NO315047B1 - Substituerte nitrogen-inneholdende heterocykliske forbindelser som inhibitorer for p38 protein-kinase - Google Patents

Substituerte nitrogen-inneholdende heterocykliske forbindelser som inhibitorer for p38 protein-kinase Download PDF

Info

Publication number
NO315047B1
NO315047B1 NO19992960A NO992960A NO315047B1 NO 315047 B1 NO315047 B1 NO 315047B1 NO 19992960 A NO19992960 A NO 19992960A NO 992960 A NO992960 A NO 992960A NO 315047 B1 NO315047 B1 NO 315047B1
Authority
NO
Norway
Prior art keywords
compound
compound according
disease
formula
compounds
Prior art date
Application number
NO19992960A
Other languages
English (en)
Other versions
NO992960D0 (no
NO992960L (no
Inventor
Guy W Bemis
Francesco Gerald Salituro
John Patrick Duffy
John E Cochran
Edmund Martin Harrington
Mark A Murcko
Keith P Wilson
Michael Su
Vincent P Galullo
Original Assignee
Vertex Pharma
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Priority claimed from US08/822,373 external-priority patent/US5945418A/en
Application filed by Vertex Pharma filed Critical Vertex Pharma
Publication of NO992960D0 publication Critical patent/NO992960D0/no
Publication of NO992960L publication Critical patent/NO992960L/no
Publication of NO315047B1 publication Critical patent/NO315047B1/no

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D213/00—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D213/02—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D213/04—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having no bond between the ring nitrogen atom and a non-ring member or having only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom
    • C07D213/60—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having no bond between the ring nitrogen atom and a non-ring member or having only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals, directly attached to ring carbon atoms
    • C07D213/62—Oxygen or sulfur atoms
    • C07D213/70—Sulfur atoms
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/08—Drugs for skeletal disorders for bone diseases, e.g. rachitism, Paget's disease
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P23/00—Anaesthetics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/18—Antipsychotics, i.e. neuroleptics; Drugs for mania or schizophrenia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/28—Drugs for disorders of the nervous system for treating neurodegenerative disorders of the central nervous system, e.g. nootropic agents, cognition enhancers, drugs for treating Alzheimer's disease or other forms of dementia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/04—Antibacterial agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A61P7/02—Antithrombotic agents; Anticoagulants; Platelet aggregation inhibitors
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/10—Drugs for disorders of the cardiovascular system for treating ischaemic or atherosclerotic diseases, e.g. antianginal drugs, coronary vasodilators, drugs for myocardial infarction, retinopathy, cerebrovascula insufficiency, renal arteriosclerosis
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D213/00—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D213/02—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D213/04—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having no bond between the ring nitrogen atom and a non-ring member or having only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom
    • C07D213/24—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having no bond between the ring nitrogen atom and a non-ring member or having only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom with substituted hydrocarbon radicals attached to ring carbon atoms
    • C07D213/54—Radicals substituted by carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals
    • C07D213/56—Amides
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D213/00—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D213/02—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D213/04—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having no bond between the ring nitrogen atom and a non-ring member or having only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom
    • C07D213/60—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having no bond between the ring nitrogen atom and a non-ring member or having only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals, directly attached to ring carbon atoms
    • C07D213/72—Nitrogen atoms
    • C07D213/75—Amino or imino radicals, acylated by carboxylic or carbonic acids, or by sulfur or nitrogen analogues thereof, e.g. carbamates
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D237/00—Heterocyclic compounds containing 1,2-diazine or hydrogenated 1,2-diazine rings
    • C07D237/02—Heterocyclic compounds containing 1,2-diazine or hydrogenated 1,2-diazine rings not condensed with other rings
    • C07D237/06—Heterocyclic compounds containing 1,2-diazine or hydrogenated 1,2-diazine rings not condensed with other rings having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D237/10—Heterocyclic compounds containing 1,2-diazine or hydrogenated 1,2-diazine rings not condensed with other rings having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals, directly attached to ring carbon atoms
    • C07D237/18—Sulfur atoms
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D241/00—Heterocyclic compounds containing 1,4-diazine or hydrogenated 1,4-diazine rings
    • C07D241/02—Heterocyclic compounds containing 1,4-diazine or hydrogenated 1,4-diazine rings not condensed with other rings
    • C07D241/10—Heterocyclic compounds containing 1,4-diazine or hydrogenated 1,4-diazine rings not condensed with other rings having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D241/12—Heterocyclic compounds containing 1,4-diazine or hydrogenated 1,4-diazine rings not condensed with other rings having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members with only hydrogen atoms, hydrocarbon or substituted hydrocarbon radicals, directly attached to ring carbon atoms
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D241/00—Heterocyclic compounds containing 1,4-diazine or hydrogenated 1,4-diazine rings
    • C07D241/02—Heterocyclic compounds containing 1,4-diazine or hydrogenated 1,4-diazine rings not condensed with other rings
    • C07D241/10—Heterocyclic compounds containing 1,4-diazine or hydrogenated 1,4-diazine rings not condensed with other rings having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D241/14—Heterocyclic compounds containing 1,4-diazine or hydrogenated 1,4-diazine rings not condensed with other rings having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals, directly attached to ring carbon atoms
    • C07D241/20—Nitrogen atoms
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D401/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom
    • C07D401/02—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom containing two hetero rings
    • C07D401/04—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom containing two hetero rings directly linked by a ring-member-to-ring-member bond
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D405/00—Heterocyclic compounds containing both one or more hetero rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms, and one or more rings having nitrogen as the only ring hetero atom
    • C07D405/02—Heterocyclic compounds containing both one or more hetero rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms, and one or more rings having nitrogen as the only ring hetero atom containing two hetero rings
    • C07D405/04—Heterocyclic compounds containing both one or more hetero rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms, and one or more rings having nitrogen as the only ring hetero atom containing two hetero rings directly linked by a ring-member-to-ring-member bond
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D405/00—Heterocyclic compounds containing both one or more hetero rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms, and one or more rings having nitrogen as the only ring hetero atom
    • C07D405/02—Heterocyclic compounds containing both one or more hetero rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms, and one or more rings having nitrogen as the only ring hetero atom containing two hetero rings
    • C07D405/12—Heterocyclic compounds containing both one or more hetero rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms, and one or more rings having nitrogen as the only ring hetero atom containing two hetero rings linked by a chain containing hetero atoms as chain links
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D409/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having sulfur atoms as the only ring hetero atoms
    • C07D409/02—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having sulfur atoms as the only ring hetero atoms containing two hetero rings
    • C07D409/04—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having sulfur atoms as the only ring hetero atoms containing two hetero rings directly linked by a ring-member-to-ring-member bond
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D471/00—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, at least one ring being a six-membered ring with one nitrogen atom, not provided for by groups C07D451/00 - C07D463/00
    • C07D471/02—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, at least one ring being a six-membered ring with one nitrogen atom, not provided for by groups C07D451/00 - C07D463/00 in which the condensed system contains two hetero rings
    • C07D471/04—Ortho-condensed systems
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D487/00—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, not provided for by groups C07D451/00 - C07D477/00
    • C07D487/02—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, not provided for by groups C07D451/00 - C07D477/00 in which the condensed system contains two hetero rings
    • C07D487/04—Ortho-condensed systems
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07F—ACYCLIC, CARBOCYCLIC OR HETEROCYCLIC COMPOUNDS CONTAINING ELEMENTS OTHER THAN CARBON, HYDROGEN, HALOGEN, OXYGEN, NITROGEN, SULFUR, SELENIUM OR TELLURIUM
    • C07F9/00—Compounds containing elements of Groups 5 or 15 of the Periodic Table
    • C07F9/02—Phosphorus compounds
    • C07F9/547—Heterocyclic compounds, e.g. containing phosphorus as a ring hetero atom
    • C07F9/6561—Heterocyclic compounds, e.g. containing phosphorus as a ring hetero atom containing systems of two or more relevant hetero rings condensed among themselves or condensed with a common carbocyclic ring or ring system, with or without other non-condensed hetero rings

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Neurology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Neurosurgery (AREA)
  • Physical Education & Sports Medicine (AREA)
  • Rheumatology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Psychiatry (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Orthopedic Medicine & Surgery (AREA)
  • Heart & Thoracic Surgery (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Vascular Medicine (AREA)
  • Hospice & Palliative Care (AREA)
  • Pain & Pain Management (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Anesthesiology (AREA)
  • Cardiology (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Nitrogen Condensed Heterocyclic Rings (AREA)
  • Heterocyclic Carbon Compounds Containing A Hetero Ring Having Oxygen Or Sulfur (AREA)

Description

Foreliggende oppfinnelse vedrører forbindelser som angitt i krav l, og som kan anvendes som inhibitorer av p38, som er et pattedyr-protein kinase som er innblandet i celleproliferasjon, celledød og respons på ekstracellulære stimuli. Oppfinnelsen vedrører også fremgangsmåter ved fremstilling av disse inhibitorer. Oppfinnelsen tilveiebringer også far-masøytiske sammensetninger som omfatter inhibitorene ifølge oppfinnelsen, disse sammensetninger kan anvendes ved behandling og forebyggelse av forskjellige forstyrrelser.
BAKGRUNN FOR OPPFINNELSEN
Protein kinaser er innblandet i forskjellige cellulære responser på ekstracellulære signaler. Nylig er en familie mitogen-aktiverte protein kinaser {MAPK) blitt oppdaget. Medlemmer av denne familie er Ser/Thr-kinaser som aktiverer sine substrater ved fosforylasjon [B. Stein et al., Ann. Rep. Med. Chem.. 31, s. 289-298 (1996)]. MAPK'er aktiveres
i sin tur av diverse signaler, omfattende vekstfaktorer, cytokiner, UV-bestråling og stressinduserende midler.
Et spesielt interessant MAPK er p38. p38, også kjent som cytokin-suppressivt anti-inflammatorisk legemiddel-bindende protein (CSBP) og RK, ble isolert fra murine pre-B-celler som var blitt transfisert med lipopolysakkarid (LPS)-recep-tor CD14 og indusert med LPS. p38 er deretter blitt isolert og sekvensiert, liksom også cDNA1 et som koder for det i menneske og mus. Aktivering av p38 er blitt observert i celler som stimueres av stress, såsom behandling av lipo-polysakkarider (LPS), UV, anisomycin eller osmotisk sjokk, og av cytokiner, såsom IL-1 og TNF.
Inhibering av p38-kinase fører til en blokkade av produksjonen av både IL-1 og TNF. IL-1 og TNF stimulerer produksjonen av andre proinflammatoriske cytokiner såsom IL-6 og IL-8, og er blitt implisert i akutte og kroniske inflamma toriske sykdommer og i post-menopausal osteoporose [R.B. Kimble et al., Endocrinol.. 136, s. 3054-3061 (1995)].
På grunnlag av dette funn tror man at p38 sammen med andre MAPK1 er spiller en rolle ved mediering av cellulære responser på inflammatoriske stimuli, såsom leukocyttakkumula-sjon, makrofag/monocytt-aktivering, vevresorpsjon, feber, akuttfase-responser og neutrofili. I tillegg er MAPK'er såsom p38 blitt implisert i kreft, trombin-indusert blodplateaggregasjon, immunsviktforstyrrelser, autoimmune sykdommer, celledød, allergier, osteoporose og neurodegenerative forstyrrelser. Inhibitorer av p38 er også blitt implisert i området smerteregulering ved inhibering av prostaglandin endoperoksid syntase-2-induksjonen. Andre sykdommer forbundet med IL-1-, IL-6-, IL-8- eller TNF-overproduksjon beskrives i WO 96/21654.
Andre har allerede begynt å prøve å utvikle legemidler som spesifikt inhibererMAPK'er. F.eks. beskriver PCT-publika-sjonen WO 95/31451 pyrazolforbindelser som inhiberer MAPK'er, og spesielt p38. Imidlertid blir virkningen av disse inhibitorer in vivo fortsatt undersøkt.
Følgelig finnes det fortsatt et sterkt behov for å utvikle andre sterke, p38-spesifikke inhibitorer som er nyttige ved behandling av forskjellige tilstander forbundet med p38-aktivering.
SAMMENFATNING AV OPPFINNELSEN
Foreliggende oppfinnelse løser dette problem ved å tilveie-bringe forbindelser som oppviser en sterk og spesifikk inhibering av p3 8.
Disse forbindelser har den generelle formel:
hvor Qiog Q2hver uavhengig velges fra karbocykliske eller heterocykliske ringsystemer valgt fra fenyl, naftyl, pyridyl, tienyl, benzofuranyl, benzotienyl, indolyl, imidazolyl eller furanyl, hvor: Qier substituert med 1 til 4 substituenter, som hver uavhengig velges fra halogen; Ci-C3-alkyl som valgfritt kan være substituert med NR'2, OR<1>, C02R' eller CONR'2; 0-(Ci-C3)alkyl som valgfritt kan være substituert med NR'2, OR<1>, C02R' eller CONR'2; NR'2; CF3; N02; C02R'; CONR'; Ci-Cs-alkylendioksy; CN; N=CH-N(R')2; morfolino-Ci-C3-alkanoyl-amino; halo-Ci-C3-alkanoylamino; Ci-C3-alkanoylamino eller
OH;
Q2er valgfritt substituert med opptil 4 substituenter, som hver uavhengig velges fra halogen,- rettkjedet eller forgrenet Ci-C3-alkyl som valgfritt kan være substituert med OCONR'aNR'2, OR', C02R' , NHR3, R3 eller CONR'2; O-(Ci-C3)alkyl som valgfritt kan være substituert med NR'2, OR' eller C02R' , NR'2; OCF3; CF3; NOa; C02R' ; CONHR'; SR<1>; CH; CONR'2; CH=N-OH; NHC(0)OR'; NH2C{0)NH2; NHC (=NH) (NH2) ; C{0)R' eller OH.
R' velges fra hydrogen, {Ci-C3)alkyl valgfritt substituert med OH, NH2eller karboksy; eller fenyl.
R3 velges fra piperazinyl; pyrrolidinyl; imidazolyl; morfolinyl eller fenyl.
X velges fra -S-, -C(0)- eller -CH(OH);
hvor R velges uavhengig fra hydrogen, -R2, -N(R2)2 eller
-OR<2>,
R2 velges fra hydrogen eller (Ci-C3) alkyl,
Y betyr N eller C,
når A foreligger, betyr den N eller CR',
n betyr 0 eller 1.
Ri velges fra hydrogen, (Ci-C3) alkyl, OH eller O-(Ci-C3)-alkyl.
I en annen utførelse tilveiebringer oppfrinnelsen farmasøy-tiske sammensetninger omfattende p38-inhibitorene ifølge oppfinnelsen. Disse sammensetninger kan benyttes ved behandling eller forebyggelse av forskjellige forstyrrelser, såsom kreft, inflammatoriske sykdommer, autoimmune sykdommer, destruktive benforstyrrelser, proliferative forstyrrelser, infeksjonssykdommer, virale sykdommer og neurodegenerative sykdommer. Disse sammensetninger er også nyttige ved forebyggelse av celledød og hyperplasi, og kan derfor brukes for å behandle eller forebygge reperfusjon/iskemi ved slag, hjerteanfall, organhypoksi. Sammensetningene er også nyttige ved forebyggelse av trombin-indusert blodplateaggregasj on.
DETALJERT BESKRIVELSE AV OPPFINNELSEN
Foreliggende oppfinnelse tilveiebringer inhibitorer av p38 som har den generelle formel:
Hvor de enkelte substituenter har samme betydning som nevnt ovenfor. Det vil være åpenbart for en fagman at hvis Rx betyr OH, kan den dannede inhibitor tautomerisere og danne en forbindelse med formel:
som også er p38-inhibitorer ifølge oppfinnelsen.
I henhold til en annen foretrukken utførelse velges Qifra fenyl eller pyridyl som inneholder 1-3 substituenter, hvor minst én av substituentene er i orto-posisjon og substituentene hver uavhengig velges fra klor, fluor, brom, -CH3, -OCH3, -OH, -CF3, -OCF3, -0{CH2)2CH3, NH2, 3,4-metylendioksy,
-N(CH3)2, -NH-C{0)CH2-morfolin eller -0-(CH2) 2-N (CH3) 2.
Enda mer foretrukne er fenyl eller pyridyl som inneholder minst 2 av de ovennevnte substituenter, hvorav begge foreligger i orto-posisjon
Noen bestemte eksempler på Qier:
Mest foretrukket velges Qifra 2-fluor-6-trifluormetyl-fenyl, 2,6-difluorfenyl, 2,6-diklorfenyl, 2-klor-4-hydrok-syfenyl, 2-klor-4-aminofenyl, 2,6-diklor-4-aminofenyl, 2,6-diklor-3-aminofenyl, 2,6-dimetyl-4-hydroksyfenyl, 2-met-oksy-3,5-diklor-4-pyridyl, 2-klor-4,5-metylendioksyfenyl eller 2-klor-4-(N-2-morfolinoacetamido)fenyl.
I henhold til en foretrukken utførelse betyr Q2fenyl eller pyridyl som inneholder 0-3 substituenter, hvor hver substi-tuent uavhengig velges fra klor, fluor, brom, metyl, etyl, isopropyl, -OCH3, -OH, -NH2, -CF3, -OCF3, -SCH3, -0CH3, -C(0)OH, -C(0)0CH3, -CH2NH2, -N(CH3)2, -CH2-pyrrolidin og
-CH2OH.
Noen bestemte eksempler på foretrukne Q2er:
usubstituert 2-pyridyl eller usubstituert fenyl.
Mest foretrukne er forbindelser hvor Q2velges fra fenyl, 2-isopropylfenyl, 3,4-dimetylfenyl, 2-etylfenyl, 3-fluorfenyl, 2-metylfenyl, 3-klor-4-fluorfenyl, 3-klorfenyl, 2-karbometoksylfenyl, 2-karboksyfenyl, 2-metyl-4-klorfenyl, 2-bromfenyl, 2-pyridyl, 2-metylenhydroksyfenyl, 4-fluorfenyl, 2-metyl-4-fluorfenyl, 2-klor-4-fluorfenyl, 2,4-difluorfenyl, 2-hydroksy-4-fluorfenyl eller 2-metylenhydrok-sy-4-fluorfenyl.
I henhold til enda en annen foretrukken utførelse betyr X
-S- eller -C(0)-. X betyr mest foretrukket S.
I henhold til en annen foretrukken utførelse betyr n 1, og A betyr N.
I henhold til en annen foretrukken utførelse betyr hver Y
C.
I henhold til en enda mer foretrukken utførelse betyr hver Y C, og R'ene forbundet med disse Y-komponenter, velges fra hydrogen eller metyl.
Noen bestemte inhibitorer ifølge foreliggende oppfinnelse vises i den følgende tabell.
Inhibitorer av p38 med formel (Ia) som ble avbildet ovenfor kan fremstilles ved fremgangsmåter som omfatter å omsette en forbindelse med formel II:
hvor hver av variablene i formelen ovenfor er de samme som ble definert ovenfor for inhibitorene ifølge foreliggende oppfinnelse, med en utgående gruppe-reagens med formel Ila: hvor R' har den ovennevnte betydning, eller en utgående gruppe-reagens med formel IIb:
hvor Li, L2og L3hver uavhengig betyr en utgående gruppe.
Den utgående gruppe-reagens som brukes i denne omsetning, settes til i et overskudd, enten i ren form eller med et ko-løsemiddel, såsom toluen. Omsetningen utføres ved en temperatur fra 25-150°C.
Utgående gruppe-reagenser med formel Ila som er nyttige ved fremstilling av p38-inhibitorer ifølge foreliggende oppfin- neise, omfatter dimetylformamiddimetylacetal, dimetylacet-amiddimetylacetal, trimetylortoformat, dimetylformamiddi-etylacetal og andre beslektede reagenser. Den utgående gruppe-reagens med formel Ila som brukes for å fremstille inhibitorene ifølge foreliggende oppfinnelse, er fortrinnsvis dimetylformamiddimetylacetal.
Utgående gruppe-reagenser med formel IIb som er nyttige ved fremstilling av p38-inhibitorene ifølge foreliggende oppfinnelse, omfatter fosgen, karbonyldiimidazol, dietylkarbo-nat og trifosfgen.
Mer foretrukne fremgangsmåter ved fremstilling av forbindelsene ifølge oppfinnelsen, benytter seg av forbindelser med formel II hvor hver av variablene er definert i henhold til de mer foretrukne og mest foretrukne valg som ble beskrevet ovenfor for forbindelsene ifølge foreliggende oppfinnelse.
På grunn av at kilden for Ri er det utgående gruppe-reagens (C-R<1>eller C=0), er dens identitet naturligvis avhengig av strukturen av dette reagens. I forbindelser hvor Rx betyr OH, må reagenset som brukes, derfor være Ilb. På lignende måte, når Ri betyr H eller (C1-C3)alkyl, må reagenset som brukes, være Ila. For å generere inhibitorer hvor Ri betyr 0- {C1-C3)alkyl, genereres først en forbindelse hvor Ri betyr OH, etterfulgt av alkylering av dette hydroksy ved stan-dardteknikker, såsom behandling med Na-hydrid i DMF, metyl-jodid og etyljodid.
De umiddelbare forløpere av inhibitorene ifølge foreliggende oppfinnelse med formel (Ia) (dvs. forbindelser med formel II) kan i sin tur syntetiseres ved enten av synteseskjemaene som avbildes i det følgende:
I skjema 1 kan rekkefølgen av trinnene 1) og 2) byttes om. Dessuten kan utgangsnitrilet erstattes med en tilsvarende syre eller med en ester. Alternativt kan andre velkjente latente karboksyl- eller karboksamid-enheter brukes istedenfor nirilet (jfr. skjema 2). Variasjoner såsom kar-boksylsyrer, karobksylsyreestere, oksazoliner eller oksi-zolidinoner kan innlemmes i dette skjema ved å benytte påfølgende avbeskyttelses- og funksjonaliseringsmetoder som er velkjent innen faget.
Basen som brukes i det første trinn av skjema 1 (og i det følgende skjema 2), velges fra natriumhydrid, natriumamid, LDA, litiumheksametyldisilazid, natriumheksametyldisilazid eller hvilke som helst andre ikke-nukleofile baser som vil deprotonere stillingen i alfa-posisjon i forhold til nitrilet.
Dessuten kan tilsetningen av HX-Q2i ett trinn slik det vises ovenfor, erstattes med to trinn: tilsetning av et beskyttet eller ubeskyttet X-derivat etterfulgt av tilsetningen av et Q2-derivat i et påfølgende trinn.
I skjema 2 velges Z fra COOH, COOR', CON{R')a, oksazolin, oksazolidinon og CN. R<1>har den ovennevnte betydning.
I henhold til en annen utførelse tilveiebringer oppfinnelsen inhibitorer av p38 som ligner de ovennevnte som har formel Ia, men hvor C=N i ringen som bærer Qi-sub-stituenten, er redusert. Disse inhibitorer har formel:
eller et farmasøytisk akseptabelt salt derav, hvor A, Qi, Q2, R, R', X, Y og n er definert på samme måte som ble beskrevet for forbindelser med formel Ia. Disse defini-sjoner gjelder for alle utførelser av hver av disse vari-
abler (dvs. grunnleggende, foretrukket, mer foretrukket og mest foretrukket) . R<B>velges fra hydrogen eller -CR^OH.
Når R<5>ikke betyr hydrogen, forventer man at de dannede forbindelser vil være prodrogeformer, som bør spaltes in vivo for å gi en forbindelse hvorR<5>betyr hydrogen.
Ifølge andre foretrukne utførelser betyr A i forbindelser med formel Ic fortrinnsvis nitrogen, n betyr fortrinnsvis 1 og X betyr fortrinnsvis svovel. I forbindelser med formel Ic eller Id er Qiog Q2fortrinnsvis de samme grupper som ble nevnt ovenfor for disse variabler i forbindelser med formel Ia.
Forbindelser med formel Ic og Id kan fremstilles direkte fra forbindelser md formel Ia som inneholder et hydrogen, Ci-C3-alkyl eller C2-C3-alkenyl eller alkynyl i Ri-posisjon (f .eks. hvor Rx = R') . Synteseskjemaene for disse forbindelser avbildes i de følgende skjemaer 5 og 6.
I disse skjemaer reduseres forbindelser med formel Ia ved omsetning med et overskudd diisobutylaluminiumhydrid eller en likeverdig reagens for å gi de ringreduserte forbindelser med formel Ic hhv. Id.
Tilsetningen av en annen R<5->komponent enn hydrogen i ring-nitrogenet, oppnås ved å omsette de ovenfor viste forbindelser med formel Ic eller Id med et eller flere egnede reagensmidler. Eksempler på slike modifikasjoner vises i det følgende avsnitt "Eksempler".
Noen bestemte inhibitorer ifølge foreliggende oppfinnelse med formel Ic vises i den følgende tabell.
I henhold til enda en annen utførelse tilveiebringer oppfinnelsen p38-inhibitorer med formlene:
hvor A, Qi, Q2, R, X, Y og n er definert på samme måte som ble beskrevet for forbindelser md formel Ia. Disse defi-nisjoner gjelder for alle utførelser av hver av variablene (dvs. grunnleggende, foretrukket, mer foretrukket og mest foretrukket). I forbindelsene med formel le er Q2mer foretrukket usubstituert fenyl.
En person med kunnskaper innen faget vil se at forbindelsene med formel le er direkte forløpere for visse av p38-inhibitorene med formel Ia og formel Ic ifølge foreliggende oppfinnelse. En fagperson vil også se at forbindelsene med formel lg er forløpere for visse av p38-inhibitorene med formel Id ifølge foreliggende oppfinnelse. Følgelig avbildes syntesen av inhibitorer med formel le ovenfor i skjemaene 1 og 2. På lignende måte avbildes syntesen av inhibitorer med formel lg ovenfor i skjemaene 3 og 4.
Syntesen av inhibitorer med formel If og formel Ih vises i de følgende skjemaer 7 og 8.
Skjema 8 viser syntesen av forbindelser av typen Ih. F.eks. gir behandling av et opprinnelig dibromderivat, såsom 2,6-dibrompyridin, med et amin i nærvær av en base såsom natriumhydrid, 2-amino-6-bromderivatet. Behandling av dette mellomprodukt med en fenylboronsyreanalog (en Q2-boronsyre) såsom fenylboronsyre, i nærvær av en palladiumkatalysator gir det disubstituerte derivat som deretter kan acyleres til sluttproduktet. Rekkefølgen av de første to trinn av denne syntese kan byttes om.
En foretrukken inhibitor med formel le ifølge foreliggende oppfinnelse er én hvor A betyr karbon, n betyr 1, X betyr svovel, hver Y betyr karbon, hver R betyr hydrogen, Qibetyr 2,6-diklorfenyl og Q2betyr fenyl, og denne forbindelse benevnes forbindelse 201. En foretrukken inhibitor med formel lg ifølge foreliggende oppfinnelse er én hvor Qibetyr 2,6-diklorfenyl, Q2betyr fenyl, hver Y betyr karbon og hver R betyr hydrogen. Denne forbindelse benevnes heri forbindelse 2 02. Andre foretrukne forbindelser med formel lg ifølge foreliggende oppfinnelse er de som er oppført i den følgende tabell 4.
Foretrukne forbindelser med formel Ih ifølge foreliggende oppfinnelse er de som vises i den følgende tabell 5. Andre foretrukne forbindelser med formel Ih er slike hvor Qxbetyr fenyl som uavhengig er substituert i 2- og 6-posisjo-nene med klor eller fluor; hver Y betyr karbon; hver R betyr hyrogen; og Q2betyr 2-metylfenyl, 4-fluorfenyl, 2,4-difluorfenyl, 2-metylenhydroksy-4-fluorfenyl eller 2-metyl-4-fluorfenyl.
Noen bestemte inhibitorer med formel le, lg og Ih er avbildet i de følgene tabeller.
Aktiviteten av p38-inhibitorene ifølge foreliggende oppfinnelse kan testes in vitro, in vivo eller i en celle-linje. In vitro-assayer omfatter assayer som bestemmer inhiberingen av enten kinase-aktiviteten ellerATPase-aktiviteten av aktivert p38. Alternativt kvantifiserer in vitro-assayer evnen av inhibitoren til å binde p38, og kan måles enten ved å radiomerke inhibitoren før bindingen, isolere inhibitor/p38-komplekset og besteme mengden radio-merking som er bundet, eller ved å kjøre et kompetisjons-eksperiment hvor nye inhibitorer inkuberes med p38 som er bundet til kjente radioligander.
Cellekulturassayer av den inhibitoriske virkning av forbindelsene ifølge foreliggende oppfinnelse kan bestemme mengden TNF, IL-1, IL-6 eller IL-8 som dannes i fullblod eller cellefraksjoner derav i celler som er blitt behandlet med inhibitor, sammenlignet med celler som er blitt behandlet med negativkontroller. Mengden av disse cytokiner kan bestemmes ved bruk av handelstilgjengelige ELISA'er.
Et in vivo-assay som er nyttig for å bestemme den inhibitoriske aktivitet av p38-inhibitorene ifølge foreliggende oppfinnelse, er suppresjonen av bakpoteødemer i rotter med AjycoJbacterium bu tyri cum~ indusert adjuvansartritt. Dette beskrives i J.C. Boehm et al., J. Med. Chem.. 39, s. 3929-3937 (1996), hvis innhold innlemmes heri ifølge henvising. p38-inhibitorene ifølge foreliggende oppfinnelse kan også testes i dyremodeller av artritt, benresorpsjon, endotok-sinsjokk og immunfunksjon, slik det beskrives i A.M. Badger et al., J. Pharmacol. Experimental Therapeutics. 279, s. 1453-1461 (1996), hvis innhold innlemmes heri ifølge hen-visning.
p38-inhibitorene eller farmasøytiske salter derav kan formuleres i farmasøytiske sammensetninger for administrasjon til dyr eller mennesker. Disse farmasøytiske sammensetninger, som omfatter en mengde av p38-inhibitor som er virksom
for behandling eller forebyggelse av en p38-mediert tilstand, og en farmasøytisk akseptabel bærer, er en annen utførelse av foreliggende oppfinnelse.
Begrepet<n>p38-mediert tilstand", slik det brukes her, betyr hvilken som helst sykdom eller annen svekkende tilstand hvor p38 er kjent for å spille en rolle. Dette omfatter tilstander som er kjent for å forårsakes av en IL-1-, TNF-, IL-6- eller IL-8-overproduksjon. Slike tilstander omfatter, uten begrensning, inflammatoriske sykdommer, autoimmune sykdommer, destruktive benforstyrrelser, proliferative forstyrrelser, infeksjonssykdommer, neurodegenerative sykdommer, allergier, reperfusjon/iskemi ved slag, hjerteanfall, angiogene forstyrrelser, organhypoksi, vaskulær hyperplasi, hjertehypertrofi, trombin-indusert blodplateaggregasjon og tilstander forbundet med prostaglandin endoperoksidase syntase-2.
Inflammatoriske sykdommer som kan behandles eller forebygges, omfatter, men er ikke begrenset til, akutt pankreatitt, kronisk pankreatitt, asthma, allergier og åndenøds-syndrom hos voksne. Autoimmune sykdommer som kan behandles eller forebygges, omfatter, men er ikke begrenset til, glo-meruloneftritt, rheumatoid artritt, systemisk lupus erythematose, skleroderma, kronisk thyroiditt, Graves' sykdom, autoimmun gastritt, diabetes, autoimmun hemolytisk anemi, autoimmun neutropeni, trombocytopenia, atopisk dermatitt, kronisk aktiv hepatitt, myasthenia gravis, multippel sklerose, inflammatorisk tarmsykdom, ulcerativ kolitt, Crohn's sykdom, psoriasis eller "graft-vs.-host-disease".
Destruktive benforstyrrelser som kan behandles eller forebygges, omfatter, men er ikke begrenset til, osteoporose, osteoartritt og multippel myeloma-relatert benforstyrrelse.
Proliferative sykdommer som kan behandles eller forebygges, omfatter, men er ikke begrenset til, akutt myelogen leu kemi, kronisk myelogen leukemi, metastatisk melanom, Kapo-si<1>s sarkoma og multippel myeloma.
Angiogene forstyrrelser som kan behandles eller forebygges, omfatter faste svulster, okulær neovaskularisering, hemangiomaer i barn.
Infeksjonssykdommer som kan behandles eller forebygges, omfatter, men er ikke begrenset til, sepsis, septisk sjokk og Shigellose.
Virale sykdommer som kan behandles eller forebygges, omfatter, men er ikke begrenset til, akutt hepatittinfeksjon (omfattende hepatitt A, hepatitt B og hepatitt C), HIV-infeksjon og CMV-retinitt.
Neurodegenerative sykdommer som kan behandles eller forebygges med forbindelsene ifølge foreliggende oppfinnelse, omfatter, men er ikke begrenset til, Alzheimers sykdom, Parkinsons sykdom, cerebral iskemi eller neurodegenerative sykdommer forårsaket av traumatisk skade.
"p38-medierte tilstander" omfatter også iskemi/reperfusjon i slag, hjerteanfall, myokardial iskemi, organhypoksia, vaskulær hyperplasia, hjertehypertrofi og trombinindusert blodplateaggregasj on.
I tillegg har p38-inhibitorene ifølge foreliggende oppfinnelse også evnen til å inhibere ekspresjonen av induserbare pro-inflammatoriske proteiner såsom prostaglandin endoperoksidase syntase-2 (PGHS-2), også benevnt cyklooksyge-nase-2 (COX-2). Derfor er andre "p38-medierte tilstander" ødem, analgesia, feber og smerter, såsom neuromuskulær smerte, hodepine, kreftsmerte, tannpine og artrittsmerter.
Sykdommene som kan behandles eller forebygges med p38-inhibitorene ifølge foreliggende oppfinnelse, kan også med fordel grupperes i henhold til cytokinet (IL-1, TNF, IL-6, IL-8) som man tror at er ansvarlig for sykdommen.
Slik omfatter en IL-l-mediert sykdom eller tilstand rheumatoid artritt, osteoartritt, slag, endotoksemia og/eller toksisk sjokksyndrom, inflammatorisk reaksjon indusert av endotoksin, inflammatorisk tarmsykdom, tuberkulose, atero-sklerose, muskeldegenerasjon, kakeksi, psoriatisk artritt, Reiter's syndrom, gikt, traumatisk artritt, rubellaartritt, akutt synovitt, diabetes, pankreatisk p-celle-sykdom og Alzheimers sykdom.
TNF-mediert sykdom eller tilstand omfatter rheumatoid artritt, rheumatoid spondylitt, osteoartritt, giktartritt og andre artrittiske tilstander, sepsis, septisk sjokk, endotoksisk sjokk, gramnegativ sepsis, toksisk sjokksyndrom, åndenødssyndrom hos voksne, cerebral malaria, kronisk pulmonær inflammatorisk sykdom, silikose, pulmonær sarko-isose, benresorpsjonssykdommer, reperfusjonsskade, "graft-vs.-host-reaction", transplantatutstøtninger, feber og myalgier som skyldes infeksjon, kakeksi etter infeksjon, AIDS, ARC eller ondartethet, keloiddannelse, arrvevdan-nelse, Crohns sykdom, ulcerativ kolitt eller pyrese. TNF-medierte sykdommer omfatter også virale infeksjoner såsom HIV, CMV, influensa og herpes; og veterinærmedisinske virale infeksjoner såsom lentivirusinfeksjoner, omfattende, men ikke begrenset til, ekvint smittelig anemivirus, kap-rint artrittvirus, visnavirus eller maedivirus; eller retrovirusinfeksjoner, omfattende felint immunsviktvirus, bovint immunsviktvirus eller canint immunsviktvirus. IL-8-mediert sykdom eller tilstand omfatter sykdommer som kjennetegnes ved massiv neutrofil infiltrasjon, såsom psoriasis, inflammatorisk tarmsykdom, asthma, hjerte- og renal reperfusjonsskade, åndenødssyndrom hos voksne, trombose og glomerulonefritt.
I tillegg kan forbindelsene ifølge foreliggende oppfinnelse brukes topisk for å behandle eller forebygge tilstander som forårsakes eller forverres av IL-1 eller TNF. Slike tilstander omfatter betente ledd, eksem, psoriasis, inflammatoriske hudtilstander såsom solbrann, inflammatoriske øyetilstander såsom konjunktivitt, pyrese, smerter og andre tilstander forbundet med betennelse.
I tillegg til forbindelsene ifølge foreliggende oppfinnelse, kan farmasøytisk akseptable salter av forbindelsene ifølge oppfinnelsen også brukes i sammensetninger for å behandle eller forebygge de ovennevnte forstyrrelser.
Farmasøytisk akseptable salter av forbindelsene ifølge foreliggende oppfinnelse omfatter dem som avledes fra far-masøytisk akseptable uorganiske og organiske syrer og baser. Eksempler på egnede syresalter omfatter acetat, adi-pat, alginat, aspartat, benzoat, benzensulfonat, bisulfat, butyrat, citrat, kamferat, kamfersulfonat, cyklopentan-propionat, diglukonat, dodekylsulfat, etansulfonat, format, fumarat, glukoheptanoat, glycerofosfat, glykolat, hemi-sulfat, heptanoat, heksanoat, hydroklorid, hydrobromid, hydrojodid, 2-hydroksyetansulfonat, laktat, maleat, malo-nat, metansulfonat, 2-naftalensulfonat, nikotinat, nitrat, oksalat, palmoat, pektinat, persulfat, 3-fenylpropionat, fosfat, pikrat, pivalat, propionat, salicylat, suksinat, sulfat, tartrat, tiocyanat, tosylat og undekanoat. Andre syrer, såsom oksalsyre, kan, selv om de i og for seg ikke er farmasøytisk akseptable, brukes ved fremstilling av salter som er nyttige som mellomprodukter ved dannelse av forbindelsene ifølge oppfinnelsen og deres farmasøytisk akseptable syreaddisjonssalter. Salter avledet fra egnede baser omfatter alkalimetallsalter (f.eks. natrium- og kalium-), alkalijordmetallsalter {f.eks. magnesium-), ammonium- og N-(Ci.4-alkyl) 4+-salter. Oppfinnelsen tilveiebringer også kvaternisering av eventuelle basiske nitrogen-holdige grupper i forbindelsene som beskrives heri. Vann- eller olje-løse- lige eller dispergerbare produkter kan erholdes ved en slik kvaternisering.
Farmasøytisk akseptable bærere som kan brukes i disse far-masøytiske sammensetninger, omfatter, men er ikke begrenset til, ionutbyttere, alumina, aluminiumstearat, lecitin, serumproteiner såsom humant serumalbumin, buffersubstanser såsom fosfater, glycin, sorbinsyre, kaliumsorbat, partsi-elle glyceridblandinger av mettede vegetabilske fettsyrer, vann, salter eller elektrolytter, såsom protaminsulfat, dinatriumhydrogenfosfat, kaliumhydrogenfosfat, natrium-klorid, sinksalter, kolloidalt silika, magnesiumtrisilikat, polyvinylpyrrolidon, cellulosebaserte substanser, poly-etylenglykol, natriumkarboksymetylcellulose, polyakrylater, vokser, polyetylen/polyoksypropylen-blokkpolymerer, poly-etylenglykol og ullfett.
Sammensetningene ifølge foreliggende oppfinnelse kan administreres oralt, parenteralt, ved inhalasjonsspray, topisk, rektalt, nasalt, bukkalt, vaginalt eller via en implantert beholder. Begrepet "parenteralt" slik det brukes her, omfatter subkutane, intravenøse, intramuskulære, intraarti-kulære, intrasynoviale, intrasternale, intratekale, intra-hepatiske, intrålesjonale og intrakraniale injeksjons-eller infusjonsteknikker. Fortrinnsvis administreres sammensetningene oralt, intraperitonealt eller intravenøst.
Sterile injiserbare former av sammensetningene ifølge oppfinnelsen kan være vandige eller oljeholdige suspensjoner. Disse suspensjoner kan formuleres i henhold til teknikker som er kjent innen faget, ved bruk av egnede dispergerings-eller fuktemidler og suspensjonsmidler. Det sterile injiserbare preparat kan også være en steril injiserbar oppløs-ning eller suspensjon i et ikke-toksisk parenteralt akseptabelt tynningsmiddel eller løsemiddel, f.eks. i form av en oppløsning i 1,3-butandiol. Blant de akseptable vehikler og løsemidler som kan brukes, er vann, Ringers oppløsning og isotonisk natriumkloridoppløsning. I tillegg anvendes sterile fete oljer konvensjonelt som løsemiddel eller suspen-sjonsmedium. Med denne hensikt kan hvilken som helst milde fete olje brukes, også syntetiske mono- eller diglycerider. Fettsyrer, såsom oleinsyre og dets glyceridderivater, er nyttige ved fremstilling av injiserbare væsker, liksom også naturlige farmasøytisk akseptable oljer, såsom olivenolje eller ricinusolje, spesielt i deres polyoksyetylerte ver-sjoner. Disse oljeoppløsninger eller -suspensjoner kan også inneholde et langkjedet alkohol-tynningsmiddel eller dis-pergeringsmiddel såsom karboksymetylcellulose, eller lignende dispergeringsmidler som er vanlige å bruke ved formulering av farmasøytisk akseptable doseringsformer omfattende emulsjoner og suspensjoner. Andre vanlig brukte sur-faktanter, såsom "Tweens", "Spans" og andre emulgeringsmid-ler eller biotilgjengelighetsforsterkere som er vanlige i bruk ved fremstilling av farmasøytisk akseptable faste, flytende eller andre doseringsformer, kan også brukes for formuleringen.
De farmasøytiske sammensetninger ifølge oppfinnelsen kan administreres oralt i hvilke som helst oralt akseptable doseringsformer, omfattende, men ikke begrenset til, kaps-ler, tabletter, vandige suspensjoner eller oppløsninger. I tilfellet av tabletter for oral bruk, omfatter bærere som er vanlige å bruke, laktose og maisstivelse. Smøremidler, såsom magnesiumstearat, settes vanligvis også til. For oral administrasjon i kapselform omfatter nyttige tynningsmidler laktose og tørket maisstivelse. Når vandige suspensjoner er ønsket for oral bruk, kombineres den aktive ingrediens med emulgerings- og suspensjonsmidler. Om ønsket kan visse søt-stoffer, smakstoffer eller fargestoffer også settes til.
Alternativt kan de farmasøytiske sammensetninger ifølge foreliggende oppfinnelse administreres i form av supposito-rier for rektal administrasjon. Disse kan fremstilles ved å blande midlet med en egnet ikke-irriterende eksipiens som er fast ved romtemperatur men flytende ved rektal temperatur, og derfor vil smelte i rektum for å frigi legemidlet. Slike materialer omfatter kakaosmør, bivoks og polyetylen-glykoler.
De farmasøytiske sammensetninger ifølge foreliggende oppfinnelse kan også administreres topisk, spesielt når målet for behandlingen omfatter områder eller organer som er lett tilgjengelige ved topisk påføring, omfattende sykdommer i øyet, på huden eller den lavere tarmtrakt. Egnede topiske formuleringer kan lett fremstilles for hvert av disse områder eller organer.
Topisk påføring for den lavere tarmtrakt kan utføres i en rektal suppositorieformulering (jfr. ovenfor) eller i en egnet klysterlavementformulering. Topisk/transdermale plas-tere kan også brukes.
For topisk påføring kan de farmasøytiske sammensetninger formuleres i en egnet salve som inneholder den aktive kom-ponent suspendert eller løst opp i én eller flere bærere. Bærere for topisk administrasjon av forbindelsene ifølge foreliggende oppfinnelse omfatter, men er ikke begrenset til, mineralolje, flytende petrolatum, hvit petrolatum, propylenglykol, polyoksyetylen, polyoksypropylenforbin-delse, emulgeringsvoks og vann. Alternativt kan de farma-søytiske sammensetninger formuleres i en egnet losjon eller krem som inneholder de aktive komponenter suspendert eller løst opp i én eller flere farmasøytisk akseptable bærere. Egnede bærere omfatter, men er ikke begrenset til, mineralolje, sorbitanmonostearat, polysorbat 60, cetylestervoks, cetearylalkohol, 2-oktyldodekanol, benzylalkohol og vann.
For oftalmisk bruk kan de farmasøytiske sammensetninger formuleres som mikroniserte suspensjoner i isotonisk pH-justert sterilt saltvann eller fortrinnsvis i form av opp-løsninger i isotonisk, pH-justert sterilt saltvann, enten med eller uten et konserveringsmiddel såsom benzylalkonium-klorid. Alternativt, for oftalmisk bruk, kan de farmasøy-tiske sammensetninger formuleres i en salve såsom petrolatum.
De farmasøytiske sammensetninger ifølge oppfinnelsen kan også administreres ved nasal aerosol eller inhalasjon. Slike sammensetninger fremstilles ved teknikker som er velkjent innen faget farmasøytisk formulering, og kan fremstilles som oppløsninger i saltvann, ved bruk av benzylalkohol eller andre egnede konserveringsmidler, absorp-sjonspromotere for å forsterke biotilgjengeligheten, fluorkarboner og/eller andre konvensjonelle solubiliserende eller dispergerende midler.
Mengden av p38-inhibitor som kan kombineres med bærermate-rialene for å gi en enkelt doseringsform, vil variere avhengig av verten som skal behandles, den bestemte admi-nistrasjonsmodus. Fortrinnsvis bør sammensetningene formuleres slik at en dosering av 0,01-100 mg/kg kroppsvekt/dag av inhibitoren kan administreres til en pasient som mottar disse sammensetninger.
Det bør også forstås at en bestemt dosering og be-handlingskur for en bestemt pasient vil være avhengig av forskjellige faktorer, bl.a. aktiviteten av den bestemte forbindelse som brukes, alderen, kroppsvekten, den generelle helsetilstand, kjønnet, kostholdet, administra-sjonstidspunktet, utsondringshastigheten, legemiddel-kombinasjonen og vurderingen av den behandlende lege, og alvoret av den bestemte sykdom som skal behandles. Mengden av inhibitor vil også avhenge av den bestemte forbindelse i sammensetningen.
X henhold til en annen utførelse brukes inhibitorene ifølge foreliggende oppfinnelse til å behandle eller forebygge en IL-1-, IL-6-, IL-8- eller TNF-mediert sykdom eller tilstand. Slike tilstander ble beskrevet ovenfor.
Avhengig av den bestemte p38-medierte tilstand som skal behandles eller forebygges, kan ytterligere legemidler som normalt administreres for å behandle eller forebygge denne tilstand, administreres sammen med inhibitorene ifølge foreliggende oppfinnelse. F.eks. kan kjemoterapeutiske midler eller andre antiproliferative midler kombineres med p38-inhibitorene ifølge foreliggende oppfinnelse for å behandle proliferative sykdommer.
Disse ytterligere midler kan administreres adskilt, i form av en flerdoseringskur, fra den p38-inhibitor-holdige sammensetning. Alternativt kan disse stoffer være en del av en enkeltdoseringsform, blandet sammen med p38-inhibitoren i en enkelt sammensetning.
For at oppfinnelsen som beskrives her, skal kunne forstås bedre, bringes de følgende eksempler. Det bør forstås at disse eksempler kun har illustrerende hensikt, og ikke skal anses å begrense oppfinnelsen på noen måte.
EKSEMPEL 1
Syntese av p38- inhibitorforbindelse 1
Eksempler på syntesen av flere forbindelser med formel Ia vises i de følgende 4 eksempler.
Til en oppslemming av natriumamid, 90% (1,17 g; 30 mmol) i tørt tetrahydrofuran (20 ml), satte vi en oppløsning av benzylcyanid (2,92 g,- 25,0 mmol) tørt tetrahydrofuran (10 ml) ved romtemperatur. Blandingen ble omrørt ved romtemperatur i 30 minutter. Til reaksjonsblandingen satte vi en oppløsning av 3,6-diklorpyridazin (3,70 g; 25,0 mmol) i tørt tetrahydrofuran (10 ml). Etter omrøring i 30 minutter ble reaksjonsblåndingen fortynnet med en vandig mettet natriumbikarbonatoppløsning. Reaksjonsblandingen ble deretter ekstrahert med etylacetat. Sjiktene ble separert, og det organiske sjikt ble vasket med vann og saltvann, tørket over magnesiumsulfat, filtrert og inndampet under vakuum.
Residuet ble renset ved kromatografi på kiselgel (elueringsmiddel: 30% etylacetat i n-heksan) for å gi 3,71 g (16,20 mmol; ca. 54%) produkt i form av et hvitt fast stoff.
Til en oppslemming av natriumhydrid, 95% (0,14 g; 6,0 mmol) i tørt tetrahydrofuran (10 ml), satte vi tiofenol (0,66 g; 6,0 ml) ved romtemperatur. Reaksjonsblandingen ble deretter omrørt i 10 minutter. Til reaksjonsbandingen satte vi en oppløsning av produktet fra trinn A ovenfor (1,31 g; 5,72 mmol) i abslutt etanol (2 0 ml). Reaksjonsblandingen ble deretter oppvarmet til tilbakeløpstemperaturen og omrørt ved denne i én time. Den avkjølte reaksjonsblanding ble inndampet under vakuum. Residuet ble fortynnet med en IN natriumhydroksidoppløsning (10 ml) og deretter ekstrahert med metylenklorid. Den organiske fase ble vasket med vann og saltvann, tørket over magnesiumsulfat og inndampet tinder vakuum.
Residuet ble renset ved kromatografi på kiselgel (elueringsmiddel: 20% etylacetat i n-heksan) for å gi 0,66 g (2,19 mmol; ca. 40%) produkt i form av et hvitt fast stoff.
En blanding av produktet fra trinn B (0,17 g; 0,69 mmol) og konsentrert svovelsyre (5 ml) ble oppvarmet til 100°C i én time. Oppløsningen ble avkjølt og justert til pH 8 med en mettet natriumbikarbonatoppløsning. Reaksjonsblandingen ble ekstrahert med metylenklorid. Det organiske sjikt ble vasket med vann og saltvann, tørket over magnesiumsulfat og inndampet under vakuum for å gi 0,22 g (0,69 mmol; ca. 100%) av forbindelsen pre-1 i form av en orange olje.<*>H NMR (500 MHZ, CD3OD) d 7,7 (d) , 7,5 (d) , 7,4 (m) , 7,3-7,2 (m) .
En oppløsning av pre-1 fra trinn C (0,22 g; 0,69 mmol) og N,N-dimetylformamiddimetylacetal (0,18 g; 1,5 mmol) i toluen (5 ml) ble oppvarmet til 100°C i én time. Etter avkjø-ling ble det dannede faste stoff filtrert og løst opp i varm etylacetat. Produktet ble felt ved en dråpevis tilsetning av dietyleter. Produktet ble deretter filtrert og vasket med dietyleter for å gi 0,038 g av forbindelse 1 (som er avbildet i tabell l) i form av et gult fast stoff.<X>H NMR (500 MHz, CDC13) d 8,63 (s) , 7,63-7,21 (m) , 6,44 (d) .
EKSEMPEL 2
Syntese av p38- inhibitorforbindelse 2
Det første mellomprodukt, som avbildes ovenfor, ble fremstilt på lignende måte som beskrevet i eksempel IA, ved bruk av 4-fluorfenylacetonitril, for å gi 1,4 g (5,7 mmol; ca. 15%) produkt.
Det ovenfor avbildede mellomprodukt ble fremstilt på lignende måte som beskrevet i eksempel IB. Dette gav 0,49 g (1,5 mmol; 56%) produkt.
Det ovenfor viste mellomprodukt ble fremstilt på lignende måte som beskrevet i eksempel IC. Dette gav 0,10 g (0,29 mmol; 45%) av forbindelsen pre-2.<X>H NMR (500 MHz, CDC13) d 7,65-7,48 (m) , 7,47-7,30 (m), 7,29-7,11 (rn), 7,06-6,91 (m) , 5,85 (s, br).
Forbindelse 2 (som er avbildet i tabell l) ble fremstilt fra pre-2 på lignende måte som beskrevet i eksempel ID. Dette gav 0,066 g produkt.<*>H NMR (500 MHz, CDC13) d 8,60 (s), 7,62-7,03 (m), 6,44 (d).
EKSEMPEL 3
Syntese av p38- inhibitorforbindelse 6
Det første mellomprodukt ved fremstilling av forbindelse 6 ble fremstilt på lignende måte som hva som ble beskrevet i eksempel IA, ved bruk av 2,6-dikorfenylacetonitril, for å gi 2,49 g (8,38; 28%) produkt.
Det følgende trinn ved syntesen av forbindelse 6 ble utført på lignende måte som hva som ble beskrevet i eksempel IB. Dette gav 2,82 g (7,6 mmol; 91%) produkt.
Det endelige mellomprodukt, pre-6, ble fremstilt på lignende måte som beskrevet i eksempel IC. Dette gav 0,89 g (2,3 mmol; 85%) produkt.<*>H NMR (500 MHZ, CD3OD) d 7,5-7,4 (dd), 7,4 (m), 7,3 (d), 7,2 (m), 7,05 (d).
Det endelige trinn i syntesen av forbindelse 6 (som er avbildet i tabell 1) ble utført slik det ble beskrevet i eksempel ID. Dette gav 0,06 g produkt.<*>H NMR (500 MHz, CDC13) d 8,69 (s) , 7,65-7,59 (d), 7,58-7,36 (m) , 7,32-7,22 (m), 6,79 (d), 6,53 (d).
EKSEMPEL 4
Fremstilling av p38- inhibitorforbindelse 5
Det første mellomprodukt i syntesen av forbindelse 5 ble fremstilt på lignende måte som beskrevet i eksempel IA, ved bruk av 2,4-diklorfenylacetonitril, for å gi 3,67 g (12,36 mmol; 49%) produkt.
Det andre mellomprodukt ble fremstilt på lignende måte som beskrevet i eksempel IB. Dette gav 3,82 g (9,92 mmol; 92%) produkt.
Det endelige mellomprodukt, pre-5, ble fremstilt på lignende måte som hva som ble beskrevet i eksempel IC. Dette gav 0,10 g (0,24 mmol; 92%) produkt.<*>H NMR (500 MHz, CDjOD) d 7,9 (d) , 7,7 (d) , 7,6-7,5 (dd), 7,4-7,3 (m) , 2,4 (s) .
Det endelige trinn ved fremstilling av forbindelse 5 (som er avbildet i tabell l) ble utført på lignende måte som beskrevet i eksempel ID. Dette gav 0,06 g produkt.<*>H NMR (500 MHz, CDC13) d 8,64 (s), 7,51-7,42 (m) , 7,32-7,21 (m) , 6,85 (d), 6,51 (d), 2,42 (s) .
Andre forbindelser med formel la ifølge foreliggende oppfinnelse kan fremstilles på lignende måte, ved bruk av de egnede utgangsstoffer.
EKSEMPEL 6
Syntese av p38- inhibitorforbindelse 103
Dette eksempel viser en typisk syntese av en forbindelse med formel Ic.
A.
p38-inhibitorforbindelse 12 fremstilles hovedsaklig slik det vises i eksempel 4, unntatt at 4-fluortiofenyl benyttes i trinn B.
B.
Forbindelse 12 ble løst opp i tørt THF {5 ml) ved romtemperatur. Til denne oppløsning satte vi diisobutylaluminiumhydrid (IM oppløsning i toluen, 5 ml; 5 mmol), og reak-sj onsblandingen ble omrørt ved romtemperatur i 1 time. Reaksjonsblandingen ble deretter fortynnet med etylacetat og inaktivert ved tilsetning av Rochelle-salt. Sjiktene ble separert, og det organiske sjikt ble isolert, vasket med vann, vasket med saltvann, tørket over magnesiumsulfat og filtrert for å gi rå forbindelse 103. Råproduktet ble kromatografert på kiselgel under eluering med 2% metanol i metylenklorid. Ren forbindelse 103 ble dermed erholdt (210 mg; 50% utbytte):<X>H NMR (500 MHz, CDC13) 7,51 (m, IH) , 7,38 (d, 2H),7,20 (t, 2H),7,08(t, 2H), 6,70(bred S, IH), 6,30 (dd, 2H), 5,20 (s, 2H).
EKSEMPEL 7
Syntese av p38- inhibitorforbindelse 201
Det ovenfor viste utgangsnitril (5,9 g; 31,8 mmol) ble løst opp i DMP (20 ml) ved romtemperatur. Natriumhydrid (763 mg; 31,8 mmol) ble deretter satt til, hvilket førte til en sterkt gulfarget oppløsning. Etter 15 minutter ble en opp-løsning av 2,5-dibrompyridin (5,0 g; 21,1 mmol) i DMF (10 ml) satt til, etterfulgt av palladiumtetrakis(trifenyl-fosfin) (3 mmol). Oppløsningen ble deretter oppvarmet under tilbakeløp i 3 timer. Reaksjonsblandingen ble avkjølt til romtemperatur og fortynnet med etylacetat. Det organiske sjikt ble deretter isolert, vasket med vann og deretter med saltvann, tørket over magnesiumsulfat, filtrert og inndampet under vakuum for å gi en rå olje. Flashkolonnekrornato-grafi under eluering med 10% etylacetat i heksan gav produktet (5,8 g; 84%) i form av et hvitaktig fast stoff.
Bromidet som ble dannet i trinn A (194,8 mg; 0,57 mmol), ble løst opp i xylen (15 ml). Til denne oppløsning satte vi tiofenylstannan (200 ul; 587 mmol) og palladiumtetrakis-(trifenylfosfin) (25 mg). Oppløsningen ble oppvarmet under tilbakeløp over natten, avkjølt, filtrert og inndampet under vakuum. Råproduktet ble kromatografert på kiselgel under eluering med metylenklorid for å gi et rent produkt (152 mg;72%) i form av en gul olje.
Nitrilet som ble dannet i trinn B (1,2 g; 3,37 mmol), ble løst opp i iseddik (30 ml). Til denne oppløsning satte vi vann (120 ul; 6,67 mmol) etterfulgt av titantetraklorid (760 ul; 6,91 mmol), som førte til en eksoterm reaksjon. Oppløsningen ble deretter oppvarmet under tilbakeløp i to timer, avkjølt og helt i IN HC1. Det vandige sjikt ble ekstrahert med metylenklorid. Det organiske sjikt ble tilbakevasket med IN NaOH, tørket over magnesiumsulfat og filtrert over en plugg av kiselgel. Pluggen ble først eluert med metylenklorid for å fjerne ureagert utgangsstoff, og deretter med etylacetat for å gi forbindelse 201. Etylacetatet ble inndampet for å gi ren forbindelse 201 (1,0 g; 77%).
EKSEMPEL 8
Syntese av p38- inhibitorforbindelse 110
Utgangsnitrilet (3,76 g; 11,1 mol) ble først løst opp i iseddik (20 ml). Til denne oppløsning satte vi titantetraklorid (22,2 mmol) og vann (22,2 mmol), og oppvarmet opp-løsningen under tilbakeløp i 1 time. Reaksjonsblandingen ble deretter avkjølt og fortynnet i vann/etylacetat. Det organiske sjikt ble deretter isolert, vasket med saltvann og tørket over magnesiumsulfat. Det organiske sjikt ble deretter filtrert og inndampet under vakuum. Det dannede råprodukt ble kromatografert på kiselgel under eluering med 5% metanol i metylenklorid for å gi rent produkt i form av et gult skum (2,77 g; 70%).
Amidet som ble dannet i trinn A (1,54 g; 4,3 mmol), ble løst opp i toluen (20 ml). Vi satte deretter N,N-dimetylformamiddimetylacetal (1,53 g; 12,9 mmol) til, oppvarmet den dannede oppløsning i 10 minutter og lot den deretter avkjøles til romtemperatur. Reaksjonsblandingen ble deretter inndampet under vakuum, og residuet ble kromatografert på kiselgel under eluering med 2-5% metanol i metylenklorid. Det isolerte materiale ble deretter løst opp i varmt etylacetat. Oppløsningen fikk avkjøles, hvilket førte til en krystallisasjon av rent produkt i form av et gult fast stoff (600 mg; 40%). Ytterligere materiale (ca. 800 mg) var tilgjengelig fra modervæsken.
Bromidet fra trinn B (369 mg; 1 mmol) ble løst opp i THF (10 ml). Vi satte deretter diisobutylaluminiumhydrid (1,0 M oppløsning, 4 mmol) til, omrørte reaksjonsblandingen ved romtemperatur i 10 minutter og stanset deretter reaksjonen med metanol (l ml). En mettet oppløsning av Rochelle-salter ble deretter satt til, og blandingen ble ekstrahert med etylacetat. Det organiske sjikt ble isolert, tørket over magnesiumsulfat og inndampet, og residuet ble kromatografert på kiselgel under eluering med 1-3% metanol i metylenklorid for å gi et sterkt orangefarget fast stoff (85 mg;23% utbytte).
Bromidet som be dannet i trinn C (35,2 mg; 0,1 mmol), ble løst opp i xylen (12 ml). Til denne oppløsning satte vi tiofenol (0,19 mmol) etterfulgt av tributyltinnmetoksid
(0,19 mmol). Den dannede oppløsning ble oppvarmet under tilbakeløp i 10 minutter, etterfulgt av tilsetningen av palladiumtetrakis(trifenylfosfin) (0,020 mmol). Reaksjonsblandingen ble oppvarmet og overvåket for forsvinningen av bromidutgangetoffet. Reaksjonsblandingen ble deretter av-kjølt til romtemperatur og ført gjennom en plugg av kiselgel. Pluggen ble eluert i utgangspunktet med metylenklorid for å fjerne overflødig tinreagens, og deretter med 5% metanol i etylacetat for å eluere p38-inhibitoren. Filtratet ble inndampet og deretter gjenkromatografert på kiselgel ved bruk av 5% metanol i etylacetat som elueringsmiddel for å gi ren forbindelse 110 (20 mg; 52%).
EKSEMPEL 9
Syntese av p38- inhibitorforbindelse 202
Utgangsnitrilet (2,32 g; 12 mmol) ble løst opp i DMF (10 ml) ved romtemperatur. Natriumhydrid (12 mmol) ble deretter satt til, hvilket gav en sterkt gulfarget oppløsning. Etter 15 minutter ble en oppløsning av 2,6-dibrompyridin (2,36 g; 10 mmol) i DMF (5 ml) satt til, etterfulgt av palladium-tetrakis (trifenylf osf in) (1,0 mmol). Oppløsningen ble deretter oppvarmet under tilbakeløp i 3 timer. Reaksjonsblandingen ble deretter avkjølt til romtemperatur og fortynnet med etylacetat. Det organiske sjikt ble isolert, vasket med vann og saltvann, tørket over magnesiumsulfat, filtrert og inndampet under vakuum til en rå olje. Plashkolonnekromato-grafi under eluering med 10% etylacetat i heksan gav produktet (1,45 g; 42%) i form av et hvitt fast stoff.
Bromforbindelsen som ble dannet i trinn A (1,77 g; 5,2 mmol), ble løst opp i toluen (20 ml), og den dannede opp-løsning ble avgasset. Under en nitrogenatmosfære ble en oppløsning av fenylboronsyre (950 mg; 7,8 mmol) i etanol (4 ml) og en oppløsning av natriumkarbonat (1,73 g; 14 mmol) i vann (4 ml) satt til. Reaksjonsblandingen ble oppvarmet under tilbakeløp i én time og ble deretter avkjølt til romtemperatur. Reaksjonsblandingen ble deretter fortynnet med etylacetat og vasket med vann og saltvann. Det organiske sjikt ble deretter tørket med magnesiumsulfat, filtrert og inndampet under vakuum. Residuet ble renset på kiselgel under eluering med 30% etylacetat i heksan for å gi produktet i form av et hvitt fast stoff (1,56 g; 88%).
Nitrilet fra trinn B (700 mg; 2,07 mmol) ble løst opp i konsentrert svovelsyre (10 ml) og oppvarmet til 80°C i 1 time. Reaksjonsblandingen ble avkjølt til romtemperatur, og pH-verdien ble justert til 8 ved bruk av 6N natriumhydrok-sid. Blandingen ble deretter ekstrahert med etylacetat. Det organiske sjikt ble isolert, tørket med magnesiumsulfat og inndampet under vakuum for å gi forbindelse 202 i form av et gult skum (618 mg; 84%).
EKSEMPEL 10
Syntese av forbindelse 410
I en flammetørket 100 ml rundbunnet kolbe ble 2,28 g (93,8 mmol) magnesiumspon satt til 50 ml vannfritt tetrahydrofuran. Én jodkrystall ble satt til, hvilket gav en lysebrun farge. Til oppløsningen satte man 1,5 ml 10,0 ml (79,1 mmol) prøve av 2-brom-5-fluortoluen. Oppløsningen ble oppvarmet under tilbakeløp. Den brune farge bleknet, og tilba-keløpet ble opprettholdt når den eksterne varmekilde ble fjernet, hvilket tydet på en Grignard-dannelse. Når tilba-keløpet gav seg, satte man til en ytterligere porsjon av1,0-1,5 ml bromid, hvilket førte til et kraftig tilbakeløp. Prosessen ble gjentatt inntil alt bromidet var blitt til-satt. Den olivengrønne oppløsning ble eksternt oppvarmet til tilbakeløp i én time for å sikre at reaksjonen var fullført. Oppløsningen ble avkjølt i et isbad og ved hjelp av en sprøyte satt til en oppløsning av 9,3 ml {81,9 mmol) trimetylborat i 100 ml tetrahydrofuran ved -78°C. Etter at Grignard-blandingen var blitt satt til, ble kolben fjernet fra kjølebadet, og oppløsningen ble omrørt ved romtemperatur over natten. Den gråhvite oppslemming ble helt i 300 ml H20, og de flyktige stoffer ble inndampet under vakuum. HC1 (400 ml av en 2N oppløsning) ble satt til, og den melke-hvite blanding ble omørt i én time ved romtemperatur. Et hvitt fast stoff feltes. Blandingen ble ekstrahert med dietyleter, og det organiske ekstrakt ble tørket (MgS04) og inndampet under vakuum for å gi 11,44 g (94%) av borsyren i form av et hvitt fast stoff.
I en 100 ml rundbunnet kolbe ble 7,92 g (33,4 mmol) 2,6-dibrompyridin løst opp i 50 ml vannfritt toluen, hvorved det dannedes en klar, fargeløs oppløsning. 4-Fluor-2-metyl-benzenboronsyre (5,09 g; 33,1 mmol) som ble dannet i trinn A, ble satt til, hvorved det dannedes en hvit suspensjon. Thalliumkarbonat (17,45 g; 37,2 mmol) ble satt til, etterfulgt av en katalytisk mengde (150 mg) Pd{PPh3)4. Blandingen ble oppvarmet under tilbakeløp over natten, avkjølt og filtrert over en pute av kiselgel. Kiselgelen ble vasket med CH2C12, og filtratet ble inndampet for å gi et hvitt fast stoff. Det faste stoff ble løst opp i en minimal mengde 50% CH2C12/heksan og kromatograf ert på en kort kolonne av kiselgel ved bruk av 30% CH2Cl2/heksan for å gi 6,55 g (74%) 2-brom-6-(4-fluor-2-metylfenyl)pyridin i form av et hvitt fast stoff.
I en 50 ml rundbunnet kolbe ble 550 mg (2,07 mmol) 2-brom-6-(4-fluor-2-metylfenyl)pyridin som ble dannet i trinn B, løst opp i 30 ml vannfritt tetrahydrofuran, hvorved det dannedes en klar, fargeløs oppløsning. 2,6-difluoranilin (2,14 ml; 2,14 mmol) ble satt til, etterfulgt av 112 mg (2,79 mmol) av en 60% NaH-suspensjon i mineralolje. Gassdannelse ble observert sammen med en mild eksoterm. Oppløs-ningen ble oppvarmet under tilbakeløp over natten og deretter avkjølt. Reaksjonsblandingen ble helt i 10% NH4C1 og ekstrahert med CH2C12. Det organiske ekstrakt ble tørket (MgS04) og inndampet under vakuum for å gi en brun olje, som var en blanding av produktet og utgangsstoffet. Materialet ble kromatografert på en kort kolonne av kiselgel ved bruk av 50% CH2Cl2/heksan for å gi 262 mg (40%) 2-{2,6-difluorfenyl)-6-(4-fluor-2-metylfenyl)pyridin i form av en fargeløs olje.
I en 100 ml rundbunnet kolbe ble 262 mg (834 mmol) 2-(2,6-difluorfenyl)-6-(4-fluor-2-metylfenyl)pyridin som ble dannet i trinn C, løst opp i 30 ml vannfritt CHC13, hvorved det dannedes en klar, fargeløs oppløsning. Klorsulfonyliso-cyanat (1,0 ml; 11,5 mmol) ble satt til, og den lysegule oppløsning ble omrørt ved romtemperatur over natten. Vann (ca. 30 ml) ble satt til, og forårsaket en mild eksoterm og en kraftig gassdannelse. Etter omrøring over natten ble det organiske sjikt separert, tørket (MgS04) og inndampet under vakuum for å gi en brun olje, som var en blanding av produktet og utgangsstoffet. Materialet ble kromatografert på en kort kiselgelkolonne ved bruk av 10% EtOAc/CH2Cl2. Det
isolerte utgangsstoff ble igjen behandlet ved de samme reaksjonsbetingelser, og renset på samme måte for å gi tilsammen 205 mg (69%) urea i form av et hvitt fast stoff.
EKSEMPEL 11
Syntese av forbindelse 138
i Forbindelse 103 (106 mg; 0,25 mmol) ble løst opp i THF (0,5
ml), og til denne oppløsning satte man trietylamin (35 ul;
0,25 mmol) etterfulgt av et overskudd formaldehyd (37% vandig oppløsning; 45 mg). Reaksjonsblandingen ble omrørt over natten ved romtemperatur. Reaksjonsblandingen ble deretter rotasjonsinndampet under redusert trykk, og residuet ble løst opp i metylenklorid og påført på en flashkiselgel-kolonne. Kolonnen ble eluert med 2% metanol i metylenklorid for å gi et rent produkt (78 mg; 70% utbytte).
EKSEMPEL 12
Syntese av prodroqer av forbindelse 103
Forbindelse 138 (1 ekvivalent) løses opp i metylenklorid, og til denne oppløsning settes trietylamin (1 ekvivalent) etterfulgt av dibenzylfosfonylklorid (1 ekvivalent). Opp-løsningen røres om ved romtemperatur og overvåkes ved TLC for å følge med forbruket av utgangsstoff. Metylenklorid-sjiktet fortynnes deretter med etylacetat og vaskes med IN HC1, mettet natriumbikarbonat og mettet NaCl. Det organiske sjikt tørkes deretter og rotasjonsfordampes, og råproduktet renses deretter på kiselgel. Det rene produkt løses deretter opp i metanol, og dibenzylesterne avbeskyttes med 10% palladium på trekull under en hydrogenatmosfære. Når over-våkingen viser at reaksjonen er fullført, filtreres kataly-satoren over celitt, og filtratet rotasjonsinndampes for å gi fosfatproduktet.
Forbindelse 103 (210 mg; 1,05 mmol) ble løst opp i THF (2 ml) og avkjølt til -50°Cunder en nitrogenatmosfære. Til denne oppløsning satte man litiumheksametyldisilazan (1,1 mmol) etterfulgt av kloracetylklorid (1,13 mmol). Reak-sj onsblandingen ble fjernet fra kjølebadet og fikk oppvarmes til romtemperatur, hvoretter reaksjonsblandingen ble fortynnet med etylacetat og inaktivert med vann. Det organiske sjikt ble vasket med saltvann, tørket og rotasjonsinndampet til tørrhet. Råproduktet ble flashkromatografert på kiselgel ved bruk av 25% etylacetat i heksan som elueringsmiddel for å gi 172 mg (70%) av det rene ønskede produkt, som ble brukt som det var i de følgende reaksjoner.
Kloracetylforbindelsen løses opp i metylenklorid og behandles med et overskudd dimetylamin. Reaksjonen overvåkes ved
TLC, og når den er fullført, fjernes alle flyktige stoffer for å gi det ønskede produkt.
EKSEMPEL 13
Syntese av forbindelsene 34 og 117
Nitrilet fra eksempel 5, trinn A (300 mg; 1,0 mmol) ble løst opp i etanol (10 ml), og til denne oppløsning satte man tiourea (80,3 mg; 1,05 mmol). Reaksjonsblandingen ble oppvarmet under tilbakeløp i 4 timer, og ved dette tids-punkt viste TLC at alt utgangsstoff var blitt oppbrukt. Reaksjonsblandingen ble avkjølt, alle flyktige stoffer ble fjernet under redusert trykk, og residuet ble løst opp i aceton (10 ml).
Til denne oppløsning satte man deretter 2,5-difluornitro-benzen (110 ul; 1,01 mmol) etterfulgt av kaliumkarbonat (200 mg; 1,45 mmol) og vann (400 ul). Reaksjonsblandingen ble omrørt ved romtemperatur over natten. Reaksjonsblandingen ble deretter fortynnet med metylenklorid (25 ml) og filtrert gjennom en bomullsplugg. Alle flyktige stoffer ble fjernet under redusert trykk, og residuet ble flashkromatografert på kiselgel under eluering med en gradient av fra 10 til 25% etylacetat i heksan for å gi det ønskede produkt (142 mg; 33%).
Nitrilproduktet fra trinn A {142 mg; 0,33 mmol) ble blandet med konsentrert svovelsyre {2 ml), oppvarmet under tilbake-løp i 1 time og fikk deretter avkjøles til romtemperatur. Blandingen ble deretter fortynnet med etylacetat og forsiktig nøytralisert med mettet kaliumkarbonatoppløsning (vandig) . Sjiktene ble separert, og det organiske sjikt ble vasket med vann og saltvann og tørket over magnesiumsulfat. Blandingen ble filtrert og inndampet til tørrhet. Residuet ble brukt i det følgende trinn uten ytterligere rensing (127 mg; 85% utbytte).
Amidet fra trinn B (127 mg; 0,28 mmol) ble løst opp i THF (3 ml), og til denne oppløsning satte man dimetylformamiddimetylacetal (110 ul; 0,83 mmol). Reaksjonsblandingen ble oppvarmet under tilbakeløp i 5 minutter og deretter avkjølt til romtemperatur. Alle flyktige stoffer ble fjernet under vakuum, og residuet ble flashkromatografert på kiselgel under eluering med 2,5% metanol i metylenklorid for å gi den rene ønskede forbindelse 34 (118 mg; 92%).
En oppløsning av nikkeldikloridheksahydrat (103 mg; 0,44 mol) i en blanding av benzen/metanol (0,84 ml/0,84 ml) ble satt til en oppløsning av forbindelse 34 (100,8 mg; 0,22 mmol) i benzen (3,4 ml), og denne oppløsning ble avkjølt til 0°C. Til denne oppløsning satte man deretter natrium-borhydrid (49 mg; 1,3 mmol). Reaksjonsblandingen ble omrørt mens man lot den oppvarmes til romtemperatur. Reaksjonsblandingen ble inndampet under vakuum, og residuet ble flashkromatografert under eluering med 2% metanol i metylenklorid for å gi det rene ønskede produkt, nemlig forbin-dese 117 (21 mg; 25% utbytte).
EKSEMPEL 14
Syntese av forbindelsene 53 og 142
Produktet som vises i reaksjonen ovenfor, ble fremstilt ved bruk av fremgangsmåten i eksempel 1, trinn B, ved bruk av klorpyridazin (359 mg; 1,21 mmol) og 2,4-difluortiofenol (176 mg; 1,21 mmol). Produktet ble erholdt etter flash-kiselgelkromatografi (451 mg; 92%).
Den ovenfor viste omsetning ble utført slik det ble beskrevet i eksempel 1, trinn C, ved bruk av 451 mg utgangsstoff og 5 ml konsentrert svovelsyre, for å gi det viste produkt (425 mg; 90%).
Den ovenfor viste omsetning ble utført slik det ble beskrevet i eksempel 1, trinn D, ved bruk av utgangsamid (410 mg; 0,96 mmol) og dimetylformamiddimetylacetal (3 mmol). Reak-sj onsblandingen ble oppvarmet ved 50°C i 30 minutter og opparbeidet slik det ble beskrevet tidligere. Forbindelse 53 ble erholdt (313 mg; 75%) .
Forbindelse 34 (213; 0,49 mmol) ble løst opp i THF (10 ml) og avkjølt til 0°C, og til denne oppløsning ble det satt boran i THF (IM; 0,6 mmol). Reaksjonsblandingen ble omrørt i 30 minutter, inaktivert med vann og fortynnet med etylacetat. Det organiske sjikt ble vasket med vann og saltvann, tørket og rotasjonsfordampet. Residuet ble renset på kiselgel under eluering med en gradient av fra 1 til 5% metanol i metylenklorid for å gi forbindelse 142 (125 mg; 57%) .
EKSEMPEL 15
Kloning av p38- kinase i insektceller
To spleisevarianter av humant p38-kinase, nemlig CSBP1 og CSBP2, er blitt identifisert. Spesifikke oligonukleotid-primere ble brukt for å amplifisere det kodende parti av CSBP2-cDNA ved bruk av en HeLa-cellesamling (Stratagene) som sjablone. Polymerasekjedereaksjonsproduktet ble klonet inn i pET-15b-vektoren (Novagen). Baculovirus-overførings-vektoren, dvs. pVL-(His)6-p3 8, ble konstruert ved å sub-klone et Xbal-BamHI-fragment av pETlSb-(His)6-p38 inn i de komplementære stillinger i plasmid pVL1392 (Pharmingen).
Plasmidet pVL-(His)6-p38 styrte syntesen av et rekombinant protein som bestod av et 23 residuer langt peptid (MGSSHHHHHHSSGLVPRGSHMLE, hvor LVPRGS representerer en trombinspaltningsstilling) som var smeltet sammen i rammen med N-terminus av p38, slik det ble bekreftet ifølge DNA- sekvensiering og ved N-terminal sekvensiering av det ut-trykte protein. Monosjiktkultur av Spodoptera £rugiperda (Sf9)-insektceller {ATCC) ble holdt i TNM-FH-medium (Gibco BRL) supplementert med 10% fatalt bovint serum i en T-kolbe ved 27°C.Sf9-celler i log-fase ble ko-transfisert med lineært viralt DNA fra Autographa californica-nukleært polyhedrosevirus (Pharmingen) og overføringsvektor pVL-(His)6-p38 ved bruk av Lipofectin (Invitrogen). De enkelte rekombinante baculoviruskloner ble renset ved plakkassay ved bruk av 1% lavsmeltende agarose.
EKSEMPEL 16
Ekspresjon og rensing av rekombinant p38- kinase
Trichoplusia ni (Tn-368) "High-Five"-celler (Invitrogen) ble dyrket i suspensjon i Excel-405 proteinfritt medium (JRH Bioscience) i en rystekolbe ved 27 °C. Celler i tetthe-ten 1,5 x io<6>celler/ml ble infisert med det ovenfor beskrevne rekombinante baculovirus med en infeksjonsmulti-plisitet på 5. Ekspresjonsnivået av rekombinant p38 ble overvåket ved immunoblotting ved bruk av et kanin-anti-p38-antistoff (Santa Cruz Biotechnology). Cellemassen ble samlet 72 timer etter infeksjonen, når ekspresjonsnivået av p38 nådde sitt maksimum.
Frossen cellepasta fra celler som uttrykker den (His)6-tag-gede p38, ble tint i 5 volumdeler Buffer A (50 mM NaH2P04pH 8,0; 200 mM NaCl; 2 mM P-merkaptoetanol, 10% glycerol og 0,2 mM PMSF). Etter mekanisk sprengning av cellene i en mikrofluidiserer, ble lysatet sentrifugert ved 30.000 x g i 30 minutter. Supernatanten ble inkubert batchvis i 3-5 timer ved 4°C med "Talon" (Clontech) metallaffinitets-harpiks i forholdet 1 ml harpiks pr. 2-4 mg forventet p38. Harpiksen ble felt ved sentrifugering ved 500 x g i 5 minutter og forsiktig vasket batchvis med Buffer A.Harpik-sen ble oppslemmet og helt i en kolonne (ca. 2,6 x 5,0 cm) og vasket med Buffer A + 5 mM imidazol.
(His)6-p38 ble eluert med Buffer A + 100 mM imidazol og
deretter dialysert over natten ved 4°C mot 2 liter Buffer B (50 mM HEPES, pH 7,5; 25 mM |5-glycerof osf at; 5% glycerol; 2 mM DTT) . His6-halen ble fjernet ved tilsetning av 1,5 enheter trombin (Calbiochem) pr. mg p38 og inkubering ved 20°C i 2-3 timer. Trombinet ble inaktivert ved tilsetning av 0,2 mM PMSP, og deretter ble hele prøven fylt på en 2 ml benz-amidinagarose-kolonne (American International Chemical).
Gjennomstrømningsfraksjonen ble direkte ladet på en 2,6 x5,0 cm Q-sepharose-kolonne (Pharmacia) som på forhånd var blitt ekvilibrert i Buffer B + 0,2 mM PMSF. p38 ble eluert med en 20 kolonnevolumers lineær gradient til 0,6M NaCl iBuffer B. De eluerte proteintopper ble samlet og dialysert over natten ved 4°C mot Buffer C (50 mM HEPES pH 7,5; 5% glycerol; 50 mM NaCl; 2 mM DTT; 0,2 mM PMSF).
Det dialyserte protein ble konsentrert i en Centriprep (Amicon) til 3-4 ml, og påført på en 2,6 x 100 cm Sephacryl S-100HR-kolonne (Pharmacia). Proteinet ble eluert med strømningshastigheten 35 ml/time. Hovedtoppen ble samlet, innstilt til 20 mM DTT, inndampet til 10-80 mg/ml og fros-set i alikvoter ved -70°C eller brukt umiddelbart.
EKSEMPEL 17
Aktivering av p38
p38 ble aktivert ved å kombinere 0,5 mg/ml p38 med 0,005 mg/ml DD-dobbeltmutant MKK6 i Buffer B + 10 mM MgCl2, 2 mM ATP, 0,2 mM Na2V04i 30 minutter ved 20°C. Akt i ve ring sbl ån-dingen ble deretter plassert på en 1,0 x 10 cm MonoQ-kolonne (Pharmacia) og eluert med en lineær 20 kolonnevolumers gradient til 1,0 M NaCl i Buffer B. Det aktiverte p38 eluerte etter ADP'et og ATP'et. Toppen med det aktiverte p38 ble samlet og dialysert mot buffer B + 0,2 mM Na2V04for å fjerne NaCl'et. Det dialyserte protein ble justert til 1,1M kaliumfosfat ved tilsetning av en 4,OM stamoppløs-
ning, og plassert på en 1,0 x 10 cm HIC-kolonne (RaininHydropore) som på forhånd var blitt ekvilibrert i Buffer D {10% glycerol; 20 mM P-glycerofosfat; 2,0 mM DTT) + 1,1 MK2HP04. Proteinet ble eluert med en 20 kolonnevolumers lineær gradient til Buffer D + 50 mM K2HP04. Det dobbelt fosforylerte p38 ble eluert som hovedtoppen, og ble samlet for dialyse mot Buffer B + 0,2 mM Na2V04. Det aktiverte p38 ble lagret ved -70°C.
EKSEMPEL 18
p38- inhiberinqsassayer
A. Inhibering av fosforylasjonen av BGF- receptorpeptid
Dette assay ble utført i nærvær av 10 mM MgCl2, 25 mM P-glycerofosfat, 10% glycerol og 100 mM HEPES-buffer ved pH 7,6. For en typisk IC50-bestemmelse ble en stamoppløsning fremstilt som inneholdt alle de ovennevnte komponenter og aktivert p38 (5 nM). Stamoppløsningen ble fylt i alikvoter på små flasker. Et fast volum DMSO eller inhibitor i DMSO (endelig konsentrasjon av DMSO i reaksjonsblandingen var 5%) ble innført i hver flaske, blandet og inkubert i 15 minutter ved romtemperatur. EGF-receptorpeptid, KRELVEPLTPSGEAPNQALLR, en fosforylakseptor i p38-katalysert kinasereaksjon (1), ble satt til hver flaske til den endelige konsentrasjon 200 uM. Kinasereaksjonen ble initiert med ATP (100 uM), og flaskene ble inkubert ved 30°C. Etter 3 0 minutter ble reaksjonene stanset med et likt volum av 10% trifluoreddiksyre (TFA).
Det fosforylerte peptid ble kvantifisert ved HPLC-analyse. Separasjon av fosforylert peptid fra det ufosforylerte
peptid ble oppnådd på en revers f asekol onne (Deltapak, 5 (im, Cl8 10OD, del nr. 011795) med en binær gradient av vann og acetonitril, hver innholdende 0,1% TFA. IC50 (konsentrasjonen av inhibitor som gav 50% inhibering) ble bestemt ved å
plotte % aktivitet som var igjen, mot inhibitorkonsentra-sj onen.
B. Inhibering av ATPase- aktivitet
Dette assay ble utført i nærvær av 10 mM MgCl2, 25 mM p-glycerofosfat, 10% glycerol og 100 mM HEPES-buffer ved pH 7,6. For en typisk bestemmelse av Ki-verdien ble Km-verdien for ATP i ATPase-aktiviteten av reaksjonen med aktivert p38 bestemt i fravær av inhibitor og i nærvær av to konsentrasjoner av inhibitor. En stamoppløsning ble fremstilt, som inneholdt alle de ovennevnte komponenter og aktivert p38 (60 nM). Stamoppløsningen ble fylt i alikvoter på flasker. Et fast volum DMSO eller inhibitor i DMSO (endelig konsentrasjon av DMSO i reaksjonen var 2,5%) ble innført i hver flaske, blandet og inkubert i 15 minutter ved romtemperatur. Reaksjonen ble initiert ved å sette til forskjellige konsentrasjoner av ATP, og deretter inkubert ved 30°C. Etter 30 minutter ble reaksjonene stanset med 50 ul EDTA (0,1 M; endelig konsentrasjon); pH 8,0. Produktet av p38-ATPase-aktiviteten, ADP, ble kvantifisert ved HPLC-analyse.
Separasjon av ADP fra ATP ble oppnådd på en reversfase-kolonne (Supelcosil, LC-18, 3 um, del nr. 5-8985) ved bruk av en binær løsemiddelgradient med den følgende sammensetning: Løsemiddel A: 0,1 M fosfatbuffer som inneholdt 8 mM tetrabutylammoniumhydrogensulfat (Sigma Chemical Co., kata-log-nr. T-7158), Løsemiddel B: Løsemiddel A med 30% metanol .
Ki-verdien ble bestemt fra hastighetsdataen som en funksjon av inhibitor- og ATP-konsentrasjonene. Resultatene for flere av inhibitorene ifølge oppfinelsen er angitt i den følgende tabell 6:
Andre p38-inhibitorer ifølge oppfinnelsen vil også inhibere ATPase-aktiviteten av p38.
C. Inhibering av IL- 1-, TNF-, IL- 6- og IL- 8- produksjonen
i LPS- stimulerte PBMCer
Inhibitorer ble serielt fortynnet i DMSO fra en 20 mM stamoppløsning. Minst 6 serielle fortynninger ble fremstilt. Deretter ble 4x inhibitor-stamoppløsninger fremstilt ved å sette 4 ul av en inhibitorfortynning til 1 ml RMPIl640-medium/10% føtalt bovint serum. 4x inhibitor-stamoppløsningene inneholdt inhibitor i konsentrasjonene 80 um, 32 UM, 12,8 UM, 5,12 UM, 2,048 UM, 0,819 UM, 0,328 UM, 0,131 uM, 0,052 uM, 0,021 uM osv. 4x inhibitor-stamoppløs-ningene ble forhåndsoppvarmet til 37°C inntil bruk.
Ferske buffy-celler fra humant blod ble separert fra andre celler i en Vacutainer CPTfra Becton & Dickinson (som inneholdt 4 ml blod og tilstrekkelig DPBS utenMg<2+>/Ca<2+>for å fylle røret) ved sentrifugering ved 1500 x g i 15 minutter. Perifere blod-mononukleære celler (PBMCer) , plassert på toppen av gradienten i Vacutaineren, ble fjernet og vasket to ganger med RMPI1640-medium/10% føtalt bovint serum. PBMCer ble samlet ved sentr i fuger ing ved 500 x g i 10 minutter. Det samlede celleantall ble bestemt ved bruk av etNeubauer celle-kammer, og cellene ble justert til konsentrasjonen 4,8 x lo<6>celler/ml i cellekulturmedium (RPMI1640 supplementert med 10% føtal bovint serum). Alternativt ble fullblod som inneholdt et antikoagulerings-middel, brukt direkte i assayet.
Vi plasserte 100 ul cellesuspensjon eller fullblod i hver brønn av en 96-brønners cellekulturplate. Deretter satte vi 50 ul av 4x inhibitor-stamoppløsningen til cellene. Til slutt satte vi til 50 ul av en lipopolysakkarid (LPS)-arbeidsstamoppløsning (16 ng/ml i cellekulturmedium) for å gi den endelige konsentrasjon 4 ng/ml LPS i assayet. Det samlede assayvolum av vehikkel-kontrollen ble også justert til 200 (il ved å sette til 50 ul cellekulturmedium. PBMC-cellene eller fullblodet ble deretter inkubert over natten (i 12-15 timer) ved 37°C/5% C02i en befuktet atmosfære.
Den følgende dag ble cellene blandet på et rysteapparat i 3-5 minutter før sentrifugering ved 500 x g i 5 minutter. Cellekultursupernatanter ble samlet og analysert ved ELISA for å bestemme nivået av IL-lb (R & D Systems, Quantikine kits, nr. DBL50), TNF-a (BioSource, nr. KHC3012), IL-6 (Endogen, nr. EH2-IL6) og IL-8 (Endogen, nr. EH2-IL8) i henhold til produsentens anvisninger. ELISA-dataen ble brukt for å generere doseresponskurver, utfra hvilke IC50-verdiene ble avledet.
Resultatene for kinaseassayet ("kinase"; delavsnitt A ovenfor), IL-1 og TNF i LPS-stimulerte PBMCer {"celle") og IL-1, TNF og IL-6 i fullblod ("WB") for forskjellige p38-inhibitorer ifølge foreliggende oppfinnelse angis i den følgende tabell 7:
For kinase IC50-verdier betyr "+++" >0,1 uM; "++" betyr mellom 0,1 og 1,0 uM; og "+" betyr <1,0 uM. For verdiene for cellulært IL-1 og TNF betyr "+++" >0,1 uM; "++" betyr mellom 0,1 og 0,5 uM og " + " betyr <0,5 uM. For alle hel-blods ("WB")-assayverdier representerer "+++" >0,25 uM; "++" betyr mellom 0,25 og 0,5 uM, og " + " betyr <0,5 uM. I alle assayer som angis i tabellen ovenfor, betyr "N.D." at verdien ikke ble bestemt.
Andre p38-inhibitorer ifølge foreliggende oppfinnelse vil også inhibere fosforylasjonen av EGF-receptorpeptid og produksjonen av IL-1, TNF og IL-6, samt IL-8 i LPS-stimulerte PBMCer eller i fullblod.
D. Inhibering av IL- 6- og IL- 8- produksjonen i IL- 1- stimulerte PBMCer
Dette assay ble utført på PBMCer på nøyaktig samme måte som beskrevet ovenfor, unntatt at 50 ul av en IL-lb-arbeidsstamoppløsning (2 ng/ml i cellekulturmedium) ble satt til assayet istedenfor (LPS-) arbeidsstamoppløsningen.
Cellekultursupernatanter ble samlet på samme måte som beskrevet ovenfor, og analysert ved ELISA for å bestemme mengden av IL-6 (Endogen, nr. EH2-IL6) og IL-8 (Endogen, nr. EH2-IL8) i henhold til produsentens anvisninger. ELISA-dataen ble brukt for å generere doseresponskurver, utfra hvilke IC50-verdiene ble avledet.
Resultatene for p38-inhibitorforbindelse 6 vises i den føl-gende tabell 8:
E. Inhibering av LPS- indusert prostaglandin endoperoksid
syntase- 2 ( PGHS- 2 eller COX- 2)- induksjon i PBMCer
Humane perifere mononukleære celler (PBMCer) ble isolert fra buffy coats fra ferskt humant blod ved sentrifugering i en Vacutainer CPT (Becton & Dickinson). Vi plasserte 15 x IO<6>celler i en 6-brønners vevkulturskål som inneholdt RPMI 1640 supplementert med 10% føtalt bovint serum, 50 U/ml penicillin, 50 ug/ml streptomycin og 2 mM L-glutamin. Forbindelse 6 (ovenfor) ble satt til i de endelige konsentrasjoner 0,2, 2,0 og 20 uM i DMSO. Deretter satte vi til LPS til den endelige konsentrasjon 4 ng/ml for å indusere enzymekspresjon. Det endelige kulturvolum var 10 ml/brønn.
Etter inkubering over natten ved 37°C, 5% C02, ble cellene samlet ved skraping og påfølgende sentrifugering, deretter ble supernatanten fjernet og cellene ble vasket to ganger i iskald DPBS (Dulbeccos fosfatbufret saltvann, BioWhitta-ker). Cellene ble spaltet på is i 10 minutter i 50 ul kald lysisbuffer (20 mM Tris-HCl, pH 7,2; 150 mM NaCl;1% Tri-ton-X-100; 1% deoksykolinsyre; 0,1% SDS; 1 mM EDTA; 2% aprotinin (Sigma); 10 ug/ml pepstatin, 10 ug/ml leupeptin, 2 mM PMSF, 1 mM benzamidin, 1 mM DTT) som inneholdt 1 ul Benzonase (DNAse fra Merck). Proteinkonsentrasjonen av hver prøve ble bestemt ved bruk av BCA-assayet (Pierce) og bovint serumalbumin som standard. Deretter ble proteinkonsentrasjonen av hver prøve justert til 1 mg/ml med kald lysisbuffer. Til 100 ul lysat satte man et likt volum 2xSDS PAGE-ladebuffer, og prøven ble kokt i 5 minutter. Proteiner (30 mg/bane) ble størrelsesfraksjonert på 4-20% SDS PAGE-gradientgeler (Novex) og deretter overført til en nitro-cellulosemembran ved elektroforetiske midler i 2 timer ved 100 mA i Towbin-overføringsbuffer (25 mM Tris, 192 mM glycin) som inneholdt 20% metanol. Membranen ble forhånds-behandlet i 1 time ved romtemperatur med blokkerende buffer (5% fettfri tørrmelk i DPBS supplementert med 0,1% Tween-20) og vasket tre ganger i DPBS/0,1% Tween-20. Membranen ble inkubert over natten ved 4°C med en 1:250-fortynning av monoklonalt anti-COX-2-antistoff (Transduction Laborato-ries) i blokkeringsbuffer. Etter 3 vaskinger i DPBS/0,1% Tween-20, ble membranen inkubert med en 1:1000-fortynning av pepperrotperoksidase-konjugert geite-antiserum mot muse-Ig (Amersham) i blokkeringsbuffer i 1 time ved romtemperatur. Deretter ble membranen vasket igjen 3 ganger i DPBS/0,1% Tween-2 0, og et ECL-påvisningssystem ("Super-Signal" CL-HRP substratsystem,Pierce) ble brukt for å bestemme ekspresjonsnivået av COX-2.
Resultatene av det ovennevnte assay tyder på at forbindelse 6 inhiberer LPS-indusert PGHS-2-ekspresjon i PBMCer.

Claims (33)

1. Forbindelse med formel:
eller et farmasøytisk akseptabelt salt derav, hvori: hver av d og Q2uavhengig velges fra et karbocyklisk eller heterocyklisk ringsystem valgt fra fenyl, naftyl, pyridyl, tienyl, benzofuranyl, benzotienyl, indolyl, imidazolyl eller furanyl; hvor: Qier substituert med l til 4 substituenter, som hver uavhengig velges fra halo; d-C3-alkyl som valgfritt kan være substituert med NR'2, OR<1>, -C02R' eller CONR'2; 0-(Ci-C3)-alkyl som valgfritt kan være substituert med NR'2; OR', C02R' eller CONR'2; NR'2; CF3 ; N02 ; C02R' ; CONR' ; C1-C3-alkylendioksy; CN; N=CH-N{R')2; morfolino-Cx-C3-alkanoyl-amino; halo-Cj-Cs-alkanoylamino; Ci-C3-alkanoylamino; eller OH; Q2er valgfritt substituert med opptil 4 substituenter, som hver uavhengig velges fra halo; Ci-C3rettkjedet eller forgrenet alkyl som valgfritt kan være substituert med OCONR'2, NR'2, OR', C02R', NHR3, R3 eller CONR'2; 0-(Ci-C3) - alkyl eventuelt substituert med NR'2; OR' eller C02R'; NR'2; OCF3; CF3; N02; C02R'; CONHR'; SR'; CN; CONR'2; CH=N-OH; NHC(0)OR'; NH2C(0)NH2; NHC{=NH) {NH2) ; C(0)R' eller OH; hvor R' velges fra hydrogen, (Ci-C3)-alkyl valgfritt substituert med OH, NH2eller karboksy; eller fenyl; R<3>velges fra piperazinyl; pyrrolidinyl; imidazolyl; morfolinyl eller fenyl; X velges fra -S-, -C(0)- eller -CH(OH)-; hvor hver R uavhengig velges fra hydrogen, -R2, -N(R2)2 eller -OR<2>; R<2>velges fra hydrogen eller (C!-C3) alkyl; Y velges fra N eller C; A, når den foreligger, velges fra N eller CR'; n er 1; og Rx velges fra hydrogen, {Ci-C3) alkyl, OH eller 0-(Ci-C3)-alkyl.
2. Forbindelse med formel:
eller et farmasøytisk akseptabelt salt derav, hvor A, Qi, 0.2, R, R1 , X, Y og n er definert på samme måte som ble beskrevet for forbindelsene med formel Ia; og R<5>velges fra hydrogen eller -CR'20H.
3. Forbindelse med formel:
eller et farmasøytisk akseptabelt salt derav, hvor: A, Qi, Q2, R, R', X, Y og n har betydningene som ble angitt i krav 1.
4. Forbindelse ifølge et av kravene 1-3, hvor Qivelges fra fenyl eller pyridyl som inneholder 1-3 substituenter som hver uavhengig velges fra klor, fluor, brom, -CH3, -OCH3, -OH, -CF3, -0(CH2)2CH3, NH3, 3,4-metylendioksy, -N(CH3)2, -NH-C(0)CH2-morfolin eller -0-(CH2)2-N(CH3)2, og hvor minst én av substituentene er i orto-posisjon.
5. Forbindelse ifølge krav4, hvor Qiinnholder minst to substituenter, som begge er i orto-posisjon.
6. Forbindelse ifølge krav 4, hvor Qivelges fra:
7. Forbindelse ifølge ethvert av kravene 1 til 3, hvor QL velges fra 2-fluor-6-trifluorraetylfenyl, 2,6-difluorfenyl, 2,6-diklorfenyl, 2-klor-4-hydroksyfenyl, 2-klor-4-amino-fenyl, 2,6-diklor-4-aminofenyl, 2,6-diklor-3-aminofenyl, 2,6-dimetyl-4-hydroksyfenyl, 2-metoksy-3,5-diklor-4-pyridyl, 2-klor-4,5-metylendioksyfenyl eller 2-klor-4-(N-2-morfolinoacetamido)fenyl.
8. Forbindelse ifølge ethvert av kravene 1 til 3, hvor Q2velges fra fenyl eller pyridyl, og hvor Q2valgfrit inneholder opptil 3 substituenter, som hver uavhengig velges fra klor, fluor, brom, metyl, etyl, isopropyl, -OCH3, -OH, -NH2, -CF3, -OCF3, -SCH3, -OCH3, -C(0)OH, -C(0)0CH3, -CH2NH2, -N(CH3)2, -CH2-pyrrolidin og -CH2OH.
9. Forbindelse ifølge krav 8, hvor Q2velges fra:
usubstituert 2-pyridyl eller usubstituert fenyl.
10. Forbindelse ifølge ethvert av kravene 1 til 3, hvor Q2velges fra fenyl, 2-isopropylfenyl, 3,4-dimetylfenyl, 2-etylfenyl,3-fluorfenyl, 2-metylfenyl, 3-klor-4-fluorfenyl, 3-klorfenyl, 2-karbometoksylfenyl, 2-karboksyfenyl, 2-metyl-4-klorfenyl, 2-bromfenyl, 2-pyridyl, 2-metylenhydroksyfenyl, 4-fluorfenyl, 2-metyl-4-fluorfenyl, 2-klor-4-fluorfenyl, 2,4-difluorfenyl, 2-hydroksy-4-fluorfenyl eller 2-metylenhydroksy-4-fluorfenyl.
11. Forbindelse ifølge ethvert av kravene 1 til 3, hvor X velges fra -S- eller -C(O)-.
12. Forbindelse ifølge krav 11, hvor X betyr S.
13. Forbindelse ifølge ethvert av kravene 1 til 3, hvo A betyr N.
14. Forbindelse ifølge ethvert av kravene 1 til 3, hvor hver Y betyr C.
15. Forbindelse ifølge krav 14, hvor hver R forbundet med Y er uavhengig valgt fra hydrogen eller metyl.
16. Forbindelse ifølge krav l, hvor forbindelsen velges fra hvilken som helst av forbindelsene 2 til 3 eller 5 til 53 som er avbildet i tabell 1.
17. Forbindelse ifølge krav 2, hvor forbindelsen velges fra hvilken som helst av forbindelsene 101 til 145 som er avbildet i tabell 2.
18. Forbindelse ifølge krav 3, hvor forbindelsen er en forbindelse med formel le og er valgt fra hvilken som helst av forbindelsene 201 eller 203 til 209 som er avbildet i tabell 3.
19. Forbindelse ifølge krav 3, hvor forbindelsen er en forbindelse med formel lg og er valgt fra hvilken som helst av forbindelsene 202/301, 302 til 399 eller 1301 som er avbildet i tabell 4.
20. Forbindelse ifølge krav 3, hvor forbindelsen er en forbindelse med formel Ih og er valgt fra hvilken som helst av forbindelsene 401 til 412 som er avbildet i tabell 5.
21. Farmasøytisk sammensetning omfattende en mengde av en forbindelse ifølge ethvert av kravene 1 til 3 som virksomt inhiberer p38, og en farmasøytisk akseptabel bærer.
22. Anvendelse av en forbindelse ifølge krav 1 til 20 eller en sammensetning ifølge krav 21 ved fremstilling av et medikament som er egnet til behandling eller forebyggelse av inflammatoriske sykdommer, autoimmune sykdommer, destruktive benforstyrrelser, proliferative forstyrrelser, infeksjonssykdommer, neurodegenerative sykdommer, allergier, reperfusjon/iskemi ved slag, hjerteanfall, angiogene forstyrelser, organhypoksi, vaskulær hyperplasi, hjertehypertrofi, trombin-indusert blodplateaggregasjon eller tilstander forbundet med prostaglandin endoperoksidase syntase-2.
23. Anvendelse ifølge krav 22, hvor medikamentet skal brukes for å behandle eller forebygge en inflamatorisk sykdom valgt fra akutt pankreatitt, kronisk pankreatitt, asthma, allergier eller åndenødssyndrom hos voksne.
24. Anvendelse ifølge krav 22, hvor medikamnetet skal brukes for å behandle eller forebygge en autoimmun sykdom valgt fra glomerulonefritt, rheumatoid artritt, systemisk lupus erythematose, skleroderma, kronisk thyroiditt. Graves' sykdom, autoimmun gastritt, diabetes, autoimmun hemolytisk anemi, autoimmun neutropeni, trombocytopenia, atopisk dermatitt, kronisk aktiv hepatitt, myasthenia gra vis, multippel sklerose, inflammatorisk tarmsykdom, ulcerativ kolitt, Crohn's sykdom, psoriasis eller "graft-vs.-host-disease".
25. Anvendelse ifølge krav 22, hvor medikamentet skal brukes for å behandle eller forebygge en destruktiv benforstyrrelse valgt fra osteoartritt, osteoporose eller multippel myeloma-relatert benforstyrrelse.
26. Anvendelse ifølge krav 22, hvor medikamentet skal brukes for å behandle eller forebygge en proliferativ sykdom valgt fra akutt myelogen leukemi, kronisk myelogen leukemi, metastatisk melanom, Kaposis sarkoma eller multippelt myeloma.
27. Anvendelse ifølge krav 22, hvor medikamentet skal brukes for å behandle eller forebygge en infeksjonssykdom valgt fra sepsis, septisk sjokk eller Shigellose.
28. Anvendelse ifølge krav 22, hvor medikamentet skal brukes for å behandle eller forebygge en viral sykdom valgt fra akutt hepatittinfeksjon, HIV-infeksjon eller CMV-retinitt.
29. Anvendelse ifølge krav 22, hvor medikamentet skal brukes for å behandle eller forebygge en neurodegenerativ sykdom valgt fra Alzheimers sykdom, Parkinsons sykdom, cerebral iskemi eller neurodegenerativ sykdom forårsaket av traumatisk skade.
30. Anvendelse ifølge krav 22, hvor medikamentet skal brukes for å behandle eller forebygge iskemi/reperfusjon ved slag eller myokardial iskemi, renal iskemi, hjerteanfall, organhypoksi eller trombin-indusert blodplateaggregasjon.
31. Anvendelse ifølge krav 22, hvor medikamentet skal brukes for å behandle eller forebygge en tilstand forbundet med prostaglandin endoperoksid syntase-2 valgt fra ødem, feber, analgesia eller smerte.
32. Anvendelse ifølge krav 31, hvor smerten velges fra neuromuskulær smerte, hodepine, kreftsmerte, tannpine eller artrittsmerter.
33. Anvendelse ifølge krav 22, hvor medikamentet skal brukes for å behandle eller forebygge en angiogen forstyr-relse valgt fra faste svulster, okulær neovaskulisasjon eller infantile hemangiomaer.
NO19992960A 1996-12-18 1999-06-17 Substituerte nitrogen-inneholdende heterocykliske forbindelser som inhibitorer for p38 protein-kinase NO315047B1 (no)

Applications Claiming Priority (4)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US3428896P 1996-12-18 1996-12-18
US08/822,373 US5945418A (en) 1996-12-18 1997-03-20 Inhibitors of p38
US08/862,925 US6147080A (en) 1996-12-18 1997-06-10 Inhibitors of p38
PCT/US1997/023392 WO1998027098A1 (en) 1996-12-18 1997-12-17 SUBSTITUTED NITROGEN CONTAINING HETEROCYCLES AS INHIBITORS OF p38 PROTEIN KINASE

Publications (3)

Publication Number Publication Date
NO992960D0 NO992960D0 (no) 1999-06-17
NO992960L NO992960L (no) 1999-08-17
NO315047B1 true NO315047B1 (no) 2003-06-30

Family

ID=27364615

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
NO19992960A NO315047B1 (no) 1996-12-18 1999-06-17 Substituerte nitrogen-inneholdende heterocykliske forbindelser som inhibitorer for p38 protein-kinase

Country Status (29)

Country Link
US (1) US6147080A (no)
EP (1) EP0951467B1 (no)
JP (1) JP4171072B2 (no)
CN (2) CN1153770C (no)
AP (1) AP1136A (no)
AT (1) ATE236165T1 (no)
AU (1) AU738000B2 (no)
BG (1) BG64533B1 (no)
BR (1) BR9714415A (no)
CA (1) CA2274825C (no)
CZ (1) CZ299600B6 (no)
DE (1) DE69720522T2 (no)
DK (1) DK0951467T3 (no)
EA (1) EA002855B1 (no)
EE (1) EE04191B1 (no)
ES (1) ES2202658T3 (no)
HK (1) HK1023340A1 (no)
HU (1) HUP0001125A3 (no)
ID (1) ID21919A (no)
IL (1) IL130349A0 (no)
IS (1) IS5069A (no)
NO (1) NO315047B1 (no)
NZ (1) NZ336146A (no)
PL (1) PL202464B1 (no)
PT (1) PT951467E (no)
SK (1) SK284578B6 (no)
TR (1) TR199902194T2 (no)
TW (1) TW521071B (no)
WO (1) WO1998027098A1 (no)

Families Citing this family (126)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US7091181B2 (en) 1994-12-12 2006-08-15 Omeros Corporation Method of inhibition of pain and inflammation during surgery comprising administration of soluble TNF receptors
US6608060B1 (en) 1996-12-18 2003-08-19 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Inhibitors of p38
JP2001520170A (ja) 1997-10-16 2001-10-30 ボード・オヴ・リージェンツ，ザ・ユニヴァーシティ・オヴ・テキサス・システム Ｎｆ−ａｔ３機能に関連した心肥大動物モデルと治療法
JP2001526230A (ja) 1997-12-19 2001-12-18 スミスクライン・ビーチャム・コーポレイション ヘテロアリール置換イミダゾール化合物、その医薬組成物および使用
MY132496A (en) * 1998-05-11 2007-10-31 Vertex Pharma Inhibitors of p38
WO1999061039A2 (en) * 1998-05-22 1999-12-02 MAX-PLANCK-Gesellschaft zur Förderung der Wissenschaften e.V. Novel composition for modulating ischemic cell death
US6858617B2 (en) 1998-05-26 2005-02-22 Smithkline Beecham Corporation Substituted imidazole compounds
JP2002517486A (ja) 1998-06-12 2002-06-18 バーテックス ファーマシューティカルズ インコーポレイテッド ｐ３８のインヒビター
EP1277740A1 (en) * 1998-06-12 2003-01-22 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Inhibitors of p38
US6184226B1 (en) 1998-08-28 2001-02-06 Scios Inc. Quinazoline derivatives as inhibitors of P-38 α
AR023659A1 (es) 1998-09-18 2002-09-04 Vertex Pharma Un compuesto inhibidor de p38, una composicion farmaceutica que lo comprende y el uso de dicha composicion en el tratamiento y prevencion de estados patologicos
CA2337755C (en) 1998-09-18 2008-07-29 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Inhibitors of p38
AU1127700A (en) * 1998-10-20 2000-05-08 Omeros Medical Systems, Inc. Irrigation solution containing mapk inhibitors and their use for treating pain and inflammation
AU1909200A (en) 1998-11-04 2000-05-22 Smithkline Beecham Corporation Pyridin-4-yl or pyrimidin-4-yl substituted pyrazines
UA73492C2 (en) * 1999-01-19 2005-08-15 Aromatic heterocyclic compounds as antiinflammatory agents
CA2360934A1 (en) 1999-02-22 2000-08-31 Lin-Hua Zhang Polycyclo heterocyclic derivatives as antiinflammatory agents
CN1511830A (zh) 1999-03-12 2004-07-14 ���ָ��.Ӣ��ķҩ�﹫˾ 作为消炎剂的化合物
DE60023853T2 (de) 1999-03-12 2006-05-24 Boehringer Ingelheim Pharmaceuticals, Inc., Ridgefield Aromatische heterozyklische verbindungen als antientzündungwirkstoffe
JP2000281588A (ja) * 1999-03-30 2000-10-10 Sankyo Co Ltd ガンの予防又は治療薬及びそのスクリーニング方法
ATE323482T1 (de) * 1999-07-02 2006-05-15 Stuart A Lipton Verwendung von p38 mapk inhibitoren in der behandlung von augenkrankheiten
CA2374737C (en) 1999-07-09 2008-02-12 Boehringer Ingelheim Pharmaceuticals, Inc. Novel process for synthesis of heteroaryl-substituted urea compounds
CZ20021743A3 (cs) * 1999-10-21 2002-08-14 F. Hoffmann-La Roche Ag Bicyklické dusíkové heterocykly substituované alkylaminoskupinou jako inhibitory P38 proteinkinázy
KR100523120B1 (ko) * 1999-10-21 2005-10-20 에프. 호프만-라 로슈 아게 Ｐ38 단백질 키나제 저해제로서 헤테로알킬아미노-치환된이환 질소 헤테로환
ATE296809T1 (de) 1999-11-23 2005-06-15 Smithkline Beecham Corp 3,4-dihydro-(1h)chinazolin-2-on-verbindungen als csbp/p38-kinase-inhibitoren
US6759410B1 (en) 1999-11-23 2004-07-06 Smithline Beecham Corporation 3,4-dihydro-(1H)-quinazolin-2-ones and their use as CSBP/p38 kinase inhibitors
EP1233950B1 (en) 1999-11-23 2005-10-05 Smithkline Beecham Corporation 3,4-DIHYDRO-(1H)QUINAZOLIN-2-ONE COMPOUNDS AS CSBP/P39 kINASE INHIBITORS
US6525046B1 (en) 2000-01-18 2003-02-25 Boehringer Ingelheim Pharmaceuticals, Inc. Aromatic heterocyclic compounds as antiinflammatory agents
US6608052B2 (en) 2000-02-16 2003-08-19 Boehringer Ingelheim Pharmaceuticals, Inc. Compounds useful as anti-inflammatory agents
US7235551B2 (en) 2000-03-02 2007-06-26 Smithkline Beecham Corporation 1,5-disubstituted-3,4-dihydro-1h-pyrimido[4,5-d]pyrimidin-2-one compounds and their use in treating csbp/p38 kinase mediated diseases
CA2403828A1 (en) * 2000-03-22 2001-09-27 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Inhibitors of p38
MXPA03001256A (es) * 2000-08-11 2004-12-06 Vertex Pharma Inhibidores de p38.
PE20020506A1 (es) * 2000-08-22 2002-07-09 Glaxo Group Ltd Derivados de pirazol fusionados como inhibidores de la proteina cinasa
US7998507B2 (en) * 2000-09-21 2011-08-16 Elan Pharma International Ltd. Nanoparticulate compositions of mitogen-activated protein (MAP) kinase inhibitors
CZ20031125A3 (cs) 2000-10-23 2003-10-15 Smithkline Beecham Corporation Nové sloučeniny
US6867300B2 (en) * 2000-11-17 2005-03-15 Bristol-Myers Squibb Company Methods for the preparation of pyrrolotriazine compounds useful as kinase inhibitors
US6670357B2 (en) 2000-11-17 2003-12-30 Bristol-Myers Squibb Company Methods of treating p38 kinase-associated conditions and pyrrolotriazine compounds useful as kinase inhibitors
EP1345603A4 (en) * 2000-12-20 2004-09-08 Merck & Co Inc P38 KINASE INHIBITORS (HALO-BENZO CARBONYL) HETEROCYCLO- FUSIONNES PHENYL
ATE305303T1 (de) * 2001-02-12 2005-10-15 Hoffmann La Roche 6-substituierte pyridopyrimidine
GB0112348D0 (en) * 2001-05-19 2001-07-11 Smithkline Beecham Plc Compounds
GB2375771A (en) * 2001-05-24 2002-11-27 Univ Leeds Decellularisation of tissue implant material
WO2002100405A1 (en) 2001-06-11 2002-12-19 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Isoquinoline inhibitors of p38
US6794265B2 (en) 2001-08-02 2004-09-21 Ultradots, Inc. Methods of forming quantum dots of Group IV semiconductor materials
US6710366B1 (en) 2001-08-02 2004-03-23 Ultradots, Inc. Nanocomposite materials with engineered properties
US7005669B1 (en) 2001-08-02 2006-02-28 Ultradots, Inc. Quantum dots, nanocomposite materials with quantum dots, devices with quantum dots, and related fabrication methods
US20030066998A1 (en) 2001-08-02 2003-04-10 Lee Howard Wing Hoon Quantum dots of Group IV semiconductor materials
US6819845B2 (en) 2001-08-02 2004-11-16 Ultradots, Inc. Optical devices with engineered nonlinear nanocomposite materials
GB0124939D0 (en) * 2001-10-17 2001-12-05 Glaxo Group Ltd Chemical compounds
GB0124934D0 (en) * 2001-10-17 2001-12-05 Glaxo Group Ltd Chemical compounds
GB0124938D0 (en) * 2001-10-17 2001-12-05 Glaxo Group Ltd Chemical compounds
GB0124932D0 (en) * 2001-10-17 2001-12-05 Glaxo Group Ltd Chemical compounds
GB0124933D0 (en) * 2001-10-17 2001-12-05 Glaxo Group Ltd Chemical compounds
GB0124941D0 (en) * 2001-10-17 2001-12-05 Glaxo Group Ltd Chemical compounds
GB0124931D0 (en) * 2001-10-17 2001-12-05 Glaxo Group Ltd Chemical compounds
GB0124936D0 (en) * 2001-10-17 2001-12-05 Glaxo Group Ltd Chemical compounds
WO2003060102A2 (en) * 2002-01-11 2003-07-24 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Crystal structures of jnk-inhibitor complexes and binding pockets thereof
EP1470112A1 (en) * 2002-01-18 2004-10-27 Pharmacia Corporation Substituted pyridazinones as inhibitors of p38
CA2474192C (en) * 2002-02-12 2011-06-21 Smithkline Beecham Corporation Nicotinamide derivates useful as p38 inhibitors
ES2299689T3 (es) 2002-02-25 2008-06-01 Boehringer Ingelheim Pharmaceuticals Inc. Compuestos de cicloalquil-uera fusionada con benzo 1,4-disustituido, utiles para el tratamiento de enfermedades por citoquinas.
EP1494664A2 (en) * 2002-04-18 2005-01-12 Pharmacia Corporation Combinations of cox-2 inhibitors and other agents for the treatment of parkinson's disease
PL373339A1 (en) 2002-04-19 2005-08-22 Smithkline Beecham Corporation Novel compounds
CA2483164C (en) * 2002-04-23 2011-06-07 Bristol-Myers Squibb Company Pyrrolo-triazine aniline compounds useful as kinase inhibitors
ES2318122T3 (es) * 2002-04-23 2009-05-01 Bristol-Myers Squibb Company Compuestos de aril cetona pirrolo-triazina utiles como inhibidores de quinasa.
US7388009B2 (en) * 2002-04-23 2008-06-17 Bristol-Myers Squibb Company Heteroaryl-substituted pyrrolo-triazine compounds useful as kinase inhibitors
TW200400034A (en) * 2002-05-20 2004-01-01 Bristol Myers Squibb Co Pyrazolo-pyrimidine aniline compounds useful as kinase inhibitors
IL165264A0 (en) * 2002-05-23 2005-12-18 Cytopia Pty Ltd Protein kinase inhibitors
DE60310730T2 (de) 2002-07-09 2007-05-16 Boehringer Ingelheim Pharma Gmbh & Co. Kg Pharmazeutische zusammensetzungen aus anticholinergica und p38 kinase hemmern zur behandlung von erkrankungen der atemwege
GB0217757D0 (en) 2002-07-31 2002-09-11 Glaxo Group Ltd Novel compounds
NZ540767A (en) 2002-11-27 2009-03-31 Dmi Biosciences Inc Treatment of diseases and conditions mediated by increased phosphorylation
GB0308186D0 (en) * 2003-04-09 2003-05-14 Smithkline Beecham Corp Novel compounds
GB0308201D0 (en) * 2003-04-09 2003-05-14 Smithkline Beecham Corp Novel compounds
GB0308185D0 (en) * 2003-04-09 2003-05-14 Smithkline Beecham Corp Novel compounds
ES2350837T3 (es) 2003-05-01 2011-01-27 Bristol-Myers Squibb Company Compuestos de pirazol-amida sustituidos con arilo útiles como inhibidores de quinasas.
AU2004247626B8 (en) 2003-05-15 2011-05-19 Arqule, Inc. Imidazothiazoles and imidazoxazole derivatives as inhibitors of p38
BRPI0410905A (pt) * 2003-06-03 2006-06-27 Novartis Ag inibidores de p-38
JP4838121B2 (ja) 2003-06-26 2011-12-14 ノバルティス アーゲー ５員ヘテロ環を基礎とするｐ３８キナーゼ阻害剤
WO2005007632A1 (en) * 2003-07-18 2005-01-27 Pharmacia Corporation Substituted pyridazinones as inhibitors of p38
BRPI0412918A (pt) 2003-07-25 2006-09-26 Novartis Ag inibidores de quinases p38
GB0318814D0 (en) * 2003-08-11 2003-09-10 Smithkline Beecham Corp Novel compounds
US7419978B2 (en) * 2003-10-22 2008-09-02 Bristol-Myers Squibb Company Phenyl-aniline substituted bicyclic compounds useful as kinase inhibitors
NZ546057A (en) 2003-12-03 2010-04-30 Ym Bioscience Australia Pty Lt Tubulin inhibitors
GB0402143D0 (en) * 2004-01-30 2004-03-03 Smithkline Beecham Corp Novel compounds
US7829560B2 (en) 2004-07-08 2010-11-09 Arqule, Inc. 1,4-disubstituted naphthalenes as inhibitors of P38 MAP kinase
US7504521B2 (en) * 2004-08-05 2009-03-17 Bristol-Myers Squibb Co. Methods for the preparation of pyrrolotriazine compounds
US20060035893A1 (en) 2004-08-07 2006-02-16 Boehringer Ingelheim International Gmbh Pharmaceutical compositions for treatment of respiratory and gastrointestinal disorders
PE20060421A1 (es) 2004-08-12 2006-06-01 Bristol Myers Squibb Co Procedimiento para preparar un compuesto de pirrolotriazina anilina como inhibidores de cinasa
WO2006021848A1 (en) * 2004-08-27 2006-03-02 Ranbaxy Laboratories Limited Anti-inflammatory agents
US20080051416A1 (en) * 2004-10-05 2008-02-28 Smithkline Beecham Corporation Novel Compounds
US8178672B2 (en) 2004-10-19 2012-05-15 Arqule, Inc. Synthesis of imidazooxazole and imidazothiazole inhibitors of p38 MAP kinase
PE20060777A1 (es) 2004-12-24 2006-10-06 Boehringer Ingelheim Int Derivados de indolinona para el tratamiento o la prevencion de enfermedades fibroticas
US20060178388A1 (en) * 2005-02-04 2006-08-10 Wrobleski Stephen T Phenyl-substituted pyrimidine compounds useful as kinase inhibitors
JP2008535822A (ja) 2005-03-25 2008-09-04 グラクソ グループ リミテッド 新規化合物
EA200702073A1 (ru) 2005-03-25 2008-12-30 Глэксо Груп Лимитед Способ получения пиридо[2,3-d]пиримидин-7-оновых и 3,4-дигидропиримидо[4,5-d]пиримидин-2(1н)-оновых производных
UY29439A1 (es) 2005-03-25 2006-10-02 Glaxo Group Ltd Nuevos compuestos
AR053346A1 (es) 2005-03-25 2007-05-02 Glaxo Group Ltd Compuesto derivado de 8h -pirido (2,3-d) pirimidin -7 ona 2,4,8- trisustituida composicion farmaceutica y uso para preparar una composicion para tratamiento y profilxis de una enfermedad mediada por la quinasa csbp/ rk/p38
US20060235020A1 (en) * 2005-04-18 2006-10-19 Soojin Kim Process for preparing salts of 4-[[5-[(cyclopropylamino)carbonyl]-2-methylphenyl]amino]-5-methyl-N-propylpyrrolo[2,1-f][1,2,4]triazine-6-carboxamide and novel stable forms produced therein
GB0512429D0 (en) * 2005-06-17 2005-07-27 Smithkline Beecham Corp Novel compound
US7473784B2 (en) * 2005-08-01 2009-01-06 Bristol-Myers Squibb Company Benzothiazole and azabenzothiazole compounds useful as kinase inhibitors
WO2007021710A1 (en) * 2005-08-12 2007-02-22 Merck & Co., Inc. Heterobicyclic compounds useful as p38 kinase inhibiting agents
AU2006306991A1 (en) 2005-10-28 2007-05-03 Takeda Pharmaceutical Company Limited Heterocyclic amide compound and use thereof
CN101395158A (zh) * 2006-03-07 2009-03-25 百时美施贵宝公司 可作为激酶抑制剂的吡咯并三嗪苯胺前体药物化合物
EP2083816A2 (en) * 2006-10-27 2009-08-05 Brystol-Myers Squibb Company Heterocyclic amide compounds useful as kinase inhibitors
US7943617B2 (en) * 2006-11-27 2011-05-17 Bristol-Myers Squibb Company Heterobicyclic compounds useful as kinase inhibitors
JP2010522155A (ja) * 2007-03-20 2010-07-01 カディラ ファーマシューティカルズ リミテッド Ｐ３８阻害剤
EP1992344A1 (en) 2007-05-18 2008-11-19 Institut Curie P38 alpha as a therapeutic target in pathologies linked to FGFR3 mutation
EP2108641A1 (en) * 2008-04-11 2009-10-14 Laboratorios Almirall, S.A. New substituted spiro[cycloalkyl-1,3'-indo]-2'(1'H)-one derivatives and their use as p38 mitogen-activated kinase inhibitors
EP2111861A1 (en) 2008-04-21 2009-10-28 Ranbaxy Laboratories Limited Compositions of phosphodiesterase type IV inhibitors
US8338604B2 (en) 2008-06-20 2012-12-25 Bristol-Myers Squibb Company Imidazopyridine and imidazopyrazine compounds useful as kinase inhibitors
EP2307411B1 (en) * 2008-06-20 2014-01-01 Bristol-Myers Squibb Company Triazolopyridine compounds useful as kinase inhibitors
WO2010038428A1 (ja) * 2008-09-30 2010-04-08 武田薬品工業株式会社 タキサン系抗がん剤の置き換え薬
BRPI1007923A2 (pt) 2009-02-06 2020-08-25 Elan Pharmaceuticals, Inc composto, composição farmacêutica, métodos para tratar uma doença neurodegenerativa, e para reduzir a concentração de p-cjun em tecido cerebral de um indivíduo em necessidade do mesmo, uso de um composto, e, método in vitro
GB0902648D0 (en) 2009-02-17 2009-04-01 Argenta Discovery Ltd Pharmaceutical compounds and compositions
GB0908317D0 (en) * 2009-05-14 2009-06-24 Argenta Discovery Ltd Pharmaceutical compounds and compositions
WO2012031057A1 (en) 2010-09-01 2012-03-08 Bristol-Myers Squibb Company Bms- 582949 for the treatment of resistant rheumatic disease
CN103842362B (zh) * 2011-05-09 2017-05-24 爱普制药有限责任公司 用于治疗阿尔茨海默氏病的组合物和方法
WO2013100208A1 (ja) 2011-12-28 2013-07-04 京都府公立大学法人 角膜内皮細胞の培養正常化
CN103772392A (zh) * 2012-10-23 2014-05-07 杨子娇 一类治疗房角狭窄的化合物及其用途
WO2015072580A1 (ja) 2013-11-14 2015-05-21 学校法人同志社 細胞増殖促進または細胞障害抑制による角膜内皮治療薬
JP6660369B2 (ja) 2014-07-09 2020-03-11 イーアイピー ファーマ， エルエルシー 神経障害を治療する方法
WO2017075274A1 (en) 2015-10-27 2017-05-04 Children's Hospital Medical Center Use of mapk inhibitors to reduce loss of hematopoietic stem cells during ex vivo culture and/or genetic manipulation
US20190060286A1 (en) 2016-02-29 2019-02-28 University Of Florida Research Foundation, Incorpo Chemotherapeutic Methods
US11466008B2 (en) 2017-09-18 2022-10-11 Eip Pharma, Llc Co-crystals of neflamapimod (VX-745)
CN114732910A (zh) 2017-10-05 2022-07-12 弗尔康医疗公司 P38激酶抑制剂降低dux4和下游基因表达以用于治疗fshd
US10342786B2 (en) 2017-10-05 2019-07-09 Fulcrum Therapeutics, Inc. P38 kinase inhibitors reduce DUX4 and downstream gene expression for the treatment of FSHD
PL3762368T3 (pl) 2018-03-08 2022-06-06 Incyte Corporation ZWIĄZKI AMINOPIRAZYNODIOLOWE JAKO INHIBITORY PI3K-γ
WO2020010003A1 (en) 2018-07-02 2020-01-09 Incyte Corporation AMINOPYRAZINE DERIVATIVES AS PI3K-γ INHIBITORS
CN111253404B (zh) * 2018-11-30 2023-05-23 上海医药集团股份有限公司 含氮杂环类化合物及其组合物、制备方法和应用

Family Cites Families (15)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5716972A (en) * 1993-01-13 1998-02-10 Smithkline Beecham Corporation Pyridyl substituted imidazoles
IL110296A (en) * 1993-07-16 1999-12-31 Smithkline Beecham Corp Imidazole compounds process for their preparation and pharmaceutical compositions containing them
WO1995021654A1 (en) * 1994-02-10 1995-08-17 Vladimir Ivanovich Ivanov Device for phono-electrophoresis
US5559137A (en) * 1994-05-16 1996-09-24 Smithkline Beecham Corp. Compounds
NZ302117A (en) * 1995-01-12 1999-10-28 Smithkline Beecham Corp 1-cycloalkyl or cycloalkylalkyl 4,5-trisubstituted imidazole derivatives and medicaments
US5717100A (en) * 1995-10-06 1998-02-10 Merck & Co., Inc. Substituted imidazoles having anti-cancer and cytokine inhibitory activity
EP0854870B1 (en) * 1995-10-06 2009-06-10 Merck & Co., Inc. Substituted imidazoles having anti-cancer and cytokine inhibitory activity
GB9523675D0 (en) * 1995-11-20 1996-01-24 Celltech Therapeutics Ltd Chemical compounds
ZA97175B (en) * 1996-01-11 1997-11-04 Smithkline Beecham Corp Novel substituted imidazole compounds.
WO1997044467A1 (en) * 1996-05-20 1997-11-27 Signal Pharmaceuticals, Inc. MITOGEN-ACTIVATED PROTEIN KINASE p38-2 AND METHODS OF USE THEREFOR
AU708883B2 (en) * 1996-06-10 1999-08-12 Merck & Co., Inc. Substituted imidazoles having cytokine inhibitory activity
GB9613021D0 (en) * 1996-06-21 1996-08-28 Pharmacia Spa Bicyclic 4-aralkylaminopyrimidine derivatives as tyrosine kinase inhibitors
EP0912548A1 (en) * 1996-07-11 1999-05-06 Pfizer Inc. Pyridylpyrrole compounds useful as interleukin- and tnf antagonists
WO1998006715A1 (en) * 1996-08-09 1998-02-19 Smithkline Beecham Corporation Novel piperazine containing compounds
US5945418A (en) * 1996-12-18 1999-08-31 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Inhibitors of p38

Also Published As

Publication number Publication date
ATE236165T1 (de) 2003-04-15
PT951467E (pt) 2003-08-29
PL202464B1 (pl) 2009-06-30
EA002855B1 (ru) 2002-10-31
SK284578B6 (sk) 2005-07-01
SK80599A3 (en) 2000-01-18
WO1998027098A1 (en) 1998-06-25
EE04191B1 (et) 2003-12-15
US6147080A (en) 2000-11-14
AP1136A (en) 2003-01-31
BG103575A (en) 2000-06-30
CN1153770C (zh) 2004-06-16
CN1244867A (zh) 2000-02-16
CA2274825C (en) 2008-08-26
DE69720522D1 (de) 2003-05-08
BG64533B1 (bg) 2005-06-30
DK0951467T3 (da) 2003-07-21
HUP0001125A3 (en) 2002-01-28
EP0951467B1 (en) 2003-04-02
JP2001506266A (ja) 2001-05-15
TW521071B (en) 2003-02-21
NO992960D0 (no) 1999-06-17
TR199902194T2 (xx) 2000-06-21
AU5610598A (en) 1998-07-15
EE9900252A (et) 1999-12-15
NO992960L (no) 1999-08-17
EA199900559A1 (ru) 2000-02-28
DE69720522T2 (de) 2003-11-27
EP0951467A1 (en) 1999-10-27
IL130349A0 (en) 2000-06-01
CN1284783C (zh) 2006-11-15
CA2274825A1 (en) 1998-06-25
NZ336146A (en) 2000-09-29
CZ216399A3 (cs) 1999-09-15
HK1023340A1 (en) 2000-09-08
ES2202658T3 (es) 2004-04-01
AP9901565A0 (en) 1999-06-30
ID21919A (id) 1999-08-12
JP4171072B2 (ja) 2008-10-22
PL334133A1 (en) 2000-02-14
CN1519240A (zh) 2004-08-11
IS5069A (is) 1999-06-07
HUP0001125A2 (hu) 2000-10-28
AU738000B2 (en) 2001-09-06
BR9714415A (pt) 2000-04-18
CZ299600B6 (cs) 2008-09-17

Similar Documents

Publication Publication Date Title
NO315047B1 (no) Substituerte nitrogen-inneholdende heterocykliske forbindelser som inhibitorer for p38 protein-kinase
NO319755B1 (no) Heterocykliske inhibitorer av P38
US7169779B2 (en) Inhibitors of p38
US8338412B2 (en) Inhibitors of P38
AU6251499A (en) Inhibitors of p38
JP2012149085A (ja) Ｐ３８のインヒビターとしてのピリジン誘導体
JP2004536057A (ja) ｐ３８インヒビターとして使用する２，５−二置換ピリジン、ピリミジン、ピリダジンおよび１，２，４−トリアジンの誘導体
AU2001283237A1 (en) Pyridine derivatives as inhibitors of p38
MXPA02009319A (es) Inhibidores de p38.
KR100559917B1 (ko) ｐ38 프로테인 키나아제의 저해제로서 치환된 질소를 함유하는헤테로사이클
AU2007200477B2 (en) Inhibitors of p38
MXPA00011076A (en) Heterocyclic inhibitors of p38

Legal Events

Date Code Title Description
MM1K Lapsed by not paying the annual fees