CN109071644B - 治疗癌症的方法和组合物 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及VEGF结合剂、DLL4结合剂、VEGF/DLL4双特异性结合剂，以及使用所述试剂治疗诸如癌症，特别是胰腺癌、结肠直肠癌、和子宫内膜癌等疾病的方法。还提供了使用包含VEGF/DLL4双特异性试剂和一种或多种化疗剂(例如，吉西他滨和

Description

治疗癌症的方法和组合物
相关申请的交叉引用
本申请要求于2015年9月23日提交的美国临时申请号62/222,505的优先权，此处将其全部内容通过引用并入本文。
技术领域
本发明大体上涉及使用结合VEGF、DLL4或同时结合VEGF和DLL4的抗体和其他试剂(特别是抗VEGF/抗DLL4双特异性抗体)，可选地，与另外的治疗剂组合治疗癌症，特别是结肠直肠癌、卵巢癌、胰腺癌和子宫内膜癌的方法。本发明还涉及包含所述组合物的组合物和试剂盒。
背景技术
结肠直肠癌是美国最常见的癌症类型之一。根据美国国家癌症研究所的数据，截至2015年，每年有超过132,000人患有结肠癌。19人中约有1人，或略大于5％的美国人，在他们的有生之年会患上结肠癌或直肠癌。
根据美国国家癌症研究所2010年至2012年的数据，大约1.3％的女性在其有生之年会被诊断为卵巢癌。2016年，美国国家癌症研究所估计将有超过60,000例卵巢癌新病例和超过24,000例卵巢癌死亡病例。
胰腺癌尽管仅占所有癌症诊断的2％，但在美国，其在癌症死亡诱因中排名第五。根据美国国家癌症研究所的统计，截至2015年，每年有超过48,000人被诊断患有胰腺癌，并且有超过40,000人死于胰腺癌。
子宫内膜癌是由子宫内层引起的另一种常见类型的癌症。根据美国国家癌症研究所的数据，截至2015年，美国每年有超过54,000例子宫内膜癌患者被诊断出来。根据美国国家癌症研究所的报告，子宫内膜癌是美国最常见的妇科恶性肿瘤，占女性所有癌症的6％。
癌症药物研究的焦点正在转向针对人类癌症中涉及的基因、蛋白质和途径的靶向治疗。需要可为癌症患者提供治疗益处的靶向信号传导途径的新试剂和靶向多途径的试剂的新组合。因此，破坏多个信号传导途径的生物分子(例如双特异性抗体)是癌症新治疗剂的潜在来源。
信号传导途径通常将细胞外信号连接至细胞核，其引起直接或间接控制细胞生长、分化、存活和死亡的基因的表达。在黑素瘤以及各种癌症中，信号传导途径失调，并可能与肿瘤发生和/或进展有关。涉及人类肿瘤发生的信号传导途径包括但不限于Notch途径、VEGF途径、Ras-Raf-MEK-ERK或MAPK途径、PI3K-AKT途径、CDKN2A/CDK4途径，Bcl-2/TP53途径和Wnt途径。
血管生成在包括实体瘤和转移瘤在内的多种疾病的发病机理中起重要作用。新血管的产生对于为肿瘤的生长和扩散提供氧气和营养物质是必要的，因此血管生成是癌症治疗剂的良好靶标。
血管生成涉及作为血管生成活化剂的蛋白家族，其包括血管内皮生长因子(VEGF-A)、VEGF-B、VEGF-C、VEGF-E及其各自的受体(VEGFR-1、VEGFR-2和VEGFR-3)。VEGF-A也称为VEGF或血管渗透性因子(VPF)，存在于由单VEGF基因的mRNA的选择性剪接产生的几种同种型中，其中VEGF165是最具生物学相关性的同种型。
抗VEGF抗体在体外和体内显示抑制肿瘤细胞的生长。人源化抗VEGF单克隆抗体贝伐单抗(AVASTIN)已经开发并在美国批准为癌症治疗剂。
Notch信号传导途径是通用的保守性信号转导系统。它涉及发育过程中的细胞命运决定，包括胚胎形成和胚胎后组织维持。此外，Notch信号传导已被鉴定为维持造血干细胞的关键因素。
Notch途径已经与血液和实体肿瘤以及癌症的发病机理相关联。已显示与肿瘤发生相关的许多细胞功能和微环境信号受Notch途径信号传导的调节，其包括细胞增殖、凋亡、粘附和血管生成(Leong等，2006，Blood，107：2223-2233)。此外，已显示Notch受体和/或Notch配体在许多人类癌症中发挥潜在的致癌作用，包括急性骨髓性白血病、B细胞慢性淋巴细胞性白血病、霍奇金淋巴瘤、多发性骨髓瘤、T细胞急性淋巴母细胞性白血病、脑癌、乳腺癌、子宫颈癌、结肠癌、肺癌、胰腺癌、前列腺癌和皮肤癌(Leong等，2006，Blood，107：2223-2233)。
Δ样4配体(DLL4)是Notch途径的重要组分，并且已被鉴定为癌症治疗的靶标。DLL4是Notch配体，其特征在于N端结构域、Δ/Serrate/Lag-2(DSL)结构域和胞外结构域内的串联EGF样重复序列。据报道，DLL4由VEGF诱导并且DLL4可以作为血管增殖的负反馈调节剂。
已显示抗DLL4抗体增强血管生成发芽和分支，这导致非生产性血管生成和减少的肿瘤生长(Noguera-Troise等，2006，Nature，444：1032-1037)。此外，抗DLL4抗体，登西珠单抗(也称为OMP-21M18或21M18)，已显示在异种移植肿瘤模型中抑制肿瘤生长并降低癌干细胞的频率(Hoey等，2009，Cell Stem Cell，5：168-177；美国专利号7,750,124)。
尽管在开发用于癌症治疗的单克隆抗体方面已经取得了重大进展，但仍有很大的进一步改善的潜力。具有增强的效力和/或减少的副作用(例如毒性)的一类抗体分子是双特异性抗体。
早期双特异性分子主要使用两种抗体的化学交联产生，或者是杂交性杂交瘤或“四交瘤(quadromas)”。一个成功的四交瘤格式是三功能抗体(triomab)，它是表现出特定物种特异性重链/轻链配对的小鼠/大鼠组合。最近，抗体工程化的进展提供了各种各样的新抗体形式，其包括但不限于串联scFv(双-scFv)、双抗体、串联双抗体(四体)、单链双抗体和双重可变结构域抗体。
本发明的目的之一在于提供改善的癌症治疗，特别是使用特异性结合人VEGF和人DLL4的双特异性抗体(可选地，与其他抗癌剂组合)来治疗癌症，特别是结肠直肠癌、卵巢癌、胰腺癌和子宫内膜癌。
发明内容
本发明提供了使用结合VEGF、DLL4或结合VEGF和DLL4两者的抗体或和其他结合剂(可选地，与另外的抗癌治疗剂组合(例如，本文所述的抗癌治疗剂中的任一种))用于治疗癌症，例如结肠直肠癌、卵巢癌(例如铂抗性卵巢癌)、胰腺癌和子宫内膜癌的方法。本发明的特征还在于包含治疗剂组合的组合物和试剂盒。
第一方面，本发明提供了一种抑制肿瘤生长的方法，该方法包括使肿瘤与有效量的结合VEGF、DLL4或VEGF和DLL4两者的抗体(或其他结合剂)与亚叶酸、5-氟尿嘧啶和伊立替康的组合接触，所述抗体包括任何本文所述的抗体或其他结合剂。在某些实施方式中，所述肿瘤是结肠直肠肿瘤。在某些实施方式中，接触在肿瘤未对另一种抗癌治疗作出响应之后发生(例如，该组合用作二线治疗)。在某些实施方式中，所述抗体是抗DLL4/VEGF双特异性的，例如任何本文描述的诸如305B83等抗体。
在另一方面，本发明提供了一种抑制受试者中肿瘤生长的方法，该方法包括向受试者施用治疗有效量的结合VEGF、DLL4或VEGF和DLL4两者的抗体(或其他结合剂)与亚叶酸、5-氟尿嘧啶和伊立替康的组合，所述抗体包括任何本文所述的抗体或其他结合剂。在某些实施方式中，所述肿瘤是结肠直肠肿瘤。在某些实施方式中，施用在肿瘤未对另一种抗癌治疗作出响应之后发生(例如，该组合用作二线治疗)。在某些实施方式中，所述抗体是抗DLL4/VEGF双特异性的，例如任何本文描述的诸如305B83等抗体。
在另一方面，本发明提供了一种降低受试者中肿瘤致瘤性的方法，该方法包括向受试者施用治疗有效量的结合VEGF、DLL4或VEGF和DLL4两者的抗体(或其他结合剂)与亚叶酸、5-氟尿嘧啶和伊立替康的组合，所述抗体包括任何本文所述的抗体或其他结合剂。在某些实施方式中，所述肿瘤是结肠直肠肿瘤。在某些实施方式中，接触在肿瘤未对另一种抗癌治疗作出响应之后发生(例如，该组合用作二线治疗)。在某些实施方式中，所述抗体是抗DLL4/VEGF双特异性的，例如任何本文描述的诸如305B83等抗体。
在另一方面，本发明提供了一种降低受试者的肿瘤中的癌干细胞频率的方法，该方法包括向受试者施用治疗有效量的结合VEGF、DLL4或VEGF和DLL4两者的抗体(或其他结合剂)与亚叶酸、5-氟尿嘧啶和伊立替康的组合，所述抗体包括任何本文所述的抗体或其他结合剂。在某些实施方式中，所述肿瘤是结肠直肠肿瘤。在某些实施方式中，施用在肿瘤未对另一种抗癌治疗作出响应之后发生(例如，该组合用作二线治疗)。在某些实施方式中，所述抗体是抗DLL4/VEGF双特异性的，例如任何本文描述的诸如305B83等抗体。
另一方面，本发明提供了一种治疗受试者中癌症的方法，该方法包括向受试者施用治疗有效量的结合VEGF、DLL4或VEGF和DLL4两者的抗体(或其他结合剂)与亚叶酸、5-氟尿嘧啶和伊立替康的组合，所述抗体包括任何本文所述的抗体或其他结合剂。在某些实施方式中，所述癌症是结肠直肠肿瘤。在某些实施方式中，施用在肿瘤未对另一种抗癌治疗作出响应之后发生(例如，该组合用作二线治疗)。在某些实施方式中，所述抗体是抗DLL4/VEGF双特异性的，例如任何本文描述的诸如305B83等抗体。
在另一方面，本发明提供了一种调节患有癌症的受试者中血管生成的方法，该方法包括向患有癌症的受试者施用治疗有效量的结合VEGF、DLL4或VEGF和DLL4两者的抗体(或其他结合剂)与亚叶酸、5-氟尿嘧啶和伊立替康的组合，所述抗体包括任何本文所述的抗体或其他结合剂。在某些实施方式中，所述癌症是结肠直肠癌。在某些实施方式中，施用在肿瘤未对另一种抗癌治疗作出响应之后发生(例如，该组合用作二线治疗)。在某些实施方式中，所述抗体是抗DLL4/VEGF双特异性的，例如任何本文描述的诸如305B83等抗体。
在所述方法包括施用亚叶酸、5-氟尿嘧啶和伊立替康的某些实施方式中，这些试剂根据FOLFIRI方案进行施用。
在另一方面，本发明提供了一种抑制肿瘤生长的方法，该方法包括使肿瘤与有效量的结合VEGF、DLL4或VEGF和DLL4两者的抗体(或其他结合剂)与紫杉醇和卡铂的组合接触，所述抗体包括任何本文所述的抗体或其他结合剂。在某些实施方式中，所述肿瘤是子宫内膜肿瘤。在某些实施方式中，接触在用另一种抗癌治疗进行治疗之前发生(例如，该组合用作一线治疗)。在某些实施方式中，所述抗体是抗DLL4/VEGF双特异性的，例如任何本文描述的诸如305B83等抗体。
在另一方面，本发明提供了一种抑制卵巢肿瘤、原发性腹膜肿瘤或输卵管肿瘤(例如铂抗性肿瘤)生长的方法，该方法包括使肿瘤或肿瘤细胞与有效量的结合VEGF、DLL4或VEGF和DLL4两者的抗体(或其他结合剂)接触，所述抗体包括任何本文所述的抗体或其他结合剂。在某些实施方式中，所述抗体或结合剂与紫杉烷(例如，紫杉醇)组合施用。在某些实施方式中，所述抗体是抗DLL4/VEGF双特异性的，例如任何本文描述的诸如305B83等抗体。
在另一方面，本发明提供了一种抑制受试者中卵巢肿瘤、原发性腹膜肿瘤或输卵管肿瘤(例如铂抗性肿瘤)生长的方法，该方法包括向受试者施用治疗有效量的结合VEGF、DLL4或VEGF和DLL4两者的抗体(或其他结合剂)，所述抗体包括任何本文所述的抗体或其他结合剂。在某些实施方式中，所述抗体或结合剂与紫杉烷(例如，紫杉醇)组合施用。在某些实施方式中，所述抗体是抗DLL4/VEGF双特异性的，例如任何本文描述的诸如305B83等抗体。
在另一方面，本发明提供了一种降低受试者中卵巢肿瘤、原发性腹膜肿瘤或输卵管肿瘤(例如铂抗性肿瘤)致瘤性的方法，该方法包括向受试者施用治疗有效量的结合VEGF、DLL4或VEGF和DLL4两者的抗体(或其他结合剂)，所述抗体包括任何本文所述的抗体或其他结合剂。在某些实施方式中，所述抗体或结合剂与紫杉烷(例如，紫杉醇)组合施用。在某些实施方式中，所述抗体是抗DLL4/VEGF双特异性的，例如任何本文描述的诸如305B83等抗体。
在另一方面，本发明提供了一种降低受试者的卵巢肿瘤、原发性腹膜肿瘤或输卵管肿瘤(例如铂抗性肿瘤)中的癌干细胞频率的方法，该方法包括向受试者施用治疗有效量的结合VEGF、DLL4或VEGF和DLL4两者的抗体(或其他结合剂)，所述抗体包括任何本文所述的抗体或其他结合剂。在某些实施方式中，所述抗体或结合剂与紫杉烷(例如，紫杉醇)组合施用。在某些实施方式中，所述抗体是抗DLL4/VEGF双特异性的，例如任何本文描述的诸如305B83等抗体。
在另一方面，本发明提供了一种治疗受试者中卵巢癌、原发性腹膜癌或输卵管癌(例如铂抗性癌症)的方法，该方法包括向受试者施用治疗有效量的结合VEGF、DLL4或VEGF和DLL4两者的抗体(或其他结合剂)，所述抗体包括任何本文所述的抗体或其他结合剂。在某些实施方式中，所述抗体或结合剂与紫杉烷(例如，紫杉醇)组合施用。在某些实施方式中，所述抗体是抗DLL4/VEGF双特异性的，例如任何本文描述的诸如305B83等抗体。
在另一方面，本发明提供了一种调节患有卵巢癌、原发性腹膜癌或输卵管癌(例如铂抗性癌症)的受试者中血管生成的方法，该方法包括向受试者施用治疗有效量的结合VEGF、DLL4或VEGF和DLL4两者的抗体(或其他结合剂)，所述抗体包括任何本文所述的抗体或其他结合剂。在某些实施方式中，所述抗体或结合剂与紫杉烷(例如，紫杉醇)组合施用。在某些实施方式中，所述抗体是抗DLL4/VEGF双特异性的，例如任何本文描述的诸如305B83等抗体。
在上述六个方面中的任何一个方面中，在至少一种、两种、三种或四种在先治疗失败(例如，多于两种，诸如三种或四种在先治疗失败)和/或已经接受了先前的抗VEGF剂(例如，抗VEGF抗体，如贝伐单抗)后，施用所述抗体、其他结合剂或包含抗体或结合剂的组合。
在另一方面，本发明提供了一种抑制肿瘤生长的方法，该方法包括使肿瘤与有效量的结合VEGF、DLL4或VEGF和DLL4两者的抗体(或其他结合剂)与吉西他滨和白蛋白结合型紫杉醇(nab-paclitaxel)的组合接触，所述抗体包括任何本文所述的抗体或其他结合剂。在某些实施方式中，所述肿瘤是胰腺肿瘤。在某些实施方式中，接触在用另一种抗癌治疗进行治疗之前发生(例如，该组合用作一线治疗)。在某些实施方式中，所述抗体是抗DLL4/VEGF双特异性的，例如任何本文描述的诸如305B83等抗体。
在另一方面，本发明提供了一种抑制受试者中肿瘤生长的方法，该方法包括向受试者施用治疗有效量的结合VEGF、DLL4或VEGF和DLL4两者的抗体(或其他结合剂)与吉西他滨和白蛋白结合型紫杉醇的组合，所述抗体包括任何本文所述的抗体或其他结合剂。在某些实施方式中，所述肿瘤是胰腺肿瘤。在某些实施方式中，施用在用另一种抗癌治疗进行治疗之前发生(例如，该组合用作一线治疗)。在某些实施方式中，所述抗体是抗DLL4/VEGF双特异性的，例如任何本文描述的诸如305B83等抗体。
在另一方面，本发明提供了一种降低受试者中肿瘤致瘤性的方法，该方法包括向受试者施用治疗有效量的结合VEGF、DLL4或VEGF和DLL4两者的抗体(或其他结合剂)与吉西他滨和白蛋白结合型紫杉醇的组合，所述抗体包括任何本文所述的抗体或其他结合剂。在某些实施方式中，所述肿瘤是胰腺肿瘤。在某些实施方式中，施用在用另一种抗癌治疗进行治疗之前发生(例如，该组合用作一线治疗)。在某些实施方式中，所述抗体是抗DLL4/VEGF双特异性的，例如任何本文描述的诸如305B83等抗体。
在另一方面，本发明提供了一种降低受试者的肿瘤中的癌干细胞频率的方法，该方法包括向受试者施用治疗有效量的结合VEGF、DLL4或VEGF和DLL4两者的抗体(或其他结合剂)与吉西他滨和白蛋白结合型紫杉醇的组合，所述抗体包括任何本文所述的抗体或其他结合剂。在某些实施方式中，所述肿瘤是胰腺肿瘤。在某些实施方式中，施用在用另一种抗癌治疗进行治疗之前发生(例如，该组合用作一线治疗)。在某些实施方式中，所述抗体是抗DLL4/VEGF双特异性的，例如任何本文描述的诸如305B83等抗体。
在另一方面，本发明提供了一种治疗受试者中癌症的方法，该方法包括向受试者施用治疗有效量的结合VEGF、DLL4或VEGF和DLL4两者的抗体(或其他结合剂)与吉西他滨和白蛋白结合型紫杉醇的组合，所述抗体包括任何本文所述的抗体或其他结合剂。在某些实施方式中，所述癌症是胰腺癌。在某些实施方式中，施用在用另一种抗癌治疗进行治疗之前发生(例如，该组合用作一线治疗)。在某些实施方式中，所述抗体是抗DLL4/VEGF双特异性的，例如任何本文描述的诸如305B83等抗体。
在另一方面，本发明提供了一种调节患有癌症的受试者中血管生成的方法，该方法包括向受试者施用治疗有效量的结合VEGF、DLL4或VEGF和DLL4两者的抗体(或其他结合剂)与吉西他滨和白蛋白结合型紫杉醇的组合，所述抗体包括任何本文所述的抗体或其他结合剂。在某些实施方式中，所述癌症是胰腺癌。在某些实施方式中，施用在用另一种抗癌治疗进行治疗之前发生(例如，该组合用作一线治疗)。在某些实施方式中，所述抗体是抗DLL4/VEGF双特异性的，例如任何本文描述的诸如305B83等抗体。
在另一方面，本发明提供了一种抑制受试者中肿瘤生长的方法，该方法包括向受试者施用治疗有效量的结合VEGF、DLL4或VEGF和DLL4两者的抗体(或其他结合剂)与紫杉醇和卡铂的组合，所述抗体包括任何本文所述的抗体或其他结合剂。在某些实施方式中，所述肿瘤是子宫内膜肿瘤。在某些实施方式中，施用在用另一种抗癌治疗进行治疗之前发生(例如，该组合用作一线治疗)。在某些实施方式中，所述抗体是抗DLL4/VEGF双特异性的，例如任何本文描述的诸如305B83等抗体。
在另一方面，本发明提供了一种降低受试者中肿瘤致瘤性的方法，该方法包括向受试者施用治疗有效量的结合VEGF、DLL4或VEGF和DLL4两者的抗体(或其他结合剂)与紫杉醇和卡铂的组合，所述抗体包括任何本文所述的抗体或其他结合剂。在某些实施方式中，所述肿瘤是子宫内膜肿瘤。在某些实施方式中，施用在用另一种抗癌治疗进行治疗之前发生(例如，该组合用作一线治疗)。在某些实施方式中，所述抗体是抗DLL4/VEGF双特异性的，例如任何本文描述的诸如305B83等抗体。
在另一方面，本发明提供了一种降低受试者的肿瘤中的肿瘤干细胞频率的方法，该方法包括向受试者施用治疗有效量的结合VEGF、DLL4或VEGF和DLL4两者的抗体(或其他结合剂)与紫杉醇和卡铂的组合，所述抗体包括任何本文所述的抗体或其他结合剂。在某些实施方式中，所述肿瘤是子宫内膜肿瘤。在某些实施方式中，施用在用另一种抗癌治疗进行治疗之前发生(例如，该组合用作一线治疗)。在某些实施方式中，所述抗体是抗DLL4/VEGF双特异性的，例如任何本文描述的诸如305B83等抗体。
在其他方面，本发明提供了一种治疗受试者中癌症的方法，该方法包括向受试者施用治疗有效量的结合VEGF、DLL4或VEGF和DLL4两者的抗体(或其他结合剂)与紫杉醇和卡铂的组合，所述抗体包括任何本文所述的抗体或其他结合剂。在某些实施方式中，所述肿瘤是子宫内膜肿瘤。在某些实施方式中，施用在用另一种抗癌治疗进行治疗之前发生(例如，该组合用作一线治疗)。在某些实施方式中，所述抗体是抗DLL4/VEGF双特异性的，例如任何本文描述的诸如305B83等抗体。
在另一方面，本发明提供了一种调节患有癌症的受试者中血管生成的方法，该方法包括向受试者施用治疗有效量的结合VEGF、DLL4或VEGF和DLL4两者的抗体(或其他结合剂)与紫杉醇和卡铂的组合，所述抗体包括任何本文所述的抗体或其他结合剂。在某些实施方式中，所述癌症是子宫内膜癌。在某些实施方式中，施用在用另一种抗癌治疗进行治疗之前发生(例如，该组合用作一线治疗)。在某些实施方式中，所述抗体是抗DLL4/VEGF双特异性的，例如任何本文描述的诸如305B83等抗体。
在其他方面，本发明提供了一种抑制子宫内膜肿瘤生长的方法，该方法包括使肿瘤与有效量的结合VEGF、DLL4或VEGF和DLL4两者的抗体(或其他结合剂)接触，所述抗体包括任何本文所述的抗体(或其他结合剂)。在某些实施方式中，接触是在与紫杉醇和卡铂组合时进行的。在某些实施方式中，接触在用另一种抗癌治疗进行治疗之前发生(例如，该抗体或包括该抗体的组合用作一线治疗)。在某些实施方式中，所述抗体是抗DLL4/VEGF双特异性的，例如任何本文描述的诸如305B83等抗体。
在另一方面，本发明提供了一种抑制受试者中子宫内膜肿瘤生长的方法，该方法包括向受试者施用治疗有效量的结合VEGF、DLL4或VEGF和DLL4两者的抗体(或其他结合剂)，所述抗体包括任何本文所述的抗体(或其他结合剂)。在某些实施方式中，施用是在与紫杉醇和卡铂组合时进行的。在某些实施方式中，施用在用另一种抗癌治疗进行治疗之前发生(例如，该抗体或包括该抗体的组合用作一线治疗)。在某些实施方式中，所述抗体是抗DLL4/VEGF双特异性的，例如任何本文描述的诸如305B83等抗体。
在另一方面，本发明提供了一种降低受试者中子宫内膜肿瘤致瘤性的方法，该方法包括向受试者施用治疗有效量的结合VEGF、DLL4或VEGF和DLL4两者的抗体(或其他结合剂)，所述抗体包括任何本文所述的抗体(或其他结合剂)。在某些实施方式中，施用是在与紫杉醇和卡铂组合时进行的。在某些实施方式中，施用在用另一种抗癌治疗进行治疗之前发生(例如，该抗体或包括该抗体的组合用作一线治疗)。在某些实施方式中，所述抗体是抗DLL4/VEGF双特异性的，例如任何本文描述的诸如305B83等抗体。
在另一方面，本发明提供了一种降低受试者的子宫内膜肿瘤中的癌干细胞频率的方法，该方法包括向受试者施用治疗有效量的结合VEGF、DLL4或VEGF和DLL4两者的抗体(或其他结合剂)，所述抗体包括任何本文所述的抗体(或其他结合剂)。在某些实施方式中，施用是在与紫杉醇和卡铂组合时进行的。在某些实施方式中，施用在用另一种抗癌治疗进行治疗之前发生(例如，该抗体或包括该抗体的组合用作一线治疗)。在某些实施方式中，所述抗体是抗DLL4/VEGF双特异性的，例如任何本文描述的诸如305B83等抗体。
在另一方面，本发明提供了一种治疗受试者中子宫内膜癌的方法，该方法包括向受试者施用治疗有效量的结合VEGF、DLL4或VEGF和DLL4两者的抗体(或其他结合剂)接触，所述抗体包括任何本文所述的抗体(或其他结合剂)。在某些实施方式中，施用是在与紫杉醇和卡铂组合时进行的。在某些实施方式中，施用在用另一种抗癌治疗进行治疗之前发生(例如，该抗体或包括该抗体的组合用作一线治疗)。在某些实施方式中，所述抗体是抗DLL4/VEGF双特异性的，例如任何本文描述的诸如305B83等抗体。
在另一方面，本发明提供了一种调节患有子宫内膜癌的受试者中血管生成的方法，该方法包括向受试者施用治疗有效量的结合VEGF、DLL4或VEGF和DLL4两者的抗体(或其他结合剂)，所述抗体包括任何本文所述的抗体(或其他结合剂)。在某些实施方式中，施用是在与紫杉醇和卡铂组合时进行的。在某些实施方式中，施用在用另一种抗癌治疗进行治疗之前发生(例如，该抗体或包括该抗体的组合用作一线治疗)。在某些实施方式中，所述抗体是抗DLL4/VEGF双特异性的，例如任何本文描述的诸如305B83等抗体。
在另一方面，本发明的特征在于一种管理受试者中血压的方法，所述受试者指示(indicated for)或接受使用结合VEGF、DLL4或VEGF和DLL4两者的抗体(或其他结合剂)的治疗，所述抗体包括本文所述的抗体或其他结合剂。所述方法包括(a)确定受试者的血压，其中大于140/90的血压指示高血压；(b)对于急性(例如，不超过48小时至72小时)血压降低，如果受试者的收缩压超过180mm Hg，则向高血压受试者施用肼屈嗪(hydralazine)或可乐定(clonidine)；(c)对于慢性血压管理，向高血压受试者施用氨氯地平和Procardia之一的初始剂量(例如，每日口服5mg氨氯地平或每日口服30mg～60mg Procardia/>)；(d)如果血压未被初始剂量充分控制(例如降至140/90以下)，则调整氨氯地平或Procardia的剂量，直至最大剂量(例如，每日口服10mg氨氯地平或每日口服120mg Procardia)；(e)如果血压未被最大剂量的氨氯地平或Procardia/>充分控制(例如降低至140/90以下)，则施用第二种抗高血压药物，其中，第二种抗高血压药物是血管紧张素转化酶(ACE)抑制剂或β阻断剂；(f)如果血压未被前两种药物充分控制，则向受试者施用第三种抗高血压药物，其中，第三种抗高血压药物是未被用作第二种抗高血压药物的ACE抑制剂或β-阻断剂；和(g)向受试者施用一定剂量的结合VEGF、DLL4或VEGF和DLL4两者的抗体(或其他结合剂)，所述抗体包括本文所述的任何抗体(或其他结合剂)。在某些实施方式中，所述抗体是抗DLL4/VEGF双特异性抗体，例如任何本文描述的诸如305B83等抗体。
在以上或本文其他地方描述的任何方面中，所述受试者是人类。
在本发明中使用的结合剂(例如，抗体)可以结合VEGF、DLL4或VEGF和DLL4两者(VEGF/DLL4结合剂)。也可以使用结合VEGF或DLL4以及至少一种其他的抗原或靶标的试剂，以及这些试剂的药物组合物。在某些实施方式中，所述结合剂是多肽，如抗体、抗体片段和与此类抗体相关的其他多肽。在某些实施方式中，所述结合剂是特异性结合人VEGF的抗体。在某些实施方式中，所述结合剂是特异性结合人DLL4的抗体。在某些实施方式中，所述结合剂是特异性结合人VEGF和人DLL4的双特异性抗体。还提供了包含本文所述的结合剂的诸如药物组合物等组合物和试剂盒。这些组合物和试剂盒可以用于本文所述的任何方法中。
在某些实施方式中，所述结合剂抑制VEGF与至少一种VEGF受体的结合。在某些实施方式中，结合剂抑制VEGF与VEGFR-1和/或VEGFR-2的结合。在某些实施方式中，所述结合剂调节血管生成。在某些实施方式中，除了人VEGF之外，抗体或其他结合剂进一步特异性结合和/或抑制人DLL4。
在某些实施方式中，所述结合剂是包含以下的抗体：包含NYWMH(SEQ ID NO:17)的重链CDR1，包含DINPSNGRTSYKEKFKR(SEQ ID NO:18)重链CDR2，和包含HYDDKYYPLMDY(SEQID NO:19)的重链CDR3；及包含RASESVDNYGISFMK(SEQ ID NO:20)的轻链CDR1，包含AASNQGS(SEQ ID NO:21)的轻链CDR2，和包含QQSKEVPWTFGG(SEQ ID NO:22)的轻链CDR3。
在某些实施方式中，所述结合剂是包含以下的抗体：与SEQ ID NO:11具有至少80％序列同一性的重链可变区；和/或与SEQ ID NO:12具有至少80％序列同一性的轻链可变区。在某些实施方式中，所述结合剂包含与SEQ ID NO:11具有至少90％序列同一性的重链可变区；和/或与SEQ ID NO:12具有至少90％序列同一性的轻链可变区。在某些实施方式中，所述结合剂包含与SEQ ID NO:11具有至少95％序列同一性的重链可变区；和/或与SEQID NO:12具有至少95％序列同一性的轻链可变区。在某些实施方式中，所述结合剂是包含以下的抗体：SEQ ID NO:11的重链可变区；和/或SEQ ID NO:12的轻链可变区。
在某些实施方式中，所述结合剂是抗体219R45、双特异性抗体219R45-MB-21M18(也称为305B18)、双特异性抗体219R45-MB-21R79(也称为305B79)、双特异性抗体219R45-MB-21R75(也称为305B75)或双特异性抗体219R45-MB-21R83(也称为305B83)。
在另一方面，本发明提供了一种结合剂，诸如特异性结合人DLL4的抗体。在某些实施方式中，所述结合剂抑制DLL4与至少一种Notch受体的结合。在某些实施方式中，所述结合剂抑制DLL4与Notch1、Notch2、Notch3、和/或Notch4的结合。在某些实施方式中，所述结合剂抑制Notch信号传导。在某些实施方式中，所述结合剂促进非生产性血管生成。在某些实施方式中，所述抗体或其他结合剂进一步特异性结合和/或抑制除人DLL4外的人VEGF。
在某些实施方式中，所述结合剂是结合人DLL4的抗体并且包含：包含TAYYIH(SEQID NO:13)或AYYIH(SEQ ID NO:79)的重链CDR1，包含YIX1X2YX3X4ATNYNQKFKG(SEQ ID NO:80)的重链CDR2，其中，X1是丝氨酸或丙氨酸，X2是丝氨酸、天冬酰胺或甘氨酸，X3是天冬酰胺或赖氨酸，并且X4是甘氨酸、精氨酸或天冬氨酸，和包含RDYDYDVGMDY(SEQ ID NO:16)的重链CDR3；及包含RASESVDNYGISFMK(SEQ ID NO:20)的轻链CDR1，包含AASNQGS(SEQ ID NO:21)的轻链CDR2，和包含QQSKEVPWTFGG(SEQ ID NO:22)的轻链CDR3。在某些实施方式中，所述抗体含有包含TAYYIH(SEQ ID NO:13)或AYYIH(SEQ ID NO:79)的重链CDR1，包含YIANYNRATNYNQKFKG(SEQ ID NO:14)的重链CDR2，和包含RDYDYDVGMDY(SEQ ID NO:16)的重链CDR3；及包含RASESVDNYGISFMK(SEQ ID NO:20)的轻链CDR1，包含AASNQGS(SEQ ID NO:21)的轻链CDR2，和包含QQSKEVPWTFGG(SEQ ID NO:22)的轻链CDR3。
在某些实施方式中，所述结合剂是包含以下的抗体：与SEQ ID NO:10具有至少90％或至少95％序列同一性的重链可变区；和/或与SEQ ID NO:12具有至少90％或至少95％序列同一性的轻链可变区。在某些实施方式中，所述结合剂是包含以下的抗体：SEQ IDNO:10的重链可变区；及SEQ ID NO:12的轻链可变区。
在某些实施方式中，所述结合剂是抗体21R79或双特异性抗体219R45-MB-21R79(305B79)。
在某些实施方式中，所述结合剂是包含以下的抗体：包含TAYYIH(SEQ ID NO:13)或AYYIH(SEQ ID NO:79)的重链CDR1，包含YIAGYKDATNYNQKFKG(SEQ ID NO:59)的重链CDR2，和包含RDYDYDVGMDY(SEQ ID NO:16)的重链CDR3；及包含RASESVDNYGISFMK(SEQ IDNO:20)的轻链CDR1，包含AASNQGS(SEQ ID NO:21)的轻链CDR2，和包含QQSKEVPWTFGG(SEQID NO:22)的轻链CDR3。
在某些实施方式中，所述结合剂是包含以下的抗体：与SEQ ID NO:58具有至少90％或至少95％序列同一性的重链可变区；和/或与SEQ ID NO:12具有至少90％或至少95％序列同一性的轻链可变区。在某些实施方式中，所述结合剂是包含以下的抗体：SEQ IDNO:58的重链可变区；及SEQ ID NO:12的轻链可变区。
在某些实施方式中，所述结合剂是抗体21R75或双特异性抗体219R45-MB-21R75(305B75)。
在某些实施方式中，所述结合剂是包含以下的抗体：包含TAYYIH(SEQ ID NO:13)或AYYIH(SEQ ID NO:79)的重链CDR1，包含YISNYNRATNYNQKFKG(SEQ ID NO:65)的重链CDR2，和包含RDYDYDVGMDY(SEQ ID NO:16)的重链CDR3；及包含RASESVDNYGISFMK(SEQ IDNO:20)的轻链CDR1，包含AASNQGS(SEQ ID NO:21)的轻链CDR2，和包含QQSKEVPWTFGG(SEQID NO:22)的轻链CDR3。
在某些实施方式中，所述结合剂是包含以下的抗体：与SEQ ID NO:64具有至少90％或至少95％序列同一性的重链可变区；和/或与SEQ ID NO:12具有至少90％或至少95％序列同一性的轻链可变区。在某些实施方式中，所述结合剂是包含以下的抗体：SEQ IDNO:64的重链可变区；及SEQ ID NO:12的轻链可变区。
在某些实施方式中，所述结合剂是抗体21R83或双特异性抗体219R45-MB-21R83(305B83)。
在前述每个方面或实施方式的某些实施方式中，以及本文其他地方描述的其他方面和/或实施方式中，所述结合剂是双特异性抗体。在某些实施方式中，所述双特异性抗体特异性结合人VEGF和第二靶标。在某些实施方式中，所述双特异性抗体特异性结合人DLL4和第二靶标。在某些实施方式中，所述双特异性抗体特异性结合人VEGF和人DLL4两者。在某些实施方式中，所述双特异性抗体调节血管生成。在某些实施方式中，所述双特异性抗体抑制Notch信号传导。在某些实施方式中，所述双特异性抗体调节血管生成和抑制Notch信号传导。在某些实施方式中，所述双特异性抗体减少癌干细胞的数量或频率。在某些实施方式中，所述双特异性抗体包含两条相同的轻链。在某些实施方式中，所述双特异性抗体是IgG抗体(例如，IgG2抗体)。
在某些实施方式中，所述双特异性抗体包含：特异性结合人VEGF的第一抗原结合位点，其中，所述第一抗原结合位点包含：包含NYWMH(SEQ ID NO:17)的重链CDR1，包含DINPSNGRTSYKEKFKR(SEQ ID NO:18)的重链CDR2，和包含HYDDKYYPLMDY(SEQ ID NO:19)的重链CDR3。在某些实施方式中，所述双特异性抗体还包含：包含RASESVDNYGISFMK(SEQ IDNO:20)的轻链CDR1，包含AASNQGS(SEQ ID NO:21)的轻链CDR2，和包含QQSKEVPWTFGG(SEQID NO:22)的轻链CDR3。在某些实施方式中，所述双特异性抗体包含：特异性结合人VEGF的第一抗原结合位点，其中，所述第一抗原结合位点包含：(a)包含NYWMH(SEQ ID NO:17)的重链CDR1，包含DINPSNGRTSYKEKFKR(SEQ ID NO:18)的重链CDR2，和包含HYDDKYYPLMDY(SEQID NO:19)的重链CDR3，和(b)包含RASESVDNYGISFMK(SEQ ID NO:20)的轻链CDR1，包含AASNQGS(SEQ ID NO:21)的轻链CDR2，和包含QQSKEVPWTFGG(SEQ ID NO:22)的轻链CDR3。
在某些实施方式中，所述双特异性抗体包含：特异性结合人DLL4的第一抗原结合位点，其中，所述第一抗原结合位点包含：包含TAYYIH(SEQ ID NO:13)或AYYIH(SEQ ID NO:79)的重链CDR1，包含YIX1X2YX3X4ATNYNQKFKG(SEQ ID NO:80)的重链CDR2，其中，X1是丝氨酸或丙氨酸，X2是丝氨酸、天冬酰胺或甘氨酸，X3是天冬酰胺或赖氨酸，并且X4是甘氨酸、精氨酸或天冬氨酸，和包含RDYDYDVGMDY(SEQ ID NO:16)的重链CDR3；及包含RASESVDNYGISFMK(SEQ ID NO:20)的轻链CDR1，包含AASNQGS(SEQ ID NO:21)的轻链CDR2，和包含QQSKEVPWTFGG(SEQ ID NO:22)的轻链CDR3。在某些实施方式中，所述双特异性抗体包含：特异性结合人DLL4的第一抗原结合位点，其中，所述第一抗原结合位点包含：包含TAYYIH(SEQID NO:13)的重链CDR1，包含YIANYNRATNYNQKFKG(SEQ ID NO:14)、YISSYNGATNYNQKFKG(SEQID NO:15)、YIAGYKDATNYNQKFKG(SEQ ID NO:59)或YISNYNRATNYNQKFKG(SEQ ID NO:65)的重链CDR2，和包含RDYDYDVGMDY(SEQ ID NO:16)的重链CDR3。在某些实施方式中，所述双特异性抗体还包含：包含RASESVDNYGISFMK(SEQ ID NO:20)的轻链CDR1，包含AASNQGS(SEQ IDNO:21)的轻链CDR2，和包含QQSKEVPWTFGG(SEQ ID NO:22)的轻链CDR3。在某些实施方式中，所述双特异性抗体包含：特异性结合人DLL4的第一抗原结合位点，其中，所述第一抗原结合位点包含：(a)包含TAYYIH(SEQ ID NO:13)的重链CDR1，包含YIANYNRATNYNQKFKG(SEQ IDNO:14)、YISSYNGATNYNQKFKG(SEQ ID NO:15)、YIAGYKDATNYNQKFKG(SEQ ID NO:59)或YISNYNRATNYNQKFKG(SEQ ID NO:65)的重链CDR2，和包含RDYDYDVGMDY(SEQ ID NO:16)的重链CDR3，和(b)包含RASESVDNYGISFMK(SEQ ID NO:20)的轻链CDR1，包含AASNQGS(SEQ IDNO:21)的轻链CDR2，和包含QQSKEVPWTFGG(SEQ ID NO:22)的轻链CDR3。
在某些实施方式中，所述双特异性抗体包含：a)特异性结合人VEGF的第一抗原结合位点，和b)特异性结合人DLL4的第二抗原结合位点，其中，所述第一抗原结合位点包含：包含NYWMH(SEQ ID NO:17)的重链CDR1，包含DINPSNGRTSYKEKFKR(SEQ ID NO:18)的重链CDR2，和包含HYDDKYYPLMDY(SEQ ID NO:19)的重链CDR3；其中，第二抗原结合位点包含：包含TAYYIH(SEQ ID NO:13)或AYYIH(SEQ ID NO:79)的重链CDR1，包含YIX1X2YX3X4ATNYNQKFKG(SEQ ID NO:80)的重链CDR2，其中，X1是丝氨酸或丙氨酸，X2是丝氨酸、天冬酰胺或甘氨酸，X3是天冬酰胺或赖氨酸，并且X4是甘氨酸、精氨酸或天冬氨酸，和包含RDYDYDVGMDY(SEQ ID NO:16)的重链CDR3；及包含RASESVDNYGISFMK(SEQ ID NO:20)的轻链CDR1，包含AASNQGS(SEQ ID NO:21)的轻链CDR2，和包含QQSKEVPWTFGG(SEQ ID NO:22)的轻链CDR3。在某些实施方式中，所述双特异性抗体包含：a)特异性结合人VEGF的第一抗原结合位点，和b)特异性结合人DLL4的第二抗原结合位点，其中，所述第一抗原结合位点包含：包含NYWMH(SEQ ID NO:17)的重链CDR1，包含DINPSNGRTSYKEKFKR(SEQ ID NO:18)的重链CDR2，和包含HYDDKYYPLMDY(SEQ ID NO:19)的重链CDR3；其中，第二抗原结合位点包含：包含TAYYIH(SEQ ID NO:13)的重链CDR1，包含YIANYNRATNYNQKFKG(SEQ ID NO:14)的重链CDR2，和包含RDYDYDVGMDY(SEQ ID NO:16)的重链CDR3；并且其中，所述第一和第二抗原结合位点均包含：包含RASESVDNYGISFMK(SEQ ID NO:20)的轻链CDR1，包含AASNQGS(SEQ IDNO:21)的轻链CDR2，和包含QQSKEVPWTFGG(SEQ ID NO:22)的轻链CDR3。在某些实施方式中，所述双特异性抗体包含：a)特异性结合人VEGF的第一抗原结合位点，和b)特异性结合人DLL4的第二抗原结合位点，其中，所述第一抗原结合位点包含：包含NYWMH(SEQ ID NO:17)的重链CDR1，包含DINPSNGRTSYKEKFKR(SEQ ID NO:18)的重链CDR2，和包含HYDDKYYPLMDY(SEQ ID NO:19)的重链CDR3；其中，第二抗原结合位点包含：包含TAYYIH(SEQ ID NO:13)的重链CDR1，包含YISSYNGATNYNQKFKG(SEQ ID NO:15)的重链CDR2，和包含RDYDYDVGMDY(SEQID NO:16)的重链CDR3；并且其中，所述第一和第二抗原结合位点均包含：包含RASESVDNYGISFMK(SEQ ID NO:20)的轻链CDR1，包含AASNQGS(SEQ ID NO:21)的轻链CDR2，和包含QQSKEVPWTFGG(SEQ ID NO:22)的轻链CDR3。在某些实施方式中，所述双特异性抗体包含：a)特异性结合人VEGF的第一抗原结合位点，和b)特异性结合人DLL4的第二抗原结合位点，其中，所述第一抗原结合位点包含：包含NYWMH(SEQ ID NO:17)的重链CDR1，包含DINPSNGRTSYKEKFKR(SEQ ID NO:18)的重链CDR2，和包含HYDDKYYPLMDY(SEQ ID NO:19)的重链CDR3；其中第二抗原结合位点包含：包含TAYYIH(SEQ ID NO:13)的重链CDR1，包含YIAGYKDATNYNQKFKG(SEQ ID NO:59)的重链CDR2，和包含RDYDYDVGMDY(SEQ ID NO:16)的重链CDR3；并且其中，所述第一和第二抗原结合位点均包含：包含RASESVDNYGISFMK(SEQ IDNO:20)的轻链CDR1，包含AASNQGS(SEQ ID NO:21)的轻链CDR2，和包含QQSKEVPWTFGG(SEQID NO:22)的轻链CDR3。在某些实施方式中，所述双特异性抗体包含：a)特异性结合人VEGF的第一抗原结合位点，和b)特异性结合人DLL4的第二抗原结合位点，其中，所述第一抗原结合位点包含：包含NYWMH(SEQ ID NO:17)的重链CDR1，包含DINPSNGRTSYKEKFKR(SEQ ID NO:18)的重链CDR2，和包含HYDDKYYPLMDY(SEQ ID NO:19)的重链CDR3；其中，第二抗原结合位点包含：包含TAYYIH(SEQ ID NO:13)的重链CDR1，包含YISNYNRATNYNQKFKG(SEQ ID NO:65)的重链CDR2，和包含RDYDYDVGMDY(SEQ ID NO:16)的重链CDR3；并且其中，所述第一和第二抗原结合位点均包含：包含RASESVDNYGISFMK(SEQ ID NO:20)的轻链CDR1，包含AASNQGS(SEQ ID NO:21)的轻链CDR2，和包含QQSKEVPWTFGG(SEQ ID NO:22)的轻链CDR3。
在某些实施方式中，所述的双特异性抗体特异性结合人VEGF，并且包含：与SEQ IDNO:11具有至少90％序列同一性的重链可变区，和/或与SEQ ID NO:12具有至少90％序列同一性的轻链可变区。在某些实施方式中，所述双特异性抗体特异性结合人VEGF，并且包含：与SEQ ID NO:11具有至少95％序列同一性的重链可变区和/或与SEQ ID NO:12具有至少95％序列同一性的轻链可变区。
在某些实施方式中，所述双特异性抗体特异性结合人DLL4，并且包含与SEQ IDNO:9、SEQ ID NO:10、SEQ ID NO:58或SEQ ID NO:64具有至少90％序列同一性的重链可变区；和/或与SEQ ID NO:12具有至少90％序列同一性的轻链可变区。在某些实施方式中，所述双特异性抗体特异性结合人DLL4，并且包含与SEQ ID NO:9、SEQ ID NO:10、SEQ ID NO:58或SEQ ID NO:64具有至少95％序列同一性的重链可变区；和/或与SEQ ID NO:12具有至少95％序列同一性的轻链可变区。
在某些实施方式中，所述双特异性抗体特异性结合人VEGF和人DLL4，并且包含：(a)与SEQ ID NO:11具有至少90％序列同一性的第一重链可变区；(b)与SEQ ID NO:9、SEQID NO:10、SEQ ID NO:58或SEQ ID NO:64具有至少90％序列同一性的第二重链可变区；及(c)与SEQ ID NO:12具有至少90％序列同一性的第一和第二轻链可变区。在某些实施方式中，VEGF/DLL4双特异性抗体包含：(a)与SEQ ID NO:11具有至少95％序列同一性的第一重链可变区；(b)与SEQ ID NO:9具有至少95％序列同一性的第二重链可变区；及(c)与SEQ IDNO:12具有至少95％序列同一性的第一和第二轻链可变区。在某些实施方式中，VEGF/DLL4双特异性抗体包含：(a)与SEQ ID NO:11具有至少95％序列同一性的第一重链可变区；(b)与SEQ ID NO:10具有至少95％序列同一性的第二重链可变区；及(c)与SEQ ID NO:12具有至少95％序列同一性的第一和第二轻链可变区。在某些实施方式中，VEGF/DLL4双特异性抗体包含：(a)与SEQ ID NO:11具有至少95％序列同一性的第一重链可变区；(b)与SEQ IDNO:58具有至少95％序列同一性的第二重链可变区；及(c)与SEQ ID NO:12具有至少95％序列同一性的第一和第二轻链可变区。在某些实施方式中，VEGF/DLL4双特异性抗体包含：(a)与SEQ ID NO:11具有至少95％序列同一性的第一重链可变区；(b)与SEQ ID NO:64具有至少95％序列同一性的第二重链可变区；及(c)与SEQ ID NO:12具有至少95％序列同一性的第一和第二轻链可变区。
在某些实施方式中，VEGF/DLL4结合剂是双特异性抗体，其包含：(a)结合人VEGF的第一抗原结合位点，KD为约0.1nM至约1.0nM，和(b)特异性结合人DLL4的第二抗原结合位点，KD为约0.1nM至约20nM。在某些实施方式中，所述双特异性抗体包含两条相同的轻链。
在某些实施方式中，VEGF/DLL4结合剂是选自由下述组成的组中的双特异性抗体：219R45-MB-21M18(305B18)、219R45-MB-21R79(305B79)、219R45-MB-21R75(305B75)和219R45-MB-21R83(305B83)。
在前述每个方面的某些实施方式中，以及本文其他地方描述的其他方面和/或实施方式中，结合剂或抗体是分离的。
在另一方面，本发明的方法、组合物或试剂盒使用选自由下述组成的组中的多肽：SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:6、SEQID NO:7、SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:9、SEQ ID NO:10、SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:12、SEQ IDNO:46、SEQ ID NO:47、SEQ ID NO:48、SEQ ID NO:49、SEQ ID NO:56、SEQ ID NO:57、SEQ IDNO:58、SEQ ID NO:62、SEQ ID NO:63和SEQ ID NO:64。在某些实施方式中，所述多肽是分离的。在某些实施方式中，所述多肽是基本上纯的。在某些实施方式中，所述多肽是抗体或抗体的一部分，如抗体片段。
在另一方面，本发明的方法、组合物或试剂盒采用分离的多核苷酸分子，其包括编码前述每个方面及本文所述的其他方面和/或实施方式的结合剂和/或多肽的多核苷酸。在某些实施方式中，所述多核苷酸包含选自由下述组成的组中的序列：SEQ ID NO:29、SEQ IDNO:30、SEQ ID NO:31、SEQ ID NO:32、SEQ ID NO:33、SEQ ID NO:34、SEQ ID NO:35、SEQ IDNO:36、SEQ ID NO:37、SEQ ID NO:38、SEQ ID NO:39、SEQ ID NO:40、SEQ ID NO:50、SEQ IDNO:51、SEQ ID NO:52、SEQ ID NO:53、SEQ ID NO:54、SEQ ID NO:55、SEQ ID NO:60、SEQ IDNO:61、SEQ ID NO:66、SEQ ID NO:67、SEQ ID NO:68、SEQ ID NO:69、SEQ ID NO:70、SEQ IDNO:71、SEQ ID NO:72、SEQ ID NO:73、和SEQ ID NO:74。本发明进一步提供包含所述多核苷酸的表达载体，以及包含所述表达载体和/或多核苷酸的细胞。在某些实施方式中，细胞是原核细胞或真核细胞。
在本文所述的任何实施方式中，VEGF/DLL4结合剂(例如，305B83)可以以0.1mg/kg至20mg/kg或者0.5mg/kg至10mg/kg或者约0.5mg/kg、1mg/kg、2.5mg/kg、3mg/kg、4mg/kg、5mg/kg、10mg/kg或15mg/kg的剂量施用。在某些实施方式中，所述剂量是3mg/kg。在其他实施方式中，所述剂量是5mg/kg。在其他实施方式中，所述剂量是10mg/kg。在某些实施方式中，所述剂量每两周施用一次(例如，以1mg/kg、3mg/kg、5mg/kg、10mg/kg或15mg/kg)。在某些实施方式中，所述剂量每三周施用一次。在其他实施方式中，所述剂量每周、每十天、每四周、每六周、每两个月施用一次。
在涉及VEGF/DLL4结合剂和另外的治疗剂的组合的实施方式中，所述试剂和另外的治疗剂可以以任何顺序或同时施用。在某些实施方式中，使用VEGF/DLL4结合剂(例如抗体)的治疗可以在施用另外的治疗剂之前、同时或之后发生。联合施用可以包括共同施用(以单一药物制剂或使用分开的制剂)，或者以任何顺序连续施用，但通常在一段时间内使得所有活性剂可以同时发挥其生物学活性。这些化疗剂的制备和给药方案可以根据制造商的说明书使用或由技术人员根据经验确定。这种化疗的制剂和给药方案也在TheChemotherapy Source Book(第4版，2008，M.C.Perry编，Lippincott，Williams&Wilkins，Philadelphia，PA)中描述。
在某些实施方式中，将基本上同时或同时施用VEGF/DLL4结合剂和另外的治疗剂。例如，受试者在接受用第二种治疗剂(例如，化疗)治疗的过程的同时可以给予VEGF/DLL4结合剂(例如，抗体)。在某些实施方式中，VEGF/DLL4结合剂将在用另外的治疗剂治疗的1年内施用。在某些替代实施方式中，VEGF/DLL4结合剂将在用另外的治疗剂进行任何治疗的10、8、6、4或2个月内施用。在某些其他实施方式中，VEGF/DLL4结合剂将在用另外的治疗剂进行任何治疗的4周、3周、2周或1周内施用。在某些实施方式中，VEGF/DLL4结合剂将在用另外的治疗剂进行任何治疗的5天、4天、3天、2天或1天内施用。应进一步理解的是，两种(或更多种)试剂或治疗可以在几小时或几分钟内(即，基本上同时)给予受试者。
当各方面或实施方式采用马库什群组或者其他可替换的群组来描述时，本发明不仅涵盖了作为整体列出的整个群组，也涵盖单独群组的各成员以及主要群组的所有可能的亚群组，也还该缺少一个或多个群组成员的主要群组。本发明还设想明确排除所要求保护的发明中的一种或多种任何群组成员。
附图说明
图1A是显示使用抗VEGF/DLL4双特异性抗体(305B83)与紫杉醇(TAXOL)的组合来治疗铂抗性卵巢癌、原发性腹膜癌或输卵管癌的1B期临床试验的递增和扩展的示意图。
图1B是显示使用抗VEGF/DLL4双特异性抗体(305B83)与紫杉醇(TAXOL)和卡铂(“Carbo”)的组合来治疗子宫内膜癌的1B期临床试验的递增和扩展的示意图。
图2A和2B是显示使用抗VEGF/DLL4双特异性抗体(305B83)与FOLFORI的组合作为转移性结肠直肠癌的二线治疗的1B期临床试验的递增和扩展示意图。
图3是显示使用抗VEGF/DLL4双特异性抗体(305B83)与吉西他滨和的组合作为转移性胰腺癌的一线治疗的1B期临床试验的递增和扩展的示意图。
图4是显示由同时完全阻断DLL4和VEGF导致的卵巢异种移植物肿瘤中的抗肿瘤活性的图。用10mg/kg的对照mAb、贝伐单抗+B20(抗mVEGF)、登西珠单抗+21R30(抗mDLL4)或305B83加21R30和B20处理OMP-OV40卵巢肿瘤，每周一次，持续4周。*：通过双因素方差分析，与对照mAb相比，p<0.05，**与单独的抗VEGF或抗DLL4相比，p<0.05。
图5A至5C是显示在接受305B83的动物中血管生成的抗VEGF抑制优于抗DLL4过度增殖的显微照片和图。图5A显示接受对照mAb、贝伐单抗+B20(抗mVEGF)、登西珠单抗+21R30(抗mDLL4)或305B83+21R30和B20的肿瘤中CD31的表达、灌注和缺氧。图5B和5C分别从左至右显示了对于各基因，接受对照mAb、贝伐单抗+B20、登西珠单抗+21R30或305B83+(21R30和B20)的鼠类基质/血管基因和人基因的表达。
图6A和6B是显示305B83与次优剂量下单独的抗hDLL4和抗hVEGF的比较的图。用对照mAb、3mg/kg的登西珠单抗+21R30(抗mDLL4)、贝伐单抗+B20(抗mVEGF)或305B83+21R30和B20处理卵巢肿瘤OMP-OV40(图6A)和胃肿瘤OMP-STM1(图6B)每周一次，持续四周。*：通过双因素方差分析，与对照mAb相比，p<0.05；**：与单独的抗VEGF或抗DLL4相比，p<0.05。
图7A和7B是显示化疗终止后，305B83+21R30和B20延迟肿瘤复发的图。将卵巢OMP-OV19和胰腺OMP-PN42-荷瘤动物随机化，并在平均肿瘤体积达到约100mm3～150mm3时开始治疗。在OMP-OV19中，NOD.SCID小鼠用15mg/kg紫杉醇处理，在OMP-PN42中用10mg/kg吉西他滨+30mg/kg蛋白结合型紫杉醇处理，使用或不用抗体，每周一次持续4周，然后进行3周至4周化疗。此后，停止治疗并且监测肿瘤生长达2个月。
图8A和8B分别是显示305B83抑制植入人皮肤移植物中的萤光素酶标记的OMP-C8肿瘤的生长的图和照片。图8A显示305B18对植入人皮肤移植物中的OMP-C8结肠异种移植肿瘤生长的影响。约2cm2的新生儿包皮移植物被植入到麻醉的NOD/SCID小鼠的外侧主干中。然后在植入后6周将萤光素酶标记的人OMP-C8结肠肿瘤细胞皮内注射到人皮肤移植物中。2周后开始治疗。通过用IVIS-200成像系统(Caliper Life Sciences)测量生物发光来监测肿瘤生长。对照mAb、登西珠单抗、贝伐单抗和305B18以25mg/kg每周一次腹膜内施用。**：与对照mAb相比，p<0.0001，+：与登西珠单抗相比，p<0.01，*：与贝伐单抗相比，p<0.05。图8B显示对照和抗体处理的小鼠的肿瘤大小的图像。
图9是显示在胰腺癌中DLL4/VEGF双特异性抗体与吉西他滨组合时是活性的图。将OMP-PN8胰腺肿瘤细胞注射到NOD-SCID小鼠中。使肿瘤生长24天，直至它们达到110mm3的平均肿瘤体积。将荷瘤小鼠随机分为4组，并用吉西他滨与对照抗体、贝伐单抗、登西珠单抗或抗DLL4/VEGF双特异性抗体一起处理。组合治疗四周后，中止吉西他滨，维持抗体治疗。吉西他滨每周以70mg/kg的剂量给药。对照Ab、登西珠单抗和贝伐单抗以15mg/kg的剂量给药，双特异性抗体以30mg/kg的剂量给药。
图10是显示抗DLL4活性降低肿瘤起始细胞频率的图。用对照抗体、登西珠单抗、贝伐单抗或抗DLL4/VEGF双特异性抗体处理OMP-PN8荷胰腺瘤小鼠。治疗四周后，收集肿瘤，并且纯化异种移植物中的人肿瘤细胞。将来自每个处理组的90个肿瘤细胞注射到10只小鼠的新组群中。使肿瘤生长83天而不进行任何进一步处理。图中显示了实验中各个小鼠的体积。
图11是显示抗-DLL4/VEGF双特异性抗体与吉西他滨+白蛋白结合型紫杉醇组合的活性的图。将OMP-PN42肿瘤植入NOD-SCID小鼠中。使用对照Ab、单独的吉西他滨(30mg/kg每周)、吉西他滨+白蛋白结合型紫杉醇、或者抗DLL4/VEGF(305B83，21R30，B20)与吉西他滨+白蛋白结合型紫杉醇的组合处理荷瘤小鼠(n＝10/组)。抗体以10mg/kg的剂量每周给药。
具体实施方式
本发明提供了使用结合剂(可选地，与另外的抗癌剂组合)治疗癌症，特别是结肠直肠癌、卵巢癌(例如，铂抗性卵巢癌)、胰腺癌和子宫内膜癌的方法，所述结合剂包括但不限于：诸如结合VEGF和/或DLL4的抗体(例如，VEGF/DLL4结合剂)等多肽。本发明还提供了使用治疗剂组合治疗癌症的方法，所述治疗剂组合例如是抗DLL4/VEGF双特异性抗体(例如，305B83)与(a)亚叶酸、5-氟尿嘧啶和伊立替康，(b)紫杉醇，(c)吉西他滨和或(c)紫杉醇和卡铂的组合。还提供了包括VEGF/DLL4结合剂和另外的抗癌剂的组合物和试剂盒。本发明的方法包括：抑制结肠直肠肿瘤、卵巢肿瘤(例如，铂抗性卵巢肿瘤)、胰腺肿瘤、和子宫内膜肿瘤生长的方法，治疗结肠直肠癌、卵巢癌(例如，铂抗性卵巢癌)、胰腺癌、和子宫内膜癌的方法，降低结肠直肠肿瘤、卵巢肿瘤(例如，铂抗性卵巢肿瘤)、胰腺肿瘤、和子宫内膜肿瘤致瘤性的方法，降低结肠直肠肿瘤、卵巢肿瘤(例如，铂抗性卵巢肿瘤)、胰腺肿瘤、和子宫内膜肿瘤中的癌干细胞的频率的方法，和/或调节患有卵巢癌(例如，铂抗性卵巢癌)、结肠直肠癌、胰腺癌、和子宫内膜癌的患者中血管生成的方法。
I.定义
为了便于理解本发明，下面定义了许多术语和短语。
术语“抗体”是指通过免疫球蛋白分子可变区内的至少一个抗原识别位点或抗原结合位点识别和特异性结合诸如蛋白、多肽、肽、碳水化合物、多核苷酸、脂质或前述的组合等靶标的免疫球蛋白分子。如本文使用的，术语“抗体”包括完整的多克隆抗体、完整的单克隆抗体、抗体片段(诸如Fab、Fab'、F(ab')2和Fv片段)、单链Fv(scFv)突变体、诸如双特异性抗体等多特异性抗体、嵌合抗体、人源化抗体、人抗体、包含抗体的抗原结合位点的融合蛋白、和包含抗原结合位点的任何其他经修饰的免疫球蛋白分子，只要所述抗体表现出所需的生物学活性即可。基于其分别被称为α、δ、ε、γ和μ的重链恒定结构域的身份，抗体可以是5种主要类别的免疫球蛋白：IgA、IgD、IgE、IgG和IgM，或其亚类(同种型)(例如，IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1和IgA2)中的任意一种。不同类别的免疫球蛋白具有不同的和公知的亚基结构和三维构型。抗体可以是裸抗体或与其他分子缀合，所述其他分子包括但不限于毒素和放射性同位素。
术语“抗体片段”是指完整抗体的一部分，如本文所用，是指完整抗体的抗原决定可变区或抗原结合位点。如本文使用的“抗体片段”包括抗原结合位点或表位结合位点。抗体片段的实例包括但不限于：由抗体片段形成的Fab、Fab'片段、F(ab')2片段和Fv片段、线性抗体、单链抗体和多特异性抗体。
术语抗体“可变区”是指单独的或组合的抗体轻链的可变区或抗体重链的可变区。重链的可变区或轻链的可变区通常由通过三个互补决定区(CDR)相连的四个框架区组成(也称为高变区)。每个链中的CDR通过框架区紧密地保持在一起，并且与来自另一个链的CDR共同有助于抗体的抗原结合位点的形成。至少存在两种用于确定CDR的技术：(1)基于跨物种序列变异性的方法(即，Kabat等，1991，Sequences of Protein of ImmunologicalInterest，第5版，National Institutes of Health，Bethesda MD)，及(2)基于抗原-抗体复合物的晶体学研究的方法(Al-Lazikani等，1997，J.Mol.Biol.，273：927-948)。此外，本领域有时使用这两种方法的组合来确定CDR。
术语“单克隆抗体”是指涉及单个抗原决定簇或表位的高度特异性识别和结合的同源抗体群体。这与通常包括针对不同抗原决定簇的不同抗体的混合物的多克隆抗体相反。术语“单克隆抗体”包括完整抗体和全长抗体及抗体片段(例如，Fab、Fab'、F(ab')2、Fv片段)、单链(scFv)突变体、包含抗体部分的融合蛋白、和包含至少一个抗原结合位点的任何其他经修饰的免疫球蛋白分子。此外，“单克隆抗体”是指通过任何数量的技术制造的抗体，所述技术包括但不限于杂交瘤生产、噬菌体选择、重组表达和转基因动物。
术语“人源化抗体”是指非人(例如，鼠类)抗体的形式，其为特异性免疫球蛋白链，嵌合免疫球蛋白，或者含有最少非人序列的其片段。
术语“人抗体”是指由人类产生的抗体或是使用本领域已知的任何技术制造的具有对应于人类产生的抗体的氨基酸序列的抗体。人抗体的此定义包括完整抗体或全长抗体及其片段。
术语“嵌合抗体”是指其中免疫球蛋白分子的氨基酸序列来源于两个以上物种的抗体。通常，轻链和重链的可变区均对应于来源于具有期望的特异性、亲和力和/或结合能力的一个哺乳动物物种(例如，小鼠、大鼠、兔等)的抗体可变区，而恒定区与来源于其他物种(通常为人类)的抗体中的序列同源，以避免在该物种中引起免疫应答。
词语“亲和力成熟抗体”是指在一个或多个CDR中具有一个或多个改变的抗体，与不具有这些改变的亲本抗体相比，其导致抗体对抗原的亲和力的改善。该定义还包括与CDR残基的改变一起进行的非CDR残基的改变。需要的亲和力成熟抗体对靶标抗原将具有纳摩尔或甚至皮摩尔的亲和力。亲和力成熟抗体通过本领域已知的方法产生，其包括但不限于，通过重链可变链改组、轻链可变链改组的亲和力成熟，CDR残基的随机诱变，框架残基的随机诱变，CDR残基的定点诱变和框架残基的定点诱变。
术语“表位”和“抗原决定簇”在本文中可互换使用，是指能够被特定抗体识别并特异性结合的抗原部分。当抗原是多肽时，表位可以由相邻氨基酸以及通过蛋白质的三级折叠并置的非相邻氨基酸形成。由相邻氨基酸形成的表位(也称为线性表位)通常在蛋白变性时保留，而通过三级折叠形成的表位(也称为构象表位)通常在蛋白变性时丧失。表位通常包括处在独特的空间构象中至少3个、更通常至少5个或8个～10个氨基酸。
术语“异源多聚分子”或“异源多聚体”或“异源多聚复合体”或“异源多聚多肽”在本文中可互换使用，以指包含至少第一多肽和第二多肽的分子，其中，第二多肽在氨基酸序列上与第一多肽的差异至少为一个氨基酸残基。异源多聚分子可以包含由第一和第二多肽形成的“异二聚体”，或者可以形成更高级的三级结构，其中存在另外的多肽。
术语“拮抗剂”和“拮抗性”指部分或完全阻断、抑制、降低或中和靶标的生物学活性和/或信号传导途径(例如，Notch途径)的任何分子。本文使用的术语“拮抗剂”包括部分或完全阻断、抑制、降低或中和蛋白质活性的任何分子。适合的拮抗剂分子具体包括但不限于：拮抗剂抗体或抗体片段。
如本文使用的术语“调节”和“调整”是指生物活性的改变或变化。调节包括但不限于刺激或抑制活性。调节可以是与蛋白质活性相关的活性的增加或减少(例如血管生成的减少或血管生成的增加)，结合特征的改变，或与蛋白质、途径或其他生物学兴趣点的活性相关的生物学、功能性或免疫学性质的任何其他改变。
术语“选择性结合”或“特异性结合”是指与替代性物质(包括不相关蛋白质)相比，结合剂或抗体与表位、蛋白质或靶分子更频繁、更快速、以更长的持续时间、以更大的亲和力或以上述的某种组合反应或结合。在某些实施方式中，“特异性结合”是指，例如，抗体以约0.1mM以下，但更通常小于约1μM的KD与蛋白质结合。在某些实施方式中，“特异性结合”是指抗体有时以至少约0.1μM以下、有时以至少约0.01μM以下或有时以至少约1nM以下的KD与靶标结合。由于不同物种中的同源蛋白之间的序列同一性，特异性结合可包识别多于一个物种中的蛋白(例如，人VEGF和小鼠VEGF)的抗体。类似地，由于不同蛋白质的多肽序列的某些区域内的同源性，特异性结合可以包括识别多于一种蛋白(例如，人VEGF和小鼠VEGF)的抗体(或其他多肽或结合剂)。应当理解的是，在某些实施方式中，特异性结合第一靶标的抗体或结合部分可以或不可以特异性结合第二靶标。因此，“特异性结合”不一定需要(尽管它可以包括)排他性结合，即结合单个靶标。因此，在某些实施方式中，抗体可以特异性结合多于一个靶标。在某些实施方式中，多个靶标可以与抗体上相同的抗原结合位点结合。例如，在某些情况下，抗体可以包含两个相同的抗原结合位点，每个位点特异性结合两种以上蛋白上相同的表位。在某些替代实施方式中，抗体可以是多特异性的并且包含至少两个具有不同特异性的抗原结合位点。作为非限制性实例，双特异性抗体可以包含识别一种蛋白(例如，人VEGF)上的表位的一个抗原结合位点，并且还包含识别第二种蛋白(例如，人DLL4)上的不同表位上的第二个不同的抗原结合位点。通常，但不是必然地，提到结合是指特异性结合。
术语“多肽”和“肽”和“蛋白质”在本文中可互换使用，是指任何长度的氨基酸的聚合物。聚合物可以是直链或支链的，它可以包含经修饰的氨基酸，并且可以被非氨基酸中断。这些术语还包括已经天然修饰或通过干预修饰的氨基酸聚合物；例如二硫键形成、糖基化、脂化、乙酰化、磷酸化或任何其他操作或修饰，例如与标记组分的缀合。定义中还包括例如含有一个或多个氨基酸类似物(例如包括非天然氨基酸)以及本领域已知的其他修饰的多肽。应当理解的是，由于本文所述方法中使用的多肽可以基于抗体，在某些实施方式中，多肽可以以单链或关联链的形式存在。
术语“多核苷酸”和“核酸”在本文中可互换使用，是指任何长度的核苷酸的聚合物，并且包括DNA和RNA。核苷酸可以是脱氧核糖核苷酸、核糖核苷酸、经修饰的核苷酸或碱基，和/或它们的类似物，或者可以通过DNA或RNA聚合酶引入聚合物的任何底物。
“高严格条件”可以通过以下方式鉴定：(1)在50℃时使用低离子强度和高温进行冲洗，例如15mM氯化钠/1.5mM柠檬酸钠/0.1％十二烷基硫酸钠；(2)在42℃时在杂交过程中使用诸如甲酰胺等变性剂，例如，在5×SSC(0.75M NaCl，75mM柠檬酸钠)中的pH 6.5的50％(v/v)甲酰胺和0.1％牛血清白蛋白/0.1％Ficoll/0.1％聚乙烯吡咯烷酮/50mM磷酸钠缓冲液；或(3)在42℃时在杂交过程中使用在5×SSC中的50％的甲酰胺，50mM磷酸钠(pH6.8)，0.1％焦磷酸钠，5×Denhardt's溶液，净超声处理的鲑鱼精子DNA(50μg/ml)，0.1％SDS和10％硫酸葡聚糖，在42℃时0.2×SSC和50％甲酰胺中冲洗，随后在55℃下用由含有EDTA的0.1×SSC进行高度严格冲洗。
在两种以上核酸或多肽的语境中，术语“相同”或百分比“同一性”是指两个以上的序列或子序列，它们相同，或当针对最大对应性进行比较和比对(必要时引入空位)时，并且在不考虑任何保守性氨基酸取代作为序列同一性的一部分的情况下，具有指定百分比的相同的核苷酸或氨基酸残基。可以使用序列比较软件或算法或目视检查来测量百分比同一性。可用于获得氨基酸或核苷酸序列比对的各种算法和软件是本领域公知的。其包括但不限于：BLAST、ALIGN、Megalign、BestFit、GCG Wisconsin Package和它们的变体。在某些实施方式中，本发明的两个核酸或多肽实质上具有同一性，意味着如使用序列比较算法或目视检查而测量的，当针对最大对应性进行比较和比对时，它们具有至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％，在某些实施方式中，至少95％、96％、97％、98％、99％的核苷酸或氨基酸残基同一性。在某些实施方式中，同一性存在于长度为至少约10个、至少约20个、至少约40-60个残基、至少约60-80个残基或者其间任何整数值的序列区域。在某些实施方式中，同一性存在于比60-80个残基的更长的区域，诸如至少约80-100个残基，在某些实施方式中，该序列在待比较的序列(如核苷酸序列的编码区)的全长上基本上相同。
“保守性氨基酸取代”是指其中一个氨基酸残基被具有类似侧链的另一个氨基酸残基替代的取代。本领域已经定义了具有类似侧链的氨基酸残基的家族，其包括碱性侧链(例如，赖氨酸、精氨酸、组氨酸)、酸性侧链(例如，天冬氨酸、谷氨酸)、不带电的极性侧链(例如，甘氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、丝氨酸、苏氨酸、酪氨酸、半胱氨酸)、非极性侧链(例如，丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、甲硫氨酸、色氨酸)、β-支链侧链(例如，苏氨酸、缬氨酸、异亮氨酸)和芳族侧链(例如，酪氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、组氨酸)。例如，苯丙氨酸取代酪氨酸是保守性取代。本发明的多肽和抗体的序列中的保守性取代优选不消除含所述氨基酸序列的多肽或抗体与结合所述多肽或抗体的抗原的结合。不会消除抗原结合的氨基酸保守性取代的鉴定方法是本领域公知的。
如本文使用的术语“载体”是指能够在宿主细胞中递送和通常表达一种或多种感兴趣的基因或序列的构建体。载体的实例包括但不限于：病毒载体、裸DNA或RNA表达载体、质粒、粘粒或噬菌体载体、与阳离子缩合剂相关联的DNA或RNA表达载体、及包封在脂质体中的DNA或RNA表达载体。
“分离的”多肽、抗体、多核苷酸、载体、细胞或组合物是处于未发现于自然中的形式的多肽、抗体、多核苷酸、载体、细胞或组合物。分离的多肽、抗体、多核苷酸、载体、细胞或组合物包括那些纯化至程度达到不再处于天然被发现时的形式的多肽、抗体、多核苷酸、载体、细胞或组合物。在某些实施方式中，分离的多肽、抗体、多核苷酸、载体、细胞或组合物是基本上纯的。
如本文使用的术语“基本上纯的”是指至少50％纯度(即，不含污染物)、至少90％纯度、至少95％纯度、至少98％纯度或至少99％纯度的材料。
如本文使用的术语“癌症”和“癌性”是指或描述哺乳动物中的细胞群体的特征为不受调节的细胞生长的生理状况。
如本文使用的术语“肿瘤”和“瘤”是指由过度的细胞生长或增殖(良性(非癌性)或恶性(癌性))引起的任何组织块，包括癌前病变。
如本文使用的术语“转移”是指癌症从原发位点扩散或转移到身体其他区域的过程，并伴随着在新位置处发生类似的癌性损伤。“转移”或“转移中”的细胞通常是与相邻细胞失去粘合接触并经由血流从疾病的原发位置迁移从而侵入相邻身体结构的细胞。
术语“癌干细胞”和“CSC”和“肿瘤干细胞”和“肿瘤初始细胞”在本文中可互换使用，是指来自癌症或肿瘤的细胞且其：(1)具有广泛的增殖能力；(2)能够进行不对称细胞分裂以产生一种或多种类型的分化细胞后代，其中分化细胞具有降低的增殖或发育潜能；和(3)能够进行对称细胞分裂以进行自我更新或自我维护。与未能形成肿瘤的大多数肿瘤细胞相比，这些性质赋予癌干细胞在连续移植到免疫受损的宿主(例如，小鼠)中时形成或建立肿瘤或癌症的能力。癌干细胞以无序方式进行自我更新与分化，以形成具有异常细胞类型的肿瘤，所述细胞类型随着突变的发生可随时间而变化。
术语“癌细胞”和“肿瘤细胞”是指源自癌症或肿瘤或癌前病变(包括非致瘤细胞)的细胞的总群体，其包含大量癌细胞群和致瘤干细胞(癌干细胞)。如本文使用的术语“癌细胞”或“肿瘤细胞”将仅在提到缺乏能够更新和分化的能力的那些细胞时被术语“非致瘤性”修饰，以将这些肿瘤细胞与癌干细胞区分。
如本文使用的术语“致瘤的”是指癌干细胞的功能性特征，其包括自我更新的性质(产生另外的致瘤性癌干细胞)和增殖以产生全部其他肿瘤细胞(产生分化且因此为非致瘤性的肿瘤细胞)。
如本文使用的术语“致瘤性”是指来自肿瘤的细胞样品在连续移植到免疫受损的宿主(例如，小鼠)中时形成可触知肿瘤的能力。该定义还包括在连续移植入免疫受损的宿主(例如，小鼠)后形成可触知肿瘤的富集和/或分离的癌干细胞群体。
在卵巢癌的情况下，术语“铂抗性”是指患有复发性疾病的患者对铂类化疗没有响应(即，疾病进展或稳定的疾病作为最佳响应)，或者如果癌症最初对铂类化疗有响应，但在初次治疗后6个月内复发。大多数复发性卵巢癌患者最终会出现铂抗性。
术语“受试者”是指任何动物(例如，哺乳动物)，其包括但不限于：人、非人类灵长类动物、犬科动物、猫科动物、啮齿动物等，其将是特定治疗的受体。通常，提到人受试者时，术语“受试者”和“患者”在本文中可互换使用。
术语“药学上可接受的”是指联邦政府或州政府的管理机构批准，或在美国药典或其他公认的药典中列出的用于包括人类的动物中的产品或化合物。
术语“药学上可接受的赋形剂、载体或佐剂”或“药学上可接受的载体”指可以与本公开的至少一种结合剂(例如，抗体)一起向受试者施用的赋形剂、载体或佐剂，且其不破坏所述结合剂的活性。当与足以提供治疗效果的剂量的结合剂一起施用时，赋形剂、载体或佐剂应该是无毒的。
术语“有效量”或“治疗有效量”或“治疗效果”是指结合剂、抗体、多肽、多核苷酸、小有机分子或其他药物有效“治疗”受试者或哺乳动物病症或疾病的量。在癌症的情况下，药物(例如，抗体)的治疗有效量具有治疗效果，并且因此可减少肿瘤细胞的数量；降低致瘤性、致瘤频率或致瘤能力；减少癌干细胞的数量或频率；减小肿瘤大小；减少癌细胞群体；抑制和/或停止癌细胞浸润周围器官中，例如包括癌症扩散到软组织和骨中；抑制和停止肿瘤或癌细胞转移；抑制和/或停止肿瘤或癌细胞生长；一定程度上缓解一种或多种与癌症相关的症状；减少发病率和死亡率；改善生活质量；或所述效果的组合。在该试剂(例如抗体)预防癌细胞生长和/或杀死现存癌细胞的程度上，其可被称为具有细胞生长抑制和/或细胞毒性。
术语“治疗中”和“治疗”和“待治疗”和“缓解”和“待缓解”是指以下两方面：1)治愈、减缓、减轻所诊断的病例状况或疾病的症状和/或停止其进展的治疗措施，和2)预防或减缓目标病理状况或疾病的发展的预防或预防性措施。因此，需要治疗的受试者包括已经患有疾病的受试者；倾向于患有疾病的受试者；及要预防其中的疾病的受试者。在某些实施方式中，如果患者显示以下的一种或多种，本文所述方法的受试者被成功“治疗”：肿瘤细胞数量的减少或完全不存在；肿瘤大小的减小；癌细胞浸润到周围器官(包括肿瘤细胞扩散到软组织和骨中)的抑制或不存在；肿瘤或癌细胞转移的抑制或不存在；癌症生长的抑制或不存在；与特定癌症相关的一种或多种症状的缓解；发病率和死亡率的降低；生活品质的改善；致瘤性的降低；癌干细胞数量或频率的减少；或所述效果的某些组合。
“FOLFIRI”是指亚叶酸(LV)、5-氟尿嘧啶(FU)和伊立替康的组合，其中l-LV200mg/m2或dl-LV 400mg/m2进行2小时输注给药，并且伊立替康以180mg/m2同时(例如通过Y型连接器)在500mL 5％葡萄糖中输注90分钟，随后推注FU 400mg/m2并且每2周给予2,400mg/m2～3,000mg/m2的FU输注46小时。
“胰腺癌”或“胰腺肿瘤”是指原发于胰腺的任何癌症或肿瘤。胰腺癌最常见的类型是胰腺腺癌。其他类型的胰腺癌包括胰岛细胞癌、胰腺母细胞瘤和壶腹癌。
“结肠直肠癌”或“结肠直肠肿瘤”是指在大肠(即结肠或直肠)中发展的任何癌症。大多数结肠直肠癌是腺癌。其他类型的结肠直肠癌包括类癌瘤、胃肠道间质瘤和肉瘤。
“卵巢癌”是指在卵巢、输卵管或原发性腹膜中发展并扩散至卵巢的任何癌症。最常见的卵巢癌是卵巢上皮癌。其他卵巢癌包括生殖细胞癌。
“子宫内膜癌”是指在子宫内层中发展的任何癌症。子宫内膜癌包括子宫内膜癌，例如腺癌、癌肉瘤、鳞状细胞癌、未分化的癌、小细胞癌和过渡性癌，其中最常见的是腺癌。
如本公开内容和权利要求中所使用的，单数形式“一个”、“一种”和“所述”包括复数形式，除非上下文另有明确规定。
应当理解的是，每当在本文用措辞“包含”来描述实施方式时，还提供了以“由……组成”和/或“基本上由……组成”描述的其他类似实施方式。还应当理解的是，每当在本文用措辞“基本上由……组成”来描述实施方式时，还提供了以“由……组成”描述的其他类似实施方式。
本文中如“A和/或B”等短语中使用的术语“和/或”旨在包括A和B两者；A或B；A(单独)；和B(单独)。同样，如“A、B和/或C”等短语中使用的术语“和/或”旨在包括以下实施方式中的每一种：A、B和C；A、B或C；A或C；A或B；B或C；A和C；A和B；B和C；A(单独)；B(单独)；及C(单独)。
II.使用方法和药物组合物
本发明的结合(例如，特异性结合)VEGF和/或DLL4的结合剂(包括多肽和抗体)在多种应用中是有用的，其包括但不限于：治疗性治疗方法，诸如癌症治疗，特别是与亚叶酸、5-氟尿嘧啶和伊立替康(例如，用于结肠直肠癌治疗)组合，与紫杉醇(例如，用于诸如铂抗性卵巢癌等卵巢癌的治疗)组合，与吉西他滨和白蛋白结合型紫杉醇(例如，用于胰腺癌治疗)组合，及与紫杉醇和/或卡铂(例如，用于子宫内膜癌治疗)组合。在某些实施方式中，所述肿瘤是铂抗性卵巢癌。在某些实施方式中，所述癌症是子宫内膜癌。在某些实施方式中，所述试剂用于抑制VEGF活性、抑制DLL4诱导的Notch信号传导、抑制肿瘤生长、减小肿瘤体积、降低肿瘤的癌干细胞频率、降低肿瘤的致瘤性、调节患有肿瘤的患者中的血管生成和/或抑制患有肿瘤的患者中的血管生成是有用的。所述使用方法可以是体外、离体或体内方法。在某些实施方式中，VEGF/DLL4结合剂是人VEGF的拮抗剂。在某些实施方式中，VEGF/DLL4结合剂是人DLL4的拮抗剂。在某些实施方式中，VEGF/DLL4结合剂是人VEGF和人DLL4两者的拮抗剂。
本发明提供了使用本文所述的VEGF/DLL4结合剂或抗体抑制肿瘤生长的方法，特别是与FOLFIRI(例如，用于结肠直肠肿瘤治疗)，与紫杉醇(例如，用于诸如铂抗性卵巢癌等卵巢癌的治疗)组合，与吉西他滨和白蛋白结合型紫杉醇(例如，用于胰腺肿瘤治疗)组合，及与紫杉醇和/或卡铂(例如，用于子宫内膜肿瘤治疗)。在某些实施方式中，所述肿瘤是铂抗性卵巢肿瘤。在某些实施方式中，所述肿瘤是子宫内膜肿瘤。在某些实施方式中，抑制肿瘤生长的方法包括使肿瘤细胞与VEGF/DLL4结合剂(例如，抗体)体外接触。例如，在添加有抗VEGF抗体、抗DLL4抗体、抗VEGF/抗DLL4双特异性抗体或治疗剂组合的培养基中培养永生化细胞系或癌细胞系以抑制肿瘤细胞生长。在某些实施方式中，从患者样品(例如，组织活检或血液样品)分离肿瘤细胞，并在添加有VEGF/DLL4结合剂或治疗剂组合的培养基中培养以抑制肿瘤细胞生长。
在某些实施方式中，抑制肿瘤生长的方法包括使肿瘤或肿瘤细胞与VEGF/DLL4结合剂(例如，抗体)体内接触，特别是与FOLFIRI(例如，用于结肠直肠肿瘤治疗)组合，与紫杉醇(例如，用于诸如铂抗性卵巢癌等卵巢癌的治疗)组合，与吉西他滨和白蛋白结合型紫杉醇(例如，用于胰腺肿瘤治疗)组合，及与紫杉醇和/或卡铂(例如，用于子宫内膜肿瘤治疗)组合。在某些实施方式中，所述肿瘤是铂抗性卵巢肿瘤。在某些实施方式中，所述肿瘤是子宫内膜肿瘤。在某些实施方式中，肿瘤或肿瘤细胞与VEGF/DLL4结合剂的接触在动物模型中进行。例如，抗VEGF抗体、抗DLL4抗体、抗VEGF/抗DLL4双特异性抗体或治疗剂组合可以施用至具有肿瘤异种移植物的免疫受损宿主动物(例如NOD/SCID小鼠)。在某些实施方式中，从患者样品(例如，组织活检或血液样品)分离肿瘤细胞和/或癌干细胞，并将其注射到免疫受损的宿主动物(例如NOD/SCID小鼠)中，然后施用VEGF/DLL4结合剂或治疗剂组合来抑制肿瘤细胞生长。在某些实施方式中，在将致瘤细胞引入动物中以防止肿瘤生长的同时或短时间后施用VEGF/DLL4结合剂或治疗剂组合(“预防性模型”)。在某些实施方式中，在肿瘤生长至特定大小后，将VEGF/DLL4结合剂或治疗剂组合作为治疗剂施用(“治疗模型”)。在某些实施方式中，VEGF/DLL4结合剂是特异性结合人VEGF和人DLL4的双特异性抗体。
在某些实施方式中，抑制肿瘤生长的方法包括向受试者施用治疗有效量的VEGF/DLL4结合剂，特别是与FOLFIRI(例如，用于结肠直肠肿瘤治疗)组合，与紫杉醇(例如，用于诸如铂抗性卵巢癌等卵巢癌的治疗)组合，与吉西他滨和白蛋白结合型紫杉醇(例如，用于胰腺癌治疗)组合，和与紫杉醇和/或卡铂(例如，用于子宫内膜肿瘤治疗)组合。在某些实施方式中，所述肿瘤是铂抗性卵巢肿瘤。在某些实施方式中，所述肿瘤是子宫内膜肿瘤。在某些实施方式中，所述受试者是人类。在某些实施方式中，所述受试者患有肿瘤(例如胰腺肿瘤、结肠直肠肿瘤或子宫内膜肿瘤)或已经手术切除了至少一部分肿瘤。在某些实施方式中，所述肿瘤包含癌干细胞。在某些实施方式中，肿瘤中癌干细胞的频率通过施用VEGF/DLL4结合剂或治疗剂组合而降低。本发明还提供了降低肿瘤(例如结肠直肠肿瘤、卵巢肿瘤、胰腺肿瘤或子宫内膜肿瘤)中癌干细胞频率的方法，其包括使肿瘤与有效量的VEGF/DLL4结合剂(例如，抗VEGF/抗DLL4双特异性抗体)或治疗剂组合接触。在某些实施方式中，降低肿瘤中癌干细胞频率的方法包括向患有肿瘤的受试者施用治疗有效量的VEGF/DLL4结合剂或治疗剂组合。
本发明进一步提供了用于治疗癌症的方法，其包括向受试者施用治疗有效量的VEGF/DLL4结合剂，特别是与FOLFIRI(例如，用于结肠直肠肿瘤治疗)组合，与紫杉醇(例如，用于诸如铂抗性卵巢癌等卵巢癌的治疗)组合，与吉西他滨和白蛋白结合型紫杉醇(例如，用于胰腺癌治疗)组合，及与紫杉醇和/或卡铂(例如，用于子宫内膜肿瘤治疗)组合。在某些实施方式中，所述肿瘤是铂抗性卵巢肿瘤。在某些实施方式中，所述肿瘤是子宫内膜肿瘤。在某些实施方式中，VEGF/DLL4结合剂结合VEGF，并且抑制或减少癌症(例如，结肠直肠癌、卵巢癌、胰腺癌或子宫内膜癌)的生长。在某些实施方式中，VEGF/DLL4结合剂结合DLL4，并且抑制或减少癌症生长。在某些实施方式中，VEGF/DLL4结合剂是结合VEGF和DLL4的双特异性抗体，并且抑制或减少癌症生长。在某些实施方式中，VEGF/DLL4结合剂结合VEGF，干扰VEGF/VEGF受体相互作用，并且抑制或减少癌症生长。在某些实施方式中，VEGF/DLL4结合剂结合DLL4，干扰DLL4/Notch相互作用，并且抑制或减少癌症生长。在某些实施方式中，VEGF/DLL4结合剂结合VEGF和DLL4两者，干扰VEGF/VEGF受体相互作用和DLL4/Notch相互作用，并且抑制或减少癌症生长。在某些实施方式中，VEGF/DLL4结合剂结合DLL4，并且降低癌症中癌干细胞的频率。
本发明提供了治疗癌症的方法，其包括向受试者(例如，需要治疗的受试者)施用治疗有效量的VEGF/DLL4结合剂，特别是与FOLFIRI(例如，用于结肠直肠肿瘤治疗)组合，与紫杉醇(例如，用于诸如铂抗性卵巢癌等卵巢癌的治疗)组合，与吉西他滨和白蛋白结合型紫杉醇(例如，用于胰腺癌治疗)组合，及与紫杉醇和/或卡铂(例如，用于子宫内膜肿瘤治疗)组合。在某些实施方式中，所述肿瘤是铂抗性卵巢肿瘤。在某些实施方式中，所述癌症是子宫内膜癌。在某些实施方式中，所述受试者是人。在某些实施方式中，所述受试者患有癌性肿瘤。在某些实施方式中，所述受试者已经手术切除了至少一部分肿瘤(例如，结肠直肠肿瘤，卵巢肿瘤、胰腺肿瘤或子宫内膜肿瘤)。
在某些实施方式中，所述受试者的癌症/肿瘤可能对某些治疗无效。在某些实施方式中，受试者的癌症(或肿瘤)可能是化学难治性的。在那些情况下，本文提供的治疗可以是癌症/肿瘤的二线或三线治疗。在某些实施方式中，受试者的癌症可能对抗VEGF治疗或抗DLL4治疗具有抗性。
在本文所述任何方法的某些实施方式中，VEGF/DLL4结合剂是特异性结合人VEGF和人DLL4的双特异性抗体。在某些实施方式中，所述双特异性抗体包含特异性结合人VEGF的第一抗原结合位点和特异性结合人DLL4的第二抗原结合位点，其中所述第一抗原结合位点包含：包含NYWMH(SEQ ID NO:17)的重链CDR1，包含DINPSNGRTSYKEKFKR(SEQ ID NO:18)的重链CDR2，和包含HYDDKYYPLMDY(SEQ ID NO:19)的重链CDR3，并且第二抗原结合位点包含：包含TAYYIH(SEQ ID NO:13)的重链CDR1，包含YIANYNRATNYNQKFKG(SEQ ID NO:14)，YISSYNGATNYNQKFKG(SEQ ID NO:15)，YIAGYKDATNYNQKFKG(SEQ ID NO:59)或YISNYNRATNYNQKFKG(SEQ ID NO:65)的重链CDR2，和包含RDYDYDVGMDY(SEQ ID NO:16)的重链CDR3；并且其中，所述第一和第二抗原结合位点均包含：包含RASESVDNYGISFMK(SEQ IDNO:20)的轻链CDR1，包含AASNQGS(SEQ ID NO:21)的轻链CDR2，和包含QQSKEVPWTFGG(SEQID NO:22)的轻链CDR3。在某些实施方式中，所述双特异性抗体包含特异性结合人VEGF的第一抗原结合位点和特异性结合人DLL4的第二抗原结合位点，其中所述第一抗原结合位点包含：包含NYWMH(SEQ ID NO:17)的重链CDR1，包含DINPSNGRTSYKEKFKR(SEQ ID NO:18)的重链CDR2，和包含HYDDKYYPLMDY(SEQ ID NO:19)的重链CDR3，并且第二抗原结合位点包含：包含TAYYIH(SEQ ID NO:13)的重链CDR1，包含YISNYNRATNYNQKFKG(SEQ ID NO:65)的重链CDR2，和包含RDYDYDVGMDY(SEQ ID NO:16)的重链CDR3；并且其中，所述第一和第二抗原结合位点均包含：包含RASESVDNYGISFMK(SEQ ID NO:20)的轻链CDR1，包含AASNQGS(SEQ IDNO:21)的轻链CDR2，和包含QQSKEVPWTFGG(SEQ ID NO:22)的轻链CDR3。
在本文所述任何方法的某些实施方式中，VEGF/DLL4双特异性抗体包含：与SEQ IDNO:11具有至少约80％序列同一性的第一重链可变区，与SEQ ID NO:9，SEQ ID NO:10，SEQID NO:58或SEQ ID NO:64具有至少约80％序列同一性的第二重链可变区，和与SEQ ID NO:12具有至少80％序列同一性的第一和第二轻链可变区。在某些实施方式中，VEGF/DLL4双特异性抗体包含：与SEQ ID NO:11就有至少约80％序列同一性的第一重链可变区，与SEQ IDNO:64具有至少约80％序列同一性的第二重链可变区，和与SEQ ID NO:12具有至少80％序列同一性的第一和第二轻链可变区。
在本文所述任何方法的某些实施方式中，VEGF/DLL4结合剂是抗体。在某些实施方式中，VEGF/DLL4结合剂是抗VEGF抗体。在某些实施方式中，抗VEGF抗体抗体219R45。在某些实施方式中，VEGF/DLL4结合剂是抗DLL4抗体。在某些实施方式中，抗DLL4抗体是抗体21R79、抗体21R83或抗体219R45。在某些实施方式中，VEGF/DLL4结合剂是包含来自抗体21R79、抗体21R75或抗体21R83的抗原结合位点的双特异性抗体。在某些实施方式中，VEGF/DLL4结合剂是包含来自抗体219R45的第一抗原结合位点和来自抗体21R79、抗体21M18、抗体21R75或抗体21R83的第二抗原结合位点的双特异性抗体。在某些实施方式中，VEGF/DLL4结合剂是双特异性抗体219R45-MB-21M18(305B18)。在某些实施方式中，VEGF/DLL4结合剂是双特异性抗体219R45-MB-21R79(305B79)。在某些实施方式中，VEGF/DLL4结合剂是双特异性抗体219R45-MB-21R75(305B75)。在某些实施方式中，VEGF/DLL4结合剂是双特异性抗体219R45-MB-21R83(305B83)。
本发明进一步提供了包含所述结合剂与另外的治疗剂(例如，本文所述的另外的治疗剂)组合的药物组合物。在某些实施方式中，所述药物组合物进一步包含药学上可接受的载体。发现这些药物组合物用于在受试者(例如，人类患者)中抑制肿瘤生长(例如，结肠直肠肿瘤、卵巢肿瘤、胰腺肿瘤或子宫内膜肿瘤生长)和/或治疗癌症(例如，结肠直肠癌、卵巢癌、胰腺癌或子宫内膜癌)。
在某些实施方式中，本发明提供了包含双特异性抗体的药物组合物，其中，组合物中至少约90％，至少约95％，至少约98％，至少约99％的抗体是双特异性抗体或异二聚体抗体。在某些实施方式中，所述双特异性抗体是IgG(例如，IgG2或IgG1)抗体。在某些实施方式中，组合物中少于约10％，少于约5％，少于约2％或少于约1％的总抗体是单特异性抗体或同二聚体抗体。在某些实施方式中，组合物中的抗体至少约98％是异二聚体。
在某些实施方式中，通过将本发明的纯化抗体、试剂或治疗剂组合与药学上可接受的载体(例如，载体或赋形剂)组合来制备用于储存和使用的制剂。适合的药学上可接受的载体包括不限于，诸如磷酸盐、柠檬酸盐和其他有机酸等无毒缓冲液；诸如氯化钠等盐；包括抗坏血酸和甲硫氨酸等抗氧化剂；防腐剂(例如十八烷基二甲基苄基氯化铵、六甲基氯化铵、苯扎氯铵、苄索氯铵、苯酚、丁基醇或苄醇、诸如对羟基苯甲酸甲酯或对羟基苯甲酸丙酯等对羟基苯甲酸烷基酯类、儿茶酚、间苯二酚、环己醇、3-戊醇、间甲酚)；低分子量多肽(如小于约10个氨基酸残基)；诸如血清白蛋白、明胶或免疫球蛋白等蛋白质；诸如聚乙烯吡咯烷酮等亲水性聚合物；诸如甘氨酸、谷氨酰胺、天冬酰胺、组氨酸、精氨酸或赖氨酸等氨基酸；诸如单糖、二糖、葡萄糖、甘露糖或糊精等碳水化合物；诸如EDTA等螯合剂；诸如蔗糖、甘露醇、海藻糖或山梨糖醇等糖；诸如钠等成盐抗衡离子；金属络合物(例如Zn-蛋白络合物)；和诸如TWEEN或聚乙二醇(PEG)等非离子型表面活性剂。(Remington:The Science andPractice of Pharmacy,第22版,2012,Pharmaceutical Press,London)。
本发明药物组合物可以以任何种方式施用以用于局部或全身治疗。可以通过经皮或透皮贴剂、软膏、洗剂、霜剂、凝胶剂、滴剂、栓剂、喷雾剂、液体和粉末剂进行局部施用；通过吸入或吹入粉末剂或气溶胶，包括通过喷雾器、气管内和鼻内进行肺部施用；口服；或者包括静脉内、动脉内、肿瘤内、皮下、腹腔内、肌内(例如，注射或输注)或颅内(例如，鞘内或脑室内)的胃肠外施用。
治疗性制剂可以是单位剂型。这样的制剂包括片剂、丸剂、胶囊剂、粉末剂、颗粒剂、水或非水性介质中的溶液或悬浮液，或栓剂。在诸如片剂等固体组合物中，主要活性成分与药物载体混合。常规的压片成分包括玉米淀粉、乳糖、蔗糖、山梨糖醇、滑石、硬脂酸、硬脂酸镁、磷酸二钙或树胶，及稀释剂(例如水)。这些可用于形成包含本发明化合物或其无毒的药学上可接受的盐的均匀混合物的固体预制剂组合物。然后将固体预制剂组合物细分为上述类型的单位剂型。所述制剂或组合物的片剂、丸剂等可以被包衣或以其他方式复合以提供具有延长作用优点的剂型。例如，片剂或丸剂可包含被外部组分覆盖的内部组合物。此外，两个组分可以通过用于抵抗崩解的肠溶层分开，并允许内部组分完整地通过胃或延迟释放。各种材料可用于所述肠溶层或包衣，其包括多种聚合酸，及聚合酸与诸如虫胶、鲸蜡醇和乙酸纤维素等材料的混合物。
本文所述的VEGF/DLL4结合剂、抗体和治疗剂组合还可封装在微胶囊中。例如通过凝聚技术或通过界面聚合制备这种微胶囊，例如分别在胶体药物递送系统(例如，脂质体、白蛋白微球、微乳液、微乳液、纳米颗粒和纳米胶囊)或在Remington:The Science andPractice of Pharmacy，第22版，2012，Pharmaceutical Press，London中所述的大乳液(macroemulsion)中的羟甲基纤维素或明胶微胶囊和聚(甲基丙烯酸甲酯)微胶囊。
在某些实施方式中，药物制剂包括与脂质体复合的本发明的VEGF/DLL4结合剂(例如，抗体)或治疗剂组合。制备脂质体的方法是本领域技术人员已知的。例如，可以通过用包含磷脂酰胆碱、胆固醇和PEG衍生的磷脂酰乙醇胺(PEG-PE)的脂质组合物进行反相蒸发来生成一些脂质体。脂质体通过规定孔径的过滤器挤出以产生具有所需直径的脂质体。
在某些实施方式中，可制备缓释制剂。缓释制剂的适合实例包括包含VEGF/DLL4结合剂(例如，抗体)或治疗剂组合的固体疏水性聚合物的半透性基质，其中该基质为成型品的形式(例如，膜或微胶囊)。缓释基质的另外实例包括聚酯类、如聚(2-羟乙基-甲基丙烯酸酯)或聚(乙烯醇)等水凝胶、聚丙交酯类、L-谷氨酸和7乙基-L-谷氨酸的共聚物、非降解性乙烯-乙酸乙烯酯、诸如LUPRON DEPOTTM(乳酸-乙醇酸共聚物和乙酸亮丙瑞林组成的可注射微球)等可降解性乳酸-乙醇酸共聚物、蔗糖乙酸异丁酸酯和聚-D-(-)-3-羟基丁酸。
III.吉西他滨和的组合
在某些实施方式中，将VEGF/DLL4结合剂(例如，抗VEGF/DLL4双特异性抗体，如305B83)与吉西他滨和组合施用。包括吉西他滨和/>的组合例如可用于治疗胰腺癌。精确的剂量和时机可以由医生确定，或者可以是本文所述的任何给药方案。在具体的实施方式中，VEGF/DLL4结合剂在吉西他滨和/>的三个月、两个月、一个月、三周、两周、一周、三天、两天或一天内施用。
VEGF/DLL4结合剂(例如，305B83)可以以0.1mg/kg～20mg/kg或0.5mg/kg～10mg/kg或约0.5mg/kg、1mg/kg、2.5mg/kg、4mg/kg、5mg/kg、10mg/kg或15mg/kg的剂量施用。在某些实施方式中，所述剂量是3mg/kg、5mg/kg、10mg/kg或15mg/kg。在某些实施方式中，所述剂量是约1mg/kg、2.5mg/kg或5mg/kg。在某些实施方式中，所述剂量约每两周或约每三周施用。在其他实施方式中，所述剂量约每周、每十天、每四周、每六周或每两个月施用。
在某些实施方式中，以50mg/m2～300mg/m2的剂量提供，例如，以约50mg/m2、100mg/m2、125mg/m2、150mg/m2、175mg/m2、200mg/m2、225mg/m2、250mg/m2、260mg/m2、275mg/m2或300mg/m2的剂量每周、每隔一周、每三周、在21天周期的第1天、第8天和第15天或在28天周期的第1天、第8天和第15天施用。通常，/>以静脉内输注方式递送，例如，20分钟～60分钟，例如，30分钟～40分钟或约30分钟。在某些实施方式中，/>在约30分钟内以约260mg/m2的剂量每三周静脉内施用，或在约30分钟内以约100mg/m2的剂量在21天周期的第1天、第8天和第15天静脉内施用。
在具体实施方式中，在30分钟～40分钟内以约125mg/m2在28天周期内的第1天、第8天和第15天静脉内施用，并且在28天周期内的第1天、第8天和第15天在后立刻施用吉西他滨。在这些实施方式中，吉西他滨可以以约1000mg/m2的剂量静脉内施用约30分钟。
在某些实施方式中，吉西他滨以100-2000mg/m2的剂量给药，例如，以约100mg/m2、200mg/m2、300mg/m2、500mg/m2、700mg/m2、1000mg/m2、1250mg/m2、1500mg/m2或2000mg/m2静脉内给药，例如，输注20分钟～60分钟或约30分钟。
IV.亚叶酸、氟尿嘧啶和伊立替康的组合
在某些实施方式中，VEGF/DLL4结合剂(例如，抗VEGF/DLL4双特异性抗体，如305B83)与亚叶酸、氟尿嘧啶和伊立替康组合施用。此组合可用于治疗结肠直肠癌(例如，转移性结肠直肠癌)。精确的剂量和时机可以由医生确定，或者可以是本文所述的任何给药方案。在具体的实施方式中，VEGF/DLL4结合剂在亚叶酸、氟尿嘧啶和伊立替康的三个月、两个月、一个月、三周、两周、一周、三天、两天或一天内施用。
VEGF/DLL4结合剂(例如，305B83)可以以0.1mg/kg～20mg/kg或0.5mg/kg～10mg/kg或约0.5mg/kg、1mg/kg、2.5mg/kg、3mg/kg、4mg/kg、5mg/kg、10mg/kg或15mg/kg的剂量施用。在某些实施方式中，所述剂量是约3mg/kg、5mg/kg、10mg/kg或15mg/kg。在某些实施方式中，所述剂量是约1mg/kg、2.5mg/kg或5mg/kg。在某些实施方式中，所述剂量约每两周或约每三周施用。在其他实施方式中，所述剂量约每周、每十天、每四周、每六周或每两个月施用。
在某些实施方式中，时机和剂量根据Tournigand等.(J.Clin.Oncol.22：229-237，2004)中所述。在这些实施方式中，所述试剂以“FOLFIRI”组合给予，即，其中输注2小时l-亚叶酸200mg/m2或dl-亚叶酸400mg/m2进行给药，并且在500ml 5％的葡萄糖中的伊立替康以180mg/m2输注90分钟同时进行给药(例如，通过Y连接器)，随后通过推注氟尿嘧啶400mg/m2并且每2周输注2,400mg/m2～3,000mg/m2的氟尿嘧啶46小时。
在其他实施方式中，dl-亚叶酸可以以100mg/m2～700mg/m2给予，例如，以约100mg/m2、200mg/m2、250mg/m2、300mg/m2、350mg/m2、400mg/m2、450mg/m2、500mg/m2、600mg/m2或700mg/m2(或者如果使用1-亚叶酸，则以适当的等效剂量给药)。亚叶酸可以通过静脉内输注给药，例如，在0.5小时～3小时内，例如，约0.5小时、1小时、1.5小时、2小时、2.5小时或3小时。伊立替康可以50mg/m2～300mg/m2的剂量施用，例如，以约100mg/m2、125mg/m2、150mg/m2、175mg/m2、180mg/m2、200mg/m2、225mg/m2、250mg/m2、275mg/m2或300mg/m2。伊立替康可以在0.5小时～3小时内施用，例如，约0.5小时、1小时、1.5小时、2小时、2.5小时或3小时。总氟尿嘧啶剂量可以是1000mg/m2～5000mg/m2，例如，约1000mg/m2、1250mg/m2、1500mg/m2、2000mg/m2、2500mg/m2、3000mg/m2、3500mg/m2、4000mg/m2、4500mg/m2或5000mg/m2。所述药物的施用可以例如是每周两次、每周一次、每隔一周一次、每三周一次或每四周一次。
在某些实施方式中，奥沙利铂可以代替伊立替康或与伊立替康一起给药。例如，奥沙利铂可作为FOLFOX4、FOLFOX6或FOLFIRINOX给药方案的一部分施用。
V.与紫杉醇组合
在某些实施方式中，VEGF/DLL4结合剂(例如，抗VEGF/DLL4双特异性抗体诸如305B83)与紫杉醇组合施用。该组合可用于治疗卵巢癌(例如，铂抗性卵巢癌)。在某些实施方式中，所述癌症已经用两种以上先前的疗法(例如，三种先前疗法或四种先前疗法)和/或之前已经用诸如贝伐单抗等抗VEGF剂进行治疗。精确的剂量和时机可以由医生确定，或者可以是本文所述的任何给药方案。在具体的实施方式中，VEGF/DLL4结合剂在紫杉醇的三个月、两个月、一个月、三周、两周、一周、三天、两天或一天内施用。VEGF/DLL4结合剂(例如，305B83)可以以0.1mg/kg～20mg/kg或0.5mg/kg～10mg/kg或约0.5mg/kg、1mg/kg、2.5mg/kg、3mg/kg、4mg/kg、5mg/kg、10mg/kg或15mg/kg的剂量施用。在某些实施方式中，所述剂量是约3mg/kg、5mg/kg、10mg/kg或15mg/kg。在某些实施方式中，所述剂量是约1mg/kg、2.5mg/kg或5mg/kg。在某些实施方式中，所述剂量约每两周或约每三周施用。在其他实施方式中，所述剂量约每周、每十天、每四周、每六周或每两个月施用。
紫杉醇可以175mg/m2的剂量给予，但还可以在50mg/m2～300mg/m2的范围内，例如，约50mg/m2、75mg/m2、100mg/m2、125mg/m2、135mg/m2、150mg/m2、175mg/m2、200mg/m2、225mg/m2、250mg/m2或300mg/m2。紫杉醇可以每周、每两周、每三周、每四周、每个月、每六周或每两个月给药。
V.与紫杉醇和卡铂组合
在某些实施方式中，VEGF/DLL4结合剂(例如，抗VEGF/DLL4双特异性抗体，例如305B83)与紫杉醇和卡铂组合施用。该组合可用于治疗子宫内膜癌。精确的剂量和时机可以由医生确定，或者可以是本文所述的任何给药方案。在具体的实施方式中，VEGF/DLL4结合剂在紫杉醇和卡铂的三个月、两个月、一个月、三周、两周、一周、三天、两天或一天内施用。
VEGF/DLL4结合剂(例如，305B83)可以以0.1mg/kg～20mg/kg或0.5mg/kg～10mg/kg或约0.5mg/kg、1mg/kg、2.5mg/kg、3mg/kg、4mg/kg、5mg/kg、10mg/kg或15mg/kg的剂量施用。在某些实施方式中，所述剂量是约3mg/kg、5mg/kg、10mg/kg或15mg/kg。在某些实施方式中，所述剂量是约1mg/kg、2.5mg/kg或5mg/kg。在某些实施方式中，所述剂量约每两周或约每三周施用。在其他实施方式中，所述剂量约每周、每十天、每四周、每六周或每两个月施用。
在某些实施方式中，卡铂剂量为300mg/m2～500mg/m2。剂量可以基于患者的球囊滤过率并且通常根据曲线下面积(AUC)来描述。如治疗医师所确定的，剂量可以是AUC 4、AUC5或AUC 6。
紫杉醇可以以175mg/m2的剂量进行给药，但还可以在50mg/m2～300mg/m2的范围内，例如，约50mg/m2、75mg/m2、100mg/m2、125mg/m2、135mg/m2、150mg/m2、175mg/m2、200mg/m2、225mg/m2、250mg/m2或300mg/m2。
在具体的实施方式中，卡铂和紫杉醇例如通过静脉内输注施用，例如约每3周施用。在其他实施方式中，约每周、每隔一周、每四周、每六周、每八周或每3个月施用所述药物。
VI.另外的联合治疗
在某些实施方式中，除了施用本文所述的VEGF/DLL4结合剂(例如，抗体)或治疗剂组合，所述方法或治疗可以进一步包括施用至少一种另外的治疗剂。在某些实施方式中，至少一种另外的治疗剂包含1种、2种、3种或更多种另外的治疗剂。
与至少两种治疗剂的联合治疗通常使用通过不同作用机制起作用的试剂，尽管这不是必需的。使用具有不同作用机制的试剂的联合治疗可以导致相加或协同作用。联合治疗可以允许比单一疗法中使用的剂量更低的剂量，由此减少毒性副作用和/或增加至少一种试剂的治疗指数。联合治疗可能会降低抗性癌细胞发展的可能性。在某些实施方式中，联合治疗包含主要影响(例如，抑制或杀死)非致瘤性细胞的治疗剂和主要影响(例如抑制或杀死)致瘤性CSC的治疗剂。
治疗剂的有用类别例如包括：抗微管蛋白剂、奥瑞他汀、DNA小沟结合剂、DNA复制抑制剂、烷基化剂(例如，诸如顺铂、单(铂)、双(铂)和三核铂络合物和卡铂等铂络合物)、蒽环类、抗生素类、抗叶酸剂、抗代谢物类、化疗敏化剂类、杜卡霉素类(duocarmycins)、依托泊苷类、氟化嘧啶类、离子载体类(ionophores)、来红菌素类(lexitropsins)、亚硝脲类、铂醇类、嘌呤抗代谢物类、嘌呤霉素类、放射敏化剂类、甾类化合物、紫杉烷类、拓扑异构酶抑制剂、长春花生物碱等。在某些实施方式中，另外的治疗剂是烷基化剂、抗代谢物、抗有丝分裂物、拓扑异构酶抑制剂或血管生成抑制剂。
可以与VEGF/DLL4结合剂或治疗剂组合一起施用的其他治疗剂包括化疗剂。因此，在某些实施方式中，所述方法或治疗涉及本发明的抗VEGF结合剂或抗体或治疗剂组合与其他化疗剂或多种不同化学治疗剂的混合物联合施用。在某些实施方式中，所述方法或治疗涉及本发明的抗DLL4结合剂或抗体或治疗剂组合与其他化疗剂或多种不同化学治疗剂的混合物联合施用。在某些实施方式中，所述方法或治疗涉及本发明的结合VEGF和DLL4的双特异性抗体或治疗剂组合与其他化疗剂或多种不同化学治疗剂的混合物联合施用。
本方面中有用的化疗剂包括但不限于：诸如噻替派和环磷酰胺(CYTOXAN)等烷化剂；诸如白消安、英丙舒凡和哌泊舒凡等烷基磺酸盐类；诸如苯佐替派、卡波醌、美妥替哌和乌瑞替哌等氮丙啶类；包括六甲蜜胺、三乙烯蜜胺、三乙烯磷酰胺、三乙烯硫代磷酰胺和三羟甲基蜜胺的乙烯亚胺类和甲基蜜胺类；诸如苯丁酸氮芥、萘氮芥、氯代磷酰胺、雌氮芥、异环磷酰胺、氮芥、盐酸氧化氮芥、美法仑、新氮芥、苯芥胆甾醇、泼尼氮芥、曲磷胺、尿嘧啶氮芥等氮芥类；诸如卡莫司汀、氯脲菌素、福莫司汀、洛莫司汀、尼莫司汀、雷莫司汀等亚硝基脲类；诸如阿克拉霉素、放线菌素、安曲霉素、重氮丝氨酸、博莱霉素、放线菌素c、加利车霉素、卡洛比星、洋红霉素、嗜癌霉素、色霉素、放线菌素d、柔红霉素、地托比星、6-重氮基-5-氧代-L-正亮氨酸、多柔比星、表柔比星、依索比星、伊达比星、麻西罗霉素、丝裂霉素、霉酚酸、诺加霉素、橄榄霉素、培洛霉素、泊非霉素、嘌呤霉素、三铁阿霉素、罗多比星、链黑菌素、链脲霉素、杀结核菌素、乌苯美司、净司他丁、佐柔比星等抗生素类；诸如甲氨蝶呤和5-氟尿嘧啶(5-FU)等抗代谢物；诸如二甲叶酸、甲氨蝶呤、蝶罗呤、三甲曲沙等叶酸类似物；诸如氟达拉滨、6-巯基嘌呤、硫咪嘌呤、硫鸟嘌呤等嘌呤类似物；诸如安西他滨、阿扎胞苷、6-阿扎尿苷、卡莫氟、阿糖胞苷、双脱氧尿苷、去氧氟尿苷、依诺他滨、氟尿苷、5-FU等嘧啶类似物；诸如卡普睾酮、丙酸屈他雄酮、环硫雄醇、美雄烷、睾内酯等雄激素类；诸如氨鲁米特、米托坦、曲洛司坦等抗肾上腺素类；诸如亚叶酸等叶酸补充剂；醋葡醛内酯；醒磷酰胺糖苷；氨基酮戊酸；安吖啶；贝曲布辛；比生群；依达曲沙；地磷酰胺；秋水仙胺；地吖醌；依氟鸟氨酸；依利醋铵；依托格鲁；硝酸镓；羟基脲；香菇多糖；氯尼达明；米托胍腙；米托蒽醌；莫哌达醇；硝氨丙吖啶；喷司他丁；蛋氨氮芥；吡柔比星；鬼臼酸；2-乙基肼；丙卡巴肼；PSK；丙亚胺；西佐非兰；锗螺胺；替奴佐酸；三亚胺醌；2,2',2”-三氯三乙胺；乌拉坦；长春地辛；达卡巴嗪；甘露醇氮芥；二溴甘露醇；二溴卫矛醇；哌泊溴烷；盖拓新；阿糖胞苷(Ara-C)；如紫杉醇(TAXOL)和多西他赛(TAXOTERE)等紫杉烷类；苯丁酸氮芥；吉西他滨；6-硫鸟嘌呤；巯基嘌呤；诸如顺铂、卡铂、奥沙利铂等铂类似物；长春碱；铂；依托泊苷(VP-16)；异环磷酰胺；丝裂霉素C；米托蒽醌；长春新碱；长春瑞滨；去甲长春碱；米托蒽醌；替尼泊苷；柔红霉素；氨基蝶呤；伊班膦酸钠；CPT11；拓扑异构酶抑制剂RFS 2000；二氟甲基鸟氨酸(DMFO)；视黄酸；埃斯波霉素；卡培他滨；及上述任何物质的药学上可接受的盐、酸或衍生物。拓扑异构酶抑制剂RFS 2000；二氟甲基鸟氨酸(DMFO)；视黄酸；拉霉素；卡培他滨(XELODA)；及上述任一种的药学上可接受的盐、酸或衍生物。化疗剂还包括用于调节或抑制激素对肿瘤的作用的抗激素剂，诸如抗雌性激素类，其例如包括他莫昔芬、雷洛昔芬、抑制4(5)-咪唑的芳香酶、4-羟基他莫昔芬、曲沃昔芬、盐酸雷洛昔芬、LY117018、奥那司酮和托瑞米芬(F是STON)；及抗雄性激素类，诸如氟他胺、尼鲁米特、比卡鲁胺、亮丙瑞林和戈舍瑞林；及上述任何物质的药学上可接受的盐、酸或衍生物。在某些实施方式中，另外的治疗剂是顺铂。在某些实施方式中，另外的治疗剂是奥沙利铂。在某些实施方式中，另外的试剂是多柔比星(阿霉素)。在某些实施方式中，另外的试剂是表柔比星。
在某些实施方式中，所述化疗剂是拓扑异构酶抑制剂。拓扑异构酶抑制剂是干扰拓扑异构酶(例如，拓扑异构酶I或II)作用的化疗剂。拓扑异构酶抑制剂包括但不限于盐酸多柔比星、柠檬酸柔红霉素、盐酸米托蒽醌、放线菌素D、依托泊苷、盐酸拓扑替康、替尼泊苷(VM-26)和伊立替康，以及任何这些物质的药学上可接受的盐、酸或衍生物。在某些实施方式中，另外的治疗剂是伊立替康。
在某些实施方式中，所述化疗剂是抗代谢药。抗代谢药是具有与正常生化反应所需的代谢物相似结构的化学物质，但是该结构足够不同以干扰细胞的一种或多种正常功能，例如细胞分裂。抗代谢药包括但不限于：吉西他滨、氟尿嘧啶、卡培他滨、甲氨蝶呤钠、雷替曲塞、培美曲塞、替加氟、阿糖胞苷、硫鸟嘌呤、5-氮杂胞苷、6-巯基嘌呤、硫唑嘌呤、6-硫鸟嘌呤、喷司他丁、磷酸氟达拉滨和克拉屈滨，及任何这些物质的药学上可接受的盐、酸或衍生物。在某些实施方式中，另外的治疗剂是5-氟尿嘧啶。在某些实施方式中，另外的试剂为5-氟尿嘧啶和伊立替康。在某些实施方式中，另外的试剂为5-氟尿嘧啶和奥沙利铂。在某些实施方式中，另外的试剂为5-氟尿嘧啶和顺铂。在某些实施方式中，另外的试剂是甲氨蝶呤。
在某些实施方式中，所述化疗剂是抗有丝分裂剂，其包括但不限于：结合微管蛋白的试剂。在某些实施方式中，所述试剂是紫杉烷。在某些实施方式中，所述试剂是紫杉醇或多西他赛或者紫杉醇或多西他赛的药学上可接受的盐、酸或衍生物。在某些实施方式中，所述试剂是紫杉醇(TAXOL)、多西他赛(TAXOTERE)、白蛋白结合型紫杉醇(ABRAXANE)、DHA-紫杉醇或PG-紫杉醇。在某些实施方式中，抗有丝分裂剂包含长春花生物碱，如长春新碱、长春碱(binblastine)、长春瑞滨或长春地辛，或其药学上可接受的盐、酸或衍生物。在某些实施方式中，抗有丝分裂剂是驱动蛋白Eg5的抑制剂或诸如Aurora A或Plk1等有丝分裂激酶的抑制剂。在某些实施方式中，另外的试剂是多西他赛。
在某些实施方式中，另外的治疗剂包含诸如小分子等试剂。例如，治疗治疗可涉及组合施用本发明的VEGF/DLL4结合剂(例如抗体)或治疗剂组合与作为针对另外的肿瘤相关蛋白的抑制剂的小分子的组合施用，所述肿瘤相关蛋白包括但不限于：EGFR、ErbB2、HER2和/或VEGF。在某些实施方式中，另外的治疗剂是抑制癌症干细胞途径的小分子。在某些实施方式中，另外的治疗剂是Notch途径的小分子抑制剂。在某些实施方式中，另外的治疗剂是Wnt途径的小分子抑制剂。在某些实施方式中，另外的治疗剂是BMP途径的小分子抑制剂。在某些实施方式中，另外的治疗剂是抑制β-连环蛋白信号传导的小分子。
在某些实施方式中，其他治疗剂包含生物分子，例如抗体。例如，治疗可涉及本发明的VEGF/DLL4结合剂(例如抗体)或治疗剂组合与另外的针对另外的肿瘤相关蛋白的抗体组合施用，其包括但不限于：结合EGFR、ErbB2、HER2、VEGF和/或VEGF受体的抗体。在某些实施方式中，另外的治疗剂是抗HER2抗体曲妥珠单抗。在某些实施方式中，另外的治疗剂是抗VEGFR-2抗体雷莫芦单抗。在某些实施方式中，另外的治疗剂是作为抗癌干细胞标志物抗体的抗体。在某些实施方式中，另外的治疗剂是结合Notch途径组分的抗体。在某些实施方式中，另外的治疗剂是结合Wnt途径组分的抗体。在某些实施方式中，另外的治疗剂是抑制癌干细胞途径的抗体。在某些实施方式中，另外的治疗剂是Notch途径的抗体抑制剂。在某些实施方式中，另外的治疗剂是Wnt途径的抗体抑制剂。在某些实施方式中，另外的治疗剂是BMP途径的抗体抑制剂。在某些实施方式中，另外的治疗剂是抑制β-连环蛋白信号传导的抗体。在某些实施方式中，另外的治疗剂是血管生成抑制剂或调节剂的抗体(例如，抗VEGF或VEGF受体抗体)。在某些实施方式中，另外的治疗剂是贝伐单抗(AVASTIN)、曲妥珠单抗(HERCEPTIN)、帕尼单抗(VECTIBIX)或西妥昔单抗(ERBITUX)。
此外，用本文所述的VEGF/DLL4结合剂或治疗剂组合进行的治疗可以包括用其他生物分子的进一步治疗，其他生物分子例如为一种或多种细胞因子(例如淋巴因子、白细胞介素、肿瘤坏死因子和/或生长因子)，或者可以伴随手术去除肿瘤、癌细胞或者治疗医生认为必要的任何其他治疗。
应当理解的是，VEGF/DLL4结合剂或治疗剂组合和另外的治疗剂可以以任何顺序或同时施用。在某些实施方式中，使用VEGF/DLL4结合剂(例如，抗体)的治疗可在施用化学疗法之前、同时或之后发生。组合施用可以包括以单个药物制剂或使用分开的制剂的共同施用，或者以任何顺序连续施用，但通常在一段时间内，使得所有活性剂可以同时发挥其生物学活性。这些化疗剂的制备和给药方案可以根据制造商的说明使用，或由本领域技术人员根据经验确定。所述化学疗法的制备和给药方案也描述于The Chemotherapy SourceBook，第4版，2008，M.C.Perry编，Lippincott，Williams&Wilkins，Philadelphia，PA。
在某些实施方式中，VEGF/DLL4结合剂或治疗剂组合和另外的治疗剂将基本上同时或同时施用。例如，受试者在经历用另外的治疗剂(例如，化疗)治疗过程的同时给予VEGF/DLL4结合剂(例如，抗体)或治疗剂组合。在某些实施方式中，VEGF/DLL4结合剂将在用另外的治疗剂治疗的1年内施用。在某些替代实施方式中，VEGF/DLL4结合剂将在用另外的治疗剂的任何治疗的10个月、8个月、6个月、4个月或2个月内施用。在某些其他实施方式中，VEGF/DLL4结合剂将在用另外的治疗剂的任何治疗的4周、3周、2周或1周内施用。在某些实施方式中，VEGF/DLL4结合剂将在用另外的治疗剂的任何治疗的5天、4天、3天、2天或1天内施用。应进一步理解的是，所述试剂或治疗可在数小时或数分钟内(即，基本上同时)向受试者施用。
在某些实施方式中，癌症治疗涉及本发明的VEGF/DLL4结合剂(例如抗体)或治疗剂组合与放疗组合施用。使用VEGF/DLL4结合剂或治疗剂组合的治疗可以在施用放疗之前、同时或之后进行。有经验的医务人员可以确定所述放疗的给药方案。
在某些实施方式中，癌症治疗涉及本发明的VEGF/DLL4结合剂(例如抗体)或治疗剂组合与外科手术过程的组合施用。使用VEGF/DLL4结合剂或治疗剂组合的治疗可在外科手术过程之前、同时或之后进行。
对于癌症的治疗，本发明的VEGF/DLL4结合剂(例如，抗体)或治疗剂组合的合适剂量取决于癌症的严重程度和过程，癌症的反应性，是否出于治疗或预防目的施用VEGF/DLL4结合剂或抗体或治疗剂组合，患者已经接受过的先前治疗，患者的临床病史等等，所有这些都由治疗医师决定。VEGF/DLL4结合剂或抗体或治疗剂组合可以一次施用或作为一系列治疗分散在几天到几个月，或直到实现治愈或达到疾病状态的减轻(例如，肿瘤大小的减小)。最佳给药方案可以从患者体内药物积聚的测量来计算，并且将根据个体抗体或试剂的相对效能而变化。主治医师可以确定最佳剂量，给药方法和重复率。
在某些实施方式中，VEGF/DLL4结合剂或抗体的剂量为约0.01μg～约100mg/kg体重，约0.1μg～约100mg/kg体重，约1μg～约100mg/kg体重，约1mg～约100mg/kg体重，约1mg～约80mg/kg体重，约10mg～约100mg/kg体重，约10mg～约75mg/kg体重或约10mg～约50mg/kg体重。在某些实施方式中，所述抗体或其他VEGF/DLL4结合剂的剂量为约0.1mg～约20mg/kg体重。在某些实施方式中，剂量可以每天、每周、每月或每年给予一次或多次。在某些实施方式中，抗体或其他VEGF/DLL4结合剂每周给予一次、每两周一次、每三周一次或每月一次。
在某些实施方式中，VEGF/DLL4结合剂(例如，抗体)可以以最初较高的“加载(loading)”剂量施用，随后施用一次或多次较低剂量。在某些实施方式中，还可以改变施用频率。在某些实施方式中，给药方案可以包括施用初始剂量，随后每周一次、每2周一次、每3周一次或每月一次施用另外的剂量(或“维持”剂量)。例如，给药方案可以包括施用初始加载剂量，随后每周施用维持剂量，例如初始剂量一半。或者给药方案可以包括施用初始加载剂量，随后施用维持剂量，例如每隔一周施用初始剂量的一半。或者给药方案可以包括在3周中施用三次初始剂量，随后施用维持剂量，例如每隔一周施用相同量的维持剂量。或者给药方案施用初始剂量，随后每3周一次或每月一次施用另外的剂量。治疗医生可以基于测量的体液或组织中药物的停留时间和浓度来估计给药重复率。治疗的进展可以通过常规技术和分析进行监测。
如本领域技术人员已知的，任何治疗剂的施用可导致副作用和/或毒性。在某些情况下，副作用和/或毒性非常严重，以致于排除以治疗有效剂量施用特定试剂。在某些情况下，必须停止药物治疗，并且可以尝试其他试剂。然而，相同治疗类别中的许多试剂经常显示相似的副作用和/或毒性，这意味着患者必须停止治疗，或者如果可能，承受与治疗剂相关的不愉快的副作用。
来自治疗剂的副作用可以包括但不限于：荨麻疹、皮疹、瘙痒、恶心、呕吐、食欲下降、腹泻、寒战、发烧、疲劳、肌肉疼痛、头痛、低血压、高血压、低钾血症、低血量、出血和心脏问题。
因此，本发明的一个方面涉及治疗患者的癌症(例如结肠直肠癌、卵巢癌、胰腺癌或子宫内膜癌)的方法，其包括使用间歇给药方案施用抗VEGF/抗DLL4双特异性抗体或治疗剂组合，其可以减少与施用抗VEGF/抗DLL4双特异性抗体或治疗剂组合相关的副作用和/或毒性。如本文所用，“间歇给药”是指使用多于每周一次的给药间隔的给药方案，例如每2周给药一次，每3周一次，每4周一次等。在某些实施方式中，用于治疗人类患者癌症的方法包括：根据间歇给药方案向患者施用有效量的抗VEGF/抗DLL4双特异性抗体或治疗剂组合。在某些实施方式中，用于治疗人类患者癌症的方法包括：根据间歇给药方案向患者施用有效量的抗VEGF/抗DLL4双特异性抗体或治疗剂组合，并增加抗VEGF/抗DLL4双特异性抗体或治疗剂组合的治疗指数。在某些实施方式中，间歇给药方案包括向患者施用初始剂量的抗VEGF/抗DLL4双特异性抗体或治疗剂组合，和约每2周一次施用后续剂量的抗VEGF/抗DLL4双特异性抗体或治疗剂组合。在某些实施方式中，间歇给药方案包括：向患者施用初始剂量的抗VEGF/抗DLL4双特异性抗体或治疗剂组合，和约每3周一次施用后续剂量的抗VEGF/抗DLL4双特异性抗体或治疗剂组合。在某些实施方式中，间歇给药方案包含向患者施用初始剂量的抗VEGF/抗DLL4双特异性抗体或治疗剂组合，和约每4周一次施用后续剂量的抗VEGF/抗DLL4双特异性抗体或治疗剂组合。
在某些实施方式中，间歇给药方案中的后续剂量与与初始剂量大约相同或小于初始剂量。在其他实施方式中，后续剂量的量大于初始剂量。如本领域技术人员所知，使用的剂量将根据要实现的临床目标而变化。在某些实施方式中，初始剂量为约0.25mg/kg～约20mg/kg。在某些实施方式中，初始剂量为约0.5mg/kg、1mg/kg、2mg/kg、3mg/kg、4mg/kg、5mg/kg、6mg/kg、7mg/kg、8mg/kg、9mg/kg、10mg/kg、11mg/kg、12mg/kg、13mg/kg、14mg/kg、15mg/kg、16mg/kg、17mg/kg、18mg/kg、19mg/kg或20mg/kg。在某些实施方式中，初始剂量为约0.5mg/kg。在某些实施方式中，初始剂量为约1mg/kg。在某些实施方式中，初始剂量为约2.5mg/kg。在某些实施方式中，初始剂量为约5mg/kg。在某些实施方式中，初始剂量为约7.5mg/kg。在某些实施方式中，初始剂量为约10mg/kg。在某些实施方式中，初始剂量为约12.5mg/kg。在某些实施方式中，初始剂量为约15mg/kg。在某些实施方式中，初始剂量为约20mg/kg。在某些实施方式中，后续剂量为约0.25mg/kg～约15mg/kg。在某些实施方式中，后续剂量为约0.5mg/kg、1mg/kg、2mg/kg、3mg/kg、4mg/kg、5mg/kg、6mg/kg、7mg/kg、8mg/kg、9mg/kg、10mg/kg、11mg/kg、12mg/kg、13mg/kg、14mg/kg或15mg/kg。在某些实施方式中，后续剂量为约0.5mg/k。在某些实施方式中，后续剂量为约1mg/kg。在某些实施方式中，后续剂量为约2.5mg/kg。在某些实施方式中，后续剂量为约5mg/kg。在某些实施方式中，后续剂量为约7.5mg/kg。在某些实施方式中，后续剂量为约10mg/kg。在某些实施方式中，后续剂量为约12.5mg/kg。
在某些实施方式中，给药方案可限于特定次数的施用或“周期”。在某些实施方式中，本文所述的抗体施用3、4、5、6、7、8或更多个周期。在某些实施方式中，本文所述的抗体与间歇给药组合施用3、4、5、6、7、8或更多个以上周期。例如，抗体每3周施用6个周期，抗体每4周施用6个周期，抗体每3周施用4个周期，抗体每4周施用4个周期等。给药方案可以由本领域技术人员决定并随后修改。
初始剂量和后续剂量的递送方法的选择根据动物或人类患者耐受将抗VEGF/抗DLL4双特异性抗体引入体内的能力进行。因此，在本文所述的任何方面和/或实施方式中，抗VEGF/抗DLL4双特异性抗体的施用可以通过静脉内注射或静脉内施用。在某些实施方式中，所述施用是通过静脉内输注。在本文所述的任何方面和/或实施方式中，抗VEGF/抗DLL4双特异性抗体的施用可以通过非静脉内途径施用。
III.抗体
本文所述的方法、组合物和试剂盒包括特异性结合人VEGF蛋白和/或人DLL4蛋白的试剂。本文将这些试剂称为“VEGF/DLL4结合剂”。短语“VEGF/DLL4结合剂”包括仅结合VEGF的试剂，仅结合DLL4的试剂，和结合VEGF和DLL4两者的双特异性试剂。在某些实施方式中，除了特异性结合VEGF和/或DLL4，VEGF/DLL4结合剂进一步特异性结合至少一种另外的靶标或抗原。在某些实施方式中，VEGF/DLL4结合剂是抗体。在某些实施方式中，VEGF/DLL4结合剂是多肽。在某些实施方式中，VEGF/DLL4结合剂特异性结合人VEGF。在某些实施方式中，VEGF/DLL4结合剂特异性结合人DLL4。在某些实施方式中，VEGF/DLL4结合剂是双特异性抗体，其包括诸如双重可变结构域免疫球蛋白等分子(DVD-Igs；例如参见，Jakob等.，MAbs5：358-63，2013)。在某些实施方式中，VEGF/DLL4结合剂是特异性结合人VEGF和人DLL4的双特异性抗体。人VEGF(VEGF-A)和人DLL4的全长氨基酸(aa)序列是本领域已知的，并在本文中以SEQ ID NO:27(VEGF)和SEQ ID NO:23(DLL4)提供。
在某些实施方式中，VEGF/DLL4结合剂或抗体以约1μM以下、约100nM以下、约40nM以下、约20nM以下、约10nM以下、约1nM以下或约0.1nM以下的解离常数(KD)结合VEGF和/或DLL4。在某些实施方式中，VEGF/DLL4结合剂或抗体以约20nM以下的KD结合VEGF和/或DLL4。在某些实施方式中，VEGF/DLL4结合剂或抗体以约10nM以下的KD结合VEGF和/或DLL4。在某些实施方式中，VEGF/DLL4结合剂或抗体以约1nM以下的KD结合VEGF和/或DLL4。在某些实施方式中，VEGF/DLL4结合剂或抗体以约0.1nM以下的KD结合VEGF和/或DLL4。在某些实施方式中，VEGF/DLL4结合剂以约100nM以下的KD结合人VEGF和小鼠VEGF两者。在某些实施方式中，VEGF/DLL4结合剂以约50nM以下的KD结合人VEGF和小鼠VEGF两者。在某些实施方式中，VEGF/DLL4结合剂以约100nM以下的KD结合人DLL4和小鼠DLL4两者。在某些实施方式中，VEGF/DLL4结合剂以约50nM以下的KD结合人DLL4和小鼠DLL4两者。在某些实施方式中，所述结合剂(例如，抗体)与VEGF的解离常数是使用包含固定在Biacore芯片上的至少一部分VEGF的VEGF融合蛋白测定的解离常数。在某些实施方式中，所述结合剂(例如，抗体)与DLL4的解离常数是使用包含固定在Biacore芯片上的至少一部分DLL4的DLL4-融合蛋白测定的解离常数。
在某些实施方式中，VEGF/DLL4结合剂是包含特异性结合VEGF的第一抗原结合位点和特异性结合DLL4的第二抗原结合位点的双特异性抗体。在某些实施方式中，VEGF/DLL4结合剂或抗体以约100nM以下的KD结合VEGF和DLL4两者。在某些实施方式中，VEGF/DLL4结合剂或抗体以约50nM以下的KD结合VEGF和DLL4两者。在某些实施方式中，VEGF/DLL4结合剂或抗体以约20nM以下的KD结合VEGF和DLL4两者。在某些实施方式中，VEGF/DLL4结合剂或抗体以约10nM以下的KD结合VEGF和DLL4两者。在某些实施方式中，VEGF/DLL4结合剂或抗体以约1nM以下的KD结合VEGF和DLL4两者。在某些实施方式中，抗原结合位点之一的亲和力可以弱于其他抗原结合位点的亲和力。例如，一个抗原结合位点的KD可以为约1nM且第二抗原结合位点的KD可以为约10nM。在某些实施方式中，两个抗原结合位点之间的亲和力差异可以为约2倍以上，约3倍以上，约5倍以上，约8倍以上，约10倍以上，约15倍以上，约20倍以上，约30倍以上，约50倍以上或约100倍以上。两个抗原结合位点的亲和力的调节可以影响双特异性抗体的生物学活性。例如，降低抗原结合位点对DLL4或VEGF的亲和力可能具有期望的作用，例如结合剂的毒性降低或治疗指数增加。
作为非限制性实例，所述双特异性抗体可以包含(a)以约0.1nM～约1.0nM的KD结合人VEGF的第一抗原结合位点，和(b)以约0.1nM～约20nM、约0.5nM～约20nM、约1.0nM～10nM的KD特异性结合人DLL4的第二抗原结合位点。在某些实施方式中，所述双特异性抗体包含两个相同的轻链。
在某些实施方式中，VEGF/DLL4结合剂(例如，抗体)以约1μM以下，约100nM以下，约40nM以下，约20nM以下，约10nM以下，约1nM以下或约0.1nM以下的半数有效浓度(EC50)结合VEGF和/或DLL4。在某些实施方式中，VEGF/DLL4结合剂(例如，抗体)以约1μM以下，约100nM以下，约40nM以下，约20nM以下，约10nM以下，约1nM以下或约0.1nM以下的半最大有效浓度(EC50)结合VEGF和/或DLL4。
在某些实施方式中，VEGF/DLL4结合剂是抗体。在某些实施方式中，所述抗体是重组抗体。在某些实施方式中，所述抗体是单克隆抗体。在某些实施方式中，所述抗体是嵌合抗体。在某些实施方式中，所述抗体是人源化抗体。在某些实施方式中，所述抗体是人抗体。在某些实施方式中，所述抗体是IgA、IgD、IgE、IgG或IgM抗体。在某些实施方式中，所述抗体是IgG1抗体。在某些实施方式中，所述抗体是IgG2抗体。在某些实施方式中，所述抗体是包含抗原结合位点的抗体片段。在某些实施方式中，所述抗体是双特异性抗体。在某些实施方式中，所述抗体是单价、单特异性、二价或多特异性的。在某些实施方式中，所述抗体与细胞毒性部分缀合。在某些实施方式中，所述抗体是分离的。在某些实施方式中，所述抗体是基本上纯的。
可以通过本领域已知的任何方法测定本发明的VEGF/DLL4结合剂(例如，抗体)的特异性结合。可以使用的免疫测定包括但不限于：使用诸如Biacore分析、FACS分析、免疫荧光、免疫细胞化学、Western印迹分析、放射免疫测定、ELISA、“夹心”免疫测定、免疫沉淀测定、沉淀反应、凝胶扩散沉淀素反应、免疫扩散测定、凝集测定、补体固定测定、免疫放射测定、荧光免疫测定、均相时间分辨荧光测定(HTRF)和蛋白A免疫测定等技术的竞争性和非竞争性测定系统。这样的测定法是常规的并且是本领域公知的(例如参见，Ausubel等编，1994至今，Current Protocols in Molecular Biology，John Wiley&Sons，Inc.，New York，NY)。
例如，可使用ELISA测定抗体与人VEGF和/或人DLL4的特异性结合。ELISA测定包括制备抗原，用抗原包被96孔微量滴定板的孔，向孔中加入与诸如酶底物等可检测化合物缀合的抗体或其他结合剂(例如辣根过氧化物酶或碱性磷酸酶)，温育一段时间，并检测与抗原结合的结合剂的存在。在某些实施方式中，所述结合剂或抗体不与可检测化合物缀合，而是缀合识别所述结合剂或抗体的第二抗体(例如，抗Fc抗体)，并且与添加到孔中的可检测化合物缀合。在某些实施方式中，代替使用抗原包被孔，可将所述结合剂或抗体包被到孔中，并且可在向包被过的孔中加入抗原后加入与可检测化合物缀合的第二抗体。本领域技术人员将了解，可以修改以增加检测信号的参数及本领域已知的ELISA的其他变体。
在另一个实例中，可使用FACS确定抗体与人VEGF和/或人DLL4的特异性结合。FACS筛选测定可包括产生表达抗原的cDNA构建体作为融合蛋白，将构建体转染到细胞中，在细胞表面上表达抗原，混合所述结合剂或抗体与转染的细胞，并且温育一段时间。通过使用与可检测化合物缀合的第二抗体(例如，PE-缀合的抗Fc抗体)和流式细胞仪可鉴定由所述结合剂或抗体结合的细胞。本领域技术人员将了解，可以修改以优化所检测信号的参数及可以增强筛选(例如筛选阻断抗体)的FACS的其他变体。
抗体或其他结合剂对抗原(例如，VEGF或DLL4)的结合亲和力和抗体-抗原相互作用的解离速率可通过竞争性结合测定来确定。竞争性结合测定的一个实例是放射免疫测定，其包括在增加量的未标记抗原存在下，将标记抗原(例如，3H或125I)或其片段或变体与感兴趣的抗体温育，然后检测抗体与标记抗原结合。抗体对抗原的亲和力和结合解离速率可以通过Scatchard图分析的数据确定。在某些实施方式中，使用Biacore动力学分析来确定结合抗原(例如，VEGF或DLL4)的抗体或试剂的结合和结合速率。Biacore动力学分析包括分析来自芯片的抗体与固定化抗原(例如，VEGF或DLL4)在其表面上的结合和解离。
在某些实施方式中，本发明提供了一种特异性结合人VEGF的VEGF结合剂(例如，抗体)，其中，VEGF结合剂(例如，抗体)包含抗体219R45的一个、两个、三个、四个、五个和/或六个CDR(参见表1)。在某些实施方式中，VEGF结合剂包含219R45的一个或多个CDR，219R45的两个以上CDR，219R45的三个以上CDR，219R45的四个以上CDR，219R45的五个以上CDR或219R45的全部六个CDR。在某些实施方式中，VEGF结合剂结合人VEGF和小鼠VEGF。
表1
在某些实施方式中，本发明提供了一种特异性结合人VEGF的VEGF结合剂(例如，抗体)，其中，VEGF结合剂包含：包含NYWMH(SEQ ID NO:17)的重链CDR1，包含DINPSNGRTSYKEKFKR(SEQ ID NO:18)的重链CDR2，和包含HYDDKYYPLMDY(SEQ ID NO:19)的重链CDR3。在某些实施方式中，VEGF结合剂进一步包含：包含RASESVDNYGISFMK(SEQ ID NO:20)的轻链CDR1，包含AASNQGS(SEQ ID NO:21)的轻链CDR2，和包含QQSKEVPWTFGG(SEQ IDNO:22)的轻链CDR3。在某些实施方式中，VEGF结合剂包含：(a)包含NYWMH(SEQ ID NO:17)的重链CDR1，包含DINPSNGRTSYKEKFKR(SEQ ID NO:18)的重链CDR2，和包含HYDDKYYPLMDY(SEQID NO:19)的重链CDR3，和(b)包含RASESVDNYGISFMK(SEQ ID NO:20)的轻链CDR1，包含AASNQGS(SEQ ID NO:21)的轻链CDR2，和包含QQSKEVPWTFGG(SEQ ID NO:22)的轻链CDR3。
在某些实施方式中，本发明提供了一种特异性结合人VEGF的VEGF结合剂(例如，抗体)，其中，VEGF结合剂包含：(a)包含NYWMH(SEQ ID NO:17)或其包含1个、2个、3个或4个氨基酸取代的变体的重链CDR1；(b)包含DINPSNGRTSYKEKFKR(SEQ ID NO:18)或其包含1个、2个、3个或4个氨基酸取代的变体的重链CDR2；(c)包含HYDDKYYPLMDY(SEQ ID NO:19)或其包含1个、2个、3个或4个氨基酸取代的变体的重链CDR3；(d)包含RASESVDNYGISFMK(SEQ IDNO:20)或其包含1个、2个、3个或4个氨基酸取代的变体的轻链CDR1；(e)包含AASNQGS(SEQID NO:21)或其包含1个、2个、3个或4个氨基酸取代的变体的轻链CDR2；及(f)包含QQSKEVPWTFGG(SEQ ID NO:22)或其包含1个、2个、3个或4个氨基酸取代的变体的轻链CDR3。在某些实施方式中，所述氨基酸取代为保守性取代。
在某些实施方式中，本发明提供了一种特异性结合VEGF的VEGF结合剂(例如，抗体)，其中，VEGF结合剂包含与SEQ ID NO:11具有至少约80％序列同一性的重链可变区，和与SEQ ID NO:12具有至少80％序列同一性的轻链可变区。在某些实施方式中，VEGF结合剂包含与SEQ ID NO:11具有至少约85％，至少约90％，至少约95％，至少约97％或至少约99％序列同一性的重链可变区。在某些实施方式中，VEGF结合剂包含与SEQ ID NO:12具有至少约85％，至少约90％，至少约95％，至少约97％或至少约99％序列同一性的轻链可变区。在某些实施方式中，VEGF结合剂包含与SEQ ID NO:11具有至少约95％序列同一性的重链可变区，和与SEQ ID NO:12具有至少约95％序列同一性的轻链可变区。在某些实施方式中，VEGF结合剂包含：包含SEQ ID NO:11重链可变区，和包含SEQ ID NO:12的轻链可变区。在某些实施方式中，VEGF结合剂包含基本上由SEQ ID NO:11组成的重链可变区，和基本上由SEQ IDNO:12组成的轻链可变区。在某些实施方式中，VEGF结合剂包含：包含SEQ ID NO:49的重链，和包含SEQ ID NO:8的轻链。在某些实施方式中，VEGF结合抗体或其他试剂包含：包含SEQIDNO:7的重链，和包含SEQ ID NO:8的轻链。
在某些实施方式中，VEGF结合剂以约10nM以下的KD结合VEGF。在某些实施方式中，VEGF结合剂以约1nM以下的KD结合VEGF。在某些实施方式中，VEGF结合剂以约0.1nM以下的KD结合VEGF。在某些实施方式中，VEGF结合剂以约0.01nM以下的KD结合VEGF。在某些实施方式中，VEGF结合剂的至少一个CDR中的至少一个氨基酸残基被不同的氨基酸取代，从而改变VEGF结合剂对VEGF的亲和力。在某些实施方式中，VEGF结合剂的亲和力增加。在某些实施方式中，VEGF结合剂的亲和力降低。在某些实施方式中，VEGF结合剂结合人VEGF。在某些实施方式中，VEGF结合剂结合人VEGF和小鼠VEGF。
在某些实施方式中，VEGF结合剂包含219R45抗体的重链可变区和轻链可变区。在某些实施方式中，VEGF结合剂包含219R45抗体的重链和轻链(具有或不具有前导序列)。在某些实施方式中，VEGF结合剂是219R45抗体。在某些实施方式中，VEGF结合剂包含与由ATCC专利保藏号PTA-13236保藏的质粒编码的多肽相同的重链可变区。将质粒PTA-13236根据布达佩斯条约的条件于2012年9月21日保藏于美国典型培养物保藏中心(ATCC)，10801University Boulevard，Manassas，VA，20110。在某些实施方式中，VEGF结合剂包含与由ATCC专利保藏号PTA-13235保藏的质粒编码的多肽相同的轻链可变区。将质粒PTA-13235根据布达佩斯条约的条件于2012年9月21日保藏于ATCC，10801University Boulevard，Manassas，VA，20110。在某些实施方式中，VEGF结合剂包含由ATCC专利保藏号PTA-13236保藏的质粒编码的多肽相同的重链可变区和由ATCC专利保藏号PTA-13235保藏的质粒编码的多肽相同的轻链可变区。
在某些实施方式中，VEGF结合剂包含抗体219R45，基本上由抗体219R45组成或由抗体219R45组成。
在某些实施方式中，VEGF结合剂(例如，抗体)与本发明的抗体结合VEGF上的相同表位或基本上相同的表位。在另一个实施方式中，VEGF结合剂是抗体，其所结合的VEGF上的表位与由本发明的抗体结合的VEGF上的表位重叠。在某些实施方式中，VEGF结合剂(例如，抗体)与抗体219R45结合VEGF上相同的表位或基本上相同的表位。在另一个实施方式中，VEGF结合剂是抗体，其所结合的VEGF上的表位与抗体219R45结合的VEGF上的表位重叠。
在某些实施方式中，VEGF结合剂抑制VEGF与至少一种VEGF受体的结合。在某些实施方式中，VEGF结合剂抑制人VEGF与VEGFR-1或VEGFR-2的结合。在某些实施方式中，VEGF结合剂特异性结合VEGF并调节血管生成。在某些实施方式中，VEGF结合剂特异性结合VEGF并抑制血管生成。在某些实施方式中，VEGF结合剂特异性结合VEGF并抑制肿瘤生长。
在某些实施方式中，本发明提供了一种特异性结合人DLL4的DLL4结合剂(例如，抗体)，其中，DLL4结合剂(例如，抗体)包含抗体21R79的一个、两个、三个、四个、五个和/或六个CDR(参见表2)。在某些实施方式中，DLL4结合剂包含21R79的一个或多个CDR，21R79的两个以上CDR，21R79的三个以上CDR，21R79的四个以上CDR，21R79的五个以上CDR或21R79的全部六个CDR。在某些实施方式中，本发明提供了一种特异性结合人DLL4的DLL4结合剂(例如，抗体)，其中，DLL4结合剂(例如，抗体)包含21R75的一个、两个、三个、四个、五个和/或六个抗体CDR(参见表2)。在某些实施方式中，DLL4结合剂包含21R75的一个或多个CDR，21R75的两个以上CDR，21R75的三个以上CDR，21R75的四个以上CDR，21R75的五个以上CDR或21R75的全部六个CDR。在某些实施方式中，本发明提供了一种特异性结合人DLL4的DLL4结合剂(例如，抗体)，其中，DLL4结合剂(例如，抗体)包含抗体21R83的一个、两个、三个、四个、五个和/或六个CDR(参见表2)。在某些实施方式中，DLL4结合剂包含21R83的一个或多个CDR，21R83的两个以上CDR，21R83的三个以上CDR，21R83的四个以上CDR，21R83的五个以上CDR或21R83的全部六个CDR。在某些实施方式中，DLL4结合剂结合人DLL4和小鼠DLL4。
表2
在某些实施方式中，DLL4-结合抗体的重链CDR1是包含AYYIH(SEQ ID NO:79)的最小HC CDR1。
在某些实施方式中，所述结合剂是结合人DLL4的抗体，并且包含：包含TAYYIH(SEQID NO:13)或AYYIH(SEQ ID NO:79)的重链CDR1，包含YIX1X2YX3X4ATNYNQKFKG(SEQ ID NO:80)的重链CDR2，其中，X1是丝氨酸或丙氨酸，X2是丝氨酸、天冬酰胺或甘氨酸，X3是天冬酰胺或赖氨酸，且X4是甘氨酸、精氨酸或天冬氨酸，和包含RDYDYDVGMDY(SEQ ID NO:16)的重链CDR3；及包含RASESVDNYGISFMK(SEQ ID NO:20)的轻链CDR1，包含AASNQGS(SEQ ID NO:21)的轻链CDR2，和包含QQSKEVPWTFGG(SEQ ID NO:22)的轻链CDR3。
在某些实施方式中，本发明提供了一种特异性结合人DLL4的DLL4结合剂(例如，抗体)，其中，DLL4结合剂包含：包含TAYYIH(SEQ ID NO:13)的重链CDR1，包含YIANYNRATNYNQKFKG(SEQ ID NO:14)的重链CDR2，和包含RDYDYDVGMDY(SEQ ID NO:16)的重链CDR3。在某些实施方式中，DLL4结合剂进一步包含：包含RASESVDNYGISFMK(SEQ ID NO:20)的轻链CDR1，包含AASNQGS(SEQ ID NO:21)的轻链CDR2，和包含QQSKEVPWTFGG(SEQ IDNO:22)的轻链CDR3。在某些实施方式中，DLL4结合剂包含：(a)包含TAYYIH(SEQ ID NO:13)的重链CDR1，包含YIANYNRATNYNQKFKG(SEQ ID NO:14)的重链CDR2，和包含RDYDYDVGMDY(SEQ ID NO:16)的重链CDR3，和(b)包含RASESVDNYGISFMK(SEQ ID NO:20)的轻链CDR1，包含AASNQGS(SEQ ID NO:21)的轻链CDR2，和包含QQSKEVPWTFGG(SEQ ID NO:22)的轻链CDR3。
在某些实施方式中，本发明提供了一种特异性结合人DLL4的DLL4结合剂(例如，抗体)，其中，DLL4结合剂包含：(a)包含TAYYIH(SEQ ID NO:13)或其包含1个、2个、3个或4个氨基酸取代的变体的重链CDR1；(b)包含YIANYNRATNYNQKFKG(SEQ ID NO:14)或其包含1个、2个、3个或4个氨基酸取代的变体的重链CDR2；(c)包含RDYDYDVGMDY(SEQ ID NO:16)或其包含1个、2个、3个或4个氨基酸取代的变体的重链CDR3；(d)包含RASESVDNYGISFMK(SEQ IDNO:20)或其包含1个、2个、3个或4个氨基酸取代的变体的轻链CDR1；(e)包含AASNQGS(SEQID NO:21)或其包含1个、2个、3个或4个氨基酸取代的变体的轻链CDR2；及(f)包含QQSKEVPWTFGG(SEQ ID NO:22)或其包含1个、2个、3个或4个氨基酸取代的变体的轻链CDR3。在某些实施方式中，所述氨基酸取代为保守性取代。
在某些实施方式中，本发明提供了一种特异性结合DLL4的DLL4结合剂(例如，抗体)，其中，DLL4结合剂包含与SEQ ID NO:10具有至少约80％序列同一性的重链可变区，和与SEQ ID NO:12具有至少80％序列同一性的轻链可变区。在某些实施方式中，DLL4结合剂包含与SEQ ID NO:10具有至少约85％，至少约90％，至少约95％，至少约97％或至少约99％序列同一性的重链可变区。在某些实施方式中，DLL4结合剂包含与SEQ ID NO:12具有至少约85％，至少约90％，至少约95％，至少约97％或至少约99％序列同一性的轻链可变区。在某些实施方式中，DLL4结合剂包含与SEQ ID NO:10具有至少约95％序列同一性的重链可变区，和与SEQ ID NO:12具有至少约95％序列同一性的轻链可变区。在某些实施方式中，DLL4结合剂包含：包含SEQ ID NO:10的重链可变区，和包含SEQ ID NO:12的轻链可变区。在某些实施方式中，DLL4结合剂包含：基本上由SEQ ID NO:10组成的重链可变区，和基本上由SEQID NO:12组成的轻链可变区。在某些实施方式中，DLL4结合剂包含：包含SEQ ID NO:48的重链，和包含SEQ ID NO:8的轻链。在某些实施方式中，DLL4-结合抗体或其他试剂包含：包含SEQ ID NO:6的重链，和包含SEQ ID NO:8的轻链。在某些实施方式中，所述抗体是双特异性抗体。
在某些实施方式中，本发明提供了一种特异性结合人DLL4的DLL4结合剂(例如，抗体)，其中，DLL4结合剂包含：包含TAYYIH(SEQ ID NO:13)的重链CDR1，包含YIAGYKDATNYNQKFKG(SEQ ID NO:59)的重链CDR2，和包含RDYDYDVGMDY(SEQ ID NO:16)的重链CDR3。在某些实施方式中，DLL4结合剂进一步包含：包含RASESVDNYGISFMK(SEQ ID NO:20)的轻链CDR1，包含AASNQGS(SEQ ID NO:21)的轻链CDR2，和包含QQSKEVPWTFGG(SEQ IDNO:22)的轻链CDR3。在某些实施方式中，DLL4结合剂包含：(a)包含TAYYIH(SEQ ID NO:13)的重链CDR1，包含YIAGYKDATNYNQKFKG(SEQ ID NO:59)的重链CDR2，和包含RDYDYDVGMDY(SEQ ID NO:16)的重链CDR3，和(b)包含RASESVDNYGISFMK(SEQ ID NO:20)的轻链CDR1，包含AASNQGS(SEQ ID NO:21)的轻链CDR2，和包含QQSKEVPWTFGG(SEQ ID NO:22)的轻链CDR3。
在某些实施方式中，本发明提供了一种特异性结合人DLL4的DLL4结合剂(例如，抗体)，其中，DLL4结合剂包含：(a)包含TAYYIH(SEQ ID NO:13)或其包含1个、2个、3个或4个氨基酸取代的变体的重链CDR1；(b)包含YIAGYKDATNYNQKFKG(SEQ ID NO:59)或其包含1个、2个、3个或4个氨基酸取代的变体的重链CDR2；(c)包含RDYDYDVGMDY(SEQ ID NO:16)或其包含1个、2个、3个或4个氨基酸取代的变体的重链CDR3；(d)包含RASESVDNYGISFMK(SEQ IDNO:20)或其包含1个、2个、3个或4个氨基酸取代的变体的轻链CDR1；(e)包含AASNQGS(SEQID NO:21)或其包含1个、2个、3个或4个氨基酸取代的变体的轻链CDR2；及(f)包含QQSKEVPWTFGG(SEQ ID NO:22)或其包含1个、2个、3个或4个氨基酸取代的变体的轻链CDR3。在某些实施方式中，所述氨基酸取代为保守性取代。
在某些实施方式中，本发明提供了一种特异性结合DLL4的DLL4结合剂(例如，抗体)，其中，DLL4结合剂包含与SEQ ID NO:58具有至少约80％序列同一性的重链可变区，和与SEQ ID NO:12具有至少80％序列同一性的轻链可变区。在某些实施方式中，DLL4结合剂包含与SEQ ID NO:58具有至少约85％，至少约90％，至少约95％，至少约97％或至少约99％序列同一性的重链可变区。在某些实施方式中，DLL4结合剂包含与SEQ ID NO:12具有至少约85％，至少约90％，至少约95％，至少约97％或至少约99％序列同一性的轻链可变区。在某些实施方式中，DLL4结合剂包含与SEQ ID NO:58具有至少约95％序列同一性的重链可变区，和与SEQ ID NO:12具有至少约95％序列同一性的轻链可变区。在某些实施方式中，DLL4结合剂包含：包含SEQ ID NO:58的重链可变区，和包含SEQ ID NO:12的轻链可变区。在某些实施方式中，DLL4结合剂包含基本上由SEQ ID NO:58组成的重链可变区，和基本上由SEQID NO:12组成的轻链可变区。在某些实施方式中，DLL4结合剂包含：包含SEQ ID NO:56的重链，和包含SEQ ID NO:8的轻链。
在某些实施方式中，本发明提供了一种特异性结合人DLL4的DLL4结合剂(例如，抗体)，其中，DLL4结合剂包含：包含TAYYIH(SEQ ID NO:13)的重链CDR1，包含YISNYNRATNYNQKFKG(SEQ ID NO:65)的重链CDR2，和包含RDYDYDVGMDY(SEQ ID NO:16)的重链CDR3。在某些实施方式中，DLL4结合剂进一步包含：包含RASESVDNYGISFMK(SEQ ID NO:20)的轻链CDR1，包含AASNQGS(SEQ ID NO:21)的轻链CDR2，和包含QQSKEVPWTFGG(SEQ IDNO:22)的轻链CDR3。在某些实施方式中，DLL4结合剂包含：(a)包含TAYYIH(SEQ ID NO:13)的重链CDR1，包含YISNYNRATNYNQKFKG(SEQ ID NO:65)的重链CDR2，和包含RDYDYDVGMDY(SEQ ID NO:16)的重链CDR3，和(b)包含RASESVDNYGISFMK(SEQ ID NO:20)的轻链CDR1，包含AASNQGS(SEQ ID NO:21)的轻链CDR2，和包含QQSKEVPWTFGG(SEQ ID NO:22)的轻链CDR3。
在某些实施方式中，本发明提供了一种特异性结合人DLL4的DLL4结合剂(例如，抗体)，其中，DLL4结合剂包含：(a)包含TAYYIH(SEQ ID NO:13)或其包含1个、2个、3个或4个氨基酸取代的变体的重链CDR1；(b)包含YISNYNRATNYNQKFKG(SEQ ID NO:65)或其包含1个、2个、3个或4个氨基酸取代的变体的重链CDR2；(c)包含RDYDYDVGMDY(SEQ ID NO:16)或其包含1个、2个、3个或4个氨基酸取代的变体的重链CDR3；(d)包含RASESVDNYGISFMK(SEQ IDNO:20)或其包含1个、2个、3个或4个氨基酸取代的变体的轻链CDR1；(e)包含AASNQGS(SEQID NO:21)或其包含1个、2个、3个或4个氨基酸取代的变体的轻链CDR2；及(f)包含QQSKEVPWTFGG(SEQ ID NO:22)或其包含1个、2个、3个或4个氨基酸取代的变体的轻链CDR3。在某些实施方式中，氨基酸取代为保守性取代。
在某些实施方式中，本发明提供了一种特异性结合DLL4的DLL4结合剂(例如，抗体)，其中，DLL4结合剂包含与SEQ ID NO:64具有至少约80％序列同一性的重链可变区，和与SEQ ID NO:12具有至少80％序列同一性的轻链可变区。在某些实施方式中，DLL4结合剂包含与SEQ ID NO:64具有至少约85％，至少约90％，至少约95％，至少约97％或至少约99％序列同一性的重链可变区。在某些实施方式中，DLL4结合剂包含与SEQ ID NO:12具有至少约85％，至少约90％，至少约95％，至少约97％或至少约99％序列同一性的轻链可变区。在某些实施方式中，DLL4结合剂包含与SEQ ID NO:64具有至少约95％序列同一性的重链可变区，和与SEQ ID NO:12具有至少约95％序列同一性的轻链可变区。在某些实施方式中，DLL4结合剂包含：包含SEQ ID NO:64的重链可变区，和包含SEQ ID NO:12的轻链可变区。在某些实施方式中，DLL4结合剂包含基本上由SEQ ID NO:64组成的重链可变区，和基本上由SEQID NO:12组成的轻链可变区。在某些实施方式中，DLL4结合剂包含：包含SEQ ID NO:62的重链，和包含SEQ ID NO:8的轻链。在某些实施方式中，所述试剂是双特异性抗体。
在某些实施方式中，DLL4结合剂是包含含有SEQ ID NO:5的重链，和含有SEQ IDNO:8的轻链的抗体。在某些实施方式中，所述抗体是双特异性抗体。
在某些实施方式中，DLL4结合剂以25nM以下的KD结合DLL4。在某些实施方式中，DLL4结合剂以10nM以下的KD结合DLL4。在某些实施方式中，DLL4结合剂以约1nM以下的KD结合DLL4。在某些实施方式中，DLL4结合剂以约0.1nM以下的KD结合DLL4。在某些实施方式中，DLL4结合剂以约0.01nM以下的KD结合DLL4。在某些实施方式中，DLL4结合剂的至少一个CDR中的至少一个氨基酸残基被不同的氨基酸取代，从而改变DLL4结合剂对DLL4的亲和力。在某些实施方式中，DLL4结合剂的亲和力增加。在某些实施方式中，DLL4结合剂的亲和力降低。
在某些实施方式中，DLL4结合剂包含21R79抗体的重链可变区和轻链可变区。在某些实施方式中，DLL4结合剂包含21R79抗体的重链和轻链(具有或不具有前导序列)。在某些实施方式中，DLL4结合剂是21R79抗体。在某些实施方式中，DLL4结合剂包含与由ATCC专利保藏号PTA-13236保藏的质粒编码的多肽相同的重链可变区。将质粒PTA-13232根据布达佩斯条约的条件于2012年9月21日保藏于ATCC，10801University Boulevard，Manassas，VA，20110。在某些实施方式中，DLL4结合剂包含与由ATCC专利保藏号PTA-13235保藏的质粒编码的多肽相同的轻链可变区。在某些实施方式中，DLL4结合剂包含与由ATCC专利保藏号PTA-13232保藏的质粒编码的多肽相同的重链可变区和与由ATCC专利保藏号PTA-13235保藏的质粒编码的多肽相同的轻链可变区。
在某些实施方式中，DLL4结合剂包含抗体21R79，基本上由抗体21R79组成或由抗体21R79组成。
在某些实施方式中，DLL4结合剂包含21R75抗体的重链可变区和轻链可变区。在某些实施方式中，DLL4结合剂包含21R75抗体的重链和轻链(具有或不具有前导序列)。在某些实施方式中，DLL4结合剂是21R75抗体。在某些实施方式中，DLL4结合剂包含与由ATCC专利保藏号PTA-13234保藏的质粒编码的多肽相同的重链可变区。将质粒PTA-13234根据布达佩斯条约的条件于2012年9月21日保藏于ATCC，10801University Boulevard，Manassas，VA，20110。在某些实施方式中，DLL4结合剂包含与由ATCC专利保藏号PTA-13235保藏的质粒编码的多肽相同的轻链可变区。在某些实施方式中，DLL4结合剂包含与由ATCC专利保藏号PTA-13232保藏的质粒编码的多肽相同的重链可变区和与由ATCC专利保藏号PTA-13235保藏的质粒编码的多肽相同的轻链可变区。
在某些实施方式中，DLL4结合剂包含抗体21R75，基本上由抗体21R75组成或由抗体21R75组成。
在某些实施方式中，DLL4结合剂包含21R83抗体的重链可变区和轻链可变区。在某些实施方式中，DLL4结合剂包含21R83抗体的重链和轻链(具有或不具有前导序列)。在某些实施方式中，DLL4结合剂是21R83抗体。在某些实施方式中，DLL4结合剂包含与由ATCC专利保藏号PTA-13278保藏的质粒编码的多肽相同的重链可变区。将质粒PTA-13278根据布达佩斯条约的条件于2012年10月24日保藏于ATCC，10801University Boulevard，Manassas，VA，20110。在某些实施方式中，DLL4结合剂包含与由ATCC专利保藏号PTA-13235保藏的质粒编码的多肽相同的轻链可变区。在某些实施方式中，DLL4结合剂包含与由ATCC专利保藏号PTA-13278保藏的质粒编码的多肽相同的重链可变区和与由ATCC专利保藏号PTA-13235保藏的质粒编码的多肽相同的轻链可变区。
在某些实施方式中，DLL4结合剂包含抗体21R83，基本上由抗体21R83组成或由抗体21R83组成。
在某些实施方式中，DLL4结合剂(例如，抗体)与本发明的抗体结合DLL4上的相同表位或基本上相同的表位。在另一个实施方式中，DLL4结合剂是抗体，其结合的DLL4上的表位与由本发明的抗体结合的DLL4上的表位重叠。在某些实施方式中，DLL4结合剂(例如，抗体)与抗体21R79结合DLL4上的相同表位或基本上相同的表位。在另一个实施方式中，DLL4结合剂是抗体，其结合的DLL4上的表位与由抗体21R79结合的DLL4上的表位重叠。在某些实施方式中，DLL4结合剂(例如，抗体)与抗体21R75结合DLL4上的相同表位或基本上相同的表位。在另一个实施方式中，DLL4结合剂是抗体，其结合的DLL4上的表位与由抗体21R75结合的DLL4上的表位重叠。在某些实施方式中，DLL4结合剂(例如，抗体)与抗体21R83结合DLL4上的相同表位或基本上相同的表位。在另一个实施方式中，DLL4结合剂是抗体，其结合的DLL4上的表位与由抗体21R83结合的DLL4上的表位重叠。
在某些实施方式中，DLL4结合剂抑制DLL4与至少一种Notch受体的结合。在某些实施方式中，Notch受体是Notch1、Notch2、Notch3或Notch4。在某些实施方式中，DLL4结合剂特异性结合DLL4并抑制DLL4活性。在某些实施方式中，DLL4结合剂特异性结合DLL4并抑制Notch信号传导。在某些实施方式中，DLL4结合剂特异性结合DLL4并调节血管生成。在某些实施方式中，DLL4结合剂特异性结合DLL4并抑制肿瘤生长。在某些实施方式中，DLL4结合剂特异性结合DLL4并抑制致瘤性。在某些实施方式中，DLL4结合剂特异性结合DLL4并减少肿瘤中的CSC的数量或频率。
在某些实施方式中，本发明提供了一种作为双特异性抗体的VEGF/DLL4结合剂。在某些实施方式中，VEGF/DLL4结合剂是包含特异性结合人VEGF的第一抗原结合位点的双特异性抗体。在某些实施方式中，VEGF/DLL4结合剂是包含特异性结合人VEGF的第一抗原结合位点和结合肿瘤相关靶标的第二抗原结合位点的双特异性抗体。在某些实施方式中，VEGF/DLL4结合剂是双特异性抗体，其包含：特异性结合人VEGF的第一抗原结合位点，其中所述第一抗原结合位点包含：包含NYWMH(SEQ ID NO:17)的重链CDR1，包含DINPSNGRTSYKEKFKR(SEQ ID NO:18)的重链CDR2，和包含HYDDKYYPLMDY(SEQ ID NO:19)的重链CDR3。在某些实施方式中，所述双特异性抗体进一步包含：包含RASESVDNYGISFMK(SEQ ID NO:20)的轻链CDR1，包含AASNQGS(SEQ ID NO:21)的轻链CDR2，和包含QQSKEVPWTFGG(SEQ ID NO:22)的轻链CDR3。在某些实施方式中，VEGF/DLL4结合剂是双特异性抗体，其包含：特异性结合人VEGF的第一抗原结合位点，其中所述第一抗原结合位点包含：(a)包含NYWMH(SEQ ID NO:17)的重链CDR1，包含DINPSNGRTSYKEKFKR(SEQ ID NO:18)的重链CDR2，和包含HYDDKYYPLMDY(SEQID NO:19)的重链CDR3，和(b)包含RASESVDNYGISFMK(SEQ ID NO:20)的轻链CDR1，包含AASNQGS(SEQ ID NO:21)的轻链CDR2，和包含QQSKEVPWTFGG(SEQ ID NO:22)的轻链CDR3。
在某些实施方式中，VEGF/DLL4结合剂是包含与SEQ ID NO:11具有至少约80％序列同一性的第一重链可变区的双特异性抗体。在某些实施方式中，所述双特异性抗体进一步包含与SEQ ID NO:12具有至少80％序列同一性的轻链可变区。在某些实施方式中，所述双特异性VEGF/DLL4结合剂包含：与SEQ ID NO:11具有至少约85％，至少约90％，至少约95％，至少约97％或至少约99％序列同一性的第一重链可变区，和与SEQ ID NO:12具有至少约85％，至少约90％，至少约95％，至少约97％或至少约99％序列同一性的轻链可变区。
在某些实施方式中，本发明提供了一种作为双特异性抗体的VEGF/DLL4结合剂。在某些实施方式中，VEGF/DLL4结合剂是包含特异性结合人DLL4的第一抗原结合位点的双特异性抗体。在某些实施方式中，VEGF/DLL4结合剂是包含特异性结合人DLL4的第一抗原结合位点和结合肿瘤相关靶标的第二抗原结合位点的双特异性抗体。在某些实施方式中，VEGF/DLL4结合剂是双特异性抗体，其包含：特异性结合人DLL4的第一抗原结合位点，其中所述第一抗原结合位点包含：包含TAYYIH(SEQ ID NO:13)或AYYIH(SEQ ID NO:79)的重链CDR1，包含YIX1X2YX3X4ATNYNQKFKG(SEQ ID NO:80)的重链CDR2，其中，X1是丝氨酸或丙氨酸，X2是丝氨酸、天冬酰胺或甘氨酸，X3是天冬酰胺或赖氨酸，并且X4是甘氨酸、精氨酸或天冬氨酸，和包含RDYDYDVGMDY(SEQ ID NO:16)的重链CDR3；及包含RASESVDNYGISFMK(SEQ ID NO:20)的轻链CDR1，包含AASNQGS(SEQ ID NO:21)的轻链CDR2，和包含QQSKEVPWTFGG(SEQ ID NO:22)的轻链CDR3。在某些实施方式中，VEGF/DLL4结合剂是双特异性抗体，其包含：特异性结合人DLL4的第一抗原结合位点，其中所述第一抗原结合位点包含：包含TAYYIH(SEQ ID NO:13)的重链CDR1，包含YIANYNRATNYNQKFKG(SEQ ID NO:14)，YISSYNGATNYNQKFKG(SEQ ID NO:15)，YIAGYKDATNYNQKFKG(SEQ ID NO:59)或YISNYNRATNYNQKFKG(SEQ ID NO:65)的重链CDR2，和包含RDYDYDVGMDY(SEQ ID NO:16)的重链CDR3。在某些实施方式中，所述双特异性抗体包含：含包含TAYYIH(SEQ ID NO:13)的重链CDR1，包含YIANYNRATNYNQKFKG(SEQ IDNO:14)的重链CDR2，和包含RDYDYDVGMDY(SEQ ID NO:16)的重链CDR3第一抗原结合位点。在某些实施方式中，所述双特异性抗体包含：包含TAYYIH(SEQ ID NO:13)的重链CDR1，包含YISSYNGATNYNQKFKG(SEQ ID NO:15)的重链CDR2，和包含RDYDYDVGMDY(SEQ ID NO:16)的重链CDR3的第一抗原结合位点。在某些实施方式中，所述双特异性抗体包含：包含TAYYIH(SEQID NO:13)的重链CDR1，包含YIAGYKDATNYNQKFKG(SEQ ID NO:59)的重链CDR2，和包含RDYDYDVGMDY(SEQ ID NO:16)的重链CDR3的第一抗原结合位点。在某些实施方式中，所述双特异性抗体包含：含包含TAYYIH(SEQ ID NO:13)的重链CDR1，包含YISNYNRATNYNQKFKG(SEQID NO:65)的重链CDR2，和包含RDYDYDVGMDY(SEQ ID NO:16)的重链CDR3的第一抗原结合位点。在某些实施方式中，所述双特异性抗体进一步包含：包含RASESVDNYGISFMK(SEQ ID NO:20)的轻链CDR1，包含AASNQGS(SEQ ID NO:21)的轻链CDR2，和包含QQSKEVPWTFGG(SEQ IDNO:22)的轻链CDR3。在某些实施方式中，VEGF/DLL4结合剂是双特异性抗体，其包含：特异性结合人DLL4的第一抗原结合位点，其中所述第一抗原结合位点包含(a)包含TAYYIH(SEQ IDNO:13)的重链CDR1，包含YIANYNRATNYNQKFKG(SEQ ID NO:14)，YISSYNGATNYNQKFKG(SEQ IDNO:15)，YIAGYKDATNYNQKFKG(SEQ ID NO:59)或YISNYNRATNYNQKFKG(SEQ ID NO:65)的重链CDR2，和包含RDYDYDVGMDY(SEQ ID NO:16)的重链CDR3，和(b)包含RASESVDNYGISFMK(SEQID NO:20)的轻链CDR1，包含AASNQGS(SEQ ID NO:21)的轻链CDR2，和包含QQSKEVPWTFGG(SEQ ID NO:22)的轻链CDR3。
在某些实施方式中，VEGF/DLL4结合剂是包含与SEQ ID NO:9，SEQ ID NO:10，SEQID NO:58或SEQ ID NO:64具有至少约80％序列同一性的第一重链可变区的双特异性抗体。在某些实施方式中，所述双特异性抗体进一步包含与SEQ ID NO:12具有至少80％序列同一性的轻链可变区。在某些实施方式中，所述双特异性VEGF/DLL4结合剂包含与SEQ ID NO:9，SEQ ID NO:10，SEQ ID NO:58或SEQ ID NO:64具有至少约85％，至少约90％，至少约95％，至少约97％或至少约99％序列同一性的第一重链可变区；和/或与SEQ ID NO:12具有至少约85％，至少约90％，至少约95％，至少约97％或至少约99％序列同一性的轻链可变区。
在某些实施方式中，本发明提供了一种特异性结合人VEGF和人DLL4的VEGF/DLL4结合剂(例如，双特异性抗体)。在某些实施方式中，所述双特异性抗体包含：a)特异性结合人VEGF的第一抗原结合位点，和b)特异性结合人DLL4的第二抗原结合位点，其中所述第一抗原结合位点包含：包含NYWMH(SEQ ID NO:17)的重链CDR1，包含DINPSNGRTSYKEKFKR(SEQID NO:18)的重链CDR2，和包含HYDDKYYPLMDY(SEQ ID NO:19)的重链CDR3；其中第二抗原结合位点包含：包含TAYYIH(SEQ ID NO:13)或AYYIH(SEQ ID NO:79)的重链CDR1，包含YIX1X2YX3X4ATNYNQKFKG(SEQ ID NO:80)的重链CDR2，其中，X1是丝氨酸或丙氨酸，X2是丝氨酸、天冬酰胺或甘氨酸，X3是天冬酰胺或赖氨酸，且X4是甘氨酸、精氨酸或天冬氨酸，和包含RDYDYDVGMDY(SEQ ID NO:16)的重链CDR3；以及包含RASESVDNYGISFMK(SEQ ID NO:20)的轻链CDR1，包含AASNQGS(SEQ ID NO:21)的轻链CDR2，和包含QQSKEVPWTFGG(SEQ ID NO:22)的轻链CDR3。在某些实施方式中，双特异性抗体包含特异性结合人VEGF的第一抗原结合位点，和特异性结合人DLL4的第二抗原结合位点，其中所述第一抗原结合位点包含：包含NYWMH(SEQ ID NO:17)的重链CDR1，包含DINPSNGRTSYKEKFKR(SEQ ID NO:18)的重链CDR2，和包含HYDDKYYPLMDY(SEQ ID NO:19)的重链CDR3，且第二抗原结合位点包含：包含TAYYIH(SEQ IDNO:13)的重链CDR1，包含YIANYNRATNYNQKFKG(SEQ ID NO:14)，YISSYNGATNYNQKFKG(SEQ IDNO:15)，YIAGYKDATNYNQKFKG(SEQ ID NO:59)或YISNYNRATNYNQKFKG(SEQ ID NO:65)的重链CDR2，和包含RDYDYDVGMDY(SEQ ID NO:16)的重链CDR3；并且其中，所述第一和第二抗原结合位点均包含：包含RASESVDNYGISFMK(SEQ ID NO:20)的轻链CDR1，包含AASNQGS(SEQ IDNO:21)的轻链CDR2，和包含QQSKEVPWTFGG(SEQ ID NO:22)的轻链CDR3。
在某些实施方式中，所述双特异性抗体包含特异性结合人VEGF的第一抗原结合位点，和特异性结合人DLL4的第二抗原结合位点，其中所述第一抗原结合位点包含：包含NYWMH(SEQ ID NO:17)的重链CDR1，包含DINPSNGRTSYKEKFKR(SEQ ID NO:18)的重链CDR2，和包含HYDDKYYPLMDY(SEQ ID NO:19)的重链CDR3，且第二抗原结合位点包含：包含TAYYIH(SEQ ID NO:13)的重链CDR1，包含YIANYNRATNYNQKFKG(SEQ ID NO:14)的重链CDR2，和包含RDYDYDVGMDY(SEQ ID NO:16)的重链CDR3；并且其中，所述第一和第二抗原结合位点均包含：包含RASESVDNYGISFMK(SEQ ID NO:20)的轻链CDR1，包含AASNQGS(SEQ ID NO:21)的轻链CDR2，和包含QQSKEVPWTFGG(SEQ ID NO:22)的轻链CDR3。在某些实施方式中，所述双特异性抗体是219R45-MB-21R79。
在某些实施方式中，所述双特异性抗体包含特异性结合人VEGF的第一抗原结合位点，和特异性结合人DLL4的第二抗原结合位点，其中所述第一抗原结合位点包含：包含NYWMH(SEQ ID NO:17)的重链CDR1，包含DINPSNGRTSYKEKFKR(SEQ ID NO:18)的重链CDR2，和包含HYDDKYYPLMDY(SEQ ID NO:19)的重链CDR3，且第二抗原结合位点包含：包含TAYYIH(SEQ ID NO:13)的重链CDR1，包含YISSYNGATNYNQKFKG(SEQ ID NO:15)的重链CDR2，和包含RDYDYDVGMDY(SEQ ID NO:16)的重链CDR3；并且其中，所述第一和第二抗原结合位点均包含：包含RASESVDNYGISFMK(SEQ ID NO:20)的轻链CDR1，包含AASNQGS(SEQ ID NO:21)的轻链CDR2，和包含QQSKEVPWTFGG(SEQ ID NO:22)的轻链CDR3。在某些实施方式中，所述双特异性抗体是219R45-MB-21M18。
在某些实施方式中，所述双特异性抗体包含特异性结合人VEGF的第一抗原结合位点，和特异性结合人DLL4的第二抗原结合位点，其中所述第一抗原结合位点包含：包含NYWMH(SEQ ID NO:17)的重链CDR1，包含DINPSNGRTSYKEKFKR(SEQ ID NO:18)的重链CDR2，和包含HYDDKYYPLMDY(SEQ ID NO:19)的重链CDR3，且第二抗原结合位点包含：包含TAYYIH(SEQ ID NO:13)的重链CDR1，包含YIAGYKDATNYNQKFKG(SEQ ID NO:59)的重链CDR2，和包含RDYDYDVGMDY(SEQ ID NO:16)的重链CDR3；并且其中，所述第一和第二抗原结合位点均包含：包含RASESVDNYGISFMK(SEQ ID NO:20)的轻链CDR1，包含AASNQGS(SEQ ID NO:21)的轻链CDR2，和包含QQSKEVPWTFGG(SEQ ID NO:22)的轻链CDR3。在某些实施方式中，所述双特异性抗体是219R45-MB-21R75。
在某些实施方式中，所述双特异性抗体包含特异性结合人VEGF的第一抗原结合位点，和特异性结合人DLL4的第二抗原结合位点，其中所述第一抗原结合位点包含：包含NYWMH(SEQ ID NO:17)的重链CDR1，包含DINPSNGRTSYKEKFKR(SEQ ID NO:18)的重链CDR2，和包含HYDDKYYPLMDY(SEQ ID NO:19)的重链CDR3，且第二抗原结合位点包含：包含TAYYIH(SEQ ID NO:13)的重链CDR1，包含YISNYNRATNYNQKFKG(SEQ ID NO:65)的重链CDR2，和包含RDYDYDVGMDY(SEQ ID NO:16)的重链CDR3；并且其中，所述第一和第二抗原结合位点均包含：包含RASESVDNYGISFMK(SEQ ID NO:20)的轻链CDR1，包含AASNQGS(SEQ ID NO:21)的轻链CDR2，和包含QQSKEVPWTFGG(SEQ ID NO:22)的轻链CDR3。在某些实施方式中，所述双特异性抗体是219R45-MB-21R83。
在某些实施方式中，VEGF/DLL4结合剂(例如，双特异性抗体)包含与SEQ ID NO:11具有至少约80％序列同一性的第一重链可变区，与SEQ ID NO:9，SEQ ID NO:10，SEQ IDNO:58或SEQ ID NO:64具有至少约80％序列同一性的第二重链可变区，和与SEQ ID NO:12具有至少80％序列同一性的第一和第二轻链可变区。在某些实施方式中，所述双特异性VEGF/DLL4结合剂包含：与SEQ ID NO:11具有至少约85％，至少约90％，至少约95％，至少约97％或至少约99％序列同一性的第一重链可变区；与SEQ ID NO:9，SEQ ID NO:10，SEQ IDNO:58或SEQ ID NO:64具有至少约85％，至少约90％，至少约95％，至少约97％或至少约99％序列同一性的第二重链可变区；及与SEQ ID NO:12具有至少约85％，至少约90％，至少约95％，至少约97％或至少约99％序列同一性的第一和第二轻链可变区。在某些实施方式中，所述双特异性VEGF/DLL4结合剂包含：与SEQ ID NO:11具有至少约95％序列同一性的第一重链可变区，与SEQ ID NO:9具有至少约95％序列同一性的第二重链可变区，和与SEQ IDNO:12具有至少约95％序列同一性的第一和第二轻链可变区。在某些实施方式中，所述双特异性VEGF/DLL4结合剂包含：与SEQ ID NO:11具有至少约95％序列同一性的第一重链可变区，与SEQ ID NO:10具有至少约95％序列同一性的第二重链可变区，和与SEQ ID NO:12具有至少约95％序列同一性的第一和第二轻链可变区。在某些实施方式中，所述双特异性VEGF/DLL4结合剂包含：与SEQ ID NO:11具有至少约95％序列同一性的第一重链可变区，与SEQ ID NO:58具有至少约95％序列同一性的第二重链可变区，和与SEQ ID NO:12具有至少约95％序列同一性的第一和第二轻链可变区。在某些实施方式中，所述双特异性VEGF/DLL4结合剂包含：与SEQ ID NO:11具有至少约95％序列同一性的第一重链可变区，与SEQ IDNO:64具有至少约95％序列同一性的第二重链可变区，和与SEQ ID NO:12具有至少约95％序列同一性的第一和第二轻链可变区。在某些实施方式中，所述双特异性VEGF/DLL4结合剂包含：包含SEQ ID NO:11的第一重链可变区，包含SEQ ID NO:9的第二重链可变区，和可变区包含SEQ ID NO:12的第一和第二轻链可变区。在某些实施方式中，所述双特异性VEGF/DLL4结合剂包含：包含SEQ ID NO:11的第一重链可变区，包含SEQ ID NO:10的第二重链可变区，和包含SEQ ID NO:12的第一和第二轻链可变区。在某些实施方式中，所述双特异性VEGF/DLL4结合剂包含：包含SEQ ID NO:11的第一重链可变区，包含SEQ ID NO:58的第二重链可变区，和包含SEQ ID NO:12的第一和第二轻链可变区。在某些实施方式中，所述双特异性VEGF/DLL4结合剂包含：包含SEQ ID NO:11的第一重链可变区，包含SEQ ID NO:64的第二重链可变区，和包含SEQ ID NO:12的第一和第二轻链可变区。在某些实施方式中，所述双特异性VEGF/DLL4结合剂包含：基本上由SEQ ID NO:11组成的第一重链可变区，基本上由SEQID NO:9组成的第二重链可变区，和基本上由SEQ ID NO:12组成的第一和第二轻链可变区。在某些实施方式中，所述双特异性VEGF/DLL4结合剂包含：基本上由SEQ ID NO:11组成的第一重链可变区，基本上由SEQ ID NO:10组成的第二重链可变区，和基本上由SEQ ID NO:12组成的第一和第二轻链可变区。在某些实施方式中，所述双特异性VEGF/DLL4结合剂包含：基本上由SEQ ID NO:11组成的第一重链可变区，基本上由SEQ ID NO:58组成的第二重链可变区，和基本上由SEQ ID NO:12组成的第一和第二轻链可变区。在某些实施方式中，所述双特异性VEGF/DLL4结合剂包含基本上由SEQ ID NO:11组成的第一重链可变区，基本上由SEQID NO:64组成的第二重链可变区，和基本上由SEQ ID NO:12组成的第一和第二轻链可变区。
在某些实施方式中，VEGF/DLL4结合剂是包含来自抗VEGF抗体219R45的重链可变区的双特异性抗体。在某些实施方式中，VEGF/DLL4结合剂是包含来自抗DLL4抗体21M18的重链可变区的双特异性抗体。在某些实施方式中，VEGF/DLL4结合剂是包含来自抗DLL4抗体21R79的重链可变区的双特异性抗体。在某些实施方式中，VEGF/DLL4结合剂是包含来自抗DLL4抗体21R75的重链可变区的双特异性抗体。在某些实施方式中，VEGF/DLL4结合剂是包含来自抗DLL4抗体21R83的重链可变区的双特异性抗体。在某些实施方式中，VEGF/DLL4结合剂是包含来自抗VEGF抗体219R45的重链可变区，来自抗DLL4抗体21R79的重链可变区和两个相同的轻链可变区的双特异性抗体。在某些实施方式中，VEGF/DLL4结合剂是包含来自抗VEGF抗体219R45的重链可变区，来自抗DLL4抗体21M18的重链可变区和两个相同的轻链可变区的双特异性抗体。在某些实施方式中，VEGF/DLL4结合剂是包含来自抗VEGF抗体219R45的重链可变区，来自抗DLL4抗体21R75的重链可变区和两个相同的轻链可变区的双特异性抗体。在某些实施方式中，VEGF/DLL4结合剂是包含来自抗VEGF抗体219R45的重链可变区，来自抗DLL4抗体21R83的重链可变区和两个相同的轻链可变区的双特异性抗体。
在某些实施方式中，VEGF/DLL4结合剂是包含第一CH3结构域和第二CH3结构域的双特异性抗体，其各自经修饰以促进异源多聚体的形成。在某些实施方式中，第一和第二CH3结构域使用杵臼(knobs-into-holes)技术进行修饰。在某些实施方式中，第一和第二CH3结构域包含导致改变的静电相互作用的氨基酸改变。在某些实施方式中，第一和第二CH3结构域包含导致改变的疏水/亲水相互作用的氨基酸的改变。
在某些实施方式中，VEGF/DLL4结合剂是包含选自由下述组成的组中的重链恒定区的双特异性抗体：(a)第一人IgG1恒定区，其中，所述氨基酸在对应于SEQ ID NO:41的第253位和第292位的位置被谷氨酸或天冬氨酸取代，和第二人IgG1恒定区，其中，所述氨基酸在对应于SEQ ID NO:41的第240位和第282位的位置被赖氨酸取代的位置；(b)第一人IgG2恒定区，其中，所述氨基酸在对应于SEQ ID NO:42的第249位和第288位的位置被谷氨酸或天冬氨酸取代，和第二人IgG2恒定区，其中，所述氨基酸在对应于SEQ ID NO:42的第236位和第278位的位置被赖氨酸取代；(c)第一人IgG3恒定区，其中，所述氨基酸在对应于SEQ IDNO:43的第300位和第339位的位置被谷氨酸或天冬氨酸取代，和第二人IgG3恒定区，其中，所述氨基酸在对应于SEQ ID NO:43的第287位和第329位的位置被赖氨酸取代；及(d)第一人IgG4恒定区，其中，所述氨基酸在对应于SEQ ID NO:44的第250位和第289位的位置被谷氨酸或天冬氨酸取代，和第二IgG4恒定区，其中，所述氨基酸在对应于SEQ ID NO:44的第237位和第279位的位置被赖氨酸取代。
在某些实施方式中，VEGF/DLL4结合剂是双特异性抗体，其包含在对应于SEQ IDNO:41的第253位和第292位的位置处具有氨基酸取代的第一人IgG1恒定区，其中，所述氨基酸被谷氨酸或天冬氨酸取代，和在对应于SEQ ID NO:41的第240位和第282位的位置处具有氨基酸取代的第二人IgG1恒定区，其中，所述氨基酸被赖氨酸取代。在某些实施方式中，VEGF/DLL4结合剂是双特异性抗体，其包含在对应于SEQ ID NO:42的第249位和第288位的位置处具有氨基酸取代的第一人IgG2恒定区，其中，所述氨基酸被谷氨酸或天冬氨酸取代，和在对应于SEQ ID NO:42的第236位和第278位的位置处具有氨基酸取代的第二人IgG2恒定区，其中，所述氨基酸被赖氨酸取代。在某些实施方式中，VEGF/DLL4结合剂是双特异性抗体，其包含在对应于SEQ ID NO:43的第300位和第339位的位置处具有氨基酸取代的第一人IgG3恒定区，其中，所述氨基酸被谷氨酸或天冬氨酸取代，和在对应于SEQ ID NO:43的第287位和第329位的位置处具有氨基酸取代的第二人IgG2恒定区，其中，所述氨基酸被赖氨酸取代。在某些实施方式中，VEGF/DLL4结合剂是双特异性抗体，其包含在对应于SEQ IDNO:44的第250位和第289位的位置处具有氨基酸取代的第一人IgG4恒定区，其中，所述氨基酸被谷氨酸或天冬氨酸取代，和在对应于SEQ ID NO:44的第237位和第279位的位置处具有氨基酸取代的第二人IgG4恒定区，其中，所述氨基酸被赖氨酸取代。
在某些实施方式中，VEGF/DLL4结合剂是双特异性抗体，其包含在对应于SEQ IDNO:42的第249位和第288位的位置处具有氨基酸取代的第一人IgG2恒定区，其中，所述氨基酸被谷氨酸取代，和在对应于SEQ ID NO:42的第236位和第278位的位置处具有氨基酸取代的第二人IgG2恒定区，其中，所述氨基酸被赖氨酸取代。在某些实施方式中，VEGF/DLL4结合剂是双特异性抗体，其包含在对应于SEQ ID NO:42的第249位和第288位的位置处具有氨基酸取代的第一人IgG2恒定区，其中，所述氨基酸被天冬氨酸取代，和在对应于SEQ ID NO:42的第236位和第278位的位置处具有氨基酸取代的第二人IgG2恒定区，其中，所述氨基酸被赖氨酸取代。
在某些实施方式中，VEGF/DLL4结合剂是包含SEQ ID NO:7的重链的双特异性抗体。在某些实施方式中，VEGF/DLL4结合剂是包含SEQ ID NO:5的重链的双特异性抗体。在某些实施方式中，VEGF/DLL4结合剂是包含SEQ ID NO:56的重链的双特异性抗体。在某些实施方式中，VEGF/DLL4结合剂是包含SEQ ID NO:62的重链的双特异性抗体。在某些实施方式中，所述双特异性抗体进一步包含SEQ ID NO:12的轻链。在某些实施方式中，VEGF/DLL4结合剂是包含SEQ ID NO:7的重链，SEQ ID NO:5的重链，和SEQ ID NO:8的两个轻链的双特异性抗体。在某些实施方式中，VEGF/DLL4结合剂是包含SEQ ID NO:7的重链，SEQ ID NO:6的重链，和SEQ ID NO:8的两个轻链的双特异性抗体。在某些实施方式中，VEGF/DLL4结合剂是包含SEQ ID NO:7的重链，SEQ ID NO:56的重链，和SEQ ID NO:8的两个轻链的双特异性抗体。在某些实施方式中，VEGF/DLL4结合剂是包含SEQ ID NO:7的重链，SEQ ID NO:62的重链，和SEQ ID NO:8的两个轻链的双特异性抗体。
在某些实施方式中，VEGF/DLL4结合剂是以约50nM以下，约25nM以下，约10nM以下，约1nM以下或约0.1nM以下的KD结合VEGF的双特异性抗体。在某些实施方式中，VEGF/DLL4结合剂是以约50nM以下，约25nM以下，约10nM以下，约1nM以下或约0.1nM以下的KD结合DLL4的双特异性抗体。在某些实施方式中，VEGF/DLL4结合剂是以约50nM以下的KD结合VEGF并以约50nM以下的KD结合DLL4的双特异性抗体。在某些实施方式中，所述双特异性抗体以约25nM以下的KD结合VEGF并以约25nM以下的KD结合DLL4。在某些实施方式中，所述双特异性抗体以约10nM以下的KD结合VEGF并以约10nM以下的KD结合DLL4。在某些实施方式中，所述双特异性抗体以约1nM以下的KD结合VEGF并以约1nM以下的和KD结合DLL4。
在某些实施方式中，VEGF/DLL4结合剂是包含具有比第二抗原结合位点的结合亲和力弱的结合亲和力的一个抗原结合位点的双特异性抗体。例如，在某些实施方式中，所述双特异性抗体可以约0.1nM～1nM的KD结合VEGF并可以约1nM～10nM的KD结合DLL4。或者所述双特异性抗体可以约1nM～10nM的KD结合VEGF并可以约0.1nM～1nM的KD结合DLL4。在某些实施方式中，所述双特异性抗体可以约0.1nM～1nM的KD结合DLL4并可以约1nM～10nM的KD结合VEGF。或者所述双特异性抗体可以约1nM～10nM的KD结合DLL4并可以约0.1nM～1nM的KD结合VEGF。在某些实施方式中，两个抗原结合位点之间的亲和力差异可以为约2倍以上，约3倍以上，约5倍以上，约8倍以上，约10倍以上，约15倍以上，约30倍以上，约50倍以上或约100倍以上。在某些实施方式中，VEGF的抗原结合位点的至少一个CDR中的至少一个氨基酸残基被不同的氨基酸取代，从而改变VEGF结合位点的亲和力。在某些实施方式中，VEGF结合位点的亲和力增加。在某些实施方式中，VEGF结合位点的亲和力降低。在某些实施方式中，DLL4的抗原结合位点的至少一个CDR中的至少一个氨基酸残基被不同的氨基酸取代，从而改变了DLL4结合位点的亲和力。在某些实施方式中，DLL4结合位点的亲和力增加。在某些实施方式中，DLL4结合位点的亲和力降低。在某些实施方式中，VEGF和DLL4抗原结合位点的亲和力均改变。
本发明提供了多肽，其包括但不限于特异性结合VEGF和/或DLL4的抗体。在某些实施方式中，多肽结合人VEGF。在某些实施方式中，多肽结合人DLL4。在某些实施方式中，多肽结合人VEGF和小鼠VEGF。在某些实施方式中，多肽结合人DLL4和小鼠DLL4。
在某些实施方式中，VEGF结合剂包含多肽，所述多肽包含选自由下述组成的组的序列：SEQ ID NO:3，SEQ ID NO:4，SEQ ID NO:7，SEQ ID NO:8，SEQ ID NO:11，SEQ ID NO:12，SEQ ID NO:47，和SEQ ID NO:49。
在某些实施方式中，DLL4结合剂包含多肽，所述多肽包含选自由下述组成的组的序列：SEQ ID NO:1，SEQ ID NO:2，SEQ ID NO:4，SEQ ID NO:5，SEQ NO ID：6，SEQ ID NO:8，SEQ ID NO:9，SEQ ID NO:10，SEQ ID NO:12，SEQ ID NO:46，SEQ ID NO:48，SEQ ID NO:56，SEQ ID NO:57，SEQ ID NO:58，SEQ ID NO:62，SEQ ID NO:63，和SEQ ID NO:64。
在某些实施方式中，VEGF/DLL4结合剂包含多肽，所述多肽包含选自由下述组成的组的序列：SEQ ID NO:1，SEQ ID NO:2，SEQ ID NO:3，SEQ ID NO:4，SEQ ID NO:5，SEQ IDNO:6，SEQ ID NO:7，SEQ ID NO:8，SEQ ID NO:9，SEQ ID NO:10，SEQ ID NO:11，SEQ ID NO:12，SEQ ID NO:46，SEQ ID NO:47，SEQ ID NO:48，SEQ ID NO:49，SEQ ID NO:56，SEQ IDNO:57，SEQ ID NO:58，SEQ ID NO:62，SEQ ID NO:63，和SEQ ID NO:64。
在某些实施方式中，VEGF/DLL4结合剂包含多肽，所述多肽包含选自由下述组成的组的序列：SEQ ID NO:1，SEQ ID NO:2，SEQ ID NO:5，SEQ ID NO:6，SEQ ID NO:9，SEQ IDNO:10，SEQ ID NO:46，SEQ ID NO:48，SEQ ID NO:56，SEQ ID NO:57，SEQ ID NO:58，SEQ IDNO:62，SEQ ID NO:63，和SEQ ID NO:64。在某些实施方式中，VEGF/DLL4结合剂进一步包含多肽，所述多肽包含选自由下述组成的组的序列：SEQ ID NO:3，SEQ ID NO:7，SEQ ID NO:11，SEQ ID NO:47，和SEQ ID NO:49。在某些实施方式中，VEGF/DLL4结合剂进一步包含多肽，所述多肽包含选自由下述组成的组的序列：SEQ ID NO:4，SEQ ID NO:8，和SEQ ID NO:12。
在某些实施方式中，VEGF/DLL4结合剂包含多肽，所述多肽包含选自由下述组成的组的序列：SEQ ID NO:3，SEQ ID NO:7，SEQ ID NO:11，SEQ ID NO:47，和SEQ ID NO:49。在某些实施方式中，VEGF/DLL4结合剂进一步包含多肽，所述多肽包含选自由下述组成的组的序列：SEQ ID NO:1，SEQ ID NO:2，SEQ ID NO:5，SEQ ID NO:6，SEQ ID NO:9，SEQ ID NO:10，SEQ ID NO:46，SEQ ID NO:48，SEQ ID NO:56，SEQ ID NO:57，SEQ ID NO:58，SEQ IDNO:62，SEQ ID NO:63，和SEQ ID NO:64。在某些实施方式中，VEGF/DLL4结合剂进一步包含多肽，所述多肽包含选自由下述组成的组的序列：SEQ ID NO:4，SEQ ID NO:8，和SEQ IDNO:12。
在某些实施方式中，VEGF/DLL4结合剂(例如，抗体)与含有包含SEQ ID NO:11的重链可变区和包含SEQ ID NO:12的轻链可变区的抗体竞争与VEGF的特异性结合。在某些实施方式中，VEGF/DLL4结合剂与抗体219R45竞争与人VEGF的特异性结合。在某些实施方式中，VEGF/DLL4结合剂或抗体在体外竞争性结合测定中竞争与VEGF的特异性结合。在某些实施方式中，VEGF是人VEGF。在某些实施方式中，VEGF是小鼠VEGF。
在某些实施方式中，VEGF-DLL4结合剂(例如，抗体)与本发明的抗体结合VEGF上的相同的表位或基本上相同的表位。在另一个实施方式中，VEGF/DLL4结合剂是抗体，其结合的VEGF上的表位与由本发明的抗体结合的VEGF上的表位重叠。在某些实施方式中，VEGF/DLL4结合剂(例如，抗体)与抗体219R45结合VEGF上相同表位或基本上相同的表位。在另一个实施方式中，VEGF/DLL4结合剂是抗体，其结合的VEGF上的表位与由抗体219R45结合的VEGF上的表位重叠。
在某些实施方式中，VEGF/DLL4结合剂是与抗体219R45竞争对VEGF的特异性结合的试剂(例如，在竞争性结合测定中)。
在某些实施方式中，VEGF/DLL4结合剂(例如，抗体)与含有包含SEQ ID NO:9，SEQID NO:10，SEQ ID NO:58或SEQ ID NO:64的重链可变区和包含SEQ ID NO:12的轻链可变区的抗体竞争对DLL4的特异性结合。在某些实施方式中，VEGF/DLL4结合剂与抗体21R79竞争对人DLL4的特异性结合。在某些实施方式中，VEGF/DLL4结合剂与抗体21R75竞争对人DLL4的特异性结合。在某些实施方式中，VEGF/DLL4结合剂与抗体21R83竞争对人DLL4的特异性结合。在某些实施方式中，在体外竞争性结合测定中，VEGF/DLL4结合剂或抗体竞争对DLL4的特异性结合。在某些实施方式中，DLL4是人DLL4。在某些实施方式中，DLL4是小鼠DLL4。
在某些实施方式中，VEGF/DLL4结合剂(例如，抗体)与本发明的抗体结合DLL4上相同的表位或基本上相同的表位。在另一个实施方式中，VEGF/DLL4结合剂是抗体，其结合的DLL4上的表位与由本发明的抗体结合的VEGF上的表位重叠。在某些实施方式中，VEGF/DLL4结合剂与抗体21R79结合DLL4上的相同的表位或基本上相同的表位。在某些实施方式中，VEGF/DLL4结合剂与抗体21R75结合DLL4上的相同的表位或基本上相同的表位。在某些实施方式中，VEGF/DLL4结合剂与抗体21R83结合DLL4上的相同的表位或基本上相同的表位。在另一个实施方式中，VEGF/DLL4结合剂是抗体，其结合的DLL4上的表位与由抗体21R79结合的DLL4上的表位重叠。在另一个实施方式中，VEGF/DLL4结合剂是抗体，其结合的DLL4上的表位与由抗体21R75结合的DLL4上的表位重叠。在另一个实施方式中，VEGF/DLL4结合剂是抗体，其结合的DLL4上的表位与由抗体21R83结合的DLL4上的表位重叠。
在某些实施方式中，VEGF/DLL4结合剂是与抗体21R79竞争对DLL4的特异性结合的试剂(例如，在竞争性结合测定中)。在某些实施方式中，VEGF/DLL4结合剂是与抗体21R75竞争对DLL4的特异性结合的试剂(例如，在竞争性结合测定中)。在某些实施方式中，VEGF/DLL4结合剂是与抗体21R83竞争对DLL4的特异性结合的试剂(例如，在竞争性结合测定中)。在某些实施方式中，VEGF/DLL4结合剂是与抗体21M18竞争对DLL4的特异性结合的试剂(例如，在竞争性结合测定中)。
在某些实施方式中，VEGF/DLL4结合剂是与双特异性抗体219R45-MB-21M18竞争对VEGF和/或DLL4的特异性结合的试剂(例如，在竞争性结合测定中)。在某些实施方式中，VEGF/DLL4结合剂是与双特异性抗体219R45-MB-21M79竞争对VEGF和/或DLL4的特异性结合的试剂(例如，在竞争性结合测定中)。在某些实施方式中，VEGF/DLL4结合剂是与双特异性抗体219R45-MB-21M75竞争对VEGF和/或DLL4的特异性结合的试剂(例如，在竞争性结合测定中)。在某些实施方式中，VEGF/DLL4结合剂是与双特异性抗体219R45-MB-21M83竞争对VEGF和/或DLL4的特异性结合的试剂(例如，在竞争性结合测定中)。
在某些实施方式中，本文所述的VEGF/DLL4结合剂(例如，抗体)结合VEGF并调节VEGF活性。在某些实施方式中，VEGF/DLL4结合剂是VEGF拮抗剂并抑制VEGF活性。在某些实施方式中，VEGF/DLL4结合剂是VEGF拮抗剂并调节血管生成。在某些实施方式中，VEGF/DLL4结合剂是VEGF拮抗剂并抑制血管生成。在某些实施方式中，VEGF/DLL4结合剂是VEGF拮抗剂并抑制肿瘤生长。
在某些实施方式中，本文所述的VEGF/DLL4结合剂(例如，抗体)结合人DLL4并调节DLL4活性。在某些实施方式中，VEGF/DLL4结合剂是DLL4拮抗剂并抑制DLL4活性。在某些实施方式中，VEGF/DLL4结合剂是DLL4拮抗剂并抑制Notch活性。在某些实施方式中，VEGF/DLL4结合剂是DLL4拮抗剂并抑制Notch信号传导。在某些实施方式中，VEGF/DLL4结合剂是DLL4拮抗剂并调节血管生成。在某些实施方式中，VEGF/DLL4结合剂是DLL4拮抗剂并促进异常血管生成。在某些实施方式中，VEGF/DLL4结合剂是DLL4拮抗剂并抑制肿瘤生长。
在某些实施方式中，本文所述的VEGF/DLL4结合剂(例如，抗体)是结合人VEGF并调节VEGF活性的双特异性抗体。在某些实施方式中，本文所述的VEGF/DLL4结合剂(例如，抗体)是结合人DLL4并调节DLL4活性的双特异性抗体。在某些实施方式中，本文所述的VEGF/DLL4结合剂(例如，抗体)是结合人VEGF和人DLL4并同时调节VEGF和DLL4活性的双特异性抗体。在某些实施方式中，所述双特异性抗体是VEGF拮抗剂和DLL4拮抗剂并同时抑制VEGF活性和DLL4活性。在某些实施方式中，所述双特异性抗体是VEGF拮抗剂和DLL4拮抗剂并抑制VEGF活性和Notch活性。在某些实施方式中，所述双特异性抗体是VEGF拮抗剂和DLL4拮抗剂并抑制VEGF活性和Notch信号传导。在某些实施方式中，所述双特异性抗体是VEGF拮抗剂和DLL4拮抗剂并调节血管生成。在某些实施方式中，所述双特异性抗体是VEGF拮抗剂和DLL4拮抗剂并促进异常血管生成。在某些实施方式中，所述双特异性抗体是VEGF拮抗剂和DLL4拮抗剂并抑制血管生成。在某些实施方式中，所述双特异性抗体是VEGF拮抗剂和DLL4拮抗剂并抑制肿瘤生长。
在某些实施方式中，VEGF/DLL4结合剂(例如，抗体或双特异性抗体)是VEGF的拮抗剂。在某些实施方式中，VEGF/DLL4结合剂是VEGF的拮抗剂并抑制VEGF活性。在某些实施方式中，VEGF/DLL4结合剂将VEGF活性抑制至少约10％，至少约20％，至少约30％，至少约50％，至少约75％，至少约90％或约100％。在某些实施方式中，抑制人VEGF活性的VEGF/DLL4结合剂是抗体219R45。在某些实施方式中，抑制人VEGF活性的VEGF/DLL4结合剂是包含219R45的抗原结合位点的双特异性抗体。在某些实施方式中，抑制人VEGF活性的VEGF/DLL4结合剂是双特异性抗体219R45-MB-21M18。在某些实施方式中，抑制人VEGF活性的VEGF/DLL4结合剂是双特异性抗体219R45-MB-21R79。在某些实施方式中，抑制人VEGF活性的VEGF/DLL4结合剂是双特异性抗体219R45-MB-21R75。在某些实施方式中，抑制人VEGF活性的VEGF/DLL4结合剂是双特异性抗体219R45-MB-21R83。
在某些实施方式中，VEGF/DLL4结合剂(例如，抗体)是DLL4的拮抗剂。在某些实施方式中，VEGF/DLL4结合剂是DLL4的拮抗剂并抑制DLL4活性。在某些实施方式中，VEGF/DLL4结合剂将DLL4活性抑制至少约10％，至少约20％，至少约30％，至少约50％，至少约75％，至少约90％或约100％。在某些实施方式中，抑制人DLL4活性的VEGF/DLL4结合剂是抗体21R79。在某些实施方式中，抑制人DLL4活性的VEGF/DLL4结合剂是抗体21R75。在某些实施方式中，抑制人DLL4活性的VEGF/DLL4结合剂是抗体21R83。在某些实施方式中，抑制人DLL4活性的VEGF/DLL4结合剂是包含21R79的抗原结合位点的双特异性抗体。在某些实施方式中，抑制人DLL4活性的VEGF/DLL4结合剂是包含21R75的抗原结合位点的双特异性抗体。在某些实施方式中，抑制人DLL4活性的VEGF/DLL4结合剂是包含21R83的抗原结合位点的双特异性抗体。在某些实施方式中，抑制人DLL4活性的VEGF/DLL4结合剂是双特异性抗体219R45-MB-21M18。在某些实施方式中，抑制人DLL4活性的VEGF/DLL4结合剂是双特异性抗体219R45-MB-21R79。在某些实施方式中，抑制人DLL4活性的VEGF/DLL4结合剂是双特异性抗体219R45-MB-21R75。在某些实施方式中，抑制人DLL4活性的VEGF/DLL4结合剂是双特异性抗体219R45-MB-21R83。
在某些实施方式中，VEGF/DLL4结合剂(例如，抗体)是Notch信号传导的拮抗剂。在某些实施方式中，VEGF/DLL4结合剂将Notch信号传导抑制至少约10％，至少约20％，至少约30％，至少约50％，至少约75％，至少约90％或约100％。在某些实施方式中，抑制Notch信号传导的VEGF/DLL4结合剂是抗体21R79。在某些实施方式中，抑制Notch信号传导的VEGF/DLL4结合剂是抗体21R75。在某些实施方式中，抑制Notch信号传导的VEGF/DLL4结合剂是抗体21R83。在某些实施方式中，抑制Notch信号传导的VEGF/DLL4结合剂是包含21R79的抗原结合位点的双特异性抗体。在某些实施方式中，抑制Notch信号传导的VEGF/DLL4结合剂是包含21R75的抗原结合位点的双特异性抗体。在某些实施方式中，抑制Notch信号传导的VEGF/DLL4结合剂是包含21R83的抗原结合位点的双特异性抗体。在某些实施方式中，抑制Notch信号传导的VEGF/DLL4结合剂是双特异性抗体219R45-MB-21M18。在某些实施方式中，抑制Notch信号传导的VEGF/DLL4结合剂是双特异性抗体219R45-MB-21R79。在某些实施方式中，抑制Notch信号传导的VEGF/DLL4结合剂是双特异性抗体219R45-MB-21R75。在某些实施方式中，抑制Notch信号传导的VEGF/DLL4结合剂是双特异性抗体219R45-MB-21R83。
在某些实施方式中，VEGF/DLL4结合剂(例如，抗体)抑制VEGF与至少一种受体的结合。在某些实施方式中，VEGF/DLL4结合剂抑制VEGF与VEGFR-1或VEGFR-2的结合。在某些实施方式中，VEGF/DLL4结合剂将VEGF与至少一种VEGF受体的结合抑制至少约10％，至少约25％，至少约50％，至少约75％，至少约90％或至少约95％。在某些实施方式中，抑制人VEGF与至少一种VEGF受体结合的VEGF/DLL4结合剂是抗体219R45。在某些实施方式中，抑制人VEGF与至少一种VEGF受体结合的VEGF/DLL4结合剂是包含219R45的抗原结合位点的双特异性抗体。在某些实施方式中，抑制人VEGF与至少一种VEGF受体结合的VEGF/DLL4结合剂是双特异性抗体219R45-MB-21M18。在某些实施方式中，抑制人VEGF与至少一种VEGF受体结合的VEGF/DLL4结合剂是双特异性抗体219R45-MB-21R79。在某些实施方式中，抑制人VEGF与至少一种VEGF受体结合的VEGF/DLL4结合剂是双特异性抗体219R45-MB-21R75。在某些实施方式中，抑制人VEGF与至少一种VEGF受体结合的VEGF/DLL4结合剂是双特异性抗体219R45-MB-21R83。
在某些实施方式中，VEGF/DLL4结合剂(例如，抗体)抑制DLL4蛋白与至少一种Notch受体的结合。在某些实施方式中，VEGF/DLL4结合剂抑制DLL4与Notch1、Notch2、Notch3和/或Notch4的结合。在某些实施方式中，VEGF/DLL4结合剂将DLL4与至少一种Notch受体的结合抑制至少约10％，至少约25％，至少约50％，至少约75％，至少约90％或至少约95％。在某些实施方式中，抑制人DLL4与至少一种Notch受体结合的VEGF/DLL4结合剂是抗体21R79。在某些实施方式中，抑制人DLL4与至少一种Notch受体结合的VEGF/DLL4结合剂是抗体21R75。在某些实施方式中，抑制人DLL4与至少一种Notch受体结合的VEGF/DLL4结合剂是抗体21R83。在某些实施方式中，抑制人DLL4与至少一种Notch受体结合的VEGF/DLL4结合剂是包含21R79的抗原结合位点的双特异性抗体。在某些实施方式中，抑制人DLL4与至少一种Notch受体结合的VEGF/DLL4结合剂是包含21R75的抗原结合位点的双特异性抗体。在某些实施方式中，抑制人DLL4与至少一种Notch受体结合的VEGF/DLL4结合剂是包含21R83的抗原结合位点的双特异性抗体。在某些实施方式中，抑制人DLL4与至少一种Notch受体结合的VEGF/DLL4结合剂是双特异性抗体219R45-MB-21M18。在某些实施方式中，抑制人DLL4与至少一种Notch受体结合的VEGF/DLL4结合剂是双特异性抗体219R45-MB-21R79。在某些实施方式中，抑制人DLL4与至少一种Notch受体结合的VEGF/DLL4结合剂是双特异性抗体219R45-MB-21R75。在某些实施方式中，抑制人DLL4与至少一种Notch受体结合的VEGF/DLL4结合剂是双特异性抗体219R45-MB-21R83。
用于确定VEGF/DLL4结合剂(或候选VEGF/DLL4结合剂)是否抑制VEGF或影响血管生成的体内和体外测定法是本领域已知的。血管生成的体外测定包括但不限于HUVEC增殖测定、内皮细胞管形成测定、发芽(或芽形成)测定、HUVEC细胞迁移测定和侵入测定。在某些实施方式中，将存在VEGF和存在VEGF/DLL4结合剂的细胞与存在VEGF而不存在VEGF/DLL4的细胞进行比较，并评估对血管生成(或与血管生成相关的生物学效应)。血管生成的体内测定包括但不限于基质胶塞测定、角膜微囊测定和鸡绒毛尿囊膜(CAM)测定。
用于确定VEGF/DLL4结合剂(或候选VEGF/DLL4结合剂)是否抑制Notch激活或信号传导的体内和体外测定法是本领域已知的。例如，利用含有萤火虫萤光素酶报告基因上游的TCF结合结构域的多个拷贝的TCF/Luc报告基因载体的基于细胞的萤光素酶报告基因测定可用于体外测量Notch信号水平(Gazit等，1999，Oncogene，18；5959-66；TOPflash，Millipore，Billerica MA)。在某些实施方式中，可以使用利用含有萤火虫萤光素酶报告基因上游的CBF结合结构域的多个拷贝的CBF/Luc报告基因载体的基于细胞的萤光素酶报告基因测定。将存在一种或多种Notch配体(例如，在转染的细胞表面上表达的DLL4或可溶性DLL4-Fc融合蛋白)和存在VEGF/DLL4结合剂时的Notch信号传导水平与不存在VEGF/DLL4结合剂时的Notch信号传导水平进行比较。
在某些实施方式中，VEGF/DLL4结合剂具有以下作用中的一种或多种：抑制肿瘤细胞的增殖，抑制肿瘤生长，降低肿瘤致瘤性，降低肿瘤中的癌干细胞频率，触发肿瘤细胞的细胞死亡，防止肿瘤细胞的转移，降低肿瘤细胞的存活，调节血管生成，抑制血管生成，抑制生产性血管生成或促进异常血管生成。
在某些实施方式中，VEGF/DLL4结合剂能够抑制肿瘤生长(例如，结肠直肠肿瘤、卵巢肿瘤、胰腺肿瘤或子宫内膜肿瘤)。在某些实施方式中，VEGF/DLL4结合剂能够在体内抑制肿瘤生长(例如，在异种移植小鼠模型中，和/或在患有癌症的人中)。在某些实施方式中，与未治疗的肿瘤相比，肿瘤生长被抑制至少约2倍，约3倍，约5倍，约10倍，约50倍，约100倍或约1000倍。
在某些实施方式中，VEGF/DLL4结合剂能够降低肿瘤(例如，结肠直肠肿瘤、卵巢肿瘤、胰腺肿瘤或子宫内膜肿瘤)的致瘤性。在某些实施方式中，VEGF/DLL4结合剂或抗体能够在诸如小鼠异种移植模型等动物模型中降低包含癌干细胞的肿瘤(例如，结肠直肠肿瘤、卵巢肿瘤、胰腺肿瘤或子宫内膜肿瘤)的致瘤性。在某些实施方式中，VEGF/DLL4结合剂或抗体能够通过降低肿瘤中的癌干细胞的数量或频率而降低肿瘤(例如，结肠直肠肿瘤、卵巢肿瘤、胰腺肿瘤或子宫内膜肿瘤)的致瘤性。在某些实施方式中，肿瘤(例如，结肠直肠肿瘤、卵巢肿瘤、胰腺肿瘤或子宫内膜肿瘤)的癌干细胞的数量或频率降低至少约2倍，约3倍，约5倍，约10倍，约50倍，约100倍或约1000倍。在某些实施方式中，癌干细胞的数量或频率的降低通过使用动物模型的有限稀释测定来确定。关于使用有限稀释测定来确定肿瘤中癌干细胞的数量或频率降低的其他实例和指导可以在例如国际公开号WO 2008/042236；美国专利公开号2008/0064049；及美国专利公开号2008/0178305中找到。
在某些实施方式中，VEGF/DLL4结合剂能够调节血管生成。在某些实施方式中，VEGF/DLL4结合剂能够在体内调节血管生成(例如，异种移植小鼠模型中，和/或在患有癌症的人中)。在某些实施方式中，VEGF/DLL4结合剂能够抑制血管生成。在某些实施方式中，VEGF/DLL4结合剂能够促进异常血管生成。在某些实施方式中，VEGF/DLL4结合剂能够抑制血管生成和/或促进异常血管生成，导致非生产性血管形成。
在某些实施方式中，本文所述的VEGF/DLL4结合剂在小鼠、食蟹猴或人中的循环半衰期为至少约2小时，至少约5小时，至少约10小时，至少约24小时，至少约3天，至少约1周或至少约2周。在某些实施方式中，VEGF/DLL4结合剂是IgG(例如，IgG1或IgG2)抗体，其在小鼠、食蟹猴或人中的循环半衰期为至少约2小时，至少约5小时，至少约10小时，至少约24小时，至少约3天，至少约1周或至少约2周。增加(或减少)诸如多肽和抗体等试剂的半衰期的方法是本领域已知的。例如，增加IgG抗体的循环半衰期的已知方法包括在pH 6.0时引入增加抗体对新生儿Fc受体(FcRn)的pH依赖性结合的Fc区中的突变(参见例如，美国专利公开号2005/0276799，2007/0148164，和2007/0122403)。增加缺乏Fc区的抗体片段的循环半衰期的已知方法包括诸如PEG化等技术。
在某些实施方式中，VEGF/DLL4结合剂是抗体。多克隆抗体可以通过任何已知的方法制备。在某些实施方式中，通过用感兴趣抗原(例如，纯化的肽片段、全长重组蛋白或融合蛋白)免疫动物(例如，兔、大鼠、小鼠、山羊、驴)通过多次皮下或腹膜内注射来制备多克隆抗体。可选地，抗原可以与诸如匙孔血蓝蛋白(KLH)或血清白蛋白等载体缀合。将抗原(含或不含载体蛋白)用无菌生理盐水稀释，并通常与佐剂(例如完全弗氏佐剂或不完全弗氏佐剂)组合形成稳定的乳剂。经过足够的时间后，从免疫的动物中(通常从血液或腹水中)回收多克隆抗体。根据本领域的标准方法，可以从血清或腹水中纯化多克隆抗体，其包括但不限于亲和色谱、离子交换色谱、凝胶电泳和透析。
在某些实施方式中，VEGF/DLL4结合剂为单克隆抗体。单克隆抗体可以使用本领域技术人员已知的杂交瘤方法来制备。在某些实施方式中，使用杂交瘤方法，如上所述免疫小鼠、仓鼠或其他合适的宿主动物以从淋巴细胞中诱导产生特异性结合免疫抗原的抗体。在某些实施方式中，可以在体外免疫淋巴细胞。在某些实施方式中，免疫抗原可以是人蛋白质或其部分。在某些实施方式中，免疫抗原可以是小鼠蛋白或其部分。
免疫后，分离淋巴细胞并使用例如聚乙二醇与合适的骨髓瘤细胞系融合。使用本领域已知的专用培养基选择杂交瘤细胞，并且未融合的淋巴细胞和骨髓瘤细胞在选择过程中不存活。产生特异性针对所选抗原的单克隆抗体的杂交瘤可以通过多种方法鉴定，其包括但不限于免疫沉淀、免疫印迹和体外结合测定(例如流式细胞术、FACS、ELISA和放射免疫测定)。可以使用标准组织培养方法在体外培养物中繁殖杂交瘤，或者在动物中体内以腹水瘤的形式繁殖杂交瘤。根据本领域的标准方法，可以从培养基或腹水中纯化单克隆抗体，所述方法包括但不限于亲和色谱、离子交换色谱，凝胶电泳和透析。
在某些实施方式中，可以使用本领域技术人员已知的重组DNA技术制备单克隆抗体。编码单克隆抗体的多核苷酸是从成熟B细胞或杂交瘤细胞中分离的，例如通过RT-PCR使用特异性扩增编码抗体重链和轻链的基因的寡核苷酸引物进行，并且它们的序列使用标准技术测定。然后将编码重链和轻链的分离的多核苷酸克隆到合适的表达载体中，其当转染到诸如大肠杆菌、猿猴COS细胞、中国仓鼠卵巢(CHO)细胞或骨髓瘤细胞等不产生免疫球蛋白蛋白质的宿主细胞中时产生单克隆抗体。
在某些其他实施方式中，重组单克隆抗体或其片段可以从表达期望物种的可变结构域或CDR的噬菌体展示文库中分离。
编码单克隆抗体的多核苷酸可以被修饰，例如，通过使用重组DNA技术修饰以产生替代抗体。在某些实施方式中，例如小鼠单克隆抗体的轻链和重链的恒定结构域可以替代例如人抗体的那些区域以产生嵌合抗体，或者替代非免疫球蛋白多肽以产生融合抗体。在某些实施方式中，截短或去除恒定区以产生单克隆抗体的所需抗体片段。可用区的定点或高密度诱变可用于优化单克隆抗体的特异性、亲和力等。
在某些实施方式中，抗VEGF和/或DLL4的单克隆抗体是人源化抗体。通常，人源化抗体为人类免疫球蛋白，其中使用本领域技术人员已知的方法使来自CDR的残基被来自非人物种(例如小鼠、大鼠、兔、仓鼠等)的CDR的残基替换，所述非人物种具有期望的特异性、亲和力和/或结合能力。在某些实施方式中，人免疫球蛋白的Fv构架区残基被来自具有期望的特异性，亲和力和/或结合能力的非人物种的抗体中的相应残基置换。在某些实施方式中，人源化抗体可以通过取代Fv构架区中和/或取代的非人残基内的额外残基来进一步修饰，以改进和优化抗体特异性，亲和力和/或能力。一般而言，人源化抗体将包含基本上全部的至少一个，并且通常两个或三个可变区，其含有对应于非人免疫球蛋白的全部或基本上全部的CDR，而全部或基本上全部框架区是人免疫球蛋白共有序列的框架区。在某些实施方式中，人源化抗体还可以包含免疫球蛋白恒定区或结构域(Fc)的至少一部分，通常是人免疫球蛋白的一部分。在某些实施方式中，此类人源化抗体在治疗上使用，因为它们可以在施用于人受试者时降低抗原性和HAMA(人抗小鼠抗体)应答。
在某些实施方式中，VEGF/DLL4结合剂是人抗体。人抗体可以使用本领域已知的各种技术直接制备。在某些实施方式中，可以从体外免疫的永生化人B淋巴细胞或从分离自免疫个体的淋巴细胞产生人抗体。在任一情况下，产生针对靶抗原的抗体的细胞都可以通过本领域已知的技术产生和分离。在某些实施方式中，可以从噬菌体文库中选择人抗体，其中该噬菌体文库表达人抗体。作为另一种选择，噬菌体展示技术可用于从来自未免疫供体的免疫球蛋白可变区基因库中体外产生人抗体和抗体片段。用于产生和使用抗体噬菌体文库的技术为本领域技术人员所熟知。一旦鉴定到抗体，可以使用本领域已知的亲和力成熟策略(包括但不限于链改组和定点诱变)来产生高亲和力人抗体。
在某些实施方式中，可以在含有人免疫球蛋白基因座的转基因小鼠中制备人抗体。在免疫后，这些小鼠能够在不存在内源性免疫球蛋白产生的情况下产生完整的人抗体全集。
本发明还包括双特异性抗体。双特异性抗体能够特异性识别和结合至少两种不同的抗原或表位。不同的表位可以在相同的分子内(例如单个蛋白质上的两个表位)或不同的分子上(例如蛋白质上的一个表位和第二蛋白质上的一个表位)。在某些实施方式中，与单独抗体或与多于一种抗体的组合相比，双特异性抗体具有增强的效力。在某些实施方式中，与单独抗体或与多于一种抗体的组合相比，双特异性抗体具有降低的毒性。本领域技术人员已知任何结合剂(例如，抗体)可具有独特的药代动力学(PK)(例如循环半衰期)。在某些实施方式中，双特异性抗体具有同步两种活性结合剂的PK的能力，其中，两种单独的结合剂具有不同的PK谱。在某些实施方式中，双特异性抗体具有将两种结合剂(例如，抗体)的作用集中于在共同区域(例如，肿瘤和/或肿瘤环境)中的能力。在某些实施方式中，双特异性抗体具有将两种结合剂(例如，抗体)的作用集中于共同靶标(例如，肿瘤或肿瘤细胞)的能力。在某些实施方式中，双特异性抗体具有将两种结合剂(例如，抗体)作用靶向多于一种生物途径或功能的能力。
在某些实施方式中，所述双特异性抗体特异性结合VEGF和第二靶标。在某些实施方式中，所述双特异性抗体特异性结合DLL4和第二靶标。在某些实施方式中，所述双特异性抗体特异性结合VEGF和DLL4。在某些实施方式中，所述双特异性抗体特异性结合人VEGF和人DLL4。在某些实施方式中，所述双特异性抗体是单克隆人或人源化抗体。在某些实施方式中，所述双特异性抗体抑制血管生成和降低癌干细胞数量或频率。在某些实施方式中，所述双特异性抗体抑制血管生长和抑制血管成熟。在某些实施方式中，所述双特异性抗体防止内皮过度增殖。在某些实施方式中，所述双特异性抗体具有降低的毒性和/或副作用。在某些实施方式中，与两种单独抗体或作为单一药剂的抗体的混合物相比，所述双特异性抗体具有降低的毒性和/或副作用。在某些实施方式中，所述双特异性抗体具有增加的治疗指数。在某些实施方式中，与两种单独抗体或作为单一试剂的抗体的混合物相比，所述双特异性抗体具有增加的治疗指数。
在某些实施方式中，所述双特异性抗体可以特异性识别和结合第一抗原靶标，(例如，DLL4)及第二抗原靶标，例如白细胞上的效应分子(例如，CD2、CD3、CD28、CD80或CD87)或Fc受体(例如，CD64、CD32或CD16)以便将细胞防御机制集中到表达第一抗原靶标的细胞上。在某些实施方式中，所述双特异性抗体可用于将细胞毒素剂引导至表达特定靶抗原的细胞。这些抗体具有抗原结合位点(例如，对人DLL4)和结合诸如EOTUBE、DPTA、DOTA或TETA等细胞毒性剂或放射性核素螯合剂的第二位点。
制备双特异性抗体的技术是本领域技术人员已知的，例如参见Millstein等.，1983，Nature，305：537-539；Brennan等.，1985，Science，229：81；Suresh等.，1986，Methodsin Enzymol.，121：120；Traunecker等.，1991，EMBO J.，10：3655-3659；Shalaby等.，1992，J.Exp.Med.，175：217-225；Kostelny等.，1992，J.Immunol.，148：1547-1553；Gruber等.，1994，J.Immunol.，152：5368；美国专利号5,731,168；国际公开号WO 2009/089004；及美国专利公开号2011/0123532。在某些实施方式中，所述双特异性抗体包含在作为两条重链之间界面的一部分的氨基酸中具有修饰的重链恒定区。在某些实施方式中，所述双特异性抗体可以使用“杵臼”策略产生(例如参见，美国专利号5,731,168；Ridgway等，1996，Prot.Engin.，9：617-621)。有时，“旋钮”和“孔”术语被替换为术语“突起”和“空腔”。在某些实施方式中，双特异性抗体可以包含不能在重链之间形成二硫键的变体铰链区(例如参见，WO 2006/028936)。在某些实施方式中，修饰可以包括导致改变的静电相互作用的氨基酸的改变。在某些实施方式中，修饰可以包括导致疏水/亲水相互作用改变的氨基酸的改变。
双特异性抗体可以是完整的抗体或包含抗原结合位点的抗体片段。也考虑具有多于两价的抗体。例如，可以制备三特异性抗体(Tutt等.，1991，J.Immunol.，147：60)。因此，在某些实施方式中，针对VEGF和/或DLL4的抗体是多特异性的。
在某些实施方式中，本文所述的抗体(或其他多肽)可以是单特异性的。在某些实施方式中，抗体含有的一个或多个抗原结合位点中的每一个都能够结合(或结合)不同蛋白质上的同源表位。
在某些实施方式中，VEGF/DLL4结合剂是抗体片段。抗体片段可以具有与完整抗体不同的功能或功能；例如，抗体片段可以具有增加的肿瘤穿透性。已知用于产生抗体片段的各种技术，其包括但不限于完整抗体的蛋白水解消化。在某些实施方式中，抗体片段包括通过胃蛋白酶消化抗体分子产生的F(ab')2片段。在某些实施方式中，抗体片段包括通过还原F(ab')2片段的二硫键产生的Fab片段。在其他实施方式中，抗体片段通过用木瓜蛋白酶和还原剂处理抗体分子产生的Fab片段。在某些实施方式中，抗体片段是重组产生的。在某些实施方式中，抗体片段包括Fv或单链Fv(scFv)片段。Fab、Fv和scFv抗体片段可以在大肠杆菌或其他宿主细胞中表达和分泌，从而允许产生大量这些片段。在某些实施方式中，如本文讨论的，从抗体噬菌体文库分离抗体片段。例如，可以使用方法来构建Fab表达文库(Huse等.，1989，Science，246：1275-1281)以允许快速和有效鉴定对VEGF和/或DLL4具有所需特异性的单克隆Fab片段或其衍生物、片段、类似物或同系物。在某些实施方式中，抗体片段是单特异性或双特异性的。在某些实施方式中，VEGF/DLL4结合剂是scFv。本领域技术人员已知的各种技术可用于生产对VEGF或DLL4特异性的单链抗体。
特别是在抗体片段的情况下，可以进一步期望修饰抗体以改变(例如增加或减少)其血清半衰期。这可以例如通过将挽救受体结合表位掺入抗体片段，通过使抗体片段中适当区域发生突变或者通过将所述表位掺入到肽标签中，然后将其在任一端或中间与抗体片段融合(例如，通过DNA或肽合成)来实现。
异源偶联抗体也在本发明的范围内。异源偶联抗体由两种共价连接的抗体组成。例如，已经提出这样的抗体以将免疫细胞靶向不需要的细胞(参见例如美国专利号4,676,980)。还考虑到异源偶联抗体可以使用合成蛋白质化学中的已知方法在体外制备，包括那些涉及交联剂的方法。例如，可以使用二硫化物交换反应或通过形成硫醚键来构建免疫毒素。用于此目的的合适试剂的实例包括亚氨基硫醇盐和甲基-4-巯基丁酰亚胺酸盐(mercaptobutyrimidate)。
出于本发明的目的，应当意识到的是，经修饰的抗体可以包含任何类型的提供抗体与靶(即，人VEGF或人DLL4)缔合的可变区。就此而言，可变区可以包含或衍生自任何类型的哺乳动物，其可被诱导产生体液应答并产生针对所需抗原的免疫球蛋白。如此，修饰抗体的可变区可以例如是人、鼠类、非人灵长类动物(例如食蟹猴、猕猴等)或兔源。在某些实施方式中，经修饰的免疫球蛋白的可变区和恒定区都是人。在其他实施方式中，相容性抗体的可变区(通常来源于非人来源)可以工程化或专门定制以改善分子的结合特性或降低免疫原性。在这方面，可用于本发明的可变区可通过包含输入的氨基酸序列而被人源化或以其他方式改变。
在某些实施方式中，重链和轻链中的可变结构域通过至少部分置换一个或多个CDR，并且如果需要，通过部分框架区替换和序列修饰和/或变动来改变。虽然CDR可源自与衍生框架区的抗体相同类别或甚至亚类的抗体，但可以设想CDR源自不同类别的抗体并且经常源自来自不同物种的抗体。可能没有必要用来自供体可变区的所有CDR替代所有CDR以将一个可变结构域的抗原结合能力转移到另一个。相反，可能仅需要转移维持抗原结合位点的活性所必需的那些残基。
对于可变区的改变，尽管本领域技术人员将理解，本发明经修饰的抗体将包括其中恒定区结构域的至少一个或多个部分被缺失或以其他方式改变的抗体(例如，全长抗体或其免疫反应性片段)，从而提供所需的生化特性，当与包含天然或未改变的恒定区的免疫原性大致相同的抗体相比时，例如增加的肿瘤定位和/或增加的血清半衰期。在某些实施方式中，经修饰的抗体的恒定区将包含人恒定区。与本发明相容的对恒定区的修饰包括在一个或多个结构域中的一个或多个氨基酸的添加、缺失或取代。本文公开的经修饰的抗体可以包括对三个重链恒定结构域(CH1、CH2或CH3)和/或对轻链恒定结构域(CL)中的一个或多个的改变或修饰。在某些实施方式中，从经修饰的抗体的恒定区部分或整个缺失一个或多个结构域。在某些实施方式中，所述经修饰的抗体将包含整个CH2结构域被除去的结构域缺失构建体或变体(ΔCH2构建体)。在某些实施方式中，省略的恒定区结构域由短氨基酸间隔子(例如，10个氨基酸残基)代替，其提供通常由缺失的恒定区结构域赋予的某些分子柔性。
在某些实施方式中，经修饰的抗体被工程化以将CH3结构域直接融合到所述抗体的铰链区。在其他实施方式中，将肽间隔子插入铰链区和经修饰的CH2和/或CH3结构域之间。例如，可以表达构建体，其中CH2结构域已经被缺失，并且剩余的CH3结构域(经修饰的或未经修饰的)用5至20个氨基酸的间隔子连接到铰链区。可以加入这种间隔子以确保恒定结构域的调控元件保持自由和可接近，或者铰链区保持柔性。然而，应当注意的是，在某些情况下，可证明氨基酸间隔子是免疫原性的，并引发针对该构建体的不需要的免疫应答。因此，在某些实施方式中，添加到构建体中的任何间隔子将是相对非免疫原性的，以保持经修饰的抗体的所需生物学特性。
在某些实施方式中，经修饰的抗体可以仅具有恒定结构域的部分缺失或几个或甚至单个氨基酸的取代。例如，CH2结构域的选定区域中单个氨基酸的突变可足以显著地减少Fc结合，从而增加癌细胞定位和/或肿瘤渗透。类似地，可能理想的是简单地删除控制特定效应子功能(例如补体C1q结合)的一个或多个恒定区的部分。恒定区的这种部分缺失可以改善抗体的所选特征(血清半衰期)，同时使留下与受试者恒定区结构域相关的其他所需功能保持完整。此外，如上所述，所公开的抗体的恒定区可以通过增加所得构建体的特征的一个或多个氨基酸的突变或取代来修饰。在此方面，可以在基本上保持经修饰的抗体的构型和免疫原性特征的同时，破坏由保守性结合位点提供的活性(例如，Fc结合)。在某些实施方式中，经修饰抗体包括向恒定区添加一个或多个氨基酸以增强所需特征，例如降低或增加效应子功能或提供更多的细胞毒素或碳水化合物附着位点。
本领域已知恒定区介导若干效应子功能。例如，补体的C1组分与IgG或IgM抗体的Fc区(与抗原结合)的结合激活补体系统。补体的激活在细胞病原体的调理作用和裂解中是重要的。补体的激活还刺激炎性反应，并且还可参与自身免疫性超敏反应。此外，抗体的Fc区可以结合表达Fc受体(FcR)的细胞。存在许多对不同类型抗体特异性的Fc受体，其包括IgG(γ受体)、IgE(ε受体)、IgA(α受体)和IgM(μ受体)。抗体与Fc受体在细胞表面的结合触发许多重要和多样化的生物学响应，其包括吞噬和破坏抗体包被的颗粒、清除免疫复合物、通过杀手细胞裂解抗体包被的靶细胞(称为抗体依赖性细胞毒性或ADCC)、释放炎症介质、胎盘转移和控制免疫球蛋白产生。
在某些实施方式中，经修饰抗体提供改变的效应子功能，这些改变的效应子功能可影响所施用的抗体的生物学特征。例如，在某些实施方式中，恒定区结构域的缺失或失活(通过点突变或其他方式)可以减少循环修饰抗体的Fc受体结合，从而增加癌细胞定位和/或肿瘤渗透。在其他实施方式中，恒定区修饰增加抗体的血清半衰期。在其他实施方式中，恒定区修饰减少抗体的血清半衰期。在某些实施方式中，修饰恒定区以消除二硫键或寡糖部分。根据对该恒定区进行修饰可以使用本领域技术人员公知的生物化学或分子工程化技术容易地进行。
在某些实施方式中，VEGF/DLL4结合剂是不具有一种或多种效应子功能的抗体。例如，在某些实施方式中，所述抗体不具有ADCC活性和/或不具有补体依赖性细胞毒性CDC活性。在某些实施方式中，所述抗体不结合Fc受体和/或补体因子。在某些实施方式中，所述抗体不具有效应子功能。
本发明还包括与本文所述的嵌合、人源化和人抗体或它们的抗体片段基本同源的变体和等同物。这些可以例如包括保守性取代突变，即一个或多个氨基酸被相似的氨基酸取代。例如，保守性取代是指用相同的一般类别内的另一种氨基酸取代氨基酸，例如一种酸性氨基酸与另一种酸性氨基酸，一种碱性氨基酸与另一种碱性氨基酸或一种中性氨基酸被另一个中性氨基酸所取代。保守性氨基酸取代意指本领域所熟知的并且在此描述。
因此，本发明提供了产生结合VEGF和/或DLL4的抗体的方法，所述抗体包括同时特异性结合VEGF和DLL4的双特异性抗体。在某些实施方式中，产生结合VEGF和/或DLL4的抗体的方法包括使用杂交瘤技术。在某些实施方式中，产生结合VEGF或DLL4的抗体或结合VEGF和DLL4的双特异性抗体的方法包括筛选人噬菌体文库。本发明进一步提供了鉴定结合VEGF和/或DLL4的抗体的方法。在某些实施方式中，通过FACS筛选与VEGF或其部分的结合来鉴定抗体。在某些实施方式中，通过FACS筛选与DLL4或其一部分的结合来鉴定抗体。在某些实施方式中，通过FACS筛选与VEGF和DLL4或其一部分的结合来鉴定抗体。在某些实施方式中，通过使用ELISA筛选与VEGF的结合来鉴定抗体。在某些实施方式中，通过使用ELISA筛选与DLL4的结合来鉴定抗体。在某些实施方式中，通过使用ELISA筛选与VEGF和DLL4的结合来鉴定抗体。在某些实施方式中，通过FACS筛选阻断人VEGF与人VEGF受体的结合来鉴定抗体。在某些实施方式中，通过FACS筛选阻断人DLL4与人Notch受体的结合来鉴定抗体。在某些实施方式中，通过筛选Notch信号传导的抑制或阻断来鉴定抗体。在某些实施方式中，通过筛选VEGF活性的抑制或阻断(例如诱导HUVEC增殖)来鉴定抗体。在某些实施方式中，通过筛选血管生成的调节来鉴定抗体。
在某些实施方式中，本文所述的抗体是分离的。在某些实施方式中，本文所述的抗体为基本上纯的。
在本发明的某些实施方式中，VEGF/DLL4结合剂为多肽。所述多肽可以是包含结合VEGF和/或DLL4的抗体或其片段的重组多肽、天然多肽或合成多肽。本领域将认识到，可以变化本文所述的结合剂的某些氨基酸序列而不显著影响蛋白质的结构或功能。因此，本发明进一步包括显示出实质活性的多肽的变体，或包括针对人VEGF和/或DLL4的抗体或其片段的区域的变体。在某些实施方式中，VEGF/DLL4结合多肽的氨基酸序列变异包括缺失、插入、倒位、重复和/或其他类型的取代。
在某些实施方式中，本文所述的所述多肽是分离的。在某些实施方式中，本文所述的多肽是基本上纯。
可以进一步修饰所述多肽、其类似物和变体以包含通常不是多肽部分的其他化学部分。衍生部分可以改善或调节多肽的溶解度、生物半衰期和/或吸收。所述部分还可以减少或消除多肽和变体的任何不期望的副作用。化学部分的综述可见于Remington：TheScience and Practice of Pharmacy，第22版，2012，Pharmaceutical Press，London。
本文所述的多肽可以通过本领域已知的任何适合的方法制备。所述方法包括直接的蛋白质合成法到构建编码多肽序列的DNA序列并在适合的宿主中表达那些序列。在某些实施方式中，使用重组技术通过分离或合成编码感兴趣的野生型蛋白的DNA序列来构建DNA序列。可选地，可以通过位点特异性诱变来诱变序列以提供其功能类似物。
在某些实施方式中，可以通过使用寡核苷酸合成仪的化学合成来构建编码感兴趣的多肽的DNA序列。可以基于所需多肽的氨基酸序列设计寡核苷酸，并选择在其中将产生感兴趣的重组多肽的宿主细胞中的有利的密码子。可以应用标准方法来合成编码感兴趣的分离多肽的多核苷酸序列。例如，可以使用完整的氨基酸序列构建反向翻译的基因。此外，可以合成含有编码特定分离多肽的核苷酸序列的DNA寡聚体。例如，可以合成几种编码所需多肽的部分的小寡核苷酸，然后将其连接。个体寡核苷酸通常含有5'或3'突出端以用于互补组装。
一旦经组装(通过合成、定点诱变或另一种方法)，可以将编码感兴趣的特定多肽的多核苷酸序列插入到表达载体中，并可操作地连接到适于在理想宿主中表达蛋白质的表达控制序列。可以通过核苷酸测序、限制性内切酶图谱和/或在适合的宿主中生物活性多肽的表达来确认正确的组装。如本领域公知的，为了在宿主中获得转染基因的高表达水平，该基因必须可操作地连接到在所选择的表达宿主中有功能的转录和翻译表达控制序列。
在某些实施方式中，重组表达载体用于扩增和表达编码抗人VEGF和/或DLL4的抗体或其片段的DNA。例如，重组表达载体可以是具有编码与来源于哺乳动物、微生物、病毒或昆虫基因的适合的转录和/或翻译调控元件可操作地连接的诸如抗VEGF抗体或抗DLL4抗体或其片段的多肽链的合成或cDNA来源的DNA片段的可复制DNA构建体。转录单元通常包含以下的组装体：(1)在基因表达中具有调节作用的遗传元件，例如转录启动子或增强子，(2)被转录成mRNA并翻译成蛋白质的结构或编码序列，和(3)适当的转录和翻译起始和终止序列。调控元件可以包括控制转录的操纵子序列。宿主中通常由复制起点赋予的复制能力以及帮助转化体识别的选择基因也可另外的引入。当DNA区域在功能上彼此相关时，DNA区域是“可操作地连接”的。例如，如果信号肽的DNA(分泌型前导序列)表达为参与多肽分泌的前体，则信号肽的DNA与多肽的DNA可操作地连接；如果启动子控制序列的转录，则启动子可操作地连接到编码序列；或者如果核糖体结合位点被定位以允许翻译，则核糖体结合位点可操作地连接到编码序列。在某些实施方式中，旨在用于酵母表达系统的结构元件可以包括能够通过宿主酵母细胞细胞外分泌所翻译蛋白的前导序列。当重组蛋白质在没有前导序列或转运序列的情况下表达时，其可以包括N-末端甲硫氨酸残基。可选地，随后可以从表达的重组蛋白中切割该残基，以提供最终产物。
表达控制序列和表达载体的选择取决于宿主的选择。可以使用多种表达宿主/载体组合。用于真核宿主的有用的表达载体例如包括，包含来自SV40、牛乳头瘤病毒、腺病毒和巨细胞病毒的表达控制序列的载体。用于细菌宿主的有用的表达载体包括诸如来自大肠杆菌的质粒等已知的细菌质粒(包括pCR1、pBR322、pMB9及其衍生物)，以及更宽的宿主范围质粒，例如M13和其他丝状单链DNA噬菌体。
本发明的VEGF/DLL4结合剂(例如，多肽)可由一个或多个载体表达。例如，在某些实施方式中，一个重链多肽由一个载体表达，第二重链多肽由第二载体表达并且轻链多肽由第三载体表达。在某些实施方式中，第一重链多肽和轻链多肽由一个载体表达并且第二重链多肽由第二载体表达。在某些实施方式中，两个重链多肽由一个载体表达并且轻链多肽由第二载体表达。在某些实施方式中，三个多肽由一个载体表达。因此，在某些实施方式中，第一重链多肽、第二重链多肽和轻链多肽由单一载体表达。
用于表达VEGF/DLL4-结合多肽或抗体(或用作抗原的VEGF或DLL4蛋白)的适合的宿主细胞包括处于适当启动子控制下的原核生物、酵母细胞、昆虫细胞或高级真核细胞。原核生物包括革兰氏阴性或革兰氏阳性生物体，例如大肠杆菌或芽孢杆菌。高等真核细胞包括如下所述的已建立的哺乳动物来源的细胞系。也可以使用无细胞翻译系统。与细菌、真菌、酵母和哺乳动物细胞宿主一起使用的克隆和表达载体描述于Pouwels等.，1985，Cloning Vectors：A Laboratory Manual，Elsevier，New York，NY。关于蛋白质生产方法(包括抗体生产)的其他信息可以例如在美国专利公开号2008/0187954；美国专利号6,413,746；6,660,501；及国际专利公开号WO 04/009823中找到。
可以使用各种哺乳动物细胞培养系统来表达重组多肽。重组蛋白在哺乳动物细胞中的表达可以是期望的，因为这些蛋白质通常被正确折叠、适当修饰并具有生物功能。适合的哺乳动物宿主细胞系的实例包括COS-7(猴肾脏来源的)、L-929(鼠类成纤维细胞来源的)、C127(鼠类乳腺肿瘤来源的)、3T3(鼠类成纤维细胞来源的)、CHO(中国仓鼠卵巢来源的)、HeLa(人类子宫颈癌来源的)、BHK(仓鼠肾脏成纤维细胞来源的)、HEK-293(人类胚胎肾脏来源的)细胞系和它们的变体。哺乳动物表达载体可以包含非转录元件(如复制起点、与待表达的基因连接的适合的启动子和增强子、和其他5'或3'侧翼非转录序列)以及5'或3'非翻译序列，如必需的核糖体结合位点、聚腺苷酸化位点、剪接供体和受体位点、和转录终止序列。
重组蛋白在昆虫细胞培养系统(例如杆状病毒)中的表达也提供了用于产生正确折叠和生物功能性蛋白质的可靠方法。用于在昆虫细胞中产生异源蛋白的杆状病毒系统是本领域技术人员公知的。
因此，本发明提供了包含本文所述的VEGF/DLL4结合剂的细胞。在某些实施方式中，所述细胞产生本文所述的VEGF/DLL4结合剂。在某些实施方式中，所述细胞产生抗体。在某些实施方式中，所述细胞产生VEGF结合剂，诸如抗VEGF抗体。在某些实施方式中，所述细胞产生结合VEGF的双特异性抗体。在某些实施方式中，所述细胞产生DLL4结合剂，诸如抗DLL4抗体。在某些实施方式中，所述细胞产生结合DLL4的双特异性抗体。在某些实施方式中，所述细胞产生双特异性VEGF/DLL4结合剂，诸如结合VEGF和DLL4的双特异性抗体。在某些实施方式中，所述细胞产生抗体219R45。在某些实施方式中，所述细胞产生抗体21R79。在某些实施方式中，所述细胞产生抗体21R75。在某些实施方式中，所述细胞产生抗体21R83。在某些实施方式中，所述细胞产生包含来自抗体219R45的抗原结合位点的双特异性抗体。在某些实施方式中，所述细胞产生包含来自抗体21R79的抗原结合位点的双特异性抗体。在某些实施方式中，所述细胞产生包含来自抗体21R75的抗原结合位点的双特异性抗体。在某些实施方式中，所述细胞产生包含来自抗体21R83的抗原结合位点的双特异性抗体。在某些实施方式中，所述细胞产生包含来自抗体219R45的抗原结合位点和来自抗体21R79的抗原结合位点的双特异性抗体。在某些实施方式中，所述细胞产生包含来自抗体219R45的抗原结合位点和来自抗体21M18的抗原结合位点的双特异性抗体。在某些实施方式中，所述细胞产生包含来自抗体219R45的抗原结合位点和来自抗体21R75的抗原结合位点的双特异性抗体。在某些实施方式中，所述细胞产生包含来自抗体219R45的抗原结合位点和来自抗体21R83的抗原结合位点的双特异性抗体。在某些实施方式中，所述细胞产生双特异性抗体219R45-MB-21M18。在某些实施方式中，所述细胞产生双特异性抗体219R45-MB-21R79。在某些实施方式中，所述细胞产生双特异性抗体219R45-MB-21R75。在某些实施方式中，所述细胞产生双特异性抗体219R45-MB-21R83。
可以根据任何适合的方法纯化由转化宿主产生的蛋白质。标准方法包括色谱法(例如离子交换、亲和力和筛分柱色谱)、离心、溶解度差异、或通过任何其他用于蛋白质纯化的标准技术。如六组氨酸、麦芽糖结合结构域、流感衣壳序列和谷胱甘肽-S-转移酶等亲和标签可以连接到蛋白质上，以便通过适合的亲和柱容易地纯化。用于纯化免疫球蛋白的亲和色谱可以包括蛋白A、蛋白G和蛋白L色谱。分离的蛋白质也可以使用诸如蛋白质水解、尺寸排阻色谱(SEC)、质谱法(MS)、核磁共振(NMR)、等电聚焦(IEF)、高效液相色谱(HPLC)和X射线晶体学等技术进行物理表征。可以使用本领域技术人员已知的技术来确定分离的蛋白质的纯度，所述技术包括但不限于SDS-PAGE、SEC、毛细管凝胶电泳、IEF和毛细管等电聚焦(cIEF)。
在某些实施方式中，可以使用市售的蛋白质浓缩过滤器(例如，Amicon或Millipore Pellicon超滤单元)首先浓缩来自将重组蛋白分泌到培养基中的表达系统的上清液。在浓缩步骤之后，浓缩物可以应用于适合的纯化基质。在某些实施方式中，可以使用阴离子交换树脂，例如具有侧链二乙基氨基乙基(DEAE)基团的基质或基底。该基质可以是丙烯酰胺、琼脂糖、葡聚糖、纤维素或通常用于蛋白纯化的其他类型。在某些实施方式中，可以采用阳离子交换步骤。适合的阳离子交换剂包括包含磺丙基或羧甲基的各种不溶性基质。在某些实施方式中，可以采用羟基磷灰石介质，其包括但不限于陶瓷羟基磷灰石(CHT)。在某些实施方式中，可以使用采用疏水性RP-HPLC介质的一个或多个反相HPLC步骤，例如具有侧甲基或其他脂肪族基团的硅胶，以进一步纯化重组蛋白(例如，VEGF/DLL4结合剂)。上述纯化步骤中的一些或全部也可以以各种组合用于提供均质的重组蛋白。
在某些实施方式中，根据本文所述的任何方法纯化诸如双特异性抗体等异二聚体蛋白。在某些实施方式中，使用至少一个色谱步骤分离和/或纯化抗VEGF/抗DLL4双特异性抗体。在某些实施方式中，至少一个色谱步骤包括亲和色谱。在某些实施方式中，至少一个色谱步骤进一步包含阴离子交换色谱。在某些实施方式中，分离的和/或纯化的抗体产物包含至少90％的异二聚体抗体。在某些实施方式中，分离的和/或纯化的抗体产物包含至少95％、96％、97％、98％或99％的异二聚体抗体。在某些实施方式中，分离的和/或纯化的抗体产物包含约100％的异二聚体抗体。
在某些实施方式中，可以将细菌培养物中产生的重组蛋白分离，例如通过从细胞球团进行初次提取，然后进行一次或多次浓缩、盐析、水相离子交换或尺寸排阻色谱步骤。HPLC可用于最终纯化步骤。可以通过任何方便的方法破坏用于表达重组蛋白的微生物细胞，包括冻融循环、超声处理、机械破碎或使用细胞裂解剂。
本领域已知的用于纯化抗体和其他蛋白质的方法还包括例如美国专利公开号2008/0312425；2008/0177048；及2009/0187005中所描述的。
在某些实施方式中，VEGF/DLL4结合剂是不是抗体的多肽。用于鉴定和产生与蛋白质靶标高亲和力结合的非抗体多肽的多种方法在本领域中是已知的。例如参见，Skerra，2007，Curr.Opin.Biotechnol.，18：295-304；Hosse等.，2006，Protein Science，15：14-27；Gill等.，2006，Curr.Opin.Biotechnol.，17：653-658；Nygren，2008，FEBS J.，275：2668-76；及Skerra，2008，FEBS J.，275：2677-83。在某些实施方式中，可以使用噬菌体或哺乳动物细胞展示技术来产生和/或鉴定不是抗体的VEGF/DLL4结合多肽。在某些实施方式中，所述多肽包含选自由以下组成的组中的类型的蛋白质支架：蛋白A、蛋白G、脂质运载蛋白、纤连蛋白结构域、锚蛋白共有重复结构域和硫氧还蛋白。
在某些实施方式中，VEGF/DLL4结合剂或抗体可以以多种缀合(即，免疫缀合物或放射性缀合物)或非缀合形式中的任何一种使用。在某些实施方式中，抗体可以非缀合形式使用以利用包括补体依赖性细胞毒性和抗体依赖性细胞毒性的受试者的天然防御机制以消除恶性或肿瘤细胞。
在某些实施方式中，VEGF/DLL4结合剂(例如，抗体或多肽)与细胞毒性剂缀合。在某些实施方式中，细胞毒性试剂是化疗剂、其包括但不限于：甲氨蝶呤、阿霉素、多柔比星、美法仑、丝裂霉素C、苯丁酸氮芥、柔红霉素或其他嵌入剂。在某些实施方式中，细胞毒性剂是细菌、真菌、植物或动物来源的酶促活性毒素或其片段，其包括但不限于：白喉A链、白喉毒素的非结合活性片段、外毒素A链、蓖麻毒素A链、相思豆毒素A链、蒴莲根毒蛋白A链、α-帚曲霉素、油桐蛋白、香石竹毒蛋白、美洲商登陆(Phytolaca americana)蛋白(PAPI、PAPII和PAP-S)、苦瓜蛋白抑制剂、麻疯树毒蛋白、巴豆毒蛋白、肥皂草抑制剂、白树毒素、米托菌素、局限曲菌素、酚霉素、依诺霉素和单端孢霉烯族毒素(tricothecenes)。在某些实施方式中，细胞毒性剂是产生放射性缀合物或放射性缀合抗体的放射性同位素。多种放射性核素可用于产生放射性缀合抗体，其包括但不限于：90Y、125I、131I、123I、111In、131In、105Rh、153Sm、67Cu、67Ga、166Ho、177Lu、186Re、188Re和212Bi。还可使用抗体和诸如加利车霉素、美登木素(例如，美登素)、美登木素生物碱、单端孢霉烯族毒素和CC1065等一种或多种小分子毒素，及具有毒素活性的那些毒素的衍生物的缀合物。可以使用如下的多种来制备抗体和细胞毒剂的缀合物：包括但不限于N-琥珀酰亚胺基-3-(2-吡啶基二硫醇)丙酸酯(SPDP)、亚氨基四氢噻吩(IT)等双官能团蛋白-偶联剂、亚氨酸酯类的双官能团衍生物(例如二甲基己二酰亚胺酯盐酸盐)、活性酯(诸如二琥珀酰亚胺基辛二酸酯)、醛类(诸如戊二醛)、双叠氮基化合物(诸如双(对叠氮苯甲酰基)己二胺)、双重氮衍生物(诸如双(对重氮基苯甲酰基)-乙二胺)、二异氰酸酯类(诸如甲苯2,6-二异氰酸酯)和双活性氟化合物(诸如1,5-二氟-2,4-二硝基苯)。
VI多核苷酸
在某些实施方式中，在本发明中使用的VEGF/DLL4结合剂由本文所述的一种或多种多核苷酸编码。这些多核苷酸可以是编码特异性结合VEGF、DLL4、VEGF和DLL4两者的多肽(或多肽的片段)的多核苷酸。术语“编码多肽的多核苷酸”包括仅包含该多肽的编码序列的多核苷酸，以及包含额外的编码和/或非编码序列的多核苷酸。例如，在某些实施方式中，所述多核苷酸包含编码针对人VEGF的抗体或编码此类抗体的片段(例如，包含抗原结合位点的片段)的多核苷酸序列。在某些实施方式中，所述多核苷酸包含编码针对人类DLL4的抗体或编码此类抗体的片段(例如，包含抗原结合位点的片段)的多核苷酸序列。所述多核苷酸可以以RNA的形式或以DNA的形式存在。DNA包括cDNA、基因组DNA和合成DNA；并且可以是双链或单链的，并且如果单链的话可以是编码链或非编码(反义)链。
在某些实施方式中，所述多核苷酸包含编码包含选自由以下组成的组中的序列的多肽的多核苷酸：SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:9、SEQ ID NO:10、SEQ ID NO:11、SEQID NO:12、SEQ ID NO:46、SEQ ID NO:47、SEQ ID NO:48、SEQ ID NO:49、SEQ ID NO:56、SEQID NO:57、SEQ ID NO:58、SEQ ID NO:62、SEQ ID NO:63和SEQ ID NO:64。在某些实施方式中，所述多核苷酸包含编码包含选自由以下组成的组中的序列的多肽的多核苷酸：SEQ IDNO:5、SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:9、SEQ ID NO:10、SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:12、SEQ ID NO:48、SEQ ID NO:49、SEQ ID NO:56、SEQ ID NO:58、SEQ IDNO:62和SEQ ID NO:64。在某些实施方式中，所述多核苷酸包含选自由以下组成的组中的多核苷酸序列：SEQ ID NO:29、SEQ ID NO:30、SEQ ID NO:31、SEQ ID NO:32、SEQ ID NO:33、SEQ ID NO:34、SEQ ID NO:35、SEQ ID NO:36、SEQ ID NO:37、SEQ ID NO:38、SEQ ID NO:39、SEQ ID NO:40、SEQ ID NO:50、SEQ ID NO:51、SEQ ID NO:52、SEQ ID NO:53、SEQ IDNO:54、SEQ ID NO:55、SEQ ID NO:60、SEQ ID NO:61、SEQ ID NO:66、SEQ ID NO:67、SEQ IDNO:68、SEQ ID NO:69、SEQ ID NO:70、SEQ ID NO:71、SEQ ID NO:72、SEQ ID NO:73、SEQ IDNO:74、SEQ ID NO:75、SEQ ID NO:76、SEQ ID NO:77和SEQ ID NO:78。
在某些实施方式中，所述多核苷酸包含具有与包含选自由下述组成的组中的序列的多核苷酸具有至少约80％同一性，至少约85％同一性，至少约90％同一性，至少约95％同一性，并且在某些实施方式中至少约96％、97％，98％或99％同一性的核苷酸序列的多核苷酸：SEQ ID NO:29、SEQ ID NO:30、SEQ ID NO:31、SEQ ID NO:32、SEQ ID NO:33、SEQ IDNO:34、SEQ ID NO:52、SEQ ID NO:53、SEQ ID NO:55、SEQ ID NO:60、SEQ ID NO:61、SEQ IDNO:66、SEQ ID NO:67、SEQ ID NO:68、SEQ ID NO:69、SEQ ID NO:70、SEQ ID NO:71、SEQ IDNO:72、SEQ ID NO:73、SEQ ID NO:74、SEQ ID NO:75、SEQ ID NO:76、SEQ ID NO:77和SEQID NO:78。在某些实施方式中，所述多核苷酸包含具有与包含选自由下述组成的组中的序列的多核苷酸具有至少约80％同一性，至少约85％同一性，至少约90％同一性，至少约95％同一性并且在某些实施方式中至少约96％、97％，98％或99％同一性的核苷酸序列的多核苷酸：SEQ ID NO:35、SEQ ID NO:36、SEQ ID NO:37、SEQ ID NO:38、SEQ ID NO:39、SEQ IDNO:40、SEQ ID NO:50、SEQ ID NO:51、SEQ ID NO:54、SEQ ID NO:68、SEQ ID NO:69、SEQ IDNO:70、SEQ ID NO:71、SEQ ID NO:72、SEQ ID NO:73、SEQ ID NO:74、SEQ ID NO:75、SEQ IDNO:76、SEQ ID NO:77、和SEQ ID NO:78。还提供了包含与以下序列杂交的多核苷酸的多核苷酸：SEQ ID NO:29、SEQ ID NO:30、SEQ ID NO:31、SEQ ID NO:32、SEQ ID NO:33、SEQ IDNO:34、SEQ ID NO:35、SEQ ID NO:36、SEQ ID NO:37、SEQ ID NO:38、SEQ ID NO:39、SEQ IDNO:40、SEQ ID NO:50、SEQ ID NO:51、SEQ ID NO:52、SEQ ID NO:53、SEQ ID NO:54、SEQ IDNO:55、SEQ ID NO:60、SEQ ID NO:61、SEQ ID NO:66、SEQ ID NO:67、SEQ ID NO:68、SEQ IDNO:69、SEQ ID NO:70、SEQ ID NO:71、SEQ ID NO:72、SEQ ID NO:73、SEQ ID NO:74、SEQ IDNO:75、SEQ ID NO:76、SEQ ID NO:77和SEQ ID NO:78。在某些实施方式中，杂交处于高度严格条件下。
在某些实施方式中，所述多核苷酸包含成熟多肽的编码序列，其在相同阅读框中融合至多核苷酸，所述多核苷酸有助于例如从宿主细胞表达和分泌多肽(例如，用作控制多肽从细胞转运的分泌序列的前导序列)。具有前导序列的多肽是前蛋白，并可具有被宿主细胞切割的前导序列以形成多肽的成熟形式。所述多核苷酸也可以编码作为成熟蛋白加上额外的5'氨基酸残基的前蛋白。具有原序列的成熟蛋白质是原蛋白，并且是蛋白质的无活性形式。一旦原序列被切割，则剩下活性成熟蛋白质。
在某些实施方式中，所述多核苷酸包含成熟多肽的编码序列，所述成熟多肽的编码序列在相同阅读框中融合至标记序列，所述标记序列允许例如纯化编码的多肽。例如，标记序列可以是由pQE-9载体提供的六组氨酸标签，以在细菌宿主的情况下提供与标记融合的成熟多肽的纯化，或者当使用哺乳动物宿主(例如COS-7细胞)时，标记序列可以是源自流感血凝素蛋白的血凝素(HA)标签。在某些实施方式中，标记序列是FLAG标签，即可与其他亲和标签一起使用的序列DYKDDDDK(SEQ ID NO:45)的肽。
本发明进一步涉及上文描述的编码例如片段、类似物和/或衍生物的多核苷酸的变体。
在某些实施方式中，所述多核苷酸包含具有与编码包含本文所述的VEGF/DLL4结合剂(例如，抗体)或其片段的多肽的多核苷酸具有至少约80％同一性，至少约85％同一性，至少约90％同一性，至少约95％同一性，并且在某些实施方式中至少约96％、97％、98％或99％同一性的核苷酸序列的多核苷酸。
如本文使用的，短语具有与参照核苷酸序列至少例如95％“同一性”的核苷酸序列的多核苷酸意在表示该多核苷酸的核苷酸序列与参照序列相同，不同之处在于所述多核苷酸序列可以包括参照核苷酸序列的每100个核苷酸至多5个点突变。换句话说，为了获得具有与参照核苷酸序列至少95％同一性的核苷酸序列的多核苷酸，参照序列中至多5％的核苷酸可以被删除或被另一个核苷酸或多个核苷酸取代，或者至多为参照序列中总核苷酸的5％数量的核苷酸可以插入参照序列中。参照序列的这些突变可以在参照核苷酸序列的5'或3'末端位置或在那些末端位置之间的任何位置出现，其散布在参照序列中的核苷酸之间或参照序列内的一个或多个相邻组中。
所述多核苷酸变体可以在编码区、非编码区或两者中含有改变。在某些实施方式中，多核苷酸变体含有产生沉默取代、添加或缺失但不改变编码的多肽的性质或活性的改变。在某些实施方式中，多核苷酸变体包含导致多肽的氨基酸序列不变的沉默取代(由于遗传密码的简并性)。多核苷酸变体可以由于各种原因而产生，例如用于针对特定宿主优化密码子表达(即，将人类mRNA中的密码子改变为如大肠杆菌等细菌宿主所优选的密码子)。在某些实施方式中，多核苷酸变体在该序列的非编码区或编码区中包含至少一个沉默突变。
在某些实施方式中，产生多核苷酸变体是以调节或改变所编码多肽的表达(或表达水平)。在某些实施方式中，产生多核苷酸变体以增加所编码多肽的表达。在某些实施方式中，产生多核苷酸变体以降低所编码多肽的表达。在某些实施方式中，与亲本多核苷酸序列相比，多核苷酸变体具有降低的所编码多肽的表达。
在某些实施方式中，产生至少一种多核苷酸变体(不改变所编码多肽的氨基酸序列)以增加异源多聚体分子的产生。在某些实施方式中，产生至少一种多核苷酸变体(不改变所编码多肽的氨基酸序列)以增加双特异性抗体的产生。
在某些实施方式中，所述多核苷酸是分离的。在某些实施方式中，所述多核苷酸为基本上纯的。
还提供了包含本文所述的多核苷酸的载体和细胞。在某些实施方式中，表达载体包含多核苷酸分子。在某些实施方式中，宿主细胞包含含有所述多核苷酸分子的表达载体。在某些实施方式中，宿主细胞包含多核苷酸分子。
VII.包含VEGF/DLL4结合剂的试剂盒
本发明还提供了包含VEGF/DLL4结合剂(例如，抗体)和至少一种另外的治疗剂的试剂盒。还提供了包含VEGF/DLL4结合剂(例如，诸如305B83等抗VEGF/抗DLL4双特异性抗体)，以及至少一种另外的治疗剂的试剂盒。在某些实施方式中，第二种(以上)治疗剂是化疗剂。在某些实施方式中，第二种(以上)治疗剂是血管生成抑制剂。在某些实施方式中，另外的试剂选自由以下组成的组：(a)亚叶酸、5-氟尿嘧啶和伊立替康；(b)紫杉醇；(c)吉西他滨和和(d)紫杉醇和卡铂。所述试剂盒可以配置用于本文所述的任何剂量方案。
本公开的实施方式可以通过参考以下非限制性实施例进一步限定，所述非限制性实施例详细描述了本公开的某些抗体的制备以及使用本公开的抗体的方法。对于本领域技术人员来说显而易见的是，可以在不脱离本公开的范围的情况下对材料和方法进行许多修改。
实施例
实施例1
305B83与紫杉醇在卵巢癌、原发性腹膜癌或输卵管癌中的临床试验
执行紫杉醇加OMP-305B83在具有铂抗性的受试者(定义为从治疗完成起进展≤6个月，在治疗过程中没有进展)的2期或3期卵巢癌、原发性腹膜癌或输卵管癌的1b期研究。研究中最多招募30名受试者。受试者必须接受过在先贝伐单抗和/或2次以上的在先治疗。此外，受试者必须不接受之前每周一次的紫杉醇治疗复发性疾病。入选前，受试者接受筛查以确定研究资格。在施用紫杉醇之前给予地塞米松、抗组胺药和H-2阻断剂作为前药。在每28天周期的第0、7和14天静脉内施用紫杉醇80mg/m2，直至确认完全响应、不耐受或疾病进展。OMP-305B83在紫杉醇前通过静脉内(IV)输注施用。在研究的剂量递增部分中，受试者将以每2周IV施用一次3mg/kg、5mg/kg和10mg/kg的剂量。剂量组群内不允许OMP-305B83的剂量递增或减少。如果未观察到剂量限制性毒性(DLT)，则将以每个剂量水平处理三名受试者。如果三名受试者中的一名经历DLT，则该剂量水平将扩大至6名受试者。如果2名以上受试者经历DLT，则不会在该水平施用另外的受试者，并且将另外3名受试者添加到前一剂量组群中，除非已经以该剂量水平治疗了6名受试者。将从第0天至第28天评估受试者的DLT。一旦建立了与紫杉醇联合治疗的OMP-305B83最大耐受剂量(即每2周1次施用3mg/kg、5mg/kg或10mg/kg)，其他受试者将被纳入扩展组群中，因此研究中将有总共30名受试者接受治疗。治疗将持续到证实完全响应、不耐受或疾病进展。
在研究第56天评估受试者的响应。如果受试者在研究第56天的响应评估中根据实体瘤的响应评估标准(RECIST 1.1)没有进行性疾病，则可以每两周以受试者的初始剂量水平继续治疗，直至发生疾病进展。
实施例2
305B83与紫杉醇和卡铂在子宫内膜癌中的临床试验
进行抗VEGF/DLL4双特异性抗体305B83联合紫杉醇和卡铂的组合作为子宫内膜癌的一线疗法的1b期临床试验(图1B)。执行从1mg/kg开始的剂量递增。在该试验中，三名患者按照护理标准最初用305B83和紫杉醇/卡铂组合的第一水平(1mg/kg)每两周或每三周给药。如果第一水平的患者没有观察到剂量限制性毒性(DLT)，则另外三名患者将以第二水平(2.5mg/kg)给药。如果一名患者在第一水平出现DLT，则另外三名受试者将在第一水平接受治疗。如果第一水平的六名患者中没有其他患者出现DLT，则另外三名患者将在第二水平给药，并且将以第二水平重复该过程。如果两名患者出现DLT，则没有其他受试者在第一水平接受治疗。通常，最大耐受剂量(MTD)将是0至1个受试者经历DLT的水平。剂量水平继续以2.5mg/kg和5.0mg/kg递增。
在剂量递增之后，治疗MTD的扩展群组，并且每21天监测治疗的安全性，其包括身体检查、生命体征、包括脑利钠肽(BNP)水平的实验室测试结果。可以治疗患者，直至其疾病进展或者除非其他安全标准表明停止治疗是适当的。
实施例3
305B83与FOLFIRI治疗结肠直肠癌的临床试验
进行抗VEGF/DLL4双特异性抗体和FOLFIRI的组合作为结肠直肠癌二线疗法的1b期临床试验(图2A)。如以上实施例1或2所述，剂量递增以每两周或每三周给予3mg/kg、5mg/kg、10mg/kg进行，并且可选地5mg/kg，然后以MTD进行扩展组群。一旦建立了MTD，患者可以接受治疗直至其疾病进展，或者除非其他安全标准提示停止治疗是恰当的。
在另一个实施例中，进行抗VEGF/DLL4双特异性抗体和FOLFIRI的组合作为结肠直肠癌中的二线疗法的1b期临床试验(图2B)。如上面实施例2中所述，剂量递增以每两周或每三周给予1mg/kg、2mg/kg、4mg/kg进行，并且可选地5mg/kg，然后以MTD进行扩展组群。一旦建立了MTD，患者可以接受治疗直至其疾病进展，或者除非其他安全标准提示停止治疗是恰当的。
实施例4
305B83与吉西他滨和治疗胰腺癌的临床试验
进行测试抗VEGF/DLL4双特异性抗体与吉西他滨和的组合作为胰腺癌的一线疗法的1b期临床试验(图3)。这项研究从0.5mg/kg或1mg/kg开始剂量递增(如图所示)。
这是在具有一线转移性胰腺癌的受试者中的吉西他滨和305B83的1b期剂量递增研究。最多24名受试者接受治疗。评估受试者的安全性、免疫原性、功效和探索性生物标志物。入选前，受试者接受筛查以确定研究资格。然后患者在每28天治疗周期的第0、7和14天通过1000mg/m2剂量的静脉内(IV)输注施用吉西他滨(或直至毒性需要减少或保持剂量)和在每28天治疗周期的第0、7和14天通过在30分钟内以125mg/m2的剂量IV输注施用/>
305B83通过IV输注每14天一次或每隔21天在30分钟内施用。在研究的初始阶段，进行剂量递增以确定最大耐受剂量(MTD)。305B83的剂量水平将是以0.5mg/kg、1.0mg/kg、2mg/kg，可选地，4mg/kg及可选地5mg/kg每两周或每三周IV施用一次。剂量群组内不允许剂量升高或降低。可以在与研究者和研究发起人达成协议后添加中间剂量组群。另外，可以在研究者和研究发起人达成一致后研究305B83的替代给药方案组群(例如每四周一次给药)。如果没有观察到剂量限制性毒性(DLT)，则以每个剂量水平处理三名受试者。如果三名受试者中的一名经历了DLT，则该剂量水平扩大到六名受试者。如果两名以上受试者经历DLT，则不会在该水平向另外的受试者给药，并且另外三名受试者被加入到前一剂量组群中，除非已经以该剂量水平治疗了六名受试者。在从第一剂量到第28天的时间内评估受试者的DLT。如果合适，在组群中的所有受试者已经完成他们的第28天DLT评估之后发生剂量递增。最大耐受剂量(MTD)是六名受试者中的零个或一个经历DLT的最高剂量水平(即六名受试者最终将在MTD剂量水平下治疗)。如果在最高的测试方案剂量后没有达到MTD，则该剂量(例如2mg/kg、4mg/kg或5mg/kg)被认为是MTD。在研究的剂量递增部分完成之后，六名患者被纳入扩展组群并在MTD治疗。
通过不良事件监测(包括归因于不良事件和严重不良事件)、身体检查、生命体征、包括每21天评估BNP的临床实验室测试、多普勒超声心动图、抗305B83测试、尿分析评估安全性，并且在停止治疗后的30天内，持续进行观察。任何有两个连续BNP值>100pg/ml或一个值>200pg/ml的受试者都是从ACE抑制剂或卡维地洛开始的。每8周对受试者进行疾病状态评估，并在每次随访时和治疗终止后30天内评估其安全性。生物标志物评估在研究第0、21、49、70天进行，然后每12周进行一次，并在治疗结束时进行。还获得了用于PK和免疫原性的血清样品。
实施例5
同时阻断DLL4和VEGF产生优异的抗肿瘤作用
通过305B83加抗mDLL4和抗mVEGF抗体同时抑制DLL4和VEGF产生的抗肿瘤效果优于抗hDLL4+抗mDLL4或抗hVEGF+抗mVEGF的抗肿瘤效果。此外，DLL4和VEGF抑制的组合诱导了脉管系统相关基因的显著下调和肿瘤中的血管密度降低，表明抗VEGF介导的血管生成抑制比抗DLL4对内皮细胞过度增殖的影响显著。在抗DLL4和抗VEGF单独产生次最佳抗肿瘤作用的剂量下，双重靶向导致增强的肿瘤生长抑制。305B83加抗mDLL4和抗mVEGF并联合化学治疗剂导致肿瘤缩小，这种作用在停止化疗后持续。除了使用抗鼠类替代抗体的实验之外，使用人皮肤移植物模型来评估抗DLL4/VEGF对肿瘤细胞在人微环境中生长的肿瘤来源和基质来源的VEGF和DLL4的影响。
这些实验通过包括替代抗体-抗小鼠DLL4(21R30)和抗小鼠VEGF(B20)来进行。使用患者来源的卵巢异种移植肿瘤OMP-OV40，显示同时抑制DLL4和VEGF产生的抗肿瘤作用优于单独的抗DLL4或抗VEGF的抗肿瘤作用(图4)。通过305B83加mDLL4和mVEGF同时抑制DLL4和VEGF诱导了脉管系统相关基因的显著下调和肿瘤基质中脉管系统密度的降低，表明显性抗VEGF介导的作用导致抑制血管生成超过内皮细胞过度增殖的抗DLL4作用(图5)。305B83在肿瘤中调节Notch靶基因表达，与抗DLL4相似。值得注意的是，在抗DLL4和抗VEGF单独产生次最佳抗肿瘤作用的剂量下，双重靶向导致增强的抗肿瘤生长抑制(图6A)。在胃肿瘤OMP-STM1中观察到类似的结果(图6B)。
实施例6
同时阻断DLL4和VEGF延迟肿瘤复发
为了确定通过双特异性抗体305B83加21R30(抗mDLL4)和B20(抗mVEGF)同时阻断DLL4和VEGF对肿瘤复发的效果，将卵巢浆液性癌肿瘤模型OMP-OV19和胰腺癌模型OMP-PN42与标准护理剂(卵巢癌中的紫杉醇和胰腺癌中的吉西他滨/白蛋白结合型紫杉醇)组合治疗4周，然后进行化疗维持阶段3周至4周。随后，在停止治疗后监测肿瘤生长多达两个月。我们的研究结果表明化疗治疗的肿瘤在研究过程中不断增长。化疗剂与305B83加21R30和B20的组合导致肿瘤缩小，并且这种作用在停止化疗后持续(图7A和7B)。在研究结束时，肿瘤完全消退或稳定。
实施例7
305B83抑制植入人体皮肤移植物的肿瘤生长
为了评估双特异性抗DLL4/VEGF抗体对由人细胞组成的微环境中的肿瘤生长的影响，使用人-小鼠嵌合体皮肤移植模型，其中将人肿瘤细胞皮内植入到预先移植到小鼠上的全厚度人皮肤。该模型中的人微环境提供肿瘤来源和间质来源的VEGF和DLL4靶标，这使我们能够评估体内功效。如图8A和8B所示，与对照抗体(p<0.00005)相比，305B83引起肿瘤生长的显著抑制(87％TGI)，并且这种效果优于登西珠单抗(45％TGI)或贝伐单抗(70％TGI)。
上述实施例中描述的研究表明同时抑制DLL4和VEGF产生的抗肿瘤效果优于单独使用抗DLL4或抗VEGF的治疗。同时抑制DLL4和VEGF诱导了脉管系统相关基因的显著下调和脉管系统密度的降低，表明抗VEGF4介导的抗血管生成作用优于抗DLL4介导的内皮细胞过度增殖。化疗剂与抗DLL4/VEGF的组合导致肿瘤消退并在治疗终止后显著延迟肿瘤复发。在人皮肤移植模型中，与登西珠单抗或贝伐单抗相比，双特异性抗体对结肠肿瘤的生长产生显著的抑制作用。
实施例8
在胰腺癌中305B83与吉西他滨联合使用是有活性的
在我们最初的实验中，比较了抗DLL4/VEGF与抗DLL4(登西珠单抗)相比与与抗VEGF(贝伐单抗)相比与吉西他滨患者来源的胰腺癌异种移植物的组合的抗肿瘤活性。治疗四周后，中止吉西他滨治疗并维持抗体治疗。在对照组中，吉西他滨撤回后肿瘤迅速再生长，并且吉西他滨与贝伐单抗组合无效。相反，用登西珠单抗或抗DLL4/VEGF双特异性抗体治疗显著延迟肿瘤生长(图9)。
为了确定DLL4和VEGF抑制对胰腺癌中肿瘤起始细胞频率的影响，进行连续移植研究。用对照Ab、登西珠单抗、贝伐单抗或DLL4/VEGF双特异性抗体处理OMP-PN8荷瘤小鼠。治疗四周后，收集肿瘤，并将来自每种治疗的肿瘤细胞植入一组新的小鼠中。然后允许肿瘤生长83天而不进行治疗。在对照组中，十只小鼠中的九只生长出大肿瘤(图10)。通过抗DLL4处理和DLL4/VEGF双特异性抗体而不是通过贝伐单抗降低了肿瘤生长频率，显示了登西珠单抗的抗CSC活性保留在DLL4/VEGF双特异性抗体中。
在患者来源的异种移植实验中，基质和脉管系统由鼠类细胞组成，而肿瘤细胞是人类。因为DLL4和VEGF在肿瘤细胞和基质/脉管系统中均有表达，所以用DLL4和VEGF拮抗剂进行的先前实验阻断了人而不是鼠类蛋白质的信号传导，并可能低估了阻断这些途径的完整的抗肿瘤作用。为了解决这个问题，在我们的异种移植研究中评估了同时阻断DLL4和VEGF在人肿瘤和鼠类基质/血管系统细胞中的作用。除了305B83(其阻断人类DLL4和VEGF)之外，还通过包括替代抗体-抗小鼠DLL4(21R30)和抗小鼠VEGF(B20)的实验完成。在OMP-PN42肿瘤中测试了与吉西他滨加白蛋白结合型紫杉醇组合的完全DLL4/VEGF抑制。如图11所示，吉西他滨单独治疗对这种肿瘤的影响很小。包括白蛋白结合型紫杉醇延迟了肿瘤生长，但最终肿瘤在用该化疗二联治疗的组中增长。相反，DLL4/VEGF抑制与吉西他滨和白蛋白结合型紫杉醇的组合导致肿瘤完全消退。
实施例9
接受305B83患者的高血压管理
在1a期试验期间观察到的副作用之一是在某些接受305B83的患者中的高血压的发展或恶化。为了处理这种副作用，开发了治疗算法。首先，如果患者的血压超过140/90，则指示患者给主要研究者打电话。最初的目标是在48小时至72小时内使血压正常化。如果血压不低于140/90，应每天调整抗高血压治疗。
如果收缩压超过180mmHg，则使用肼屈嗪或可乐定来快速降低血压。这些药物不能用于收缩压低于180毫米汞柱的患者或用于慢性高血压管理。
在施用305B83并维持慢性血压控制之前，将氨氯地平和Procardia之一用作第一慢性抗高血压药物。建议氨氯地平的起始剂量为每日口服5mg。如果血压未得到控制，则应每日调整剂量，直至达到每日口服最大剂量10mg。Procardia/>的推荐起始剂量为每日口服30mg至60mg。如果血压未得到控制，则每日调整剂量，直至达到每日口服120mg的最大剂量。
如果在给予氨氯地平或Procardia的最大有效剂量后血压未得到控制，则添加血管紧张素转化酶(ACE)抑制剂(如果心率低)或β阻断剂如卡维地洛(如果心率高)。
如果BP不受氨氯地平或Procardia加最大剂量的第二种抗高血压控制，则向混合物中加入第三种抗高血压。第三种抗高血压药应该是ACE抑制剂或β阻断剂，这些试剂中的任一种都不作为第二种抗高血压药物加入。
除非禁忌，否则在研究进入时已经进行抗高血压治疗的患者仍应遵循该通用算法。也就是说，如果合适，他们应该在给药之前给予肼屈嗪或可乐定的处方。此外，如果患者尚未接受氨氯地平、Procardia或类似的钙通道阻断剂，氨氯地平或Procardia/>应该是第一个添加到他们现有的抗高血压治疗方案中的药物。
应当理解的是，本文描述的实施例和实施方式仅出于说明性目的，本领域技术人员据此可以想到多种修改或改变，且这些修改和改变也包含在本申请的主旨和范围内。
本文引用的所有公开物、专利、专利申请、互联网网址以及登录号/数据库序列(包括多核苷酸和多肽序列)出于所有目的通过引用并入本文，其程度等同于将每个单独的公开物、专利、专利申请、互联网网址或登录号/数据库序列均专门且单独地指明如此通过引用并入。
本申请中公开了以下序列：
具有信号序列(加下划线的)的21M18重链(SEQ ID NO:1)
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具有信号序列(加下划线的)的21R79重链(SEQ ID NO:2)
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具有信号序列(加下划线的)的219R45重链(SEQ ID NO:3)
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具有信号序列(加下划线的)的轻链(SEQ ID NO:4)
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无预测信号序列的21R79重链(SEQ ID NO:6)
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无预测信号序列的219R45重链(SEQ ID NO:7)
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无预测信号序列的轻链(SEQ ID NO:8)
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21M18重链可变区(SEQ ID NO:9)
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21R79重链可变区(SEQ ID NO:10)
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219R45重链可变区(SEQ ID NO:11)
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轻链可变区(SEQ ID NO:12)
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21R75、21R79、21R83和21M18重链CDR1(SEQ ID NO:13)
TAYYIH
21R79重链CDR2(SEQ ID NO:14)
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21M18重链CDR2(SEQ ID NO:15)
YISSYNGATNYNQKFKG
21R75、21R79、21R83和21M18重链CDR3(SEQ ID NO:16)
RDYDYDVGMDY
219R45重链CDR1(SEQ ID NO:17)
NYWMH
219R45重链CDR2(SEQ ID NO:18)
DINPSNGRTSYKEKFKR
219R45重链CDR3(SEQ ID NO:19)
HYDDKYYPLMDY
轻链CDR1(SEQ ID NO:20)
RASESVDNYGISFMK
轻链CDR2(SEQ ID NO:21)
AASNQGS
轻链CDR3(SEQ ID NO:22)
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具有信号序列(加下划线的)的人DLL4(SEQ ID NO:23)
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无预测信号序列的人DLL4(SEQ ID NO:24)
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人DLL4N端区域(SEQ ID NO:25)
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人DLL4DSL结构域(SEQ ID NO:26)
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具有信号序列(加下划线的)的人VEGF-A(SEQ ID NO:27)
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无预测信号序列的人VEGF-A(SEQ ID NO:28)
APMAEGGGQNHHEVVKFMDVYQRSYCHPIETLVDIFQEYPDEIEYIFKPSCVPLMRCGGCCNDEGLECVPTEESNITMQIMRIKPHQGQHIGEMSFLQHNKCECRPKKDRARQEKKSVRGKGKGQKRKRKKSRYKSWSVYVGARCCLMPWSLPGPHPCGPCSERRKHLFVQDPQTCKCSCKNTDSRCKARQLELNERTCRCDKPRR
21M18重链核苷酸序列(13B版本1)(SEQ ID NO:29)
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21R79重链核苷酸序列(13B版本1)(SEQ ID NO:30)
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21R79重链核苷酸序列(13B版本2)(SEQ ID NO:31)
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219R45重链核苷酸序列(13A版本1(SEQ ID NO:32)
ATGAAGCATCTGTGGTTTTTCCTGTTGCTCGTGGCGGCACCCAGATGGGTGTTGTCCCAAGTGCAGCTGGTCCAGAGCGGGGCTGAGGTGAAGAAACCCGGAGCAAGCGTAAAAGTATCGTGTAAGGCCTCGGGGTACACGTTTACAAACTACTGGATGCATTGGGTGCGGCAGGCTCCGGGACAGGGGTTGGAATGGATGGGTGACATTAACCCCTCAAATGGCAGAACATCATATAAGGAAAAGTTCAAACGCCGCGTCACACTCTCCGTGGACAAGTCAAGCTCGACTGCGTACATGGAACTTTCGTCGCTGAGGTCGGAGGACACGGCAGTGTACTTTTGCACCATCCATTATGATGACAAGTATTACCCTCTGATGGATTATTGGGGTCAGGGTACGTTGGTCACCGTCTCCAGCGCGTCGACGAAAGGTCCCTCGGTATTTCCCCTCGCCCCCTGCTCGAGGTCGACATCCGAATCAACAGCTGCCCTCGGCTGCCTGGTCAAAGACTACTTCCCAGAGCCGGTAACGGTGTCGTGGAACTCGGGAGCGCTTACGTCCGGAGTCCACACATTTCCGGCGGTACTGCAATCCTCGGGACTGTATTCGTTGTCGTCAGTGGTGACTGTCCCGTCCTCCAATTTCGGGACTCAGACCTATACGTGCAACGTCGACCACAAACCCTCAAACACCAAGGTGGATAAGACAGTGGAGCGCAAGTGCTGCGTGGAGTGTCCCCCGTGTCCGGCACCCCCTGTCGCCGGACCCTCAGTCTTTTTGTTTCCGCCGAAGCCCAAAGATACACTCATGATCTCAAGAACGCCCGAGGTAACATGCGTGGTGGTCGATGTAAGCCACGAGGATCCAGAAGTACAATTCAATTGGTATGTAGACGGGGTCGAGGTCCATAACGCAAAGACGAAACCGAGGGAAGAGCAGTTCAATTCGACTTTCCGGGTGGTGTCGGTGCTTACAGTCGTACATCAGGACTGGTTGAACGGGAAGGAGTACAAGTGTAAAGTATCGAATAAGGGCCTTCCAGCGCCGATTGAAAAGACCATCTCCAAGACCAAAGGACAGCCACGAGAGCCGCAAGTCTATACGCTTCCTCCCAGCCGAGAAAAGATGACTAAAAACCAGGTATCGCTTACGTGTCTCGTCAAGGGTTTCTACCCTTCGGACATCGCGGTGGAATGGGAGAGCAATGGACAACCGGAAAACAACTACAAGACGACACCGCCTATGTTGAAAAGCGATGGATCGTTTTTCCTCTATTCGAAACTCACGGTCGATAAGTCACGGTGGCAGCAGGGGAATGTGTTCTCCTGTTCAGTGATGCACGAGGCGCTCCACAATCACTATACCCAGAAAAGCCTGTCACTTTCCCCGGGAAAATGA
219R45重链核苷酸序列(13A版本2)(SEQ ID NO:33)
ATGAAGCACCTCTGGTTCTTCCTGCTCCTCGTGGCTGCTCCTCGGTGGGTCCTCTCCCAAGTGCAGCTGGTCCAGAGCGGGGCTGAGGTGAAGAAACCCGGAGCTTCCGTCAAAGTCTCCTGTAAGGCTTCCGGATACACCTTTACCAACTATTGGATGCACTGGGTGCGGCAGGCTCCTGGACAAGGGCTGGAATGGATGGGAGACATCAATCCTTCCAATGGCAGAACCTCCTACAAGGAAAAATTCAAACGGCGGGTCACACTCTCCGTGGACAAGTCTAGCTCCACAGCTTACATGGAACTCTCCTCCCTGCGGTCCGAAGACACAGCTGTCTACTTCTGCACCATCCACTACGACGACAAGTACTACCCTCTGATGGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTGTCCAGCGCTTCCACAAAAGGACCCTCCGTCTTTCCCCTCGCCCCCTGCTCCCGGTCCACATCCGAATCAACAGCTGCCCTCGGCTGCCTGGTCAAAGACTACTTCCCAGAGCCTGTCACAGTGTCCTGGAACTCCGGAGCTCTCACATCCGGAGTCCACACATTTCCTGCTGTGCTCCAATCCTCCGGACTGTATTCCCTCTCCTCCGTGGTGACAGTGCCTTCCTCCAATTTCGGGACACAGACCTATACATGCAACGTGGACCACAAACCCTCCAACACCAAAGTCGATAAGACAGTGGAGCGCAAGTGCTGCGTGGAGTGTCCCCCTTGTCCTGCTCCCCCTGTGGCTGGACCTTCCGTCTTTCTGTTTCCTCCTAAACCTAAAGACACCCTCATGATCTCCCGGACCCCCGAGGTCACATGCGTGGTCGTCGATGTGAGCCACGAGGACCCCGAAGTCCAATTTAATTGGTATGTGGACGGGGTGGAGGTCCATAACGCTAAGACCAAACCTAGGGAAGAGCAGTTCAATTCCACTTTCCGGGTGGTGTCCGTGCTGACCGTCGTTCATCAGGACTGGCTCAACGGGAAAGAATACAAATGCAAAGTCTCTAATAAGGGCCTCCCTGCTCCTATTGAAAAAACAATTTCCAAAACAAAAGGACAACCTCGGGAGCCTCAAGTCTACACACTGCCACCTTCCCGGGAAAAAATGACAAAAAATCAAGTCTCCCTCACATGTCTCGTCAAGGGATTCTACCCTTCCGACATTGCTGTGGAATGGGAATCCAATGGACAACCTGAAAACAACTACAAGACAACACCTCCTATGCTCAAAAGCGATGGGTCCTTTTTCCTCTATTCCAAACTCACAGTCGATAAGTCTCGGTGGCAGCAGGGGAATGTGTTCTCCTGTTCCGTGATGCACGAGGCTCTCCACAATCACTATACCCAGAAAAGCCTGTCCCTCTCCCCTGGAAAATGA
轻链核苷酸序列(SEQ ID NO:34)
ATGGTGCTGCAGACCCAGGTGTTCATCTCCCTGCTGCTGTGGATCTCCGGCGCCTACGGCGACATCGTGATGACCCAGTCCCCAGACTCCCTGGCTGTGTCTCTGGGAGAGCGGGCCACCATCTCTTGCAGAGCCTCCGAGTCCGTGGACAACTACGGCATCTCCTTCATGAAGTGGTTCCAGCAGAAGCCCGGCCAGCCCCCAAAGCTGCTGATCTACGCCGCCTCCAACCAGGGATCTGGCGTGCCCGACCGGTTCTCTGGATCCGGCTCTGGCACCGACTTTACCCTGACCATCAGCTCCCTGCAGGCCGAGGACGTGGCCGTGTACTACTGCCAGCAGTCCAAAGAGGTGCCCTGGACCTTCGGCGGAGGCACCAAGGTGGAAATCAAGCGGACCGTGGCCGCTCCCTCCGTGTTCATCTTCCCACCCTCCGACGAGCAGCTGAAGTCCGGAACCGCCTCCGTCGTGTGCCTGCTGAACAACTTCTACCCCCGCGAGGCCAAGGTGCAGTGGAAGGTGGACAACGCCCTGCAGTCCGGCAACTCCCAGGAATCCGTCACCGAGCAGGACTCCAAGGACAGCACCTACTCCCTGTCCTCCACCCTGACCCTGTCCAAGGCCGACTACGAGAAGCACAAGGTGTACGCCTGCGAAGTGACCCACCAGGGCCTGTCCAGCCCCGTGACCAAGTCCTTCAACCGGGGCGAGTGTTAG
21M18重链可变区核苷酸序列(SEQ ID NO:35)
CAGGTGCAGCTGGTGCAGTCTGGCGCCGAAGTGAAGAAACCTGGCGCCTCCGTGAAGATCTCCTGCAAGGCCTCCGGCTACTCCTTCACCGCTTACTACATCCACTGGGTCAAGCAGGCCCCTGGGCAGGGCCTGGAATGGATCGGCTACATCTCCTCCTACAACGGCGCCACCAACTACAACCAGAAATTCAAGGGCCGCGTGACCTTCACCACCGACACCTCCACCTCCACCGCCTACATGGAACTGCGGTCCCTGCGGAGCGACGACACCGCCGTGTACTACTGCGCCAGAGACTACGACTACGACGTGGGCATGGACTACTGGGGCCAGGGCACCCTGGTCACCGTGTCCTCT
21R79重链可变区核苷酸序列(13B)(SEQ ID NO:36)
CAGGTGCAGCTGGTGCAGTCTGGCGCCGAAGTGAAGAAACCTGGCGCCTCCGTGAAGATCTCCTGCAAGGCCTCCGGCTACTCCTTCACCGCCTACTACATCCACTGGGTGAAACAGGCACCAGGCCAGGGACTGGAATGGATCGGCTATATCGCCAACTACAACCGGGCCACCAACTACAACCAGAAATTCAAGGGCCGCGTGACCTTCACCACCGACACCTCCACCTCCACAGCCTACATGGAACTGCGGTCCCTGCGGAGCGACGACACCGCCGTGTACTACTGCGCCAGAGACTACGACTACGACGTGGGCATGGACTACTGGGGCCAGGGCACCCTGGTGACAGTGTCCTCC
21R79重链可变区核苷酸序列(13B版本2)(SEQ ID NO:37)
CAGGTTCAGCTAGTTCAGTCTGGAGCGGAAGTTAAGAAACCTGGAGCATCCGTGAAAATAAGTTGCAAGGCATCCGGTTACTCGTTCACCGCATACTATATCCACTGGGTTAAACAGGCACCAGGACAGGGACTTGAATGGATCGGATATATCGCTAATTATAATAGAGCTACAAACTATAACCAAAAATTCAAAGGACGCGTGACTTTCACAACTGACACCTCAACCTCGACAGCATACATGGAATTACGGTCCCTACGGTCTGACGACACTGCCGTTTACTATTGCGCTAGAGATTATGATTATGATGTTGGAATGGACTATTGGGGCCAGGGAACACTGGTGACAGTGTCTTCT
219R45重链可变区核苷酸序列(13A版本1)(SEQ ID NO:38)
CAAGTGCAGCTGGTCCAGAGCGGGGCTGAGGTGAAGAAACCCGGAGCAAGCGTAAAAGTATCGTGTAAGGCCTCGGGGTACACGTTTACAAACTACTGGATGCATTGGGTGCGGCAGGCTCCGGGACAGGGGTTGGAATGGATGGGTGACATTAACCCCTCAAATGGCAGAACATCATATAAGGAAAAGTTCAAACGCCGCGTCACACTCTCCGTGGACAAGTCAAGCTCGACTGCGTACATGGAACTTTCGTCGCTGAGGTCGGAGGACACGGCAGTGTACTTTTGCACCATCCATTATGATGACAAGTATTACCCTCTGATGGATTATTGGGGTCAGGGTACGTTGGTCACCGTCTCC
AGC
219R45重链可变区核苷酸序列(13A版本2)(SEQ ID NO:39)
CAAGTGCAGCTGGTCCAGAGCGGGGCTGAGGTGAAGAAACCCGGAGCTTCCGTCAAAGTCTCCTGTAAGGCTTCCGGATACACCTTTACCAACTATTGGATGCACTGGGTGCGGCAGGCTCCTGGACAAGGGCTGGAATGGATGGGAGACATCAATCCTTCCAATGGCAGAACCTCCTACAAGGAAAAATTCAAACGGCGGGTCACACTCTCCGTGGACAAGTCTAGCTCCACAGCTTACATGGAACTCTCCTCCCTGCGGTCCGAAGACACAGCTGTCTACTTCTGCACCATCCACTACGACGACAAGTACTACCCTCTGATGGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTGTCCAGC
轻链可变区核苷酸序列(SEQ ID NO:40)
GACATCGTGATGACCCAGTCCCCAGACTCCCTGGCTGTGTCTCTGGGAGAGCGGGCCACCATCTCTTGCAGAGCCTCCGAGTCCGTGGACAACTACGGCATCTCCTTCATGAAGTGGTTCCAGCAGAAGCCCGGCCAGCCCCCAAAGCTGCTGATCTACGCCGCCTCCAACCAGGGATCTGGCGTGCCCGACCGGTTCTCTGGATCCGGCTCTGGCACCGACTTTACCCTGACCATCAGCTCCCTGCAGGCCGAGGACGTGGCCGTGTACTACTGCCAGCAGTCCAAAGAGGTGCCCTGGACCTTCGGCGGAGGCACCAAGGTGGAAATCAAG
人类IgG1重链恒定区(SEQ ID NO:41)
ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
人类IgG2重链恒定区(SEQ ID NO:42)
ASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSNFGTQTYTCNVDHKPSNTKVDKTVERKCCVECPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTFRVVSVLTVVHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPAPIEKTISKTKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPMLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
人类IgG3重链恒定区(SEQ ID NO:43)
ASTKGPSVFPLAPCSRSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYTCNVNHKPSNTKVDKRVELKTPLGDTTHTCPRCPEPKSCDTPPPCPRCPEPKSCDTPPPCPRCPEPKSCDTPPPCPRCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVQFKWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTFRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKTKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVK
GFYPSDIAVEWESSGQPENNYNTTPPMLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNIFSCSVMHEALHNRFTQKSLSLSPGK
人类IgG4重链恒定区(SEQ ID NO:44)
ASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPSCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK
FLAG肽(SEQ ID NO:45)
DYKDDDDK
具有加下划线的未经修饰的链的信号序列的亲本21R79重链(SEQ ID NO:46)
MKHLWFFLLLVAAPRWVLSQVQLVQSGAEVKKPGASVKISCKASGYSFTAYYIHWVKQAPGQGLEWIGYIANYNRATNYNQKFKGRVTFTTDTSTSTAYMELRSLRSDDTAVYYCARDYDYDVGMDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSNFGTQTYTCNVDHKPSNTKVDKTVERKCCVECPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTFRVVSVLTVVHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPAPIEKTISKTKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPMLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
具有加下划线的信号序列的亲本219R45重链(SEQ ID NO:47)
MKHLWFFLLLVAAPRWVLSQVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTNYWMHWVRQAPGQGLEWMGDINPSNGRTSYKEKFKRRVTLSVDKSSSTAYMELSSLRSEDTAVYFCTIHYDDKYYPLMDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSNFGTQTYTCNVDHKPSNTKVDKTVERKCCVECPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTFRVVSVLTVVHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPAPIEKTISKTKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPMLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
无预测信号序列的亲本21R79重链(SEQ ID NO:48)
QVQLVQSGAEVKKPGASVKISCKASGYSFTAYYIHWVKQAPGQGLEWIGYIANYNRATNYNQKFKGRVTFTTDTSTSTAYMELRSLRSDDTAVYYCARDYDYDVGMDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSNFGTQTYTCNVDHKPSNTKVDKTVERKCCVECPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTFRVVSVLTVVHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPAPIEKTISKTKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPMLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
无信号序列的亲本219R45重链(SEQ ID NO:49)
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTNYWMHWVRQAPGQGLEWMGDINPSNGRTSYKEKFKRRVTLSVDKSSSTAYMELSSLRSEDTAVYFCTIHYDDKYYPLMDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSNFGTQTYTCNVDHKPSNTKVDKTVERKCCVECPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTFRVVSVLTVVHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPAPIEKTISKTKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPMLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
亲本21R79重链可变区核苷酸序列(SEQ ID NO:50)
CAAGTGCAGCTCGTGCAGTCAGGGGCGGAGGTCAAGAAGCCGGGAGCATCGGTCAAAATCTCGTGTAAGGCCTCGGGGTACTCCTTTACTGCGTATTACATCCATTGGGTAAAGCAGGCGCCAGGGCAGGGATTGGAGTGGATTGGGTATATCGCCAATTACAATCGCGCGACGAACTATAACCAGAAATTCAAGGGAAGGGTGACCTTCACAACGGATACATCGACATCGACGGCCTACATGGAACTTCGCAGCCTGCGATCAGATGACACGGCGGTATACTATTGCGCAAGAGATTACGACTATGATGTGGGAATGGACTATTGGGGTCAAGGTACTCTGGTCACAGTCTCCTCC
亲本219R45重链可变区核苷酸序列(SEQ ID NO:51)
CAGGTACAGCTCGTGCAATCGGGGGCAGAGGTCAAAAAGCCCGGTGCGTCGGTAAAGGTCAGCTGCAAAGCGTCAGGTTATACATTCACGAATTACTGGATGCATTGGGTCAGACAGGCCCCTGGACAAGGGCTTGAATGGATGGGAGATATCAATCCGTCGAACGGACGGACTAGCTATAAGGAGAAGTTTAAGAGGCGCGTAACACTGTCGGTGGACAAATCGTCCTCAACGGCCTACATGGAGTTGTCATCCCTGCGGTCGGAAGATACGGCGGTCTACTTCTGTACTATCCACTATGACGATAAGTACTACCCGCTTATGGACTACTGGGGTCAGGGAACATTGGTAACCGTGAGCAGC
具有信号序列的亲本21R79重链核苷酸序列(SEQ ID NO:52)
ATGAAACACTTGTGGTTTTTCCTCTTGCTCGTGGCAGCTCCTCGGTGGGTACTTTCACAAGTGCAGCTCGTGCAGTCAGGGGCGGAGGTCAAGAAGCCGGGAGCATCGGTCAAAATCTCGTGTAAGGCCTCGGGGTACTCCTTTACTGCGTATTACATCCATTGGGTAAAGCAGGCGCCAGGGCAGGGATTGGAGTGGATTGGGTATATCGCCAATTACAATCGCGCGACGAACTATAACCAGAAATTCAAGGGAAGGGTGACCTTCACAACGGATACATCGACATCGACGGCCTACATGGAACTTCGCAGCCTGCGATCAGATGACACGGCGGTATACTATTGCGCAAGAGATTACGACTATGATGTGGGAATGGACTATTGGGGTCAAGGTACTCTGGTCACAGTCTCCTCCGCCAGCACCAAGGGCCCTAGCGTCTTCCCTCTGGCTCCCTGCAGCAGGAGCACCAGCGAGAGCACAGCCGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCTCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCAGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAACTTCGGCACCCAGACCTACACCTGCAACGTAGATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGACAGTTGAGCGCAAATGTTGTGTCGAGTGCCCACCGTGCCCAGCACCACCTGTGGCAGGACCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACCCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACGTGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCACGAAGACCCCGAGGTCCAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCACGGGAGGAGCAGTTCAACAGCACGTTCCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTTGTGCACCAGGACTGGCTGAACGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGGCCTCCCAGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAACCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTACCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACACCTCCCATGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAAGCTCACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACGCAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCGGGTAAA
具有信号序列的亲本219R45重链核苷酸序列(SEQ ID NO:53)
ATGAAACACCTCTGGTTCTTTTTGCTCCTGGTGGCAGCTCCCCGATGGGTGCTTAGCCAGGTACAGCTCGTGCAATCGGGGGCAGAGGTCAAAAAGCCCGGTGCGTCGGTAAAGGTCAGCTGCAAAGCGTCAGGTTATACATTCACGAATTACTGGATGCATTGGGTCAGACAGGCCCCTGGACAAGGGCTTGAATGGATGGGAGATATCAATCCGTCGAACGGACGGACTAGCTATAAGGAGAAGTTTAAGAGGCGCGTAACACTGTCGGTGGACAAATCGTCCTCAACGGCCTACATGGAGTTGTCATCCCTGCGGTCGGAAGATACGGCGGTCTACTTCTGTACTATCCACTATGACGATAAGTACTACCCGCTTATGGACTACTGGGGTCAGGGAACATTGGTAACCGTGAGCAGCGCGTCCACAAAGGGCCCTAGCGTCTTCCCTCTGGCTCCCTGCAGCAGGAGCACCAGCGAGAGCACAGCCGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCTCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCAGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAACTTCGGCACCCAGACCTACACCTGCAACGTAGATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGACAGTTGAGCGCAAATGTTGTGTCGAGTGCCCACCGTGCCCAGCACCACCTGTGGCAGGACCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACCCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACGTGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCACGAAGACCCCGAGGTCCAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCACGGGAGGAGCAGTTCAACAGCACGTTCCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTTGTGCACCAGGACTGGCTGAACGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGGCCTCCCAGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAACCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTACCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACACCTCCCATGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAAGCTCACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACGCAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCGGGTAAA
亲本21R79和219R45轻链可变区核苷酸序列(SEQ ID NO:54)
GACATCGTGATGACCCAGTCCCCTGACTCCCTGGCTGTGTCCCTGGGCGAGAGGGCCACCATCTCCTGCAGAGCCAGCGAATCCGTCGATAATTATGGCATTTCCTTTATGAAGTGGTTCCAGCAGAAACCAGGACAGCCTCCTAAGCTGCTCATTTACGCTGCATCCAACCAAGGGTCCGGGGTCCCTGACAGGTTCTCCGGCAGCGGGTCCGGAACAGATTTCACTCTCACCATCAGCAGCCTGCAGGCTGAAGATGTGGCTGTCTATTACTGTCAGCAAAGCAAGGAGGTGCCTTGGACATTCGGAGGAGGGACCAAGGTGGAAATCAAA
亲本21R79和219R45轻链核苷酸序列(SEQ ID NO:55)
ATGGTGCTCCAGACCCAGGTCTTCATTTCCCTGCTGCTCTGGATCAGCGGAGCCTACGGGGACATCGTGATGACCCAGTCCCCTGACTCCCTGGCTGTGTCCCTGGGCGAGAGGGCCACCATCTCCTGCAGAGCCAGCGAATCCGTCGATAATTATGGCATTTCCTTTATGAAGTGGTTCCAGCAGAAACCAGGACAGCCTCCTAAGCTGCTCATTTACGCTGCATCCAACCAAGGGTCCGGGGTCCCTGACAGGTTCTCCGGCAGCGGGTCCGGAACAGATTTCACTCTCACCATCAGCAGCCTGCAGGCTGAAGATGTGGCTGTCTATTACTGTCAGCAAAGCAAGGAGGTGCCTTGGACATTCGGAGGAGGGACCAAGGTGGAAATCAAACGTACGGTGGCTGCCCCCTCCGTCTTCATCTTCCCCCCCAGCGATGAGCAGCTGAAAAGCGGCACTGCCAGCGTGGTGTGCCTGCTGAATAACTTCTATCCCCGGGAGGCCAAAGTGCAGTGGAAGGTGGATAACGCCCTCCAAAGCGGCAACTCCCAGGAGAGCGTCACAGAGCAGGACAGCAAGGACAGCACCTACAGCCTCAGCAGCACCCTGACCCTGAGCAAAGCCGACTACGAGAAACACAAAGTCTACGCCTGCGAAGTCACCCATCAGGGCCTGAGCAGCCCCGTCACAAAGAGCTTCAACAGGGGCGAGTGTTGA
无预测信号序列的21R75重链(SEQ ID NO:56)
QVQLVQSGAEVKKPGASVKISCKASGYSFTAYYIHWVKQAPGQGLEWIGYIAGYKDATNYNQKFKGRVTFTTDTSTSTAYMELRSLRSDDTAVYYCARDYDYDVGMDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSNFGTQTYTCNVDHKPSNTKVDKTVERKCCVECPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTFRVVSVLTVVHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPAPIEKTISKTKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVEGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPMLDSDGSFFLYSELTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
具有预测信号序列(加下划线的)的21R75重链(SEQ ID NO:57)
MKHLWFFLLLVAAPRWVLSQVQLVQSGAEVKKPGASVKISCKASGYSFTAYYIHWVKQAPGQGLEWIGYIAGYKDATNYNQKFKGRVTFTTDTSTSTAYMELRSLRSDDTAVYYCARDYDYDVGMDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWN
SGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSNFGTQTYTCNVDHKPSNTKVDKTVERKCCVECPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTFRVVSVLTVVHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPAPIEKTISKTKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVEGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPMLDSDGSFFLYSELTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
21R75重链可变区(SEQ ID NO:58)
QVQLVQSGAEVKKPGASVKISCKASGYSFTAYYIHWVKQAPGQGLEWIGYIAGYKDATNYNQKFKGRVTFTTDTSTSTAYMELRSLRSDDTAVYYCARDYDYDVGMDYWGQGTLVTVSS
21R75重链CDR2(SEQ ID NO:59)
YIAGYKDATNYNQKFKG
具有信号序列的21R75重链核苷酸序列(13B版本1)(SEQ ID NO:60)
ATGAAGCACCTGTGGTTCTTTCTGCTGCTGGTGGCCGCTCCCAGATGGGTGCTGTCCCAGGTGCAGCTGGTGCAGTCTGGCGCCGAAGTGAAGAAACCTGGCGCCTCCGTGAAGATCTCCTGCAAGGCCTCCGGCTACTCCTTCACCGCCTACTACATCCACTGGGTCAAGCAGGCCCCTGGACAGGGCCTGGAATGGATCGGCTATATCGCCGGCTACAAGGACGCCACCAACTACAACCAGAAATTCAAGGGCAGAGTGACCTTCACCACCGACACCTCCACCTCTACCGCCTACATGGAACTGCGGTCCCTGCGGAGCGACGACACCGCCGTGTACTACTGCGCCAGAGACTACGACTACGACGTGGGCATGGACTACTGGGGCCAGGGCACACTCGTGACCGTGTCCTCTGCTTCCACCAAGGGCCCCTCCGTGTTTCCTCTGGCCCCTTGCTCCAGATCCACCTCCGAGTCTACCGCCGCTCTGGGCTGCCTCGTGAAGGACTACTTCCCCGAGCCCGTGACAGTGTCTTGGAACTCTGGCGCCCTGACCTCCGGCGTGCACACCTTTCCAGCTGTGCTGCAGTCCTCCGGCCTGTACTCCCTGTCCTCCGTCGTGACTGTGCCCTCCTCCAACTTCGGCACCCAGACCTACACCTGTAACGTGGACCACAAGCCCTCCAACACCAAGGTGGACAAGACCGTGGAACGGAAGTGCTGCGTGGAATGCCCCCCTTGTCCTGCCCCTCCTGTGGCTGGCCCTAGCGTGTTCCTGTTCCCCCCAAAGCCCAAGGACACCCTGATGATCTCCCGGACCCCCGAAGTGACCTGCGTGGTGGTGGATGTGTCCCACGAGGACCCCGAGGTGCAGTTCAATTGGTACGTGGACGGCGTGGAAGTGCACAACGCCAAGACCAAGCCCAGAGAGGAACAGTTCAACTCCACCTTCCGGGTGGTGTCCGTGCTGACCGTGGTGCATCAGGACTGGCTGAACGGCAAAGAGTACAAGTGCAAGGTGTCCAACAAGGGCCTGCCTGCCCCCATCGAAAAGACCATCTCTAAGACCAAGGGACAGCCCCGCGAGCCCCAGGTGTACACACTGCCTCCATCCCGGGAAGAGATGACCAAGAACCAGGTGTCCCTGACCTGTCTGGTGGAAGGCTTCTACCCCTCCGATATCGCCGTGGAATGGGAGTCCAACGGCCAGCCCGAGAACAACTACAAGACCACCCCCCCCATGCTGGACTCCGACGGCTCATTCTTCCTGTACAGCGAGCTGACAGTGGACAAGTCCCGGTGGCAGCAGGGCAACGTGTTCTCCTGCTCCGTGATGCACGAGGCCCTGCACAACCACTACACCCAGAAGTCCCTGTCCCTGAGCCCCGGCAAG
具有信号序列的21R75重链核苷酸序列(13B版本S1-2)(SEQ ID NO:61)
ATGAAGCACCTGTGGTTCTTTCTGCTGCTGGTGGCCGCTCCCAGATGGGTGCTGTCCCAGGTTCAGCTAGTTCAGTCTGGAGCGGAAGTTAAGAAACCTGGAGCATCCGTGAAAATAAGTTGCAAGGCATCCGGTTACTCGTTCACCGCATACTATATCCACTGGGTTAAACAGGCACCAGGACAGGGACTTGAATGGATCGGATATATCGCTGGATATAAAGATGCTACAAACTATAACCAAAAATTCAAAGGACGCGTGACTTTCACAACTGACACCTCAACCTCGACAGCATACATGGAATTACGGTCCCTACGGTCTGACGACACTGCCGTTTACTATTGCGCTAGAGATTATGATTATGATGTTGGAATGGACTATTGGGGCCAGGGAACACTGGTGACAGTGTCTTCTGCATCCACTAAGGGACCATCCGTGTTCCCTTTGGCCCCTTGCTCTCGTTCGACCTCTGAATCGACTGCCGCTCTGGGATGCCTCGTGAAAGATTACTTCCCTGAGCCTGTGACCGTTTCCTGGAACTCGGGCGCCCTAACCTCTGGCGTGCACACATTCCCTGCCGTGCTACAGTCTTCTGGCCTATACTCTTTATCTTCGGTTGTTACCGTACCTTCTTCTAACTTCGGAACCCAAACTTACACCTGTAACGTAGACCACAAGCCTTCGAACACCAAGGTGGACAAGACTGTTGAGCGAAAGTGCTGCGTTGAGTGCCCTCCATGTCCTGCACCTCCTGTGGCTGGCCCTTCTGTGTTCCTGTTCCCTCCAAAACCTAAGGACACTCTAATGATCTCTCGGACTCCTGAGGTGACTTGCGTGGTTGTGGACGTGTCCCACGAGGACCCTGAGGTGCAGTTCAATTGGTACGTGGACGGAGTCGAGGTGCACAATGCAAAGACCAAGCCTCGGGAGGAACAGTTCAACTCCACCTTCCGGGTGGTTTCTGTGTTGACCGTTGTGCACCAAGACTGGCTGAACGGCAAAGAATACAAGTGCAAGGTGTCCAACAAGGGCCTGCCTGCCCCTATCGAAAAGACCATCAGCAAGACCAAGGGCCAGCCTCGCGAGCCTCAGGTGTACACCCTGCCTCCCAGCCGGGAAGAAATGACCAAGAACCAGGTGTCCCTGACCTGTCTGGTGGAGGGCTTCTACCCTTCCGACATCGCCGTTGAGTGGGAGTCTAACGGACAGCCGGAGAACAACTACAAGACTACGCCTCCAATGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTGTACTCCGAACTGACCGTGGACAAGTCCCGGTGGCAGCAGGGCAACGTGTTCTCATGCTCCGTAATGCACGAAGCCTTGCACAATCACTACACTCAAAAGTCCCTATCCTTATCTCCTGGCAAG
无预测信号序列的21R83重链(SEQ ID NO:62)
QVQLVQSGAEVKKPGASVKISCKASGYSFTAYYIHWVKQAPGQGLEWIGYISNYNRATNY
NQKFKGRVTFTTDTSTSTAYMELRSLRSDDTAVYYCARDYDYDVGMDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSNFGTQTYTCNVDHKPSNTKVDKTVERKCCVECPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTFRVVSVLTVVHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPAPIEKTISKTKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVEGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPMLDSDGSFFLYSELTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
具有预测信号序列(加下划线的)的21R83重链(SEQ ID NO:63)
MKHLWFFLLLVAAPRWVLSQVQLVQSGAEVKKPGASVKISCKASGYSFTAYYIHWVKQAPGQGLEWIGYISNYNRATNYNQKFKGRVTFTTDTSTSTAYMELRSLRSDDTAVYYCARDYDYDVGMDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWN
SGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSNFGTQTYTCNVDHKPSNTKVDKTVERKCCVECPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTFRVVSVLTVVHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPAPIEKTISKTKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVEGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPMLDSDGSFFLYSELTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
21R83重链可变区(SEQ ID NO:64)
QVQLVQSGAEVKKPGASVKISCKASGYSFTAYYIHWVKQAPGQGLEWIGYISNYNRATNY
NQKFKGRVTFTTDTSTSTAYMELRSLRSDDTAVYYCARDYDYDVGMDYWGQGTLVTVSS
21R83重链CDR2(SEQ ID NO:65)
YISNYNRATNYNQKFKG
具有加下划线的信号序列的21R83重链核苷酸序列(13B版本1)(SEQ ID NO:66)
ATGAAGCACCTGTGGTTCTTTCTGCTGCTGGTGGCCGCTCCCAGATGGGTGCTGTCCCAGGTGCAGCTGGTGCAGTCTGGCGCCGAAGTGAAGAAACCTGGCGCCTCCGTGAAGATCTCCTGCAAGGCCTCCGGCTACTCCTTCACCGCCTACTACATCCACTGGGTCAAGCAGGCCCCTGGACAGGGCCTGGAATGGATCGGCTACATCTCCAACTACAACCGGGCCACCAATTACAACCAGAAATTCAAGGGCCGCGTGACCTTCACCACCGACACCTCTACCTCTACCGCCTACATGGAACTGCGGTCCCTGCGGAGCGACGACACCGCCGTGTACTACTGCGCCAGAGACTACGACTACGACGTGGGCATGGACTACTGGGGCCAGGGCACACTCGTGACCGTGTCTAGCGCTTCCACCAAGGGCCCCTCCGTGTTTCCTCTGGCCCCTTGCTCCAGATCCACCTCCGAGTCTACCGCCGCTCTGGGCTGCCTCGTGAAGGACTACTTCCCCGAGCCCGTGACAGTGTCCTGGAACTCTGGCGCTCTGACCTCCGGCGTGCACACCTTTCCAGCTGTGCTGCAGTCCTCCGGCCTGTACTCCCTGTCCTCCGTCGTGACTGTGCCCTCCTCCAACTTCGGCACCCAGACCTACACCTGTAACGTGGACCACAAGCCCTCCAACACCAAGGTGGACAAGACCGTGGAACGGAAGTGCTGCGTGGAATGCCCCCCTTGTCCTGCCCCTCCTGTGGCTGGCCCTAGCGTGTTCCTGTTCCCCCCAAAGCCCAAGGACACCCTGATGATCTCCCGGACCCCCGAAGTGACCTGCGTGGTGGTGGATGTGTCCCACGAGGACCCCGAGGTGCAGTTCAATTGGTACGTGGACGGCGTGGAAGTGCACAACGCCAAGACCAAGCCCAGAGAGGAACAGTTCAACTCCACCTTCCGGGTGGTGTCCGTGCTGACCGTGGTGCATCAGGACTGGCTGAACGGCAAAGAGTACAAGTGCAAGGTGTCCAACAAGGGCCTGCCTGCCCCCATCGAAAAGACCATCTCTAAGACCAAGGGACAGCCCCGCGAGCCCCAGGTGTACACACTGCCTCCATCCCGGGAAGAGATGACCAAGAACCAGGTGTCCCTGACCTGTCTGGTGGAAGGCTTCTACCCCTCCGATATCGCCGTGGAATGGGAGTCCAACGGCCAGCCCGAGAACAACTACAAGACCACCCCCCCCATGCTGGACTCCGACGGCTCATTCTTCCTGTACAGCGAGCTGACAGTGGACAAGTCCCGGTGGCAGCAGGGCAACGTGTTCTCCTGCTCCGTGATGCACGAGGCCCTGCACAACCACTACACCCAGAAGTCCCTGTCCCTGAGCCCCGGCAAG
具有加下划线的信号序列的21R75重链核苷酸序列(13B版本S1-2)(SEQ ID NO:67)
ATGAAGCACCTGTGGTTCTTTCTGCTGCTGGTGGCCGCTCCCAGATGGGTGCTGTCCCAGGTTCAGCTAGTTCAGTCTGGAGCGGAAGTTAAGAAACCTGGAGCATCCGTGAAAATAAGTTGCAAGGCATCCGGTTACTCGTTCACCGCATACTATATCCACTGGGTTAAACAGGCACCAGGACAGGGACTTGAATGGATCGGATATATCGCTGGATATAAAGATGCTACAAACTATAACCAAAAATTCAAAGGACGCGTGACTTTCACAACTGACACCTCAACCTCGACAGCATACATGGAATTACGGTCCCTACGGTCTGACGACACTGCCGTTTACTATTGCGCTAGAGATTATGATTATGATGTTGGAATGGACTATTGGGGCCAGGGAACACTGGTGACAGTGTCTTCTGCATCCACTAAGGGACCATCCGTGTTCCCTTTGGCCCCTTGCTCTCGTTCGACCTCTGAATCGACTGCCGCTCTGGGATGCCTCGTGAAAGATTACTTCCCTGAGCCTGTGACCGTTTCCTGGAACTCGGGCGCCCTAACCTCTGGCGTGCACACATTCCCTGCCGTGCTACAGTCTTCTGGCCTATACTCTTTATCTTCGGTTGTTACCGTACCTTCTTCTAACTTCGGAACCCAAACTTACACCTGTAACGTAGACCACAAGCCTTCGAACACCAAGGTGGACAAGACTGTTGAGCGAAAGTGCTGCGTTGAGTGCCCTCCATGTCCTGCACCTCCTGTGGCTGGCCCTTCTGTGTTCCTGTTCCCTCCAAAACCTAAGGACACTCTAATGATCTCTCGGACTCCTGAGGTGACTTGCGTGGTTGTGGACGTGTCCCACGAGGACCCTGAGGTGCAGTTCAATTGGTACGTGGACGGAGTCGAGGTGCACAATGCAAAGACCAAGCCTCGGGAGGAACAGTTCAACTCCACCTTCCGGGTGGTTTCTGTGTTGACCGTTGTGCACCAAGACTGGCTGAACGGCAAAGAATACAAGTGCAAGGTGTCCAACAAGGGCCTGCCTGCCCCTATCGAAAAGACCATCAGCAAGACCAAGGGCCAGCCTCGCGAGCCTCAGGTGTACACCCTGCCTCCCAGCCGGGAAGAAATGACCAAGAACCAGGTGTCCCTGACCTGTCTGGTGGAGGGCTTCTACCCTTCCGACATCGCCGTTGAGTGGGAGTCTAACGGACAGCCGGAGAACAACTACAAGACTACGCCTCCAATGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTGTACTCCGAACTGACCGTGGACAAGTCCCGGTGGCAGCAGGGCAACGTGTTCTCATGCTCCGTAATGCACGAAGCCTTGCACAATCACTACACTCAAAAGTCCCTATCCTTATCTCCTGGCAAG
21R75重链可变区核苷酸序列(13B版本1)(SEQ ID NO:68)
CAGGTGCAGCTGGTGCAGTCTGGCGCCGAAGTGAAGAAACCTGGCGCCTCCGTGAAGATCTCCTGCAAGGCCTCCGGCTACTCCTTCACCGCCTACTACATCCACTGGGTCAAGCAGGCCCCTGGACAGGGCCTGGAATGGATCGGCTATATCGCCGGCTACAAGGACGCCACCAACTACAACCAGAAATTCAAGGGCAGAGTGACCTTCACCACCGACACCTCCACCTCTACCGCCTACATGGAACTGCGGTCCCTGCGGAGCGACGACACCGCCGTGTACTACTGCGCCAGAGACTACGACTACGACGTGGGCATGGACTACTGGGGCCAGGGCACACTCGTGACCGTGTCCTCT
21R75重链可变区核苷酸序列(13B版本2)(SEQ ID NO:69)
CAGGTTCAGCTAGTTCAGTCTGGAGCGGAAGTTAAGAAACCTGGAGCATCCGTGAAAATAAGTTGCAAGGCATCCGGTTACTCGTTCACCGCATACTATATCCACTGGGTTAAACAGGCACCAGGACAGGGACTTGAATGGATCGGATATATCGCTGGATATAAAGATGCTACAAACTATAACCAAAAATTCAAAGGACGCGTGACTTTCACAACTGACACCTCAACCTCGACAGCATACATGGAATTACGGTCCCTACGGTCTGACGACACTGCCGTTTACTATTGCGCTAGAGATTATGATTATGATGTTGGAATGGACTATTGGGGCCAGGGAACACTGGTGACAGTGTCTTCT
21R83重链可变区核苷酸序列(13B版本1)(SEQ ID NO:70)
CAGGTGCAGCTGGTGCAGTCTGGCGCCGAAGTGAAGAAACCTGGCGCCTCCGTGAAGATCTCCTGCAAGGCCTCCGGCTACTCCTTCACCGCCTACTACATCCACTGGGTCAAGCAGGCCCCTGGACAGGGCCTGGAATGGATCGGCTACATCTCCAACTACAACCGGGCCACCAATTACAACCAGAAATTCAAGGGCCGCGTGACCTTCACCACCGACACCTCTACCTCTACCGCCTACATGGAACTGCGGTCCCTGCGGAGCGACGACACCGCCGTGTACTACTGCGCCAGAGACTACGACTACGACGTGGGCATGGACTACTGGGGCCAGGGCACACTCGTGACCGTGTCTAGC
21R75重链可变区核苷酸序列(13B版本2)(SEQ ID NO:71)
CAGGTTCAGCTAGTTCAGTCTGGAGCGGAAGTTAAGAAACCTGGAGCATCCGTGAAAATAAGTTGCAAGGCATCCGGTTACTCGTTCACCGCATACTATATCCACTGGGTTAAACAGGCACCAGGACAGGGACTTGAATGGATCGGATATATCGCTGGATATAAAGATGCTACAAACTATAACCAAAAATTCAAAGGACGCGTGACTTTCACAACTGACACCTCAACCTCGACAGCATACATGGAATTACGGTCCCTACGGTCTGACGACACTGCCGTTTACTATTGCGCTAGAGATTATGATTATGATGTTGGAATGGACTATTGGGGCCAGGGAACACTGGTGACAGTGTCTTCT
具有加下划线的信号序列的21R83重链核苷酸序列(13B版本2)(SEQ ID NO:72)
ATGAAGCACCTATGGTTCTTTCTATTATTAGTGGCCGCTCCCCGTTGGGTGTTATCGCAG
GTTCAGCTAGTTCAGTCTGGAGCGGAAGTTAAGAAACCTGGAGCATCCGTGAAAATAAGTTGCAAGGCATCCGGTTACTCGTTCACCGCATACTATATCCACTGGGTTAAACAGGCACCAGGACAGGGACTTGAATGGATCGGATATATCTCCAATTATAATAGAGCTACAAACTATAACCAAAAATTCAAAGGACGCGTGACTTTCACAACTGACACCTCAACCTCGACAGCATACATGGAATTACGGTCCCTACGGTCTGACGACACTGCCGTTTACTATTGCGCTAGAGATTATGATTATGATGTTGGAATGGACTATTGGGGCCAGGGAACACTGGTGACAGTGTCTTCTGCATCCACTAAGGGACCATCCGTGTTCCCTTTGGCCCCTTGCTCTCGTTCGACCTCTGAATCGACTGCCGCTCTGGGATGCCTCGTGAAAGATTACTTCCCTGAGCCTGTGACCGTTTCCTGGAACTCGGGCGCCCTAACCTCTGGCGTGCACACATTCCCTGCCGTGCTACAGTCTTCTGGCCTATACTCTTTATCTTCGGTTGTTACCGTACCTTCTTCTAACTTCGGAACCCAAACTTACACCTGTAACGTAGACCACAAGCCTTCGAACACCAAGGTGGACAAGACTGTTGAGCGAAAGTGCTGCGTTGAGTGCCCTCCATGTCCTGCACCTCCTGTGGCTGGCCCTTCTGTGTTCCTGTTCCCTCCAAAACCTAAGGACACTCTAATGATCTCTCGGACTCCTGAGGTGACTTGCGTGGTTGTGGACGTGTCCCACGAGGACCCTGAGGTGCAGTTCAATTGGTACGTGGACGGAGTCGAGGTGCACAATGCAAAGACCAAGCCTCGGGAGGAACAGTTCAACTCCACCTTCCGGGTGGTTTCTGTGTTGACCGTTGTGCACCAAGACTGGCTGAACGGCAAAGAATACAAGTGCAAGGTGTCCAACAAGGGCCTGCCTGCCCCTATCGAAAAGACCATCAGCAAGACCAAGGGCCAGCCTCGCGAGCCTCAGGTGTACACCCTGCCTCCCAGCCGGGAAGAAATGACCAAGAACCAGGTGTCCCTGACCTGTCTGGTGGAGGGCTTCTACCCTTCCGACATCGCCGTTGAGTGGGAGTCTAACGGACAGCCGGAGAACAACTACAAGACTACGCCTCCAATGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTGTACTCCGAACTGACCGTGGACAAGTCCCGGTGGCAGCAGGGCAACGTGTTCTCATGCTCCGTAATGCACGAAGCCTTGCACAATCACTACACTCAAAAGTCCCTATCCTTATCTCCTGGCAAGTAG
21R83重链可变区核苷酸序列(13B版本2)(SEQ ID NO:73)
CAGGTTCAGCTAGTTCAGTCTGGAGCGGAAGTTAAGAAACCTGGAGCATCCGTGAAAATAAGTTGCAAGGCATCCGGTTACTCGTTCACCGCATACTATATCCACTGGGTTAAACAGGCACCAGGACAGGGACTTGAATGGATCGGATATATCTCCAATTATAATAGAGCTACAAACTATAACCAAAAATTCAAAGGACGCGTGACTTTCACAACTGACACCTCAACCTCGACAGCATACATGGAATTACGGTCCCTACGGTCTGACGACACTGCCGTTTACTATTGCGCTAGAGATTATGATTATGATGTTGGAATGGACTATTGGGGCCAGGGAACACTGGTGACAGTGTCTTCT
具有加下划线的信号序列的21R75重链核苷酸序列(13B版本2)(SEQ ID NO:74)
ATGAAGCACCTATGGTTCTTTCTATTATTAGTGGCCGCTCCCCGTTGGGTGTTATCGCAG
GTTCAGCTAGTTCAGTCTGGAGCGGAAGTTAAGAAACCTGGAGCATCCGTGAAAATAAGTTGCAAGGCATCCGGTTACTCGTTCACCGCATACTATATCCACTGGGTTAAACAGGCACCAGGACAGGGACTTGAATGGATCGGATATATCGCTGGATATAAAGATGCTACAAACTATAACCAAAAATTCAAAGGACGCGTGACTTTCACAACTGACACCTCAACCTCGACAGCATACATGGAATTACGGTCCCTACGGTCTGACGACACTGCCGTTTACTATTGCGCTAGAGATTATGATTATGATGTTGGAATGGACTATTGGGGCCAGGGAACACTGGTGACAGTGTCTTCTGCATCCACTAAGGGACCATCCGTGTTCCCTTTGGCCCCTTGCTCTCGTTCGACCTCTGAATCGACTGCCGCTCTGGGATGCCTCGTGAAAGATTACTTCCCTGAGCCTGTGACCGTTTCCTGGAACTCGGGCGCCCTAACCTCTGGCGTGCACACATTCCCTGCCGTGCTACAGTCTTCTGGCCTATACTCTTTATCTTCGGTTGTTACCGTACCTTCTTCTAACTTCGGAACCCAAACTTACACCTGTAACGTAGACCACAAGCCTTCGAACACCAAGGTGGACAAGACTGTTGAGCGAAAGTGCTGCGTTGAGTGCCCTCCATGTCCTGCACCTCCTGTGGCTGGCCCTTCTGTGTTCCTGTTCCCTCCAAAACCTAAGGACACTCTAATGATCTCTCGGACTCCTGAGGTGACTTGCGTGGTTGTGGACGTGTCCCACGAGGACCCTGAGGTGCAGTTCAATTGGTACGTGGACGGAGTCGAGGTGCACAATGCAAAGACCAAGCCTCGGGAGGAACAGTTCAACTCCACCTTCCGGGTGGTTTCTGTGTTGACCGTTGTGCACCAAGACTGGCTGAACGGCAAAGAATACAAGTGCAAGGTGTCCAACAAGGGCCTGCCTGCCCCTATCGAAAAGACCATCAGCAAGACCAAGGGCCAGCCTCGCGAGCCTCAGGTGTACACCCTGCCTCCCAGCCGGGAAGAAATGACCAAGAACCAGGTGTCCCTGACCTGTCTGGTGGAGGGCTTCTACCCTTCCGACATCGCCGTTGAGTGGGAGTCTAACGGACAGCCGGAGAACAACTACAAGACTACGCCTCCAATGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTGTACTCCGAACTGACCGTGGACAAGTCCCGGTGGCAGCAGGGCAACGTGTTCTCATGCTCCGTAATGCACGAAGCCTTGCACAATCACTACACTCAAAAGTCCCTATCCTTATCTCCTGGCAAGTAG
21M18重链核苷酸序列(版本2)(SEQ ID NO:75)
ATGAAGCACCTATGGTTCTTTCTATTATTAGTGGCCGCTCCCCGTTGGGTGTTATCGCAG
GTTCAGCTAGTTCAGTCTGGAGCGGAAGTTAAGAAACCTGGAGCATCCGTGAAAATAAGTTGCAAGGCATCCGGTTACTCGTTCACCGCATACTATATCCACTGGGTTAAACAGGCACCAGGACAGGGACTTGAATGGATCGGATATATCTCCTCTTATAATGGAGCTACAAACTATAACCAAAAATTCAAAGGACGCGTGACTTTCACAACTGACACCTCAACCTCGACAGCATACATGGAATTACGGTCCCTACGGTCTGACGACACTGCCGTTTACTATTGCGCTAGAGATTATGATTATGATGTTGGAATGGACTATTGGGGCCAGGGAACACTGGTGACAGTGTCTTCTGCATCCACTAAGGGACCATCCGTGTTCCCTTTGGCCCCTTGCTCTCGTTCGACCTCTGAATCGACTGCCGCTCTGGGATGCCTCGTGAAAGATTACTTCCCTGAGCCTGTGACCGTTTCCTGGAACTCGGGCGCCCTAACCTCTGGCGTGCACACATTCCCTGCCGTGCTACAGTCTTCTGGCCTATACTCTTTATCTTCGGTTGTTACCGTACCTTCTTCTAACTTCGGAACCCAAACTTACACCTGTAACGTAGACCACAAGCCTTCGAACACCAAGGTGGACAAGACTGTTGAGCGAAAGTGCTGCGTTGAGTGCCCTCCATGTCCTGCACCTCCTGTGGCTGGCCCTTCTGTGTTCCTGTTCCCTCCAAAACCTAAGGACACTCTAATGATCTCTCGGACTCCTGAGGTGACTTGCGTGGTTGTGGACGTGTCCCACGAGGACCCTGAGGTGCAGTTCAATTGGTACGTGGACGGAGTCGAGGTGCACAATGCAAAGACCAAGCCTCGGGAGGAACAGTTCAACTCCACCTTCCGGGTGGTTTCTGTGTTGACCGTTGTGCACCAAGACTGGCTGAACGGCAAAGAATACAAGTGCAAGGTGTCCAACAAGGGCCTGCCTGCCCCTATCGAAAAGACCATCAGCAAGACCAAGGGCCAGCCTCGCGAGCCTCAGGTGTACACCCTGCCTCCCAGCCGGGAAGAAATGACCAAGAACCAGGTGTCCCTGACCTGTCTGGTGGAGGGCTTCTACCCTTCCGACATCGCCGTTGAGTGGGAGTCTAACGGACAGCCGGAGAACAACTACAAGACTACGCCTCCAATGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTGTACTCCGAACTGACCGTGGACAAGTCCCGGTGGCAGCAGGGCAACGTGTTCTCATGCTCCGTAATGCACGAAGCCTTGCACAATCACTACACTCAAAAGTCCCTATCCTTATCTCCTGGCAAGTAG
21M18重链可变区(版本2)(SEQ ID NO:76)
CAGCTAGTTCAGTCTGGAGCGGAAGTTAAGAAACCTGGAGCATCCGTGAAAATAAGTTGCAAGGCATCCGGTTACTCGTTCACCGCATACTATATCCACTGGGTTAAACAGGCACCAGGACAGGGACTTGAATGGATCGGATATATCTCCTCTTATAATGGAGCTACAAACTATAACCAAAAATTCAAAGGACGCGTGACTTTCACAACTGACACCTCAACCTCGACAGCATACATGGAATTACGGTCCCTACGGTCTGACGACACTGCCGTTTACTATTGCGCTAGAGATTATGATTATGATGTTGGAATGGACTATTGGGGCCAGGGAACACTGGTGACAGTGTCTTCT
具有信号序列的21R75重链核苷酸序列(13B版本1T)(SEQ ID NO:77)
ATGAAGCACCTGTGGTTCTTTCTGCTGCTGGTGGCCGCTCCCAGATGGGTGCTGTCTCAGGTGCAGCTGGTGCAGTCTGGCGCCGAAGTGAAGAAACCTGGCGCCTCCGTGAAGATCTCCTGCAAGGCCTCCGGCTACTCCTTCACCGCCTACTACATCCACTGGGTCAAGCAGGCCCCTGGACAGGGCCTGGAATGGATCGGCTATATCGCCGGCTACAAGGACGCCACCAACTACAACCAGAAATTCAAGGGCAGAGTGACCTTCACCACCGACACCTCCACCTCTACCGCCTACATGGAACTGCGGTCCCTGCGGAGCGACGACACCGCCGTGTACTACTGCGCCAGAGACTACGACTACGACGTGGGCATGGACTACTGGGGCCAGGGCACACTCGTGACCGTGTCCTCTGCTTCCACCAAGGGCCCCTCCGTGTTTCCTCTGGCCCCTTGCTCCAGATCCACCTCCGAGTCTACCGCCGCTCTGGGCTGCCTCGTGAAGGACTACTTCCCCGAGCCCGTGACAGTGTCTTGGAACTCTGGCGCCCTGACCTCCGGCGTGCACACCTTTCCAGCTGTGCTGCAGTCCTCCGGCCTGTACTCCCTGTCCTCCGTCGTGACTGTGCCCTCCTCCAACTTCGGCACCCAGACCTACACCTGTAACGTGGACCACAAGCCCTCCAACACCAAGGTGGACAAGACCGTGGAACGGAAGTGCTGCGTGGAATGCCCCCCTTGTCCTGCCCCTCCTGTGGCTGGCCCTAGCGTGTTCCTGTTCCCCCCAAAGCCCAAGGACACCCTGATGATCTCCCGGACCCCCGAAGTGACCTGCGTGGTGGTGGATGTGTCCCACGAGGACCCCGAGGTGCAGTTCAATTGGTACGTGGACGGCGTGGAAGTGCACAACGCCAAGACCAAGCCCAGAGAGGAACAGTTCAACTCCACCTTCCGGGTGGTGTCCGTGCTGACCGTGGTGCATCAGGACTGGCTGAACGGCAAAGAGTACAAGTGCAAGGTGTCCAACAAGGGCCTGCCTGCCCCCATCGAAAAGACCATCTCTAAGACCAAGGGACAGCCCCGCGAGCCCCAGGTGTACACACTGCCTCCATCCCGGGAAGAGATGACCAAGAACCAGGTGTCCCTGACCTGTCTGGTGGAAGGCTTCTACCCCTCCGATATCGCCGTGGAATGGGAGTCCAACGGCCAGCCCGAGAACAACTACAAGACCACCCCCCCCATGCTGGACTCCGACGGCTCATTCTTCCTGTACAGCGAGCTGACAGTGGACAAGTCCCGGTGGCAGCAGGGCAACGTGTTCTCCTGCTCCGTGATGCACGAGGCCCTGCACAACCACTACACCCAGAAGTCCCTGTCCCTGAGCCCCGGCAAG
具有加下划线的信号序列的21R83重链核苷酸序列(13B版本1T)(SEQ ID NO:78)
ATGAAGCACCTGTGGTTCTTTCTGCTGCTGGTGGCCGCTCCCAGATGGGTGCTGTCTCAGGTGCAGCTGGTGCAGTCTGGCGCCGAAGTGAAGAAACCTGGCGCCTCCGTGAAGATCTCCTGCAAGGCCTCCGGCTACTCCTTCACCGCCTACTACATCCACTGGGTCAAGCAGGCCCCTGGACAGGGCCTGGAATGGATCGGCTACATCTCCAACTACAACCGGGCCACCAATTACAACCAGAAATTCAAGGGCCGCGTGACCTTCACCACCGACACCTCTACCTCTACCGCCTACATGGAACTGCGGTCCCTGCGGAGCGACGACACCGCCGTGTACTACTGCGCCAGAGACTACGACTACGACGTGGGCATGGACTACTGGGGCCAGGGCACACTCGTGACCGTGTCTAGCGCTTCCACCAAGGGCCCCTCCGTGTTTCCTCTGGCCCCTTGCTCCAGATCCACCTCCGAGTCTACCGCCGCTCTGGGCTGCCTCGTGAAGGACTACTTCCCCGAGCCCGTGACAGTGTCCTGGAACTCTGGCGCTCTGACCTCCGGCGTGCACACCTTTCCAGCTGTGCTGCAGTCCTCCGGCCTGTACTCCCTGTCCTCCGTCGTGACTGTGCCCTCCTCCAACTTCGGCACCCAGACCTACACCTGTAACGTGGACCACAAGCCCTCCAACACCAAGGTGGACAAGACCGTGGAACGGAAGTGCTGCGTGGAATGCCCCCCTTGTCCTGCCCCTCCTGTGGCTGGCCCTAGCGTGTTCCTGTTCCCCCCAAAGCCCAAGGACACCCTGATGATCTCCCGGACCCCCGAAGTGACCTGCGTGGTGGTGGATGTGTCCCACGAGGACCCCGAGGTGCAGTTCAATTGGTACGTGGACGGCGTGGAAGTGCACAACGCCAAGACCAAGCCCAGAGAGGAACAGTTCAACTCCACCTTCCGGGTGGTGTCCGTGCTGACCGTGGTGCATCAGGACTGGCTGAACGGCAAAGAGTACAAGTGCAAGGTGTCCAACAAGGGCCTGCCTGCCCCCATCGAAAAGACCATCTCTAAGACCAAGGGACAGCCCCGCGAGCCCCAGGTGTACACACTGCCTCCATCCCGGGAAGAGATGACCAAGAACCAGGTGTCCCTGACCTGTCTGGTGGAAGGCTTCTACCCCTCCGATATCGCCGTGGAATGGGAGTCCAACGGCCAGCCCGAGAACAACTACAAGACCACCCCCCCCATGCTGGACTCCGACGGCTCATTCTTCCTGTACAGCGAGCTGACAGTGGACAAGTCCCGGTGGCAGCAGGGCAACGTGTTCTCCTGCTCCGTGATGCACGAGGCCCTGCACAACCACTACACCCAGAAGTCCCTGTCCCTGAGCCCCGGCAAG
替代性21R75、21R79、21R83和21M18重链CDR1(SEQ ID NO:79)
AYYIH
抗DLL4重链CDR2共有序列(SEQ ID NO:80)
YIX1X2YX3X4ATNYNQKFKG
其中X1是丝氨酸或丙氨酸，X2是丝氨酸、天冬酰胺或甘氨酸，X3是天冬酰胺或赖氨酸，并且X4是甘氨酸、精氨酸或天冬氨酸。
序列表
<110> 昂考梅德药品有限公司 (OncoMed Pharmaceuticals, Inc.)
J·杜邦 (Dupont, Jakob)
H·帕尔马 (Parmar, Hema)
R·J·斯塔格 (Stagg, Robert J.)
<120> 治疗癌症的方法和组合物
<130> 2293.148PC01/PAC/MIG
<150> 62/222,505
<151> 2015-09-23
<160> 80
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 464
<212> PRT
<213> 人工序列 (Artificial Sequence)
<220>
<223> 21M18 重链
<220>
<221> 信号(SIGNAL)
<222> (1)..(19)
<400> 1
Met Lys His Leu Trp Phe Phe Leu Leu Leu Val Ala Ala Pro Arg Trp
1 5 10 15
Val Leu Ser Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys
20 25 30
Pro Gly Ala Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe
35 40 45
Thr Ala Tyr Tyr Ile His Trp Val Lys Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu
50 55 60
Glu Trp Ile Gly Tyr Ile Ser Ser Tyr Asn Gly Ala Thr Asn Tyr Asn
65 70 75 80
Gln Lys Phe Lys Gly Arg Val Thr Phe Thr Thr Asp Thr Ser Thr Ser
85 90 95
Thr Ala Tyr Met Glu Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val
100 105 110
Tyr Tyr Cys Ala Arg Asp Tyr Asp Tyr Asp Val Gly Met Asp Tyr Trp
115 120 125
Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro
130 135 140
Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr
145 150 155 160
Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr
165 170 175
Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro
180 185 190
Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr
195 200 205
Val Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gln Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp
210 215 220
His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Thr Val Glu Arg Lys Cys
225 230 235 240
Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser
245 250 255
Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg
260 265 270
Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro
275 280 285
Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala
290 295 300
Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Phe Arg Val Val
305 310 315 320
Ser Val Leu Thr Val Val His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr
325 330 335
Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr
340 345 350
Ile Ser Lys Thr Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu
355 360 365
Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys
370 375 380
Leu Val Glu Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser
385 390 395 400
Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Met Leu Asp
405 410 415
Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Glu Leu Thr Val Asp Lys Ser
420 425 430
Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala
435 440 445
Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
450 455 460
<210> 2
<211> 464
<212> PRT
<213> 人工序列 (Artificial Sequence)
<220>
<223> 21R79 重链
<220>
<221> 信号(SIGNAL)
<222> (1)..(19)
<400> 2
Met Lys His Leu Trp Phe Phe Leu Leu Leu Val Ala Ala Pro Arg Trp
1 5 10 15
Val Leu Ser Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys
20 25 30
Pro Gly Ala Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe
35 40 45
Thr Ala Tyr Tyr Ile His Trp Val Lys Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu
50 55 60
Glu Trp Ile Gly Tyr Ile Ala Asn Tyr Asn Arg Ala Thr Asn Tyr Asn
65 70 75 80
Gln Lys Phe Lys Gly Arg Val Thr Phe Thr Thr Asp Thr Ser Thr Ser
85 90 95
Thr Ala Tyr Met Glu Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val
100 105 110
Tyr Tyr Cys Ala Arg Asp Tyr Asp Tyr Asp Val Gly Met Asp Tyr Trp
115 120 125
Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro
130 135 140
Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr
145 150 155 160
Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr
165 170 175
Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro
180 185 190
Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr
195 200 205
Val Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gln Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp
210 215 220
His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Thr Val Glu Arg Lys Cys
225 230 235 240
Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser
245 250 255
Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg
260 265 270
Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro
275 280 285
Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala
290 295 300
Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Phe Arg Val Val
305 310 315 320
Ser Val Leu Thr Val Val His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr
325 330 335
Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr
340 345 350
Ile Ser Lys Thr Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu
355 360 365
Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys
370 375 380
Leu Val Glu Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser
385 390 395 400
Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Met Leu Asp
405 410 415
Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Glu Leu Thr Val Asp Lys Ser
420 425 430
Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala
435 440 445
Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
450 455 460
<210> 3
<211> 466
<212> PRT
<213> 人工序列 (Artificial Sequence)
<220>
<223> 219R45 重链
<220>
<221> 信号(SIGNAL)
<222> (1)..(19)
<400> 3
Met Lys His Leu Trp Phe Phe Leu Leu Leu Val Ala Ala Pro Arg Trp
1 5 10 15
Val Leu Ser Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys
20 25 30
Pro Gly Ala Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe
35 40 45
Thr Asn Tyr Trp Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu
50 55 60
Glu Trp Met Gly Asp Ile Asn Pro Ser Asn Gly Arg Thr Ser Tyr Lys
65 70 75 80
Glu Lys Phe Lys Arg Arg Val Thr Leu Ser Val Asp Lys Ser Ser Ser
85 90 95
Thr Ala Tyr Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val
100 105 110
Tyr Phe Cys Thr Ile His Tyr Asp Asp Lys Tyr Tyr Pro Leu Met Asp
115 120 125
Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys
130 135 140
Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu
145 150 155 160
Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro
165 170 175
Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr
180 185 190
Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val
195 200 205
Val Thr Val Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gln Thr Tyr Thr Cys Asn
210 215 220
Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Thr Val Glu Arg
225 230 235 240
Lys Cys Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly
245 250 255
Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile
260 265 270
Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu
275 280 285
Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His
290 295 300
Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Phe Arg
305 310 315 320
Val Val Ser Val Leu Thr Val Val His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys
325 330 335
Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ala Pro Ile Glu
340 345 350
Lys Thr Ile Ser Lys Thr Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr
355 360 365
Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Lys Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu
370 375 380
Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp
385 390 395 400
Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Met
405 410 415
Leu Lys Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp
420 425 430
Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His
435 440 445
Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro
450 455 460
Gly Lys
465
<210> 4
<211> 238
<212> PRT
<213> 人工序列 (Artificial Sequence)
<220>
<223> 轻链
<220>
<221> 信号(SIGNAL)
<222> (1)..(20)
<400> 4
Met Val Leu Gln Thr Gln Val Phe Ile Ser Leu Leu Leu Trp Ile Ser
1 5 10 15
Gly Ala Tyr Gly Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala
20 25 30
Val Ser Leu Gly Glu Arg Ala Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Glu Ser
35 40 45
Val Asp Asn Tyr Gly Ile Ser Phe Met Lys Trp Phe Gln Gln Lys Pro
50 55 60
Gly Gln Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Ala Ala Ser Asn Gln Gly Ser
65 70 75 80
Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr
85 90 95
Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys
100 105 110
Gln Gln Ser Lys Glu Val Pro Trp Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val
115 120 125
Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro
130 135 140
Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu
145 150 155 160
Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn
165 170 175
Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser
180 185 190
Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala
195 200 205
Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly
210 215 220
Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
225 230 235
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<211> 445
<212> PRT
<213> 人工序列 (Artificial Sequence)
<220>
<223> 21M18 重链
<400> 5
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Ala Tyr
20 25 30
Tyr Ile His Trp Val Lys Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Tyr Ile Ser Ser Tyr Asn Gly Ala Thr Asn Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Arg Val Thr Phe Thr Thr Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Asp Tyr Asp Tyr Asp Val Gly Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe
115 120 125
Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu
130 135 140
Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp
145 150 155 160
Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu
165 170 175
Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser
180 185 190
Ser Asn Phe Gly Thr Gln Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro
195 200 205
Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Thr Val Glu Arg Lys Cys Cys Val Glu
210 215 220
Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu
225 230 235 240
Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu
245 250 255
Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Gln
260 265 270
Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys
275 280 285
Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Phe Arg Val Val Ser Val Leu
290 295 300
Thr Val Val His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys
305 310 315 320
Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys
325 330 335
Thr Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser
340 345 350
Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Glu
355 360 365
Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln
370 375 380
Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Met Leu Asp Ser Asp Gly
385 390 395 400
Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Glu Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln
405 410 415
Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn
420 425 430
His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
435 440 445
<210> 6
<211> 445
<212> PRT
<213> 人工序列 (Artificial Sequence)
<220>
<223> 21R79 重链
<400> 6
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Ala Tyr
20 25 30
Tyr Ile His Trp Val Lys Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Tyr Ile Ala Asn Tyr Asn Arg Ala Thr Asn Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Arg Val Thr Phe Thr Thr Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Asp Tyr Asp Tyr Asp Val Gly Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe
115 120 125
Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu
130 135 140
Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp
145 150 155 160
Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu
165 170 175
Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser
180 185 190
Ser Asn Phe Gly Thr Gln Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro
195 200 205
Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Thr Val Glu Arg Lys Cys Cys Val Glu
210 215 220
Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu
225 230 235 240
Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu
245 250 255
Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Gln
260 265 270
Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys
275 280 285
Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Phe Arg Val Val Ser Val Leu
290 295 300
Thr Val Val His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys
305 310 315 320
Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys
325 330 335
Thr Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser
340 345 350
Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Glu
355 360 365
Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln
370 375 380
Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Met Leu Asp Ser Asp Gly
385 390 395 400
Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Glu Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln
405 410 415
Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn
420 425 430
His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
435 440 445
<210> 7
<211> 447
<212> PRT
<213> 人工序列 (Artificial Sequence)
<220>
<223> 219R45 重链
<400> 7
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr
20 25 30
Trp Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Asp Ile Asn Pro Ser Asn Gly Arg Thr Ser Tyr Lys Glu Lys Phe
50 55 60
Lys Arg Arg Val Thr Leu Ser Val Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys
85 90 95
Thr Ile His Tyr Asp Asp Lys Tyr Tyr Pro Leu Met Asp Tyr Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser
115 120 125
Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala
130 135 140
Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val
145 150 155 160
Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala
165 170 175
Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val
180 185 190
Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gln Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His
195 200 205
Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Thr Val Glu Arg Lys Cys Cys
210 215 220
Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val
225 230 235 240
Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr
245 250 255
Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu
260 265 270
Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys
275 280 285
Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Phe Arg Val Val Ser
290 295 300
Val Leu Thr Val Val His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys
305 310 315 320
Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile
325 330 335
Ser Lys Thr Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro
340 345 350
Pro Ser Arg Glu Lys Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu
355 360 365
Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn
370 375 380
Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Met Leu Lys Ser
385 390 395 400
Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg
405 410 415
Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu
420 425 430
His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
435 440 445
<210> 8
<211> 217
<212> PRT
<213> 人工序列 (Artificial Sequence)
<220>
<223> 轻链
<400> 8
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Glu Ser Val Asp Asn Tyr
20 25 30
Gly Ile Ser Phe Met Lys Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro
35 40 45
Lys Leu Leu Ile Tyr Ala Ala Ser Asn Gln Gly Ser Gly Val Pro Asp
50 55 60
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser
65 70 75 80
Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Lys
85 90 95
Glu Val Pro Trp Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg
100 105 110
Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu
115 120 125
Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro
130 135 140
Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly
145 150 155 160
Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr
165 170 175
Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His
180 185 190
Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val
195 200 205
Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210 215
<210> 9
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列 (Artificial Sequence)
<220>
<223> 21M18 重链
<400> 9
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Ala Tyr
20 25 30
Tyr Ile His Trp Val Lys Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Tyr Ile Ser Ser Tyr Asn Gly Ala Thr Asn Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Arg Val Thr Phe Thr Thr Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Asp Tyr Asp Tyr Asp Val Gly Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 10
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列 (Artificial Sequence)
<220>
<223> 21R79 重链可变区
<400> 10
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Ala Tyr
20 25 30
Tyr Ile His Trp Val Lys Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Tyr Ile Ala Asn Tyr Asn Arg Ala Thr Asn Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Arg Val Thr Phe Thr Thr Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Asp Tyr Asp Tyr Asp Val Gly Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 11
<211> 121
<212> PRT
<213> 人工序列 (Artificial Sequence)
<220>
<223> 219R45 重链可变区
<400> 11
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr
20 25 30
Trp Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Asp Ile Asn Pro Ser Asn Gly Arg Thr Ser Tyr Lys Glu Lys Phe
50 55 60
Lys Arg Arg Val Thr Leu Ser Val Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys
85 90 95
Thr Ile His Tyr Asp Asp Lys Tyr Tyr Pro Leu Met Asp Tyr Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 12
<211> 111
<212> PRT
<213> 人工序列 (Artificial Sequence)
<220>
<223> 轻链可变区
<400> 12
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Glu Ser Val Asp Asn Tyr
20 25 30
Gly Ile Ser Phe Met Lys Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro
35 40 45
Lys Leu Leu Ile Tyr Ala Ala Ser Asn Gln Gly Ser Gly Val Pro Asp
50 55 60
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser
65 70 75 80
Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Lys
85 90 95
Glu Val Pro Trp Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 13
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列 (Artificial Sequence)
<220>
<223> 21R75、 21R79、 21R83和21M18 重链 CDR1
<400> 13
Thr Ala Tyr Tyr Ile His
1 5
<210> 14
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列 (Artificial Sequence)
<220>
<223> 21R79 重链 CDR2
<400> 14
Tyr Ile Ala Asn Tyr Asn Arg Ala Thr Asn Tyr Asn Gln Lys Phe Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 15
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列 (Artificial Sequence)
<220>
<223> 21M18 重链 CDR2
<400> 15
Tyr Ile Ser Ser Tyr Asn Gly Ala Thr Asn Tyr Asn Gln Lys Phe Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 16
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列 (Artificial Sequence)
<220>
<223> 21R75、21R79、21R83和21M18 重链 CDR3
<400> 16
Arg Asp Tyr Asp Tyr Asp Val Gly Met Asp Tyr
1 5 10
<210> 17
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列 (Artificial Sequence)
<220>
<223> 219R45 重链 CDR1
<400> 17
Asn Tyr Trp Met His
1 5
<210> 18
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列 (Artificial Sequence)
<220>
<223> 219R45 重链 CDR2
<400> 18
Asp Ile Asn Pro Ser Asn Gly Arg Thr Ser Tyr Lys Glu Lys Phe Lys
1 5 10 15
Arg
<210> 19
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列 (Artificial Sequence)
<220>
<223> 219R45 重链 CDR3
<400> 19
His Tyr Asp Asp Lys Tyr Tyr Pro Leu Met Asp Tyr
1 5 10
<210> 20
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列 (Artificial Sequence)
<220>
<223> 轻链 CDR1
<400> 20
Arg Ala Ser Glu Ser Val Asp Asn Tyr Gly Ile Ser Phe Met Lys
1 5 10 15
<210> 21
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列 (Artificial Sequence)
<220>
<223> 轻链 CDR2
<400> 21
Ala Ala Ser Asn Gln Gly Ser
1 5
<210> 22
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列 (Artificial Sequence)
<220>
<223> 轻链 CDR3
<400> 22
Gln Gln Ser Lys Glu Val Pro Trp Thr Phe Gly Gly
1 5 10
<210> 23
<211> 522
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<220>
<221> 信号(SIGNAL)
<222> (1)..(26)
<400> 23
Met Ala Ala Ala Ser Arg Ser Ala Ser Gly Trp Ala Leu Leu Leu Leu
1 5 10 15
Val Ala Leu Trp Gln Gln Arg Ala Ala Gly Ser Gly Val Phe Gln Leu
20 25 30
Gln Leu Gln Glu Phe Ile Asn Glu Arg Gly Val Leu Ala Ser Gly Arg
35 40 45
Pro Cys Glu Pro Gly Cys Arg Thr Phe Phe Arg Val Cys Leu Lys His
50 55 60
Phe Gln Ala Val Val Ser Pro Gly Pro Cys Thr Phe Gly Thr Val Ser
65 70 75 80
Thr Pro Val Leu Gly Thr Asn Ser Phe Ala Val Arg Asp Asp Ser Ser
85 90 95
Gly Gly Gly Arg Asn Pro Leu Gln Leu Pro Phe Asn Phe Thr Trp Pro
100 105 110
Gly Thr Phe Ser Leu Ile Ile Glu Ala Trp His Ala Pro Gly Asp Asp
115 120 125
Leu Arg Pro Glu Ala Leu Pro Pro Asp Ala Leu Ile Ser Lys Ile Ala
130 135 140
Ile Gln Gly Ser Leu Ala Val Gly Gln Asn Trp Leu Leu Asp Glu Gln
145 150 155 160
Thr Ser Thr Leu Thr Arg Leu Arg Tyr Ser Tyr Arg Val Ile Cys Ser
165 170 175
Asp Asn Tyr Tyr Gly Asp Asn Cys Ser Arg Leu Cys Lys Lys Arg Asn
180 185 190
Asp His Phe Gly His Tyr Val Cys Gln Pro Asp Gly Asn Leu Ser Cys
195 200 205
Leu Pro Gly Trp Thr Gly Glu Tyr Cys Gln Gln Pro Ile Cys Leu Ser
210 215 220
Gly Cys His Glu Gln Asn Gly Tyr Cys Ser Lys Pro Ala Glu Cys Leu
225 230 235 240
Cys Arg Pro Gly Trp Gln Gly Arg Leu Cys Asn Glu Cys Ile Pro His
245 250 255
Asn Gly Cys Arg His Gly Thr Cys Ser Thr Pro Trp Gln Cys Thr Cys
260 265 270
Asp Glu Gly Trp Gly Gly Leu Phe Cys Asp Gln Asp Leu Asn Tyr Cys
275 280 285
Thr His His Ser Pro Cys Lys Asn Gly Ala Thr Cys Ser Asn Ser Gly
290 295 300
Gln Arg Ser Tyr Thr Cys Thr Cys Arg Pro Gly Tyr Thr Gly Val Asp
305 310 315 320
Cys Glu Leu Glu Leu Ser Glu Cys Asp Ser Asn Pro Cys Arg Asn Gly
325 330 335
Gly Ser Cys Lys Asp Gln Glu Asp Gly Tyr His Cys Leu Cys Pro Pro
340 345 350
Gly Tyr Tyr Gly Leu His Cys Glu His Ser Thr Leu Ser Cys Ala Asp
355 360 365
Ser Pro Cys Phe Asn Gly Gly Ser Cys Arg Glu Arg Asn Gln Gly Ala
370 375 380
Asn Tyr Ala Cys Glu Cys Pro Pro Asn Phe Thr Gly Ser Asn Cys Glu
385 390 395 400
Lys Lys Val Asp Arg Cys Thr Ser Asn Pro Cys Ala Asn Gly Gly Gln
405 410 415
Cys Leu Asn Arg Gly Pro Ser Arg Met Cys Arg Cys Arg Pro Gly Phe
420 425 430
Thr Gly Thr Tyr Cys Glu Leu His Val Ser Asp Cys Ala Arg Asn Pro
435 440 445
Cys Ala His Gly Gly Thr Cys His Asp Leu Glu Asn Gly Leu Met Cys
450 455 460
Thr Cys Pro Ala Gly Phe Ser Gly Arg Arg Cys Glu Val Arg Thr Ser
465 470 475 480
Ile Asp Ala Cys Ala Ser Ser Pro Cys Phe Asn Arg Ala Thr Cys Tyr
485 490 495
Thr Asp Leu Ser Thr Asp Thr Phe Val Cys Asn Cys Pro Tyr Gly Phe
500 505 510
Val Gly Ser Arg Cys Glu Phe Pro Val Gly
515 520
<210> 24
<211> 496
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 24
Ser Gly Val Phe Gln Leu Gln Leu Gln Glu Phe Ile Asn Glu Arg Gly
1 5 10 15
Val Leu Ala Ser Gly Arg Pro Cys Glu Pro Gly Cys Arg Thr Phe Phe
20 25 30
Arg Val Cys Leu Lys His Phe Gln Ala Val Val Ser Pro Gly Pro Cys
35 40 45
Thr Phe Gly Thr Val Ser Thr Pro Val Leu Gly Thr Asn Ser Phe Ala
50 55 60
Val Arg Asp Asp Ser Ser Gly Gly Gly Arg Asn Pro Leu Gln Leu Pro
65 70 75 80
Phe Asn Phe Thr Trp Pro Gly Thr Phe Ser Leu Ile Ile Glu Ala Trp
85 90 95
His Ala Pro Gly Asp Asp Leu Arg Pro Glu Ala Leu Pro Pro Asp Ala
100 105 110
Leu Ile Ser Lys Ile Ala Ile Gln Gly Ser Leu Ala Val Gly Gln Asn
115 120 125
Trp Leu Leu Asp Glu Gln Thr Ser Thr Leu Thr Arg Leu Arg Tyr Ser
130 135 140
Tyr Arg Val Ile Cys Ser Asp Asn Tyr Tyr Gly Asp Asn Cys Ser Arg
145 150 155 160
Leu Cys Lys Lys Arg Asn Asp His Phe Gly His Tyr Val Cys Gln Pro
165 170 175
Asp Gly Asn Leu Ser Cys Leu Pro Gly Trp Thr Gly Glu Tyr Cys Gln
180 185 190
Gln Pro Ile Cys Leu Ser Gly Cys His Glu Gln Asn Gly Tyr Cys Ser
195 200 205
Lys Pro Ala Glu Cys Leu Cys Arg Pro Gly Trp Gln Gly Arg Leu Cys
210 215 220
Asn Glu Cys Ile Pro His Asn Gly Cys Arg His Gly Thr Cys Ser Thr
225 230 235 240
Pro Trp Gln Cys Thr Cys Asp Glu Gly Trp Gly Gly Leu Phe Cys Asp
245 250 255
Gln Asp Leu Asn Tyr Cys Thr His His Ser Pro Cys Lys Asn Gly Ala
260 265 270
Thr Cys Ser Asn Ser Gly Gln Arg Ser Tyr Thr Cys Thr Cys Arg Pro
275 280 285
Gly Tyr Thr Gly Val Asp Cys Glu Leu Glu Leu Ser Glu Cys Asp Ser
290 295 300
Asn Pro Cys Arg Asn Gly Gly Ser Cys Lys Asp Gln Glu Asp Gly Tyr
305 310 315 320
His Cys Leu Cys Pro Pro Gly Tyr Tyr Gly Leu His Cys Glu His Ser
325 330 335
Thr Leu Ser Cys Ala Asp Ser Pro Cys Phe Asn Gly Gly Ser Cys Arg
340 345 350
Glu Arg Asn Gln Gly Ala Asn Tyr Ala Cys Glu Cys Pro Pro Asn Phe
355 360 365
Thr Gly Ser Asn Cys Glu Lys Lys Val Asp Arg Cys Thr Ser Asn Pro
370 375 380
Cys Ala Asn Gly Gly Gln Cys Leu Asn Arg Gly Pro Ser Arg Met Cys
385 390 395 400
Arg Cys Arg Pro Gly Phe Thr Gly Thr Tyr Cys Glu Leu His Val Ser
405 410 415
Asp Cys Ala Arg Asn Pro Cys Ala His Gly Gly Thr Cys His Asp Leu
420 425 430
Glu Asn Gly Leu Met Cys Thr Cys Pro Ala Gly Phe Ser Gly Arg Arg
435 440 445
Cys Glu Val Arg Thr Ser Ile Asp Ala Cys Ala Ser Ser Pro Cys Phe
450 455 460
Asn Arg Ala Thr Cys Tyr Thr Asp Leu Ser Thr Asp Thr Phe Val Cys
465 470 475 480
Asn Cys Pro Tyr Gly Phe Val Gly Ser Arg Cys Glu Phe Pro Val Gly
485 490 495
<210> 25
<211> 128
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 25
Ser Gly Val Phe Gln Leu Gln Leu Gln Glu Phe Ile Asn Glu Arg Gly
1 5 10 15
Val Leu Ala Ser Gly Arg Pro Cys Glu Pro Gly Cys Arg Thr Phe Phe
20 25 30
Arg Val Cys Leu Lys His Phe Gln Ala Val Val Ser Pro Gly Pro Cys
35 40 45
Thr Phe Gly Thr Val Ser Thr Pro Val Leu Gly Thr Asn Ser Phe Ala
50 55 60
Val Arg Asp Asp Ser Ser Gly Gly Gly Arg Asn Pro Leu Gln Leu Pro
65 70 75 80
Phe Asn Phe Thr Trp Pro Gly Thr Phe Ser Leu Ile Ile Glu Ala Trp
85 90 95
His Ala Pro Gly Asp Asp Leu Arg Pro Glu Ala Leu Pro Pro Asp Ala
100 105 110
Leu Ile Ser Lys Ile Ala Ile Gln Gly Ser Leu Ala Val Gly Gln Asn
115 120 125
<210> 26
<211> 63
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 26
Trp Leu Leu Asp Glu Gln Thr Ser Thr Leu Thr Arg Leu Arg Tyr Ser
1 5 10 15
Tyr Arg Val Ile Cys Ser Asp Asn Tyr Tyr Gly Asp Asn Cys Ser Arg
20 25 30
Leu Cys Lys Lys Arg Asn Asp His Phe Gly His Tyr Val Cys Gln Pro
35 40 45
Asp Gly Asn Leu Ser Cys Leu Pro Gly Trp Thr Gly Glu Tyr Cys
50 55 60
<210> 27
<211> 232
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<220>
<221> 信号(SIGNAL)
<222> (1)..(26)
<400> 27
Met Asn Phe Leu Leu Ser Trp Val His Trp Ser Leu Ala Leu Leu Leu
1 5 10 15
Tyr Leu His His Ala Lys Trp Ser Gln Ala Ala Pro Met Ala Glu Gly
20 25 30
Gly Gly Gln Asn His His Glu Val Val Lys Phe Met Asp Val Tyr Gln
35 40 45
Arg Ser Tyr Cys His Pro Ile Glu Thr Leu Val Asp Ile Phe Gln Glu
50 55 60
Tyr Pro Asp Glu Ile Glu Tyr Ile Phe Lys Pro Ser Cys Val Pro Leu
65 70 75 80
Met Arg Cys Gly Gly Cys Cys Asn Asp Glu Gly Leu Glu Cys Val Pro
85 90 95
Thr Glu Glu Ser Asn Ile Thr Met Gln Ile Met Arg Ile Lys Pro His
100 105 110
Gln Gly Gln His Ile Gly Glu Met Ser Phe Leu Gln His Asn Lys Cys
115 120 125
Glu Cys Arg Pro Lys Lys Asp Arg Ala Arg Gln Glu Lys Lys Ser Val
130 135 140
Arg Gly Lys Gly Lys Gly Gln Lys Arg Lys Arg Lys Lys Ser Arg Tyr
145 150 155 160
Lys Ser Trp Ser Val Tyr Val Gly Ala Arg Cys Cys Leu Met Pro Trp
165 170 175
Ser Leu Pro Gly Pro His Pro Cys Gly Pro Cys Ser Glu Arg Arg Lys
180 185 190
His Leu Phe Val Gln Asp Pro Gln Thr Cys Lys Cys Ser Cys Lys Asn
195 200 205
Thr Asp Ser Arg Cys Lys Ala Arg Gln Leu Glu Leu Asn Glu Arg Thr
210 215 220
Cys Arg Cys Asp Lys Pro Arg Arg
225 230
<210> 28
<211> 206
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 28
Ala Pro Met Ala Glu Gly Gly Gly Gln Asn His His Glu Val Val Lys
1 5 10 15
Phe Met Asp Val Tyr Gln Arg Ser Tyr Cys His Pro Ile Glu Thr Leu
20 25 30
Val Asp Ile Phe Gln Glu Tyr Pro Asp Glu Ile Glu Tyr Ile Phe Lys
35 40 45
Pro Ser Cys Val Pro Leu Met Arg Cys Gly Gly Cys Cys Asn Asp Glu
50 55 60
Gly Leu Glu Cys Val Pro Thr Glu Glu Ser Asn Ile Thr Met Gln Ile
65 70 75 80
Met Arg Ile Lys Pro His Gln Gly Gln His Ile Gly Glu Met Ser Phe
85 90 95
Leu Gln His Asn Lys Cys Glu Cys Arg Pro Lys Lys Asp Arg Ala Arg
100 105 110
Gln Glu Lys Lys Ser Val Arg Gly Lys Gly Lys Gly Gln Lys Arg Lys
115 120 125
Arg Lys Lys Ser Arg Tyr Lys Ser Trp Ser Val Tyr Val Gly Ala Arg
130 135 140
Cys Cys Leu Met Pro Trp Ser Leu Pro Gly Pro His Pro Cys Gly Pro
145 150 155 160
Cys Ser Glu Arg Arg Lys His Leu Phe Val Gln Asp Pro Gln Thr Cys
165 170 175
Lys Cys Ser Cys Lys Asn Thr Asp Ser Arg Cys Lys Ala Arg Gln Leu
180 185 190
Glu Leu Asn Glu Arg Thr Cys Arg Cys Asp Lys Pro Arg Arg
195 200 205
<210> 29
<211> 1395
<212> DNA
<213> 人工序列 (Artificial Sequence)
<220>
<223> 21M18 重链
<400> 29
atgaagcacc tgtggttctt tctgctgctg gtggccgctc ccagatgggt gctgtcccag 60
gtgcagctgg tgcagtctgg cgccgaagtg aagaaacctg gcgcctccgt gaagatctcc 120
tgcaaggcct ccggctactc cttcaccgct tactacatcc actgggtcaa gcaggcccct 180
gggcagggcc tggaatggat cggctacatc tcctcctaca acggcgccac caactacaac 240
cagaaattca agggccgcgt gaccttcacc accgacacct ccacctccac cgcctacatg 300
gaactgcggt ccctgcggag cgacgacacc gccgtgtact actgcgccag agactacgac 360
tacgacgtgg gcatggacta ctggggccag ggcaccctgg tcaccgtgtc ctctgcctcc 420
accaagggcc catccgtgtt ccctctggcc ccttgctccc ggtccacctc tgagtctacc 480
gccgctctgg gctgcctggt gaaggactac ttccctgagc ctgtgaccgt gtcctggaac 540
tctggcgccc tgacctctgg cgtgcacacc ttccctgccg tgctgcagtc ctccggcctg 600
tactccctgt ctagcgtggt gaccgtgcct tcctccaact tcggcaccca gacctacacc 660
tgtaacgtgg accacaagcc ttccaacacc aaggtggaca agaccgtgga gcggaagtgc 720
tgcgtggagt gccctccttg tcctgctcct cctgtggctg gcccttctgt gttcctgttc 780
cctccaaagc ctaaggacac cctgatgatc tcccggaccc ctgaagtgac ctgcgtggtg 840
gtggacgtgt cccacgagga ccctgaggtg cagttcaatt ggtacgtgga cggcgtggag 900
gtgcacaacg ccaagaccaa gcctcgggag gaacagttca actccacctt ccgggtggtg 960
tctgtgctga ccgtggtgca ccaggactgg ctgaacggca aagaatacaa gtgcaaggtg 1020
tccaacaagg gcctgcctgc ccctatcgaa aagaccatca gcaagaccaa gggccagcct 1080
cgcgagcctc aggtgtacac cctgcctccc agccgggaag aaatgaccaa gaaccaggtg 1140
tccctgacct gtctggtgga gggcttctac ccttccgata tcgccgtgga gtgggagtct 1200
aacggccagc ctgagaacaa ctacaagacc acccctccta tgctggactc cgacggctcc 1260
ttcttcctgt actccgaact gaccgtggac aagtcccggt ggcagcaggg caacgtgttc 1320
tcctgctccg tgatgcacga ggccctgcac aaccactaca cccagaagtc cctgtccctg 1380
tctcctggca agtag 1 395
<210> 30
<211> 1395
<212> DNA
<213> 人工序列 (Artificial Sequence)
<220>
<223> 21R79 重链
<400> 30
atgaagcacc tgtggttctt tctgctgctg gtggccgctc ccagatgggt gctgtcccag 60
gtgcagctgg tgcagtctgg cgccgaagtg aagaaacctg gcgcctccgt gaagatctcc 120
tgcaaggcct ccggctactc cttcaccgcc tactacatcc actgggtgaa acaggcacca 180
ggccagggac tggaatggat cggctatatc gccaactaca accgggccac caactacaac 240
cagaaattca agggccgcgt gaccttcacc accgacacct ccacctccac agcctacatg 300
gaactgcggt ccctgcggag cgacgacacc gccgtgtact actgcgccag agactacgac 360
tacgacgtgg gcatggacta ctggggccag ggcaccctgg tgacagtgtc ctccgcctcc 420
accaagggcc cctccgtgtt ccctctggcc ccttgctccc ggtccacctc tgagtctacc 480
gccgctctgg gctgcctggt gaaggactac ttccctgagc ctgtgaccgt gtcctggaac 540
tctggcgccc tgacctctgg cgtgcacacc ttccctgccg tgctgcagtc ctccggcctg 600
tactccctgt ctagcgtggt gaccgtgcct tcctccaact tcggcaccca gacctacacc 660
tgtaacgtgg accacaagcc ttccaacacc aaggtggaca agaccgtgga gcggaagtgc 720
tgcgtggagt gccctccttg tcctgctcct cctgtggctg gcccttctgt gttcctgttc 780
cctccaaagc ctaaggacac cctgatgatc tcccggaccc ctgaagtgac ctgcgtggtg 840
gtggacgtgt cccacgagga ccctgaggtg cagttcaatt ggtacgtgga cggcgtggag 900
gtgcacaacg ccaagaccaa gcctcgggag gaacagttca actccacctt ccgggtggtg 960
tctgtgctga ccgtggtgca ccaggactgg ctgaacggca aagaatacaa gtgcaaggtg 1020
tccaacaagg gcctgcctgc ccctatcgaa aagaccatca gcaagaccaa gggccagcct 1080
cgcgagcctc aggtgtacac cctgcctccc agccgggaag aaatgaccaa gaaccaggtg 1140
tccctgacct gtctggtgga gggcttctac ccttccgata tcgccgtgga gtgggagtct 1200
aacggccagc ctgagaacaa ctacaagacc acccctccta tgctggactc cgacggctcc 1260
ttcttcctgt actccgaact gaccgtggac aagtcccggt ggcagcaggg caacgtgttc 1320
tcctgctccg tgatgcacga ggccctgcac aaccactaca cccagaagtc cctgtccctg 1380
tctcctggca agtag 1395
<210> 31
<211> 1395
<212> DNA
<213> 人工序列 (Artificial Sequence)
<220>
<223> 21R79 重链
<400> 31
atgaagcacc tatggttctt tctattatta gtggccgctc cccgttgggt gttatcgcag 60
gttcagctag ttcagtctgg agcggaagtt aagaaacctg gagcatccgt gaaaataagt 120
tgcaaggcat ccggttactc gttcaccgca tactatatcc actgggttaa acaggcacca 180
ggacagggac ttgaatggat cggatatatc gctaattata atagagctac aaactataac 240
caaaaattca aaggacgcgt gactttcaca actgacacct caacctcgac agcatacatg 300
gaattacggt ccctacggtc tgacgacact gccgtttact attgcgctag agattatgat 360
tatgatgttg gaatggacta ttggggccag ggaacactgg tgacagtgtc ttctgcatcc 420
actaagggac catccgtgtt ccctttggcc ccttgctctc gttcgacctc tgaatcgact 480
gccgctctgg gatgcctcgt gaaagattac ttccctgagc ctgtgaccgt ttcctggaac 540
tcgggcgccc taacctctgg cgtgcacaca ttccctgccg tgctacagtc ttctggccta 600
tactctttat cttcggttgt taccgtacct tcttctaact tcggaaccca aacttacacc 660
tgtaacgtag accacaagcc ttcgaacacc aaggtggaca agactgttga gcgaaagtgc 720
tgcgttgagt gccctccatg tcctgcacct cctgtggctg gcccttctgt gttcctgttc 780
cctccaaaac ctaaggacac tctaatgatc tctcggactc ctgaggtgac ttgcgtggtt 840
gtggacgtgt cccacgagga ccctgaggtg cagttcaatt ggtacgtgga cggagtcgag 900
gtgcacaatg caaagaccaa gcctcgggag gaacagttca actccacctt ccgggtggtt 960
tctgtgttga ccgttgtgca ccaagactgg ctgaacggca aagaatacaa gtgcaaggtg 1020
tccaacaagg gcctgcctgc ccctatcgaa aagaccatca gcaagaccaa gggccagcct 1080
cgcgagcctc aggtgtacac cctgcctccc agccgggaag aaatgaccaa gaaccaggtg 1140
tccctgacct gtctggtgga gggcttctac ccttccgaca tcgccgttga gtgggagtct 1200
aacggacagc cggagaacaa ctacaagact acgcctccaa tgctggactc cgacggctcc 1260
ttcttcctgt actccgaact gaccgtggac aagtcccggt ggcagcaggg caacgtgttc 1320
tcatgctccg taatgcacga agccttgcac aatcactaca ctcaaaagtc cctatcctta 1380
tctcctggca agtag 1395
<210> 32
<211> 1401
<212> DNA
<213> 人工序列 (Artificial Sequence)
<220>
<223> 219R45 重链
<400> 32
atgaagcatc tgtggttttt cctgttgctc gtggcggcac ccagatgggt gttgtcccaa 60
gtgcagctgg tccagagcgg ggctgaggtg aagaaacccg gagcaagcgt aaaagtatcg 120
tgtaaggcct cggggtacac gtttacaaac tactggatgc attgggtgcg gcaggctccg 180
ggacaggggt tggaatggat gggtgacatt aacccctcaa atggcagaac atcatataag 240
gaaaagttca aacgccgcgt cacactctcc gtggacaagt caagctcgac tgcgtacatg 300
gaactttcgt cgctgaggtc ggaggacacg gcagtgtact tttgcaccat ccattatgat 360
gacaagtatt accctctgat ggattattgg ggtcagggta cgttggtcac cgtctccagc 420
gcgtcgacga aaggtccctc ggtatttccc ctcgccccct gctcgaggtc gacatccgaa 480
tcaacagctg ccctcggctg cctggtcaaa gactacttcc cagagccggt aacggtgtcg 540
tggaactcgg gagcgcttac gtccggagtc cacacatttc cggcggtact gcaatcctcg 600
ggactgtatt cgttgtcgtc agtggtgact gtcccgtcct ccaatttcgg gactcagacc 660
tatacgtgca acgtcgacca caaaccctca aacaccaagg tggataagac agtggagcgc 720
aagtgctgcg tggagtgtcc cccgtgtccg gcaccccctg tcgccggacc ctcagtcttt 780
ttgtttccgc cgaagcccaa agatacactc atgatctcaa gaacgcccga ggtaacatgc 840
gtggtggtcg atgtaagcca cgaggatcca gaagtacaat tcaattggta tgtagacggg 900
gtcgaggtcc ataacgcaaa gacgaaaccg agggaagagc agttcaattc gactttccgg 960
gtggtgtcgg tgcttacagt cgtacatcag gactggttga acgggaagga gtacaagtgt 1020
aaagtatcga ataagggcct tccagcgccg attgaaaaga ccatctccaa gaccaaagga 1080
cagccacgag agccgcaagt ctatacgctt cctcccagcc gagaaaagat gactaaaaac 1140
caggtatcgc ttacgtgtct cgtcaagggt ttctaccctt cggacatcgc ggtggaatgg 1200
gagagcaatg gacaaccgga aaacaactac aagacgacac cgcctatgtt gaaaagcgat 1260
ggatcgtttt tcctctattc gaaactcacg gtcgataagt cacggtggca gcaggggaat 1320
gtgttctcct gttcagtgat gcacgaggcg ctccacaatc actataccca gaaaagcctg 1380
tcactttccc cgggaaaatg a 1401
<210> 33
<211> 1401
<212> DNA
<213> 人工序列 (Artificial Sequence)
<220>
<223> 219R45 重链
<400> 33
atgaagcacc tctggttctt cctgctcctc gtggctgctc ctcggtgggt cctctcccaa 60
gtgcagctgg tccagagcgg ggctgaggtg aagaaacccg gagcttccgt caaagtctcc 120
tgtaaggctt ccggatacac ctttaccaac tattggatgc actgggtgcg gcaggctcct 180
ggacaagggc tggaatggat gggagacatc aatccttcca atggcagaac ctcctacaag 240
gaaaaattca aacggcgggt cacactctcc gtggacaagt ctagctccac agcttacatg 300
gaactctcct ccctgcggtc cgaagacaca gctgtctact tctgcaccat ccactacgac 360
gacaagtact accctctgat ggactactgg ggccagggaa ccctggtcac cgtgtccagc 420
gcttccacaa aaggaccctc cgtctttccc ctcgccccct gctcccggtc cacatccgaa 480
tcaacagctg ccctcggctg cctggtcaaa gactacttcc cagagcctgt cacagtgtcc 540
tggaactccg gagctctcac atccggagtc cacacatttc ctgctgtgct ccaatcctcc 600
ggactgtatt ccctctcctc cgtggtgaca gtgccttcct ccaatttcgg gacacagacc 660
tatacatgca acgtggacca caaaccctcc aacaccaaag tcgataagac agtggagcgc 720
aagtgctgcg tggagtgtcc cccttgtcct gctccccctg tggctggacc ttccgtcttt 780
ctgtttcctc ctaaacctaa agacaccctc atgatctccc ggacccccga ggtcacatgc 840
gtggtcgtcg atgtgagcca cgaggacccc gaagtccaat ttaattggta tgtggacggg 900
gtggaggtcc ataacgctaa gaccaaacct agggaagagc agttcaattc cactttccgg 960
gtggtgtccg tgctgaccgt cgttcatcag gactggctca acgggaaaga atacaaatgc 1020
aaagtctcta ataagggcct ccctgctcct attgaaaaaa caatttccaa aacaaaagga 1080
caacctcggg agcctcaagt ctacacactg ccaccttccc gggaaaaaat gacaaaaaat 1140
caagtctccc tcacatgtct cgtcaaggga ttctaccctt ccgacattgc tgtggaatgg 1200
gaatccaatg gacaacctga aaacaactac aagacaacac ctcctatgct caaaagcgat 1260
gggtcctttt tcctctattc caaactcaca gtcgataagt ctcggtggca gcaggggaat 1320
gtgttctcct gttccgtgat gcacgaggct ctccacaatc actataccca gaaaagcctg 1380
tccctctccc ctggaaaatg a 1401
<210> 34
<211> 717
<212> DNA
<213> 人工序列 (Artificial Sequence)
<220>
<223> 轻链
<400> 34
atggtgctgc agacccaggt gttcatctcc ctgctgctgt ggatctccgg cgcctacggc 60
gacatcgtga tgacccagtc cccagactcc ctggctgtgt ctctgggaga gcgggccacc 120
atctcttgca gagcctccga gtccgtggac aactacggca tctccttcat gaagtggttc 180
cagcagaagc ccggccagcc cccaaagctg ctgatctacg ccgcctccaa ccagggatct 240
ggcgtgcccg accggttctc tggatccggc tctggcaccg actttaccct gaccatcagc 300
tccctgcagg ccgaggacgt ggccgtgtac tactgccagc agtccaaaga ggtgccctgg 360
accttcggcg gaggcaccaa ggtggaaatc aagcggaccg tggccgctcc ctccgtgttc 420
atcttcccac cctccgacga gcagctgaag tccggaaccg cctccgtcgt gtgcctgctg 480
aacaacttct acccccgcga ggccaaggtg cagtggaagg tggacaacgc cctgcagtcc 540
ggcaactccc aggaatccgt caccgagcag gactccaagg acagcaccta ctccctgtcc 600
tccaccctga ccctgtccaa ggccgactac gagaagcaca aggtgtacgc ctgcgaagtg 660
acccaccagg gcctgtccag ccccgtgacc aagtccttca accggggcga gtgttag 717
<210> 35
<211> 357
<212> DNA
<213> 人工序列 (Artificial Sequence)
<220>
<223> 21M18 重链可变区
<400> 35
caggtgcagc tggtgcagtc tggcgccgaa gtgaagaaac ctggcgcctc cgtgaagatc 60
tcctgcaagg cctccggcta ctccttcacc gcttactaca tccactgggt caagcaggcc 120
cctgggcagg gcctggaatg gatcggctac atctcctcct acaacggcgc caccaactac 180
aaccagaaat tcaagggccg cgtgaccttc accaccgaca cctccacctc caccgcctac 240
atggaactgc ggtccctgcg gagcgacgac accgccgtgt actactgcgc cagagactac 300
gactacgacg tgggcatgga ctactggggc cagggcaccc tggtcaccgt gtcctct 357
<210> 36
<211> 357
<212> DNA
<213> 人工序列 (Artificial Sequence)
<220>
<223> 21R79 重链可变区
<400> 36
caggtgcagc tggtgcagtc tggcgccgaa gtgaagaaac ctggcgcctc cgtgaagatc 60
tcctgcaagg cctccggcta ctccttcacc gcctactaca tccactgggt gaaacaggca 120
ccaggccagg gactggaatg gatcggctat atcgccaact acaaccgggc caccaactac 180
aaccagaaat tcaagggccg cgtgaccttc accaccgaca cctccacctc cacagcctac 240
atggaactgc ggtccctgcg gagcgacgac accgccgtgt actactgcgc cagagactac 300
gactacgacg tgggcatgga ctactggggc cagggcaccc tggtgacagt gtcctcc 357
<210> 37
<211> 357
<212> DNA
<213> 人工序列 (Artificial Sequence)
<220>
<223> 21R79 重链可变区
<400> 37
caggttcagc tagttcagtc tggagcggaa gttaagaaac ctggagcatc cgtgaaaata 60
agttgcaagg catccggtta ctcgttcacc gcatactata tccactgggt taaacaggca 120
ccaggacagg gacttgaatg gatcggatat atcgctaatt ataatagagc tacaaactat 180
aaccaaaaat tcaaaggacg cgtgactttc acaactgaca cctcaacctc gacagcatac 240
atggaattac ggtccctacg gtctgacgac actgccgttt actattgcgc tagagattat 300
gattatgatg ttggaatgga ctattggggc cagggaacac tggtgacagt gtcttct 357
<210> 38
<211> 360
<212> DNA
<213> 人工序列 (Artificial Sequence)
<220>
<223> 219R45 重链可变区
<400> 38
caagtgcagc tggtccagag cggggctgag gtgaagaaac ccggagcaag cgtaaaagta 60
tcgtgtaagg cctcggggta cacgtttaca aactactgga tgcattgggt gcggcaggct 120
ccgggacagg ggttggaatg gatgggtgac attaacccct caaatggcag aacatcatat 180
aaggaaaagt tcaaacgccg cgtcacactc tccgtggaca agtcaagctc gactgcgtac 240
atggaacttt cgtcgctgag gtcggaggac acggcagtgt acttttgcac catccattat 300
gatgacaagt attaccctct gatggattat tggggtcagg gtacgttggt caccgtctcc 360
<210> 39
<211> 363
<212> DNA
<213> 人工序列 (Artificial Sequence)
<220>
<223> 219R45 重链可变区
<400> 39
caagtgcagc tggtccagag cggggctgag gtgaagaaac ccggagcttc cgtcaaagtc 60
tcctgtaagg cttccggata cacctttacc aactattgga tgcactgggt gcggcaggct 120
cctggacaag ggctggaatg gatgggagac atcaatcctt ccaatggcag aacctcctac 180
aaggaaaaat tcaaacggcg ggtcacactc tccgtggaca agtctagctc cacagcttac 240
atggaactct cctccctgcg gtccgaagac acagctgtct acttctgcac catccactac 300
gacgacaagt actaccctct gatggactac tggggccagg gaaccctggt caccgtgtcc 360
agc 363
<210> 40
<211> 333
<212> DNA
<213> 人工序列 (Artificial Sequence)
<220>
<223> 轻链可变区
<400> 40
gacatcgtga tgacccagtc cccagactcc ctggctgtgt ctctgggaga gcgggccacc 60
atctcttgca gagcctccga gtccgtggac aactacggca tctccttcat gaagtggttc 120
cagcagaagc ccggccagcc cccaaagctg ctgatctacg ccgcctccaa ccagggatct 180
ggcgtgcccg accggttctc tggatccggc tctggcaccg actttaccct gaccatcagc 240
tccctgcagg ccgaggacgt ggccgtgtac tactgccagc agtccaaaga ggtgccctgg 300
accttcggcg gaggcaccaa ggtggaaatc aag 333
<210> 41
<211> 330
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 41
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys
1 5 10 15
Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 60
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr
65 70 75 80
Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
85 90 95
Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys
100 105 110
Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro
115 120 125
Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys
130 135 140
Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp
145 150 155 160
Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu
165 170 175
Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu
180 185 190
His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn
195 200 205
Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly
210 215 220
Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu
225 230 235 240
Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr
245 250 255
Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn
260 265 270
Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe
275 280 285
Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn
290 295 300
Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr
305 310 315 320
Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
325 330
<210> 42
<211> 326
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 42
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg
1 5 10 15
Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 60
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gln Thr
65 70 75 80
Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
85 90 95
Thr Val Glu Arg Lys Cys Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro
100 105 110
Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp
115 120 125
Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp
130 135 140
Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly
145 150 155 160
Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn
165 170 175
Ser Thr Phe Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Val His Gln Asp Trp
180 185 190
Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro
195 200 205
Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Thr Lys Gly Gln Pro Arg Glu
210 215 220
Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn
225 230 235 240
Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile
245 250 255
Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr
260 265 270
Thr Pro Pro Met Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys
275 280 285
Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys
290 295 300
Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu
305 310 315 320
Ser Leu Ser Pro Gly Lys
325
<210> 43
<211> 377
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 43
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg
1 5 10 15
Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 60
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr
65 70 75 80
Tyr Thr Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
85 90 95
Arg Val Glu Leu Lys Thr Pro Leu Gly Asp Thr Thr His Thr Cys Pro
100 105 110
Arg Cys Pro Glu Pro Lys Ser Cys Asp Thr Pro Pro Pro Cys Pro Arg
115 120 125
Cys Pro Glu Pro Lys Ser Cys Asp Thr Pro Pro Pro Cys Pro Arg Cys
130 135 140
Pro Glu Pro Lys Ser Cys Asp Thr Pro Pro Pro Cys Pro Arg Cys Pro
145 150 155 160
Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys
165 170 175
Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val
180 185 190
Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Lys Trp Tyr
195 200 205
Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu
210 215 220
Gln Tyr Asn Ser Thr Phe Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His
225 230 235 240
Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys
245 250 255
Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Thr Lys Gly Gln
260 265 270
Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met
275 280 285
Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro
290 295 300
Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Ser Gly Gln Pro Glu Asn Asn
305 310 315 320
Tyr Asn Thr Thr Pro Pro Met Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu
325 330 335
Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Ile
340 345 350
Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn Arg Phe Thr Gln
355 360 365
Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
370 375
<210> 44
<211> 327
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 44
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg
1 5 10 15
Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 60
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr
65 70 75 80
Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
85 90 95
Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Ser Cys Pro Ala Pro
100 105 110
Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys
115 120 125
Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val
130 135 140
Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp
145 150 155 160
Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe
165 170 175
Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp
180 185 190
Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu
195 200 205
Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg
210 215 220
Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys
225 230 235 240
Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp
245 250 255
Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys
260 265 270
Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser
275 280 285
Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser
290 295 300
Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser
305 310 315 320
Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys
325
<210> 45
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列 (Artificial Sequence)
<220>
<223> FLAG肽
<400> 45
Asp Tyr Lys Asp Asp Asp Asp Lys
1 5
<210> 46
<211> 464
<212> PRT
<213> 人工序列 (Artificial Sequence)
<220>
<223> 亲本21R79 重链
<220>
<221> 信号(SIGNAL)
<222> (1)..(19)
<400> 46
Met Lys His Leu Trp Phe Phe Leu Leu Leu Val Ala Ala Pro Arg Trp
1 5 10 15
Val Leu Ser Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys
20 25 30
Pro Gly Ala Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe
35 40 45
Thr Ala Tyr Tyr Ile His Trp Val Lys Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu
50 55 60
Glu Trp Ile Gly Tyr Ile Ala Asn Tyr Asn Arg Ala Thr Asn Tyr Asn
65 70 75 80
Gln Lys Phe Lys Gly Arg Val Thr Phe Thr Thr Asp Thr Ser Thr Ser
85 90 95
Thr Ala Tyr Met Glu Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val
100 105 110
Tyr Tyr Cys Ala Arg Asp Tyr Asp Tyr Asp Val Gly Met Asp Tyr Trp
115 120 125
Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro
130 135 140
Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr
145 150 155 160
Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr
165 170 175
Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro
180 185 190
Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr
195 200 205
Val Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gln Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp
210 215 220
His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Thr Val Glu Arg Lys Cys
225 230 235 240
Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser
245 250 255
Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg
260 265 270
Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro
275 280 285
Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala
290 295 300
Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Phe Arg Val Val
305 310 315 320
Ser Val Leu Thr Val Val His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr
325 330 335
Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr
340 345 350
Ile Ser Lys Thr Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu
355 360 365
Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys
370 375 380
Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser
385 390 395 400
Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Met Leu Asp
405 410 415
Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser
420 425 430
Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala
435 440 445
Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
450 455 460
<210> 47
<211> 466
<212> PRT
<213> 人工序列 (Artificial Sequence)
<220>
<223> 亲本219R45 重链
<220>
<221> 信号(SIGNAL)
<222> (1)..(19)
<400> 47
Met Lys His Leu Trp Phe Phe Leu Leu Leu Val Ala Ala Pro Arg Trp
1 5 10 15
Val Leu Ser Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys
20 25 30
Pro Gly Ala Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe
35 40 45
Thr Asn Tyr Trp Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu
50 55 60
Glu Trp Met Gly Asp Ile Asn Pro Ser Asn Gly Arg Thr Ser Tyr Lys
65 70 75 80
Glu Lys Phe Lys Arg Arg Val Thr Leu Ser Val Asp Lys Ser Ser Ser
85 90 95
Thr Ala Tyr Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val
100 105 110
Tyr Phe Cys Thr Ile His Tyr Asp Asp Lys Tyr Tyr Pro Leu Met Asp
115 120 125
Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys
130 135 140
Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu
145 150 155 160
Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro
165 170 175
Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr
180 185 190
Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val
195 200 205
Val Thr Val Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gln Thr Tyr Thr Cys Asn
210 215 220
Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Thr Val Glu Arg
225 230 235 240
Lys Cys Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly
245 250 255
Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile
260 265 270
Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu
275 280 285
Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His
290 295 300
Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Phe Arg
305 310 315 320
Val Val Ser Val Leu Thr Val Val His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys
325 330 335
Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ala Pro Ile Glu
340 345 350
Lys Thr Ile Ser Lys Thr Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr
355 360 365
Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu
370 375 380
Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp
385 390 395 400
Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Met
405 410 415
Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp
420 425 430
Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His
435 440 445
Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro
450 455 460
Gly Lys
465
<210> 48
<211> 445
<212> PRT
<213> 人工序列 (Artificial Sequence)
<220>
<223> 亲本21R79 重链
<400> 48
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Ala Tyr
20 25 30
Tyr Ile His Trp Val Lys Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Tyr Ile Ala Asn Tyr Asn Arg Ala Thr Asn Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Arg Val Thr Phe Thr Thr Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Asp Tyr Asp Tyr Asp Val Gly Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe
115 120 125
Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu
130 135 140
Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp
145 150 155 160
Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu
165 170 175
Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser
180 185 190
Ser Asn Phe Gly Thr Gln Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro
195 200 205
Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Thr Val Glu Arg Lys Cys Cys Val Glu
210 215 220
Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu
225 230 235 240
Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu
245 250 255
Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Gln
260 265 270
Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys
275 280 285
Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Phe Arg Val Val Ser Val Leu
290 295 300
Thr Val Val His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys
305 310 315 320
Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys
325 330 335
Thr Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser
340 345 350
Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys
355 360 365
Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln
370 375 380
Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Met Leu Asp Ser Asp Gly
385 390 395 400
Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln
405 410 415
Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn
420 425 430
His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
435 440 445
<210> 49
<211> 447
<212> PRT
<213> 人工序列 (Artificial Sequence)
<220>
<223> 亲本219R45 重链
<400> 49
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr
20 25 30
Trp Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Asp Ile Asn Pro Ser Asn Gly Arg Thr Ser Tyr Lys Glu Lys Phe
50 55 60
Lys Arg Arg Val Thr Leu Ser Val Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys
85 90 95
Thr Ile His Tyr Asp Asp Lys Tyr Tyr Pro Leu Met Asp Tyr Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser
115 120 125
Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala
130 135 140
Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val
145 150 155 160
Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala
165 170 175
Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val
180 185 190
Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gln Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His
195 200 205
Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Thr Val Glu Arg Lys Cys Cys
210 215 220
Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val
225 230 235 240
Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr
245 250 255
Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu
260 265 270
Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys
275 280 285
Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Phe Arg Val Val Ser
290 295 300
Val Leu Thr Val Val His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys
305 310 315 320
Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile
325 330 335
Ser Lys Thr Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro
340 345 350
Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu
355 360 365
Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn
370 375 380
Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Met Leu Asp Ser
385 390 395 400
Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg
405 410 415
Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu
420 425 430
His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
435 440 445
<210> 50
<211> 357
<212> DNA
<213> 人工序列 (Artificial Sequence)
<220>
<223> 亲本21R79 重链可变区
<400> 50
caagtgcagc tcgtgcagtc aggggcggag gtcaagaagc cgggagcatc ggtcaaaatc 60
tcgtgtaagg cctcggggta ctcctttact gcgtattaca tccattgggt aaagcaggcg 120
ccagggcagg gattggagtg gattgggtat atcgccaatt acaatcgcgc gacgaactat 180
aaccagaaat tcaagggaag ggtgaccttc acaacggata catcgacatc gacggcctac 240
atggaacttc gcagcctgcg atcagatgac acggcggtat actattgcgc aagagattac 300
gactatgatg tgggaatgga ctattggggt caaggtactc tggtcacagt ctcctcc 357
<210> 51
<211> 363
<212> DNA
<213> 人工序列 (Artificial Sequence)
<220>
<223> 亲本219R45 重链可变区
<400> 51
caggtacagc tcgtgcaatc gggggcagag gtcaaaaagc ccggtgcgtc ggtaaaggtc 60
agctgcaaag cgtcaggtta tacattcacg aattactgga tgcattgggt cagacaggcc 120
cctggacaag ggcttgaatg gatgggagat atcaatccgt cgaacggacg gactagctat 180
aaggagaagt ttaagaggcg cgtaacactg tcggtggaca aatcgtcctc aacggcctac 240
atggagttgt catccctgcg gtcggaagat acggcggtct acttctgtac tatccactat 300
gacgataagt actacccgct tatggactac tggggtcagg gaacattggt aaccgtgagc 360
agc 363
<210> 52
<211> 1392
<212> DNA
<213> 人工序列 (Artificial Sequence)
<220>
<223> 亲本21R79 重链
<400> 52
atgaaacact tgtggttttt cctcttgctc gtggcagctc ctcggtgggt actttcacaa 60
gtgcagctcg tgcagtcagg ggcggaggtc aagaagccgg gagcatcggt caaaatctcg 120
tgtaaggcct cggggtactc ctttactgcg tattacatcc attgggtaaa gcaggcgcca 180
gggcagggat tggagtggat tgggtatatc gccaattaca atcgcgcgac gaactataac 240
cagaaattca agggaagggt gaccttcaca acggatacat cgacatcgac ggcctacatg 300
gaacttcgca gcctgcgatc agatgacacg gcggtatact attgcgcaag agattacgac 360
tatgatgtgg gaatggacta ttggggtcaa ggtactctgg tcacagtctc ctccgccagc 420
accaagggcc ctagcgtctt ccctctggct ccctgcagca ggagcaccag cgagagcaca 480
gccgccctgg gctgcctggt caaggactac ttccccgaac cggtgacggt gtcgtggaac 540
tcaggcgctc tgaccagcgg cgtgcacacc ttcccagctg tcctacagtc ctcaggactc 600
tactccctca gcagcgtggt gaccgtgccc tccagcaact tcggcaccca gacctacacc 660
tgcaacgtag atcacaagcc cagcaacacc aaggtggaca agacagttga gcgcaaatgt 720
tgtgtcgagt gcccaccgtg cccagcacca cctgtggcag gaccgtcagt cttcctcttc 780
cccccaaaac ccaaggacac cctcatgatc tcccggaccc ctgaggtcac gtgcgtggtg 840
gtggacgtga gccacgaaga ccccgaggtc cagttcaact ggtacgtgga cggcgtggag 900
gtgcataatg ccaagacaaa gccacgggag gagcagttca acagcacgtt ccgtgtggtc 960
agcgtcctca ccgttgtgca ccaggactgg ctgaacggca aggagtacaa gtgcaaggtc 1020
tccaacaaag gcctcccagc ccccatcgag aaaaccatct ccaaaaccaa agggcagccc 1080
cgagaaccac aggtgtacac cctgccccca tcccgggagg agatgaccaa gaaccaggtc 1140
agcctgacct gcctggtcaa aggcttctac cccagcgaca tcgccgtgga gtgggagagc 1200
aatgggcagc cggagaacaa ctacaagacc acacctccca tgctggactc cgacggctcc 1260
ttcttcctct acagcaagct caccgtggac aagagcaggt ggcagcaggg gaacgtcttc 1320
tcatgctccg tgatgcatga ggctctgcac aaccactaca cgcagaagag cctctccctg 1380
tctccgggta aa 1392
<210> 53
<211> 1398
<212> DNA
<213> 人工序列 (Artificial Sequence)
<220>
<223> 亲本219R45 重链
<400> 53
atgaaacacc tctggttctt tttgctcctg gtggcagctc cccgatgggt gcttagccag 60
gtacagctcg tgcaatcggg ggcagaggtc aaaaagcccg gtgcgtcggt aaaggtcagc 120
tgcaaagcgt caggttatac attcacgaat tactggatgc attgggtcag acaggcccct 180
ggacaagggc ttgaatggat gggagatatc aatccgtcga acggacggac tagctataag 240
gagaagttta agaggcgcgt aacactgtcg gtggacaaat cgtcctcaac ggcctacatg 300
gagttgtcat ccctgcggtc ggaagatacg gcggtctact tctgtactat ccactatgac 360
gataagtact acccgcttat ggactactgg ggtcagggaa cattggtaac cgtgagcagc 420
gcgtccacaa agggccctag cgtcttccct ctggctccct gcagcaggag caccagcgag 480
agcacagccg ccctgggctg cctggtcaag gactacttcc ccgaaccggt gacggtgtcg 540
tggaactcag gcgctctgac cagcggcgtg cacaccttcc cagctgtcct acagtcctca 600
ggactctact ccctcagcag cgtggtgacc gtgccctcca gcaacttcgg cacccagacc 660
tacacctgca acgtagatca caagcccagc aacaccaagg tggacaagac agttgagcgc 720
aaatgttgtg tcgagtgccc accgtgccca gcaccacctg tggcaggacc gtcagtcttc 780
ctcttccccc caaaacccaa ggacaccctc atgatctccc ggacccctga ggtcacgtgc 840
gtggtggtgg acgtgagcca cgaagacccc gaggtccagt tcaactggta cgtggacggc 900
gtggaggtgc ataatgccaa gacaaagcca cgggaggagc agttcaacag cacgttccgt 960
gtggtcagcg tcctcaccgt tgtgcaccag gactggctga acggcaagga gtacaagtgc 1020
aaggtctcca acaaaggcct cccagccccc atcgagaaaa ccatctccaa aaccaaaggg 1080
cagccccgag aaccacaggt gtacaccctg cccccatccc gggaggagat gaccaagaac 1140
caggtcagcc tgacctgcct ggtcaaaggc ttctacccca gcgacatcgc cgtggagtgg 1200
gagagcaatg ggcagccgga gaacaactac aagaccacac ctcccatgct ggactccgac 1260
ggctccttct tcctctacag caagctcacc gtggacaaga gcaggtggca gcaggggaac 1320
gtcttctcat gctccgtgat gcatgaggct ctgcacaacc actacacgca gaagagcctc 1380
tccctgtctc cgggtaaa 1398
<210> 54
<211> 333
<212> DNA
<213> 人工序列 (Artificial Sequence)
<220>
<223> 亲本21R79 and 219R45 轻链可变区
<400> 54
gacatcgtga tgacccagtc ccctgactcc ctggctgtgt ccctgggcga gagggccacc 60
atctcctgca gagccagcga atccgtcgat aattatggca tttcctttat gaagtggttc 120
cagcagaaac caggacagcc tcctaagctg ctcatttacg ctgcatccaa ccaagggtcc 180
ggggtccctg acaggttctc cggcagcggg tccggaacag atttcactct caccatcagc 240
agcctgcagg ctgaagatgt ggctgtctat tactgtcagc aaagcaagga ggtgccttgg 300
acattcggag gagggaccaa ggtggaaatc aaa 333
<210> 55
<211> 717
<212> DNA
<213> 人工序列 (Artificial Sequence)
<220>
<223> 亲本21R79和219R45 轻链
<400> 55
atggtgctcc agacccaggt cttcatttcc ctgctgctct ggatcagcgg agcctacggg 60
gacatcgtga tgacccagtc ccctgactcc ctggctgtgt ccctgggcga gagggccacc 120
atctcctgca gagccagcga atccgtcgat aattatggca tttcctttat gaagtggttc 180
cagcagaaac caggacagcc tcctaagctg ctcatttacg ctgcatccaa ccaagggtcc 240
ggggtccctg acaggttctc cggcagcggg tccggaacag atttcactct caccatcagc 300
agcctgcagg ctgaagatgt ggctgtctat tactgtcagc aaagcaagga ggtgccttgg 360
acattcggag gagggaccaa ggtggaaatc aaacgtacgg tggctgcccc ctccgtcttc 420
atcttccccc ccagcgatga gcagctgaaa agcggcactg ccagcgtggt gtgcctgctg 480
aataacttct atccccggga ggccaaagtg cagtggaagg tggataacgc cctccaaagc 540
ggcaactccc aggagagcgt cacagagcag gacagcaagg acagcaccta cagcctcagc 600
agcaccctga ccctgagcaa agccgactac gagaaacaca aagtctacgc ctgcgaagtc 660
acccatcagg gcctgagcag ccccgtcaca aagagcttca acaggggcga gtgttga 717
<210> 56
<211> 445
<212> PRT
<213> 人工序列 (Artificial Sequence)
<220>
<223> 21R75 重链
<400> 56
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Ala Tyr
20 25 30
Tyr Ile His Trp Val Lys Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Tyr Ile Ala Gly Tyr Lys Asp Ala Thr Asn Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Arg Val Thr Phe Thr Thr Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Asp Tyr Asp Tyr Asp Val Gly Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe
115 120 125
Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu
130 135 140
Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp
145 150 155 160
Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu
165 170 175
Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser
180 185 190
Ser Asn Phe Gly Thr Gln Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro
195 200 205
Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Thr Val Glu Arg Lys Cys Cys Val Glu
210 215 220
Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu
225 230 235 240
Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu
245 250 255
Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Gln
260 265 270
Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys
275 280 285
Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Phe Arg Val Val Ser Val Leu
290 295 300
Thr Val Val His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys
305 310 315 320
Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys
325 330 335
Thr Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser
340 345 350
Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Glu
355 360 365
Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln
370 375 380
Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Met Leu Asp Ser Asp Gly
385 390 395 400
Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Glu Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln
405 410 415
Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn
420 425 430
His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
435 440 445
<210> 57
<211> 464
<212> PRT
<213> 人工序列 (Artificial Sequence)
<220>
<223> 21R75 重链
<220>
<221> 信号(SIGNAL)
<222> (1)..(19)
<400> 57
Met Lys His Leu Trp Phe Phe Leu Leu Leu Val Ala Ala Pro Arg Trp
1 5 10 15
Val Leu Ser Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys
20 25 30
Pro Gly Ala Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe
35 40 45
Thr Ala Tyr Tyr Ile His Trp Val Lys Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu
50 55 60
Glu Trp Ile Gly Tyr Ile Ala Gly Tyr Lys Asp Ala Thr Asn Tyr Asn
65 70 75 80
Gln Lys Phe Lys Gly Arg Val Thr Phe Thr Thr Asp Thr Ser Thr Ser
85 90 95
Thr Ala Tyr Met Glu Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val
100 105 110
Tyr Tyr Cys Ala Arg Asp Tyr Asp Tyr Asp Val Gly Met Asp Tyr Trp
115 120 125
Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro
130 135 140
Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr
145 150 155 160
Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr
165 170 175
Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro
180 185 190
Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr
195 200 205
Val Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gln Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp
210 215 220
His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Thr Val Glu Arg Lys Cys
225 230 235 240
Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser
245 250 255
Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg
260 265 270
Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro
275 280 285
Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala
290 295 300
Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Phe Arg Val Val
305 310 315 320
Ser Val Leu Thr Val Val His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr
325 330 335
Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr
340 345 350
Ile Ser Lys Thr Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu
355 360 365
Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys
370 375 380
Leu Val Glu Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser
385 390 395 400
Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Met Leu Asp
405 410 415
Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Glu Leu Thr Val Asp Lys Ser
420 425 430
Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala
435 440 445
Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
450 455 460
<210> 58
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列 (Artificial Sequence)
<220>
<223> 21R75 重链可变区
<400> 58
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Ala Tyr
20 25 30
Tyr Ile His Trp Val Lys Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Tyr Ile Ala Gly Tyr Lys Asp Ala Thr Asn Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Arg Val Thr Phe Thr Thr Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Asp Tyr Asp Tyr Asp Val Gly Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 59
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列 (Artificial Sequence)
<220>
<223> 21R75 重链 CDR2
<400> 59
Tyr Ile Ala Gly Tyr Lys Asp Ala Thr Asn Tyr Asn Gln Lys Phe Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 60
<211> 1392
<212> DNA
<213> 人工序列 (Artificial Sequence)
<220>
<223> 21R75 重链
<220>
<221> 信号肽
<222> (1)..(57)
<400> 60
atgaagcacc tgtggttctt tctgctgctg gtggccgctc ccagatgggt gctgtcccag 60
gtgcagctgg tgcagtctgg cgccgaagtg aagaaacctg gcgcctccgt gaagatctcc 120
tgcaaggcct ccggctactc cttcaccgcc tactacatcc actgggtcaa gcaggcccct 180
ggacagggcc tggaatggat cggctatatc gccggctaca aggacgccac caactacaac 240
cagaaattca agggcagagt gaccttcacc accgacacct ccacctctac cgcctacatg 300
gaactgcggt ccctgcggag cgacgacacc gccgtgtact actgcgccag agactacgac 360
tacgacgtgg gcatggacta ctggggccag ggcacactcg tgaccgtgtc ctctgcttcc 420
accaagggcc cctccgtgtt tcctctggcc ccttgctcca gatccacctc cgagtctacc 480
gccgctctgg gctgcctcgt gaaggactac ttccccgagc ccgtgacagt gtcttggaac 540
tctggcgccc tgacctccgg cgtgcacacc tttccagctg tgctgcagtc ctccggcctg 600
tactccctgt cctccgtcgt gactgtgccc tcctccaact tcggcaccca gacctacacc 660
tgtaacgtgg accacaagcc ctccaacacc aaggtggaca agaccgtgga acggaagtgc 720
tgcgtggaat gccccccttg tcctgcccct cctgtggctg gccctagcgt gttcctgttc 780
cccccaaagc ccaaggacac cctgatgatc tcccggaccc ccgaagtgac ctgcgtggtg 840
gtggatgtgt cccacgagga ccccgaggtg cagttcaatt ggtacgtgga cggcgtggaa 900
gtgcacaacg ccaagaccaa gcccagagag gaacagttca actccacctt ccgggtggtg 960
tccgtgctga ccgtggtgca tcaggactgg ctgaacggca aagagtacaa gtgcaaggtg 1020
tccaacaagg gcctgcctgc ccccatcgaa aagaccatct ctaagaccaa gggacagccc 1080
cgcgagcccc aggtgtacac actgcctcca tcccgggaag agatgaccaa gaaccaggtg 1140
tccctgacct gtctggtgga aggcttctac ccctccgata tcgccgtgga atgggagtcc 1200
aacggccagc ccgagaacaa ctacaagacc acccccccca tgctggactc cgacggctca 1260
ttcttcctgt acagcgagct gacagtggac aagtcccggt ggcagcaggg caacgtgttc 1320
tcctgctccg tgatgcacga ggccctgcac aaccactaca cccagaagtc cctgtccctg 1380
agccccggca ag 1392
<210> 61
<211> 1392
<212> DNA
<213> 人工序列 (Artificial Sequence)
<220>
<223> 21R75 重链
<220>
<221> 信号肽
<222> (1)..(57)
<400> 61
atgaagcacc tgtggttctt tctgctgctg gtggccgctc ccagatgggt gctgtcccag 60
gttcagctag ttcagtctgg agcggaagtt aagaaacctg gagcatccgt gaaaataagt 120
tgcaaggcat ccggttactc gttcaccgca tactatatcc actgggttaa acaggcacca 180
ggacagggac ttgaatggat cggatatatc gctggatata aagatgctac aaactataac 240
caaaaattca aaggacgcgt gactttcaca actgacacct caacctcgac agcatacatg 300
gaattacggt ccctacggtc tgacgacact gccgtttact attgcgctag agattatgat 360
tatgatgttg gaatggacta ttggggccag ggaacactgg tgacagtgtc ttctgcatcc 420
actaagggac catccgtgtt ccctttggcc ccttgctctc gttcgacctc tgaatcgact 480
gccgctctgg gatgcctcgt gaaagattac ttccctgagc ctgtgaccgt ttcctggaac 540
tcgggcgccc taacctctgg cgtgcacaca ttccctgccg tgctacagtc ttctggccta 600
tactctttat cttcggttgt taccgtacct tcttctaact tcggaaccca aacttacacc 660
tgtaacgtag accacaagcc ttcgaacacc aaggtggaca agactgttga gcgaaagtgc 720
tgcgttgagt gccctccatg tcctgcacct cctgtggctg gcccttctgt gttcctgttc 780
cctccaaaac ctaaggacac tctaatgatc tctcggactc ctgaggtgac ttgcgtggtt 840
gtggacgtgt cccacgagga ccctgaggtg cagttcaatt ggtacgtgga cggagtcgag 900
gtgcacaatg caaagaccaa gcctcgggag gaacagttca actccacctt ccgggtggtt 960
tctgtgttga ccgttgtgca ccaagactgg ctgaacggca aagaatacaa gtgcaaggtg 1020
tccaacaagg gcctgcctgc ccctatcgaa aagaccatca gcaagaccaa gggccagcct 1080
cgcgagcctc aggtgtacac cctgcctccc agccgggaag aaatgaccaa gaaccaggtg 1140
tccctgacct gtctggtgga gggcttctac ccttccgaca tcgccgttga gtgggagtct 1200
aacggacagc cggagaacaa ctacaagact acgcctccaa tgctggactc cgacggctcc 1260
ttcttcctgt actccgaact gaccgtggac aagtcccggt ggcagcaggg caacgtgttc 1320
tcatgctccg taatgcacga agccttgcac aatcactaca ctcaaaagtc cctatcctta 1380
tctcctggca ag 1392
<210> 62
<211> 445
<212> PRT
<213> 人工序列 (Artificial Sequence)
<220>
<223> 21R83 重链
<400> 62
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Ala Tyr
20 25 30
Tyr Ile His Trp Val Lys Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Tyr Ile Ser Asn Tyr Asn Arg Ala Thr Asn Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Arg Val Thr Phe Thr Thr Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Asp Tyr Asp Tyr Asp Val Gly Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe
115 120 125
Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu
130 135 140
Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp
145 150 155 160
Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu
165 170 175
Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser
180 185 190
Ser Asn Phe Gly Thr Gln Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro
195 200 205
Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Thr Val Glu Arg Lys Cys Cys Val Glu
210 215 220
Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu
225 230 235 240
Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu
245 250 255
Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Gln
260 265 270
Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys
275 280 285
Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Phe Arg Val Val Ser Val Leu
290 295 300
Thr Val Val His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys
305 310 315 320
Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys
325 330 335
Thr Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser
340 345 350
Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Glu
355 360 365
Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln
370 375 380
Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Met Leu Asp Ser Asp Gly
385 390 395 400
Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Glu Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln
405 410 415
Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn
420 425 430
His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
435 440 445
<210> 63
<211> 464
<212> PRT
<213> 人工序列 (Artificial Sequence)
<220>
<223> 21R83 重链
<220>
<221> 信号(SIGNAL)
<222> (1)..(19)
<400> 63
Met Lys His Leu Trp Phe Phe Leu Leu Leu Val Ala Ala Pro Arg Trp
1 5 10 15
Val Leu Ser Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys
20 25 30
Pro Gly Ala Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe
35 40 45
Thr Ala Tyr Tyr Ile His Trp Val Lys Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu
50 55 60
Glu Trp Ile Gly Tyr Ile Ser Asn Tyr Asn Arg Ala Thr Asn Tyr Asn
65 70 75 80
Gln Lys Phe Lys Gly Arg Val Thr Phe Thr Thr Asp Thr Ser Thr Ser
85 90 95
Thr Ala Tyr Met Glu Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val
100 105 110
Tyr Tyr Cys Ala Arg Asp Tyr Asp Tyr Asp Val Gly Met Asp Tyr Trp
115 120 125
Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro
130 135 140
Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr
145 150 155 160
Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr
165 170 175
Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro
180 185 190
Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr
195 200 205
Val Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gln Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp
210 215 220
His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Thr Val Glu Arg Lys Cys
225 230 235 240
Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser
245 250 255
Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg
260 265 270
Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro
275 280 285
Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala
290 295 300
Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Phe Arg Val Val
305 310 315 320
Ser Val Leu Thr Val Val His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr
325 330 335
Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr
340 345 350
Ile Ser Lys Thr Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu
355 360 365
Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys
370 375 380
Leu Val Glu Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser
385 390 395 400
Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Met Leu Asp
405 410 415
Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Glu Leu Thr Val Asp Lys Ser
420 425 430
Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala
435 440 445
Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
450 455 460
<210> 64
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列 (Artificial Sequence)
<220>
<223> 21R83 重链可变区
<400> 64
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Ala Tyr
20 25 30
Tyr Ile His Trp Val Lys Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Tyr Ile Ser Asn Tyr Asn Arg Ala Thr Asn Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Arg Val Thr Phe Thr Thr Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Asp Tyr Asp Tyr Asp Val Gly Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 65
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列 (Artificial Sequence)
<220>
<223> 21R83 重链 CDR2
<400> 65
Tyr Ile Ser Asn Tyr Asn Arg Ala Thr Asn Tyr Asn Gln Lys Phe Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 66
<211> 1392
<212> DNA
<213> 人工序列 (Artificial Sequence)
<220>
<223> 21R83 重链
<220>
<221> 信号肽
<222> (1)..(57)
<400> 66
atgaagcacc tgtggttctt tctgctgctg gtggccgctc ccagatgggt gctgtcccag 60
gtgcagctgg tgcagtctgg cgccgaagtg aagaaacctg gcgcctccgt gaagatctcc 120
tgcaaggcct ccggctactc cttcaccgcc tactacatcc actgggtcaa gcaggcccct 180
ggacagggcc tggaatggat cggctacatc tccaactaca accgggccac caattacaac 240
cagaaattca agggccgcgt gaccttcacc accgacacct ctacctctac cgcctacatg 300
gaactgcggt ccctgcggag cgacgacacc gccgtgtact actgcgccag agactacgac 360
tacgacgtgg gcatggacta ctggggccag ggcacactcg tgaccgtgtc tagcgcttcc 420
accaagggcc cctccgtgtt tcctctggcc ccttgctcca gatccacctc cgagtctacc 480
gccgctctgg gctgcctcgt gaaggactac ttccccgagc ccgtgacagt gtcctggaac 540
tctggcgctc tgacctccgg cgtgcacacc tttccagctg tgctgcagtc ctccggcctg 600
tactccctgt cctccgtcgt gactgtgccc tcctccaact tcggcaccca gacctacacc 660
tgtaacgtgg accacaagcc ctccaacacc aaggtggaca agaccgtgga acggaagtgc 720
tgcgtggaat gccccccttg tcctgcccct cctgtggctg gccctagcgt gttcctgttc 780
cccccaaagc ccaaggacac cctgatgatc tcccggaccc ccgaagtgac ctgcgtggtg 840
gtggatgtgt cccacgagga ccccgaggtg cagttcaatt ggtacgtgga cggcgtggaa 900
gtgcacaacg ccaagaccaa gcccagagag gaacagttca actccacctt ccgggtggtg 960
tccgtgctga ccgtggtgca tcaggactgg ctgaacggca aagagtacaa gtgcaaggtg 1020
tccaacaagg gcctgcctgc ccccatcgaa aagaccatct ctaagaccaa gggacagccc 1080
cgcgagcccc aggtgtacac actgcctcca tcccgggaag agatgaccaa gaaccaggtg 1140
tccctgacct gtctggtgga aggcttctac ccctccgata tcgccgtgga atgggagtcc 1200
aacggccagc ccgagaacaa ctacaagacc acccccccca tgctggactc cgacggctca 1260
ttcttcctgt acagcgagct gacagtggac aagtcccggt ggcagcaggg caacgtgttc 1320
tcctgctccg tgatgcacga ggccctgcac aaccactaca cccagaagtc cctgtccctg 1380
agccccggca ag 1392
<210> 67
<211> 1392
<212> DNA
<213> 人工序列 (Artificial Sequence)
<220>
<223> 21R75 重链
<220>
<221> 信号肽
<222> (1)..(57)
<400> 67
atgaagcacc tgtggttctt tctgctgctg gtggccgctc ccagatgggt gctgtcccag 60
gttcagctag ttcagtctgg agcggaagtt aagaaacctg gagcatccgt gaaaataagt 120
tgcaaggcat ccggttactc gttcaccgca tactatatcc actgggttaa acaggcacca 180
ggacagggac ttgaatggat cggatatatc gctggatata aagatgctac aaactataac 240
caaaaattca aaggacgcgt gactttcaca actgacacct caacctcgac agcatacatg 300
gaattacggt ccctacggtc tgacgacact gccgtttact attgcgctag agattatgat 360
tatgatgttg gaatggacta ttggggccag ggaacactgg tgacagtgtc ttctgcatcc 420
actaagggac catccgtgtt ccctttggcc ccttgctctc gttcgacctc tgaatcgact 480
gccgctctgg gatgcctcgt gaaagattac ttccctgagc ctgtgaccgt ttcctggaac 540
tcgggcgccc taacctctgg cgtgcacaca ttccctgccg tgctacagtc ttctggccta 600
tactctttat cttcggttgt taccgtacct tcttctaact tcggaaccca aacttacacc 660
tgtaacgtag accacaagcc ttcgaacacc aaggtggaca agactgttga gcgaaagtgc 720
tgcgttgagt gccctccatg tcctgcacct cctgtggctg gcccttctgt gttcctgttc 780
cctccaaaac ctaaggacac tctaatgatc tctcggactc ctgaggtgac ttgcgtggtt 840
gtggacgtgt cccacgagga ccctgaggtg cagttcaatt ggtacgtgga cggagtcgag 900
gtgcacaatg caaagaccaa gcctcgggag gaacagttca actccacctt ccgggtggtt 960
tctgtgttga ccgttgtgca ccaagactgg ctgaacggca aagaatacaa gtgcaaggtg 1020
tccaacaagg gcctgcctgc ccctatcgaa aagaccatca gcaagaccaa gggccagcct 1080
cgcgagcctc aggtgtacac cctgcctccc agccgggaag aaatgaccaa gaaccaggtg 1140
tccctgacct gtctggtgga gggcttctac ccttccgaca tcgccgttga gtgggagtct 1200
aacggacagc cggagaacaa ctacaagact acgcctccaa tgctggactc cgacggctcc 1260
ttcttcctgt actccgaact gaccgtggac aagtcccggt ggcagcaggg caacgtgttc 1320
tcatgctccg taatgcacga agccttgcac aatcactaca ctcaaaagtc cctatcctta 1380
tctcctggca ag 1392
<210> 68
<211> 357
<212> DNA
<213> 人工序列 (Artificial Sequence)
<220>
<223> 21R75 重链可变区
<400> 68
caggtgcagc tggtgcagtc tggcgccgaa gtgaagaaac ctggcgcctc cgtgaagatc 60
tcctgcaagg cctccggcta ctccttcacc gcctactaca tccactgggt caagcaggcc 120
cctggacagg gcctggaatg gatcggctat atcgccggct acaaggacgc caccaactac 180
aaccagaaat tcaagggcag agtgaccttc accaccgaca cctccacctc taccgcctac 240
atggaactgc ggtccctgcg gagcgacgac accgccgtgt actactgcgc cagagactac 300
gactacgacg tgggcatgga ctactggggc cagggcacac tcgtgaccgt gtcctct 357
<210> 69
<211> 357
<212> DNA
<213> 人工序列 (Artificial Sequence)
<220>
<223> 21R75 重链可变区
<400> 69
caggttcagc tagttcagtc tggagcggaa gttaagaaac ctggagcatc cgtgaaaata 60
agttgcaagg catccggtta ctcgttcacc gcatactata tccactgggt taaacaggca 120
ccaggacagg gacttgaatg gatcggatat atcgctggat ataaagatgc tacaaactat 180
aaccaaaaat tcaaaggacg cgtgactttc acaactgaca cctcaacctc gacagcatac 240
atggaattac ggtccctacg gtctgacgac actgccgttt actattgcgc tagagattat 300
gattatgatg ttggaatgga ctattggggc cagggaacac tggtgacagt gtcttct 357
<210> 70
<211> 357
<212> DNA
<213> 人工序列 (Artificial Sequence)
<220>
<223> 21R83 重链可变区
<400> 70
caggtgcagc tggtgcagtc tggcgccgaa gtgaagaaac ctggcgcctc cgtgaagatc 60
tcctgcaagg cctccggcta ctccttcacc gcctactaca tccactgggt caagcaggcc 120
cctggacagg gcctggaatg gatcggctac atctccaact acaaccgggc caccaattac 180
aaccagaaat tcaagggccg cgtgaccttc accaccgaca cctctacctc taccgcctac 240
atggaactgc ggtccctgcg gagcgacgac accgccgtgt actactgcgc cagagactac 300
gactacgacg tgggcatgga ctactggggc cagggcacac tcgtgaccgt gtctagc 357
<210> 71
<211> 357
<212> DNA
<213> 人工序列 (Artificial Sequence)
<220>
<223> 21R75 重链可变区
<400> 71
caggttcagc tagttcagtc tggagcggaa gttaagaaac ctggagcatc cgtgaaaata 60
agttgcaagg catccggtta ctcgttcacc gcatactata tccactgggt taaacaggca 120
ccaggacagg gacttgaatg gatcggatat atcgctggat ataaagatgc tacaaactat 180
aaccaaaaat tcaaaggacg cgtgactttc acaactgaca cctcaacctc gacagcatac 240
atggaattac ggtccctacg gtctgacgac actgccgttt actattgcgc tagagattat 300
gattatgatg ttggaatgga ctattggggc cagggaacac tggtgacagt gtcttct 357
<210> 72
<211> 1395
<212> DNA
<213> 人工序列 (Artificial Sequence)
<220>
<223> 21R83 重链
<220>
<221> 信号肽
<222> (1)..(57)
<400> 72
atgaagcacc tatggttctt tctattatta gtggccgctc cccgttgggt gttatcgcag 60
gttcagctag ttcagtctgg agcggaagtt aagaaacctg gagcatccgt gaaaataagt 120
tgcaaggcat ccggttactc gttcaccgca tactatatcc actgggttaa acaggcacca 180
ggacagggac ttgaatggat cggatatatc tccaattata atagagctac aaactataac 240
caaaaattca aaggacgcgt gactttcaca actgacacct caacctcgac agcatacatg 300
gaattacggt ccctacggtc tgacgacact gccgtttact attgcgctag agattatgat 360
tatgatgttg gaatggacta ttggggccag ggaacactgg tgacagtgtc ttctgcatcc 420
actaagggac catccgtgtt ccctttggcc ccttgctctc gttcgacctc tgaatcgact 480
gccgctctgg gatgcctcgt gaaagattac ttccctgagc ctgtgaccgt ttcctggaac 540
tcgggcgccc taacctctgg cgtgcacaca ttccctgccg tgctacagtc ttctggccta 600
tactctttat cttcggttgt taccgtacct tcttctaact tcggaaccca aacttacacc 660
tgtaacgtag accacaagcc ttcgaacacc aaggtggaca agactgttga gcgaaagtgc 720
tgcgttgagt gccctccatg tcctgcacct cctgtggctg gcccttctgt gttcctgttc 780
cctccaaaac ctaaggacac tctaatgatc tctcggactc ctgaggtgac ttgcgtggtt 840
gtggacgtgt cccacgagga ccctgaggtg cagttcaatt ggtacgtgga cggagtcgag 900
gtgcacaatg caaagaccaa gcctcgggag gaacagttca actccacctt ccgggtggtt 960
tctgtgttga ccgttgtgca ccaagactgg ctgaacggca aagaatacaa gtgcaaggtg 1020
tccaacaagg gcctgcctgc ccctatcgaa aagaccatca gcaagaccaa gggccagcct 1080
cgcgagcctc aggtgtacac cctgcctccc agccgggaag aaatgaccaa gaaccaggtg 1140
tccctgacct gtctggtgga gggcttctac ccttccgaca tcgccgttga gtgggagtct 1200
aacggacagc cggagaacaa ctacaagact acgcctccaa tgctggactc cgacggctcc 1260
ttcttcctgt actccgaact gaccgtggac aagtcccggt ggcagcaggg caacgtgttc 1320
tcatgctccg taatgcacga agccttgcac aatcactaca ctcaaaagtc cctatcctta 1380
tctcctggca agtag 1395
<210> 73
<211> 357
<212> DNA
<213> 人工序列 (Artificial Sequence)
<220>
<223> 21R83 重链可变区
<400> 73
caggttcagc tagttcagtc tggagcggaa gttaagaaac ctggagcatc cgtgaaaata 60
agttgcaagg catccggtta ctcgttcacc gcatactata tccactgggt taaacaggca 120
ccaggacagg gacttgaatg gatcggatat atctccaatt ataatagagc tacaaactat 180
aaccaaaaat tcaaaggacg cgtgactttc acaactgaca cctcaacctc gacagcatac 240
atggaattac ggtccctacg gtctgacgac actgccgttt actattgcgc tagagattat 300
gattatgatg ttggaatgga ctattggggc cagggaacac tggtgacagt gtcttct 357
<210> 74
<211> 1395
<212> DNA
<213> 人工序列 (Artificial Sequence)
<220>
<223> 21R75 重链
<220>
<221> 信号肽
<222> (1)..(57)
<400> 74
atgaagcacc tatggttctt tctattatta gtggccgctc cccgttgggt gttatcgcag 60
gttcagctag ttcagtctgg agcggaagtt aagaaacctg gagcatccgt gaaaataagt 120
tgcaaggcat ccggttactc gttcaccgca tactatatcc actgggttaa acaggcacca 180
ggacagggac ttgaatggat cggatatatc gctggatata aagatgctac aaactataac 240
caaaaattca aaggacgcgt gactttcaca actgacacct caacctcgac agcatacatg 300
gaattacggt ccctacggtc tgacgacact gccgtttact attgcgctag agattatgat 360
tatgatgttg gaatggacta ttggggccag ggaacactgg tgacagtgtc ttctgcatcc 420
actaagggac catccgtgtt ccctttggcc ccttgctctc gttcgacctc tgaatcgact 480
gccgctctgg gatgcctcgt gaaagattac ttccctgagc ctgtgaccgt ttcctggaac 540
tcgggcgccc taacctctgg cgtgcacaca ttccctgccg tgctacagtc ttctggccta 600
tactctttat cttcggttgt taccgtacct tcttctaact tcggaaccca aacttacacc 660
tgtaacgtag accacaagcc ttcgaacacc aaggtggaca agactgttga gcgaaagtgc 720
tgcgttgagt gccctccatg tcctgcacct cctgtggctg gcccttctgt gttcctgttc 780
cctccaaaac ctaaggacac tctaatgatc tctcggactc ctgaggtgac ttgcgtggtt 840
gtggacgtgt cccacgagga ccctgaggtg cagttcaatt ggtacgtgga cggagtcgag 900
gtgcacaatg caaagaccaa gcctcgggag gaacagttca actccacctt ccgggtggtt 960
tctgtgttga ccgttgtgca ccaagactgg ctgaacggca aagaatacaa gtgcaaggtg 1020
tccaacaagg gcctgcctgc ccctatcgaa aagaccatca gcaagaccaa gggccagcct 1080
cgcgagcctc aggtgtacac cctgcctccc agccgggaag aaatgaccaa gaaccaggtg 1140
tccctgacct gtctggtgga gggcttctac ccttccgaca tcgccgttga gtgggagtct 1200
aacggacagc cggagaacaa ctacaagact acgcctccaa tgctggactc cgacggctcc 1260
ttcttcctgt actccgaact gaccgtggac aagtcccggt ggcagcaggg caacgtgttc 1320
tcatgctccg taatgcacga agccttgcac aatcactaca ctcaaaagtc cctatcctta 1380
tctcctggca agtag 1395
<210> 75
<211> 1395
<212> DNA
<213> 人工序列 (Artificial Sequence)
<220>
<223> 21M18 重链
<400> 75
atgaagcacc tatggttctt tctattatta gtggccgctc cccgttgggt gttatcgcag 60
gttcagctag ttcagtctgg agcggaagtt aagaaacctg gagcatccgt gaaaataagt 120
tgcaaggcat ccggttactc gttcaccgca tactatatcc actgggttaa acaggcacca 180
ggacagggac ttgaatggat cggatatatc tcctcttata atggagctac aaactataac 240
caaaaattca aaggacgcgt gactttcaca actgacacct caacctcgac agcatacatg 300
gaattacggt ccctacggtc tgacgacact gccgtttact attgcgctag agattatgat 360
tatgatgttg gaatggacta ttggggccag ggaacactgg tgacagtgtc ttctgcatcc 420
actaagggac catccgtgtt ccctttggcc ccttgctctc gttcgacctc tgaatcgact 480
gccgctctgg gatgcctcgt gaaagattac ttccctgagc ctgtgaccgt ttcctggaac 540
tcgggcgccc taacctctgg cgtgcacaca ttccctgccg tgctacagtc ttctggccta 600
tactctttat cttcggttgt taccgtacct tcttctaact tcggaaccca aacttacacc 660
tgtaacgtag accacaagcc ttcgaacacc aaggtggaca agactgttga gcgaaagtgc 720
tgcgttgagt gccctccatg tcctgcacct cctgtggctg gcccttctgt gttcctgttc 780
cctccaaaac ctaaggacac tctaatgatc tctcggactc ctgaggtgac ttgcgtggtt 840
gtggacgtgt cccacgagga ccctgaggtg cagttcaatt ggtacgtgga cggagtcgag 900
gtgcacaatg caaagaccaa gcctcgggag gaacagttca actccacctt ccgggtggtt 960
tctgtgttga ccgttgtgca ccaagactgg ctgaacggca aagaatacaa gtgcaaggtg 1020
tccaacaagg gcctgcctgc ccctatcgaa aagaccatca gcaagaccaa gggccagcct 1080
cgcgagcctc aggtgtacac cctgcctccc agccgggaag aaatgaccaa gaaccaggtg 1140
tccctgacct gtctggtgga gggcttctac ccttccgaca tcgccgttga gtgggagtct 1200
aacggacagc cggagaacaa ctacaagact acgcctccaa tgctggactc cgacggctcc 1260
ttcttcctgt actccgaact gaccgtggac aagtcccggt ggcagcaggg caacgtgttc 1320
tcatgctccg taatgcacga agccttgcac aatcactaca ctcaaaagtc cctatcctta 1380
tctcctggca agtag 1395
<210> 76
<211> 351
<212> PRT
<213> 人工序列 (Artificial Sequence)
<220>
<223> 21M18 重链可变区
<400> 76
Cys Ala Gly Cys Thr Ala Gly Thr Thr Cys Ala Gly Thr Cys Thr Gly
1 5 10 15
Gly Ala Gly Cys Gly Gly Ala Ala Gly Thr Thr Ala Ala Gly Ala Ala
20 25 30
Ala Cys Cys Thr Gly Gly Ala Gly Cys Ala Thr Cys Cys Gly Thr Gly
35 40 45
Ala Ala Ala Ala Thr Ala Ala Gly Thr Thr Gly Cys Ala Ala Gly Gly
50 55 60
Cys Ala Thr Cys Cys Gly Gly Thr Thr Ala Cys Thr Cys Gly Thr Thr
65 70 75 80
Cys Ala Cys Cys Gly Cys Ala Thr Ala Cys Thr Ala Thr Ala Thr Cys
85 90 95
Cys Ala Cys Thr Gly Gly Gly Thr Thr Ala Ala Ala Cys Ala Gly Gly
100 105 110
Cys Ala Cys Cys Ala Gly Gly Ala Cys Ala Gly Gly Gly Ala Cys Thr
115 120 125
Thr Gly Ala Ala Thr Gly Gly Ala Thr Cys Gly Gly Ala Thr Ala Thr
130 135 140
Ala Thr Cys Thr Cys Cys Thr Cys Thr Thr Ala Thr Ala Ala Thr Gly
145 150 155 160
Gly Ala Gly Cys Thr Ala Cys Ala Ala Ala Cys Thr Ala Thr Ala Ala
165 170 175
Cys Cys Ala Ala Ala Ala Ala Thr Thr Cys Ala Ala Ala Gly Gly Ala
180 185 190
Cys Gly Cys Gly Thr Gly Ala Cys Thr Thr Thr Cys Ala Cys Ala Ala
195 200 205
Cys Thr Gly Ala Cys Ala Cys Cys Thr Cys Ala Ala Cys Cys Thr Cys
210 215 220
Gly Ala Cys Ala Gly Cys Ala Thr Ala Cys Ala Thr Gly Gly Ala Ala
225 230 235 240
Thr Thr Ala Cys Gly Gly Thr Cys Cys Cys Thr Ala Cys Gly Gly Thr
245 250 255
Cys Thr Gly Ala Cys Gly Ala Cys Ala Cys Thr Gly Cys Cys Gly Thr
260 265 270
Thr Thr Ala Cys Thr Ala Thr Thr Gly Cys Gly Cys Thr Ala Gly Ala
275 280 285
Gly Ala Thr Thr Ala Thr Gly Ala Thr Thr Ala Thr Gly Ala Thr Gly
290 295 300
Thr Thr Gly Gly Ala Ala Thr Gly Gly Ala Cys Thr Ala Thr Thr Gly
305 310 315 320
Gly Gly Gly Cys Cys Ala Gly Gly Gly Ala Ala Cys Ala Cys Thr Gly
325 330 335
Gly Thr Gly Ala Cys Ala Gly Thr Gly Thr Cys Thr Thr Cys Thr
340 345 350
<210> 77
<211> 1392
<212> DNA
<213> 人工序列 (Artificial Sequence)
<220>
<223> 21R75 重链
<220>
<221> 信号肽
<222> (1)..(57)
<400> 77
atgaagcacc tgtggttctt tctgctgctg gtggccgctc ccagatgggt gctgtctcag 60
gtgcagctgg tgcagtctgg cgccgaagtg aagaaacctg gcgcctccgt gaagatctcc 120
tgcaaggcct ccggctactc cttcaccgcc tactacatcc actgggtcaa gcaggcccct 180
ggacagggcc tggaatggat cggctatatc gccggctaca aggacgccac caactacaac 240
cagaaattca agggcagagt gaccttcacc accgacacct ccacctctac cgcctacatg 300
gaactgcggt ccctgcggag cgacgacacc gccgtgtact actgcgccag agactacgac 360
tacgacgtgg gcatggacta ctggggccag ggcacactcg tgaccgtgtc ctctgcttcc 420
accaagggcc cctccgtgtt tcctctggcc ccttgctcca gatccacctc cgagtctacc 480
gccgctctgg gctgcctcgt gaaggactac ttccccgagc ccgtgacagt gtcttggaac 540
tctggcgccc tgacctccgg cgtgcacacc tttccagctg tgctgcagtc ctccggcctg 600
tactccctgt cctccgtcgt gactgtgccc tcctccaact tcggcaccca gacctacacc 660
tgtaacgtgg accacaagcc ctccaacacc aaggtggaca agaccgtgga acggaagtgc 720
tgcgtggaat gccccccttg tcctgcccct cctgtggctg gccctagcgt gttcctgttc 780
cccccaaagc ccaaggacac cctgatgatc tcccggaccc ccgaagtgac ctgcgtggtg 840
gtggatgtgt cccacgagga ccccgaggtg cagttcaatt ggtacgtgga cggcgtggaa 900
gtgcacaacg ccaagaccaa gcccagagag gaacagttca actccacctt ccgggtggtg 960
tccgtgctga ccgtggtgca tcaggactgg ctgaacggca aagagtacaa gtgcaaggtg 1020
tccaacaagg gcctgcctgc ccccatcgaa aagaccatct ctaagaccaa gggacagccc 1080
cgcgagcccc aggtgtacac actgcctcca tcccgggaag agatgaccaa gaaccaggtg 1140
tccctgacct gtctggtgga aggcttctac ccctccgata tcgccgtgga atgggagtcc 1200
aacggccagc ccgagaacaa ctacaagacc acccccccca tgctggactc cgacggctca 1260
ttcttcctgt acagcgagct gacagtggac aagtcccggt ggcagcaggg caacgtgttc 1320
tcctgctccg tgatgcacga ggccctgcac aaccactaca cccagaagtc cctgtccctg 1380
agccccggca ag 1392
<210> 78
<211> 1392
<212> DNA
<213> 人工序列 (Artificial Sequence)
<220>
<223> 21R83 重链
<220>
<221> 信号肽
<222> (1)..(57)
<400> 78
atgaagcacc tgtggttctt tctgctgctg gtggccgctc ccagatgggt gctgtctcag 60
gtgcagctgg tgcagtctgg cgccgaagtg aagaaacctg gcgcctccgt gaagatctcc 120
tgcaaggcct ccggctactc cttcaccgcc tactacatcc actgggtcaa gcaggcccct 180
ggacagggcc tggaatggat cggctacatc tccaactaca accgggccac caattacaac 240
cagaaattca agggccgcgt gaccttcacc accgacacct ctacctctac cgcctacatg 300
gaactgcggt ccctgcggag cgacgacacc gccgtgtact actgcgccag agactacgac 360
tacgacgtgg gcatggacta ctggggccag ggcacactcg tgaccgtgtc tagcgcttcc 420
accaagggcc cctccgtgtt tcctctggcc ccttgctcca gatccacctc cgagtctacc 480
gccgctctgg gctgcctcgt gaaggactac ttccccgagc ccgtgacagt gtcctggaac 540
tctggcgctc tgacctccgg cgtgcacacc tttccagctg tgctgcagtc ctccggcctg 600
tactccctgt cctccgtcgt gactgtgccc tcctccaact tcggcaccca gacctacacc 660
tgtaacgtgg accacaagcc ctccaacacc aaggtggaca agaccgtgga acggaagtgc 720
tgcgtggaat gccccccttg tcctgcccct cctgtggctg gccctagcgt gttcctgttc 780
cccccaaagc ccaaggacac cctgatgatc tcccggaccc ccgaagtgac ctgcgtggtg 840
gtggatgtgt cccacgagga ccccgaggtg cagttcaatt ggtacgtgga cggcgtggaa 900
gtgcacaacg ccaagaccaa gcccagagag gaacagttca actccacctt ccgggtggtg 960
tccgtgctga ccgtggtgca tcaggactgg ctgaacggca aagagtacaa gtgcaaggtg 1020
tccaacaagg gcctgcctgc ccccatcgaa aagaccatct ctaagaccaa gggacagccc 1080
cgcgagcccc aggtgtacac actgcctcca tcccgggaag agatgaccaa gaaccaggtg 1140
tccctgacct gtctggtgga aggcttctac ccctccgata tcgccgtgga atgggagtcc 1200
aacggccagc ccgagaacaa ctacaagacc acccccccca tgctggactc cgacggctca 1260
ttcttcctgt acagcgagct gacagtggac aagtcccggt ggcagcaggg caacgtgttc 1320
tcctgctccg tgatgcacga ggccctgcac aaccactaca cccagaagtc cctgtccctg 1380
agccccggca ag 1392
<210> 79
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列 (Artificial Sequence)
<220>
<223> 替代性 21R75、 21R79、21R83和21M18 重链 CDR1
<400> 79
Ala Tyr Tyr Ile His
1 5
<210> 80
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列 (Artificial Sequence)
<220>
<223> 抗DLL4 重链 CDR2共有序列
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (3)..(3)
<223> X可以是丝氨酸或丙氨酸
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (4)..(4)
<223> X 可以是丝氨酸、天冬酰胺或甘氨酸
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (6)..(6)
<223> X 可以是天冬酰胺或赖氨酸
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (7)..(7)
<223> X 可以是甘氨酸、精氨酸或天冬氨酸
<400> 80
Tyr Ile Xaa Xaa Tyr Xaa Xaa Ala Thr Asn Tyr Asn Gln Lys Phe Lys
1 5 10 15
Gly

Claims (12)

1.治疗有效量的经修饰的免疫球蛋白分子与紫杉烷的组合在制造用于治疗已经至少三种在先抗癌治疗失败的受试者中铂抗性的卵巢癌、铂抗性的原发性腹膜癌或铂抗性的输卵管癌的药物中的用途，所述经修饰的免疫球蛋白分子包含特异性结合人VEGF的第一抗原结合位点，和特异性结合人DLL4的第二抗原结合位点，
其中所述第一抗原结合位点包含：NYWMH(SEQ ID NO:17)的重链CDR1，DINPSNGRTSYKEKFKR(SEQ ID NO:18)的重链CDR2，和HYDDKYYPLMDY(SEQ ID NO:19)的重链CDR3；所述第二抗原结合位点包含：TAYYIH(SEQ ID NO:13)的重链CDR1，YISNYNRATNYNQKFKG(SEQ ID NO:65)的重链CDR2，和RDYDYDVGMDY(SEQ ID NO:16)的重链CDR3；并且所述第一抗原结合位点和第二抗原结合位点均包含：RASESVDNYGISFMK(SEQ IDNO:20)的轻链CDR1，AASNQGS(SEQ ID NO:21)的轻链CDR2，和QQSKEVPWTFGG(SEQ ID NO:22)的轻链CDR3。
2.如权利要求1所述的用途，其中，所述紫杉烷是紫杉醇、多西他赛、白蛋白结合型紫杉醇、DHA-紫杉醇或PG-紫杉醇。
3.如权利要求1所述的用途，其中，所述经修饰的免疫球蛋白分子是单价双特异性抗体或双价双特异性抗体。
4.如权利要求1所述的用途，其中，所述经修饰的免疫球蛋白分子以0.5mg/kg～10mg/kg的剂量施用。
5.如权利要求1所述的用途，其中，所述经修饰的免疫球蛋白分子以3mg/kg、4mg/kg、5mg/kg或10mg/kg的剂量施用。
6.如权利要求1所述的用途，其中，所述经修饰的免疫球蛋白分子每周、每隔一周、每三周或每四周施用。
7.如权利要求1所述的用途，其中，所述经修饰的免疫球蛋白分子每两周或每三周施用。
8.如权利要求1所述的用途，其中，所述经修饰的免疫球蛋白分子以每三周3mg/kg、4mg/kg或5mg/kg的剂量施用。
9.如权利要求1所述的用途，其中，所述经修饰的免疫球蛋白分子以每两周3mg/kg的剂量施用。
10.如权利要求1所述的用途，其中，所述受试者是人。
11.如权利要求1所述的用途，其中所述在先抗癌治疗中的一种是贝伐单抗。
12.如权利要求1所述的用途，其中所述第一抗原结合位点包含与SEQ ID NO:11具有至少95％序列同一性的重链可变区，并且包含：(i)NYWMH(SEQ ID NO:17)的重链CDR1和(ii)DINPSNGRTSYKEKFKR(SEQ ID NO:18)的重链CDR2中的一个或多个以及HYDDKYYPLMDY(SEQID NO:19)的重链CDR3；所述第二抗原结合位点包含与SEQ ID NO:64具有至少95％序列同一性的重链可变区，并且包含：(i)TAYYIH(SEQ ID NO:13)的重链CDR1和(ii)YISNYNRATNYNQKFKG(SEQ ID NO:65)的重链CDR2中的一个或多个以及RDYDYDVGMDY(SEQ IDNO:16)的重链CDR3；并且所述第一抗原结合位点和第二抗原结合位点均包含与SEQ ID NO:12具有至少95％序列同一性的相同轻链可变区。
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Families Citing this family (9)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
PT2488204E (pt) 2009-10-16 2016-06-09 Oncomed Pharm Inc Combinação terapêutica e utilização de anticorpos antagonistas de dll4 e agentes anti-hipertensivos
LT2758073T (lt) 2011-09-23 2019-01-10 Oncomed Pharmaceuticals, Inc. Vegf/dll4 surišantys agentai ir jų panaudojimas
MX2017005258A (es) * 2014-10-31 2017-07-26 Oncomed Pharm Inc Terapia combinada para tratamiento de enfermedad.
CN109071644B (zh) 2015-09-23 2023-09-19 昂考梅德药品有限公司 治疗癌症的方法和组合物
WO2019112958A1 (en) * 2017-12-05 2019-06-13 Abbvie Biotherapeutics Inc. Abt-165 in combination with folinic acid, 5-fluorouracil, and irinotecan for the treatment of cancers
AU2019380595A1 (en) 2018-11-15 2021-06-03 Oncomed Pharmaceuticals, Inc. Methods and monitoring of treatment with VEGF/DLL4 binding agent
CA3141664A1 (en) * 2019-05-23 2020-11-26 American Molecular Laboratories, Inc. Methods for detecting a level of h. pylori in a fecal sample
CN111234003B (zh) * 2020-02-07 2022-02-01 中国人民解放军第四军医大学 一种用于癌症靶向治疗的短肽及基于其的超声响应纳米载药微泡和应用
CA3225489A1 (en) * 2021-08-10 2023-02-16 The Johns Hopkins University Compositions and methods for treatment of cancer

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2013135602A2 (en) * 2012-03-13 2013-09-19 F. Hoffmann-La Roche Ag Combination therapy for the treatment of ovarian cancer
CN104168914A (zh) * 2011-09-23 2014-11-26 昂考梅德药品有限公司 Vegf/dll4结合剂及其应用

Family Cites Families (182)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US3773919A (en) 1969-10-23 1973-11-20 Du Pont Polylactide-drug mixtures
US4485045A (en) 1981-07-06 1984-11-27 Research Corporation Synthetic phosphatidyl cholines useful in forming liposomes
US4816567A (en) 1983-04-08 1989-03-28 Genentech, Inc. Recombinant immunoglobin preparations
US4544545A (en) 1983-06-20 1985-10-01 Trustees University Of Massachusetts Liposomes containing modified cholesterol for organ targeting
US4676980A (en) 1985-09-23 1987-06-30 The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Department Of Health And Human Services Target specific cross-linked heteroantibodies
US5681718A (en) 1986-03-14 1997-10-28 Celltech Limited Methods for enhanced production of tissue plasminogen activator in cell culture using alkanoic acids or salts thereof
US5225539A (en) 1986-03-27 1993-07-06 Medical Research Council Recombinant altered antibodies and methods of making altered antibodies
GB8823869D0 (en) 1988-10-12 1988-11-16 Medical Res Council Production of antibodies
US5530101A (en) 1988-12-28 1996-06-25 Protein Design Labs, Inc. Humanized immunoglobulins
US5013556A (en) 1989-10-20 1991-05-07 Liposome Technology, Inc. Liposomes with enhanced circulation time
US5633425A (en) 1990-08-29 1997-05-27 Genpharm International, Inc. Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies
US5661016A (en) 1990-08-29 1997-08-26 Genpharm International Inc. Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies of various isotypes
ES2108048T3 (es) 1990-08-29 1997-12-16 Genpharm Int Produccion y utilizacion de animales inferiores transgenicos capaces de producir anticuerpos heterologos.
US5625126A (en) 1990-08-29 1997-04-29 Genpharm International, Inc. Transgenic non-human animals for producing heterologous antibodies
US5545806A (en) 1990-08-29 1996-08-13 Genpharm International, Inc. Ransgenic non-human animals for producing heterologous antibodies
ES2113940T3 (es) 1990-12-03 1998-05-16 Genentech Inc Metodo de enriquecimiento para variantes de proteinas con propiedades de union alteradas.
US6582959B2 (en) 1991-03-29 2003-06-24 Genentech, Inc. Antibodies to vascular endothelial cell growth factor
IL101728A (en) 1991-05-03 2007-08-19 Univ Yale Human Abandonment and Delta, Restrictive Areas of Effect in Tophoric Proteins, and Methods Based on Them
US5786158A (en) 1992-04-30 1998-07-28 Yale University Therapeutic and diagnostic methods and compositions based on notch proteins and nucleic acids
US20050112121A1 (en) 1992-04-30 2005-05-26 Yale University Therapeutic and diagnostic methods and compositions based on notch proteins and nucleic acids
US5840299A (en) 1994-01-25 1998-11-24 Athena Neurosciences, Inc. Humanized antibodies against leukocyte adhesion molecule VLA-4
US5731168A (en) 1995-03-01 1998-03-24 Genentech, Inc. Method for making heteromultimeric polypeptides
US5641870A (en) 1995-04-20 1997-06-24 Genentech, Inc. Low pH hydrophobic interaction chromatography for antibody purification
PT861261E (pt) 1995-06-28 2009-12-16 Imp Cancer Res Tech Sequências nucleotídicas e proteicas de genes delta de vertebrado e métodos nelas baseados
US5730977A (en) 1995-08-21 1998-03-24 Mitsui Toatsu Chemicals, Inc. Anti-VEGF human monoclonal antibody
JPH09124697A (ja) 1995-11-01 1997-05-13 Toagosei Co Ltd ペプチド及びモノクローナル抗体
WO1997019172A1 (fr) 1995-11-17 1997-05-29 Asahi Kasei Kogyo Kabushiki Kaisha Polypeptide suppresseur et de differenciation
US20020137890A1 (en) 1997-03-31 2002-09-26 Genentech, Inc. Secreted and transmembrane polypeptides and nucleic acids encoding the same
US6121045A (en) 1997-04-04 2000-09-19 Millennium Biotherapeutics, Inc. Human Delta3 nucleic acid molecules
US20030180784A1 (en) 1997-04-04 2003-09-25 Millennium Pharmaceuticals, Inc. Novel human Delta3 compositions and therapeutic and diagnostic uses therefor
CA2285020A1 (en) 1997-04-04 1998-10-15 Millennium Biotherapeutics, Inc. Novel human delta3 compositions and therapeutic and diagnostic uses therefor
US20060122373A1 (en) 1997-04-04 2006-06-08 Millennium Pharmaceuticals, Inc. Delta3, FTHMA-070, Tango85, Tango77, SPOIL,NEOKINE, Tango129 and integrin alpha subunit protein and nucleic acid molecules and uses thereof
CA2286330C (en) 1997-04-07 2008-06-10 Genentech, Inc. Anti-vegf antibodies
US20020032315A1 (en) 1997-08-06 2002-03-14 Manuel Baca Anti-vegf antibodies
US7365166B2 (en) 1997-04-07 2008-04-29 Genentech, Inc. Anti-VEGF antibodies
US7951917B1 (en) 1997-05-02 2011-05-31 Genentech, Inc. Method for making multispecific antibodies having heteromultimeric and common components
US20020062010A1 (en) 1997-05-02 2002-05-23 Genentech, Inc. Method for making multispecific antibodies having heteromultimeric and common components
EP0979281B1 (en) 1997-05-02 2005-07-20 Genentech, Inc. A method for making multispecific antibodies having heteromultimeric and common components
ES2284205T3 (es) 1997-05-14 2007-11-01 Asahi Kasei Kabushiki Kaisha Nuevo inhibidor de diferenciacion.
AU8162898A (en) 1997-06-18 1999-01-04 Trustees Of Columbia University In The City Of New York, The Angiogenic modulation by notch signal transduction
US6004528A (en) 1997-09-18 1999-12-21 Bergstein; Ivan Methods of cancer diagnosis and therapy targeted against the cancer stemline
AU5099499A (en) 1998-07-13 2000-02-01 Yale University Delta cleavage products and methods based thereon
WO2000006726A2 (en) 1998-07-27 2000-02-10 Amgen Inc. Delta-related polypeptides
ATE269357T1 (de) 1999-04-28 2004-07-15 Univ Texas Zusammensetzungen und verfahren zur krebsbehandlung durch die selektive hemmung von vegf
US6703221B1 (en) 1999-08-19 2004-03-09 Chiron Corporation Notch receptor ligands and uses thereof
CA2492049A1 (en) 1999-12-01 2001-06-07 Genentech, Inc. Secreted and transmembrane polypeptides and nucleic acids encoding the same
US20110131679A2 (en) 2000-04-19 2011-06-02 Thomas La Rosa Rice Nucleic Acid Molecules and Other Molecules Associated with Plants and Uses Thereof for Plant Improvement
US20020028488A1 (en) 2000-06-19 2002-03-07 Sujay Singh Transgenic avian species for making human and chimeric antibodies
US8044259B2 (en) 2000-08-03 2011-10-25 The Regents Of The University Of Michigan Determining the capability of a test compound to affect solid tumor stem cells
US6984522B2 (en) 2000-08-03 2006-01-10 Regents Of The University Of Michigan Isolation and use of solid tumor stem cells
US6689744B2 (en) 2000-09-22 2004-02-10 Genentech, Inc. Notch receptor agonists and uses
ES2649037T3 (es) 2000-12-12 2018-01-09 Medimmune, Llc Moléculas con semividas prolongadas, composiciones y usos de las mismas
US7667004B2 (en) 2001-04-17 2010-02-23 Abmaxis, Inc. Humanized antibodies against vascular endothelial growth factor
JP2004536877A (ja) 2001-07-25 2004-12-09 ロランティス リミテッド 免疫療法に用いるノッチシグナル伝達モジュレーター
WO2003012105A2 (en) 2001-08-01 2003-02-13 University Of Bristol Vegf isoform
WO2003041735A2 (en) 2001-11-14 2003-05-22 Lorantis Limited Composotion comprising inhibitors of the notch signalling pathway for the modulation of the immune system
US20050137130A1 (en) 2001-11-14 2005-06-23 Bodmer Mark W. Medical treatment
EP1448599A2 (en) 2001-11-14 2004-08-25 Lorantis Limited Inhibitors of the notch signalling pathway for use in the treatment of cancer
JP2005511754A (ja) 2001-12-07 2005-04-28 リージェンツ オブ ザ ユニバーシティ オブ ミシガン 乳癌幹細胞の予測的同定および特徴づけ
US8034904B2 (en) 2002-06-14 2011-10-11 Immunogen Inc. Anti-IGF-I receptor antibody
GB0216648D0 (en) 2002-07-18 2002-08-28 Lonza Biologics Plc Method of expressing recombinant protein in CHO cells
GB0218879D0 (en) 2002-08-14 2002-09-25 Lorantis Ltd Medical treatment
JP2006515177A (ja) 2002-09-10 2006-05-25 ロランティス リミテッド Ｎｏｔｃｈリガンドタンパク質を含む医薬組成物及び医学的処置
EP2085096A3 (en) 2002-09-11 2009-08-12 Genentech, Inc. Novel composition and methods for the treatment of immune related diseases
US7365168B2 (en) 2002-10-15 2008-04-29 Pdl Biopharma, Inc. Alteration of FcRn binding affinities or serum half-lives of antibodies by mutagenesis
AU2004247095A1 (en) 2003-06-06 2004-12-23 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Use of VEGF inhibitors for tumor regression
US7758859B2 (en) 2003-08-01 2010-07-20 Genentech, Inc. Anti-VEGF antibodies
US20050106667A1 (en) 2003-08-01 2005-05-19 Genentech, Inc Binding polypeptides with restricted diversity sequences
US20050079184A1 (en) 2003-08-08 2005-04-14 Immunomedics, Inc. Bispecific antibodies for inducing apoptosis of tumor and diseased cells
FR2859725B1 (fr) 2003-09-16 2006-03-10 Neovacs Procede a haut rendement pour l'obtention d'anticorps humains neutralisant l'activite biologique d'une cytokine humaine
WO2005047327A2 (en) 2003-11-12 2005-05-26 Biogen Idec Ma Inc. NEONATAL Fc RECEPTOR (FcRn)-BINDING POLYPEPTIDE VARIANTS, DIMERIC Fc BINDING PROTEINS AND METHODS RELATED THERETO
WO2005054426A2 (en) 2003-12-05 2005-06-16 Angiogenetics Sweden Ab Angiogenesis affecting polypeptides, proteins, and compositions, and methods of use thereof
JP2007526455A (ja) 2004-02-03 2007-09-13 ザ リージェンツ オブ ザ ユニバーシティ オブ ミシガン 癌を特徴付ける、制御する、診断する、および処置するための組成物ならびに方法
EP1725585A2 (en) 2004-03-10 2006-11-29 Lonza Ltd Method for producing antibodies
EP2583685A1 (en) 2004-06-10 2013-04-24 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Method of administering and using VEGF inhibitors for the treatment of human cancer
ES2421556T3 (es) 2004-06-15 2013-09-03 Hoffmann La Roche Utilización de hormonas cardíacas para diagnosticar el riesgo de sufrir complicaciones cardiovasculares como consecuencia de medicamentos cardiotóxicos
EP1755645A2 (en) 2004-06-18 2007-02-28 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Vegf inhibitors for the treatment of malignant pleural effusion
EP1615036B1 (en) 2004-07-07 2007-09-19 F.Hoffmann-La Roche Ag Multimarker panel for diabetes type 1 and 2
KR20070072510A (ko) 2004-08-30 2007-07-04 론자 바이올로직스 피엘씨 항체 정제를 위한 친화도- 및 이온 교환- 크로마토그래피
AU2005282700A1 (en) 2004-09-02 2006-03-16 Genentech, Inc. Heteromultimeric molecules
US20080254031A1 (en) 2004-09-09 2008-10-16 Exonhit Therapeutics Sa Tumor Specific Genes and Variant Rnas and Uses Thereof as Targets for Cancer Therapy and Diagnosis
US8911726B2 (en) 2004-09-22 2014-12-16 Kyowa Hakko Kirin Co., Ltd Stabilized human Igg4 antibodies
US20060134121A1 (en) 2004-10-29 2006-06-22 Gavin Thurston DII4 antagonists, assays, and therapeutic methods thereof
US8048418B2 (en) * 2004-10-29 2011-11-01 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Therapeutic methods for inhibiting tumor growth with combination of Dll4 antagonists and VEGF antagonists
RU2392961C2 (ru) 2004-11-10 2010-06-27 Хубрехт Лабораториум Лечение аденомы и/или аденокарциномы кишечника с помощью ингибирования активации пути notch
EP1812064A4 (en) 2004-11-19 2009-07-08 Cornell Res Foundation Inc USE OF ENDOTHELIAL VASCULAR GROWTH FACTOR RECEPTOR CELLS IN THE TREATMENT AND MONITORING OF CANCER AND IN THE SCREENING OF CHEMOTHERAPEUTIC AGENTS
US7432107B2 (en) 2005-01-24 2008-10-07 Roche Diagnostics Operations, Inc. Cardiac hormones for assessing cardiovascular risk
CA2595794A1 (en) 2005-01-24 2006-07-27 F. Hoffmann-La Roche Ag The use of cardiac hormones for assessing a cardiovascular risk with respect to the administration of anti-inflammatory drugs
EP1853298A2 (en) 2005-02-11 2007-11-14 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Therapeutic combination of a vegf antagonist (vegf trap) and an anti-hypertensive agent
EP3050963B1 (en) 2005-03-31 2019-09-18 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Process for production of polypeptide by regulation of assembly
US9296816B2 (en) 2005-04-15 2016-03-29 Macrogenics, Inc. Covalent diabodies and uses thereof
CA2607147C (en) 2005-05-09 2018-07-17 Ono Pharmaceutical Co., Ltd. Human monoclonal antibodies to programmed death 1 (pd-1) and methods for treating cancer using anti-pd-1 antibodies alone or in combination with other immunotherapeutics
US20070054360A1 (en) 2005-05-12 2007-03-08 Zeren Gao Compositions and methods for modulating immune responses
JP2008545753A (ja) 2005-06-02 2008-12-18 ギャラクシー バイオテック， エルエルシー 抗体で脳腫瘍を処置する方法
US7531172B2 (en) 2005-08-12 2009-05-12 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Methods of treating diseases with a VEGF antagonist
EP1928486A2 (en) 2005-09-01 2008-06-11 Vasgene Therapeutics, Inc. Methods for using and identifying modulators of delta-like 4
US7906116B2 (en) 2005-09-01 2011-03-15 Parkash Gill Methods for using and identifying modulators of Delta-like 4
US7723112B2 (en) 2005-10-31 2010-05-25 The Regents Of The University Of Michigan Compositions and methods for treating and diagnosing cancer
AU2006326417B2 (en) 2005-12-16 2012-05-24 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Therapeutic methods for inhibiting tumor growth with Dll4 antagonists
CA2642685A1 (en) 2006-02-17 2007-08-30 Gilead Colorado, Inc. Antihypertensive therapy
WO2007103114A2 (en) 2006-03-07 2007-09-13 The Brigham & Women's Hospital, Inc. Notch inhibition in the treatment or prevention of atherosclerosis
US7354582B2 (en) 2006-03-10 2008-04-08 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Use of VEGF antagonists for the treatment of malignant gliomas
PT1999154E (pt) 2006-03-24 2013-01-24 Merck Patent Gmbh Domínios proteicos heterodiméricos modificados
AU2007319672B2 (en) 2006-06-06 2011-06-30 Genentech, Inc. Anti-DLL4 antibodies and methods using same
RU2008152435A (ru) 2006-06-06 2010-07-20 Дженентек, Инк. (Us) Композиции и способы регулирования развития сосудов
PL2032166T3 (pl) 2006-06-13 2013-09-30 Oncomed Pharm Inc Kompozycje i sposoby diagnozowania i leczenia nowotworów
JP2009541275A (ja) 2006-06-22 2009-11-26 ノボ・ノルデイスク・エー／エス 二重特異性抗体の生産
NZ574794A (en) 2006-08-07 2011-06-30 Regeneron Pharma Use of delta-like ligand 4 (DLL4) antagonists for treating eye vascular and ischemic injury
WO2008027236A2 (en) 2006-08-30 2008-03-06 Genentech, Inc. Multispecific antibodies
JP5535633B2 (ja) 2006-09-29 2014-07-02 オンコメッド ファーマシューティカルズ インコーポレイテッド 癌の診断および処置のための組成物および方法
WO2008133706A2 (en) 2006-10-20 2008-11-06 Schering Corporation Fully human anti-vegf antibodies and methods of using
WO2008070350A2 (en) 2006-10-27 2008-06-12 The Board Of Regents Of The University Of Texas System Methods and compositions related to wrapping of dehydrons
WO2008070042A2 (en) 2006-12-04 2008-06-12 Medimmune, Inc. High potency recombinant antibodies, methods for producing them and use in cancer therapy
KR101320198B1 (ko) 2006-12-11 2013-10-30 제넨테크, 인크. 신생물의 치료를 위한 조성물 및 방법
NO347649B1 (no) 2006-12-14 2024-02-12 Regeneron Pharma Humant antistoff eller antistoff fragment som spesifikt binder human deltaliknende ligand 4 (hDII4), nukleinsyremolekyl som koder for slike og vektor og vert-vektorsystemer, samt fremgangsmåte for fremstilling, sammensetning og anvendelse.
PL2101807T3 (pl) 2006-12-19 2016-11-30 Antagoniści specyficzni względem VEGF dla terapii adiuwantem i neoadiuwantem i leczenie wczesnych stadiów guzów
EP2120996A2 (en) 2006-12-20 2009-11-25 Vasgene Therapeutics, Inc. Methods for using and identifying modulators of delta-like 4
US7691980B2 (en) 2007-01-09 2010-04-06 Bio-Rad Laboratories, Inc. Enhanced capacity and purification of antibodies by mixed mode chromatography in the presence of aqueous-soluble nonionic organic polymers
JP2010517944A (ja) 2007-01-26 2010-05-27 バイオインヴェント インターナショナル アーベー Ｄｌｌ４シグナリング阻害薬およびその使用
WO2008137318A1 (en) 2007-05-04 2008-11-13 Ironwood Pharmaceuticals, Inc. Compositions and methods for treating disorders associated with salt or fluid retention
GB0709333D0 (en) 2007-05-15 2007-06-20 Smart Targeting Ltd Binding protein
CN101918579A (zh) 2007-10-22 2010-12-15 先灵公司 完全人抗-vegf抗体和使用方法
AU2008315414A1 (en) 2007-10-25 2009-04-30 Philogene, Inc. Antibodies specific to pro-angiogenic isoforms of vascular endothelial growth factor (VEGF)
TWI468417B (zh) 2007-11-30 2015-01-11 Genentech Inc 抗－ｖｅｇｆ抗體
WO2009075565A1 (en) 2007-12-12 2009-06-18 Erasmus University Medical Center Rotterdam Methods for controlling vasculogenesis
US9266967B2 (en) 2007-12-21 2016-02-23 Hoffmann-La Roche, Inc. Bivalent, bispecific antibodies
MX350962B (es) 2008-01-07 2017-09-27 Amgen Inc Metodo para fabricar moleculas heterodimericas de fragmentos cristalizables de anticuerpo, utilizando efectos electrostaticos de direccion.
JP5624476B2 (ja) 2008-01-18 2014-11-12 バイオ−ラッド ラボラトリーズ インコーポレーティッド アパタイトクロマトグラフィーによるリン酸化生体分子および非リン酸化生体分子の向上した精製法
WO2009124931A2 (en) 2008-04-07 2009-10-15 Ablynx Nv Amino acid sequences directed against the notch pathways and uses thereof
KR101855381B1 (ko) 2008-04-09 2018-05-09 제넨테크, 인크. 면역 관련 질병의 치료를 위한 신규한 조성물 및 방법
KR20110014607A (ko) 2008-04-29 2011-02-11 아보트 러보러터리즈 이원 가변 도메인 면역글로불린 및 이의 용도
US20100260668A1 (en) 2008-04-29 2010-10-14 Abbott Laboratories Dual Variable Domain Immunoglobulins and Uses Thereof
PL2307459T3 (pl) 2008-07-08 2015-05-29 Oncomed Pharm Inc Czynniki wiążące receptor Notch1 i sposoby ich stosowania
JP2011528798A (ja) 2008-07-23 2011-11-24 エフ．ホフマン−ラ ロシュ アーゲー 抗血管形成療法のモニター
JP5606438B2 (ja) 2008-07-23 2014-10-15 エフ．ホフマン−ラ ロシュ アーゲー 抗血管新生療法を受容可能な被験体の同定
US8192738B2 (en) 2008-09-19 2012-06-05 Medimmune, Llc Targeted antibodies directed to DLL4
WO2010054007A1 (en) 2008-11-07 2010-05-14 Fabrus Llc Combinatorial antibody libraries and uses thereof
TWI471139B (zh) 2008-12-12 2015-02-01 Boehringer Ingelheim Int 抗－ｉｇｆ抗體
JP2012524083A (ja) 2009-04-20 2012-10-11 ジェネンテック， インコーポレイテッド アジュバント癌治療
WO2010124009A2 (en) 2009-04-21 2010-10-28 Schering Corporation Fully human anti-vegf antibodies and methods of using
CA2759233C (en) 2009-04-27 2019-07-16 Oncomed Pharmaceuticals, Inc. Method for making heteromultimeric molecules
TWI513465B (zh) 2009-06-25 2015-12-21 Regeneron Pharma 以ｄｌｌ４拮抗劑與化學治療劑治療癌症之方法
MX2011013455A (es) 2009-07-08 2012-02-13 Amgen Inc Diseño de moleculas de fc de anticuerpo estables y libres de agregacion a traves del diseño de la interfase del dominio de ch3.
KR20120089659A (ko) 2009-08-29 2012-08-13 아보트 러보러터리즈 치료용 ｄｌｌ4 결합 단백질
WO2011028811A2 (en) 2009-09-01 2011-03-10 Abbott Laboratories Dual variable domain immunoglobulins and uses thereof
US20110172398A1 (en) 2009-10-02 2011-07-14 Boehringer Ingelheim International Gmbh Bispecific binding molecules for anti-angiogenesis therapy
US20110195494A1 (en) 2009-10-02 2011-08-11 Boehringer Ingelheim International Gmbh Dll4-binging molecules
PT2488204E (pt) 2009-10-16 2016-06-09 Oncomed Pharm Inc Combinação terapêutica e utilização de anticorpos antagonistas de dll4 e agentes anti-hipertensivos
CN102686609A (zh) 2009-10-23 2012-09-19 加文医学研究所 修饰的可变域分子及其生产和使用方法
EP2493497A4 (en) 2009-11-01 2013-07-24 Brigham & Womens Hospital INHIBITION OF NOTCH FOR THE TREATMENT AND PREVENTION OF OBESITY AND METABOLIC SYNDROME
EP2506875A4 (en) 2009-12-01 2013-11-27 Oncomed Pharm Inc METHOD FOR THE TREATMENT OF TUMORS WITH K-RAS MUTATIONS
JO3183B1 (ar) 2010-01-29 2018-03-08 Regeneron Pharma طرق لمعالجة أمراض المناعة الذاتية مضادات dll4
CN102844442B (zh) 2010-02-12 2016-09-07 昂考梅德药品有限公司 用于鉴定和分离表达多肽的细胞的方法
AU2011221229B2 (en) 2010-02-23 2015-06-18 F. Hoffmann-La Roche Ag Anti-angiogenesis therapy for the treatment of ovarian cancer
MX348312B (es) 2010-03-02 2017-06-06 Abbvie Inc Proteínas terapéuticas de enlace dll4.
UY33702A (es) 2010-11-02 2012-05-31 Abbott Lab Inmunoglobulinas con dominio variable dual y usos de las mismas
US20130323265A1 (en) 2010-11-15 2013-12-05 Oncomed Pharmaceuticals, Inc. Methods for treating cancer with dll4 antagonists
TWI530489B (zh) 2011-03-22 2016-04-21 必治妥美雅史谷比公司 雙（氟烷基）－１，４－苯二氮呯酮化合物
JP2014523421A (ja) 2011-06-17 2014-09-11 ハリス，エイドリアン，エル． 抗ｄｌｌ４抗体を使用して腫瘍治療における放射線に対する反応を増大させる方法
EP2855522A1 (en) 2012-02-03 2015-04-08 MedImmune Limited Process for reducing antibody aggregate levels and antibodies produced thereby
CA2873402C (en) 2012-05-15 2023-10-24 Bristol-Myers Squibb Company Cancer immunotherapy by disrupting pd-1/pd-l1 signaling
CN104603151A (zh) 2012-05-31 2015-05-06 索伦托治疗有限公司 与dll-4结合的抗原结合蛋白
AR092325A1 (es) 2012-05-31 2015-04-15 Regeneron Pharma Formulaciones estabilizadas que contienen anticuerpos anti-dll4 y kit
KR101535341B1 (ko) 2012-07-02 2015-07-13 한화케미칼 주식회사 Dll4에 특이적으로 결합하는 신규한 단일클론항체 및 이의 용도
LT3495387T (lt) 2012-07-13 2021-11-25 Roche Glycart Ag Bispecifiniai anti-vegf / anti-ang-2 antikūnai ir jų panaudojimas akių kraujagyslių ligoms gydyti
AU2013322564A1 (en) 2012-09-28 2015-03-12 Boehringer Ingelheim International Gmbh Pharmaceutical combinations comprising dual Angiopoietin-2 / Dll4 binders and anti-VEGF agents
US20140227252A1 (en) 2012-10-31 2014-08-14 Oncomed Pharmaceuticals , Inc. Methods and Monitoring of Treatment with a DLL4 Antagonist
RU2636043C2 (ru) 2012-11-01 2017-11-17 Эббви Инк. Анти-vegf/dll4-иммуноглобулины с двойными вариабельными доменами и их применения
TW201438736A (zh) * 2012-11-14 2014-10-16 Regeneron Pharma 以ｄｌｌ４拮抗劑治療卵巢癌之方法
KR101569083B1 (ko) 2012-11-21 2015-11-16 주식회사 파멥신 Vegfr-2와 dll4를 표적으로 하는 이중표적항체 및 이를 포함하는 약학적 조성물
US20140154255A1 (en) 2012-11-30 2014-06-05 Abbvie Biotherapeutics Inc. Anti-vegf antibodies and their uses
JP6283411B2 (ja) 2013-07-09 2018-02-21 エービーエルバイオ Ｄｌｌ４とｖｅｇｆに特異的に結合する新規二重標的タンパク質とこれの用途
PT3021869T (pt) 2013-07-16 2020-09-10 Hoffmann La Roche Métodos de tratamento do cancro com antagonistas da ligação ao eixo pd-1 e inibidores do tigit
WO2015130751A1 (en) 2014-02-26 2015-09-03 Medimmune, Llc Methods of treatment with dll4 antagonists
KR20170029490A (ko) 2014-07-11 2017-03-15 제넨테크, 인크. 노치 경로 억제
EP3169363A4 (en) 2014-07-16 2018-02-21 F. Hoffmann-La Roche AG Methods of treating cancer using tigit inhibitors and anti-cancer agents
TWI790593B (zh) 2014-08-19 2023-01-21 美商默沙東有限責任公司 抗tigit抗體
MX2017005258A (es) 2014-10-31 2017-07-26 Oncomed Pharm Inc Terapia combinada para tratamiento de enfermedad.
EP4249066A3 (en) 2014-12-23 2023-11-22 Bristol-Myers Squibb Company Antibodies to tigit
CN109071644B (zh) 2015-09-23 2023-09-19 昂考梅德药品有限公司 治疗癌症的方法和组合物
TWI747841B (zh) 2015-09-25 2021-12-01 美商建南德克公司 抗ｔｉｇｉｔ抗體及使用方法
AU2019380595A1 (en) 2018-11-15 2021-06-03 Oncomed Pharmaceuticals, Inc. Methods and monitoring of treatment with VEGF/DLL4 binding agent

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN104168914A (zh) * 2011-09-23 2014-11-26 昂考梅德药品有限公司 Vegf/dll4结合剂及其应用
WO2013135602A2 (en) * 2012-03-13 2013-09-19 F. Hoffmann-La Roche Ag Combination therapy for the treatment of ovarian cancer

Non-Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
NCT01952249;Mereo BioPharma;《ClinicalTrials.gov》;20130927;Title，Study Description，Outcome Measures，Eligibility Criteria *
Targeting Notch, a key pathway for ovarian cancer stem cells, sensitizes tumors to platinum therapy;Shannon M. McAuliffe等;《PNAS》;20120927;摘要 *
双特异性抗体治疗卵巢癌的研究进展;陈士伟等;《中国实用妇科与产科杂志》;20061231;全文 *

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