JP2021534196A - 抗ｔｉｇｉｔ抗体 - Google Patents

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Abstract

ヒトＴＩＧＩＴ（ＩｇドメインおよびＩＴＩＭドメインを有するＴ細胞免疫受容体）に結合する単離された抗体が、提供される。一部の実施形態では、抗体は、ヒトＴＩＧＩＴに対して、５ｎＭ未満の結合親和性（ＫＤ）を有する。一部の実施形態では、抗ＴＩＧＩＴ抗体は、ＴＩＧＩＴへのＣＤ１５５および／またはＣＤ１１２の結合を遮断する。一部の実施形態では、抗体は、アフコシル化されている。ヒトＴＩＧＩＴに結合する単離された抗体を含む組成物もまた提供される。

Description

関連出願の相互参照
本出願は、２０１８年８月２３日に出願された米国仮出願第６２／７２２，０６３号、２０１８年９月２０日に出願された米国仮出願第６２／７３４，１３０号、２０１９年３月２２日に出願された米国仮出願第６２／８２２，６７４号の優先権の利益を主張し、これらのそれぞれは、あらゆる目的で、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
分野
ヒトＴＩＧＩＴ（ＩｇドメインおよびＩＴＩＭドメインを有するＴ細胞免疫受容体）に結合する抗体、ならびにその使用が、本明細書において提供される。
背景
ＴＩＧＩＴ（「ＩｇおよびＩＴＩＭドメインを有するＴ細胞免疫受容体」）は、Ｔ細胞のサブセット、たとえば、活性化Ｔ細胞、メモリーＴ細胞、制御性Ｔ細胞、およびナチュラルキラー（ＮＫ）細胞に発現される免疫受容体である。ＴＩＧＩＴは、Ｉｇスーパーファミリータンパク質内のＣＤ２８ファミリーのメンバーであり、Ｔ細胞の増殖および活性化ならびにＮＫ細胞の機能を制限する共阻害性分子としての機能を果たす。ＴＩＧＩＴは、ＣＤ２２６（ＤＮＡＸアクセサリー分子−１または「ＤＮＡＭ−１」としても知られている）と、同じリガンドのセット：ＣＤ１５５（ポリオウイルス受容体または「ＰＶＲ」としても知られている）およびＣＤ１１２（ポリオウイルス受容体関連２または「ＰＶＲＬ２」としても知られている）に関して競合することによって、その免疫抑制作用を媒介する。Levin et al., Eur. J. Immunol., 2011, 41:902-915を参照されたい。ＴＩＧＩＴに対するＣＤ１５５の親和性は、ＣＤ２２６に対するその親和性よりも高いため、ＴＩＧＩＴの存在下では、ＣＤ２２６シグナル伝達が阻害され、それによって、Ｔ細胞の増殖および活性化が制限される。
黒色腫を有する患者において、ＴＩＧＩＴの発現は、腫瘍抗原（ＴＡ）特異的ＣＤ８＋ Ｔ細胞およびＣＤ８＋腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）で上方調節されている。ＴＩＧＩＴリガンド（ＣＤ１５５）を発現する細胞の存在下におけるＴＩＧＩＴの遮断により、ＴＡ特異的ＣＤ８＋ Ｔ細胞およびＣＤ８＋ ＴＩＬの両方の増殖、サイトカイン産生、および脱顆粒化が増加した。Chauvin et al., J Clin Invest., 2015, 125:2046-2058を参照されたい。したがって、ＴＩＧＩＴは、患者において抗腫瘍Ｔ細胞応答を刺激するための有望な治療標的を表すが、ＴＩＧＩＴを遮断し、抗腫瘍応答を促進させる改善された方法に対する必要性が存在する。
Levin et al., Eur. J. Immunol., 2011, 41:902-915 Chauvin et al., J Clin Invest., 2015, 125:2046-2058
簡単な概要
実施形態１． ヒトＴＩＧＩＴ（ＩｇドメインおよびＩＴＩＭドメインを有するＴ細胞免疫受容体）に結合する単離された抗体を含む組成物であって、前記抗体が、ヒトＴＩＧＩＴに対して、５ｎＭ未満の結合親和性（ＫＤ）を有し、前記組成物中の前記抗体のうちの少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％が、アフコシル化されている、組成物。
実施形態２． 前記抗体が、ヒトＴＩＧＩＴに対して、１ｎＭ未満のＫＤを有する、実施形態１に記載の組成物。
実施形態３． 前記抗体が、ヒトＴＩＧＩＴに対して、１００ｐＭ未満のＫＤを有する、実施形態１に記載の組成物。
実施形態４． 前記抗体が、カニクイザルＴＩＧＩＴおよび／またはマウスＴＩＧＩＴとの交差反応性を示す、実施形態１から３のいずれか一項に記載の組成物。
実施形態５． 前記抗体が、カニクイザルＴＩＧＩＴおよびマウスＴＩＧＩＴの両方との交差反応性を示す、実施形態４に記載の組成物。
実施形態６． 前記抗体が、ＴＩＧＩＴへのＣＤ１５５の結合を遮断する、実施形態１から５のいずれか一項に記載の組成物。
実施形態７． 前記抗体が、ＴＩＧＩＴへのＣＤ１１２の結合を遮断する、実施形態１から５のいずれか一項に記載の組成物。
実施形態８． 前記抗体が、ＴＩＧＩＴへのＣＤ１５５およびＣＤ１１２の両方の結合を遮断する、実施形態１から５のいずれか一項に記載の組成物。
実施形態９． 前記抗体が、ヒトＴＩＧＩＴへの結合に関して、配列番号５５のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域および配列番号６４のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む抗体と競合する、実施形態１から８のいずれか一項に記載の組成物。
実施形態１０． 前記抗体が、ヒトＴＩＧＩＴに結合するときに、アミノ酸８１位および８２位のうちの一方または両方に結合する、実施形態１から９のいずれか一項に記載の組成物。
実施形態１１． 前記抗体が、アミノ酸８１位および８２位の両方に結合する、実施形態１０に記載の組成物。
実施形態１２． アミノ酸８１位および８２位が、Ｐｈｅ８１およびＬｙｓ８２である、実施形態１０または１１に記載の組成物。
実施形態１３． 前記抗体が、アミノ酸８１位および８２位のうちの一方または両方を含むヒトＴＩＧＩＴ上のエピトープに結合する、実施形態１から１２のいずれか一項に記載の組成物。
実施形態１４． ヒトＴＩＧＩＴに結合する単離された抗体を含む組成物であって、前記抗体が、ヒトＴＩＧＩＴに結合するときに、アミノ酸８１位および８２位のうちの一方または両方に結合し、前記組成物中の前記抗体のうちの少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％が、アフコシル化されている、組成物。
実施形態１５． 前記抗体が、アミノ酸８１位および８２位の両方に結合する、実施形態１４に記載の組成物。
実施形態１６． アミノ酸８１位および８２位が、Ｐｈｅ８１およびＬｙｓ８２である、実施形態１４または実施形態１５に記載の組成物。
実施形態１７． ヒトＴＩＧＩＴに結合する単離された抗体を含む組成物であって、前記抗体が、アミノ酸８１位および８２位のうちの一方または両方を含むヒトＴＩＧＩＴ上のエピトープに結合し、前記組成物中の前記抗体のうちの少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％が、アフコシル化されている、組成物。
実施形態１８． 前記エピトープが、８１位におけるＰｈｅを含む、実施形態１３または実施形態１７に記載の組成物。
実施形態１９． 前記エピトープが、８２位におけるＬｙｓまたはＳｅｒを含む、実施形態１３、１７、および１８のいずれか一項に記載の組成物。
実施形態２０． 前記エピトープが、８１位におけるＰｈｅおよび８２位におけるＬｙｓまたはＳｅｒを含む、実施形態１３および１７から１９のいずれか一項に記載の組成物。
実施形態２１． 前記エピトープが、Ｐｈｅ８１およびＬｙｓ８２を含む、実施形態２０に記載の組成物。
実施形態２２． 前記エピトープが、非連続的エピトープである、実施形態１３および１７から２１のいずれか一項に記載の組成物。
実施形態２３． 前記抗体が、アミノ酸５１位、５２位、５３位、５４位、５５位、７３位、７４位、７５位、７６位、７７位、７９位、８３位、８４位、８５位、８６位、８７位、８８位、８９位、９０位、９１位、９２位、または９３位のうちの１つまたは複数をさらに含むヒトＴＩＧＩＴ上のエピトープに結合する、実施形態１３および１７から２２のいずれか一項に記載の組成物。
実施形態２４． 前記エピトープが、Ｔｈｒ５１、Ａｌａ５２、Ｇｌｎ５３、Ｖａｌ５４、Ｔｈｒ５５、Ｌｅｕ７３、Ｇｌｙ７４、Ｔｒｐ７５、Ｈｉｓ７６、Ｉｌｅ７７、Ｐｒｏ７９、Ａｓｐ８３、Ａｒｇ８４、Ｖａｌ８５、Ａｌａ８６、Ｐｒｏ８７、Ｇｌｙ８８、Ｐｒｏ８９、Ｇｌｙ９０、Ｌｅｕ９１、Ｇｌｙ９２、およびＬｅｕ９３からなる群から選択される１つまたは複数のアミノ酸残基をさらに含む、実施形態２３に記載の組成物。
実施形態２５． 前記エピトープが、アミノ酸残基Ｔｈｒ５１、Ａｌａ５２、Ｇｌｎ５３、Ｖａｌ５４、Ｔｈｒ５５、Ｇｌｙ７４、Ｔｒｐ７５、Ｈｉｓ７６、Ｉｌｅ７７、Ｐｈｅ８１、Ｌｙｓ８２、Ｐｒｏ８７、Ｇｌｙ８８、Ｐｒｏ８９、Ｇｌｙ９０、Ｌｅｕ９１、Ｇｌｙ９２、およびＬｅｕ９３を含む、実施形態２４に記載の組成物。
実施形態２６． 前記エピトープが、アミノ酸残基Ａｌａ５２、Ｇｌｎ５３、Ｌｅｕ７３、Ｇｌｙ７４、Ｔｒｐ７５、Ｐｒｏ７９、Ｐｈｅ８１、Ｌｙｓ８２、Ａｓｐ８３、Ａｒｇ８４、Ｖａｌ８５、およびＡｌａ８６を含む、実施形態２４に記載の組成物。
実施形態２７． 前記エピトープが、配列ＩＣＮＡＤＬＧＷＨＩＳＰＳＦＫ（配列番号２５８）を含む、実施形態１３および１７から２６のいずれか一項に記載の組成物。
実施形態２８． ヒトＴＩＧＩＴが、配列番号２１８の配列を含む、実施形態１から２７のいずれか一項に記載の組成物。
実施形態２９． 前記抗体のそれぞれが、
（ａ）配列番号４、配列番号２２、配列番号４０、配列番号５８、配列番号７６、配列番号９４、配列番号１１２、配列番号１３０、配列番号１４８、配列番号１６６、配列番号１８４、配列番号２０２、配列番号２２１、配列番号２２４、配列番号２２６、配列番号２３１、配列番号２３３、配列番号２３９、配列番号２４３、配列番号２８３、配列番号２８４、配列番号２９３、配列番号２９４、配列番号２８９、および配列番号２９０から選択される配列を含む重鎖ＣＤＲ１、
（ｂ）配列番号６、配列番号２４、配列番号４２、配列番号６０、配列番号７８、配列番号９６、配列番号１１４、配列番号１３２、配列番号１５０、配列番号１６８、配列番号１８６、配列番号２０４、配列番号２２２、配列番号２２５、配列番号２２７、配列番号２２９、配列番号２３２、配列番号２３４、配列番号２３８、配列番号２４０、配列番号２８５、配列番号２９７、配列番号２９１、および配列番号２９５から選択される配列を含む重鎖ＣＤＲ２、
（ｃ）配列番号８、配列番号２６、配列番号４４、配列番号６２、配列番号８０、配列番号９８、配列番号１１６、配列番号１３４、配列番号１５２、配列番号１７０、配列番号１８８、配列番号２０６、配列番号２２３、配列番号２２８、配列番号２３０、配列番号２３５、配列番号２３６、配列番号２３７、配列番号２４１、配列番号２４２、配列番号２４４、配列番号２８６、配列番号２９２、および配列番号２９６から選択される配列を含む重鎖ＣＤＲ３、
（ｄ）配列番号１３、配列番号３１、配列番号４９、配列番号６７、配列番号８５、配列番号１０３、配列番号１２１、配列番号１３９、配列番号１５７、配列番号１７５、配列番号１９３、配列番号２１１、および配列番号２８７から選択される配列を含む軽鎖ＣＤＲ１、
（ｅ）配列番号１５、配列番号３３、配列番号５１、配列番号６９、配列番号８７、配列番号１０５、配列番号１２３、配列番号１４１、配列番号１５９、配列番号１７７、配列番号１９５、配列番号２１３、および配列番号２８８から選択される配列を含む軽鎖ＣＤＲ２、または
（ｆ）配列番号１７、配列番号３５、配列番号５３、配列番号７１、配列番号８９、配列番号１０７、配列番号１２５、配列番号１４３、配列番号１６１、配列番号１７９、配列番号１９７、および配列番号２１５から選択される配列を含む軽鎖ＣＤＲ３
のうちの１つまたは複数を含む、実施形態１から２８のいずれか一項に記載の組成物。
実施形態３０． 前記抗体のそれぞれが、
（ａ）配列番号５８、配列番号２８３、配列番号２８４、配列番号２２４、配列番号２９３、配列番号２９４、配列番号２２６、配列番号２８９、および配列番号２９０から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１配列、
（ｂ）配列番号６０、配列番号２８５、配列番号２２５、配列番号２９７、配列番号２２７、配列番号２９１、配列番号２２９、および配列番号２９５から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２配列、
（ｃ）配列番号６２、配列番号２８６、配列番号２２８、配列番号２９２、配列番号２３０、および配列番号２９６から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３配列、
（ｄ）配列番号６７および配列番号２８７から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１配列、
（ｅ）配列番号６９および配列番号２８８から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２配列、ならびに／または
（ｆ）配列番号７１のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３配列
を含む、実施形態２９に記載の組成物。
実施形態３１． 前記抗体のそれぞれが、
（ａ）それぞれ、配列番号４、６、８、１３、１５、および１７、または
（ｂ）それぞれ、配列番号２２、２４、２６、３１、３３、および３５、または
（ｃ）それぞれ、配列番号４０、４２、４４、４９、５１、および５３、または
（ｄ）それぞれ、配列番号５８、６０、６２、６７、６９、および７１、または
（ｅ）それぞれ、配列番号２８３、２８５、６２、２８７、２８８、および７１、または
（ｆ）それぞれ、配列番号２８４、６０、２８６、６７、６９、および７１、または
（ｇ）それぞれ、配列番号７６、７８、８０、８５、８７、および８９、または
（ｈ）それぞれ、配列番号９４、９６、９８、１０３、１０５、および１０７、または
（ｉ）それぞれ、配列番号１１２、１１４、１１６、１２１、１２３、および１２５、または
（ｊ）それぞれ、配列番号１３０、１３２、１３４、１３９、１４１、および１４３、または
（ｋ）それぞれ、配列番号１４８、１５０、１５２、１５７、１５９、および１６１、または
（ｌ）それぞれ、配列番号１６６、１６８、１７０、１７５、１７７、および１７９、または
（ｍ）それぞれ、配列番号１８４、１８６、１８８、１９３、１９５、および１９７、または
（ｎ）それぞれ、配列番号２０２、２０４、２０６、２１１、２１３、および２１５、または
（ｏ）それぞれ、配列番号２２１、２２２、２２３、１３、１５、および１７、または
（ｐ）それぞれ、配列番号２２４、２２５、６２、６７、６９、および７１、または
（ｑ）それぞれ、配列番号２９３、２９７、６２、２８７、２８８、および７１、または
（ｒ）それぞれ、配列番号２９４、２２５、２８６、６７、６９、および７１、または
（ｓ）それぞれ、配列番号２２６、２２７、２２８、６７、６９、および７１、または
（ｔ）それぞれ、配列番号２８９、２９１、２２８、２８７、２８８、および７１、または
（ｕ）それぞれ、配列番号２９０、２２７、２９２、６７、６９、および７１、または
（ｖ）それぞれ、配列番号２２４、２２９、２３０、６７、６９、および７１、または
（ｗ）それぞれ、配列番号２９３、２９５、２３０、２８７、２８８、および７１、または
（ｘ）それぞれ、配列番号２９４、２２９、２９６、６７、６９、および７１、または
（ｙ）それぞれ、配列番号２２４、２２７、２３０、６７、６９、および７１、または
（ｚ）それぞれ、配列番号２９３、２９０、２３０、２８７、２８８、および７１、または
（ａａ）それぞれ、配列番号２９４、２９０、２３０、６７、６９、および７１、または
（ｂｂ）それぞれ、配列番号２３１、２３２、２３５、１０３、１０５、および１０７、または
（ｃｃ）それぞれ、配列番号２３３、２３４、２３６、１０３、１０５、および１０７、または
（ｄｄ）それぞれ、配列番号２３３、２３４、２３７、１０３、１０５、および１０７、または
（ｅｅ）それぞれ、配列番号１６６、２３８、１７０、１７５、１７７、および１７９、または
（ｆｆ）それぞれ、配列番号２３９、２４０、１７０、１７５、１７７、および１７９、または
（ｇｇ）それぞれ、配列番号２３９、２４０、２４１、１７５、１７７、および１７９、または
（ｈｈ）それぞれ、配列番号２３９、２４０、２４２、１７５、１７７、および１７９、または
（ｉｉ）それぞれ、配列番号２４３、１６８、２４４、１７５、１７７、および１７９
の配列を含む重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３、ならびに軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ、およびＣＤＲ３を含む、実施形態２９または実施形態３０に記載の組成物。
実施形態３２． 前記抗体のそれぞれが、
（ａ）それぞれ、配列番号５８、６０、６２、６７、６９、および７１、または
（ｂ）それぞれ、配列番号２８３、２８５、６２、２８７、２８８、および７１、または
（ｃ）それぞれ、配列番号２８４、６０、２８６、６７、６９、および７１
の配列を含む重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３、ならびに軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ、およびＣＤＲ３を含む、実施形態１から３１のいずれか一項に記載の組成物。
実施形態３３． 前記抗体のそれぞれが、
（ａ）配列番号１、配列番号１９、配列番号３７、配列番号５５、配列番号７３、配列番号９１、配列番号１０９、配列番号１２７、配列番号１４５、配列番号１６３、配列番号１８１、配列番号１９９、配列番号２４５、配列番号２４６、配列番号２４７、配列番号２４８、配列番号２４９、配列番号２５０、配列番号２５１、配列番号２５２、配列番号２５３、配列番号２５４、配列番号２５５、配列番号２５６、または配列番号２５７に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、ならびに／または
（ｂ）配列番号１０、配列番号２８、配列番号４６、配列番号６４、配列番号８２、配列番号１００、配列番号１１８、配列番号１３６、配列番号１５４、配列番号１７２、配列番号１９０、または配列番号２０８に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域
を含む、実施形態１から３２のいずれか一項に記載の組成物。
実施形態３４． 前記抗体のそれぞれが、
（ａ）配列番号１もしくは配列番号２４５に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号１０に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、または
（ｂ）配列番号１９に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号２８に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、または
（ｃ）配列番号３７に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号４６に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、または
（ｄ）配列番号５５、配列番号２４６、配列番号２４７、配列番号２４８、もしくは配列番号２４９のうちのいずれか１つに対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号６４に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、または
（ｅ）配列番号７３に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号８２に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、または
（ｆ）配列番号９１、配列番号２５０、配列番号２５１、もしくは配列番号２５２のうちのいずれか１つに対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号１００に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、または
（ｇ）配列番号１０９に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号１１８に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、または
（ｈ）配列番号１２７に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号１３６に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、または
（ｉ）配列番号１４５に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号１５４に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、または
（ｊ）配列番号１６３、配列番号２５３、配列番号２５４、配列番号２５５、配列番号２５６、もしくは配列番号２５７のうちのいずれか１つに対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号１７２に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、または
（ｋ）配列番号１８１に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号１９０に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、または
（ｌ）配列番号１９９に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号２０８に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域
を含む、実施形態１から３３のいずれか一項に記載の組成物。
実施形態３５． 前記抗体のそれぞれが、
（ａ）配列番号１もしくは配列番号２４５のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号１０のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、または
（ｂ）配列番号１９のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号２８のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、または
（ｃ）配列番号３７のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号４６のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、または
（ｄ）配列番号５５、配列番号２４６、配列番号２４７、配列番号２４８、もしくは配列番号２４９のうちのいずれか１つのアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号６４のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、または
（ｅ）配列番号７３のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号８２のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、または
（ｆ）配列番号９１、配列番号２５０、配列番号２５１、もしくは配列番号２５２のうちのいずれか１つのアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号１００のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、または
（ｇ）配列番号１０９のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号１１８のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、または
（ｈ）配列番号１２７のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号１３６のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、または
（ｉ）配列番号１４５のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号１５４のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、または
（ｊ）配列番号１６３、配列番号２５３、配列番号２５４、配列番号２５５、配列番号２５６、もしくは配列番号２５７のうちのいずれか１つのアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号１７２のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、または
（ｋ）配列番号１８１のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号１９０のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、または
（ｌ）配列番号１９９のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号２０８のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域
を含む、実施形態３４に記載の組成物。
実施形態３６． 前記抗体のそれぞれが、配列番号５５のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号６４のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む、実施形態１から３５のいずれか一項に記載の組成物。
実施形態３７． 前記抗体が、ＩｇＧ抗体である、実施形態１から３６のいずれか１項に記載の組成物。
実施形態３８． 前記抗体が、ＩｇＧ１抗体またはＩｇＧ３抗体である、実施形態３７に記載の組成物。
実施形態３９． 前記抗体のそれぞれが、配列番号２６０、２６２、２６４、２６６、２６８、２７０、および２７２から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖、ならびに配列番号２７４のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む、実施形態１から３８のいずれか一項に記載の組成物。
実施形態４０． 前記抗体のそれぞれが、配列番号２６０のアミノ酸配列を含む重鎖、および配列番号２７４のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む、実施形態３９に記載の組成物。
実施形態４１． 前記抗体のそれぞれが、配列番号２６０のアミノ酸配列からなる重鎖、および配列番号２７４のアミノ酸配列からなる軽鎖を含む、実施形態３９に記載の組成物。
実施形態４２． ヒトＴＩＧＩＴに結合する単離された抗体を含む組成物であって、前記組成物中の前記抗体のうちの少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％が、アフコシル化されており、前記抗体のそれぞれが、配列番号２６０のアミノ酸配列を含む重鎖および配列番号２７４のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む、組成物。
実施形態４３． ヒトＴＩＧＩＴに結合する単離された抗体を含む組成物であって、前記組成物中の前記抗体のうちの少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％が、アフコシル化されており、前記抗体のそれぞれが、配列番号２６０のアミノ酸配列からなる重鎖および配列番号２７４のアミノ酸配列からなる軽鎖を含む、組成物。
実施形態４４． 前記抗体が、抗ＰＤ−１抗体または抗ＰＤ−Ｌ１抗体との相乗作用を示す、実施形態１から４３のいずれか一項に記載の組成物。
実施形態４５． 相乗作用が、（ｉ）ＰＤ−１、ＴＩＧＩＴ、およびＣＤ２２６を発現するＪｕｒｋａｔエフェクター細胞であって、ＩＬ−２プロモーターによって駆動されるルシフェラーゼレポーター遺伝子を含むＪｕｒｋａｔエフェクター細胞、ならびに（ｉｉ）ＴＣＲ活性化因子、ＰＤ−Ｌ１、およびＣＤ１５５を発現するＣＨＯ−Ｋ１人工抗原提示細胞（ａＡＰＣ）を含む共培養物を、前記組成物および抗ＰＤ−１抗体または抗ＰＤ−Ｌ１抗体と接触させることを含むアッセイを使用して、決定される、実施形態４４に記載の組成物。
実施形態４６． 制御性Ｔ（Ｔｒｅｇ）細胞が、前記組成物と接触させたヒトＰＢＭＣから枯渇される、実施形態１から４５のいずれか一項に記載の組成物。
実施形態４７． ＭＣＰ１、ＩＬ−８、およびＭＩＰ１αの発現が、前記組成物と接触させたヒトＰＢＭＣにおいて増加する、実施形態１から４６のいずれか一項に記載の組成物。
実施形態４８． 単球／マクロファージが、前記組成物と接触させると活性化される、実施形態１から４７のいずれか一項に記載の組成物。
実施形態４９． ＣＤ８６およびＭＨＣＩＩが、ＣＤ１４＋単球／マクロファージを前記組成物と接触させると、上方調節される、実施形態１から４８のいずれか一項に記載の組成物。
実施形態５０． 前記組成物と接触させたＣＤ１４＋単球／マクロファージが、抗原提示細胞へと成熟する、実施形態１から４９のいずれか一項に記載の組成物。
実施形態５１． 前記組成物と接触させたメモリーＴ細胞が、抗原に応答したＩＦＮγ産生の増加を示す、実施形態１から５０のいずれか一項に記載の組成物。
実施形態５２． 前記組成物と接触させたメモリーＴ細胞が、抗原に対する応答の増強を示す、実施形態１から５１のいずれか一項に記載の組成物。
実施形態５３． エフェクターメモリーＣＤ８＋ Ｔ細胞および／またはエフェクターメモリーＣＤ４＋ Ｔ細胞が、前記組成物と接触させた腫瘍において増加する、実施形態１から５２のいずれか一項に記載の組成物。
実施形態５４． 前記組成物が、前記組成物を投与した動物においてＴｈ１応答を増強させる、実施形態１から５３のいずれか一項に記載の組成物。
実施形態５５． 前記組成物中の前記抗体が、ＦｃγＲＩＩａおよび／またはＦｃγＲＩＩｂに対して、アフコシル化されていない同じ抗ＴＩＧＩＴ抗体と比較して低い結合親和性を有する、実施形態１から５４のいずれか一項に記載の組成物。
実施形態５６． 前記組成物が、単球マクロファージの存在下において、ＴＩＧＩＴを発現する細胞の抗体依存性細胞ファゴサイトーシス（ＡＤＣＰ）を媒介する、実施形態１から５５のいずれか一項に記載の組成物。
実施形態５７． 前記抗体が、モノクローナルである、実施形態１から５６のいずれか一項に記載の組成物。
実施形態５８． 前記抗体が、完全ヒト抗体である、実施形態１から５７のいずれか一項に記載の組成物。
実施形態５９． 前記抗体が、キメラ抗体である、実施形態１から５８のいずれか一項に記載の組成物。
実施形態６０． 前記抗体が、ヒト化抗体である、実施形態１から２８および４４から５９のいずれか一項に記載の組成物。
実施形態６１． 前記抗体が、抗体断片である、実施形態１から６０のいずれか一項に記載の組成物。
実施形態６２． 前記抗体断片が、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、ｓｃＦｖ、またはダイアボディである、実施形態６１に記載の組成物。
実施形態６３． 前記抗体が、二重特異性抗体である、実施形態１から６２のいずれか一項に記載の組成物。
実施形態６４． 前記抗体が、抗体−薬物コンジュゲートである、実施形態１から６３のいずれか一項に記載の組成物。
実施形態６５． ヒトＴＩＧＩＴ（ＩｇドメインおよびＩＴＩＭドメインを有するＴ細胞免疫受容体）に結合する抗体であって、ヒトＴＩＧＩＴに対して、５ｎＭ未満の結合親和性（ＫＤ）を有し、アフコシル化されている、抗体。
実施形態６６． ヒトＴＩＧＩＴに対して、１ｎＭ未満のＫＤを有する、実施形態６５に記載の抗体。
実施形態６７． ヒトＴＩＧＩＴに対して、１００ｐＭ未満のＫＤを有する、実施形態６６に記載の抗体。
実施形態６８． カニクイザルＴＩＧＩＴおよび／またはマウスＴＩＧＩＴとの交差反応性を示す、実施形態６５から６７のいずれか一項に記載の抗体。
実施形態６９． カニクイザルＴＩＧＩＴおよびマウスＴＩＧＩＴの両方との交差反応性を示す、実施形態６８に記載の抗体。
実施形態７０． ＴＩＧＩＴへのＣＤ１５５の結合を遮断する、実施形態６５から６９のいずれか一項に記載の抗体。
実施形態７１． ＴＩＧＩＴへのＣＤ１１２の結合を遮断する、実施形態６５から７０のいずれか一項に記載の抗体。
実施形態７２． ＴＩＧＩＴへのＣＤ１５５およびＣＤ１１２の両方の結合を遮断する、実施形態６５から７１のいずれか一項に記載の抗体。
実施形態７３． ヒトＴＩＧＩＴへの結合に関して、配列番号５５のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域および配列番号６４のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む抗体と競合する、実施形態６５から７２のいずれか一項に記載の抗体。
実施形態７４． ヒトＴＩＧＩＴに結合するときに、アミノ酸８１位および８２位のうちの一方または両方に結合する、実施形態６５から７３のいずれか一項に記載の抗体。
実施形態７５． アミノ酸８１位および８２位の両方に結合する、実施形態７４に記載の抗体。
実施形態７６． アミノ酸８１位および８２位が、Ｐｈｅ８１およびＬｙｓ８２である、実施形態７４または７５に記載の抗体。
実施形態７７． アミノ酸８１位および８２位のうちの一方または両方を含むヒトＴＩＧＩＴ上のエピトープに結合する、実施形態６５から７６のいずれか一項に記載の抗体。
実施形態７８． ヒトＴＩＧＩＴに結合する抗体であって、ヒトＴＩＧＩＴに結合するときに、アミノ酸８１位および８２位のうちの一方または両方に結合する、アフコシル化されている、抗体。
実施形態７９． アミノ酸８１位および８２位の両方に結合する、実施形態７８に記載の抗体。
実施形態８０． アミノ酸８１位および８２位が、Ｐｈｅ８１およびＬｙｓ８２である、実施形態７８または実施形態７９に記載の抗体。
実施形態８１． ヒトＴＩＧＩＴに結合する抗体であって、アミノ酸８１位および８２位のうちの一方または両方を含むヒトＴＩＧＩＴ上のエピトープに結合し、アフコシル化されている、抗体。
実施形態８２． 前記エピトープが、８１位におけるＰｈｅを含む、実施形態７７または実施形態８１に記載の抗体。
実施形態８３． 前記エピトープが、８２位におけるＬｙｓまたはＳｅｒを含む、実施形態７７、８１、および８２のいずれか一項に記載の抗体。
実施形態８４． 前記エピトープが、８１位におけるＰｈｅおよび８２位におけるＬｙｓまたはＳｅｒを含む、実施形態７７および８１から８３のいずれか一項に記載の抗体。
実施形態８５． 前記エピトープが、Ｐｈｅ８１およびＬｙｓ８２を含む、実施形態８４に記載の抗体。
実施形態８６． 前記エピトープが、非連続的エピトープである、実施形態７７および８１から８５のいずれか一項に記載の抗体。
実施形態８７． アミノ酸５１位、５２位、５３位、５４位、５５位、７３位、７４位、７５位、７６位、７７位、７９位、８３位、８４位、８５位、８６位、８７位、８８位、８９位、９０位、９１位、９２位、または９３位のうちの１つまたは複数をさらに含むヒトＴＩＧＩＴ上のエピトープに結合する、実施形態７７および８１から８６のいずれか一項に記載の抗体。
実施形態８８． 前記エピトープが、Ｔｈｒ５１、Ａｌａ５２、Ｇｌｎ５３、Ｖａｌ５４、Ｔｈｒ５５、Ｌｅｕ７３、Ｇｌｙ７４、Ｔｒｐ７５、Ｈｉｓ７６、Ｉｌｅ７７、Ｐｒｏ７９、Ａｓｐ８３、Ａｒｇ８４、Ｖａｌ８５、Ａｌａ８６、Ｐｒｏ８７、Ｇｌｙ８８、Ｐｒｏ８９、Ｇｌｙ９０、Ｌｅｕ９１、Ｇｌｙ９２、およびＬｅｕ９３からなる群から選択される１つまたは複数のアミノ酸残基をさらに含む、実施形態８７に記載の抗体。
実施形態８９． 前記エピトープが、アミノ酸残基Ｔｈｒ５１、Ａｌａ５２、Ｇｌｎ５３、Ｖａｌ５４、Ｔｈｒ５５、Ｇｌｙ７４、Ｔｒｐ７５、Ｈｉｓ７６、Ｉｌｅ７７、Ｐｈｅ８１、Ｌｙｓ８２、Ｐｒｏ８７、Ｇｌｙ８８、Ｐｒｏ８９、Ｇｌｙ９０、Ｌｅｕ９１、Ｇｌｙ９２、およびＬｅｕ９３を含む、実施形態８８に記載の抗体。
実施形態９０． 前記エピトープが、アミノ酸残基Ａｌａ５２、Ｇｌｎ５３、Ｌｅｕ７３、Ｇｌｙ７４、Ｔｒｐ７５、Ｐｒｏ７９、Ｐｈｅ８１、Ｌｙｓ８２、Ａｓｐ８３、Ａｒｇ８４、Ｖａｌ８５、およびＡｌａ８６を含む、実施形態８８に記載の抗体。
実施形態９１． 前記エピトープが、配列ＩＣＮＡＤＬＧＷＨＩＳＰＳＦＫ（配列番号２５８）を含む、実施形態７７および８１から９０のいずれか一項に記載の抗体。
実施形態９２． ヒトＴＩＧＩＴが、配列番号２１８の配列を含む、実施形態６５から９１のいずれか一項に記載の抗体。
実施形態９３． （ａ）配列番号４、配列番号２２、配列番号４０、配列番号５８、配列番号７６、配列番号９４、配列番号１１２、配列番号１３０、配列番号１４８、配列番号１６６、配列番号１８４、配列番号２０２、配列番号２２１、配列番号２２４、配列番号２２６、配列番号２３１、配列番号２３３、配列番号２３９、配列番号２４３、配列番号２８３、配列番号２８４、配列番号２９３、配列番号２９４、配列番号２８９、および配列番号２９０から選択される配列を含む重鎖ＣＤＲ１、
（ｂ）配列番号６、配列番号２４、配列番号４２、配列番号６０、配列番号７８、配列番号９６、配列番号１１４、配列番号１３２、配列番号１５０、配列番号１６８、配列番号１８６、配列番号２０４、配列番号２２２、配列番号２２５、配列番号２２７、配列番号２２９、配列番号２３２、配列番号２３４、配列番号２３８、配列番号２４０、配列番号２８５、配列番号２９７、配列番号２９１、および配列番号２９５から選択される配列を含む重鎖ＣＤＲ２、
（ｃ）配列番号８、配列番号２６、配列番号４４、配列番号６２、配列番号８０、配列番号９８、配列番号１１６、配列番号１３４、配列番号１５２、配列番号１７０、配列番号１８８、配列番号２０６、配列番号２２３、配列番号２２８、配列番号２３０、配列番号２３５、配列番号２３６、配列番号２３７、配列番号２４１、配列番号２４２、配列番号２４４、配列番号２８６、配列番号２９２、および配列番号２９６から選択される配列を含む重鎖ＣＤＲ３、
（ｄ）配列番号１３、配列番号３１、配列番号４９、配列番号６７、配列番号８５、配列番号１０３、配列番号１２１、配列番号１３９、配列番号１５７、配列番号１７５、配列番号１９３、配列番号２１１、および配列番号２８７から選択される配列を含む軽鎖ＣＤＲ１、
（ｅ）配列番号１５、配列番号３３、配列番号５１、配列番号６９、配列番号８７、配列番号１０５、配列番号１２３、配列番号１４１、配列番号１５９、配列番号１７７、配列番号１９５、配列番号２１３、および配列番号２８８から選択される配列を含む軽鎖ＣＤＲ２、または
（ｆ）配列番号１７、配列番号３５、配列番号５３、配列番号７１、配列番号８９、配列番号１０７、配列番号１２５、配列番号１４３、配列番号１６１、配列番号１７９、配列番号１９７、および配列番号２１５から選択される配列を含む軽鎖ＣＤＲ３
のうちの１つまたは複数を含む、実施形態６５から９２のいずれか一項に記載の抗体。
実施形態９４． （ｄ）配列番号５８、配列番号２８３、配列番号２８４、配列番号２２４、配列番号２９３、配列番号２９４、配列番号２２６、配列番号２８９、および配列番号２９０から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１配列、
（ｅ）配列番号６０、配列番号２８５、配列番号２２５、配列番号２９７、配列番号２２７、配列番号２９１、配列番号２２９、および配列番号２９５から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２配列、
（ｆ）配列番号６２、配列番号２８６、配列番号２２８、配列番号２９２、配列番号２３０、および配列番号２９６から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３配列、
（ｇ）配列番号６７および配列番号２８７から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１配列、
（ｈ）配列番号６９および配列番号２８８から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２配列、ならびに／または
（ｉ）配列番号７１のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３配列
を含む、実施形態９３に記載の抗体。
実施形態９５． （ａ）それぞれ、配列番号４、６、８、１３、１５、および１７、または
（ｂ）それぞれ、配列番号２２、２４、２６、３１、３３、および３５、または
（ｃ）それぞれ、配列番号４０、４２、４４、４９、５１、および５３、または
（ｄ）それぞれ、配列番号５８、６０、６２、６７、６９、および７１、または
（ｅ）それぞれ、配列番号７６、７８、８０、８５、８７、および８９、または
（ｆ）それぞれ、配列番号９４、９６、９８、１０３、１０５、および１０７、または
（ｇ）それぞれ、配列番号１１２、１１４、１１６、１２１、１２３、および１２５、または
（ｈ）それぞれ、配列番号１３０、１３２、１３４、１３９、１４１、および１４３、または
（ｉ）それぞれ、配列番号１４８、１５０、１５２、１５７、１５９、および１６１、または
（ｊ）それぞれ、配列番号１６６、１６８、１７０、１７５、１７７、および１７９、または
（ｋ）それぞれ、配列番号１８４、１８６、１８８、１９３、１９５、および１９７、または
（ｌ）それぞれ、配列番号２０２、２０４、２０６、２１１、２１３、および２１５、または
（ｍ）それぞれ、配列番号２２１、２２２、２２３、１３、１５、および１７、または
（ｎ）それぞれ、配列番号２２４、２２５、６２、６７、６９、および７１、または
（ｏ）それぞれ、配列番号２２６、２２７、２２８、６７、６９、および７１、または
（ｐ）それぞれ、配列番号２２４、２２９、２３０、６７、６９、および７１、または
（ｑ）それぞれ、配列番号２２４、２２７、２３０、６７、６９、および７１、または
（ｒ）それぞれ、配列番号２３１、２３２、２３５、１０３、１０５、および１０７、または
（ｓ）それぞれ、配列番号２３３、２３４、２３６、１０３、１０５、および１０７、または
（ｔ）それぞれ、配列番号２３３、２３４、２３７、１０３、１０５、および１０７、または
（ｕ）それぞれ、配列番号１６６、２３８、１７０、１７５、１７７、および１７９、または
（ｖ）それぞれ、配列番号２３９、２４０、１７０、１７５、１７７、および１７９、または
（ｗ）それぞれ、配列番号２３９、２４０、２４１、１７５、１７７、および１７９、または
（ｘ）それぞれ、配列番号２３９、２４０、２４２、１７５、１７７、および１７９、または
（ｙ）それぞれ、配列番号２４３、１６８、２４４、１７５、１７７、および１７９
の配列を含む重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３、ならびに軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ、およびＣＤＲ３を含む、実施形態９４に記載の抗体。
実施形態９６． （ｊ）それぞれ、配列番号５８、６０、６２、６７、６９、および７１、または
（ｋ）それぞれ、配列番号２８３、２８５、６２、２８７、２８８、および７１、または
（ｌ）それぞれ、配列番号２８４、６０、２８６、６７、６９、および７１
の配列を含む重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３、ならびに軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ、およびＣＤＲ３を含む、実施形態６５から９５のいずれか一項に記載の抗体。
実施形態９７． （ａ）配列番号１、配列番号１９、配列番号３７、配列番号５５、配列番号７３、配列番号９１、配列番号１０９、配列番号１２７、配列番号１４５、配列番号１６３、配列番号１８１、配列番号１９９、配列番号２４５、配列番号２４６、配列番号２４７、配列番号２４８、配列番号２４９、配列番号２５０、配列番号２５１、配列番号２５２、配列番号２５３、配列番号２５４、配列番号２５５、配列番号２５６、または配列番号２５７に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、ならびに／または
（ｂ）配列番号１０、配列番号２８、配列番号４６、配列番号６４、配列番号８２、配列番号１００、配列番号１１８、配列番号１３６、配列番号１５４、配列番号１７２、配列番号１９０、または配列番号２０８に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域
を含む、実施形態６５から９６のいずれか一項に記載の抗体。
実施形態９８． （ａ）配列番号１もしくは配列番号２４５に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号１０に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、または
（ｂ）配列番号１９に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号２８に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、または
（ｃ）配列番号３７に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号４６に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、または
（ｄ）配列番号５５、配列番号２４６、配列番号２４７、配列番号２４８、もしくは配列番号２４９のうちのいずれか１つに対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号６４に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、または
（ｅ）配列番号７３に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号８２に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、または
（ｆ）配列番号９１、配列番号２５０、配列番号２５１、もしくは配列番号２５２のうちのいずれか１つに対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号１００に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、または
（ｇ）配列番号１０９に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号１１８に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、または
（ｈ）配列番号１２７に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号１３６に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、または
（ｉ）配列番号１４５に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号１５４に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、または
（ｊ）配列番号１６３、配列番号２５３、配列番号２５４、配列番号２５５、配列番号２５６、もしくは配列番号２５７のうちのいずれか１つに対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号１７２に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、または
（ｋ）配列番号１８１に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号１９０に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、または
（ｌ）配列番号１９９に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号２０８に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域
を含む、実施形態６５から９７のいずれか一項に記載の抗体。
実施形態９９． （ａ）配列番号１もしくは配列番号２４５のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号１０のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、または
（ｂ）配列番号１９のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号２８のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、または
（ｃ）配列番号３７のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号４６のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、または
（ｄ）配列番号５５、配列番号２４６、配列番号２４７、配列番号２４８、もしくは配列番号２４９のうちのいずれか１つのアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号６４のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、または
（ｅ）配列番号７３のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号８２のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、または
（ｆ）配列番号９１、配列番号２５０、配列番号２５１、もしくは配列番号２５２のうちのいずれか１つのアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号１００のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、または
（ｇ）配列番号１０９のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号１１８のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、または
（ｈ）配列番号１２７のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号１３６のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、または
（ｉ）配列番号１４５のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号１５４のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、または
（ｊ）配列番号１６３、配列番号２５３、配列番号２５４、配列番号２５５、配列番号２５６、もしくは配列番号２５７のうちのいずれか１つのアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号１７２のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、または
（ｋ）配列番号１８１のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号１９０のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、または
（ｌ）配列番号１９９のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号２０８のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域
を含む、実施形態９８に記載の抗体。
実施形態１００． 配列番号５５のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号６４のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む、実施形態６５から９９のいずれか一項に記載の抗体。
実施形態１０１． ＩｇＧ抗体である、実施形態６５から１００のいずれか一項に記載の抗体。
実施形態１０２． ＩｇＧ１抗体またはＩｇＧ３抗体である、実施形態１０１に記載の抗体。
実施形態１０３． 配列番号２６０、２６２、２６４、２６６、２６８、２７０、および２７２から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖、ならびに配列番号２７４のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む、実施形態６５から１０２のいずれか一項に記載の抗体。
実施形態１０４． 配列番号２６０のアミノ酸配列を含む重鎖、および配列番号２７４のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む、実施形態１０３に記載の抗体。
実施形態１０５． 配列番号２６０のアミノ酸配列からなる重鎖、および配列番号２７４のアミノ酸配列からなる軽鎖を含む、実施形態１０３に記載の抗体。
実施形態１０６． ヒトＴＩＧＩＴに結合する抗体であって、配列番号２６０、２６２、２６４、２６６、２６８、２７０、および２７２から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖、ならびに配列番号２７４のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む、抗体。
実施形態１０７． ヒトＴＩＧＩＴに結合する抗体であって、配列番号２６０のアミノ酸配列を含む重鎖、および配列番号２７４のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む、抗体。
実施形態１０８． ヒトＴＩＧＩＴに結合する抗体であって、配列番号２６０のアミノ酸配列からなる重鎖、および配列番号２７４のアミノ酸配列からなる軽鎖を含む抗体。
実施形態１０９． 抗ＰＤ−１抗体または抗ＰＤ−Ｌ１抗体との相乗作用を示す、実施形態６５から１０８のいずれか一項に記載の抗体。
実施形態１１０． 相乗作用が、（ｉ）ＰＤ−１、ＴＩＧＩＴ、およびＣＤ２２６を発現するＪｕｒｋａｔエフェクター細胞であって、ＩＬ−２プロモーターによって駆動されるルシフェラーゼレポーター遺伝子を含むＪｕｒｋａｔエフェクター細胞、ならびに（ｉｉ）ＴＣＲ活性化因子、ＰＤ−Ｌ１、およびＣＤ１５５を発現するＣＨＯ−Ｋ１人工抗原提示細胞（ａＡＰＣ）を含む共培養物を、組成物および抗ＰＤ−１抗体または抗ＰＤ−Ｌ１抗体と接触させることを含むアッセイを使用して、決定される、実施形態１０９に記載の抗体。
実施形態１１１． 制御性Ｔ（Ｔｒｅｇ）細胞が、前記抗体と接触させたヒトＰＢＭＣから枯渇される、実施形態６５から１１０のいずれか一項に記載の抗体。
実施形態１１２． ＭＣＰ１、ＩＬ−８、およびＭＩＰ１αの発現が、前記抗体と接触させたヒトＰＢＭＣにおいて増加する、実施形態６５から１１１のいずれか一項に記載の抗体。
実施形態１１３． 単球／マクロファージが、前記抗体と接触させると活性化される、実施形態６５から１１２のいずれか一項に記載の抗体。
実施形態１１４． ＣＤ８６およびＭＨＣＩＩが、ＣＤ１４＋単球／マクロファージを前記抗体と接触させると、上方調節される、実施形態６５から１１３のいずれか一項に記載の抗体。
実施形態１１５． 前記抗体と接触させたＣＤ１４＋単球／マクロファージが、抗原提示細胞へと成熟する、実施形態６５から１１４のいずれか一項に記載の抗体。
実施形態１１６． 前記抗体と接触させたメモリーＴ細胞が、抗原に応答したＩＦＮγ産生の増加を示す、実施形態６５から１１５のいずれか一項に記載の抗体。
実施形態１１７． 前記抗体と接触させたメモリーＴ細胞が、抗原に対する応答の増強を示す、実施形態６５から１１６のいずれか一項に記載の抗体。
実施形態１１８． エフェクターメモリーＣＤ８＋ Ｔ細胞および／またはエフェクターメモリーＣＤ４＋ Ｔ細胞が、前記抗体と接触させた腫瘍において増加する、実施形態６５から１１７のいずれか一項に記載の抗体。
実施形態１１９． 前記抗体を投与した動物においてＴｈ１応答を増強させる、実施形態６５から１１８のいずれか一項に記載の抗体。
実施形態１２０． ＦｃγＲＩＩａおよび／またはＦｃγＲＩＩｂに対して、アフコシル化されていない同じ抗ＴＩＧＩＴ抗体と比較して低い結合親和性を有する、実施形態６５から１１９のいずれか一項に記載の抗体。
実施形態１２１． 前記組成物が、単球マクロファージの存在下において、ＴＩＧＩＴを発現する細胞の抗体依存性細胞ファゴサイトーシス（ＡＤＣＰ）を媒介する、実施形態６５から１２０のいずれか一項に記載の抗体。
実施形態１２２． モノクローナルである、実施形態６５から１２１のいずれか一項に記載の抗体。
実施形態１２３． 完全ヒト抗体である、実施形態６５〜１２２のいずれか一項に記載の抗体。
実施形態１２４． キメラ抗体である、実施形態６５〜１２３のいずれか一項に記載の抗体。
実施形態１２５． ヒト化抗体である、実施形態６５から９２および１０９から１２４のいずれか一項に記載の抗体。
実施形態１２６． 抗体断片である、実施形態６５から１２５のいずれか一項に記載の抗体。
実施形態１２７． 前記抗体断片が、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、ｓｃＦｖ、またはダイアボディである、実施形態１２６に記載の抗体。
実施形態１２８． 二重特異性抗体である、実施形態６５から１２７のいずれか一項に記載の抗体。
実施形態１２９． 抗体−薬物コンジュゲートである、実施形態６５から１２８のいずれか一項に記載の抗体。
実施形態１３０． 実施形態１から６４のいずれか一項に記載の組成物または実施形態６５から１２９のいずれか一項に記載の抗体と、薬学的に許容される担体とを含む医薬製剤。
実施形態１３１． （ｉ）実施形態１０６から１０８のいずれか一項に記載の抗体の重鎖、（ｉｉ）実施形態１０６から１０８のいずれか一項に記載の抗体の軽鎖、または（ｉｉｉ）実施形態１０６から１０８のいずれか一項に記載の抗体の重鎖および軽鎖をコードする、単離されたポリヌクレオチド。
実施形態１３２． （ｉ）配列番号２５９、２６１、１６３、２６５、２６７、２６９、および２７１から選択されるヌクレオチド配列、または（ｉｉ）配列番号２７３のヌクレオチド配列、または（ｉｉｉ）配列番号２５９、２６１、２６３、２６５、２６７、２６９、および２７１から選択されるヌクレオチド配列、ならびに配列番号２７３のヌクレオチド配列を含む、実施形態１３１に記載の単離されたポリヌクレオチド。
実施形態１３３． 実施形態１３１または実施形態１３２に記載のポリヌクレオチドを含むベクター。
実施形態１３４． 実施形態１３１もしくは実施形態１３２に記載の単離されたポリヌクレオチドまたは実施形態１３３に記載のベクターを含む、単離された宿主細胞。
実施形態１３５． 実施形態１０６から１０８のいずれか一項に記載の抗体を発現する、単離された宿主細胞。
実施形態１３６． アフコシル化抗体を産生するように操作されている、実施形態１３４または実施形態１３５に記載の宿主細胞。
実施形態１３７． ヒトＴＩＧＩＴに結合する抗体を産生させる方法であって、実施形態１３４から１３６のいずれか一項に記載の宿主細胞を、前記抗体を産生させるのに適切な条件下においてインキュベートすることを含む、方法。
実施形態１３８． 前記宿主細胞が、アフコシル化抗体を産生するように操作されている、実施形態１３７に記載の方法。
実施形態１３９． 前記宿主細胞を、フコースアナログの存在下で、アフコシル化抗体を産生させるのに適切な条件下において培養する、実施形態１３７に記載の方法。
実施形態１４０． 前記抗体を単離することをさらに含む、実施形態１３７から１３９のいずれか一項に記載の方法。
実施形態１４１． ヒトＴＩＧＩＴに結合する単離された抗体の組成物であって、前記組成物中の前記抗体のうちの少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％が、アフコシル化されており、前記抗体が、実施形態１３８から１４０のいずれか一項に記載の方法によって産生される、組成物。
実施形態１４２． ヒトＴＩＧＩＴに結合する単離された抗体の組成物であって、前記組成物中の前記抗体のうちの少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％が、アフコシル化されており、前記抗体が、実施形態１３４または実施形態１３５に記載の宿主細胞を、アフコシル化抗体を産生させるのに適切な条件下においてインキュベートすることと、前記抗体を単離して、前記単離された抗体の組成物を形成することとを含む方法によって産生される、組成物。
実施形態１４３． 前記宿主細胞が、アフコシル化抗体を産生するように操作されている、実施形態１４２に記載の組成物。
実施形態１４４． 前記宿主細胞が、フコースアナログの存在下で、アフコシル化抗体を産生させるのに適切な条件下において培養される、実施形態１４２に記載の組成物。
実施形態１４５． （ｉ）実施形態１から６３のいずれか一項に記載の組成物の抗体または（ｉｉ）実施形態６５から１２８のいずれか一項に記載の抗体をコードするヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチドを含む宿主細胞であって、アフコシル化抗体を産生するように操作されている、宿主細胞。
実施形態１４６． 前記ポリヌクレオチドが、ベクターである、実施形態１４５に記載の宿主細胞。
実施形態１４７． （ｉ）実施形態１から６３のいずれか一項に記載の組成物の抗体または（ｉｉ）実施形態６５から１２８のいずれか一項に記載の抗体を発現する宿主細胞であって、アフコシル化抗体を産生するように操作されている、宿主細胞。
実施形態１４８． （ａ）配列番号２、配列番号２０、配列番号３８、配列番号５６、配列番号７４、配列番号９２、配列番号１１０、配列番号１２８、配列番号１４６、配列番号１６４、配列番号１８２、配列番号２００、配列番号２５９、配列番号２６５、配列番号２６７、配列番号２６９、もしくは配列番号２７１のヌクレオチド配列、および／または
（ｂ）配列番号１１、配列番号２９、配列番号４７、配列番号６５、配列番号８３、配列番号１０１、配列番号１１９、配列番号１３７、配列番号１５５、配列番号１７３、配列番号１９１、配列番号２０９、もしくは配列番号２７３のヌクレオチド配列
を含む、実施形態１４５から１４７のいずれか一項に記載の宿主細胞。
実施形態１４９． ＴＩＧＩＴに結合するアフコシル化抗体を産生させる方法であって、実施形態１４５から１４８のいずれか一項に記載の宿主細胞を、前記アフコシル化抗体を産生させるのに適切な条件下において培養することを含む、方法。
実施形態１５０． ＴＩＧＩＴに結合するアフコシル化抗体を産生させる方法であって、宿主細胞を、フコースアナログの存在下で、アフコシル化抗体を産生させるのに適切な条件下において培養することを含み、前記宿主細胞が、（ｉ）実施形態１から６３のいずれか一項に記載の組成物の抗体または（ｉｉ）実施形態６５から１２８のいずれか一項に記載の抗体をコードするヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチドを含む、方法。
実施形態１５１． 前記ポリヌクレオチドが、ベクターである、実施形態１５０に記載の方法。
実施形態１５２． ＴＩＧＩＴに結合するアフコシル化抗体を産生させる方法であって、宿主細胞を、フコースアナログの存在下で、アフコシル化抗体を産生させるのに適切な条件下において培養することを含み、前記宿主細胞が、（ｉ）実施形態１から６３のいずれか一項に記載の組成物の抗体または（ｉｉ）実施形態６５から１２８のいずれか一項に記載の抗体を発現する、方法。
実施形態１５３． 前記宿主細胞が、
（ａ）配列番号２、配列番号２０、配列番号３８、配列番号５６、配列番号７４、配列番号９２、配列番号１１０、配列番号１２８、配列番号１４６、配列番号１６４、配列番号１８２、配列番号２００、配列番号２５９、配列番号２６５、配列番号２６７、配列番号２６９、もしくは配列番号２７１のヌクレオチド配列、および／または
（ｂ）配列番号１１、配列番号２９、配列番号４７、配列番号６５、配列番号８３、配列番号１０１、配列番号１１９、配列番号１３７、配列番号１５５、配列番号１７３、配列番号１９１、配列番号２０９、もしくは配列番号２７３のヌクレオチド配列
を含む、実施形態１５０から１５２のいずれか一項に記載の方法。
実施形態１５４． 前記フコースアナログが、２−フルオロフコースである、実施形態１５０から１５３のいずれか一項に記載の方法。
実施形態１５５． 前記アフコシル化抗体を単離することをさらに含む、実施形態１４９から１５４のいずれか一項に記載の方法。
実施形態１５６． ヒトＴＩＧＩＴに結合する単離された抗体の組成物であって、前記組成物中の前記抗体のうちの少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％が、アフコシル化されており、前記抗体が、実施形態１４９から１５５のいずれか一項に記載の方法によって産生される、組成物。
実施形態１５７． ヒトＴＩＧＩＴに結合する単離された抗体の組成物であって、前記組成物中の前記抗体のうちの少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％が、アフコシル化されており、前記抗体が、実施形態１４５から１４７のいずれか一項に記載の宿主細胞を、アフコシル化抗体を産生させるのに適切な条件下においてインキュベートすることと、前記抗体を単離して、前記単離された抗体の組成物を形成することとを含む方法によって産生される、組成物。
実施形態１５８． ヒトＴＩＧＩＴに結合する単離された抗体の組成物であって、前記組成物中の前記抗体のうちの少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％が、アフコシル化されており、前記抗体が、宿主細胞を、フコースアナログの存在下で、アフコシル化抗体を産生させるのに適切な条件下において培養することを含む方法によって産生され、前記宿主細胞が、（ｉ）実施形態１から６３のいずれか一項に記載の組成物の抗体または（ｉｉ）実施形態６５から１２８のいずれか一項に記載の抗体をコードするヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチドを含む、組成物。
実施形態１５９． ヒトＴＩＧＩＴに結合する単離された抗体の組成物であって、前記組成物中の前記抗体のうちの少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％が、アフコシル化されており、前記抗体が、宿主細胞を、フコースアナログの存在下で、アフコシル化抗体を産生させるのに適切な条件下において培養することを含む方法によって産生され、前記宿主細胞が、（ｉ）実施形態１から６３のいずれか一項に記載の組成物の抗体または（ｉｉ）実施形態６５から１２８のいずれか一項に記載の抗体を発現する、組成物。
実施形態１６０． 実施形態１から６４のいずれか一項に記載の組成物、実施形態６５から１２９のいずれか一項に記載の抗体、または実施形態１３０に記載の医薬組成物と、
追加の治療剤と
を含むキット。
実施形態１６１． 前記追加の治療剤が、抗がん剤である、実施形態１６０に記載のキット。
実施形態１６２． 前記追加の治療剤が、抗体である、実施形態１６０または実施形態１６１に記載のキット。
実施形態１６３． 前記追加の治療剤が、Ｔ細胞共阻害因子のアンタゴニストもしくは阻害剤、Ｔ細胞共活性化因子のアゴニスト、免疫刺激性サイトカイン、またはＳＧＮ−２ＦＦである、実施形態１６０から１６２のいずれか一項に記載のキット。
実施形態１６４． 前記追加の治療剤が、ＣＤ２５、ＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１、Ｔｉｍ３、Ｌａｇ３、ＣＴＬＡ４、４１ＢＢ、ＯＸ４０、ＣＤ３、ＣＤ４０、ＣＤ４７Ｍ、ＧＭ−ＣＳＦ、ＣＳＦ１Ｒ、ＴＬＲ、ＳＴＩＮＧ、ＲＩＧＩ、ＴＡＭ受容体キナーゼ、ＮＫＧ２Ａ、ＮＫＧ２Ｄ、ＧＤ２、ＨＥＲ２、ＥＧＦＲ、ＰＤＧＦＲα、ＳＬＡＭＦ７、ＶＥＧＦ、ＣＴＬＡ−４、ＣＤ２０、ｃＣＬＢ８、ＫＩＲ、およびＣＤ５２から選択されるタンパク質に結合する、実施形態１６０から１６３のいずれか一項に記載のキット。
実施形態１６５． 前記追加の治療剤が、抗ＣＤ２５抗体、抗ＰＤ−１抗体、抗ＰＤ−Ｌ１抗体、抗Ｔｉｍ３抗体、抗Ｌａｇ３抗体、抗ＣＴＬＡ４抗体、抗４１ＢＢ抗体、抗ＯＸ４０抗体、抗ＣＤ３抗体、抗ＣＤ４０抗体、抗ＣＤ４７Ｍ抗体、抗ＣＳＦ１Ｒ抗体、抗ＴＬＲ抗体、抗ＳＴＩＮＧ抗体、抗ＲＩＧＩ抗体、抗ＴＡＭ受容体キナーゼ抗体、抗ＮＫＧ２Ａ抗体、抗ＮＫＧ２Ｄ抗体、抗ＧＤ２抗体、抗ＨＥＲ２抗体、抗ＥＧＦＲ抗体、抗ＰＤＧＦＲ−α抗体、抗ＳＬＡＭＦ７抗体、抗ＶＥＧＦ抗体、抗ＣＴＬＡ−４抗体、抗ＣＤ２０抗体、抗ｃＣＬＢ８抗体、抗ＫＩＲ抗体、および抗ＣＤ５２抗体から選択される、実施形態１６０から１６４のいずれか一項に記載のキット。
実施形態１６６． 前記追加の治療剤が、ＩＬ−１５、ＩＬ−２１、ＩＬ−２、ＧＭ−ＣＳＦ、Ｍ−ＣＳＦ、Ｇ−ＣＳＦ、ＩＬ−１、ＩＬ−３、ＩＬ−１２、およびＩＦＮγから選択されるサイトカインを含む、実施形態１６０から１６５のいずれか一項に記載のキット。
実施形態１６７． 前記追加の治療剤が、ＳＥＡ−ＣＤ４０、アベルマブ、デュルバルマブ、ニボルマブ、ペンブロリズマブ、ピディリズマブ、アテゾリズマブ、Ｈｕｌ４．１８Ｋ３２２Ａ、Ｈｕ３Ｆ８、ジニツキシマブ、トラスツズマブ、セツキシマブ、オララツマブ、ネシツムマブ、エロツズマブ、ラムシルマブ、ペルツズマブ、イピリムマブ、ベバシズマブ、リツキシマブ、オビヌツズマブ、シルツキシマブ、オファツムマブ、リリルマブ、およびアレムツズマブから選択される、実施形態１６０から１６５のいずれか一項に記載のキット。
実施形態１６８． 前記追加の治療剤が、アルキル化剤（たとえば、シクロホスファミド、イホスファミド、クロラムブシル、ブスルファン、メルファラン、メクロレタミン、ウラムスチン、チオテパ、ニトロソ尿素、もしくはテモゾロミド）、アントラサイクリン（たとえば、ドキソルビシン、アドリアマイシン、ダウノルビシン、エピルビシン、もしくはミトキサントロン）、細胞骨格破壊剤（たとえば、パクリタキセルもしくはドセタキセル）、ヒストンデアセチラーゼ阻害剤（たとえば、ボリノスタットもしくはロミデプシン）、トポイソメラーゼの阻害剤（たとえば、イリノテカン、トポテカン、アムサクリン、エトポシド、もしくはテニポシド）、キナーゼ阻害剤（たとえば、ボルテゾミブ、エルロチニブ、ゲフィチニブ、イマチニブ、ベムラフェニブ、もしくはビスモデギブ）、ヌクレオシドアナログまたは前駆体アナログ（たとえば、アザシチジン、アザチオプリン、カペシタビン、シタラビン、フルオロウラシル、ゲムシタビン、ヒドロキシ尿素、メルカプトプリン、メトトレキサート、もしくはチオグアニン）、ペプチド抗生物質（たとえば、アクチノマイシンもしくはブレオマイシン）、白金系薬剤（たとえば、シスプラチン、オキサロプラチン、もしくはカルボプラチン）、または植物アルカロイド（たとえば、ビンクリスチン、ビンブラスチン、ビノレルビン、ビンデシン、ポドフィロトキシン、パクリタキセル、もしくはドセタキセル）、ガラルディン、サリドマイド、レナリドマイド、およびポマリドミドから選択される、実施形態１６０または実施形態１６１に記載のキット。
実施形態１６９． 対象におけるがんを処置する方法であって、前記対象に、治療有効量の、実施形態１から６４のいずれか一項に記載の組成物、実施形態６５から１２９のいずれか一項に記載の抗体、または実施形態１３０に記載の医薬組成物を投与することを含む、方法。
実施形態１７０． 前記がんが、ＣＤ１１２またはＣＤ１５５の発現が富化されているがんである、実施形態１６９に記載の方法。
実施形態１７１． 前記がんが、ＴＩＧＩＴを発現するＴ細胞またはナチュラルキラー（ＮＫ）細胞が富化されているがんである、実施形態１６９または実施形態１７０に記載の方法。
実施形態１７２． 前記がんが、膀胱がん、乳がん、子宮がん、子宮頸がん、卵巣がん、前立腺がん、精巣がん、食道がん、消化管がん、胃がん、膵臓がん、結腸直腸がん、結腸がん、腎臓がん、腎明細胞癌、頭頸部がん、肺がん、肺腺癌、胃がん、生殖細胞がん、骨がん、肝臓がん、甲状腺がん、皮膚がん、黒色腫、中枢神経系の新生物、中皮腫、リンパ腫、白血病、慢性リンパ球性白血病、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、濾胞性リンパ腫、ホジキンリンパ腫、骨髄腫、または肉腫である、実施形態１６９から１７１のいずれか一項に記載の方法。
実施形態１７３． 前記がんが、リンパ腫、白血病、慢性リンパ球性白血病、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、濾胞性リンパ腫、またはホジキンリンパ腫である、実施形態１７２に記載の方法。
実施形態１７４． 前記対象に、治療有効量の追加の治療剤を投与することをさらに含む、実施形態１６９から１７３のいずれか一項に記載の方法。
実施形態１７５． 前記追加の治療剤が、抗がん剤である、実施形態１７４に記載の方法。
実施形態１７６． 前記追加の治療剤が、抗体である、実施形態１７４または実施形態１７５に記載の方法。
実施形態１７７． 前記追加の治療剤が、Ｔ細胞共阻害因子のアンタゴニストもしくは阻害剤、Ｔ細胞共活性化因子のアゴニスト、または免疫刺激性サイトカイン、またはＳＧＮ−２ＦＦである、実施形態１７４から１７６のいずれか一項に記載の方法。
実施形態１７８． 前記追加の治療剤が、ＣＤ２５、ＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１、Ｔｉｍ３、Ｌａｇ３、ＣＴＬＡ４、４１ＢＢ、ＯＸ４０、ＣＤ３、ＣＤ４０、ＣＤ４７Ｍ、ＧＭ−ＣＳＦ、ＣＳＦ１Ｒ、ＴＬＲ、ＳＴＩＮＧ、ＲＩＧＩ、ＴＡＭ受容体キナーゼ、ＮＫＧ２Ａ、ＮＫＧ２Ｄ、ＧＤ２、ＨＥＲ２、ＥＧＦＲ、ＰＤＧＦＲα、ＳＬＡＭＦ７、ＶＥＧＦ、ＣＴＬＡ−４、ＣＤ２０、ｃＣＬＢ８、ＫＩＲ、およびＣＤ５２から選択されるタンパク質に結合する、実施形態１７４から１７７のいずれか一項に記載の方法。
実施形態１７９． 前記追加の治療剤が、抗ＣＤ２５抗体、抗ＰＤ−１抗体、抗ＰＤ−Ｌ１抗体、抗Ｔｉｍ３抗体、抗Ｌａｇ３抗体、抗ＣＴＬＡ４抗体、抗４１ＢＢ抗体、抗ＯＸ４０抗体、抗ＣＤ３抗体、抗ＣＤ４０抗体、抗ＣＤ４７Ｍ抗体、抗ＣＳＦ１Ｒ抗体、抗ＴＬＲ抗体、抗ＳＴＩＮＧ抗体、抗ＲＩＧＩ抗体、抗ＴＡＭ受容体キナーゼ抗体、抗ＮＫＧ２Ａ抗体、抗ＮＫＧ２Ｄ抗体、抗ＧＤ２抗体、抗ＨＥＲ２抗体、抗ＥＧＦＲ抗体、抗ＰＤＧＦＲ−α抗体、抗ＳＬＡＭＦ７抗体、抗ＶＥＧＦ抗体、抗ＣＴＬＡ−４抗体、抗ＣＤ２０抗体、抗ｃＣＬＢ８抗体、抗ＫＩＲ抗体、および抗ＣＤ５２抗体から選択される、実施形態１７８に記載の方法。
実施形態１８０． 前記追加の治療剤が、ＩＬ−１５、ＩＬ−２１、ＩＬ−２、ＧＭ−ＣＳＦ、Ｍ−ＣＳＦ、Ｇ−ＣＳＦ、ＩＬ−１、ＩＬ−３、ＩＬ−１２、およびＩＦＮγから選択されるサイトカインを含む、実施形態１７４または実施形態１７５に記載の方法。
実施形態１８１． 前記追加の治療剤が、ＳＥＡ−ＣＤ４０、アベルマブ、デュルバルマブ、ニボルマブ、ペンブロリズマブ、ピディリズマブ、アテゾリズマブ、Ｈｕｌ４．１８Ｋ３２２Ａ、Ｈｕ３Ｆ８、ジニツキシマブ、トラスツズマブ、セツキシマブ、オララツマブ、ネシツムマブ、エロツズマブ、ラムシルマブ、ペルツズマブ、イピリムマブ、ベバシズマブ、リツキシマブ、オビヌツズマブ、シルツキシマブ、オファツムマブ、リリルマブ、およびアレムツズマブから選択される、実施形態１７４から１７９のいずれか一項に記載の方法。
実施形態１８２． 前記追加の治療剤が、アルキル化剤（たとえば、シクロホスファミド、イホスファミド、クロラムブシル、ブスルファン、メルファラン、メクロレタミン、ウラムスチン、チオテパ、ニトロソ尿素、もしくはテモゾロミド）、アントラサイクリン（たとえば、ドキソルビシン、アドリアマイシン、ダウノルビシン、エピルビシン、もしくはミトキサントロン）、細胞骨格破壊剤（たとえば、パクリタキセルもしくはドセタキセル）、ヒストンデアセチラーゼ阻害剤（たとえば、ボリノスタットもしくはロミデプシン）、トポイソメラーゼの阻害剤（たとえば、イリノテカン、トポテカン、アムサクリン、エトポシド、もしくはテニポシド）、キナーゼ阻害剤（たとえば、ボルテゾミブ、エルロチニブ、ゲフィチニブ、イマチニブ、ベムラフェニブ、もしくはビスモデギブ）、ヌクレオシドアナログまたは前駆体アナログ（たとえば、アザシチジン、アザチオプリン、カペシタビン、シタラビン、フルオロウラシル、ゲムシタビン、ヒドロキシ尿素、メルカプトプリン、メトトレキサート、もしくはチオグアニン）、ペプチド抗生物質（たとえば、アクチノマイシンもしくはブレオマイシン）、白金系薬剤（たとえば、シスプラチン、オキサロプラチン、もしくはカルボプラチン）、または植物アルカロイド（たとえば、ビンクリスチン、ビンブラスチン、ビノレルビン、ビンデシン、ポドフィロトキシン、パクリタキセル、もしくはドセタキセル）、ガラルディン、サリドマイド、レナリドマイド、およびポマリドミドから選択される、実施形態１７４または実施形態１７５に記載の方法。
実施形態１８３． 前記組成物、前記抗体、または前記医薬組成物が、前記追加の治療剤と同時に投与される、実施形態１７４から１８２のいずれか一項に記載の方法。
実施形態１８４． 前記組成物、前記抗体、または前記医薬組成物が、前記追加の治療剤に対して逐次的に投与される、実施形態１７４から１８３のいずれか一項に記載の方法。
ヒトＴＩＧＩＴ（上部パネル）、カニクイザルＴＩＧＩＴ（中央パネル）、およびマウスＴＩＧＩＴ（下部パネル）を発現するように操作したＨＥＫ ２９３細胞への６５個の抗ＴＩＧＩＴ抗体クローンおよび無関係なアイソタイプ対照抗体の結合。
初代ヒトＴ細胞（上部パネル）、カニクイザルＴ細胞（中央パネル）、およびマウスＴ細胞（下部パネル）への６５個の抗ＴＩＧＩＴ抗体クローンおよび無関係なアイソタイプ対照抗体の結合。下部パネルについては、６５個のクローンのうち３５個を評価した。評価した３５個のクローンのうち、３５個中５個は、薄緑色のバーによって示されるように、ｍＴＩＧＩＴ−Ｆｃタンパク質に結合しなかった（クローン２０、２７、５５、５６、および６０）。
図３Ａ〜３Ｄ。（Ａ〜Ｃ）ＨＥＫ ２９３細胞上に発現されるヒト（Ａ）、マウス（Ｂ）、およびカニクイザル（Ｃ）ＴＩＧＩＴに対する８つの抗ＴＩＧＩＴ抗体クローン（クローン２、５、１３、１６、１７、２０、２５、および５４）の結合滴定値。結果を、単連のウェルに関して示す。（Ｄ）ＨＥＫ ２９３細胞上に発現されるヒト、マウス、およびカニクイザルＴＩＧＩＴに対する８つの抗ＴＩＧＩＴ抗体クローン（クローン２、５、１３、１６、１７、２０、２５、および５４）のＥＣ５０値。 図３Ａ〜３Ｄ。（Ａ〜Ｃ）ＨＥＫ ２９３細胞上に発現されるヒト（Ａ）、マウス（Ｂ）、およびカニクイザル（Ｃ）ＴＩＧＩＴに対する８つの抗ＴＩＧＩＴ抗体クローン（クローン２、５、１３、１６、１７、２０、２５、および５４）の結合滴定値。結果を、単連のウェルに関して示す。（Ｄ）ＨＥＫ ２９３細胞上に発現されるヒト、マウス、およびカニクイザルＴＩＧＩＴに対する８つの抗ＴＩＧＩＴ抗体クローン（クローン２、５、１３、１６、１７、２０、２５、および５４）のＥＣ５０値。
活性化されたマウス脾臓Ｔ細胞に対する抗ＴＩＧＩＴ抗体クローン１３および２５の結合滴定。結果を、単連のウェルに関して示す。クローン１３は、０．２４μｇ／ｍＬのＥＣ５０を有した。クローン２５は、２．２８μｇ／ｍＬのＥＣ５０を有した。
図５Ａ〜５Ｂ。ヒトＴＩＧＩＴを発現するＨＥＫ ２９３細胞へのヒトＣＤ１５５の結合（Ａ）およびマウスＴＩＧＩＴを発現するＨＥＫ ２９３細胞へのマウスＣＤ１５５の結合（Ｂ）の両方について、抗ＴＩＧＩＴ抗体は、ＨＥＫ ２９３細胞上に発現されるＴＩＧＩＴとのＣＤ１５５の相互作用を遮断した。結果を、単連のウェルに関して示す。
抗ＴＩＧＩＴ抗体は、ＨＥＫ ２９３細胞上に発現されるヒトＴＩＧＩＴとのヒトＣＤ１１２の相互作用を遮断した。結果を、単連のウェルに関して示す。
図７Ａ〜７Ｂ。（Ａ）上部パネル：選択された抗ＴＩＧＩＴ抗体は、ルシフェラーゼ活性における１．５倍を上回る誘導によって測定したときに、ＴＩＧＩＴ−ＣＤ１５５の結合を効果的に遮断し、Ｔ細胞活性化をもたらした。約１２個のクローンが、バイオアッセイにおいて、１．５倍を上回る誘導を示した。２つのクローンは、ＦｏｒｔｅＢｉｏアッセイにおいて、ＴＩＧＩＴ−ＣＤ１５５相互作用を遮断しなかった（ピンク色のバー）。誘導倍数は、抗体なしの対照に対して測定した。平均および標準偏差は、二連の実験からのものであり、抗体は、２０μｇ／ｍＬであった。灰色のバー＝ｈＩｇＧ１アイソタイプ対照。黒色のバー＝抗体なしの対照（ベースラインとして定義される）。下部パネル：ＴＩＧＩＴ／ＣＤ１５５遮断バイオアッセイとＴＩＧＩＴ−Ｆｃ親和性との相関プロット。バイオアッセイにおける活性は、組換えタンパク質に対する親和性と相関した。（Ｂ）ＴＩＧＩＴ／ＣＤ１５５遮断バイオアッセイにおける１２個の選択された抗ＴＩＧＩＴクローンの用量応答。３つすべての種への強力な結合を示したクローン１３および２５は、バイオアッセイにおいて良好な活性を示した。平均および標準偏差は、三連のウェルのものである。 図７Ａ〜７Ｂ。（Ａ）上部パネル：選択された抗ＴＩＧＩＴ抗体は、ルシフェラーゼ活性における１．５倍を上回る誘導によって測定したときに、ＴＩＧＩＴ−ＣＤ１５５の結合を効果的に遮断し、Ｔ細胞活性化をもたらした。約１２個のクローンが、バイオアッセイにおいて、１．５倍を上回る誘導を示した。２つのクローンは、ＦｏｒｔｅＢｉｏアッセイにおいて、ＴＩＧＩＴ−ＣＤ１５５相互作用を遮断しなかった（ピンク色のバー）。誘導倍数は、抗体なしの対照に対して測定した。平均および標準偏差は、二連の実験からのものであり、抗体は、２０μｇ／ｍＬであった。灰色のバー＝ｈＩｇＧ１アイソタイプ対照。黒色のバー＝抗体なしの対照（ベースラインとして定義される）。下部パネル：ＴＩＧＩＴ／ＣＤ１５５遮断バイオアッセイとＴＩＧＩＴ−Ｆｃ親和性との相関プロット。バイオアッセイにおける活性は、組換えタンパク質に対する親和性と相関した。（Ｂ）ＴＩＧＩＴ／ＣＤ１５５遮断バイオアッセイにおける１２個の選択された抗ＴＩＧＩＴクローンの用量応答。３つすべての種への強力な結合を示したクローン１３および２５は、バイオアッセイにおいて良好な活性を示した。平均および標準偏差は、三連のウェルのものである。
選択された抗ＴＩＧＩＴ抗体が、抗ＰＤ−１と相乗作用し、Ｔ細胞活性化をもたらした。平均および標準偏差は、三連のウェルのものである。クローン１３およびクローン２５の両方が、組合せバイオアッセイにおいて、抗ＰＤ−１との相乗作用を示した。
図９Ａ〜９Ｈ。（Ａ〜Ｄ）完全ヒト抗ＴＩＧＩＴ クローン１３（「ｃ１３ ｈＩｇＧ１」）ならびにクローン１３のマウスＩｇＧ１（「ｃ１３ ｍＩｇＧ１」）およびマウスＩｇＧ２ａ（「ｃ１３ ｍＩｇＧ２ａ」）キメラについて、ＨＥＫ ２９３細胞上に発現されるヒト（Ａ）、マウス（Ｂ）、およびカニクイザル（Ｃ）ＴＩＧＩＴへの結合の結合滴定（Ａ〜Ｃ）およびＥＣ５０値（Ｄ）。平均および標準偏差は、二連のウェルのものである。（Ｅ〜Ｆ）ヒトＴＩＧＩＴを発現するＨＥＫ ２９３細胞へのヒトＣＤ１５５の結合（Ｅ）およびマウスＴＩＧＩＴを発現するＨＥＫ ２９３細胞へのマウスＣＤ１５５の結合（Ｆ）の両方について、抗体ｃ１３ ｈＩｇＧ１、ｃ１３ ｍＩｇＧ１、およびｃ１３ ｍＩｇＧ２ａは、ＨＥＫ ２９３細胞上に発現されるＴＩＧＩＴとのＣＤ１５５の相互作用を遮断した。結果は、単連のウェルに関する。（Ｇ）抗体ｃ１３ ｈＩｇＧ１、ｃ１３ ｍＩｇＧ１、およびｃ１３ ｍＩｇＧ２ａは、ＨＥＫ ２９３細胞上に発現されるヒトＴＩＧＩＴとのヒトＣＤ１１２の相互作用を遮断した。結果は、単連のウェルに関する。（Ｈ）ＴＩＧＩＴ／ＣＤ１５５遮断バイオアッセイにおける親およびキメラ抗ＴＩＧＩＴ抗体クローンｃ１３ ｈＩｇＧ１、ｃ１３ ｍＩｇＧ１、およびｃ１３ ｍＩｇＧ２ａの用量応答。平均および標準偏差は、三連のウェルのものである。 図９Ａ〜９Ｈ。（Ａ〜Ｄ）完全ヒト抗ＴＩＧＩＴ クローン１３（「ｃ１３ ｈＩｇＧ１」）ならびにクローン１３のマウスＩｇＧ１（「ｃ１３ ｍＩｇＧ１」）およびマウスＩｇＧ２ａ（「ｃ１３ ｍＩｇＧ２ａ」）キメラについて、ＨＥＫ ２９３細胞上に発現されるヒト（Ａ）、マウス（Ｂ）、およびカニクイザル（Ｃ）ＴＩＧＩＴへの結合の結合滴定（Ａ〜Ｃ）およびＥＣ５０値（Ｄ）。平均および標準偏差は、二連のウェルのものである。（Ｅ〜Ｆ）ヒトＴＩＧＩＴを発現するＨＥＫ ２９３細胞へのヒトＣＤ１５５の結合（Ｅ）およびマウスＴＩＧＩＴを発現するＨＥＫ ２９３細胞へのマウスＣＤ１５５の結合（Ｆ）の両方について、抗体ｃ１３ ｈＩｇＧ１、ｃ１３ ｍＩｇＧ１、およびｃ１３ ｍＩｇＧ２ａは、ＨＥＫ ２９３細胞上に発現されるＴＩＧＩＴとのＣＤ１５５の相互作用を遮断した。結果は、単連のウェルに関する。（Ｇ）抗体ｃ１３ ｈＩｇＧ１、ｃ１３ ｍＩｇＧ１、およびｃ１３ ｍＩｇＧ２ａは、ＨＥＫ ２９３細胞上に発現されるヒトＴＩＧＩＴとのヒトＣＤ１１２の相互作用を遮断した。結果は、単連のウェルに関する。（Ｈ）ＴＩＧＩＴ／ＣＤ１５５遮断バイオアッセイにおける親およびキメラ抗ＴＩＧＩＴ抗体クローンｃ１３ ｈＩｇＧ１、ｃ１３ ｍＩｇＧ１、およびｃ１３ ｍＩｇＧ２ａの用量応答。平均および標準偏差は、三連のウェルのものである。 図９Ａ〜９Ｈ。（Ａ〜Ｄ）完全ヒト抗ＴＩＧＩＴ クローン１３（「ｃ１３ ｈＩｇＧ１」）ならびにクローン１３のマウスＩｇＧ１（「ｃ１３ ｍＩｇＧ１」）およびマウスＩｇＧ２ａ（「ｃ１３ ｍＩｇＧ２ａ」）キメラについて、ＨＥＫ ２９３細胞上に発現されるヒト（Ａ）、マウス（Ｂ）、およびカニクイザル（Ｃ）ＴＩＧＩＴへの結合の結合滴定（Ａ〜Ｃ）およびＥＣ５０値（Ｄ）。平均および標準偏差は、二連のウェルのものである。（Ｅ〜Ｆ）ヒトＴＩＧＩＴを発現するＨＥＫ ２９３細胞へのヒトＣＤ１５５の結合（Ｅ）およびマウスＴＩＧＩＴを発現するＨＥＫ ２９３細胞へのマウスＣＤ１５５の結合（Ｆ）の両方について、抗体ｃ１３ ｈＩｇＧ１、ｃ１３ ｍＩｇＧ１、およびｃ１３ ｍＩｇＧ２ａは、ＨＥＫ ２９３細胞上に発現されるＴＩＧＩＴとのＣＤ１５５の相互作用を遮断した。結果は、単連のウェルに関する。（Ｇ）抗体ｃ１３ ｈＩｇＧ１、ｃ１３ ｍＩｇＧ１、およびｃ１３ ｍＩｇＧ２ａは、ＨＥＫ ２９３細胞上に発現されるヒトＴＩＧＩＴとのヒトＣＤ１１２の相互作用を遮断した。結果は、単連のウェルに関する。（Ｈ）ＴＩＧＩＴ／ＣＤ１５５遮断バイオアッセイにおける親およびキメラ抗ＴＩＧＩＴ抗体クローンｃ１３ ｈＩｇＧ１、ｃ１３ ｍＩｇＧ１、およびｃ１３ ｍＩｇＧ２ａの用量応答。平均および標準偏差は、三連のウェルのものである。 図９Ａ〜９Ｈ。（Ａ〜Ｄ）完全ヒト抗ＴＩＧＩＴ クローン１３（「ｃ１３ ｈＩｇＧ１」）ならびにクローン１３のマウスＩｇＧ１（「ｃ１３ ｍＩｇＧ１」）およびマウスＩｇＧ２ａ（「ｃ１３ ｍＩｇＧ２ａ」）キメラについて、ＨＥＫ ２９３細胞上に発現されるヒト（Ａ）、マウス（Ｂ）、およびカニクイザル（Ｃ）ＴＩＧＩＴへの結合の結合滴定（Ａ〜Ｃ）およびＥＣ５０値（Ｄ）。平均および標準偏差は、二連のウェルのものである。（Ｅ〜Ｆ）ヒトＴＩＧＩＴを発現するＨＥＫ ２９３細胞へのヒトＣＤ１５５の結合（Ｅ）およびマウスＴＩＧＩＴを発現するＨＥＫ ２９３細胞へのマウスＣＤ１５５の結合（Ｆ）の両方について、抗体ｃ１３ ｈＩｇＧ１、ｃ１３ ｍＩｇＧ１、およびｃ１３ ｍＩｇＧ２ａは、ＨＥＫ ２９３細胞上に発現されるＴＩＧＩＴとのＣＤ１５５の相互作用を遮断した。結果は、単連のウェルに関する。（Ｇ）抗体ｃ１３ ｈＩｇＧ１、ｃ１３ ｍＩｇＧ１、およびｃ１３ ｍＩｇＧ２ａは、ＨＥＫ ２９３細胞上に発現されるヒトＴＩＧＩＴとのヒトＣＤ１１２の相互作用を遮断した。結果は、単連のウェルに関する。（Ｈ）ＴＩＧＩＴ／ＣＤ１５５遮断バイオアッセイにおける親およびキメラ抗ＴＩＧＩＴ抗体クローンｃ１３ ｈＩｇＧ１、ｃ１３ ｍＩｇＧ１、およびｃ１３ ｍＩｇＧ２ａの用量応答。平均および標準偏差は、三連のウェルのものである。 図９Ａ〜９Ｈ。（Ａ〜Ｄ）完全ヒト抗ＴＩＧＩＴ クローン１３（「ｃ１３ ｈＩｇＧ１」）ならびにクローン１３のマウスＩｇＧ１（「ｃ１３ ｍＩｇＧ１」）およびマウスＩｇＧ２ａ（「ｃ１３ ｍＩｇＧ２ａ」）キメラについて、ＨＥＫ ２９３細胞上に発現されるヒト（Ａ）、マウス（Ｂ）、およびカニクイザル（Ｃ）ＴＩＧＩＴへの結合の結合滴定（Ａ〜Ｃ）およびＥＣ５０値（Ｄ）。平均および標準偏差は、二連のウェルのものである。（Ｅ〜Ｆ）ヒトＴＩＧＩＴを発現するＨＥＫ ２９３細胞へのヒトＣＤ１５５の結合（Ｅ）およびマウスＴＩＧＩＴを発現するＨＥＫ ２９３細胞へのマウスＣＤ１５５の結合（Ｆ）の両方について、抗体ｃ１３ ｈＩｇＧ１、ｃ１３ ｍＩｇＧ１、およびｃ１３ ｍＩｇＧ２ａは、ＨＥＫ ２９３細胞上に発現されるＴＩＧＩＴとのＣＤ１５５の相互作用を遮断した。結果は、単連のウェルに関する。（Ｇ）抗体ｃ１３ ｈＩｇＧ１、ｃ１３ ｍＩｇＧ１、およびｃ１３ ｍＩｇＧ２ａは、ＨＥＫ ２９３細胞上に発現されるヒトＴＩＧＩＴとのヒトＣＤ１１２の相互作用を遮断した。結果は、単連のウェルに関する。（Ｈ）ＴＩＧＩＴ／ＣＤ１５５遮断バイオアッセイにおける親およびキメラ抗ＴＩＧＩＴ抗体クローンｃ１３ ｈＩｇＧ１、ｃ１３ ｍＩｇＧ１、およびｃ１３ ｍＩｇＧ２ａの用量応答。平均および標準偏差は、三連のウェルのものである。
図１０Ａ〜１０Ｋ。活性型Ｆｃガンマ受容体に結合することができる抗ＴＩＧＩＴ抗体は、マウスにおけるＣＴ２６同系腫瘍モデルで、抗腫瘍効果を媒介した。（Ａ）群平均腫瘍体積。（Ｂ〜Ｋ）群１から１０の個々の動物の腫瘍体積。ＰＲ＝部分応答（腫瘍体積が、３回の連続した測定で、その１日目の体積の５０％またはそれよりも小さく、これらの３回の測定のうちの１回または複数回で１３．５ｍｍ３に等しいかまたはそれよりも大きい）。ＣＲ＝完全応答（腫瘍体積が、３回の連続した測定で、１３．５ｍｍ３未満である）。 図１０Ａ〜１０Ｋ。活性型Ｆｃガンマ受容体に結合することができる抗ＴＩＧＩＴ抗体は、マウスにおけるＣＴ２６同系腫瘍モデルで、抗腫瘍効果を媒介した。（Ａ）群平均腫瘍体積。（Ｂ〜Ｋ）群１から１０の個々の動物の腫瘍体積。ＰＲ＝部分応答（腫瘍体積が、３回の連続した測定で、その１日目の体積の５０％またはそれよりも小さく、これらの３回の測定のうちの１回または複数回で１３．５ｍｍ３に等しいかまたはそれよりも大きい）。ＣＲ＝完全応答（腫瘍体積が、３回の連続した測定で、１３．５ｍｍ３未満である）。 図１０Ａ〜１０Ｋ。活性型Ｆｃガンマ受容体に結合することができる抗ＴＩＧＩＴ抗体は、マウスにおけるＣＴ２６同系腫瘍モデルで、抗腫瘍効果を媒介した。（Ａ）群平均腫瘍体積。（Ｂ〜Ｋ）群１から１０の個々の動物の腫瘍体積。ＰＲ＝部分応答（腫瘍体積が、３回の連続した測定で、その１日目の体積の５０％またはそれよりも小さく、これらの３回の測定のうちの１回または複数回で１３．５ｍｍ３に等しいかまたはそれよりも大きい）。ＣＲ＝完全応答（腫瘍体積が、３回の連続した測定で、１３．５ｍｍ３未満である）。 図１０Ａ〜１０Ｋ。活性型Ｆｃガンマ受容体に結合することができる抗ＴＩＧＩＴ抗体は、マウスにおけるＣＴ２６同系腫瘍モデルで、抗腫瘍効果を媒介した。（Ａ）群平均腫瘍体積。（Ｂ〜Ｋ）群１から１０の個々の動物の腫瘍体積。ＰＲ＝部分応答（腫瘍体積が、３回の連続した測定で、その１日目の体積の５０％またはそれよりも小さく、これらの３回の測定のうちの１回または複数回で１３．５ｍｍ３に等しいかまたはそれよりも大きい）。ＣＲ＝完全応答（腫瘍体積が、３回の連続した測定で、１３．５ｍｍ３未満である）。 図１０Ａ〜１０Ｋ。活性型Ｆｃガンマ受容体に結合することができる抗ＴＩＧＩＴ抗体は、マウスにおけるＣＴ２６同系腫瘍モデルで、抗腫瘍効果を媒介した。（Ａ）群平均腫瘍体積。（Ｂ〜Ｋ）群１から１０の個々の動物の腫瘍体積。ＰＲ＝部分応答（腫瘍体積が、３回の連続した測定で、その１日目の体積の５０％またはそれよりも小さく、これらの３回の測定のうちの１回または複数回で１３．５ｍｍ３に等しいかまたはそれよりも大きい）。ＣＲ＝完全応答（腫瘍体積が、３回の連続した測定で、１３．５ｍｍ３未満である）。 図１０Ａ〜１０Ｋ。活性型Ｆｃガンマ受容体に結合することができる抗ＴＩＧＩＴ抗体は、マウスにおけるＣＴ２６同系腫瘍モデルで、抗腫瘍効果を媒介した。（Ａ）群平均腫瘍体積。（Ｂ〜Ｋ）群１から１０の個々の動物の腫瘍体積。ＰＲ＝部分応答（腫瘍体積が、３回の連続した測定で、その１日目の体積の５０％またはそれよりも小さく、これらの３回の測定のうちの１回または複数回で１３．５ｍｍ３に等しいかまたはそれよりも大きい）。ＣＲ＝完全応答（腫瘍体積が、３回の連続した測定で、１３．５ｍｍ３未満である）。 図１０Ａ〜１０Ｋ。活性型Ｆｃガンマ受容体に結合することができる抗ＴＩＧＩＴ抗体は、マウスにおけるＣＴ２６同系腫瘍モデルで、抗腫瘍効果を媒介した。（Ａ）群平均腫瘍体積。（Ｂ〜Ｋ）群１から１０の個々の動物の腫瘍体積。ＰＲ＝部分応答（腫瘍体積が、３回の連続した測定で、その１日目の体積の５０％またはそれよりも小さく、これらの３回の測定のうちの１回または複数回で１３．５ｍｍ３に等しいかまたはそれよりも大きい）。ＣＲ＝完全応答（腫瘍体積が、３回の連続した測定で、１３．５ｍｍ３未満である）。 図１０Ａ〜１０Ｋ。活性型Ｆｃガンマ受容体に結合することができる抗ＴＩＧＩＴ抗体は、マウスにおけるＣＴ２６同系腫瘍モデルで、抗腫瘍効果を媒介した。（Ａ）群平均腫瘍体積。（Ｂ〜Ｋ）群１から１０の個々の動物の腫瘍体積。ＰＲ＝部分応答（腫瘍体積が、３回の連続した測定で、その１日目の体積の５０％またはそれよりも小さく、これらの３回の測定のうちの１回または複数回で１３．５ｍｍ３に等しいかまたはそれよりも大きい）。ＣＲ＝完全応答（腫瘍体積が、３回の連続した測定で、１３．５ｍｍ３未満である）。 図１０Ａ〜１０Ｋ。活性型Ｆｃガンマ受容体に結合することができる抗ＴＩＧＩＴ抗体は、マウスにおけるＣＴ２６同系腫瘍モデルで、抗腫瘍効果を媒介した。（Ａ）群平均腫瘍体積。（Ｂ〜Ｋ）群１から１０の個々の動物の腫瘍体積。ＰＲ＝部分応答（腫瘍体積が、３回の連続した測定で、その１日目の体積の５０％またはそれよりも小さく、これらの３回の測定のうちの１回または複数回で１３．５ｍｍ３に等しいかまたはそれよりも大きい）。ＣＲ＝完全応答（腫瘍体積が、３回の連続した測定で、１３．５ｍｍ３未満である）。 図１０Ａ〜１０Ｋ。活性型Ｆｃガンマ受容体に結合することができる抗ＴＩＧＩＴ抗体は、マウスにおけるＣＴ２６同系腫瘍モデルで、抗腫瘍効果を媒介した。（Ａ）群平均腫瘍体積。（Ｂ〜Ｋ）群１から１０の個々の動物の腫瘍体積。ＰＲ＝部分応答（腫瘍体積が、３回の連続した測定で、その１日目の体積の５０％またはそれよりも小さく、これらの３回の測定のうちの１回または複数回で１３．５ｍｍ３に等しいかまたはそれよりも大きい）。ＣＲ＝完全応答（腫瘍体積が、３回の連続した測定で、１３．５ｍｍ３未満である）。
ＢＬＩによる、滴定した抗ＴＩＧＩＴ抗体へのヒトＦｃγＲＩＩＩａ １５８Ｖの結合のセンサグラム。結果を、抗ＴＩＧＩＴクローン１３ ｈＩｇＧ１野生型、アフコシル化、およびＬＡＬＡ−ＰＧ（左パネル）、抗ＴＩＧＩＴクローン１３ ｍＩｇＧ２ａ野生型、アフコシル化、およびＬＡＬＡ−ＰＧ（中央パネル）、ならびに抗ＴＩＧＩＴクローン１３Ｃ ｈＩｇＧ１野生型（右パネル）について示す。 ＢＬＩによる、滴定した抗ＴＩＧＩＴ抗体へのヒトＦｃγＲＩＩＩａ １５８Ｖの結合のセンサグラム。結果を、抗ＴＩＧＩＴクローン１３ ｈＩｇＧ１野生型、アフコシル化、およびＬＡＬＡ−ＰＧ（左パネル）、抗ＴＩＧＩＴクローン１３ ｍＩｇＧ２ａ野生型、アフコシル化、およびＬＡＬＡ−ＰＧ（中央パネル）、ならびに抗ＴＩＧＩＴクローン１３Ｃ ｈＩｇＧ１野生型（右パネル）について示す。 ＢＬＩによる、滴定した抗ＴＩＧＩＴ抗体へのヒトＦｃγＲＩＩＩａ １５８Ｖの結合のセンサグラム。結果を、抗ＴＩＧＩＴクローン１３ ｈＩｇＧ１野生型、アフコシル化、およびＬＡＬＡ−ＰＧ（左パネル）、抗ＴＩＧＩＴクローン１３ ｍＩｇＧ２ａ野生型、アフコシル化、およびＬＡＬＡ−ＰＧ（中央パネル）、ならびに抗ＴＩＧＩＴクローン１３Ｃ ｈＩｇＧ１野生型（右パネル）について示す。
ｍＣＤ１６（ＦｃγＲＩＶａのマウス形態）を発現するＣＨＯ細胞への抗ＴＩＧＩＴ ｍＩｇＧ２ａ抗体の結合。アフコシル化クローン１３ ｍＩｇＧ２ａ（黒色の四角形）は、野生型ｍＩｇＧ２ａ（黒色の円形）またはｍＩｇＧ２ａ ＬＡＬＡ−ＰＧ（黒色の三角形）と比較して、有意に高い親和性で結合した。結合データを、以下の表に要約する。
健常ドナーに由来するＴ細胞サブセットによるＴＩＧＩＴ（上部パネル）、ＣＤ２２６（中央パネル）、およびＣＤ１５５（下部パネル）の発現。Ｔｒｅｇがもっとも高いレベルのＴＩＧＩＴを発現し、試験したすべてのＴ細胞サブセットが活性型受容体ＣＤ２２６を発現した。ＣＤ１５５の発現は、ほぼ不在であった。
様々な濃度におけるクローン１３ ＩｇＧ１野生型（黒色の円形）、クローン１３ ＩｇＧ１アフコシル化（黒色の四角形）、クローン１３ ＩｇＧ１ ＬＡＬＡ−ＰＧ（黒色の三角形）、およびヒトＩｇＧ１アイソタイプ対照（灰色の逆三角形）によるＴＩＧＩＴ陽性Ｔｒｅｇ細胞の枯渇。
同種ＮＫ／Ｔｒｅｇ共培養実験における、クローン１３ ＩｇＧ１野生型（黒色の円形）、クローン１３ ＩｇＧ１アフコシル化（黒色の四角形）、およびクローン１３ ＩｇＧ１ ＬＡＬＡ−ＰＧ（黒色の三角形）によるＴｒｅｇの枯渇。アフコシル化ＯＫＴ９抗体（白抜きの円形）は、陽性対照として含めた。
クローン１３ ＩｇＧ１野生型抗体（黒色の四角形）、クローン１３ ＩｇＧ１アフコシル化抗体（黒色の菱形）、またはクローン１３ ＩｇＧ１ ＬＡＬＡ−ＰＧ抗体（黒色の円形）での処置の後のＰＢＭＣによる炎症性サイトカインＭＣＰ−１（上部パネル）、ＩＬ−８（中央パネル）、およびＭＩＰ１α（下部パネル）の産生。
クローン１３ ＩｇＧ１野生型抗体（灰色の円形）、クローン１３ ＩｇＧ１アフコシル化抗体（灰色の四角形）、およびクローン１３ ＩｇＧ１ ＬＡＬＡ−ＰＧ抗体（黒色の三角形）での処置の後のＣＤ１４＋単球上のＣＤ８６（左パネル）およびＭＨＣクラスＩＩ（右パネル）の発現の用量依存的上方調節。
図１８Ａ〜１８Ｃ。３つの異なる同系腫瘍モデルにおける抗ＴＩＧＩＴ抗体のｉｎ ｖｉｖｏ活性。図８Ａは、Ａ２０同系リンパ腫モデルにおける腫瘍体積に対するクローン１３ ＩｇＧ２ａ野生型、クローン１３ ＩｇＧ２ａアフコシル化、およびクローン１３ ＩｇＧ２ａ ＬＡＬＡ−ＰＧの作用を示す。図８Ｂは、ＣＴ２６同系結腸がんモデルにおける腫瘍体積に対するクローン１３ ＩｇＧ２ａ野生型、クローン１３ ＩｇＧ２ａアフコシル化、およびクローン１３ ＩｇＧ２ａ ＬＡＬＡ−ＰＧの作用を示す。図８Ｃは、ＭＣ３８同系結腸がんモデルにおける腫瘍体積に対するクローン１３ ＩｇＧ２ａ野生型、クローン１３ ＩｇＧ２ａアフコシル化、およびクローン１３ ＩｇＧ２ａ ＬＡＬＡ−ＰＧの作用を示す。３つすべてのモデルにおいて、クローン１３ ｍＩｇＧ２ａ野生型（黒色の円形）およびクローン１３ ｍＩＧｇ２ａアフコシル化（黒色の菱形）が、クローン１３ ＩｇＧ２ａ ＬＡＬＰＧ（黒色の四角形）または未処置動物（灰色の三角形）と比較して、腫瘍サイズの制御により有効であった。
セツキシマブ単独（白抜きの四角形）、セツキシマブと抗ＴＩＧＩＴ抗体クローン１３ ＩｇＧ１との組合せ（黒色の四角形）、およびＩｇＧ１アイソタイプ対照抗体（白抜きの三角形）と接触させたＡ５４９細胞に対するＡＤＣＣ活性。
ＣＭＶリコール抗原に曝露し、抗ＰＤ−１抗体（ペンブロリズマブ処置は灰色の四角形で示し、ニボルマブ処置は灰色の菱形で示す）および漸増濃度の抗ＴＩＧＩＴ抗体クローン１３ ＩｇＧ１で処置したＰＢＭＣにおける、ＣＭＶに誘導されるＩＦＮγ発現。抗ＴＩＧＩＴ抗体クローン１３ ＩｇＧ１単独での処置もまた、示されている（黒色の四角形）。
ＣＭＢリコール抗原に曝露し、漸増濃度の抗ＴＩＧＩＴ抗体クローン１３ ＩｇＧ１野生型（「クローン１３ ＩｇＧ１」）、アフコシル化クローン１３ ＩｇＧ１（「クローン１３ ＳＥＡ ＩｇＧ１」）、およびクローン１３ ＩｇＧ１ ＬＡＬＡ−ＰＧ（「クローン１３ ＬＡＬＡ ＩｇＧ１」）で処置したＰＢＭＣにおける、ＣＭＶに誘導されるＩＦＮγ発現。
漸増濃度の抗ＴＩＧＩＴ抗体クローン１３ ＩｇＧ１野生型（「クローン１３ ＩｇＧ１」）、アフコシル化クローン１３ ＩｇＧ１（「クローン１３ ＳＥＡ ＩｇＧ１」）、およびクローン１３ ＩｇＧ１ ＬＡＬＡ−ＰＧ（「クローン１３ ＬＡＬＡ ＩｇＧ１」）で処置した、ＨＬＡ不一致の共培養したＰＢＭＣにおける、ＩＬ２発現。
ＣＴ２６結腸がん異種移植片マウスに由来する血漿および組織における、抗ＴＩＧＩＴ抗体に応答したサイトカイン誘導。ＣＴ２６結腸がん細胞を埋め込んだマウスを、１ｍｇ／ｋｇのクローン１３ ＩｇＧ２ａ野生型（「野生型」）、アフコシル化クローン１３ ＩｇＧ１（「ＳＥＡ」）、またはクローン１３ ＩｇＧ２ａ ＬＡＬＡ−ＰＧ（「ＬＡＬＡ」）で処置し、サイトカインレベルを、血漿、脾臓、および腫瘍ライセートにおいて測定した。 ＣＴ２６結腸がん異種移植片マウスに由来する血漿および組織における、抗ＴＩＧＩＴ抗体に応答したサイトカイン誘導。ＣＴ２６結腸がん細胞を埋め込んだマウスを、１ｍｇ／ｋｇのクローン１３ ＩｇＧ２ａ野生型（「野生型」）、アフコシル化クローン１３ ＩｇＧ１（「ＳＥＡ」）、またはクローン１３ ＩｇＧ２ａ ＬＡＬＡ−ＰＧ（「ＬＡＬＡ」）で処置し、サイトカインレベルを、血漿、脾臓、および腫瘍ライセートにおいて測定した。
抗ＴＩＧＩＴ抗体クローン１３ ＩｇＧ２ａ野生型（「野生型ＴＩＧＩＴ」）、アフコシル化クローン１３ ＩｇＧ２ａ（「ＳＥＡ ＴＩＧＩＴ」）、またはクローン１３ ＩｇＧ２ａ ＬＡＬＡ−ＰＧ（「ＬＡＬＡ ＴＩＧＩＴ」）で処置した後のＣＴ２６結腸がん異種移植片マウスにおける腫瘍内または末梢ＣＤ８＋ Ｔ細胞サブセットの変化。 抗ＴＩＧＩＴ抗体クローン１３ ＩｇＧ２ａ野生型（「野生型ＴＩＧＩＴ」）、アフコシル化クローン１３ ＩｇＧ２ａ（「ＳＥＡ ＴＩＧＩＴ」）、またはクローン１３ ＩｇＧ２ａ ＬＡＬＡ−ＰＧ（「ＬＡＬＡ ＴＩＧＩＴ」）で処置した後のＣＴ２６結腸がん異種移植片マウスにおける腫瘍内または末梢ＣＤ８＋ Ｔ細胞サブセットの変化。
抗ＴＩＧＩＴ抗体クローン１３ ＩｇＧ２ａ野生型（「野生型ＴＩＧＩＴ」）、アフコシル化クローン１３ ＩｇＧ２ａ（「ＳＥＡ ＴＩＧＩＴ」）、またはクローン１３ ＩｇＧ２ａ ＬＡＬＡ−ＰＧ（「ＬＡＬＡ ＴＩＧＩＴ」）で処置したＣＴ２６結腸がん異種移植片マウスにおける腫瘍内または末梢ＣＤ４＋ Ｔ細胞サブセットの変化。 抗ＴＩＧＩＴ抗体クローン１３ ＩｇＧ２ａ野生型（「野生型ＴＩＧＩＴ」）、アフコシル化クローン１３ ＩｇＧ２ａ（「ＳＥＡ ＴＩＧＩＴ」）、またはクローン１３ ＩｇＧ２ａ ＬＡＬＡ−ＰＧ（「ＬＡＬＡ ＴＩＧＩＴ」）で処置したＣＴ２６結腸がん異種移植片マウスにおける腫瘍内または末梢ＣＤ４＋ Ｔ細胞サブセットの変化。
図２６Ａ〜Ｂ。抗ＴＩＧＩＴ抗体クローン１３ ＩｇＧ２ａ野生型（「野生型ＴＩＧＩＴ」）、アフコシル化クローン１３ ＩｇＧ２ａ（「ＳＥＡ ＴＩＧＩＴ」）、またはクローン１３ ＩｇＧ２ａ ＬＡＬＡ−ＰＧ（「ＬＡＬＡ ＴＩＧＩＴ」）の６回の投薬の後のＣＴ２６結腸がん異種移植片マウスにおける脾臓ＣＤ８＋（Ａ）およびＣＤ４＋（Ｂ）Ｔ細胞サブセットの変化。ＣＤ８＋またはＣＤ４＋でゲーティングしたＣＤ４５＋生細胞からの結果を示す。 図２６Ａ〜Ｂ。抗ＴＩＧＩＴ抗体クローン１３ ＩｇＧ２ａ野生型（「野生型ＴＩＧＩＴ」）、アフコシル化クローン１３ ＩｇＧ２ａ（「ＳＥＡ ＴＩＧＩＴ」）、またはクローン１３ ＩｇＧ２ａ ＬＡＬＡ−ＰＧ（「ＬＡＬＡ ＴＩＧＩＴ」）の６回の投薬の後のＣＴ２６結腸がん異種移植片マウスにおける脾臓ＣＤ８＋（Ａ）およびＣＤ４＋（Ｂ）Ｔ細胞サブセットの変化。ＣＤ８＋またはＣＤ４＋でゲーティングしたＣＤ４５＋生細胞からの結果を示す。 図２６Ａ〜Ｂ。抗ＴＩＧＩＴ抗体クローン１３ ＩｇＧ２ａ野生型（「野生型ＴＩＧＩＴ」）、アフコシル化クローン１３ ＩｇＧ２ａ（「ＳＥＡ ＴＩＧＩＴ」）、またはクローン１３ ＩｇＧ２ａ ＬＡＬＡ−ＰＧ（「ＬＡＬＡ ＴＩＧＩＴ」）の６回の投薬の後のＣＴ２６結腸がん異種移植片マウスにおける脾臓ＣＤ８＋（Ａ）およびＣＤ４＋（Ｂ）Ｔ細胞サブセットの変化。ＣＤ８＋またはＣＤ４＋でゲーティングしたＣＤ４５＋生細胞からの結果を示す。 図２６Ａ〜Ｂ。抗ＴＩＧＩＴ抗体クローン１３ ＩｇＧ２ａ野生型（「野生型ＴＩＧＩＴ」）、アフコシル化クローン１３ ＩｇＧ２ａ（「ＳＥＡ ＴＩＧＩＴ」）、またはクローン１３ ＩｇＧ２ａ ＬＡＬＡ−ＰＧ（「ＬＡＬＡ ＴＩＧＩＴ」）の６回の投薬の後のＣＴ２６結腸がん異種移植片マウスにおける脾臓ＣＤ８＋（Ａ）およびＣＤ４＋（Ｂ）Ｔ細胞サブセットの変化。ＣＤ８＋またはＣＤ４＋でゲーティングしたＣＤ４５＋生細胞からの結果を示す。
抗ＴＩＧＩＴ抗体クローン１３ ＩｇＧ２ａ野生型（「野生型ＴＩＧＩＴ」）、アフコシル化クローン１３ ＩｇＧ２ａ（「ＳＥＡ ＴＩＧＩＴ」）、またはクローン１３ ＩｇＧ２ａ ＬＡＬＡ−ＰＧ（「ＬＡＬＡ ＴＩＧＩＴ」）で処置したＣＴ２６結腸がん異種移植片マウスの血漿および脾臓におけるサイトカイン誘導。
抗ＴＩＧＩＴ抗体クローン１３ ＩｇＧ２ａ野生型（「野生型ＴＩＧＩＴ」）、アフコシル化クローン１３ ＩｇＧ２ａ（「ＳＥＡ ＴＩＧＩＴ」）、またはクローン１３ ＩｇＧ２ａ ＬＡＬＡ−ＰＧ（「ＬＡＬＡ ＴＩＧＩＴ」）で処置したマウスにおける抗原特異的Ｔ細胞応答の誘導。
図２９Ａ〜Ｃ。３つの異なる同系腫瘍モデルにおける抗ＴＩＧＩＴ抗体のｉｎ ｖｉｖｏ活性。図２９Ａは、ＥＭＴ６同系乳がんモデルにおける腫瘍体積に対する５ｍｇ／ｋｇのクローン１３ ＩｇＧ２ａ野生型（「ＴＩＧＩＴ」）、ならびに０．１ｍｇ／ｋｇ、１ｍｇ．ｋｇ、および５ｍｇ／ｋｇのクローン１３ ＩｇＧ２ａアフコシル化（「ＳＥＡ ＴＩＧＩＴ」）の作用を示す。図２９Ｂは、Ｅ０７７１同系乳がんモデルにおける腫瘍体積に対する５ｍｇ／ｋｇのクローン１３ ＩｇＧ２ａ野生型（「ＴＩＧＩＴ」）、ならびに０．１ｍｇ／ｋｇ、１ｍｇ．ｋｇ、および５ｍｇ／ｋｇのクローン１３ ＩｇＧ２ａアフコシル化（「ＳＥＡ ＴＩＧＩＴ」）の作用を示す。図２９Ｃは、外部に維持されているＣＴ２６同系結腸がんモデルにおける腫瘍体積に対する１ｍｇ／ｍｌのクローン１３ ＩｇＧ２ａ野生型の作用を示す。 図２９Ａ〜Ｃ。３つの異なる同系腫瘍モデルにおける抗ＴＩＧＩＴ抗体のｉｎ ｖｉｖｏ活性。図２９Ａは、ＥＭＴ６同系乳がんモデルにおける腫瘍体積に対する５ｍｇ／ｋｇのクローン１３ ＩｇＧ２ａ野生型（「ＴＩＧＩＴ」）、ならびに０．１ｍｇ／ｋｇ、１ｍｇ．ｋｇ、および５ｍｇ／ｋｇのクローン１３ ＩｇＧ２ａアフコシル化（「ＳＥＡ ＴＩＧＩＴ」）の作用を示す。図２９Ｂは、Ｅ０７７１同系乳がんモデルにおける腫瘍体積に対する５ｍｇ／ｋｇのクローン１３ ＩｇＧ２ａ野生型（「ＴＩＧＩＴ」）、ならびに０．１ｍｇ／ｋｇ、１ｍｇ．ｋｇ、および５ｍｇ／ｋｇのクローン１３ ＩｇＧ２ａアフコシル化（「ＳＥＡ ＴＩＧＩＴ」）の作用を示す。図２９Ｃは、外部に維持されているＣＴ２６同系結腸がんモデルにおける腫瘍体積に対する１ｍｇ／ｍｌのクローン１３ ＩｇＧ２ａ野生型の作用を示す。 図２９Ａ〜Ｃ。３つの異なる同系腫瘍モデルにおける抗ＴＩＧＩＴ抗体のｉｎ ｖｉｖｏ活性。図２９Ａは、ＥＭＴ６同系乳がんモデルにおける腫瘍体積に対する５ｍｇ／ｋｇのクローン１３ ＩｇＧ２ａ野生型（「ＴＩＧＩＴ」）、ならびに０．１ｍｇ／ｋｇ、１ｍｇ．ｋｇ、および５ｍｇ／ｋｇのクローン１３ ＩｇＧ２ａアフコシル化（「ＳＥＡ ＴＩＧＩＴ」）の作用を示す。図２９Ｂは、Ｅ０７７１同系乳がんモデルにおける腫瘍体積に対する５ｍｇ／ｋｇのクローン１３ ＩｇＧ２ａ野生型（「ＴＩＧＩＴ」）、ならびに０．１ｍｇ／ｋｇ、１ｍｇ．ｋｇ、および５ｍｇ／ｋｇのクローン１３ ＩｇＧ２ａアフコシル化（「ＳＥＡ ＴＩＧＩＴ」）の作用を示す。図２９Ｃは、外部に維持されているＣＴ２６同系結腸がんモデルにおける腫瘍体積に対する１ｍｇ／ｍｌのクローン１３ ＩｇＧ２ａ野生型の作用を示す。
ＮＫ細胞（左）および活性化ＣＤ８ Ｔ細胞（右）分子シグネチャーと、抗ＴＩＧＩＴ抗体処置に対する同系腫瘍モデル応答との相関。
ＴＩＧＩＴ（左）およびＣＤ１５５（右）の発現と、抗ＴＩＧＩＴ抗体処置に対する同系腫瘍モデル応答との相関。
ＯＶＡのワクチン接種および１ｍｇ／ｋｇのクローン１３ ＩｇＧ２ａ野生型（「野生型ＴＩＧＩＴ」）、クローン１３ ｍＩｇＧ２ａアフコシル化（「ＳＥＡ ＴＩＧＩＴ」）、またはクローン１３ ｍＩｇＧ２ａ ＬＡＬＡ−ＰＧ（「ＬＡＬＡ ＴＩＧＩＴ」）抗体での処置の後のマウスにおける抗ＯＶＡ ＩｇＧ１（左パネル）およびＩｇＧ２ａ（右パネル）のレベル。
ＯＶＡワクチン接種、続いて、１ｍｇ／ｋｇのクローン１３ ＩｇＧ２ａ野生型（「野生型ＴＩＧＩＴ」）、クローン１３ ｍＩｇＧ２ａアフコシル化（「ＳＥＡ ＴＩＧＩＴ」）、またはクローン１３ ｍＩｇＧ２ａ ＬＡＬＡ−ＰＧ（「ＬＡＬＡ ＴＩＧＩＴ」）抗体で処置したマウスに由来する脾細胞のｅｘ ｖｉｖｏでの再刺激後のサイトカイン発現。 ＯＶＡワクチン接種、続いて、１ｍｇ／ｋｇのクローン１３ ＩｇＧ２ａ野生型（「野生型ＴＩＧＩＴ」）、クローン１３ ｍＩｇＧ２ａアフコシル化（「ＳＥＡ ＴＩＧＩＴ」）、またはクローン１３ ｍＩｇＧ２ａ ＬＡＬＡ−ＰＧ（「ＬＡＬＡ ＴＩＧＩＴ」）抗体で処置したマウスに由来する脾細胞のｅｘ ｖｉｖｏでの再刺激後のサイトカイン発現。
クローン１３ ｍＩｇＧ２ａアフコシル化抗体での処置の後にＣＴ２６同系腫瘍モデルにおける完全応答を示したマウスの再チャレンジ。
抗ＴＩＧＩＴ抗体クローン１３ ＩｇＧ１野生型（「野生型」）、クローン１３ ＩｇＧ１アフコシル化（「ＳＥＡクローン１３ ＩｇＧ１」）、またはクローン１３ ＩｇＧ１ ＤＬＥ（「ＤＬＥ」）によるＴｒｅｇの枯渇。
抗ＴＩＧＩＴ抗体クローン１３ ＩｇＧ１野生型（「野生型クローン１３」）、クローン１３ ＩｇＧ１アフコシル化（「ＳＥＡクローン１３ ＩｇＧ１」）、またはクローンＨ５／Ｌ４ ＩｇＧ１によるＴｒｅｇ枯渇。
ＭＣ３８マウス腫瘍モデルにおける抗ＴＩＧＩＴ抗体クローン１３ ＩｇＧ１野生型（「野生型クローン１３」または「野生型ＴＩＧＩＴ」）、クローン１３ ＩｇＧ１アフコシル化（「ＳＥＡクローン１３」または「ＳＧＮ−ＴＧＴ」）、抗ＰＤ−１抗体、および抗ＰＤ−１抗体とクローン１３ ＩｇＧ１野生型またはクローン１３ ＩｇＧ１アフコシル化との組合せの有効性。 ＭＣ３８マウス腫瘍モデルにおける抗ＴＩＧＩＴ抗体クローン１３ ＩｇＧ１野生型（「野生型クローン１３」または「野生型ＴＩＧＩＴ」）、クローン１３ ＩｇＧ１アフコシル化（「ＳＥＡクローン１３」または「ＳＧＮ−ＴＧＴ」）、抗ＰＤ−１抗体、および抗ＰＤ−１抗体とクローン１３ ＩｇＧ１野生型またはクローン１３ ＩｇＧ１アフコシル化との組合せの有効性。
図３８Ａ〜３８Ｂ。図３８Ａ スーパー抗原ブドウ球菌エンテロトキシンＢペプチド、および抗ＴＩＧＩＴ抗体クローン１３ ＩｇＧ１野生型（「野生型クローン１３」）、クローン１３ ＩｇＧ１アフコシル化（「ＳＥＡクローン１３」）、クローン１３ ＩｇＧ１ ＤＬＥ（「ＤＬＥ」）、またはクローンＨ５／Ｌ４ ＩｇＧ１と接触させた後のＩＬ−２発現（図３８Ａ）またはＩＬ−１０発現（図３８Ｂ）。
図３９Ａ〜３９Ｄ。ＣＨＯ細胞の表面上に発現されるＦｃγＲＩ（図３９Ａ）、ＦｃγＲＩＩＩａ Ｖ／Ｖ（図３９Ｂ）、ＦｃγＲＩＩｂ（図３９Ｃ）、またはＦｃγＲＩＩａ（「図３９Ｄ」）への抗ＴＩＧＩＴ抗体クローン１３ ＩｇＧ１野生型（「クローン１３ ＩｇＧ１」）、クローン１３ ＩｇＧ１アフコシル化（「ＳＥＡクローン１３」）、クローン１３ ＬＡＬＡ−ＰＧ（「クローン１３ ＬＡＬＡ」）、クローン１３ ＩｇＧ１ ＤＬＥ（「クローン１３ ＤＬＥ」）、またはクローンＨ５／Ｌ４ ＩｇＧ１の結合。 図３９Ａ〜３９Ｄ。ＣＨＯ細胞の表面上に発現されるＦｃγＲＩ（図３９Ａ）、ＦｃγＲＩＩＩａ Ｖ／Ｖ（図３９Ｂ）、ＦｃγＲＩＩｂ（図３９Ｃ）、またはＦｃγＲＩＩａ（「図３９Ｄ」）への抗ＴＩＧＩＴ抗体クローン１３ ＩｇＧ１野生型（「クローン１３ ＩｇＧ１」）、クローン１３ ＩｇＧ１アフコシル化（「ＳＥＡクローン１３」）、クローン１３ ＬＡＬＡ−ＰＧ（「クローン１３ ＬＡＬＡ」）、クローン１３ ＩｇＧ１ ＤＬＥ（「クローン１３ ＤＬＥ」）、またはクローンＨ５／Ｌ４ ＩｇＧ１の結合。
抗ＴＩＧＩＴ抗体クローン１３ ＩｇＧ１野生型（「クローン１３」）、クローン１３ ＩｇＧ１アフコシル化（「ＳＥＡクローン１３」）、およびクローン１３ ＩｇＧ１ ＤＬＥ（「クローン１３ ＤＬＥ」）によって媒介されるＴＩＧＩＴ陽性Ｊｕｒｋａｔ細胞のファゴサイトーシス。
抗ＴＩＧＩＴ抗体クローン１３ ＩｇＧ１野生型（「クローン１３ ＩｇＧ１」）、クローン１３ ＩｇＧ１アフコシル化（「ＳＥＡクローン１３」）、クローン１３ ＬＡＬＡ−ＰＧ（「クローン１３ ＬＡＬＡ−ＰＧ」）、クローン１３ ＩｇＧ１ ＤＬＥ（「クローン１３ ＤＬＥ」）、またはクローンＨ５／Ｌ４ ＩｇＧ１、ならびに抗ＣＤ４７抗体ｈＢ６ｈ１２．３によって媒介される、ＴＩＧＩＴ陽性Ｊｕｒｋａｔ細胞のＣＤＣ。
詳細な説明
Ｉ．序説
ヒトＴＩＧＩＴ（ＩｇドメインおよびＩＴＩＭドメインを有するＴ細胞免疫受容体）に対する高い親和性を有し、マウスＴＩＧＩＴおよびカニクイザルＴＩＧＩＴのうちのいずれかまたは両方との交差反応性をさらに有する抗体であって、ＴＩＧＩＴとＣＤ１５５との間の相互作用を阻害することが特定されている抗体が、本明細書において提供される。これらの抗体は、抗ＰＤ−１抗体との相乗作用も呈する。したがって、本明細書に記載される抗ＴＩＧＩＴ抗体は、単剤としてかまたは別の治療剤との組合せのいずれかで、様々ながんの処置などの多数の治療用途において使用することができる。一部の実施形態では、抗ＴＩＧＩＴ抗体は、アフコシル化されている。
したがって、一部の実施形態では、本発明は、ヒトＴＩＧＩＴに結合するアフコシル化されている抗体を含む、組成物、キット、および処置の方法を提供する。
ＩＩ．定義
別途定義されない限り、本明細書において使用される技術用語および科学用語は、当業者によって広く理解されているものと同じ意味を有する。たとえば、Lackie, DICTIONARY OF CELL AND MOLECULAR BIOLOGY, Elsevier (4th ed. 2007)、Sambrook et al., MOLECULAR CLONING, A LABORATORY MANUAL, Cold Springs Harbor Press (Cold Springs Harbor, NY 1989)を参照されたい。本明細書に記載されるものと類似または同等の任意の方法、デバイス、および材料を、本発明の実施において使用することができる。
本明細書で使用される場合、単数形の「１つの（ａ）」、「１つの（ａｎ）」、および「その（ｔｈｅ）」は、文脈により別途明確に示されない限り、複数形の参照物を含む。したがって、たとえば、「１つの抗体」への言及は、必要に応じて、２つまたはそれを上回るそのような分子の組合せなども含む。
「約」という用語は、本明細書で使用される場合、当該技術分野の当業者に容易に理解される、それぞれの値の通常の誤差範囲を指す。
本明細書で使用される場合、「ＴＩＧＩＴ」という用語は、「ＩｇドメインおよびＩＴＩＭドメインを有するＴ細胞免疫受容体」を指す。ＴＩＧＩＴ遺伝子によってコードされるタンパク質は、Ｉｇスーパーファミリータンパク質内のＣＤ２８ファミリーのメンバーである。ＴＩＧＩＴは、いくつかのクラスのＴ細胞およびナチュラルキラー（ＮＫ）細胞に発現され、リガンドＣＤ１５５およびＣＤ１１２に関してＣＤ２２６と競合することによってその免疫抑制作用を媒介する。Levin et al., Eur. J. Immunol., 2011, 41:902-915を参照されたい。ＴＩＧＩＴはまた、当該技術分野において、ＷＵＣＡＭ（Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｃｅｌｌ Ａｄｈｅｓｉｏｎ Ｍｏｌｅｃｕｌｅ、ワシントン大学細胞接着分子）およびＶＳＴＭ３（ＨＵＧＯ表記）とも称される。Levin et al., Eur J Immunol, 2011, 41:902-915を参照されたい。したがって、本出願を通じて、「ＴＩＧＩＴ」への参照は、別途示されるかまたは文脈により明らかでない限り、ＷＵＣＡＭおよび／またはＶＳＴＭ３への参照も含む。ヒトＴＩＧＩＴのヌクレオチドおよびタンパク質配列は、それぞれ、たとえば、Ｇｅｎｂａｎｋ受託番号ＮＭ１７３７９９（配列番号２１７）およびＮＰ７７６１６０（配列番号２１８）に記載されている。
「抗体」という用語は、インタクトな抗体およびその抗原結合性断片を含み、ここで、抗原結合性断片は、抗原結合性領域およびＣＨ２に位置するアスパラギン（Ｎ）２９７を含む重鎖定常領域の少なくとも一部分を含む。典型的には、「可変領域」は、抗体の抗原結合性領域を含み、結合の特異性および親和性に関与する。Fundamental Immunology 7th Edition, Paul, ed., Wolters Kluwer Health/Lippincott Williams & Wilkins (2013)を参照されたい。軽鎖は、典型的に、カッパまたはラムダのいずれかとして分類される。重鎖は、典型的に、ガンマ、ミュー、アルファ、デルタ、またはイプシロンとして分類され、これらが、それぞれ、免疫グロブリンクラスＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＤ、およびＩｇＥを定めている。
「抗体」という用語には、二価分子または二特異性分子、ダイアボディ、トリアボディ、およびテトラボディも含まれる。二価および二特異性分子は、たとえば、Kostelny et al. (1992) J. Immunol. 148:1547, Pack and Pluckthun (1992) Biochemistry 31:1579、Hollinger et al. (1993), PNAS. USA 90:6444、Gruber et al. (1994) J Immunol. 152:5368、Zhu et al. (1997) Protein Sci. 6:781、Hu et al. (1996) Cancer Res. 56:3055、Adams et al. (1993) Cancer Res. 53:4026、およびMcCartney, et al. (1995) Protein Eng. 8:301に記載されている。
「抗体」という用語は、抗体そのもの（ネイキッド抗体）または細胞傷害薬もしくは細胞増殖抑制薬にコンジュゲートされた抗体を含む。
「モノクローナル抗体」とは、実質的に均質な抗体集団から得られた抗体を指し、すなわち、集団を構成する個々の抗体は、わずかな量で存在し得る可能性のある天然に存在する変異を除き、同一である。「モノクローナル」という修飾語は、抗体が、実質的に均質な抗体集団から得られているという特徴を示すものであり、任意の特定の方法による抗体の産生を必要とするものと解釈されるものではない。たとえば、本発明により使用しようとするモノクローナル抗体は、Kohler et al. (1975) Nature 256:495によって初めて説明されたハイブリドーマ方法によって作製されてもよく、または組換えＤＮＡ方法（たとえば、米国特許第４８１６５６７号を参照されたい）によって作製されてもよい。「モノクローナル抗体」はまた、たとえば、Clackson et al. (1991) Nature, 352:624-628およびMarks et al. (1991) J. Mol. Biol., 222:581-597に記載される技法を使用して、ファージ抗体ライブラリーから単離されてもよく、または他の方法によって作製されてもよい。本明細書に記載される抗体は、モノクローナル抗体である。
モノクローナル抗体の、その標的抗原への特異的結合とは、少なくとも１０６、１０７、１０８、１０９、または１０１０Ｍ−１の親和性を意味する。特異的結合は、少なくとも１つの無関係な標的に対して生じる非特異的結合よりも程度が検出可能に高く、それとの区別が可能である。特異的結合は、特定の官能基間の結合または特定の空間適合（たとえば、ロックとキー型）の形成の結果であり得、一方で、非特異的結合は、通常、ファンデルワールス力の結果である。
基本的な抗体の構造単位は、サブユニットの四量体である。それぞれの四量体は、２つの同一なポリペプチド鎖対を含み、それぞれの対が、１つの「軽」鎖（約２５ｋＤａ）および１つの「重」鎖（約５０〜７０ｋＤａ）を有する。それぞれの鎖のアミノ末端部分には、主として抗原認識を担う約１００〜１１０個またはそれよりも多いアミノ酸の可変領域が含まれる。この可変領域は、最初、切断可能なシグナルペプチドに連結された状態で発現される。シグナルペプチドを有さない可変領域は、成熟可変領域と称されることがある。したがって、たとえば、軽鎖成熟可変領域は、軽鎖シグナルペプチドを有さない軽鎖可変領域を意味する。それぞれの鎖のカルボキシ末端部分には、主としてエフェクター機能を担う定常領域が定められる。
軽鎖は、カッパまたはラムダのいずれかとして分類される。重鎖は、ガンマ、ミュー、アルファ、デルタ、またはイプシロンとして分類され、それぞれ、抗体のアイソタイプをＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＤ、およびＩｇＥとを定めている。軽鎖および重鎖内で、可変領域および定常領域は、約１２個またはそれよりも多くのアミノ酸の「Ｊ」領域によって結合されており、重鎖には、約１０個またはそれよりも多くのアミノ酸の「Ｄ」領域も含まれる。（概して、Fundamental Immunology (Paul, W., ed., 2nd ed. Raven Press, N.Y., 1989, Ch. 7を参照されたく、これは、あらゆる目的で参照によりその全体が組み込まれる）。
それぞれの軽鎖／重鎖対の成熟可変領域が、抗体の結合性部位を形成する。したがって、インタクトな抗体は、２つの結合性部位を有する。二官能性または二重特異性抗体におけるものを除き、２つの結合性部位は、同じである。鎖は、すべてが、比較的保存されるフレームワーク領域（ＦＲ）に相補性決定領域またはＣＤＲとも称される３つの超可変領域が結合した同じ一般構造を呈する。それぞれの対の２つの鎖に由来するＣＤＲには、フレームワーク領域が並んでおり、特定のエピトープに結合することを可能にしている。Ｎ末端からＣ末端の方向に、軽鎖および重鎖のいずれも、ＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、およびＦＲ４というドメインを含む。それぞれのドメインへのアミノ酸の割当ては、Kabat, Sequences of Proteins of Immunological Interest (National Institutes of Health, Bethesda, MD, 1987 and 1991)もしくはChothia & Lesk, J. Mol. Biol. 196:901-917 (1987)、Chothia et al., Nature 342:878-883 (1989)、もしくはＫａｂａｔとＣｈｏｔｈｉａの複合型、もしくはＩＭＧＴ（ＩｍＭｕｎｏＧｅｎｅＴｉｃｓ ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ ｓｙｓｔｅｍ）、ＡｂＭ、もしくはＣｏｎｔａｃｔの定義、または他の従来的なＣＤＲ定義に従う。Ｋａｂａｔはまた、広く使用されている番号付けの慣例（Ｋａｂａｔの番号付け）も提供し、そこでは、異なる重鎖間または異なる軽鎖間の対応する残基には、同じ番号が割り当てられる。文脈により別途明らかでない限り、Ｋａｂａｔの番号付けが、可変領域内のアミノ酸の位置を指定するために使用される。文脈により別途明らかでない限り、ＥＵ番号付けが、定常領域内の位置を指定するために使用される。
「ヒト化」抗体は、非ヒト抗体の反応性を保持し、同時に、ヒトにおける免疫原性が低い、抗体である。これは、たとえば、非ヒトＣＤＲ領域を保持し、抗体の残りの部分を、そのヒト対応物で置き換えることによって達成することができる。たとえば、Morrison et al., PNAS USA, 81:6851-6855 (1984)、Morrison and Oi, Adv. Immunol., 44:65-92 (1988)、Verhoeyen et al., Science, 239:1534-1536 (1988)、Padlan, Molec. Immun., 28:489-498 (1991)、Padlan, Molec. Immun., 31(3):169-217 (1994)を参照されたい。
本明細書で使用される場合、「キメラ抗体」という用語は、（ａ）抗原結合性部位（可変領域、ＣＤＲ、またはその一部分）が異なる種の定常領域に連結されるように、定常領域またはその一部分が置き換えられた、抗体分子を指す。
「エピトープ」という用語は、抗体が結合する抗原上の部位を指す。エピトープは、連続的なアミノ酸、または１つもしくは複数のタンパク質の三次元フォールディングによって並置される非連続的なアミノ酸から形成され得る。連続的なアミノ酸から形成されるエピトープは、典型的に、変性溶媒に曝露された際に保持されるが、三次元フォールディングによって形成されるエピトープは、典型的に、変性溶媒での処置の際に失われる。エピトープは、固有の空間配置において、典型的には少なくとも３つのアミノ酸を含み、より通例的には少なくとも５つまたは８〜１０個のアミノ酸を含む。エピトープの空間配置を決定する方法としては、たとえば、Ｘ線結晶構造解析および二次元核磁気共鳴が挙げられる。たとえば、Epitope Mapping Protocols, in Methods in Molecular Biology, Vol. 66, Glenn E. Morris, Ed. (1996)を参照されたい。
同じかまたはオーバーラップするエピトープを認識する抗体は、単純なイムノアッセイにおいて、１つの抗体が、標的抗原に対する別の抗体の結合と競合する能力を示すことにより、特定することができる。抗体のエピトープは、その抗原に結合する抗体のＸ線結晶構造解析により接触残基を特定することによって定義することもできる。あるいは、２つの抗体は、一方の抗体の結合を低減または排除する抗原におけるすべてのアミノ酸変異が、他方の結合を低減または排除する場合、同じエピトープを有する。２つの抗体は、一方の抗体の結合を低減または排除する一部のアミノ酸変異が、他方の結合を低減または排除する場合、オーバーラップするエピトープを有する。
抗体間の競合は、試験下にある抗体が共通の抗原への参照抗体の特異的結合を阻害するアッセイによって、決定される（たとえば、Junghans et al., Cancer Res. 50:1495, 1990を参照されたい）。試験抗体は、過剰な試験抗体（たとえば、少なくとも２倍、５倍、１０倍、２０倍、または１００倍）が、競合的結合アッセイにおいて測定したときに、参照抗体の結合を、少なくとも５０％であるが、好ましくは７５％、９０％、または９９％阻害する場合に、参照抗体と競合する。競合アッセイによって特定される抗体（競合抗体）には、参照抗体と同じエピトープに結合する抗体、および参照抗体が結合するエピトープに、立体障害が生じるのに十分な近接性で隣接するエピトープに結合する抗体が含まれる。
「特異的に結合する」という語句は、試料中の標的に対して、非標的化合物に結合するよりも高い親和性で、アビディティで、より容易に、および／またはより長い期間、その標的に結合する分子（たとえば、抗体または抗体断片）を指す。一部の実施形態では、標的に特異的に結合する抗体は、非標的化合物よりも少なくとも２倍高い親和性で、たとえば、例として、少なくとも４倍、５倍、６倍、７倍、８倍、９倍、１０倍、２０倍、２５倍、５０倍、または１００倍高い親和性で、標的に結合する抗体である。たとえば、ＴＩＧＩＴに特異的に結合する抗体は、典型的に、非ＴＩＧＩＴ標的に対するものよりも、少なくとも２倍高い親和性で、ＴＩＧＩＴに結合する。当業者がこの定義を読むことにより、たとえば、第１の標的に特異的または優先的に結合する抗体（または部分もしくはエピトープ）が、第２の標的に特異的または優先的に結合する場合も結合しない場合もあることが理解される。そのため、「特異的結合」は、必ずしも、排他的結合を必要とするものではない（が、それを含んでもよい）。
「結合親和性」という用語は、本明細書において、２つの分子間、たとえば、抗体またはその断片と、抗原との間の非共有結合的相互作用の強度の尺度として使用される。「結合親和性」という用語は、一価相互作用（本質的活性）を説明して使用される。
一価相互作用を通じた２つの分子間、たとえば、抗体またはその断片と、抗原との間の結合親和性は、解離定数（ＫＤ）の決定によって定量することができる。次に、ＫＤは、非限定的な例として、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）方法（Ｂｉａｃｏｒｅ（商標））を使用して、複合体の形成および解離の動態の測定によって決定することができる。一価複合体の会合および解離に対応する速度定数は、それぞれ、結合速度定数ｋａ（またはｋｏｎ）および解離速度定数ｋｄ（またはｋｏｆｆ）と称される。ＫＤは、等式ＫＤ＝ｋｄ／ｋａによって、ｋａおよびｋｄに関連している。解離定数の値は、周知の方法によって直接的に決定することができ、たとえば、Caceci et al. (1984, Byte 9: 340-362)に記載されるものなどの方法によって、複合体混合物に関しても計算することができる。たとえば、ＫＤは、Wong & Lohman(1993, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90: 5428-5432)によって開示されるものなどの二重フィルターニトロセルロースフィルター結合アッセイを使用して確立することができる。たとえば、ＥＬＩＳＡ、ウエスタンブロット、ＲＩＡ、およびフローサイトメトリー分析、ならびに本明細書の他の箇所において例示されている他のアッセイを含め、リガンド、たとえば、抗体の、標的抗原に対する結合能力を評価するための他の標準的なアッセイは、当該技術分野において公知である。抗体の結合動態および結合親和性は、当該技術分野において公知であるか、または以下の実施例の節において記載されている標準的なアッセイ、たとえば、例として、Ｂｉａｃｏｒｅ（商標）システムを使用する表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）、結合平衡除外アッセイ（ｋｉｎｅｔｉｃ ｅｘｃｌｕｓｉｏｎ ａｓｓａｙ）、たとえば、ＫｉｎＥｘＡ（登録商標）、およびＢｉｏＬａｙｅｒインターフェロメトリー（たとえば、ＦｏｒｔｅＢｉｏ（登録商標）Ｏｃｔｅｔプラットフォームを使用する）によっても、評価することができる。一部の実施形態では、結合親和性は、ＢｉｏＬａｙｅｒインターフェロメトリーアッセイを使用して決定される。たとえば、Wilson et al., Biochemistry and Molecular Biology Education, 38:400-407 (2010)、Dysinger et al., J. Immunol. Methods, 379:30-41 (2012)、およびEstep et al., Mabs, 2013, 5:270-278を参照されたい。
「交差反応する」という用語は、本明細書で使用される場合、抗体が、その抗体が生じた対象である抗原以外の抗原に結合する能力を指す。一部の実施形態では、交差反応性は、抗体が、その抗体が生じた対象である抗原ではない別の種に由来する抗原に結合する能力を指す。非限定的な例として、ヒトＴＩＧＩＴ抗原に対して生じた本明細書に記載される抗ＴＩＧＩＴ抗体は、異なる種（たとえば、マウスまたはサル）に由来するＴＩＧＩＴとの交差反応性を示し得る。
「単離された」抗体とは、その天然の環境の構成成分から特定され、分離および／もしくは回収されている抗体、ならびに／または組換えで産生された抗体を指し得る。「精製された抗体」とは、典型的に、干渉するタンパク質およびその産生もしくは精製により生じる他の混入物から少なくとも５０％ ｗ／ｗ純粋である抗体であるが、モノクローナル抗体が、その使用を容易にすることが意図される過剰な薬学的に許容される担体または他のビヒクルと組み合わされる可能性を排除するものではない。干渉タンパク質および他の混入物としては、たとえば、抗体が単離されるかまたは組換えで産生される細胞の細胞内成分を挙げることができる。モノクローナル抗体は、干渉タンパク質および産生もしくは精製による混入物から、少なくとも６０％、７０％、８０％、９０％、９５、または９９％ ｗ／ｗ純粋な場合がある。本明細書に記載される抗体は、ラット、キメラ、ベニヤ化、およびヒト化抗体を含め、単離および／または精製された形態で提供され得る。
「免疫−腫瘍学剤」という用語は、対象において（たとえば、腫瘍成長を阻害するための免疫応答を刺激する際に）がんに対する免疫応答を増強、刺激、または上方調節する薬剤を指す。一部の実施形態では、免疫−腫瘍学剤は、小分子、抗体、ペプチド、タンパク質、環状ペプチド、ペプチド模倣体、ポリヌクレオチド、阻害性ＲＮＡ、アプタマー、薬物化合物、または他の化合物である。一部の実施形態では、免疫−腫瘍学剤は、ＰＤ−１またはＰＤ−１経路のアンタゴニストまたは阻害剤である。
「対象」、「患者」、「個体」などの用語は、互換可能に使用され、示される場合を除き、哺乳動物、たとえば、ヒトおよび非ヒト霊長類、ならびにウサギ、ラット、マウス、ヤギ、ブタ、および他の哺乳動物種を指す。この用語は、必ずしも、対象が特定の疾患と診断されていることを示すものではなく、典型的には、医療監視下にある個体を指す。
「治療法」、「処置」、および「軽減」という用語は、症状の重症度における任意の低減を指す。がんを処置する場合、処置とは、たとえば、腫瘍サイズ、がん細胞の数、増殖速度、転移活性、非がん細胞の細胞死などを低減することを指す。本明細書で使用される場合、「処置する」および「予防する」という用語は、絶対的な用語であることを意図するものではない。処置および予防は、発症における任意の遅延、症状の軽減、患者生存率の改善、生存期間もしくは生存率の増加などを指し得る。処置および予防は、症状が、本明細書に記載される処置なしの患者におけるものよりも低い頻度もしくは重症度であるような、完全（検出可能な症状が残っていない）であっても部分的であってもよい。処置の効果は、処置を受けていない個体もしくは個体のプールと比較してもよく、または処置の前もしくは処置の間の異なる時点における同じ患者と比較してもよい。一部の態様では、疾患の重症度は、たとえば、投与前の個体または処置を受けていない対照個体と比較して、少なくとも１０％低減される。一部の態様では、疾患の重症度は、少なくとも２５％、５０％、７５％、８０％、もしくは９０％低減されるか、または一部の事例では、標準的な診断技法を使用して、もはや検出することができない。
本明細書で使用される場合、薬剤（たとえば、本明細書に記載される抗体）の「治療量」または「治療有効量」とは、対象における疾患（たとえば、がん）の症状を予防、緩和、排除、軽減、またはその重症度を低減させる薬剤の量である。
「投与する」、「投与される」、または「投与すること」という用語は、薬剤、化合物、または組成物を、所望される生物学的作用部位へと送達する方法を指す。これらの方法としては、局所送達、非経口送達、静脈内送達、皮内送達、筋肉内送達、結腸送達、直腸送達、または腹腔内送達が挙げられるが、これらに限定されない。必要に応じて、本明細書に記載される薬剤および方法とともに用いられる投与技法としては、たとえば、Goodman and Gilman, The Pharmacological Basis of Therapeutics, current ed.; Pergamon; and Remington’s, Pharmaceutical Sciences (current edition), Mack Publishing Co., Easton, PAにおいて考察されているものが挙げられる。
ＩＩＩ．ＴＩＧＩＴに対する抗体
一態様では、ヒトＴＩＧＩＴ（ＩｇドメインおよびＩＴＩＭドメインを有するＴ細胞免疫受容体）に結合する抗体が、提供される。本明細書に記載されるように、一部の実施形態では、抗ＴＩＧＩＴ抗体は、ＴＩＧＩＴと、リガンドＣＤ１５５およびＣＤ１１２のうちの一方または両方との間の相互作用を阻害する。一部の実施形態では、抗ＴＩＧＩＴ抗体は、機能性バイオアッセイにおいて、ＴＩＧＩＴとＣＤ１５５との間の相互作用を阻害し、ＣＤ１５５−ＣＤ２２６シグナル伝達が生じるのを可能にする。一部の実施形態では、抗ＴＩＧＩＴ抗体は、抗ＰＤ−１剤（たとえば、抗ＰＤ−１抗体）または抗ＰＤ−Ｌ１剤（たとえば、抗ＰＤ−Ｌ１抗体）との相乗作用を示す。
本発明者らは、驚くべきことに、アフコシル化ＩｇＧ１抗体で達成することができるような、増強されたエフェクター機能を有する抗ＴＩＧＩＴ抗体が、Ｔｒｅｇ細胞を枯渇させ、ｉｎ ｖｉｖｏにおいて改善された有効性を示すことを発見した。したがって、様々な実施形態では、アフコシル化抗ＴＩＧＩＴ抗体が、提供される。
抗ＴＩＧＩＴ抗体の例示的な特徴
一部の実施形態では、抗ＴＩＧＩＴ抗体、たとえば、アフコシル化抗ＴＩＧＩＴ抗体は、ヒトＴＩＧＩＴタンパク質（配列番号２１８）またはその一部分に、高い親和性で結合する。一部の実施形態では、抗体は、ヒトＴＩＧＩＴに対して、５ｎＭ未満、１ｎＭ未満、５００ｐＭ未満、２５０ｐＭ未満、１５０ｐＭ未満、１００ｐＭ未満、５０ｐＭ未満、４０ｐＭ未満、３０ｐＭ未満、２０ｐＭ未満、または約１０ｐＭ未満の結合親和性（ＫＤ）を有する。一部の実施形態では、抗体は、ヒトＴＩＧＩＴに対して、５０ｐＭ未満の結合親和性（ＫＤ）を有する。一部の実施形態では、抗体は、ヒトＴＩＧＩＴに対して、約１ｐＭ〜約５ｎＭ、たとえば、約１ｐＭ〜約１ｎＭ、約１ｐＭ〜約５００ｐＭ、約５ｐＭ〜約２５０ｐＭ、または約１０ｐＭ〜約１００ｐＭの範囲内のＫＤを有する。
一部の実施形態では、高い親和性でヒトＴＩＧＩＴに結合することに加えて、アフコシル化抗ＴＩＧＩＴ抗体は、カニクイザル（「ｃｙｎｏ」）ＴＩＧＩＴ（たとえば、配列番号２１９の配列を有するカニクイザルＴＩＧＩＴタンパク質）および／またはマウスＴＩＧＩＴ（たとえば、配列番号２２０の配列を有するマウスＴＩＧＩＴタンパク質）との交差反応性を示す。一部の実施形態では、抗ＴＩＧＩＴ抗体は、１００ｎＭまたはそれ未満の結合親和性（ＫＤ）で、マウスＴＩＧＩＴ（たとえば、配列番号２２０の配列を有するマウスＴＩＧＩＴ）に結合する。一部の実施形態では、抗ＴＩＧＩＴ抗体は、５ｎＭまたはそれ未満のＫＤで、ヒトＴＩＧＩＴに結合し、１００ｎＭまたはそれ未満のＫＤで、マウスＴＩＧＩＴと交差反応する。一部の実施形態では、ヒトＴＩＧＩＴに結合する抗ＴＩＧＩＴ抗体はまた、カニクイザルＴＩＧＩＴおよびマウスＴＩＧＩＴの両方との交差反応性も示す。
一部の実施形態では、抗体の交差反応性は、細胞（たとえば、ヒトＴＩＧＩＴ、カニクイザルＴＩＧＩＴ、もしくはマウスＴＩＧＩＴを発現する細胞系、またはＴＩＧＩＴを内因的に発現する初代細胞、たとえば、ヒトＴＩＧＩＴ、カニクイザルＴＩＧＩＴ、もしくはマウスＴＩＧＩＴを内因的に発現する初代Ｔ細胞）上に発現されるＴＩＧＩＴへの抗ＴＩＧＩＴ抗体の特異的結合を検出することによって、決定される。一部の実施形態では、抗体の結合および抗体の交差反応性は、精製または組換えＴＩＧＩＴ（たとえば、精製もしくは組換えヒトＴＩＧＩＴ、精製もしくは組換えカニクイザルＴＩＧＩＴ、または精製もしくは組換えマウスＴＩＧＩＴ）、またはＴＩＧＩＴを含むキメラタンパク質（たとえば、ヒトＴＩＧＩＴ、カニクイザルＴＩＧＩＴ、もしくはマウスＴＩＧＩＴを含むＦｃ融合タンパク質、またはヒトＴＩＧＩＴ、カニクイザルＴＩＧＩＴ、もしくはマウスＴＩＧＩＴを含むＨｉｓタグ化タンパク質）への抗ＴＩＧＩＴ抗体の特異的結合を検出することによって、決定される。
結合親和性、結合動態、および交差反応性を分析するための方法は、当該技術分野において公知である。たとえば、Ernst et al., Determination of Equilibrium Dissociation Constants, Therapeutic Monoclonal Antibodies (Wiley & Sons ed. 2009)を参照されたい。これらの方法としては、固相結合アッセイ（たとえば、ＥＬＩＳＡアッセイ）、免疫沈降、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ、たとえば、Ｂｉａｃｏｒｅ（商標）（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ、Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ、ＮＪ））、結合平衡除外アッセイ（たとえば、ＫｉｎＥｘＡ（登録商標））、フローサイトメトリー、蛍光活性化細胞分取（ＦＡＣＳ）、ＢｉｏＬａｙｅｒインターフェロメトリー（たとえば、Ｏｃｔｅｔ（商標）（ＦｏｒｔｅＢｉｏ， Ｉｎｃ．、Ｍｅｎｌｏ Ｐａｒｋ、ＣＡ））、およびウエスタンブロット分析が挙げられるが、これらに限定されない。ＳＰＲ技法は、たとえば、Hahnfeld et al. Determination of Kinetic Data Using SPR Biosensors, Molecular Diagnosis of Infectious Diseases (2004)において考察されている。典型的なＳＰＲ実験では、一方の相互作用物質（標的または標的化剤）を、フローセル内のＳＰＲ活性金コーティングガラススライドに固定化し、他方の相互作用物質を含む試料を、表面全体に流れるように導入する。所与の波長の光を表面上に照らしたときに、金の光学反射率に対する変化は、結合および結合動態を示す。一部の実施形態では、結合平衡除外アッセイを使用して、親和性を決定する。この技法は、たとえば、Darling et al., Assay and Drug Development Technologies Vol. 2, number 6 647-657 (2004)に記載されている。一部の実施形態では、ＢｉｏＬａｙｅｒインターフェロメトリーアッセイを使用して、親和性を決定する。この技法は、たとえば、Wilson et al., Biochemistry and Molecular Biology Education, 38:400-407 (2010); Dysinger et al., J. Immunol. Methods, 379:30-41 (2012)に記載されている。
一部の実施形態では、本明細書に提供される抗ＴＩＧＩＴ抗体は、ＴＩＧＩＴとリガンドＣＤ１５５との間の相互作用を阻害する。一部の実施形態では、本明細書に提供される抗ＴＩＧＩＴ抗体は、ＴＩＧＩＴとリガンドＣＤ１１２との間の相互作用を阻害する。一部の実施形態では、本明細書に提供される抗ＴＩＧＩＴ抗体は、ＴＩＧＩＴと、リガンドＣＤ１５５およびＣＤ１１２の両方との間の相互作用を阻害する。
一部の実施形態では、抗ＴＩＧＩＴ抗体がＴＩＧＩＴとＣＤ１５５および／またはＣＤ１１２との間の相互作用を阻害する能力は、ＴＩＧＩＴとＣＤ１５５またはＣＤ１１２との間の物理的な相互作用が減少するかどうかを結合アッセイにおいて測定することによって評価される。一部の実施形態では、結合アッセイは、競合的結合アッセイである。このアッセイは、ＥＬＩＳＡアッセイ、フローサイトメトリー、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）アッセイ（たとえば、Ｂｉａｃｏｒｅ（商標））、またはＢｉｏＬａｙｅｒインターフェロメトリー（たとえば、ＦｏｒｔｅＢｉｏ Ｏｃｔｅｔ（商標））などであるがこれらに限定されない様々な形式で、実行することができる。たとえば、Duff et al., Biochem J., 2009, 419:577-584、Dysinger et al., J. Immunol. Methods, 379:30-41 (2012)、およびEstep et al, Mabs, 2013, 5:270-278を参照されたい。
一部の実施形態では、抗ＴＩＧＩＴ抗体は、機能性バイオアッセイにおいて、たとえば、機能性細胞アッセイにおいて、ＴＩＧＩＴとＣＤ１５５との間の相互作用を阻害し、ここで、ＴＩＧＩＴ／ＣＤ１５５相互作用の阻害は、細胞におけるＣＤ１５５−ＣＤ２２６シグナル伝達の活性化（たとえば、下流レポーターの活性化を介した）を測定することによって評価される。非限定的で例示的な機能性細胞アッセイは、以下の実施例の節に記載されている。この例示的な機能性アッセイでは、ルシフェラーゼ発現には、ＴＣＲの結合およびＣＤ１５５−ＣＤ２２６に由来する共刺激シグナルが必要である。第１の細胞（「エフェクターＴ細胞」とも称される）は、細胞表面上にＴＣＲ複合体、ＴＩＧＩＴ、およびＣＤ２２６を発現し、ルシフェラーゼ遺伝子を含む。第２の細胞（「人工抗原提示細胞」とも称される）は、ＴＣＲ活性化因子およびＣＤ１５５を発現する。抗ＴＩＧＩＴ抗体の不在下における細胞の共培養では、ＣＤ１５５−ＣＤ２２６によるエフェクター細胞の共刺激を阻害するＴＩＧＩＴ−ＣＤ１５５相互作用が生じ、エフェクター細胞によるルシフェラーゼの発現が防止される。ＴＩＧＩＴとＣＤ１５５との間の相互作用を阻害する抗ＴＩＧＩＴ抗体の存在下では、ＣＤ１５５およびＣＤ２２６が相互作用し、第１の細胞におけるルシフェラーゼ発現を駆動させる共刺激シグナルを産生させることができる。そのような機能性細胞アッセイは、当該技術分野、たとえば、Cong et al., Genetic Engineering and Biotechnology News, 2015, 35(10):16-17において説明されており、また、市販入手も可能である（たとえば、ＴＩＧＩＴ／ＣＤ１５５遮断バイオアッセイキット、Ｐｒｏｍｅｇａ Ｃｏｒｐ．、Ｍａｄｉｓｏｎ、ＷＩ）。一部の実施形態では、ＴＩＧＩＴとＣＤ１５５との間の相互作用を阻害する抗ＴＩＧＩＴ抗体は、（たとえば、ＴＩＧＩＴ／ＣＤ１５５遮断バイオアッセイキットなどの細胞アッセイにおいて測定したときに）ＣＤ１５５−ＣＤ２２６シグナル伝達の活性化のレベルまたは量を、抗ＴＩＧＩＴ抗体の不在下におけるＣＤ１５５−ＣＤ２２６シグナル伝達のレベルまたは量と比較して、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、またはそれを上回って増加させる。一部の実施形態では、ＴＩＧＩＴとＣＤ１５５との間の相互作用を阻害する抗ＴＩＧＩＴ抗体は、（たとえば、ＴＩＧＩＴ／ＣＤ１５５遮断バイオアッセイキットなどの細胞アッセイにおいて測定したときに）ＣＤ１５５−ＣＤ２２６シグナル伝達の活性化のレベルまたは量を、抗ＴＩＧＩＴ抗体の不在下におけるＣＤ１５５−ＣＤ２２６シグナル伝達のレベルまたは量と比較して、少なくとも約１．２倍、少なくとも約１．５倍、少なくとも約２倍、少なくとも約３倍、少なくとも約４倍、少なくとも約５倍、少なくとも約６倍、少なくとも約７倍、少なくとも約８倍、少なくとも約９倍、少なくとも約１０倍、またはそれを上回って増加させる。
一部の実施形態では、ヒトＴＩＧＩＴに結合する（ならびに必要に応じて、カニクイザルおよび／もしくはマウスＴＩＧＩＴとの交差反応性を示し、かつ／または必要に応じて、ＴＩＧＩＴとＣＤ１５５および／もしくはＣＤ１１２との間の相互作用を阻害する）抗ＴＩＧＩＴ抗体は、抗ＰＤ−１剤（たとえば、抗ＰＤ−１抗体）との相乗作用を示す。一部の実施形態では、抗ＴＩＧＩＴ抗体は、抗ＰＤ−１剤（たとえば、抗ＰＤ−１抗体）の作用を、少なくとも約１．２倍、少なくとも約１．５倍、少なくとも約２倍、少なくとも約３倍、少なくとも約４倍、少なくとも約５倍、少なくとも約６倍、少なくとも約７倍、少なくとも約８倍、少なくとも約９倍、少なくとも約１０倍、またはそれを上回って増強させる。
一部の実施形態では、抗ＴＩＧＩＴ抗体は、機能性バイオアッセイ、たとえば、機能性細胞アッセイにおいて、抗ＰＤ−１剤（たとえば、抗ＰＤ−１抗体）との相乗作用を示し、ここで、ＴＩＧＩＴシグナル伝達の阻害およびＰＤ−１シグナル伝達の阻害は、エフェクター細胞におけるシグナル伝達の活性化を測定することによって評価される。非限定的で例示的な機能性細胞アッセイは、以下の実施例の節に記載されている。この例示的な機能性アッセイにおいて、第１の細胞（「エフェクターＴ細胞」とも称される）は、細胞表面上にＴＣＲ複合体、ＴＩＧＩＴ、ＣＤ２２６、およびＰＤ−１を発現し、ルシフェラーゼ遺伝子を含む。第２の細胞（「人工抗原提示細胞」とも称される）は、ＴＣＲ活性化因子、ＣＤ１５５、およびＰＤ−Ｌ１を発現する。エフェクター細胞によるルシフェラーゼ遺伝子の発現は、（１）ＴＩＧＩＴ−ＣＤ１５５相互作用を遮断し、それによってＣＤ１５５−ＣＤ２２６相互作用、およびそれに続くエフェクター細胞によるルシフェラーゼ発現の共刺激を可能にすること、または（２）ＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１相互作用を遮断し、それによって、エフェクター細胞によるルシフェラーゼ発現の阻害を緩和することのいずれかまたは両方によって、活性化される。抗ＴＩＧＩＴ抗体が、抗ＰＤ−１剤または抗ＰＤ−Ｌ１剤との相乗作用を示すかどうかを決定するために、抗ＴＩＧＩＴ抗体および抗ＰＤ−１剤または抗ＰＤ−Ｌ１剤の不在下または存在下におけるルシフェラーゼ発現のレベルを、測定および定量することができる。そのような機能性細胞アッセイは、当該技術分野において説明されており（たとえば、Cong et al., Genetic Engineering and Biotechnology News, 2015, 35(10):16-17）、また、市販入手も可能である（たとえば、ＰＤ−１／ＴＩＧＩＴ組合せバイオアッセイキット、Ｐｒｏｍｅｇａ Ｃｏｒｐ．、Ｍａｄｉｓｏｎ、ＷＩ）。
一部の実施形態では、抗ＴＩＧＩＴ抗体の有効性、ならびに抗ＴＩＧＩＴ抗体が、抗ＰＤ−１剤（たとえば、抗ＰＤ−１抗体）または抗ＰＤ−Ｌ１剤（たとえば、抗ＰＤ−Ｌ１抗体）と相乗作用して阻害するかどうかは、ｉｎ ｖｉｖｏモデル、たとえば、ｉｎ ｖｉｖｏ腫瘍モデルを使用して測定することができる。たとえば、本明細書に記載される抗ＴＩＧＩＴ抗体の有効性、または抗ＰＤ−１剤もしくは抗ＰＤ−Ｌ１剤と組み合わせて投与した場合の本明細書に記載される抗ＴＩＧＩＴ抗体の有効性は、同系マウス腫瘍モデルを使用して評価することができる。適切な同系腫瘍モデルは、当該技術分野において説明されている。たとえば、Rios-Doria et al., Neoplasia, 2015, 17:661-670、およびMoynihan et al., Nature Medicine, 2016, doi:10.1038/nm.4200を参照されたい。一部の実施形態では、抗ＴＩＧＩＴ抗体は、ｉｎ ｖｉｖｏモデルにおいて、腫瘍のサイズまたは全体的な腫瘍の数を、対照または参照値と比較して（たとえば、未処置対照における腫瘍サイズまたは全体的な腫瘍の数と比較して）、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、またはそれを上回って低減させる。
一部の実施形態では、抗ＴＩＧＩＴ抗体は、配列番号２１８を参照して番号付けしてアミノ酸８１位および８２位のうちの一方または両方を含むヒトＴＩＧＩＴのエピトープを認識する。一部の実施形態では、抗ＴＩＧＩＴ抗体は、８１位におけるＰｈｅを含むエピトープを認識する。一部の実施形態では、抗ＴＩＧＩＴ抗体は、８２位におけるＬｙｓまたはＳｅｒを含むエピトープを認識する。一部の実施形態では、抗ＴＩＧＩＴ抗体は、８１位におけるＰｈｅおよび８２位におけるＬｙｓを含むエピトープを認識する。一部の実施形態では、抗ＴＩＧＩＴ抗体は、８１位におけるＰｈｅおよび８２位におけるＳｅｒを含むエピトープを認識する。
一部の実施形態では、抗ＴＩＧＩＴ抗体は、アミノ酸８１位および８２位のうちの一方または両方を含む線状エピトープ（たとえば、８１位におけるＰｈｅおよび８２位におけるＬｙｓもしくはＳｅｒを含む線状エピトープ）を認識する。一部の実施形態では、抗ＴＩＧＩＴ抗体は、アミノ酸８１位および８２位のうちの一方または両方を含む非連続的エピトープ（たとえば、８１位におけるＰｈｅおよび８２位におけるＬｙｓもしくはＳｅｒを含む非連続的エピトープ）を認識する。
一部の実施形態では、抗ＴＩＧＩＴ抗体は、アミノ酸５１位、５２位、５３位、５４位、５５位、７３位、７４位、７５位、７６位、７７位、７９位、８３位、８４位、８５位、８６位、８７位、８８位、８９位、９０位、９１位、９２位、または９３位のうちの１つまたは複数（たとえば、１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、７つ、８つ、９つ、１０個、１２個、１３個、１４個、１５個、またはそれよりも多く）をさらに含むヒトＴＩＧＩＴ上のエピトープに結合する。一部の実施形態では、抗ＴＩＧＩＴ抗体は、以下の：５１位におけるＴｈｒ、５２位におけるＡｌａ、５３位におけるＧｌｕもしくはＧｌｎ、５４位におけるＶａｌ、５５位におけるＴｈｒ、７３位におけるＬｅｕ、７４位におけるＧｌｙ、７５位におけるＴｒｐ、７６位におけるＨｉｓ、７７位におけるＶａｌもしくはＩｌｅ、７９位におけるＳｅｒもしくはＰｒｏ、８３位におけるＡｓｐ、８４位におけるＡｒｇ、８５位におけるＶａｌ、８６位におけるＶａｌもしくはＡｌａ、８７位におけるＰｒｏ、８８位におけるＧｌｙ、８９位におけるＰｒｏ、９０位におけるＳｅｒもしくはＧｌｙ、９１位におけるＬｅｕ、９２位におけるＧｌｙ、または９３位におけるＬｅｕのうちの１つまたは複数（たとえば、１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、７つ、８つ、９つ、１０個、１２個、１３個、１４個、１５個、またはそれよりも多く）をさらに含むヒトＴＩＧＩＴ上のエピトープに結合する。一部の実施形態では、抗ＴＩＧＩＴ抗体は、アミノ酸残基Ｔｈｒ５１、Ａｌａ５２、Ｇｌｎ５３、Ｖａｌ５４、Ｔｈｒ５５、Ｌｅｕ７３、Ｇｌｙ７４、Ｔｒｐ７５、Ｈｉｓ７６、Ｉｌｅ７７、Ｐｒｏ７９、Ａｓｐ８３、Ａｒｇ８４、Ｖａｌ８５、Ａｌａ８６、Ｐｒｏ８７、Ｇｌｙ８８、Ｐｒｏ８９、Ｇｌｙ９０、Ｌｅｕ９１、Ｇｌｙ９２、およびＬｅｕ９３のうちの１つまたは複数（たとえば、１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、７つ、８つ、９つ、１０個、１２個、１３個、１４個、１５個、またはそれよりも多く）をさらに含むヒトＴＩＧＩＴ上のエピトープに結合する。
一部の実施形態では、抗ＴＩＧＩＴ抗体は、８１位におけるＰｈｅおよび８２位におけるＬｙｓまたはＳｅｒを含み、５１位におけるＴｈｒ、５２位におけるＡｌａ、５３位におけるＧｌｕもしくはＧｌｎ、５４位におけるＶａｌ、および／または５５位におけるＴｈｒをさらに含むエピトープを認識する。一部の実施形態では、抗ＴＩＧＩＴ抗体は、８１位におけるＰｈｅおよび８２位におけるＬｙｓまたはＳｅｒを含み、７４位におけるＧｌｙ、７５位におけるＴｒｐ、７６位におけるＨｉｓ、および／または７７位におけるＶａｌもしくはＩｌｅをさらに含むエピトープを認識する。一部の実施形態では、抗ＴＩＧＩＴ抗体は、８１位におけるＰｈｅおよび８２位におけるＬｙｓまたはＳｅｒを含み、８７位におけるＰｒｏ、８８位におけるＧｌｙ、８９位におけるＰｒｏ、９０位におけるＳｅｒもしくはＧｌｙ、９１位におけるＬｅｕ、９２位におけるＧｌｙ、および／または９３位におけるＬｅｕをさらに含むエピトープを認識する。一部の実施形態では、抗ＴＩＧＩＴ抗体は、アミノ酸残基Ｔｈｒ５１、Ａｌａ５２、Ｇｌｎ５３、Ｖａｌ５４、Ｔｈｒ５５、Ｇｌｙ７４、Ｔｒｐ７５、Ｈｉｓ７６、Ｉｌｅ７７、Ｐｈｅ８１、Ｌｙｓ８２、Ｐｒｏ８７、Ｇｌｙ８８、Ｐｒｏ８９、Ｇｌｙ９０、Ｌｅｕ９１、Ｇｌｙ９２、およびＬｅｕ９３を含むエピトープを認識する。
一部の実施形態では、抗ＴＩＧＩＴ抗体は、８１位におけるＰｈｅおよび８２位におけるＬｙｓまたはＳｅｒを含み、５２位におけるＡｌａおよび／または５３位におけるＧｌｕもしくはＧｌｎをさらに含むエピトープを認識する。一部の実施形態では、抗ＴＩＧＩＴ抗体は、８１位におけるＰｈｅおよび８２位におけるＬｙｓまたはＳｅｒを含み、７３位におけるＬｅｕ、７４位におけるＧｌｙ、および／または７５位におけるＴｒｐをさらに含むエピトープを認識する。一部の実施形態では、抗ＴＩＧＩＴ抗体は、８１位におけるＰｈｅおよび８２位におけるＬｙｓまたはＳｅｒを含み、８３位におけるＡｓｐ、８４位におけるＡｒｇ、８５位におけるＶａｌ、および／または８６位におけるＶａｌもしくはＡｌａをさらに含むエピトープを認識する。一部の実施形態では、抗ＴＩＧＩＴ抗体は、アミノ酸残基Ａｌａ５２、Ｇｌｎ５３、Ｌｅｕ７３、Ｇｌｙ７４、Ｔｒｐ７５、Ｐｒｏ７９、Ｐｈｅ８１、Ｌｙｓ８２、Ａｓｐ８３、Ａｒｇ８４、Ｖａｌ８５、およびＡｌａ８６を含むエピトープを認識する。
一部の実施形態では、抗ＴＩＧＩＴ抗体は、ヒトＴＩＧＩＴ（配列番号２１８）の残基６８〜８２に対応する配列ＩＣＮＡＤＬＧＷＨＩＳＰＳＦＫ（配列番号２５８）を含むヒトＴＩＧＩＴのエピトープを認識する。一部の実施形態では、抗ＴＩＧＩＴ抗体は、配列ＩＣＮＡＤＬＧＷＨＩＳＰＳＦＫ（配列番号２５８）からなるヒトＴＩＧＩＴのエピトープを認識する。
ある特定の抗ＴＩＧＩＴ抗体配列
一部の実施形態では、ヒトＴＩＧＩＴに結合し、必要に応じて、カニクイザルＴＩＧＩＴおよび／またはマウスＴＩＧＩＴとの交差反応性を示す、抗ＴＩＧＩＴ抗体は、本明細書に記載される以下の抗体：クローン２、クローン２Ｃ、クローン３、クローン５、クローン１３、クローン１３Ａ、クローン１３Ｂ、クローン１３Ｃ、クローン１３Ｄ、クローン１４、クローン１６、クローン１６Ｃ、クローン１６Ｄ、クローン１６Ｅ、クローン１８、クローン２１、クローン２２、クローン２５、クローン２５Ａ、クローン２５Ｂ、クローン２５Ｃ、クローン２５Ｄ、クローン２５Ｅ、クローン２７、またはクローン５４のうちのいずれかに由来する軽鎖可変領域配列もしくはその一部分、および／または重鎖可変領域配列もしくはその一部分を含む。抗ＴＩＧＩＴ抗体クローン２、クローン２Ｃ、クローン３、クローン５、クローン１３、クローン１３Ａ、クローン１３Ｂ、クローン１３Ｃ、クローン１３Ｄ、クローン１４、クローン１６、クローン１６Ｃ、クローン１６Ｄ、クローン１６Ｅ、クローン１８、クローン２１、クローン２２、クローン２５、クローン２５Ａ、クローン２５Ｂ、クローン２５Ｃ、クローン２５Ｄ、クローン２５Ｅ、クローン２７、およびクローン５４のＣＤＲ、軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）、および重鎖可変ドメイン（ＶＨ）のアミノ酸配列は、以下の配列表に記載されている。
一部の実施形態では、抗ＴＩＧＩＴ抗体は、配列番号１、配列番号１９、配列番号３７、配列番号５５、配列番号７３、配列番号９１、配列番号１０９、配列番号１２７、配列番号１４５、配列番号１６３、配列番号１８１、配列番号１９９、配列番号２４５、配列番号２４６、配列番号２４７、配列番号２４８、配列番号２４９、配列番号２５０、配列番号２５１、配列番号２５２、配列番号２５３、配列番号２５４、配列番号２５５、配列番号２５６、または配列番号２５７に対して少なくとも９０％の配列同一性（たとえば、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％の配列同一性）を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）を含む。一部の実施形態では、抗ＴＩＧＩＴ抗体は、配列番号１、配列番号１９、配列番号３７、配列番号５５、配列番号７３、配列番号９１、配列番号１０９、配列番号１２７、配列番号１４５、配列番号１６３、配列番号１８１、配列番号１９９、配列番号２４５、配列番号２４６、配列番号２４７、配列番号２４８、配列番号２４９、配列番号２５０、配列番号２５１、配列番号２５２、配列番号２５３、配列番号２５４、配列番号２５５、配列番号２５６、または配列番号２５７のアミノ酸配列を含むＶＨを含む。一部の実施形態では、参照配列（たとえば、配列番号１、配列番号１９、配列番号３７、配列番号５５、配列番号７３、配列番号９１、配列番号１０９、配列番号１２７、配列番号１４５、配列番号１６３、配列番号１８１、配列番号１９９、配列番号２４５、配列番号２４６、配列番号２４７、配列番号２４８、配列番号２４９、配列番号２５０、配列番号２５１、配列番号２５２、配列番号２５３、配列番号２５４、配列番号２５５、配列番号２５６、または配列番号２５７）に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するＶＨ配列は、参照配列と比較して１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、７つ、８つ、９つ、１０個、またはそれよりも多くの置換（たとえば、保存的置換）、挿入、または欠失を含むが、ヒトＴＩＧＩＴに結合する能力を保持し、必要に応じて、ＴＩＧＩＴへのＣＤ１５５および／またはＣＤ１１２の結合を遮断する能力を保持する。
一部の実施形態では、抗ＴＩＧＩＴ抗体は、配列番号１０、配列番号２８、配列番号４６、配列番号６４、配列番号８２、配列番号１００、配列番号１１８、配列番号１３６、配列番号１５４、配列番号１７２、配列番号１９０、または配列番号２０８に対して少なくとも９０％の配列同一性（たとえば、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％の配列同一性）を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む。一部の実施形態では、抗ＴＩＧＩＴ抗体は、配列番号１０、配列番号２８、配列番号４６、配列番号６４、配列番号８２、配列番号１００、配列番号１１８、配列番号１３６、配列番号１５４、配列番号１７２、配列番号１９０、または配列番号２０８のアミノ酸配列を含むＶＬを含む。一部の実施形態では、参照配列（たとえば、配列番号１０、配列番号２８、配列番号４６、配列番号６４、配列番号８２、配列番号１００、配列番号１１８、配列番号１３６、配列番号１５４、配列番号１７２、配列番号１９０、または配列番号２０８）に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するＶＬ配列は、参照配列と比較して１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、７つ、８つ、９つ、１０個、またはそれよりも多くの置換（たとえば、保存的置換）、挿入、または欠失を含むが、ヒトＴＩＧＩＴに結合する能力を保持し、必要に応じて、ＴＩＧＩＴへのＣＤ１５５および／またはＣＤ１１２の結合を遮断する能力を保持する。
一部の実施形態では、抗ＴＩＧＩＴ抗体は、配列番号１、配列番号１９、配列番号３７、配列番号５５、配列番号７３、配列番号９１、配列番号１０９、配列番号１２７、配列番号１４５、配列番号１６３、配列番号１８１、配列番号１９９、配列番号２４５、配列番号２４６、配列番号２４７、配列番号２４８、配列番号２４９、配列番号２５０、配列番号２５１、配列番号２５２、配列番号２５３、配列番号２５４、配列番号２５５、配列番号２５６、または配列番号２５７に対して少なくとも９０％の配列同一性（たとえば、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％の配列同一性）を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含み、配列番号１０、配列番号２８、配列番号４６、配列番号６４、配列番号８２、配列番号１００、配列番号１１８、配列番号１３６、配列番号１５４、配列番号１７２、配列番号１９０、または配列番号２０８に対して少なくとも９０％の配列同一性（たとえば、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％の配列同一性）を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域をさらに含む。一部の実施形態では、抗ＴＩＧＩＴ抗体は、配列番号１、配列番号１９、配列番号３７、配列番号５５、配列番号７３、配列番号９１、配列番号１０９、配列番号１２７、配列番号１４５、配列番号１６３、配列番号１８１、配列番号１９９、配列番号２４５、配列番号２４６、配列番号２４７、配列番号２４８、配列番号２４９、配列番号２５０、配列番号２５１、配列番号２５２、配列番号２５３、配列番号２５４、配列番号２５５、配列番号２５６、または配列番号２５７のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含み、配列番号１０、配列番号２８、配列番号４６、配列番号６４、配列番号８２、配列番号１００、配列番号１１８、配列番号１３６、配列番号１５４、配列番号１７２、配列番号１９０、または配列番号２０８のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域をさらに含む。
一部の実施形態では、抗ＴＩＧＩＴ抗体は、
（ａ）配列番号１もしくは配列番号２４５に対して少なくとも９０％の配列同一性（たとえば、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性）を有するアミノ酸配列を含むＶＨ、および配列番号１０に対して少なくとも９０％の配列同一性（たとえば、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性）を有するアミノ酸配列を含むＶＬ、
（ｂ）配列番号１９に対して少なくとも９０％の配列同一性（たとえば、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性）を有するアミノ酸配列を含むＶＨ、および配列番号２８に対して少なくとも９０％の配列同一性（たとえば、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性）を有するアミノ酸配列を含むＶＬ、
（ｃ）配列番号３７に対して少なくとも９０％の配列同一性（たとえば、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性）を有するアミノ酸配列を含むＶＨ、および配列番号４６に対して少なくとも９０％の配列同一性（たとえば、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性）を有するアミノ酸配列を含むＶＬ、
（ｄ）配列番号５５、配列番号２４６、配列番号２４７、配列番号２４８、もしくは配列番号２４９のうちのいずれか１つに対して少なくとも９０％の配列同一性（たとえば、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性）を有するアミノ酸配列を含むＶＨ、および配列番号６４に対して少なくとも９０％の配列同一性（たとえば、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性）を有するアミノ酸配列を含むＶＬ、
（ｅ）配列番号７３に対して少なくとも９０％の配列同一性（たとえば、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性）を有するアミノ酸配列を含むＶＨ、および配列番号８２に対して少なくとも９０％の配列同一性（たとえば、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性）を有するアミノ酸配列を含むＶＬ、
（ｆ）配列番号９１、配列番号２５０、配列番号２５１、もしくは配列番号２５２のうちのいずれか１つに対して少なくとも９０％の配列同一性（たとえば、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性）を有するアミノ酸配列を含むＶＨ、および配列番号１００に対して少なくとも９０％の配列同一性（たとえば、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性）を有するアミノ酸配列を含むＶＬ、
（ｇ）配列番号１０９に対して少なくとも９０％の配列同一性（たとえば、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性）を有するアミノ酸配列を含むＶＨ、および配列番号１１８に対して少なくとも９０％の配列同一性（たとえば、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性）を有するアミノ酸配列を含むＶＬ、
（ｈ）配列番号１２７に対して少なくとも９０％の配列同一性（たとえば、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性）を有するアミノ酸配列を含むＶＨ、および配列番号１３６に対して少なくとも９０％の配列同一性（たとえば、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性）を有するアミノ酸配列を含むＶＬ、
（ｉ）配列番号１４５に対して少なくとも９０％の配列同一性（たとえば、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性）を有するアミノ酸配列を含むＶＨ、および配列番号１５４に対して少なくとも９０％の配列同一性（たとえば、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性）を有するアミノ酸配列を含むＶＬ、
（ｊ）配列番号１６３、配列番号２５３、配列番号２５４、配列番号２５５、配列番号２５６、もしくは配列番号２５７のうちのいずれか１つに対して少なくとも９０％の配列同一性（たとえば、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性）を有するアミノ酸配列を含むＶＨ、および配列番号１７２に対して少なくとも９０％の配列同一性（たとえば、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性）を有するアミノ酸配列を含むＶＬ、
（ｋ）配列番号１８１に対して少なくとも９０％の配列同一性（たとえば、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性）を有するアミノ酸配列を含むＶＨ、および配列番号１９０に対して少なくとも９０％の配列同一性（たとえば、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性）を有するアミノ酸配列を含むＶＬ、または
（ｌ）配列番号１９９に対して少なくとも９０％の配列同一性（たとえば、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性）を有するアミノ酸配列を含むＶＨ、および配列番号２０８に対して少なくとも９０％の配列同一性（たとえば、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性）を有するアミノ酸配列を含むＶＬ
を含む。
一部の実施形態では、抗ＴＩＧＩＴ抗体は、
（ａ）配列番号１のアミノ酸配列を含むＶＨおよび配列番号１０のアミノ酸配列を含むＶＬ、
（ｂ）配列番号１９のアミノ酸配列を含むＶＨおよび配列番号２８のアミノ酸配列を含むＶＬ、
（ｃ）配列番号３７のアミノ酸配列を含むＶＨおよび配列番号４６のアミノ酸配列を含むＶＬ、
（ｄ）配列番号５５のアミノ酸配列を含むＶＨおよび配列番号６４のアミノ酸配列を含むＶＬ、
（ｅ）配列番号７３のアミノ酸配列を含むＶＨおよび配列番号８２のアミノ酸配列を含むＶＬ、
（ｆ）配列番号９１のアミノ酸配列を含むＶＨおよび配列番号１００のアミノ酸配列を含むＶＬ、
（ｇ）配列番号１０９のアミノ酸配列を含むＶＨおよび配列番号１１８のアミノ酸配列を含むＶＬ、
（ｈ）配列番号１２７のアミノ酸配列を含むＶＨおよび配列番号１３６のアミノ酸配列を含むＶＬ、
（ｉ）配列番号１４５のアミノ酸配列を含むＶＨおよび配列番号１５４のアミノ酸配列を含むＶＬ、
（ｊ）配列番号１６３のアミノ酸配列を含むＶＨおよび配列番号１７２のアミノ酸配列を含むＶＬ、
（ｋ）配列番号１８１のアミノ酸配列を含むＶＨおよび配列番号１９０のアミノ酸配列を含むＶＬ、
（ｌ）配列番号１９９のアミノ酸配列を含むＶＨおよび配列番号２０８のアミノ酸配列を含むＶＬ、または
（ｍ）配列番号２４５のアミノ酸配列を含むＶＨおよび配列番号１０のアミノ酸配列を含むＶＬ、または
（ｎ）配列番号２４６のアミノ酸配列を含むＶＨおよび配列番号６４のアミノ酸配列を含むＶＬ、または
（ｏ）配列番号２４７のアミノ酸配列を含むＶＨおよび配列番号６４のアミノ酸配列を含むＶＬ、または
（ｐ）配列番号２４８のアミノ酸配列を含むＶＨおよび配列番号６４のアミノ酸配列を含むＶＬ、
（ｑ）配列番号２４９のアミノ酸配列を含むＶＨおよび配列番号６４のアミノ酸配列を含むＶＬ、または
（ｒ）配列番号２５０のアミノ酸配列を含むＶＨおよび配列番号１００のアミノ酸配列を含むＶＬ、または
（ｓ）配列番号２５１のアミノ酸配列を含むＶＨおよび配列番号１００のアミノ酸配列を含むＶＬ、または
（ｔ）配列番号２５２のアミノ酸配列を含むＶＨおよび配列番号１００のアミノ酸配列を含むＶＬ、または
（ｕ）配列番号２５３のアミノ酸配列を含むＶＨおよび配列番号１７２のアミノ酸配列を含むＶＬ、または
（ｖ）配列番号２５４のアミノ酸配列を含むＶＨおよび配列番号１７２のアミノ酸配列を含むＶＬ、または
（ｗ）配列番号２５５のアミノ酸配列を含むＶＨおよび配列番号１７２のアミノ酸配列を含むＶＬ、または
（ｘ）配列番号２５６のアミノ酸配列を含むＶＨおよび配列番号１７２のアミノ酸配列を含むＶＬ、または
（ｙ）配列番号２５７のアミノ酸配列を含むＶＨおよび配列番号１７２のアミノ酸配列を含むＶＬ
を含む。
一部の実施形態では、抗ＴＩＧＩＴ抗体は、重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３、ならびに軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３を含み、ここで、ＣＤＲのうちの１つまたは複数（たとえば、１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、または６つ）は、表Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、およびＥに示される重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３、ならびに軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３から選択される。
Figure 2021534196
Figure 2021534196
Figure 2021534196
Figure 2021534196
Figure 2021534196
一部の実施形態では、抗ＴＩＧＩＴ抗体は、
配列番号５８、配列番号２８３、配列番号２８４、配列番号２２４、配列番号２９３、配列番号２９４、配列番号２２６、配列番号２８９、および配列番号２９０から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１配列、
配列番号６０、配列番号２８５、配列番号２２５、配列番号２９７、配列番号２２７、配列番号２９１、配列番号２２９、および配列番号２９５から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２配列、
配列番号６２、配列番号２８６、配列番号２２８、配列番号２９２、配列番号２３０、および配列番号２９６から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３配列、
配列番号６７および配列番号２８７から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１配列、
配列番号６９および配列番号２８８から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２配列、ならびに／または
配列番号７１のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３配列
のうちの１つまたは複数（たとえば、１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、または６つ）を含む。
一部の実施形態では、抗ＴＩＧＩＴ抗体は、配列番号５８、配列番号２８３、配列番号２８４、配列番号２２４、配列番号２９３、配列番号２９４、配列番号２２６、配列番号２８９、または配列番号２９０のうちのいずれかのアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１配列、配列番号６０、配列番号２８５、配列番号２２５、配列番号２９７、配列番号２２７、配列番号２９１、配列番号２２９、または配列番号２９５のうちのいずれかのアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２配列、配列番号６２、配列番号２８６、配列番号２２８、配列番号２９２、配列番号２３０、または配列番号２９６のうちのいずれかのアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３配列、配列番号６７または配列番号２８７のうちのいずれかのアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１配列、配列番号６９または配列番号２８８のうちのいずれかのアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２配列、および配列番号７１のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３配列を含む。
一部の実施形態では、抗ＴＩＧＩＴ抗体は、配列番号５８、配列番号２８３、配列番号２８４、配列番号２２４、配列番号２９３、配列番号２９４、配列番号２２６、配列番号２８９、または配列番号２９０のうちのいずれかのアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１配列、配列番号６０、配列番号２８５、配列番号２２５、配列番号２９７、配列番号２２７、配列番号２９１、配列番号２２９、または配列番号２９５のうちのいずれかのアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２配列、および配列番号６２、配列番号２８６、配列番号２２８、配列番号２９２、配列番号２３０、または配列番号２９６のうちのいずれかのアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３配列を含む。
一部の実施形態では、抗ＴＩＧＩＴ抗体は、配列番号６７または配列番号２８７のうちのいずれかのアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１配列、配列番号６９または配列番号２８８のうちのいずれかのアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２配列、および配列番号７１のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３配列を含む。
一部の実施形態では、抗ＴＩＧＩＴ抗体は、（ｉ）配列番号５８、配列番号２８３、または配列番号２８４のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１配列、（ｉｉ）配列番号６０または配列番号２８５のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２配列、（ｉｉｉ）配列番号６２または配列番号２８６のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３配列、（ｉｖ）配列番号６７または配列番号２８７のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１配列、（ｖ）配列番号６９または配列番号２８８のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２配列、および（ｖｉ）配列番号７１のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３配列を含む。
一部の実施形態では、抗ＴＩＧＩＴ抗体は、（ｉ）配列番号２２４、配列番号２９３、または配列番号２９４のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１配列、（ｉｉ）配列番号２２５または配列番号２９７のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２配列、（ｉｉｉ）配列番号６２または配列番号２８６のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３配列、（ｉｖ）配列番号６７または配列番号２８７のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１配列、（ｖ）配列番号６９または配列番号２８８のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２配列、および（ｖｉ）配列番号７１のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３配列を含む。
一部の実施形態では、抗ＴＩＧＩＴ抗体は、（ｉ）配列番号２２６、配列番号２８９、または配列番号２９０のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１配列、（ｉｉ）配列番号２２７または配列番号２９１のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２配列、（ｉｉｉ）配列番号２２８または配列番号２９２のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３配列、（ｉｖ）配列番号６７または配列番号２８７のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１配列、（ｖ）配列番号６９または配列番号２８８のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２配列、および（ｖｉ）配列番号７１のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３配列を含む。
一部の実施形態では、抗ＴＩＧＩＴ抗体は、（ｉ）配列番号２２４、配列番号２９３、または配列番号２９４のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１配列、（ｉｉ）配列番号２２９または配列番号２９５のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２配列、（ｉｉｉ）配列番号２３０または配列番号２９６のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３配列、（ｉｖ）配列番号６７または配列番号２８７のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１配列、（ｖ）配列番号６９または配列番号２８８のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２配列、および（ｖｉ）配列番号７１のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３配列を含む。
一部の実施形態では、抗ＴＩＧＩＴ抗体は、（ｉ）配列番号２２４、配列番号２９３、または配列番号２９４のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１配列、（ｉｉ）配列番号２２７または配列番号２９０のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２配列、（ｉｉｉ）配列番号２３０または配列番号２９６のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３配列、（ｉｖ）配列番号６７または配列番号２８７のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１配列、（ｖ）配列番号６９または配列番号２８８のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２配列、および（ｖｉ）配列番号７１のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３配列を含む。
一部の実施形態では、抗ＴＩＧＩＴ抗体は、
配列番号４、配列番号２２、配列番号４０、配列番号５８、配列番号７６、配列番号９４、配列番号１１２、配列番号１３０、配列番号１４８、配列番号１６６、配列番号１８４、配列番号２０２、配列番号２２１、配列番号２２４、配列番号２２６、配列番号２３１、配列番号２３３、配列番号２３９、配列番号２４３、配列番号２８３、配列番号２８４、配列番号２９３、配列番号２９４、配列番号２８９、または配列番号２９０のうちのいずれかのアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１配列、
配列番号６、配列番号２４、配列番号４２、配列番号６０、配列番号７８、配列番号９６、配列番号１１４、配列番号１３２、配列番号１５０、配列番号１６８、配列番号１８６、配列番号２０４、配列番号２２２、配列番号２２５、配列番号２２７、配列番号２２９、配列番号２３２、配列番号２３４、配列番号２３８、配列番号２４０、配列番号２８５、配列番号２９７、配列番号２９１、または配列番号２９５のうちのいずれかのアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２配列、
配列番号８、配列番号２６、配列番号４４、配列番号６２、配列番号８０、配列番号９８、配列番号１１６、配列番号１３４、配列番号１５２、配列番号１７０、配列番号１８８、配列番号２０６、配列番号２２３、配列番号２２８、配列番号２３０、配列番号２３５、配列番号２３６、配列番号２３７、配列番号２４１、配列番号２４２、配列番号２４４、配列番号２８６、配列番号２９２、または配列番号２９６のうちのいずれかのアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３配列、
配列番号１３、配列番号３１、配列番号４９、配列番号６７、配列番号８５、配列番号１０３、配列番号１２１、配列番号１３９、配列番号１５７、配列番号１７５、配列番号１９３、配列番号２１１、または配列番号２８７のうちのいずれかのアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１配列、
配列番号１５、配列番号３３、配列番号５１、配列番号６９、配列番号８７、配列番号１０５、配列番号１２３、配列番号１４１、配列番号１５９、配列番号１７７、配列番号１９５、配列番号２１３、または配列番号２８８のうちのいずれかのアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２配列、および／または
配列番号１７、配列番号３５、配列番号５３、配列番号７１、配列番号８９、配列番号１０７、配列番号１２５、配列番号１４３、配列番号１６１、配列番号１７９、配列番号１９７、または配列番号２１５のうちのいずれかのアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３配列
のうちの１つまたは複数（たとえば、１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、または６つ）を含む。
一部の実施形態では、抗ＴＩＧＩＴ抗体は、配列番号４、配列番号２２、配列番号４０、配列番号５８、配列番号７６、配列番号９４、配列番号１１２、配列番号１３０、配列番号１４８、配列番号１６６、配列番号１８４、配列番号２０２、配列番号２２１、配列番号２２４、配列番号２２６、配列番号２３１、配列番号２３３、配列番号２３９、配列番号２４３、配列番号２８３、配列番号２８４、配列番号２９３、配列番号２９４、配列番号２８９、または配列番号２９０のうちのいずれかのアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１配列、配列番号６、配列番号２４、配列番号４２、配列番号６０、配列番号７８、配列番号９６、配列番号１１４、配列番号１３２、配列番号１５０、配列番号１６８、配列番号１８６、配列番号２０４、配列番号２２２、配列番号２２５、配列番号２２７、配列番号２２９、配列番号２３２、配列番号２３４、配列番号２３８、配列番号２４０、配列番号２８５、配列番号２９７、配列番号２９１、または配列番号２９５のうちのいずれかのアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２配列、および配列番号８、配列番号２６、配列番号４４、配列番号６２、配列番号８０、配列番号９８、配列番号１１６、配列番号１３４、配列番号１５２、配列番号１７０、配列番号１８８、配列番号２０６、配列番号２２３、配列番号２２８、配列番号２３０、配列番号２３５、配列番号２３６、配列番号２３７、配列番号２４１、配列番号２４２、配列番号２４４、配列番号２８６、配列番号２９２、または配列番号２９６のうちのいずれかのアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３配列を含む。
一部の実施形態では、抗ＴＩＧＩＴ抗体は、配列番号１３、配列番号３１、配列番号４９、配列番号６７、配列番号８５、配列番号１０３、配列番号１２１、配列番号１３９、配列番号１５７、配列番号１７５、配列番号１９３、配列番号２１１、または配列番号２８７のうちのいずれかのアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１配列、配列番号１５、配列番号３３、配列番号５１、配列番号６９、配列番号８７、配列番号１０５、配列番号１２３、配列番号１４１、配列番号１５９、配列番号１７７、配列番号１９５、配列番号２１３、または配列番号２８８のうちのいずれかのアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２配列、および配列番号１７、配列番号３５、配列番号５３、配列番号７１、配列番号８９、配列番号１０７、配列番号１２５、配列番号１４３、配列番号１６１、配列番号１７９、配列番号１９７、または配列番号２１５のうちのいずれかのアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３配列を含む。
一部の実施形態では、抗ＴＩＧＩＴ抗体は、
（ｉ）配列番号４、配列番号２２、配列番号４０、配列番号５８、配列番号７６、配列番号９４、配列番号１１２、配列番号１３０、配列番号１４８、配列番号１６６、配列番号１８４、配列番号２０２、配列番号２２１、配列番号２２４、配列番号２２６、配列番号２３１、配列番号２３３、配列番号２３９、配列番号２４３、配列番号２８３、配列番号２８４、配列番号２９３、配列番号２９４、配列番号２８９、または配列番号２９０のうちのいずれかのアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１配列、および
（ｉｉ）配列番号６、配列番号２４、配列番号４２、配列番号６０、配列番号７８、配列番号９６、配列番号１１４、配列番号１３２、配列番号１５０、配列番号１６８、配列番号１８６、配列番号２０４、配列番号２２２、配列番号２２５、配列番号２２７、配列番号２２９、配列番号２３２、配列番号２３４、配列番号２３８、配列番号２４０、配列番号２８５、配列番号２９７、配列番号２９１、または配列番号２９５のうちのいずれかのアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２配列、および
（ｉｉｉ）配列番号８、配列番号２６、配列番号４４、配列番号６２、配列番号８０、配列番号９８、配列番号１１６、配列番号１３４、配列番号１５２、配列番号１７０、配列番号１８８、配列番号２０６、配列番号２２３、配列番号２２８、配列番号２３０、配列番号２３５、配列番号２３６、配列番号２３７、配列番号２４１、配列番号２４２、配列番号２４４、配列番号２８６、配列番号２９２、または配列番号２９６のうちのいずれかのアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３配列、および
（ｉｖ）配列番号１３、配列番号３１、配列番号４９、配列番号６７、配列番号８５、配列番号１０３、配列番号１２１、配列番号１３９、配列番号１５７、配列番号１７５、配列番号１９３、配列番号２１１、または配列番号２８７のうちのいずれかのアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１配列、および
（ｖ）配列番号１５、配列番号３３、配列番号５１、配列番号６９、配列番号８７、配列番号１０５、配列番号１２３、配列番号１４１、配列番号１５９、配列番号１７７、配列番号１９５、配列番号２１３、または配列番号２８８のうちのいずれかのアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２配列、および
（ｖｉ）配列番号１７、配列番号３５、配列番号５３、配列番号７１、配列番号８９、配列番号１０７、配列番号１２５、配列番号１４３、配列番号１６１、配列番号１７９、配列番号１９７、または配列番号２１５のうちのいずれかのアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３配列
を含む。
一部の実施形態では、抗ＴＩＧＩＴ抗体は、（ｉ）配列番号４または配列番号２２１のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１配列、（ｉｉ）配列番号６または配列番号２２２のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２配列、（ｉｉｉ）配列番号８または配列番号２２３のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３配列、（ｉｖ）配列番号１３のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１配列、（ｖ）配列番号１５のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２配列、および（ｖｉ）配列番号１７のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３配列を含む。
一部の実施形態では、抗ＴＩＧＩＴ抗体は、（ｉ）配列番号５８、配列番号２２４、または配列番号２２６のうちのいずれかのアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１配列、（ｉｉ）配列番号６０、配列番号２２５、配列番号２２７、または配列番号２２９のうちのいずれかのアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２配列、（ｉｉｉ）配列番号６２、配列番号２２８、または配列番号２３０のうちのいずれかのアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３配列、（ｉｖ）配列番号６７のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１配列、（ｖ）配列番号６９のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２配列、および（ｖｉ）配列番号７１のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３配列を含む。
一部の実施形態では、抗ＴＩＧＩＴ抗体は、（ｉ）配列番号９４、配列番号２３１、または配列番号２３３のうちのいずれかのアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１配列、（ｉｉ）配列番号９６、配列番号２３２、または配列番号２３４のうちのいずれかのアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２配列、（ｉｉｉ）配列番号９８、配列番号２３５、配列番号２３６または配列番号２３７のうちのいずれかのアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３配列、（ｉｖ）配列番号１０３のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１配列、（ｖ）配列番号１０５のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２配列、および（ｖｉ）配列番号１０７のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３配列を含む。
一部の実施形態では、抗ＴＩＧＩＴ抗体は、（ｉ）配列番号１６６、配列番号２３９、または配列番号２４３のうちのいずれかのアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１配列、（ｉｉ）配列番号１６８、配列番号２３８、または配列番号２４０のうちのいずれかのアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２配列、（ｉｉｉ）配列番号１７０、配列番号２４１、配列番号２４２または配列番号２４４のうちのいずれかのアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３配列、（ｉｖ）配列番号１７５のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１配列、（ｖ）配列番号１７７のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２配列、および（ｖｉ）配列番号１７９のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３配列を含む。
一部の実施形態では、抗ＴＩＧＩＴ抗体は、
（ａ）それぞれ、配列番号４、６、８、１３、１５、および１７、
（ｂ）それぞれ、配列番号２２、２４、２６、３１、３３、および３５、
（ｃ）それぞれ、配列番号４０、４２、４４、４９、５１、および５３、
（ｄ）それぞれ、配列番号５８、６０、６２、６７、６９、および７１、
（ｅ）それぞれ、配列番号７６、７８、８０、８５、８７、および８９、
（ｆ）それぞれ、配列番号９４、９６、９８、１０３、１０５、および１０７、
（ｇ）それぞれ、配列番号１１２、１１４、１１６、１２１、１２３、および１２５、
（ｈ）それぞれ、配列番号１３０、１３２、１３４、１３９、１４１、および１４３、
（ｉ）それぞれ、配列番号１４８、１５０、１５２、１５７、１５９、および１６１、
（ｊ）それぞれ、配列番号１６６、１６８、１７０、１７５、１７７、および１７９、
（ｋ）それぞれ、配列番号１８４、１８６、１８８、１９３、１９５、および１９７、
（ｌ）それぞれ、配列番号２０２、２０４、２０６、２１１、２１３、および２１５、または
（ｍ）それぞれ、配列番号２２１、２２２、２２３、１３、１５、および１７、または
（ｎ）それぞれ、配列番号２２４、２２５、６２、６７、６９、および７１、または
（ｏ）それぞれ、配列番号２２６、２２７、２２８、６７、６９、および７１、または
（ｐ）それぞれ、配列番号２２４、２２９、２３０、６７、６９、および７１、または
（ｑ）それぞれ、配列番号２２４、２２７、２３０、６７、６９、および７１、または
（ｒ）それぞれ、配列番号２３１、２３２、２３５、１０３、１０５、および１０７、または
（ｓ）それぞれ、配列番号２３３、２３４、２３６、１０３、１０５、および１０７、または
（ｔ）それぞれ、配列番号２３３、２３４、２３７、１０３、１０５、および１０７、または
（ｕ）それぞれ、配列番号１６６、２３８、１７０、１７５、１７７、および１７９、または
（ｖ）それぞれ、配列番号２３９、２４０、１７０、１７５、１７７、および１７９、または
（ｗ）それぞれ、配列番号２３９、２４０、２４１、１７５、１７７、および１７９、または
（ｘ）それぞれ、配列番号２３９、２４０、２４２、１７５、１７７、および１７９、または
（ｙ）それぞれ、配列番号２４３、１６８、２４４、１７５、１７７、および１７９
のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１〜３および軽鎖ＣＤＲ１〜３を含む。
一部の実施形態では、抗ＴＩＧＩＴ抗体は、配列番号３、配列番号５、配列番号７、配列番号９、配列番号２１、配列番号２３、配列番号２５、配列番号２７、配列番号３９、配列番号４１、配列番号４３、配列番号４５、配列番号５７、配列番号５９、配列番号６１、配列番号６３、配列番号７５、配列番号７７、配列番号７９、配列番号８１、配列番号９３、配列番号９５、配列番号９７、配列番号９９、配列番号１１１、配列番号１１３、配列番号１１５、配列番号１１７、配列番号１２９、配列番号１３１、配列番号１３３、配列番号１３５、配列番号１４７、配列番号１４９、配列番号１５１、配列番号１５３、配列番号１６５、配列番号１６７、配列番号１６９、配列番号１７１、配列番号１８３、配列番号１８５、配列番号１８７、配列番号１８９、配列番号２０１、配列番号２０３、配列番号２０５、または配列番号２０７のアミノ酸配列を含む１つまたは複数の重鎖フレームワーク領域（ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３、および／またはＦＲ４）を含む。
一部の実施形態では、抗ＴＩＧＩＴ抗体は、配列番号１２、配列番号１４、配列番号１６、配列番号１８、配列番号３０、配列番号３２、配列番号３４、配列番号３６、配列番号４８、配列番号５０、配列番号５２、配列番号５４、配列番号６６、配列番号６８、配列番号７０、配列番号７２、配列番号８４、配列番号８６、配列番号８８、配列番号９０、配列番号１０２、配列番号１０４、配列番号１０６、配列番号１０８、配列番号１２０、配列番号１２２、配列番号１２４、配列番号１２６、配列番号１３８、配列番号１４０、配列番号１４２、配列番号１４４、配列番号１５６、配列番号１５８、配列番号１６０、配列番号１６２、配列番号１７４、配列番号１７６、配列番号１７８、配列番号１８０、配列番号１９２、配列番号１９４、配列番号１９６、配列番号１９８、配列番号２１０、配列番号２１２、配列番号２１４、または配列番号２１６のアミノ酸配列を含む１つまたは複数の軽鎖フレームワーク領域（ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３、および／またはＦＲ４）を含む。
一部の実施形態では、抗ＴＩＧＩＴ抗体は、配列番号２６０、２６６、２６８、２７０、および２７２から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖、ならびに配列番号２７４のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。
一部の実施形態では、本開示の抗ＴＩＧＩＴ抗体は、結合に関して、米国公開第２００９／０２５８０１３号、同第２０１６／０１７６９６３号、同第２０１６／０３７６３６５号、または国際公開第２０１６／０２８６５６号に記載される抗体と競合しない。一部の実施形態では、本開示の抗ＴＩＧＩＴ抗体は、米国公開第２００９／０２５８０１３号、同第２０１６／０１７６９６３号、同第２０１６／０３７６３６５号、または国際公開第２０１６／０２８６５６号に記載される抗体と同じエピトープに結合しない。
抗体の調製
ＴＩＧＩＴに結合する抗体を調製するために、当該技術分野において公知の多数の技法を使用することができる。たとえば、Kohler & Milstein, Nature 256:495-497 (1975)、Kozbor et al., Immunology Today 4: 72 (1983)、Cole et al., pp. 77-96 in Monoclonal Antibodies and Cancer Therapy, Alan R. Liss, Inc. (1985)、Coligan, Current Protocols in Immunology (1991)、Harlow & Lane, Antibodies, A Laboratory Manual (1988)、およびGoding, Monoclonal Antibodies: Principles and Practice (2nd ed. 1986))を参照されたい。
目的の抗体の重鎖および軽鎖をコードする遺伝子を、細胞からクローニングすることができ、たとえば、モノクローナル抗体をコードする遺伝子を、抗体を発現するハイブリドーマからクローニングし、組換えモノクローナル抗体を産生させるために使用することができる。モノクローナル抗体の重鎖および軽鎖をコードする遺伝子ライブラリーもまた、ハイブリドーマまたは形質細胞から作製することができる。加えて、ファージまたは酵母ディスプレイ技術を使用して、選択された抗原に特異的に結合する抗体およびヘテロマーＦａｂ断片を特定することができる（たとえば、McCafferty et al., Nature 348:552-554 (1990)、Marks et al., Biotechnology 10:779-783 (1992)、Lou et al. (2010) PEDS 23:311、およびChao et al., Nature Protocols, 1:755-768 (2006)を参照されたい）。あるいは、抗体および抗体配列は、酵母に基づく抗体提示系、たとえば、例として、Xu et al., Protein Eng Des Sel, 2013, 26:663-670、国際公開第２００９／０３６３７９号、同第２０１０／１０５２５６号、および同第２０１２／００９５６８号に開示されるものを使用して、単離および／または特定してもよい。重鎖および軽鎖遺伝子産物のランダムな組合せにより、異なる抗原特異性を有する大きな抗体プールが得られる（たとえば、Kuby, Immunology (3rd ed. 1997)を参照されたい）。一本鎖抗体または組換え抗体の産生のための技法（米国特許第４，９４６，７７８号、米国特許第４，８１６，５６７号）もまた、抗体を産生させるために適合させることができる。抗体はまた、二特異性にすることもでき、すなわち、２つの異なる抗原を認識することができる（たとえば、国際公開第９３／０８８２９号、Traunecker et al., EMBO J. 10:3655-3659 (1991)、およびSuresh et al., Methods in Enzymology 121:210 (1986)を参照されたい）。抗体はまた、ヘテロコンジュゲート、たとえば、２つの共有結合的に結合した抗体であってもよく、または免疫毒素に共有結合的に結合した抗体であってもよい（たとえば、米国特許第４，６７６，９８０号、国際公開第９１／００３６０号、および同第９２／２００３７３号を参照されたい）。
抗体は、原核生物および真核生物発現系を含む、任意の数の発現系を使用して産生させることができる。一部の実施形態では、発現系は、哺乳動物細胞、たとえば、ハイブリドーマ、またはＣＨＯ細胞である。多数のそのような系が、市販供給業者から広範に入手可能である。抗体が重鎖および軽鎖の両方を含む実施形態では、重鎖および重鎖および軽鎖は、単一のベクターを使用して、たとえば、２シストロン性発現ユニットにおいて発現されてもよく、または異なるプロモーターの制御下にあってもよい。他の実施形態では、重鎖および軽鎖領域は、別個のベクターを使用して発現され得る。本明細書に記載される重鎖および軽鎖は、必要に応じて、Ｎ末端にメチオニンを含んでもよい。
一部の実施形態では、抗体断片（たとえば、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、ｓｃＦｖ、またはダイアボディ）が、生成される。抗体断片の産生のために、様々な技法が開発されている。従来的には、これらの断片は、インタクトな抗体のタンパク質分解消化を通じて誘導されていた（たとえば、Morimoto et al., J. Biochem. Biophys. Meth., 24:107-117 (1992)およびBrennan et al., Science, 229:81 (1985)を参照されたい）。しかしながら、これらの断片は、現在では、組換え宿主細胞を使用して、直接的に産生させることができる。たとえば、抗体断片は、抗体ファージライブラリーから単離することができる。あるいは、Ｆａｂ’−ＳＨ断片は、大腸菌細胞から直接的に回収することができ、化学的に連結させて、Ｆ（ａｂ’）２断片を形成することができる（たとえば、Carter et al., BioTechnology, 10:163-167 (1992)を参照されたい）。別のアプローチによると、Ｆ（ａｂ’）２断片は、組換え宿主細胞培養物から直接的に単離することができる。抗体断片の産生のための他の技法は、当業者には明らかであろう。他の実施形態では、選択される抗体は、一本鎖Ｆｖ断片（ｓｃＦｖ）である。たとえば、ＰＣＴ公開第９３／１６１８５号ならびに米国特許第５，５７１，８９４号および同第５，５８７，４５８号を参照されたい。抗体断片はまた、たとえば、米国特許５，６４１，８７０号に記載されるような線状抗体であってもよい。
一部の実施形態では、抗体または抗体断片は、別の分子、たとえば、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ化）または血清アルブミンにコンジュゲートされて、ｉｎ ｖｉｖｏにおける半減期の延長をもたらすことができる。抗体断片のＰＥＧ化の例は、Knight et al. Platelets 15:409, 2004（アブシキシマブに関して）、Pedley et al., Br. J. Cancer 70:1126, 1994(抗CEA抗体に関して）、Chapman et al., Nature Biotech. 17:780, 1999、およびHumphreys, et al., Protein Eng. Des. 20: 227, 2007)に提供されている。
一部の実施形態では、本明細書に記載される抗ＴＩＧＩＴ抗体を含む多特異性抗体、たとえば、二重特異性抗体が、提供される。多特異性抗体は、少なくとも２つの異なる部位に対する結合特異性を有する抗体である。一部の実施形態では、多特異性抗体は、ＴＩＧＩＴ（たとえば、ヒトＴＩＧＩＴ）に対する結合特異性を有し、少なくとも１つの他の抗原に対する結合特異性を有する。多特異性抗体を作製するための方法としては、宿主細胞における２つの重鎖および軽鎖対の組換え共発現（たとえば、Zuo et al., Protein Eng Des Sel, 2000, 13:361-367を参照されたい）、「ノブ・インゥー・ホール」操作（たとえば、Ridgway et al., Protein Eng Des Sel, 1996, 9:617-721を参照されたい）、「ダイアボディ」技術（たとえば、Hollinger et al., PNAS (USA), 1993, 90:6444-6448を参照されたい）、および分子内三量体化（たとえば、Alvarez-Cienfuegos et al., Scientific Reports, 2016, doi:/10.1038/srep28643を参照されたい）が挙げられるがこれらに限定されず、Spiess et al., Molecular Immunology, 2015, 67(2), Part A:95-106もまた参照されたい。
一部の実施形態では、本明細書に記載される抗ＴＩＧＩＴ抗体を含む抗体−薬物コンジュゲートが、提供される。抗体−薬物コンジュゲートでは、抗原（たとえば、ＴＩＧＩＴ）に対する結合特異性を有するモノクローナル抗体が、細胞傷害性薬物に共有結合的に連結されている。抗体−薬物コンジュゲートを作製するための方法は、たとえば、Chudasama et al., Nature Chemistry, 2016, 8:114-119、国際公開第２０１３／０６８８７４号、および米国特許第８，５３５，６７８号に記載されている。
定常領域の選択
本明細書に記載される抗ＴＩＧＩＴ抗体の重鎖および軽鎖可変領域は、ヒト定常領域の少なくとも一部分に連結され得る。定常領域の選択は、部分的に、抗体依存性細胞媒介性細胞傷害性、抗体依存性細胞ファゴサイトーシス、および／または補体依存性細胞傷害性が所望されるかどうかに依存する。たとえば、ヒトアイソタイプＩｇＧ１およびＩｇＧ３は、強力な補体依存性細胞傷害性を有し、ヒトアイソタイプＩｇＧ２は、弱い補体依存性細胞傷害性を有し、ヒトＩｇＧ４は、補体依存性細胞傷害性が欠如している。ヒトＩｇＧ１およびＩｇＧ３はまた、ヒトＩｇＧ２およびＩｇＧ４よりも強力な細胞媒介性エフェクター機能も誘導する。軽鎖定常領域は、ラムダまたはカッパであり得る。抗体は、２つの軽鎖および２つの重鎖を含む四量体として、別個の重鎖、軽鎖として、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、およびＦｖとして、または重鎖および軽鎖可変ドメインがスペーサーを通じて連結された一本鎖抗体として、発現させることができる。
ヒト定常領域は、異なる個体間でアロタイプ多様性およびイソアロタイプ多様性を示す、すなわち、定常領域は、異なる個体において、１つまたは複数の多型位置が異なり得る。イソアロタイプは、イソアロタイプを認識する血清が１つまたは複数の他のアイソタイプの非多型領域に結合するという点で、アロタイプとは異なる。
軽鎖および／または重鎖のアミノ末端またはカルボキシ末端における１つまたは複数のアミノ酸、たとえば、重鎖のＣ末端リシンは、ある比率またはすべての分子において、失われていてもよく、または誘導体化されていてもよい。エフェクター機能、たとえば、補体媒介性細胞傷害性もしくはＡＤＣＣを低減もしくは増加させるため（たとえば、Ｗｉｎｔｅｒらの米国特許第５，６２４，８２１号、Ｔｓｏらの米国特許第５，８３４，５９７号、およびLazar et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 103:4005, 2006を参照されたい）、またはヒトにおける半減期を延長するために（たとえば、Hinton et al., J. Biol. Chem. 279:6213, 2004を参照されたい）、定常領域に置換が行われてもよい。
例示的な置換としては、アミノ酸２３４位、２３５位、２３７位、２３９位、２６７位、２９８位、２９９位、３２６位、３３０位、または３３２位に導入される天然のアミノ酸のシステイン残基へのアミノ酸置換、好ましくは、ヒトＩｇＧ１アイソタイプにおけるＳ２３９Ｃ変異が挙げられる（番号付けは、ＥＵインデックス（Kabat, Sequences of Proteins of Immunological Interest (National Institutes of Health, Bethesda, MD, 1987 and 1991）に基づき、米国公開第２０１００１５８９０９号を参照されたく、これは参照により本明細書に組み込まれる）。追加のシステイン残基の存在により、鎖間ジスルフィド結合の形成が可能となり得る。そのような鎖間ジスルフィド結合の形成により、立体障害が引き起こされ、それによって、Ｆｃ領域−ＦｃγＲ結合相互作用の親和性が低減され得る。ＩｇＧ定常領域のＦｃ領域またはその近傍に導入されたシステイン残基はまた、治療剤のコンジュゲーションのための部位としての機能も果たし得る（すなわち、チオール特異的試薬、たとえば、薬物のマレイミド誘導体を使用して細胞傷害性薬物に連結する。治療剤の存在により、立体障害が引き起こされ、それによって、Ｆｃ領域−ＦｃγＲ結合相互作用の親和性がさらに低減される。２３４位、２３５位、２３６位、および／または２３７位のうちのいずれかにおける他の置換は、Ｆｃγ受容体、特に、ＦｃγＲＩ受容体に対する親和性を低減させる（たとえば、米国特許第６，６２４，８２１号、同第５，６２４，８２１号を参照されたい）。変異の好ましい組合せは、Ｓ２３９Ｄ、Ａ３３０Ｌ、およびＩ３３２Ｅであり、これにより、ＦｃγＲＩＩＩＡに対するＦｃドメインの親和性が増加し、結果としてＡＤＣＣが増加する。
抗体のｉｎ ｖｉｖｏ半減期もまた、そのエフェクター機能に影響を及ぼし得る。抗体の半減期を増加または減少させて、その治療活性を改変することができる。ＦｃＲｎは、β２−ミクログロブリンと非共有結合的に会合するＭＨＣクラスＩ抗原に構造的に類似する受容体である。ＦｃＲｎは、ＩｇＧの異化および組織全体でのそれらのトランスサイトーシスを調節する（Ghetie and Ward, 2000, Annu. Rev. Immunol. 18:739-766、Ghetie and Ward, 2002, Immunol. Res. 25:97-113）。ＩｇＧ−ＦｃＲｎ相互作用は、ｐＨ６．０（細胞内小胞のｐＨ）で生じるが、ｐＨ７．４（血液のｐＨ）では生じず、この相互作用により、ＩｇＧが、循環へとリサイクルされることが可能となる（Ghetie and Ward, 2000, Ann. Rev. Immunol. 18:739-766、Ghetie and Ward, 2002, Immunol. Res. 25:97-113）。ＦｃＲｎ結合に関与するヒトＩｇＧ１の領域が、マッピングされている（Shields et al., 2001, J. Biol. Chem. 276:6591-604）。ヒトＩｇＧ１のＰｒｏ２３８位、Ｔｈｒ２５６位、Ｔｈｒ３０７位、Ｇｌｎ３１１位、Ａｓｐ３１２位、Ｇｌｕ３８０位、Ｇｌｕ３８２位、またはＡｓｎ４３４位におけるアラニン置換は、ＦｃＲｎ結合を増強させる（Shields et al., 2001, J. Biol. Chem. 276:6591-604）。これらの置換を有するＩｇＧ１分子は、長い血清半減期を有する。結果として、これらの改変されたＩｇＧ１分子は、改変されていないＩｇＧ１と比較して、より長い期間にわたって、それらのエフェクター機能を実行することができ、したがってそれらの治療効果を発揮することができる。ＦｃＲｎへの結合を増加させるための他の例示的な置換としては、２５０位におけるＧｌｎおよび／または４２８位におけるＬｅｕが挙げられる。定常領域におけるすべての位置について、ＥＵ番号付けが使用されている。
保存されたＡｓｎ２９７に共有結合的に結合したオリゴ糖が、ＩｇＧのＦｃ領域がＦｃγＲに結合する能力に関係している（Lund et al., 1996, J. Immunol. 157:4963-69、Wright and Morrison, 1997, Trends Biotechnol. 15:26-31）。ＩｇＧに対するこのグリコフォームの操作により、ＩｇＧに媒介されるＡＤＣＣが有意に改善され得る。このグリコフォームへの二分岐型Ｎ−アセチルグルコサミン改変（Umana et al., 1999, Nat. Biotechnol. 17:176-180、Davies et al., 2001, Biotech. Bioeng. 74:288-94）の付加またはこのグリコフォームからのフコースの除去（Shields et al., 2002, J. Biol. Chem. 277:26733-40、Shinkawa et al., 2003, J. Biol. Chem. 278:6591-604、Niwa et al., 2004, Cancer Res. 64:2127-33）が、ＩｇＧ ＦｃとＦｃγＲとの間の結合を改善し、それによってＩｇに媒介されるＡＤＣＣ活性を増強させるＩｇＧ Ｆｃ操作の２つの例である。
ヒトＩｇＧ１ Ｆｃ領域の溶媒に曝露されるアミノ酸の体系的置換により、変更されたＦｃγＲ結合親和性を有するＩｇＧバリアントが得られた（Shields et al., 2001, J. Biol. Chem. 276:6591-604）。親ＩｇＧ１と比較すると、Ｔｈｒ２５６／Ｓｅｒ２９８、Ｓｅｒ２９８／Ｇｌｕ３３３、Ｓｅｒ２９８／Ｌｙｓ３３４、またはＳｅｒ２９８／Ｇｌｕ３３３／Ｌｙｓ３３４のＡｌａへの置換を含むこれらのバリアントのサブセットは、ＦｃγＲに対する結合親和性およびＡＤＣＣ活性の両方の増加を示す（Shields et al., 2001, J. Biol. Chem. 276:6591-604、Okazaki et al., 2004, J. Mol. Biol. 336:1239-49）。
抗体の補体結合活性（Ｃ１ｑ結合およびＣＤＣ活性の両方）は、Ｌｙｓ３２６およびＧｌｕ３３３における置換によって改善され得る（Idusogie et al., 2001, J. Immunol. 166:2571-2575）。ヒトＩｇＧ２骨格における同じ置換により、Ｃ１ｑへの結合が乏しく補体活性化活性が重度に欠損している抗体アイソタイプを、Ｃ１ｑへの結合およびＣＤＣ媒介の両方を行うことができるものに変換させることができる（Idusogie et al., 2001, J. Immunol. 166:2571-75）。いくつかの他の方法もまた、抗体の補体結合活性を改善するために適用されている。たとえば、ＩｇＭの１８個のアミノ酸のカルボキシル末端尾部片を、ＩｇＧのカルボキシル末端にグラフトすることにより、それらのＣＤＣ活性が大幅に増強される。これは、通常は検出可能なＣＤＣ活性を有さないＩｇＧ４でさえも観察される（Smith et al., 1995, J. Immunol. 154:2226-36）。また、ＩｇＧ１重鎖のカルボキシ末端の近傍に位置するＳｅｒ４４４をＣｙｓと置換することにより、単量体ＩｇＧ１と比べてＣＤＣ活性の２００倍の増加を有するＩｇＧ１の尾部間の二量体化が誘導された（Shopes et al., 1992, J. Immunol. 148:2918-22）。加えて、Ｃ１ｑに対する特異性を有する二特異性ダイアボディ構築物もまた、ＣＤＣ活性を付与する（Kontermann et al., 1997, Nat. Biotech. 15:629-31）。
補体活性は、重鎖のアミノ酸残基３１８、３２０、および３２２のうちの少なくとも１つを、異なる側鎖を有する残基、たとえば、Ａｌａに変異させることによって、低減させることができる。３つの残基のうちのいずれか１つの代わりに、他のアルキル置換された非イオン性残基、たとえば、Ｇｌｙ、Ｉｌｅ、Ｌｅｕ、もしくはＶａｌ、または芳香族非極性残基、たとえば、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、およびＰｒｏによっても、Ｃ１ｑ結合が低減または停止される。Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｃｙｓ、およびＭｅｔは、Ｃ１ｑ結合活性を低減または停止させるために、残基３２０および３２２において使用することができるが、３１８には使用できない。極性残基による３１８（Ｇｌｕ）残基の置き換えは、Ｃ１ｑ結合活性を改変させ得るが、停止させることはできない。残基２９７（Ａｓｎ）をＡｌａと置き換えることにより、溶解活性の除去が生じるが、Ｃ１ｑに対する親和性はわずかにしか低減されない（約３分の１の弱さ）。この変更によりグリコシル化部位および補体活性化に必要とされる炭水化物の存在が破壊される。この部位における他の置換によっても、グリコシル化部位が破壊される。以下の変異およびそれらの任意の組合せもまた、Ｃ１ｑ結合を低減させる：Ｄ２７０Ａ、Ｋ３２２Ａ、Ｐ３２９Ａ、およびＰ３１１Ｓ（国際公開第０６／０３６２９１号を参照されたい）。
ヒト定常領域への言及には、任意の天然のアロタイプまたは天然のアロタイプにおける多型位置を占める残基の任意の並べ替えを有する定常領域が含まれる。また、Ｆｃγ受容体結合を低減させるかＦｃＲＮへの結合を増加させるために、上記に示されるものなど、最大で１つ、２つ、５つ、または１０個の変異が、天然のヒト定常領域と比べて存在していてもよい。
核酸、ベクター、および宿主細胞
一部の実施形態では、本明細書に記載される抗ＴＩＧＩＴ抗体は、組換え方法を使用して調製される。したがって、一部の態様では、本発明は、本明細書に記載される抗ＴＩＧＩＴ抗体のうちのいずれか（たとえば、本明細書に記載されるＣＤＲのうちのいずれか１つまたは複数）をコードする核酸配列を含む単離された核酸、そのような核酸を含むベクター、ならびに抗体をコードする核酸を複製するためおよび／または抗体を発現させるために使用される、核酸が導入された宿主細胞を提供する。一部の実施形態では、宿主細胞は、真核生物細胞、たとえば、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞、またはヒト細胞である。
一部の実施形態では、ポリヌクレオチド（たとえば、単離されたポリヌクレオチド）は、本明細書に記載される抗体をコードするヌクレオチド配列を含む。一部の実施形態では、ポリヌクレオチドは、配列表に開示される１つまたは複数のアミノ酸配列（たとえば、ＣＤＲ、重鎖、軽鎖、および／またはフレームワーク領域）をコードするヌクレオチド配列を含む。一部の実施形態では、ポリヌクレオチドは、以下の配列表に開示される配列（たとえば、ＣＤＲ、重鎖、軽鎖、またはフレームワーク領域配列）に対して少なくとも８５％の配列同一性（たとえば、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％の配列同一性）を有するアミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列を含む。
一部の実施形態では、ポリヌクレオチド（たとえば、単離されたポリヌクレオチド）は、本明細書に記載される重鎖可変領域をコードするヌクレオチド配列を含む。一部の実施形態では、ポリヌクレオチドは、配列番号１、配列番号１９、配列番号３７、配列番号５５、配列番号７３、配列番号９１、配列番号１０９、配列番号１２７、配列番号１４５、配列番号１６３、配列番号１８１、配列番号１９９、配列番号２４５、配列番号２４６、配列番号２４７、配列番号２４８、配列番号２４９、配列番号２５０、配列番号２５１、配列番号２５２、配列番号２５３、配列番号２５４、配列番号２５５、配列番号２５６、または配列番号２５７に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域をコードするヌクレオチド配列を含む。一部の実施形態では、ポリヌクレオチドは、配列番号２、配列番号２０、配列番号３８、配列番号５６、配列番号７４、配列番号９２、配列番号１１０、配列番号１２８、配列番号１４６、配列番号１６４、配列番号１８２、配列番号２００、配列番号２５９、配列番号２６５、配列番号２６７、配列番号２６９、または配列番号２７１に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む。
一部の実施形態では、ポリヌクレオチド（たとえば、単離されたポリヌクレオチド）は、本明細書に記載される軽鎖可変領域をコードするヌクレオチド配列を含む。一部の実施形態では、ポリヌクレオチドは、配列番号１０、配列番号２８、配列番号４６、配列番号６４、配列番号８２、配列番号１００、配列番号１１８、配列番号１３６、配列番号１５４、配列番号１７２、配列番号１９０、または配列番号２０８に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域をコードするヌクレオチド配列を含む。一部の実施形態では、ポリヌクレオチドは、配列番号１１、配列番号２９、配列番号４７、配列番号６５、配列番号８３、配列番号１０１、配列番号１１９、配列番号１３７、配列番号１５５、配列番号１７３、配列番号１９１、配列番号２０９、または配列番号２７３に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む。
一部の実施形態では、ポリヌクレオチドは、本明細書に記載される重鎖可変領域および軽鎖可変領域をコードするヌクレオチド配列を含む。一部の実施形態では、ポリヌクレオチドは、配列番号１、配列番号１９、配列番号３７、配列番号５５、配列番号７３、配列番号９１、配列番号１０９、配列番号１２７、配列番号１４５、配列番号１６３、配列番号１８１、配列番号１９９、配列番号２４５、配列番号２４６、配列番号２４７、配列番号２４８、配列番号２４９、配列番号２５０、配列番号２５１、配列番号２５２、配列番号２５３、配列番号２５４、配列番号２５５、配列番号２５６、または配列番号２５７に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域をコードし、配列番号１０、配列番号２８、配列番号４６、配列番号６４、配列番号８２、配列番号１００、配列番号１１８、配列番号１３６、配列番号１５４、配列番号１７２、配列番号１９０、または配列番号２０８に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域をコードする、ヌクレオチド配列を含む。一部の実施形態では、ポリヌクレオチドは、配列番号２、配列番号２０、配列番号３８、配列番号５６、配列番号７４、配列番号９２、配列番号１１０、配列番号１２８、配列番号１４６、配列番号１６４、配列番号１８２、配列番号２００、配列番号２５９、配列番号２６５、配列番号２６７、配列番号２６９、または配列番号２７１に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含み、配列番号１１、配列番号２９、配列番号４７、配列番号６５、配列番号８３、配列番号１０１、配列番号１１９、配列番号１３７、配列番号１５５、配列番号１７３、配列番号１９１、配列番号２０９、または配列番号２７３に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有するヌクレオチド配列をさらに含む。
さらなる態様では、本明細書に記載される抗ＴＩＧＩＴ抗体を作製する方法が、提供される。一部の実施形態では、本方法は、本明細書に記載される宿主細胞（たとえば、本明細書に記載されるポリヌクレオチドまたはベクターを発現する宿主細胞）を、抗体の発現に適切な条件下において培養することを含む。一部の実施形態では、抗体は、続いて、宿主細胞（または宿主細胞培養培地）から回収される。
本開示の抗体またはその断片をコードするポリヌクレオチドを含む適切なベクターとしては、クローニングベクターおよび発現ベクターが挙げられる。選択されるクローニングベクターは、使用することが意図される宿主細胞に応じて変動し得るが、有用なクローニングベクターは、一般に、自己複製する能力を有し、特定の制限エンドヌクレアーゼに対する単一の標的を有し得、および／またはベクターを含むクローンを選択するのに使用することができるマーカーの遺伝子を保持し得る。例としては、プラスミドおよび細菌ウイルス、たとえば、ｐＵＣ１８、ｐＵＣ１９、Ｂｌｕｅｓｃｒｉｐｔ（たとえば、ｐＢＳ ＳＫ＋）およびその誘導体、ｍｐｌ８、ｍｐｌ９、ｐＢＲ３２２、ｐＭＢ９、ＣｏｌＥ１、ｐＣＲ１、ＲＰ４、ファージＤＮＡ、ならびにｐＳＡ３およびｐＡＴ２８などのシャトルベクターが挙げられる。クローニングベクターは、ＢｉｏＲａｄ、Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ、およびＩｎｖｉｔｒｏｇｅｎなどの市販業者から入手可能である。
発現ベクターは、一般に、本開示の核酸を含む複製可能なポリヌクレオチド構築物である。発現ベクターは、エピソームとしてまたは染色体ＤＮＡに組み込まれた部分としてのいずれかで、宿主細胞において複製し得る。適切な発現ベクターとしては、プラスミド、アデノウイルス、アデノ随伴ウイルス、レトロウイルスを含むウイルスベクター、および任意の他のベクターが挙げられるが、これらに限定されない。
組換え抗体の発現
抗体は、典型的に、組換え発現によって生成され得る。組換えポリヌクレオチド構築物は、典型的に、天然に会合しているかまたは異種プロモーター領域を含む、抗体鎖のコーディング配列に作動可能に連結された発現制御配列を含む。好ましくは、発現制御配列は、真核生物宿主細胞に形質転換またはトランスフェクトすることができるベクターに含まれる真核生物プロモーター系である。ベクターが、適切な宿主に組み込まれると、宿主は、ヌクレオチド配列の高レベルな発現ならびに交差反応する抗体の回収および精製に適切な条件下において維持される。
哺乳動物細胞は、免疫グロブリンまたはその断片をコードするヌクレオチドセグメントを発現させるのに適切な宿主である。Winnacker, From Genes to Clones, (VCH Publishers, NY, 1987）を参照されたい。インタクトな異種タンパク質を分泌することができるいくつかの適切な宿主細胞系が、当該技術分野において開発されており、これには、ＣＨＯ細胞系（たとえば、ＤＧ４４）、種々のＣＯＳ細胞系、ＨｅＬａ細胞、ＨＥＫ２９３細胞、Ｌ細胞、ならびにＳｐ２／０およびＮＳ０を含む非抗体産生骨髄腫が挙げられる。好ましくは、細胞は、非ヒトである。これらの細胞の発現ベクターには、発現制御配列、たとえば、複製起点、プロモーター、エンハンサー（Queen et al., Immunol. Rev. 89:49 (1986)）、ならびに必要なプロセシング情報部位、たとえば、リボソーム結合部位、ＲＮＡスプライス部位、ポリアデニル化部位、および転写終結因子配列が含まれ得る。好ましい発現制御配列は、内因性遺伝子、サイトメガロウイルス、ＳＶ４０、アデノウイルス、ウシパピローマウイルスなどに由来するプロモーターである。Co et al., J. Immunol. 148:1149 (1992)を参照されたい。
発現されると、抗体は、ＨＰＬＣ精製、カラムクロマトグラフィー、ゲル電気泳動などを含む、当該技術分野の標準的な手順に従って精製することができる（概して、Scopes, Protein Purification (Springer-Verlag, NY, 1982)を参照されたい）。
グリコシル化バリアント
抗体は、それらの定常領域内の保存された位置において、グリコシル化されてもよい（Jefferis and Lund, (1997) Chem. Immunol. 65:111-128、Wright and Morrison, (1997) TibTECH 15:26-32）。免疫グロブリンのオリゴ糖側鎖は、タンパク質の機能（Boyd et al., (1996) Mol. Immunol. 32:1311-1318、Wittwe and Howard, (1990) Biochem. 29:4175-4180）、ならびに糖タンパク質の構成および提示される三次元表面に影響を及ぼし得る糖タンパク質の部分間における分子内相互作用（Hefferis and Lund（上記）、Wyss and Wagner, (1996) Current Opin. Biotech. 7:409-416）に影響を及ぼす。オリゴ糖は、特異的な認識構造に基づいて、所与の糖タンパク質をある特定の分子へと標的化する機能も果たし得る。たとえば、非ガラクトシル化ＩｇＧにおいて、オリゴ糖部分は、「反転」してＣＨ２間の空間の外に出て、末端Ｎ−アセチルグルコサミン残基が、マンノース結合タンパク質への結合に利用可能となる（Malhotra et al., (1995) Nature Med. 1:237-243）ことが報告されている。チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞において産生されたＣＡＭＰＡＴＨ−１Ｈ（ヒトリンパ球のＣＤｗ５２抗原を認識する組換えヒト化マウスモノクローナルＩｇＧ１抗体）からグリコペプチダーゼによりオリゴ糖を除去することにより、補体に媒介される溶解（ＣＭＣＬ）の完全な低減がもたらされたが（Boyd et al., (1996) Mol. Immunol. 32:1311-1318）、一方でノイラミニダーゼを使用したシアル酸残基の選択的な除去は、ＤＭＣＬの消失をもたらさなかった。抗体のグリコシル化はまた、抗体依存性細胞傷害性（ＡＤＣＣ）に影響を及ぼすことも報告されている。具体的には、二分岐型ＧｌｃＮＡｃの形成を触媒するグリコシルトランスフェラーゼであるβ（１，４）−Ｎ−アセチルグルコサミニルトランスフェラーゼＩＩＩ（ＧｎＴＩＩＩ）のテトラサイクリンにより制御される発現を有するＣＨＯ細胞は、改善されたＡＤＣＣ活性を有することが報告されている（Umana et al. (1999) Mature Biotech. 17:176-180）。
抗体のグリコシル化は、典型的に、Ｎ結合型またはＯ結合型のいずれかである。Ｎ結合型は、アスパラギン残基の側鎖への炭水化物部分の結合を指す。トリペプチド配列であるアスパラギン−Ｘ−セリンおよびアスパラギン−Ｘ−スレオニンは、アスパラギン側鎖への炭水化物部分の酵素結合の認識配列であり、ここで、Ｘは、プロリン以外の任意のアミノ酸である。したがって、ポリペプチドにおけるこれらのトリペプチド配列のうちのいずれかの存在により、潜在的なグリコシル化部位が生じる。Ｏ結合型グリコシル化は、糖であるＮ−アセチルガラクトサミン（N-aceylgalactosamine）、ガラクトース、またはキシロースのうちのいずれかが、ヒドロキシアミノ酸に結合することを指し、ヒドロキシアミノ酸は、もっとも一般的にはセリンまたはスレオニンであるが、５−ヒドロキシプロリンまたは５−ヒドロキシリシンも使用可能である。
抗体のグリコシル化バリアントは、抗体のグリコシル化パターンが変更されたバリアントである。変更するとは、抗体において見出される１つまたは複数の炭水化物部分を欠失させること、抗体に１つまたは複数の炭水化物部分を付加すること、グリコシル化の組成（グリコシル化パターン）、グリコシル化の程度を変化させることなどを意味する。
抗体へのグリコシル化部位の付加は、アミノ酸配列を、上述のトリペプチド配列のうちの１つまたは複数を含むように変更することによって、達成することができる（Ｎ結合型グリコシル化部位の場合）。変更はまた、もともとの抗体の配列への１つまたは複数のセリンまたはスレオニン残基の付加または置換によって、作製することもできる（Ｏ結合型グリコシル化部位の場合）。同様に、グリコシル化部位の除去は、抗体の天然のグリコシル化部位内のアミノ酸の変更によって、達成することができる。
アミノ酸配列は、通常、根底にある核酸配列を変更することによって変更される。これらの方法としては、天然の源（天然に存在するアミノ酸配列バリアントの場合）からの単離、または抗体の初期調製バリアントもしくは非バリアントバージョンのオリゴヌクレオチドに媒介される（もしくは部位指向型）変異生成、ＰＣＲ変異生成、およびカセット変異生成による調製が挙げられる。
抗体のグリコシル化（グリコシル化パターンを含む）はまた、アミノ酸配列または根底にあるヌクレオチド配列を変更することなく変更することもできる。グリコシル化は、大部分が、抗体を発現させるために使用される宿主細胞に依存する。有望な治療薬としての組換え糖タンパク質、たとえば、抗体の発現に使用される細胞型は、天然の細胞であることは珍しいため、抗体のグリコシル化パターンにおける著しい変動は、予測可能である。たとえば、Hse et al., (1997) J. Biol. Chem. 272:9062-9070を参照されたい。宿主細胞の選択に加え、抗体の組換え産生の際にグリコシル化に影響を及ぼす因子としては、増殖モード、培地の配合、培養物の密度、酸素負荷、ｐＨ、精製スキームなどが挙げられる。オリゴ糖産生に関与するある特定の酵素を導入することまたはそれを過剰発現させることを含め、特定の宿主生物において達成されるグリコシル化パターンを変更するための様々な方法が提案されている（米国特許第５０４７３３５号、同第５５１０２６１号、同第５２７８２９９号）。グリコシル化、またはある特定の種類のグリコシル化は、たとえば、エンドグリコシダーゼＨ（Ｅｎｄｏ Ｈ）を使用して、糖タンパク質から酵素的に除去することができる。加えて、組換え宿主細胞は、遺伝子操作することができ、たとえば、ある特定の種類の多糖のプロセシングを欠損させることができる。これらおよび類似の技法は、当該技術分野において公知である。
抗体のグリコシル化構造は、レクチンクロマトグラフィー、ＮＭＲ、質量分析、ＨＰＬＣ、ＧＰＣ、単糖組成分析、逐次的酵素消化、および高ｐＨのアニオン交換クロマトグラフィーを使用して電荷に基づいてオリゴ糖を分離するＨＰＡＥＣ−ＰＡＤを含む、従来的な炭水化物分析の技法によって、容易に分析することができる。分析目的でオリゴ糖を放出させるための方法もまた、公知であり、これには、限定することなく、酵素処置（一般に、ペプチド−Ｎ−グリコシダーゼＦ／エンド−β−ガラクトシダーゼを使用して行われる）、強力なアルカリ環境を使用して主としてＯ結合型構造を放出させる脱離、ならびに無水ヒドラジンを使用してＮ結合型およびＯ結合型の両方のオリゴ糖を放出させる化学的方法が挙げられる。
抗体のグリコシル化の好ましい改変形態は、コアフコシル化の低減である。「コアフコシル化」とは、Ｎ結合型グリカンの還元末端における、Ｎ−アセチルグルコサミン（「ＧｌｃＮＡｃ」）へのフコースの付加（「フコシル化」）を指す。
「複合Ｎ−グリコシド結合型糖鎖」は、典型的に、アスパラギン２９７（Ｋａｂａｔの番号による）に結合する。本明細書で使用される場合、複合Ｎ−グリコシド結合型糖鎖は、主として以下の構造を有する二分岐複合型糖鎖を有し、
Figure 2021534196
 式中、±は、糖分子が存在しても不在であってもよいことを示し、数字は、糖分子間の連結の位置を示す。上記の構造において、アスパラギンに結合する糖鎖末端は、還元末端（右側）と称され、反対側は、非還元末端と称される。フコースは、通常、還元末端のＮ−アセチルグルコサミン（「ＧｌｃＮＡｃ」）に、典型的にはα１，６結合によって結合する（ＧｌｃＮＡｃの６位が、フコースの１位に連結される）。「Ｇａｌ」は、ガラクトースを指し、「Ｍａｎ」は、マンノースを指す。
「複合Ｎ−グリコシド結合型糖鎖」は、１）コア構造の非還元末端側が、ガラクトース−Ｎ−アセチルグルコサミン（「ｇａｌ−ＧｌｃＮＡｃ」とも称される）の０、１つ、または複数の分枝を有し、ｇａｌ−ＧｌｃＮＡｃの非還元末端側が、必要に応じて、シアル酸、二分岐型Ｎ−アセチルグルコサミンなどを有する、複合型、および２）コア構造の非還元末端側が、高マンノースＮ−グリコシド結合型糖鎖および複合Ｎ−グリコシド結合型糖鎖の両方の分枝を有する、ハイブリッド型を含む。
本方法によると、典型的に、ごくわずかな量のフコースが、抗ＴＩＧＩＴ抗体の複合Ｎ−グリコシド結合型糖鎖に組み込まれる。たとえば、様々な実施形態では、組成物中の抗体のうちの約６０％未満、約５０％未満、約４０％未満、約３０％未満、約２０％未満、約１５％未満、約１０％未満、約５％未満、または約３％未満が、フコースによるコアフコシル化を有する。一部の実施形態では、組成物中の抗体のうちの約２％が、フコースによるコアフコシル化を有する。様々な実施形態では、組成物中の抗体のうちの６０％未満がフコースによるコアフコシル化を有する場合、その組成物の抗体は、「フコシル化されていない（ｎｏｎｆｕｃｏｓｙｌａｔｅｄ）」または「アフコシル化されている（ａｆｕｃｏｓｙｌａｔｅｄ）」と称され得る。一部の実施形態では、組成物中の抗体のうちの少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％が、アフコシル化されている。
ある特定の実施形態では、わずかな量フコースアナログ（またはフコースアナログの代謝産物もしくは産物）だけが、複合Ｎ−グリコシド結合型糖鎖に組み込まれる。たとえば、様々な実施形態では、抗ＴＩＧＩＴ抗体のうちの約６０％未満、約５０％未満、約４０％未満、約３０％未満、約２０％未満、約１５％未満、約１０％未満、約５％未満、または約３％未満が、フコースアナログまたはフコースアナログの代謝産物もしくは産物によるコアフコシル化を有する。一部の実施形態では、抗ＴＩＧＩＴ抗体のうちの約２％が、フコースアナログまたはフコースアナログの代謝産物もしくは産物によるコアフコシル化を有する。
一部の実施形態では、組成物中の抗体のうちの約６０％未満、約５０％未満、約４０％未満、約３０％未満、約２０％未満、約１５％未満、約１０％未満、約５％未満、または約３％未満が、Ｇ０、Ｇ１、またはＧ２グリカン構造にフコース残基を有する。（たとえば、Raju et al., 2012, MAbs 4: 385-391, Figure 3を参照されたい）。一部の実施形態では、組成物中の抗体のうちの約２％が、Ｇ０、Ｇ１、またはＧ２グリカン構造にフコース残基を有する。様々な実施形態では、組成物中の抗体のうちの６０％未満がＧ０、Ｇ１、またはＧ２グリカン構造にフコース残基を有する場合、その組成物の抗体は、「アフコシル化されている」と称される。一部の実施形態では、組成物中の抗体のうちの少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％が、Ｇ０、Ｇ１、またはＧ２グリカン構造にフコースが欠如している。Ｇ０グリカンは、Ｇ０−ＧＮグリカンを含むことに留意されたい。Ｇ０−ＧＮグリカンは、１つの末端ＧｌｃＮＡｃ残基を有する単一分岐型グリカンである。Ｇ１グリカンは、Ｇ１−ＧＮグリカンを含む。Ｇ１−ＧＮグリカンは、１つの末端ガラクトース残基を有する単一分岐型グリカンである。Ｇ０−ＧＮおよびＧ１−ＧＮグリカンは、フコシル化されていてもよく、またはフコシル化されていなくてもよい。
抗体産生細胞をフコースアナログとともにインキュベートすることによって、アフコシル化抗体を作製する方法は、たとえば、国際公開第２００９／１３５１８１号に記載されている。簡単に述べると、抗ＴＩＧＩＴ抗体を発現するように操作されている細胞を、フコースアナログまたはフコースアナログの細胞内代謝産物もしくは産物の存在下においてインキュベートする。細胞内代謝産物は、たとえば、ＧＤＰに媒介されるアナログまたは完全もしくは部分的に脱エステル化されたアナログであってもよい。産物は、たとえば、完全または部分的に脱エステル化されたアナログであり得る。一部の実施形態では、フコースアナログは、フコースサルベージ経路における酵素を阻害し得る。たとえば、フコースアナログ（またはフコースアナログの細胞内代謝産物もしくは産物）は、フコキナーゼ、またはＧＤＰ−フコース−ピロホスホリラーゼの活性を阻害し得る。一部の実施形態では、フコースアナログ（またはフコースアナログの細胞内代謝産物もしくは産物）は、フコシルトランスフェラーゼ（好ましくは、１，６−フコシルトランスフェラーゼ、たとえば、ＦＵＴ８タンパク質）を阻害する。一部の実施形態では、フコースアナログ（またはフコースアナログの細胞内代謝産物もしくは産物）は、フコースのｄｅ ｎｏｖｏ合成経路における酵素の活性を阻害し得る。たとえば、フコースアナログ（またはフコースアナログの細胞内代謝産物もしくは産物）は、ＧＤＰ−マンノース４，６−デヒドラターゼまたは／またはＧＤＰ−フコースシンセターゼの活性を阻害し得る。一部の実施形態では、フコースアナログ（またはフコースアナログの細胞内代謝産物もしくは産物）は、フコース輸送体（たとえば、ＧＤＰ−フコース輸送体）を阻害し得る。
一実施形態では、フコースアナログは、２−フルオロフコースである。増殖培地においてフコースアナログを使用する方法および他のフコースアナログは、たとえば、国際公開第２００９／１３５１８１号に開示されており、これは、参照により本明細書に組み込まれる。
コアフコシル化を低減させるように細胞系を操作するための他の方法には、遺伝子ノックアウト、遺伝子ノックイン、およびＲＮＡ干渉（ＲＮＡｉ）が含まれた。遺伝子ノックアウトの場合、ＦＵＴ８（アルファ１，６−フコシルトランスフェラーゼ酵素）をコードする遺伝子が、不活性化される。ＦＵＴ８は、ＧＤＰ−フコースから、Ｎ−グリカンのＡｓｎ結合型（Ｎ結合型）ＧｌｃＮａｃの６位へのフコシル残基の輸送を触媒する。ＦＵＴ８は、Ａｓｎ２９７におけるＮ結合型二分岐型炭水化物へのフコースの付加を担う唯一の酵素であると報告されている。遺伝子ノックインは、ＧＮＴＩＩＩまたはゴルジアルファマンノシダーゼＩＩなどの酵素をコードする遺伝子を付加する。細胞内のそのような酵素のレベルの増加は、モノクローナル抗体をフコシル化経路から転換させ（コアフコシル化の減少をもたらし）、二分岐型Ｎ−アセチルグルコサミンの量が増加している。ＲＮＡｉはまた、典型的に、ＦＵＴ８遺伝子発現を標的とし、ｍＲＮＡ転写産物レベルの減少をもたらすか、または遺伝子発現全体をノックアウトする。これらの方法のうちのいずれかを使用して、アフコシル化抗体、たとえば、抗ＴＩＧＩＴ抗体を産生させることができるであろう細胞系を生成することができる。
多数の方法が、抗体におけるフコシル化の量を決定するのに利用可能である。方法としては、たとえば、ＰＬＲＰ−Ｓクロマトグラフィーを介したＬＣ−ＭＳ、エレクトロスプレーイオン化四極子ＴＯＦ ＭＳ、レーザー誘導型蛍光を用いたキャピラリー電気泳動（ＣＥ−ＬＩＦ）、および蛍光検出を用いた親水性相互作用クロマトグラフィー（ＨＩＬＩＣ）が挙げられる。
ＩＶ．抗ＴＩＧＩＴ抗体を使用した治療方法
一部の実施形態では、対象におけるがんを処置または予防するための方法が、提供される。一部の実施形態では、本方法は、対象に、治療量の抗ＴＩＧＩＴ抗体を投与することを含む。一部の実施形態では、抗ＴＩＧＩＴ抗体は、アフコシル化されている。一部の実施形態では、本方法は、対象に、治療量の、抗ＴＩＧＩＴ抗体を含む医薬組成物を投与することを含み、ここで、組成物中の抗体のうちの少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％は、アフコシル化されている。一部の実施形態では、対象は、ヒトである。
一部の実施形態では、がんは、ＣＤ１１２および／またはＣＤ１５５の発現が富化されているがんまたはがん細胞である。一部の実施形態では、ＣＤ１１２および／またはＣＤ１５５が富化されているがんは、ＣＤ１１２またはＣＤ１５５に特異的な抗体を使用して腫瘍試料の免疫組織化学評価によって特定される。一部の実施形態では、ＣＤ１１２またはＣＤ１５５の発現は、腫瘍細胞または腫瘍浸潤白血球において富化されているか、または増加している。一部の実施形態では、がんは、腫瘍試料中のＣＤ１１２および／またはＣＤ１５５ ｍＲＮＡレベルの評価に基づいて特定される（たとえば、当該技術分野において公知の方法、たとえば、定量的ＲＴ−ＰＣＲによって）。一部の実施形態では、がん患者から得られた血液試料中の可溶性ＣＤ１１２またはＣＤ１５５の測定値を使用して、ＣＤ１１２および／またはＣＤ１５５の発現が富化されているがんを特定することができる。一部の実施形態では、本方法は、対象から試料（たとえば、腫瘍試料または血液試料）を得ること、対象から得られた試料中のＣＤ１１２および／またはＣＤ１５５のレベルを測定すること、ならびに対象から得られた試料中のＣＤ１１２および／またはＣＤ１５５のレベルを、対照値（たとえば、健常対照対象から得られた試料、または健常対照集団に関して決定されたＣＤ１１２および／もしくはＣＤ１５５の発現レベル）と比較することを含む。一部の実施形態では、本方法は、対象から得られた試料中のＣＤ１１２および／またはＣＤ１５５のレベルが、対照値よりも高いと決定すること、ならびにそれに続いて、対象に、本明細書に記載される抗ＴＩＧＩＴ抗体を投与することを含む。
一部の実施形態では、がんは、ＴＩＧＩＴを発現するＴ細胞またはナチュラルキラー（ＮＫ）細胞が富化されているがんまたはがん細胞である。一部の実施形態では、ＴＩＧＩＴが富化されているがんは、ＴＩＧＩＴに特異的な抗体を使用して腫瘍試料の免疫組織化学評価によって特定される。一部の実施形態では、Ｔ細胞またはＮＫ細胞に特異的な抗体（たとえば、抗ＣＤ３、抗ＣＤ４、抗ＣＤ８、抗ＣＤ２５、または抗ＣＤ５６）を使用して、ＴＩＧＩＴを発現する腫瘍浸潤細胞のサブセットを決定する。一部の実施形態では、がんは、腫瘍試料中のＴＩＧＩＴ ｍＲＮＡレベルの評価に基づいて特定される。一部の実施形態では、がん患者から得られた血液試料中の可溶性ＴＩＧＩＴの測定値を、（必要に応じてＴ細胞またはＮＫ細胞に特異的な抗体と組み合わせて）使用して、ＴＩＧＩＴを発現するＴ細胞またはＮＫ細胞が富化されているがんを特定することができる。一部の実施形態では、本方法は、対象から試料（たとえば、腫瘍試料または血液試料）を得ること、対象から得られた試料中のＴＩＧＩＴのレベルを測定し、必要に応じて、Ｔ細胞またはＮＫ細胞の存在を検出すること（たとえば、Ｔ細胞またはＮＫ細胞に特異的な抗体、たとえば、抗ＣＤ３、抗ＣＤ４、抗ＣＤ８、抗ＣＤ２５、または抗ＣＤ５６を使用して）、ならびに対象から得られた試料中のＴＩＧＩＴのレベルを、対照値（たとえば、健常対照対象から得られた試料、または健常対照集団に関して決定されたＴＩＧＩＴの発現レベル）と比較することを含む。一部の実施形態では、本方法は、対象から得られた試料中のＴＩＧＩＴのレベルが、対照値よりも高いと決定すること、ならびにそれに続いて、対象に、本明細書に記載される抗ＴＩＧＩＴ抗体を投与することを含む。
一部の実施形態では、がんは、膀胱がん、乳がん、子宮がん、子宮頸がん、卵巣がん、前立腺がん、精巣がん、食道がん、消化管がん、胃がん（ｇａｓｔｒｉｃ ｃａｎｃｅｒ）、膵臓がん、結腸直腸がん、結腸がん、腎臓がん、腎明細胞癌、頭頸部がん、肺がん、肺腺癌、胃がん（ｓｔｏｍａｃｈ ｃａｎｃｅｒ）、生殖細胞がん、骨がん、肝臓がん、甲状腺がん、皮膚がん、黒色腫、中枢神経系の新生物、中皮腫、リンパ腫、白血病、慢性リンパ球性白血病、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、濾胞性リンパ腫、ホジキンリンパ腫、骨髄腫、または肉腫である。一部の実施形態では、がんは、胃がん（ｇａｓｔｒｉｃ ｃａｎｃｅｒ）、精巣がん、膵臓がん、肺腺癌、膀胱がん、頭頸部がん、前立腺がん、乳がん、中皮腫、および腎明細胞癌から選択される。一部の実施形態では、がんは、急性骨髄腫、慢性骨髄腫、急性リンパ球性もしくは慢性リンパ球性白血病、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、濾胞性リンパ腫、マントル細胞リンパ腫、小リンパ球性リンパ腫、原発性縦隔大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、脾臓辺縁帯Ｂ細胞リンパ腫、または節外辺縁帯Ｂ細胞リンパ腫を含むがこれらに限定されない、リンパ腫または白血病である。一部の実施形態では、がんは、慢性リンパ球性白血病、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、濾胞性リンパ腫、およびホジキンリンパ腫から選択される。一部の実施形態では、がんは、転移がんである。
一部の実施形態では、本方法は、対象に、治療量の追加の治療剤を投与することをさらに含む。一部の実施形態では、追加の治療剤は、免疫−腫瘍学剤である。一部の実施形態では、免疫−腫瘍学剤は、免疫チェックポイント経路、たとえば、ＰＤ−１経路、ＣＴＬＡ−４経路、Ｌａｇ３経路、またはＴＩＭ−３経路の成分をアンタゴナイズまたは阻害する、薬剤（たとえば、抗体、小分子、またはペプチド）である。一部の実施形態では、免疫−腫瘍学剤は、ＯＸ−４０経路、４−１ＢＢ（ＣＤ１３７）経路、ＣＤ２７経路、ＩＣＯＳ経路、またはＧＩＴＲ経路を標的化することによるＴ細胞共活性化因子のアゴニスト（すなわち、Ｔ細胞活性化を刺激するタンパク質のアゴニスト）である。
一部の実施形態では、免疫−腫瘍学剤は、ＰＤ−１経路阻害剤である。一部の実施形態では、ＰＤ−１経路阻害剤は、ペンブロリズマブ、ニボルマブ、デュルバルマブ、ピディリズマブ、アベルマブ、またはアテゾリズマブなどであるがこれらに限定されない、抗ＰＤ−１抗体または抗ＰＤ−Ｌ１抗体である。ＰＤ−１経路阻害剤は、当該技術分野において説明されている。たとえば、Dolan et al., Cancer Control, 2014, 21:231-237、Luke et al., Oncotarget, 2014, 6:3479-3492、米国公開第２０１６／０２２２１１３号、同第２０１６／０２７２７０８号、同第２０１６／０２７２７１２号、および同第２０１６／０３１９０１９号を参照されたい。
一部の実施形態では、免疫−腫瘍学剤は、Ｔ細胞共活性化因子のアゴニストである。一部の実施形態では、免疫−腫瘍学剤は、ＣＤ２８、ＣＤ２８Ｈ、ＣＤ３、４−１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＩＣＯＳ、ＯＸ４０、ＧＩＴＲ、ＣＤ２７、またはＣＤ４０のアゴニストである。一部の実施形態では、免疫−腫瘍学剤は、免疫刺激性サイトカインである。一部の実施形態では、免疫刺激性サイトカインは、顆粒球−マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ）、マクロファージコロニー刺激因子（Ｍ−ＣＳＦ）、顆粒球コロニー刺激因子（Ｇ−ＣＳＦ）、インターロイキン１（ＩＬ−１）、インターロイキン２（ＩＬ−２）、インターロイキン３（ＩＬ−３）、インターロイキン１２（ＩＬ−１２）、インターロイキン１５（ＩＬ−１５）、またはインターフェロンガンマ（ＩＦＮ−γ）である。一部の実施形態では、免疫−腫瘍学剤は、ＳＧＮ−２ＦＦ（Ｓｅａｔｔｌｅ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ、たとえば、国際公開第２００９／１３５１８１号Ａ２、同第２０１２／０１９１６５号Ａ２、および同第２０１７／０９６２７４号Ａ１を参照されたい）。
一部の実施形態では、追加の治療剤は、抗ＣＤ２５抗体、抗ＰＤ−１抗体、抗ＰＤ−Ｌ１抗体、抗Ｔｉｍ３抗体、抗Ｌａｇ３抗体、抗ＣＴＬＡ４抗体、抗４１ＢＢ抗体、抗ＯＸ４０抗体、抗ＣＤ３抗体、抗ＣＤ４０抗体、抗ＣＤ４７Ｍ抗体、抗ＣＳＦ１Ｒ抗体、抗ＴＬＲ抗体、抗ＳＴＩＮＧ抗体、抗ＲＩＧＩ抗体、抗ＴＡＭ受容体キナーゼ抗体、抗ＮＫＧ２Ａ抗体、抗ＮＫＧ２Ｄ抗体、抗ＧＤ２抗体、抗ＨＥＲ２抗体、抗ＥＧＦＲ抗体、抗ＰＤＧＦＲ−α抗体、抗ＳＬＡＭＦ７抗体、抗ＶＥＧＦ抗体、抗ＣＴＬＡ−４抗体、抗ＣＤ２０抗体、抗ｃＣＬＢ８抗体、抗ＫＩＲ抗体、および抗ＣＤ５２抗体から選択される。一部の実施形態では、追加の治療剤は、ＳＥＡ−ＣＤ４０（Ｓｅａｔｔｌｅ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ、たとえば、国際公開第２００６／１２８１０３号Ａ２および同第２０１６／０６９９１９号Ａ１を参照されたい）、アベルマブ、デュルバルマブ、ニボルマブ、ペンブロリズマブ、ピディリズマブ、アテゾリズマブ、Ｈｕｌ４．１８Ｋ３２２Ａ（抗ＧＤ２抗体、Ｓｔ． Ｊｕｄｅ）、Ｈｕ３Ｆ８（抗ＧＤ２抗体、ＭＳＫＣＣ）、ジニツキシマブ（dinituximab）、トラスツズマブ、セツキシマブ、オララツマブ、ネシツムマブ、エロツズマブ、ラムシルマブ、ペルツズマブ、イピリムマブ、ベバシズマブ、リツキシマブ、オビヌツズマブ、シルツキシマブ、オファツムマブ、およびアレムツズマブから選択される。
一部の実施形態では、本明細書に記載される抗ＴＩＧＩＴ抗体での処置は、１つまたは複数の他の抗がん処置、たとえば、外科手術または放射線と組み合わされる。一部の実施形態では、本明細書に記載される抗ＴＩＧＩＴ抗体での処置は、１つまたは複数の他の抗がん剤、たとえば、化学療法剤と組み合わされる。非限定的で例示的な化学療法剤としては、アルキル化剤（たとえば、シクロホスファミド、イホスファミド、クロラムブシル、ブスルファン、メルファラン、メクロレタミン、ウラムスチン、チオテパ、ニトロソ尿素、もしくはテモゾロミド）、アントラサイクリン（たとえば、ドキソルビシン、アドリアマイシン、ダウノルビシン、エピルビシン、もしくはミトキサントロン）、細胞骨格破壊剤（たとえば、パクリタキセルもしくはドセタキセル）、ヒストンデアセチラーゼ阻害剤（たとえば、ボリノスタットもしくはロミデプシン）、トポイソメラーゼの阻害剤（たとえば、イリノテカン、トポテカン、アムサクリン、エトポシド、もしくはテニポシド）、キナーゼ阻害剤（たとえば、ボルテゾミブ、エルロチニブ、ゲフィチニブ、イマチニブ、ベムラフェニブ、もしくはビスモデギブ）、ヌクレオシドアナログもしくは前駆体アナログ（たとえば、アザシチジン、アザチオプリン、カペシタビン、シタラビン、フルオロウラシル、ゲムシタビン、ヒドロキシ尿素、メルカプトプリン、メトトレキサート、もしくはチオグアニン）、ペプチド抗生物質（たとえば、アクチノマイシンもしくはブレオマイシン）、白金系薬剤（たとえば、シスプラチン、オキサロプラチン（oxaloplatin）、もしくはカルボプラチン）、または植物アルカロイド（たとえば、ビンクリスチン、ビンブラスチン、ビノレルビン、ビンデシン、ポドフィロトキシン、パクリタキセル、もしくはドセタキセル）、ガラルディン、サリドマイド、レナリドマイド、ならびにポマリドミドが挙げられる。
一部の実施形態では、抗ＴＩＧＩＴ抗体（および必要に応じて追加の治療剤）は、治療有効量または用量で投与される。約０．０１ｍｇ／ｋｇ〜約５００ｍｇ／ｋｇ、または約０．１ｍｇ／ｋｇ〜約２００ｍｇ／ｋｇ、または約１ｍｇ／ｋｇ〜約１００ｍｇ／ｋｇ、または約１０ｍｇ／ｋｇ〜約５０ｍｇ／ｋｇの１日用量範囲を、使用することができる。投薬量は、しかしながら、選択される投与経路、組成物の配合、患者の応答、状態の重症度、対象の体重、および処方する医師の判断を含む、いくつかの因子により変動し得る。投薬量は、個々の患者により必要とされる場合、経時的に増加または減少させることができる。ある特定の事例では、患者は、最初に低い用量が与えられ、次いで、これが、患者の耐容できる有効な投薬量へと増加される。有効量の決定は、十分に当業者の能力の範囲内である。
抗ＴＩＧＩＴ抗体または抗ＴＩＧＩＴ抗体を含む医薬組成物（および必要に応じて免疫−腫瘍学剤または他の治療処置）の投与経路は、経口、腹腔内、経皮、皮下、静脈内、筋肉内、吸入、局所、病巣内、直腸、気管支内、鼻内、経粘膜、腸内、眼内、もしくは耳内送達、または当該技術分野において公知の任意の他の方法であり得る。一部の実施形態では、抗ＴＩＧＩＴ抗体（および必要に応じて免疫−腫瘍学剤）は、経口、静脈内、または腹腔内で投与される。
共投与される治療剤（たとえば、抗ＴＩＧＩＴ抗体および追加の治療剤）は、一緒または別個に、同時または異なる時点で、投与することができる。投与されるとき、治療剤は、独立して、必要に応じて、１日１回、２回、３回、４回、またはより多いかもしくは少ない頻度で、投与することができる。一部の実施形態では、投与される治療剤は、１日１回投与される。一部の実施形態では、投与される治療剤は、同時に、たとえば、混合物として、投与される。一部の実施形態では、治療剤のうちの１つまたは複数は、持続放出製剤で投与される。
一部の実施形態では、抗ＴＩＧＩＴ抗体および追加の治療剤は、同時に投与される。一部の実施形態では、抗ＴＩＧＩＴ抗体および追加の治療剤は、逐次的に投与される。たとえば、一部の実施形態では、抗ＴＩＧＩＴ抗体が、まず、追加の治療剤を投与する前に、たとえば、約１日間、２日間、３日間、４日間、５日間、６日間、７日間、８日間、９日間、１０日間、１５日間、２０日間、２５日間、３０日間、４０日間、５０日間、６０日間、７０日間、８０日間、９０日間、１００日間、またはそれよりも長く、投与される。一部の実施形態では、追加の治療剤が、まず、抗ＴＩＧＩＴ抗体を投与する前に、たとえば、約１日間、２日間、３日間、４日間、５日間、６日間、７日間、８日間、９日間、１０日間、１５日間、２０日間、２５日間、３０日間、４０日間、５０日間、６０日間、７０日間、８０日間、９０日間、１００日間、またはそれよりも長く、投与される。
一部の実施形態では、抗ＴＩＧＩＴ抗体（および必要に応じて追加の治療剤）は、対象に、長期間にわたって、たとえば、少なくとも３０日間、４０日間、５０日間、６０日間、７０日間、８０日間、９０日間、１００日間、１５０日間、２００日間、２５０日間、３００日間、３５０日間、またはそれよりも長く、投与される。
Ｖ．組成物およびキット
別の態様では、対象におけるがんを処置または予防する際に使用するための、抗ＴＩＧＩＴ抗体を含む組成物およびキットが、提供される。
医薬組成物
一部の実施形態では、がんを有する対象に投与する際に使用するための抗ＴＩＧＩＴ抗体を含む医薬組成物が、提供される。一部の実施形態では、抗ＴＩＧＩＴ抗体は、本明細書に記載される通りであり、たとえば、結合親和性、活性、交差反応性、エピトープ認識、ならびに／または本明細書に開示される１つもしくは複数のＣＤＲ、ＶＨ、および／もしくはＶＬ配列を有する、抗ＴＩＧＩＴ抗体である。一部の実施形態では、抗ＴＩＧＩＴ抗体は、アフコシル化されている。
一部の実施形態では、抗ＴＩＧＩＴ抗体および追加の治療剤は、本明細書に記載されるように、一緒にまたは別個に、医薬組成物に製剤化される。一部の実施形態では、追加の治療剤は、免疫−腫瘍学剤、たとえば、ＰＤ−１経路阻害剤またはＣＴＬＡ−４経路阻害剤である。一部の実施形態では、免疫−腫瘍学剤は、Ｔ細胞共活性化因子のアゴニストである。一部の実施形態では、ＰＤ−１経路阻害剤は、ペンブロリズマブ、ニボルマブ、デュルバルマブ、ピディリズマブ、またはアテゾリズマブなどであるがこれらに限定されない、抗ＰＤ−１抗体または抗ＰＤ−Ｌ１抗体である。
本発明において使用するための製剤を調製するための指針は、たとえば、Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 21st Ed., 2006（上記）、Martindale: The Complete Drug Reference, Sweetman, 2005, London: Pharmaceutical Press、Niazi, Handbook of Pharmaceutical Manufacturing Formulations, 2004, CRC Press、およびGibson, Pharmaceutical Preformulation and Formulation: A Practical Guide from Candidate Drug Selection to Commercial Dosage Form, 2001, Interpharm Pressに見出され、これらは、参照により本明細書に組み込まれる。本明細書に記載される医薬組成物は、当業者に公知である様式で、すなわち、従来的な混合、溶解、顆粒化、ドラジェ作製、乳化、カプセル封入、封入、または凍結乾燥のプロセスを用いて、製造することができる。以下の方法および賦形剤は、単なる例示であり、決して限定するものではない。
一部の実施形態では、抗ＴＩＧＩＴ抗体（および必要に応じて追加の治療剤）は、持続放出、制御放出、延長放出、時間放出、または遅延放出製剤での送達用に、たとえば、治療剤を含む固体疎水性ポリマーの半透過性マトリックスで調製される。様々な種類の持続放出材料が、確立されており、当業者に周知である。現在の延長放出製剤としては、フィルムコーティング錠剤、多粒子もしくはペレット系、親水性材料もしくは親油性材料を使用するマトリックス技術、および細孔形成賦形剤を用いたワックス系錠剤が挙げられる（たとえば、Huang, et al. Drug Dev. Ind. Pharm. 29:79 (2003)、Pearnchob, et al. Drug Dev. Ind. Pharm. 29:925 (2003)、Maggi, et al. Eur. J. Pharm. Biopharm. 55:99 (2003)、Khanvilkar, et al., Drug Dev. Ind. Pharm. 228:601 (2002)、およびSchmidt, et al., Int. J. Pharm. 216:9 (2001)を参照されたい）。持続放出送達系は、それらの設計に応じて、数時間または数日間の過程にわたって、たとえば、４時間、６時間、８時間、１０時間、１２時間、１６時間、２０時間、２４時間、またはそれよりも長くにわたって、化合物を放出することができる。通常、持続放出製剤は、天然に存在するかまたは合成のポリマー、たとえば、重合性ビニルピロリドン、たとえば、ポリビニルピロリドン（ＰＶＰ）、カルボキシビニル親水性ポリマー、疎水性および／または親水性ハイドロコロイド、たとえば、メチルセルロース、エチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、およびヒドロキシプロピルメチルセルロース、ならびにカルボキシポリメチレンを使用して、調製することができる。
経口投与については、抗ＴＩＧＩＴ抗体（および必要に応じて追加の治療剤）は、当該技術分野において周知の薬学的に許容される担体と組み合わせることによって容易に製剤化することができる。そのような担体は、化合物を、処置しようとする患者による経口摂取のための錠剤、丸剤、ドラジェ剤、カプセル、エマルジョン、親油性および親水性懸濁液、液体、ゲル、シロップ、スラリー、懸濁液などとして製剤化することを可能にする。経口使用のための医薬調製物は、化合物を、固体賦形剤と混合し、必要に応じて結果として得られた混合物を粉砕し、所望される場合は、適切な補助剤を添加した後に、顆粒の混合物を処理して、錠剤またはドラジェ剤のコアを得ることによって、得ることができる。適切な賦形剤としては、たとえば、充填剤、たとえば、ラクトース、スクロース、マンニトール、またはソルビトールを含む糖、セルロース調製物、たとえば、例として、トウモロコシデンプン、コムギデンプン、コメデンプン、ジャガイモデンプン、ゼラチン、トラガカントガム、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチル−セルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウム、ならびに／またはポリビニルピロリドン（ＰＶＰ）が挙げられる。所望される場合、架橋型ポリビニルピロリドン、寒天、もしくはアルギン酸、またはアルギン酸ナトリウムなどのそれらの塩といった、崩壊剤を添加してもよい。
抗ＴＩＧＩＴ抗体（および必要に応じて追加の治療剤）は、注射、たとえば、ボーラス注射または連続注入による非経口投与用に製剤化することができる。注射に関して、化合物は、それらを、水性または非水性の溶媒、たとえば、植物油または他の類似の油、合成脂肪酸グリセリド、高級脂肪酸もしくはプロピレングリコールのエステルに、所望される場合には従来的な添加剤、たとえば、可溶化剤、等張剤、懸濁化剤、乳化剤、安定化剤、および保存剤とともに、溶解、懸濁、または乳化させることによって、調製物へと製剤化することができる。一部の実施形態では、化合物は、水溶液、好ましくは、生理学的に適合性のある緩衝液、たとえば、ハンクス溶液、リンガー溶液、または生理食塩緩衝液において製剤化され得る。注射用の製剤は、添加された保存剤とともに、単位投薬形態、たとえば、アンプルまたは複数用量用の容器で提示され得る。組成物は、油性または水性ビヒクル中の懸濁液、溶液、またはエマルジョンなどの形態をとり得、懸濁化剤、安定化剤、および／または分散剤などの製剤化用薬剤を含有し得る。
抗ＴＩＧＩＴ抗体（および必要に応じて追加の治療剤）は、経粘膜または経皮手段によって全身的に投与することができる。経粘膜投与または経皮投与に関して、透過させようとする障壁に適切な透過性物質が、製剤中に使用される。局所投与に関して、薬剤は、軟膏、クリーム、膏薬、粉末、およびゲルに製剤化される。一実施形態では、経皮送達剤は、ＤＭＳＯであり得る。経皮送達系としては、たとえば、パッチを挙げることができる。経粘膜投与に関しては、透過させようとする障壁に適切な透過性物質が、製剤中に使用される。そのような透過性物質は、概して、当該技術分野において公知である。例示的な経皮送達製剤としては、米国特許第６，５８９，５４９号、同第６，５４４，５４８号、同第６，５１７，８６４号、同第６，５１２，０１０号、同第６，４６５，００６号、同第６，３７９，６９６号、同第６，３１２，７１７号、および同第６，３１０，１７７号に記載されるものが挙げられ、これらのそれぞれは、参照により本明細書に組み込まれる。
一部の実施形態では、医薬組成物は、許容される担体および／または賦形剤を含む。薬学的に許容される担体としては、治療剤と生理学的に適合性があり、好ましくは治療剤に干渉することもその活性を阻害することもない、任意の溶媒、分散媒、またはコーティング剤が挙げられる。一部の実施形態では、担体は、静脈内、筋肉内、経口、腹腔内、経皮、局所、または皮下投与に適切である。薬学的に許容される担体は、たとえば、組成物を安定させるか、または活性剤の吸収を増加もしくは減少させるように作用する、１つまたは複数の生理学的に許容される化合物を含有し得る。生理学的に許容される化合物としては、たとえば、炭水化物、たとえば、グルコース、スクロース、もしくはデキストラン、抗酸化剤、たとえば、アスコルビン酸もしくはグルタチオン、キレート剤、低分子量タンパク質、活性剤のクリアランスもしくは加水分解を低減させる組成物、または賦形剤、または他の安定化剤および／もしくは緩衝剤を挙げることができる。他の薬学的に許容される担体およびそれらの製剤は、周知であり、概して、たとえば、Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 21st Edition, Philadelphia, PA. Lippincott Williams & Wilkins, 2005に記載されている。様々な薬学的に許容される賦形剤が、当該技術分野において周知であり、たとえば、Handbook of Pharmaceutical Excipients (5th ed., Ed. Rowe et al., Pharmaceutical Press, Washington, D.C.)に見出すことができる。
本開示の医薬組成物の投薬量および所望される薬物濃度は、想定される具体的な使用に応じて変動し得る。適切な投薬量または投与経路の決定は、十分に当業者の技能の範囲内である。適切な投薬量はまた、本明細書に記載されている。
キット
一部の実施形態では、がんを有する対象を処置する際に使用するためのキットが、提供される。一部の実施形態では、キットは、
抗ＴＩＧＩＴ抗体と、
追加の治療剤と
を含む。
一部の実施形態では、抗ＴＩＧＩＴ抗体は、本明細書に記載される通りであり、たとえば、結合親和性、活性、交差反応性、エピトープ認識、ならびに／または本明細書に開示される１つもしくは複数のＣＤＲ、ＶＨ、および／もしくはＶＬ配列を有する、抗ＴＩＧＩＴ抗体である。一部の実施形態では、抗ＴＩＧＩＴ抗体は、アフコシル化されている。一部の実施形態では、追加の治療剤は、免疫−腫瘍学剤、たとえば、ＰＤ−１経路阻害剤またはＣＴＬＡ−４経路阻害剤である。一部の実施形態では、免疫−腫瘍学剤は、Ｔ細胞共活性化因子のアゴニストである。一部の実施形態では、ＰＤ−１経路阻害剤は、抗ＰＤ−１抗体または抗ＰＤ−Ｌ１抗体である。一部の実施形態では、免疫−腫瘍学剤は、ペンブロリズマブ、ニボルマブ、デュルバルマブ、ピディリズマブ、またはアテゾリズマブである。
一部の実施形態では、キットは、本発明の方法の実施のための指示（すなわち、プロトコール）を含む説明材料（たとえば、がんの処置にキットを使用するための説明書）をさらに含み得る。説明材料は、典型的に、文書または書面材料を含むが、そのようなものに限定されない。そのような説明を記憶し、それらをエンドユーザーに伝えることができる任意の媒体が、本発明によって企図される。そのような媒体としては、電子記憶媒体（たとえば、磁気ディスク、テープ、カートリッジ、チップ）、光学媒体（たとえば、ＣＤ ＲＯＭ）などが挙げられるが、これらに限定されない。そのような媒体には、そのような説明材料を提供するインターネットサイトへのアドレスが含まれ得る。
ＶＩ．実施例
以下に考察される実施例は、純粋に本発明の例示であることを意図するものであり、決して本発明を制限するとみなされるものではない。実施例は、以下の実験が、実施されるすべての実験または唯一の実験であると表すことを意図するものではない。使用される数字（たとえば、量、温度など）に関して正確性を確保する努力がなされたが、ある程度の実験的誤差および偏差は考慮すべきである。別途示されない限り、部は重量部であり、分子量は平均分子量であり、温度は摂氏度であり、圧力は大気圧またはその付近である。
（実施例１）
抗ＴＩＧＩＴ抗体の生成
完全ヒト抗ＴＩＧＩＴモノクローナル抗体を、酵母に基づく抗体提示系を使用して生成した（たとえば、Xu et al, "Addressing polyspecificity of antibodies selected from an in vitro yeast presentation system: a FACS-based, high-throughput selection and analytical tool," PEDS, 2013, 26:663-670、国際公開第２００９／０３６３７９号、同第２０１０／１０５２５６号、および同第２０１２／００９５６８号を参照されたい）。それぞれ約１０９の多様性の８つのナイーブヒト合成酵母ライブラリーを、スクリーニングした。最初の２ラウンドの選択については、以前に説明されているように、Ｍｉｌｔｅｎｙｉ ＭＡＣＳシステムを利用して磁気ビーズ分取技法を行った（たとえば、Siegel et al, "High efficiency recovery and epitope-specific sorting of an scFv yeast display library," J Immunol Methods, 2004, 286:141-153を参照されたい）。簡単に述べると、酵母細胞（約１０１０個の細胞／ライブラリー）を、５ｍＬの１０ｎＭビオチン化Ｆｃ融合抗原とともに、洗浄緩衝液（リン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）／０．１％ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ））において、３０℃で３０分間インキュベートした。４０ｍＬの氷冷洗浄緩衝液で１回洗浄した後、細胞ペレットを、２０ｍＬの洗浄緩衝液中に再懸濁させ、ストレプトアビジンマイクロビーズ（５００μＬ）を酵母に添加し、４℃で１５分間インキュベートした。次に、酵母をペレット状にし、２０ｍＬの洗浄緩衝液中に再懸濁させ、Ｍｉｌｔｅｎｙｉ ＬＳカラムにロードした。この２０ｍＬをロードした後、カラムを、３ｍＬの洗浄緩衝液で３回洗浄した。次いで、カラムを、磁場から取り出し、酵母を、５ｍＬの増殖培地で溶出させた後、一晩増殖させた。次のラウンドの選択は、フローサイトメトリーを使用して行った。およそ２×１０７個の酵母をペレット状にし、洗浄緩衝液で３回洗浄し、平衡条件下において１０ｎＭのＦｃ融合抗原および漸減濃度のビオチン化単量体抗原（１００から１ｎＭ）とともに、種間交差反応性を得るために１０ｎＭのビオチン化Ｆｃ融合抗原もしくは１００ｎＭの異なる種の単量体抗原とともに、または選択から非特異性抗体を除去するために複特異性枯渇試薬（ＰＳＲ）とともに、３０℃でインキュベートした。ＰＳＲ枯渇については、ライブラリーを、以前に説明されているように、ビオチン化ＰＳＲ試薬の１：１０希釈物とともにインキュベートした（たとえば、Xu et al（上記）を参照されたい）。次いで、酵母を、洗浄緩衝液で２回洗浄し、４℃で１５分間、ＬＣ−ＦＩＴＣ（１：１００で希釈）、およびＳＡ−６３３（１：５００で希釈）またはＥＡ−ＰＥ（エクストラアビジン（ｅｘｔｒａｖｉｄｉｎ）−Ｒ−ＰＥ、１：５０で希釈）のいずれかの二次試薬で染色した。洗浄緩衝液で２回洗浄した後、細胞ペレットを、０．３ｍＬの洗浄緩衝液中に再懸濁させ、ストレーナーキャップ付き分取チューブに移した。ＦＡＣＳ ＡＲＩＡ分取装置（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）を使用して分取を行い、分取ゲートは、所望される特徴を有する抗体を選択するように決定した。選択ラウンドは、所望される特徴のすべてを有する集団が得られるまで繰り返した。最後のラウンドの分取の後、酵母を播種し、個々のコロニーを特徴付けのために選択した。
抗原には、組換え二量体ヒトＴＩＧＩＴ−Ｆｃ（Ａｃｒｏ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ ＴＩＴ−Ｈ５２５４）、単量体ヒトＴＩＧＩＴ（Ｓｉｎｏ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ １０９１７−Ｈ０８Ｈ）、二量体マウスＴＩＧＩＴ−Ｆｃ（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ、７２６７−ＴＧ）、および単量体マウスＴＩＧＩＴ（Ｓｉｎｏ Ｂｉｏｌｏｇｉｃｓ ５０９３９−Ｍ０８Ｈ）が含まれた。
ナイーブキャンペーン：７４４個のクローンをシーケンシングして、３４５個の固有のクローン（固有のＣＤＲＨ３）を得た。１８個のＶＨ生殖系列が、クローンにおいて示された。
軽鎖バッチ多様化キャンペーン：ラウンド６のナイーブ発見選択から得られた、富化されたバインダープールに由来する重鎖（ＶＨ）プラスミドを、スマッシュアンドグラブ法（ｓｍａｓｈ ａｎｄ ｇｒａｂ）によって酵母から抽出し、大腸菌において増殖させた後、そこから精製し、次いで、１０７の多様性を有する軽鎖ライブラリーに形質転換した。
ナイーブ発見のものと本質的に同じ条件下において、選択を行った。簡単に述べると、磁気ビーズ富化を１ラウンド行い、続いて、フローサイトメトリーによる選択を３ラウンド行った。磁気ビーズ富化のラウンドでは、１０ｎＭのビオチン化Ｆｃ融合抗原を使用した。フローサイトメーターでの第１のラウンドは、１００ｎＭのビオチン化一価抗原を使用した陽性選択ラウンドからなっていた。これに続いて、ＰＳＲ枯渇の陰性選択ラウンドからなる第２のラウンドを行った。最後のラウンド（３第ラのウンド）は、一価抗原を１００ｎＭ、１０ｎＭ、１ｎＭで滴定する陽性選択ラウンドからなっていた。すべてのライブラリーについて、この第３のラウンドから得られた１ｎＭの分取物に由来する酵母を播種し、個々のコロニーを選択し、特徴付けた。合計すると、７２８個のクローンをシーケンシングして、３５０個の固有のＨＣ／ＬＣの組合せ（９３個の固有のＣＤＲＨ３）を得た。
合計で６９５個の固有のクローンが、ナイーブおよび軽鎖バッチシャッフルキャンペーン間で特定された。
（実施例２）
抗ＴＩＧＩＴ抗体の特徴付け
１２個のＶＨ生殖系列および９個のＶＬ生殖系列を表す６５個のクローンを、産生およびさらなる評価に選択した。
抗体の産生および精製
酵母クローンを、飽和まで増殖させた後、振盪させながら３０℃で４８時間誘導した。誘導した後、酵母細胞をペレット状にし、上清を精製のために採取した。ＩｇＧを、プロテインＡカラムを使用して精製し、酢酸、ｐＨ２．０で溶出させた。パパイン消化によってＦａｂ断片を生成し、ＫａｐｐａＳｅｌｅｃｔ（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ ＬｉｆｅＳｃｉｅｎｃｅｓ）で精製した。
組換えヒトおよびマウスタンパク質への抗ＴＩＧＩＴ抗体の結合
ＦｏｒｔｅＢｉｏ親和性測定を、概して以前に説明されているように、Ｏｃｔｅｔ ＲＥＤ３８４において行った（たとえば、Estep et al., "High throughput solution-based measurement of antibody-antigen affinity and epitope binning," Mabs, 2013, 5:270-278を参照されたい）。簡単に述べると、ＦｏｒｔｅＢｉｏ親和性測定を、ＩｇＧをオンラインでＡＨＱセンサーにロードすることによって行った。センサーを、アッセイ緩衝液中で３０分間、オフラインで平衡させ、次いで、ベースライン構築のために６０秒間、オンラインでモニタリングした。ＩｇＧがロードされたセンサーを、１００ｎＭの抗原（二量体Ｆｃ融合抗原または単量体抗原）に３分間曝露させ、その後、解離速度測定のために、３分間、アッセイ緩衝液に移した。すべての結合および解離動態は、１：１結合モデルを使用して分析した。
６５個のＩｇＧクローンのうち、４３個は、ＴＩＧＩＴ単量体に対して、１００ｎＭ未満の親和性を有した。６５個のＩｇＧクローンのうち、３４個は、マウスＴＩＧＩＴ−Ｆｃと交差反応した。選択されたクローンの結合親和性を、以下の表１に示す。
エピトープビニング／リガンド競合アッセイ
エピトープビニング／リガンド遮断を、標準的なサンドイッチ形式の交差遮断アッセイを使用して、ＦｏｒｔｅＢｉｏ Ｏｃｔｅｔ ＲＥＤ３８４システムにおいて行った。対照抗標的ＩｇＧを、ＡＨＱセンサーにロードし、センサー上の占有されていないＦｃ結合部位を、無関係のヒトＩｇＧ１抗体でブロッキングした。次いで、センサーを、１００ｎＭの標的抗原に曝露させた後、二次抗標的抗体またはリガンド（ヒトＣＤ１５５−Ｆｃ（Ｓｉｎｏ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ、１０１０９−Ｈ０２Ｈ））に曝露した。抗原会合後の二次抗体またはリガンドによるさらなる結合は、占有されていないエピトープ（非競合物質）を示すが、結合がないことは、エピトープ遮断（競合物質またはリガンド遮断）を示す。
４つのビニング抗体（相互排他的でない）を、ビンの評価に使用し、５つのオーバーラップするビニングプロファイルを特定した。６５個の抗ＴＩＧＩＴ抗体のうちの６３個が、ｈＴＩＧＩＴ−Ｆｃへの結合に関して、リガンドと競合した。選択されたクローンのビニングプロファイルおよびリガンド競合の結果を、以下の表１に示す。
Figure 2021534196
ＨＥＫ ２９３細胞において過剰発現されるヒト、マウス、およびカニクイザルＴＩＧＩＴへの抗ＴＩＧＩＴ抗体の結合
ＨＥＫ ２９３細胞を、レンチウイルス形質導入によって、高レベルのヒト、マウス、またはカニクイザルＴＩＧＩＴを安定に発現するように操作した。およそ１００，０００個の親ＨＥＫ ２９３（ＴＩＧＩＴ陰性）細胞、またはヒト、マウス、もしくはカニクイザルを過剰発現するＨＥＫ ２９３細胞を、室温で５分間、１００ｎＭのそれぞれの抗ＴＩＧＩＴ抗体で染色した。次いで、細胞を、洗浄緩衝液で２回洗浄し、ＰＥにコンジュゲートした抗ヒトＩｇＧとともに、氷上で１５分間インキュベートした。次いで、細胞を、洗浄緩衝液で２回洗浄し、ＦＡＣＳ Ｃａｎｔｏ ＩＩ機器（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）においてフローサイトメトリーによって分析した。バックグラウンドに対する倍数（ＦＯＢ）を、標的陽性細胞に結合した抗ＴＩＧＩＴクローンの中央値蛍光強度（ＭＦＩ）を標的陰性細胞に結合した抗ＴＩＧＩＴクローンのＭＦＩで除したものとして計算した。
図１に示されるように、６５個すべての抗体が、２９３−ｈＴＩＧＩＴ系への特異的な結合を示した（ＦＯＢ＞１０、図において水平方向の黒色の線で示される）。５３個のクローンは、２９３−ｃｙＴＩＧＩＴ系に特異的に結合し、一方で３１個のクローンは、２９３−ｍＴＩＧＩＴ系に特異的に結合した。
複特異性試薬（ＰＳＲ）アッセイ
複特異性試薬への結合の評価を、以前に説明されているように、ＴＩＧＩＴに対する特異性を決定するために行った（たとえば、Xu et al（上記）を参照されたい）。簡単に述べると、原液から１：１０で希釈したビオチン化ＰＳＲ試薬を、ＩｇＧを提示する酵母とともに、氷上で２０分間インキュベートした。細胞を洗浄し、ＥＡ−ＰＥ（エクストラアビジン−Ｒ−ＰＥ）で標識し、ＦＡＣＳ分析装置で読み取った。複特異性結合のスコア付けは、０から１のスケールで行い、０のスコアが結合なしを示し、１のスコアが非常に高い非特異性結合を示す、低い、中等度、および高い非特異性結合を有する対照ＩｇＧと相関させる。
６５個のクローンのうちの６２個は、ＰＳＲスコアが０．１０未満である非複特異性バインダーとしてスコア付けされた。３つのクローンは、低い複特異性バインダー（ＰＳＲスコア０．１０〜０．３３）としてスコア付けされた。
疎水性相互作用クロマトグラフィーアッセイ
疎水性相互作用クロマトグラフィー（ＨＩＣ）を、以前に説明されているように行った（Estep et al.（上記））。簡単に述べると、分析の前に、５μｇのＩｇＧ試料に、移動相Ａ溶液（１．８Ｍ硫酸アンモニウムおよび０．１Ｍリン酸ナトリウム、ｐＨ６．６）をスパイク添加して、約１Ｍの最終硫酸アンモニウム濃度を達成した。Ｓｅｐａｘ Ｐｒｏｔｅｏｍｉｘ ＨＩＣブチル−ＮＰ５カラムを、移動相Ａおよび移動相Ｂ溶液（０．１Ｍリン酸ナトリウム、ｐＨ６．５）の線形勾配で２０分間、１ｍＬ／分の流速で使用し、ＵＶ吸光を２８０ｎＭでモニタリングした。
疎水性カラム上の抗体の保持の増加は、疎水性の増加、および精製中の発現不良、凝集、または沈降の傾向と相関付けられている。６５個のクローンのうちの５つは、１１．５分間を超える高いＨＩＣ保持時間を有し、１０個のクローンは、１０．５〜１１．５分間の中等度のＨＩＣ保持時間を有し、残りのクローンは、低いＨＩＣ保持時間を有した。
（実施例３）
初代Ｔ細胞上に内因的に発現されるヒト、マウス、およびカニクイザルＴＩＧＩＴへの抗ＴＩＧＩＴ抗体の結合
ＨＥＫ ２９３細胞に発現されるヒトＴＩＧＩＴ組換えタンパク質およびヒトＴＩＧＩＴに対して特異的であると示された６５個の抗体を、初代ヒト末梢血Ｔ細胞上の内因性ＴＩＧＩＴに結合するそれらの能力について、評価した。これらの抗体を、末梢血Ｔ細胞上のカニクイザルＴＩＧＩＴへの交差反応性についても評価し、６５個のクローンのうち３５個を、活性化された脾臓Ｔ細胞上のマウスＴＩＧＩＴへの交差反応性について評価した。
ヒト汎Ｔ細胞を、白血球アフェレーシス産物から９９％の純度に陰性単離した。１００，０００個の細胞を、４℃で３０分間、２０μｇ／ｍＬのそれぞれの抗ＴＩＧＩＴ抗体で染色した。抗ＴＩＧＩＴ抗体を、ＰＥにコンジュゲートしたポリクローナルヤギ抗ヒトＩｇＧ（Ｊａｃｋｓｏｎ ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ １０９−１１６−０９８）で検出した。試料を、ＣｙｔｏＦＬＥＸフローサイトメーターで分析した。ＦＳＣ／ＳＳＣでゲーティングしたリンパ球集団中のＴＩＧＩＴ＋のパーセントを、抗ヒトＩｇＧ−ＰＥのみでの染色を使用してそれぞれの抗体について決定して、陽性の閾値を決定した。
カニクイザル白血球を、全血から、赤血球溶解によって単離した（ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ ００−４３００）。２００，０００個の細胞を、４℃で３０分間、２０μｇ／ｍＬのそれぞれの抗ＴＩＧＩＴ抗体で染色した。抗ＴＩＧＩＴ抗体を、ＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ６４７にコンジュゲートしたサル免疫グロブリンに対して吸着されるポリクローナルヤギ抗ヒトＩｇＧ（ＳｏｕｔｈｅｒｎＢｉｏｔｅｃｈ ２０４９−３１）を用いて検出し、Ｔ細胞を、ＦＩＴＣにコンジュゲートした抗ＣＤ３クローンＳＰ３４（ＢＤ Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ ５５６６１１）での対比染色によって特定した。試料を、ＣｙｔｏＦＬＥＸフローサイトメーターで分析した。ＣＤ３＋集団中のＴＩＧＩＴ＋のパーセントを、抗ヒトＩｇＧ−ＰＥのみでの染色を使用してそれぞれの抗体について決定して、陽性の閾値を決定した。
ＢＡＬＢ／ｃマウスＴ細胞を、脾臓から９９％を上回る純度に陰性選択によって単離した（Ｓｔｅｍ Ｃｅｌｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ １９８５１Ａ）。細胞を、プレートに結合した抗ＣＤ３クローン１４５−２Ｃ１１（ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ １００３０２）を用いて２４時間活性化して、ＴＩＧＩＴを上方調節した。２００，０００個の活性化された細胞を、４℃で３０分間、２０μｇ／ｍＬのそれぞれの抗ＴＩＧＩＴ抗体で染色した（６５個のクローンのうち３５個を試験）。抗ＴＩＧＩＴ抗体を、ＰＥにコンジュゲートしたポリクローナルヤギ抗ヒトＩｇＧ（Ｊａｃｋｓｏｎ ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ １０９−１１６−０９８）で検出した。試料を、ＦＡＣＳＣａｌｉｂｕｒフローサイトメーターで分析した。ＦＳＣ／ＳＳＣでゲーティングしたリンパ球集団の中央値蛍光強度を、それぞれの抗体について決定した。
図２は、初代ヒト、カニクイザル、およびマウスＴ細胞への６５個の抗ＴＩＧＩＴ抗体クローンおよび無関係なアイソタイプ対照抗体の結合を示す。クローン１３および２５は、いずれも、３つすべての種のＴ細胞への強力な結合を示した。
細胞表面に発現されるＴＩＧＩＴへの抗ＴＩＧＩＴ抗体の滴定可能な結合
ＨＥＫ ２９３細胞を、レンチウイルス形質導入によって、高レベルのヒト、マウス、またはカニクイザルＴＩＧＩＴを安定に発現するように操作した。２００，０００個の２９３−ＴＩＧＩＴ細胞を、４℃で３０分間、それぞれの抗ＴＩＧＩＴ抗体の１０点３倍滴定物（３０〜０．００２μｇ／ｍＬ）で染色した。抗ＴＩＧＩＴ抗体を、ＰＥにコンジュゲートしたポリクローナルヤギ抗ヒトＩｇＧ（Ｊａｃｋｓｏｎ ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ １０９−１１６−０９８）で検出した。試料を、ＣｙｔｏＦＬＥＸフローサイトメーターで分析した。ＦＳＣ／ＳＳＣでゲーティングした集団の中央値蛍光強度を、それぞれの抗体濃度について決定した。Ｌｏｇ（Ｘ）変換データの非線形回帰を使用して、ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ ６においてＥＣ５０値を得た。抗ＴＩＧＩＴ抗体のいずれも、親ＨＥＫ ２９３細胞（ＴＩＧＩＴ−）への結合を示さなかった（データは示されない）。図３Ａ〜Ｃは、ＨＥＫ ２９３細胞上に発現されるヒト、カニクイザル、およびマウスＴＩＧＩＴへの８つの抗ＴＩＧＩＴ抗体クローン（クローン２、クローン５、クローン１３、クローン１６、クローン１７、クローン２０、クローン２５、およびクローン５４）の結合の結合滴定を示し、図３Ｄは、そのＥＣ５０を示す。
Ｃ５７ＢＬ／６マウスＴ細胞を、脾臓から９９％を上回る純度に陰性選択によって単離した（Ｓｔｅｍ Ｃｅｌｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ １９８５１Ａ）。細胞を、プレートに結合した抗ＣＤ３クローン１４５−２Ｃ１１（ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ １００３０２）を用いて２４時間活性化して、ＴＩＧＩＴを上方調節した。２００，０００個の細胞を、４℃で３０分間、それぞれの抗ＴＩＧＩＴ抗体の８点３倍滴定物（３０〜０．０１４μｇ／ｍＬ）で染色した。抗ＴＩＧＩＴ抗体を、ＰＥにコンジュゲートしたポリクローナルヤギ抗ヒトＩｇＧ（Ｊａｃｋｓｏｎ ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ １０９−１１６−０９８）で検出した。試料を、ＦＡＣＳＣａｌｉｂｕｒフローサイトメーターで分析した。ＦＳＣ／ＳＳＣでゲーティングしたリンパ球集団の中央値蛍光強度を、それぞれの抗体について決定した。Ｌｏｇ（Ｘ）変換データの非線形回帰を使用して、ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ ６においてＥＣ５０値を得た。図４は、活性化されたマウス脾臓Ｔ細胞への抗ＴＩＧＩＴクローン１３および２５の結合の結合滴定およびＥＣ５０を示す。
（実施例４）
抗ＴＩＧＩＴ抗体は、細胞表面に発現されるＴＩＧＩＴへのＣＤ１５５およびＣＤ１１２リガンドの結合を遮断する
ＨＥＫ ２９３細胞を、レンチウイルス形質導入によって、高レベルのヒトまたはマウスＴＩＧＩＴを安定に発現するように操作した。ｈＣＤ１５５−Ｆｃ（Ｓｉｎｏ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ １０１０９−Ｈ０２Ｈ）、ｈＣＤ１１２−Ｆｃ（Ｓｉｎｏ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ １０００５−Ｈ０２Ｈ）、およびｍＣＤ１５５−Ｆｃ（Ｓｉｎｏ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ ５０２５９−Ｍ０３Ｈ）を、ＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ６４７（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ａ３０００９）にコンジュゲートした。２００，０００個の２９３−ｈＴＩＧＩＴまたは２９３−ｍＴＩＧＩＴ細胞を、１μｇ／ｍＬのＣＤ１５５−Ｆｃ−ＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ６４７または５μｇ／ｍＬのＣＤ１１２−Ｆｃ−ＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ６４７、ならびにそれぞれの抗ＴＩＧＩＴ抗体の１２点２倍滴定物（１０〜０．００５μｇ／ｍＬ）またはアイソタイプ対照抗体とともに、共インキュベートした。試料を、ＣｙｔｏＦＬＥＸフローサイトメーターで分析した。ＦＳＣ／ＳＳＣでゲーティングした集団の中央値蛍光強度を、それぞれの抗体濃度について決定した。遮断パーセントを、抗体なしの対照のＭＦＩに対して計算した。Ｌｏｇ（Ｘ）変換データの非線形回帰を、ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ ６において行った。
図５Ａ〜Ｂに示されるように、６つの抗ＴＩＧＩＴ抗体クローン（クローン２、クローン５、クローン１３、クローン１７、クローン２５、およびクローン５５）を試験し、６つのクローンのうちの５つ（クローン２、クローン５、クローン１３、クローン１７、およびクローン２５）が、ヒトＣＤ１５５／ヒトＴＩＧＩＴおよびマウスＣＤ１５５／マウスＴＩＧＩＴの両方に関して、ＨＥＫ ２９３細胞上に発現されるＴＩＧＩＴとのＣＤ１５５の相互作用を有意に遮断した。クローン５５は、ヒトＴＩＧＩＴに特異的に結合するが、ＦｏｒｔｅＢｉｏ Ｏｃｔｅｔリガンド競合アッセイにおいて、ｈＴＩＧＩＴ−Ｆｃへの結合に関してｈＣＤ１５５−Ｆｃと競合しなかった。同様に、クローン５５は、２９３−ｈＴＩＧＩＴ細胞系とのｈＣＤ１５５の相互作用を効率的に遮断しなかった。クローン２、クローン５、クローン１３、クローン１７、およびクローン２５はまた、ヒトＴＩＧＩＴへのヒトＣＤ１１２の結合を妨害することができた。ＣＤ１５５に関して観察されたように、クローン５５は、ＣＤ１１２−ＴＩＧＩＴ相互作用の遮断にはさらに効果が低かった。図６を参照されたい。
（実施例５）
ＴＩＧＩＴ／ＣＤ１５５遮断バイオアッセイにおける抗ＴＩＧＩＴ抗体のｉｎ ｖｉｔｒｏ活性
抗ＴＩＧＩＴ抗体の活性は、抗体がＴＩＧＩＴ／ＣＤ１５５相互作用を遮断するとレポーター遺伝子の発現が誘導または増強される、ＴＩＧＩＴ／ＣＤ１５５遮断バイオアッセイ（たとえば、ＴＩＧＩＴ／ＣＤ１５５遮断バイオアッセイキット、Ｐｒｏｍｅｇａ Ｃｏｒｐ．、Ｍａｄｉｓｏｎ、ＷＩ）を使用して機能的に特徴付けることができる。ＴＩＧＩＴ／ＣＤ１５５遮断バイオアッセイは、細胞表面上にＴＩＧＩＴ、ＣＤ２２６、およびＴＣＲ複合体を発現し、ルシフェラーゼレポーター遺伝子を含む、エフェクター細胞、ならびに細胞表面上にＣＤ１５５およびＴＣＲ活性化因子を発現する人工抗原提示細胞という２つの細胞型を含む。このバイオアッセイにおいて、ルシフェラーゼ発現には、ＴＣＲの結合に加えて、共刺激シグナルが必要である。ＣＤ１５５−ＴＩＧＩＴ相互作用は、ＣＤ１５５−ＣＤ２２６相互作用よりも高い親和性を有し、その結果、正味の阻害性シグナル伝達をもたらし、ルシフェラーゼ発現が生じない。ＣＤ１５５−ＴＩＧＩＴ相互作用の遮断により、ルシフェラーゼ発現を駆動させるＣＤ１５５−ＣＤ２２６共刺激が可能となる。
ＴＩＧＩＴおよびＣＤ２２６の両方を発現するＪｕｒｋａｔエフェクター細胞を、ＴＣＲ活性化因子およびＣＤ１５５を発現するＣＨＯ−Ｋ１人工抗原提示細胞（ａＡＰＣ）とともに共培養した。Ｊｕｒｋａｔエフェクター細胞は、ＩＬ−２プロモーターによって駆動されるルシフェラーゼレポーター遺伝子を含む。遮断性抗ＴＩＧＩＴ抗体の不在下では、ＣＤ１５５−ＴＩＧＩＴ結合によりＴ細胞共阻害が引き起こされ、ＩＬ−２プロモーター活性は生じない。抗ＴＩＧＩＴ抗体を添加すると、ＣＤ１５５−ＴＩＧＩＴ相互作用が妨害され、ＣＤ１５５がＣＤ２２６と会合して、共刺激シグナルを送達し、ルシフェラーゼ発現を駆動させることが可能となる。
ａＡＰＣを、９６ウェルプレートに播種し、一晩付着させた。翌日、２０μｇ／ｍＬのそれぞれの抗ＴＩＧＩＴ抗体またはアイソタイプ対照抗体、およびＪｕｒｋａｔエフェクター細胞を、プレートに添加した。３７℃で６時間のインキュベーションの後、細胞を溶解させ、ルシフェラーゼ基質を添加した。ルシフェラーゼ活性を、プレートリーダーで定量した。ルシフェラーゼ活性を、抗体なしの対照におけるシグナルに対する倍数として計算した。
図７Ａ〜７Ｂに示されるように、１２個の抗ＴＩＧＩＴ抗体クローンが、このバイオアッセイにおいて、機能的遮断を示した。
（実施例６）
ＴＩＧＩＴ／ＰＤ−１組合せバイオアッセイにおける抗ＴＩＧＩＴ抗体のｉｎ ｖｉｔｒｏ活性
抗ＰＤ−１剤（たとえば、抗ＰＤ−１抗体）と組み合わせた抗ＴＩＧＩＴ抗体の相乗活性を、抗体がＴＩＧＩＴ／ＣＤ１５５相互作用およびＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１相互作用の両方を遮断するとレポーター遺伝子の発現が増強される、ＴＩＧＩＴ／ＰＤ−１組合せバイオアッセイを使用して、機能的に特徴付けた。バイオアッセイは、細胞表面上にＴＩＧＩＴ、ＣＤ２２６、ＰＤ−１、およびＴＣＲ複合体を発現し、ルシフェラーゼレポーター遺伝子を含む、エフェクター細胞、ならびに細胞表面上にＣＤ１５５、ＰＤ−Ｌ１、およびＴＣＲ活性化因子を発現する人工抗原提示細胞という２つの細胞型を含む。このバイオアッセイにおいて、ルシフェラーゼ発現には、ＴＣＲの結合に加えて、共刺激シグナルが必要である。ＣＤ１５５−ＴＩＧＩＴ相互作用は、ＣＤ１５５−ＣＤ２２６相互作用よりも高い親和性を有し、その結果、正味の阻害性シグナル伝達をもたらし、ルシフェラーゼ発現が生じない。加えて、ＰＤ−１へのＰＤ−Ｌ１の結合により、ルシフェラーゼ発現が阻害される。ＣＤ１５５−ＴＩＧＩＴ相互作用およびＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１相互作用の両方の遮断により、阻害が緩和され、ＣＤ１５５−ＣＤ２２６共刺激によりルシフェラーゼ発現を駆動させることが可能となる。
ＰＤ−１、ＴＩＧＩＴ、およびＣＤ２２６を発現するＪｕｒｋａｔエフェクター細胞を、ＴＣＲ活性化因子、ＰＤ−Ｌ１、およびＣＤ１５５を発現するＣＨＯ−Ｋ１人工抗原提示細胞（ａＡＰＣ）とともに共培養した。Ｊｕｒｋａｔエフェクター細胞は、ＩＬ−２プロモーターによって駆動されるルシフェラーゼレポーター遺伝子を含む。遮断性抗ＴＩＧＩＴ抗体の不在下では、ＰＤ−Ｌ１−ＰＤ−１およびＣＤ１５５−ＴＩＧＩＴの結合によりＴ細胞共阻害が引き起こされ、ＩＬ−２プロモーター活性は生じない。抗ＰＤ−１抗体および抗ＴＩＧＩＴ抗体を添加すると、ＰＤ−Ｌ１−ＰＤ−１相互作用が遮断され、１つの共刺激シグナルが緩和され、ＣＤ１５５−ＴＩＧＩＴ相互作用が妨害され、ＣＤ１５５がＣＤ２２６と会合して、共刺激シグナルを送達し、ルシフェラーゼ産生を駆動させることが可能となる。
ａＡＰＣを、９６ウェルプレートに播種し、一晩付着させた。翌日、それぞれの抗ＴＩＧＩＴ抗体の１０点２．５倍滴定物（１００〜０．０３μｇ／ｍＬ）単独、または抗ＰＤ−１抗体（クローンＥＨ１２．２Ｈ７、ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ、Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ、ＣＡ）、またはそれぞれの抗ＴＩＧＩＴ抗体＋抗ＰＤ−１抗体（１：１の比）、ならびにＪｕｒｋａｔエフェクター細胞を、プレートに添加した。３７℃で６時間のインキュベーションの後、細胞を溶解させ、ルシフェラーゼ基質を添加した。ルシフェラーゼ活性を、プレートリーダーで定量した。ルシフェラーゼ活性を、抗体なしの対照におけるシグナルに対する倍数として計算した。図８に示されるように、抗ＴＩＧＩＴも抗ＰＤ−１も単独では、劇的なＪｕｒｋａｔ活性化をもたらさなかったが、しかしながら、抗ＴＩＧＩＴクローン１３またはクローン２５のいずれかと抗ＰＤ−１との組合せにより、強力な活性化が生じた。
（実施例７）
ＢＡＬＢ／ｃマウスにおけるＣＴ２６同系腫瘍モデルにおける抗ＴＩＧＩＴ抗体のｉｎ ｖｉｖｏ活性
マウスＴＩＧＩＴに対する親和性に基づいて、抗ＴＩＧＩＴクローン１３を、マウス同系腫瘍モデルにおける評価に選択した。ＦｃアイソタイプがアンタゴニストＴＩＧＩＴ抗体のｉｎ ｖｉｖｏでの有効性に対して影響を有するかどうかという問いについて検討するために、親完全ヒト抗ＴＩＧＩＴクローン１３のマウスＩｇＧ１およびマウスＩｇＧ２ａキメラを、ｉｎ ｖｉｖｏ実験用に生成した。ｉｎ ｖｉｔｒｏでは、キメラ抗体は、（１）ヒト、マウス、およびカニクイザルＴＩＧＩＴへの結合、（２）細胞表面に発現されるＴＩＧＩＴへのＣＤ１５５およびＣＤ１１２リガンドの結合の遮断、ならびに（３）ＣＤ１５５−ＴＩＧＩＴ遮断バイオアッセイにおける活性に関して、親ｈＩｇＧ１抗体に類似する活性を示した。図９Ａ〜９Ｈを参照されたい。
平均体重が１９ｇである８週齢のＢＡＬＢ／ｃマウスを、Ｃｈａｒｌｅｓ Ｒｉｖｅｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓから入手した。マウスには、３００，０００個のＣＴ２６結腸癌細胞を右後方側腹部の皮下に埋め込んだ。腫瘍を、腫瘍接種後７日目に群平均腫瘍体積が７２ｍｍ３（４８〜８８ｍｍ３の範囲）になるまで成長させた。動物は、群平均腫瘍体積がすべての処置群で類似となるように、対でのマッチに基づいてｎ＝１０匹の１０個の処置群に割り当てた。腫瘍の長さおよび幅を測定し、体積（ｍｍ３）＝０．５×長さ×幅２の式を使用して、腫瘍体積を計算し、ここで、長さは、長い方の寸法である。抗ＴＩＧＩＴクローン１３ ｍＩｇＧ１、抗ＴＩＧＩＴクローン１３ ｍＩｇＧ２ａ、および抗ＰＤ−１クローンＲＭＰ１−１４（ＢｉｏＸＣｅｌｌ）を、滅菌ＰＢＳにおいて、投薬に適した濃度に希釈した。滅菌ＰＢＳを、ビヒクル対照として使用した。ＴＩＧＩＴ抗体を、５または２０ｍｇ／ｋｇで腹腔内注射により、１週間に２回、３週間（合計６用量）投薬した。抗ＰＤ−１抗体は、５ｍｇ／ｋｇで腹腔内注射により、１週間に２回、２週間（合計４用量）投薬した。投薬は、割当ての日に開始した（研究１日目）。腫瘍体積および体重測定値を、マウスが腫瘍体積のカットオフ２０００ｍｍ３に達するまで、１週間に２回収集した。動物はいずれも、投薬前の体重と比べた体重減少を示さず、すべての試験剤の例外的な耐容性が示された。
図１０Ａに示されるように、抗ｍＰＤ−１単独では、腫瘍進行にいずれの作用も有さなかった。活性型Ｆｃガンマ受容体に効率的に結合しないクローン１３のｍＩｇＧ１抗ＴＩＧＩＴキメラ（「１３−１」）は、単剤としても抗ＰＤ−１との組合せでもいずれの抗腫瘍活性も媒介しなかった。対照的に、活性型Ｆｃガンマ受容体に結合することができるクローン１３のｍＩｇＧ２ａキメラ（「１３−２」）は、腫瘍進行を遅らせた（１８日目に８６．５％（５ｍｇ／ｋｇ）または７４．４％（２０ｍｇ／ｋｇ）の腫瘍成長阻害）。５ｍｇ／ｋｇの１３−２単剤群における１０匹の動物のうちの３匹は、完全な腫瘍退縮を示し、研究の終了（研究４６日目）まで安定していた。２０ｍｇ／ｋｇの１３−２単剤群では、１０匹の動物のうちの２匹が、部分的な腫瘍退縮（３回の連続的な測定で初回体積の５０％未満の腫瘍体積として定義される）を示した。図１０Ａは、ｍＩｇＧ２ａクローン１３キメラ（１３−２）への抗ＰＤ−１の添加が、１３−２単独と比べて有効性を増加させなかったことを示す（１８日目の腫瘍成長阻害が５３．８％（５ｍｇ／ｋｇの抗ＴＩＧＩＴ＋５ｍｇ／ｋｇの抗ＰＤ−１）対８６．５％（５ｍｇ／ｋｇの抗ＴＩＧＩＴ単独）、および８９．６％（２０ｍｇ／ｋｇの抗ＴＩＧＩＴ＋５ｍｇ／ｋｇの抗ＰＤ−１）対７４．４％（２０ｍｇ／ｋｇの抗ＴＩＧＩＴ単独））。同様の数の完全および部分的レスポンダーが、組合せの群で観察された。たとえば、図１０Ｂ〜１０Ｋを参照されたい。
（実施例８）
抗体の最適化および最適化された抗体の特徴付け
主要発見アウトプットからの抗体クローン２、１３、１６、および２５を、さらなる親和性成熟に選択した。重鎖可変領域に多様性を導入することによって、抗体の最適化を行った。２つの最適化サイクルを、上記の系統に適用した。第１のサイクルは、ＣＤＲＨ１およびＣＤＲＨ２の多様化アプローチから構成され、一方で第２のサイクルでは、ＣＤＲＨ３変異生成アプローチが適用された。
ＣＤＲＨ１およびＣＤＲＨ２のアプローチ：単一抗体のＣＤＲＨ３を、１×１０８の多様性のＣＤＲＨ１およびＣＤＲＨ２バリアントを有する事前に作製したライブラリーへと組換えにより導入した。次いで、ナイーブ発見に関して説明されているように、１ラウンドのＭＡＣＳおよび４ラウンドのＦＡＣＳにより、選択を行った。
第１のラウンドのＦＡＣＳにおいて、ライブラリーを、１ｎＭの単量体ＴＩＧＩＴ結合について分取した。第２のラウンドのＦＡＣＳは、複特異性を低減させるためのＰＳＲ枯渇ラウンドであった。最後の２ラウンドでは、高親和性に関して親ＦａｂまたはＩｇＧを使用して圧をかける陽性選択ラウンドであった。Ｆａｂ／ＩｇＧ圧を、次のように行った：抗原を、１０倍親ＦａｂまたはＩｇＧとともにインキュベートし、次いで、酵母ライブラリーとともにインキュベートした。選択により、親ＦａｂまたはＩｇＧよりも良好な親和性を有するＩｇＧを富化した。種間交差反応性を、最後の２ラウンドのＦＡＣＳにおいて調べた。
ＣＤＲＨ３変異生成：ＣＤＲＨ３における位置をランダム化することによって、ＣＤＲＨ３多様化を有するライブラリーを生成した。以前に説明されているように、１ラウンドのＭＡＣＳおよび３ラウンドのＦＡＣＳにより、選択を行った。所望される特徴を有する集団を得るために、ＰＳＲ陰性選択、種間交差反応性、親和性圧、および分取を行った。
ＭＳＤ−ＳＥＴ ＫＤ測定
平衡親和性測定を、概して、以前に説明されているように行った（Estep et al.（上記））。簡単に述べると、溶液平衡滴定（ＳＥＴ）を、ＰＢＳ＋０．１％ ＩｇＧ−Ｆｒｅｅ ＢＳＡ（ＰＢＳＦ）において、５０ｐＭで一定に保持したビオチン化ヒトＴＩＧＩＴ−Ｈｉｓ単量体を用いて行い、およそ５ｎＭで開始する抗体の３〜５倍連続希釈物とともにインキュベートした。抗体（ＰＢＳ中２０ｎＭ）を、４℃で一晩または室温で３０分間、標準的な結合ＭＳＤ−ＥＣＬプレートにコーティングした。次いで、プレートを、１％ ＢＳＡで３０分間、７００ｒｐｍで振盪させながらブロッキングした後、洗浄緩衝液（ＰＢＳＦ＋０．０５％ Ｔｗｅｅｎ ２０）で３回洗浄した。ＳＥＴ試料を適用し、プレートにおいて、１５０秒間、７００ｒｐｍで振盪させながらインキュベートした後、１回洗浄した。プレートに捕捉された抗原を、プレートにおける３分間のインキュベーションによって、ＰＢＳＦ中の２５０ｎｇ／ｍｌのスルホタグ標識化ストレプトアビジンで検出した。プレートを、洗浄緩衝液で３回洗浄した後、界面活性剤を有する１×Ｒｅａｄ Ｂｕｆｆｅｒ Ｔを使用してＭＳＤ Ｓｅｃｔｏｒ Ｉｍａｇｅｒ ２４００機器で読み取った。遊離抗原パーセントを、Ｐｒｉｓｍにおいて滴定した抗体に対する関数としてプロットし、二次方程式に当てはめてＫＤを抽出した。スループットを改善するために、液体ハンドリングロボットを、ＳＥＴ試料調製を含むＭＳＤ−ＳＥＴ実験全体で使用した。
Ｈｉｓタグ化ヒトＴＩＧＩＴ、カニクイザルＴＩＧＩＴ−Ｆｃ、およびマウスＴＩＧＩＴ−Ｆｃへの最適化された抗体の結合を、上述のように、ＦｏｒｔｅＢｉｏシステムを使用して測定した。最適化された抗体はまた、上述のように、ＣＤ１５５リガンド競合アッセイにおいてリガンド遮断に関して、ならびにヒトＴＩＧＩＴ ＨＥＫ、カニクイザルＴＩＧＩＴ ＨＥＫ、マウスＴＩＧＩＴ ＨＥＫ、および親ＨＥＫ細胞系への結合に関しても試験した。
親和性最適化抗体の親和性データおよび細胞結合データを、以下の表２に示す。
Figure 2021534196
（実施例９）
エピトープマッピング
本明細書に開示されるモノクローナル抗体のうちの２つ、クローン１３およびクローン２５のエピトープを、ペプチドアレイによって特徴付けた。標的分子のエピトープを再構築するために、ペプチドに基づくエピトープ模倣体のライブラリーを、固相Ｆｍｏｃ合成を使用して合成した。アミノ官能化ポリプロピレン支持体を、専有の親水性ポリマー製剤を用いてグラフトすることによって得た後、Ｎヒドロキシベンゾトリアゾール（ＨＯＢｔ）とともにジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ）を使用してｔ−ブチルオキシカルボニル−ヘキサメチレンジアミン（ＢｏｃＨＭＤＡ）と反応させ、続いて、トリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）を使用してＢｏｃ基を切断した。標準的なＦｍｏｃペプチド合成を使用して、特別に改変させたＪＡＮＵＳ液体ハンドリングステーション（Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ）によって、アミノ官能化させた固体支持体上でペプチドを合成した。
構造模倣体の合成を、専有のスキャフォールドに化学的に連結したペプチド（Ｃｈｅｍｉｃａｌｌｙ Ｌｉｎｋｅｄ Ｐｅｐｔｉｄｅｓ ｏｎ Ｓｃａｆｆｏｌｄｓ、ＣＬＩＰＳ）技術（Ｐｅｐｓｃａｎ）を使用して行った。ＣＬＩＰＳ技術により、ペプチドを単一ループ、二重ループ、三重ループ、シート様フォールド、ヘリックス様フォールド、およびこれらの組合せに組み立てることが可能となる。ＣＬＩＰＳ鋳型を、システイン残基に連結させる。ペプチドにおける複数のシステインの側鎖を、１つまたは２つのＣＬＩＰＳ鋳型に連結させる。たとえば、Ｐ２ ＣＬＩＰＳ（２，６−ビス（ブロモメチル）ピリジン）の０．５ｍＭ溶液を、重炭酸アンモニウム（２０ｍＭ、ｐＨ７．８）／アセトニトリル（１：３（ｖ／ｖ））に溶解させる。溶液を、ペプチドアレイに添加する。ＣＬＩＰＳ鋳型が、ペプチドアレイの固相結合ペプチドに存在する２つのシステインの側鎖に結合する（３μｌのウェルを有する４５５ウェルのプレート）。ペプチドアレイを、溶液中に完全に覆いながら、３０〜６０分間、溶液中で緩徐に振盪させる。最後に、ペプチドアレイを、過剰量のＨ２Ｏで広範囲に洗浄し、ＰＢＳ（ｐＨ７．２）中１％ ＳＤＳ／０．１％ ベータ−メルカプトエタノールを含む破壊緩衝液において７０℃で３０分間超音波処理した後、Ｈ２Ｏ中でさらに４５分間超音波処理する。Ｔ３ ＣＬＩＰＳを保持するペプチドを、類似の様式であるが３つのシステインを用いて作製した。
異なるペプチドセットを、以下の設計に従って合成した。セット１は、ヒトＴＩＧＩＴの標的配列に由来し、１つの残基のオフセットを有する、１５個のアミノ酸の長さを有する線状ペプチドのセットで構成されていた。セット２は、セット１の線状ペプチドのセットで構成されていたが、１０位および１１位の残基がＡｌａで置き換えられていた。天然のＡｌａがいずれかの位置で生じる場合には、Ｇｌｙで置き換えた。セット３は、Ｃｙｓ残基を含む、セット１の線状ペプチドのセットで構成されていた。このセットでは、天然のＣｙｓを、Ｃｙｓ−アセトアミドメチル（「Ｃｙｓ−ａｃｍ」）で置き換えた。セット４は、ヒトＴＩＧＩＴの標的配列に由来し、１つの残基のオフセットを有する、１７個のアミノ酸の長さを有する線状ペプチドのセットで構成されていた。１位および１７位には、ｍＰ２ ＣＬＩＰＳを用いてループ型模倣体を作製するために使用されるＣｙｓ残基があった。天然のＣｙｓを、Ｃｙｓ−ａｃｍで置き換えた。セット６は、ヒトＴＩＧＩＴの標的配列に由来し、１つの残基のオフセットを有する、２２個のアミノ酸の長さを有する線状ペプチドのセットで構成されていた。１１位および１２位の残基を、「ＰＧ」モチーフで置き換え、一方でＣｙｓ残基を、１位および２２位に配置して、ｍＰ２を有する拘束型模倣体を作製した。天然のＣｙｓ残基を、Ｃｙｓ−ａｃｍで置き換えた。セット７は、２７個のアミノ酸の長さを有する線状ペプチドのセットで構成されていた。１〜１１位および１７〜２７位には、「ＧＧＳＧＧ」（配列番号３０９）リンカーを介して結合された、標的配列に由来する１１量体ペプチド配列があった。ヒトＴＩＧＩＴのジスルフィド架橋に関するＵｎｉＰｒｏｔの情報に基づいて、組合せを作製した。セット８は、３３個のアミノ酸の長さを有するコンビナトリアルペプチドのセットで構成されていた。２〜１６位および１８〜３２位には、ヒトＴＩＧＩＴの標的配列に由来する１５量体ペプチドがあった。１位、１７位、および３３位には、Ｔ３ ＣＬＩＰＳを用いて非連続的模倣体を作製するために使用されるＣｙｓ残基があった。
合成したペプチドのそれぞれに対する抗体の結合を、ｐｅｐｓｃａｎに基づくＥＬＩＳＡにおいて試験した。ペプチドアレイを、一次抗体溶液とともに（４℃で一晩）インキュベートした。洗浄した後、ペプチドアレイを、ヤギ抗ヒトＨＲＰコンジュゲート（Ｓｏｕｔｈｅｒｎ Ｂｉｏｔｅｃｈ）の１／１０００希釈物とともに、２５℃で１時間インキュベートした。洗浄した後、ペルオキシダーゼ基質２，２’−アジノ−ジ−３−エチルベンズチアゾリンスルホネート（ＡＢＴＳ）および２０μｌ／ｍｌの３パーセントＨ２Ｏ２を添加した。１時間後に、発色を測定した。発色を、電荷結合素子（ＣＣＤ）カメラおよび画像処理システムで定量した。ＣＣＤカメラから得られた値は、０〜３０００ｍＡＵの範囲であり、標準的な９６ウェルプレートＥＬＩＳＡリーダーと類似していた。
合成したペプチドの品質を検証するために、別個の陽性対照および陰性対照ペプチドのセットを、並行して合成した。これらを、市販の抗体３Ｃ９および５７．９を用いてスクリーニングした（Posthumus et al., J. Virol., 1990, 64:3304-3309）。
クローン１３については、高ストリンジェンシー条件下で試験した場合、クローン１３は、非連続的エピトープ模倣体に弱く結合した。抗体はまた、中等度のストリンジェンシー条件下においても試験し、抗体の検出可能な結合が、観察された。もっとも高いシグナル強度は、コアストレッチ６８ＩＣＮＡＤＬＧＷＨＩＳＰＳＦＫ８２（配列番号２５８）、４２ＩＬＱＣＨＬＳＳＴＴＡＱＶ５４（配列番号２９８）、１０８ＣＩＹＨＴＹＰＤＧＴＹＴＧＲＩ１２２（配列番号２９９）を含む非連続的エピトープ模倣体で記録された。加えて、弱い結合が、ペプチドストレッチ８０ＳＦＫＤＲＶＡＰＧＰＧ９０（配列番号３００）を含むペプチドで観察された。線状エピトープ模倣体および単純な立体構造エピトープ模倣体への抗体の結合は、概して低く、モチーフ６８ＩＣＮＡＤＬＧＷＨＩＳＰＳＦＫ８２（配列番号２５８）、１０８ＣＩＹＨＴＹＰＤＧＴＹＴＧＲＩ１２２（配列番号２９９）、および８０ＳＦＫＤＲＶＡＰＧＰＧ９０（配列番号３００）に対してしか観察されなかった。
クローン２５については、高ストリンジェンシー条件下で試験した場合、クローン２５は、すべてのセットに由来するペプチドに検出可能に結合した。もっとも強力な結合は、非連続的エピトープ模倣体で観察された。ストレッチ６８ＩＣＮＡＤＬＧＷＨＩＳＰＳＦＫ８２（配列番号２５８）内の残基を含むペプチドへの結合は、他のセットでも観察されたが、ペプチドストレッチ５０ＴＴＡＱＶＴＱ５６（配列番号３０１）への結合は、６８ＩＣＮＡＤＬＧＷＨＩＳＰＳＦＫ８２（配列番号２５８）との組合せでしか観察されなかった。加えて、弱い結合が、ペプチドストレッチ８０ＳＦＫＤＲＶＡＰＧＰＧＬＧＬ９３（配列番号３００）を含むペプチドでも観察された。
クローン１３およびクローン２５のこれらのエピトープマッピングの結果に基づいて、クローン１３およびクローン２５のエピトープの詳しいマッピングを、以下のペプチドセットを使用して上述の方法を使用して行った。セット１は、配列ＣＩＬＱ２ＨＬＳＳＴＴＡＱＶＴＱＣＩ２ＮＡＤＬＧＷＨＩＳＰＳＦＫＣ（配列番号３０２）に基づく単一残基のエピトープ変異体ライブラリーで構成されていた。残基ＡＤＨＩＱＲＹ（配列番号３０４）を、置き換えに供した。１位、１７位、１９位、３０位、および３３位は、置き換えなかった。天然のＣｙｓ残基を、Ｃｙｓ−ａｃｍで置き換えた（終始「２」と表記する）。セット２は、配列ＣＩＬＱ２ＨＬＳＳＴＴＡＱＶＴＱＣＩ２ＮＡＤＬＧＷＨＩＳＰＳＦＫＣ（配列番号３０２）に由来するウォーキング二重Ａｌａ変異体ライブラリーで構成されていた。１位、１７位、および３３位は、置き換えなかった。天然のＣｙｓ残基を、Ｃｙｓ−ａｃｍで置き換えた。セット３は、配列ＣＫＤＲＶＡＰＧＰＧＬＧＬＴＬＱＣＩ２ＮＡＤＬＧＷＨＩＳＰＳＦＫＣ（配列番号３０３）に基づく単一残基のエピトープ変異体ライブラリーで構成されていた。残基ＡＤＨＩＱＲＹ（配列番号３０４）を、置き換えに使用した。１位、２位、１７位、１９位、３０位、および３３位は、置き換えなかった。セット４は、配列ＣＫＤＲＶＡＰＧＰＧＬＧＬＴＬＱＣＩ２ＮＡＤＬＧＷＨＩＳＰＳＦＫＣ（配列番号３０３）に由来するウォーキング二重Ａｌａ変異体ライブラリーで構成されていた。１位、１７位、および３３位は、置き換えなかった。
クローン１３を、高および中等度のストリンジェンシー条件下において、ペプチドＣＩＬＱ２ＨＬＳＳＴＴＡＱＶＴＱＣＩ２ＮＡＤＬＧＷＨＩＳＰＳＦＫＣ（配列番号３０２）およびＣＫＤＲＶＡＰＧＰＧＬＧＬＴＬＱＣＩ２ＮＡＤＬＧＷＨＩＳＰＳＦＫＣ（配列番号３０３）に由来する４連の非連続的エピトープ変異体を用いて試験した。データ分析により、すべての事例において、残基８１ＦＫ８２を単一残基または二重Ａｌａのいずれかと置き換えることにより、クローン１３の結合が損なわれたことが示された。非連続的エピトープ模倣体内の他の残基の単一変異は、結合に劇的な影響を有さなかった。対照的に、二重Ａｌａエピトープ変異体は、対応する非連続的模倣体の一連の単一残基変異体と比較すると、結合に対してより顕著な影響を示した。ＣＩＬＱ２ＨＬＳＳＴＴＡＱＶＴＱＣＩ２ＮＡＤＬＧＷＨＩＳＰＳＦＫＣ（配列番号３０２）内の残基５１ＴＡＱＶＴ５５（配列番号３０５）の二重Ａｌａ置き換えが、クローン１３の結合に顕著に影響を及ぼしたことも見出された。配列ＣＫＤＲＶＡＰＧＰＧＬＧＬＴＬＱＣＩ２ＮＡＤＬＧＷＨＩＳＰＳＦＫＣ（配列番号３０３）に由来するエピトープ模倣体を用いてクローン１３に記録されたシグナル強度は、ＣＩＬＱ２ＨＬＳＳＴＴＡＱＶＴＱＣＩ２ＮＡＤＬＧＷＨＩＳＰＳＦＫＣ（配列番号３０２）で記録されたものよりも低かった。８１ＦＫ８２に加えて、７４ＧＷＨＩ７７（配列番号３０６）の二重Ａｌａ置き換えが、クローン１３の結合を顕著に低減させることが、さらに見出された。加えて、ストレッチ８７ＰＧＰＧＬＧＬ９３（配列番号３０７）内の二重Ａｌａ変異により、結合がいくらか弱まった。
クローン２５を、高および中等度のストリンジェンシー条件下において、ペプチドＣＩＬＱ２ＨＬＳＳＴＴＡＱＶＴＱＣＩ２ＮＡＤＬＧＷＨＩＳＰＳＦＫＣ（配列番号３０２）およびＣＫＤＲＶＡＰＧＰＧＬＧＬＴＬＱＣＩ２ＮＡＤＬＧＷＨＩＳＰＳＦＫＣ（配列番号３０３）に由来する４連の非連続的エピトープ変異体で試験した。個々のエピトープ変異体セットから収集されたデータの分析により、残基８１ＦＫ８２の単一または二重置き換えが、結合に劇的に影響を及ぼしたことが示された。ＣＩＬＱ２ＨＬＳＳＴＴＡＱＶＴＱＣＩ２ＮＡＤＬＧＷＨＩＳＰＳＦＫＣ（配列番号３０２）およびＣＫＤＲＶＡＰＧＰＧＬＧＬＴＬＱＣＩ２ＮＡＤＬＧＷＨＩＳＰＳＦＫＣ（配列番号３０３）内の他の残基の単一残基置き換えは、シグナル強度に目立った減少を引き起こさなかった。一連の二重ウォーキングＡｌａ変異体は、模倣体へのクローン２５の結合に対してより顕著な影響を示した。８１ＦＫ８２に加えて、残基５２ＡＱ５３およびＰ７９の二重Ａｌａ置き換えもまた、エピトープ模倣体ＣＩＬＱ２ＨＬＳＳＴＴＡＱＶＴＱＣＩ２ＮＡＤＬＧＷＨＩＳＰＳＦＫＣ（配列番号３０２）への抗体の結合に軽度に影響を及ぼした。ＣＫＤＲＶＡＰＧＰＧＬＧＬＴＬＱＣＩ２ＮＡＤＬＧＷＨＩＳＰＳＦＫＣ（配列番号３０３）に由来する二重Ａｌａ変異体シリーズへのクローン２５の結合の分析により、８１ＦＫ８２の重要性が再び確認されたが、さらに、残基７３ＬＧＷ７５および８２ＫＤＲＶＡ８６（配列番号３０８）の二重Ａｌａ置き換えが、結合に中等度に影響を及ぼしたことも示された。
まとめると、モノクローナル抗体クローン１３およびクローン２５に関して、残基８１ＦＫ８２が、ＴＩＧＩＴエピトープ模倣体への両方の抗体の結合に重要であることが見出された。クローン１３については、残基５１ＴＡＱＶＴ５５（配列番号３０５）、７４ＧＷＨＩ７７（配列番号３０６）、および８７ＰＧＰＧＬＧＬ９３（配列番号３０７）もまた、結合に寄与することが見出された。クローン２５については、残基５２ＡＱ５３、７３ＬＧＷ７５、Ｐ７９、および８２ＫＤＲＶＡ８６（配列番号３０８）もまた、結合に寄与することが見出された。
（実施例１０）
骨格が変更された抗ＴＩＧＩＴ抗体
現在の抗ＴＩＧＩＴ抗体の生成を潜在的に改善するために、アフコシル化抗ＴＩＧＩＴ抗体および低減されたエフェクター機能を有する抗ＴＩＧＩＴ抗体のＦｃ変異型バージョン（ＩｇＧ１ ＬＡＬＡ−ＰＧ）を、開発した。アフコシル化およびＬＡＬＡ−ＰＧ抗体は、依然として、ＣＤ１５５およびＣＤ１１２のＴＩＧＩＴとの相互作用を遮断することが予測される。いずれの特定の理論によっても束縛されることを意図するものではないが、アフコシル化抗ＴＩＧＩＴ抗体は、腫瘍浸潤Ｔｒｅｇに直接的に結合し、より高いＦｃ媒介性ＡＤＣＣおよび／またはＡＤＣＰをもたらし、最終的に、より優れた抗腫瘍免疫応答を誘起するか、あるいは、エフェクター機能が、エフェクターＴ細胞の枯渇をもたらし、それによってエフェクターヌル抗体が活性化されたＣＤ８ Ｔ細胞の保存を可能にし得るという仮説を立てた。
ＤＮＡおよびベクターの生成（Ｇｅｎｅｗｉｚ）：
抗体の可変および定常ドメイン配列を、非鋳型ＰＣＲを使用して合成する。実質的な遺伝子配列を、Ｇｅｎｅｗｉｚのバイオインフォマティクスツールを使用して、オリゴヌクレオチド配列に変換する。オリゴヌクレオチドを合成し、プールし、ＰＣＲを使用して増幅させる。ＰＣＲ反応により得られた全長アンプリコンを、ベクターにクローニングし、次いで、産物を大腸菌に形質転換させ、固有のコロニーを単離する。コロニーを、液体培地で一晩増殖させ、プラスミドＤＮＡを単離し、精製し、配列を、サンガーシーケンシングを使用して検証する。軽鎖および重鎖を、ｐｃＤＮＡ３．４ベクターにクローニングする。
抗体の発現（Ｓｅａｔｔｌｅ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ）：
１：１の比の抗体重鎖および軽鎖ベクターを、ＥｘｐｉＦｅｃｔａｍｉｎｅ ＣＨＯトランスフェクション試薬を有するＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ ＯｐｔｉＰＲＯ ＳＦＭ培地中に希釈する。次いで、ＤＮＡ／トランスフェクション試薬を、ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ ＥｘｐｉＣＨＯ発現培地中のＥｘｐｉＣＨＯ培養物に添加し、１日目にＥｘｐｉＣＨＯエンハンサーを添加し、１日目および２日目にＥｘｐｉＣＨＯフィードを添加して、９日間培養する。Ｎ２９７グリカンにおいてコアフコシル化が低減された抗体（アフコシル化抗体）を作製するために、フコースアナログ２−フルオロフコースを、トランスフェクションの前日および当日に、ＥｘｐｉＣＨＯ培地に添加する。培養物を、遠心分離および０．２μｍでの濾過によって採取する。
抗体の精製（Ｓｅａｔｔｌｅ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ）：
ＧＥ ＨｉＴｒａｐ ｍＡｂ Ｓｅｌｅｃｔ ＳｕＲｅカラムを、それぞれのＩｇＧの精製に使用する。溶出の前に、樹脂を、５ＣＶのＰＢＳ＋０．１％ Ｔｒｉｔｏｎ、５ＣＶのＰＢＳ＋０．５Ｍ ＮａＣｌ、および７．５ＣＶのＰＢＳで洗浄する。ＩｇＧを、２５ｍＭの酢酸ｐＨ３緩衝液を使用して溶出させる。試料を、２６／６０ ＨｉＰｒｅｐ Ｄｅｓａｌｔカラムを使用して、ＰＢＳ中に緩衝液交換する。次いで、試料を、濾過滅菌した後、試料を、特徴付けのために採取する。特徴付けには、Ａ２８０濃縮、ａＳＥＣ ＨＰＬＣ、ａＨＩＣ ＨＰＬＣ、ならびに還元グリコシル化および脱グリコシル化ＰＬＲＰ−ＭＳ（ＱＴｏＦ）が含まれる。
（実施例１１）
骨格が変更された抗体の特徴付け
ｉｎ ｖｉｖｏにおいて、単球、マクロファージ、好中球、樹状細胞、およびＮＫ細胞は、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩａ、ＦｃγＲＩ、およびＦｃγＲＩＩＩａを介してＡＤＣＰ（抗体依存性細胞媒介性ファゴサイトーシス）およびＡＤＣＣ（抗体依存性細胞媒介性細胞傷害性を媒介する。３つすべての受容体が、ＡＤＣＰに関与するが、ＦｃγＲＩＩＩａが、ＡＤＣＣに関与する主要なＦｃγ受容体であると考えられる。ＩｇＧ１抗体のアフコシル化により、ＦｃγＲＩＩＩａおよびｂへのより親和性の高い結合がもたらされ、したがって、ＡＤＣＣおよびＡＤＣＰ活性が増加し得る。
アフコシル化抗体およびＬＡＬＡ−ＰＧ変異の作用を理解するために、Ｂｉｏｌａｙｅｒインターフェロメトリー（ＢＬＩ）を利用して、３０℃において、様々な抗ＴＩＧＩＴ抗体へのヒトＦｃγＲＩＩＩａ １５８Ｖの結合動態を評価した。Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド（ＮＨＳ）−エステルビオチン化ヒトＦｃγＲＩＩＩａ １５８Ｖ−ｍｏｎｏ Ｆｃ Ｎ２９７Ａ融合タンパク質（Ｓｅａｔｔｌｅ Ｇｅｎｅｔｉｃｓにおいて発現させたもの）を、精度の高いストレプトアビジンバイオセンサー（Ｐａｌｌ ＦｏｒｔｅＢｉｏ）に、３μｇ／ｍＬで３００秒間ロードした後、３００秒間のセンサーチェックを行った。２００秒間のベースラインの後、滴定した抗ＴＩＧＩＴ抗体を、５０秒間会合させ、２００秒間解離させた。分析の前に、参照物を、それぞれのアッセイから差し引いた。データを、会合の開始においてＹ軸アライメントで補正し、ステップ間の解離補正およびＳａｖｉｔｚｋｙ−Ｇｏｌａｙフィルタリングを行った。１：１ラングミュア等温線全体適合モデルを使用して、曲線を当てはめた。
代表的なデータを、図１０に示す。ＴＩＧＩＴ ｈＩｇＧ１バリアントのセンサグラムは、ＢＬＩによるｈＦｃγＲＩＩＩａ結合で典型的に観察されているものに類似していた：野生型ＩｇＧ１は、１００〜２００ｎＭの範囲であり、アフコシル化ＩｇＧ１は、エンタルピーの増加またはｈＦｃγＲＩＩＩａとｈＩｇＧ１との間の相互作用の増加によって引き起こされるｋｏｎにおける１０倍の増加に起因して、約１０〜２０ｎＭであった。ｈＩｇＧ１ ＬＡＬＡ−ＰＧは、５０００ｎＭの最高濃度であっても、定量可能な結合を有さなかった。結果を、表３に要約する。
Figure 2021534196
抗腫瘍活性に対する抗ＴＩＧＩＴ抗体のＦｃ改変の影響を評価するために、ヒトＣＤＲ、および野生型またはアフコシル化もしくはＬＡＬＡ−ＰＧ改変を有するマウスＩｇＧ２ａ骨格から構成されるキメラ抗体を作製した。マウスＩｇＧ２ａ抗体のアフコシル化は、アフコシル化ヒトＩｇＧ１骨格の産生に類似しており、ヒトＦｃγＲＩＶに対する同種受容体であるマウスＦｃγＲＩＶへの結合の増加をもたらす。変更されたＦｃγＲＩＶ結合の程度を評価するために、ＣＨＯ細胞上に発現されるＦｃγＲＩＶへの抗体の親和性を、抗マウスＩｇＧ ＦＩＴＣを使用してＦＡＣＳによって決定した。図１２に示されるように、フコシル化されていないクローン１３ ｍＩｇＧ２ａは、野生型またはＬＡＬＡ−ＰＧ改変骨格のいずれよりも有意に高い程度で結合した。アフコシル化クローン１３ ｍＩｇＧ２ａは、３３．４のＫＤで結合した野生型クローン１３ ｍＩｇＧ２ａと比較して、２．３７ｎＭのＫＤの親和性で結合した。
（実施例１２）
健常ドナーＴ細胞におけるＴ細胞サブセット上のＴＩＧＩＴ発現
健常ドナーにおけるＴ細胞サブセット上のＴＩＧＩＴ発現を、フローサイトメトリーによって評価した。１２人の健常ドナーから得られた凍結ＰＢＭＣを、Ａｓｔａｒｔｅ Ｂｉｏｌｏｇｉｃｓ（Ｂｏｔｈｅｌｌ、Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ）およびＦｏｌｉｏ Ｃｏｎｖｅｒｓａｎｔ（Ｈｕｎｔｓｖｉｌｌｅ、Ａｌａｂａｍａ）から購入した。ドナーの年齢は、２１歳〜７４歳の範囲に及び、年齢中央値は４８歳であった。細胞を、Ｆｃ受容体ブロッキング後に生存性色素および以下の抗ヒト抗体で染色した：ＣＤ３、ＣＤ９６、ＣＤ２２６、ＣＣＲ７、ＣＤ２５、ＣＤ１２７、ＣＤ４５ＲＡ、ＣＤ８、ＣＤ４、ＣＤ２２６、ＣＤ１５５（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）、およびＴＩＧＩＴ（ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）。次いで、染色した細胞を、Ａｔｔｕｎｅ Ｎｘｔフローサイトメーター（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）で分析した。Ｔｒｅｇサブセットを、ＣＤ４、ＣＤ２５、およびＣＤ１２７の適切な発現（ＣＤ４＋ＣＤ２５＋ＣＤ１２７ｌｏ）によって定義した。ＣＤ４＋およびＣＤ８＋エフェクターメモリー（ＴＥＭ、ＣＤ４５ＲＡ−ＣＣＲ７−）、ＣＤ４５ＲＡ＋エフェクターメモリー（ＴＥＭＲＡ、ＣＤ４５ＲＡ＋ＣＣＲ７−）、セントラルメモリー（ＴＣＭ、ＣＤ４５ＲＡ−ＣＣＲ７＋）、およびナイーブ（ＴＮ、ＣＤ４５ＲＡ＋ＣＣＲ７＋）細胞のサブセットを、ＣＤ４５ＲＡおよびＣＣＲ７の発現によって定義した。図３に示されるように、ＴＩＧＩＴ発現は、Ｔｒｅｇにおいてもっとも高く、一方で活性型受容体ＣＤ２２６発現は、メモリーおよびナイーブＣＤ８ Ｔ細胞サブセットの両方で低く、ナイーブＣＤ４ Ｔ細胞サブセットと類似のレベルを示す。ＣＤ１５５発現は、Ｔ細胞ではほとんど不在であるが、抗原提示細胞において確認された。
（実施例１３）
抗ＴＩＧＩＴ抗体クローン１３は、Ｔｒｅｇの枯渇を駆動させる
正常ＰＢＭＣにおけるＴｒｅｇおよび他のＴ細胞サブセットの絶対数に対する抗ＴＩＧＩＴ抗体の作用を評価するために、ＦｃγＲＩＩＩ受容体のＶ／Ｆ対立遺伝子を発現するドナーから得られた健常ドナーのＰＢＭＣ（Ａｓｔａｒｔｅ Ｂｉｏｌｏｇｉｃｓ）を、単離した。細胞を、クローン１３抗ＴＩＧＩＴ抗体の野生型、ＬＡＬＡ−ＰＧ、もしくはアフコシル化バージョン、またはヒトＩｇＧ１アイソタイプ対照（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）の存在下において、様々な濃度で培養した。凍結保存したＰＢＭＣ（Ａｓｔａｒｔｅ Ｂｉｏｌｏｇｉｃｓ）を、９６ウェルの丸底プレートにおいて、１０％ ＦＢＳを有するＲＰＭＩ １６４０中で、３７℃でインキュベートした。抗ＴＩＧＩＴの滴定物または対照抗体を有する三連のウェルにおいて、１ウェル当たり２．５×１０５個のＰＢＭＣを播種した。２４時間後に、細胞を洗浄し、Ｆｃ受容体ブロッキングを行い、細胞を、生存性染色および以下の抗ヒト抗体で染色した：ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ８、ＣＤ２５、ＣＤ１２７、およびＣＤ４５ＲＡ（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）。染色した細胞を、Ａｔｔｕｎｅ ＮｘＴフローサイトメーターで分析し、Ｔ細胞サブセットを、上述のように特徴付けた。図１４に示されるように、Ｔｒｅｇは、アッセイの開始時点で、ＴＩＧＩＴに関して７３％陽性であった。２４時間の培養の後、クローン１３ ＩｇＧ１抗体の野生型バージョン（黒塗りの円形）は、ＴＩＧＩＴ陽性Ｔｒｅｇの用量依存性減少を誘起し、最大の枯渇は１μｇ／ｍｌで生じた。クローン１３のアフコシル化バージョン（黒塗りの四角形）は、より高い活性をもたらし、最大のＴｒｅｇ枯渇は２００ｐｇ／ｍｌで生じた。クローン１３のＬＡＬＡ−ＰＧバージョン（黒塗りの三角形）およびヒトＩｇＧ１アイソタイプ対照（灰色の逆三角形）は、このアッセイにおいて明らかな活性を示さなかった。
クローン１３抗ＴＩＧＩＴ抗体の野生型、アフコシル化、およびＬＡＬＡ−ＰＧバージョンの評価に加えて、Ｆｃγ受容体に対する親和性を増強させることがこれまでに報告されているＳ２９３Ｄ／Ａ３３０Ｌ／Ｉ３３２Ｅ（「ＤＬＥ」）変異を有するＩｇＧ１定常領域を含むバージョンを作製した。Lazar, 2006, PNAS 103: 4005-4010を参照されたい。クローン１３の野生型、アフコシル化、ＬＡＬＡ−ＰＧ、およびＤＬＥバージョンを、Ｔｒｅｇの枯渇に関して、ＦｃγＲＩＩＩ受容体の高親和性Ｖ／Ｖ対立遺伝子を発現するドナーから得られた健常ドナーのＰＢＭＣにおいて、実質的に上述のように評価した。
図３５に示されるように、クローン１３ ＩｇＧ１野生型抗体（三角形）は、約０．０２４μｇ／ｍｌのＩＣ５０でＴｒｅｇを枯渇させ、一方でクローン１３ ＩｇＧ１ ＤＬＥ抗体（四角形）およびクローン１３ ＩｇＧ１アフコシル化抗体（円形）は、それぞれ０．０００６μｇ／ｍｌおよび０．０００５μｇ／ｍｌのＩＣ５０でさらに高い効力でＴｒｅｇを枯渇させた。（図３５において、ＩｇＧ１野生型のデータは、同じドナーに由来するＰＢＭＣを使用した以前の実験からのものである）。
別の抗ＴＩＧＩＴ抗体、Ｈ５／Ｌ４ ＩｇＧ１（国際公開第２０１６／０２８６５６号Ａ１を参照されたい）もまた、Ｔｒｅｇを枯渇させるその能力に関して、ＦｃγＲＩＩＩ受容体の高親和性Ｖ／Ｖ対立遺伝子を発現するドナーから得られた健常ドナーのＰＢＭＣにおいて試験した。図３６に示されるように、クローン１３ ＩｇＧ１アフコシル化抗体は、Ｔｒｅｇの枯渇を誘導するのにもっとも強力であり、一方で、２つのＩｇＧ１野生型抗体は、非常に類似する効力および枯渇曲線を示した。（図３６において、クローン１３ ＩｇＧ１野生型のデータは、同じドナーに由来するＰＢＭＣを使用した以前の実験からのものである）。
（実施例１４）
同種ＮＫ／Ｔｒｅｇ共培養物におけるＴｒｅｇ枯渇の評価
Ｔｒｅｇ／ＮＫ細胞共培養物において可能性のある抗体依存性細胞媒介性細胞傷害性（ＡＤＣＣ）を探すために、凍結保存したヒトＣＤ４＋ＣＤ２５＋ Ｔ細胞（Ｓｔｅｍ Ｃｅｌｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を解凍し、２０ｎｇ／ｍｌの組換えヒトＩＬ−２（Ｒ＆Ｄ ｓｙｓｔｅｍｓ）を補充したＲＰＭＩ １０％ ＦＢＳ培地において、ＣＤ３／ＣＤ２８ ＭＡＣＳ ｉＢｅａｄ粒子（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｅｃ）によって、１：２のビーズ：細胞比で３日間刺激して、ＴＩＧＩＴ発現を増加させた。３日後に、Ｔｒｅｇを、細胞表面のＴＩＧＩＴ発現に関して、フローサイトメトリーによって評価し、約４０％陽性であることが見出された。次いで、Ｔｒｅｇを洗浄し、ＣＦＳＥ（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）で標識化して、共培養後のＮＫ細胞由来のものと区別した。その同じ日に、精製されたヒトＮＫ細胞（Ａｓｔａｒｔｅ Ｂｉｏｌｏｇｉｃｓ）を解凍し、２００ｎｇ／ｍｌのＩＬ−２の存在下において、２時間、予備活性化した。ＮＫ：Ｔｒｅｇの比が２．５：１のＮＫ細胞およびＴｒｅｇの共培養物を、１０％ ＦＢＳを有するＲＰＭＩ １６４０において、１００ｎｇ／ｍｌのＩＬ−２の存在下で、９６ウェルプレートに設置した。細胞を、三連のウェルにおいてクローン１３抗ＴＩＧＩＴ抗体の野生型、ＬＡＬＡ−ＰＧ、もしくはアフコシル化バージョン、またはヒトＩｇＧ１アイソタイプ対照（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）とともに、あるいは陽性対照としての機能を果たすアフコシル化抗ＯＫＴ９抗体とともに、３７℃でインキュベートした。２４時間後に、細胞を洗浄し、生存性色素で染色し、Ａｔｔｕｎｅ ＮｘｔフローサイトメーターにおいてＦＡＣＳによって分析した。Ｔｒｅｇは、生存性色素およびＣＦＳＥ染色によって特定し、計数した。
結果を、図１５に示す。Ｔｒｅｇレベルは、クローン１３ ＩｇＧ１野生型処置（黒塗りの円形）では低下し、枯渇が、部分的に、直接的なＮＫ媒介性ＡＤＣＣに起因し得ることが示された。クローン１３ ＩｇＧ１野生型がＴ細胞を枯渇させる能力は、１μｇ／ｍｌでの処置で最大に出現した。Ｔｒｅｇ枯渇の比率は、クローン１３ ＩｇＧ１アフコシル化バージョン（黒塗りの四角形）ではより顕著であり、最大活性は４０ｎｇ／ｍｌで出現した。クローン１３ ＩｇＧ１のエフェクターヌルＬＡＬＡ−ＰＧバージョン（黒塗りの三角形）およびヒトＩｇＧ１アイソタイプ対照（灰色の逆三角形）は、Ｔｒｅｇ数に目立った影響を示さなかったが、陽性対照ＳＥＡ ＯＫＴ９抗体（白抜きの円形）は、最大の枯渇を示した。結果は、Ｔｒｅｇが高レベルのＴＩＧＩＴを発現したことを示したＴＩＧＩＴ発現データ（図４）と一致する。
（実施例１５）
抗ＴＩＧＩＴ抗体は、サイトカイン産生を誘導する
ＮＫ細胞上のＦｃγＲＩＩＩａへの高い親和性での結合およびＡＤＣＣの作動に加えて、アフコシル化抗体はまた、抗原提示細胞上のＦｃγＲＩＩＩａおよびＦｃγＲＩＩＩｂ、ならびに好中球に高い親和性で結合し、ＡＤＣＰおよび抗原提示細胞活性化を増強させることができる。
抗原提示細胞に対する抗ＴＩＧＩＴ抗体およびＦｃバリアントの影響を調査するために、ＰＢＭＣを、以下のように単離した。３人の固有なヒトドナー由来の血液を、ヘパリンチューブに採取し、多血小板画分を分離させるために、採取から約４時間以内に、５０ｍｌの円錐チューブ（Ｆａｌｃｏｎ）にアリコートし、エッペンドルフ５８１０Ｒ（Ａ−４−６２ロータ）において２００ｇで２０分間、２５℃で制動なしで回転処理した。遠心分離の後、３つの異なる層が形成された：下層、赤血球（総体積の５０〜８０％を占める）；中央層、非常に細い白血球のバンド（「バッフィーコート」とも称される）；上層、淡黄色の多血小板血漿（ＰＲＰ）。血小板が富化されている上部の淡黄色層を、１ｍｌのピペットで取り出し、廃棄した。多血小板血漿を除去した後、残りの画分を、等体積の滅菌ＰＢＳ（Ｇｉｂｃｏ）で希釈した。室温に温めた１５ｍｌのＨｉｓｔｏｐａｑｕｅ−１０７７（Ｓｉｇｍａ）を、希釈画分の下層に入れた。試料を、１５００ｒｐｍで２５分間、２５℃で制動なしで回転処理した。遠心分離の後、再び３つの層が形成された：下層、赤血球（総体積の５０〜８０％を占める）；中央層、太い白血球のバンド；上層、ＰＢＳおよび残存血小板。上部のＰＢＳ／血小板層を、１ｍｌのピペットで取り出し、廃棄した。太い白血球のバンドの層を、穏やかに取り出し、清浄な５０ｍｌの滅菌円錐チューブに入れた。チューブを、５０ｍｌまで充填し、細胞を、８００ｇで１０分間回転処理した。洗浄溶液を除去し、ペレットを、１０分間、１０ｍｌのＡＣＫ赤血球溶解緩衝液（Ｇｉｂｃｏ）中に再懸濁させた。３５ｍｌの滅菌ＰＢＳを添加し、細胞を、８００ｇで１０分間回転処理した。洗浄溶液を除去し、ペレットを、５０ｍｌのＰＢＳ中に再懸濁させた。５００μｌの試料を取り出し、ＰＢＭＣを、Ｖｉ−ｃｅｌｌ−ＸＲ（Ｂｅｃｋｍａｎ Ｃｏｕｌｔｅｒ）で計数した。細胞を、８００ｇで１０分間、再度回転処理した。
細胞を、１００万個の細胞／ｍｌで、１０％熱不活性化ＦＢＳ（Ａｔｌａｎｔｉｃａ Ｂｉｏｌｏｇｉｃｓ）および１×ペニシリン／ｓｔｒｅｐＡおよび１×グルタミンを含有する完全ＤＭＥＭ中に再懸濁させ、１００，０００個の細胞／ウェルで、９６ウェルプレートに播種した。ＰＢＭＣを、漸増濃度（１０、１．０、０．１、０．０１、０．００１、０．０００１、または０μｇ／ｍｌ）のクローン１３ ＩｇＧ１の野生型、クローン１３ ＩｇＧ１のアフコシル化、またはクローン１３ ＩｇＧ１のＬＡＬＡ−ＰＧに、２４時間曝露した。組織培養上清を採取し、Ｌｕｍｉｎｅｘ ｍｕｌｔｉｐｌｅｘ（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）を製造業者の説明書に従って使用して、サイトカイン産生のために処理した。
結果を、図１６に示す。クローン１３ ＩｇＧ１野生型抗体（黒塗りの四角形）およびクローン１３ ＩｇＧ１アフコシル化抗体（黒塗りの菱形）でのＰＢＭＣの処置は、単球／マクロファージ活性化と関連するもの、たとえば、ＭＣＰ１、ＩＬ−８、およびＭＩＰ１αを含む、炎症性サイトカインの産生をもたらした。クローン１３ ＩｇＧ１アフコシル化への細胞の曝露は、より強力なサイトカイン応答を誘起したが、ＬＡＬＡ−ＰＧ Ｆｃエフェクターヌル形態は、非常に最小限なサイトカイン産生をもたらした。
（実施例１６）
抗ＴＩＧＩＴ抗体は、ＡＰＣにおいて活性化マーカーを誘導する
ＰＢＭＣに存在する抗原提示細胞に対する抗ＴＩＧＩＴ抗体の作用を評価するために、共刺激分子の発現を、上述のサイトカイン分析からの残りである細胞ペレットにおいて評価した。細胞ペレットを、５０ｍｌのＢＤ ＦＡＣＳ緩衝液中に再懸濁させ、９６ウェルの丸底マイクロタイタープレートに移した。Ｆｃ受容体を、氷上において３０分間、ヒト１００μｇ／ｍｌ Ｆｃ断片（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）でブロッキングした。１：１００で希釈した抗ＣＤ１４抗体（ＢＤ）、抗ＣＤ８６抗体（ＢＤ）、および抗ＭＨＣＩＩ抗体（汎抗ＤＲ、ＤＰ、ＤＱ抗体、ＢＤ）から構成されるマスターミックスを、１００ｍｇ／ｍｌのヒトＦｃ断片を含有するＢＤ ＦＡＣＳ緩衝液において調製した。５μｌのマスターミックスを、９０μｌの再懸濁細胞を含有するそれぞれのウェルに添加し、試料を、氷上で１時間インキュベートした。次いで、細胞を、予備冷却したエッペンドルフ５８１０Ｒ遠心分離装置において、４００ｇで５分間回転処理した。上清を取り出し、細胞を、２００μｌのＢＤ ＦＡＣＳ緩衝液で洗浄した。細胞を、２回洗浄した後、２００μｌのＦＡＣＳ緩衝液中に再懸濁させた。試料を、ＤＩＶＡソフトウェア（ＢＤ ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）を有するＬＳＲＩＩフローサイトメーター（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）で採取した。ＣＤ１４＋単球／マクロファージ上のＣＤ８６およびＭＨＣＩＩの平均蛍光強度（ＭＦＩ）を、ＦｌｏｗＪｏソフトウェアを使用して分析した。
その実験の結果を、図１７に示す。抗ＴＩＧＩＴ抗体クローン１３ ＩｇＧ１野生型またはクローン１３ ＩｇＧ１アフコシル化でのＣＤ１４＋単球／マクロファージの処置は、活性化マーカーＣＤ８６（左パネル）およびＭＨＣＩＩ（右パネル）の上方調節をもたらし、抗原提示細胞の成熟を示した。クローン１３ ＩｇＧ１ ＬＡＬＡ−ＰＧでの処置は、ＣＤ１４＋細胞によるＣＤ８６またはＭＨＣＩＩの発現を増加させなかった。
（実施例１７）
同系腫瘍モデルにおける差示的Ｆｃ親和性を有する抗ＴＩＧＩＴ抗体のｉｎ ｖｉｖｏでの評価
ＬＡＬＡ−ＰＧ変異を含むエフェクター機能ヌル抗ＴＩＧＩＴ抗体と比べたアフコシル化抗ＴＩＧＩＴ抗体の抗腫瘍効果を、調査した。この実験は、抗ＴＩＧＩＴ抗体のエフェクター機能（アフコシル化バージョンでは増強され、ＬＡＬＡ−ＰＧバージョンでは停止されている）が抗腫瘍作用機序に関与するかどうかを決定するように設計した。３つの異なるＦｃドメインを有する抗ＴＩＧＩＴ抗体クローン１３のマウスバージョンを、生成した：１）野生型ｍＩｇＧ２ａ、２）アフコシル化ｍＩｇＧ２ａ、３）ｍＩｇＧ２ａ ＬＡＬＡ−ＰＧ（エフェクター機能が低減されている）。抗体を、ＣＴ２６（結腸）、Ａ２０（Ｂ細胞リンパ腫）、およびＭＣ３８（結腸）同系腫瘍モデルにおいて、腫瘍モデルごとに１つの抗体群につき６匹のマウスを用いて評価した。それぞれの抗体には、腫瘍が１００ｍｍ３に達した後、３日ごとに５ｍｇ／ｋｇの用量で６用量を、腹腔内（ｉ．ｐ．）で投与した。皮下腫瘍の長さおよび幅を、デジタルキャリパーを使用して測定し、腫瘍体積を、式Ｖ＝（Ｌ×Ｗ２）／２を使用して計算した。
その実験の結果を、図１８に示す。それぞれの線は、中央値腫瘍体積（ｍｍ３）を表す（１群当たりＮ＝６匹）。図１８Ａは、抗ＴＩＧＩＴ抗体クローン１３ ｍＩｇＧ２ａアフコシル化、クローン１３ ｍＩｇＧ２ａ野生型、およびクローン１３ ｍＩｇＧ２ａ ＬＡＬＡ−ＰＧでのＡ２０（同系リンパ腫モデル）モデルの処置が、それぞれ、４／６、２／６、および０／６の完全応答をもたらしたことを示す。図１８Ｂは、抗ＴＩＧＩＴ抗体クローン１３ ｍＩｇＧ２ａアフコシル化、クローン１３ ｍＩｇＧ２ａ野生型、およびクローン１３ ｍＩｇＧ２ａ ＬＡＬＡ−ＰＧでのＣＴ２６ＷＴ（マウス結腸癌）モデルの処置が、それぞれ、４／６、３／６、および０／６の完全応答をもたらしたことを示す。図１８Ｃは、抗ＴＩＧＩＴ抗体クローン１３ ｍＩｇＧ２ａアフコシル化、クローン１３ ｍＩｇＧ２ａ野生型、およびクローン１３ ｍＩｇＧ２ａ ＬＡＬＡ−ＰＧでのＭＣ３８（マウス結腸癌）モデルの処置が、それぞれ、１／６、１／６、および０／６の完全応答をもたらしたことを示す。
異なる同系モデルにおいて誘導される応答の二分性は、それらの報告された差示的免疫プロファイルの点で興味深い。ＣＴ２６およびＡ２０腫瘍モデルは、ＮＫ細胞およびＴ細胞がより高度に浸潤していると報告されているが、一方でＭＣ３８モデルは、骨髄由来のサプレッサー細胞がより浸潤していることが公知である（Mosely, et al., 2017, Canc. Immunol. Res. 5(1): 29-41）。Ａ２０およびＣＴ２６腫瘍モデルにおける抗ＴＩＧＩＴ抗体の活性の増加は、これらの抗体のＴ細胞モジュレート活性を裏付け、浸潤したＴ細胞が、この治療法の肯定的な予測バイオマーカーとしての機能を果たし得ることを示唆する。まとめると、このデータは、マウス抗ＴＩＧＩＴ抗体のｉｎ ｖｉｖｏでの抗腫瘍活性が、Ｆｃエフェクター機能に依存すること、およびアフコシル化ＩｇＧ２ａが、野生型と比較して、増強された有効性を有することを示す。
（実施例１８）
抗ＴＩＧＩＴ抗体のコンビナトリアル活性。
ＴＩＧＩＴは、Ｔ細胞だけでなく、ＮＫ細胞および抗原提示細胞にも発現される。多面的発現を考慮すると、ＴＩＧＩＴ機能は、可能性として多因子活性を作動させ得、抗ＴＩＧＩＴ抗体は、たとえば、ＮＫ細胞ＡＤＣＣ活性、Ｔ細胞活性化、および最適な抗原リコール応答を含む、多数の細胞機能に対する影響を有し得る。単剤活性に加えて、抗ＴＩＧＩＴ抗体は、他の治療薬との組合せで、Ｔ細胞、ＮＫ細胞、または抗原提示細胞の活性を増幅させ得る。ＴＩＧＩＴおよびＣＤ２２６は、ＮＫ細胞に発現され、ＴＩＧＩＴ発現は、最適なＮＫ活性およびＡＤＣＣ能を積極的に阻害し得るだけでなく、ＣＤ２２６に媒介される活性化も防止し得る。ＴＩＧＩＴの遮断は、したがって、ヒトＩｇＧ１標的化剤のＮＫ媒介性ＡＤＣＣを増幅させ、ＡＤＣＣに方向付けられた治療薬は、抗ＴＩＧＩＴ抗体と組み合わせた場合に、活性の増強を示し得る。
この可能性を調査するために、非小細胞肺癌細胞系Ａ５４９を、Ｎａ２［５１Ｃｒ］Ｏ４（１００μＣｉを細胞に添加）で放射標識し、洗浄し、セツキシマブ単独の滴定物、または１０μｇ／ｍＬの抗ＴＩＧＩＴ抗体クローン１３ ｈＩｇＧ１野生型と組み合わせたセツキシマブと混合した。アイソタイプ対照もまた、１０μｇ／ｍＬでこの実験に含めた。エフェクター細胞を、凍結保存された正常ドナーのＰＢＭＣから、ＥａｓｙＳｅｐヒトＮＫ細胞富化キット（Ｓｔｅｍ Ｃｅｌｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を使用して単離した。ドナー細胞は、ＦｃγＲＩＩＩａ １５８ Ｖ／Ｖ遺伝子型のものであった。エフェクター細胞を、エフェクター対標的の細胞比１０：１（５０，０００：５０００）で添加した。４時間のインキュベーションの後、培養上清中に放出された放射性を測定し、特異的細胞溶解パーセントを（試験試料ｃｐｍ−自発的ｃｐｍ）／（総ｃｐｍ−自発的ｃｐｍ）×１００として計算した。自発的ｃｐｍ値および総ｃｐｍ値は、それぞれ、培地単独においてインキュベートした標的細胞の上清および１％ Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ−１００で溶解させた標的細胞から決定した。
図１９に示されるように、抗ＴＩＧＩＴ抗体クローン１３ ＩｇＧ１抗体単独でのＡ５４９標的細胞の処置は、ＡＤＣＣ活性を作動させなかったが、Ａ５４９標的細胞を、セツキシマブおよび抗ＴＩＧＩＴ抗体クローン１３ ＩｇＧ１の組合せと接触させた場合には、最大溶解活性が、セツキシマブ単独で観察されたものよりも増加した。
ＮＫ活性をモジュレートすることに加えて、ＴＩＧＩＴ遮断は、Ｔ細胞における抗原特異的メモリー応答を増加させ得る。Ｔ細胞上に存在するチェックポイントタンパク質を標的とする抗体は、したがって、抗ＴＩＧＩＴ抗体と組み合わせた場合に、増強された活性を示し得る。
この可能性を調査するために、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）に応答する抗原リコールアッセイを行った。ＣＭＶ反応性ドナーに由来するヒトＰＢＭＣを、Ａｓｔａｒｔｅ Ｂｉｏから購入した。このドナーに由来するメモリーＴ細胞を、ＣＭＶ抗原を用いてｉｎ ｖｉｔｒｏで再活性化させて、それらの抗原特異的応答を評価した。ＰＢＭＣを、１０％ ＦＢＳ（Ａｔｌａｎｔａ Ｂｉｏｌｏｇｉｃｓ）を含有するＸ−ｖｉｖｏ １０（Ｌｏｎｚａ）中に再懸濁させ、１００，０００個の細胞を、丸底９６ウェルプレートに播種した。細胞を、抗ＴＩＧＩＴ抗体および／または抗ＰＤ−１指向性抗体の存在下または不在下において、１０μｇ／ｍｌのＣＭＶ抗原に曝露した。コンビナトリアル活性を評価するために、ＰＢＭＣを、１μｇ／ｍｌの準最適用量の抗ＰＤ−１抗体（ペンブロリズマブまたはニボルマブ）で処置し、漸増濃度の抗ＴＩＧＩＴ抗体クローン１３ ＩｇＧ１野生型（１ｐｇ／ｍｌから１μｇ／ｍｌ）を添加した。ＣＭＶ抗原に対するメモリーリコール応答を、５日間進行させ、その後で、組織培養上清を採取し、サイトカイン応答を、製造業者の説明書に従ってＬｕｍｉｎｅｘアッセイ評価（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）によって決定した。
図２０に示されるように、抗ＴＩＧＩＴ抗体クローン１３ ＩｇＧ１は、抗ＰＤ−１抗体で処置しＣＭＶ抗原に曝露したＰＢＭＣによるＩＦＮγ分泌を、用量依存性様式で増大させた。
ｉｎ ｖｉｖｏでのコンビナトリアル活性を調査するために、同系マウス腫瘍モデルを使用した。１群当たり８匹のＣ５７ＢＬ／６マウスに、１×１０６個のＭＣ３８腫瘍細胞を側腹部の皮下に埋め込んだ。腫瘍が約１００ｍｍ３に達したときに、動物を、群にランダム化し、３日ごとに３用量（Ｑ３ｄ×３）、０．３ｍｇ／ｋｇの抗ＴＩＧＩＴ抗体クローン１３ ｈＩｇＧ１野生型、アフコシル化クローン１３ ＩｇＧ１、１ｍｇ／ｋｇの抗ＰＤ−１抗体（抗マウスＰＤ−１抗体クローン２９Ｆ．１Ａ１２、クローン１３ ｈＩｇＧ１野生型／抗ＰＤ−１抗体の組合せ、またはアフコシル化クローン１３ ＩｇＧ１／抗ＰＤ−１抗体の組合せのいずれかで処置した。腫瘍体積を経時的にモニタリングし、腫瘍量が１０００ｍｍ３を上回った場合には動物を安楽死させた。
この実験では、クローン１３ ｈＩｇＧ１野生型およびアフコシル化クローン１３ ＩｇＧ１の両方が、良好な腫瘍成長遅延を示し、野生型およびアフコシル化抗体のそれぞれについて、４／８および３／８の完全応答があった。図３７、左上部を参照されたい。抗ＰＤ−１抗体もまた、この実験において良好な有効性を示した。組合せ療法は、１５日目に測定した腫瘍体積によって明らかなように、単剤単独よりもさらに高速な腫瘍退縮を示した。図３７、右上部および下部。
（実施例１９）
ｉｎ ｖｉｔｒｏにおけるヒトＴ細胞応答に対する抗ＴＩＧＩＴ抗体の活性
メモリーＴ細胞再活性化を調査するために、抗原リコール実験を行った。ＣＭＶペプチドに対して応答性であることが既に示されているＨＬＡ−Ａ２ドナーに由来するヒトＰＢＭＣ（１００，０００個の細胞）を、１０％ ＦＢＳ、１×ペニシリン、および１×グルタミンを含有するＲＰＭＩ中に再懸濁させ、９６ウェルプレートの丸底ウェルに播種した。細胞を、漸増濃度の抗ＴＩＧＩＴ抗体クローン１３ ｈＩｇＧ１野生型、アフコシル化クローン１３ ＩｇＧ１、またはクローン１３ ｈＩｇＧ１ ＬＡＬＡ−ＰＧの存在下または不在下において、５日間、ＣＭＶペプチドで刺激した。組織培養上清を採取し、サイトカイン産生を、製造業者の説明書に従ってＬｕｍｉｎｅｘ多重アッセイによって評価した。
図２１に示されるように、抗ＴＩＧＩＴ抗体で刺激した培養物は、ＩＦＮγ産生の増加によって確認されるように、ＣＭＶ抗原に対する応答の増加を示した。アフコシル化クローン１３ ＩｇＧ１は、１ｐｇ／ｍｌまで抗原特異的Ｔ細胞応答の増幅をもたらし、この活性は、クローン１３ ＩｇＧ１野生型に関連する応答よりも強力であった。エフェクターヌルクローン１３ ＩｇＧ１ ＬＡＬＡ−ＰＧ抗体は、メモリーＴ細胞応答を作動させるのが不十分であった。
ナイーブエフェクターＴ細胞応答の誘導を調査するために、一方向混合リンパ球反応（ＭＬＲ）を行った。ＨＬＡ−Ａ２ドナーに由来するヒトＰＢＭＣ（１００，０００個の細胞）を、１０％ ＦＢＳ、１×ペニシリン、および１×グルタミンを含有するＲＰＭＩ中に再懸濁させ、丸底９６ウェルプレートにおいて、１：１の比で、照射したＨＬＡ不一致同種ＰＢＭＣとともに培養した。細胞を、漸増濃度のクローン１３ ｈＩｇＧ１野生型、アフコシル化クローン１３ ｈＩｇＧ１、またはクローン１３ ＩｇＧ１ ＬＡＬＡ−ＰＧで５日間刺激した。組織培養上清を採取し、サイトカイン産生を、製造業者の説明書に従ってＬｕｍｉｎｅｘ多重アッセイによって評価した。
図２２に示されるように、抗ＴＩＧＩＴ抗体で刺激した培養物は、ＩＬ２産生の増加によって確認されるように、同種エフェクターＴ細胞応答の増加を示した。アフコシル化クローン１３ ＩｇＧ１は、１００ｐｇ／ｍｌまで抗原特異的Ｔ細胞応答の増幅をもたらし、この活性は、クローン１３ ＩｇＧ１野生型に関連する応答よりも強力であった。エフェクターヌルクローン１３ ＩｇＧ１ ＬＡＬＡ−ＰＧ抗体は、メモリーＴ細胞応答を作動させるのが不十分であった。
抗原ナイーブおよびメモリーアッセイにおいてＴ細胞の活性化を調査することに加えて、ブドウ球菌エンテロトキシンＢペプチドを、スーパー抗原として、クローン１３ ｈＩｇＧ１野生型、クローン１３ ｈＩｇＧ１アフコシル化、クローン１３ ＩｇＧ１ ＤＬＥ、および別の抗ＴＩＧＩＴ抗体Ｈ５／Ｌ４ ＩｇＧ１と組み合わせて使用した。アフコシル化クローン１３ ｈＩｇＧ１は、ＩＬ−２の誘導によって測定したとき、クローン１３ ｈＩｇＧ１野生型またはＨ５／Ｌ４よりも強力に、Ｔ細胞の活性化を誘導することができた。図３８Ａ。クローン１３ ＩｇＧ１ ＤＬＥもまた、クローン１３ ｈＩｇＧ１野生型およびクローン１３ ｈＩｇＧ１アフコシル化の両方とほぼ同等に、ＩＬ−２産生を誘導することができた。クローン１３ ＩｇＧ１ ＤＬＥは、他の抗体とは対照的に、ＩＬ−１０の産生を同時に誘導することが見出された。図３８Ｂ。この結果は、ＦｃγＲＩＩｂ受容体の結合がＩＬ−１０の誘導をもたらすという報告と一致する。ＩｇＧ１ ＤＬＥは、ＦｃγＲＩＩｂに結合することが予測される。
（実施例２０）
マウス腫瘍モデルにおける抗ＴＩＧＩＴ抗体の活性
野生型ＩｇＧ２ａ、エフェクターヌルＩｇＧ２ａ ＬＡＬＡ−ＰＧ、またはアフコシル化ＩｇＧ２ａのいずれかである抗ＴＩＧＩＴ抗体の様々な形態での腫瘍保持（ＣＴ２６結腸癌）マウスの処置は、全身的および組織特異的の両方のサイトカイン誘導をもたらした。抗ＴＩＧＩＴ抗体での処置の可能性のある全身的および組織特異的作用を調べるために、６匹のＢａｌｂ／ｃマウスに、ＣＴ２６結腸がん細胞を側腹部へ埋め込み、腫瘍が１００ｍｍ３に達した後に、１ｍｇ／ｋｇの抗ＴＩＧＩＴ抗体クローン１３ ＩｇＧ２ａ野生型、アフコシル化クローン１３ ＩｇＧ２ａ、クローン１３ ＩｇＧ２ａ ＬＡＬＡ−ＰＧで、３日ごとに１回６用量で処置したか、または処置なしとした。３回目の抗ＴＩＧＩＴ抗体投薬の２４時間後に、マウスの半数を殺処分し、血漿、脾臓、および腫瘍組織を採取した。それぞれの脾臓および腫瘍の半分を、機械的破壊によりＲＩＰＡ緩衝液中に溶解させた。血漿および組織ライセートを、次いで、２５個の異なる炎症性サイトカインの分析を可能にするＭｉｌｉｐｏｒｅ ２５プレミックスＬｕｍｉｎｅｘ多重キットを使用してサイトカインに関して分析した。組織サイトカインレベルを、ＢＣＡ（ビシンコニン酸アッセイ）により決定されるタンパク質含量によって互いに正規化した。
図２３に示されるように、サイトカイン分析は、任意の抗体処置に応答した全身応答または組織を示すであろう血漿中のサイトカインの劇的な増加は示さなかった。限定的なサイトカインが、未処置のマウスにおいて、血漿および腫瘍に観察されたが、抗ＴＩＧＩＴ処置後に観察された変化はわずかしかなく、ＴＩＧＩＴ処置がアフコシル化抗体であっても全体的な炎症応答を開始させなかったことを示す。
抗ＴＩＧＩＴに誘導されるサイトカインレベルの分析に加えて、３回目の抗ＴＩＧＩＴの抗体投薬の２４時間後に採取した腫瘍および末梢試料を、フローサイトメトリーによって、様々なＴ細胞サブセットの比率における全体的な変化について分析した。図２３に関して上述のものと同じＢａｌｂ／ｃマウスに由来する腫瘍および脾臓単一細胞懸濁液ならびにＰＢＭＣを、ナイーブ／メモリーＴ細胞（ＣＤ６２Ｌ＋ＣＤ４４−ナイーブ、ＣＤ６２Ｌ−ＣＤ４４−エフェクター、ＣＤ４４＋ＣＤ６２Ｌ＋セントラルメモリー、およびＣＤ４４＋ＣＤ６２Ｌ−エフェクターメモリー）、ならびにＴｒｅｇ（ＣＤ２５＋ＣＤ１２７−）のＣＤ８＋、ＣＤ４＋サブセットを表す様々な細胞表面マーカーに関して染色した。試料を、Ａｔｔｕｎｅ Ａｃｏｕｓｔｉｃ Ｆｏｃｕｓｉｎｇ Ｃｙｔｏｍｅｔｅｒに流し、ＦｌｏｗＪｏを使用して分析した。ゲートは、ＣＤ４５＋生細胞に設定した。
図２４に示されるように、未処置動物と比較して、腫瘍におけるＣＤ８＋ Ｔ細胞の増加は、抗ＴＩＧＩＴ抗体クローン１３ ｍＩｇＧ２ａ野生型およびアフコシル化クローン１３ ｍＩｇＧ２ａ抗体に応答して観察されたが、エフェクターヌルクローン１３ ｍＩｇＧ２ａ ＬＡＬＡ−ＰＧでは観察されなかった（図２４、上部パネル）。抗ＴＩＧＩＴ抗体処置後のＣＤ８＋細胞のパーセンテージにおけるさらにわずかな増加が、ＰＢＭＣおよび脾臓において観察された。ナイーブ、エフェクター、およびメモリーＴ細胞の腫瘍内での変化も認められた。具体的には、腫瘍内ナイーブＣＤ８＋ Ｔ細胞のレベルは、クローン１３ ｍＩｇＧ２ａ野生型およびアフコシル化クローン１３ ｍＩｇＧ２ａでの処置後に減少したが、クローン１３ ｍＩｇＧ２ａ ＬＡＬＡ−ＰＧではあまり減少しなかった（図２４、下部左パネル）。ＣＤ８＋ＣＤ４４＋ＣＤ６２Ｌ−エフェクターメモリー細胞（図２４、上部右パネル）およびＣＤ８＋ＣＤ４４＋ＣＤ６２Ｌ＋セントラルメモリー細胞（図２４、上部左パネル）の比率の増加が、腫瘍において、クローン１３ ｍＩｇＧ２ａ野生型およびアフコシル化抗体に応答して観察されたが、クローン１３ ｍＩｇＧ２ａ ＬＡＬＡ−ＰＧ抗体に応答して観察されることはなかった。これらの変化は、脾臓においてもＰＢＭＣにおいても認められなかったが、これらの組織においていくらかの軽度な変化は生じた。
ＣＤ４＋ Ｔ細胞サブセットもまた、ＣＤ８＋細胞に関して上述のものと類似の戦略を使用して、抗ＴＩＧＩＴ抗体処置によって誘導される変化について、フローサイトメトリーによって分析した。図２５（上部左パネル）に示されるように、クローン１３ ｍＩｇＧ２ａ野生型およびアフコシル化抗体での処置により、腫瘍内ＣＤ４＋細胞に、クローン１３ ｍＩｇＧ２ａ ＬＡＬＡ−ＰＧ抗体での処置または未処置動物と比較して、軽度な減少が誘導された。この作用は、ＰＢＭＣにおいても脾臓においても見られなかった。クローン１３ ＬＡＬＡ−ＰＧ抗体に応答してではなく、クローン１３ ｍＩｇＧ２ａ野生型およびアフコシル化抗体に応答しての腫瘍内の減少は、ＣＤ４＋ Ｔｒｅｇ集団においてもわずかに観察され、抗ＴＩＧＩＴ抗体処置が、腫瘍において免疫抑制Ｔｒｅｇ集団を減少させるが、正常組織では減少させないことを示唆する。ＣＤ８＋ Ｔ細胞での結果に類似して、腫瘍内ＣＤ４＋ナイーブＴ細胞は、クローン１３ ｍＩｇＧ２ａ野生型およびアフコシル化抗体での処置の後に、未処置と比較して減少し（図２５、下部左パネル）、この発見は、腫瘍におけるエフェクターメモリーＣＤ４＋ Ｔ細胞の比率の増加と同時に発生した（図２５、中央右パネル）。エフェクターメモリーＣＤ４＋およびＣＤ８＋ Ｔ細胞は、抗腫瘍応答を誘起するのに関与しており、ＴＩＧＩＴ指向性抗体による増加は、抗腫瘍応答に寄与し得る。これらの顕著な腫瘍内Ｔ細胞集団変化の多くは、末梢におけるこれらの集団の大きな変化を伴わなかった。
６回の抗ＴＩＧＩＴ抗体投薬の後、処置の開始からおよそ２０日目の時点で、腫瘍が減少し、ほとんど検出不可能となった。脾臓および血漿をこれらのマウスから採取し、細胞を、上述のようにフローサイトメトリーのために調製した。図２６Ａ〜Ｂに示されるように、これらのマウスの脾臓に由来する様々なＴ細胞サブセットの分析により、ＣＤ８＋またはＣＤ４＋サブセットのいずれにも、群間で劇的な変化は示されなかった。
抗ＴＩＧＩＴ抗体で処置したマウスの脾臓および血漿におけるサイトカインの誘導を、多重分析を使用して評価し、結果を図２７に示す。処置動物の脾臓において、未処置動物と比較してサイトカイン産生の上昇は観察されず、概して低いレベルのサイトカインが血漿において検出されたが、ケモカインＬＩＸ（マウスＩＬ８ホモログ）およびエオタキシンは例外であり、これらは、未処置およびある特定の抗ＴＩＧＩＴ抗体処置動物において上昇していた。
これらの動物における腫瘍に対する抗原特異的メモリーの生成を、抗ＴＩＧＩＴ抗体での処置の開始からおよそ２０日後の時点で採取した脾細胞を使用して評価した。上述の抗ＴＩＧＩＴ抗体で処置したマウスに由来する脾細胞を、培養培地中に再懸濁させ、９６ウェルプレートのウェルに二連に播種した。細胞は、未刺激のままにしたか、ＣＴ２６結腸直腸腫瘍に対するＣＤ８＋ Ｔ細胞応答の主要な標的である１μｇ／ｍｌのＡＨ１ペプチドで再刺激したかのいずれかであった。４８時間後に、培養上清を採取し、多重分析によってサイトカイン産生に関して分析した。
図２８に示されるように、ペプチドの不在下において、ごくわずかなサイトカインが産生された。興味深い例外は、アフコシル化クローン１３ ｍＩｇＧ２ａで処置した動物に由来する未刺激の脾細胞によって産生されるＩＬ５およびＩＬ４レベルの上昇の観察であった（図２８、下部パネル）。しかしながら、ＣＴ−２６特異的ペプチドでの脾細胞の刺激は、クローン１３ ｍＩｇＧ２ａ野生型およびアフコシル化抗体で処置した動物において、強力なＩＦＮγおよびＴＮＦα産生をもたらしたが、クローン１３ ｍＩｇＧ２ａ ＬＡＬＡ−ＰＧ抗体で処置した動物ではもたらさず（図２８、上部パネル）、クローン１３ ｍＩｇＧ２ａ野生型およびアフコシル化抗体処置が、長期持続性抗原特異的メモリーＣＤ８＋ Ｔ細胞応答を刺激することができることが示された。メモリーＴ細胞応答の生成は、長期の抗腫瘍応答を作動させることに関与する。クローン１３ ｍＩｇＧ２ａ野生型およびアフコシル化抗体で処置した脾細胞のペプチド再刺激後のＩＬ４産生の増加もまた、観察された（図２８、下部右パネル）。再刺激なしでのアフコシル化クローン１３ ｍＩｇＧ２ａ群の未刺激の脾細胞におけるＩＬ４およびＩＬ５の産生は、この抗体によるＴＨ２応答の誘導を示唆し得る。
（実施例２１）
さらなるマウス腫瘍モデルにおける抗ＴＩＧＩＴ抗体の活性
ＥＭＴ６およびＥ０７７１乳癌の２つのマウス同系腫瘍モデルを、５ｍｇ／ｋｇの野生型ｍＩｇＧ２ａを含む抗ＴＩＧＩＴクローン１３抗体、または０．１ｍｇ／ｋｇ、１ｍｇ／ｋｇ、もしくは５ｍｇ／ｋｇのアフコシル化ｍＩｇＧ２ａを含む抗ＴＩＧＩＴクローン１３抗体で処置した。投薬スケジュールは、ｑ４ｄｘ４（４日ごとに１用量、合計４用量）であった。腫瘍の長さおよび幅を測定し、体積（ｍｍ３）＝０．５×長さ×幅２の式を使用して、腫瘍体積を計算し、ここで、長さは、長い方の寸法である。
図２９Ａ〜２９Ｂに示されるように、乳がんモデルにおける抗腫瘍応答は、腫瘍成長の遅延を示したが、治癒応答は最小であった。ＥＭＴ６モデルでは、クローン１３ ｍＩｇＧ２ａ野生型およびアフコシル化抗体の両方が、５ｍｇ／ｋｇにおいて、良好な腫瘍成長の遅延を示し、平均生存期間の増加は、３０．５日間から、それぞれ、３７日間および３９日間であった（図２９Ａ）。クローン１３ ｍＩｇＧ２ａアフコシル化抗体の追加の用量群では、低用量で活性のいくらかの消失が示され、１および０．１ｍｇ／ｋｇの用量では３５．２日間および３６．８日間の平均全生存期間しか観察されなかったが、腫瘍成長は、依然として、未処置対照と比較して遅延された（図２９Ａ）。
Ｅ０７７１モデルでは、より軽微な腫瘍成長遅延が、５ｍｇ／ｋｇにおいてクローン１３ ｍＩｇＧ２ａ野生型およびアフコシル化抗体の両方で観察され、平均生存期間の増加は、３８．６日間から、それぞれ、４４および４２日間であった（図２９Ｂ）。さらに、６匹のマウスのうち１匹は、１ｍｇ／ｋｇおよび５ｍｇ／ｋｇの用量でクローン１３ ｍＩｇＧ２ａアフコシル化抗体により治癒したと見られた。クローン１３ ｍＩｇＧ２ａアフコシル化抗体の低用量群、１ｍｇ／ｋｇおよび０．１ｍｇ／ｋｇは、３９日間の平均全生存期間をもたらした（図２９Ｂ）。
加えて、１ｍｇ／ｋｇのクローン１３ ｍＩｇＧ２ａ野生型抗体を、外部研究室（ＭＩ Ｂｉｏｒｅｓｅａｒｃｈ）から入手した第２のＣＴ２６結腸がんモデルにおいて評価した。図２９Ｃに示されるように、このＣＴ２６結腸がんモデルにおいて、クローン１３ ｍＩｇＧ２ａ野生型抗体は、処置により平均全生存期間に３０日間から４０日間への増加を示したが、完全退縮は１つしか誘導しなかった（１６％）。図１８Ｂに示されるように、Ｓｅａｔｔｌｅ Ｇｅｎｅｔｉｃｓで維持されているＣＴ２６結腸がんモデルは、１ｍｇ／ｋｇのクローン１３ ＩｇＧ２ａ野生型抗体により５０％（３／６）の完全退縮を示した。
（実施例２２）
ＲＮＡ−Ｓｅｑ分析およびｉｎ ｖｉｖｏ応答と分子シグネチャーとの相関
２つのＣＴ２６結腸がんモデル、ならびに他の同系がんモデルの応答における差異を評価するために、ＲＮＡ−ｓｅｑ分析を使用して、モデル間のトランスクリプトームにおける根底にある変化を特定した。それぞれのモデルの代表的な未処置腫瘍のＲＮＡ−ｓｅｑの未加工リード（ｆａｓｔｑ形式）は、以下の通り入手可能であった。
Ａ２０（Ｓｅａｔｔｌｅ Ｇｅｎｅｔｉｃｓにおいて維持）、２つの複製物
ＣＴ２６（Ｓｅａｔｔｌｅ Ｇｅｎｅｔｉｃｓにおいて維持）、２つの複製物
ＣＴ２６（ＭＩＢｉｏから入手）、１つの複製物
Ｅ０７７１（ＭＩＢｉｏから入手）、１つの複製物
ＥＭＴ−６（ＭＩＢｉｏから入手）、１つの複製物
ＭＣ３８（Ｓｅａｔｔｌｅ Ｇｅｎｅｔｉｃｓにおいて維持）、１つの複製物
試料のＲＮＡ−ｓｅｑリードを、アダプタートリミング（ｃｕｔａｄａｐｔ）、マウスゲノム／トランスクリプトームへのアライメント（ＳＴＡＲ）、および転写物定量（ＲＳＥＭ）からなる標準的なパイプラインで処理した。ＦＰＫＭ（１００万リード当たりのキロ塩基当たりの断片）に対して正規化した遺伝子発現値を、後続の分析に使用した。ｉｎ ｖｉｖｏ応答曲線の検査に基づいて、モデルを、野生型ＴＩＧＩＴ処置に対する全体的な応答の点で、以下のように分類した：完全レスポンダー＝Ａ２０（Ｓｅａｔｔｌｅ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ、図１８Ａ）、ＣＴ２６（Ｓｅａｔｔｌｅ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ、図１８Ｂ）、および部分的レスポンダー＝ＣＴ２６（ＭＩＢｉｏ、図２９Ｃ）、ＥＭＴ−６（ＭＩＢｉｏ、図２９Ａ）、Ｅ０７７１（ＭＩＢｉｏ、図２９Ｂ）、ＭＣ３８（Ｓｅａｔｔｌｅ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ、図１８Ｃ）。転写レベルで２つのＣＴ２６結腸がんモデル間における差異が観察され、有効性研究に使用したモデルを特徴付けることが重要であり得ることが示唆された。
応答と相関し得る腫瘍微小環境（ＴＭＥ）に関連する分子シグネチャーもまた、２つの公開されている源：Mosely et al., "Rational selection of syngeneic preclinical tumor models for immunotherapeutic drug discovery," Cancer Immunol Res 2017;5:29-41、およびTCIA, The Cancer Immunome Atlas (tcia.at/home)から得られた免疫系および免疫応答に関係する遺伝子シグネチャーを、Charoentong et al., "Pan-cancer Immunogenomic Analyses Reveal Genotype-Immunophenotype Relationships and Predictors of Response to Checkpoint Blockade," Cell Rep 2017 Jan 3;18(1):248-262から得られたシグネチャーとともに編集することによって、決定した。これらの源から得られた遺伝子シグネチャーは、発現が特定の生物学的状況、たとえば、ＣＤ８＋ Ｔ細胞において高い遺伝子の一覧からなる。ＴＣＩＡ遺伝子シグネチャーは、ヒト由来であるため、それらのシグネチャーのそれぞれにおける遺伝子を、ＲライブラリーｂｉｏｍａＲｔを使用して、マウスオルソログにマッピングした。合計でおよそ５０個の遺伝子シグネチャーを考慮し、８つのＲＮＡ−ｓｅｑ未処置腫瘍試料のそれぞれを、シグネチャー内の遺伝子の試料ＦＰＫＭ値を合計することによって５０個のシグネチャーのそれぞれに対してスコア付けした。
どの遺伝子シグネチャースコアによって強力なレスポンダーが弱いレスポンダーと区別されるかを定量的に評価するために、すべての試料にわたるシグネチャースコアのベクトルを、応答ベクトルと相関付けた（ピアソン相関、弱いレスポンダーは０、強いレスポンダーは１）。応答と特に高い相関を有するシグネチャーには、ＮＫ細胞および活性化ＣＤ８ Ｔ細胞が含まれた（図３０）。いずれの場合にも、より強力なレスポンダーは、より弱いレスポンダーと比較して、免疫サブセットが高くスコアされた。表４は、ある特定の免疫細胞サブセットと、抗ＴＩＧＩＴ抗体処置に対する腫瘍細胞の応答との間の相関性の概要を示す。
Figure 2021534196
いずれの特定の理論によっても束縛されることを意図するものではないが、ＴＩＧＩＴ遮断は、ＮＫ細胞およびＣＤ８ Ｔ細胞に媒介される腫瘍殺滅の両方を刺激し得るため、ＴＭＥにおけるこれらの免疫細胞集団の利用可能なプールが大きいことは、これらのサブセットのスコアが高いモデルにおいて応答がより強力であることを説明し得る。
興味深いことに、ＴＩＧＩＴ発現は、この評価において、応答の強力な差示因子ではなく、ＣＤ１５５発現もまたそうではない（図３１）。たとえば、Ｓｅａｔｔｌｅ ＧｅｎｅｔｉｃｓのＣＴ２６結腸がんモデルは、すべてのモデルの中でもっとも高いＣＤ１５５発現を示し、一方でＡ２０リンパ腫モデルは、もっとも低い発現を有したが、いずれも強力なレスポンダーである。
（実施例２３）
抗ＴＩＧＩＴ抗体は、Ｔｈ１応答を増強させる
クローン１３抗ＴＩＧＩＴ抗体が、ナイーブ抗原特異的Ｔ細胞応答の作動を補助するかどうかを評価するために、ｂａｌｂ／ｃマウス（１群当たり５匹）に、フロイント完全アジュバント（ＣＦＡ）の存在下において１００μｇのモデル抗原卵白アルブミン（ＯＶＡ）を皮下に、１回ワクチン接種した。同時に、マウスに、１ｍｇ／ｋｇのクローン１３ ＩｇＧ２ａ野生型、クローン１３ ｍＩｇＧ２ａアフコシル化、またはクローン１３ ｍＩｇＧ２ａ ＬＡＬＡ−ＰＧ抗体を投与し、次いで、３日間隔でさらに３用量投与した（ｑ３ｄｘ４）。ワクチン接種の１４日後に、マウスを、抗ＯＶＡ ＩｇＧ１およびＩｇＧ２ａ ＥＬＩＳＡを使用して抗原特異的免疫の誘導に関して分析した。脾細胞を、再刺激し、サイトカイン誘導に関して評価した。
抗ＯＶＡ ＥＬＩＳＡにより、マウスがワクチンに誘導される抗原特異的プライミングを受けている間にクローン１３ ＩｇＧ２ａ野生型またはクローン１３ ｍＩｇＧ２ａ ＬＡＬＡ−ＰＧのいずれの抗体を共投与することによって、生成されるＩｇＧ１抗体のレベルが、約１．５倍に増大したことが示された。クローン１３ ｍＩｇＧ２ａアフコシル化抗体は、この実験では、抗原特異的ＩｇＧ１抗体レベルを増大させなかった（図３２、右パネル）。これらのデータにより、ＴＩＧＩＴ遮断は、ＣＤ４／Ｔｈ２応答のプライミングを増加させることができるが、増強されたエフェクター機能がこの作用を抑止することが示唆される。ＴＩＧＩＴ遮断はまた、ＩｇＧ２ａ抗原特異的抗体のレベルを増大させたが（図３２、右パネル）、この事例では、クローン１３ ｍＩｇＧ２ａアフコシル化抗体が、もっとも高い効果を示した。まとめると、ＩｇＧ１レベルとエフェクター機能の増強との間には逆相関が観察されたが、ＩｇＧ２ａレベルは、増強されたエフェクター機能と正相関し、クローン１３ ｍＩｇＧ２ａアフコシル化抗体は抗ＯＶＡ ＩｇＧ２ａレベルを９倍を上回って増加させた。クローン１３ ＩｇＧ２ａ野生型およびクローン１３ ｍＩｇＧ２ａ ＬＡＬＡ−ＰＧ抗体は、約４倍のみであるがＩｇＧ２ａレベルも増大させた（図３２、右パネル）。この実験において、ＴＩＧＩＴ遮断単独では、マウス株および使用されるアジュバントによって作動されるこの重度にＴｈ２に偏った系を、Ｔｈ１の方へと傾けるのに十分ではなかったが、ＴＩＧＩＴ遮断は、Ｔｈ１応答を増強させることが示され、その応答は、エフェクター機能と相関していた。
抗原特異的抗体産生を分析することに加えて、抗原特異的Ｔ細胞の誘導も評価した。それぞれのマウスに由来する同等数の脾細胞を、ｅｘ ｖｉｖｏにおいて、１μｇの全タンパク質（ＯＶＡ）で７２時間再刺激した後、Ｔエフェクターサイトカイン分析を行った。抗原再刺激（「１μｇ／ｍｌのＯＶＡ」）に応答した活性化されたＴ細胞サイトカインによるＩＬ−２の産生は、予測した通り、抗原／アジュバント処置群において、未処置動物よりも増加し、これは、プライミングの際にエフェクター機能が有効である（クローン１３ ＩｇＧ２ａ野生型）かまたは増強されている（クローン１３ ｍＩｇＧ２ａアフコシル化）抗ＴＩＧＩＴ抗体で処置した動物から得られた脾細胞では、さらに増加した（図３３、下部右パネル）。これらの結果は、ＴＩＧＩＴ遮断がナイーブ抗原特異的Ｔ細胞応答の生成を増強させる能力と一貫性がある。Ｔｈ２エフェクターサイトカインＩＬ−５およびＩＬ−４の分析により、抗原再刺激後の抗ＴＩＧＩＴ抗体で処置した動物からの抗原／アジュバント単独を上回るいくらかの追加のサイトカイン誘導が示されたが、エフェクター機能と応答との間に観察された相関性はあまり明確でなかった（図３３、左パネル）。Ｔｈ１／ＣＤ８ Ｔ細胞サイトカインＩＦＮγについて、抗原プライミング事象中のＴＩＧＩＴ遮断は、抗原特異的Ｔ細胞の生成をさらに顕著に増強させた（図３３、上部右パネル）。もっとも有意な増大は、エフェクター増強型クローン１３ ｍＩｇＧ２ａアフコシル化抗体で処置した動物に由来する脾細胞において観察された。
（実施例２４）
抗ＴＩＧＩＴ抗体は、長期持続性抗腫瘍メモリーＣＤ８ Ｔ細胞を誘導する。
ＣＴ２６結腸がん同系腫瘍モデルにおいて、クローン１３ ｍＩｇＧ２ａアフコシル化抗体もしくは未改変抗体での処置の後に完全応答を示したマウス、および４匹の未処置マウスに、ＣＴ２６結腸がん細胞で再チャレンジを行った。図３４に示されるように、１ｍｇ／ｋｇまたは５ｍｇ／ｋｇのクローン１３ ｍＩｇＧ２ａアフコシル化抗体または未改変抗体で処置した後に完全応答を示したマウスは、再チャレンジした腫瘍細胞を拒絶することができる長期持続性抗腫瘍メモリーＣＤ８ Ｔ細胞を有すると見られた。
前述の発明は、理解の明確さの目的で、例証および実施例を用いていくらか詳細に説明されているが、当業者であれば、本発明の多数の修正形および変化形が、その趣旨および範囲から逸脱することなくなされ得ることを理解するであろう。本明細書に記載される具体的な実施形態は、例示で提供されているにすぎず、決して制限することを意味するものではない。本明細書および実施例は例示と見なされるにすぎないことが意図され、本発明の真の範囲および趣旨は、以下の特許請求の範囲によって示される。
（実施例２５）
Ｆｃγ受容体への抗ＴＩＧＩＴ抗体の結合
ｉｎ ｖｉｖｏにおいて、単球、マクロファージ、好中球、樹状細胞、およびナチュラルキラー細胞は、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩ、およびＦｃγＲＩＩＩａを介して、ＡＤＣＰ、ＡＤＣＣ、およびＣＤＣを媒介し得る。細胞のＦｃγＲ結合を評価するために、ＣＨＯ細胞に、ヒトＦｃγＲＩ、ＦｃγＩＩａ、ＦｃγＩＩＢ、または高親和性ＦｃγＲＩＩＩａ Ｖ／Ｖ受容体をトランスフェクトした。細胞を、漸増濃度のクローン１３ ＩｇＧ１抗ＴＩＧＩＴ抗体の野生型、アフコシル化、ＬＡＬＡ−ＰＧ、もしくはＤＬＥバージョン、または別の抗ＴＩＧＩＴ抗体Ｈ５Ｌ４に曝露した。蛍光タグ化抗ヒトＦｃ二次抗体およびフローサイトメトリーを使用して、結合をモニタリングした。
図３９Ａに示されるように、ＩｇＧ１ ＬＡＬＡ−ＰＧ不活性骨格を除くすべての抗体が、ＣＨＯ細胞表面上のＦｃγＲＩに実質的に同等に結合した。ＩｇＧ１アフコシル化およびＩｇＧ１ ＤＬＥ骨格は、ＣＨＯ細胞表面上のＦｃγＲＩＩＩａへの結合の増加を示した。図３９Ｂ。ＣＨＯ細胞表面上のＦｃｙＲＩＩａおよびＦｃγＲＩＩｂの両方への結合は、野生型ＩｇＧ１骨格およびＩｇＧ１ ＤＬＥエフェクター増強骨格でもっとも高かった。図３９Ｃおよび図３９Ｄ。アフコシル化ＩｇＧ１骨格は、ＦｃγＲＩＩａおよびＦｃγＲＩＩｂの両方に対して、ＩｇＧ１野生型骨格と比較して低い結合親和性を有するが、その結合親和性は、ＩｇＧ１ ＬＡＬＡ−ＰＧ骨格よりは高かった。図３９Ｃおよび図３９Ｄ。阻害性ＦｃγＲＩＩｂ受容体への結合の低減は、アフコシル化ＩｇＧ１骨格によって媒介される免疫応答に影響を及ぼし得る。
（実施例２６）
抗ＴＩＧＩＴ抗体はファゴサイトーシスを媒介した
「抗体依存性細胞ファゴサイトーシス」または「ＡＤＣＰ」という用語は、抗体に結合した細胞が、全体的または部分的のいずれかで、抗体のＦｃ領域に結合するファゴサイトーシス性免疫細胞によって（たとえば、マクロファージ、好中球、および／または樹状細胞によって）内部移行されるプロセスを指す。
クローン１３ ＩｇＧ１抗ＴＩＧＩＴ抗体の野生型、アフコシル化、およびＤＬＥバージョンを、ヒト単球／マクロファージおよびＴＩＧＩＴ陽性Ｊｕｒｋａｔ Ｔ細胞を使用して、抗体媒介性ファゴサイトーシスに関してアッセイした。赤色蛍光ＰＫＨ色素で標識したヒトＴＩＧＩＴ陽性Ｊｕｒｋａｔ Ｔ細胞を、３０分間、漸増濃度の抗ＴＩＧＩＴ抗体でオプソニン化した。細胞を洗浄し、１０：１の比で単球マクロファージとともに、１８時間インキュベートした。試料を、３回洗浄し、フローサイトメトリーに供して、ファゴサイトーシスを評価した。
図４０に示されるように、野生型およびアフコシル化ＩｇＧ１クローン１３抗ＴＩＧＩＴ抗体は、類似のレベルのファゴサイトーシスを媒介したが、一方で、クローン１３ ＩｇＧ１ ＤＬＥ抗体は、ファゴサイトーシス活性の媒介にあまり有効ではなかった。
ＡＤＣＣおよびＡＤＣＰに加えて、細胞に結合した抗体のＦｃ領域もまた、古典的補体経路を活性化し、ＣＤＣを誘起することができる。補体系のＣ１ｑは、抗体が抗原と複合体を形成すると、抗体のＦｃ領域に結合する。細胞に結合した抗体にＣ１ｑが結合することで、Ｃ３変換酵素を生じるＣ４およびＣ２のタンパク質分解活性化を含む事象のカスケードが開始され得る。Ｃ３変換酵素によるＣ３からＣ３ｂへの切断が、Ｃ５ｂ、Ｃ６、Ｃ７、Ｃ８、およびＣ９を含む末端補体成分の活性化を可能にする。まとめると、これらのタンパク質は、抗体がコーティングされた細胞上に、膜侵襲複合体細孔を形成する。これらの細孔は、細胞膜完全性を破壊し、補体依存性細胞傷害性または「ＣＤＣ」を介して標的細胞を殺滅させる。
クローン１３ ＩｇＧ１抗ＴＩＧＩＴ抗体の野生型、アフコシル化、ＬＡＬＡ−ＰＧ、およびＤＬＥバージョン、ならびにＨ５／Ｌ４を、ＴＩＧＩＴ＋ Ｊｕｒｋａｔ Ｔ細胞を標的細胞として使用して、ＣＤＣ活性に関して評価した。Ｊｕｒｋａｔ細胞を、ヒト血清（熱不活性化されていない）の存在下において、３７℃で２時間、生細胞からは排除されるがＣＤＣおよび溶解が活性化されると取り込まれるＳＹＴＯＸ（登録商標）グリーンを含有する培地において、漸増用量の抗体とともにインキュベートした。インキュベーションの後に、試料を、プレートリーダーで分析し、バックグラウンドシグナルを差し引き、最大溶解％を、１％ Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ溶液で殺滅させた細胞からの最大シグナルを決定することによって、計算した。
図４１に示されるように、試験した抗ＴＩＧＩＴ抗体のいずれも、ＣＤＣ活性を媒介しなかった。対照的に、抗ＣＤ４７抗体ｈＢ６Ｈ１２．３は、この系において強力なＣＤＣ活性を媒介した。抗体によるＣＤＣの誘導は、立体構造に依存し、それらが結合するエピトープに依存することが多い。これらの結果により、抗体が結合するＴＩＧＩＴエピトープが、適切なＣ１ｑ結合を可能にするものではないことが示唆される。
本明細書において引用されるすべての刊行物、特許、特許出願、または他の文書は、それぞれ個々の刊行物、特許、特許出願、または他の文書があらゆる目的で参照により組み込まれるのと同程度に、あらゆる目的で、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。
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簡単な概要
実施形態１． ヒトＴＩＧＩＴ（ＩｇドメインおよびＩＴＩＭドメインを有するＴ細胞免疫受容体）に結合する単離された抗体を含む組成物であって、前記抗体が、ヒトＴＩＧＩＴに対して、５ｎＭ未満の結合親和性（ＫＤ）を有し、前記組成物中の前記抗体のうちの少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８
％、または少なくとも９９％が、アフコシル化されている、組成物。
実施形態２． 前記抗体が、ヒトＴＩＧＩＴに対して、１ｎＭ未満のＫＤを有する、実施形態１に記載の組成物。
実施形態３． 前記抗体が、ヒトＴＩＧＩＴに対して、１００ｐＭ未満のＫＤを有する、実施形態１に記載の組成物。
実施形態４． 前記抗体が、カニクイザルＴＩＧＩＴおよび／またはマウスＴＩＧＩＴとの交差反応性を示す、実施形態１から３のいずれか一項に記載の組成物。
実施形態５． 前記抗体が、カニクイザルＴＩＧＩＴおよびマウスＴＩＧＩＴの両方との交差反応性を示す、実施形態４に記載の組成物。
実施形態６． 前記抗体が、ＴＩＧＩＴへのＣＤ１５５の結合を遮断する、実施形態１から５のいずれか一項に記載の組成物。
実施形態７． 前記抗体が、ＴＩＧＩＴへのＣＤ１１２の結合を遮断する、実施形態１から５のいずれか一項に記載の組成物。
実施形態８． 前記抗体が、ＴＩＧＩＴへのＣＤ１５５およびＣＤ１１２の両方の結合を遮断する、実施形態１から５のいずれか一項に記載の組成物。
実施形態９． 前記抗体が、ヒトＴＩＧＩＴへの結合に関して、配列番号５５のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域および配列番号６４のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む抗体と競合する、実施形態１から８のいずれか一項に記載の組成物。
実施形態１０． 前記抗体が、ヒトＴＩＧＩＴに結合するときに、アミノ酸８１位および８２位のうちの一方または両方に結合する、実施形態１から９のいずれか一項に記載の組成物。
実施形態１１． 前記抗体が、アミノ酸８１位および８２位の両方に結合する、実施形態１０に記載の組成物。
実施形態１２． アミノ酸８１位および８２位が、Ｐｈｅ８１およびＬｙｓ８２である、実施形態１０または１１に記載の組成物。
実施形態１３． 前記抗体が、アミノ酸８１位および８２位のうちの一方または両方を含むヒトＴＩＧＩＴ上のエピトープに結合する、実施形態１から１２のいずれか一項に記載の組成物。
実施形態１４． ヒトＴＩＧＩＴに結合する単離された抗体を含む組成物であって、前記抗体が、ヒトＴＩＧＩＴに結合するときに、アミノ酸８１位および８２位のうちの一方または両方に結合し、前記組成物中の前記抗体のうちの少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％が、アフコシル化されている、組成物。
実施形態１５． 前記抗体が、アミノ酸８１位および８２位の両方に結合する、実施形態１４に記載の組成物。
実施形態１６． アミノ酸８１位および８２位が、Ｐｈｅ８１およびＬｙｓ８２である、実施形態１４または実施形態１５に記載の組成物。
実施形態１７． ヒトＴＩＧＩＴに結合する単離された抗体を含む組成物であって、前記抗体が、アミノ酸８１位および８２位のうちの一方または両方を含むヒトＴＩＧＩＴ上のエピトープに結合し、前記組成物中の前記抗体のうちの少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％が、アフコシル化されている、組成物。
実施形態１８． 前記エピトープが、８１位におけるＰｈｅを含む、実施形態１３または実施形態１７に記載の組成物。
実施形態１９． 前記エピトープが、８２位におけるＬｙｓまたはＳｅｒを含む、実施形態１３、１７、および１８のいずれか一項に記載の組成物。
実施形態２０． 前記エピトープが、８１位におけるＰｈｅおよび８２位におけるＬｙｓまたはＳｅｒを含む、実施形態１３および１７から１９のいずれか一項に記載の組成物
。
実施形態２１． 前記エピトープが、Ｐｈｅ８１およびＬｙｓ８２を含む、実施形態２０に記載の組成物。
実施形態２２． 前記エピトープが、非連続的エピトープである、実施形態１３および１７から２１のいずれか一項に記載の組成物。
実施形態２３． 前記抗体が、アミノ酸５１位、５２位、５３位、５４位、５５位、７３位、７４位、７５位、７６位、７７位、７９位、８３位、８４位、８５位、８６位、８７位、８８位、８９位、９０位、９１位、９２位、または９３位のうちの１つまたは複数をさらに含むヒトＴＩＧＩＴ上のエピトープに結合する、実施形態１３および１７から２２のいずれか一項に記載の組成物。
実施形態２４． 前記エピトープが、Ｔｈｒ５１、Ａｌａ５２、Ｇｌｎ５３、Ｖａｌ５４、Ｔｈｒ５５、Ｌｅｕ７３、Ｇｌｙ７４、Ｔｒｐ７５、Ｈｉｓ７６、Ｉｌｅ７７、Ｐｒｏ７９、Ａｓｐ８３、Ａｒｇ８４、Ｖａｌ８５、Ａｌａ８６、Ｐｒｏ８７、Ｇｌｙ８８、Ｐｒｏ８９、Ｇｌｙ９０、Ｌｅｕ９１、Ｇｌｙ９２、およびＬｅｕ９３からなる群から選択される１つまたは複数のアミノ酸残基をさらに含む、実施形態２３に記載の組成物。
実施形態２５． 前記エピトープが、アミノ酸残基Ｔｈｒ５１、Ａｌａ５２、Ｇｌｎ５３、Ｖａｌ５４、Ｔｈｒ５５、Ｇｌｙ７４、Ｔｒｐ７５、Ｈｉｓ７６、Ｉｌｅ７７、Ｐｈｅ８１、Ｌｙｓ８２、Ｐｒｏ８７、Ｇｌｙ８８、Ｐｒｏ８９、Ｇｌｙ９０、Ｌｅｕ９１、Ｇｌｙ９２、およびＬｅｕ９３を含む、実施形態２４に記載の組成物。
実施形態２６． 前記エピトープが、アミノ酸残基Ａｌａ５２、Ｇｌｎ５３、Ｌｅｕ７３、Ｇｌｙ７４、Ｔｒｐ７５、Ｐｒｏ７９、Ｐｈｅ８１、Ｌｙｓ８２、Ａｓｐ８３、Ａｒｇ８４、Ｖａｌ８５、およびＡｌａ８６を含む、実施形態２４に記載の組成物。
実施形態２７． 前記エピトープが、配列ＩＣＮＡＤＬＧＷＨＩＳＰＳＦＫ（配列番号２５８）を含む、実施形態１３および１７から２６のいずれか一項に記載の組成物。
実施形態２８． ヒトＴＩＧＩＴが、配列番号２１８の配列を含む、実施形態１から２７のいずれか一項に記載の組成物。
実施形態２９． 前記抗体のそれぞれが、
（ａ）配列番号４、配列番号２２、配列番号４０、配列番号５８、配列番号７６、配列番号９４、配列番号１１２、配列番号１３０、配列番号１４８、配列番号１６６、配列番号１８４、配列番号２０２、配列番号２２１、配列番号２２４、配列番号２２６、配列番号２３１、配列番号２３３、配列番号２３９、配列番号２４３、配列番号２８３、配列番号２８４、配列番号２９３、配列番号２９４、配列番号２８９、および配列番号２９０から選択される配列を含む重鎖ＣＤＲ１、
（ｂ）配列番号６、配列番号２４、配列番号４２、配列番号６０、配列番号７８、配列番号９６、配列番号１１４、配列番号１３２、配列番号１５０、配列番号１６８、配列番号１８６、配列番号２０４、配列番号２２２、配列番号２２５、配列番号２２７、配列番号２２９、配列番号２３２、配列番号２３４、配列番号２３８、配列番号２４０、配列番号２８５、配列番号２９７、配列番号２９１、および配列番号２９５から選択される配列を含む重鎖ＣＤＲ２、
（ｃ）配列番号８、配列番号２６、配列番号４４、配列番号６２、配列番号８０、配列番号９８、配列番号１１６、配列番号１３４、配列番号１５２、配列番号１７０、配列番号１８８、配列番号２０６、配列番号２２３、配列番号２２８、配列番号２３０、配列番号２３５、配列番号２３６、配列番号２３７、配列番号２４１、配列番号２４２、配列番号２４４、配列番号２８６、配列番号２９２、および配列番号２９６から選択される配列を含む重鎖ＣＤＲ３、
（ｄ）配列番号１３、配列番号３１、配列番号４９、配列番号６７、配列番号８５、配列番号１０３、配列番号１２１、配列番号１３９、配列番号１５７、配列番号１７５、配列番号１９３、配列番号２１１、および配列番号２８７から選択される配列を含む軽鎖ＣＤＲ１、
（ｅ）配列番号１５、配列番号３３、配列番号５１、配列番号６９、配列番号８７、配列
番号１０５、配列番号１２３、配列番号１４１、配列番号１５９、配列番号１７７、配列番号１９５、配列番号２１３、および配列番号２８８から選択される配列を含む軽鎖ＣＤＲ２、または
（ｆ）配列番号１７、配列番号３５、配列番号５３、配列番号７１、配列番号８９、配列番号１０７、配列番号１２５、配列番号１４３、配列番号１６１、配列番号１７９、配列番号１９７、および配列番号２１５から選択される配列を含む軽鎖ＣＤＲ３
のうちの１つまたは複数を含む、実施形態１から２８のいずれか一項に記載の組成物。
実施形態３０． 前記抗体のそれぞれが、
（ａ）配列番号５８、配列番号２８３、配列番号２８４、配列番号２２４、配列番号２９３、配列番号２９４、配列番号２２６、配列番号２８９、および配列番号２９０から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１配列、
（ｂ）配列番号６０、配列番号２８５、配列番号２２５、配列番号２９７、配列番号２２７、配列番号２９１、配列番号２２９、および配列番号２９５から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２配列、
（ｃ）配列番号６２、配列番号２８６、配列番号２２８、配列番号２９２、配列番号２３０、および配列番号２９６から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３配列、
（ｄ）配列番号６７および配列番号２８７から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１配列、
（ｅ）配列番号６９および配列番号２８８から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２配列、ならびに／または
（ｆ）配列番号７１のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３配列
を含む、実施形態２９に記載の組成物。
実施形態３１． 前記抗体のそれぞれが、
（ａ）それぞれ、配列番号４、６、８、１３、１５、および１７、または
（ｂ）それぞれ、配列番号２２、２４、２６、３１、３３、および３５、または
（ｃ）それぞれ、配列番号４０、４２、４４、４９、５１、および５３、または
（ｄ）それぞれ、配列番号５８、６０、６２、６７、６９、および７１、または
（ｅ）それぞれ、配列番号２８３、２８５、６２、２８７、２８８、および７１、または（ｆ）それぞれ、配列番号２８４、６０、２８６、６７、６９、および７１、または
（ｇ）それぞれ、配列番号７６、７８、８０、８５、８７、および８９、または
（ｈ）それぞれ、配列番号９４、９６、９８、１０３、１０５、および１０７、または
（ｉ）それぞれ、配列番号１１２、１１４、１１６、１２１、１２３、および１２５、または
（ｊ）それぞれ、配列番号１３０、１３２、１３４、１３９、１４１、および１４３、または
（ｋ）それぞれ、配列番号１４８、１５０、１５２、１５７、１５９、および１６１、または
（ｌ）それぞれ、配列番号１６６、１６８、１７０、１７５、１７７、および１７９、または
（ｍ）それぞれ、配列番号１８４、１８６、１８８、１９３、１９５、および１９７、または
（ｎ）それぞれ、配列番号２０２、２０４、２０６、２１１、２１３、および２１５、または
（ｏ）それぞれ、配列番号２２１、２２２、２２３、１３、１５、および１７、または
（ｐ）それぞれ、配列番号２２４、２２５、６２、６７、６９、および７１、または
（ｑ）それぞれ、配列番号２９３、２９７、６２、２８７、２８８、および７１、または（ｒ）それぞれ、配列番号２９４、２２５、２８６、６７、６９、および７１、または
（ｓ）それぞれ、配列番号２２６、２２７、２２８、６７、６９、および７１、または
（ｔ）それぞれ、配列番号２８９、２９１、２２８、２８７、２８８、および７１、または
（ｕ）それぞれ、配列番号２９０、２２７、２９２、６７、６９、および７１、または
（ｖ）それぞれ、配列番号２２４、２２９、２３０、６７、６９、および７１、または
（ｗ）それぞれ、配列番号２９３、２９５、２３０、２８７、２８８、および７１、または
（ｘ）それぞれ、配列番号２９４、２２９、２９６、６７、６９、および７１、または
（ｙ）それぞれ、配列番号２２４、２２７、２３０、６７、６９、および７１、または
（ｚ）それぞれ、配列番号２９３、２９１、２３０、２８７、２８８、および７１、または
（ａａ）それぞれ、配列番号２９４、２２７、２９６、６７、６９、および７１、または（ｂｂ）それぞれ、配列番号２３１、２３２、２３５、１０３、１０５、および１０７、または
（ｃｃ）それぞれ、配列番号２３３、２３４、２３６、１０３、１０５、および１０７、または
（ｄｄ）それぞれ、配列番号２３３、２３４、２３７、１０３、１０５、および１０７、または
（ｅｅ）それぞれ、配列番号１６６、２３８、１７０、１７５、１７７、および１７９、または
（ｆｆ）それぞれ、配列番号２３９、２４０、１７０、１７５、１７７、および１７９、または
（ｇｇ）それぞれ、配列番号２３９、２４０、２４１、１７５、１７７、および１７９、または
（ｈｈ）それぞれ、配列番号２３９、２４０、２４２、１７５、１７７、および１７９、または
（ｉｉ）それぞれ、配列番号２４３、１６８、２４４、１７５、１７７、および１７９
の配列を含む重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３、ならびに軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ、およびＣＤＲ３を含む、実施形態２９または実施形態３０に記載の組成物。
実施形態３２． 前記抗体のそれぞれが、
（ａ）それぞれ、配列番号５８、６０、６２、６７、６９、および７１、または
（ｂ）それぞれ、配列番号２８３、２８５、６２、２８７、２８８、および７１、または（ｃ）それぞれ、配列番号２８４、６０、２８６、６７、６９、および７１
の配列を含む重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３、ならびに軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ、およびＣＤＲ３を含む、実施形態１から３１のいずれか一項に記載の組成物。
実施形態３３． 前記抗体のそれぞれが、
（ａ）配列番号１、配列番号１９、配列番号３７、配列番号５５、配列番号７３、配列番号９１、配列番号１０９、配列番号１２７、配列番号１４５、配列番号１６３、配列番号１８１、配列番号１９９、配列番号２４５、配列番号２４６、配列番号２４７、配列番号２４８、配列番号２４９、配列番号２５０、配列番号２５１、配列番号２５２、配列番号２５３、配列番号２５４、配列番号２５５、配列番号２５６、または配列番号２５７に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、ならびに／または
（ｂ）配列番号１０、配列番号２８、配列番号４６、配列番号６４、配列番号８２、配列番号１００、配列番号１１８、配列番号１３６、配列番号１５４、配列番号１７２、配列番号１９０、または配列番号２０８に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域
を含む、実施形態１から３２のいずれか一項に記載の組成物。
実施形態３４． 前記抗体のそれぞれが、
（ａ）配列番号１もしくは配列番号２４５に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号１０に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、または
（ｂ）配列番号１９に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む
重鎖可変領域、および配列番号２８に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、または
（ｃ）配列番号３７に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号４６に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、または
（ｄ）配列番号５５、配列番号２４６、配列番号２４７、配列番号２４８、もしくは配列番号２４９のうちのいずれか１つに対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号６４に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、または
（ｅ）配列番号７３に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号８２に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、または
（ｆ）配列番号９１、配列番号２５０、配列番号２５１、もしくは配列番号２５２のうちのいずれか１つに対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号１００に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、または
（ｇ）配列番号１０９に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号１１８に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、または
（ｈ）配列番号１２７に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号１３６に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、または
（ｉ）配列番号１４５に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号１５４に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、または
（ｊ）配列番号１６３、配列番号２５３、配列番号２５４、配列番号２５５、配列番号２５６、もしくは配列番号２５７のうちのいずれか１つに対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号１７２に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、または
（ｋ）配列番号１８１に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号１９０に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、または
（ｌ）配列番号１９９に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号２０８に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域
を含む、実施形態１から３３のいずれか一項に記載の組成物。
実施形態３５． 前記抗体のそれぞれが、
（ａ）配列番号１もしくは配列番号２４５のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号１０のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、または
（ｂ）配列番号１９のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号２８のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、または
（ｃ）配列番号３７のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号４６のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、または
（ｄ）配列番号５５、配列番号２４６、配列番号２４７、配列番号２４８、もしくは配列番号２４９のうちのいずれか１つのアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号６４のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、または
（ｅ）配列番号７３のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号８２のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、または
（ｆ）配列番号９１、配列番号２５０、配列番号２５１、もしくは配列番号２５２のうちのいずれか１つのアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号１００のアミノ酸配
列を含む軽鎖可変領域、または
（ｇ）配列番号１０９のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号１１８のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、または
（ｈ）配列番号１２７のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号１３６のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、または
（ｉ）配列番号１４５のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号１５４のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、または
（ｊ）配列番号１６３、配列番号２５３、配列番号２５４、配列番号２５５、配列番号２５６、もしくは配列番号２５７のうちのいずれか１つのアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号１７２のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、または
（ｋ）配列番号１８１のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号１９０のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、または
（ｌ）配列番号１９９のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号２０８のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域
を含む、実施形態３４に記載の組成物。
実施形態３６． 前記抗体のそれぞれが、配列番号５５のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号６４のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む、実施形態１から３５のいずれか一項に記載の組成物。
実施形態３７． 前記抗体が、ＩｇＧ抗体である、実施形態１から３６のいずれか１項に記載の組成物。
実施形態３８． 前記抗体が、ＩｇＧ１抗体またはＩｇＧ３抗体である、実施形態３７に記載の組成物。
実施形態３９． 前記抗体のそれぞれが、配列番号２６０、２６２、２６４、２６６、２６８、２７０、および２７２から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖、ならびに配列番号２７４のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む、実施形態１から３８のいずれか一項に記載の組成物。
実施形態４０． 前記抗体のそれぞれが、配列番号２６０のアミノ酸配列を含む重鎖、および配列番号２７４のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む、実施形態３９に記載の組成物。
実施形態４１． 前記抗体のそれぞれが、配列番号２６０のアミノ酸配列からなる重鎖、および配列番号２７４のアミノ酸配列からなる軽鎖を含む、実施形態３９に記載の組成物。
実施形態４２． ヒトＴＩＧＩＴに結合する単離された抗体を含む組成物であって、前記組成物中の前記抗体のうちの少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％が、アフコシル化されており、前記抗体のそれぞれが、配列番号２６０のアミノ酸配列を含む重鎖および配列番号２７４のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む、組成物。
実施形態４３． ヒトＴＩＧＩＴに結合する単離された抗体を含む組成物であって、前記組成物中の前記抗体のうちの少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％が、アフコシル化されており、前記抗体のそれぞれが、配列番号２６０のアミノ酸配列からなる重鎖および配列番号２７４のアミノ酸配列からなる軽鎖を含む、組成物。
実施形態４４． 前記抗体が、抗ＰＤ−１抗体または抗ＰＤ−Ｌ１抗体との相乗作用を示す、実施形態１から４３のいずれか一項に記載の組成物。
実施形態４５． 相乗作用が、（ｉ）ＰＤ−１、ＴＩＧＩＴ、およびＣＤ２２６を発現するＪｕｒｋａｔエフェクター細胞であって、ＩＬ−２プロモーターによって駆動されるルシフェラーゼレポーター遺伝子を含むＪｕｒｋａｔエフェクター細胞、ならびに（ｉｉ）ＴＣＲ活性化因子、ＰＤ−Ｌ１、およびＣＤ１５５を発現するＣＨＯ−Ｋ１人工抗原提示細胞（ａＡＰＣ）を含む共培養物を、前記組成物および抗ＰＤ−１抗体または抗ＰＤ−
Ｌ１抗体と接触させることを含むアッセイを使用して、決定される、実施形態４４に記載の組成物。
実施形態４６． 制御性Ｔ（Ｔｒｅｇ）細胞が、前記組成物と接触させたヒトＰＢＭＣから枯渇される、実施形態１から４５のいずれか一項に記載の組成物。
実施形態４７． ＭＣＰ１、ＩＬ−８、およびＭＩＰ１αの発現が、前記組成物と接触させたヒトＰＢＭＣにおいて増加する、実施形態１から４６のいずれか一項に記載の組成物。
実施形態４８． 単球／マクロファージが、前記組成物と接触させると活性化される、実施形態１から４７のいずれか一項に記載の組成物。
実施形態４９． ＣＤ８６およびＭＨＣＩＩが、ＣＤ１４＋単球／マクロファージを前記組成物と接触させると、上方調節される、実施形態１から４８のいずれか一項に記載の組成物。
実施形態５０． 前記組成物と接触させたＣＤ１４＋単球／マクロファージが、抗原提示細胞へと成熟する、実施形態１から４９のいずれか一項に記載の組成物。
実施形態５１． 前記組成物と接触させたメモリーＴ細胞が、抗原に応答したＩＦＮγ産生の増加を示す、実施形態１から５０のいずれか一項に記載の組成物。
実施形態５２． 前記組成物と接触させたメモリーＴ細胞が、抗原に対する応答の増強を示す、実施形態１から５１のいずれか一項に記載の組成物。
実施形態５３． エフェクターメモリーＣＤ８＋ Ｔ細胞および／またはエフェクターメモリーＣＤ４＋ Ｔ細胞が、前記組成物と接触させた腫瘍において増加する、実施形態１から５２のいずれか一項に記載の組成物。
実施形態５４． 前記組成物が、前記組成物を投与した動物においてＴｈ１応答を増強させる、実施形態１から５３のいずれか一項に記載の組成物。
実施形態５５． 前記組成物中の前記抗体が、ＦｃγＲＩＩａおよび／またはＦｃγＲＩＩｂに対して、アフコシル化されていない同じ抗ＴＩＧＩＴ抗体と比較して低い結合親和性を有する、実施形態１から５４のいずれか一項に記載の組成物。
実施形態５６． 前記組成物が、単球マクロファージの存在下において、ＴＩＧＩＴを発現する細胞の抗体依存性細胞ファゴサイトーシス（ＡＤＣＰ）を媒介する、実施形態１から５５のいずれか一項に記載の組成物。
実施形態５７． 前記抗体が、モノクローナルである、実施形態１から５６のいずれか一項に記載の組成物。
実施形態５８． 前記抗体が、完全ヒト抗体である、実施形態１から５７のいずれか一項に記載の組成物。
実施形態５９． 前記抗体が、キメラ抗体である、実施形態１から５８のいずれか一項に記載の組成物。
実施形態６０． 前記抗体が、ヒト化抗体である、実施形態１から２８および４４から５９のいずれか一項に記載の組成物。
実施形態６１． 前記抗体が、抗体断片である、実施形態１から６０のいずれか一項に記載の組成物。
実施形態６２． 前記抗体断片が、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、ｓｃＦｖ、またはダイアボディである、実施形態６１に記載の組成物。
実施形態６３． 前記抗体が、二重特異性抗体である、実施形態１から６２のいずれか一項に記載の組成物。
実施形態６４． 前記抗体が、抗体−薬物コンジュゲートである、実施形態１から６３のいずれか一項に記載の組成物。
実施形態６５． ヒトＴＩＧＩＴ（ＩｇドメインおよびＩＴＩＭドメインを有するＴ細胞免疫受容体）に結合する抗体であって、ヒトＴＩＧＩＴに対して、５ｎＭ未満の結合親和性（ＫＤ）を有し、アフコシル化されている、抗体。
実施形態６６． ヒトＴＩＧＩＴに対して、１ｎＭ未満のＫＤを有する、実施形態６５に記載の抗体。
実施形態６７． ヒトＴＩＧＩＴに対して、１００ｐＭ未満のＫＤを有する、実施形態６６に記載の抗体。
実施形態６８． カニクイザルＴＩＧＩＴおよび／またはマウスＴＩＧＩＴとの交差反応性を示す、実施形態６５から６７のいずれか一項に記載の抗体。
実施形態６９． カニクイザルＴＩＧＩＴおよびマウスＴＩＧＩＴの両方との交差反応性を示す、実施形態６８に記載の抗体。
実施形態７０． ＴＩＧＩＴへのＣＤ１５５の結合を遮断する、実施形態６５から６９のいずれか一項に記載の抗体。
実施形態７１． ＴＩＧＩＴへのＣＤ１１２の結合を遮断する、実施形態６５から７０のいずれか一項に記載の抗体。
実施形態７２． ＴＩＧＩＴへのＣＤ１５５およびＣＤ１１２の両方の結合を遮断する、実施形態６５から７１のいずれか一項に記載の抗体。
実施形態７３． ヒトＴＩＧＩＴへの結合に関して、配列番号５５のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域および配列番号６４のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む抗体と競合する、実施形態６５から７２のいずれか一項に記載の抗体。
実施形態７４． ヒトＴＩＧＩＴに結合するときに、アミノ酸８１位および８２位のうちの一方または両方に結合する、実施形態６５から７３のいずれか一項に記載の抗体。
実施形態７５． アミノ酸８１位および８２位の両方に結合する、実施形態７４に記載の抗体。
実施形態７６． アミノ酸８１位および８２位が、Ｐｈｅ８１およびＬｙｓ８２である、実施形態７４または７５に記載の抗体。
実施形態７７． アミノ酸８１位および８２位のうちの一方または両方を含むヒトＴＩＧＩＴ上のエピトープに結合する、実施形態６５から７６のいずれか一項に記載の抗体。
実施形態７８． ヒトＴＩＧＩＴに結合する抗体であって、ヒトＴＩＧＩＴに結合するときに、アミノ酸８１位および８２位のうちの一方または両方に結合する、アフコシル化されている、抗体。
実施形態７９． アミノ酸８１位および８２位の両方に結合する、実施形態７８に記載の抗体。
実施形態８０． アミノ酸８１位および８２位が、Ｐｈｅ８１およびＬｙｓ８２である、実施形態７８または実施形態７９に記載の抗体。
実施形態８１． ヒトＴＩＧＩＴに結合する抗体であって、アミノ酸８１位および８２位のうちの一方または両方を含むヒトＴＩＧＩＴ上のエピトープに結合し、アフコシル化されている、抗体。
実施形態８２． 前記エピトープが、８１位におけるＰｈｅを含む、実施形態７７または実施形態８１に記載の抗体。
実施形態８３． 前記エピトープが、８２位におけるＬｙｓまたはＳｅｒを含む、実施形態７７、８１、および８２のいずれか一項に記載の抗体。
実施形態８４． 前記エピトープが、８１位におけるＰｈｅおよび８２位におけるＬｙｓまたはＳｅｒを含む、実施形態７７および８１から８３のいずれか一項に記載の抗体。
実施形態８５． 前記エピトープが、Ｐｈｅ８１およびＬｙｓ８２を含む、実施形態８４に記載の抗体。
実施形態８６． 前記エピトープが、非連続的エピトープである、実施形態７７および８１から８５のいずれか一項に記載の抗体。
実施形態８７． アミノ酸５１位、５２位、５３位、５４位、５５位、７３位、７４位、７５位、７６位、７７位、７９位、８３位、８４位、８５位、８６位、８７位、８８位、８９位、９０位、９１位、９２位、または９３位のうちの１つまたは複数をさらに含むヒトＴＩＧＩＴ上のエピトープに結合する、実施形態７７および８１から８６のいずれか一項に記載の抗体。
実施形態８８． 前記エピトープが、Ｔｈｒ５１、Ａｌａ５２、Ｇｌｎ５３、Ｖａｌ５４、Ｔｈｒ５５、Ｌｅｕ７３、Ｇｌｙ７４、Ｔｒｐ７５、Ｈｉｓ７６、Ｉｌｅ７７、Ｐｒ
ｏ７９、Ａｓｐ８３、Ａｒｇ８４、Ｖａｌ８５、Ａｌａ８６、Ｐｒｏ８７、Ｇｌｙ８８、Ｐｒｏ８９、Ｇｌｙ９０、Ｌｅｕ９１、Ｇｌｙ９２、およびＬｅｕ９３からなる群から選択される１つまたは複数のアミノ酸残基をさらに含む、実施形態８７に記載の抗体。
実施形態８９． 前記エピトープが、アミノ酸残基Ｔｈｒ５１、Ａｌａ５２、Ｇｌｎ５３、Ｖａｌ５４、Ｔｈｒ５５、Ｇｌｙ７４、Ｔｒｐ７５、Ｈｉｓ７６、Ｉｌｅ７７、Ｐｈｅ８１、Ｌｙｓ８２、Ｐｒｏ８７、Ｇｌｙ８８、Ｐｒｏ８９、Ｇｌｙ９０、Ｌｅｕ９１、Ｇｌｙ９２、およびＬｅｕ９３を含む、実施形態８８に記載の抗体。
実施形態９０． 前記エピトープが、アミノ酸残基Ａｌａ５２、Ｇｌｎ５３、Ｌｅｕ７３、Ｇｌｙ７４、Ｔｒｐ７５、Ｐｒｏ７９、Ｐｈｅ８１、Ｌｙｓ８２、Ａｓｐ８３、Ａｒｇ８４、Ｖａｌ８５、およびＡｌａ８６を含む、実施形態８８に記載の抗体。
実施形態９１． 前記エピトープが、配列ＩＣＮＡＤＬＧＷＨＩＳＰＳＦＫ（配列番号２５８）を含む、実施形態７７および８１から９０のいずれか一項に記載の抗体。
実施形態９２． ヒトＴＩＧＩＴが、配列番号２１８の配列を含む、実施形態６５から９１のいずれか一項に記載の抗体。
実施形態９３． （ａ）配列番号４、配列番号２２、配列番号４０、配列番号５８、配列番号７６、配列番号９４、配列番号１１２、配列番号１３０、配列番号１４８、配列番号１６６、配列番号１８４、配列番号２０２、配列番号２２１、配列番号２２４、配列番号２２６、配列番号２３１、配列番号２３３、配列番号２３９、配列番号２４３、配列番号２８３、配列番号２８４、配列番号２９３、配列番号２９４、配列番号２８９、および配列番号２９０から選択される配列を含む重鎖ＣＤＲ１、
（ｂ）配列番号６、配列番号２４、配列番号４２、配列番号６０、配列番号７８、配列番号９６、配列番号１１４、配列番号１３２、配列番号１５０、配列番号１６８、配列番号１８６、配列番号２０４、配列番号２２２、配列番号２２５、配列番号２２７、配列番号２２９、配列番号２３２、配列番号２３４、配列番号２３８、配列番号２４０、配列番号２８５、配列番号２９７、配列番号２９１、および配列番号２９５から選択される配列を含む重鎖ＣＤＲ２、
（ｃ）配列番号８、配列番号２６、配列番号４４、配列番号６２、配列番号８０、配列番号９８、配列番号１１６、配列番号１３４、配列番号１５２、配列番号１７０、配列番号１８８、配列番号２０６、配列番号２２３、配列番号２２８、配列番号２３０、配列番号２３５、配列番号２３６、配列番号２３７、配列番号２４１、配列番号２４２、配列番号２４４、配列番号２８６、配列番号２９２、および配列番号２９６から選択される配列を含む重鎖ＣＤＲ３、
（ｄ）配列番号１３、配列番号３１、配列番号４９、配列番号６７、配列番号８５、配列番号１０３、配列番号１２１、配列番号１３９、配列番号１５７、配列番号１７５、配列番号１９３、配列番号２１１、および配列番号２８７から選択される配列を含む軽鎖ＣＤＲ１、
（ｅ）配列番号１５、配列番号３３、配列番号５１、配列番号６９、配列番号８７、配列番号１０５、配列番号１２３、配列番号１４１、配列番号１５９、配列番号１７７、配列番号１９５、配列番号２１３、および配列番号２８８から選択される配列を含む軽鎖ＣＤＲ２、または
（ｆ）配列番号１７、配列番号３５、配列番号５３、配列番号７１、配列番号８９、配列番号１０７、配列番号１２５、配列番号１４３、配列番号１６１、配列番号１７９、配列番号１９７、および配列番号２１５から選択される配列を含む軽鎖ＣＤＲ３
のうちの１つまたは複数を含む、実施形態６５から９２のいずれか一項に記載の抗体。
実施形態９４． （ｄ）配列番号５８、配列番号２８３、配列番号２８４、配列番号２２４、配列番号２９３、配列番号２９４、配列番号２２６、配列番号２８９、および配列番号２９０から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１配列、
（ｅ）配列番号６０、配列番号２８５、配列番号２２５、配列番号２９７、配列番号２２７、配列番号２９１、配列番号２２９、および配列番号２９５から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２配列、
（ｆ）配列番号６２、配列番号２８６、配列番号２２８、配列番号２９２、配列番号２３０、および配列番号２９６から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３配列、
（ｇ）配列番号６７および配列番号２８７から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１配列、
（ｈ）配列番号６９および配列番号２８８から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２配列、ならびに／または
（ｉ）配列番号７１のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３配列
を含む、実施形態９３に記載の抗体。
実施形態９５． （ａ）それぞれ、配列番号４、６、８、１３、１５、および１７、または
（ｂ）それぞれ、配列番号２２、２４、２６、３１、３３、および３５、または
（ｃ）それぞれ、配列番号４０、４２、４４、４９、５１、および５３、または
（ｄ）それぞれ、配列番号５８、６０、６２、６７、６９、および７１、または
（ｅ）それぞれ、配列番号７６、７８、８０、８５、８７、および８９、または
（ｆ）それぞれ、配列番号９４、９６、９８、１０３、１０５、および１０７、または
（ｇ）それぞれ、配列番号１１２、１１４、１１６、１２１、１２３、および１２５、または
（ｈ）それぞれ、配列番号１３０、１３２、１３４、１３９、１４１、および１４３、または
（ｉ）それぞれ、配列番号１４８、１５０、１５２、１５７、１５９、および１６１、または
（ｊ）それぞれ、配列番号１６６、１６８、１７０、１７５、１７７、および１７９、または
（ｋ）それぞれ、配列番号１８４、１８６、１８８、１９３、１９５、および１９７、または
（ｌ）それぞれ、配列番号２０２、２０４、２０６、２１１、２１３、および２１５、または
（ｍ）それぞれ、配列番号２２１、２２２、２２３、１３、１５、および１７、または
（ｎ）それぞれ、配列番号２２４、２２５、６２、６７、６９、および７１、または
（ｏ）それぞれ、配列番号２２６、２２７、２２８、６７、６９、および７１、または
（ｐ）それぞれ、配列番号２２４、２２９、２３０、６７、６９、および７１、または
（ｑ）それぞれ、配列番号２２４、２２７、２３０、６７、６９、および７１、または
（ｒ）それぞれ、配列番号２３１、２３２、２３５、１０３、１０５、および１０７、または
（ｓ）それぞれ、配列番号２３３、２３４、２３６、１０３、１０５、および１０７、または
（ｔ）それぞれ、配列番号２３３、２３４、２３７、１０３、１０５、および１０７、または
（ｕ）それぞれ、配列番号１６６、２３８、１７０、１７５、１７７、および１７９、または
（ｖ）それぞれ、配列番号２３９、２４０、１７０、１７５、１７７、および１７９、または
（ｗ）それぞれ、配列番号２３９、２４０、２４１、１７５、１７７、および１７９、または
（ｘ）それぞれ、配列番号２３９、２４０、２４２、１７５、１７７、および１７９、または
（ｙ）それぞれ、配列番号２４３、１６８、２４４、１７５、１７７、および１７９
の配列を含む重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３、ならびに軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ、およびＣＤＲ３を含む、実施形態９４に記載の抗体。
実施形態９６． （ｊ）それぞれ、配列番号５８、６０、６２、６７、６９、および７
１、または
（ｋ）それぞれ、配列番号２８３、２８５、６２、２８７、２８８、および７１、または（ｌ）それぞれ、配列番号２８４、６０、２８６、６７、６９、および７１
の配列を含む重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３、ならびに軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ、およびＣＤＲ３を含む、実施形態６５から９５のいずれか一項に記載の抗体。
実施形態９７． （ａ）配列番号１、配列番号１９、配列番号３７、配列番号５５、配列番号７３、配列番号９１、配列番号１０９、配列番号１２７、配列番号１４５、配列番号１６３、配列番号１８１、配列番号１９９、配列番号２４５、配列番号２４６、配列番号２４７、配列番号２４８、配列番号２４９、配列番号２５０、配列番号２５１、配列番号２５２、配列番号２５３、配列番号２５４、配列番号２５５、配列番号２５６、または配列番号２５７に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、ならびに／または
（ｂ）配列番号１０、配列番号２８、配列番号４６、配列番号６４、配列番号８２、配列番号１００、配列番号１１８、配列番号１３６、配列番号１５４、配列番号１７２、配列番号１９０、または配列番号２０８に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域
を含む、実施形態６５から９６のいずれか一項に記載の抗体。
実施形態９８． （ａ）配列番号１もしくは配列番号２４５に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号１０に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、または
（ｂ）配列番号１９に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号２８に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、または
（ｃ）配列番号３７に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号４６に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、または
（ｄ）配列番号５５、配列番号２４６、配列番号２４７、配列番号２４８、もしくは配列番号２４９のうちのいずれか１つに対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号６４に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、または
（ｅ）配列番号７３に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号８２に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、または
（ｆ）配列番号９１、配列番号２５０、配列番号２５１、もしくは配列番号２５２のうちのいずれか１つに対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号１００に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、または
（ｇ）配列番号１０９に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号１１８に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、または
（ｈ）配列番号１２７に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号１３６に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、または
（ｉ）配列番号１４５に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号１５４に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、または
（ｊ）配列番号１６３、配列番号２５３、配列番号２５４、配列番号２５５、配列番号２５６、もしくは配列番号２５７のうちのいずれか１つに対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号１７２に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、または
（ｋ）配列番号１８１に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号１９０に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、または
（ｌ）配列番号１９９に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号２０８に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域
を含む、実施形態６５から９７のいずれか一項に記載の抗体。
実施形態９９． （ａ）配列番号１もしくは配列番号２４５のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号１０のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、または
（ｂ）配列番号１９のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号２８のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、または
（ｃ）配列番号３７のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号４６のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、または
（ｄ）配列番号５５、配列番号２４６、配列番号２４７、配列番号２４８、もしくは配列番号２４９のうちのいずれか１つのアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号６４のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、または
（ｅ）配列番号７３のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号８２のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、または
（ｆ）配列番号９１、配列番号２５０、配列番号２５１、もしくは配列番号２５２のうちのいずれか１つのアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号１００のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、または
（ｇ）配列番号１０９のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号１１８のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、または
（ｈ）配列番号１２７のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号１３６のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、または
（ｉ）配列番号１４５のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号１５４のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、または
（ｊ）配列番号１６３、配列番号２５３、配列番号２５４、配列番号２５５、配列番号２５６、もしくは配列番号２５７のうちのいずれか１つのアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号１７２のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、または
（ｋ）配列番号１８１のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号１９０のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、または
（ｌ）配列番号１９９のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号２０８のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域
を含む、実施形態９８に記載の抗体。
実施形態１００． 配列番号５５のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号６４のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む、実施形態６５から９９のいずれか一項に記載の抗体。
実施形態１０１． ＩｇＧ抗体である、実施形態６５から１００のいずれか一項に記載の抗体。
実施形態１０２． ＩｇＧ１抗体またはＩｇＧ３抗体である、実施形態１０１に記載の抗体。
実施形態１０３． 配列番号２６０、２６２、２６４、２６６、２６８、２７０、および２７２から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖、ならびに配列番号２７４のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む、実施形態６５から１０２のいずれか一項に記載の抗体。
実施形態１０４． 配列番号２６０のアミノ酸配列を含む重鎖、および配列番号２７４のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む、実施形態１０３に記載の抗体。
実施形態１０５． 配列番号２６０のアミノ酸配列からなる重鎖、および配列番号２７４のアミノ酸配列からなる軽鎖を含む、実施形態１０３に記載の抗体。
実施形態１０６． ヒトＴＩＧＩＴに結合する抗体であって、配列番号２６０、２６２
、２６４、２６６、２６８、２７０、および２７２から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖、ならびに配列番号２７４のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む、抗体。
実施形態１０７． ヒトＴＩＧＩＴに結合する抗体であって、配列番号２６０のアミノ酸配列を含む重鎖、および配列番号２７４のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む、抗体。
実施形態１０８． ヒトＴＩＧＩＴに結合する抗体であって、配列番号２６０のアミノ酸配列からなる重鎖、および配列番号２７４のアミノ酸配列からなる軽鎖を含む抗体。
実施形態１０９． 抗ＰＤ−１抗体または抗ＰＤ−Ｌ１抗体との相乗作用を示す、実施形態６５から１０８のいずれか一項に記載の抗体。
実施形態１１０． 相乗作用が、（ｉ）ＰＤ−１、ＴＩＧＩＴ、およびＣＤ２２６を発現するＪｕｒｋａｔエフェクター細胞であって、ＩＬ−２プロモーターによって駆動されるルシフェラーゼレポーター遺伝子を含むＪｕｒｋａｔエフェクター細胞、ならびに（ｉｉ）ＴＣＲ活性化因子、ＰＤ−Ｌ１、およびＣＤ１５５を発現するＣＨＯ−Ｋ１人工抗原提示細胞（ａＡＰＣ）を含む共培養物を、組成物および抗ＰＤ−１抗体または抗ＰＤ−Ｌ１抗体と接触させることを含むアッセイを使用して、決定される、実施形態１０９に記載の抗体。
実施形態１１１． 制御性Ｔ（Ｔｒｅｇ）細胞が、前記抗体と接触させたヒトＰＢＭＣから枯渇される、実施形態６５から１１０のいずれか一項に記載の抗体。
実施形態１１２． ＭＣＰ１、ＩＬ−８、およびＭＩＰ１αの発現が、前記抗体と接触させたヒトＰＢＭＣにおいて増加する、実施形態６５から１１１のいずれか一項に記載の抗体。
実施形態１１３． 単球／マクロファージが、前記抗体と接触させると活性化される、実施形態６５から１１２のいずれか一項に記載の抗体。
実施形態１１４． ＣＤ８６およびＭＨＣＩＩが、ＣＤ１４＋単球／マクロファージを前記抗体と接触させると、上方調節される、実施形態６５から１１３のいずれか一項に記載の抗体。
実施形態１１５． 前記抗体と接触させたＣＤ１４＋単球／マクロファージが、抗原提示細胞へと成熟する、実施形態６５から１１４のいずれか一項に記載の抗体。
実施形態１１６． 前記抗体と接触させたメモリーＴ細胞が、抗原に応答したＩＦＮγ産生の増加を示す、実施形態６５から１１５のいずれか一項に記載の抗体。
実施形態１１７． 前記抗体と接触させたメモリーＴ細胞が、抗原に対する応答の増強を示す、実施形態６５から１１６のいずれか一項に記載の抗体。
実施形態１１８． エフェクターメモリーＣＤ８＋ Ｔ細胞および／またはエフェクターメモリーＣＤ４＋ Ｔ細胞が、前記抗体と接触させた腫瘍において増加する、実施形態６５から１１７のいずれか一項に記載の抗体。
実施形態１１９． 前記抗体を投与した動物においてＴｈ１応答を増強させる、実施形態６５から１１８のいずれか一項に記載の抗体。
実施形態１２０． ＦｃγＲＩＩａおよび／またはＦｃγＲＩＩｂに対して、アフコシル化されていない同じ抗ＴＩＧＩＴ抗体と比較して低い結合親和性を有する、実施形態６５から１１９のいずれか一項に記載の抗体。
実施形態１２１． 前記組成物が、単球マクロファージの存在下において、ＴＩＧＩＴを発現する細胞の抗体依存性細胞ファゴサイトーシス（ＡＤＣＰ）を媒介する、実施形態６５から１２０のいずれか一項に記載の抗体。
実施形態１２２． モノクローナルである、実施形態６５から１２１のいずれか一項に記載の抗体。
実施形態１２３． 完全ヒト抗体である、実施形態６５〜１２２のいずれか一項に記載の抗体。
実施形態１２４． キメラ抗体である、実施形態６５〜１２３のいずれか一項に記載の抗体。
実施形態１２５． ヒト化抗体である、実施形態６５から９２および１０９から１２４のいずれか一項に記載の抗体。
実施形態１２６． 抗体断片である、実施形態６５から１２５のいずれか一項に記載の抗体。
実施形態１２７． 前記抗体断片が、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、ｓｃＦｖ、またはダイアボディである、実施形態１２６に記載の抗体。
実施形態１２８． 二重特異性抗体である、実施形態６５から１２７のいずれか一項に記載の抗体。
実施形態１２９． 抗体−薬物コンジュゲートである、実施形態６５から１２８のいずれか一項に記載の抗体。
実施形態１３０． 実施形態１から６４のいずれか一項に記載の組成物または実施形態６５から１２９のいずれか一項に記載の抗体と、薬学的に許容される担体とを含む医薬製剤。
実施形態１３１． （ｉ）実施形態１０６から１０８のいずれか一項に記載の抗体の重鎖、（ｉｉ）実施形態１０６から１０８のいずれか一項に記載の抗体の軽鎖、または（ｉｉｉ）実施形態１０６から１０８のいずれか一項に記載の抗体の重鎖および軽鎖をコードする、単離されたポリヌクレオチド。
実施形態１３２． （ｉ）配列番号２５９、２６１、２６３、２６５、２６７、２６９、および２７１から選択されるヌクレオチド配列、または（ｉｉ）配列番号２７３のヌクレオチド配列、または（ｉｉｉ）配列番号２５９、２６１、２６３、２６５、２６７、２６９、および２７１から選択されるヌクレオチド配列、ならびに配列番号２７３のヌクレオチド配列を含む、実施形態１３１に記載の単離されたポリヌクレオチド。
実施形態１３３． 実施形態１３１または実施形態１３２に記載のポリヌクレオチドを含むベクター。
実施形態１３４． 実施形態１３１もしくは実施形態１３２に記載の単離されたポリヌクレオチドまたは実施形態１３３に記載のベクターを含む、単離された宿主細胞。
実施形態１３５． 実施形態１０６から１０８のいずれか一項に記載の抗体を発現する、単離された宿主細胞。
実施形態１３６． アフコシル化抗体を産生するように操作されている、実施形態１３４または実施形態１３５に記載の宿主細胞。
実施形態１３７． ヒトＴＩＧＩＴに結合する抗体を産生させる方法であって、実施形態１３４から１３６のいずれか一項に記載の宿主細胞を、前記抗体を産生させるのに適切な条件下においてインキュベートすることを含む、方法。
実施形態１３８． 前記宿主細胞が、アフコシル化抗体を産生するように操作されている、実施形態１３７に記載の方法。
実施形態１３９． 前記宿主細胞を、フコースアナログの存在下で、アフコシル化抗体を産生させるのに適切な条件下において培養する、実施形態１３７に記載の方法。
実施形態１４０． 前記抗体を単離することをさらに含む、実施形態１３７から１３９のいずれか一項に記載の方法。
実施形態１４１． ヒトＴＩＧＩＴに結合する単離された抗体の組成物であって、前記組成物中の前記抗体のうちの少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％が、アフコシル化されており、前記抗体が、実施形態１３８から１４０のいずれか一項に記載の方法によって産生される、組成物。
実施形態１４２． ヒトＴＩＧＩＴに結合する単離された抗体の組成物であって、前記組成物中の前記抗体のうちの少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％が、アフコシル化されており、前記抗体が、実施形態１３４または実施形態１３５に記載の宿主細胞を、アフコシル化抗体を産生させるのに適切な条件下においてインキュベートすることと、前記抗体を単離して、前記単離された抗体の組成物を形成することとを含む方法によって産生される、組成物
。
実施形態１４３． 前記宿主細胞が、アフコシル化抗体を産生するように操作されている、実施形態１４２に記載の組成物。
実施形態１４４． 前記宿主細胞が、フコースアナログの存在下で、アフコシル化抗体を産生させるのに適切な条件下において培養される、実施形態１４２に記載の組成物。
実施形態１４５． （ｉ）実施形態１から６３のいずれか一項に記載の組成物の抗体または（ｉｉ）実施形態６５から１２８のいずれか一項に記載の抗体をコードするヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチドを含む宿主細胞であって、アフコシル化抗体を産生するように操作されている、宿主細胞。
実施形態１４６． 前記ポリヌクレオチドが、ベクターである、実施形態１４５に記載の宿主細胞。
実施形態１４７． （ｉ）実施形態１から６３のいずれか一項に記載の組成物の抗体または（ｉｉ）実施形態６５から１２８のいずれか一項に記載の抗体を発現する宿主細胞であって、アフコシル化抗体を産生するように操作されている、宿主細胞。
実施形態１４８． （ａ）配列番号２、配列番号２０、配列番号３８、配列番号５６、配列番号７４、配列番号９２、配列番号１１０、配列番号１２８、配列番号１４６、配列番号１６４、配列番号１８２、配列番号２００、配列番号２５９、配列番号２６５、配列番号２６７、配列番号２６９、もしくは配列番号２７１のヌクレオチド配列、および／または
（ｂ）配列番号１１、配列番号２９、配列番号４７、配列番号６５、配列番号８３、配列番号１０１、配列番号１１９、配列番号１３７、配列番号１５５、配列番号１７３、配列番号１９１、配列番号２０９、もしくは配列番号２７３のヌクレオチド配列
を含む、実施形態１４５から１４７のいずれか一項に記載の宿主細胞。
実施形態１４９． ＴＩＧＩＴに結合するアフコシル化抗体を産生させる方法であって、実施形態１４５から１４８のいずれか一項に記載の宿主細胞を、前記アフコシル化抗体を産生させるのに適切な条件下において培養することを含む、方法。
実施形態１５０． ＴＩＧＩＴに結合するアフコシル化抗体を産生させる方法であって、宿主細胞を、フコースアナログの存在下で、アフコシル化抗体を産生させるのに適切な条件下において培養することを含み、前記宿主細胞が、（ｉ）実施形態１から６３のいずれか一項に記載の組成物の抗体または（ｉｉ）実施形態６５から１２８のいずれか一項に記載の抗体をコードするヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチドを含む、方法。
実施形態１５１． 前記ポリヌクレオチドが、ベクターである、実施形態１５０に記載の方法。
実施形態１５２． ＴＩＧＩＴに結合するアフコシル化抗体を産生させる方法であって、宿主細胞を、フコースアナログの存在下で、アフコシル化抗体を産生させるのに適切な条件下において培養することを含み、前記宿主細胞が、（ｉ）実施形態１から６３のいずれか一項に記載の組成物の抗体または（ｉｉ）実施形態６５から１２８のいずれか一項に記載の抗体を発現する、方法。
実施形態１５３． 前記宿主細胞が、
（ａ）配列番号２、配列番号２０、配列番号３８、配列番号５６、配列番号７４、配列番号９２、配列番号１１０、配列番号１２８、配列番号１４６、配列番号１６４、配列番号１８２、配列番号２００、配列番号２５９、配列番号２６５、配列番号２６７、配列番号２６９、もしくは配列番号２７１のヌクレオチド配列、および／または
（ｂ）配列番号１１、配列番号２９、配列番号４７、配列番号６５、配列番号８３、配列番号１０１、配列番号１１９、配列番号１３７、配列番号１５５、配列番号１７３、配列番号１９１、配列番号２０９、もしくは配列番号２７３のヌクレオチド配列
を含む、実施形態１５０から１５２のいずれか一項に記載の方法。
実施形態１５４． 前記フコースアナログが、２−フルオロフコースである、実施形態１５０から１５３のいずれか一項に記載の方法。
実施形態１５５． 前記アフコシル化抗体を単離することをさらに含む、実施形態１４
９から１５４のいずれか一項に記載の方法。
実施形態１５６． ヒトＴＩＧＩＴに結合する単離された抗体の組成物であって、前記組成物中の前記抗体のうちの少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％が、アフコシル化されており、前記抗体が、実施形態１４９から１５５のいずれか一項に記載の方法によって産生される、組成物。
実施形態１５７． ヒトＴＩＧＩＴに結合する単離された抗体の組成物であって、前記組成物中の前記抗体のうちの少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％が、アフコシル化されており、前記抗体が、実施形態１４５から１４７のいずれか一項に記載の宿主細胞を、アフコシル化抗体を産生させるのに適切な条件下においてインキュベートすることと、前記抗体を単離して、前記単離された抗体の組成物を形成することとを含む方法によって産生される、組成物。
実施形態１５８． ヒトＴＩＧＩＴに結合する単離された抗体の組成物であって、前記組成物中の前記抗体のうちの少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％が、アフコシル化されており、前記抗体が、宿主細胞を、フコースアナログの存在下で、アフコシル化抗体を産生させるのに適切な条件下において培養することを含む方法によって産生され、前記宿主細胞が、（ｉ）実施形態１から６３のいずれか一項に記載の組成物の抗体または（ｉｉ）実施形態６５から１２８のいずれか一項に記載の抗体をコードするヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチドを含む、組成物。
実施形態１５９． ヒトＴＩＧＩＴに結合する単離された抗体の組成物であって、前記組成物中の前記抗体のうちの少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％が、アフコシル化されており、前記抗体が、宿主細胞を、フコースアナログの存在下で、アフコシル化抗体を産生させるのに適切な条件下において培養することを含む方法によって産生され、前記宿主細胞が、（ｉ）実施形態１から６３のいずれか一項に記載の組成物の抗体または（ｉｉ）実施形態６５から１２８のいずれか一項に記載の抗体を発現する、組成物。
実施形態１６０． 実施形態１から６４のいずれか一項に記載の組成物、実施形態６５から１２９のいずれか一項に記載の抗体、または実施形態１３０に記載の医薬組成物と、追加の治療剤と
を含むキット。
実施形態１６１． 前記追加の治療剤が、抗がん剤である、実施形態１６０に記載のキット。
実施形態１６２． 前記追加の治療剤が、抗体である、実施形態１６０または実施形態１６１に記載のキット。
実施形態１６３． 前記追加の治療剤が、Ｔ細胞共阻害因子のアンタゴニストもしくは阻害剤、Ｔ細胞共活性化因子のアゴニスト、免疫刺激性サイトカイン、またはＳＧＮ−２ＦＦである、実施形態１６０から１６２のいずれか一項に記載のキット。
実施形態１６４． 前記追加の治療剤が、ＣＤ２５、ＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１、Ｔｉｍ３、Ｌａｇ３、ＣＴＬＡ４、４１ＢＢ、ＯＸ４０、ＣＤ３、ＣＤ４０、ＣＤ４７Ｍ、ＧＭ−ＣＳＦ、ＣＳＦ１Ｒ、ＴＬＲ、ＳＴＩＮＧ、ＲＩＧＩ、ＴＡＭ受容体キナーゼ、ＮＫＧ２Ａ、ＮＫＧ２Ｄ、ＧＤ２、ＨＥＲ２、ＥＧＦＲ、ＰＤＧＦＲα、ＳＬＡＭＦ７、ＶＥＧＦ、ＣＴＬＡ−４、ＣＤ２０、ｃＣＬＢ８、ＫＩＲ、およびＣＤ５２から選択されるタンパク質に結合する、実施形態１６０から１６３のいずれか一項に記載のキット。
実施形態１６５． 前記追加の治療剤が、抗ＣＤ２５抗体、抗ＰＤ−１抗体、抗ＰＤ−
Ｌ１抗体、抗Ｔｉｍ３抗体、抗Ｌａｇ３抗体、抗ＣＴＬＡ４抗体、抗４１ＢＢ抗体、抗ＯＸ４０抗体、抗ＣＤ３抗体、抗ＣＤ４０抗体、抗ＣＤ４７Ｍ抗体、抗ＣＳＦ１Ｒ抗体、抗ＴＬＲ抗体、抗ＳＴＩＮＧ抗体、抗ＲＩＧＩ抗体、抗ＴＡＭ受容体キナーゼ抗体、抗ＮＫＧ２Ａ抗体、抗ＮＫＧ２Ｄ抗体、抗ＧＤ２抗体、抗ＨＥＲ２抗体、抗ＥＧＦＲ抗体、抗ＰＤＧＦＲ−α抗体、抗ＳＬＡＭＦ７抗体、抗ＶＥＧＦ抗体、抗ＣＴＬＡ−４抗体、抗ＣＤ２０抗体、抗ｃＣＬＢ８抗体、抗ＫＩＲ抗体、および抗ＣＤ５２抗体から選択される、実施形態１６０から１６４のいずれか一項に記載のキット。
実施形態１６６． 前記追加の治療剤が、ＩＬ−１５、ＩＬ−２１、ＩＬ−２、ＧＭ−ＣＳＦ、Ｍ−ＣＳＦ、Ｇ−ＣＳＦ、ＩＬ−１、ＩＬ−３、ＩＬ−１２、およびＩＦＮγから選択されるサイトカインを含む、実施形態１６０から１６５のいずれか一項に記載のキット。
実施形態１６７． 前記追加の治療剤が、ＳＥＡ−ＣＤ４０、アベルマブ、デュルバルマブ、ニボルマブ、ペンブロリズマブ、ピディリズマブ、アテゾリズマブ、Ｈｕｌ４．１８Ｋ３２２Ａ、Ｈｕ３Ｆ８、ジニツキシマブ、トラスツズマブ、セツキシマブ、オララツマブ、ネシツムマブ、エロツズマブ、ラムシルマブ、ペルツズマブ、イピリムマブ、ベバシズマブ、リツキシマブ、オビヌツズマブ、シルツキシマブ、オファツムマブ、リリルマブ、およびアレムツズマブから選択される、実施形態１６０から１６５のいずれか一項に記載のキット。
実施形態１６８． 前記追加の治療剤が、アルキル化剤（たとえば、シクロホスファミド、イホスファミド、クロラムブシル、ブスルファン、メルファラン、メクロレタミン、ウラムスチン、チオテパ、ニトロソ尿素、もしくはテモゾロミド）、アントラサイクリン（たとえば、ドキソルビシン、アドリアマイシン、ダウノルビシン、エピルビシン、もしくはミトキサントロン）、細胞骨格破壊剤（たとえば、パクリタキセルもしくはドセタキセル）、ヒストンデアセチラーゼ阻害剤（たとえば、ボリノスタットもしくはロミデプシン）、トポイソメラーゼの阻害剤（たとえば、イリノテカン、トポテカン、アムサクリン、エトポシド、もしくはテニポシド）、キナーゼ阻害剤（たとえば、ボルテゾミブ、エルロチニブ、ゲフィチニブ、イマチニブ、ベムラフェニブ、もしくはビスモデギブ）、ヌクレオシドアナログまたは前駆体アナログ（たとえば、アザシチジン、アザチオプリン、カペシタビン、シタラビン、フルオロウラシル、ゲムシタビン、ヒドロキシ尿素、メルカプトプリン、メトトレキサート、もしくはチオグアニン）、ペプチド抗生物質（たとえば、アクチノマイシンもしくはブレオマイシン）、白金系薬剤（たとえば、シスプラチン、オキサロプラチン、もしくはカルボプラチン）、または植物アルカロイド（たとえば、ビンクリスチン、ビンブラスチン、ビノレルビン、ビンデシン、ポドフィロトキシン、パクリタキセル、もしくはドセタキセル）、ガラルディン、サリドマイド、レナリドマイド、およびポマリドミドから選択される、実施形態１６０または実施形態１６１に記載のキット。
実施形態１６９． 対象におけるがんを処置する方法であって、前記対象に、治療有効量の、実施形態１から６４のいずれか一項に記載の組成物、実施形態６５から１２９のいずれか一項に記載の抗体、または実施形態１３０に記載の医薬組成物を投与することを含む、方法。
実施形態１７０． 前記がんが、ＣＤ１１２またはＣＤ１５５の発現が富化されているがんである、実施形態１６９に記載の方法。
実施形態１７１． 前記がんが、ＴＩＧＩＴを発現するＴ細胞またはナチュラルキラー（ＮＫ）細胞が富化されているがんである、実施形態１６９または実施形態１７０に記載の方法。
実施形態１７２． 前記がんが、膀胱がん、乳がん、子宮がん、子宮頸がん、卵巣がん、前立腺がん、精巣がん、食道がん、消化管がん、胃がん、膵臓がん、結腸直腸がん、結腸がん、腎臓がん、腎明細胞癌、頭頸部がん、肺がん、肺腺癌、胃がん、生殖細胞がん、骨がん、肝臓がん、甲状腺がん、皮膚がん、黒色腫、中枢神経系の新生物、中皮腫、リンパ腫、白血病、慢性リンパ球性白血病、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、濾胞性リンパ
腫、ホジキンリンパ腫、骨髄腫、または肉腫である、実施形態１６９から１７１のいずれか一項に記載の方法。
実施形態１７３． 前記がんが、リンパ腫、白血病、慢性リンパ球性白血病、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、濾胞性リンパ腫、またはホジキンリンパ腫である、実施形態１７２に記載の方法。
実施形態１７４． 前記対象に、治療有効量の追加の治療剤を投与することをさらに含む、実施形態１６９から１７３のいずれか一項に記載の方法。
実施形態１７５． 前記追加の治療剤が、抗がん剤である、実施形態１７４に記載の方法。
実施形態１７６． 前記追加の治療剤が、抗体である、実施形態１７４または実施形態１７５に記載の方法。
実施形態１７７． 前記追加の治療剤が、Ｔ細胞共阻害因子のアンタゴニストもしくは阻害剤、Ｔ細胞共活性化因子のアゴニスト、または免疫刺激性サイトカイン、またはＳＧＮ−２ＦＦである、実施形態１７４から１７６のいずれか一項に記載の方法。
実施形態１７８． 前記追加の治療剤が、ＣＤ２５、ＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１、Ｔｉｍ３、Ｌａｇ３、ＣＴＬＡ４、４１ＢＢ、ＯＸ４０、ＣＤ３、ＣＤ４０、ＣＤ４７Ｍ、ＧＭ−ＣＳＦ、ＣＳＦ１Ｒ、ＴＬＲ、ＳＴＩＮＧ、ＲＩＧＩ、ＴＡＭ受容体キナーゼ、ＮＫＧ２Ａ、ＮＫＧ２Ｄ、ＧＤ２、ＨＥＲ２、ＥＧＦＲ、ＰＤＧＦＲα、ＳＬＡＭＦ７、ＶＥＧＦ、ＣＴＬＡ−４、ＣＤ２０、ｃＣＬＢ８、ＫＩＲ、およびＣＤ５２から選択されるタンパク質に結合する、実施形態１７４から１７７のいずれか一項に記載の方法。
実施形態１７９． 前記追加の治療剤が、抗ＣＤ２５抗体、抗ＰＤ−１抗体、抗ＰＤ−Ｌ１抗体、抗Ｔｉｍ３抗体、抗Ｌａｇ３抗体、抗ＣＴＬＡ４抗体、抗４１ＢＢ抗体、抗ＯＸ４０抗体、抗ＣＤ３抗体、抗ＣＤ４０抗体、抗ＣＤ４７Ｍ抗体、抗ＣＳＦ１Ｒ抗体、抗ＴＬＲ抗体、抗ＳＴＩＮＧ抗体、抗ＲＩＧＩ抗体、抗ＴＡＭ受容体キナーゼ抗体、抗ＮＫＧ２Ａ抗体、抗ＮＫＧ２Ｄ抗体、抗ＧＤ２抗体、抗ＨＥＲ２抗体、抗ＥＧＦＲ抗体、抗ＰＤＧＦＲ−α抗体、抗ＳＬＡＭＦ７抗体、抗ＶＥＧＦ抗体、抗ＣＴＬＡ−４抗体、抗ＣＤ２０抗体、抗ｃＣＬＢ８抗体、抗ＫＩＲ抗体、および抗ＣＤ５２抗体から選択される、実施形態１７８に記載の方法。
実施形態１８０． 前記追加の治療剤が、ＩＬ−１５、ＩＬ−２１、ＩＬ−２、ＧＭ−ＣＳＦ、Ｍ−ＣＳＦ、Ｇ−ＣＳＦ、ＩＬ−１、ＩＬ−３、ＩＬ−１２、およびＩＦＮγから選択されるサイトカインを含む、実施形態１７４または実施形態１７５に記載の方法。
実施形態１８１． 前記追加の治療剤が、ＳＥＡ−ＣＤ４０、アベルマブ、デュルバルマブ、ニボルマブ、ペンブロリズマブ、ピディリズマブ、アテゾリズマブ、Ｈｕｌ４．１８Ｋ３２２Ａ、Ｈｕ３Ｆ８、ジニツキシマブ、トラスツズマブ、セツキシマブ、オララツマブ、ネシツムマブ、エロツズマブ、ラムシルマブ、ペルツズマブ、イピリムマブ、ベバシズマブ、リツキシマブ、オビヌツズマブ、シルツキシマブ、オファツムマブ、リリルマブ、およびアレムツズマブから選択される、実施形態１７４から１７９のいずれか一項に記載の方法。
実施形態１８２． 前記追加の治療剤が、アルキル化剤（たとえば、シクロホスファミド、イホスファミド、クロラムブシル、ブスルファン、メルファラン、メクロレタミン、ウラムスチン、チオテパ、ニトロソ尿素、もしくはテモゾロミド）、アントラサイクリン（たとえば、ドキソルビシン、アドリアマイシン、ダウノルビシン、エピルビシン、もしくはミトキサントロン）、細胞骨格破壊剤（たとえば、パクリタキセルもしくはドセタキセル）、ヒストンデアセチラーゼ阻害剤（たとえば、ボリノスタットもしくはロミデプシン）、トポイソメラーゼの阻害剤（たとえば、イリノテカン、トポテカン、アムサクリン、エトポシド、もしくはテニポシド）、キナーゼ阻害剤（たとえば、ボルテゾミブ、エルロチニブ、ゲフィチニブ、イマチニブ、ベムラフェニブ、もしくはビスモデギブ）、ヌクレオシドアナログまたは前駆体アナログ（たとえば、アザシチジン、アザチオプリン、カペシタビン、シタラビン、フルオロウラシル、ゲムシタビン、ヒドロキシ尿素、メルカプトプリン、メトトレキサート、もしくはチオグアニン）、ペプチド抗生物質（たとえば、
アクチノマイシンもしくはブレオマイシン）、白金系薬剤（たとえば、シスプラチン、オキサロプラチン、もしくはカルボプラチン）、または植物アルカロイド（たとえば、ビンクリスチン、ビンブラスチン、ビノレルビン、ビンデシン、ポドフィロトキシン、パクリタキセル、もしくはドセタキセル）、ガラルディン、サリドマイド、レナリドマイド、およびポマリドミドから選択される、実施形態１７４または実施形態１７５に記載の方法。
実施形態１８３． 前記組成物、前記抗体、または前記医薬組成物が、前記追加の治療剤と同時に投与される、実施形態１７４から１８２のいずれか一項に記載の方法。
実施形態１８４． 前記組成物、前記抗体、または前記医薬組成物が、前記追加の治療剤に対して逐次的に投与される、実施形態１７４から１８３のいずれか一項に記載の方法。
特定の実施形態では、例えば、以下が提供される：
（項目１）
ヒトＴＩＧＩＴ（ＩｇドメインおよびＩＴＩＭドメインを有するＴ細胞免疫受容体）に結合する単離された抗体を含む組成物であって、前記抗体が、ヒトＴＩＧＩＴに対して、５ｎＭ未満の結合親和性（Ｋ Ｄ ）を有し、前記組成物中の前記抗体のうちの少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％が、アフコシル化されている、組成物。
（項目２）
前記抗体が、ヒトＴＩＧＩＴに対して、１ｎＭ未満のＫ Ｄ を有する、項目１に記載の組成物。
（項目３）
前記抗体が、ヒトＴＩＧＩＴに対して、１００ｐＭ未満のＫ Ｄ を有する、項目１に記載の組成物。
（項目４）
前記抗体が、カニクイザルＴＩＧＩＴおよび／またはマウスＴＩＧＩＴとの交差反応性を示す、項目１から３のいずれか一項に記載の組成物。
（項目５）
前記抗体が、カニクイザルＴＩＧＩＴおよびマウスＴＩＧＩＴの両方との交差反応性を示す、項目４に記載の組成物。
（項目６）
前記抗体が、ＴＩＧＩＴへのＣＤ１５５の結合を遮断する、項目１から５のいずれか一項に記載の組成物。
（項目７）
前記抗体が、ＴＩＧＩＴへのＣＤ１１２の結合を遮断する、項目１から５のいずれか一項に記載の組成物。
（項目８）
前記抗体が、ＴＩＧＩＴへのＣＤ１５５およびＣＤ１１２の両方の結合を遮断する、項目１から５のいずれか一項に記載の組成物。
（項目９）
前記抗体が、ヒトＴＩＧＩＴへの結合に関して、配列番号５５のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域および配列番号６４のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む抗体と競合する、項目１から８のいずれか一項に記載の組成物。
（項目１０）
前記抗体が、ヒトＴＩＧＩＴに結合するときに、アミノ酸８１位および８２位のうちの一方または両方に結合する、項目１から９のいずれか一項に記載の組成物。
（項目１１）
前記抗体が、アミノ酸８１位および８２位の両方に結合する、項目１０に記載の組成物。
（項目１２）
アミノ酸８１位および８２位が、Ｐｈｅ８１およびＬｙｓ８２である、項目１０または１１に記載の組成物。
（項目１３）
前記抗体が、アミノ酸８１位および８２位のうちの一方または両方を含むヒトＴＩＧＩＴ上のエピトープに結合する、項目１から１２のいずれか一項に記載の組成物。
（項目１４）
ヒトＴＩＧＩＴに結合する単離された抗体を含む組成物であって、前記抗体が、ヒトＴＩＧＩＴに結合するときに、アミノ酸８１位および８２位のうちの一方または両方に結合し、前記組成物中の前記抗体のうちの少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％が、アフコシル化されている、組成物。
（項目１５）
前記抗体が、アミノ酸８１位および８２位の両方に結合する、項目１４に記載の組成物。
（項目１６）
アミノ酸８１位および８２位が、Ｐｈｅ８１およびＬｙｓ８２である、項目１４または項目１５に記載の組成物。
（項目１７）
ヒトＴＩＧＩＴに結合する単離された抗体を含む組成物であって、前記抗体が、アミノ酸８１位および８２位のうちの一方または両方を含むヒトＴＩＧＩＴ上のエピトープに結合し、前記組成物中の前記抗体のうちの少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％が、アフコシル化されている、組成物。
（項目１８）
前記エピトープが、８１位におけるＰｈｅを含む、項目１３または項目１７に記載の組成物。
（項目１９）
前記エピトープが、８２位におけるＬｙｓまたはＳｅｒを含む、項目１３、１７、および１８のいずれか一項に記載の組成物。
（項目２０）
前記エピトープが、８１位におけるＰｈｅおよび８２位におけるＬｙｓまたはＳｅｒを含む、項目１３および１７から１９のいずれか一項に記載の組成物。
（項目２１）
前記エピトープが、Ｐｈｅ８１およびＬｙｓ８２を含む、項目２０に記載の組成物。
（項目２２）
前記エピトープが、非連続的エピトープである、項目１３および１７から２１のいずれか一項に記載の組成物。
（項目２３）
前記抗体が、アミノ酸５１位、５２位、５３位、５４位、５５位、７３位、７４位、７５位、７６位、７７位、７９位、８３位、８４位、８５位、８６位、８７位、８８位、８９位、９０位、９１位、９２位、または９３位のうちの１つまたは複数をさらに含むヒトＴＩＧＩＴ上のエピトープに結合する、項目１３および１７から２２のいずれか一項に記載の組成物。
（項目２４）
前記エピトープが、Ｔｈｒ５１、Ａｌａ５２、Ｇｌｎ５３、Ｖａｌ５４、Ｔｈｒ５５、Ｌｅｕ７３、Ｇｌｙ７４、Ｔｒｐ７５、Ｈｉｓ７６、Ｉｌｅ７７、Ｐｒｏ７９、Ａｓｐ８３、Ａｒｇ８４、Ｖａｌ８５、Ａｌａ８６、Ｐｒｏ８７、Ｇｌｙ８８、Ｐｒｏ８９、Ｇｌｙ９０、Ｌｅｕ９１、Ｇｌｙ９２、およびＬｅｕ９３からなる群から選択される１つまたは複数のアミノ酸残基をさらに含む、項目２３に記載の組成物。
（項目２５）
前記エピトープが、アミノ酸残基Ｔｈｒ５１、Ａｌａ５２、Ｇｌｎ５３、Ｖａｌ５４、Ｔｈｒ５５、Ｇｌｙ７４、Ｔｒｐ７５、Ｈｉｓ７６、Ｉｌｅ７７、Ｐｈｅ８１、Ｌｙｓ８２、Ｐｒｏ８７、Ｇｌｙ８８、Ｐｒｏ８９、Ｇｌｙ９０、Ｌｅｕ９１、Ｇｌｙ９２、およびＬｅｕ９３を含む、項目２４に記載の組成物。
（項目２６）
前記エピトープが、アミノ酸残基Ａｌａ５２、Ｇｌｎ５３、Ｌｅｕ７３、Ｇｌｙ７４、Ｔｒｐ７５、Ｐｒｏ７９、Ｐｈｅ８１、Ｌｙｓ８２、Ａｓｐ８３、Ａｒｇ８４、Ｖａｌ８５、およびＡｌａ８６を含む、項目２４に記載の組成物。
（項目２７）
前記エピトープが、配列ＩＣＮＡＤＬＧＷＨＩＳＰＳＦＫ（配列番号２５８）を含む、項目１３および１７から２６のいずれか一項に記載の組成物。
（項目２８）
ヒトＴＩＧＩＴが、配列番号２１８の配列を含む、項目１から２７のいずれか一項に記載の組成物。
（項目２９）
前記抗体のそれぞれが、
（ａ）配列番号４、配列番号２２、配列番号４０、配列番号５８、配列番号７６、配列番号９４、配列番号１１２、配列番号１３０、配列番号１４８、配列番号１６６、配列番号１８４、配列番号２０２、配列番号２２１、配列番号２２４、配列番号２２６、配列番号２３１、配列番号２３３、配列番号２３９、配列番号２４３、配列番号２８３、配列番号２８４、配列番号２９３、配列番号２９４、配列番号２８９、および配列番号２９０から選択される配列を含む重鎖ＣＤＲ１、
（ｂ）配列番号６、配列番号２４、配列番号４２、配列番号６０、配列番号７８、配列番号９６、配列番号１１４、配列番号１３２、配列番号１５０、配列番号１６８、配列番号１８６、配列番号２０４、配列番号２２２、配列番号２２５、配列番号２２７、配列番号２２９、配列番号２３２、配列番号２３４、配列番号２３８、配列番号２４０、配列番号２８５、配列番号２９７、配列番号２９１、および配列番号２９５から選択される配列を含む重鎖ＣＤＲ２、
（ｃ）配列番号８、配列番号２６、配列番号４４、配列番号６２、配列番号８０、配列番号９８、配列番号１１６、配列番号１３４、配列番号１５２、配列番号１７０、配列番号１８８、配列番号２０６、配列番号２２３、配列番号２２８、配列番号２３０、配列番号２３５、配列番号２３６、配列番号２３７、配列番号２４１、配列番号２４２、配列番号２４４、配列番号２８６、配列番号２９２、および配列番号２９６から選択される配列を含む重鎖ＣＤＲ３、
（ｄ）配列番号１３、配列番号３１、配列番号４９、配列番号６７、配列番号８５、配列番号１０３、配列番号１２１、配列番号１３９、配列番号１５７、配列番号１７５、配列番号１９３、配列番号２１１、および配列番号２８７から選択される配列を含む軽鎖ＣＤＲ１、
（ｅ）配列番号１５、配列番号３３、配列番号５１、配列番号６９、配列番号８７、配列番号１０５、配列番号１２３、配列番号１４１、配列番号１５９、配列番号１７７、配列番号１９５、配列番号２１３、および配列番号２８８から選択される配列を含む軽鎖ＣＤＲ２、または
（ｆ）配列番号１７、配列番号３５、配列番号５３、配列番号７１、配列番号８９、配列番号１０７、配列番号１２５、配列番号１４３、配列番号１６１、配列番号１７９、配列番号１９７、および配列番号２１５から選択される配列を含む軽鎖ＣＤＲ３
のうちの１つまたは複数を含む、項目１から２８のいずれか一項に記載の組成物。
（項目３０）
前記抗体のそれぞれが、
（ａ）配列番号５８、配列番号２８３、配列番号２８４、配列番号２２４、配列番号２９３、配列番号２９４、配列番号２２６、配列番号２８９、および配列番号２９０から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１配列、
（ｂ）配列番号６０、配列番号２８５、配列番号２２５、配列番号２９７、配列番号２２７、配列番号２９１、配列番号２２９、および配列番号２９５から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２配列、
（ｃ）配列番号６２、配列番号２８６、配列番号２２８、配列番号２９２、配列番号２３０、および配列番号２９６から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３配列、
（ｄ）配列番号６７および配列番号２８７から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１配列、
（ｅ）配列番号６９および配列番号２８８から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２配列、ならびに／または
（ｆ）配列番号７１のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３配列
を含む、項目２９に記載の組成物。
（項目３１）
前記抗体のそれぞれが、
（ａ）それぞれ、配列番号４、６、８、１３、１５、および１７、または
（ｂ）それぞれ、配列番号２２、２４、２６、３１、３３、および３５、または
（ｃ）それぞれ、配列番号４０、４２、４４、４９、５１、および５３、または
（ｄ）それぞれ、配列番号５８、６０、６２、６７、６９、および７１、または
（ｅ）それぞれ、配列番号２８３、２８５、６２、２８７、２８８、および７１、または（ｆ）それぞれ、配列番号２８４、６０、２８６、６７、６９、および７１、または
（ｇ）それぞれ、配列番号７６、７８、８０、８５、８７、および８９、または
（ｈ）それぞれ、配列番号９４、９６、９８、１０３、１０５、および１０７、または
（ｉ）それぞれ、配列番号１１２、１１４、１１６、１２１、１２３、および１２５、または
（ｊ）それぞれ、配列番号１３０、１３２、１３４、１３９、１４１、および１４３、または
（ｋ）それぞれ、配列番号１４８、１５０、１５２、１５７、１５９、および１６１、または
（ｌ）それぞれ、配列番号１６６、１６８、１７０、１７５、１７７、および１７９、または
（ｍ）それぞれ、配列番号１８４、１８６、１８８、１９３、１９５、および１９７、または
（ｎ）それぞれ、配列番号２０２、２０４、２０６、２１１、２１３、および２１５、または
（ｏ）それぞれ、配列番号２２１、２２２、２２３、１３、１５、および１７、または
（ｐ）それぞれ、配列番号２２４、２２５、６２、６７、６９、および７１、または
（ｑ）それぞれ、配列番号２９３、２９７、６２、２８７、２８８、および７１、または（ｒ）それぞれ、配列番号２９４、２２５、２８６、６７、６９、および７１、または
（ｓ）それぞれ、配列番号２２６、２２７、２２８、６７、６９、および７１、または
（ｔ）それぞれ、配列番号２８９、２９１、２２８、２８７、２８８、および７１、または
（ｕ）それぞれ、配列番号２９０、２２７、２９２、６７、６９、および７１、または
（ｖ）それぞれ、配列番号２２４、２２９、２３０、６７、６９、および７１、または
（ｗ）それぞれ、配列番号２９３、２９５、２３０、２８７、２８８、および７１、または
（ｘ）それぞれ、配列番号２９４、２２９、２９６、６７、６９、および７１、または
（ｙ）それぞれ、配列番号２２４、２２７、２３０、６７、６９、および７１、または
（ｚ）それぞれ、配列番号２９３、２９０、２３０、２８７、２８８、および７１、または
（ａａ）それぞれ、配列番号２９４、２９０、２３０、６７、６９、および７１、または（ｂｂ）それぞれ、配列番号２３１、２３２、２３５、１０３、１０５、および１０７、または
（ｃｃ）それぞれ、配列番号２３３、２３４、２３６、１０３、１０５、および１０７、または
（ｄｄ）それぞれ、配列番号２３３、２３４、２３７、１０３、１０５、および１０７、または
（ｅｅ）それぞれ、配列番号１６６、２３８、１７０、１７５、１７７、および１７９、または
（ｆｆ）それぞれ、配列番号２３９、２４０、１７０、１７５、１７７、および１７９、または
（ｇｇ）それぞれ、配列番号２３９、２４０、２４１、１７５、１７７、および１７９、または
（ｈｈ）それぞれ、配列番号２３９、２４０、２４２、１７５、１７７、および１７９、または
（ｉｉ）それぞれ、配列番号２４３、１６８、２４４、１７５、１７７、および１７９
の配列を含む重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３、ならびに軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ、およびＣＤＲ３を含む、項目２９または項目３０に記載の組成物。
（項目３２）
前記抗体のそれぞれが、
（ａ）それぞれ、配列番号５８、６０、６２、６７、６９、および７１、または
（ｂ）それぞれ、配列番号２８３、２８５、６２、２８７、２８８、および７１、または（ｃ）それぞれ、配列番号２８４、６０、２８６、６７、６９、および７１
の配列を含む重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３、ならびに軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ、およびＣＤＲ３を含む、項目１から３１のいずれか一項に記載の組成物。
（項目３３）
前記抗体のそれぞれが、
（ａ）配列番号１、配列番号１９、配列番号３７、配列番号５５、配列番号７３、配列番号９１、配列番号１０９、配列番号１２７、配列番号１４５、配列番号１６３、配列番号１８１、配列番号１９９、配列番号２４５、配列番号２４６、配列番号２４７、配列番号２４８、配列番号２４９、配列番号２５０、配列番号２５１、配列番号２５２、配列番号２５３、配列番号２５４、配列番号２５５、配列番号２５６、または配列番号２５７に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、ならびに／または
（ｂ）配列番号１０、配列番号２８、配列番号４６、配列番号６４、配列番号８２、配列番号１００、配列番号１１８、配列番号１３６、配列番号１５４、配列番号１７２、配列番号１９０、または配列番号２０８に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域
を含む、項目１から３２のいずれか一項に記載の組成物。
（項目３４）
前記抗体のそれぞれが、
（ａ）配列番号１もしくは配列番号２４５に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号１０に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、または
（ｂ）配列番号１９に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号２８に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、または
（ｃ）配列番号３７に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号４６に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、または
（ｄ）配列番号５５、配列番号２４６、配列番号２４７、配列番号２４８、もしくは配列番号２４９のうちのいずれか１つに対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号６４に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、または
（ｅ）配列番号７３に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号８２に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、または
（ｆ）配列番号９１、配列番号２５０、配列番号２５１、もしくは配列番号２５２のうちのいずれか１つに対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号１００に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、または
（ｇ）配列番号１０９に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号１１８に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、または
（ｈ）配列番号１２７に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号１３６に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、または
（ｉ）配列番号１４５に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号１５４に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、または
（ｊ）配列番号１６３、配列番号２５３、配列番号２５４、配列番号２５５、配列番号２５６、もしくは配列番号２５７のうちのいずれか１つに対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号１７２に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、または
（ｋ）配列番号１８１に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号１９０に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、または
（ｌ）配列番号１９９に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号２０８に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域
を含む、項目１から３３のいずれか一項に記載の組成物。
（項目３５）
前記抗体のそれぞれが、
（ａ）配列番号１もしくは配列番号２４５のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号１０のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、または
（ｂ）配列番号１９のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号２８のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、または
（ｃ）配列番号３７のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号４６のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、または
（ｄ）配列番号５５、配列番号２４６、配列番号２４７、配列番号２４８、もしくは配列番号２４９のうちのいずれか１つのアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号６４のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、または
（ｅ）配列番号７３のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号８２のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、または
（ｆ）配列番号９１、配列番号２５０、配列番号２５１、もしくは配列番号２５２のうちのいずれか１つのアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号１００のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、または
（ｇ）配列番号１０９のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号１１８のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、または
（ｈ）配列番号１２７のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号１３６のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、または
（ｉ）配列番号１４５のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号１５４のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、または
（ｊ）配列番号１６３、配列番号２５３、配列番号２５４、配列番号２５５、配列番号２５６、もしくは配列番号２５７のうちのいずれか１つのアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号１７２のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、または
（ｋ）配列番号１８１のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号１９０のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、または
（ｌ）配列番号１９９のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号２０８のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域
を含む、項目３４に記載の組成物。
（項目３６）
前記抗体のそれぞれが、配列番号５５のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号６４のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む、項目１から３５のいずれか一項に記載の組成物。
（項目３７）
前記抗体が、ＩｇＧ抗体である、項目１から３６のいずれか１項に記載の組成物。
（項目３８）
前記抗体が、ＩｇＧ１抗体またはＩｇＧ３抗体である、項目３７に記載の組成物。
（項目３９）
前記抗体のそれぞれが、配列番号２６０、２６２、２６４、２６６、２６８、２７０、および２７２から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖、ならびに配列番号２７４のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む、項目１から３８のいずれか一項に記載の組成物。
（項目４０）
前記抗体のそれぞれが、配列番号２６０のアミノ酸配列を含む重鎖、および配列番号２７４のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む、項目３９に記載の組成物。
（項目４１）
前記抗体のそれぞれが、配列番号２６０のアミノ酸配列からなる重鎖、および配列番号２７４のアミノ酸配列からなる軽鎖を含む、項目３９に記載の組成物。
（項目４２）
ヒトＴＩＧＩＴに結合する単離された抗体を含む組成物であって、前記組成物中の前記抗体のうちの少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％が、アフコシル化されており、前記抗体のそれぞれが、配列番号２６０のアミノ酸配列を含む重鎖および配列番号２７４のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む、組成物。
（項目４３）
ヒトＴＩＧＩＴに結合する単離された抗体を含む組成物であって、前記組成物中の前記抗体のうちの少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％が、アフコシル化されており、前記抗体のそれぞれが、配列番号２６０のアミノ酸配列からなる重鎖および配列番号２７４のアミノ酸配列からなる軽鎖を含む、組成物。
（項目４４）
前記抗体が、抗ＰＤ−１抗体または抗ＰＤ−Ｌ１抗体との相乗作用を示す、項目１から４３のいずれか一項に記載の組成物。
（項目４５）
相乗作用が、（ｉ）ＰＤ−１、ＴＩＧＩＴ、およびＣＤ２２６を発現するＪｕｒｋａｔエフェクター細胞であって、ＩＬ−２プロモーターによって駆動されるルシフェラーゼレポーター遺伝子を含むＪｕｒｋａｔエフェクター細胞、ならびに（ｉｉ）ＴＣＲ活性化因子、ＰＤ−Ｌ１、およびＣＤ１５５を発現するＣＨＯ−Ｋ１人工抗原提示細胞（ａＡＰＣ）を含む共培養物を、前記組成物および抗ＰＤ−１抗体または抗ＰＤ−Ｌ１抗体と接触させることを含むアッセイを使用して、決定される、項目４４に記載の組成物。
（項目４６）
制御性Ｔ（Ｔｒｅｇ）細胞が、前記組成物と接触させたヒトＰＢＭＣから枯渇される、項目１から４５のいずれか一項に記載の組成物。
（項目４７）
ＭＣＰ１、ＩＬ−８、およびＭＩＰ１αの発現が、前記組成物と接触させたヒトＰＢＭＣにおいて増加する、項目１から４６のいずれか一項に記載の組成物。
（項目４８）
単球／マクロファージが、前記組成物と接触させると活性化される、項目１から４７のいずれか一項に記載の組成物。
（項目４９）
ＣＤ８６およびＭＨＣＩＩが、ＣＤ１４＋単球／マクロファージを前記組成物と接触させると、上方調節される、項目１から４８のいずれか一項に記載の組成物。
（項目５０）
前記組成物と接触させたＣＤ１４＋単球／マクロファージが、抗原提示細胞へと成熟する、項目１から４９のいずれか一項に記載の組成物。
（項目５１）
前記組成物と接触させたメモリーＴ細胞が、抗原に応答したＩＦＮγ産生の増加を示す、項目１から５０のいずれか一項に記載の組成物。
（項目５２）
前記組成物と接触させたメモリーＴ細胞が、抗原に対する応答の増強を示す、項目１から５１のいずれか一項に記載の組成物。
（項目５３）
エフェクターメモリーＣＤ８＋ Ｔ細胞および／またはエフェクターメモリーＣＤ４＋
Ｔ細胞が、前記組成物と接触させた腫瘍において増加する、項目１から５２のいずれか一項に記載の組成物。
（項目５４）
前記組成物が、前記組成物を投与した動物においてＴｈ１応答を増強させる、項目１から５３のいずれか一項に記載の組成物。
（項目５５）
前記組成物中の前記抗体が、ＦｃγＲＩＩａおよび／またはＦｃγＲＩＩｂに対して、アフコシル化されていない同じ抗ＴＩＧＩＴ抗体と比較して低い結合親和性を有する、項目１から５４のいずれか一項に記載の組成物。
（項目５６）
前記組成物が、単球マクロファージの存在下において、ＴＩＧＩＴを発現する細胞の抗体依存性細胞ファゴサイトーシス（ＡＤＣＰ）を媒介する、項目１から５５のいずれか一項に記載の組成物。
（項目５７）
前記抗体が、モノクローナルである、項目１から５６のいずれか一項に記載の組成物。
（項目５８）
前記抗体が、完全ヒト抗体である、項目１から５７のいずれか一項に記載の組成物。
（項目５９）
前記抗体が、キメラ抗体である、項目１から５８のいずれか一項に記載の組成物。
（項目６０）
前記抗体が、ヒト化抗体である、項目１から２８および４４から５９のいずれか一項に記載の組成物。
（項目６１）
前記抗体が、抗体断片である、項目１から６０のいずれか一項に記載の組成物。
（項目６２）
前記抗体断片が、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’） ２ 、ｓｃＦｖ、またはダイアボディである、項目６１に記載の組成物。
（項目６３）
前記抗体が、二重特異性抗体である、項目１から６２のいずれか一項に記載の組成物。
（項目６４）
前記抗体が、抗体−薬物コンジュゲートである、項目１から６３のいずれか一項に記載の組成物。
（項目６５）
ヒトＴＩＧＩＴ（ＩｇドメインおよびＩＴＩＭドメインを有するＴ細胞免疫受容体）に結合する抗体であって、ヒトＴＩＧＩＴに対して、５ｎＭ未満の結合親和性（Ｋ Ｄ ）を有し、アフコシル化されている、抗体。
（項目６６）
ヒトＴＩＧＩＴに対して、１ｎＭ未満のＫ Ｄ を有する、項目６５に記載の抗体。
（項目６７）
ヒトＴＩＧＩＴに対して、１００ｐＭ未満のＫ Ｄ を有する、項目６６に記載の抗体。
（項目６８）
カニクイザルＴＩＧＩＴおよび／またはマウスＴＩＧＩＴとの交差反応性を示す、項目６５から６７のいずれか一項に記載の抗体。
（項目６９）
カニクイザルＴＩＧＩＴおよびマウスＴＩＧＩＴの両方との交差反応性を示す、項目６８に記載の抗体。
（項目７０）
ＴＩＧＩＴへのＣＤ１５５の結合を遮断する、項目６５から６９のいずれか一項に記載の抗体。
（項目７１）
ＴＩＧＩＴへのＣＤ１１２の結合を遮断する、項目６５から７０のいずれか一項に記載の抗体。
（項目７２）
ＴＩＧＩＴへのＣＤ１５５およびＣＤ１１２の両方の結合を遮断する、項目６５から７１のいずれか一項に記載の抗体。
（項目７３）
ヒトＴＩＧＩＴへの結合に関して、配列番号５５のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域および配列番号６４のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む抗体と競合する、項目６５から７２のいずれか一項に記載の抗体。
（項目７４）
ヒトＴＩＧＩＴに結合するときに、アミノ酸８１位および８２位のうちの一方または両方に結合する、項目６５から７３のいずれか一項に記載の抗体。
（項目７５）
アミノ酸８１位および８２位の両方に結合する、項目７４に記載の抗体。
（項目７６）
アミノ酸８１位および８２位が、Ｐｈｅ８１およびＬｙｓ８２である、項目７４または７５に記載の抗体。
（項目７７）
アミノ酸８１位および８２位のうちの一方または両方を含むヒトＴＩＧＩＴ上のエピトープに結合する、項目６５から７６のいずれか一項に記載の抗体。
（項目７８）
ヒトＴＩＧＩＴに結合する抗体であって、ヒトＴＩＧＩＴに結合するときに、アミノ酸８１位および８２位のうちの一方または両方に結合する、アフコシル化されている、抗体。
（項目７９）
アミノ酸８１位および８２位の両方に結合する、項目７８に記載の抗体。
（項目８０）
アミノ酸８１位および８２位が、Ｐｈｅ８１およびＬｙｓ８２である、項目７８または項目７９に記載の抗体。
（項目８１）
ヒトＴＩＧＩＴに結合する抗体であって、アミノ酸８１位および８２位のうちの一方または両方を含むヒトＴＩＧＩＴ上のエピトープに結合し、アフコシル化されている、抗体。
（項目８２）
前記エピトープが、８１位におけるＰｈｅを含む、項目７７または項目８１に記載の抗体。
（項目８３）
前記エピトープが、８２位におけるＬｙｓまたはＳｅｒを含む、項目７７、８１、および８２のいずれか一項に記載の抗体。
（項目８４）
前記エピトープが、８１位におけるＰｈｅおよび８２位におけるＬｙｓまたはＳｅｒを含む、項目７７および８１から８３のいずれか一項に記載の抗体。
（項目８５）
前記エピトープが、Ｐｈｅ８１およびＬｙｓ８２を含む、項目８４に記載の抗体。
（項目８６）
前記エピトープが、非連続的エピトープである、項目７７および８１から８５のいずれか一項に記載の抗体。
（項目８７）
アミノ酸５１位、５２位、５３位、５４位、５５位、７３位、７４位、７５位、７６位、７７位、７９位、８３位、８４位、８５位、８６位、８７位、８８位、８９位、９０位、９１位、９２位、または９３位のうちの１つまたは複数をさらに含むヒトＴＩＧＩＴ上のエピトープに結合する、項目７７および８１から８６のいずれか一項に記載の抗体。
（項目８８）
前記エピトープが、Ｔｈｒ５１、Ａｌａ５２、Ｇｌｎ５３、Ｖａｌ５４、Ｔｈｒ５５、Ｌｅｕ７３、Ｇｌｙ７４、Ｔｒｐ７５、Ｈｉｓ７６、Ｉｌｅ７７、Ｐｒｏ７９、Ａｓｐ８３、Ａｒｇ８４、Ｖａｌ８５、Ａｌａ８６、Ｐｒｏ８７、Ｇｌｙ８８、Ｐｒｏ８９、Ｇｌｙ９０、Ｌｅｕ９１、Ｇｌｙ９２、およびＬｅｕ９３からなる群から選択される１つまたは複数のアミノ酸残基をさらに含む、項目８７に記載の抗体。
（項目８９）
前記エピトープが、アミノ酸残基Ｔｈｒ５１、Ａｌａ５２、Ｇｌｎ５３、Ｖａｌ５４、Ｔｈｒ５５、Ｇｌｙ７４、Ｔｒｐ７５、Ｈｉｓ７６、Ｉｌｅ７７、Ｐｈｅ８１、Ｌｙｓ８２、Ｐｒｏ８７、Ｇｌｙ８８、Ｐｒｏ８９、Ｇｌｙ９０、Ｌｅｕ９１、Ｇｌｙ９２、およびＬｅｕ９３を含む、項目８８に記載の抗体。
（項目９０）
前記エピトープが、アミノ酸残基Ａｌａ５２、Ｇｌｎ５３、Ｌｅｕ７３、Ｇｌｙ７４、Ｔｒｐ７５、Ｐｒｏ７９、Ｐｈｅ８１、Ｌｙｓ８２、Ａｓｐ８３、Ａｒｇ８４、Ｖａｌ８５、およびＡｌａ８６を含む、項目８８に記載の抗体。
（項目９１）
前記エピトープが、配列ＩＣＮＡＤＬＧＷＨＩＳＰＳＦＫ（配列番号２５８）を含む、項目７７および８１から９０のいずれか一項に記載の抗体。
（項目９２）
ヒトＴＩＧＩＴが、配列番号２１８の配列を含む、項目６５から９１のいずれか一項に記載の抗体。
（項目９３）
（ａ）配列番号４、配列番号２２、配列番号４０、配列番号５８、配列番号７６、配列番号９４、配列番号１１２、配列番号１３０、配列番号１４８、配列番号１６６、配列番号１８４、配列番号２０２、配列番号２２１、配列番号２２４、配列番号２２６、配列番号２３１、配列番号２３３、配列番号２３９、配列番号２４３、配列番号２８３、配列番号２８４、配列番号２９３、配列番号２９４、配列番号２８９、および配列番号２９０から選択される配列を含む重鎖ＣＤＲ１、
（ｂ）配列番号６、配列番号２４、配列番号４２、配列番号６０、配列番号７８、配列番号９６、配列番号１１４、配列番号１３２、配列番号１５０、配列番号１６８、配列番号１８６、配列番号２０４、配列番号２２２、配列番号２２５、配列番号２２７、配列番号２２９、配列番号２３２、配列番号２３４、配列番号２３８、配列番号２４０、配列番号２８５、配列番号２９７、配列番号２９１、および配列番号２９５から選択される配列を含む重鎖ＣＤＲ２、
（ｃ）配列番号８、配列番号２６、配列番号４４、配列番号６２、配列番号８０、配列番号９８、配列番号１１６、配列番号１３４、配列番号１５２、配列番号１７０、配列番号１８８、配列番号２０６、配列番号２２３、配列番号２２８、配列番号２３０、配列番号２３５、配列番号２３６、配列番号２３７、配列番号２４１、配列番号２４２、配列番号２４４、配列番号２８６、配列番号２９２、および配列番号２９６から選択される配列を含む重鎖ＣＤＲ３、
（ｄ）配列番号１３、配列番号３１、配列番号４９、配列番号６７、配列番号８５、配列番号１０３、配列番号１２１、配列番号１３９、配列番号１５７、配列番号１７５、配列番号１９３、配列番号２１１、および配列番号２８７から選択される配列を含む軽鎖ＣＤＲ１、
（ｅ）配列番号１５、配列番号３３、配列番号５１、配列番号６９、配列番号８７、配列番号１０５、配列番号１２３、配列番号１４１、配列番号１５９、配列番号１７７、配列番号１９５、配列番号２１３、および配列番号２８８から選択される配列を含む軽鎖ＣＤＲ２、または
（ｆ）配列番号１７、配列番号３５、配列番号５３、配列番号７１、配列番号８９、配列番号１０７、配列番号１２５、配列番号１４３、配列番号１６１、配列番号１７９、配列番号１９７、および配列番号２１５から選択される配列を含む軽鎖ＣＤＲ３
のうちの１つまたは複数を含む、項目６５から９２のいずれか一項に記載の抗体。
（項目９４）
（ａ）配列番号５８、配列番号２８３、配列番号２８４、配列番号２２４、配列番号２９３、配列番号２９４、配列番号２２６、配列番号２８９、および配列番号２９０から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１配列、
（ｂ）配列番号６０、配列番号２８５、配列番号２２５、配列番号２９７、配列番号２２７、配列番号２９１、配列番号２２９、および配列番号２９５から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２配列、
（ｃ）配列番号６２、配列番号２８６、配列番号２２８、配列番号２９２、配列番号２３０、および配列番号２９６から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３配列、
（ｄ）配列番号６７および配列番号２８７から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１配列、
（ｅ）配列番号６９および配列番号２８８から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２配列、ならびに／または
（ｆ）配列番号７１のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３配列
を含む、項目９３に記載の抗体。
（項目９５）
（ａ）それぞれ、配列番号４、６、８、１３、１５、および１７、または
（ｂ）それぞれ、配列番号２２、２４、２６、３１、３３、および３５、または
（ｃ）それぞれ、配列番号４０、４２、４４、４９、５１、および５３、または
（ｄ）それぞれ、配列番号５８、６０、６２、６７、６９、および７１、または
（ｅ）それぞれ、配列番号７６、７８、８０、８５、８７、および８９、または
（ｆ）それぞれ、配列番号９４、９６、９８、１０３、１０５、および１０７、または
（ｇ）それぞれ、配列番号１１２、１１４、１１６、１２１、１２３、および１２５、または
（ｈ）それぞれ、配列番号１３０、１３２、１３４、１３９、１４１、および１４３、または
（ｉ）それぞれ、配列番号１４８、１５０、１５２、１５７、１５９、および１６１、または
（ｊ）それぞれ、配列番号１６６、１６８、１７０、１７５、１７７、および１７９、または
（ｋ）それぞれ、配列番号１８４、１８６、１８８、１９３、１９５、および１９７、または
（ｌ）それぞれ、配列番号２０２、２０４、２０６、２１１、２１３、および２１５、または
（ｍ）それぞれ、配列番号２２１、２２２、２２３、１３、１５、および１７、または
（ｎ）それぞれ、配列番号２２４、２２５、６２、６７、６９、および７１、または
（ｏ）それぞれ、配列番号２２６、２２７、２２８、６７、６９、および７１、または
（ｐ）それぞれ、配列番号２２４、２２９、２３０、６７、６９、および７１、または
（ｑ）それぞれ、配列番号２２４、２２７、２３０、６７、６９、および７１、または
（ｒ）それぞれ、配列番号２３１、２３２、２３５、１０３、１０５、および１０７、または
（ｓ）それぞれ、配列番号２３３、２３４、２３６、１０３、１０５、および１０７、または
（ｔ）それぞれ、配列番号２３３、２３４、２３７、１０３、１０５、および１０７、または
（ｕ）それぞれ、配列番号１６６、２３８、１７０、１７５、１７７、および１７９、または
（ｖ）それぞれ、配列番号２３９、２４０、１７０、１７５、１７７、および１７９、または
（ｗ）それぞれ、配列番号２３９、２４０、２４１、１７５、１７７、および１７９、または
（ｘ）それぞれ、配列番号２３９、２４０、２４２、１７５、１７７、および１７９、または
（ｙ）それぞれ、配列番号２４３、１６８、２４４、１７５、１７７、および１７９
の配列を含む重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３、ならびに軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ、およびＣＤＲ３を含む、項目９４に記載の抗体。
（項目９６）
（ａ）それぞれ、配列番号５８、６０、６２、６７、６９、および７１、または
（ｂ）それぞれ、配列番号２８３、２８５、６２、２８７、２８８、および７１、または（ｃ）それぞれ、配列番号２８４、６０、２８６、６７、６９、および７１
の配列を含む重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３、ならびに軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ、およびＣＤＲ３を含む、項目６５から９５のいずれか一項に記載の抗体。
（項目９７）
（ａ）配列番号１、配列番号１９、配列番号３７、配列番号５５、配列番号７３、配列番号９１、配列番号１０９、配列番号１２７、配列番号１４５、配列番号１６３、配列番号１８１、配列番号１９９、配列番号２４５、配列番号２４６、配列番号２４７、配列番号２４８、配列番号２４９、配列番号２５０、配列番号２５１、配列番号２５２、配列番号２５３、配列番号２５４、配列番号２５５、配列番号２５６、または配列番号２５７に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、ならびに／または
（ｂ）配列番号１０、配列番号２８、配列番号４６、配列番号６４、配列番号８２、配列番号１００、配列番号１１８、配列番号１３６、配列番号１５４、配列番号１７２、配列番号１９０、または配列番号２０８に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域
を含む、項目６５から９６のいずれか一項に記載の抗体。
（項目９８）
（ａ）配列番号１もしくは配列番号２４５に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号１０に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、または
（ｂ）配列番号１９に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号２８に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、または
（ｃ）配列番号３７に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号４６に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、または
（ｄ）配列番号５５、配列番号２４６、配列番号２４７、配列番号２４８、もしくは配列番号２４９のうちのいずれか１つに対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号６４に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、または
（ｅ）配列番号７３に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号８２に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、または
（ｆ）配列番号９１、配列番号２５０、配列番号２５１、もしくは配列番号２５２のうちのいずれか１つに対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号１００に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、または
（ｇ）配列番号１０９に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号１１８に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、または
（ｈ）配列番号１２７に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号１３６に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、または
（ｉ）配列番号１４５に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号１５４に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、または
（ｊ）配列番号１６３、配列番号２５３、配列番号２５４、配列番号２５５、配列番号２５６、もしくは配列番号２５７のうちのいずれか１つに対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号１７２に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、または
（ｋ）配列番号１８１に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号１９０に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、または
（ｌ）配列番号１９９に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号２０８に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域
を含む、項目６５から９７のいずれか一項に記載の抗体。
（項目９９）
（ａ）配列番号１もしくは配列番号２４５のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号１０のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、または
（ｂ）配列番号１９のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号２８のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、または
（ｃ）配列番号３７のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号４６のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、または
（ｄ）配列番号５５、配列番号２４６、配列番号２４７、配列番号２４８、もしくは配列番号２４９のうちのいずれか１つのアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号６４のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、または
（ｅ）配列番号７３のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号８２のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、または
（ｆ）配列番号９１、配列番号２５０、配列番号２５１、もしくは配列番号２５２のうちのいずれか１つのアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号１００のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、または
（ｇ）配列番号１０９のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号１１８のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、または
（ｈ）配列番号１２７のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号１３６のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、または
（ｉ）配列番号１４５のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号１５４のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、または
（ｊ）配列番号１６３、配列番号２５３、配列番号２５４、配列番号２５５、配列番号２５６、もしくは配列番号２５７のうちのいずれか１つのアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号１７２のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、または
（ｋ）配列番号１８１のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号１９０のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、または
（ｌ）配列番号１９９のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号２０８のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域
を含む、項目９８に記載の抗体。
（項目１００）
配列番号５５のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号６４のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む、項目６５から９９のいずれか一項に記載の抗体。
（項目１０１）
ＩｇＧ抗体である、項目６５から１００のいずれか一項に記載の抗体。
（項目１０２）
ＩｇＧ１抗体またはＩｇＧ３抗体である、項目１０１に記載の抗体。
（項目１０３）
配列番号２６０、２６２、２６４、２６６、２６８、２７０、および２７２から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖、ならびに配列番号２７４のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む、項目６５から１０２のいずれか一項に記載の抗体。
（項目１０４）
配列番号２６０のアミノ酸配列を含む重鎖、および配列番号２７４のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む、項目１０３に記載の抗体。
（項目１０５）
配列番号２６０のアミノ酸配列からなる重鎖、および配列番号２７４のアミノ酸配列からなる軽鎖を含む、項目１０３に記載の抗体。
（項目１０６）
ヒトＴＩＧＩＴに結合する抗体であって、配列番号２６０、２６２、２６４、２６６、２６８、２７０、および２７２から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖、ならびに配列番号２７４のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む、抗体。
（項目１０７）
ヒトＴＩＧＩＴに結合する抗体であって、配列番号２６０のアミノ酸配列を含む重鎖、および配列番号２７４のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む、抗体。
（項目１０８）
ヒトＴＩＧＩＴに結合する抗体であって、配列番号２６０のアミノ酸配列からなる重鎖、および配列番号２７４のアミノ酸配列からなる軽鎖を含む抗体。
（項目１０９）
抗ＰＤ−１抗体または抗ＰＤ−Ｌ１抗体との相乗作用を示す、項目６５から１０８のいずれか一項に記載の抗体。
（項目１１０）
相乗作用が、（ｉ）ＰＤ−１、ＴＩＧＩＴ、およびＣＤ２２６を発現するＪｕｒｋａｔエフェクター細胞であって、ＩＬ−２プロモーターによって駆動されるルシフェラーゼレポーター遺伝子を含むＪｕｒｋａｔエフェクター細胞、ならびに（ｉｉ）ＴＣＲ活性化因子、ＰＤ−Ｌ１、およびＣＤ１５５を発現するＣＨＯ−Ｋ１人工抗原提示細胞（ａＡＰＣ）を含む共培養物を、組成物および抗ＰＤ−１抗体または抗ＰＤ−Ｌ１抗体と接触させることを含むアッセイを使用して、決定される、項目１０９に記載の抗体。
（項目１１１）
制御性Ｔ（Ｔｒｅｇ）細胞が、前記抗体と接触させたヒトＰＢＭＣから枯渇される、項目６５から１１０のいずれか一項に記載の抗体。
（項目１１２）
ＭＣＰ１、ＩＬ−８、およびＭＩＰ１αの発現が、前記抗体と接触させたヒトＰＢＭＣにおいて増加する、項目６５から１１１のいずれか一項に記載の抗体。
（項目１１３）
単球／マクロファージが、前記抗体と接触させると活性化される、項目６５から１１２のいずれか一項に記載の抗体。
（項目１１４）
ＣＤ８６およびＭＨＣＩＩが、ＣＤ１４＋単球／マクロファージを前記抗体と接触させると、上方調節される、項目６５から１１３のいずれか一項に記載の抗体。
（項目１１５）
前記抗体と接触させたＣＤ１４＋単球／マクロファージが、抗原提示細胞へと成熟する、項目６５から１１４のいずれか一項に記載の抗体。
（項目１１６）
前記抗体と接触させたメモリーＴ細胞が、抗原に応答したＩＦＮγ産生の増加を示す、項目６５から１１５のいずれか一項に記載の抗体。
（項目１１７）
前記抗体と接触させたメモリーＴ細胞が、抗原に対する応答の増強を示す、項目６５から１１６のいずれか一項に記載の抗体。
（項目１１８）
エフェクターメモリーＣＤ８＋ Ｔ細胞および／またはエフェクターメモリーＣＤ４＋
Ｔ細胞が、前記抗体と接触させた腫瘍において増加する、項目６５から１１７のいずれか一項に記載の抗体。
（項目１１９）
前記抗体を投与した動物においてＴｈ１応答を増強させる、項目６５から１１８のいずれか一項に記載の抗体。
（項目１２０）
ＦｃγＲＩＩａおよび／またはＦｃγＲＩＩｂに対して、アフコシル化されていない同じ抗ＴＩＧＩＴ抗体と比較して低い結合親和性を有する、項目６５から１１９のいずれか一項に記載の抗体。
（項目１２１）
前記組成物が、単球マクロファージの存在下において、ＴＩＧＩＴを発現する細胞の抗体依存性細胞ファゴサイトーシス（ＡＤＣＰ）を媒介する、項目６５から１２０のいずれか一項に記載の抗体。
（項目１２２）
モノクローナルである、項目６５から１２１のいずれか一項に記載の抗体。
（項目１２３）
完全ヒト抗体である、項目６５〜１２２のいずれか一項に記載の抗体。
（項目１２４）
キメラ抗体である、項目６５〜１２３のいずれか一項に記載の抗体。
（項目１２５）
ヒト化抗体である、項目６５から９２および１０９から１２４のいずれか一項に記載の抗体。
（項目１２６）
抗体断片である、項目６５から１２５のいずれか一項に記載の抗体。
（項目１２７）
前記抗体断片が、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’） ２ 、ｓｃＦｖ、またはダイアボディである、項目１２６に記載の抗体。
（項目１２８）
二重特異性抗体である、項目６５から１２７のいずれか一項に記載の抗体。
（項目１２９）
抗体−薬物コンジュゲートである、項目６５から１２８のいずれか一項に記載の抗体。
（項目１３０）
項目１から６４のいずれか一項に記載の組成物または項目６５から１２９のいずれか一項に記載の抗体と、薬学的に許容される担体とを含む医薬製剤。
（項目１３１）
（ｉ）項目１０６から１０８のいずれか一項に記載の抗体の重鎖、（ｉｉ）項目１０６から１０８のいずれか一項に記載の抗体の軽鎖、または（ｉｉｉ）項目１０６から１０８のいずれか一項に記載の抗体の重鎖および軽鎖をコードする、単離されたポリヌクレオチド。
（項目１３２）
（ｉ）配列番号２５９、２６１、１６３、２６５、２６７、２６９、および２７１から選択されるヌクレオチド配列、または（ｉｉ）配列番号２７３のヌクレオチド配列、または（ｉｉｉ）配列番号２５９、２６１、２６３、２６５、２６７、２６９、および２７１から選択されるヌクレオチド配列、ならびに配列番号２７３のヌクレオチド配列を含む、項目１３１に記載の単離されたポリヌクレオチド。
（項目１３３）
項目１３１または項目１３２に記載のポリヌクレオチドを含むベクター。
（項目１３４）
項目１３１もしくは項目１３２に記載の単離されたポリヌクレオチドまたは項目１３３に記載のベクターを含む、単離された宿主細胞。
（項目１３５）
項目１０６から１０８のいずれか一項に記載の抗体を発現する、単離された宿主細胞。
（項目１３６）
アフコシル化抗体を産生するように操作されている、項目１３４または項目１３５に記載の宿主細胞。
（項目１３７）
ヒトＴＩＧＩＴに結合する抗体を産生させる方法であって、項目１３４から１３６のいずれか一項に記載の宿主細胞を、前記抗体を産生させるのに適切な条件下においてインキュベートすることを含む、方法。
（項目１３８）
前記宿主細胞が、アフコシル化抗体を産生するように操作されている、項目１３７に記載の方法。
（項目１３９）
前記宿主細胞を、フコースアナログの存在下で、アフコシル化抗体を産生させるのに適切な条件下において培養する、項目１３７に記載の方法。
（項目１４０）
前記抗体を単離することをさらに含む、項目１３７から１３９のいずれか一項に記載の方法。
（項目１４１）
ヒトＴＩＧＩＴに結合する単離された抗体の組成物であって、前記組成物中の前記抗体のうちの少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％が、アフコシル化されており、前記抗体が、項目１３８から１４０のいずれか一項に記載の方法によって産生される、組成物。
（項目１４２）
ヒトＴＩＧＩＴに結合する単離された抗体の組成物であって、前記組成物中の前記抗体のうちの少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％が、アフコシル化されており、前記抗体が、項目１３４または項目１３５に記載の宿主細胞を、アフコシル化抗体を産生させるのに適切な条件下においてインキュベートすることと、前記抗体を単離して、前記単離された抗体の組成物を形成することとを含む方法によって産生される、組成物。
（項目１４３）
前記宿主細胞が、アフコシル化抗体を産生するように操作されている、項目１４２に記載の組成物。
（項目１４４）
前記宿主細胞が、フコースアナログの存在下で、アフコシル化抗体を産生させるのに適切な条件下において培養される、項目１４２に記載の組成物。
（項目１４５）
（ｉ）項目１から６３のいずれか一項に記載の組成物の抗体または（ｉｉ）項目６５から１２８のいずれか一項に記載の抗体をコードするヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチドを含む宿主細胞であって、アフコシル化抗体を産生するように操作されている、宿主細胞。
（項目１４６）
前記ポリヌクレオチドが、ベクターである、項目１４５に記載の宿主細胞。
（項目１４７）
（ｉ）項目１から６３のいずれか一項に記載の組成物の抗体または（ｉｉ）項目６５から１２８のいずれか一項に記載の抗体を発現する宿主細胞であって、アフコシル化抗体を産生するように操作されている、宿主細胞。
（項目１４８）
（ａ）配列番号２、配列番号２０、配列番号３８、配列番号５６、配列番号７４、配列番号９２、配列番号１１０、配列番号１２８、配列番号１４６、配列番号１６４、配列番号１８２、配列番号２００、配列番号２５９、配列番号２６５、配列番号２６７、配列番号２６９、もしくは配列番号２７１のヌクレオチド配列、および／または
（ｂ）配列番号１１、配列番号２９、配列番号４７、配列番号６５、配列番号８３、配列番号１０１、配列番号１１９、配列番号１３７、配列番号１５５、配列番号１７３、配列番号１９１、配列番号２０９、もしくは配列番号２７３のヌクレオチド配列
を含む、項目１４５から１４７のいずれか一項に記載の宿主細胞。
（項目１４９）
ＴＩＧＩＴに結合するアフコシル化抗体を産生させる方法であって、項目１４５から１４８のいずれか一項に記載の宿主細胞を、前記アフコシル化抗体を産生させるのに適切な条件下において培養することを含む、方法。
（項目１５０）
ＴＩＧＩＴに結合するアフコシル化抗体を産生させる方法であって、宿主細胞を、フコースアナログの存在下で、アフコシル化抗体を産生させるのに適切な条件下において培養することを含み、前記宿主細胞が、（ｉ）項目１から６３のいずれか一項に記載の組成物の抗体または（ｉｉ）項目６５から１２８のいずれか一項に記載の抗体をコードするヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチドを含む、方法。
（項目１５１）
前記ポリヌクレオチドが、ベクターである、項目１５０に記載の方法。
（項目１５２）
ＴＩＧＩＴに結合するアフコシル化抗体を産生させる方法であって、宿主細胞を、フコースアナログの存在下で、アフコシル化抗体を産生させるのに適切な条件下において培養することを含み、前記宿主細胞が、（ｉ）項目１から６３のいずれか一項に記載の組成物の抗体または（ｉｉ）項目６５から１２８のいずれか一項に記載の抗体を発現する、方法。
（項目１５３）
前記宿主細胞が、
（ａ）配列番号２、配列番号２０、配列番号３８、配列番号５６、配列番号７４、配列番号９２、配列番号１１０、配列番号１２８、配列番号１４６、配列番号１６４、配列番号１８２、配列番号２００、配列番号２５９、配列番号２６５、配列番号２６７、配列番号２６９、もしくは配列番号２７１のヌクレオチド配列、および／または
（ｂ）配列番号１１、配列番号２９、配列番号４７、配列番号６５、配列番号８３、配列番号１０１、配列番号１１９、配列番号１３７、配列番号１５５、配列番号１７３、配列番号１９１、配列番号２０９、もしくは配列番号２７３のヌクレオチド配列
を含む、項目１５０から１５２のいずれか一項に記載の方法。
（項目１５４）
前記フコースアナログが、２−フルオロフコースである、項目１５０から１５３のいずれか一項に記載の方法。
（項目１５５）
前記アフコシル化抗体を単離することをさらに含む、項目１４９から１５４のいずれか一項に記載の方法。
（項目１５６）
ヒトＴＩＧＩＴに結合する単離された抗体の組成物であって、前記組成物中の前記抗体のうちの少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％が、アフコシル化されており、前記抗体が、項目１４９から１５５のいずれか一項に記載の方法によって産生される、組成物。
（項目１５７）
ヒトＴＩＧＩＴに結合する単離された抗体の組成物であって、前記組成物中の前記抗体のうちの少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％が、アフコシル化されており、前記抗体が、項目１４５から１４７のいずれか一項に記載の宿主細胞を、アフコシル化抗体を産生させるのに適切な条件下においてインキュベートすることと、前記抗体を単離して、前記単離された抗体の組成物を形成することとを含む方法によって産生される、組成物。
（項目１５８）
ヒトＴＩＧＩＴに結合する単離された抗体の組成物であって、前記組成物中の前記抗体のうちの少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％が、アフコシル化されており、前記抗体が、宿主細胞を、フコースアナログの存在下で、アフコシル化抗体を産生させるのに適切な条件下において培養することを含む方法によって産生され、前記宿主細胞が、（ｉ）項目１から６３のいずれか一項に記載の組成物の抗体または（ｉｉ）項目６５から１２８のいずれか一項に記載の抗体をコードするヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチドを含む、組成物。
（項目１５９）
ヒトＴＩＧＩＴに結合する単離された抗体の組成物であって、前記組成物中の前記抗体のうちの少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％が、アフコシル化されており、前記抗体が、宿主細胞を、フコースアナログの存在下で、アフコシル化抗体を産生させるのに適切な条件下において培養することを含む方法によって産生され、前記宿主細胞が、（ｉ）項目１から６３のいずれか一項に記載の組成物の抗体または（ｉｉ）項目６５から１２８のいずれか一項に記載の抗体を発現する、組成物。
（項目１６０）
項目１から６４のいずれか一項に記載の組成物、項目６５から１２９のいずれか一項に記載の抗体、または項目１３０に記載の医薬組成物と、
追加の治療剤と
を含むキット。
（項目１６１）
前記追加の治療剤が、抗がん剤である、項目１６０に記載のキット。
（項目１６２）
前記追加の治療剤が、抗体である、項目１６０または項目１６１に記載のキット。
（項目１６３）
前記追加の治療剤が、Ｔ細胞共阻害因子のアンタゴニストもしくは阻害剤、Ｔ細胞共活性化因子のアゴニスト、免疫刺激性サイトカイン、またはＳＧＮ−２ＦＦである、項目１６０から１６２のいずれか一項に記載のキット。
（項目１６４）
前記追加の治療剤が、ＣＤ２５、ＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１、Ｔｉｍ３、Ｌａｇ３、ＣＴＬＡ４、４１ＢＢ、ＯＸ４０、ＣＤ３、ＣＤ４０、ＣＤ４７Ｍ、ＧＭ−ＣＳＦ、ＣＳＦ１Ｒ、ＴＬＲ、ＳＴＩＮＧ、ＲＩＧＩ、ＴＡＭ受容体キナーゼ、ＮＫＧ２Ａ、ＮＫＧ２Ｄ、ＧＤ２、ＨＥＲ２、ＥＧＦＲ、ＰＤＧＦＲα、ＳＬＡＭＦ７、ＶＥＧＦ、ＣＴＬＡ−４、ＣＤ２０、ｃＣＬＢ８、ＫＩＲ、およびＣＤ５２から選択されるタンパク質に結合する、項目１６０から１６３のいずれか一項に記載のキット。
（項目１６５）
前記追加の治療剤が、抗ＣＤ２５抗体、抗ＰＤ−１抗体、抗ＰＤ−Ｌ１抗体、抗Ｔｉｍ３抗体、抗Ｌａｇ３抗体、抗ＣＴＬＡ４抗体、抗４１ＢＢ抗体、抗ＯＸ４０抗体、抗ＣＤ３抗体、抗ＣＤ４０抗体、抗ＣＤ４７Ｍ抗体、抗ＣＳＦ１Ｒ抗体、抗ＴＬＲ抗体、抗ＳＴＩＮＧ抗体、抗ＲＩＧＩ抗体、抗ＴＡＭ受容体キナーゼ抗体、抗ＮＫＧ２Ａ抗体、抗ＮＫＧ２Ｄ抗体、抗ＧＤ２抗体、抗ＨＥＲ２抗体、抗ＥＧＦＲ抗体、抗ＰＤＧＦＲ−α抗体、抗ＳＬＡＭＦ７抗体、抗ＶＥＧＦ抗体、抗ＣＴＬＡ−４抗体、抗ＣＤ２０抗体、抗ｃＣＬＢ８抗体、抗ＫＩＲ抗体、および抗ＣＤ５２抗体から選択される、項目１６０から１６４のいずれか一項に記載のキット。
（項目１６６）
前記追加の治療剤が、ＩＬ−１５、ＩＬ−２１、ＩＬ−２、ＧＭ−ＣＳＦ、Ｍ−ＣＳＦ、Ｇ−ＣＳＦ、ＩＬ−１、ＩＬ−３、ＩＬ−１２、およびＩＦＮγから選択されるサイトカインを含む、項目１６０から１６５のいずれか一項に記載のキット。
（項目１６７）
前記追加の治療剤が、ＳＥＡ−ＣＤ４０、アベルマブ、デュルバルマブ、ニボルマブ、ペンブロリズマブ、ピディリズマブ、アテゾリズマブ、Ｈｕｌ４．１８Ｋ３２２Ａ、Ｈｕ３Ｆ８、ジニツキシマブ、トラスツズマブ、セツキシマブ、オララツマブ、ネシツムマブ、エロツズマブ、ラムシルマブ、ペルツズマブ、イピリムマブ、ベバシズマブ、リツキシマブ、オビヌツズマブ、シルツキシマブ、オファツムマブ、リリルマブ、およびアレムツズマブから選択される、項目１６０から１６５のいずれか一項に記載のキット。
（項目１６８）
前記追加の治療剤が、アルキル化剤（たとえば、シクロホスファミド、イホスファミド、クロラムブシル、ブスルファン、メルファラン、メクロレタミン、ウラムスチン、チオテパ、ニトロソ尿素、もしくはテモゾロミド）、アントラサイクリン（たとえば、ドキソルビシン、アドリアマイシン、ダウノルビシン、エピルビシン、もしくはミトキサントロン）、細胞骨格破壊剤（たとえば、パクリタキセルもしくはドセタキセル）、ヒストンデアセチラーゼ阻害剤（たとえば、ボリノスタットもしくはロミデプシン）、トポイソメラーゼの阻害剤（たとえば、イリノテカン、トポテカン、アムサクリン、エトポシド、もしくはテニポシド）、キナーゼ阻害剤（たとえば、ボルテゾミブ、エルロチニブ、ゲフィチニブ、イマチニブ、ベムラフェニブ、もしくはビスモデギブ）、ヌクレオシドアナログまたは前駆体アナログ（たとえば、アザシチジン、アザチオプリン、カペシタビン、シタラビン、フルオロウラシル、ゲムシタビン、ヒドロキシ尿素、メルカプトプリン、メトトレキサート、もしくはチオグアニン）、ペプチド抗生物質（たとえば、アクチノマイシンもしくはブレオマイシン）、白金系薬剤（たとえば、シスプラチン、オキサロプラチン、もしくはカルボプラチン）、または植物アルカロイド（たとえば、ビンクリスチン、ビンブラスチン、ビノレルビン、ビンデシン、ポドフィロトキシン、パクリタキセル、もしくはドセタキセル）、ガラルディン、サリドマイド、レナリドマイド、およびポマリドミドから選択される、項目１６０または項目１６１に記載のキット。
（項目１６９）
対象におけるがんを処置する方法であって、前記対象に、治療有効量の、項目１から６４のいずれか一項に記載の組成物、項目６５から１２９のいずれか一項に記載の抗体、または項目１３０に記載の医薬組成物を投与することを含む、方法。
（項目１７０）
前記がんが、ＣＤ１１２またはＣＤ１５５の発現が富化されているがんである、項目１６９に記載の方法。
（項目１７１）
前記がんが、ＴＩＧＩＴを発現するＴ細胞またはナチュラルキラー（ＮＫ）細胞が富化されているがんである、項目１６９または項目１７０に記載の方法。
（項目１７２）
前記がんが、膀胱がん、乳がん、子宮がん、子宮頸がん、卵巣がん、前立腺がん、精巣がん、食道がん、消化管がん、胃がん、膵臓がん、結腸直腸がん、結腸がん、腎臓がん、腎明細胞癌、頭頸部がん、肺がん、肺腺癌、胃がん、生殖細胞がん、骨がん、肝臓がん、甲状腺がん、皮膚がん、黒色腫、中枢神経系の新生物、中皮腫、リンパ腫、白血病、慢性リンパ球性白血病、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、濾胞性リンパ腫、ホジキンリンパ腫、骨髄腫、または肉腫である、項目１６９から１７１のいずれか一項に記載の方法。
（項目１７３）
前記がんが、リンパ腫、白血病、慢性リンパ球性白血病、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、濾胞性リンパ腫、またはホジキンリンパ腫である、項目１７２に記載の方法。
（項目１７４）
前記対象に、治療有効量の追加の治療剤を投与することをさらに含む、項目１６９から１７３のいずれか一項に記載の方法。
（項目１７５）
前記追加の治療剤が、抗がん剤である、項目１７４に記載の方法。
（項目１７６）
前記追加の治療剤が、抗体である、項目１７４または項目１７５に記載の方法。
（項目１７７）
前記追加の治療剤が、Ｔ細胞共阻害因子のアンタゴニストもしくは阻害剤、Ｔ細胞共活性化因子のアゴニスト、または免疫刺激性サイトカイン、またはＳＧＮ−２ＦＦである、項目１７４から１７６のいずれか一項に記載の方法。
（項目１７８）
前記追加の治療剤が、ＣＤ２５、ＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１、Ｔｉｍ３、Ｌａｇ３、ＣＴＬＡ４、４１ＢＢ、ＯＸ４０、ＣＤ３、ＣＤ４０、ＣＤ４７Ｍ、ＧＭ−ＣＳＦ、ＣＳＦ１Ｒ、ＴＬＲ、ＳＴＩＮＧ、ＲＩＧＩ、ＴＡＭ受容体キナーゼ、ＮＫＧ２Ａ、ＮＫＧ２Ｄ、ＧＤ２、ＨＥＲ２、ＥＧＦＲ、ＰＤＧＦＲα、ＳＬＡＭＦ７、ＶＥＧＦ、ＣＴＬＡ−４、ＣＤ２０、ｃＣＬＢ８、ＫＩＲ、およびＣＤ５２から選択されるタンパク質に結合する、項目１７４から１７７のいずれか一項に記載の方法。
（項目１７９）
前記追加の治療剤が、抗ＣＤ２５抗体、抗ＰＤ−１抗体、抗ＰＤ−Ｌ１抗体、抗Ｔｉｍ３抗体、抗Ｌａｇ３抗体、抗ＣＴＬＡ４抗体、抗４１ＢＢ抗体、抗ＯＸ４０抗体、抗ＣＤ３抗体、抗ＣＤ４０抗体、抗ＣＤ４７Ｍ抗体、抗ＣＳＦ１Ｒ抗体、抗ＴＬＲ抗体、抗ＳＴＩＮＧ抗体、抗ＲＩＧＩ抗体、抗ＴＡＭ受容体キナーゼ抗体、抗ＮＫＧ２Ａ抗体、抗ＮＫＧ２Ｄ抗体、抗ＧＤ２抗体、抗ＨＥＲ２抗体、抗ＥＧＦＲ抗体、抗ＰＤＧＦＲ−α抗体、抗ＳＬＡＭＦ７抗体、抗ＶＥＧＦ抗体、抗ＣＴＬＡ−４抗体、抗ＣＤ２０抗体、抗ｃＣＬＢ８抗体、抗ＫＩＲ抗体、および抗ＣＤ５２抗体から選択される、項目１７８に記載の方法。
（項目１８０）
前記追加の治療剤が、ＩＬ−１５、ＩＬ−２１、ＩＬ−２、ＧＭ−ＣＳＦ、Ｍ−ＣＳＦ、Ｇ−ＣＳＦ、ＩＬ−１、ＩＬ−３、ＩＬ−１２、およびＩＦＮγから選択されるサイトカインを含む、項目１７４または項目１７５に記載の方法。
（項目１８１）
前記追加の治療剤が、ＳＥＡ−ＣＤ４０、アベルマブ、デュルバルマブ、ニボルマブ、ペンブロリズマブ、ピディリズマブ、アテゾリズマブ、Ｈｕｌ４．１８Ｋ３２２Ａ、Ｈｕ３Ｆ８、ジニツキシマブ、トラスツズマブ、セツキシマブ、オララツマブ、ネシツムマブ、エロツズマブ、ラムシルマブ、ペルツズマブ、イピリムマブ、ベバシズマブ、リツキシマブ、オビヌツズマブ、シルツキシマブ、オファツムマブ、リリルマブ、およびアレムツズマブから選択される、項目１７４から１７９のいずれか一項に記載の方法。
（項目１８２）
前記追加の治療剤が、アルキル化剤（たとえば、シクロホスファミド、イホスファミド、クロラムブシル、ブスルファン、メルファラン、メクロレタミン、ウラムスチン、チオテパ、ニトロソ尿素、もしくはテモゾロミド）、アントラサイクリン（たとえば、ドキソルビシン、アドリアマイシン、ダウノルビシン、エピルビシン、もしくはミトキサントロン）、細胞骨格破壊剤（たとえば、パクリタキセルもしくはドセタキセル）、ヒストンデアセチラーゼ阻害剤（たとえば、ボリノスタットもしくはロミデプシン）、トポイソメラーゼの阻害剤（たとえば、イリノテカン、トポテカン、アムサクリン、エトポシド、もしくはテニポシド）、キナーゼ阻害剤（たとえば、ボルテゾミブ、エルロチニブ、ゲフィチニブ、イマチニブ、ベムラフェニブ、もしくはビスモデギブ）、ヌクレオシドアナログまたは前駆体アナログ（たとえば、アザシチジン、アザチオプリン、カペシタビン、シタラビン、フルオロウラシル、ゲムシタビン、ヒドロキシ尿素、メルカプトプリン、メトトレキサート、もしくはチオグアニン）、ペプチド抗生物質（たとえば、アクチノマイシンもしくはブレオマイシン）、白金系薬剤（たとえば、シスプラチン、オキサロプラチン、もしくはカルボプラチン）、または植物アルカロイド（たとえば、ビンクリスチン、ビンブラスチン、ビノレルビン、ビンデシン、ポドフィロトキシン、パクリタキセル、もしくはドセタキセル）、ガラルディン、サリドマイド、レナリドマイド、およびポマリドミドから選択される、項目１７４または項目１７５に記載の方法。
（項目１８３）
前記組成物、前記抗体、または前記医薬組成物が、前記追加の治療剤と同時に投与される、項目１７４から１８２のいずれか一項に記載の方法。
（項目１８４）
前記組成物、前記抗体、または前記医薬組成物が、前記追加の治療剤に対して逐次的に投与される、項目１７４から１８３のいずれか一項に記載の方法。
一部の実施形態では、抗ＴＩＧＩＴ抗体は、重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３、ならびに軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３を含み、ここで、ＣＤＲのうちの１つまたは複数（たとえば、１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、または６つ）は、表Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、およびＥに示される重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３、ならびに軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３から選択される。
Figure 2021534196
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Figure 2021534196
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一部の実施形態では、抗ＴＩＧＩＴ抗体は、（ｉ）配列番号２２４、配列番号２９３、または配列番号２９４のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１配列、（ｉｉ）配列番号２２７または配列番号２９１のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２配列、（ｉｉｉ）配列番号２３０または配列番号２９６のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３配列、（ｉｖ）配列番号６７または配列番号２８７のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１配列、（ｖ）配列番号６９または配列番号２８８のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２配列、および（ｖｉ）配列番号７１のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３配列を含む。

Claims (184)

  1. ヒトＴＩＧＩＴ（ＩｇドメインおよびＩＴＩＭドメインを有するＴ細胞免疫受容体）に結合する単離された抗体を含む組成物であって、前記抗体が、ヒトＴＩＧＩＴに対して、５ｎＭ未満の結合親和性（ＫＤ）を有し、前記組成物中の前記抗体のうちの少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％が、アフコシル化されている、組成物。
  2. 前記抗体が、ヒトＴＩＧＩＴに対して、１ｎＭ未満のＫＤを有する、請求項１に記載の組成物。
  3. 前記抗体が、ヒトＴＩＧＩＴに対して、１００ｐＭ未満のＫＤを有する、請求項１に記載の組成物。
  4. 前記抗体が、カニクイザルＴＩＧＩＴおよび／またはマウスＴＩＧＩＴとの交差反応性を示す、請求項１から３のいずれか一項に記載の組成物。
  5. 前記抗体が、カニクイザルＴＩＧＩＴおよびマウスＴＩＧＩＴの両方との交差反応性を示す、請求項４に記載の組成物。
  6. 前記抗体が、ＴＩＧＩＴへのＣＤ１５５の結合を遮断する、請求項１から５のいずれか一項に記載の組成物。
  7. 前記抗体が、ＴＩＧＩＴへのＣＤ１１２の結合を遮断する、請求項１から５のいずれか一項に記載の組成物。
  8. 前記抗体が、ＴＩＧＩＴへのＣＤ１５５およびＣＤ１１２の両方の結合を遮断する、請求項１から５のいずれか一項に記載の組成物。
  9. 前記抗体が、ヒトＴＩＧＩＴへの結合に関して、配列番号５５のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域および配列番号６４のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む抗体と競合する、請求項１から８のいずれか一項に記載の組成物。
  10. 前記抗体が、ヒトＴＩＧＩＴに結合するときに、アミノ酸８１位および８２位のうちの一方または両方に結合する、請求項１から９のいずれか一項に記載の組成物。
  11. 前記抗体が、アミノ酸８１位および８２位の両方に結合する、請求項１０に記載の組成物。
  12. アミノ酸８１位および８２位が、Ｐｈｅ８１およびＬｙｓ８２である、請求項１０または１１に記載の組成物。
  13. 前記抗体が、アミノ酸８１位および８２位のうちの一方または両方を含むヒトＴＩＧＩＴ上のエピトープに結合する、請求項１から１２のいずれか一項に記載の組成物。
  14. ヒトＴＩＧＩＴに結合する単離された抗体を含む組成物であって、前記抗体が、ヒトＴＩＧＩＴに結合するときに、アミノ酸８１位および８２位のうちの一方または両方に結合し、前記組成物中の前記抗体のうちの少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％が、アフコシル化されている、組成物。
  15. 前記抗体が、アミノ酸８１位および８２位の両方に結合する、請求項１４に記載の組成物。
  16. アミノ酸８１位および８２位が、Ｐｈｅ８１およびＬｙｓ８２である、請求項１４または請求項１５に記載の組成物。
  17. ヒトＴＩＧＩＴに結合する単離された抗体を含む組成物であって、前記抗体が、アミノ酸８１位および８２位のうちの一方または両方を含むヒトＴＩＧＩＴ上のエピトープに結合し、前記組成物中の前記抗体のうちの少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％が、アフコシル化されている、組成物。
  18. 前記エピトープが、８１位におけるＰｈｅを含む、請求項１３または請求項１７に記載の組成物。
  19. 前記エピトープが、８２位におけるＬｙｓまたはＳｅｒを含む、請求項１３、１７、および１８のいずれか一項に記載の組成物。
  20. 前記エピトープが、８１位におけるＰｈｅおよび８２位におけるＬｙｓまたはＳｅｒを含む、請求項１３および１７から１９のいずれか一項に記載の組成物。
  21. 前記エピトープが、Ｐｈｅ８１およびＬｙｓ８２を含む、請求項２０に記載の組成物。
  22. 前記エピトープが、非連続的エピトープである、請求項１３および１７から２１のいずれか一項に記載の組成物。
  23. 前記抗体が、アミノ酸５１位、５２位、５３位、５４位、５５位、７３位、７４位、７５位、７６位、７７位、７９位、８３位、８４位、８５位、８６位、８７位、８８位、８９位、９０位、９１位、９２位、または９３位のうちの１つまたは複数をさらに含むヒトＴＩＧＩＴ上のエピトープに結合する、請求項１３および１７から２２のいずれか一項に記載の組成物。
  24. 前記エピトープが、Ｔｈｒ５１、Ａｌａ５２、Ｇｌｎ５３、Ｖａｌ５４、Ｔｈｒ５５、Ｌｅｕ７３、Ｇｌｙ７４、Ｔｒｐ７５、Ｈｉｓ７６、Ｉｌｅ７７、Ｐｒｏ７９、Ａｓｐ８３、Ａｒｇ８４、Ｖａｌ８５、Ａｌａ８６、Ｐｒｏ８７、Ｇｌｙ８８、Ｐｒｏ８９、Ｇｌｙ９０、Ｌｅｕ９１、Ｇｌｙ９２、およびＬｅｕ９３からなる群から選択される１つまたは複数のアミノ酸残基をさらに含む、請求項２３に記載の組成物。
  25. 前記エピトープが、アミノ酸残基Ｔｈｒ５１、Ａｌａ５２、Ｇｌｎ５３、Ｖａｌ５４、Ｔｈｒ５５、Ｇｌｙ７４、Ｔｒｐ７５、Ｈｉｓ７６、Ｉｌｅ７７、Ｐｈｅ８１、Ｌｙｓ８２、Ｐｒｏ８７、Ｇｌｙ８８、Ｐｒｏ８９、Ｇｌｙ９０、Ｌｅｕ９１、Ｇｌｙ９２、およびＬｅｕ９３を含む、請求項２４に記載の組成物。
  26. 前記エピトープが、アミノ酸残基Ａｌａ５２、Ｇｌｎ５３、Ｌｅｕ７３、Ｇｌｙ７４、Ｔｒｐ７５、Ｐｒｏ７９、Ｐｈｅ８１、Ｌｙｓ８２、Ａｓｐ８３、Ａｒｇ８４、Ｖａｌ８５、およびＡｌａ８６を含む、請求項２４に記載の組成物。
  27. 前記エピトープが、配列ＩＣＮＡＤＬＧＷＨＩＳＰＳＦＫ（配列番号２５８）を含む、請求項１３および１７から２６のいずれか一項に記載の組成物。
  28. ヒトＴＩＧＩＴが、配列番号２１８の配列を含む、請求項１から２７のいずれか一項に記載の組成物。
  29. 前記抗体のそれぞれが、
    （ａ）配列番号４、配列番号２２、配列番号４０、配列番号５８、配列番号７６、配列番号９４、配列番号１１２、配列番号１３０、配列番号１４８、配列番号１６６、配列番号１８４、配列番号２０２、配列番号２２１、配列番号２２４、配列番号２２６、配列番号２３１、配列番号２３３、配列番号２３９、配列番号２４３、配列番号２８３、配列番号２８４、配列番号２９３、配列番号２９４、配列番号２８９、および配列番号２９０から選択される配列を含む重鎖ＣＤＲ１、
    （ｂ）配列番号６、配列番号２４、配列番号４２、配列番号６０、配列番号７８、配列番号９６、配列番号１１４、配列番号１３２、配列番号１５０、配列番号１６８、配列番号１８６、配列番号２０４、配列番号２２２、配列番号２２５、配列番号２２７、配列番号２２９、配列番号２３２、配列番号２３４、配列番号２３８、配列番号２４０、配列番号２８５、配列番号２９７、配列番号２９１、および配列番号２９５から選択される配列を含む重鎖ＣＤＲ２、
    （ｃ）配列番号８、配列番号２６、配列番号４４、配列番号６２、配列番号８０、配列番号９８、配列番号１１６、配列番号１３４、配列番号１５２、配列番号１７０、配列番号１８８、配列番号２０６、配列番号２２３、配列番号２２８、配列番号２３０、配列番号２３５、配列番号２３６、配列番号２３７、配列番号２４１、配列番号２４２、配列番号２４４、配列番号２８６、配列番号２９２、および配列番号２９６から選択される配列を含む重鎖ＣＤＲ３、
    （ｄ）配列番号１３、配列番号３１、配列番号４９、配列番号６７、配列番号８５、配列番号１０３、配列番号１２１、配列番号１３９、配列番号１５７、配列番号１７５、配列番号１９３、配列番号２１１、および配列番号２８７から選択される配列を含む軽鎖ＣＤＲ１、
    （ｅ）配列番号１５、配列番号３３、配列番号５１、配列番号６９、配列番号８７、配列番号１０５、配列番号１２３、配列番号１４１、配列番号１５９、配列番号１７７、配列番号１９５、配列番号２１３、および配列番号２８８から選択される配列を含む軽鎖ＣＤＲ２、または
    （ｆ）配列番号１７、配列番号３５、配列番号５３、配列番号７１、配列番号８９、配列番号１０７、配列番号１２５、配列番号１４３、配列番号１６１、配列番号１７９、配列番号１９７、および配列番号２１５から選択される配列を含む軽鎖ＣＤＲ３
    のうちの１つまたは複数を含む、請求項１から２８のいずれか一項に記載の組成物。
  30. 前記抗体のそれぞれが、
    （ａ）配列番号５８、配列番号２８３、配列番号２８４、配列番号２２４、配列番号２９３、配列番号２９４、配列番号２２６、配列番号２８９、および配列番号２９０から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１配列、
    （ｂ）配列番号６０、配列番号２８５、配列番号２２５、配列番号２９７、配列番号２２７、配列番号２９１、配列番号２２９、および配列番号２９５から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２配列、
    （ｃ）配列番号６２、配列番号２８６、配列番号２２８、配列番号２９２、配列番号２３０、および配列番号２９６から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３配列、
    （ｄ）配列番号６７および配列番号２８７から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１配列、
    （ｅ）配列番号６９および配列番号２８８から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２配列、ならびに／または
    （ｆ）配列番号７１のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３配列
    を含む、請求項２９に記載の組成物。
  31. 前記抗体のそれぞれが、
    （ａ）それぞれ、配列番号４、６、８、１３、１５、および１７、または
    （ｂ）それぞれ、配列番号２２、２４、２６、３１、３３、および３５、または
    （ｃ）それぞれ、配列番号４０、４２、４４、４９、５１、および５３、または
    （ｄ）それぞれ、配列番号５８、６０、６２、６７、６９、および７１、または
    （ｅ）それぞれ、配列番号２８３、２８５、６２、２８７、２８８、および７１、または
    （ｆ）それぞれ、配列番号２８４、６０、２８６、６７、６９、および７１、または
    （ｇ）それぞれ、配列番号７６、７８、８０、８５、８７、および８９、または
    （ｈ）それぞれ、配列番号９４、９６、９８、１０３、１０５、および１０７、または
    （ｉ）それぞれ、配列番号１１２、１１４、１１６、１２１、１２３、および１２５、または
    （ｊ）それぞれ、配列番号１３０、１３２、１３４、１３９、１４１、および１４３、または
    （ｋ）それぞれ、配列番号１４８、１５０、１５２、１５７、１５９、および１６１、または
    （ｌ）それぞれ、配列番号１６６、１６８、１７０、１７５、１７７、および１７９、または
    （ｍ）それぞれ、配列番号１８４、１８６、１８８、１９３、１９５、および１９７、または
    （ｎ）それぞれ、配列番号２０２、２０４、２０６、２１１、２１３、および２１５、または
    （ｏ）それぞれ、配列番号２２１、２２２、２２３、１３、１５、および１７、または
    （ｐ）それぞれ、配列番号２２４、２２５、６２、６７、６９、および７１、または
    （ｑ）それぞれ、配列番号２９３、２９７、６２、２８７、２８８、および７１、または
    （ｒ）それぞれ、配列番号２９４、２２５、２８６、６７、６９、および７１、または
    （ｓ）それぞれ、配列番号２２６、２２７、２２８、６７、６９、および７１、または
    （ｔ）それぞれ、配列番号２８９、２９１、２２８、２８７、２８８、および７１、または
    （ｕ）それぞれ、配列番号２９０、２２７、２９２、６７、６９、および７１、または
    （ｖ）それぞれ、配列番号２２４、２２９、２３０、６７、６９、および７１、または
    （ｗ）それぞれ、配列番号２９３、２９５、２３０、２８７、２８８、および７１、または
    （ｘ）それぞれ、配列番号２９４、２２９、２９６、６７、６９、および７１、または
    （ｙ）それぞれ、配列番号２２４、２２７、２３０、６７、６９、および７１、または
    （ｚ）それぞれ、配列番号２９３、２９０、２３０、２８７、２８８、および７１、または
    （ａａ）それぞれ、配列番号２９４、２９０、２３０、６７、６９、および７１、または
    （ｂｂ）それぞれ、配列番号２３１、２３２、２３５、１０３、１０５、および１０７、または
    （ｃｃ）それぞれ、配列番号２３３、２３４、２３６、１０３、１０５、および１０７、または
    （ｄｄ）それぞれ、配列番号２３３、２３４、２３７、１０３、１０５、および１０７、または
    （ｅｅ）それぞれ、配列番号１６６、２３８、１７０、１７５、１７７、および１７９、または
    （ｆｆ）それぞれ、配列番号２３９、２４０、１７０、１７５、１７７、および１７９、または
    （ｇｇ）それぞれ、配列番号２３９、２４０、２４１、１７５、１７７、および１７９、または
    （ｈｈ）それぞれ、配列番号２３９、２４０、２４２、１７５、１７７、および１７９、または
    （ｉｉ）それぞれ、配列番号２４３、１６８、２４４、１７５、１７７、および１７９
    の配列を含む重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３、ならびに軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ、およびＣＤＲ３を含む、請求項２９または請求項３０に記載の組成物。
  32. 前記抗体のそれぞれが、
    （ａ）それぞれ、配列番号５８、６０、６２、６７、６９、および７１、または
    （ｂ）それぞれ、配列番号２８３、２８５、６２、２８７、２８８、および７１、または
    （ｃ）それぞれ、配列番号２８４、６０、２８６、６７、６９、および７１
    の配列を含む重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３、ならびに軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ、およびＣＤＲ３を含む、請求項１から３１のいずれか一項に記載の組成物。
  33. 前記抗体のそれぞれが、
    （ａ）配列番号１、配列番号１９、配列番号３７、配列番号５５、配列番号７３、配列番号９１、配列番号１０９、配列番号１２７、配列番号１４５、配列番号１６３、配列番号１８１、配列番号１９９、配列番号２４５、配列番号２４６、配列番号２４７、配列番号２４８、配列番号２４９、配列番号２５０、配列番号２５１、配列番号２５２、配列番号２５３、配列番号２５４、配列番号２５５、配列番号２５６、または配列番号２５７に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、ならびに／または
    （ｂ）配列番号１０、配列番号２８、配列番号４６、配列番号６４、配列番号８２、配列番号１００、配列番号１１８、配列番号１３６、配列番号１５４、配列番号１７２、配列番号１９０、または配列番号２０８に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域
    を含む、請求項１から３２のいずれか一項に記載の組成物。
  34. 前記抗体のそれぞれが、
    （ａ）配列番号１もしくは配列番号２４５に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号１０に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、または
    （ｂ）配列番号１９に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号２８に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、または
    （ｃ）配列番号３７に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号４６に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、または
    （ｄ）配列番号５５、配列番号２４６、配列番号２４７、配列番号２４８、もしくは配列番号２４９のうちのいずれか１つに対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号６４に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、または
    （ｅ）配列番号７３に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号８２に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、または
    （ｆ）配列番号９１、配列番号２５０、配列番号２５１、もしくは配列番号２５２のうちのいずれか１つに対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号１００に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、または
    （ｇ）配列番号１０９に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号１１８に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、または
    （ｈ）配列番号１２７に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号１３６に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、または
    （ｉ）配列番号１４５に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号１５４に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、または
    （ｊ）配列番号１６３、配列番号２５３、配列番号２５４、配列番号２５５、配列番号２５６、もしくは配列番号２５７のうちのいずれか１つに対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号１７２に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、または
    （ｋ）配列番号１８１に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号１９０に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、または
    （ｌ）配列番号１９９に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号２０８に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域
    を含む、請求項１から３３のいずれか一項に記載の組成物。
  35. 前記抗体のそれぞれが、
    （ａ）配列番号１もしくは配列番号２４５のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号１０のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、または
    （ｂ）配列番号１９のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号２８のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、または
    （ｃ）配列番号３７のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号４６のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、または
    （ｄ）配列番号５５、配列番号２４６、配列番号２４７、配列番号２４８、もしくは配列番号２４９のうちのいずれか１つのアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号６４のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、または
    （ｅ）配列番号７３のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号８２のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、または
    （ｆ）配列番号９１、配列番号２５０、配列番号２５１、もしくは配列番号２５２のうちのいずれか１つのアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号１００のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、または
    （ｇ）配列番号１０９のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号１１８のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、または
    （ｈ）配列番号１２７のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号１３６のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、または
    （ｉ）配列番号１４５のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号１５４のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、または
    （ｊ）配列番号１６３、配列番号２５３、配列番号２５４、配列番号２５５、配列番号２５６、もしくは配列番号２５７のうちのいずれか１つのアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号１７２のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、または
    （ｋ）配列番号１８１のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号１９０のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、または
    （ｌ）配列番号１９９のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号２０８のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域
    を含む、請求項３４に記載の組成物。
  36. 前記抗体のそれぞれが、配列番号５５のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号６４のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む、請求項１から３５のいずれか一項に記載の組成物。
  37. 前記抗体が、ＩｇＧ抗体である、請求項１から３６のいずれか１項に記載の組成物。
  38. 前記抗体が、ＩｇＧ１抗体またはＩｇＧ３抗体である、請求項３７に記載の組成物。
  39. 前記抗体のそれぞれが、配列番号２６０、２６２、２６４、２６６、２６８、２７０、および２７２から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖、ならびに配列番号２７４のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む、請求項１から３８のいずれか一項に記載の組成物。
  40. 前記抗体のそれぞれが、配列番号２６０のアミノ酸配列を含む重鎖、および配列番号２７４のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む、請求項３９に記載の組成物。
  41. 前記抗体のそれぞれが、配列番号２６０のアミノ酸配列からなる重鎖、および配列番号２７４のアミノ酸配列からなる軽鎖を含む、請求項３９に記載の組成物。
  42. ヒトＴＩＧＩＴに結合する単離された抗体を含む組成物であって、前記組成物中の前記抗体のうちの少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％が、アフコシル化されており、前記抗体のそれぞれが、配列番号２６０のアミノ酸配列を含む重鎖および配列番号２７４のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む、組成物。
  43. ヒトＴＩＧＩＴに結合する単離された抗体を含む組成物であって、前記組成物中の前記抗体のうちの少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％が、アフコシル化されており、前記抗体のそれぞれが、配列番号２６０のアミノ酸配列からなる重鎖および配列番号２７４のアミノ酸配列からなる軽鎖を含む、組成物。
  44. 前記抗体が、抗ＰＤ−１抗体または抗ＰＤ−Ｌ１抗体との相乗作用を示す、請求項１から４３のいずれか一項に記載の組成物。
  45. 相乗作用が、（ｉ）ＰＤ−１、ＴＩＧＩＴ、およびＣＤ２２６を発現するＪｕｒｋａｔエフェクター細胞であって、ＩＬ−２プロモーターによって駆動されるルシフェラーゼレポーター遺伝子を含むＪｕｒｋａｔエフェクター細胞、ならびに（ｉｉ）ＴＣＲ活性化因子、ＰＤ−Ｌ１、およびＣＤ１５５を発現するＣＨＯ−Ｋ１人工抗原提示細胞（ａＡＰＣ）を含む共培養物を、前記組成物および抗ＰＤ−１抗体または抗ＰＤ−Ｌ１抗体と接触させることを含むアッセイを使用して、決定される、請求項４４に記載の組成物。
  46. 制御性Ｔ（Ｔｒｅｇ）細胞が、前記組成物と接触させたヒトＰＢＭＣから枯渇される、請求項１から４５のいずれか一項に記載の組成物。
  47. ＭＣＰ１、ＩＬ−８、およびＭＩＰ１αの発現が、前記組成物と接触させたヒトＰＢＭＣにおいて増加する、請求項１から４６のいずれか一項に記載の組成物。
  48. 単球／マクロファージが、前記組成物と接触させると活性化される、請求項１から４７のいずれか一項に記載の組成物。
  49. ＣＤ８６およびＭＨＣＩＩが、ＣＤ１４＋単球／マクロファージを前記組成物と接触させると、上方調節される、請求項１から４８のいずれか一項に記載の組成物。
  50. 前記組成物と接触させたＣＤ１４＋単球／マクロファージが、抗原提示細胞へと成熟する、請求項１から４９のいずれか一項に記載の組成物。
  51. 前記組成物と接触させたメモリーＴ細胞が、抗原に応答したＩＦＮγ産生の増加を示す、請求項１から５０のいずれか一項に記載の組成物。
  52. 前記組成物と接触させたメモリーＴ細胞が、抗原に対する応答の増強を示す、請求項１から５１のいずれか一項に記載の組成物。
  53. エフェクターメモリーＣＤ８＋ Ｔ細胞および／またはエフェクターメモリーＣＤ４＋ Ｔ細胞が、前記組成物と接触させた腫瘍において増加する、請求項１から５２のいずれか一項に記載の組成物。
  54. 前記組成物が、前記組成物を投与した動物においてＴｈ１応答を増強させる、請求項１から５３のいずれか一項に記載の組成物。
  55. 前記組成物中の前記抗体が、ＦｃγＲＩＩａおよび／またはＦｃγＲＩＩｂに対して、アフコシル化されていない同じ抗ＴＩＧＩＴ抗体と比較して低い結合親和性を有する、請求項１から５４のいずれか一項に記載の組成物。
  56. 前記組成物が、単球マクロファージの存在下において、ＴＩＧＩＴを発現する細胞の抗体依存性細胞ファゴサイトーシス（ＡＤＣＰ）を媒介する、請求項１から５５のいずれか一項に記載の組成物。
  57. 前記抗体が、モノクローナルである、請求項１から５６のいずれか一項に記載の組成物。
  58. 前記抗体が、完全ヒト抗体である、請求項１から５７のいずれか一項に記載の組成物。
  59. 前記抗体が、キメラ抗体である、請求項１から５８のいずれか一項に記載の組成物。
  60. 前記抗体が、ヒト化抗体である、請求項１から２８および４４から５９のいずれか一項に記載の組成物。
  61. 前記抗体が、抗体断片である、請求項１から６０のいずれか一項に記載の組成物。
  62. 前記抗体断片が、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、ｓｃＦｖ、またはダイアボディである、請求項６１に記載の組成物。
  63. 前記抗体が、二重特異性抗体である、請求項１から６２のいずれか一項に記載の組成物。
  64. 前記抗体が、抗体−薬物コンジュゲートである、請求項１から６３のいずれか一項に記載の組成物。
  65. ヒトＴＩＧＩＴ（ＩｇドメインおよびＩＴＩＭドメインを有するＴ細胞免疫受容体）に結合する抗体であって、ヒトＴＩＧＩＴに対して、５ｎＭ未満の結合親和性（ＫＤ）を有し、アフコシル化されている、抗体。
  66. ヒトＴＩＧＩＴに対して、１ｎＭ未満のＫＤを有する、請求項６５に記載の抗体。
  67. ヒトＴＩＧＩＴに対して、１００ｐＭ未満のＫＤを有する、請求項６６に記載の抗体。
  68. カニクイザルＴＩＧＩＴおよび／またはマウスＴＩＧＩＴとの交差反応性を示す、請求項６５から６７のいずれか一項に記載の抗体。
  69. カニクイザルＴＩＧＩＴおよびマウスＴＩＧＩＴの両方との交差反応性を示す、請求項６８に記載の抗体。
  70. ＴＩＧＩＴへのＣＤ１５５の結合を遮断する、請求項６５から６９のいずれか一項に記載の抗体。
  71. ＴＩＧＩＴへのＣＤ１１２の結合を遮断する、請求項６５から７０のいずれか一項に記載の抗体。
  72. ＴＩＧＩＴへのＣＤ１５５およびＣＤ１１２の両方の結合を遮断する、請求項６５から７１のいずれか一項に記載の抗体。
  73. ヒトＴＩＧＩＴへの結合に関して、配列番号５５のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域および配列番号６４のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む抗体と競合する、請求項６５から７２のいずれか一項に記載の抗体。
  74. ヒトＴＩＧＩＴに結合するときに、アミノ酸８１位および８２位のうちの一方または両方に結合する、請求項６５から７３のいずれか一項に記載の抗体。
  75. アミノ酸８１位および８２位の両方に結合する、請求項７４に記載の抗体。
  76. アミノ酸８１位および８２位が、Ｐｈｅ８１およびＬｙｓ８２である、請求項７４または７５に記載の抗体。
  77. アミノ酸８１位および８２位のうちの一方または両方を含むヒトＴＩＧＩＴ上のエピトープに結合する、請求項６５から７６のいずれか一項に記載の抗体。
  78. ヒトＴＩＧＩＴに結合する抗体であって、ヒトＴＩＧＩＴに結合するときに、アミノ酸８１位および８２位のうちの一方または両方に結合する、アフコシル化されている、抗体。
  79. アミノ酸８１位および８２位の両方に結合する、請求項７８に記載の抗体。
  80. アミノ酸８１位および８２位が、Ｐｈｅ８１およびＬｙｓ８２である、請求項７８または請求項７９に記載の抗体。
  81. ヒトＴＩＧＩＴに結合する抗体であって、アミノ酸８１位および８２位のうちの一方または両方を含むヒトＴＩＧＩＴ上のエピトープに結合し、アフコシル化されている、抗体。
  82. 前記エピトープが、８１位におけるＰｈｅを含む、請求項７７または請求項８１に記載の抗体。
  83. 前記エピトープが、８２位におけるＬｙｓまたはＳｅｒを含む、請求項７７、８１、および８２のいずれか一項に記載の抗体。
  84. 前記エピトープが、８１位におけるＰｈｅおよび８２位におけるＬｙｓまたはＳｅｒを含む、請求項７７および８１から８３のいずれか一項に記載の抗体。
  85. 前記エピトープが、Ｐｈｅ８１およびＬｙｓ８２を含む、請求項８４に記載の抗体。
  86. 前記エピトープが、非連続的エピトープである、請求項７７および８１から８５のいずれか一項に記載の抗体。
  87. アミノ酸５１位、５２位、５３位、５４位、５５位、７３位、７４位、７５位、７６位、７７位、７９位、８３位、８４位、８５位、８６位、８７位、８８位、８９位、９０位、９１位、９２位、または９３位のうちの１つまたは複数をさらに含むヒトＴＩＧＩＴ上のエピトープに結合する、請求項７７および８１から８６のいずれか一項に記載の抗体。
  88. 前記エピトープが、Ｔｈｒ５１、Ａｌａ５２、Ｇｌｎ５３、Ｖａｌ５４、Ｔｈｒ５５、Ｌｅｕ７３、Ｇｌｙ７４、Ｔｒｐ７５、Ｈｉｓ７６、Ｉｌｅ７７、Ｐｒｏ７９、Ａｓｐ８３、Ａｒｇ８４、Ｖａｌ８５、Ａｌａ８６、Ｐｒｏ８７、Ｇｌｙ８８、Ｐｒｏ８９、Ｇｌｙ９０、Ｌｅｕ９１、Ｇｌｙ９２、およびＬｅｕ９３からなる群から選択される１つまたは複数のアミノ酸残基をさらに含む、請求項８７に記載の抗体。
  89. 前記エピトープが、アミノ酸残基Ｔｈｒ５１、Ａｌａ５２、Ｇｌｎ５３、Ｖａｌ５４、Ｔｈｒ５５、Ｇｌｙ７４、Ｔｒｐ７５、Ｈｉｓ７６、Ｉｌｅ７７、Ｐｈｅ８１、Ｌｙｓ８２、Ｐｒｏ８７、Ｇｌｙ８８、Ｐｒｏ８９、Ｇｌｙ９０、Ｌｅｕ９１、Ｇｌｙ９２、およびＬｅｕ９３を含む、請求項８８に記載の抗体。
  90. 前記エピトープが、アミノ酸残基Ａｌａ５２、Ｇｌｎ５３、Ｌｅｕ７３、Ｇｌｙ７４、Ｔｒｐ７５、Ｐｒｏ７９、Ｐｈｅ８１、Ｌｙｓ８２、Ａｓｐ８３、Ａｒｇ８４、Ｖａｌ８５、およびＡｌａ８６を含む、請求項８８に記載の抗体。
  91. 前記エピトープが、配列ＩＣＮＡＤＬＧＷＨＩＳＰＳＦＫ（配列番号２５８）を含む、請求項７７および８１から９０のいずれか一項に記載の抗体。
  92. ヒトＴＩＧＩＴが、配列番号２１８の配列を含む、請求項６５から９１のいずれか一項に記載の抗体。
  93. （ａ）配列番号４、配列番号２２、配列番号４０、配列番号５８、配列番号７６、配列番号９４、配列番号１１２、配列番号１３０、配列番号１４８、配列番号１６６、配列番号１８４、配列番号２０２、配列番号２２１、配列番号２２４、配列番号２２６、配列番号２３１、配列番号２３３、配列番号２３９、配列番号２４３、配列番号２８３、配列番号２８４、配列番号２９３、配列番号２９４、配列番号２８９、および配列番号２９０から選択される配列を含む重鎖ＣＤＲ１、
    （ｂ）配列番号６、配列番号２４、配列番号４２、配列番号６０、配列番号７８、配列番号９６、配列番号１１４、配列番号１３２、配列番号１５０、配列番号１６８、配列番号１８６、配列番号２０４、配列番号２２２、配列番号２２５、配列番号２２７、配列番号２２９、配列番号２３２、配列番号２３４、配列番号２３８、配列番号２４０、配列番号２８５、配列番号２９７、配列番号２９１、および配列番号２９５から選択される配列を含む重鎖ＣＤＲ２、
    （ｃ）配列番号８、配列番号２６、配列番号４４、配列番号６２、配列番号８０、配列番号９８、配列番号１１６、配列番号１３４、配列番号１５２、配列番号１７０、配列番号１８８、配列番号２０６、配列番号２２３、配列番号２２８、配列番号２３０、配列番号２３５、配列番号２３６、配列番号２３７、配列番号２４１、配列番号２４２、配列番号２４４、配列番号２８６、配列番号２９２、および配列番号２９６から選択される配列を含む重鎖ＣＤＲ３、
    （ｄ）配列番号１３、配列番号３１、配列番号４９、配列番号６７、配列番号８５、配列番号１０３、配列番号１２１、配列番号１３９、配列番号１５７、配列番号１７５、配列番号１９３、配列番号２１１、および配列番号２８７から選択される配列を含む軽鎖ＣＤＲ１、
    （ｅ）配列番号１５、配列番号３３、配列番号５１、配列番号６９、配列番号８７、配列番号１０５、配列番号１２３、配列番号１４１、配列番号１５９、配列番号１７７、配列番号１９５、配列番号２１３、および配列番号２８８から選択される配列を含む軽鎖ＣＤＲ２、または
    （ｆ）配列番号１７、配列番号３５、配列番号５３、配列番号７１、配列番号８９、配列番号１０７、配列番号１２５、配列番号１４３、配列番号１６１、配列番号１７９、配列番号１９７、および配列番号２１５から選択される配列を含む軽鎖ＣＤＲ３
    のうちの１つまたは複数を含む、請求項６５から９２のいずれか一項に記載の抗体。
  94. （ａ）配列番号５８、配列番号２８３、配列番号２８４、配列番号２２４、配列番号２９３、配列番号２９４、配列番号２２６、配列番号２８９、および配列番号２９０から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１配列、
    （ｂ）配列番号６０、配列番号２８５、配列番号２２５、配列番号２９７、配列番号２２７、配列番号２９１、配列番号２２９、および配列番号２９５から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２配列、
    （ｃ）配列番号６２、配列番号２８６、配列番号２２８、配列番号２９２、配列番号２３０、および配列番号２９６から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３配列、
    （ｄ）配列番号６７および配列番号２８７から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１配列、
    （ｅ）配列番号６９および配列番号２８８から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２配列、ならびに／または
    （ｆ）配列番号７１のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３配列
    を含む、請求項９３に記載の抗体。
  95. （ａ）それぞれ、配列番号４、６、８、１３、１５、および１７、または
    （ｂ）それぞれ、配列番号２２、２４、２６、３１、３３、および３５、または
    （ｃ）それぞれ、配列番号４０、４２、４４、４９、５１、および５３、または
    （ｄ）それぞれ、配列番号５８、６０、６２、６７、６９、および７１、または
    （ｅ）それぞれ、配列番号７６、７８、８０、８５、８７、および８９、または
    （ｆ）それぞれ、配列番号９４、９６、９８、１０３、１０５、および１０７、または
    （ｇ）それぞれ、配列番号１１２、１１４、１１６、１２１、１２３、および１２５、または
    （ｈ）それぞれ、配列番号１３０、１３２、１３４、１３９、１４１、および１４３、または
    （ｉ）それぞれ、配列番号１４８、１５０、１５２、１５７、１５９、および１６１、または
    （ｊ）それぞれ、配列番号１６６、１６８、１７０、１７５、１７７、および１７９、または
    （ｋ）それぞれ、配列番号１８４、１８６、１８８、１９３、１９５、および１９７、または
    （ｌ）それぞれ、配列番号２０２、２０４、２０６、２１１、２１３、および２１５、または
    （ｍ）それぞれ、配列番号２２１、２２２、２２３、１３、１５、および１７、または
    （ｎ）それぞれ、配列番号２２４、２２５、６２、６７、６９、および７１、または
    （ｏ）それぞれ、配列番号２２６、２２７、２２８、６７、６９、および７１、または
    （ｐ）それぞれ、配列番号２２４、２２９、２３０、６７、６９、および７１、または
    （ｑ）それぞれ、配列番号２２４、２２７、２３０、６７、６９、および７１、または
    （ｒ）それぞれ、配列番号２３１、２３２、２３５、１０３、１０５、および１０７、または
    （ｓ）それぞれ、配列番号２３３、２３４、２３６、１０３、１０５、および１０７、または
    （ｔ）それぞれ、配列番号２３３、２３４、２３７、１０３、１０５、および１０７、または
    （ｕ）それぞれ、配列番号１６６、２３８、１７０、１７５、１７７、および１７９、または
    （ｖ）それぞれ、配列番号２３９、２４０、１７０、１７５、１７７、および１７９、または
    （ｗ）それぞれ、配列番号２３９、２４０、２４１、１７５、１７７、および１７９、または
    （ｘ）それぞれ、配列番号２３９、２４０、２４２、１７５、１７７、および１７９、または
    （ｙ）それぞれ、配列番号２４３、１６８、２４４、１７５、１７７、および１７９
    の配列を含む重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３、ならびに軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ、およびＣＤＲ３を含む、請求項９４に記載の抗体。
  96. （ａ）それぞれ、配列番号５８、６０、６２、６７、６９、および７１、または
    （ｂ）それぞれ、配列番号２８３、２８５、６２、２８７、２８８、および７１、または
    （ｃ）それぞれ、配列番号２８４、６０、２８６、６７、６９、および７１
    の配列を含む重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３、ならびに軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ、およびＣＤＲ３を含む、請求項６５から９５のいずれか一項に記載の抗体。
  97. （ａ）配列番号１、配列番号１９、配列番号３７、配列番号５５、配列番号７３、配列番号９１、配列番号１０９、配列番号１２７、配列番号１４５、配列番号１６３、配列番号１８１、配列番号１９９、配列番号２４５、配列番号２４６、配列番号２４７、配列番号２４８、配列番号２４９、配列番号２５０、配列番号２５１、配列番号２５２、配列番号２５３、配列番号２５４、配列番号２５５、配列番号２５６、または配列番号２５７に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、ならびに／または
    （ｂ）配列番号１０、配列番号２８、配列番号４６、配列番号６４、配列番号８２、配列番号１００、配列番号１１８、配列番号１３６、配列番号１５４、配列番号１７２、配列番号１９０、または配列番号２０８に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域
    を含む、請求項６５から９６のいずれか一項に記載の抗体。
  98. （ａ）配列番号１もしくは配列番号２４５に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号１０に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、または
    （ｂ）配列番号１９に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号２８に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、または
    （ｃ）配列番号３７に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号４６に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、または
    （ｄ）配列番号５５、配列番号２４６、配列番号２４７、配列番号２４８、もしくは配列番号２４９のうちのいずれか１つに対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号６４に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、または
    （ｅ）配列番号７３に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号８２に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、または
    （ｆ）配列番号９１、配列番号２５０、配列番号２５１、もしくは配列番号２５２のうちのいずれか１つに対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号１００に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、または
    （ｇ）配列番号１０９に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号１１８に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、または
    （ｈ）配列番号１２７に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号１３６に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、または
    （ｉ）配列番号１４５に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号１５４に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、または
    （ｊ）配列番号１６３、配列番号２５３、配列番号２５４、配列番号２５５、配列番号２５６、もしくは配列番号２５７のうちのいずれか１つに対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号１７２に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、または
    （ｋ）配列番号１８１に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号１９０に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、または
    （ｌ）配列番号１９９に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号２０８に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域
    を含む、請求項６５から９７のいずれか一項に記載の抗体。
  99. （ａ）配列番号１もしくは配列番号２４５のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号１０のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、または
    （ｂ）配列番号１９のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号２８のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、または
    （ｃ）配列番号３７のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号４６のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、または
    （ｄ）配列番号５５、配列番号２４６、配列番号２４７、配列番号２４８、もしくは配列番号２４９のうちのいずれか１つのアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号６４のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、または
    （ｅ）配列番号７３のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号８２のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、または
    （ｆ）配列番号９１、配列番号２５０、配列番号２５１、もしくは配列番号２５２のうちのいずれか１つのアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号１００のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、または
    （ｇ）配列番号１０９のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号１１８のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、または
    （ｈ）配列番号１２７のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号１３６のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、または
    （ｉ）配列番号１４５のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号１５４のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、または
    （ｊ）配列番号１６３、配列番号２５３、配列番号２５４、配列番号２５５、配列番号２５６、もしくは配列番号２５７のうちのいずれか１つのアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号１７２のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、または
    （ｋ）配列番号１８１のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号１９０のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、または
    （ｌ）配列番号１９９のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号２０８のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域
    を含む、請求項９８に記載の抗体。
  100. 配列番号５５のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号６４のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む、請求項６５から９９のいずれか一項に記載の抗体。
  101. ＩｇＧ抗体である、請求項６５から１００のいずれか一項に記載の抗体。
  102. ＩｇＧ１抗体またはＩｇＧ３抗体である、請求項１０１に記載の抗体。
  103. 配列番号２６０、２６２、２６４、２６６、２６８、２７０、および２７２から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖、ならびに配列番号２７４のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む、請求項６５から１０２のいずれか一項に記載の抗体。
  104. 配列番号２６０のアミノ酸配列を含む重鎖、および配列番号２７４のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む、請求項１０３に記載の抗体。
  105. 配列番号２６０のアミノ酸配列からなる重鎖、および配列番号２７４のアミノ酸配列からなる軽鎖を含む、請求項１０３に記載の抗体。
  106. ヒトＴＩＧＩＴに結合する抗体であって、配列番号２６０、２６２、２６４、２６６、２６８、２７０、および２７２から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖、ならびに配列番号２７４のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む、抗体。
  107. ヒトＴＩＧＩＴに結合する抗体であって、配列番号２６０のアミノ酸配列を含む重鎖、および配列番号２７４のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む、抗体。
  108. ヒトＴＩＧＩＴに結合する抗体であって、配列番号２６０のアミノ酸配列からなる重鎖、および配列番号２７４のアミノ酸配列からなる軽鎖を含む抗体。
  109. 抗ＰＤ−１抗体または抗ＰＤ−Ｌ１抗体との相乗作用を示す、請求項６５から１０８のいずれか一項に記載の抗体。
  110. 相乗作用が、（ｉ）ＰＤ−１、ＴＩＧＩＴ、およびＣＤ２２６を発現するＪｕｒｋａｔエフェクター細胞であって、ＩＬ−２プロモーターによって駆動されるルシフェラーゼレポーター遺伝子を含むＪｕｒｋａｔエフェクター細胞、ならびに（ｉｉ）ＴＣＲ活性化因子、ＰＤ−Ｌ１、およびＣＤ１５５を発現するＣＨＯ−Ｋ１人工抗原提示細胞（ａＡＰＣ）を含む共培養物を、組成物および抗ＰＤ−１抗体または抗ＰＤ−Ｌ１抗体と接触させることを含むアッセイを使用して、決定される、請求項１０９に記載の抗体。
  111. 制御性Ｔ（Ｔｒｅｇ）細胞が、前記抗体と接触させたヒトＰＢＭＣから枯渇される、請求項６５から１１０のいずれか一項に記載の抗体。
  112. ＭＣＰ１、ＩＬ−８、およびＭＩＰ１αの発現が、前記抗体と接触させたヒトＰＢＭＣにおいて増加する、請求項６５から１１１のいずれか一項に記載の抗体。
  113. 単球／マクロファージが、前記抗体と接触させると活性化される、請求項６５から１１２のいずれか一項に記載の抗体。
  114. ＣＤ８６およびＭＨＣＩＩが、ＣＤ１４＋単球／マクロファージを前記抗体と接触させると、上方調節される、請求項６５から１１３のいずれか一項に記載の抗体。
  115. 前記抗体と接触させたＣＤ１４＋単球／マクロファージが、抗原提示細胞へと成熟する、請求項６５から１１４のいずれか一項に記載の抗体。
  116. 前記抗体と接触させたメモリーＴ細胞が、抗原に応答したＩＦＮγ産生の増加を示す、請求項６５から１１５のいずれか一項に記載の抗体。
  117. 前記抗体と接触させたメモリーＴ細胞が、抗原に対する応答の増強を示す、請求項６５から１１６のいずれか一項に記載の抗体。
  118. エフェクターメモリーＣＤ８＋ Ｔ細胞および／またはエフェクターメモリーＣＤ４＋ Ｔ細胞が、前記抗体と接触させた腫瘍において増加する、請求項６５から１１７のいずれか一項に記載の抗体。
  119. 前記抗体を投与した動物においてＴｈ１応答を増強させる、請求項６５から１１８のいずれか一項に記載の抗体。
  120. ＦｃγＲＩＩａおよび／またはＦｃγＲＩＩｂに対して、アフコシル化されていない同じ抗ＴＩＧＩＴ抗体と比較して低い結合親和性を有する、請求項６５から１１９のいずれか一項に記載の抗体。
  121. 前記組成物が、単球マクロファージの存在下において、ＴＩＧＩＴを発現する細胞の抗体依存性細胞ファゴサイトーシス（ＡＤＣＰ）を媒介する、請求項６５から１２０のいずれか一項に記載の抗体。
  122. モノクローナルである、請求項６５から１２１のいずれか一項に記載の抗体。
  123. 完全ヒト抗体である、請求項６５〜１２２のいずれか一項に記載の抗体。
  124. キメラ抗体である、請求項６５〜１２３のいずれか一項に記載の抗体。
  125. ヒト化抗体である、請求項６５から９２および１０９から１２４のいずれか一項に記載の抗体。
  126. 抗体断片である、請求項６５から１２５のいずれか一項に記載の抗体。
  127. 前記抗体断片が、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、ｓｃＦｖ、またはダイアボディである、請求項１２６に記載の抗体。
  128. 二重特異性抗体である、請求項６５から１２７のいずれか一項に記載の抗体。
  129. 抗体−薬物コンジュゲートである、請求項６５から１２８のいずれか一項に記載の抗体。
  130. 請求項１から６４のいずれか一項に記載の組成物または請求項６５から１２９のいずれか一項に記載の抗体と、薬学的に許容される担体とを含む医薬製剤。
  131. （ｉ）請求項１０６から１０８のいずれか一項に記載の抗体の重鎖、（ｉｉ）請求項１０６から１０８のいずれか一項に記載の抗体の軽鎖、または（ｉｉｉ）請求項１０６から１０８のいずれか一項に記載の抗体の重鎖および軽鎖をコードする、単離されたポリヌクレオチド。
  132. （ｉ）配列番号２５９、２６１、１６３、２６５、２６７、２６９、および２７１から選択されるヌクレオチド配列、または（ｉｉ）配列番号２７３のヌクレオチド配列、または（ｉｉｉ）配列番号２５９、２６１、２６３、２６５、２６７、２６９、および２７１から選択されるヌクレオチド配列、ならびに配列番号２７３のヌクレオチド配列を含む、請求項１３１に記載の単離されたポリヌクレオチド。
  133. 請求項１３１または請求項１３２に記載のポリヌクレオチドを含むベクター。
  134. 請求項１３１もしくは請求項１３２に記載の単離されたポリヌクレオチドまたは請求項１３３に記載のベクターを含む、単離された宿主細胞。
  135. 請求項１０６から１０８のいずれか一項に記載の抗体を発現する、単離された宿主細胞。
  136. アフコシル化抗体を産生するように操作されている、請求項１３４または請求項１３５に記載の宿主細胞。
  137. ヒトＴＩＧＩＴに結合する抗体を産生させる方法であって、請求項１３４から１３６のいずれか一項に記載の宿主細胞を、前記抗体を産生させるのに適切な条件下においてインキュベートすることを含む、方法。
  138. 前記宿主細胞が、アフコシル化抗体を産生するように操作されている、請求項１３７に記載の方法。
  139. 前記宿主細胞を、フコースアナログの存在下で、アフコシル化抗体を産生させるのに適切な条件下において培養する、請求項１３７に記載の方法。
  140. 前記抗体を単離することをさらに含む、請求項１３７から１３９のいずれか一項に記載の方法。
  141. ヒトＴＩＧＩＴに結合する単離された抗体の組成物であって、前記組成物中の前記抗体のうちの少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％が、アフコシル化されており、前記抗体が、請求項１３８から１４０のいずれか一項に記載の方法によって産生される、組成物。
  142. ヒトＴＩＧＩＴに結合する単離された抗体の組成物であって、前記組成物中の前記抗体のうちの少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％が、アフコシル化されており、前記抗体が、請求項１３４または請求項１３５に記載の宿主細胞を、アフコシル化抗体を産生させるのに適切な条件下においてインキュベートすることと、前記抗体を単離して、前記単離された抗体の組成物を形成することとを含む方法によって産生される、組成物。
  143. 前記宿主細胞が、アフコシル化抗体を産生するように操作されている、請求項１４２に記載の組成物。
  144. 前記宿主細胞が、フコースアナログの存在下で、アフコシル化抗体を産生させるのに適切な条件下において培養される、請求項１４２に記載の組成物。
  145. （ｉ）請求項１から６３のいずれか一項に記載の組成物の抗体または（ｉｉ）請求項６５から１２８のいずれか一項に記載の抗体をコードするヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチドを含む宿主細胞であって、アフコシル化抗体を産生するように操作されている、宿主細胞。
  146. 前記ポリヌクレオチドが、ベクターである、請求項１４５に記載の宿主細胞。
  147. （ｉ）請求項１から６３のいずれか一項に記載の組成物の抗体または（ｉｉ）請求項６５から１２８のいずれか一項に記載の抗体を発現する宿主細胞であって、アフコシル化抗体を産生するように操作されている、宿主細胞。
  148. （ａ）配列番号２、配列番号２０、配列番号３８、配列番号５６、配列番号７４、配列番号９２、配列番号１１０、配列番号１２８、配列番号１４６、配列番号１６４、配列番号１８２、配列番号２００、配列番号２５９、配列番号２６５、配列番号２６７、配列番号２６９、もしくは配列番号２７１のヌクレオチド配列、および／または
    （ｂ）配列番号１１、配列番号２９、配列番号４７、配列番号６５、配列番号８３、配列番号１０１、配列番号１１９、配列番号１３７、配列番号１５５、配列番号１７３、配列番号１９１、配列番号２０９、もしくは配列番号２７３のヌクレオチド配列
    を含む、請求項１４５から１４７のいずれか一項に記載の宿主細胞。
  149. ＴＩＧＩＴに結合するアフコシル化抗体を産生させる方法であって、請求項１４５から１４８のいずれか一項に記載の宿主細胞を、前記アフコシル化抗体を産生させるのに適切な条件下において培養することを含む、方法。
  150. ＴＩＧＩＴに結合するアフコシル化抗体を産生させる方法であって、宿主細胞を、フコースアナログの存在下で、アフコシル化抗体を産生させるのに適切な条件下において培養することを含み、前記宿主細胞が、（ｉ）請求項１から６３のいずれか一項に記載の組成物の抗体または（ｉｉ）請求項６５から１２８のいずれか一項に記載の抗体をコードするヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチドを含む、方法。
  151. 前記ポリヌクレオチドが、ベクターである、請求項１５０に記載の方法。
  152. ＴＩＧＩＴに結合するアフコシル化抗体を産生させる方法であって、宿主細胞を、フコースアナログの存在下で、アフコシル化抗体を産生させるのに適切な条件下において培養することを含み、前記宿主細胞が、（ｉ）請求項１から６３のいずれか一項に記載の組成物の抗体または（ｉｉ）請求項６５から１２８のいずれか一項に記載の抗体を発現する、方法。
  153. 前記宿主細胞が、
    （ａ）配列番号２、配列番号２０、配列番号３８、配列番号５６、配列番号７４、配列番号９２、配列番号１１０、配列番号１２８、配列番号１４６、配列番号１６４、配列番号１８２、配列番号２００、配列番号２５９、配列番号２６５、配列番号２６７、配列番号２６９、もしくは配列番号２７１のヌクレオチド配列、および／または
    （ｂ）配列番号１１、配列番号２９、配列番号４７、配列番号６５、配列番号８３、配列番号１０１、配列番号１１９、配列番号１３７、配列番号１５５、配列番号１７３、配列番号１９１、配列番号２０９、もしくは配列番号２７３のヌクレオチド配列
    を含む、請求項１５０から１５２のいずれか一項に記載の方法。
  154. 前記フコースアナログが、２−フルオロフコースである、請求項１５０から１５３のいずれか一項に記載の方法。
  155. 前記アフコシル化抗体を単離することをさらに含む、請求項１４９から１５４のいずれか一項に記載の方法。
  156. ヒトＴＩＧＩＴに結合する単離された抗体の組成物であって、前記組成物中の前記抗体のうちの少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％が、アフコシル化されており、前記抗体が、請求項１４９から１５５のいずれか一項に記載の方法によって産生される、組成物。
  157. ヒトＴＩＧＩＴに結合する単離された抗体の組成物であって、前記組成物中の前記抗体のうちの少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％が、アフコシル化されており、前記抗体が、請求項１４５から１４７のいずれか一項に記載の宿主細胞を、アフコシル化抗体を産生させるのに適切な条件下においてインキュベートすることと、前記抗体を単離して、前記単離された抗体の組成物を形成することとを含む方法によって産生される、組成物。
  158. ヒトＴＩＧＩＴに結合する単離された抗体の組成物であって、前記組成物中の前記抗体のうちの少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％が、アフコシル化されており、前記抗体が、宿主細胞を、フコースアナログの存在下で、アフコシル化抗体を産生させるのに適切な条件下において培養することを含む方法によって産生され、前記宿主細胞が、（ｉ）請求項１から６３のいずれか一項に記載の組成物の抗体または（ｉｉ）請求項６５から１２８のいずれか一項に記載の抗体をコードするヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチドを含む、組成物。
  159. ヒトＴＩＧＩＴに結合する単離された抗体の組成物であって、前記組成物中の前記抗体のうちの少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％が、アフコシル化されており、前記抗体が、宿主細胞を、フコースアナログの存在下で、アフコシル化抗体を産生させるのに適切な条件下において培養することを含む方法によって産生され、前記宿主細胞が、（ｉ）請求項１から６３のいずれか一項に記載の組成物の抗体または（ｉｉ）請求項６５から１２８のいずれか一項に記載の抗体を発現する、組成物。
  160. 請求項１から６４のいずれか一項に記載の組成物、請求項６５から１２９のいずれか一項に記載の抗体、または請求項１３０に記載の医薬組成物と、
    追加の治療剤と
    を含むキット。
  161. 前記追加の治療剤が、抗がん剤である、請求項１６０に記載のキット。
  162. 前記追加の治療剤が、抗体である、請求項１６０または請求項１６１に記載のキット。
  163. 前記追加の治療剤が、Ｔ細胞共阻害因子のアンタゴニストもしくは阻害剤、Ｔ細胞共活性化因子のアゴニスト、免疫刺激性サイトカイン、またはＳＧＮ−２ＦＦである、請求項１６０から１６２のいずれか一項に記載のキット。
  164. 前記追加の治療剤が、ＣＤ２５、ＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１、Ｔｉｍ３、Ｌａｇ３、ＣＴＬＡ４、４１ＢＢ、ＯＸ４０、ＣＤ３、ＣＤ４０、ＣＤ４７Ｍ、ＧＭ−ＣＳＦ、ＣＳＦ１Ｒ、ＴＬＲ、ＳＴＩＮＧ、ＲＩＧＩ、ＴＡＭ受容体キナーゼ、ＮＫＧ２Ａ、ＮＫＧ２Ｄ、ＧＤ２、ＨＥＲ２、ＥＧＦＲ、ＰＤＧＦＲα、ＳＬＡＭＦ７、ＶＥＧＦ、ＣＴＬＡ−４、ＣＤ２０、ｃＣＬＢ８、ＫＩＲ、およびＣＤ５２から選択されるタンパク質に結合する、請求項１６０から１６３のいずれか一項に記載のキット。
  165. 前記追加の治療剤が、抗ＣＤ２５抗体、抗ＰＤ−１抗体、抗ＰＤ−Ｌ１抗体、抗Ｔｉｍ３抗体、抗Ｌａｇ３抗体、抗ＣＴＬＡ４抗体、抗４１ＢＢ抗体、抗ＯＸ４０抗体、抗ＣＤ３抗体、抗ＣＤ４０抗体、抗ＣＤ４７Ｍ抗体、抗ＣＳＦ１Ｒ抗体、抗ＴＬＲ抗体、抗ＳＴＩＮＧ抗体、抗ＲＩＧＩ抗体、抗ＴＡＭ受容体キナーゼ抗体、抗ＮＫＧ２Ａ抗体、抗ＮＫＧ２Ｄ抗体、抗ＧＤ２抗体、抗ＨＥＲ２抗体、抗ＥＧＦＲ抗体、抗ＰＤＧＦＲ−α抗体、抗ＳＬＡＭＦ７抗体、抗ＶＥＧＦ抗体、抗ＣＴＬＡ−４抗体、抗ＣＤ２０抗体、抗ｃＣＬＢ８抗体、抗ＫＩＲ抗体、および抗ＣＤ５２抗体から選択される、請求項１６０から１６４のいずれか一項に記載のキット。
  166. 前記追加の治療剤が、ＩＬ−１５、ＩＬ−２１、ＩＬ−２、ＧＭ−ＣＳＦ、Ｍ−ＣＳＦ、Ｇ−ＣＳＦ、ＩＬ−１、ＩＬ−３、ＩＬ−１２、およびＩＦＮγから選択されるサイトカインを含む、請求項１６０から１６５のいずれか一項に記載のキット。
  167. 前記追加の治療剤が、ＳＥＡ−ＣＤ４０、アベルマブ、デュルバルマブ、ニボルマブ、ペンブロリズマブ、ピディリズマブ、アテゾリズマブ、Ｈｕｌ４．１８Ｋ３２２Ａ、Ｈｕ３Ｆ８、ジニツキシマブ、トラスツズマブ、セツキシマブ、オララツマブ、ネシツムマブ、エロツズマブ、ラムシルマブ、ペルツズマブ、イピリムマブ、ベバシズマブ、リツキシマブ、オビヌツズマブ、シルツキシマブ、オファツムマブ、リリルマブ、およびアレムツズマブから選択される、請求項１６０から１６５のいずれか一項に記載のキット。
  168. 前記追加の治療剤が、アルキル化剤（たとえば、シクロホスファミド、イホスファミド、クロラムブシル、ブスルファン、メルファラン、メクロレタミン、ウラムスチン、チオテパ、ニトロソ尿素、もしくはテモゾロミド）、アントラサイクリン（たとえば、ドキソルビシン、アドリアマイシン、ダウノルビシン、エピルビシン、もしくはミトキサントロン）、細胞骨格破壊剤（たとえば、パクリタキセルもしくはドセタキセル）、ヒストンデアセチラーゼ阻害剤（たとえば、ボリノスタットもしくはロミデプシン）、トポイソメラーゼの阻害剤（たとえば、イリノテカン、トポテカン、アムサクリン、エトポシド、もしくはテニポシド）、キナーゼ阻害剤（たとえば、ボルテゾミブ、エルロチニブ、ゲフィチニブ、イマチニブ、ベムラフェニブ、もしくはビスモデギブ）、ヌクレオシドアナログまたは前駆体アナログ（たとえば、アザシチジン、アザチオプリン、カペシタビン、シタラビン、フルオロウラシル、ゲムシタビン、ヒドロキシ尿素、メルカプトプリン、メトトレキサート、もしくはチオグアニン）、ペプチド抗生物質（たとえば、アクチノマイシンもしくはブレオマイシン）、白金系薬剤（たとえば、シスプラチン、オキサロプラチン、もしくはカルボプラチン）、または植物アルカロイド（たとえば、ビンクリスチン、ビンブラスチン、ビノレルビン、ビンデシン、ポドフィロトキシン、パクリタキセル、もしくはドセタキセル）、ガラルディン、サリドマイド、レナリドマイド、およびポマリドミドから選択される、請求項１６０または請求項１６１に記載のキット。
  169. 対象におけるがんを処置する方法であって、前記対象に、治療有効量の、請求項１から６４のいずれか一項に記載の組成物、請求項６５から１２９のいずれか一項に記載の抗体、または請求項１３０に記載の医薬組成物を投与することを含む、方法。
  170. 前記がんが、ＣＤ１１２またはＣＤ１５５の発現が富化されているがんである、請求項１６９に記載の方法。
  171. 前記がんが、ＴＩＧＩＴを発現するＴ細胞またはナチュラルキラー（ＮＫ）細胞が富化されているがんである、請求項１６９または請求項１７０に記載の方法。
  172. 前記がんが、膀胱がん、乳がん、子宮がん、子宮頸がん、卵巣がん、前立腺がん、精巣がん、食道がん、消化管がん、胃がん、膵臓がん、結腸直腸がん、結腸がん、腎臓がん、腎明細胞癌、頭頸部がん、肺がん、肺腺癌、胃がん、生殖細胞がん、骨がん、肝臓がん、甲状腺がん、皮膚がん、黒色腫、中枢神経系の新生物、中皮腫、リンパ腫、白血病、慢性リンパ球性白血病、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、濾胞性リンパ腫、ホジキンリンパ腫、骨髄腫、または肉腫である、請求項１６９から１７１のいずれか一項に記載の方法。
  173. 前記がんが、リンパ腫、白血病、慢性リンパ球性白血病、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、濾胞性リンパ腫、またはホジキンリンパ腫である、請求項１７２に記載の方法。
  174. 前記対象に、治療有効量の追加の治療剤を投与することをさらに含む、請求項１６９から１７３のいずれか一項に記載の方法。
  175. 前記追加の治療剤が、抗がん剤である、請求項１７４に記載の方法。
  176. 前記追加の治療剤が、抗体である、請求項１７４または請求項１７５に記載の方法。
  177. 前記追加の治療剤が、Ｔ細胞共阻害因子のアンタゴニストもしくは阻害剤、Ｔ細胞共活性化因子のアゴニスト、または免疫刺激性サイトカイン、またはＳＧＮ−２ＦＦである、請求項１７４から１７６のいずれか一項に記載の方法。
  178. 前記追加の治療剤が、ＣＤ２５、ＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１、Ｔｉｍ３、Ｌａｇ３、ＣＴＬＡ４、４１ＢＢ、ＯＸ４０、ＣＤ３、ＣＤ４０、ＣＤ４７Ｍ、ＧＭ−ＣＳＦ、ＣＳＦ１Ｒ、ＴＬＲ、ＳＴＩＮＧ、ＲＩＧＩ、ＴＡＭ受容体キナーゼ、ＮＫＧ２Ａ、ＮＫＧ２Ｄ、ＧＤ２、ＨＥＲ２、ＥＧＦＲ、ＰＤＧＦＲα、ＳＬＡＭＦ７、ＶＥＧＦ、ＣＴＬＡ−４、ＣＤ２０、ｃＣＬＢ８、ＫＩＲ、およびＣＤ５２から選択されるタンパク質に結合する、請求項１７４から１７７のいずれか一項に記載の方法。
  179. 前記追加の治療剤が、抗ＣＤ２５抗体、抗ＰＤ−１抗体、抗ＰＤ−Ｌ１抗体、抗Ｔｉｍ３抗体、抗Ｌａｇ３抗体、抗ＣＴＬＡ４抗体、抗４１ＢＢ抗体、抗ＯＸ４０抗体、抗ＣＤ３抗体、抗ＣＤ４０抗体、抗ＣＤ４７Ｍ抗体、抗ＣＳＦ１Ｒ抗体、抗ＴＬＲ抗体、抗ＳＴＩＮＧ抗体、抗ＲＩＧＩ抗体、抗ＴＡＭ受容体キナーゼ抗体、抗ＮＫＧ２Ａ抗体、抗ＮＫＧ２Ｄ抗体、抗ＧＤ２抗体、抗ＨＥＲ２抗体、抗ＥＧＦＲ抗体、抗ＰＤＧＦＲ−α抗体、抗ＳＬＡＭＦ７抗体、抗ＶＥＧＦ抗体、抗ＣＴＬＡ−４抗体、抗ＣＤ２０抗体、抗ｃＣＬＢ８抗体、抗ＫＩＲ抗体、および抗ＣＤ５２抗体から選択される、請求項１７８に記載の方法。
  180. 前記追加の治療剤が、ＩＬ−１５、ＩＬ−２１、ＩＬ−２、ＧＭ−ＣＳＦ、Ｍ−ＣＳＦ、Ｇ−ＣＳＦ、ＩＬ−１、ＩＬ−３、ＩＬ−１２、およびＩＦＮγから選択されるサイトカインを含む、請求項１７４または請求項１７５に記載の方法。
  181. 前記追加の治療剤が、ＳＥＡ−ＣＤ４０、アベルマブ、デュルバルマブ、ニボルマブ、ペンブロリズマブ、ピディリズマブ、アテゾリズマブ、Ｈｕｌ４．１８Ｋ３２２Ａ、Ｈｕ３Ｆ８、ジニツキシマブ、トラスツズマブ、セツキシマブ、オララツマブ、ネシツムマブ、エロツズマブ、ラムシルマブ、ペルツズマブ、イピリムマブ、ベバシズマブ、リツキシマブ、オビヌツズマブ、シルツキシマブ、オファツムマブ、リリルマブ、およびアレムツズマブから選択される、請求項１７４から１７９のいずれか一項に記載の方法。
  182. 前記追加の治療剤が、アルキル化剤（たとえば、シクロホスファミド、イホスファミド、クロラムブシル、ブスルファン、メルファラン、メクロレタミン、ウラムスチン、チオテパ、ニトロソ尿素、もしくはテモゾロミド）、アントラサイクリン（たとえば、ドキソルビシン、アドリアマイシン、ダウノルビシン、エピルビシン、もしくはミトキサントロン）、細胞骨格破壊剤（たとえば、パクリタキセルもしくはドセタキセル）、ヒストンデアセチラーゼ阻害剤（たとえば、ボリノスタットもしくはロミデプシン）、トポイソメラーゼの阻害剤（たとえば、イリノテカン、トポテカン、アムサクリン、エトポシド、もしくはテニポシド）、キナーゼ阻害剤（たとえば、ボルテゾミブ、エルロチニブ、ゲフィチニブ、イマチニブ、ベムラフェニブ、もしくはビスモデギブ）、ヌクレオシドアナログまたは前駆体アナログ（たとえば、アザシチジン、アザチオプリン、カペシタビン、シタラビン、フルオロウラシル、ゲムシタビン、ヒドロキシ尿素、メルカプトプリン、メトトレキサート、もしくはチオグアニン）、ペプチド抗生物質（たとえば、アクチノマイシンもしくはブレオマイシン）、白金系薬剤（たとえば、シスプラチン、オキサロプラチン、もしくはカルボプラチン）、または植物アルカロイド（たとえば、ビンクリスチン、ビンブラスチン、ビノレルビン、ビンデシン、ポドフィロトキシン、パクリタキセル、もしくはドセタキセル）、ガラルディン、サリドマイド、レナリドマイド、およびポマリドミドから選択される、請求項１７４または請求項１７５に記載の方法。
  183. 前記組成物、前記抗体、または前記医薬組成物が、前記追加の治療剤と同時に投与される、請求項１７４から１８２のいずれか一項に記載の方法。
  184. 前記組成物、前記抗体、または前記医薬組成物が、前記追加の治療剤に対して逐次的に投与される、請求項１７４から１８３のいずれか一項に記載の方法。
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