MXPA04003172A - Formulacion microbiocida que comprende aceites esenciales o sus derivados. - Google Patents

Abstract

La presente invencion se refiere a una formulacion acuosa microbiocida que comprende: (i) una cantidad efectiva de al menos un componente de aceite esencial, o derivados del mismo, los derivados del mismo se obtienen por exposicion a la luz o por oxidacion, o mezclas de los mismos, y (ii) al menos un estabilizador adicional seleccionado del grupo que consiste de etanol en una cantidad desde el 10% hasta alrededor de 50%, un emulsificante, un antioxidante o un agente encapsulante. La invencion se dirige ademas a un metodo para inhibir el desarrollo microbiano usando una formulacion acuosa microbiocida.

Description

FORMULACIÓN MICROBIOCIDA QUE COMPRENDE ACEITES ESENCIALES O SUS DERIVADOS Campo de la Invención La presente invención se refiere a un medio para inhibir el desarrollo microbiano. Más específicamente, la presente invención se refiere a formulaciones y métodos para inhibir el desarrollo microbiano en productos agrícolas perecederos, del hogar e higiene humana, que comprende componentes de aceite esenciales o sus derivados obtenidos por la exposición a irradiación de luz o por oxidación, junto con estabilizadores .

Antecedentes de la Invención La descomposición de los productos agrícolas perecederos se causa por una infección microbiana. Tales productos se mantienen típicamente durante periodos suficientemente largos de tiempo, durante los cuales las condiciones permiten la propagación de varios microorganismos existentes y en consecuencia, muy f ecuentemente, se infecta un alto porcentaje de los productos. Además de las pérdidas financieras substanciales obvias debido a tal descomposición, algunos de estos microorganismos producen metabolitos tóxicos y carcinogénicos , que son perjudiciales para los humanos. El control de la infección por patógenos de productos REF: 155243 agrícolas perecederos, se realiza hoy en día principalmente por la aplicación exógena de fungicidas y/o bactericidas sintéticos. Sin embargo, estos químicos sintéticos tienen residuos tóxicos en el producto. Adicionalmente, también se ha observado el desarrollo de cepas resistentes de microorganismos. Como resultado, varios de tales fungicidas y bactericidas están descontinuados por las agencias reguladoras. La toxicidad residual y la descontinuación potencial empujan al desarrollo de alternativas a los químicos sintéticos actualmente usados para la prevención de la descomposición. Varias de las alternativas se describen a continuación. Por ejemplo, la irradiación del producto de agricultura por luz ultravioleta (Ben-Yehoshua, S.,Rodov, V.,Kim, J. J.and Carmeli, S.,1992. Preformed and induced antifungal materials of citrus fruits in relation to the enhancement of decay resistance by heat and ultraviolet treatments. J, Agrie. Food Chem. , 40:1217-1221; Rodov, V., Ben-Yehoshua, S., Kim, J. J. , Shapiro, , B. and Ittah, Y., 1992. Ultraviolet illumination induces scoparone production in kumquat and orange fruit and improves decay resistance, J. Amer. Soc. Hortic. Sci . , 117:188-192), o la exposición del producto a levaduras antagonistas (Wilson, C.L. and Chalutz, E., 1989. Postharvest biocontrol of Penicillium rots of citrus with antagonistic yeasts and bacteria. Scientia Horticulturae, 40:105-112). Sin embargo, la irradiación de luz U.V puede ser fitotóxica y el biocontrol con la levadura antagonista no está aún bien aceptado comercialmente , posiblemente debido al control inadecuado de los patógenos. Adicionalmente , estos métodos tienen varias desventajas y algunas de las autoridades sanitarias relevantes no han aprobado todavía algunos de ellos . Las frutas cítricas, así como otras varias plantas, poseen alguna resistencia endógena contra los propios patógenos para la producción de substancias anti -microbianas en los tejidos de las plantas {Ben-Yehoshua, S., Rodov, V.,Kim, J.J. and Carmeli, S.,(1992) Preformed and induced antifungal materials of citrus fruits in relation to the enhancement of decay resistance by heat and ultraviaolet treatments. J. Agrie. Food Chem. , 40:1217-1221; Ben-Yehoshua, S., Rodov, V., Fang, D.Q., and Kim, J. J., (1995) Preformed antifungal compounds of citrus fruit: effect of postharvest treatments with heat and growth regulators, J. Agrie. Food Chem, 43:1062-1066; Rodov, V., Ben-Yehoshua, S., Fang, D. Q. , and Kim, J. J., (1995) Preformed antifungal compounds of lemon fruit: citral and its relation to disease resistance. J. Agrie. Food Chem. 43:1062-1066). Se ha mostrado previamente que estas sustancias incluyen componentes de aceites esenciales, que exhiben un amplio rango de actividad anti-microbiana. Las patentes de E.U.A 5,334,619 y 5,958,490 describen el uso de varios aceites que se presentan de manera natural como agentes activos para prevenir la descomposición en productos de agricultura después de cosechar. Sin embargo, sólo algunos de estos componentes de aceite esencial tienen actividad microbiocida . El Citral [3 , 7-dimetil-2 , 6-octadienal] es un componente de aceite esencial que se produce naturalmente en varios tipos de frutas cítricas, así como en algunas otras plantas tales como hierba de limón y el eucalipto. El citral es un aldehido insaturado de la serie de terpeno y está compuesto de una mezcla isomérica de geraniol y neral . Debido al intenso aroma y sabor de limón, el citral se ha usado extensivamente en las industrias alimenticia y de cosméticos. El citral se reconoce como un aditivo de alimentos seguro y está aprobado para usarse en alimentos por la Food and Drug Administration de los Estados Unidos. El citral también ha mostrado que exhibe un amplio rango muy efectivo de actividad antimicrobiana y antifungal. De hecho, Ben Yehoshua et al (1992) y Rodov et al (1995) han mostrado que el citral es el compuesto antifungal constitutivo más activo en la fruta de limón. El limoneno, 1-metil- 4- (1-metiletenil) ciclohexeno (conocido también como p-menta-1 , 8-dieno) es otro ejemplo de un componente de aceite esencial abundante, que puede extraerse de las glándulas de flavedo de la fruta cítrica.

Las patentes de E.U.A 4,379,168 y E.U.A 5,951,992 describen el uso del limoneno como un insecticida y pesticida, respectivamente. Sin embargo, en su forma pura, tiene una actividad antifungal muy baja. Chalchat et al. (Chalchat, J. C, Chiron, F., Garry, R. Ph and Lacoste (2000, J. Essent . Oil Res. 12, 125-134) describe una actividad antimicrobiana del hidroperóxido de limoneno contra patógenos humanos. Aureli et al. (Aureli, P., Costantini, A. and Zolea, S., 1992. Antimicrobial activity of some plant essential oil against Listeria monocytogenes . J. Food Protection, 55:344-348) muestra que algunos componentes de aceite esencial tienen una fuerte actividad contra las bacterias patogénicas tales como Listeria y sugieren su uso para prevenir la infección de alimentos por Listeria. Se han hecho varios intentos para usar el citral para controlar la descomposición de varios productos de agricultura. Se ha mostrado que el citral podría reducir el deterioro del grano de Aspergillus inoculado de cebada de alta humedad (Mandi, B., Thomke S. and Fríes, N.,1997 Preservation of high moisture barley grains with citral and allyl caproate and preliminary acceptability tests with piglets. Acta Agrie. Scand. , 2T_: 105-109), arroz silvestre (Mallick, A. K. and Nandi, B.,1982. Deterioration of stored rough rice. IV. Preservation and palatability of citral and propionic acid treated grains. Acta Agrie, Scand., 32:177- 187) y trigo (Ghosh, J. and Nandi, B., 1985. Preservation of high moisture wheat by some antifungal volatile compounds and palatability tests with rats. Acta Agrie. Scand. , 35: 245-254). Arora y Pandey (Arora, R. and Pandey, G.N., 1977. The application of essential oils and their isolates for blue mold decay control in Citrus reticulata Blanco. J. Food Sci. and Tech. 14:14-16) reportan que el citral, geraniol y otros compuestos de aceite esencial reducen la descomposición de hongo azul de la fruta de Citrus reticulata. Los inventores de la presente invención (Ben-Yehoshua, S., Rodov, V., Kim, J. J. and Carmeli, S., 1992. Preformed and induced antifungal materials of citrus fruits in relation to the enhancement of decay resistance by heat and ultraviolet treatments. J, Agrie. Food Chem. , 40:1217-1221) muestran que la aplicación de citral exógeno a limones inoculados con Penicillium inhiben significativamente su descomposición. En la mayoría de los casos del uso previo de componentes de aceite esencial para prevenir la descomposición de productos de agricultura, el componente de aceite esencial se aplica al producto en una emulsión acuosa. No obstante que la prevención parcial de la descomposición de los productos se realiza por el uso de tales substancias, los componentes de aceite esencial, que incluyen citral y geraniol, todavía no se usan comercialmente para el control de la descomposición de productos agrícolas perecederos. Una razón principal para no usar aquellas substancias es que su aplicación a productos perecederos, en una concentración efectiva contra los microorganismos, inflinge daño al producto, que puede causar su posterior descomposición. Por ejemplo, los aceites esenciales infligen daño a la piel en la fruta y cambios de color en la pulpa. Este daño puede ser severo y resulta en una descomposición importante del producto tratado después de un periodo de tiempo relativamente corto. Otra razón para la carencia de su uso comercial es su inestabilidad, ya que muchos de estos aceites esenciales son inestables y tienden a descomponerse antes de llevar a cabo su actividad bactericida .

Breve Descripción de la Invención La presente invención se basa en el hecho de que los componentes de aceite esenciales de grado alimenticio o sus derivados obtenidos por exposición a la radiación de la luz o por oxidación, se pueden usar como el ingrediente activo en una formulación microbiocida efectiva estable para la inhibición del desarrollo microbiano. En tal formulación, el daño fitotóxico conocido de los componentes del aceite esencial, y la estabilidad del componente del aceite esencial o sus derivados, se prolonga, lo que resulta en una composición microbiocida ambientalmente amigable. Así, un objeto de la presente invención es proporcionar una formulación acuosa microbiocida novedosa que comprende: (i) una cantidad efectiva de al menos un componente de aceite esencial o derivados del mismo, los derivados del mismo se obtienen por exposición a la luz o por oxidación, o mezclas de los mismos; y (ii) al menos un estabilizador adicional seleccionado del grupo que consiste de etanol en una cantidad desde 10% a alrededor de 50%, un emulsificante, un antioxidante o un agente encapsulante . La cantidad de etanol agregada es desde alrededor de 10 a alrededor de 50%. El componente de aceite esencial se selecciona del grupo de hidrocarburos de monoterpeno, sesquiterpenos , derivados de terpeno oxigenados, derivados que no son de terpeno tales como aldehidos, alcoholes, ácidos y fenólicos. La concentración de los aceites esenciales en la composición microbiocida acuosa es desde alrededor de 0.1% a alrededor de 1% (v/v) . La concentración del derivado del aceite esencial obtenido por exposición a la luz es desde alrededor de alrededor de 1000 µL L"1 a alrededor de 12,000 µL L"1. La composición microbiocida puede además comprender una cantidad adicional de otro biocida en una cantidad pequeña que puede, en sí misma, no ser suficiente para inhibir el desarrollo microbiano. Es un objetivo adicional de la presente invención proporcionar un método para inhibir el desarrollo microbiano en productos agrícolas perecederos al aplicar una formulación microbiocida acuosa que comprende : (i) una cantidad efectiva de al menos un componente de aceite esencial o derivados del mismo, los derivados del mismo se obtienen por exposición a la luz o por oxidación, o mezclas de los mismos; y (ii) al menos un estabilizador adicional seleccionado del grupo que consiste de etanol y una cantidad desde 10% a alrededor de 50%, un emulsificante, un antioxidante, o un agente encapsulante . La cantidad de etanol agregado es desde alrededor de 10 a alrededor de 50%. El componente de aceite esencial se selecciona del grupo de hidrocarburos de monoterpenos y sesquiterpenos , derivados de terpenos oxigenados, derivados que no son de terpeno tales como aldehidos, alcoholes, ácidos y fenólicos. La formulación puede además comprender otro pesticida en una cantidad pequeña, que en sí misma, no es suficiente para inhibir el desarrollo microbiano. Un objetivo adicional de la presente invención, es proporcionar métodos para la inhibición del desarrollo microbiano en hogares, al aplicar la formulación microbiocida acuosa de la presente invención, ya sea sola o en conjunto con detergentes comúnmente usados . Todavía aún un objetivo adicional de la presente invención es suministrar el uso de la formulación microbiocida para la higiene humana, en donde los aceites esenciales o derivados de los mismos junto con aditivos adecuados, se agregan a barras de jabón, higiene, detergentes para lavado de trastes, enjuagues para la boca desinfectantes, o aplicaciones cosméticas. Es todavía un objetivo adicional de la presente invención, proporcionar el uso de una formulación microbiocida como un compuesto nutritivo farmacéutico para aliviar o tratar infecciones menores provocadas por microbios, así como para suministrar beneficios a la salud humana .

Breve Descripción de las Figuras Con objeto de entender la invención y con objeto de ver como se lleva a cabo en la práctica, se describirá ahora una modalidad preferida, a manera de ejemplo no limitativo solamente, con referencia a las figuras anexas, en los cuales : La Figura 1 muestra la inducción de la producción de escoparona en el limón verde maduro al inyectar limoneno tratado con sol, limoneno o citral a albedo o al liberar los contenidos de las glándulas aceitosas en limones verdes maduros . La Figura 2 muestra el efecto de la maduración de la fruta de los limones en la producción de fitoalexinas en frutas de limón verde y amarillo maduras. La Figura 3 muestra la tasa de descomposición en la toronja inoculada con Penicillium tratada al sumergir en formulaciones de citral, y geraniol . La Figura 4 muestra la tasa de descomposición de los limones inoculados con Penicillium tratados con una emulsión acuosa de citral estabilizada por 25% etanol , amif 72 (20% de hidroxianisol butilado, 6% de galato de propilo y 4% de ácido cítrico en propilen glicol) , ß-ciclodextrina y monolaurato de polioxietilen sorbitan (Tween 20) en comparación con la disminución de la fruta del mismo tipo con 5000 ppm de Tween 20 sin etanol. La Figura 5 muestra la tasa de descomposición de los limones inoculados con Penicillium tratados con una emulsión acuosa de citral que comprenden alcohol de octil fenil poliéter (Tritón X100) e hidroxianisol butilado (BHA) . La Figura 6 muestra la tasa de descomposición de limones inoculados con Penicillium tratados con una emulsión acuosa de citral que comprende monolaureato de polioxietilen sorbitan (Tween 20) e hidroxianisol butilado (BHA) en comparación con la tasa de descomposición en donde se agrega imazalil. (Imazalil es un Fungicida que se utiliza comúnmente en la protección post-cosecha de frutas y vegetales) . La Figura 7 muestra la tasa de descomposición de limones inoculados con Penicillium, tratados con una emulsión acuosa de etanol al 25% de extracto crudo de diclorometano de flavedo de limón verde en comparación con imazalil 1000 ppm y solución de etanol al 25%. La Figura B muestra la tasa de descomposición de limones inoculados con Penicillíum tratados con una solución acuosa de etanol al 25%, de diversas formulaciones combinadas que comprenden citral , 1-octanol y extracto crudo de diclorometano en etanol al 25% a partir del flavedo de limón que, previo a su uso, se expone a la luz del sol por 4 horas. La Figura 9 muestra la tasa de descomposición de limones inoculados con Penicillíum tratados con una solución de etanol al 25% de limoneno 5000 ppm expuesto a la luz del sol por 3 horas. El efecto de la longitud de la inmersión así como el número de las inmersiones se compara. La Figura 10 muestra la tasa de descomposición de limones inoculados con Penicillíum tratados con una solución acuosa de limoneno 2500 ppm que, previo a su uso, se irradió con luz ultravioleta por tres horas y luego se disuelve en 25% de etanol. El tratamiento de inmersión de 1 minuto con esta solución (3ULV) se compara con 3 inmersiones consecutivas en un minuto en la misma solución con un periodo de 1 hora entre estas inmersiones (3UVL3) . Estos tratamientos se compararon con una inmersión en agua o en etanol al 25%. La Figura 11 muestra el efecto del hidroperóxido de limoneno preparado con fotooxidación con Rosa Bengala en un porcentaje de descomposición de la fruta de limón inoculada con Penicillium digitatum. La Figura 12 muestra el efecto del hidroxiperóxido de limoneno preparado con un catalizador de molibdato en la descomposición de la fruta de limón inoculada con Penicillium digd tatum. La Figura 13 muestra el efecto de la eliminación del catalizador Rosa Bengala y la dosis de Tween 20 sobre la fitotoxicidad de la fruta limón tratada con hidroxiperóxido de limoneno. La Figura 14 muestra el efecto de la formulación de citral en el crecimiento de células de Staphylococcus aureus.

La Figura 15 muestra el efecto del limoneno tratado con el sol y el citral en el crecimiento de células de Candida altácans.

Descripción Detallada de la Invención Como se establece anteriormente, la presente invención proporciona una formulación microbiocida ambientalmente amigable, efectiva en la prevención de la descomposición en la producción agrícola, en el hogar, para la higiene humana, y como composición nutritiva farmacéutica. La formulación microbiocida acuosa comprende como ingrediente activo, al menos un componente de aceite esencial o derivados del mismo, obtenidos por exposición a la luz o por oxidación, o mezclas de tales aceites esenciales y/o sus derivados, y al menos un estabilizador adicional seleccionado del grupo que consiste de etanol en una cantidad desde alrededor de 10% a alrededor de 50%, un emulsificante , un antioxidante o un agente encapsulante . El papel del estabilizador es estabilizar los componentes del aceite esencial de la descomposición previo a efectuar su acción microbiocida y/o evitar y/o reducir la fitotoxicidad de estos compuestos. El componente del aceite esencial microbiocida se selecciona del grupo de hidrocarburos monoterpenos y sesquiterpenos , derivados de terpeno oxigenados y derivados que no son de terpeno, tales como aldehidos (citral o nonanal) , alcoholes (octanol, nonanol) y fenólicos (cravacrol) . La formulación microbiocida acuosa se puede usar para un control efectivo e inhibición del desarrollo microbiano. Todos los componentes de aceites esenciales son bien conocidos por ser componentes de grado alimenticio. Se debe además enfatizar que todos los componentes de la formulación microbiocida acuosa son de grado alimenticio y no presentan ningún daño al cuerpo humano. Un amplio uso potencial particular es para la protección de productos agrícolas perecederos de la descomposición provocada por los microbios. Los productos agrícolas pueden incluir, por ejemplo, cualquier producto alimenticio fresco, que se puede echar a perder como resultado de una infección microbiana, tales como frutas, vegetales, carne o pescado. Otros usos potenciales para la formulación adecuada, puede ser en cualquier caso que se necesite una protección efectiva de microbios, tales como en el uso en el hogar, higiene corporal y productos nutritivos farmacéuticos. Para el uso en el hogar, la formulación microbiocida acuosa se puede usar sola o junto con detergentes comerciales. Para uso de los componentes de aceites esenciales o sus derivados para higiene corporal , una cantidad efectiva de estos componentes de aceite esenciales o sus derivados se puede incorporar en barras de jabón, formulaciones de limpieza, detergentes para lavado de trastes, enjuagues para la boca o composición o una solución o composición desodorante. Una cantidad efectiva de un componente de aceite esencial de la presente invención, particularmente para los aceites esenciales seleccionados de citral, perilaldehído o limoneno, también puede ser parte de una composición utilizada como un producto nutritivo farmacéutico. Tal composición nutritiva farmacéutica puede lograr los dos efectos, nominalmente proteger contra infecciones biocidas, así como producir beneficios adicionales de salud tal como introducir una actividad anti-cáncer. Diversas formulaciones de la presente invención que comprenden aceites esenciales tales como citral, limoneno, geraniol, mentol , carvona, perilaldehído, se encuentran que actúan como agentes anti-cáncer y reducen el nivel de colesterol y LDL. Se sabe que el citral y el citronelal calman y relajan las emociones y ayudan al cuerpo en una función digestiva adecuada. Tales componentes de aceites esenciales se conocen como fitonutrientes o alimentos funcionales. Algunos de los componentes de aceites esenciales se conocen en el arte previo como efectivos para combatir microbios, especialmente en productos agrícolas. Sin embargo, los componentes de los aceites esenciales padecen de dos problemas inherentes, que limitan su uso práctico hasta ahora. Un problema se asocia con su estabilidad limitada, debido al proceso de oxigenación que provoca una desintegración rápida de los aceites esenciales al exponerse al oxígeno. Así, aunque su uso como microbiocidas potentes se conoce, se limita efectivamente tal uso debido a su corta duración. El uso de cantidades bastante mayores de un aceite esencial con objeto de prolongar su efecto microbiocida, conduce finalmente al segundo inconveniente asociado con su uso: la exposición de las frutas a concentraciones elevadas de aceites esenciales, particularmente si la mezcla no forma una solución real, provoca daño al producto. Se ha encontrado ahora que cuando los componentes de aceites esenciales se aplican como el componente activo de una composición microbiocida, junto con al menos un aditivo que estabiliza o disuelve los componentes de aceites esenciales, se obtiene una composición microbiocida estable y efectiva que no provoca ningún daño al producto. Estos aditivos se seleccionan del etanol, un antioxidante, un emulsificante o un agente encapsulante . Cada uno de estos aditivos protege los componentes del aceite esenciales en un mecanismo diferente. El etanol, que es un biocida en sí mismo, se agrega con objeto de disolver el componente de aceite esencial y evita la fitotoxicidad, y debe estar presente en una cantidad desde alrededor de 10% a alrededor de 50%. El emulsificante evita la formación de una solución microcoloidal que ayuda en la prevención de la fitotoxicidad de los componentes de aceites esenciales. Los emulsificantes se pueden escoger del grupo que comprende un alcohol de alquilaril poliéter (DX) , monolaurato de polioxietilen sorbitan (Tween 20) , monooleato de polioxietilen sorbitan (DX) , alcohol de octil-fenil poliéter (Tritón 100) . Algunos de estos emulsificantes son de grado alimenticio, por ejemplo Tween 20. La concentración de los emulsificantes debe estar arriba de 0.1% (p/p) . El antioxidante reduce la tasa de oxidación de los aceites esenciales, lo que conduce a su descomposición. Reduce además la fitotoxicidad inherente del aceite esencial. El antioxidante se puede escoger del grupo que comprende compuestos tales como, pero no se limitan a: hidroxianisol butilado (BHA) , ácido ascórbico, ácido isoascórbico, a- tocoferol, hidroxitolueno butilado (BHT) , ß-caroteno o sus mezclas. Las concentraciones preferidas del antioxidante de la formulación están en el rango desde alrededor de 0.05% a alrededor de 0.8% (p/v) . El efecto del antioxidante en la reducción de la fitotoxicidad del aceite esencial para el caso de la adición de BHA al citral se demuestra en la Tabla 1, que muestra el índice de Manchado en Cascara, en donde se debe entender que el BHA por sí mismo no provoca ninguna mancha. El índice de mancha en la cascara se determina por índice=? (número X registrado de frutas con un registro dado) (número total de frutas) El registro de mancha es 0= sin manchas; 1= manchas ligeras; 2= manchas moderadas y 3= manchas severas. Tabla 1. Efecto de la inmersión por 1 minuto del antioxidante BHA en manchas de cáscara en fruta de limón que se mantienen a 20°C por 20 días. Citral (%) BHA (%) índice de mancha en cáscara 0.0 0.1 0.10 0.5 0.0 0.48 0.5 0.05 0.14 0.5 0.1 0.05 0.5 0.3 0.00 0.5 0.6 0.00 1.0 0.0 0.90 1.0 0.3 0.52 Los agentes encapsulantes agregados a la formulación, forman complejos junto con los componentes del aceite esencial, con lo que se evita su degradación, y se prolonga su periodo de acción microbiocida efectiva. El agente encapsulante puede ser cualquier tipo de matriz grado alimenticio o polímero hecho de un carbohidrato o proteína u otra matriz, tal como, pero no limitado a, almidón de maíz, maltodextrina , ß-ciclodextrina, gel de sílice, ceseina, quitosan y sus mezclas. El polietileno de bajo peso molecular y diversas ceras también pueden actuar como materiales de encapsulación . De hecho se encontró que al agregar el citral en diversas formulaciones de ceras que no comprendían ningunos Fungicidas, mejora la efectividad del citral en reducir la disminución así como la fítotoxicidad. La adición de la ciclodextrina al citral, resultó también en una vida más prolongada del citral en la superficie de la fruta de naranja tratada. Las concentraciones preferidas del agente encapsulante en la formulación de la invención están en el rango de alrededor de 0.1 a alrededor de 0.8% (p/v) . La adición de un emulsificante reduce la fítotoxicidad inherente del aceite esencial . Este efecto se muestra por el índice de mancha del aceite esencial de citral por la adición del emulsificante como se muestra en la Tabla 2.

Tabla 2. Resumen de los ensayos que evalúan la fitotoxicidad de soluciones de citral que comprenden emulsificantes (relación 1:1 con citral)1.

La fruta se sumerge por 1 minuto en la emulsión y luego mantiene por 1 mes a 20 °C. La fitotoxicidad se mide como en tabla 1. Se debe observar que además del al menos un componente de aceite esencial, sus derivados obtenidos por exposición a la radiación o mezclas de los mismos, la composición microbiocida puede comprender otro biocida en una concentración muy baja. Tal concentración baja del biocida no es suficiente para incrementar el daño microbiano en sí mismo, junto con los aceites esenciales' de la presente invención o sus derivados, se puede evitar la descomposición microbiana. Los ejemplos no limitativos de tales biocidas pueden ser imazalil, tiabendazol, panoctina, rovral, procloraz, ortofenilfenato de sodio, metalaxil, fosetil-Al, captan, oxiquinolina, cloruro de dicloran benzalconio, canon, tiofanato-metilo, triforina, carbendazim, triademinol , vinclozolin, etaconazol , o una mezcla de los mismos. La concentración de tales pesticidas puede ser de alrededor de 5 ppm a alrededor de 100 ppm. El uso de tal composición que comprende una combinación de un componente de aceite esencial o sus derivados obtenidos por exposición a la radiación, junto con una cantidad pequeña de Fungicida permitirá dos beneficios importantes: 1. Reducción del residuo tóxico del biocida, que es una demanda importante de todas las autoridades de salud para todos los fungicidas tóxicos. 2. Controlar el desarrollo de resistencia del patógeno al biocida. Este punto específico se lograría por el uso de la nueva formulación con o sin el componente biocida. De hecho, el uso de un biocida diferente que puede tener un modo diferente de acción aún por un tiempo relativamente corto, se considera la vía recomendada de controlar la población resistente a los biocidas. Los componentes de aceite esenciales de conformidad con la presente invención, se pueden producir sintéticamente o puede ser una preparación de extracto de plantas que comprende una pluralidad de componentes de aceites esenciales, esto es, mezclas de los mismos. También puede ser una preparación de aceite esencial natural purificado, enriquecido con un componente de aceite esencial sencillo o cualquier combinación del mismo. Las preparaciones que contienen aceites esenciales naturales se pueden producir a partir de diversas plantas, tales como frutas de cítricos, árboles de eucalipto, y plantas de limón. Los ejemplos particulares no limitativos de compuestos de aceites esenciales son el citral, 1-octanol, heptanol, nonanol, geraniol , octanal, nonanal , decanal, perilaldehído, perilalcohol , citronelol, citronelal, carvona, carveol, linalol, vainillina, aldehido cinámico, ácido cinámico, eugenol, mentol, limoneno, carvacrol, terpineol, timol, vainillina y alcanfor. En casos de acuerdo con la invención en donde el aceite esencial de deriva por exposición a la luz, se puede hacer tal derivación en un aceite esencial producido sintéticamente, sobre aceites esenciales extraídos naturalmente o en un extracto crudo que comprende una pluralidad de aceite esencial. En el último caso, uno o más aceites esenciales se pueden derivar, mientras que el otro puede estar sin afectarse. Además, la exposición a la luz se puede hacer previo a la extracción de los componentes del aceite esencial a partir de su fuente natural o después de su extracción . De acuerdo con la presente invención, una mezcla de al menos un componente de aceite esencial o un derivado del mismo obtenido por radiación de luz con el emulsificante y el antioxidante, se puede agregar directamente como una composición antimicrobiana a alimentos, cosméticos, y artículos para el hogar para propósitos microbiocidas . También, se puede preparar la mezcla en forma de un líquido o como un aerosol al agregar bases no tóxicas en una cantidad adecuada como sea necesario, y se agregan o rocían para propósitos microbiocidas. La concentración del al menos un componente de aceite esencial necesario para lograr un efecto, se puede determinar fácilmente por el técnico en cada caso, y depende del tipo de aceite esencial así como en la forma de aplicación de la preparación. En el caso del citral o el geraniol, una cantidad efectiva está en el rango entre alrededor de 0.1%-1%, en particularmente 0.2-0.4%. Se puede aplicar la formulación al producto a ser protegido, diversas veces antes y durante su almacenamiento. Cuando se aplica la formulación a las frutas, se aplicará preferiblemente previo al empaque, por ejemplo, después de la cosecha. La formulación de la presente invención se puede aplicar al producto por cualquier método en el cual el producto estará en contacto con una cantidad efectiva de la formulación, esto es, una cantidad que inhibirá su infección por microorganismos a través del periodo de almacenamiento. Los ejemplos para los métodos de aplicación son inmersión, fumigación, rocío y espumado de la fruta en una casa de empaque. Otro método puede ser al incorporar estos materiales dentro de una emulsión de cera. De hecho, como se menciona previamente, la emulsión de cera es un solvente adecuado para el tratamiento de diversas frutas cítricas. Otro método de aplicación es al fumigar la fruta en una cámara relativamente hermética al aire, utilizando la volatilidad de muchos de los materiales activos, tal como el citral . Otro método posible para aplicación se puede hacer al cargar los materiales activos en un material de gel de sílice usado para agente de secado o como un absorbente. Este material puede absorber más del 10% de su peso en los materiales activos y luego mantenerse como entidad encapsulada. Sin embargo, cuando la humedad ambiente de este material de eleva, luego estos biocidas activos se liberan y el agua los reemplaza. De hecho ésta es la situación cuando la fruta se encierra en cuarto de almacenamiento o en cualquier recipiente que mantiene productos agrícolas perecederos que transpiran continuamente. Tal aplicación puede dar una liberación lenta controlada del fungicida que permite una protección mayor de la descomposición. La formulación también se puede aplicar por medio de polímeros de degradación lenta, que durante su degradación liberan el compuesto de aceite esencial contenido dentro de ellos sobre el producto. De acuerdo con la presente invención, el pH de la formulación en aceite es preferiblemente ácido, pero puede ser también básico con un valor de pH de hasta 9. Como se menciona, la formulación microbiocida acuosa debe comprender un estabilizador para disolver el al menos un componente de aceite esencial. En el caso de que el estabilizador sea etanol, se muestra que el citral a una concentración de 0.2% fue mucho más efectivo en inhibir la descomposición de la fruta de naranja Washington no inoculada cuando se aplica como una formulación que contiene 10-50% de etanol, que cuando se aplica a la misma concentración en una emulsión acuosa (Tabla 3, ver también el Ejemplo 4) .

Tabla 3: Efectos del citral y etanol al 50% en el porcentaje de descomposición de naranjas Washington no inoculadas (números =% de frutas podridas) .

Meses de almacenamiento- - Tratamiento 0.5 1 2 3 4 Sin tratar 5 8 20 29 36 Citral al 0.2%, emulsificador 0.02% en agua 0 8 28 35 48 Etanol al 50% en agua 0 4 14 20 23 Citral 0.2%, 50% de etanol en agua 0 0 2 3 5 Imazalil, 0.2% en agua 0 2 4 3 8 Además, no sucede ningún daño notable al producto, asociado normalmente con la aplicación del aceite esencial. En presencia de etanol del 10 al 50%, el aceite esencial no provocó daño fitotóxico. El daño no sucede aún cuando se aplican los aceites esenciales a concentraciones relativamente altas (0.5 a 1%) conocidas en el arte por provocar un daño considerable. El efecto de tales formulaciones en reducir la descomposición se demuestra así con todas las frutas cítricas probadas en las casas de empaque (se muestran los resultados en la tabla 3 y 4) , y con las frutas de pimiento y mango (no se muestran los datos) . El experimento con el pimiento muestra un buen control de los patógenos principales del pimiento en Israel, Botrytis cinérea y Alternaría alternata.

Tabla 4. Efecto del limoneno expuesto a tres horas de luz de sol en la descomposición de la fruta naranjita china después de almacenamiento por 11 días a 10°C y una simulación de vida de anaquel a 20°C por 6 días. Tratamiento fin del almacenamiento Inmersión en agua 12.0 b Etanol 25% 7.9 ab Limoneno1 1.6 a 15000 µ?? L"1 expuesto a la luz del sol por 3 horas en etanol al 25% +5000 µ?, LT1 o de TWEEN Cuantitativamente, el componente del aceite esencial en limoneno, que pertenece a la familia de los monoterpenos de hidrocarburo, comprende alrededor de 85% de los componentes del aceite esencial presentes en el cítrico. El limoneno como tal, sin embargo, no es adecuadamente activo. Independientemente del hecho de que no es activo, se encuentra que el limoneno puede servir como un precursor para un microbiocida muy activo, al exponer la cáscara de fruta homogeneizada a la luz del sol, seguido por la extracción del aceite con un solvente orgánico, particularmente por diclorometano, hexano o acetato de etilo. Se puede lograr el mismo efecto por radiación ultravioleta del limoneno después de su extracción (Figuras 9 y 10) . Lo mismo aplica al limoneno producido sintéticamente. Además, el limoneno también se puede oxidar usando agentes convencionales de oxidación. Un ejemplo particular no limitativo es la catálisis heterogénea usando sal de molibdato. Asi, el microbiocida de conformidad con la presente invención puede comprende limoneno o un extracto crudo de aceites esenciales, que comprende una cantidad substancial del limoneno que se irradió por luz. Se debe observar que los antioxidantes no se deben usar cuando se utilizan tales derivados de aceites esenciales que se expusieron a la irradiación de luz. Tal exposición del limoneno a la irradiación conduce a una foto-oxidación rápida que forma un material antifungal altamente activo. Tal material se puede caracterizar como el componente que da un color púrpura en la prueba de ácido sulfúrico-vainillina (de aquí en adelante "prueba de vainillina"), o preferiblemente por fluorescencia azul obtenida como resultado de la radicación por una lámpara ultravioleta. Aunque esta prueba puede reaccionar con otros terpenos y sus compuestos derivados, el producto específico de limoneno se puede caracterizar por su color típico y su relación de retención -Rf en el cromatograma. Se puede hacer la foto-oxidación por exposición del limoneno a la luz blanca o ultravioleta, o por su exposición a la luz del sol. En estos tres casos, el material obtenido obtuvo el mismo tiempo de retención en CLAR. Estos materiales dieron el mismo color púrpura en la prueba de vainillina y la misma mancha en una placa de cromatograma de capa delgada. Así se puede concluir que todas estas trayectorias de exposición resultan en el mismo material. Se encontró que la clorofila participa en la foto-oxidación de limoneno al nuevo producto que da una respuesta positiva de color púrpura en la prueba de vainillina. Este material mostró una elevada actividad antifungal en el bioensayo de inhibición de elongación de conidia de Penicillium digitatum. La actividad resultante fue mucho mayor que aquella de escoparona o escopoletina, materiales que se conocen como fitoalexinas endógenas de frutas cítricas, o que aquel del citral que se conoce como el material antifungal constitutivo más activo en la fruta de limón (Ben Yehoshua et al, 1992) . Otra observación muestra que este material induce los mecanismos de resistencia de la fruta del cítrico, tal como la obtención de la acumulación de fitoalexina (Figura 1) . El tratamiento de limones no inoculados al inyectar 5µ?_ de limoneno foto-oxidado en el tejido de albedo, justo debajo del flavedo, produce en estos limones la producción de escoparona y escopoletina hasta los niveles adecuados para proteger la fruta del patógeno. Se lograron resultados similares al inyectar el diclorometano o el extracto crudo de hexano del flavedo de limón que se demuestra que evita completamente la descomposición (Fig. 7). Similarmente, al lesionar las glándulas de aceite o inyectar limoneno en el tejido de albedo de limones verdes maduros, resultó en un efecto muy importante de producción de los mecanismos resistencia endógenos de frutas cítricas como se muestra por la acumulación de escoparona en la Figura 1. Tal lesión de la fruta amarilla dio una respuesta mucho menor que muestra que la madurez de la fruta afecta esta respuesta de resistencia y la fruta más vieja es menos protegida (Fig. 2) . De hecho, esta resistencia inferior de la fruta amarilla se observa en muchos otros experimentos. De manera interesante, la inyección de citral no produce la misma respuesta protectora (Fig. 1) . Probablemente, la inyección de citral a diferencia del limoneno, no indujo la producción del material activo positivo de vainillina. Adicionalmente , los niveles mucho mayores de escoparona (de más de 1000 µg/g de peso fresco) y escopoletina (de más de 200 g/g de peso fresco) se encontraron después de sumergir la fruta inoculada en el extracto crudo de diclorometano que evita la descomposición (Fig. 7) . El nivel de fitoalexinas encontrado fue varias veces la cantidad requerida para controlar completamente los patógenos. Así aparentemente, los hidroperóxidos de limoneno formados forman especies de oxígeno reactivas, que producen el sistema inmune de la planta. Tales especies reactivas de oxígeno afectan también al patógeno. Estas especies reactivas de oxígeno tienen una vida corta y se descomponen bien antes de que la fruta se distribuya al mercado. Un aspecto importante de esta nueva invención es que el control de descomposición del patógeno se logra por una inhibición directa del patógeno, así como por la producción de mecanismos endógenos de la resistencia de plantas. Así, el limoneno tratado con sol o ultravioleta o el extracto crudo tratado con sol, ejerce una actividad antifungal directa así como la obtención de la resistencia endógena. Se reportó previamente, sin ninguna relevancia a la actividad antifungal, (Schieberle, P., Maier, W. Firl, J. and Grosch, W. 1987, HRGC separation of hydroperoxides formed during the photosensitized oxidation of (R) - (+) -limonene . J. of High Resolution Chromatography & Chromatography Communications p. 588) que irradiando el limoneno se producen diversos peróxidos. Se muestra ahora que los hidroperóxidos formados, y en particular (1S, 4R) -p-menta-2 , 8-dien-l-hidroperóxido ; (IR, 4R) -p-menta-2 , 8-dien 1 -hidroperóxido; (2R, 4R) -p-menta-6 , 8-dien 2 -hidroperóxido; y (2S , 4R) -p-menta-6, 8-dien 2 -hidroperóxido se pueden usar como biocidas efectivos en la solución acuosa de la presente invención. La presencia de estos hidroperóxidos en el limoneno irradiado de la presente invención, se confirma por espectrometría de masas de cromatografía y estudios de resonancia magnética nuclear (no se muestran los datos) . En la presente invención, un procedimiento novedoso que da concentraciones altas de hidroperóxidos, se desarrolló como la Rosa Bengala como el catalizador o activador que eleva el oxígeno en la reacción hasta el nivel de energía de un oxígeno singlete. Al utilizar este procedimiento resulta en que casi la totalidad del limoneno se convierte a los hidroperóxidos. La mezcla de estos hidroperóxidos es muy efectiva en controlar la descomposición de los limones inoculados aún a la dosis de 2500 ppm (Fig. 11) . Los experimentos hechos muestran claramente que si la extracción cruda de la cáscara, o si el limoneno extraído no se irradia o expone a la luz del sol, la solución del limoneno resultante de hecho no está adecuadamente activa y es demasiado variable para la inhibición de la descomposición. La descomposición en tales casos se desarrolla como si la fruta no estuviera en contacto con una formulación microbiocida en absoluto. Así, la actividad antifungal así como la inducción de los mecanismos de resistencia como se muestra por la acumulación de la escoparona se refieren a estos hidroperóxidos de limoneno. La exposición a la luz del sol o la irradiación del clorometano o el extracto de hexano del flavedo de limón, se deben efectuar por 3 a 6 horas. La eficiencia de la formulación de hidroperóxido en extracto como una composición biocida crece con periodos prolongados de exposición de la fruta a la solución de hidroperóxido. Al sumergir la fruta inoculada en una solución de hidroperóxido (limoneno expuesto a 4 horas de luz de sol) por 4 periodos consecutivos de 1 minuto, resulta cada uno en la prevención de las descomposición de los limones inoculados que se mantienen a 20°C por un periodo de 3 semanas (Figura 9) . El efecto de la exposición de limoneno a 3 horas de luz de sol y su eficiencia para evitar la descomposición en comparación sin tratamiento (inmersión en agua) o tratamiento con una solución de etanol (25%) se resumen en la Tabla 4, en un experimento tipo comercial con fruta no inoculada. Adicionalmente, un rocío en el huerto con una formulación acuosa de 5000, 10,000 ó 20,000 ppm de limoneno en solución de etanol al 25%, que se había convertido completamente, indujo la producción de escoparona y escopoletina en la fruta Valencia sobre (y fuera) del árbol, redujo la descomposición de esta fruta cuando se inocula con P. digitatum después de la cosecha (no se presentan los datos) . En un experimento por separado, el citral y el limoneno tratado al sol (disuelto en etanol al 25%) mostró una inhibición notable de otro patógeno Cladosporium herbarum que crece en la mazorca de maíz inoculada. El método convencional de control de la descomposición en cajas de empaque de cítricos, comprende diversos compuestos que también son ambientalmente amigables, pero que no incluyen en la formulación actual por razones técnicas. Tales compuestos son las sales de calcio, ácido giberélico, acetaldehído del ácido 2 , 4-dicloroacético, quitosan o quitosan más una concentración baja de metales tales como Zn o Cu, algunos ácidos orgánicos tales como el ácido acético, ácido propiónico, etc. Estos compuestos pudieran ser parte de la nueva formulación ambientalmente amigable. De hecho, los datos recientes demostraron tal actividad. De hecho, al disminuir el pH de las formulaciones hasta 2 ó 3 se ayuda también al control del patógeno en los experimentos de frutas inoculadas . Se ilustrará ahora la invención con mayor detalle en los siguientes ejemplos no limitativos con referencia ocasional a las figuras anexas.

Ejemplos Ejemplo 1 Concentración Mínima Inhibidora contra P . digi ta txim y Modo de Acción de los Aceites Esenciales en Comparación al Imazalil La concentración inhibidora mínima (MIC) de más de 50 compuestos que se encontraron en las glándulas de aceite de frutas cítricas se evalúo (in vitro) , al establecer la concentración más baja del compuesto en donde no se presentó crecimiento del patógeno (in vitro) en cajas petri . La Tabla 5 da el MIC de los compuestos más prometedores (en comparación con el imazalil) . La cantidad requerida de cada uno de los compuestos a probarse, disuelta en 0.5 mi de acetona, se agrega a una caja petri estéril (90 mm) que contiene 15 mi de agar de dextrosa de papa fundida (PDA) (50°C) para dar una concentración final de 1 mg mi"1. La caja se agitó suavemente para asegurar una distribución uniforme del compuesto de prueba y el agar luego se dejó asentar. Las cajas se inocularon usando un disco micelial (8 mm) cortado de un cultivo de placa de agar P. digi ta tum que no había comenzado todavía la esporulación. Se colocaron los discos miceliales en el centro de cada caja de prueba y luego se pusieron a 24°C. Se observó la inhibición fungal al medir el diámetro del crecimiento hifal después de 7 días. Se hizo una prueba adicional (in vitro) para investigar si el modo de acción fue Fungicida o fungiestático ; se transfirió el disco micelial del inoculo de la placa de ensayo a una placa que sólo contenía PDA. Luego se observaron las placas para crecimiento durante los siguientes 5 días. Si se reestablece el crecimiento, el compuesto se clasifica como fungiestático, y si no se reestablece el crecimiento se clasifica como Fungicida. Los resultados se muestran en las Tablas 5 y 6.

Tabla 5: Concentración Mínima Inhibidora (MIC) contra P. digitatum y Modos de Acción Compuesto de prueba MIC mg mi'1 agar Modo de acción Imazalil <0.025 Fungicida Decanol 0.05 Fungiestático Octanol 0.1 Fungicida Nonanol 0.2 Fungiestático Citral 0.4 Fungicida Aldehido cinámico 0.4 Fungicida Periladelhído 0.4 Fungicida Perilalcohol 0.4 Fungicida Citronelal 0.6 Fungiestático Terpineol 0.8 Fungicida Carveol 1.0 Fungiestático Tabla 6 : Efectos Inhibidores de Diversos Compuestos contra 3 Especies Diferentes de Patógenos del Cítrico en el Ensayo de Difusión de Agar In Vitro ÁREA DE INHIBICIÓN DE CRECIMIENTO DEL PATÓGENO1 (cm2) Compuesto Geotrichum Penícilliu Al ternaria candidum i talicu Citri Imazalil 8.3 Inhibición 42.8 total Aldehido 24.2 Inhibición Inhibición cinámico total total Octanal 3.6 2.6 5.3 Decanol 0.95 Inhibición Inhibición total total 1 -Octanol Inhibición Inhibición Inhibición total total total peri1aldehido Inhibición Inhibición Inhibición total total total Citral 10.6 Inhibición Inhibición total total ¦"¦La inhibición total es la inhibición máxima que es 62.3 cm2.

Método de Eneayo de DifuBión en Agar Se preparó y esterilizó el agar de dextrosa de papa (Difco) . Luego se enfrió el medio en un baño de agua hasta 50°C previo a la inoculación por la adición de una suspensión de esporas de P. digitatum en agua estéril, para hacer la concentración final de las esporas en el medio a 10" esporas/ral . El medio se mezcló suavemente para dispersar las esporas de manera uniforme, previo a dosificar 15 mi dentro de cada caja petri de 90 mm de diámetro. Cinco mg de cada substancia a probarse se pipetearon en un papel disco de ensayo Whatman antibiótico de 13 mm estéril, que se colocó centralmente en la placa de agar inoculado. Se incubaron las placas a 24 °C por 3 días. Se observó la actividad antifungal al medir el ancho de la zona transparente del borde de disco de papel al área del crecimiento fungal . Los valores son para el radio (mm) de la zona del crecimiento inhibido del patógeno en la caja petri. La inhibición total del crecimiento significa que el crecimiento se inhibió completamente. En otros experimentos (no se muestran los datos) se encontró que el citral y otras formulaciones de aceites esenciales fueron efectivas en el control de crecimiento de los hongos P. digitatum y de la bacteria Erwinia carotovora, un patógeno importante de los productos agrícolas.

Ejemplo 2 Se cosecharon toronjas sin manchar del huerto, y el mismo día se clasificaron de nuevo en el laboratorio para eliminar la frutas dañadas. La toronja se lavó con agua de la llave y se secó al aire. Luego se inoculó cada fruta al perforar su tejido de flavedo 1.5 mm de profundidad, con una herramienta que incorpora 3 agujas en 3 sitios diferentes. Previo a cada perforación, se sumergió la herramienta en una suspensión de esporas de Penicillium digitatu (10s esporas/ml) . Se mantuvo la toronja inoculada a 17°C y una humedad relativa de 85% por 24 horas, después de lo cual se dividió la toronja en 6 grupos y se trataron las toronjas de cada grupo al sumergir por 2 minutos en (a) agua, (b) etanol al 25%, (c) 0.2% Geraniol en 25% EtOH; (d) 0.1% de citral en 25% EtOH, (e) 0.2 % de citral en 25% EtOH y (f) 0.5% en citral en 25% EtOH. El porcentaje de fruta podrida en cada grupo se mide cada día después del tratamiento y se muestran los resultados en la Figura 3. Como se muestra en la Figura 3, la fruta de control (sumergida solamente en agua) desarrolla la descomposición rápidamente alcanzando 100%, 8 días después de la inoculación. La descomposición de la fruta sumergida en 25% de etanol (EtOH) se retrasó, pero 6 días después de la inoculación, una elevación rápida en la descomposición de la fruta tratada con EtOH comenzó y 3 semanas después de la inoculación, se pudrieron más del 50% de las frutas. En contraste, la fruta sumergida en 0.2% Geraniol y 0.1-0.2% citral disuelta en 25% EtOH mostró una tasa de descomposición y al día 18 después de la inoculación, solamente se pudrieron 20-40% de la fruta en estos grupos. La inhibición más eficiente de la descomposición resultó de la inmersión de la fruta inoculada en 0.2% citral disuelto en 25% EtOH lo cual inhibe completamente la descomposición de la fruta hasta 18 días después de la inoculación, y resulta en solamente 20% de la fruta que muestra descomposición tanto como 28 días después de la inoculación. La dosis de 0.5% citral fue demasiado alta y en este experimento mejoró la descomposición debido a la fitotoxicidad .

Ejemplo 3 Se inocularon limones como se muestra y se trataron con o sin 25% de etanol para verificar si 5000 ppm del emulsificante Tween 20 puede estabilizar la actividad antifungal del citral. Los resultados, que se muestran en la Figura 4, demuestran que esta concentración de Tween 20 mejora la actividad del citral. Adicionalmente , previene la fitotoxicidad que se provoca usualmente por el citral, si no se disuelve por etanol. Probablemente el emulsificante permite la formación de una emulsión estable microcoloidal , que evita la fitotoxicidad al permitir la dispersión uniforme del citral, que es fitotóxico por sí mismo en estas concentraciones. Así, el Tween 20 combinado con el antioxidante BHA puede sustituir al etanol en la formulación.

Ejemplo 4 Naranjas umbilicadas Washington no inoculadas se dividieron en 4 grupos que se trataron como sigue: (a) sin tratamiento; (b) sumergida en 50% de etanol ; (c) sumergida en 0.2% Citral en emulsificante 0.2% L-77 (emulsión acuosa); (d) sumergida en 0.2% Citral en 50% etanol; y (e) sumergida en una solución de Imazalil acuosa a 0.2%. Las naranjas luego se almacenaron por cuatro meses a 15°C en una humedad relativa de 50-75%, y se midió el porcentaje de fruta podrida en cada grupo en periodos de tiempo diferentes después del almacenamiento. Los resultados se muestran en la Tabla 3. Como se puede observar en la Tabla 3, el porcentaje de fruta podrido después del tratamiento con la formulación de la invención (0.2% citral en etanol al 50%) fue significativamente inferior que aquel del tratamiento con citral en una emulsión acuosa o solamente con etanol. Además, los resultados con la formulación de la invención son comparables con aquellos logrados con imazalil. El alto nivel de descomposición en el tratamiento con citral con el emulsificante al 0.02% se provocó probablemente por la fitotoxicidad que se observa en este tratamiento, debido a la falta de etanol o a un nivel superior de emulsificante .

Ej emplo 5 Se dividen cortes de carne de res en los siguientes dos grupos: (a) cortes de carne no tratados; (b) cortes de carne inmersos durante 30 segundos en Citral al 0.2% disuelto en etanol al 20%. Los cortes de carne se almacenan entonces a 1°C y 85% de humedad relativa, y se lleva a cabo una cuenta total de población de microbios en cada corte de carne 2 semanas después del tratamiento. Los resultados muestran que las cuentas totales de la población de microbios en los cortes de carne tratados por el citral disuelto en etanol al 20%, fueron menores al 10% de la cuenta total encontrada en los cortes de carne no tratados.

Ejemplo 6 Se sumergieron limones inoculados con Penicillium como se muestra en el Ejemplo 2 durante 2 minutos en una solución acuosa que comprende citral, emulsificante (Tritón X100) y BHA a varias concentraciones. La concentración de Citral es del 1.0%. La solución de control comprende Tritón X100 al 0.5%. Los resultados se muestran en la Figura 5. El efecto del BHA al 0.1% en el aumento de la actividad del citral para prevenir el desarrollo de los patógenos, se muestra claramente .

Ejemplo 7 Se trataron limones inoculados con Penicillium como se muestra en el Ejemplo 2 con una solución acuosa que comprende citral al 0.5%, BHA al 0.3%, Tween 20 e imazalil, y se almacenan a 20°C durante un periodo de 21 días. Los resultados se muestran en la Figura 6. Las concentraciones de imazalil de 1 y 10 ppm fueron insuficientes para controlar completamente la descomposición. Sin embargo, la adición de citral al 0.5% a los 10 ppm de imazalil previene completamente la descomposición y permite reducir tanto la dosis como los residuos de este funguicida sintético, efectivo, pero indeseable. La adición de citral al 1 ppm de imazalil no controla la descomposición adecuadamente, pero fue mucho mejor que la 1 ppm de imazalil por sí mismo.

Ejemplo 8 Se sumergieron limones inoculados con Penicillium 104 esporas/ml un día después en una solución acuosa que comprende citral y un detergente (Tween 20) , otros aceites esenciales así como alguna combinación de los aceites esenciales más efectivos y se mantienen durante un periodo de seis días. Los resultados de la protección de microbios realizada con estos varios aceites esenciales se muestra en la Tabla 7. Algunos de estos aceites esenciales, particularmente ácido cinámico, vainillina, octanol y mezcla de varios aceites esenciales, fueron más efectivos en estos experimentos que el citral. Adicionalmente , su actividad contra P. digritatum se mantiene durante más tiempo.

TABLA 7 Efecto de varios aceites esenciales en el porcentaje descomposición de fruta inoculada mantenida 6 días a 20°C.

No. TRATAMIENTO % de descomposición 1. Sumergido en agua 73 2. Etanol al 25% 30 5000 ppm de 1-octanol + EtOH al 25% + 3. 5000 ppm de Tween 20 7 1000 ppm de citral + 1000 ppm de 1- nonanol + 1000 ppm de 1-octanol + 1000 4. ppm de carveol + EtOH al 25% + 4000 ppm de Tween 20 7 2500 ppm de ácido trans-cinámico + EtOH 5. al 25% + 2500 ppm de Tween 20 3 2500 ppm de 1-octanol + EtOH al 25% + 6. 2500 ppm de Tween 20 10 2500 ppm de benzaldehido + EtOH al 25% + 7. 2500 ppm de Tween 20 20 2500 ppm de citral + EtOH al 25% + 2500 8. ppm de Tween 20 13 2500 ppm de vainillina + EtOH al 25% + 9. 2500 ppm de Tween 20 7 2500 ppm de carveol + EtOH al 25% + 2500 10. ppm de Tween 20 23 Ejemplo 9 Procedimiento general para obtener un extracto crudo más activo del flavedo de limón. Se tomó flavedo de la fruta del limón (exocarpio) y se extrajo durante la noche en diclorometano, luego se expone a la luz del día durante alrededor de 18 horas hasta que el color del extracto de diclorometano se vuelve café. El flavedo se mezcló y se filtró a través de una capa de papel Whatman. La solución de extracto se evaporó para remover el diclorometano y el licor denso se separó además por cromatografía con una columna de sílice 60 usando diclorometano como el portador. Dos fracciones de diclorometano, una verde y la otra incolora, se obtienen después de la cromatografía. El extracto activo crudo se aisló por evaporación de la fracción de diclorometano verde. Se remojó fruta de limón con Penicillium digitat m 10* esporas/ml 24 horas después de la inoculación en una solución etanólica que comprende los compuestos positivos de vainillina extraídos, y se mantiene entonces a 20°C. El efecto de los compuestos en el desarrollo patógeno en la fruta se revisó diariamente durante el almacenamiento. El efecto se muestra en la Figura 7, para varias concentraciones (10,000, 5,000 y 2,500 ppm del extracto crudo) en comparación con el efecto alcanzado por una solución de etanol , imazalil o agua. Las 10, 000 ppm del extracto crudo previenen completamente el desarrollo del patógeno. En tal dosis alta del extracto crudo, algo de fruta muestra alguna fitotoxicidad . Sin embargo, se muestra que esta fitotoxicidad fue principalmente causada por los diferentes compuestos y no por los componentes antifungales activos, ya que la fitotoxicidad podrá removerse mientras se mantiene la actividad biocida. Se alcanzan resultados similares por las extracciones de hexano del limoneno.

Ejemplo 10 Se preparan hidroperóxidos de limoneno por las siguientes dos rutas del limoneno. Ruta 1: Por fotooxidación : La conversión del limoneno y el rendimiento de la reacción fue cercanamente del 100% después de aproximadamente 8 horas de tiempo de reacción. Se usó EtOH puro como el solvente, Rosa Bengala como activador. Otros activadores a la luz, por ejemplo clorofila, también catalizan la reacción. Se usa una lámpara de mercurio de alta presión con un filtro WG 345 para la reacción fotocatalítica . Otras vías de excitación de luz, tipo luz monocromática (emisión de luz «345 nm en el caso del Rosa Bengala) , luz UV, láser, también dan el producto de hidroperoxido de limoneno. Ruta 2: Por medio de una ruta catalítica heterogénea (sin luz) : Se usó molibdato de sodio (Na2Mo04 2H20) como un catalizador, se agregó 300 mi de H202 concentrado como un agente de oxidación al solvente, a 700 mi de EtOH. Las condiciones de reacción para llegar a los productos deseados fueron: presión atmosférica, temperatura 50°C y 5-6 horas de tiempo de reacción agitación continua. La conversión del limoneno y el rendimiento de la reacción fue cercano al 100%.

Se comparan los productos de las dos rutas. Las mediciones de la cromatografía en gas muestran distribuciones de productos aproximadamente similares. La actividad antifungal de los productos preparados en las dos diferentes rutas se revisa en el mismo método. Los limones inoculados con Penicillium (104 esporas/ml) se sumergen en una solución acuosa que comprende hidroperóxido de limoneno, un detergente (Tween 20), y etanol . Se evalúa la descomposición a intervalos específicos durante un periodo de 26 días. Los resultados de la protección de microbios realizada con estas mezclas se muestra en las Figuras 11 y 12. En el caso de la Ruta 1, la fitotoxicidad de la fruta toma lugar después del remojo. Al incrementar la cantidad de Tween 20 en la mezcla, y al remover la Rosa Bengala, se elimina o al menos se reduce marcadamente esta fitotoxicidad. La Rosa Bengala se separa del hidroperóxido activo al montar la solución en una columna de sílice usando una mezcla hexano : acetato etílico 9:1. Después de remover la Rosa Bengala, se encuentra muy poco, si es que hay, de daño fitotóxico . La formulación usada comprende hidroperóxido de limoneno al 0.25%, Tween 20 al 1%, 400 ppm de Rosa Bengala y EtOH al 25%. Tal composición inhibe completamente el desarrollo de descomposición, sin ninguna fitotoxicidad . Sesenta días después de la inoculación no se encuentra descomposición en la fruta tratada, mientras que en la muestra usada como control, la fruta inoculada se pudre después de 5 días (Figura 11) . Este efecto antifungal puede explicarse tanto por el efecto antifungal directo del hidroperóxido de limoneno y también el nivel incrementado de escoparona y escopoletina que se induce por los hidroperóxidos de limoneno mostrados previamente para el limoneno tratado con sol (Figura 1) . En el caso de la Ruta 2, la formulación usada comprende hidroperóxido de limoneno al 0.5% y 0.25%, Tween 20 al 2% y EtOH al 25%. No se desarrolla descomposición de los limones inoculados durante 12 días (Figura 12) . La dosis de LHPO al 0.5% dio un control completo de la descomposición y el LHPO al 0.25% tiene todavía algo de desarrollo de descomposición. La solución de control, que comprende Tween 20 al 2% y EtOH al 25% exhibe una actividad antifungal muy baja (90% de descomposición) mostrando nuevamente que el compuesto activo es el hidroperóxido de limoneno. Se prefiere la Ruta 2, en vista del hecho de que la Rosa Bengala, que se usa como un catalizador en la Ruta i, tiene efectos indeseables: reduce la actividad antifungal y aumenta la fitotoxicidad, y al final de la reacción deberá removerse del compuesto activo.

Ejemplo 11 Se sumergen limones inoculados con Penicillium (104 esporas/ml) en una solución acuosa que comprende citral, un detergente (Tween 20) , otros componentes de aceite esenciales, así como un extracto crudo de diclorometano de flavedo de limón expuesto a la luz del sol. Se evalúa la descomposición a intervalos específicos durante un periodo de 20 días. Los resultados de la protección microbiana realizada con estos varios aceites esenciales se muestra en la Figura 8. La combinación del citral, crudo, tratado al sol, y 1-octanol a una concentración de 0.5% y 0.25%, respectivamente, muestra la inhibición del desarrollo de la descomposición por más de 20 días (Figura 8) . Estos tratamientos resultan en menos del 5% de descomposición, mientras que el control se encuentra que es mayor al 95%. Adicionalmente , menos del 10% de descomposición en la fruta se presenta después del tratamiento con una combinación de citral al 0.25% y 1-octanol al 0.25%, o citral al 0.25% y crudo tratado al sol a 0.25%, o citral al 0.125%, crudo tratado al sol al 0.125% y 1-octanol al 0.125%. Ejemplo 12 Se expone el limoneno puro a la luz del sol durante tres horas. Se prepara una composición microbiocida al disolver el limoneno tratado en una solución acuosa que contiene etanol al 25% y un detergente (Tween 20) . Los limones inoculados con Penicillium 104 esporas/ml se sumergen durante un minuto una vez hasta cuatro veces un día después de la inoculación en la composición que comprende la solución de limoneno expuesta a la luz del sol y almacenada a 20°C. El efecto del limoneno tratado con el sol en el desarrollo de patógenos en la fruta se revisa diariamente durante su almacenado. La Figura 9 muestra el efecto del número de inmersiones y la longitud de cada inmersión en la reducción de la descomposición. Los datos sugieren que los resultados se afectan mayormente por la cantidad de material absorbido por el patógeno o los tejidos de la fruta. Esta figura muestra que el limoneno tratado por la luz del sol da un mejor control de la descomposición después de más, o más largas, inmersiones en comparación con una inmersión.

Ejemplo 13 Se irradió limoneno puro con luz UV (254 nm) durante tres horas . Se preparó una composición microbiocida al disolver el limoneno tratado en una solución acuosa que contiene etanol al 25% y un detergente (Tween 20) . Los limones inoculados con Penicillium 104 esporas/ml se sumergen una vez hasta tres veces en la solución un día después de la inoculación durante un minuto en la solución irradiada y se almacenan a 20°C. En el caso de inmersiones múltiples, la fruta se deja que seque durante una hora entre dos inmersiones consecutivas. El efecto del limoneno tratado con irradiación ultravioleta en el desarrollo de patógenos en la fruta se revisa durante un mes. La Figura 10 muestra la inhibición de la descomposición similar por la solución de alcohol al 25% y el tratamiento de una inmersión en 2500 ppm de limoneno tratado con luz UV (definido como 3UVL) . Las tres inmersiones consecutivas en el limoneno tratado con luz UV, (definido como 3UVL3) tiene un control de la descomposición mucho mejor que todos estos tratamientos. La solución de control es una solución acuosa que contiene Tween 20.

Ejemplo 14 Se hacen crecer células de Staphylococcus aureus de tipo silvestre (5xl08, OD600 = 0.219) durante 3 horas en un caldo de cultivo (cy/gp) a 37°C con una concentración diferente de extractos 5-100µ1. El OD se determina a 600nm. La muestra 1 comprende 2000 ppm de citral, etanol al 25% y 2000 ppm de Tween 20. La muestra 2 comprende las mismas substancias como la muestra 1 junto con 500 ppm de ß-CD y 300 ppm de BHA. Ambas muestras 1 y 2 inhiben significativamente el crecimiento celular del Staphylococcus aureus. Las mismas composiciones de substancias sin citral (MUESTRAS 3, 4) no inhiben el crecimiento del patógeno (Figura 14) .

Ejemplo 15 Se hacen crecer células de Candida albicans de tipo silvestre (IxlO3) en un caldo de cultivo a 37°C con diferentes concentraciones de extractos 50-100µ1. El OD se determina a 600nm. Se dan los siguientes tratamientos en 6 diferentes tubos : TUBO 1. 2000 ppm de Citral + Etanol al 25% + 2000 ppm de Tween 20. TUBO 2. 2000 ppm de Citral + Etanol al 25% + 2000 ppm de Tween 20 + 3000 ppm de BHA. TUBO 3. 2000 ppm de limoneno tratado al sol + 2000 ppm de Tween 20. TUBO 4. 2000 ppm de limoneno tratado al sol + etanol al 25% + 2000 ppm de Tween 20. TUBO 5. Etanol al 25% + 2000 ppm de Tween 20. TUBO 6. Etanol al 25% + 2000 ppm de Tween 20 + 500 ppm de ß-CD + 300 ppm de BHA. 2000 ppm de citral en etanol al 25% y 2000 ppm de Tween 20, o las mismas substancias junto con 500 ppm de ß-CD, 300 ppm de BHA, o limoneno tratado al sol disuelto ya sea con etanol al 25% o 2000 ppm de T een 20, inhibe completamente el crecimiento celular de este organismo. Las mismas composiciones de substancias sin citral o limoneno tratado al sol (Tubos 5 y 6) no inhiben el crecimiento del patógeno (Figura 15) . No obstante que la invención se ha descrito en conjunto con las modalidades específicas, es evidente que muchas alternativas y variaciones serán aparentes para aquellos expertos en el arte a la luz de la descripción anterior. En consecuencia, la invención se pretende que abarque todas las alternativas y variaciones que caen dentro del espíritu y alcance de las reivindicaciones adjuntas. Se hace constar que con relación a esta fecha, el mejor método conocido por la solicitante para llevar a la práctica la citada invención, es el que resulta claro de la presente descripción de la invención.

Claims (1)

1. Reivindicaciones Habiéndose descrito la invención como antecede se reclama como propiedad lo contenido en las siguientes reivindicaciones . 1. Una formulación microbiocida acuosa, caracterizada porque comprende : (i) una cantidad efectiva de al menos un componente de aceite esencial, o derivados del mismo, los derivados del mismo se obtienen por exposición a la luz o por oxidación, o mezclas de los mismos ; y (ii) al menos un estabilizador adicional seleccionado del grupo que consiste de etanol, en una cantidad desde 10% a alrededor de 50%, un emulsificante , un antioxidante, o un agente encapsulante . 2. La composición microbiocida acuosa de conformidad con la reivindicación 1, caracterizada porque el emulsificante se selecciona del grupo que comprende alcohol de alquilaril poliéter, monolaurato de polioxietilen sorbitán, monooleato de polioxietilen sorbitán, alcohol de octil-fenil poliéter o mezclas de los mismos. 3. La formulación microbiocida acuosa de conformidad con la reivindicación 1, caracterizada porque el antioxidante se selecciona del grupo que comprende hidroxianisol butilado (BHA) , ácido ascórbico, hidroxitolueno butilado (BHT) ácido isoascórbico, a-tocoferol , ß-caroteno, o mezclas de los mismos . . La formulación microbiocida acuosa de conformidad con la reivindicación 1, caracterizada porque el agente encapsulante se selecciona del grupo que comprende almidón de maíz, maltodextrina , gel de sílice, ß-ciclodextrina, caseína, quitosán y mezclas de los mismos. 5. La formulación microbiocida acuosa de conformidad con la reivindicación 1, caracterizada porque el componente de aceite esencial se selecciona del grupo que comprende de hidrocarburos de monoterpenos o sesquiterpenos , derivados de terpeno oxigenados, derivados que no son de terpenos tales como aldehidos, alcoholes, ácidos, ésteres y fenólicos. 6. La formulación microbiocida acuosa de conformidad con la reivindicación 5, caracterizada · porque el componente de aceite esencial se selecciona del grupo que comprende perilaldehído, citral, terpineol, terpinen-4-ol, peril alcohol, carvona, carveol, 6-metil-5-hepten-2-ona, C7-nCHO, C7-10OH, geraniol, limoneno, aldehido cinámico, ácido cinámico, carvacrol , vainillina o mezclas de los mismos. 7. La formulación microbiocida acuosa de conformidad con la reivindicación 5, caracterizada porque el componente de aceite esencial se selecciona del grupo que consiste de citral, geraniol, carvacrol, 1-octanol, perilaldehído, decanol, aldehido cinámico, ácido cinámico, o una mezcla de los mismos . 8. La formulación microbiocida acuosa de conformidad con la reivindicación 1, caracterizada porque el componente derivado de aceite esencial es limoneno oxidado, preferiblemente hidroperóxido de limoneno. 9. La formulación microbiocida acuosa de conformidad con la reivindicación 8, caracterizada porque la oxidación es una oxidación heterogénea en presencia de una sal de molibdato. 10. La formulación microbiocida acuosa de conformidad con la reivindicación 1, caracterizada porque el componente derivado de aceite esencial es limoneno expuesto a luz solar o radiación ultravioleta. 11. La formulación microbiocida acuosa de conformidad con la reivindicación 10, caracterizada porque el limoneno se expone a luz solar o radiación ultravioleta después de su extracción de su fuente natural . 12. La formulación microbiocida acuosa de conformidad con la reivindicación 1, caracterizada porque una fuente natural que contiene una mezcla de componentes de aceites esenciales que comprende una cantidad de limoneno, se expone a luz solar o radiación ultravioleta previo a la extracción de los componentes de aceites esenciales. 13. La formulación microbiocida acuosa de conformidad con la reivindicación 1, caracterizada porque una fuente natural que contiene una mezcla de componentes de aceites esenciales que comprende una cantidad de limoneno, se expone a luz solar o radiación ultravioleta después de su extracción de su fuente natural . 1 . La formulación microbiocida acuosa de conformidad con las reivindicaciones 12 ó 13, caracterizada porque la fuente natural que contiene una mezcla de componentes de aceites esenciales, es cascara de cítricos. 15. Una formulación microbiocida acuosa de conformidad con cualesquiera de las reivindicaciones 10 a 14, caracterizada porque el limoneno o mezcla de componentes de aceites esenciales se expone a luz solar por un periodo de alrededor de 4 horas . 16. Una formulación microbiocida acuosa de conformidad con cualesquiera de las reivindicaciones 10 a 14, caracterizada porque el limoneno o la mezcla de componentes de aceites esenciales se expone a radiación ultravioleta por un periodo de alrededor de 3 horas . 17. La formulación microbiocida acuosa de conformidad con la reivindicación 7, caracterizada porque la concentración del aceite esencial es desde alrededor de 0.1% a alrededor de 1%. 18. La formulación microbiocida acuosa de conformidad con la reivindicación 16, caracterizada porque la concentración del limoneno irradiado con luz, o mezcla de componentes de aceites esenciales está en el intervalo desde alrededor de 1000 µL· L"1 hasta alrededor de 12, 000 µ?? LT1. 19. La formulación microbiocida acuosa de conformidad con la reivindicación 1, caracterizada porque comprende como un componente activo citral, 1-octanol y mezcla de componentes de aceites esenciales, que comprenden una cantidad substancial de limoneno expuesto a luz solar o radiación ultravioleta después de su extracción. 20. La formulación microbiocida acuosa de conformidad con la reivindicación 1, caracterizada porque comprende como un componente- activo 1 -octanol y mezcla de componentes de aceites esenciales, que comprenden una cantidad substancial de limoneno expuesto a luz solar o radiación ultravioleta después de su extracción. 21. La formulación microbiocida acuosa de conformidad con la reivindicación 1, caracterizada porque comprende además un biocida adicional, en una concentración desde alrededor de 5 ppm a alrededor de 100 ppm. 22. La formulación microbiocida acuosa de conformidad con la reivindicación 21, caracterizada porque el biocida se escoge del grupo que comprende imazalil, tiabendazol, panoctine, rovral, procloraz, ortofenilfenato de sodio, metalaxil, fosetil-al, captan, oxiquinolina, cloruro de dicloran benzalconio, canon, tiofanato-metil , triforina, carbendazim, triademinol, vinclozolin, etaconazol, o mezclas de los mismos. 23. La formulación microbiocida acuosa de conformidad con la reivindicación 1, caracterizada porque el pH de la formulación está en el intervalo desde alrededor de 1 a alrededor de 9. 2 . La formulación microbiocida acuosa de conformidad con cualesquiera de las reivindicaciones anteriores, caracterizada por la protección de frutas y vegetales contra la descomposición post-cosecha. 25. La formulación microbiocida acuosa de conformidad con cualesquiera de las reivindicaciones anteriores, caracterizada por la protección de frutas y vegetales contra la descomposición pre- cosecha. 26. La formulación microbiocida acuosa de conformidad con la reivindicación 1, caracterizada porque es para evitar que se eche a perder carne o pescado. 27. La formulación microbiocida acuosa de conformidad con la reivindicación 1, caracterizada porque es para evitar el crecimiento de células de Staphylococcus aureus. 28. La formulación microbiocida acuosa de conformidad con la reivindicación 1, caracterizada porque es para evitar el crecimiento de Candida albicans. 29. La formulación microbiocida acuosa de conformidad con la reivindicación 1, caracterizada porque el aceite esencial es geraniol, perilaldehído, limoneno o citral, para su uso como un componente de una composición nutritiva farmacéutica . 30. Un método para inhibir el desarrollo de microbios, que comprende la aplicación de una cantidad efectiva de una formulación acuosa, la formulación acuosa caracterizada porque comprende : (i) una cantidad efectiva de al menos un componente de aceite esencial, o derivados del mismo, los derivados del mismo se obtienen por exposición a la luz o por oxidación, o mezclas de los mismos ; y (ii) al menos un estabilizador adicional seleccionado del grupo que consiste de etanol en una cantidad desde 10% a alrededor de 50%, un emulsificante , un antioxidante, o un agente encapsulante . 31. El método de conformidad con la reivindicación 30, caracterizado porque el agente emulsificante se selecciona del grupo que comprende de alcohol del alquilaril poliéter, monolaurato de polioxietilen sorbitán, monooleato de polioxietilen sorbitán, alcohol de octil-fenil poliéter, o mezclas de los mismos. 32. El método de conformidad con la reivindicación 30, caracterizado porque el antioxidante se selecciona del grupo que comprende hidroxianisol butilado (BHA) , ácido ascórbico, hidroxitolueno butilado (BHT) ácido isoascórbico, a-tocoferol, ß-caroteno, o mezclas de los mismos. 33. El método de conformidad con la reivindicación 30, caracterizado porque el agente encapsulante se selecciona del grupo que comprende almidón de maíz, maltodextrina, ß-ciclodextrina, gel de sílice, caseína, quitosán y mezclas de los mismos. 34. El método de conformidad con la reivindicación 30, caracterizado porque el componente de aceite esencial se selecciona del grupo que comprende de hidrocarburos de monoterpeno, sesquiterpenos, derivados de terpeno oxigenados, derivados que no son de terpenos tales como aldehidos, alcoholes, ácidos, ésteres y fenólicos. 35. El método de conformidad con la reivindicación 34, caracterizado porque el componente de aceite esencial se selecciona del grupo que comprende de perilaldehído, citral, terpineol, terpinen-4 -ol , peril alcohol, carvona, carveol, 6-metil-5-hepten-2-ona, C7_nCH0, C7_i0.OH, geraniol, limoneno, aldehido cinámico, ácido cinámico, carvacrol, vainillina o mezclas de los mismos. 36. El método de conformidad con la reivindicación 35, caracterizado porque el componente de aceite esencial se selecciona del grupo que consiste de citral, geraniol, 1-octanol, carvacrol, perilaldehído, decanol, aldehido cinámico, ácido cinámico, o una mezcla de los mismos. 37. El método de conformidad con la reivindicación 30, caracterizado porque el componente de aceite esencial es limoneno oxidado, preferiblemente hidroperóxido de limoneno. 38. El método de conformidad con la reivindicación 30, caracterizado porque el componente de aceite esencial, es limoneno expuesto a luz solar o radiación ultravioleta. 39. 31 método de conformidad con la reivindicación 38, caracterizado porque el limoneno se expone a luz solar o radiación ultravioleta después de la extracción de su fuente natural . 40. El método de conformidad con la reivindicación 30, caracterizado porque una fuente natural que contiene una mezcla de componentes de aceites esenciales que comprende una cantidad de limoneno, se expone a luz solar o radiación ultravioleta previo a la extracción de los componentes del aceite esencial . 41. El método de conformidad con la reivindicación 30, caracterizado porque una fuente natural que contiene una mezcla de componentes de aceites esenciales que comprende una cantidad de limoneno, se expone a luz solar o radiación ultravioleta después de su extracción de su fuente natural. 42. El método de conformidad con la reivindicación 30, caracterizado porque la fuente natural que contiene una mezcla de componentes de aceites esenciales, es ciscara de cítricos . 43. El método de conformidad con cualesquiera de las reivindicaciones 38 a 42, caracterizado porque el limoneno o mezcla de componentes de aceites esenciales, se expone a luz solar por un periodo de alrededor de 4 horas. 44. El método de conformidad con cualesquiera de las reivindicaciones 38 a 42, caracterizado porque el limoneno o mezcla de componentes de aceites esenciales se expone a radiación ultravioleta por un periodo de alrededor de 3 horas . 45. El método de conformidad con la reivindicación 36, caracterizado porque la concentración del aceite esencial es desde alrededor de 0.1% a alrededor de 1%. 46. El método de conformidad con la reivindicación 43, caracterizado porque la concentración de limoneno está en el intervalo desde alrededor de 1000 µ?. L"1 hasta alrededor de 12, 000 µ?- L"1. 47. El método de conformidad con la reivindicación 30, caracterizado porque comprende como un componente activo citral, 1-octanol y mezcla de componentes de aceites esenciales, que comprenden una cantidad substancial de limoneno expuesto a luz solar o radiación ultravioleta después de su extracción. 48. El método de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque comprende como un componente activo 1-octanol y mezcla de componentes de aceites esenciales que comprenden una cantidad substancial de limoneno expuesto a luz solar o radiación ultravioleta después de su extracción. 49. El método de conformidad con la reivindicación 30, caracterizado porque la solución acuosa comprende además un biocida en una concentración desde alrededor de 5 ppm a alrededor de 100 ppm. 50. El método de conformidad con la reivindicación 49, caracterizado porque el biocida se selecciona del grupo que comprende imazalil, tiabendazol, panoctina, rovral, procloraz, ortofenilfenato de sodio, metalaxil, fosetil-al, captan, oxiquinolina, cloruro de dicloran benzalconio, canon, tiofanato-metil , triforina, carbendazim, triademinol, vinclozolin, etaconazol, o mezclas de los mismos. 51. El método de conformidad con la reivindicación 30, caracterizado porque es para proteger frutas y vegetales de la descomposición post-cosecha . 52. El método de conformidad con la reivindicación 30, caracterizado porque es para proteger frutas y vegetales de la descomposición pre-cosecha. 53. El método de conformidad con la reivindicación 30, caracterizado porque es para evitar que se eche a perder carne y pescado. 54. El método de conformidad con la reivindicación 30, caracterizado porque es para evitar el crecimiento de células de Staphylococcus aureus. 55. El método de conformidad con la reivindicación 30, caracterizado porque es para evitar el crecimiento de Candida albicans.