JP2020510422A - 抗ｔｉｇｉｔ抗体 - Google Patents

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Abstract

ヒトＴＩＧＩＴ（ＩｇとＩＴＩＭドメインをもつＴ細胞免疫受容体）に結合する単離された抗体または抗原結合部分が提供される。いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合部分は、５ｎＭ未満のヒトＴＩＧＩＴに対する結合親和性（ＫＤ）を有する。いくつかの実施形態では、抗ＴＩＧＩＴ抗体は、ＣＤ１５５及び／またはＣＤ１１２のＴＩＧＩＴに対する結合を遮断する。【選択図】図１

Description

本出願は、参照によりその各々の全ての内容が本明細書に組み込まれる、２０１７年２月２８日に出願された、米国特許仮出願第６２／４６４，５２９号、及び２０１８年１月１２日に出願された、米国特許仮出願第６２／６１６，７７９号の優先権を主張する。
ＴＩＧＩＴ（「ＩｇとＩＴＩＭドメインをもつＴ細胞免疫受容体」）は、活性化Ｔ細胞、メモリーＴ細胞、調節性Ｔ細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞などのＴ細胞のサブセットに発現する免疫受容体である。ＴＩＧＩＴはＩｇスーパーファミリーのタンパク質内のＣＤ２８ファミリーのメンバーであり、Ｔ細胞の増殖と活性化及びＮＫ細胞機能を制限する共阻害分子として機能する。ＴＩＧＩＴは、同一のリガンドセット：ＣＤ１５５（ポリオウイルス受容体または「ＰＶＲ」としても知られる）及びＣＤ１１２（ポリオウイルス受容体関連２または「ＰＶＲＬ２」としても知られる）に対してＣＤ２２６（ＤＮＡＸ補助分子−１、または「ＤＮＡＭ−１」とも呼ばれる）と競合することにより、免疫抑制効果を媒介する。Ｌｅｖｉｎ ｅｔ ａｌ．， Ｅｕｒ． Ｊ． Ｉｍｍｕｎｏｌ．， ２０１１， ４１：９０２−９１５を参照されたい。ＴＩＧＩＴに対するＣＤ１５５の親和性はＣＤ２２６に対する親和性よりも高いため、ＴＩＧＩＴの存在下でＣＤ２２６シグナル伝達は阻害され、それによってＴ細胞の増殖と活性化が制限される。
黒色腫の患者では、ＴＩＧＩＴ発現は腫瘍抗原（ＴＡ）特異的ＣＤ８＋Ｔ細胞及びＣＤ８＋腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）で上方制御されている。ＴＩＧＩＴリガンド（ＣＤ１５５）発現細胞の存在下でのＴＩＧＩＴの遮断は、ＴＡ特異的ＣＤ８＋Ｔ細胞とＣＤ８＋ＴＩＬの両方の増殖、サイトカイン産生、及び脱顆粒を増加させた。Ｃｈａｕｖｉｎ ｅｔ ａｌ．， Ｊ Ｃｌｉｎ Ｉｎｖｅｓｔ．， ２０１５， １２５：２０４６−２０５８を参照されたい。したがって、ＴＩＧＩＴは患者の抗腫瘍Ｔ細胞応答を刺激するための潜在的な治療標的を表すが、ＴＩＧＩＴを遮断し、抗腫瘍応答を促進する改善された方法の必要性がいまだ存在する。
Ｌｅｖｉｎ ｅｔ ａｌ．， Ｅｕｒ． Ｊ． Ｉｍｍｕｎｏｌ．， ２０１１， ４１：９０２−９１５ Ｃｈａｕｖｉｎ ｅｔ ａｌ．， Ｊ Ｃｌｉｎ Ｉｎｖｅｓｔ．， ２０１５， １２５：２０４６−２０５８
一態様では、ヒトＴＩＧＩＴ（ＩｇとＩＴＩＭドメインをもつＴ細胞免疫受容体）に結合する単離された抗体またはその抗原結合部分が提供される。いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合部分は、５ｎＭ未満のヒトＴＩＧＩＴに対する結合親和性（ＫＤ）を有する。いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合部分は、１ｎＭ未満のヒトＴＩＧＩＴに対するＫＤを有する。いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合部分は、１００ｐＭ未満のヒトＴＩＧＩＴに対するＫＤを有する。
いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合部分は、カニクイザルＴＩＧＩＴ及び／またはマウスＴＩＧＩＴと交差反応性を示す。いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合部分は、カニクイザルＴＩＧＩＴとマウスＴＩＧＩＴの両方と交差反応性を示す。
いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合部分は、ＣＤ１５５のＴＩＧＩＴに対する結合を遮断する。いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合部分は、ＣＤ１１２のＴＩＧＩＴに対する結合を遮断する。いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合部分は、ＣＤ１５５とＣＤ１１２の両方のＴＩＧＩＴに対する結合を遮断する。
いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原は、アミノ酸８１位及び８２位を含むヒトＴＩＧＩＴ上のエピトープに結合する。いくつかの実施形態では、エピトープは、８１位のＰｈｅ及び／または８２位のＬｙｓもしくはＳｅｒを含む。いくつかの実施形態では、エピトープはＰｈｅ８１及びＬｙｓ８２を含む。
いくつかの実施形態では、エピトープは不連続エピトープである。
いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合部分は、アミノ酸５１位、５２位、５３位、５４位、５５位、７３位、７４位、７５位、７６位、７７位、７９位、８３位、８４位、８５位、８６位、８７位、８８位、８９位、９０位、９１位、９２位、または９３位のうちの１つ以上をさらに含む、ヒトＴＩＧＩＴ上のエピトープに結合する。いくつかの実施形態では、エピトープは、Ｔｈｒ５１、Ａｌａ５２、Ｇｌｎ５３、Ｖａｌ５４、Ｔｈｒ５５、Ｌｅｕ７３、Ｇｌｙ７４、Ｔｒｐ７５、Ｈｉｓ７６、Ｉｌｅ７７、Ｐｒｏ７９、Ａｓｐ８３、Ａｒｇ８４、Ｖａｌ８５、Ａｌａ８６、Ｐｒｏ８７、Ｇｌｙ８８、Ｐｒｏ８９、Ｇｌｙ９０、Ｌｅｕ９１、Ｇｌｙ９２、及びＬｅｕ９３からなる群から選択される１つ以上のアミノ酸残基をさらに含む。いくつかの実施形態では、エピトープは、アミノ酸残基Ｔｈｒ５１、Ａｌａ５２、Ｇｌｎ５３、Ｖａｌ５４、Ｔｈｒ５５、Ｇｌｙ７４、Ｔｒｐ７５、Ｈｉｓ７６、Ｉｌｅ７７、Ｐｈｅ８１、Ｌｙｓ８２、Ｐｒｏ８７、Ｇｌｙ８８、Ｐｒｏ８９、Ｇｌｙ９０、Ｌｅｕ９１、Ｇｌｙ９２、及びＬｅｕ９３を含む。いくつかの実施形態では、エピトープは、アミノ酸残基Ａｌａ５２、Ｇｌｎ５３、Ｌｅｕ７３、Ｇｌｙ７４、Ｔｒｐ７５、Ｐｒｏ７９、Ｐｈｅ８１、Ｌｙｓ８２、Ａｓｐ８３、Ａｒｇ８４、Ｖａｌ８５、及びＡｌａ８６を含む。いくつかの実施形態では、エピトープは、配列ＩＣＮＡＤＬＧＷＨＩＳＰＳＦＫ（配列番号２５８）を含む。
いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合部分は、以下の表３に列挙される１つ以上の配列を含む。いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合部分は、以下のうちの１つ以上を含む：
（ａ）配列番号４、配列番号２２、配列番号４０、配列番号５８、配列番号７６、配列番号９４、配列番号１１２、配列番号１３０、配列番号１４８、配列番号１６６、配列番号１８４、配列番号２０２、配列番号２２１、配列番号２２４、配列番号２２６、配列番号２３１、配列番号２３３、配列番号２３９、もしくは配列番号２４３のいずれかの配列を含む重鎖ＣＤＲ１；
（ｂ）配列番号６、配列番号２４、配列番号４２、配列番号６０、配列番号７８、配列番号９６、配列番号１１４、配列番号１３２、配列番号１５０、配列番号１６８、配列番号１８６、配列番号２０４、配列番号２２２、配列番号２２５、配列番号２２７、配列番号２２９、配列番号２３２、配列番号２３４、配列番号２３８、もしくは配列番号２４０のいずれかの配列を含む重鎖ＣＤＲ２；
（ｃ）配列番号８、配列番号２６、配列番号４４、配列番号６２、配列番号８０、配列番号９８、配列番号１１６、配列番号１３４、配列番号１５２、配列番号１７０、配列番号１８８、配列番号２０６、配列番号２２３、配列番号２２８、配列番号２３０、配列番号２３５、配列番号２３６、配列番号２３７、配列番号２４１、配列番号２４２、もしくは配列番号２４４のいずれかの配列を含む重鎖ＣＤＲ３；
（ｄ）配列番号１３、配列番号３１、配列番号４９、配列番号６７、配列番号８５、配列番号１０３、配列番号１２１、配列番号１３９、配列番号１５７、配列番号１７５、配列番号１９３、もしくは配列番号２１１のいずれかの配列を含む軽鎖ＣＤＲ１；
（ｅ）配列番号１５、配列番号３３、配列番号５１、配列番号６９、配列番号８７、配列番号１０５、配列番号１２３、配列番号１４１、配列番号１５９、配列番号１７７、配列番号１９５、もしくは配列番号２１３のいずれかの配列を含む軽鎖ＣＤＲ２；または
（ｆ）配列番号１７、配列番号３５、配列番号５３、配列番号７１、配列番号８９、配列番号１０７、配列番号１２５、配列番号１４３、配列番号１６１、配列番号１７９、配列番号１９７、もしくは配列番号２１５のいずれかの配列を含む軽鎖ＣＤＲ３。
いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合部分は、以下の配列を含む、重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３、ならびに軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含む：
（ａ）それぞれ、配列番号４、６、８、１３、１５、及び１７；または
（ｂ）それぞれ、配列番号２２、２４、２６、３１、３３、及び３５；または
（ｃ）それぞれ、配列番号４０、４２、４４、４９、５１、及び５３；または
（ｄ）それぞれ、配列番号５８、６０、６２、６７、６９、及び７１；または
（ｅ）それぞれ、配列番号７６、７８、８０、８５、８７、及び８９；または
（ｆ）それぞれ、配列番号９４、９６、９８、１０３、１０５、及び１０７；または
（ｇ）それぞれ、配列番号１１２、１１４、１１６、１２１、１２３、及び１２５；または
（ｈ）それぞれ、配列番号１３０、１３２、１３４、１３９、１４１、及び１４３；または
（ｉ）それぞれ、配列番号１４８、１５０、１５２、１５７、１５９、及び１６１；または
（ｊ）それぞれ、配列番号１６６、１６８、１７０、１７５、１７７、及び１７９；または
（ｋ）それぞれ、配列番号１８４、１８６、１８８、１９３、１９５、及び１９７；または
（ｌ）それぞれ、配列番号２０２、２０４、２０６、２１１、２１３、及び２１５；または
（ｍ）それぞれ、配列番号２２１、２２２、２２３、１３、１５、及び１７；または
（ｎ）それぞれ、配列番号２２４、２２５、６２、６７、６９、及び７１；または
（ｏ）それぞれ、配列番号２２６、２２７、２２８、６７、６９、及び７１；または
（ｐ）それぞれ、配列番号２２４、２２９、２３０、６７、６９、及び７１；または
（ｑ）それぞれ、配列番号２２４、２２７、２３０、６７、６９、及び７１；または
（ｒ）それぞれ、配列番号２３１、２３２、２３５、１０３、１０５、及び１０７；または
（ｓ）それぞれ、配列番号２３３、２３４、２３６、１０３、１０５、及び１０７；または
（ｔ）それぞれ、配列番号２３３、２３４、２３７、１０３、１０５、及び１０７；または
（ｕ）それぞれ、配列番号１６６、２３８、１７０、１７５、１７７、及び１７９；または
（ｖ）それぞれ、配列番号２３９、２４０、１７０、１７５、１７７、及び１７９；または
（ｗ）それぞれ、配列番号２３９、２４０、２４１、１７５、１７７、及び１７９；または
（ｘ）それぞれ、配列番号２３９、２４０、２４２、１７５、１７７、及び１７９；または
（ｙ）それぞれ、配列番号２４３、１６８、２４４、１７５、１７７、及び１７９。
いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合部分は、以下を含む：
（ａ）配列番号１、配列番号１９、配列番号３７、配列番号５５、配列番号７３、配列番号９１、配列番号１０９、配列番号１２７、配列番号１４５、配列番号１６３、配列番号１８１、配列番号１９９、配列番号２４５、配列番号２４６、配列番号２４７、配列番号２４８、配列番号２４９、配列番号２５０、配列番号２５１、配列番号２５２、配列番号２５３、配列番号２５４、配列番号２５５、配列番号２５６、もしくは配列番号２５７に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；及び／または
（ｂ）配列番号１０、配列番号２８、配列番号４６、配列番号６４、配列番号８２、配列番号１００、配列番号１１８、配列番号１３６、配列番号１５４、配列番号１７２、配列番号１９０、もしくは配列番号２０８に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域。
いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合部分は、以下を含む：
（ａ）配列番号１もしくは配列番号２４５に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、及び配列番号１０に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；または
（ｂ）配列番号１９に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、及び配列番号２８に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；または
（ｃ）配列番号３７に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、及び配列番号４６に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；または
（ｄ）配列番号５５、配列番号２４６、配列番号２４７、配列番号２４８、もしくは配列番号２４９のうちのいずれか１つに対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、及び配列番号６４に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；または
（ｅ）配列番号７３に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、及び配列番号８２に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；または
（ｆ）配列番号９１、配列番号２５０、配列番号２５１、もしくは配列番号２５２に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、及び配列番号１００に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；または
（ｇ）配列番号１０９に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、及び配列番号１１８に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；または
（ｈ）配列番号１２７に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、及び配列番号１３６に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；または
（ｉ）配列番号１４５に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、及び配列番号１５４に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；または
（ｊ）配列番号１６３、配列番号２５３、配列番号２５４、配列番号２５５、配列番号２５６、もしくは配列番号２５７のうちのいずれか１つに対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、及び配列番号１７２に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；または
（ｋ）配列番号１８１に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、及び配列番号１９０に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；または
（ｌ）配列番号１９９に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、及び配列番号２０８に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域。
別の態様では、ヒトＴＩＧＩＴに結合する抗体またはその抗原結合部分が提供され、抗体またはその抗原結合部分は、アミノ酸８１位及び８２位を含むヒトＴＩＧＩＴ上のエピトープに結合する。いくつかの実施形態では、エピトープは、８１位のＰｈｅ及び／または８２位のＬｙｓもしくはＳｅｒを含む。いくつかの実施形態では、エピトープはＰｈｅ８１及びＬｙｓ８２を含む。
いくつかの実施形態では、エピトープは不連続エピトープである。
いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合部分は、アミノ酸５１位、５２位、５３位、５４位、５５位、７３位、７４位、７５位、７６位、７７位、７９位、８３位、８４位、８５位、８６位、８７位、８８位、８９位、９０位、９１位、９２位、または９３位のうちの１つ以上をさらに含む、ヒトＴＩＧＩＴ上のエピトープに結合する。いくつかの実施形態では、Ｔｈｒ５１、Ａｌａ５２、Ｇｌｎ５３、Ｖａｌ５４、Ｔｈｒ５５、Ｌｅｕ７３、Ｇｌｙ７４、Ｔｒｐ７５、Ｈｉｓ７６、Ｉｌｅ７７、Ｐｒｏ７９、Ａｓｐ８３、Ａｒｇ８４、Ｖａｌ８５、Ａｌａ８６、Ｐｒｏ８７、Ｇｌｙ８８、Ｐｒｏ８９、Ｇｌｙ９０、Ｌｅｕ９１、Ｇｌｙ９２、及びＬｅｕ９３からなる群から選択される１つ以上のアミノ酸残基をさらに含む。いくつかの実施形態では、エピトープは、アミノ酸残基Ｔｈｒ５１、Ａｌａ５２、Ｇｌｎ５３、Ｖａｌ５４、Ｔｈｒ５５、Ｇｌｙ７４、Ｔｒｐ７５、Ｈｉｓ７６、Ｉｌｅ７７、Ｐｈｅ８１、Ｌｙｓ８２、Ｐｒｏ８７、Ｇｌｙ８８、Ｐｒｏ８９、Ｇｌｙ９０、Ｌｅｕ９１、Ｇｌｙ９２、及びＬｅｕ９３を含む。いくつかの実施形態では、エピトープは、アミノ酸残基Ａｌａ５２、Ｇｌｎ５３、Ｌｅｕ７３、Ｇｌｙ７４、Ｔｒｐ７５、Ｐｒｏ７９、Ｐｈｅ８１、Ｌｙｓ８２、Ａｓｐ８３、Ａｒｇ８４、Ｖａｌ８５、及びＡｌａ８６を含む。いくつかの実施形態では、エピトープは、配列ＩＣＮＡＤＬＧＷＨＩＳＰＳＦＫ（配列番号２５８）を含む。
さらに別の態様では、本明細書に開示されるような１つ以上の配列（例えば、以下の表３に列挙される１つ以上の配列）を含む抗体またはその抗原結合部分が提供される。いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合部分は、本明細書に開示されるような（例えば、以下の表３に列挙されるような）、１つ以上のＣＤＲ、重鎖可変領域、軽鎖可変領域、またはフレームワーク領域の配列を含む。いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合部分は、以下のうちの１つ以上を含む：
（ａ）配列番号４、配列番号２２、配列番号４０、配列番号５８、配列番号７６、配列番号９４、配列番号１１２、配列番号１３０、配列番号１４８、配列番号１６６、配列番号１８４、配列番号２０２、配列番号２２１、配列番号２２４、配列番号２２６、配列番号２３１、配列番号２３３、配列番号２３９、もしくは配列番号２４３のいずれかの配列を含む重鎖ＣＤＲ１；
（ｂ）配列番号６、配列番号２４、配列番号４２、配列番号６０、配列番号７８、配列番号９６、配列番号１１４、配列番号１３２、配列番号１５０、配列番号１６８、配列番号１８６、配列番号２０４、配列番号２２２、配列番号２２５、配列番号２２７、配列番号２２９、配列番号２３２、配列番号２３４、配列番号２３８、もしくは配列番号２４０のいずれかの配列を含む重鎖ＣＤＲ２；
（ｃ）配列番号８、配列番号２６、配列番号４４、配列番号６２、配列番号８０、配列番号９８、配列番号１１６、配列番号１３４、配列番号１５２、配列番号１７０、配列番号１８８、配列番号２０６、配列番号２２３、配列番号２２８、配列番号２３０、配列番号２３５、配列番号２３６、配列番号２３７、配列番号２４１、配列番号２４２、もしくは配列番号２４４のいずれかの配列を含む重鎖ＣＤＲ３；
（ｄ）配列番号１３、配列番号３１、配列番号４９、配列番号６７、配列番号８５、配列番号１０３、配列番号１２１、配列番号１３９、配列番号１５７、配列番号１７５、配列番号１９３、もしくは配列番号２１１のいずれかの配列を含む軽鎖ＣＤＲ１；
（ｅ）配列番号１５、配列番号３３、配列番号５１、配列番号６９、配列番号８７、配列番号１０５、配列番号１２３、配列番号１４１、配列番号１５９、配列番号１７７、配列番号１９５、もしくは配列番号２１３のいずれかの配列を含む軽鎖ＣＤＲ２；または
（ｆ）配列番号１７、配列番号３５、配列番号５３、配列番号７１、配列番号８９、配列番号１０７、配列番号１２５、配列番号１４３、配列番号１６１、配列番号１７９、配列番号１９７、もしくは配列番号２１５のいずれかの配列を含む軽鎖ＣＤＲ３。
いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合部分は、以下の配列を含む、重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３、ならびに軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含む：
（ａ）それぞれ、配列番号４、６、８、１３、１５、及び１７；または
（ｂ）それぞれ、配列番号２２、２４、２６、３１、３３、及び３５；または
（ｃ）それぞれ、配列番号４０、４２、４４、４９、５１、及び５３；または
（ｄ）それぞれ、配列番号５８、６０、６２、６７、６９、及び７１；または
（ｅ）それぞれ、配列番号７６、７８、８０、８５、８７、及び８９；または
（ｆ）それぞれ、配列番号９４、９６、９８、１０３、１０５、及び１０７；または
（ｇ）それぞれ、配列番号１１２、１１４、１１６、１２１、１２３、及び１２５；または
（ｈ）それぞれ、配列番号１３０、１３２、１３４、１３９、１４１、及び１４３；または
（ｉ）それぞれ、配列番号１４８、１５０、１５２、１５７、１５９、及び１６１；または
（ｊ）それぞれ、配列番号１６６、１６８、１７０、１７５、１７７、及び１７９；または
（ｋ）それぞれ、配列番号１８４、１８６、１８８、１９３、１９５、及び１９７；または
（ｌ）それぞれ、配列番号２０２、２０４、２０６、２１１、２１３、及び２１５；または
（ｍ）それぞれ、配列番号２２１、２２２、２２３、１３、１５、及び１７；または
（ｎ）それぞれ、配列番号２２４、２２５、６２、６７、６９、及び７１；または
（ｏ）それぞれ、配列番号２２６、２２７、２２８、６７、６９、及び７１；または
（ｐ）それぞれ、配列番号２２４、２２９、２３０、６７、６９、及び７１；または
（ｑ）それぞれ、配列番号２２４、２２７、２３０、６７、６９、及び７１；または
（ｒ）それぞれ、配列番号２３１、２３２、２３５、１０３、１０５、及び１０７；または
（ｓ）それぞれ、配列番号２３３、２３４、２３６、１０３、１０５、及び１０７；または
（ｔ）それぞれ、配列番号２３３、２３４、２３７、１０３、１０５、及び１０７；または
（ｕ）それぞれ、配列番号１６６、２３８、１７０、１７５、１７７、及び１７９；または
（ｖ）それぞれ、配列番号２３９、２４０、１７０、１７５、１７７、及び１７９；または
（ｗ）それぞれ、配列番号２３９、２４０、２４１、１７５、１７７、及び１７９；または
（ｘ）それぞれ、配列番号２３９、２４０、２４２、１７５、１７７、及び１７９；または
（ｙ）それぞれ、配列番号２４３、１６８、２４４、１７５、１７７、及び１７９。
いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合部分は、以下を含む：
（ａ）配列番号１、配列番号１９、配列番号３７、配列番号５５、配列番号７３、配列番号９１、配列番号１０９、配列番号１２７、配列番号１４５、配列番号１６３、配列番号１８１、配列番号１９９、配列番号２４５、配列番号２４６、配列番号２４７、配列番号２４８、配列番号２４９、配列番号２５０、配列番号２５１、配列番号２５２、配列番号２５３、配列番号２５４、配列番号２５５、配列番号２５６、もしくは配列番号２５７に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；及び／または
（ｂ）配列番号１０、配列番号２８、配列番号４６、配列番号６４、配列番号８２、配列番号１００、配列番号１１８、配列番号１３６、配列番号１５４、配列番号１７２、配列番号１９０、もしくは配列番号２０８に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域。
いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合部分は、以下を含む：
（ａ）配列番号１もしくは配列番号２４５に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、及び配列番号１０に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；または
（ｂ）配列番号１９に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、及び配列番号２８に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；または
（ｃ）配列番号３７に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、及び配列番号４６に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；または
（ｄ）配列番号５５、配列番号２４６、配列番号２４７、配列番号２４８、もしくは配列番号２４９のうちのいずれか１つに対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、及び配列番号６４に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；または
（ｅ）配列番号７３に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、及び配列番号８２に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；または
（ｆ）配列番号９１、配列番号２５０、配列番号２５１、もしくは配列番号２５２に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、及び配列番号１００に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；または
（ｇ）配列番号１０９に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、及び配列番号１１８に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；または
（ｈ）配列番号１２７に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、及び配列番号１３６に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；または
（ｉ）配列番号１４５に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、及び配列番号１５４に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；または
（ｊ）配列番号１６３、配列番号２５３、配列番号２５４、配列番号２５５、配列番号２５６、もしくは配列番号２５７のうちのいずれか１つに対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、及び配列番号１７２に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；または
（ｋ）配列番号１８１に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、及び配列番号１９０に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；または
（ｌ）配列番号１９９に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、及び配列番号２０８に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域。
いくつかの実施形態では、本明細書に開示されるような抗体またはその抗原結合部分は、抗ＰＤ１抗体または抗ＰＤ−Ｌ１抗体と相乗効果を示す。
いくつかの実施形態では、本明細書に開示されるような抗体またはその抗原結合部分は、モノクローナル抗体である。いくつかの実施形態では、抗体はヒト化抗体である。いくつかの実施形態では、抗体は完全ヒト抗体である。いくつかの実施形態では、抗体はキメラ抗体である。いくつかの実施形態では、抗原結合断片は、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、ｓｃＦｖ、または二価ｓｃＦｖである。
別の態様では、本明細書に記載されるような単離された抗体またはその抗原結合部分と、薬学的に許容される担体とを含む医薬組成物が提供される。
さらに別の態様では、本明細書に記載されるような単離された抗体またはその抗原結合部分含む二重特異性抗体が提供される。
さらに別の態様では、本明細書に記載されるような単離された抗体またはその抗原結合部分含む抗体−薬物コンジュゲートが提供される。
さらに別の態様では、単離されたポリヌクレオチドが提供される。いくつかの実施形態では、ポリヌクレオチドは、本明細書に記載されるような抗体またはその抗原結合部分をコードする１つ以上のヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ポリヌクレオチドは、以下の表３に開示されるポリペプチドをコードする１つ以上のヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ポリヌクレオチドは、ヒトＴＩＧＩＴに結合する抗体またはその抗原結合部分をコードする１つ以上のヌクレオチド配列を含み、単離されたポリヌクレオチドは以下を含む：
（ａ）配列番号２、配列番号２０、配列番号３８、配列番号５６、配列番号７４、配列番号９２、配列番号１１０、配列番号１２８、配列番号１４６、配列番号１６４、配列番号１８２、もしくは配列番号２００のヌクレオチド配列；及び／または
（ｂ）配列番号１１、配列番号２９、配列番号４７、配列番号６５、配列番号８３、配列番号１０１、配列番号１１９、配列番号１３７、配列番号１５５、配列番号１７３、配列番号１９１、もしくは配列番号２０９のヌクレオチド配列。
さらに別の態様では、本明細書に記載されるようなポリヌクレオチドを含むベクター及び宿主細胞が提供される。別の態様では、抗体を産生するのに適した条件下で本明細書に記載されるような宿主細胞を培養することを含む、抗体を産生する方法が提供される。
別の態様では、キット（例えば、本明細書に記載されるような治療方法における使用のための）が提供される。いくつかの実施形態では、キットは、本明細書に記載されるような単離された抗ＴＩＧＩＴ抗体もしくはその抗原結合部分、または本明細書に記載されるような抗ＴＩＧＩＴ抗体もしくははその抗原結合部分を含む医薬組成物を含み、腫瘍免疫療法薬をさらに含む。いくつかの実施形態では、腫瘍免疫療法薬は、ＰＤ−１経路阻害剤である。いくつかの実施形態では、ＰＤ−１経路阻害剤は、抗ＰＤ１抗体または抗ＰＤ−Ｌ１抗体である。いくつかの実施形態では、ＰＤ−１経路阻害剤は、Ｔ細胞共阻害剤のアンタゴニストまたは阻害剤である。いくつかの実施形態では、腫瘍免疫療法薬は、Ｔ細胞コアクチベーターのアゴニストである。いくつかの実施形態では、腫瘍免疫療法薬は、免疫刺激性サイトカインである。
別の態様では、対象のがんを治療する方法が提供される。いくつかの実施形態では、方法は、治療量の本明細書に記載されるような単離された抗体もしくはその抗原結合部分、または本明細書に記載されるような医薬組成物、本明細書に記載されるような二重特異性抗体、または本明細書に記載されるような抗体−薬物コンジュゲートを対象に投与することを含む。
いくつかの実施形態では、がんはＣＤ１１２またはＣＤ１１５の発現が豊富ながんである。いくつかの実施形態では、がんは、ＴＩＧＩＴを発現するＴ細胞またはナチュラルキラー（ＮＫ）細胞が豊富ながんである。いくつかの実施形態では、がんは、膀胱癌、乳癌、子宮癌、子宮頸癌、卵巣癌、前立腺癌、精巣癌、食道癌、胃腸癌、膵臓癌、大腸癌、結腸癌、腎臓癌、頭頸部癌、肺癌、胃癌、胚細胞癌、骨癌、肝臓癌、甲状腺癌、皮膚癌、中枢神経系腫瘍、リンパ腫、白血病、骨髄腫、または肉腫である。いくつかの実施形態では、がんはリンパ腫または白血病である。
いくつかの実施形態では、方法は、治療量の腫瘍免疫療法薬を対象に投与することをさらに含む。いくつかの実施形態では、腫瘍免疫療法薬は、ＰＤ−１経路阻害剤である。いくつかの実施形態では、ＰＤ−１経路阻害剤は、抗ＰＤ１抗体または抗ＰＤ−Ｌ１抗体である。いくつかの実施形態では、ＰＤ−１経路阻害剤は、Ｔ細胞共阻害剤のアンタゴニストまたは阻害剤である。いくつかの実施形態では、腫瘍免疫療法薬は、Ｔ細胞コアクチベーターのアゴニストである。いくつかの実施形態では、腫瘍免疫療法薬は、免疫刺激性サイトカインである。いくつかの実施形態では、単離された抗体、医薬組成物、二重特異性抗体、または抗体−薬物コンジュゲートは、腫瘍免疫療法薬と同時に投与される。いくつかの実施形態では、単離された抗体、医薬組成物、二重特異性抗体、または抗体−薬物コンジュゲートは、腫瘍免疫療法薬と逐次的に投与される。
６５個の抗ＴＩＧＩＴ抗体クローン及び無関係なアイソタイプ対照抗体の、ヒトＴＩＧＩＴ（上パネル）、カニクイザルＴＩＧＩＴ（中央パネル）、及びマウスＴＩＧＩＴ（下パネル）を発現するように遺伝子操作されたＨＥＫ２９３細胞に対する結合。 ６５個の抗ＴＩＧＩＴ抗体クローン及び無関係なアイソタイプ対照抗体の、初代ヒトＴ細胞（上パネル）、カニクイザルＴ細胞（中央パネル）、及びマウスＴ細胞（下パネル）に対する結合。下のパネルでは、６５個のクローンのうちの３５個のクローンが評価された。評価された３５個のクローンのうちで、淡緑色のバーで示される、３５個のうちの５個がｍＴＩＧＩＴ−Ｆｃタンパク質に結合しなかった（クローン２０、２７、５５、５６、及び６０）。 （Ａ〜Ｃ）ＨＥＫ２９３細胞で発現するヒト（Ａ）、マウス（Ｂ）、及びカニクイザル（Ｃ）のＴＩＧＩＴに対する、８個の抗ＴＩＧＩＴ抗体クローン（クローン２、５、１３、１６、１７、２０、２５、及び５４）の結合滴定値。単一ウェルの結果が示されている。（Ｄ）ＨＥＫ２９３細胞で発現するヒト、マウス、及びカニクイザルのＴＩＧＩＴに対する、８個の抗ＴＩＧＩＴ抗体クローン（クローン２、５、１３、１６、１７、２０、２５、及び５４）のＥＣ５０値。 同上。 活性化マウス脾臓Ｔ細胞に対する抗ＴＩＧＩＴ抗体クローン１３及び２５の結合滴定。単一ウェルの結果が示されている。クローン１３は、０．２４μｇ／ｍＬのＥＣ５０を有した。クローン２５は、２．２８μｇ／ｍＬのＥＣ５０を有した。 抗ＴＩＧＩＴ抗体は、ヒトＴＩＧＩＴを発現するＨＥＫ２９３細胞に対するヒトＣＤ１５５の結合（Ａ）とマウスＴＩＧＩＴを発現するＨＥＫ２９３細胞に対するマウスＣＤ１５５の結合（Ｂ）の両方について、ＨＥＫ２９３細胞に発現するＴＩＧＩＴとのＣＤ１５５の相互作用を遮断した。単一ウェルの結果が示されている。 抗ＴＩＧＩＴ抗体は、ＨＥＫ２９３細胞で発現するヒトＴＩＧＩＴとのヒトＣＤ１１２の相互作用を遮断した。単一ウェルの結果が示されている。 （Ａ）上パネル：選択した抗ＴＩＧＩＴ抗体は、ＴＩＧＩＴ−ＣＤ１５５の結合を効果的に遮断し、ルシフェラーゼ活性の１．５倍を超える誘導で測定されるように、Ｔ細胞の活性化をもたらした。約１２個のクローンが、バイオアッセイで１．５倍を超える誘導を示した。２個のクローンは、ＦｏｒｔｅＢｉｏアッセイでＴＩＧＩＴ−ＣＤ１５５の相互作用を遮断しなかった（ピンク色のバー）。誘導倍率は、Ａｂ対照のないものに対して測定された。平均値とＳＤは、重複した実験のものである；抗体は２０μｇ／ｍＬであった。灰色のバー＝ｈＩｇＧ１アイソタイプ対照。黒色のバー＝無抗体対照（ベースラインとして定義される）。下パネル：ＴＩＧＩＴ／ＣＤ１５５遮断バイオアッセイ対ＴＩＧＩＴ−Ｆｃ親和性の相関プロット。バイオアッセイにおける活性は、組換えタンパク質に対する親和性と相関していた。 （Ｂ）ＴＩＧＩＴ／ＣＤ１５５遮断バイオアッセイで選択された１２個の抗ＴＩＧＩＴクローンの用量反応。３種の全てに対して強い結合を示したクローン１３及び２５は、バイオアッセイで良好な活性を示した。平均値とＳＤは三重のウェルのものである。 抗ＰＤ−１と相乗作用してＴ細胞の活性化をもたらす抗ＴＩＧＩＴ抗体を選択する。平均値とＳＤは三重のウェルのものである。クローン１３とクローン２５の両方は、組み合わせバイオアッセイで抗ＰＤ−１との相乗効果を示した。 （Ａ〜Ｄ）完全ヒト抗ＴＩＧＩＴクローン１３（「ｃ１３ ｈＩｇＧ１」）、及びクローン１３のマウスＩｇＧ１（「ｃ１３ ｍＩｇＧ１」）とマウスＩｇＧ２ａ（「ｃ１３ ｍＩｇＧ２ａ」）のキメラについての、ＨＥＫ２９３細胞で発現するヒト（Ａ）、マウス（Ｂ）、及びカニクイザル（Ｃ）のＴＩＧＩＴに対する、結合滴定（Ａ〜Ｃ）、及びＥＣ５０値（Ｄ）。平均値とＳＤは重複したウェルのものである。（Ｅ〜Ｆ）抗体ｃ１３ ｈＩｇＧ１、ｃ１３ ｍＩｇＧ１、及びｃ１３ ｍＩｇＧ２ａは、ヒトＴＩＧＩＴを発現するＨＥＫ２９３細胞に対するヒトＣＤ１５５の結合（Ｅ）とマウスＴＩＧＩＴを発現するＨＥＫ２９３細胞に対するマウスＣＤ１５５の結合（Ｆ）の両方について、ＨＥＫ２９３細胞に発現するＴＩＧＩＴとのＣＤ１５５の相互作用を遮断した。結果は、単一ウェルの結果についてのものである。（Ｇ）抗体ｃ１３ ｈＩｇＧ１、ｃ１３ ｍＩｇＧ１、及びｃ１３ ｍＩｇＧ２ａは、ＨＥＫ２９３細胞で発現するヒトＴＩＧＩＴとのヒトＣＤ１１２の相互作用を遮断した。結果は、単一ウェルの結果についてのものである。（Ｈ）ＴＩＧＩＴ／ＣＤ１５５遮断バイオアッセイにおける親及びキメラの抗ＴＩＧＩＴ抗体クローンｃ１３１３ ｈＩｇＧ１、ｃ１３ ｍＩｇＧ１、及びｃ１３ ｍＩｇＧ２ａの用量反応。平均値とＳＤは三重のウェルのものである。 同上。 同上。 同上。 同上。 マウスのＣＴ２６同系腫瘍モデルにおけるＦｃガンマ受容体を介した抗腫瘍効果の活性化に関与できる抗ＴＩＧＩＴ抗体。（Ａ）群の平均腫瘍体積。（Ｂ〜Ｋ）群１〜１０の個々の動物の腫瘍体積。ＰＲ＝部分奏効（腫瘍体積は、３回連続して測定した場合、１日目の体積の５０％以下であり、これら３回の測定のうち１回以上で１３．５ｍｍ３以上である）。ＣＲ＝完全奏効（３回連続して測定した場合、腫瘍体積が１３．５ｍｍ３未満である）。 同上。 同上。 同上。 同上。 同上。 同上。 同上。 同上。 同上。
Ｉ． 導入
本明細書で記載されるように、ヒトＴＩＧＩＴ（ＩｇとＩＴＩＭドメインをもつＴ細胞免疫受容体）に対して高い親和性を有し、マウスＴＩＧＩＴ及びカニクイザルＴＩＧＩＴのいずれか、またはその両方との交差反応性をさらに有する抗体は、ＴＩＧＩＴとＣＤ１５５との相互作用を阻害すると同定された。これらの抗体は、抗ＰＤ−１抗体との相乗効果も示す。したがって、本明細書に記載される抗ＴＩＧＩＴ抗体は、単一の薬剤として、または抗ＰＤ−１薬もしくは抗ＰＤ−Ｌ１薬などの別の治療薬と組み合わせて、数多くの治療用途において、例えば様々ながんの治療のために使用することができる。
したがって、一態様では、本発明は、ヒトＴＩＧＩＴに結合する抗体または抗体の抗原結合部分を含む組成物、キット、及び治療方法を提供する。
ＩＩ． 定義
別途定義されない限り、本明細書において使用される技術用語及び科学用語は、当業者によって一般に理解されるのと同一の意味を有する。例えば、Ｌａｃｋｉｅ， Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ ｏｆ Ｃｅｌｌ ａｎｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ， Ｅｌｓｅｖｉｅｒ （４ｔｈ ｅｄ． ２００７）；Ｓａｍｂｒｏｏｋ ｅｔ ａｌ．， Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ， Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ， Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇｓ Ｈａｒｂｏｒ Ｐｒｅｓｓ （Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇｓ Ｈａｒｂｏｒ， ＮＹ １９８９）を参照されたい。本明細書に記載されるものと同様または同等の任意の方法、デバイス、及び材料を、本発明の実施において使用することができる。以下の定義は、本明細書で頻繁に使用される特定の用語の理解を促すために提供されるものであり、本開示の範囲を限定することを意味しない。
本明細書で使用されるとき、単数形「ａ」、「ａｎ」、及び「ｔｈｅ」は、その内容が別のものを明確に指示しない限り、複数の指示対象を包む。したがって、例えば、「抗体」への言及は、２つ以上のこのような分子の組み合わせなどを必要に応じて含む。
本明細書で使用されるとき、「約」という用語は、この技術分野の当業者に容易に知られている各値の通常の誤差範囲を指す。
本明細書で使用されるとき、「ＴＩＧＩＴ」という用語は、「ＩｇとＩＴＩＭドメインをもつＴ細胞免疫受容体」を指す。ＴＩＧＩＴ遺伝子によってコードされるタンパク質は、タンパク質のＩｇスーパーファミリー内のＣＤ２８ファミリーのメンバーである。ＴＩＧＩＴは、いくつかのクラスのＴ細胞及びナチュラルキラー（ＮＫ）細胞で発現し、リガンドＣＤ１５５及びＣＤ１１２についてＣＤ２２６と競合することにより、その免疫抑制効果を媒介する。Ｌｅｖｉｎ ｅｔ ａｌ．， Ｅｕｒ． Ｊ． Ｉｍｍｕｎｏｌ．， ２０１１， ４１：９０２−９１５を参照されたい。ＴＩＧＩＴは、当技術分野ではＷＵＣＡＭ（ワシントン大学細胞接着分子）及びＶＳＴＭ３（ＨＵＧＯ命名）とも呼ばれている。Ｌｅｖｉｎ ｅｔ ａｌ．， Ｅｕｒ Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ， ２０１１， ４１：９０２−９１５を参照されたい。したがって、本出願全体にわたる「ＴＩＧＩＴ」への言及には、特に明記しない限り、または文脈から明らかでない限り、ＷＵＣＡＭ及び／またはＶＳＴＭ３への言及も含まれる。ヒトＴＩＧＩＴヌクレオチド及びタンパク質の配列は、例えば、それぞれ、Ｇｅｎｂａｎｋ受理番号ＮＭ１７３７９９（配列番号２１７）及びＮＰ７７６１６０ （配列番号２１８）に記述されている。
「がん」という用語は、異常な細胞の制御不能の増殖を特徴とする疾患を指す。この用語には、悪性、良性、軟部組織、または固形と特徴づけられる全ての既知のがん及び新生物状態、ならびに転移前及び転移後のがんを含む全ての段階及びグレードのがんが含まれる。種々の種類のがんの例には、胃癌（ｇａｓｔｒｉｃ ｃａｎｃｅｒ）（例えば、胃癌（ｓｔｏｍａｃｈ ｃａｎｃｅｒ））、結腸直腸癌、消化管間質腫瘍、胃腸カルチノイド腫瘍、結腸癌、直腸癌、肛門癌、胆管癌、小腸癌、及び食道癌などの消化器癌及び胃腸癌；乳癌；肺癌；胆嚢癌；肝臓癌；膵臓癌；虫垂癌；前立腺癌、卵巣癌；腎癌；中枢神経系腫瘍；皮膚癌（例えば、黒色腫）；リンパ腫；神経膠腫；絨毛癌；頭頸部癌；骨形成肉腫；及び血液癌が含まれるが、これらに限定されない。本明細書で使用されるとき、「腫瘍」には、１つ以上のがん細胞が含まれる。
「抗体」という用語は、抗原（例えば、ヒトＴＩＧＩＴ）、特定の細胞表面マーカー、または任意の所望の標的に特異的に結合して認識する、免疫グロブリン遺伝子によってコードされるポリペプチドまたはその機能的断片を指す。典型的には、「可変領域」は、抗体の抗原結合領域（またはその機能的同等物）を含み、結合の特異性と親和性において最も重要である。Ｆｕｎｄａｍｅｎｔａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ ７ｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ， Ｐａｕｌ， ｅｄ．， Ｗｏｌｔｅｒｓ Ｋｌｕｗｅｒ Ｈｅａｌｔｈ／Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ Ｗｉｌｌｉａｍｓ ＆ Ｗｉｌｋｉｎｓ （２０１３）を参照されたい。認識されている免疫グロブリン遺伝子には、カッパ、ラムダ、アルファ、ガンマ、デルタ、イプシロン、及びミューの定常領域遺伝子、ならびに無数の免疫グロブリン可変領域遺伝子が含まれる。軽鎖はカッパまたはラムダのいずれかとして分類される。重鎖はガンマ、ミュー、アルファ、デルタ、またはイプシロンに分類され、それらは次に、免疫グロブリンのクラス、ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＤ、及びＩｇＥをそれぞれ画定する。
例示的な免疫グロブリン（抗体）構造単位は、四量体を含む。各四量体は、２本の同一のポリペプチド鎖対からなり、各対は、１本の「軽」鎖（約２５ｋＤａ）と、１本の「重」鎖（約５０〜７０ｋＤａ）とを有する。各鎖のＮ末端は、主に抗原認識に関与する約１００〜１１０またはそれ以上のアミノ酸の可変領域を画定する。可変軽鎖（ＶＬ）及び可変重鎖（ＶＨ）という用語は、それぞれこれらの軽鎖及び重鎖を指す。
「アイソタイプ」は、重鎖定常領域によって画定される抗体のクラスである。免疫グロブリン遺伝子には、カッパ、ラムダ、アルファ、ガンマ、デルタ、イプシロン、及びミューの定常領域遺伝子が含まれる。軽鎖はカッパまたはラムダのいずれかとして分類される。重鎖はガンマ、ミュー、アルファ、デルタ、またはイプシロンに分類され、それらは次に、アイソタイプのクラス、ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＤ、及びＩｇＥをそれぞれ画定する。
本明細書で使用されるとき、「相補性決定領域（ＣＤＲ）」とは、軽鎖と重鎖の可変領域によって確立される、４つの「フレームワーク」領域を中断する、各鎖の３つの超可変領域を指す。ＣＤＲは、主に抗原のエピトープに対する結合に関与する。各鎖のＣＤＲは通常、Ｎ末端から開始して順に付番されたＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３と呼ばれ、特定のＣＤＲが位置する鎖によっても通常識別される。したがって、ＶＨ ＣＤＲ３は、それが見出される抗体の重鎖の可変ドメインに位置し、一方、ＶＬ ＣＤＲ１は、それが見出される抗体の軽鎖の可変ドメイン由来のＣＤＲ１である。
異なる軽鎖または重鎖のフレームワーク領域の配列は、種内で比較的保存されている。構成要素である軽鎖と重鎖との組み合わされたフレームワーク領域である、抗体のフレームワーク領域は、３次元空間でＣＤＲを配置及び整列するのに役立つ。
ＣＤＲ及びフレームワーク領域のアミノ酸配列は、当該技術分野で周知の様々な定義、例えば、Ｋａｂａｔ， Ｃｈｏｔｈｉａ， ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ ＩｍＭｕｎｏＧｅｎｅＴｉｃｓ ｄａｔａｂａｓｅ （ＩＭＧＴ）、及びＡｂＭ（例えば、Ｊｏｈｎｓｏｎ ａｎｄ Ｗｕ， Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ． ２０００ Ｊａｎ １；２８（１）：２１４−２１８、及びＪｏｈｎｓｏｎ ｅｔ ａｌ．， Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．， ２９：２０５−２０６ （２００１）；Ｃｈｏｔｈｉａ ＆ Ｌｅｓｋ， （１９８７） Ｊ． Ｍｏｌ． Ｂｉｏｌ． １９６， ９０１−９１７；Ｃｈｏｔｈｉａ ｅｔ ａｌ． （１９８９） Ｎａｔｕｒｅ ３４２， ８７７−８８３；Ｃｈｏｔｈｉａ ｅｔ ａｌ． （１９９２） Ｊ． Ｍｏｌ． Ｂｉｏｌ． ２２７， ７９９−８１７；Ａｌ−Ｌａｚｉｋａｎｉ ｅｔ ａｌ．， Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ １９９７， ２７３（４））を使用して決定され得る。別途示されない限り、ＣＤＲはＫａｂａｔに従って決定される。抗原結合部位の定義は以下でも説明されている：Ｒｕｉｚ ｅｔ ａｌ． Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．， ２８， ２１９−２２１ （２０００）；及びＬｅｆｒａｎｃ Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ． Ｊａｎ １；２９（１）：２０７−９ （２００１）；ＭａｃＣａｌｌｕｍ ｅｔ ａｌ．， Ｊ． Ｍｏｌ． Ｂｉｏｌ．， ２６２：７３２−７４５ （１９９６）；及びＭａｒｔｉｎ ｅｔ ａｌ， Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． ＵＳＡ， ８６， ９２６８−９２７２ （１９８９）；Ｍａｒｔｉｎ， ｅｔ ａｌ， Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｅｎｚｙｍｏｌ．， ２０３：１２１−１５３， （１９９１）；Ｐｅｄｅｒｓｅｎ ｅｔ ａｌ， Ｉｍｍｕｎｏｍｅｔｈｏｄｓ， １， １２６， （１９９２）；及びＲｅｅｓ ｅｔ ａｌ， Ｉｎ Ｓｔｅｒｎｂｅｒｇ Ｍ．Ｊ．Ｅ． （ｅｄ．）， Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ Ｐｒｅｄｉｃｔｉｏｎ． Ｏｘｆｏｒｄ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｐｒｅｓｓ， Ｏｘｆｏｒｄ， １４１−１７２ １９９６）。
「抗原結合部分」または「抗原結合断片」という用語は、本明細書で交換可能に使用され、抗原（例えば、ＴＩＧＩＴ）に特異的に結合する能力を保持する抗体の１つ以上の断片を指す。抗体の抗原結合機能は、完全長抗体の断片によって実行できることが示されている。抗原結合断片の例には、Ｆａｂフラグメント（ＶＬ、ＶＨ、ＣＬ、及びＣＨ１ドメインからなる一価断片）、Ｆ（ａｂ’）２断片（ヒンジ領域でジスルフィド架橋により連結された２つのＦａｂ断片を含む二価断片）、単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）、相補性決定領域（ＣＤＲ）、ＶＬ（軽鎖可変領域）、ＶＨ（重鎖可変領域）、ジスルフィド結合Ｆｖ（ｄｓＦｖ）、ならびにそれらの任意の組み合わせ、または標的抗原に結合することのできる免疫グロブリンペプチドの、任意の他の機能的部分（例えば、Ｆｕｎｄａｍｅｎｔａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、前出を参照されたい）が含まれるが、これらには限定されない。当業者には理解されるように、様々な抗体断片は、様々な方法、例えば、ペプシンなどの酵素による無傷の抗体の消化によって、またはデノボ合成によって得ることができる。抗体断片は、しばしば、化学的に、または組換えＤＮＡ方法論を使用することによって、デノボ合成される。したがって、本明細書で使用されるとき、抗体という用語には、抗体全体の修飾によって生成された抗体断片、または組換えＤＮＡ方法論を使用してデノボで合成されたもの（例えば、単鎖Ｆｖ）、またはファージディスプレイライブラリー及び酵母ベースの抗体ライブラリー提示システムを使用して特定されたものが含まれる（例えば、ＭｃＣａｆｆｅｒｔｙ ｅｔ ａｌ．， （１９９０） Ｎａｔｕｒｅ ３４８：５５２；Ｙ． Ｘｕ ｅｔ ａｌ．， ＰＥＤＳ， ２０１３， ２６：６６３−６７０；ＷＯ２００９／０３６３７９；ＷＯ２０１０／１０５２５６；及びＷＯ２０１２／００９５６８を参照されたい）。「抗体」という用語には、二価または二重特異性分子、ジアボディ、トリアボディ、及びテトラボディも含まれる。二価及び二重特異性分子は、例えば、Ｋｏｓｔｅｌｎｙ ｅｔ ａｌ． （１９９２） Ｊ． Ｉｍｍｕｎｏｌ． １４８：１５４７、Ｐａｃｋ ａｎｄ Ｐｌｕｃｋｔｈｕｎ （１９９２） Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ３１：１５７９、Ｈｏｌｌｉｎｇｅｒ ｅｔ ａｌ． （１９９３）， ＰＮＡＳ． ＵＳＡ ９０：６４４４、Ｇｒｕｂｅｒ ｅｔ ａｌ． （１９９４） Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ． １５２：５３６８、Ｚｈｕ ｅｔ ａｌ． （１９９７） Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｃｉ． ６：７８１、Ｈｕ ｅｔ ａｌ． （１９９６） Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ． ５６：３０５５、Ａｄａｍｓ ｅｔ ａｌ． （１９９３） Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ． ５３：４０２６、及びＭｃＣａｒｔｎｅｙ， ｅｔ ａｌ． （１９９５） Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇ． ８：３０１に記載されている。
「モノクローナル抗体」とは、抗原上の所定のエピトープに対して単一の結合特異性及び親和性を有する抗体のクローン調製物を指す。「ポリクローナル抗体」とは、単一の抗原に対して生じるが、異なる結合特異性及び親和性を有する抗体の調製物を指す。
「ヒト化」抗体は、ヒトでは免疫原性が低い一方で、非ヒト抗体の反応性を保持する抗体である。これは、例えば、非ヒトＣＤＲ領域を保持し、抗体の残りの部分をそのヒトの対応物と置き換えることによって達成できる。例えば、Ｍｏｒｒｉｓｏｎ ｅｔ ａｌ．， ＰＮＡＳ ＵＳＡ， ８１：６８５１−６８５５ （１９８４）；Ｍｏｒｒｉｓｏｎ ａｎｄ Ｏｉ， Ａｄｖ． Ｉｍｍｕｎｏｌ．， ４４：６５−９２ （１９８８）；Ｖｅｒｈｏｅｙｅｎ ｅｔ ａｌ．， Ｓｃｉｅｎｃｅ， ２３９：１５３４−１５３６ （１９８８）；Ｐａｄｌａｎ， Ｍｏｌｅｃ． Ｉｍｍｕｎ．， ２８：４８９−４９８ （１９９１）；Ｐａｄｌａｎ， Ｍｏｌｅｃ． Ｉｍｍｕｎ．， ３１（３）：１６９−２１７ （１９９４）を参照されたい。
本明細書で使用されるとき、「キメラ抗体」という用語は、（ａ）抗原結合部位（可変領域、ＣＤＲ、またはその一部）が、異なるかもしくは改変されたクラス、エフェクター機能、及び／または種の定常領域、または全く異なる分子に連結してキメラ抗体に新規の特性を付与する（例えば、酵素、毒素、ホルモン、増殖因子、薬物など）ように、定常領域またはその部分が、改変、置換、または交換されているか、あるいは（ｂ）可変領域またはその一部が、異なるかまたは改変された抗原特異性を有する可変領域（例えば、異なる種由来のＣＤＲ及びフレームワーク領域）で、改変、置換、または交換されている、抗体分子を指す。
「エピトープ」という用語は、抗体が特異的に結合する抗原のエリアまたは領域、すなわち、抗体と物理的に接触するエリアまたは領域を指し、数個のアミノ酸または数個のアミノ酸の部分、例えば５または６個以上、例えば２０個以上のアミノ酸、またはそれらのアミノ酸の部分を含むことができる。いくつかの場合では、エピトープは、例えば炭水化物、核酸、または脂質からの非タンパク質成分を含む。いくつかの場合では、エピトープは三次元部分である。したがって、例えば、標的がタンパク質である場合、エピトープは、連続したアミノ酸、またはタンパク質フォールディングにより近接するタンパク質の異なる部分からのアミノ酸（例えば、不連続なエピトープ）から構成され得る。同じことは、三次元構造を形成する他のタイプの標的分子にも当てはまる。
「特異的に結合する」という語句は、試料中の標的に対して、非標的の化合物に結合するよりも、より高い親和性、結合力で、より容易に、及び／またはより長い持続時間で標的に結合する分子（例えば、抗体または抗体断片）を指す。いくつかの実施形態では、標的に特異的に結合する抗体またはその抗原結合部分は、非標的化合物と比べて少なくとも２倍高い親和性で、例えば、少なくとも、４倍、５倍、６倍、７倍、８倍、９倍、１０倍、２０倍、２５倍、５０倍、または１００倍高い親和性で、標的に対して結合する抗体または抗原結合部分である。例えば、ＴＩＧＩＴに特異的に結合する抗体は、通常、非ＴＩＧＩＴ標的よりも少なくとも２倍高い親和性でＴＩＧＩＴに結合する。例えば、第１の標的に特異的または優先的に結合する抗体（または部分またはエピトープ）は、第２の標的に特異的または優先的に結合してもしなくてもよいことを、この定義を読んだ当業者には理解されよう。
「結合親和性」という用語は、本明細書では、２つの分子、例えば抗体またはその断片と抗原との非共有相互作用の強度の尺度として使用される。「結合親和性」という用語は、一価の相互作用（固有の活性）を記載するために使用される。
一価の相互作用を介した、２つの分子、例えば抗体またはその断片と抗原との結合親和性は、解離定数（ＫＤ）の決定によって定量化され得る。そして、ＫＤは、例えば、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）法（Ｂｉａｃｏｒｅ（商標））を使用して、複合体の形成及び解離の動態を測定することにより決定できる。一価複合体の会合及び解離に対応する速度定数は、それぞれ会合速度定数ｋａ（またはｋｏｎ）及び解離速度定数ｋｄ（またはｋｏｆｆ）と呼ばれる。ＫＤは、式ＫＤ＝ｋｄ／ｋａによってｋａ及びｋｄと相関する。解離定数の値は、周知された方法で直接決定でき、たとえ複雑な混合物であっても、例えば、Ｃａｃｅｃｉ ｅｔ ａｌ． （１９８４， Ｂｙｔｅ ９：３４０−３６２）に記述されているような方法で計算することができる。例えば、ＫＤは、Ｗｏｎｇ ＆ Ｌｏｈｍａｎ（１９９３， Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． ＵＳＡ ９０：５４２８−５４３２）によって開示させるもののような、ダブルフィルターニトロセルロースフィルター結合アッセイを使用して確立できる。例えばＥＬＩＳＡ、ウエスタンブロット、ＲＩＡ、及びフローサイトメトリー分析、ならびに本明細書の他の場所で例示される他のアッセイを含む、標的抗原に対する抗体などのリガンドの結合能力を評価する他の標準的なアッセイは、当該技術分野で公知である。抗体の結合キネティクス及び結合親和性はまた、例えばＢｉａｃｏｒｅ（商標）システムを使用する表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）；ＫｉｎＥｘＡ（登録商標）などの結合平衡除外法；及びバイオレイヤー干渉法（例えば、ＦｏｒｔｅＢｉｏ（登録商標）Ｏｃｔｅｔプラットフォームを使用する）などの、当技術分野で知られているかまたは以下の実施例セクションに記載されている標準的なアッセイによって評価できる。いくつかの実施形態では、結合親和性は、バイオレイヤー干渉法アッセイを使用して決定される。例えば、Ｗｉｌｓｏｎ ｅｔ ａｌ．， Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ａｎｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ Ｅｄｕｃａｔｉｏｎ， ３８：４００−４０７ （２０１０）；Ｄｙｓｉｎｇｅｒ ｅｔ ａｌ．， Ｊ． Ｉｍｍｕｎｏｌ． Ｍｅｔｈｏｄｓ， ３７９：３０−４１ （２０１２）；及びＥｓｔｅｐ ｅｔ ａｌ．， Ｍａｂｓ， ２０１３， ５：２７０−２７８を参照されたい。
本明細書で使用されるとき、「交差反応する」という用語は、抗体が産生された抗原以外の抗原に結合する抗体の能力を指す。いくつかの実施形態では、交差反応性とは、抗体が産生された抗原とは別の種由来抗原に結合する抗体の能力を指す。非限定的な例として、ヒトＴＩＧＩＴ抗原に対して産生された本明細書に記載されるような抗ＴＩＧＩＴ抗体は、異なる種（例えば、マウスまたはサル）由来のＴＩＧＩＴとの交差反応性を示し得る。
用語「ポリペプチド」、「ペプチド」、及び「タンパク質」は、アミノ酸残基のポリマーを指すために本明細書で交換可能に使用される。この用語は、１つ以上のアミノ酸残基が、対応する天然に存在するアミノ酸の人工化学模倣物であるアミノ酸ポリマー、ならびに天然に存在するアミノ酸ポリマー及び天然に存在しないアミノ酸ポリマーに適用される。本明細書で使用されるとき、この用語は、アミノ酸残基が共有ペプチド結合により連結されている、完全長タンパク質を含む任意の長さのアミノ酸鎖を包含する。
「アミノ酸」という用語は、天然に存在するアミノ酸及び合成アミノ酸、ならびに天然に存在するアミノ酸と同様の方法で機能するアミノ酸類似体及びアミノ酸模倣物を指す。天然に存在するアミノ酸は、遺伝暗号によってコードされるアミノ酸、及び後で修飾されるアミノ酸、例えば、ヒドロキシプロリン、γ−カルボキシグルタミン酸、及びＯ−ホスホセリンである。アミノ酸類似体とは、天然に存在するアミノ酸と同一の基本的な化学構造、すなわち、水素、カルボキシル基、アミノ基、及びＲ基に結合したα炭素を有する化合物、例えばホモセリン、ノルロイシン、メチオニンスルホキシド、メチオニンメチルスルホニウムを指す。そのような類似体は、修飾されたＲ基（例えば、ノルロイシン）または修飾されたペプチド骨格を有するが、天然に存在するアミノ酸と同一の基本的な化学構造を保持している。「アミノ酸模倣物」とは、アミノ酸の一般的な化学構造とは異なる構造を有するが、天然に存在するアミノ酸と同様に機能する化合物を指す。
本明細書では、アミノ酸は、それらの一般に知られている３文字記号またはＩＵＰＡＣ−ＩＵＢ生化学命名法委員会によって推奨されている１文字記号のいずれかによって言及されてよい。同様に、ヌクレオチドは、一般に受け入れられているそれらの１文字コードによって言及されてよい。
本明細書で使用されるとき、「核酸」及び「ポリヌクレオチド」という用語は、交換可能に、任意の長さのヌクレオチドの鎖を指し、ＤＮＡ及びＲＮＡを含む。ヌクレオチドは、デオキシリボヌクレオチド、リボヌクレオチド、修飾ヌクレオチドもしくは塩基、及び／またはそれらの類似体、またはＤＮＡポリメラーゼまたはＲＮＡポリメラーゼによって鎖に組み込まれ得る任意の基質であり得る。ポリヌクレオチドは、メチル化ヌクレオチド及びそれらの類似体のような、修飾されたヌクレオチドを含み得る。本明細書で企図されるポリヌクレオチドの例には、一本鎖及び二本鎖のＤＮＡ、一本鎖及び二本鎖のＲＮＡ、ならびに一本鎖及び二本鎖のＤＮＡ及びＲＮＡの混合物を有するハイブリッド分子が含まれる。
核酸またはタンパク質（例えば、抗体）に関して使用されるとき、「単離された」という用語は、核酸またはタンパク質が自然状態で関連する他の細胞成分を本質的に含まないことを示す。均一な状態であることが好ましい。それは、乾燥または水溶液のいずれかであってよい。通常、純度と均一性は、ポリアクリルアミドゲル電気泳動または高速液体クロマトグラフィーなどの分析化学技術を使用して決定される。調製中に存在する主要な種であるタンパク質は、実質的に精製されている。特に、単離された遺伝子は、遺伝子に隣接し、目的の遺伝子によってコードされるタンパク質以外のタンパク質をコードするオープンリーディングフレームから分離されている。「精製された」という用語は、核酸またはタンパク質が電気泳動ゲルで本質的に１つのバンドを生じさせることを意味する。特に、それは、核酸またはタンパク質が少なくとも８５％の純度、より好ましくは少なくとも９５％の純度、最も好ましくは少なくとも９９％の純度であることを意味する。
「腫瘍免疫療法薬」という用語は、対象のがんに対する免疫応答を増強、刺激、または上方制御する薬剤を指す（例えば、腫瘍増殖を阻害するための免疫応答の刺激）。いくつかの実施形態では、腫瘍免疫療法薬は、小分子、抗体、ペプチド、タンパク質、環状ペプチド、ペプチド模倣物、ポリヌクレオチド、阻害性ＲＮＡ、アプタマー、薬物化合物、または他の化合物である。いくつかの実施形態では、腫瘍免疫療法薬は、ＰＤ−１またはＰＤ−１の経路のアンタゴニストまたは阻害剤である。
「対象」、「患者」、「個体」などの用語は交換可能に使用され、示されている場合を除き、ヒトや非ヒト霊長類、ならびにウサギ、ラット、マウス、ヤギ、ブタ、及び他の哺乳類種などのなどの哺乳動物を指す。この用語は、対象が特定の病気と診断されたことを必ずしも示すものではないが、通常、医学的監督下にある個体を指す。患者は、既存の治療計画などの治療、モニタリング、調整、または修正を求めている個体であり得る。
「治療法」、「治療」、及び「改善」という用語は、症状の重症度の任意の軽減を指す。がんを治療する場合、治療とは、例えば、腫瘍のサイズ、がん細胞の数、増殖速度、転移活性、非がん細胞の細胞死などを減少させることを指し得る。本明細書で使用されるとき、「治療する」及び「予防する」という用語は、絶対的な用語であることを意図しない。治療と予防は、発症の遅延、症状の改善、患者の生存率の改善、生存期間または生存率の増加などを指す。治療及び予防は、本明細書に記載される治療を受けていない患者よりも、症状の頻度または重症度が低くなるように、完全（検出可能な症状が残っていない）または部分的であり得る。治療の効果は、治療を受けていない個体もしくは個体のプール、または治療前もしくは治療中の異なる時間での同一の患者と比較することができる。いくつかの態様では、例えば、投与前の個体または治療を受けていない対照の個体と比較して、疾患の重症度は少なくとも１０％減少する。いくつかの態様では、疾患の重症度は少なくとも２５％、５０％、７５％、８０％、または９０％減少するか、いくつかの場合では、標準的な診断技術を使用しては検出できなくなる。
本明細書で使用されるとき、薬剤（例えば、本明細書に記載される抗体）の「治療量」または「治療有効量」は、対象において、疾患（例えば、がん）を予防、その重症度を緩和、軽減、または低減する薬剤の量である。例えば、所与のパラメーターに対して、治療有効量は少なくとも５％、１０％、１５％、２０％、２５％、４０％、５０％、６０％、７５％、８０％、９０％、または少なくとも１００％の治療効果の増加または減少を示す。治療効果は、「倍」の増加または減少として表すこともできる。例えば、治療有効量は、対照に対して少なくとも１．２倍、１．５倍、２倍、５倍、またはそれ以上の効果を有し得る。
「投与する」、「投与された」、または「投与すること」という用語は、生物学的作用の所望の部位に薬剤、化合物、または組成物を送達する方法を指す。これらの方法には、局所送達、非経口送達、静脈内送達、皮内送達、筋肉内送達、結腸送達、直腸送達、または腹腔内送達が含まれるが、これらに限定されない。本明細書に記載される薬剤及び方法と共に必要に応じて利用される投与技術には、例えば、Ｇｏｏｄｍａｎ ａｎｄ Ｇｉｌｍａｎ， Ｔｈｅ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ Ｂａｓｉｓ ｏｆ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ， ｃｕｒｒｅｎｔ ｅｄ．；Ｐｅｒｇａｍｏｎ；ａｎｄ Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ， Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ （ｃｕｒｒｅｎｔ ｅｄｉｔｉｏｎ）， Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏ．， Ｅａｓｔｏｎ， ＰＡにおいて論じられているものが含まれる。
ＩＩＩ． ＴＩＧＩＴに対する抗体
一態様では、ヒトＴＩＧＩＴ（ＩｇとＩＴＩＭドメインをもつＴ細胞免疫受容体）に結合する抗体及び抗体の抗原結合部分が提供される。本明細書において記載されるように、いくつかの実施形態では、抗ＴＩＧＩＴ抗体は、ＴＩＧＩＴと、ＣＤ１５５及びＣＤ１１２の一方または両方との相互作用を阻害する。いくつかの実施形態では、抗ＴＩＧＩＴ抗体は、機能的バイオアッセイでＴＩＧＩＴとＣＤ１５５の相互作用を阻害し、ＣＤ１５５−ＣＤ２２６シグナル伝達を可能にする。いくつかの実施形態では、抗ＴＩＧＩＴ抗体は、抗ＰＤ−１剤（例えば、抗ＰＤ−１抗体）または抗ＰＤ−Ｌ１剤（例えば、抗ＰＤ−Ｌ１抗体）との相乗効果を示す。
抗ＴＩＧＩＴ抗体の特徴
いくつかの実施形態では、抗ＴＩＧＩＴ抗体は、高い親和性でヒトＴＩＧＩＴタンパク質（配列番号２１８）またはその部分と結合する。いくつかの実施形態では、この抗体は、５ｎＭ未満、１ｎＭ未満、５００ｐＭ未満、２５０ｐＭ未満、１５０ｐＭ未満、１００ｐＭ未満、５０ｐＭ未満、４０ｐＭ未満、３０ｐＭ未満、２０ｐＭ未満、または約１０ｐＭ未満のヒトＴＩＧＩＴに対する結合親和性（ＫＤ）を有する。いくつかの実施形態では、この抗体は、５０ｐＭ未満のヒトＴＩＧＩＴに対する結合親和性（ＫＤ）を有する。いくつかの実施形態では、この抗体は、約１ｐＭ〜約５ｎＭ、例えば約１ｐＭ〜約１ｎＭ、約１ｐＭ〜約５００ｐＭ、約５ｐＭ〜約２５０ｐＭ、または約１０ｐＭ〜約１００ｐＭのヒトＴＩＧＩＴに対する結合親和性（ＫＤ）を有する。
いくつかの実施形態では、高い親和性でヒトＴＩＧＩＴに結合することに加えて、抗ＴＩＧＩＴ抗体は、カニクイザル（「ｃｙｎｏ」）のＴＩＧＩＴ（例えば、配列番号２１９の配列を有するｃｙｎｏ ＴＩＧＩＴタンパク質）、及び／またはマウスＴＩＧＩＴ（例えば、配列番号２２０の配列を有するマウスＴＩＧＩＴタンパク質）との交差反応性を示す。いくつかの実施形態では、抗ＴＩＧＩＴ抗体は、１００ｎＭ以下の結合親和性（ＫＤ）で、マウスＴＩＧＩＴ（例えば、配列番号２２０の配列を有するマウスＴＩＧＩＴ）に結合する。いくつかの実施形態では、抗ＴＩＧＩＴ抗体は、５ｎＭ以下のＫＤでヒトＴＩＧＩＴに結合し、１００ｎＭ以下のＫＤでマウスＴＩＧＩＴと交差反応する。いくつかの実施形態では、ヒトＴＩＧＩＴに結合する抗ＴＩＧＩＴ抗体はまた、カニクイザルＴＩＧＩＴとマウスＴＩＧＩＴの両方との交差反応性を示す。
いくつかの実施形態では、抗体の交差反応性は、細胞（例えば、ヒトＴＩＧＩＴ、ｃｙｎｏ ＴＩＧＩＴ、もしくはマウスＴＩＧＩＴを発現する細胞株、または内在性にＴＩＧＩＴを発現する初代細胞、例えば、ヒトＴＩＧＩＴ、ｃｙｎｏ ＴＩＧＩＴ、もしくはマウスＴＩＧＩＴを内在性に発現する初代Ｔ細胞）で発現するＴＩＧＩＴに対する抗ＴＩＧＩＴ抗体の特異的結合を検出することにより決定される。いくつかの実施形態では、抗体の結合及び抗体の交差反応性は、精製されるかまたは組換えのＴＩＧＩＴ（例えば、精製されるかまたは組換えのヒトＴＩＧＩＴ、精製されるかもしくは組換えのｃｙｎｏ ＴＩＧＩＴ、または精製されるかもしくは組換えのマウスＴＩＧＩＴ）、あるいはＴＩＧＩＴを含むキメラタンパク質（例えば、ヒトＴＩＧＩＴ、ｃｙｎｏ ＴＩＧＩＴ、もしくはマウスＴＩＧＩＴを含むＦｃ融合タンパク質、またはヒトＴＩＧＩＴ、ｃｙｎｏ ＴＩＧＩＴ、もしくはマウスＴＩＧＩＴを含むＨｉｓタグ付きタンパク質）に対する抗ＴＩＧＩＴ抗体の特異的結合を検出することにより決定される。
結合親和性、結合キネティクス、及び交差反応性を分析する方法は、当該技術分野で公知である。例えば、Ｅｒｎｓｔ ｅｔ ａｌ．， Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ Ｅｑｕｉｌｉｂｒｉｕｍ Ｄｉｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ Ｃｏｎｓｔａｎｔｓ， Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ （Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ ｅｄ． ２００９）を参照されたい。これらの方法には、固相結合アッセイ（例えば、ＥＬＩＳＡアッセイ）、免疫沈降、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ、Ｂｉａｃｏｒｅ（商標）（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ， Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ， ＮＪ））、結合平衡除外法（例えば、ＫｉｎＥｘＡ（登録商標））、フローサイトメトリー、蛍光標識細胞分取（ＦＡＣＳ）、バイオレイヤー干渉法（例えば、Ｏｃｔｅｔ（商標）（ＦｏｒｔｅＢｉｏ， Ｉｎｃ．， Ｍｅｎｌｏ Ｐａｒｋ， ＣＡ））、及びウエスタンブロット分析が含まれるが、これらに限定されない。ＳＰＲ技術は、例えば、Ｈａｈｎｆｅｌｄ ｅｔ ａｌ． Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ Ｋｉｎｅｔｉｃ Ｄａｔａ Ｕｓｉｎｇ ＳＰＲ Ｂｉｏｓｅｎｓｏｒｓ， Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｄｉａｇｎｏｓｉｓ ｏｆ Ｉｎｆｅｃｔｉｏｕｓ Ｄｉｓｅａｓｅｓ （２００４）で総説されている。典型的なＳＰＲ実験では、一方の相互作用物質（標的または標的化剤）がフローセルのＳＰＲ活性金コーティングガラススライドに固定され、他方の相互作用物質を含む試料が表面を横切るように導入される。特定の波長の光が表面に照射されると、金の光反射率の変化が、結合と結合の動態を示す。いくつかの実施形態では、結合平衡除外法が親和性を決定するのに使用される。この技術は、例えば、Ｄａｒｌｉｎｇ ｅｔ ａｌ．， Ａｓｓａｙ ａｎｄ Ｄｒｕｇ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ Ｖｏｌ． ２， ｎｕｍｂｅｒ ６ ６４７−６５７ （２００４）に記載されている。いくつかの実施形態では、バイオレイヤー干渉法が親和性を決定するのに使用される。この技術は、例えば、Ｗｉｌｓｏｎ ｅｔ ａｌ．， Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ａｎｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ Ｅｄｕｃａｔｉｏｎ， ３８：４００−４０７ （２０１０）；Ｄｙｓｉｎｇｅｒ ｅｔ ａｌ．， Ｊ． Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｍｅｔｈｏｄｓ， ３７９：３０−４１ （２０１２）に記載されている。
いくつかの実施形態では、本開示の抗ＴＩＧＩＴ抗体及びその抗原結合部分は、ＴＩＧＩＴとリガンドＣＤ１５５との相互作用を阻害する。いくつかの実施形態では、抗ＴＩＧＩＴ抗体及びその抗原結合部分は、ＴＩＧＩＴとリガンドＣＤ１１２との相互作用を阻害する。いくつかの実施形態では、抗ＴＩＧＩＴ抗体及びその抗原結合部分は、ＴＩＧＩＴとリガンドＣＤ１５５及びＣＤ１１２の両方との相互作用を阻害する。
いくつかの実施形態では、ＴＩＧＩＴとＣＤ１５５及び／またはＣＤ１１２との相互作用を阻害する抗ＴＩＧＩＴ抗体の能力は、ＴＩＧＩＴとＣＤ１５５またはＣＤ１１２との物理的相互作用が結合アッセイで減少するかどうかを測定することにより評価される。いくつかの実施形態では、結合アッセイは競合結合アッセイである。アッセイは、ＥＬＩＳＡアッセイ、フローサイトメトリー、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）アッセイ（例えば、Ｂｉａｃｏｒｅ（商標））、またはバイオレイヤー干渉法（例えば、ＦｏｒｔｅＢｉｏ Ｏｃｔｅｔ（商標））などであるが、これらに限定されない、様々な形式で実行される。例えば、Ｄｕｆｆ ｅｔ ａｌ．， Ｂｉｏｃｈｅｍ Ｊ．， ２００９， ４１９：５７７−５８４；Ｄｙｓｉｎｇｅｒ ｅｔ ａｌ．， Ｊ． Ｉｍｍｕｎｏｌ． Ｍｅｔｈｏｄｓ， ３７９：３０−４１ （２０１２）；及びＥｓｔｅｐ ｅｔ ａｌ， Ｍａｂｓ， ２０１３， ５：２７０−２７８を参照されたい。
いくつかの実施形態では、抗ＴＩＧＩＴ抗体は、細胞内のＣＤ１５５−ＣＤ２２６シグナル伝達の活性化を測定する（例えば、下流のレポーターの活性化によって）ことによりＴＩＧＩＴ／ＣＤ１５５相互作用の阻害を評価する機能的細胞アッセイなどの、機能的バイオアッセイにおいてＴＩＧＩＴとＣＤ１５５の相互作用を阻害する。非限定的な例示的な機能的細胞アッセイは、以下の実施例セクションに記載されている。この例示的な機能的アッセイでは、ルシフェラーゼ発現は、ＴＣＲの結合とＣＤ１５５−ＣＤ２２６からの共刺激シグナルを必要とする。第１の細胞（「Ｔエフェクター細胞」とも呼ばれる）は、細胞表面でＴＣＲ複合体、ＴＩＧＩＴ、及びＣＤ２２６を発現し、ルシフェラーゼ遺伝子を含んでいる。第２の細胞（「人工抗原提示細胞」とも呼ばれる）は、ＴＣＲアクチベーター及びＣＤ１５５を発現する。抗ＴＩＧＩＴ抗体の非存在下での細胞の共培養は、ＣＤ１５５−ＣＤ２２６によるエフェクター細胞の共刺激を阻害するＴＩＧＩＴ−ＣＤ１５５相互作用をもたらし、エフェクター細胞によるルシフェラーゼの発現を防ぐ。ＴＩＧＩＴとＣＤ１５５の相互作用を阻害する抗ＴＩＧＩＴ抗体の存在下で、ＣＤ１５５とＣＤ２２６は相互作用し、第１の細胞でルシフェラーゼ発現を駆動する共刺激シグナルを生成することができる。そのような機能的細胞アッセイは、当技術分野で、例えば、Ｃｏｎｇ ｅｔ ａｌ．， Ｇｅｎｅｔｉｃ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ ａｎｄ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｎｅｗｓ， ２０１５， ３５（１０）：１６−１７において記載されており、市販もされている（例えば、ＴＩＧＩＴ／ＣＤ１５５ Ｂｌｏｃｋａｄｅ Ｂｉｏａｓｓａｙ Ｋｉｔ， Ｐｒｏｍｅｇａ Ｃｏｒｐ．， Ｍａｄｉｓｏｎ， ＷＩ）。いくつかの実施形態では、ＴＩＧＩＴとＣＤ１５５の相互作用を阻害する抗ＴＩＧＩＴ抗体は、ＣＤ１５５−ＣＤ２２６シグナル伝達の活性化のレベルまたは量を、（例えば、ＴＩＧＩＴ／ＣＤ１５５ Ｂｌｏｃｋａｄｅ Ｂｉｏａｓｓａｙ Ｋｉｔなどの細胞アッセイにおいて測定されるとき、）抗ＴＩＧＩＴ抗体の非存在下でのＣＤ１５５−ＣＤ２２６シグナル伝達のレベルまたは量と比較して、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、またはそれ以上増加させる。いくつかの実施形態では、ＴＩＧＩＴとＣＤ１５５の相互作用を阻害する抗ＴＩＧＩＴ抗体は、ＣＤ１５５−ＣＤ２２６シグナル伝達の活性化のレベルまたは量を、（例えば、ＴＩＧＩＴ／ＣＤ１５５ Ｂｌｏｃｋａｄｅ Ｂｉｏａｓｓａｙ Ｋｉｔなどの細胞アッセイにおいて測定されるとき、）抗ＴＩＧＩＴ抗体の非存在下でのＣＤ１５５−ＣＤ２２６シグナル伝達のレベルまたは量と比較して、少なくとも約１．２倍、少なくとも１．５倍、少なくとも２倍、少なくとも３倍、少なくとも４倍、少なくとも５倍、少なくとも６倍、少なくとも７倍、少なくとも８倍、少なくとも９倍、少なくとも１０倍、またはそれ以上増加させる。
いくつかの実施形態では、ヒトＴＩＧＩＴに結合する（ならびに、必要に応じて、カニクイザル及び／またはマウスのＴＩＧＩＴと交差反応性を示し、及び／または、必要に応じてＴＩＧＩＴとＣＤ１５５及び／またはＣＤ１１２との相互作用を阻害する）抗ＴＩＧＩＴ抗体は、抗ＰＤ−１剤（例えば、抗ＰＤ−１抗体）との相乗効果を示す。いくつかの実施形態では、抗ＴＩＧＩＴ抗体は、抗ＰＤ−１剤（例えば、抗ＰＤ−１抗体）の効果を、少なくとも約１．２倍、少なくとも約１．５倍、少なくとも約２倍、少なくとも約３倍、少なくとも約４倍、少なくとも約５倍、少なくとも約６倍、少なくとも約７倍、少なくとも約８倍、少なくとも約９倍、少なくとも約１０倍、またはそれ以上増強する。
いくつかの実施形態では、抗ＴＩＧＩＴ抗体は、ＴＩＧＩＴシグナル伝達の阻害及びＰＤ−１シグナル伝達の阻害が、エフェクター細胞におけるシグナル伝達の活性化を測定することにより評価される機能的細胞アッセイなどの機能的バイオアッセイで、抗ＰＤ−１剤（例えば、抗ＰＤ−１抗体）と相乗効果を示す。非限定的な例示的な機能的細胞アッセイは、以下の実施例セクションに記載されている。例示的な機能アッセイにでは、第１の細胞（「Ｔエフェクター細胞」とも呼ばれる）は、細胞表面でＴＣＲ複合体、ＴＩＧＩＴ、ＣＤ２２６、及びＰＤ−１を発現し、ルシフェラーゼ遺伝子を含んでいる。第２の細胞（「人工抗原提示細胞」とも呼ばれる）は、ＴＣＲアクチベーター、ＣＤ１５５、及びＰＤ−Ｌ１を発現する。エフェクター細胞によるルシフェラーゼ遺伝子の発現は、（１）ＴＩＧＩＴ−ＣＤ１５５相互作用の遮断によりＣＤ１５５−ＣＤ２２６相互作用とそれに続くエフェクター細胞によるルシフェラーゼ発現の共刺激、または（２）ＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１相互作用の遮断により、エフェクター細胞によるルシフェラーゼ発現の阻害の緩和、のいずれかまたはその両方によって活性化される。抗ＴＩＧＩＴ抗体と抗ＰＤ−１剤または抗ＰＤ−Ｌ１剤の非存在下または存在下でのルシフェラーゼ発現レベルを測定し、抗ＴＩＧＩＴ抗体が抗ＰＤ−１剤または抗ＰＤ−Ｌ１剤と相乗効果を示すかどうかを判定するために、定量化することができる。そのような機能的細胞アッセイは、当技術分野で記載され（例えば、Ｃｏｎｇ ｅｔ ａｌ．， Ｇｅｎｅｔｉｃ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ ａｎｄ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｎｅｗｓ， ２０１５， ３５（１０）：１６−１７）ており、市販もされている（例えば、ＰＤ−１／ＴＩＧＩＴ Ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ Ｂｉｏａｓｓａｙ Ｋｉｔ， Ｐｒｏｍｅｇａ Ｃｏｒｐ．， Ｍａｄｉｓｏｎ， ＷＩ）。
いくつかの実施形態では、抗ＴＩＧＩＴ抗体の有効性、及び抗ＴＩＧＩＴ抗体が抗ＰＤ−１剤（例えば、抗ＰＤ−１抗体）または抗ＰＤ−Ｌ１剤（例えば、抗 −ＰＤ−Ｌ１抗体）と共に相乗効果して阻害するかどうかを、インビボモデル、例えばインビボ腫瘍モデルを使用して測定することができる。例えば、本明細書に記載される抗ＴＩＧＩＴ抗体の有効性、または抗ＰＤ−１剤または抗ＰＤ−Ｌ１剤と組み合わせて投与したときの本明細書に記載される抗ＴＩＧＩＴ抗体の有効性を、同系マウス腫瘍モデルを使用して評価することができる。適切な同系腫瘍モデルは、当該技術分野で記載されている。例えば、Ｒｉｏｓ−Ｄｏｒｉａ ｅｔ ａｌ．， Ｎｅｏｐｌａｓｉａ， ２０１５， １７：６６１−６７０；ａｎｄ Ｍｏｙｎｉｈａｎ ｅｔ ａｌ．， Ｎａｔｕｒｅ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ， ２０１６， ｄｏｉ：１０．１０３８／ｎｍ．４２００を参照されたい。いくつかの実施形態では、抗ＴＩＧＩＴ抗体は、インビボモデルにおいて、腫瘍のサイズまたは全体的な腫瘍の数を、対照または参照値と比較して（例えば、未処理対象における腫瘍サイズまたは全体的な腫瘍の数と比較して）、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、またはそれ以上低減する。
いくつかの実施形態では、抗ＴＩＧＩＴ抗体は、配列番号２１８を参照して付番されるアミノ酸８１位及び８２位の一方または両方を含むヒトＴＩＧＩＴのエピトープを認識する。いくつかの実施形態では、抗ＴＩＧＩＴ抗体は、８１位にＰｈｅを含むエピトープを認識する。いくつかの実施形態では、抗ＴＩＧＩＴ抗体は、８２位にＬｙｓまたはＳｅｒを含むエピトープを認識する。いくつかの実施形態では、抗ＴＩＧＩＴ抗体は、８１位にＰｈｅ、及び８２位にＬｙｓを含むエピトープを認識する。いくつかの実施形態では、抗ＴＩＧＩＴ抗体は、８１位にＰｈｅ、及び８２位にＳｅｒを含むエピトープを認識する。
いくつかの実施形態では、抗ＴＩＧＩＴ抗体は、アミノ酸８１位及び８２位の一方または両方を含む直線状エピトープ（例えば、８１位にＰｈｅ、及び８２位にＬｙｓまたはＳｅｒを含む不連続エピトープ）を認識する。いくつかの実施形態では、抗ＴＩＧＩＴ抗体は、アミノ酸８１位及び８２位の一方または両方を含む不連続エピトープ（例えば、８１位にＰｈｅ、及び８２位にＬｙｓまたはＳｅｒを含む不連続エピトープ）を認識する。
いくつかの実施形態では、抗ＴＩＧＩＴ抗体は、アミノ酸５１位、５２位、５３位、５４位、５５位、７３位、７４位、７５位、７６位、７７位、７９位、８３位、８４位、８５位、８６位、８７位、８８位、８９位、９０位、９１位、９２位、または９３位のうちの１つ以上（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１２、１３、１４、１５、またはそれ以上）をさらに含む、ヒトＴＩＧＩＴ上のエピトープに結合する。いくつかの実施形態では、抗ＴＩＧＩＴ抗体は、以下のうちの１つ以上（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１２、１３、１４、１５、またはそれ以上）をさらに含む、ヒトＴＩＧＩＴ上のエピトープに結合する：５１位にＴｈｒ、５２位にＡｌａ、５３位にＧｌｕもしくはＧｌｎ、５４位にＶａｌ、５５位にＴｈｒ、７３位にＬｅｕ、７４位にＧｌｙ、７５位にＴｒｐ、７６位にＨｉｓ、７７位にＶａｌもしくはＩｌｅ、７９位にＳｅｒもしくはＰｒｏ、８３位にＡｓｐ、８４位にＡｒｇ、８５位Ｖａｌに、８６位にＶａｌもしくはＡｌａ、８７位にＰｒｏ、８８位にＧｌｙ、８９位にＰｒｏ、９０位にＳｅｒもしくはＧｌｙ、９１位にＬｅｕ、９２位にＧｌｙ、または９３位にＬｅｕ。いくつかの実施形態では、抗ＴＩＧＩＴ抗体は、アミノ酸残基Ｔｈｒ５１、Ａｌａ５２、Ｇｌｎ５３、Ｖａｌ５４、Ｔｈｒ５５、Ｌｅｕ７３、Ｇｌｙ７４、Ｔｒｐ７５、Ｈｉｓ７６、Ｉｌｅ７７、Ｐｒｏ７９、Ａｓｐ８３、Ａｒｇ８４、Ｖａｌ８５、Ａｌａ８６、Ｐｒｏ８７、Ｇｌｙ８８、Ｐｒｏ８９、Ｇｌｙ９０、Ｌｅｕ９１、Ｇｌｙ９２、及びＬｅｕ９３のうちの１つ以上（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１２、１３、１４、１５、またはそれ以上）をさらに含む、ヒトＴＩＧＩＴ上のエピトープに結合する。
いくつかの実施形態では、抗ＴＩＧＩＴ抗体は、８１位にＰｈｅ、及び８２位にＬｙｓまたはＳｅｒを含み、５１位にＴｈｒ、５２位にＡｌａ、５３位にＧｌｕもしくはＧｌｎ、５４位にＶａｌ、及び／または５５位にＴｈｒをさらに含むエピトープを認識する。いくつかの実施形態では、抗ＴＩＧＩＴ抗体は、８１位にＰｈｅ、及び８２位にＬｙｓまたはＳｅｒを含み、７４位にＧｌｙ、７５位にＴｒｐ、７６位にＨｉｓ、及び／または７７位にＶａｌをさらに含むエピトープを認識する。いくつかの実施形態では、抗ＴＩＧＩＴ抗体は、８１位にＰｈｅ、及び８２位にＬｙｓまたはＳｅｒを含み、８７位にＰｒｏ、８８位にＧｌｙ、８９位にＰｒｏ、９０位にＳｅｒまたはＧｌｙ、９１位にＬｅｕ、９２位にＧｌｙ、及び／または９３位にＬｅｕをさらに含むエピトープを認識する。いくつかの実施形態では、抗ＴＩＧＩＴ抗体は、アミノ酸残基Ｔｈｒ５１、Ａｌａ５２、Ｇｌｎ５３、Ｖａｌ５４、Ｔｈｒ５５、Ｇｌｙ７４、Ｔｒｐ７５、Ｈｉｓ７６、Ｉｌｅ７７、Ｐｈｅ８１、Ｌｙｓ８２、Ｐｒｏ８７、Ｇｌｙ８８、Ｐｒｏ８９、Ｇｌｙ９０、Ｌｅｕ９１、Ｇｌｙ９２、及びＬｅｕ９３を含むエピトープを認識する。
いくつかの実施形態では、抗ＴＩＧＩＴ抗体は、８１位にＰｈｅ、及び８２位にＬｙｓまたはＳｅｒを含み、５２位にＡｌａ、及び／または５３位にＧｌｕもしくはＧｌｎをさらに含むエピトープを認識する。いくつかの実施形態では、抗ＴＩＧＩＴ抗体は、８１位にＰｈｅ、及び８２位にＬｙｓまたはＳｅｒを含み、７３位にＬｅｕ、７４位にＧｌｙ、及び／または７５位にＴｒｐをさらに含むエピトープを認識する。いくつかの実施形態では、抗ＴＩＧＩＴ抗体は、８１位にＰｈｅ、及び８２位にＬｙｓまたはＳｅｒを含み、８３位にＡｓｐ、８４位にＡｒｇ、８５位にＶａｌ、及び／または８６位にＶａｌもしくはＡｌａをさらに含むエピトープを認識する。いくつかの実施形態では、抗ＴＩＧＩＴ抗体は、アミノ酸残基Ａｌａ５２、Ｇｌｎ５３、Ｌｅｕ７３、Ｇｌｙ７４、Ｔｒｐ７５、Ｐｒｏ７９、Ｐｈｅ８１、Ｌｙｓ８２、Ａｓｐ８３、Ａｒｇ８４、Ｖａｌ８５、及びＡｌａ８６を含むエピトープを認識する。
いくつかの実施形態では、抗ＴＩＧＩＴ抗体は、ヒトＴＩＧＩＴ（配列番号２１８）の残基６８〜８２に対応する配列ＩＣＮＡＤＬＧＷＨＩＳＰＳＦＫ（配列番号２５８）を含むヒトＴＩＧＩＴのエピトープを認識する。いくつかの実施形態では、抗ＴＩＧＩＴ抗体は、配列ＩＣＮＡＤＬＧＷＨＩＳＰＳＦＫ（配列番号２５８）からなるヒトＴＩＧＩＴのエピトープを認識する。
抗ＴＩＧＩＴ抗体の配列
いくつかの実施形態では、ヒトＴＩＧＩＴに結合し、必要に応じてカニクイザルＴＩＧＩＴ及び／またはマウスＴＩＧＩＴと交差反応性を示す抗ＴＩＧＩＴ抗体は、軽鎖配列もしくはその部分、及び／または重鎖配列もしくはその部分を含み、本明細書に記載される以下の抗体のいずれかに由来する：クローン２、クローン２Ｃ、クローン３、クローン５、クローン１３、クローン１３Ａ、クローン１３Ｂ、クローン１３Ｃ、クローン１３Ｄ、クローン１４、クローン１６、クローン１６Ｃ、クローン１６Ｄ、クローン１６Ｅ、クローン１８、クローン２１、クローン２２、クローン２５、クローン２５Ａ、クローン２５Ｂ、クローン２５Ｃ、クローン２５Ｄ、クローン２５Ｅ、クローン２７、またはクローン５４。抗ＴＩＧＩＴ抗体のクローン２、クローン２Ｃ、クローン３、クローン５、クローン１３、クローン１３Ａ、クローン１３Ｂ、クローン１３Ｃ、クローン１３Ｄ、クローン１４、クローン１６、クローン１６Ｃ、クローン１６Ｄ、クローン１６Ｅ、クローン１８、クローン２１、クローン２２、クローン２５、クローン２５Ａ、クローン２５Ｂ、クローン２５Ｃ、クローン２５Ｄ、クローン２５Ｅ、クローン２７、及びクローン５４のＣＤＲ、軽鎖可変領域（ＶＬ）、及び重鎖可変領域（ＶＨ）のアミノ酸配列は、以下の表３に記述されている。
いくつかの実施形態では、抗ＴＩＧＩＴ抗体は、配列番号１、配列番号１９、配列番号３７、配列番号５５、配列番号７３、配列番号９１、配列番号１０９、配列番号１２７、配列番号１４５、配列番号１６３、配列番号１８１、配列番号１９９、配列番号２４５、配列番号２４６、配列番号２４７、配列番号２４８、配列番号２４９、配列番号２５０、配列番号２５１、配列番号２５２、配列番号２５３、配列番号２５４、配列番号２５５、配列番号２５６、または配列番号２５７に対して少なくとも９０％の配列同一性（例えば、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％の配列同一性）を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）を含む。いくつかの実施形態では、抗ＴＩＧＩＴ抗体は、配列番号１、配列番号１９、配列番号３７、配列番号５５、配列番号７３、配列番号９１、配列番号１０９、配列番号１２７、配列番号１４５、配列番号１６３、配列番号１８１、配列番号１９９、配列番号２４５、配列番号２４６、配列番号２４７、配列番号２４８、配列番号２４９、配列番号２５０、配列番号２５１、配列番号２５２、配列番号２５３、配列番号２５４、配列番号２５５、配列番号２５６、または配列番号２５７に対して少なくとも９０％のアミノ酸配列を含むＶＨを含む。いくつかの実施形態では、参照配列（例えば、配列番号１、配列番号１９、配列番号３７、配列番号５５、配列番号７３、配列番号９１、配列番号１０９、配列番号１２７、配列番号１４５、配列番号１６３、配列番号１８１、配列番号１９９、配列番号２４５、配列番号２４６、配列番号２４７、配列番号２４８、配列番号２４９、配列番号２５０、配列番号２５１、配列番号２５２、配列番号２５３、配列番号２５４、配列番号２５５、配列番号２５６、または配列番号２５７）に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するＶＨ配列は、参照配列に対して、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０またはそれ以上の置換（例えば、保存的置換）、挿入、または欠失を含むが、ヒトＴＩＧＩＴに結合する能力を保持し、必要に応じて、ＣＤ１５５及び／またはＣＤ１１２のＴＩＧＩＴに対する結合を遮断する能力を保持する。
いくつかの実施形態では、抗ＴＩＧＩＴ抗体は、配列番号１０、配列番号２８、配列番号４６、配列番号６４、配列番号８２、配列番号１００、配列番号１１８、配列番号１３６、配列番号１５４、配列番号１７２、配列番号１９０、または配列番号２０８に対して少なくとも９０％の配列同一性（例えば、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％の配列同一性）を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む。いくつかの実施形態では、抗ＴＩＧＩＴ抗体は、配列番号１０、配列番号２８、配列番号４６、配列番号６４、配列番号８２、配列番号１００、配列番号１１８、配列番号１３６、配列番号１５４、配列番号１７２、配列番号１９０、または配列番号２０８のアミノ酸配列を含むＶＬを含む。いくつかの実施形態では、参照配列（例えば、配列番号１０、配列番号２８、配列番号４６、配列番号６４、配列番号８２、配列番号１００、配列番号１１８、配列番号１３６、配列番号１５４、配列番号１７２、配列番号１９０、または配列番号２０８）に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するＶＬ配列は、参照配列に対して、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０またはそれ以上の置換（例えば、保存的置換）、挿入、または欠失を含むが、ヒトＴＩＧＩＴに結合する能力を保持し、必要に応じて、ＣＤ１５５及び／またはＣＤ１１２のＴＩＧＩＴに対する結合を遮断する能力を保持する。
いくつかの実施形態では、抗ＴＩＧＩＴ抗体は、配列番号１、配列番号１９、配列番号３７、配列番号５５、配列番号７３、配列番号９１、配列番号１０９、配列番号１２７、配列番号１４５、配列番号１６３、配列番号１８１、配列番号１９９、配列番号２４５、配列番号２４６、配列番号２４７、配列番号２４８、配列番号２４９、配列番号２５０、配列番号２５１、配列番号２５２、配列番号２５３、配列番号２５４、配列番号２５５、配列番号２５６、または配列番号２５７に対して少なくとも９０％の配列同一性（例えば、例えば、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％の配列同一性）を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含み、配列番号１０、配列番号２８、配列番号４６、配列番号６４、配列番号８２、配列番号１００、配列番号１１８、配列番号１３６、配列番号１５４、配列番号１７２、配列番号１９０、または配列番号２０８に対して少なくとも９０％の配列同一性（例えば、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％の配列同一性）を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域をさらに含む。いくつかの実施形態では、抗ＴＩＧＩＴ抗体は、配列番号１、配列番号１９、配列番号３７、配列番号５５、配列番号７３、配列番号９１、配列番号１０９、配列番号１２７、配列番号１４５、配列番号１６３、配列番号１８１、配列番号１９９、配列番号２４５、配列番号２４６、配列番号２４７、配列番号２４８、配列番号２４９、配列番号２５０、配列番号２５１、配列番号２５２、配列番号２５３、配列番号２５４、配列番号２５５、配列番号２５６、または配列番号２５７に対して少なくとも９０％のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含み、配列番号１０、配列番号２８、配列番号４６、配列番号６４、配列番号８２、配列番号１００、配列番号１１８、配列番号１３６、配列番号１５４、配列番号１７２、配列番号１９０、または配列番号２０８のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域をさらに含む。
いくつかの実施形態では、抗ＴＩＧＩＴ抗体は以下を含む：
（ａ）配列番号１もしくは配列番号２４５に対して少なくとも９０％の配列同一性（例えば、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性）を有するアミノ酸配列を含むＶＨ、及び配列番号１０に対して少なくとも９０％の配列同一性（例えば、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性）を有するアミノ酸配列を含むＶＬ；
（ｂ）配列番号１９に対して少なくとも９０％の配列同一性（例えば、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性）を有するアミノ酸配列を含むＶＨ、及び配列番号２８に対して少なくとも９０％の配列同一性（例えば、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性）を有するアミノ酸配列を含むＶＬ；
（ｃ）配列番号３７に対して少なくとも９０％の配列同一性（例えば、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性）を有するアミノ酸配列を含むＶＨ、及び配列番号４６に対して少なくとも９０％の配列同一性（例えば、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性）を有するアミノ酸配列を含むＶＬ；
（ｄ）配列番号５５、配列番号２４６、配列番号２４７、配列番号２４８、もしくは配列番号２４９のうちのいずれか１つに対して少なくとも９０％の配列同一性（例えば、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性）を有するアミノ酸配列を含むＶＨ、及び配列番号６４に対して少なくとも９０％の配列同一性（例えば、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性）を有するアミノ酸配列を含むＶＬ；
（ｅ）配列番号７３に対して少なくとも９０％の配列同一性（例えば、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性）を有するアミノ酸配列を含むＶＨ、及び配列番号８２に対して少なくとも９０％の配列同一性（例えば、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性）を有するアミノ酸配列を含むＶＬ；
（ｆ）配列番号９１、配列番号２５０、配列番号２５１、または配列番号２５２のうちのいずれか１つに対して少なくとも９０％の配列同一性（例えば、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性）を有するアミノ酸配列を含むＶＨ、及び配列番号１００に対して少なくとも９０％の配列同一性（例えば、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性）を有するアミノ酸配列を含むＶＬ；
（ｇ）配列番号１０９に対して少なくとも９０％の配列同一性（例えば、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性）を有するアミノ酸配列を含むＶＨ、及び配列番号１１８に対して少なくとも９０％の配列同一性（例えば、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性）を有するアミノ酸配列を含むＶＬ；
（ｈ）配列番号１２７に対して少なくとも９０％の配列同一性（例えば、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性）を有するアミノ酸配列を含むＶＨ、及び配列番号１３６に対して少なくとも９０％の配列同一性（例えば、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性）を有するアミノ酸配列を含むＶＬ；
（ｉ）配列番号１４５に対して少なくとも９０％の配列同一性（例えば、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性）を有するアミノ酸配列を含むＶＨ、及び配列番号１５４に対して少なくとも９０％の配列同一性（例えば、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性）を有するアミノ酸配列を含むＶＬ；
（ｊ）配列番号１６３、配列番号２５３、配列番号２５４、配列番号２５５、配列番号２５６、もしくは配列番号２５７のうちのいずれか１つに対して少なくとも９０％の配列同一性（例えば、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性）を有するアミノ酸配列を含むＶＨ、及び配列番号１７２に対して少なくとも９０％の配列同一性（例えば、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性）を有するアミノ酸配列を含むＶＬ；
（ｈ）配列番号１８１に対して少なくとも９０％の配列同一性（例えば、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性）を有するアミノ酸配列を含むＶＨ、及び配列番号１９０に対して少なくとも９０％の配列同一性（例えば、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性）を有するアミノ酸配列を含むＶＬ；または
（ｌ）配列番号１９９に対して少なくとも９０％の配列同一性（例えば、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性）を有するアミノ酸配列を含むＶＨ、及び配列番号２０８に対して少なくとも９０％の配列同一性（例えば、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性）を有するアミノ酸配列を含むＶＬ。
いくつかの実施形態では、抗ＴＩＧＩＴ抗体は以下を含む：
（ａ）配列番号１のアミノ酸配列を含むＶＨ、及び配列番号１０のアミノ酸配列を含むＶＬ；
（ｂ）配列番号１９のアミノ酸配列を含むＶＨ、及び配列番号２８のアミノ酸配列を含むＶＬ；
（ｃ）配列番号３７のアミノ酸配列を含むＶＨ、及び配列番号４６のアミノ酸配列を含むＶＬ；
（ｄ）配列番号５５アミノ酸配列を含むＶＨ、及び配列番号６４のアミノ酸配列を含むＶＬ；
（ｅ）配列番号７３のアミノ酸配列を含むＶＨ、及び配列番号８２のアミノ酸配列を含むＶＬ；
（ｆ）配列番号９１のアミノ酸配列を含むＶＨ、及び配列番号１００のアミノ酸配列を含むＶＬ；
（ｇ）配列番号１０９アミノ酸配列を含むＶＨ、及び配列番号１１８のアミノ酸配列を含むＶＬ；
（ｈ）配列番号１２７のアミノ酸配列を含むＶＨ、及び配列番号１３６のアミノ酸配列を含むＶＬ；
（ｉ）配列番号１４５のアミノ酸配列を含むＶＨ、及び配列番号１５４のアミノ酸配列を含むＶＬ；
（ｊ）配列番号１６３アミノ酸配列を含むＶＨ、及び配列番号１７２のアミノ酸配列を含むＶＬ；
（ｋ）配列番号１８１のアミノ酸配列を含むＶＨ、及び配列番号１９０のアミノ酸配列を含むＶＬ；
（ｌ）配列番号１９９のアミノ酸配列を含むＶＨ、及び配列番号２０８のアミノ酸配列を含むＶＬ；または
（ｍ）配列番号２４５のアミノ酸配列を含むＶＨ、及び配列番号１０のアミノ酸配列を含むＶＬ；または
（ｎ）配列番号２４６アミノ酸配列を含むＶＨ、及び配列番号６４のアミノ酸配列を含むＶＬ；または
（ｏ）配列番号２４７アミノ酸配列を含むＶＨ、及び配列番号６４のアミノ酸配列を含むＶＬ；または
（ｐ）配列番号２４８アミノ酸配列を含むＶＨ、及び配列番号６４のアミノ酸配列を含むＶＬ；
（ｑ）配列番号２４９アミノ酸配列を含むＶＨ、及び配列番号６４のアミノ酸配列を含むＶＬ；または
（ｒ）配列番号２５０のアミノ酸配列を含むＶＨ、及び配列番号１００のアミノ酸配列を含むＶＬ；または
（ｓ）配列番号２５１のアミノ酸配列を含むＶＨ、及び配列番号１００のアミノ酸配列を含むＶＬ；または
（ｔ）配列番号２５２のアミノ酸配列を含むＶＨ、及び配列番号１００のアミノ酸配列を含むＶＬ；または
（ｕ）配列番号２５３アミノ酸配列を含むＶＨ、及び配列番号１７２のアミノ酸配列を含むＶＬ；または
（ｖ）配列番号２５４アミノ酸配列を含むＶＨ、及び配列番号１７２のアミノ酸配列を含むＶＬ；または
（ｗ）配列番号２５５アミノ酸配列を含むＶＨ、及び配列番号１７２のアミノ酸配列を含むＶＬ；または
（ｘ）配列番号２５６アミノ酸配列を含むＶＨ、及び配列番号１７２のアミノ酸配列を含むＶＬ；または
（ｙ）配列番号２５７アミノ酸配列を含むＶＨ、及び配列番号１７２のアミノ酸配列を含むＶＬ。
いくつかの実施形態では、抗ＴＩＧＩＴ抗体は、以下の１つ以上（例えば、１、２、３、４、５、またはそれ以上）を含む：
配列番号４、配列番号２２、配列番号４０、配列番号５８、配列番号７６、配列番号９４、配列番号１１２、配列番号１３０、配列番号１４８、配列番号１６６、配列番号１８４、配列番号２０２、配列番号２２１、配列番号２２４、配列番号２２６、配列番号２３１、配列番号２３３、配列番号２３９、もしくは配列番号２４３のいずれかのアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１配列；
配列番号６、配列番号２４、配列番号４２、配列番号６０、配列番号７８、配列番号９６、配列番号１１４、配列番号１３２、配列番号１５０、配列番号１６８、配列番号１８６、配列番号２０４、配列番号２２２、配列番号２２５、配列番号２２７、配列番号２２９、配列番号２３２、配列番号２３４、配列番号２３８、もしくは配列番号２４０のいずれかのアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２配列；
配列番号８、配列番号２６、配列番号４４、配列番号６２、配列番号８０、配列番号９８、配列番号１１６、配列番号１３４、配列番号１５２、配列番号１７０、配列番号１８８、配列番号２０６、配列番号２２３、配列番号２２８、配列番号２３０、配列番号２３５、配列番号２３６、配列番号２３７、配列番号２４１、配列番号２４２、もしくは配列番号２４４のいずれかのアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３配列；
配列番号１３、配列番号３１、配列番号４９、配列番号６７、配列番号８５、配列番号１０３、配列番号１２１、配列番号１３９、配列番号１５７、配列番号１７５、配列番号１９３、もしくは配列番号２１１のいずれかのアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１配列；
配列番号１５、配列番号３３、配列番号５１、配列番号６９、配列番号８７、配列番号１０５、配列番号１２３、配列番号１４１、配列番号１５９、配列番号１７７、配列番号１９５、もしくは配列番号２１３のいずれかのアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２配列；及び／または
配列番号１７、配列番号３５、配列番号５３、配列番号７１、配列番号８９、配列番号１０７、配列番号１２５、配列番号１４３、配列番号１６１、配列番号１７９、配列番号１９７、もしくは配列番号２１５のいずれかのアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３配列。
いくつかの実施形態では、抗ＴＩＧＩＴ抗体は、配列番号４、配列番号２２、配列番号４０、配列番号５８、配列番号７６、配列番号９４、配列番号１１２、配列番号１３０、配列番号１４８、配列番号１６６、配列番号１８４、配列番号２０２、配列番号２２１、配列番号２２４、配列番号２２６、配列番号２３１、配列番号２３３、配列番号２３９、もしくは配列番号２４３のいずれかのアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１配列；配列番号６、配列番号２４、配列番号４２、配列番号６０、配列番号７８、配列番号９６、配列番号１１４、配列番号１３２、配列番号１５０、配列番号１６８、配列番号１８６、配列番号２０４、配列番号２２２、配列番号２２５、配列番号２２７、配列番号２２９、配列番号２３２、配列番号２３４、配列番号２３８、もしくは配列番号２４０のいずれかのアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２配列；及び配列番号８、配列番号２６、配列番号４４、配列番号６２、配列番号８０、配列番号９８、配列番号１１６、配列番号１３４、配列番号１５２、配列番号１７０、配列番号１８８、配列番号２０６、配列番号２２３、配列番号２２８、配列番号２３０、配列番号２３５、配列番号２３６、配列番号２３７、配列番号２４１、配列番号２４２、もしくは配列番号２４４のいずれかのアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３配列を含む。
いくつかの実施形態では、抗ＴＩＧＩＴ抗体は、配列番号１３、配列番号３１、配列番号４９、配列番号６７、配列番号８５、配列番号１０３、配列番号１２１、配列番号１３９、配列番号１５７、配列番号１７５、配列番号１９３、もしくは配列番号２１１のいずれかのアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１配列；配列番号１５、配列番号３３、配列番号５１、配列番号６９、配列番号８７、配列番号１０５、配列番号１２３、配列番号１４１、配列番号１５９、配列番号１７７、配列番号１９５、もしくは配列番号２１３のいずれかのアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２配列；及び配列番号１７、配列番号３５、配列番号５３、配列番号７１、配列番号８９、配列番号１０７、配列番号１２５、配列番号１４３、配列番号１６１、配列番号１７９、配列番号１９７、もしくは配列番号２１５のいずれかのアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３配列を含む。
いくつかの実施形態では、抗ＴＩＧＩＴ抗体は以下を含む：
（ｉ）配列番号４、配列番号２２、配列番号４０、配列番号５８、配列番号７６、配列番号９４、配列番号１１２、配列番号１３０、配列番号１４８、配列番号１６６、配列番号１８４、配列番号２０２、配列番号２２１、配列番号２２４、配列番号２２６、配列番号２３１、配列番号２３３、配列番号２３９、もしくは配列番号２４３のいずれかのアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１配列；及び
（ｉｉ）配列番号６、配列番号２４、配列番号４２、配列番号６０、配列番号７８、配列番号９６、配列番号１１４、配列番号１３２、配列番号１５０、配列番号１６８、配列番号１８６、配列番号２０４、配列番号２２２、配列番号２２５、配列番号２２７、配列番号２２９、配列番号２３２、配列番号２３４、配列番号２３８、もしくは配列番号２４０のいずれかのアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２配列；及び
（ｉｉｉ）配列番号８、配列番号２６、配列番号４４、配列番号６２、配列番号８０、配列番号９８、配列番号１１６、配列番号１３４、配列番号１５２、配列番号１７０、配列番号１８８、配列番号２０６、配列番号２２３、配列番号２２８、配列番号２３０、配列番号２３５、配列番号２３６、配列番号２３７、配列番号２４１、配列番号２４２、もしくは配列番号２４４のいずれかのアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３配列；及び
（ｉｖ）配列番号１３、配列番号３１、配列番号４９、配列番号６７、配列番号８５、配列番号１０３、配列番号１２１、配列番号１３９、配列番号１５７、配列番号１７５、配列番号１９３、もしくは配列番号２１１のいずれかのアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１配列；及び
（ｖ）配列番号１５、配列番号３３、配列番号５１、配列番号６９、配列番号８７、配列番号１０５、配列番号１２３、配列番号１４１、配列番号１５９、配列番号１７７、配列番号１９５、もしくは配列番号２１３のいずれかのアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２配列；及び
（ｖｉ）配列番号１７、配列番号３５、配列番号５３、配列番号７１、配列番号８９、配列番号１０７、配列番号１２５、配列番号１４３、配列番号１６１、配列番号１７９、配列番号１９７、もしくは配列番号２１５のいずれかのアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３配列。
いくつかの実施形態では、抗ＴＩＧＩＴ抗体は以下を含む：（ｉ）配列番号４または配列番号２２１のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１配列；（ｉｉ）配列番号６または配列番号２２２のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２配列；（ｉｉｉ）配列番号８または配列番号２２３のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３配列；（ｉｖ）配列番号１３のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１配列；（ｖ）配列番号１５のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２配列；及び（ｖｉ）配列番号１７のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３配列。
いくつかの実施形態では、抗ＴＩＧＩＴ抗体は以下を含む：（ｉ）配列番号５８、配列番号２２４、または配列番号２２６のうちのいずれかのアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１配列；（ｉｉ）配列番号６０、配列番号２２５、配列番号２２７、または配列番号２２９のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２配列；（ｉｉｉ）配列番号６２、配列番号２２８、または配列番号２３０のうちのいずれかのアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３配列；（ｉｖ）配列番号６７のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１配列；（ｖ）配列番号６９のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２配列；及び（ｖｉ）配列番号７１のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３配列。
いくつかの実施形態では、抗ＴＩＧＩＴ抗体は以下を含む：（ｉ）配列番号９４、配列番号２３１、または配列番号２３３のうちのいずれかのアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１配列；（ｉｉ）配列番号９６、配列番号２３２、または配列番号２３４のうちのいずれかのアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２配列；（ｉｉｉ）配列番号９８、配列番号２３４、配列番号２３６、または配列番号２３７のうちのいずれかのアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３配列；（ｉｖ）配列番号１０３のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１配列；（ｖ）配列番号１０５のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２配列；及び（ｖｉ）配列番号１０７のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３配列。
いくつかの実施形態では、抗ＴＩＧＩＴ抗体は以下を含む：（ｉ）配列番号１６６、配列番号２３９、または配列番号２４３のうちのいずれかのアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１配列；（ｉｉ）配列番号１６８、配列番号２３８、または配列番号２４０のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２配列；（ｉｉｉ）配列番号１７０、配列番号２４１、配列番号２４２、または配列番号２４４のうちのいずれかのアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３配列；（ｉｖ）配列番号１７５のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１配列；（ｖ）配列番号１７７のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２配列；及び（ｖｉ）配列番号１７９のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３配列。
いくつかの実施形態では、抗ＴＩＧＩＴ抗体は、以下のアミノ酸配列を含む、重鎖ＣＤＲ１〜３及び軽鎖ＣＤＲ１〜３を含む：
（ａ）それぞれ、配列番号４、６、８、１３、１５、及び１７；
（ｂ）それぞれ、配列番号２２、２４、２６、３１、３３、及び３５；
（ｃ）それぞれ、配列番号４０、４２、４４、４９、５１、及び５３；
（ｄ）それぞれ、配列番号５８、６０、６２、６７、６９、及び７１；
（ｅ）それぞれ、配列番号７６、７８、８０、８５、８７、及び８９；
（ｆ）それぞれ、配列番号９４、９６、９８、１０３、１０５、及び１０７；
（ｇ）それぞれ、配列番号１１２、１１４、１１６、１２１、１２３、及び１２５；
（ｈ）それぞれ、配列番号１３０、１３２、１３４、１３９、１４１、及び１４３；
（ｉ）それぞれ、配列番号１４８、１５０、１５２、１５７、１５９、及び１６１；
（ｊ）それぞれ、配列番号１６６、１６８、１７０、１７５、１７７、及び１７９；
（ｋ）それぞれ、配列番号１８４、１８６、１８８、１９３、１９５、及び１９７；
（ｌ）それぞれ、配列番号２０２、２０４、２０６、２１１、２１３、及び２１５；または
（ｍ）それぞれ、配列番号２２１、２２２、２２３、１３、１５、及び１７；または
（ｎ）それぞれ、配列番号２２４、２２５、６２、６７、６９、及び７１；または
（ｏ）それぞれ、配列番号２２６、２２７、２２８、６７、６９、及び７１；または
（ｐ）それぞれ、配列番号２２４、２２９、２３０、６７、６９、及び７１；または
（ｑ）それぞれ、配列番号２２４、２２７、２３０、６７、６９、及び７１；または
（ｒ）それぞれ、配列番号２３１、２３２、２３５、１０３、１０５、及び１０７；または
（ｓ）それぞれ、配列番号２３３、２３４、２３６、１０３、１０５、及び１０７；または
（ｔ）それぞれ、配列番号２３３、２３４、２３７、１０３、１０５、及び１０７；または
（ｕ）それぞれ、配列番号１６６、２３８、１７０、１７５、１７７、及び１７９；または
（ｖ）それぞれ、配列番号２３９、２４０、１７０、１７５、１７７、及び１７９；または
（ｗ）それぞれ、配列番号２３９、２４０、２４１、１７５、１７７、及び１７９；または
（ｘ）それぞれ、配列番号２３９、２４０、２４２、１７５、１７７、及び１７９；または
（ｙ）それぞれ、配列番号２４３、１６８、２４４、１７５、１７７、及び１７９。
いくつかの実施形態では、抗体は、ヒト免疫グロブリンフレームワークのようなフレームワークをさらに含む。例えば、いくつかの実施形態では、抗体は、本明細書で記載されるようなＣＤＲを含み、アクセプターヒトフレームワーク、例えば、ヒト免疫グロブリンフレームワークまたはヒトコンセンサスフレームワークをさらに含む。ヒト免疫グロブリンフレームワークは、ヒト抗体の部分であってもよいし、または非ヒト抗体が、１つ以上の内在性フレームワークをヒトフレームワーク領域（複数可）で置き換えることによりヒト化されてもよい。ヒト化に使用できる人間のフレームワーク領域には、以下のものが含まれるが、これらに限定されない：「ベストフィット」法を使用して選択されるフレームワーク（例えば、Ｓｉｍｓ ｅｔ ａｌ．， Ｊ． Ｉｍｍｕｎｏｌ． １５１：２２９６ （１９９３）を参照されたい）；軽鎖または重鎖可変領域の特定のサブグループのヒト抗体のコンセンサス配列に由来するフレームワーク領域（例えば、Ｃａｒｔｅｒ ｅｔ ａｌ．， Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． ＵＳＡ， ８９：４２８５ （１９９２）；及びＰｒｅｓｔａ ｅｔ ａｌ．， Ｊ． Ｉｍｍｕｎｏｌ．， １５１：２６２３ （１９９３）を参照されたい）；ヒト成熟（体細胞変異）フレームワーク領域またはヒト生殖細胞系フレームワーク領域（例えば、Ａｌｍａｇｒｏ ａｎｄ Ｆｒａｎｓｓｏｎ， Ｆｒｏｎｔ． Ｂｉｏｓｃｉ． １３：１６１９−１６３３ （２００８）を参照されたい）；ならびにＦＲライブラリーのスクリーニングに由来するフレームワーク領域（例えばＢａｃａ ｅｔ ａｌ．， Ｊ． Ｂｉｏｌ． Ｃｈｅｍ． ２７２：１０６７８−１０６８４ （１９９７）及びＲｏｓｏｋ ｅｔ ａｌ．， Ｊ． Ｂｉｏｌ． Ｃｈｅｍ． ２７１：２２６１１−２２６１８ （１９９６）を参照されたい）。フレームワーク配列は、生殖細胞系抗体遺伝子配列を含む公的なＤＮＡデータベースまたは公開された参考文献から入手できる。例えば、ヒト重鎖可変領域及び軽鎖可変領域の遺伝子の生殖細胞系ＤＮＡ配列は、ヒト及びマウスの配列の生殖細胞系可変遺伝子配列データベース「ＶＢＡＳＥ２」に見いだせる。
いくつかの実施形態では、抗ＴＩＧＩＴ抗体は、配列番号３、配列番号５、配列番号７、配列番号９、配列番号２１、配列番号２３、配列番号２５、配列番号２７、配列番号３９、配列番号４１、配列番号４３、配列番号４５、配列番号５７、配列番号５９、配列番号６１、配列番号６３、配列番号７５、配列番号７７、配列番号７９、配列番号８１、配列番号９３、配列番号９５、配列番号９７、配列番号９９、配列番号１１１、配列番号１１３、配列番号１１５、配列番号１１７、配列番号１２９、配列番号１３１、配列番号１３３、配列番号１３５、配列番号１４７、配列番号１４９、配列番号１５１、配列番号１５３、配列番号１６５、配列番号１６７、配列番号１６９、配列番号１７１、配列番号１８３、配列番号１８５、配列番号１８７、配列番号１８９、配列番号２０１、配列番号２０３、配列番号２０５、または配列番号２０７のアミノ酸配列を含む、１つ以上の重鎖フレームワーク領域（ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３、及び／またはＦＲ４）を含む。
いくつかの実施形態では、抗ＴＩＧＩＴ抗体は、配列番号１２、配列番号１４、配列番号１６、配列番号１８、配列番号３０、配列番号３２、配列番号３４、配列番号３６、配列番号４８、配列番号５０、配列番号５２、配列番号５４、配列番号６６、配列番号６８、配列番号７０、配列番号７２、配列番号８４、配列番号８６、配列番号８８、配列番号９０、配列番号１０２、配列番号１０４、配列番号１０６、配列番号１０８、配列番号１２０、配列番号１２２、配列番号１２４、配列番号１２６、配列番号１３８、配列番号１４０、配列番号１４２、配列番号１４４、配列番号１５６、配列番号１５８、配列番号１６０、配列番号１６２、配列番号１７４、配列番号１７６、配列番号１７８、配列番号１８０、配列番号１９２、配列番号１９４、配列番号１９６、配列番号１９８、配列番号２１０、配列番号２１２、配列番号２１４、または配列番号２１６のアミノ酸配列を含む、１つ以上の軽鎖フレームワーク領域（ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３、及び／またはＦＲ４）を含む。
いくつかの実施形態では、本開示の抗ＴＩＧＩＴ抗体は、ＵＳ２００９／０２５８０１３、ＵＳ２０１６／０１７６９６３、ＵＳ２０１６／０３７６３６５、またはＷＯ２０１６／０２８６５６に記載されている抗体とは結合について競合しない。いくつかの実施形態では、本開示の抗ＴＩＧＩＴ抗体は、ＵＳ２００９／０２５８０１３、ＵＳ２０１６／０１７６９６３、ＵＳ２０１６／０３７６３６５、またはＷＯ２０１６／０２８６５６に記載されている抗体と同一のエピトープには結合しない。
抗体の調製
ＴＩＧＩＴに結合する抗体を調製するために、当該技術分野で知られている多くの技術を使用することができる。例えば、Ｋｏｈｌｅｒ ＆ Ｍｉｌｓｔｅｉｎ， Ｎａｔｕｒｅ ２５６：４９５−４９７ （１９７５）；Ｋｏｚｂｏｒ ｅｔ ａｌ．， Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ Ｔｏｄａｙ ４：７２ （１９８３）；Ｃｏｌｅ ｅｔ ａｌ．， ｐｐ． ７７−９６ ｉｎ Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ａｎｄ Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒａｐｙ， Ａｌａｎ Ｒ． Ｌｉｓｓ， Ｉｎｃ． （１９８５）；Ｃｏｌｉｇａｎ， Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ （１９９１）；Ｈａｒｌｏｗ ＆ Ｌａｎｅ， Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ， Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ （１９８８）；及びＧｏｄｉｎｇ， Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ （２ｎｄ ｅｄ． １９８６））を参照されたい。
目的の抗体の重鎖及び軽鎖をコードする遺伝子は、細胞からクローン化することができ、例えば、モノクローナル抗体をコードする遺伝子は、ハイブリドーマからクローン化して、組換えモノクローナル抗体を産生するのに使用できる。モノクローナル抗体の重鎖及び軽鎖をコードする遺伝子ライブラリーはまた、ハイブリドーマまたは形質細胞から作成することもできる。さらに、ファージまたは酵母のディスプレイ技術を使用して、選択した抗原に特異的に結合する抗体及びヘテロマーＦａｂ断片を同定することができる（例えば、ＭｃＣａｆｆｅｒｔｙ ｅｔ ａｌ．， Ｎａｔｕｒｅ ３４８：５５２−５５４ （１９９０）；Ｍａｒｋｓ ｅｔ ａｌ．， Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ １０：７７９−７８３ （１９９２）；Ｌｏｕ ｅｔ ａｌ． （２０１０） ＰＥＤＳ ２３：３１１；及びＣｈａｏ ｅｔ ａｌ．， Ｎａｔｕｒｅ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ， １：７５５−７６８ （２００６）を参照されたい）。代替的に、例えば、Ｘｕ ｅｔ ａｌ．， Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇ Ｄｅｓ Ｓｅｌ， ２０１３， ２６：６６３−６７０；ＷＯ２００９／０３６３７９；ＷＯ２０１０／１０５２５６；及びＷＯ２０１２／００９５６８に開示されるもののように、酵母ベースの抗体提示システムを使用して、抗体及び抗体配列を単離及び／または同定してもよい。重鎖遺伝子産物と軽鎖遺伝子産物のランダムな組み合わせにより、異なる抗原特異性を持つ抗体の大きなプールが生成される（例えば、Ｋｕｂｙ， Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ （３ｒｄ ｅｄ． １９９７）を参照されたい）。一本鎖抗体または組換え抗体の産生のための技術（米国特許第４，９４６，７７８号、米国特許第４，８１６，５６７号）も抗体を産生するために適合させることができる。抗体は二重特異性、すなわち２つの異なる抗原を認識できるようにすることもできる（例えば、ＷＯ９３／０８８２９、Ｔｒａｕｎｅｃｋｅｒ ｅｔ ａｌ．， ＥＭＢＯ Ｊ． １０：３６５５−３６５９ （１９９１）；及びＳｕｒｅｓｈ ｅｔ ａｌ．， Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ １２１：２１０ （１９８６）を参照されたい）。抗体はヘテロコンジュゲート、例えば２つの共有結合抗体、または免疫毒素に共有結合した抗体でもあり得る（例えば、米国特許第４，６７６，９８０号、ＷＯ９１／００３６０；及びＷＯ９２／２００３７３を参照されたい）。
抗体は、原核生物及び真核生物の発現系を含む、任意の数の発現系を使用して産生できる。いくつかの実施形態では、発現系は、ハイブリドーマなどの哺乳動物細胞、またはＣＨＯ細胞である。このような系の多くは、商業的な供給者から広く入手可能である。抗体がＶＨ領域とＶＬ領域の両方を含む実施形態では、ＶＨ領域及びＶＬ領域は、単一のベクターを使用して、例えば、ジシストロン性発現ユニットで発現してもよいか、または異なるプロモーターの制御下にあってよい。他の実施形態では、ＶＨ領域及びＶＬ領域は、別個のベクターを使用して発現してもよい。本明細書で記載されるようなＶＨまたはＶＬ領域は、必要に応じてＮ末端にメチオニンを含んでもよい。
非ヒト抗体のヒト化または霊長類化の方法はまた、当該技術分野において公知である。一般的に、ヒト化抗体は、非ヒトの供給源からそれに導入される１つ以上のアミノ酸残基を有する。これらの非ヒトアミノ酸残基はしばしば、インポート（ｉｍｐｏｒｔ）残基と呼ばれ、典型的にはインポート可変ドメインから得られる。ヒト化は、Ｗｉｎｔｅｒと同僚の方法に従って、げっ歯類の複数のＣＤＲまたはＣＤＲの配列をヒト抗体の対応する配列に置き換えることにより、基本的に実行できる（例えば、Ｊｏｎｅｓ ｅｔ ａｌ．， Ｎａｔｕｒｅ ３２１：５２２−５２５ （１９８６）；Ｒｉｅｃｈｍａｎｎ ｅｔ ａｌ．， Ｎａｔｕｒｅ ３３２：３２３−３２７ （１９８８）；Ｖｅｒｈｏｅｙｅｎ ｅｔ ａｌ．， Ｓｃｉｅｎｃｅ ２３９：１５３４−１５３６ （１９８８）、及びＰｒｅｓｔａ， Ｃｕｒｒ． Ｏｐ． Ｓｔｒｕｃｔ． Ｂｉｏｌ． ２：５９３−５９６ （１９９２）を参照されたい）。そのような「ヒト化」抗体は、無傷のヒト可変ドメインより実質的に少ない部分が、非ヒト種由来の対応する配列によって置換されている、キメラ抗体である（米国特許第４８１６５６７号）。実際に、ヒト化抗体は、典型的にはヒト抗体であり、いくつかのＣＤＲ残基と、可能性のあるいくつかのＦＲ残基が、げっ歯類の抗体の類似部位からの残基によって置換されている。トランスジェニックマウス、または他の哺乳類などの他の生物を使用して、ヒト化抗体またはヒト抗体を発現させることができる（例えば、米国特許第５，５４５，８０７号；同第５，５４５，８０６号；同第５，５６９，８２５号；同第５，６２５，１２６号；同第５，６３３，４２５号；同第５，６６１，０１６号、Ｍａｒｋｓ ｅｔ ａｌ．， Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ １０：７７９−７８３ （１９９２）；Ｌｏｎｂｅｒｇ ｅｔ ａｌ．， Ｎａｔｕｒｅ ３６８：８５６−８５９ （１９９４）；Ｍｏｒｒｉｓｏｎ， Ｎａｔｕｒｅ ３６８：８１２−１３ （１９９４）；Ｆｉｓｈｗｉｌｄ ｅｔ ａｌ．， Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ １４：８４５−５１ （１９９６）；Ｎｅｕｂｅｒｇｅｒ， Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ １４：８２６ （１９９６）；及びＬｏｎｂｅｒｇ ＆ Ｈｕｓｚａｒ， Ｉｎｔｅｒｎ． Ｒｅｖ． Ｉｍｍｕｎｏｌ． １３：６５−９３ （１９９５）を参照されたい）。
ヒト化の代替として、ヒト抗体を産生することができる。非限定的な例として、内在性免疫グロブリン産生の非存在下で、免疫の際に、ヒト抗体の完全なレパートリーを産生することができるトランスジェニック動物（例えば、マウス）を産生することができる。例えば、キメラ及び生殖細胞系列変異マウスにおける抗体重鎖連結領域（ＪＨ）遺伝子のホモ接合性欠失により、内在性抗体産生が完全に阻害されることが報告されている。そのような生殖細胞系変異マウスにおけるヒト生殖細胞系免疫グロブリン遺伝子アレイの移入は、抗原チャレンジ時にヒト抗体の産生をもたらすだろう。例えば、Ｊａｋｏｂｏｖｉｔｓ ｅｔ ａｌ．， Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． ＵＳＡ， ９０：２５５１ （１９９３）；Ｊａｋｏｂｏｖｉｔｓ ｅｔ ａｌ．， Ｎａｔｕｒｅ， ３６２：２５５−２５８ （１９９３）；Ｂｒｕｇｇｅｒｍａｎｎ ｅｔ ａｌ．， Ｙｅａｒ ｉｎ Ｉｍｍｕｎ．， ７：３３ （１９９３）；ならびに米国特許第５，５９１，６６９号、同第５，５８９，３６９号、及び同第５，５４５，８０７号を参照されたい。
いくつかの実施形態では、抗体断片（Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、ｓｃＦｖ、またはジアボディなど）が生成される。抗体断片の産生のために、様々な技術が開発されている。伝統的に、これらの断片は無傷の抗体のタンパク質分解消化に由来した（例えば、Ｍｏｒｉｍｏｔｏ ｅｔ ａｌ．， Ｊ． Ｂｉｏｃｈｅｍ． Ｂｉｏｐｈｙｓ． Ｍｅｔｈ．， ２４：１０７−１１７ （１９９２）；及びＢｒｅｎｎａｎ ｅｔ ａｌ．， Ｓｃｉｅｎｃｅ， ２２９：８１ （１９８５）を参照されたい）。しかしながら、これらの断片は現在、組換え宿主細胞を使用して直接生産することができる。例えば、抗体断片は抗体ファージライブラリーから単離することができる。代替的に、Ｆａｂ’−ＳＨ断片は、Ｅ． ｃｏｌｉ細胞から直接的に回収し、化学的に結合してＦ（ａｂ’）２断片を形成することができる（例えば、Ｃａｒｔｅｒ ｅｔ ａｌ．， ＢｉｏＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ， １０：１６３−１６７ （１９９２）を参照されたい）。別のアプローチによると、Ｆ（ａｂ’）２断片は、組換え宿主細胞培養から直接的に単離することができる。抗体断片の産生のための他の技術は、当業者には明らかであろう。他の実施形態では、選択の抗体は単鎖Ｆｖ断片（ｓｃＦｖ）である。例えば、ＰＣＴ公開第ＷＯ９３／１６１８５号；及び米国特許第５，５７１，８９４号及び同第５，５８７，４５８号を参照されたい。抗体断片は、例えば米国特許第５，６４１，８７０号に記載されているような直線状抗体であってもよい。
いくつかの実施形態では、抗体または抗体断片を別の分子、例えばポリエチレングリコール（ＰＥＧ化）または血清アルブミンに結合させて、インビボでの半減期を延長することができる。抗体断片のＰＥＧ化の例は、Ｋｎｉｇｈｔ ｅｔ ａｌ． Ｐｌａｔｅｌｅｔｓ １５：４０９， ２００４（アブシキシマブについて）；Ｐｅｄｌｅｙ ｅｔ ａｌ．， Ｂｒ． Ｊ． Ｃａｎｃｅｒ ７０：１１２６， １９９４（抗ＣＥＡ抗体について）；Ｃｈａｐｍａｎ ｅｔ ａｌ．， Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈ． １７：７８０， １９９９；及び、Ｈｕｍｐｈｒｅｙｓ， ｅｔ ａｌ．， Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇ． Ｄｅｓ． ２０：２２７， ２００７）に提供されている。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載される抗ＴＩＧＩＴ抗体または抗原結合断片を含む多重特異性抗体、例えば二重特異性抗体が提供される。多重特異性抗体は、少なくとも２つの異なる部位に結合特異性を持つ抗体である。いくつかの実施形態では、多重特異性抗体は、ＴＩＧＩＴ（例えば、ヒトＴＩＧＩＴ）に対して結合特異性を有し、少なくとも１つの他の抗原に対して結合特異性を有する。多重特異性抗体を作成する方法には、宿主細胞における重鎖と軽鎖の２対の組換え共発現（例えば、Ｚｕｏ ｅｔ ａｌ．， Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇ Ｄｅｓ Ｓｅｌ， ２０００， １３：３６１−３６７を参照されたい）；「ｋｎｏｂｓ−ｉｎｔｏ−ｈｏｌｅｓ」技術（例えば、Ｒｉｄｇｗａｙ ｅｔ ａｌ．， Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇ Ｄｅｓ Ｓｅｌ， １９９６， ９：６１７−７２１を参照されたい）；「ジアボディ」技術（例えば、Ｈｏｌｌｉｎｇｅｒ ｅｔ ａｌ．， ＰＮＡＳ （ＵＳＡ）， １９９３， ９０：６４４４−６４４８を参照されたい）；及び、分子内三量体化（例えば、Ａｌｖａｒｅｚ−Ｃｉｅｎｆｕｅｇｏｓ ｅｔ ａｌ．， Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｒｅｐｏｒｔｓ， ２０１６， ｄｏｉ：／１０．１０３８／ｓｒｅｐ２８６４３を参照されたい）；（Ｓｐｉｅｓｓ ｅｔ ａｌ．， Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ， ２０１５， ６７（２）， Ｐａｒｔ Ａ：９５−１０６をもまた参照されたい）が含まれるが、これらに限定されない。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載される抗ＴＩＧＩＴ抗体または抗原結合断片を含む抗体−薬物コンジュゲートが提供される。抗体−薬物コンジュゲートでは、抗原（例えば、ＴＩＧＩＴ）に対する結合特異性を有するモノクローナル抗体は、細胞毒性薬物に共有結合している。抗体−薬物コンジュゲートを作製する方法は、例えば、Ｃｈｕｄａｓａｍａ ｅｔ ａｌ．， Ｎａｔｕｒｅ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ， ２０１６， ８：１１４−１１９；ＷＯ２０１３／０６８８７４；及び米国特許第８，５３５，６７８号に記載されている。
核酸、ベクター、及び宿主細胞
いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるような、抗ＴＩＧＩＴ抗体は、組換え法を使用して調製される。したがって、いくつかの態様では、本発明は、本明細書に記載されるような抗ＴＩＧＩＴ抗体のいずれか（例えば、本明細書に記載されるようなＣＤＲのいずれか１つ以上）をコードする核酸配列を含む単離された核酸；そのような核酸を含むベクター；抗体をコードする核酸の複製及び／または抗体の発現に使用される核酸が導入される宿主細胞を提供する。いくつかの実施形態では、宿主細胞は真核生物、例えばチャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞；またはヒト細胞である。
いくつかの実施形態では、ポリヌクレオチド（例えば、単離されたポリヌクレオチド）は、本明細書に記載されるような抗体またはその抗原結合部分をコードするヌクレオチド配列（例えば、上述の「抗ＴＩＧＩＴ抗体配列」セクションに記載されるような）を含む。いくつかの実施形態では、ポリヌクレオチドは、以下の表３に開示される１つ以上のアミノ酸配列（例えば、ＣＤＲ、重鎖、軽鎖、及び／またはフレームワーク領域）をコードするヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ポリヌクレオチドは、以下の表３に開示される配列（例えば、ＣＤＲ、重鎖、軽鎖、またはフレームワーク領域）に対して少なくとも８５％の配列同一性（例えば、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％の配列同一性）を有するアミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列を含む。
いくつかの実施形態では、ポリヌクレオチド（例えば、単離されたポリヌクレオチド）は、本明細書に記載される重鎖可変領域をコードするヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ポリヌクレオチドは、配列番号１、配列番号１９、配列番号３７、配列番号５５、配列番号７３、配列番号９１、配列番号１０９、配列番号１２７、配列番号１４５、配列番号１６３、配列番号１８１、配列番号１９９、配列番号２４５、配列番号２４６、配列番号２４７、配列番号２４８、配列番号２４９、配列番号２５０、配列番号２５１、配列番号２５２、配列番号２５３、配列番号２５４、配列番号２５５、配列番号２５６、もしくは配列番号２５７に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域をコードするヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ポリヌクレオチドは、配列番号２、配列番号２０、配列番号３８、配列番号５６、配列番号７４、配列番号９２、配列番号１１０、配列番号１２８、配列番号１４６、配列番号１６４、配列番号１８２、もしくは配列番号２００のヌクレオチド配列を含む。
いくつかの実施形態では、ポリヌクレオチド（例えば、単離されたポリヌクレオチド）は、本明細書に記載される軽鎖可変領域をコードするヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ポリヌクレオチドは、配列番号１０、配列番号２８、配列番号４６、配列番号６４、配列番号８２、配列番号１００、配列番号１１８、配列番号１３６、配列番号１５４、配列番号１７２、配列番号１９０、もしくは配列番号２０８に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域をコードするヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ポリヌクレオチドは、配列番号１１、配列番号２９、配列番号４７、配列番号６５、配列番号８３、配列番号１０１、配列番号１１９、配列番号１３７、配列番号１５５、配列番号１７３、配列番号１９１、もしくは配列番号２０９のヌクレオチド配列を含む。
いくつかの実施形態では、ポリヌクレオチドは、本明細書に記載されるような重鎖可変領域及び軽鎖可変領域をコードするヌクレオチド配列を含むヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ポリヌクレオチドは、配列番号１、配列番号１９、配列番号３７、配列番号５５、配列番号７３、配列番号９１、配列番号１０９、配列番号１２７、配列番号１４５、配列番号１６３、配列番号１８１、配列番号１９９、配列番号２４５、配列番号２４６、配列番号２４７、配列番号２４８、配列番号２４９、配列番号２５０、配列番号２５１、配列番号２５２、配列番号２５３、配列番号２５４、配列番号２５５、配列番号２５６、または配列番号２５７に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域をコードし、配列番号１０、配列番号２８、配列番号４６、配列番号６４、配列番号８２、配列番号１００、配列番号１１８、配列番号１３６、配列番号１５４、配列番号１７２、配列番号１９０、または配列番号２０８に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域をコードするヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ポリヌクレオチドは、配列番号２、配列番号２０、配列番号３８、配列番号５６、配列番号７４、配列番号９２、配列番号１１０、配列番号１２８、配列番号１４６、配列番号１６４、配列番号１８２、または配列番号２００のヌクレオチド配列を含み、配列番号１１、配列番号２９、配列番号４７、配列番号６５、配列番号８３、配列番号１０１、配列番号１１９、配列番号１３７、配列番号１５５、配列番号１７３、配列番号１９１、または配列番号２０９のヌクレオチド配列をさらに含む。
さらなる態様では、本明細書に記載されるような抗ＴＩＧＩＴ抗体を作製する方法が提供される。いくつかの実施形態では、この方法は、抗体の発現に適した条件下で、本明細書に記載されるような宿主細胞（例えば、本明細書に記載されるようなポリヌクレオチドまたはベクターを発現する宿主細胞）を培養することを含む。いくつかの実施形態では、抗体はその後に宿主細胞（または宿主細胞培地）から回収される。
本開示の抗体またはその断片をコードするポリヌクレオチドを含む適切なベクターには、クローニングベクター及び発現ベクターが含まれる。選択したクローニングベクターは、使用しようとする宿主細胞に応じて変動し得るが、一般的に、有用なクローニングベクターは自己複製する能力を持ち、特定の制限エンドヌクレアーゼの単一の標的を保有し、及び／またはベクターを含むクローンの選択に使用できるマーカーの遺伝子を担持し得る。例には、プラスミド及び細菌ウイルス、例えば、ｐＵＣ１８、ｐＵＣ１９、Ｂｌｕｅｓｃｒｉｐｔ（例えば、ｐＢＳ ＳＫ＋）及びその誘導体、ｍｐｌ８、ｍｐｌ９、ｐＢＲ３２２、ｐＭＢ９、ＣｏｌＥ１、ｐＣＲ１、ＲＰ４、ファージＤＮＡ、及びｐＳＡ３やｐＡＴ２８などのシャトルベクターが含まれる。クローニングベクターは、ＢｉｏＲａｄ、Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎなどの商用ベンダーから入手できる。
発現ベクターは一般に、本開示の核酸を含む複製可能なポリヌクレオチドコンストラクトである。発現ベクターは、典型的には、エピソーム、または染色体ＤＮＡの一体化した部分のいずれかとして、宿主細胞中で複製し得る。適切な発現ベクターには、プラスミド、アデノウイルス、アデノ随伴ウイルス、レトロウイルスを含むウイルスベクター、及び任意の他のベクターが含まれるが、これらに限定されない。
ＩＶ． 抗ＴＩＧＩＴ抗体を使用する治療方法
別の態様では、対象のがんを治療または予防するための方法が提供される。いくつかの実施形態では、本方法は、治療量の本明細書に記載されるような抗ＴＩＧＩＴ抗体または抗原結合断片、または本明細書に記載されるような抗ＴＩＧＩＴ抗体または抗原結合断片を含む医薬組成物を対象に投与することを含む。いくつかの実施形態では、対象は、ヒト、例えば、ヒトの成人またはヒトの小児である。
いくつかの実施形態では、がんはＣＤ１１２及び／またはＣＤ１５５の発現が豊富ながんまたはがん細胞である。いくつかの実施形態では、ＣＤ１１２及び／またはＣＤ１５５が豊富ながんは、ＣＤ１１２またはＣＤ１５５に特異的な抗体を使用する腫瘍試料の免疫組織化学的評価により同定される。いくつかの実施形態では、ＣＤ１１２またはＣＤ１５５の発現は、腫瘍細胞または腫瘍浸潤白血球で豊富であるかまたは増加している。いくつかの実施形態では、がんは、腫瘍試料中のＣＤ１１２及び／またはＣＤ１５５のｍＲＮＡレベルの評価に基づいて同定される（例えば、定量的ＲＴ−ＰＣＲなどの当該技術分野で既知の方法による）。いくつかの実施形態では、がん患者から得られた血液試料中の可溶性ＣＤ１１２またはＣＤ１５５の測定を使用して、ＣＤ１１２及び／またはＣＤ１５５の発現が豊富ながんを同定できる。いくつかの実施形態では、この方法は、対象から試料（例えば、腫瘍試料または血液試料）を取得することと、対象由来の試料中のＣＤ１１２及び／またはＣＤ１５５のレベルを測定することと、対象由来の試料中のＣＤ１１２及び／またはＣＤ１５５のレベルを対照値（例えば、健常対照対象由来の試料、または健常対照集団について決定されたＣＤ１１２及び／またはＣＤ１５５発現のレベル）と比較することと、を含む。いくつかの実施形態では、この方法は、対象由来の試料中のＣＤ１１２及び／またはＣＤ１５５のレベルが対照値よりも高いことを決定することと、続いて本明細書に記載されるような抗ＴＩＧＩＴ抗体を対象に投与することと、を含む。
いくつかの実施形態では、がんは、ＴＩＧＩＴを発現するＴ細胞またはナチュラルキラー（ＮＫ）細胞が豊富ながんまたはがん細胞である。いくつかの実施形態では、ＴＩＧＩＴが豊富ながんは、ＴＩＧＩＴに特異的な抗体を使用する腫瘍試料の免疫組織化学的評価により同定される。いくつかの実施形態では、Ｔ細胞またはＮＫ細胞に特異的な抗体（例えば、抗ＣＤ３、抗ＣＤ４、抗ＣＤ８、抗ＣＤ２５、または抗ＣＤ５６）は、ＴＩＧＩＴを発現する腫瘍浸潤細胞のサブセットを決定するために使用される。いくつかの実施形態では、がんは、腫瘍試料中のＴＩＧＩＴのｍＲＮＡレベルの評価に基づいて同定される。いくつかの実施形態では、がん患者から得られた血液試料中の可溶性ＴＩＧＩＴの測定を使用して（必要に応じて、Ｔ細胞またはＮＫ細胞に特異的な抗体と組み合わせて）、ＴＩＧＩＴを発現するＴ細胞またはＮＫ細胞が豊富ながんを同定することができる。いくつかの実施形態では、方法は、対象から試料（例えば、腫瘍試料または血液試料）を取得することと、対象由来の試料中のＴＩＧＩＴのレベルを測定することと、必要に応じて、Ｔ細胞またはＮＫ細胞を検出すること（例えば、抗ＣＤ３、抗ＣＤ４、抗ＣＤ２５、または抗ＣＤ５６などのＴ細胞またはＮＫ細胞に特異的な抗体を使用して）と、対象由来の試料中のＴＩＧＩＴのレベルを対照値（例えば、健常対照対象由来の試料または健常対照集団について決定されたＴＩＧＩＴの発現レベル）と比較することと、を含む。いくつかの実施形態では、この方法は、対象からの試料中のＴＩＧＩＴのレベルが対照値よりも高いことを決定することと、続いて本明細書に記載されるような抗ＴＩＧＩＴ抗体を対象に投与することと、を含む。
いくつかの実施形態では、がんは、膀胱癌、乳癌、子宮癌、子宮頸癌、卵巣癌、前立腺癌、精巣癌、食道癌、胃腸癌、膵臓癌、大腸癌、結腸癌、腎臓癌、頭頸部癌、肺癌、胃癌、胚細胞癌、骨癌、肝臓癌、甲状腺癌、皮膚癌（例えば、黒色腫）、中枢神経系腫瘍、リンパ腫、白血病、骨髄腫、または肉腫である。いくつかの実施形態では、がんは胃癌である。いくつかの実施形態では、がんは肺癌である。いくつかの実施形態では、がんは皮膚癌（例えば、黒色腫）である。いくつかの実施形態では、癌は転移性がんである。いくつかの実施形態では、がんは、急性骨髄性、慢性骨髄性、急性リンパ性、または慢性リンパ性の白血病、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、濾胞性リンパ腫、マントル細胞リンパ腫、小リンパ球性リンパ腫、縦隔原発大細胞型Ｂ細胞リンパ、脾性辺縁帯Ｂ細胞リンパ腫、または節外性辺縁帯Ｂ細胞リンパ腫を含むが、これらに限定されないリンパ腫または白血病である。
いくつかの実施形態では、方法は、治療量の腫瘍免疫療法薬を対象に投与することをさらに含む。いくつかの実施形態では、腫瘍免疫療法薬は、ＰＤ−１経路、ＣＴＬＡ−４経路、Ｌａｇ３経路またはＴＩＭ−３経路などの免疫チェックポイント経路の構成要素をアンタゴナイズまたは阻害する薬剤（例えば、抗体、小分子、またはペプチド）である。いくつかの実施形態では、腫瘍免疫療法薬は、ＯＸ−４０経路、４−１ＢＢ（ＣＤ１３７）経路、ＣＤ２７経路、ＩＣＯＳ経路、またはＧＩＴＲ経路を標的化することによる、Ｔ細胞コアクチベーターのアゴニスト（すなわち、Ｔ細胞活性化を刺激するタンパク質のアゴニスト）である。
いくつかの実施形態では、腫瘍免疫療法薬は、ＰＤ−１経路阻害剤である。いくつかの実施形態では、いくつかの実施形態では、ＰＤ−１経路阻害剤は、ペンブロリズマブ、ニボルマブ、デュルバルマブ、ピジリズマブ、またはアテゾリズマブなどであるが、これらに限定されない、抗ＰＤ−１抗体または抗ＰＤ−Ｌ１抗体である。ＰＤ−１経路阻害剤は、当該技術分野において記載されている。例えば、Ｄｏｌａｎ ｅｔ ａｌ．， Ｃａｎｃｅｒ Ｃｏｎｔｒｏｌ， ２０１４， ２１：２３１−２３７；Ｌｕｋｅ ｅｔ ａｌ．， Ｏｎｃｏｔａｒｇｅｔ， ２０１４， ６：３４７９−３４９２；ＵＳ２０１６／０２２２１１３；ＵＳ２０１６／０２７２７０８；ＵＳ２０１６／０２７２７１２；及びＵＳ２０１６／０３１９０１９を参照されたい。
いくつかの実施形態では、腫瘍免疫療法薬は、Ｔ細胞コアクチベーターのアゴニストである。いくつかの実施形態では、腫瘍免疫療法薬は、ＣＤ２８、ＣＤ２８Ｈ、ＣＤ３、４−１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＩＣＯＳ、ＯＸ４０、ＧＩＴＲ、ＣＤ２７、またはＣＤ４０のアゴニストである。いくつかの実施形態では、腫瘍免疫療法薬は、免疫刺激性サイトカインである。いくつかの実施形態では、免疫刺激性サイトカインは、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ）、マクロファージコロニー刺激因子（Ｍ−ＣＳＦ）、顆粒球コロニー刺激因子（Ｇ−ＣＳＦ）、インターロイキン１（ＩＬ−１）、インターロイキン２（ＩＬ−２）、インターロイキン３（ＩＬ−３）、インターロイキン１２（ＩＬ−１２）、インターロイキン１５（ＩＬ−１５）、またはインターフェロンガンマ（ＩＦＮ−γ）である。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるような抗ＴＩＧＩＴ抗体による治療は、手術、放射線、または化学療法などの１つ以上の他のがん治療と組み合わされる。いくつかの実施形態では、化学療法剤は、アルキル化剤（例えば、シクロホスファミド、イホスファミド、クロラムブシル、ブスルファン、メルファラン、メクロレタミン、ウラムスチン、チオテパ、ニトロソウレア、もしくはテモゾロミド）、アントラサイクリン（例えば、ドキソルビシン、アドリアマイシン、ダウノルビシン、エピルビシン、もしくはミトキサントロン）、細胞骨格破壊剤（例えば、パクリタキセルもしくはドセタキセル）、ヒストンデアセチラーゼ阻害剤（例えば、ボリノスタットもしくはロミデプシン）、トポイソメラーゼの阻害剤（例えば、イリノテカン、トポテカン、アムサクリン、エトポシド、もしくはテニポシド）、キナーゼ阻害剤（例えば、ボルテゾミブ、エルロチニブ、ゲフィチニブ、イマチニブ、ベムラフェニブ、もしくはビスモデギブ）、ヌクレオシド類似体または前駆体類似体（例えば、アザシチジン、アザチオプリン、カペシタビン、シタラビン、フルオロウラシル、ゲムシタビン、ヒドロキシウレア、メルカプトプリン、メトトレキサート、もしくはチオグアニン）、ペプチド抗生剤（例えばアクチノマイシンもしくはブレオマイシン）、白金ベースの薬剤（例えば、シスプラチン、オキサロプラチン（ｏｘａｌｏｐｌａｔｉｎ）、もしくはカルボプラチン）、または植物アルカロイド（例えば、ビンクリスチン、ビンブラスチン、ビノレルビン、ビンデシン、ポドフィロトキシン、パクリタキセル、もしくはドセタキセル）である。
いくつかの実施形態では、抗ＴＩＧＩＴ抗体 （及び必要に応じて腫瘍免疫療法薬または他の治療的処置）は、治療有効量または治療有効用量で投与される。約０．０１ｍｇ／ｋｇ〜約５００ｍｇ／ｋｇ、または約０．１ｍｇ／ｋｇ〜約２００ｍｇ／ｋｇ、または約１ｍｇ／ｋｇ〜約１００ｍｇ／ｋｇ、または約１０ｍｇ／ｋｇ〜約５０ｍｇ／ｋｇの１日用量範囲を使用できる。しかしながら、投与量は、選択した投与経路、組成物の製剤、患者の応答、状態の重症度、対象の体重、処方医の判断など、いくつかの要因に応じて変化し得る。投与量は、個々の患者の必要に応じて、経時的に増減できる。特定の例では、患者に最初に低用量を投与し、その後、患者に許容される有効な用量まで増加させる。有効量の決定は、十分に当業者の能力の範囲内である。
抗ＴＩＧＩＴ抗体または抗ＴＩＧＩＴ抗体（及び必要に応じて腫瘍免疫療法薬もしくは他の治療的処置）を含む医薬組成物の投与経路は、経口、腹腔内、経皮、皮下、静脈内、筋肉内、吸入、局所、病巣内、直腸、気管支内、鼻腔内、経粘膜、腸内、眼内または耳内の送達、または当該技術分野で公知の他の方法であり得る。いくつかの実施形態では、抗ＴＩＧＩＴ抗体（及び必要に応じて腫瘍免疫療法薬）は、経口、静脈内、または腹腔内に投与される。
共投与される治療薬（例えば、抗ＴＩＧＩＴ抗体と腫瘍免疫療法薬または他の治療的処理）は、一緒にまたは別個に、同時にまたは異なる時間で投与できる。投与される場合、治療薬は、必要に応じて、１日１回、２回、３回、４回、またはそれ以上またはそれ以下の頻度で独立して投与することができる。いくつかの実施形態では、投与される治療薬は１日１回投与される。いくつかの実施形態では、投与される治療薬は、例えば混合物として同時に単回または複数回投与される。いくつかの実施形態では、１つ以上の治療薬は持続放出製剤で投与される。
いくつかの実施形態では、抗ＴＩＧＩＴ抗体と別の治療的処置（例えば、腫瘍免疫療法薬）は、同時に投与される。いくつかの実施形態では、抗ＴＩＧＩＴ抗体と別の治療的処置（例えば、腫瘍免疫療法薬）は、逐次的に投与される。例えば、いくつかの実施形態では、最初に抗ＴＩＧＩＴ抗体を、例えば、腫瘍免疫療法薬を投与する約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５、２０、２５、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００日またはそれ以上前に投与する。いくつかの実施形態では、最初に腫瘍免疫療法薬を、例えば、抗ＴＩＧＩＴ抗体を投与する約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５、２０、２５、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００日またはそれ以上前に投与する。
いくつかの実施形態では、抗ＴＩＧＩＴ抗体（及び必要に応じて腫瘍免疫療法薬）は、例えば少なくとも３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１５０、２００、２５０、３００、３５０日またはそれ以上の長期間にわたって対象に投与される。
Ｖ． 組成物及びキット
別の態様では、対象のがんを治療または予防するのに使用するための抗ＴＩＧＩＴ抗体を含む組成物及びキットが提供される。
医薬組成物
いくつかの実施形態では、がんを有する対象に投与するのに使用するための抗ＴＩＧＩＴ抗体を含む医薬組成物が提供される。いくつかの実施形態では、抗ＴＩＧＩＴ抗体は上述のセクションＩＩＩで記載されるようなものであり、例えば、上述のセクションＩＩＩに開示されるような親和性、活性、交差反応性、エピトープ認識、及び／または１つ以上のＣＤＲ、ＶＨ、及び／またはＶＬの配列を有する抗ＴＩＧＩＴ抗体である。
いくつかの実施形態では、抗ＴＩＧＩＴ抗体及び腫瘍免疫療法薬（例えば、本明細書に記載されるようなＰＤ−１経路阻害剤）は、一緒にまたは別個に、医薬組成物中に製剤化される。いくつかの実施形態では、腫瘍免疫療法薬は、ＰＤ−１経路阻害剤、またはＣＴＬＡ−４経路阻害剤である。いくつかの実施形態では、腫瘍免疫療法薬は、Ｔ細胞コアクチベーターのアゴニストである。いくつかの実施形態では、ＰＤ−１経路阻害剤は、ペンブロリズマブ、ニボルマブ、デュルバルマブ、ピジリズマブ、またはアテゾリズマブなどであるが、これらに限定されない、抗ＰＤ−１抗体または抗ＰＤ−Ｌ１抗体である。
本発明で使用する製剤を調製するためのガイダンスは、例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ， ２１ｓｔ Ｅｄ．， ２００６， ｓｕｐｒａ；Ｍａｒｔｉｎｄａｌｅ：Ｔｈｅ Ｃｏｍｐｌｅｔｅ Ｄｒｕｇ Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ， Ｓｗｅｅｔｍａｎ， ２００５， Ｌｏｎｄｏｎ：Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｐｒｅｓｓ；Ｎｉａｚｉ， Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｍａｎｕｆａｃｔｕｒｉｎｇ Ｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎｓ， ２００４， ＣＲＣ Ｐｒｅｓｓ；及び、Ｇｉｂｓｏｎ， Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｐｒｅｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎ ａｎｄ Ｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎ：Ａ Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ｇｕｉｄｅ ｆｒｏｍ Ｃａｎｄｉｄａｔｅ Ｄｒｕｇ Ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ ｔｏ Ｃｏｍｍｅｒｃｉａｌ Ｄｏｓａｇｅ Ｆｏｒｍ， ２００１， Ｉｎｔｅｒｐｈａｒｍ Ｐｒｅｓｓに見出せ、これらは、参照により本明細書に組み込まれる。本明細書に記載の医薬組成物は、当業者に公知の方法、すなわち、従来の混合、溶解、造粒、糖衣錠製造、乳化、カプセル化、封入、または凍結乾燥プロセスの手段によって製造することができる。以下の方法及び賦形剤は単なる例示であり、決して限定的なものではない。
いくつかの実施形態では、抗ＴＩＧＩＴ抗体（及び必要に応じて腫瘍免疫療法薬）は、持続放出（ｓｕｓｔａｉｎｅｄ−ｒｅｌｅａｓｅ）、制御放出、持続放出（ｅｘｔｅｎｄｅｄ−ｒｅｌｅａｓｅ）、持続放出（ｔｉｍｅｄ−ｒｅｌｅａｓｅ）、または遅延放出製剤による送達のために、例えば、治療薬を含む固体疎水性ポリマーの半透性マトリックスに調製される。様々なタイプの持続放出物質が確立されており、当業者には周知である。現在の持続放出製剤には、フィルムコーティング錠、多粒子またはペレットシステム、親水性または親油性の物質を使用するマトリックス技術、細孔形成賦形剤を含むワックスベースの錠剤が含まれる（例えば、Ｈｕａｎｇ， ｅｔ ａｌ． Ｄｒｕｇ Ｄｅｖ． Ｉｎｄ． Ｐｈａｒｍ． ２９：７９ （２００３）；Ｐｅａｒｎｃｈｏｂ， ｅｔ ａｌ． Ｄｒｕｇ Ｄｅｖ． Ｉｎｄ． Ｐｈａｒｍ． ２９：９２５ （２００３）；Ｍａｇｇｉ， ｅｔ ａｌ． Ｅｕｒ． Ｊ． Ｐｈａｒｍ． Ｂｉｏｐｈａｒｍ． ５５：９９ （２００３）；Ｋｈａｎｖｉｌｋａｒ， ｅｔ ａｌ．， Ｄｒｕｇ Ｄｅｖ． Ｉｎｄ． Ｐｈａｒｍ． ２２８：６０１ （２００２）；及びＳｃｈｍｉｄｔ， ｅｔ ａｌ．， Ｉｎｔ． Ｊ． Ｐｈａｒｍ． ２１６：９ （２００１）を参照されたい）。持続放出送達システムは、その設計に応じて、数時間または数日間、例えば４、６、８、１０、１２、１６、２０、２４時間またはそれ以上の時間経過にわたって化合物を放出できる。通常、持続放出製剤は、天然に存在するポリマーまたは合成ポリマー、例えば、ポリビニルピロリドン（ＰＶＰ）などの高分子ビニルピロリドン；カルボキシビニル親水性ポリマー；メチルセルロース、エチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、及びヒドロキシプロピルメチルセルロースなどの疎水性及び／または親水性のハイドロコロイド；ならびにカルボキシポリメチレンを使用して調製できる。
経口投与の場合、抗ＴＩＧＩＴ抗体（及び必要に応じて腫瘍免疫療法薬）は、当該技術分野で周知の薬学的に許容される担体と組み合わせることにより容易に製剤化することができる。そのような担体により、治療される患者による経口摂取のために、化合物を錠剤、丸薬、糖衣錠、カプセル剤、乳剤、親油性及び親水性の懸濁剤、液剤、ゲル、シロップ、スラリー、懸濁剤などとして製剤化することが可能になる。経口使用のための医薬製剤は、化合物を固体賦形剤と混合し、必要に応じて得られた混合物を粉砕し、混合物を処理し、必要に応じて適切な補助剤を添加した後、錠剤または糖衣錠コアを得ることにより得ることができる。適切な賦形剤には、例えば、ラクトース、スクロース、マンニトール、ソルビトールを含む糖などの充填剤；例えば、トウモロコシデンプン、小麦デンプン、米デンプン、ジャガイモデンプン、ゼラチン、トラガカントゴム、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウム、及び／またはポリビニルピロリドン（ＰＶＰ）などのセルロース製剤が含まれる。必要に応じて、架橋ポリビニルピロリドン、寒天、またはアルギン酸もしくはアルギン酸ナトリウムなどのその塩などの崩壊剤を添加することができる。
抗ＴＩＧＩＴ抗体（及び必要に応じて腫瘍免疫療法薬）は、注射、例えば、ボーラス注射または持続注入による非経口投与用に製剤化することができる。注射の場合、化合物または複数の化合物は、植物または他の類似の油、合成脂肪酸グリセリド、高級脂肪酸のエステルまたはプロピレングリコールなどの水性または非水性溶媒に溶解、懸濁、または乳化することにより；そして、必要に応じて、可溶化剤、等張剤、懸濁剤、乳化剤、安定剤、及び防腐剤などの従来の添加剤とともに、製剤に製剤化することができる。いくつかの実施形態では、化合物は水溶液、好ましくはハンクス液、リンガー液、または生理食塩水緩衝液などの生理学的に適合する緩衝液で製剤化することができる。注射のための製剤は、単位剤形で、例えばアンプルで、または保存剤を添加した複数用量容器で提供することができる。組成物は、油性または水性ビヒクル中の懸濁剤、液剤、または乳剤のような形態を取り得、懸濁剤、安定剤、及び／または分散剤のような配合剤を含むことができる。
抗ＴＩＧＩＴ抗体（及び必要に応じて腫瘍免疫療法薬）は、経粘膜または経皮手段により全身投与できる。経粘膜または経皮投与の場合、浸透する障壁に適した浸透剤が製剤に使用される。局所投与の場合、薬剤は軟膏、クリーム、軟膏、散剤及びゲルに製剤化される。一実施形態では、経皮送達剤はＤＭＳＯであってよい。経皮送達システムには、例えばパッチが含まれ得る。経粘膜投与の場合、浸透する障壁に適した浸透剤が製剤に使用される。そのような浸透剤は当該技術分野において周知である。例示的な経皮送達製剤には、米国特許第６，５８９，５４９号；同第６，５４４，５４８号；同第６，５１７，８６４号；同第６，５１２，０１０号；同第６，４６５，００６号；同第６，３７９，６９６号；同第６，３１２，７１７号及び同第６，３１０，１７７号に記載されているものが含まれ、その各々が参照により本明細書に組み込まれる。
いくつかの実施形態では、医薬組成物は、許容される担体及び／または賦形剤を含む。薬学的に許容される担体には、生理学的に適合性があり、好ましくは治療薬の活性を妨げないか、さもなければ阻害しない任意の溶媒、分散媒、またはコーティングが含まれる。いくつかの実施形態では、担体は、静脈内、筋肉内、経口、腹腔内、経皮、局所、または皮下投与に適している。薬学的に許容される担体は、例えば、組成物を安定化するか、または活性剤（複数可）の吸収を増加または減少させるように作用する１つ以上の生理学的に許容される化合物（複数可）を含むことができる。生理学的に許容される化合物には、例えば、グルコース、スクロース、もしくはデキストランなどの炭水化物、アスコルビン酸またはグルタチオンなどの抗酸化剤、キレート剤、低分子量タンパク質、活性剤のクリアランスもしくは加水分解を低減する組成物、または賦形剤または他の安定剤及び／または緩衝液が含まれる。他の薬学的に許容される担体及びそれらの製剤は周知であり、概して、例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ， ２１ｓｔ Ｅｄｉｔｉｏｎ， Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ， ＰＡ． Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ Ｗｉｌｌｉａｍｓ ＆ Ｗｉｌｋｉｎｓ， ２００５に説明されている。様々な薬学的に許容される賦形剤は、当該技術分野で周知であり、例えば、Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｅｘｃｉｐｉｅｎｔｓ （５ｔｈ ｅｄ．， Ｅｄ． Ｒｏｗｅ ｅｔ ａｌ．， Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｐｒｅｓｓ， Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ， Ｄ．Ｃ．）に見出されれる。
本開示の医薬組成物の投与量及び所望の薬物濃度は、想定される特定の使用に応じて変動し得る。適切な投与量または投与経路の決定は、十分に当業者の範囲内である。適切な用量はまた、上述のセクションＩＶにも記載されている。
キット
いくつかの実施形態では、がんを有する対象の治療において使用するためのキットが提供される。いくつかの実施形態では、キットは以下を含む：
抗ＴＩＧＩＴ抗体；及び
腫瘍免疫療法薬。
いくつかの実施形態では、抗ＴＩＧＩＴ抗体は上述のセクションＩＩＩで記載されるようなものであり、例えば、上述のセクションＩＩＩに開示されるような親和性、活性、交差反応性、エピトープ認識、及び／または１つ以上のＣＤＲ、ＶＨ、及び／またはＶＬの配列を有する抗ＴＩＧＩＴ抗体である。いくつかの実施形態では、腫瘍免疫療法薬は、ＰＤ−１経路阻害剤、またはＣＴＬＡ−４経路阻害剤である。いくつかの実施形態では、腫瘍免疫療法薬は、Ｔ細胞コアクチベーターのアゴニストである。いくつかの実施形態では、ＰＤ−１経路阻害剤は、抗ＰＤ−１抗体または抗ＰＤ−Ｌ１抗体である。いくつかの実施形態では、腫瘍免疫療法薬は、ペンブロリズマブ、ニボルマブ、デュルバルマブ、ピジリズマブ、またはアテゾリズマブである。
いくつかの実施形態では、キットは、本発明の方法の実施のための指示書（すなわち、プロトコール）を含む取扱説明書（例えば、がんを治療するためのキットの使用説明書）をさらに含むことができる。取扱説明書は通常、書面または印刷資料を含むが、それに限定されるものではない。そのような指示を保存し、それらをエンドユーザーに伝えることができる任意の媒体が、本発明によって企図される。そのような媒体には、電子記憶媒体（例えば、磁気ディスク、テープ、カートリッジ、チップ）、光学媒体（例えば、ＣＤ ＲＯＭ）などが含まれるが、これらに限定されない。そのような媒体には、そのような取扱説明書を提供するインターネットサイトのアドレスが含まれていてもよい。
ＶＩ． 実施例
以下の実施例は、特許請求される発明を例示するために提供されるが、これに限定されるものではない。
実施例１：抗ＴＩＧＩＴ抗体の生成
完全ヒト抗ＴＩＧＩＴモノクローナル抗体は、酵母ベースの抗体提示システムを使用して生成された（例えば、Ｘｕ ｅｔ ａｌ， “Ａｄｄｒｅｓｓｉｎｇ ｐｏｌｙｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙ ｏｆ ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ｓｅｌｅｃｔｅｄ ｆｒｏｍ ａｎ ｉｎ ｖｉｔｒｏ ｙｅａｓｔ ｐｒｅｓｅｎｔａｔｉｏｎ ｓｙｓｔｅｍ：ａ ＦＡＣＳ−ｂａｓｅｄ， ｈｉｇｈ−ｔｈｒｏｕｇｈｐｕｔ ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ ａｎｄ ａｎａｌｙｔｉｃａｌ ｔｏｏｌ，” ＰＥＤＳ， ２０１３， ２６：６６３−６７０；ＷＯ２００９／０３６３７９；ＷＯ２０１０／１０５２５６；及びＷＯ２０１２／００９５６８を参照されたい）。各々が約１０９の多様性である８つのナイーブヒト合成酵母ライブラリーがスクリーニングされた。選択の最初の２ラウンドでは、これまでに記載される（例えば、Ｓｉｅｇｅｌ ｅｔ ａｌ， “Ｈｉｇｈ ｅｆｆｉｃｉｅｎｃｙ ｒｅｃｏｖｅｒｙ ａｎｄ ｅｐｉｔｏｐｅ−ｓｐｅｃｉｆｉｃ ｓｏｒｔｉｎｇ ｏｆ ａｎ ｓｃＦｖ ｙｅａｓｔ ｄｉｓｐｌａｙ ｌｉｂｒａｒｙ，” Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｍｅｔｈｏｄｓ， ２００４， ２８６：１４１−１５３を参照されたい）ように、Ｍｉｌｔｅｎｙｉ ＭＡＣＳシステムを利用した磁気ビーズソーティングテクニックを実行した。簡潔に述べると、酵母細胞（約１０１０細胞／ライブラリー）は、３０℃で３０分間、洗浄緩衝液（リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）／０．１％ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ））中で５ｍＬの１０ｎＭビオチン化Ｆｃ融合抗原とインキュベートした。４０ｍＬの氷冷洗浄緩衝液で１回洗浄した後、細胞ペレットを２０ｍＬの洗浄緩衝液に再懸濁し、ストレプトアビジンＭｉｃｒｏＢｅａｄｓ（５００μＬ）を酵母に添加し、４℃で１５分間インキュベートした。次いで、酵母をペレット化し、２０ｍＬの洗浄緩衝液に再懸濁し、Ｍｉｌｔｅｎｙｉ ＬＳカラムにロードした。２０ｍＬをロードした後、カラムを３ｍＬの洗浄緩衝液で３回洗浄した。次いで、カラムを磁場から取り出し、酵母を５ｍＬの増殖培地で溶離し、一晩増殖させた。フローサイトメトリーを使用して次の選択ラウンドを実施した。約２×１０７の酵母がペレット化され、洗浄緩衝液で３回洗浄され、種の交差反応性を得るために、平衡条件下で１０ｎＭのＦｃ融合抗原と低下する濃度（１００〜１ｎＭ）のビオチン化単量体抗原、１０ｎＭのビオチン化Ｆｃ融合抗原、もしくは１００ｎＭの異なる種の単量体抗原とともに３０℃でインキュベートし、または、選択から非特異的抗体を除去するために、多重特異性除去試薬（ｐｏｌｙ−ｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙ ｄｅｐｌｅｔｉｏｎ ｒｅａｇｅｎｔ；ＰＳＲ）とともにインキュベートした。ＰＳＲを枯渇させるために、これまでに記載された（例えば、Ｘｕ ｅｔ ａｌ、前出を参照されたい）ように、ライブラリーをビオチン化ＰＳＲ試薬の１：１０希釈液とともにインキュベートした。次に、酵母を洗浄緩衝液で２回洗浄し、ＬＣ−ＦＩＴＣ（１：１００に希釈）及びＳＡ−６３３（１：５００に希釈）またはＥＡ−ＰＥ（ｅｘｔｒａｖｉｄｉｎ−Ｒ−ＰＥ、１：５０に希釈）のいずれかの二次試薬とともに４℃で１５分間染色した。洗浄緩衝液で２回洗浄した後、細胞ペレットを０．３ｍＬの洗浄緩衝液に再懸濁し、ストレーナーでキャップしたソートチューブに移した。ＦＡＣＳ ＡＲＩＡソーター（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）を使用してソーティングを行い、所望の特性を持つ抗体を選択するためにソートゲートを決定した。所望の特性を全て備えた母集団が得られるまで、選択のラウンドを繰り返した。ソーティングの最終ラウンドの後、酵母を播種し、特性評価のために個々のコロニーをつつきとった。
抗体には、組換え二量体ヒトＴＩＧＩＴ−Ｆｃ（Ａｃｒｏ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ ＴＩＴ−Ｈ５２５４）、単量体ヒトＴＩＧＩＴ（Ｓｉｎｏ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ １０９１７−Ｈ０８Ｈ）、二量体マウスＴＩＧＩＴ−Ｆｃ（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ， ７２６７−ＴＧ）、及び単量体マウスＴＩＧＩＴ（Ｓｉｎｏ Ｂｉｏｌｏｇｉｃｓ ５０９３９−Ｍ０８Ｈ）が含まれた。
ナイーブキャンペーン：７４４個のクローンがシークエンス解析され、３４５個の固有のクローン（固有のＣＤＲＨ３）を得た。クローンには１８のＶＨ生殖系列が含まれていた。
軽鎖バッチの多様性キャンペーン：ラウンド６のナイーブディスカバリー選択からの豊富なバインダープールからの重鎖（ＶＨ）プラスミドはｓｍａｓｈ ａｎｄ ｇｒａｂによって酵母から抽出され、Ｅ． Ｃｏｌｉで増殖され、その後精製され、次いで、１０７の多様性のある軽鎖ライブラリーに変換された。
選択は、ナイーブな発見と本質的に同一の条件で実施された。簡潔に述べると、１ラウンドの磁気ビーズ濃縮の後、フローサイトメトリーによる３ラウンドの選択が続いた。磁気ビーズ濃縮ラウンドでは、１０ｎＭのビオチン化Ｆｃ融合抗原を使用した。フローサイトメーターの第１のラウンドは、１００ｎＭビオチン化一価抗原を使用する陽性選択ラウンドからなった。ＰＳＲ除去の陰性選択ラウンドからなる第２のラウンドがこれに続いた。最終（第３の）ラウンドは、陽性選択ラウンドからなり、１価抗原が１００ｎＭ、１０ｎＭ、１ｎＭで滴定された。すべてのライブラリーについて、この第３のラウンドからの１ｎＭソートの酵母を播種し、個々のコロニーをつつきとって特性評価した。全体で、７２８個のクローンがシーケンス解析され、３５０個の固有のＨＣ／ＬＣの組み合わせ（９３個の固有のＣＤＲＨ３）を得た。
ナイーブキャンペーンとライトチェーンバッチシャッフルキャンペーンの間で、合計６９５個の固有のクローンが同定された。
実施例２：抗ＴＩＧＩＴ抗体の特性評価
１２のＶＨ生殖細胞系と９のＶＬ生殖細胞系を表す６５個のクローンが産生とさらなる評価のために選択された。
抗体産生及び精製
酵母クローンは飽和状態まで増殖し、その後、振とうしながら３０℃で４８時間誘導された。誘導後、酵母細胞をペレット化し、上清を精製のために回収した。プロテインＡカラムを使用してＩｇＧを精製し、ｐＨ２．０の酢酸で溶離した。Ｆａｂ断片はパパイン消化により生成され、ＫａｐｐａＳｅｌｅｃｔ（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ ＬｉｆｅＳｃｉｅｎｃｅｓ）で精製された。
抗ＴＩＧＩＴ抗体の組換えヒトタンパク質及び組換えマウスタンパク質に対する結合
ＦｏｒｔｅＢｉｏ親和性測定は、概してこれまでに記載された（例えば、Ｅｓｔｅｐ ｅｔ ａｌ．， “Ｈｉｇｈ ｔｈｒｏｕｇｈｐｕｔ ｓｏｌｕｔｉｏｎ−ｂａｓｅｄ ｍｅａｓｕｒｅｍｅｎｔ ｏｆ ａｎｔｉｂｏｄｙ−ａｎｔｉｇｅｎ ａｆｆｉｎｉｔｙ ａｎｄ ｅｐｉｔｏｐｅ ｂｉｎｎｉｎｇ，” Ｍａｂｓ， ２０１３， ５：２７０−２７８を参照されたい）ように、Ｏｃｔｅｔ ＲＥＤ３８４で実施した。簡潔に述べると、ＦｏｒｔｅＢｉｏ親和性測定は、ＡＨＱセンサーにＩｇＧをオンラインでロードすることにより実施された。センサーは、アッセイ緩衝液により３０分間オフラインで平衡化され、次いでベースラインの確立のために６０秒間オンラインでモニターされた。ＩｇＧをロードしたセンサーを１００ｎＭ抗原（二量体Ｆｃ融合抗原または単量体抗原）に３分間曝し、その後、オフレート測定のためにアッセイ緩衝液に３分間移した。すべての結合及び解離反応速度は、１：１結合モデルを使用して分析した。
６５個のＩｇＧクローンのうち、４３個はＴＩＧＩＴ単量体に対する１００ｎＭ未満の親和性を有した。６５個のＩｇＧクローンのうち、３４個がマウスＴＩＧＩＴ−Ｆｃと交差反応した。選択したクローンの結合親和性を以下の表１に示す。
エピトープ結合／リガンド競合アッセイ
エピトープ結合／リガンド遮断は、ＦｏｒｔｅＢｉｏ Ｏｃｔｅｔ ＲＥＤ３８４システムでの標準的なサンドイッチ形式のクロスブロッキングアッセイを使用して実施した。対照の抗標的ＩｇＧをＡＨＱセンサーにロードし、センサー上の占有されていないＦｃ結合部位を無関係なヒトＩｇＧ１抗体でブロッキングした。次いで、センサーを１００ｎＭの標的抗原に曝露した後、二次抗標的抗体またはリガンド（ヒトＣＤ１５５−Ｆｃ（Ｓｉｎｏ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ， １０１０９−Ｈ０２Ｈ））に曝露した。抗原結合後の二次抗体またはリガンドによるさらなる結合は、占有されていないエピトープ（非競合）を示し、結合がないことはエピトープ遮断（競合またはリガンド遮断）を示す。
４つのビニング抗体（相互排他的ではない）がビン評価に使用され、５つの重複するビニングプロファイルが同定された。６５個の抗ＴＩＧＩＴ抗体のうち６３個がｈＴＩＧＩＴ−Ｆｃに対する結合についてリガンドと競合した。選択されたクローンのビニングプロファイルとリガンド競合結果を以下の表１に示す。
ＨＥＫ２９３細胞で過剰発現したヒト、マウス、及びカニクイザルのＴＩＧＩＴに対する抗ＴＩＧＩＴ抗体の結合
ＨＥＫ２９３細胞は、レンチウイルス形質導入により高レベルのヒト、マウス、またはカニクイザルのＴＩＧＩＴを安定して発現するように遺伝子操作された。約１００，０００の親ＨＥＫ２９３（ＴＩＧＩＴ陰性）細胞またはヒト、マウス、もしくははカニクイザルを過剰発現するＨＥＫ２９３細胞を、室温で５分間、１００ｎＭの各抗ＴＩＧＩＴ抗体で染色した。次いで、細胞を洗浄緩衝液で２回洗浄し、氷上で１５分間、ＰＥにコンジュゲートした抗ヒトＩｇＧとともにインキュベートした。次いで、細胞を洗浄緩衝液で２回洗浄し、ＦＡＣＳ Ｃａｎｔｏ ＩＩ機器（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）でフローサイトメトリーにより分析した。バックグラウンドに対する倍率（ＦＯＢ）は、標的陽性細胞に結合した抗ＴＩＧＩＴクローンの蛍光強度の中央値（ＭＦＩ）を、標的陰性細胞に結合した抗ＴＩＧＩＴクローンのＭＦＩで除算して計算した。
図１に示すように、６５の抗体全てが２９３−ｈＴＩＧＩＴ系統に対する特異的結合を示した（チャートの黒い水平線で示されるように、ＦＯＢ＞１０）。５３クローンが２９３−ｃｙＴＩＧＩＴ系統に特異的に結合し、３１クローンが２９３−ｍＴＩＧＩＴ系統に特異的に結合した。
多重特異性試薬（ＰＳＲ）アッセイ
多重特異性試薬に対する結合の評価は、これまでに記載された（例えば、Ｘｕ ｅｔ ａｌ、前出を参照されたい）ように、ＴＩＧＩＴの特異性を決定するために実施された。簡潔に述べると、ストックから１：１０に希釈したビオチン化ＰＳＲ試薬を、氷上で２０分間ＩｇＧ提示酵母とともにインキュベートした。細胞を洗浄し、ＥＡ−ＰＥ（ｅｘｔｒａｖｉｄｉｎ−Ｒ−ＰＥ）で標識し、ＦＡＣＳアナライザーで読み取った。多重特異的結合の採点は０から１のスケールであり、低、中、及び高の非特異的結合を持つ対照ＩｇＧと相関し、スコア０は無結合、スコア１は非常に高い非特異的結合を示す。
６５個のクローン中６２個のクローンが、ＰＳＲスコアが０．１０未満の非多重特異性バインダーとしてスコア付けされた。３個のクローンは、低多重特異性バインダーとしてスコア付けされた（ＰＳＲスコア０．１０〜０．３３）。
疎水性相互作用クロマトグラフィーアッセイ
疎水性相互作用クロマトグラフィー（ＨＩＣ）は、これまでに記載された（Ｅｓｔｅｐ ｅｔ ａｌ．、前出）ように実施された。簡潔に述べると、５μｇのＩｇＧサンプルを、移動相Ａ溶液（１．８Ｍ硫酸アンモニウムと０．１Ｍリン酸ナトリウム、ｐＨ６．６）でスパイクして、分析前に約１Ｍの最終硫酸アンモニウム濃度を達成した。Ｓｅｐａｘ Ｐｒｏｔｅｏｍｉｘ ＨＩＣブチル−ＮＰ５カラムを、移動相Ａと移動相Ｂ溶液（０．１Ｍリン酸ナトリウム、ｐＨ ６．５）の２０分間にわたる直線状勾配で、流速１ｍＬ／分、２８０ｎＭでのＵＶ吸光度モニタリングで使用した。
疎水性カラムでの抗体の保持の増加は、疎水性の増加と、乏しい発現、精製中の凝集または沈殿の傾向と相関している。６５個のクローンのうちの５個は１１．５分を超える高いＨＩＣ保持時間を有し、１０個のクローンは１０．５〜１１．５分の中程度のＨＩＣ保持時間を有し、残りのクローンは低いＨＩＣ保持時間を有した。
実施例３：抗ＴＩＧＩＴ抗体の初代Ｔ細胞で内在的に発現するヒト、マウス、及びカニクイザルＴＩＧＩＴに対する結合
ヒトＴＩＧＩＴ組換えタンパク質及びＨＥＫ２９３細胞で発現するヒトＴＩＧＩＴに特異的であることが示された６５の抗体を、初代ヒト末梢血Ｔ細胞の内在性ＴＩＧＩＴに結合する能力について評価した。抗体は、末梢血Ｔ細胞のカニクイザルＴＩＧＩＴに対する交差反応性についても評価され、６５個のクローンのうち３５個のクローンは、活性化脾臓Ｔ細胞のマウスＴＩＧＩＴに対する交差反応性について評価された。
ヒト汎Ｔ細胞は、白血球除去製品から９９％の純度で陰性に単離された。１００，０００個の細胞を、２０μｇ／ｍＬの各抗ＴＩＧＩＴ抗体により４℃で３０分間染色した。抗ＴＩＧＩＴ抗体は、ＰＥにコンジュゲートしたポリクローナルヤギ抗ヒトＩｇＧで検出した（Ｊａｃｋｓｏｎ ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ １０９−１１６−０９８）。試料をＣｙｔｏＦＬＥＸフローサイトメーターで分析した。陽性の閾値を決定するために、抗ヒトＩｇＧ−ＰＥ単独での染色を使用して、ＦＳＣ／ＳＳＣゲートしたリンパ球集団のＴＩＧＩＴ＋パーセントを各抗体について決定した。
カニクイザル白血球は、赤血球溶解により全血から単離した（ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ ００−４３００）。２００，０００個の細胞を、２０μｇ／ｍＬの各抗ＴＩＧＩＴ抗体により４℃で３０分間染色した。抗ＴＩＧＩＴ抗体は、ＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ６４７（ＳｏｕｔｈｅｒｎＢｉｏｔｅｃｈ ２０４９−３１）でコンジュゲートしたサル免疫グロブリンに対して吸着したポリクローナルヤギ抗ヒトＩｇＧによって検出し、Ｔ細胞は、ＦＩＴＣコンジュゲート抗ＣＤ３クローンＳＰ３４（ＢＤ Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ ５５６６１１）で対比染色することにより同定した。試料をＣｙｔｏＦＬＥＸフローサイトメーターで分析した。陽性の閾値を決定するために、抗ヒトＩｇＧ−ＰＥ単独での染色を使用して、ＣＤ３＋集団のＴＩＧＩＴ＋パーセントを各抗体について決定した。
ＢＡＬＢ／ｃマウスのＴ細胞は、９９％を超える純度で、陰性選択により脾臓から単離した（Ｓｔｅｍ Ｃｅｌｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ １９８５１Ａ）。ＴＩＧＩＴを上方制御するために、細胞をプレートに結合した抗ＣＤ３クローン１４５−２Ｃ１１（ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ １００３０２）で２４時間活性化した。２００，０００個の活性化した細胞を、２０μｇ／ｍＬの各抗ＴＩＧＩＴ抗体（６５個のクローンのうちの３５個を試験した）により４℃で３０分間染色した。抗ＴＩＧＩＴ抗体は、ＰＥにコンジュゲートしたポリクローナルヤギ抗ヒトＩｇＧで検出した（Ｊａｃｋｓｏｎ ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ １０９−１１６−０９８）。試料をＦＡＣＳＣａｌｉｂｕｒフローサイトメーターで分析した。ＦＳＣ／ＳＳＣゲートされたリンパ球集団の蛍光強度の中央値は、各抗体について決定された。
図２は、６５個の抗ＴＩＧＩＴ抗体クローンと無関係なアイソタイプ対照抗体の、初代のヒト、カニクイザル、及びマウスのＴ細胞に対する結合を示す。クローン１３と２５の両方は、Ｔ細胞の３つ全ての種に対して強力な結合を示した。
ＴＩＧＩＴを発現する細胞表面に対する抗ＴＩＧＩＴ抗体の滴定可能な結合
ＨＥＫ２９３細胞は、レンチウイルス形質導入により高レベルのヒト、マウス、またはカニクイザルのＴＩＧＩＴを安定して発現するように遺伝子操作された。２００，０００個の２９３−ＴＩＧＩＴ細胞を、各抗ＴＩＧＩＴ抗体の１０点の３倍滴定（３０〜０．００２μｇ／ｍＬ）により４℃で３０分間染色した。抗ＴＩＧＩＴ抗体は、ＰＥにコンジュゲートしたポリクローナルヤギ抗ヒトＩｇＧで検出した（Ｊａｃｋｓｏｎ ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ １０９−１１６−０９８）。試料をＣｙｔｏＦＬＥＸフローサイトメーターで分析した。ＦＳＣ／ＳＳＣゲートされた集団の蛍光強度の中央値は、各抗体濃度について決定された。Ｌｏｇ（Ｘ）変換データの非線形回帰を使用して、ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ ６でＥＣ５０値を生成した。抗ＴＩＧＩＴ抗体は、親ＨＥＫ２９３細胞（ＴＩＧＩＴ−）に対する結合を全く示さなかった（データ示さず）。８個の抗ＴＩＧＩＴ抗体クローン（クローン２、クローン５、クローン１３、クローン１６、クローン１７、クローン２０、クローン２５、及びクローン５４）の、ＨＥＫ２９３細胞で発現するヒト、カニクイザル、及びマウスのＴＩＧＩＴに対する結合について、図３Ａ〜Ｃは結合滴定を示し、図３ＤはＥＣ５０を示す。
Ｃ５７ＢＬ／６マウスのＴ細胞は、９９％を超える純度で、陰性選択により脾臓から単離した（Ｓｔｅｍ Ｃｅｌｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ １９８５１Ａ）。ＴＩＧＩＴを上方制御するために、細胞をプレートに結合した抗ＣＤ３クローン１４５−２Ｃ１１（ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ １００３０２）で２４時間活性化した。２００，０００個の細胞を、各抗ＴＩＧＩＴ抗体の８点の３倍滴定（３０〜０．０１４μｇ／ｍＬ）により４℃で３０分間染色した。抗ＴＩＧＩＴ抗体は、ＰＥにコンジュゲートしたポリクローナルヤギ抗ヒトＩｇＧで検出した（Ｊａｃｋｓｏｎ ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ １０９−１１６−０９８）。試料をＦＡＣＳＣａｌｉｂｕｒフローサイトメーターで分析した。ＦＳＣ／ＳＳＣゲートされたリンパ球集団の蛍光強度の中央値は、各抗体について決定された。Ｌｏｇ（Ｘ）変換データの非線形回帰を使用して、ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ ６でＥＣ５０値を生成した。図４は、活性化したマウス脾臓Ｔ細胞に対する抗ＴＩＧＩＴクローン１３及び２５の結合力価と結合のＥＣ５０を示している。
実施例４：抗ＴＩＧＩＴ抗体は、ＣＤ１５５及びＣＤ１１２リガンドの細胞表面発現ＴＩＧＩＴに対する結合を遮断する
ＨＥＫ２９３細胞は、レンチウイルス形質導入により高レベルのヒトまたはマウスのＴＩＧＩＴを安定して発現するように遺伝子操作された。ｈＣＤ１５５−Ｆｃ（Ｓｉｎｏ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ １０１０９−Ｈ０２Ｈ）、ｈＣＤ１１２−Ｆｃ（Ｓｉｎｏ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ １０００５−Ｈ０２Ｈ）、及びｍＣＤ１５５−Ｆｃ（Ｓｉｎｏ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ ５０２５９−Ｍ０３Ｈ）が、ＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ６４７（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ａ３０００９）に対してコンジュゲートされた。２００，０００個の２９３−ｈＴＩＧＩＴ細胞または２９３−ｍＴＩＧＩＴ細胞が、１μｇ／ｍＬのＣＤ１５５−Ｆｃ−ＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ６４７または５μｇ／ｍＬのＣＤ１１２−Ｆｃ−ＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ６４７と、各抗ＴＩＧＩＴ抗体またはアイソタイプ対照抗体の１２点の２倍滴定（１０〜０．００５μｇ／ｍＬ）とともに共インキュベートされた。試料をＣｙｔｏＦＬＥＸフローサイトメーターで分析した。ＦＳＣ／ＳＳＣゲートされた集団の蛍光強度の中央値は、各抗体濃度について決定された。遮断パーセントは、無抗体対照のＭＦＩと比較して計算された。Ｌｏｇ（Ｘ）変換データの非線形回帰はＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ ６で実施された。
図５Ａ〜Ｂに示すように、６個の抗ＴＩＧＩＴ抗体クローン（クローン２、クローン５、クローン１３、クローン１７、クローン２５、及びクローン５５）が試験され、６個のクローンのうち５個（クローン２、クローン５、クローン１３、クローン１７、及びクローン２５）は、ヒトＣＤ１５５／ヒトＴＩＧＩＴ及びマウスＣＤ１５５／マウスＴＩＧＩＴの両方について、ＨＥＫ２９３細胞で発現するＴＩＧＩＴとＣＤ１５５の相互作用を顕著に遮断した。クローン５５はヒトＴＩＧＩＴに特異的に結合するが、ＦｏｒｔｅＢｉｏ Ｏｃｔｅｔリガンド競合アッセイにおいてｈＴＩＧＩＴ−Ｆｃに対する結合についてｈＣＤ１５５−Ｆｃと競合しなかった。同様に、クローン５５は、２９３−ｈＴＩＧＩＴ細胞株とのｈＣＤ１５５の相互作用を効果的に遮断しなかった。クローン２、クローン５、クローン１３、クローン１７、及びクローン２５も、ヒトＣＤ１１２のヒトＴＩＧＩＴに対する結合を中断することができた。ＣＤ１５５で観察されたように、クローン５５はＣＤ１１２−ＴＩＧＩＴ相互作用を遮断する効果がはるかに低かった。図６を参照されたい。
実施例５：ＴＩＧＩＴ／ＣＤ１５５遮断バイオアッセイにおける抗ＴＩＧＩＴ抗体のインビトロ活性
抗ＴＩＧＩＴ抗体の活性は、抗体がＴＩＧＩＴ／ＣＤ１５５相互作用を遮断するとき、レポーター遺伝子の発現が誘導または増強される、ＴＩＧＩＴ／ＣＤ１５５遮断バイオアッセイ（例えば、ＴＩＧＩＴ／ＣＤ１５５遮断バイオアッセイキット、Ｐｒｏｍｅｇａ Ｃｏｒｐ．， Ｍａｄｉｓｏｎ， ＷＩ）を使用して機能的に特徴付けることができる。ＴＩＧＩＴ／ＣＤ１５５遮断バイオアッセイは、２つの細胞型：細胞表面にＴＩＧＩＴ、ＣＤ２２６、及びＴＣＲ複合体を発現し、ルシフェラーゼレポーター遺伝子を含むエフェクター細胞、ならびに、細胞表面にＣＤ１５５とＴＣＲ活性化因子を発現する人工抗原提示細胞を含む。このバイオアッセイでは、ルシフェラーゼの発現は、ＴＣＲの結合と共刺激シグナルを必要とする。ＣＤ１５５−ＴＩＧＩＴの相互作用は、ＣＤ１５５−ＣＤ２２６の相互作用よりも高い親和性を有し、その結果、最終的に阻害シグナル伝達が起こり、ルシフェラーゼの発現がない。ＣＤ１５５−ＴＩＧＩＴ相互作用の遮断により、ルシフェラーゼ発現を促進するＣＤ１５５−ＣＤ２２６共刺激が可能になる。
ＴＩＧＩＴとＣＤ２２６の両方を発現するＪｕｒｋａｔエフェクター細胞を、ＴＣＲアクチベーターとＣＤ１５５を発現するＣＨＯ−Ｋ１人工抗原提示細胞（ａＡＰＣ）と共培養した。Ｊｕｒｋａｔエフェクター細胞には、ＩＬ−２プロモーターによって駆動されるルシフェラーゼレポーター遺伝子が含まれている。遮断する抗ＴＩＧＩＴ抗体の非存在の場合、ＣＤ１５５−ＴＩＧＩＴの結合によりＴ細胞の共阻害が起こり、ＩＬ−２プロモーター活性はない。抗ＴＩＧＩＴ抗体を添加すると、ＣＤ１５５−ＴＩＧＩＴ相互作用が中断され、ＣＤ１５５がＣＤ２２６と結合して共刺激シグナルを送り、ルシフェラーゼ発現を駆動する。
ａＡＰＣを９６ウェルプレートに播種し、一晩接着させた。次の日に、２０μｇ／ｍＬの各抗ＴＩＧＩＴ抗体またはアイソタイプ対照抗体とＪｕｒｋａｔエフェクター細胞とをプレートに添加した。３７℃で６時間インキュベートした後、細胞を溶解し、ルシフェラーゼ基質を添加した。ルシフェラーゼ活性はプレートリーダーで定量化された。ルシフェラーゼ活性は、無抗体対照のシグナルの倍数として計算された。
図７Ａ〜７Ｂに示されるように、１２個の抗ＴＩＧＩＴ抗体クローンは、このバイオアッセイにおいて機能的な遮断を実証した。
実施例６：ＴＩＧＩＴ／ＰＤ−１組み合わせバイオアッセイにおける抗ＴＩＧＩＴ抗体のインビトロ活性
抗ＰＤ−１剤（例えば、抗ＰＤ−１抗体）と組み合わせた抗ＴＩＧＩＴ抗体の相乗活性は、抗体がＴＩＧＩＴ／ＣＤ１５５相互作用とＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１相互作用の両方を遮断するとき、レポーター遺伝子の発現が増強されるＴＩＧＩＴ／ＰＤ−１組み合わせバイオアッセイを使用して機能的に特徴付けることができる。このバイオアッセイは、２つの細胞型：細胞表面にＴＩＧＩＴ、ＣＤ２２６、ＰＤ−１、及びＴＣＲ複合体を発現し、ルシフェラーゼレポーター遺伝子を含むエフェクター細胞、ならびに、細胞表面にＣＤ１５５、ＰＤ−Ｌ１、及びＴＣＲ活性化因子を発現する人工抗原提示細胞を含む。このバイオアッセイでは、ルシフェラーゼの発現は、ＴＣＲの結合と共刺激シグナルを必要とする。ＣＤ１５５−ＴＩＧＩＴの相互作用は、ＣＤ１５５−ＣＤ２２６の相互作用よりも高い親和性を有し、その結果、最終的に阻害シグナル伝達が起こり、ルシフェラーゼの発現がない。さらに、ＰＤ−Ｌ１のＰＤ−１に対する結合は、ルシフェラーゼ発現を阻害する。Ｂｌｏｃｋａｄｅ ｏｆ ｂｏｔｈ ｔｈｅ ＣＤ１５５−ＴＩＧＩＴ相互作用とＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１相互作用の両方の遮断は、阻害を緩和し、ルシフェラーゼ発現を駆動するＣＤ１５５−ＣＤ２２６共刺激を可能にする。
ＰＤ−１、ＴＩＧＩＴ、及びＣＤ２２６を発現するＪｕｒｋａｔエフェクター細胞を、ＴＣＲアクチベーター、ＰＤ−Ｌ１、及びＣＤ１５５を発現するＣＨＯ−Ｋ１人工抗原提示細胞（ａＡＰＣ）と共培養した。Ｊｕｒｋａｔエフェクター細胞には、ＩＬ−２プロモーターによって駆動されるルシフェラーゼレポーター遺伝子が含まれている。遮断する抗ＴＩＧＩＴ抗体の非存在の場合、ＰＤ−Ｌ１−ＰＤ−１とＣＤ１５５−ＴＩＧＩＴの結合によりＴ細胞の共阻害が起こり、ＩＬ−２プロモーター活性はない。抗ＰＤ−１及び抗ＴＩＧＩＴ抗体を添加すると、ＰＤ−Ｌ１−ＰＤ−１相互作用が遮断され、１つの共抑制シグナルが緩和され、ＣＤ１５５−ＴＩＧＩＴ相互作用が中断され、ＣＤ１５５がＣＤ２２６と結合して共刺激シグナルを送り、ルシフェラーゼ産生を駆動する。
ａＡＰＣを９６ウェルプレートに播種し、一晩接着させた。次の日に、各抗ＴＩＧＩＴ抗体単独、または抗ＰＤ−１抗体（ｃｌｏｎｅ ＥＨ１２．２Ｈ７， ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ， Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ， ＣＡ）、または各抗ＴＩＧＩＴ抗体＋抗ＰＤ−１抗体（１：１の比）の１０点２．５倍滴定（１００〜０．０３μｇ／ｍＬ）とＪｕｒｋａｔエフェクター細胞とをプレートに添加した。３７℃で６時間インキュベートした後、細胞を溶解し、ルシフェラーゼ基質を添加した。ルシフェラーゼ活性はプレートリーダーで定量化された。ルシフェラーゼ活性は、無抗体対照のシグナルの倍数として計算された。図８に示すように、抗ＴＩＧＩＴ単独でも抗ＰＤ−１単独でも、劇的なＪｕｒｋａｔ活性化をもたらさなかったが、抗ＴＩＧＩＴクローン１３またはクローン２５のいずれかと抗ＰＤ−１との組み合わせは、強力な活性化をもたらした。
実施例７：ＢＡＬＢ／ｃマウスのＣＴ２６同系腫瘍モデルにおける抗ＴＩＧＩＴ抗体のインビボ活性
マウスＴＩＧＩＴに対する親和性に基づいて、抗ＴＩＧＩＴクローン１３がマウス同系腫瘍モデルでの評価のために選択された。Ｆｃアイソタイプが拮抗性ＴＩＧＩＴ抗体のインビボの有効性に影響を及ぼすかどうかという問題に対処するために、インビボ実験用に、親の完全ヒト抗ＴＩＧＩＴクローン１３のマウスＩｇＧ１及びマウスＩｇＧ２ａとのキメラを作成した。インビトロで、キメラ抗体は、（１）ヒト、マウス、及びカニクイザルＴＩＧＩＴに対する結合、（２）細胞表面で発現するＴＩＧＩＴに対するＣＤ１５５及びＣＤ１１２のリガンドの結合の遮断、及び（３）ＣＤ１５５−ＴＩＧＩＴ遮断バイオアッセイにおける活性に関して、親ｈＩｇＧ１抗体と同様の活性を示した。図９Ａ〜９Ｈを参照されたい。
平均体重１９ｇの８週齢のＢＡＬＢ／ｃマウスは、Ｃｈａｒｌｅｓ Ｒｉｖｅｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓから入手した。マウスの右側腹部に３００，０００個のＣＴ２６結腸癌細胞を皮下移植した。腫瘍接種後７日目に、群の平均腫瘍体積が７２ｍｍ３（４８〜８８ｍｍ３の範囲）になるまで腫瘍を進行させた。動物をｎ＝１０の１０の処理群に割り当て、群の平均腫瘍体積がすべての処理群で類似するようにペアマッチした。腫瘍の長さと幅を測定し、式、体積（ｍｍ３）＝０．５×長さ×幅２（式中、長さは長手方向である）を使用して腫瘍の体積を計算した。抗ＴＩＧＩＴクローン１３ｍＩｇＧ１、抗ＴＩＧＩＴクローン１３ｍＩｇＧ２ａ、及び抗ＰＤ−１クローンＲＭＰ１−１４（ＢｉｏＸＣｅｌｌ）は、滅菌ＰＢＳでの投与に適した濃度に希釈された。滅菌ＰＢＳをビヒクル対照として使用した。ＴＩＧＩＴ抗体は、３週間にわたって週２回（合計６回投与）、腹腔内注射で５または２０ｍｇ／ｋｇを投与した。抗ＰＤ−１抗体を２週間にわたって週２回（合計４回投与）、腹腔内注射で５ｍｇ／ｋｇを投与した。投与は割り当ての日（試験１日目）に開始された。マウスが２０００ｍｍ３の腫瘍体積カットオフに達するまで、腫瘍体積及び体重の測定値を週２回収集した。どの動物も投与前の体重と比較して体重減少を示さず、すべての試験薬剤の並外れた忍容性を示した。
図１０Ａに示すように、抗ｍＰＤ−１単独では、腫瘍の進行に影響を与えなかった。Ｆｃガンマ受容体の活性化に効率的に関与しないクローン１３のｍＩｇＧ１抗ＴＩＧＩＴキメラ（「１３−１」）は、単一の薬剤としても抗ＰＤ−１と組み合わせても、抗腫瘍活性を媒介しなかった。対照的に、活性化Ｆｃガンマ受容体と結合できるクローン１３のｍＩｇＧ２ａキメラ（「１３−２」）は、腫瘍の進行を遅らせた（１８日目で８６．５％（５ｍｇ／ｋｇ）または７４．４％（２０ｍｇ／ｋｇ）の腫瘍増殖阻害）。５ｍｇ／ｋｇの１３−２単剤群の１０匹の動物のうち３匹が完全な腫瘍退縮を示し、試験の終わり（試験４６日目）まで安定であった。２０ｍｇ／ｋｇの１３−２単剤群では、１０匹の動物のうち２匹が部分的な腫瘍退縮を示した（３回連続して測定した場合、初期体積の５０％未満の腫瘍体積として定義）。図１０Ａは、ｍＩｇＧ２ａクローン１３キメラ（１３−２）への抗ＰＤ−１の添加は、１３−２単独と比較して効力を増加しなかったことを示しす（１８日目の腫瘍増殖阻害５３．８％（５ｍｇ／ｋｇの抗ＴＩＧＩＴ＋５ｍｇ／ｋｇの抗ＰＤ１）対８６．５％（５ｍｇ／ｋｇの抗ＴＩＧＩＴ単独）及び８９．６％（２０ｍｇ／ｋｇの抗ＴＩＧＩＴ＋５ｍｇ／ｋｇの抗ＰＤ−１）対７４．４％（２０ｍｇ／ｋｇの抗ＴＩＧＩＴ単独）。組み合わせ群でも同様の数の完全及び部分的な応答者が観察された。例えば、図１０Ｂ〜１０Ｋを参照されたい。
実施例８：抗体の最適化と最適化された抗体の特性評価
一次発見出力からの抗体クローン２、１３、１６、及び２５は、さらなる親和性成熟のために選択された。抗体の最適化は、重鎖可変領域に多様性を導入することにより実施された。上述の系統に最適化の２つのサイクルが適用された。第１のサイクルはＣＤＲＨ１及びＣＤＲＨ２の多様化アプローチからなり、第２のサイクルではＣＤＲＨ３変異導入アプローチが適用された。
ＣＤＲＨ１及びＣＤＲＨ２のアプローチ：単一の抗体のＣＤＲＨ３は、１×１０８の多様性のＣＤＲＨ１及びＣＤＲＨ２バリアントを有する既製のライブラリーに組み換えられた。次いで、ナイーブな発見について記載したように、１ラウンドのＭＡＣＳと４ラウンドのＦＡＣＳで選択を実施した。
第１のＦＡＣＳラウンドでは、ライブラリーは１ｎＭの単量体ＴＩＧＩＴ結合についてソートされた。第２のＦＡＣＳラウンドは、多重特異性を低減するためのＰＳＲ除去ラウンドであった。最後の２ラウンドは、親ＦａｂまたはＩｇＧを使用して高親和性のために圧力をかける陽性選択ラウンドであった。Ｆａｂ／ＩｇＧ圧力は以下のように実施された：抗原は１０倍の親ＦａｂまたはＩｇＧとともにインキュベートされ、次いで酵母ライブラリーとともにインキュベートされた。選択は、親ＦａｂまたはＩｇＧよりも良好な親和性のＩｇＧを濃縮した。種の交差反応性は、ＦＡＣＳの最後の２ラウンドで確認された。
ＣＤＲＨ３変異導入：ライブラリーは、ＣＤＲＨ３の位置をランダム化することにより、ＣＤＲＨ３の多様化で生成された。上述したように、１ラウンドのＭＡＣＳと３ラウンドのＦＡＣＳで選択を実施した。所望の特性を持つ母集団を得るために、ＰＳＲの陰性選択、種の交差反応性、親和性の圧力、及びソーティングを実施した。
ＭＳＤ−ＳＥＴ ＫＤの測定
平衡親和性測定は、概してこれまでに記載された（Ｅｓｔｅｐ ｅｔ ａｌ．、前出）ように実施された。簡潔に述べると、、溶液平衡滴定（ＳＥＴ）は、ＰＢＳ＋０．１％ＩｇＧを含まないＢＳＡ（ＰＢＳＦ）で行われ、ビオチン化ヒトＴＩＧＩＴ−Ｈｉｓ単量体は５０ｐＭで一定に保たれ、５ｎＭから開始する抗体の約３〜５倍の連続希釈でインキュベートされた。抗体（ＰＢＳ中２０ｎＭ）を標準的な結合ＭＳＤ−ＥＣＬプレートに４℃で一晩、または室温で３０分間コーティングした。次いで、プレートを７００ｒｐｍで振盪しながら１％ＢＳＡで３０分間ブロッキングした後、洗浄緩衝液（ＰＢＳＦ＋０．０５％Ｔｗｅｅｎ２０）で３回洗浄した。ＳＥＴ試料を適用し、７００ｒｐｍで振盪しながら１５０秒間プレート上でインキュベートした後、１回洗浄した。プレート上で捕捉された抗原は、プレート上で３分間インキュベートすることにより、ＰＢＳＦ中の２５０ｎｇ／ｍｌのスルホタグ標識ストレプトアビジンで検出された。プレートを洗浄緩衝液で３回洗浄し、次いで界面活性剤を含む１×読み取り緩衝液Ｔを使用してＭＳＤ Ｓｅｃｔｏｒ Ｉｍａｇｅｒ ２４００機器で読み取った。遊離抗原のパーセントは、Ｐｒｉｓｍの滴定抗体の関数としてプロットされ、ＫＤを抽出するための２次方程式にフィッティングした。スループットを向上させるために、ＳＥＴ試料調製を含むＭＳＤ−ＳＥＴ実験全体で液体処理ロボットが使用された。
Ｈｉｓタグ付きヒトＴＩＧＩＴ、ｃｙｎｏ ＴＩＧＩＴ−Ｆｃ、及びマウスＴＩＧＩＴ−Ｆｃへの最適化抗体の結合を、上述のＦｏｒｔｅＢｉｏシステムを使用して測定した。上述のように、最適化された抗体は、ＣＤ１５５リガンド競合アッセイにおけるリガンド遮断、及びヒトＴＩＧＩＴ ＨＥＫ、ｃｙｎｏ ＴＩＧＩＴ ＨＥＫ、マウスＴＩＧＩＴ ＨＥＫ、及び親ＨＥＫ細胞株に対する結合についても試験された。
親和性最適化抗体の親和性データと細胞結合データを以下の表２に示す。
実施例９：エピトープマッピング
本明細書に開示されている２つのモノクローナル抗体、クローン１３及びクローン２５のエピトープは、ペプチドアレイによって特徴付けられた。標的分子のエピトープを再構築するために、ペプチドベースのエピトープ模倣物のライブラリーが、固相Ｆｍｏｃ合成を使用して合成された。アミノ官能化ポリプロピレン支持体は、独自の親水性ポリマー配合物をグラフトした後、ジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ）とＮヒドロキシベンゾトリアゾール（ＨＯＢｔ）を使用してｔ−ブチルオキシカルボニル−ヘキサメチレンジアミン（ＢｏｃＨＭＤＡ）と反応させ、続いてトリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）を使用してＢｏｃ基を切断した。標準のＦｍｏｃペプチド合成を使用して、特注のＪＡＮＵＳリキッドハンドリングステーション（Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ）によりアミノ官能化固体支持体上にペプチドを合成した。
構造模倣物の合成は、独自のＣｈｅｍｉｃａｌｌｙ Ｌｉｎｋｅｄ Ｐｅｐｔｉｄｅｓ ｏｎ Ｓｃａｆｆｏｌｄｓ（ＣＬＩＰＳ）テクノロジー（Ｐｅｐｓｃａｎ）を使用して実施した。ＣＬＩＰＳテクノロジーにより、ペプチドを単一ループ、二重ループ、三重ループ、シート状の折り畳み、ヘリックス様の折り畳み、及びそれらの組み合わせに構造化できる。ＣＬＩＰＳテンプレートはシステイン残基に結合している。ペプチドの複数のシステインの側鎖は、１つまたは２つのＣＬＩＰＳテンプレートに結合している。例えば、Ｐ２ ＣＬＩＰＳ（２，６−ビス（ブロモメチル）ピリジン）の０．５ｍＭ溶液を炭酸水素アンモニウム（２０ｍＭ、ｐＨ７．８）／アセトニトリル（１：３（ｖ／ｖ））に溶解する。この溶液を、ペプチドアレイに追加する。ＣＬＩＰＳテンプレートは、ペプチドアレイ（３μｌウェルを有する４５５ウェルプレート）の固相結合ペプチドに存在する２つのシステインの側鎖に結合する。ペプチドアレイは、溶液中で完全に覆われた状態で３０〜６０分間、溶液中で穏やかに振盪される。最後に、ペプチドアレイを過剰のＨ２Ｏで十分に洗浄し、ＰＢＳ（ｐＨ７．２）中１％ＳＤＳ／０．１％ベータメルカプトエタノールを含む破砕緩衝液により７０℃で３０分間超音波処理した後、さらに４５分間Ｈ２Ｏ中で超音波処理する。ペプチドを運ぶＴ３ ＣＬＩＰＳも同様の方法で作成されたが、３つのシステインを有した。
ペプチドの異なるセットは、以下の設計に従って合成された。セット１は、１残基のオフセットを有するヒトＴＩＧＩＴの標的配列に由来する１５アミノ酸の長さを有する一連の直線状ペプチドを含んでいた。セット２はセット１の直線状ペプチドのセットを含んでいるが、１０位及び１１位の残基がＡｌａで置き換えられていた。天然のＡｌａがいずれかの位置で生じるとき、Ｇｌｙで置き換えられた。セット３は、Ｃｙｓ残基を含むセット１の直線状ペプチドのセットを含んでいた。このセットでは、天然のＣｙｓがシスアセトアミドメチル（「Ｃｙｓ−ａｃｍ」）で置き換えられていた。セット４は、１残基のオフセットを有するヒトＴＩＧＩＴの標的配列に由来する１７アミノ酸の長さを有する一連の直線状ペプチドを含んでいた。１位及び１７位には、ｍＰ２ ＣＬＩＰＳを使用してループ模倣物を作成するために使用されるＣｙｓ残基が存在した。天然のＣｙｓは、Ｃｙｓ−ａｃｍで置き換えられていた。セット６は、１残基のオフセットを有するヒトＴＩＧＩＴの標的配列に由来する２２アミノ酸の長さを有する一連の直線状ペプチドを含んでいた。１１位及び１２位の残基は、「ＰＧ」モチーフによって置き換えられ、Ｃｙｓ残基は１位及び２２位に配置されて、ｍＰ２で拘束された模倣物をもたらした。天然のＣｙｓ残基は、Ｃｙｓ−ａｃｍで置き換えられていた。セット７には、２７アミノ酸の長さを有する直線状ペプチドのセットが含まれていた。１〜１１位及び１７〜２７位には、標的配列に由来し、「ＧＧＳＧＧ」リンカーを介して結合された１１−ｍｅｒのペプチド配列が存在した。組み合わせは、ヒトＴＩＧＩＴのジスルフィド架橋に関するＵｎｉＰｒｏｔ情報に基づいてなされた。セット８には、３３アミノ酸の長さを有するコンビナトリアルペプチドのセットが含まれていた。２〜１６位及び１８〜３２位には、ヒトＴＩＧＩＴの標的配列に由来する１５−ｍｅｒのペプチドが存在した。１位、１７位、及び３３位には、Ｔ３ ＣＬＩＰＳを使用して不連続模倣物を作成するために使用されるＣｙｓ残基が存在した。
合成されたペプチドのそれぞれに対する抗体の結合は、ペプスキャンベースのＥＬＩＳＡで試験された。ペプチドアレイを一次抗体溶液とともにインキュベートした（４℃で一晩）。洗浄後、ペプチドアレイをヤギ抗ヒトＨＲＰコンジュゲート（Ｓｏｕｔｈｅｒｎ Ｂｉｏｔｅｃｈ）の１／１０００希釈液とともに２５℃で１時間インキュベートした。洗浄後、ペルオキシダーゼ基質２，２’−アジノ−ジ−３−エチルベンズチアゾリンスルホネート（ＡＢＴＳ）及び２０μｌ／ｍｌの３パーセントＨ２Ｏ２を添加した。１時間後、発色が測定された。発色は、電荷結合素子（ＣＣＤ）−カメラと画像処理システムで定量化された。ＣＣＤカメラから得られる値は、標準的な９６ウェルプレートＥＬＩＳＡリーダーと同様に、０〜３０００ｍＡＵの範囲である。
合成されたペプチドの品質を検証するために、陽性対照ペプチドと陰性対照ペプチドの別個のセットが並行して合成された。これらは市販の抗体３Ｃ９及び５７．９でスクリーニングされた（Ｐｏｓｔｈｕｍｕｓ ｅｔ ａｌ．， Ｊ． Ｖｉｒｏｌ．， １９９０， ６４：３３０４−３３０９）。
クローン１３の場合、高ストリンジェンシー条件下で試験すると、クローン１３は不連続エピトープ模倣物に弱く結合した。抗体は、中程度のストリンジェンシー条件下でも試験され、抗体の検出可能な結合が観察された。最高のシグナル強度は、コアストレッチ６８ＩＣＮＡＤＬＧＷＨＩＳＰＳＦＫ８２（配列番号２５８）、４２ＩＬＱＣＨＬＳＳＴＴＡＱＶ５４（配列番号２５９）、１０８ＣＩＹＨＴＹＰＤＧＴＹＴＧＲＩ１２２（配列番号２６０）を含む不連続エピトープ模倣物で記録された。追加の、より弱い結合は、ペプチドストレッチ８０ＳＦＫＤＲＶＡＰＧＰＧ９０（配列番号２６１）を含むペプチドで観察された。直線的で単純な立体構造エピトープ模倣物に対する抗体の結合は概して低く、モチーフ６８ＩＣＮＡＤＬＧＷＨＩＳＰＳＦＫ８２（配列番号２５８）、１０８ＣＩＹＨＴＹＰＤＧＴＹＴＧＲＩ１２２（配列番号２６０）、及び８０ＳＦＫＤＲＶＡＰＧＰＧ９０（配列番号２６１）でのみ観察された。
クローン２５の場合、高ストリンジェンシー条件下で試験すると、クローン２５は全てのセット由来のペプチドに検出可能に結合した。最も強い結合は、不連続エピトープ模倣物で観察された。ストレッチ６８ＩＣＮＡＤＬＧＷＨＩＳＰＳＦＫ８２（配列番号２５８）内の残基を含むペプチドに対する結合もまた他のセットで観察されたが、ペプチドストレッチ５０ＴＴＡＱＶＴＱ５６（配列番号２６２）に対する結合は、６８ＩＣＮＡＤＬＧＷＨＩＳＰＳＦＫ８２（配列番号２５８）との組み合わせにおいてのみ観察された。追加の、より弱い結合はまた、ペプチドストレッチ８０ＳＦＫＤＲＶＡＰＧＰＧＬＧＬ９３（配列番号２６３）を含むペプチドで観察された。
クローン１３及びクローン２５のこれらのエピトープマッピング結果に基づいて、クローン１３及びクローン２５のエピトープの詳細なマッピングは、以下のペプチドセットを使用して上述の方法を使用して実施された。セット１は、配列ＣＩＬＱ２ＨＬＳＳＴＴＡＱＶＴＱＣＩ２ＮＡＤＬＧＷＨＩＳＰＳＦＫＣ（配列番号２６４）に基づく単一残基のエピトープ変異のライブラリーを含んでいた。残基ＡＤＨＩＱＲＹ（配列番号２６５）を置換に供した。１位、１７位、１９位、３０位、及び３３位は置き換えられなかった。天然のＣｙｓ残基は、Ｃｙｓ−ａｃｍで置き換えられていた（全体を通して「２」と表記）。セット２は、配列ＣＩＬＱ２ＨＬＳＳＴＴＡＱＶＴＱＣＩ２ＮＡＤＬＧＷＨＩＳＰＳＦＫＣ（配列番号２６４）に由来する歩行する二重Ａｌａ変異のライブラリーを含んでいた。１位、１７位、及び３３位は置き換えられなかった。天然のＣｙｓ残基は、Ｃｙｓ−ａｃｍで置き換えられていた。セット３は、配列ＣＫＤＲＶＡＰＧＰＧＬＧＬＴＬＱＣＩ２ＮＡＤＬＧＷＨＩＳＰＳＦＫＣ（配列番号２６６）に基づく単一残基のエピトープ変異のライブラリーを含んでいた。残基ＡＤＨＩＱＲＹ（配列番号２６５）を置換に使用した。１位、２位、１７位、１９位、３０位、及び３３位は置き換えられなかった。セット４は、配列ＣＫＤＲＶＡＰＧＰＧＬＧＬＴＬＱＣＩ２ＮＡＤＬＧＷＨＩＳＰＳＦＫＣ（配列番号２６６）に由来する歩行する二重Ａｌａ変異のライブラリーを含んでいた。１位、１７位、及び３３位は置き換えられなかった。
クローン１３は、高及び中程度のストリンジェンシー条件下で、ペプチドＣＩＬＱ２ＨＬＳＳＴＴＡＱＶＴＱＣＩ２ＮＡＤＬＧＷＨＩＳＰＳＦＫＣ（配列番号２６４）及びＣＫＤＲＶＡＰＧＰＧＬＧＬＴＬＱＣＩ２ＮＡＤＬＧＷＨＩＳＰＳＦＫＣ（配列番号２６６）に由来する４つのシリーズの不連続エピトープ変異で試験された。データ分析は、全ての場合において、残基８１ＦＫ８２の単一残基または二重Ａｌａのいずれかとの置換がクローン１３の結合を損なうことを示した。不連続エピトープ模倣物内の他の残基の単一変異は、結合に劇的な影響を与えなかった。その逆に、対応する不連続模倣物の単一残基変異のシリーズと比較したとき、二重Ａｌａエピトープ変異は結合に対してより顕著な効果を示した。ＣＩＬＱ２ＨＬＳＳＴＴＡＱＶＴＱＣＩ２ＮＡＤＬＧＷＨＩＳＰＳＦＫＣ（配列番号２６４）内の残基５１ＴＡＱＶＴ５５（配列番号２６７）の二重Ａｌａ置換がクローン１３の結合に著しく影響を及ぼしたこともまた判明した。配列ＣＫＤＲＶＡＰＧＰＧＬＧＬＴＬＱＣＩ２ＮＡＤＬＧＷＨＩＳＰＳＦＫＣ（配列番号２６６）に由来したエピトープ模倣物で記録されたクローン１３のシグナル強度は、ＣＩＬＱ２ＨＬＳＳＴＴＡＱＶＴＱＣＩ２ＮＡＤＬＧＷＨＩＳＰＳＦＫＣ（配列番号２６４）で記録されたものよりも低かった。８１ＦＫ８２に加えて、７４ＧＷＨＩ７７（配列番号２６８）の二重Ａｌａ置換は、クローン１３の結合を顕著に低減したこともさらに判明した。さらに、ストレッチ８７ＰＧＰＧＬＧＬ９３（配列番号２６９）中の二重のＡｌａ変異は、結合を幾分か弱めた。
クローン２５は、高及び中程度のストリンジェンシー条件下で、ペプチドＣＩＬＱ２ＨＬＳＳＴＴＡＱＶＴＱＣＩ２ＮＡＤＬＧＷＨＩＳＰＳＦＫＣ（配列番号２６４）及びＣＫＤＲＶＡＰＧＰＧＬＧＬＴＬＱＣＩ２ＮＡＤＬＧＷＨＩＳＰＳＦＫＣ（配列番号２６６）に由来する４つのシリーズの不連続エピトープ変異で試験された。エピトープ変異の個々のセットから収集されたデータの分析は、残基８１ＦＫ８２の単一または二重置換が結合に劇的に影響することを示した。ＣＩＬＱ２ＨＬＳＳＴＴＡＱＶＴＱＣＩ２ＮＡＤＬＧＷＨＩＳＰＳＦＫＣ（配列番号２６４）及びＣＫＤＲＶＡＰＧＰＧＬＧＬＴＬＱＣＩ２ＮＡＤＬＧＷＨＩＳＰＳＦＫＣ（配列番号２６６）内の他の残基の単一残基置換は、シグナル強度の顕著な低下を生じなかった。二重歩行Ａｌａ変異のシリーズは、模倣物に対するクローン２５の結合に対してより顕著な効果を示した。８１ＦＫ８２に加えて、残基５２ＡＱ５３及びＰ７９の二重Ａｌａ置換はまた、エピトープ模倣物ＣＩＬＱ２ＨＬＳＳＴＴＡＱＶＴＱＣＩ２ＮＡＤＬＧＷＨＩＳＰＳＦＫＣ（配列番号２６４）に対する抗体の結合に軽度の影響を及ぼした。ＣＫＤＲＶＡＰＧＰＧＬＧＬＴＬＱＣＩ２ＮＡＤＬＧＷＨＩＳＰＳＦＫＣ（配列番号２６６）に由来する二重Ａｌａ変異シリーズに対するクローン２５の結合の分析は、８１ＦＫ８２の重要性を同様に確認したが、残基７３ＬＧＷ７５及び８２ＫＤＲＶＡ８６（配列番号２７０）の二重Ａｌａ置換が、結合に軽度に影響を及ぼしたこともまた示した。
要約すると、モノクローナル抗体クローン１３及びクローン２５の場合、残基８１ＦＫ８２が、両方の抗体のＴＩＧＩＴエピトープ模倣物に対する結合に重要であることが判明した。クローン１３の場合、残基５１ＴＡＱＶＴ５５（配列番号２６７）、７４ＧＷＨＩ７７（配列番号２６８）、及び８７ＰＧＰＧＬＧＬ９３（配列番号２６９）もまた、結合に寄与することが判明した。クローン２５の場合、残基５２ＡＱ５３、７３ＬＧＷ７５、Ｐ７９、及び８２ＫＤＲＶＡ８６（配列番号２７０）もまた、結合に寄与することが判明した。
上述の発明は、理解を明確にするために、例示及び実施例によってある程度詳細に説明されたが、当業者は、本発明の趣旨及び範囲から逸脱することなく、本発明の多くの修正及び変更をなし得ること理解するであろう。本明細書で説明される特定の実施形態は、例としてのみ提供され、決して限定することを意味するものではない。本明細書及び実施例は例示としてのみ考えられ、本発明の真の範囲及び趣旨が以下の特許請求の範囲によって示されることが意図されている。
本明細書で引用されているすべての出版物、特許、特許出願、またはその他の文書は、個々の出版物、特許、特許出願、またはその他の文書がすべての目的のために個々に参照により組み込まれていると示されているのと同程度に、すべての目的のためにその全体が参照により組み込まれている。
いくつかの実施形態では、方法は、治療量の腫瘍免疫療法薬を対象に投与することをさらに含む。いくつかの実施形態では、腫瘍免疫療法薬は、ＰＤ−１経路阻害剤である。いくつかの実施形態では、ＰＤ−１経路阻害剤は、抗ＰＤ１抗体または抗ＰＤ−Ｌ１抗体である。いくつかの実施形態では、ＰＤ−１経路阻害剤は、Ｔ細胞共阻害剤のアンタゴニストまたは阻害剤である。いくつかの実施形態では、腫瘍免疫療法薬は、Ｔ細胞コアクチベーターのアゴニストである。いくつかの実施形態では、腫瘍免疫療法薬は、免疫刺激性サイトカインである。いくつかの実施形態では、単離された抗体、医薬組成物、二重特異性抗体、または抗体−薬物コンジュゲートは、腫瘍免疫療法薬と同時に投与される。いくつかの実施形態では、単離された抗体、医薬組成物、二重特異性抗体、または抗体−薬物コンジュゲートは、腫瘍免疫療法薬と逐次的に投与される。
特定の実施形態では、例えば以下の項目が提供される。
（項目１）
ヒトＴＩＧＩＴ（ＩｇとＩＴＩＭドメインをもつＴ細胞免疫受容体）に結合する単離された抗体またはその抗原結合部分であって、５ｎＭ未満のヒトＴＩＧＩＴに対する結合親和性（Ｋ Ｄ ）を有する、前記単離された抗体またはその抗原結合部分。
（項目２）
前記抗体またはその抗原結合部分が、１ｎＭ未満のヒトＴＩＧＩＴに対するＫ Ｄ を有する、項目１に記載の単離された抗体。
（項目３）
前記抗体またはその抗原結合部分が、１００ｐＭ未満のヒトＴＩＧＩＴに対するＫ Ｄ を有する、項目１に記載の単離された抗体。
（項目４）
前記抗体またはその抗原結合部分が、カニクイザルＴＩＧＩＴ及び／またはマウスＴＩＧＩＴと交差反応性を示す、項目１〜３のいずれか１項に記載の単離された抗体。
（項目５）
前記抗体またはその抗原結合部分が、カニクイザルＴＩＧＩＴとマウスＴＩＧＩＴの両方と交差反応性を示す、項目４に記載の単離された抗体。
（項目６）
前記抗体またはその抗原結合部分が、ＣＤ１５５のＴＩＧＩＴに対する結合を遮断する、項目１〜５のいずれか１項に記載の単離された抗体。
（項目７）
前記抗体またはその抗原結合部分が、ＣＤ１１２のＴＩＧＩＴに対する結合を遮断する、項目１〜５のいずれか１項に記載の単離された抗体。
（項目８）
前記抗体またはその抗原結合部分が、ＣＤ１５５とＣＤ１１２の両方のＴＩＧＩＴに対する結合を遮断する、項目１〜５のいずれか１項に記載の単離された抗体。
（項目９）
前記抗体またはその抗原結合部分が、アミノ酸８１位と８２位の１つまたは両方を含むヒトＴＩＧＩＴ上のエピトープに結合する、項目１〜８のいずれか１項に記載の単離された抗体。
（項目１０）
前記エピトープが８１位にＰｈｅを含む、項目９に記載の単離された抗体。
（項目１１）
前記エピトープが８２位にＬｙｓまたはＳｅｒを含む、項目８に記載の単離された抗体。
（項目１２）
前記エピトープが８１位にＰｈｅ、及び８２位にＬｙｓまたはＳｅｒを含む、項目９〜１１のいずれか１項に記載の単離された抗体。
（項目１３）
前記エピトープがＰｈｅ８１及びＬｙｓ８２を含む、項目１２に記載の単離された抗体。
（項目１４）
前記エピトープが不連続エピトープである、項目９〜１３のいずれか１項に記載の単離された抗体。
（項目１５）
前記抗体またはその抗原結合部分が、アミノ酸５１位、５２位、５３位、５４位、５５位、７３位、７４位、７５位、７６位、７７位、７９位、８３位、８４位、８５位、８６位、８７位、８８位、８９位、９０位、９１位、９２位、または９３位のうちの１つ以上をさらに含む、ヒトＴＩＧＩＴ上のエピトープに結合する、項目９〜１４のいずれか１項に記載の単離された抗体。
（項目１６）
前記エピトープが、Ｔｈｒ５１、Ａｌａ５２、Ｇｌｎ５３、Ｖａｌ５４、Ｔｈｒ５５、Ｌｅｕ７３、Ｇｌｙ７４、Ｔｒｐ７５、Ｈｉｓ７６、Ｉｌｅ７７、Ｐｒｏ７９、Ａｓｐ８３、Ａｒｇ８４、Ｖａｌ８５、Ａｌａ８６、Ｐｒｏ８７、Ｇｌｙ８８、Ｐｒｏ８９、Ｇｌｙ９０、Ｌｅｕ９１、Ｇｌｙ９２、及びＬｅｕ９３からなる群から選択される１つ以上のアミノ酸残基をさらに含む、項目１５に記載の単離された抗体。
（項目１７）
前記エピトープが、アミノ酸残基Ｔｈｒ５１、Ａｌａ５２、Ｇｌｎ５３、Ｖａｌ５４、Ｔｈｒ５５、Ｇｌｙ７４、Ｔｒｐ７５、Ｈｉｓ７６、Ｉｌｅ７７、Ｐｈｅ８１、Ｌｙｓ８２、Ｐｒｏ８７、Ｇｌｙ８８、Ｐｒｏ８９、Ｇｌｙ９０、Ｌｅｕ９１、Ｇｌｙ９２、及びＬｅｕ９３を含む、項目１６に記載の単離された抗体。
（項目１８）
前記エピトープが、アミノ酸残基Ａｌａ５２、Ｇｌｎ５３、Ｌｅｕ７３、Ｇｌｙ７４、Ｔｒｐ７５、Ｐｒｏ７９、Ｐｈｅ８１、Ｌｙｓ８２、Ａｓｐ８３、Ａｒｇ８４、Ｖａｌ８５、及びＡｌａ８６を含む、項目１６に記載の単離された抗体。
（項目１９）
前記エピトープが、配列ＩＣＮＡＤＬＧＷＨＩＳＰＳＦＫを含む、項目９〜１８のいずれか１項に記載の単離された抗体。
（項目２０）
前記抗体またはその抗原結合部分が、
（ａ）配列番号４、配列番号２２、配列番号４０、配列番号５８、配列番号７６、配列番号９４、配列番号１１２、配列番号１３０、配列番号１４８、配列番号１６６、配列番号１８４、配列番号２０２、配列番号２２１、配列番号２２４、配列番号２２６、配列番号２３１、配列番号２３３、配列番号２３９、もしくは配列番号２４３のいずれかの配列を含む重鎖ＣＤＲ１；
（ｂ）配列番号６、配列番号２４、配列番号４２、配列番号６０、配列番号７８、配列番号９６、配列番号１１４、配列番号１３２、配列番号１５０、配列番号１６８、配列番号１８６、配列番号２０４、配列番号２２２、配列番号２２５、配列番号２２７、配列番号２２９、配列番号２３２、配列番号２３４、配列番号２３８、もしくは配列番号２４０のいずれかの配列を含む重鎖ＣＤＲ２；
（ｃ）配列番号８、配列番号２６、配列番号４４、配列番号６２、配列番号８０、配列番号９８、配列番号１１６、配列番号１３４、配列番号１５２、配列番号１７０、配列番号１８８、配列番号２０６、配列番号２２３、配列番号２２８、配列番号２３０、配列番号２３５、配列番号２３６、配列番号２３７、配列番号２４１、配列番号２４２、もしくは配列番号２４４のいずれかの配列を含む重鎖ＣＤＲ３；
（ｄ）配列番号１３、配列番号３１、配列番号４９、配列番号６７、配列番号８５、配列番号１０３、配列番号１２１、配列番号１３９、配列番号１５７、配列番号１７５、配列番号１９３、もしくは配列番号２１１のいずれかの配列を含む軽鎖ＣＤＲ１；
（ｅ）配列番号１５、配列番号３３、配列番号５１、配列番号６９、配列番号８７、配列番号１０５、配列番号１２３、配列番号１４１、配列番号１５９、配列番号１７７、配列番号１９５、もしくは配列番号２１３のいずれかの配列を含む軽鎖ＣＤＲ２；または
（ｆ）配列番号１７、配列番号３５、配列番号５３、配列番号７１、配列番号８９、配列番号１０７、配列番号１２５、配列番号１４３、配列番号１６１、配列番号１７９、配列番号１９７、もしくは配列番号２１５のいずれかの配列を含む軽鎖ＣＤＲ３
のうちの１つ以上を含む、項目１〜１９のいずれか１項に記載の単離された抗体。
（項目２１）
前記抗体またはその抗原結合部分が、
（ａ）それぞれ、配列番号４、６、８、１３、１５、及び１７；または
（ｂ）それぞれ、配列番号２２、２４、２６、３１、３３、及び３５；または
（ｃ）それぞれ、配列番号４０、４２、４４、４９、５１、及び５３；または
（ｄ）それぞれ、配列番号５８、６０、６２、６７、６９、及び７１；または
（ｅ）それぞれ、配列番号７６、７８、８０、８５、８７、及び８９；または
（ｆ）それぞれ、配列番号９４、９６、９８、１０３、１０５、及び１０７；または
（ｇ）それぞれ、配列番号１１２、１１４、１１６、１２１、１２３、及び１２５；または
（ｈ）それぞれ、配列番号１３０、１３２、１３４、１３９、１４１、及び１４３；または
（ｉ）それぞれ、配列番号１４８、１５０、１５２、１５７、１５９、及び１６１；または
（ｊ）それぞれ、配列番号１６６、１６８、１７０、１７５、１７７、及び１７９；または
（ｋ）それぞれ、配列番号１８４、１８６、１８８、１９３、１９５、及び１９７；または
（ｌ）それぞれ、配列番号２０２、２０４、２０６、２１１、２１３、及び２１５；または
（ｍ）それぞれ、配列番号２２１、２２２、２２３、１３、１５、及び１７；または
（ｎ）それぞれ、配列番号２２４、２２５、６２、６７、６９、及び７１；または
（ｏ）それぞれ、配列番号２２６、２２７、２２８、６７、６９、及び７１；または
（ｐ）それぞれ、配列番号２２４、２２９、２３０、６７、６９、及び７１；または
（ｑ）それぞれ、配列番号２２４、２２７、２３０、６７、６９、及び７１；または
（ｒ）それぞれ、配列番号２３１、２３２、２３５、１０３、１０５、及び１０７；または
（ｓ）それぞれ、配列番号２３３、２３４、２３６、１０３、１０５、及び１０７；または
（ｔ）それぞれ、配列番号２３３、２３４、２３７、１０３、１０５、及び１０７；または
（ｕ）それぞれ、配列番号１６６、２３８、１７０、１７５、１７７、及び１７９；または
（ｖ）それぞれ、配列番号２３９、２４０、１７０、１７５、１７７、及び１７９；または
（ｗ）それぞれ、配列番号２３９、２４０、２４１、１７５、１７７、及び１７９；または
（ｘ）それぞれ、配列番号２３９、２４０、２４２、１７５、１７７、及び１７９；または
（ｙ）それぞれ、配列番号２４３、１６８、２４４、１７５、１７７、及び１７９
の配列を含む、重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３、ならびに軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ、及びＣＤＲ３を含む、項目２０に記載の単離された抗体。
（項目２２）
前記抗体またはその抗原結合部分が、
（ａ）配列番号１、配列番号１９、配列番号３７、配列番号５５、配列番号７３、配列番号９１、配列番号１０９、配列番号１２７、配列番号１４５、配列番号１６３、配列番号１８１、配列番号１９９、配列番号２４５、配列番号２４６、配列番号２４７、配列番号２４８、配列番号２４９、配列番号２５０、配列番号２５１、配列番号２５２、配列番号２５３、配列番号２５４、配列番号２５５、配列番号２５６、もしくは配列番号２５７に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；及び／または
（ｂ）配列番号１０、配列番号２８、配列番号４６、配列番号６４、配列番号８２、配列番号１００、配列番号１１８、配列番号１３６、配列番号１５４、配列番号１７２、配列番号１９０、もしくは配列番号２０８に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む、項目１〜２１のいずれか１項に記載の単離された抗体。
（項目２３）
前記抗体またはその抗原結合部分が、
（ａ）配列番号１もしくは配列番号２４５に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、及び配列番号１０に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；または
（ｂ）配列番号１９に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、及び配列番号２８に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；または
（ｃ）配列番号３７に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、及び配列番号４６に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；または
（ｄ）配列番号５５、配列番号２４６、配列番号２４７、配列番号２４８、もしくは配列番号２４９のうちのいずれか１つに対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、及び配列番号６４に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；または
（ｅ）配列番号７３に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、及び配列番号８２に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；または
（ｆ）配列番号９１、配列番号２５０、配列番号２５１、もしくは配列番号２５２に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、及び配列番号１００に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；または
（ｇ）配列番号１０９に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、及び配列番号１１８に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；または
（ｈ）配列番号１２７に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、及び配列番号１３６に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；または
（ｉ）配列番号１４５に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、及び配列番号１５４に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；または
（ｊ）配列番号１６３、配列番号２５３、配列番号２５４、配列番号２５５、配列番号２５６、もしくは配列番号２５７のうちのいずれか１つに対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、及び配列番号１７２に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；または
（ｋ）配列番号１８１に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、及び配列番号１９０に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；または
（ｌ）配列番号１９９に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、及び配列番号２０８に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域
を含む、項目２２に記載の単離された抗体。
（項目２４）
前記抗体またはその抗原結合部分が、抗ＰＤ１抗体または抗ＰＤ−Ｌ１抗体と相乗効果を示す、項目１〜２３のいずれか１項に記載の単離された抗体。
（項目２５）
ヒトＴＩＧＩＴに結合する抗体またはその抗原結合部分であって、アミノ酸８１位及び８２位を含むヒトＴＩＧＩＴ上のエピトープに結合する、前記単離された抗体またはその抗原結合部分。
（項目２６）
前記エピトープが８１位にＰｈｅ、及び／または８２位にＬｙｓもしくはＳｅｒを含む、項目２５に記載の単離された抗体。
（項目２７）
前記エピトープがＰｈｅ８１及びＬｙｓ８２を含む、項目２６に記載の単離された抗体。
（項目２８）
前記エピトープが不連続エピトープである、項目２５〜２７のいずれか１項に記載の単離された抗体。
（項目２９）
前記抗体またはその抗原結合部分が、アミノ酸５１位、５２位、５３位、５４位、５５位、７３位、７４位、７５位、７６位、７７位、７９位、８３位、８４位、８５位、８６位、８７位、８８位、８９位、９０位、９１位、９２位、または９３位のうちの１つ以上をさらに含む、ヒトＴＩＧＩＴ上のエピトープに結合する、項目２５〜２８のいずれか１項に記載の単離された抗体。
（項目３０）
前記エピトープが、Ｔｈｒ５１、Ａｌａ５２、Ｇｌｎ５３、Ｖａｌ５４、Ｔｈｒ５５、Ｌｅｕ７３、Ｇｌｙ７４、Ｔｒｐ７５、Ｈｉｓ７６、Ｉｌｅ７７、Ｐｒｏ７９、Ａｓｐ８３、Ａｒｇ８４、Ｖａｌ８５、Ａｌａ８６、Ｐｒｏ８７、Ｇｌｙ８８、Ｐｒｏ８９、Ｇｌｙ９０、Ｌｅｕ９１、Ｇｌｙ９２、及びＬｅｕ９３からなる群から選択される１つ以上のアミノ酸残基をさらに含む、項目２９に記載の単離された抗体。
（項目３１）
前記エピトープが、アミノ酸残基Ｔｈｒ５１、Ａｌａ５２、Ｇｌｎ５３、Ｖａｌ５４、Ｔｈｒ５５、Ｇｌｙ７４、Ｔｒｐ７５、Ｈｉｓ７６、Ｉｌｅ７７、Ｐｈｅ８１、Ｌｙｓ８２、Ｐｒｏ８７、Ｇｌｙ８８、Ｐｒｏ８９、Ｇｌｙ９０、Ｌｅｕ９１、Ｇｌｙ９２、及びＬｅｕ９３を含む、項目３０に記載の単離された抗体。
（項目３２）
前記エピトープが、アミノ酸残基Ａｌａ５２、Ｇｌｎ５３、Ｌｅｕ７３、Ｇｌｙ７４、Ｔｒｐ７５、Ｐｒｏ７９、Ｐｈｅ８１、Ｌｙｓ８２、Ａｓｐ８３、Ａｒｇ８４、Ｖａｌ８５、及びＡｌａ８６を含む、項目３０に記載の単離された抗体。
（項目３３）
前記エピトープが、配列ＩＣＮＡＤＬＧＷＨＩＳＰＳＦＫを含む、項目２５〜３２のいずれか１項に記載の単離された抗体。
（項目３４）
前記抗体またはその抗原結合部分が、
（ａ）配列番号４、配列番号２２、配列番号４０、配列番号５８、配列番号７６、配列番号９４、配列番号１１２、配列番号１３０、配列番号１４８、配列番号１６６、配列番号１８４、配列番号２０２、配列番号２２１、配列番号２２４、配列番号２２６、配列番号２３１、配列番号２３３、配列番号２３９、もしくは配列番号２４３のいずれかの配列を含む重鎖ＣＤＲ１；
（ｂ）配列番号６、配列番号２４、配列番号４２、配列番号６０、配列番号７８、配列番号９６、配列番号１１４、配列番号１３２、配列番号１５０、配列番号１６８、配列番号１８６、配列番号２０４、配列番号２２２、配列番号２２５、配列番号２２７、配列番号２２９、配列番号２３２、配列番号２３４、配列番号２３８、もしくは配列番号２４０のいずれかの配列を含む重鎖ＣＤＲ２；
（ｃ）配列番号８、配列番号２６、配列番号４４、配列番号６２、配列番号８０、配列番号９８、配列番号１１６、配列番号１３４、配列番号１５２、配列番号１７０、配列番号１８８、配列番号２０６、配列番号２２３、配列番号２２８、配列番号２３０、配列番号２３５、配列番号２３６、配列番号２３７、配列番号２４１、配列番号２４２、もしくは配列番号２４４のいずれかの配列を含む重鎖ＣＤＲ３；
（ｄ）配列番号１３、配列番号３１、配列番号４９、配列番号６７、配列番号８５、配列番号１０３、配列番号１２１、配列番号１３９、配列番号１５７、配列番号１７５、配列番号１９３、もしくは配列番号２１１のいずれかの配列を含む軽鎖ＣＤＲ１；
（ｅ）配列番号１５、配列番号３３、配列番号５１、配列番号６９、配列番号８７、配列番号１０５、配列番号１２３、配列番号１４１、配列番号１５９、配列番号１７７、配列番号１９５、もしくは配列番号２１３のいずれかの配列を含む軽鎖ＣＤＲ２；または
（ｆ）配列番号１７、配列番号３５、配列番号５３、配列番号７１、配列番号８９、配列番号１０７、配列番号１２５、配列番号１４３、配列番号１６１、配列番号１７９、配列番号１９７、もしくは配列番号２１５のいずれかの配列を含む軽鎖ＣＤＲ３
のうちの１つ以上を含む、項目２５〜３２のいずれか１項に記載の単離された抗体。
（項目３５）
前記抗体またはその抗原結合部分が、
（ａ）それぞれ、配列番号４、６、８、１３、１５、及び１７；または
（ｂ）それぞれ、配列番号２２、２４、２６、３１、３３、及び３５；または
（ｃ）それぞれ、配列番号４０、４２、４４、４９、５１、及び５３；または
（ｄ）それぞれ、配列番号５８、６０、６２、６７、６９、及び７１；または
（ｅ）それぞれ、配列番号７６、７８、８０、８５、８７、及び８９；または
（ｆ）それぞれ、配列番号９４、９６、９８、１０３、１０５、及び１０７；または
（ｇ）それぞれ、配列番号１１２、１１４、１１６、１２１、１２３、及び１２５；または
（ｈ）それぞれ、配列番号１３０、１３２、１３４、１３９、１４１、及び１４３；または
（ｉ）それぞれ、配列番号１４８、１５０、１５２、１５７、１５９、及び１６１；または
（ｊ）それぞれ、配列番号１６６、１６８、１７０、１７５、１７７、及び１７９；または
（ｋ）それぞれ、配列番号１８４、１８６、１８８、１９３、１９５、及び１９７；または
（ｌ）それぞれ、配列番号２０２、２０４、２０６、２１１、２１３、及び２１５；または
（ｍ）それぞれ、配列番号２２１、２２２、２２３、１３、１５、及び１７；または
（ｎ）それぞれ、配列番号２２４、２２５、６２、６７、６９、及び７１；または
（ｏ）それぞれ、配列番号２２６、２２７、２２８、６７、６９、及び７１；または
（ｐ）それぞれ、配列番号２２４、２２９、２３０、６７、６９、及び７１；または
（ｑ）それぞれ、配列番号２２４、２２７、２３０、６７、６９、及び７１；または
（ｒ）それぞれ、配列番号２３１、２３２、２３５、１０３、１０５、及び１０７；または
（ｓ）それぞれ、配列番号２３３、２３４、２３６、１０３、１０５、及び１０７；または
（ｔ）それぞれ、配列番号２３３、２３４、２３７、１０３、１０５、及び１０７；または
（ｕ）それぞれ、配列番号１６６、２３８、１７０、１７５、１７７、及び１７９；または
（ｖ）それぞれ、配列番号２３９、２４０、１７０、１７５、１７７、及び１７９；または
（ｗ）それぞれ、配列番号２３９、２４０、２４１、１７５、１７７、及び１７９；または
（ｘ）それぞれ、配列番号２３９、２４０、２４２、１７５、１７７、及び１７９；または
（ｙ）それぞれ、配列番号２４３、１６８、２４４、１７５、１７７、及び１７９
の配列を含む、重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３、ならびに軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ、及びＣＤＲ３を含む、項目３４に記載の単離された抗体。
（項目３６）
前記抗体またはその抗原結合部分が、
（ａ）配列番号１、配列番号１９、配列番号３７、配列番号５５、配列番号７３、配列番号９１、配列番号１０９、配列番号１２７、配列番号１４５、配列番号１６３、配列番号１８１、配列番号１９９、配列番号２４５、配列番号２４６、配列番号２４７、配列番号２４８、配列番号２４９、配列番号２５０、配列番号２５１、配列番号２５２、配列番号２５３、配列番号２５４、配列番号２５５、配列番号２５６、もしくは配列番号２５７に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；及び／または
（ｂ）配列番号１０、配列番号２８、配列番号４６、配列番号６４、配列番号８２、配列番号１００、配列番号１１８、配列番号１３６、配列番号１５４、配列番号１７２、配列番号１９０、もしくは配列番号２０８に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域
を含む、項目３４に記載の単離された抗体。
（項目３７）
前記抗体またはその抗原結合部分が、
（ａ）配列番号１もしくは配列番号２４５に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、及び配列番号１０に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；または
（ｂ）配列番号１９に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、及び配列番号２８に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；または
（ｃ）配列番号３７に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、及び配列番号４６に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；または
（ｄ）配列番号５５、配列番号２４６、配列番号２４７、配列番号２４８、もしくは配列番号２４９のうちのいずれか１つに対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、及び配列番号６４に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；または
（ｅ）配列番号７３に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、及び配列番号８２に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；または
（ｆ）配列番号９１、配列番号２５０、配列番号２５１、もしくは配列番号２５２に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、及び配列番号１００に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；または
（ｇ）配列番号１０９に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、及び配列番号１１８に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；または
（ｈ）配列番号１２７に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、及び配列番号１３６に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；または
（ｉ）配列番号１４５に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、及び配列番号１５４に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；または
（ｊ）配列番号１６３、配列番号２５３、配列番号２５４、配列番号２５５、配列番号２５６、もしくは配列番号２５７のうちのいずれか１つに対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、及び配列番号１７２に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；または
（ｋ）配列番号１８１に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、及び配列番号１９０に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；または
（ｌ）配列番号１９９に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、及び配列番号２０８に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域
を含む、項目３６に記載の単離された抗体。
（項目３８）
前記抗体がモノクローナル抗体である、項目１〜３７のいずれか１項に記載の単離された抗体。
（項目３９）
前記抗体がヒト化抗体である、項目１〜３８のいずれか１項に記載の単離された抗体。
（項目４０）
前記抗体が完全ヒト抗体である、項目１〜３８のいずれか１項に記載の単離された抗体。
（項目４１）
前記抗体がキメラ抗体である、項目１〜３８のいずれか１項に記載の単離された抗体。
（項目４２）
前記抗原結合断片が、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’） ２ 、ｓｃＦｖ、または二価ｓｃＦｖである、項目１〜３８のいずれか１項に記載の単離された抗体。
（項目４３）
項目１〜４２のいずれか１項に記載の単離された抗体と、薬学的に許容される担体と、を含む、医薬組成物。
（項目４４）
項目１〜４２のいずれか１項に記載の抗体を含む二重特異性抗体。
（項目４５）
項目１〜４２のいずれか１項に記載の抗体を含む抗体−薬物コンジュゲート。
（項目４６）
項目１〜４２のいずれか１項に記載の抗体をコードするヌクレオチド配列を含む単離されたポリヌクレオチド。
（項目４７）
ヒトＴＩＧＩＴに結合する抗体またはその抗原結合部分をコードする１つ以上のヌクレオチド配列を含む単離されたポリヌクレオチドであって、
（ａ）配列番号２、配列番号２０、配列番号３８、配列番号５６、配列番号７４、配列番号９２、配列番号１１０、配列番号１２８、配列番号１４６、配列番号１６４、配列番号１８２、もしくは配列番号２００のヌクレオチド配列；及び／または
（ｂ）配列番号１１、配列番号２９、配列番号４７、配列番号６５、配列番号８３、配列番号１０１、配列番号１１９、配列番号１３７、配列番号１５５、配列番号１７３、配列番号１９１、もしくは配列番号２０９のヌクレオチド配列
を含む前記単離されたポリヌクレオチド。
（項目４８）
項目４６または項目４７に記載のポリヌクレオチドを含むベクター。
（項目４９）
項目４６もしくは項目４７に記載のポリヌクレオチドまたは項目４８に記載のベクターを含む宿主細胞。
（項目５０）
抗体を産生するのに適した条件下で項目４９に記載の宿主細胞を培養することを含む、前記抗体を産生する方法。
（項目５１）
項目１〜４２のいずれか１項に記載の単離された抗体、項目４３に記載の医薬組成物と、
腫瘍免疫療法薬と、
を含む、キット。
（項目５２）
前記腫瘍免疫療法薬が、ＰＤ−１経路阻害剤である、項目５１に記載のキット。
（項目５３）
前記ＰＤ−１経路阻害剤が、抗ＰＤ１抗体または抗ＰＤ−Ｌ１抗体である、項目５２に記載のキット。
（項目５４）
前記腫瘍免疫療法薬が、Ｔ細胞共阻害剤のアンタゴニストまたは阻害剤である、項目５１に記載のキット。
（項目５５）
前記腫瘍免疫療法薬が、Ｔ細胞コアクチベーターのアゴニストである、項目５１に記載のキット。
（項目５６）
前記腫瘍免疫療法薬が、免疫刺激性サイトカインである、項目５１に記載のキット。
（項目５７）
対象においてがんを治療する方法であって、治療量の項目１〜４２のいずれか１項に記載の単離された抗体、項目４３に記載の医薬組成物、項目４４に記載の二重特異性抗体、または項目４５に記載の抗体−薬物コンジュゲートを前記対象に投与することを含む、前記方法。
（項目５８）
前記がんが、ＣＤ１１２またはＣＤ１５５の発現が豊富ながんである、項目５７に記載の方法。
（項目５９）
前記がんが、ＴＩＧＩＴを発現するＴ細胞またはナチュラルキラー（ＮＫ）細胞が豊富ながんである、項目５７に記載の方法。
（項目６０）
前記がんが、膀胱癌、乳癌、子宮癌、子宮頸癌、卵巣癌、前立腺癌、精巣癌、食道癌、胃腸癌、膵臓癌、大腸癌、結腸癌、腎臓癌、頭頸部癌、肺癌、胃癌、胚細胞癌、骨癌、肝臓癌、甲状腺癌、皮膚癌、中枢神経系腫瘍、リンパ腫、白血病、骨髄腫、または肉腫である、項目５７〜５９のいずれか１項に記載の方法。
（項目６１）
前記がんがリンパ腫または白血病である、項目６０に記載の方法。
（項目６２）
治療量の腫瘍免疫療法薬を前記対象に投与することをさらに含む、項目５７〜６１のいずれか１項に記載の方法。
（項目６３）
前記腫瘍免疫療法薬が、ＰＤ−１経路阻害剤である、項目６２に記載の方法。
（項目６４）
前記ＰＤ−１経路阻害剤が、抗ＰＤ１抗体または抗ＰＤ−Ｌ１抗体である、項目６３に記載の方法。
（項目６５）
前記腫瘍免疫療法薬が、Ｔ細胞共阻害剤のアンタゴニストまたは阻害剤である、項目６２に記載の方法。
（項目６６）
前記腫瘍免疫療法薬が、Ｔ細胞コアクチベーターのアゴニストである、項目６２に記載の方法。
（項目６７）
前記腫瘍免疫療法薬が、免疫刺激性サイトカインである、項目６２に記載の方法。
（項目６８）
前記単離された抗体、前記医薬組成物、前記二重特異性抗体、または前記抗体−薬物コンジュゲートが、前記腫瘍免疫療法薬と同時に投与される、項目６２〜６７のいずれか１項に記載の方法。
（項目６９）
前記単離された抗体、前記医薬組成物、前記二重特異性抗体、または前記抗体−薬物コンジュゲートは、前記腫瘍免疫療法薬と逐次的に投与される、項目６２〜６７のいずれか１項に記載の方法。
要約すると、モノクローナル抗体クローン１３及びクローン２５の場合、残基８１ＦＫ８２が、両方の抗体のＴＩＧＩＴエピトープ模倣物に対する結合に重要であることが判明した。クローン１３の場合、残基５１ＴＡＱＶＴ５５（配列番号２６７）、７４ＧＷＨＩ７７（配列番号２６８）、及び８７ＰＧＰＧＬＧＬ９３（配列番号２６９）もまた、結合に寄与することが判明した。クローン２５の場合、残基５２ＡＱ５３、７３ＬＧＷ７５、Ｐ７９、及び８２ＫＤＲＶＡ８６（配列番号２７０）もまた、結合に寄与することが判明した。



























Claims (69)

  1. ヒトＴＩＧＩＴ（ＩｇとＩＴＩＭドメインをもつＴ細胞免疫受容体）に結合する単離された抗体またはその抗原結合部分であって、５ｎＭ未満のヒトＴＩＧＩＴに対する結合親和性（ＫＤ）を有する、前記単離された抗体またはその抗原結合部分。
  2. 前記抗体またはその抗原結合部分が、１ｎＭ未満のヒトＴＩＧＩＴに対するＫＤを有する、請求項１に記載の単離された抗体。
  3. 前記抗体またはその抗原結合部分が、１００ｐＭ未満のヒトＴＩＧＩＴに対するＫＤを有する、請求項１に記載の単離された抗体。
  4. 前記抗体またはその抗原結合部分が、カニクイザルＴＩＧＩＴ及び／またはマウスＴＩＧＩＴと交差反応性を示す、請求項１〜３のいずれか１項に記載の単離された抗体。
  5. 前記抗体またはその抗原結合部分が、カニクイザルＴＩＧＩＴとマウスＴＩＧＩＴの両方と交差反応性を示す、請求項４に記載の単離された抗体。
  6. 前記抗体またはその抗原結合部分が、ＣＤ１５５のＴＩＧＩＴに対する結合を遮断する、請求項１〜５のいずれか１項に記載の単離された抗体。
  7. 前記抗体またはその抗原結合部分が、ＣＤ１１２のＴＩＧＩＴに対する結合を遮断する、請求項１〜５のいずれか１項に記載の単離された抗体。
  8. 前記抗体またはその抗原結合部分が、ＣＤ１５５とＣＤ１１２の両方のＴＩＧＩＴに対する結合を遮断する、請求項１〜５のいずれか１項に記載の単離された抗体。
  9. 前記抗体またはその抗原結合部分が、アミノ酸８１位と８２位の１つまたは両方を含むヒトＴＩＧＩＴ上のエピトープに結合する、請求項１〜８のいずれか１項に記載の単離された抗体。
  10. 前記エピトープが８１位にＰｈｅを含む、請求項９に記載の単離された抗体。
  11. 前記エピトープが８２位にＬｙｓまたはＳｅｒを含む、請求項８に記載の単離された抗体。
  12. 前記エピトープが８１位にＰｈｅ、及び８２位にＬｙｓまたはＳｅｒを含む、請求項９〜１１のいずれか１項に記載の単離された抗体。
  13. 前記エピトープがＰｈｅ８１及びＬｙｓ８２を含む、請求項１２に記載の単離された抗体。
  14. 前記エピトープが不連続エピトープである、請求項９〜１３のいずれか１項に記載の単離された抗体。
  15. 前記抗体またはその抗原結合部分が、アミノ酸５１位、５２位、５３位、５４位、５５位、７３位、７４位、７５位、７６位、７７位、７９位、８３位、８４位、８５位、８６位、８７位、８８位、８９位、９０位、９１位、９２位、または９３位のうちの１つ以上をさらに含む、ヒトＴＩＧＩＴ上のエピトープに結合する、請求項９〜１４のいずれか１項に記載の単離された抗体。
  16. 前記エピトープが、Ｔｈｒ５１、Ａｌａ５２、Ｇｌｎ５３、Ｖａｌ５４、Ｔｈｒ５５、Ｌｅｕ７３、Ｇｌｙ７４、Ｔｒｐ７５、Ｈｉｓ７６、Ｉｌｅ７７、Ｐｒｏ７９、Ａｓｐ８３、Ａｒｇ８４、Ｖａｌ８５、Ａｌａ８６、Ｐｒｏ８７、Ｇｌｙ８８、Ｐｒｏ８９、Ｇｌｙ９０、Ｌｅｕ９１、Ｇｌｙ９２、及びＬｅｕ９３からなる群から選択される１つ以上のアミノ酸残基をさらに含む、請求項１５に記載の単離された抗体。
  17. 前記エピトープが、アミノ酸残基Ｔｈｒ５１、Ａｌａ５２、Ｇｌｎ５３、Ｖａｌ５４、Ｔｈｒ５５、Ｇｌｙ７４、Ｔｒｐ７５、Ｈｉｓ７６、Ｉｌｅ７７、Ｐｈｅ８１、Ｌｙｓ８２、Ｐｒｏ８７、Ｇｌｙ８８、Ｐｒｏ８９、Ｇｌｙ９０、Ｌｅｕ９１、Ｇｌｙ９２、及びＬｅｕ９３を含む、請求項１６に記載の単離された抗体。
  18. 前記エピトープが、アミノ酸残基Ａｌａ５２、Ｇｌｎ５３、Ｌｅｕ７３、Ｇｌｙ７４、Ｔｒｐ７５、Ｐｒｏ７９、Ｐｈｅ８１、Ｌｙｓ８２、Ａｓｐ８３、Ａｒｇ８４、Ｖａｌ８５、及びＡｌａ８６を含む、請求項１６に記載の単離された抗体。
  19. 前記エピトープが、配列ＩＣＮＡＤＬＧＷＨＩＳＰＳＦＫを含む、請求項９〜１８のいずれか１項に記載の単離された抗体。
  20. 前記抗体またはその抗原結合部分が、
    （ａ）配列番号４、配列番号２２、配列番号４０、配列番号５８、配列番号７６、配列番号９４、配列番号１１２、配列番号１３０、配列番号１４８、配列番号１６６、配列番号１８４、配列番号２０２、配列番号２２１、配列番号２２４、配列番号２２６、配列番号２３１、配列番号２３３、配列番号２３９、もしくは配列番号２４３のいずれかの配列を含む重鎖ＣＤＲ１；
    （ｂ）配列番号６、配列番号２４、配列番号４２、配列番号６０、配列番号７８、配列番号９６、配列番号１１４、配列番号１３２、配列番号１５０、配列番号１６８、配列番号１８６、配列番号２０４、配列番号２２２、配列番号２２５、配列番号２２７、配列番号２２９、配列番号２３２、配列番号２３４、配列番号２３８、もしくは配列番号２４０のいずれかの配列を含む重鎖ＣＤＲ２；
    （ｃ）配列番号８、配列番号２６、配列番号４４、配列番号６２、配列番号８０、配列番号９８、配列番号１１６、配列番号１３４、配列番号１５２、配列番号１７０、配列番号１８８、配列番号２０６、配列番号２２３、配列番号２２８、配列番号２３０、配列番号２３５、配列番号２３６、配列番号２３７、配列番号２４１、配列番号２４２、もしくは配列番号２４４のいずれかの配列を含む重鎖ＣＤＲ３；
    （ｄ）配列番号１３、配列番号３１、配列番号４９、配列番号６７、配列番号８５、配列番号１０３、配列番号１２１、配列番号１３９、配列番号１５７、配列番号１７５、配列番号１９３、もしくは配列番号２１１のいずれかの配列を含む軽鎖ＣＤＲ１；
    （ｅ）配列番号１５、配列番号３３、配列番号５１、配列番号６９、配列番号８７、配列番号１０５、配列番号１２３、配列番号１４１、配列番号１５９、配列番号１７７、配列番号１９５、もしくは配列番号２１３のいずれかの配列を含む軽鎖ＣＤＲ２；または
    （ｆ）配列番号１７、配列番号３５、配列番号５３、配列番号７１、配列番号８９、配列番号１０７、配列番号１２５、配列番号１４３、配列番号１６１、配列番号１７９、配列番号１９７、もしくは配列番号２１５のいずれかの配列を含む軽鎖ＣＤＲ３
    のうちの１つ以上を含む、請求項１〜１９のいずれか１項に記載の単離された抗体。
  21. 前記抗体またはその抗原結合部分が、
    （ａ）それぞれ、配列番号４、６、８、１３、１５、及び１７；または
    （ｂ）それぞれ、配列番号２２、２４、２６、３１、３３、及び３５；または
    （ｃ）それぞれ、配列番号４０、４２、４４、４９、５１、及び５３；または
    （ｄ）それぞれ、配列番号５８、６０、６２、６７、６９、及び７１；または
    （ｅ）それぞれ、配列番号７６、７８、８０、８５、８７、及び８９；または
    （ｆ）それぞれ、配列番号９４、９６、９８、１０３、１０５、及び１０７；または
    （ｇ）それぞれ、配列番号１１２、１１４、１１６、１２１、１２３、及び１２５；または
    （ｈ）それぞれ、配列番号１３０、１３２、１３４、１３９、１４１、及び１４３；または
    （ｉ）それぞれ、配列番号１４８、１５０、１５２、１５７、１５９、及び１６１；または
    （ｊ）それぞれ、配列番号１６６、１６８、１７０、１７５、１７７、及び１７９；または
    （ｋ）それぞれ、配列番号１８４、１８６、１８８、１９３、１９５、及び１９７；または
    （ｌ）それぞれ、配列番号２０２、２０４、２０６、２１１、２１３、及び２１５；または
    （ｍ）それぞれ、配列番号２２１、２２２、２２３、１３、１５、及び１７；または
    （ｎ）それぞれ、配列番号２２４、２２５、６２、６７、６９、及び７１；または
    （ｏ）それぞれ、配列番号２２６、２２７、２２８、６７、６９、及び７１；または
    （ｐ）それぞれ、配列番号２２４、２２９、２３０、６７、６９、及び７１；または
    （ｑ）それぞれ、配列番号２２４、２２７、２３０、６７、６９、及び７１；または
    （ｒ）それぞれ、配列番号２３１、２３２、２３５、１０３、１０５、及び１０７；または
    （ｓ）それぞれ、配列番号２３３、２３４、２３６、１０３、１０５、及び１０７；または
    （ｔ）それぞれ、配列番号２３３、２３４、２３７、１０３、１０５、及び１０７；または
    （ｕ）それぞれ、配列番号１６６、２３８、１７０、１７５、１７７、及び１７９；または
    （ｖ）それぞれ、配列番号２３９、２４０、１７０、１７５、１７７、及び１７９；または
    （ｗ）それぞれ、配列番号２３９、２４０、２４１、１７５、１７７、及び１７９；または
    （ｘ）それぞれ、配列番号２３９、２４０、２４２、１７５、１７７、及び１７９；または
    （ｙ）それぞれ、配列番号２４３、１６８、２４４、１７５、１７７、及び１７９
    の配列を含む、重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３、ならびに軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ、及びＣＤＲ３を含む、請求項２０に記載の単離された抗体。
  22. 前記抗体またはその抗原結合部分が、
    （ａ）配列番号１、配列番号１９、配列番号３７、配列番号５５、配列番号７３、配列番号９１、配列番号１０９、配列番号１２７、配列番号１４５、配列番号１６３、配列番号１８１、配列番号１９９、配列番号２４５、配列番号２４６、配列番号２４７、配列番号２４８、配列番号２４９、配列番号２５０、配列番号２５１、配列番号２５２、配列番号２５３、配列番号２５４、配列番号２５５、配列番号２５６、もしくは配列番号２５７に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；及び／または
    （ｂ）配列番号１０、配列番号２８、配列番号４６、配列番号６４、配列番号８２、配列番号１００、配列番号１１８、配列番号１３６、配列番号１５４、配列番号１７２、配列番号１９０、もしくは配列番号２０８に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域
    を含む、請求項１〜２１のいずれか１項に記載の単離された抗体。
  23. 前記抗体またはその抗原結合部分が、
    （ａ）配列番号１もしくは配列番号２４５に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、及び配列番号１０に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；または
    （ｂ）配列番号１９に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、及び配列番号２８に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；または
    （ｃ）配列番号３７に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、及び配列番号４６に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；または
    （ｄ）配列番号５５、配列番号２４６、配列番号２４７、配列番号２４８、もしくは配列番号２４９のうちのいずれか１つに対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、及び配列番号６４に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；または
    （ｅ）配列番号７３に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、及び配列番号８２に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；または
    （ｆ）配列番号９１、配列番号２５０、配列番号２５１、もしくは配列番号２５２に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、及び配列番号１００に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；または
    （ｇ）配列番号１０９に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、及び配列番号１１８に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；または
    （ｈ）配列番号１２７に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、及び配列番号１３６に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；または
    （ｉ）配列番号１４５に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、及び配列番号１５４に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；または
    （ｊ）配列番号１６３、配列番号２５３、配列番号２５４、配列番号２５５、配列番号２５６、もしくは配列番号２５７のうちのいずれか１つに対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、及び配列番号１７２に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；または
    （ｋ）配列番号１８１に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、及び配列番号１９０に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；または
    （ｌ）配列番号１９９に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、及び配列番号２０８に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域
    を含む、請求項２２に記載の単離された抗体。
  24. 前記抗体またはその抗原結合部分が、抗ＰＤ１抗体または抗ＰＤ−Ｌ１抗体と相乗効果を示す、請求項１〜２３のいずれか１項に記載の単離された抗体。
  25. ヒトＴＩＧＩＴに結合する抗体またはその抗原結合部分であって、アミノ酸８１位及び８２位を含むヒトＴＩＧＩＴ上のエピトープに結合する、前記単離された抗体またはその抗原結合部分。
  26. 前記エピトープが８１位にＰｈｅ、及び／または８２位にＬｙｓもしくはＳｅｒを含む、請求項２５に記載の単離された抗体。
  27. 前記エピトープがＰｈｅ８１及びＬｙｓ８２を含む、請求項２６に記載の単離された抗体。
  28. 前記エピトープが不連続エピトープである、請求項２５〜２７のいずれか１項に記載の単離された抗体。
  29. 前記抗体またはその抗原結合部分が、アミノ酸５１位、５２位、５３位、５４位、５５位、７３位、７４位、７５位、７６位、７７位、７９位、８３位、８４位、８５位、８６位、８７位、８８位、８９位、９０位、９１位、９２位、または９３位のうちの１つ以上をさらに含む、ヒトＴＩＧＩＴ上のエピトープに結合する、請求項２５〜２８のいずれか１項に記載の単離された抗体。
  30. 前記エピトープが、Ｔｈｒ５１、Ａｌａ５２、Ｇｌｎ５３、Ｖａｌ５４、Ｔｈｒ５５、Ｌｅｕ７３、Ｇｌｙ７４、Ｔｒｐ７５、Ｈｉｓ７６、Ｉｌｅ７７、Ｐｒｏ７９、Ａｓｐ８３、Ａｒｇ８４、Ｖａｌ８５、Ａｌａ８６、Ｐｒｏ８７、Ｇｌｙ８８、Ｐｒｏ８９、Ｇｌｙ９０、Ｌｅｕ９１、Ｇｌｙ９２、及びＬｅｕ９３からなる群から選択される１つ以上のアミノ酸残基をさらに含む、請求項２９に記載の単離された抗体。
  31. 前記エピトープが、アミノ酸残基Ｔｈｒ５１、Ａｌａ５２、Ｇｌｎ５３、Ｖａｌ５４、Ｔｈｒ５５、Ｇｌｙ７４、Ｔｒｐ７５、Ｈｉｓ７６、Ｉｌｅ７７、Ｐｈｅ８１、Ｌｙｓ８２、Ｐｒｏ８７、Ｇｌｙ８８、Ｐｒｏ８９、Ｇｌｙ９０、Ｌｅｕ９１、Ｇｌｙ９２、及びＬｅｕ９３を含む、請求項３０に記載の単離された抗体。
  32. 前記エピトープが、アミノ酸残基Ａｌａ５２、Ｇｌｎ５３、Ｌｅｕ７３、Ｇｌｙ７４、Ｔｒｐ７５、Ｐｒｏ７９、Ｐｈｅ８１、Ｌｙｓ８２、Ａｓｐ８３、Ａｒｇ８４、Ｖａｌ８５、及びＡｌａ８６を含む、請求項３０に記載の単離された抗体。
  33. 前記エピトープが、配列ＩＣＮＡＤＬＧＷＨＩＳＰＳＦＫを含む、請求項２５〜３２のいずれか１項に記載の単離された抗体。
  34. 前記抗体またはその抗原結合部分が、
    （ａ）配列番号４、配列番号２２、配列番号４０、配列番号５８、配列番号７６、配列番号９４、配列番号１１２、配列番号１３０、配列番号１４８、配列番号１６６、配列番号１８４、配列番号２０２、配列番号２２１、配列番号２２４、配列番号２２６、配列番号２３１、配列番号２３３、配列番号２３９、もしくは配列番号２４３のいずれかの配列を含む重鎖ＣＤＲ１；
    （ｂ）配列番号６、配列番号２４、配列番号４２、配列番号６０、配列番号７８、配列番号９６、配列番号１１４、配列番号１３２、配列番号１５０、配列番号１６８、配列番号１８６、配列番号２０４、配列番号２２２、配列番号２２５、配列番号２２７、配列番号２２９、配列番号２３２、配列番号２３４、配列番号２３８、もしくは配列番号２４０のいずれかの配列を含む重鎖ＣＤＲ２；
    （ｃ）配列番号８、配列番号２６、配列番号４４、配列番号６２、配列番号８０、配列番号９８、配列番号１１６、配列番号１３４、配列番号１５２、配列番号１７０、配列番号１８８、配列番号２０６、配列番号２２３、配列番号２２８、配列番号２３０、配列番号２３５、配列番号２３６、配列番号２３７、配列番号２４１、配列番号２４２、もしくは配列番号２４４のいずれかの配列を含む重鎖ＣＤＲ３；
    （ｄ）配列番号１３、配列番号３１、配列番号４９、配列番号６７、配列番号８５、配列番号１０３、配列番号１２１、配列番号１３９、配列番号１５７、配列番号１７５、配列番号１９３、もしくは配列番号２１１のいずれかの配列を含む軽鎖ＣＤＲ１；
    （ｅ）配列番号１５、配列番号３３、配列番号５１、配列番号６９、配列番号８７、配列番号１０５、配列番号１２３、配列番号１４１、配列番号１５９、配列番号１７７、配列番号１９５、もしくは配列番号２１３のいずれかの配列を含む軽鎖ＣＤＲ２；または
    （ｆ）配列番号１７、配列番号３５、配列番号５３、配列番号７１、配列番号８９、配列番号１０７、配列番号１２５、配列番号１４３、配列番号１６１、配列番号１７９、配列番号１９７、もしくは配列番号２１５のいずれかの配列を含む軽鎖ＣＤＲ３
    のうちの１つ以上を含む、請求項２５〜３２のいずれか１項に記載の単離された抗体。
  35. 前記抗体またはその抗原結合部分が、
    （ａ）それぞれ、配列番号４、６、８、１３、１５、及び１７；または
    （ｂ）それぞれ、配列番号２２、２４、２６、３１、３３、及び３５；または
    （ｃ）それぞれ、配列番号４０、４２、４４、４９、５１、及び５３；または
    （ｄ）それぞれ、配列番号５８、６０、６２、６７、６９、及び７１；または
    （ｅ）それぞれ、配列番号７６、７８、８０、８５、８７、及び８９；または
    （ｆ）それぞれ、配列番号９４、９６、９８、１０３、１０５、及び１０７；または
    （ｇ）それぞれ、配列番号１１２、１１４、１１６、１２１、１２３、及び１２５；または
    （ｈ）それぞれ、配列番号１３０、１３２、１３４、１３９、１４１、及び１４３；または
    （ｉ）それぞれ、配列番号１４８、１５０、１５２、１５７、１５９、及び１６１；または
    （ｊ）それぞれ、配列番号１６６、１６８、１７０、１７５、１７７、及び１７９；または
    （ｋ）それぞれ、配列番号１８４、１８６、１８８、１９３、１９５、及び１９７；または
    （ｌ）それぞれ、配列番号２０２、２０４、２０６、２１１、２１３、及び２１５；または
    （ｍ）それぞれ、配列番号２２１、２２２、２２３、１３、１５、及び１７；または
    （ｎ）それぞれ、配列番号２２４、２２５、６２、６７、６９、及び７１；または
    （ｏ）それぞれ、配列番号２２６、２２７、２２８、６７、６９、及び７１；または
    （ｐ）それぞれ、配列番号２２４、２２９、２３０、６７、６９、及び７１；または
    （ｑ）それぞれ、配列番号２２４、２２７、２３０、６７、６９、及び７１；または
    （ｒ）それぞれ、配列番号２３１、２３２、２３５、１０３、１０５、及び１０７；または
    （ｓ）それぞれ、配列番号２３３、２３４、２３６、１０３、１０５、及び１０７；または
    （ｔ）それぞれ、配列番号２３３、２３４、２３７、１０３、１０５、及び１０７；または
    （ｕ）それぞれ、配列番号１６６、２３８、１７０、１７５、１７７、及び１７９；または
    （ｖ）それぞれ、配列番号２３９、２４０、１７０、１７５、１７７、及び１７９；または
    （ｗ）それぞれ、配列番号２３９、２４０、２４１、１７５、１７７、及び１７９；または
    （ｘ）それぞれ、配列番号２３９、２４０、２４２、１７５、１７７、及び１７９；または
    （ｙ）それぞれ、配列番号２４３、１６８、２４４、１７５、１７７、及び１７９
    の配列を含む、重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３、ならびに軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ、及びＣＤＲ３を含む、請求項３４に記載の単離された抗体。
  36. 前記抗体またはその抗原結合部分が、
    （ａ）配列番号１、配列番号１９、配列番号３７、配列番号５５、配列番号７３、配列番号９１、配列番号１０９、配列番号１２７、配列番号１４５、配列番号１６３、配列番号１８１、配列番号１９９、配列番号２４５、配列番号２４６、配列番号２４７、配列番号２４８、配列番号２４９、配列番号２５０、配列番号２５１、配列番号２５２、配列番号２５３、配列番号２５４、配列番号２５５、配列番号２５６、もしくは配列番号２５７に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；及び／または
    （ｂ）配列番号１０、配列番号２８、配列番号４６、配列番号６４、配列番号８２、配列番号１００、配列番号１１８、配列番号１３６、配列番号１５４、配列番号１７２、配列番号１９０、もしくは配列番号２０８に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域
    を含む、請求項３４に記載の単離された抗体。
  37. 前記抗体またはその抗原結合部分が、
    （ａ）配列番号１もしくは配列番号２４５に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、及び配列番号１０に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；または
    （ｂ）配列番号１９に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、及び配列番号２８に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；または
    （ｃ）配列番号３７に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、及び配列番号４６に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；または
    （ｄ）配列番号５５、配列番号２４６、配列番号２４７、配列番号２４８、もしくは配列番号２４９のうちのいずれか１つに対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、及び配列番号６４に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；または
    （ｅ）配列番号７３に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、及び配列番号８２に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；または
    （ｆ）配列番号９１、配列番号２５０、配列番号２５１、もしくは配列番号２５２に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、及び配列番号１００に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；または
    （ｇ）配列番号１０９に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、及び配列番号１１８に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；または
    （ｈ）配列番号１２７に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、及び配列番号１３６に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；または
    （ｉ）配列番号１４５に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、及び配列番号１５４に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；または
    （ｊ）配列番号１６３、配列番号２５３、配列番号２５４、配列番号２５５、配列番号２５６、もしくは配列番号２５７のうちのいずれか１つに対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、及び配列番号１７２に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；または
    （ｋ）配列番号１８１に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、及び配列番号１９０に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；または
    （ｌ）配列番号１９９に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、及び配列番号２０８に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域
    を含む、請求項３６に記載の単離された抗体。
  38. 前記抗体がモノクローナル抗体である、請求項１〜３７のいずれか１項に記載の単離された抗体。
  39. 前記抗体がヒト化抗体である、請求項１〜３８のいずれか１項に記載の単離された抗体。
  40. 前記抗体が完全ヒト抗体である、請求項１〜３８のいずれか１項に記載の単離された抗体。
  41. 前記抗体がキメラ抗体である、請求項１〜３８のいずれか１項に記載の単離された抗体。
  42. 前記抗原結合断片が、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、ｓｃＦｖ、または二価ｓｃＦｖである、請求項１〜３８のいずれか１項に記載の単離された抗体。
  43. 請求項１〜４２のいずれか１項に記載の単離された抗体と、薬学的に許容される担体と、を含む、医薬組成物。
  44. 請求項１〜４２のいずれか１項に記載の抗体を含む二重特異性抗体。
  45. 請求項１〜４２のいずれか１項に記載の抗体を含む抗体−薬物コンジュゲート。
  46. 請求項１〜４２のいずれか１項に記載の抗体をコードするヌクレオチド配列を含む単離されたポリヌクレオチド。
  47. ヒトＴＩＧＩＴに結合する抗体またはその抗原結合部分をコードする１つ以上のヌクレオチド配列を含む単離されたポリヌクレオチドであって、
    （ａ）配列番号２、配列番号２０、配列番号３８、配列番号５６、配列番号７４、配列番号９２、配列番号１１０、配列番号１２８、配列番号１４６、配列番号１６４、配列番号１８２、もしくは配列番号２００のヌクレオチド配列；及び／または
    （ｂ）配列番号１１、配列番号２９、配列番号４７、配列番号６５、配列番号８３、配列番号１０１、配列番号１１９、配列番号１３７、配列番号１５５、配列番号１７３、配列番号１９１、もしくは配列番号２０９のヌクレオチド配列
    を含む前記単離されたポリヌクレオチド。
  48. 請求項４６または請求項４７に記載のポリヌクレオチドを含むベクター。
  49. 請求項４６もしくは請求項４７に記載のポリヌクレオチドまたは請求項４８に記載のベクターを含む宿主細胞。
  50. 抗体を産生するのに適した条件下で請求項４９に記載の宿主細胞を培養することを含む、前記抗体を産生する方法。
  51. 請求項１〜４２のいずれか１項に記載の単離された抗体、請求項４３に記載の医薬組成物と、
    腫瘍免疫療法薬と、
    を含む、キット。
  52. 前記腫瘍免疫療法薬が、ＰＤ−１経路阻害剤である、請求項５１に記載のキット。
  53. 前記ＰＤ−１経路阻害剤が、抗ＰＤ１抗体または抗ＰＤ−Ｌ１抗体である、請求項５２に記載のキット。
  54. 前記腫瘍免疫療法薬が、Ｔ細胞共阻害剤のアンタゴニストまたは阻害剤である、請求項５１に記載のキット。
  55. 前記腫瘍免疫療法薬が、Ｔ細胞コアクチベーターのアゴニストである、請求項５１に記載のキット。
  56. 前記腫瘍免疫療法薬が、免疫刺激性サイトカインである、請求項５１に記載のキット。
  57. 対象においてがんを治療する方法であって、治療量の請求項１〜４２のいずれか１項に記載の単離された抗体、請求項４３に記載の医薬組成物、請求項４４に記載の二重特異性抗体、または請求項４５に記載の抗体−薬物コンジュゲートを前記対象に投与することを含む、前記方法。
  58. 前記がんが、ＣＤ１１２またはＣＤ１５５の発現が豊富ながんである、請求項５７に記載の方法。
  59. 前記がんが、ＴＩＧＩＴを発現するＴ細胞またはナチュラルキラー（ＮＫ）細胞が豊富ながんである、請求項５７に記載の方法。
  60. 前記がんが、膀胱癌、乳癌、子宮癌、子宮頸癌、卵巣癌、前立腺癌、精巣癌、食道癌、胃腸癌、膵臓癌、大腸癌、結腸癌、腎臓癌、頭頸部癌、肺癌、胃癌、胚細胞癌、骨癌、肝臓癌、甲状腺癌、皮膚癌、中枢神経系腫瘍、リンパ腫、白血病、骨髄腫、または肉腫である、請求項５７〜５９のいずれか１項に記載の方法。
  61. 前記がんがリンパ腫または白血病である、請求項６０に記載の方法。
  62. 治療量の腫瘍免疫療法薬を前記対象に投与することをさらに含む、請求項５７〜６１のいずれか１項に記載の方法。
  63. 前記腫瘍免疫療法薬が、ＰＤ−１経路阻害剤である、請求項６２に記載の方法。
  64. 前記ＰＤ−１経路阻害剤が、抗ＰＤ１抗体または抗ＰＤ−Ｌ１抗体である、請求項６３に記載の方法。
  65. 前記腫瘍免疫療法薬が、Ｔ細胞共阻害剤のアンタゴニストまたは阻害剤である、請求項６２に記載の方法。
  66. 前記腫瘍免疫療法薬が、Ｔ細胞コアクチベーターのアゴニストである、請求項６２に記載の方法。
  67. 前記腫瘍免疫療法薬が、免疫刺激性サイトカインである、請求項６２に記載の方法。
  68. 前記単離された抗体、前記医薬組成物、前記二重特異性抗体、または前記抗体−薬物コンジュゲートが、前記腫瘍免疫療法薬と同時に投与される、請求項６２〜６７のいずれか１項に記載の方法。
  69. 前記単離された抗体、前記医薬組成物、前記二重特異性抗体、または前記抗体−薬物コンジュゲートは、前記腫瘍免疫療法薬と逐次的に投与される、請求項６２〜６７のいずれか１項に記載の方法。
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