/S | Purification of vaccinia viruses using hydrophobic interaction chromatography |
| US20100285050A1 (en) * | 2007-10-05 | 2010-11-11 | Isis Innovation Limited | Compositions and Methods |
| BRPI0800485B8 (pt) * | 2008-01-17 | 2021-05-25 | Univ Minas Gerais | vetores virais recombinantes, composição vacinal para leishmaniose e método de vacinação para leishmaniose |
| EP2240573A4 (en) | 2008-02-12 | 2011-08-31 | Sanofi Pasteur Ltd | METHOD USING ION EXCHANGE AND GELFILTRATION CHROMATOGRAPHY FOR POXVIRUS CLEANING |
| EP2303322A1 (en) * | 2008-06-20 | 2011-04-06 | Bavarian Nordic A/S | Recombinant modified vaccinia virus measles vaccine |
| US8691502B2 (en) | 2008-10-31 | 2014-04-08 | Tremrx, Inc. | T-cell vaccination with viral vectors via mechanical epidermal disruption |
| WO2010127115A1 (en) | 2009-04-30 | 2010-11-04 | Centre Hospitalier Universitaire Vaudois Lausanne (Chuv) | Modified immunization vectors |
| NZ598000A (en) | 2009-08-07 | 2013-10-25 | Transgene Sa | Composition for treating hbv infection |
| WO2011063359A1 (en) * | 2009-11-20 | 2011-05-26 | Inviragen, Inc. | Compositions, methods and uses for poxvirus elements in vaccine constructs |
| US9005632B2 (en) | 2009-11-20 | 2015-04-14 | Takeda Vaccines, Inc. | Compositions, methods and uses for poxvirus elements in vaccine constructs against influenza virus subtypes or strains |
| WO2011119920A2 (en) | 2010-03-25 | 2011-09-29 | Oregon Health & Science University | Cmv glycoproteins and recombinant vectors |
| GB201006405D0 (en) * | 2010-04-16 | 2010-06-02 | Isis Innovation | Poxvirus expression system |
| US20110262965A1 (en) * | 2010-04-23 | 2011-10-27 | Life Technologies Corporation | Cell culture medium comprising small peptides |
| EP2668201A2 (en) | 2011-01-28 | 2013-12-04 | Sanofi Pasteur SA | Immunological compositions comprising hiv gp41 polypeptide derivatives |
| WO2012151272A2 (en) | 2011-05-02 | 2012-11-08 | Tremrx, Inc. | T-cell vaccination with viral vectors via mechanical epidermal disruption |
| HUE037408T2 (hu) | 2011-06-10 | 2018-08-28 | Univ Oregon Health & Science | CMV glikoproteinek és rekombináns vektorok |
| DK2739293T3 (da) * | 2011-08-05 | 2020-08-24 | Sillajen Biotherapeutics Inc | Fremgangsmåder og sammensætninger til frembringelse af vaccinavirus |
| US20130189754A1 (en) | 2011-09-12 | 2013-07-25 | International Aids Vaccine Initiative | Immunoselection of recombinant vesicular stomatitis virus expressing hiv-1 proteins by broadly neutralizing antibodies |
| EP2761011B1 (en) * | 2011-09-26 | 2018-05-23 | Theravectys | Use of non-subtype b gag proteins for lentiviral packaging |
| EP2586461A1 (en) | 2011-10-27 | 2013-05-01 | Christopher L. Parks | Viral particles derived from an enveloped virus |
| DK2788021T3 (en) | 2011-12-09 | 2017-04-10 | Bavarian Nordic As | POXVIRUS VECTOR FOR EXPRESSION OF BACTERIAL ANTIGENES CONNECTED TO TETANANOX INFRAGMENT C |
| EP2620446A1 (en) | 2012-01-27 | 2013-07-31 | Laboratorios Del Dr. Esteve, S.A. | Immunogens for HIV vaccination |
| ES2631608T3 (es) | 2012-06-27 | 2017-09-01 | International Aids Vaccine Initiative | Variante de la glicoproteína Env del VIH-1 |
| SG11201500171YA (en) | 2012-07-10 | 2015-02-27 | Transgene Sa | Mycobacterial antigen vaccine |
| WO2014009433A1 (en) | 2012-07-10 | 2014-01-16 | Transgene Sa | Mycobacterium resuscitation promoting factor for use as adjuvant |
| WO2014043535A1 (en) | 2012-09-14 | 2014-03-20 | The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services | Compositions for the treatment of cancer |
| WO2014066443A1 (en) | 2012-10-23 | 2014-05-01 | Emory University | Gm-csf and il-4 conjugates, compositions, and methods related thereto |
| US20140286981A1 (en) * | 2013-03-14 | 2014-09-25 | Wisconsin Alumni Research Foundation | Broadly reactive mosaic peptide for influenza vaccine |
| DE102013004595A1 (de) | 2013-03-15 | 2014-09-18 | Emergent Product Development Germany Gmbh | RSV-Impfstoffe |
| EP2848937A1 (en) | 2013-09-05 | 2015-03-18 | International Aids Vaccine Initiative | Methods of identifying novel HIV-1 immunogens |
| US10058604B2 (en) | 2013-10-07 | 2018-08-28 | International Aids Vaccine Initiative | Soluble HIV-1 envelope glycoprotein trimers |
| CA2936131A1 (en) | 2014-01-09 | 2015-07-16 | Transgene Sa | Fusion of heterooligomeric mycobacterial antigens |
| GB201412494D0 (en) | 2014-07-14 | 2014-08-27 | Ospedale San Raffaele And Fond Telethon | Vector production |
| KR102159626B1 (ko) | 2014-09-26 | 2020-09-25 | 베쓰 이스라엘 디코니스 메디칼 센터 인크 | 인간 면역 결핍 바이러스 감염에 대한 방어 면역을 유도하기 위한 방법 및 조성물 |
| WO2016115116A1 (en) | 2015-01-12 | 2016-07-21 | Geovax, Inc. | Compositions and methods for generating an immune response to a hemorrhagic fever virus |
| WO2016131945A1 (en) | 2015-02-20 | 2016-08-25 | Transgene Sa | Combination product with autophagy modulator |
| US10174292B2 (en) | 2015-03-20 | 2019-01-08 | International Aids Vaccine Initiative | Soluble HIV-1 envelope glycoprotein trimers |
| US9931394B2 (en) | 2015-03-23 | 2018-04-03 | International Aids Vaccine Initiative | Soluble HIV-1 envelope glycoprotein trimers |
| DK3390430T3 (da) | 2015-12-15 | 2019-11-18 | Janssen Vaccines & Prevention Bv | Human immundefektvirus-antigener, vektorer, sammensætninger og fremgangsmåder til anvendelse deraf |
| US11278607B2 (en) | 2016-01-08 | 2022-03-22 | Geovax, Inc. | Compositions and methods for generating an immune response to a tumor associated antigen |
| WO2017136419A1 (en) | 2016-02-03 | 2017-08-10 | Geovax Inc. | Compositions and methods for generating an immune response to a flavivirus |
| JP7034080B2 (ja) * | 2016-02-25 | 2022-03-11 | メモリアル スローン ケタリング キャンサー センター | ヒトｆｌｔ３ｌを発現する組換えｍｖａまたはｍｖａδｅ３ｌおよび固形腫瘍に対する免疫療法薬としてのそれらの使用 |
| CA3023022A1 (en) | 2016-05-04 | 2017-11-09 | Transgene Sa | Combination therapy with cpg tlr9 ligand |
| AU2017286375B2 (en) | 2016-06-16 | 2019-04-18 | Janssen Vaccines & Prevention B.V. | HIV vaccine formulation |
| AU2017318689A1 (en) | 2016-09-02 | 2019-04-11 | Beth Israel Deaconess Medical Center, Inc. | Methods for inducing an immune response against human immunodeficiency virus infection in subjects undergoing antiretroviral treatment |
| IL265186B (en) | 2016-09-15 | 2022-09-01 | Janssen Vaccines Prevention B V | HIV envelope proteins with trimer-stabilizing mutations |
| WO2018069316A2 (en) | 2016-10-10 | 2018-04-19 | Transgene Sa | Immunotherapeutic product and mdsc modulator combination therapy |
| CN110958887B (zh) | 2017-06-15 | 2023-10-31 | 扬森疫苗与预防公司 | 编码hiv抗原的痘病毒载体及其使用方法 |
| SG11201912429RA (en) | 2017-06-21 | 2020-01-30 | Transgene Sa | Personalized vaccine |
| CN110891601A (zh) | 2017-07-19 | 2020-03-17 | 扬森疫苗与预防公司 | 三聚体稳定性hiv包膜蛋白突变 |
| US20190022212A1 (en) | 2017-07-21 | 2019-01-24 | Beth Israel Deaconess Medical Center, Inc. | Methods for safe induction of cross-clade immunity against human immunodeficiency virus infection in human |
| US20190083620A1 (en) | 2017-09-18 | 2019-03-21 | Janssen Vaccines & Prevention B.V. | Methods for inducing an immune response against human immunodeficiency virus infection in subjects undergoing antiretroviral treatment |
| US11311612B2 (en) | 2017-09-19 | 2022-04-26 | Geovax, Inc. | Compositions and methods for generating an immune response to treat or prevent malaria |
| CA3081436A1 (en) | 2017-10-31 | 2019-05-09 | Western Oncolytics Ltd. | Platform oncolytic vector for systemic delivery |
| JP7320601B2 (ja) | 2018-09-11 | 2023-08-03 | 上▲海▼市公共▲衛▼生▲臨▼床中心 | 広域スペクトルな抗インフルエンザワクチン免疫原及びその使用 |
| WO2020237052A1 (en) | 2019-05-22 | 2020-11-26 | Janssen Vaccines & Prevention B.V. | Methods for inducing an immune response against human immunodeficiency virus infection in subjects undergoing antiretroviral treatment |
| AU2020366460A1 (en) * | 2019-10-16 | 2022-03-24 | Kalivir Immunotherapeutics, Inc. | Producer viruses for generation of retroviruses in SITU |
| EP4058058A1 (en) | 2019-11-14 | 2022-09-21 | Aelix Therapeutics S.L. | Dosage regimens for vaccines |
| EP3842065A1 (en) | 2019-12-23 | 2021-06-30 | Transgene | Process for designing a recombinant poxvirus for a therapeutic vaccine |
| EP3928789A1 (en) | 2020-06-24 | 2021-12-29 | Consejo Superior de Investigaciones Científicas (CSIC) | Mva-based vaccine against covid-19 expressing sars-cov-2 antigens |
| WO2021260065A1 (en) | 2020-06-24 | 2021-12-30 | Consejo Superior De Investigaciones Científicas (Csic) | Mva-based vaccine against covid-19 expressing sars-cov-2 antigens |
| JP2024516400A (ja) | 2021-04-30 | 2024-04-15 | カリヴィル イムノセラピューティクス， インコーポレイテッド | 修飾されたｍｈｃ発現のための腫瘍溶解性ウイルス |
| WO2022269003A1 (en) | 2021-06-23 | 2022-12-29 | Consejo Superior De Investigaciones Cientificas | MVA-BASED VACCINE EXPRESSING A PREFUSION-STABILIZED SARS-CoV-2 S PROTEIN |
| EP4108257A1 (en) | 2021-06-23 | 2022-12-28 | Consejo Superior De Investigaciones Científicas | Mva-based vaccine against covid-19 expressing a prefusion-stabilized sars-cov-2 s protein |
| WO2023077147A2 (en) | 2021-11-01 | 2023-05-04 | Pellis Therapeutics, Inc. | T-cell vaccines for patients with reduced humoral immunity |
| WO2023213764A1 (en) | 2022-05-02 | 2023-11-09 | Transgene | Fusion polypeptide comprising an anti-pd-l1 sdab and a member of the tnfsf |
| WO2023213763A1 (en) | 2022-05-02 | 2023-11-09 | Transgene | Poxvirus encoding a binding agent comprising an anti- pd-l1 sdab |
| US20230364227A1 (en) | 2022-05-12 | 2023-11-16 | Pellis Therapeutics, Inc. | Poxvirus adjuvant for t-cell vaccination |
| EP4316514A1 (en) | 2022-08-03 | 2024-02-07 | Consejo Superior de Investigaciones Científicas (CSIC) | Mva-based vectors and their use as vaccine against sars-cov-2 |
| WO2024193905A1 (en) | 2023-03-17 | 2024-09-26 | Helmholtz Zentrum München - Deutsches Forschungszentrum für Gesundheit und Umwelt (GmbH) | Hbv antigen formulation for treating hepatitis b |
Family Cites Families (13)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| BE787901A (fr) | 1971-09-11 | 1972-12-18 | Freistaat Bayern Represente Pa | Vaccin antivariolique |
| AU570940B2 (en) | 1982-11-30 | 1988-03-31 | United States of America, as represented by the Secretary, U.S. Department of Commerce, The | Process for producing poxvirus recombinants for expression offoreign genes |
| US5679511A (en) * | 1986-10-06 | 1997-10-21 | Donald Guthrie Foundation For Medical Research, Inc. | CDNA clones for a regulatory protein in the melanin-production pathway |
| CA1341245C (en) | 1988-01-12 | 2001-06-05 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Recombinant vaccinia virus mva |
| US5221610A (en) * | 1988-05-26 | 1993-06-22 | Institut Pasteur | Diagnostic method and composition for early detection of HIV infection |
| CN1042564A (zh) * | 1988-11-11 | 1990-05-30 | 中国科学院上海生物化学研究所 | 乙肝疫苗的制备方法及其制品 |
| JPH03271233A (ja) * | 1990-03-19 | 1991-12-03 | Inst Pasteur | ウイルスエンベロープ糖タンパク質及びその糖タンパク質の中和エピトープに対応するペプチドの間の相乗作用による、ウイルス性感染に対する防御の誘発 |
| AU2800392A (en) * | 1991-10-28 | 1993-06-07 | Institut Pasteur | Induction of protection against viral infection by synergy between viral proteins and viral peptides |
| PT1025849E (pt) * | 1992-12-22 | 2002-09-30 | Ludwig Inst Cancer Res | Metodos para deteccao e tratamento de individuos tendo celulas anormais que expressam antigenios do peptideo hla-a2/tirosinase |
| US5620886A (en) * | 1993-03-18 | 1997-04-15 | Ludwig Institute For Cancer Research | Isolated nucleic acid sequence coding for a tumor rejection antigen precursor processed to at least one tumor rejection antigen presented by HLA-A2 |
| WO1995011255A1 (fr) * | 1993-10-19 | 1995-04-27 | Ajinomoto Co., Inc. | Peptide pouvant induire une reponse immune contre vih et agent contenant ce peptide pour la prevention ou le traitement du sida |
| US5676950A (en) * | 1994-10-28 | 1997-10-14 | University Of Florida | Enterically administered recombinant poxvirus vaccines |
| UA68327C2 (en) | 1995-07-04 | 2004-08-16 | Gsf Forschungszentrum Fur Unwe | A recombinant mva virus, an isolated eukaryotic cell, infected with recombinant mva virus, a method for production in vitro of polypeptides with use of said cell, a method for production in vitro of virus parts (variants), vaccine containing the recombinant mva virus, a method for immunization of animals |
-
1996
- 1996-03-07 UA UA97126424A patent/UA68327C2/uk unknown
- 1996-07-03 IL IL12212096A patent/IL122120A/xx not_active IP Right Cessation
- 1996-07-03 DK DK03001379T patent/DK1312679T3/da active
- 1996-07-03 EE EE9700344A patent/EE04199B1/xx unknown
- 1996-07-03 MX MX9800025A patent/MX9800025A/es unknown
- 1996-07-03 DE DE69635173T patent/DE69635173T2/de not_active Expired - Lifetime
- 1996-07-03 RU RU98101904/13A patent/RU2198217C2/ru active
- 1996-07-03 PL PL96324347A patent/PL186857B1/pl unknown
- 1996-07-03 NZ NZ313597A patent/NZ313597A/xx not_active IP Right Cessation
- 1996-07-03 EP EP03001378A patent/EP1312678B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1996-07-03 AU AU66110/96A patent/AU721735B2/en not_active Expired
- 1996-07-03 JP JP50482497A patent/JP4312260B2/ja not_active Expired - Lifetime
- 1996-07-03 WO PCT/EP1996/002926 patent/WO1997002355A1/en active Application Filing
- 1996-07-03 ES ES03001378T patent/ES2249647T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1996-07-03 EE EEP200300331A patent/EE05138B1/xx unknown
- 1996-07-03 AT AT03001378T patent/ATE304057T1/de active
- 1996-07-03 CA CA002225278A patent/CA2225278C/en not_active Expired - Lifetime
- 1996-07-03 AT AT03001379T patent/ATE304058T1/de active
- 1996-07-03 DE DE69628011T patent/DE69628011T2/de not_active Expired - Lifetime
- 1996-07-03 SI SI9630718T patent/SI1312678T1/sl unknown
- 1996-07-03 EP EP03001379A patent/EP1312679B8/en not_active Expired - Lifetime
- 1996-07-03 AT AT96925654T patent/ATE239796T1/de active
- 1996-07-03 CN CN2004100367144A patent/CN1554764B/zh not_active Expired - Lifetime
- 1996-07-03 SI SI9630719T patent/SI1312679T1/sl unknown
- 1996-07-03 HU HU0402350A patent/HU229261B1/hu unknown
- 1996-07-03 ES ES03001379T patent/ES2249648T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1996-07-03 SI SI9630623T patent/SI0836648T1/xx unknown
- 1996-07-03 ES ES96925654T patent/ES2199294T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1996-07-03 EP EP96925654A patent/EP0836648B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1996-07-03 CA CA2608864A patent/CA2608864C/en not_active Expired - Lifetime
- 1996-07-03 BR BRPI9609303-0B8A patent/BR9609303B8/pt active IP Right Grant
- 1996-07-03 HU HU9802217A patent/HU224061B1/hu active IP Right Grant
- 1996-07-03 EE EEP200300332A patent/EE04753B1/xx unknown
- 1996-07-03 KR KR1019970709939A patent/KR19990028617A/ko not_active Application Discontinuation
- 1996-07-03 DE DE69635172T patent/DE69635172T2/de not_active Expired - Lifetime
- 1996-07-03 CZ CZ19974241A patent/CZ292460B6/cs not_active IP Right Cessation
- 1996-07-03 CA CA2596274A patent/CA2596274C/en not_active Expired - Lifetime
- 1996-07-03 CN CNA2005101248556A patent/CN1782071A/zh active Pending
- 1996-07-03 UA UA20031212890A patent/UA75410C2/uk unknown
- 1996-07-03 PT PT96925654T patent/PT836648E/pt unknown
- 1996-07-03 DK DK96925654T patent/DK0836648T3/da active
- 1996-07-03 CN CNB961952547A patent/CN1154742C/zh not_active Expired - Lifetime
- 1996-07-03 UA UA20031212892A patent/UA75411C2/uk unknown
- 1996-07-03 DK DK03001378T patent/DK1312678T3/da active
- 1996-12-31 TW TW085116379A patent/TW575664B/zh not_active IP Right Cessation
- 1996-12-31 TW TW092116681A patent/TWI245075B/zh not_active IP Right Cessation
-
1998
- 1998-01-02 NO NO19980026A patent/NO322476B1/no not_active IP Right Cessation
- 1998-01-02 US US09/002,443 patent/US6440422B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1998-09-15 HK HK98110632A patent/HK1009830A1/xx not_active IP Right Cessation
-
2002
- 2002-05-15 US US10/147,284 patent/US7198934B2/en not_active Expired - Fee Related
-
2004
- 2004-09-28 IL IL164318A patent/IL164318A/en not_active IP Right Cessation
-
2005
- 2005-01-11 HK HK05100216.3A patent/HK1068015A1/xx not_active IP Right Cessation
-
2006
- 2006-09-19 US US11/522,889 patent/US8153138B2/en not_active Expired - Fee Related
- 2006-09-19 US US11/523,004 patent/US20070071769A1/en not_active Abandoned
- 2006-09-19 US US11/523,030 patent/US20070071770A1/en not_active Abandoned
-
2007
- 2007-03-12 JP JP2007062630A patent/JP4764366B2/ja not_active Expired - Lifetime
- 2007-03-12 JP JP2007062631A patent/JP4764367B2/ja not_active Expired - Lifetime
-
2009
- 2009-12-01 IL IL202448A patent/IL202448A0/en unknown
-
2010
- 2010-06-14 US US12/814,602 patent/US8197825B2/en not_active Expired - Fee Related
-
2011
- 2011-05-17 IL IL212933A patent/IL212933A0/en unknown
-
2012
- 2012-05-02 IL IL219528A patent/IL219528A0/en unknown
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| EP1312678B1 (en) | Recombinant MVA virus, and the use thereof | |
| US6869793B2 (en) | Recombinant MVA virus expressing dengue virus antigens, and the use thereof in vaccines | |
| US20040265324A1 (en) | Recombinant MVA virus expressing dengue virus antigens, and the use thereof in vaccines |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MK1K | Patent expired |