RU2489486C2 - Процесс получения поксвирусов и композиции поксвирусов - Google Patents
Процесс получения поксвирусов и композиции поксвирусов Download PDFInfo
- Publication number
- RU2489486C2 RU2489486C2 RU2009101382/10A RU2009101382A RU2489486C2 RU 2489486 C2 RU2489486 C2 RU 2489486C2 RU 2009101382/10 A RU2009101382/10 A RU 2009101382/10A RU 2009101382 A RU2009101382 A RU 2009101382A RU 2489486 C2 RU2489486 C2 RU 2489486C2
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- poxvirus
- cells
- particles
- cell
- mixture
- Prior art date
Links
- 239000000203 mixture Substances 0.000 title claims abstract description 60
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 58
- 241000700605 Viruses Species 0.000 title abstract description 39
- 239000002245 particle Substances 0.000 claims abstract description 39
- 238000011026 diafiltration Methods 0.000 claims abstract description 9
- 230000002238 attenuated effect Effects 0.000 claims abstract description 8
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims abstract description 8
- 239000012228 culture supernatant Substances 0.000 claims abstract 2
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 claims description 22
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 claims description 20
- 239000000047 product Substances 0.000 claims description 17
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 claims description 16
- 238000000746 purification Methods 0.000 claims description 12
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 claims description 12
- 238000001914 filtration Methods 0.000 claims description 10
- 238000001471 micro-filtration Methods 0.000 claims description 9
- 238000004806 packaging method and process Methods 0.000 claims description 9
- 101710163270 Nuclease Proteins 0.000 claims description 5
- 238000011118 depth filtration Methods 0.000 claims description 5
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 claims description 4
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 claims description 4
- 230000002458 infectious effect Effects 0.000 claims description 4
- 238000011321 prophylaxis Methods 0.000 claims description 4
- 238000012258 culturing Methods 0.000 claims description 2
- GNFTZDOKVXKIBK-UHFFFAOYSA-N 3-(2-methoxyethoxy)benzohydrazide Chemical compound COCCOC1=CC=CC(C(=O)NN)=C1 GNFTZDOKVXKIBK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 208000035473 Communicable disease Diseases 0.000 claims 1
- 229940126601 medicinal product Drugs 0.000 claims 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 abstract description 14
- 238000011282 treatment Methods 0.000 abstract description 12
- 238000012856 packing Methods 0.000 abstract description 6
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 4
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 2
- 238000011109 contamination Methods 0.000 abstract 1
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 111
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 35
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 31
- 229940002612 prodrug Drugs 0.000 description 22
- 239000000651 prodrug Substances 0.000 description 22
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 22
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 20
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 18
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 17
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 17
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 17
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 15
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 15
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 15
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 14
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 13
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 11
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 11
- 101100346932 Mus musculus Muc1 gene Proteins 0.000 description 11
- 241000700618 Vaccinia virus Species 0.000 description 11
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 11
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 11
- 235000013601 eggs Nutrition 0.000 description 10
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 description 10
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 10
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 description 9
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 9
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 9
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 9
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 8
- 108010034546 Serratia marcescens nuclease Proteins 0.000 description 8
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 8
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 8
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 8
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 8
- 239000006143 cell culture medium Substances 0.000 description 7
- -1 subylisin Proteins 0.000 description 7
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 239000013256 coordination polymer Substances 0.000 description 6
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 6
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 6
- 239000011148 porous material Substances 0.000 description 6
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 6
- 241000287828 Gallus gallus Species 0.000 description 5
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 5
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 description 5
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 5
- 210000002257 embryonic structure Anatomy 0.000 description 5
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 5
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 5
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 5
- 108700020796 Oncogene Proteins 0.000 description 4
- 239000000356 contaminant Substances 0.000 description 4
- 230000002950 deficient Effects 0.000 description 4
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 4
- 230000036541 health Effects 0.000 description 4
- 239000010410 layer Substances 0.000 description 4
- 210000001161 mammalian embryo Anatomy 0.000 description 4
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 4
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 4
- 238000010257 thawing Methods 0.000 description 4
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 4
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 4
- 230000004614 tumor growth Effects 0.000 description 4
- 102000000311 Cytosine Deaminase Human genes 0.000 description 3
- 108010080611 Cytosine Deaminase Proteins 0.000 description 3
- WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N Formaldehyde Chemical compound O=C WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241000700629 Orthopoxvirus Species 0.000 description 3
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 3
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 3
- 230000008859 change Effects 0.000 description 3
- 210000000805 cytoplasm Anatomy 0.000 description 3
- 230000007547 defect Effects 0.000 description 3
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 3
- 108010007093 dispase Proteins 0.000 description 3
- 229960004279 formaldehyde Drugs 0.000 description 3
- 235000019256 formaldehyde Nutrition 0.000 description 3
- 238000001415 gene therapy Methods 0.000 description 3
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 3
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 3
- 239000012535 impurity Substances 0.000 description 3
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 3
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 3
- 230000008569 process Effects 0.000 description 3
- 238000011160 research Methods 0.000 description 3
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 3
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 3
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 3
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- LSBDFXRDZJMBSC-UHFFFAOYSA-N 2-phenylacetamide Chemical class NC(=O)CC1=CC=CC=C1 LSBDFXRDZJMBSC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108020005544 Antisense RNA Proteins 0.000 description 2
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000271566 Aves Species 0.000 description 2
- 102000005600 Cathepsins Human genes 0.000 description 2
- 108010084457 Cathepsins Proteins 0.000 description 2
- 108010053770 Deoxyribonucleases Proteins 0.000 description 2
- 102000016911 Deoxyribonucleases Human genes 0.000 description 2
- AOJJSUZBOXZQNB-TZSSRYMLSA-N Doxorubicin Chemical compound O([C@H]1C[C@@](O)(CC=2C(O)=C3C(=O)C=4C=CC=C(C=4C(=O)C3=C(O)C=21)OC)C(=O)CO)[C@H]1C[C@H](N)[C@H](O)[C@H](C)O1 AOJJSUZBOXZQNB-TZSSRYMLSA-N 0.000 description 2
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 description 2
- GHASVSINZRGABV-UHFFFAOYSA-N Fluorouracil Chemical compound FC1=CNC(=O)NC1=O GHASVSINZRGABV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000700721 Hepatitis B virus Species 0.000 description 2
- 241000282414 Homo sapiens Species 0.000 description 2
- 206010025323 Lymphomas Diseases 0.000 description 2
- 102100034256 Mucin-1 Human genes 0.000 description 2
- 102000005348 Neuraminidase Human genes 0.000 description 2
- 108010006232 Neuraminidase Proteins 0.000 description 2
- 108700026244 Open Reading Frames Proteins 0.000 description 2
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 2
- 108010073038 Penicillin Amidase Proteins 0.000 description 2
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 2
- 239000004365 Protease Substances 0.000 description 2
- 108700020978 Proto-Oncogene Proteins 0.000 description 2
- 102000052575 Proto-Oncogene Human genes 0.000 description 2
- 241000589516 Pseudomonas Species 0.000 description 2
- LCTONWCANYUPML-UHFFFAOYSA-M Pyruvate Chemical compound CC(=O)C([O-])=O LCTONWCANYUPML-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 108010083644 Ribonucleases Proteins 0.000 description 2
- 102000006382 Ribonucleases Human genes 0.000 description 2
- 108010039491 Ricin Proteins 0.000 description 2
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 2
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 2
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L Sulfate Chemical compound [O-]S([O-])(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 108090000631 Trypsin Proteins 0.000 description 2
- 102000004142 Trypsin Human genes 0.000 description 2
- 102000044209 Tumor Suppressor Genes Human genes 0.000 description 2
- 108700025716 Tumor Suppressor Genes Proteins 0.000 description 2
- 241000700647 Variola virus Species 0.000 description 2
- 108010006886 Vitrogen Proteins 0.000 description 2
- RJURFGZVJUQBHK-UHFFFAOYSA-N actinomycin D Natural products CC1OC(=O)C(C(C)C)N(C)C(=O)CN(C)C(=O)C2CCCN2C(=O)C(C(C)C)NC(=O)C1NC(=O)C1=C(N)C(=O)C(C)=C2OC(C(C)=CC=C3C(=O)NC4C(=O)NC(C(N5CCCC5C(=O)N(C)CC(=O)N(C)C(C(C)C)C(=O)OC4C)=O)C(C)C)=C3N=C21 RJURFGZVJUQBHK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000005540 biological transmission Effects 0.000 description 2
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 2
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 2
- DQLATGHUWYMOKM-UHFFFAOYSA-L cisplatin Chemical compound N[Pt](N)(Cl)Cl DQLATGHUWYMOKM-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 238000005352 clarification Methods 0.000 description 2
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 2
- KNHUKKLJHYUCFP-UHFFFAOYSA-N clofibrate Chemical compound CCOC(=O)C(C)(C)OC1=CC=C(Cl)C=C1 KNHUKKLJHYUCFP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000003184 complementary RNA Substances 0.000 description 2
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 2
- 238000011437 continuous method Methods 0.000 description 2
- 230000009089 cytolysis Effects 0.000 description 2
- 230000001085 cytostatic effect Effects 0.000 description 2
- 230000037213 diet Effects 0.000 description 2
- 235000005911 diet Nutrition 0.000 description 2
- 239000003797 essential amino acid Substances 0.000 description 2
- 235000020776 essential amino acid Nutrition 0.000 description 2
- 210000002950 fibroblast Anatomy 0.000 description 2
- XRECTZIEBJDKEO-UHFFFAOYSA-N flucytosine Chemical compound NC1=NC(=O)NC=C1F XRECTZIEBJDKEO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229960004413 flucytosine Drugs 0.000 description 2
- 230000008014 freezing Effects 0.000 description 2
- 238000007710 freezing Methods 0.000 description 2
- ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N glutamine Natural products OC(=O)C(N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 2
- 208000002672 hepatitis B Diseases 0.000 description 2
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 2
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 2
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 2
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 2
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 2
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 2
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 2
- 230000037353 metabolic pathway Effects 0.000 description 2
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 2
- 235000016709 nutrition Nutrition 0.000 description 2
- 230000035764 nutrition Effects 0.000 description 2
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 2
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 2
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 2
- 230000000069 prophylactic effect Effects 0.000 description 2
- 230000010076 replication Effects 0.000 description 2
- 210000005132 reproductive cell Anatomy 0.000 description 2
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 2
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 2
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 2
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 2
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 2
- 239000012588 trypsin Substances 0.000 description 2
- XUCIJNAGGSZNQT-JHSLDZJXSA-N (R)-amygdalin Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1OC[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O[C@@H](C#N)C=2C=CC=CC=2)O1 XUCIJNAGGSZNQT-JHSLDZJXSA-N 0.000 description 1
- OTLLEIBWKHEHGU-UHFFFAOYSA-N 2-[5-[[5-(6-aminopurin-9-yl)-3,4-dihydroxyoxolan-2-yl]methoxy]-3,4-dihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-2-yl]oxy-3,5-dihydroxy-4-phosphonooxyhexanedioic acid Chemical compound C1=NC=2C(N)=NC=NC=2N1C(C(C1O)O)OC1COC1C(CO)OC(OC(C(O)C(OP(O)(O)=O)C(O)C(O)=O)C(O)=O)C(O)C1O OTLLEIBWKHEHGU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- AOPRXJXHLWYPQR-UHFFFAOYSA-N 2-phenoxyacetamide Chemical class NC(=O)COC1=CC=CC=C1 AOPRXJXHLWYPQR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101710091601 21 kDa protein Proteins 0.000 description 1
- LKKMLIBUAXYLOY-UHFFFAOYSA-N 3-Amino-1-methyl-5H-pyrido[4,3-b]indole Chemical compound N1C2=CC=CC=C2C2=C1C=C(N)N=C2C LKKMLIBUAXYLOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- TVZGACDUOSZQKY-LBPRGKRZSA-N 4-aminofolic acid Chemical compound C1=NC2=NC(N)=NC(N)=C2N=C1CNC1=CC=C(C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O)C=C1 TVZGACDUOSZQKY-LBPRGKRZSA-N 0.000 description 1
- 101150034604 A17L gene Proteins 0.000 description 1
- 101150080480 A27L gene Proteins 0.000 description 1
- 102000002260 Alkaline Phosphatase Human genes 0.000 description 1
- 108020004774 Alkaline Phosphatase Proteins 0.000 description 1
- 241000272525 Anas platyrhynchos Species 0.000 description 1
- 102000009133 Arylsulfatases Human genes 0.000 description 1
- 241000700663 Avipoxvirus Species 0.000 description 1
- 241000193738 Bacillus anthracis Species 0.000 description 1
- 241000588807 Bordetella Species 0.000 description 1
- 241000589968 Borrelia Species 0.000 description 1
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- 244000056139 Brassica cretica Species 0.000 description 1
- 235000003351 Brassica cretica Nutrition 0.000 description 1
- 235000003343 Brassica rupestris Nutrition 0.000 description 1
- 101150029409 CFTR gene Proteins 0.000 description 1
- 241000700664 Capripoxvirus Species 0.000 description 1
- 108010006303 Carboxypeptidases Proteins 0.000 description 1
- 102000005367 Carboxypeptidases Human genes 0.000 description 1
- 108090000994 Catalytic RNA Proteins 0.000 description 1
- 102000053642 Catalytic RNA Human genes 0.000 description 1
- 241000606161 Chlamydia Species 0.000 description 1
- 241000952524 Chordovirus Species 0.000 description 1
- 102000029816 Collagenase Human genes 0.000 description 1
- 108060005980 Collagenase Proteins 0.000 description 1
- 206010010356 Congenital anomaly Diseases 0.000 description 1
- 201000003883 Cystic fibrosis Diseases 0.000 description 1
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 1
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 1
- 241000701022 Cytomegalovirus Species 0.000 description 1
- 108010092160 Dactinomycin Proteins 0.000 description 1
- 108090000204 Dipeptidase 1 Proteins 0.000 description 1
- 206010013801 Duchenne Muscular Dystrophy Diseases 0.000 description 1
- 101150009495 E10R gene Proteins 0.000 description 1
- 108700037122 EWS-FLI fusion Proteins 0.000 description 1
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 1
- 101710147220 Ent-copalyl diphosphate synthase, chloroplastic Proteins 0.000 description 1
- 101710204837 Envelope small membrane protein Proteins 0.000 description 1
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 1
- 241000282324 Felis Species 0.000 description 1
- 206010018338 Glioma Diseases 0.000 description 1
- 102100041003 Glutamate carboxypeptidase 2 Human genes 0.000 description 1
- 101150071666 HBA gene Proteins 0.000 description 1
- 101710154606 Hemagglutinin Proteins 0.000 description 1
- 241000711549 Hepacivirus C Species 0.000 description 1
- 241000724675 Hepatitis E virus Species 0.000 description 1
- 241000709721 Hepatovirus A Species 0.000 description 1
- 208000009889 Herpes Simplex Diseases 0.000 description 1
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 1
- 101000892862 Homo sapiens Glutamate carboxypeptidase 2 Proteins 0.000 description 1
- 101000578784 Homo sapiens Melanoma antigen recognized by T-cells 1 Proteins 0.000 description 1
- 101001133056 Homo sapiens Mucin-1 Proteins 0.000 description 1
- 101001012157 Homo sapiens Receptor tyrosine-protein kinase erbB-2 Proteins 0.000 description 1
- 241000701085 Human alphaherpesvirus 3 Species 0.000 description 1
- 241000725303 Human immunodeficiency virus Species 0.000 description 1
- 241000713772 Human immunodeficiency virus 1 Species 0.000 description 1
- 241000701806 Human papillomavirus Species 0.000 description 1
- 101000954493 Human papillomavirus type 16 Protein E6 Proteins 0.000 description 1
- 108010003272 Hyaluronate lyase Proteins 0.000 description 1
- 102000009066 Hyaluronoglucosaminidase Human genes 0.000 description 1
- XQFRJNBWHJMXHO-RRKCRQDMSA-N IDUR Chemical compound C1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1N1C(=O)NC(=O)C(I)=C1 XQFRJNBWHJMXHO-RRKCRQDMSA-N 0.000 description 1
- 206010061598 Immunodeficiency Diseases 0.000 description 1
- 208000026350 Inborn Genetic disease Diseases 0.000 description 1
- 108010074328 Interferon-gamma Proteins 0.000 description 1
- 102000008070 Interferon-gamma Human genes 0.000 description 1
- 108010002350 Interleukin-2 Proteins 0.000 description 1
- 102000000588 Interleukin-2 Human genes 0.000 description 1
- 101150008942 J gene Proteins 0.000 description 1
- 241000700563 Leporipoxvirus Species 0.000 description 1
- 208000016604 Lyme disease Diseases 0.000 description 1
- 101001133631 Lysinibacillus sphaericus Penicillin acylase Proteins 0.000 description 1
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 1
- 102100028389 Melanoma antigen recognized by T-cells 1 Human genes 0.000 description 1
- 208000024556 Mendelian disease Diseases 0.000 description 1
- 229930192392 Mitomycin Natural products 0.000 description 1
- 241001183012 Modified Vaccinia Ankara virus Species 0.000 description 1
- 241001430197 Mollicutes Species 0.000 description 1
- 241000700559 Molluscipoxvirus Species 0.000 description 1
- 108010008707 Mucin-1 Proteins 0.000 description 1
- 102100034263 Mucin-2 Human genes 0.000 description 1
- 108010008705 Mucin-2 Proteins 0.000 description 1
- 101100391191 Mus musculus Foxo1 gene Proteins 0.000 description 1
- NWIBSHFKIJFRCO-WUDYKRTCSA-N Mytomycin Chemical compound C1N2C(C(C(C)=C(N)C3=O)=O)=C3[C@@H](COC(N)=O)[C@@]2(OC)[C@@H]2[C@H]1N2 NWIBSHFKIJFRCO-WUDYKRTCSA-N 0.000 description 1
- 206010028851 Necrosis Diseases 0.000 description 1
- 241000588653 Neisseria Species 0.000 description 1
- 108091034117 Oligonucleotide Proteins 0.000 description 1
- 102000043276 Oncogene Human genes 0.000 description 1
- 101710093908 Outer capsid protein VP4 Proteins 0.000 description 1
- 101710135467 Outer capsid protein sigma-1 Proteins 0.000 description 1
- 206010033128 Ovarian cancer Diseases 0.000 description 1
- 241001631646 Papillomaviridae Species 0.000 description 1
- 241000700639 Parapoxvirus Species 0.000 description 1
- 102000035195 Peptidases Human genes 0.000 description 1
- 241000224016 Plasmodium Species 0.000 description 1
- 241000700625 Poxviridae Species 0.000 description 1
- 108010059712 Pronase Proteins 0.000 description 1
- 101710176177 Protein A56 Proteins 0.000 description 1
- 102100030086 Receptor tyrosine-protein kinase erbB-2 Human genes 0.000 description 1
- 101710088839 Replication initiation protein Proteins 0.000 description 1
- 102100037486 Reverse transcriptase/ribonuclease H Human genes 0.000 description 1
- 101710188106 SEC14-like protein 2 Proteins 0.000 description 1
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 1
- 235000014680 Saccharomyces cerevisiae Nutrition 0.000 description 1
- 241000607142 Salmonella Species 0.000 description 1
- 101710172711 Structural protein Proteins 0.000 description 1
- 241000700568 Suipoxvirus Species 0.000 description 1
- 101150006914 TRP1 gene Proteins 0.000 description 1
- 108090001109 Thermolysin Proteins 0.000 description 1
- 102000006601 Thymidine Kinase Human genes 0.000 description 1
- 108020004440 Thymidine kinase Proteins 0.000 description 1
- 241000223996 Toxoplasma Species 0.000 description 1
- LVTKHGUGBGNBPL-UHFFFAOYSA-N Trp-P-1 Chemical compound N1C2=CC=CC=C2C2=C1C(C)=C(N)N=C2C LVTKHGUGBGNBPL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108060008682 Tumor Necrosis Factor Proteins 0.000 description 1
- 102000003425 Tyrosinase Human genes 0.000 description 1
- 108060008724 Tyrosinase Proteins 0.000 description 1
- 101100171542 Vaccinia virus (strain Western Reserve) VACWR066 gene Proteins 0.000 description 1
- 108010067390 Viral Proteins Proteins 0.000 description 1
- 208000036142 Viral infection Diseases 0.000 description 1
- 241000710886 West Nile virus Species 0.000 description 1
- 241000700574 Yatapoxvirus Species 0.000 description 1
- JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N [3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-hydroxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methyl [5-(6-aminopurin-9-yl)-2-(hydroxymethyl)oxolan-3-yl] hydrogen phosphate Polymers Cc1cn(C2CC(OP(O)(=O)OCC3OC(CC3OP(O)(=O)OCC3OC(CC3O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)C(COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3CO)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)O2)c(=O)[nH]c1=O JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000001015 abdomen Anatomy 0.000 description 1
- 229960004150 aciclovir Drugs 0.000 description 1
- MKUXAQIIEYXACX-UHFFFAOYSA-N aciclovir Chemical compound N1C(N)=NC(=O)C2=C1N(COCCO)C=N2 MKUXAQIIEYXACX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- RJURFGZVJUQBHK-IIXSONLDSA-N actinomycin D Chemical compound C[C@H]1OC(=O)[C@H](C(C)C)N(C)C(=O)CN(C)C(=O)[C@@H]2CCCN2C(=O)[C@@H](C(C)C)NC(=O)[C@H]1NC(=O)C1=C(N)C(=O)C(C)=C2OC(C(C)=CC=C3C(=O)N[C@@H]4C(=O)N[C@@H](C(N5CCC[C@H]5C(=O)N(C)CC(=O)N(C)[C@@H](C(C)C)C(=O)O[C@@H]4C)=O)C(C)C)=C3N=C21 RJURFGZVJUQBHK-IIXSONLDSA-N 0.000 description 1
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 1
- 229940009456 adriamycin Drugs 0.000 description 1
- 239000000443 aerosol Substances 0.000 description 1
- 230000029936 alkylation Effects 0.000 description 1
- 238000005804 alkylation reaction Methods 0.000 description 1
- 150000001412 amines Chemical class 0.000 description 1
- 229960003896 aminopterin Drugs 0.000 description 1
- 229940089837 amygdalin Drugs 0.000 description 1
- YZLOSXFCSIDECK-UHFFFAOYSA-N amygdalin Natural products OCC1OC(OCC2OC(O)C(O)C(O)C2O)C(O)C(O)C1OC(C#N)c3ccccc3 YZLOSXFCSIDECK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 210000004102 animal cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 1
- 230000000840 anti-viral effect Effects 0.000 description 1
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 1
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 1
- 206010064097 avian influenza Diseases 0.000 description 1
- 244000052616 bacterial pathogen Species 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 102000005936 beta-Galactosidase Human genes 0.000 description 1
- 108010005774 beta-Galactosidase Proteins 0.000 description 1
- 102000006635 beta-lactamase Human genes 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- QKSKPIVNLNLAAV-UHFFFAOYSA-N bis(2-chloroethyl) sulfide Chemical compound ClCCSCCCl QKSKPIVNLNLAAV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 210000001185 bone marrow Anatomy 0.000 description 1
- 210000000481 breast Anatomy 0.000 description 1
- 244000309466 calf Species 0.000 description 1
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 1
- 229930188550 carminomycin Natural products 0.000 description 1
- XREUEWVEMYWFFA-CSKJXFQVSA-N carminomycin Chemical compound C1[C@H](N)[C@H](O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@@H]1C2=C(O)C(C(=O)C3=C(O)C=CC=C3C3=O)=C3C(O)=C2C[C@@](O)(C(C)=O)C1 XREUEWVEMYWFFA-CSKJXFQVSA-N 0.000 description 1
- XREUEWVEMYWFFA-UHFFFAOYSA-N carminomycin I Natural products C1C(N)C(O)C(C)OC1OC1C2=C(O)C(C(=O)C3=C(O)C=CC=C3C3=O)=C3C(O)=C2CC(O)(C(C)=O)C1 XREUEWVEMYWFFA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229950001725 carubicin Drugs 0.000 description 1
- 210000003169 central nervous system Anatomy 0.000 description 1
- 238000002512 chemotherapy Methods 0.000 description 1
- 229960004316 cisplatin Drugs 0.000 description 1
- 229960002424 collagenase Drugs 0.000 description 1
- 210000001072 colon Anatomy 0.000 description 1
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 1
- 101150071119 cpg-2 gene Proteins 0.000 description 1
- 210000004748 cultured cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000000515 cyanogenic effect Effects 0.000 description 1
- 239000000824 cytostatic agent Substances 0.000 description 1
- 231100000433 cytotoxic Toxicity 0.000 description 1
- 210000001151 cytotoxic T lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000001472 cytotoxic effect Effects 0.000 description 1
- 229960000640 dactinomycin Drugs 0.000 description 1
- 230000007812 deficiency Effects 0.000 description 1
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 1
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 1
- 230000000249 desinfective effect Effects 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 1
- 238000004090 dissolution Methods 0.000 description 1
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 description 1
- 210000001671 embryonic stem cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000007613 environmental effect Effects 0.000 description 1
- 230000006862 enzymatic digestion Effects 0.000 description 1
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 1
- 210000002919 epithelial cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000003238 esophagus Anatomy 0.000 description 1
- VJJPUSNTGOMMGY-MRVIYFEKSA-N etoposide Chemical compound COC1=C(O)C(OC)=CC([C@@H]2C3=CC=4OCOC=4C=C3[C@@H](O[C@H]3[C@@H]([C@@H](O)[C@@H]4O[C@H](C)OC[C@H]4O3)O)[C@@H]3[C@@H]2C(OC3)=O)=C1 VJJPUSNTGOMMGY-MRVIYFEKSA-N 0.000 description 1
- 229960005420 etoposide Drugs 0.000 description 1
- YGHHWSRCTPQFFC-UHFFFAOYSA-N eucalyptosin A Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OC1C(OC(C#N)C=2C=CC=CC=2)OC(CO)C(O)C1O YGHHWSRCTPQFFC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000002095 exotoxin Substances 0.000 description 1
- 231100000776 exotoxin Toxicity 0.000 description 1
- 239000013613 expression plasmid Substances 0.000 description 1
- 239000012894 fetal calf serum Substances 0.000 description 1
- 230000001605 fetal effect Effects 0.000 description 1
- 229960002949 fluorouracil Drugs 0.000 description 1
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 1
- 238000013467 fragmentation Methods 0.000 description 1
- 238000006062 fragmentation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 1
- 229960002963 ganciclovir Drugs 0.000 description 1
- IRSCQMHQWWYFCW-UHFFFAOYSA-N ganciclovir Chemical compound O=C1NC(N)=NC2=C1N=CN2COC(CO)CO IRSCQMHQWWYFCW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000016361 genetic disease Diseases 0.000 description 1
- 210000002288 golgi apparatus Anatomy 0.000 description 1
- 239000003102 growth factor Substances 0.000 description 1
- 239000000185 hemagglutinin Substances 0.000 description 1
- 229960002773 hyaluronidase Drugs 0.000 description 1
- 230000000887 hydrating effect Effects 0.000 description 1
- 230000003301 hydrolyzing effect Effects 0.000 description 1
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 description 1
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 1
- 239000012678 infectious agent Substances 0.000 description 1
- 229960003130 interferon gamma Drugs 0.000 description 1
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 description 1
- 238000007912 intraperitoneal administration Methods 0.000 description 1
- 230000002601 intratumoral effect Effects 0.000 description 1
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 1
- 238000010253 intravenous injection Methods 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 239000000644 isotonic solution Substances 0.000 description 1
- 150000002605 large molecules Chemical class 0.000 description 1
- 210000000867 larynx Anatomy 0.000 description 1
- 208000032839 leukemia Diseases 0.000 description 1
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 1
- 230000004807 localization Effects 0.000 description 1
- 229920002521 macromolecule Polymers 0.000 description 1
- 230000003211 malignant effect Effects 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 1
- SGDBTWWWUNNDEQ-LBPRGKRZSA-N melphalan Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(N(CCCl)CCCl)C=C1 SGDBTWWWUNNDEQ-LBPRGKRZSA-N 0.000 description 1
- 229960001924 melphalan Drugs 0.000 description 1
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 1
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 1
- 229960004857 mitomycin Drugs 0.000 description 1
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 description 1
- 238000010172 mouse model Methods 0.000 description 1
- 210000000663 muscle cell Anatomy 0.000 description 1
- 235000010460 mustard Nutrition 0.000 description 1
- LWGJTAZLEJHCPA-UHFFFAOYSA-N n-(2-chloroethyl)-n-nitrosomorpholine-4-carboxamide Chemical compound ClCCN(N=O)C(=O)N1CCOCC1 LWGJTAZLEJHCPA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000017074 necrotic cell death Effects 0.000 description 1
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- GQPLMRYTRLFLPF-UHFFFAOYSA-N nitrous oxide Inorganic materials [O-][N+]#N GQPLMRYTRLFLPF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000004882 non-tumor cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000012457 nonaqueous media Substances 0.000 description 1
- 231100000252 nontoxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000003000 nontoxic effect Effects 0.000 description 1
- 230000030648 nucleus localization Effects 0.000 description 1
- 231100000590 oncogenic Toxicity 0.000 description 1
- 230000002246 oncogenic effect Effects 0.000 description 1
- 210000000496 pancreas Anatomy 0.000 description 1
- 244000045947 parasite Species 0.000 description 1
- 230000007918 pathogenicity Effects 0.000 description 1
- 231100000915 pathological change Toxicity 0.000 description 1
- 230000036285 pathological change Effects 0.000 description 1
- 230000007170 pathology Effects 0.000 description 1
- 230000000149 penetrating effect Effects 0.000 description 1
- 210000005105 peripheral blood lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 229940021222 peritoneal dialysis isotonic solution Drugs 0.000 description 1
- 239000012466 permeate Substances 0.000 description 1
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 1
- 239000000825 pharmaceutical preparation Substances 0.000 description 1
- 229940127557 pharmaceutical product Drugs 0.000 description 1
- 229920001481 poly(stearyl methacrylate) Polymers 0.000 description 1
- 244000144977 poultry Species 0.000 description 1
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 1
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 1
- 238000003825 pressing Methods 0.000 description 1
- 230000003449 preventive effect Effects 0.000 description 1
- 230000000750 progressive effect Effects 0.000 description 1
- 210000002307 prostate Anatomy 0.000 description 1
- 230000002797 proteolythic effect Effects 0.000 description 1
- 230000001698 pyrogenic effect Effects 0.000 description 1
- 238000001959 radiotherapy Methods 0.000 description 1
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 1
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 1
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 1
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 1
- 230000000241 respiratory effect Effects 0.000 description 1
- 108091092562 ribozyme Proteins 0.000 description 1
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 1
- 208000007056 sickle cell anemia Diseases 0.000 description 1
- 239000002356 single layer Substances 0.000 description 1
- 150000003384 small molecules Chemical class 0.000 description 1
- 230000003381 solubilizing effect Effects 0.000 description 1
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 1
- 230000000087 stabilizing effect Effects 0.000 description 1
- 210000000130 stem cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000008223 sterile water Substances 0.000 description 1
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 1
- 108060007951 sulfatase Proteins 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 238000001356 surgical procedure Methods 0.000 description 1
- 101150047061 tag-72 gene Proteins 0.000 description 1
- 239000013076 target substance Substances 0.000 description 1
- NRUKOCRGYNPUPR-QBPJDGROSA-N teniposide Chemical compound COC1=C(O)C(OC)=CC([C@@H]2C3=CC=4OCOC=4C=C3[C@@H](O[C@H]3[C@@H]([C@@H](O)[C@@H]4O[C@@H](OC[C@H]4O3)C=3SC=CC=3)O)[C@@H]3[C@@H]2C(OC3)=O)=C1 NRUKOCRGYNPUPR-QBPJDGROSA-N 0.000 description 1
- 229960001278 teniposide Drugs 0.000 description 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 1
- RYYWUUFWQRZTIU-UHFFFAOYSA-K thiophosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=S RYYWUUFWQRZTIU-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 235000013619 trace mineral Nutrition 0.000 description 1
- 239000011573 trace mineral Substances 0.000 description 1
- 238000001890 transfection Methods 0.000 description 1
- 239000012096 transfection reagent Substances 0.000 description 1
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 1
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 1
- 238000013519 translation Methods 0.000 description 1
- 102000003390 tumor necrosis factor Human genes 0.000 description 1
- 241000701161 unidentified adenovirus Species 0.000 description 1
- 241001529453 unidentified herpesvirus Species 0.000 description 1
- 241000712461 unidentified influenza virus Species 0.000 description 1
- 241001430294 unidentified retrovirus Species 0.000 description 1
- 210000003932 urinary bladder Anatomy 0.000 description 1
- 210000004291 uterus Anatomy 0.000 description 1
- 238000002255 vaccination Methods 0.000 description 1
- 230000029812 viral genome replication Effects 0.000 description 1
- 230000009385 viral infection Effects 0.000 description 1
- 244000052613 viral pathogen Species 0.000 description 1
- 239000013603 viral vector Substances 0.000 description 1
- 150000003952 β-lactams Chemical class 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
- A61K35/66—Microorganisms or materials therefrom
- A61K35/76—Viruses; Subviral particles; Bacteriophages
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
- C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
- C12N15/85—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for animal cells
- C12N15/86—Viral vectors
- C12N15/863—Poxviral vectors, e.g. entomopoxvirus
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/0005—Vertebrate antigens
- A61K39/0011—Cancer antigens
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/12—Viral antigens
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/82—Translation products from oncogenes
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/51—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising whole cells, viruses or DNA/RNA
- A61K2039/525—Virus
- A61K2039/5256—Virus expressing foreign proteins
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
- A61K2039/55511—Organic adjuvants
- A61K2039/55522—Cytokines; Lymphokines; Interferons
- A61K2039/55527—Interleukins
- A61K2039/55533—IL-2
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/58—Medicinal preparations containing antigens or antibodies raising an immune response against a target which is not the antigen used for immunisation
- A61K2039/585—Medicinal preparations containing antigens or antibodies raising an immune response against a target which is not the antigen used for immunisation wherein the target is cancer
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K48/00—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2319/00—Fusion polypeptide
- C07K2319/01—Fusion polypeptide containing a localisation/targetting motif
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
- C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
- C12N15/85—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for animal cells
- C12N15/86—Viral vectors
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2500/00—Specific components of cell culture medium
- C12N2500/05—Inorganic components
- C12N2500/10—Metals; Metal chelators
- C12N2500/20—Transition metals
- C12N2500/24—Iron; Fe chelators; Transferrin
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2501/00—Active agents used in cell culture processes, e.g. differentation
- C12N2501/10—Growth factors
- C12N2501/11—Epidermal growth factor [EGF]
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2510/00—Genetically modified cells
- C12N2510/02—Cells for production
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2710/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA dsDNA viruses
- C12N2710/00011—Details
- C12N2710/20011—Papillomaviridae
- C12N2710/20034—Use of virus or viral component as vaccine, e.g. live-attenuated or inactivated virus, VLP, viral protein
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2710/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA dsDNA viruses
- C12N2710/00011—Details
- C12N2710/24011—Poxviridae
- C12N2710/24111—Orthopoxvirus, e.g. vaccinia virus, variola
- C12N2710/24141—Use of virus, viral particle or viral elements as a vector
- C12N2710/24143—Use of virus, viral particle or viral elements as a vector viral genome or elements thereof as genetic vector
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2710/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA dsDNA viruses
- C12N2710/00011—Details
- C12N2710/24011—Poxviridae
- C12N2710/24111—Orthopoxvirus, e.g. vaccinia virus, variola
- C12N2710/24151—Methods of production or purification of viral material
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N7/00—Viruses; Bacteriophages; Compositions thereof; Preparation or purification thereof
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N7/00—Viruses; Bacteriophages; Compositions thereof; Preparation or purification thereof
- C12N7/02—Recovery or purification
Abstract
Изобретение относится к области биотехнологии, вирусологии и медицины. Раскрыт способ продуцирования дикого типа, аттенуированного или рекомбинантного поксвируса, без выявленной инфекционной специфичности. Способ предусматривает приготовление культуры упаковывающих клеток, инфицирование поксвирусом и культивирование инфицированных клеток. Далее проводят извлечение ЕЕУ частиц из супернатанта культуры и из упаковывающих клеток, очистку смеси поксвирусных частиц, концентрирование очищенной смеси поксвирусных частиц и диафильтрацию концентрированной смеси поксвирусных частиц. Полученные поксвирусные частицы используются для получения лекарственных средств. Изобретение может быть использовано в медицине. 2 н. и 6 з.п. ф-лы, 3 ил., 2 пр.
Description
Данное изобретение имеет отношение к таким композициям, а также к таким фармацевтическим композициям, которые включают поксвирусы и более конкретно, к таким, которые влючают внеклеточные оболочечные вирусы. Данное изобретение также имеет отношение к способу, который является пригодным для того, чтобы продуцировать поксвирусы, а также к поксвирусам, полученным с помощью указанного способа. Кроме того, данное изобретение также имеет отношение к использованию указанных поксвирусов и указанной композиции для получения лекарственного средства.
Возникновение таких новых угроз (птичий грипп, западный нильский вирус, сибирская язва, и т.д.), так же, как развитие генной терапии, увеличило со временем потребность в производстве и очищении поксвирусов в профилактических или терапевтических целях. Это особенно имеет место для такого вируса, которым является вирус Анкара млекопитающих (MVA). Этот поксвирус, который первоначально был использован для того, чтобы вакцинировать пациентов с иммунодефицитными состояниями против натуральной оспы, теперь также используется в качестве вектора в целях генной терапии. Например, MVA используется в качестве вектора для гена MUC 1 для того, чтобы вакцинировать пациентов против экспрессии опухоли Muc 1 (Scholl и др., 2003, J Biomed BiotechnoL, 2003, 3, 194-201). MVA перенос гена, который кодирует антигены HPV, также используется в качестве вектора для терапевтического лечения карциномы яичников.
Поксвирусы - это группа оболочечных сложных вирусов, которые отличаются их преимущественно необычной морфологией, их большим геномом ДНК и их сайтом репликации, который является расположенным в цитоплазме. Геном нескольких членов Poxviridae, включая копенгагенский штамм вируса осповакцины (W) (Goebel и др., 1990, Virol. 179, 247-266 и 517-563; Johnson и др., 1993, Virol. 196. 381-401) и модифицированный штамм вирус осповакцины Анкара (MVA) (Antoine и др., 1998, Virol. 244, 365-396), был картированы и секвенирован. У копенгагенского штамма вируса осповакцины есть двух цепочечный геном ДНК, состоящий приблизительно из 192 КБ, предназначенный для кодирования приблизительно 200 белков, из которых приблизительно 100 вовлечены в сборку вируса. MVA является сильно аттенуированным штаммом вируса осповакцины, который произведен путем более чем 500 серийными пассажами штамма вируса осповакцины Анкара в культуре эмбрионов куриных фибробластов (Mayr и др., 1975, Infection 3, 6-16). Вирус MVA был депонирован в Национальной Коллекции Культур Микроорганизмов (CNCM) под депозитным номером N 602I-721. Определение полной последовательности генома MVA и сравнения с геномом копенгагенского штамма вируса осповакцины позволяет точно идентифицировать те изменения, которые произошли в вирусном геноме и определить семь делеций (от I до VII), а также те многочисленные мутации, которые приводят к фрагментированию ORFs (открытая рамка считывания) (Antoine и др., 1998, Virology 244, 365-396).
Естественный метаболический путь внутриклеточного захвата оболочечных вирусов включает ряд таких этапов, которые состоят из закрепления вирусного полипептида, ориентированного на вирусной поверхности к клеточному рецептору, и этапа слияния между вирусной и клеточной мембранами, что приводит к тому, что вирусный геном высвобождается в цитоплазму зараженной клетки.
Однако, в особом случае для поксвирусов, точный анализ метаболического пути сложен тем, что существуют две морфологически отличные формы инфекционного вируса, которые имеют названия «внутриклеточный зрелый вирус» (IMV) и «внеклеточный оболочечный вирус» (EEV). Для формы IMV, среди других особенностей, характерно окруженное монолипидной оболочкой вирусное ядро, и преимущественно локализация в цитоплазме зараженных клеток, хотя это может быть и для экстрацеллюларного, выпущенного после лизиса зараженных клеток. Многие из естественных полипептидов, являются представленными на поверхности липидной оболочки IMV, были идентифицированы, такие как, например, р 14 kDa и р 21 kDa белки, соответственно закодированные геном A27L (Rodriguez и др., 1985, J.Virol. 56, 482-488; Rodriguez и Estaban, 1987, J.Virol. 61, 3550-3554), и ген A17L, так же, который кодирует белки A14L, D8L, A9L (Yeh и др., 2000, J.Virol. 74. 9701-9711), E10R (Senkevich и др. 2000, Virol. 5, 244-252) и гены H3L. По сравнению с IMV у формы EEV есть дополнительная внешняя поверхность мембраны липида (двойной слой липида), которая получена из комплекса Гольджи. Это соответствует вирусной форме, выпущенной вне зараженных клеток. Мембранная поверхность EEV содержит приблизительно 10 белков, которые отсутствуют на поверхности IMV, такие как, например, закодированный B5R, A34R и гемагглютининовые (ХА) генные продукты. Сосуществование указанного IMV и форм EEV было описано для большинства штаммов оспы (например, Копенгагенский и штамм MVA) также, как для других поксвирусов, таких как поксвирусы домашней птицы (Boulanger и др., 2000, J.Gen Virol. 81, 675-687).
Поскольку они являются самыми устойчивыми в окружающей среде, IMVs играют преобладающую роль в клетке-хозяине, для того, чтобы быть готовыми для трансмиссии (Hooper и др., м Virology, 2003, 306, 181-185). С учетом этого частицы IMV были традиционными векторами в целях генной терапии. Поэтому доступный процесс поксвирусной очистки позволяет обрабатывать только те вирусы, которые являются представлеными на клетках (то есть IMV), тогда как от пула частиц EEV в среде культивирования не возможно избавиться. Из-за присутствия на его поверхности большего разнообразия полипептидов, чем на поверхности IMV, использование рекомбинантного EEVs было уже предложено и известно в назначении для инфицирования (US 20050208074; Galmiche и др. J.Gen. Virol., 1997, 78, 3019-3027). Однако, даже для этого определенного использования, частицы IMV особенно являются предпочтительными (US 2005 0208074, страница 4, глава 29).
Неожиданно автор нашел, что у EEVs без предназначенной инфекции специфически имеет большую терапевтическую и/или профилактическую эффективность по сравнению с IMV.
В этом аспекте данное изобретение имеет отношение к поксвирусам и предпочтительно рекомбинантным поксвирусам, при этом поксвирусом является EEV, без выявленной специфики инфекционности. Данное изобретение также имеет отношение к композициям и предпочтительно фармацевтическим композициям, которые включают рекомбинантный EEV без выявленной специфики инфекционности.
В том значении, как используется везде по данному описанию, термин "один" используется в том смысле, что он подразумевает "по крайней мере один", "по крайней мере первое", "один или более" или "множество" компонентов, на которые ссылаются, или этапов, если из контекста явно не исходит иное. Например, термин "клетка" включает множество клеток, включая смеси клеток.
Термин "и/или" везде, там, где используется в данном описании, включает значение "и", "или" и "все или любая другая комбинация элементов, связанных указанным термином".
Термин "около" или "приблизительно", как используется в данном описании, означает в пределах 20%, предпочтительно в пределах 10%, и более предпочтительно в пределах 5% данного интервала или диапазона.
Как используется в данном описании, термин "включающий" предназначен для того, чтобы уяснять, что продукты, композиции и методы включают компоненты, на которые ссылаются, или этапы, но не исключая при этом другие.
"Включающий по существу" используется тогда, когда необходимо определить продукты, композиции и методы, и он должен означать, что исключены другие компоненты или этапы, имеющие другое любое существенное значение. Таким образом, композиция, состоящая по существу из указанных компонентов, не исключает следовые количества контаминантов и фармацевтически приемлемые носители. "Включающий" должен означать, что исключены более, чем микроэлементы, другие компоненты или этапы.
Семейство поксвирусов включает вирусы Chordo - поксвирус и подсемейство Entomo - поксвирус. Среди них поксвирус является представленым согласно изобретению и предпочтительно выбранным из группы, которая включает Ortho - поксвирусы, Para -поксвирусы, Avi - поксвирусы, Capri - поксвирусы, Lepori - поксвирусы, Sui - поксвирусы, Mollusci - поксвирусы, Yata - поксвирусы. Согласно более преимущественному воплощению является представленным, согласно данному изобретению, поксвирусом Ortho - поксвирус.
Orthoпоксвирус - предпочтительно вирус осповакцины и более предпочтительно, им является измененный вирус осповакцины Анкара (MVA), точнее, MVA 575 (ЕСАСС VO 0120707) и MVA-BN (ЕСАСС V 00083008).
Как ранее было указано, частица IMV включает вирусное ядро, включая вирусный геном, окруженный поверхностью монослоя из липидов. Термин "EEV" относится к частице IMV, окруженной дополнительной поверхностью, состоящей из двойного липидного слоя на ее поверхностных клеточных, а так же, как и на вирусных полипептидах.
Термин "без выявленной специфики инфекционности " в том значении, в котором он используется здесь, касается контролируемой инфекционной специфичности, при которой поксвирусная частица сориентирована таким образом, чтобы выявить новое или расширенное сродство к целевым клеткам, по сравнению со связанными и не измененными поксвирусными частицами.
В результате поксвирусная частица с выявленной спецификой инфекционности показывает, что склонность инфицировать является специфичной для целевых клеток в отличие от таких же связанных и не измененных поксвирусных частиц, что означает, что поксвирусная частица с выявленной спецификой инфекционности заражает более эффективно или - и более быстро, ее целевые клетки (является представленым на их поверхности антилиганд, выявленный половиной лиганда, проявленного на поверхности поксвирусной частицы согласно представленному изобретению), чем нецелевые клетки, и предназначена для клеток (которые не выявляют на их поверхности такой антилиганд), тогда как связанная поксвирусная частица без выявленной специфики инфекционности заражает, как выявилось, целевые клетки, с более низкой или подобной эффективностью, в сравнении, для того, чтобы быть не предназначенной для клеток.
Термин "рекомбинантный вирус" относится к такому вирусу, который включает экзогенную последовательность, вставленную в ее геном. В значении, используемом здесь, экзогенная последовательность касается нуклеиновой кислоты, которая в природе не присутствует в родительском вирусе.
В одном из воплощений данного изобретения экзогенная последовательность кодирует молекулу, которая имеет прямо или косвенно опосредованную цитостатическую активность. Под "прямо или косвенно" цитостатическим мы подразумеваем, что молекула, которая закодирована экзогенной последовательностью, может самостоятельно быть токсичной (например рицин, фактор некроза опухоли, интерлейкин 2, интерферон гамма, рибонуклеаза, дезоксирибонуклеаза, экзотоксин Pseudomonas А), или указанная может быть метаболизирована, для того, чтобы образовать впоследствии токсичный продукт, или указанная может оказывать влияние на что - то еще, для того, чтобы сформировать токсичный продукт. Последовательность рицина кДНК раскрыта Lamb и др. (Eur. J.Biochem., 1985, 148, 265-270) и включена здесь в качестве ссылки.
В преимущественном воплощении изобретения экзогенная последовательность - ген является способным к самоуничтожению. Ген, который является способным к самоуничтожению, кодирует белок, который является способным преобразовать относительно нетоксичный препарат в токсичный препарат. Например, фермент цитозин дезаминаза преобразовывает 5-фторцитозин (5 FC) в 5-фтороурацил (5 FU) (Mullen и др. (1922) PNAS 89, 33); фермент тимидин киназа герпеса простого делает чувствительными клетки к обработке противовирусным средством ганцикловир (G CV) или ацикловир (Mooiten (1986) Рак Res. 46, 5276; Ezzedine и др. (1991) New Biol 3, 608). Цитозин деаминаза любого организма, например Е.coli или Saccharomyces cerevisiae, может быть здесь использована также.
Таким образом, в более преимущественном воплощении изобретения, ген, который кодирует белок, - который имеет цитозин деаминазную активность и, еще более предпочтительно, белок, такой, как он описан в заявках на патент WO 2005007857 и WO 9954481.
Другие примеры пролекарственных ферментных комбинаций включают раскрытые Bagshawe и др. (WO 88/07378), а именно, различные агенты алкилирования и Pseudomonas spp. Фермент CPG 2 и раскрытые Epenetos & Rowlinson-Busza (WO 91/11201), а именно, цианогенные пролекарства (например амигдалин) и те, которые получены из растений, в частности, бета глюозидаза.
Ферменты, которые являются применимыми в этом воплощении изобретения, включают, но не являются ограниченными, щелочную фосфатазу, которая является применимой для преобразования содержащих фосфат пролекарств в свободные лекарства;
арилсульфатазу, которая является применимой для преобразования содержащих сульфат пролекарств в свободные лекарства; протеазы, такие как серная протеаза, термолизин, субилизин, карбоксипептидазы и катепсины (такие как, например, катепсины В и L), которые являются полезными для преобразования содержащих пептид пролекарств в свободные лекарства; D - аланилкарбоксипептидаза, которая является полезной для преобразования пролекарств, которые содержат заместители D - аминокислоты; гидратирующие углевод ферменты, такие как бета галактозидаза и нейраминидаза, которая является применимой для преобразования глкозилированных пролекарств в свободные лекарства; бета - лактамазу, которая является полезной для преобразования производных лекарств с бета лактамами в свободные лекарства; и амидазы пенициллина, такие как пенициллин V амидаза или амидаза Г пенициллина, которая является полезной для преобразования производных лекарств в их азотистые амины с феноксиацетиловыми или фенилацетиловыми группами, соответственно, в свободные лекарства. Альтернативно, антитела с ферментативной активностью, также известной в уровне техники как абзимы, могут использоваться для того, чтобы преобразовать пролекарства изобретения в свободные активные лекарства (Massey R. и др., Nature, 1987, 328, 457-458).
Точно так же пролекарства включают, но не являются ограниченными, вышеупомянутые пролекарства - это перечисленные пролекарства, например, содержащие фосфат пролекарства, тиофосфат содержащие пролекарства, содержащие сульфат пролекарства, содержащие пептид пролекарства, D-амино кислотно-модифицированные пролекарства, гликозилированные пролекарства, бета пактам, содержащие пролекарства, произвольно замененный феноксиацетамид содержащие пролекарства или произвольно замененные фенилацетамид содержащий пролекарства, 5-фторцитозин и другие 5-фторированные пролекарства, которые могут быть преобразованы. Примерами таких цитотоксических препаратов, которые могут быть преобразованы в форму пропрепарата для использования в этом изобретении, включают, но не являются ограниченными, этопозид, тенипозид, адриамицин, дауномоцин, карминомицин, аминоптерин, дактиномицин, митомицин, цисплатину и аналоги цисплатины, блеомицин, эсперамицин (см. например US 4,675,187), с 5 - фтороурацилами, мелфалан и другие, связанные азотом иприта.
В дальнейшем воплощении экзогенный ген кодирует рибозим, который является способным расщеплять и предназначен для РНК или ДНК. Предназначенные РНК или ДНК, которые будут расщеплены, могут быть РНК или ДНК, которые являются существенными для функционирования клетки, и расщепление их приводит к некрозу клеток или РНК, или ДНК, которые будут расщеплены, может быть РНК или ДНК, которые кодирует нежелательный белок, например онкогенный продукт, и расщепление этой РНК или ДНК может препятствовать тому, чтобы клетка стала злокачественной.
Во всех следующих дальнейших воплощениях экзогенный ген кодирует антисмысловую РНК.
Под " антисмысловой РНК " мы подразумеваем такую молекулу РНК, которая скрещивается и интерферируется с экспрессией м РНК молекулы, которая кодирует белок или к другой молекулы РНК в пределах клетки, такой как пре - м РНК или т РНК или р РНК, или скрещивается и интерферируется с экспрессией гена.
В другом воплощении изобретения экзогенная последовательность заменяет функцию дефектного гена в целевой клетке. Есть несколько тысяч унаследованных генетических болезней млекопитающих, включая людей, которые вызваны такими дефектными генами. Примеры таких генетических болезней включают кистозный фиброз, при котором, как известно, происходит мутация в гене CFTR; мускулярную дистрофию Дюххенна, при которой, как известно, присходит мутация в дистрофичном гене; болезнь серповидных клеток, при которой, как известно, происходит мутация в гене HbA. Много типов рака вызваны дефектными генами, особенно протоонкогенными, и генами супрессора опухоли, которые подверглись мутации.
Примеры протоонкогенов - ras, src, bcl и так далее; примеры генов супрессора опухоли - р 53 и Rb.
В дальнейшем воплощении изобретения экзогенная последовательность кодирует опухоль ассоциированный антиген (ТАА). ТАА обращается к молекуле, которая обнаружена при более высокой частоте или плотности в клетках опухоли, чем в клетках неопухоли того же самого типа ткани. Примеры ТАА включают, но не являются ограниченными СЕА, MART - 1, MAGE - 1, MAGE - 3, GP - 100, MUC - 1, MUC - 2, указанный мутированный ras онкоген, нормальный, или точечно мутированный р 53, сверхэкспрессированный р 53, СА - 125, PSA, С - erb / В2, BRCA I, BRCA II, PSMA, тирозиназа, TRP - 1, TRP - 2, NY - ESO - 1, TAG 72, KSA, HER-2/neu, Icr - al. раз - fkhr, ews - fli - 1, сохранившийся и LRP. Согласно более преимущественному воплощению является представленным в данном изобретении ТАА MUC 1.
Рекомбинантный ген поксвируса может включать больше чем одну экзогенную последовательность, и каждая экзогенная последовательность может кодировать больше чем одну молекулу. Например, может быть пригодна проассоциировать в том же самом рекомбинантном гене поксвируса, экзогенное секвенированное кодирование ТАА с экзогенной последовательностью, которая кодирует цитокин.
В другом воплощении изобретения экзогенный ген кодирует антиген.
В значении, используемом здесь, "антиген" касается лиганда, который может быть связан антителом; антиген должен не непосредственно быть иммуногенным.
Предпочтительно антиген получен из вируса, такого, как например, HIV - 1, (такой как gp 120 или gp 160), любой кошачий вирус иммунной недостаточности, человеческий или вирус герпеса животных, такие как gD или производные этого или непосредственно ранний белок, такие как ICP 27 из HSV 1 или HSV 2, цитомегаловирус (такие как gB или производные этого). Varicella Zoster вирус (такие как gp 1, II или III), или из вируса гепатита, такие как вирус гепатита В, например антиген поверхности гепатита В или производная этого, вирус гепатита А, вирус гепатита С (предпочтительно не структурный белок от генотипа 1b штамма ja), и вирус гепатита Е, или из других вирусных болезнетворных микроорганизмов, таких как респираторно сцинцитиальный вирус, вирус папилломы человека (предпочтительно Е 6 и белок Е 7 из штамма HPV 16) или вирус гриппа, или полученный из бактериальных болезнетворных микроорганизмов, таких как сальмонелла, Neisseria, боррелия (например Osp А или Osp В или производные указанных), или Chlamydia, или бордетелла например Р.69, РТ и FHA, или полученный из паразитов, таких как плазмодий или токсоплазма.
В особенно преимущественном воплощении изобретения рекомбинантный ген поксвируса кодирует те же самые белки, что и TG 4010 (Rochlitz и др. J Gene Med 2003 Aug; 5 (8): 690-900) и TG 4001 (Liu и др. Proc Natt Acad Sci США. 2004 5 октября; 101 SuppI 2: 14567-14571). В другом особенно преимущественном воплощении изобретения у поксвируса согласно представленному изобретению есть последовательность, которая является на больше чем 90% гомологичной относительно последовательности TG 4010 или TG 4001.
Преимущественно, что рекомбинантный ген поксвируса далее включает элементы, необходимые для экспрессии экзогенной последовательности. Элементы, необходимые для экспрессии, включают набор таких элементов, которые позволяют реализовывать транскрипцию последовательности нуклеотида к РНК и трансформацию мРНК в полипептид, в особенности промоторные последовательности и/или регулирующие последовательности, которые являются эффективными в клетке, которая будет заражена рекомбинантным геном поксвируса согласно представленному изобретению и произвольных последовательностей, требуемых для выделения или выражения на поверхности клеток для указанного полипептида. Эти элементы могут быть индуцибельными или конститутивными. Конечно, промотор может быть адаптирован к рекомбинантному гену поксвируса и подобран под клетку хозяина. Тут могут быть упомянуты, посредством примера, промоторы вируса осповакцины р 7.5Кр H5R, р K1L, р 28, р 11 или комбинации указанных промоторов. Литература позволяет получить большое количество информации, касающейся таких последовательностей промотора.
Необходимые элементы могут, кроме того, включать дополнительные элементы, которые улучшают экспрессию экзогенной последовательности или ее существование в клетке хозяина. Тут могут быть упомянуты, в особенности, последовательности интрона (WO 94/29471), последовательности сигнальной секреции, ядерные последовательности локализации, внутренние участки для переинициирования трансляции IRES типа, поли А последовательности, предназначенные для завершения транскрипции.
Доступные способы производства поксвирусов включают репликацию вируса в клеточной линии (например, в Hela S 3), в эмбрионах яиц или в эмбрионах куриных фибробластов. После репликации вируса культуральная среда является непригодной, клетки являються лизированными, и поксвирус, который высвободился их клеток, очищают центрифугированием в градиенте плотности сахарозы (Kotwal and Abraham; Поксвирус growth, Purification and tittering in Vaccinia Virus and Poxvirology, 2004, 101-108, Humana Press Inc., Totowa; NJ; США). Согласно этим способам никакие EEVs не являются присутствующими в очищенной композиции.
Однако доступные способы вирусного производства не являются удовлетворительными. Во-первых, они включают использование композиций, происходящих из животных, таких как сыворотка и ферменты. При использовании композиций, происходящих из животных, в способах производства, есть несколько недостатков. Например, химический состав этих композиций может изменяться между партиями, даже в том случае, если изготовитель является одним и тем же лицом. Композиции могут также быть загрязнены инфекционными агентами (например, микоплазмы и вирусы), что может серьезно негативно повлиять на состояние культивируемых клеток, в том случае, когда эти загрязненные примеси используются в композициях сред для клеточных культур.
Кроме того, использование дополнительной сыворотки для культуральных сред может усложнить и увеличить затраты очистки целевых веществ от культуральных сред из-за неспецифичной очистки сыворотки или извлекаемых белков. Наиболее важно то, что использование неопределенных композиций может препятствовать одобрению медицинскими агентствами фармацевтической композиции, полученной данным способом.
Данное изобретение далее описывает способ продуцирования поксвирусных частиц согласно данному изобретению, который включает следующие этапы:
a) приготовление культуры упоковываемых клеток,
b) инфицирование указанной клеточной культуры,
c) культивирование указанных зараженных клеток в течение соответствующего промежутка времени,
d) восстановление поксвирусных частиц, продицируемых в супернатант культуры и/или клеток с дефектом упаковки нуклеотидных последовательностей, и
e) произвольно, очистка восстановленных поксвирусных частиц.
Способ согласно данному изобретению предпочтительно является свободным от продуктов животного происхождения.
Способ согласно данному изобретению может также использоваться для производства дикого типа, и/или аттенуированного поксвируса.
В значении, как используется здесь, термин "аттенуированный поксвирус" относится к любому поксвирусу, который был изменен так, чтобы его патогенность относительно инфицированного предмета была существенно уменьшена. Предпочтительным является то, что поксвирус является аттенуированным по сути и является непатогенным с клинической точки зрения, иными словами, это означает, что выявленный поксвирус не проявляет статистически существенного увеличенного уровня патологических изменений относительно контрольных объектов.
Согласно преимущественному воплощению согласно данному изобретению, аттенуированный вирус - это аттенуированный вирус осповакцины, такой как MVA.
Термин "инфекция" относится к передаче вирусной нуклеиновой кислоты к клетке, при чем вирусная нуклеиновая кислота реплицируется, вирусные белки синтезируются, или собираются новые вирусные частицы.
В значении, как используется здесь, термин " упоковываемая клетка" относится к клетке, которая может быть заражена поксвирусом, который будет произведен. Клетка с дефектом упаковки нуклеотидных последовательностей может быть первичной клеткой, рекомбинантной клеткой и/или клеточной линией. Например, может также быть использована рекомбинантная клетка, которая содержит элементы, необходимые для производства рекомбинантного вируса, которых нет в рекомбинантном вирусном векторе.
В одном воплощении изобретения клетка с дефектом упаковки нуклеотидных последовательностей - непрерывная линия клеток птиц.
В одном воплощении изобретения упоковываемая клетка - клетка DF1 (US 5,879,924), которая является спонтанно перевиваемой куриной клеточной линией, полученной из 10-дневных яиц старой Восточной Линии Лансинга (ELL - 0).
Непрерывная линия клеток птиц может быть получена из эмбриональных стволовых клеток прогрессирующим разведением ростовым фактором выростающих слоев клеток, таким образом поддерживая особенности роста и особенность непрерывной продолжительности жизни недифференцированной лини. Например, куриная клеточная линия Ebx (WO 2005007840) была получена этим способом.
Согласно преимущественному воплощению является, согласно представленому изобретению, утиный эмбрион может также использоваться в качестве постоянной клеточной линии. Например, клеточная линия, определяемая как DEC 99 (Ivanov и др. Experimental Pathology And Parasitology, 4/2000 Bulgarian Academy of Sciences), была культивирована в течение более чем 140 последовательных пассажей, и это было не оконогенно для птиц. Клеточные линии DEC 99 - стандартная система клеточной культуры, которая использовалась для исследования и может быть использована для целей биотехнологии. Согласно более преимущественному воплощению является, согласно представленному изобретению, клетка с дефектом упаковки нуклеотидных последовательностей - клеточная линия, которая получена способом, раскрытым в заявке на патент ЕР 06360001.9.
Согласно другому преимущественному воплощению, согласно представленному изобретению, клетка с дефектом упаковки нуклеотидных последовательностей является эмбрионами куриных фибробластов (СЕР). Подготовка и использование CEF для производства вирусов известны специалисту, квалифицированному в данной области техники.
СЕР предпочтительно являются экстаргироваными из свободных от специфичных патогенов яиц (SPF). Яйца SPF являются коммерчески доступными, например от лабораторий Charles River (Уилмингтон, Массачусетс, США). Указанным яйцам предпочтительно больше чем 9 дней, более предпочтительно между, 10 и 14 дней и еще более предпочтительно 12 дней.
Перед извлечением эмбриона яйцо предпочтительно дезинфицируют. Много методов и продуктов, предназначенных для дезинфекции яиц, доступны их предшествующему уровню техники. Инкубация в растворе формола (например, 2% формол, 1 мин), с последующим полосканием в 70% этаноле является особенно предпочтительной.
Клетки эмбрионов после этих процедур отделяют и очищают. Согласно преимущественному воплощению, согласно данному изобретению, клетки подвергают этапу ферментативного вываривания, что позволяет разрушать межклеточный матрикс. С этой целью, использование фермента, способного расщепить межклеточный матрикс, особенно полезно. Такой фермент может быть выбран из группы, которая включает, но не ограничена трипсином, коллагеназой, проназой, диспазой, гиалуронидазой, нейраминидазой. Этот фермент может использоваться один или в комбинации. В особенно преимущественном воплощении изобретения диспаза и трипсин (например, Tryp LE, выбранный из Gibco™), используются в комбинации. Любое лицо, квалифицированное в данном уровне техники, в состоянии определить концентрацию фермента, температуру и длительность инкубации, позволяющие эффективное разделение клеток.
Согласно преимущественному воплощению способ согласно данному изобретению свободен от продуктов животного происхождения (кроме клеток с дефектом упаковки нуклеотидных последовательностей). С учетом этого, фермент (ы), используемый для подготовки CEF, имеет (ют) предпочтительно рекомбинантное происхождение. В значении, используемом здесь, «продукты животных» означают любую композиция или коллекцию композиций, которая была произведена или клеткой животных или в живом организме.
Подготовка CEF может далее включать этап фильтрации и/или этап центрифугирования, для того, чтобы удалить загрязнители.
Эта первичная клетка CEF может или использоваться непосредственно, или после одного дальнейшего пассажа клетки как вторичная клетка CEF.
Любое лицо, квалифицированное в данном уровне техники, в состоянии выбрать наиболее соответствующую клетку для производства определенного вируса. Согласно преимущественному воплощению, способ согласно данному изобретению включает использование CEF или клетки согласно ЕР 06360001.9 для производства MVA.
Клетка с дефектом упаковки нуклеотидных последовательностей, используемая в способе согласно представленному изобретению, выращена в соответствующих культуральных средах. Возможно использовать больше чем одну культуральную среду в способе согласно представленному изобретению. Например, первая культуральная среда может использоваться во время подготовки клетки с дефектом упаковки нуклеотидных последовательностей (то есть во время этапа а) и вторая среда клеточной культуры для инфекции (то есть во время этапа си/или этап b).
Согласно преимущественному воплощению культуральные среды согласно данному изобретению свободны от продуктов животного происхождения.
Многие их культуральных сред, свободных от продуктов животного происхождения, были уже описаны, и некоторые из них являются коммерчески доступными. Например 293 SFM II; 293 - F Cells, SFM Adapted; 293 - H Cells, SFM Adapted; 293 fectin™ Transfection Reagent; CD 293 AGT™; CD 293 Medium; FreeStyle™ 293 Expression System; FreeStyle™ 293 Medium; FreeStyle™ 293 - F Cells, SFM Adapted; Adenovirus Expression Medium (AEM) Growth Medium for PER.C6 ® Cells; CD 293 AGT™; CD 293 Medium; COS - 71 - Cells, SFM Adapted; EPISERF® Medium; OptiPro™ SFM; VP - SFM; VP - SFM AGT™ (все являются доступными и имеются в продаже), могут использоваться в качестве культуральных сред в способе согласно представленному изобретению.
Для тех случаев, когда клетка с дефектом упаковки нуклеотидных последовательностей является CEF, VP - SFM (invitrogen) для этапа а) и минимальная среда для яиц (invitrogen) является средой культивирования для этапа b), и с), являются особенно предпочтительными случаями.
Специфическим воплощением является, представленные согласно изобретению, те случаи, когда клетки с дефектом упаковки нуклеотидных последовательностей являются CEF, и среда для клеточной культуры является выбранной между от 0.5 до 1.5 и предпочтительно, является выбранной между 1.1 и 1.3 и более предпочтительным случаем является приблизительно 1.2 эмбрионов / литр среды клеточной культуры.
В этом воплощении CEF предпочтительно являются вырощенными для между 1 и 5 днями, более предпочтительно являются вырощенными между 1 и 2 днями и еще более предпочтительно являются вырощенными за 2 дня до инфекции.
Специфическим воплощением согласно данному изобретению, являются те случаи, когда поксвирус, который является пригодным для того, чтобы его продуцировать, является представленым MVA, при этом указанный вирус введен в среду клеточной культуры в MOI, который предпочтительно является расположенным между 0. 001 и 0. 1, более предпочтительно является расположенным между 0, 03 и 0. 07 и, еще более предпочтительно, является расположенным приблизительно 0. 05.
Специфическим воплощением согласно данному изобретению являются те случаи, когда, во время этапа с) клетки с дефектом упаковки нуклеотидных последовательностей выращены при температуре, которая ниже чем 37°С, предпочтительно при температуре между 30°С и 36.5°С или при температуре между приблизительно 32°С и о 36°С, более предпочтительно при температуре между 33°С и 35°С, наиболее предпочтительно при температуре, которая равняется 34°С.
Специфическим воплощением согласно данному изобретению являются те случаи, когда этап с) длится от одного до шести дней, более предпочтительно, длится между двумя и четырьмя днями и наиболее предпочтительно длится приблизительно 72 час.
После того, как этап инфекции является совершеным, клетки, которые находятся в культуральной среде, и те из них, которые будут использованы для того, чтобы вырастить клетку с дефектом упаковки нуклеотидных последовательностей, собирают. Указанные клетки из культуральной среды включают так же частицы EEV, элиминированные из зараженной клетки с дефектом упаковки нуклеотидных последовательностей.
Согласно преимущественному воплощению данного изобретения, после этапа инфекции, проводят этап сбора клеток из культуральной среды и клеток с дефектом упаковки нуклеотидных последовательностей. Среда, в которой были вырощены клетки, и клетки с дефектом упаковки нуклеотидных последовательностей могут быть объединенными или сепарироваными отдельно.
Для того, чтобы получить поксвирусы, которые представлены на клетках с дефектом упаковки нуклеотидных последовательностей, способ согласно данному изобретению может включать этап, который позволяет их разрушить. Этот этап приводит к высвобождению поксвирусов из клеток с дефектом упаковки нуклеотидных последовательностей. Разрушение мембраны клеток с дефектом упаковки нуклеотидных последовательностей может быть произведено различными методами, известными тем лицам, которые являются квалифицированными в данной отрасли техники. Эти методы включают, но не являются ограниченными, разрушение ультразвуком, замораживание / таяние, гитопонический лизис, а также микрофлюидизацию.
Согласно преимущественному воплощению данного изобретения, мембраны клеток с дефектом упаковки нуклеотидных последовательностей разрушают при использовании гомогенизатора высокой скорости. Гомогенизаторы высокой скорости являются коммерчески доступными от фирмы Silverson Machines Inc (East Longmeadow, США) или фирмы Ika - Labotechnik (Staufen, Германия). Согласно особенно преимущественному воплощению представленного изобретения, гомогенизатором высокой скорости может являться гомогенизатор SILVERSON L4R.
В том случае, когда клетка с дефектом упаковки нуклеотидных последовательностей и среда культивирования клеток являются объединенными, разрушение мембраны клеток с дефектом упаковки нуклеотидных последовательностей не проводят методом замораживания / таяния, по той причине, что эта техника приводит к разрушению частиц EEV (Ichihashi у. и др. 1996, virology, 217 (2), 478-85).
Согласно преимущественному воплощению представленного изобретения, этап d) далее включает этап кларификации, который позволяет получить отделение клеточных осколков. Согласно более преимущественному воплощению данного изобретения, указанным выше этапом кларификации может быть этап глубинной фильтрации.
Процесс глубинной фильтрации включает, но не является ограниченным, использованием одного или более коммерчески доступных следующих продуктов: глубинные фильтры ряда АР CUNO Incorporated (примеры, котрые включают АР 01), CUNO, глубинные фильтры CUNO Incorporated ряда (примеры, которые включают СР 10, СР 30, СР 50, СР 60, СР 70, СР 90), глубинные фильтры CUNO Incorporated ряда, например, которые включают HP 10, HP 30, HP 50, HP 60, HP 70, HP 90), глубинные фильтры CUNO Incorporated Халиф ряда (примеры, которые включают СА 10, СА 30, СА 50, СА 60, СА 70, СА 90), глубинные фильтры CUNO Incorporated SP ряда (примеры, которые включают SP 10, SP 30, SP 50, SP 60, SP 70, SP 90), глубинные фильтры CUNO Delipid и Delipid Плюс фильтры, Корпорация Millipore, ряда СЕ (примеры, которые включают СЕ 15, СЕ 20, СЕ 25, СЕ 30, СЕ 35, СЕ 40, СЕ 45, СЕ 50, СЕ 70, СЕ 75), глубинные фильтры Корпорации Millipore ряда DE (примеры, которые включают DE 25, DE 30, DE 35, DE 40, DE 45, DE 50, DE 55, DE 60, DE 65, DE 70, DE 75), фильтры НС Корпорации Millipore (примеры, которые включают А1 НС, В1 НС, СО НС), фильтры CUNO полинет (примеры, которые включают Полинет - ПБ, Millipore Clarigard и Polygard фильтры, CUNO Life Assure, глубинные фильтры Ассоциации Man Cel (примеры, которые включают, но не являются ограниченными, PR 12 UP, PR 12, PR 5 UP), и PALL или SeitzSchenk Incorporated фильтры. Для того, чтобы улучшить способность к кларификации доступных единиц глубинных фильтров, может быть полезно соединить две или больше единицы с такими размерами пор, которые уменьшаются. В этом воплощении изобретения, смесь, которая будет кларифицирована, проходит через первую единицу глубинного фильтра, где остаются самые крупные контаминанты, и впоследствии проходит через вторую единицу глубинного фильтра. Согласно более преимущественному воплощению представленного изобретения, sartopure® (sartorius) с размером пор 8 мкм, соединенный с sartopure® с размером пор 5 мкм, можно так же использовать для этапа глубинной фильтрации.
Согласно преимущественному воплощению представленного далее изобретения, способ включает этап концентр ирования. Более предпочтительно, указанный этап концентрирования далее позволяет элиминировать те белки, которые находятся в смеси, полученной на ранее описанных этапах.
Согласно более преимущественному воплощению представленного изобретения, указанный этап концентрирования является этапом микрофильтрации. Микрофильтрация -это такой способ применения давления, относительно мембранных способов, благодаря которому может быть реализовано концентрированно, а так же указанный способ позволяет очищать большие молекулы. Более преимущественно, раствор подают через полуводопроницаемую мембрану, размеры пор которой выбирают при этом таким образом, чтобы задержать большие частицы (вирусы) в слоях фильтрующего материала, и позволить маленьким молекулам (например, белкам) проходить через мембрану в пермиат. Микрофильтрация уменьшает объем того раствора, который подвержен концентрированию.
Согласно преимущественному воплощению представленного изобретения, этап микрофильтрации сопровождается этапом диафильтрации. Эти два этапа могут быть осуществлены с теми же самыми мембранами фильтрации. Диафильтрация является усовершенствованием процесса микрофильтрации и позволяет дилюировать концентрат раствора и привести к эффекту сокращения концентрирования примесей в концентрате. Растворение концентрата позволяет вымывать больше примесей из концентрата. Имеется в виду то, что диафильтрация может быть осуществлена в пакетном режиме, в полунепрерывном способе, или в непрерывном способе. Этап диафильтрации может с пользой использован для того, чтобы изменить буфер, в котором находится вирус. Например, может быть полезно изменить буфер, используемый в способе очистки на буфер, который является приемлемым для фармацевтической продукции.
Предпочтительно, мембранами фильтрации, используемыми в микрофильтрации и/или в этапе диафильтрации, являются мембраны, которые включают размеры пор между 0.01 и 0.15 мкм, и более предпочтительно, которые включают размеры пор, приблизительно 0.1 мкм.
Нуклеиновые кислоты могут содержаться в полученных частицах клетки, таких как вирусы. С учетом этого, способ согласно данному изобретению, может произвольно далее включать этап, состоящий в удалении находящихся нуклеиновых кислот, в качестве контаминантов, в растворе. С этой целью могут быть использованы нуклеазы. Примеры нуклеаз включают бензоназу или любую другую дезоксирибонуклеазу или RN азу, которые обычно используют для целей данного отрасли техники, среди них, бензоназа является особенно предпочтительной.
Бензоназа разрушает нуклеиновую кислоту и не имеет никакой протеолитической активности. При этом, бензоназа быстро разрушает нуклеиновую кислоту, гидролизируя внутренние фосфодиэфирные связи между определенными нуклеотидами. После полного разрушения, является весь свободный пул нуклеиновых кислот в растворе уменьшенным до олигонуклеотидов размером из 2-4 оснований по длине. Бензоназа может быть использована при этапе конечного концентрирования, состоящего между 50 и 400 Ед / мл, предпочтительно состоящего между 100 и 300 Ед / мл и более предпочтительно состоящего между 150 и 250 Ед / мл. Обработка бензоназой может продлиться в течение 1 час и 4 час и еще более предпочтительно в течение 1.5 час и 2.5 час.
Однако, в том случае, когда глубинная фильтрация, микрофильтрация и диафильтрация, ранее описанные, используются, использование нуклеаз и более конкретно, использование бензоназы, не является необходимым. С учетом этого, данное изобретение также касается способа такого производства поксвируса, в котором нуклеазы, и более конкретно, никакой бензоназы, не используется.
На данном этапе, поксвирус, полученный согласно способу, ранее описанному, является достаточно очищенным. Возможным является изменение буфера, в котором находится вирус.Например, может быть целесообразным заменить буфер, используемый в способе очистки, на фармацевтически приемлемый буфер. Множество методов, пригодных к применению для того, чтобы заменить буфер, известны лицу, квалифицированному в данной отрасли техники. Среди таких методов особенно предпочтительным является способ тангенциальной фильтрации.
Способ тангенциальной фильтрации является такой техникой фильтрации, при которой та суспензия, которая будет отфильтрована на этом этапе, при высокой скорости ориенторована вдоль того направления, которое идет параллельно направлению поверхности фильтрования, для того, чтобы создать турбулентность, которая предотвращает формирование комка фильтрования, и так же, довольно частое блокирование фильтра.
В то время, как потоки суспензии направлены при высокой скорости, которая параллельна относительно проникающей поверхности, раствор проходит через и проникает сквозь поверхностные отверстия из-за разности давления и непрерывно при этом удаляется. Поверхностное фильтрование должно быть таким для того, чтобы не происходило механического сопротивления, чтобы дать возможным возникнуть градиенту давления в разных частях фильтрующей поверхности (то есть, разницы концентраций суспензии) и концентрата на поверхности (чистый отфильтрованный раствор, свободный от суспендированных частиц).
Различные этапы, из которых состоит способ согласно данному изобретению, могут быть осуществлены на разделенных рабочих местах и/или в различных периодах времени. Например, инфицирование клетки с дефектом упаковки нуклеотидных последовательностей и очистка поксвирусов могут быть осуществлены на различных рабочих местах. Также, клетка с дефектом упаковки нуклеотидных последовательностей и/или до тех пор будут реализованы, пока будет необходимо их очищать.
Данное изобретение также имеет отношение к таким композициям, которые могут быть получены согласно способу, ранее описанному, и к тем композициям, которые включают поксвирус согласно представленному изобретению. Предпочтительно, композиция, согласно представленному изобретению, включает больше чем 1%, предпочтительно больше чем 5%, еще более предпочтительно больше чем 10%, и наиболее предпочтительно по крайней мере 20% поксвируса, который состоит в указанной композиции, при этом вирусом являются EEV.
Согласно преимущественному воплощению представленного изобретения, для композиции согласно представленному изобретению являются пригодными титры, по крайней мере 105, предпочтительно по крайней мере 106, более предпочтительно по крайней мере 107, еще более предпочтительно по крайней мере 108 вирусных частиц на мл.
Согласно другому преимущественному воплощению представленного изобретения, для композиции являются пригодным титры по крайней мере 103, предпочтительно по крайней мере 104, более преимущественно по крайней мере 3*103 вирусных частиц на микрограмм белка.
Данное изобретение также имеет отношение к таким фармацевтическим композициям, которые включают поксвирус, полученный по способу согласно данному изобретению, и/или композициям, согласно представленному изобретению. В том значении, в котором используется здесь, термин "фармацевтическая композиция" является такой композицией, которая включает фармацевтически приемлемые добавки.
Такие добавки являются предпочтительно изотоническими, гипотоническими, или слабо гипертоническими, и имеют относительно низкую ионную силу, такие, как например, раствор сахарозы.
Кроме того, такие добавки могут содержать любой растворитель, или водную или частично водную жидкость, такую как непирогенная стерильная вода. РН фактор фармацевтической композиции, кроме того, может быть адьюирован и буферизован, для того, чтобы соответствовать требованиям использования в естественных условиях.
Фармацевтическая композиция может также включать фармацевтически приемлемый растворитель, адъювант или наполнитель, так же как и солюбилизирующие, стабилизирующие и сохраняющие агенты.
Для таких путей введения, как инъекции, для композиции предпочтительны водные, неводные или изотонические растворы. Это может быть обеспечено в единственной дозе или в мультидозе для формы жидкости или сухого состояния (порошок, лиофилизат и т.п.), которая может быть воссоздана во время непосредственного использования с соответствующим растворителем.
Данное изобретение также имеет отношение к поксвирусам и композициям, полученным способом согласно данному изобретению.
Данное изобретение также имеет отношение к использованию способа согласно представленному изобретению для производства вируса, композиции и/или фармацевтической композиции.
Данное изобретение также имеет отношение к использованию поксвируса, композиции и/или фармацевтической композиции согласно представленному изобретению для подготовки лекарственного средства.
Согласно преимущественному воплощению согласно данному изобретению лекарство, согласно представленному изобретению, является лекарством для терапевтического или профилактического лечения рака.
Среди тех расстройств, которые могут быть предусмотрены, могут быть упомянуты раковые образования груди, матки (в особенности вызванные вирусами папилломы), простаты, легких, мочевого пузыря, печени, толстой кишки, поджелудочной железы, живота, пищевода, гортани, центральной нервной системы (в преимуществе глиомы) и крови (лимфомы, лейкемия и т.п.).
Композиция согласно представленному изобретению может быть произведена традиционно для таких путей введения, как местный, парентеральный или энтеральный пути.
Способы введения, которое могут быть предусмотрены, является представленымы многими способами. Так, может быть упомянут, например, внутрижелудочный, подкожный, внутрисердечный, внутримышечный, внутривенный, внутрибрюшинный, внутриопухолевый, интраназальный, интралегочный или внутритрахеальный пути введения.
Для последних трех случаев введение аэрозолем или путем инстилляции является более выгодным.
Путь введения может быть представленым как единственная доза или как разовая доза или как доза в несколько раз после определенного временного интервала. Соответствующий путь введения и дозировка изменяется как функция различных параметров, например, человека, болезни, которую будут рассматривать или гена (-ов) заболевания, который будет передан.
Согласно первой возможности, лекарство может быть введено непосредственно в естественных условиях (например внутривенная инъекция в доступную опухоль или в ее периферию, преимущественно для терапевтической или профилактической прививки). Также возможно принять его ex vivo подходом, который состоит в том, что получают клетки от пациента (стволовые клетки костного мозга, лимфоциты периферической крови, мышечные клетки и т.п.), транспортируют их или инфицируют их в пробирке согласно предшествующим методам, известным из уровня техники, и вводят их пациенту.
Кроме того, возможно предусмотреть способы, где соответственно и не отступая от предмета существующего изобретения, выполняют одновременные или последовательные пути введения, различными способами, различных компонентов, которые содержатся в фармацевтической композиции или в композиции согласно представленному изобретению.
Согласно преимущественному воплощению представленного изобретения, терапевтическое использование или метод лечения могут быть объединены с иным лечением пациента хирургическим путем (частичное или полное удаление опухоли), радиотерапией или химиотерапией. В данном случае, лечение согласно представленному изобретению может быть применено до, одновременно или в качестве последующего вслед за указанным иным лечением.
Предпочтительно, это лечение будет применено в качестве последующего вслед за указанным вторым лечением.
Согласно другому преимущественному воплощению согласно данному изобретению лекарство предназначено для терапевтического или профилактического лечения инфекционных, в особенности болезней вирусного происхождения, вызванного гепатитом В или вирусом С, ВИЧ, герпесом, ретровирусами и т.п.
Примеры, которые следуют, предназначены для того, чтобы проиллюстрировать различные предметы существующего изобретения и, следовательно, не ограничивают его по сути.
На фигурах 1-2 приведены таблицы.
Таблица 1: изображаетнорму выживания мышей С 57BL / 6, которым имплантирован с клетками ТС 1, экспрессирующими HPV 16 Е6 и Е7, онкоген C-Ha-ras. Различные группы мышей обрабатывали с помощью композиций, которые включают IMV и EEV, кодирующие антигены HPV, IMV, кодирующие антигены HPV или IMV, и не кодирующие каких-либо антигенов.
Таблица 2: изображает процент от мышей С 57BL / 6, свободных от опухоли после внесения с клетками ТС1, экспрессирующими HPV 16 Е6 и Е7 и онкоген C-Ha-ras. Различные группы мышей обрабатывали с помощью композиций, которые включают IMV и EEV, которые кодируют антигены HPV, IMV и которые кодируют антигены HPV или IMV, не экспрессирующий каких-либо антигенов.
Таблица 3: изображает норму выживания мышей С 57BL / 6, которым было имплантировано при помощи клеток ТС 1, которые экспрессируют MUC 1. Различные группы мышей обрабатывали при помощи композиций, которые включают IMV и EEV, который кодирует MUC 1 и IL 2, IMV, который кодирует MUC 1 и IL 2 или IMV, который не экспрессирует каких-либо антигенов.
Примеры.
1. Приготовление композиций, которые включают IMV и EEV.
А. Подготовка CEF.
Шестьдесят шесть яиц SPF были инкубированы в течение 60 сек в 2% растворе формола. После ополаскивания в 70%-ном этаноле, яйца были вскрыты, эмбрионы были извлечены и были подвержены анализу. Полученные ткани были обработаны при 36.5°С в течение 120 минут диспазой (МЕд/мл) и втройне отселектированы (МЕд/мл). Смесь была отфильтрована для того, чтобы удалить необработанные ткани, и CEF собраны центрифугированием (2 300 оборотов в минуту, в течение 15 мин.)
В. Культивирование CEF и инфицирование.
CEF были инкубированы в 55 л VP-SFM (инвитрогенно) в течение 2 дней при 36.5°С. Среда культивирования для клеток была отобрана и был далее добавлен поксвирус (0.05 MOI) в 55 л минимальной среды для яиц (инвитрогеная). Зараженные клетки с дефектом упаковки нуклеотидных последовательностей были далее инкубированы в течение трех дней.
С. Очистка поксвируса.
Клетки с дефектом упаковки нуклеотидных последовательностей и среда культивирования клеточной культуры были собраны.
Смесь далее была гомогенизирована в течение 15 мин в гомогенизаторе высокой скорости Silverson® L 4 R. Смесь, которая была получена, далее была кларифицирована методом глубинной фильтрации на ячейках 8 мкм (sartorius), соединенных с ячейками 5 мкм при расходе 1 литр/мин.
Смесь далее была сконцентрирована 18 раз через 0. 1 мкм модуль микрофильтрации Prostak (относительно: PSWAG 021, Millipore).
Поксвирусная композиция далее была подвержена диафильтрации на том же самом модуле относительно желаемого фармацевтически приемлемого дополнительного агента.
2. Терапевтическая эффективность относительно композиций, которые включают EEV и IMV и композиций, которые включают только IMV.
А. Терапевтическая обработка мышей, переносящих опухоль, которые экспрессируют антигены HPV.
Наименование и краткое описание каждой векторной конструкции
TG 4001: вектор MVA, несущий кодирующие последовательности для белков HPV, E 6 и Е 7, (под контролем промотора р 7.5) и IL 2 (под контролем промотора рН 5R). Были проверены две партии, одна из которых включала IMV и EEV (подготовленный как ранее раскрыто) и одна из которых включала только IMV.
N 33: пустой вектор MVA, который не экспрессирует ни белков HPV Е 6 и Е 7, ни IL 2, при этом он был использован в качестве отрицательного контроля.
Модель животного
Животные - самки мыши модели С57 BI / 6 в возрасте 6-8 недель были использованы в течение этого всего исследования. Указанные мыши были получены от Charles River (Руан, Франция).
Спецификация: животным было 6 недель в день прибытия. В начале эксперимента животным было меньше чем 8 недель.
Окружающая среда: животные были размещены в единственной, эксклюзивной комнате, которая была кондиционируема, для того чтобы обеспечить минимум 11 воздушных объемов в час. Диапазоны температурной и относительной влажности были расположены в пределах 18°С и 22°С и 40-70% соответственно. Освещение управлялось автоматическим путем, для того, чтобы получать цикл 12 часов света и 12 часов темноты.
Специфичный патогенный свободный статус был проверен регулярным контролем окружающей среды.
Питание: В течение всего времени исследования у животных был свободный доступ к стерильному типу диеты D 04 (UAR, Epinay sur Orge, Франция). Вода была подана свободно через бутылки.
Акклиматизация и процедуры здоровья:
Всем животным был проведен клинический осмотр здоровья в момент прибытия. Они были акклиматизированы в специфичном свободном от патогенов средстве для животных (SPF) между одной и двумя неделями перед началом эксперимента, для того, чтобы была гарантирована их пригодность для исследования. Особенности клеток опухоли и условия использования:
Линия ТС 1 была получена из первичного легкого эпителиальных клеток мышей С57 BI / 6, которые были котрансформированы с HPV - 16Е6 и Е7 и c-Ha-ras онкогенами Эти клетки растут в DMEM с глутамином (2 мМ), эмбриональной сывороткой теленка (10%), незаменимыми аминокислотами (0.1 мМ), в пирувате (1 мМ), парамеркаптоэтаноле (3 мкмМ, Hygromycine (0.2 мг / мл) и G 418 (0.5 мг/мл). После размораживания клетки были амплифицированы два раза, последний пасаж был выполнен за два дня до клеточной инъекции.
Клеточная инъекция
Клеточная инъекция была проведена в первый день эксперимента, клетки ТС 1 были введены под кожу мышам в дозе 2.0 Е+05 клеток на мышь.
Вирусное инфицирование
По истечении 7 дней после инъекции клеток, 5.0 Е+05 pfu / 50 мкл / мышь тестированных партий (TG 4001 IMV / EEV или IMV только) MVATGN 33 (пустой вектор) были введены в мышей. Двадцать мышей использовались как тестированная партия.
Вирусное инъецирование было выполнено под кожу, но на отдаленном участке от места инъекции клеток, и было выполнено 3 раза с 7-дневными интервалами. Параметры контроля:
Рост опухоли был проверен в течение 90 дней после инъекции клеток с помощью кронциркуля. Мышей уничтожали по этическим причинам, когда размер опухоли превосходил 25 мм в диаметре или тогда, когда они ощущали боль, даже если опухоль была меньшей.
Были зарегистрированы выживающие мыши.
Результаты
Все группы, которые были обработаны вектором MVA, который кодирует антиген HPV, показали более высокую норму выживания, чем группа, котопая была обработана пустым вектором MVA. Мыши, которые были обработаны при помощи композиций, которые включают EEV и IMV, показали более высокую норму выживания, чем те мыши, которые были обработаны композициями, которые включали только IMV. Кроме того, 35 % мышей, которых обрабатывали композицией, которая включала EEV и IMV, были свободны от опухоли спустя 77 дней, после этого, будучи инъецироваными по сравнению с только 10% мышей, которые были обработаны с помощью композиции, включающий только IMV.
В. Терапевтическое лечение мышей, переносящих опухоль, экспрессирующую MUC1.
Наименование и краткое описание каждой векторной конструкции
TG 4010: Вектор MVA, несущий кодирующие последовательности для белков MUC 1 (под контролем промотора р 7.5) и IL 2 (под контролем промотора рН 5R). Были проверены две партии, одно включение IMV и EEV и одно включение только IMV.
Пустой вектор MVATGN 33, который не экспрессирует ни MUC 1, ни IL 2, использовался в качестве отрицательного контроля.
Модель мыши и разновидности системы экспериментов животных
Штаммы и поставщик: самки мыши С 57BI / 6 в возрасте 6-8 недель использовались в течение всего этого исследования. Эти мыши были получены от Charles River (Руан, Франция).
Спецификация: животные находились в возрасте 6 недель в день прибытия. В начале эксперимента им было меньше чем 8 недель.
Окружающая среда: животные были размещены в единственной, эксклюзивной комнате, которая была кондиционируема для того, чтобы обеспечить минимум 11 воздушных объемов в час.Диапазоны температурной и относительной влажности были в расположены пределах 18°С и 22°С и 40-70% соответственно. Освещение управлялось автоматическим путем, для того чтобы дать цикл 12 часов света и 12 часов темноты. Животные были размещенными в общие группы по 10 на клетку 43×27×15 см, при этом закрытая площадь составляла 1161 см2.
Питание: В течение всего времени исследования у животных был свободный доступ к стерильному типу диеты D 04 (UAR, Epinay sur Orge, Франция). Вода была подана свободно через бутылки.
Акклиматизация и процедуры здоровья: Всем животным был проведен клинический осмотр для здоровья в момент прибытия. Они были акклиматизированы в специфичном свободном от патогенов средстве для животных (SPF) между одной и двумя неделями перед началом эксперимента, для того, чтобы гарантировать их пригодность для исследования.
Особенности клеток опухоли и условия использования:
Линия опухоли RMA была получена из лимфомы С57В 1/6. Клетки RMA-MUC 1 были получены после трансфекции с плазмидой экспрессии, содержащей ген MUC 1 а. Эти клетки были выращены в DMEM с глутамином (2 мМ), эмбриональной сывороткой теленка (10%), незаменимыми аминокислотами (0.1 мМ), пируватом (1 мМ), парамеркаптоэтанолом (36 мкМ) и гидромицином (550 мкг / мл). После размораживания клетки были амплифицированы два раза, последний пассаж был выполнен день перед исследованием.
Иммунизация
Мыши были иммунизированы с 1.0 104 или 3.0 104 вирусных частиц / мышь для вируса TG 4010 и с 3.0 104 вирусных частиц / мышь для MVATGN 33.
20 мышей использовались как тестируемая партия.
Вирусные иммунизации были выполнены под кожу и выполнены 3 раза с 14 - дневными интервалами.
Исследование опухоли
Спустя две недели после последней иммунизации, мышам было введено под кожу, в том же самом участке кожи, но на отдаленном участке от места вирусной инъекции, с 1.0 Е+06 RMA - MUC 1 жизнеспособных клеток /50 мкл / мышь.
Параметры контроля:
Рост опухоли был измерен в течение 6 недель после введения опухоли, с помощью кронциркуля. Мышей уничтожали по этическим причинам, в том случае, когда размер опухоли превосходил 25 мм в диаметре или когда они испытавали боль, даже если опухоль была меньшей по размеру.
Были зарегистрированы выживающие мыши.
20 мышей были использованы в качестве дозы.
Результаты.
Все группы, которые были обработаны с помощью вектора MVA, который кодирует антиген MUC 1, показали более низкий рост опухоли и более высокую норму выживания, чем та группа, которая была обработана с помощью пустого вектора MVA.
Мыши, которые были обработаны при помощи композиций, которые включали EEV, и IMV, показали более низкий рост опухоли, чем те мыши, которые были обработаны при помощи композиций, которые включали только IMV.
Claims (8)
1. Способ продуцирования дикого типа, аттенуированного или рекомбинантного поксвируса, без выявленной инфекционной специфичности, где указанным поксвирусом является ЕЕV, который включает следующие этапы:
а) приготовление культуры упаковывающих клеток,
b) инфицирование указанной клеточной культуры указанным поксвирусом для получения зараженных клеток,
с) культивирование указанных зараженных инфицированных клеток в период времени между одним и шестью днями для получения поксвирусных частиц,
d) извлечение ЕЕV частиц из супернатанта культуры и из упаковывающих клеток, разрушенных с помощью высокоскоростного гомогенизатора, с получением смеси поксвирусных частиц,
е) очистка смеси поксвирусных частиц посредством удаления клеточного дебриса, при котором очистка включает глубинную фильтрацию для получения очищенной смеси поксвирусных частиц,
f) концентрирование указанной очищенной смеси поксвирусных частиц, где это концентрирование включает микрофильтрацию для получения концентрированной смеси поксвирусных частиц и
g) диафильтрация указанной концентрированной смеси поксвирусных частиц, причем этот способ является свободным от продуктов животного происхождения.
а) приготовление культуры упаковывающих клеток,
b) инфицирование указанной клеточной культуры указанным поксвирусом для получения зараженных клеток,
с) культивирование указанных зараженных инфицированных клеток в период времени между одним и шестью днями для получения поксвирусных частиц,
d) извлечение ЕЕV частиц из супернатанта культуры и из упаковывающих клеток, разрушенных с помощью высокоскоростного гомогенизатора, с получением смеси поксвирусных частиц,
е) очистка смеси поксвирусных частиц посредством удаления клеточного дебриса, при котором очистка включает глубинную фильтрацию для получения очищенной смеси поксвирусных частиц,
f) концентрирование указанной очищенной смеси поксвирусных частиц, где это концентрирование включает микрофильтрацию для получения концентрированной смеси поксвирусных частиц и
g) диафильтрация указанной концентрированной смеси поксвирусных частиц, причем этот способ является свободным от продуктов животного происхождения.
2. Способ согласно п.1, в котором указанные упаковывающие клетки являются CEF.
3. Способ по п.1, в котором не используется какая-либо нуклеаза и, более предпочтительно, в котором не используется какая-либо бензоаза.
4. Способ по п.1, который дополнительно включает этап изменения буфера, используемого на этапе g) фармацевтически приемлемым буфером.
5. Способ по п.4, где указанный этап осуществляется с помощью тангенциальной фильтрации.
6. Применение поксвирусных частиц, полученных с помощью способа по п.1, для приготовления лекарственного средства.
7. Применение по п.6 для терапевтического или профилактического лечения рака.
8. Применение по п.6 для терапевтического или профилактического лечения инфекционных болезней.
Applications Claiming Priority (5)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
EP06360027 | 2006-06-20 | ||
EP06360027.4 | 2006-06-20 | ||
US86145206P | 2006-11-29 | 2006-11-29 | |
US60/861,452 | 2006-11-29 | ||
PCT/EP2007/005302 WO2007147528A1 (en) | 2006-06-20 | 2007-06-15 | Process for producing poxviruses and poxvirus compositions |
Related Child Applications (2)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
RU2013119415/10A Division RU2551982C2 (ru) | 2006-06-20 | 2007-06-15 | Способ получения поксвирусов и композиции поксвирусов |
RU2013119416/10A Division RU2581910C2 (ru) | 2006-06-20 | 2013-04-26 | Процесс получения поксвирусов и композиции поксвирусов |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
RU2009101382A RU2009101382A (ru) | 2010-07-27 |
RU2489486C2 true RU2489486C2 (ru) | 2013-08-10 |
Family
ID=40770647
Family Applications (3)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
RU2009101382/10A RU2489486C2 (ru) | 2006-06-20 | 2007-06-15 | Процесс получения поксвирусов и композиции поксвирусов |
RU2013119415/10A RU2551982C2 (ru) | 2006-06-20 | 2007-06-15 | Способ получения поксвирусов и композиции поксвирусов |
RU2013119416/10A RU2581910C2 (ru) | 2006-06-20 | 2013-04-26 | Процесс получения поксвирусов и композиции поксвирусов |
Family Applications After (2)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
RU2013119415/10A RU2551982C2 (ru) | 2006-06-20 | 2007-06-15 | Способ получения поксвирусов и композиции поксвирусов |
RU2013119416/10A RU2581910C2 (ru) | 2006-06-20 | 2013-04-26 | Процесс получения поксвирусов и композиции поксвирусов |
Country Status (22)
Country | Link |
---|---|
US (5) | US8058049B2 (ru) |
EP (2) | EP2530161B1 (ru) |
JP (1) | JP5456464B2 (ru) |
KR (1) | KR101082296B1 (ru) |
CN (1) | CN101460627B (ru) |
AU (1) | AU2007263280B2 (ru) |
BR (1) | BRPI0712158B8 (ru) |
CA (1) | CA2656259C (ru) |
CO (1) | CO6141479A2 (ru) |
CR (1) | CR10528A (ru) |
DK (2) | DK2029756T3 (ru) |
ES (2) | ES2671230T3 (ru) |
HK (1) | HK1125405A1 (ru) |
HU (2) | HUE030533T2 (ru) |
IL (1) | IL194978A (ru) |
MA (1) | MA30580B1 (ru) |
MX (2) | MX348525B (ru) |
NO (1) | NO20084855L (ru) |
NZ (1) | NZ573437A (ru) |
RU (3) | RU2489486C2 (ru) |
WO (1) | WO2007147528A1 (ru) |
ZA (1) | ZA200810658B (ru) |
Families Citing this family (47)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
DK2029756T3 (en) * | 2006-06-20 | 2017-02-13 | Transgene Sa | PROCEDURE FOR PREPARING POXVIRA AND POXVIRUS COMPOSITIONS |
WO2009132195A1 (en) * | 2008-04-23 | 2009-10-29 | Michigan State University | Immortal avian cell line and methods of use |
AU2010205717A1 (en) | 2009-01-13 | 2010-07-22 | Transgene Sa | Use of a Saccharomyces cerevisiae mitochondrial nucleic acids fraction for immune stimulation |
JP2012525830A (ja) * | 2009-05-08 | 2012-10-25 | グラクソスミスクライン バイオロジカルズ ソシエテ アノニム | 均質化を含む細胞培養からのウイルスの製造方法 |
CA2760465A1 (en) * | 2009-05-12 | 2010-11-18 | Transgene Sa | Method for orthopoxvirus production and purification |
EP2456461A1 (en) | 2009-07-21 | 2012-05-30 | Transgene SA | Enzymatic composition for the digestion of chicken embryos |
CN102313803A (zh) * | 2011-06-21 | 2012-01-11 | 贵州大学 | 山羊痘正向间接血凝诊断试剂及其制备方法和检测方法 |
KR101370620B1 (ko) * | 2011-08-05 | 2014-03-06 | 한국생명공학연구원 | 다람쥐폭스바이러스를 유효성분으로 포함하는 암 예방 및 치료용 약학적 조성물 |
TW201321016A (zh) | 2011-09-29 | 2013-06-01 | Transgene Sa | 免疫療法組成物及用於治療c型肝炎病毒感染之療程(二) |
WO2013045658A1 (en) | 2011-09-29 | 2013-04-04 | Transgene Sa | Immunotherapy composition and regimen for treating hepatitis c virus infection |
TWI690322B (zh) | 2012-10-02 | 2020-04-11 | 法商傳斯堅公司 | 含病毒的調配物及其使用 |
PL3169341T3 (pl) | 2014-07-16 | 2019-12-31 | Transgene Sa | Wirus onkolityczny do ekspresji modulatorów punktu kontroli immunologicznej |
CN104147145B (zh) * | 2014-07-31 | 2017-01-11 | 许峰 | 一种预防和治疗羊痘的药剂 |
DK3226894T3 (da) | 2014-12-01 | 2019-10-21 | Transgene Sa | Stabile flydende vacciniavirus-formuleringer |
WO2016131945A1 (en) | 2015-02-20 | 2016-08-25 | Transgene Sa | Combination product with autophagy modulator |
CN106591361A (zh) * | 2015-10-20 | 2017-04-26 | 钱文斌 | 一种重组痘溶瘤病毒及其构建方法和应用 |
EP3402802B1 (en) | 2016-01-08 | 2023-04-12 | Geovax, Inc. | Compositions and methods for generating an immune response to a tumor associated antigen |
CA3023022A1 (en) | 2016-05-04 | 2017-11-09 | Transgene Sa | Combination therapy with cpg tlr9 ligand |
US20190328869A1 (en) | 2016-10-10 | 2019-10-31 | Transgene Sa | Immunotherapeutic product and mdsc modulator combination therapy |
WO2018091680A1 (en) | 2016-11-18 | 2018-05-24 | Transgene Sa | Cowpox-based oncolytic vectors |
KR20190097240A (ko) | 2016-12-28 | 2019-08-20 | 트랜스진 에스.에이. | 종양용해성 바이러스 및 치료 분자 |
US11306292B2 (en) | 2017-05-15 | 2022-04-19 | Janssen Vaccines & Prevention B.V. | Stable virus-containing composition |
WO2018211419A1 (en) | 2017-05-15 | 2018-11-22 | Janssen Vaccines & Prevention B.V. | Stable virus-containing composition |
EP3641803A2 (en) * | 2017-06-21 | 2020-04-29 | Transgene | Personalized vaccine |
WO2019020543A1 (en) | 2017-07-28 | 2019-01-31 | Transgene Sa | ONCOLYTIC VIRUSES EXPRESSING AGENTS TARGETING METABOLIC IMMUNE MODULATORS |
MX2020007010A (es) | 2018-01-05 | 2020-12-10 | Ottawa Hospital Res Inst | Vectores modificados de orthopoxvirus. |
BR112020014727A2 (pt) * | 2018-01-19 | 2020-12-08 | Kolon Life Science, Inc. | Vírus vaccinia recombinante e composição farmacêutica compreendendo o mesmo |
MX2020009262A (es) | 2018-03-07 | 2021-01-08 | Transgene | Vectores de parapoxvirus. |
WO2020011754A1 (en) | 2018-07-09 | 2020-01-16 | Transgene | Chimeric vaccinia viruses |
EP3617230A1 (en) | 2018-09-03 | 2020-03-04 | BioInvent International AB | Novel antibodies and nucleotide sequences, and uses thereof |
AU2019336940A1 (en) | 2018-09-06 | 2021-03-11 | Bavarian Nordic A/S | Storage improved poxvirus compositions |
AU2019412516A1 (en) | 2018-12-28 | 2021-07-15 | Transgene | M2-defective poxvirus |
EP3842065A1 (en) | 2019-12-23 | 2021-06-30 | Transgene | Process for designing a recombinant poxvirus for a therapeutic vaccine |
WO2021180943A1 (en) | 2020-03-12 | 2021-09-16 | Bavarian Nordic A/S | Compositions improving poxvirus stability |
KR20230038496A (ko) | 2020-07-13 | 2023-03-20 | 트랜스진 | 면역 억제의 치료 |
WO2022148736A1 (en) | 2021-01-05 | 2022-07-14 | Transgene | Vectorization of muc1 t cell engager |
WO2023025899A2 (en) | 2021-08-26 | 2023-03-02 | Transgene | Delivery system for targeting genes of the interferon pathway |
TW202321458A (zh) | 2021-09-22 | 2023-06-01 | 瑞典商生物創新國際公司 | 新穎抗體組合及其用途 |
WO2023128672A1 (ko) * | 2021-12-29 | 2023-07-06 | 재단법인 아산사회복지재단 | 외피외 바이러스 생산이 증가한 신규한 백시니아 바이러스 변이주 |
WO2023213763A1 (en) | 2022-05-02 | 2023-11-09 | Transgene | Poxvirus encoding a binding agent comprising an anti- pd-l1 sdab |
WO2023213764A1 (en) | 2022-05-02 | 2023-11-09 | Transgene | Fusion polypeptide comprising an anti-pd-l1 sdab and a member of the tnfsf |
WO2023238106A1 (en) | 2022-06-10 | 2023-12-14 | Transgene | Recombinant virus expressing interleukin-12 |
WO2024003238A1 (en) | 2022-06-29 | 2024-01-04 | Bavarian Nordic A/S | Epstein-barr-virus vaccine |
WO2024003239A1 (en) | 2022-06-29 | 2024-01-04 | Bavarian Nordic A/S | RECOMBINANT MODIFIED saRNA (VRP) AND VACCINIA VIRUS ANKARA (MVA) PRIME-BOOST REGIMEN |
WO2024003353A1 (en) | 2022-07-01 | 2024-01-04 | Transgene | Fusion protein comprising a surfactant-protein-d and a member of the tnfsf |
WO2024023740A1 (en) | 2022-07-27 | 2024-02-01 | Astrazeneca Ab | Combinations of recombinant virus expressing interleukin-12 with pd-1/pd-l1 inhibitors |
WO2024038175A1 (en) | 2022-08-18 | 2024-02-22 | Transgene | Chimeric poxviruses |
Family Cites Families (21)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US4675187A (en) | 1983-05-16 | 1987-06-23 | Bristol-Myers Company | BBM-1675, a new antibiotic complex |
GB8705477D0 (en) | 1987-03-09 | 1987-04-15 | Carlton Med Prod | Drug delivery systems |
GB9001641D0 (en) | 1990-01-24 | 1990-03-21 | Imp Cancer Res Tech | Compounds |
GB9208402D0 (en) | 1992-04-16 | 1992-06-03 | Devro Ltd | Rotatable linking and hanging device |
JPH08511423A (ja) | 1993-06-10 | 1996-12-03 | ジェネティック セラピー,インコーポレイテッド | 血友病治療のためのアデノウイルスベクター |
UA68327C2 (en) * | 1995-07-04 | 2004-08-16 | Gsf Forschungszentrum Fur Unwe | A recombinant mva virus, an isolated eukaryotic cell, infected with recombinant mva virus, a method for production in vitro of polypeptides with use of said cell, a method for production in vitro of virus parts (variants), vaccine containing the recombinant mva virus, a method for immunization of animals |
US7118754B1 (en) | 1996-07-30 | 2006-10-10 | Transgene S.A. | Pharmaceutical composition for treating papillomavirus tumors and infection |
FR2751879B1 (fr) * | 1996-07-30 | 1998-10-30 | Transgene Sa | Composition pharmaceutique contre les tumeurs et infections a papillomavirus |
US5672485A (en) | 1996-08-13 | 1997-09-30 | Regents Of The University Of Minnesota | Immortalized cell lines for virus growth |
FR2766091A1 (fr) * | 1997-07-18 | 1999-01-22 | Transgene Sa | Composition antitumorale a base de polypeptide immunogene de localisation cellulaire modifiee |
FR2777570A1 (fr) | 1998-04-17 | 1999-10-22 | Transgene Sa | Mutant ayant une activite phosphoribosyl transferase |
US7348014B2 (en) | 2000-04-14 | 2008-03-25 | Transgene, S.A. | Poxvirus with targeted infection specificity |
NZ524661A (en) * | 2000-11-23 | 2005-03-24 | Bavarian Nordic As | Modified vaccinia ankara virus variant |
DE10143490C2 (de) * | 2001-09-05 | 2003-12-11 | Gsf Forschungszentrum Umwelt | Rekombinantes MVA mit der Fähigkeit zur Expression von HCV Struktur-Antigenen |
EP2269619A1 (en) * | 2002-08-12 | 2011-01-05 | Jennerex Biotherapeutics ULC | Methods and compositions concerning poxviruses and cancer |
KR101044538B1 (ko) * | 2002-09-05 | 2011-06-27 | 버베리안 노딕 에이/에스 | 무혈청 조건하에서 일차세포의 배양 및 바이러스의 증식방법 |
KR101062140B1 (ko) | 2003-07-21 | 2011-09-05 | 트랜스진 에스.에이. | 향상된 시토신 디아미네이즈 활성을 갖는 폴리펩티드 |
PL1646715T3 (pl) | 2003-07-22 | 2010-10-29 | Valneva | Wytwarzanie pokswirusów za pomocą linii adherentnych lub nieadherentnych komórek ptasich |
US20060094104A1 (en) | 2004-10-29 | 2006-05-04 | Leopold Grillberger | Animal protein-free media for cultivation of cells |
US7951576B2 (en) * | 2004-11-05 | 2011-05-31 | The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services | Methods for preparing cells and viruses |
DK2029756T3 (en) * | 2006-06-20 | 2017-02-13 | Transgene Sa | PROCEDURE FOR PREPARING POXVIRA AND POXVIRUS COMPOSITIONS |
-
2007
- 2007-06-15 DK DK07764674.3T patent/DK2029756T3/en active
- 2007-06-15 US US12/304,353 patent/US8058049B2/en active Active
- 2007-06-15 WO PCT/EP2007/005302 patent/WO2007147528A1/en active Application Filing
- 2007-06-15 NZ NZ573437A patent/NZ573437A/en unknown
- 2007-06-15 MX MX2013003402A patent/MX348525B/es unknown
- 2007-06-15 DK DK12179919.1T patent/DK2530161T3/en active
- 2007-06-15 JP JP2009515747A patent/JP5456464B2/ja active Active
- 2007-06-15 HU HUE07764674A patent/HUE030533T2/hu unknown
- 2007-06-15 EP EP12179919.1A patent/EP2530161B1/en active Active
- 2007-06-15 AU AU2007263280A patent/AU2007263280B2/en active Active
- 2007-06-15 MX MX2008015166A patent/MX2008015166A/es active IP Right Grant
- 2007-06-15 RU RU2009101382/10A patent/RU2489486C2/ru active
- 2007-06-15 CA CA 2656259 patent/CA2656259C/en active Active
- 2007-06-15 ES ES12179919.1T patent/ES2671230T3/es active Active
- 2007-06-15 ES ES07764674.3T patent/ES2611975T3/es active Active
- 2007-06-15 KR KR1020087030976A patent/KR101082296B1/ko active IP Right Grant
- 2007-06-15 RU RU2013119415/10A patent/RU2551982C2/ru active
- 2007-06-15 CN CN2007800205211A patent/CN101460627B/zh active Active
- 2007-06-15 BR BRPI0712158A patent/BRPI0712158B8/pt active IP Right Grant
- 2007-06-15 EP EP07764674.3A patent/EP2029756B1/en not_active Revoked
- 2007-06-15 HU HUE12179919A patent/HUE037866T2/hu unknown
-
2008
- 2008-10-29 IL IL194978A patent/IL194978A/en active IP Right Grant
- 2008-11-18 NO NO20084855A patent/NO20084855L/no not_active Application Discontinuation
- 2008-12-16 CO CO08133446A patent/CO6141479A2/es unknown
- 2008-12-18 CR CR10528A patent/CR10528A/es not_active Application Discontinuation
- 2008-12-18 ZA ZA2008/10658A patent/ZA200810658B/en unknown
-
2009
- 2009-01-09 MA MA31556A patent/MA30580B1/fr unknown
- 2009-05-05 HK HK09104142.0A patent/HK1125405A1/zh unknown
-
2011
- 2011-10-24 US US13/279,543 patent/US8945581B2/en active Active
- 2011-10-24 US US13/279,569 patent/US8415134B1/en active Active
- 2011-10-24 US US13/279,525 patent/US8415133B2/en active Active
-
2013
- 2013-04-26 RU RU2013119416/10A patent/RU2581910C2/ru active
-
2014
- 2014-12-23 US US14/580,366 patent/US9295702B2/en active Active
Non-Patent Citations (2)
Title |
---|
KATZ EHUD ет al. The cytoplasmic and transmembrane domains of the vaccinia virus B5R protein target a chimeric human immunodeficiency virus type 1 glycoprotein to the outer envelope of nascent vaccinia virions. Journal of virology. Vol.71, no.4, 1997, p. 3178-3187. * |
TREVOR K.Т. ет al. Transduction of human dendritic cells with a recombinant modified vaccinia Ankara virus encoding MUC1 and IL-2". Cancer immunology and immunotherapy. Berlin. DE, vol.50, no.8, 22 August 2001 (2001-08-22), p. 397-407. * |
Also Published As
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
RU2489486C2 (ru) | Процесс получения поксвирусов и композиции поксвирусов | |
JP5855564B2 (ja) | オルソポックスウイルスの製造および精製方法 | |
US20120190100A1 (en) | Enzymatic composition for the digestion of chicken embryos |