MD4733C1 - Anticorpi anti-TIGIT - Google Patents

Anticorpi anti-TIGIT Download PDF

Info

Publication number
MD4733C1
MD4733C1 MDA20170032A MD20170032A MD4733C1 MD 4733 C1 MD4733 C1 MD 4733C1 MD A20170032 A MDA20170032 A MD A20170032A MD 20170032 A MD20170032 A MD 20170032A MD 4733 C1 MD4733 C1 MD 4733C1
Authority
MD
Moldova
Prior art keywords
amino acid
antibody
variable region
acid sequence
antigen
Prior art date
Application number
MDA20170032A
Other languages
English (en)
Russian (ru)
Other versions
MD4733B1 (ro
MD20170032A2 (ro
Inventor
Сибил М. Г. УИЛЬЯМС
Дрейк ЛАФЕЙС
Лоренс ФАЯДАТ-ДИЛМАН
Гопалан РАХУНАТАН
Линда ЛЬЯНГ
Вольфганг СЕГЕЦЦИ
Original Assignee
Merck Sharp & Dohme Corp
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Family has litigation
First worldwide family litigation filed litigation Critical https://patents.darts-ip.com/?family=53938463&utm_source=google_patent&utm_medium=platform_link&utm_campaign=public_patent_search&patent=MD4733(C1) "Global patent litigation dataset” by Darts-ip is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.
Application filed by Merck Sharp & Dohme Corp filed Critical Merck Sharp & Dohme Corp
Publication of MD20170032A2 publication Critical patent/MD20170032A2/ro
Publication of MD4733B1 publication Critical patent/MD4733B1/ro
Publication of MD4733C1 publication Critical patent/MD4733C1/ro

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2803—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily
    • C07K16/2818—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily against CD28 or CD152
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
    • A61K39/39533—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals
    • A61K39/39541—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals against normal tissues, cells
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
    • A61K39/39533—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals
    • A61K39/3955—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals against proteinaceous materials, e.g. enzymes, hormones, lymphokines
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K45/00—Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
    • A61K45/06—Mixtures of active ingredients without chemical characterisation, e.g. antiphlogistics and cardiaca
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A61P37/04—Immunostimulants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2803—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
    • A61K2039/507—Comprising a combination of two or more separate antibodies
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
    • C07K2317/21—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin from primates, e.g. man
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
    • C07K2317/24—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin containing regions, domains or residues from different species, e.g. chimeric, humanized or veneered
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
    • C07K2317/34—Identification of a linear epitope shorter than 20 amino acid residues or of a conformational epitope defined by amino acid residues
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/52—Constant or Fc region; Isotype
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C07K2317/565—Complementarity determining region [CDR]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/73—Inducing cell death, e.g. apoptosis, necrosis or inhibition of cell proliferation
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/74—Inducing cell proliferation
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/76—Antagonist effect on antigen, e.g. neutralization or inhibition of binding
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
    • C07K2317/92—Affinity (KD), association rate (Ka), dissociation rate (Kd) or EC50 value
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
    • Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
    • Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Endocrinology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Nitrogen Condensed Heterocyclic Rings (AREA)
  • Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
  • Saccharide Compounds (AREA)
  • Plural Heterocyclic Compounds (AREA)
  • Nitrogen And Oxygen Or Sulfur-Condensed Heterocyclic Ring Systems (AREA)

Abstract

Invenţia se referă la anticorpi anti-TIGIT, precum şi la utilizarea acestor anticorpi în tratamentul afecţiunilor, cum ar fi o tumoare malignă şi o boală infecţioasă.Secvenţe: 167

Description

Prezenta invenţie se referă la anticorpi anti-TIGIT, precum şi la utilizarea acestor anticorpi în tratamentul unor boli, cum ar fi o tumoare malignă şi o boală infecţioasă.
Un factor-cheie în asigurarea imunoterapiei tumorilor a apărut odată cu descoperirea faptului că receptorii imunomodulatori inhibibitori (IMR), care funcţionează, de regulă, ca puncte de control imunitar pentru a menţine auto-toleranţa, deţin un rol esenţial în capacitatea micromediilor tumorale de a se sustrage de la imunitate. Blocarea IMR-ilor inhibitorii pare să elibereze răspunsuri imune tumoral-specifice puternice mai eficient, decât stimularea directă a imunităţii tumorale prin activarea citokinelor sau prin vaccinuri antitumorale, iar această abordare are potenţialul de a transforma terapia cancerului uman. În prezent, apare o importantă implicare şi oportunitate pentru potenţialul de a dezvolta noi antagonişti ai anticorpilor pentru alte IMR-uri şi de a combina anticorpii antagonişti cu mai mult de o IMR cu scopul de a spori procentul de răspunsuri din cadrul studiilor clinice din domeniul oncologiei, precum şi de a extinde indicaţiile oncologice în care tratamentele de imunoterapie tumorală sunt eficiente.
În mod semnificativ, IMR-rile inhibitorii şi liganzii care regleaza imunitatea celulară sunt de obicei supraexprimaţi pe celulele tumorale şi pe macrofagele asociate tumorii (MAT). În special, supraexprimarea PD-L1 în tumori este asociată cu epuizarea celulelor T tumoral-specifice şi cu un prognostic slab. Blocarea ligării PD-1/PD-L1 în studiile clinice au drept rezultat răspunsuri de regresie durabilă a tumorii la o parte semnificativă din pacienţi. Un raport recent a demonstrat faptul că co-exprimarea PD-1 şi a unui alt inhibitor IMR (TIM-3) în celulele T CD8+ specifice tumorii, obţinute de la un pacient cu melanom, a fost asociată cu fenotipuri de epuizare mai disfuncţională a celulelor T, comparativ cu celulele exprimate de oricare dintre IMR separat. De asemenea, mai multe rapoarte în care s-au utilizat modele tumorale pre-clinice au demonstrat faptul că blocarea unor multiple IMR-uri, inclusiv PD-1, TIM-3, LAG-3 şi CTLA-4, a indus mai eficient răspunsuri antitumorale decât antagonistul unui singur PD-1. Aceste rezultate subliniază importanţa de a investiga în continuare căile IMR.
TIGIT (imunoreceptor de celule T cu domeniile Ig şi ITIM) reprezintă un receptor imunomodulator, exprimat în principal pe celulele T activate şi pe celulele NK. TIGIT este cunoscut, de asemenea, sub numele de VSIG9; VSTM3; şi WUCAM. Structura sa prezintă un domeniu de imunoglobulină extracelular, o regiune transmembranară de tip 1 şi două motive ITIM. TIGIT face formează o parte din reţeaua co-stimulatoare, care constă din receptori imunomodulatori pozitivi (CD226) şi negativi (TIGIT) pe celulele T şi liganzi exprimaţi pe APC-uri (CD155 şi CD112).
O caracteristică importantă a structurii TIGIT este prezenţa unui motiv inhibitor pe bază pe tirozină imunoreceptor (ITIM) în domeniul cozii sale citoplasmatice. Ca şi în cazul PD-1 şi CTLA-4, s-a presupus că domeniul ITIM în regiunea citoplasmatică TIGIT este destinat să recruteze tirozin fosfatazele, cum ar fi SHP-1 şi SHP-2, şi ulterior să efectueze de-fosforilarea resturilor de tirozină cu ajutorul motivelor de activare a imunoreceptorulului (ITAM) bazate pe tyrosină pe subunităţile receptorulului de celule T (TCR). Astfel, legarea TIGIT prin intermediul receptor-liganzilor CD155 şi CD112, exprimaţi de către celulele tumorale, sau TAMS, poate contribui la suprimarea semnalizării TCR şi activării celulelor T, ceea ce este esenţial pentru dezvoltarea unei imunităţi antitumorale eficiente. Astfel, un anticorp antagonist, specific pentru TIGIT, poate inhiba suprimarea indusă de CD155 şi CD112 a răspunsurilor din partea celulelor T şi poate spori imunitatea antitumorală. Scopul prezentei invenţii este de a obţine un anticorp anti-TIGIT care să poată fi utilizat pentru tratamentul tumorii maligne, fie separat, fie în combinaţie cu alţi reactivi.
Invenţia de faţă se referă la anticorpii anti-TIGIT şi fragmente acestora de legare a antigenului cuprinzând caracteristicile structurale şi funcţionale menţionate în continuare.
Într-o variantă de realizare, prezenta invenţie se referă la un anticorp sau la un fragment al acestuia de legare a antigenului, care se leagă la TIGIT uman cuprinzând: CDR3 a regiunii variabile a lanţului greu care conţine secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 3, 79, 80, 81, 82, 83, 59, 90, 140, 153, 154, 155, 156, 157, 158, 159, 160, 161, 162, 163, 164, 165, 166 sau 167. Într-o variantă de realizare, anticorpul sau fragmentul acestuia de legare a antigenului posedă, în mod opţional, cel puţin una dintre următoarele caracteristici: (i) se leagă la TIGIT uman cu o valoare a KD de la aproximativ 1 x 10-9 M până la aproximativ 1 x 10-12 M, determinată prin intermediul rezonanţei plasmonice de rezonanţă (de exemplu, BIACORE) sau printr-o tehnică similară (de exemplu, KinExA sau OCTET); (ii) reacţionează încrucişat cu TIGIT cynomolgus şi rhesus; (iii) blochează legarea TIGIT uman cu CD155 uman şi CD112 uman; (iv) sporeşte activarea celulelor T; (v) stimulează producţia de IL-2 şi IFNγ de către celulele T antigen-specifice; (vi) blochează inducţia de suprimare a activării celulelor T, indusă prin legarea TIGIT cu liganzii inrudiţi CD155 şi CD112.
Într-o altă variantă de realizare, prezenta invenţie se referă la un anticorp sau la un fragment al acestuia de legare a antigenului, care se leagă la TIGIT uman, cuprinzând: CDR3 a regiunii variabile a lanţului uşor care include secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 6, 62, 74, 75, 76, 77, 78 sau 93. Într-o variantă de realizare a invenţiei, în mod opţional, anticorpul posedă cel puţin una dintre următoarele caracteristici: (i) se leagă la TIGIT uman cu o valoare a KD de la aproximativ 1 x 10-9 M până la aproximativ 1 x 10-12 M, determinată prin rezonanţa plasmonică de suprafaţă (de exemplu, BIACORE) sau printr-o tehnică similară (de exemplu, KinExA sau OCTET); (ii) reacţionează încrucişat cu TIGIT cynomolgus şi rhesus; (iii) blochează legarea TIGIT uman la CD155 uman şi CD112 uman; (iv) sporeşte activarea celulelor T; (v) stimulează producţia de IL-2 şi IFNγ de către celulele T antigen-specifice; (vi) blochează inducţia de suprimare a activării celulelor T, indusă prin legarea TIGIT la liganzii inrudiţi CD155 şi CD112.
În următoarea variantă de realizare, invenţia în cauză se referă la un anticorp sau la un fragment al acestuia de legare a antigenului, care se leagă la TIGIT uman, cuprinzând: (i) CDR1 a regiunii variabile a lanţului greu care conţine secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 1; (ii) CDR2 a regiunii variabile a lanţului greu care include secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 2; şi (iii) CDR3 a regiunii variabile a lanţului greu cuprinzând secvenţa de aminoacizi SECV. ID NR. 140. Într-o variantă de realizare a invenţiei, anticorpul sau fragmentul acestuia de legare la antigen cuprinde: (i) CDR1 a regiunii variabile a lanţului greu care include secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 1; (ii) CDR2 a regiunii variabile a lanţului greu care include secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 2; şi (iii) CDR3 a regiunii variabile a lanţului greu cuprinzând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 3, 79, 80, 81, 82 sau 83. Într-o variantă de realizare a prezentei invenţii, anticorpul sau fragmentul acestuia de legare a antigenului cuprinde: (i) CDR1 a regiunii variabile a lanţului greu care conţine secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 1; (ii) CDR2 a regiunii variabile a lanţului greu care conţine secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 2; şi (iii) CDR3 a regiunii variabile a lanţului greu cuprinzând secvenţa de aminoacizi SECV. ID NR. 3. Într-o variantă de realizare, anticorpul sau fragmentul acestuia de legare a antigenului posedă, în mod opţional, cel puţin una dintre următoarele caracteristici: (i) se leagă la TIGIT uman cu o valoare a KD de la aproximativ 1 x 10-9 M până la aproximativ 1 x 10-12 M, determinată prin rezonanţa plasmonică de suprafaţă (de exemplu, BIACORE) sau printr-o tehnică similară (de exemplu, KinExA sau OCTET); (ii) reacţionează încrucişat cu TIGIT cynomolgus şi rhesus; (iii) blochează legarea TIGIT uman la CD155 uman şi CD112 uman; (iv) sporeşte activarea celulelor T; (v) stimulează producţia de IL-2 şi IFNγ de către celulele T antigen-specifice; (vi) blochează inducţia de suprimare a activării celulelor T, indusă prin legarea TIGIT la liganzii inrudiţi CD155 şi CD112.
Într-o altă variantă de realizare, invenţia în cauză se referă la un anticorp sau la un fragment al acestuia de legare a antigenului, care se leagă cu TIGIT uman, cuprinzând: (i) CDR1 a regiunii variabile a lanţului greu care include secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 57; (ii) CDR2 a regiunii variabile a lanţului greu care include secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 58; şi (iii) CDR3 a regiunii variabile a lanţului greu cuprinzând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 59. Într-o variantă de realizare a invenţiei, anticorpul sau fragmentul acestuia de legare a antigenului posedă, în mod opţional, cel puţin una dintre următoarele caracteristici: (i) se leagă la TIGIT uman cu valoarea KD de la aproximativ 1 x 10-9 M până la aproximativ 1 x 10-12 M, determinată prin rezonanţa plasmonică de suprafaţă (de exemplu, BIACORE) sau printr-o tehnică similară (de exemplu, KinExA sau OCTET); (ii) reacţionează încrucişat cu TIGIT cynomolgus şi rhesus; (iii) blochează legarea TIGIT uman la CD155 uman şi CD112 uman; (iv) sporeţte activarea celulelor T; (v) stimulează producţia de IL-2 şi IFNγ de către celulele T antigen-specifice; (vi) blochează inducţia de suprimare a activării celulelor T, indusă prin legarea TIGIT cu liganzii înrudiţi CD155 şi CD112.
Într-o altă variantă de realizare, invenţia propusă se referă la un anticorp sau la un fragment al acestuia de legare a antigenului, care se leagă cu TIGIT uman, cuprinzând: (i) CDR1 a regiunii variabile a lanţului greu care include secvenţa de aminoacizi din SECV ID NR. 88; (ii) CDR2 a regiunii variabile a lanţului greu care include secvenţa de aminoacizi din SECV ID NR. 147; şi (iii) CDR3 a regiunii variabile a lanţului greu cuprinzând secvenţa de aminoacizi din SECV ID NR. 153. Într-o variantă de realizare, anticorpul sau fragmentul acestuia de legare a antigenului cuprinde: (i) CDR1 a regiunii variabile a lanţului greu care conţine secvenţa de aminoacizi din SECV ID NR. 88; (ii) CDR2 a regiunii variabile a lanţului greu cuprinzând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 89, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110 , 111, 134 sau 135; şi (iii) CDR3 a regiunii variabile a lanţului greu cuprinzând secvenţa de aminoacizi din SECV ID NR. 90, 154, 155, 156, 157, 158, 159, 160, 161, 162, 163, 164, 165, 166 sau 167. Într-o variantă de realizare a invenţiei, anticorpul sau fragmentul acestuia de legare a antigenului cuprinde: (i) CDR1 a regiunii variabile a lanţului greu care cuprinde secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 88; (ii) CDR2 a regiunii variabile a lanţului greu care cuprinde secvenţa de aminoacizi din SECV ID NR. 89, 134 sau 135; şi (iii) CDR3 a regiunii variabile a lanţului greu care cuprinde secvenţa de aminoacizi din SECV ID NR. 90. Într-o variantă de realizare, anticorpul sau fragmentul acestuia de legare a antigenului cuprinde: (i) CDR1 a regiunii variabile a lanţului greu care cuprinde secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 88; (ii) CDR2 a regiunii variabile a lanţului greu care cuprinde secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 134; şi (iii) CDR3 a regiunii variabile a lanţului greu cuprinzând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 90. Într-o variantă de realizare a invenţiei propuse, anticorpul sau fragmentul acestuia de legare a antigenului cuprinde: (i) CDR1 a regiunii variabile a lanţului greu care cuprinde secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 88; (ii) CDR2 a regiunii variabile a lanţului greu care cuprinde secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 134; şi (iii) CDR3 a regiunii variabile a lanţului greu cuprinzând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 154. Într-o variantă de realizare, anticorpul sau fragmentul acestuia de legare a antigenului cuprinde: (i) CDR1 a regiunii variabile a lanţului greu care conţine secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 88; (ii) CDR2 a regiunii variabile a lanţului greu care conţine secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 134; şi (iii) CDR3 a regiunii variabile a lanţului greu cuprinzând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 155. Într-o variantă de realizare, anticorpul sau fragmentul acestuia de legare a antigenului cuprinde: (i) CDR1 a regiunii variabile a lanţului greu care cuprinde secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 88; (ii) CDR2 a regiunii variabile a lanţului greu care cuprinde secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 134; şi (iii) CDR3 a regiunii variabile a lanţului greu cuprinzând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 156. Într-o variantă de realizare a invenţiei, anticorpul sau fragmentul acestuia de legare a antigenului cuprinde: (i) CDR1 a regiunii variabile a lanţului greu care cuprinde secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 88; (ii) CDR2 a regiunii variabile a lanţului greu care cuprinde secvenţa de aminoacizi din SECV. ID Nr. 134; şi (iii) CDR3 a regiunii variabile a lanţului greu cuprinzând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 157. Într-o variantă de realizare, anticorpul sau fragmentul acestuia de legare a antigenului cuprinde: (i) CDR1 a regiunii variabile a lanţului greu care cuprinde secvenţa de aminoacizi din SECV ID NR. 88; (ii) CDR2 a regiunii variabile a lanţului greu care cuprinde secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 134; şi (iii) CDR3 a regiunii variabile a lanţului greu care cuprinde secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 158. Într-o variantă de realizare, anticorpul sau fragmentul acestuia de legare a antigenului cuprinde: (i) CDR1 a regiunii variabile a lanţului greu care include secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 88; (ii) CDR2 a regiunii variabile a lanţului greu care cuprinde secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 134; şi (iii) CDR3 a regiunii variabile a lanţului greu cuprinzând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 159. Într-o variantă de realizare a invenţiei, anticorpul sau fragmentul acestuia de legare a antigenului cuprinde: (i) CDR1 a regiunii variabile a lanţului greu care conţine secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 88; (ii) CDR2 a regiunii variabile a lanţului greu care cuprinde secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 134; şi (iii) CDR3 a regiunii variabile a lanţului greu cuprinzând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 160. Într-o variantă de realizare a invenţiei, anticorpul sau fragmentul acestuia de legare a antigenului cuprinde: (i) CDR1 a regiunii variabile a lanţului greu care include secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 88; (ii) CDR2 a regiunii variabile a lanţului greu care cuprinde secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 134; şi (iii) CDR3 a regiunii variabile a lanţului greu cuprinzând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 161. Într-o variantă derealizare, anticorpul sau fragmentul acestuia de legare a antigenului cuprinde: (i) CDR1 a regiunii variabile a lanţului greu care conţine secvenţa de aminoacizi din SECV ID NR. 88; (ii) CDR2 aregiunii variabile a lanţului greu care conţine secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 134; şi (iii) CDR3 a regiunii variabile a lanţului greu cuprinzând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 162. Într-o variantă de realizare a invenţiei, anticorpul sau fragmentul acestuia de legare a antigenului cuprinde: (i) CDR1 a regiunii variabile a lanţului greu care conţine secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 88; (ii) CDR2 a regiunii variabile a lanţului greu care cuprinde secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 134; şi (iii) CDR3 a regiunii variabile a lanţului greu cuprinzând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 163. Într-o variantă de realizare a invenţiei, anticorpul sau fragmentul acestuia de legare a antigenului cuprinde: (i) CDR1 a regiunii variabile a lanţului greu care conţine secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 88; (ii) CDR2 a regiunii variabile a lanţului greu care cuprinde secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 134; şi (iii) CDR3 a regiunii variabile a lanţului greu cuprinzând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 164. Într-o variantă de realizare, anticorpul sau fragmentul acestuia de legare a antigenului cuprinde: (i) CDR1 a regiunii variabile a lanţului greu care conţine secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 88; (ii) CDR2 a regiunii variabile a lanţului greu care cuprinde secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 134; şi (iii) CDR3 a regiunii variabile a lanţului greu cuprinzând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 165. Într-o variantă de realizare a invenţiei, anticorpul sau fragmentul acestuia de legare a antigenului cuprinde: (i) CDR1 a regiunii variabile a lanţului greu care conţine secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 88; (ii) CDR2 a regiunii variabile a lanţului greu care cuprinde secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 134; şi (iii) CDR3 a regiunii variabile a lanţului greu cuprinzând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 166. Într-o variantă de realizare a invenţiei propuse, anticorpul sau fragmentul acestuia de legare a antigenului cuprinde: (i) CDR1 a regiunii variabile a lanţului greu care conţine secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 88; (ii) CDR2 a regiunii variabile a lanţului greu care cuprinde secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 134; şi (iii) CDR3 a regiunii variabile a lanţului greu care cuprinde secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 167. Într-o variantă de realizare, anticorpul sau fragmentul acestuia de legare a antigenului posedă, în mod opţional, cel puţin una dintre următoarele caracteristici: (i) se leagă la TIGIT uman cu o valoare a KD de la aproximativ 1 x 10-9 M până la aproximativ 1 x 10-12 M, determinată prin rezonanţă plasmonică de suprafaţă (de exemplu, BIACORE) sau printr-o tehnică similară (de exemplu, KinExA sau OCTET); (ii) reacţionează încrucişat cu TIGIT cynomolgus şi rhesus; (iii) blochează legarea TIGIT uman la CD155 uman şi CD112 uman; (iv) sporeşte activarea celulelor T; (v) stimulează producţia de IL-2 şi IFNΓ de către celulele T antigen-specifice; (vi) blochează inducţia de suprimare a activării celulelor T, indusă prin legarea TIGIT cu liganzii înrudiţi CD155 şi CD112.
Într-o altă variantă de realizare, invenţia de faţă se referă la un anticorp sau la un fragment al acestuia de legare a antigenului care se leagă cu TIGIT uman cuprinzând: (i) CDR1 a regiunii variabile a lanţului uşor care include secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 4; (ii) CDR2 a regiunii variabile a lanţului uşor care cuprinde secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 141; şi (iii) CDR3 a regiunii variabile a lanţului uşor care cuprinde secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 142. Într-o variantă de realizare a invenţiei, anticorpul sau fragmentul acestuia de legare a antigenului cuprinde: (i) CDR1 a regiunii variabile a lanţului uşor incluzând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 4; (ii) CDR2 a regiunii variabile a lanţului uşor care cuprinde secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 5, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71 sau 72; şi (iii) CDR3 a regiunii variabile a lanţului uşor care cuprinde secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 6, 74, 75, 76, 77 sau 78. Într-o variantă de realizare a invenţiei, anticorpul sau fragmentul acestuia de legare a antigenului cuprinde: (i) CDR1 a regiunii variabile a lanţului uşor care conţine secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 4; (ii) CDR2 a regiunii variabile a lanţului uşor care cuprinde secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 5; şi (iii) CDR3 a regiunii variabile a lanţului uşor care cuprinde secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 6. Într-o variantă de realizare a invenţiei, anticorpul sau fragmentul acestuia de legare a antigenului posedă, în mod opţional, cel puţin una dintre următoarele caracteristici: (i) se leagă la TIGIT uman cu o valoare a KD de la aproximativ 1 x 10-9 M până la aproximativ 1 x 10-12 M, determinată prin rezonanţă plasmonică de suprafaţă (de exemplu, BIACORE) sau printr-o tehnică similară (de exemplu, KinExA sau OCTET); (ii) reacţionează încrucişat cu TIGIT cynomolgus şi rhesus; (iii) blochează legarea TIGIT uman la CD155 uman şi CD112 uman; (iv) sporeşte activarea celulelor T; (v) stimulează producţia de IL-2 şi IFNΓ de către celulele T antigen-specifice; (vi) blochează inducţia de suprimare a activării celulelor T, indusă prin legarea TIGIT cu liganzii înrudiţi CD155 şi CD112.
Într-o altă variantă de realizare, invenţia propusă se referă la un anticorp sau la un fragment al acestuia de legarea a antigenului care se leagă la TIGIT uman cuprinzând: (i) CDR1 a regiunii variabile a lanţului uşor care conţine secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 60; (ii) CDR2 a regiunii variabile a lanţului uşor care cuprinde secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 61; şi (iii) CDR3 a regiunii variabile a lanţului uşor care cuprinde secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 62. Într-o variantă de realizare, anticorpul sau fragmentul acestuia de legare a antigenului posedă, în mod opţional, cel puţin una dintre următoarele caracteristici: (i) se leagă la TIGIT uman cu o valoare a KD de la aproximativ 1 x 10-9 M până la aproximativ 1 x 10-12 M, determinată prin rezonanţă plasmonică de suprafaţă (de exemplu, BIACORE) sau printr-o tehnică similară (de exemplu, KinExA sau OCTET); (ii) reacţionează încrucişat cu TIGIT cynomolgus şi rhesus; (iii) blochează legarea TIGIT uman la CD155 uman şi CD112 uman; (iv) sporeşte activarea celulelor T; (v) stimulează producţia de IL-2 şi IFNγ de către celulele T antigen-specifice; (vi) blochează inducţia de suprimare a activării celulelor T, indusă prin legarea TIGIT cu liganzii înrudiţi CD155 şi CD112.
Într-o altă variantă de realizare, invenţia dată se referă la un anticorp sau la un fragment al acestiua de legare a antigenului care se leagă la TIGIT uman cuprinzând: (i) CDR1 a regiunii variabile a lanţului uşor care cuprinde secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 91; (ii) CDR2 a regiunii variabile a lanţului uşor care cuprinde secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 148; şi (iii) CDR3 a regiunii variabile a lanţului uşor care cuprinde secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 93. Într-o variantă de realizarea invenţiei, anticorpul sau fragmentull acestiua de legare a antigenului cuprinde: (i) CDR1 a regiunii variabile a lanţului uşor care cuprinde secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 91; (ii) CDR2 a regiunii variabile a lanţului uşor care cuprinde secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 92, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121 sau 122; şi (iii) CDR3 a regiunii variabile a lanţului uşor care cuprinde secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 93. Într-o variantă de realizare, anticorpul sau fragmentul acestuia de legare a antigenului cuprinde: (i) CDR1 a regiunii variabile a lanţului uşor care include secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 91; (ii) CDR2 a regiunii variabile a lanţului uşor care cuprinde secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 92; şi (iii) CDR3 a regiunii variabile a lanţului uşor care cuprinde secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 93. Într-o variantă de realizare, anticorpul sau fragmentul acestuia de legare a antigenului posedă, în mod opţional, cel puţin una dintre următoarele caracteristici: (i) se leagă la TIGIT uman cu o valoare a KD de la aproximativ 1 x 10-9 M până la aproximativ 1 x 10-12 M, determinată prin rezonanţă plasmonică de suprafaţă (de exemplu, BIACORE) sau printr-o tehnică similară (de exemplu, KinExA sau OCTET); (ii) reacţionează încrucişat cu TIGIT cynomolgus şi rhesus; (iii) blochează legarea TIGIT uman la CD155 uman şi CD112 uman; (iv) sporeşte activarea celulelor T; (v) stimulează producţia de IL-2 şi IFNγ de către celulele T antigen-specifice; (vi) blochează inducţia de suprimare a activării celulelor T, indusă prin legarea TIGIT cu liganzii înrudiţi CD155 şi CD112.
Într-o altă variantă de realizare, prezenta invenţie se referă la un anticorp sau la un fragment al acestiua de legare a antigenului care se leagă la TIGIT uman cuprinzând: (i) CDR1 a regiunii variabile a lanţului greu care include secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 1; (ii) CDR2 a regiunii variabile a lanţului greu care cuprinde secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 2; (iii) CDR3 a regiunii variabile a lanţului greu care cuprinde secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 140; (iv) CDR1 a regiunii variabile a lanţului uşor care cuprinde secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NE. 4; (v) CDR2 a regiunii variabile a lanţului uşor care cuprinde secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 141; şi (vi) CDR3 a regiunii variabile a lanţului uşor care cuprinde secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 142. Într-o variantă de realizare a invenţiei, anticorpul sau fragmentul acestuia de legare a antigenului cuprinde: (i) CDR1 a regiunii variabile a lanţului greu care conţine secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 1; (ii) CDR2 a regiunii variabile a lanţului greu care cuprinde secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 2; (iii) CDR3 a regiunii variabile a lanţului greu care cuprinde secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 3, 79, 80, 81, 82 sau 83; (iv) CDR1 a regiunii variabile a lanţului uşor care cuprinde secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 4; (v) CDR2 a regiunii variabile a lanţului uşor care cuprinde secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 5, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72 sau 73; şi (vi) CDR3 a regiunii variabile a lanţului uşor care cuprinde secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 6, 74, 75, 76, 77 sau 78. Într-o variantă de realizare a invenţiei, anticorpul sau fragmentul acestuia de legare a antigenului cuprinde: (i) CDR1 a regiunii variabile a lanţului greu care cuprinde secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 1; (ii) CDR2 a regiunii variabile a lanţului greu care cuprinde secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 2; (iii) CDR3 a regiunii variabile a lanţului greu care cuprinde secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 3; (iv) CDR1 a regiunii variabile a lanţului uşor care cuprinde secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 4; (v) CDR2 a regiunii variabile a lanţului uşor care cuprinde secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 5; şi (vi) CDR3 a regiunii variabile a lanţului uşor care cuprinde secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 6. Într-o variantă de realizare, anticorpul sau fragmentul acestuia de legare a antigenului este umanizat. Într-o variantă de realizare, anticorpul sau fragmentul acestuia de legare a antigenului cuprinde regiunea variabilă a lanţului greu, selectată din grupul format din SECV. ID NR. 9-24, 37-47, 143 şi 144; şi regiunea variabilă a lanţului uşor, selectată din grupul constând din SECV. ID Nr. 25-30, 48-52, 146 şi 147. Într-o variantă de realizare, anticorpul sau fragmentul acestuia de legare a antigenului posedă, în mod opţional, cel puţin una dintre următoarele caracteristici: (i) se leagă la TIGIT uman cu o valoare a KD de la aproximativ 1 x 10-9 M până la aproximativ 1 x 10-12 M, determinată prin rezonanţă plasmonică de suprafaţă (de exemplu, BIACORE) sau printr-o tehnică similară (de exemplu, KinExA sau OCTET); (ii) reacţionează încrucişat cu TIGIT cynomolgus şi rhesus; (iii) blochează legarea TIGIT uman la CD155 uman şi CD112 uman; (iv) sporeşte activarea celulelor T; (v) stimulează producţia de IL-2 şi IFNγ de către celulele T antigen-specifice; (vi) blochează inducţia de suprimare a activării celulelor T, indusă prin legarea TIGIT cu liganzii înrudiţi CD155 şi CD112.
Într-o altă variantă de realizare, invenţia de faţă se referă la un anticorp sau la un fragment al acestuia de legare a antigenului, care se leagă la TIGIT uman cuprinzând: (i) CDR1 a regiunii variabile a lanţului greu care cuprinde secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 1; (ii) CDR2 a regiunii variabile a lanţului greu care cuprinde secvenţa de aminoacizi din SECV ID NR. 2; (iii) CDR3 a regiunii variabile a lanţului greu care cuprinde secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 3, 79, 80, 81, 82 sau 83; (iv) CDR1 a regiunii variabile a lanţului uşor care cuprinde secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 4; (v) CDR2 a regiunii variabile a lanţului uşor care cuprinde secvenţa de aminoacizi din din SECV. ID NR. 5, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72 sau 73; şi (vi) CDR3 a regiunii variabile a lanţului uşor cuprinzând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID Nr. 6, 74, 75, 76, 77 sau 78; caracterizată prin aceea că anticorpul sau fragmentul acestuia de legare a antigenului cuprinde regiunea variabilă a lanţului greu deţinând cel puţin 90% 95%, 96%, 97%, 98% sau 99% din identitatea regiunii variabile a lanţului greu, selectată din grupul constând din SECV. ID NR. 9-24 sau 37-47, şi regiunea variabilă a lanţului uşor care posedă cel puţin 90%, 95%, 96%, 97%, 98% sau 99% din identitatea regiunii variabile a lanţului greu, selectat din grupul constând din SECV. ID NR. 25-30 sau 48-52. În exemplul de realizare a invenţiei, menţionat mai sus, variantele de secvenţă se întâlnesc în regiunile cadru. Într-o variantă de realizare, anticorpul se leagă la TIGIT uman cu o valoare a KD de la aproximativ 1x10-9 M până la aproximativ 1x10-12 M, determinată prin rezonanţă plasmonică de suprafaţă (de exemplu, BIACORE) sau printr-o tehnică similară (de exemplu, KinExA sau OCTET).
Într-o altă variantă de realizare, invenţia de faţă se referă, de asemenea, la un anticorp sau la un fragment al acestuia de legare a antigenului care se leagă cu TIGIT uman cuprinzând: (i) CDR1 a regiunii variabile a lanţului greu care conţine secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 1; (ii) CDR2 a regiunii variabile a lanţului greu care cuprinde secvenţa de aminoacizi din SECV ID NR. 2; (iii) CDR3 a regiunii variabile a lanţului greu care cuprinde secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 3; (iv) CDR1 a regiunii variabile a lanţului uşor care cuprinde secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 4; (v) CDR2 a regiunii variabile a lanţului uşor care cuprinde secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 5; şi (vi) CDR3 a regiunii variabile a lanţului uşor care cuprinde secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 6. Într-o variantă de realizare, anticorpul sau fragmentul acestuia de legare a antigenului cuprinde 1, 2 sau 3 substituţii de aminoacizi în CDR-ul lanţului greu (SECV. ID NR. 1-3) sau în CDR-ul lanţului uşor (SECV. ID NR. 3-6). Într-o variantă de realizare, anticorpul cuprinde o substituţie de aminoacizi în CDR-ul de lanţ greu din SECV. ID NR. 3, caracterizată prin aceea că substituţia este făcută la poziţia 13W, şi caracterizată prin aceea că restul 13W este substituit cu: F, Y, I, V sau L. Într-o variantă de realizare a invenţiei, anticorpul cuprinde două substituţii de aminoacizi în CDR-ul lanţului uşor din SECV. ID NR. 5, în care substituţiile sunt efectuate la poziţia 3-4, şi în care resturile 3N şi 4S sunt substituite cu: SN, SS, ST, TT, SY, NQ, GS, SQ şi DS. Într-o variantă de realizare, anticorpul cuprinde o substituţie de aminoacizi în CDR-ul lanţului uşor din SECV. ID NR. 6, în care substituţia este făcută la poziţia 7, şi în care restul 7W este înlocuit cu: F, Y, I, V sau L. Secvenţele VH ale SECV. ID NR. 9-24 şi 37-47 deţin CDR-urile din SECV. ID NR. 1-3; şi secvenţele VL ale SECV. ID NR. 25-30 şi 48-52 deţin CDR-urile din SECV. ID NR. 4-6. În unele variante de realizare, substituţiile efectuate în CDR-urile descrise mai sus pot fi realizate în CDR-urile corespunzătoare ale secvenţelor VH din SECV. ID NR. 9-24 şi 37-47, şi în CDR-urile secvenţelor VL din SECV. ID NR. 25-30 şi 48-52. Într-o variantă de realizare, anticorpul se leagă la TIGIT uman cu o valoarea a KD de la aproximativ 1 x 10-9 M până la aproximativ 1 x 10-12 M, determinată prin rezonanţă plasmonică de suprafaţă (de exemplu, BIACORE) sau printr-o tehnică similară ( de exemplu, KinExA sau OCTET).
Într-o altă variantă de realizare, invenţia se referă la un anticorp sau la un fragment al acestuia de legare a antigenului care se leagă la TIGIT uman cuprinzând: (i) CDR1 a regiunii variabile a lanţului greu care conţine secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 57; (ii) CDR2 a regiunii variabile a lanţului greu care cuprinde secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 58; (iii) CDR3 a regiunii variabile a lanţului greu care cuprinde secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 59; (iv) CDR1 a regiunii variabile a lanţului uşor care cuprinde secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 60; (v) CDR2 a regiunii variabile a lanţului uşor care cuprinde secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 61; şi (vi) CDR3 a regiunii variabile a lanţului uşor care cuprinde secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 62. Într-o variantă de realizare a invenţiei, anticorpul sau fragmentul acestuia de legare a antigenului este umanizat. Într-o variantă de realizare, anticorpul sau fragmentul acestuia de legare a antigenului cuprinde 1, 2 sau 3 substituţii de aminoacizid în CDR-urile lanţului greu (SECV. ID NR. 57-59) sau în CDR-urile lanţului uşor (SECV. ID NR. 60-62) şi păstrează una sau mai multe dintre caracteristicile sale funcţionale. Într-o variantă de realizare, anticorpul sau fragmentul acestuia de legare a antigenului posedă, în mod opţional, cel puţin una dintre următoarele caracteristici funcţionale: (i) se leagă la TIGIT uman cu o valoare a KD de la aproximativ 1 x 10-9 M până la aproximativ 1 x 10-12 M, determinată prin rezonanţă plasmonică de suprafaţă (de exemplu, BIACORE) sau printr-o tehnică similară (de exemplu, KinExA sau OCTET); (ii) reacţionează încrucişat cu TIGIT cynomolgus şi rhesus; (iii) blochează legarea TIGIT uman la CD155 uman şi CD112 uman; (iv) sporeşte activarea celulelor T; (v) stimulează producţia de IL-2 şi IFNγ de către celulele T antigen-specifice; (vi) blochează inducţia de suprimare a activării celulelor T, indusă prin legarea TIGIT cu liganzii înrudiţi CD155 şi CD112.
Într-o altă variantă de realizare, invenţia de faţă se referă, de asemenea, la un anticorp sau la un fragment al acestuia de legare a antigenului care se leagă la TIGIT uman cuprinzând: (i) CDR1 a regiunii variabile a lanţului greu care cuprinde secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 88; (Ii) CDR2 a regiunii variabile a lanţului greu care cuprinde secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 147; (iii) CDR3 a regiunii variabile a lanţului greu care cuprinde secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 153; (iv) CDR1 a regiunii variabile a lanţului uşor care cuprinde secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 91; (v) CDR2 a regiunii variabile a lanţului uşor care cuprinde secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 148; şi (vi) CDR3 a regiunii variabile a lanţului uşor care cuprinde secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 93. Într-o variantă de realizare a invenţiei, anticorpul sau fragmentul acestuia de legare a antigenului cuprinde: (i) CDR1 a regiunii variabile a lanţului greu care cuprinde secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 88; (ii) CDR2 a regiunii variabile a lanţului greu cuprinzând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 89, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110 , 111, 134 sau 135; (iii) CDR3 a regiunii variabile a lanţului greu care cuprinde secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 90, 154, 155, 156, 157, 158, 159, 160, 161, 162, 163, 164, 165, 166 sau 167; (iv) CDR1 a regiunii variabile a lanţului uşor care cuprinde secvenţa de aminoacizi din SECV. ID Nr. 91; (v) CDR2 a regiunii variabile a lanţului uşor care cuprinde secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 92, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121 sau 122; şi (vi) CDR3 a regiunii variabile a lanţului uşor care cuprinde secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 93. Într-o variantă de realizare a invenţiei, anticorpul sau fragmentul acestuia de legare a antigenului cuprinde: (i) CDR1 a regiunii variabile a lanţului greu care cuprinde secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 88; (ii) CDR2 a regiunii variabile a lanţului greu care cuprinde secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 89, 134 sau 135; (iii) CDR3 a regiunii variabile a lanţului greu care cuprinde secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 90; (iv) CDR1 a regiunii variabile a lanţului uşor care cuprinde secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 91; (v) CDR2 a regiunii variabile a lanţului uşor care cuprinde secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 92; şi (vi) CDR3 a regiunii variabile a lanţului uşor care cuprinde secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 93. Într-o variantă de realizare a invenţiei propuse, anticorpul sau fragmentul acestuia de legare a antigenului cuprinde: (i) CDR1 a regiunii variabile a lanţului greu care cuprinde secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 88; (ii) CDR2 a regiunii variabile a lanţului greu care cuprinde secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 134; (iii) CDR3 a regiunii variabile a lanţului greu care cuprinde secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 90; (iv) CDR1 a regiunii variabile a lanţului uşor care cuprinde secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 91; (v) CDR2 a regiunii variabile a lanţului uşor care cuprinde secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 92; şi (vi) CDR3 a regiunii variabile a lanţului uşor care cuprinde secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 93. Într-o variantă de realizare a invenţiei, anticorpul sau fragmentul acestuia de legare a antigenului este umanizat. Într-o variantă de realizare, anticorpul sau fragmentul acestuia de legare a antigenului cuprinde: (i) CDR1 a regiunii variabile a lanţului greu care cuprinde secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 88; (ii) CDR2 a regiunii variabile a lanţului greu care cuprinde secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 134; (iii) CDR3 a regiunii variabile a lanţului greu care cuprinde secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 154; (iv) CDR1 a regiunii variabile a lanţului uşor care cuprinde secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 91; (v) CDR2 a regiunii variabile a lanţului uşor care cuprinde secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 92; şi (vi) CDR3 a regiunii variabile a lanţului uşor care cuprinde secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 93. Într-o variantă de realizare a invenţiei, anticorpul sau fragmentul acestuia de legare a antigenului este umanizat. Într-o variantă de realizare, anticorpul sau fragmentul acestuia de legare a antigenului cuprinde: (i) CDR1 a regiunii variabile a lanţului greu care cuprinde secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 88; (ii) CDR2 a regiunii variabile a lanţului greu care cuprinde secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 134; (iii) CDR3 a regiunii variabile a lanţului greu care cuprinde secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 155; (iv) CDR1 a regiunii variabile a lanţului uşor care cuprinde secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 91; (v) CDR2 a regiunii variabile a lanţului uşor care cuprinde secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 92; şi (vi) CDR3 a regiunii variabile a lanţului uşor care cuprinde secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 93. Într-o variantă de realizare a invenţiei, anticorpul sau fragmentul acestuia de legare a antigenului este umanizat. Într-o variantă de realizare, anticorpul sau fragmentul acestuia de legare a antigenului cuprinde: (i) CDR1 a regiunii variabile a lanţului greu care conţine secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 88; (ii) CDR2 a regiunii variabile a lanţului greu care cuprinde secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 134; (iii) CDR3 a regiunii variabile a lanţului greu care cuprinde secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 156; (iv) CDR1 a regiunii variabile a lanţului uşor care cuprinde secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 91; (v) CDR2 a regiunii variabile a lanţului uşor care cuprinde secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 92; şi (vi) CDR3 a regiunii variabile a lanţului uşor care cuprinde secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 93. Într-o variantă de realizare a invenţiei, anticorpul sau fragmentul acestuia de legare a antigenului este umanizat. Într-o variantă de realizare, anticorpul sau fragmentul acestuia de legare la antigen cuprinde: (i) CDR1 a regiunii variabile a lanţului greu care cuprinde secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 88; (ii) CDR2 a regiunii variabile a lanţului greu care cuprinde secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 134; (Iii) CDR3 o a regiunii variabile a lanţului greu care cuprinde secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 157; (iv) CDR1 a regiunii variabile a lanţului uşor care cuprinde secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 91; (v) CDR2 a regiunii variabile a lanţului uşor care cuprinde secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 92; şi (vi) CDR3 a regiunii variabile a lanţului uşor care cuprinde secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 93. Într-o variantă de realizare a invenţiei, anticorpul sau fragmentul acestuia de legare la antigen este umanizat. Într-o variantă de realizare, anticorpul sau fragmentul acestuia de legare a antigenului cuprinde: (i) CDR1 a regiunii variabile a lanţului greu care conţine secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 88; (ii) CDR2 a regiunii variabile a lanţului greu care cuprinde secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 134; (iii) CDR3 a regiunii variabile a lanţului greu care cuprinde secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 158; (iv) CDR1 a regiunii variabile a lanţului uşor care cuprinde secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 91; (v) CDR2 a regiunii variabile a lanţului uşor care cuprinde secvenţa de aminoacizi din SECV ID NR:. 92; şi (vi) CDR3 a regiunii variabile a lanţului uşor care cuprinde secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 93. Într-o variantă de realizare a invenţiei, anticorpul sau fragmentul acestuia de legare a antigenului este umanizat. Într-o variantă de realizare, anticorpul sau fragmentul acestuia de legare a antigenului cuprinde: (i) CDR1 a regiunii variabile a lanţului greu care conţine secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 88; (ii) CDR2 a regiunii variabile a lanţului greu care cuprinde secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 134; (iii) CDR3 a regiunii variabile a lanţului greu care cuprinde secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 159; (iv) CDR1 a regiunii variabile a lanţului uşor care cuprinde secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 91; (v) CDR2 a regiunii variabile a lanţului uşor care cuprinde secvenţa de aminoacizi din SECV. ID Nr. 92; şi (vi) CDR3 a regiunii variabile a lanţului uşor care cuprinde secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 93. Într-o variantă de realizare a invenţiei, anticorpul sau fragmentul acestuia de legare a antigenului este umanizat. Într-o variantă de realizare, anticorpul sau fragmentul acestuia de legare a antigenului cuprinde: (i) CDR1 a regiunii variabile a lanţului greu care conţine secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 88; (ii) CDR2 a regiunii variabile a lanţului greu care cuprinde secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 134; (iii) CDR3 a regiunii variabile a lanţului greu care cuprinde secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 160; (iv) CDR1 a regiunii variabile a lanţului uşor care cuprinde secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 91; (v) CDR2 a regiunii variabile a lanţului uşor care cuprinde secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 92; şi (vi) CDR3 a regiunii variabile a lanţului uşor care cuprinde secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 93. Într-o variantă de realizare a invenţiei, anticorpul sau fragmentul acestuia de legare la antigen este umanizat. Într-o variantă de realizare, anticorpul sau fragmentul acestuia de legare a antigenului cuprinde: (i) CDR1 a regiunii variabile a lanţului greu care conţine secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 88; (ii) CDR2 a regiunii variabile a lanţului greu care cuprinde secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 134; (iii) CDR3 a regiunii variabile a lanţului greu care cuprinde secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 161; (iv) CDR1 a regiunii variabile a lanţului uşor care cuprinde secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 91; (v) CDR2 a regiunii variabile a lanţului uşor care cuprinde secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 92; şi (vi) CDR3 a regiunii variabile a lanţului uşor care cuprinde secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 93. Într-o variantă de realizare a invenţiei, anticorpul sau fragmentul acestuia de legare a antigenului este umanizat. Într-o variantă de realizare, anticorpul sau fragmentul acestuia de legare a antigenului cuprinde: (i) CDR1 a regiunii variabile a lanţului greu care conţine secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 88; (ii) CDR2 a regiunii variabile a lanţului greu care cuprinde secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 134; (iii) CDR3 a regiunii variabile a lanţului greu care cuprinde secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 162; (iv) CDR1 a regiunii variabile a lanţului uşor care cuprinde secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 91; (v) CDR2 a regiunii variabile a lanţului uşor care cuprinde secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 92; şi (vi) CDR3 a regiunii variabile a lanţului uşor care cuprinde secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 93. Într-o variantă de realizare a invenţiei, anticorpul sau fragmentul acestuia de legare a antigenului este umanizat. Într-o variantă de realizare, anticorpul sau fragmentul acestuia de legare a antigenului cuprinde: (i) CDR1 a regiunii variabile a lanţului greu care conţine secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 88; (ii) CDR2 a regiunii variabile a lanţului greu care cuprinde secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 134; (iii) CDR3 a regiunii variabile a lanţului greu care cuprinde secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 163; (iv) CDR1 a regiunii variabile a lanţului uşor care cuprinde secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 91; (v) CDR2 a regiunii variabile a lanţului uşor care cuprinde secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 92; şi (vi) CDR3 a regiunii variabile a lanţului uşor care cuprinde secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 93. Într-o variantă de realizare a invenţiei, anticorpul sau fragmentul acestuia de legare a antigenului este umanizat. Într-o variantă de realizare, anticorpul sau fragmentul acestuia de legare a antigenului cuprinde: (i) CDR1 a regiunii variabile a lanţului greu care conţine secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 88; (ii) CDR2 a regiunii variabile a lanţului greu care cuprinde secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 134; (iii) CDR3 a regiunii variabile a lanţului greu care cuprinde secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 164; (iv) CDR1 a regiunii variabile a lanţului uşor care cuprinde secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 91; (v) CDR2 a regiunii variabile a lanţului uşor care cuprinde secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 92; şi (vi) CDR3 a regiunii variabile a lanţului uşor care cuprinde secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 93. Într-o variantă de realizare a invenţiei, anticorpul sau fragmentul acestuia de legare a antigenului este umanizat. Într-o variantă de realizare, anticorpul sau fragmentul acestuia de legare a antigenului cuprinde: (i) CDR1 a regiunii variabile a lanţului greu care conţine secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 88; (ii) CDR2 a regiunii variabile a lanţului greu care cuprinde secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 134; (iii) CDR3 a regiunii variabile a lanţului greu care cuprinde secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 165; (iv) CDR1 a regiunii variabile a lanţului uşor care cuprinde secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 91; (v) CDR2 a regiunii variabile a lanţului uşor care cuprinde secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 92; şi (vi) CDR3 a regiunii variabile a lanţului uşor care cuprinde secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 93. Într-o variantă de realizare a invenţiei, anticorpul sau fragmentul acestuia de legare a antigenului este umanizat. Într-o variantă de realizare, anticorpul sau fragmentul acestuia de legare a antigenului cuprinde: (i) CDR1 a regiunii variabile a lanţului greu care conţine secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 88; (ii) CDR2 a regiunii variabile a lanţului greu care cuprinde secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 134; (iii) CDR3 a regiunii variabile a lanţului greu care cuprinde secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 166; (iv) CDR1 a regiunii variabile a lanţului uşor care cuprinde secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 91; (v) CDR2 a regiunii variabile a lanţului uşor care cuprinde secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 92; şi (vi) CDR3 a regiunii variabile a lanţului uşor care cuprinde secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 93. Într-o variantă de realizare a invenţiei, anticorpul sau fragmentul acestuia de legare a antigenului este umanizat. Într-o variantă de realizare, anticorpul sau fragmentul acestuia de legare a antigenului cuprinde: (i) CDR1 a regiunii variabile a lanţului greu care conţine secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 88; (ii) CDR2 a regiunii variabile a lanţului greu care cuprinde secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 134; (iii) CDR3 a regiunii variabile a lanţului greu care cuprinde secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 167; (iv) CDR1 a regiunii variabile a lanţului uşor care cuprinde secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 91; (v) CDR2 a regiunii variabile a lanţului uşor care cuprinde secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 92; şi (vi) CDR3 a regiunii variabile a lanţului uşor care cuprinde secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 93. Într-o variantă de realizare a invenţiei, anticorpul sau fragmentul acestuia de legare a antigenului este umanizat. Într-o variantă de realizare, anticorpul sau fragmentul acestuia de legare a antigenului posedă, în mod opţional, cel puţin una dintre următoarele caracteristici: (i) se leagă la TIGIT uman cu o valoare a KD de la aproximativ 1 x 10-9 M până la aproximativ 1 x 10-12 M, determinată prin rezonanţă plasmonică de suprafaţă (de exemplu, BIACORE) sau printr-o tehnică similară (de exemplu, KinExA sau OCTET); (ii) reacţionează încrucişat cu TIGIT cynomolgus şi rhesus; (iii) blochează legarea TIGIT uman la CD155 uman şi CD112 uman; (iv) sporeşte activarea celulelor T; (v) stimulează producţia de IL-2 şi IFNγ de către celulele T antigen-specifice; (vi) blochează inducţia de suprimare a activării celulelor T, indusă prin legarea TIGIT cu liganzii înrudiţi CD155 şi CD112.
Într-o variantă de realizare, anticorpul sau fragmentul acestuia de legare a antigenului se leagă la TIGIT uman şi cuprinde: (i) CDR1 a regiunii variabile a lanţului greu care conţine secvenţa de aminoacid din SECV. ID NR. 88; (ii) CDR2 a regiunii variabile a lanţului greu care cuprinde secvenţa de aminoacid din SECV. ID NR. 89; (iii) CDR3 a regiunii variabile a lanţului greu care cuprinde secvenţa de aminoacid din SECV ID NR. 90; (iv) CDR1 a regiunii variabile a lanţului uşor care cuprinde secvenţa de aminoacid din SECV. ID NR. 91; (v) CDR2 a regiunii variabile a lanţului uşor care cuprinde secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 92; şi (vi) CDR3 a regiunii variabile a lanţului uşor care cuprinde secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 93. Într-o variantă de realizare a invenţiei, anticorpul cuprinde o substituţie de aminoacizi în CDR2 a lanţului greu din SECV. ID NR. 89, caracterizată prin aceea că substituţia este făcută la poziţia 7, şi caracterizată prin aceea că restul D este substituit cu: R, L K, F, S, Y sau V. Într-o altă variantă de realizare, anticorpul cuprinde o substituţie de aminoacizi în CDR2 al lanţului greu din SECV. ID NR. 89, caracterizată prin aceea că substituţia este făcută la poziţia 8, şi caracterizată prin aceea că restul G este substituit cu: R, N, Q, E, L, K, S, Y sau V. Într-o altă variantă de realizare, anticorpul cuprinde o substituţie de aminoacizi în CDR2 a lanţului greu din SECV. ID NR. 89, caracterizată prin aceea că substituţia este făcută la poziţia 12, caracterizată prin aceea că restul N este substituit cu: A sau S. Într-o altă variantă de realizare, anticorpul cuprinde o substituţie de aminoacizi în CDR2 al lanţului greu din SECV. ID NR. 89, caracterizată prin aceea că substituţia este făcută la poziţia 13, caracterizată prin aceea că restul E este substituit cu Q. Într-o altă variantă de realizare a invenţiei, anticorpul cuprinde o substituţie de aminoacizi în CDR2 a lanţului greu din SECV. ID NR. 89, caracterizată prin aceea că substituţia este făcută la poziţia 16, caracterizată prin aceea că restul K este substituit cu Q. Într-o altă variantă de realizare a invenţiei, anticorpul cuprinde o substituţie de aminoacizi în CDR2 a lanţului greu din SECV. ID NR. 89, caracterizată prin aceea că restul de aminoacizi 12 este substituit cu: A sau S, restul de aminoacizi 13 este substituit cu Q şi restul de aminoacid 16 este substituit cu Q. Într-o variantă de realizare, anticorpul cuprinde o substituţie de aminoacizi în CDR3 al lanţului greu din SECV. ID NR. 90, caracterizată prin aceea că restul de aminoacizi 6 este substituit cu: A, D, E, F, G, I, K, N, Q, R, S, T, V sau Y. Într-o altă variantă de realizare, anticorpul cuprinde o substituţie de aminoacizi în CDR al lanţului uşor din SECV. ID NR. 92, caracterizată prin aceea că substituţia este făcută la poziţia 1, şi caracterizată prin aceea că restul N este substituit cu A, Y, W, S, T, R, H, G, I sau V. Îîntr-o altă variantă de realizare, anticorpul cuprinde o substituţie de aminoacid în CDR al lanţului uşor din SECV. ID NR. 92, caracterizată prin aceea că substituţia este făcută la poziţia 2, şi caracterizată prin aceea că restul A este substituit cu N, I, L, T, V. Într-o variantă de realizare, anticorpul sau fragmentul acestuia de legare a antigenului este umanizat. Într-o variantă de realizare, anticorpul sau fragmentul acestuia de legare a antigenului posedă, în mod opţional, cel puţin una dintre următoarele caracteristici: (i) se leagă la TIGIT uman cu o valoare a KD de la aproximativ 1x10-9 M până la aproximativ 1x10-12 M, determinată prin rezonanţă plasmonică de suprafaţă (de exemplu, BIACORE) sau printr-o tehnică similară (de exemplu, KinExA sau OCTET); (ii) reacţionează încrucişat cu TIGIT cynomolgus şi rhesus; (iii) blochează legarea TIGIT uman la CD155 uman şi CD112 uman; (iv) sporeşte activarea celulelor T; (v) stimulează producţia de IL-2 şi IFNγ de către celulele T antigen-specifice; (vi) blochează inducţia de suprimare a activării celulelor T, indusă prin legarea TIGIT cu liganzii înrudiţi CD155 şi CD112.
Într-o altă variantă de realizare a sa, invenţia se referă, de asemenea, la un anticorp sau la un fragment al acestuia de legare a antigenului care se leagă la TIGIT uman cuprinzând: o regiune variabilă a lanţului greu, care conţine CDR1, CDR2 şi CDR3 din oricare dintre SECV. ID NR. 124-129 şi/sau o regiune variabilă a lanţului uşor cuprinzând CDR1, CDR2 şi CDR3 din oricare dintre SECV. ID NR. 130-133. Într-o variantă de realizare, invenţia se referă, de asemenea, la un anticorp izolat sau la un fragment al acestuia de legare a antigenului, care se leagă la TIGIT uman cuprinzând: o regiune variabilă a lanţului greu, selectată din grupul constând din SECV. ID NR: 124-129 şi/sau o regiune variabilă a lanţului , selectată din grupul constând din SECV. ID NR. 130-133. Într-o variantă de realizare a invenţiei, restul D din poziţia 56 a oricăreia dintre SECV. ID Nr: 124-129 poate fi substituit cu R, L, K, F, S, Y sau V. Într-o altă variantă de realizare, restul G din poziţia 57 a oricăreia dintre SECV. ID NR: 124-129 poate fi substituit cu R, N, Q, E, L, K, S, Y sau V. Într-o variantă de realizare, restul W din poziţia 104 a oricăreia dintre SECV. ID NR: 124-129 poate fi substituit cu A, D, E, F, G, I, K, N, Q, R, S, T, V sau Y. Într-o altă variantă de realizare, restul N din poziţia 50 a oricăreia dintre SECV. ID Nr: 130-133 poate fi substituit cu A, Y, W, S, T, I sau V. Într-o altă variantă de realizare a prezentei invenţii, restul A de din poziţia 51 a oricăreia dintre SECV. ID NR: 130-133 este substituit cu N, I, L, T sau V. Într-o variantă de realizare, invenţia propusă se referă la un anticorp izolat sau la un fragment al acestuia de legare a antigenului care se leagă la TIGIT uman cuprinzând: o regiune variabilă a lanţului greu care cuprinde SECV. ID NR. 128 sau o regiune variabilă a lanţului uşor care cuprinde SECV. ID NR. 132. Într-o altă variantă de realizare, invenţia de faţă se referă la un anticorp izolat sau la un fragment al acestuia de legare a antigenului care se leagă la TIGIT uman cuprinzând: o regiune variabilă a lanţului greu care cuprinde SECV. ID NR. 128 sau o regiune variabilă a lanţului uşor care cuprinde SECV. ID NR. 133. Într-o altă variantă de realizare, invenţia se referă, de asemenea, la un anticorp izolat sau la un fragment al acestuia de legare a antigenului care se leagă la TIGIT uman cuprinzând: o regiune variabilă a lanţului greu care cuprinde SECV. ID NR. 127 sau o regiune variabilă a lanţului uşor care cuprinde SECV. ID NR. 130. Într-o variantă de realizare, invenţia se referă la un anticorp izolat sau la un fragment al acestuia de legare la antigen care se leagă la TIGIT uman cuprinzând: o regiune variabilă a lanţului greu care cuprinde SECV. ID NR. 128 şi o regiune variabilă a lanţului uşor care cuprinde SECV. ID NR. 132. Într-o altă variantă de realizare, invenţia se referă, de asemenea, la un anticorp izolat sau la un fragment al acestuia de legare a antigenului care se leagă la TIGIT uman cuprinzând: o regiune variabilă a lanţului greu care cuprinde SECV. ID NR. 128 şi o regiune variabilă a lanţului uşor care cuprinde SECV. ID NR. 133. Într-o altă formă de realizare, invenţia de faţă se referă, de asemenea, la un anticorp izolat sau la un fragment al acestuia de legare a antigenului care se leagă la TIGIT uman cuprinzând: o regiune variabilă a lanţului greu care cuprinde SECV. ID NR. 127 şi o regiune variabilă a lanţului uşor care cuprinde SECV. ID NR. 130. În unele variante de realizare, anticorpul sau fragmentul acestuia de legare a antigenului se leagă la TIGIT uman cu o valoare a KD de la aproximativ 1 x 10-9 M până la aproximativ 1 x 10-12 M, determinată prin rezonanţă plasmonică de suprafaţă (de exemplu, BIACORE) sau printr-o tehnică similară (de exemplu, KinExA sau OCTET).
Într-o altă variantă de realizare, invenţia se referă, de asemenea, la un anticorp sau la un fragment al acestuia de legare a antigenului care se leagă la TIGIT uman cuprinzând: (i) o regiune variabilă a lanţului greu care conţine CDR1, CDR2 şi CDR3 ale oricăreia dintre SECV. ID NR. 124-129, caracterizat prin aceea că regiunea variabilă a lanţului greu cuprinde cel puţin 90%, 95% 96%, 97%, 98% sau% 99% identitate cu oricare dintre SECV. ID NR. 124-129 şi/sau (ii) o regiune variabilă a lanţului uşor cuprinzând CDR1, CDR2 şi CDR3 ale oricăreia dintre SECV. ID NR. 130-133, caracterizat prin aceea că regiunea variabilă a lanţului uşor cuprinde cel puţin 90%, 95%, 96%, 97%, 98% sau 99% identitate cu oricare dintre SECV. ID NR. 130-133. Într-o altă variantă de realizare, invenţia propusă se referă, de asemenea, la un anticorp sau la un fragment al acestuia de legare a antigenului care se leagă la TIGIT uman cuprinzând: (i) o regiune variabilă a lanţului greu care cuprinde CDR1, CDR2 şi CDR3 ale SECV. ID NR. 128, caracterizată prin aceea că regiunea variabilă a lanţului greu cuprinde 90%, 95%, 96%, 97%, 98% sau 99% identitate cu SECV. ID NR. 128 şi/sau (ii) o regiune variabilă a lanţului uşor care cuprinde CDR1, CDR2 şi CDR3 ale SECV. ID NR. 132, caracterizată prin aceea că regiunea variabilă a lanţului uşor cuprinde cel puţin 90%, 95%, 96%, 97%, 98% sau 99% identitate cu SECV. ID NR. 132. Într-o altă variantă de realizare, prezenta invenţie se referă, de asemenea, la un anticorp sau la un fragment al acestuia de legare a antigenului care se leagă la TIGIT uman cuprinzând: (i) o regiune variabilă a lanţului greu care conţine CDR1, CDR2 şi CDR3 ale SECV. ID NR. 128, caracterizată prin aceea că regiunea variabilă a lanţului greu cuprinde cel puţin 90%, 95%, 96%, 97%, 98% sau 99% identitate cu SECV. ID NR. 128 şi/sau (ii) o regiune variabilă a lanţului uşor care cuprinde CDR1, CDR2 şi CDR3 ale SECV. ID NR. 133, caracterizată prin aceea că regiunea variabilă a lanţului uşor cuprinde cel puţin 90%, 95%, 96%, 97%, 98% sau 99% identitate cu SECV. ID NR. 133. Într-o altă variantă de realizare, invenţia se referă, de asemenea, la un anticorp sau la un fragment al acestuia de legare a antigenului care se leagă la TIGIT uman cuprinzând: (i) o regiune variabilă a lanţului greu care conţine CDR1, CDR2 şi CDR3 din SECV. ID NR. 127, caracterizată prin aceea că regiunea variabilă a lanţului greu cuprinde cel puţin 90%, 95%, 96%, 97%, 98% sau de 99% identitate cu SECV. ID Nr. 127 şi/sau (ii) o regiune variabilă a lanţului uşor care cuprinde CDR1, CDR2 şi CDR3 din SECV. ID NR. 130, caracterizată prin aceea că regiunea variabilă a lanţului uşor cuprinde cel puţin 90%, 95%, 96%, 97%, 98% sau 99% identitate cu SECV. ID NR. 130. În aceste variante de realizare, variantele admise ale secvenţei se produc în regiunile cadru ale lanţurilor variabile. În unele variante de realizare, anticorpul sau fragmentul acestuia de legare a antigenului se leagă la TIGIT uman cu o valoare a KD de la aproximativ 1x10-9 M până la aproximativ 1x10-12 M, determinată prin rezonanţă plasmonică de suprafaţă (de exemplu, BIACORE) sau printr-o tehnică similară (de exemplu, KinExA sau OCTET).
Într-o altă variantă de realizare, invenţia se referă la un anticorp sau la un fragment al acestuia de legare a antigenului cuprinzând: un lanţ variabil greu care cuprinde secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 7. şi/sau un lanţ variabil uşor care cuprinde secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 8, caracterizat prin aceea că anticorpul sau fragmentul acestuia de legare a antigenului se leagă la TIGIT uman. Într- o variantă de realizare, anticorpul se leagă la TIGIT uman cu o valoare a KD de la aproximativ 1x10-9 M până la aproximativ 1x10-12 M, determinată prin rezonanţă plasmonică de suprafaţă (de exemplu, BIACORE) sau printr-o tehnică similară (de exemplu, KinExA sau OCTET).
Într-o altă variantă de realizare, invenţia de faţă se referă la un anticorp sau la un fragment al acestuia de legare a antigenului cuprinzând: un lanţ variabil greu care cuprinde secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 143 şi/sau un lanţ variabil uşor care cuprinde secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 145, caracterizat prin aceea că anticorpul sau fragmentul acestuia de legare a antigenului se leagă la TIGIT uman. Într-o variantă de realizare a invenţiei, anticorpul se leagă la TIGIT uman cu o valoare a KD de la aproximativ 1x10-9 M până la aproximativ 1x10-12 M, determinată prin rezonanţă plasmonică de suprafaţă (de exemplu, BIACORE) sau printr-o tehnică similară (de exemplu, KinExA sau OCTET).
Într-o altă formă de realizare, invenţia se referă la un anticorp sau la un fragment al acestuia de legare a antigenului cuprinzând: un lanţ variabil greu care cuprinde secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 144 şi/sau un lanţ variabil uşor care cuprinde secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 146, caracterizat prin aceea că anticorpul sau fragmentul acestuia de legare la antigen se leagă la TIGIT uman. Într-o variantă, anticorpul se leagă la TIGIT uman cu o valoare a KD de la aproximativ 1x10-9 M până la aproximativ 1x10-12 M, determinată prin rezonanţă plasmonică de suprafaţă (de exemplu, BIACORE) sau printr-o tehnică similară (de exemplu, KinExA sau OCTET).
Într-o altă variantă de realizare, invenţia propusă se referă la un anticorp sau la un fragment al acestuia de legare a antigenului cuprinzând: un lanţ variabil greu care conţine secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 63 şi/sau un lanţ variabil uşor care cuprinde secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 64, caracterizat prin aceea că anticorpul sau fragmentul acestuia de legare la antigen se leagă la TIGIT uman. Într-o variantă, anticorpul se leagă la TIGIT uman cu o valoare a KD de la aproximativ 1x10-9 M până la aproximativ 1x10-12 M, determinată prin rezonanţă plasmonică de suprafaţă (de exemplu, BIACORE) sau printr-o tehnică similară (de exemplu, KinExA sau OCTET).
Într-o altă variantă de realizare, invenţia se referă la un anticorp sau la un fragment al acestuia de legare a antigenului cuprinzând: un lanţ variabil greu care conţine secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 94 şi / sau un lanţ variabil uşor care cuprinde secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 95, caracterizat prin aceea că anticorpul sau fragmentul acestuia de legare a antigenului se leagă la TIGIT uman. Într-o variantă de realizare, anticorpul se leagă la TIGIT uman cu o valoare a KD de la aproximativ 1x10-9 M până la aproximativ 1x10-12 M, determinată prin rezonanţă plasmonică de suprafaţă (de exemplu, BIACORE) sau printr-o tehnică similară (de exemplu, KinExA sau OCTET).
Într-o variantă de realizare, invenţia se referă, de asemenea, la un anticorp izolat sau la un fragment al acestuia de legare a antigenului care se leagă la TIGIT uman cuprinzând: o regiune variabilă a lanţului greu care cuprinde SECV. ID NR. 149 şi / sau o regiune variabilă a lanţului uşor care cuprinde SECV. ID NR. 151. Într-o variantă, anticorpul se leagă la TIGIT uman cu o valoare a KD de la aproximativ 1x10-9 M până la aproximativ 1x10-12 M, determinată prin rezonanţă plasmonică de suprafaţă (de exemplu, BIACORE) sau printr-o tehnică similară (de exemplu, KinExA sau OCTET).
Într-o variantă de realizare, invenţia se referă, de asemenea, la un anticorp izolat sau la un fragment al acestuia de legare a antigenului care se leagă la TIGIT uman cuprinzând: o regiune variabilă a lanţului greu care conţine SECV. ID NR. 150 şi / sau o regiune variabilă a lanţului uşor care cuprinde SECV. ID NR. 152. Într-o variantă de realizare, anticorpul se leagă la TIGIT uman cu o valoare a KD de la aproximativ 1x10-9 M până la aproximativ 1x10-12 M, determinată prin rezonanţă plasmonică de suprafaţă (de exemplu, BIACORE) sau printr-o tehnică similară (de exemplu, KinExA sau OCTET).
Într-o altă variantă de realizare, invenţia se referă la un anticorp sau la un fragment al acestuia de legare a antigenului care se leagă cu acelaşi epitop al TIGIT uman ca şi un anticorp care cuprinde lanţul variabil greu al SECV. ID NR. 7 şi lanţul variabil uşor al SECV. ID NR. 8, caracterizat prin aceea că anticorpul sau fragmentul acestuia de legare la antigen posedă cel puţin una dintre următoarele caracteristici: (i) se leagă la TIGIT uman cu o valoare a KD de la aproximativ 1x10-9 M până la aproximativ 1x10-12 M, determinată prin rezonanţă plasmonică de suprafaţă (de exemplu, BIACORE) sau printr-o tehnică similară (de exemplu, KinExA sau OCTET), (ii) blochează legarea TIGIT uman la CD155 uman şi CD112 uman; (iii) sporeşte activarea celulelor T; (iv) stimulează producţia de IL-2 şi IFNγ de către celulele T antigen-specifice; (v) blochează inducţia de suprimare a activării celulelor T, indusă prin legarea TIGIT cu liganzi înrudiţi CD155 şi CD112. Într-o variantă de realizare, anticorpul cuprinde cel puţin 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% sau 99% identitate a secvenţei cu lanţul variabil greu şi / sau lanţul variabil uşor ale oricăreia dintre SECV. ID Nr. 7-30 sau 37-52. Într-o altă variantă de realizare, anticorpul sau fragmentul acestuia de legare a antigenului cuprinde 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29 sau 30 de substituţii de aminoacizi în regiunea variabilă a lanţului greu din oricare dintre SECV. ID NR.7, 9-24 şi 37-47 şi / sau în regiunea variabilă a lanţului uşor din oricare dintre SECV. ID NR. 8, 25-30 şi 48-52.
Într-o variantă de realizare, prezenta invenţie se referă la un anticorp sau la un fragment al acestuia de legare a antigenului care se leagă la un epitop de TIGIT uman cuprinzând cel puţin una dintre următoarele regiuni: resturile 54-57 ale SECV. ID NR. 31, resturile 68-70 ale SECV. ID NR. 31 şi resturile 76-81 ale SECV. ID NR. 31. Într-o variantă de realizare, invenţia se referă la un anticorp sau la un fragment al acestuia de legare a antigenului care se leagă la un epitop de TIGIT uman conţinând resturile: 54-57, 68-70 şi 76-81 ale SECV. ID NR. 31.
Într-o altă variantă de realizare, invenţia se referă la un anticorp sau la un fragment al acestuia de legare a antigenului care se leagă la acelaşi epitop al TIGIT uman ca şi un anticorp care cuprinde regiunea variabilă a lanţului greu al SECV. ID NR. 63 şi regiunea variabilă a lanţului uşor al SECV. ID NR. 64, caracterizat prin aceea că anticorpul sau fragmentul acestuia de legare a antigenului posedă cel puţin una dintre următoarele caracteristici: (i) se leagă la TIGIT uman cu o valoare a KD de la aproximativ 1x10-9 M până la aproximativ 1x10-12 M, determinată prin rezonanţă plasmonică de suprafaţă (de exemplu, BIACORE) sau printr-o tehnică similară (de exemplu, KinExA sau OCTET), (ii) reacţionează încrucişat cu TIGIT cynomolgus şi rhesus; (iii) blochează legarea TIGIT uman la CD155 uman şi CD112 uman; (iv) sporeşte activarea celulelor T; (v) stimulează producţia de IL-2 şi IFNγ de către celulele T antigen-specifice; (vi) blochează inducţia de suprimare a activării celulelor T, indusă prin legarea TIGIT cu liganzii înrudiţi CD155 şi CD112. Într-o variantă de realizare, anticorpul sau fragmentul acestuia de legare a antigenului posedă cel puţin 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%), 98%) sau 99% identitate de secvenţă cu regiunea variabilă a lanţului greu al SECV. ID NR. 63 şi / sau cu regiunea variabilă a lanţului uşor al SECV. ID NR. 64. Într-o altă formă de realizare, anticorpul sau fragmentul acestuia de legare a antigenului cuprinde 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29 sau 30 substituţii de aminoacizi în regiunea variabilă a lanţului greu al SECV. ID NR. 63 şi / sau în regiunea variabilă a lanţului uşor al SECV. ID NR. 64. Într-o altă variantă de realizare, anticorpul sau fragmentul acestuia de legare a antigenului cuprinde 1, 2 sau 3 substituţii de aminoaciză în CDR-urile lanţului greu (SECV. ID NR. 57-59) sau în CDR-urile lanţului uşor (SECV. ID NR. 60-62).
Într-o altă variantă de realizare, invenţia se referă la un anticorp sau la un fragment al acestuia de legare a antigenului care se leagă la acelaşi epitop al TIGIT uman ca şi un anticorp care cuprinde regiunea variabilă a lanţului greu al SECV. ID NR. 94 şi regiunea variabilă a lanţului uşor al SECV. ID Nr. 95, caracterizat prin aceea că anticorpul sau fragmentul acestuia de legare a antigenului posedă cel puţin una dintre următoarele caracteristici: (i) se leagă la TIGIT uman cu o valoare a KD de la aproximativ 1x10-9 M până la aproximativ 1x10-12 M, determinată prin rezonanţă plasmonică de suprafaţă (de exemplu, BIACORE) sau printr-o tehnică similară (de exemplu, KinExA sau OCTET), (ii) reacţionează încrucişat cu TIGIT cynomolgus şi rhesus, (iii) blochează legarea TIGIT uman la CD155 uman şi CD112 uman; (iv) sporeşte activarea celulelor T; (v) stimulează producţia de IL-2 şi IFNγ de către celulele T antigen-specifice; (vi) blochează inducţia de suprimare a activării celulelor T, indusă prin legarea TIGIT cu liganzii înrudiţi CD155 şi CD112. Într-o variantă, anticorpul sau fragmentul acestuia de legare a antigenului cuprinde cel puţin 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% sau 99% identitate de secvenţă cu regiunea variabilă a lanţului greu al oricăreia dintre SECV. ID NR. 94 sau 124-129 şi/sau cu regiunea variabilă a lanţului uşor al oricăreia dintre SECV. ID NR. 95 sau 130-133. Într-o altă variantă de realizare, anticorpul sau fragmentul acestuia de legare a antigenului cuprinde 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29 sau 30 substituţii de aminoacizi în regiunea variabilă a lanţului greu al oricăreia dintre SECV. ID NR. 94 sau 124-129 şi/sau în regiunea variabilă a lanţului uşor al oricăreia dintre SECV. ID NR. 95 sau 130-133. Într-o altă variantă, anticorpul sau fragmentul acestuia de legare a antigenului cuprinde 1, 2 sau 3 substituţii de aminoacizi în CDR-urile regiunii variabile a lanţului greu (SECV. ID NR. 88-90) şi / sau în CDR-urile regiunii variabile a lanţului uşor (SECV. ID NR. 91-93). Într-o altă variantă de realizare, anticorpul sau fragmentul acestuia de legare a antigenului cuprinde CDR-urile lanţului greu din SECV. ID NR. 88, 134 şi 90 şi / sau CDR-urile lanţului uşor din SECV. ID NR. 91, 92 şi 93.
Într-o variantă de realizare, invenţia propusă se referă la un anticorp sau la un fragment al acestuia de legare a antigenului care se leagă la un epitop de TIGIT uman cuprinzând cel puţin una dintre următoarele regiuni: resturile 53-57, resturile 60-65, resturile 68-70, resturile 72-81, resturile 94-95 şi resturile 109-119 ale SECV. ID NR. 31. Într-o variantă de realizare, invenţia se referă la un anticorp sau un fragment al acestuia de legare a antigenului care se leagă la un epitop de TIGIT uman cuprinzând resturile: 53-57, 60-65, 68-70, 72-81, 94-95 şi 109-119 din SECV. ID NR. 31.
Într-o altă variantă de realizare, invenţia se referă la un anticorp sau un fragment al acestuia de legare a antigenului care blochează încrucişat legarea unui anticorp (sau care concurează cu anticorpul) cuprinzând regiunea variabilă a lanţului greu din SECV. ID NR. 7 şi regiunea variabilă a lanţului uşor din SECV. ID NR. 8 la TIGIT uman, caracterizat prin aceea că anticorpul sau fragmentul acestuia de legare a antigenului posedă cel puţin una dintre următoarele caracteristici: (i) se leagă la TIGIT uman cu o valoare a KD de la aproximativ 1x10-9 M până la aproximativ 1x10-12 M, determinată prin rezonanţă plasmonică de suprafaţă (de exemplu, BIACORE) sau printr-o tehnică similară (de exemplu, KinExA sau OCTET), (ii) reacţionează încrucişat cu TIGIT cynomolgus şi rhesus, (iii) blochează legarea TIGIT uman la CD155 uman şi CD112 uman; (iv) sporeşte activarea celulelor T; (v) stimulează producţia de IL-2 şi IFNγ de către celulele T antigen-specifice; (vi) blochează inducţia de suprimare a activării celulelor T, indusă prin legarea TIGIT cu liganzii înrudiţi CD155 şi CD112. Într-o variantă de realizare, anticorpul sau fragmentul acestuia de legare la antigen conţine cel puţin 80%, 85%, 90%), 95%, 96%, 97%, 98%, sau 99% identitate de secvenţă cu lanţul variabil greu sau lanţul variabil uşor ale SECV. ID Nr. 7-30 sau 37-52. Într-o altă variantă de realizare, anticorpul sau fragmentul acestuia de legare a antigenului cuprinde 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29 sau 30 substituţii de aminoacizi în regiunile variabile ale lanţurilor grele ale SECV. ID NR. 7, 9-24 şi 37-47 sau în regiunile variabile ale lanţurilor uşoare ale SECV. ID NR. 8, 25-30 şi 48-52. Într-o altă variantă de realizare, anticorpul sau fragmentul acestuia de legare a antigenului cuprinde 1, 2 sau 3 substituţii de aminoacizi în CDR-urile lanţului greu (SECV. ID NR. 1-3) sau în CDR-urile lanţului uşor (SECV. ID NR. 3-6).
Într-o altă variantă de realizare, invenţia se referă la un anticorp sau un fragment al acestuia de legare a antigenului care blochează încrucişat legarea unui anticorp (sau care concurează cu un anticorp) cuprinzând regiunea variabilă a lanţului greu al SECV. ID NR. 63 şi regiunea variabilă a lanţului uşor al SECV. ID NR. 64 la TIGIT uman, caracterizat prin aceea că anticorpul sau fragmentul acestuia de legare a antigenului posedă cel puţin una dintre următoarele caracteristici funcţionale: (i) se leagă la TIGIT uman cu o valoare a KD de la aproximativ 1x10-9 M până la aproximativ 1x10-12 M, determinată prin rezonanţă plasmonică de suprafaţă (de exemplu, BIACORE) sau printr-o tehnică similară (de exemplu, KinExA sau OCTET); (ii) reacţionează încrucişat cu TIGIT cynomolgus şi rhesus; (iii) blochează legarea TIGIT uman la CD155 uman şi CD112 uman; (iv) sporeşte activarea celulelor T; (v) stimulează producţia de IL-2 şi IFNγ a celuleor T antigen-specifice; (vi) blochează inducţia de suprimare a activării celulelor T, indusă prin legarea TIGIT cu liganzii înrudiţi CD155 şi CD112. Într-o variantă de realizare, anticorpul cuprinde cel puţin 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% sau 99% identitate de secvenţă cu regiunea variabilă a lanţului greu al SECV. ID NR. 63 sau cu regiunea variabilă a lanţului uşor al SECV. ID NR. 64. Într-o altă variantă de realizare, anticorpul sau fragmentul acestuia de legare a antigenului cuprinde 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29 sau 30 substituţii de aminoacizi în regiunea variabilă a lanţului greu al SECV. ID NR: 63 sau în regiunea variabilă a lanţului uşor al SECV. ID NR. 64. Într-o altă variantă, anticorpul sau fragmentul acestuia de legare a antigenului cuprinde 1, 2 sau 3 substituţii de aminoacizi în CDR-urile lanţului greu (SECV. ID NR. 57-59) sau în CDR-urile lanţului uşor (SECV. ID NR. 60-62).
Într-o altă variantă de realizare, invenţia se referă la un anticorp sau la un fragment al acestuia de legare a antigenului care blochează încrucişat legarea unui anticorp (sau care concurează cu un anticorp) cuprinzând regiunea variabilă a lanţului greu al SECV. ID NR. 94 şi regiunea variabilă a lanţului uşor al SECV. ID NR: 95 la TIGIT uman, caracterizat prin aceea că anticorpul sau fragmentul acestuia de legare a antigenului posedă cel puţin una dintre următoarele caracteristici: (i) se leagă la TIGIT uman cu o valoare a KD de la aproximativ 1x10-9 M până la aproximativ 1x10-12 M, determinată prin rezonanţă plasmonică de suprafaţă (de exemplu, BIACORE) sau printr-o tehnică similară (de exemplu, KinExA sau OCTET); (ii) reacţionează încrucişat cu TIGIT cynomolgus şi rhesus; (iii) blochează legarea TIGIT uman la CD155 uman şi CD112 uman; (iv) sporeşte activarea celulelor T; (v) stimulează producţia de IL-2 şi IFNγ a celuleor T antigen-specifice; (vi) blochează inducţia de suprimare a activării celulelor T, indusă prin legarea TIGIT cu liganzii înrudiţi CD155 şi CD112. Într-o variantă de realizare, anticorpul conţine cel puţin 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% sau 99% identitate de secvenţă cu regiunea variabilă a lanţului greu al SECV. ID NR. 94 sau cu regiunea variabilă a lanţului uşor al SECV. ID NR. 95. Într-o altă variantă de realizare, anticorpul sau fragmentul acestuia de legare a antigenului cuprinde 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29 sau 30 substituţii de aminoacizi în regiunea variabilă a lanţului greu al oricăreia dintre SECV. ID NR. 94 sau 124-129 sau în regiunea variabilă a lanţului uşor al oricăreia dintre SECV. ID NR. 95 sau 130-133. Într-un alt exemplu de realizare, anticorpul sau fragmentul acestuia de legare a antigenului cuprinde 1, 2 sau 3 substituţii de aminoacizi în CDR-urile lanţului greu (SECV. ID NR. 88-90) sau în CDR-urile lanţului uşor (SECV. ID NR. 91-93). Într-o variantă de realizare, anticorpul sau fragmentul acestuia de legare a antigenului cuprinde: regiunea variabilă a lanţului greu care conţine SECV. ID NR. 128 şi regiunea variabilă a lanţului uşor care conţine SECV. ID NR. 132. Într-o altă variantă de realizare, anticorpul sau fragmentul acestuia de legare a antigenului cuprinde: regiunea variabilă a lanţului greu conţinând SECV. ID NR. 127 şi regiunea variabilă a lanţului uşor conţinând SECV. ID NR. 130. Într-o altă variantă de realizare, anticorpul sau fragmentul acestuia de legare a antigenului cuprinde: regiunea variabilă a lanţului greu conţinând SECV. ID NR. 128 şi regiunea variabilă a lanţului uşor conţinând SECV. ID NR. 133.
Într-o altă variantă de realizare, invenţia se referă la un anticorp sau la un fragment al acestuia de legare a antigenului care se leagă la TIGIT uman cuprinzând regiunea variabilă a lanţului greu, selectată din grupul constând din oricare dintre SECV. ID NR. 9-24 şi 37-47, şi/sau regiunea variabilă a lanţului uşor, selectată din grupul constând din oricare dintre SECV. ID NR. 25-30 şi 48-52. Într-o variantă de realizare, anticorpul cuprinde o substituţie de aminoacizi în FR4 a lanţului greu, caracterizată prin aceea că substituţia este făcută la poziţia 122 a SECV. ID NR. 9-24 şi 37-47, caracterizată prin aceea că restul M este substituit cu: V, L, A, R, N, P, Q, E, G, I, H, K, F, S, T, W sau Y. Într-o variantă de realizare, anticorpul cuprinde două substituţii de aminoacizi în FR4 a lanţului greu, caracterizată prin aceea că substituţiile sunt efectuate la poziţiile 122 şi 123 din SECV. ID NR. 9-24 şi 37-47, în care resturile M şi V sunt substituite cu T şi L, respectiv.
Într-o altă variantă de realizare, invenţia se referă la un anticorp sau la un fragment al acestuia de legare a antigenului care se leagă la TIGIT uman cuprinzând regiunea variabilă a lanţului greu, selectată din grupul constând din oricare dintre SECV. ID NR. 9-24 şi 37-47 şi/sau regiunea variabilă a lanţului uşor, selectată din grupul constând din oricare dintre SECV. ID NR. 25-30 şi 48-52. Într-o variantă de realizare, anticorpul cuprinde o substituţie de aminoacizi în FR4 a lanţului greu, caracterizat prin aceea că substituţia este făcută la poziţia 122 a SECV. ID NR. 9-24 şi 37-47, caracterizat prin aceea că restul M este substituit cu: V, L, A, R, N, P, Q, E, G, I, H, K, F, S, T, W sau Y. Într-o variantă de realizare, anticorpul cuprinde două substituţii de aminoacizi în FR4 a lanţului greu, caracterizat prin aceea că substituţiile sunt efectuate la poziţiile 122 şi 123 din SECV. ID NR. 9-24 şi 37-47, caracterizat prin aceea că resturile M şi V sunt substituite cu T şi L, respectiv.
Într-o variantă de realizare, invenţia se referă la un anticorp izolat sau la un fragment al acestuia de legare a antigenului care se leagă la TIGIT uman cuprinzând: un lanţ greu conţinând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 7 sau o variantă a acestuia care cuprinde până la 30 substituţii de aminoacizi şi/sau un lanţ uşor conţinând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 8 care cuprinde până la 12 substituţii de aminoacizi. Într-o variantă de realizare, lanţul greu cuprinde secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 7 conţinând substituţii de aminoacizi la una sau la mai multe poziţii, selectate din grupul format din: 6, 9, 12, 15, 16, 17, 23, 25, 37, 39, 40, 43, 44, 45, 48, 67, 68, 70, 71, 79, 81, 83, 87, 88, 92, 94, 119, 122 şi 123. Într-o variantă de realizare, lanţul greu cuprinde secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 7 conţinând substituţii de aminoacizi la una sau la mai multe poziţii, selectate din grupul format din: 6, 9, 12, 15, 16, 17, 23, 25, 37, 39, 40, 43, 44, 45, 48, 67, 68, 70, 71, 79, 81, 83, 87, 88, 92, 94, 110, 119, 122 şi 123, caracterizat prin aceea că aminoacidul din poziţia 6 poate prezenta E sau Q, aminoacidul din poziţia 9 poate prezenta P sau A, aminoacidul din poziţia 12 poate prezenta V sau L, aminoacidul din poziţia 15 poate prezenta S sau P, aminoacidul din poziţia 16 poate prezenta Q sau E sau G, aminoacidul din poziţia 17 poate prezenta S sau T, aminoacidul din poziţia 23 poate prezenta S sau T, aminoacidul din poziţia 25 poate prezenta T sau S, aminoacidul din poziţia 37 pot prezenta I sau V, aminoacidul din poziţia 39 poate prezenta K sau Q, aminoacidul din poziţia 40 poate prezenta F sau P, aminoacidul din poziţia 43 poate prezenta N sau K, aminoacidul din poziţia 44 poate prezenta K sau G, aminoacidul din poziţia 45 poate prezenta M sau L, aminoacidul din poziţia 48 poate prezenta M sau I, aminoacidul din poziţia 67 poate prezenta I sau V, aminoacidul din poziţia 68 poate prezenta S sau T, aminoacidul din poziţia 70 poate prezenta T sau S, aminoacidul din poziţia 71 poate prezenta R sau V, aminoacidul din poziţia 79 poate prezenta F sau S, aminoacidul din poziţia 81 poate prezenta Q sau K, aminoacidul din poziţia 83 poate prezenta H sau S, aminoacidul din poziţia 87 poate prezenta T sau A, aminoacidul din poziţia 88 poate prezenta D sau A, aminoacidul din poziţia 92 poate prezenta T sau V, aminoacidul din poziţia 94 poate prezenta S sau Y, aminoacidul din poziţia 110 poate prezenta W, F, Y, I, V sau L, aminoacidul din poziţia 119 poate prezenta P sau Q, aminoacidul din poziţia 122 poate prezenta M, V, L, A, R, N, P, Q, E, G, I, H, K, F, S, T, W sau Y, iar aminoacidul din poziţia 123 poate prezenta V, T sau L. Într-o variantă de realizare, lanţul uşor cuprinde secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 8 care cuprinde substituţii de aminoacizi la una sau la mai multe poziţii, selectate din grupul constând din: 10, 21, 22, 40, 42, 46, 52, 53 , 58, 77, 83, 87, 95 şi 106. Într-o variantă de realizare, lanţul uşor cuprinde secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 8 care conţine substituţii de aminoacizi la una sau la mai multe poziţii, selectate din grupul constând din: 10, 21, 22, 40, 42, 46, 52, 53, 58, 77, 83, 87, 95 şi 106, caracterizat prin aceea că: aminoacidul din poziţia 10 poate prezenta L sau S, aminoacidul din poziţia 21 poate prezenta L sau I, aminoacidul din poziţia 22 poate prezenta N sau T, aminoacidul din poziţia 40 poate prezenta L sau P, aminoacidul din poziţia 42 poate prezenta E sau K, aminoacidul din poziţia 46 poate prezenta F sau L, aminoacidul din poziţia 52 poate prezenta N, S, T, G sau D, aminoacidul din poziţia 53 poate prezenta S, N, T, Y sau Q, aminoacidul din poziţia 58 poate prezenta I sau V, aminoacidul din poziţia 77 poate prezenta G sau S, aminoacidul din poziţia 83 poate prezenta V sau F, aminoacidul din poziţia 87 poate prezenta F sau Y, aminoacidul din poziţia 95 poate prezenta W, F, Y, I, V sau L, iar aminoacidul din poziţia 105 poate prezenta L sau I.
Într-o altă variantă de realizare, prezenta invenţie se referă la un anticorp sau la un fragment al acestuia de legare a antigenului care se leagă la TIGIT uman cuprinzând: un lanţ greu care cuprinde secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 9 şi/sau un lanţ uşor care cuprinde secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 25, caracterizat prin aceea că fiecare dintre lanţurile variabile poate cuprinde 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 sau 8 substituţii de aminoacizi. Într-o variantă de realizare, anticorpul poate cuprinde mutaţii la poziţiile 27, 48, 67, 71, 83, 110, 122 şi 123 din SECV. ID NR. 9. De exemplu, în raport cu SECV. ID NR. 9: aminoacidul din poziţia 27 poate constitui G sau S; aminoacidul din poziţia 48 poate constitui I sau M; aminoacidul din poziţia 67 poate constitui V sau I; aminoacidul din poziţia 71 poate constitui V sau R; aminoacidul din poziţia 83 poate constitui S sau H; aminoacidul din poziţia 110 poate constitui W F, Y, I, V sau L; aminoacidul din poziţia 122 poate constitui M, V, L, A, R, N, P, Q, E, G, I, H, K, F, S, T, W sau Y; şi aminoacidul din poziţia 123 poate constitui V, T sau L. Într-o altă variantă de realizare, anticorpul poate cuprinde mutaţii la poziţiile 46, 52, 53, 58 şi 95 din SECV. ID NR. 25. De exemplu, în raport cu SECV. ID NR. 25, aminoacidul din poziţia 46 poate constitui L sau F; aminoacidul din poziţia 52 poate constitui N, S, T, G sau D, aminoacidul din poziţia 53 poate constitui S, N, T, Y sau Q; aminoacidul din poziţia 58 poate constitui I sau V; aminoacidul din poziţia 58 poate constitui V sau I; şi aminoacidul din poziţia 95 poate constitui W, F, Y, I, V sau L.
Într-o variantă de realizare, invenţia se referă la un anticorp sau la un fragment al acestuia de legare a antigenului care se leagă la TIGIT uman cuprinzând: un lanţ greu care conţine secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 94 sau o variantă a acesteia având până la 30 de substituţii de aminoacizi, şi un lanţ uşor care conţine secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 95 sau o variantă a acesteia având până la 18 substituţii de aminoacizi. Într-un exemplu de realizare, lanţul greu cuprinde o variantă a secvenţei de aminoacizi din SECV. ID NR. 94 care conţine substituţii de aminoacizi la una sau la mai multe poziţii, selectate din grupul format din: 5, 9, 11, 12, 16, 20, 38 , 40, 44, 56, 57, 61, 62, 65, 67, 68, 72, 74, 76, 79, 85, 87, 89, 91, 92, 104 şi 111. Într-un exemplu de realizare, lanţul greu cuprinde o variantă a secvenţei de aminoacizi din SECV. ID NR. 94 având substituţii de aminoacizi la una sau la mai multe poziţii, selectate din grupul constând din: 5, 9, 11, 12, 16, 20, 38 , 40, 44, 56, 57, 61, 62, 65, 67, 68, 72, 74, 76, 79, 85, 87, 89, 91, 92, 104 şi 111, caracterizat prin aceea că: aminoacidul din poziţia 5 poate constitui Q sau V, aminoacidul din poziţia 9 poate constitui P sau A, aminoacidul din poziţia 11 poate constitui V sau L, aminoacidul din poziţia 12 poate constitui V sau K, aminoacidul din poziţia 16 poate constitui S sau A, aminoacidul din poziţia 20 poate constitui M sau V, aminoacidul din poziţia 38 poate constitui K sau R, aminoacidul din poziţia 40 poate constitui K sau A, aminoacidului din poziţia 44 poate constitui G sau R, aminoacidul din poziţia 56 poate constitui D, R, L, K, F, S, Y sau V, aminoacidul din poziţia 57 poate constitui G, R, N, Q, E, L, K, S, Y sau V , aminoacidul din poziţia 61 poate constitui N, A sau S, aminoacidul din poziţia 62 poate constitui E sau Q, aminoacidul din poziţia 65 poate constitui K sau Q aminoacidul din poziţia 67 poate constitui R sau K, aminoacidul din poziţia 68 poate constitui A sau V, aminoacidul din poziţia 72 poate constitui S sau R, aminoacidul din poziţia 74 poate constitui K sau T, aminoacidul din poziţia 76 poate constitui S, I, A sau T, aminoacidul din poziţia 79 poate constitui A sau V, aminoacidul din poziţia 85 poate constitui R sau S, aminoacidul din poziţia 87 poate constitui T sau R, aminoacidul din poziţia 89 poate constitui D sau E, aminoacidul din poziţia 91 poate constitui S sau T, aminoacidul din poziţia 92 poate constitui A sau V, aminoacidul din poziţia 104 poate constitui W, A, D, E, F, G, I, K, N , Q, R, S, T, V sau Y, iar aminoacidul din poziţia 111 poate constitui A sau Q. Într-un exemplu de realizare, lanţul uşor cuprinde o variantă a secvenţei de aminoacizi din SECV. ID NR. 95 cuprinzând substituţii de aminoacizi la una sau la mai multe poziţii, selectate din grupul constând din: 9, 17, 18, 40, 43, 45, 48, 50, 51, 70, 72, 74, 76, 83, 84, 100, 103 şi 106. Într-un exemplu de realizare, lanţul uşor cuprinde o variantă a secvenţei de aminoacizi din SECV. ID NR. 95 conţinând substituţii de aminoacizi la una sau la mai multe poziţii, selectate din grupul constând din: 9, 17, 18, 40, 43, 45, 48 50, 51, 70, 72, 74, 76, 83, 84, 100, 103 şi 106, caracterizat prin aceea că aminoacidul din poziţia 9 poate prezenta A sau S, aminoacidului din poziţia 17 poate prezenta E sau D, aminoacidul din poziţia 18 poate prezenta T sau R, aminoacidul din poziţia 40 poate prezenta Q sau P, aminoacidul din poziţia 43 poate prezenta S, A sau V, aminoacidul din poziţia 45 poate prezenta Q sau K, aminoacidul din poziţia 48 poate prezenta V sau I, aminoacidul din poziţia 50 poate prezenta N, A, Y, W, S, T, I sau V, aminoacidul din poziţia 51 poate prezenta A, N, I, L, T sau V, aminoacidul din poziţia 70 poate prezenta Q sau D, aminoacidul din poziţia 72 poate prezenta S sau T, aminoacidul din poziţia 74 poate prezenta K sau T, aminoacidul din poziţia 76 poate prezenta N sau S, aminoacidului din poziţia 83 poate prezenta F sau V, aminoacidul din poziţia 84 poate prezenta G sau A, aminoacidul din poziţia 100 poate prezenta A sau Q, aminoacidul din poziţia 103 poate prezenta T sau R şi aminoacidul din poziţia 106 poate prezenta L sau I.
Într-o variantă de realizare, invenţia se referă la un anticorp sau un fragment al acestuia de legare a antigenului care se leagă la TIGIT uman cuprinzând: un lanţ greu care conţine secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 124 sau o variantă a acesteia cuprinzând până la 10 substituţii de aminoacizi şi/sau un lanţ uşor care conţine secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 130 sau o variantă a acesteia cuprinzând până la 5 substituţii de aminoacizi. Într-o altă variantă de realizare, invenţia se referă la un anticorp sau un fragment al acestuia de legare a antigenului care se leagă la TIGIT uman cuprinzând regiunea variabilă a lanţului greu din SECV. ID NR. 124 sau o variantă a acesteia, caracterizat prin aceea că varianta cuprinde substituţii la una sau la mai multe poziţii, selectate din grupul constând din: 16, 44, 56, 57, 61, 72, 74, 76, 79, 85, 89, 92 şi 104. Într-o altă variantă de realizare, invenţia se referă la un anticorp sau la un fragment al acestuia de legare a antigenului care se leagă la TIGIT uman cuprinzând regiunea variabilă a lanţului greu din SECV. ID NR. 124 sau o variantă a acesteia care conţine substituţii la una sau la mai multe poziţii, selectate din grupul constând din: 16, 44, 56, 57, 61, 72, 74, 76, 79, 85, 89, 92 şi 104, caracterizat prin aceea că aminoacidul din poziţia 16 poate constitui A sau S, aminoacidul din poziţia 44 poate constitui R sau G, aminoacidul din poziţia 56 poate constitui D, R, L, K, F, S, Y sau V, aminoacidul din poziţia 57 poate constitui G, R, N, Q, E, L, K, S, Y sau V, aminoacidul din poziţia 61 poate constitui S sau A, aminoacidul din poziţia 72 poate constitui R sau S, aminoacidul din poziţia 74 poate constitui T sau K, aminoacidul din poziţia 76 poate constitui A sau T sau I, aminoacidul din poziţia 79 poate constitui A sau V, aminoacidul din poziţia 85 poate constitui S sau R, aminoacidul din poziţia 89 poate constitui E sau D, aminoacidul din poziţia 92 poate constitui A sau V, iar aminoacidul din poziţia 104 poate constitui W, A, D, E, F, G, I, K, N, Q, R, S, T, V sau Y. Într-o altă variantă de realizare, invenţia propusă se referă la un anticorp sau un fragment al acestuia de legare a antigenului care se leagă la TIGIT uman cuprinzând regiunea variabilă a lanţului uşor din SECV. ID NR. 130 sau o variantă a acesteia care conţine substituţii la una sau la mai multe poziţii, selectate din grupul constând din: 43, 50, 51, 70 şi 83. Într-o altă variantă de realizare, invenţia dată se referă la un anticorp sau un fragment al acestuia de legare a antigenului care se leagă la TIGIT uman cuprinzând regiunea variabilă a lanţului uşor din SECV ID NR. 130 sau o variantă a acesteia care conţine substituţii la una sau la mai multe poziţii, selectate din grupul format din: 43, 50, 51, 70 şi 83, caracterizat prin aceea că aminoacidul din poziţia 43 poate prezenta S, A sau V, aminoacidul din poziţia 50 poate prezenta N, A, Y, W, S, T, I sau V, aminoacidul din poziţia 51 poate prezenta A, N, I, L, T sau V, aminoacidul din poziţia 70 poate prezenta Q sau D, iar aminoacidul din poziţia 83 poate prezenta F sau V.
În oricare dintre variantele de realizare, menţionate mai sus, anticorpul sau fragmentul acestuia de legare a antigenului este izolat.
În oricare dintre variantele de realizare, menţionate mai sus, anticorpul sau fragmentul acestuia de legare a antigenului este un anticorp recombinant.
În oricare dintre variantele de realizare, menţionate mai sus, anticorpul sau fragmentul acestuia de legare a antigenului este un anticorp cu lungime deplină.
În oricare dintre variantele de realizare, menţionate mai sus, anticorpul sau fragmentul acestuia de legare a antigenului, conform invenţiei, poate cuprinde o regiune variabilă a lanţului greu constând din: (a) oricare dintre regiunile variabile ale lanţurilor grele descrise mai sus şi (b) o peptidă lider (de exemplu, peptida lider din SECV. ID NR. 53). În oricare dintre variantele de realizare, menţionate mai sus, anticorpul sau fragmentul acestuia de legare a antigenului, conform invenţiei, poate cuprinde o regiune variabilă a lanţului uşor constând din: (a) oricare dintre regiunile variabile ale lanţurilor uşoare descrise anterior şi (b) o peptidă lider (de exemplu, peptida lider din SECV. ID Nr. 54).
În oricare dintre variantele de realizare, menţionate mai sus, anticorpul sau fragmentul acestuia de legare a antigenului, conform invenţiei, constituie un anticorp care cuprinde oricare dintre lanţurile variabile grele descrise mai sus şi oricare domeniu constant de lanţ greu uman. Într-o variantă de realizare, anticorpul sau fragmentul acestuia de legare a antigenului, conform invenţiei, se referă la izotipul IgG şi cuprinde domeniul constant de lanţ greu uman al IgG1, lgG2, lgG3 sau lgG4 umane. Într-o variantă de realizare, anticorpul sau fragmentul acestuia de legare a antigenului, conform invenţiei, cuprinde domeniul constant de lanţ greu uman al lgG1 umane (SECV. ID NR. 86) sau o variantă a acestuia, caracterizat prin aceea că varianta conţine până la 20 de substituţii de aminoacizi modificate. Într-o variantă de realizare, anticorpul sau fragmentul acestuia de legare a antigenului, conform invenţiei, prezintă un anticorp care cuprinde domeniul constant al lanţului greu IgG1 uman, caracterizat prin aceea că domeniul constant conţine secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 86. Într-o variantă de realizare, anticorpul sau fragmentul acestuia de legare a antigenului, conform invenţiei, cuprinde domeniul constant al lanţului greu lgG1 uman, caracterizat prin aceea că domeniul constant IgG1 este afucozilat. Într-o variantă de realizare, anticorpul sau fragmentul acestuia de legare a antigenului, conform invenţiei, cuprinde domeniul constant al lanţului greu IgG4 uman sau o variantă a acestuia, caracterizat prin aceea că varianta conţine până la 20 de substituţii de aminoacizi modificate. Într-o altă variantă de realizare, anticorpul sau fragmentul acestuia de legare a antigenului, conform invenţiei, cuprinde domeniul constant al lanţului greu IgG4 uman, caracterizat prin aceea că aminoacidul din poziţia 228 (folosind sistemul EU de numerotare) a fost înlocuit din Ser în Pro. Într-o variantă de realizare, anticorpul sau fragmentul acestuia de legare a antigenului, conform invenţiei, cuprinde domeniul constant al lanţului greu IgG4 uman care conţine secvenţa de aminoacizi din SECV ID NR. 55.
În oricare dintre variantele de realizare, menţionate mai sus, anticorpul sau fragmentul acestuia de legare a antigenului, conform prezentei invenţii, poate cuprinde oricare dintre lanţurile variabile uşoare, descrise mai sus, şi domeniul constant al lanţului uşor uman. Într-o variantă de realizare, anticorpul sau fragmentul acestuia de legare a antigenului, conform invenţiei, cuprinde domeniul constant al lanţului uşor kappa uman sau o variantă a acestuia, caracterizat prin aceea că varianta cuprinde până la 20 de substituţii de aminoacizi modificate. Într-o altă variantă de realizare, anticorpul sau fragmentul acestuia de legare a antigenului, conform prezentei invenţii, cuprinde domeniul constant al lanţului uşor lambda uman sau o variantă a acestuia, caracterizat prin aceea că varianta cuprinde până la 20 de substituţii de aminoacizi modificate. Într-o variantă de realizare, anticorpul sau fragmentul acestuia de legare a antigenului, conform prezentei invenţii, cuprinde domeniul constant al lanţului uşor kappa uman care conţine secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 56.
Într-o variantă de realizare, anticorpul anti-TIGIT, conform prezentei invenţii, cuprinde o structură tetramerică completă având două lanţuri uşoare şi două lanţuri grele, caracterizat prin aceea că fiecare lanţ uşor cuprinde: regiunea variabilă conţinând SECV. ID NR. 132 şi lanţul uşor kappa uman (SECV. ID NR. 56); iar fiecare lanţ greu cuprinde: regiunea variabilă cuprinzând SECV. ID NR. 128, regiunea constantă a lgG1 umană (SECV. ID NR. 86).
Într-o variantă de realizare, anticorpul anti-TIGIT, conform invenţiei propuse, cuprinde o structură tetramerică completă având două lanţuri uşoare şi două lanţuri grele, caracterizat prin aceea că fiecare lanţ uşor cuprinde: regiunea variabilă conţinând SECV. ID NR.130 şi lanţul uşor kappa uman (SECV. ID NR. 56); iar fiecare lanţ greu cuprinde: regiunea variabilă conţinând SECV. ID NR. 127, regiunea constantă a IgG1 umană (SECV. ID NR. 86).
Într-o variantă de realizare, anticorpul anti-TIGIT, conform invenţiei propuse, cuprinde o structură tetramerică completă având două lanţuri uşoare şi două lanţuri grele, caracterizat prin aceea că fiecare lanţ uşor cuprinde: regiunea variabilă conţinând SECV. ID NR. 133 şi lanţul uşor kappa uman (SECV. ID NR. 56); iar fiecare lanţ greu cuprinde: regiunea variabilă conţinând SECV. ID NR. 128, regiunea constantă a lgG1 umană (SECV. ID NR. 86).
În oricare dintre variantele de realizare, menţionate mai sus, anticorpul anti-TIGIT sau fragmentul acestuia de legare a antigenului, conform invenţiei de faţă, poate fi conjugat cu cel puţin un agent terapeutic. Într-o variantă de realizare, caracterizată prin acea că agentul terapeutic cuprinde un al doilea anticorp sau un fragment al acestuia, un imunomodulator, un hormon, un agent citotoxic, o enzimă, un radionuclid, cel de-al doilea anticorp este conjugat cu cel puţin un imunomodulator, o enzimă, un marcaj radioactiv, un hormon, o oligonucleotidă antisens sau un agent citotoxic, sau cu o combinaţie a acestora.
Invenţia de faţă se referă, de asemenea, la polipeptidele izolate care cuprind secvenţa de aminoacizi din oricare dintre SECV. ID NR.1-30, 37-52, 57-83 sau 88-151, sau un fragment al oricăreia dintre secvenţele menţionate.
Prezenta invenţie se referă, de asemenea, la acizii nucleici izolaţi care codifică oricare dintre anticorpii anti-TIGIT sau dintre fragmentele acestora de legare a antigenului, conform invenţiei. Într-o variantă de realizare, invenţia se referă la acizii nucleici izolaţi care codifică oricare dintre polipeptidele din SECV. ID NR. 1-30, 37- 52, 57-64 sau 88-133, caracterizate prin aceea că respectivele polipeptide pot cuprinde, în mod opţional, o secvenţă lider. Invenţia se referă, de asemenea, la vectori de expresie cuprinzând un acid nucleic care codifică oricare dintre polipeptidele din SECV. ID NR. 1-30, 37-52, 57-83 sau 88-167 (în care respectivele polipeptide pot cuprinde, în mod opţional, o secvenţă lider). Aceşti acizi nucleici izolaţi şi vectori de expresie care îi conţin pot fi folosiţi pentru expresia anticorpilor, conform invenţiei, sau a fragmentelor acestora de legare a antigenului în celulele gazdă recombinante. Astfel, invenţia se referă, de asemenea, la celulele gazdă cuprinzând acizii nucleici izolaţi care codifică oricare dintre polipeptidele din SECV. ID NR. 1-30, 37-52, 57-83 sau 88-151 (în care respectivele polipeptide pot cuprinde, în mod opţional, o secvenţă lider). Într-o variantă de realizare, celula gazdă prezintă o celulă ovariană de hamster chinezesc. Într-o variantă de realizare, celula gazdă prezintă o celulă de drojdie, de exemplu, o celulă gazdă Pichia sau o celulă gazdă Pichia pastoris.
Invenţia propusă se referă, de asemenea, la compoziţii farmaceutice care conţin un anticorp sau un fragment al acestuia de legare a antigenului, conform invenţiei, şi un purtător acceptabil farmaceutic sau un diluant. Într-o variantă de realizare, compoziţia conţine suplimentar un agent terapeutic. Într-o variantă de realizare, agentul terapeutic suplimentar este selectat din grupul format din: un anticorp anti-PD1 sau un fragment al acestuia de legare a antigenului; un anticorp anti-LAG3 sau un fragment al acestuia de legare a antigenului; un anticorp anti-VISTA sau un fragment al acestuia de legare a antigenului; un anticorp anti-BTLA sau un fragment al acestuia de legare a antigenului; un anticorp anti-TIM3 sau un fragment al acestuia de legare a antigenului; un anticorp anti-CTLA4 sau un fragment al acestuia de legare a antigenului; un anticorp anti-HVEM sau un fragment al acestuia de legare a antigenului; un anticorp anti-CD27 sau un fragment al acestuia de legare la antigen, un anticorp anti-CD137 sau un fragment al acestuia de legare a antigenului; un anticorp anti-OX40 sau un fragment al acestuia de legare a antigenului; un anticorp anti-CD28 sau un fragment al acestuia de legare a antigenului; un anticorp anti-PDL1 sau un fragment al acestuia de legare a antigenului; un anticorp anti-PDL2 sau un fragment al acestuia de legare a antigenului; un anticorp anti-GITR sau un fragment al acestuia de legare a antigenului; un anticorp anti-ICOS sau un fragment al acestuia de legare a antigenului; un anticorp anti-SIRPα sau un fragment al acestuia de legare a antigenului; un anticorp anti-ILT2 sau un fragment al acestuia de legare a antigenului; un anticorp anti-ILT3 sau un fragment al acestuia de legare a antigenului; un anticorp anti-ILT4 sau un fragment al acestuia de legare a antigenului; şi un anticorp anti-ILT5 sau un fragment al acestuia de legare a antigenului; un anticorp anti-4-1BB sau un fragment al acestuia de legare a antigenului. Într-o variantă de realizare, anticorpul anti-PD1 sau fragmentul acestuia de legare a antigenului este selectat din grupul constând din: pembrolizumab sau un fragment al acestuia de legare a antigenului şi nivolumab sau un fragment al acestuia de legare a antigenului. Într-o variantă de realizare, anticorpul anti-TIGIT sau fragmentul acestuia de legare a antigenului, conform prezentei invenţii, cuprinde: (i) CDR1 a regiunii variabile a lanţului greu conţinând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 1; (ii) CDR2 a regiunii variabile a lanţului greu conţinând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 2; (iii) CDR3 a regiunii variabile a lanţului greu conţinând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 3, 79, 80, 81, 82, 83 sau 140; (iv) CDR1 a regiunii variabile a lanţului uşor conţinând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NRr. 4; (v) CDR2 a regiunii variabile a lanţului uşor conţinând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 5, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73 sau 141; şi (vi) CDR3 a a regiunii variabile a lanţului uşor conţinând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 6, 74, 75, 76, 77, 78 sau 142. Într-o variantă de realizare, anticorpul anti-TIGIT sau fragmentul acestuia de legare a antigenului cuprinde: (i) CDR1 a regiunii variabile a lanţului greu conţinând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 88; (ii) CDR2 a regiunii variabile a lanţului greu conţinând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 89, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 134, 135 sau 147; (iii) CDR3 a regiunii variabile a lanţului greu conţinând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 90; (iv) CDR1 a regiunii variabile a lanţului uşor conţinând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 91; (v) CDR2 a regiunii variabile a lanţului uşor conţinând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 92, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122 sau 148; şi (vi) CDR3 a regiunii variabile a lanţului uşor conţinând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 93. Într-o variantă de realizare, anticorpul anti-TIGIT sau fragmentul acestuia de legare a antigenului, conform prezentei invenţii, cuprinde: (i) CDR1 a regiunii variabile a lanţului greu care include secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 1; (ii) CDR2 a regiunii variabile a lanţului greu care include secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 2; (iii) CDR3 a regiunii variabile a lanţului greu care include secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 3; (iv) CDR1 a regiunii variabile a lanţului uşor care conţine secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 4; (v) CDR2 a regiunii variabile a lanţului uşor care conţine secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 5; şi (vi) CDR3 a regiunii variabile a lanţului uşor care conţine secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 6. Într-o altă variantă de realizare, anticorpul anti-TIGIT sau fragmentul acestuia de legare a antigenului, conform prezentei invenţii, cuprinde: (i) CDR1 a regiunii variabile a lanţului greu care cuprinde secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 57; (ii) CDR2 a regiunii variabile a lanţului greu care cuprinde secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 58; (iii) CDR3 a regiunii variabile a lanţului greu care cuprinde secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 59; (iv) CDR1 a regiunii variabile a lanţului uşor care cuprinde secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 60; (v) CDR2 a regiunii variabile a lanţului uşor care cuprinde secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 61; şi (vi) CDR3 a regiunii variabile a lanţului uşor care cuprinde secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 62. Într-o variantă de realizare, anticorpul anti-TIGIT sau fragmentul acestuia de legare a antigenului cuprinde: (i) CDR1 a regiunii variabile a lanţului greu conţinând secvenţa de aminoacid din SECV. ID NR. 88; (ii) CDR2 a regiunii variabile a lanţului greu conţinând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 89, 134 sau 135; (iii) CDR3 a regiunii variabile a lanţului greu conţinând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 90; (iv) CDR1 a regiunii variabile a lanţului uşor conţinând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 91; (v) CDR2 a regiunii variabile a lanţului uşor conţinând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 92; şi (vi) CDR3 a regiunii variabile a lanţului uşor conţinând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 93. Într-o variantă de realizare, anticorpul anti-TIGIT sau fragmentul acestuia de legare a antigenului cuprinde: (i) CDR1 a regiunii variabile a lanţului greu conţinând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 88; (ii) CDR2 a regiunii variabile a lanţului greu conţinând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 134; (iii) CDR3 a regiunii variabile a lanţului greu conţinând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 90; (iv) CDR1 a regiunii variabile a lanţului uşor conţinând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 91; (v) CDR2 a regiunii variabile a lanţului uşor conţinând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 92; şi (vi) CDR3 a regiunii variabile a lanţului uşor conţinând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 93.
Într-o variantă de realizare, invenţia se referă la o compoziţie care cuprinde: (i) un anticorp anti-TIGIT sau un fragment al acestuia de legare a antigenului, conform invenţiei; şi (ii) un anticorp anti-PD1 cuprinzând secvenţa lanţului greu din SECV. ID NR. 33 şi secvenţa variabilă a lanţului uşor din SECV. ID NR. 34. Într-o altă formă de realizare, invenţia se referă la o compoziţie care cuprinde: (a) un anticorp anti-TIGIT sau un fragment al acestuia de legare a antigenului, conform invenţiei; şi (b) un anticorp anti-PD1 cuprinzând secvenţa lanţului greu din SECV. ID NR. 35 şi secvenţa variabilă a lanţului uşor din SECV. ID NR. 36. Într-o variantă de realizare, anticorpul anti-PD1 este administrat înainte de administrarea anticorpului anti-TIGIT. Într-o variantă de realizare, anticorpul anti-PD1 este administrat cu 4-10 zile înainte de administrarea anticorpului anti-TIGIT. Într-o variantă de realizare, pre-tratamentul efectuat cu anticorpul anti-PD1 poate modula celulele imune şi, ca rezultat, poate îmbunătăţi funcţia intermediată de Fc a anticorpilor anti-TIGIT. Într-o variantă, anticorpul anti-TIGIT sau fragmentul acestuia de legare a antigenului, conform invenţiei, cuprinde: (i) CDR1 a regiunii variabile a lanţului greu conţinând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 1; (ii) CDR2 a regiunii variabile a lanţului greu conţinând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 2; (iii) CDR3 a regiunii variabile a lanţului greu conţinând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 3, 79, 80, 81, 82, 83 sau 140; (iv) CDR1 a regiunii variabile a lanţului uşor conţinând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 4; (v) CDR2 a regiunii variabile a lanţului uşor conţinând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 5, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73 sau 141; şi (vi) CDR3 a regiunii variabile a lanţului uşor conţinând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 6, 74, 75, 76, 77, 78 sau 142. Într-o variantă, anticorpul anti-TIGIT sau fragmentul acestuia de legare a antigenului cuprinde: (i) CDR1 a regiunii variabile a lanţului greu cuprinzând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 88; (ii) CDR2 a regiunii variabile a lanţului greu cuprinzând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 89, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 134, 135 sau 147; (iii) CDR3 a regiunii variabile a lanţului greu cuprinzând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 90; (iv) CDR1 a regiunii variabile a lanţului uşor cuprinzând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 91; (v) CDR2 a regiunii variabile a lanţului uşor cuprinzând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 92, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122 sau 148; şi (vi) CDR3 a regiunii variabile a lanţului uşor cuprinzând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 93. Într-o variantă de realizare, anticorpul anti-TIGIT sau fragmentul acestuia de legare a antigenului, conform prezentei invenţii, cuprinde: (i) CDR1 a regiunii variabile a lanţului greu cuprinzând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 1; (ii) CDR2 a regiunii variabile a lanţului greu cuprinzând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 2; (iii) CDR3 a regiunii variabile a lanţului greu cuprinzând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 3; (iv) CDR1 a regiunii variabile a lanţului uşor cuprinzând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 4; (v) CDR2 a regiunii variabile a lanţului uşor cuprinzând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 5; şi (vi) CDR3 a regiunii variabile a lanţului uşor cuprinzând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 6. Într-o altă variantă de realizare, anticorpul anti-TIGIT sau fragmentul acestuia de legare a antigenului, conform prezentei invenţii, cuprinde: (i) regiunea variabilă a lanţului greu CDR1 conţinând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 57; (ii) CDR2 a regiunii variabile a lanţului greu conţinând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 58; (iii) CDR3 a regiunii variabile a lanţului greu conţinând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 59; (iv) CDR1 a regiunii variabile a lanţului uşor conţinând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 60; (v) CDR2 a regiunii variabile a lanţului uşor conţinând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 61; şi (vi) CDR3 a regiunii variabile a lanţului uşor conţinând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 62. Într-o variantă de realizare, anticorpul anti-TIGIT sau fragmentul acestuia de legare la antigen, conform prezentei invenţii, cuprinde: (i) CDR1 a regiunii variabile a lanţului greu conţinând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 88; (ii) CDR2 a regiunii variabile a lanţului greu conţinând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 89, 134 sau 135; (iii) CDR3 a regiunii variabile a lanţului greu conţinând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID Nr. 90; (iv) CDR1 a regiunii variabile a lanţului uşor conţinând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 91; (v) CDR2 a regiunii variabile a lanţului uşor conţinând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 92; şi (vi) CDR3 a regiunii variabile a lanţului uşor conţinând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 93. Într-o variantă de realizare, anticorpul anti-TIGIT sau fragmentul acestuia de legare a antigenului cuprinde: (i) CDR1 a regiunii variabile a lanţului greu conţinând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 88; (ii) CDR2 a regiunii variabile a lanţului greu conţinând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 134; (iii) CDR3 a regiunii variabile a lanţului greu conţinând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 90; (iv) CDR1 a regiunii variabile a lanţului uşor conţinând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 91; (v) CDR2 a regiunii variabile a lanţului uşor conţinând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 92; şi (vi) CDR3 a regiunii variabile a lanţului uşor conţinând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 93.
Invenţia propusă se referă, de asemenea, la o combinaţie care conţine un anticorp anti-TIGIT sau un fragment al acestuia de legare a antigenului, conform invenţiei, în combinaţie cu unul, doi sau mai mulţi agenţi terapeutici; caracterizat prin aceea că cel de-al doilea agent terapeutic este selectat din grupul format din: un anticorp anti-PD1 sau un fragment al acestuia de legare a antigenului; un anticorp anti-LAG3 sau un fragment al acestuia de legare a antigenului; un anticorp anti-VISTA sau un fragment al acestuia de legare a antigenului; un anticorp anti-BTLA sau un fragment al acestuia de legare a antigenului; un anticorp anti-TIM3 sau un fragment al acestuia de legare a antigenului; un anticorp anti-CTLA4 sau un fragment al acestuia de legare a antigenului; un anticorp anti-HVEM sau un fragment al acestuia de legare a antigenului; un anticorp anti-CD27 sau un fragment al acestuia de legare a antigenului; un anticorp anti-CD137 sau un fragment al acestuia de legare a antigenului; un anticorp anti-OX40 sau sau un fragment al acestuia de legare a antigenului; un anticorp anti-CD28 sau un fragment al acestuia de legare a antigenului; un anticorp anti-PDL1 sau un fragment al acestuia de legare la antigen; un anticorp anti-PDL2 sau un fragment al acestuia de legare a antigenului; un anticorp anti-GITR sau un fragment al acestuia de legare a antigenului; un anticorp anti-ICOS sau un fragment al acestuia de legare a antigenului; un anticorp anti-SIRPα sau un fragment al acestuia de legare a antigenului; un anticorp anti-ILT2 sau un fragment al acestuia de legare a antigenului; un anticorp anti-ILT3 sau un fragment al acestuia de legare a antigenului; un anticorp anti-ILT4 sau un fragment al acestuia de legare a antigenului; un anticorp anti-ILT5 sau un fragment al acestuia de legare a antigenului; şi un anticorp anti-4-1BB sau un fragment al acestuia de legare a antigenului. Într-o variantă de realizare, anticorpul anti-TIGIT sau fragmentul acestuia de legare a antigenului, conform invenţiei, cuprinde: (i) CDR1 a regiunii variabile a lanţului greu conţinând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 1; (ii) CDR2 a regiunii variabile a lanţului greu conţinând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 2; (iii) CDR3 a regiunii variabile a lanţului greu conţinând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 3, 79, 80, 81, 82, 83 sau 140; (iv) CDR1 a regiunii variabile a lanţului uşor conţinând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 4; (v) CDR2 a regiunii variabile a lanţului uşor conţinând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 5, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73 sau 141; şi (vi) CDR3 a regiunii variabile a lanţului uşor conţinând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 6, 74, 75, 76, 77, 78 sau 142. Într-o variantă de realizare, anticorpul anti-TIGIT sau fragmentul acestuia de legare a antigenului cuprinde: (i) CDR1 a regiunii variabile a lanţului greu conţinând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 88; (ii) CDR2 a regiunii variabile a lanţului greu cuprinzând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 89, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 134, 135 sau 147; (iii) CDR3 a regiunii variabile a lanţului greu conţinând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 90; (iv) CDR1 a regiunii variabile a lanţului uşor conţinând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 91; (v) CDR2 a regiunii variabile a lanţului uşor conţinând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 92, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122 sau 148; şi (vi) CDR3 a regiunii variabile a lanţului uşor conţinând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID Nr. 93. Într-o variantă de realizare, anticorpul anti-TIGIT sau fragmentul acestuia de legare a antigenului, conform invenţiei, cuprinde: (i) CDR1 a regiunii variabile a lanţului greu cuprinzând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 1; (ii) CDR2 a regiunii variabile a lanţului greu cuprinzând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 2; (iii) CDR3 a regiunii variabile a lanţului greu cuprinzând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 3; (iv) CDR1 a regiunii variabile a lanţului uşor cuprinzând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 4; (v) CDR2 a regiunii variabile a lanţului uşor cuprinzând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 5; şi (vi) CDR3 a regiunii variabile a lanţului uşor cuprinzând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 6. Într-o altă variantă de realizare, anticorpul anti-TIGIT sau fragmentul acestuia de legare a antigenului, conform invenţiei, cuprinde: (i) CDR1 a regiunii variabile a lanţului greu cuprinzând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 57; (ii) CDR2 a regiunii variabile a lanţului greu cuprinzând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 58; (iii) CDR3 a regiunii variabile a lanţului greu cuprinzând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 59; (iv) CDR1 a regiunii variabile a lanţului uşor cuprinzând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 60; (v) CDR2 a regiunii variabile a lanţului uşor cuprinzând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 61; şi (vi) CDR3 a regiunii variabile a lanţului uşor cuprinzând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 62. Într-o variantă de realizare, anticorpul anti-TIGIT sau fragmentul acestuia de legare a antigenului cuprinde: (i) CDR1 a regiunii variabile a lanţului greu cuprinzând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 88; (ii) CDR2 a regiunii variabile a lanţului greu cuprinzând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 89, 134 sau 135; (iii) CDR3 a regiunii variabile a lanţului greu cuprinzând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 90; (iv) CDR1 a regiunii variabile a lanţului uşor cuprinzând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 91; (v) CDR2 a regiunii variabile a lanţului uşor cuprinzând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 92; şi (vi) CDR3 a regiunii variabile a lanţului uşor cuprinzând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 93. Într-o variantă de realizare, anticorpul anti-TIGIT sau fragmentul acestuia de legare a antigenului cuprinde: (i) CDR1 a regiunii variabile a lanţului greu cuprinzând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 88; (ii) CDR2 a regiunii variabile a lanţului greu cuprinzând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 134; (iii) CDR3 a regiunii variabile a lanţului greu cuprinzând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 90; (iv) CDR1 a regiunii variabile a lanţului uşor cuprinzând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 91; (v) CDR2 a regiunii variabile a lanţului uşor cuprinzând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 92; şi (vi) CDR3 a regiunii variabile a lanţului uşor cuprinzând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 93.
Invenţia de faţă se referă, de asemenea, la un recipient sau un dispozitiv pentru injecţii care cuprinde oricare dintre anticorpii anti-TIGIT sau dintre fragmentele acestora de legare a antigenului, conform prezentei invenţii. Într-o variantă de realizare, anticorpul anti-TIGIT sau fragmentul acestuia de legare a antigenului, conform invenţiei, cuprinde: (i) CDR1 a regiunii variabile a lanţului greu cuprinzând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 1; (ii) CDR2 a regiunii variabile a lanţului greu cuprinzând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 2; (iii) CDR3 a regiunii variabile a lanţului greu cuprinzând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 3, 79, 80, 81, 82, 83 sau 140; (iv) CDR1 a regiunii variabile a lanţului uşor cuprinzând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 4; (v) CDR2 a regiunii variabile a lanţului uşor cuprinzând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 5, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73 sau 141; şi (vi) CDR3 a regiunii variabile a lanţului uşor cuprinzând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 6, 74, 75, 76, 77, 78 sau 142. Într-o variantă de realizare, anticorpul anti-TIGIT sau fragmentul acestuia de legare a antigenului cuprinde: (i) CDR1 a regiunii variabile a lanţului greu cuprinzând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 88; (ii) CDR2 a regiunii variabile a lanţului greu cuprinzând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 89, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 134, 135 sau 147; (iii) CDR3 a regiunii variabile a lanţului greu cuprinzând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 90; (iv) CDR1 a regiunii variabile a lanţului uşor cuprinzând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 91; (v) CDR2 a regiunii variabile a lanţului uşor cuprinzând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 92, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122 sau 148; şi (vi) CDR3 a regiunii variabile a lanţului uşor cuprinzând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 93. Într-o variantă de realizare, anticorpul anti-TIGIT sau fragmentul acestuia de legare a antigenului conform invenţiei cuprinde: (i) CDR1 a regiunii variabile a lanţului greu cuprinzând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 1; (ii) CDR2 a regiunii variabile a lanţului greu cuprinzând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 2; (iii) CDR3 a regiunii variabile a lanţului greu cuprinzând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 3; (iv) CDR1 a regiunii variabile a lanţului uşor cuprinzând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 4; (v) CDR2 a regiunii variabile a lanţului uşor cuprinzând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 5; şi (vi) CDR3 a regiunii variabile a lanţului uşor cuprinzând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 6. Într-o altă variantă de realizare, anticorpul anti-TIGIT sau fragmentul acestuia de legare a antigenului, conform invenţiei, cuprinde: (i) CDR1 a regiunii variabile a lanţului greu cuprinzând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 57; (ii) CDR2 a regiunii variabile a lanţului greu cuprinzând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 58; (iii) CDR3 a regiunii variabile a lanţului greu cuprinzând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 59; (iv) CDR1 a regiunii variabile a lanţului uşor cuprinzând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 60; (v) CDR2 a regiunii variabile a lanţului uşor cuprinzând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 61; şi (vi) CDR3 a regiunii variabile a lanţului uşor cuprinzând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 62. Într-o variantă de realizare, anticorpul anti-TIGIT sau fragmentul acestuia de legare a antigenului cuprinde: (i) CDR1 a regiunii variabile a lanţului greu cuprinzând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID Nr. 88; (ii) CDR2 a regiunii variabile a lanţului greu cuprinzând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID Nr. 89, 134 sau 135; (iii) CDR3 a regiunii variabile a lanţului greu cuprinzând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 90; (iv) CDR1 a regiunii variabile a lanţului uşor cuprinzând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 91; (v) CDR2 a regiunii variabile a lanţului uşor cuprinzând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 92; şi (vi) CDR3 a regiunii variabile a lanţului uşor cuprinzând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 93. Într-o variantă de realizare, anticorpul anti-TIGIT sau fragmentul acestuia de legare a antigenului cuprinde: (i) CDR1 a regiunii variabile a lanţului greu cuprinzând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 88; (ii) CDR2 a regiunii variabile a lanţului greu cuprinzând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 134; (iii) CDR3 a regiunii variabile a lanţului greu cuprinzând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 90; (iv) CDR1 a regiunii variabile a lanţului uşor cuprinzând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 91; (v) CDR2 a regiunii variabile a lanţului uşor cuprinzând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 92; şi (vi) CDR3 a regiunii variabile a lanţului uşor cuprinzând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 93.
Invenţia solicitată se referă, de asemenea, la un procedeu de obţinere a unui anticorp anti-TIGIT sau a unui fragment de legare a antigenului, conform invenţiei, care cuprinde: cultivarea unei celule gazdă conţinând o polinucleotidă care codifică un lanţ greu şi/sau un lanţ uşor al unui anticorp în conformitate cu prezenta invenţie (sau un fragment al acestuia de legare a antigenului) în condiţii favorabile pentru expresia polinucleotidei; şi, în mod opţional, recuperarea anticorpului sau a fragmentului de legare a antigenului din celula gazdă şi/sau din mediul de cultură. Într-o variantă de realizare, polinucleotida care codifică lanţul greu şi polinucleotida care codifică lanţul uşor se află într-un singur vector. Într-o altă variantă de realizare, polinucleotida care codifică lanţul greu şi polinucleotida care codifică lanţul uşor se află în vectori diferiţi. Într-o variantă de realizare, polinucleotida care codifică lanţul greu şi polinucleotida care codifică lanţul uşor codifică anticorpul sau fragmentul de legare a antigenului care cuprinde: (i) CDR1 a regiunii variabile a lanţului greu cuprinzând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 1; (ii) CDR2 a regiunii variabile a lanţului greu cuprinzând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 2; (iii) CDR3 a regiunii variabile a lanţului greu cuprinzând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 3, 79, 80, 81, 82, 83 sau 140; (iv) CDR1 a regiunii variabile a lanţului uşor cuprinzând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 4; (v) CDR2 a regiunii variabile a lanţului uşor cuprinzând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 5, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73 sau 141; şi (vi) CDR3 a regiunii variabile a lanţului uşor cuprinzând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 6, 74, 75, 76, 77, 78 sau 142. Într-o altă variantă de realizare, polinucleotida care codifică lanţul greu şi polinucleotida care codifică lanţul uşor codifică anticorpul sau fragmentul de legare a antigenului care cuprinde: (i) CDR1 a regiunii variabile a lanţului greu cuprinzând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 88; (ii) CDR2 a regiunii variabile a lanţului greu cuprinzând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 89, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 134, 135 sau 147; (iii) CDR3 a regiunii variabile a lanţului greu cuprinzând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 90; (iv) CDR1 a regiunii variabile a lanţului uşor cuprinzând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 91; (v) CDR2 a regiunii variabile a lanţului uşor cuprinzând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 92, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122 sau 148; şi (vi) CDR3 a regiunii variabile a lanţului uşor cuprinzând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 93. Într-o altă variantă de realizare, polinucleotida care codifică lanţul greu şi polinucleotida care codifică lanţul uşor codifică anticorpul sau fragmentul de legare a antigenului cuprinzând: (i) CDR1 a regiunii variabile a lanţului greu care cuprinde secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 1; (ii) CDR2 a regiunii variabile a lanţului greu care cuprinde secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 2; (iii) CDR3 a regiunii variabile a lanţului greu care cuprinde secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 3; (iv) CDR1 a regiunii variabile a lanţului uşor care cuprinde secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 4; (v) CDR2 a regiunii variabile a lanţului uşor care cuprinde secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 5; şi (vi) CDR3 a regiunii variabile a lanţului uşor care cuprinde secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 6. Într-o altă variantă de realizare, polinucleotida care codifică lanţul greu şi polinucleotida care codifică lanţul uşor codifică anticorpul sau fragmentul de legare a antigenului cuprinzând: (i) CDR1 a regiunii variabile a lanţului greu care cuprinde secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 57; (ii) CDR2 a regiunii variabile a lanţului greu care cuprinde secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 58; (iii) CDR3 a regiunii variabile a lanţului greu care cuprinde secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 59; (iv) CDR1 a regiunii variabile a lanţului uşor care cuprinde secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 60; (v) CDR2 a regiunii variabile a lanţului uşor care cuprinde secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 61; şi (vi) CDR3 a regiunii variabile a lanţului uşor care cuprinde secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 62. Într-un alt exemplu de realizare, polinucleotida care codifică lanţul greu şi polinucleotida care codifică lanţul uşor codifică anticorpul sau fragmentul de legare a antigenului cuprinzând: (i) CDR1 a regiunii variabile a lanţului greu care cuprinde secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 88; (ii) CDR2 a regiunii variabile a lanţului greu care cuprinde secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 89, 134 sau 135; (iii) CDR3 a regiunii variabile a lanţului greu care cuprinde secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 90; (iv) CDR1 a regiunii variabile a lanţului uşor care cuprinde secvenţa de aminoacizi din SECV. ID Nr. 91; (v) CDR2 a regiunii variabile a lanţului uşor care cuprinde secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 92; şi (vi) CDR3 a regiunii variabile a lanţului uşor care cuprinde secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 93. Într-o altă variantă de realizare, polinucleotida care codifică lanţul greu şi polinucleotida care codifică lanţul uşor codifică anticorpul sau fragmentul de legare a antigenului cuprinzând: (i) CDR1 a regiunii variabile a lanţului greu care cuprinde secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 88; (ii) CDR2 a regiunii variabile a lanţului greu care cuprinde secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 134; (iii) CDR3 a regiunii variabile a lanţului greu care cuprinde secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 90; (iv) CDR1 a regiunii variabile a lanţului uşor care cuprinde secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 91; (v) CDR2 a regiunii variabile a lanţului uşor care cuprinde secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 92; şi (vi) CDR3 a regiunii variabile a lanţului uşor care cuprinde secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 93. Într-o altă variantă de realizare, polinucleotida care codifică lanţul greu şi polinucleotida care codifică lanţul uşor codifică anticorpul sau fragmentul de legare a antigenului cuprinzând: o regiune variabilă a lanţului greu care cuprinde SECV. ID Nr. 128 şi o regiune variabilă a lanţului uşor care cuprinde SECV. ID Nr. 132. Într-o altă variantă de realizare, polinucleotida care codifică lanţul greu şi polinucleotida care codifică lanţul uşor codifică un anticorp sau un fragment de legare la antigen cuprinzând: regiunea variabilă a lanţului greu care cuprinde SECV. ID NR. 127 şi regiunea variabilă a lanţului uşor care cuprinde SECV. ID NR. 130. Într-o altă variantă de realizare, polinucleotida care codifică lanţul greu şi polinucleotida care codifică lanţul uşor codifică anticorpul sau fragmentul de legare a antigenului cuprinzând: regiunea variabilă a lanţului greu care cuprinde SECV. ID NR. 128 şi regiunea variabilă a lanţului uşor care cuprinde SECV. ID NR. 133.
Invenţia de faţă se referă, de asemenea, la un procedeu de tratare a cancerului la un subiect, care necesită aceasta, cuprinzând administrarea la subiectul în cauză a unei cantităţi eficiente dintr-un anticorp anti-TIGIT sau dintr-un fragment de legare a antigenului, conform invenţiei, în mod opţional în asociere cu un agent terapeutic suplimentar sau cu o procedură terapeutică. Într-o variantă de realizare, subiectul supus tratatamentului este un subiect uman. Într-o variantă, agentul terapeutic suplimentar a fost selectat din grupul constând din: un anticorp anti-PD1 sau un fragment al acestuia de legare a antigenului; un anticorp anti-LAG3 sau un fragment al acestuia de legare a antigenului; un anticorp anti-VISTA sau un fragment al acestuia de legare a antigenului; un anticorp anti-BTLA sau un fragment al acestuia de legare a antigenului; un anticorp anti-TIM3 sau un fragment al acestuia de legare a antigenului; un anticorp anti-CTLA4 sau un fragment al acestuia de legare a antigenului; un anticorp anti-HVEM sau un fragment al acestuia de legare a antigenului; un anticorp anti-CD27 sau un fragment al acestuia de legare a antigenului; un anticorp anti-CD137 sau un fragment al acestuia de legare a antigenului; un anticorp anti-OX40 sau sau un fragment al acestuia de legare a antigenului; un anticorp anti-CD28 sau un fragment al acestuia de legare a antigenului; un anticorp anti-PDL1 sau un fragment al acestuia de legare a antigenului; un anticorp anti-PDL2 sau un fragment al acestuia de legare a antigenului; un anticorp anti-GITR sau un fragment al acestuia de legare a antigenului; un anticorp anti-ICOS sau un fragment al acestuia de legare a antigenului; un anticorp anti-SIRPα sau un fragment al acestuia de legare a antigenului; un anticorp anti-ILT2 sau un fragment al acestuia de legare a antigenului; un anticorp anti-ILT3 sau un fragment al acestuia de legare a antigenului; un anticorp anti-ILT4 sau un fragment al acestuia de legare a antigenului; un anticorp anti-ILT5 sau un fragment al acestuia de legare a antigenului; şi un anticorp anti-4-1BB sau un fragment al acestuia de legare a antigenului. Într-o variantă de realizare, anticorpul anti-PD1 sau fragmentul acestuia de legare a antigenului a fost selectat din grupul conţinând: pembrolizumab sau un fragment al acestuia de legare a antugenului şi nivolumab sau un fragment al acestuia de legare a antugenului. Într-o variantă de realizare, anticorpul anti-TIGIT sau fragmentul acestuia de legare a antigenului, conform invenţiei, cuprinde: (i) CDR1 a regiunii variabile a lanţului greu conţinând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 1; (ii) CDR2 a regiunii variabile a lanţului greu conţinând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 2; (iii) CDR3 a regiunii variabile a lanţului greu conţinând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 3, 79, 80, 81, 82, 83 sau 140; (iv) CDR1 a regiunii variabile a lanţului uşor conţinând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 4; (v) CDR2 a regiunii variabile a lanţului uşor conţinând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 5, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73 sau 141; şi (vi) CDR3 a regiunii variabile a lanţului uşor conţinând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 6, 74, 75, 76, 77, 78 sau 142. Într-o variantă de realizare, anticorpul anti-TIGIT sau fragmentul acestuia de legare a antigenului cuprinde: (i) CDR1 a regiunii variabile a lanţului greu conţinând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 88; (ii) CDR2 a regiunii variabile a lanţului greu cuprinzând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 89, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 134, 135 sau 147; (iii) CDR3 a regiunii variabile a lanţului greu conţinând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 90; (iv) CDR1 a regiunii variabile a lanţului uşor conţinând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 91; (v) CDR2 a regiunii variabile a lanţului uşor conţinând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 92, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122 sau 148; şi (vi) CDR3 a regiunii variabile a lanţului uşor conţinând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID Nr. 93. Într-o variantă de realizare, anticorpul anti-TIGIT sau fragmentul acestuia de legare a antigenului, conform invenţiei, cuprinde: (i) CDR1 a regiunii variabile a lanţului greu cuprinzând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 1; (ii) CDR2 a regiunii variabile a lanţului greu cuprinzând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 2; (iii) CDR3 a regiunii variabile a lanţului greu cuprinzând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 3; (iv) CDR1 a regiunii variabile a lanţului uşor cuprinzând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 4; (v) CDR2 a regiunii variabile a lanţului uşor cuprinzând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 5; şi (vi) CDR3 a regiunii variabile a lanţului uşor cuprinzând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 6. Într-o altă variantă de realizare, anticorpul anti-TIGIT sau fragmentul acestuia de legare a antigenului, conform invenţiei, cuprinde: (i) CDR1 a regiunii variabile a lanţului greu cuprinzând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 57; (ii) CDR2 a regiunii variabile a lanţului greu cuprinzând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 58; (iii) CDR3 a regiunii variabile a lanţului greu cuprinzând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 59; (iv) CDR1 a regiunii variabile a lanţului uşor cuprinzând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 60; (v) CDR2 a regiunii variabile a lanţului uşor cuprinzând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 61; şi (vi) CDR3 a regiunii variabile a lanţului uşor cuprinzând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 62. Într-o variantă de realizare, anticorpul anti-TIGIT sau fragmentul acestuia de legare a antigenului cuprinde: (i) CDR1 a regiunii variabile a lanţului greu cuprinzând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 88; (ii) CDR2 a regiunii variabile a lanţului greu cuprinzând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 89, 134 sau 135; (iii) CDR3 a regiunii variabile a lanţului greu cuprinzând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 90; (iv) CDR1 a regiunii variabile a lanţului uşor cuprinzând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 91; (v) CDR2 a regiunii variabile a lanţului uşor cuprinzând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 92; şi (vi) CDR3 a regiunii variabile a lanţului uşor cuprinzând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 93. Într-o variantă de realizare, anticorpul anti-TIGIT sau fragmentul acestuia de legare a antigenului cuprinde: (i) CDR1 a regiunii variabile a lanţului greu cuprinzând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 88; (ii) CDR2 a regiunii variabile a lanţului greu cuprinzând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 134; (iii) CDR3 a regiunii variabile a lanţului greu cuprinzând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 90; (iv) CDR1 a regiunii variabile a lanţului uşor cuprinzând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 91; (v) CDR2 a regiunii variabile a lanţului uşor cuprinzând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 92; şi (vi) CDR3 a regiunii variabile a lanţului uşor cuprinzând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 93.
Invenţia de faţă se referă, de asemenea, la un procedeu de tratare a cancerului la un subiect, care necesită aceasta, cuprinzând administrarea subiectului în cauză a unei cantităţi eficiente dintr-un anticorp anti-TIGIT sau dintr-un fragment de legare a antigenului, conform invenţiei şi administrarea suplimentară a unui anticorp anti-PD1 sau a unui fragment al acestuia de legare la antigen. Într-o variantă de realizare, anticorpul anti-PD1 sau fragmentul acestuia de legare la antigen este selectat din grupul constând din: pembrolizumab sau un fragment al acestuia de legare la antigen şi nivolumab sau un fragment al acestuia de legare la antigen. Într-o variantă de realizare, anticorpul anti-TIGIT sau fragmentul acestuia de legare la antigen conform prezentei invenţii cuprinde: (i) CDR1 a regiunii variabile a lanţului greu conţinând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 1; (ii) CDR2 a regiunii variabile a lanţului greu conţinând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 2; (iii) CDR3 a regiunii variabile a lanţului greu conţinând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 3, 79, 80, 81, 82, 83 sau 140; (iv) CDR1 a regiunii variabile a lanţului uşor conţinând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 4; (v) CDR2 a regiunii variabile a lanţului uşor conţinând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 5, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73 sau 141; şi (vi) CDR3 a regiunii variabile a lanţului uşor conţinând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 6, 74, 75, 76, 77, 78 sau 142. Într-o variantă de realizare, anticorpul anti-TIGIT sau fragmentul acestuia de legare a antigenului cuprinde: (i) CDR1 a regiunii variabile a lanţului greu conţinând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 88; (ii) CDR2 a regiunii variabile a lanţului greu cuprinzând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 89, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 134, 135 sau 147; (iii) CDR3 a regiunii variabile a lanţului greu conţinând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 90; (iv) CDR1 a regiunii variabile a lanţului uşor conţinând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 91; (v) CDR2 a regiunii variabile a lanţului uşor conţinând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 92, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122 sau 148; şi (vi) CDR3 a regiunii variabile a lanţului uşor conţinând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID Nr. 93. Într-o variantă de realizare, anticorpul anti-TIGIT sau fragmentul acestuia de legare a antigenului, conform invenţiei, cuprinde: (i) CDR1 a regiunii variabile a lanţului greu cuprinzând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 1; (ii) CDR2 a regiunii variabile a lanţului greu cuprinzând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 2; (iii) CDR3 a regiunii variabile a lanţului greu cuprinzând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 3; (iv) CDR1 a regiunii variabile a lanţului uşor cuprinzând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 4; (v) CDR2 a regiunii variabile a lanţului uşor cuprinzând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 5; şi (vi) CDR3 a regiunii variabile a lanţului uşor cuprinzând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 6. Într-o altă variantă de realizare, anticorpul anti-TIGIT sau fragmentul acestuia de legare a antigenului, conform invenţiei, cuprinde: (i) CDR1 a regiunii variabile a lanţului greu cuprinzând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 57; (ii) CDR2 a regiunii variabile a lanţului greu cuprinzând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 58; (iii) CDR3 a regiunii variabile a lanţului greu cuprinzând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 59; (iv) CDR1 a regiunii variabile a lanţului uşor cuprinzând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 60; (v) CDR2 a regiunii variabile a lanţului uşor cuprinzând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 61; şi (vi) CDR3 a regiunii variabile a lanţului uşor cuprinzând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 62. Într-o variantă de realizare, anticorpul anti-TIGIT sau fragmentul acestuia de legare a antigenului cuprinde: (i) CDR1 a regiunii variabile a lanţului greu cuprinzând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 88; (ii) CDR2 a regiunii variabile a lanţului greu cuprinzând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 89, 134 sau 135; (iii) CDR3 a regiunii variabile a lanţului greu cuprinzând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 90; (iv) CDR1 a regiunii variabile a lanţului uşor cuprinzând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 91; (v) CDR2 a regiunii variabile a lanţului uşor cuprinzând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 92; şi (vi) CDR3 a regiunii variabile a lanţului uşor cuprinzând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 93. Într-o variantă de realizare, anticorpul anti-TIGIT sau fragmentul acestuia de legare a antigenului cuprinde: (i) CDR1 a regiunii variabile a lanţului greu cuprinzând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 88; (ii) CDR2 a regiunii variabile a lanţului greu cuprinzând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 134; (iii) CDR3 a regiunii variabile a lanţului greu cuprinzând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 90; (iv) CDR1 a regiunii variabile a lanţului uşor cuprinzând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 91; (v) CDR2 a regiunii variabile a lanţului uşor cuprinzând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 92; şi (vi) CDR3 a regiunii variabile a lanţului uşor cuprinzând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 93.
Invenţia de faţă se referă, de asemenea, la un procedeu de tratare a unei infecţii sau a unei boli infecţioase la un subiect cuprinzând administrarea subiectului în cauză a unei cantităţi eficiente dintr-un anticorp sau dintr-un fragment de legare a antigenului, conform invenţiei, în mod opţional, în asociere cu un agent terapeutic suplimentar sau cu o procedură terapeutică. Într-o variantă de realizare, subiectul supus tratamentului este un subiect uman. Într-o variantă de realizare, agentul terapeutic suplimentar este selectat din grupul format din: un anticorp anti-PD1 sau un fragment al acestuia de legare a antigenului; un anticorp anti-LAG3 sau un fragment al acestuia de legare a antigenului; un anticorp anti-VISTA sau un fragment al acestuia de legare a antigenului; un anticorp anti-BTLA sau un fragment al acestuia de legare a antigenului; un anticorp anti-TIM3 sau un fragment al acestuia de legare a antigenului; un anticorp anti-CTLA4 sau un fragment al acestuia de legare a antigenului; un anticorp anti-HVEM sau un fragment al acestuia de legare a antigenului; un anticorp anti-CD27 sau un fragment al acestuia de legare a antigenului; un anticorp anti-CD137 sau un fragment al acestuia de legare a antigenului; un anticorp anti-OX40 sau sau un fragment al acestuia de legare a antigenului; un anticorp anti-CD28 sau un fragment al acestuia de legare a antigenului; un anticorp anti-PDL1 sau un fragment al acestuia de legare a antigenului; un anticorp anti-PDL2 sau un fragment al acestuia de legare a antigenului; un anticorp anti-GITR sau un fragment al acestuia de legare a antigenului; un anticorp anti-ICOS sau un fragment al acestuia de legare a antigenului; un anticorp anti-SIRPα sau un fragment al acestuia de legare a antigenului; un anticorp anti-ILT2 sau un fragment al acestuia de legare a antigenului; un anticorp anti-ILT3 sau un fragment al acestuia de legare a antigenului; un anticorp anti-ILT4 sau un fragment al acestuia de legare a antigenului; un anticorp anti-ILT5 sau un fragment al acestuia de legare a antigenului; şi un anticorp anti-4-1BB sau un fragment al acestuia de legare a antigenului. Într-o variantă de realizare, anticorpul anti-PD1 sau un fragment al acestuia de legare la antigen a fost selectat din grupul constând din: pembrolizumab sau un fragment al acestuia de legare a antigenului şi nivolumab sau un fragment al acestuia de legare a antigenului. Într-o variantă de realizare, anticorpul anti-TIGIT sau fragmentul acestuia de legare a antigenului, conform prezentei invenţii, cuprinde: (i) CDR1 a regiunii variabile a lanţului greu conţinând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 1; (ii) CDR2 a regiunii variabile a lanţului greu conţinând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 2; (iii) CDR3 a regiunii variabile a lanţului greu conţinând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 3, 79, 80, 81, 82, 83 sau 140; (iv) CDR1 a regiunii variabile a lanţului uşor conţinând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 4; (v) CDR2 a regiunii variabile a lanţului uşor conţinând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 5, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73 sau 141; şi (vi) CDR3 a regiunii variabile a lanţului uşor conţinând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 6, 74, 75, 76, 77, 78 sau 142. Într-o variantă de realizare, anticorpul anti-TIGIT sau fragmentul acestuia de legare a antigenului cuprinde: (i) CDR1 a regiunii variabile a lanţului greu conţinând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 88; (ii) CDR2 a regiunii variabile a lanţului greu cuprinzând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 89, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 134, 135 sau 147; (iii) CDR3 a regiunii variabile a lanţului greu conţinând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 90; (iv) CDR1 a regiunii variabile a lanţului uşor conţinând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 91; (v) CDR2 a regiunii variabile a lanţului uşor conţinând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 92, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122 sau 148; şi (vi) CDR3 a regiunii variabile a lanţului uşor conţinând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID Nr. 93. Într-o variantă de realizare, anticorpul anti-TIGIT sau fragmentul acestuia de legare a antigenului, conform invenţiei, cuprinde: (i) CDR1 a regiunii variabile a lanţului greu cuprinzând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 1; (ii) CDR2 a regiunii variabile a lanţului greu cuprinzând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 2; (iii) CDR3 a regiunii variabile a lanţului greu cuprinzând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 3; (iv) CDR1 a regiunii variabile a lanţului uşor cuprinzând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 4; (v) CDR2 a regiunii variabile a lanţului uşor cuprinzând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 5; şi (vi) CDR3 a regiunii variabile a lanţului uşor cuprinzând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 6. Într-o altă variantă de realizare, anticorpul anti-TIGIT sau fragmentul acestuia de legare a antigenului, conform invenţiei, cuprinde: (i) CDR1 a regiunii variabile a lanţului greu cuprinzând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 57; (ii) CDR2 a regiunii variabile a lanţului greu cuprinzând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 58; (iii) CDR3 a regiunii variabile a lanţului greu cuprinzând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 59; (iv) CDR1 a regiunii variabile a lanţului uşor cuprinzând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 60; (v) CDR2 a regiunii variabile a lanţului uşor cuprinzând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 61; şi (vi) CDR3 a regiunii variabile a lanţului uşor cuprinzând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 62. Într-o variantă de realizare, anticorpul anti-TIGIT sau fragmentul acestuia de legare a antigenului cuprinde: (i) CDR1 a regiunii variabile a lanţului greu cuprinzând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 88; (ii) CDR2 a regiunii variabile a lanţului greu cuprinzând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 89, 134 sau 135; (iii) CDR3 a regiunii variabile a lanţului greu cuprinzând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 90; (iv) CDR1 a regiunii variabile a lanţului uşor cuprinzând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 91; (v) CDR2 a regiunii variabile a lanţului uşor cuprinzând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 92; şi (vi) CDR3 a regiunii variabile a lanţului uşor cuprinzând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 93. Într-o variantă de realizare, anticorpul anti-TIGIT sau fragmentul acestuia de legare a antigenului cuprinde: (i) CDR1 a regiunii variabile a lanţului greu cuprinzând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 88; (ii) CDR2 a regiunii variabile a lanţului greu cuprinzând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 134; (iii) CDR3 a regiunii variabile a lanţului greu cuprinzând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 90; (iv) CDR1 a regiunii variabile a lanţului uşor cuprinzând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 91; (v) CDR2 a regiunii variabile a lanţului uşor cuprinzând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 92; şi (vi) CDR3 a regiunii variabile a lanţului uşor cuprinzând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 93.
Prezenta invenţie se referă, de asemenea, la un vaccin care cuprinde un anticorp sau un fragment al acestuia de legare a antigenului, conform invenţiei. Într-o variantă de realizare, anticorpul anti-TIGIT sau fragmentul acestuia de legare a antigenului, conform prezentei invenţii, cuprinde: (i) CDR1 a regiunii variabile a lanţului greu conţinând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 1; (ii) CDR2 a regiunii variabile a lanţului greu conţinând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 2; (iii) CDR3 a regiunii variabile a lanţului greu conţinând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 3, 79, 80, 81, 82, 83 sau 140; (iv) CDR1 a regiunii variabile a lanţului uşor conţinând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 4; (v) CDR2 a regiunii variabile a lanţului uşor conţinând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 5, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73 sau 141; şi (vi) CDR3 a regiunii variabile a lanţului uşor conţinând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 6, 74, 75, 76, 77, 78 sau 142. Într-o variantă de realizare, anticorpul anti-TIGIT sau fragmentul acestuia de legare a antigenului cuprinde: (i) CDR1 a regiunii variabile a lanţului greu conţinând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 88; (ii) CDR2 a regiunii variabile a lanţului greu cuprinzând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 89, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 134, 135 sau 147; (iii) CDR3 a regiunii variabile a lanţului greu conţinând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 90; (iv) CDR1 a regiunii variabile a lanţului uşor conţinând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 91; (v) CDR2 a regiunii variabile a lanţului uşor conţinând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 92, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122 sau 148; şi (vi) CDR3 a regiunii variabile a lanţului uşor conţinând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID Nr. 93. Într-o variantă de realizare, anticorpul anti-TIGIT sau fragmentul acestuia de legare a antigenului, conform invenţiei, cuprinde: (i) CDR1 a regiunii variabile a lanţului greu cuprinzând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 1; (ii) CDR2 a regiunii variabile a lanţului greu cuprinzând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 2; (iii) CDR3 a regiunii variabile a lanţului greu cuprinzând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 3; (iv) CDR1 a regiunii variabile a lanţului uşor cuprinzând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 4; (v) CDR2 a regiunii variabile a lanţului uşor cuprinzând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 5; şi (vi) CDR3 a regiunii variabile a lanţului uşor cuprinzând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 6. Într-o altă variantă de realizare, anticorpul anti-TIGIT sau fragmentul acestuia de legare a antigenului, conform invenţiei, cuprinde: (i) CDR1 a regiunii variabile a lanţului greu cuprinzând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 57; (ii) CDR2 a regiunii variabile a lanţului greu cuprinzând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 58; (iii) CDR3 a regiunii variabile a lanţului greu cuprinzând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 59; (iv) CDR1 a regiunii variabile a lanţului uşor cuprinzând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 60; (v) CDR2 a regiunii variabile a lanţului uşor cuprinzând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 61; şi (vi) CDR3 a regiunii variabile a lanţului uşor cuprinzând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 62. Într-o variantă de realizare, anticorpul anti-TIGIT sau fragmentul acestuia de legare a antigenului cuprinde: (i) CDR1 a regiunii variabile a lanţului greu cuprinzând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 88; (ii) CDR2 a regiunii variabile a lanţului greu cuprinzând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 89, 134 sau 135; (iii) CDR3 a regiunii variabile a lanţului greu cuprinzând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 90; (iv) CDR1 a regiunii variabile a lanţului uşor cuprinzând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 91; (v) CDR2 a regiunii variabile a lanţului uşor cuprinzând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 92; şi (vi) CDR3 a regiunii variabile a lanţului uşor cuprinzând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 93. Într-o variantă de realizare, anticorpul anti-TIGIT sau fragmentul acestuia de legare a antigenului cuprinde: (i) CDR1 a regiunii variabile a lanţului greu cuprinzând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 88; (ii) CDR2 a regiunii variabile a lanţului greu cuprinzând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 134; (iii) CDR3 a regiunii variabile a lanţului greu cuprinzând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 90; (iv) CDR1 a regiunii variabile a lanţului uşor cuprinzând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 91; (v) CDR2 a regiunii variabile a lanţului uşor cuprinzând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 92; şi (vi) CDR3 a regiunii variabile a lanţului uşor cuprinzând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 93. Într-o variantă de realizare, vaccinul cuprinde suplimentar un antigen.
Invenţia de faţă se referă, de asemenea, la un procedeu de detectare a prezenţei unei peptide TIGIT sau a unui fragment al acesteia într-o probă care cuprinde contactarea probei în cauză cu un anticorp sau cu un fragment al acestuia de legare a antigenului, conform prezentei invenţii, şi de detectare a prezenţei unui complex între anticorp sau fragment şi peptidă, caracterizat prin aceea că detectarea complexului indică prezenţa peptidei TIGIT. Într-o variantă de realizare, anticorpul anti-TIGIT sau fragmentul de legare a antigenului, conform prezentei invenţii, cuprinde: (i) CDR1 a regiunii variabile a lanţului greu conţinând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 1; (ii) CDR2 a regiunii variabile a lanţului greu conţinând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 2; (iii) CDR3 a regiunii variabile a lanţului greu conţinând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 3, 79, 80, 81, 82, 83 sau 140; (iv) CDR1 a regiunii variabile a lanţului uşor conţinând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 4; (v) CDR2 a regiunii variabile a lanţului uşor conţinând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 5, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73 sau 141; şi (vi) CDR3 a regiunii variabile a lanţului uşor conţinând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 6, 74, 75, 76, 77, 78 sau 142. Într-o variantă de realizare, anticorpul sau fragmentul acestuia de legare a antigenului cuprinde: (i) CDR1 a regiunii variabile a lanţului greu conţinând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 88; (ii) CDR2 a regiunii variabile a lanţului greu cuprinzând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 89, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 134, 135 sau 147; (iii) CDR3 a regiunii variabile a lanţului greu conţinând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 153; (iv) CDR1 a regiunii variabile a lanţului uşor conţinând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 91; (v) CDR2 a regiunii variabile a lanţului uşor conţinând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 92, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122 sau 148; şi (vi) CDR3 a regiunii variabile a lanţului uşor conţinând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 93. Într-o variantă de realizare, anticorpul sau fragmentul de legare a antigenului, conform invenţiei, cuprinde: (i) CDR1 a regiunii variabile a lanţului greu cuprinzând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 1; (ii) CDR2 a regiunii variabile a lanţului greu cuprinzând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 2; (iii) CDR3 a regiunii variabile a lanţului greu cuprinzând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 3; (iv) CDR1 a regiunii variabile a lanţului uşor cuprinzând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 4; (v) CDR2 a regiunii variabile a lanţului uşor cuprinzând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 5; şi (vi) CDR3 a regiunii variabile a lanţului uşor cuprinzând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 6. Într-o altă variantă de realizare, anticorpul sau fragmentul de legare a antigenului, conform invenţiei, cuprinde: (i) CDR1 a regiunii variabile a lanţului greu cuprinzând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 57; (ii) CDR2 a regiunii variabile a lanţului greu cuprinzând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 58; (iii) CDR3 a regiunii variabile a lanţului greu cuprinzând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 59; (iv) CDR1 a regiunii variabile a lanţului uşor cuprinzând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 60; (v) CDR2 a regiunii variabile a lanţului uşor cuprinzând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 61; şi (vi) CDR3 a regiunii variabile a lanţului uşor cuprinzând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 62. Într-o variantă de realizare, anticorpul sau fragmentul de legare a antigenului cuprinde: (i) CDR1 a regiunii variabile a lanţului greu cuprinzând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 88; (ii) CDR2 a regiunii variabile a lanţului greu cuprinzând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 89, 134 sau 135; (iii) CDR3 a regiunii variabile a lanţului greu cuprinzând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 90; (iv) CDR1 a regiunii variabile a lanţului uşor cuprinzând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 91; (v) CDR2 a regiunii variabile a lanţului uşor cuprinzând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 92; şi (vi) CDR3 a regiunii variabile a lanţului uşor cuprinzând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 93. Într-o variantă de realizare, anticorpul anti-TIGIT sau fragmentul acestuia de legare a antigenului cuprinde: (i) CDR1 a regiunii variabile a lanţului greu cuprinzând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 88; (ii) CDR2 a regiunii variabile a lanţului greu cuprinzând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 134; (iii) CDR3 a regiunii variabile a lanţului greu cuprinzând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 90; (iv) CDR1 a regiunii variabile a lanţului uşor cuprinzând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 91; (v) CDR2 a regiunii variabile a lanţului uşor cuprinzând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 92; şi (vi) CDR3 a regiunii variabile a lanţului uşor cuprinzând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 93.
Prezenta invenţie se referă, de asemenea, la un procedeu de sporire a activităţii unei celule imune cuprinzând aducerea în contact a celulei imune cu oricare dintre anticorpii sau fragmentele de legare a antigenului, conform invenţiei. Într-o variantă de realizare, invenţia se referă la o metodă de sporire a activităţii unei celule imune, caracterizată prin aceea că cuprinde administrarea la un subiect, care necesită aceasta, a unei cantităţi eficiente dintr-un anticorp sau dintr-un fragment de legare a antigenului, conform invenţiei. Într-o variantă de realizare, procedeul este utilizat pentru: tratamentul tumorii maligne, tratamentul unei infecţii sau al unei boli infecţioase, sau în calitate de adjuvant pentru vaccin. Într-o variantă de realizare, sporirea activităţii unei celule imune poate fi detectată prin măsurarea proliferării acestei celule imune. De exemplu, creşterea activităţii unei celule T poate fi detectată prin măsurarea proliferării celulei T. Într-o variantă de realizare, creşterea activităţii unei celule imune poate fi detectată prin măsurarea activării celulelor T ex vivo într-o probă provenită de la subiectul în cauză. Într-o variantă de realizare, creşterea activităţii celulelor T este determinată prin: (i) măsurarea reacţiilor limfocitare mixte sau stimularea mAb anti-CD3 directă a receptorului celulelor T (TCR) de semnalizare pentru a induce producerea unei citokine, selectate din grupul constând din: IL-2, TNFα, IL-17, IFNγ, IL-1β, GM-CSF, RANTES, IL-6, IL-8, IL-5 şi IL-13; (ii) măsurarea producţiei induse de către SEB a uneia sau a mai multor citokine, selectate din grupul constând din: IL-2, TNFα, IL-17, IFNγ, GM-CSF, RANTES, IL-6, IL-8, IL-5 şi IL-13; sau (iii) măsurarea producţiei induse de către TT a unei citokine, selectate din grupul format din: IL-2, TNFα, IL-17, IFNγ, GM-CSF, RANTES, IL-6, IL-8, IL-5 şi IL-13. Într-o variantă de realizare, anticorpul anti-TIGIT sau fragmentul acestuia de legare a antigenului, conform prezentei invenţii, cuprinde: (i) CDR1 a regiunii variabile a lanţului greu conţinând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 1; (ii) CDR2 a regiunii variabile a lanţului greu conţinând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 2; (iii) CDR3 a regiunii variabile a lanţului greu conţinând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 3, 79, 80, 81, 82, 83 sau 140; (iv) CDR1 a regiunii variabile a lanţului uşor conţinând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 4; (v) CDR2 a regiunii variabile a lanţului uşor conţinând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 5, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73 sau 141; şi (vi) CDR3 a regiunii variabile a lanţului uşor conţinând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 6, 74, 75, 76, 77, 78 sau 142. Într-o variantă de realizare, anticorpul sau fragmentul acestuia de legare a antigenului cuprinde: (i) CDR1 a regiunii variabile a lanţului greu conţinând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 88; (ii) CDR2 a regiunii variabile a lanţului greu cuprinzând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 89, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 134, 135 sau 147; (iii) CDR3 a regiunii variabile a lanţului greu conţinând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 90; (iv) CDR1 a regiunii variabile a lanţului uşor conţinând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 91; (v) CDR2 a regiunii variabile a lanţului uşor conţinând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 92, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122 sau 148; şi (vi) CDR3 a regiunii variabile a lanţului uşor conţinând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 93. Într-o variantă de realizare, anticorpul anti-TIGIT sau fragmentul de legare a antigenului, conform invenţiei, cuprinde: (i) CDR1 a regiunii variabile a lanţului greu cuprinzând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 1; (ii) CDR2 a regiunii variabile a lanţului greu cuprinzând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 2; (iii) CDR3 a regiunii variabile a lanţului greu cuprinzând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 3; (iv) CDR1 a regiunii variabile a lanţului uşor cuprinzând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 4; (v) CDR2 a regiunii variabile a lanţului uşor cuprinzând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 5; şi (vi) CDR3 a regiunii variabile a lanţului uşor cuprinzând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 6. Într-o altă variantă de realizare, anticorpul anti-TIGIT sau fragmentul de legare a antigenului, conform invenţiei, cuprinde: (i) CDR1 a regiunii variabile a lanţului greu cuprinzând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 57; (ii) CDR2 a regiunii variabile a lanţului greu cuprinzând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 58; (iii) CDR3 a regiunii variabile a lanţului greu cuprinzând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 59; (iv) CDR1 a regiunii variabile a lanţului uşor cuprinzând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 60; (v) CDR2 a regiunii variabile a lanţului uşor cuprinzând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 61; şi (vi) CDR3 a regiunii variabile a lanţului uşor cuprinzând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 62. Într-o variantă de realizare, anticorpul anti-TIGIT sau fragmentul acestuia de legare a antigenului cuprinde: (i) CDR1 a regiunii variabile a lanţului greu cuprinzând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 88; (ii) CDR2 a regiunii variabile a lanţului greu cuprinzând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 89, 134 sau 135; (iii) CDR3 a regiunii variabile a lanţului greu cuprinzând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 90; (iv) CDR1 a regiunii variabile a lanţului uşor cuprinzând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 91; (v) CDR2 a regiunii variabile a lanţului uşor cuprinzând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 92; şi (vi) CDR3 a regiunii variabile a lanţului uşor cuprinzând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 93. Într-o variantă de realizare, anticorpul anti-TIGIT sau fragmentul acestuia de legare a antigenului cuprinde: (i) CDR1 a regiunii variabile a lanţului greu cuprinzând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 88; (ii) CDR2 a regiunii variabile a lanţului greu cuprinzând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 134; (iii) CDR3 a regiunii variabile a lanţului greu cuprinzând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 90; (iv) CDR1 a regiunii variabile a lanţului uşor cuprinzând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 91; (v) CDR2 a regiunii variabile a lanţului uşor cuprinzând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 92; şi (vi) CDR3 a regiunii variabile a lanţului uşor cuprinzând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 93.
Invenţia propusă se referă, de asemenea, la un procedeu de tratare a cancerului sau a unei boli infecţioase la un subiect cuprinzând administrarea subiectului în cauză a unei cantităţi eficiente dintr-un anticorp antagonist anti-TIGIT şi dintr-un anticorp antagonist anti-PD1, caracterizat prin aceea că anticorpul anti-TIGIT posedă o funcţie efectoare sporită în comparaţie cu un anticorp parental. Termenul „anticorp parental”, aşa cum este utilizat în prezenta invenţie, se referă la anticorpii având o regiune Fc de tip sălbatic şi/sau o glicozilare de tip sălbatic (şi anume, paternul de glicozilare care rezultă din expresia polipeptidei într-o celulă gazdă nemodificată de mamifer). Funcţia efectoare a unui anticorp parental poate fi sporită prin intermediul mutagenezei regiunii sale Fc sau prin modificarea glicozilării acestuia (aşa cum se discută în detaliu în continuare). Într-o variantă de realizare, anticorpul anti-PD1 este administrat înainte de administrarea unui anticorp parental. Într-o variantă de realizare, anticorpul anti-PD1 este administrat cu 4-10 zile înainte de administrarea anticorpului anti-TIGIT. Într-o variantă de realizare, pre-tratamentul cu anticorp anti-PD1 poate modula celulele imune, astfel încât rezultă o funcţie Fc intermediată sporită a anticorpilor anti-TIGIT. Într-o variantă de realizare, anticorpul anti-TIGIT cuprinde un domeniu constant de IgG1 umană. Într-o variantă de realizare, tratamentul cu anti-TIGIT şi anticorp anti-PD1 nu conduce la epuizarea Treg. Într-o variantă de realizare, anticorpul anti-PD1 sau un fragment al acestuia de legare a antigenului este selectat din grupul constând din: pembrolizumab şi nivolumab. Într-o variantă de realizare, anticorpul anti-TIGIT sau fragmentul de legare a antigenului, conform invenţiei solicitate, cuprinde: (i) CDR1 a regiunii variabile a lanţului greu cuprinzând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 1; (ii) CDR2 a regiunii variabile a lanţului greu cuprinzând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 2; (iii) CDR3 a regiunii variabile a lanţului greu cuprinzând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 3; (iv) CDR1 a regiunii variabile a lanţului uşor cuprinzând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 4; (v) CDR2 a regiunii variabile a lanţului uşor cuprinzând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 5; şi (vi) CDR3 a regiunii variabile a lanţului uşor cuprinzând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 6. Într-o variantă de realizare, anticorpul anti-TIGIT sau fragmentul de legare a antigenului cuprinde: (i) CDR1 a regiunii variabile a lanţului greu cuprinzând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 88; (ii) CDR2 a regiunii variabile a lanţului greu cuprinzând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 89, 134 sau 135; (iii) CDR3 a regiunii variabile a lanţului greu cuprinzând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 90; (iv) CDR1 a regiunii variabile a lanţului uşor cuprinzând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 91; (v) CDR2 a regiunii variabile a lanţului uşor cuprinzând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 92; şi (vi) CDR3 a regiunii variabile a lanţului uşor cuprinzând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 93. Într-o variantă de realizare, anticorpul anti-TIGIT sau fragmentul acestuia de legare a antigenului cuprinde: (i) CDR1 a regiunii variabile a lanţului greu cuprinzând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 88; (ii) CDR2 a regiunii variabile a lanţului greu cuprinzând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 134; (iii) CDR3 a regiunii variabile a lanţului greu cuprinzând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 90; (iv) CDR1 a regiunii variabile a lanţului uşor cuprinzând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 91; (v) CDR2 a regiunii variabile a lanţului uşor cuprinzând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 92; şi (vi) CDR3 a regiunii variabile a lanţului uşor cuprinzând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 93.
Invenţia solicitată se referă, de asemenea, la un procedeu de tratare a cancerului sau a unei boli infecţioase la un subiect, care cuprinde administrarea la subiectul respectiv a unei cantităţi eficiente dintr-un anticorp antagonist anti-TIGIT şi un anticorp antagonist anti-PD1, caracterizat prin aceea că anticorpul anti-TIGIT este afucozilat. Într-o variantă de realizare, anticorpului anti-TIGIT sau fragmentul acestuia de legare a antigenului, conform invenţiei, cuprinde: (i) CDR1 a regiunii variabile a lanţului greu cuprinzând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 1; (ii) CDR2 a regiunii variabile a lanţului greu cuprinzând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 2; (iii) CDR3 a regiunii variabile a lanţului greu cuprinzând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 3; (iv) CDR1 a regiunii variabile a lanţului uşor cuprinzând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 4; (v) CDR2 a regiunii variabile a lanţului uşor cuprinzând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 5; şi (vi) CDR3 a regiunii variabile a lanţului uşor cuprinzând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 6. Într-o variantă de realizare, anticorpul anti-TIGIT sau fragmentul de legare a antigenului, conform invenţiei, cuprinde: (i) CDR1 a regiunii variabile a lanţului greu cuprinzând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 88; (ii) CDR2 a regiunii variabile a lanţului greu cuprinzând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 89, 134 sau 135; (iii) CDR3 a regiunii variabile a lanţului greu cuprinzând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 90; (iv) CDR1 a regiunii variabile a lanţului uşor cuprinzând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 91; (v) CDR2 a regiunii variabile a lanţului uşor cuprinzând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 92; şi (vi) CDR3 a regiunii variabile a lanţului uşor cuprinzând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 93. Într-o variantă de realizare, anticorpul anti-TIGIT sau fragmentul acestuia de legare a antigenului cuprinde: (i) CDR1 a regiunii variabile a lanţului greu cuprinzând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 88; (ii) CDR2 a regiunii variabile a lanţului greu cuprinzând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 134; (iii) CDR3 a regiunii variabile a lanţului greu cuprinzând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 90; (iv) CDR1 a regiunii variabile a lanţului uşor cuprinzând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 91; (v) CDR2 a regiunii variabile a lanţului uşor cuprinzând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 92; şi (vi) CDR3 a regiunii variabile a lanţului uşor cuprinzând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 93.
Invenţia în cauză se referă, de asemenea, la un procedeu de sporire a activităţii antitumorale a anticorpului anti-TIGIT cuprinzând: obţinerea unui anticorp anti-TIGIT parental şi sporirea funcţiei efectoare a anticorpului anti-TIGIT, caracterizat prin aceea că activitatea anticorpului anti-TIGIT rezultat este sporită în comparaţie cu cea a anticorpului anti-TIGIT parental. Aşa cum este utilizat în prezenta invenţie, termenul „anticorp parental” se referă la anticorpii posedând o regiune Fc de tip sălbatic şi/sau o glicozilare de tip sălbatic (de exemplu, modelul de glicozilare care rezultă din exprimarea polipeptidei într-o celulă gazdă nemodificată de mamifer). Funcţia efectoare a unui anticorp parental poate fi crescută prin mutageneza regiunii sale Fc sau prin modificarea glicozilării sale, de exemplu, prin generarea anticorpului afucozilat (aşa cum s-a discutat în detaliu în continuare). Într-o variantă de realizare, funcţia efectoare a unui anticorp anti-TIGIT parental este sporită prin mutageneză în regiunea Fc a anticorpului anti-TIGIT parental. Într-o altă formă de realizare, funcţia efectoare a unui anticorp anti-TIGIT parental este sporită prin eliminarea resturilor de fucoză din anticorp sau prin exprimarea anticorpului într-o celulă gazdă, modificată genetic pentru a elimina activitatea enzimei care adaugă fucoză în glicoproteine.
Invenţia se explică prin desenele din fig. 1 - fig. 17, care reprezintă:
fig. 1, legarea anticorpului 14A6 la TIGIT uman şi rhesus (exprimate în celulele CHO-K1).
fig. 2, legarea anticorpului 28H5 la TIGIT uman şi rhesus (exprimate în celulele CHO-K1).
fig. 3, blocarea de către anticorpii 14A6 şi 28H5 a interacţiunii hCD155 cu hTIGIT, determinată prin intermediul testului de blocare ELISA pe bază de celule.
fig. 4, legarea anticorpului 31C6 la TIGIT uman şi rhesus (exprimate în celulele CHO-K1) şi, de asemenea, se arată că anticorpul 31C6 blochează interacţiunea hCD155 cu hTIGIT.
fig. 5, activitatea anticorpilor 14A6 şi 28H5 într-un test de celule T in vitro.
fig. 6, activitatea anticorpilor 14A6 şi 31C6 într-un test de celule T in vitro.
fig. 7, expresia TIGIT, CD226, CD155 şi CD96 în liniile de celule T umane primare. În ziua a 3-a, clona BC4-49 demonstrează cea mai înaltă reglare a TIGIT (negativă) şi reglarea descendentă a CD226 (pozitivă).
fig. 8A şi 8B, activitatea diverşilor anticorpi anti-TIGIT într-un test de celule T in vitro. Aceasta arată că MBS43 şi anticorpii anti-TIGIT, 14A6, 37D10 şi 28H5 regenerează răspunsurile IFNγ în celulele T umane primare.
fig. 9A-9D, efectul administrării concomitente a unui anticorp de şobolan anti-TIGIT murin (GIGD7) şi a unui anticorp anti-PD-1 murin la răspunsul antitumoral al şoarecilor implantaţi cu linia celulară CT26 (n = 10/grup), în comparaţie cu grupele în care s-a efectiuat tratamentul monoterapeutic. Tratamentul a început atunci când tumorile au atins 75 mm3 - 115 mm3.
fig. 10, efectul izotipului Fc asupra activităţii antitumorale a anticorpului anti-TIGIT (18G10) în combinaţie cu anticorpul anti-PD-1 într-un model tumoral animal.
fig. 11A-11C, efectul izotipului Fc asupra activităţii antitumorale a anticorpului anti-TIGIT (18G10) în combinaţie cu anticorpul anti-PD-1 într-un model tumoral animal.
fig. 12, efectul izotipului Fc asupra activităţii antitumorale a anticorpului anti-TIGIT (11A11) în combinaţie cu anticorpul anti-DP-1 într-un model tumoral animal.
fig. 13A-13C, efectul izotipului Fc asupra activităţii antitumorale a anticorpului anti-TIGIT (11A11) în combinaţie cu anticorpul anti-PD-1 într-un model tumoral animal.
fig. 14, harta termică indicând regiunile TIGIT umane care sunt puternic sau slab protejate de deuterare prin legarea anticorpului 14A6. Secvenţa de aminoacizi, prezentată pe harta termică, corespunde SECV. ID NR. 87.
fig. 15, harta termică indicând regiunile TIGIT umane care sunt puternic sau slab protejate de deuterare prin legarea anticorpului 31C6. Secvenţa de aminoacizi, prezentată pe harta termică, corespunde SECV. ID NR. 87.
fig. 16, efectul unor diverse clone ale 31C6 umanizate, în comparaţie cu anticorpii parentali şi himerici, într-un test funcţional de celule T modificate.
fig. 17, efectul unor diverse clone ale 31C6 umanizate, în comparaţie cu anticorpii himerici, într-un test funcţional de celule T primare.
Abrevieri
Pe tot parcursul descrierii detaliate şi exemplelor de realizare a prezentei invenţii vor fi folosite următoarele abrevieri:
ADCC - Citotoxicitate celulară dependentă de anticorpi
CDC - Citotoxicitate dependentă de complement
CDR - Regiune de determinare a complementarităţii în regiunile variabile ale imunoglobulinei, definită prin intermediul sistemului de numerotare Kabat
CHO - Celule ovariene de hamster chinezesc
ELISA - Test de imunoabsorbţie a enzimelor lincate
FR - Regiune cadru de anticorp: regiunile variabile ale imunoglobulinei, cu excepţia regiunilor CDR
HRP - Peroxidază de hrean
IFN - Interferon
IC50 - Concentraţie având ca rezultat o inhibare de 50%
IgG - Imunoglobulina G
Kabat - Sistem de ajustare şi numerotare a imunoglobulinelor, elaborat pentru prima dată de către Elvin A. Kabat ((1991) Sequences of Proteins of Immunological Interes, Health Service 5th Ed. Public, National Institutes of Health, Bethesda, Md.)
mAb sau Mab, sau MAb - Anticorp monoclonal
SEB - Enterotoxina stafilococică B
TT - Toxoid tetanic
V region - Segmentul lanţurilor IgG care este variabil în secvenţă între diferiţi anticorpi. Acesta se extinde până la restul 109 după Kabat în lanţul uşor şi 113 în lanţul greu
VH - Regiunea variabilă a lanţului greu al imunoglobulinei
VK - Regiunea variabilă a lanţului uşor al imunoglobulinei kappa
Definiţii
Ca invenţia solicitată să poată fi înţeleasă mai uşor, anumiţi termeni tehnici şi ştiinţifici sunt definiţi în mod concret în continuare. Dacă nu sunt definiţi în mod concret în altă parte în prezentul document, toţi ceilalţi termeni tehnici şi ştiinţifici utilizaţi aici poartă semnificaţia înţeleasă în mod obişnuit de către un specialist în domeniul de care ţine această invenţie.
Aşa cum este utilizat în descrierea de faţă, inclusiv în revendicările anexate, formele singulare ale cuvintelor, cum ar fi „a”, „an” şi articolul hotărât „the”, includ referinţele lor de plural corespunzătoare dacă contextul nu dictează în mod clar contrariul.
Cuvintele „administrare” şi „tratament”, aşa cum se aplică acestea unui animal, om, subiect experimental, celule, ţesut, organ sau fluid biologic, se referă la contactarea unui produs farmaceutic, terapeutic, de diagnostic exogen, sau a unei compoziţii, cu un animal, om, subiect, celulă, ţesut, organ sau fluid biologic. Tratarea unei celule cuprinde contactarea unui reactiv cu celula, precum şi contactarea unui reactiv cu un fluid, unde fluidul este în contact cu celula. Cuvintele „administrare” şi „tratament” se referă, de asemenea, la tratamentele in vitro şi ex vivo, de exemplu, ale unei celule, cu ajutorul unui reactiv, unui produs diagnostic, unui compus de legare sau unei altor celule.
Cuvintele „a trata” sau „tratare” semnifică administrarea unui agent terapeutic, cum ar fi o compoziţie care conţine oricare dintre anticorpii sau fragmentele de legare a antigenului, conform prezentei invenţii, pe cale internă sau externă, la un subiect sau un pacient care are unul sau mai multe simptome de boală sau care este suspectat de a avea o boală, împotriva căreia agentul comportă activitate terapeutică. De regulă, agentul este administrat într-o cantitate eficientă pentru a ameliora unul sau mai multe simptome de boală la subiectul tratat sau la populaţie, fie prin inducerea regresiei, fie prin inhibarea progresiei unui astfel de simptom(e) până la orice grad măsurabil clinic. Cantitatea dintr-un agent terapeutic care este eficientă pentru a atenua orice simptom al unei anumite boli poate varia în funcţie de factori, cum ar fi starea bolii, vârsta şi greutatea pacientului, precum şi capacitatea preparatului de a genera răspunsul dorit la subiectul în cauză. Faptul dacă un simptom al maladiei a fost atenuat poate fi evaluat prin orice măsurare clinică, utilizată în mod obişnuit de către terapeuţi sau de către alţi lucrători medicali calificaţi pentru evaluarea severităţii sau stării de progresie a acestui simptom.
TIGIT
Termenul TIGIT include TIGIT uman, TIGIT maimuţă-cynomolgus şi TIGIT maimuţă-rhesus, precum şi fragmentele acestora, cum ar fi fragmentele lor mature, lipsite de peptida de semnal. Într-o variantă de realizare a invenţiei, secvenţa de aminoacizi a TIGIT uman cuprinde secvenţa de aminoacizi, descrisă în resturile de aminoacizi 25-244 din GenBank Accession Number_ NP 776160.2 (SECV. ID NR. 31). (Resturile de aminoacizi 1-24 din SECV. ID NR. 31 corespunde unei peptide lider).
Într-o variantă de realizare a invenţiei, secvenţa de aminoacizi a TIGIT de maimuţă cynomolgus, de exemplu, Macaca fascicularis, cuprinde secvenţa de aminoacizi descrisă în (SECV. ID NR. 32); a se vedea, de asemenea, Genbank Accession nr. XP_005548157. Secvenţa de aminoacizi a TIGIT maimuţă-rhesus este identică cu secvenţa de aminoacizi a TIGIT maimuţă-cynomolgous. (Resturile de aminoacizi 1-24 din SECV. ID NR. 32 corespunde unei peptide lider) .
Anticorpii anti-TIGIT şi fragmentele acestora de legare la antigen
Prezenta invenţie se referă la anticorpii sau la fragmentele acestora de legare a antigenului care se leagă la TIGIT uman şi la modurile de utilizare a unor astfel de anticorpi sau fragmente. În unele variante de realizare, anticorpii anti-TIGIT sunt izolaţi.
Aşa cum este utilizat în documentul de faţă, anticorpul anti-TIGIT sau fragmentul acestuia de legare a antigenului se referă la un anticorp sau la un fragment al acestuia de legare a antigenului care se leagă în mod specific la TIGIT uman. Anticorpul sau fragmentul acestuia de legare a antigenului care „se leagă în mod specific la TIGIT uman” este un anticorp sau un fragment al acestuia de legare a antigenului care se leagă la TIGIT uman cu o valoare a KD de aproximativ 1 nM sau cu o afinitate mai mare (de exemplu, 1 nM-2pM, 1 nM, 100 pM, 10 pM sau 2pM), însă nu se leagă la alte proteine lipsite de această secvenţă. De exemplu, un anticorp care „se leagă specific” la TIGIT uman nu se leagă la CD226 uman, CD155 uman şi CD112 uman. În calitate de alt exemplu, un anticorp sau un fragment de legare a antigenului, care se leagă în mod specific la TIGIT uman, se poate lega la o formă FLAG®-marcată de TIGIT uman, dar nu se pot lega la alte proteine FLAG®-marcate care sunt lipsite de epitopii TIGIT uman. Într-o variantă de realizare, anticorpul, conform prezentei invenţii, care se leagă în mod specific la TIGIT uman posedă, de asemenea, o reactivitate încrucişată în raport cu TIGIT cynomolgus şi rhesus. Aşa cum este utilizat în documentul de faţă, termenul „capacitatea de reactivitate încrucişată” se referă la capacitatea unui anticorp de a reacţiona cu o proteina omoloagă de la alte specii. Faptul dacă un anticorp se leagă în mod specific la TIGIT uman poate fi determinat folosind orice teste cunoscute în domeniul de referinţă. Exemplele de teste, cunoscute în domeniu, pentru determinarea afinităţii de legare includ rezonanţa plasmonică de suprafaţă (de exemplu, BIACORE) sau o tehnică similară (de exemplu, KinExA sau OCTET).
Prezenta invenţie se referă la anticorpii anti-TIGIT şi la procedeele de aplicare a acestora. Aşa cum este utilizat în documentul de faţă, termenul „anticorp” se referă la orice formă de anticorp care manifestă activitatea biologică dorită. Astfel, acesta este folosit în sensul cel mai larg şi acoperă în mod specific, dar nu se limitează la aceasta, anticorpii monoclonali (incluzând anticorpii monoclonali de lungime deplină care conţin două lanţuri uşoare şi două lanţuri grele), anticorpii policlonali, anticorpii multispecifici (de exemplu, anticorpii bispecifici), anticorpii umanizaţi, anticorpii total umani, anticorpii himerici şi anticorpii de cămilă cu un singur domeniu.
Prezenta invenţie se referă la anticorpii anti-TIGIT parentali neumani (de exemplu, de şoarece şi de rozătoare) şi la fragmentele lor de legare a antigenului şi la procedeele de utilizare a acestora. Aceşti anticorpi pot fi modificaţi pentru utilizarea preconizată, cum ar fi umanizarea unui anticorp pentru utilizarea sa în calitate de anticorp terapeutic sau de fragment uman.
Prezenta invenţie se referă la fragmentele anti-TIGIT de legare a antigenului şi la procedeele de utilizare a acestora. Aşa cum este utilizat în prezentul document, şi dacă nu se indică altfel, termenul „fragment de anticorp” sau „fragment de legare a antigenului” se referă la fragmentele de legare a antigenului ale anticorpilor, şi anume, la fragmentele de anticorpi care păstrează capacitatea de a se lega specific la antigenul legat de un anticorp cu lungime deplină, de exemplu, la fragmentele care păstrează una sau mai multe regiuni CDR. Exemplele de fragmente de legare a antigenului includ, dar nu se limitează la acestea, Fab, Fab', F(ab')2 şi fragmentele Fv; diacorpii; anticorpii liniari; moleculele de anticorp cu un singur lanţ, de exemplu, sc-Fv; nano-anticorpii şi anticorpii multispecifici, formaţi din fragmente de anticorpi.
Prezenta invenţie se referă la fragmentele Fab anti-TIGIT şi la procedeele de utilizare a acestora. Un „fragment Fab” este format dintr-un lanţ uşor şi bucla CH1, şi regiunile variabile ale unui lanţ greu. Lanţul greu al unei molecule Fab nu poate forma o legătură disulfurică cu o altă moleculă de lanţ greu. Un „fragment Fab” poate constitui produsul clivajului cu papaină al unui anticorp.
Prezenta invenţie se referă la anticorpii anti-IGIT şi fragmentele acestora de legare a antigenului, care cuprind o regiune Fc, şi la procedeele de utilizare a acestora. Regiunea „Fc” conţine două fragmente de lanţ greu cuprinzând domeniile CH1 şi CH2 ale unui anticorp. Cele două fragmente de lanţ greu se menţin împreună prin intermediul a două sau mai multe legături disulfidice şi prin interacţiunile hidrofobe ale domeniilor CH3.
Prezenta invenţie se referă la fragmentele Fab' anti-TIGIT şi la procedeele de utilizare a acestora. Un „fragment Fab'” conţine un lanţ uşor şi o porţiune sau un fragment dintr-un lanţ greu cuprinzând domeniul VH şi domeniul CH1, precum şi regiunea dintre domeniile CH1 şi CH2, astfel încât legătura disulfidică intercatenare se poate formata între cele două lanţuri grele a două fragmente Fab' pentru a forma molecula F(ab')2.
Prezenta invenţie se referă la fragmentele F(ab')2 anti-TIGIT şi la procedeele de utilizare a acestora. Un „fragment F(ab')2” conţine două lanţuri uşoare şi două lanţuri grele conţinând o porţiune a regiunii constante dntre domeniile CH1 şi CH2, astfel încât legătura disulfidică intercatenare se formează între cele două lanţuri grele. Prin urmare, fragmentul F(ab')2 este compus din două fragmente Fab' care sunt ţinute împreună printr-o legătură disulfidică dintre cele două lanţuri grele. Un „fragment F(ab')2” poate fi produsul clivajului cu pepsină al unui anticorp.
Prezenta invenţie se referă la fragmentele anticorpilor anti-TIGIT Fv şi la procedeele de utilizare a acestora. „Regiunea Fv” cuprinde regiunile variabile atât din lanţurile grelecât şi din lanţurile uşoare, însă este lipsită de regiunile constante.
Prezenta invenţie se referă la fragmentele scFv anti-TIGIT şi la procedeele de utilizare a acestora. Termenul „Fv monocatenar” sau anticorp „scFv” se referă la fragmentele anticorpului cuprinzând domeniile VH şi VL ale unui anticorp, în care aceste domenii sunt prezente într-un singur lanţ polipeptidic. În general, polipeptida Fv cuprinde suplimentar un linker polipeptidic între domeniile VH şi VL care îi permite scFv să formeze structura dorită pentru legarea antigenului [1] (WO 88/01649, US 4.946.778; US 5.260.203).
Prezenta invenţie se referă la anticorpii anti-TIGIT de domeniu şi la procedeele de utilizare a acestora. Un „anticorp de domeniu” este un fragment imunologic funcţional al unei imunoglobuline conţinând doar regiunea variabilă a unui lanţ greu sau regiunea variabilă a unui lanţ uşor. În anumite cazuri, două sau mai multe regiuni VH sunt unite în mod covalent prin intermediul unui linker peptidic pentru a crea un anticorp de domeniu bivalent. Cele două regiuni VH ale unui anticorp de domeniu bivalent pot fi direcţionate spre antigene identice sau diferite.
Prezenta invenţie se referă la anticorpii bivalenţi anti-TIGIT şi la procedeele de utilizare a acestora. Un „anticorp bivalent” cuprinde două situsuri de legare a antigenului. În anumite cazuri, cele două situsuri de legare au aceleaşi specificităţi antigen. Cu toate acestea, anticorpii bivalenţi pot fi bispecifici (de văzut în continuare).
Prezenta invenţie se referă la anticorpii anti-TIGIT cu un singur domeniu camelized (de cămilă) şi la procedeele de utilizare a acestora. În anumite variante de realizare, anticorpii includ, de asemenea, anticorpii cu un singur domeniu camelizat [2] (Reichmann et al. J. Immunol. Methods, no 231, 1999, p.25; WO 94/04678; WO 94/25591; US 6.005.079). Într-o variantă de realizare, prezenta invenţie se referă la anticorpii cu un singur domeniu cuprinzând două domenii VH cu astfel de modificări, încât se formează anticorpi cu un singur domeniu.
Prezenta invenţie se referă la diacorpii anti-TIGIT şi la procedeele de utilizare a acestora. Aşa cum este utilizat în prezenta descriere, termenul „diacorpi” desemnează fragmentele mici de anticorp cu doua situsuuri de legare a antigenului, caracterizat prin aceea că fragmentele cuprind un domeniu variabil de lanţ greu (VH), conectat la un domeniu variabil de lanţ uşor (VL) în unul şi acelaşi lanţ polipeptidic (VH-VL sau VL-VH). Prin folosirea unui linker care este prea scurt pentru a permite împerecherea celor două domenii pe unul şi acelaşi lanţ, domeniile sunt forţate să se împerecheze cu domeniile complementare ale unui alt lanţ şi să formeze doua situsuri de legare a antigenului. Diacorpii sunt descrişi mai detaliat în literatura de specialitate [3] (WO 93/11161; Holliger et al. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90, 1993, p. 6444-6448; Holliger and Hudson. Nat. Biotechnol., no 23, 2005, p. 1126-1136).
De regulă, anticorpul sau fragmentul de legare a antigenului, conform invenţiei, care este modificat într-un fel sau altul pot păstra cel puţin 10% din activitatea sa (în comparaţie cu anticorpul parental), atunci când această activitate este exprimată pe bază molară. De preferinţă, anticorpul sau fragmentul de legare a antigenului, conform invenţiei, păstrează cel puţin 20%, 50%, 70%, 80%, 90%, 95% sau 100%, sau mai mult din afinitatea de legare a TIGIT de către anticorpul parental. De asemenea, este prevăxut că un anticorp sau un fragment de legare a antigenului conform prezentei invenţii poate include substituţii de aminoacizi conservative sau non-conservative (denumite în continuare „variante conservative” sau „variante funcţionale de conservare” ale anticorpului), care nu afectează în mod substanţial activitatea sa biologică.
Prezenta invenţie se referă la anticorpii anti-TIGIT izolaţi şi la fragmentele acestora de legare a antigenului, şi la procedeele de utilizare a acestora. Anticorpii „izolaţi” sau fragmentele acestora de legare a antigenului sunt, cel puţin parţial, liberi de alte molecule biologice din celulele sau culturile celulare în care sunt produse aceştia. Astfel de molecule biologice includ acizi nucleici, proteine, lipide, carbohidraţi sau alte materiale, cum ar fi reziduurile celulare şi mediul de creştere. Totodată, un anticorp izolat sau un fragment de legare a antigenului pot fi, cel puţin parţial, liberi de componentele sistemului de expresie, cum ar fi moleculele biologice dintr-o celulă gazdă sau din mediul de creştere a acestora. În general, termenul „izolat” nu este menit să desemneze absenţa completă a unor astfel de molecule biologice sau absenţa apei, soluţiilor tampon sau sărurilor, sau componentelor unui produs farmaceutic care cuprinde aceşti anticorpi sau aceste fragmente.
Prezenta invenţie se referă la anticorpii monoclonali anti-TIGIT şi fragmentele acestora de legare a antigenului, precum şi la compoziţiile monoclonale cuprinzând o multitudine de anticorpi monoclonali izolaţi. Termenul „anticorp monoclonal”, aşa cum este utilizat în invenţia solicitată, se referă la o populaţie de anticorpi în mod esenţial omogenă, şi anume, moleculele anticorpilor cuprinşi în populaţie sunt identici după secvenţa de aminoacizi, cu excepţia unor posibile mutaţii naturale, care pot fi prezente în cantităţi mici. Spre deosebire de aceasta, preparatele convenţionale (policlonale) de anticorpi includ, de regulă, o multitudine de anticorpi diferiţi dispunând de diferite secvenţe de aminoacizi în domeniile lor variabile, în special în CDR-urile acestora, care adesea sunt specifice pentru diferiţi epitopi. Determinativul „monoclonal” indică caracterul anticorpului ca fiind obţinut dintr-o populaţie de anticorpi în mod esenţial omogenă şi acesta nu trebuie să fie interpretat ca necesitând obţinerea anticorpului printr-un procedeu concret. De exemplu, pentru a fi utilizaţi în conformitate cu prezenta invenţie, anticorpii monoclonali pot fi obţinuţi prin procedeul hibridoma, descris pentru prima data de Kohler şi colab. [4], sau pot fi obţinuţi prin procedee ce ţin de ADN recombinant [5]. „Anticorpii monoclonali” pot fi, de asemenea, izolaţi din bănci de anticorpi fagi folosind procedeele descrise în literatura de specialitate (Clackson et al. Nature, no 352, 1991, p. 624-628; Marks et al. J. Mol. Biol., no 222, 1991, p. 581-597; Presta. J. Allergy Clin. Immunol., no 116, 2005, p. 731).
Prezenta invenţie se referă la anticorpii himerici anti-TIGIT {de exemplu, domeniul constant uman/domeniul variabil murin) şi la procedeele de utilizare a acestora. Aşa cum este utilizat în invenţia propusă, un „anticorp himeric” este un anticorp având domeniul variabil dintr-un anticorp primar şi domeniul constant dintr-un anticorp secundar, caracterizat prin aceea că anticorpul primar şi anticorpul secundar provin de la diferite specii (US 4816567; Morrison et al. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 81, 1984, p. 6851-6855). De regulă, domeniile variabile sunt obţinute dintr-un anticorp de animal experimental („anticorpul parental”), cum ar fi o rozătoare, iar secvenţele domeniului constant sunt obţinute de la anticorpi umani, astfel încât va fi mai puţin probabil ca anticorpul himeric obţinut să declanşeze un răspuns imun advers la un subiect uman, decât anticorpul parental (de exemplu, anticorpul de şoarece).
Prezenta invenţie se referă la anticorpii umanizaţi anti-TIGIT şi fragmentele acestora de legare a antigenului (de exemplu, anticorpii de şobolan sau de şoarece care au fost umanizaţi) şi la procedeele de utilizare a lor. Invenţia se referă la orice versiune umanizată a anticorpului 14A6 (care cuprinde SECV. ID NR. 7 şi 8), a anticorpului 28H5 (care cuprinde SECV. ID NR. 63 şi 64) şi a anticorpului 31C6 (care cuprinde SECV. ID NR. 94-95). Aşa cum este utilizat în documentul de faţă, termenul „anticorp umanizat” se referă la formele anticorpilor conţinând atât secvenţe din anticorpii umani, cât şi din anticorpii non-umani (de exemplu, de şobolan sau de şoarece). De regulă, anticorpul umanizat poate cuprinde în esenţă toate sau cel puţin unul, şi în mod tipic două, domenii variabile, în care toate sau aproape toate buclele hipervariabile corespund buclelor hipervariabile ale unei imunoglobuline non-umane şi toate sau aproape toate regiunile cadru (FR) prezintă regiunile cadru din secvenţele de imunoglobulină umană. Anticorpul umanizat poate conţine, în mod opţional, cel puţin o porţiune dintr-o regiune constantă de imunoglobulină umană (Fc).
De regulă, unitatea structurală de bază a anticorpului cuprinde un tetramer. Fiecare tetramer include două perechi identice de lanţuri polipeptidice, caracterizat prin aceea că fiecare pereche posedă un lanţ „uşor” (de aproximativ 25 kDa) şi un lanţ „greu” (de aproximativ 50...70 kDa). Porţiunea amino-terminală a fiecărui lanţ include o regiune variabilă de la aproximativ 100 până la 110 sau mai mulţi aminoacizi, responsabili, în primul rând, de recunoaşterea antigenului. Porţiunea carboxi-terminală a lanţului greu poate defini o regiune constantă, responsabilă în principal de funcţia efectoare. De regulă, lanţurile uşoare umane sunt clasificate ca lanţuri uşoare kappa şi lambda. În plus, lanţurile grele umane sunt, de regulă, clasificate ca mu, delta, gama, alfa sau epsilon şi definesc izotipul anticorpului ca IgM, IgD, IgG, IgA şi, respectiv, IgE. În interiorul lanţurilor uşoare şi grele, regiunile variabile şi cele constante sunt unite printr-o regiune „J” formată din aproximativ 12 sau mai mulţi aminoacizi, în care lanţul greu include, de asemenea, o regiune „D” formată din aproximativ 10 sau mai mulţi aminoacizi (Fundamental Immunology Ch. 7 (Paul, W., ed., 2nd ed. Raven Press, N.Y., 1989).
Regiunile variabile ale fiecărei perechi de lanţ uşor/lanţ greu formează situsul de legare a anticorpului. Astfel, de regulă, un anticorp intact posedă două situsuri de legare. Excepţie fac anticorpii bifuncţionali sau bispecifici, cele două situsuri de legare fiind, în general, la fel.
De regulă, atât domeniile variabile ale lanţurilor grele, cât şi cele ale lanţurilor uşoare cuprind trei regiuni hipervariabile, denumite, de asemenea, şi regiuni de determinare a complementarităţii (CDR-uri), localizate în regiunile cadru (FR) relativ conservative. CDR-urile sunt, de regulă, aliniate prin intermediul regiunilor cadru, permiţând astfel legarea la un epitop specific. În general, de la N-terminal până la C-terminal, atât domeniile variabile ale lanţurilor uşoare, cât şi domeniile variabile ale lanţurilor grele cuprind FR1, CDR1, FR2, CDR2, FR3, CDR3 şi FR4. Atribuirea aminoacizilor la fiecare domeniu corespunde, în general, definiţiilor prezentate în Sequences of Proteins of Immunological Interest (Kabat et al. National Institutes of Health, Bethesda, Md.; 5th ed.; NIH Publ. No. 91-3242, 1991; Kabat et al. Adv. Prot. Chem., no 32, 1978, p. 1-75; Kabat et al. J. Biol. Chem., no 252, 1977, p. 6609-6616; Chothia et al. J. Mol. Biol., no 196, 1987, p. 901-917; Chothia et al. Nature, no 342, 1989, p. 878-883).
Termenul „regiune hipervariabilă”, aşa cum este utilizat în descrierea de faţă, se referă la resturile de aminoacizi ale unui anticorp sau ale unui fragment al acestuia de legare a antigenului, responsabil de legarea antigenului. Regiunea hipervariabilă cuprinde resturi de aminoacizi dintr-o „regiune de determinare a complementarităţii” sau „CDR” (şi anume, CDRL1, CDRL2 şi CDRL3 în domeniul variabil al lanţului uşor şi CDRH1, CDRH2 şi CDRH3 în domeniul variabil al lanţului greu). (Kabat et al. National Institutes of Health, Bethesda, Md.; 5th ed.; NIH Publ. No. 91-3242, 1991) (care defineşte regiunile CDR ale unui anticorp după secvenţă); (Chothia et al. J. Mol. Biol., no 196, 1987, p. 901-917) (care defineşte regiunile CDR ale unui anticorp după structură). Aşa cum este utilizat în prezentul document, termenul resturi „cadru" sau „FR” se referă la resturile domeniului variabil, altele decât resturile regiunii hipervariabile, definite în descrierea de faţă ca resturi CDR.
Termenii „moleculă de acid nucleic izolată” sau „polinucleotidă izolată” definesc un ADN sau un ARN de origine genomică, ARNm, ADNc sau sintetică, sau unele combinaţii ale acestora care nu sunt asociate cu întreaga polinucleotidă sau cu o porţiune a acesteia, în care polinucleotida izolată se găseşte în natură, sau este legată cu o polinucleotidă cu care nu este legată în natură. Pentru scopurile acestei descrieri, trebuie să se înţeleagă că „o moleculă de acid nucleic cuprinzând” o secvenţă concretă de nucleotide nu cuprinde cromozomi intacţi. Moleculele de acid nucleic izolate „cuprinzând” secvenţele specifice de acid nucleic pot include, suplimentar la secvenţele specifice, secvenţe care codifică până la zece sau chiar până la douăzeci sau mai multe alte proteine sau porţiuni ale acestora, sau fragmente ale acestora, sau pot include secvenţe reglatorii legate în mod operaţional care controlează expresia regiunii codificatoare a secvenţelor specifice de acid nucleic şi/sau pot include secvenţe vectoriale.
Expresia „secvenţe de control” se referă la secvenţele de ADN, necesare pentru exprimarea unei secvenţe de codificare legată în mod operabil într-un anumit organism gazdă. Secvenţele de control potrivite pentru procariote, de exemplu, cele care includ un promotor, în mod opţional, o secvenţă operatorie, şi un situs de legare la ribozom. Se cunoaşte că celulele eucariote folosesc promotori, semnalele de poliadenilare şi amplificatori.
Un acid nucleic sau o polinucleotidă este „legată în mod operabil” atunci când este plasată într-o interacţiune funcţională cu o altă secvenţă de acid nucleic. De exemplu, ADN-ul pentru o presecvenţă sau un lider secretor este legat în mod operabil cu ADN-ul pentru o polipeptidă dacă el este exprimat ca o preproteină care participă la secreţia polipeptidei; un promotor sau un amplificator este legat operabil la o secvenţă de codificare dacă acesta influenţează transcripţia secvenţei; sau un situs de legare a ribozomului este legat operabil la o secvenţă de codificare dacă este poziţionat astfel, încât să faciliteze translaţia secvenţei. De regulă, dar nu întotdeauna, termenul „legat operabil” înseamnă că secvenţele legate de ADN sunt contigue, iar în cazul unui lider secretor, acestea sunt contigue şi în faza de citire. Cu toate acestea, amplificatorii nu trebuie să fie în mod obligatoriu contigui. Legarea este realizată prin ligaturarea în situsuri convenabile de restricţie. În cazul în care nu există astfel de situsuri, sunt utilizate adaptoare oligonucleotidice sintetice sau linkeri, în conformitate cu practica unanim acceptată.
Aşa cum este utilizat în prezentul document, expresiile „celulă”, „linie celulară" şi „cultură celulară" sunt utilizate interşanjabil şi toate aceste denumiri includ descendenţii. Astfel, cuvintele „transformanţi” şi „celule transformate” includ subiectul primar de celulă şi culturile derivate din acestea, indiferent de numărul de transferuri. De asemenea, trebuie să se înţeleagă faptul că nu toţi descendenţii vor avea un conţinut de ADN exact identic, datorită mutaţiilor deliberate sau spontane. Descendenţii mutanţi care au aceeaşi funcţie sau activitate biologică sunt incluşi în examinarea celulelor transformate iniţial. În cazul în care sunt prevăzute denumiri distincte, acest lucru va fi clar din context.
Termenul „secvenţa liniei germinale”, aşa cum este utilizat în descrierea dată, se referă la o secvenţă din linia de secvenţe non-rearanjate ale ADN-ului de imunoglobuline. Poate fi utilizată orice sursă adecvată de secvenţe non-rearanjate de imunoglobulină. Secvenţele liniei germinale umane pot fi obţinute, de exemplu, din bazele de date ale secvenţelor liniei germinale JOINSOLVER de pe web site-ul Institutului National de Artrită şi Boli musculo-scheletice şi de piele al Institutului Naţional al Sănătăţii din Statele Unite ale Americii. Secvenţele liniei germinale de şoarece pot fi obţinute, de exemplu, după cum este descris în literatura de specialitate (Giudicelli et al. Nucleic Acids Res, .no 33, 2005, D256-D261).
Proprietăţile fizice şi funcţionale ale anticorpilor anti-TIGIT, cu titlu de exemple
Prezenta invenţie se referă la anticorpii anti-TIGIT şi fragmentele acestora de legare a antigenului având caracteristicile funcţionale şi structurale specificate şi la procedeele de utilizare a anticorpilor sau a fragmentelor acestora de legare a antigenului în tratamentul sau prevenirea unor boli (de exemplu, tumoare malignă sau maladie infecţioasă).
Un „anticorp anti-TIGIT sau un fragment al acestuia de legare a antigenului, conform prezentei invenţii” include: orice anticorp sau fragment al acestuia de legare a antigenului discutat în documentul de faţă (de exemplu, 14A6, 28H5, 31C6 sau versiunile umanizate ale acestor anticorpi, descrişi în Tabelul 4) sau o variantă a acestora (de exemplu, o variantă de secvenţă sau o variantă funcţională); orice anticorp sau fragment de legare a antigenului cuprinzând una sau mai multe dintre CDR-urile prezentate în Tabelul 4; orice anticorp sau fragment de legare a antigenului care se leagă la acelaşi epitop în TIGIT uman ca şi anticorpii discutaţi în prezenta descriere (de exemplu, 14A6, 28H5 sau 31C6); şi orice anticorp sau fragment de legare a antigenului care blochează încrucişat (parţial sau total) legarea cu TIGIT a anticorpului, discutat în documentul de faţă, sau legarea cărora cu TIGIT este blocată încrucişat (parţial sau total) de către un anticorp discutat în documentul de faţă (de exemplu, 14A6, 28H5 sau 31C6).
Blocarea încrucişată a anticorpilor şi a fragmentelor acestora de legare a antigenului poate fi identificată pe baza capacităţii lor de concurenţă încrucişată cu anticorpul conform prezentei invenţii în testele standard de legare (de exemplu, BIAcore, ELISA, citometrie în flux). De exemplu, pot fi utilizate testele ELISA standard în care o proteină recombinantă TIGIT (de exemplu, TIGIT uman) este imobilizată pe placă, unul dintre anticorpi este supus marcării fluorescente şi este evaluată capacitatea anticorpilor nemarcaţi de a concura pentru legarea cu anticorpul marcat. Adiţional sau în mod alternativ, poate fi utilizată analiza BIAcore pentru a evalua capacitatea anticorpilor de a cocura în mod încrucişat. Capacitatea unui anticorp testat de a inhiba legarea unui alt anticorp (de exemplu, anticorpul 14A6 sau 28H5, sau 31C6) cu TIGIT (de exemplu, TIGIT uman) demonstrează că anticorpul testat poate concura cu un alt anticorp (de exemplu, 14A6 sau 28H5, sau 31C6) pentru legarea la TIGIT (de exemplu, la TIGIT uman) şi, astfel, în unele cazuri poate să se lege la acelaşi epitop de pe TIGIT (de exemplu, TIGIT uman) ca şi anticorpul 14A6 sau 28H5, sau 31C6, sau la un epitop de suprapunere.
După cum s-a menţionat anterior, anticorpii şi fragmentele care se leagă la acelaşi epitop ca şi oricare dintre anticorpii anti-TIGIT sau fragmentele acestora de legare a antigenului, conform prezentei invenţii, fac parte, de asemenea, din prezenta invenţie. Totodată, anticorpii care se leagă la un epitop suprapunându-se epitopului legat de către oricare dintre anticorpii anti-TIGIT, conform invenţiei, fac parte, de asemenea, din prezenta invenţie. Există mai multe procedee disponibile pentru cartografierea anticorpilor pe antigenele ţintă, printre care: spectrometria de masă H/D-Ex, cristalografia cu raze X, analiza PEPSCAN şi mutageneza situs-direcţionată. De exemplu, HDX (Hidrogen Deuterium Exchange), cuplat cu proteoliza şi spectrometria de masă, poate fi utilizat pentru a determina epitopul unui anticorp pe un antigen specific Y. HDX-MS se bazează pe măsurarea precisă şi compararea gradului de încorporare a deuteriului de către un antigen la incubarea de sine stătătoare cu D2O şi în prezenţa anticorpului său la diferite intervale de timp. Deuteriul se schimbă cu hidrogenul pe scheletul amidic al proteinelor din zonele expuse, în timp ce regiunile antigenului, legat la anticorp, sunt protejate şi vor arăta mai puţin sau lipsă de schimb după analiza a fragmentelor proteolitice, efectuată prin intermediul LC-MS/MS. Exemplul 9 ilustrează utilizarea HDX pentru cartografierea epitopului legat de către anticorpul 14A6.
Lanţurile de imunoglobulină ale anticorpilor anti-TIGIT, conform prezentei invenţii, precum şi CDR-urile lor, includ, în calitate de exemple nelimitative, exemplele descrise în Tabelul 4 (SECV. ID NR. 1-30, 37-52, 57-83 sau 88-167). Prezenta invenţie se referă la orice polipeptidă cuprinzând secvenţele de aminoacizi sau constând din secvenţele de aminoacizi din SECV. ID NR. 1-30, 37-52, 57-83 sau 88-167, şi la nucleotidele recombinante care codifică astfel de polipeptide.
Domeniul de aplicare al prezentei invenţii include anticorpii anti-TIGIT izolaţi şi fragmentele acestora de legare a antigenului (de exemplu, anticorpii umanizaţi) conţinând o variantă a lanţului de imunoglobulină prezentat în documentul de faţă, de exemplu, oricare dintre SECV. ID NR. 7-30, 37-52, 63-64, 94-95 sau 124-133; caracterizat prin aceea că varianta posedă una sau mai multe dintre următoarele caracteristici: (i) se leagă la TIGIT uman; (ii) reacţionează încrucişat cu TIGIT cynomolgus şi rhesus; (iii) blochează legarea TIGIT uman la CD155 uman şi CD112 uman; (iv) sporeşte activarea celulelor T; (v) stimulează producţia de IL-2 şi ΙFνγ a celulelor T antigen-specifice; (vi) blochează inducţia de suprimare a activării celulelor T, indusă de legarea TIGIT cu liganzii înrudiţi CD155 şi CD112.
În alte variante de realizare, invenţia solicitată se referă la anticorpii sau fragmentele acestora de legare a antigenului care se leagă cu TIGIT uman (de exemplu, anticorpii umanizaţi) şi posedă domeniile VL şi domeniile VH cu cel puţin 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% sau 99% identitate de secvenţă cu SECV. ID NR. 7-30, 37-52, 63-64, 94-95 sau 124-133; caracterizat prin aceea că varianta posedă legarea şi proprietăţile pretinse, de exemplu: (i) se leagă la TIGIT uman cu o valoare a KD de la aproximativ 1x 0-9 M până la aproximativ 1x10-12 M, determinată prin rezonanţă plasmonică de suprafaţă (de exemplu, BIACORE) sau printr-o tehnică similară (de exemplu, KinExA sau OCTET); (ii) reacţionează încrucişat cu TIGIT cynomolgus şi rhesus; (iii) blochează legarea TIGIT uman la CD155 uman şi CD112 uman; (iv) sporeşte activarea celulelor T; (v) stimulează producţia de IL-2 şi IFNγ a celulelor T antigen-specifice a; (vi) blochează inducţia de suprimare a activării celulelor T, indusă prin legarea TIGIT cu liganzii înrudiţi CD155 şi CD112.
Expresiile „variante modificate conservativ” sau „substituţie conservativă” se referă la substituţiile de aminoacizi dintr-o proteină cu alţi aminoacizi posedând caracteristici similare (de exemplu, sarcină, dimensiune a lanţurilor laterale, hidrofobie/hidrofilie, conformaţie şi rigiditate a coloanei vertebrale etc.), astfel încât modificările pot fi realizate, în mod frecvent, fără a modifica activitatea biologică a proteinei. Persoanele specializate în domeniul de referinţă cunosc faptul că, de regulă, substituţiile unice de aminoacizi, efectuate în regiunile neesenţiale ale unei polipeptide, nu modifică în mod substanţial activitatea biologică (Watson et al. Molecular Biology of the Gene, The Benjamin/Cummings Pub. Co., 1987, p. 224 (ed. 4)). Totodată, substituţiile cu aminoacizi similari din punct de vedere structural sau funcţional sunt mai puţin susceptibile de a perturba activitatea biologică. Exemple de substituţii conservative sunt prezentate în Tabelul 1.
Exemple de substituţii conservative de aminoacizi
Tabelul 1
Resturi iniţiale Substituţii conservative Ala (A) Gly; Ser Arg (R) Lys; His Asn (N) Gln; His Asp (D) Glu; Asn Cys (C) Ser; Ala Gln (Q) Asn Glu (E) Asp; Gln Gly (G) Ala His (H) Asn; Gln Ile (I) Leu; Val Leu (L) Ile; Val Lys (K) Arg; His Met (M) Leu; Ile; Tyr Phe (F) Tyr; Met; Leu Pro (P) Ala Ser (S) Thr Thr (T) Ser Trp (W) Tyr; Phe Tyr (Y) Trp; Phe Val (V) Ile; Leu
Variantele funcţional-conservative ale anticorpilor conform invenţiei sunt, de asemenea, incluse în prezenta invenţie. Termenul „variante funcţional-conservative", aşa cum este utilizat în prezenta descriere, se referă la anticorpii sau fragmentele în care unul sau mai multe resturi de aminoacizi au fost înlocuite fără a modifica proprietatea preconizată, cum ar fi afinitatea şi/sau specificitatea antigenului. De asemenea, variantele includ, fără a se limita la aceasta, înlocuirea unui aminoacid cu un altul având proprietăţi similare, cum ar fi substituţiile conservative de aminoacizi din Tabelul 1. De asemenea, sunt prezentate polipeptidele izolate care cuprind domeniile VL ale anticorpilor anti-TIGIT, conform invenţiei (de exemplu, SECV. ID NR. 8, 25-30 şi 48-52), şi polipeptidele izolate care cuprind domeniile VH (de exemplu, SECV. ID NR. 7, 9-24 şi 37-47) ale anticorpilor anti-TIGIT, conform invenţiei, având până la 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30 sau mai multe substituţii de aminoacizi. Sunt prezentate, de asemenea, polipeptidele izolate care cuprind domeniile VL ale anticorpilor anti-TIGIT, conform prezentei invenţii (de exemplu, SECV. ID NR. 64), şi polipeptidele izolate cuprinzând domeniile VH (de exemplu, SECV. ID Nr. 63) ale anticorpilor anti-TIGIT conform invenţiei având până la 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30 sau mai multe substituţii de aminoacizi. De asemenea, sunt prezentate polipeptidele izolate care cuprind domeniile VL ale anticorpilor anti-TIGIT, conform invenţiei (de exemplu, SECV. ID NR. 95 şi 130-133), şi polipeptidele izolate cuprinzând domeniile VH (de exemplu, SECV. ID NR. 94 şi 124-129) ale anticorpilor anti-TIGIT, conform invenţiei, având până la 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 , 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30 sau mai multe substituţii de aminoacizi.
Într-o altă variantă de realizare, este prezentat un anticorp sau un fragment al acestuia de legare a antigenului care se leagă la TIGIT şi conţin domeniile VL şi domeniile VH cu cel puţin 99% 98%, 97%, 96%, 95%, 90%, 85%, 80% sau 75% identitate de secvenţă cu una sau mai multe dintre domeniile VL şi domeniile VH, descrise în prezenta invenţie, şi posedă o legătură specifică cu TIGIT. Într-o altă variantă de realizare, anticorpul de legare sau fragmentul acestuia de legare a antigenului, conform prezentei invenţii, cuprinde domeniile VL şi VH (cu şi fără secvenţă de semnal) având până la 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 , 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30 sau mai multe substituţii de aminoacizi, şi posedă o legătură specifică cu TIGIT.
Polinucleotide şi polipeptide
Prezenta invenţie se referă, totodată, la polinucleotidele codificând oricare dintre polipeptidele sau lanţurile de imunoglobulină ale anticorpilor anti-TIGIT şi fragmentele acestora de legare a antigenului, conform invenţiei. De exemplu, prezenta invenţie se referă la polinucleotidele care codifică aminoacizii descrişi în SECV. ID NR. 1-30, 37-52, 57-83 şi 88-167, precum şi la polinucleotidele care hibridizează cu aceştia şi, de asemenea, la orice polipeptidă codificată de către o astfel de polinucleotidă hibridizantă. Într-o variantă de realizare, invenţia se referă la o secvenţă de acid nucleic cuprinzând sau constând în mod esenţial din SECV. ID NR. 84 sau SECV. ID NR. 85.
De regulă, polinucleotidele hibridizează în condiţii de stringenţă redusă, moderată sau ridicată şi codifică anticorpii sau fragmentele acestora de legare a antigenului care menţin capacitatea de a se lega cu TIGIT (uman, maimuţe rhesus şi/sau maimuţe cynomolgus, de exemplu, Macaca fascicularis). Molecula primei polinucleotide este „capabilă de hibridizare” cu molecula celei de-a doua polinucleotide atunci când forma monocatenară a moleculei primei polinucleotide poate hibridiza cu molecula celei de-a doua polinucleotide în condiţii adecvate de temperatură şi forţă ionică a soluţiei (Sambrook şi colab.). Condiţiile de temperatură şi putere ionică determină „stringenţa” hibridizării. Condiţiile tipice de stringenţă scăzută de hibridizare includ 55°C, 5X SSC, 0,1% SDS şi absenţa formamidei; sau 30% formamidă, 5X SSC, 0,5% SDS la temperatura de 42°C. Condiţiile tipice de stringenţă moderată de hibridizare prezintă 40% formamidă, 5X sau 6X SSC şi 0,1% SDS la temperatura de 42°C. Condiţiile de stringenţă înaltă de hibridizare prezintă 50% formamidă, 5X sau 6X SSC la temperatura de 42°C sau, în mod opţional, la o temperatură mai ridicată (de exemplu, 57°C, 59°C, 60°C, 62°C, 63°C, 65°C sau 68°C). De regulă, SSC prezintă 0,15M NaCI şi 0,015M citrat de sodiu. Hibridizarea necesită ca cele două polinucleotide să conţină secvenţe complementare, deşi, în funcţie de stringenţa hibridizării, sunt posibile nepotriviri între baze. O stringenţă adecvată pentru hibridizarea polinucleotidelor depinde de lungimea polinucleotidelor şi de gradul de complementaritate, variabile, bine cunoscute în domeniul de referinţă. Cu cât este mai mare gradul de similaritate sau omologie dintre două secvenţe de nucleotide, cu atât este mai mare gradul de stringenţă, la care acizii nucleici se pot hibridiza. Pentru hibrizii cu o lungime mai mare de 100 de nucleotide, au fost dezvoltate ecuaţii pentru calcularea temperaturii de topire (de văzut Sambrook şi colab., mai sus, 9.50-9.51). Pentru hibridizarea cu polinucleotide mai scurte, de exemplu, oligonucleotide, condiţia nepotrivirilor devine mai importantă şi lungimea oligonucleotidei determină specificitatea acesteia (de văzut Sambrook şi colab., mai sus, 11,7-11,8).
Într-o altă variantă de realizare, este prezentată o polinucleotidă izolată, de exemplu, un ADN care codifică lanţurile polipeptidice ale anticorpilor izolaţi sau ale fragmentelor acestora de legare a antigenului, prezentate în descrierea de faţă. Într-o variantă de realizare, polinucleotida izolată codifică anticorpul sau fragmentul acestuia de legare a antigenului care cuprinde cel puţin un domeniu variabil (VL) al lanţului uşor al unei imunoglobuline mature, conform prezentei invenţii, şi/sau cel puţin un domeniu variabil (VH) al lanţului uşor al unei imunoglobuline mature, conform prezentei invenţii. În unele variante de realizare, polinucleotida izolată codifică atât lanţul uşor, cât şi lanţul greu pe o singură moleculă polinucleotidică, iar în alte variante de materializare, lanţurile uşoare şi lanţurile grele sunt codificate pe molecule polinucleotidice separate. Într-o altă variantă de materializare, polinucleotida codifică suplimentar o secvenţă de semnal.
Într-o variantă de realizare, invenţia se referă la o polinucleotidă izolată care codifică domeniul variabil (VH) al lanţului greu al anticorpului sau al fragmentului acestuia de legare a antigenului conţinând CDR-H1 (SECV. ID NR. 1), CDR-H2 (SECV. ID NR. 2) şi CDR-H3 (SECV. ID NR. 3 sau 79, sau 80, sau 81, sau 82, sau 83, sau 140).
Într-o variantă de materializare, invenţia se referă la o polinucleotidă izolată care codifică domeniul variabil (VL) al lanţului uşor al anticorpului sau al fragmentului acestuia de legare a antigenului cuprinzând CDR-L1 (SECV. ID NR. 4), CDR-L2 (SECV. ID NR. 5 sau 65, sau 66, sau 67, sau 68, sau 69, sau 70, sau 71, sau 72, sau 73, sau 141) şi CDR-L3 (SECV. ID NR. 6 sau 74, sau 75, sau 76, sau 77, sau 78).
Într-o variantă de realizare, invenţia se referă la o polinucleotidă izolată care codifică domeniul variabil (VH) al lanţului greu al imunoglobulinei din SECV. ID NR. 7.
Într-un variantă de realizare, invenţia se referă la o polinucleotidă izolată care codifică domeniul variabil (VL) al lanţului greu al imunoglobulinei din SECV. ID NR. 8.
Într-o variantă de realizare, invenţia se referă la o polinucleotidă izolată care codifică domeniul variabil (VH) al lanţului greu al imunoglobulinei din oricare dintre SECV. ID NR. 9-24 sau 37-47.
Într-o variantă de realizare, invenţia se referă la o polinucleotidă izolată care codifică domeniul variabil (VL) al lanţului greu al imunoglobulinei din oricare dintre SECV. ID NR. 25-30 sau 48-52.
Într-o variantă de realizare, invenţia se referă la o polinucleotidă izolată care codifică domeniul variabil (VH) al lanţului greu al anticorpului sau al fragmentului acestuia de legare a antigenului cuprinzând CDR-H1 (SECV. ID NR. 57), CDR-H2 (SECV. ID NR. 58) şi CDR-H3 (SECV. ID NR. 59).
Într-o variantă de realizare, invenţia se referă la o polinucleotidă izolată care codifică domeniul variabil (VL) al lanţului uşor al anticorpului sau al fragmentului acestuia de legare a antigenului cuprinzând CDR-L1 (SECV. ID NR. 60), CDR-L2 (SECV. ID NR. 61) şi CDR-L3 (SECV. ID NR. 62).
Într-o variantă de realizare, invenţia se referă la o polinucleotidă izolată care codifică domeniul variabil (VH) al lanţului greu al imunoglobulinei din SECV. ID NR. 63.
Într-o variantă de realizare, invenţia se referă la o polinucleotidă izolată care codifică domeniul variabil (VL) al lanţului greu al imunoglobulinei din SECV. ID NR. 64.
Într-o variantă de realizare, invenţia se referă la o polinucleotidă izolată care codifică domeniul variabil (VH) al lanţului greu al anticorpului sau al fragmentului acestuia de legare a antigenului cuprinzând CDR-H1 (SECV. ID NR. 88), CDR-H2 (SECV. ID NR. 89, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 134 sau 135) şi CDR-H3 (SECV. ID NR. 90).
Într-o variantă de realizare, invenţia se referă la o polinucleotidă izolată care codifică domeniul variabil (VL) al lanţului uşor al anticorpului sau al fragmentului acestuia de legare a antigenului cuprinzând CDR-L1 (SECV. ID NR. 91), CDR-L2 (SECV. ID NR. 92, 112 , 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122 sau 123) şi CDR-L3 (SECV. ID NR. 93).
Într-o variantă de realizare, invenţia se referă la o polinucleotidă izolată care codifică domeniul variabil (VH) al lanţului greu al imunoglobulinei din SECV. ID NR. 94.
Într-o variantă de realizare, invenţia se referă la o polinucleotidă izolată care codifică domeniul variabil (VL) al lanţului greu al imunoglobulinei din SECV. ID NR. 95.
Într-o variantă de realizare, invenţia se referă la o polinucleotidă izolată care codifică domeniul variabil (VH) al lanţului greu al imunoglobulinei din oricare dintre SECV. ID NR. 124-129.
Într-o variantă de realizare, invenţia se referă la o polinucleotidă izolată care codifică domeniul variabil (VL) al lanţului greu al imunoglobulinei din oricare dintre SECV. ID NR. 130-133.
Într-o variantă de realizare, invenţia se referă la o polinucleotidă izolată care codifică domeniul variabil (VH) al lanţului greu al imunoglobulinei din SECV. ID NR. 127.
Într-o variantă de realizare, invenţia se referă la o polinucleotidă izolată care codifică domeniul variabil (VH) al lanţului greu al imunoglobulinei din SECV. ID Nr. 128.
Într-o variantă de realizare, invenţia se referă la o polinucleotidă izolată care codifică domeniul variabil (VL) al lanţului greu al imunoglobulinei din SECV. ID NR. 130.
Într-o variantă de realizare, invenţia se referă la o polinucleotidă izolată care codifică domeniul variabil (VL) al lanţului greu al imunoglobulinei din SECV. ID NR. 132.
Într-o variantă de realizare, invenţia se referă la o polinucleotidă izolată care codifică domeniul variabil (VL) al lanţului greu al imunoglobulinei din SECV. ID NR. 133.
Prezenta invenţie se referă, de asemenea, la vectori, de exemplu, la vectori de expresie, cum ar fi plasmide, cuprinzând polinucleotidele izolate, conform invenţiei, caracterizate prin aceea că polinucleotida este legată în mod operaţional cu secvenţele de control recunoscute de către o celulă gazdă atunci când celula gazdă este transfectată de către vector. De asemenea, sunt prezentate celule gazdă cuprinzând un vector, conform prezentei invenţii, şi procedee de obţinere a anticorpului sau a fragmentului acestuia de legare a antigenului, sau polipeptida descrisă în documentul de faţă cuprinzând cultivarea unei celule gazdă care adăposteşte un vector de expresie sau un acid nucleic codificând lanţurile imunoglobulinice ale anticorpului sau ale fragmentului acestuia de legare a antigenului în mediul de cultură, şi izolarea anticorpului sau a fragmentului acestuia de legare a antigenului din celula gazdă sau din mediul de cultură.
De asemenea, prezenta invenţie se referă la polipeptide, de exemplu, la polipeptidele imunoglobulinei cuprinzând secvenţe de aminoacizi care sunt cel puţin cu circa 75% identice, 80% identice, mai preferabil cel puţin cu circa 90% identice şi cel mai preferabil cel puţin cu circa 95% identice (de exemplu, 95% 96%, 97%, 98%, 99%, 100%) cu secvenţele de aminoacizi ale anticorpilor prezentaţi în invenţia de faţă, atunci când comparaţia se realizează prin intermediul algoritmului BLAST, în care parametrii algoritmului sunt selectaţi ca să asigure cea mai mare corespundere între secvenţele respective pe întreaga lungime a secvenţelor respective de referinţă (de exemplu, prag aşteptare: 10; mărimea cuvântului: 3, corespunderea maximă de coincidenţe în intervalul unei solicitări: 0; matrice BLOSUM 62, costuri de acces: existenţă 11, extensie 1; ajustarea structurală condiţionată a matricii de puncte).
Identitatea secvenţei se referă la gradul în care aminoacizii din două polipeptide sunt identici în poziţii echivalente, atunci când cele două secvenţe sunt aliniate în mod optimal.
Algoritmii BLAST se utilizează frecvent pentru analiza secvenţelor: (Altschul et al. FEBS J., no 272 (20), 2005, p. 5101-5109; Altschul S.F. et al. J. Mol. Biol., no 215, 1990, p. 403-410; Gish, W. et al. Nature Genet., no 3, 1993, p. 266-272; Madden T.L. et al. Meth. Enzymol., no 266, 1996, p. 131-141; Madden T.L. et al. Meth. Enzymol., no 266, 1996, p. 131-141; Zhang, J. et al. Genome Res., no 7, 1997, p. 649-656; Wootton, J.C. et al. Comput. Chem., no 17, 1993, p. 149-163; Hancock J.M. et al. Comput. Appl. Biosci., no 10, 1994, p. 67-70; Dayhoff M.O. et al. "A model of evolutionary change in proteins." in Atlas of Protein Sequence and Structure, vol 5, supl. 3. M.O. Dayhoff (ed.), Natl. Biomed. Res. Found., Washington, DC., 1978, p. 345-352; Schwartz R.M. et al. "Matrices for detecting distant relationships." in Atlas of Protein Sequence and Structure, vol 5, supl. 3. M.O. Dayhoff (ed.), Natl. Biomed. Res. Found., Washington, DC. 1978, p. 353-358; Altschul S.F. J. Mol. Biol., no 219, 1991, p. 555-565; States D.J. et al. Methodes, no 3, 1991, p. 66-70; Henikoff S. et al. Proc. Natl. Acad. Sci. USA, no 89, 1992, p. 10915-10919; Altschul S.F. et al. J. Mol. Evol., no 36, 1993, p. 290-300; Karlin S. et al. Proc. Natl. Acad. Sci. USA, no 87, 1990, p. 2264-2268; Karlin S. et al. Proc. Natl. Acad. Sci. USA, no 90, 1993, p. 5873-5877; Dembo A. et al. Ann. Prob., no 22, 1994, p.2022-2039; Altschul S.F. "Evaluating the statistical significance of multiple distinct local alignments." in Theoretical and Computational Methods in Genome Research (S. Suhai, ed.), Plenum, New York; 1997, p. 1-14).
Afinitatea legării
Cu titlu de exemplu, însă fără a se limita la acesta, anticorpii şi fragmentele acestora de legare a antigenului, descrişi în prezenta invenţie, pot lega TIGIT uman cu o valoare a KD de cel puţin circa 1x10-9 M (şi anume, o valoare a KD de 1x10-9 M sau mai mică), determinată prin rezonanţă plasmonică de suprafaţă (de exemplu, BIACORE) sau printr-o tehnică similară (de exemplu, KinExA sau OCTET). Într-o variantă de realizare, anticorpii şi fragmentele acestora de legare a antigenului, dezvăluiţi în descierea de faţă, pot lega TIGIT uman cu o valoare a KD de la cel puţin aproximativ 1x10-9 M până la aproximativ 1x10-12 M, determinată prin rezonanţă plasmonică de suprafaţă (de exemplu, BIACORE) sau printr-o tehnică similară (de exemplu, KinExA sau OCTET). Într-o variantă de materializare, anticorpii şi fragmentele acestora de legare a antigenului, dezvăluiţi în documentul de faţă, pot lega TIGIT uman cu o valoare a KD de la aproximativ 1x100-9 M până la aproximativ 1x10-12 M, determinată prin rezonanţă plasmonică de suprafaţă (de exemplu, BIACORE) sau printr-o tehnică similară (de exemplu, KinExA sau OCTET). Într-o variantă de materializare, anticorpii şi fragmentele acestora de legare a antigenului, dezvăluiţi în descierea de faţă, pot lega TIGIT uman cu o valoare a KD de cel puţin aproximativ 50 pM (şi anume, cu o valoare a KD de aproximativ 50 pM sau mai mică), determinată prin intermediul BIACORE sau al unei tehnici similare. Într-o variantă, anticorpii şi fragmentele acestora de legare a antigenului, dezvăluiţi în lucrarea de faţă, pot lega TIGIT uman cu o valoare a KD de cel puţin circa 10 pM (şi anume, cu o valoare a KD de aproximativ 10 pM şi mai mică), determinată prin BIACORE sau printr-o tehnică similară. Într-o variantă de realizare, anticorpii şi fragmentele acestora de legare a antigenului, conform invenţiei, pot lega TIGIT uman cu un KD de la aproximativ 50 pM până la aproximativ 1 pM, precum a fot determinat prin BIACORE sau printr-o tehnică similară.
Activarea celulelor imunitare
În unele variante de materializare, anticorpii sau fragmentele acestora de legare a antigenului, conform invenţiei, sporesc activitatea celulelor imune. Creşterea activităţii celulelor imune poate fi detectată folosind orice metodă cunoscută în domeniul de referinţă. Într-o variantă de realizare, creşterea activităţii celulelor imune poate fi detectată prin măsurarea proliferării celulelor imune. De exemplu, creşterea activităţii celulelor T poate fi detectată prin măsurarea proliferării celulelor T sau a evenimentelor de transducţie a semnalului, cum ar fi fosforilarea tirozinică a receptorilor imuni sau a kinazelor din aval care transmit semnalele spre regulatorii transcripţionali. În alte exemple de realizare, creşterea activităţii celulelor imune poate fi detectată prin măsurarea funcţiei citotoxice a celulelor CTL sau NK pe celulele ţintă specifice sau pe răspunsurile citokinei ΙFνγ, care sunt asociate cu stimularea imunităţii antitumorale. În alte variante de realizare, creşterea activităţii celulelor imune poate fi detectată prin măsurarea activării celulelor T ex vivo într-o probă obţinută de la subiect. Într-o variantă de realizare, creşterea activităţii celulelor T este determinată prin: (i) măsurarea producţiei induse SEB (enterotoxină B Staphylococcus) a uneia sau a mai multor citokine pro-inflamatorii, selectate din grupul format din: IL-2, TNFα, IL-17, IFNγ, IL-1β, GM-CSF, RANTES, IL-6, IL-8, IL-5 şi IL-13; sau (ii) prin măsurarea reacţiilor limfocitare mixte sau prin stimularea directa cu mAb anti-CD3 a transducţiei semnalului receptorului celulelor T (TCR) pentru a induce producerea citokinei, selectate din grupul constând din: IL-2, TNFα, IL-17, IFNγ, IL-1β, GM-CSF, RANTES, IL-6, IL-8, IL-5 şi IL-13. În anumite variante de realizare, anticorpul anti-TIGIT sau fragmentul acestuia de legare a antigenului, conform prezentei invenţii, poate stimula producţia de IL-2 şi/sau IFNγ a celulelor T antigen-specifice de cel puţin 1,5 ori.
Prezenta invenţie se referă la anticorpii antagonişti anti-TIGIT, la fragmentele acestora de legare a antigenului şi la procedeele de utilizare a lor, de exemplu, la anticorpii antagonişti anti-TIGIT umanizaţi şi la fragmentele acestora. Anticorpul antagonist anti-TIGIT sau fragmentul acestuia de legare a antigenului antagonizează activitatea TIGIT uman, de exemplu, prin inhibarea legării TIGIT cu CD155 şi CD112, şi inhibarea transducţiei semnalului ITIM funcţional de către TIGIT în procesul de legare la CD155 şi CD112. Măsurarea activităţii antagoniste anti-TIGIT poate fi evaluată demonstrând blocarea supresiei celulelor T după activarea TCR, indusă de ligaturarea TIGIT cu liganzii înrudiţi CD155 şi CD112. Astfel, într-o variantă de realizare a răspunsurilor sporite, tratamentul cu anticorpi antagonişti anti-TIGIT este capabil de a salva răspunsurile IL-2 până la nivelurile observate în celulele T, non-reprimate prin inducţia TIGIT prin intermediul CD155 sau CD112. La un nivel de activare mai preferabil, după tratamentul cu un anticorp antagonist anti-TIGIT răspunsurile pot creşte până la un nivel mai mare decât răspunsurile celulelor T non-reprimate prin intermediul CD155 sau CD112.
Capacitatea anticorpilor anti-hTIGIT de a bloca legarea cu hCD155 şi hCD112
În unele variante de realizare, anticorpii anti-TIGIT sau fragmentele acestora de legare a antigenului din invenţia de faţă sunt capabili de a bloca legarea TIGIT uman la CD155 uman şi CD112 uman. Capacitatea de a bloca legarea TIGIT uman la CD155 uman şi CD112 uman poate fi determinată folosind orice procedeu cunoscut în domeniul de referinţă. Într-o variantă de realizare, capacitatea anticorpilor de a bloca legarea TIGIT uman la CD155 uman şi CD112 uman este determinată cu ajutorul unui test ELISA, după cum este descris în Exemplul 2.
Procedee de obţinere a anticorpilor şi a fragmentelor acestora de legare a antigenului
Celulele hibridoma care produc anticorpi anti-TIGIT monoclonali parentali (de exemplu, de şobolan sau de şoarece) sau fragmente ale acestora de legare a antigenului, discutaţi în invenţia de faţă, pot fi obţinuţi prin procedeele cunoscute în domeniul de referinţă. Astfel de hibridoame izolate sunt parte a prezentei invenţii. Aceste procedee includ, dar nu se limitează la acestea, procedeul hibridoma (Kohler et al. Nature, no 256, 1975, p. 495-497), precum şi procedeul trioma (Hering et al. Biomed. Biochem. Acta., no 47, 1988, p. 211-216; Hagiwara et al. Hum. Antibod. Hybridomas, no 4, 1993, p. 15), procedeul hibridoma cu celule B umane (Kozbor et al. Immunology Today, no 4, 1983, p. 72; Cote et al. Proc. Natl. Acad. Sci. USA, no 80, 1983, p. 2026-2030), procedeul hibridoma-EBV (Cole et al. Monoclonal Antibodies and Cancer Therapy, Alan R. Liss, Inc., 1985, p. 77-96) şi electrofuziunea pe bază de câmp electric folosind un electroporator de fuziune a celuleor cu cameră mare de la Cyto Pulse (Cyto Pulse Sciences, Inc., Glen Burnie, Md). De preferinţă, splenocitele de şoarece sunt izolate şi fuzionate cu ajutorul PEG sau prin electrofuziune cu o linie de celule de mielom de şoarece bazate pe protocoale standard. Hibridoamele rezultate pot fi mai apoi examinate pentru producerea de anticorpi antigen-specifici. De exemplu, suspensiile de celule separate de limfocite splenice de la şoareci imunizaţi pot fi fuzionate cu o şesime din numărul de celule non-secretoare de mielom de şoarece P3X63-Ag8.653 (ATCC, CRL 1580) cu ajutorul 50% PEG. Celulele pot fi placate la aproximativ 2x 05 celule/ml pe o placă de microtitrare cu fundul plat, cu o incubare ulterioară de două săptămâni într-un mediu selectiv conţinând 20% ser Clona fetal, 18% de mediu condiţionat „653”, 5% origen (IGEN), 4 mM L-glutamină, 1 mM L-glutamină, 1 mM piruvat de sodiu, 5 mM HEPES, 0,055 mM 2-mercaptoetanol, 50 unităţi/ml penicilină, 50 mg/ml streptomicină, 50 mg/ml gentamicină şi 1X HAT (Sigma, HAT se adaugă peste 24 de ore după fuziune). După două săptămâni, celulele pot fi cultivate într-un mediu în care HAT este substituit cu HT. După aceasta, anumite godeuri pot fi analizate prin testul ELISA pentru anticorpii monoclonali IgG anti-TIGIT. După ce se produce o creştere extensivă a hibridomei, mediul poate fi observat, de regulă, peste 10...14 zile. Hibridoamele secretoare de anticorpi pot fi replantate, verificate din nou, şi dacă sunt încă pozitive pentru IgG umană, anticorpii monoclonali anti-TIGIT pot fi subclonaţi cel puţin de două ori prin diluţie limitativă. După aceasta, subclonele stabile pot fi cultivate in vitro pentru a genera cantităţi mici de anticorpi în mediul tisular de cultură pentru caracterizare.
Astfel, prezenta invenţie include procedeele de producere a unui anticorp anti-TIGIT sau a unui fragment al acestuia de legare a antigenului, conform invenţiei, cuprinzând cultivarea celulelor de hibridom care exprimă anticorpul sau fragmentul acestuia în condiţii favorabile pentru o astfel de expresie şi, în mod opţional, izolarea anticorpului sau a fragmentului din hibridom şi/sau din mediul de creştere (de exemplu, mediul de cultură celulară).
Anticorpii anti-TIGIT, devăluiţi în prezenta invenţie, pot fi produşi, de asemenea, într-un mod recombinant (de exemplu, în sistemul de expresie E. coli/T7, în sistemul de expresie a celulelor de mamifer sau în sistemul de expresie a eucariotelor inferioare). În această variantă de realizare, acizii nucleici care codifică moleculele de imunoglobulinină ale anticorpilor, conform invenţiei (de exemplu, VH sau VL) pot fi inseraţi într-o plasmidă pe bază de pET şi exprimaţi în sistemul E. coli/T7. De exemplu, prezenta invenţie se referă la procedee de exprimare a unui anticorp sau a unui fragment al acestuia de legare a antigenului, sau a unui lanţ de imunoglobulină al acestuia într-o celulă gazdă (de exemplu, celula gazdă bacteriană, cum ar fi E. coli, cum ar fi BL21 sau BL21DE3) cuprinzând exprimarea ARN-polimerazei T7 într-o celulă cuprinzând, de asemenea, o polinucleotidă care codifică lanţul de imunoglobulină, legat în mod funcţional la un promotor T7. De exemplu, într-o variantă de realizare a invenţiei, o celulă gazdă bacteriană, cum ar fi E. coli, include o polinucleotidă care codifică gena ARN-polimerazei T7, legată în mod funcţional la un promotor lac şi expresia polimerazei şi a lanţului este indusă prin incubarea celulei gazdă cu IPTG (izopropil-beta-D-tiogalactopiranozidă).
Există mai multe procedee de producere a anticorpilor recombinaţi, cunoscute în domeniul de referinţă. Un exemplu de procedeu de producere recombinantă a anticorpilor este dezvăluit în literatura brevetară (US 4816567).
Transformarea poate fi realizată prin orice procedeu cunoscut de introducere a polinucleotidelor într-o celulă gazdă. Procedeele de introducere a polinucleotidelor heterologe în celule de mamifer sunt bine cunoscute în domeniul discutat şi includ transfecţia mediată de dextran, precipitarea cu fosfat de calciu, transfecţia mediată de polibren, fuziunea protoplastelor, electroporarea, încapsularea polinucleotidei(lor) în lipozomi, injectarea biolistică şi microinjectarea directă a ADN-ului în nuclee. Totodată, moleculele de acid nucleic pot fi introduse în celulele de mamifer prin vectorii virali. Procedeele de transformare a celulelor sunt bine cunoscute în domeniul de referinţă al tehnicii (US 4399216; US 4912040; US 4740461; US 4959455).
Astfel, prezenta invenţie se referă la procedeele recombinante de producere a unui anticorp anti-TIGIT sau a unui fragment al acestuia de legare a antigenului, conform prezentei invenţii, sau a unui lanţ imunoglobulinic al acestuia cuprinzând introducerea unei polinucleotide care codifică una sau mai multe lanţuri de imunoglobulină ale anticorpului sau ale fragmentului (de exemplu, lanţul greu şi/sau lanţul uşor de imunoglobulină); cultivarea celulei gazdă (de exemplu, CHO sau Pichia sau Pichia pastoris) în condiţii favorabile pentru o astfel de expresie şi, în mod opţional, izolarea anticorpului sau a fragmentului, sau a lanţului din celula gazdă şi/sau din mediul în care este cultivată celula gazdă.
Anticorpii anti-TIGIT pot fi, de asemenea, sintetizaţi prin oricare dintre procedeele prezentate în brevetul US 6331415.
Celulele gazdă eucariote şi procariote incluzând celulele de mamifer în calitate de gazdă pentru exprimarea anticorpilor sau a fragmentelor, sau a lanţurilor de imunoglobulină, devăluite în invenţia propusă, sunt bine cunoscute în domeniul de referinţă şi includ o multitudine de linii celulare imortalizate, disponibile în American Type Culture Collection (ATCC). Acestea includ, inter alia, celule ovariene de hamster chinezesc (CHO), NSO, celule SP2, celule HeLa, celule de rinichi de la pui de hamster (BHK), celule de rinichi de maimuţă (COS), celule de carcinom hepatocelular uman (de exemplu, Hep G2), celule A549, celule 3T3, celule HEK-293 şi o serie de alte linii celulare. Celulele gazdă de mamifer includ celule umane, de şoarece, şobolan, câine, maimuţă, porc, capră, bovină, cal şi hamster. Liniile celulare, preferate în mod deosebit, sunt selectate prin determinarea liniilor celulare care au niveluri înalte de exprimare. Alte linii celulare, care pot fi folosite, sunt liniile celulare de insecte, cum ar fi celulele Sf9, celulele amfibiene, celulele bacteriene, celulele de plante şi celulele fungice. Celulele fungice includ celule de drojdii şi celule de fungi filamentoşi, inclusiv, de exemplu, Pichia pastoris, Pichia finlandica, Pichia trehalophila, Pichia koclamae, Pichia membranaefaciens, Pichia minuta (Ogataea minuta, Pichia lindneri), Pichia opuntiae, Pichia thermotolerans, Pichia salictaria, Pichia guercuum, Pichia pijperi, Pichia stiptis, Pichia methanolica, Pichia sp., Saccharomyces cerevisiae, Saccharomyces sp., Hansenula polymorpha, Kluyveromyces sp., Kluyveromyces lactis, Candida albicans, Aspergillus nidulans, Aspergillus niger, Aspergillus oryzae, Trichoderma reesei, Chrysosporium lucknowense, Fusarium sp., Fusarium gramineum, Fusarium venenatum, Physcomitrella patens şi Neurospora crassa. Pichia sp., orice Saccharomyces sp., Hansenula polymorpha, orice Kluyveromyces sp., Candida albicans, orice Aspergillus sp., Trichoderma reesei, Chrysosporium lucknowense, orice Fusarium sp., Yarrowia lipolytica şi Neurospora crassa. Când vectorii de expresie recombinanţi care codifică lanţul greu sau o porţiune a acestuia de legare a antigenului, sau un fragment al acestuia, lanţul uşor şi/sau fragmentul acestuia de legare a antigenului sunt introduşi în celule gazdă de mamifere, anticorpii sunt obţinuţi prin cultivarea celulelor gazdă o perioadă de timp suficientă pentru a permite exprimarea anticorpului sau a fragmentului, sau a lanţului din celulele gazdă, sau secreţia în mediul de cultură în care sunt crescute celulele gazdă.
Anticorpii şi fragmentele acestora de legare a antigenului, şi lanţurile de imunoglobulină pot fi izolate din mediul de cultură folosind procedeele standard de purificare a proteinelor. Totodată, expresia anticorpilor şi a fragmentelor acestora de legare a antigenului şi a lanţurilor de imunoglobulină, în conformitate cu invenţia de faţă, (sau a altor părţi din acestea) din liniile celulare de producţie poate fi îmbunătăţită utilizând o serie de tehnici cunoscute. De exemplu, sistemul de expresie a genei glutamin sintetază (sistemul GS) este o abordare general recunoscută pentru ameliorarea exprimării în anumite condiţii. Sistemul GS este discutat în integritate sau parţial în literatura brevetară (EP 0216846; EP 0256055; EP 0323997; EP 89303964.4). Astfel, într-un exemplu de realizare a invenţiei, celulele gazdă de mamifer (de exemplu, CHO) sunt lipsite de gena glutamin sintetază şi acestea sunt cultivate în absenţa glutaminei într-un mediu unde polinucleotida care codifică lanţul de imunoglobulină cuprinde, totuşi, o genă glutamin sintetază complementând lipsa genei în celula gazdă.
Prezenta invenţie se referă la procedee de purificare a unui anticorp anti-TIGIT sau a unui fragment al acestuia de legare a antigenului, conform prezentei invenţii, cuprinzând administrarea unei probe, care include anticorpul sau fragmentul, într-un mediu de purificare (de exemplu, un mediu cu schimb de cationi, un mediu cu schimb de anioni, un mediu cu schimb hidrofob, un mediu de purificare a afinităţii (de exemplu, proteina A, proteina G, proteina A/G, proteina L)) şi fie colectarea anticorpului purificat sau a fragmentului din fracţiunea filtratului respectivei probe care nu se leagă la mediu; fie eliminarea fracţiunii filtratului şi eluarea anticorpulului sau a fragmentului legat din acest mediu şi colectarea eluatului. Într-o variantă de realizare a invenţiei, mediul se află într-o coloană pe care se aplică proba. Într-o variantă de realizare, procedeul de purificare se efectuează după exprimarea recombinantă a anticorpului sau a fragmentului în celula gazdă, de exemplu, caracterizat prin aceea că celula gazdă este mai întâi lizată şi apoi, în mod opţional, lizatul este purificat de materialele insolubile înainte de purificarea sa pe un mediu.
De regulă, glicoproteinele, produse într-o anumită linie celulară sau un animal transgenic, posedă un model de glicozilare caracteristic pentru glicoproteinele produse în linia celulară sau animalul transgenic. Prin urmare, modelul specific de glicozilare a unui anticorp depinde de linia celulară particulară sau de animalul transgenic folosite pentru producerea anticorpului. Totuşi, toţi anticorpii codificaţi de moleculele de acid nucleic, prezentate în documentul de faţă sau cuprinzând secvenţele de aminoacizi prezentate în documentul de faţă, fac parte din prezenta invenţie, independent de modelul de glicozilare pe care îl pot avea anticorpii. În mod similar, în unele variante particulare de realizare, anticorpii cu un model de glicozilare cuprinzând doar N-glicani non-fucozilaţi pot oferi avantaje, deoarece s-a dovedit că aceşti anticorpi prezintă, de regulă, o eficacitate mai mare decât omologii lor fucozilaţi atat in vitro, cât şi in vivo (Shinkawa et al. J. Biol. Chem., no 278, 2003, p. 3466-3473; US 6946292; US 7214775). Aceşti anticorpi cu N-glicani non-fucozilaţi nu sunt susceptibili de a fi imunogeni, deoarece structurile lor de carbohidraţi constituie o componentă normală a populaţiei care există în IgG din serul uman.
Prezenta invenţie se referă la anticorpii policlonali anti-TIGIT şi la fragmentele acestora de legare a antigenului, de exemplu, la o compoziţie care cuprinde o multitudine de anticorpi anti-TIGIT şi fragmente conţinând unul sau mai mulţi anticorpi anti-TIGIT sau fragmente ale acestora de legare a antigenului, conform prezentei invenţii, şi la procedeele de utilizare a lor. Un anticorp policlonal este un anticorp care a fost obţinut împreună cu unul sau cu câţiva alţi anticorpi neidentici sau în prezenţa lor. De regulă, anticorpii policlonali sunt obţinuţi din colecţii de diferite limfocite B, de exemplu, din limfocite B ale unui animal, tratat cu un imunogen care prezintă interes, producând o populaţie de diferiţi anticorpi, dar care cu toţii sunt orientaţi împotriva imunogenului. De regulă, anticorpii policlonali sunt obţinuţi direct de la un animal imunizat, de exemplu, din splină, ser sau lichid de ascită.
Prezenta invenţie se referă la anticorpii bifuncţionali şi bispecifici şi la fragmentele de legare a antigenului având specificitate de legare pentru TIGIT şi pentru un alt antigen, cum ar fi, de exemplu, PD-1 sau PD-L1, sau LAG-3, şi la procedeele de utilizare a acestora. Într-un exemplu de realizare a invenţiei, lanţurile anti-TIGIT conţin oricare dintre secvenţele VH/VL, descrise în Tabelul 4, iar lanţurile PD1 conţin secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 33 şi 34 sau din SECV. ID NR. 35 şi 36 (sau un fragment de legare a antigenului conform oricăreia dintre secvenţele menţionate mai sus). Un anticorp bifuncţional sau bispecific constituie un anticorp hibrid artificial având două perechi diferite de lanţuri grele/lanţuri uşoare şi două situsuri diferite de legare. Anticorpii bispecifici pot fi obţinuţi printr-o varietate de procedee, inclusiv prin fuziunea hibridoamelor sau prin legarea fragmentelor Fab' (Songsivilai et al. Clin. Exp. Immunol., no 79, 1990, p. 315-321; Kostelny et al. J. Immunol., no 148, 1992, p. 1547-1553). Totodată, anticorpii bispecifici pot fi formaţi ca „diacorpi” (Holliger et al. PNAS USA, no 90, 1993, p. 6444-6448) sau ca „janusins” (Traunecker et al. EMBO J., no 10, 1991, p. 3655-3659; Traunecker et al. Int. J. Cancer Suppl., no 7, 1992, p. 51-52).
În afară de aceasta, prezenta invenţie se referă, de asemenea, la fragmente anti-TIGIT de legare a antigenului ale anticorpilor anti-TIGIT, dezvăluiţi în documentul de faţă. Fragmentele anticorpilor includ fragmente F(ab)2, care pot fi obţinute prin scindarea enzimatică a unei IgG, de exemplu, cu ajutorul pepsinei. Fragmentele Fab pot fi obţinute, de exemplu, prin reducerea F(ab)2 cu ditiotreitol sau mercaptoetilamină.
Imunoglobulinele pot fi atribuite unor clase diferite, în funcţie de secvenţele de aminoacizi ale domeniului constant al lanţurilor lor grele. Există cel puţin cinci clase principale de imunoglobuline: IgA, IgD, IgE, IgG si IgM şi câteva dintre acestea pot fi divizate mai departe în subclase (izotipuri), de exemplu, IgG1, lgG2, lgG3 şi lgG4; IgA1 şi IgA2. Invenţia în cauză se referă la anticorpi şi la fragmente ale acestora de legare a antigenului din oricare dintre aceste clase sau subclase.
Într-o variantă de realizare, anticorpul sau fragmentul de legare a antigenului cuprinde o regiune constantă a lanţului greu, de exemplu, o regiune constantă umană, precum regiunea constantă a lanţului greu γ1, γ2, γ3, sau γ4 uman ori o variantă a acesteia. Într-o altă variantă de realizare, anticorpul sau fragmentul de legare a antigenului cuprinde o regiune constantă a lanţului uşor, de exemplu, regiunea constantă a lanţului uşor uman, cum ar fi regiunea lanţului uşor lambda sau kappa uman sau o variantă a acesteia. Cu titlu de exemplu, însă fără limitare la acesta, regiunea constantă a lanţului greu uman poate prezenta γ4 şi regiunea constantă a lanţului uşor uman poate prezenta kappa. Într-o variantă alternativă de realizare, regiunea Fc a anticorpului constituie γ4 cu o mutaţie Ser228Pro (Schuurman, J. şi colab. Mol. Immunol., no 38, 2001, p. 1-8).
Într-o variantă de realizare, anticorpul sau fragmentul de legare a antigenului cuprinde regiunea constantă a lanţului greu al subtipului IgG1.
În unele exemple de realizare, diverse domenii constante pot fi alipite la regiunile VH şi VL umanizate, obţinute din CDR-urile prezentate în invenţia de faţă. De exemplu, dacă o anumită utilizare preconizată a unui anticorp (sau fragment), conform prezentei invenţii, necesită funcţii efectoare modificate, poate fi utilizat un domeniu constant al lanţului greu, altul decât IgG1 uman, sau pot fi utilizat hibridul IgG1/IgG4.
Cu toate că anticorpii umani lgG1 asigură o perioadă lungă de înjumătăţire şi funcţii efectoare, cum ar fi activarea complementului şi citotoxicitatea celulară dependentă de anticorp, astfel de activităţi pot fi nedorite pentru toate modurile de utilizare ale anticorpului. În astfel de cazuri, poate fi utilizat, de exemplu, domeniul constant al IgG4 uman. Prezenta invenţie se referă la anticorpii anti-TIGIT şi la fragmentele acestora de legare a antigenului cuprinzând domeniul constant IgG4, de exemplu, la anticorpii antagonişti umanizaţi anti-TIGIT şi la fragmentele acestora, şi la procedeele de utilizare a lor. Într-o variantă de realizare, domeniul constant IgG4 poate să difere de domeniul constant IgG4 uman nativ (Swiss-Prot Accession Nr. P01861.1) în poziţia corespunzătoare poziţiei 228 din sistemul UE şi poziţiei 241 din sistemul KABAT, caracterizat prin aceea că Ser108 nativ este înlocuit cu Pro pentru a preveni o potenţială legătură disulfidică intercatenară dintre Cys 106 şi Cis 109 (care corespund poziţiilor Cis 226 şi Cis 229 din sistemul UE şi poziţiilor Cys 239 şi Cys 242 din sistemul KABAT), care poate afecta formarea legăturii disulfidice intracatenare corecte (Angal et al. Mol. Imunol., no 30, 1993, p. 105). În alte cazuri, poate fi utilizat domeniul constant IgG1 modificat cu scopul de a creşte timpul de înjumătăţire sau de reducere a funcţiei efectoare.
Ingineria anticorpilor
În continuare, sunt incluse variante de realizare în care anticorpii anti-TIGIT şi fragmentele acestora de legare a antigenului prezintă anticorpi constriuţi pentru a include modificări în resturile cadru din interiorul domeniilor variabile ale unui anticorp monoclonal parental (de exemplu, de şoarece sau de şobolan), de exemplu, pentru a îmbunătăţi proprietăţile anticorpului sau ale fragmentului. În mod tipic, aceste modificări ale cadrului sunt efectuare pentru a reduce imunogenitatea anticorpului sau fragmentului. Acest lucru este realizat, de regulă, prin înlocuirea resturilor care nu se referă la CDR-urile din domeniile variabile (şi anume, ale resturilor cadru) într-un anticorp parental (de exemplu, de rozătoare) sau într-un fragment cu resturi similare din repertoriul imun al speciilor, în care urmează să fie utilizat anticorpul, de exemplu, resturi umane în cazul unui remediu terapeutic pentru un subiect uman. Un astfel de anticorp sau fragment este desemnat ca un anticorp sau fragment „umanizat”. În unele cazuri, este de dorit să fie mărită afinitatea sau să fie modificată specificitatea unui anticorp creat (de exemplu, unui anticorp umanizat). Unul dintre procedee constă în „mutageneza inversă” a unuia sau a mai multor resturi cadru până la secvenţa liniei germinale corespunzătoare. Mai concret, un anticorp sau un fragment care a fost supus unei mutaţii somatice poate conţine resturi cadru care diferă de secvenţa liniei germinale din care este derivat anticorpul. Aceste resturi pot fi identificate prin compararea secvenţelor cadru ale anticorpului sau fragmentului cu secvenţele liniei germinale din care provine anticorpul sau fragmentul. Un alt procedeu constă în revenirea la restul iniţial parental (de exemplu, care provine de la rozătoare) în una sau în mai multe poziţii ale anticorpului construit (de exemplu, umanizat), de exemplu, pentru a restabili afinitatea de legare care poate fi pierdută în procesul de înlocuire a resturilor cadru (US 5693762; US 5585089; US 5530101).
În anumite exemple de realizare, anticorpii anti-TIGIT şi fragmentele acestora de legare a antigenului sunt construite (de exemplu, umanizate) pentru a include modificări în structură şi/sau CDR-uri cu scopul de a îmbunătăţi proprietăţile acestora. Astfel de modificări create pot fi operate în baza modelării moleculare. Un model molecular al regiunii variabile pentru secvenţa parentală (non-umană) a anticorpului poate fi construit pentru înţelegerea caracteristicilor structurale ale anticorpului şi utilizat pentru a identifica potenţialele regiuni ale anticorpului care pot interacţiona cu antigenul. CDR-urile convenţionale se bazează pe aliniamentul secvenţelor de imunoglobulină şi identificarea regiunilor variabile (Kabat et al. National Institutes of Health, Bethesda, Md.; 5th ed.; NIH Publ. No. 91-3242, 1991; Kabat et al. Adv. Prot. Chem., no 32, 1978, p. 1-75; Kabat et al. J. Biol. Chem., no 252, 1977, p. 6609-6616). Chothia şi colaboratorii au examinat minuţios conformaţiile buclelor în structurile cristaline ale anticorpilor şi au propus bucle hipervariabile (Chothia et al. J. Mol. Biol., no 196, 1987, p. 901-917; Chothia et al. Nature, no 342, 1989, p. 878-883). Există deosebiri între regiuni, clasificate ca „CDR-uri” şi „bucle hipervariabile”. În studiile ulterioare (Raghunathan et al. J. Mol. Recog., vol 25, no 3, 2012, p. 103-113) au fost analizate mai multe complexe cristaline de anticorp-antigen şi a fost depistat faptul că regiunile de legare a antigenului din anticorpi nu sunt neapărat strict conforme resturilor „CDR” sau buclelor „hypervarible”. Modelul molecular pentru regiunea variabilă a anticorpului non-uman poate fi utilizat în calitate de instrucţiune pentru procesul de selectare a regiunilor care în mod potenţial se pot lega la antigen. În practică, regiunile potenţiale de legare la antigen, bazate pe model, diferă de buclele „CDR” sau „hipervariabile” convenţionale. Pentru modelarea moleculară poate fi utilizat software ştiinţific comercial, precum este MOE (Chemical Computing Group). Regiunile cadru umane pot fi selectate pe baza celor mai bune coincidenţe cu secvenţa non-umană, atât în regiunile cadru, cât şi în CDR-uri. Pentru FR4 (regiunea cadru 4) din VH, regiunile VJ din liniile germinale umane sunt comparate cu regiunea non-umană corespunzătoare. În cazul FR4 (regiunea cadru 4) din VL, regiunile J-kappa şi J-lambda ale secvenţelor liniei germinale umane sunt comparate cu regiunea non-umană corespunzătoare. După identificarea regiunilor cadru umane adecvate, CDR-urile sunt grefate în regiunile cadru umane selectate. În unele cazuri, anumite resturi de pe suprafaţa segmentului VL-VH pot fi consevate aşa cum sunt ele în secvenţa non-umană (parentală). Modelele moleculare pot fi, de asemenea, utilizate pentru identificarea resturilor care pot modifica în mod potenţial conformaţiile CDR şi, astfel, legarea la antigen. În unele cazuri, aceste resturi sunt conservate ca în secvenţa neumană (parentală). Modelele moleculare pot fi, de asemenea, folosite pentru identificarea aminoacizilor expuşi solventului care pot conduce la efecte nedorite, cum ar fi glicozilarea, dezamidarea şi oxidarea. Filtrele de dezvoltare pot fi introduse din timp, în faza de proiectare, pentru eliminarea/minimizarea acestor posibile probleme.
Un alt tip de modificare a cadrului presupune mutageneza unuia sau a mai multor resturi din regiunea cadru, sau chiar în una sau mai multe regiuni CDR, pentru a elimina epitopii celulelor T şi pentru a reduce astfel potenţiala imunogenitate a anticorpului. Acest procedeu este denumit, de asemenea, ca „deimunizare” (US 7125689).
În unele exemple particulare de realizare, este de dorit ca anumiţi aminoacizi conţinând lanţuri laterale expuse să fie înlocuiţi cu un alt rest de aminoacid, pentru a asigura o stabilitate chimică mai mare a anticorpului final, astfel încât deamidarea sau izomerizarea să fie evitate. Deamidarea asparaginei poate avea loc în secvenţele NG, DG, NG, NS, NA, NT, QG sau QS şi au ca rezultat formarea unui rest de acid izoaspartic care introduce o inflexiune în lanţul polipeptidic şi scade stabilitatea acestuia (efectul acidului izoaspartic). Izomerizarea poate avea loc în secvenţele DG, DS, DA sau DT. În anumite exemple de realizare, anticorpii conform prezentei invenţii nu conţin sitesuri de deamidare sau izomerizare a asparaginei.
De exemplu, restul de asparagină (Asn) poate fi substituit cu Gin sau Ala pentru a reduce potenţialul de formare a izoaspartatului în oricare dintre secvenţele Asn-Gly, în special, în interiorul CDR. O problemă similară poate apărea la secvenţa Asp-Gly (Reissner and Aswad. Cell. Mol. Life Sci., no 60, 2003, p. 1281). Formarea izoaspartatului poate slăbi sau suprima complet legarea anticorpuşlui la antigenul ţintă (Presta. J. Allergy Clin. Immunol., no 116, 2005, p. 731-734). Într-o variantă de realizare, asparagina este substituită cu glutamină (Gln). Poate fi, de asemenea, de dorit să fie modificat aminoacidul adiacent unui rest de asparagină (Asn) sau de glutamină (Gln) pentru a reduce probabilitatea dezamidării care are loc cu o frecvenţă mai mare atunci când aminoacizii mici nimeresc în vecinătatea asparaginei sau glutaminei (Bischoff & Kolbe. J. Chromatog., no 662, 1994, p. 261). În afară de aceasta, toate resturile de metionină (de regulă, expusă solventului Met) din CDR-uri pot fi înlocuite cu Lys, Leu, Ala sau Phe, sau cu alţi aminoacizi în scopul reducerii probabilităţii de oxidare a sulfului din metionină, ceea ce ar putea reduce afinitatea de legare cu antigenul şi, de asemenea, ar putea contribui la eterogenitatea moleculară în preparatul final al anticorpului, Id. Totodată, pentru a preveni sau minimiza potenţialul clivaj al legăturilor peptidice Asn-Pro, poate fi dezirabil să fie substituite orice combinaţii Asn-Pro, depistate în CDR, cu Gln-Pro, Ala-Pro sau Asn-Ala. Ulterior, anticorpii cu astfel de substituţii sunt supuşi analizei pentru a se asigura că substituţiile nu scad afinitatea sau specificitatea anticorpului în raport cu TIGIT sau o altă activitate biologică preconizată până la niveluri inacceptabile.
Variante de stabilizare CDR cu titlu de exemple
Tabelul 2
Resturi CDR Variante de stabilizare a secvenţei Asn-Gly (N-G) Gln-Gly, Ala-Gly sau Asn-Ala (Q-G), (A-G) sau (N-A) Asp-Gly (D-G) Glu-Gly, Ala-Gly sau Asp-Ala (E-G), (A-G) sau (D-A) Met (de regulă, expus solventului) (M) Lys, Leu, Ala sau Phe (K), (L), (A) sau (F) Asn (N) Gln sau Ala (Q) sau (A) Asn-Pro (N-P) Gln-Pro, Ala-Pro sau Asn-Ala (Q-P), (A-P) sau (N-A)
În unele variante de realizare a prezentei invenţii, CDR3 din SECV. ID NR. 3 poate fi modificată la poziţia 110W pentru a reduce sau elimina o potenţială oxidare (în care numerotarea corespunde cu Kabat). Astfel, de exemplu, SECV. ID NR. 3 (MPSFITLASLSTWEGYFDF) poate fi modificată până la oricare dintre următoarele secvenţe: MPSFITLASLSTFEGYFDF (SECV. ID NR. 79), MPSFITLASLSTYEGYFDF (SECV. ID NR. 80), MPSFITLASLSTIEGYFDF (SECV. ID NR. 81), MPSFITLASLSTVEGYFDF (SECV. ID NR. 82) sau MPSFITLASLSTLEGYFDF (SECV. ID NR. 83). Astfel, în unele exemple de realizare a prezentei invenţii, anticorpul anti-TIGIT conform invenţiei cuprinde regiunea variabilă a lanţului greu cuprinzând CDR1 din SECV. ID NR. 1, CDR2 din SECV. ID NR. 2 şi CDR3 din SECV. ID NR. 3, 79, 80, 81, 82 sau 83.
În unele variante de realizare a prezentei invenţii, CDR2 din SECV. ID NR. 5 poate fi modificată în poziţiile 52N şi 53S pentru a reduce sau a elimina potenţialele sitesuri de dezamidare (în care numerotarea este conformă cu Kabat). Astfel, de exemplu, SECV. ID NR. 5 (YANSLQT) poate fi modificată până la oricare dintre următoarele secvenţe: YASNLQT (SECV. ID NR. 65), YASSLQT (SECV. ID NR. 66), YASTLQT (SECV. ID NR. 67), YATTLQT (SECV. ID NR. 68), YASYLQT (SECV. ID NR. 69), YANQLQT (SECV. ID NR. 70), YAGSLQT (SECV. ID NR. 71), YASQLQT (SECV. ID NR. 72), YADSLQT (SECV. ID NR. 73). Astfel, în unele exemple de realizare a prezentei invenţii, anticorpul anti-TIGIT conform invenţiei de faţă conţine o regiune variabilă a lanţului uşor care cuprinde CDR1 din SECV. ID NR. 4, CDR2 din SECV. ID NR. 5, SECV. ID NR. 66, SECV. ID NR. 67, SECV. ID NR. 68, SECV. ID NR. 69, SECV. ID NR. 70, SECV. ID NR. 71, SECV. ID NR. 72 sau SECV. ID NR. 73, şi CDR3 din SECV. ID NR. 6.
În unele exemple de realizare a prezentei invenţii, CDR3 din SECV. ID NR. 6 poate fi modificată la poziţia 95W pentru a reduce sau a elimina o potenţială oxidare (în care numerotarea este conformă metodei Kabat). Astfel, de exemplu, SECV. ID NR. 6 (QQYYSGWT) poate fi modificată până la oricare dintre următoarele secvenţe: QQYYSGFT (SECV. ID NR. 74), QQYYSGYT (SECV. ID NR. 75), QQYYSGIT (SECV. ID NR. 76), QQYYSGVT (SECV. ID NR. 77), QQYYSGLT (SECV. ID NR. 78). Astfel, în unele exemple de realizare a prezentei invenţii, anticorpul anti-TIGIT conform invenţiei conţine o regiune variabilă a lanţului uşor care cuprinde CDR1 din SECV. ID NR. 4, CDR2 din SECV. ID NR. 5 şi CDR3 din SECV. ID NR. 6, SECV. ID NR. 74, SECV. ID NR. 75, SECV. ID NR. 76, SECV. ID NR. 77 sau SECV. ID NR. 78.
În unele variante de realizare a prezentei invenţii, anticorpul anti-TIGIT conform invenţiei conţine regiunea variabilă a lanţului uşor care cuprinde CDR1 din SECV. ID NR. 4, CDR2 din SECV. ID NR. 5, SECV. ID NR. 66, SECV. ID NR. 67, SECV. ID NR. 68, SECV. ID NR. 69, SECV. ID NR. 70, SECV. ID NR. 71, SECV. ID NR. 72 sau SECV. ID NR. 73, şi CDR3 din SECV. ID NR. 6, SECV. ID NR. 74, SECV. ID NR. 75, SECV. ID NR. 76, SECV. ID NR. 77 sau SECV. ID NR. 78.
Într-o altă variantă de realizare a prezentei invenţii, anticorpul anti-TIGIT conform invenţiei conţine regiunea FR4 a lanţului greu care cuprinde secvenţa de aminoacizi din oricare dintre SECV. ID NR. 7, 9-24 sau 38-47, caracterizat prin aceea că M din poziţia 122 este substituit cu V, L, A, R, N, P, Q, E, G, I, H, K, F, S, T, W sau L pentru a evita o posibilă oxidare.
Într-o altă formă de realizare a prezentei invenţii, anticorpul anti-TIGIT conform invenţiei cuprinde regiunea FR4 a lanţului greu care cuprinde secvenţa de aminoacizi din oricare dintre SECV. ID NR. 7, 9-24 sau 38-47, caracterizat prin aceea că M din poziţia 122 şi V din poziţia 123 sunt substituite cu T şi, respectiv, L, pentru a evita o potenţială oxidare.
În unele exemple de realizare a prezentei invenţii, CDR3 din SECV. ID NR. 90 poate fi modificată în poziţia 6 pentru a reduce sau a elimina o potenţială oxidare. Astfel, de exemplu, SECV. ID NR. 90 (GGPYGWYFDV) poate fi modificată până la oricare dintre următoarele secvenţe: SECV. ID NR. 154-167.
Ingineria regiunii Fc a anticorpului
Anticorpii (de exemplu, anticorpii umanizaţi) şi fragmentele acestora de legare a antigenului, descrişi în prezentul document (de exemplu, 14A6, 28H5, 31C6 şi versiunile umanizate ale acestora), pot fi, de asemenea ocnstruiţi astfel pentru a include modificările în regiunea Fc, de regulă, pentru a modifica una sau mai multe proprietăţi ale anticorpului, cum ar fi timpul de înjumătăţire în ser, fixarea complementului, legarea cu receptorul Fc şi/sau funcţia efectoare (de exemplu, citotoxicitatea celulară dependentă de antigen). Mai mult ca atât, anticorpii şi fragmentele acestora de legare a antigenului, devăluiţi în prezenta invenţie (de exemplu, 14A6, 28H5, 31C6 şi versiunile umanizate ale acestora), pot fi modificaţi din punct de vedere chimic (de exemplu, una sau mai multe fragmente chimice pot fi unite la anticorp) sau pot fi modificaţi pentru a le schimba glicozilarea, precum şi pentru a modifica una sau mai multe proprietăţi ale anticorpului sau ale fragmentului. Fiecare dintre aceste exemple de realizare este descris în detaliu în continuare. Numerotarea resturilor din regiunea Fc este conformă cu cea din indicele UE după Kabat.
Anticorpii şi fragmentele acestora de legare a antigenului descriţi în documentul de faţă (de exemplu, 14A6, 28H5, 31C6 şi versiunile umanizate ale acestora), includ, de asemenea, anticorpii şi fragmentele cu regiunile Fc modificate (sau blocate) pentru a fasigura funcţii efectoare modificate. (US 5624821; WO2003/086310; WO2005/120571; WO2006/0057702). Astfel de modificări pot fi folosite pentru a spori sau suprima diferite reacţii ale sistemului imunitar, cu posibile efecte benefice pentru diagnostic şi terapie. Modificările din regiunile Fc includ modificări ale aminoacizilor (substituţii, deleţii şi inserţii), glicozilarea sau deglicozilarea şi adăugarea mai multor regiuni Fc. Modificările aduse regiunii Fc pot schimba, de asemenea, timpul de înjumătăţire a anticorpilor în anticorpii terapeutici, ceea ce permite o dozare mai puţin frecventă şi, astfel, o comoditate mai mare şi o utilizare mai redusă a materialului (Presta. J. Allergy Clin. Immunol., no 116, 2005, p. 731-734).
Într-o variantă de realizare, anticorpul sau fragment acestuia de legare a antigenului, conform invenţiei (de exemplu, 14A6, 28H5, 31C6 sau versiunile umanizate ale acestora), prezintă un anticorp sau un fragment al izotipului IgG4 care cuprinde o mutaţie a serinei până la prolină într-o poziţie corespunzătoare poziţiei 228 (S228P; indicele UE) în regiunea balama a regiunii constante a lanţului greu. A fost publicată informaţia privind faptul că această mutaţie elimină eterogenitatea punţilor disulfidice dintre lanţurile grele în regiunea balama ((Angal et al. Mol. Imunol., no 30, 1993, p. 105) poziţia 241 în baza sistemului de numerotare Kabat).
Într-o variantă de realizare a invenţiei, regiunea balama a CH1 este modificată astfel, încât numărul resturilor de cisteină din regiunea balama creşte sau scade. Acest procedeu este descris suplimentar în brevetul US nr. 5677425. Numărul resturilor de cisteină din regiunea balama a CH1 este modificat, de exemplu, pentru a facilita asamblarea lanţurilor uşoare şi grele sau pentru a mări sau micşora stabilitatea anticorpului.
Într-o altă variantă de realizare, regiunea balama Fc a unui anticorp sau fragment de legare a antigenului, conform invenţiei (de exemplu, 14A6, 28H5 sau 31C6 sau versiunile umanizate ale acestora), este supusă mutagenezei pentru a reduce timpul biologic de înjumătăţire a anticorpului sau fragmentului. Mai precis, una sau mai multe mutaţii de aminoacizi sunt introduse pe suprafaţa de contact CH2-CH3 a domeniului fragmentului Fc-balama astfel, încât anticorpul sau fragmentul posedă o deficienţă de legare a proteinei stafilococice A (SpA) în raport cu legarea SpA de către domeniul Fc-balama nativ. Acest procedeu este descris în detaliu în brevetul US nr. 6165745.
Într-o altă variantă de realizare, anticorpul sau fragmentul de legare a antigenului, conform invenţiei (de exemplu, 14A6 sau 28H5, sau o versiune umanizată a acestora), este modificat pentru a creşte timpul său biologic de înjumătăţire. Sunt posibile diverse procedee. De exemplu, pot fi introduse una sau mai multe dintre următoarele mutaţii: T252L, T254S, T256F (US 6277375). Ca alternativă, pentru a creşte timpul biologic de înjumătăţire, anticorpul poate fi modificat în interiorul regiunii CH1 sau CL ca să conţină un epitop de legare la receptorul recuperatoriu, luat din două bucle ale domeniului CH2 al regiunii Fc a IgG (US 5869046; US 6121022).
În alte variante de realizare, regiunea Fc este modificată prin înlocuirea a cel puţin unui rrest de aminoacid cu un rest de aminoacid diferit pentru a modifica funcţia (funcţiile) efectoare ale anticorpului sau fragmentului de legare a antigenului. De exemplu, unul sau mai mulţi aminoacizi, selectaţi dintre resturile de aminoacizi 234, 235, 236, 237, 297, 318, 320 şi 322 pot fi înlocuiţi cu un alt rest de aminoacid, astfel încât anticorpul să aibă o afinitate modificată pentru un ligand efector şi să păstreze capacitatea de legare la antigen a anticorpului parental. Ligandul efector, afinitatea căruia este modificată, poate prezenta, de exemplu, un receptor Fc sau o componentă a complementului C1 (US 5624821; US 5648260).
Într-un alt exemplu de realizare, unul sau mai mulţi aminoacizi, selectaţi dintre resturile de aminoacizi 329, 331 şi 322, pot fi substituiţi cu un alt rest de aminoacid, astfel încât anticorpul să posede o modificată a C1q şi/sau o citotoxicitate dependentă de complement (CDC) redusă sau pierdută (US 6194551).
Într-un alt exemplu de realizare, unul sau mai multe resturi de aminoacizi din poziţiile 231 şi 239 ale aminoacizilor sunt modificate pentru a schimba astfel capacitatea anticorpului de a fixa complementul (WO 94/29351).
Încă într-un exemplu de realizare, regiunea Fc este modificată pentru a reduce capacitatea anticorpului sau fragmentulului de legare a antigenului conform invenţiei (de exemplu, 14A6 sau 28H5, sau o versiune umanizată a acestora) de a media citotoxicitatea celulară dependentă de anticorp (CCDA) şi/sau de a scădea afinitatea anticorpului sau a fragmentului pentru un receptor Fcy prin modificarea unuia sau a mai multor aminoacizi din următoarele poziţii: 238, 239, 243, 248, 249, 252, 254, 255, 256, 258, 264, 265, 267, 268, 269, 270, 272, 276, 278, 280, 283, 285, 286, 289, 290, 292, 293, 294, 295, 296, 298, 301, 303, 305, 307, 309, 312, 315, 320, 322, 324, 326, 327, 329, 330, 331, 333, 334, 335, 337, 338, 340, 360, 373, 376, 378, 382, 388, 389, 398, 414, 416, 419, 430, 434, 435, 437, 438 sau 439. Acest procedeu este descris suplimentar în publicaţia PCT WO 00/42072. Mai mult decât atât, au fost cartografiate situsurile de legare la IgGI umană pentru FcγR1, FcγRII, FcγRIII şi FcRn, fiind descrise variante cu legare îmbunătăţită (Shields et al. J. Biol. Chem., no 276, 2001, p. 6591-6604).
Într-un exemplu de realizare a invenţiei, regiunea Fc este modificată pentru a reduce capacitatea anticorpilor conform invenţiei (de exemplu, 14A6, 28H5, 31C6 şi versiunile umanizate ale acestora) de a media funcţia efectoare şi/sau de a spori proprietăţile anti-inflamatorii prin intermediul modificării resturilor 243 şi 264. Într-o variantă de realizare, regiunea Fc a anticorpului sau a fragmentului este modificată prin substituirea resturilor din poziţiile 243 şi 264 cu alanină. Într-o altă variantă de realizare, regiunea Fc este modificată pentru a reduce capacitatea anticorpului sau a fragmentului de a media funcţia efectoare şi/sau de a spori proprietăţile anti-inflamatorii prin modificarea resturilor 243, 264, 267 şi 328.
Fortificarea funcţiei efectoare
În unele variante de realizare, regiunea Fc a unui anticorp anti-TIGIT este modificată pentru a spori capacitatea anticorpului sau fragmentului de legare a antigenului de a media funcţia efectoare şi/sau de a fortifica legarea lor la receptorii Fc-gamma (FcγRs).
Termenul „funcţie efectoare”, aşa cum este utilizat în invenţia solicitată, este destinat pentru a desemna una sau mai multe dintre următoarele activităţi: activitatea citotoxică mediată de celulele anticorp-dependente (ADCC), răspunsurile mediate de activitatea citotoxică complement-dependentă (CDC), fagocitoza Fc-mediată sau fagocitoza celulară anticorp-dependentă (ADCP) şi reciclarea anticorpilor prin intermediul receptorului FcRn.
Se estimează că interacţiunea dintre regiunea constantă a unei proteine de legare a antigenului şi diferiţi receptori Fc (FcR) incluzând Fc-gammaRI (CD64), Fc-gammaRII (CD32) şi Fc-gammaRIII (CD 16), medază funcţiile efectoare, cum ar fi ADCC şi CDC, ale proteinei de legare a antigenului. Receptorul Fc este, de asemenea, important pentru legarea încrucişată a anticorpului şi poate fi semnificativ pentru imunitatea antitumorală.
Funcţia efectoare poate fi măsurată prin mai multe modalităţi, inclusiv, de exemplu, prin legarea Fc-gammaRIII cu celulele Natural Killer sau prin legarea Fc-gammaRI cu monocite/macrofage pentru a masura funcţia efectoare a ADCC. De exemplu, o proteină de legare a antigenului, conform prezentei invenţii, poate fi evaluată după funcţia efectoare a ADCC într-un test de celule Natural Killer. Exemple de astfel de teste pot fi găsite în literatura de specialitate (Shields et al. J. Biol. Chem., no 276, 2001, p. 6591-6604; Chappel et al. J. Biol. Chem., vol. 268, 1993, p. 25124-25131; Lazar et al. PNAS,no 103, 2006, p. 4005-4010).
Proprietăţile ADCC sau CDC ale anticorpilor, conform prezentei invenţii, sau proprietăţile lor de legare încrucişată pot fi fortificate prin mai multe procedee.
Pentru regiunile constante ale IgG1 umane care posedă mutaţii specifice sau glicozilare modificată pe restul Asn297 a fost demonstrată o legare mărită cu receptorii Fc. În unele cazuri, s-a demonstrat, de asemenea, că aceste mutaţii sporesc ADCC şi CDC (Shields et al. J. Biol. Chem., no 276, 2001, p. 6591-6604; Lazar et al. PNAS,no 103, 2006, p. 4005-4010; Nechansky et al. Mol. Immunol., no 44, 2007, p. 1815-1817).
Într-o variantă de realizare a prezentei invenţii, astfel de mutaţii sunt prezente în una sau mai multe din poziţiile, selectate din 239, 332 şi 330 (IgG1) sau în poziţiile echivalente din alte izotipuri de IgG. Exemple de mutaţii adecvate prezintă S239D, I332E şi A330L. Într-o variantă de realizare, proteina de legare a antigenului, conform invenţiei, descrisă în documentul de faţă, este supusă mutagenezei în poziţiile 239 şi 332, de exemplu, S239D şi I332E sau, într-o altă variantă de realizare, este supusă mutagenezei în trei sau mai multe poziţii, selectate dintre 239, 332 şi 330, de exemplu, S239D şi I332E, şi A330L. (Numerotare conformă indicelui UE).
Într-o variantă alternativă de realizare a prezentei invenţii, a fost prezentat un anticorp care cuprinde o regiune constantă a lanţului greu cu un profil de glicozilare modificat, astfel încât proteina de legare a antigenului posedă o funcţie efectoare fortificată. De exemplu, caracterizată prin aceea că anticorpul posedă o ADCC îmbunătăţită sau CDC îmbunătăţită, sau că el posedă funcţii efectoare îmbunătăţite atât ADCC, cât şi CDC. Exemple de procedee adecvate de obţinere a proteinei de legare a antigenului cu un profil modificat de glicozilare sunt descrise în literatura brevetară (WO 2003/011878; WO 2006/014679; EP 1229125).
Într-un alt aspect al său, prezenta invenţie se referă la anticorpi „non-fucozilaţi” sau „afucozilaţi”. Anticorpii non-fucozilaţi conţin o structură nucleică tri-manozil de N-glicani de tip complex Fc fără resturi de fucoză. Aceşti anticorpi glico-modificaţi, care sunt lipsiţi de restul nucleic de fucoză din N-glicanii Fc, pot avea o ADCC mai puternică decât echivalentele lor fucozilate, datorită sporirii capacităţii de legare a Fc-gammaRIII.
Prezenta invenţie se referă, de asemenea, la un procedeu de producere a unui anticorp conform invenţiei, care cuprinde următoarele etape de: a) cultivare a unei celule gazdă recombinantă cuprinzând un vector de expresie care conţine un acid nucleic izolat, aşa cum este descris în documentul de faţă, caracterizat prin aceea că celula gazdă recombinantă nu cuprinde o alfa-1,6-fucoziltransferază; şi b) izolarea proteinei de legare a antigenului. În mod normal, celula gazdă recombinantă poate să nu conţină o genă care codifică o alfa-1,6-fucoziltransferază (de exemplu, celulele gazdă de drojdie, cum ar fi Pichia sp.) sau poate fi modificată genetic pentru inactivarea unei alfa-1,6-fucoziltransferază. Sunt disponibile celule gazdă recombinante modificate genetic pentru inactivarea genei FUT8 codificând o alfa-1,6-fucoziltransferază. A se vedea, de exemplu, sistemul tehnologic POTELLIGENT™ disponibil de la BioWa, Inc. (Princeton, N.J.), în care celulele CHOK1SV, lipsite de o copie funcţională a genei FUT8, produc anticorpi monoclonali având o activitate sporită de citotoxicitate cu mediere celulară anticorp-dependentă (ADCC) în raport cu un anticorp monoclonal identic, produs într-o celulă cu gena funcţională FUT8. Aspectele sistemului tehnologic POTELLIGENT™ sunt descrise în literatura de specialitate (US 7214775; US 6946292; WO 0061739; WO 0231240). Specialiştii din domeniul de referinţă vor recunoaşte, de asemenea, şi alte sisteme adecvate.
Pentru specialiştii în domeniul de referinţă va fi evident faptul că astfel de modificări pot fi utilizate nu doar în monoterapie, ci pot fi aplicate şi în combinaţie unele cu altele, cu scopul de a fortifica şi mai mult funcţia efectoare.
Obţinerea anticorpilor cu glicozilare modificată
Într-o altă variantă de realizare, anticorpii sau fragmentele acestora de legare a antigenului, conform prezentei invenţii (de exemplu, 14A6, 28H5, 31C6 şi versiunile umanizate ale acestora), cuprind un anumit model de glicozilare. De exemplu, se poate obţine un anticorp afucozilat sau un anticorp aglicozilat sau un fragment (şi anume, un anticorp lipsit de fucoză sau de glicozilare, respectiv). Modelul de glicozilare al unui anticorp sau al unui fragment poate fi modificat, de exemplu, pentru a spori afinitatea sau aviditatea anticorpului sau a fragmentului pentru un antigen TIGIT. Astfel de modificări pot fi realizate, de exemplu, prin modificarea unua sau a mai multor situsuri de glicozilare în secvenţa anticorpului sau a fragmentului. De exemplu, pot fi efectuate una sau mai multe substituţii de aminoacizi care conduc la eliminarea unuia sau a mai multor situsuri de glicozilare din cadrul regiunii variabile pentru a elimina astfel glicozilarea în acest situs. O astfel de aglicozilare poate creşte afinitatea sau aviditatea anticorpului sau a fragmentului în raport cu antigenul (US 5714350; US 6350861).
Anticorpii şi fragmentele acestora de legare a antigenului, dezvăluiţi în invenţia propusă (de exemplu, 14A6, 28H5, 31C6 şi versiunile umanizate ale acestora, pot include suplimentar anticorpii şi fragmentele produşi în celulele gazdă ale eucariotelor inferioare, în special în celulele gazdă fungice, cum ar fi drojdia şi fungiile filamentoase, modificate genetic pentru a produce glicoproteine posedând modele de glicozilare similare modelelor de glicozilare de mamifer sau uman (Choi et al. Proc. Natl. Acad. Sci., no 100, 2003, p. 5022-5027; Hamilton et al. Science, no 301, 2003, p.1244-1246; Hamilton et al. Science, no 313, 2006, p. 1441-1443; Nett et al, Yeast, no 28(3), 2011, p. 237-52; Hamilton et al. Curr. Opin. Biotechnol. Oct, vol 18(5), 2007, p. 387-392). Un avantaj deosebit al acestor celule gazdă modificate genetic, în comparaţie cu liniile celulare de mamifere utilizate în timpul de faţă, îl constituie capacitatea de a controla profilul de glicozilare a glicoproteinelor produse în celule, astfel încât pot fi obţinute compoziţii de glicoproteine în care predomină o anumită structură de N-glican (US 7029872; US 7449308). Aceste celule gazdă modificate genetic au fost folosite pentru a produce anticorpi având în mod predominant structuri de N-glican specifice (Li et al. Nat. Biotechnol., no 24, 2006, p. 210-215).
În variantele particulare de realizare, anticorpii şi fragmentele acestora de legare a ului, dezvăluiţi în documentul de faţă (de exemplu, 14A6, 28H5, 31C6 şi versiunile umanizate ale acestora), includ suplimentar anticorpii şi fragmentele produşi în celulele gazdă de eucariote inferioare şi cuprinzând N-glicani hibrizi şi complecşi fucozilaţi şi non-fucozilaţi, inclusiv molecule bi-secţionate şi multiantenice, cuprinzând, dar fără a se limita la aceştia, N-glicani, cum ar fi GlcNAc(1-4)Man3GlcNAc2; Gal(1-4)GlcNAc(1-4)Man3GlcNAc2; NANA(1-4)Gal(1-4)GlcNAc(1-4)Man3GlcNAc2.
În variante particulare de realizare, anticorpii şi fragmentele acestora de legare a antigenului, prezentaţi în acest document (de exemplu, 14A6, 28H5, 31C6 şi versiunile umanizate ale acestora), pot cuprinde anticorpi sau fragmente având cel puţin un N-glican hibrid, selectat din grupul constând din GlcNAcMan5GlcNAc2; GalGlcNAcMan5GlcNAc2; şi NANAGalGlcNAcMan5GlcNAc2. În anumite aspecte, N-glicanul hibrid prezintă specia predominantă de N-glicani din compoziţie.
În variante particulare de realizare, anticorpii şi fragmentele acestora de legare a antigenului, prezentaţi în documentul de faţă (de exemplu, 14A6, 28H5, 31C6 şi versiunile umanizate ale acestora), cuprind anticorpi şi fragmente având cel puţin un N-glican complex, selectat din grupul constând din GlcNAcMan3GlcNAc2; GalGlcNAcMan3GlcNAc2; NANAGalGlcNAcMan3GlcNAc2; GlcNAc2Man3GlcNAc2; GalGlcNAc2Man3GlcNAc2;Gal2GlcNAc2Man3GlcNAc2; NANAGal2GlcNAc2Man3GlcNAc2; şi NANA2Gal2GlcNAc2Man3GlcNAc2. În aspecte particulare de realizare, N-glicanii complecşi constituie specia predominantă de N-glicani din compoziţie. În aspectele următoare, N-glicanul complex prezintă o specie particulară de N-glicani care constituie aproximativ 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 97%, 98%, 99% sau 100% din N-glicanii complecşi din compoziţie. Într-o variantă de realizare, anticorpul sau fragmentele acestuia de legare a antigenului, prezentaţi în prezentul document, cuprind N-glicani complecşi, în care cel puţin 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 97%, 98%, 99% sau 100% din N-glicanii complecşi conţin structura NANA2Gal2GlcNAc2Man3GlcNAc2, în care o astfel de structură este afucozilată. Astfel de structuri pot fi obţinute, de exemplu, în celulele gazdă modificate Pichia pastoris.
În variante particulare de realizare, N-glicanul este fucozilat. De regulă, fucosa se află într-o legătură α1,3 cu GlcNAc la capătul reducător al N-glicanului, într-o legătură α1,6 cu GlcNAc la capătul reducător al N-glicanului, într-o legătură α1,2 cu GlcNAc la capătul nereducător al N-glicanului, într-o legătură α1,3 cu GlcNAc la capătul nereducător al N-glicanului sau într-o legătură α1,4 cu GlcNAc la capătul nereducător al N-glicanului.
Astfel, în aspectele particulare menţionate mai sus ale compoziţiilor glicoproteince, glicoforma prezintă o fucoză cu o legătură α1,3 sau α1,6 pentru a produce glicoforma, selectată din grupul constând din Man5GlcNAc2(Fuc), GlcNAcMan5GlcNAc2(Fuc), Man3GlcNAc2(Fuc), GlcNAcMan3GlcNAc2(Fuc), GlcNAc2Man3GlcNAc2(Fuc), GalGlcNAc2Man3GlcNAc2(Fuc), Gal2GlcNAc2Man3GlcNAc2(Fuc), NANAGal2GlcNAc2Man3GlcNAc2(Fuc), şi NANA2Gal2GlcNAc2Man3GlcNAc2(Fuc); o fucoză cu o legătură α1,3 sau α1,4 pentru a produce glicoforma, selectată din grupul constând din GlcNAc(Fuc)Man5GlcNAc2, GlcNAc(Fuc)Man3GlcNAc2, GlcNAc2(Fuc1-2)Man3GlcNAc2, GalGlcNAc2(Fuc1-2)Man3GlcNAc2, Gal2GlcNAc2(Fuc1-2)Man3GlcNAc2, NANAGal2GlcNAc2(Fuc1-2)Man3GlcNAc2, şi NANA2Gal2GlcNAc2(Fuc1-2)Man3GlcNAc2; sau o fucoză cu o legătură α1,2 pentru a produce glicoforma, selectată din grupul constând din Gal(Fuc)GlcNAc2Man3GlcNAc2, Gal2(Fuc1-2)GlcNAc2Man3GlcNAc2, NANAGal2(Fuc1-2)GlcNAc2Man3GlcNAc2, şi NANA2Gal2(Fuc1-2)GlcNAc2Man3GlcNAc2.
În următoarele aspecte de realizare, anticorpii (de exemplu, anticorpii umanizaţi) sau fragmentele acestora de legare a antigenului cuprind N-glicani cu conţinut ridicat de manoză incluzând, dar fără a se limita la acestea, Man8GlcNAc2, Man7GlcNAc2, Man6GlcNAc2, Man5GlcNAc2, Man4GlcNAc2, sau N-glicani constând din structura N-glicanică Man3GlcNAc2.
În următoarele aspecte ale celor menţionate mai sus, N-glicanii complecşi includ suplimentar molecule fucozilate şi non-fucosilate bi-secţionate şi multiantenice.
Aşa cum sunt utilizaţi în prezentul document, termenii „N-glican” şi „glicoformă” sunt folosiţi interşanjabil şi se referă la o oligozaharidă N-legată, de exemplu, la o oligozaharidă ataşată printr-o legătură asparagină-N-acetilglucozamină la un rest de asparagină al unei polipeptide. Glicoproteinele N-legate conţin un rest N-acetilglucozamină legat cu azotul amidic al unui rest de asparagină din proteină. Zaharurile găsite în mod predominant pe glicoproteine sunt glucoza, galactoza, manoza, fucoza, N-acetilgalactozamina (GalNAc), N-acetilglucozamina (GlcNAc) şi acidul sialic (de exemplu, acidul N-acetil-neuraminic (NANA)). Prelucrarea grupelor de zaharuri se produce în mod co-translaţional în lumenul ER şi continuă în mod post-translaţional pe complexul Golgi pentru glicoproteinele N-legate.
N-glicanii posedă un nucleu comun de pentazaharidă Man3GlcNAc2 (termenul „Man” desemnează manoza; termenul „Glc” desemnează glucoza; şi termenul „Nac” desemnează N-acetilul; GlcNAc desemnează N-acetilglucozamina). De regulă, structurile N-glicanilor sunt prezentate cu capătul nereducător în stânga şi cu capătul reducător în dreapta. Capătul reducător al N-glicanului constituie extremitatea ataşată la restul Asn, cuprinzând sitesul de glicozilare, pe proteină. N-glicanii diferă în ceea ce priveşte numărul de ramuri (antene) cuprinzând zaharuri periferice (de exemplu, GIcNAc, galactoză, fucoză şi acid sialic), care sunt adaugate la structura nucleică Man3GlcNAc2 („Man3”), menţionată de asemenea şi ca „nucleu de trimanoză”, „nucleu pentazaharidic” sau „nucleu de paucimanoză”. N-glicanii sunt clasificaţi în funcţie de constituenţii lor ramificaţi (de exemplu, cu conţinut ridicat de manoză, complecşi sau hibrizi). Tipul de N-glicani „cu conţinut ridicat de manoză” posedă cinci sau mai multe resturi de manoză. N-glicanii de tip „complecşi” posedă, de regulă, cel puţin un GlcNAc ataşat la braţul 1,3 al manozei şi cel puţin un GIcNAc ataşat la ramura 1,6 a manozei unui nucleu "trimanoză”. N-glicanii complecşi pot conţine, de asemenea, galactoză („Gal”) sau resturi de N-acetilgalactozamină („GalNAc"), care, în mod opţional, sunt modificaţi cu acid sialic sau cu derivaţi (de exemplu, „NANA” sau „NeuAc”, unde „Neu” desemnează acidul neuraminic şi „Ac” desemnează acetilul). N-glicanii complecşi pot avea, de asemenea, substituţii intracatenare care cuprind un GlcNAc „bi-secţionat" şi un fucoză nucleică („Fuc”). N-glicanii complecşi pot avea, de asemenea, multiple antene pe „nucleul de trimanoză”, denumite adesea şi „glicani multiantenici”. N-glicanul „hibrid” are cel puţin un GIcNAc pe extremitatea braţului 1,3 de manoză al nucleului de trimanoză şi zero sau mai multe resturi de manoză pe braţul 1,6 de manoză al nucleului de trimanoză. Diferiţi N-glicani sunt denumiţi, de asemenea, „glicoforme”.
În ceea ce priveşte N-glicanii complecşi, termenii „G-2”, „G-1”, „G0”, „G1”, „G2”, „A1” şi „A2” înseamnă următoarele: termenul „G-2” se referă la structura N-glicanului care poate fi caracterizată drept Man3GlcNAc2; termenul „G-1” se referă la structura N-glicanului care poate fi caracterizată drept GlcNAcMan3GlcNAc2; termenul „G0” se referă la structura N-glicanului care poate fi caracterizată drept GlcNAc2Man3GlcNAc2; termenul „G1” se referă la structura N-glicanului care poate fi caracterizată drept GalGlcNAc2Man3GlcNAc2; termenul „G2” se referă la structura N-glicanului care poate fi caracterizată drept Gal2GlcNAc2Man3GlcNAc2; termenul „A1” se referă la structura N-glicanului care poate fi caracterizată drept NANAGal2GlcNAc2Man3GlcNAc2; şi termenul „A2” se referă la structura N-glicanului care poate fi caracterizată drept NANA2Gal2GlcNAc2Man3GlcNAc2. Dacă nu se specifică altfel, termenii „G-2”, „G-1”, „G0”, „G1”, „G2”, „A1” şi „A2” se referă la moleculele N-glicanului care nu conţin fucoză, ataşată la restul de GlcNAc de pe capătul reducător al N-glicanului. Când termenul include „F”, atunci acest „F” indică faptul că molecula de N-glican conţine un rest de fucoză pe restul GIcNAc de pe capătul reducător al N-glicanului. De exemplu, toate G0F, G1F, G2F, A1F şi A2F indică faptul că N-glicanul mai include un rest de fucoză, ataşat la restul de GlcNAc de pe capătul reducător al N-glicanului. Eucariotele inferioare, cum ar fi drojdia şi ciupercile filamentoase, în mod normal nu produc N-glicani care conţin fucoză.
În ceea ce priveşte N-glicanii multiantenici, termenul „N-glicani multiantenici” se referă la N-glicanii care cuprind suplimentar un rest de G1cNAc pe restul de manoză conţinând un capăt nereducător al braţului 1,6 sau al braţului 1,3 al N-glicanului, sau un rest GlcNAc pe fiecare dintre resturile de manoză conţinând un capăt nereducător al braţului 1,6 şi al braţului 1,3 al N-glicanului. Astfel, N-glicanii multiantenicii pot fi caracterizaţi prin formulele GlcNAc(2-4)Man3GlcNAc2, Gal(1-4)GlcNAc(2-4)Man3GlcNAc2 sau NANA(1-4)Gal(1-4)GlcNAc(2-4)Man3GlcNAc2. Termenul „1-4” se referă la resturile1, 2, 3 sau 4.
În ceea ce priveşte N-glicanii bi-secţionaţi, termenul „N-glican bi-secţionat” se referă la N-glicanii în care restul de GIcNAc este legat de restul de manoză pe capătul reducător al N-glicanului. N-glicanul bi-secţionat poate fi caracterizat prin formula GlcNAc3Man3GlcNAc2, în care fiecare rest de manoză este legat cu restul de GIcNAc pe capătul nereductor al acestuia. Spre deosebire de aceasta, atunci când un N-glican multiantenic este caracterizat drept GlcNAc3Man3GlcNAc2, formula indică faptul că două resturi de GlcNAc sunt legate la restul de manoză pe capătul nereducător al unuia dintre cele două braţe ale N-glicanilor şi un rest de GlcNAc este legat la restul de manoză pe capătul nereducător al celuilalt braţ al N-glicanului.
Proprietăţile fizice ale anticorpilor
Anticorpii şi fragmentele acestora de legare a antigenului, dezvăluţi în documentul de faţă (de exemplu, 14A6, 28H5, 31C6 şi versiunile umanizate ale acestora), pot conţine suplimentar unul sau mai multe situsuri de glicozilare în regiunea variabilă a lanţului uşor sau a lanţului greu al imunoglobulinei. Astfel de situsuri de glicozilare pot conduce la o imunogenitate crescută a anticorpului sau a fragmentului, sau la o modificare a pK a anticorpului din cauza unei legări modificate a antigenului (Marshall et al. Annu. Rev. Biochem., 1972, p. 41673-41702; Gala and Morrison. J. Immunol., no 172, 2004, p. 5489-5494; Wallick et al. J. Exp. Med., no 168, 1988, p. 1099-1109; Spiro. Glycobiology, no 12, 2002, p. 43R-56R; Parekh et al., (1985) Nature, no 316, p. 452-457; Mimura et al. Mol. Immunol., no 37, 2000, p. 697-706). Este cunoscut faptul că glicozilarea se produce pe motivele care conţin secvenţa N-X-S/T.
Fiecare anticorp sau fragment de legare a antigenului (de exemplu, 14A6, 28H5, 31C6 sau versiunile umanizate ale acestora) posedă un punct izoelectric unic (pI), care se încadrează, de regulă, în diapazonul pH-ului dintre 6 şi 9,5. pl pentru un anticorp IgG1 se încadrează, de regulă, în diapazonul pH-ului dintre 7 şi 9,5, iar pI pentru un anticorp IgG4 se încadrează, de regulă, în diapazonul pHui dintre 6 şi 8.
Fiecare anticorp sau fragment de legare a antigenului (de exemplu, 14A6, 28H5, 31C6 sau versiunile umanizate ale acestora) posedă o temperatură specifică de topire, unde cea mai înaltă temperatură de topire indică o mai mare stabilitate generală in vivo (Krishnamurthy R. and Manning M.C. Curr. Pharm. Biotechnol., no 3, 2002, p. 361-371). De regulă, TM1 (temperatura desfăşurării iniţiale), poate fi mai mare de 60°C, mai mare de 65°C, sau mai mare de 70°C. Temperatura de topire a unui anticorp sau a unui fragment poate fi măsurată cu ajutorul calorimetriei cu scanare diferenţială (Chen et al. Pharm. Res., no 20, 2003, p. 1952-1960; Ghirlando et al. Immunol. Lett., no 68, 1999, p. 47-52) sau cu dicroism circular (Murray et al. J. Chromatogr. Sci., no 40, 2002, p. 343-349).
În următorul exemplu de realizare, anticorpii şi fragmentele acestora de legare a antigenului (de exemplu, 14A6, 28H5, 31C6 şi versiunile umanizate ale acestora) sunt selectaţi astfel, încât să nu degradeze rapid. Degradarea unui anticorp sau a unui fragment poate fi măsurată cu ajutorul electroforezei capilare (CE) şi al MALDI-MS (Alexander A.J. and Hughes D.E. Anal. Chem., no 67, 1995, p. 3626-3632).
În următoarea variantă de realizare, anticorpii (de exemplu, 14A6, 28H5, 31C6 şi versiunile lor umanizate) şi fragmentele acestora de legare a antigenului sunt selectaţi astfel, încât să arate efecte minime de agregare, care pot conduce la declanşarea unui răspuns imun nedorit şi/sau la proprietăţi farmacocinetice modificate sau nefavorabile. De regulă, sunt acceptabili anticorpii şi fragmentele cu o agregare de 25% sau mai puţin, 20% sau mai puţin, 15% sau mai puţin, 10% sau mai puţin ori 5% sau mai puţin. Agregarea poate fi masurată prin mai multe procedee, inclusiv prin cromatografia de excludere sterică (SEC), cromatografia lichidă de înaltă performanţă (HPLC) şi difuzia luminii.
Conjugatele anticorpilor
Anticorpii anti-TIGIT şi fragmentele acestora de legare a antigenului, dezvăluiţi în documentul de faţă (de exemplu, 14A6, 28H5, 31C6 şi versiunile umanizate ale acestora), pot fi, de asemenea, conjugaţi cu un grup chimic. Grupul chimic poate prezenta, inter alia, un polimer, un radionuclid sau un factor citotoxic. În variante particulare de realizare, grupul chimic prezintă un polimer care măreşte timpul de înjumătăţire al anticorpului sau al fragmentului în organismul subiectului. Polimerii adecvaţi includ, dar nu se limitează la aceştia, polimeri hidrofili, care conţin, dar nu se limitează la aceştia, polietilen glicol (PEG) (de exemplu, PEG cu o greutate moleculară de 2 kDa, 5 kDa, 10 kDa, 12 kDa, 20 kDa, 30 kDa sau 40 kDa), dextran şi monometoxipolietilen glicol (mPEG). Sunt dezvăluiţi anticorpii cu un singur lanţ, conjugaţi cu PEG (Lee et al. Bioconj. Chem., no 10, 1999, p. 973-981). Mai este descrisă conjugarea anticorpilor cu PEG, care este ataşat la un chelator de radiometale (acid dietilentriaminpentaacetic (DTPA) (Wen et al. Bioconj. Chem., no 12, 2001, p. 545-553).
Anticorpii şi fragmentele acestora de legare a antigenului, dezvăluiţi în documentul de faţă (de exemplu, 14A6, 28H5, 31C6 şi versiunile umanizate ale acestora), pot fi, de asemenea, conjugaţi cu marcaje precum 99Tc, 90Y, 111In, 32P, 14C, 125I, 3H, 131I, 11C, 15O, 13N, 18F, 35S, 51Cr, 57To, 226Ra, 60Co, 59Fe, 57Se, 152Eu, 67Cu, 217Ci, 211At, 212Pb, 47Sc, 109Pd, 234Th şi 40K, 157Gd, 55Mn, 52Tr şi 56Fe.
Anticorpii şi fragmentele de legare a antigenului, dezvăluiţi în prezenta descriere (de exemplu, 14A6, 28H5, 31C6 şi versiunile umanizate ale acestora), pot fi, de asemenea PEGilaţi, de exemplu, pentru a creşte timpul lor de înjumătăţire biologică (de exemplu, în ser). Pentru a PEGila un anticorp sau un fragment, în mod tipic anticorpul sau fragmentul este supus interacţiunii cu o formă reactivă de polietilen glicol (PEG), cum ar fi un ester reactiv sau un derivat de aldehidă PEG, în condiţiile în care una sau mai multe grupuri PEG se ataşează la anticorp sau la fragmentul acestuia. În variante particulare de realizare, PEGilarea este realizată printr-o reacţie de acilare sau o reacţie de alchilare cu o moleculă reactivă de PEG (sau un polimer analog solubil în apă reactiv). Aşa cum este utilizat în descrierea de faţă, termenul „polietilen glicol” este destinat să cuprindă toate formele de PEG care sunt utilizate pentru derivarea altor proteine, cum sunt mono(C1-C10) alcoxi- sau ariloxi-polietilen glicol sau polietilen glicol-maleimidă. În anumite variante de realizare, anticorpul sau fragmentul, care urmează să fie PEGilat, constituie un anticorp sau un fragment aglicozilat. Procedeele de PEGilare a proteinelor sunt cunoscute în domeniul de referinţă şi pot fi aplicate pentru anticorpii din invenţia solicitată (EP 0154316; EP 0401384).
Anticorpii şi fragmentele de legare a antigenului, descrişi în documentul de faţă (de exemplu, 14A6, 28H5, 31C6 şi versiunile umanizate ale acestora), pot fi, de asemenea, conjugaţi cu marcaje fluorescente sau chemiluminescente, inclusiv cu fluorofori, cum ar fi chelaţii de pământuri rare, fluoresceina şi derivaţii săi, rodamina şi derivaţii săi, izotiocianatul, ficoeritrina, ficocianina, alloficocianina, o-ftalaldehida, fluorescamina, 152Eu, dansilul, umbeliferona, luciferina, marcajul cu luminal, marcajul cu isoluminal, marcajul pe bază de ester de acridiniu aromatic, marcajul cu imidazol, marcajul pe bază de sare de acridimium, marcajul cu ester al acidului oxalic, marcajul cu aequorină, 2,3-dihidroftalazindionă, biotină/avidină, marcaje de spin şi radicali liberi stabili.
Anticorpii şi fragmentele acestora de legare a antigenului, conform invenţiei (de exemplu, 14A6, 28H5, 31C6 şi versiunile umanizate ale acestora), pot fi, de asemenea, conjugaţi cu un factor citotoxic, cum ar fi toxina difterică, lanţul A de exotoxină Pseudomonas aeruginosa, lanţul A de ricină, lanţul A de abrină, lanţul A de modecină, alfa-sarcină, proteinele şi compuşii lor (de exemplu, acizii graşi) Aleurites fordii proteinele diantin, proteinele PAPI, PAPII şi PAP-S Phytoiacca americana, inhibitorul de Momordica charantia, curcinul, crotina, inhibitorul de saponaria officinalis, mitogelina, restrictocina, fenomicina şi enomicina.
Pentru conjugarea anticorpilor şi a fragmentelor acestora de legare a antigenului, conform prezentei invenţii (de exemplu, 14A6, 28H5, 31C6 şi versiunile lor umanizate), cu diferite grupuri, poate fi utilizat orice procedeu, cunoscut în domeniul de referinţă al tehnicii (inclusiv (Hunteret al. Nature, no 144, 1962, p. 945; David et al. Biochemistry, no 13, 1974, p. 1014; Painet al. J. Immunol. Meth., no 40, 1981, p. 219; Nygren. J. Histochem. and Cytochem., no 30, 1982, p. 407)). Procedeele de conjugare a anticorpilor şi a fragmentelor acestora sunt unanim acceptate şi foarte bine cunoscute în domeniul dat.
Utilizările terapeutice ale anticorpilor anti-TIGIT
În continuare, sunt prezentate procedeele de tratare a subiecţilor, inclusiv a subiecţilor umani, care necesită tratament cu anticorpi izolaţi sau cu fragmentele acestora de legare a antigenului, dezvăluiţi în prezenta invenţie (de exemplu, 14A6, 28H5, 31C6 şi versiunile umanizate ale acestora). Într-o variantă de realizare a invenţiei, un asemenea subiect suferă de o infecţie sau de o boală infecţioasă. Într-o altă variantă de realizare, un astfel de subiect suferă de o tumoare malignă. Într-o variantă de realizare, cancerul prezintă o tumoare solidă, infiltrată de limfocite tumor-infiltrative exprimând TIGIT. Într-o variantă de realizare, cancerul prezintă, de exemplu, osteosarcom, rabdomiosarcom, neuroblastom, cancer renal, leucemie, cancer renal cu celule tranziţionale, cancer de vezică urinară, cancer Wilms, cancer ovarian, cancer pancreatic, cancer de sân, cancer de prostată, cancer osos, cancer pulmonar (de exemplu, cancerul pulmonar non-microcelular), cancer gastric, cancer colorectal, cancer de col uterin, sarcom sinovial, cancerul capului şi gâtului, carcinom cu celule scuamoase, mielom multiplu, carcinom renal cu celule clare, retinoblastom, hepatoblastom, carcinom hepatocelular, melanom, tumoare rabdoidă de rinichi, sarcom Ewing, condrosarcom, cancer cerebral, glioblastom, meningiom, adenom hipofizar, schwannoma vestibular, tumoare neuroectodermală primitivă, meduloblastom, astrocitom, astrocitom anaplazic, oligodendrogliom, ependimom, papilom de plex coroid, policitemie vera, trombocitemie, mielofibroză idiopatică, sarcom de ţesuturi moi, cancer tiroidian, cancer endometrial, cancer carcinoid sau cancer hepatic, cancer de sân sau cancer gastric. Într-o variantă de realizare a invenţiei, tumoarea malignă prezintă un cancer metastatic, de exemplu, din varietăţile menţionate mai sus.
Într-o variantă de realizare, prezenta invenţie se referă la procedeele de tratare a subiecţilor folosind un anticorp anti-TIGIT sau un fragment al acestuia de legare a antigenului, conform invenţiei (de exemplu, 14A6, 28H5, 31C6 şi versiunile umanizate ale acestora), în care subiectul suferă de o infecţie virală. Într-o variantă de realizare, infecţia virală este infecţia cu un virus, selectat din grupul format din virusul imunodeficienţei umane (HIV), virusul hepatic (A, B sau C), virusul herpetic (de exemplu, VZV, HSV-I, HAV-6 , HSV-II şi CMV, virusul Epstein-Barr), adenovirus, virus gripal, flavivirusuri, echovirus, rinovirus, virusul Coxsackie, coronavirus, virus sinciţial respirator, virusul oreionului, rotavirus, virusul rujeolei, virusul rubeolei, parvovirus, virusul vaccinia, virusul HTLV, virusul dengue, papilomavirus, virusul molluscum contagiosum, poliovirus, virusul rabiei, virusul JC sau virusul encefalitei arbovirale.
Într-o variantă de realizare, invenţia se referă la procedeele de tratare a subiecţilor folosind un anticorp anti-TIGIT sau un fragment al acestuia de legare a antigenului, conform invenţiei, în care subiectul suferă de o infecţie bacteriană. Într-o variantă de realizare, infecţia bacteriană este infecţia cu o bacterie, selectată din grupul constând din Chlamidia, bacterii rickettsia, micobacterii, stafilococi, streptococi, pneumonococi, meningococi şi gonococi, klebsiella, proteus, serratia, pseudomonas, Legionella, Corynebacterium diphteriae, Salmonella, bacili, Vibrio cholerae, Clostridium tetan, Clostridium botulinum, Bacillus anthricis, Yersinia pestis, Mycobacterium leprae, Mycobacterium lepromatosis şi Borriella.
Într-o variantă de realizare, invenţia se referă la procedeele de tratare a subiecţilor folosind un anticorp anti-TIGIT sau un fragment al acestuia de legare a antigenului, conform invenţiei, în care subiectul suferă de o infecţie fungică. Într-o variantă de realizare, infecţia fungică este infecţia cu o ciupercă, selectată din grupul constând din Candida (albicans, krusei, glabrata, tropicalis etc.), Cryptococcus neoformans, Aspergillus (fumigatus, niger etc.), Genus Mucorales (mucor, absidia, rhizopus), Sporotrix schenkii, Blastomyces dermatitidis, Paracoccidioides brasiliensis, Coccidioides immitis şi Histoplasma capsulatum.
Într-o variantă de realizare, invenţia se referă la procedeele de tratare a subiecţilor folosind un anticorp anti-TIGIT sau un fragment al acestuia de legare a antigenului, conform invenţiei, în care subiectul suferă de o infecţie parazitară. Într-o variantă de realizare, infecţia parazitară este infectarea cu un parazit, selectat din grupul constând din Entamoeba histolytica, Balantidium coli, Naegleria fowleri, Acanthamoeba, Giardia Lambia, Cryptosporidium, Pneumocystis carinii, Plasmodium vivax, Babesia microti, Trypanosoma brucei, Trypanosoma cruzi, Leishmania donovani, Toxoplasma gondii şi NippostrongyIus brasiliensis.
Totodată, prezenta invenţie se referă la un procedeu de prevenire sau de inhibare a legării TIGIT cu MHC clasa II, de sporire a activării celulelor T antigen-specific sau de stimulare a producţiei interleukinei-2 de către celulele T la un subiect (de exemplu, un subiect uman), de exemplu, în care subiectul suferă de o tumoare malignă sau de o boală infecţioasă (de exemplu, aşa cum este discutat în invenţia de faţă) cuprinzând administrarea unei cantităţi eficiente dintr-un anticorp anti-TIGIT sau dintr-un fragment al acestuia de legare a antigenului (de exemplu, 14A6, 28A5, 31C6 şi versiunile umanizate ale acestora), în mod opţional, în asociere cu un agent chimioterapeutic suplimentar.
Un „subiect” poate fi un mamifer, precum om, câine, pisică, cal, vacă, şoarece, şobolan, maimuţă (de exemplu, maimuţe cynomolgus, de exemplu, Macaca fascicularis) sau iepure. În exemplele de realizare preferabile ale prezentei invenţii subiectul prezintă un subiect uman.
În variante particulare de realizare a invenţiei, anticorpii sau fragmentele acestora de legare a antigenului, dezvăluiţi în documentul de faţă (de exemplu, 14A6, 28H5, 31C6 şi versiunile umanizate ale acestora), pot fi utilizaţi de sine stătător sau în asociere cu alţi agenţi terapeutici suplimentari şi/sau proceduri terapeutice, pentru tratarea sau prevenirea oricărei maladii, cum ar fi tumoarea malignă, de exemplu, aşa cum este discutat în documentul de faţă, la un subiect care are nevoie de un astfel de tratament sau de o astfel de prevenire. Compoziţiile, de exemplu, compoziţiile farmaceutice care cuprind un purtător acceptabil farmaceutic conţinând astfel de anticorpi şi fragmente, în asociere cu agenţi terapeutici suplimentari, sunt, de asemenea, parte a prezentei invenţii.
În unele variante particulare de realizare a prezentei invenţii, anticorpii sau fragmentele acestora de legare a antigenului, dezvăluiţi în documentul de faţă (de exemplu, 14A6, 28H5. 31C6 şi versiunile umanizate ale acestora), pot fi utilizaţi de sine stătător sau în asociere cu vaccinuri tumorale.
În unele variante particulare de realizare, anticorpii sau fragmentele acestora de legare a antigenului, descrişi în documentul de faţă (de exemplu, 14A6, 28H5, 31C6 şi versiunile umanizate ale acestora), pot fi utilizaţi de sine stătător sau în asociere cu agenţi chimioterapeutici.
În unele variante particulare de realizare, anticorpii sau fragmentele acestora de legare a antigenului, descrişi în documentul de faţă (de exemplu, 14A6, 28H5, 31C6 şi versiunile umanizate ale acestora), pot fi utilizaţi de sine stătător sau în asociere cu radioterapie.
În unele variante particulare de realizare, anticorpii sau fragmentele acestora de legare a antigenului, descrişi în documentul de faţă (de exemplu, 14A6, 28H5, 31C6 şi versiunile umanizate ale acestora), pot fi utilizaţi de sine stătător sau în asociere cu terapii direcţionate. Exemplele de terapii direcţionate includ: terapii hormonale, inhibitori de transmitere a semnalului (de exemplu, inhibitorii EGFR, cum sunt cetuximab (Erbitux) si erlotinib (Tarceva)); inhibitorii HER2 (de exemplu, trastuzumab (Herceptin) şi pertuzumab (Perjeta)); inhibitorii BCR-ABL (cum sunt imatinib (Gleevec) şi dasatinib (Sprycel)); inhibitorii ALK (cum sunt crizotinib (Xalkori) şi ceritinib (Zykadia)); inhibitorii BRAF (cum sunt vemurafenib (Zelboraf) şi dabrafenib (Tafinlar)), modulatori de expresie a genelor, inductori ai apoptozei (de exemplu, bortezomib (Velcade) şi carfilzomib (Kyprolis)), inhibitorii de angiogeneză (de exemplu, bevacizumab (Avastin) şi ramucirumab (Cyramza), anticorpi monoclonali ataşaţi la toxine (de exemplu, brentuximab vedotin (Adcetris) şi ado-trastuzumab emtansine (Kadcyla)).
În unele variante particulare de realizare, anticorpii anti-TIGIT sau fragmentele acestora de legare a antigenului, conform invenţiei (de exemplu, 14A6, 28H5, 31C6 şi versiunile umanizate ale acestora), pot fi utilizaţi în combinaţie cu un agent terapeutic anti-cancer sau cu un agent imunomodulator, cum ar fi un inhibitor al receptorului imunomodulator, de exemplu, un anticorp sau un fragment al acestuia de legare a antigenului care se leagă în mod specific cu receptorul dat.
Astfel, prezenta invenţie se referă la compoziţii care cuprind un anticorp anti-TIGIT sau un fragment al acestuia de legare a antigenului, conform prezentei invenţii (de exemplu, 14A6, 28H5, 31C6 şi versiuni umanizate ale acestora), în asociere cu pembrolizumab; precum şi la procedee de tratare sau de prevenire a cancerului la un subiect care cuprinde administrarea unei cantităţi eficiente dintr-un anticorp anti-TIGIT sau dintr-un fragment al acestuia de legare a antigenului şi pembrolizumab la subiectul în cauză. În mod opţional, subiectului i se administrează, de asemenea, un agent terapeutic suplimentar.
Într-un exemplu de realizare a invenţiei, un anticorp anti-TIGIT sau un fragment al acestuia de legare a antigenului, conform prezentei invenţii (de exemplu, 14A6, 28H5, 31C6 şi versiunile umanizate ale acestora), este prezent în asociere cu un anticorp izolat care cuprinde lanţul greu al imunoglobulinăei conţinând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 33 şi lanţul uşor al imunoglobulinei conţinând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 34. SECV. ID NR. 33 şi SECV. ID NR. 34 codifică lanţul greu şi lanţul uşor al pembrolizumabului.
Într-una dintre variantele de realizare a invenţiei, anticorpul anti-TIGIT sau fragmentul acestuia de legare a antigenului, conform prezentei invenţii (de exemplu, 14A6, 28H5, 31C6 şi versiunile umanizate ale acestora), este prezent în asociere cu un anticorp izolat care cuprinde lanţul greu al imunoglobulinei conţinând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 35 şi lanţul uşor al imunoglobulinei conţinând secvenţa de aminoacizi din SECV. ID NR. 36. SECV. ID NR. 35 şi SECV. ID NR. 36 codifică lanţul greu şi lanţul uşor al nivolumabului.
Într-una dintre variantele de realizare a invenţiei, anticorpul anti-TIGIT sau fragmentul acestuia de legare a antigenului, conform invenţiei (de exemplu, 14A6, 28H5, 31C6 şi versiunile umanizate ale acestora), este prezent în asociere cu unul sau cu mai mulţi dintre: anticorpul anti-PD1 (de exemplu, pembrolizumab, nivolumab, pidilizumab (CT-011)), anticorpul anti-PDL1, anticorpul anti-CTLA4, anticorpul anti-CS1 (de exemplu, elotuzumab), anticorpul anti-KIR2DL1/2/3 (de exemplu, lirilumab), anticorpul anti-CD137 (de exemplu, urelumab), anticorpul anti-GITR (de exemplu, TRX518), anticorpul anti-PD-L1 (de exemplu, BMS-936559, MSB0010718C sau MPDL3280A), anticorpul anti-PD-L2, anticorpul anti-ILT1, anticorpul anti-ILT2, anticorpul anti-ILT3, anticorpul anti-ILT4, anticorpul anti-ILT5, anticorpul anti-ILT6, anticorpul anti-ILT7, anticorpul anti-ILT8, anticorpul anti-CD40, anticorpul anti-OX40, anticorpul anti-ICOS, anticorpul anti-SIRPα, anticorpul anti-KIR2DL1, anticorpul anti-KIR2DL2/3, anticorpul anti-KIR2DL4, anticorpul anti-KIR2DL5A, anticorpul anti-KIR2DL5B, anticorpul anti-KIR3DL1, anticorpul anti-KIR3DL2, anticorpul anti-KIR3DL3, anticorpul anti-NKG2A, anticorpul anti-NKG2C, anticorpul anti-NKG2E, anticorpul anti- 4-1BB (de exemplu, PF-05082566), anticorpul anti-TSLP, anticorpul anti-IL-10, IL-10 sau IL-10 PEGilat, sau oricare inhibitor de molecule organice mici a unor asemenea ţinte.
Într-una din variantele de realizare a invenţiei, anticorpul anti-TIGIT sau fragmentul acestuia de legare a antigenului, conform invenţiei (de exemplu, 14A6, 28H5, 31C6 sau versiunile umanizate ale acestora), prezintă o asociere cu anticorpul anti-PD1.
Într-una din variantele de realizare a invenţiei, anticorpul anti-TIGIT sau fragmentul acestuia de legare a antigenului, conform invenţiei (de exemplu, 14A6, 28H5, 31C6 sau versiunile umanizate ale acestora), prezintă o asociere cu anticorpul anti-PDL1 (de exemplu, BMS-936559, MSB0010718C sau MPDL3280A).
Într-una din variantele de realizare a invenţiei, anticorpul anti-TIGIT sau fragmentul acestuia de legare a antigenului, conform invenţiei (de exemplu, 14A6, 28H5, 31C6 sau versiunile umanizate ale acestora), prezintă o asociere cu anticorpul anti-CTLA4.
Într-una din variantele de realizare a invenţiei, anticorpul anti-TIGIT sau fragmentul acestuia de legare a antigenului, conform invenţiei (de exemplu, 14A6, 28H5, 31C6 sau versiunile umanizate ale acestora), prezintă o asociere cu anticorpul anti-CS1.
Într-una din variantele de realizare a invenţiei, anticorpul anti-TIGIT sau fragmentul acestuia de legare a antigenului, conform invenţiei (de exemplu, 14A6, 28H5, 31C6 sau versiunile umanizate ale acestora), prezintă o asociere cu anticorpul anti-KIR2DL1/2/3.
Într-una din variantele de realizare a invenţiei, anticorpul anti-TIGIT sau fragmentul acestuia de legare a antigenului, conform invenţiei (de exemplu, 14A6, 28H5, 31C6 sau versiunile umanizate ale acestora), prezintă o asociere cu anticorpul anti-CD137 (de exemplu, urelumab).
Într-una din variantele de realizare a invenţiei, anticorpul anti-TIGIT sau fragmentul acestuia de legare a antigenului, conform invenţiei (de exemplu, 14A6, 28H5, 31C6 sau versiunile umanizate ale acestora), prezintă o asociere cu anticorpul anti-GITR (de exemplu, TRX518).
Într-una din variantele de realizare a invenţiei, anticorpul anti-TIGIT sau fragmentul acestuia de legare a antigenului, conform invenţiei (de exemplu, 14A6, 28H5, 31C6 sau versiunile umanizate ale acestora), prezintă o asociere cu anticorpul anti-PD-L2.
Într-una din variantele de realizare a invenţiei, anticorpul anti-TIGIT sau fragmentul acestuia de legare a antigenului, conform invenţiei (de exemplu, 14A6, 28H5, 31C6 sau versiunile umanizate ale acestora), prezintă o asociere cu anticorpul anti-ITL1.
Într-una din variantele de realizare a invenţiei, anticorpul anti-TIGIT sau fragmentul acestuia de legare a antigenului, conform invenţiei (de exemplu, 14A6, 28H5, 31C6 sau versiunile umanizate ale acestora), prezintă o asociere cu anticorpul anti-ITL2.
Într-una din variantele de realizare a invenţiei, anticorpul anti-TIGIT sau fragmentul acestuia de legare a antigenului, conform invenţiei (de exemplu, 14A6, 28H5, 31C6 sau versiunile umanizate ale acestora), prezintă o asociere cu anticorpul anti-ITL3.
Într-una din variantele de realizare a invenţiei, anticorpul anti-TIGIT sau fragmentul acestuia de legare a antigenului, conform invenţiei (de exemplu, 14A6, 28H5, 31C6 sau versiunile umanizate ale acestora), prezintă o asociere cu anticorpul anti-ITL4.
Într-una din variantele de realizare a invenţiei, anticorpul anti-TIGIT sau fragmentul acestuia de legare a antigenului, conform invenţiei (de exemplu, 14A6, 28H5, 31C6 sau versiunile umanizate ale acestora), prezintă o asociere cu anticorpul anti-ITL5.
Într-una din variantele de realizare a invenţiei, anticorpul anti-TIGIT sau fragmentul acestuia de legare a antigenului, conform invenţiei (de exemplu, 14A6, 28H5, 31C6 sau versiunile umanizate ale acestora) prezintă o asociere cu anticorpul anti-ITL6.
Într-una din variantele de realizare a invenţiei, anticorpul anti-TIGIT sau fragmentul acestuia de legare a antigenului, conform invenţiei (de exemplu, 14A6, 28H5, 31C6 sau versiunile umanizate ale acestora), prezintă o asociere cu anticorpul anti-ITL7.
Într-una din variantele de realizare a invenţiei, anticorpul anti-TIGIT sau fragmentul acestuia de legare a antigenului, conform invenţiei (de exemplu, 14A6, 28H5, 31C6 sau versiunile umanizate ale acestora) prezintă o asociere cu un anticorp anti-ITL8.
Într-una din variantele de realizare a invenţiei, anticorpul anti-TIGIT sau fragmentul acestuia de legare a antigenului, conform invenţiei (de exemplu, 14A6, 28H5, 31C6 sau versiunile umanizate ale acestora), prezintă o asociere cu anticorpul anti-CD40.
Într-una din variantele de realizare a invenţiei, anticorpul anti-TIGIT sau fragmentul acestuia de legare a antigenului, conform invenţiei (de exemplu, 14A6, 28H5, 31C6 sau versiunile umanizate ale acestora), prezintă o asociere cu anticorpul anti-OX40.
Într-una din variantele de realizare a invenţiei, anticorpul anti-TIGIT sau fragmentul acestuia de legare a antigenului, conform invenţiei (de exemplu, 14A6, 28H5, 31C6 sau versiunile umanizate ale acestora), prezintă o asociere cu anticorpul anti-KIR2DL1.
Într-una din variantele de realizare a invenţiei, anticorpul anti-TIGIT sau fragmentul acestuia de legare a antigenului, conform invenţiei (de exemplu, 14A6, 28H5, 31C6 sau versiunile umanizate ale acestora), prezintă o asociere cu anticorpul anti-KIR2DL2/3.
Într-una din variantele de realizare a invenţiei, anticorpul anti-TIGIT sau fragmentul acestuia de legare a antigenului, conform invenţiei (de exemplu, 14A6, 28H5, 31C6 sau versiunile umanizate ale acestora), prezintă o asociere cu anticorpul anti-KIR2DL4.
Într-una din variantele de realizare a invenţiei, anticorpul anti-TIGIT sau fragmentul acestuia de legare a antigenului, conform invenţiei (de exemplu, 14A6, 28H5, 31C6 sau versiunile umanizate ale acestora), prezintă o asociere cu anticorpul anti-KIR2DL5A.
Într-una din variantele de realizare a invenţiei, anticorpul anti-TIGIT sau fragmentul acestuia de legare a antigenului, conform invenţiei (de exemplu, 14A6, 28H5, 31C6 sau versiunile umanizate ale acestora), prezintă o asociere cu anticorpul anti-KIR2DL5B.
Într-una din variantele de realizare a invenţiei, anticorpul anti-TIGIT sau fragmentul acestuia de legare a antigenului, conform invenţiei (de exemplu, 14A6, 28H5, 31C6 sau versiunile umanizate ale acestora), prezintă o asociere cu anticorpul anti-KIR3DL1.
Într-una din variantele de realizare a invenţiei, anticorpul anti-TIGIT sau fragmentul acestuia de legare a antigenului, conform invenţiei (de exemplu, 14A6, 28H5, 31C6 sau versiunile umanizate ale acestora), prezintă o asociere cu anticorpul anti-KIR3DL2.
Într-una din variantele de realizare a invenţiei, anticorpul anti-TIGIT sau fragmentul acestuia de legare a antigenului, conform invenţiei (de exemplu, 14A6, 28H5, 31C6 sau versiunile umanizate ale acestora), prezintă o asociere cu anticorpul anti-KIR3DL3.
Într-una din variantele de realizare a invenţiei, anticorpul anti-TIGIT sau fragmentul acestuia de legare a antigenului, conform invenţiei (de exemplu, 14A6, 28H5, 31C6 sau versiunile umanizate ale acestora), prezintă o asociere cu anticorpul anti-NKG2A.
Într-una din variantele de realizare a invenţiei, anticorpul anti-TIGIT sau fragmentul acestuia de legare a antigenului, conform invenţiei (de exemplu, 14A6, 28H5, 31C6 sau versiunile umanizate ale acestora), prezintă o asociere cu anticorpul anti-NKG2C.
Într-una din variantele de realizare a invenţiei, anticorpul anti-TIGIT sau fragmentul acestuia de legare a antigenului, conform invenţiei (de exemplu, 14A6, 28H5, 31C6 sau versiunile umanizate ale acestora), prezintă o asociere cu anticorpul anti-ICOS.
Într-una din variantele de realizare a invenţiei, anticorpul anti-TIGIT sau fragmentul acestuia de legare a antigenului, conform invenţiei (de exemplu, 14A6, 28H5, 31C6 sau versiunile umanizate ale acestora), prezintă o asociere cu anticorpul anti-SIRPα.
Într-una din variantele de realizare a invenţiei, anticorpul anti-TIGIT sau fragmentul acestuia de legare a antigenului, conform invenţiei (de exemplu, 14A6, 28H5, 31C6 sau versiunile umanizate ale acestora), prezintă o asociere cu anticorpul anti-4-1BB.
Într-una din variantele de realizare a invenţiei, anticorpul anti-TIGIT sau fragmentul acestuia de legare a antigenului, conform invenţiei (de exemplu, 14A6, 28H5, 31C6 sau versiunile umanizate ale acestora), prezintă o asociere cu anticorpul anti-IL-10.
Într-una din variantele de realizare a invenţiei, anticorpul anti-TIGIT sau fragmentul acestuia de legare a antigenului, conform invenţiei (de exemplu, 14A6, 28H5, 31C6 sau versiunile umanizate ale acestora), prezintă o asociere cu anticorpul anti-TSLP.
Într-una din variantele de realizare a invenţiei, anticorpul anti-TIGIT sau fragmentul acestuia de legare a antigenului, conform invenţiei (de exemplu, 14A6, 28H5, 31C6 sau versiunile umanizate ale acestora), prezintă o asociere cu IL-10 sau cu IL-10 PEGilat.
Într-una din variantele de realizare a invenţiei, anticorpul anti-TIGIT sau fragmentul acestuia de legare a antigenului, conform invenţiei (de exemplu, 14A6, 28H5, 31C6 sau versiunile umanizate ale acestora), este prezent în asociere cu unul sau cu mai mulţi inhibitori (de exemplu, cu o moleculă organică mică sau cu un anticorp sau un fragment al acestuia de legare a antigenului), cum ar fi: un inhibitorul mTOR (factorul ţintă al rapamicinei la mamifere), un agent citotoxic, un agent pe bază de platină, un inhibitor de EGFR, un inhibitor de VEGF, un stabilizator de microtubuli, un taxan, un inhibitor de CD20, un inhibitor de CD52, un inhibitor de CD30, un inhibitor de RANK (ligandul receptor-activatorului factorului nuclear kappa-B), un inhibitor de RANKL (ligandul receptor-activatorului factorului nuclear kappa-B), un inhibitor de ERK, un inhibitor de MAP Kinaze, un inhibitor de AKT, un inhibitor de MEK, un inhibitor de PI3K, un inhibitor de HER1, un inhibitor de HER2, un inhibitor de HER3, un inhibitor de HER4, un inhibitor de Bcl-2, un inhibitor de CD22, un inhibitor de CD79b, un inhibitor de ErbB2 sau un inhibitor de farnesil-protein transferază.
Într-una din variantele de realizare a invenţiei, anticorpul anti-TIGIT sau fragmentul acestuia de legare a antigenului, conform invenţiei (de exemplu, 14A6, 28H5, 31C6 sau versiunile umanizate ale acestora), este prezent în asociere cu unul sau cu mai mulţi dintre: acidul 13-cis-retinoic, 3-[5-(metilsulfonilpiperadinemetil)-indolil]-chinolone, 4-hidroxitamoxifen, 5-deoxiuridin, 5'-deoxi-5-fluorouridin, 5-fluorouracil, 6-mecaptopurină, 7-hidroxistaurosporină, A-443654, abiraterone acetat, abraxane, ABT-578, acolbifene, ADS-100380, ALT-110, altretamină, amifostină, aminoglutetimidă, amrubicin, amsacrină, anagrelidă, anastrozol, angiostatină, AP-23573, ARQ-197, arzoxifen, AS-252424, AS-605240, asparaginază, AT-9263, atrasentan, axitinib, AZD1152, vaccinul Bacillus Calmette-Guerin (BCG), batabulin, BC-210, besodutox, bevacizumab, bicalutamidă, Bio111, BIO140, bleomicină, BMS-214662, BMS-247550, BMS-275291, BMS-310705, bortezimib, buserelin, busulfan, calcitriol, camptotecină, canertinib, capecitabină, carboplatină, carmustină, CC8490, cediranib, CG-1521, CG-781, hlamydocină, clorambucil, clorotoxină, cilengitide, cimetidină, cisplatină, cladribină, clodronat, COL-3 CP-724714, ciclofosfamidă, ciproteron, ciproteroneacetate, citarabină, citosinearabinosidă, dacarbazină, dacinostat, dactinomicină, dalotuzumab, danusertib, dasatanib, daunorubicină, decatanib, deguelin, diftitox, docetaxel, dovitinib, doxorubicină, droloxifen, edotecarin, ytriu-90 marcat cu edotreotid, edotreotid, EKB-569, EMD121974, endostatină, enzalutamidă, enzastaurin, epirubicină, epothilone B, ERA- 923, erbitux, erlotinib, estradiol, estramustină, etopozidă, everolimus, exemestan, ficlatuzumab, finasterid, flavopiridol, floxuridină, fludarabină, fludrocortizon, fluoximesteronă, flutamidă, FOLFOX regimen, fulvestrant, galeterone, gefitinib, gemcitabină, gimatecan, goserelină, acetat de goserelină, gosipol, GSK461364, GSK690693, HMR-3339, hidroxiprogesteron caproat, hidroxiuree, IC87114, idarubicin, idoxifen, ifosfamidă, IM862, imatinib, IMC-1C11, INCB24360, INO1001, interferon, interleukina-12, ipilimumab, irinotecan, JNJ-16241199, ketoconazol, KRX-0402, lapatinib, lasofoxifen, letrozol, leucovorin, leuprolidă, acetat de leuprolidă, levamisol, paclitaxel captat de liposom, lomustină, lonafarnib, lucanton, LY292223, LY292696, LY293646, LY293684, LY294002, LY317615, marimastat, mecloretamină, medroxiprogesteron acetat, megestrol acetat, melfalan, mercaptopurină, mesna, metotrexat, mitramicină, mitomicină, mitotan, mitoxantronă, tozasertib, MLN8054, neovastat, neratinib, neuradiab, nilotinib, nilutimid, nolatrexed, NVP-BEZ235, oblimersen, octreotid, ofatumumab, oregovomab, orteronel, oxaliplatină, paclitaxel, palbociclib, pamidronat, panitumumab, pazopanib, PD0325901, PD184352, PEG-interferon, pemetrexed, pentostatină, perifosin, fenilalanină muştar, PI-103, pictilisib, PIK-75, pipendoxifen, PKI-166, plicamicină, porfimer, prednison, procarbazină, progestină, PX-866, R-763, raloxifen, raltitrexed, razoxin, ridaforolimus, rituximab, romidepsin, RTA744, rubitecan, scriptaid, Sdx102, seliciclib, selumetinib, semaxanib, SF1126, sirolimus, SN36093, sorafenib, spironolactonă, squalamină, SR13668, streptozocină, SU6668, acid suberoilanalid hidroxamic, sunitinib, estrogen sintetic, talampanel, talimogen laherparepvec, tamoxifen, temozolomidă, temsirolimus, tenipoxid, tesmilifen, testosteron, tetrandrină, TGX-221, talidomidă, tioguanină, tiotepa, ticilimumab, tipifarnib, tivozanib, TKI-258, TLK286, topotecan, toremifen citrat, trabedectin, trastuzumab, tretinoin, tricostatina A, monohidrat de triciribinfosfat, triptorelin pamoat, TSE-424, uramustin, acid valproic, valrubicină, vandetanib, vatalanib, capcana de VEGF, vinblastină, vincristină, vindesină, vinorelbină, vitaxin, vitespan, vorinostat, VX-745, wortmannin, Xr311, zanolimumab, ZK186619, ZK-304709, ZM336372, ZSTK474.
Într-una din variantele de realizare a invenţiei, anticorpul anti-TIGIT sau fragmentul acestuia de legare a antigenului, conform invenţiei (de exemplu, 14A6, 28H5, 31C6 sau versiunile umanizate ale acestuia), prezintă o asociere cu una sau cu mai multe antiemetice incluzand, dar fara a se limita la acestea: casopitant (GlaxoSmithKline), netupitant (MGI-Helsinn) şi alţi antagonişti ai receptorului NK-1, palonosetron (comercializat ca Aloxi de către compania MGI Pharma), aprepitant (comercializat ca Emend de către compania Merck şi Co.; Rahway, NJ), difenhidramină (comercializat ca Benadryl® de către compania Pfizer, New York, NY), hidroxizin (comercializat ca Atarax® de către compania Pfizer, New York, NY), metoclopramidă (comercializat ca Reglan® de către compania AH Robins Co.; Richmond, VA), lorazepam (comercializat ca Ativan® de către compania Wyeth, Madison, NJ), alprazolam (comercializat ca Xanax de către compania Pfizer, New York, NY), haloperidol (comercializat ca Haldol® de către compania Ortho-McNeil, Raritan, NJ), droperidol (Inapsine®), dronabinol (comercializat ca Marinol® de către compania Solvay Pharmaceuticals, Inc.; Marietta, GA), dexametazonă (comercializat ca Decadron® de către compania Merck şi Co.; Rahway, NJ), metilprednisolon (comercializat ca Medrol® de către compania Pfizer, New York, NY), proclorperazină (comercializat ca Compazine® de către compania Glaxosmithkline, Research Triangle Park, NC), granisetron (comercializat ca Kytril® de către compania Hoffmann-La Roche Inc.; Nutley, NJ), ondansetron (comercializat ca Zofran® de către compania Glaxosmithkline, Research Triangle Park, NC), dolasetron (comercializat ca Anzemet® de către compania Sanofi-Aventis, New York, NY), tropisetron (comercializat ca Navoban® de către compania Novartis, East Hanover, NJ).
Alte efecte secundare ale tratamentului cancerului includ deficitul de globule roşii şi albe. În consecinţă, într-una din variantele de realizare a invenţiei, anticorpul anti-TIGIT sau fragmentul acestuia de legare a antigenului (de exemplu, 14A6, 28H5, 31C6 sau versiunile umanizate ale acestora) prezintă o asociere cu un agent care tratează sau care previne o astfel de deficienţă, cum ar fi, de exemplu, filgrastim, PEG-filgrastim, eritropoietină, epoetină alfa sau darbepoetină alfa.
Într-una dintre variantele de realizare a invenţiei, anticorpul anti-TIGIT sau fragmentul acesteia de legare a antigenului, conform invenţiei (de exemplu, 14A6, 28H5, 31C6 sau versiunile umanizate ale acestora), se administrează în asociere cu radioterapia anticanceroasă. De exemplu, într-o variantă de realizare a invenţiei, radioterapia este o terapie cu fascicul extern (EBT): un procedeu de furnizare a fasciculului de raze-X de înaltă energie la locul tumorii. Fasciculul este generat în exteriorul organismului pacientului (de exemplu, printr-un accelerator liniar) şi este orientat la locul tumorii. Aceste raze X pot distruge celulele canceroase, iar o planificare minuţioasă a tratamentului permite ca ţesuturile normale adiacente să fie protejate de acţiunea lor. În interiorul organismului pacientului nu este plasată nici o sursă radioactivă. Într-o variantă de realizare a invenţiei, radioterapia prezintă o terapie prin fascicul de protoni: un tip de terapie conformală care bombardează ţesutul bolnav cu protoni, în loc de raze X. Într-o variantă de realizare a invenţiei, radioterapia prezintă o terapie conformală cu fascicul extern: un procedeu care utilizează o tehnologie avansată pentru a adapta radioterapia la structurile organismului individului. Într-o variantă de realizare a invenţiei, radioterapia prezintă brahiterapie: plasarea temporară a materialelor radioactive în interiorul organismului pacientului, folosită, de regulă, pentru a administra o doză suplimentară sau pentru a mări intensitatea radiaţiei într-o anumită zonă.
Într-o variantă de realizare a invenţiei, procedura chirurgicală, administrată în asociere cu un anticorp anti-TIGIT sau cu un fragment al acestuia de legare a antigenului (de exemplu, 14A6, 28H5. 31C6 sau versiunile umanizate ale acestora), prezintă o tumorectomie chirurgicală.
Termenul „în asociere cu” indică faptul că componentele, administrate printr-un procedeu conform prezentei invenţii (de exemplu, un anticorp anti-TIGIT, de exemplu, un anticorp umanizat), sau un fragment al acestuia de legare a antigenului (de exemplu, 14A6, 28H5, 31C6 sau versiunile lor umanizate), împreună cu pembrolizumab)) pot fi constituite într-o singură compoziţie, pentru o aplicare simultană, sau pot fi constituite separat, în două sau mai multe compoziţii (de exemplu, un kit). Fiecare componentă poate fi administrată la un subiect într-un moment de timp diferit de cel în care se administrează un alt component; de exemplu, fiecare administrare poate fi efectuată non-simultan (de exemplu, separat sau succesiv) în câteva intervale ale unei anumite perioade de timp. Totodată, componentele separate pot fi administrate unui subiect prin acelaşi sau printr-un alt procedeu.
Utilizări experimentale şi diagnostice
Anticorpii anti-TIGIT şi fragmentele acestora de legare a antigenului, dezvăluiţi în prezenta invenţie (de exemplu, 14A6, 28H5, 31C6 şi versiunile umanizate ale acestora), pot fi utilizaţi în calitate de agenţi de purificare a afinităţii. În acest proces, anticorpii anti-TIGIT şi fragmentele acestora de legare a antigenului sunt imobilizaţi pe o fază solidă, cum este Sephadex, sticlă sau răşină de agaroza, sau hârtie de filtru, utilizând procedeele bine cunoscute în domeniul de referinţă. Anticorpul sau fragmentul imobilizat este pus în contact cu o probă conţinând proteina TIGIT (sau un fragment al acestuia) care urmează să fie purificată şi apoi substratul este spălat cu un solvent adecvat, care poate îndepărta, practic, tot materialul din probă, cu excepţia proteinei TIGIT, care este legată la anticorpul sau fragmentul imobilizat. În cele din urmă, substratul este spălat cu un solvent care eluează TIGIT-ul legat (de exemplu, proteina A). Astfel de anticorpi şi fragmente imobilizate fac parte din prezenta invenţie.
În continuare, sunt prezentaţi antigeni pentru generarea anticorpilor secundari care pot fi utilizaţi, de exemplu, pentru efectuarea analizelor Western şi altor imunoteste, discutate în prezenta invenţie. În particular, sunt dezvăluite polipeptide care cuprind regiunile variabile şi/sau secvenţele CDR ale unui anticorp terapeutic, descris în documentul de faţă (de exemplu, 14A6, 28H5 sau 31C6), şi care pot fi utilizate pentru a genera anticorpi anti-idiotipici pentru aplicare la detectarea specifică a prezenţei anticorpului, de exemplu, într-un context terapeutic.
Anticorpii anti-TIGIT (de exemplu, anticorpi umanizaţi) şi fragmentele acestora de legare a antigenului pot fi, de asemenea, utilizaţi în teste diagnostice ale proteinei TIGIT, de exemplu, la detectarea expresiei sale în celule specifice, în ţesuturi sau ser, de exemplu, în celulele tumorale, cum sunt celulele de melanom. Astfel de procedee de diagnostic pot fi utilizate la determinarea unor diverse afecţiuni.
Prezenta invenţie se referă la testele ELISA (teste pentru imunoabsorbţia enzimelor) care includ utilizarea unui anticorp anti-TIGIT sau a unui fragment al acestuia de legare a antigenului, dezvăluit în documentul de faţă (de exemplu, 14A6 sau o versiune umanizată a acestuia).
De exemplu, un astfel de procedeu cuprinde următoarele etape:
(a) acoperirea unui substrat (de exemplu, suprafaţa unei cavităţi de pe o placă de microtitrare, de exemplu, o placă de plastic) cu anticorpul anti-TIGIT sau cu fragmentul acestuia de legare a antigenului;
(b) aplicarea unei probe care urmează să fie testată la prezenţa TIGIT-ului pe substrat;
(c) spălarea plăcii, astfel încât materialul nelegat din probă este îndepărtat;
(d) introducerea anticorpilor marcaţi prin marcaj detectabil (de exemplu, anticorpi legaţi la enzyme), care, de asemenea, sunt specifici antigenului TIGIT;
(e) spălarea substratului, astfel încât anticorpii marcaţi nelegaţi sunt eliminaţi;
(f) în cazul în care anticorpii marcaţi sunt legaţi cu enzima, se introduce o substanţă chimică care este transformată de către enzimă într-un semnal fluorescent; şi
(g) detectarea prezenţei anticorpului marcat.
Detectarea marcajului, asociat cu substratul, indică prezenţa proteinei TIGIT.
Într-o următoarea variantă de realizare, anticorpul marcat sau fragmentul acestuia de legare a antigenului este marcat cu ajutorul peroxidazei care reacţionează cu ABTS (de exemplu, acid 2,2'-azino-bis(3-etilbenztiazolin-6-sulfonic)) sau 3,3',5,5'-tetrametilbenzidină pentru a obţine schimbarea culorii, care poate fi detectată. În mod alternativ, anticorpul sau fragmentul marcat este marcat cu un radioizotop detectabil (de exemplu, 3H) care poate fi identificat cu ajutorul unui contor de scintilaţie în prezenţa unui scintilator.
Un anticorp anti-TIGIT sau un fragment al acestuia de legare a antigenului, conform invenţiei (de exemplu, 14A6, 28H5, 31C6 sau versiunile umanizate ale acestora), pote fi utilizaţi într-un test Western blot sau de imunoblot al proteinelor. O astfel de procedură face parte din prezenta invenţie şi include, de exemplu:
(1) transferarea opţională a proteinelor dintr-o probă care urmează să fie testată la prezenţa TIGIT-ului (de exemplu, după separarea electroforetică a proteinelor dintr-o probă prin intermediul PAGE sau SDS-PAGE) pe o membrană sau pe un alt substrat solid folosind un procedeu cunoscut în domeniul de referinţă (de exemplu, blotting semi-uscat sau blotting în rezervor); contactarea membranei sau a altui substrat solid pentru a fi testate la prezenţa TIGIT-ului legat sau a unui fragment al acestuia cu un anticorp anti-TIGIT sau cu un fragment al acestuia de legare a antigenului, conform invenţiei.
O astfel de membrană poate lua forma unei membrane pe bază de nitroceluloză sau de vinil (de exemplu, fluorură de poliviniliden (PVDF)) pe care au fost transferate proteinele care trebuie să fie testate la prezenţa TIGIT-ului într-un gel pentru PAGE non-denaturant (electroforeză în gel de poliacrilamidă) sau în gel pentru SDS-PAGE (electroforeză în gel de poliacrilamidă cu dodecil sulfat de sodiu) (de exemplu, după separarea electroforetică în gel). Înainte de a pune membrana în contact cu anticorpul anti-TIGIT sau cu fragmentul, membrana este în mod opţional blocată, de exemplu, cu lapte praf degresat sau cu altele similare, astfel încât să lege situsurile nespecifice de legare a proteinelor pe membrană.
(2) spălarea membranei o dată sau de mai multe ori pentru a îndepărta anticorpul anti-TIGIT nelegat sau fragmentul acestuia şi alte substanţe nelegate; şi
(3) detectarea anticorpului anti-TIGIT legat sau a fragmentului.
Detectarea anticorpului legat sau a fragmentului indică faptul că proteina TIGIT este prezentă pe membrană sau pe substrat şi în probă. Detectarea anticorpului legat sau a fragmentului poate fi efectuată prin intermediul legării anticorpului sau a fragmentului cu un anticorp secundar (un anticorp anti-imunoglobulină), marcat cu un marcaj detectabil, şi, ulterior, prin identificarea prezenţei anticorpului secundar.
Anticorpii anti-TIGIT şi fragmentele acestora de legare a antigenului, descrişi în documentul de faţă (de exemplu, 14A6, 28H5, 31C6 şi versiunile umanizate ale acestora), pot fi, de asemenea, utilizaţi pentru imunohistochimie. Un astfel de procedeu face parte din prezenta invenţie şi cuprinde, de exemplu,
(1) punerea în contact a unei celule (de exemplu, a unei o celule tumorale, cum ar fi o celulă de melanom), care urmează să fie testată la prezenţa proteinei TIGIT, cu un anticorp anti-TIGIT sau un fragment al acestuia de legare a antigenului, conform invenţiei; şi
(2) detectarea anticorpului sau a fragmentului pe- sau în celulă.
În cazul în care anticorpul sau fragmentul ca atare este marcat cu un marcaj detectabil, acesta poate fi detectat în mod direct. Ca alternativă, anticorpul sau fragmentul poate fi legat cu un anticorp secundar marcat cu un marcaj detectabil, care este apoi identificat.
Anumiţi anticorpi anti-TIGIT şi fragmentele acestora de legare a antigenului, descrişi în documentul de faţă (de exemplu, 14A6, 28H5, 31C6 şi versiunile umanizate ale acestora), pot fi, de asemenea, utilizaţi pentru vizualizarea tumorilor in vivo. Un astfel de procedeu poate include injectarea unui anticorp anti-TIGIT radiomarcat sau a unui fragment al acestuia de legare a antigenului în organismul unui pacient care urmează să fie testat la prezenţa unei tumori, asociate cu expresia TIGIT (de exemplu, care exprimă TIGIT, de exemplu, pe suprafaţa celulei tumorale), urmată de vizualizarea nucleară a organismului pacientului pentru a detecta prezenţa anticorpului sau a fragmentului marcat, de exemplu, în loci care conţin o concentraţie ridicată de anticorp sau de fragment legaţi la tumoare. Detectarea locilor indică prezenţa tumorilor TIGIT+ şi a celulelor tumorale.
Tehnicile de vizualizare includ imagistica SPECT (tomografie computerizată cu emisie de monofotoni) sau imagistica PET (tomografie cu emisie de pozitroni). Marcajele includ, de exemplu, iod-123 (123I) şi techneţiu-99m (99mTc), de exemplu, în combinaţie cu imagistica SPECT sau cu 11C, 13N, 15O sau 18F, de exemplu, în combinaţie cu imagistica PET sau cu indiu-111 (Gordon et al. International Rev. Neurobiol, no. 67, 2005, p. 385-440).
Compoziţii farmaceutice şi administrarea lor
Pentru obţinerea compoziţiilor farmaceutice sau sterile de anticorpi anti-TIGIT şi fragmente ale acestora de legare a antigenului, conform invenţiei (de exemplu, 14A6, 28H5, 31C6 şi versiunile umanizate ale acestora), anticorpul sau fragmentul acestuia de legare a antigenului este amestecat cu un purtător acceptabil farmaceutic sau cu un excipient. A se vedea, de exemplu, Remington's Pharmaceutical Sciences şi U.S. Pharmacopeia: National Formulary, Mack Publishing Company, Easton, PA (1984).
Compoziţia preparatelor terapeutice şi diagnostice poate fi obţinută prin amestecarea cu purtători, excipienţi sau stabilizatori acceptabili, de exemplu, sub formă de pulberi liofilizate, paste, soluţii apoase sau suspensii (a se vedea, de exemplu, Hardman şi colab. (2001) Goodman şi Gilman's The Pharmacological Basis of Therapeutics, McGraw-Hill, New York, NY; Gennaro (2000) Remington: The Science and Practice of Pharmacy, Lippincott, Williams şi Wilkins, New York, NY; Avis, şi colab. (ed.) (1993) Pharmaceutical Dosage Forms: Parenteral Medications, Marcel Dekker, NY; Lieberman, şi colab. (ed.) (1990) Pharmaceutical Dosage Forms: Tablets, Marcel Dekker, NY; Lieberman, şi colab. (ed.) (1990) Pharmaceutical Dosage Forms: Disperse Systems, Marcel Dekker, NY; Weiner şi Kotkoskie (2000) Excipient Toxicity and Safety, Marcel Dekker, Inc., New York, NY).
Toxicitatea şi eficacitatea terapeutică a anticorpilor conform invenţiei, administraţi de sine stătător sau în combinaţie cu un alt agent terapeutic, pot fi determinate prin procedee farmaceutice standard în culturi celulare sau animale experimentale, de exemplu, pentru determinarea LD50 (doză letală pentru 50% din populaţie) şi ED50 (doză terapeutică eficientă pentru 50% din populaţie). Coraportul dozei dintre efectele toxic şi terapeutic constituie indicele terapeutic (LD50/ED50). Datele obţinute din aceste teste ale culturilor celulare şi studii pe animale pot fi utilizate la formularea diapazonului de posologie pentru utilizarea la om. Posologia acestor compuşi se află, de preferinţă, într-un diapazon de concentraţii circulante care includ ED50 cu o toxicitate neînsemnată sau cu lipsă de toxicitate. În acest diapazon doza poate varia în funcţie de forma de dozare a preparatului utilizată şi de calea de administrare.
În următoarea variantă de realizare, agentul terapeutic suplimentar se administrează unui subiect în asociere cu un anticorp anti-TIGIT sau cu un fragment al acestuia de legare a antigenului, conform invenţiei (de exemplu, 14A6, 28H5, 31C6), în conformitate cu Physicians' Desk Reference 2003 (Thomson Healthcare, ediţia a 57-ea (1 noiembrie 2002)). Modul de administrare poate varia. Căile de administrare includ administrarea orală, rectală, transmucozală, intestinală, parenterală; intramusculară, subcutanată, intradermică, intramedulară, intratecală, intraventriculară directă, intravenoasă, intraperitoneală, intranazală, intraoculară, inhalare, insuflare, topică, cutanată, transdermică sau intraarterială.
În variante particulare de realizare, anticorpii anti-TIGIT sau fragmentele acestora de legare a antigenului, conform invenţiei (de exemplu, 14A6, 28H5, 31C6 şi versiunile umanizate ale acestora), pot fi administraţi pe cale invazivă, cum ar fi prin injectare. În alte variante de realizare a invenţiei, anticorpul anti-TIGIT sau fragmentul acestuia de legare a antigenului, sau compoziţia farmaceutică a acestuia, se administrează intravenos, subcutanat, intramuscular, intraarterial, intratumoral sau prin inhalare, sub formă de aerosol. Administrarea pe căi non-invazive (de exemplu, pe cale orală, de exemplu, în pastile, capsule sau comprimate) face parte, de asemenea, din volumul invenţiei solicitate.
Prezenta invenţie se referă la un recipient (de exemplu, un flacon din plastic sau din sticlă, de exemplu, cu capac sau cu coloană cromatografică, ac cu gaură sau cilindru de seringă) care cuprinde oricare dintre anticorpii sau fragmentele de legare a antigenului, conform invenţiei (de exemplu, 14A6, 28H5, 31C6 şi versiunile umanizate ale acestora), sau o compoziţie farmaceutică a acestora. Prezenta invenţie se referă, de asemenea, la un dispozitiv de injectare cuprinzând oricare dintre anticorpii sau fragmentele de legare a antigenului, conform invenţiei (de exemplu, 14A6, 28H5, 31C6 şi versiunile umanizate ale acestora), sau o compoziţie farmaceutică a acestora. Dispozitivul de injectare prezintă un dispozitiv care introduce o substanţă în organismul unui pacient pe cale parenterală, de exemplu, intramusculară, subcutanată sau intravenoasă. De exemplu, un dispozitiv de injectare poate fi o seringă (de exemplu, pre-umplută cu compoziţia farmaceutică, cum ar fi un auto-injector), care, de exemplu, include un cilindru sau un balon pentru menţinerea fluidului ce urmează să fie injectat (de exemplu, anticorp sau fragment, sau o compoziţie farmaceutică a acestuia), un ac pentru străpungerea pielii şi/sau a vaselor de sânge pentru injectarea fluidului; şi un piston pentru împingerea fluidului din cilindru prin gaura acului. Într-una dintre variantele de realizare a invenţiei, dispozitivul pentru injecţie, care cuprinde un anticorp sau un fragment al acestuia de legare a antigenului, conform prezentei invenţii, sau o compoziţie farmaceutică a acestuia, prezintă un dispozitiv de administrare intravenoasă (i/v). Un astfel de dispozitiv conţine anticorpul sau fragmentul acestuia, sau o compoziţie farmaceutică a acestuia, într-o canulă sau un trocar/ac, cu posibilitatea de a fi fixate la un tub care poate fi unit la un pachet sau un rezervor de menţinere a fluidului (de exemplu, o soluţie salină; sau o soluţie Ringer-lactat cuprinzând NaCl, lactat de sodiu, KCl, CaCl2 şi, în mod opţional, incluzând glucoză), introduse în organismul pacientului prin canulă sau trocar/ac. Anticorpul sau fragmentul, sau compoziţia farmaceutică a acestuia, poate fi, într-un exemplu de realizare a invenţiei, introdus în dispozitiv după introducerea trocarului şi a canulei în vena subiectului şi trocarul este îndepărtat din canula introdusă. Dispozitivul i/v poate, de exemplu, să fie introdus în vena periferică (de exemplu, în mână sau umăr); în vena cavă superioară sau vena cavă inferioară, sau în atriul drept al inimii (de exemplu, un cateter intravenos central); sau în vena subclavie, jugulară internă sau femurală şi, de exemplu, dispozitivul se avansează în direcţia inimii până când acesta ajunge la vena cavă superioară sau la atriul drept (de exemplu, cateterul venos central). Într-una dintre variantele de realizare a invenţiei, dispozitivul pentru injecţii prezintă un auto-injector; un injector cu jet sau o pompă de perfuzie externă. În injectorul cu jet se utilizează un jet subţire de lichid la o presiune înaltă care penetrează epiderma pentru a introduce anticorpul sau fragmentul, sau compoziţia farmaceutică a acestuia, în organismul pacientului. Pompele externe de perfuzie constituie dispozitive medicale care eliberează anticorpul sau fragmentul, sau compoziţia farmaceutică a acestuia, în organismul pacientului în cantităţi controlate. Pompele de perfuzie externă pot fi acţionate în mod electric sau mecanic. Diferite pompe funcţionează în mod diferit, de exemplu, pompa cu seringă menţine lichidul în rezervorul seringii şi un piston mobil controlează distribuţia lichidului, pompa elastomer menţine lichidul în rezervorul unui balon elastic şi presiunea pereţilor elastici ai balonului conduce eliberarea lichidului. Într-o pompă peristaltică, un set de role efectuează compresia pe lungimea tubului flexibil, împingând fluidul înainte. Într-o pompă multi-canal, lichidele pot fi eliberate din mai multe rezervoare, cu diferite viteze.
Compoziţiile farmaceutice, dezvăluite în prezenta descriere, pot fi, de asemenea, administrate prin intermediul unui dispozitiv de injectare hipodermică fără ac; cum sunt dispozitivele descrise în brevetele US 6620135; US 6096002; US 5399163; US 5383851; US 5312335; US 5064413; US 4941880; US 4790824 sau US 4596556. Astfel de dispozitive fără ace, care conţin o compoziţie farmaceutică, sunt, de asemenea, parte a prezentei invenţii. Compoziţiile farmaceutice, descrise în documentul de faţă, pot fi, de asemenea, administrate prin perfuzie. Exemplele de implanturi şi module pentru administrarea compoziţiilor farmaceutice bine cunoscute includ exemplele, descrise în brevetul US nr. 4487603, în care este descrisă o pompă implantabilă pentru microperfuzie de eliberare a preparatului farmaceutic cu o viteză controlată; brevetul US 4447233, în care este descrisă o pompă de perfuzie a medicamentului pentru administrarea preparatului la o viteză de perfuzare controlată; brevetul US 4447224, în care este descris un aparat implantabil de perfuzie cu debit variabil pentru eliberarea continuă a preparatului; brevetul US 4439196, în care este descris un sistem osmotic de administrare a medicamentului având compartimente cu mai multe camere. Specialiştilor în domeniul de referinţă le sunt bine cunoscute şi multe alte implanturi, sisteme de administare şi module similare, şi cele care cuprind compoziţiile farmaceutice, conform prezentei invenţii, sunt parte a invenţiei de faţă
Ca alternativă, se poate administra anticorpul anti-TIGIT sau fragmentul de legare a antigenului, conform invenţiei (de exemplu, 14A6, 28H5, 31C6 sau versiunile umanizate ale acestora), în mod local şi nu sistemic, de exemplu, prin injectarea anticorpului sau fragmentului direct în tumoare, de exemplu, într-o tumoare TIGIT+. Totodată, se poate administra anticorpul sau fragmentul într-un sistem-ţintă de eliberare a medicamentului, de exemplu, într-un lipozom acoperit cu un anticorp tisular-specific, direcţionat, de exemplu, spre o tumoare TIGIT+, de exemplu, caracterizată printr-o imunopatologie. Lipozomii pot fi direcţionaţi către ţesutul afectat şi absorbiţi în mod selectiv de către ţesutul afectat. Astfel de procedee şi de lipozomi constituie o parte din prezenta invenţie.
Regimul de administrare depinde de mai mulţi factori, inclusiv de viteza de rotaţie a anticorpului terapeutic sau a fragmentului de legare a antigenului, în ser sau în ţesut, de nivelul simptomelor, de imunogenitatea anticorpului terapeutic şi de accesibilitatea celulelor ţintă în matricea biologică. În mod preferabil, regimul de administrare asigură o eliberarea unei cantităţi suficiente de anticorp sau de fragment terapeutic pentru a asigura un efect de îmbunătăţire a stării preconizate a afecţiunii, minimizând simultan efectele secundare nedorite. În mod corespunzător, cantitatea de preparat biologic eliberat depinde parţial de anticorpul terapeutic concret şi de severitatea afecţiunii care este tratată. Sunt disponibile instrucţiuni privind selectarea unor doze adecvate de anticorpi terapeutici sau de fragmente ale acestora (a se vedea, de exemplu, Wawrzynczak. Antibody Therapy, Bios. Scientific Pub. Ltd, Oxfordshire, UK, 1996; Kresina (ed.). Monoclonal Antibodies, Cytokines and Arthritis, Marcel Dekker, New York, NY, 1991; Bach (ed.). Monoclonal Antibodies and Peptide Therapy in Autoimmune Diseases, Marcel Dekker, New York, NY, 1993; Baert, şi colab. New Engl. J. Med., no 348, 2003, p. 601-608; Milgrom şi colab. New Engl. J. Med., no 341, 1999, p. 1966-1973; Slamon şi colab. New Engl. J. Med., no 344, 2001, p. 783-792; Beniaminovitz şi colab. New Engl. J. Med., no 342, 2000, p. 613-619; Ghosh şi colab. New Engl. J. Med., no 348, 2003, p. 24-32; Lipsky şi colab. New Engl. J. Med., no 343, 2000, p. 1594-1602).
Determinarea dozei adecvate este făcută de către clinician, de exemplu, utilizând parametri sau factori cunoscuţi sau suspectaţi în domeniul de referinţă, care influenţează tratamentul. De regulă, doza începe cu o cantitate ceva mai mică decât doza optimă şi în continuare aceasta este mărită prin paşi mici, până când se ajunge la efectul dorit sau efectul optimal în raport cu oricare efecte secundare negative. Măsurările diagnostice importante includ măsurarea simptomelor, de exemplu, a inflamării sau nivelul de producere a citokinelor inflamatorii. De regulă, este de dorit ca preparatul biologic utilizat să provină de la aceeaşi specie ca şi animalul destinat tratamentului, minimizând, astfel, orice răspuns imun la reactivul respectiv. În cazul subiecţilor umani, de exemplu, poate fi dezirabilă folosirea anticorpilor umanizaţi şi complet umani.
Anticorpii sau fragmentele acestora de legare a antigenului, dezvăluiţi în documentul de faţă (de exemplu, 14A6, 28H5, 31C6 şi versiunile umanizate ale acestora), pot fi furnizaţi prin infuzie continuă sau prin doze administrate, de exemplu, zilnic, de 1-7 ori pe săptămână, săptămânal, o dată la două săptămâni, lunar, o dată la două luni, trimestrial, semestrial, anual etc. Dozele pot fi administrate, de exemplu, intravenos, subcutanat, local, oral, nazal, rectal, intramuscular, intracerebral, intraspinal sau prin inhalare. Doza săptămânală totală constituie, de regulă, cel puţin 0,05 µg/kg greutate corporală, mai frecvent cel puţin 0,2 µg/kg, 0,5 µg/kg, 1 µg/kg, 10 µg/kg, 100 µg/kg, 0,25 mg/kg, 1,0 mg/kg, 2,0 mg/kg, 5,0 mg/ml, 10 mg/kg, 25 mg/kg, 50 mg/kg sau mai mare (a se vedea, de exemplu, Yang, şi colab. New Engl. J. Med., no 349, 2003, p. 427-434; Herold, şi colab. New Engl. J. Med., no 346, 2002, p. 1692-1698; Liu, şi colab. J. Neural. Neurosurg. Psych., no 67, 1999, p. 451-456; Portielji, şi colab. Cancer Immunol. Immunother., no 52, 2003, p. 151-144). Dozele pot fi, de asemenea, furnizate pentru a se obţine concentraţia predeterminată dorită a anticorpului anti-TIGIT în serul subiectului, cum ar fi de 0,1, 0,3, 1, 3, 10, 30, 100, 300 µg/ml sau mai mult. În alte exemple de realizare, un anticorp anti-TIGIT, conform prezentei invenţii, este administrată, de exemplu, subcutanat sau intravenos, în baza administrării săptămânale, o dată la două săptămâni, „la fiecare 4 săptămâni”, o dată în lună, o dată la două luni sau o dată în trimestru a câte 10, 20, 50, 80, 100, 200, 500, 1000 sau 2500 mg/subiect.
Aşa cum este utilizat în descrierea de faţă, termenul „cantitate eficientă” se referă la o cantitate dintr-un anti-TIGIT sau un fragment al acestuia de legare a antigenului, conform invenţiei (de exemplu, 14A6 umanizat sau 28H5 umanizat), care, atunci când este administrat separat sau în combinaţie cu un agent terapeutic suplimentar într-o celulă, ţesut sau subiect, se dovedeşte a fi eficientă pentru a produce o ameliorare măsurabilă a unuia sau a mai multor simptome de boală, de exemplu, a cancerului sau a progresiei cancerului. Totodată, o doză eficientă se referă la cantitatea de anticorp sau de fragment suficientă pentru a avea ca rezultat cel puţin ameliorarea parţială a simptomelor, de exemplu, contracţia sau eliminarea tumorii, lipsa creşterii tumorii, mărirea timpului de supravieţuire. Atunci când este utilizat pentru un ingredient activ individual, administrat de sine stătător, doza eficientă se referă anume la acel ingredient. Atunci când este aplicat pentru o combinaţie, doza eficientă se referă la cantităţile combinate de ingrediente active, indiferent de faptul dacă sunt administrate în combinaţie, succesiv sau simultan, care au ca rezultat un efect terapeutic. O cantitate eficientă dintr-un preparat terapeutic are ca rezultat o ameliorare a unei măsurări diagnostice sau a unui parametru cu cel puţin 10%; de regulă, cu cel puţin 20%; preferabil, cu cel puţin aproximativ 30%; mai preferabil, cu cel puţin 40% şi cel mai preferabil, cu cel puţin 50%. De asemenea, o cantitate eficientă poate conduce la o îmbunătăţire a unui criteriu subiectiv, în cazurile în care criteriile subiective sunt folosite pentru a evalua severitatea bolii.
Kituri
În continuare, sunt propuse kituri cuprinzând unul sau mai multe componente care includ, dar nu sunt limitate la acestea, un anticorp anti-TIGIT sau un fragment de legare a antigenului, aşa cum este discutat în documentul de faţă (de exemplu, 14A6 umanizat sau 28H5 umanizat, sau 31C6 umanizat), în asociere cu unul sau mai multe componente suplimentare incluzând, dar fără a se limita la acestea, un purtător farmaceutic acceptabil şi/sau un agent terapeutic, aşa cum se discută în prezentul document. Anticorpul sau fragmentul şi/sau agentul terapeutic pot fi exprimate sub formă de compoziţie pură sau în combinaţie cu un purtător farmaceutic acceptabil într-o compoziţie farmaceutică.
Într-o variantă de realizare, kitul cuprinde un anticorp anti-TIGIT sau un fragment al acestuia de legare a antigenului, conform invenţiei (de exemplu, 14A6 umanizat sau 28H5 umanizat, sau 31C6 umanizat), sau compoziţia farmaceutică a acestora într-un container (de exemplu, într-un flacon steril de sticlă sau de plastic) şi compoziţia farmaceutică a acestora şi/sau un agent terapeutic într-un alt container (de exemplu, într-un flacon steril de sticlă sau de plastic).
Într-o altă variantă de realizare, kitul cuprinde o combinaţie conform invenţiei, incluzând un anticorp anti-TIGIT sau un fragment al acestuia de legare a antigenului, conform invenţiei (de exemplu, 14A6 umanizat sau 28H5 umanizat, sau 31C6 umanizat), împreună cu un purtător acceptabil farmaceutic, în mod opţional, în combinaţie cu unul sau cu mai mulţi agenţi terapeutici formulaţi împreună, opţional, într-o compoziţie farmaceutică într-un container comun.
Dacă kitul include o compoziţie farmaceutică pentru administrare parenterală la un subiect, kitul poate include un dispozitiv pentru efectuarea unei atare administrări. De exemplu, kitul poate include unul sau mai multe ace hipodermice sau alte dispozitive pentru injecţie, aşa cum s-a indicat mai sus.
Kitul poate include un prospect conţinând informaţii referitoare la compoziţiile farmaceutice şi formele posologice din kit. De regulă, o asemenea informaţie ajută pacienţilor şi medicilor la utilizarea eficientă şi în condiţii de siguranţă a compoziţiilor farmaceutice şi formelor posologice incluse în kit. De exemplu, în prospectul anexat pot fi furnizate următoarele informaţii referitoare la combinaţia conform invenţiei: farmacocinetice, farmacodinamice, studiile clinice, parametrii de eficacitate, indicaţiile şi modul de utilizare, contraindicaţiile, atenţionările, precauţiile, reacţiile adverse, supradozarea, dozarea şi administrarea corectă, condiţiile corespunzătoare de păstrare, referinţe, informaţii despre producător/distribuitor şi informaţii referitoare la brevete.
Kituri pentru detectare şi kituri terapeutice
Pentru comoditate, în kit poate fi inclus un anticorp anti-TIGIT sau un fragment al acestuia de legare a antigenului, conform invenţiei (de exemplu, 14A6, 28H5, 31C6 sau versiunile umanizate ale acestora), şi anume, o combinaţie ambalată de reactivi în cantităţi predeterminate cu instrucţiuni pentru realizarea testului de diagnostic sau de detectare. În cazul în care anticorpul sau fragmentul este marcat cu ajutorul unei enzime, kitul poate include substraturile şi co-factorii necesari pentru enzimă (de exemplu, un precursor de substrat care asigură cromoforul sau fluoroforul detectabil). Totodată, pot fi incluşi şi alţi aditivi, cum ar fi stabilizatori, tampoane (de exemplu, tamponul de blocare sau tamponul pentru liză) şi altele similare. Pentru a asigura concentraţiile reactivilor din soluţie, care optimizează substanţial sensibilitatea testului, cantităţile relative ale diferitor reactivi pot fi modificate. În particular, reactivii pot fi furnizaţi sub formă de pulberi uscate, de regulă, liofilizate, inclusiv excipienţi care, la dizolvare, asigură soluţia de reactivi având concentraţia corespunzătoare.
De asemenea, sunt prezentaţi reactivi şi kituri pentru diagnostic sau detectare care cuprind unul sau mai mulţi astfel de reactivi pentru utilizare într-o varietate de teste de detectare, incluzând, de exemplu, teste imunologice, cum ar fi ELISA (de tip „sandwich”” sau de format competitiv). Componentele kitului pot fi pre-legate la un substrat solid sau pot fi aplicate pe suprafaţa unui substrat solid atunci când kitul este utilizat. În unele variante de realizare a invenţiei, mijloacele de generare a semnalului pot fi furnizate pre-legate cu un anticorp sau un fragment al invenţiei sau pot necesita înainte de utilizare o combinaţie cu unul sau cu mai multe componente, de exemplu, tampoane, conjugaţi anticorp-enzimă, substraturi pentru enzime sau altele similare. Kiturile pot include, de asemenea, reactivi suplimentari, de exemplu, reactivi de blocare pentru a reduce legarea nespecifică cu suprafaţa fazei solide, reactivi pentru spălare, substraturi pentu enzime şi altele similare. Suprafaţa fazei solide poate avea forma unui tub, unei granule, unei microplăci de titrare, unei microsfere sau altor materiale, adecvate pentru imobilizarea proteinelor, peptidelor sau polipeptidelor. În unele aspecte particulare, o enzimă care catalizează formarea unui produs chemiluminescent sau cromogenic, sau reducerea unui substrat chemiluminescent sau cromogen constituie o componentă a mijloacelor de obţinere a semnalului. Astfel de enzime sunt bine cunoscute în domeniul de referinţă. Kiturile pot cuprinde oricare dintre agenţii de legare şi reactivii pentru detectare, descrişi în prezenta invenţie. În mod opţional, kitul poate cuprinde, de asemenea, instrucţiuni pentru realizarea procedeelor conform invenţiei.
Este prezentat, de asemenea, un kit care cuprinde un anticorp anti-TIGIT (de exemplu, un anticorp umanizat) sau un fragment al acestuia de legare a antigenului, ambalat într-un container, cum ar fi un flacon sau o butelie, şi care cuprinde suplimentar un marcaj aplicat pe container sau ambalat împreună cu acesta, marcajul descriind conţinutul containerului şi furnizând indicaţii şi/sau instrucţiuni privind utilizarea conţinutului containerului pentru tratarea uneia sau a mai multor stări patologice, aşa cum este descris în documentul de faţă.
Într-un aspect, kitul serveşte la tratarea tumorii maligne şi cuprinde un anticorp anti-TIGIT (de exemplu, un anticorp umanizat) sau un fragment al acestuia de legare a antigenului şi un agent terapeutic suplimentar sau un vaccin. Kitul poate include, în mod opţional, o seringă pentru administrare parenterală, de exemplu, intravenoasă. Într-un alt aspect, kitul cuprinde un anticorp anti-TIGIT (de exemplu, un anticorp umanizat) sau un fragment al acestuia de legare a antigenului şi un marcaj ataşat sau ambalat împreună cu containerul, descriind utilizarea anticorpului sau a fragmentului cu vaccinul sau cu agentul terapeutic suplimentar. În următorul aspect, kitul cuprinde vaccinul sau un agent terapeutic suplimentar şi un marcaj ataşat sau ambalat împreună cu recipientul, descriind utilizarea vaccinului sau a agentului terapeutic suplimentar cu anticorpul anti-TIGIT sau cu fragmentul acestuia. În anumite variante de realizare, anticorpul anti-TIGIT şi vaccinul sau agentul terapeutic suplimentar se află în flacoane separate sau sunt combinate împreună în una şi aceeaşi compoziţie farmaceutică.
Aşa cum s-a indicat mai sus în secţiunea terapie combinată, administrarea concomitentă a doi agenţi terapeutici nu impune ca agenţii să fie administraţi simultan sau prin unul şi acelaşii procedeu, cu condiţia că există o suprapunere a perioadelor de timp în care agenţii îşi exercită efectul lor terapeutic. O administrare simultană sau secvenţială, precum şi administrarea în zile sau săptămâni diferite, este avută în vedere.
Pot fi obţinute, de asemenea, kiturile terapeutice şi de detectare, descrise în documentul de faţă, care conţin cel puţin unul dintre anticorpi, o peptidă, un fragment de legare a antigenului sau o polinucleotidă, descrise în documentul de faţă, şi instrucţiuni pentru utilizarea compoziţiei în calitate de reactiv de detectare sau agent terapeutic. Containerele utilizate în astfel de kituri pot cuprinde, în mod obişnuit, cel puţin un flacon, o epruvetă, o fiolă, o butelie, o seringă sau un alt recipient adecvat, în care pot fi amplasate una sau mai multe dintre compoziţia(compoziţiile) de detectare şi/sau compoziţia(compoziţiile) terapeutice şi, în mod preferabil, porţionate în modul corespunzător în alicote. În cazul în care este prevăzut şi un al doilea agent terapeutic, kitul poate conţine, de asemenea, un al doilea recipient distinct, în care poate fi amplasată această a doua compoziţie de detectare şi/sau compoziţie terapeutică. În mod alternativ, pot fi obţinuţi mai mulţi compuşi într-o singură compoziţie farmaceutică şi pot fi ambalaţi într-un singur recipient, cum ar fi un flacon, o fiolă, o seringă, o butelie sau un alt recipient unic corespunzător. Kiturile descrise în documentul de faţă pot include, de regulă, un mijloc de păstrare a flaconului (flacoanelor) în stare închisă pentru vânzare comercială, cum ar fi, de exemplu, recipiente din plastic, fabricate prin turnare sau prin fasonare cu bombare şi întindere, în care sunt ţinute flacoanele în cauză. În cazul în care kitul include un radiomarker, un marcaj cromogen, fluorigenic sau un alt tip de marcaj detectabil, sau mijloace de detectare, agentul de marcare fie că poate fi furnizat în acelaşi recipient ca şi însăşi compoziţia de detectare sau compoziţia terapeutică, fie că, în mod alternativ, poate fi plasat în cel de-al doilea recipient, în care poate fi plasată această a doua compoziţie şi divizată în alicote. Ca alternativă, reactivul de detectare şi marcajul pot fi obţinute în recipiente separate şi în cele mai multe cazuri kitul poate include, de asemenea, în mod tipic, un mijloc de păstrare a flaconului (flacoanelor) în stare închisă pentru vânzare comercială şi/sau ambalre şi livrare comode.
Invenţia de faţă prezintă, de asemenea, un dispozitiv sau aparat pentru efectuarea procedeelor de detectare sau monitorizare, descrise în documentul de faţă. Un astfel de aparat poate include o cameră sau o eprubetă în care poate fi plasată proba, un sistem de îmbuteliere a lichidelor incluzând, în mod opţional, supape sau pompe pentru direcţionarea fluxului probei prin dispozitiv, în mod opţional, poate include filtre pentru a separa plasma sau serul de sânge, camere de malaxare pentru adăugarea agenţilor de legare sau a reactivilor de detectare şi, în mod opţional, un dispozitiv de detecţie pentru identificarea cantităţii de marker detectabil, legat la imunocomplexul agentului de legare. Fluxul probei poate fi pasiv (de exemplu, prin forţe capilare, hidrostatice sau prin alte forţe care nu necesită manipulări ulterioare ale dispozitivului după aplicarea probei) sau activ (de exemplu, prin aplicarea forţei generate de pompe mecanice, pompe electroosmotice, forţei centrifuge sau prin presiunea ridicată a aerului), sau printr-o combinaţie de forţe active şi pasive.
În alte variante de materializare a prezentei invenţi sunt prezentate, de asemenea, un procesor, o memorie care poate fi citită de calculator şi un flux de lucru standard, stocat în memoria informatizată şi adaptat pentru a fi executat de procesor pentru efectuarea oricăruia dintre procedeele descrise în documentul de faţă. Exemplele de sisteme de calcul potrivite, medii şi/sau config.ţii includ calculatoare personale, calculatoare server, dispozitive portabile sau laptop-uri, sisteme multiprocesor, sisteme bazate pe microprocesoare, set top boxe pentru TV, aparate electronice de consum programabile, PC-uri de reţea, minicalculatoare, calculatoare mainframe, medii de aplicaţii distribuite, care conţin oricare dintre sistemele sau dispozitivele menţionate mai sus sau oricare alte sisteme, cunoscute în domeniul de referinţă.
Procedee generale
Procedeele standard ale biologiei moleculare sunt descrise la Sambrook, Fritsch şi Maniatis (1982 şi 1989, ediţia a 2-a, 2001, ediţia a 3-a) Molecular Cloning, A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY; Sambrook şi Russell. Molecular Cloning, ediţia a 3-a, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY., 2001; Wu. Recombinant DNA, vol. 217, 1993, Academic Press, San Diego, CA,). Procedeele standard sunt prezentate, de asemenea, la Ausbel, şi colab. Current Protocols in Molecular Biology, vol.1-4, 2001, John Wiley şi Sons, Inc. New York, NY, în care este descrisă clonarea în celule bacteriene şi mutageneza ADN-ului (vol. 1), clonarea în celule de mamifere şi drojdie (vol. 2), glicoconjugatele şi exprimarea proteinei (vol. 3), şi bioinformatica (vol. 4).
Sunt descrise procedeele de purificare a proteinelor, inclusiv imunoprecipitarea, cromatografia, electroforeza, centrifugarea şi cristalizarea (Coligan, şi colab. Current Protocols in Protein Science, vol. 1, John Wiley şi Sons, Inc., New York, 2000). Sunt descrise analiza chimică, modificarea chimică, modificarea post-translaţională, producerea proteinelor de fuziune, glicozilarea proteinelor (a se vedea, de exemplu, Coligan, şi colab. Current Protocols in Protein Science, vol. 2, John Wiley şi Sons, Inc., New York, 2000; Ausubel, şi colab. Current Protocols in Molecular Biology, vol. 3, John Wiley şi Sons, Inc., New York, NY, 2001, p. 16.0.5-16.22.17; Sigma-Aldrich, Co. Products for Life Science Research, St. Louis, MO, 2001, p. 45-89; Amersham Pharmacia Biotech BioDirectory, Piscataway, N.J., 2001, pag. 384-391). Sunt descrise obţinerea, purificarea şi fragmentarea anticorpilor policlonali şi monoclonali (Coligan, şi colab. Current Protcols in Immunology, vol. 1, John Wiley şi Sons, Inc., New York, 2001; Harlow şi Lane. Using Antibodies, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY, 1999; Harlow şi Lane, supra). Sunt disponibile procedee standard pentru caracterizarea interacţiunilor ligand/receptorilor (a se vedea, de exemplu, Coligan, şi colab. Current Protocols in Immunology, vol. 4, John Wiley, Inc., New York, 2001).
Anticorpii monoclonali, policlonali şi umanizaţi pot fi obţinuţi (a se vedea, de exemplu, Sheperd şi Dean (ed.). Monoclonal Antibodies, Oxford Univ. Press, New York, NY, 2000; Kontermann şi Dubel (ed.). Antibody Engineering, Springer- Verlag, New York, 2001; Harlow şi Lane. Antibodies A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY, 1988, p. 139-243; Carpenter, şi colab. J. Immunol. 165, 2000, p. 6205; He, şi colab. J. Immunol. 160, 1998, p. 1029; Tang, şi colab. J. Biol. Chem. 274, 1999, p. 27371-27378; Baca, şi colab. J. Biol. Chem. 272, 1997, p. 10678-10684; Chothia, şi colab. Nature 342, 1989, p. 877-883; Foote şi Winter J. Mol. Biol. 224, 1992, p. 487-499; US 6329511).
O alternativă pentru umanizarea anticorpilor este utilizarea băncilor de anticorpi umani, expuşi pe fagi, sau a băncilor de anticorpi umani în şoareci transgenici (Vaughan, şi colab. Nature Biotechnol. 14, 1996, p. 309-314; Barbas (1995) Nature Medicine 1, p. 837-839; Mendez, şi colab. Nature Genetics 15, 1997, p. 146-156; Hoogenboom, şi Chames Immunol. Today 21, 2000, p. 371-377; Barbas, şi colab. Phage Display: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, New York, 2001; Kay, şi colab. Phage Display of Peptides and Proteins: A Laboratory Manual, Academic Press, San Diego, CA, 1996; de Bruin, şi colab. Nature Biotechnol. 17, 1999, p. 397-399).
Sunt descrişi anticorpi monocatenari şi diacorpi (a se vedea, de exemplu, Malecki, şi colab. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 99, 2002, p. 213-218; Conrath, şi colab. J. Biol. Chem. 276, 2001, p. 7346-7350; Desmyter, şi colab. J. Biol. Chem. 276, 2001, p. 26285-26290; Hudson, şi Kortt. J. Immunol. Metods 231, 1999, p. 177-189; şi US 4.946.778). Sunt prezentaţi anticorpi bifuncţionali (a se vedea, de exemplu, Mack, şi colab. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 92, 1995, p. 7021-7025; Carter. J. Immunol. Metods 248, 2001, p. 7-15; Volkel, şi colab. Protein Engineering 14, 2001, p. 815-823; Segal, şi colab. J. Immunol. Metods 248, 2001, p. 1-6; Brennan, şi colab. Science 229, 1985, p. 81-83; Raso, şi colab. J. Biol. Chem. 272, 1997, p. 27623; Morrison. Science 229, 1985, p. 1202-1207; Traunecker, şi colab. EMBO J. 10, 1991, p. 3655-3659; US 5932448, US 5532210 şi US 6129914).
De asemenea, sunt prezentaţi anticorpi bispecifici (a se vedea, de exemplu, Azzoni, şi colab. J. Immunol. 161, 1998, p. 3493; Kita, şi colab. J. Immunol. 162, 1999, p. 6901; Merchant, şi colab. J. Biol. Chem. 74, 2000, p. 9115; Pandey, şi colab. J. Biol. Chem. 275, 2000, p. 38633; Zheng, şi colab. J. Biol Chem. 276, 2001, p. 12999; Propst, şi colab. J. Immunol. 165, 2000, p. 2214; Long. Ann. Rev. Immunol. 17, 1999, p. 875).
Purificarea antigenului nu este necesară pentru obţinerea de anticorpi. Animalele pot fi imunizate cu celule care poartă antigenul ce prezintă interes. Ulterior, splenocitele pot fi izolate de la animale imunizate şi splenocitele pot fi fuzionate cu o linie de celule de mielom pentru a obţine un hibridom (a se vedea, de exemplu, Meyaard, şi colab. Immunity 7, 1997, p. 283-290; Wright, şi colab. Immunity 13, 2000, p. 233-242; Preston, şi colab., supra; Kaithamana, şi colab. J. Immunol. 163, 1999, p. 5157-5164).
Anticorpii pot fi conjugaţi, de exemplu, cu molecule mici de preparat medicamentos, cu enzime, lipozomi, polietilenglicol (PEG). Anticorpii pot fi utilizaţi în scopuri terapeutice, de diagnostic, în kituri sau în alte scopuri şi includ anticorpi legaţi, de exemplu, cu coloranţi, radioizotopi, enzime sau metale, de exemplu, aur coloidal (a se vedea, de exemplu, Le Doussal şi colab. J. Immunol. 146, 1991, p. 169-175; Gibellini şi colab. J. Immunol. 160, 1998, p. 3891-3898; Hsing şi Bishop. J. Immunol. 162, 1999, p. 2804-2811; Everts şi colab. J. Immunol. 168, 2002, p. 883-889).
Sunt disponibile procedee de citometrie în flux incluzând sortarea celulelor activată prin fluorescenţă (FACS), (a se vedea, de exemplu, Owens şi colab. Flow Cytometry Principles for Clinical Laboratory Practice, John Wiley şi Sons, Hoboken, NJ, 1994; Givan. Flow Cytometry, ed. a 2-a; Wiley-Liss, Hoboken, NJ, 2001; Shapiro. Practical Flow Cytometry, John Wiley şi Sons, Hoboken, NJ, 2003). Sunt disponibili reactivi fluorescenţi, adecvaţi pentru modificarea acizilor nucleici, incluzând primeri şi sonde de acid nucleic, polipeptide şi anticorpi pentru utilizare, de exemplu, în calitate de reactivi pentru diagnostic (Molecular Probes Catalogue, Molecular Probes, Inc., Eugene, OR, 2003; Sigma-Aldrich Catalogue, St. Louis, MO, 2003).
Sunt descrise procedee standard de histologie a sistemului imunitar (a se vedea, de exemplu, Muller Harmelink (ed.) Human Thymus: Histopathology and Pathology, Springer Verlag, New York, NY, 1986; Hiatt şi colab. Color Atlas of Histology, Lippincott, Williams şi Wilkins, Phila, PA, 2000; Louis şi colab. Basic Histology: Text and Atlas, McGraw-Hill, New York, NY, 2002).
Sunt disponibile pachete software şi baze de date pentru a determina, de exemplu, fragmentele antigenice, secvenţele lider, plierea proteine, domeniile funcţionale, situsurile de glicozilare şi aliniamentele secvenţelor (a se vedea, de exemplu, GenBank, Vector NTI® Suite (Informax, Inc., Bethesda, Md) ; GCG Wisconsin Package (Accelrys, Inc., San Diego, CA); DeCypher® (TimeLogic Corp., Crystal Bay, Nevada); Menne şi colab. Bioinformatics 16, 2000, p. 741-742; Menne şi colab. Bioinformatics Applications Note 16, 2000, p. 741-742; Wren şi colab. Comput. Methods Programs Biomed. 68, 2002, p. 177-181; von Heijne. Eur. J. Biochem. 133, 1983, p. 17-21; von Heijne. Nucleic Acids Res. 14, 1986, p. 4683-4690).
Exemplul 1
Obţinerea anticorpilor anti-hTIGIT de şobolan şi şoarece
Pentru a obţine anticorpi anti-TIGIT umani, şobolanii Lewis au fost imunizaţi cu proteina recombinantă - his-TIGIT uman marcat de le Sino Biologicals Cat. nr. 10917-H08H) - folosind adjuvantul RIBI şi o ingecţie în pernuţa tălpii după un program de două ori pe săptămână. Ca alternativă, şoarecii Balb/C au fost imunizaţi cu proteina recombinantă - TIGIT uman marcat cu Fc uman - folosind adjuvantul RIBI şi o înjecţie în pernuţa tălpii după un program de două ori pe săptămână. De la animalele imunizate a fost colectat sânge şi au fost determinate titrurile serului pentru legarea cu celulele CHOK1 transfectate de TIGIT uman utilizându-se un test ELISA pe bază de celule (descris mai jos). Animalelor cu cele mai înalte titruri li s-a administrat o injecţie finală de rapel cu proteină recombinantă şi ganglionii limfatici drenaţi din regiunea popliteală au fost izolaţi cu patru zile mai târziu. Hibridoamele au fost obţinute prin electrofuziunea limfocitelor izolate cu partenerul de fuziune mielomul P3X63-Ag8.653 folosind sistemul de electrofuziune Cytopulse Hybrimmune. Celulele fuzionate au fost însămânţate pe plăci cu 96 de godeuri în DMEM/F12, 15% BCS, HAT, IL-6, supliment OPI şi gentamicină.
Supernatanţii hibridoamelor au fost testaţi la legarea celulele CHOK1 care exprimă TIGIT uman şi la capacitatea reactivă încrucişată în raport cu celulele CHO care exprimă TIGIT rhesus folosind formatul ELISA pe bază de celule. Celulele CHO-K1 care exprimă TIGIT uman şi TIGIT rhesus au fost însămânţate pe plăci de cultură celulară cu 96 de godeuri în 50 µl de DMEM/F12, 10% BCS şi gentamicină (mediul CHO-K1). Celulele au fost placate fie la 2x104 celule/godeu cu două zile înainte de test, fie la 4x104 celule/godeu cu o zi înainte de test. Mediul a fost îndepărtat din godeuri înainte de analiză şi au fost adăugate 50 µl de supernatant de hibridom. Supernatanţii de hibridom au fost incubaţi timp de 30...60 min la temperatura camerei şi spalaţi de 3 ori cu PBS/0,05% Tween 20 folosind protocolul de spălare ELISA pe celulele din epuratorul pentru plăcile Biotek EL405x Select CW. Cincizeci de microlitri de anticorp pentru detecţie (anticorpul capră anti-IgG şobolan conjugat cu HRP (Southern Biotech cat. nr. 3030-05) sau anticorpul capră anti-IgG şoarece conjugat cu HRP (Southern Biotech cat. nr. 1043-05)), a fost adăugat la o diluţie de 1:2000 în mediul CHO-K1 şi a fost incubat la temperatura camerei timp de 30...60 min. Plăcile pentru test au fost spălate după cum se descrie mai sus şi developate cu TMB, şi reacţia a fost stopată cu ajutorul soluţiei de stopare pentru TMB (KPL cat. nr. 50-85-06) sau cu acid fosforic de 0,1N. Absorbanţa a fost determinată la 450 nm...620 nm. Clonele pozitive s-au dovedit apte de a reacţiona cu celulele CHO-K1, transfectate atât de TIGIT uman, cât şi de TIGIT rhesus, şi s-au dovedit a fi negative pentru legarea la celulele parentale CHO-K1. În aceste teste, dacă pentru anticorp apărea legarea cu celulele parentale (netransfectate) CHO-K1; autorii prezentei invenţii eliminau acest anticorp din screening ca fiind non-specific pentru TIGIT.
Hibridoamele pozitive au fost subclonate prin diluţie limitativă sau subclonate prin placarea hibridoamelor în medii semisolide, şi clonele au fost prelevate pe ClonePix® (Genetix). Pentru hibridoamele parentale au fost efectuate două cicluri de subclonare. Subclonele finale au fost crescute în culturi la scară mică, într-un mediu fără ser de producere a hibridoamelor, acestea fiind curăţate în vederea obţinerii anticorpului purificat pentru caracterizare ulterioară.
Folosind aceste procedee, au fost obţinute circa 819 hibridoame.
Exemplul 2
Caracterizarea anticorpilor anti-hTIGIT
Supernatanţii provenind de la clonele pozitive au fost testaţi la capacitatea lor de a bloca legarea proteinei CD155-huFc umane recombinante la celulele hTIGIT CHOK1 într-un format ELISA pe bază de celule. Celulele TIGIT-CHO-K1 umane au fost semănate pe plăci cu 96 de godeuri, aşa cum este descris mai sus. Mediul a fost îndepărtat de pe plăci şi 50 µl de supernatant hibridoma au fost incubate cu celule TIGIT-CHO-K1 uman la temperatura de 4°C timp de 30 min. Cincizeci de microlitri de CD155-huFc uman au fost adăugate pe placă până la o concentraţie finală de 0,5 µg/ml de CD155-huFc uman şi incubate timp de 30 min la temperatura de 4°C. Plăcile pentru testare au fost spălate de 3 ori cu PBS/0,05% Tween-20 după cum a fost arătat mai sus. Legarea CD155-huFc uman la celulele hTIGIT-CHOK1 a fost detectată folosind conjugatul-HRP al anticorpului secundar F(ab)'2 de capră anti-IgG uman (Jackson 109-036-098) la o diluţie de 1:2000 în mediul CHO-K1. Plăcile au fost developate folosind TMB şi reacţia a fost oprită prin intermediul soluţiei de stopare pentru TMB, după cum a fost descris mai sus, şi a fost determinat A450-620 nm.
Un anticorp de şobolan, obţinut în conformitate cu procedeul descris mai sus, a fost desemnat ca 14A6 şi a fost derivat din clona LB155.14A6.G2.A8. Acest anticorp de şobolan (14A6) aparţine de izotipul lgG2/kappa şi cuprinde regiunea variabilă a lanţului greu din SECV. ID NR. 7 şi regiunea variabilă a lanţului uşor din SECV. ID NR. 8. Anticorpul 14A6 purificat se leagă la TIGIT uman şi la TIGIT rhesus, după cum a fost determinat prin testul ELISA pe bază de celule, la celulele CHOK1 TIGIT umane şi TIGIT rhesus (Fig. 1), folosind procedeele descrise mai sus. (Un anticorp martor al izotipului nu a prezentat vreo legare (datele nu sunt prezentate). Anticorpul 14A6 purificat poate, de asemenea, bloca interacţiunea dintre hTIGIT şi hCD155 utilizând un test de blocare ELISA pe bază de celule (Fig. 3), folosind procedeul, descris mai sus.
Un anticorp de şoarece, obţinut în conformitate cu procedeul descris mai sus, este desemnat ca 28H5 şi provine din clona TC167.28H5.H5. Acest anticorp de şoarece (28H5) aparţine de izotipul IgG1/kappa şi cuprinde regiunea variabilă a lanţului greu din SECV. ID NR. 63 şi regiunea variabilă a lanţului uşor din SECV. ID NR. 64. Anticorpul 28H5 purificat de asemenea se leagă la TIGIT uman şi TIGIT rhesus, după cum s-a determinat după legarea cu celulele CHOK1 TIGIT uman şi TIGIT rhesus, cu ajutorul ELISA pe bază de celule (Fig. 2), în conformitate cu procedeele descrise mai sus. Anticorpul 28H5 purificat blochează, de asemenea, interacţiunea dintre hTIGIT şi hCD155, utilizând testul de blocare ELISA pe bază de celule (Fig. 3), în conformitate cu procedeul, descris mai sus.
Un alt anticorp de şoarece, obţinut în conformitate cu procedeul descris mai sus, a fost desemnat ca 31C6 şi provine din clona MEB125.31C6.A1.205. Acest anticorp de şoarece (31C6) se referă la izotipul IgG1/kappa şi cuprinde regiunea variabilă a lanţului greu din SECV. ID NR. 94 şi regiunea variabilă a lanţului uşor din SECV. ID NR. 95. Anticorpul 31C6purificat de asemenea se leagă la TIGIT uman şi TIGIT rhesus, după cum s-a determinat prin legarea la celulele CHOK1 TIGIT uman şi TIGIT rhesus cu ajutorul testului ELISA pe bază de celule (Fig. 4), în conformitate cu procedeele descrise mai sus. Anticorpul 31C6 purificat de asemenea blochează interacţiunea dintre hTIGIT şi hCD155 utilizând testul de blocare ELISA pe bază de celule (Fig. 4), în conformitate cu procedeul, descris mai sus.
Determinarea afinităţii de legare a anticorpilor anti-TIGIT parentali (non-umani) la proteina recombinantă cu TIGIT uman: Cinetica activităţii de legare a anticorpilor anti-TIGIT uman 14A6 şi 31C6 (obţinuţi după cum este descris în Exemplul 1) şi a anticorpului comercial MBSA43 a fost măsurată prin rezonanţă plasmonică de suprafaţă cu ajutorul sistemului Biacore T200 (Biacore, GE Healthcare, Piscataway, NJ). Aproximativ 5000 PE de anticorp anti-IgG de şoarece, GE Healthcare, număr de catalog BR-1008-38, sau aproximativ 13000 PE specific pentru fragmentul anticorpului de capră IgG anti-Fc gamma de şobolan, Jackson ImmunoResearch, număr de catalog 112-006-071, a fost imobilizat prin reacţii chimice de adiţie a aminei pe un cip senzor CM5 seria S, număr de catalog BR-1005-30. Fiecare din clonele anticorpului de şoarece anti-TIGIT uman 31C6 şi MBSA43 au fost injectate pe suprafeţele imobilizate ale anticorpilor imobilizaţi anti-şoarece la 1 ug/ml până la nivelul de captare a 40 RU. Clona anticorpilor de şobolan anti-TIGIT uman 14A6 a fost injectată pe suprafeţele anti-corpilor imobilizaţi anti-şobolan la 1 ug/ml până la nivelul de captare a 40 RU. Tamponul HBS-EP + (BR-1006-69) a fost utilizat în calitate de tampon de rulare, cu un debit al fluxului de 30 µl/min. Pe suprafeţele anticorpilor au fost injectate diferite concentraţii de proteină TIGIT-His uman sau de proteină TIGIT-Fc, variind în diapazonul de la 0,29 nM până la 40 nM, la un debit al fluxului de 45 µl/min. La sfârşitul fiecărui ciclu de injectare a anticorpilor de şoarece anti-TIGIT uman pentru clonele 31C6 şi MBSA43, suprafaţa cipului CM5 seria S a fost regenerată folosind o injecţie de 3 minute de glicină de 10 mM cu pH de 1,7 la debitul fluxului de 10 µl/min. După fiecare ciclu de injectare a anticorpilor de şobolan anti-TIGIT uman, suprafaţa cipului de CM5 seria S a fost regenerată folosind o injecţie de 20 de secunde de glicină de 10 mM cu pH de1,5, urmată de două injecţii a câte 10 sec de 12,5 mM NaOH, la debitul fluxului de 60 µl/min.
Senzorogramele de legare a subtracţiei de fundal, au fost utilizate pentru analiza constantei vitezei de asociere (ka) şi de disociere (kd) şi a constantei de echilibru a fenomenului de disociere KD. Seturile de date rezultate au fost puse în conformitate cu modelul de legare Langmuir 1:1 folosind software-ul de evaluare BIAcore T200 (versiunea 2.0). În Tabelul 3 sunt rezumate afinităţile anticorpilor anti-TIGIT uman pentru proteina TIGIT-His uman şi proteina TIGIT-Fc.
Măsurarea afinităţii anticorpilor anti-TIGIT umani cu proteina TIGIT-His umană şi proteina TIGIT-Fc folosind BIAcore
Tabelul 3
Clona KD conform BIAcore (TIGIT- his uman) (pM) KD conform BIAcore (TIGIT- Fc uman) (pM) 14A6 (rIgG2a/K) 3,09 3,12 31C6 (mIgG1/K) 34,4 10,9 Comparatorul MBSA43 (mIgG1) 36,3 16,5
Exemplul 3
Analiza activităţii celulelor T in vitro pentru anticorpii antagonişti anti-hTIGIT
Printre anticorpii testaţi, pentru aproximativ 352 de anticorpi monoclonali, indicaţi de a bloca legarea CD155-Fc la celulele CHO exprimând hTIGIT, a fost efectuat un screening în vederea determinării capacităţii lor de a spori activitatea celulelor T in vitro utilizând testele funcţionale pe bază de celule.
Autorii prezentei invenţii au dezvoltat un test pentru caracterizarea consecinţelor funcţionale ale blocării receptorului TIGIT uman utilizând celulele Jurkat, linia celulare imortalizate de limfocite T umane (clona E6-1; ATCC TIB-152), concepută pentru a supra-exprima TIGIT umane (hTIGIT-Jurkat), care au fost cultivate împreună cu celulele THP-1, linia de celule monocitare umane în prezenţa sau în absenţa unuia dintre liganzii TIGIT, CD155 şi CD112. Celulele hTIGIT-Jurkat, co-cultivate cu celule THP-1 şi stimulate prin intemediul plăcii mAb anti-CD3, produc IL-2, însă atunci când ligandul TIGIT (CD155 sau CD112) era adaugat la co-cultură, nivelurile de IL-2 se reduceau într-un mod dependent de ligand. Tratamentul cu anticorpii care blochează interacţiunea CD155-TIGIT sau CD112-TIGIT, cum ar fi un Ab anti-hTIGIT disponibil comercial, clona MBSA43 (eBioscience Cat. Nr. 12-9500-42), reconstituie producţia de IL-2 în acest test într-o manieră dependentă de doză (Fig. 5).
Plăcile cu fund plat cu 96 de godeuri au fost acoperite cu anticorpul de şoarece anti-CD3 uman (1 µg/ml în PBS; clona HIT3a; BD Pharmingen Cat. Nr. 555336) timp de o noapte la temperatura de 4°C. În ziua următoare, celulele hTIGIT-Jurkat (50000) erau însămânţate pe plăcile pre-acoperite şi erau pre-incubate timp de 30-60 minute cu mAb de concentraţii diferite. Celulele THP-1 (50000) erau adăugate la cultură, apoi fie CD155-Fc (ECD CD155 uman fuzionat cu Fc uman; 1,0 µg/ml), fie CD112-Fc (ECD CD112 uman fuzionat cu Fc uman; 0,5 µg/ml). După incubare timp de 18-24 ore la temperatura de 37°C şi 5,0% de CO2, nivelurile de IL-2 erau evaluate în supernatanţii de cultură prin intermediul Meso Scale (kitul MESO cultură de ţesut IL-2 uman: Cat. Nr. K151AHB-2). Tratamentul cu MBSA43 (10 µg/ml) restabilea IL-2 până la un nivel egal cu cel al celulelor activate hTIGIT Jurkat, cultivate cu THP-1 în absenţa CD155 sau CD112.
După cum se arată în Fig. 5, la titrarea anticorpului anti-hTIGIT, clona 14A6, de la 30 µg/ml până la 0,04 µg/ml, s-a obţinut EC50 de 0,190 µg/ml comparativ cu MBSA43 de 0,24 µg/ml, folosind testul dat. Clona 14A6 (30 µg/ml) restabilea nivelul IL-2 până la 82% din MBSA43 (10 µg/ml).
Folosind testul în cauză, în Fig. 5 s-a demonstrat, de asemenea, că, la titrarea anticorpului anti-hTIGIT, clona 28H5, de la 30 µg/ml până la 0,04 µg/ml, s-a obţinut EC50 de 0,24 µg/ml, în raport cu MBSA43 de 0,24 µg/ml.
Folosind acest test, în Fig. 6 s-a demonstrat, de asemenea, că, la titrarea anticorpului anti-hTIGIT. clona 31C6, de la 30 µg/ml până la 0,04 µg/ml, s-a obţinut EC50 de 0,14 µg/ml, comparativ cu MBSA43 de 0,24 µg/ml. Clona 31C6 (30 µg/ml) restabilea nivelul IL-2 până la 118% din MBSA43 (10 µg/ml).
Folosind testele funcţionale pe bază de celule, din cei 352 de anticorpi monoclonali testaţi, aproximativ 113 au fost capabili de a spori activitatea limfocitelor T in vitro.
Exemplul 4
Analiza activităţii celulelor T in vitro pentru anticorpii antagonişti anti-hTIGIT
În continuare, autorii invenţiei de faţă au analizat antagonismul funcţional relativ al TIGIT şi restabilirea activării celulelor T şi a funcţiei efectoare folosind o linie primară de celule T umane care exprimă TIGIT endogen atunci când este activat receptorul celululat T (TCR). Linia de celule T umane ale clonei BC4-49 prezintă o clonă CD4+, specifică pentru aloantigenul celulelor T umane, care exprimă TCR, specific pentru moleculele MHC HLA-clasa II, exprimat pe linia celulară EBV transformată, JY (HLA-DR1,4). Linia de celule T umane ale clonei BC4-49 necesită restimularea cu aloantigen la fiecare două săptămâni, folosind celulele stimulatoare JY iradiate (5000 rad), PBMC iradiate (4000 rad), izolate din două straturi leucocitare, şi PHA-P (2,5 µg/ml; Sigma), precum şi 10 ng/ml de IL-2 umană (R&D) suplimentat la fiecare 3-4 zile după restimulare şi extindere. Câteva clone de celule T (BC1-6, BC4-27, BC4-49) au fost analizate prin intermediul PCR şi mai apoi prin intermediul citometriei în flux pentru exprimarea relativă a TIGIT în urma stimulării repetate, fiind selectată clona BC4-49, deoarece aceasta poseda cea mai înaltă expresie a TIGIT, comparativ cu alte clone. Expresia relativă şi cinetica TIGIT, CD226, CD96 şi CD155 au fost monitorizate după stimularea repetată cu celule stimulatoare JY iradiate (5000 rad), cu PBMC şi PHA-P iradiate, pentru a evalua cel mai bun timp pentru analiza antagoniştilor mAb privind activitatea antagonistă relativă în raport cu TIGIT. Vârful expresiei TIGIT s-a observat peste 3-4 zile după stimularea repetată, în timp ce expresia CD226 şi CD96 din aceeaşi perioadă de timp se micşora. În continuare, expresia TIGIT a scăzut, în timp ce expresia CD226 şi CD96 a crescut din nou în ziua a 6-ea după stimularea repetată (Fig. 7). În mod corespunzător, mAb - candidaţii la rolul de antagonişti ai TIGIT - au fost evaluaţi după 3-4 zile de la stimularea repetată. Transfectantul JY supraexprimând CD155 umană a fost obţinut folosind vectorii retrovirali pMX->huTIGIT în calitate de mijloace pentru supresia răspunsurilor celulelor T ale clonei BC4-47 din biotestul de celule T primare şi pentru evaluarea capacităţii relative a mAb anti-TIGIT de a antagoniza activarea TIGIT prin intermediul CD155 şi de a restabili proliferarea celulelor T şi IFNγ cu trei zile mai târziu.
Testul de celule T primare cu privire la antagonismul relativ al mAb anti-hTIGIT a fost efectuat după cum urmează. Linia celulară CD4+ de celule T umanăe ale clonei BC4-49 a fost cultivată împreună cu CD155-Fc mAb de blocare, specifice pentru hTIGIT, în diverse concentraţii (33, 11, 3,7, 1,2, 0,4 şi 0,1 µg/ml) timp de 30 minute şi mai apoi erau însămânţate pe plăci cu fundul plat de 96 de godeuri (2x104 c/godeu). Transfectanţii JY-hCD155, care exprimă aloantigenul şi nivelurile ridicate de hCD155, au fost iradiate (5000 rad), spălate şi mai apoi adaugate în godeurile conţinând celulele T ale clonei BC4-49, tratate cu mAb anti-TIGIT, până la o concentraţie finală de 1x104 (celule T 2:1: raportul de celule ţintă) sau de 5x103 (celule T 1:4: raportul de celule ţintă) într-un volum total de 200 µl/godeu. Grupele de control nu au inclus tratamentul cu mAb, cultivarea comună cu celule T tratate cu mAb de acelaşi izotip, doar celule T şi doar celule JY-CD155. După trei sau patru zile de cultivare în comun, supernatanţii au fost recoltaţi pentru cuantificarea cantitativă a citochinelor interferon-gamma (IFNγ), iar celulele T au fost prelucrate timp de 6 ore cu timidină tritiată pentru a evalua proliferarea relativă.
După cum se arată în Figurile 8A şi 8B, prelucrarea mAb anti-hTIGIT 14A6, 28H5 şi 31C6 a celulelor T ale clonei BC4-49 a condus la restabilirea IFNγ şi răspunsurilor proliferative, fapt dterminat după răspunsurile crescute în comparaţie cu izotipul şi cu celulele T netratate. Anticorpul MBSA43 disponibil comercial şi anticorpii 37D10 şi 25G10 (anticorpii anti-TIGIT, obţinuţi aşa cum este descris în Exemplul 1) au prezentat, de asemenea, activitate în testul dat. Creşterea producţiei de IFNγ după prelucrarea 14A6, 28H5 şi 31C6 a fost în medie de aproximativ 2 ori.
Exemplul 5
Activitatea anti-tumorală a anticorpilor anti-TIGIT şi anti-PD1 în modelul tumoral animal
Şoareci: Femelele murine BALB/cAnN cu vârsta de aproximativ şapte sau opt săptămâni şi greutatea corporală medie de 20 grame au fost obţinute de la Taconic Laboratory (Germantown, NY). Hrana convenţională pentru animale şi apa au fost furnizate ad libitum.
Reactivi-anticorpi: Un anticorp monoclonal al izotipului murin IgG1 anti-PD-1 murin şi anticorpul de control al aceluiaşi izotip au fost obţinuţi din surse interne sub formă de stocuri congelate (-80°C). Anticorpul de şobolan anti-TIGIT de şoarece (GIGD7) a fost obţinut de la eBioscience sub formă de stoc la la temperatura de 4°C. Anticorpul de control al izotipului IgG1 prezenta un anticorp monoclonal de şoarece, specific pentru hexonul adenoviral 25. Anticorpul de control al izotipului lgG2a prezenta un anticorp monoclonal de şobolan, specific pentru beta-galactozidază. Izotipul de şoarece IgG1 constituia un izotip omolog de şoarece pentru izotipul uman IgG4.
Componentele reactivilor-anticorpi: Tampoanele compoziţiilor erau specifice pentru fiecare anticorp în procesul de stabilizare a proteinelor şi prevenire a precipitării. Compoziţiile au fost următoarele: mIgG1: 75 mM NaCI, 10 mM fosfat de sodiu, 3% zaharoză, pH 7,3; anti-PD-1: 20 mM acetat de sodiu, 7% zaharoză, pH 5,5; lgG2a de şobolan: 20 mM acetat de sodiu, 9% zaharoză, pH 5,5; şi anticorpul anti-TIGIT (GIGD7): PBS pH 7,0.
Obţinerea şi implantarea liniei de celule tumorale: celule de carcinom de colon CT26 au fost cultivate înt mediul RPMI, suplimentat cu ser fetal bovin de 10%, inactivat prin încălzire. Celulele CT26 sub-confluente şi log-faza 3x105 au fost injectate subcutanat (s/c) într-un volum de 100 µL RPMI liber de ser în partea dorsală inferioară din dreapta a fiecărui şoarece. Şoarecii au fost mai întâi raşi cu maşini electronice în zona care destinată de a fi folosită pentru implantare.
CT-26 prezintă o linie celulară de adenocarcinom colorectal murin singenică pentru tulpina murină BALB/c. CT-26 este un sistem model relevant pentru evaluarea mecanismului de acţiune al anticorpului anti-PD-1, datorită profilului molecular translatabil al acestei tumori după tratamentul cu anticorpul anti-PD-1.
Măsurătorile tumorilor şi greutăţii corporale: Tumorile au fost măsurate cu o zi înainte de prima doză şi de două ori pe săptămână după aceea. Lungimea şi lăţimea tumorii au fost măsurate utilizând şublere electronice şi volumul tumoral era determinat prin formula Volumul (mm3) = 0,5 x lungimea x lăţimea2, unde lungimea constituie dimensiunea mai mare. Şoarecii au fost cântăriţi periodic pentru monitorizarea stării generale de sănătate, precum şi pentru a estima doza reală pentru livrare în mg/kg per şoarece, în caz de necesitate. Înainte de tratament, şoarecii au fost cântăriţi şi au fost măsurate tumorile unor şoareci individuali. Pentru a preveni abaterile, orice valoare atipică în volumul sau greutatea tumorii şoarecilor au fost eliminate, iar soarecii rămaşi au fost randomizaţi în diferite grupuri de tratament cu o dimensiune medie echivalentă a tumorii. Când volumul mediu al tumorii la şoarecii purtători de tumoare CT26 a atins ~ 100 mm3, peste aproximativ 7 zile de la implantare, animalele au fost randomizate în grupuri de tratament a câte 10 şoareci şi a fost iniţiată dozarea. Animalelor le-au fost administrate concentraţiile de dozaj, specificate mai jos.
Prepararea, administrarea şi analiza soluţiilor de dozare: Stocurile congelate de anticorpi care urmau să fie testate pe modelul animal au fost dezgheţate şi transferate în gheaţă umedă. Pentru a evita congelarea şi decongelarea repetate, fiecare flacon cu soluţie iniţială a fost decongelat o singură dată şi distribuite în alicote având volume suficiente pentru o singură utilizare. În acest scop au fost folosite eprubete de polipropilenă cu aderenţă redusă. Alicotele au fost congelate rapid în gheaţă uscată şi stocate la -80°C. Înainte de fiecare dozare, o alicotă a fost dezgheţată, diluată cu un diluant adecvat până la concentraţia nominală şi administrată imediat. Alicotele soluţiilor pentru dozare au fost congelate rapid şi stocate la -80°C până la efectuarea analizelor. Soluţiile pentru dozare au fost evaluate cu ajutorul platformei Meso Scale Discovery (MSD®, Rockville, MD), bazată pe tehnologia multiplex; o combinaţie de detecţie prin electrochimioluminiscenţă şi imunoteste multiplexate.
Rezultatele tratamentului cu dozarea anticorpilor anti-TIGIT/anti-PD1: Şoarecilor BALB/cAnN purtători de tumoare CT26 le-a fost administrat anticorpul de şobolan anti-TIGIT de şoarece (GIGD7) într-o doză de 20 mg/kg, IP, la fiecare 4 zile, pe parcursul fiecăruia din cele 5 cicluri. Anticorpii PD-1 de şoarece (descrişi mai sus) au fost administrat într-o doză de 10 mg/kg, IP, la fiecare 4 zile pe parcursul fiecăruia din cele 5 cicluri. După dozare, animalele au continuat să fie monitorizate şi volumele tumorale au fost măsurate până la 36 de zile. Tratamentul a fost început atunci când dimensiunea tumorii a atins în medie 100 mm3 (75 mm3 - 115 mm3). Tumorile au fost măsurate de două ori pe săptămână. După cum demonstrează rezultatele, prezentate în Fig. 9, răspunsul antitumoral mediu în terapia combinată cu antagonistul PD-1 şi antagonistul TIGIT a fost mai înalt decât răspunsul antitumoral, observat în monoterapia fie cu anti-PD1 (p<0,05), fie cu anti-TIGIT (p<0,005). Pentru monoterapia cu anti-TIGIT, a fost identificată o inhibare de 21% a creşterii tumorii (TGI) în ziua a 14-ea. Pentru monoterapia cu anti-PD1 a fost identificat TGI de 52% în ziua a 14-ea. Tratamentul combinat a generat 85% de TGI în ziua a 14-ea şi a demonstrat 40% cazuri de regresie completă (CR), astfel încât la 4 din 10 şoareci nu a rămas nici o tumoare măsurabilă în ziua a 36-ea. Eficacitatea anti-tumorală cu oricare dintre anticorpii, administraţi în calitate de monoterapie, a constituit 0-10% CR.
Exemplul 6
Umanizarea anticorpilor
Anticorpul 14A6 de şobolan şi anticorpul 31C6 de şoarece au fost umanizaţi folosind procedeele prezentate în descriere. Din anticorpul 14A6 de şobolan au fost construite următoarele lanţuri variabile grele umanizate: SECV. ID NR. 9-24 şi SECV. ID NR. 37-47; şi au fost construite următoarele lanţuri variabile uşoare umanizate: SECV. ID NR. 25-30 şi SECV. ID NR. 48-52. Din anticorpul 31C6 de şoarece au fost construite următoarele lanţuri variabile grele umanizate: SECV. ID NR. 124-129; şi au fost construite următoarele lanţuri variabile uşoare umanizate: SECV. ID NR. 130-133.
Exemplul 7
Efectul izotipului Fc asupra activităţii antitumorale a anticorpilor anti-TIGIT
într-un model tumoral animal
Şoareci: Femelele de şoareci BALB/cAnN cu vârsta de aproximativ şapte sau opt săptămâni şi greutatea corporală medie de 20 grame au fost obţinute de la Taconic Laboratory (Germantown, NY). Hrana convenţională pentru animale şi apa au fost furnizate ad libitum.
Reactivi-anticorpi:
· Anticorpul de şoarece anti-PD1 de şoarece - subtipul IgG1.
· Anticorpul de şobolan anti-TIGIT de şoarece (18G10) - subtipul IgG1 de şobolan. Acest anticorp este descris în Figuri ca 18G10 parental. Anticorpul 18G10 posedă secvenţa VH din SECV. ID NR. 136 şi secvenţa VL din SECV. ID NR. 137.
· Anticorpul chimeric de şobolan anti-TIGIT de şoarece (18G10), care cuprinde o regiune Fc de şoarece de subtipul mlgG1. Acest anticorp este descris în Figuri ca 18G10-G2a. (Izotipul IgG1 de şoarece prezintă izotipul de şoarece, omolog izotipului uman IgG4) .
· Anticorpul chimeric de şobolan anti-TIGIT de şoarece18G10, care cuprinde o regiune Fc de şoarece de subtipul mIgG2a. Acest anticorp este descris în Figuri ca 18G10-G2a. (Izotipul lgG2a de şoarece prezintă izotipul de şoarece, omolog izotipului uman IgG1) .
· Anticorpul de control al izotipului IgG1 de şoarece (anticorp monoclonal de control, corespunzător izotipului IgG1 de şoarece, specific pentru hexonul adenoviral 25).
· Anticorpul de control al izotipului IgG1 de şobolan (anticorp monoclonal de control, corespunzător izotipului IgG1 de şobolan, specific pentru IL-4 uman).
· Anticorpul de control al izotipului lgG2a de şoarece (anticorp monoclonal de control, corespunzător izotipului lgG2a de şoarece, specific pentru hexonul adenoviral 25).
Componentele reactivilor-anticorpi.
Componentele au fost următoarele:
· mlgG1: 75 mM NaCI, 10 mM fosfat de sodiu, 3% zaharoză, pH 7,4;
· anticorpul anti-PD-1: 20 mM acetat de sodiu, 9% zaharoză, pH 5,5; mIgG2a: 75 mM NaCI, 10 mM fosfat de sodiu, 3% zaharoză, pH 7,3;
· IgG1 de şobolan: 20 mM acetat de sodiu, 7% zaharoză, pH 5,5; 18G10: 20 mM NaAc, 100 mM NaCI, 3% zaharoză; 18G10-G1: 20 mM NaAc, 9% zaharoză, pH 5,5; 18G10-G2a: 20 mM NaAc, 9% zaharoză, pH 5,5.
Prepararea şi implantarea liniei de celule tumorale:
Celulele carcinomului de colon CT26 au fost cultivate în mediul RPMI, suplimentat cu ser fetal bovin de 10%, inactivat prin încălzire. 3 x 105 în faza de log şi celule sub-confluente CT26 au fost injectate subcutanat (s/c) într-un volum de 100 µL de RPMI libere de ser în partea dorsală inferioară din dreapta a şoldului fiecărui şoarece. Şoarecii au fost mai întâi raşi cu o maşină electronică în zona care urma să fie folosită pentru implantare.
CT-26 prezintă o linie celulară de adenocarcinom colorectal de şoarece, singenică pentru linia BALB/c de şoarece. CT-26 este un sistem model relevant pentru evaluarea mecanismului de acţiune a anticorpului anti-PD-1, datorită profilului molecular translatabil al acestei tumori după tratament cu anti-PD-1.
Măsurătorile tumorii şi greutăţii corporale:
Tumorile au fost măsurate în ziua premergătoare administrării primei doze şi de două ori pe săptămână după aceea. Lungimea şi lăţimea tumorii au fost măsurate utilizând şublere electronice şi volumul tumoral a fost determinat folosind formula Volumul (mm3) = 0,5 x lungimea x lăţimea2 , în cazul în care dimensiunea lungimii este mai mare. Şoarecii au fost cântăriţi periodic pentru a monitoriza starea lor generală de sănătate, însă, de asemenea, şi pentru a estima doza reală pentru furnizare în mg/kg per şoarece, în cazul în care este necesar. Înainte de tratament, şoarecii au fost cântăriţi şi au fost măsurate tumorile unor şoareci individuali. Pentru a preveni abaterile, orice valoare atipică în volumul sau greutatea tumorii şoarecilor au fost eliminate, iar soarecii rămaşi au fost randomizaţi în diferite grupuri de tratament cu o dimensiune medie echivalentă a tumorii.
Prepararea, administrarea şi analiza soluţiilor pentru dozare:
Stocurile congelate de soluţii primare ale anticorpilor, care urmau să fie testaţi pe modelul animal, au fost decongelate şi transferate în gheaţă umedă. Pentru a evita o congelare şi o decongelare repetate, fiecare flacon cu soluţie primară a fost decongelat o singură dată şi porţionate pe alicote în volume suficiente pentru o singură utilizare. În acest scop, au fost folosite eprubete de polipropilenă cu aderenţă redusă. Alicotele au fost congelate rapid în gheaţă uscată şi stocate la -80°C. Înainte de fiecare dozare, o alicotă a fost dezgheţată, diluată cu un diluant adecvat până la concentraţia nominală şi administrată imediat. Alicotele soluţiilor pentru dozare au fost instantaneu congelate în gheaţă uscată şi stocate la -80°C până la efectuarea analizei. Soluţiile pentru dozare au fost evaluate cu ajutorul platformei Meso Scale Discovery (MSD®, Rockville, MD), bazată pe tehnologia multiplex; o combinaţie de detecţie prin electrochimioluminiscenţă şi imunoteste multiplexate.
Rezultatele tratamentului cu dozarea anticorpilor anti-TIGIT/anti-PD1:
Şoarecii BALB/cAnN purtători de tumori CT26 au fost randomizaţi în 10 grupuri de tratament în momentul când volumul mediu al tumorilor acestor şoareci a atins o dimensiune medie a tumorii de 100 mm3 (80 mm3 - 119 mm3) (1) controlul izotipului muIgG1 + controlul izotipului IgG1 de şobolan; (2) controlul izotipului muIgG1 + controlul izotipului muIgG2a; (3) muDX400 + controlul izotipului IgG1 de şobolan; (4) muDX400 + controlul izotipului muIgG2a; (5) controlul izotipului muIgG1 + 18G10; (6) control izotip muIgG1 + 18G10-G1; (7) controlul izotipului muIgG1 + 18G10-G2a; (8) muDX400 + 18G10; (9) muDX400 + 18G10_G1; (10) muDX400 + 18G10_G2a. Animalelor li s-au administrat anticorpi de şobolan anti-TIGIT (18G10) de şoarece sau anticorpi anti-TIGIT 18G10-G1 sau anticorpi himerici anti-TIGIT 18G10-G2a (descrişi mai sus) la o doză de 18 mg/kg, IP, la fiecare 4 zile pe parcursul fiecăruia din cele 6 cicluri. Anticorp anti-PD-1 de şoarece (descris mai sus) a fost administrat la o doză de 10 mg/kg, IP, la fiecare 4 zile pe parcursul fiecăruia din cele 6 cicluri. După dozare, monitorizarea animalelor a continuat şi volumele tumorilor au fost măsurate până la 76 de zile pentru unele grupuri de tratament. Tumorile au fost măsurate de două ori pe săptămână. Rezultatele sunt prezentate în Figurile 10 şi 11. Pentru monoterapia cu anti-TIGIT utilizând 18G10-G2a, a fost relevată o inhibare de 44% acreşterii tumorale (TGI) în ziua a 13-ea; în timp ce pentru anticorpul parental 18G10 a fost relevată o inhibare de 38% şi pentru anticorpul 18G10-G1 a fost relevată o inhibare de 36%. Pentru monoterapia cu anticorpul anti-PD1, combinat cu martorul izotipului rIgG1, s-au identificat 51% TGI în ziua a 13-ea. Când anticorpul anti-PD-1 a fost combinat cu controlul izotipului muIgG2a, s-au identificat 50% TGI şi 10% regresie completă (CR) în ziua a 18-ea, astfel încât s-a observat 1 răspuns complet din 10 animale. Pentru combinaţia anticorpului anti-PD1 cu 18G10 parental au fost relevate 80% TGI în ziua a 13-ea şi au fost relevate 300% CR în ziua a 39-ea. Pentru combinaţia anticorpului anti-PD1 cu18G10-G1 au fost relevate 59% TGI în ziua a 13-ea şi au fost relevate 10% CR în ziua a 13-ea. Pentru combinaţia anticorpului anti-PD1 cu 18G10-G2a au fost relevate 88% TGI în ziua a 13-ea şi au fost relevate 60% CR în ziua a 63-ea. Pentru combinaţia anticorpului anti-PD1 cu 18G10-G2a a fost relevată o activitate antitumorală mai mare şi o regresie mai completă, în comparaţie cu combinaţiile anticorpului anti-PD1 cu anticorpii 18G10 parental sau 18G10-G1. Nu a existat nici o pierdere semnificativă de greutate corporală, asociată cu administrarea monoterapiei sau a terapiei combinate, indicând faptul că tratamentele au fost bine tolerate.
Exemplul 8
Efectul izotipului Fc asupra activităţii antitumorale a anticorpilor anti-TIGIT în modelul tumoral animal
Experimentul, descris în Exemplul 7, a fost repetat, cu excepţia faptului că anticorpul 18G10 de şobolan a fost substituit cu anticorpul de şobolan 11A11.
Şoareci: Femelele de şoareci BALB/cAnN cu vârsta de aproximativ şapte sau opt săptămâni şi greutatea corporală medie de 20 grame au fost obţinute de la Taconic Laboratory (Germantown, NY). Hrana convenţională pentru animale şi apa au fost furnizate ad libitum.
Reactivi-anticorpi:
· Anticorpul de şoarece anti-PD1 de şoarece - subtipul IgG1.
· Anticorpul de şobolan anti-TIGIT de şoarece (11A11) - subtipul IgG1 de şobolan. Acest anticorp este descris în Figuri ca 11A11 parental. Anticorpul 11A11 posedă secvenţa VH din SECV. ID NR. 138 şi secvenţa VL din SECV. ID NR. 139.
· Anticorpul chimeric de şobolan anti-TIGIT de şoarece (11A11), care cuprinde o regiune Fc de şoarece de subtipul mlgG1. Acest anticorp este descris în Figuri ca 11A11-G2a. (Izotipul IgG1 de şoarece prezintăconstituie izotipul de şoarece, omolog izotipului uman IgG4) .
· Anticorpul chimeric de şobolan anti-TIGIT de şoarece 11A11, care cuprinde o regiune Fc de şoarece de subtipul mIgG2a. Acest anticorp este descris în Figuri ca 11A11-G2a. (Izotipul lgG2a de şoarece constituie izotipul de şoarece, omolog izotipului uman IgG1) .
· Anticorpul de control al izotipului IgG1 de şoarece (anticorp monoclonal de control, corespunzător izotipului IgG1 de şoarece, specific pentru hexonul adenoviral 25).
· Anticorpul de control al izotipului IgG1 de şobolan (anticorp monoclonal de control, corespunzător izotipului IgG1 de şobolan, specific pentru IL-4 uman).
· Anticorpul de control al izotipului lgG2a de şoarece (anticorp monoclonal de control, corespunzător izotipului lgG2a de şoarece, specific pentru hexonul adenoviral 25).
Componentele reactivilor-anticorpi.
Componentele au constituit următoarele:
· mlgG1: 75 mM NaCI, 10 mM fosfat de sodiu, 3% zaharoză, pH 7,4;
· anticorpul anti-PD-1: 20 mM acetat de sodiu, 9% zaharoză, pH 5,5; mIgG2a: 75 mM NaCI, 10 mM fosfat de sodiu, 3% zaharoză, pH 7,3;
· IgG1 de şobolan: 20 mM acetat de sodiu, 7% zaharoză, pH 5,5; 11A11: 20 mM NaAc, 100 mM NaCI, 3% zaharoză; 11A11-G1: 20 mM NaAc, 9% zaharoză, pH 5,5; 11A11-G2a: 20 mM NaAc, 9% zaharoză, pH 5,5.
Prepararea şi implantarea liniei de celule tumorale:
Celulele carcinomului de colon CT26 au fost cultivate în mediul RPMI, suplimentat cu ser fetal bovin de 10%, inactivat prin încălzire. 3 x 105 în faza de log şi celulele sub-confluente CT26 au fost injectate subcutanat (s/c) într-un volum de 100 µL de RPMI liber de ser în partea dorsală inferioară din dreapta a şoldului fiecărui şoarece. Şoarecii au fost mai întâi raşi cu o maşină electronică în zona care urma să fie folosită pentru implantare.
CT-26 prezintă o linie celulară de adenocarcinom colorectal de şoarece, singenică pentru linia de şoarece BALB/c. CT-26 constituie un sistem model relevant pentru evaluarea mecanismului de acţiune a anticorpului anti-PD-1, datorită profilului molecular translatabil după tratamentul cu anti-PD-1al acestei tumori.
Măsurătorile tumorii şi greutăţii corporale:
Tumorile au fost măsurate în ziua premergătoare administrării primei doze şi de două ori pe săptămână după aceea. Lungimea şi lăţimea tumorii au fost măsurate utilizând şublere electronice şi volumul tumoral a fost determinat folosind formula Volumul (mm3) = 0,5 x lungimea x lăţimea2 , în cazul în care dimensiunea lungimii este mai mare. Şoarecii au fost cântăriţi periodic pentru a monitoriza starea lor generală de sănătate, însă, de asemenea, şi pentru a estima doza reală pentru administrare în mg/kg per şoarece, în cazul în care este necesar. Înainte de tratament, şoarecii au fost cântăriţi şi au fost măsurate tumorile unor şoareci individuali. Pentru a preveni abaterile, orice valoare atipică în volumul sau greutatea tumorii au fost eliminate, iar soarecii rămaşi au fost randomizaţi în diferite grupuri de tratament cu o dimensiune medie echivalentă a tumorii. Când volumul mediu al tumorii la şoarecii purtători de tumoare CT26 a atins ~ 100 mm3, peste aproximativ 7 zile de la implantare, animalele au fost randomizate în grupuri de tratament a câte 10 şoareci şi a fost începută dozarea. Animalelor le-au fost administrate dozarea corespunzătoare concentraţiilor, specificate mai jos.
Prepararea, administrarea şi analiza soluţiei pentru dozare:
Stocurile congelate ale soluţiilor primare de anticorpi, care urmau să fie testaţi în modelul animal, au fost decongelate şi transferate în gheaţă umedă. Pentru a evita o congelare sşi o decngelare repetate, fiecare flacon cu soluţie primară a fost decongelat o singură dată şi au fost porţionate în alicote în volume suficiente pentru o singură utilizare. În acest scop, au fost folosite eprubete de polipropilenă cu aderenţă scăzută. Alicotele au fost congelate rapid în gheaţă uscată şi stocate la -80°C. Înainte de fiecare dozare, o alicotă a fost decongelată, diluată cu un diluant adecvat până la concentraţia nominală şi administrată imediat. Alicotele soluţiilor pentru dozare au fost instantaneu congelate în gheaţă uscată şi stocate la -80°C până la efectuarea analizei. Soluţiile de dozare au fost evaluate cu ajutorul platformei Meso Scale Discovery (MSD®, Rockville, MD), care se bazează pe tehnologia multiplex; o combinaţie de detecţie prin electrochimioluminiscenţă şi imunoteste multiplexate.
Rezultatele tratamentului cu dozarea anticorpilor anti-TIGIT/anti-PD1:
Şoarecii BALB/cAnN purtători ai tumorii CT26 au fost randomizaţi în 10 grupuri de tratament în momentul când volumul mediu al tumorilor acestor şoareci a atins o dimensiune medie a tumorii de 100 mm3 (75 mm3 - 115 mm3) (1) controlul izotipului muIgG1 + controlul izotipului IgG1 de şobolan; (2) controlul izotipului muIgG1 + controlul izotipului muIgG2a; (3) muDX400 + controlul izotipului IgG1 de şobolan; (4) muDX400 + controlul izotipului muIgG2a; (5) controlul izotipului muIgG1 + 11A11; (6) controlul izotipului muIgG1 + 11A11-G1; (7) controlul izotipului muIgG1 + 11A11-G2a; (8) muDX400 + 11A11; (9) muDX400 + 11A11_G1; (10) muDX400 + 11A11_G2a. Animalelor li s-au administrat anticorpi de şobolan anti-TIGIT de şoarece (11A11) sau anticorpi chimerici anti-TIGIT 11A11-G1, sau 11A11-G2a (descrişi mai sus) la o doză de 20 mg/kg, IP, la fiecare 4 zile pe parcursul fiecăruia din cele 6 cicluri. Anticorpul anti-PD-1 de şoarece (descris mai sus) a fost administrat la o doză de 10 mg/kg, IP, la fiecare 4 zile pe parcursul fiecăruia din cele 6 cicluri. După dozare, monitorizarea animalelor a continuat şi volumele tumorilor au fost măsurate până la 54 de zile pentru unele grupuri de tratament. Tumorile au fost măsurate de două ori pe săptămână. Rezultatele sunt prezentate în Figurile 12 şi 13. Pentru monoterapia cu anti-TIGIT, utilizând 11A11-G2a, s-a relevat inhibarea de 52% a creşterii tumorale (TGI) în ziua a 14-ea; în timp ce s-a observat de la o mică până la o lipsă de activitate la utilizarea anticorpului parental 11A11 sau anticorpului 11A11-G1. Pentru monoterapia cu anticorpul anti-PD1, s-au relevat 40-50% TGI în ziua a 14-ea. Atunci când anticorpul anti-PD-1 a fost combinat cu martorul izotipului de şobolan IgG1, s-au relevat 10% cazuri de regresie completă (CR) în ziua a 28-a, astfel încât s-a observat 1 răspuns complet la 10 animale. Pentru combinaţia anticorpului anti-PD1 cu 11A11 parental s-au relevat 60% TGI în ziua a 14-ea şi s-au relevat 30% CR în ziua a 54-a. Pentru combinaţia anticorpului anti-PD1 şicu 11A11-G1 s-au relevat 56% TGI în ziua a 14-ea şi s-au relevat 10% CR în ziua a 25-ea. Pentru combinaţia anticorpului anti-PD1 cu 11A11-G2a s-au relevat 94% TGI în ziua a 14-ea şi s-au relevat 70% CR în ziua a 42-a. Pentru combinaţia anticorpului anti-PD1 cu 11A11-G2a s-au relevat o activitate antitumorală mai mare şi o regresie mai completă, în comparaţie cu combinaţiile anticorpului anti-PD1 cu 11A11 parental sau 11A11-G1. Nu a existat nici o pierdere semnificativă în greutatea corporală, asociată cu administrarea monoterapiei sau a terapiei combinate, indicând faptul că tratamentele au fost bine tolerate.
Exemplul 9
Cartografierea epitopică a anticorpului anti-hTIGIT 14A6 prin intermediul spectrometriei de masă cu schimb de hidrogen-deuteriu
Zonele de contact dintre anticorpii anti-TIGIT 14A6 şi TIGIT uman au fost determinate utilizând analiza efectuată prin spectrometrie de masă (HDX-MS) cu schimb de hidrogen-deuteriu. HDX-MS măsoară schimbul de hidrogen cu deuteriu în coloana vertebrală amidă a proteinei. Nivelul de schimb este influenţat de expunerea hidrogenului la solvent. Prin compararea nivelurilor de schimb din antigen, atunci când anticorpul este legat, se pot identifica regiunile proteinei în care se leagă anticorpul.
Materiale
· TIGIT-His uman, care cuprinde domeniul extracelular al hTIGIT (resturile 25-150 din SECV. ID NR. 31) şi marcajul histidină (SECV. ID NR. 87).
· Anticorpul de şobolan anti-hTIGIT 14A6 (care cuprinde secvenţele VH/VL din SECV. ID NR. 7/8 (lotul nr. 78AGU) şi o regiune Fc a IgG2a de şobolan) (mAb de şobolan x [TIGIT_ H] (LB155.14A6.G2.A8) lgG2a/kappa (HY)).
Cromatografiea lichidă (LC)-spectrometria de masă (MS)
Spectrometrul de masă a fosprezintă un Thermo Scientific Orbitrap-Velos. Pentru măsurarea probelor marcate cu deuteriu, spectrometrul de masă a fost config.t pentru a obţine datele unei scanări MS într-un diapazon complet în trapa ionică orbitală la o rezoluţie de 60000, un număr de ioni ţintă de 1E6, un timp maxim de injecţie a ionului de 500 milisecunde şi două microscanări. Pentru achiziţionarea de date MS/MS pentru identificarea peptidelor, spectrometrul de masă a fost config.t pentru a obţine un spectru complet de scanare la o rezoluţie de 60000, urmat de 10 spectre MS/MS, în funcţie de datele din trapa ionică.
Sistemul de cromatografie lichidă a prezentat un Waters® nanoACQUITY pentru gradientul coloanei analitice şi o pompă izocratică Waters® 515 pentru pentru clivajul şi aplicarea probei. Pentru clivajul şi aplicarea probei, tamponul utilizat a constituit acetonitril de 2% şi acid trifluoracetic de 0,05% la un debit de 80 ul/min. Pentru gradientul analitic, tampoanele au prezentat tamponul A) acid formic de 0,1% în apă şi tamponul B) acid formic de 0,1% în acetonitril.
Gradientul a fost trecut la 40 ul/min de la 2% B până la 36% B în 10 minute, urmat de o spălare ulterioară la 80% B timp de 2 minute şi o reechilibrare la 2% B timp de 3 minute. Coloana a fost mai apoi spălată prin trecerea periodică a gradientului de la 2% până la 80% B, de trei ori a câte 1 min la fiecare etapă, urmat de o echilibrare finală la 2% B timp de 5 minute. Coloana de captare a prezentat o capcană de protecţie Waters® Vanguard C18 BEH 1.7 um, şi coloana analitică a prezentat o coloană Waters® C18 BEH300 1.7 um 1x50 mm.
Manipularea mostrei pentru marcarea cu deuteriului a fost realizată printr-un sistem Leaptec H/D-X PAL. Pe placa pentru etichetarea probelor a fost stabilită temperatura de 25°C, pe placa pentru stingerea (stoparea) reacţiei a fost stabilită temperatura de 1,5°C, şi în camera pentru trapa ionică şi coloana analitică a fost stabilită temperatura de 1,5°C. Coloana cu pepsină imobilizată (Porosyme Immobilized Pepsin 2,1x30 mmm, Life Technologies) a fost menţinută în afara camerei pentru coloane, la temperatura ambiantă.
Marcarea deuteriului
hTIGIT-His (30 pmol/µl) a fost amestecat cu un volum egal de anticorp (14 pmol/ µl) sau, pentru martorul nelegat, cu PBS pH 7,6. Probele legate la anticorp şi martorul nelegat au fost incubate la temperatura camerei timp de 1 oră înainte de începerea experimentului de marcare.
Pentru marcarea probelor cu deuteriu, 2 µl de probă au fost amestecate cu 25 µ1 de PBS în oxid de dueteriu pD 7,6. Timpii de marcare au fost de 30, 300, 1500, 4500 sau 9000 secunde. După expirarea timpului fixat, 25 µl de amestec marcat s-au adăugat la 35 µl de tampon rece de stopare (8 M uree, 100 mM TCEP). Proba stinsă a fost incubată la temperatura de 1,5°C, timp de 1 minut. După aceasta, 55 µl au fost injectate în camera de răcire a coloanei, în care proba a fost trecută prin coloana pepsinei şi peptidele rezultate au fost încărcate în coloana de captare. După trei minute, un întrerupător de supapă a deconectat coloana pepsinei din linie, iar capcana a fost spălată timp de încă un minut. Dupa aceea, capcana a fost comutată în linie cu coloana analitică şi gradientul analitic, şi spectrometrul de masă a demarat.
O probă complet deuterată a fost generată prin incubarea a 2 µl de hTIGIT cu 108 µl de tampon denaturant deuterat (4 M uree, 100 mM TCEP, 0,01% DDM în oxid de deueteriu de 99,5%). Proba a fost incubată la temperatura camerei peste noapte. După aceasta, 55µ1 a fost injectată direct în camera pentru coloane şi datele au fost obţinute ca mai sus.
Analiza datelor
Datele LC-MS/MS au fost obţinute dintr-o probă nemarcată şi au fost cercetate înainte de marcarea cu deuteriu, pentru a verifica dezintegrarea reuşită a proteinelor şi pentru a genera lista de peptide de după dezintegrarea pepsinei. Datele au fost căutate cu ajutorul Proteome Discoverer 1.4 şi al algoritmului de căutare SEQUEST HT (ThermoFisher Scientific). Baza de date de proteine utilizată reprezintă secvenţele anticorpilor TIGIT-His uman şi anti-hTIGIT a fost legată cu baza de date de drojdii Saccharomycese cerevisiae uniprot (5/20/13).
Datele MS din experimentul de marcare a deuteriului au fost procesate cu ajutorul HDExaminer (versiunea 1.3, Sierra Analytics). Masa şi timpul de retenţie, selectate de către software pentru fiecare peptidă, au fost verificate în mod manual.
Rezultate
Peptidele TIGIT umane, protejate prin legarea anticorpului 14A6, sunt ilustrate în Heatmap din Fig. 14 şi corespund resturilor de aminoacizi 54-57, 68-70 şi 76-81 din SECV. ID NR. 31. (Aceiaşi aminoacizi sunt prezentaţi ca resturile 30-33, 44-46 şi 52-57 din SECV. ID NR. 87).
Exemplul 10
Cartografierea epitopică a anticorpului hTIGIT 31C6 prin spectrometrie de masă cu schimb hidrogen-deuteriu
Zonele de contact dintre anticorpii anti-TIGIT 31C6 şi TIGIT uman au fost determinate prin utilizarea analizei efectuate cu spectrometrie de masă cu schimb hidrogen-deuteriu (HDX-MS). HDX-MS măsoară înlocuirea hidrogenului cu deuteriu în coloana vertebrală amidă a proteinei. Unul dintre factorii care influenţează nivelul de schimb îl constituie expunerea hidrogenului la solvent. Prin compararea nivelurilor de schimb din antigen, atunci când anticorpul este legat, se pot identifica regiunile proteinei în care se leagă anticorpul.
Materiale
· TIGIT-His uman care cuprinde domeniul extracelular al hTIGIT (resturile 25-145 din SECV. ID NR. 31) şi marcajul histidinic (SECV. ID NR. 87).
· Anticorpul de şoarece anti-hTIGIT 31C6 (lotul nr. 41 AHK) (mAb de şoarece x [TIGIT_H] (MEB125.31C6.A1.205) IgG1/kappa (HY)).
Cromatografia lichidă-spectrometria de masă
Spectrometrul de masă a prezentat un Thermo Scientific Orbitrap-Elite. Pentru măsurarea probelor marcate cu deuteriu, spectrometrul de masă a fost config.t pentru a obţine datele unei scanări complete MS în trapa ionică orbitală la o rezoluţie de 120000, un număr de ioni ţintă de 1E6, un timp maxim de injecţie a ionului de 500 milisecunde şi două microscanări. Pentru obţinerea datelor MS/MS pentru identificarea peptidelor, spectrometrul de masă a fost config.t pentru a se obţine un spectru complet de scanare la o rezoluţie de 120000, cu următoarele 10 spectre MS/MS, în funcţie de datele din capcana ionică.
Sistemul de cromatografie lichidă a prezentat un Waters nanoAcquity pentru gradientul coloanei analitice şi o pompă izocratică Waters 515 pentru dezintegrarea şi aplicarea probelor. Pentru dezintegrarea şi aplicarea probelor, tamponul utilizat a prezentat 2% acetonitril şi 0,05% acid trifluoracetic la un debit de 80 ul/min. Pentru gradientul analitic, tampoanele au prezentat tamponul A) 0,1% acid formic în apă şi tamponul B) 0,1% acid formic în acetonitril.
Gradientul a fost trecut la 40 ul/min de la 2% B până la 36% B în 10 minute, urmat de o spălare la 80% B timp de 2 minute şi o reechilibrare la 2% B timp de 3 minute. Coloana a fost mai apoi spălată prin trecerea periodică a gradientului la 2% şi 80% B, de trei ori a câte 1 min la fiecare etapă, urmat de o echilibrare finală la 2% B timp de 5 minute. Coloana de captare a prezentat o coloană de protecţie Waters Vanguard CSH C18 1,7 um şi coloana analitică a prezentat o coloană Waters CSH C18 1,7um 1x50 mm.
Prelucrarea mostrelor pentru marcarea cu deuteriu a fost realizată printr-un sistem Lealtec H/D-X PAL. Placa cu probe pentru marcare a fost config.tă la temperatura de 25°C, în placa pentru stoparea reacţiei a fost stabilită o temperatură de de 1,5°C, iar în camera pentru capcană şi coloana analitică a fost stabilită o temperatură de 1,5°C. Coloana cu pepsină imobilizată (Enzymate BEH Pepsin, Waters Corporation) a fost menţinută în afara camerei pentru coloane la temperatura ambiantă.
Marcarea cu deuteriu
hTIGIT-His (63 pmol/ul) a fost amestecat cu un volum egal de anticorp (32 pmol/ µl) sau, pentru martorul nelegat, cu PBS pH 7,6. Probele legate la anticorp şi martorul nelegat au fost incubate la temperatura camerei timp de 1 oră înainte de începerea experimentului de marcare.
Pentru marcarea probelor cu deuteriu, 2 µl de probă au fost amestecate cu 25 µl de PBS în oxid de deuteriu cu pH 7,6. Punctele temporale de marcare au fost de 30, 300, 1500, 4500 sau 9000 secunde. După expirarea timpului stabilit, 25 µl de amestec destinat marcării au fost adăugate la 35 µl de tampon rece pentru stoparea reacţiei (8 M uree, 100 mM TCEP). După stoparea reacţiei, proba a fost incubată la temperatura de 1,5°C, timp de 1 minut. În continuare, 55 µl au fost injectate în coloana din camera de răcire, în care proba a fost trecută prin coloana cu pepsină, iar peptidele obţinute au fost aplicate pe coloana de captare. După trei minute, printr-un comutator de supapă coloana cu pepsină a fost deconectată de la linie şi capcana a fost spălată timp de încă 1 minut. După aceasta, capcana a fost unită la linia cu coloană analitică şi au fost conectaţi gradientul analitic şi spectrometrul de masă. Fiecare punct temporal a fost obţinut în trei exemplare în ordine aleatorie.
Proba complet deuterată a fost obţinută prin incubarea a 2 µl de hTIGIT (63 pmol/ µl cu 108 µl de tampon denaturant deuterat (4 M uree, 100 mM TCEP, 0,01% DDM în 99,5% oxid de deuteriu). Proba a fost incubată la temperatura camerei timp de o noapte. În continuare, 55 µl au fost injectate direct în camera pentru coloane şi datele au fost obţinute ca mai înainte.
Analiza datelor
Datele LC-MS/MS au fost obţinute pentru o probă nemarcată şi au fost examinate în baza de date pentru a verifica dezintegrarea reuşită a proteinelor şi pentru a obţine lista de peptide de după dezintegrarea cu pepsină. Căutarea datelor în baza de date a fost efectuată folosind Proteome Discoverer 1.4 şi algoritmul de căutare SEQUEST HT (ThermoFisher Scientific). Baza de date a proteinelor, utilizată pentru secvenţele anticorpilor TIGIT-His uman şi anti-hTIGIT, a fost legată la baza de date pentru drojdii Saccharomyces cerevisiae uniprot (5/20/13).
Datele MS pentru experimentele de marcare cu deuteriu au fost procesate cu ajutorul HDExaminer (versiunea 1.3, Sierra Analytics). Masa şi timpul de retenţie, selectate cu ajutorul software pentru fiecare peptidă, au fost verificate în mod manual.
Rezultate
Peptidele TIGIT umane, protejate prin intermediul legării anticorpului 31C6, sunt ilustrate în Heatmap din Fig. 15 şi corespund resturilor de aminoacizi 53-57, 60-65, 68-70, 72-81, 94-95, 109-119 din SECV. ID NR. 31. (Aceiaşi aminoacizi sunt reprezentaţi ca resturile 29-33, 36-41, 44-46, 48-57, 70-71, 85-95 din SECV. ID NR. 87).
Exemplul 11
Testul de activitate a celulelor T in vitro pentru anticorpii umanizaţi anti-hTIGIT
În continuare, autorii invenţiei de faţă au analizat activitatea diferitelor variante umanizate ale unuia dintre anticorpii conform invenţiei (31C6). Într-un test, autorii prezentei invenţii au caracterizat consecinţele funcţionale ale blocării receptorului TIGIT uman folosind celulele hTIGIT-Jurkat. În analiza dată, hTIGIT-Jurkat au fost cultivate împreună cu celulele JY, concepute pentru expresia CD155 uman (hCD155-JY). Linia celulară JY utilizată reprezintă linia de celule B limfoblastoidă, imortalizată prin intermediul virusului Epstein-Barr (EBV). La fel ca şi în testul descris mai sus în Exemplul 3, atunci când celulele hTIGIT-Jurkat sunt stimulate cu ajutorul α-CD3, legat la placă, şi sunt cultivate împreună cu celulele JY parentale (care nu exprimă CD155 uman), ele produc IL-2. Totodată, în cazul în care hTIGIT-Jurkat au fost cultivate împreună cu hCD155-JY, nivelurile de IL-2 se reduceau într-un mod dependent de ligand. Tratamentul cu anticorpii anti-hTIGIT restabileşte producţia de IL-2 în acest test într-o manieră dependentă de doză.
În testul dat, plăcile cu fund plat de 96 de godeuri au fost acoperite cu anticorpul de şoarece anti-CD3 uman (1 µg/ml în PBS; Clona HIT3a, BD Pharmingen Cat. nr. 555336) pe parcursul unei nopţi la temperatura de 4°C. A doua zi, celulele Jurkat (50000) exprimând hTIGIT au fost însămânţate pe plăci pre-acoperite şi se efectua incubarea prealabilă timp de 30-60 minute cu mAb de diverse concentraţii. Celulele JY (50000) exprimând CD155 uman au fost adăugate la cultură. După incubarea timp de 18-24 de ore la temperatura de 37°C şi CO2 de 5,0%, nivelurile de IL-2 în supernatanţii de cultură au fost evaluaţi prin intermediul mezoscării (kitul Human IL-2 Tissue Culture MESO: Cat. nr. K151AHB-2). Rezultatele sunt prezentate în Fig. 16. Atunci când a fost efectuată titrarea anticorpului parental de şoarece anti-hTIGIT al clonei 31C6 (MEB125.31C6.A1.205 mlgG1) de la 30 µg/ml până la 0,04 µg/ml, a fost obţinut EC50 de 0,730 µg/ml şi atunci când a fost efectuată aceeaşi titrare a 31C6 chimeric uman-şoarece (MEB125.31C6.A1.205 IgG1 himeric uman-şoarece), a fost obţinut EC50 de 0,910 µg/ml. (31C6 chimeric uman-şoarece cuprindea regiunile variabile ale clonei parentale 31C6 (SECV. ID NR: 94 şi 95) şi regiunea IgG1 umană). În mod similar, la efectuarea titrării variantelor umanizate ale 31C6 de la 30 µg/ml până la 0,04 µg/ml au fost obţinute următoarele EC50:
Varianta umanizată EC50 MEB125.31C6.A1.205 VH4/VL1 (Anticorp cuprinzând VH din SECV. ID NR. 127 şi VL din SECV. ID NR. 130, şi regiunea Fc a IgG1 uman) 0,620 µg/ml MEB125.31C6.A1.205 VH5/VL4 (Anticorp cuprinzând VH din SECV. ID NR. 128 şi VL din SECV. ID NR.133, şi regiunea Fc a IgG1 uman) 1,2 µg/ml MEB125.31C6.A1.205 VH5/VL3 (Anticorp cuprinzând VH din SECV. ID NR. 128 şi VL din SECV. ID NR. 132, şi regiunea Fc a IgG1 uman) 1,2 µg/ml
Autorii invenţiei de faţă au folosit, de asemenea, un test pe bază de celule primare pentru a demonstra că anticorpii anti-hTIGIT umanizaţi posedă activitate în raport cu celulele primare. Mai multe loturi de celule mononucleare din sângele periferic uman (PBMC) au fost analizate cu privire la expresia TIGIT după stimulare (stimularea reacţiei limfocitare mixte şi stimularea α-CD3). În continuare, celulele PBMC au fost selectate pentru testele pe bază de celule primare în funcţie de expresia lor de TIGIT după stimulare. Plăcile de cultură tisulară au fost acoperite cu HuCD155-Fc, iar celulele PBMC au fost stimulate cu anti-CD3.
În acest test, plăcile de legare înaltă cu 96 de godeuri (Corning 3361) au fost acoperite cu CD155-Fc uman (de producţie proprie, 1 ug/ml în PBS) pe parcursul unei nopţi la temperatura de 4°C. În ziua următoare, 50000 PBMC uman (Precision Bioservice cat. nr. 83000C-1,0, lotul nr. 12920 în RPMI + 10% ser uman Bio-world cat. nr. 30611043-1, lotul nr. V15022401, RBC au fost îndepărtate prin intermediul BD Pharmlyse BD cat. Nr. 555899), au fost însămânţate pe plăci pre-acoperite şi a fost efectuată incubatea preliminară timp de 30-60 minute cu mAb anti-TIGIT de diverse concentraţii. În continuare, s-a adăugat anticorpul anti-CD3 (eBioscience 16-0037-85) în concentraţie finală de 1 ug/ml. După incubarea timp de 48 de ore la temperatura de 37°C şi CO2 de 5,0%, citokinele pro-inflamatorii (IFNγ, IL1β, IL6 şi TNFα) au fost evaluate în supernatanţii de cultură prin intermediul testului cu mezoscară (kitul Human Proinflammaatory-4 I tissue culture MESO: cat. Nr. K15009B-4). După cum se arată în Fig. 17, variantele umanizate ale 31C6 au fost capabile să stimuleze IL-6, TNFα şi IFNγ într-un mod dependent de doză, similar cu anticorpul himeric 31C6 uman-şoarece.
Înscrisurile din Fig. 17 corespund următorilor anticorpi:
· MEB125.31C6.A1.205 IgG1 chimeric uman-şoarece corespunde anticorpului cuprinzând regiunile variabile ale clonei parentale 31C6 (SECV. ID NR. 94 şi 95) şi regiunea Fc a IgG1 uman)
· MEB125.31C6.A1.205 VH4/VL1 corespunde anticorpului cuprinzând VH din SECV. ID NR. 127 şi VL din SECV. ID NR. 130, şi regiunea Fc a IgG1 uman).
· MEB125.31C6.A1.205 VH5/VL4 corespunde anticorpului cuprinzând VH din SECV. ID NR. 128 şi VL din SECV. ID NR. 133, şi regiunea Fc a IgG1 uman).
· MEB125.31C6.A1.205 VH5/VL3 corespunde anticorpului cuprinzând VH din SECV. ID NR. 128 şi VL din SECV. ID NR. 133, şi regiunea Fc a IgG1 uman).
Conţinutul tuturor referinţelor citate în documentul de faţă este încorporat în calitate de referinţă în aceeaşi măsură, ca şi în cazul în care ar fost indicat în mod concret şi individual că conţinutul fiecărei publicaţii în parte, înscrieri din bazele de date (de exemplu, secvenţele din GenBank sau înscrierile din GenelD), cereri de brevet sau brevet este încorporată în documentul de faţă în calitate de referinţă. Această afirmaţie de încorporare în calitate de referinţă este destinată solicitanţilor, în conformitate cu 37 C.F.R. 1.57(b)(1), pentru a se referi la fiecare, fără excepţie, publicaţie individuală, înscriere în bazele de date (de exemplu, secvenţele în GenBank sau înscrierile în GenelD), cererile de brevet sau brevetele, fiecare dintre acestea fiind identificate în mod clar în conformitate cu 37 C.F.R. 1.57(b)(2), chiar şi în cazul în care o astfel de citare nu este imediat adiacentă unei afirmaţii dedicate de încorporare în calitate de referinţă. Includerea afirmaţiilor dedicate de încorporare în calitate de referinţă, dacă acestea sunt prezente în descriere, nu slăbeşte în nici un mod această afirmaţie generală de încorporare în calitate de referinţă. Citarea referinţelor prezentate în documentul de faţă nu vizează recunoaşterea faptului că referinţa se referă la stadiul anterior al tehnicii şi nici nu constituie vreo recunoaştere cu privire la conţinutul sau data acestor publicaţii sau documente.
Volumul prezentei invenţii nu este destinat să limiteze prin variantele concrete de realizare, descrise în documentul de faţă. Într-adevăr, diferite modificări ale invenţiei, în completarea celor descrise în prezentul document, vor deveni evidente specialiştilor din domeniul de referinţă din descrierea prezentată mai sus şi din figurile însoţitoare. Astfel de modificări sunt destinate să fie încadrate în volumul revendicărilor anexate.
Descrierea prezentată mai sus este considerată a fi suficientă pentru a permite unui specialist din domeniul de referinţă să pună în practică invenţia. Diversele modificări ale invenţiei, în completarea celor prezentate şi descrise în documentul de faţă, vor deveni evidente specialiştilor în domeniu dat din descrierea expusă mai sus şi sunt incluse în volumul revendicărilor anexate ale invenţiei.
Informaţia cu privire la secvenţe
Tabelul 4
Descriere SECV ID NR. SECCVENŢA 14A6 H - CDR1 1 SDYWG 14A6 H - CDR2 2 FITYSGSTSYNPSLKS 14A6 H - CDR3 3 MPSFITLASLSTWEGYFDF 14A6 L - CDR1 4 KASQSIHKNLA 14A6 L - CDR2 5 YANSLQT 14A6 L - CDR3 6 QQYYSGWT 14A6 VH PARENTALĂ 7 EVQLQESGPGLVKPSQSLSLTCSVTGSSIASDYWGWIRKFPGNKMEWMGFITYSGSTSYNPSLKSRISITRDTSKNQFFLQLHSVTTDDTATYSCARMPSFITLASLSTWEGYFDFWGPGTMVTVSS 14A6 VL PARENTALĂ 8 DIQMTQSPSLLSASVGDRVTLNCKASQSIHKNLAWYQQKLGEAPKFLIYYANSLQTGIPSRFSGSGSGTDFTLTISGLQPEDVATYFCQQYYSGWTFGGGTKVELK Hu14A6VH.1 9 EVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSISSDYWGWIRQPPGKGLEWIGFITYSGSTSYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARMPSFITLASLSTWEGYFDFWGQGTMVTVSS Hu14A6VH.1a 10 EVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSISSDYWGWIRQPPGKGLEWIGFITYSGSTSYNPSLKSRVTISRDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARMPSFITLASLSTWEGYFDFWGQGTMVTVSS Hu14A6VH.1b 11 EVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSISSDYWGWIRQPPGKGLEWIGFITYSGSTSYNPSLKSRITISRDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARMPSFITLASLSTWEGYFDFWGQGTMVTVSS Hu14A6VH.1c 12 EVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGSSISSDYWGWIRQPPGKGLEWMGFITYSGSTSYNPSLKSRITISRDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARMPSFITLASLSTWEGYFDFWGQGTMVTVSS Hu14A6VH.1d 13 EVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSISSDYWGWIRQPPGKGLEWIGFITYSGSTSYNPSLKSRVTISRDTSKNQFSLKLHSVTAADTAVYYCARMPSFITLASLSTWEGYFDFWGQGTMVTVSS Hu14A6VH.1e 14 EVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSISSDYWGWIRQPPGKGLEWIGFITYSGSTSYNPSLKSRITISRDTSKNQFSLKLHSVTAADTAVYYCARMPSFITLASLSTWEGYFDFWGQGTMVTVSS Hu14A6VH.1f 15 EVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGSSISSDYWGWIRQPPGKGLEWIGFITYSGSTSYNPSLKSRITISRDTSKNQFSLKLHSVTAADTAVYYCARMPSFITLASLSTWEGYFDFWGQGTMVTVSS Hu14A6VH.1g 16 EVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGSSISSDYWGWIRQPPGKGLEWMGFITYSGSTSYNPSLKSRITISVDTSKNQFSLKLHSVTAADTAVYYCARMPSFITLASLSTWEGYFDFWGQGTMVTVSS Hu14A6VH.2 17 EVQLQESGPGLVKPSETLSLTCAVSGYSISSDYWGWIRQPPGKGLEWIGFITYSGSTSYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARMPSFITLASLSTWEGYFDFWGQGTMVTVSS Hu14A6VH.2a 18 EVQLQESGPGLVKPSETLSLTCAVSGYSISSDYWGWIRQPPGKGLEWIGFITYSGSTSYNPSLKSRVTISRDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARMPSFITLASLSTWEGYFDFWGQGTMVTVSS Hu14A6VH.2b 19 EVQLQESGPGLVKPSETLSLTCAVSGYSISSDYWGWIRQPPGKGLEWIGFITYSGSTSYNPSLKSRITISRDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARMPSFITLASLSTWEGYFDFWGQGTMVTVSS Hu14A6VH.2c 20 EVQLQESGPGLVKPSETLSLTCAVSGSSISSDYWGWIRQPPGKGLEWMGFITYSGSTSYNPSLKSRITISRDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARMPSFITLASLSTWEGYFDFWGQGTMVTVSS Hu14A6VH.2d 21 EVQLQESGPGLVKPSETLSLTCAVSGYSISSDYWGWIRQPPGKGLEWIGFITYSGSTSYNPSLKSRVTISRDTSKNQFSLKLHSVTAADTAVYYCARMPSFITLASLSTWEGYFDFWGQGTMVTVSS Hu14A6VH.2e 22 EVQLQESGPGLVKPSETLSLTCAVSGYSISSDYWGWIRQPPGKGLEWIGFITYSGSTSYNPSLKSRITISRDTSKNQFSLKLHSVTAADTAVYYCARMPSFITLASLSTWEGYFDFWGQGTMVTVSS Hu14A6VH.2f 23 EVQLQESGPGLVKPSETLSLTCAVSGSSISSDYWGWIRQPPGKGLEWIGFITYSGSTSYNPSLKSRITISRDTSKNQFSLKLHSVTAADTAVYYCARMPSFITLASLSTWEGYFDFWGQGTMVTVSS Hu14A6VH.2e 24 EVQLQESGPGLVKPSETLSLTCAVSGSSISSDYWGWIRQPPGKGLEWMGFITYSGSTSYNPSLKSRITISRDTSKNQFSLKLHSVTAADTAVYYCARMPSFITLASLSTWEGYFDFWGQGTMVTVSS Hu14A6Vk.1 25 DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCKASQSIHKNLAWYQQKPGKAPKLLIYYANSLQTGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQYYSGWTFGGGTKVEIK Hu14A6Vk.1a 26 DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCKASQSIHKNLAWYQQKPGKAPKFLIYYANSLQTGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQYYSGWTFGGGTKVEIK Hu14A6Vk.1b 27 DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCKASQSIHKNLAWYQQKPGKAPKFLIYYANSLQTGIPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQYYSGWTFGGGTKVEIK Hu14A6Vk.2 28 DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCKASQSIHKNLAWYQQKPGKVPKLLIYYANSLQTGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDVATYYCQQYYSGWTFGGGTKVEIK Hu14A6Vk.2a 29 DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCKASQSIHKNLAWYQQKPGKVPKFLIYYANSLQTGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDVATYYCQQYYSGWTFGGGTKVEIK Hu14A6Vk.2b 30 DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCKASQSIHKNLAWYQQKPGKVPKFLIYYANSLQTGIPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDVATYYCQQYYSGWTFGGGTKVEIK TIGIT uman 31 mrwcllliwa qglrqaplas gmmtgtiett gnisaekggs iilqchlsst taqvtqvnwe qqdqllaicn adlgwhisps fkdrvapgpg lgltlqsltv ndtgeyfciy htypdgtytg riflevless vaehgarfqi pllgamaatl vvictavivv valtrkkkal rihsvegdlr rksagqeews psapsppgsc vqaeaapagl cgeqrgedca elhdyfnvls yrslgncsff tetg TIGIT cinomolgus/ rhesus 32 mrwclfliwa qglrqaplas gmmtgtiett gnisakkggs vilqchlsst maqvtqvnwe qhdhsllair naelgwhiyp afkdrvapgp glgltlqslt mndtgeyfct yhtypdgtyr griflevles svaehsarfq ipllgamamm lvviciaviv vvvlarkkks lrihsvesgl qrkstgqeeq ipsapsppgs cvqaeaapag lcgeqqgddc aelhdyfnvl syrslgscsf ftetg Lanţul greu de pembrolizumab 33 QVQLVQSGVEVKKPGASVKVSCKASGYTFTNYYMYWVRQAPGQGLEWMGGINPSNGGTNFNEKFKNRVTLTTDSSTTTAYMELKSLQFDDTAVYYCARRDYRFDMGFDYWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK Lanţul uşor de pembrolizumab 34 EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASKGVSTSGYSYLHWYQQKPGQAPRLLIYLASYLESGVPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCQHSRDLPLTFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC Lanţul greu de nivolumab 35 QVQLVESGGGVVQPGRSLRLDCKASGITFSNSGMHWVRQAPGKGLEWVAVIWYDGSKRYYADSVKGRFTISRDNSKNTLFLQMNSLRAEDTAVYYCATNDDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK Lanţul uşor de nivolumab 36 EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYDASNRATGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCQQSSNWPRTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC 16AHA_tigit_14a6_umanizată_VH1 LB155.14A6.G2.A8_VH1 37 EVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGSSIASDYWGWIRQPPGKGLEWIGFITYSGSTSYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARMPSFITLASLSTWEGYFDFWGQGTMVTVSSAS 18AHA_tigit_14a6_umanizată_VH2 LB155.14A6.G2.A8_VH2 38 EVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGSSIASDYWGWIRQPPGKGLEWIGFITYSGSTSYNPSLKSRVTISRDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARMPSFITLASLSTWEGYFDFWGQGTMVTVSS 20AHA_tigit_14a6_umanizată_VH3 LB155.14A6.G2.A8_VH3 39 EVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGSSIASDYWGWIRKPPGKGLEWIGFITYSGSTSYNPSLKSRVTISRDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARMPSFITLASLSTWEGYFDFWGQGTMVTVSS 21AHA_tigit_14a6_umanizată_VH4 LB155.14A6.G2.A8_VH4 40 EVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGSSIASDYWGWIRQPPGKKLEWIGFITYSGSTSYNPSLKSRVTISRDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARMPSFITLASLSTWEGYFDFWGQGTMVTVSS 19AHA_tigit_14a6_umanizată_VH5 LB155.14A6.G2.A8_VH5 41 EVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGSSIASDYWGWIRQPPGKGMEWIGFITYSGSTSYNPSLKSRVTISRDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARMPSFITLASLSTWEGYFDFWGQGTMVTVSS 22AHA_tigit_14a6_ umanizată_VH6 LB155.14A6.G2.A8_VH6 42 EVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGSSIASDYWGWIRKPPGKKMEWIGFITYSGSTSYNPSLKSRVTISRDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARMPSFITLASLSTWEGYFDFWGQGTMVTVSS 23AHA_tigit_14a6_umanizată_VH7 LB155.14A6.G2.A8_VH7 43 EVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGSSIASDYWGWIRQFPGKGLEWIGFITYSGSTSYNPSLKSRVTISRDTSKNQFSLKLSSVTADDTAVYYCARMPSFITLASLSTWEGYFDFWGQGTMVTVSS 24AHA_tigit_14a6_ umanizată_VH8 LB155.14A6.G2.A8_VH8 44 EVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGSSIASDYWGWIRKPPGKKMEWIGFITYSGSTSYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARMPSFITLASLSTWEGYFDFWGQGTMVTVSS 25AHA_tigit_14a6_ umanizată_VH9 LB155.14A6.G2.A8_VH9 45 EVQLQESGPGLVKPSETLSLTCSVTGSSIASDYWGWIRQPPGKGLEWIGFITYSGSTSYNPSLKSRVTISRDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARMPSFITLASLSTWEGYFDFWGQGTMVTVSS 26AHA_tigit_14a6_ umanizată_VH10 LB155.14A6.G2.A8_VH10 46 EVQLQQSGAGLLKPSETLSLTCSVTGSSIASDYWGWIRQPPGKGLEWIGFITYSGSTSYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARMPSFITLASLSTWEGYFDFWGQGTMVTVSS 27AHA_tigit_14a6_ umanizată_VH11 LB155.14A6.G2.A8_VH11 47 EVQLQESGPGLVKPPGTLSLTCSVTGSSIASDYWGWVRQPPGKGLEWIGFITYSGSTSYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARMPSFITLASLSTWEGYFDFWGQGTMVTVSS 09AHA_tigit_14a6_ umanizată_VL1 LB155.14A6.G2.A8_VL1 48 DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCKASQSIHKNLAWYQQKPGKAPKLLIYYANSLQTGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQYYSGWTFGGGTKVEIK 11AHA_tigit_14a6_ umanizată_VL2 LB155.14A6.G2.A8_VL2 49 DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCKASQSIHKNLAWYQQKPGKAPKFLIYYANSLQTGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQYYSGWTFGGGTKVEIK 12AHA_tigit_14a6_ umanizată_VL3 LB155.14A6.G2.A8_VL3 50 DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCKASQSIHKNLAWYQQKPGKAPKLLIYYANSLQTGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYFCQQYYSGWTFGGGTKVEIK 13AHA_tigit_14a6_ umanizată_VL4 LB155.14A6.G2.A8_VL4 51 DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCKASQSIHKNLAWYQQKPGKAPKFLIYYANSLQTGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYFCQQYYSGWTFGGGTKVEIK 15AHA_tigit_14a6_ umanizată_VL5 LB155.14A6.G2.A8_VL5 52 DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCKASQSIHKNLAWYQQKPGKAPKLLIYYANSLQTGIPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQYYSGWTFGGGTKVEIK Secvenţă lider de lanţuri grele 53 MEWSWVFLFFLSVTTGVHS Secvenţă lider de lanţuri uşoare 54 MSVPTQVLGLLLLWLTDARC Domeniul constant al lanţului greu - IgG4, S228P 55 TKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK Domeniul constant al lanţului uşor kappa 56 VAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC 28H5 H - CDR1 57 GYSITSDYAWN 28H5 H - CDR2 58 YISNSGSASYNPSLKS 28H5 H - CDR3 59 LIYYDYGGAMNF 28H5 L - CDR1 60 KASQGVSTTVA 28H5 L - CDR2 61 SASYRYT 28H5 L - CDR3 62 QHYYSTPWT 28H5 VH PARENTALĂ 63 DVQLQESGPGLVKPSQSLSLTCTVTGYSITSDYAWNWIRQFPGNKLEWMGYISNSGSASYNPSLKSRISITRDTSKNQFFLQLNSVTTEDTATYYCATLIYYDYGGAMNFWGQGTSVTVSS 28H5 VL PARENTALĂ 64 DIVMTQSHKFMSTSVGDRVSITCKASQGVSTTVAWYQQKPGQSPKLLIYSASYRYTGVPDRFTGSGSGTDFTFTISSVQSEDLAVYYCQHYYSTPWTFGGGTKLEIK 14H6 L - varianta CDR2 65 YASNLQT 14H6 L - varianta CDR2 65 YASSLQT 14H6 L - varianta CDR2 67 YASTLQT 14H6 L - varianta CDR2 68 YATTLQT 14H6 L - varianta CDR2 69 YASYLQT 14H6 L - varianta CDR2 70 YANQLQT 14H6 L - varianta CDR2 71 YAGSLQT 14H6 L - varianta CDR2 72 YASQLQT 14H6 L - varianta CDR2 73 YADSLQT 14H6 L - varianta CDR3 74 QQYYSGFT 14H6 L - varianta CDR3 75 QQYYSGYT 14H6 L - varianta CDR3 76 QQYYSGIT 14H6 L - varianta CDR3 77 QQYYSGVT 14H6 L - varianta CDR3 78 QQYYSGLT 14H6 H - varianta CDR3 79 MPSFITLASLSTFEGYFDF 14H6 H - varianta CDR3 80 MPSFITLASLSTYEGYFDF 14H6 H - varianta CDR3 81 MPSFITLASLSTIEGYFDF 14H6 H - varianta CDR3 82 MPSFITLASLSTVEGYFDF 14H6 H - varianta CDR3 83 MPSFITLASLSTLEGYFDF Acidul nucleic care codifică VH parentală 28H5 84 GATGTGCAGCTTCAGGAGTCGGGACCTGGCCTGGTGAAACCTTCTCAGTCTCTGTCCCTCACCTGCACTGTCACTGGCTACTCAATCACCAGTGATTATGCCTGGAACTGGATCCGACAGTTTCCAGGAAACAAACTGGAGTGGATGGGCTACATAAGCAACAGTGGTAGCGCTAGCTACAACCCATCTCTCAAAAGTCGCATCTCTATCACTCGAGACACATCCAAGAACCAGTTCTTCCTGCAGTTGAATTCTGTGACTACTGAGGACACAGCCACATATTACTGTGCAACCCTGATCTACTATGATTACGGGGGGGCTATGAACTTCTGGGGTCAAGGAACCTCAGTCACCGTCTCCTCA Acidul nucleic care codifică VL parentală 28H5 85 GACATTGTGATGACCCAGTCTCACAAATTCATGTCCACATCAGTAGGAGACAGGGTCAGCATCACCTGCAAGGCCAGTCAGGGTGTGAGTACTACTGTGGCCTGGTATCAACAGAAACCAGGACAATCTCCTAAACTACTGATTTACTCGGCATCCTACCGGTACACTGGAGTCCCTGATCGCTTCACTGGCAGTGGATCTGGGACGGATTTCACTTTCACCATCAGCAGTGTGCAGTCTGAAGACCTGGCAGTTTATTACTGTCAGCATTATTATAGTACTCCGTGGACGTTCGGTGGAGGCACCAAGCTGGAAATCAAA Domeniul constant al lanţului greu - IgG1 86 ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK hTIGIT-HIS 87 GTIETT GNISAEKGGS IILQCHLSST TAQVTQVNWE QQDQLLAICN ADLGWHISPS FKDRVAPGPG LGLTLQSLTV NDTGEYFCIY HTYPDGTYTG RIFLEVLESS VAEHGARFQI PLLGA HHHHHHHHHGGQ 31C6 H - CDR1 88 SYVMH 31C6 H - CDR2 89 YIDPYNDGAKYNEKFKG 31C6 H - CDR3 90 GGPYGWYFDV 31C6 L - CDR1 91 RASEHIYSYLS 31C6 L - CDR2 92 NAKTLAE 31C6 L - CDR3 93 QHHFGSPLT 31C6 VH PARENTALĂ (cu CDR-uri subliniate) 94 EVQLQQSGPELVKPGSSVKMSCKASGYTFSSYVMHWVKQKPGQGLEWIGYIDPYNDGAKYNEKFKGKATLTSDKSSSTAYMELSSLTSEDSAVYYCARGGPYGWYFDVWGAGTTVTVSS 31C6 VL PARENTALĂ (cu CDR-uri subliniate) 95 DIQMTQSPASLSASVGETVTITCRASEHIYSYLSWYQQKQGKSPQLLVYNAKTLAEGVPSRFSGSGSGTQFSLKINSLQPEDFGTYYCQHHFGSPLTFGAGTTLELK 31C6 H - VARIANTA CDR2 (D56R) 96 YIDPYNrGAKYNEKFG 31C6 H - VARIANTA CDR2 (D56L) 97 YIDPYNlGAKYNEKG F 31C6 H - VARIANTA CDR2 (D56K) 98 YIDPYNkGAKYNEKFG 31C6 H - VARIANTA CDR2 (D56F) 99 YIDPYNfGAKYNEKFG 31C6 H - VARIANTA CDR2 (D56S) 100 YIDPYNsGAKYNEKFG 31C6 H - VARIANTA CDR2 (D56Y) 101 YIDPYNyGAKYNEKFG 31C6 H - VARIANTA CDR2 (D56V) 102 YIDPYNvGAKYNEKFG 31C6 H - VARIANTA CDR2 (G57R) 103 YIDPYNDrAKYNEKFKG 31C6 H - VARIANTA CDR2 (G57N) 104 YIDPYNDnAKYNEKFKG 31C6 H - VARIANTA CDR2 (G57Q) 105 YIDPYNDqAKYNEKFKG 31C6 H - VARIANTA CDR2 (G57E) 106 YIDPYNDeAKYNEKFKG 31C6 H - VARIANTA CDR2 (G57L) 107 YIDPYNDlAKYNEKFKG 31C6 H - VARIANTA CDR2 (G57K) 108 YIDPYNDkAKYNEKFKG 31C6 H - VARIANTA CDR2 (G57S) 109 YIDPYNDsAKYNEKFKG 31C6 H - VARIANTA CDR2 (G57Y) 110 YIDPYNDyAKYNEKFKG 31C6 H - VARIANTA CDR2 (G57V) 111 YIDPYNDvAKYNEKFKG 31C6 L - varianta CDR2 (N50A) 112 AAKTLAE 31C6 L - varianta CDR2 (N50Y) 113 YAKTLAE 31C6 L - CDR2 (N50W) 114 WAKTLAE 31C6 L - varianta CDR2 (N50S) 115 SAKTLAE 31C6 L - varianta CDR2 (N50T) 116 TAKTLAE 31C6 L - varianta CDR2 (N50I) 117 IAKTLAE 31C6 L - varianta CDR2 (N50V) 118 VAKTLAE 31C6 L - varianta CDR2 (A51N) 119 NNKTLAE 31C6 L - varianta CDR2 (A51I) 120 NIKTLAE 31C6 L - varianta CDR2 (A51L) 121 NLLTLAE 31C6 L - varianta CDR2 (A51T) 122 NTKTLAE 31C6 L - varianta CDR2 (A51V) 123 NVKTLAE 31C6_HUMZ_VH1 (cu CDR-uri subliniate) 124 EVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFSSYVMHWVRQAPGQRLEWIGYIDPYNDGAKYSQKFQGRVTLTRDTSASTAYMELSSLRSEDTAVYYCARGGPYGWYFDVWGQGTTVTVSS 31C6_HUMZ_VH2 (cu CDR-uri subliniate) 125 EVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFSSYVMHWVRQAPGQRLEWIGYIDPYNDGAKYSQKFQGRVTLTSDKSASTAYMELSSLRSEDTAVYYCARGGPYGWYFDVWGQGTTVTVSS 31C6_HUMZ_VH3 (cu CDR-uri subliniate) 126 EVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFSSYVMHWVRQAPGQGLEWIGYIDPYNDGAKYAQKFQGRVTLTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCARGGPYGWYFDVWGQGTTVTVSS 31C6_HUMZ_VH4 (cu CDR-uri subliniate) 127 EVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFSSYVMHWVRQAPGQGLEWIGYIDPYNDGAKYAQKFQGRVTLTSDKSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCARGGPYGWYFDVWGQGTTVTVSS 31C6_HUMZ_VH5 (cu CDR-uri subliniate) 128 EVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGYTFSSYVMHWVRQAPGQGLEWIGYIDPYNDGAKYAQKFQGRVTLTSDKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARGGPYGWYFDVWGQGTTVTVSS 31C6_HUMZ_VH6 (cu CDR-uri subliniate) 129 EVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFSSYVMHWVRQAPGQGLEWIGYIDPYNDGAKYAQKFQGRVTLTSDKSISTAYMELSRLRSDDTVVYYCARGGPYGWYFDVWGQGTTVTVSS 31C6_Humz_L1 (cu CDR-uri subliniate) 130 DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASEHIYSYLSWYQQKPGKAPKLLIYNAKTLAEGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQHHFGSPLTFGQGTRLEIK 31C6_Humz_L2 (cu CDR-uri subliniate) 131 DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASEHIYSYLSWYQQKPGKAPKLLIYNAKTLAEGVPSRFSGSGSGTQFTLTISSLQPEDFATYYCQHHFGSPLTFGQGTRLEIK 31C6_Humz_L3 (cu CDR-uri subliniate) 132 DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASEHIYSYLSWYQQKPGKVPKLLIYNAKTLAEGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDVATYYCQHHFGSPLTFGQGTRLEIK 31C6_Humz_L4 (cu CDR-uri subliniate) 133 DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASEHIYSYLSWYQQKPGKVPKLLIYNAKTLAEGVPSRFSGSGSGTQFTLTISSLQPEDVATYYCQHHFGSPLTFGQGTRLEIK 31C6 H - varianta CDR2 134 YIDPYNDGAKYAQKFQG 31C6 H - varianta CDR2 135 YIDPYNDGAKYSQKFQG 18G10 - secvenţa VH 136 QVQLMESGPGLVQPSQTLSLTCTVSGFPLTSYTVHWVRQPPGKGLEWIGAIWSSGSTDYNSALKSRLNINRDSSKSQVFLKMNSLQTEDTAIYFCTKSGWAFFDYWGQGVMVTVSS 18G10 - secvenţa VL 137 DIQMTQSPSLLSASVGDRVTLNCIASQNIYKSLAWYQLKLGEAPKLLIYNANSLQAGIPSRFSGSGSGTDFALTISGLQPEDVATYFCQQYSGGYTFGAGTKLELK 11A11 - secvenţa VH 138 EVQLVESGGDLVQPGRSLKISCVASGFTFSDYYMAWVRLAPQKGLEWVASISYEGSRTHYGDSVRGRFIISRDNPKNILYLQMNSLGSEDTATYFCARHTGTLDWLVYWGQGTLVIVSS 11A11 - secvenţa VL 139 NIVMAQSPKSMSISAGDRVTMNCKASQNVDNNIAWYQQKPGQSPKLLIFYASNRYSGVPDRFTGGGYGTDFTLTIKSVQAEDAAFYYCQRIYNFPTFGSGTKLEIK 14A6 H - CONSENSUS CDR3 140 MPSFITLASLSTXEGYFDF X= W, F, Y, I, V, L 14A6 L - CONSENSUS CDR2 141 YAX1X2LQT X1= N, S, T, G, D X2= S, N, S, T, Y, Q 14A6 L - CONSENSUS CDR3 142 QQYYSGXT X= W, F, Y, I, V, L 14A6 VH PARENTALĂ de CONSENSUS 143 EVQLQX1SGX2GLX3KPX4X5X6LSLTCX7VX8GX30SIX31SDYWGWX9RX10X11PGX12X13X14EWX15GFITYSGSTSYNPSLKSRX16X17IX18X19DTSKNQFX20LX21LX22SVTX23X24DTAX25Y X26CARMPSFITLASLSTX27EGYFDFWGX32GTX28X29TVSS X1= E sau Q X2= P sau A X3= V sau L X4= S sau P X5= Q sau E sau G X6= S sau T X7= S sau T sau A X8= T sau S X9= I sau V X10= K sau Q X11= F sau P X12= N sau K X13= K sau G X14= M sau L X15= M sau I X16= I sau V X17= S sau T X18= T sau S X19= R sau V X20= F sau S X21= Q sau K X22= H sau S X23= T sau A X24= D sau A X25= T sau V X26= S sau Y, X27= W, F, Y, I, V sau L X28= M, V, L, A, R, N, P, Q, E, G, I, H, K, F, S, T, W sau Y X29 = V, T sau L X30= S sau G sau Y X31= A sau S X31= P sau Q 14A6 VH UMANIZATĂ de CONSENSUS 144 EVQLQX1SGX2GLX3KPX4X5TLSLTCX6VX7GX8SIX9SDYWGWX10RX11X12PGKX13X14EWX15GFITYSGSTSYNPSLKSRX16TISX17DTSKNQFSLKLX18SVTAX19DTAVYYCARMPSFITLASLSTX20EGYFDFWGQGTX21X22TVSS X1 = E sau Q X2= P sau A X3 = V sau L X4 = S sau P X5= E sau G X6 = T sau A sau S X7 = S sau T X8 = G sau S sau Y X9 = S sau A X10 = I sau V X11=Q sau K X12= P sau F X13 = G sau K X14 = L sau M X15 = I sau M X16 = V sau I X17 = V sau R X18 = S sau H X19 = A sau D X20 = W, F, Y, I, V, L X21 = M, V, L, A, R, N, P, Q, E, G, I, H, K, F, S, T, W sau Y X22 = V, T sau L 14A6 VL PARENTALĂ De CONSENSUS 145 DIQMTQSPSX1LSASVGDRVTX2X3CKASQSIHKNLAWYQQKX4GX5X15PKX6LIYYAX7X8LQTGX9PSRFSGSGSGTDFTLTISX10LQPEDX11ATYX12CQQYYSGX13TFGGGTKVEX14K X1 =L sau S X2 = L sau I X3 = N sau T X4 = L sau P X5 = E sau K X6 = F sau L X7 = N, S, T, G sau D X8 = S, N, T, Y sau Q X9 = I sau V X10 = G sau S X11 = V sau F X12 = F sau Y X13 = W, F, Y, I, V sau L X14 = L sau I X15 = A sau V 14A6 VL UMANIZATĂ de CONSENSUS 146 DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCKASQSIHKNLAWYQQKPGKX6PKX1LIYYAX2X3LQTGX4PSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDX7ATYYCQQYYSGX5TFGGGTKVEIK X1 = L sau F X2 = N, S, T, G sau D X3 = S, N, T, Y sau Q X4 = V sau I X5 = W, F, Y, I, V sau L X6= A sau V X7 = F sau V 31C6 H - CDR2 CONSENSUS 147 YIDPYNX1X2AKYX3X4KFX5G X1= D, R, L, K, F, S, Y sau V X2= G, R, N, Q, E, L K, S, Y sau V X3= N, A sau S X4= E sau Q X5= K sau Q 31C6 L - CDR2 CONSENSUS 148 X1X2KTLAE X1= N, A, V, W, S, T, R, H G, I sau V X2= A, N, I, L, T sau V 31C6 VH PARENTALĂ de CONSENSUS 149 EVQLX1QSGX2EX3X4KPGX5SVKX6SCKASGYTFSSYVMHWVX7QX8PGQX9LEWIGYIDPYN X10X11AKYX12X13KFX14GX15X16TLTX17DX18SX19STX20YMELSX21LX22SX23DX24X25VYYCARGGPYGX26YFDVWGX27GTTVTVSS X1= Q sau V X2= P sau A X3 =V sau L X4= V sau K X5= S sau A X6= M sau V X7= K sau R X8= K sau A X9= G sau R X10= D, R, L, K, F, S, Y sau V X11= G, R, N, Q, E, L K, S, Y sau V X12= N, A sau S X13= E sau Q X14 = K sau Q X15= R sau K X16= A sau V X17 = S sau R X18 = K sau T X19 = S, I , A sau T X20 = A sau V X21 = R sau S X22 = T sau R X23 = D sau E X24 = S sau T X25 = A sau V X26 = W, A, D, E, F, G, I, K, N, Q, R, S, T, V sau Y X27 = A sau Q 31C6 VH UMANIZATĂ De CONSENSUS 150 EVQLVQSGAEVKKPGX1SVKVSCKASGYTFSSYVMHWVRQAPGQX2LEWIG YIDPYNX3X4AKYX5X5KFX7GRVTLTX8DX9SX10STX11YMELSX12LRSX13DT X14VYYCARGGPYGX15YFDVWGQGTTVTVSS X1= A sau S X2= R sau G X3= D, R, L, K, F, S, Y sau V X4= G, R, N, Q, E, L K, S, Y sau V X5= N, A sau S X6= E sau Q X7= K sau Q X8= R sau S X9= T sau K X10= A, T sau I X11= A sau V X12= S sau R X13= E sau D X14= A sau V X15 = W, A, D, E, F, G, I, K, N, Q, R, S, T, V sau Y 31C6 VL PARENTALĂ De CONSENSUS 151 DIQMTQSPX1SLSASVGX2X3VTITCRASEHIYSYLSWYQQKX4GKX5PX6LLX7YX8X9KTLAEGVPSRFSGSGSGTX10FX11LX12IX13SLQPEDX14X15TYYCQHHFGSPLTFGX16GTX17LEX18K X1= A sau S X2= E sau D X3 = T sau R X4= Q sau P X5= S, A sau V X6= Q sau K X7= V sau I X8= N, A, Y, W, S, T, I sau V X9= A, N, I, L, T sau V X10= Q sau D X11= S sau T X12= K sau T X13= N sau S X14 = F sau V X15= G sau A X16= A sau Q X17 = T sau R X18 = L sau I 31C6 L - VL UMANIZATĂ de CONSENSUS 152 DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASEHIYSYLSWYQQKPGKX1PKLLIY X2X3KTLAEGVPSRFSGSGSGTX4FTLTISSLQPEDX5ATYYCQHHFGSPLTFGQGTRLEIK X1= A sau V X2= N, A, W, W, S, T, I sau V X3 = A, N, I, L, T sau V X4 = D sau Q X5= F sau V 31C6 H - CDR3 CONSENSUS 153 GGPYGXYFDV X15 = W, A, D, E, F, G, I, K, N, Q, R, S, T, V sau Y 31C6 H - VARIANTA CDR3 154 GGPYGAYFDV 31C6 H - VARIANTA CDR3 155 GGPYGDYFDV 31C6 H - VARIANTA CDR3 156 GGPYGEYFDV 31C6 H - VARIANTA CDR3 157 GGPYGFYFDV 31C6 H - VARIANTA CDR3 158 GGPYGGYFDV 31C6 H - VARIANTA CDR3 159 GGPYGIYFDV 31C6 H - VARIANTA CDR3 160 GGPYGKYFDV 31C6 H - VARIANTA CDR3 161 GGPYGNYFDV 31C6 H - VARIANTA CDR3 162 GGPYGQYFDV 31C6 H - VARIANTA CDR3 163 GGPYGRYFDV 31C6 H - VARIANTA CDR3 164 GGPYGSYFDV 31C6 H - VARIANTA CDR3 165 GGPYGTYFDV 31C6 H - VARIANTA CDR3 166 GGPYGVYFDV 31C6 H - VARIANTA CDR3 167 GGPYGYYFDV
1. Pluckthun. The Pharmacology of Monoclonal Antibodies, vol. 113, Rosenburg and Moore edit. Springer-Verlag. New York, 1994, p. 269-315
2. Muyldermans et al.Trends Biochem. Sci. no 26, 2001, p. 230
3. EP 0404097 A2 1990.12.27
4. Kohler et al. Nature, no 256, 1975, p. 495
5. US 4816567 A 1989.03.28

Claims (30)

1. Anticorp sau fragment al acestuia de legare a antigenului care se leagă la TIGIT uman, în care anticorpul sau fragmentul de legare a antigenului conţine o regiune variabilă a lanţului greu şi o regiune variabilă a lanţului uşor, în care regiunea variabilă a lanţului greu conţine CDR1 a regiunii variabile a lanţului greu conţinând secvenţa aminoacidă a SECV. ID NR: 88, CDR2 a regiunii variabile a lanţului greu cuprinzând secvenţa aminoacidă a SECV. ID NR: 89 sau 134 şi CDR3 a regiunii variabile a lanţului greu cuprinzând secvenţa aminoacidă a SECV. ID NR: 90, şi în care regiunea variabilă a lanţului uşor conţine CDR1 a regiunii variabile a lanţului uşor cuprinzând secvenţa aminoacidă a SECV. ID NR: 91, CDR2 a regiunii variabile a lanţului uşor cuprinzând secvenţa aminoacidă a SECV. ID NR: 92 si CDR3 a regiunii variabile a lanţului uşor cuprinzând secvenţa aminoacidă a SECV. ID NR: 93.
2. Anticorp sau fragment de legare a antigenului, conform revendicării 1, în care anticorpul conţine CDR1 a regiunii variabile a lanţului greu conţinând secvenţa aminoacidă a SECV. ID NR: 88, CDR2 a regiunii variabile a lanţului greu cuprinzând secvenţa aminoacidă a SECV. ID NR: 134 şi CDR3 a regiunii variabile a lanţului greu cuprinzând secvenţa aminoacidă a SECV. ID NR: 90, şi în care regiunea variabilă a lanţului uşor conţine CDR1 a regiunii variabile a lanţului uşor cuprinzând secvenţa aminoacidă a SECV. ID NR: 91, CDR2 a regiunii variabile a lanţului uşor cuprinzând secvenţa aminoacidă a SECV. ID NR: 92 şi CDR3 a regiunii variabile a lanţului uşor cuprinzând secvenţa aminoacidă a SECV. ID NR: 93.
3. Anticorp sau fragment al acestuia de legare a antigenului conform revendicării 1, în care anticorpul sau fragmentul de legare a antigenului conţine: a. o regiune variabilă a lanţului greu conţinând secvenţa aminoacidă a SECV. ID NR: 94 şi o regiune variabilă a lanţului uşor conţinând secvenţa aminoacidă a SECV. ID NR: 95; b. o regiune variabilă a lanţului greu conţinând secvenţa aminoacidă a SECV. ID NR:128 şi o regiune variabilă a lanţului uşor conţinând secvenţa aminoacidă a SECV. ID NR:132; c. o regiune variabilă a lanţului greu conţinând secvenţa aminoacidă a SECV. ID NR:127 şi o regiune variabilă a lanţului uşor conţinând secvenţa aminoacidă a SECV. ID NR:130; d. o regiune variabilă a lanţului greu conţinând secvenţa aminoacidă a SECV. ID NR:128 şi o regiune variabilă a lanţului uşor conţinând secvenţa aminoacidă a SECV. ID NR:133; e. o regiune variabilă a lanţului greu, conţinând cel puţin 97% identitate a secvenţei aminoacide cu SECV. ID NR: 128 şi o regiune variabilă a lanţului uşor conţinând cel puţin 97% identitate a secvenţei aminoacide cu SECV. ID NR: 132, în care orice variaţii ale secvenţei se întîlnesc în regiunile de cadru ale anticorpului; f. o regiune variabilă a lanţului greu, conţinând cel puţin 97% identitate a secvenţei aminoacide cu SECV. ID NR: 127 şi o regiune variabilă a lanţului uşor conţinând cel puţin 97% identitate a secvenţei aminoacide cu SECV. ID NR: 130, în care orice variaţii ale secvenţei se întâlnesc în regiunile de cadru ale anticorpului; sau g. o regiune variabilă a lanţului greu, conţinând cel puţin 97% identitate a secvenţei aminoacide cu SECV. ID NR: 128 şi o regiune variabilă a lanţului uşor conţinând cel puţin 97% identitate a secvenţei aminoacide cu SECV. ID NR: 133, în care orice variaţii ale secvenţei se întîlnesc în regiunile de cadru ale anticorpului.
4. Anticorp sau fragment de legare a antigenului, conform oricăreia dintre revendicările 1-3, în care anticorpul se leagă la TIGIT uman cu o valoare a KD de aproximativ 1x10-9 M până la aproximativ 1x10-12 M, aşa cum a fost determinat prin rezonanţa plasmonică de suprafaţă.
5. Anticorp sau fragment de legare a antigenului, conform oricăreia dintre revendicările 1-4, în care anticorpul conţine două lanţuri grele şi două lanţuri uşoare.
6. Anticorp sau fragment de legare a antigenului, conform oricăreia dintre revendicările 1-4, care este un anticorp umanizat, care conţine un domeniu constant IgG1 uman şi un domeniu constant kappa uman.
7. Anticorp sau fragment de legare a antigenului, conform oricăreia dintre revendicările anterioare, care reprezintă un anticorp umanizat, care conţine un domeniu constant IgG4 uman şi un domeniu constant kappa uman.
8. Anticorp, conform revendicării 6, în care domeniul constant IgG1 uman conţine secvenţa aminoacidă a SECV. ID NR: 86 şi domeniul constant kappa uman conţine secvenţa aminoacidă a SECV. ID NR: 56.
9. Anticorp, conform revendicării 7, în care domeniul constant IgG4 uman conţine secvenţa aminoacidă a SECV. ID NR: 55 şi domeniul constant kappa uman conţine secvenţa aminoacidă a SECV. ID NR: 56.
10. Anticorp, conform revendicării 2, care reprezintă un anticorp izolat conţinând două imunoglobuline a lanţului greu şi două imunoglobuline a lanţului uşor, în care fiecare imunoglobulină a lanţului greu cuprinde (i) o regiune variabilă a lanţului greu conţinând secvenţa aminoacidă a SECV. ID NR: 128 şi (ii) un domeniu constant IgG1 cuprinzând secvenţa aminoacidă a SECV. ID NR: 86 şi în care fiecare imunoglobulină a lanţului uşor conţine (i) o regiune variabilă a lanţului uşor cuprinzând secvenţa aminoacidă a SECV. ID NR: 132 şi (ii) un domeniu constant kappa uman cuprinzând secvenţa aminoacidă a SECV. ID NR: 56.
11. Anticorp, conform revendicării 2, care reprezintă un anticorp izolat conţinând două imunoglobuline a lanţului greu şi două imunoglobuline a lanţului uşor, în care fiecare imunoglobulină a lanţului greu cuprinde (i) o regiune variabilă a lanţului greu conţinând secvenţa aminoacidă a SECV. ID NR: 128 şi (ii) un domeniu constant IgG1 cuprinzând secvenţa aminoacidă a SECV. ID NR: 86, şi în care fiecare imunoglobulină a lanţului uşor conţine (i) o regiune variabilă a lanţului uşor cuprinzând secvenţa aminoacidă a SECV. ID NR: 133 şi (ii) un domeniu constant kappa uman cuprinzând secvenţa aminoacidă a SECV. ID NR: 56.
12. Anticorp, conform revendicării 2, care reprezintă un anticorp izolat conţinând două imunoglobuline a lanţului greu şi două imunoglobuline a lanţului uşor, în care fiecare imunoglobulină a lanţului greu cuprinde (i) o regiune variabilă a lanţului greu conţinând secvenţa aminoacidă a SECV. ID NR: 127 şi (ii) un domeniu constant IgG1 cuprinzând secvenţa aminoacidă a SECV. ID NR: 86 şi în care fiecare imunoglobulină a lanţului uşor conţine (i) o regiune variabilă a lanţului uşor cuprinzând secvenţa aminoacidă a SECV. ID NR: 130 şi (ii) un domeniu constant kappa uman cuprinzând secvenţa aminoacidă a SECV. ID NR: 56.
13. Anticorp sau fragment de legare a antigenului, conform oricăreia dintre revendicările 1-12, care este un anticorp, anticorpul fiind produs într-o celulă CHO.
14. Moleculă de acid nucleic izolat, care codifică i) o regiune variabilă a lanţului greu a anticorpului sau fragmentului acestuia de legare a antigenului, conform oricăreia dintre revendicările 1-13 sau ii) o regiune variabilă a lanţului uşor a anticorpului sau a fragmentului acestuia de legare a antigenului, conform oricăreia dintre revendicările 1-13.
15. Moleculă de acid nucleic izolat, conform revendicării 14, în care regiunea variabilă a lanţului greu conţine setul de secvenţe aminoacide prezente în oricare dintre SECV. ID NR: 94, 128 sau 127, sau regiunea variabilă a lanţului uşor conţine setul de secvenţe aminoacide în oricare dintre SECV. ID NR: 95, 132, 130 sau 133.
16. Vector de expresie cuprinzând acidul nucleic izolat, conform revendicării 14.
17. Celula gazdă cuprinzând vectorul de expresie, conform revendicării 16.
18. Celula gazdă, conform revendicării 17, care prezintă o celulă Pichia sau o celulă ovariană de hamster chinezesc.
19. Compoziţie cuprinzând anticorpul sau fragmentul de legare a antigenului, conform oricăreia dintre revendicările 1-13 şi un purtător acceptabil farmaceutic sau un diluant.
20. Compoziţie, conform revendicării 19, cuprinzând suplimentar un agent, selectat din grupa constând din: a. anticorp anti-PD1 sau fragment al acestuia de legare a antigenului; b. anticorp anti-LAG3 sau fragment al acestuia de legare a antigenului; c. anticorp anti-VISTA sau fragment al acestuia de legare a antigenului; d. anticorp anti-BTLA sau fragment al acestuia de legare a antigenului; e. anticorp anti-TIM3 sau fragment al acestuia de legare a antigenului; f. anticorp anti-CTLA4 sau fragment al acestuia de legare a antigenului; g. anticorp anti-HVEM sau fragment al acestuia de legare a antigenului; h. anticorp anti-CD27 sau fragment al acestuia de legare a antigenului; i. anticorp anti-CD137 sau fragment al acestuia de legare a antigenului; j. anticorp anti-OX40 sau fragment al acestuia de legare a antigenului; k. anticorp anti-CD28 sau fragment al acestuia de legare a antigenului; I. anticorp anti-PDL1 sau fragment al acestuia de legare a antigenului; m. anticorp anti-PDL2 sau fragment al acestuia de legare a antigenului; n. anticorp anti-GITR sau fragment al acestuia de legare a antigenului; o. anticorp anti-ICOS sau fragment al acestuia de legare a antigenului; p. anticorp anti-SIRPα sau fragment al acestuia de legare a antigenului; q. anticorp anti-ILT2 sau fragment al acestuia de legare a antigenului; r. anticorp anti-ILT3 sau fragment al acestuia de legare a antigenului; s. anticorp anti-ILT4 sau fragment al acestuia de legare a antigenului; si t. anticorp anti-ILT5 sau fragment al acestuia de legare a antigenului.
21. Compoziţie, conform revendicării 20, în care anticorpul anti-PD1 sau fragmentul acestuia de legare a antigenului este selectat din grupa constând din: pembrolizumab sau un fragment al acestuia de legare a antigenului şi nivolumab sau un fragment al acestuia de legare a antigenului.
22. Compoziţie, conform revendicării 21, în care anticorpul anti-PD1 reprezintă pembrolizumab.
23. Compoziţie, conform revendicării 20, în care compoziţia conţine adiţional un anticorp anti-PDL1 sau un fragment al acestuia de legare a antigenului.
24. Metodă de preparare a unui anticorp sau a unui fragment al acestuia de legare a antigenului, conform oricăreia din revendicările 1-13, cuprinzând: a. cultivarea unei celule gazdă în condiţii potrivite, în care celula gazdă conţine: (i) o secvenţă de nucleotide, care codifică regiunea variabilă a lanţului greu a anticorpului sau fragmentului acestuia de legare a antigenului; şi (ii) o secvenţă de nucleotide, care codifică regiunea variabilă a lanţului uşor a anticorpului sau fragmentului acestuia de legare a antigenului; şi b. opţional, izolarea anticorpului sau a fragmentului de legare a antigenului din celula gazdă şi/sau din mediul de cultură.
25. Anticorp sau fragment de legare a antigenului, conform oricăreia din revendicările 1-13, pentru utilizare într-o metodă de tratament al cancerului la un subiect uman.
26. Anticorp sau fragment de legare a antigenului, conform revendicării 25, pentru utilizare opţional în asociere cu un alt agent terapeutic sau procedură terapeutică.
27. Anticorp sau fragment de legare a antigenului, conform oricăreia din revendicările 1-13, pentru utilizare într-o metodă de tratament a unei infecţii sau a unei boli infecţioase la un subiect uman.
28. Anticorp sau fragment de legare a antigenului, conform revendicării 27, pentru utilizare opţional în asociere cu un alt agent terapeutic sau procedură terapeutică.
29. Anticorp sau fragment de legare a antigenului, conform oricăreia din revendicările 1-13, pentru utilizare într-o metodă de tratament al cancerului în combinaţie cu un anticorp anti-PD1 sau un fragment al acestuia de legare a antigenului.
30. Anticorp sau fragment de legare a antigenului, conform revendicării 29, pentru utilizare în care anticorpul anti-PD1 sau fragmentul acestuia de legare la antigen este selectat din grupa constând din pembrolizumab sau un fragment al acestuia de legare a antigenului şi nivolumab sau un fragment al acestuia de legare a antigenului.
MDA20170032A 2014-08-19 2015-08-17 Anticorpi anti-TIGIT MD4733C1 (ro)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201462038912P 2014-08-19 2014-08-19
US201562126733P 2015-03-02 2015-03-02
PCT/US2015/045447 WO2016028656A1 (en) 2014-08-19 2015-08-17 Anti-tigit antibodies

Publications (3)

Publication Number Publication Date
MD20170032A2 MD20170032A2 (ro) 2017-08-31
MD4733B1 MD4733B1 (ro) 2020-12-31
MD4733C1 true MD4733C1 (ro) 2021-07-31

Family

ID=53938463

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
MDA20170032A MD4733C1 (ro) 2014-08-19 2015-08-17 Anticorpi anti-TIGIT

Country Status (30)

Country Link
US (5) US20160355589A1 (ro)
EP (1) EP3183267A1 (ro)
JP (3) JP6920194B2 (ro)
KR (2) KR102050082B1 (ro)
CN (2) CN113583131B (ro)
AP (1) AP2017009765A0 (ro)
AU (3) AU2015305754B2 (ro)
CA (1) CA2957722C (ro)
CL (2) CL2017000310A1 (ro)
CO (1) CO2017001561A2 (ro)
CR (1) CR20170060A (ro)
DO (1) DOP2017000046A (ro)
EA (1) EA036311B1 (ro)
GE (1) GEP20217331B (ro)
GT (1) GT201700033A (ro)
IL (1) IL250583B (ro)
JO (2) JO3664B1 (ro)
MA (1) MA40475A (ro)
MD (1) MD4733C1 (ro)
MX (2) MX389684B (ro)
MY (2) MY198017A (ro)
NI (1) NI201700019A (ro)
PE (1) PE20170289A1 (ro)
PH (1) PH12017500296B1 (ro)
SG (1) SG11201701161QA (ro)
TN (1) TN2017000024A1 (ro)
TW (2) TWI790593B (ro)
UA (1) UA122395C2 (ro)
WO (1) WO2016028656A1 (ro)
ZA (1) ZA201700955B (ro)

Families Citing this family (166)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
ES2437327T3 (es) 2007-06-18 2014-01-10 Merck Sharp & Dohme B.V. Anticuerpos para el receptor PD-1 humano de muerte programada
EP3605088A1 (en) 2008-04-09 2020-02-05 Genentech, Inc. Compositions and methods for the treatment of immune related diseases
HRP20190044T1 (hr) 2011-09-23 2019-02-22 Oncomed Pharmaceuticals, Inc. Agensi koji vežu vegf/dll4 i njihove uporabe
ME03527B (me) 2013-12-12 2020-04-20 Shanghai hengrui pharmaceutical co ltd Pd-1 antitijelo, njegov fragment koji se vezuje na antigen, i njegova medicinska primjena
GB201403775D0 (en) 2014-03-04 2014-04-16 Kymab Ltd Antibodies, uses & methods
CN108064242B (zh) 2014-05-28 2022-10-21 阿吉纳斯公司 抗gitr抗体和其使用方法
UA122395C2 (uk) * 2014-08-19 2020-11-10 Мерк Шарп Енд Доум Корп. Антитіло проти tigit
BR112017013385A2 (pt) 2014-12-23 2018-02-06 Bristol-Myers Squibb Company anticorpos para tigit
WO2016134335A2 (en) 2015-02-19 2016-08-25 Compugen Ltd. Pvrig polypeptides and methods of treatment
EP3653221B1 (en) 2015-02-19 2022-08-03 Compugen Ltd. Anti-pvrig antibodies and methods of use
AU2016256911B2 (en) 2015-05-07 2022-03-31 Agenus Inc. Anti-OX40 antibodies and methods of use thereof
TWI715587B (zh) 2015-05-28 2021-01-11 美商安可美德藥物股份有限公司 Ｔｉｇｉｔ結合劑和彼之用途
JP6976241B2 (ja) 2015-08-14 2021-12-08 メルク・シャープ・アンド・ドーム・コーポレーションMerck Sharp & Dohme Corp. 抗ｔｉｇｉｔ抗体
HK1257840A1 (zh) 2015-09-01 2019-11-01 Agenus Inc. 抗-pd-1抗體及其使用方法
US10946095B2 (en) 2015-09-02 2021-03-16 Yissum Research Development Company Of The Hebrew University Of Jerusalem Ltd. Antibodies specific to human T-cell immunoglobulin and ITIM domain (TIGIT)
CN109071644B (zh) 2015-09-23 2023-09-19 昂考梅德药品有限公司 治疗癌症的方法和组合物
AU2016331052B2 (en) 2015-10-01 2023-08-03 Potenza Therapeutics, Inc. Anti-TIGIT antigen-binding proteins and methods of use thereof
AU2016355570B2 (en) 2015-11-18 2020-01-02 Merck Sharp & Dohme Llc PD1 and/or LAG3 binders
KR20180083944A (ko) 2015-12-02 2018-07-23 아게누스 인코포레이티드 항체 및 이의 사용 방법
CA3014934A1 (en) 2016-03-04 2017-09-08 JN Biosciences, LLC Antibodies to tigit
EP3432927A4 (en) 2016-03-24 2019-11-20 Gensun Biopharma Inc. TRIPLE-SPECIFIC INHIBITORS FOR CANCER TREATMENT
WO2017181139A2 (en) * 2016-04-15 2017-10-19 Michael Molloy Anti-human vista antibodies and use thereof
CN118359722A (zh) 2016-05-27 2024-07-19 艾吉纳斯公司 抗tim-3抗体及其使用方法
JP7261379B2 (ja) 2016-06-20 2023-04-20 カイマブ・リミテッド 抗ｐｄ－ｌ１抗体
US9567399B1 (en) 2016-06-20 2017-02-14 Kymab Limited Antibodies and immunocytokines
EP3497128A2 (en) 2016-08-09 2019-06-19 Kymab Limited Anti-icos antibodies
LT3347379T (lt) 2016-08-17 2020-05-11 Compugen Ltd. Anti-tigit antikūnai, anti-pvrig antikūnai ir jų kombinacijos
WO2018041120A1 (en) 2016-08-31 2018-03-08 Beijing Biocytogen Co., Ltd Genetically modified non-human animal with human or chimeric tigit
CN107815467B (zh) 2016-08-31 2021-03-16 百奥赛图(北京)医药科技股份有限公司 人源化基因改造动物模型的制备方法及应用
US10844119B2 (en) 2016-10-11 2020-11-24 Agenus Inc. Anti-LAG-3 antibodies and methods of use thereof
WO2018083248A1 (en) 2016-11-03 2018-05-11 Kymab Limited Antibodies, combinations comprising antibodies, biomarkers, uses & methods
EP4545093A2 (en) 2016-11-04 2025-04-30 Aximmune, Inc. Beta-alethine, immune modulatos, and uses thereof
WO2018089628A1 (en) 2016-11-09 2018-05-17 Agenus Inc. Anti-ox40 antibodies, anti-gitr antibodies, and methods of use thereof
JP7126269B2 (ja) * 2016-11-30 2022-08-26 メレオ バイオファーマ ５ インコーポレイテッド Ｔｉｇｉｔ結合物質を含む、がんの処置のための方法
WO2018102746A1 (en) * 2016-12-02 2018-06-07 Rigel Pharmaceuticals, Inc. Antigen binding molecules to tigit
JP7106538B2 (ja) 2016-12-07 2022-07-26 アジェナス インコーポレイテッド 抗体およびその使用方法
US10232053B2 (en) 2016-12-30 2019-03-19 Trieza Therapeutics, Inc. Immunomodulatory oncolytic adenoviral vectors, and methods of production and use thereof for treatment of cancer
US10537637B2 (en) 2017-01-05 2020-01-21 Gensun Biopharma Inc. Checkpoint regulator antagonists
CA3054885A1 (en) * 2017-03-03 2018-09-07 Rinat Neuroscience Corp. Anti-gitr antibodies and methods of use thereof
JOP20190203A1 (ar) 2017-03-30 2019-09-03 Potenza Therapeutics Inc بروتينات رابطة لمولد ضد مضادة لـ tigit وطرق استخدامها
WO2018187191A1 (en) 2017-04-03 2018-10-11 Jounce Therapeutics, Inc Compositions and methods for the treatment of cancer
EP3612201B1 (en) 2017-04-21 2023-10-25 Sillajen, Inc. Oncolytic vaccinia virus and checkpoint inhibitor combination therapy
JP2020517699A (ja) 2017-04-26 2020-06-18 ブリストル−マイヤーズ スクイブ カンパニーＢｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂ Ｃｏｍｐａｎｙ ジスルフィド結合の還元を最小限にする抗体製造法
RS64576B1 (sr) 2017-05-01 2023-10-31 Agenus Inc Anti-tigit antitela i postupci njihove primene
JOP20190260A1 (ar) 2017-05-02 2019-10-31 Merck Sharp & Dohme صيغ ثابتة لأجسام مضادة لمستقبل الموت المبرمج 1 (pd-1) وطرق استخدامها
CA3060581A1 (en) 2017-05-02 2018-11-08 Merck Sharp & Dohme Corp. Formulations of anti-lag3 antibodies and co-formulations of anti-lag3 antibodies and anti-pd-1 antibodies
KR102770786B1 (ko) * 2017-05-02 2025-02-20 머크 샤프 앤드 돔 엘엘씨 항-tigit 항체 단독의, 및 프로그램화된 사멸 수용체 1 (pd-1) 항체와 조합된 항-tigit 항체의 안정한 제제 및 그의 사용 방법
AU2018276140B2 (en) 2017-06-01 2025-06-05 Compugen Ltd. Triple combination antibody therapies
WO2018229163A1 (en) 2017-06-14 2018-12-20 King's College London Methods of activating v delta 2 negative gamma delta t cells
GB201709808D0 (en) * 2017-06-20 2017-08-02 Kymab Ltd Antibodies
IL272227B1 (en) * 2017-07-27 2025-05-01 iTeos Belgium SA Anti-tigit antibodies
BE1025333B1 (fr) * 2017-07-27 2019-01-23 Iteos Therapeutics S.A. Anticorps anti-tigit
WO2019023504A1 (en) 2017-07-27 2019-01-31 Iteos Therapeutics Sa ANTI-TIGIT ANTIBODIES
CN111051347B (zh) * 2017-09-29 2021-12-21 江苏恒瑞医药股份有限公司 Tigit抗体、其抗原结合片段及医药用途
EP3728314A1 (en) 2017-12-19 2020-10-28 Kymab Limited Bispecific antibody for icos and pd-l1
CN117050184A (zh) * 2017-12-28 2023-11-14 南京传奇生物科技有限公司 针对tigit的单域抗体和其变体
TWI877769B (zh) * 2017-12-30 2025-03-21 英屬開曼群島商百濟神州有限公司 抗tigit抗體及其作為治療和診斷的用途
KR20200109313A (ko) * 2018-01-15 2020-09-22 난징 레전드 바이오테크 씨오., 엘티디. Tigit에 대한 항체 및 이의 변이체
US20210363243A1 (en) * 2018-02-01 2021-11-25 Merck Sharp & Dohme Corp. Methods for treating cancer or infection using a combination of an anti-pd-1 antibody, an anti-lag3 antibody, and an anti-tigit antibody
JP7156607B2 (ja) * 2018-02-06 2022-10-19 アイ－エムエービー バイオファーマ （ハンジョウ） カンパニー リミテッド Ｉｇおよびｉｔｉｍドメインを持つｔ細胞免疫受容体（ｔｉｇｉｔ）に対する抗体およびその使用
MX2020008795A (es) * 2018-02-28 2020-10-08 Yuhan Corp Anti cuerpos anti tigit y usos de los mismos.
EP3774840A1 (en) 2018-03-27 2021-02-17 Bristol-Myers Squibb Company Real-time monitoring of protein concentration using ultraviolet signal
US20190300610A1 (en) * 2018-03-29 2019-10-03 Hummingbird Bioscience Pte. Ltd. Vista antigen-binding molecules
AR114789A1 (es) * 2018-04-18 2020-10-14 Hoffmann La Roche Anticuerpos anti-hla-g y uso de los mismos
EP3790900A1 (en) 2018-05-09 2021-03-17 Yissum Research Development Company of The Hebrew University of Jerusalem Ltd. Antibodies specific to human nectin4
CA3101019A1 (en) 2018-06-01 2019-12-05 Compugen Ltd Anti-pvrig/anti-tigit bispecific antibodies and methods of use
CN113056285B (zh) 2018-06-29 2025-02-07 璟尚生物制药公司 抗肿瘤免疫检查点调节剂拮抗剂
TWI754157B (zh) * 2018-07-25 2022-02-01 大陸商信達生物製藥（蘇州）有限公司 抗ｔｉｇｉｔ抗體及其用途
JP2021534196A (ja) 2018-08-23 2021-12-09 シージェン インコーポレイテッド 抗ｔｉｇｉｔ抗体
AU2019328290B2 (en) 2018-08-30 2024-10-10 Immunitybio, Inc. Multi-chain chimeric polypeptides and uses thereof
CN113365663A (zh) 2018-08-30 2021-09-07 Hcw生物科技公司 单链嵌合多肽和其用途
CN110511912B (zh) * 2018-08-30 2024-03-22 浙江煦顼技术有限公司 免疫细胞的功能调节
EP3844182B1 (en) 2018-08-30 2025-05-14 ImmunityBio, Inc. Single-chain and multi-chain chimeric polypeptides and uses thereof
JP2022512851A (ja) * 2018-11-05 2022-02-07 メルク・シャープ・アンド・ドーム・コーポレーション がんの処置のための抗ｔｉｇｉｔ抗体の投薬レジメン
WO2020097139A1 (en) 2018-11-07 2020-05-14 Merck Sharp & Dohme Corp. Co-formulations of anti-lag3 antibodies and anti-pd-1 antibodies
WO2020127377A1 (en) 2018-12-21 2020-06-25 Ose Immunotherapeutics Bifunctional anti-pd-1/il-7 molecule
MX2021008216A (es) 2019-01-07 2021-11-04 iTeos Belgium SA Anticuerpos anti-tigit.
WO2020165374A1 (en) 2019-02-14 2020-08-20 Ose Immunotherapeutics Bifunctional molecule comprising il-15ra
WO2020172658A1 (en) 2019-02-24 2020-08-27 Bristol-Myers Squibb Company Methods of isolating a protein
WO2020185739A1 (en) 2019-03-11 2020-09-17 Jounce Therapeutics, Inc. Anti-icos antibodies for the treatment of cancer
CN111744007B (zh) * 2019-03-29 2023-05-12 江苏恒瑞医药股份有限公司 一种抗tigit抗体药物组合物及其用途
CN111744013B (zh) * 2019-03-29 2022-07-26 江苏恒瑞医药股份有限公司 抗tigit抗体联合pd-1抑制剂治疗疾病的方法和药物组合
KR20220012292A (ko) 2019-05-23 2022-02-03 브리스톨-마이어스 스큅 컴퍼니 세포 배양 배지를 모니터링하는 방법
TWI760751B (zh) 2019-05-29 2022-04-11 美商美國禮來大藥廠 Tigit及pd-1/tigit-結合分子
MX2021013850A (es) * 2019-06-13 2022-01-07 Green Cross Corp Anticuerpo contra tigit y uso del mismo.
AU2020294797A1 (en) 2019-06-21 2021-12-23 Immunitybio, Inc. Multi-chain chimeric polypeptides and uses thereof
JP2022540571A (ja) 2019-06-28 2022-09-16 ゲンスン バイオファーマ、インコーポレーテッド 変異したＴＧＦβ１－ＲＩＩ細胞外ドメインおよび免疫グロブリン足場で構成される抗腫瘍アンタゴニスト
WO2021008523A1 (zh) * 2019-07-15 2021-01-21 上海君实生物医药科技股份有限公司 抗tigit抗体及其应用
AR119507A1 (es) * 2019-07-30 2021-12-22 Merck Sharp & Dohme Anticuerpos triespecíficos anti-pd-1 / lag3 / tigit y anticuerpos biespecíficos anti-pd-1 / lag3
JP7122354B2 (ja) * 2019-09-24 2022-08-19 財團法人工業技術研究院 抗ｔｉｇｉｔ抗体および使用方法
WO2021058711A2 (en) * 2019-09-27 2021-04-01 Glaxosmithkline Intellectual Property Development Limited Antigen binding proteins
US20220340660A1 (en) * 2019-10-01 2022-10-27 Merck Sharp & Dohme Corp. Biomarkers for anti-tigit antibody treatment
US20220378909A1 (en) 2019-11-05 2022-12-01 Jounce Therapeutics, Inc. Methods of Treating Cancer with Anti-PD-1 Antibodies
CN114728171A (zh) * 2019-11-05 2022-07-08 默克专利有限公司 抗tigit抗体及其应用
TW202124452A (zh) * 2019-11-14 2021-07-01 中國大陸商上海藥明生物技術有限公司 抗tigit的新型抗體
US20230057899A1 (en) 2019-12-05 2023-02-23 Compugen Ltd. Anti-pvrig and anti-tigit antibodies for enhanced nk-cell based tumor killing
AU2020406083A1 (en) 2019-12-17 2022-06-16 Boehringer Ingelheim International Gmbh Bifunctional molecules comprising an IL-7 variant
CA3161733A1 (en) 2020-01-07 2021-05-15 Everett Stone Improved human methylthioadenosine/adenosine depleting enzyme variants for cancer therapy
JP2023519106A (ja) 2020-02-11 2023-05-10 エイチシーダブリュー バイオロジックス インコーポレイテッド クロマトグラフィー樹脂およびその使用
WO2021163369A2 (en) 2020-02-11 2021-08-19 HCW Biologics, Inc. Methods of treating age-related and inflammatory diseases
JP2023519107A (ja) 2020-02-11 2023-05-10 エイチシーダブリュー バイオロジックス インコーポレイテッド 制御性ｔ細胞を活性化する方法
EP4119162A4 (en) 2020-03-13 2023-08-23 Jiangsu Hengrui Pharmaceuticals Co., Ltd. PVRIG-BINDING PROTEIN AND ITS MEDICAL USES
CN115916247B (zh) * 2020-04-19 2025-04-01 奥美药业有限公司 人tigit特异性单域抗体及其应用
US20230235037A1 (en) * 2020-04-22 2023-07-27 Chemomab Ltd. Method of treatment using anti-ccl24 antibody
CN115836087A (zh) 2020-04-29 2023-03-21 Hcw生物科技公司 抗cd26蛋白及其用途
CN113563470B (zh) 2020-04-29 2023-02-10 广州昂科免疫生物技术有限公司 结合tigit抗原的抗体及其制备方法与应用
US20230258645A1 (en) 2020-05-07 2023-08-17 Institut Curie Antxr1 as a biomarker of immunosuppressive fibroblast populations and its use for predicting response to immunotherapy
CN111995681B (zh) * 2020-05-09 2022-03-08 华博生物医药技术（上海）有限公司 抗tigit的抗体、其制备方法和应用
KR20230031280A (ko) 2020-06-01 2023-03-07 에이치씨더블유 바이올로직스, 인크. 노화 관련 장애의 치료 방법
WO2021247003A1 (en) 2020-06-01 2021-12-09 HCW Biologics, Inc. Methods of treating aging-related disorders
US12024545B2 (en) 2020-06-01 2024-07-02 HCW Biologics, Inc. Methods of treating aging-related disorders
TW202210514A (zh) * 2020-06-02 2022-03-16 美商阿克思生物科學有限公司 針對tigit的抗體
IL298946A (en) 2020-06-18 2023-02-01 Genentech Inc Treatment with anti-tigit antibodies and pd-1 axis binding antagonists
WO2021258337A1 (en) * 2020-06-24 2021-12-30 Huahui Health Ltd. Human monoclonal antibodies against tigit for immune related diseases
CN111718415B (zh) * 2020-07-03 2021-02-23 上海洛启生物医药技术有限公司 一种抗tigit纳米抗体及其应用
TW202216778A (zh) 2020-07-15 2022-05-01 美商安進公司 Ｔｉｇｉｔ及ｃｄ１１２ｒ阻斷
EP4192883A4 (en) * 2020-08-05 2024-12-04 Crystal Bioscience Inc. Anti-tigit antibody and methods of use thereof
WO2022044010A1 (en) 2020-08-26 2022-03-03 Yissum Research Development Company Of The Hebrew University Of Jerusalem Ltd. Anti-t-cell immunoglobulin and itim domain (tigit) antibodies for the treatment of fungal infections
JP2023544410A (ja) 2020-10-05 2023-10-23 ブリストル－マイヤーズ スクイブ カンパニー タンパク質を濃縮するための方法
MX2023004941A (es) 2020-11-08 2023-07-12 Seagen Inc Conjugado de anticuerpo y fármaco para terapia de combinación con inhibidor de células inmunitarias.
US11028172B1 (en) 2020-11-10 2021-06-08 Lepu Biopharma Co., Ltd. Anti-TIGIT antibodies and uses thereof
WO2022112198A1 (en) 2020-11-24 2022-06-02 Worldwide Innovative Network Method to select the optimal immune checkpoint therapies
TW202222345A (zh) * 2020-11-26 2022-06-16 大陸商信達生物製藥（蘇州）有限公司 包含抗ｔｉｇｉｔ／ｐｄ－１雙特異性抗體的製劑及其製備方法和用途
US20240018248A1 (en) 2020-12-02 2024-01-18 Vib Vzw An ltbr agonist in combination therapy against cancer
KR20220082776A (ko) * 2020-12-10 2022-06-17 주식회사 유틸렉스 항-tigit 항체 및 이의 용도
AU2021401052A1 (en) 2020-12-18 2023-06-22 Century Therapeutics, Inc. Chimeric antigen receptor systems with adaptable receptor specificity
JP2024500190A (ja) * 2020-12-22 2024-01-04 レジーナ イー． ヘルツリンガー， モノクローナル抗体および／またはポリクローナル抗体処置を急速注入により投与するための方法、システム、および装置
US11806507B2 (en) * 2020-12-22 2023-11-07 Regina E. HERZLINGER Methods, systems, and apparatus for administering an antibody treatment via infusion
US12133966B2 (en) * 2020-12-22 2024-11-05 Regina E. HERZLINGER Methods, systems, and apparatus for administering an antibody treatment via infusion
WO2022148781A1 (en) 2021-01-05 2022-07-14 Institut Curie Combination of mcoln activators and immune checkpoint inhibitors
AU2022207020A1 (en) 2021-01-14 2023-08-31 Shanghai Junshi Biosciences Co., Ltd. Anti-tigit antibody pharmaceutical composition and application thereof
WO2022184067A1 (zh) * 2021-03-02 2022-09-09 百奥泰生物制药股份有限公司 抗tigit抗体在联合用药中的应用
CN114989300A (zh) * 2021-03-02 2022-09-02 百奥泰生物制药股份有限公司 抗tigit抗体在治疗肿瘤或癌症中的应用
EP4320156A1 (en) 2021-04-09 2024-02-14 Ose Immunotherapeutics Scaffold for bifunctioanl molecules comprising pd-1 or cd28 and sirp binding domains
EP4320160A1 (en) 2021-04-09 2024-02-14 Seagen Inc. Methods of treating cancer with anti-tigit antibodies
JP2024515263A (ja) 2021-04-09 2024-04-08 オーエスイー・イミュノセラピューティクス 改善された特性を有する二機能性分子のための新規足場構造
TW202304965A (zh) 2021-05-04 2023-02-01 美商艾吉納斯公司 抗ｔｉｇｉｔ抗體、抗ｃｄ９６抗體及其使用方法
KR102500845B1 (ko) * 2021-05-10 2023-02-17 메디맵바이오 주식회사 항-tigit 항체 및 이의 용도
WO2022242663A1 (en) * 2021-05-18 2022-11-24 Suzhou Kanova Biopharmaceutical Co., Ltd. Anti-tigit antibodies and their use
CN115466327B (zh) * 2021-06-10 2025-07-08 北京天广实生物技术股份有限公司 结合tigit的抗体及其用途
JP2024527049A (ja) 2021-07-28 2024-07-19 ジェネンテック， インコーポレイテッド がんを治療するための方法及び組成物
WO2023036340A1 (en) * 2021-09-13 2023-03-16 Biocytogen Pharmaceuticals (Beijing) Co., Ltd. Protein complexes targeting il21 pathway
US20240376207A1 (en) 2021-09-15 2024-11-14 Jiangsu Hengrui Pharmaceuticals Co., Ltd. Pharmaceutical composition comprising anti-pvrig/tigit bispecific antibody
US20240376204A1 (en) 2021-09-15 2024-11-14 Jiangsu Hengrui Pharmaceuticals Co., Ltd. Protein specifically binding to pd-1 and pharmaceutical use thereof
CN115838424A (zh) * 2021-09-22 2023-03-24 上海康岱生物医药技术股份有限公司 靶向tigit的单克隆抗体
TW202321308A (zh) 2021-09-30 2023-06-01 美商建南德克公司 使用抗ｔｉｇｉｔ抗體、抗ｃｄ３８抗體及ｐｄ—１軸結合拮抗劑治療血液癌症的方法
CN114181310B (zh) * 2022-02-14 2022-07-05 中山康方生物医药有限公司 抗tigit抗体、其药物组合物及用途
CN119095611A (zh) 2022-03-02 2024-12-06 免疫生物有限公司 治疗胰腺癌的方法
JP2025508076A (ja) 2022-03-08 2025-03-21 アレンティス・セラピューティクス・アクチェンゲゼルシャフト Ｔ細胞の利用能を向上させるための抗クローディン－１抗体の使用
KR20240156411A (ko) 2022-03-09 2024-10-29 브리스톨-마이어스 스큅 컴퍼니 치료 단백질의 일시적 발현
EP4493195A1 (en) 2022-03-15 2025-01-22 Compugen Ltd. Il-18bp antagonist antibodies and their use in monotherapy and combination therapy in the treatment of cancer
TW202400232A (zh) 2022-03-16 2024-01-01 日商第一三共股份有限公司 多特異性分子與免疫檢查點抑制劑之組合
KR20250006959A (ko) 2022-05-02 2025-01-13 아르커스 바이오사이언시즈 인코포레이티드 항-tigit 항체 및 이의 용도
IL317449A (en) 2022-06-07 2025-02-01 Genentech Inc Method for determining the efficacy of a lung cancer treatment comprising an anti-PD-L1 antagonist and an anti-TIGIT antibody-antagonist
KR102769148B1 (ko) * 2022-06-10 2025-02-20 메디맵바이오 주식회사 항-tigit 항체, 인터류킨-15, 및 인터류킨-15 수용체 알파 스시 도메인을 포함하는 융합 단백질 및 이의 용도
EP4538290A1 (en) * 2022-06-10 2025-04-16 MediMabbio Inc. Fusion protein comprising antibody binding specifically to tigit and interleukin-15, and use thereof
WO2024003360A1 (en) 2022-07-01 2024-01-04 Institut Curie Biomarkers and uses thereof for the treatment of neuroblastoma
WO2024028386A1 (en) 2022-08-02 2024-02-08 Ose Immunotherapeutics Multifunctional molecule directed against cd28
IL320293A (en) 2022-10-18 2025-06-01 Meiji Seika Pharma Co Ltd Therapeutic agent for T-cell malignancies
WO2024191807A1 (en) 2023-03-10 2024-09-19 Seagen Inc. Methods of treating cancer with anti-tigit antibodies
WO2024200820A1 (en) 2023-03-30 2024-10-03 Ose Immunotherapeutics Method of synthesis of targeted lipid nanoparticle and uses thereof
WO2024200823A1 (en) 2023-03-30 2024-10-03 Ose Immunotherapeutics Lipid-based nanoparticle targeted at activated immune cells for the expression of immune cell enhancing molecule and use thereof
TW202515608A (zh) 2023-06-26 2025-04-16 以色列商坎布根有限公司 Ｉｌ—１８ｂｐ拮抗抗體及其於癌症治療之單一療法及組合療法的用途
WO2025068452A1 (en) 2023-09-29 2025-04-03 Negio Therapeutics Guanfacine derivatives and their use in treating cancer
WO2025068461A1 (en) 2023-09-29 2025-04-03 Negio Therapeutics Guanfacine derivatives and their use in treating cancer
WO2025132831A1 (en) 2023-12-19 2025-06-26 Universite D'aix-Marseille N-heteroaryl derivatives and uses thereof for treating cancer

Family Cites Families (103)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4399216A (en) 1980-02-25 1983-08-16 The Trustees Of Columbia University Processes for inserting DNA into eucaryotic cells and for producing proteinaceous materials
US4447233A (en) 1981-04-10 1984-05-08 Parker-Hannifin Corporation Medication infusion pump
US4439196A (en) 1982-03-18 1984-03-27 Merck & Co., Inc. Osmotic drug delivery system
US4447224A (en) 1982-09-20 1984-05-08 Infusaid Corporation Variable flow implantable infusion apparatus
US4487603A (en) 1982-11-26 1984-12-11 Cordis Corporation Implantable microinfusion pump system
US4816567A (en) 1983-04-08 1989-03-28 Genentech, Inc. Recombinant immunoglobin preparations
US4740461A (en) 1983-12-27 1988-04-26 Genetics Institute, Inc. Vectors and methods for transformation of eucaryotic cells
EP0154316B1 (en) 1984-03-06 1989-09-13 Takeda Chemical Industries, Ltd. Chemically modified lymphokine and production thereof
US4596556A (en) 1985-03-25 1986-06-24 Bioject, Inc. Hypodermic injection apparatus
WO1986005807A1 (en) 1985-04-01 1986-10-09 Celltech Limited Transformed myeloma cell-line and a process for the expression of a gene coding for a eukaryotic polypeptide employing same
GB8601597D0 (en) 1986-01-23 1986-02-26 Wilson R H Nucleotide sequences
US4959455A (en) 1986-07-14 1990-09-25 Genetics Institute, Inc. Primate hematopoietic growth factors IL-3 and pharmaceutical compositions
US5260203A (en) 1986-09-02 1993-11-09 Enzon, Inc. Single polypeptide chain binding molecules
EP0281604B1 (en) 1986-09-02 1993-03-31 Enzon Labs Inc. Single polypeptide chain binding molecules
US4946778A (en) 1987-09-21 1990-08-07 Genex Corporation Single polypeptide chain binding molecules
US4912040A (en) 1986-11-14 1990-03-27 Genetics Institute, Inc. Eucaryotic expression system
EP0307434B2 (en) 1987-03-18 1998-07-29 Scotgen Biopharmaceuticals, Inc. Altered antibodies
US4790824A (en) 1987-06-19 1988-12-13 Bioject, Inc. Non-invasive hypodermic injection device
US4941880A (en) 1987-06-19 1990-07-17 Bioject, Inc. Pre-filled ampule and non-invasive hypodermic injection device assembly
GB8717430D0 (en) 1987-07-23 1987-08-26 Celltech Ltd Recombinant dna product
US5677425A (en) 1987-09-04 1997-10-14 Celltech Therapeutics Limited Recombinant antibody
CA2006596C (en) 1988-12-22 2000-09-05 Rika Ishikawa Chemically-modified g-csf
US5530101A (en) 1988-12-28 1996-06-25 Protein Design Labs, Inc. Humanized immunoglobulins
DE3920358A1 (de) 1989-06-22 1991-01-17 Behringwerke Ag Bispezifische und oligospezifische, mono- und oligovalente antikoerperkonstrukte, ihre herstellung und verwendung
US5312335A (en) 1989-11-09 1994-05-17 Bioject Inc. Needleless hypodermic injection device
US5064413A (en) 1989-11-09 1991-11-12 Bioject, Inc. Needleless hypodermic injection device
ES2165851T3 (es) 1991-11-25 2002-04-01 Enzon Inc Proteinas multivalentes que se unen a antigenos.
US5932448A (en) 1991-11-29 1999-08-03 Protein Design Labs., Inc. Bispecific antibody heterodimers
US5714350A (en) 1992-03-09 1998-02-03 Protein Design Labs, Inc. Increasing antibody affinity by altering glycosylation in the immunoglobulin variable region
US6129914A (en) 1992-03-27 2000-10-10 Protein Design Labs, Inc. Bispecific antibody effective to treat B-cell lymphoma and cell line
EP0640094A1 (en) 1992-04-24 1995-03-01 The Board Of Regents, The University Of Texas System Recombinant production of immunoglobulin-like domains in prokaryotic cells
US5383851A (en) 1992-07-24 1995-01-24 Bioject Inc. Needleless hypodermic injection device
US6005079A (en) 1992-08-21 1999-12-21 Vrije Universiteit Brussels Immunoglobulins devoid of light chains
EP1087013B1 (en) 1992-08-21 2009-01-07 Vrije Universiteit Brussel Immunoglobulins devoid of light chains
DK0698097T3 (da) 1993-04-29 2001-10-08 Unilever Nv Produktion af antistoffer eller (funktionaliserede) fragmenter deraf afledt af Camelidae-immunoglobuliner med tung kæde
CA2163345A1 (en) 1993-06-16 1994-12-22 Susan Adrienne Morgan Antibodies
US5532210A (en) 1994-06-08 1996-07-02 E. I. Du Pont De Nemours And Company High temperature superconductor dielectric slow wave structures for accelerators and traveling wave tubes
US6121022A (en) 1995-04-14 2000-09-19 Genentech, Inc. Altered polypeptides with increased half-life
US5869046A (en) 1995-04-14 1999-02-09 Genentech, Inc. Altered polypeptides with increased half-life
US6277375B1 (en) 1997-03-03 2001-08-21 Board Of Regents, The University Of Texas System Immunoglobulin-like domains with increased half-lives
GB2339430A (en) 1997-05-21 2000-01-26 Biovation Ltd Method for the production of non-immunogenic proteins
US6194551B1 (en) 1998-04-02 2001-02-27 Genentech, Inc. Polypeptide variants
GB9818110D0 (en) 1998-08-19 1998-10-14 Weston Medical Ltd Needleless injectors and other devices
US6096002A (en) 1998-11-18 2000-08-01 Bioject, Inc. NGAS powered self-resetting needle-less hypodermic jet injection apparatus and method
ATE477273T1 (de) 1998-12-01 2010-08-15 Facet Biotech Corp Humanisierte antikoerper gegen gamma-interferon
EP2364997A3 (en) 1999-01-15 2012-07-04 Genentech, Inc. Polypeptide variants with altered effector function
WO2000058334A1 (en) 1999-03-26 2000-10-05 Human Genome Sciences, Inc. 50 human secreted proteins
US7368527B2 (en) 1999-03-12 2008-05-06 Human Genome Sciences, Inc. HADDE71 polypeptides
EP3031917A1 (en) 1999-04-09 2016-06-15 Kyowa Hakko Kirin Co., Ltd. Method for controlling the activity of immunologically functional molecule
JP4668498B2 (ja) 1999-10-19 2011-04-13 協和発酵キリン株式会社 ポリペプチドの製造方法
US7449308B2 (en) 2000-06-28 2008-11-11 Glycofi, Inc. Combinatorial DNA library for producing modified N-glycans in lower eukaryotes
AU2001276842B2 (en) 2000-06-28 2007-04-26 Glycofi, Inc. Methods for producing modified glycoproteins
US6946292B2 (en) 2000-10-06 2005-09-20 Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. Cells producing antibody compositions with increased antibody dependent cytotoxic activity
US6374470B1 (en) 2000-10-06 2002-04-23 Milliken & Company Face plate for spun-like textured yarn
US7408041B2 (en) 2000-12-08 2008-08-05 Alexion Pharmaceuticals, Inc. Polypeptides and antibodies derived from chronic lymphocytic leukemia cells and uses thereof
RU2321630C2 (ru) 2001-08-03 2008-04-10 Гликарт Биотекнолоджи АГ Гликозилированные антитела (варианты), обладающие повышенной антителозависимой клеточной цитотоксичностью
EP2388265A1 (en) 2002-02-22 2011-11-23 Genentech, Inc. Compositions and methods for the treatment of immune related diseases
US7193069B2 (en) 2002-03-22 2007-03-20 Research Association For Biotechnology Full-length cDNA
WO2003086310A2 (en) 2002-04-12 2003-10-23 Ramot At Tel Aviv University Ltd. Prevention of brain inflammation as a result of induced autoimmune response
JP2006518582A (ja) 2002-09-11 2006-08-17 ジェネンテック・インコーポレーテッド 乾癬の治療のための新規組成物と方法
EP2085096A3 (en) 2002-09-11 2009-08-12 Genentech, Inc. Novel composition and methods for the treatment of immune related diseases
DK2301965T3 (en) 2002-10-16 2015-04-27 Purdue Pharma Lp Antibodies that bind to cell-associated CA 125 / O722P and methods of use thereof
US20090047213A1 (en) * 2003-04-14 2009-02-19 Young David S F Cytotoxicity mediation of cells evidencing surface expression of CD59
US7410483B2 (en) 2003-05-23 2008-08-12 Novare Surgical Systems, Inc. Hand-actuated device for remote manipulation of a grasping tool
US7312320B2 (en) 2003-12-10 2007-12-25 Novimmune Sa Neutralizing antibodies and methods of use thereof
US20110142858A1 (en) 2004-06-07 2011-06-16 Ramot At Tel Aviv University Ltd. Method of Passsive Immunization Against Disease or Disorder Charcterized by Amyloid Aggregation with Diminished Risk of Neuroinflammation
JP2008512353A (ja) 2004-07-21 2008-04-24 グライコフィ， インコーポレイテッド 主にＧｌｃＮＡｃ２Ｍａｎ３ＧｌｃＮＡｃ２グリコフォームを含むイムノグロブリン
CN101023102B (zh) * 2004-09-17 2013-05-29 霍夫曼-拉罗奇有限公司 抗-ox40l抗体
CA2607291A1 (en) 2005-05-12 2006-11-23 Steven D. Levin Compositions and methods for modulating immune responses
KR101245462B1 (ko) 2005-07-08 2013-03-20 바이오겐 아이덱 엠에이 인코포레이티드 Ｓｐ35 항체 및 그의 용도
WO2008047914A1 (fr) * 2006-10-20 2008-04-24 Forerunner Pharma Research Co., Ltd. Agent anticancéreux comprenant un anticorps anti-hb-egf en tant qu'ingrédient actif
AR063840A1 (es) * 2006-11-15 2009-02-25 Medarex Inc Anticuerpos humanos monoclonales para btla y metodos de uso
MX2009008140A (es) 2007-02-02 2009-10-26 Baylor Res Inst Vacunas a base de antigeno dirigido a dcir expresado en celulas que presentan antigeno.
DK2426144T3 (en) * 2007-02-23 2019-01-07 Merck Sharp & Dohme Manipulated Anti-IL-23P19 Antibodies
US20100150918A1 (en) 2007-04-03 2010-06-17 Micromet Ag Cross-species-specific binding domain
EP3605088A1 (en) * 2008-04-09 2020-02-05 Genentech, Inc. Compositions and methods for the treatment of immune related diseases
AU2015202123B2 (en) 2008-04-09 2017-06-15 Genentech, Inc. Novel compositions and methods for the treatment of immune related diseases
DK2462161T3 (en) 2009-08-06 2017-06-06 Immunas Pharma Inc Antibodies specifically binding to A-beta oligomers and their use
AU2010303443A1 (en) 2009-10-09 2012-04-19 Merck Sharp & Dohme Corp. Generation, characterization and uses thereof of anti-Her 3 antibodies
WO2011066995A1 (en) 2009-12-05 2011-06-09 Universität Heidelberg Malaria vaccines based on apicomplexan ferlins, ferlin-like proteins and other c2-domain containing proteins
US9169325B2 (en) 2010-04-13 2015-10-27 Celldex Therapeutics, Inc. Antibodies that bind human CD27 and uses thereof
EP2580238A1 (en) 2010-06-09 2013-04-17 Zymogenetics, Inc. Dimeric vstm3 fusion proteins and related compositions and methods
KR101704865B1 (ko) 2010-08-23 2017-02-09 보드 오브 리전츠, 더 유니버시티 오브 텍사스 시스템 항-ox40 항체 및 그의 용도
UA112434C2 (uk) 2011-05-27 2016-09-12 Ґлаксо Ґруп Лімітед Антигензв'язувальний білок, який специфічно зв'язується з всма
US9205144B2 (en) 2011-06-03 2015-12-08 Dana-Farber Cancer Institute, Inc. Identification of conserved peptide blocks in homologous polypeptides
KR20130062168A (ko) 2011-12-02 2013-06-12 고려대학교 산학협력단 재조합 형광 단백질 나노입자
CA2865501A1 (en) 2012-02-29 2013-09-06 Gilead Biologics, Inc. Antibodies to matrix metalloproteinase 9
US20150086570A1 (en) 2012-03-29 2015-03-26 Biogen Idec Ma Inc. Biomarkers for use in integrin therapy applications
US9637740B2 (en) 2012-04-02 2017-05-02 President And Fellows Of Harvard College Cancer treatment and immune system regulation through FAT10 pathway inhibition
EP3202419A1 (en) 2012-06-06 2017-08-09 OncoMed Pharmaceuticals, Inc. Pvrig binding agents that modulate the hippo pathway and uses thereof
ES2715673T3 (es) 2012-12-03 2019-06-05 Bristol Myers Squibb Co Mejora de la actividad anticancerosa de proteínas de fusión FC inmunomoduladoras
MX2015006973A (es) * 2012-12-04 2015-09-28 Oncomed Pharm Inc Inmunoterapia con agentes de enlace.
CN103073644B (zh) * 2012-12-31 2014-03-12 中国科学技术大学 特异性抗小鼠tigit的单克隆抗体及其制备方法、鉴定及应用
US20140314741A1 (en) 2013-04-18 2014-10-23 Developmen Center For Biotechnology Human Antibody against Interleukin-20 and Treatment for Inflammatory Diseases
TWI685349B (zh) * 2013-07-16 2020-02-21 建南德克公司 利用ｐｄ-１軸結合拮抗劑及ｔｉｇｉｔ抑制劑治療癌症之方法
WO2015127273A1 (en) 2014-02-21 2015-08-27 Medimmune, Llc Anti-pcsk9~glp-1 fusions and methods for use
SG10201811841UA (en) 2014-07-16 2019-02-27 Genentech Inc Methods of treating cancer using tigit inhibitors and anti-cancer agents
UA122395C2 (uk) 2014-08-19 2020-11-10 Мерк Шарп Енд Доум Корп. Антитіло проти tigit
EP3215536A1 (en) 2014-11-06 2017-09-13 F. Hoffmann-La Roche AG Combination therapy comprising ox40 binding agonists and tigit inhibitors
CN107250157B (zh) 2014-11-21 2021-06-29 百时美施贵宝公司 包含修饰的重链恒定区的抗体
BR112017013385A2 (pt) 2014-12-23 2018-02-06 Bristol-Myers Squibb Company anticorpos para tigit
TWI715587B (zh) 2015-05-28 2021-01-11 美商安可美德藥物股份有限公司 Ｔｉｇｉｔ結合劑和彼之用途
DK3353210T3 (da) 2015-09-25 2025-01-06 Hoffmann La Roche Anti-TIGIT-antistoffer og fremgangsmåder til anvendelse

Also Published As

Publication number Publication date
TWI790593B (zh) 2023-01-21
SG11201701161QA (en) 2017-03-30
TW201609813A (zh) 2016-03-16
AU2019200426B2 (en) 2021-01-21
ZA201700955B (en) 2022-11-30
MD4733B1 (ro) 2020-12-31
KR102321168B1 (ko) 2021-11-02
CN107148430A (zh) 2017-09-08
US10618958B2 (en) 2020-04-14
CA2957722C (en) 2022-05-31
AP2017009765A0 (en) 2017-02-28
JP2022105108A (ja) 2022-07-12
BR112017003108A2 (pt) 2017-12-05
CL2019001926A1 (es) 2019-11-29
CO2017001561A2 (es) 2017-05-19
MD20170032A2 (ro) 2017-08-31
KR20170041272A (ko) 2017-04-14
WO2016028656A1 (en) 2016-02-25
JP6920194B2 (ja) 2021-08-18
GT201700033A (es) 2019-09-30
US20250064924A1 (en) 2025-02-27
MY198017A (en) 2023-07-26
US20160355589A1 (en) 2016-12-08
IL250583B (en) 2022-07-01
JP2020162614A (ja) 2020-10-08
MX2022001105A (es) 2022-02-14
EA036311B1 (ru) 2020-10-26
PE20170289A1 (es) 2017-04-05
TW202144422A (zh) 2021-12-01
AU2019200426A1 (en) 2019-02-07
CL2017000310A1 (es) 2017-08-18
CN113583131B (zh) 2024-09-03
PH12017500296A1 (en) 2017-06-28
JO3664B1 (ar) 2020-08-27
DOP2017000046A (es) 2017-08-31
TWI724997B (zh) 2021-04-21
JP7066777B2 (ja) 2022-05-13
MX389684B (es) 2025-03-20
IL250583A0 (en) 2017-04-30
US12102680B2 (en) 2024-10-01
JP7487256B2 (ja) 2024-05-20
JOP20200192A1 (ar) 2022-10-30
CR20170060A (es) 2017-04-18
UA122395C2 (uk) 2020-11-10
KR20190133078A (ko) 2019-11-29
CN107148430B (zh) 2021-08-27
EP3183267A1 (en) 2017-06-28
AU2015305754A1 (en) 2017-02-23
MY184288A (en) 2021-03-30
US20180066055A1 (en) 2018-03-08
KR102050082B1 (ko) 2019-11-29
NI201700019A (es) 2017-03-08
NZ729162A (en) 2024-08-30
BR112017003108A8 (pt) 2023-04-11
AU2015305754B2 (en) 2018-10-25
GEP20217331B (en) 2021-12-10
JP2017532007A (ja) 2017-11-02
AU2021202360A1 (en) 2021-05-13
NZ766881A (en) 2024-08-30
PH12017500296B1 (en) 2017-06-28
AU2021202360B2 (en) 2024-08-08
MX2017002229A (es) 2017-05-09
MA40475A (fr) 2017-06-28
CN113583131A (zh) 2021-11-02
US20200270346A1 (en) 2020-08-27
TN2017000024A1 (en) 2018-07-04
EA201790413A1 (ru) 2017-08-31
US20170198042A1 (en) 2017-07-13
CA2957722A1 (en) 2016-02-25

Similar Documents

Publication Publication Date Title
JP7487256B2 (ja) 抗ｔｉｇｉｔ抗体
US11958902B2 (en) Anti-TIGIT antibodies
EP3182999B1 (en) Anti-lag3 antibodies and antigen-binding fragments
BR112017003108B1 (pt) Anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo, molécula de ácido nucleico isolado, vetor de expressão,microorganismo transgênico, composição, e, método para produção de um anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno
EA039293B1 (ru) Антитела против lag3 и антигенсвязывающие фрагменты

Legal Events

Date Code Title Description
FG4A Patent for invention issued
TC4A Change of name of proprietor (patent for invention)

Owner name: MERCK SHARP & DOHME LLC, US126 EAST LINCOLN AVENUE, RAHWAY, NEW JERSEY 07065, STATELE UNITE ALE AMERICII

Free format text: PREVIOUS NAME OF PROPRIETOR: MERCK SHARP & DOHME CORP, US126 EAST LINCOLN AVENUE, RAHWAY,NEW JERSEY 07065-0907, STATELE UNITE ALE AMERICII