KR20190123749A - 항-tigit 항체 - Google Patents

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KR20190123749A
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줄리아 씨. 피아세키
코트니 비어스
스콧 페터슨
비앙카 프린즈
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시애틀 지네틱스, 인크.
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Abstract

인간 TIGIT (Ig 및 ITIM 도메인을 갖는 T-세포 면역수용체)에 결합하는 단리된 항체 또는 항원 결합 부분이 제공된다. 일부 구체예에서, 상기 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 인간 TIGIT에 대해 5 nM보다 적은 결합 친화성 (KD)을 갖는다. 일부 구체예에서, 항-TIGIT 항체는 TIGIT에 CD155 및/또는 CD112의 결합을 차단한다.

Description

항-TIGIT 항체
발명의 배경
본 출원은 2017년 2월 28일자에 제출된 U.S. 가출원 번호 62/464,529, 그리고 2018년 1월 12일자 제출된 U.S. 가출원 번호 62/616,779에 우선권을 주장하고, 이들 각각의 전체 내용은 본원에서 참조로서 편입된다.
발명의 배경
TIGIT ("Ig 및 ITIM 도메인을 갖는 T-세포 면역수용체")는 T 세포의 부분집합, 예를 들면, 활성화된, 기억 및 조절 T 세포, 그리고 자연 킬러 (NK) 세포에서 발현되는 면역 수용체이다. TIGIT는 단백질의 Ig 상과 내에 CD28 패밀리의 구성원이고, 그리고 T 세포 증식과 활성화 및 NK 세포 기능을 제한하는 동시저해성 분자로서 역할을 한다. TIGIT는 동일한 세트의 리간드: CD155 (폴리오바이러스 수용체 또는 "PVR"로서 또한 알려져 있음) 및 CD112 (폴리오바이러스 수용체-관련된 2 또는 "PVRL2"로서 또한 알려져 있음)에 대해 CD226 (DNAX 액세서리 분자-1, 또는 "DNAM-1"로서 또한 알려져 있음)과 경쟁함으로써 면역억제 효과를 매개한다. Levin et al., Eur. J. Immunol., 2011, 41:902-915를 참조한다. TIGIT에 대한 CD155의 친화성이 CD226에 대한 이의 친화성보다 높기 때문에, TIGIT의 존재에서 CD226 신호전달이 저해되고, 따라서 T 세포 증식 및 활성화가 제한된다.
흑색종을 앓는 환자에서, TIGIT 발현은 종양 항원 (TA)-특이적 CD8+ T 세포 및 CD8+ 종양-침윤 림프구 (TILs)에서 상향조절된다. TIGIT 리간드 (CD155)-발현 세포의 존재에서 TIGIT의 차단은 TA-특이적 CD8+ T 세포 및 CD8+ TILs 둘 모두의 증식, 사이토킨 생산 및 탈과립을 증가시켰다. Chauvin et al., J Clin Invest., 2015, 125:2046-2058을 참조한다. 따라서, 비록 TIGIT를 차단하고 항종양 반응을 증진하는 향상된 방법이 여전히 요구되긴 하지만, TIGIT는 환자에서 항종양 T 세포 반응을 자극하기 위한 잠재적인 치료 표적을 나타낸다.
발명의 간단한 요약
한 양상에서, 인간 TIGIT (Ig 및 ITIM 도메인을 갖는 T-세포 면역수용체)에 결합하는 단리된 항체 또는 이들의 항원 결합 부분이 제공된다. 일부 구체예에서, 상기 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 인간 TIGIT에 대해 5 nM보다 적은 결합 친화성 (KD)을 갖는다. 일부 구체예에서, 상기 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 인간 TIGIT에 대해 1 nM보다 적은 KD를 갖는다. 일부 구체예에서, 상기 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 인간 TIGIT에 대해 100 pM보다 적은 KD를 갖는다.
일부 구체예에서, 상기 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 시노몰구스 원숭이 TIGIT 및/또는 생쥐 TIGIT와 교차반응성을 전시한다. 일부 구체예에서, 상기 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 시노몰구스 원숭이 TIGIT 및 생쥐 TIGIT 둘 모두와 교차반응성을 전시한다.
일부 구체예에서, 상기 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 TIGIT에 CD155의 결합을 차단한다. 일부 구체예에서, 상기 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 TIGIT에 CD112의 결합을 차단한다. 일부 구체예에서, 상기 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 TIGIT에 CD155와 CD112 둘 모두의 결합을 차단한다.
일부 구체예에서, 상기 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 아미노산 위치 81 및 82를 포함하는 인간 TIGIT 상에서 에피토프에 결합한다. 일부 구체예에서, 상기 에피토프는 위치 81에서 Phe 및/또는 위치 82에서 Lys 또는 Ser을 포함한다. 일부 구체예에서, 상기 에피토프는 Phe81 및 Lys82를 포함한다.
일부 구체예에서, 상기 에피토프는 불연속적 에피토프이다.
일부 구체예에서, 상기 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 아미노산 위치 51, 52, 53, 54, 55, 73, 74, 75, 76, 77, 79, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 또는 93 중에서 하나 또는 그 이상을 더욱 포함하는 인간 TIGIT 상에서 에피토프에 결합한다. 일부 구체예에서, 상기 에피토프는 Thr51, Ala52, Gln53, Val54, Thr55, Leu73, Gly74, Trp75, His76, Ile77, Pro79, Asp83, Arg84, Val85, Ala86, Pro87, Gly88, Pro89, Gly90, Leu91, Gly92 및 Leu93으로 구성된 군에서 선택되는 하나 또는 그 이상의 아미노산 잔기를 더욱 포함한다. 일부 구체예에서, 상기 에피토프는 아미노산 잔기 Thr51, Ala52, Gln53, Val54, Thr55, Gly74, Trp75, His76, Ile77, Phe81, Lys82, Pro87, Gly88, Pro89, Gly90, Leu91, Gly92 및 Leu93을 포함한다. 일부 구체예에서, 상기 에피토프는 아미노산 잔기 Ala52, Gln53, Leu73, Gly74, Trp75, Pro79, Phe81, Lys82, Asp83, Arg84, Val85 및 Ala86을 포함한다. 일부 구체예에서, 상기 에피토프는 서열 ICNADLGWHISPSFK (서열 번호: 258)를 포함한다.
일부 구체예에서, 상기 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 아래의 표 3에서 열거된 한 가지 또는 그 이상의 서열을 포함한다. 일부 구체예에서, 상기 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 하기 중에서 한 가지 또는 그 이상을 포함한다:
(a) 서열 번호: 4, 서열 번호: 22, 서열 번호: 40, 서열 번호: 58, 서열 번호: 76, 서열 번호: 94, 서열 번호: 112, 서열 번호: 130, 서열 번호: 148, 서열 번호: 166, 서열 번호: 184, 서열 번호: 202, 서열 번호: 221, 서열 번호: 224, 서열 번호: 226, 서열 번호: 231, 서열 번호: 233, 서열 번호: 239, 또는 서열 번호: 243 중에서 어느 것의 서열을 포함하는 중쇄 CDR1;
(b) 서열 번호: 6, 서열 번호: 24, 서열 번호: 42, 서열 번호: 60, 서열 번호: 78, 서열 번호: 96, 서열 번호: 114, 서열 번호: 132, 서열 번호: 150, 서열 번호: 168, 서열 번호: 186, 서열 번호: 204, 서열 번호: 222, 서열 번호: 225, 서열 번호: 227, 서열 번호: 229, 서열 번호: 232, 서열 번호: 234, 서열 번호: 238, 또는 서열 번호: 240 중에서 어느 것의 서열을 포함하는 중쇄 CDR2;
(c) 서열 번호: 8, 서열 번호: 26, 서열 번호: 44, 서열 번호: 62, 서열 번호: 80, 서열 번호: 98, 서열 번호: 116, 서열 번호: 134, 서열 번호: 152, 서열 번호: 170, 서열 번호: 188, 서열 번호: 206, 서열 번호: 223, 서열 번호: 228, 서열 번호: 230, 서열 번호: 235, 서열 번호: 236, 서열 번호: 237, 서열 번호: 241, 서열 번호: 242, 또는 서열 번호: 244 중에서 어느 것의 서열을 포함하는 중쇄 CDR3;
(d) 서열 번호: 13, 서열 번호: 31, 서열 번호: 49, 서열 번호: 67, 서열 번호: 85, 서열 번호: 103, 서열 번호: 121, 서열 번호: 139, 서열 번호: 157, 서열 번호: 175, 서열 번호: 193, 또는 서열 번호: 211 중에서 어느 것의 서열을 포함하는 경쇄 CDR1;
(e) 서열 번호: 15, 서열 번호: 33, 서열 번호: 51, 서열 번호: 69, 서열 번호: 87, 서열 번호: 105, 서열 번호: 123, 서열 번호: 141, 서열 번호: 159, 서열 번호: 177, 서열 번호: 195, 또는 서열 번호: 213 중에서 어느 것의 서열을 포함하는 경쇄 CDR2; 또는
(f) 서열 번호: 17, 서열 번호: 35, 서열 번호: 53, 서열 번호: 71, 서열 번호: 89, 서열 번호: 107, 서열 번호: 125, 서열 번호: 143, 서열 번호: 161, 서열 번호: 179, 서열 번호: 197, 또는 서열 번호: 215 중에서 어느 것의 서열을 포함하는 경쇄 CDR3.
일부 구체예에서, 상기 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 하기 서열을 포함하는 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3, 그리고 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3을 포함한다:
(a) 각각, 서열 번호: 4, 6, 8, 13, 15 및 17; 또는
(b) 각각, 서열 번호: 22, 24, 26, 31, 33 및 35; 또는
(c) 각각, 서열 번호: 40, 42, 44, 49, 51 및 53; 또는
(d) 각각, 서열 번호: 58, 60, 62, 67, 69 및 71; 또는
(e) 각각, 서열 번호: 76, 78, 80, 85, 87 및 89; 또는
(f) 각각, 서열 번호: 94, 96, 98, 103, 105 및 107; 또는
(g) 각각, 서열 번호: 112, 114, 116, 121, 123 및 125; 또는
(h) 각각, 서열 번호: 130, 132, 134, 139, 141 및 143; 또는
(i) 각각, 서열 번호: 148, 150, 152, 157, 159 및 161; 또는
(j) 각각, 서열 번호: 166, 168, 170, 175, 177 및 179; 또는
(k) 각각, 서열 번호: 184, 186, 188, 193, 195 및 197; 또는
(l) 각각, 서열 번호: 202, 204, 206, 211, 213 및 215; 또는
(m) 각각, 서열 번호: 221, 222, 223, 13, 15 및 17; 또는
(n) 각각, 서열 번호: 224, 225, 62, 67, 69 및 71; 또는
(o) 각각, 서열 번호: 226, 227, 228, 67, 69 및 71; 또는
(p) 각각, 서열 번호: 224, 229, 230, 67, 69 및 71; 또는
(q) 각각, 서열 번호: 224, 227, 230, 67, 69 및 71; 또는
(r) 각각, 서열 번호: 231, 232, 235, 103, 105 및 107; 또는
(s) 각각, 서열 번호: 233, 234, 236, 103, 105 및 107; 또는
(t) 각각, 서열 번호: 233, 234, 237, 103, 105 및 107; 또는
(u) 각각, 서열 번호: 166, 238, 170, 175, 177 및 179; 또는
(v) 각각, 서열 번호: 239, 240, 170, 175, 177 및 179; 또는
(w) 각각, 서열 번호: 239, 240, 241, 175, 177 및 179; 또는
(x) 각각, 서열 번호: 239, 240, 242, 175, 177 및 179; 또는
(y) 각각, 서열 번호: 243, 168, 244, 175, 177 및 179.
일부 구체예에서, 상기 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 하기를 포함한다:
(a) 서열 번호: 1, 서열 번호: 19, 서열 번호: 37, 서열 번호: 55, 서열 번호: 73, 서열 번호: 91, 서열 번호: 109, 서열 번호: 127, 서열 번호: 145, 서열 번호: 163, 서열 번호: 181, 서열 번호: 199, 서열 번호: 245, 서열 번호: 246, 서열 번호: 247, 서열 번호: 248, 서열 번호: 249, 서열 번호: 250, 서열 번호: 251, 서열 번호: 252, 서열 번호: 253, 서열 번호: 254, 서열 번호: 255, 서열 번호: 256, 또는 서열 번호: 257에 최소한 90% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역; 및/또는
(b) 서열 번호: 10, 서열 번호: 28, 서열 번호: 46, 서열 번호: 64, 서열 번호: 82, 서열 번호: 100, 서열 번호: 118, 서열 번호: 136, 서열 번호: 154, 서열 번호: 172, 서열 번호: 190, 또는 서열 번호: 208에 최소한 90% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역.
일부 구체예에서, 상기 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 하기를 포함한다:
(a) 서열 번호: 1 또는 서열 번호: 245에 최소한 90% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열 번호: 10에 최소한 90% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역; 또는
(b) 서열 번호: 19에 최소한 90% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열 번호: 28에 최소한 90% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역; 또는
(c) 서열 번호: 37에 최소한 90% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열 번호: 46에 최소한 90% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역; 또는
(d) 서열 번호: 55, 서열 번호: 246, 서열 번호: 247, 서열 번호: 248, 또는 서열 번호: 249 중에서 한 가지에 최소한 90% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열 번호: 64에 최소한 90% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역; 또는
(e) 서열 번호: 73에 최소한 90% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열 번호: 82에 최소한 90% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역; 또는
(f) 서열 번호: 91, 서열 번호: 250, 서열 번호: 251, 또는 서열 번호: 252 중에서 한 가지에 최소한 90% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열 번호: 100에 최소한 90% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역; 또는
(g) 서열 번호: 109에 최소한 90% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열 번호: 118에 최소한 90% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역; 또는
(h) 서열 번호: 127에 최소한 90% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열 번호: 136에 최소한 90% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역; 또는
(i) 서열 번호: 145에 최소한 90% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열 번호: 154에 최소한 90% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역; 또는
(j) 서열 번호: 163, 서열 번호: 253, 서열 번호: 254, 서열 번호: 255, 서열 번호: 256, 또는 서열 번호: 257 중에서 한 가지에 최소한 90% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열 번호: 172에 최소한 90% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역; 또는
(k) 서열 번호: 181에 최소한 90% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열 번호: 190에 최소한 90% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역; 또는
(l) 서열 번호: 199에 최소한 90% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열 번호: 208에 최소한 90% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역.
다른 양상에서, 인간 TIGIT에 결합하는 항체 또는 이들의 항원 결합 부분이 제공되고, 여기서 상기 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 아미노산 위치 81 및 82를 포함하는 인간 TIGIT 상에서 에피토프에 결합한다. 일부 구체예에서, 상기 에피토프는 위치 81에서 Phe 및/또는 위치 82에서 Lys 또는 Ser을 포함한다. 일부 구체예에서, 상기 에피토프는 Phe81 및 Lys82를 포함한다.
일부 구체예에서, 상기 에피토프는 불연속적 에피토프이다.
일부 구체예에서, 상기 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 아미노산 위치 51, 52, 53, 54, 55, 73, 74, 75, 76, 77, 79, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 또는 93 중에서 하나 또는 그 이상을 더욱 포함하는 인간 TIGIT 상에서 에피토프에 결합한다. 일부 구체예에서, 상기 에피토프는 Thr51, Ala52, Gln53, Val54, Thr55, Leu73, Gly74, Trp75, His76, Ile77, Pro79, Asp83, Arg84, Val85, Ala86, Pro87, Gly88, Pro89, Gly90, Leu91, Gly92 및 Leu93으로 구성된 군에서 선택되는 하나 또는 그 이상의 아미노산 잔기를 더욱 포함한다. 일부 구체예에서, 상기 에피토프는 아미노산 잔기 Thr51, Ala52, Gln53, Val54, Thr55, Gly74, Trp75, His76, Ile77, Phe81, Lys82, Pro87, Gly88, Pro89, Gly90, Leu91, Gly92 및 Leu93을 포함한다. 일부 구체예에서, 상기 에피토프는 아미노산 잔기 Ala52, Gln53, Leu73, Gly74, Trp75, Pro79, Phe81, Lys82, Asp83, Arg84, Val85 및 Ala86을 포함한다. 일부 구체예에서, 상기 에피토프는 서열 ICNADLGWHISPSFK (서열 번호: 258)를 포함한다.
또 다른 양상에서, 본원에서 개시된 바와 같은 한 가지 또는 그 이상의 서열 (가령, 아래의 표 3에서 열거된 한 가지 또는 그 이상의 서열)을 포함하는 항체 또는 이들의 항원 결합 부분이 제공된다. 일부 구체예에서, 상기 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 본원에서 개시된 바와 같은 한 가지 또는 그 이상의 CDR, 중쇄 가변 영역, 경쇄 가변 영역, 또는 프레임워크 영역 서열 (가령, 아래의 표 3에서 열거된 바와 같은)을 포함한다. 일부 구체예에서, 상기 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 하기 중에서 한 가지 또는 그 이상을 포함한다:
(a) 서열 번호: 4, 서열 번호: 22, 서열 번호: 40, 서열 번호: 58, 서열 번호: 76, 서열 번호: 94, 서열 번호: 112, 서열 번호: 130, 서열 번호: 148, 서열 번호: 166, 서열 번호: 184, 서열 번호: 202, 서열 번호: 221, 서열 번호: 224, 서열 번호: 226, 서열 번호: 231, 서열 번호: 233, 서열 번호: 239, 또는 서열 번호: 243 중에서 어느 것의 서열을 포함하는 중쇄 CDR1;
(b) 서열 번호: 6, 서열 번호: 24, 서열 번호: 42, 서열 번호: 60, 서열 번호: 78, 서열 번호: 96, 서열 번호: 114, 서열 번호: 132, 서열 번호: 150, 서열 번호: 168, 서열 번호: 186, 서열 번호: 204, 서열 번호: 222, 서열 번호: 225, 서열 번호: 227, 서열 번호: 229, 서열 번호: 232, 서열 번호: 234, 서열 번호: 238, 또는 서열 번호: 240 중에서 어느 것의 서열을 포함하는 중쇄 CDR2;
(c) 서열 번호: 8, 서열 번호: 26, 서열 번호: 44, 서열 번호: 62, 서열 번호: 80, 서열 번호: 98, 서열 번호: 116, 서열 번호: 134, 서열 번호: 152, 서열 번호: 170, 서열 번호: 188, 서열 번호: 206, 서열 번호: 223, 서열 번호: 228, 서열 번호: 230, 서열 번호: 235, 서열 번호: 236, 서열 번호: 237, 서열 번호: 241, 서열 번호: 242, 또는 서열 번호: 244 중에서 어느 것의 서열을 포함하는 중쇄 CDR3;
(d) 서열 번호: 13, 서열 번호: 31, 서열 번호: 49, 서열 번호: 67, 서열 번호: 85, 서열 번호: 103, 서열 번호: 121, 서열 번호: 139, 서열 번호: 157, 서열 번호: 175, 서열 번호: 193, 또는 서열 번호: 211 중에서 어느 것의 서열을 포함하는 경쇄 CDR1;
(e) 서열 번호: 15, 서열 번호: 33, 서열 번호: 51, 서열 번호: 69, 서열 번호: 87, 서열 번호: 105, 서열 번호: 123, 서열 번호: 141, 서열 번호: 159, 서열 번호: 177, 서열 번호: 195, 또는 서열 번호: 213 중에서 어느 것의 서열을 포함하는 경쇄 CDR2; 또는
(f) 서열 번호: 17, 서열 번호: 35, 서열 번호: 53, 서열 번호: 71, 서열 번호: 89, 서열 번호: 107, 서열 번호: 125, 서열 번호: 143, 서열 번호: 161, 서열 번호: 179, 서열 번호: 197, 또는 서열 번호: 215 중에서 어느 것의 서열을 포함하는 경쇄 CDR3.
일부 구체예에서, 상기 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 하기 서열을 포함하는 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3, 그리고 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3을 포함한다:
(a) 각각, 서열 번호: 4, 6, 8, 13, 15 및 17; 또는
(b) 각각, 서열 번호: 22, 24, 26, 31, 33 및 35; 또는
(c) 각각, 서열 번호: 40, 42, 44, 49, 51 및 53; 또는
(d) 각각, 서열 번호: 58, 60, 62, 67, 69 및 71; 또는
(e) 각각, 서열 번호: 76, 78, 80, 85, 87 및 89; 또는
(f) 각각, 서열 번호: 94, 96, 98, 103, 105 및 107; 또는
(g) 각각, 서열 번호: 112, 114, 116, 121, 123 및 125; 또는
(h) 각각, 서열 번호: 130, 132, 134, 139, 141 및 143; 또는
(i) 각각, 서열 번호: 148, 150, 152, 157, 159 및 161; 또는
(j) 각각, 서열 번호: 166, 168, 170, 175, 177 및 179; 또는
(k) 각각, 서열 번호: 184, 186, 188, 193, 195 및 197; 또는
(l) 각각, 서열 번호: 202, 204, 206, 211, 213 및 215; 또는
(m) 각각, 서열 번호: 221, 222, 223, 13, 15 및 17; 또는
(n) 각각, 서열 번호: 224, 225, 62, 67, 69 및 71; 또는
(o) 각각, 서열 번호: 226, 227, 228, 67, 69 및 71; 또는
(p) 각각, 서열 번호: 224, 229, 230, 67, 69 및 71; 또는
(q) 각각, 서열 번호: 224, 227, 230, 67, 69 및 71; 또는
(r) 각각, 서열 번호: 231, 232, 235, 103, 105 및 107; 또는
(s) 각각, 서열 번호: 233, 234, 236, 103, 105 및 107; 또는
(t) 각각, 서열 번호: 233, 234, 237, 103, 105 및 107; 또는
(u) 각각, 서열 번호: 166, 238, 170, 175, 177 및 179; 또는
(v) 각각, 서열 번호: 239, 240, 170, 175, 177 및 179; 또는
(w) 각각, 서열 번호: 239, 240, 241, 175, 177 및 179; 또는
(x) 각각, 서열 번호: 239, 240, 242, 175, 177 및 179; 또는
(y) 각각, 서열 번호: 243, 168, 244, 175, 177 및 179.
일부 구체예에서, 상기 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 하기를 포함한다:
(a) 서열 번호: 1, 서열 번호: 19, 서열 번호: 37, 서열 번호: 55, 서열 번호: 73, 서열 번호: 91, 서열 번호: 109, 서열 번호: 127, 서열 번호: 145, 서열 번호: 163, 서열 번호: 181, 서열 번호: 199, 서열 번호: 245, 서열 번호: 246, 서열 번호: 247, 서열 번호: 248, 서열 번호: 249, 서열 번호: 250, 서열 번호: 251, 서열 번호: 252, 서열 번호: 253, 서열 번호: 254, 서열 번호: 255, 서열 번호: 256, 또는 서열 번호: 257에 최소한 90% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역; 및/또는
(b) 서열 번호: 10, 서열 번호: 28, 서열 번호: 46, 서열 번호: 64, 서열 번호: 82, 서열 번호: 100, 서열 번호: 118, 서열 번호: 136, 서열 번호: 154, 서열 번호: 172, 서열 번호: 190, 또는 서열 번호: 208에 최소한 90% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역.
일부 구체예에서, 상기 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 하기를 포함한다:
(a) 서열 번호: 1 또는 서열 번호: 245에 최소한 90% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열 번호: 10에 최소한 90% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역; 또는
(b) 서열 번호: 19에 최소한 90% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열 번호: 28에 최소한 90% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역; 또는
(c) 서열 번호: 37에 최소한 90% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열 번호: 46에 최소한 90% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역; 또는
(d) 서열 번호: 55, 서열 번호: 246, 서열 번호: 247, 서열 번호: 248, 또는 서열 번호: 249 중에서 한 가지에 최소한 90% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열 번호: 64에 최소한 90% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역; 또는
(e) 서열 번호: 73에 최소한 90% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열 번호: 82에 최소한 90% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역; 또는
(f) 서열 번호: 91, 서열 번호: 250, 서열 번호: 251, 또는 서열 번호: 252 중에서 한 가지에 최소한 90% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열 번호: 100에 최소한 90% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역; 또는
(g) 서열 번호: 109에 최소한 90% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열 번호: 118에 최소한 90% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역; 또는
(h) 서열 번호: 127에 최소한 90% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열 번호: 136에 최소한 90% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역; 또는
(i) 서열 번호: 145에 최소한 90% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열 번호: 154에 최소한 90% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역; 또는
(j) 서열 번호: 163, 서열 번호: 253, 서열 번호: 254, 서열 번호: 255, 서열 번호: 256, 또는 서열 번호: 257 중에서 한 가지에 최소한 90% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열 번호: 172에 최소한 90% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역; 또는
(k) 서열 번호: 181에 최소한 90% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열 번호: 190에 최소한 90% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역; 또는
(l) 서열 번호: 199에 최소한 90% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열 번호: 208에 최소한 90% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역.
일부 구체예에서, 본원에서 개시된 바와 같은 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 항-PD1 항체 또는 항-PD-L1 항체와의 상승작용을 전시한다.
일부 구체예에서, 본원에서 개시된 바와 같은 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 단일클론 항체이다. 일부 구체예에서, 상기 항체는 인간화 항체이다. 일부 구체예에서, 상기 항체는 완전한 인간 항체이다. 일부 구체예에서, 상기 항체는 키메라 항체이다. 일부 구체예에서, 상기 항원 결합 단편은 Fab, F(ab')2, scFv, 또는 이가 scFv이다.
다른 양상에서, 본원에서 설명된 바와 같은 단리된 항체 또는 이의 항원 결합 부분 및 제약학적으로 허용되는 담체를 포함하는 제약학적 조성물이 제공된다.
또 다른 양상에서, 본원에서 설명된 바와 같은 단리된 항체 또는 이의 항원 결합 부분을 포함하는 이중특이적 항체가 제공된다.
또 다른 양상에서, 본원에서 설명된 바와 같은 단리된 항체 또는 이의 항원 결합 부분을 포함하는 항체-약물 접합체가 제공된다.
또 다른 양상에서, 단리된 폴리뉴클레오티드가 제공된다. 일부 구체예에서, 상기 폴리뉴클레오티드는 본원에서 설명된 바와 같은 항체 또는 이의 항원 결합 부분을 인코딩하는 한 가지 또는 그 이상의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 일부 구체예에서, 상기 폴리뉴클레오티드는 아래의 표 3에서 개시된 폴리펩티드를 인코딩하는 한 가지 또는 그 이상의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 일부 구체예에서, 상기 폴리뉴클레오티드는 인간 TIGIT에 결합하는 항체 또는 이의 항원 결합 부분을 인코딩하는 한 가지 또는 그 이상의 뉴클레오티드 서열을 포함하고, 여기서 상기 단리된 폴리뉴클레오티드는 하기를 포함한다:
(a) 서열 번호: 2, 서열 번호: 20, 서열 번호: 38, 서열 번호: 56, 서열 번호: 74, 서열 번호: 92, 서열 번호: 110, 서열 번호: 128, 서열 번호: 146, 서열 번호: 164, 서열 번호: 182, 또는 서열 번호: 200의 뉴클레오티드 서열; 및/또는
(b) 서열 번호: 11, 서열 번호: 29, 서열 번호: 47, 서열 번호: 65, 서열 번호: 83, 서열 번호: 101, 서열 번호: 119, 서열 번호: 137, 서열 번호: 155, 서열 번호: 173, 서열 번호: 191, 또는 서열 번호: 209의 뉴클레오티드 서열.
또 다른 양상에서, 본원에서 설명된 바와 같은 폴리뉴클레오티드를 포함하는 벡터 및 숙주 세포가 제공된다. 다른 양상에서, 항체를 생산하는데 적합한 조건 하에 본원에서 설명된 바와 같은 숙주 세포를 배양하는 것을 포함하는, 항체를 생산하는 방법이 제공된다.
다른 양상에서, 키트 (가령, 본원에서 설명된 바와 같은 치료 방법에서 이용을 위한)가 제공된다. 일부 구체예에서, 상기 키트는 본원에서 설명된 바와 같은 단리된 항-TIGIT 항체 또는 이의 항원 결합 부분, 또는 본원에서 설명된 바와 같은 항-TIGIT 항체 또는 이의 항원 결합 부분을 포함하는 제약학적 조성물을 포함하고; 그리고 면역항암제를 더욱 포함한다. 일부 구체예에서, 면역항암제는 PD-1 경로 저해제이다. 일부 구체예에서, PD-1 경로 저해제는 항-PD1 항체 또는 항-PD-L1 항체이다. 일부 구체예에서, PD-1 경로 저해제는 T 세포 동시저해제의 길항제 또는 저해제이다. 일부 구체예에서, 면역항암제는 T 세포 보조활성인자의 효현제이다. 일부 구체예에서, 면역항암제는 면역 자극 사이토킨이다.
다른 양상에서, 개체에서 암을 치료하는 방법이 제공된다. 일부 구체예에서, 상기 방법은 본원에서 설명된 바와 같은 단리된 항체 또는 이의 항원 결합 부분, 또는 본원에서 설명된 바와 같은 제약학적 조성물, 본원에서 설명된 바와 같은 이중특이적 항체, 또는 본원에서 설명된 바와 같은 항체-약물 접합체의 치료량을 개체에게 투여하는 것을 포함한다.
일부 구체예에서, 암은 CD112 또는 CD115의 발현에 대해 농축되는 암이다. 일부 구체예에서, 암은 TIGIT를 발현하는 T 세포 또는 자연 킬러 (NK) 세포에 대해 농축되는 암이다. 일부 구체예에서, 암은 방광암, 유방암, 자궁암, 자궁경부암, 난소암, 전립선암, 고환암, 식도암, 위장관암, 췌장암, 결장직장암, 결장암, 신장암, 두경부암, 폐암, 위암, 생식 세포 암, 골암, 간암, 갑상선암, 피부암, 중추신경계의 신생물, 림프종, 백혈병, 골수종, 또는 육종이다. 일부 구체예에서, 암은 림프종 또는 백혈병이다.
일부 구체예에서, 상기 방법은 면역항암제의 치료량을 개체에게 투여하는 것을 더욱 포함한다. 일부 구체예에서, 면역항암제는 PD-1 경로 저해제이다. 일부 구체예에서, PD-1 경로 저해제는 항-PD1 항체 또는 항-PD-L1 항체이다. 일부 구체예에서, PD-1 경로 저해제는 T 세포 동시저해제의 길항제 또는 저해제이다. 일부 구체예에서, 면역항암제는 T 세포 보조활성인자의 효현제이다. 일부 구체예에서, 면역항암제는 면역 자극 사이토킨이다. 일부 구체예에서, 상기 단리된 항체, 제약학적 조성물, 이중특이적 항체, 또는 항체-약물 접합체는 면역항암제와 동시에 투여된다. 일부 구체예에서, 상기 단리된 항체, 제약학적 조성물, 이중특이적 항체, 또는 항체-약물 접합체는 면역항암제와 순차적으로 투여된다.
도면의 간단한 설명
도 1. 인간 TIGIT (위쪽 패널), 시노몰구스 원숭이 TIGIT (중간 패널) 및 생쥐 TIGIT (아래쪽 패널)를 발현하도록 가공된 HEK 293 세포에 65개의 항-TIGIT 항체 클론 및 무관한 아이소타입 대조 항체의 결합.
도 2. 일차 인간 T 세포 (위쪽 패널), 시노몰구스 원숭이 T 세포 (중간 패널) 및 생쥐 T 세포 (아래쪽 패널)에 65개의 항-TIGIT 항체 클론 및 무관한 아이소타입 대조 항체의 결합. 아래쪽 패널의 경우에, 65개의 클론 중에서 35개가 평가되었다. 평가된 35개의 클론 중에서, 이들 35개중 5개가 담녹색 막대에 의해 지시된 바와 같이, mTIGIT-Fc 단백질에 결합하지 않았다 (클론 20, 27, 55, 56 및 60).
도 3a-3d. (a-c) HEK 293 세포에서 발현된 인간 (a), 생쥐 (b) 및 시노몰구스 원숭이 (c) TIGIT에 8개의 항-TIGIT 항체 클론 (클론 2, 5, 13, 16, 17, 20, 25 및 54)의 결합 적정 값. 싱글리케이트 웰에 대한 결과가 도시된다. (d) HEK 293 세포에서 발현된 인간, 생쥐 및 시노몰구스 원숭이 TIGIT에 8개의 항-TIGIT 항체 클론 (클론 2, 5, 13, 16, 17, 20, 25 및 54)의 EC50 값.
도 4. 활성화된 생쥐 비장 T 세포에 항-TIGIT 항체 클론 13과 25의 결합 적정. 싱글리케이트 웰에 대한 결과가 도시된다. 클론 13은 0.24 μg/mL의 EC50을 가졌다. 클론 25는 2.28 μg/mL의 EC50을 가졌다.
도 5a-5b. 항-TIGIT 항체는 인간 TIGIT를 발현하는 HEK 293 세포에 인간 CD155 결합 (a) 및 생쥐 TIGIT를 발현하는 HEK 293 세포에 생쥐 CD155 결합 (b) 둘 모두에 대해, HEK 293 세포에서 발현된 TIGIT와의 CD155 상호작용을 차단하였다. 싱글리케이트 웰에 대한 결과가 도시된다.
도 6. 항-TIGIT 항체는 HEK 293 세포에서 발현된 인간 TIGIT와의 인간 CD112 상호작용을 차단하였다. 싱글리케이트 웰에 대한 결과가 도시된다.
도 7a-7b. (a) 위쪽 패널: 선별 항-TIGIT 항체들은 TIGIT-CD155 포용을 효과적으로 차단하여, 루시페라아제 활성에서 > 1.5-배 유도에 의해 계측된 바와 같이 T 세포 활성화를 유발하였다. 약 12개의 클론이 생물학적 검정에서 >1.5-배 유도를 보여주었다. 2개의 클론은 ForteBio 검정에서 TIGIT-CD155 상호작용을 차단하지 못하였다 (핑크색 막대). Ab 없음 대조에서는 배수 유도가 계측되었다. 평균 및 SD는 중복 실험의 것들이다; 항체는 20 μg/mL이었다. 회색 막대 = hIgG1 아이소타입 대조. 흑색 막대 = 항체 없음 대조 (기준선으로서 규정됨). 아래쪽 패널: TIGIT/CD155 차단 생물학적 검정 대 TIGIT-Fc 친화성의 상관 플롯. 생물학적 검정에서 활성은 재조합 단백질에 대한 친화성과 상관하였다. (b) TIGIT/CD155 차단 생물학적 검정에서 12개의 선별된 항-TIGIT 클론의 용량 반응. 3가지 종 모두에 강한 결합을 보여준 클론 13과 25는 생물학적 검정에서 우수한 활성을 보여주었다. 평균 및 SD는 삼중 웰의 것들이다.
도 8. 선별 항-TIGIT 항체는 항-PD-1과 상승작용하여, T 세포 활성화를 유발하였다. 평균 및 SD는 삼중 웰의 것들이다. 클론 13 및 클론 25 둘 모두 조합 생물학적 검정에서 항-PD-1과의 상승작용을 보여주었다.
도 9a-9h. (a-d) 완전 인간 항-TIGIT 클론 13 ("c13 hIgG1") 및 클론 13의 생쥐 IgG1 ("c13 mIgG1")와 생쥐 IgG2a ("c13 mIgG2a") 키메라에 대해 HEK 293 세포에서 발현된 인간 (a), 생쥐 (b) 및 시노몰구스 원숭이 (c) TIGIT에 결합에 대한 결합 적정 (a-c) 및 EC50 값 (d). 평균 및 SD는 이중 웰의 것들이다. (e-f) 항체 c13 hIgG1, c13 mIgG1 및 c13 mIgG2a는 인간 TIGIT를 발현하는 HEK 293 세포에 인간 CD155 결합 (e) 및 생쥐 TIGIT를 발현하는 HEK 293 세포에 생쥐 CD155 결합 (f) 둘 모두에 대해, HEK 293 세포에서 발현된 TIGIT와의 CD155 상호작용을 차단하였다. 결과는 싱글리케이트 웰에 대한 것이다. (g) 항체 c13 hIgG1, c13 mIgG1 및 c13 mIgG2a는 HEK 293 세포에서 발현된 인간 TIGIT와의 인간 CD112 상호작용을 차단하였다. 결과는 싱글리케이트 웰에 대한 것이다. (h) TIGIT/CD155 차단 생물학적 검정에서 부모와 키메라 항-TIGIT 항체 클론 c1313 hIgG1, c13 mIgG1 및 c13 mIgG2a의 용량 반응. 평균 및 SD는 삼중 웰의 것들이다.
도 10a-10k. 활성화 Fc감마 수용체를 포용할 수 있는 항-TIGIT 항체는 생쥐에서 CT26 동계 종양 모형에서 항종양 효력을 매개하였다. (a) 군 평균 종양 체적. (b-k) 군 1 내지 10에 대한 개별 동물 종양 체적. PR = 부분적인 반응 (종양 체적이 3회 연속 계측에 대해 1 일자 용적의 50% 또는 그 이하이고, 그리고 이들 3회 계측 중에서 1회 또는 그 이상에 대해 13.5 mm3와 동등하거나 또는 이보다 크다). CR = 완전한 반응 (종양 체적이 3회 연속 계측에 대해 13.5 mm3보다 적다).
발명의 상세한 설명
I. 도입
본원에서 설명된 바와 같이, 인간 TIGIT (Ig 및 ITIM 도메인을 갖는 T-세포 면역수용체)에 대해 높은 친화성을 갖고, 그리고 생쥐 TIGIT 및 시노몰구스 원숭이 TIGIT 중에서 한 가지 또는 둘 모두와 교차반응성을 더욱 갖는 항체는 TIGIT 및 CD155 사이의 상호작용을 저해하는 것으로 확인되었다. 이들 항체는 또한, 항-PD-1 항체와의 상승작용을 전시한다. 따라서, 본원에서 설명된 항-TIGIT 항체는 단일 작용제로서 또는 다른 치료적 작용제, 예를 들면, 항-PD-1 작용제 또는 항-PD-L1 작용제와 조합으로 다수의 치료적 적용에서, 예를 들면, 다양한 암의 치료를 위해 이용될 수 있다.
따라서, 한 양상에서, 본 발명은 인간 TIGIT에 결합하는 항체 또는 항체의 항원 결합 부분을 포함하는 조성물, 키트 및 치료 방법을 제공한다.
II. 정의
달리 규정되지 않으면, 본원에서 이용된 기술 용어 및 과학 용어는 당업자에 의해 통상적으로 이해되는 바와 동일한 의미를 갖는다. 가령, Lackie, DICTIONARY OF CELL AND MOLECULAR BIOLOGY, Elsevier (4th ed. 2007); Sambrook et al., MOLECULAR CLONING, A LABORATORY MANUAL, Cold Springs Harbor Press (Cold Springs Harbor, NY 1989)를 참조한다. 본원에서 설명된 것들과 유사한 또는 동등한 임의의 방법, 장치와 물질이 본 발명의 실시에서 이용될 수 있다. 하기의 정의는 본원에서 빈번하게 이용되는 일정한 용어에 관한 이해를 용이하게 하기 위해 제공되고, 그리고 본 발명의 범위를 제한하는 것으로 의미되지 않는다.
본원에서 이용된 바와 같이, 단수 형태 ("a", "an" 및 "the")는 문맥에서 달리 지시되지 않으면, 복수 지시대상을 포함한다. 따라서, 예로서, "항체"에 대한 언급은 2개 또는 그 이상의 이런 분자의 조합 등을 임의선택적으로 포함한다.
본원에서 이용된 바와 같이, 용어 "약"은 당해 기술 분야에서 당업자에게 쉽게 공지된 개별 값에 대한 통상의 오차 범위를 지칭한다.
본원에서 이용된 바와 같이, 용어 "TIGIT"는 "Ig 및 ITIM 도메인을 갖는 T-세포 면역수용체"를 지칭한다. TIGIT 유전자에 의해 인코딩된 단백질은 단백질의 Ig 상과 내에 CD28 패밀리의 구성원이다. TIGIT는 여러 부류의 T 세포에서 및 자연 킬러 (NK) 세포에서 발현되고, 그리고 리간드 CD155와 CD112에 대해 CD226과 경쟁함으로써 면역억제 효과를 매개한다. Levin et al., Eur. J. Immunol., 2011, 41:902-915를 참조한다. TIGIT는 또한, 당해 분야에서 WUCAM (Washington University 세포 부착 분자) 및 VSTM3 (HUGO 지정)으로서 지칭된다. Levin et al., Eur J Immunol, 2011, 41:902-915를 참조한다. 따라서, 본 출원 전반에서 "TIGIT"에 대한 언급은 또한, 달리 명시되지 않으면 또는 맥락으로부터 명백하지 않으면, WUCAM 및/또는 VSTM3에 대한 언급을 포함한다. 인간 TIGIT 뉴클레오티드 및 단백질 서열은 가령, Genbank 수탁 번호 NM173799 (서열 번호: 217) 및 NP776160 (서열 번호: 218)에서 각각 진술된다.
용어 "암"은 일탈적 세포의 통제되지 않는 성장에 의해 특징화되는 질환을 지칭한다. 상기 용어는 악성, 양성, 연조직, 또는 고체로서 특징화되는 지에 상관없이, 모든 공지된 암 및 신생물 질환, 그리고 전이전 암 및 전이후 암을 비롯한 모든 시기와 등급의 암을 포함한다. 상이한 유형의 암의 실례는 소화암 및 위장관암, 예를 들면, 위암 (가령, 위암), 결장직장암, 위장관 간질 종양, 위장관 카르시노이드 종양, 결장암, 직장암, 항문암, 담관암, 소장암 및 식도암; 유방암; 폐암; 담낭암; 간암; 췌장암; 충수암; 전립선암, 난소암; 신장암; 중추신경계의 암; 피부암 (가령, 흑색종); 림프종; 신경교종; 융모막암종; 두경부암; 골원성 육종; 그리고 혈액암을 포함하지만 이들에 한정되지 않는다. 본원에서 이용된 바와 같이, "종양"은 한 가지 또는 그 이상의 암성 세포를 포함한다.
용어 "항체"는 항원 (가령, 인간 TIGIT), 특정 세포 표면 마커, 또는 임의의 원하는 표적에 특이적으로 결합하고 이를 인식하는, 면역글로불린 유전자에 의해 인코딩된 폴리펩티드 또는 이의 기능적 단편을 지칭한다. 전형적으로, "가변 영역"은 항체 (또는 이의 기능적 등가물)의 항원 결합 영역을 내포하고, 그리고 결합의 특이성 및 친화성에서 가장 결정적이다. Fundamental Immunology 7 th Edition, Paul, ed., Wolters Kluwer Health/Lippincott Williams & Wilkins (2013)를 참조한다. 인정된 면역글로불린 유전자는 카파, 람다, 알파, 감마, 델타, 엡실론 및 뮤 불변 영역 유전자뿐만 아니라 무수한 면역글로불린 가변 영역 유전자를 포함한다. 경쇄는 카파 또는 람다로 분류된다. 중쇄는 감마, 뮤, 알파, 델타 또는 엡실론으로서 분류되고, 이들은 차례로, 면역글로불린 부류, IgG, IgM, IgA, IgD 및 IgE를 각각 정의한다.
예시적인 면역글로불린 (항체) 구조 단위는 사합체를 포함한다. 각 사합체는 폴리펩티드 사슬의 2개의 동일한 쌍으로 구성되고, 각 쌍은 하나의 "경쇄" (약 25 kD) 및 하나의 "중쇄" (약 50-70 kD)를 갖는다. 각 사슬의 N 말단은 항원 인식에 대해 일차적으로 책임을 지는 약 100 내지 110개 또는 그 이상의 아미노산의 가변 영역을 규정한다. 용어 가변 경쇄 (VL) 및 가변 중쇄 (VH)는 각각, 이들 경쇄와 중쇄를 지칭한다.
"아이소타입"은 중쇄 불변 영역에 의해 규정되는 한 부류의 항체이다. 면역글로불린 유전자는 카파, 람다, 알파, 감마, 델타, 엡실론 및 뮤 불변 영역 유전자를 포함한다. 경쇄는 카파 또는 람다로서 분류된다. 중쇄는 감마, 뮤, 알파, 델타 또는 엡실론으로서 분류되고, 이들은 차례로, 아이소타입 부류, IgG, IgM, IgA, IgD 및 IgE를 각각 규정한다.
본원에서 이용된 바와 같이, "상보성 결정 영역 (CDR)"은 경쇄와 중쇄 가변 영역에 의해 확립된 4개의 "프레임워크" 영역에 끼어드는, 각 사슬 내에 3개의 초가변 영역을 지칭한다. CDRs는 항원의 에피토프에 결합에 대해 일차적으로 책임을 진다. 각 사슬의 CDRs는 전형적으로, N 말단으로부터 시작하여 연속적으로 넘버링된 CDR1, CDR2 및 CDR3으로서 지칭되고, 그리고 또한, 전형적으로 특정 CDR이 위치되는 사슬에 의해 확인된다. 따라서, VH CDR3은 자신이 발견되는 항체의 중쇄의 가변 도메인 내에 위치되고, 반면 VL CDR1은 자신이 발견되는 항체의 경쇄의 가변 도메인으로부터 CDR1이다.
상이한 경쇄 또는 중쇄의 프레임워크 영역의 서열은 종 내에서 상대적으로 보존된다. 항체의 프레임워크 영역, 다시 말하면, 성분 경쇄와 중쇄의 조합된 프레임워크 영역은 CDRs를 3차원 공간 내에 위치시키고 정렬하는데 역할을 한다.
CDRs 및 프레임워크 영역의 아미노산 서열은 당해 분야에서 다양한 널리 공지된 정의, 예를 들면, Kabat, Chothia, international ImMunoGeneTics database (IMGT), 그리고 AbM을 이용하여 결정될 수 있다 (가령, Johnson and Wu, Nucleic Acids Res. 2000 Jan 1; 28(1): 214-218 및 Johnson et al., Nucleic Acids Res., 29:205-206 (2001); Chothia & Lesk, (1987) J. Mol. Biol. 196, 901-917; Chothia et al. (1989) Nature 342, 877-883; Chothia et al. (1992) J. Mol. Biol. 227, 799-817; Al-Lazikani et al., J.Mol.Biol 1997, 273(4)을 참조한다). 달리 지시되지 않으면, CDRs는 Kabat에 따라서 결정된다. 항원 결합 부위의 정의는 또한, 하기에서 설명된다: Ruiz et al. Nucleic Acids Res., 28, 219-221 (2000); 및 Lefranc Nucleic Acids Res. Jan 1;29(1):207-9 (2001); MacCallum et al., J. Mol. Biol., 262: 732-745 (1996); 및 Martin et al, Proc. Natl Acad. Sci. USA, 86, 9268-9272 (1989); Martin, et al, Methods Enzymol., 203: 121-153, (1991); Pedersen et al, Immunomethods, 1, 126, (1992); 및 Rees et al, In Sternberg M.J.E. (ed.), Protein Structure Prediction. Oxford University Press, Oxford, 141-172 1996).
용어 "항원 결합 부분" 또는 "항원 결합 단편"은 본원에서 교체가능하게 이용되고, 그리고 항원 (가령, TIGIT)에 특이적으로 결합하는 능력을 유지하는 항체의 하나 또는 그 이상의 단편을 지칭한다. 항체의 항원 결합 기능은 전장 항체의 단편에 의해 수행될 수 있는 것으로 밝혀졌다. 항원 결합 단편의 실례는 Fab 단편 (VL, VH, CL 및 CH1 도메인으로 구성되는 일가 단편), F(ab')2 단편 (힌지 영역에서 디설피드 다리에 의해 연결된 2개의 Fab 단편을 포함하는 이가 단편), 단일 사슬 Fv (scFv), 상보성 결정 영역 (CDRs), VL (경쇄 가변 영역), VH (중쇄 가변 영역), 디설피드 연계된 Fvs (dsFv), 그리고 이들 또는 표적 항원에 결합할 수 있는 면역글로불린 펩티드의 임의의 다른 기능적 부분의 임의의 조합을 포함하지만 이들에 한정되지 않는다 (가령, Fundamental Immunology, 위와 같음을 참조한다). 당업자에 의해 인지되는 바와 같이, 다양한 항체 단편이 다양한 방법, 예를 들면, 효소, 예를 들면, 펩신으로 무손상 항체의 소화; 또는 데노보 합성에 의해 획득될 수 있다. 항체 단편은 종종, 화학적으로 또는 재조합 DNA 방법론을 이용함으로써 데노보 합성된다. 따라서, 본원에서 이용된 바와 같이, 용어 항체는 전체 항체의 변형에 의해 생산된 항체 단편, 또는 재조합 DNA 방법론을 이용하여 데노보 합성된 것들 (가령, 단일 사슬 Fv), 또는 파지 전시 라이브러리 및 효모-기초된 항체 라이브러리 제시 시스템을 이용하여 확인된 것들을 포함한다 (가령, McCafferty et al., (1990) Nature 348:552; Y. Xu et al., PEDS, 2013, 26:663-670; WO 2009/036379; WO 2010/105256; 및 WO 2012/009568을 참조한다). 용어 "항체"는 또한, 이가 또는 이중특이적 분자, 디아바디, 트리아바디 및 테트라바디를 포함한다. 이가 및 이중특이적 분자는 가령, Kostelny et al. (1992) J. Immunol. 148:1547, Pack and Pluckthun (1992) Biochemistry 31:1579, Hollinger et al. (1993), PNAS. USA 90:6444, Gruber et al. (1994) J Immunol. 152:5368, Zhu et al. (1997) Protein Sci. 6:781, Hu et al. (1996) Cancer Res. 56:3055, Adams et al. (1993) Cancer Res. 53:4026, 그리고 McCartney, et al. (1995) Protein Eng. 8:301에서 설명된다.
"단일클론 항체"는 항원 상에서 소정의 에피토프에 대해 단일 결합 특이성 및 친화성을 갖는 항체의 클론 제조물을 지칭한다. "다중클론 항체"는 단일 항원에 대하여 조성되지만, 상이한 결합 특이성 및 친화성을 갖는 항체의 제조물을 지칭한다.
"인간화" 항체는 인간에서 면역원성이 덜하지만, 비인간 항체의 반응성을 유지하는 항체이다. 이것은 예로서, 비인간 CDR 영역을 유지하고, 그리고 항체의 나머지 부분을 그들의 인간 대응물로 대체함으로써 달성될 수 있다. 가령, Morrison et al., PNAS USA, 81:6851-6855 (1984); Morrison and Oi, Adv. Immunol., 44:65-92 (1988); Verhoeyen et al., Science, 239:1534-1536 (1988); Padlan, Molec. Immun., 28:489-498 (1991); Padlan, Molec. Immun., 31(3):169-217 (1994)을 참조한다.
본원에서 이용된 바와 같이, 용어 "키메라 항체"는 (a) 항원 결합 부위 (가변 영역, CDR, 또는 이들의 부분)가 상이한 또는 변경된 부류, 작동체 기능 및/또는 종의 불변 영역, 또는 키메라 항체에 새로운 성질을 부여하는 완전히 상이한 분자 (가령, 효소, 독소, 호르몬, 성장 인자, 약물 등)에 연결되도록 불변 영역 또는 이의 부분이 변경되거나, 대체되거나 또는 교환되고; 또는 (b) 가변 영역 또는 이의 부분이 상이한 또는 변경된 항원 특이성을 갖는 가변 영역 (가령, 상이한 종으로부터 CDR 및 프레임워크 영역)으로 변경되거나, 대체되거나 또는 교환되는 항체 분자를 지칭한다.
용어 "에피토프"는 항체가 특이적으로 결합하는 항원의 구역 또는 영역, 다시 말하면, 항체와 물리적으로 접촉하는 구역 또는 영역을 지칭하고, 그리고 소수의 아미노산 또는 소수의 아미노산의 부분, 예를 들면, 5 또는 6개, 또는 그 이상, 예를 들면, 20개 또는 그 이상의 아미노산, 또는 이들 아미노산의 부분을 포함할 수 있다. 일부 경우에, 에피토프는 예로서, 탄수화물, 핵산 또는 지질로부터 비단백질 성분을 포함한다. 일부 경우에, 에피토프는 3차원 모이어티이다. 따라서, 예로서, 표적이 단백질인 경우에, 에피토프는 연속 아미노산, 또는 단백질 접힘에 의해 근접되는 상기 단백질의 상이한 부분으로부터 아미노산 (가령, 불연속적 에피토프)으로 구성될 수 있다. 3차원 구조를 형성하는 다른 유형의 표적 분자에 대해서도 마찬가지다.
관용구 "특이적으로 결합한다"는 비표적 화합물에 결합하는 것보다 표본 내에 표적에 더욱 큰 친화성으로, 결합능으로, 더욱 쉽게 및/또는 더욱 큰 지속 기간으로 상기 표적에 결합하는 분자 (가령, 항체 또는 항체 단편)을 지칭한다. 일부 구체예에서, 표적에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 비표적 화합물보다 최소한 2배 큰 친화성, 예를 들면, 최소한 4-배, 5-배, 6-배, 7-배, 8-배, 9-배, 10-배, 20-배, 25-배, 50-배, 또는 100-배 큰 친화성으로 표적에 결합하는 항체 또는 항원 결합 부분이다. 가령, TIGIT에 특이적으로 결합하는 항체는 전형적으로, 비-TIGIT 표적보다 최소한 2-배 큰 친화성으로 TIGIT에 결합할 것이다. 이러한 정의를 읽은 당업자에 의해, 예로서, 첫 번째 표적에 특이적으로 또는 우선적으로 결합하는 항체 (또는 모이어티 또는 에피토프)는 두 번째 표적에 특이적으로 또는 우선적으로 결합하거나 또는 결합하지 않을 수 있는 것으로 이해될 것이다.
용어 "결합 친화성"은 두 분자, 예를 들면, 항체 또는 이의 단편, 그리고 항원 사이에 비공유 상호작용의 강도의 척도로서 본원에서 이용된다. 용어 "결합 친화성"은 일가 상호작용 (내재성 활성)을 설명하는데 이용된다.
일가 상호작용을 통한 두 분자, 예를 들면, 항체 또는 이의 단편, 그리고 항원 사이에 결합 친화성은 해리 상수 (KD)의 결정에 의해 정량될 수 있다. 차례로, KD는 예로서, 표면 플라스몬 공명 (SPR) 방법 (Biacore™)을 이용한 복합체 형성과 해리의 동역학의 계측에 의해 결정될 수 있다. 일가 복합체의 결합과 해리에 상응하는 이들 속도 상수는 각각, 결합 속도 상수 k a (또는 k 온 ) 및 해리 속도 상수 k d (또는 k 오프 )로서 지칭된다. KD는 방정식 KD = k d / k a 를 통해 k a 및 k d 에 관련된다. 해리 상수의 값은 널리 알려진 방법에 의해 직접적으로 결정될 수 있고, 그리고 심지어 복합적인 혼합물에 대해서도 가령, Caceci et al. (1984, Byte 9: 340-362)에서 진술된 것들과 같은 방법에 의해 연산될 수 있다. 가령, KD는 이중-필터 니트로셀룰로오스 필터 결합 검정, 예를 들면, Wong & Lohman (1993, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90: 5428-5432)에 의해 개시된 것을 이용하여 확립될 수 있다. 예로서, ELISAs, 웨스턴 블롯, RIAs 및 유세포분석법 분석, 그리고 본원의 다른 곳에서 예시된 다른 검정을 비롯하여, 표적 항원을 향한 리간드, 예를 들면, 항체의 결합 능력을 평가하기 위한 다른 표준 검정이 당해 분야에서 공지된다. 항체의 결합 동역학 및 결합 친화성은 또한, 당해 분야에서 공지되거나 또는 아래의 실시예 섹션에서 설명된 바와 같은 표준 검정, 예를 들면, 표면 플라스몬 공명 (SPR) (가령, Biacore™ 시스템을 이용함으로써); 역학적 배제 검정, 예를 들면, KinExA®; 그리고 생물층 간섭측정 (가령, ForteBio® Octet 플랫폼을 이용한)에 의해 사정될 수 있다. 일부 구체예에서, 결합 친화성은 생물층 간섭측정 검정을 이용하여 결정된다. 가령, Wilson et al., Biochemistry and Molecular Biology Education, 38:400-407 (2010); Dysinger et al., J. Immunol. Methods, 379:30-41 (2012); 및 Estep et al., Mabs, 2013, 5:270-278을 참조한다.
본원에서 이용된 바와 같이, 용어 "교차반응한다"는 항체가 자신이 조성된 항원 이외의 항원에 결합하는 항체의 능력을 지칭한다. 일부 구체예에서, 교차반응성은 항체가 자신이 조성된 항원보다 다른 종으로부터 항원에 결합하는 항체의 능력을 지칭한다. 무제한적 실례로서, 인간 TIGIT 항원에 대하여 조성된, 본원에서 설명된 바와 같은 항-TIGIT 항체는 상이한 종 (가령, 생쥐 또는 원숭이)으로부터 TIGIT와 교차반응성을 전시할 수 있다.
용어 "폴리펩티드," "펩티드," 및 "단백질"은 아미노산 잔기의 중합체를 지칭하기 위해 본원에서 교체가능하게 이용된다. 이들 용어는 하나 또는 그 이상의 아미노산 잔기가 상응하는 자연발생 아미노산의 인공 화학적 모방체뿐만 아니라 자연발생 아미노산 중합체 및 비자연발생 아미노산 중합체인 아미노산 중합체에 적용된다. 본원에서 이용된 바와 같이, 이들 용어는 전장 단백질을 비롯한 임의의 길이의 아미노산 사슬을 포괄하고, 여기서 이들 아미노산 잔기는 공유 펩티드 결합에 의해 연결된다.
용어 "아미노산"은 자연발생 및 합성 아미노산뿐만 아니라 자연발생 아미노산과 유사한 방식으로 기능하는 아미노산 유사체 및 아미노산 모방체를 지칭한다. 자연발생 아미노산은 유전자 코드에 의해 인코딩된 아미노산뿐만 아니라 추후 변형되는 아미노산, 예를 들면, 히드록시프롤린, γ-카르복시글루타메이트 및 O-포스포세린이다. 아미노산 유사체는 자연발생 아미노산과 동일한 기본 화학 구조, 다시 말하면, 수소에 결합된 α 탄소, 카르복실 기, 아미노 기, 그리고 R 기를 갖는 화합물, 예를 들면, 호모세린, 노르류신, 메티오닌 술폭시드, 메티오닌 메틸 술포늄을 지칭한다. 이런 유사체는 변형된 R 기 (가령, 노르류신) 또는 변형된 펩티드 중추를 갖지만, 자연 발생 아미노산과 동일한 기본 화학 구조를 유지한다. "아미노산 모방체"는 아미노산의 일반적인 화학 구조와 상이한 구조를 갖지만, 자연발생 아미노산과 유사한 방식으로 기능하는 화학적 화합물을 지칭한다.
아미노산은 본원에서, 그들의 통상적으로 알려진 3 문자 기호에 의해 또는 IUPAC-IUB Biochemical Nomenclature Commission에 의해 권장되는 1-문자 기호에 의해 지칭될 수 있다. 뉴클레오티드는 유사하게, 그들의 통상적으로 인정되는 1-문자 코드에 의해 지칭될 수 있다.
본원에서 이용된 바와 같이, 용어 "핵산" 및 "폴리뉴클레오티드"는 임의의 길이의 뉴클레오티드의 사슬을 교체가능하게 지칭하고, 그리고 DNA 및 RNA를 포함한다. 뉴클레오티드는 데옥시리보뉴클레오티드, 리보뉴클레오티드, 변형된 뉴클레오티드 또는 염기 및/또는 이들의 유사체, 또는 DNA 또는 RNA 중합효소에 의해 사슬 내로 통합될 수 있는 임의의 기질일 수 있다. 폴리뉴클레오티드는 변형된 뉴클레오티드, 예를 들면, 메틸화된 뉴클레오티드 및 이들의 유사체를 포함할 수 있다. 본원에서 예기되는 폴리뉴클레오티드의 실례는 단일 및 이중 가닥 DNA, 단일 및 이중 가닥 RNA, 그리고 단일 및 이중 가닥 DNA 및 RNA의 혼합물을 갖는 하이브리드 분자를 포함한다.
핵산 또는 단백질 (가령, 항체)을 참고로 하여 이용될 때, 용어 "단리된"은 상기 핵산 또는 단백질이 자연 상태에서 연관되는 다른 세포 성분이 본질적으로 없다는 것을 표시한다. 이것은 바람직하게는, 균질한 상태에 있다. 이것은 건성 또는 수성 용액 내에 있을 수 있다. 순도와 균질성은 전형적으로, 분석화학 기술, 예를 들면, 폴리아크릴아미드 겔 전기영동 또는 고성능 액체 크로마토그래피를 이용하여 결정된다. 제조물 내에 존재하는 우세한 종류인 단백질은 실제적으로 정제된다. 특히, 단리된 유전자는 상기 유전자에 접하는 개방 해독틀로부터 분리되고, 그리고 관심되는 유전자에 의해 인코딩된 단백질 이외의 단백질을 인코딩한다. 용어 "정제된"은 핵산 또는 단백질이 전기이동 겔에서 본질적으로 하나의 띠를 발생시킨다는 것을 표시한다. 특히, 이것은 핵산 또는 단백질이 최소한 85% 순수하고, 더욱 바람직하게는 최소한 95% 순수하고, 그리고 가장 바람직하게는 최소한 99% 순수하다는 것을 의미한다.
용어 "면역항암제"는 개체에서 암에 대한 면역 반응을 증강하거나, 자극하거나, 또는 상향조절하는 (가령, 종양 성장을 저해하기 위한 면역 반응을 자극하는) 작용제를 지칭한다. 일부 구체예에서, 면역항암제는 소형 분자, 항체, 펩티드, 단백질, 환상 펩티드, 펩티드모방체, 폴리뉴클레오티드, 저해성 RNA, 앱타머, 약물 화합물, 또는 다른 화합물이다. 일부 구체예에서, 면역항암제는 PD-1 또는 PD-1 경로의 길항제 또는 저해제이다.
"피험자," "환자," "개체" 및 기타 유사한 용어는 교체가능하게 이용되고, 그리고 지시된 경우를 제외하고, 포유동물, 예를 들면, 인간 및 비인간 영장류뿐만 아니라 토끼, 쥐, 생쥐, 염소, 돼지, 그리고 다른 포유류 종을 지칭한다. 상기 용어는 개체가 특정 질환으로 진단되었다는 것을 반드시 지시하는 것은 아니고, 전형적으로 의학적 감독 하에 있는 개체를 지칭한다. 환자는 치료, 모니터링, 기존의 치료 섭생의 조정 또는 변형 등을 모색하는 개체일 수 있다.
용어 "요법," "치료," 및 "개선"은 증상의 심각도에서 임의의 감소를 지칭한다. 암을 치료하는 경우에, 치료는 예로서, 종양 크기, 암 세포의 숫자, 성장률, 전이 활성, 비-암 세포의 세포 사멸 등을 감소시키는 것을 지칭할 수 있다. 본원에서 이용된 바와 같이, 용어 "치료한다" 및 "예방한다"는 절대적 용어인 것으로 의도되지 않는다. 치료 및 예방은 개시에서 임의의 지연, 증상의 개선, 환자 생존에서 향상, 생존 기간 또는 비율에서 증가 등을 지칭할 수 있다. 치료 및 예방은 완전하거나 (남아있는 검출가능한 증상 없음), 또는 본원에서 설명된 치료가 없는 환자에서보다 증상이 덜 빈번하거나 또는 덜 심각하도록 부분적일 수 있다. 치료 효과는 치료를 제공받지 않는 개체 또는 개체의 풀, 또는 치료에 앞서 또는 치료 동안 상이한 시점에서 동일한 환자와 비교될 수 있다. 일부 양상에서, 질환의 심각도는 예로서, 투여 전 개체 또는 치료를 받지 않는 대조 개체와 비교하여 최소한 10% 감소된다. 일부 양상에서, 질환의 심각도는 최소한 25%, 50%, 75%, 80% 또는 90% 감소되거나, 또는 일부 경우에, 표준 진단 기술을 이용하여 더 이상 검출가능하지 않다.
본원에서 이용된 바와 같이, 작용제 (가령, 본원에서 설명된 바와 같은 항체)의 "치료량" 또는 "치료 효과량"은 개체에서 질환 (가령, 암)을 예방하거나, 경감하거나, 약화시키거나, 또는 이의 증상의 심각도를 감소시키는 작용제의 양이다. 가령, 소정의 파라미터에 대해, 치료 효과량은 치료 효과의 최소한 5%, 10%, 15%, 20%, 25%, 40%, 50%, 60%, 75%, 80%, 90%, 또는 최소한 100%의 증가 또는 감소를 보여줄 것이다. 치료 효력은 또한, "-배" 증가 또는 감소로서 표현될 수 있다. 가령, 치료 효과량은 대조에 비하여 최소한 1.2-배, 1.5-배, 2-배, 5-배, 또는 그 이상의 효과를 가질 수 있다.
용어 "투여한다," "투여된," 또는 "투여하는"은 작용제, 화합물, 또는 조성물을 생물학적 작용의 원하는 부위로 전달하는 방법을 지칭한다. 이들 방법은 국소 전달, 비경구 전달, 정맥내 전달, 피내 전달, 근육내 전달, 결장 전달, 직장 전달, 또는 복막내 전달을 포함하지만 이들에 한정되지 않는다. 본원에서 설명된 작용제 및 방법과 함께 임의선택적으로 이용되는 투여 기술은 가령, Goodman and Gilman, The Pharmacological Basis of Therapeutics, 최신판; Pergamon; 및 Remington's, Pharmaceutical Sciences (최신판), Mack Publishing Co., Easton, PA에서 논의된 바와 것들을 포함한다.
III. TIGIT에 대항하는 항체
한 양상에서, 인간 TIGIT (Ig 및 ITIM 도메인을 갖는 T-세포 면역수용체)에 결합하는 항체 및 항체의 항원 결합 부분이 제공된다. 본원에서 설명된 바와 같이, 일부 구체예에서, 항-TIGIT 항체는 TIGIT 및 리간드 CD155와 CD112 중에서 한 가지 또는 둘 모두 사이의 상호작용을 저해한다. 일부 구체예에서, 항-TIGIT 항체는 기능적 생물학적 검정에서 TIGIT 및 CD155 사이의 상호작용을 저해하고, CD155-CD226 신호전달이 발생하도록 허용한다. 일부 구체예에서, 항-TIGIT 항체는 항-PD-1 작용제 (가령, 항-PD-1 항체) 또는 항-PD-L1 작용제 (가령, 항-PD-L1 항체)와의 상승작용을 전시한다.
항-TIGIT 항체의 특징
일부 구체예에서, 항-TIGIT 항체는 인간 TIGIT 단백질 (서열 번호: 218) 또는 이의 부분에 높은 친화성으로 결합한다. 일부 구체예에서, 상기 항체는 인간 TIGIT에 대해 5 nM보다 적은, 1 nM보다 적은, 500 pM보다 적은, 250 pM보다 적은, 150 pM보다 적은, 100 pM보다 적은, 50 pM보다 적은, 40 pM보다 적은, 30 pM보다 적은, 20 pM보다 적은, 또는 약 10 pM보다 적은 결합 친화성 (KD)을 갖는다. 일부 구체예에서, 상기 항체는 인간 TIGIT에 대해 50 pM보다 적은 결합 친화성 (KD)을 갖는다. 일부 구체예에서, 상기 항체는 인간 TIGIT에 대해 약 1 pM 내지 약 5 nM, 예를 들면, 약 1 pM 내지 약 1 nM, 약 1 pM 내지 약 500 pM, 약 5 pM 내지 약 250 pM, 또는 약 10 pM 내지 약 100 pM의 범위에서 KD를 갖는다.
일부 구체예에서, 인간 TIGIT에 높은 친화성으로 결합하는 것에 더하여, 항-TIGIT 항체는 시노몰구스 원숭이 ("cyno") TIGIT (가령, 서열 번호: 219의 서열을 갖는 cyno TIGIT 단백질) 및/또는 생쥐 TIGIT (가령, 서열 번호: 220의 서열을 갖는 생쥐 TIGIT 단백질)와 교차반응성을 전시한다. 일부 구체예에서, 항-TIGIT 항체는 생쥐 TIGIT (가령, 서열 번호: 220의 서열을 갖는 생쥐 TIGIT)에 100 nM 또는 그 이하의 결합 친화성 (KD)으로 결합한다. 일부 구체예에서, 항-TIGIT 항체는 인간 TIGIT에 5 nM 또는 그 이하의 KD로 결합하고, 그리고 생쥐 TIGIT와 100 nM 또는 그 이하의 KD로 교차반응한다. 일부 구체예에서, 인간 TIGIT에 결합하는 항-TIGIT 항체는 또한, 시노몰구스 원숭이 TIGIT 및 생쥐 TIGIT 둘 모두와 교차반응성을 전시한다.
일부 구체예에서, 항체 교차반응성은 세포 (가령, 인간 TIGIT, cyno TIGIT 또는 생쥐 TIGIT를 발현하는 세포주, 또는 TIGIT를 내생적으로 발현하는 일차 세포, 예를 들면, 인간 TIGIT, cyno TIGIT 또는 생쥐 TIGIT를 내생적으로 발현하는 일차 T 세포) 상에서 발현되는 TIGIT에 대한 항-TIGIT 항체의 특이적 결합을 검출함으로써 결정된다. 일부 구체예에서, 항체 결합 및 항체 교차반응성은 정제된 또는 재조합 TIGIT (가령, 정제된 또는 재조합 인간 TIGIT, 정제된 또는 재조합 cyno TIGIT, 또는 정제된 또는 재조합 생쥐 TIGIT) 또는 TIGIT을 포함하는 키메라 단백질 (가령, 인간 TIGIT, cyno TIGIT 또는 생쥐 TIGIT를 포함하는 Fc-융합 단백질, 또는 인간 TIGIT, cyno TIGIT 또는 생쥐 TIGIT를 포함하는 His-태깅된 단백질)에 대한 항-TIGIT 항체의 특이적 결합을 검출함으로써 결정된다.
결합 친화성, 결합 동역학 및 교차반응성을 분석하기 위한 방법은 당해 분야에서 공지된다. 가령, Ernst et al., Determination of Equilibrium Dissociation Constants, Therapeutic Monoclonal Antibodies (Wiley & Sons ed. 2009)를 참조한다. 이들 방법은 고체상 결합 검정 (가령, ELISA 검정), 면역침전, 표면 플라스몬 공명 (SPR, 예를 들면, Biacore™ (GE Healthcare, Piscataway, NJ)), 역학적 배제 검정 (가령, KinExA®), 유세포분석법, 형광-활성화된 세포 분류 (FACS), 생물층 간섭측정 (가령, Octet™ (Fort
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Bio, Inc., Menlo Park, CA)), 그리고 웨스턴 블롯 분석을 포함하지만 이들에 한정되지 않는다. SPR 기술은 가령, Hahnfeld et al. Determination of Kinetic Data Using SPR Biosensors, Molecular Diagnosis of Infectious Diseases (2004)에서 리뷰된다. 전형적인 SPR 실험에서, 하나의 반응물 (표적 또는 표적화 작용제)이 흐름 셀 내에 SPR-활성, 금-코팅된 유리 슬라이드 위에 고정되고, 그리고 다른 반응물을 내포하는 표본이 상기 표면을 교차하여 유동하도록 도입된다. 소정의 파장의 광이 표면 위에 비춰질 때, 금의 광학적 반사율에 대한 변화는 결합 및 결합의 동역학을 지시한다. 일부 구체예에서, 역학적 배제 검정이 친화성을 결정하는데 이용된다. 이러한 기술은 가령, Darling et al., Assay and Drug Development Technologies Vol. 2, number 6 647-657 (2004)에서 설명된다. 일부 구체예에서, 생물층 간섭측정 검정이 친화성을 결정하는데 이용된다. 이러한 기술은 가령, Wilson et al., Biochemistry and Molecular Biology Education, 38:400-407 (2010); Dysinger et al., J. Immunol. Methods, 379:30-41 (2012)에서 설명된다.
일부 구체예에서, 본 발명의 항-TIGIT 항체 및 이들의 항원 결합 부분은 TIGIT 및 리간드 CD155 사이의 상호작용을 저해한다. 일부 구체예에서, 항-TIGIT 항체 및 이들의 항원 결합 부분은 TIGIT 및 리간드 CD112 사이의 상호작용을 저해한다. 일부 구체예에서, 항-TIGIT 항체 및 이들의 항원 결합 부분은 TIGIT 및 리간드 CD155와 CD112의 양쪽 모두 사이의 상호작용을 저해한다.
일부 구체예에서, TIGIT 및 CD155 및/또는 CD112 사이의 상호작용을 저해하는 항-TIGIT 항체의 능력은 TIGIT 및 CD155 또는 CD112 사이의 물리적 상호작용이 결합 검정에서 감소하는 지를 계측함으로써 평가된다. 일부 구체예에서, 결합 검정은 경쟁적 결합 검정이다. 상기 검정은 다양한 형식, 예를 들면, 하지만 제한 없이 ELISA 검정, 유세포분석법, 표면 플라스몬 공명 (SPR) 검정 (가령, Biacore™), 또는 생물층 간섭측정 (가령, ForteBio Octet™)에서 수행될 수 있다. 가령, Duff et al., Biochem J., 2009, 419:577-584; Dysinger et al., J. Immunol. Methods, 379:30-41 (2012); 및 Estep et al, Mabs, 2013, 5:270-278을 참조한다.
일부 구체예에서, 항-TIGIT 항체는 기능적 생물학적 검정에서, 예를 들면, TIGIT/CD155 상호작용의 저해가 세포에서 CD155-CD226 신호전달의 활성화 (가령, 하류 리포터의 활성화를 통해)를 계측함으로써 평가되는 기능적 세포 검정에서 TIGIT 및 CD155 사이의 상호작용을 저해한다. 무제한의 예시적인 기능적 세포 검정은 아래의 실시예 섹션에서 설명된다. 이러한 예시적인 기능적 검정에서, 루시페라아제 발현은 TCR 포용 및 CD155-CD226으로부터 동시자극성 신호를 필요로 한다. 첫 번째 세포 ("T 작동체 세포"로서 또한 지칭됨)는 세포 표면상에서 TCR 복합체, TIGIT 및 CD226을 발현하고, 그리고 루시페라아제 유전자를 내포한다. 두 번째 세포 ("인공 항원 제시 세포"로서 또한 지칭됨)는 TCR 활성인자 및 CD155를 발현한다. 항-TIGIT 항체의 부재에서 이들 세포의 공동배양은 TIGIT-CD155 상호작용을 유발하는데, 이것은 CD155-CD226에 의한 상기 작동체 세포의 동시자극을 저해하여, 상기 작동체 세포에 의한 루시페라아제의 발현을 방지한다. TIGIT 및 CD155 사이의 상호작용을 저해하는 항-TIGIT 항체의 존재에서, CD155 및 CD226은 상호작용하고, 그리고 첫 번째 세포에서 루시페라아제 발현을 주동하는 동시자극성 신호를 발생시킬 수 있다. 이런 기능적 세포 검정은 당해 분야, 예를 들면, Cong et al., Genetic Engineering and Biotechnology News, 2015, 35(10):16-17에서 설명되고, 그리고 또한, 상업적으로 가용하다 (가령, TIGIT/CD155 차단 생물학적 검정 키트, Promega Corp., Madison, WI). 일부 구체예에서, TIGIT 및 CD155 사이의 상호작용을 저해하는 항-TIGIT 항체는 CD155-CD226 신호전달의 활성화의 수준 또는 양 (가령, 세포 검정, 예를 들면, TIGIT/CD155 차단 생물학적 검정 키트에서 계측될 때)을 항-TIGIT 항체의 부재에서 CD155-CD226 신호전달의 수준 또는 양과 비교하여, 최소한 10%, 최소한 20%, 최소한 30%, 최소한 40%, 최소한 50%, 최소한 60%, 최소한 70%, 최소한 80%, 최소한 90%, 또는 그 이상 증가시킨다. 일부 구체예에서, TIGIT 및 CD155 사이의 상호작용을 저해하는 항-TIGIT 항체는 CD155-CD226 신호전달의 활성화의 수준 또는 양 (가령, 세포 검정, 예를 들면, TIGIT/CD155 차단 생물학적 검정 키트에서 계측될 때)을 항-TIGIT 항체의 부재에서 CD155-CD226 신호전달의 수준 또는 양과 비교하여, 최소한 약 1.2-배, 최소한 약 1.5-배, 최소한 약 2-배, 최소한 약 3-배, 최소한 약 4-배, 최소한 약 5-배, 최소한 약 6-배, 최소한 약 7-배, 최소한 약 8-배, 최소한 약 9-배, 최소한 약 10-배 또는 그 이상 증가시킨다.
일부 구체예에서, 인간 TIGIT에 결합하는 (그리고, 시노몰구스 원숭이 및/또는 생쥐 TIGIT와 교차반응성을 임의선택적으로 전시하고 및/또는 TIGIT 및 CD155 및/또는 CD112 사이의 상호작용을 임의선택적으로 저해하는) 항-TIGIT 항체는 항-PD-1 작용제 (가령, 항-PD-1 항체)와의 상승작용을 전시한다. 일부 구체예에서, 항-TIGIT 항체는 항-PD-1 작용제 (가령, 항-PD-1 항체)의 효과를 최소한 약 1.2-배, 최소한 약 1.5-배, 최소한 약 2-배, 최소한 약 3-배, 최소한 약 4-배, 최소한 약 5-배, 최소한 약 6-배, 최소한 약 7-배, 최소한 약 8-배, 최소한 약 9-배, 최소한 약 10-배 또는 그 이상 증강한다.
일부 구체예에서, 항-TIGIT 항체는 기능적 생물학적 검정, 예를 들면, TIGIT 신호전달의 저해 및 PD-1 신호전달의 저해가 작동체 세포에서 신호전달의 활성화를 계측함으로써 평가되는 기능적 세포 검정에서 항-PD-1 작용제 (가령, 항-PD-1 항체)와의 상승작용을 전시한다. 무제한의 예시적인 기능적 세포 검정은 아래의 실시예 섹션에서 설명된다. 이러한 예시적인 기능적 검정에서, 첫 번째 세포 ("T 작동체 세포"로서 또한 지칭됨)는 세포 표면상에서 TCR 복합체, TIGIT, CD226 및 PD-1을 발현하고, 그리고 루시페라아제 유전자를 내포한다. 두 번째 세포 ("인공 항원 제시 세포"로서 또한 지칭됨)는 TCR 활성인자, CD155 및 PD-L1을 발현한다. 상기 작동체 세포에 의한 루시페라아제 유전자의 발현은 (1) TIGIT-CD155 상호작용의 차단, 따라서 CD155-CD226 상호작용 및 상기 작동체 세포에 의한 루시페라아제 발현의 차후 동시자극의 허용, 또는 (2) PD-1/PD-L1 상호작용의 차단, 따라서 상기 작동체 세포에 의한 루시페라아제 발현의 저해의 완화 중에서 한 가지 또는 둘 모두에 의해 활성화된다. 항-TIGIT 항체가 항-PD-1 작용제 또는 항-PD-L1 작용제와의 상승작용을 전시하는 지를 결정하기 위해, 항-TIGIT 항체 및 항-PD-1 작용제 또는 항-PD-L1 작용제의 부재 또는 존재에서 루시페라아제 발현의 수준이 계측되고 정량될 수 있다. 이런 기능적 세포 검정은 당해 분야 (가령, Cong et al., Genetic Engineering and Biotechnology News, 2015, 35(10):16-17)에서 설명되고, 그리고 또한, 상업적으로 가용하다 (가령, PD-1/TIGIT 조합 생물학적 검정 키트, Promega Corp., Madison, WI).
일부 구체예에서, 항-TIGIT 항체의 효력뿐만 아니라 항-TIGIT 항체가 항-PD-1 작용제 (가령, 항-PD-1 항체) 또는 항-PD-L1 작용제 (가령, 항-PD-L1 항체)와 상승적으로 저해하는 지의 여부는 생체내 모형, 예를 들면, 생체내 종양 모형을 이용하여 계측될 수 있다. 가령, 본원에서 설명된 바와 같은 항-TIGIT 항체의 효력, 또는 항-PD-1 작용제 또는 항-PD-L1 작용제와 조합으로 투여될 때 본원에서 설명된 바와 같은 항-TIGIT 항체의 효력은 동계 생쥐 종양 모형을 이용하여 평가될 수 있다. 적합한 동계 종양 모형은 당해 분야에서 설명된다. 가령, Rios-Doria et al., Neoplasia, 2015, 17:661-670; 및 Moynihan et al., Nature Medicine, 2016, doi:10.1038/nm.4200을 참조한다. 일부 구체예에서, 항-TIGIT 항체는 생체내 모형에서 종양의 크기 또는 종양의 전체 숫자를 대조 또는 기준값과 비교하여 (가령, 치료되지 않은 대조에서 종양 크기 또는 종양의 전체 숫자와 비교하여), 최소한 10%, 최소한 20%, 최소한 30%, 최소한 40%, 최소한 50%, 최소한 60%, 최소한 70%, 최소한 80%, 최소한 90% 또는 그 이상 감소시킨다.
일부 구체예에서, 항-TIGIT 항체는 서열 번호: 218을 참고로 하여 넘버링될 때, 아미노산 위치 81 및 82 중에서 하나 또는 둘 모두를 포함하는 인간 TIGIT의 에피토프를 인식한다. 일부 구체예에서, 항-TIGIT 항체는 위치 81에서 Phe를 포함하는 에피토프를 인식한다. 일부 구체예에서, 항-TIGIT 항체는 위치 82에서 Lys 또는 Ser을 포함하는 에피토프를 인식한다. 일부 구체예에서, 항-TIGIT 항체는 위치 81에서 Phe 및 위치 82에서 Lys를 포함하는 에피토프를 인식한다. 일부 구체예에서, 항-TIGIT 항체는 위치 81에서 Phe 및 위치 82에서 Ser을 포함하는 에피토프를 인식한다.
일부 구체예에서, 항-TIGIT 항체는 아미노산 위치 81 및 82 중에서 하나 또는 둘 모두를 포함하는 선형 에피토프 (가령, 위치 81에서 Phe 및 위치 82에서 Lys 또는 Ser을 포함하는 불연속적 에피토프)를 인식한다. 일부 구체예에서, 항-TIGIT 항체는 아미노산 위치 81 및 82 중에서 하나 또는 둘 모두를 포함하는 불연속적 에피토프 (가령, 위치 81에서 Phe 및 위치 82에서 Lys 또는 Ser을 포함하는 불연속적 에피토프)를 인식한다.
일부 구체예에서, 항-TIGIT 항체는 아미노산 위치 51, 52, 53, 54, 55, 73, 74, 75, 76, 77, 79, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 또는 93 중에서 하나 또는 그 이상 (가령, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 12, 13, 14, 15개 또는 그 이상)을 더욱 포함하는 인간 TIGIT 상에서 에피토프에 결합한다. 일부 구체예에서, 항-TIGIT 항체는 하기 중에서 하나 또는 그 이상 (가령, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 12, 13, 14, 15개 또는 그 이상)을 더욱 포함하는 인간 TIGIT 상에서 에피토프에 결합한다: 위치 51에서 Thr, 위치 52에서 Ala, 위치 53에서 Glu 또는 Gln, 위치 54에서 Val, 위치 55에서 Thr, 위치 73에서 Leu, 위치 74에서 Gly, 위치 75에서 Trp, 위치 76에서 His, 위치 77에서 Val 또는 Ile, 위치 79에서 Ser 또는 Pro, 위치 83에서 Asp, 위치 84에서 Arg, 위치 85에서 Val, 위치 86에서 Val 또는 Ala, 위치 87에서 Pro, 위치 88에서 Gly, 위치 89에서 Pro, 위치 90에서 Ser 또는 Gly, 위치 91에서 Leu, 위치 92에서 Gly, 또는 위치 93에서 Leu. 일부 구체예에서, 항-TIGIT 항체는 아미노산 잔기 Thr51, Ala52, Gln53, Val54, Thr55, Leu73, Gly74, Trp75, His76, Ile77, Pro79, Asp83, Arg84, Val85, Ala86, Pro87, Gly88, Pro89, Gly90, Leu91, Gly92 및 Leu93 중에서 하나 또는 그 이상 (가령, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 12, 13, 14, 15개 또는 그 이상)을 더욱 포함하는 인간 TIGIT 상에서 에피토프에 결합한다.
일부 구체예에서, 항-TIGIT 항체는 위치 81에서 Phe 및 위치 82에서 Lys 또는 Ser을 포함하고, 그리고 위치 51에서 Thr, 위치 52에서 Ala, 위치 53에서 Glu 또는 Gln, 위치 54에서 Val 및/또는 위치 55에서 Thr을 더욱 포함하는 에피토프를 인식한다. 일부 구체예에서, 항-TIGIT 항체는 위치 81에서 Phe 및 위치 82에서 Lys 또는 Ser을 포함하고, 그리고 위치 74에서 Gly, 위치 75에서 Trp, 위치 76에서 His 및/또는 위치 77에서 Val 또는 Ile를 더욱 포함하는 에피토프를 인식한다. 일부 구체예에서, 항-TIGIT 항체는 위치 81에서 Phe 및 위치 82에서 Lys 또는 Ser을 포함하고, 그리고 위치 87에서 Pro, 위치 88에서 Gly, 위치 89에서 Pro, 위치 90에서 Ser 또는 Gly, 위치 91에서 Leu, 위치 92에서 Gly 및/또는 위치 93에서 Leu를 더욱 포함하는 에피토프를 인식한다. 일부 구체예에서, 항-TIGIT 항체는 아미노산 잔기 Thr51, Ala52, Gln53, Val54, Thr55, Gly74, Trp75, His76, Ile77, Phe81, Lys82, Pro87, Gly88, Pro89, Gly90, Leu91, Gly92 및 Leu93을 포함하는 에피토프를 인식한다.
일부 구체예에서, 항-TIGIT 항체는 위치 81에서 Phe 및 위치 82에서 Lys 또는 Ser을 포함하고, 그리고 위치 52에서 Ala 및/또는 위치 53에서 Glu 또는 Gln을 더욱 포함하는 에피토프를 인식한다. 일부 구체예에서, 항-TIGIT 항체는 위치 81에서 Phe 및 위치 82에서 Lys 또는 Ser을 포함하고, 그리고 위치 73에서 Leu, 위치 74에서 Gly 및/또는 위치 75에서 Trp를 더욱 포함하는 에피토프를 인식한다. 일부 구체예에서, 항-TIGIT 항체는 위치 81에서 Phe 및 위치 82에서 Lys 또는 Ser을 포함하고, 그리고 위치 83에서 Asp, 위치 84에서 Arg, 위치 85에서 Val 및/또는 위치 86에서 Val 또는 Ala를 더욱 포함하는 에피토프를 인식한다. 일부 구체예에서, 항-TIGIT 항체는 아미노산 잔기 Ala52, Gln53, Leu73, Gly74, Trp75, Pro79, Phe81, Lys82, Asp83, Arg84, Val85 및 Ala86을 포함하는 에피토프를 인식한다.
일부 구체예에서, 항-TIGIT 항체는 서열 ICNADLGWHISPSFK (서열 번호: 258)를 포함하는 인간 TIGIT의 에피토프를 인식하는데, 이것은 인간 TIGIT (서열 번호: 218)의 잔기 68-82에 상응한다. 일부 구체예에서, 항-TIGIT 항체는 서열 ICNADLGWHISPSFK (서열 번호: 258)로 구성되는 인간 TIGIT의 에피토프를 인식한다.
항-TIGIT 항체 서열
일부 구체예에서, 인간 TIGIT에 결합하고, 그리고 시노몰구스 원숭이 TIGIT 및/또는 생쥐 TIGIT와 교차반응성을 임의선택적으로 전시하는 항-TIGIT 항체는 본원에서 설명된 하기의 항체 중에서 어느 것으로부터 유래된 경쇄 서열 또는 이의 부분 및/또는 중쇄 서열 또는 이의 부분을 포함한다: 클론 2, 클론 2C, 클론 3, 클론 5, 클론 13, 클론 13A, 클론 13B, 클론 13C, 클론 13D, 클론 14, 클론 16, 클론 16C, 클론 16D, 클론 16E, 클론 18, 클론 21, 클론 22, 클론 25, 클론 25A, 클론 25B, 클론 25C, 클론 25D, 클론 25E, 클론 27, 또는 클론 54. 항-TIGIT 항체 클론 2, 클론 2C, 클론 3, 클론 5, 클론 13, 클론 13A, 클론 13B, 클론 13C, 클론 13D, 클론 14, 클론 16, 클론 16C, 클론 16D, 클론 16E, 클론 18, 클론 21, 클론 22, 클론 25, 클론 25A, 클론 25B, 클론 25C, 클론 25D, 클론 25E, 클론 27 및 클론 54의 CDR, 경쇄 가변 도메인 (VL) 및 중쇄 가변 도메인 (VH)의 아미노산 서열은 아래의 표 3에서 진술된다.
일부 구체예에서, 항-TIGIT 항체는 서열 번호: 1, 서열 번호: 19, 서열 번호: 37, 서열 번호: 55, 서열 번호: 73, 서열 번호: 91, 서열 번호: 109, 서열 번호: 127, 서열 번호: 145, 서열 번호: 163, 서열 번호: 181, 서열 번호: 199, 서열 번호: 245, 서열 번호: 246, 서열 번호: 247, 서열 번호: 248, 서열 번호: 249, 서열 번호: 250, 서열 번호: 251, 서열 번호: 252, 서열 번호: 253, 서열 번호: 254, 서열 번호: 255, 서열 번호: 256, 또는 서열 번호: 257에 최소한 90% 서열 동일성 (가령, 최소한 91%, 최소한 92%, 최소한 93%, 최소한 94%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98%, 또는 최소한 99% 서열 동일성)을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 (VH)을 포함한다. 일부 구체예에서, 항-TIGIT 항체는 서열 번호: 1, 서열 번호: 19, 서열 번호: 37, 서열 번호: 55, 서열 번호: 73, 서열 번호: 91, 서열 번호: 109, 서열 번호: 127, 서열 번호: 145, 서열 번호: 163, 서열 번호: 181, 서열 번호: 199, 서열 번호: 245, 서열 번호: 246, 서열 번호: 247, 서열 번호: 248, 서열 번호: 249, 서열 번호: 250, 서열 번호: 251, 서열 번호: 252, 서열 번호: 253, 서열 번호: 254, 서열 번호: 255, 서열 번호: 256, 또는 서열 번호: 257의 아미노산 서열을 포함하는 VH를 포함한다. 일부 구체예에서, 참고 서열 (가령, 서열 번호: 1, 서열 번호: 19, 서열 번호: 37, 서열 번호: 55, 서열 번호: 73, 서열 번호: 91, 서열 번호: 109, 서열 번호: 127, 서열 번호: 145, 서열 번호: 163, 서열 번호: 181, 서열 번호: 199, 서열 번호: 245, 서열 번호: 246, 서열 번호: 247, 서열 번호: 248, 서열 번호: 249, 서열 번호: 250, 서열 번호: 251, 서열 번호: 252, 서열 번호: 253, 서열 번호: 254, 서열 번호: 255, 서열 번호: 256, 또는 서열 번호: 257)에 최소한 90% 서열 동일성을 갖는 VH 서열은 참고 서열에 비하여 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개 또는 그 이상의 치환 (가령, 보존성 치환), 삽입 또는 결실을 내포하지만, 인간 TIGIT에 결합하는 능력을 유지하고, 그리고 TIGIT에 CD155 및/또는 CD112의 결합을 차단하는 능력을 임의선택적으로 유지한다.
일부 구체예에서, 항-TIGIT 항체는 서열 번호: 10, 서열 번호: 28, 서열 번호: 46, 서열 번호: 64, 서열 번호: 82, 서열 번호: 100, 서열 번호: 118, 서열 번호: 136, 서열 번호: 154, 서열 번호: 172, 서열 번호: 190, 또는 서열 번호: 208에 최소한 90% 서열 동일성 (가령, 최소한 91%, 최소한 92%, 최소한 93%, 최소한 94%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98%, 또는 최소한 99% 서열 동일성)을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역 (VL)을 포함한다. 일부 구체예에서, 항-TIGIT 항체는 서열 번호: 10, 서열 번호: 28, 서열 번호: 46, 서열 번호: 64, 서열 번호: 82, 서열 번호: 100, 서열 번호: 118, 서열 번호: 136, 서열 번호: 154, 서열 번호: 172, 서열 번호: 190, 또는 서열 번호: 208의 아미노산 서열을 포함하는 VL을 포함한다. 일부 구체예에서, 참고 서열 (가령, 서열 번호: 10, 서열 번호: 28, 서열 번호: 46, 서열 번호: 64, 서열 번호: 82, 서열 번호: 100, 서열 번호: 118, 서열 번호: 136, 서열 번호: 154, 서열 번호: 172, 서열 번호: 190, 또는 서열 번호: 208)에 최소한 90% 서열 동일성을 갖는 VL 서열은 참고 서열에 비하여 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개 또는 그 이상의 치환 (가령, 보존성 치환), 삽입 또는 결실을 내포하지만, 인간 TIGIT에 결합하는 능력을 유지하고, 그리고 TIGIT에 CD155 및/또는 CD112의 결합을 차단하는 능력을 임의선택적으로 유지한다.
일부 구체예에서, 항-TIGIT 항체는 서열 번호: 1, 서열 번호: 19, 서열 번호: 37, 서열 번호: 55, 서열 번호: 73, 서열 번호: 91, 서열 번호: 109, 서열 번호: 127, 서열 번호: 145, 서열 번호: 163, 서열 번호: 181, 서열 번호: 199, 서열 번호: 245, 서열 번호: 246, 서열 번호: 247, 서열 번호: 248, 서열 번호: 249, 서열 번호: 250, 서열 번호: 251, 서열 번호: 252, 서열 번호: 253, 서열 번호: 254, 서열 번호: 255, 서열 번호: 256, 또는 서열 번호: 257에 최소한 90% 서열 동일성 (가령, 최소한 91%, 최소한 92%, 최소한 93%, 최소한 94%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98%, 또는 최소한 99% 서열 동일성)을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역을 포함하고, 그리고 서열 번호: 10, 서열 번호: 28, 서열 번호: 46, 서열 번호: 64, 서열 번호: 82, 서열 번호: 100, 서열 번호: 118, 서열 번호: 136, 서열 번호: 154, 서열 번호: 172, 서열 번호: 190, 또는 서열 번호: 208에 최소한 90% 서열 동일성 (가령, 최소한 91%, 최소한 92%, 최소한 93%, 최소한 94%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98%, 또는 최소한 99% 서열 동일성)을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 더욱 포함한다. 일부 구체예에서, 항-TIGIT 항체는 서열 번호: 1, 서열 번호: 19, 서열 번호: 37, 서열 번호: 55, 서열 번호: 73, 서열 번호: 91, 서열 번호: 109, 서열 번호: 127, 서열 번호: 145, 서열 번호: 163, 서열 번호: 181, 서열 번호: 199, 서열 번호: 245, 서열 번호: 246, 서열 번호: 247, 서열 번호: 248, 서열 번호: 249, 서열 번호: 250, 서열 번호: 251, 서열 번호: 252, 서열 번호: 253, 서열 번호: 254, 서열 번호: 255, 서열 번호: 256, 또는 서열 번호: 257의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역을 포함하고, 그리고 서열 번호: 10, 서열 번호: 28, 서열 번호: 46, 서열 번호: 64, 서열 번호: 82, 서열 번호: 100, 서열 번호: 118, 서열 번호: 136, 서열 번호: 154, 서열 번호: 172, 서열 번호: 190, 또는 서열 번호: 208의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 더욱 포함한다.
일부 구체예에서, 항-TIGIT 항체는 하기를 포함한다:
(a) 서열 번호: 1 또는 서열 번호: 245에 최소한 90% 서열 동일성 (가령, 최소한 91%, 최소한 92%, 최소한 93%, 최소한 94%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98%, 또는 최소한 99% 서열 동일성)을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열 번호: 10에 최소한 90% 서열 동일성 (가령, 최소한 91%, 최소한 92%, 최소한 93%, 최소한 94%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98%, 또는 최소한 99% 서열 동일성)을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VL;
(b) 서열 번호: 19에 최소한 90% 서열 동일성 (가령, 최소한 91%, 최소한 92%, 최소한 93%, 최소한 94%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98%, 또는 최소한 99% 서열 동일성)을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열 번호: 28에 최소한 90% 서열 동일성 (가령, 최소한 91%, 최소한 92%, 최소한 93%, 최소한 94%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98%, 또는 최소한 99% 서열 동일성)을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VL;
(c) 서열 번호: 37에 최소한 90% 서열 동일성 (가령, 최소한 91%, 최소한 92%, 최소한 93%, 최소한 94%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98%, 또는 최소한 99% 서열 동일성)을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열 번호: 46에 최소한 90% 서열 동일성 (가령, 최소한 91%, 최소한 92%, 최소한 93%, 최소한 94%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98%, 또는 최소한 99% 서열 동일성)을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VL;
(d) 서열 번호: 55, 서열 번호: 246, 서열 번호: 247, 서열 번호: 248, 또는 서열 번호: 249 중에서 한 가지에 최소한 90% 서열 동일성 (가령, 최소한 91%, 최소한 92%, 최소한 93%, 최소한 94%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98%, 또는 최소한 99% 서열 동일성)을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열 번호: 64에 최소한 90% 서열 동일성 (가령, 최소한 91%, 최소한 92%, 최소한 93%, 최소한 94%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98%, 또는 최소한 99% 서열 동일성)을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VL;
(e) 서열 번호: 73에 최소한 90% 서열 동일성 (가령, 최소한 91%, 최소한 92%, 최소한 93%, 최소한 94%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98%, 또는 최소한 99% 서열 동일성)을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열 번호: 82에 최소한 90% 서열 동일성 (가령, 최소한 91%, 최소한 92%, 최소한 93%, 최소한 94%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98%, 또는 최소한 99% 서열 동일성)을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VL;
(f) 서열 번호: 91, 서열 번호: 250, 서열 번호: 251, 또는 서열 번호: 252 중에서 한 가지에 최소한 90% 서열 동일성 (가령, 최소한 91%, 최소한 92%, 최소한 93%, 최소한 94%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98%, 또는 최소한 99% 서열 동일성)을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열 번호: 100에 최소한 90% 서열 동일성 (가령, 최소한 91%, 최소한 92%, 최소한 93%, 최소한 94%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98%, 또는 최소한 99% 서열 동일성)을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VL;
(g) 서열 번호: 109에 최소한 90% 서열 동일성 (가령, 최소한 91%, 최소한 92%, 최소한 93%, 최소한 94%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98%, 또는 최소한 99% 서열 동일성)을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열 번호: 118에 최소한 90% 서열 동일성 (가령, 최소한 91%, 최소한 92%, 최소한 93%, 최소한 94%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98%, 또는 최소한 99% 서열 동일성)을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VL;
(h) 서열 번호: 127에 최소한 90% 서열 동일성 (가령, 최소한 91%, 최소한 92%, 최소한 93%, 최소한 94%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98%, 또는 최소한 99% 서열 동일성)을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열 번호: 136에 최소한 90% 서열 동일성 (가령, 최소한 91%, 최소한 92%, 최소한 93%, 최소한 94%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98%, 또는 최소한 99% 서열 동일성)을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VL;
(i) 서열 번호: 145에 최소한 90% 서열 동일성 (가령, 최소한 91%, 최소한 92%, 최소한 93%, 최소한 94%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98%, 또는 최소한 99% 서열 동일성)을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열 번호: 154에 최소한 90% 서열 동일성 (가령, 최소한 91%, 최소한 92%, 최소한 93%, 최소한 94%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98%, 또는 최소한 99% 서열 동일성)을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VL;
(j) 서열 번호: 163, 서열 번호: 253, 서열 번호: 254, 서열 번호: 255, 서열 번호: 256, 또는 서열 번호: 257 중에서 한 가지에 최소한 90% 서열 동일성 (가령, 최소한 91%, 최소한 92%, 최소한 93%, 최소한 94%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98%, 또는 최소한 99% 서열 동일성)을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열 번호: 172에 최소한 90% 서열 동일성 (가령, 최소한 91%, 최소한 92%, 최소한 93%, 최소한 94%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98%, 또는 최소한 99% 서열 동일성)을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VL;
(k) 서열 번호: 181에 최소한 90% 서열 동일성 (가령, 최소한 91%, 최소한 92%, 최소한 93%, 최소한 94%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98%, 또는 최소한 99% 서열 동일성)을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열 번호: 190에 최소한 90% 서열 동일성 (가령, 최소한 91%, 최소한 92%, 최소한 93%, 최소한 94%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98%, 또는 최소한 99% 서열 동일성)을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VL; 또는
(l) 서열 번호: 199에 최소한 90% 서열 동일성 (가령, 최소한 91%, 최소한 92%, 최소한 93%, 최소한 94%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98%, 또는 최소한 99% 서열 동일성)을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열 번호: 208에 최소한 90% 서열 동일성 (가령, 최소한 91%, 최소한 92%, 최소한 93%, 최소한 94%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98%, 또는 최소한 99% 서열 동일성)을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VL.
일부 구체예에서, 항-TIGIT 항체는 하기를 포함한다:
(a) 서열 번호: 1의 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열 번호: 10의 아미노산 서열을 포함하는 VL;
(b) 서열 번호: 19의 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열 번호: 28의 아미노산 서열을 포함하는 VL;
(c) 서열 번호: 37의 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열 번호: 46의 아미노산 서열을 포함하는 VL;
(d) 서열 번호: 55의 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열 번호: 64의 아미노산 서열을 포함하는 VL;
(e) 서열 번호: 73의 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열 번호: 82의 아미노산 서열을 포함하는 VL;
(f) 서열 번호: 91의 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열 번호: 100의 아미노산 서열을 포함하는 VL;
(g) 서열 번호: 109의 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열 번호: 118의 아미노산 서열을 포함하는 VL;
(h) 서열 번호: 127의 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열 번호: 136의 아미노산 서열을 포함하는 VL;
(i) 서열 번호: 145의 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열 번호: 154의 아미노산 서열을 포함하는 VL;
(j) 서열 번호: 163의 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열 번호: 172의 아미노산 서열을 포함하는 VL;
(k) 서열 번호: 181의 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열 번호: 190의 아미노산 서열을 포함하는 VL;
(l) 서열 번호: 199의 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열 번호: 208의 아미노산 서열을 포함하는 VL; 또는
(m) 서열 번호: 245의 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열 번호: 10의 아미노산 서열을 포함하는 VL; 또는
(n) 서열 번호: 246의 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열 번호: 64의 아미노산 서열을 포함하는 VL; 또는
(o) 서열 번호: 247의 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열 번호: 64의 아미노산 서열을 포함하는 VL; 또는
(p) 서열 번호: 248의 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열 번호: 64의 아미노산 서열을 포함하는 VL;
(q) 서열 번호: 249의 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열 번호: 64의 아미노산 서열을 포함하는 VL; 또는
(r) 서열 번호: 250의 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열 번호: 100의 아미노산 서열을 포함하는 VL; 또는
(s) 서열 번호: 251의 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열 번호: 100의 아미노산 서열을 포함하는 VL; 또는
(t) 서열 번호: 252의 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열 번호: 100의 아미노산 서열을 포함하는 VL; 또는
(u) 서열 번호: 253의 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열 번호: 172의 아미노산 서열을 포함하는 VL; 또는
(v) 서열 번호: 254의 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열 번호: 172의 아미노산 서열을 포함하는 VL; 또는
(w) 서열 번호: 255의 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열 번호: 172의 아미노산 서열을 포함하는 VL; 또는
(x) 서열 번호: 256의 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열 번호: 172의 아미노산 서열을 포함하는 VL; 또는
(y) 서열 번호: 257의 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열 번호: 172의 아미노산 서열을 포함하는 VL.
일부 구체예에서, 항-TIGIT 항체는 하기 중에서 한 가지 또는 그 이상 (가령, 1가지, 2가지, 3가지, 4가지, 5가지 또는 그 이상)을 포함한다:
서열 번호: 4, 서열 번호: 22, 서열 번호: 40, 서열 번호: 58, 서열 번호: 76, 서열 번호: 94, 서열 번호: 112, 서열 번호: 130, 서열 번호: 148, 서열 번호: 166, 서열 번호: 184, 서열 번호: 202, 서열 번호: 221, 서열 번호: 224, 서열 번호: 226, 서열 번호: 231, 서열 번호: 233, 서열 번호: 239, 또는 서열 번호: 243 중에서 어느 것의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR1 서열;
서열 번호: 6, 서열 번호: 24, 서열 번호: 42, 서열 번호: 60, 서열 번호: 78, 서열 번호: 96, 서열 번호: 114, 서열 번호: 132, 서열 번호: 150, 서열 번호: 168, 서열 번호: 186, 서열 번호: 204, 서열 번호: 222, 서열 번호: 225, 서열 번호: 227, 서열 번호: 229, 서열 번호: 232, 서열 번호: 234, 서열 번호: 238, 또는 서열 번호: 240 중에서 어느 것의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR2 서열;
서열 번호: 8, 서열 번호: 26, 서열 번호: 44, 서열 번호: 62, 서열 번호: 80, 서열 번호: 98, 서열 번호: 116, 서열 번호: 134, 서열 번호: 152, 서열 번호: 170, 서열 번호: 188, 서열 번호: 206, 서열 번호: 223, 서열 번호: 228, 서열 번호: 230, 서열 번호: 235, 서열 번호: 236, 서열 번호: 237, 서열 번호: 241, 서열 번호: 242, 또는 서열 번호: 244 중에서 어느 것의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR3 서열;
서열 번호: 13, 서열 번호: 31, 서열 번호: 49, 서열 번호: 67, 서열 번호: 85, 서열 번호: 103, 서열 번호: 121, 서열 번호: 139, 서열 번호: 157, 서열 번호: 175, 서열 번호: 193, 또는 서열 번호: 211 중에서 어느 것의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR1 서열;
서열 번호: 15, 서열 번호: 33, 서열 번호: 51, 서열 번호: 69, 서열 번호: 87, 서열 번호: 105, 서열 번호: 123, 서열 번호: 141, 서열 번호: 159, 서열 번호: 177, 서열 번호: 195, 또는 서열 번호: 213 중에서 어느 것의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR2 서열; 및/또는
서열 번호: 17, 서열 번호: 35, 서열 번호: 53, 서열 번호: 71, 서열 번호: 89, 서열 번호: 107, 서열 번호: 125, 서열 번호: 143, 서열 번호: 161, 서열 번호: 179, 서열 번호: 197, 또는 서열 번호: 215 중에서 어느 것의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR3 서열.
일부 구체예에서, 항-TIGIT 항체는 서열 번호: 4, 서열 번호: 22, 서열 번호: 40, 서열 번호: 58, 서열 번호: 76, 서열 번호: 94, 서열 번호: 112, 서열 번호: 130, 서열 번호: 148, 서열 번호: 166, 서열 번호: 184, 서열 번호: 202, 서열 번호: 221, 서열 번호: 224, 서열 번호: 226, 서열 번호: 231, 서열 번호: 233, 서열 번호: 239, 또는 서열 번호: 243 중에서 어느 것의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR1 서열; 서열 번호: 6, 서열 번호: 24, 서열 번호: 42, 서열 번호: 60, 서열 번호: 78, 서열 번호: 96, 서열 번호: 114, 서열 번호: 132, 서열 번호: 150, 서열 번호: 168, 서열 번호: 186, 서열 번호: 204, 서열 번호: 222, 서열 번호: 225, 서열 번호: 227, 서열 번호: 229, 서열 번호: 232, 서열 번호: 234, 서열 번호: 238, 또는 서열 번호: 240 중에서 어느 것의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR2 서열; 및 서열 번호: 8, 서열 번호: 26, 서열 번호: 44, 서열 번호: 62, 서열 번호: 80, 서열 번호: 98, 서열 번호: 116, 서열 번호: 134, 서열 번호: 152, 서열 번호: 170, 서열 번호: 188, 서열 번호: 206, 서열 번호: 223, 서열 번호: 228, 서열 번호: 230, 서열 번호: 235, 서열 번호: 236, 서열 번호: 237, 서열 번호: 241, 서열 번호: 242, 또는 서열 번호: 244 중에서 어느 것의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR3 서열을 포함한다.
일부 구체예에서, 항-TIGIT 항체는 서열 번호: 13, 서열 번호: 31, 서열 번호: 49, 서열 번호: 67, 서열 번호: 85, 서열 번호: 103, 서열 번호: 121, 서열 번호: 139, 서열 번호: 157, 서열 번호: 175, 서열 번호: 193, 또는 서열 번호: 211 중에서 어느 것의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR1 서열; 서열 번호: 15, 서열 번호: 33, 서열 번호: 51, 서열 번호: 69, 서열 번호: 87, 서열 번호: 105, 서열 번호: 123, 서열 번호: 141, 서열 번호: 159, 서열 번호: 177, 서열 번호: 195, 또는 서열 번호: 213 중에서 어느 것의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR2 서열; 및 서열 번호: 17, 서열 번호: 35, 서열 번호: 53, 서열 번호: 71, 서열 번호: 89, 서열 번호: 107, 서열 번호: 125, 서열 번호: 143, 서열 번호: 161, 서열 번호: 179, 서열 번호: 197, 또는 서열 번호: 215 중에서 어느 것의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR3 서열을 포함한다.
일부 구체예에서, 항-TIGIT 항체는 하기를 포함한다:
(i) 서열 번호: 4, 서열 번호: 22, 서열 번호: 40, 서열 번호: 58, 서열 번호: 76, 서열 번호: 94, 서열 번호: 112, 서열 번호: 130, 서열 번호: 148, 서열 번호: 166, 서열 번호: 184, 서열 번호: 202, 서열 번호: 221, 서열 번호: 224, 서열 번호: 226, 서열 번호: 231, 서열 번호: 233, 서열 번호: 239, 또는 서열 번호: 243 중에서 어느 것의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR1 서열; 및
(ii) 서열 번호: 6, 서열 번호: 24, 서열 번호: 42, 서열 번호: 60, 서열 번호: 78, 서열 번호: 96, 서열 번호: 114, 서열 번호: 132, 서열 번호: 150, 서열 번호: 168, 서열 번호: 186, 서열 번호: 204, 서열 번호: 222, 서열 번호: 225, 서열 번호: 227, 서열 번호: 229, 서열 번호: 232, 서열 번호: 234, 서열 번호: 238, 또는 서열 번호: 240 중에서 어느 것의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR2 서열; 및
(iii) 서열 번호: 8, 서열 번호: 26, 서열 번호: 44, 서열 번호: 62, 서열 번호: 80, 서열 번호: 98, 서열 번호: 116, 서열 번호: 134, 서열 번호: 152, 서열 번호: 170, 서열 번호: 188, 서열 번호: 206, 서열 번호: 223, 서열 번호: 228, 서열 번호: 230, 서열 번호: 235, 서열 번호: 236, 서열 번호: 237, 서열 번호: 241, 서열 번호: 242, 또는 서열 번호: 244 중에서 어느 것의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR3 서열; 및
(iv) 서열 번호: 13, 서열 번호: 31, 서열 번호: 49, 서열 번호: 67, 서열 번호: 85, 서열 번호: 103, 서열 번호: 121, 서열 번호: 139, 서열 번호: 157, 서열 번호: 175, 서열 번호: 193, 또는 서열 번호: 211 중에서 어느 것의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR1 서열; 및
(v) 서열 번호: 15, 서열 번호: 33, 서열 번호: 51, 서열 번호: 69, 서열 번호: 87, 서열 번호: 105, 서열 번호: 123, 서열 번호: 141, 서열 번호: 159, 서열 번호: 177, 서열 번호: 195, 또는 서열 번호: 213 중에서 어느 것의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR2 서열; 및
(vi) 서열 번호: 17, 서열 번호: 35, 서열 번호: 53, 서열 번호: 71, 서열 번호: 89, 서열 번호: 107, 서열 번호: 125, 서열 번호: 143, 서열 번호: 161, 서열 번호: 179, 서열 번호: 197, 또는 서열 번호: 215 중에서 어느 것의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR3 서열.
일부 구체예에서, 항-TIGIT 항체는 하기를 포함한다: (i) 서열 번호: 4 또는 서열 번호: 221의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR1 서열; (ii) 서열 번호: 6 또는 서열 번호: 222의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR2 서열; (iii) 서열 번호: 8 또는 서열 번호: 223의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR3 서열; (iv) 서열 번호: 13의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR1 서열; (v) 서열 번호: 15의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR2 서열; 및 (vi) 서열 번호: 17의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR3 서열.
일부 구체예에서, 항-TIGIT 항체는 하기를 포함한다: (i) 서열 번호: 58, 서열 번호: 224, 또는 서열 번호: 226 중에서 어느 것의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR1 서열; (ii) 서열 번호: 60, 서열 번호: 225, 서열 번호: 227, 또는 서열 번호: 229 중에서 어느 것의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR2 서열; (iii) 서열 번호: 62, 서열 번호: 228, 또는 서열 번호: 230 중에서 어느 것의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR3 서열; (iv) 서열 번호: 67의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR1 서열; (v) 서열 번호: 69의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR2 서열; 및 (vi) 서열 번호: 71의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR3 서열.
일부 구체예에서, 항-TIGIT 항체는 하기를 포함한다: (i) 서열 번호: 94, 서열 번호: 231, 또는 서열 번호: 233 중에서 어느 것의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR1 서열; (ii) 서열 번호: 96, 서열 번호: 232, 또는 서열 번호: 234 중에서 어느 것의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR2 서열; (iii) 서열 번호: 98, 서열 번호: 235, 서열 번호: 236, 또는 서열 번호: 237 중에서 어느 것의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR3 서열; (iv) 서열 번호: 103의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR1 서열; (v) 서열 번호: 105의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR2 서열; 및 (vi) 서열 번호: 107의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR3 서열.
일부 구체예에서, 항-TIGIT 항체는 하기를 포함한다: (i) 서열 번호: 166, 서열 번호: 239, 또는 서열 번호: 243 중에서 어느 것의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR1 서열; (ii) 서열 번호: 168, 서열 번호: 238, 또는 서열 번호: 240 중에서 어느 것의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR2 서열; (iii) 서열 번호: 170, 서열 번호: 241, 서열 번호: 242, 또는 서열 번호: 244 중에서 어느 것의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR3 서열; (iv) 서열 번호: 175의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR1 서열; (v) 서열 번호: 177의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR2 서열; 및 (vi) 서열 번호: 179의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR3 서열.
일부 구체예에서, 항-TIGIT 항체는 하기의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR1-3 및 경쇄 CDR1-3을 포함한다:
(a) 각각, 서열 번호: 4, 6, 8, 13, 15 및 17;
(b) 각각, 서열 번호: 22, 24, 26, 31, 33 및 35;
(c) 각각, 서열 번호: 40, 42, 44, 49, 51 및 53;
(d) 각각, 서열 번호: 58, 60, 62, 67, 69 및 71;
(e) 각각, 서열 번호: 76, 78, 80, 85, 87 및 89;
(f) 각각, 서열 번호: 94, 96, 98, 103, 105 및 107;
(g) 각각, 서열 번호: 112, 114, 116, 121, 123 및 125;
(h) 각각, 서열 번호: 130, 132, 134, 139, 141 및 143;
(i) 각각, 서열 번호: 148, 150, 152, 157, 159 및 161;
(j) 각각, 서열 번호: 166, 168, 170, 175, 177 및 179;
(k) 각각, 서열 번호: 184, 186, 188, 193, 195 및 197;
(l) 각각, 서열 번호: 202, 204, 206, 211, 213 및 215; 또는
(m) 각각, 서열 번호: 221, 222, 223, 13, 15 및 17; 또는
(n) 각각, 서열 번호: 224, 225, 62, 67, 69 및 71; 또는
(o) 각각, 서열 번호: 226, 227, 228, 67, 69 및 71; 또는
(p) 각각, 서열 번호: 224, 229, 230, 67, 69 및 71; 또는
(q) 각각, 서열 번호: 224, 227, 230, 67, 69 및 71; 또는
(r) 각각, 서열 번호: 231, 232, 235, 103, 105 및 107; 또는
(s) 각각, 서열 번호: 233, 234, 236, 103, 105 및 107; 또는
(t) 각각, 서열 번호: 233, 234, 237, 103, 105 및 107; 또는
(u) 각각, 서열 번호: 166, 238, 170, 175, 177 및 179; 또는
(v) 각각, 서열 번호: 239, 240, 170, 175, 177 및 179; 또는
(w) 각각, 서열 번호: 239, 240, 241, 175, 177 및 179; 또는
(x) 각각, 서열 번호: 239, 240, 242, 175, 177 및 179; 또는
(y) 각각, 서열 번호: 243, 168, 244, 175, 177 및 179
일부 구체예에서, 상기 항체는 프레임워크, 예를 들면, 인간 면역글로불린 프레임워크를 더욱 포함한다. 가령, 일부 구체예에서, 항체는 본원에서 설명된 바와 같은 CDR을 포함하고, 그리고 수용자 인간 프레임워크, 예를 들면, 인간 면역글로불린 프레임워크 또는 인간 공통 프레임워크를 더욱 포함한다. 인간 면역글로불린 프레임워크는 인간 항체의 부분일 수 있거나, 또는 하나 또는 그 이상의 내인성 프레임워크를 인간 프레임워크 영역(들)으로 대체함으로써 비인간 항체가 인간화될 수 있다. 인간화에 이용될 수 있는 인간 프레임워크 영역은 하기를 포함하지만 이들에 한정되지 않는다: "최고 적합" 방법을 이용하여 선별된 프레임워크 영역 (가령, Sims et al., J. Immunol. 151:2296 (1993)을 참조한다); 경쇄 또는 중쇄 가변 영역의 특정 하위군의 인간 항체의 공통 서열로부터 유래된 프레임워크 영역 (가령, Carter et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 89:4285 (1992); 및 Presta et al., J. Immunol., 151:2623 (1993)을 참조한다); 인간 성숙 (체성으로 돌연변이된) 프레임워크 영역 또는 인간 생식계열 프레임워크 영역 (가령, Almagro and Fransson, Front. Biosci. 13:1619-1633 (2008)을 참조한다); 및 FR 라이브러리를 선별하는 것으로부터 유래된 프레임워크 영역 (가령, Baca et al., J. Biol. Chem. 272:10678-10684 (1997) 및 Rosok et al., J. Biol. Chem. 271:22611-22618 (1996)을 참조한다). 프레임워크 서열은 생식계열 항체 유전자 서열을 포함하는 공개 DNA 데이터베이스 또는 공개된 참고문헌으로부터 획득될 수 있다. 가령, 인간 중쇄와 경쇄 가변 영역 유전자에 대한 생식계열 DNA 서열은 인간과 생쥐 서열에 대한 "VBASE2" 생식계열 가변 유전자 서열 데이터베이스에서 발견될 수 있다.
일부 구체예에서, 항-TIGIT 항체는 서열 번호: 3, 서열 번호: 5, 서열 번호: 7, 서열 번호: 9, 서열 번호: 21, 서열 번호: 23, 서열 번호: 25, 서열 번호: 27, 서열 번호: 39, 서열 번호: 41, 서열 번호: 43, 서열 번호: 45, 서열 번호: 57, 서열 번호: 59, 서열 번호: 61, 서열 번호: 63, 서열 번호: 75, 서열 번호: 77, 서열 번호: 79, 서열 번호: 81, 서열 번호: 93, 서열 번호: 95, 서열 번호: 97, 서열 번호: 99, 서열 번호: 111, 서열 번호: 113, 서열 번호: 115, 서열 번호: 117, 서열 번호: 129, 서열 번호: 131, 서열 번호: 133, 서열 번호: 135, 서열 번호: 147, 서열 번호: 149, 서열 번호: 151, 서열 번호: 153, 서열 번호: 165, 서열 번호: 167, 서열 번호: 169, 서열 번호: 171, 서열 번호: 183, 서열 번호: 185, 서열 번호: 187, 서열 번호: 189, 서열 번호: 201, 서열 번호: 203, 서열 번호: 205, 또는 서열 번호: 207의 아미노산 서열을 포함하는 한 가지 또는 그 이상의 중쇄 프레임워크 영역 (FR1, FR2, FR3 및/또는 FR4)을 포함한다.
일부 구체예에서, 항-TIGIT 항체는 서열 번호: 12, 서열 번호: 14, 서열 번호: 16, 서열 번호: 18, 서열 번호: 30, 서열 번호: 32, 서열 번호: 34, 서열 번호: 36, 서열 번호: 48, 서열 번호: 50, 서열 번호: 52, 서열 번호: 54, 서열 번호: 66, 서열 번호: 68, 서열 번호: 70, 서열 번호: 72, 서열 번호: 84, 서열 번호: 86, 서열 번호: 88, 서열 번호: 90, 서열 번호: 102, 서열 번호: 104, 서열 번호: 106, 서열 번호: 108, 서열 번호: 120, 서열 번호: 122, 서열 번호: 124, 서열 번호: 126, 서열 번호: 138, 서열 번호: 140, 서열 번호: 142, 서열 번호: 144, 서열 번호: 156, 서열 번호: 158, 서열 번호: 160, 서열 번호: 162, 서열 번호: 174, 서열 번호: 176, 서열 번호: 178, 서열 번호: 180, 서열 번호: 192, 서열 번호: 194, 서열 번호: 196, 서열 번호: 198, 서열 번호: 210, 서열 번호: 212, 서열 번호: 214, 또는 서열 번호: 216의 아미노산 서열을 포함하는 한 가지 또는 그 이상의 경쇄 프레임워크 영역 (FR1, FR2, FR3 및/또는 FR4)을 포함한다.
일부 구체예에서, 본 발명의 항-TIGIT 항체는 US 2009/0258013, US 2016/0176963, US 2016/0376365, 또는 WO 2016/028656에서 설명된 항체와의 결합에 대해 경쟁하지 않는다. 일부 구체예에서, 본 발명의 항-TIGIT 항체는 US 2009/0258013, US 2016/0176963, US 2016/0376365, 또는 WO 2016/028656에서 설명된 항체와 동일한 에피토프에 결합하지 않는다.
항체의 제조
TIGIT에 결합하는 항체를 제조하기 위해, 당해 분야에서 공지된 많은 기술이 이용될 수 있다. 가령, Kohler & Milstein, Nature 256:495-497 (1975); Kozbor et al., Immunology Today 4: 72 (1983); Cole et al., pp. 77-96 in Monoclonal Antibodies and Cancer Therapy, Alan R. Liss, Inc. (1985); Coligan, Current Protocols in Immunology (1991); Harlow & Lane, Antibodies, A Laboratory Manual (1988); 및 Goding, Monoclonal Antibodies: Principles and Practice (2nd ed. 1986))를 참조한다.
관심되는 항체의 중쇄와 경쇄를 인코딩하는 유전자는 세포로부터 클로닝될 수 있고, 예를 들면, 단일클론 항체를 인코딩하는 유전자는 하이브리도마로부터 클로닝될 수 있고, 그리고 재조합 단일클론 항체를 생산하는데 이용될 수 있다. 단일클론 항체의 중쇄와 경쇄를 인코딩하는 유전자 라이브러리는 또한, 하이브리도마 또는 혈장 세포로부터 만들어질 수 있다. 추가적으로, 파지 또는 효모 전시 기술이 선별된 항원에 특이적으로 결합하는 항체 및 이형화학성 Fab 단편을 확인하는데 이용될 수 있다 (가령, McCafferty et al., Nature 348:552-554 (1990); Marks et al., Biotechnology 10:779-783 (1992); Lou et al. (2010) PEDS 23:311; 및 Chao et al., Nature Protocols, 1:755-768 (2006)을 참조한다). 대안으로, 항체 및 항체 서열은 효모-기초된 항체 제시 시스템, 예를 들면, 예로서, Xu et al., Protein Eng Des Sel, 2013, 26:663-670; WO 2009/036379; WO 2010/105256; 및 WO 2012/009568에서 개시된 것을 이용하여 단리되고 및/또는 확인될 수 있다. 중쇄와 경쇄 유전자 산물의 무작위 조합은 상이한 항원 특이성을 갖는 항체의 큰 풀을 산출한다 (가령, Kuby, Immunology (3rd ed. 1997)를 참조한다). 단일 사슬 항체 또는 재조합 항체의 생산을 위한 기술 (U.S. 특허 4,946,778, U.S. 특허 번호 4,816,567) 역시 항체를 생산하기 위해 적합될 수 있다. 항체는 또한, 이중특이적으로 만들어질 수 있다, 다시 말하면, 2개의 상이한 항원을 인식할 수 있다 (가령, WO 93/08829, Traunecker et al., EMBO J. 10:3655-3659 (1991); 및 Suresh et al., Methods in Enzymology 121:210 (1986)을 참조한다). 항체는 또한, 헤테로접합체, 예를 들면, 2개의 공유적으로 결합된 항체, 또는 면역독소에 공유 결합된 항체일 수 있다 (가령, U.S. 특허 번호 4,676,980, WO 91/00360; 및 WO 92/200373을 참조한다).
항체는 원핵과 진핵 발현 시스템을 비롯한 수많은 발현 시스템을 이용하여 생산될 수 있다. 일부 구체예에서, 발현 시스템은 포유류 세포, 예를 들면, 하이브리도마, 또는 CHO 세포이다. 많은 이런 시스템은 상업적인 공급업체로부터 폭넓게 가용하다. 항체가 VH와 VL 영역 둘 모두를 포함하는 구체예에서, VH와 VL 영역은 예로서, 디시스트론 발현 단위에서 단일 벡터를 이용하여 발현될 수 있거나, 또는 상이한 프로모터의 제어 하에 있을 수 있다. 다른 구체예에서, VH와 VL 영역은 별개의 벡터를 이용하여 발현될 수 있다. 본원에서 설명된 바와 같은 VH 또는 VL 영역은 N 말단에서 메티오닌을 임의선택적으로 포함할 수 있다.
비인간 항체를 인간화하거나 또는 영장류화하기 위한 방법 또한 당해 분야에서 알려져 있다. 일반적으로, 인간화 항체는 비인간인 공급원으로부터 이것 내로 도입된 하나 또는 그 이상의 아미노산 잔기를 갖는다. 이들 비인간 아미노산 잔기는 이입 잔기로서 종종 지칭되는데, 이들은 전형적으로, 이입 가변 도메인으로부터 취해진다. 인간화는 Winter 및 동료들의 방법 (가령, Jones et al., Nature 321:522-525 (1986); Riechmann et al., Nature 332:323-327 (1988); Verhoeyen et al., Science 239:1534-1536 (1988) 및 Presta, Curr. Op. Struct. Biol. 2:593-596 (1992)을 참조한다)에 따라서, 인간 항체의 상응하는 서열을 설치류 CDRs 또는 CDR 서열로 치환함으로써 본질적으로 수행될 수 있다. 이런 인간화 항체는 키메라 항체 (U.S. 특허 번호 4,816,567)이고, 여기서 실질적으로 무손상 인간 가변 도메인이 비인간 종으로부터 상응하는 서열에 의해 치환되었다. 실제로, 인간화 항체는 전형적으로, 일부 CDR 잔기 및 아마도 일부 FR 잔기가 설치류 항체에서 유사한 부위로부터 잔기에 의해 치환되는 인간 항체이다. 유전자도입 생쥐, 또는 다른 생물체, 예를 들면, 다른 포유동물이 인간화 또는 인간 항체를 발현하는데 이용될 수 있다 (가령, U.S. 특허 번호 5,545,807; 5,545,806; 5,569,825; 5,625,126; 5,633,425; 5,661,016, Marks et al., Bio/Technology 10:779-783 (1992); Lonberg et al., Nature 368:856-859 (1994); Morrison, Nature 368:812-13 (1994); Fishwild et al., Nature Biotechnology 14:845-51 (1996); Neuberger, Nature Biotechnology 14:826 (1996); 및 Lonberg & Huszar, Intern. Rev. Immunol. 13:65-93 (1995)을 참조한다).
인간화에 대한 대안으로서, 인간 항체가 산출될 수 있다. 무제한적 실례로서, 면역화 시에, 내인성 면역글로불린 생산의 부재에서 인간 항체의 완전한 레퍼토리를 생산할 수 있는 유전자도입 동물 (가령, 생쥐)이 생산될 수 있다. 가령, 키메라 및 생식계열 돌연변이체 생쥐에서 항체 중쇄 결합 영역 (JH) 유전자의 동형접합성 결실은 내인성 항체 생산의 완전한 저해를 유발하는 것으로 설명되었다. 이런 생식계열 돌연변이체 생쥐 내에 인간 생식계열 면역글로불린 유전자 어레이의 전달은 항원 공격 시에 인간 항체의 생산을 유발할 것이다. 가령, Jakobovits et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 90:2551 (1993); Jakobovits et al., Nature, 362:255-258 (1993); Bruggermann et al., Year in Immun., 7:33 (1993); 그리고 U.S. 특허 번호 5,591,669, 5,589,369 및 5,545,807을 참조한다.
일부 구체예에서, 항체 단편 (가령, Fab, Fab', F(ab')2, scFv, 또는 디아바디)이 산출된다. 항체 단편의 생산을 위한 다양한 기술이 개발되었다. 전통적으로, 이들 단편은 무손상 항체의 단백질분해 소화를 통해 도출되었다 (가령, Morimoto et al., J. Biochem. Biophys. Meth., 24:107-117 (1992); 및 Brennan et al., Science, 229:81 (1985)을 참조한다). 하지만, 이들 단편은 현재, 재조합 숙주 세포를 이용하여 직접적으로 생산될 수 있다. 가령, 항체 단편은 항체 파지 라이브러리로부터 단리될 수 있다. 대안으로, Fab'-SH 단편이 대장균 (E. coli) 세포로부터 직접적으로 회수되고 화학적으로 연계되어 F(ab')2 단편을 형성할 수 있다 (가령, Carter et al., BioTechnology, 10:163-167 (1992)을 참조한다). 다른 접근법에 따라서, F(ab')2 단편은 재조합 숙주 세포 배양액으로부터 직접적으로 단리될 수 있다. 항체 단편의 생산을 위한 다른 기술은 당업자에게 명백할 것이다. 다른 구체예에서, 선택되는 항체는 단일 사슬 Fv 단편 (scFv)이다. 가령, PCT 공개 번호 WO 93/16185; 그리고 U.S. 특허 번호 5,571,894 및 5,587,458을 참조한다. 항체 단편은 또한, 가령 U.S. 특허 번호 5,641,870에서 설명된 바와 같은 선형 항체일 수 있다.
일부 구체예에서, 상기 항체 또는 항체 단편은 생체내에서 연장된 반감기를 제공하기 위해, 다른 분자, 예를 들면, 폴리에틸렌 글리콜 (페길화) 또는 혈청 알부민에 접합될 수 있다. 항체 단편의 페길화의 실례는 Knight et al. Platelets 15:409, 2004 (아브식시맙의 경우); Pedley et al., Br. J. Cancer 70:1126, 1994 (항-CEA 항체의 경우); Chapman et al., Nature Biotech. 17:780, 1999; 및 Humphreys, et al., Protein Eng. Des. 20: 227, 2007)에서 제공된다.
일부 구체예에서, 본원에서 설명된 바와 같은 항-TIGIT 항체 또는 항원 결합 단편을 포함하는 다중특이적 항체, 예를 들면, 이중특이적 항체가 제공된다. 다중특이적 항체는 최소한 2개의 상이한 부위에 대한 결합 특이성을 갖는 항체이다. 일부 구체예에서, 다중특이적 항체는 TIGIT (가령, 인간 TIGIT)에 대한 결합 특이성을 갖고, 그리고 최소한 하나의 다른 항원에 대한 결합 특이성을 갖는다. 다중특이적 항체를 만들기 위한 방법은 숙주 세포에서 중쇄와 경쇄의 2개의 쌍의 재조합 공동발현 (가령, Zuo et al., Protein Eng Des Sel, 2000, 13:361-367을 참조한다); "노브-인투-홀" 가공 (가령, Ridgway et al., Protein Eng Des Sel, 1996, 9:617-721을 참조한다); "디아바디" 기술 (가령, Hollinger et al., PNAS (USA), 1993, 90:6444-6448을 참조한다); 및 분자내 삼합체화 (가령, Alvarez-Cienfuegos et al., Scientific Reports, 2016, doi:/10.1038/srep28643을 참조한다)를 포함하지만 이들에 한정되지 않는다; 또한, Spiess et al., Molecular Immunology, 2015, 67(2), Part A:95-106을 참조한다.
일부 구체예에서, 본원에서 설명된 바와 같은 항-TIGIT 항체 또는 항원 결합 단편을 포함하는 항체-약물 접합체가 제공된다. 항체-약물 접합체에서, 항원 (가령, TIGIT)에 대한 결합 특이성을 갖는 단일클론 항체가 세포독성 약물에 공유 연결된다. 항체-약물 접합체를 만들기 위한 방법은 가령, Chudasama et al., Nature Chemistry, 2016, 8:114-119; WO 2013/068874; 및 US 8,535,678에서 설명된다.
핵산, 벡터 및 숙주 세포
일부 구체예에서, 본원에서 설명된 바와 같은 항-TIGIT 항체는 재조합 방법을 이용하여 제조된다. 따라서, 일부 양상에서, 본 발명은 본원에서 설명된 바와 같은 항-TIGIT 항체 중에서 어느 것 (가령, 본원에서 설명된 CDRs 중에서 한 가지 또는 그 이상)을 인코딩하는 핵산 서열을 포함하는 단리된 핵산; 이런 핵산을 포함하는 벡터; 그리고 항체-인코딩 핵산을 복제하고 및/또는 항체를 발현하는데 이용되는, 상기 핵산이 도입되는 숙주 세포가 제공한다. 일부 구체예에서, 숙주 세포는 진핵 세포, 예를 들면, 중국 햄스터 난소 (CHO) 세포; 또는 인간 세포이다.
일부 구체예에서, 폴리뉴클레오티드 (가령, 단리된 폴리뉴클레오티드)는 본원에서 설명된 바와 같은 항체 또는 이의 항원 결합 부분을 인코딩하는 뉴클레오티드 서열을 포함한다 (가령, "항-TIGIT 항체 서열"이라는 제목의 상기 섹션에서 설명된 바와 같이). 일부 구체예에서, 폴리뉴클레오티드는 아래의 표 3에서 개시된 한 가지 또는 그 이상의 아미노산 서열 (가령, CDR, 중쇄, 경쇄 및/또는 프레임워크 영역)을 인코딩하는 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 일부 구체예에서, 폴리뉴클레오티드는 아래의 표 3에서 개시된 서열 (가령, CDR, 중쇄, 경쇄, 또는 프레임워크 영역 서열)에 최소한 85% 서열 동일성 (가령, 최소한 85%, 최소한 90%, 최소한 91%, 최소한 92%, 최소한 93%, 최소한 94%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98%, 또는 최소한 99% 서열 동일성)을 갖는 아미노산 서열을 인코딩하는 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
일부 구체예에서, 폴리뉴클레오티드 (가령, 단리된 폴리뉴클레오티드)는 본원에서 설명된 바와 같은 중쇄 가변 영역을 인코딩하는 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 일부 구체예에서, 폴리뉴클레오티드는 서열 번호: 1, 서열 번호: 19, 서열 번호: 37, 서열 번호: 55, 서열 번호: 73, 서열 번호: 91, 서열 번호: 109, 서열 번호: 127, 서열 번호: 145, 서열 번호: 163, 서열 번호: 181, 서열 번호: 199, 서열 번호: 245, 서열 번호: 246, 서열 번호: 247, 서열 번호: 248, 서열 번호: 249, 서열 번호: 250, 서열 번호: 251, 서열 번호: 252, 서열 번호: 253, 서열 번호: 254, 서열 번호: 255, 서열 번호: 256, 또는 서열 번호: 257에 최소한 90% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역을 인코딩하는 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 일부 구체예에서, 폴리뉴클레오티드는 서열 번호: 2, 서열 번호: 20, 서열 번호: 38, 서열 번호: 56, 서열 번호: 74, 서열 번호: 92, 서열 번호: 110, 서열 번호: 128, 서열 번호: 146, 서열 번호: 164, 서열 번호: 182, 또는 서열 번호: 200의 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
일부 구체예에서, 폴리뉴클레오티드 (가령, 단리된 폴리뉴클레오티드)는 본원에서 설명된 바와 같은 경쇄 가변 영역을 인코딩하는 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 일부 구체예에서, 폴리뉴클레오티드는 서열 번호: 10, 서열 번호: 28, 서열 번호: 46, 서열 번호: 64, 서열 번호: 82, 서열 번호: 100, 서열 번호: 118, 서열 번호: 136, 서열 번호: 154, 서열 번호: 172, 서열 번호: 190, 또는 서열 번호: 208에 최소한 90% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 인코딩하는 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 일부 구체예에서, 폴리뉴클레오티드는 서열 번호: 11, 서열 번호: 29, 서열 번호: 47, 서열 번호: 65, 서열 번호: 83, 서열 번호: 101, 서열 번호: 119, 서열 번호: 137, 서열 번호: 155, 서열 번호: 173, 서열 번호: 191, 또는 서열 번호: 209의 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
일부 구체예에서, 폴리뉴클레오티드는 본원에서 설명된 바와 같은 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역을 인코딩하는 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 일부 구체예에서, 폴리뉴클레오티드는 서열 번호: 1, 서열 번호: 19, 서열 번호: 37, 서열 번호: 55, 서열 번호: 73, 서열 번호: 91, 서열 번호: 109, 서열 번호: 127, 서열 번호: 145, 서열 번호: 163, 서열 번호: 181, 서열 번호: 199, 서열 번호: 245, 서열 번호: 246, 서열 번호: 247, 서열 번호: 248, 서열 번호: 249, 서열 번호: 250, 서열 번호: 251, 서열 번호: 252, 서열 번호: 253, 서열 번호: 254, 서열 번호: 255, 서열 번호: 256, 또는 서열 번호: 257에 최소한 90% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역을 인코딩하고, 그리고 서열 번호: 10, 서열 번호: 28, 서열 번호: 46, 서열 번호: 64, 서열 번호: 82, 서열 번호: 100, 서열 번호: 118, 서열 번호: 136, 서열 번호: 154, 서열 번호: 172, 서열 번호: 190, 또는 서열 번호: 208에 최소한 90% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 인코딩하는 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 일부 구체예에서, 폴리뉴클레오티드는 서열 번호: 2, 서열 번호: 20, 서열 번호: 38, 서열 번호: 56, 서열 번호: 74, 서열 번호: 92, 서열 번호: 110, 서열 번호: 128, 서열 번호: 146, 서열 번호: 164, 서열 번호: 182, 또는 서열 번호: 200의 뉴클레오티드 서열을 포함하고, 그리고 서열 번호: 11, 서열 번호: 29, 서열 번호: 47, 서열 번호: 65, 서열 번호: 83, 서열 번호: 101, 서열 번호: 119, 서열 번호: 137, 서열 번호: 155, 서열 번호: 173, 서열 번호: 191, 또는 서열 번호: 209의 뉴클레오티드 서열을 더욱 포함한다.
추가의 양상에서, 본원에서 설명된 바와 같은 항-TIGIT 항체를 만드는 방법이 제공된다. 일부 구체예에서, 상기 방법은 항체의 발현에 적합한 조건 하에, 본원에서 설명된 바와 같은 숙주 세포 (가령, 본원에서 설명된 바와 같은 폴리뉴클레오티드 또는 벡터를 발현하는 숙주 세포)를 배양하는 것을 포함한다. 일부 구체예에서, 상기 항체는 차후에, 숙주 세포 (또는 숙주 세포 배양 배지)로부터 회수된다.
본 발명의 항체 또는 이들의 단편을 인코딩하는 폴리뉴클레오티드를 내포하는 적합한 벡터는 클로닝 벡터 및 발현 벡터를 포함한다. 선별되는 클로닝 벡터가 이용되도록 의도되는 숙주 세포에 따라서 변할 수 있긴 하지만, 유용한 클로닝 벡터는 일반적으로, 자가복제하는 능력을 갖고, 특정 제한 엔도뉴클레아제에 대한 단일 표적을 소유할 수 있고 및/또는 상기 벡터를 내포하는 클론을 선별하는데 이용될 수 있는 마커에 대한 유전자를 보유할 수 있다. 실례는 플라스미드 및 세균 바이러스, 예를 들면, pUC18, pUC19, Bluescript (가령, pBS SK+) 및 이의 유도체, mpl8, mpl9, pBR322, pMB9, ColE1, pCR1, RP4, 파지 DNAs, 그리고 셔틀 벡터, 예를 들면, pSA3 및 pAT28을 포함한다. 클로닝 벡터는 상업적인 판매자, 예를 들면, BioRad, Stratagene 및 Invitrogen으로부터 가용하다.
발현 벡터는 일반적으로, 본 발명의 핵산을 내포하는 복제가능한 폴리뉴클레오티드 작제물이다. 발현 벡터는 숙주 세포에서 에피솜으로서 또는 염색체 DNA의 필수적인 부분으로서 복제될 수 있다. 적합한 발현 벡터는 플라스미드, 아데노바이러스, 아데노 연관된 바이러스, 레트로바이러스를 비롯한 바이러스 벡터, 그리고 임의의 다른 벡터를 포함하지만 이들에 한정되지 않는다.
IV. 항-TIGIT 항체를 이용한 치료 방법
다른 양상에서, 개체에서 암을 치료하거나 예방하기 위한 방법이 제공된다. 일부 구체예에서, 상기 방법은 본원에서 설명된 바와 같은 항-TIGIT 항체 또는 항원 결합 단편, 또는 본원에서 설명된 바와 같은 항-TIGIT 항체 또는 항원 결합 단편을 포함하는 제약학적 조성물의 치료량을 개체에게 투여하는 것을 포함한다. 일부 구체예에서, 개체는 인간, 예를 들면, 성인 또는 인간 소아이다.
일부 구체예에서, 암은 CD112 및/또는 CD155의 발현에 대해 농축되는 암 또는 암 세포이다. 일부 구체예에서, CD112- 및/또는 CD155-농축된 암은 CD112 또는 CD155에 대해 특이적인 항체를 이용한, 종양 표본의 면역조직화학 사정에 의해 확인된다. 일부 구체예에서, CD112 또는 CD155 발현은 종양 세포에서 또는 종양 침윤성 백혈구에서 농축되거나 또는 증가된다. 일부 구체예에서, 암은 종양 표본에서 CD112 및/또는 CD155 mRNA 수준의 사정에 근거하여 확인된다 (가령, 당해 분야에서 공지된 방법, 예를 들면, 정량적 RT-PCR에 의해). 일부 구체예에서, 암 환자로부터 획득된 혈액 표본 내에 가용성 CD112 또는 CD155의 계측이 CD112 및/또는 CD155의 발현에 대해 농축되는 암을 확인하는데 이용될 수 있다. 일부 구체예에서, 상기 방법은 개체로부터 표본 (가령, 종양 표본 또는 혈액 표본)을 획득하고, 개체로부터 표본 내에 CD112 및/또는 CD155의 수준을 계측하고, 그리고 개체로부터 표본 내에 CD112 및/또는 CD155의 수준을 대조 값 (가령, 건강한 대조 개체로부터 표본, 또는 건강한 대조의 개체군에 대해 결정된 CD112 및/또는 CD155 발현의 수준)과 비교하는 것을 포함한다. 일부 구체예에서, 상기 방법은 개체로부터 표본 내에 CD112 및/또는 CD155의 수준이 대조 값보다 높다는 것을 결정하고, 그리고 차후에, 본원에서 설명된 바와 같은 항-TIGIT 항체를 개체에게 투여하는 것을 포함한다.
일부 구체예에서, 암은 TIGIT를 발현하는 T 세포 또는 자연 킬러 (NK) 세포에 대해 농축되는 암 또는 암 세포이다. 일부 구체예에서, TIGIT-농축된 암은 TIGIT에 대해 특이적인 항체를 이용한 종양 표본의 면역조직화학 사정에 의해 확인된다. 일부 구체예에서, T 세포 또는 NK 세포에 대해 특이적인 항체 (가령, 항-CD3, 항-CD4, 항-CD8, 항-CD25, 또는 항-CD56)가 TIGIT를 발현하는 종양 침윤성 세포의 부분집합 또는 부분집합들을 결정하는데 이용된다. 일부 구체예에서, 암은 종양 표본에서 TIGIT mRNA 수준의 사정에 근거하여 확인된다. 일부 구체예에서, 암 환자로부터 획득된 혈액 표본 내에 가용성 TIGIT의 계측이 TIGIT를 발현하는 T 세포 또는 NK 세포에 대해 농축되는 암을 확인하는데 이용될 수 있다 (임의선택적으로, T 세포 또는 NK 세포에 대해 특이적인 항체와 조합으로). 일부 구체예에서, 상기 방법은 개체로부터 표본 (가령, 종양 표본 또는 혈액 표본)을 획득하고, 개체로부터 표본 내에 TIGIT의 수준을 계측하고, T 세포 또는 NK 세포의 존재를 임의선택적으로 검출하고 (가령, T 세포 또는 NK 세포에 대해 특이적인 항체, 예를 들면, 항-CD3, 항-CD4, 항-CD8, 항-CD25, 또는 항-CD56을 이용하여), 그리고 개체로부터 표본 내에 TIGIT의 수준을 대조 값 (가령, 건강한 대조 개체로부터 표본, 또는 건강한 대조의 개체군에 대해 결정된 TIGIT 발현의 수준)과 비교하는 것을 포함한다. 일부 구체예에서, 상기 방법은 개체로부터 표본 내에 TIGIT의 수준이 대조 값보다 높다는 것을 결정하고, 그리고 차후에, 본원에서 설명된 바와 같은 항-TIGIT 항체를 개체에게 투여하는 것을 포함한다.
일부 구체예에서, 암은 방광암, 유방암, 자궁암, 자궁경부암, 난소암, 전립선암, 고환암, 식도암, 위장관암, 췌장암, 결장직장암, 결장암, 신장암, 두경부암, 폐암, 위암, 생식 세포 암, 골암, 간암, 갑상선암, 피부암 (가령, 흑색종), 중추신경계의 신생물, 림프종, 백혈병, 골수종, 또는 육종이다. 일부 구체예에서, 암은 위암이다. 일부 구체예에서, 암은 폐암이다. 일부 구체예에서, 암은 피부암 (가령, 흑색종)이다. 일부 구체예에서, 암은 전이성 암이다. 일부 구체예에서, 암은 급성 골수성, 만성 골수성, 급성 림프성 또는 만성 림프성 백혈병, 미만성 큰 B 세포 림프종, 여포성 림프종, 외투 세포 림프종, 소형 림프성 림프종, 원발성 종격 큰 B-세포 림프종, 비장 변연대 B-세포 림프종, 또는 외부결절성 변연대 B-세포 림프종을 포함하지만 이들에 한정되지 않는 림프종 또는 백혈병이다.
일부 구체예에서, 상기 방법은 면역항암제의 치료량을 개체에게 투여하는 것을 더욱 포함한다. 일부 구체예에서, 면역항암제는 면역 관문 경로, 예를 들면, PD-1 경로, CTLA-4 경로, Lag3 경로, 또는 TIM-3 경로의 성분을 길항작용하거나 또는 저해하는 작용제 (가령, 항체, 소형 분자, 또는 펩티드)이다. 일부 구체예에서, 면역항암제는 OX-40 경로, 4-1BB (CD137) 경로, CD27 경로, ICOS 경로, 또는 GITR 경로를 표적으로 함으로써, T 세포 보조활성인자의 효현제 (다시 말하면, T 세포 활성화를 자극하는 단백질의 효현제)이다.
일부 구체예에서, 면역항암제는 PD-1 경로 저해제이다. 일부 구체예에서, PD-1 경로 저해제는 항-PD-1 항체 또는 항-PD-L1 항체, 예를 들면, 하지만 제한 없이 펨브로리주맙, 니볼루맙, 더발루맙, 피딜리주맙, 또는 아테졸리주맙이다. PD-1 경로 저해제는 당해 분야에서 설명된다. 가령, Dolan et al., Cancer Control, 2014, 21:231-237; Luke et al., Oncotarget, 2014, 6:3479-3492; US 2016/0222113; US 2016/0272708; US 2016/0272712; 및 US 2016/0319019를 참조한다.
일부 구체예에서, 면역항암제는 T 세포 보조활성인자의 효현제이다. 일부 구체예에서, 면역항암제는 CD28, CD28H, CD3, 4-1BB (CD137), ICOS, OX40, GITR, CD27, 또는 CD40의 효현제이다. 일부 구체예에서, 면역항암제는 면역 자극 사이토킨이다. 일부 구체예에서, 면역 자극 사이토킨은 과립구-대식세포 집락 자극 인자 (GM-CSF), 대식세포 집락 자극 인자 (M-CSF), 과립구 집락 자극 인자 (G-CSF), 인터류킨 1 (IL-1), 인터류킨 2 (IL-2), 인터류킨 3 (IL-3), 인터류킨 12 (IL-12), 인터류킨 15 (IL-15), 또는 인터페론 감마 (IFN-γ)이다.
일부 구체예에서, 본원에서 설명된 바와 같은 항-TIGIT 항체로 치료는 한 가지 또는 그 이상의 다른 암 치료, 예를 들면, 수술, 방사선, 또는 화학요법과 조합된다. 일부 구체예에서, 화학요법 작용제는 알킬화제 (가령, 시클로포스파미드, 이포스파미드, 클로람부실, 부술판, 멜팔란, 메클로르에타민, 우라무스틴, 티오테파, 니트로소요소, 또는 테모졸로미드), 안트라사이클린 (가령, 독소루비신, 아드리아마이신, 다우노루비신, 에피루비신, 또는 미톡산트론), 세포골격 교란물질 (가령, 파클리탁셀 또는 도세탁셀), 히스톤 탈아세틸화효소 저해제 (가령, 보리노스탯 또는 로미뎁신), 국소이성화효소의 저해제 (가령, 이리노테칸, 토포테칸, 암사크린, 에토포시드, 또는 테니포시드), 키나아제 저해제 (가령, 보르테조밉, 에를로티닙, 제피티닙, 이마티닙, 베무라페닙, 또는 비스모데깁), 뉴클레오시드 유사체 또는 전구체 유사체 (가령, 아자시티딘, 아자티오프린, 카페시타빈, 시타라빈, 플루오로우라실, 젬시타빈, 히드록시요소, 메르캅토푸린, 메토트렉사트, 또는 티오구아닌), 펩티드 항생제 (가령, 악티노마이신 또는 블레오마이신), 백금-기초된 작용제 (가령, 시스플라틴, 옥살로플라틴, 또는 카르보플라틴), 또는 식물 알칼로이드 (가령, 빈크리스틴, 빈블라스틴, 비노렐빈, 빈데신, 포도필로톡신, 파클리탁셀, 또는 도세탁셀)이다.
일부 구체예에서, 항-TIGIT 항체 (그리고 임의선택적으로, 면역항암제 또는 다른 치료적 처치)는 치료 효과량 또는 용량에서 투여된다. 약 0.01 mg/kg 내지 약 500 mg/kg, 또는 약 0.1 mg/kg 내지 약 200 mg/kg, 또는 약 1 mg/kg 내지 약 100 mg/kg, 또는 약 10 mg/kg 내지 약 50 mg/kg의 일일 용량 범위가 이용될 수 있다. 용량은 하지만, 선택된 투여 루트, 조성물의 제제, 환자 반응, 질환의 심각도, 개체의 체중, 그리고 처방 의사의 판단을 비롯한 여러 인자에 따라서 변할 수 있다. 용량은 개별 환자에 의한 필요에 따라, 시간의 추이에서 증가되거나 또는 감소될 수 있다. 일정한 사례에서, 환자는 먼저 저용량이 제공되고, 이후, 환자에 내약성인 유효한 용량까지 증가된다. 효과량의 결정은 당업자의 능력 범위 내에 있다.
항-TIGIT 항체, 또는 항-TIGIT 항체 (그리고 임의선택적으로, 면역항암제 또는 다른 치료적 처치)를 포함하는 제약학적 조성물의 투여 루트는 경구, 복막내, 경피, 피하, 정맥내, 근육내, 흡입, 국소, 병소내, 직장, 기관지내, 코, 경점막, 장관, 눈 또는 귀 전달, 또는 당해 분야에서 공지된 임의의 다른 방법일 수 있다. 일부 구체예에서, 항-TIGIT 항체 (그리고 임의선택적으로, 면역항암제)는 경구, 정맥내, 또는 복막내 투여된다.
공동투여되는 치료적 작용제 (가령, 항-TIGIT 항체 및 면역항암제 또는 다른 치료적 처치)는 함께 또는 별개로, 동시에 또는 상이한 시점에서 투여될 수 있다. 투여될 때, 치료적 작용제는 하루 1회, 2회, 3회, 4회, 또는 필요에 따라, 더욱 빈번하게 또는 덜 빈번하게 독립적으로 투여될 수 있다. 일부 구체예에서, 투여되는 치료적 작용제는 하루 1회 투여된다. 일부 구체예에서, 투여되는 치료적 작용제는 예로서, 혼합물로서 동일한 시점 또는 시점들에서 투여된다. 일부 구체예에서, 치료적 작용제 중에서 한 가지 또는 그 이상은 지속된 방출 제제에서 투여된다.
일부 구체예에서, 항-TIGIT 항체 및 다른 치료적 처치 (가령, 면역항암제)는 동시에 투여된다. 일부 구체예에서, 항-TIGIT 항체 및 다른 치료적 처치 (가령, 면역항암제)는 순차적으로 투여된다. 가령, 일부 구체예에서, 항-TIGIT 항체는 면역항암제를 투여하기에 앞서, 예로서 약 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 15, 20, 25, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100 일 또는 그 이상 동안 먼저 투여된다. 일부 구체예에서, 면역항암제는 항-TIGIT 항체를 투여하기에 앞서, 예로서 약 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 15, 20, 25, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100 일 또는 그 이상 동안 먼저 투여된다.
일부 구체예에서, 항-TIGIT 항체 (그리고 임의선택적으로, 면역항암제)는 연장된 기간에 걸쳐, 예를 들면, 최소한 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 150, 200, 250, 300, 350 일 또는 그 이상 동안 개체에게 투여된다.
V. 조성물 및 키트
다른 양상에서, 개체에서 암을 치료하거나 예방하는데 이용을 위한 항-TIGIT 항체를 포함하는 조성물 및 키트가 제공된다.
제약학적 조성물
일부 구체예에서, 암을 앓는 개체에게 투여하는데 이용을 위한 항-TIGIT 항체를 포함하는 제약학적 조성물이 제공된다. 일부 구체예에서, 항-TIGIT 항체는 상기 섹션 III에서 설명된 바와 같다, 예를 들면, 항-TIGIT 항체는 상기 섹션 III에서 개시된 바와 같은 결합 친화성, 활성, 교차반응성, 에피토프 인식 및/또는 한 가지 또는 그 이상의 CDR, VH 및/또는 VL 서열을 갖는다.
일부 구체예에서, 항-TIGIT 항체 및 면역항암제 (가령, 본원에서 설명된 바와 같은 PD-1 경로 저해제)는 본원에서 설명된 바와 같이, 함께 또는 별개로 제약학적 조성물로 조제된다. 일부 구체예에서, 면역항암제는 PD-1 경로 저해제 또는 CTLA-4 경로 저해제이다. 일부 구체예에서, 면역항암제는 T 세포 보조활성인자의 효현제이다. 일부 구체예에서, PD-1 경로 저해제는 항-PD-1 항체 또는 항-PD-L1 항체, 예를 들면, 하지만 제한 없이 펨브로리주맙, 니볼루맙, 더발루맙, 피딜리주맙, 또는 아테졸리주맙이다.
본 발명에서 이용을 위한 제제를 제조하기 위한 보도는 가령, Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 21st Ed., 2006, 위와 같음; Martindale: The Complete Drug Reference, Sweetman, 2005, London: Pharmaceutical Press; Niazi, Handbook of Pharmaceutical Manufacturing Formulations, 2004, CRC Press; 그리고 Gibson, Pharmaceutical Preformulation and Formulation: A Practical Guide from Candidate Drug Selection to Commercial Dosage Form, 2001, Interpharm Press에서 발견되는데, 이들은 본원에서 참조로서 편입된다. 본원에서 설명된 제약학적 조성물은 당업자에게 공지되어 있는 방식으로, 다시 말하면, 전통적인 혼합, 용해화, 제립화, 당의정-만들기, 유화, 캡슐화, 가둠 또는 동결건조 과정에 의하여 제조될 수 있다. 하기 방법과 부형제는 단지 예시일 뿐이고 결코 제한하지 않는다.
일부 구체예에서, 항-TIGIT 항체 (그리고 임의선택적으로, 면역항암제)는 지속된 방출, 제어된 방출, 연장된 방출, 일정시한 방출 또는 지연된 방출 제제에서, 예를 들면, 치료적 작용제를 내포하는 고체 소수성 중합체의 반투성 매트릭스에서 전달의 준비가 되어 있다. 다양한 유형의 지속된 방출 물질이 확립되었고, 그리고 당업자에 의해 널리 알려져 있다. 현재 연장된 방출 제제는 필름-코팅된 정제, 다입자체 또는 펠렛 시스템, 친수성 또는 친유성 물질을 이용한 매트릭스 기술, 그리고 포어 형성 부형제를 포함하는 왁스-기초된 정제를 포함한다(가령, Huang, et al. Drug Dev. Ind. Pharm. 29:79 (2003); Pearnchob, et al. Drug Dev. Ind. Pharm. 29:925 (2003); Maggi, et al. Eur. J. Pharm. Biopharm. 55:99 (2003); Khanvilkar, et al., Drug Dev. Ind. Pharm. 228:601 (2002); 및 Schmidt, et al., Int. J. Pharm. 216:9 (2001)를 참조한다). 지속된 방출 전달 시스템은 그들의 설계에 따라서, 수 시간 또는 수 일의 코스에 걸쳐, 예를 들면, 4, 6, 8, 10, 12, 16, 20, 24 시간 또는 그 이상에 걸쳐 화합물을 방출할 수 있다. 통상적으로, 지속된 방출 제제는 자연발생 또는 합성 중합체, 예를 들면, 중합성 비닐 피롤리돈, 예를 들면, 폴리비닐 피롤리돈 (PVP); 카르복시비닐 친수성 중합체; 소수성 및/또는 친수성 수성콜로이드, 예를 들면, 메틸셀룰로오스, 에틸셀룰로오스, 히드록시프로필셀룰로오스 및 히드록시프로필메틸셀룰로오스; 그리고 카르복시폴리메틸렌을 이용하여 제조될 수 있다.
경구 투여를 위해, 항-TIGIT 항체 (그리고 임의선택적으로, 면역항암제)는 당해 분야에서 널리 공지된 제약학적으로 허용되는 담체와 조합함으로써 쉽게 조제될 수 있다. 이런 담체는 화합물이, 치료되는 환자에 의한 경구 섭취를 위한 정제, 알약, 당의정, 캡슐, 유제, 친유성 및 친수성 현탁액, 액체, 겔, 시럽, 슬러리, 현탁액 등으로서 조제되는 것을 가능하게 한다. 경구 이용을 위한 제약학적 제조물은 화합물을 고체 부형제와 혼합하고, 결과의 혼합물을 임의선택적으로 분쇄하고, 그리고 원하는 경우에, 정제 또는 당의정 코어를 획득하기 위한 적합한 보조제를 첨가한 후, 과립의 혼합물을 처리함으로써 획득될 수 있다. 적합한 부형제는 예로서, 충전제, 예를 들면, 락토오스, 수크로오스, 만니톨 또는 소르비톨을 비롯한 당; 셀룰로오스 제조물, 예를 들면, 예로서, 옥수수 전분, 밀 전분, 쌀 전분, 감자 전분, 젤라틴, 트래거캔스 검, 메틸 셀룰로오스, 히드록시프로필메틸-셀룰로오스, 나트륨 카르복시메틸셀룰로오스 및/또는 폴리비닐피롤리돈 (PVP)을 포함한다. 원하는 경우에, 붕해제, 예를 들면, 교차연결된 폴리비닐 피롤리돈, 한천, 또는 알긴산 또는 이의 염, 예를 들면, 알긴산나트륨이 첨가될 수 있다.
항-TIGIT 항체 (그리고 임의선택적으로, 면역항암제)는 주사에 의한, 예를 들면, 일시 주사에 의한 또는 연속 주입에 의한 비경구 투여용으로 조제될 수 있다. 주사의 경우에, 화합물 또는 화합물들은 이들을 수성 또는 비수성 용매, 예를 들면, 식물성 오일 또는 다른 유사한 오일, 합성 지방족산 글리세리드, 고급 지방족산의 에스테르 또는 프로필렌 글리콜에서; 그리고 원하는 경우에, 전통적인 첨가제, 예를 들면, 가용화제, 등장성 작용제, 현탁제, 유화제, 안정제 및 보존제와 함께 용해시키거나, 현탁하거나 또는 유화함으로써 제조물로 조제될 수 있다. 일부 구체예에서, 화합물은 수성 용액에서, 바람직하게는 생리학적으로 양립성 완충액, 예를 들면, 행크 용액, 링거액, 또는 생리 식염수 완충액에서 조제될 수 있다. 주사용 제제는 보존제가 첨가된 단위 약형에서, 예를 들면, 앰풀에서 또는 다중 용량 용기에서 제공될 수 있다. 조성물은 현탁액, 용액, 또는 유성 또는 수성 운반제에서 유제와 같은 형태를 취할 수 있고, 그리고 조제 작용제, 예를 들면, 현탁제, 안정제 및/또는 분산제를 내포할 수 있다.
항-TIGIT 항체 (그리고 임의선택적으로, 면역항암제)는 경점막 또는 경피 수단에 의해 전신적으로 투여될 수 있다. 경점막 또는 경피 투여를 위해, 침투되는 장벽에 적절한 침투물이 제제에서 이용된다. 국소 투여를 위해, 작용제는 연고, 크림, 고약, 분말 및 겔로 조제된다. 한 구체예에서, 경피 전달 작용제는 DMSO일 수 있다. 경피 전달 시스템은 예로서, 패치를 포함할 수 있다. 경점막 투여를 위해, 침투되는 장벽에 적절한 침투물이 제제에서 이용된다. 이런 침투물은 당해 분야에서 전반적으로 공지되어 있다. 예시적인 경피 전달 제제는 U.S. 특허 번호 6,589,549; 6,544,548; 6,517,864; 6,512,010; 6,465,006; 6,379,696; 6,312,717 및 6,310,177에서 설명된 것들을 포함하고, 이들은 각각 본원에서 참조로서 편입된다.
일부 구체예에서, 제약학적 조성물은 허용되는 담체 및/또는 부형제를 포함한다. 제약학적으로 허용되는 담체는 생리학적으로 양립성이고, 그리고 바람직하게는, 치료적 작용제의 활성을 간섭하지 않거나 또는 만약 그렇지 않으면 저해하지 않는 임의의 용매, 분산 매체, 또는 코팅을 포함한다. 일부 구체예에서, 담체는 정맥내, 근육내, 경구, 복막내, 경피, 국소, 또는 피하 투여에 적합하다. 제약학적으로 허용되는 담체는 예로서, 조성물을 안정시키거나, 또는 활성제(들)의 흡수를 증가 또는 감소시키는 작용을 하는 한 가지 또는 그 이상의 생리학적으로 허용되는 화합물(들)을 내포할 수 있다. 생리학적으로 허용되는 화합물은 예로서, 탄수화물, 예를 들면, 글루코오스, 수크로오스 또는 덱스트란, 항산화제, 예를 들면, 아스코르빈산 또는 글루타티온, 킬레이트화제, 저분자량 단백질, 활성제의 소실 또는 가수분해를 감소시키는 조성물, 또는 부형제 또는 다른 안정제 및/또는 완충액을 포함할 수 있다. 다른 제약학적으로 허용되는 담체 및 이들의 제제는 널리 알려져 있고, 그리고 가령, Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 21st Edition, Philadelphia, PA. Lippincott Williams & Wilkins, 2005에서 전반적으로 설명된다. 다양한 제약학적으로 허용되는 부형제는 당해 분야에서 널리 공지되고, 그리고 가령, Handbook of Pharmaceutical Excipients (5th ed., Ed. Rowe et al., Pharmaceutical Press, Washington, D.C.)에서 발견될 수 있다.
본 발명의 제약학적 조성물의 용량 및 원하는 약물 농도는 구상된 특정 용도에 따라서 변할 수 있다. 온당한 용량 또는 투여 루트의 결정은 당업자의 기술 범위 내에 있다. 적합한 용량은 상기 섹션 IV에서 또한 설명된다.
키트
일부 구체예에서, 암을 앓는 개체를 치료하는데 이용을 위한 키트가 제공된다. 일부 구체예에서, 키트는 하기를 포함한다:
항-TIGIT 항체; 및
면역항암제.
일부 구체예에서, 항-TIGIT 항체는 상기 섹션 III에서 설명된 바와 같다, 예를 들면, 항-TIGIT 항체는 상기 섹션 III에서 개시된 바와 같은 결합 친화성, 활성, 교차반응성, 에피토프 인식 및/또는 한 가지 또는 그 이상의 CDR, VH 및/또는 VL 서열을 갖는다. 일부 구체예에서, 면역항암제는 PD-1 경로 저해제 또는 CTLA-4 경로 저해제이다. 일부 구체예에서, 면역항암제는 T 세포 보조활성인자의 효현제이다. 일부 구체예에서, PD-1 경로 저해제는 항-PD-1 항체 또는 항-PD-L1 항체이다. 일부 구체예에서, 면역항암제는 펨브로리주맙, 니볼루맙, 더발루맙, 피딜리주맙, 또는 아테졸리주맙이다.
일부 구체예에서, 키트는 본 발명의 방법의 실시를 위한 지시 사항 (다시 말하면, 프로토콜)을 내포하는 교육 자료 (가령, 암을 치료하기 위해 상기 키트를 이용하기 위한 사용설명서)를 더욱 포함할 수 있다. 교육 자료가 서면 자료 또는 인쇄된 자료를 전형적으로 포함하긴 하지만, 이들은 이와 같이 한정되지 않는다. 이런 사용설명서를 저장하고 이들을 최종 사용자에게 전달할 수 있는 임의의 매체가 본 발명에 의해 예기된다. 이런 매체는 전자 저장 매체 (가령, 자성 디스크, 테이프, 카트리지, 칩), 광학 매체 (가령, CD ROM) 등을 포함하지만 이들에 한정되지 않는다. 이런 매체는 이런 교육 자료를 제공하는 인터넷 사이트의 주소를 포함할 수 있다.
VI. 실시예
하기 실시예는 청구된 발명을 도해하기 위해 제공되고, 이를 한정하지 않는다.
실시예 1: 항-TIGIT 항체의 산출
완전 인간 항-TIGIT 단일클론 항체가 효모-기초된 항체 제시 시스템을 이용하여 산출되었다 (가령, Xu et al, "Addressing polyspecificity of antibodies selected from an in vitro yeast presentation system: a FACS-based, high-throughput selection and analytical tool," PEDS, 2013, 26:663-670; WO 2009/036379; WO 2010/105256; 및 WO 2012/009568을 참조한다). 각각 ~109 다양성의 8개 미경험 인간 합성 효모 라이브러리가 선별검사되었다. 첫 2 라운드의 선별의 경우에, Miltenyi MACS 시스템을 활용하는 자성 비드 분류 기술이 기존 문헌에서 기술된 바와 같이 수행되었다 (가령, Siegel et al, "High efficiency recovery and epitope-specific sorting of an scFv yeast display library," J Immunol Methods, 2004, 286:141-153을 참조한다). 간단히 말하면, 효모 세포 (~1010 세포/라이브러리)가 세척 완충액 (인산염 완충된 식염수 (PBS)/0.1% 소 혈청 알부민 (BSA))에서 30℃에서 30 분 동안 5 mL의 10 nM 비오틴화된 Fc-융합 항원과 함께 배양되었다. 40 mL 얼음같이 차가운 세척 완충액으로 1회 세척한 후, 세포 펠렛이 20 mL 세척 완충액에서 재현탁되었고, 그리고 스트렙타비딘 마이크로비드 (500 μL)가 효모에 첨가되고 4℃에서 15 분 동안 배양되었다. 그 다음, 이들 효모는 펠렛화되고, 20 mL 세척 완충액에서 재현탁되고, 그리고 Miltenyi LS 칼럼 위에 부하되었다. 20 mL가 부하된 후, 칼럼이 3 mL 세척 완충액으로 3 회 세척되었다. 칼럼은 이후, 자기장으로부터 제거되었고, 그리고 효모가 5 mL의 성장 배지로 용리되고, 그리고 이후, 하룻밤 동안 성장되었다. 다음 라운드의 선별이 유세포분석법을 이용하여 수행되었다. 대략 2x107 효모가 펠렛화되고, 세척 완충액으로 3회 세척되고, 그리고 종 교차반응성을 획득하기 위해 평형 조건 하에 10 nM Fc-융합 항원 및 감소하는 농도의 비오틴화된 단위체성 항원 (100 내지 1 nM), 10 nM 비오틴화된 Fc-융합 항원 또는 상이한 종의 100 nM 단위체성 항원과 함께, 또는 선별로부터 비특이적 항체를 제거하기 위해 다중특이성 고갈 시약 (PSR)과 함께 30℃에서 배양되었다. PSR 고갈을 위해, 이들 라이브러리는 기존 문헌에서 기술된 바와 같이 비오틴화된 PSR 시약의 1:10 희석액과 함께 배양되었다 (가령, Xu et al, 위와 같음을 참조한다). 효모는 이후, 세척 완충액으로 2회 세척되고, 그리고 4℃에서 15 분 동안 LC-FITC (1:100 희석됨) 및 SA-633 ( 1:500 희석됨) 또는 EA-PE (엑스트라비딘-R-PE, 1:50 희석됨) 이차 시약으로 염색되었다. 세척 완충액으로 2회 세척한 후, 세포 펠렛이 0.3 mL 세척 완충액에서 재현탁되고 여과기-캡핑된 분류 튜브로 이전되었다. 분류는 FACS ARIA 분류기 (BD Biosciences)를 이용하여 수행되었고, 그리고 원하는 특징을 갖는 항체를 선별하기 위해 분류 게이트가 결정되었다. 선별 라운드는 모든 원하는 특징을 갖는 개체군이 획득될 때까지 반복되었다. 최종 라운드의 분류 후, 효모가 도말되었고, 그리고 개별 집락이 특징화를 위해 선발되었다.
항원은 재조합 이합체성 인간 TIGIT-Fc (Acro Biosystems TIT-H5254), 단위체성 인간 TIGIT (Sino Biological 10917-H08H), 이합체성 생쥐 TIGIT-Fc (R&D Systems, 7267-TG), 그리고 단위체성 생쥐 TIGIT (Sino Biologics 50939-M08H)를 포함하였다.
미경험 캠페인: 744개의 클론이 염기서열결정되어, 345개의 독특한 클론 (독특한 CDRH3)이 산출되었다. 18개의 VH 생식계열이 이들 클론에서 대표되었다.
경쇄 배치 다각화 캠페인: 6 라운드의 미경험 발견 선별로부터 농축된 결합제 풀로부터 중쇄 (VH) 플라스미드가 스매쉬 앤 그랩을 통해 효모로부터 추출되고, 대장균 (E. Coli)에서 증식되고, 그리고 차후에, 대장균으로부터 정제되고, 그리고 이후, 107의 다양성을 갖는 경쇄 라이브러리 내로 형질전환되었다.
선별은 미경험 발견에서와 본질적으로 동일한 조건 하에 수행되었다. 간단히 말하면, 1 라운드의 자성 비드 농축이 유세포분석법에 의한 3 라운드의 선별에 의해 이어졌다. 자성 비드 농축 라운드에서, 10 nM 비오틴화된 Fc-융합 항원이 이용되었다. 유세포분석기에서 첫 번째 라운드는 100 nM 비오틴화된 일가 항원을 이용한 양성 선별 라운드로 구성되었다. 이것은 두 번째 라운드에 의해 이어졌는데, 이것은 PSR 고갈에 대한 음성 선별 라운드로 구성되었다. 최종 (세 번째) 라운드는 양성 선별 라운드로 구성되었는데, 여기서 일가 항원은 100 nM, 10 nM, 1 nM에서 적정되었다. 모든 라이브러리에 대해, 이러한 세 번째 라운드로부터 1 nM 분류로부터 효모가 도말되었고, 그리고 개별 집락이 선발되고 특징화되었다. 전체로서, 728개의 클론이 염기서열결정되어, 350개의 독특한 HC/LC 조합 (93개의 독특한 CDRH3s)이 산출되었다.
총 695개의 독특한 클론이 미경험 캠페인 및 경쇄 배치 셔플 캠페인 사이에서 확인되었다.
실시예 2: 항-TIGIT 항체의 특징화
12개의 VH 생식계열 및 9개의 VL 생식계열을 나타내는 65개의 클론이 생산 및 추가 평가를 위해 선택되었다.
항체 생산 및 정제
효모 클론이 포화까지 성장되고, 그리고 이후, 진탕하면서 30℃에서 48 시간 동안 유도되었다. 유도 후, 효모 세포는 펠렛화되었고, 그리고 정제를 위해 상층액이 수확되었다. IgGs는 단백질 A 칼럼을 이용하여 정제되고 아세트산, pH 2.0으로 용리되었다. Fab 단편은 파파인 소화에 의해 산출되고 KappaSelect (GE Healthcare LifeSciences) 위에서 정제되었다.
재조합 인간 및 생쥐 단백질에 항-TIGIT 항체의 결합
ForteBio 친화성 계측이 기존 문헌에서 전반적으로 기술된 바와 같이 Octet RED384에서 수행되었다 (가령, Estep et al., "High throughput solution-based measurement of antibody-antigen affinity and epitope binning," Mabs, 2013, 5:270-278을 참조한다). 간단히 말하면, ForteBio 친화성 계측은 IgGs를 AHQ 센서 위에 온라인 부하함으로써 수행되었다. 센서는 30 분 동안 검정 완충액에서 오프라인 평형화되고, 그리고 이후, 기준선 확립을 위해 60 초 동안 온라인 모니터링되었다. 부하된 IgGs를 갖는 센서는 3 분 동안 100 nM 항원 (이합체성 Fc-융합 항원 또는 단위체성 항원)에 노출되고, 그리고 그 후에, 오프 레이트 계측을 위해 3 분 동안 검정 완충액으로 이전되었다. 모든 결합 및 해리 동역학은 1:1 결합 모형을 이용하여 분석되었다.
65개의 IgG 클론 중에서, 43개는 < 100 nM의 TIGIT 단위체에 대한 친화성을 가졌다. 65개의 IgG 클론 중에서, 34개는 생쥐 TIGIT-Fc와 교차반응하였다. 선별된 클론에 대한 결합 친화성은 아래의 표 1에서 도시된다.
에피토프 비닝/리간드 경쟁 검정
에피토프 비닝/리간드 차단이 ForteBio Octet RED384 시스템에서 표준 샌드위치 형식 교차 차단 검정을 이용하여 수행되었다. 대조 항-표적 IgG가 AHQ 센서 위에 부하되었고, 그리고 상기 센서 상에서 비점유된 Fc-결합 부위가 무관한 인간 IgG1 항체로 차단되었다. 이들 센서는 이후, 100 nM 표적 항원, 그 이후에 두 번째 항-표적 항체 또는 리간드 (인간 CD155-Fc (Sino Biological, 10109-H02H))에 노출되었다. 항원 연관 후 두 번째 항체 또는 리간드에 의한 추가 결합은 비점유된 에피토프 (비-경쟁자)를 지시하고, 반면 결합 없음은 에피토프 차단 (경쟁자 또는 리간드 차단)을 지시한다.
4개의 비닝 항체 (상호간에 배타적이지 않음)가 빈 사정에 이용되었고, 그리고 5개의 중첩 비닝 프로필이 확인되었다. 65개의 항-TIGIT 항체 중에서 63개는 hTIGIT-Fc에 결합에 대해 상기 리간드와 경쟁하였다. 선별된 클론에 대한 비닝 프로필 및 리간드 경쟁 결과는 아래에 표 1에서 도시된다.
표 1. 선별된 항-TIGIT 클론에 대한 에피토프 비닝, 리간드 경쟁, 그리고 친화성 데이터
클론 빈 코드 CD155 경쟁 IgG KD 인간 TIGIT-Fc (M) IgG KD 인간 TIGIT 단위체 (M) IgG KD 생쥐 TIGIT-Fc (M)
2 1, 2, 3, 4 예 9.56E-10 1.01E-08 2.03E-09
3 1, 2, 3, 4 예 2.77E-09 7.36E-08 5.64E-09
5 1, 2, 3, 4 예 9.85E-10 1.41E-08 3.25E-09
13 1, 2, 3 예 5.43E-10 2.56E-09 1.16E-10
14 1, 2, 3 예 2.01E-09 5.87E-08 2.43E-09
16 1, 2, 3 예 6.90E-10 2.06E-09 1.05E-08
18 1, 2, 3 예 2.39E-09 5.08E-08 8.82E-09
21 1, 2, 3 예 5.85E-10 2.18E-09 N.B.
22 1, 2, 3 예 7.90E-10 1.38E-08 1.05E-08
25 1, 2, 3 예 6.20E-10 6.18E-10 1.10E-09
27 1, 2, 3 예 5.58E-10 2.32E-09 N.B.
54 1, 2, 3 예 6.89E-10 3.49E-09 N.B.
주의:
N.B. = 이러한 검정의 조건 하에 비-결합제
빈 코드 및 CD155 경쟁 데이터는 실시예 2에서 설명된 바와 같이 표준 샌드위치 형식 교차 차단 검정을 이용하여 ForteBio Octet RED384 시스템에서 산출되었다.
KD 친화성 데이터는 실시예 2에서 설명된 바와 같이 ForteBio Octet RED384 시스템에서 산출되었다.
HEK 293 세포에서 과다발현된 인간, 생쥐 및 시노몰구스 원숭이 TIGIT에 항-TIGIT 항체의 결합
HEK 293 세포가 렌티바이러스 형질도입에 의해 높은 수준의 인간, 생쥐 또는 시노몰구스 원숭이 TIGIT를 안정되게 발현하도록 가공되었다. 대략 100,000개의 부모 HEK 293 (TIGIT-음성) 세포, 또는 인간, 생쥐 또는 시노몰구스 원숭이를 과다발현하는 HEK 293 세포가 실온에서 5 분 동안 100 nM의 각 항-TIGIT 항체로 염색되었다. 세포는 이후, 세척 완충액으로 2회 세척되고, 그리고 얼음 위에서 15 분 동안, PE에 접합된 항인간 IgG와 함께 배양되었다. 세포는 이후, 세척 완충액으로 2회 세척되고, 그리고 FACS Canto II 기기 (BD Biosciences)에서 유세포분석법에 의해 분석되었다. 배경 대비 배수 (FOB)가 표적-음성 세포에 결합된 항-TIGIT 클론의 MFI에 의해 나눗셈된, 표적-양성 세포에 결합된 항-TIGIT 클론의 중앙 형광 강도 (MFI)로서 계산되었다.
도 1에서 도시된 바와 같이, 65개 항체 모두 293-hTIGIT 라인에 특이적 결합을 보여주었다 (FOB>10, 차트 내에 수평 흑색 라인에 의해 지시된 바와 같이). 53개의 클론은 293-cyTIGIT 라인에 특이적으로 결합하였고, 반면 31개의 클론은 293-mTIGIT 라인에 특이적으로 결합하였다.
다중특이성 시약 (PSR) 검정
다중특이성 시약에 결합의 사정이 기존 문헌에서 기술된 바와 같이 TIGIT에 대한 특이성을 결정하기 위해 수행되었다 (가령, Xu et al, 위와 같음을 참조한다). 간단히 말하면, 스톡으로부터 1:10 희석된 비오틴화된 PSR 시약이 얼음 위에서 20 분 동안 IgG-제시 효모와 함께 배양되었다. 세포는 세척되고, EA-PE (엑스트라비딘-R-PE)로 표지화되고, 그리고 FACS 분석기에서 판독되었다. 다중특이적 결합의 채점은 0 내지 1 규모이고, 그리고 낮은, 중간 및 높은 비특이적 결합을 갖는 대조 IgGs와 상관되는데, 0의 점수는 결합 없음을 지시하고, 그리고 1의 점수는 매우 높은 비특이적 결합을 지시한다.
65개의 클론 중에서 62개는 < 0.10의 PSR 점수를 갖는 비-다중특이적 결합제로서 채점되었다. 3개의 클론은 낮은 다중특이적 결합제로서 채점되었다 (PSR 점수 0.10 - 0.33).
소수성 상호작용 크로마토그래피 검정
소수성 상호작용 크로마토그래피 (HIC)가 기존 문헌에서 기술된 바와 같이 수행되었다 (Estep et al., 위와 같음). 간단히 말하면, 5 μg IgG 표본이 분석 전 약 1 M의 최종 황산암모늄 농도를 달성하기 위해, 이동상 A 용액 (pH 6.6에서 1.8 M 황산암모늄 및 0.1 M 인산나트륨)으로 스파이크되었다. 1 mL/분의 유속에서 20 분에 걸쳐 이동상 A 및 이동상 B 용액 (0.1 M 인산나트륨, pH 6.5)의 선형 구배를 갖는 Sepax Proteomix HIC 부틸-NP5 칼럼이 이용되었고, UV 흡광도 모니터링이 280 nM에서 수행되었다.
소수성 칼럼 상에서 항체의 증가된 체류는 증가된 소수성, 그리고 정제 동안 불량한 발현, 응집 또는 침전에 대한 성향과 상관되었다. 65개의 클론 중에서 5개는 > 11.5 분의 높은 HIC 체류 시간을 가졌고, 10개의 클론은 10.5 - 11.5 분의 중간 HIC 체류 시간을 가졌고, 그리고 이들 클론 중에서 나머지는 낮은 HIC 체류 시간을 가졌다.
실시예 3: 일차 T 세포에서 내생적으로 발현된 인간, 생쥐 및 시노몰구스 원숭이 TIGIT에 항-TIGIT 항체의 결합
HEK 293 세포에서 발현된 인간 TIGIT 재조합 단백질 및 인간 TIGIT에 대해 특이적인 것으로 밝혀진 65개의 항체가 일차 인간 말초혈 T 세포에서 내인성 TIGIT에 결합하는 능력에 대해 평가되었다. 항체는 또한, 말초혈 T 세포에서 시노몰구스 TIGIT에 대한 교차반응성에 대해 평가되었고, 그리고 65개 클론 중에서 35개가 활성화된 비장 T 세포에서 생쥐 TIGIT에 대한 교차반응성에 대해 평가되었다.
인간 범 T 세포가 백혈구성분채집술 산물로부터 99% 순도까지 음성적으로 단리되었다. 100,000개의 세포가 20 μg/mL의 각 항-TIGIT 항체와 함께 4℃에서 30 분 동안 염색되었다. 이들 항-TIGIT 항체는 PE에 접합된 다중클론 염소 항인간 IgG (Jackson ImmunoResearch 109-116-098)로 검출되었다. 표본은 CytoFLEX 유세포분석기에서 분석되었다. 양성에 대한 역치를 결정하기 위해, FSC/SSC 게이팅된 림프구 개체군의 TIGIT+ 퍼센트가 항인간 IgG-PE 단독 염색을 이용하여 각 항체에 대해 결정되었다.
시노몰구스 백혈구가 적혈구 용해 (eBioscience 00-4300)에 의해 전혈로부터 단리되었다. 200,000개의 세포가 20 μg/mL의 각 항-TIGIT 항체와 함께 4℃에서 30 분 동안 염색되었다. 이들 항-TIGIT 항체는 AlexaFluor647 (SouthernBiotech 2049-31)에 접합된 원숭이 면역글로불린에 대항하여 흡착된 다중클론 염소 항인간 IgG로 검출되었고, 그리고 T 세포가 FITC-접합된 항-CD3 클론 SP34 (BD Pharmingen 556611)로 대비염색에 의해 확인되었다. 표본은 CytoFLEX 유세포분석기에서 분석되었다. CD3+ 개체군의 TIGIT+ 퍼센트가 양성에 대한 역치를 결정하기 위해, 항인간 IgG-PE 단독 염색을 이용하여 각 항체에 대해 결정되었다.
BALB/c 생쥐 T 세포가 음성 선별 (Stem Cell Technologies 19851A)에 의해 비장으로부터 >99% 순도까지 단리되었다. 이들 세포는 TIGIT를 상향조절하기 위해, 평판 결합된 항-CD3 클론 145-2C11 (BioLegend 100302)로 24 시간 동안 활성화되었다. 200,000개의 활성화된 세포가 20 μg/mL의 각 항-TIGIT 항체와 함께 4℃에서 30 분 동안 염색되었다 (65개의 클론 중에서 35개가 검사됨). 이들 항-TIGIT 항체는 PE에 접합된 다중클론 염소 항인간 IgG (Jackson ImmunoResearch 109-116-098)로 검출되었다. 표본은 FACSCalibur 유세포분석기에서 분석되었다. FSC/SSC 게이팅된 림프구 개체군의 중앙 형광 강도가 각 항체에 대해 결정되었다.
도 2는 일차 인간, 시노몰구스 원숭이 및 생쥐 T 세포에 65개의 항-TIGIT 항체 클론 및 무관한 아이소타입 대조 항체의 결합을 보여준다. 클론 13과 25 둘 모두 3가지 종류의 T 세포 모두에 강한 결합을 보여주었다.
세포 표면 발현된 TIGIT에 항-TIGIT 항체의 적정가능 결합
HEK 293 세포가 렌티바이러스 형질도입에 의해 높은 수준의 인간, 생쥐 또는 시노몰구스 원숭이 TIGIT를 안정되게 발현하도록 가공되었다. 200,000개의 293-TIGIT 세포가 10-포인트, 3-배 적정 (30 내지 0.002 μg/mL)의 각 항-TIGIT 항체와 함께 4℃에서 30 분 동안 염색되었다. 이들 항-TIGIT 항체는 PE에 접합된 다중클론 염소 항인간 IgG (Jackson ImmunoResearch 109-116-098)로 검출되었다. 표본은 CytoFLEX 유세포분석기에서 분석되었다. FSC/SSC 게이팅된 개체군의 중앙 형광 강도가 각 항체 농도에 대해 결정되었다. 로그(X) 변환된 데이터의 비선형 회귀가 GraphPad Prism 6에서 EC50 값을 산출하는데 이용되었다. 이들 항-TIGIT 항체 중에서 어느 것도 부모 HEK 293 세포 (TIGIT-)에 결합을 보여주지 않았다 (데이터 제시되지 않음). 도 3a-c는 결합 적정을 보여주고, 그리고 도 3d는 HEK 293 세포에서 발현된 인간, 시노몰구스 원숭이 및 생쥐 TIGIT에 8개의 항-TIGIT 항체 클론 (클론 2, 클론 5, 클론 13, 클론 16, 클론 17, 클론 20, 클론 25 및 클론 54)의 결합의 EC50을 보여준다.
C57BL/6 생쥐 T 세포가 음성 선별 (Stem Cell Technologies 19851A)에 의해 비장으로부터 >99% 순도까지 단리되었다. 이들 세포는 TIGIT를 상향조절하기 위해, 평판 결합된 항-CD3 클론 145-2C11 (BioLegend 100302)로 24 시간 동안 활성화되었다. 200,000개의 세포가 8-포인트, 3-배 적정 (30 내지 0.014 μg/mL)의 각 항-TIGIT 항체로 4℃에서 30 분 동안 염색되었다. 이들 항-TIGIT 항체는 PE에 접합된 다중클론 염소 항인간 IgG (Jackson ImmunoResearch 109-116-098)로 검출되었다. 표본은 FACSCalibur 유세포분석기에서 분석되었다. FSC/SSC 게이팅된 림프구 개체군의 중앙 형광 강도가 각 항체에 대해 결정되었다. 로그(X) 변환된 데이터의 비선형 회귀가 GraphPad Prism 6에서 EC50 값을 산출하는데 이용되었다. 도 4는 활성화된 생쥐 비장 T 세포에 항-TIGIT 클론 13과 25의 결합의 결합 적정 및 EC50을 보여준다.
실시예 4: 항-TIGIT 항체는 세포 표면-발현된 TIGIT에 CD155와 CD112 리간드의 결합을 차단한다
HEK 293 세포가 렌티바이러스 형질도입에 의해 높은 수준의 인간 또는 생쥐 TIGIT를 안정되게 발현하도록 가공되었다. hCD155-Fc (Sino Biological 10109-H02H), hCD112-Fc (Sino Biological 10005-H02H) 및 mCD155-Fc (Sino Biological 50259-M03H)가 AlexaFluor647 (ThermoFisher A30009)에 접합되었다. 200,000개의 293-hTIGIT 또는 293-mTIGIT 세포가 1 μg/mL CD155-Fc-AlexaFluor647 또는 5 μg/mL CD112-Fc-AlexaFluor647 및 12-포인트, 2-배 적정 (10 내지 0.005 μg/mL)의 각 항-TIGIT 항체 또는 아이소타입 대조 항체와 공동배양되었다. 표본은 CytoFLEX 유세포분석기에서 분석되었다. FSC/SSC 게이팅된 개체군의 중앙 형광 강도가 각 항체 농도에 대해 결정되었다. 차단 퍼센트가 항체 없음 대조의 MFI에 상대적으로 계산되었다. 로그(X) 변환된 데이터의 비선형 회귀가 GraphPad Prism 6에서 수행되었다.
도 5a-b에서 도시된 바와 같이, 6개의 항-TIGIT 항체 클론 (클론 2, 클론 5, 클론 13, 클론 17, 클론 25 및 클론 55)이 검사되었고, 그리고 이들 6개 클론 중에서 5개 (클론 2, 클론 5, 클론 13, 클론 17 및 클론 25)가 인간 CD155/인간 TIGIT 및 생쥐 CD155/생쥐 TIGIT 둘 모두에 대해, HEK 293 세포에서 발현된 TIGIT와의 CD155 상호작용을 유의미하게 차단하였다. 클론 55는 인간 TIGIT에 특이적으로 결합하지만, ForteBio Octet 리간드 경쟁 검정에서 hTIGIT-Fc에 결합에 대해 hCD155-Fc와 경쟁하지 않았다. 유사하게, 클론 55는 293-hTIGIT 세포주와의 hCD155 상호작용을 효율적으로 차단하지 못하였다. 클론 2, 클론 5, 클론 13, 클론 17 및 클론 25는 또한, 인간 TIGIT에 인간 CD112의 결합을 방해할 수 있었다. CD155에 대해 관찰된 바와 같이, 클론 55는 CD112-TIGIT 상호작용을 차단하는데 훨씬 덜 효과적이었다. 도 6을 참조한다.
실시예 5: TIGIT/CD155 차단 생물학적 검정에서 항-TIGIT 항체의 시험관내 활성
항-TIGIT 항체의 활성은 TIGIT/CD155 차단 생물학적 검정 (가령, TIGIT/CD155 차단 생물학적 검정 키트, Promega Corp., Madison, WI)을 이용하여 기능적으로 특징화될 수 있는데, 여기서 항체가 TIGIT/CD155 상호작용을 차단할 때, 리포터 유전자의 발현이 유도되거나 또는 증강된다. TIGIT/CD155 차단 생물학적 검정은 2가지 세포 유형을 포함한다: 세포 표면상에서 TIGIT, CD226 및 TCR 복합체를 발현하고 루시페라아제 리포터 유전자를 내포하는 작동체 세포; 그리고 세포 표면상에서 CD155 및 TCR 활성인자를 발현하는 인공 항원 제시 세포. 이러한 생물학적 검정에서, 루시페라아제 발현은 TCR 포용 플러스 동시자극성 신호를 필요로 한다. CD155-TIGIT 상호작용은 CD155-CD226 상호작용보다 더욱 높은 친화성을 갖고, 순 저해 신호전달 및 루시페라아제 발현 없음을 유발한다. CD155-TIGIT 상호작용의 차단은 루시페라아제 발현을 주동하는 CD155-CD226 동시자극을 허용한다.
TIGIT 및 CD226 둘 모두를 발현하는 Jurkat 작동체 세포가 TCR 활성인자 및 CD155를 발현하는 CHO-K1 인공 항원 제시 세포 (aAPCs)와 공동배양되었다. 이들 Jurkat 작동체 세포는 IL-2 프로모터에 의해 주동된 루시페라아제 리포터 유전자를 내포한다. 차단성 항-TIGIT 항체의 부재에서, CD155-TIGIT 포용은 T 세포 동시저해 및 IL-2 프로모터 활성 없음을 야기한다. 항-TIGIT 항체의 첨가 시에, CD155-TIGIT 상호작용이 중단되어, CD155가 CD226와 상종하여 동시자극성 신호를 보내고 루시페라아제 발현을 주동하는 것이 허용된다.
aAPCs는 96-웰 평판에서 도말되고 하룻밤 동안 부착하도록 허용되었다. 다음 날, 20 μg/mL의 각 항-TIGIT 항체 또는 아이소타입 대조 항체 및 Jurkat 작동체 세포가 상기 평판에 첨가되었다. 37℃에서 6 시간 배양 후, 세포가 용해되었고, 그리고 루시페라아제 기질이 첨가되었다. 루시페라아제 활성이 평판 판독기에서 정량되었다. 루시페라아제 활성은 항체 없음 대조에서 신호 대비 배수로서 계산되었다.
도 7a-7b에서 도시된 바와 같이, 12개의 항-TIGIT 항체 클론은 이러한 생물학적 검정에서 기능적 차단을 나타냈다.
실시예 6: TIGIT/PD-1 조합 생물학적 검정에서 항-TIGIT 항체의 시험관내 활성
항-PD-1 작용제 (가령, 항-PD-1 항체)와 조합으로 항-TIGIT 항체의 상승적 활성은 TIGIT/PD-1 조합 생물학적 검정을 이용하여 기능적으로 특징화될 수 있는데, 여기서 항체가 TIGIT/CD155 상호작용 및 PD-1/PD-L1 상호작용 둘 모두를 차단할 때, 리포터 유전자의 발현이 증강된다. 생물학적 검정은 2가지 세포 유형을 포함한다: 세포 표면상에서 TIGIT, CD226, PD-1 및 TCR 복합체를 발현하고 루시페라아제 리포터 유전자를 내포하는 작동체 세포; 그리고 세포 표면상에서 CD155, PD-L1 및 TCR 활성인자를 발현하는 인공 항원 제시 세포. 이러한 생물학적 검정에서, 루시페라아제 발현은 TCR 포용 플러스 동시자극성 신호를 필요로 한다. CD155-TIGIT 상호작용은 CD155-CD226 상호작용보다 더욱 높은 친화성을 갖고, 순 저해 신호전달 및 루시페라아제 발현 없음을 유발한다. 추가적으로, PD-1에 PD-L1의 결합은 루시페라아제 발현을 저해한다. CD155-TIGIT 상호작용 및 PD-1/PD-L1 상호작용 둘 모두의 차단은 이러한 저해를 완화하고, 그리고 루시페라아제 발현을 주동하는 CD155-CD226 동시자극을 허용한다.
PD-1, TIGIT 및 CD226을 발현하는 Jurkat 작동체 세포가 TCR 활성인자, PD-L1 및 CD155를 발현하는 CHO-K1 인공 항원 제시 세포 (aAPCs)와 공동배양되었다. 이들 Jurkat 작동체 세포는 IL-2 프로모터에 의해 주동된 루시페라아제 리포터 유전자를 내포한다. 차단성 항-TIGIT 항체의 부재에서, PD-L1-PD-1 및 CD155-TIGIT 포용은 T 세포 동시저해 및 IL-2 프로모터 활성 없음을 야기한다. 항-PD-1 및 항-TIGIT 항체의 첨가 시에, PD-L1-PD-1 상호작용이 차단되어, 한 가지 동시저해성 신호가 완화되고, 그리고 CD155-TIGIT 상호작용이 중단되어, CD155가 CD226와 상종하고 동시자극성 신호를 보내고 루시페라아제 생산을 주동하는 것이 허용된다.
aAPCs는 96-웰 평판에서 도말되고 하룻밤 동안 부착하도록 허용되었다. 다음 날, 10-포인트 2.5-배 적정 (100 내지 0.03 μg/mL)의 각 항-TIGIT 항체 단독, 또는 항-PD-1 항체 (클론 EH12.2H7, BioLegend, San Diego, CA), 또는 각 항-TIGIT 항체 + 항-PD-1 항체 (1:1 비율) 및 Jurkat 작동체 세포가 상기 평판에 첨가되었다. 37℃에서 6 시간 배양 후, 세포가 용해되었고, 그리고 루시페라아제 기질이 첨가되었다. 루시페라아제 활성이 평판 판독기에서 정량되었다. 루시페라아제 활성은 항체 없음 대조에서 신호 대비 배수로서 계산되었다. 도 8에서 도시된 바와 같이, 항-TIGIT 및 항-PD-1 단독 중에서 어느 것도 극적인 Jurkat 활성화를 야기하지 않았지만, 항-TIGIT 클론 13 또는 클론 25의 항-PD-1과의 조합은 강한 활성화를 산출하였다.
실시예 7: BALB/c 생쥐에서 CT26 동계 종양 모형에서 항-TIGIT 항체의 생체내 활성
뮤린 TIGIT에 대한 친화성에 근거하여, 항-TIGIT 클론 13이 뮤린 동계 종양 모형에서 평가를 위해 선택되었다. Fc 아이소타입이 길항성 TIGIT 항체의 생체내 효력에 영향을 주는 지의 문제를 다루기 위한 생체내 실험을 위해, 부모 완전 인간 항-TIGIT 클론 13의 생쥐 IgG1 및 생쥐 IgG2a 키메라가 산출되었다. 시험관내에서, 이들 키메라 항체는 (1) 인간, 생쥐 및 시노몰구스 원숭이 TIGIT에 결합, (2) 세포 표면 발현된 TIGIT에 CD155와 CD112 리간드 결합의 차단 및 (3) CD155-TIGIT 차단 생물학적 검정에서 활성에 대하여 부모 hIgG1 항체와 유사한 활성을 보여주었다. 도 9a-9h를 참조한다.
19 g의 평균 체중을 갖는 8 주령 BALB/c 생쥐가 Charles River Laboratories로부터 획득되었다. 생쥐는 오른쪽 편측 옆구리에 300,000개의 CT26 결장 암종 세포가 피하 이식되었다. 종양은 종양 접종 후 7 일자에서 군 평균 종양 체적이 72 mm3 (48 - 88 mm3의 범위)일 때까지, 진행하도록 허용되었다. 동물은 군 평균 종양 체적이 모든 치료군 전역에서 유사하도록, 쌍 정합에 의해 n=10의 10가지 치료군으로 배정되었다. 종양 길이와 너비가 계측되었고, 그리고 종양 체적이 공식 체적 (mm3) = 0.5 * 길이 * 너비2 (여기서 길이는 더욱 긴 쪽 치수이다)를 이용하여 계산되었다. 항-TIGIT 클론 13 mIgG1, 항-TIGIT 클론 13 mIgG2a 및 항-PD-1 클론 RMP1-14 (BioXCell)가 무균 PBS에서 투약을 위한 온당한 농도로 희석되었다. 무균 PBS가 운반제 대조로서 이용되었다. TIGIT 항체가 3 주 동안 주 2회 복막내 주사를 통해 5 또는 20 mg/kg에서 투약되었다 (총 6회 투약). 항-PD-1 항체가 2 주 동안 주 2회 복막내 주사를 통해 5 mg/kg에서 투약되었다 (총 4회 투약). 투약은 배정의 일자 (연구 1 일자)에서 시작되었다. 생쥐가 2000 mm3의 종양 체적 컷오프에 도달할 때까지, 종양 체적 및 체중 치수가 주 2회 수집되었다. 이들 동물 중에서 어느 것도 투약전 체중에 비하여 체중 감소를 전시하지 않았는데, 이것은 모든 검사 작용제의 이례적인 내약성을 지시한다.
도 10a에서 도시된 바와 같이, 항-mPD-1 단독은 종양 진행에 대한 어떤 효과도 갖지 않았다. 활성화 Fc감마 수용체를 효율적으로 포용하지 않는, 클론 13의 mIgG1 항-TIGIT 키메라 ("13-1")는 단일 작용제로서 또는 항-PD-1과 조합으로, 어떤 항종양 활성도 매개하지 못하였다. 대조적으로, 활성화 Fc감마 수용체에 결합할 수 있는, 클론 13의 mIgG2a 키메라 ("13-2")는 종양 진행을 늦추었다 (18 일자에서 86.5% (5 mg/kg) 또는 74.4% (20 mg/kg) 종양 성장 저해). 5 mg/kg 13-2 단일 작용제 군에서 10마리 동물 중에서 3마리는 연구의 종료 (연구 46 일자)까지 안정된 완전한 종양 퇴화를 보여주었다. 20 mg/kg 13-2 단일 작용제 군에서, 10마리 동물 중에서 2마리는 부분적인 종양 퇴화 (3회 연속 계측 동안 초기 체적의 <50%인 종양 체적으로서 규정됨)를 보여주었다. 도 10a는 mIgG2a 클론 13 키메라 (13-2)에 항-PD-1의 첨가가 13-2 단독에 비하여 효력을 증가시키지 못한다는 것을 보여준다 (53.8% (5 mg/kg 항-TIGIT + 5 mg/kg 항-PD1) 대 86.5% (5 mg/kg 항-TIGIT 단독) 및 89.6% (20 mg/kg 항-TIGIT + 5 mg/kg 항-PD-1) 대 74.4% (20 mg/kg 항-TIGIT 단독)의 18 일자 종양 성장 저해. 유사한 숫자의 완전한 반응자 및 부분적인 반응자가 조합 군에서 관찰되었다. 가령, 도 10b-10k를 참조한다.
실시예 8: 항체 최적화 및 최적화된 항체의 특징화
일차 발견 출력으로부터 항체 클론 2, 13, 16 및 25가 추가 친화성 성숙을 위해 선택되었다. 항체의 최적화는 중쇄 가변 영역 내로 다양성을 도입하는 것을 통해 수행되었다. 2회 주기의 최적화가 상기 계통에 적용되었다. 첫 번째 주기는 CDRH1 및 CDRH2 다각화 접근법으로 구성되었고, 반면 두 번째 주기에서는 CDRH3 돌연변이유발 접근법이 적용되었다.
CDRH1 및 CDRH2 접근법: 단일 항체의 CDRH3이 1 x 108의 다양성의 CDRH1 및 CDRH2 변이체를 갖는, 미리 만들어진 라이브러리로 재조합되었다. 선별은 이후, 미경험 발견에서 설명된 바와 같은 1 라운드의 MACS 및 4 라운드의 FACS로 수행되었다.
첫 번째 FACS 라운드에서, 라이브러리는 1 nM 단위체성 TIGIT 결합에 대해 분류되었다. 두 번째 FACS 라운드는 다중특이성을 감소시키기 위한 PSR 고갈 라운드이었다. 최종 2회 라운드는 높은 친화성에 대한 압력을 가하기 위한, 부모 Fab 또는 IgG를 이용한 양성 선별 라운드이다. Fab/IgG 압력은 하기와 같이 수행되었다: 항원이 10 배의 부모 Fab 또는 IgG와 함께 배양되고, 그리고 이후, 효모 라이브러리와 함께 배양되었다. 선별은 부모 Fab 또는 IgG보다 더욱 우수한 친화성을 갖는 IgGs에 대해 농축되었다. 종 교차반응성이 마지막 2회 라운드의 FACS에서 조사되었다.
CDRH3 돌연변이유발: CDRH3에서 위치를 무작위화함으로써 CDRH3 다각화를 갖는 라이브러리가 산출되었다. 선별은 전술된 바와 같이 1 라운드의 MACS 및 3 라운드의 FACS로 수행되었다. PSR 음성 선별, 종 교차반응성, 친화성 압력, 그리고 분류가 원하는 특징을 갖는 개체군을 획득하기 위해 수행되었다.
MSD-SET K D 계측
평형 친화성 계측이 기존 문헌에서 전반적으로 기술된 바와 같이 수행되었다 (Estep et al., 위와 같음). 간단히 말하면, 용액 평형 적정 (SET)이 50 pM에서 일정하게 유지된 비오틴화된 인간 TIGIT-His 단위체를 포함하는 PBS + 0.1% IgG-없는 BSA (PBSF)에서 수행되고, 그리고 대략 5 nM에서 시작하는 항체의 3- 내지 5-배 계열 희석액과 함께 배양되었다. 항체 (PBS에서 20 nM)가 4℃에서 하룻밤 동안 또는 실온에서 30 분 동안 표준 결합 MSD-ECL 평판 위에 코팅되었다. 평판은 이후, 700 rpm에서 진탕하면서 30 분 동안 1% BSA로 차단되었고, 그 이후에 세척 완충액 (PBSF + 0.05% Tween 20)으로 3회 세척이 이어졌다. SET 표본이 700 rpm에서 진탕하면서 평판 위에 150s 동안 적용되고 배양되었고, 그 이후에 1회 세척이 이어졌다. 평판에서 포획된 항원은 3 분 동안 평판 위에서 배양에 의해, PBSF에서 250 ng/ml 술포태그-표지화된 스트렙타비딘으로 검출되었다. 이들 평판은 세척 완충액으로 3회 세척되고, 그리고 이후, 계면활성제를 포함하는 1x 판독 완충액 T를 이용하여 MSD 섹터 영상장치 2400 기기에서 판독되었다. 유리 항원 퍼센트가 Prism에서 적정된 항체의 함수로서 플로팅되고, 그리고 KD를 도출하기 위해 이차 방정식에 적합되었다. 처리량을 향상시키기 위해, 액체 취급 로봇이 SET 표본 준비를 비롯한 MSD-SET 실험 내내 이용되었다.
His-태깅된 인간 TIGIT, cyno TIGIT-Fc 및 생쥐 TIGIT-Fc에 이들 최적화된 항체의 결합은 전술된 바와 같이 ForteBio 시스템을 이용하여 계측되었다. 이들 최적화된 항체는 또한, 전술된 바와 같이, CD155 리간드 경쟁 검정에서 리간드 차단에 대해, 그리고 인간 TIGIT HEK, cyno TIGIT HEK, 생쥐 TIGIT HEK 및 부모 HEK 세포주에 결합에 대해 검사되었다.
친화성 최적화된 항체에 대한 친화성 데이터 및 세포 결합 데이터는 아래의 표 2에서 도시된다.
표 2. 친화성 최적화된 항체에 대한 친화성 및 세포 결합 데이터
클론 지수 ForteBio IgG K D 인간 TIGIT-His (M) 일가 ForteBio IgG K D Cyno TIGIT-Fc (M) 결합능 ForteBio IgG K D 뮤린 TIGIT-Fc (M) 결합능 MSD IgG K D (M) 인간 TIGIT-His 세포 결합 인간 TIGIT HEK 세포 (FOB 배경 대비 배수) 세포 결합 Cyno TIGIT HEK 세포 (FOB 배경 대비 배수) 세포 결합 생쥐 TIGIT HEK 세포 (FOB 배경 대비 배수)
2 8.18E-09 1.34E-09 1.76E-09 해당 없음 158 162 73
2C 5.18E-10 9.84E-10 3.92E-10 1.60E-11 193 224 100
13 2.63E-09 1.04E-09 3.41E-10 해당 없음 212 224 119
13A 6.27E-10 1.12E-09 3.70E-10 2.50E-11 206 240 115
13B 6.10E-10 1.05E-09 3.30E-10 5.30E-12 201 235 102
13C 5.63E-10 1.07E-09 3.29E-10 8.60E-12 194 281 116
13D 5.71E-10 1.16E-09 3.64E-10 5.00E-12 190 245 116
16 2.52E-09 4.67E-09 9.07E-09 해당 없음 192 27 19
16C 9.11E-10 4.25E-09 8.01E-10 6.30E-12 208 157 99
16D 5.96E-10 1.15E-09 2.63E-09 1.30E-11 199 241 63
16E 7.78E-10 1.36E-09 3.70E-09 1.10E-11 195 186 56
25 1.27E-09 1.50E-09 9.67E-10 해당 없음 205 247 117
25A 1.10E-09 1.64E-09 8.23E-10 1.80E-11 207 238 119
25B 1.16E-09 1.40E-09 7.19E-10 2.20E-11 222 291 129
25C 6.97E-10 1.24E-09 4.94E-10 5.60E-12 216 286 124
25D 8.46E-10 1.18E-09 5.80E-10 2.70E-11 225 272 137
25E 8.51E-10 1.18E-09 5.66E-10 1.30E-11 204 252 116
실시예 9: 에피토프 지도화
본원에서 개시된 단일클론 항체 중에서 2가지, 클론 13 및 클론 25의 에피토프가 펩티드 어레이에 의해 특징화되었다. 표적 분자의 에피토프를 재구성하기 위해, 펩티드 기초된 에피토프 모방체의 라이브러리가 고체상 Fmoc 합성을 이용하여 합성되었다. 아미노 기능화된 폴리프로필렌 지지체가 독점 친수성 중합체 제제와의 합체, 그 이후에 N히드록시벤조트리아졸 (HOBt)과 함께 디시클로헥실카르보디이미드 (DCC)를 이용한 t-부틸옥시카르보닐-헥사메틸렌디아민 (BocHMDA)과의 반응 및 트리플루오로아세트산 (TFA)을 이용한 Boc-기의 차후 개열에 의해 획득되었다. 표준 Fmoc-펩티드 합성이 맞춤 변형된 JANUS 액체 취급 스테이션 (Perkin Elmer)에 의해, 아미노-기능화된 고체 지지체 상에서 펩티드를 합성하는데 이용되었다.
구조적 모방체의 합성은 독점된 골격 상에서 화학적으로 연결된 펩티드 (CLIPS) 기술 (Pepscan)을 이용하여 수행되었다. CLIPS 기술은 펩티드를 단일 루프, 이중-루프, 삼중 루프, 시트-유사 접힘, 나선-유사 접힘, 그리고 이들의 조합을 구축하는 것을 허용한다. CLIPS 주형은 시스테인 잔기에 연계된다. 펩티드 내에 복수 시스테인의 측쇄가 1개 또는 2개의 CLIPS 주형에 연계된다. 가령, P2 CLIPS (2,6-비스(브로모메틸)피리딘)의 0.5 mM 용액이 암모늄 중탄산염 (20 mM, pH 7.8)/아세토니트릴 (1:3(v/v))에서 용해된다. 이러한 용액은 펩티드 어레이 위에 첨가된다. CLIPS 주형은 펩티드-어레이 (3 μl 웰을 갖는 455개의 웰 평판)의 고체상 결합된 펩티드 내에 존재하는 2개의 시스테인의 측쇄에 결합할 것이다. 이들 펩티드 어레이는 용해 상태에서 완전히 커버되어 있는 동안, 30 내지 60 분 동안 상기 용액에서 부드럽게 진탕된다. 최종적으로, 이들 펩티드 어레이는 과잉의 H2O로 광범위하게 세척되고, 그리고 70℃에서 30 분 동안 PBS (pH 7.2)에서 1 % SDS/0.1 % 베타-메르캅토에탄올을 내포하는 붕괴 완충액에서 초음파처리되고, 그 이후에 추가로 45 분 동안 H2O에서 초음파처리가 이어졌다. T3 CLIPS 운반 펩티드는 3개의 시스테인을 갖는다는 점을 제외하고, 유사한 방식으로 만들어졌다.
상이한 세트의 펩티드가 하기의 설계에 따라서 합성되었다. 세트 1은 1개 잔기의 오프셋을 갖는 인간 TIGIT의 표적 서열로부터 유래된 15개 아미노산의 길이를 갖는 한 세트의 선형 펩티드를 포함하였다. 세트 2는 위치 10 및 11에서 잔기가 Ala에 의해 대체된 점을 제외하고, 세트 1의 선형 펩티드 세트를 포함하였다. 선천적 Ala가 어느 한쪽 위치에서 발생할 때, 이것은 Gly에 의해 대체되었다. 세트 3은 Cys 잔기를 내포하는, 세트 1의 선형 펩티드 세트를 포함하였다. 이러한 세트에서, 선천적 Cys는 Cys-아세트아미도메틸 ("Cys-acm")에 의해 대체되었다. 세트 4는 1개 잔기의 오프셋을 갖는 인간 TIGIT의 표적 서열로부터 유래된 17개 아미노산의 길이를 갖는 한 세트의 선형 펩티드를 포함하였다. 위치 1 및 17에는 mP2 CLIPS에 의하여 고리 모양으로 구부러진 모방체를 창출하는데 이용된 Cys 잔기가 존재하였다. 선천적 Cys는 Cys-acm으로 대체되었다. 세트 6은 1개 잔기의 오프셋을 갖는 인간 TIGIT의 표적 서열로부터 유래된 22개 아미노산의 길이를 갖는 한 세트의 선형 펩티드를 포함하였다. 위치 11 및 12에서 잔기가 "PG" 모티프로 대체되었고, 반면 mP2를 갖는 제약된 모방체를 창출하기 위해, 위치 1 및 22 상에 Cys 잔기가 배치되었다. 선천적 Cys 잔기는 Cys-acm에 의해 대체되었다. 세트 7은 27개 아미노산의 길이를 갖는 한 세트의 선형 펩티드를 내포하였다. 위치 1-11 및 17-27에는 표적 서열로부터 유래되고 "GGSGG" 링커를 통해 연결된 11-mer 펩티드 서열이 존재하였다. 인간 TIGIT에 대한 디설피드 가교화에 관한 UniProt 정보에 근거하여 조합이 만들어졌다. 세트 8은 33개 아미노산의 길이를 갖는 한 세트의 조합 펩티드를 포함하였다. 위치 2-16 및 18-32에는 인간 TIGIT의 표적 서열로부터 유래된 15-mer 펩티드가 존재하였다. 위치 1, 17 및 33에는 T3 CLIPS에 의하여 불연속적 모방체를 창출하는데 이용된 Cys 잔기가 존재하였다.
각각의 합성된 펩티드에 항체의 결합이 펩스캔-기초된 ELISA에서 검사되었다. 이들 펩티드 어레이는 일차 항체 용액과 함께 배양되었다 (4℃에서 하룻밤 동안). 세척한 후, 이들 펩티드 어레이는 25℃에서 1 시간 동안 염소 항인간 HRP 접합체 (Southern Biotech)의 1/1000 희석액과 함께 배양되었다. 세척한 후, 페록시다아제 기질 2,2'-아지노-디-3-에틸벤즈티아졸린 술폰산염 (ABTS) 및 20 μl/ml의 3 퍼센트 H2O2가 첨가되었다. 1 시간 후, 발색 현상이 계측되었다. 이러한 발색 현상은 전하 결합 소자 (CCD) - 카메라 및 영상 처리 시스템으로 정량되었다. CCD 카메라로부터 획득된 값은 표준 96-웰 평판 ELISA-판독기와 유사하게, 0 내지 3000 mAU의 범위에 있다.
합성된 펩티드의 품질을 실증하기 위해, 양성과 음성 대조 펩티드의 별개의 세트가 병렬적으로 합성되었다. 이들은 상업적인 항체 3C9 및 57.9로 선별검사되었다 (Posthumus et al., J. Virol., 1990, 64:3304-3309).
클론 13의 경우에, 높은 엄격함 조건 하에 검사될 때, 클론 13은 불연속적 에피토프 모방체에 약하게 결합하였다. 상기 항체는 또한, 중간 엄격함 조건 하에 검사되었고, 그리고 상기 항체의 검출가능한 결합이 관찰되었다. 가장 높은 신호 강도는 코어 스트레치 68ICNADLGWHISPSFK82, 42ILQCHLSSTTAQV54, 108CIYHTYPDGTYTGRI122를 내포하는 불연속적 에피토프 모방체로 기록되었다. 추가적인, 더욱 약한 결합이 펩티드 스트레치 80SFKDRVAPGPG90을 내포하는 펩티드에서 관찰되었다. 선형 및 단순한 입체형태적 에피토프 모방체에 대한 항체의 결합은 일반적으로, 더욱 낮았고, 그리고 단지 모티프 68ICNADLGWHISPSFK82, 108CIYHTYPDGTYTGRI122 및 80SFKDRVAPGPG90에 대해서만 관찰되었다.
클론 25의 경우에, 높은 엄격함 조건 하에 검사될 때, 클론 25는 모든 세트로부터 펩티드에 검출가능하게 결합하였다. 가장 강한 결합은 불연속적 에피토프 모방체에서 관찰되었다. 스트레치 68ICNADLGWHISPSFK82 내에 잔기를 내포하는 펩티드에 결합은 다른 세트에서도 관찰되지만, 펩티드 스트레치 50TTAQVTQ56에 결합은 단지 68ICNADLGWHISPSFK82와의 조합에서만 관찰되었다. 추가적인, 더욱 약한 결합이 또한, 펩티드 스트레치 80SFKDRVAPGPGLGL93을 내포하는 펩티드에서 관찰되었다.
클론 13 및 클론 25에 대한 이들 에피토프 지도화 결과에 근거하여, 클론 13 및 클론 25의 에피토프의 미세 지도화가 하기의 펩티드 세트를 이용하는 전술된 방법을 이용하여 수행되었다. 세트 1은 서열 CILQ2HLSSTTAQVTQCI2NADLGWHISPSFKC에 기초된 단일 잔기 에피토프 돌연변이체의 라이브러리를 포함하였다. 잔기 ADHIQRY는 대체에 종속되었다. 위치 1, 17, 19, 30 및 33은 대체되지 않았다. 선천적 Cys 잔기는 Cys-acm에 의해 대체되었다 (전역에서 "2"로 표시됨). 세트 2는 서열 CILQ2HLSSTTAQVTQCI2NADLGWHISPSFKC로부터 유래된, 보행 이중 Ala 돌연변이체의 라이브러리를 포함하였다. 위치 1, 17 및 33은 대체되지 않았다. 선천적 Cys 잔기는 Cys-acm에 의해 대체되었다. 세트 3은 서열 CKDRVAPGPGLGLTLQCI2NADLGWHISPSFKC에 기초된 단일 잔기 에피토프 돌연변이체의 라이브러리를 포함하였다. 잔기 ADHIQRY는 대체에 이용되었다. 위치 1, 2, 17, 19, 30 및 33은 대체되지 않았다. 세트 4는 서열 CKDRVAPGPGLGLTLQCI2NADLGWHISPSFKC로부터 유래된 보행 이중 Ala 돌연변이체의 라이브러리를 포함하였다. 위치 1, 17 및 33은 대체되지 않았다.
클론 13은 높은 및 중간 엄격함 조건 하에, 펩티드 CILQ2HLSSTTAQVTQCI2NADLGWHISPSFKC 및 CKDRVAPGPGLGLTLQCI2NADLGWHISPSFKC로부터 유래된 4가지 계열의 불연속적 에피토프 돌연변이체로 검사되었다. 데이터 분석 결과는 모든 경우에서, 단일 잔기 또는 이중 Ala로 잔기 81FK82의 대체가 클론 13의 결합을 손상시킨다는 것을 지시하였다. 불연속적 에피토프 모방체 내에 다른 잔기의 단일 돌연변이는 결합에 대한 극적인 효과를 갖지 않았다. 이에 반하여, 이중 Ala 에피토프 돌연변이체는 상응하는 불연속적 모방체에 대한 단일 잔기 돌연변이체의 계열과 비교할 때, 결합에 대한 더욱 확연한 효과를 전시하였다. CILQ2HLSSTTAQVTQCI2NADLGWHISPSFKC 내에 잔기 51TAQVT55의 이중 Ala 대체는 클론 13의 결합에 눈에 띄게 충격을 주는 것으로 또한 밝혀졌다. 서열 CKDRVAPGPGLGLTLQCI2NADLGWHISPSFKC로부터 유래된 에피토프 모방체를 갖는 클론 13에 대해 기록된 신호 강도는 CILQ2HLSSTTAQVTQCI2NADLGWHISPSFKC에서 기록된 것들 보다 낮았다. 81FK82에 더하여, 74GWHI77의 이중 Ala 대체가 클론 13의 결합을 눈에 띄게 감소시키는 것으로 더욱 밝혀졌다. 이에 더하여, 스트레치 87PGPGLGL93 내에 이중 Ala 돌연변이가 결합을 다소간 약화시켰다.
클론 25는 높은 및 중간 엄격함 조건 하에 펩티드 CILQ2HLSSTTAQVTQCI2NADLGWHISPSFKC 및 CKDRVAPGPGLGLTLQCI2NADLGWHISPSFKC로부터 유래된 4가지 계열의 불연속적 에피토프 돌연변이체에서 검사되었다. 에피토프 돌연변이체의 개별 세트로부터 수집된 데이터의 분석 결과는 잔기 81FK82의 단일 또는 이중 대체가 결합에 극적으로 영향을 준다는 것을 지시하였다. CILQ2HLSSTTAQVTQCI2NADLGWHISPSFKC 및 CKDRVAPGPGLGLTLQCI2NADLGWHISPSFKC 내에 다른 잔기의 단일 잔기 대체는 신호 강도에서 주목할 만한 감소를 유발하지 않았다. 일련의 이중 보행 Ala 돌연변이체는 상기 모방체에 클론 25 결합에 대한 더욱 확연한 효과를 전시하였다. 81FK82에 더하여, 잔기 52AQ53 및 P79의 이중 Ala 대체 또한, 에피토프 모방체 CILQ2HLSSTTAQVTQCI2NADLGWHISPSFKC에 대한 항체의 결합에 가볍게 영향을 주었다. CKDRVAPGPGLGLTLQCI2NADLGWHISPSFKC로부터 유래된 이중 Ala 돌연변이체 계열에 클론 25의 결합의 분석 결과는 81FK82의 중요성을 다시 한 번 확증했을 뿐만 아니라, 잔기 73LGW75 및 82KDRVA86의 이중 Ala 대체가 결합에 중간 정도로 영향을 준다는 것을 지시하였다.
요약하면, 단일클론 항체 클론 13 및 클론 25의 경우에, 잔기 81FK82가 TIGIT 에피토프 모방체에 대한 양쪽 항체의 결합에 결정적인 것으로 밝혀졌다. 클론 13의 경우에, 잔기 51TAQVT55, 74GWHI77 및 87PGPGLGL93 역시 결합에 기여하는 것으로 밝혀졌다. 클론 25의 경우에, 잔기 52AQ53, 73LGW75, P79 및 82KDRVA86 역시 결합에 기여하는 것으로 밝혀졌다.
표 3. 약식 서열 목록
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비록 전술한 발명이 이해의 명료함을 위해 예시 및 실례로서 일부 상세하게 설명되긴 했지만, 당업자는 본 발명의 많은 변형과 변이가 이의 사상 및 범위로부터 벗어나지 않으면서 만들어질 수 있다는 것을 인지할 것이다. 본원에서 설명된 특정한 구체예는 단지 실례로서만 제안되고, 그리고 어떤 방식으로도 제한하는 것으로 의미되지 않는다. 본 명세서 및 실시예는 단지 예시로서 고려되고, 발명의 진정한 범위 및 사상은 하기 청구항에 의해 지시되는 것으로 의도된다.
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ttcactctca ccatcagcag tctgcaacct 240 gaagattttg caacttacta ctgtcagcaa agcctcgcca ctccttacac ttttggcgga 300 gggaccaagg ttgagatcaa a 321 <210> 48 <211> 23 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic construct <400> 48 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys 20 <210> 49 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic construct <400> 49 Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Tyr Leu Asn 1 5 10 <210> 50 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic construct <400> 50 Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr 1 5 10 15 <210> 51 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic construct <400> 51 Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser 1 5 <210> 52 <211> 32 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic construct <400> 52 Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr 1 5 10 15 Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr 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360 ccagtcgctg accgtgaacg atacagggga gtacttctgc atctatcaca cctaccctga 420 tgggacgtac actgggagaa tcttcctgga ggtcctagaa agctcagtgg ctgagcacgg 480 tgccaggttc cagattccat tgcttggagc catggccgcg acgctggtgg tcatctgcac 540 agcagtcatc gtggtggtcg cgttgactag aaagaagaaa gccctcagaa tccattctgt 600 ggaaggtgac ctcaggagaa aatcagctgg acaggaggaa tggagcccca gtgctccctc 660 acccccagga agctgtgtcc aggcagaagc tgcacctgct gggctctgtg gagagcagcg 720 gggagaggac tgtgccgagc tgcatgacta cttcaatgtc ctgagttaca gaagcctggg 780 taactgcagc ttcttcacag agactggtta gcaaccagag gcatcttctg gaagatacac 840 ttttgtcttt gctattatag atgaatatat aagcagctgt actctccatc agtgctgcgt 900 gtgtgtgtgt gtgtgtatgt gtgtgtgtgt tcagttgagt gaataaatgt catcctcttc 960 tccatcttca tttccttggc cttttcgttc tattccattt tgcattatgg caggcctagg 1020 gtgagtaacg tggatcttga tcataaatgc aaaattaaaa aatatcttga cctggtttta 1080 aatctggcag tttgagcaga tcctatgtct ctgagagaca cattcctcat aatggccagc 1140 attttgggct acaaggtttt gtggttgatg atgaggatgg catgactgca gagccatcct 1200 catctcattt tttcacgtca ttttcagtaa ctttcactca ttcaaaggca ggttataagt 1260 aagtcctggt agcagcctct atggggagat ttgagagtga ctaaatcttg gtatctgccc 1320 tcaagaactt acagttaaat ggggagacaa tgttgtcatg aaaaggtatt atagtaagga 1380 gagaaggaga catacacagg ccttcaggaa gagacgacag tttggggtga ggtagttggc 1440 ataggcttat ctgtgatgaa gtggcctggg agcaccaagg ggatgttgag gctagtctgg 1500 gaggagcagg agttttgtct agggaacttg taggaaattc ttggagctga aagtcccaca 1560 aagaaggccc tggcaccaag ggagtcagca aacttcagat tttattctct gggcaggcat 1620 ttcaagtttc cttttgctgt gacatactca tccattagac agcctgatac aggcctgtag 1680 cctcttccgg ccgtgtgtgc tggggaagcc ccaggaaacg cacatgccca cacagggagc 1740 caagtcgtag catttgggcc ttgatctacc ttttctgcat caatacactc ttgagccttt 1800 gaaaaaagaa cgtttcccac taaaaagaaa atgtggattt ttaaaatagg gactcttcct 1860 aggggaaaaa ggggggctgg gagtgataga gggtttaaaa aataaacacc ttcaaactaa 1920 cttcttcgaa cccttttatt cactccctga cgactttgtg ctggggttgg ggtaactgaa 1980 ccgcttattt ctgtttaatt gcattcaggc tggatcttag aagactttta tccttccacc 2040 atctctctca 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tttcagtagt tttggtatat tgtgtgtcaa aaatgataat attttggatg 2940 tattgggtga aataaaatat taacattaaa aaaaaaaa 2978 <210> 218 <211> 244 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 218 Met Arg Trp Cys Leu Leu Leu Ile Trp Ala Gln Gly Leu Arg Gln Ala 1 5 10 15 Pro Leu Ala Ser Gly Met Met Thr Gly Thr Ile Glu Thr Thr Gly Asn 20 25 30 Ile Ser Ala Glu Lys Gly Gly Ser Ile Ile Leu Gln Cys His Leu Ser 35 40 45 Ser Thr Thr Ala Gln Val Thr Gln Val Asn Trp Glu Gln Gln Asp Gln 50 55 60 Leu Leu Ala Ile Cys Asn Ala Asp Leu Gly Trp His Ile Ser Pro Ser 65 70 75 80 Phe Lys Asp Arg Val Ala Pro Gly Pro Gly Leu Gly Leu Thr Leu Gln 85 90 95 Ser Leu Thr Val Asn Asp Thr Gly Glu Tyr Phe Cys Ile Tyr His Thr 100 105 110 Tyr Pro Asp Gly Thr Tyr Thr Gly Arg Ile Phe Leu Glu Val Leu Glu 115 120 125 Ser Ser Val Ala Glu His Gly Ala Arg Phe Gln Ile Pro Leu Leu Gly 130 135 140 Ala Met Ala Ala Thr Leu Val Val Ile Cys Thr Ala Val Ile Val Val 145 150 155 160 Val Ala Leu Thr Arg Lys Lys Lys Ala Leu Arg Ile His Ser Val Glu 165 170 175 Gly Asp 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110 Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 251 <211> 121 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic construct <400> 251 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Thr Phe Ser Asp Tyr 20 25 30 Pro Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Gly Ile Ile Pro Ile Val Gly Gly Ala Asn Tyr Ala Gln Lys Phe 50 55 60 Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Thr Arg Gln Ser Thr Trp His Lys Leu Phe Gly Thr Asp Val Trp Gly 100 105 110 Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 252 <211> 121 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic construct <400> 252 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Thr Phe Ser Asp Tyr 20 25 30 Pro Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Gly Ile Ile Pro Ile Val Gly Gly Ala Asn Tyr Ala Gln Lys Phe 50 55 60 Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gln Ser Thr Trp His Lys Val Tyr Gly Thr Asp Val Trp Gly 100 105 110 Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 253 <211> 125 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic construct <400> 253 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr 20 25 30 Ala Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Trp Ile Ser Ala Tyr Asn Gly Asn Thr Lys Tyr Ala Gln Lys Leu 50 55 60 Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Thr Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Asp Leu Ser Ser Phe Trp Ser Gly Asp Val Leu Gly Ala Phe 100 105 110 Asp Ile Trp Gly Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser 115 120 125 <210> 254 <211> 125 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic construct <400> 254 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr 20 25 30 Pro Ile Gly Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Trp Ile Ser Ser Tyr Asn Gly Asn Thr Asn Tyr Ala Gln Lys Leu 50 55 60 Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Thr Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Asp Leu Ser Ser Phe Trp Ser Gly Asp Val Leu Gly Ala Phe 100 105 110 Asp Ile Trp Gly Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser 115 120 125 <210> 255 <211> 125 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic construct <400> 255 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr 20 25 30 Pro Ile Gly Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Trp Ile Ser Ser Tyr Asn Gly Asn Thr Asn Tyr Ala Gln Lys Leu 50 55 60 Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Thr Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Ala Ser Ser Phe Trp Ser Gly Asp Val Leu Gly Ala Phe 100 105 110 Asp Ile Trp Gly Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser 115 120 125 <210> 256 <211> 125 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic construct <400> 256 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr 20 25 30 Pro Ile Gly Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Trp Ile Ser Ser Tyr Asn Gly Asn Thr Asn Tyr Ala Gln Lys Leu 50 55 60 Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Thr Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Asp Leu Lys Ser Phe Trp Ser Gly Asp Val Leu Gly Ala Phe 100 105 110 Asp Ile Trp Gly Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser 115 120 125 <210> 257 <211> 125 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic construct <400> 257 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr 20 25 30 Ala Ile Ala Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Trp Ile Ser Ala Tyr Asn Gly Asn Thr Asn Tyr Ala Gln Lys Leu 50 55 60 Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Thr Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Ser Gly Ser Ser Phe Trp Ser Gly Asp Val Leu Gly Ala Phe 100 105 110 Asp Ile Trp Gly Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser 115 120 125 <210> 258 <211> 15 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 258 Ile Cys Asn Ala Asp Leu Gly Trp His Ile Ser Pro Ser Phe Lys 1 5 10 15 <210> 259 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic construct <400> 259 Ile Leu Gln Cys His Leu Ser Ser Thr Thr Ala Gln Val 1 5 10 <210> 260 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic construct <400> 260 Cys Ile Tyr His Thr Tyr Pro Asp Gly Thr Tyr Thr Gly Arg Ile 1 5 10 15 <210> 261 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic construct <400> 261 Ser Phe Lys Asp Arg Val Ala Pro Gly Pro Gly 1 5 10 <210> 262 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic construct <400> 262 Thr Thr Ala Gln Val Thr Gln 1 5 <210> 263 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic construct <400> 263 Ser Phe Lys Asp Arg Val Ala Pro Gly Pro Gly Leu Gly Leu 1 5 10 <210> 264 <211> 33 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic construct <220> <221> MISC_FEATURE <222> (5)..(5) <223> Xaa = Cys-acm <220> <221> MISC_FEATURE <222> (19)..(19) <223> Xaa = Cys-acm <400> 264 Cys Ile Leu Gln Xaa His Leu Ser Ser Thr Thr Ala Gln Val Thr Gln 1 5 10 15 Cys Ile Xaa Asn Ala Asp Leu Gly Trp His Ile Ser Pro Ser Phe Lys 20 25 30 Cys <210> 265 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic construct <400> 265 Ala Asp His Ile Gln Arg Tyr 1 5 <210> 266 <211> 33 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic construct <220> <221> MISC_FEATURE <222> (19)..(19) <223> Xaa = Cys-acm <400> 266 Cys Lys Asp Arg Val Ala Pro Gly Pro Gly Leu Gly Leu Thr Leu Gln 1 5 10 15 Cys Ile Xaa Asn Ala Asp Leu Gly Trp His Ile Ser Pro Ser Phe Lys 20 25 30 Cys <210> 267 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic construct <400> 267 Thr Ala Gln Val Thr 1 5 <210> 268 <211> 4 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic construct <400> 268 Gly Trp His Ile 1 <210> 269 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic construct <400> 269 Pro Gly Pro Gly Leu Gly Leu 1 5 <210> 270 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic construct <400> 270 Lys Asp Arg Val Ala 1 5

Claims (69)

  1. 인간 TIGIT (Ig 및 ITIM 도메인을 갖는 T-세포 면역수용체)에 결합하는 단리된 항체 또는 이의 항원 결합 부분에 있어서, 상기 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 인간 TIGIT에 대해 5 nM보다 적은 결합 친화성 (KD)을 갖는 것을 특징으로 하는 단리된 항체.
  2. 청구항 1에 있어서, 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 인간 TIGIT에 대해 1 nM보다 적은 KD를 갖는 것을 특징으로 하는 단리된 항체.
  3. 청구항 1에 있어서, 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 인간 TIGIT에 대해 100 pM보다 적은 KD를 갖는 것을 특징으로 하는 단리된 항체.
  4. 청구항 1 내지 3 중에서 어느 한 항에 있어서, 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 시노몰구스 원숭이 TIGIT 및/또는 생쥐 TIGIT와 교차반응성을 전시하는 것을 특징으로 하는 단리된 항체.
  5. 청구항 4에 있어서, 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 시노몰구스 원숭이 TIGIT 및 생쥐 TIGIT 둘 모두와 교차반응성을 전시하는 것을 특징으로 하는 단리된 항체.
  6. 청구항 1 내지 5 중에서 어느 한 항에 있어서, 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 TIGIT에 CD155의 결합을 차단하는 것을 특징으로 하는 단리된 항체.
  7. 청구항 1 내지 5 중에서 어느 한 항에 있어서, 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 TIGIT에 CD112의 결합을 차단하는 것을 특징으로 하는 단리된 항체.
  8. 청구항 1 내지 5 중에서 어느 한 항에 있어서, 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 TIGIT에 CD155와 CD112 둘 모두의 결합을 차단하는 것을 특징으로 하는 단리된 항체.
  9. 청구항 1 내지 8 중에서 어느 한 항에 있어서, 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 아미노산 위치 81 및 82 중에서 하나 또는 둘 모두를 포함하는 인간 TIGIT 상에서 에피토프에 결합하는 것을 특징으로 하는 단리된 항체.
  10. 청구항 9에 있어서, 에피토프는 위치 81에서 Phe를 포함하는 것을 특징으로 하는 단리된 항체.
  11. 청구항 8에 있어서, 에피토프는 위치 82에서 Lys 또는 Ser을 포함하는 것을 특징으로 하는 단리된 항체.
  12. 청구항 9 내지 11 중에서 어느 한 항에 있어서, 에피토프는 위치 81에서 Phe 및 위치 82에서 Lys 또는 Ser을 포함하는 것을 특징으로 하는 단리된 항체.
  13. 청구항 12에 있어서, 에피토프는 Phe81 및 Lys82를 포함하는 것을 특징으로 하는 단리된 항체.
  14. 청구항 9 내지 13 중에서 어느 한 항에 있어서, 에피토프는 불연속적 에피토프인 것을 특징으로 하는 단리된 항체.
  15. 청구항 9 내지 14 중에서 어느 한 항에 있어서, 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 아미노산 위치 51, 52, 53, 54, 55, 73, 74, 75, 76, 77, 79, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 또는 93 중에서 하나 또는 그 이상을 더욱 포함하는 인간 TIGIT 상에서 에피토프에 결합하는 것을 특징으로 하는 단리된 항체.
  16. 청구항 15에 있어서, 에피토프는 Thr51, Ala52, Gln53, Val54, Thr55, Leu73, Gly74, Trp75, His76, Ile77, Pro79, Asp83, Arg84, Val85, Ala86, Pro87, Gly88, Pro89, Gly90, Leu91, Gly92 및 Leu93으로 구성된 군에서 선택되는 하나 또는 그 이상의 아미노산 잔기를 더욱 포함하는 것을 특징으로 하는 단리된 항체.
  17. 청구항 16에 있어서, 에피토프는 아미노산 잔기 Thr51, Ala52, Gln53, Val54, Thr55, Gly74, Trp75, His76, Ile77, Phe81, Lys82, Pro87, Gly88, Pro89, Gly90, Leu91, Gly92 및 Leu93을 포함하는 것을 특징으로 하는 단리된 항체.
  18. 청구항 16에 있어서, 에피토프는 아미노산 잔기 Ala52, Gln53, Leu73, Gly74, Trp75, Pro79, Phe81, Lys82, Asp83, Arg84, Val85 및 Ala86을 포함하는 것을 특징으로 하는 단리된 항체.
  19. 청구항 9 내지 18 중에서 어느 한 항에 있어서, 에피토프는 서열 ICNADLGWHISPSFK를 포함하는 것을 특징으로 하는 단리된 항체.
  20. 청구항 1 내지 19 중에서 어느 한 항에 있어서, 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 하기 중에서 한 가지 또는 그 이상을 포함하는 것을 특징으로 하는 단리된 항체:
    (a) 서열 번호: 4, 서열 번호: 22, 서열 번호: 40, 서열 번호: 58, 서열 번호: 76, 서열 번호: 94, 서열 번호: 112, 서열 번호: 130, 서열 번호: 148, 서열 번호: 166, 서열 번호: 184, 서열 번호: 202, 서열 번호: 221, 서열 번호: 224, 서열 번호: 226, 서열 번호: 231, 서열 번호: 233, 서열 번호: 239, 또는 서열 번호: 243 중에서 어느 것의 서열을 포함하는 중쇄 CDR1;
    (b) 서열 번호: 6, 서열 번호: 24, 서열 번호: 42, 서열 번호: 60, 서열 번호: 78, 서열 번호: 96, 서열 번호: 114, 서열 번호: 132, 서열 번호: 150, 서열 번호: 168, 서열 번호: 186, 서열 번호: 204, 서열 번호: 222, 서열 번호: 225, 서열 번호: 227, 서열 번호: 229, 서열 번호: 232, 서열 번호: 234, 서열 번호: 238, 또는 서열 번호: 240 중에서 어느 것의 서열을 포함하는 중쇄 CDR2;
    (c) 서열 번호: 8, 서열 번호: 26, 서열 번호: 44, 서열 번호: 62, 서열 번호: 80, 서열 번호: 98, 서열 번호: 116, 서열 번호: 134, 서열 번호: 152, 서열 번호: 170, 서열 번호: 188, 서열 번호: 206, 서열 번호: 223, 서열 번호: 228, 서열 번호: 230, 서열 번호: 235, 서열 번호: 236, 서열 번호: 237, 서열 번호: 241, 서열 번호: 242, 또는 서열 번호: 244 중에서 어느 것의 서열을 포함하는 중쇄 CDR3;
    (d) 서열 번호: 13, 서열 번호: 31, 서열 번호: 49, 서열 번호: 67, 서열 번호: 85, 서열 번호: 103, 서열 번호: 121, 서열 번호: 139, 서열 번호: 157, 서열 번호: 175, 서열 번호: 193, 또는 서열 번호: 211 중에서 어느 것의 서열을 포함하는 경쇄 CDR1;
    (e) 서열 번호: 15, 서열 번호: 33, 서열 번호: 51, 서열 번호: 69, 서열 번호: 87, 서열 번호: 105, 서열 번호: 123, 서열 번호: 141, 서열 번호: 159, 서열 번호: 177, 서열 번호: 195, 또는 서열 번호: 213 중에서 어느 것의 서열을 포함하는 경쇄 CDR2; 또는
    (f) 서열 번호: 17, 서열 번호: 35, 서열 번호: 53, 서열 번호: 71, 서열 번호: 89, 서열 번호: 107, 서열 번호: 125, 서열 번호: 143, 서열 번호: 161, 서열 번호: 179, 서열 번호: 197, 또는 서열 번호: 215 중에서 어느 것의 서열을 포함하는 경쇄 CDR3.
  21. 청구항 20에 있어서, 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 하기의 서열을 포함하는 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3, 그리고 경쇄 CDR1, CDR 및 CDR3을 포함하는 것을 특징으로 하는 단리된 항체:
    (a) 각각, 서열 번호: 4, 6, 8, 13, 15 및 17; 또는
    (b) 각각, 서열 번호: 22, 24, 26, 31, 33 및 35; 또는
    (c) 각각, 서열 번호: 40, 42, 44, 49, 51 및 53; 또는
    (d) 각각, 서열 번호: 58, 60, 62, 67, 69 및 71; 또는
    (e) 각각, 서열 번호: 76, 78, 80, 85, 87 및 89; 또는
    (f) 각각, 서열 번호: 94, 96, 98, 103, 105 및 107; 또는
    (g) 각각, 서열 번호: 112, 114, 116, 121, 123 및 125; 또는
    (h) 각각, 서열 번호: 130, 132, 134, 139, 141 및 143; 또는
    (i) 각각, 서열 번호: 148, 150, 152, 157, 159 및 161; 또는
    (j) 각각, 서열 번호: 166, 168, 170, 175, 177 및 179; 또는
    (k) 각각, 서열 번호: 184, 186, 188, 193, 195 및 197; 또는
    (l) 각각, 서열 번호: 202, 204, 206, 211, 213 및 215; 또는
    (m) 각각, 서열 번호: 221, 222, 223, 13, 15 및 17; 또는
    (n) 각각, 서열 번호: 224, 225, 62, 67, 69 및 71; 또는
    (o) 각각, 서열 번호: 226, 227, 228, 67, 69 및 71; 또는
    (p) 각각, 서열 번호: 224, 229, 230, 67, 69 및 71; 또는
    (q) 각각, 서열 번호: 224, 227, 230, 67, 69 및 71; 또는
    (r) 각각, 서열 번호: 231, 232, 235, 103, 105 및 107; 또는
    (s) 각각, 서열 번호: 233, 234, 236, 103, 105 및 107; 또는
    (t) 각각, 서열 번호: 233, 234, 237, 103, 105 및 107; 또는
    (u) 각각, 서열 번호: 166, 238, 170, 175, 177 및 179; 또는
    (v) 각각, 서열 번호: 239, 240, 170, 175, 177 및 179; 또는
    (w) 각각, 서열 번호: 239, 240, 241, 175, 177 및 179; 또는
    (x) 각각, 서열 번호: 239, 240, 242, 175, 177 및 179; 또는
    (y) 각각, 서열 번호: 243, 168, 244, 175, 177 및 179.
  22. 청구항 1 내지 21 중에서 어느 한 항에 있어서, 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 하기를 포함하는 것을 특징으로 하는 단리된 항체:
    (a) 서열 번호: 1, 서열 번호: 19, 서열 번호: 37, 서열 번호: 55, 서열 번호: 73, 서열 번호: 91, 서열 번호: 109, 서열 번호: 127, 서열 번호: 145, 서열 번호: 163, 서열 번호: 181, 서열 번호: 199, 서열 번호: 245, 서열 번호: 246, 서열 번호: 247, 서열 번호: 248, 서열 번호: 249, 서열 번호: 250, 서열 번호: 251, 서열 번호: 252, 서열 번호: 253, 서열 번호: 254, 서열 번호: 255, 서열 번호: 256, 또는 서열 번호: 257에 최소한 90% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역; 및/또는
    (b) 서열 번호: 10, 서열 번호: 28, 서열 번호: 46, 서열 번호: 64, 서열 번호: 82, 서열 번호: 100, 서열 번호: 118, 서열 번호: 136, 서열 번호: 154, 서열 번호: 172, 서열 번호: 190, 또는 서열 번호: 208에 최소한 90% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역.
  23. 청구항 22에 있어서, 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 하기를 포함하는 것을 특징으로 하는 단리된 항체:
    (a) 서열 번호: 1 또는 서열 번호: 245에 최소한 90% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열 번호: 10에 최소한 90% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역; 또는
    (b) 서열 번호: 19에 최소한 90% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열 번호: 28에 최소한 90% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역; 또는
    (c) 서열 번호: 37에 최소한 90% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열 번호: 46에 최소한 90% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역; 또는
    (d) 서열 번호: 55, 서열 번호: 246, 서열 번호: 247, 서열 번호: 248, 또는 서열 번호: 249 중에서 한 가지에 최소한 90% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열 번호: 64에 최소한 90% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역; 또는
    (e) 서열 번호: 73에 최소한 90% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열 번호: 82에 최소한 90% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역; 또는
    (f) 서열 번호: 91, 서열 번호: 250, 서열 번호: 251, 또는 서열 번호: 252 중에서 한 가지에 최소한 90% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열 번호: 100에 최소한 90% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역; 또는
    (g) 서열 번호: 109에 최소한 90% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열 번호: 118에 최소한 90% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역; 또는
    (h) 서열 번호: 127에 최소한 90% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열 번호: 136에 최소한 90% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역; 또는
    (i) 서열 번호: 145에 최소한 90% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열 번호: 154에 최소한 90% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역; 또는
    (j) 서열 번호: 163, 서열 번호: 253, 서열 번호: 254, 서열 번호: 255, 서열 번호: 256, 또는 서열 번호: 257 중에서 한 가지에 최소한 90% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열 번호: 172에 최소한 90% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역; 또는
    (k) 서열 번호: 181에 최소한 90% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열 번호: 190에 최소한 90% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역; 또는
    (l) 서열 번호: 199에 최소한 90% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열 번호: 208에 최소한 90% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역.
  24. 청구항 1 내지 23 중에서 어느 한 항에 있어서, 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 항-PD1 항체 또는 항-PD-L1 항체와의 상승작용을 전시하는 것을 특징으로 하는 단리된 항체.
  25. 인간 TIGIT에 결합하는 단리된 항체 또는 이의 항원 결합 부분에 있어서, 상기 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 아미노산 위치 81 및 82를 포함하는 인간 TIGIT 상에서 에피토프에 결합하는 것을 특징으로 하는 단리된 항체.
  26. 청구항 25에 있어서, 에피토프는 위치 81에서 Phe 및/또는 위치 82에서 Lys 또는 Ser을 포함하는 것을 특징으로 하는 단리된 항체.
  27. 청구항 26에 있어서, 에피토프는 Phe81 및 Lys82를 포함하는 것을 특징으로 하는 단리된 항체.
  28. 청구항 25 내지 27 중에서 어느 한 항에 있어서, 에피토프는 불연속적 에피토프인 것을 특징으로 하는 단리된 항체.
  29. 청구항 25 내지 28 중에서 어느 한 항에 있어서, 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 아미노산 위치 51, 52, 53, 54, 55, 73, 74, 75, 76, 77, 79, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 또는 93 중에서 하나 또는 그 이상을 더욱 포함하는 인간 TIGIT 상에서 에피토프에 결합하는 것을 특징으로 하는 단리된 항체.
  30. 청구항 29에 있어서, 에피토프는 Thr51, Ala52, Gln53, Val54, Thr55, Leu73, Gly74, Trp75, His76, Ile77, Pro79, Asp83, Arg84, Val85, Ala86, Pro87, Gly88, Pro89, Gly90, Leu91, Gly92 및 Leu93으로 구성된 군에서 선택되는 하나 또는 그 이상의 아미노산 잔기를 더욱 포함하는 것을 특징으로 하는 단리된 항체.
  31. 청구항 30에 있어서, 에피토프는 아미노산 잔기 Thr51, Ala52, Gln53, Val54, Thr55, Gly74, Trp75, His76, Ile77, Phe81, Lys82, Pro87, Gly88, Pro89, Gly90, Leu91, Gly92 및 Leu93을 포함하는 것을 특징으로 하는 단리된 항체.
  32. 청구항 30에 있어서, 에피토프는 아미노산 잔기 Ala52, Gln53, Leu73, Gly74, Trp75, Pro79, Phe81, Lys82, Asp83, Arg84, Val85 및 Ala86을 포함하는 것을 특징으로 하는 단리된 항체.
  33. 청구항 25 내지 32 중에서 어느 한 항에 있어서, 에피토프는 서열 ICNADLGWHISPSFK를 포함하는 것을 특징으로 하는 단리된 항체.
  34. 청구항 25 내지 32 중에서 어느 한 항에 있어서, 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 하기 중에서 한 가지 또는 그 이상을 포함하는 것을 특징으로 하는 단리된 항체:
    (a) 서열 번호: 4, 서열 번호: 22, 서열 번호: 40, 서열 번호: 58, 서열 번호: 76, 서열 번호: 94, 서열 번호: 112, 서열 번호: 130, 서열 번호: 148, 서열 번호: 166, 서열 번호: 184, 서열 번호: 202, 서열 번호: 221, 서열 번호: 224, 서열 번호: 226, 서열 번호: 231, 서열 번호: 233, 서열 번호: 239, 또는 서열 번호: 243 중에서 어느 것의 서열을 포함하는 중쇄 CDR1;
    (b) 서열 번호: 6, 서열 번호: 24, 서열 번호: 42, 서열 번호: 60, 서열 번호: 78, 서열 번호: 96, 서열 번호: 114, 서열 번호: 132, 서열 번호: 150, 서열 번호: 168, 서열 번호: 186, 서열 번호: 204, 서열 번호: 222, 서열 번호: 225, 서열 번호: 227, 서열 번호: 229, 서열 번호: 232, 서열 번호: 234, 서열 번호: 238, 또는 서열 번호: 240 중에서 어느 것의 서열을 포함하는 중쇄 CDR2;
    (c) 서열 번호: 8, 서열 번호: 26, 서열 번호: 44, 서열 번호: 62, 서열 번호: 80, 서열 번호: 98, 서열 번호: 116, 서열 번호: 134, 서열 번호: 152, 서열 번호: 170, 서열 번호: 188, 서열 번호: 206, 서열 번호: 223, 서열 번호: 228, 서열 번호: 230, 서열 번호: 235, 서열 번호: 236, 서열 번호: 237, 서열 번호: 241, 서열 번호: 242, 또는 서열 번호: 244 중에서 어느 것의 서열을 포함하는 중쇄 CDR3;
    (d) 서열 번호: 13, 서열 번호: 31, 서열 번호: 49, 서열 번호: 67, 서열 번호: 85, 서열 번호: 103, 서열 번호: 121, 서열 번호: 139, 서열 번호: 157, 서열 번호: 175, 서열 번호: 193, 또는 서열 번호: 211 중에서 어느 것의 서열을 포함하는 경쇄 CDR1;
    (e) 서열 번호: 15, 서열 번호: 33, 서열 번호: 51, 서열 번호: 69, 서열 번호: 87, 서열 번호: 105, 서열 번호: 123, 서열 번호: 141, 서열 번호: 159, 서열 번호: 177, 서열 번호: 195, 또는 서열 번호: 213 중에서 어느 것의 서열을 포함하는 경쇄 CDR2; 또는
    (f) 서열 번호: 17, 서열 번호: 35, 서열 번호: 53, 서열 번호: 71, 서열 번호: 89, 서열 번호: 107, 서열 번호: 125, 서열 번호: 143, 서열 번호: 161, 서열 번호: 179, 서열 번호: 197, 또는 서열 번호: 215 중에서 어느 것의 서열을 포함하는 경쇄 CDR3.
  35. 청구항 34에 있어서, 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 하기의 서열을 포함하는 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3, 그리고 경쇄 CDR1, CDR 및 CDR3을 포함하는 것을 특징으로 하는 단리된 항체:
    (a) 각각, 서열 번호: 4, 6, 8, 13, 15 및 17; 또는
    (b) 각각, 서열 번호: 22, 24, 26, 31, 33 및 35; 또는
    (c) 각각, 서열 번호: 40, 42, 44, 49, 51 및 53; 또는
    (d) 각각, 서열 번호: 58, 60, 62, 67, 69 및 71; 또는
    (e) 각각, 서열 번호: 76, 78, 80, 85, 87 및 89; 또는
    (f) 각각, 서열 번호: 94, 96, 98, 103, 105 및 107; 또는
    (g) 각각, 서열 번호: 112, 114, 116, 121, 123 및 125; 또는
    (h) 각각, 서열 번호: 130, 132, 134, 139, 141 및 143; 또는
    (i) 각각, 서열 번호: 148, 150, 152, 157, 159 및 161; 또는
    (j) 각각, 서열 번호: 166, 168, 170, 175, 177 및 179; 또는
    (k) 각각, 서열 번호: 184, 186, 188, 193, 195 및 197; 또는
    (l) 각각, 서열 번호: 202, 204, 206, 211, 213 및 215; 또는
    (m) 각각, 서열 번호: 221, 222, 223, 13, 15 및 17; 또는
    (n) 각각, 서열 번호: 224, 225, 62, 67, 69 및 71; 또는
    (o) 각각, 서열 번호: 226, 227, 228, 67, 69 및 71; 또는
    (p) 각각, 서열 번호: 224, 229, 230, 67, 69 및 71; 또는
    (q) 각각, 서열 번호: 224, 227, 230, 67, 69 및 71; 또는
    (r) 각각, 서열 번호: 231, 232, 235, 103, 105 및 107; 또는
    (s) 각각, 서열 번호: 233, 234, 236, 103, 105 및 107; 또는
    (t) 각각, 서열 번호: 233, 234, 237, 103, 105 및 107; 또는
    (u) 각각, 서열 번호: 166, 238, 170, 175, 177 및 179; 또는
    (v) 각각, 서열 번호: 239, 240, 170, 175, 177 및 179; 또는
    (w) 각각, 서열 번호: 239, 240, 241, 175, 177 및 179; 또는
    (x) 각각, 서열 번호: 239, 240, 242, 175, 177 및 179; 또는
    (y) 각각, 서열 번호: 243, 168, 244, 175, 177 및 179.
  36. 청구항 34에 있어서, 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 하기를 포함하는 것을 특징으로 하는 단리된 항체:
    (a) 서열 번호: 1, 서열 번호: 19, 서열 번호: 37, 서열 번호: 55, 서열 번호: 73, 서열 번호: 91, 서열 번호: 109, 서열 번호: 127, 서열 번호: 145, 서열 번호: 163, 서열 번호: 181, 서열 번호: 199, 서열 번호: 245, 서열 번호: 246, 서열 번호: 247, 서열 번호: 248, 서열 번호: 249, 서열 번호: 250, 서열 번호: 251, 서열 번호: 252, 서열 번호: 253, 서열 번호: 254, 서열 번호: 255, 서열 번호: 256, 또는 서열 번호: 257에 최소한 90% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역; 및/또는
    (b) 서열 번호: 10, 서열 번호: 28, 서열 번호: 46, 서열 번호: 64, 서열 번호: 82, 서열 번호: 100, 서열 번호: 118, 서열 번호: 136, 서열 번호: 154, 서열 번호: 172, 서열 번호: 190, 또는 서열 번호: 208에 최소한 90% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역.
  37. 청구항 36에 있어서, 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 하기를 포함하는 것을 특징으로 하는 단리된 항체:
    (a) 서열 번호: 1 또는 서열 번호: 245에 최소한 90% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열 번호: 10에 최소한 90% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역; 또는
    (b) 서열 번호: 19에 최소한 90% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열 번호: 28에 최소한 90% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역; 또는
    (c) 서열 번호: 37에 최소한 90% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열 번호: 46에 최소한 90% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역; 또는
    (d) 서열 번호: 55, 서열 번호: 246, 서열 번호: 247, 서열 번호: 248, 또는 서열 번호: 249 중에서 한 가지에 최소한 90% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열 번호: 64에 최소한 90% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역; 또는
    (e) 서열 번호: 73에 최소한 90% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열 번호: 82에 최소한 90% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역; 또는
    (f) 서열 번호: 91, 서열 번호: 250, 서열 번호: 251, 또는 서열 번호: 252 중에서 한 가지에 최소한 90% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열 번호: 100에 최소한 90% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역; 또는
    (g) 서열 번호: 109에 최소한 90% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열 번호: 118에 최소한 90% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역; 또는
    (h) 서열 번호: 127에 최소한 90% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열 번호: 136에 최소한 90% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역; 또는
    (i) 서열 번호: 145에 최소한 90% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열 번호: 154에 최소한 90% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역; 또는
    (j) 서열 번호: 163, 서열 번호: 253, 서열 번호: 254, 서열 번호: 255, 서열 번호: 256, 또는 서열 번호: 257 중에서 한 가지에 최소한 90% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열 번호: 172에 최소한 90% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역; 또는
    (k) 서열 번호: 181에 최소한 90% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열 번호: 190에 최소한 90% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역; 또는
    (l) 서열 번호: 199에 최소한 90% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열 번호: 208에 최소한 90% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역.
  38. 청구항 1 내지 37 중에서 어느 한 항에 있어서, 항체는 단일클론 항체인 것을 특징으로 하는 단리된 항체.
  39. 청구항 1 내지 38 중에서 어느 한 항에 있어서, 항체는 인간화 항체인 것을 특징으로 하는 단리된 항체.
  40. 청구항 1 내지 38 중에서 어느 한 항에 있어서, 항체는 완전한 인간 항체인 것을 특징으로 하는 단리된 항체.
  41. 청구항 1 내지 38 중에서 어느 한 항에 있어서, 항체는 키메라 항체인 것을 특징으로 하는 단리된 항체.
  42. 청구항 1 내지 38 중에서 어느 한 항에 있어서, 항원 결합 단편은 Fab, F(ab')2, scFv, 또는 이가 scFv인 것을 특징으로 하는 단리된 항체.
  43. 청구항 1 내지 42 중에서 어느 한 항의 단리된 항체 및 제약학적으로 허용되는 담체를 포함하는 제약학적 조성물.
  44. 청구항 1 내지 42 중에서 어느 한 항의 항체를 포함하는 이중특이적 항체.
  45. 청구항 1 내지 42 중에서 어느 한 항의 항체를 포함하는 항체-약물 접합체.
  46. 청구항 1 내지 42 중에서 어느 한 항의 항체를 인코딩하는 뉴클레오티드 서열을 포함하는 단리된 폴리뉴클레오티드.
  47. 인간 TIGIT에 결합하는 항체 또는 이의 항원 결합 부분을 인코딩하는 뉴클레오티드 서열을 포함하는 단리된 폴리뉴클레오티드에 있어서, 상기 단리된 폴리뉴클레오티드는 하기를 포함하는 것을 특징으로 하는 단리된 폴리뉴클레오티드:
    (a) 서열 번호: 2, 서열 번호: 20, 서열 번호: 38, 서열 번호: 56, 서열 번호: 74, 서열 번호: 92, 서열 번호: 110, 서열 번호: 128, 서열 번호: 146, 서열 번호: 164, 서열 번호: 182, 또는 서열 번호: 200의 뉴클레오티드 서열; 및/또는
    (b) 서열 번호: 11, 서열 번호: 29, 서열 번호: 47, 서열 번호: 65, 서열 번호: 83, 서열 번호: 101, 서열 번호: 119, 서열 번호: 137, 서열 번호: 155, 서열 번호: 173, 서열 번호: 191, 또는 서열 번호: 209의 뉴클레오티드 서열.
  48. 청구항 46 또는 청구항 47의 폴리뉴클레오티드를 포함하는 벡터.
  49. 청구항 46 또는 청구항 47의 폴리뉴클레오티드, 또는 청구항 48의 벡터를 포함하는 숙주 세포.
  50. 항체를 생산하는 방법에 있어서, 상기 항체를 생산하는데 적합한 조건 하에 청구항 49의 숙주 세포를 배양하는 것을 포함하는 것을 특징으로 하는 방법.
  51. 하기를 포함하는 키트:
    청구항 1 내지 42 중에서 어느 한 항의 단리된 항체, 청구항 43의 제약학적 조성물; 그리고
    면역항암제.
  52. 청구항 51에 있어서, 면역항암제는 PD-1 경로 저해제인 것을 특징으로 하는 키트.
  53. 청구항 52에 있어서, PD-1 경로 저해제는 항-PD1 항체 또는 항-PD-L1 항체인 것을 특징으로 하는 키트.
  54. 청구항 51에 있어서, 면역항암제는 T 세포 동시저해제의 길항제 또는 저해제인 것을 특징으로 하는 키트.
  55. 청구항 51에 있어서, 면역항암제는 T 세포 보조활성인자의 효현제인 것을 특징으로 하는 키트.
  56. 청구항 51에 있어서, 면역항암제는 면역 자극 사이토킨인 것을 특징으로 하는 키트.
  57. 개체에서 암을 치료하는 방법에 있어서, 상기 방법은 청구항 1 내지 42 중에서 어느 한 항의 단리된 항체, 청구항 43의 제약학적 조성물, 청구항 44의 이중특이적 항체, 또는 청구항 45의 항체-약물 접합체의 치료량을 개체에게 투여하는 것을 포함하는 것을 특징으로 하는 방법.
  58. 청구항 57에 있어서, 암은 CD112 또는 CD155의 발현에 대해 농축되는 암인 것을 특징으로 하는 방법.
  59. 청구항 57에 있어서, 암은 TIGIT를 발현하는 T 세포 또는 자연 킬러 (NK) 세포에 대해 농축되는 암인 것을 특징으로 하는 방법.
  60. 청구항 57 내지 59 중에서 어느 한 항에 있어서, 암은 방광암, 유방암, 자궁암, 자궁경부암, 난소암, 전립선암, 고환암, 식도암, 위장관암, 췌장암, 결장직장암, 결장암, 신장암, 두경부암, 폐암, 위암, 생식 세포 암, 골암, 간암, 갑상선암, 피부암, 중추신경계의 신생물, 림프종, 백혈병, 골수종, 또는 육종인 것을 특징으로 하는 방법.
  61. 청구항 60에 있어서, 암은 림프종 또는 백혈병인 것을 특징으로 하는 방법.
  62. 청구항 57 내지 61 중에서 어느 한 항에 있어서, 면역항암제의 치료량을 개체에게 투여하는 것을 더욱 포함하는 것을 특징으로 하는 방법.
  63. 청구항 62에 있어서, 면역항암제는 PD-1 경로 저해제인 것을 특징으로 하는 방법.
  64. 청구항 63에 있어서, PD-1 경로 저해제는 항-PD1 항체 또는 항-PD-L1 항체인 것을 특징으로 하는 방법.
  65. 청구항 62에 있어서, 면역항암제는 T 세포 동시저해제의 길항제 또는 저해제인 것을 특징으로 하는 방법.
  66. 청구항 62에 있어서, 면역항암제는 T 세포 보조활성인자의 효현제인 것을 특징으로 하는 방법.
  67. 청구항 62에 있어서, 면역항암제는 면역 자극 사이토킨인 것을 특징으로 하는 방법.
  68. 청구항 62 내지 67 중에서 어느 한 항에 있어서, 단리된 항체, 제약학적 조성물, 이중특이적 항체, 또는 항체-약물 접합체는 면역항암제와 동시에 투여되는 것을 특징으로 하는 방법.
  69. 청구항 62 내지 67 중에서 어느 한 항에 있어서, 단리된 항체, 제약학적 조성물, 이중특이적 항체, 또는 항체-약물 접합체는 면역항암제와 순차적으로 투여되는 것을 특징으로 하는 방법.
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