KR20210057053A - 항-tigit 항체 - Google Patents

항-tigit 항체 Download PDF

Info

Publication number
KR20210057053A
KR20210057053A KR1020217008379A KR20217008379A KR20210057053A KR 20210057053 A KR20210057053 A KR 20210057053A KR 1020217008379 A KR1020217008379 A KR 1020217008379A KR 20217008379 A KR20217008379 A KR 20217008379A KR 20210057053 A KR20210057053 A KR 20210057053A
Authority
KR
South Korea
Prior art keywords
seq
antibody
amino acid
acid sequence
composition
Prior art date
Application number
KR1020217008379A
Other languages
English (en)
Inventor
줄리아 씨. 피아세츠키
코트니 비어스
스콧 피터슨
비안카 프린츠
샤이라 가르다이
Original Assignee
씨젠 인크.
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 씨젠 인크. filed Critical 씨젠 인크.
Publication of KR20210057053A publication Critical patent/KR20210057053A/ko

Links

Images

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2803—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily
    • C07K16/2818—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily against CD28 or CD152
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6801—Drug-antibody or immunoglobulin conjugates defined by the pharmacologically or therapeutically active agent
    • A61K47/6803—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6835—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site
    • A61K47/6849—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody targeting a receptor, a cell surface antigen or a cell surface determinant
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2803—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/30—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants from tumour cells
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
    • A61K2039/507—Comprising a combination of two or more separate antibodies
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
    • C07K2317/21—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin from primates, e.g. man
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
    • C07K2317/24—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin containing regions, domains or residues from different species, e.g. chimeric, humanized or veneered
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
    • C07K2317/31—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency multispecific
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
    • C07K2317/32—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency specific for a neo-epitope on a complex, e.g. antibody-antigen or ligand-receptor
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
    • C07K2317/33—Crossreactivity, e.g. for species or epitope, or lack of said crossreactivity
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
    • C07K2317/34—Identification of a linear epitope shorter than 20 amino acid residues or of a conformational epitope defined by amino acid residues
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/40—Immunoglobulins specific features characterized by post-translational modification
    • C07K2317/41—Glycosylation, sialylation, or fucosylation
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/52—Constant or Fc region; Isotype
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C07K2317/565—Complementarity determining region [CDR]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/73—Inducing cell death, e.g. apoptosis, necrosis or inhibition of cell proliferation
    • C07K2317/734—Complement-dependent cytotoxicity [CDC]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/74—Inducing cell proliferation
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/76—Antagonist effect on antigen, e.g. neutralization or inhibition of binding
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
    • C07K2317/92—Affinity (KD), association rate (Ka), dissociation rate (Kd) or EC50 value
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
    • Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
    • Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)

Abstract

인간 TIGIT (Ig 및 ITIM 도메인을 갖는 T-세포 면역수용체)에 결합하는 단리된 항체가 제공된다. 일부 실시양태에서, 항체는 5 nM 미만의 인간 TIGIT에 대한 결합 친화도 (KD)를 갖는다. 일부 실시양태에서, 항-TIGIT 항체는 CD155 및/또는 CD112가 TIGIT에 결합하는 것을 차단한다. 일부 실시양태에서, 항체는 비-푸코실화된다.

Description

항-TIGIT 항체
관련 출원에 대한 상호 참조
본 출원은 2018년 8월 23일에 출원된 미국 가출원 번호 62/722,063; 2018년 9월 20일에 출원된 미국 가출원 번호 62/734,130; 및 2019년 3월 22일에 출원된 미국 가출원 번호 62/822,674를 우선권 주장하고, 이들 각각은 임의의 목적을 위해 전문이 본원에 참조로 포함된다.
분야
인간 TIGIT (Ig 및 ITIM 도메인을 갖는 T-세포 면역수용체)에 결합하는 항체, 및 그의 용도가 본원에서 제공된다
배경
TIGIT ("Ig 및 ITIM 도메인을 갖는 T-세포 면역수용체")는 T 세포의 서브세트, 예컨대 활성화, 기억, 및 조절 T 세포 및 자연 킬러 (NK) 세포 상에서 발현되는 면역 수용체이다. TIGIT는 단백질의 Ig 수퍼패밀리 내의 CD28 패밀리의 구성원이고, T 세포 증식 및 활성화 및 NK 세포 기능을 제한하는 공동-억제 분자로서의 역할을 한다. TIGIT는 동일한 리간드 세트인 CD155 (일명 폴리오바이러스 수용체 또는 "PVR") 및 CD112 (일명 폴리오바이러스 수용체-관련 2 또는 "PVRL2")에 대해 CD226 (일명 DNAX 보조 분자-1, 또는 "DNAM-1")과 경쟁하는 것에 의해 그의 면역억제 효과를 매개한다. 문헌 [Levin et al., Eur. J. Immunol., 2011, 41:902-915]을 참조한다. TIGIT에 대한 CD155의 친화도가 CD226에 대한 그의 친화도보다 더 높기 때문에, TIGIT의 존재 하에 CD226 신호전달이 억제되고, 이에 의해 T 세포 증식 및 활성화를 제한한다.
흑색종 환자에서, TIGIT 발현이 종양 항원 (TA)-특이적 CD8+ T 세포 및 CD8+ 종양-침윤 림프구 (TIL) 상에서 상향조절된다. TIGIT 리간드 (CD155)-발현 세포의 존재 하에서의 TIGIT의 차단이 TA-특이적 CD8+ T 세포 및 CD8+ TIL 둘 다의 증식, 시토카인 생산 및 탈과립을 증가시켰다. 문헌 [Chauvin et al., J Clin Invest., 2015, 125:2046-2058]을 참조한다. 따라서, TIGIT를 차단하고 항종양 반응을 촉진하는 개선된 방법이 여전히 요구되지만, TIGIT는 환자에서 항종양 T 세포 반응을 자극하기 위한 잠재적인 치료 표적을 나타낸다.
실시양태 1. 인간 TIGIT (Ig 및 ITIM 도메인을 갖는 T-세포 면역수용체)에 결합하는 단리된 항체를 포함하는 조성물이고, 여기서 항체가 5 nM 미만의 인간 TIGIT에 대한 결합 친화도 (KD)를 갖고, 조성물 내의 항체의 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99%가 비-푸코실화된 조성물.
실시양태 2. 실시양태 1에 있어서, 항체가 1 nM 미만의 인간 TIGIT에 대한 KD를 갖는 조성물.
실시양태 3. 실시양태 1에 있어서, 항체가 100 pM 미만의 인간 TIGIT에 대한 KD를 갖는 조성물.
실시양태 4. 실시양태 1 내지 3 중 어느 하나에 있어서, 항체가 시노몰거스 원숭이 TIGIT 및/또는 마우스 TIGIT와의 교차-반응성을 나타내는 조성물.
실시양태 5. 실시양태 4에 있어서, 항체가 시노몰거스 원숭이 TIGIT 및 마우스 TIGIT 둘 다와의 교차-반응성을 나타내는 조성물.
실시양태 6. 실시양태 1 내지 5 중 어느 하나에 있어서, 항체가 TIGIT에 대한 CD155의 결합을 차단하는 조성물.
실시양태 7. 실시양태 1 내지 5 중 어느 하나에 있어서, 항체가 TIGIT에 대한 CD112의 결합을 차단하는 조성물.
실시양태 8. 실시양태 1 내지 5 중 어느 하나에 있어서, 항체가 TIGIT에 대한 CD155 및 CD112 둘 다의 결합을 차단하는 조성물.
실시양태 9. 실시양태 1 내지 8 중 어느 하나에 있어서, 항체가 인간 TIGIT에 결합하는 것에 대해 서열식별번호(SEQ ID NO): 55의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열식별번호: 64의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는 항체와 경쟁하는 조성물.
실시양태 10. 실시양태 1 내지 9 중 어느 하나에 있어서, 인간 TIGIT에 결합된 경우의 항체가 아미노산 위치 81 및 82 중 하나 또는 둘 다에 결합하는 조성물.
실시양태 11. 실시양태 10에 있어서, 항체가 아미노산 위치 81 및 82 둘 다에 결합하는 조성물.
실시양태 12. 실시양태 10 또는 실시양태 11에 있어서, 아미노산 위치 81 및 82가 Phe81 및 Lys82인 조성물.
실시양태 13. 실시양태 1 내지 12 중 어느 하나에 있어서, 항체가 아미노산 위치 81 및 82 중 하나 또는 둘 다를 포함하는 인간 TIGIT 상의 에피토프에 결합하는 조성물.
실시양태 14. 인간 TIGIT에 결합하는 단리된 항체를 포함하는 조성물이고, 여기서 인간 TIGIT에 결합된 경우의 항체가 아미노산 위치 81 및 82 중 하나 또는 둘 다에 결합하고, 조성물 내의 항체의 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99%가 비-푸코실화된 조성물.
실시양태 15. 실시양태 14에 있어서, 항체가 아미노산 위치 81 및 82 둘 다에 결합하는 조성물.
실시양태 16. 실시양태 14 또는 실시양태 15에 있어서, 아미노산 위치 81 및 82가 Phe81 및 Lys82인 조성물.
실시양태 17. 인간 TIGIT에 결합하는 단리된 항체를 포함하는 조성물이고, 여기서 항체가 아미노산 위치 81 및 82 중 하나 또는 둘 다를 포함하는 인간 TIGIT 상의 에피토프에 결합하고, 조성물 내의 항체의 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99%가 비-푸코실화된 조성물.
실시양태 18. 실시양태 13 또는 실시양태 17에 있어서, 에피토프가 위치 81의 Phe을 포함하는 조성물.
실시양태 19. 실시양태 13, 17, 및 18 중 어느 하나에 있어서, 에피토프가 위치 82의 Lys 또는 Ser을 포함하는 조성물.
실시양태 20. 실시양태 13 및 17 내지 19 중 어느 하나에 있어서, 에피토프가 위치 81의 Phe 및 위치 82의 Lys 또는 Ser을 포함하는 조성물.
실시양태 21. 실시양태 20에 있어서, 에피토프가 Phe81 및 Lys82를 포함하는 조성물.
실시양태 22. 실시양태 13 및 17 내지 21 중 어느 하나에 있어서, 에피토프가 불연속 에피토프인 조성물.
실시양태 23. 실시양태 13 및 17 내지 22 중 어느 하나에 있어서, 항체가 아미노산 위치 51, 52, 53, 54, 55, 73, 74, 75, 76, 77, 79, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 또는 93 중 하나 이상을 추가로 포함하는 인간 TIGIT 상의 에피토프에 결합하는 조성물.
실시양태 24. 실시양태 23에 있어서, 에피토프가 Thr51, Ala52, Gln53, Val54, Thr55, Leu73, Gly74, Trp75, His76, Ile77, Pro79, Asp83, Arg84, Val85, Ala86, Pro87, Gly88, Pro89, Gly90, Leu91, Gly92, 및 Leu93으로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 아미노산 잔기를 추가로 포함하는 조성물.
실시양태 25. 실시양태 24에 있어서, 에피토프가 아미노산 잔기 Thr51, Ala52, Gln53, Val54, Thr55, Gly74, Trp75, His76, Ile77, Phe81, Lys82, Pro87, Gly88, Pro89, Gly90, Leu91, Gly92, 및 Leu93을 포함하는 조성물.
실시양태 26. 실시양태 24에 있어서, 에피토프가 아미노산 잔기 Ala52, Gln53, Leu73, Gly74, Trp75, Pro79, Phe81, Lys82, Asp83, Arg84, Val85, 및 Ala86을 포함하는 조성물.
실시양태 27. 실시양태 13 및 17 내지 26 중 어느 하나에 있어서, 에피토프가 서열 ICNADLGWHISPSFK (서열식별번호: 258)를 포함하는 조성물.
실시양태 28. 실시양태 1 내지 27 중 어느 하나에 있어서, 인간 TIGIT가 서열식별번호: 218의 서열을 포함하는 조성물.
실시양태 29. 실시양태 1 내지 28 중 어느 하나에 있어서, 각각의 항체가
(a) 서열식별번호: 4, 서열식별번호: 22, 서열식별번호: 40, 서열식별번호: 58, 서열식별번호: 76, 서열식별번호: 94, 서열식별번호: 112, 서열식별번호: 130, 서열식별번호: 148, 서열식별번호: 166, 서열식별번호: 184, 서열식별번호: 202, 서열식별번호: 221, 서열식별번호: 224, 서열식별번호: 226, 서열식별번호: 231, 서열식별번호: 233, 서열식별번호: 239, 서열식별번호: 243, 서열식별번호: 283, 서열식별번호: 284, 서열식별번호: 293, 서열식별번호: 294, 서열식별번호: 289, 및 서열식별번호: 290으로부터 선택된 서열을 포함하는 중쇄 CDR1;
(b) 서열식별번호: 6, 서열식별번호: 24, 서열식별번호: 42, 서열식별번호: 60, 서열식별번호: 78, 서열식별번호: 96, 서열식별번호: 114, 서열식별번호: 132, 서열식별번호: 150, 서열식별번호: 168, 서열식별번호: 186, 서열식별번호: 204, 서열식별번호: 222, 서열식별번호: 225, 서열식별번호: 227, 서열식별번호: 229, 서열식별번호: 232, 서열식별번호: 234, 서열식별번호: 238, 서열식별번호: 240, 서열식별번호: 285, 서열식별번호: 297, 서열식별번호: 291, 및 서열식별번호: 295로부터 선택된 서열을 포함하는 중쇄 CDR2;
(c) 서열식별번호: 8, 서열식별번호: 26, 서열식별번호: 44, 서열식별번호: 62, 서열식별번호: 80, 서열식별번호: 98, 서열식별번호: 116, 서열식별번호: 134, 서열식별번호: 152, 서열식별번호: 170, 서열식별번호: 188, 서열식별번호: 206, 서열식별번호: 223, 서열식별번호: 228, 서열식별번호: 230, 서열식별번호: 235, 서열식별번호: 236, 서열식별번호: 237, 서열식별번호: 241, 서열식별번호: 242, 서열식별번호: 244, 서열식별번호: 286, 서열식별번호: 292, 및 서열식별번호: 296으로부터 선택된 서열을 포함하는 중쇄 CDR3;
(d) 서열식별번호: 13, 서열식별번호: 31, 서열식별번호: 49, 서열식별번호: 67, 서열식별번호: 85, 서열식별번호: 103, 서열식별번호: 121, 서열식별번호: 139, 서열식별번호: 157, 서열식별번호: 175, 서열식별번호: 193, 서열식별번호: 211, 및 서열식별번호: 287로부터 선택된 서열을 포함하는 경쇄 CDR1;
(e) 서열식별번호: 15, 서열식별번호: 33, 서열식별번호: 51, 서열식별번호: 69, 서열식별번호: 87, 서열식별번호: 105, 서열식별번호: 123, 서열식별번호: 141, 서열식별번호: 159, 서열식별번호: 177, 서열식별번호: 195, 서열식별번호: 213, 및 서열식별번호: 288로부터 선택된 서열을 포함하는 경쇄 CDR2; 또는
(f) 서열식별번호: 17, 서열식별번호: 35, 서열식별번호: 53, 서열식별번호: 71, 서열식별번호: 89, 서열식별번호: 107, 서열식별번호: 125, 서열식별번호: 143, 서열식별번호: 161, 서열식별번호: 179, 서열식별번호: 197, 및 서열식별번호: 215로부터 선택된 서열을 포함하는 경쇄 CDR3
중 하나 이상을 포함하는 조성물.
실시양태 30. 실시양태 29에 있어서, 각각의 항체가
(a) 서열식별번호: 58, 서열식별번호: 283, 서열식별번호: 284, 서열식별번호: 224, 서열식별번호: 293, 서열식별번호: 294, 서열식별번호: 226, 서열식별번호: 289, 및 서열식별번호: 290으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR1 서열;
(b) 서열식별번호: 60, 서열식별번호: 285, 서열식별번호: 225, 서열식별번호: 297, 서열식별번호: 227, 서열식별번호: 291, 서열식별번호: 229, 및 서열식별번호: 295로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR2 서열;
(c) 서열식별번호: 62, 서열식별번호: 286, 서열식별번호: 228, 서열식별번호: 292, 서열식별번호: 230, 및 서열식별번호: 296으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR3 서열;
(d) 서열식별번호: 67 및 서열식별번호: 287로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR1 서열;
(e) 서열식별번호: 69 및 서열식별번호: 288로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR2 서열; 및/또는
(f) 서열식별번호: 71의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR3 서열
을 포함하는 조성물.
실시양태 31. 실시양태 29 또는 실시양태 30에 있어서, 각각의 항체가
(a) 각각 서열식별번호: 4, 6, 8, 13, 15, 및 17; 또는
(b) 각각 서열식별번호: 22, 24, 26, 31, 33, 및 35; 또는
(c) 각각 서열식별번호: 40, 42, 44, 49, 51, 및 53; 또는
(d) 각각 서열식별번호: 58, 60, 62, 67, 69, 및 71; 또는
(e) 각각 서열식별번호: 283, 285, 62, 287, 288, 및 71; 또는
(f) 각각 서열식별번호: 284, 60, 286, 67, 69, 및 71; 또는
(g) 각각 서열식별번호: 76, 78, 80, 85, 87, 및 89; 또는
(h) 각각 서열식별번호: 94, 96, 98, 103, 105, 및 107; 또는
(i) 각각 서열식별번호: 112, 114, 116, 121, 123, 및 125; 또는
(j) 각각 서열식별번호: 130, 132, 134, 139, 141, 및 143; 또는
(k) 각각 서열식별번호: 148, 150, 152, 157, 159, 및 161; 또는
(l) 각각 서열식별번호: 166, 168, 170, 175, 177, 및 179; 또는
(m) 각각 서열식별번호: 184, 186, 188, 193, 195, 및 197; 또는
(n) 각각 서열식별번호: 202, 204, 206, 211, 213, 및 215; 또는
(o) 각각 서열식별번호: 221, 222, 223, 13, 15, 및 17; 또는
(p) 각각 서열식별번호: 224, 225, 62, 67, 69, 및 71; 또는
(q) 각각 서열식별번호: 293, 297, 62, 287, 288, 및 71; 또는
(r) 각각 서열식별번호: 294, 225, 286, 67, 69, 및 71; 또는
(s) 각각 서열식별번호: 226, 227, 228, 67, 69, 및 71; 또는
(t) 각각 서열식별번호: 289, 291, 228, 287, 288, 및 71; 또는
(u) 각각 서열식별번호: 290, 227, 292, 67, 69, 및 71; 또는
(v) 각각 서열식별번호: 224, 229, 230, 67, 69, 및 71; 또는
(w) 각각 서열식별번호: 293, 295, 230, 287, 288, 및 71; 또는
(x) 각각 서열식별번호: 294, 229, 296, 67, 69, 및 71; 또는
(y) 각각 서열식별번호: 224, 227, 230, 67, 69, 및 71; 또는
(z) 각각 서열식별번호: 293, 290, 230, 287, 288, 및 71; 또는
(aa) 각각 서열식별번호: 294, 290, 230, 67, 69, 및 71; 또는
(bb) 각각 서열식별번호: 231, 232, 235, 103, 105, 및 107; 또는
(cc) 각각 서열식별번호: 233, 234, 236, 103, 105, 및 107; 또는
(dd) 각각 서열식별번호: 233, 234, 237, 103, 105, 및 107; 또는
(ee) 각각 서열식별번호: 166, 238, 170, 175, 177, 및 179; 또는
(ff) 각각 서열식별번호: 239, 240, 170, 175, 177, 및 179; 또는
(gg) 각각 서열식별번호: 239, 240, 241, 175, 177, 및 179; 또는
(hh) 각각 서열식별번호: 239, 240, 242, 175, 177, 및 179; 또는
(ii) 각각 서열식별번호: 243, 168, 244, 175, 177, 및 179
의 서열을 포함하는 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 및 경쇄 CDR1, CDR 및 CDR3을 포함하는 조성물.
실시양태 32. 실시양태 1 내지 31 중 어느 하나에 있어서, 각각의 항체가
(a) 각각 서열식별번호: 58, 60, 62, 67, 69, 및 71; 또는
(b) 각각 서열식별번호: 283, 285, 62, 287, 288, 및 71; 또는
(c) 각각 서열식별번호: 284, 60, 286, 67, 69, 및 71
의 서열을 포함하는 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 및 경쇄 CDR1, CDR 및 CDR3을 포함하는 조성물.
실시양태 33. 실시양태 1 내지 32 중 어느 하나에 있어서, 각각의 항체가
(a) 서열식별번호: 1, 서열식별번호: 19, 서열식별번호: 37, 서열식별번호: 55, 서열식별번호: 73, 서열식별번호: 91, 서열식별번호: 109, 서열식별번호: 127, 서열식별번호: 145, 서열식별번호: 163, 서열식별번호: 181, 서열식별번호: 199, 서열식별번호: 245, 서열식별번호: 246, 서열식별번호: 247, 서열식별번호: 248, 서열식별번호: 249, 서열식별번호: 250, 서열식별번호: 251, 서열식별번호: 252, 서열식별번호: 253, 서열식별번호: 254, 서열식별번호: 255, 서열식별번호: 256, 또는 서열식별번호: 257에 대한 적어도 90%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역; 및/또는
(b) 서열식별번호: 10, 서열식별번호: 28, 서열식별번호: 46, 서열식별번호: 64, 서열식별번호: 82, 서열식별번호: 100, 서열식별번호: 118, 서열식별번호: 136, 서열식별번호: 154, 서열식별번호: 172, 서열식별번호: 190, 또는 서열식별번호: 208에 대한 적어도 90%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역
을 포함하는 조성물.
실시양태 34. 실시양태 1 내지 33 중 어느 하나에 있어서, 각각의 항체가
(a) 서열식별번호: 1 또는 서열식별번호: 245에 대한 적어도 90%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열식별번호: 10에 대한 적어도 90%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역; 또는
(b) 서열식별번호: 19에 대한 적어도 90%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열식별번호: 28에 대한 적어도 90%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역; 또는
(c) 서열식별번호: 37에 대한 적어도 90%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열식별번호: 46에 대한 적어도 90%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역; 또는
(d) 서열식별번호: 55, 서열식별번호: 246, 서열식별번호: 247, 서열식별번호: 248, 또는 서열식별번호: 249 중 어느 하나에 대한 적어도 90%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열식별번호: 64에 대한 적어도 90%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역; 또는
(e) 서열식별번호: 73에 대한 적어도 90%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열식별번호: 82에 대한 적어도 90%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역; 또는
(f) 서열식별번호: 91, 서열식별번호: 250, 서열식별번호: 251, 또는 서열식별번호: 252 중 어느 하나에 대한 적어도 90%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열식별번호: 100에 대한 적어도 90%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역; 또는
(g) 서열식별번호: 109에 대한 적어도 90%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열식별번호: 118에 대한 적어도 90%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역; 또는
(h) 서열식별번호: 127에 대한 적어도 90%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열식별번호: 136에 대한 적어도 90%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역; 또는
(i) 서열식별번호: 145에 대한 적어도 90%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열식별번호: 154에 대한 적어도 90%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역; 또는
(j) 서열식별번호: 163, 서열식별번호: 253, 서열식별번호: 254, 서열식별번호: 255, 서열식별번호: 256, 또는 서열식별번호: 257 중 어느 하나에 대한 적어도 90%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열식별번호: 172에 대한 적어도 90%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역; 또는
(k) 서열식별번호: 181에 대한 적어도 90%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열식별번호: 190에 대한 적어도 90%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역; 또는
(l) 서열식별번호: 199에 대한 적어도 90%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열식별번호: 208에 대한 적어도 90%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역
을 포함하는 조성물.
실시양태 35. 실시양태 34에 있어서, 각각의 항체가
(a) 서열식별번호: 1 또는 서열식별번호: 245의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열식별번호: 10의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역; 또는
(b) 서열식별번호: 19의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열식별번호: 28의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역; 또는
(c) 서열식별번호: 37의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열식별번호: 46의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역; 또는
(d) 서열식별번호: 55, 서열식별번호: 246, 서열식별번호: 247, 서열식별번호: 248, 또는 서열식별번호: 249 중 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열식별번호: 64의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역; 또는
(e) 서열식별번호: 73의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열식별번호: 82의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역; 또는
(f) 서열식별번호: 91, 서열식별번호: 250, 서열식별번호: 251, 또는 서열식별번호: 252 중 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열식별번호: 100의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역; 또는
(g) 서열식별번호: 109의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열식별번호: 118의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역; 또는
(h) 서열식별번호: 127의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열식별번호: 136의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역; 또는
(i) 서열식별번호: 145의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열식별번호: 154의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역; 또는
(j) 서열식별번호: 163, 서열식별번호: 253, 서열식별번호: 254, 서열식별번호: 255, 서열식별번호: 256, 또는 서열식별번호: 257 중 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열식별번호: 172의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역; 또는
(k) 서열식별번호: 181의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열식별번호: 190의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역; 또는
(l) 서열식별번호: 199의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열식별번호: 208의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역
을 포함하는 조성물.
실시양태 36. 실시양태 1 내지 35 중 어느 하나에 있어서, 각각의 항체가 서열식별번호: 55의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역, 및 서열식별번호: 64의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는 조성물.
실시양태 37. 실시양태 1 내지 36 중 어느 하나에 있어서, 항체가 IgG 항체인 조성물.
실시양태 38. 실시양태 37에 있어서, 항체가 IgG1 항체 또는 IgG3 항체인 조성물.
실시양태 39. 실시양태 1 내지 38 중 어느 하나에 있어서, 각각의 항체가 서열식별번호: 260, 262, 264, 266, 268, 270, 및 272로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄; 및 서열식별번호: 274의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하는 조성물.
실시양태 40. 실시양태 39에 있어서, 각각의 항체가 서열식별번호: 260의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄; 및 서열식별번호: 274의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하는 조성물.
실시양태 41. 실시양태 39에 있어서, 각각의 항체가 서열식별번호: 260의 아미노산 서열로 이루어진 중쇄; 및 서열식별번호: 274의 아미노산 서열로 이루어진 경쇄를 포함하는 조성물.
실시양태 42. 인간 TIGIT에 결합하는 단리된 항체를 포함하는 조성물이고, 여기서 조성물 내의 항체의 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99%가 비-푸코실화되고, 각각의 항체가 서열식별번호: 260의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄; 및 서열식별번호: 274의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하는 조성물.
실시양태 43. 인간 TIGIT에 결합하는 단리된 항체를 포함하는 조성물이고, 여기서 조성물 내의 항체의 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99%가 비-푸코실화되고, 각각의 항체가 서열식별번호: 260의 아미노산 서열로 이루어진 중쇄; 및 서열식별번호: 274의 아미노산 서열로 이루어진 경쇄를 포함하는 조성물.
실시양태 44. 실시양태 1 내지 43 중 어느 하나에 있어서, 항체가 항-PD-1 항체 또는 항-PD-L1 항체와의 상승작용을 나타내는 조성물.
실시양태 45. 실시양태 44에 있어서, 상승작용이 (i) PD-1, TIGIT 및 CD226을 발현하는 저캣(Jurkat) 이펙터 세포로서, 여기서 저캣 이펙터 세포가 IL-2 프로모터에 의해 구동되는 루시퍼라제 리포터 유전자를 포함하는 저캣 이펙터 세포; 및 (ii) TCR 활성자, PD-L1 및 CD155를 발현하는 CHO-K1 인공 항원 제시 세포 (aAPC)를 포함하는 공동-배양물을 조성물 및 항-PD-1 항체 또는 항-PD-L1 항체와 접촉시키는 것을 포함하는 검정법을 사용하여 결정되는 조성물.
실시양태 46. 실시양태 1 내지 45 중 어느 하나에 있어서, 조절 T (Treg) 세포가 조성물과 접촉된 인간 PBMC로부터 고갈되는 조성물.
실시양태 47. 실시양태 1 내지 46 중 어느 하나에 있어서, 조성물과 접촉된 인간 PBMC에서 MCP1, IL-8, 및 MIP1α의 발현이 증가되는 조성물.
실시양태 48. 실시양태 1 내지 47 중 어느 하나에 있어서, 조성물과 접촉된 경우에 단핵구/대식세포가 활성화되는 조성물.
실시양태 49. 실시양태 1 내지 48 중 어느 하나에 있어서, CD14+ 단핵구/대식세포가 조성물과 접촉되는 경우에 CD86 및 MHCII가 상향조절되는 조성물.
실시양태 50. 실시양태 1 내지 49 중 어느 하나에 있어서, 조성물과 접촉된 CD14+ 단핵구/대식세포가 항원 제시 세포로 성숙되는 조성물.
실시양태 51. 실시양태 1 내지 50 중 어느 하나에 있어서, 조성물과 접촉된 기억 T 세포가 항원에 반응하여 증가된 IFNγ 생산을 나타내는 조성물.
실시양태 52. 실시양태 1 내지 51 중 어느 하나에 있어서, 조성물과 접촉된 기억 T 세포가 항원에 대한 강화된 반응을 입증하는 조성물.
실시양태 53. 실시양태 1 내지 52 중 어느 하나에 있어서, 이펙터 기억 CD8+ T 세포 및/또는 이펙터 기억 CD4+ T 세포가 조성물과 접촉된 종양에서 증가되는 조성물.
실시양태 54. 실시양태 1 내지 53 중 어느 하나에 있어서, 조성물이 투여된 동물에서 조성물이 Th1 반응을 강화시키는 조성물.
실시양태 55. 실시양태 1 내지 54 중 어느 하나에 있어서, 조성물의 항체가 비-푸코실화되지 않은 동일한 항-TIGIT 항체에 비교하여 FcγRIIa 및/또는 FcγRIIb에 대한 더 낮은 결합 친화도를 갖는 조성물.
실시양태 56. 실시양태 1 내지 55 중 어느 하나에 있어서, 조성물이 단핵구 대식세포의 존재 하에 TIGIT를 발현하는 세포의 항체-의존적 세포성 포식작용 (ADCP)을 매개하는 조성물.
실시양태 57. 실시양태 1 내지 56 중 어느 하나에 있어서, 항체가 모노클로날인 조성물.
실시양태 58. 실시양태 1 내지 57 중 어느 하나에 있어서, 항체가 완전 인간 항체인 조성물.
실시양태 59. 실시양태 1 내지 58 중 어느 하나에 있어서, 항체가 키메라 항체인 조성물.
실시양태 60. 실시양태 1 내지 28 및 44 내지 59 중 어느 하나에 있어서, 항체가 인간화된 조성물.
실시양태 61. 실시양태 1 내지 60 중 어느 하나에 있어서, 항체가 항체 단편인 조성물.
실시양태 62. 실시양태 61에 있어서, 항체 단편이 Fab, Fab', F(ab')2, scFv, 또는 디아바디인 조성물.
실시양태 63. 실시양태 1 내지 62 중 어느 하나에 있어서, 항체가 이중특이적 항체인 조성물.
실시양태 64. 실시양태 1 내지 63 중 어느 하나에 있어서, 항체가 항체-약물 접합체인 조성물.
실시양태 65. 인간 TIGIT (Ig 및 ITIM 도메인을 갖는 T-세포 면역수용체)에 결합하는 항체이고, 여기서 항체가 5 nM 미만의 인간 TIGIT에 대한 결합 친화도 (KD)를 갖고, 항체가 비-푸코실화된 항체.
실시양태 66. 실시양태 65에 있어서, 항체가 1 nM 미만의 인간 TIGIT에 대한 KD를 갖는 항체.
실시양태 67. 실시양태 66에 있어서, 항체가 100 pM 미만의 인간 TIGIT에 대한 KD를 갖는 항체.
실시양태 68. 실시양태 65 내지 67 중 어느 하나에 있어서, 항체가 시노몰거스 원숭이 TIGIT 및/또는 마우스 TIGIT와의 교차-반응성을 나타내는 항체.
실시양태 69. 실시양태 68에 있어서, 항체가 시노몰거스 원숭이 TIGIT 및 마우스 TIGIT 둘 다와의 교차-반응성을 나타내는 항체.
실시양태 70. 실시양태 65 내지 69 중 어느 하나에 있어서, 항체가 TIGIT에 대한 CD155의 결합을 차단하는 항체.
실시양태 71. 실시양태 65 내지 70 중 어느 하나에 있어서, 항체가 TIGIT에 대한 CD112의 결합을 차단하는 항체.
실시양태 72. 실시양태 65 내지 71 중 어느 하나에 있어서, 항체가 TIGIT에 대한 CD155 및 CD112 둘 다의 결합을 차단하는 항체.
실시양태 73. 실시양태 65 내지 72 중 어느 하나에 있어서, 항체가 인간 TIGIT에 결합하는 것에 대해 서열식별번호: 55의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열식별번호: 64의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는 항체와 경쟁하는 항체.
실시양태 74. 실시양태 65 내지 73 중 어느 하나에 있어서, 인간 TIGIT에 결합된 경우에 아미노산 위치 81 및 82 중 하나 또는 둘 다에 결합하는 항체.
실시양태 75. 실시양태 74에 있어서, 항체가 아미노산 위치 81 및 82 둘 다에 결합하는 항체.
실시양태 76. 실시양태 74 또는 실시양태 75에 있어서, 아미노산 위치 81 및 82가 Phe81 및 Lys82인 항체.
실시양태 77. 실시양태 65 내지 76 중 어느 하나에 있어서, 항체가 아미노산 위치 81 및 82 중 하나 또는 둘 다를 포함하는 인간 TIGIT 상의 에피토프에 결합하는 항체.
실시양태 78. 인간 TIGIT에 결합하는 항체이고, 여기서 인간 TIGIT에 결합된 경우에 아미노산 위치 81 및 82 중 하나 또는 둘 다에 결합하고, 항체가 비-푸코실화된 항체.
실시양태 79. 실시양태 78에 있어서, 항체가 아미노산 위치 81 및 82 둘 다에 결합하는 항체.
실시양태 80. 실시양태 78 또는 실시양태 79에 있어서, 아미노산 위치 81 및 82가 Phe81 및 Lys82인 항체.
실시양태 81. 인간 TIGIT에 결합하는 항체이고, 여기서 항체가 아미노산 위치 81 및 82 중 하나 또는 둘 다를 포함하는 인간 TIGIT 상의 에피토프에 결합하고, 항체가 비-푸코실화된 항체.
실시양태 82. 실시양태 77 또는 실시양태 81에 있어서, 에피토프가 위치 81의 Phe을 포함하는 항체.
실시양태 83. 실시양태 77, 81, 및 82 중 어느 하나에 있어서, 에피토프가 위치 82의 Lys 또는 Ser을 포함하는 항체.
실시양태 84. 실시양태 77 및 81 내지 83 중 어느 하나에 있어서, 에피토프가 위치 81의 Phe 및 위치 82의 Lys 또는 Ser을 포함하는 항체.
실시양태 85. 실시양태 84에 있어서, 에피토프가 Phe81 및 Lys82를 포함하는 항체.
실시양태 86. 실시양태 77 및 81 내지 85 중 어느 하나에 있어서, 에피토프가 불연속 에피토프인 항체.
실시양태 87. 실시양태 77 및 81 내지 86 중 어느 하나에 있어서, 항체가 아미노산 위치 51, 52, 53, 54, 55, 73, 74, 75, 76, 77, 79, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 또는 93 중 하나 이상을 추가로 포함하는 인간 TIGIT 상의 에피토프에 결합하는 항체.
실시양태 88. 실시양태 87에 있어서, 에피토프가 Thr51, Ala52, Gln53, Val54, Thr55, Leu73, Gly74, Trp75, His76, Ile77, Pro79, Asp83, Arg84, Val85, Ala86, Pro87, Gly88, Pro89, Gly90, Leu91, Gly92, 및 Leu93으로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 아미노산 잔기를 추가로 포함하는 항체.
실시양태 89. 실시양태 88에 있어서, 에피토프가 아미노산 잔기 Thr51, Ala52, Gln53, Val54, Thr55, Gly74, Trp75, His76, Ile77, Phe81, Lys82, Pro87, Gly88, Pro89, Gly90, Leu91, Gly92, 및 Leu93을 포함하는 항체.
실시양태 90. 실시양태 88에 있어서, 에피토프가 아미노산 잔기 Ala52, Gln53, Leu73, Gly74, Trp75, Pro79, Phe81, Lys82, Asp83, Arg84, Val85, 및 Ala86을 포함하는 항체.
실시양태 91. 실시양태 77 및 81 내지 90 중 어느 하나에 있어서, 에피토프가 서열 ICNADLGWHISPSFK (서열식별번호: 258)를 포함하는 항체.
실시양태 92. 실시양태 65 내지 91 중 어느 하나에 있어서, 인간 TIGIT가 서열식별번호: 218의 서열을 포함하는 항체.
실시양태 93. 실시양태 65 내지 92 중 어느 하나에 있어서, 항체가
(a) 서열식별번호: 4, 서열식별번호: 22, 서열식별번호: 40, 서열식별번호: 58, 서열식별번호: 76, 서열식별번호: 94, 서열식별번호: 112, 서열식별번호: 130, 서열식별번호: 148, 서열식별번호: 166, 서열식별번호: 184, 서열식별번호: 202, 서열식별번호: 221, 서열식별번호: 224, 서열식별번호: 226, 서열식별번호: 231, 서열식별번호: 233, 서열식별번호: 239, 서열식별번호: 243, 서열식별번호: 283, 서열식별번호: 284, 서열식별번호: 293, 서열식별번호: 294, 서열식별번호: 289, 및 서열식별번호: 290으로부터 선택된 서열을 포함하는 중쇄 CDR1;
(b) 서열식별번호: 6, 서열식별번호: 24, 서열식별번호: 42, 서열식별번호: 60, 서열식별번호: 78, 서열식별번호: 96, 서열식별번호: 114, 서열식별번호: 132, 서열식별번호: 150, 서열식별번호: 168, 서열식별번호: 186, 서열식별번호: 204, 서열식별번호: 222, 서열식별번호: 225, 서열식별번호: 227, 서열식별번호: 229, 서열식별번호: 232, 서열식별번호: 234, 서열식별번호: 238, 서열식별번호: 240, 서열식별번호: 285, 서열식별번호: 297, 서열식별번호: 291, 및 서열식별번호: 295로부터 선택된 서열을 포함하는 중쇄 CDR2;
(c) 서열식별번호: 8, 서열식별번호: 26, 서열식별번호: 44, 서열식별번호: 62, 서열식별번호: 80, 서열식별번호: 98, 서열식별번호: 116, 서열식별번호: 134, 서열식별번호: 152, 서열식별번호: 170, 서열식별번호: 188, 서열식별번호: 206, 서열식별번호: 223, 서열식별번호: 228, 서열식별번호: 230, 서열식별번호: 235, 서열식별번호: 236, 서열식별번호: 237, 서열식별번호: 241, 서열식별번호: 242, 서열식별번호: 244, 서열식별번호: 286, 서열식별번호: 292, 및 서열식별번호: 296으로부터 선택된 서열을 포함하는 중쇄 CDR3;
(d) 서열식별번호: 13, 서열식별번호: 31, 서열식별번호: 49, 서열식별번호: 67, 서열식별번호: 85, 서열식별번호: 103, 서열식별번호: 121, 서열식별번호: 139, 서열식별번호: 157, 서열식별번호: 175, 서열식별번호: 193, 서열식별번호: 211, 및 서열식별번호: 287로부터 선택된 서열을 포함하는 경쇄 CDR1;
(e) 서열식별번호: 15, 서열식별번호: 33, 서열식별번호: 51, 서열식별번호: 69, 서열식별번호: 87, 서열식별번호: 105, 서열식별번호: 123, 서열식별번호: 141, 서열식별번호: 159, 서열식별번호: 177, 서열식별번호: 195, 서열식별번호: 213, 및 서열식별번호: 288로부터 선택된 서열을 포함하는 경쇄 CDR2; 또는
(f) 서열식별번호: 17, 서열식별번호: 35, 서열식별번호: 53, 서열식별번호: 71, 서열식별번호: 89, 서열식별번호: 107, 서열식별번호: 125, 서열식별번호: 143, 서열식별번호: 161, 서열식별번호: 179, 서열식별번호: 197, 및 서열식별번호: 215로부터 선택된 서열을 포함하는 경쇄 CDR3
중 하나 이상을 포함하는 항체.
실시양태 94. 실시양태 93에 있어서, 항체가
(d) 서열식별번호: 58, 서열식별번호: 283, 서열식별번호: 284, 서열식별번호: 224, 서열식별번호: 293, 서열식별번호: 294, 서열식별번호: 226, 서열식별번호: 289, 및 서열식별번호: 290으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR1 서열;
(e) 서열식별번호: 60, 서열식별번호: 285, 서열식별번호: 225, 서열식별번호: 297, 서열식별번호: 227, 서열식별번호: 291, 서열식별번호: 229, 및 서열식별번호: 295로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR2 서열;
(f) 서열식별번호: 62, 서열식별번호: 286, 서열식별번호: 228, 서열식별번호: 292, 서열식별번호: 230, 및 서열식별번호: 296으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR3 서열;
(g) 서열식별번호: 67 및 서열식별번호: 287로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR1 서열;
(h) 서열식별번호: 69 및 서열식별번호: 288로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR2 서열; 및/또는
(i) 서열식별번호: 71의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR3 서열
을 포함하는 항체.
실시양태 95. 실시양태 94에 있어서, 항체가
(a) 각각 서열식별번호: 4, 6, 8, 13, 15, 및 17; 또는
(b) 각각 서열식별번호: 22, 24, 26, 31, 33, 및 35; 또는
(c) 각각 서열식별번호: 40, 42, 44, 49, 51, 및 53; 또는
(d) 각각 서열식별번호: 58, 60, 62, 67, 69, 및 71; 또는
(e) 각각 서열식별번호: 76, 78, 80, 85, 87, 및 89; 또는
(f) 각각 서열식별번호: 94, 96, 98, 103, 105, 및 107; 또는
(g) 각각 서열식별번호: 112, 114, 116, 121, 123, 및 125; 또는
(h) 각각 서열식별번호: 130, 132, 134, 139, 141, 및 143; 또는
(i) 각각 서열식별번호: 148, 150, 152, 157, 159, 및 161; 또는
(j) 각각 서열식별번호: 166, 168, 170, 175, 177, 및 179; 또는
(k) 각각 서열식별번호: 184, 186, 188, 193, 195, 및 197; 또는
(l) 각각 서열식별번호: 202, 204, 206, 211, 213, 및 215; 또는
(m) 각각 서열식별번호: 221, 222, 223, 13, 15, 및 17; 또는
(n) 각각 서열식별번호: 224, 225, 62, 67, 69, 및 71; 또는
(o) 각각 서열식별번호: 226, 227, 228, 67, 69, 및 71; 또는
(p) 각각 서열식별번호: 224, 229, 230, 67, 69, 및 71; 또는
(q) 각각 서열식별번호: 224, 227, 230, 67, 69, 및 71; 또는
(r) 각각 서열식별번호: 231, 232, 235, 103, 105, 및 107; 또는
(s) 각각 서열식별번호: 233, 234, 236, 103, 105, 및 107; 또는
(t) 각각 서열식별번호: 233, 234, 237, 103, 105, 및 107; 또는
(u) 각각 서열식별번호: 166, 238, 170, 175, 177, 및 179; 또는
(v) 각각 서열식별번호: 239, 240, 170, 175, 177, 및 179; 또는
(w) 각각 서열식별번호: 239, 240, 241, 175, 177, 및 179; 또는
(x) 각각 서열식별번호: 239, 240, 242, 175, 177, 및 179; 또는
(y) 각각 서열식별번호: 243, 168, 244, 175, 177, 및 179
의 서열을 포함하는 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 및 경쇄 CDR1, CDR 및 CDR3을 포함하는 항체.
실시양태 96. 실시양태 65 내지 95 중 어느 하나에 있어서, 항체가
(j) 각각 서열식별번호: 58, 60, 62, 67, 69, 및 71; 또는
(k) 각각 서열식별번호: 283, 285, 62, 287, 288, 및 71; 또는
(l) 각각 서열식별번호: 284, 60, 286, 67, 69, 및 71
의 서열을 포함하는 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 및 경쇄 CDR1, CDR 및 CDR3을 포함하는 항체.
실시양태 97. 실시양태 65 내지 96 중 어느 하나에 있어서, 항체가
(a) 서열식별번호: 1, 서열식별번호: 19, 서열식별번호: 37, 서열식별번호: 55, 서열식별번호: 73, 서열식별번호: 91, 서열식별번호: 109, 서열식별번호: 127, 서열식별번호: 145, 서열식별번호: 163, 서열식별번호: 181, 서열식별번호: 199, 서열식별번호: 245, 서열식별번호: 246, 서열식별번호: 247, 서열식별번호: 248, 서열식별번호: 249, 서열식별번호: 250, 서열식별번호: 251, 서열식별번호: 252, 서열식별번호: 253, 서열식별번호: 254, 서열식별번호: 255, 서열식별번호: 256, 또는 서열식별번호: 257에 대한 적어도 90%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역; 및/또는
(b) 서열식별번호: 10, 서열식별번호: 28, 서열식별번호: 46, 서열식별번호: 64, 서열식별번호: 82, 서열식별번호: 100, 서열식별번호: 118, 서열식별번호: 136, 서열식별번호: 154, 서열식별번호: 172, 서열식별번호: 190, 또는 서열식별번호: 208에 대한 적어도 90%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역
을 포함하는 항체.
실시양태 98. 실시양태 65 내지 97 중 어느 하나에 있어서, 항체가
(a) 서열식별번호: 1 또는 서열식별번호: 245에 대한 적어도 90%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열식별번호: 10에 대한 적어도 90%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역; 또는
(b) 서열식별번호: 19에 대한 적어도 90%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열식별번호: 28에 대한 적어도 90%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역; 또는
(c) 서열식별번호: 37에 대한 적어도 90%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열식별번호: 46에 대한 적어도 90%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역; 또는
(d) 서열식별번호: 55, 서열식별번호: 246, 서열식별번호: 247, 서열식별번호: 248, 또는 서열식별번호: 249 중 어느 하나에 대한 적어도 90%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열식별번호: 64에 대한 적어도 90%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역; 또는
(e) 서열식별번호: 73에 대한 적어도 90%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열식별번호: 82에 대한 적어도 90%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역; 또는
(f) 서열식별번호: 91, 서열식별번호: 250, 서열식별번호: 251, 또는 서열식별번호: 252 중 어느 하나에 대한 적어도 90%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열식별번호: 100에 대한 적어도 90%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역; 또는
(g) 서열식별번호: 109에 대한 적어도 90%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열식별번호: 118에 대한 적어도 90%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역; 또는
(h) 서열식별번호: 127에 대한 적어도 90%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열식별번호: 136에 대한 적어도 90%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역; 또는
(i) 서열식별번호: 145에 대한 적어도 90%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열식별번호: 154에 대한 적어도 90%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역; 또는
(j) 서열식별번호: 163, 서열식별번호: 253, 서열식별번호: 254, 서열식별번호: 255, 서열식별번호: 256, 또는 서열식별번호: 257 중 어느 하나에 대한 적어도 90%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열식별번호: 172에 대한 적어도 90%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역; 또는
(k) 서열식별번호: 181에 대한 적어도 90%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열식별번호: 190에 대한 적어도 90%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역; 또는
(l) 서열식별번호: 199에 대한 적어도 90%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열식별번호: 208에 대한 적어도 90%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역
을 포함하는 항체.
실시양태 99. 실시양태 98에 있어서, 항체가
(a) 서열식별번호: 1 또는 서열식별번호: 245의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열식별번호: 10의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역; 또는
(b) 서열식별번호: 19의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열식별번호: 28의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역; 또는
(c) 서열식별번호: 37의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열식별번호: 46의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역; 또는
(d) 서열식별번호: 55, 서열식별번호: 246, 서열식별번호: 247, 서열식별번호: 248, 또는 서열식별번호: 249 중 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열식별번호: 64의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역; 또는
(e) 서열식별번호: 73의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열식별번호: 82의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역; 또는
(f) 서열식별번호: 91, 서열식별번호: 250, 서열식별번호: 251, 또는 서열식별번호: 252 중 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열식별번호: 100의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역; 또는
(g) 서열식별번호: 109의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열식별번호: 118의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역; 또는
(h) 서열식별번호: 127의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열식별번호: 136의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역; 또는
(i) 서열식별번호: 145의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열식별번호: 154의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역; 또는
(j) 서열식별번호: 163, 서열식별번호: 253, 서열식별번호: 254, 서열식별번호: 255, 서열식별번호: 256, 또는 서열식별번호: 257 중 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열식별번호: 172의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역; 또는
(k) 서열식별번호: 181의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열식별번호: 190의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역; 또는
(l) 서열식별번호: 199의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열식별번호: 208의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역
을 포함하는 항체.
실시양태 100. 실시양태 65 내지 99 중 어느 하나에 있어서, 항체가 서열식별번호: 55의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역, 및 서열식별번호: 64의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는 항체.
실시양태 101. 실시양태 65 내지 100 중 어느 하나에 있어서, 항체가 IgG 항체인 항체.
실시양태 102. 실시양태 101에 있어서, 항체가 IgG1 항체 또는 IgG3 항체인 항체.
실시양태 103. 실시양태 65 내지 102 중 어느 하나에 있어서, 항체가 서열식별번호: 260, 262, 264, 266, 268, 270, 및 272로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄; 및 서열식별번호: 274의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하는 항체.
실시양태 104. 실시양태 103에 있어서, 항체가 서열식별번호: 260의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄; 및 서열식별번호: 274의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하는 항체.
실시양태 105. 실시양태 103에 있어서, 항체가 서열식별번호: 260의 아미노산 서열로 이루어진 중쇄; 및 서열식별번호: 274의 아미노산 서열로 이루어진 경쇄를 포함하는 항체.
실시양태 106. 인간 TIGIT에 결합하는 항체이고, 여기서 항체가 서열식별번호: 260, 262, 264, 266, 268, 270, 및 272로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄; 및 서열식별번호: 274의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하는 항체.
실시양태 107. 인간 TIGIT에 결합하는 항체이고, 여기서 항체가 서열식별번호: 260의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄; 및 서열식별번호: 274의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하는 항체.
실시양태 108. 인간 TIGIT에 결합하는 항체이고, 여기서 항체가 서열식별번호: 260의 아미노산 서열로 이루어진 중쇄; 및 서열식별번호: 274의 아미노산 서열로 이루어진 경쇄를 포함하는 항체.
실시양태 109. 실시양태 65 내지 108 중 어느 하나에 있어서, 항체가 항-PD-1 항체 또는 항-PD-L1 항체와의 상승작용을 나타내는 항체.
실시양태 110. 실시양태 109에 있어서, 상승작용이 (i) PD-1, TIGIT 및 CD226을 발현하는 저캣 이펙터 세포로서, 여기서 저캣 이펙터 세포가 IL-2 프로모터에 의해 구동되는 루시퍼라제 리포터 유전자를 포함하는 저캣 이펙터 세포; 및 (ii) TCR 활성자, PD-L1 및 CD155를 발현하는 CHO-K1 인공 항원 제시 세포 (aAPC)를 포함하는 공동-배양물을 조성물 및 항-PD-1 항체 또는 항-PD-L1 항체와 접촉시키는 것을 포함하는 검정법을 사용하여 결정되는 항체.
실시양태 111. 실시양태 65 내지 110 중 어느 하나에 있어서, 조절 T (Treg) 세포가 항체와 접촉된 인간 PBMC로부터 고갈되는 항체.
실시양태 112. 실시양태 65 내지 111 중 어느 하나에 있어서, 항체와 접촉된 인간 PBMC에서 MCP1, IL-8, 및 MIP1α의 발현이 증가되는 항체.
실시양태 113. 실시양태 65 내지 112 중 어느 하나에 있어서, 항체와 접촉된 경우에 단핵구/대식세포가 활성화되는 항체.
실시양태 114. 실시양태 65 내지 113 중 어느 하나에 있어서, CD14+ 단핵구/대식세포가 항체와 접촉되는 경우에 CD86 및 MHCII가 상향조절되는 항체.
실시양태 115. 실시양태 65 내지 114 중 어느 하나에 있어서, 항체와 접촉된 CD14+ 단핵구/대식세포가 항원 제시 세포로 성숙되는 항체.
실시양태 116. 실시양태 65 내지 115 중 어느 하나에 있어서, 항체와 접촉된 기억 T 세포가 항원에 반응하여 증가된 IFNγ 생산을 나타내는 항체.
실시양태 117. 실시양태 65 내지 116 중 어느 하나에 있어서, 항체와 접촉된 기억 T 세포가 항원에 대한 강화된 반응을 입증하는 항체.
실시양태 118. 실시양태 65 내지 117 중 어느 하나에 있어서, 이펙터 기억 CD8+ T 세포 및/또는 이펙터 기억 CD4+ T 세포가 항체와 접촉된 종양에서 증가되는 항체.
실시양태 119. 실시양태 65 내지 118 중 어느 하나에 있어서, 항체가 투여된 동물에서 항체가 Th1 반응을 강화시키는 항체.
실시양태 120. 실시양태 65 내지 119 중 어느 하나에 있어서, 항체가 비-푸코실화되지 않은 동일한 항-TIGIT 항체에 비교하여 FcγRIIa 및/또는 FcγRIIb에 대한 더 낮은 결합 친화도를 갖는 항체.
실시양태 121. 실시양태 65 내지 120 중 어느 하나에 있어서, 조성물이 단핵구 대식세포의 존재 하에 TIGIT를 발현하는 세포의 항체-의존적 세포성 포식작용 (ADCP)을 매개하는 항체.
실시양태 122. 실시양태 65 내지 121 중 어느 하나에 있어서, 항체가 모노클로날인 항체.
실시양태 123. 실시양태 65 내지 122 중 어느 하나에 있어서, 항체가 완전 인간 항체인 항체.
실시양태 124. 실시양태 65 내지 123 중 어느 하나에 있어서, 항체가 키메라 항체인 항체.
실시양태 125. 실시양태 65 내지 92 및 109 내지 124 중 어느 하나에 있어서, 항체가 인간화된 항체.
실시양태 126. 실시양태 65 내지 125 중 어느 하나에 있어서, 항체가 항체 단편인 항체.
실시양태 127. 실시양태 126에 있어서, 항체 단편이 Fab, Fab', F(ab')2, scFv, 또는 디아바디인 항체.
실시양태 128. 실시양태 65 내지 127 중 어느 하나에 있어서, 항체가 이중특이적 항체인 항체.
실시양태 129. 실시양태 65 내지 128 중 어느 하나에 있어서, 항체가 항체-약물 접합체인 항체.
실시양태 130. 실시양태 1 내지 64 중 어느 하나의 조성물 또는 실시양태 65 내지 129 중 어느 하나의 항체, 및 제약상 허용되는 담체를 포함하는 제약 제형.
실시양태 131. (i) 실시양태 106 내지 108 중 어느 하나의 항체의 중쇄; (ii) 실시양태 106 내지 108 중 어느 하나의 항체의 경쇄; 또는 (iii) 실시양태 106 내지 108 중 어느 하나의 항체의 중쇄 및 경쇄를 코딩하는 단리된 폴리뉴클레오티드.
실시양태 132. 실시양태 131에 있어서, 폴리뉴클레오티드가 (i) 서열식별번호: 259, 261, 163, 265, 267, 269, 및 271로부터 선택된 뉴클레오티드 서열; 또는 (ii) 서열식별번호: 273의 뉴클레오티드 서열; 또는 (iii) 서열식별번호: 259, 261, 263, 265, 267, 269, 및 271로부터 선택된 뉴클레오티드 서열, 및 서열식별번호: 273의 뉴클레오티드 서열을 포함하는 단리된 폴리뉴클레오티드.
실시양태 133. 실시양태 131 또는 실시양태 132의 폴리뉴클레오티드를 포함하는 벡터.
실시양태 134. 실시양태 131 또는 실시양태 132의 단리된 폴리뉴클레오티드, 또는 실시양태 133의 벡터를 포함하는 단리된 숙주 세포.
실시양태 135. 실시양태 106 내지 108 중 어느 하나의 항체를 발현하는 단리된 숙주 세포.
실시양태 136. 실시양태 134 또는 실시양태 135에 있어서, 비-푸코실화 항체를 생산하도록 조작된 숙주 세포.
실시양태 137. 실시양태 134 내지 136 중 어느 하나의 숙주 세포를 항체를 생산하는 데 적절한 조건 하에 인큐베이션하는 것을 포함하는, 인간 TIGIT에 결합하는 항체를 생산하는 방법.
실시양태 138. 실시양태 137에 있어서, 숙주 세포가 비-푸코실화 항체를 생산하도록 조작된 방법.
실시양태 139. 실시양태 137에 있어서, 숙주 세포가 비-푸코실화 항체를 생산하는 데 적절한 조건 하에 푸코스 유사체의 존재 하에 배양되는 방법.
실시양태 140. 실시양태 137 내지 139 중 어느 하나에 있어서, 항체를 단리하는 것을 추가로 포함하는 방법.
실시양태 141. 인간 TIGIT에 결합하는 단리된 항체의 조성물이고, 여기서 조성물 내의 항체의 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99%가 비-푸코실화되고, 항체가 실시양태 138 내지 140 중 어느 하나의 방법에 생산되는 조성물.
실시양태 142. 인간 TIGIT에 결합하는 단리된 항체의 조성물이고, 여기서 조성물 내의 항체의 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99%가 비-푸코실화되고, 항체가 실시양태 134 또는 실시양태 135의 숙주 세포를 비-푸코실화 항체를 생산하는 데 적절한 조건 하에 인큐베이션하고, 항체를 단리하여 단리된 항체의 조성물을 형성시키는 것을 포함하는 방법에 의해 생산되는 조성물.
실시양태 143. 실시양태 142에 있어서, 숙주 세포가 비-푸코실화 항체를 생산하도록 조작된 조성물.
실시양태 144. 실시양태 142에 있어서, 숙주 세포가 비-푸코실화 항체를 생산하는 데 적절한 조건 하에 푸코스 유사체의 존재 하에 배양되는 조성물.
실시양태 145. (i) 실시양태 1 내지 63 중 어느 하나의 조성물의 항체, 또는 (ii) 실시양태 65 내지 128 중 어느 하나의 항체를 코딩하는 뉴클레오티드 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 숙주 세포이고, 여기서 숙주 세포가 비-푸코실화 항체를 생산하도록 조작된 숙주 세포.
실시양태 146. 실시양태 145에 있어서, 폴리뉴클레오티드가 벡터인 숙주 세포.
실시양태 147. (i) 실시양태 1 내지 63 중 어느 하나의 조성물의 항체, 또는 (ii) 실시양태 65 내지 128 중 어느 하나의 항체를 발현하는 숙주 세포이고, 여기서 숙주 세포가 비-푸코실화 항체를 생산하도록 조작된 숙주 세포.
실시양태 148. 실시양태 145 내지 147 중 어느 하나에 있어서, 숙주 세포가
(a) 서열식별번호: 2, 서열식별번호: 20, 서열식별번호: 38, 서열식별번호: 56, 서열식별번호: 74, 서열식별번호: 92, 서열식별번호: 110, 서열식별번호: 128, 서열식별번호: 146, 서열식별번호: 164, 서열식별번호: 182, 서열식별번호: 200, 서열식별번호: 259, 서열식별번호: 265, 서열식별번호: 267, 서열식별번호: 269, 또는 서열식별번호: 271의 뉴클레오티드 서열; 및/또는
(b) 서열식별번호: 11, 서열식별번호: 29, 서열식별번호: 47, 서열식별번호: 65, 서열식별번호: 83, 서열식별번호: 101, 서열식별번호: 119, 서열식별번호: 137, 서열식별번호: 155, 서열식별번호: 173, 서열식별번호: 191, 서열식별번호: 209, 또는 서열식별번호: 273의 뉴클레오티드 서열
을 포함하는 숙주 세포.
실시양태 149. 실시양태 145 내지 148 중 어느 하나의 숙주 세포를 비-푸코실화 항체를 생산하는 데 적절한 조건 하에 배양하는 것을 포함하는, TIGIT에 결합하는 비-푸코실화 항체를 생산하는 방법.
실시양태 150. 숙주 세포를 비-푸코실화 항체를 생산하는 데 적절한 조건 하에 푸코스 유사체의 존재 하에 배양하는 것을 포함하는, TIGIT에 결합하는 비-푸코실화 항체를 생산하는 방법이고, 여기서 숙주 세포가 (i) 실시양태 1 내지 63 중 어느 하나의 조성물의 항체, 또는 (ii) 실시양태 65 내지 128 중 어느 하나의 항체를 코딩하는 뉴클레오티드 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 방법.
실시양태 151. 실시양태 150에 있어서, 폴리뉴클레오티드가 벡터인 방법.
실시양태 152. 숙주 세포를 비-푸코실화 항체를 생산하는 데 적절한 조건 하에 푸코스 유사체의 존재 하에 배양하는 것을 포함하는, TIGIT에 결합하는 비-푸코실화 항체를 생산하는 방법이고, 여기서 숙주 세포가 (i) 실시양태 1 내지 63 중 어느 하나의 조성물의 항체, 또는 (ii) 실시양태 65 내지 128 중 어느 하나의 항체를 발현하는 방법.
실시양태 153. 실시양태 150 내지 152 중 어느 하나에 있어서, 숙주 세포가
(a) 서열식별번호: 2, 서열식별번호: 20, 서열식별번호: 38, 서열식별번호: 56, 서열식별번호: 74, 서열식별번호: 92, 서열식별번호: 110, 서열식별번호: 128, 서열식별번호: 146, 서열식별번호: 164, 서열식별번호: 182, 서열식별번호: 200, 서열식별번호: 259, 서열식별번호: 265, 서열식별번호: 267, 서열식별번호: 269, 또는 서열식별번호: 271의 뉴클레오티드 서열; 및/또는
(b) 서열식별번호: 11, 서열식별번호: 29, 서열식별번호: 47, 서열식별번호: 65, 서열식별번호: 83, 서열식별번호: 101, 서열식별번호: 119, 서열식별번호: 137, 서열식별번호: 155, 서열식별번호: 173, 서열식별번호: 191, 서열식별번호: 209, 또는 서열식별번호: 273의 뉴클레오티드 서열
을 포함하는 방법.
실시양태 154. 실시양태 150 내지 153 중 어느 하나에 있어서, 푸코스 유사체가 2-플루오로푸코스인 방법.
실시양태 155. 실시양태 149 내지 154 중 어느 하나에 있어서, 비-푸코실화 항체를 단리하는 것을 추가로 포함하는 방법.
실시양태 156. 인간 TIGIT에 결합하는 단리된 항체의 조성물이고, 여기서 조성물 내의 항체의 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99%가 비-푸코실화되고, 항체가 실시양태 149 내지 155 중 어느 하나의 방법에 의해 생산되는 조성물.
실시양태 157. 인간 TIGIT에 결합하는 단리된 항체의 조성물이고, 여기서 조성물 내의 항체의 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99%가 비-푸코실화되고, 항체가 실시양태 145 내지 147 중 어느 하나의 숙주 세포를 비-푸코실화 항체를 생산하는 데 적절한 조건 하에 인큐베이션하고, 항체를 단리하여 단리된 항체의 조성물을 형성시키는 것을 포함하는 방법에 의해 생산되는 조성물.
실시양태 158. 인간 TIGIT에 결합하는 단리된 항체의 조성물이고, 여기서 조성물 내의 항체의 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99%가 비-푸코실화되고, 항체가 비-푸코실화 항체를 생산하는 데 적절한 조건 하에 푸코스 유사체의 존재 하에 숙주 세포를 배양하는 것을 포함하는 방법에 의해 생산되고, 숙주 세포가 (i) 실시양태 1 내지 63 중 어느 하나의 조성물의 항체, 또는 (ii) 실시양태 65 내지 128 중 어느 하나의 항체를 코딩하는 뉴클레오티드 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 조성물.
실시양태 159. 인간 TIGIT에 결합하는 단리된 항체의 조성물이고, 여기서 조성물 내의 항체의 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99%가 비-푸코실화되고, 항체가 비-푸코실화 항체를 생산하는 데 적절한 조건 하에 푸코스 유사체의 존재 하에 숙주 세포를 배양하는 것을 포함하는 방법에 의해 생산되고, 숙주 세포가 (i) 실시양태 1 내지 63 중 어느 하나의 조성물의 항체, 또는 (ii) 실시양태 65 내지 128 중 어느 하나의 항체를 발현하는 조성물.
실시양태 160. 실시양태 1 내지 64 중 어느 하나의 조성물, 실시양태 65 내지 129 중 어느 하나의 항체, 또는 실시양태 130의 제약 조성물; 및
추가적인 치료제
를 포함하는 키트.
실시양태 161. 실시양태 160에 있어서, 추가적인 치료제가 항암제인 키트.
실시양태 162. 실시양태 160 또는 실시양태 161에 있어서, 추가적인 치료제가 항체인 키트.
실시양태 163. 실시양태 160 내지 162 중 어느 하나에 있어서, 추가적인 치료제가 T 세포 공동억제제의 길항제 또는 억제제; T 세포 공동활성자의 효능제; 면역 자극 시토카인; 또는 SGN-2FF인 키트.
실시양태 164. 실시양태 160 내지 163 중 어느 하나에 있어서, 추가적인 치료제가 CD25, PD-1, PD-L1, Tim3, Lag3, CTLA4, 41BB, OX40, CD3, CD40, CD47M, GM-CSF, CSF1R, TLR, STING, RIGI, TAM 수용체 키나제, NKG2A, NKG2D, GD2, HER2, EGFR, PDGFRα, SLAMF7, VEGF, CTLA-4, CD20, cCLB8, KIR, 및 CD52로부터 선택된 단백질에 결합하는 키트.
실시양태 165. 실시양태 160 내지 164 중 어느 하나에 있어서, 추가적인 치료제가 항-CD25 항체, 항-PD-1 항체, 항-PD-L1 항체, 항-Tim3 항체, 항-Lag3 항체, 항-CTLA4 항체, 항-41BB 항체, 항-OX40 항체, 항-CD3 항체, 항-CD40 항체, 항-CD47M 항체, 항-CSF1R 항체, 항-TLR 항체, 항-STING 항체, 항-RIGI 항체, 항-TAM 수용체 키나제 항체, 항-NKG2A 항체, 항-NKG2D 항체, 항-GD2 항체, 항-HER2 항체, 항-EGFR 항체, 항-PDGFR-α-항체, 항-SLAMF7 항체, 항-VEGF 항체, 항-CTLA-4 항체, 항-CD20 항체, 항-cCLB8 항체, 항-KIR 항체, 및 항-CD52 항체로부터 선택되는 키트.
실시양태 166. 실시양태 160 내지 165 중 어느 하나에 있어서, 추가적인 치료제가 IL-15, IL-21, IL-2, GM-CSF, M-CSF, G-CSF, IL-1, IL-3, IL-12, 및 IFNγ로부터 선택된 시토카인을 포함하는 키트.
실시양태 167. 실시양태 160 내지 165 중 어느 하나에 있어서, 추가적인 치료제가 SEA-CD40, 아벨루맙, 더발루맙, 니볼루맙, 펨브롤리주맙, 피딜리주맙, 아테졸리주맙, Hul4.18K322A, Hu3F8, 디니툭시맙, 트라스투주맙, 세툭시맙, 올라라투맙, 네시투무맙, 엘로투주맙, 라무시루맙, 퍼투주맙, 이필리무맙, 베바시주맙, 리툭시맙, 오비누투주맙, 실툭시맙, 오파투무맙, 리릴루맙, 및 알렘투주맙으로부터 선택되는 키트.
실시양태 168. 실시양태 160 또는 실시양태 161에 있어서, 추가적인 치료제가 알킬화제 (예를 들어, 시클로포스파미드, 이포스파미드, 클로람부실, 부술판, 멜팔란, 메클로레타민, 우라무스틴, 티오테파, 니트로소우레아, 또는 테모졸로미드), 안트라사이클린 (예를 들어, 독소루비신, 아드리아마이신, 다우노루비신, 에피루비신, 또는 미톡산트론), 세포골격 파괴제 (예를 들어, 파클리탁셀 또는 도세탁셀), 히스톤 데아세틸라제 억제제 (예를 들어, 보리노스탯 또는 로미뎁신), 토포이소머라제의 억제제 (예를 들어, 이리노테칸, 토포테칸, 암사크린, 에토포시드, 또는 테니포시드), 키나제 억제제 (예를 들어, 보르테조밉, 에를로티닙, 제피티닙, 이마티닙, 베무라페닙, 또는 비스모데깁), 뉴클레오시드 유사체 또는 전구물질 유사체 (예를 들어, 아자시티딘, 아자티오프린, 카페시타빈, 시타라빈, 플루오로우라실, 젬시타빈, 히드록시우레아, 메르캅토퓨린, 메토트렉세이트, 또는 티오구아닌), 펩티드 항생제 (예를 들어, 악티노마이신 또는 블레오마이신), 백금-기반 작용제 (예를 들어, 시스플라틴, 옥살로플라틴, 또는 카르보플라틴), 또는 식물 알칼로이드 (예를 들어, 빈크리스틴, 빈블라스틴, 비노렐빈, 빈데신, 포도필로톡신, 파클리탁셀, 또는 도세탁셀), 갈라딘, 탈리도미드, 레날리도미드, 및 포말리도미드로부터 선택되는 키트.
실시양태 169. 치료적 유효량의 실시양태 1 내지 64 중 어느 하나의 조성물, 실시양태 65 내지 129 중 어느 하나의 항체, 또는 실시양태 130의 제약 조성물을 대상체에게 투여하는 것을 포함하는, 대상체에서 암을 치료하는 방법.
실시양태 170. 실시양태 169에 있어서, 암이 CD112 또는 CD155의 발현에 대해 강화된 암인 방법.
실시양태 171. 실시양태 169 또는 실시양태 170에 있어서, 암이 TIGIT를 발현하는 T 세포 또는 자연 킬러 (NK) 세포에 대해 강화된 암인 방법.
실시양태 172. 실시양태 169 내지 171 중 어느 하나에 있어서, 암이 방광암, 유방암, 자궁암, 자궁경부암, 난소암, 전립선암, 고환암, 식도암, 위장암, 위암, 췌장암, 결장직장암, 결장암, 신장암, 투명세포 신장 암종, 두경부암, 폐암, 폐 선암종, 위암, 생식세포암, 골암, 간암, 갑상선암, 피부암, 흑색종, 중추신경계의 신생물, 중피종, 림프종, 백혈병, 만성 림프구성 백혈병, 미만성 거대 B 세포 림프종, 소포 림프종, 호지킨 림프종, 골수종, 또는 육종인 방법.
실시양태 173. 실시양태 172에 있어서, 암이 림프종, 백혈병, 만성 림프구성 백혈병, 미만성 거대 B 세포 림프종, 소포 림프종, 또는 호지킨 림프종인 방법.
실시양태 174. 실시양태 169 내지 173 중 어느 하나에 있어서, 대상체에게 치료적 유효량의 추가적인 치료제를 투여하는 것을 추가로 포함하는 방법.
실시양태 175. 실시양태 174에 있어서, 추가적인 치료제가 항암제인 방법.
실시양태 176. 실시양태 174 또는 실시양태 175에 있어서, 추가적인 치료제가 항체인 방법.
실시양태 177. 실시양태 174 내지 176 중 어느 하나에 있어서, 추가적인 치료제가 T 세포 공동억제제의 길항제 또는 억제제; T 세포 공동활성자의 효능제; 또는 면역 자극 시토카인; 또는 SGN-2FF인 방법.
실시양태 178. 실시양태 174 내지 177 중 어느 하나에 있어서, 추가적인 치료제가 CD25, PD-1, PD-L1, Tim3, Lag3, CTLA4, 41BB, OX40, CD3, CD40, CD47M, GM-CSF, CSF1R, TLR, STING, RIGI, TAM 수용체 키나제, NKG2A, NKG2D, GD2, HER2, EGFR, PDGFRα, SLAMF7, VEGF, CTLA-4, CD20, cCLB8, KIR, 및 CD52로부터 선택된 단백질에 결합하는 방법.
실시양태 179. 실시양태 178에 있어서, 추가적인 치료제가 항-CD25 항체, 항-PD-1 항체, 항-PD-L1 항체, 항-Tim3 항체, 항-Lag3 항체, 항-CTLA4 항체, 항-41BB 항체, 항-OX40 항체, 항-CD3 항체, 항-CD40 항체, 항-CD47M 항체, 항-CSF1R 항체, 항-TLR 항체, 항-STING 항체, 항-RIGI 항체, 항-TAM 수용체 키나제 항체, 항-NKG2A 항체, 항-NKG2D 항체, 항-GD2 항체, 항-HER2 항체, 항-EGFR 항체, 항-PDGFR-α-항체, 항-SLAMF7 항체, 항-VEGF 항체, 항-CTLA-4 항체, 항-CD20 항체, 항-cCLB8 항체, 항-KIR 항체, 및 항-CD52 항체로부터 선택되는 방법.
실시양태 180. 실시양태 174 또는 실시양태 175에 있어서, 추가적인 치료제가 IL-15, IL-21, IL-2, GM-CSF, M-CSF, G-CSF, IL-1, IL-3, IL-12, 및 IFNγ로부터 선택된 시토카인을 포함하는 방법.
실시양태 181. 실시양태 174 내지 179 중 어느 하나에 있어서, 추가적인 치료제가 SEA-CD40, 아벨루맙, 더발루맙, 니볼루맙, 펨브롤리주맙, 피딜리주맙, 아테졸리주맙, Hul4.18K322A, Hu3F8, 디니툭시맙, 트라스투주맙, 세툭시맙, 올라라투맙, 네시투무맙, 엘로투주맙, 라무시루맙, 퍼투주맙, 이필리무맙, 베바시주맙, 리툭시맙, 오비누투주맙, 실툭시맙, 오파투무맙, 리릴루맙, 및 알렘투주맙으로부터 선택되는 방법.
실시양태 182. 실시양태 174 또는 실시양태 175에 있어서, 추가적인 치료제가 알킬화제 (예를 들어, 시클로포스파미드, 이포스파미드, 클로람부실, 부술판, 멜팔란, 메클로레타민, 우라무스틴, 티오테파, 니트로소우레아, 또는 테모졸로미드), 안트라사이클린 (예를 들어, 독소루비신, 아드리아마이신, 다우노루비신, 에피루비신, 또는 미톡산트론), 세포골격 파괴제 (예를 들어, 파클리탁셀 또는 도세탁셀), 히스톤 데아세틸라제 억제제 (예를 들어, 보리노스탯 또는 로미뎁신), 토포이소머라제의 억제제 (예를 들어, 이리노테칸, 토포테칸, 암사크린, 에토포시드, 또는 테니포시드), 키나제 억제제 (예를 들어, 보르테조밉, 에를로티닙, 제피티닙, 이마티닙, 베무라페닙, 또는 비스모데깁), 뉴클레오시드 유사체 또는 전구물질 유사체 (예를 들어, 아자시티딘, 아자티오프린, 카페시타빈, 시타라빈, 플루오로우라실, 젬시타빈, 히드록시우레아, 메르캅토퓨린, 메토트렉세이트, 또는 티오구아닌), 펩티드 항생제 (예를 들어, 악티노마이신 또는 블레오마이신), 백금-기반 작용제 (예를 들어, 시스플라틴, 옥살로플라틴, 또는 카르보플라틴), 또는 식물 알칼로이드 (예를 들어, 빈크리스틴, 빈블라스틴, 비노렐빈, 빈데신, 포도필로톡신, 파클리탁셀, 또는 도세탁셀), 갈라딘, 탈리도미드, 레날리도미드, 및 포말리도미드로부터 선택되는 방법.
실시양태 183. 실시양태 174 내지 182 중 어느 하나에 있어서, 조성물, 항체 또는 제약 조성물이 추가적인 치료제와 동반적으로 투여되는 방법.
실시양태 184. 실시양태 174 내지 183 중 어느 하나에 있어서, 조성물, 항체 또는 제약 조성물이 추가적인 치료제에 대해 순차적으로 투여되는 방법.
도 1. 인간 TIGIT (상부 패널), 시노몰거스 원숭이 TIGIT (중간 패널), 및 마우스 TIGIT (하부 패널)를 발현하도록 조작된 HEK 293 세포에 대한 65개의 항-TIGIT 항체 클론 및 관련되지 않은 이소형 대조군 항체의 결합.
도 2. 1차 인간 T 세포 (상부 패널), 시노몰거스 원숭이 T 세포 (중간 패널), 및 마우스 T 세포 (하부 패널)에 대한 65개의 항-TIGIT 항체 클론 및 관련되지 않은 이소형 대조군 항체의 결합. 하부 패널의 경우, 65개의 클론 중 35개 평가되었다. 평가된 35개의 클론 중에서, 연녹색 막대에 의해 지시된 바와 같이, 35개 중 5개는 mTIGIT-Fc 단백질에 결합하지 않았다 (클론 20, 27, 55, 56, 및 60).
도 3a-3d. (a-c) HEK 293 세포 상에서 발현된 인간 (a), 마우스 (b), 및 시노몰거스 원숭이 (c) TIGIT에 대한 8개의 항-TIGIT 항체 클론 (클론 2, 5, 13, 16, 17, 20, 25, 및 54)의 결합 적정 값. 결과는 단수 웰에 대해 제시된다. (d) HEK 293 세포 상에서 발현된 인간, 마우스, 및 시노몰거스 원숭이 TIGIT에 대한 8개의 항-TIGIT 항체 클론 (클론 2, 5, 13, 16, 17, 20, 25, 및 54)의 EC50 값.
도 4. 활성화된 마우스 비장 T 세포에 대한 항-TIGIT 항체 클론 13 및 25의 결합 적정. 결과는 단수 웰에 대해 제시된다. 클론 13은 EC50이 0.24 ㎍/mL였고. 클론 25는 EC50이 2.28 ㎍/mL였다.
도 5a-5b. 인간 TIGIT를 발현하는 HEK 293 세포에 대한 인간 CD155 결합 (a) 및 마우스 TIGIT를 발현하는 HEK 293 세포에 대한 마우스 CD155 결합 (b) 둘 다에 대해, 항-TIGIT 항체가 HEK 293 세포 상에서 발현된 TIGIT와의 CD155 상호작용을 차단하였다. 결과는 단수 웰에 대해 제시된다.
도 6. 항-TIGIT 항체가 HEK 293 세포 상에서 발현된 인간 TIGIT와의 인간 CD112 상호작용을 차단하였다. 결과는 단수 웰에 대해 제시된다.
도 7a-7b. (a) 상부 패널: 선택된 항-TIGIT 항체가 TIGIT-CD155 맞물림을 효과적으로 차단하여, 루시퍼라제 활성의 >1.5배 유도에 의해 측정된 바와 같이, T 세포 활성화를 초래하였다. 약 12개의 클론이 생물검정법에서 >1.5배 유도를 나타냈다. 2개의 클론은 포르테바이오(ForteBio) 검정법에서 TIGIT-CD155 상호작용을 차단하지 않았다 (분홍색 막대). 배수 유도는 Ab 없음 대조군에 대비하여 측정되었다. 평균 및 SD는 이중 실험의 것이다; 항체는 20 ㎍/mL이었다. 회색 막대 = hIgG1 이소형 대조군. 흑색 막대 = 항체 없음 대조군 (기준선으로서 정의됨). 하부 패널: TIGIT/CD155 차단 생물검정법 대 TIGIT-Fc 친화도의 상관관계 플롯. 생물검정법에서의 활성이 재조합 단백질에 대한 친화도와 상호관련되었다. (b) TIGIT/CD155 차단 생물검정법에서의 12개의 선택된 항-TIGIT 클론의 용량 반응. 3개의 종 모두에 대한 강한 결합을 나타낸 클론 13 및 25가 생물검정법에서 양호한 활성을 나타냈다. 평균 및 SD는 삼중 웰의 것이다.
도 8. 선택된 항-TIGIT 항체가 항-PD-1와 상승작용을 일으켜, T 세포 활성화를 초래하였다. 평균 및 SD는 삼중 웰의 것이다. 클론 13 및 클론 25 둘 다 조합 생물검정법에서 항-PD-1과의 상승작용을 나타냈다.
도 9a-9h. (a-d) 완전 인간 항-TIGIT 클론 13 ("c13 hIgG1") 및 클론 13의 마우스 IgG1 ("c13 mIgG1") 및 마우스 IgG2a ("c13 mIgG2a") 키메라에 대한, HEK 293 세포 상에서 발현된 인간 (a), 마우스 (b), 및 시노몰거스 원숭이 (c) TIGIT에 결합하는 것에 대한 결합 적정 (a-c) 및 EC50 값 (d). 평균 및 SD는 이중 웰의 것이다. (e-f) 인간 TIGIT를 발현하는 HEK 293 세포에 대한 인간 CD155 결합 (e) 및 마우스 TIGIT를 발현하는 HEK 293 세포에 대한 마우스 CD155 결합 (f) 둘 다에 대해, 항체 c13 hIgG1, c13 mIgG1, 및 c13 mIgG2a가 HEK 293 세포 상에서 발현된 TIGIT와의 CD155 상호작용을 차단하였다. 결과는 단수 웰에 대한 것이다. (g) 항체 c13 hIgG1, c13 mIgG1, 및 c13 mIgG2a가 HEK 293 세포 상에서 발현된 인간 TIGIT와의 인간 CD112 상호작용을 차단하였다. 결과는 단수 웰에 대한 것이다. (h) TIGIT/CD155 차단 생물검정법에서의 모체 및 키메라 항-TIGIT 항체 클론 c13 hIgG1, c13 mIgG1, 및 c13 mIgG2a의 용량 반응. 평균 및 SD는 삼중 웰의 것이다.
도 10a-10k. 활성화 Fc감마 수용체와 맞물릴 수 있는 항-TIGIT 항체가 마우스에서 CT26 동계 종양 모델에서 항종양 효능을 매개하였다. (a) 군 평균 종양 부피. (b-k) 군 1 내지 10에 대한 개별적인 동물 종양 부피. PR = 부분 반응 (종양 부피가 3회의 연속 측정에 대해 이의 제1일 부피의 50% 이하이고, 이러한 3회의 측정 중 1회 이상에 대해 13.5 ㎣ 이상이다). CR = 완전 반응 (종양 부피가 3회의 연속 측정에 대해 13.5 ㎣ 미만이다).
도 11. BLI에 의해 항-TIGIT 항체로 적정된 인간 FcγRIIIa 158V 결합의 센서그램. 항-TIGIT 클론 13 hIgG1 야생형, 비-푸코실화, 및 LALA-PG (왼쪽 패널), 항-TIGIT 클론 13 mIgG2a 야생형, 비-푸코실화, 및 LALA-PG (중앙 패널), 및 항-TIGIT 클론 13C hIgG1 야생형 (오른쪽 패널)에 대해 결과가 제시된다.
도 12. mCD16 (FcγRIVa의 뮤린 형태)을 발현하는 CHO 세포에 대한 항-TIGIT mIgG2a 항체의 결합. 비-푸코실화 클론 13 mIgG2a (흑색 사각형)가 야생형 mIgG2a (흑색 원) 또는 mIgG2a LALA-PG (흑색 삼각형)에 비교하여 유의하게 더 큰 친화도로 결합하였다. 결합 데이터가 하기 표에서 요약된다.
도 13. 건강한 공여자로부터의 T-세포 서브세트에 의한 TIGIT (상부 패널), CD226 (중간 패널) 및 CD155 (하부 패널)의 발현. Treg가 가장 높은 수준의 TIGIT를 발현한 한편, 테스트된 모든 T 세포 서브세트가 활성화 수용체 CD226을 발현하였다. CD155의 발현은 대부분 부재하였다.
도 14. 다양한 농도의 클론 13 IgG1 야생형 (흑색 원), 클론 13 IgG1 비-푸코실화 (흑색 사각형), 클론 13 IgG1 LALA-PG (흑색 삼각형), 및 인간 IgG1 이소형 대조군 (회색 역삼각형)에 의한 TIGIT-양성 Treg 세포의 고갈.
도 15. 클론 13 IgG1 야생형 (흑색 원), 클론 13 IgG1 비-푸코실화 (흑색 사각형), 및 클론 13 IgG1 LALA-PG (흑색 삼각형)에 의한 동종이형 NK/Treg 공동-배양 실험에서의 Treg의 고갈. 비-푸코실화 OKT9 항체 (빈 원)가 양성 대조군으로서 포함되었다.
도 16. 클론 13 IgG1 야생형 항체 (흑색 사각형), 클론 13 IgG1 비-푸코실화 항체 (흑색 다이아몬드), 또는 클론 13 IgG1 LALA-PG 항체 (흑색 원)로 처리한 후의 PBMC에 의한 염증성 시토카인 MCP-1 (상부 패널), IL-8 (중간 패널), 및 MIP1α (하부 패널)의 생산.
도 17. 클론 13 IgG1 야생형 항체 (회색 원), 클론 13 IgG1 비-푸코실화 항체 (회색 사각형), 및 클론 13 IgG1 LALA-PG 항체 (흑색 삼각형)로 처리한 후의 CD14+ 단핵구 상에서의 CD86 (왼쪽 패널) 및 MHC 클래스 II (오른쪽 패널)의 발현의 용량-의존적 상향조절.
도 18a-18c. 3개의 상이한 동계 종양 모델에서의 항-TIGIT 항체의 생체 내 활성. 도 8a는 A20 동계 림프종 모델에서의 종양 부피에 대한 클론 13 IgG2a 야생형, 클론 13 IgG2a 비-푸코실화, 및 클론 13 IgG2a LALA-PG의 효과를 나타낸다. 도 8b는 CT26 동계 결장암 모델에서의 종양 부피에 대한 클론 13 IgG2a 야생형, 클론 13 IgG2a 비-푸코실화, 및 클론 13 IgG2a LALA-PG의 효과를 나타낸다. 도 8c는 MC38 동계 결장암 모델에서의 종양 부피에 대한 클론 13 IgG2a 야생형, 클론 13 IgG2a 비-푸코실화, 및 클론 13 IgG2a LALA-PG의 효과를 나타낸다. 3개의 모델 모두에서, 클론 13 mIgG2a 야생형 (흑색 원) 및 클론 13 mIGg2a 비-푸코실화 (흑색 다이아몬드)가 클론 13 IgG2a LALPG (흑색 사각형) 또는 미처리 동물 (회색 삼각형)에 비교했을 때 종양 크기를 제어하는 것에서 더욱 효과적이었다.
도 19. 세툭시맙 단독 (빈 사각형), 세툭시맙과 항-TIGIT 항체 클론 13 IgG1의 조합물 (흑색 사각형), 및 IgG1 이소형 대조군 항체 (빈 삼각형)와 접촉된 A549 세포에 대한 ADCC 활성.
도 20. CMV 회상 항원에 노출되고 항-PD-1 항체 (펨브롤리주맙 처리는 회색 사각형으로 제시되고, 니볼루맙 처리는 회색 다이아몬드로 제시된다) 및 증가되는 농도의 항-TIGIT 항체 클론 13 IgG1로 처리된 PBMC에서의 CMV-유도 IFNγ 발현. 항-TIGIT 항체 클론 13 IgG1 단독으로의 처리 또한 제시된다 (흑색 사각형).
도 21. CMB 회상 항원에 노출되고 증가되는 농도의 항-TIGIT 항체 클론 13 IgG1 야생형 ("클론 13 IgG1"), 비-푸코실화 클론 13 IgG1 ("클론 13 SEA IgG1"), 및 클론 13 IgG1 LALA-PG ("클론 13 LALA IgG1")로 처리된 PBMC에서의 CMV-유도 IFNγ 발현.
도 22. 증가되는 농도의 항-TIGIT 항체 클론 13 IgG1 야생형 ("클론 13 IgG1"), 비-푸코실화 클론 13 IgG1 ("클론 13 SEA IgG1"), 및 클론 13 IgG1 LALA-PG ("클론 13 LALA IgG1")로 처리된 HLA 미스매치 공동-배양 PBMC에서의 IL2 발현.
도 23. 항-TIGIT 항체에 반응한 CT26 결장암 이종이식 마우스로부터의 혈장 및 조직에서의 시토카인 유도. CT26 결장암 세포가 이식된 마우스를 1 mg/kg 클론 13 IgG2a 야생형 ("WT"), 비-푸코실화 클론 13 IgG1 ("SEA"), 또는 클론 13 IgG2a LALA-PG ("LALA")로 처리하고, 혈장, 비장, 및 종양 용해물에서 시토카인 수준을 측정하였다.
도 24. 항-TIGIT 항체 클론 13 IgG2a 야생형 ("WT TIGIT"), 비-푸코실화 클론 13 IgG2a ("SEA TIGIT"), 또는 클론 13 IgG2a LALA-PG ("LALA TIGIT")로 처리한 후의 CT26 결장암 이종이식 마우스에서의 종양내 및 말초 CD8+ T 세포 서브세트의 변화.
도 25. 항-TIGIT 항체 클론 13 IgG2a 야생형 ("WT TIGIT"), 비-푸코실화 클론 13 IgG2a ("SEA TIGIT"), 또는 클론 13 IgG2a LALA-PG ("LALA TIGIT")로 처리된 CT26 결장암 이종이식 마우스에서의 종양내 및 말초 CD4+ T 세포 서브세트의 변화.
도 26a-b. 6회 용량의 항-TIGIT 항체 클론 13 IgG2a 야생형 ("WT TIGIT"), 비-푸코실화 클론 13 IgG2a ("SEA TIGIT"), 또는 클론 13 IgG2a LALA-PG ("LALA TIGIT") 후의 CT26 결장암 이종이식 마우스에서의 비장 CD8+ (a) 및 CD4+ (b) T 세포 서브세트의 변화. CD8+ 또는 CD4+ 상에서 게이팅된 살아있는 CD45+ 세포로부터의 결과가 제시된다.
도 27. 항-TIGIT 항체 클론 13 IgG2a 야생형 ("WT TIGIT"), 비-푸코실화 클론 13 IgG2a ("SEA TIGIT"), 또는 클론 13 IgG2a LALA-PG ("LALA TIGIT")로 처리된 CT26 결장암 이종이식 마우스의 혈장 및 비장에서의 시토카인 유도.
도 28. 항-TIGIT 항체 클론 13 IgG2a 야생형 ("WT TIGIT"), 비-푸코실화 클론 13 IgG2a ("SEA TIGIT"), 또는 클론 13 IgG2a LALA-PG ("LALA TIGIT")로 처리된 마우스에서의 항원-특이적 T 세포 반응의 유도.
도 29a-c. 3개의 상이한 동계 종양 모델에서의 항-TIGIT 항체의 생체 내 활성. 도 29a는 EMT6 동계 유방암 모델에서의 종양 부피에 대한 5 mg/kg 클론 13 IgG2a 야생형 ("TIGIT") 및 0.1 mg/kg, 1 mg/kg, 및 5 mg/kg 클론 13 IgG2a 비-푸코실화 ("SEA TIGIT")의 효과를 나타낸다. 도 29b는 E0771 동계 유방암 모델에서의 종양 부피에 대한 5 mg/kg 클론 13 IgG2a 야생형 ("TIGIT") 및 0.1 mg/kg, 1 mg.kg, 및 5 mg/kg 클론 13 IgG2a 비-푸코실화 ("SEA TIGIT")의 효과를 나타낸다. 도 29c는 외부에서 유지된 CT26 동계 결장암 모델에서의 종양 부피에 대한 1 mg/ml 클론 13 IgG2a 야생형의 효과를 나타낸다.
도 30. NK 세포 (왼쪽) 및 활성화된 CD8 T 세포 (오른쪽) 분자 서명과 항-TIGIT 항체 처리에 대한 동계 종양 모델 반응의 상관관계.
도 31. TIGIT (왼쪽) 및 CD155 (오른쪽) 발현과 항-TIGIT 항체 처리에 대한 동계 종양 모델 반응의 상관관계.
도 32. OVA 백신접종 및 1 mg/kg 클론 13 IgG2a 야생형 ("WT TIGIT"), 클론 13 mIgG2a 비-푸코실화 ("SEA TIGIT"), 또는 클론 13 mIgG2a LALA-PG ("LALA TIGIT") 항체로의 처리 후의 마우스에서의 항-OVA IgG1 (왼쪽 패널) 및 IgG2a (오른쪽 패널) 수준.
도 33. OVA 백신접종에 이어서 1 mg/kg 클론 13 IgG2a 야생형 ("WT TIGIT"), 클론 13 mIgG2a 비-푸코실화 ("SEA TIGIT"), 또는 클론 13 mIgG2a LALA-PG ("LALA TIGIT") 항체로 처리된 마우스로부터의 생체 외 비장세포의 재자극 후의 시토카인 발현.
도 34. 클론 13 mIgG2a 비-푸코실화 항체로의 처리 후 CT26 동계 종양 모델에서 완전 반응을 나타낸 마우스의 재-챌린지.
도 35. 항-TIGIT 항체 클론 13 IgG1 야생형 ("WT"), 클론 13 IgG1 비-푸코실화 ("SEA 클론 13 IgG1"), 또는 클론 13 IgG1 DLE ("DLE")에 의한 Treg 고갈.
도 36. 항-TIGIT 항체 클론 13 IgG1 야생형 ("WT 클론 13"), 클론 13 IgG1 비-푸코실화 ("SEA 클론 13 IgG1"), 또는 클론 H5/L4 IgG1에 의한 Treg 고갈.
도 37. MC38 마우스 종양 모델에서의 항-TIGIT 항체 클론 13 IgG1 야생형 ("WT 클론 13" 또는 "WT TIGIT"), 클론 13 IgG1 비-푸코실화 ("SEA 클론 13" 또는 "SGN-TGT"), 항-PD-1 항체, 및 항-PD-1 항체와 클론 13 IgG1 야생형 또는 클론 13 IgG1 비-푸코실화의 조합물의 효능.
도 38a-38b. 초항원 스타필로코쿠스 장독소 B 펩티드 및 항-TIGIT 항체 클론 13 IgG1 야생형 ("WT 클론 13"), 클론 13 IgG1 비-푸코실화 ("SEA 클론 13"), 클론 13 IgG1 DLE ("DLE"), 또는 클론 H5/L4 IgG1과의 접촉 후의 도 38a IL-2 발현 (도 38a) 또는 IL-10 발현 (도 38b).
도 39a-39d. CHO 세포의 표면 상에서 발현된 FcγRI (도 39a), FcγRIIIa V/V (도 39b), FcγRIIb (도 39c), 또는 FcγRIIa (도 39d)에 대한 항-TIGIT 항체 클론 13 IgG1 야생형 ("클론 13 IgG1"), 클론 13 IgG1 비-푸코실화 ("SEA 클론 13"), 클론 13 LALA-PG ("클론 13 LALA"), 클론 13 IgG1 DLE ("클론 13 DLE"), 또는 클론 H5/L4 IgG1의 결합.
도 40. 항-TIGIT 항체 클론 13 IgG1 야생형 ("클론 13"), 클론 13 IgG1 비-푸코실화 ("SEA 클론 13"), 및 클론 13 IgG1 DLE ("클론 13 DLE")에 의해 매개된 TIGIT-양성 저캣(Jurkat) 세포의 포식작용.
도 41. 항-TIGIT 항체 클론 13 IgG1 야생형 ("클론 13 IgG1"), 클론 13 IgG1 비-푸코실화 ("SEA 클론 13"), 클론 13 LALA-PG ("클론 13 LALA-PG"), 클론 13 IgG1 DLE ("클론 13 DLE"), 또는 클론 H5/L4 IgG1; 및 항-CD47 항체 hB6h12.3에 의해 매개된 TIGIT-양성 저캣 세포의 CDC.
I. 서론
TIGIT와 CD155 사이의 상호작용을 억제하는, 인간 TIGIT (Ig 및 ITIM 도메인을 갖는 T-세포 면역수용체)에 대한 높은 친화도를 갖고, 추가로 마우스 TIGIT 및 시노몰거스 원숭이 TIGIT 중 하나 또는 둘 다와의 교차-반응성을 갖는 항체가 확인되었고, 본원에서 제공된다. 이러한 항체는 항-PD-1 항체와의 상승작용을 또한 나타낸다. 따라서, 본원에 기술된 항-TIGIT 항체는 단일 작용제로서 또는 또 다른 치료제와 조합되어 다수의 치료 용도에서, 예컨대 다양한 암의 치료를 위해 사용될 수 있다. 일부 실시양태에서, 항-TIGIT 항체는 비-푸코실화된다.
따라서, 일부 실시양태에서, 본 발명은 인간 TIGIT에 결합하는 항체를 포함하는 조성물, 키트, 및 치료 방법을 제공하고, 여기서 항체는 비-푸코실화된다.
II. 정의
달리 정의되지 않는 한, 본원에서 사용된 기술 및 과학 용어는 관련 기술 분야의 통상의 기술자가 통상적으로 이해하는 바와 동일한 의미를 갖는다. 예를 들어, 문헌 [Lackie, DICTIONARY OF CELL AND MOLECULAR BIOLOGY, Elsevier (4th ed. 2007)]; [Sambrook et al., MOLECULAR CLONING, A LABORATORY MANUAL, Cold Springs Harbor Press (Cold Springs Harbor, NY 1989)]을 참조한다. 본원에 기술된 것과 유사하거나 또는 동등한 임의의 방법, 장치 및 물질이 본 발명의 실행에서 사용될 수 있다.
본원에서 사용된 바와 같이, 단수 형태 "하나"는 문맥적으로 명확하게 달리 지시되지 않는 한 복수의 지시대상을 포함한다. 따라서, 예를 들어, "하나의 항체"에 대한 언급은 임의적으로 2개 이상의 이러한 분자의 조합물을 포함하는 것 등이다.
용어 "약"은, 본원에서 사용된 바와 같이, 이러한 기술 분야의 통상의 기술자에게 쉽게 공지되어 있는 각각의 값에 대한 일반적인 오차 범위를 지칭한다.
본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "TIGIT"는 "Ig 및 ITIM 도메인을 갖는 T-세포 면역수용체"를 지칭한다. TIGIT 유전자에 의해 코딩되는 단백질은 단백질의 단백질의 Ig 수퍼패밀리 내의 CD28 패밀리의 구성원이다. TIGIT는 여러 클래스의 T 세포 및 자연 킬러 (NK) 세포 상에서 발현되고, 리간드 CD155 및 CD112에 대해 CD226과 경쟁하는 것에 의해 그의 면역억제 효과를 매개한다. 문헌 [Levin et al., Eur. J. Immunol., 2011, 41:902-915]을 참조한다. TIGIT는 관련 분야에서 WUCAM (워싱턴 유니버시티 세포 부착 분자(Washington University Cell Adhesion Molecule)) 및 VSTM3 (HUGO 명칭)으로 지칭되기도 한다. 문헌 [Levin et al., Eur J Immunol, 2011, 41:902-915]를 참조한다. 따라서, 본 출원 전반에 걸친 "TIGIT"에 대한 언급은 달리 언급되거나 또는 문맥으로부터 명백하지 않는 한 WUCAM 및/또는 VSTM3에 대한 언급을 또한 포함한다. 인간 TIGIT 뉴클레오티드 및 단백질 서열이, 예를 들어, 진뱅크 등록 번호 NM173799 (서열식별번호: 217) 및 NP776160 (서열식별번호: 218)에 각각 기재되어 있다.
용어 "항체"는 무손상 항체 및 그의 항원-결합 단편을 포함하고, 여기서 항원-결합 단편은 항원-결합 영역, 및 CH2에 위치하는, 아스파라긴 (N) 297을 포함하는 중쇄 불변 영역의 적어도 일부분을 포함한다. 전형적으로, "가변 영역"이 항체의 항원-결합 영역을 함유하고, 결합의 특이성 및 친화도에서 수반된다. 문헌 [Fundamental Immunology 7 th Edition, Paul, ed., Wolters Kluwer Health/Lippincott Williams & Wilkins (2013)]을 참조한다. 경쇄는 전형적으로 카파 또는 람다로 분류된다. 중쇄는 전형적으로, 감마, 뮤, 알파, 델타 또는 엡실론으로 분류되고, 이는 차례로 면역글로불린 클래스 IgG, IgM, IgA, IgD 및 IgE를 각각 정의한다.
용어 "항체"는 2가 또는 이중특이적 분자, 디아바디, 트리아바디 및 테트라바디를 또한 포함한다. 2가 및 이중특이적 분자가, 예를 들어, 문헌 [Kostelny et al. (1992) J. Immunol. 148:1547], [Pack and Pluckthun (1992) Biochemistry 31:1579], [Hollinger et al. (1993), PNAS. USA 90:6444], [Gruber et al. (1994) J Immunol. 152:5368], [Zhu et al. (1997) Protein Sci. 6:781], [Hu et al. (1996) Cancer Res. 56:3055], [Adams et al. (1993) Cancer Res. 53:4026], 및 [McCartney, et al. (1995) Protein Eng. 8:301]에 기술되어 있다.
용어 "항체"는 항체 단독 (네이키드 항체) 또는 세포독성 또는 세포정지 약물에 접합된 항체를 포함한다.
"모노클로날 항체"는 실질적으로 균질한 항체들의 집단으로부터 수득된 항체를 지칭하고, 즉 집단을 이루는 개별적인 항체들이 미량으로 존재할 수 있는 가능한 자연 발생 돌연변이를 제외하고는 동일하다. 수식어구 "모노클로날"은 실질적으로 균질한 항체 집단으로부터 수득되는 것으로서의 항체의 특성을 나타내고, 임의의 특정 방법에 의한 항체 생산을 요구하는 것으로 해석되지 않아야 한다. 예를 들어, 본 발명에 따라 사용될 모노클로날 항체는 문헌 [Kohler et al. (1975) Nature 256:495]에 최초로 기술된 하이브리도마 방법에 의해 제조될 수 있거나, 또는 재조합 DNA 방법에 의해 제조될 수 있다 (예를 들어, 미국 특허 번호 4816567을 참조한다). "모노클로날 항체"는, 예를 들어, 문헌 [Clackson et al. (1991) Nature, 352:624-628] 및 [Marks et al. (1991) J. Mol. Biol., 222:581-597]에 기술된 기술을 사용하여 파지 항체 라이브러리로부터 단리될 수도 있거나, 또는 다른 방법에 의해 제조될 수 있다. 본원에 기술된 항체는 모노클로날 항체이다.
모노클로날 항체가 그의 표적 항원에 특이적으로 결합하는 것은 적어도 106, 107, 108, 109, 또는 1010 M-1의 친화도를 의미한다. 특이적 결합은 적어도 1개의 관련되지 않은 표적에 대해 발생하는 비-특이적 결합보다 규모 면에서 검출가능하게 더 높고, 이로부터 구별가능하다. 특이적 결합은 특정한 관능기 사이의 결합 형성 또는 특정한 공간 맞춤 (예를 들어, 락 앤드 키 유형)의 결과일 수 있는 반면, 비-특이적 결합은 일반적으로 반데르발스 힘의 결과이다.
기본 항체 구조 단위는 서브유닛의 사량체이다. 각각의 사량체는 2개의 동일한 폴리펩티드 쇄 쌍을 포함하고, 각각의 쌍은 1개의 "경쇄" (약 25 kDa) 및 1개의 "중쇄" (약 50-70 kDa)를 갖는다. 각각의 쇄의 아미노-말단 부분은 항원 인식을 주로 담당하는 약 100 내지 110개 이상의 아미노산의 가변 영역을 포함한다. 이러한 가변 영역은 초기에는 절단가능한 신호 펩티드에 연결되어 발현된다. 신호 펩티드가 없는 가변 영역은 때때로 성숙 가변 영역으로 지칭된다. 따라서, 예를 들어, 경쇄 성숙 가변 영역은 경쇄 신호 펩티드가 없는 경쇄 가변 영역을 의미한다. 각각의 쇄의 카르복시-말단 부분은 이펙터 기능을 주로 담당하는 불변 영역을 규정한다.
경쇄는 카파 또는 람다로 분류된다. 중쇄는 감마, 뮤, 알파, 델타, 또는 엡실론으로 분류되고, 항체의 이소형을 각각 IgG, IgM, IgA, IgD 및 IgE로 규정한다. 경쇄 및 중쇄 내에서, 가변 및 불변 영역은 약 12개 이상의 아미노산의 "J" 영역에 의해 연결되고, 중쇄는 약 10개 이상의 아미노산의 "D" 영역을 또한 포함한다. (일반적으로, 모든 목적을 위해 전문이 참조로 포함된 문헌 [Fundamental Immunology (Paul, W., ed., 2nd ed. Raven Press, N.Y., 1989, Ch. 7]을 참조한다).
각각의 경쇄/중쇄 쌍의 성숙 가변 영역은 항체 결합 부위를 형성한다. 따라서, 무손상 항체는 2개의 결합 부위를 갖는다. 이관능성 또는 이중특이적 항체에서를 제외하고, 2개의 결합 부위는 동일하다. 쇄 모두는 상보성 결정 영역 또는 CDR로도 칭해지는 3개의 초가변 영역에 의해 연결된 비교적 보존된 프레임워크 영역 (FR)의 동일한 일반 구조를 나타낸다. 각각의 쌍의 2개의 쇄로부터의 CDR이 프레임워크 영역에 의해 정렬되어, 특이적 에피토프에 대한 결합을 가능하게 한다. N-말단에서 C-말단으로, 경쇄 및 중쇄 둘 다 도메인 FR1, CDR1, FR2, CDR2, FR3, CDR3 및 FR4를 포함한다. 각각의 도메인에 대한 아미노산 할당은 문헌 [Kabat, Sequences of Proteins of Immunological Interest (National Institutes of Health, Bethesda, MD, 1987 and 1991)], 또는 [Chothia & Lesk, J. Mol. Biol. 196:901-917 (1987)]; [Chothia et al., Nature 342:878-883 (1989)]의 정의, 또는 카바트(Kabat) 및 코티아(Chothia)의 복합물, 또는 IMGT (이뮤노제네틱스(ImMunoGeneTics) 정보 시스템), AbM 또는 컨택트(Contact) 또는 기타 통상적인 CDR 정의에 따른다. 카바트는 상이한 중쇄들 사이 또는 상이한 경쇄들 사이의 상응하는 잔기에 동일한 번호가 할당되는, 널리 사용되는 번호매김 협약 (카바트 번호매김)을 또한 제공한다. 문맥으로부터 달리 명백하지 않는 한, 카바트 번호매김이 가변 영역 내의 아미노산의 위치를 지정하는 데 사용된다. 문맥으로부터 달리 명백하지 않는 한, EU 번호매김이 불변 영역 내의 지정된 위치에 사용된다.
"인간화" 항체는 인간에서 덜 면역원성이면서 비-인간 항체의 반응성을 유지하는 항체이다. 이는, 예를 들어, 비-인간 CDR 영역을 유지하고, 항체의 나머지 부분을 그의 인간 대응물로 교체함으로써 달성될 수 있다. 예를 들어, 문헌 [Morrison et al., PNAS USA, 81:6851-6855 (1984)]; [Morrison and Oi, Adv. Immunol., 44:65-92 (1988)]; [Verhoeyen et al., Science, 239:1534-1536 (1988)]; [Padlan, Molec. Immun., 28:489-498 (1991)]; [Padlan, Molec. Immun., 31(3):169-217 (1994)]을 참조한다.
본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "키메라 항체"는 (a) 항원 결합 부위 (가변 영역, CDR, 또는 그의 일부분)가 상이한 종의 불변 영역에 연결되도록 불변 영역 또는 그의 일부분이 교체된 항체 분자를 지칭한다.
용어 "에피토프"는 항체가 결합하는 항원 상의 부위를 지칭한다. 에피토프는 연속 아미노산 또는 하나 이상의 단백질의 3차 폴딩에 의해 병치된 불연속 아미노산으로부터 형성될 수 있다. 연속 아미노산으로부터 형성된 에피토프는 전형적으로 변성 용매에 노출되는 경우 유지되는 반면, 3차 폴딩에 의해 형성된 에피토프는 전형적으로 변성 용매 처리 시 상실된다. 에피토프는 전형적으로 고유한 공간적 입체형상 내의 적어도 3개, 더욱 일반적으로는 적어도 5개 또는 8-10개의 아미노산을 포함한다. 에피토프의 공간적 입체형상을 결정하는 방법은, 예를 들어, x선 결정학 및 2차원 핵 자기 공명을 포함한다. 예를 들어, 문헌 [Epitope Mapping Protocols, Methods in Molecular Biology, Vol. 66, Glenn E. Morris, Ed. (1996)]을 참조한다.
하나의 항체가 표적 항원에 대한 또 다른 항체의 결합과 경쟁하는 능력을 나타내는 간단한 면역검정법에서 동일하거나 중첩되는 에피토프를 인식하는 항체들을 확인할 수 있다. 항체의 에피토프는 접촉 잔기를 확인하기 위해 자신의 항원에 결합된 항체의 X선 결정학에 의해 결정될 수도 있다. 대안적으로, 하나의 항체의 결합을 감소시키거나 제거하는 항원 내의 모든 아미노산 돌연변이가 다른 항체의 결합을 감소시키거나 제거하면 2개의 항체가 동일한 에피토프를 갖는다. 하나의 항체의 결합을 감소시키거나 제거하는 일부 아미노산 돌연변이가 다른 항체의 결합을 감소시키거나 제거하면 2개의 항체가 중첩 에피토프를 갖는다.
테스트 중인 항체가 공통 항원에 대한 기준 항체의 특이적 결합을 억제하는 검정법에 의해 항체들 사이의 경쟁이 결정된다 (예를 들어, 문헌 [Junghans et al., Cancer Res. 50:1495, 1990]을 참조한다). 경쟁적 결합 검정법에서 측정 시 과량의 테스트 항체 (예를 들어, 적어도 2x, 5x, 10x, 20x 또는 100x)가 기준 항체의 결합을 적어도 50%, 그러나 바람직하게는 75%, 90% 또는 99%만큼 억제하면 테스트 항체가 기준 항체와 경쟁한다. 경쟁 검정법에 의해 확인된 항체 (경쟁 항체)는 기준 항체와 동일한 에피토프에 결합하는 항체, 및 입체 장애가 발생하도록 기준 항체에 의해 결합되는 에피토프에 충분히 가까운 인접 에피토프에 결합하는 항체를 포함한다.
"특이적으로 결합한다"라는 구절은 비-표적 화합물에 결합하는 것보다 표적에 더 큰 친화도로, 더 큰 결합력으로, 더욱 용이하게, 및/또는 더 많은 기간으로 샘플 내의 이러한 표적에 결합하는 분자 (예를 들어, 항체 또는 항체 단편)를 지칭한다. 일부 실시양태에서, 표적에 특이적으로 결합하는 항체는 비-표적 화합물보다 적어도 2배 더 큰 친화도, 예를 들어, 적어도 4배, 5배, 6배, 7배, 8배, 9배, 10배, 20배, 25배, 50배, 또는 100배 더 큰 친화도로 표적에 결합하는 항체이다. 예를 들어, TIGIT에 특이적으로 결합하는 항체는 전형적으로 비-TIGIT 표적에 대한 것보다 적어도 2배 더 큰 친화도로 TIGIT에 결합할 것이다. 이러한 정의를 읽는 관련 기술 분야의 통상의 기술자는, 예를 들어, 제1 표적에 특이적으로 또는 우선적으로 결합하는 항체 (또는 모이어티 또는 에피토프)가 제2 표적에 특이적으로 또는 우선적으로 결합할 수 있거나 또는 그렇지 않을 수 있다는 것을 이해할 것이다. 따라서, "특이적 결합"은 배타적 결합을 (포함할 수 있지만) 반드시 필요로 하지는 않는다.
용어 "결합 친화도"는 2개의 분자, 예를 들어, 항체 또는 그의 단편과 항원 사이의 비-공유결합 상호작용의 강도의 척도로서 본원에서 사용된다. 용어 "결합 친화도"는 1가 상호작용 (내인성 활성)을 기술하도록 사용된다.
1가 상호작용을 통한 2개의 분자, 예를 들어, 항체 또는 그의 단편과 항원 사이의 결합 친화도를 해리 상수 (KD)의 결정에 의해 정량할 수 있다. 차례로, 비제한적인 예로서, 표면 플라즈몬 공명 (SPR) 방법 (비아코어(Biacore)™)을 사용하여, 복합체 형성 및 해리의 동역학의 측정에 의해 KD를 결정할 수 있다. 1가 복합체의 회합 및 해리에 상응하는 속도 상수가 각각 회합 속도 상수 k a (또는 k on ) 및 해리 속도 상수 k d (또는 k off )로 지칭된다. KD는 등식 KD = k d / k a 를 통해 k a 및 k d 에 관련된다. 해리 상수의 값은 널리 공지되어 있는 방법에 의해 직접적으로 결정될 수 있고, 예를 들어, 문헌 [Caceci et al. (1984, Byte 9: 340-362)]에 기재된 것과 같은 방법에 비해 심지어 복합적인 혼합물에 대해서도 계산될 수 있다. 예를 들어, 이중-필터 니트로셀룰로스 필터 결합 검정법 예컨대 문헌 [Wong & Lohman (1993, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90: 5428-5432)]에 개시된 것을 사용하여 KD가 확립될 수 있다. 리간드 예컨대 항체의 표적 항원에 대한 결합 능력을 평가하기 위한 다른 표준 검정법이, 예를 들어, ELISA, 웨스턴 블롯, RIA, 및 유동 세포측정법 분석, 및 본원의 다른 곳에서 예시된 다른 검정법을 포함하여, 관련 기술 분야에 공지되어 있다. 항체의 결합 동역학 및 결합 친화도를 관련 기술 분야에 공지되어 있거나 또는 하기 실시예 섹션에 기술된 바와 같은 표준 검정법, 예컨대 표면 플라즈몬 공명 (SPR)에 의해, 예를 들어 비아코어™ 시스템; 동역학 배제 검정법 예컨대 KinExA®; 및 바이오레이어(BioLayer) 간섭법 (예를 들어, 포르테바이오® 옥텟(ForteBio® Octet) 플랫폼을 사용함)을 사용함으로써 평가할 수도 있다. 일부 실시양태에서, 바이오레이어 간섭법 검정법을 사용하여 결합 친화도가 결정된다. 예를 들어, 문헌 [Wilson et al., Biochemistry and Molecular Biology Education, 38:400-407 (2010)]; [Dysinger et al., J. Immunol. Methods, 379:30-41 (2012)]; 및 [Estep et al., Mabs, 2013, 5:270-278]을 참조한다.
용어 "교차-반응한다"는, 본원에서 사용된 바와 같이, 항체가 이에 대해 생성된 항원 이외의 항원에 결합하는 항체의 능력을 지칭한다. 일부 실시양태에서, 교차-반응성은 항체가 이에 대해 생성된 항원 이외의 또 다른 종으로부터의 항원에 결합하는 항체의 능력을 지칭한다. 비-제한적인 예로서, 인간 TIGIT 항원에 대해 생성된 본원에 기술된 바와 같은 항-TIGIT 항체는 상이한 종 (예를 들어, 마우스 또는 원숭이)으로부터의 TIGIT와의 교차-반응성을 나타낼 수 있다.
"단리된" 항체는 확인되었고 그의 천연 환경의 성분으로부터 분리 및/또는 회수된 항체, 및/또는 재조합으로 생산된 항체를 지칭한다. "정제된 항체"는 그의 생산 또는 정제 동안 발생하는 간섭 단백질 및 기타 오염 물질이 전형적으로 적어도 50% w/w 없는 항체이지만, 모노클로날 항체가 그의 사용을 용이하게 하도록 의도되는 과량의 제약상 허용되는 담체(들) 또는 다른 비히클과 조합될 가능성을 배제하지 않는다. 간섭 단백질 및 기타 오염 물질은, 예를 들어, 항체가 이로부터 단리되거나 또는 재조합으로 생산되는 세포의 세포 성분을 포함할 수 있다. 때때로, 모노클로날 항체는 생산 또는 정제로부터의 간섭 단백질 및 오염 물질이 적어도 60%, 70%, 80%, 90%, 95 또는 99% w/w 없다. 래트, 키메라, 베니어드(veneered) 및 인간화 항체를 포함하는 본원에 기술된 항체는 단리 및/또는 정제된 형태로 제공될 수 있다.
용어 "면역항암제(immuno-oncology agent)"는 (예를 들어, 종양 성장을 억제하기 위해 면역 반응을 자극하는 것에서) 대상체에서 암에 대한 면역 반응을 강화하거나, 자극하거나, 또는 상향조절하는 작용제를 지칭한다. 일부 실시양태에서, 면역항암제는 소형 분자, 항체, 펩티드, 단백질, 원형 펩티드, 펩티드모방체, 폴리뉴클레오티드, 억제 RNA, 앱타머, 약물 화합물, 또는 기타 화합물이다. 일부 실시양태에서, 면역항암제는 PD-1 또는 PD-1 경로의 길항제 또는 억제제이다.
"대상체", "환자", "개체" 등의 용어는 상호교환가능하게 사용되고, 지시된 경우를 제외하고는, 포유동물 예컨대 인간 및 비-인간 영장류, 뿐만 아니라 토끼, 래트, 마우스, 염소, 돼지 및 기타 포유동물 종을 지칭한다. 이러한 용어는 대상체가 특정 질환으로 진단되었음을 반드시 나타내지는 않지만, 전형적으로 의학적 감독 하에 있는 개체를 지칭한다.
용어 "요법", "치료", 및 "호전"은 증상의 중증도에서의 임의의 감소를 지칭한다. 암을 치료하는 경우에, 치료는, 예를 들어, 종양 크기, 암세포의 수, 성장 속도, 전이 활성, 비-암세포의 세포 사망 등을 감소시키는 것을 지칭할 수 있다. 본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "치료하다" 및 "예방하다"는 절대적인 용어인 것으로 의도되지 않는다. 치료 및 예방은 임의의 발병 지연, 증상 호전, 환자 생존 개선, 생존 시간 또는 비율 증가 등을 지칭할 수 있다. 치료 및 예방은 완전할 수 있거나 (검출가능한 증상이 잔존하지 않음), 또는 본원에 기술된 치료를 받지 않은 환자에서보다 증상이 덜 빈번하거나 또는 덜 중증이도록 부분적일 수 있다. 치료 효과는 치료를 받지 않는 개체 또는 개체 풀, 또는 치료 전이거나 치료 중의 상이한 시점인 동일한 환자에 비교될 수 있다. 일부 측면에서, 예를 들어, 투여 전의 개체 또는 치료를 받지 않는 대조군 개체에 비교하여, 질환의 중증도가 적어도 10%만큼 감소된다. 일부 측면에서, 질환의 중증도는 적어도 25%, 50%, 75%, 80%, 또는 90%만큼 감소되거나, 또는 일부 경우에, 더 이상 표준 진단 기술을 사용하여 검출가능하지 않다.
본원에서 사용된 바와 같이, 작용제 (예를 들어, 본원에 기술된 바와 같은 항체)의 "치료량" 또는 "치료적 유효량"은 대상체에서 질환 (예를 들어, 암)의 증상을 예방하거나, 완화시키거나, 약화시키거나, 호전시키거나, 또는 그의 중증도를 감소시키는 작용제의 양이다.
용어 "투여하다", "투여된", 또는 "투여함"은 작용제, 화합물 또는 조성물을 원하는 생물학적 작용 부위로 전달하는 방법을 지칭한다. 이러한 방법은 국소 전달, 비경구 전달, 정맥내 전달, 피내 전달, 근육내 전달, 결장 전달, 직장 전달, 또는 복막내 전달을 포함하지만, 이에 제한되지 않는다. 본원에 기술된 작용제 및 방법과 함께 임의적으로 사용되는 투여 기술은, 예를 들어, 문헌 [Goodman and Gilman, The Pharmacological Basis of Therapeutics, current ed.; Pergamon]; 및 [Remington's, Pharmaceutical Sciences (current edition), Mack Publishing Co., Easton, PA]에 논의된 바와 같은 것을 포함한다.
III. TIGIT에 대한 항체
한 측면에서, 인간 TIGIT (Ig 및 ITIM 도메인을 갖는 T-세포 면역수용체)에 결합하는 항체가 제공된다. 본원에 기술된 바와 같이, 일부 실시양태에서, 항-TIGIT 항체는 TIGIT와 리간드 CD155 및 CD112 중 하나 또는 둘 다 사이의 상호작용을 억제한다. 일부 실시양태에서, 항-TIGIT 항체는 기능성 생물검정법에서 TIGIT와 CD155 사이의 상호작용을 억제하여, CD155-CD226 신호전달이 발생하도록 허용한다. 일부 실시양태에서, 항-TIGIT 항체는 항-PD-1 작용제 (예를 들어, 항-PD-1 항체) 또는 항-PD-L1 작용제 (예를 들어, 항-PD-L1 항체)와 상승작용을 나타낸다.
본 발명가들은, 놀랍게도, 비-푸코실화 IgG1 항체로 달성될 수 있는 것과 같이 강화된 이펙터 기능이 있는 항-TIGIT 항체가 Treg 세포를 고갈시키고, 생체 내에서 개선된 효능을 나타낸다는 것을 발견하였다. 따라서, 다양한 실시양태에서, 비-푸코실화 항-TIGIT 항체가 제공된다.
항-TIGIT 항체의 예시적인 특성
일부 실시양태에서, 항-TIGIT 항체, 예컨대 비-푸코실화 항-TIGIT 항체는 인간 TIGIT 단백질 (서열식별번호: 218) 또는 그의 일부분에 높은 친화도로 결합한다. 일부 실시양태에서, 항체는 5 nM 미만, 1 nM 미만, 500 pM 미만, 250 pM 미만, 150 pM 미만, 100 pM 미만, 50 pM 미만, 40 pM 미만, 30 pM 미만, 20 pM 미만, 또는 약 10 pM 미만의 인간 TIGIT에 대한 결합 친화도 (KD)를 갖는다. 일부 실시양태에서, 항체는 50 pM 미만의 인간 TIGIT에 대한 결합 친화도 (KD)를 갖는다. 일부 실시양태에서, 항체는 약 1 pM 내지 약 5 nM, 예를 들어, 약 1 pM 내지 약 1 nM, 약 1 pM 내지 약 500 pM, 약 5 pM 내지 약 250 pM, 또는 약 10 pM 내지 약 100 pM의 인간 TIGIT에 대한 KD를 갖는다.
일부 실시양태에서, 인간 TIGIT에 높은 친화도로 결합하는 것에 더하여, 비-푸코실화 항-TIGIT 항체는 시노몰거스 원숭이 ("시노") TIGIT (예를 들어, 서열식별번호: 219의 서열을 갖는 시노 TIGIT 단백질) 및/또는 마우스 TIGIT (예를 들어, 서열식별번호: 220의 서열을 갖는 마우스 TIGIT 단백질)와의 교차-반응성을 나타낸다. 일부 실시양태에서, 항-TIGIT 항체는 마우스 TIGIT (예를 들어, 서열식별번호: 220의 서열을 갖는 마우스 TIGIT)에 100 nM 이하의 결합 친화도 (KD)로 결합한다. 일부 실시양태에서, 항-TIGIT 항체는 인간 TIGIT에 5 nM 이하의 KD로 결합하고, 마우스 TIGIT와 100 nM 이하의 KD로 교차 반응한다. 일부 실시양태에서, 인간 TIGIT에 결합하는 항-TIGIT 항체는 시노몰거스 원숭이 TIGIT 및 마우스 TIGIT 둘 다와의 교차-반응성을 또한 나타낸다.
일부 실시양태에서, 항체 교차-반응성은 세포 (예를 들어, 인간 TIGIT, 시노 TIGIT, 또는 마우스 TIGIT를 발현하는 세포주, 또는 내인성으로 TIGIT를 발현하는 1차 세포, 예를 들어, 내인성으로 인간 TIGIT, 시노 TIGIT, 또는 마우스 TIGIT를 발현하는 1차 T 세포) 상에서 발현된 TIGIT에 대한 항-TIGIT 항체의 특이적 결합을 검출함으로써 결정된다. 일부 실시양태에서, 항체 결합 및 항체 교차-반응성은 정제된 또는 재조합 TIGIT (예를 들어, 정제된 또는 재조합 인간 TIGIT, 정제된 또는 재조합 시노 TIGIT, 또는 정제된 또는 재조합 마우스 TIGIT) 또는 TIGIT를 포함하는 키메라 단백질 (예를 들어, 인간 TIGIT, 시노 TIGIT, 또는 마우스 TIGIT를 포함하는 Fc-융합 단백질, 또는 인간 TIGIT, 시노 TIGIT, 또는 마우스 TIGIT를 포함하는 His-태그부착 단백질)에 대한 항-TIGIT 항체의 특이적 결합을 검출함으로써 결정된다.
결합 친화도, 결합 동역학, 및 교차-반응성을 분석하는 방법이 관련 기술 분야에 널리 공지되어 있다. 예를 들어, 문헌 [Ernst et al., Determination of Equilibrium Dissociation Constants, Therapeutic Monoclonal Antibodies (Wiley & Sons ed. 2009)]을 참조한다. 이러한 방법은 고체-상 결합 검정법 (예를 들어, ELISA 검정법), 면역침전, 표면 플라즈몬 공명 (SPR, 예를 들어, 비아코어™ (GE 헬스케어(GE Healthcare), 뉴저지주 피스카타웨이)), 동역학 배제 검정법 (예를 들어, KinExA®), 유동 세포측정법, 형광-활성화 세포 분류 (FACS), 바이오레이어 간섭법 (예를 들어, 옥텟™ (포르테바이오 인크(ForteBio, Inc.), 캘리포니아주 멘로 파크)), 및 웨스턴 블롯 분석을 포함하지만, 이에 제한되지 않는다. SPR 기술이, 예를 들어, 문헌 [Hahnfeld et al. Determination of Kinetic Data Using SPR Biosensors, Molecular Diagnosis of Infectious Diseases (2004)]에 리뷰되어 있다. 전형적인 SPR 실험에서는, 하나의 상호작용물 (표적 또는 표적화제)이 유동 셀 내의 SPR-활성, 금-코팅 유리 슬라이드 상에 고정되고, 다른 상호작용물을 함유하는 샘플이 표면을 가로질러 유동하도록 도입된다. 소정의 파장의 빛이 표면 상에 비춰지는 경우, 금의 광학 반사력에 대한 변화가 결합 및 결합의 동역학을 지시한다. 일부 실시양태에서, 동역학 배제 검정법이 친화도를 결정하는 데 사용된다. 이러한 기술은, 예를 들어, 문헌 [Darling et al., Assay and Drug Development Technologies Vol. 2, number 6 647-657 (2004)]에 기술되어 있다. 일부 실시양태에서, 바이오레이어 간섭법 검정법이 친화도를 결정하는 데 사용된다. 이러한 기술은, 예를 들어, 문헌 [Wilson et al., Biochemistry and Molecular Biology Education, 38:400-407 (2010)]; [Dysinger et al., J. Immunol. Methods, 379:30-41 (2012)]에 기술되어 있다.
일부 실시양태에서, 본원에서 제공되는 항-TIGIT 항체는 TIGIT와 리간드 CD155 사이의 상호작용을 억제한다. 일부 실시양태에서, 본원에서 제공되는 항-TIGIT 항체는 TIGIT와 리간드 CD112 사이의 상호작용을 억제한다. 일부 실시양태에서, 본원에서 제공되는 항-TIGIT 항체는 TIGIT와 리간드 CD155 및 CD112 둘 다 사이의 상호작용을 억제한다.
일부 실시양태에서, TIGIT와 CD155 및/또는 CD112 사이의 상호작용을 억제하는 항-TIGIT 항체의 능력이 TIGIT와 CD155 또는 CD112 사이의 물리적 상호작용이 결합 검정법에서 감소되는지 여부를 측정하는 것에 의해 평가된다. 일부 실시양태에서, 결합 검정법은 경쟁적 결합 검정법이다. 검정법은 ELISA 검정법, 유동 세포측정법, 표면 플라즈몬 공명 (SPR) 검정법 (예를 들어, 비아코어™), 또는 바이오레이어 간섭법 (예를 들어, 포르테바이오 옥텟™)과 같은, 그러나 이에 제한되지 않는 다양한 양식으로 수행될 수 있다. 예를 들어, 문헌 [Duff et al., Biochem J., 2009, 419:577-584]; [Dysinger et al., J. Immunol. Methods, 379:30-41 (2012)]; 및 [Estep et al., Mabs, 2013, 5:270-278]을 참조한다.
일부 실시양태에서, 항-TIGIT 항체는 기능성 생물검정법, 예컨대 (예를 들어 하류 리포터의 활성화를 통해) 세포에서 CD155-CD226 신호전달의 활성화를 측정하는 것에 의해 TIGIT/CD155 상호작용의 억제가 평가되는 기능성 세포 검정법에서 TIGIT와 CD155 사이의 상호작용을 억제한다. 비-제한적인 예시적 기능성 세포 검정법이 하기 실시예 섹션에서 기술된다. 이러한 예시적 기능성 검정법에서, 루시퍼라제 발현은 TCR 맞물림 및 CD155-CD226으로부터의 공동-자극 신호를 필요로 한다. 제1 세포 ("T 이펙터 세포"로도 지칭됨)는 TCR 복합체, TIGIT, 및 CD226을 세포 표면 상에 발현하고, 루시퍼라제 유전자를 함유한다. 제2 세포 ("인공 항원 제시 세포"로도 지칭됨)는 TCR 활성자 및 CD155를 발현한다. 항-TIGIT 항체의 부재 하에서의 세포의 공동-배양은 CD155-CD226에 의한 이펙터 세포의 공동-자극을 억제하는 TIGIT-CD155 상호작용을 초래하여, 이펙터 세포에 의한 루시퍼라제 발현을 방지한다. TIGIT와 CD155 사이의 상호작용을 억제하는 항-TIGIT 항체의 존재 하에서는, CD155 및 CD226가 상호작용할 수 있고, 제1 세포에서의 루시퍼라제 발현을 구동시키는 공동-자극 신호를 생산한다. 이러한 기능성 세포 검정법은 관련 기술 분야, 예를 들어, 문헌 [Cong et al., Genetic Engineering and Biotechnology News, 2015, 35(10):16-17]에 기술되어 있고, 또한 상업적으로 이용가능하다 (예를 들어, TIGIT/CD155 차단 생물검정법 키트, 프로메가 코포레이션(Promega Corp.), 위스컨신주 매디슨). 일부 실시양태에서, TIGIT와 CD155 사이의 상호작용을 억제하는 항-TIGIT 항체는 (예를 들어, 세포 검정법 예컨대 TIGIT/CD155 차단 생물검정법 키트에서 측정 시) CD155-CD226 신호전달의 활성화의 수준 또는 양을 항-TIGIT 항체의 부재 하의 CD155-CD226 신호전달의 수준 또는 양에 비교하여 적어도 10%, 적어도 20%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 90% 이상만큼 증가시킨다. 일부 실시양태에서, TIGIT와 CD155 사이의 상호작용을 억제하는 항-TIGIT 항체는 (예를 들어, 세포 검정법 예컨대 TIGIT/CD155 차단 생물검정법 키트에서 측정 시) CD155-CD226 신호전달의 활성화의 수준 또는 양을 항-TIGIT 항체의 부재 하의 CD155-CD226 신호전달의 수준 또는 양에 비교하여 적어도 약 1.2배, 적어도 약 1.5배, 적어도 약 2배, 적어도 약 3배, 적어도 약 4배, 적어도 약 5배, 적어도 약 6배, 적어도 약 7배, 적어도 약 8배, 적어도 약 9배, 적어도 약 10배 이상만큼 증가시킨다.
일부 실시양태에서, 인간 TIGIT에 결합하는 (그리고, 임의적으로 시노몰거스 원숭이 및/또는 마우스 TIGIT와의 교차-반응성을 나타내고/내거나 임의적으로 TIGIT와 CD155 및/또는 CD112 사이의 상호작용을 억제하는) 항-TIGIT 항체는 항-PD-1 작용제 (예를 들어, 항-PD-1 항체)와의 상승작용을 나타낸다. 일부 실시양태에서, 항-TIGIT 항체는 항-PD-1 작용제 (예를 들어, 항-PD-1 항체)의 효과를 적어도 약 1.2배, 적어도 약 1.5배, 적어도 약 2배, 적어도 약 3배, 적어도 약 4배, 적어도 약 5배, 적어도 약 6배, 적어도 약 7배, 적어도 약 8배, 적어도 약 9배, 적어도 약 10배 이상만큼 강화한다.
일부 실시양태에서, 항-TIGIT 항체는 기능성 생물검정법, 예컨대 이펙터 세포에서의 신호전달의 활성화를 측정하는 것에 의해 TIGIT 신호전달의 억제 및 PD-1 신호전달의 억제가 평가되는 기능성 세포 검정법에서 항-PD-1 작용제 (예를 들어, 항-PD-1 항체)와의 상승작용을 나타낸다. 비-제한적인 예시적 기능성 세포 검정법이 하기 실시예 섹션에서 기술된다. 이러한 예시적 기능 검정법에서, 제1 세포 ("T 이펙터 세포"로도 지칭됨)는 TCR 복합체, TIGIT, CD226, 및 PD-1을 세포 표면 상에 발현하고, 루시퍼라제 유전자를 함유한다. 제2 세포 ("인공 항원 제시 세포"로도 지칭됨)는 TCR 활성자, CD155, 및 PD-L1을 발현한다. 이펙터 세포에 의한 루시퍼라제 유전자의 발현이 (1) TIGIT-CD155 상호작용의 차단 및 이에 의해 CD155-CD226 상호작용 및 후속적인 이펙터 세포에 의한 루시퍼라제 발현의 공동-자극을 허용하는 것, 또는 (2) PD-1/PD-L1 상호작용의 차단 및 이에 의해 이펙터 세포에 의한 루시퍼라제 발현의 억제를 경감시키는 것 중 하나 또는 둘 다에 의해 활성화된다. 항-TIGIT 항체가 항-PD-1 작용제 또는 항-PD-L1 작용제와의 상승작용을 나타내는지 여부를 결정하기 위해 항-TIGIT 항체 및 항-PD-1 작용제 또는 항-PD-L1 작용제의 존재 또는 부재 하의 루시퍼라제 발현의 수준을 측정 및 정량할 수 있다. 이러한 기능성 세포 검정법이 관련 기술 분야에 기술되어 있고 (예를 들어, 문헌 [Cong et al., Genetic Engineering and Biotechnology News, 2015, 35(10):16-17]), 또한 상업적으로 이용가능하다 (예를 들어, PD-1/TIGIT 조합 생물검정법 키트, 프로메가 코포레이션, 위스컨신주 매디슨).
일부 실시양태에서, 항-TIGIT 항체의 효능, 뿐만 아니라 항-TIGIT 항체가 항-PD-1 작용제 (예를 들어, 항-PD-1 항체) 또는 항-PD-L1 작용제 (예를 들어, 항-PD-L1 항체)와 상승작용적으로 억제하는지 여부를 생체 내 모델, 예를 들어, 생체 내 종양 모델을 사용하여 측정할 수 있다. 예를 들어, 본원에 기술된 바와 같은 항-TIGIT 항체의 효능, 또는 항-PD-1 작용제 또는 항-PD-L1 작용제와 조합되어 투여된 경우의 본원에 기술된 바와 같은 항-TIGIT 항체의 효능을 동계 마우스 종양 모델을 사용하여 평가할 수 있다. 적절한 동계 종양 모델이 관련 기술 분야에 기술되어 있다. 예를 들어, 문헌 [Rios-Doria et al., Neoplasia, 2015, 17:661-670]; 및 [Moynihan et al., Nature Medicine, 2016, doi:10.1038/nm.4200]을 참조한다. 일부 실시양태에서, 항-TIGIT 항체는 생체 내 모델에서 종양의 크기 또는 전체 종양 개수를 대조군 또는 기준 값에 비교하여 (예를 들어, 미처리 대조군에서의 종양 크기 또는 전체 종양 개수에 비교하여) 적어도 10%, 적어도 20%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 90% 이상만큼 감소시킨다.
일부 실시양태에서, 항-TIGIT 항체는 서열식별번호: 218을 참조하여 번호가 매겨졌을 때의 아미노산 위치 81 및 82 중 하나 또는 둘 다를 포함하는 인간 TIGIT의 에피토프를 인식한다. 일부 실시양태에서, 항-TIGIT 항체는 위치 81의 Phe을 포함하는 에피토프를 인식한다. 일부 실시양태에서, 항-TIGIT 항체는 위치 82의 Lys 또는 Ser을 포함하는 에피토프를 인식한다. 일부 실시양태에서, 항-TIGIT 항체는 위치 81의 Phe 및 위치 82의 Lys을 포함하는 에피토프를 인식한다. 일부 실시양태에서, 항-TIGIT 항체는 위치 81의 Phe 및 위치 82의 Ser을 포함하는 에피토프를 인식한다.
일부 실시양태에서, 항-TIGIT 항체는 아미노산 위치 81 및 82 중 하나 또는 둘 다를 포함하는 선형 에피토프 (예를 들어, 위치 81의 Phe 및 위치 82의 Lys 또는 Ser을 포함하는 선형 에피토프)를 인식한다. 일부 실시양태에서, 항-TIGIT 항체는 아미노산 위치 81 및 82 중 하나 또는 둘 다를 포함하는 불연속 에피토프 (예를 들어, 위치 81의 Phe 및 위치 82의 Lys 또는 Ser을 포함하는 불연속 에피토프)를 인식한다.
일부 실시양태에서, 항-TIGIT 항체는 아미노산 위치 51, 52, 53, 54, 55, 73, 74, 75, 76, 77, 79, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 또는 93 중 하나 이상 (예를 들어, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 12, 13, 14, 15개 이상)을 추가로 포함하는 인간 TIGIT 상의 에피토프에 결합한다. 일부 실시양태에서, 항-TIGIT 항체는 하기 중 하나 이상 (예를 들어, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 12, 13, 14, 15개 이상)을 추가로 포함하는 인간 TIGIT 상의 에피토프에 결합한다: 위치 51의 Thr, 위치 52의 Ala, 위치 53의 Glu 또는 Gln, 위치 54의 Val, 위치 55의 Thr, 위치 73의 Leu, 위치 74의 Gly, 위치 75의 Trp, 위치 76의 His, 위치 77의 Val 또는 Ile, 위치 79의 Ser 또는 Pro, 위치 83의 Asp, 위치 84의 Arg, 위치 85의 Val, 위치 86의 Val 또는 Ala, 위치 87의 Pro, 위치 88의 Gly, 위치 89의 Pro, 위치 90의 Ser 또는 Gly, 위치 91의 Leu, 위치 92의 Gly, 또는 위치 93의 Leu. 일부 실시양태에서, 항-TIGIT 항체는 아미노산 잔기 Thr51, Ala52, Gln53, Val54, Thr55, Leu73, Gly74, Trp75, His76, Ile77, Pro79, Asp83, Arg84, Val85, Ala86, Pro87, Gly88, Pro89, Gly90, Leu91, Gly92, 및 Leu93 중 하나 이상 (예를 들어, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 12, 13, 14, 15개 이상)을 추가로 포함하는 인간 TIGIT 상의 에피토프에 결합한다.
일부 실시양태에서, 항-TIGIT 항체는 위치 81의 Phe 및 위치 82의 Lys 또는 Ser을 포함하고, 추가로 위치 51의 Thr, 위치 52의 Ala, 위치 53의 Glu 또는 Gln, 위치 54의 Val, 및/또는 위치 55의 Thr을 포함하는 에피토프를 인식한다. 일부 실시양태에서, 항-TIGIT 항체는 위치 81의 Phe 및 위치 82의 Lys 또는 Ser을 포함하고, 추가로 위치 74의 Gly, 위치 75의 Trp, 위치 76의 His, 및/또는 위치 77의 Val 또는 Ile을 포함하는 에피토프를 인식한다. 일부 실시양태에서, 항-TIGIT 항체는 위치 81의 Phe 및 위치 82의 Lys 또는 Ser을 포함하고, 추가로 위치 87의 Pro, 위치 88의 Gly, 위치 89의 Pro, 위치 90의 Ser 또는 Gly, 위치 91의 Leu, 위치 92의 Gly, 및/또는 위치 93의 Leu을 포함하는 에피토프를 인식한다. 일부 실시양태에서, 항-TIGIT 항체는 아미노산 잔기 Thr51, Ala52, Gln53, Val54, Thr55, Gly74, Trp75, His76, Ile77, Phe81, Lys82, Pro87, Gly88, Pro89, Gly90, Leu91, Gly92, 및 Leu93을 포함하는 에피토프를 인식한다.
일부 실시양태에서, 항-TIGIT 항체는 위치 81의 Phe 및 위치 82의 Lys 또는 Ser을 포함하고, 추가로 위치 52의 Ala 및/또는 위치 53의 Glu 또는 Gln을 포함하는 에피토프를 인식한다. 일부 실시양태에서, 항-TIGIT 항체는 위치 81의 Phe 및 위치 82의 Lys 또는 Ser을 포함하고, 추가로 위치 73의 Leu, 위치 74의 Gly, 및/또는 위치 75의 Trp을 포함하는 에피토프를 인식한다. 일부 실시양태에서, 항-TIGIT 항체는 위치 81의 Phe 및 위치 82의 Lys 또는 Ser을 포함하고, 추가로 위치 83의 Asp, 위치 84의 Arg, 위치 85의 Val, 및/또는 위치 86의 Val 또는 Ala을 포함하는 에피토프를 인식하다. 일부 실시양태에서, 항-TIGIT 항체는 아미노산 잔기 Ala52, Gln53, Leu73, Gly74, Trp75, Pro79, Phe81, Lys82, Asp83, Arg84, Val85, 및 Ala86을 포함하는 에피토프를 인식하다.
일부 실시양태에서, 항-TIGIT 항체는 인간 TIGIT (서열식별번호: 218)의 잔기 68-82에 상응하는 서열 ICNADLGWHISPSFK (서열식별번호: 258)를 포함하는 인간 TIGIT의 에피토프를 인식한다. 일부 실시양태에서, 항-TIGIT 항체는 서열 ICNADLGWHISPSFK (서열식별번호: 258)로 이루어진 인간 TIGIT의 에피토프를 인식한다.
특정 항-TIGIT 항체 서열
일부 실시양태에서, 인간 TIGIT에 결합하고, 임의적으로 시노몰거스 원숭이 TIGIT 및/또는 마우스 TIGIT와의 교차-반응성을 나타내는 항-TIGIT 항체는 본원에기술된 하기 항체 중 임의의 것으로부터 유래된 경쇄 가변 영역 서열 또는 그의 일부분 및/또는 중쇄 가변 영역 서열 또는 그의 일부분을 포함한다: 클론 2, 클론 2C, 클론 3, 클론 5, 클론 13, 클론 13A, 클론 13B, 클론 13C, 클론 13D, 클론 14, 클론 16, 클론 16C, 클론 16D, 클론 16E, 클론 18, 클론 21, 클론 22, 클론 25, 클론 25A, 클론 25B, 클론 25C, 클론 25D, 클론 25E, 클론 27, 또는 클론 54. 항-TIGIT 항체 클론 2, 클론 2C, 클론 3, 클론 5, 클론 13, 클론 13A, 클론 13B, 클론 13C, 클론 13D, 클론 14, 클론 16, 클론 16C, 클론 16D, 클론 16E, 클론 18, 클론 21, 클론 22, 클론 25, 클론 25A, 클론 25B, 클론 25C, 클론 25D, 클론 25E, 클론 27, 및 클론 54의 CDR, 경쇄 가변 도메인 (VL), 및 중쇄 가변 도메인 (VH)의 아미노산 서열이 하기 서열 표에서 기재된다.
일부 실시양태에서, 항-TIGIT 항체는 서열식별번호: 1, 서열식별번호: 19, 서열식별번호: 37, 서열식별번호: 55, 서열식별번호: 73, 서열식별번호: 91, 서열식별번호: 109, 서열식별번호: 127, 서열식별번호: 145, 서열식별번호: 163, 서열식별번호: 181, 서열식별번호: 199, 서열식별번호: 245, 서열식별번호: 246, 서열식별번호: 247, 서열식별번호: 248, 서열식별번호: 249, 서열식별번호: 250, 서열식별번호: 251, 서열식별번호: 252, 서열식별번호: 253, 서열식별번호: 254, 서열식별번호: 255, 서열식별번호: 256, 또는 서열식별번호: 257에 대한 적어도 90%의 서열 동일성 (예를 들어, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99%의 서열 동일성)을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 (VH)을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항-TIGIT 항체는 서열식별번호: 1, 서열식별번호: 19, 서열식별번호: 37, 서열식별번호: 55, 서열식별번호: 73, 서열식별번호: 91, 서열식별번호: 109, 서열식별번호: 127, 서열식별번호: 145, 서열식별번호: 163, 서열식별번호: 181, 서열식별번호: 199, 서열식별번호: 245, 서열식별번호: 246, 서열식별번호: 247, 서열식별번호: 248, 서열식별번호: 249, 서열식별번호: 250, 서열식별번호: 251, 서열식별번호: 252, 서열식별번호: 253, 서열식별번호: 254, 서열식별번호: 255, 서열식별번호: 256, 또는 서열식별번호: 257의 아미노산 서열을 포함하는 VH를 포함한다. 일부 실시양태에서, 기준 서열 (예를 들어, 서열식별번호: 1, 서열식별번호: 19, 서열식별번호: 37, 서열식별번호: 55, 서열식별번호: 73, 서열식별번호: 91, 서열식별번호: 109, 서열식별번호: 127, 서열식별번호: 145, 서열식별번호: 163, 서열식별번호: 181, 서열식별번호: 199, 서열식별번호: 245, 서열식별번호: 246, 서열식별번호: 247, 서열식별번호: 248, 서열식별번호: 249, 서열식별번호: 250, 서열식별번호: 251, 서열식별번호: 252, 서열식별번호: 253, 서열식별번호: 254, 서열식별번호: 255, 서열식별번호: 256, 또는 서열식별번호: 257)에 대한 적어도 90%의 서열 동일성을 갖는 VH 서열은 기준 서열에 비교하여 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개 이상의 치환 (예를 들어, 보존적 치환), 삽입, 또는 결실을 함유하지만, 인간 TIGIT에 결합하는 능력을 유지하고, 임의적으로, TIGIT에 대한 CD155 및/또는 CD112의 결합을 차단하는 능력을 유지한다.
일부 실시양태에서, 항-TIGIT 항체는 서열식별번호: 10, 서열식별번호: 28, 서열식별번호: 46, 서열식별번호: 64, 서열식별번호: 82, 서열식별번호: 100, 서열식별번호: 118, 서열식별번호: 136, 서열식별번호: 154, 서열식별번호: 172, 서열식별번호: 190, 또는 서열식별번호: 208에 대한 적어도 90%의 서열 동일성 (예를 들어, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99%의 서열 동일성)을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역 (VL)을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항-TIGIT 항체는 서열식별번호: 10, 서열식별번호: 28, 서열식별번호: 46, 서열식별번호: 64, 서열식별번호: 82, 서열식별번호: 100, 서열식별번호: 118, 서열식별번호: 136, 서열식별번호: 154, 서열식별번호: 172, 서열식별번호: 190, 또는 서열식별번호: 208의 아미노산 서열을 포함하는 VL을 포함한다. 일부 실시양태에서, 기준 서열 (예를 들어, 서열식별번호: 10, 서열식별번호: 28, 서열식별번호: 46, 서열식별번호: 64, 서열식별번호: 82, 서열식별번호: 100, 서열식별번호: 118, 서열식별번호: 136, 서열식별번호: 154, 서열식별번호: 172, 서열식별번호: 190, 또는 서열식별번호: 208)에 대한 적어도 90%의 서열 동일성을 갖는 VL 서열은 기준 서열에 비교하여 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개 이상의 치환 (예를 들어, 보존적 치환), 삽입, 또는 결실을 함유하지만, 인간 TIGIT에 결합하는 능력을 유지하고, 임의적으로, TIGIT에 대한 CD155 및/또는 CD112의 결합을 차단하는 능력을 유지한다.
일부 실시양태에서, 항-TIGIT 항체는 서열식별번호: 1, 서열식별번호: 19, 서열식별번호: 37, 서열식별번호: 55, 서열식별번호: 73, 서열식별번호: 91, 서열식별번호: 109, 서열식별번호: 127, 서열식별번호: 145, 서열식별번호: 163, 서열식별번호: 181, 서열식별번호: 199, 서열식별번호: 245, 서열식별번호: 246, 서열식별번호: 247, 서열식별번호: 248, 서열식별번호: 249, 서열식별번호: 250, 서열식별번호: 251, 서열식별번호: 252, 서열식별번호: 253, 서열식별번호: 254, 서열식별번호: 255, 서열식별번호: 256, 또는 서열식별번호: 257에 대한 적어도 90%의 서열 동일성 (예를 들어, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99%의 서열 동일성)을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역을 포함하고, 서열식별번호: 10, 서열식별번호: 28, 서열식별번호: 46, 서열식별번호: 64, 서열식별번호: 82, 서열식별번호: 100, 서열식별번호: 118, 서열식별번호: 136, 서열식별번호: 154, 서열식별번호: 172, 서열식별번호: 190, 또는 서열식별번호: 208에 대한 적어도 90%의 서열 동일성 (예를 들어, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99%의 서열 동일성)을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 항-TIGIT 항체는 서열식별번호: 1, 서열식별번호: 19, 서열식별번호: 37, 서열식별번호: 55, 서열식별번호: 73, 서열식별번호: 91, 서열식별번호: 109, 서열식별번호: 127, 서열식별번호: 145, 서열식별번호: 163, 서열식별번호: 181, 서열식별번호: 199, 서열식별번호: 245, 서열식별번호: 246, 서열식별번호: 247, 서열식별번호: 248, 서열식별번호: 249, 서열식별번호: 250, 서열식별번호: 251, 서열식별번호: 252, 서열식별번호: 253, 서열식별번호: 254, 서열식별번호: 255, 서열식별번호: 256, 또는 서열식별번호: 257의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역을 포함하고, 서열식별번호: 10, 서열식별번호: 28, 서열식별번호: 46, 서열식별번호: 64, 서열식별번호: 82, 서열식별번호: 100, 서열식별번호: 118, 서열식별번호: 136, 서열식별번호: 154, 서열식별번호: 172, 서열식별번호: 190, 또는 서열식별번호: 208의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 추가로 포함한다.
일부 실시양태에서, 항-TIGIT 항체는
(a) 서열식별번호: 1 또는 서열식별번호: 245에 대한 적어도 90%의 서열 동일성 (예를 들어, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99%의 서열 동일성)을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열식별번호: 10에 대한 적어도 90%의 서열 동일성 (예를 들어, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99%의 서열 동일성)을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VL;
(b) 서열식별번호: 19에 대한 적어도 90%의 서열 동일성 (예를 들어, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99%의 서열 동일성)을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열식별번호: 28에 대한 적어도 90%의 서열 동일성 (예를 들어, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99%의 서열 동일성)을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VL;
(c) 서열식별번호: 37에 대한 적어도 90%의 서열 동일성 (예를 들어, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99%의 서열 동일성)을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열식별번호: 46에 대한 적어도 90%의 서열 동일성 (예를 들어, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99%의 서열 동일성)을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VL;
(d) 서열식별번호: 55, 서열식별번호: 246, 서열식별번호: 247, 서열식별번호: 248, 또는 서열식별번호: 249 중 어느 하나에 대한 적어도 90%의 서열 동일성 (예를 들어, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99%의 서열 동일성)을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열식별번호: 64에 대한 적어도 90%의 서열 동일성 (예를 들어, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99%의 서열 동일성)을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VL;
(e) 서열식별번호: 73에 대한 적어도 90%의 서열 동일성 (예를 들어, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99%의 서열 동일성)을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열식별번호: 82에 대한 적어도 90%의 서열 동일성 (예를 들어, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99%의 서열 동일성)을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VL;
(f) 서열식별번호: 91, 서열식별번호: 250, 서열식별번호: 251, 또는 서열식별번호: 252 중 어느 하나에 대한 적어도 90%의 서열 동일성 (예를 들어, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99%의 서열 동일성)을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열식별번호: 100에 대한 적어도 90%의 서열 동일성 (예를 들어, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99%의 서열 동일성)을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VL;
(g) 서열식별번호: 109에 대한 적어도 90%의 서열 동일성 (예를 들어, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99%의 서열 동일성)을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열식별번호: 118에 대한 적어도 90%의 서열 동일성 (예를 들어, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99%의 서열 동일성)을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VL;
(h) 서열식별번호: 127에 대한 적어도 90%의 서열 동일성 (예를 들어, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99%의 서열 동일성)을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열식별번호: 136에 대한 적어도 90%의 서열 동일성 (예를 들어, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99%의 서열 동일성)을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VL;
(i) 서열식별번호: 145에 대한 적어도 90%의 서열 동일성 (예를 들어, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99%의 서열 동일성)을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열식별번호: 154에 대한 적어도 90%의 서열 동일성 (예를 들어, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99%의 서열 동일성)을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VL;
(j) 서열식별번호: 163, 서열식별번호: 253, 서열식별번호: 254, 서열식별번호: 255, 서열식별번호: 256, 또는 서열식별번호: 257 중 어느 하나에 대한 적어도 90%의 서열 동일성 (예를 들어, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99%의 서열 동일성)을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열식별번호: 172에 대한 적어도 90%의 서열 동일성 (예를 들어, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99%의 서열 동일성)을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VL;
(k) 서열식별번호: 181에 대한 적어도 90%의 서열 동일성 (예를 들어, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99%의 서열 동일성)을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열식별번호: 190에 대한 적어도 90%의 서열 동일성 (예를 들어, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99%의 서열 동일성)을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VL; 또는
(l) 서열식별번호: 199에 대한 적어도 90%의 서열 동일성 (예를 들어, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99%의 서열 동일성)을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열식별번호: 208에 대한 적어도 90%의 서열 동일성 (예를 들어, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99%의 서열 동일성)을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VL
을 포함한다.
일부 실시양태에서, 항-TIGIT 항체는
(a) 서열식별번호: 1의 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열식별번호: 10의 아미노산 서열을 포함하는 VL;
(b) 서열식별번호: 19의 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열식별번호: 28의 아미노산 서열을 포함하는 VL;
(c) 서열식별번호: 37의 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열식별번호: 46의 아미노산 서열을 포함하는 VL;
(d) 서열식별번호: 55의 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열식별번호: 64의 아미노산 서열을 포함하는 VL;
(e) 서열식별번호: 73의 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열식별번호: 82의 아미노산 서열을 포함하는 VL;
(f) 서열식별번호: 91의 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열식별번호: 100의 아미노산 서열을 포함하는 VL;
(g) 서열식별번호: 109의 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열식별번호: 118의 아미노산 서열을 포함하는 VL;
(h) 서열식별번호: 127의 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열식별번호: 136의 아미노산 서열을 포함하는 VL;
(i) 서열식별번호: 145의 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열식별번호: 154의 아미노산 서열을 포함하는 VL;
(j) 서열식별번호: 163의 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열식별번호: 172의 아미노산 서열을 포함하는 VL;
(k) 서열식별번호: 181의 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열식별번호: 190의 아미노산 서열을 포함하는 VL;
(l) 서열식별번호: 199의 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열식별번호: 208의 아미노산 서열을 포함하는 VL; 또는
(m) 서열식별번호: 245의 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열식별번호: 10의 아미노산 서열을 포함하는 VL; 또는
(n) 서열식별번호: 246의 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열식별번호: 64의 아미노산 서열을 포함하는 VL; 또는
(o) 서열식별번호: 247의 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열식별번호: 64의 아미노산 서열을 포함하는 VL; 또는
(p) 서열식별번호: 248의 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열식별번호: 64의 아미노산 서열을 포함하는 VL;
(q) 서열식별번호: 249의 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열식별번호: 64의 아미노산 서열을 포함하는 VL; 또는
(r) 서열식별번호: 250의 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열식별번호: 100의 아미노산 서열을 포함하는 VL; 또는
(s) 서열식별번호: 251의 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열식별번호: 100의 아미노산 서열을 포함하는 VL; 또는
(t) 서열식별번호: 252의 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열식별번호: 100의 아미노산 서열을 포함하는 VL; 또는
(u) 서열식별번호: 253의 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열식별번호: 172의 아미노산 서열을 포함하는 VL; 또는
(v) 서열식별번호: 254의 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열식별번호: 172의 아미노산 서열을 포함하는 VL; 또는
(w) 서열식별번호: 255의 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열식별번호: 172의 아미노산 서열을 포함하는 VL; 또는
(x) 서열식별번호: 256의 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열식별번호: 172의 아미노산 서열을 포함하는 VL; 또는
(y) 서열식별번호: 257의 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열식별번호: 172의 아미노산 서열을 포함하는 VL
을 포함한다.
일부 실시양태에서, 항-TIGIT 항체는 하나 이상 (예를 들어, 1개, 2개, 3개, 4개, 5개 또는 6개)의 CDR이 표 A, B, C, D, 및 E에 제시된 중쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3, 및 경쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3으로부터 선택되는 중쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3, 및 경쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3을 포함한다.
표 A: 클론 13 대안적 CDR 정의
Figure pct00001
표 B: 클론 13A 대안적 CDR 정의
Figure pct00002
표 C: 클론 13B 대안적 CDR 정의
Figure pct00003
표 D: 클론 13C 대안적 CDR 정의
Figure pct00004
표 E: 클론 13D 대안적 CDR 정의
Figure pct00005
일부 실시양태에서, 항-TIGIT 항체는
서열식별번호: 58, 서열식별번호: 283, 서열식별번호: 284, 서열식별번호: 224, 서열식별번호: 293, 서열식별번호: 294, 서열식별번호: 226, 서열식별번호: 289, 및 서열식별번호: 290으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR1 서열;
서열식별번호: 60, 서열식별번호: 285, 서열식별번호: 225, 서열식별번호: 297, 서열식별번호: 227, 서열식별번호: 291, 서열식별번호: 229, 및 서열식별번호: 295로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR2 서열;
서열식별번호: 62, 서열식별번호: 286, 서열식별번호: 228, 서열식별번호: 292, 서열식별번호: 230, 및 서열식별번호: 296으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR3 서열;
서열식별번호: 67 및 서열식별번호: 287로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR1 서열;
서열식별번호: 69 및 서열식별번호: 288로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR2 서열; 및/또는
서열식별번호: 71의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR3 서열
중 하나 이상 (예를 들어, 1개, 2개, 3개, 4개, 5개 또는 6개)을 포함한다.
일부 실시양태에서, 항-TIGIT 항체는 서열식별번호: 58, 서열식별번호: 283, 서열식별번호: 284, 서열식별번호: 224, 서열식별번호: 293, 서열식별번호: 294, 서열식별번호: 226, 서열식별번호: 289, 또는 서열식별번호: 290 중 임의의 것의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR1 서열; 서열식별번호: 60, 서열식별번호: 285, 서열식별번호: 225, 서열식별번호: 297, 서열식별번호: 227, 서열식별번호: 291, 서열식별번호: 229, 또는 서열식별번호: 295 중 임의의 것의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR2 서열; 서열식별번호: 62, 서열식별번호: 286, 서열식별번호: 228, 서열식별번호: 292, 서열식별번호: 230, 또는 서열식별번호: 296 중 임의의 것의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR3 서열; 서열식별번호: 67 또는 서열식별번호: 287 중 임의의 것의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR1 서열; 서열식별번호: 69 또는 서열식별번호: 288 중 임의의 것의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR2 서열; 및 서열식별번호: 71의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR3 서열을 포함한다.
일부 실시양태에서, 항-TIGIT 항체는 서열식별번호: 58, 서열식별번호: 283, 서열식별번호: 284, 서열식별번호: 224, 서열식별번호: 293, 서열식별번호: 294, 서열식별번호: 226, 서열식별번호: 289, 또는 서열식별번호: 290 중 임의의 것의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR1 서열; 서열식별번호: 60, 서열식별번호: 285, 서열식별번호: 225, 서열식별번호: 297, 서열식별번호: 227, 서열식별번호: 291, 서열식별번호: 229, 또는 서열식별번호: 295 중 임의의 것의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR2 서열; 및 서열식별번호: 62, 서열식별번호: 286, 서열식별번호: 228, 서열식별번호: 292, 서열식별번호: 230, 또는 서열식별번호: 296 중 임의의 것의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR3 서열을 포함한다.
일부 실시양태에서, 항-TIGIT 항체는 서열식별번호: 67 또는 서열식별번호: 287 중 임의의 것의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR1 서열; 서열식별번호: 69 또는 서열식별번호: 288 중 임의의 것의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR2 서열; 및 서열식별번호: 71의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR3 서열을 포함한다.
일부 실시양태에서, 항-TIGIT 항체는 (i) 서열식별번호: 58, 서열식별번호: 283, 또는 서열식별번호: 284의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR1 서열; (ii) 서열식별번호: 60 또는 서열식별번호: 285의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR2 서열; (iii) 서열식별번호: 62 또는 서열식별번호: 286의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR3 서열; (iv) 서열식별번호: 67 또는 서열식별번호: 287의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR1 서열; (v) 서열식별번호: 69 또는 서열식별번호: 288의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR2 서열; 및 (vi) 서열식별번호: 71의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR3 서열을 포함한다.
일부 실시양태에서, 항-TIGIT 항체는 (i) 서열식별번호: 224, 서열식별번호: 293, 또는 서열식별번호: 294의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR1 서열; (ii) 서열식별번호: 225 또는 서열식별번호: 297의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR2 서열; (iii) 서열식별번호: 62 또는 서열식별번호: 286의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR3 서열; (iv) 서열식별번호: 67 또는 서열식별번호: 287의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR1 서열; (v) 서열식별번호: 69 또는 서열식별번호: 288의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR2 서열; 및 (vi) 서열식별번호: 71의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR3 서열을 포함한다.
일부 실시양태에서, 항-TIGIT 항체는 (i) 서열식별번호: 226, 서열식별번호: 289, 또는 서열식별번호: 290의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR1 서열; (ii) 서열식별번호: 227 또는 서열식별번호: 291의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR2 서열; (iii) 서열식별번호: 228 또는 서열식별번호: 292의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR3 서열; (iv) 서열식별번호: 67 또는 서열식별번호: 287의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR1 서열; (v) 서열식별번호: 69 또는 서열식별번호: 288의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR2 서열; 및 (vi) 서열식별번호: 71의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR3 서열을 포함한다.
일부 실시양태에서, 항-TIGIT 항체는 (i) 서열식별번호: 224, 서열식별번호: 293, 또는 서열식별번호: 294의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR1 서열; (ii) 서열식별번호: 229 또는 서열식별번호: 295의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR2 서열; (iii) 서열식별번호: 230 또는 서열식별번호: 296의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR3 서열; (iv) 서열식별번호: 67 또는 서열식별번호: 287의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR1 서열; (v) 서열식별번호: 69 또는 서열식별번호: 288의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR2 서열; 및 (vi) 서열식별번호: 71의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR3 서열을 포함한다.
일부 실시양태에서, 항-TIGIT 항체는 (i) 서열식별번호: 224, 서열식별번호: 293, 또는 서열식별번호: 294의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR1 서열; (ii) 서열식별번호: 227 또는 서열식별번호: 290의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR2 서열; (iii) 서열식별번호: 230 또는 서열식별번호: 296의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR3 서열; (iv) 서열식별번호: 67 또는 서열식별번호: 287의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR1 서열; (v) 서열식별번호: 69 또는 서열식별번호: 288의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR2 서열; 및 (vi) 서열식별번호: 71의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR3 서열을 포함한다.
일부 실시양태에서, 항-TIGIT 항체는
서열식별번호: 4, 서열식별번호: 22, 서열식별번호: 40, 서열식별번호: 58, 서열식별번호: 76, 서열식별번호: 94, 서열식별번호: 112, 서열식별번호: 130, 서열식별번호: 148, 서열식별번호: 166, 서열식별번호: 184, 서열식별번호: 202, 서열식별번호: 221, 서열식별번호: 224, 서열식별번호: 226, 서열식별번호: 231, 서열식별번호: 233, 서열식별번호: 239, 서열식별번호: 243, 서열식별번호: 283, 서열식별번호: 284, 서열식별번호: 293, 서열식별번호: 294, 서열식별번호: 289, 또는 서열식별번호: 290 중 임의의 것의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR1 서열;
서열식별번호: 6, 서열식별번호: 24, 서열식별번호: 42, 서열식별번호: 60, 서열식별번호: 78, 서열식별번호: 96, 서열식별번호: 114, 서열식별번호: 132, 서열식별번호: 150, 서열식별번호: 168, 서열식별번호: 186, 서열식별번호: 204, 서열식별번호: 222, 서열식별번호: 225, 서열식별번호: 227, 서열식별번호: 229, 서열식별번호: 232, 서열식별번호: 234, 서열식별번호: 238, 서열식별번호: 240, 서열식별번호: 285, 서열식별번호: 297, 서열식별번호: 291, 또는 서열식별번호: 295 중 임의의 것의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR2 서열;
서열식별번호: 8, 서열식별번호: 26, 서열식별번호: 44, 서열식별번호: 62, 서열식별번호: 80, 서열식별번호: 98, 서열식별번호: 116, 서열식별번호: 134, 서열식별번호: 152, 서열식별번호: 170, 서열식별번호: 188, 서열식별번호: 206, 서열식별번호: 223, 서열식별번호: 228, 서열식별번호: 230, 서열식별번호: 235, 서열식별번호: 236, 서열식별번호: 237, 서열식별번호: 241, 서열식별번호: 242, 서열식별번호: 244, 서열식별번호: 286, 서열식별번호: 292, 또는 서열식별번호: 296 중 임의의 것의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR3 서열;
서열식별번호: 13, 서열식별번호: 31, 서열식별번호: 49, 서열식별번호: 67, 서열식별번호: 85, 서열식별번호: 103, 서열식별번호: 121, 서열식별번호: 139, 서열식별번호: 157, 서열식별번호: 175, 서열식별번호: 193, 서열식별번호: 211, 또는 서열식별번호: 287 중 임의의 것의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR1 서열;
서열식별번호: 15, 서열식별번호: 33, 서열식별번호: 51, 서열식별번호: 69, 서열식별번호: 87, 서열식별번호: 105, 서열식별번호: 123, 서열식별번호: 141, 서열식별번호: 159, 서열식별번호: 177, 서열식별번호: 195, 서열식별번호: 213, 또는 서열식별번호: 288 중 임의의 것의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR2 서열; 및/또는
서열식별번호: 17, 서열식별번호: 35, 서열식별번호: 53, 서열식별번호: 71, 서열식별번호: 89, 서열식별번호: 107, 서열식별번호: 125, 서열식별번호: 143, 서열식별번호: 161, 서열식별번호: 179, 서열식별번호: 197, 또는 서열식별번호: 215 중 임의의 것의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR3 서열
중 하나 이상 (예를 들어, 1개, 2개, 3개, 4개, 5개 또는 6개)을 포함한다.
일부 실시양태에서, 항-TIGIT 항체는 서열식별번호: 4, 서열식별번호: 22, 서열식별번호: 40, 서열식별번호: 58, 서열식별번호: 76, 서열식별번호: 94, 서열식별번호: 112, 서열식별번호: 130, 서열식별번호: 148, 서열식별번호: 166, 서열식별번호: 184, 서열식별번호: 202, 서열식별번호: 221, 서열식별번호: 224, 서열식별번호: 226, 서열식별번호: 231, 서열식별번호: 233, 서열식별번호: 239, 서열식별번호: 243, 서열식별번호: 283, 서열식별번호: 284, 서열식별번호: 293, 서열식별번호: 294, 서열식별번호: 289, 또는 서열식별번호: 290 중 임의의 것의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR1 서열; 서열식별번호: 6, 서열식별번호: 24, 서열식별번호: 42, 서열식별번호: 60, 서열식별번호: 78, 서열식별번호: 96, 서열식별번호: 114, 서열식별번호: 132, 서열식별번호: 150, 서열식별번호: 168, 서열식별번호: 186, 서열식별번호: 204, 서열식별번호: 222, 서열식별번호: 225, 서열식별번호: 227, 서열식별번호: 229, 서열식별번호: 232, 서열식별번호: 234, 서열식별번호: 238, 서열식별번호: 240, 서열식별번호: 285, 서열식별번호: 297, 서열식별번호: 291, 또는 서열식별번호: 295 중 임의의 것의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR2 서열; 및 서열식별번호: 8, 서열식별번호: 26, 서열식별번호: 44, 서열식별번호: 62, 서열식별번호: 80, 서열식별번호: 98, 서열식별번호: 116, 서열식별번호: 134, 서열식별번호: 152, 서열식별번호: 170, 서열식별번호: 188, 서열식별번호: 206, 서열식별번호: 223, 서열식별번호: 228, 서열식별번호: 230, 서열식별번호: 235, 서열식별번호: 236, 서열식별번호: 237, 서열식별번호: 241, 서열식별번호: 242, 서열식별번호: 244, 서열식별번호: 286, 서열식별번호: 292, 또는 서열식별번호: 296 중 임의의 것의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR3 서열을 포함한다.
일부 실시양태에서, 항-TIGIT 항체는 서열식별번호: 13, 서열식별번호: 31, 서열식별번호: 49, 서열식별번호: 67, 서열식별번호: 85, 서열식별번호: 103, 서열식별번호: 121, 서열식별번호: 139, 서열식별번호: 157, 서열식별번호: 175, 서열식별번호: 193, 서열식별번호: 211, 또는 서열식별번호: 287 중 임의의 것의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR1 서열; 서열식별번호: 15, 서열식별번호: 33, 서열식별번호: 51, 서열식별번호: 69, 서열식별번호: 87, 서열식별번호: 105, 서열식별번호: 123, 서열식별번호: 141, 서열식별번호: 159, 서열식별번호: 177, 서열식별번호: 195, 서열식별번호: 213, 또는 서열식별번호: 288 중 임의의 것의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR2 서열; 및 서열식별번호: 17, 서열식별번호: 35, 서열식별번호: 53, 서열식별번호: 71, 서열식별번호: 89, 서열식별번호: 107, 서열식별번호: 125, 서열식별번호: 143, 서열식별번호: 161, 서열식별번호: 179, 서열식별번호: 197, 또는 서열식별번호: 215 중 임의의 것의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR3 서열을 포함한다.
일부 실시양태에서, 항-TIGIT 항체는
(i) 서열식별번호: 4, 서열식별번호: 22, 서열식별번호: 40, 서열식별번호: 58, 서열식별번호: 76, 서열식별번호: 94, 서열식별번호: 112, 서열식별번호: 130, 서열식별번호: 148, 서열식별번호: 166, 서열식별번호: 184, 서열식별번호: 202, 서열식별번호: 221, 서열식별번호: 224, 서열식별번호: 226, 서열식별번호: 231, 서열식별번호: 233, 서열식별번호: 239, 서열식별번호: 243, 서열식별번호: 283, 서열식별번호: 284, 서열식별번호: 293, 서열식별번호: 294, 서열식별번호: 289, 또는 서열식별번호: 290 중 임의의 것의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR1 서열; 및
(ii) 서열식별번호: 6, 서열식별번호: 24, 서열식별번호: 42, 서열식별번호: 60, 서열식별번호: 78, 서열식별번호: 96, 서열식별번호: 114, 서열식별번호: 132, 서열식별번호: 150, 서열식별번호: 168, 서열식별번호: 186, 서열식별번호: 204, 서열식별번호: 222, 서열식별번호: 225, 서열식별번호: 227, 서열식별번호: 229, 서열식별번호: 232, 서열식별번호: 234, 서열식별번호: 238, 서열식별번호: 240, 서열식별번호: 285, 서열식별번호: 297, 서열식별번호: 291, 또는 서열식별번호: 295 중 임의의 것의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR2 서열; 및
(iii) 서열식별번호: 8, 서열식별번호: 26, 서열식별번호: 44, 서열식별번호: 62, 서열식별번호: 80, 서열식별번호: 98, 서열식별번호: 116, 서열식별번호: 134, 서열식별번호: 152, 서열식별번호: 170, 서열식별번호: 188, 서열식별번호: 206, 서열식별번호: 223, 서열식별번호: 228, 서열식별번호: 230, 서열식별번호: 235, 서열식별번호: 236, 서열식별번호: 237, 서열식별번호: 241, 서열식별번호: 242, 서열식별번호: 244, 서열식별번호: 286, 서열식별번호: 292, 또는 서열식별번호: 296 중 임의의 것의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR3 서열; 및
(iv) 서열식별번호: 13, 서열식별번호: 31, 서열식별번호: 49, 서열식별번호: 67, 서열식별번호: 85, 서열식별번호: 103, 서열식별번호: 121, 서열식별번호: 139, 서열식별번호: 157, 서열식별번호: 175, 서열식별번호: 193, 서열식별번호: 211, 또는 서열식별번호: 287 중 임의의 것의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR1 서열; 및
(v) 서열식별번호: 15, 서열식별번호: 33, 서열식별번호: 51, 서열식별번호: 69, 서열식별번호: 87, 서열식별번호: 105, 서열식별번호: 123, 서열식별번호: 141, 서열식별번호: 159, 서열식별번호: 177, 서열식별번호: 195, 서열식별번호: 213, 또는 서열식별번호: 288 중 임의의 것의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR2 서열; 및
(vi) 서열식별번호: 17, 서열식별번호: 35, 서열식별번호: 53, 서열식별번호: 71, 서열식별번호: 89, 서열식별번호: 107, 서열식별번호: 125, 서열식별번호: 143, 서열식별번호: 161, 서열식별번호: 179, 서열식별번호: 197, 또는 서열식별번호: 215 중 임의의 것의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR3 서열
을 포함한다.
일부 실시양태에서, 항-TIGIT 항체는 (i) 서열식별번호: 4 또는 서열식별번호: 221의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR1 서열; (ii) 서열식별번호: 6 또는 서열식별번호: 222의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR2 서열; (iii) 서열식별번호: 8 또는 서열식별번호: 223의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR3 서열; (iv) 서열식별번호: 13의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR1 서열; (v) 서열식별번호: 15의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR2 서열; 및 (vi) 서열식별번호: 17의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR3 서열을 포함한다.
일부 실시양태에서, 항-TIGIT 항체는 (i) 서열식별번호: 58, 서열식별번호: 224, 또는 서열식별번호: 226 중 임의의 것의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR1 서열; (ii) 서열식별번호: 60, 서열식별번호: 225, 서열식별번호: 227, 또는 서열식별번호: 229 중 임의의 것의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR2 서열; (iii) 서열식별번호: 62, 서열식별번호: 228, 또는 서열식별번호: 230 중 임의의 것의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR3 서열; (iv) 서열식별번호: 67의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR1 서열; (v) 서열식별번호: 69의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR2 서열; 및 (vi) 서열식별번호: 71의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR3 서열을 포함한다.
일부 실시양태에서, 항-TIGIT 항체는 (i) 서열식별번호: 94, 서열식별번호: 231, 또는 서열식별번호: 233 중 임의의 것의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR1 서열; (ii) 서열식별번호: 96, 서열식별번호: 232, 또는 서열식별번호: 234 중 임의의 것의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR2 서열; (iii) 서열식별번호: 98, 서열식별번호: 235, 서열식별번호: 236, 또는 서열식별번호: 237 중 임의의 것의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR3 서열; (iv) 서열식별번호: 103의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR1 서열; (v) 서열식별번호: 105의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR2 서열; 및 (vi) 서열식별번호: 107의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR3 서열을 포함한다.
일부 실시양태에서, 항-TIGIT 항체는 (i) 서열식별번호: 166, 서열식별번호: 239, 또는 서열식별번호: 243 중 임의의 것의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR1 서열; (ii) 서열식별번호: 168, 서열식별번호: 238, 또는 서열식별번호: 240 중 임의의 것의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR2 서열; (iii) 서열식별번호: 170, 서열식별번호: 241, 서열식별번호: 242, 또는 서열식별번호: 244 중 임의의 것의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR3 서열; (iv) 서열식별번호: 175의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR1 서열; (v) 서열식별번호: 177의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR2 서열; 및 (vi) 서열식별번호: 179의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR3 서열을 포함한다.
일부 실시양태에서, 항-TIGIT 항체는
(a) 각각 서열식별번호: 4, 6, 8, 13, 15, 및 17;
(b) 각각 서열식별번호: 22, 24, 26, 31, 33, 및 35;
(c) 각각 서열식별번호: 40, 42, 44, 49, 51, 및 53;
(d) 각각 서열식별번호: 58, 60, 62, 67, 69, 및 71;
(e) 각각 서열식별번호: 76, 78, 80, 85, 87, 및 89;
(f) 각각 서열식별번호: 94, 96, 98, 103, 105, 및 107;
(g) 각각 서열식별번호: 112, 114, 116, 121, 123, 및 125;
(h) 각각 서열식별번호: 130, 132, 134, 139, 141, 및 143;
(i) 각각 서열식별번호: 148, 150, 152, 157, 159, 및 161;
(j) 각각 서열식별번호: 166, 168, 170, 175, 177, 및 179;
(k) 각각 서열식별번호: 184, 186, 188, 193, 195, 및 197;
(l) 각각 서열식별번호: 202, 204, 206, 211, 213, 및 215; 또는
(m) 각각 서열식별번호: 221, 222, 223, 13, 15, 및 17; 또는
(n) 각각 서열식별번호: 224, 225, 62, 67, 69, 및 71; 또는
(o) 각각 서열식별번호: 226, 227, 228, 67, 69, 및 71; 또는
(p) 각각 서열식별번호: 224, 229, 230, 67, 69, 및 71; 또는
(q) 각각 서열식별번호: 224, 227, 230, 67, 69, 및 71; 또는
(r) 각각 서열식별번호: 231, 232, 235, 103, 105, 및 107; 또는
(s) 각각 서열식별번호: 233, 234, 236, 103, 105, 및 107; 또는
(t) 각각 서열식별번호: 233, 234, 237, 103, 105, 및 107; 또는
(u) 각각 서열식별번호: 166, 238, 170, 175, 177, 및 179; 또는
(v) 각각 서열식별번호: 239, 240, 170, 175, 177, 및 179; 또는
(w) 각각 서열식별번호: 239, 240, 241, 175, 177, 및 179; 또는
(x) 각각 서열식별번호: 239, 240, 242, 175, 177, 및 179; 또는
(y) 각각 서열식별번호: 243, 168, 244, 175, 177, 및 179
의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR1-3 및 경쇄 CDR1-3을 포함한다.
일부 실시양태에서, 항-TIGIT 항체는 서열식별번호: 3, 서열식별번호: 5, 서열식별번호: 7, 서열식별번호: 9, 서열식별번호: 21, 서열식별번호: 23, 서열식별번호: 25, 서열식별번호: 27, 서열식별번호: 39, 서열식별번호: 41, 서열식별번호: 43, 서열식별번호: 45, 서열식별번호: 57, 서열식별번호: 59, 서열식별번호: 61, 서열식별번호: 63, 서열식별번호: 75, 서열식별번호: 77, 서열식별번호: 79, 서열식별번호: 81, 서열식별번호: 93, 서열식별번호: 95, 서열식별번호: 97, 서열식별번호: 99, 서열식별번호: 111, 서열식별번호: 113, 서열식별번호: 115, 서열식별번호: 117, 서열식별번호: 129, 서열식별번호: 131, 서열식별번호: 133, 서열식별번호: 135, 서열식별번호: 147, 서열식별번호: 149, 서열식별번호: 151, 서열식별번호: 153, 서열식별번호: 165, 서열식별번호: 167, 서열식별번호: 169, 서열식별번호: 171, 서열식별번호: 183, 서열식별번호: 185, 서열식별번호: 187, 서열식별번호: 189, 서열식별번호: 201, 서열식별번호: 203, 서열식별번호: 205, 또는 서열식별번호: 207의 아미노산 서열을 포함하는 하나 이상의 중쇄 프레임워크 영역 (FR1, FR2, FR3, 및/또는 FR4)을 포함한다.
일부 실시양태에서, 항-TIGIT 항체는 서열식별번호: 12, 서열식별번호: 14, 서열식별번호: 16, 서열식별번호: 18, 서열식별번호: 30, 서열식별번호: 32, 서열식별번호: 34, 서열식별번호: 36, 서열식별번호: 48, 서열식별번호: 50, 서열식별번호: 52, 서열식별번호: 54, 서열식별번호: 66, 서열식별번호: 68, 서열식별번호: 70, 서열식별번호: 72, 서열식별번호: 84, 서열식별번호: 86, 서열식별번호: 88, 서열식별번호: 90, 서열식별번호: 102, 서열식별번호: 104, 서열식별번호: 106, 서열식별번호: 108, 서열식별번호: 120, 서열식별번호: 122, 서열식별번호: 124, 서열식별번호: 126, 서열식별번호: 138, 서열식별번호: 140, 서열식별번호: 142, 서열식별번호: 144, 서열식별번호: 156, 서열식별번호: 158, 서열식별번호: 160, 서열식별번호: 162, 서열식별번호: 174, 서열식별번호: 176, 서열식별번호: 178, 서열식별번호: 180, 서열식별번호: 192, 서열식별번호: 194, 서열식별번호: 196, 서열식별번호: 198, 서열식별번호: 210, 서열식별번호: 212, 서열식별번호: 214, 또는 서열식별번호: 216의 아미노산 서열을 포함하는 하나 이상의 경쇄 프레임워크 영역 (FR1, FR2, FR3, 및/또는 FR4)을 포함한다.
일부 실시양태에서, 항-TIGIT 항체는 서열식별번호: 260, 266, 268, 270, 및 272로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄; 및 서열식별번호: 274의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함한다.
일부 실시양태에서, 본 개시내용의 항-TIGIT 항체는 US 2009/0258013, US 2016/0176963, US 2016/0376365, 또는 WO 2016/028656에 기술된 항체와 결합에 대해 경쟁하지 않는다. 일부 실시양태에서, 본 개시내용의 항-TIGIT 항체는 US 2009/0258013, US 2016/0176963, US 2016/0376365, 또는 WO 2016/028656에 기술된 항체와 동일한 에피토프에 결합하지 않는다.
항체 제조
TIGIT에 결합하는 항체를 제조하기 위해, 관련 기술 분야에 공지되어 있는 많은 기술을 사용할 수 있다. 예를 들어, 문헌 [Kohler & Milstein, Nature 256:495-497 (1975)]; [Kozbor et al., Immunology Today 4: 72 (1983)]; [Cole et al., pp. 77-96 in Monoclonal Antibodies and Cancer Therapy, Alan R. Liss, Inc. (1985)]; [Coligan, Current Protocols in Immunology (1991)]; [Harlow & Lane, Antibodies, A Laboratory Manual (1988)]; 및 [Goding, Monoclonal Antibodies: Principles and Practice (2nd ed. 1986))]을 참조한다.
관심 항체의 중쇄 및 경쇄를 코딩하는 유전자를 세포로부터 클로닝할 수 있고, 예를 들어, 모노클로날 항체를 코딩하는 유전자를 항체를 발현하는 하이브리도마로부터 클로닝하여 재조합 모노클로날 항체를 생산하는 데 사용할 수 있다. 하이브리도마 또는 형질 세포로부터 모노클로날 항체의 중쇄 및 경쇄를 코딩하는 유전자 라이브러리를 제조할 수도 있다. 추가적으로, 선택된 항원에 특이적으로 결합하는 항체 및 헤테로머 Fab 단편을 확인하기 위해 파지 또는 효모 디스플레이 기술을 사용할 수도 있다 (예를 들어, 문헌 [McCafferty et al., Nature 348:552-554 (1990)]; [Marks et al., Biotechnology 10:779-783 (1992)]; [Lou et al. (2010) PEDS 23:311]; 및 [Chao et al., Nature Protocols, 1:755-768 (2006)]을 참조한다). 대안적으로, 효모-기반 항체 제시 시스템, 예컨대 문헌 [Xu et al., Protein Eng Des Sel, 2013, 26:663-670]; WO 2009/036379; WO 2010/105256; 및 WO 2012/009568에 예를 들어 개시된 것을 사용하여 항체 및 항체 서열을 단리 및/또는 확인할 수 있다. 중쇄 및 경쇄 유전자 생성물의 무작위 조합으로 상이한 항원 특이성을 갖는 항체들의 대형 풀이 생성된다 (예를 들어, 문헌 [Kuby, Immunology (3rd ed. 1997)]을 참조한다). 단일쇄 항체 또는 재조합 항체의 생산을 위한 기술 (미국 특허 4,946,778, 미국 특허 번호 4,816,567)을 개조하여 항체를 생산할 수도 있다. 항체는 이중특이적으로, 즉, 2개의 상이한 항원을 인식할 수 있게 제조될 수도 있다 (예를 들어, WO 93/08829, 문헌 [Traunecker et al., EMBO J. 10:3655-3659 (1991)]; 및 [Suresh et al., Methods in Enzymology 121:210 (1986)]을 참조한다). 항체는 또한 이종접합체, 예를 들어, 2개의 공유결합으로 연결된 항체, 또는 면역독소에 공유결합으로 결합된 항체일 수 있다 (예를 들어, 미국 특허 번호 4,676,980, WO 91/00360; 및 WO 92/200373을 참조한다).
원핵생물 및 진핵생물 발현 시스템을 포함하는 다수의 발현 시스템을 사용하여 항체가 생산될 수 있다. 일부 실시양태에서, 발현 시스템은 포유동물 세포, 예컨대 하이브리도마, 또는 CHO 세포이다. 많은 이러한 시스템이 상업적 공급자로부터 광범위하게 입수가능하다. 항체가 중쇄 및 경쇄 둘 다를 포함하는 실시양태에서, 중쇄 및 중쇄 및 경쇄는 단일 벡터를 사용하여, 예를 들어, 디-시스트론 발현 단위에서 발현될 수 있거나, 또는 상이한 프로모터들의 제어 하에 있을 수 있다. 다른 실시양태에서, 중쇄 및 경쇄 영역은 별개의 벡터를 사용하여 발현될 수 있다. 본원에 기술된 바와 같은 중쇄 및 경쇄는 임의적으로 N-말단에 메티오닌을 포함할 수 있다.
일부 실시양태에서, 항체 단편 (예컨대 Fab, Fab', F(ab')2, scFv, 또는 디아바디)이 생성된다. 항체 단편의 생산을 위해 다양한 기술이 개발되었다. 전통적으로, 이러한 단편은 무손상 항체의 단백질분해성 소화를 통해 유도되었다 (예를 들어, 문헌 [Morimoto et al., J. Biochem. Biophys. Meth., 24:107-117 (1992)]; 및 [Brennan et al., Science, 229:81 (1985)]을 참조한다). 그러나, 이러한 단편은 이제 재조합 숙주 세포를 사용하여 직접적으로 생산될 수 있다. 예를 들어, 항체 단편이 항체 파지 라이브러리로부터 단리될 수 있다. 대안적으로, Fab'-SH 단편이 이. 콜라이(E. coli) 세포로부터 직접적으로 회수되어, F(ab')2 단편을 형성하도록 화학적으로 커플링될 수 있다 (예를 들어, 문헌 [Carter et al., BioTechnology, 10:163-167 (1992)]을 참조한다). 또 다른 접근법에 따르면, F(ab')2 단편이 재조합 숙주 세포 배양물로부터 직접적으로 단리될 수 있다. 항체 단편의 생산을 위한 기타 기술이 관련 기술 분야의 기술자에게 명백할 것이다. 다른 실시양태에서, 선택된 항체는 단일쇄 Fv 단편 (scFv)이다. 예를 들어, PCT 공개 번호 WO 93/16185; 및 미국 특허 번호 5,571,894 및 5,587,458을 참조한다. 항체 단편은, 예를 들어, 미국 특허 번호 5,641,870에 기술된 바와 같은 선형 항체일 수도 있다.
일부 실시양태에서, 항체 또는 항체 단편은 생체 내에서의 반감기 연장을 제공하기 위해 또 다른 분자, 예를 들어, 폴리에틸렌 글리콜 (PEG화) 또는 혈청 알부민에 접합될 수 있다. 항체 단편의 PEG화의 예가 문헌 [Knight et al. Platelets 15:409, 2004] (압식시맙의 경우); [Pedley et al., Br. J. Cancer 70:1126, 1994] (항-CEA 항체의 경우); [Chapman et al., Nature Biotech. 17:780, 1999]; 및 [Humphreys, et al., Protein Eng. Des. 20: 227, 2007]에서 제공된다.
일부 실시양태에서, 본원에 기술된 바와 같은 항-TIGIT 항체를 포함하는 다중특이적 항체, 예를 들어, 이중특이적 항체가 제공된다. 다중특이적 항체는 적어도 2개의 상이한 부위에 대한 결합 특이성을 갖는 항체이다. 일부 실시양태에서, 다중특이적 항체는 TIGIT (예를 들어, 인간 TIGIT)에 대한 결합 특이성을 갖고, 적어도 1개의 다른 항원에 대한 결합 특이성을 갖는다. 다중특이적 항체를 제조하는 방법은 숙주 세포에서의 2쌍의 중쇄 및 경쇄의 재조합 공동-발현 (예를 들어, 문헌 [Zuo et al., Protein Eng Des Sel, 2000, 13:361-367]을 참조한다); "놉-인투-홀(knobs-into-holes)" 조작 (예를 들어, 문헌 [Ridgway et al., Protein Eng Des Sel, 1996, 9:617-721]을 참조한다); "디아바디" 기술 (예를 들어, 문헌 [Hollinger et al., PNAS (USA), 1993, 90:6444-6448]을 참조한다); 및 분자내 삼량체화 (예를 들어, 문헌 [Alvarez-Cienfuegos et al., Scientific Reports, 2016, doi:/10.1038/srep28643]을 참조한다)를 포함하지만, 이에 제한되지 않는다; 문헌 [Spiess et al., Molecular Immunology, 2015, 67(2), Part A:95-106]을 또한 참조한다.
일부 실시양태에서, 본원에 기술된 바와 같은 항-TIGIT 항체를 포함하는 항체-약물 접합체가 제공된다. 항체-약물 접합체에서, 항원 (예를 들어, TIGIT)에 대한 결합 특이성을 갖는 모노클로날 항체가 세포독성 약물에 공유결합으로 연결된다. 항체-약물 접합체를 제조하는 방법이, 예를 들어, 문헌 [Chudasama et al., Nature Chemistry, 2016, 8:114-119]; WO 2013/068874; 및 US 8,535,678에서 기술된다.
불변 영역의 선택
본원에 기술된 항-TIGIT 항체의 중쇄 및 경쇄 가변 영역이 인간 불변 영역의 적어도 일부분에 연결될 수 있다. 불변 영역의 선택은, 부분적으로, 항체-의존적 세포-매개 세포독성, 항체 의존적 세포성 포식작용 및/또는 보체 의존적 세포독성을 원하는지 여부에 의존적이다. 예를 들어, 인간 이소형 IgG1 및 IgG3은 보체-의존적 세포독성이 강하고, 인간 이소형 IgG2는 보체-의존적 세포독성이 약하며, 인간 IgG4는 보체-의존적 세포독성이 결여된다. 또한 인간 IgG1 및 IgG3은 인간 IgG2 및 IgG4보다 더 강한 세포 매개 이펙터 기능을 유도한다. 경쇄 불변 영역은 람다 또는 카파일 수 있다. 항체는 2개의 경쇄 및 2개의 중쇄를 포함하는 사량체로서, 별개의 중쇄, 경쇄로서, Fab, Fab', F(ab')2, 및 Fv로서, 또는 중쇄 및 경쇄 가변 도메인이 스페이서를 통해 연결된 단일쇄 항체로서 발현될 수 있다.
인간 불변 영역은 상이한 개체들 사이에서 알로타입(allotype) 변이 및 이소알로타입(isoallotype) 변이를 나타내고, 즉, 상이한 개체들에서 불변 영역이 하나 이상의 다형성 위치에서 상이할 수 있다. 이소알로타입은 이소알로타입을 인식하는 혈청이 하나 이상의 다른 이소형의 비-다형성 영역에 결합한다는 점에서 알로타입과 상이하다.
경쇄 및/또는 중쇄의 아미노 또는 카르복시 말단의 1개 또는 여러 개의 아미노산, 예컨대 중쇄의 C-말단 라이신이 분자의 일부분 또는 분자 모두에서 상실되거나 또는 유도체화될 수 있다. 이펙터 기능 예컨대 보체-매개 세포독성 또는 ADCC를 감소 또는 증가시키기 위해 (예를 들어, 미국 특허 번호 5,624,821 (Winter et al.); 미국 특허 번호 5,834,597 (Tso et al.); 및 문헌 [Lazar et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 103:4005, 2006]을 참조한다), 또는 인간에서의 반감기를 연장하기 위해 (예를 들어, 문헌 [Hinton et al., J. Biol. Chem. 279:6213, 2004]을 참조한다), 불변 영역에서 치환이 이루어질 수 있다.
예시적인 치환은 천연 아미노산의 시스테인 잔기로의 아미노산 치환이 아미노산 위치 234, 235, 237, 239, 267, 298, 299, 326, 330, 또는 332에서 도입되는 것, 바람직하게는 인간 IgG1 이소형에서의 S239C 돌연변이를 포함한다 (번호매김은 EU 인덱스 (Kabat, Sequences of Proteins of Immunological Interest (National Institutes of Health, Bethesda, MD, 1987 and 1991)에 따른다; 본원에 참조로 포함된 US 20100158909를 참조한다). 추가적인 시스테인 잔기의 존재는 쇄간 디술피드 결합 형성을 허용할 수 있다. 이러한 쇄간 디술피드 결합 형성은 입체 장애를 야기할 수 있고, 이에 의해 Fc 영역-FcγR 결합 상호작용의 친화도를 감소시킨다. IgG 불변 영역의 Fc 영역에 또는 이에 인접하여 도입된 시스테인 잔기(들)는 치료제에 대한 접합을 위한 부위로서의 역할을 할 수도 있다 (즉, 티올 특이적 시약 예컨대 약물의 말레이미드 유도체를 사용하여 세포독성 약물을 커플링시킴). 치료제의 존재는 입체 장애를 야기하고, 이에 의해 Fc 영역-FcγR 결합 상호작용의 친화도를 추가로 감소시킨다. 위치 234, 235, 236 및/또는 237 중 임의의 것에서의 다른 치환은 Fcγ 수용체, 특히 FcγRI 수용체에 대한 친화도를 감소시킨다 (예를 들어, US 6,624,821, US 5,624,821을 참조한다). 돌연변이의 바람직한 조합은 S239D, A330L 및 I332E이고, 이는 FcγRIIIA에 대한 Fc 도메인의 친화도를 증가시키고, 결과적으로 ADCC를 증가시킨다.
항체의 생체 내 반감기 또한 그의 이펙터 기능에 영향을 미칠 수 있다. 항체의 반감기가 그의 치료 활성을 변형시키도록 증가 또는 감소될 수 있다. FcRn은 β2-마이크로글로불린과 비-공유결합으로 회합되는 MHC 클래스 I 항원과 구조적으로 유사한 수용체이다. FcRn은 IgG의 이화작용 및 조직을 가로지르는 그의 세포통과(transcytosis)를 조절한다 (Ghetie and Ward, 2000, Annu. Rev. Immunol. 18:739-766; Ghetie and Ward, 2002, Immunol. Res. 25:97-113). pH 6.0 (세포내 소포의 pH)에서는 IgG-FcRn 상호작용이 발생하지만, pH 7.4 (혈액의 pH)에서는 그렇지 않다; 이러한 상호작용은 IgG가 순환계로 다시 재순환될 수 있게 한다 (Ghetie and Ward, 2000, Ann. Rev. Immunol. 18:739-766; Ghetie and Ward, 2002, Immunol. Res. 25:97-113). FcRn 결합에서 수반되는 인간 IgG1 상의 영역이 맵핑되었다 (Shields et al., 2001, J. Biol. Chem. 276:6591-604). 인간 IgG1의 위치 Pro238, Thr256, Thr307, Gln311, Asp312, Glu380, Glu382, 또는 Asn434에서의 알라닌 치환은 FcRn 결합을 강화한다 (Shields et al., 2001, J. Biol. Chem. 276:6591-604). 이러한 치환을 보유하는 IgG1 분자는 혈청 반감기가 더 길다. 결과적으로, 이러한 변형된 IgG1 분자는 미변형 IgG1에 비교하여 더 긴 기간에 걸쳐 그의 이펙터 기능을 수행할 수 있고, 따라서 그의 치료 효능을 발휘할 수 있다. FcRn에 대한 결합을 증가시키기 위한 다른 예시적인 치환은 위치 250의 Gln 및/또는 위치 428의 Leu을 포함한다. 불변 영역 내의 모든 위치에 대해 EU 번호매김이 사용된다.
보존된 Asn297에 공유결합으로 부착된 올리고당류는 FcγR에 결합하는 IgG의 Fc 영역의 능력에서 수반된다 (Lund et al., 1996, J. Immunol. 157:4963-69; Wright and Morrison, 1997, Trends Biotechnol. 15:26-31). IgG 상의 이러한 당형의 조작은 IgG-매개 ADCC를 유의하게 개선시킬 수 있다. 이러한 당형에 이분성 N-아세틸글루코사민 변형을 부가하는 것 (Umana et al., 1999, Nat. Biotechnol. 17:176-180; Davies et al., 2001, Biotech. Bioeng. 74:288-94) 또는 이러한 당형으로부터 푸코스를 제거하는 것 (Shields et al., 2002, J. Biol. Chem. 277:26733-40; Shinkawa et al., 2003, J. Biol. Chem. 278:6591-604; Niwa et al., 2004, Cancer Res. 64:2127-33)은 IgG Fc와 FcγR 사이의 결합을 개선시키고, 이에 의해 Ig-매개 ADCC 활성을 강화하는 IgG Fc 조작의 2가지 예이다.
인간 IgG1 Fc 영역의 용매-노출 아미노산의 체계적인 치환으로 FcγR 결합 친화도가 변경된 IgG 변이체가 생성되었다 (Shields et al., 2001, J. Biol. Chem. 276:6591-604). 모체 IgG1에 비교했을 때, Thr256/Ser298, Ser298/Glu333, Ser298/Lys334, 또는 Ser298/Glu333/Lys334에서의 Ala으로의 치환을 수반하는 이러한 변이체들의 서브세트가 FcγR에 대한 결합 친화도 및 ADCC 활성 둘 다의 증가를 입증하였다 (Shields et al., 2001, J. Biol. Chem. 276:6591-604; Okazaki et al., 2004, J. Mol. Biol. 336:1239-49).
Lys326 및 Glu333에서의 치환에 의해 항체의 보체 고정 활성 (C1q 결합 및 CDC 활성 둘 다)이 개선될 수 있다 (Idusogie et al., 2001, J. Immunol. 166:2571-2575). 인간 IgG2 백본 상에서의 동일한 치환은 C1q에 불량하게 결합하고 보체 활성화 활성이 심하게 결핍된 항체 이소형을 C1q에 결합하고 CDC를 매개하는 것 둘 다가 가능한 것으로 전환시킬 수 있다 (Idusogie et al., 2001, J. Immunol. 166:2571-75). 항체의 보체 고정 활성을 개선하기 위해 몇몇 다른 방법이 또한 적용되었다. 예를 들어, IgM의 18-아미노산 카르복실-말단 꼬리 조각을 IgG의 카르복실-말단에 그래프팅하는 것이 그의 CDC 활성을 크게 강화한다. 이것은 심지어 IgG4로도 관찰되는데, 이는 일반적으로 검출가능한 CDC 활성이 없다 (Smith et al., 1995, J. Immunol. 154:2226-36). 또한, IgG1 중쇄의 카르복시-말단에 가깝게 위치하는 Ser444를 Cys로 치환하는 것이 단량체성 IgG1에 비해 CDC 활성이 200배 증가된 IgG1의 꼬리-대-꼬리 이량체화를 유도하였다 (Shopes et al., 1992, J. Immunol. 148:2918-22). 추가적으로, C1q에 대한 특이성을 갖는 이중특이적 디아바디 구축물이 CDC 활성을 또한 부여한다 (Kontermann et al., 1997, Nat. Biotech. 15:629-31).
중쇄의 아미노산 잔기 318, 320, 및 322 중 적어도 1개를 상이한 측쇄를 갖는 잔기, 예컨대 Ala으로 돌연변이시키는 것에 의해 보체 활성이 감소될 수 있다. 이러한 3개의 잔기 중 어느 하나 대신의 다른 알킬-치환 비-이온성 잔기, 예컨대 Gly, Ile, Leu, 또는 Val, 또는 방향족 비-극성 잔기 예컨대 Phe, Tyr, Trp 및 Pro 또한 C1q 결합을 감소 또는 폐지시켰다. C1q 결합 활성을 감소 또는 폐지시키기 위해, Ser, Thr, Cys, 및 Met이 잔기 320 및 322에서 사용될 수 있지만, 318은 그렇지 않다. 318 (Glu) 잔기를 극성 잔기로 교체하는 것은 C1q 결합 활성을 변형시킬 수 있지만, 폐지시킬 수는 없다. 잔기 297 (Asn)을 Ala로 교체하는 것은 용해 활성의 제거를 초래하지만, C1q에 대한 친화도를 약간만 감소시킨다 (약 3배 더 약함). 이러한 변경은 글리코실화 부위 및 보체 활성화에 요구되는 탄수화물의 존재를 파괴한다. 이러한 부위에서의 임의의 다른 치환 또한 글리코실화 부위를 파괴한다. 하기의 돌연변이 및 그의 임의의 조합 또한 C1q 결합을 감소시킨다: D270A, K322A, P329A, 및 P311S (WO 06/036291을 참조한다).
인간 불변 영역에 대한 언급은 임의의 천연 알로타입 또는 천연 알로타입 내의 다형성 위치를 점유하는 잔기의 임의의 순열의 불변 영역을 포함한다. 또한, 천연 인간 불변 영역에 비교하여 1, 2, 5, 또는 10개 이하의 돌연변이, 예컨대 Fcγ 수용체 결합을 감소시키거나 또는 FcRN에 대한 결합을 증가시키기 위한 상기 지시된 것들이 존재할 수 있다.
핵산, 벡터, 및 숙주 세포
일부 실시양태에서, 재조합 방법을 사용하여 본원에 기술된 바와 같은 항-TIGIT 항체가 제조된다. 따라서, 일부 측면에서, 본 발명은 본원에 기술된 바와 같은 항-TIGIT 항체 중 임의의 것 (예를 들어, 본원에 기술된 CDR 중 임의의 하나 이상)을 코딩하는 핵산 서열을 포함하는 단리된 핵산; 이러한 핵산을 포함하는 벡터; 및 항체-코딩 핵산을 복제하고/하거나 항체를 발현시키는 데 사용되는, 이러한 핵산이 도입된 숙주 세포를 제공한다. 일부 실시양태에서, 숙주 세포는 진핵생물, 예를 들어, 차이니즈 햄스터 난소 (CHO) 세포; 또는 인간 세포이다.
일부 실시양태에서, 폴리뉴클레오티드 (예를 들어, 단리된 폴리뉴클레오티드)는 본원에 기술된 항체를 코딩하는 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 폴리뉴클레오티드는 서열 표에 개시된 하나 이상의 아미노산 서열 (예를 들어, CDR, 중쇄, 경쇄, 및/또는 프레임워크 영역)을 코딩하는 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 폴리뉴클레오티드는 하기 서열 표에 개시된 서열 (예를 들어, CDR, 중쇄, 경쇄, 또는 프레임워크 영역 서열)에 대한 적어도 85%의 서열 동일성 (예를 들어, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99%의 서열 동일성)을 갖는 아미노산 서열을 코딩하는 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
일부 실시양태에서, 폴리뉴클레오티드 (예를 들어, 단리된 폴리뉴클레오티드)는 본원에 기술된 바와 같은 중쇄 가변 영역을 코딩하는 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 폴리뉴클레오티드는 서열식별번호: 1, 서열식별번호: 19, 서열식별번호: 37, 서열식별번호: 55, 서열식별번호: 73, 서열식별번호: 91, 서열식별번호: 109, 서열식별번호: 127, 서열식별번호: 145, 서열식별번호: 163, 서열식별번호: 181, 서열식별번호: 199, 서열식별번호: 245, 서열식별번호: 246, 서열식별번호: 247, 서열식별번호: 248, 서열식별번호: 249, 서열식별번호: 250, 서열식별번호: 251, 서열식별번호: 252, 서열식별번호: 253, 서열식별번호: 254, 서열식별번호: 255, 서열식별번호: 256, 또는 서열식별번호: 257에 대한 적어도 90%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역을 코딩하는 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 폴리뉴클레오티드는 서열식별번호: 2, 서열식별번호: 20, 서열식별번호: 38, 서열식별번호: 56, 서열식별번호: 74, 서열식별번호: 92, 서열식별번호: 110, 서열식별번호: 128, 서열식별번호: 146, 서열식별번호: 164, 서열식별번호: 182, 서열식별번호: 200, 서열식별번호: 259, 서열식별번호: 265, 서열식별번호: 267, 서열식별번호: 269, 또는 서열식별번호: 271에 대한 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
일부 실시양태에서, 폴리뉴클레오티드 (예를 들어, 단리된 폴리뉴클레오티드)는 본원에 기술된 바와 같은 경쇄 가변 영역을 코딩하는 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 폴리뉴클레오티드는 서열식별번호: 10, 서열식별번호: 28, 서열식별번호: 46, 서열식별번호: 64, 서열식별번호: 82, 서열식별번호: 100, 서열식별번호: 118, 서열식별번호: 136, 서열식별번호: 154, 서열식별번호: 172, 서열식별번호: 190, 또는 서열식별번호: 208에 대한 적어도 90%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 코딩하는 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 폴리뉴클레오티드는 서열식별번호: 11, 서열식별번호: 29, 서열식별번호: 47, 서열식별번호: 65, 서열식별번호: 83, 서열식별번호: 101, 서열식별번호: 119, 서열식별번호: 137, 서열식별번호: 155, 서열식별번호: 173, 서열식별번호: 191, 서열식별번호: 209, 또는 서열식별번호: 273에 대한 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
일부 실시양태에서, 폴리뉴클레오티드는 본원에 기술된 바와 같은 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역을 코딩하는 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 폴리뉴클레오티드는 서열식별번호: 1, 서열식별번호: 19, 서열식별번호: 37, 서열식별번호: 55, 서열식별번호: 73, 서열식별번호: 91, 서열식별번호: 109, 서열식별번호: 127, 서열식별번호: 145, 서열식별번호: 163, 서열식별번호: 181, 서열식별번호: 199, 서열식별번호: 245, 서열식별번호: 246, 서열식별번호: 247, 서열식별번호: 248, 서열식별번호: 249, 서열식별번호: 250, 서열식별번호: 251, 서열식별번호: 252, 서열식별번호: 253, 서열식별번호: 254, 서열식별번호: 255, 서열식별번호: 256, 또는 서열식별번호: 257에 대한 적어도 90%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역을 코딩하고, 서열식별번호: 10, 서열식별번호: 28, 서열식별번호: 46, 서열식별번호: 64, 서열식별번호: 82, 서열식별번호: 100, 서열식별번호: 118, 서열식별번호: 136, 서열식별번호: 154, 서열식별번호: 172, 서열식별번호: 190, 또는 서열식별번호: 208에 대한 적어도 90%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 코딩하는 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 폴리뉴클레오티드는 서열식별번호: 2, 서열식별번호: 20, 서열식별번호: 38, 서열식별번호: 56, 서열식별번호: 74, 서열식별번호: 92, 서열식별번호: 110, 서열식별번호: 128, 서열식별번호: 146, 서열식별번호: 164, 서열식별번호: 182, 서열식별번호: 200, 서열식별번호: 259, 서열식별번호: 265, 서열식별번호: 267, 서열식별번호: 269, 또는 서열식별번호: 271에 대한 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 뉴클레오티드 서열을 포함하고, 서열식별번호: 11, 서열식별번호: 29, 서열식별번호: 47, 서열식별번호: 65, 서열식별번호: 83, 서열식별번호: 101, 서열식별번호: 119, 서열식별번호: 137, 서열식별번호: 155, 서열식별번호: 173, 서열식별번호: 191, 서열식별번호: 209, 또는 서열식별번호: 273에 대한 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 뉴클레오티드 서열을 추가로 포함한다.
추가 측면에서, 본원에 기술된 바와 같은 항-TIGIT 항체를 제조하는 방법이 제공된다. 일부 실시양태에서, 방법은 본원에 기술된 바와 같은 숙주 세포 (예를 들어, 본원에 기술된 바와 같은 폴리뉴클레오티드 또는 벡터를 발현하는 숙주 세포)를 항체 발현에 적절한 조건 하에 배양하는 것을 포함한다. 일부 실시양태에서, 후속적으로 항체가 숙주 세포 (또는 숙주 세포 배양 배지)로부터 회수된다.
본 개시내용의 항체 또는 그의 단편을 코딩하는 폴리뉴클레오티드를 함유하는 적절한 벡터는 클로닝 벡터 및 발현 벡터를 포함한다. 선택된 클로닝 벡터는 사용하려는 숙주 세포에 따라 다양할 수 있는 한편, 유용한 클로닝 벡터는 일반적으로 자가-복제 능력을 갖고/거나, 특정한 제한 엔도뉴클레아제에 대한 단일 표적을 지닐 수 있고/거나, 벡터를 함유하는 클론을 선택하는 데 사용될 수 있는 마커에 대한 유전자를 보유할 수 있다. 예는 플라스미드 및 박테리아 바이러스, pUC18, pUC19, 블루스크립트(Bluescript) (예를 들어, pBS SK+) 및 그의 유도체, mpl8, mpl9, pBR322, pMB9, ColE1, pCR1, RP4, 파지 DNA, 및 셔틀 벡터 예컨대 pSA3 및 pAT28을 포함한다. 클로닝 벡터는 상업적인 공급원 예컨대 바이오래드(BioRad), 스트라타진(Stratagene), 및 인비트로젠(Invitrogen)으로부터 입수가능하다.
일반적으로 발현 벡터는 본 개시내용의 핵산을 함유하는 복제가능한 폴리뉴클레오티드 구축물이다. 발현 벡터는 숙주 세포 내에서 에피솜으로서 또는 염색체 DNA의 통합 부분으로서 복제될 수 있다. 적절한 발현 벡터는 플라스미드, 아데노바이러스, 아데노-연관 바이러스, 레트로바이러스를 포함하는 바이러스 벡터, 및 임의의 다른 벡터를 포함하지만, 이에 제한되지 않는다.
재조합 항체의 발현
항체는 전형적으로 재조합 발현에 의해 생산된다. 재조합 폴리뉴클레오티드 구축물은 자연적으로 회합되거나 또는 이종성인 프로모터 영역을 포함하는, 항체 쇄의 코딩 서열에 작동가능하게 연결된 발현 제어 서열을 전형적으로 포함한다. 바람직하게는, 발현 제어 서열은 진핵생물 숙주 세포를 형질전환 또는 형질감염시킬 수 있는 벡터 내의 진핵생물 프로모터 시스템이다. 벡터가 적합한 숙주 내로 도입되었으면, 숙주가 뉴클레오티드 서열의 고수준 발현, 및 교차 반응 항체의 수집 및 정제에 적절한 조건 하에 유지된다.
포유동물 세포는 면역글로불린 또는 그의 단편을 코딩하는 뉴클레오티드 분절을 발현시키기 위한 바람직한 숙주이다. 문헌 [Winnacker, From Genes to Clones, (VCH Publishers, NY, 1987)]을 참조한다. 무손상 이종 단백질을 분비할 수 있는 다수의 적절한 숙주 세포주가 관련 기술 분야에서 개발되었고, 이는 CHO 세포주 (예를 들어, DG44), 다양한 COS 세포주, HeLa 세포, HEK293 세포, L 세포, 및 Sp2/0 및 NS0 포함하는 비-항체-생산 골수종을 포함한다. 바람직하게는, 세포는 비-인간이다. 이러한 세포에 대한 발현 벡터는 발현 제어 서열, 예컨대 복제 기원, 프로모터, 인핸서 (Queen et al., Immunol. Rev. 89:49 (1986)), 및 필요한 프로세싱 정보 부위, 예컨대 리보솜 결합 부위, RNA 스플라이스 부위, 폴리아데닐화 부위, 및 전사 종결인자 서열을 포함할 수 있다. 바람직한 발현 제어 서열은 내인성 유전자, 사이토메갈로바이러스, SV40, 아데노바이러스, 소 유두종바이러스 등으로부터 유래된 프로모터이다. 문헌 [Co et al., J. Immunol. 148:1149 (1992)]을 참조한다.
발현되었으면, 항체를 HPLC 정제, 칼럼 크로마토그래피, 겔 전기영동 등을 포함하는 관련 기술 분야의 표준 절차에 따라 정제할 수 있다 (일반적으로, 문헌 [Scopes, Protein Purification (Springer-Verlag, NY, 1982)]을 참조한다).
글리코실화 변이체
항체는 그의 불변 영역 내의 보존된 위치에서 글리코실화될 수 있다 (Jefferis and Lund, (1997) Chem. Immunol. 65:111-128; Wright and Morrison, (1997) TibTECH 15:26-32). 면역글로불린의 올리고당류 측쇄는 단백질의 기능 (Boyd et al., (1996) Mol. Immunol. 32:1311-1318; Wittwe and Howard, (1990) Biochem. 29:4175-4180), 및 당단백질의 입체형상 및 제시된 3차원 표면에 영향을 미칠 수 있는 당단백질의 일부분들 사이의 분자내 상호작용 (상기 문헌 [Hefferis and Lund]; 문헌 [Wyss and Wagner, (1996) Current Opin. Biotech. 7:409-416])에 영향을 미친다. 올리고당류는 소정의 당단백질을 특이적인 인식 구조를 기초로 특정한 분자로 표적화하는 역할을 할 수도 있다. 예를 들어, 비-갈락토실화 IgG에서, 올리고당류 모이어티가 CH2-사이 공간 밖으로 "플립(flip)"되고, 말단 N-아세틸글루코사민 잔기가 만노스 결합 단백질에 결합하도록 이용가능하게 된다는 것이 보고되었다 (Malhotra et al., (1995) Nature Med. 1:237-243). 차이니즈 햄스터 난소 (CHO) 세포에서 생산된 CAMPATH-1H (인간 림프구의 CDw52 항원을 인식하는 재조합 인간화 뮤린 모노클로날 IgG1 항체)로부터의 올리고당류의 글리코펩티다제에 의한 제거는 보체 매개 용해 (CMCL)의 완전한 감소를 초래한 한편 (Boyd et al., (1996) Mol. Immunol. 32:1311-1318), 뉴로아미니다제를 이용한 시알산 잔기의 선택적 제거는 DMCL의 상실을 초래하지 않았다. 항체의 글리코실화는 항체-의존적 세포성 세포독성 (ADCC)에 영향을 미치는 것으로 또한 보고되었다. 특히, 이분성 GlcNAc의 형성을 촉매하는 글리코실트랜스퍼라제인 β(1,4)-N-아세틸글루코사미닐트랜스퍼라제 III (GnTIII)의 발현이 테트라사이클린으로 조절된 CHO 세포는 ADCC 활성을 갖는 것으로 보고되었다 (Umana et al. (1999) Mature Biotech. 17:176-180).
항체의 글리코실화는 전형적으로 N-연결 또는 O-연결이다. N-연결은 탄수화물 모이어티가 아스파라긴 잔기에 부착되는 것을 지칭한다. 트리펩티드 서열 아스파라긴-X-세린 및 아스파라긴-X-트레오닌 [식 중, X는 프롤린을 제외한 임의의 아미노산이다]이 아스파라긴 측쇄에 탄수화물 모이어티를 효소로 부착시키기 위한 인식 서열이다. 따라서, 폴리펩티드 내에 이러한 트리펩티드 서열 중 하나가 존재하는 것은 잠재적인 글리코실화 부위를 생성시킨다. O-연결 글리코실화는 N-아세틸갈락토스아민, 갈락토스 또는 자일로스 당 중 하나가 가장 통상적으로는 세린 또는 트레오닌이지만, 5-히드록시프롤린 또는 5-히드록시라이신 또한 사용될 수 있는 히드록시아미노산에 부착되는 것을 지칭한다.
항체의 글리코실화 변이체는 항체의 글리코실화 패턴이 변경된 변이체이다. 변경은 항체에서 발견되는 하나 이상의 탄수화물 모이어티를 결실시키는 것, 항체에 하나 이상의 탄수화물 모이어티를 부가하는 것, 글리코실화의 조성 (글리코실화 패턴), 글리코실화 정도 등을 변화시키는 것을 의미한다.
항체에 글리코실화 부위를 부가하는 것은 상기 언급된 트리펩티드 서열 중 하나 이상을 함유하도록 아미노산 서열을 변경시키는 것에 의해 달성될 수 있다 (N-연결 글리코실화 부위의 경우). 변경은 원래의 항체의 서열에 대한 하나 이상의 세린 또는 트레오닌 잔기의 부가 또는 치환에 의해 이루어질 수도 있다 (O-연결 글리코실화 부위의 경우). 유사하게, 항체의 천연 글리코실화 부위 내에서의 아미노산 변경에 의해 글리코실화 부위의 제거가 달성될 수 있다.
일반적으로 아미노산 서열은 기저 핵산 서열을 변경시키는 것에 의해 변경된다. 이러한 방법은 천연 공급원으로부터의 단리 (자연-발생 아미노산 아미노산 서열 변이체의 경우), 또는 항체의 이전에 제조된 변이체 또는 비-변이체 버전의 올리고뉴클레오티드-매개 (또는 부위-지정) 돌연변이유발, PCR 돌연변이유발, 및 카세트 돌연변이유발에 의한 제조를 포함한다.
아미노산 서열 또는 기저 뉴클레오티드 서열을 변경시키지 않으면서 항체의 글리코실화 (글리코실화 패턴 포함)가 변경될 수도 있다. 글리코실화는 주로 항체를 발현시키는 데 사용된 숙주 세포에 의존적이다. 잠재적인 치료제로서의 재조합 당단백질, 예를 들어, 항체의 발현에 사용된 세포 유형은 거의 천연 세포가 아니기 때문에, 항체의 글리코실화 패턴에서의 상당한 변이가 예상될 수 있다. 예를 들어, 문헌 [Hse et al., (1997) J. Biol. Chem. 272:9062-9070]을 참조한다. 숙주 세포의 선택에 더하여, 항체의 재조합 생산 동안 글리코실화에 영향을 미치는 요인은 성장 방식, 배지 제형, 배양 밀도, 산소처리, pH, 정제 방식 등을 포함한다. 올리고당류 생산에서 수반되는 특정 효소를 도입하거나 과발현시키는 것을 포함하여 다양한 방법이 특정 숙주 생물에서 달성되는 글리코실화 패턴을 변경시키기 위해 제안되었다 (미국 특허 번호 5047335; 5510261; 5278299). 예를 들어, 엔도글리코시다제 H (Endo H)를 사용하여, 글리코실화, 또는 특정 유형의 글리코실화가 당단백질로부터 효소에 의해 제거될 수 있다. 추가적으로, 예를 들어, 특정 유형의 다당류를 프로세싱하는 것에서 결함이 있도록 만들기 위해, 재조합 숙주 세포가 유전자 조작될 수 있다. 이러한 기술 및 유사한 기술이 관련 기술 분야에 공지되어 있다.
렉틴 크로마토그래피, NMR, 질량 분광법, HPLC, GPC, 단랑류 조성 분석, 순차적 효소 소화, 및 HPAEC-PAD (고 pH 음이온 교환 크로마토그래피를 이용하여 전하를 기초로 올리고당류를 분리함)를 포함하는 탄수화물 분석의 통상적인 기술에 의해 항체의 글리코실화 구조를 쉽게 분석할 수 있다. 분석 목적을 위해 올리고당류를 방출시키는 방법 또한 공지되어 있고, 비제한적으로, 효소 처리 (통상적으로 펩티드-N-글리코시다제 F/엔도-β-갈락토시다제를 사용하여 수행됨), 주로 O-연결 구조를 방출하기 위해 강한 알칼리성 환경을 사용하는 제거, 및 N- 및 O-연결 올리고당류 둘 다를 방출시키기 위해 무수 히드라진을 사용하는 화학적 방법을 포함한다.
항체의 글리코실화 변형의 바람직한 형태는 감소된 코어 푸코실화이다. "코어 푸코실화"는 N-연결 글리칸의 환원 말단에서 N-아세틸글루코사민 ("GlcNAc")에 푸코스를 부가하는 것 ("푸코실화")을 지칭한다.
"복합 N-글리코시드-연결 당 쇄"는 전형적으로 아스파라긴 297 (카바트 번호에 따름)에 결합된다. 본원에서 사용된 바와 같이, 복합 N-글리코시드-연결 당 쇄는 주로 하기의 구조를 갖는 2안테나형 복합 당 쇄를 갖는다:
Figure pct00006
[식 중, ±는 당 분자가 존재 또는 부재할 수 있다는 것을 나타내고, 숫자는 당 분자들 사이의 연결의 위치를 나타낸다]. 상기 구조에서, 아스파라긴에 결합하는 당 쇄 말단이 환원 말단으로 칭해지고 (오른쪽), 반대쪽은 비-환원 말단으로 칭해진다. 일반적으로 푸코스는 환원 말단의 N-아세틸글루코사민 ("GlcNAc")에 전형적으로 α1,6 결합 (GlcNAc의 6-위치가 푸코스의 1-위치에 연결된다)에 의해 결합된다. "Gal"은 갈락토스를 지칭하고, "Man"은 만노스를 지칭한다.
"복합 N-글리코시드-연결 당 쇄"는 1) 코어 구조의 비-환원 말단 측이 갈락토스-N-아세틸글루코사민 ("gal-GlcNAc"로도 지칭됨)의 0개, 1개 또는 이를 초과하는 개수의 분지를 갖고, gal-GlcNAc의 비-환원 말단 측이 임의적으로 시알산, 이분성 N-아세틸글루코사민 등을 갖는 복합 유형, 및 2) 코어 구조의 비-환원 말단 측이 고-만노스 N-글리코시드-연결 당 쇄 및 복합 N-글리코시드-연결 당 쇄의 분지 둘 다를 갖는 하이브리드 유형을 포함한다.
본 발명의 방법에 따르면, 전형적으로 미량의 푸코스만이 항-TIGIT 항체의 복합 N-글리코시드-연결 당 쇄(들) 내로 혼입된다. 예를 들어, 다양한 실시양태에서, 조성물 내의 항체의 약 60% 미만, 약 50% 미만, 약 40% 미만, 약 30% 미만, 약 20% 미만, 약 15% 미만, 약 10% 미만, 약 5% 미만, 또는 약 3% 미만에 푸코스에 의한 코어 푸코실화가 있다. 일부 실시양태에서, 조성물 내의 항체의 약 2%에 푸코스에 의한 코어 푸코실화가 있다. 다양한 실시양태에서, 조성물 내의 항체의 60% 미만에 푸코스에 의한 코어 푸코실화가 있는 경우, 조성물 내의 항체는 "푸코실화되지 않음" 또는 "비-푸코실화"로 지칭될 수 있다. 일부 실시양태에서, 조성물 내의 항체의 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99%가 비-푸코실화된다.
특정 실시양태에서, 미량의 푸코스 유사체 (또는 푸코스 유사체의 대사물 또는 생성물)만이 복합 N-글리코시드-연결 당 쇄(들) 내로 혼입된다. 예를 들어, 다양한 실시양태에서, 항-TIGIT 항체의 약 60% 미만, 약 50% 미만, 약 40% 미만, 약 30% 미만, 약 20% 미만, 약 15% 미만, 약 10% 미만, 약 5% 미만, 또는 약 3% 미만에 푸코스 유사체 또는 푸코스 유사체의 대사물 또는 생성물에 의한 코어 푸코실화가 있다. 일부 실시양태에서, 항-TIGIT 항체의 약 2%에 푸코스 유사체 또는 푸코스 유사체의 대사물 또는 생성물에 의한 코어 푸코실화가 있다.
일부 실시양태에서, 조성물 내의 항체의 약 60% 미만, 약 50% 미만, 약 40% 미만, 약 30% 미만, 약 20% 미만, 약 15% 미만, 약 10% 미만, 약 5% 미만, 또는 약 3% 미만이 G0, G1, 또는 G2 글리칸 구조 상에 푸코스 잔기를 갖는다. (예를 들어, 문헌 [Raju et al., 2012, MAbs 4: 385-391]의 도 3을 참조한다.) 일부 실시양태에서, 조성물 내의 항체의 약 2%가 G0, G1, 또는 G2 글리칸 구조 상에 푸코스 잔기를 갖는다. 다양한 실시양태에서, 조성물 내의 항체의 60% 미만이 G0, G1, 또는 G2 글리칸 구조 상에 푸코스 잔기를 갖는 경우에, 조성물의 항체가 "비-푸코실화"로 지칭될 수 있다. 일부 실시양태에서, 조성물 내의 항체의 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99%가 G0, G1, 또는 G2 글리칸 구조 상에서 푸코스가 결여된다. G0 글리칸은 G0-GN 글리칸을 포함한다는 것을 주목하여야 한다. G0-GN 글리칸은 1개의 말단 GlcNAc 잔기가 있는 1안테나형 글리칸이다. G1 글리칸은 G1-GN 글리칸을 포함한다. G1-GN 글리칸은 1개의 말단 갈락토스 잔기가 있는 1안테나형 글리칸이다. G0-GN 및 G1-GN 글리칸은 푸코실화 또는 비-푸코실화될 수 있다.
항체-생산 세포를 푸코스 유사체와 함께 인큐베이션함으로써 비-푸코실화 항체를 제조하는 방법이, 예를 들어, WO2009/135181에 기술되어 있다. 간략하게, 항-TIGIT 항체를 발현하도록 조작된 세포를 푸코스 유사체 또는 푸코스 유사체의 세포내 대사물 또는 생성물의 존재 하에 인큐베이션한다. 세포내 대사물은, 예를 들어, GDP-변형 유사체 또는 완전히 또는 부분적으로 탈에스테르화된 유사체일 수 있다. 생성물은, 예를 들어, 완전히 또는 부분적으로 탈에스테르화된 유사체일 수 있다. 일부 실시양태에서, 푸코스 유사체는 푸코스 구조 경로에서 효소(들)를 억제할 수 있다. 예를 들어, 푸코스 유사체 (또는 푸코스 유사체의 세포내 대사물 또는 생성물)는 푸코키나제, 또는 GDP-푸코스-파이로포스포릴라제의 활성을 억제할 수 있다. 일부 실시양태에서, 푸코스 유사체 (또는 푸코스 유사체의 세포내 대사물 또는 생성물)는 푸코실트랜스퍼라제 (바람직하게는 1,6-푸코실트랜스퍼라제, 예를 들어, FUT8 단백질)를 억제한다. 일부 실시양태에서, 푸코스 유사체 (또는 푸코스 유사체의 세포내 대사물 또는 생성물)는 푸코스에 대한 드노보(de novo) 합성 경로에서 효소의 활성을 억제할 수 있다. 예를 들어, 푸코스 유사체 (또는 푸코스 유사체의 세포내 대사물 또는 생성물)는 GDP-만노스 4,6-데히드라타제 또는/또는 GDP-푸코스 신쎄타제의 활성을 억제할 수 있다. 일부 실시양태에서, 푸코스 유사체 (또는 푸코스 유사체의 세포내 대사물 또는 생성물)는 푸코스 운반체 (예를 들어, GDP-푸코스 운반체)를 억제할 수 있다.
한 실시양태에서, 푸코스 유사체는 2-플루오로푸코스이다. 성장 배지에서 푸코스 유사체를 사용하는 방법 및 다른 푸코스 유사체가, 예를 들어, 본원에 참조로 포함된 WO 2009/135181에 개시되어 있다.
코어 푸코실화를 감소시키기 위해 세포주를 조작하는 다른 방법은 유전자 녹-아웃(knock-out), 유전자 녹-인(knock-in) 및 RNA 간섭 (RNAi)을 포함하였다. 유전자 녹-아웃에서는, FUT8 (알파 1,6-푸코실트랜스퍼라제 효소)를 코딩하는 유전자가 불활성화된다. FUT8은 GDP-푸코스로부터 N-글리칸의 Asn-연결 (N-연결) GlcNac의 위치 6으로의 푸코실 잔기의 전달을 촉매한다. FUT8은 Asn297에서 N-연결 2안테나형 탄수화물에 푸코스를 부가하는 것을 담당하는 유일한 효소인 것으로 보고된다. 유전자 녹-인은 효소 예컨대 GNTIII 또는 골지 알파 만노시다제 II를 코딩하는 유전자를 부가한다. 세포 내의 이러한 효소의 수준의 증가는 모노클로날 항체를 푸코실화 경로로부터 벗어나게 하고 (감소된 코어 푸코실화에 이름), 증가된 양의 이분성 N-아세틸글루코사민을 갖는 것으로부터 벗어나게 한다. RNAi 또한 전형적으로 FUT8 유전자 발현을 표적화하여, 감소된 mRNA 전사체 수준 또는 유전자 발현의 전체적인 녹-아웃에 이른다. 이러한 방법 중 임의의 것이 비-푸코실화 항체, 예를 들어, 항-TIGIT 항체를 생산할 수 있을 세포주를 생성시키는 데 사용될 수 있다.
항체 상의 푸코실화의 양을 결정하기 위해 다수의 방법이 이용가능하다. 방법은, 예를 들어, PLRP-S 크로마토그래피를 통한 LC-MS, 전기분무 이온화 사중극자 TOF MS, 레이저-유도 형광을 수반한 모세관 전기영동 (CE-LIF), 및 형광 검출을 수반한 친수성 상호작용 크로마토그래피 (HILIC)를 포함한다.
IV. 항-TIGIT 항체를 사용한 치료 방법
일부 실시양태에서, 대상체에서 암을 치료 또는 예방하는 방법이 제공된다. 일부 실시양태에서, 방법은 대상체에게 치료량의 항-TIGIT 항체를 투여하는 것을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항-TIGIT 항체는 비-푸코실화된다. 일부 실시양태에서, 방법은 대상체에게 항-TIGIT 항체를 포함하는 치료량의 제약 조성물을 투여하는 것을 포함하고, 여기서 조성물 내의 항체의 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99%가 비-푸코실화된다. 일부 실시양태에서, 대상체는 인간이다.
일부 실시양태에서, 암은 CD112 및/또는 CD155의 발현에 대해 강화된 암 또는 암세포이다. 일부 실시양태에서, CD112- 및/또는 CD155-강화 암은 CD112 또는 CD155에 대해 특이적인 항체를 사용하여 종양 샘플의 면역조직화학 평가에 의해 확인된다. 일부 실시양태에서, 종양 세포에서 또는 종양 침윤 백혈구에서 CD112 또는 CD155 발현이 강화 또는 증가된다. 일부 실시양태에서, (예를 들어, 관련 기술 분야에 공지된 방법 예컨대 정량적 RT-PCR에 의해) 종양 샘플 내의 CD112 및/또는 CD155 mRNA 수준의 평가를 기초로 암이 확인된다. 일부 실시양태에서, 암 환자로부터 수득된 혈액 샘플 내의 가용성 CD112 또는 CD155의 측정이 CD112 및/또는 CD155의 발현에 대해 강화된 암을 확인하는 데 사용될 수 있다. 일부 실시양태에서, 방법은 대상체로부터의 샘플 (예를 들어, 종양 샘플 또는 혈액 샘플)을 수득하고, 대상체로부터의 샘플 내의 CD112 및/또는 CD155의 수준을 측정하고, 대상체로부터의 샘플 내의 CD112 및/또는 CD155의 수준을 대조군 값 (예를 들어, 건강한 대조군 대상체로부터의 샘플 또는 건강한 대조군의 집단에 대해 결정된 CD112 및/또는 CD155 발현의 수준)에 비교하는 것을 포함한다. 일부 실시양태에서, 방법은 대상체로부터의 샘플 내의 CD112 및/또는 CD155의 수준이 대조군 값보다 더 높다는 것을 결정하고, 후속적으로 대상체에게 본원에 기술된 바와 같은 항-TIGIT 항체를 투여하는 것을 포함한다.
일부 실시양태에서, 암은 TIGIT를 발현하는 T 세포 또는 자연 킬러 (NK) 세포에 대해 강화된 암 또는 암세포이다. 일부 실시양태에서, TIGIT-강화 암은 TIGIT에 대해 특이적인 항체를 사용하여 종양 샘플의 면역조직화학 평가에 의해 확인된다. 일부 실시양태에서, T 세포 또는 NK 세포에 대해 특이적인 항체 (예를 들어, 항-CD3, 항-CD4, 항-CD8, 항-CD25, 또는 항-CD56)가 TIGIT를 발현하는 종양 침윤 세포의 서브세트 또는 서브세트들을 결정하는 데 사용된다. 일부 실시양태에서, 종양 샘플 내의 TIGIT mRNA 수준의 평가를 기초로 암이 확인된다. 일부 실시양태에서, 암 환자로부터 수득된 혈액 샘플 내의 가용성 TIGIT의 측정이 (임의적으로, T 세포 또는 NK 세포에 대해 특이적인 항체와 조합되어) TIGIT를 발현하는 T 세포 또는 NK 세포에 대해 강화된 암을 확인하는 데 사용될 수 있다. 일부 실시양태에서, 방법은 대상체로부터의 샘플 (예를 들어, 종양 샘플 또는 혈액 샘플)을 수득하고, 대상체로부터의 샘플 내의 TIGIT의 수준을 측정하고, 임의적으로 (예를 들어, T 세포 또는 NK 세포에 대해 특이적인 항체 예컨대 항-CD3, 항-CD4, 항-CD8, 항-CD25, 또는 항-CD56을 사용하여) T 세포 또는 NK 세포의 존재를 검출하고, 대상체로부터의 샘플 내의 TIGIT의 수준을 대조군 값 (예를 들어, 건강한 대조군 대상체로부터의 샘플 또는 건강한 대조군의 집단에 대해 결정된 TIGIT 발현의 수준)에 비교하는 것을 포함한다. 일부 실시양태에서, 방법은 대상체로부터의 샘플 내의 TIGIT의 수준이 대조군 값보다 더 높다는 것을 결정하고, 후속적으로 대상체에게 본원에 기술된 바와 같은 항-TIGIT 항체를 투여하는 것을 포함한다.
일부 실시양태에서, 암은 방광암, 유방암, 자궁암, 자궁경부암, 난소암, 전립선암, 고환암, 식도암, 위장암, 위암, 췌장암, 결장직장암, 결장암, 신장암, 투명세포 신장 암종, 두경부암, 폐암, 폐 선암종, 위암, 생식세포암, 골암, 간암, 갑상선암, 피부암, 흑색종, 중추신경계의 신생물, 중피종, 림프종, 백혈병, 만성 림프구성 백혈병, 미만성 거대 B 세포 림프종, 소포 림프종, 호지킨 림프종, 골수종, 또는 육종이다. 일부 실시양태에서, 암은 위암, 고환암, 췌장암, 폐 선암종, 방광암, 두경부암, 전립선암, 유방암, 중피종, 및 투명세포 신장 암종으로부터 선택된다. 일부 실시양태에서, 암은 급성 골수성, 만성 골수성, 급성 림프구성 또는 만성 림프구성 백혈병, 미만성 거대 B-세포 림프종, 소포 림프종, 외투세포 림프종, 소림프구성 림프종, 원발성 종격동 거대 B-세포 림프종, 비장 변연대 B-세포 림프종, 또는 림프절외 변연대 B-세포 림프종을 포함하지만 이에 제한되지 않는 림프종 또는 백혈병이다. 일부 실시양태에서, 암은 만성 림프구성 백혈병, 미만성 거대 B 세포 림프종, 소포 림프종, 및 호지킨 림프종으로부터 선택된다. 일부 실시양태에서, 암은 전이성 암이다.
일부 실시양태에서, 방법은 대상체에게 치료량의 추가적인 치료제를 투여하는 것을 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 추가적인 치료제는 면역항암제이다. 일부 실시양태에서, 면역항암제는 면역 관문 경로, 예컨대 PD-1 경로, CTLA-4 경로, Lag3 경로, 또는 TIM-3 경로의 성분을 길항하거나 억제하는 작용제 (예를 들어, 항체, 소형 분자, 또는 펩티드)이다. 일부 실시양태에서, 면역항암제는 OX-40 경로, 4-1BB (CD137) 경로, CD27 경로, ICOS 경로, 또는 GITR 경로를 표적화하는 것에 의한 T 세포 공동활성자의 효능제 (즉, T 세포 활성화를 자극하는 단백질의 효능제)이다.
일부 실시양태에서, 면역항암제는 PD-1 경로 억제제이다. 일부 실시양태에서, PD-1 경로 억제제는 펨브롤리주맙, 니볼루맙, 더발루맙, 피딜리주맙, 아벨루맙, 또는 아테졸리주맙과 같은, 그러나 이제 제한되지 않는 항-PD-1 항체 또는 항-PD-L1 항체이다. 관련 기술 분야에 PD-1 경로 억제제가 기술되어 있다. 예를 들어, 문헌 [Dolan et al., Cancer Control, 2014, 21:231-237]; [Luke et al., Oncotarget, 2014, 6:3479-3492]; US 2016/0222113; US 2016/0272708; US 2016/0272712; 및 US 2016/0319019를 참조한다.
일부 실시양태에서, 면역항암제는 T 세포 공동활성자의 효능제이다. 일부 실시양태에서, 면역항암제는 CD28, CD28H, CD3, 4-1BB (CD137), ICOS, OX40, GITR, CD27, 또는 CD40의 효능제이다. 일부 실시양태에서, 면역항암제는 면역 자극 시토카인이다. 일부 실시양태에서, 면역 자극 시토카인은 과립구-대식세포 콜로니 자극 인자 (GM-CSF), 대식세포 콜로니 자극 인자 (M-CSF), 과립구 콜로니 자극 인자 (G-CSF), 인터루킨 1 (IL-1), 인터루킨 2 (IL-2), 인터루킨 3 (IL-3), 인터루킨 12 (IL-12), 인터루킨 15 (IL-15), 또는 인터페론 감마 (IFN-γ)이다. 일부 실시양태에서, 면역항암제는 SGN-2FF이다 (시애틀 제네틱스(Seattle Genetics); 예를 들어, WO 2009/135181 A2, WO 2012/019165 A2, 및 WO 2017/096274 A1을 참조한다).
일부 실시양태에서, 추가적인 치료제는 항-CD25 항체, 항-PD-1 항체, 항-PD-L1 항체, 항-Tim3 항체, 항-Lag3 항체, 항-CTLA4 항체, 항-41BB 항체, 항-OX40 항체, 항-CD3 항체, 항-CD40 항체, 항-CD47M 항체, 항-CSF1R 항체, 항-TLR 항체, 항-STING 항체, 항-RIGI 항체, 항-TAM 수용체 키나제 항체, 항-NKG2A 항체, 항-NKG2D 항체, 항-GD2 항체, 항-HER2 항체, 항-EGFR 항체, 항-PDGFR-α-항체, 항-SLAMF7 항체, 항-VEGF 항체, 항-CTLA-4 항체, 항-CD20 항체, 항-cCLB8 항체, 항-KIR 항체, 및 항-CD52 항체로부터 선택된다. 일부 실시양태에서, 추가적인 치료제는 SEA-CD40 (시애틀 제네틱스; 예를 들어, WO 2006/128103 A2 및 WO 2016/069919 A1을 참조한다), 아벨루맙, 더발루맙, 니볼루맙, 펨브롤리주맙, 피딜리주맙, 아테졸리주맙, Hul4.18K322A (항-GD2 항체, 세인트 주드(St. Jude)), Hu3F8 (항-GD2 항체, MSKCC), 디니툭시맙, 트라스투주맙, 세툭시맙, 올라라투맙, 네시투무맙, 엘로투주맙, 라무시루맙, 퍼투주맙, 이필리무맙, 베바시주맙, 리툭시맙, 오비누투주맙, 실툭시맙, 오파투무맙, 및 알렘투주맙으로부터 선택된다.
일부 실시양태에서, 본원에 기술된 바와 같은 항-TIGIT 항체로의 치료는 하나 이상의 다른 항암 치료, 예컨대 수술 또는 방사선과 조합된다. 일부 실시양태에서, 본원에 기술된 바와 같은 항-TIGIT 항체로의 치료는 하나 이상의 다른 항암제, 예컨대 화학요법제와 조합된다. 비제한적인 예시적인 화학요법제는 알킬화제 (예를 들어, 시클로포스파미드, 이포스파미드, 클로람부실, 부술판, 멜팔란, 메클로레타민, 우라무스틴, 티오테파, 니트로소우레아, 또는 테모졸로미드), 안트라사이클린 (예를 들어, 독소루비신, 아드리아마이신, 다우노루비신, 에피루비신, 또는 미톡산트론), 세포골격 파괴제 (예를 들어, 파클리탁셀 또는 도세탁셀), 히스톤 데아세틸라제 억제제 (예를 들어, 보리노스탯 또는 로미뎁신), 토포이소머라제의 억제제 (예를 들어, 이리노테칸, 토포테칸, 암사크린, 에토포시드, 또는 테니포시드), 키나제 억제제 (예를 들어, 보르테조밉, 에를로티닙, 제피티닙, 이마티닙, 베무라페닙, 또는 비스모데깁), 뉴클레오시드 유사체 또는 전구물질 유사체 (예를 들어, 아자시티딘, 아자티오프린, 카페시타빈, 시타라빈, 플루오로우라실, 젬시타빈, 히드록시우레아, 메르캅토퓨린, 메토트렉세이트, 또는 티오구아닌), 펩티드 항생제 (예를 들어, 악티노마이신 또는 블레오마이신), 백금-기반 작용제 (예를 들어, 시스플라틴, 옥살로플라틴, 또는 카르보플라틴), 또는 식물 알칼로이드 (예를 들어, 빈크리스틴, 빈블라스틴, 비노렐빈, 빈데신, 포도필로톡신, 파클리탁셀, 또는 도세탁셀), 갈라딘, 탈리도미드, 레날리도미드, 및 포말리도미드를 포함한다.
일부 실시양태에서, 항-TIGIT 항체 (및 임의적으로 추가적인 치료제)는 치료적 유효량 또는 유효 용량으로 투여된다. 약 0.01 mg/kg 내지 약 500 mg/kg, 또는 약 0.1 mg/kg 내지 약 200 mg/kg, 또는 약 1 mg/kg 내지 약 100 mg/kg, 또는 약 10 mg/kg 내지 약 50 mg/kg의 일일 용량 범위가 사용될 수 있다. 그러나, 투여량은 선택된 투여 경로, 조성물의 제형, 환자 반응, 병태의 중증도, 대상체의 체중, 및 처방의의 판단을 포함하는 여러 요인에 따라 변할 수 있다. 투여량은 개별적인 환자에 의해 요구되는 바에 따라 경시적으로 증가 또는 감소될 수 있다. 특정 경우에, 낮은 용량이 환자에게 초기에 제공된 후, 환자에게 허용가능한 효과적인 투여량으로 증가된다. 유효량의 결정은 충분히 관련 기술 분야의 통상의 기술자의 능력 내에 속한다.
항-TIGIT 항체 또는 항-TIGIT 항체 (및 임의적으로 면역항암제 또는 다른 치료적 처치)를 포함하는 제약 조성물의 투여 경로는 경구, 복막내, 경피, 피하, 정맥내, 근육내, 흡입, 국소, 병변내, 직장, 기관지내, 비강, 경점막, 장, 안구 또는 귀 전달, 또는 관련 기술 분야에 공지된 임의의 다른 방법일 수 있다. 일부 실시양태에서, 항-TIGIT 항체 (및 임의적으로 면역항암제)는 경구로, 정맥내로, 또는 복막내로 투여된다.
공동-투여되는 치료제 (예를 들어, 항-TIGIT 항체 및 추가적인 치료제)는 함께 또는 별개로, 동시에 또는 상이한 시간에 투여될 수 있다. 투여되는 경우에, 치료제들은 필요에 따라 독립적으로 1일 1회, 2회, 3회, 4회, 또는 더 또는 덜 자주 투여될 수 있다. 일부 실시양태에서, 투여되는 치료제는 1일 1회 투여된다. 일부 실시양태에서, 투여되는 치료제는 동일한 시점 또는 시점들에, 예를 들어, 혼합물로서 투여된다. 일부 실시양태에서, 치료제 중 하나 이상은 지속-방출 제형에서 투여된다.
일부 실시양태에서, 항-TIGIT 항체 및 추가적인 치료제는 동반적으로 투여된다. 일부 실시양태에서, 항-TIGIT 항체 및 추가적인 치료제는 순차적으로 투여된다. 예를 들어, 일부 실시양태에서, 항-TIGIT 항체가 먼저, 예를 들어, 추가적인 치료제를 투여하기 전에 약 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 15, 20, 25, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100일 이상 동안 투여된다. 일부 실시양태에서, 추가적인 치료제가 먼저, 예를 들어, 항-TIGIT 항체를 투여하기 전에 약 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 15, 20, 25, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100일 이상 동안 투여된다.
일부 실시양태에서, 항-TIGIT 항체 (및 임의적으로 추가적인 치료제)는 연장된 기간에 걸쳐, 예를 들어, 적어도 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 150, 200, 250, 300, 350일 이상 동안 대상체에게 투여된다.
V. 조성물 및 키트
또 다른 측면에서, 대상체에서 암을 치료 또는 예방하는 것에서 사용하기 위한 항-TIGIT 항체를 포함하는 조성물 및 키트가 제공된다.
제약 조성물
일부 실시양태에서, 암에 걸린 대상체에게 투여하는 것에서 사용하기 위한 항-TIGIT 항체를 포함하는 제약 조성물이 제공된다. 일부 실시양태에서, 항-TIGIT 항체는 본원에 기술된 바와 같고, 예를 들어, 본원에 개시된 바와 같은 결합 친화도, 활성, 교차-반응성, 에피토프 인식, 및/또는 하나 이상의 CDR, VH, 및/또는 VL 서열을 갖는 항-TIGIT 항체이다. 일부 실시양태에서, 항-TIGIT 항체는 비-푸코실화된다.
일부 실시양태에서, 항-TIGIT 항체 및 추가적인 치료제는 본원에 기술된 바와 같이 함께 또는 별개로 제약 조성물 내로 제형된다. 일부 실시양태에서, 추가적인 치료제는 면역항암제, 예컨대 PD-1 경로 억제제 또는 CTLA-4 경로 억제제이다. 일부 실시양태에서, 면역항암제는 T 세포 공동활성자의 효능제이다. 일부 실시양태에서, PD-1 경로 억제제는 펨브롤리주맙, 니볼루맙, 더발루맙, 피딜리주맙 또는 아테졸리주맙과 같은, 그러나 이에 제한되지 않는 항-PD-1 항체 또는 항-PD-L1 항체이다.
본 발명에서 사용하기 위한 제형을 제조하기 위한 지침이, 예를 들어, 상기 문헌 [Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 21st Ed., 2006]; 문헌 [Martindale: The Complete Drug Reference, Sweetman, 2005, London: Pharmaceutical Press]; [Niazi, Handbook of Pharmaceutical Manufacturing Formulations, 2004, CRC Press]; 및 [Gibson, Pharmaceutical Preformulation and Formulation: A Practical Guide from Candidate Drug Selection to Commercial Dosage Form, 2001, Interpharm Press]에서 확인되고, 이들은 이에 의해 본원에 참조로 포함된다. 본원에 기술된 제약 조성물은 관련 기술 분야의 통상의 기술자에게 공지된 방식으로, 즉, 통상적인 혼합, 용해, 과립화, 당의 제조, 유화, 캡슐화, 봉입 또는 동결건조 공정에 의해 제작될 수 있다. 하기의 방법 및 부형제는 예시일 뿐이고, 결코 제한적이지 않다.
일부 실시양태에서, 항-TIGIT 항체 (및 임의적으로 추가적인 치료제)는 지속-방출, 제어 방출, 연장-방출, 시한-방출 또는 지연-방출 제형, 예를 들어, 치료제를 함유하는 고체 친수성 중합체의 반투과성 매트릭스에서의 전달을 위해 제조된다. 다양한 유형의 지속-방출 물질이 확립되어 있고, 관련 기술 분야의 통상의 기술자에게 널리 공지되어 있다. 현재의 연장-방출 제형은 필름-코팅 정제, 다중미립자 또는 펠릿 시스템, 친수성 또는 친지성 물질을 사용하는 매트릭스 기술, 및 세공-형성 부형제를 갖는 왁스-기반 정제를 포함한다 (예를 들어, 문헌 [Huang, et al. Drug Dev. Ind. Pharm. 29:79 (2003)]; [Pearnchob, et al. Drug Dev. Ind. Pharm. 29:925 (2003)]; [Maggi, et al. Eur. J. Pharm. Biopharm. 55:99 (2003)]; [Khanvilkar, et al., Drug Dev. Ind. Pharm. 228:601 (2002)]; 및 [Schmidt, et al., Int. J. Pharm. 216:9 (2001)]을 참조한다). 지속-방출 전달 시스템은, 그의 디자인에 따라, 수 시간 또는 수 일에 걸쳐, 예를 들어, 4, 6, 8, 10, 12, 16, 20, 24시간 이상에 걸쳐 화합물을 방출할 수 있다. 일반적으로, 지속 방출 제형은 자연-발생 또는 합성 중합체, 예를 들어, 중합체성 비닐 피롤리돈, 예컨대 폴리비닐 피롤리돈 (PVP); 카르복시비닐 친수성 중합체; 소수성 및/또는 친수성 히드로콜로이드, 예컨대 메틸셀룰로스, 에틸셀룰로스, 히드록시프로필셀룰로스, 및 히드록시프로필메틸셀룰로스; 및 카르복시폴리메틸렌을 사용하여 제조될 수 있다.
경구 투여의 경우, 관련 기술 분야에 널리 공지되어 있는 제약상 허용되는 담체와 조합하는 것에 의해 항-TIGIT 항체 (및 임의적으로 추가적인 치료제)가 쉽게 제형될 수 있다. 이러한 담체는 화합물이 치료될 환자에 의한 경구 섭취를 위한 정제, 알약, 당의정, 캡슐, 에멀션, 친지성 및 친수성 현탁액, 액체, 겔, 시럽, 슬러리, 현탁액 등으로 제형될 수 있게 한다. 경구 용도의 제약 제제는 화합물을 고체 부형제와 혼합하고, 임의적으로 생성된 혼합물을 분쇄하고, 원한다면 정제 또는 당의정 코어를 수득하기 위한 적절한 보조제를 첨가한 후, 과립 혼합물을 가공하는 것에 의해 수득될 수 있다. 적절한 부형제는, 예를 들어, 충전제 예컨대 락토스, 수크로스, 만니톨 또는 소르비톨을 포함하는 당; 셀룰로스 제제, 예를 들어, 옥수수 전분, 밀 전분, 쌀 전분, 감자 전분, 젤라틴, 트래거캔스 고무, 메틸 셀룰로스, 히드록시프로필메틸-셀룰로스, 소듐 카르복시메틸셀룰로스, 및/또는 폴리피닐피롤리돈 (PVP)을 포함한다. 원한다면, 붕해제, 예컨대 가교된 폴리비닐 피롤리돈, 한천, 또는 알긴산 또는 그의 염 예컨대 알긴산나트륨이 첨가될 수 있다.
항-TIGIT 항체 (및 임의적으로 추가적인 치료제)는 주사, 예를 들어, 볼루스 주사 또는 연속 주입에 의한 비경구 투여용으로 제형될 수 있다. 주사를 위해, 화합물 또는 화합물들이 이를, 원한다면 통상적인 첨가물 예컨대 가용화제, 등장성 작용제, 현탁제, 유화제, 안정화제 및 보존제와 함께, 수성 또는 비-수성 용매, 예컨대 식물성 또는 기타 유사 오일, 합성 지방족 산 글리세리드, 고급 지방족 산의 에스테르 또는 프로필렌 글리콜에 용해, 현탁 또는 유화시키는 것에 의해 제제로 제형될 수 있다. 일부 실시양태에서, 화합물은 수성 용액 내에, 바람직하게는 생리적으로 상용성인 완충제 예컨대 행크스 용액, 링거액, 또는 생리학적 염수 완충제 내에 제형될 수 있다. 주사용 제형은 보존제가 첨가된 단위 투여량 형태로, 예를 들어, 앰풀 또는 다중 용량 용기에서 제시될 수 있다. 조성물은 유성 또는 수성 비히클 내의 현탁액, 용액 또는 에멀션과 같은 형태를 취할 수 있고, 제형 작용제 예컨대 현탁제, 안정화제 및/또는 분산제를 함유할 수 있다.
항-TIGIT 항체 (및 임의적으로 추가적인 치료제)는 경점막 또는 경피 수단에 의해 전신으로 투여될 수 있다. 경점막 또는 경피 투여를 위해, 투과될 장벽에 적합한 침투제가 제형에서 사용된다. 국소 투여를 위해, 작용제는 연고, 크림, 고약, 분말 및 겔 내로 제형된다. 한 실시양태에서, 경피 전달제는 DMSO일 수 있다. 경피 전달 시스템은, 예를 들어, 패치를 포함할 수 있다. 경점막 투여를 위해, 투과될 장벽에 적합한 침투제가 제형에서 사용된다. 이러한 침투제는 일반적으로 관련 기술 분야에 공지되어 있다. 예시적인인 경피 전달 제형은 미국 특허 번호 6,589,549; 6,544,548; 6,517,864; 6,512,010; 6,465,006; 6,379,696; 6,312,717 및 6,310,177에 기술된 것들을 포함하고, 이들 각각은 이에 의해 본원에 참조로 포함된다.
일부 실시양태에서, 제약 조성물은 허용되는 담체 및/또는 부형제를 포함한다. 제약상 허용되는 담체는 생리적으로 상용성이고 바람직하게는 치료제의 활성을 방해하지 않거나 또는 다른 식으로 억제하지 않는 임의의 용매, 분산 매질, 또는 코팅제를 포함한다. 일부 실시양태에서, 담체는 정맥내, 근육내, 경구, 복막내, 경피, 국소, 또는 피하 투여에 적절하다. 제약상 허용되는 담체는 예를 들어 조성물을 안정화시키거나 또는 활성 작용제(들)의 흡수를 증가 또는 감소시키는 작용을 하는 하나 이상의 생리학상 허용되는 화합물(들)을 함유할 수 있다. 생리학상 허용되는 화합물은, 예를 들어, 탄수화물, 예컨대 글루코스, 수크로스, 또는 덱스트란, 항산화제, 예컨대 아스코르브산 또는 글루타티온, 킬레이팅제, 저분자량 단백질, 활성 작용제의 소거 또는 가수분해를 감소시키는 조성물, 또는 부형제 또는 기타 안정화제 및/또는 완충제를 포함할 수 있다. 기타 제약상 허용되는 담체 및 그의 제형이 널리 공지되어 있고, 일반적으로, 예를 들어, 문헌 [Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 21st Edition, Philadelphia, PA. Lippincott Williams & Wilkins, 2005]에서 기술된다. 다양한 제약상 허용되는 부형제가 관련 기술 분야에 널리 공지되어 있고, 예를 들어, 문헌 [Handbook of Pharmaceutical Excipients (5th ed., Ed. Rowe et al., Pharmaceutical Press, Washington, D.C.)]에서 확인할 수 있다.
본 개시내용의 제약 조성물의 투여량 및 원하는 약물 농도는 구상되는 특정 용도에 따라 변할 수 있다. 적합한 투여량 또는 투여 경로의 결정은 충분히 관련 기술 분야의 통상의 기술자의 범위 내에 속한다. 적절한 투여량은 또한 본원에서 기술된다.
키트
일부 실시양태에서, 암에 걸린 대상체를 치료하는 것에서 사용하기 위한 키트가 제공된다. 일부 실시양태에서, 키트는
항-TIGIT 항체; 및
추가적인 치료제
를 포함한다.
일부 실시양태에서, 항-TIGIT 항체는 본원에 기술된 바와 같고, 예를 들어, 본원에 개시된 바와 같은 결합 친화도, 활성, 교차-반응성, 에피토프 인식, 및/또는 하나 이상의 CDR, VH, 및/또는 VL 서열을 갖는 항-TIGIT 항체이다. 일부 실시양태에서, 항-TIGIT 항체는 비-푸코실화된다. 일부 실시양태에서, 추가적인 치료제는 면역항암제, 예컨대 PD-1 경로 억제제 또는 CTLA-4 경로 억제제이다. 일부 실시양태에서, 면역항암제는 T 세포 공동활성자의 효능제이다. 일부 실시양태에서, PD-1 경로 억제제는 항-PD-1 항체 또는 항-PD-L1 항체이다. 일부 실시양태에서, 면역항암제는 펨브롤리주맙, 니볼루맙, 더발루맙, 피딜리주맙, 또는 아테졸리주맙이다.
일부 실시양태에서, 키트는 본 발명의 방법의 실행을 위한 지침 (즉, 프로토콜)을 함유하는 설명 자료 (예를 들어, 암을 치료하기 위해 키트를 사용하기 위한 설명서)를 추가로 포함할 수 있다. 설명 자료는 전형적으로 서면 또는 인쇄 자료를 포함하지만, 이에 제한되지 않는다. 이러한 설명서를 저장할 수 있고 이를 최종 사용자에게 전달할 수 있는 임의의 매체가 본 발명에서 구상된다. 이러한 매체는 전자 저장 매체 (예를 들어, 자기 디스크, 테이프, 카트리지, 칩), 광학 매체 (예를 들어, CD ROM) 등을 포함하지만, 이에 제한되지 않는다. 이러한 매체는 이러한 설명 자료를 제공하는 인터넷 사이트에 대한 주소를 포함할 수 있다.
VI. 실시예
하기 논의된 실시예는 순수하게 본 발명을 예시하도록 의도되고, 어떠한 방식으로도 본 발명을 제한하는 것으로 간주되지 않아야 한다. 실시예는 하기 실험이 수행된 모든 또는 유일한 실험이라는 것을 나타내도록 의도되지 않는다. 사용된 숫자 (예를 들어, 양, 온도 등)와 관련하여 정확도를 확실히 하도록 노력이 이루어졌지만, 일부 실험 오차 및 편차가 고려되어야 한다. 달리 지시되지 않는 한, 부는 중량부이고, 분자량은 평균 분자량이고, 온도는 섭씨 온도이며, 압력은 대기압 또는 대기압 근처이다.
실시예 1: 항-TIGIT 항체의 생성
효모-기반 항체 제시 시스템을 사용하여 완전 인간 항-TIGIT 모노클로날 항체가 생성되었다 (예를 들어, 문헌 [Xu et al., "Addressing polyspecificity of antibodies selected from an in vitro yeast presentation system: a FACS-based, high-throughput selection and analytical tool", PEDS, 2013, 26:663-670]; WO 2009/036379; WO 2010/105256; 및 WO 2012/009568을 참조한다). 각각 ~109의 다양성의 8개의 나이브 인간 합성 효모 라이브러리를 스크리닝하였다. 처음 2회의 선택 라운드를 위해, 기존에 기술된 바와 같이 (예를 들어, 문헌 [Siegel et al., "High efficiency recovery and epitope-specific sorting of an scFv yeast display library", J Immunol Methods, 2004, 286:141-153]을 참조한다), 밀테니이(Miltenyi) MACS 시스템을 활용하는 자기 비드 분류 기술을 수행하였다. 간략하게, 효모 세포 (~1010개의 세포/라이브러리)를 세정 완충제 (포스페이트-완충 염수 (PBS)/0.1% 소 혈청 알부민 (BSA))에서 5 mL의 10 nM 비오틴화 Fc-융합 항원과 함께 30분 동안 30℃에서 인큐베이션하였다. 40 mL 빙냉 세정 완충제로 1회 세정한 후, 세포 펠릿을 20 mL 세정 완충제에 재현탁시키고, 스트렙타비딘 마이크로비드 (500 ㎕)를 효모에 첨가하고, 15분 동안 4℃에서 인큐베이션하였다. 다음으로, 효모를 펠릿화시키고, 20 mL 세정 완충제에 재현탁시키고, 밀테니이 LS 칼럼 상에 로딩하였다. 20 mL을 로딩한 후, 칼럼을 3 mL 세정 완충제로 3회 세정하였다. 그 후, 칼럼을 자기장으로부터 제거하고, 5 mL의 성장 배지로 효모를 용출시키고, 철야로 성장시켰다. 유동 세포측정법을 사용하여 다음 선택 라운드를 수행하였다. 약 2×107개의 효모를 펠릿화시키고, 세정 완충제로 3회 세정하고, 30℃에서 평형 조건 하의 10 nM Fc-융합 항원 및 감소되는 농도의 비오틴화 단량체성 항원 (100 내지 1 nM), 10 nM 비오틴화 Fc-융합 항원 또는 종 교차-반응성을 수득하기 위한 상이한 종들의 100 nM 단량체성 항원과 함께, 또는 선택으로부터 비-특이적 항체를 제거하기 위한 다중-특이성 고갈 시약 (PSR)과 함께 인큐베이션하였다. PSR 고갈을 위해, 라이브러리를 기존에 기술된 바와 같이 비오틴화 PSR 시약의 1:10 희석물과 함께 인큐베이션하였다 (예를 들어, 상기 문헌 [Xu et al.]을 참조한다). 그 후, 효모를 세정 완충제로 2회 세정하고, LC-FITC (1:100 희석됨) 및 SA-633 (1:500 희석됨) 또는 EA-PE (엑스트라비딘-R-PE, 1:50 희석됨) 2차 시약으로 15분 동안 4℃에서 염색하였다. 세정 완충제로 2회 세정한 후, 세포 펠릿을 0.3 mL 세정 완충제에 재현탁시키고, 스트레이너-캡핑 분류 튜브로 옮겼다. FACS ARIA 분류기 (BD 바이오사이언시즈(BD Biosciences))를 사용하여 분류를 수행하고, 원하는 특성을 갖는 항체를 선택하도록 분류 게이트를 결정하였다. 모든 원하는 특성을 갖는 집단이 수득될 때까지 선택 라운드를 반복하였다. 최종 분류 라운드 후, 효모를 플레이팅하고, 특성화를 위해 개별적인 콜로니를 채집하였다.
항원은 재조합 이량체성 인간 TIGIT-Fc (아크로 바이오시스템즈(Acro Biosystems) TIT-H5254), 단량체성 인간 TIGIT (시노 바이올로지컬(Sino Biological) 10917-H08H), 이량체성 마우스 TIGIT-Fc (R&D 시스템즈(R&D Systems), 7267-TG), 및 단량체성 마우스 TIGIT (시노 바이오로직스(Sino Biologics) 50939-M08H)를 포함하였다.
나이브 캠페인: 744개의 클론을 시퀀싱하여 345개의 고유한 클론 (고유한 CDRH3)이 산출되었다. 클론에서 18개의 VH 생식계열이 표시되었다.
경쇄 뱃치 다양화 캠페인: 나이브 발견 선택의 제6 라운드로부터의 강화된 결합제 풀로부터의 중쇄 (VH) 플라스미드를 스매시 앤 그랩(smash and grab)을 통해 효모로부터 추출하고, 이. 콜라이에서 증식시키고, 이어서 이. 콜라이로부터 정제한 후, 107의 다양성으로 경쇄 라이브러리 내로 형질전환시켰다.
나이브 발견에 대한 것과 본질적으로 동일한 조건 하에 선택을 수행하였다. 간략하게, 1 라운드의 자기 비드 강화에 유동 세포측정법에 의한 3 라운드의 선택이 이어졌다. 자기 비드 강화 라운드에서, 10 nM 비오틴화 Fc-융합 항원이 사용되었다. 유동 세포측정기에서의 제1 라운드는 100 nM 비오틴화 1가 항원을 이용하는 양성 선택 라운드로 이루어졌다. 여기에 PSR 고갈에 대한 음성 선택 라운드로 이루어진 제2 라운드가 이어졌다. 최종 (제3) 라운드는 1가 항원이 100 nM, 10 nM, 1 nM에서 적정된 양성 선택 라운드로 이루어졌다. 모든 라이브러리에 대해, 이러한 제3 라운드로부터의 1 nM 부류로부터의 효모를 플레이팅하고, 개별적인 콜로니를 채집하고, 특성화하였다. 총괄적으로, 728개의 클론이 시퀀싱되어, 350개의 고유한 HC/LC 조합 (93개의 고유한 CDRH3)이 산출되었다.
나이브와 경쇄 뱃치 셔플 캠페인 사이에서 총 695개의 고유한 클론이 확인되었다.
실시예 2: 항-TIGIT 항체의 특성화
12개의 VH 생식계열 및 9개의 VL 생식계열을 대표하여, 생산 및 추가 평가를 위해 65개의 클론이 선택되었다.
항체 생산 및 정제
효모 클론을 포화로 성장시킨 후, 48시간 동안 30℃에서 진탕하면서 유도시켰다. 유도 후, 효모 세포를 펠릿화시키고, 정제를 위해 상청액을 수확하였다. 단백질 A 칼럼을 이용하여 IgG를 정제하고, 아세트산 pH 2.0으로 용출시켰다. 파파인 소화에 의해 Fab 단편이 생성되었고, 이를 카파셀렉트(KappaSelect) (GE 헬스케어 라이프사이언시즈(GE Healthcare LifeSciences))에서 정제하였다.
재조합 인간 및 마우스 단백질에 대한 항-TIGIT 항체의 결합
일반적으로 기존에 기술된 바와 같이 옥텟 RED384 상에서 포르테바이오 친화도 측정을 수행하였다 (예를 들어, 문헌 [Estep et al., "High throughput solution-based measurement of antibody-antigen affinity and epitope binning", Mabs, 2013, 5:270-278]을 참조한다). 간략하게, 온라인으로 IgG를 AHQ 센서 상에 로딩함으로써 포르테바이오 친화도 측정을 수행하였다. 센서를 오프라인으로 검정법 완충제 내에서 30분 동안 평형화시킨 후, 기준선 확립을 위해 온라인으로 60초 동안 모니터링하였다. IgG가 로딩된 센서를 100 nM 항원 (이량체성 Fc-융합 항원 또는 단량체성 항원)에 3분 동안 노출시키고, 그 후 오프 속도 측정을 위해 3분 동안 검정법 완충제로 옮겼다. 모든 결합 및 해리 동역학을 1:1 결합 모델을 사용하여 분석하였다.
65개의 IgG 클론 중에서, 43개가 TIGIT 단량체에 대한 친화도가 < 100 nM이었다. 65개의 IgG 클론 중에서, 34개가 마우스 TIGIT-Fc와 교차 반응하였다. 선택된 클론에 대한 결합 친화도가 하기 표 1에서 제시된다.
에피토프 비닝/리간드 경쟁 검정법
포르테바이오 옥텟 RED384 시스템 상에서 표준 샌드위치 양식 교차 차단 검정법을 사용하여 에피토프 비닝/리간드 차단을 수행하였다. 대조군 항-표적 IgG를 AHQ 센서 상에 로딩하고, 센서 상의 점유되지 않은 Fc-결합 부위를 관련되지 않은 인간 IgG1 항체로 차단하였다. 그 후, 센서를 100 nM 표적 항원에 이어서 제2 항-표적 항체 또는 리간드 (인간 CD155-Fc (시노 바이오로지컬, 10109-H02H))에 노출시켰다. 항원 회합 후의 제2 항체 또는 리간드에 의한 추가적인 결합은 점유되지 않은 에피토프를 지시하는 한편 (비-경쟁자), 결합 없음은 에피토프 차단을 지시한다 (경쟁자 또는 리간드 차단).
4개의 비닝 항체 (상호 배타적이지 않음)가 빈 평가에 사용되었고, 5개의 중첩 비닝 프로파일이 확인되었다. 65개의 항-TIGIT 항체 중 63개가 hTIGIT-Fc에 결합하는 것에 대해 리간드와 경쟁하였다. 선택된 클론에 대한 비닝 프로파일 및 리간드 경쟁 결과가 하기 표 1에서 제시된다.
표 1. 선택된 항-TIGIT 클론에 대한 에피토프 비닝, 리간드 경쟁, 및 친화도 데이터
Figure pct00007
HEK 293 세포에서 과발현된 인간, 마우스, 및 시노몰거스 원숭이 TIGIT에 대한 항-TIGIT 항체의 결합
렌티바이러스 형질도입에 의해 높은 수준의 인간, 마우스 또는 시노몰거스 원숭이 TIGIT를 안정적으로 발현하도록 HEK 293 세포를 조작하였다. 약 100,000개의 모체 HEK 293 (TIGIT-음성) 세포 또는 인간, 마우스 또는 시노몰거스 원숭이를 과발현하는 HEK 293 세포를 실온에서 5분 동안 100 nM의 각각의 항-TIGIT 항체로 염색하였다. 그 후, 세포를 세정 완충제로 2회 세정하고, PE에 접합된 항-인간 IgG와 함께 15분 동안 얼음 상에서 인큐베이션하였다. 그 후, 세포를 세정 완충제로 2회 세정하고, FACS 칸토(Canto) II 기기 (BD 바이오사이언시즈) 상에서 유동 세포측정법에 의해 분석하였다. 표적-양성 세포에 결합된 항-TIGIT 클론의 중앙값 형광 강도 (MFI)를 표적-음성 세포에 결합된 항-TIGIT 클론의 MFI로 나눈 것으로서 배경 대비 배수 (FOB)가 계산되었다.
도 1에 제시된 바와 같이, 65개의 항체 모두가 293-hTIGIT 세포주에 대한 특이적 결합을 나타냈다 (FOB>10, 차트 내의 흑색 수평선에 의해 지시되는 바와 같음). 53개의 클론이 293-cyTIGIT 세포주에 특이적으로 결합한 한편, 31개의 클론이 293-mTIGIT 세포주에 특이적으로 결합하였다.
다중특이성 시약 (PSR) 검정법
기존에 기술된 바와 같이 TIGIT에 대한 특이성을 결정하기 위해 다중특이성 시약에 결합하는 것의 평가를 수행하였다 (예를 들어, 상기 문헌 [Xu et al.]을 참조한다). 간략하게, 모액으로부터 1:10 희석된 비오틴화 PSR 시약을 IgG-제시 효모와 함께 얼음 상에서 20분 동안 인큐베이션하였다. 세포를 세정하고, EA-PE (엑스트라비딘-R-PE)로 표지하고, FACS 분석기 상에서 판독하였다. 다중특이적 결합의 채점은 0 내지 1점 척도이고, 0점은 결합 없음을 나타내고, 1점은 매우 높은 비-특이적 결합을 나타내면서, 낮은 비-특이적 결합, 중간 비-특이적 결합 및 높은 비-특이적 결합의 대조군 IgG와 상호관련된다.
65개의 클론 중 62개가 PSR 점수 < 0.10의 비-다중특이적 결합제로서 채점되었다. 3개의 클론이 낮은 다중특이적 결합제로서 채점되었다 (PSR 점수 0.10 - 0.33).
소수성 상호작용 크로마토그래피 검정법
기존에 기술된 바와 같이 소수성 상호작용 크로마토그래피 (HIC)를 수행하였다 (상기 문헌 [Estep et al.]). 간략하게, 5 ㎍ IgG 샘플을 이동상 A 용액 (pH 6.6에서 1.8 M 황산암모늄 및 0.1 M 인산나트륨)에 스파이킹하여, 분석 전에 약 1 M의 최종 황산암모늄 농도를 달성하였다. 280 nM에서 UV 흡광도를 모니터링하면서, 20분에 걸쳐 1 mL/분의 유속으로 세팍스 프로테오믹스(Sepax Proteomix) HIC 부틸-NP5 칼럼을 선형 구배의 이동상 A 및 이동상 B 용액 (0.1 M 인산나트륨, pH 6.5)과 함께 사용하였다.
소수성 칼럼 상에서의 항체의 체류 증가는 정제 동안의 증가된 소수성 및 불량한 발현, 응집 또는 침전에 대한 경향과 상호관련되었다. 65개의 클론 중 5개가 > 11.5분의 높은 HIC 체류 시간을 가졌고, 10개의 클론이 10.5 - 11.5분의 중간 HIC 체류 시간을 가졌으며, 나머지 클론은 낮은 HIC 체류 시간을 가졌다.
실시예 3: 1차 T 세포 상에서 내인성으로 발현된 인간, 마우스, 및 시노몰거스 원숭이 TIGIT에 대한 항-TIGIT 항체의 결합
HEK 293 세포 상에서 발현된 인간 TIGIT 재조합 단백질 및 인간 TIGIT에 대해 특이적인 것으로 나타난 65개의 항체를 1차 인간 말초혈 T 세포 상의 내인성 TIGIT에 결합하는 능력에 대해 평가하였다. 항체를 말초혈 T 세포 상의 시노몰거스 TIGIT에 대한 교차 반응성에 대해 또한 평가하였고, 65개의 클론 중 35개를 활성화된 비장 T 세포 상의 마우스 TIGIT에 대한 교차 반응성에 대해 평가하였다.
인간 범-T 세포가 음성으로 백혈구성분채집술 생성물로부터 99% 순도로 단리되었다. 100,000개의 세포를 4℃에서 30분 동안 20 ㎍/mL의 각각의 항-TIGIT 항체로 염색하였다. PE에 접합된 폴리클로날 염소 항-인간 IgG (잭슨 이뮤노리서치(Jackson ImmunoResearch) 109-116-098)로 항-TIGIT 항체를 검출하였다. 샘플을 CytoFLEX 유동 세포측정기 상에서 분석하였다. 양성에 대한 역치를 결정하기 위해 항-인간 IgG-PE 단독 염색을 사용하여 각각의 항체에 대해 FSC/SSC 게이팅 림프구 집단의 퍼센트 TIGIT+를 결정하였다.
적혈구용해 (이바이오사이언스(eBioscience) 00-4300)에 의해 전혈로부터 시노몰거스 백혈구를 단리하였다. 200,000개의 세포를 4℃에서 30분 동안 20 ㎍/mL의 각각의 항-TIGIT 항체로 염색하였다. 알렉사플루오르647(AlexaFluor647)에 접합된 원숭이 면역글로불린에 대해 흡착된 폴리클로날 염소 항-인간 IgG (서던바이오테크(SouthernBiotech) 2049-31)로 항-TIGIT 항체를 검출하고, FITC-접합 항-CD3 클론 SP34 (BD 파민젠(BD Pharmingen) 556611)로의 대비염색에 의해 T 세포를 확인하였다. 샘플을 CytoFLEX 유동 세포측정기 상에서 분석하였다. 양성에 대한 역치를 결정하기 위해 항-인간 IgG-PE 단독 염색을 사용하여 각각의 항체에 대해 CD3+ 집단의 퍼센트 TIGIT+를 결정하였다.
BALB/c 마우스 T 세포를 비장으로부터 음성 선택 (스템 셀 테크놀러지즈(Stem Cell Technologies) 19851A)에 의해 >99% 순도로 단리하였다. 세포를 플레이트에 결합된 항-CD3 클론 145-2C11 (바이오레전드(BioLegend) 100302)로 24시간 동안 활성화시켜 TIGIT를 상향조절시켰다. 200,000개의 활성화된 세포를 4℃에서 30분 동안 20 ㎍/mL의 각각의 항-TIGIT 항체 (테스트된 65개의 클론 중 35개)로 염색하였다. PE에 접합된 폴리클로날 염소 항-인간 IgG (잭슨 이뮤노리서치 109-116-098)로 항-TIGIT 항체를 검출하였다. 샘플을 FACSCalibur 유동 세포측정기 상에서 분석하였다. FSC/SSC 게이팅 림프구 집단의 중앙값 형광 강도를 각각의 항체에 대해 결정하였다.
도 2는 1차 인간, 시노몰거스 원숭이 및 마우스 T 세포에 대한 65개의 항-TIGIT 항체 클론 및 관련되지 않은 이소형 대조군 항체의 결합을 나타낸다. 클론 13 및 25 둘 다 3개 모두의 T 세포 종에 대해 강한 결합을 나타냈다.
세포 표면에 발현된 TIGIT에 대한 항-TIGIT 항체의 적정가능한 결합
렌티바이러스 형질도입에 의해 높은 수준의 인간, 마우스 또는 시노몰거스 원숭이 TIGIT를 안정적으로 발현하도록 HEK 293 세포를 조작하였다. 200,000개의 293-TIGIT 세포를 4℃에서 30분 동안 10-포인트, 3배 적정 (30 내지 0.002 ㎍/mL)의 각각의 항-TIGIT 항체로 염색하였다. PE에 접합된 폴리클로날 염소 항-인간 IgG (잭슨 이뮤노리서치 109-116-098)로 항-TIGIT 항체를 검출하였다. 샘플을 CytoFLEX 유동 세포측정기 상에서 분석하였다. FSC/SSC 게이팅 집단의 중앙값 형광 강도를 각각의 항체 농도에 대해 결정하였다. Log(X) 변환 데이터의 비선형 회귀를 사용하여 그래프패드 프리즘(GraphPad Prism) 6에서 EC50 값이 생성되었다. 어떠한 항-TIGIT 항체도 모체 HEK 293 세포 (TIGIT-)에 대한 결합을 나타내지 않았다 (데이터는 제시되지 않음). 도 3a-c는 HEK 293 세포 상에서 발현된 인간, 시노몰거스 원숭이, 및 마우스 TIGIT에 대한 8개의 항-TIGIT 항체 클론 (클론 2, 클론 5, 클론 13, 클론 16, 클론 17, 클론 20, 클론 25, 및 클론 54)의 결합 적정을 나타내고, 도 3d는 이러한 결합의 EC50을 나타낸다.
C57BL/6 마우스 T 세포를 비장으로부터 음성 선택 (스템 셀 테크놀러지즈 19851A)에 의해 >99% 순도로 단리하였다. 세포를 플레이트에 결합된 항-CD3 클론 145-2C11 (바이오레전드 100302)로 24시간 동안 활성화시켜 TIGIT를 상향조절시켰다. 200,000개의 세포를 4℃에서 30분 동안 8-포인트, 3배 적정 (30 내지 0.014 ㎍/mL)의 각각의 항-TIGIT 항체로 염색하였다. PE에 접합된 폴리클로날 염소 항-인간 IgG (잭슨 이뮤노리서치 109-116-098)로 항-TIGIT 항체를 검출하였다. 샘플을 FACSCalibur 유동 세포측정기 상에서 분석하였다. FSC/SSC 게이팅 림프구 집단의 중앙값 형광 강도를 각각의 항체에 대해 결정하였다. Log(X) 변환 데이터의 비선형 회귀를 사용하여 그래프패드 프리즘 6에서 EC50 값이 생성되었다. 도 4는 활성화된 마우스 비장 T 세포에 대한 항-TIGIT 클론 13 및 25의 결합 적정 및 이러한 결합의 EC50을 나타낸다.
실시예 4: 항-TIGIT 항체가 세포 표면-발현 TIGIT에 대한 CD155 및 CD112 리간드의 결합을 차단한다
렌티바이러스 형질도입에 의해 높은 수준의 인간 또는 마우스 TIGIT를 안정적으로 발현하도록 HEK 293 세포를 조작하였다. hCD155-Fc (시노 바이오로지컬 10109-H02H), hCD112-Fc (시노 바이오로지컬 10005-H02H) 및 mCD155-Fc (시노 바이오로지컬 50259-M03H)를 알렉사플루오르647 (써모피셔(ThermoFisher) A30009)에 접합시켰다. 200,000개의 293-hTIGIT 또는 293-mTIGIT 세포를 1 ㎍/mL CD155-Fc-알렉사플루오르647 또는 5 ㎍/mL CD112-Fc-알렉사플루오르647 및 12-포인트, 2배 적정 (10 내지 0.005 ㎍/mL)의 각각의 항-TIGIT 항체 또는 이소형 대조군 항체와 함께 공동-인큐베이션하였다. 샘플을 CytoFLEX 유동 세포측정기 상에서 분석하였다. FSC/SSC 게이팅 집단의 중앙값 형광 강도를 각각의 항체 농도에 대해 결정하였다. 퍼센트 차단을 항체 없음 대조군의 MFI에 비교하여 계산하였다. Log(X) 변환 데이터의 비선형 회귀를 그래프패드 프리즘 6에서 수행하였다.
도 5a-b에 제시된 바와 같이, 6개의 항-TIGIT 항체 클론 (클론 2, 클론 5, 클론 13, 클론 17, 클론 25, 및 클론 55)을 테스트하였고, 6개의 클론 중 5개 (클론 2, 클론 5, 클론 13, 클론 17, 및 클론 25)가 인간 CD155/인간 TIGIT 및 마우스 CD155/마우스 TIGIT 둘 다에 대해 HEK 293 세포 상에서 발현된 TIGIT와의 CD155 상호작용을 유의하게 차단하였다. 클론 55는 인간 TIGIT에 특이적으로 결합하지만, 포르테바이오 옥텟 리간드 경쟁 검정법에서 hTIGIT-Fc에 결합하는 것에 대해 hCD155-Fc와 경쟁하지 않았다. 유사하게, 클론 55는 293-hTIGIT 세포주와의 hCD155 상호작용을 효율적으로 차단하지 않았다. 클론 2, 클론 5, 클론 13, 클론 17, 및 클론 25는 또한 인간 TIGIT에 대한 인간 CD112의 결합을 방해할 수 있었다. CD155에 대해 관찰된 바와 같이, 클론 55는 CD112-TIGIT 상호작용을 차단하는 것에서 훨씬 덜 효과적이었다. 도 6을 참조한다.
실시예 5: TIGIT/CD155 차단 생물검정법에서의 항-TIGIT 항체의 시험관 내 활성
항체가 TIGIT/CD155 상호작용을 차단하는 경우에 리포터 유전자의 발현이 유도 또는 강화되는 TIGIT/CD155 차단 생물검정법 (예를 들어, TIGIT/CD155 차단 생물검정법 키트, 프로메가 코포레이션, 위스컨신주 매디슨)을 사용하여 항-TIGIT 항체의 활성을 기능적으로 특성화할 수 있다. TIGIT/CD155 차단 생물검정법은 2가지 세포 유형을 포함한다: 세포 표면 상에 TIGIT, CD226, 및 TCR 복합체를 발현하고, 루시퍼라제 리포터 유전자를 함유하는 이펙터 세포; 및 세포 표면 상에 CD155 및 TCR 활성자를 발현하는 인공 항원 제시 세포. 이러한 생물검정법에서, 루시퍼라제 발현은 TCR 맞물림 + 공동-자극 신호를 필요로 한다. CD155-TIGIT 상호작용은 CD155-CD226 상호작용보다 친화도가 더 높아서, 순 억제성 신호전달 및 루시퍼라제 발현 없음을 초래한다. CD155-TIGIT 상호작용의 차단은 루시퍼라제 발현을 구동시키는 CD155-CD226 공동-자극을 허용한다.
TIGIT 및 CD226 둘 다를 발현하는 저캣 이펙터 세포를 TCR 활성자 및 CD155를 발현하는 CHO-K1 인공 항원 제시 세포 (aAPC)와 함께 공동-배양하였다. 저캣 이펙터 세포는 IL-2 프로모터에 의해 구동되는 루시퍼라제 리포터 유전자를 함유한다. 차단성 항-TIGIT 항체의 부재 하에, CD155-TIGIT 맞물림이 T 세포 공동-억제 및 IL-2 프로모터 활성 없음에 이른다. 항-TIGIT 항체의 첨가 시, CD155-TIGIT 상호작용이 방해되어, CD155가 CD226과 회합하여 공동-자극 신호를 보내고 루시퍼라제 발현을 구동시키는 것을 허용한다.
aAPC를 96-웰 플레이트에 플레이팅하고, 철야로 부착되도록 허용하였다. 다음날, 20 ㎍/mL의 각각의 항-TIGIT 항체 또는 이소형 대조군 항체 및 저캣 이펙터 세포를 플레이트에 첨가하였다. 37℃에서 6시간 인큐베이션한 후, 세포를 용해시키고, 루시퍼라제 기질을 첨가하였다. 플레이트 판독기에서 루시퍼라제 활성을 정량하였다. 항체 없음 대조군에서의 신호에 대비된 배수로서 루시퍼라제 활성이 계산되었다.
도 7a-7b에 제시된 바와 같이, 12개의 항-TIGIT 항체 클론이 이러한 생물검정법에서 기능적인 차단을 입증하였다.
실시예 6: TIGIT/PD-1 조합 생물검정법에서의 항-TIGIT 항체의 시험관 내 활성
항체들이 TIGIT/CD155 상호작용 및 PD-1/PD-L1 상호작용 둘 다를 차단하는 경우에 리포터 유전자의 발현이 강화되는 TIGIT/PD-1 조합 생물검정법을 사용하여 항-PD-1 작용제 (예를 들어, 항-PD-1 항체)와 조합된 항-TIGIT 항체의 상승작용적 활성을 기능적으로 특성화할 수 있다. 이러한 생물검정법은 2가지 세포 유형을 포함한다: 세포 표면 상에 TIGIT, CD226, PD-1, 및 TCR 복합체를 발현하고, 루시퍼라제 리포터 유전자를 함유하는 이펙터 세포; 및 세포 표면 상에 CD155, PD-L1 및 TCR 활성자를 발현하는 인공 항원 제시 세포. 이러한 생물검정법에서, 루시퍼라제 발현은 TCR 맞물림 + 공동-자극 신호를 필요로 한다. CD155-TIGIT 상호작용은 CD155-CD226 상호작용보다 친화도가 더 높아서, 순 억제성 신호전달 및 루시퍼라제 발현 없음을 초래한다. 추가적으로, PD-L1이 PD-1에 결합하는 것이 루시퍼라제 발현을 억제한다. CD155-TIGIT 상호작용 및 PD-1/PD-L1 상호작용 둘 다의 차단은 억제를 경감시키고, 루시퍼라제 발현을 구동시키는 CD155-CD226 공동-자극을 허용한다.
PD-1, TIGIT 및 CD226을 발현하는 저캣 이펙터 세포를 TCR 활성자, PD-L1 및 CD155를 발현하는 CHO-K1 인공 항원 제시 세포 (aAPC)와 함께 공동-배양하였다. 저캣 이펙터 세포는 IL-2 프로모터에 의해 구동되는 루시퍼라제 리포터 유전자를 함유한다. 차단성 항-TIGIT 항체의 부재 하에, PD-L1-PD-1 및 CD155-TIGIT 맞물림이 T 세포 공동-억제 및 IL-2 프로모터 활성 없음에 이른다. 항-PD-1 및 항-TIGIT 항체의 첨가 시, PD-L1-PD-1 상호작용이 차단되어, 하나의 공동-억제 신호를 경감시키고, CD155-TIGIT 상호작용이 방해되어, CD155가 CD226과 회합하여 공동-자극 신호를 보내고 루시퍼라제 생산을 구동시키는 것을 허용한다.
aAPC를 96-웰 플레이트에 플레이팅하고, 철야로 부착되도록 허용하였다. 다음날, 10-포인트 2.5배 적정 (100 내지 0.03 ㎍/mL)의 각각의 항-TIGIT 항체 단독, 또는 항-PD-1 항체 (클론 EH12.2H7, 바이오레전드, 캘리포니아주 샌디에고), 또는 각각의 항-TIGIT 항체 + 항-PD-1 항체 (1:1 비) 및 저캣 이펙터 세포를 플레이트에 첨가하였다. 37℃에서 6시간 인큐베이션한 후, 세포를 용해시키고, 루시퍼라제 기질을 첨가하였다. 플레이트 판독기에서 루시퍼라제 활성을 정량하였다. 항체 없음 대조군에서의 신호에 대비된 배수로서 루시퍼라제 활성이 계산되었다. 도 8에 제시된 바와 같이, 항-TIGIT 또는 항-PD-1 단독은 극적인 저캣 활성화에 이르지 않았지만, 항-TIGIT 클론 13 또는 클론 25와 항-PD-1의 조합은 강한 활성화를 산출하였다.
실시예 7: BALB/c 마우스에서의 CT26 동계 종양 모델에서의 항-TIGIT 항체의 생체 내 활성
뮤린 TIGIT에 대한 친화도를 기초로, 항-TIGIT 클론 13을 뮤린 동계 종양 모델에서의 평가를 위해 선택하였다. Fc 이소형이 길항성 TIGIT 항체의 생체 내 효능에 대한 효과가 있는지 여부의 질문을 다루기 위한 생체 내 실험을 위해 모체 완전 인간 항-TIGIT 클론 13의 마우스 IgG1 및 마우스 IgG2a 키메라가 생성되었다. 시험관 내에서, 키메라 항체는 (1) 인간, 마우스 및 시노몰거스 원숭이 TIGIT에 결합하는 것, (2) 세포 표면에 발현된 TIGIT에 대한 CD155 및 CD112 리간드 결합의 차단, 및 (3) CD155-TIGIT 차단 생물검정법에서의 활성과 관련하여 모체 hIgG1 항체와 유사한 활성을 나타냈다. 도 9a-9h를 참조한다.
평균 체중 19 g의 8주령 BALB/c 마우스를 찰스 리버 래버러토리즈(Charles River Laboratories)로부터 수득하였다. 마우스의 오른쪽 측면 옆구리에 300,000개의 CT26 결장 암종 세포를 피하 이식하였다. 종양 접종 후 제7일에 군 평균 종양 부피가 72 ㎣ (48 - 88 ㎣의 범위)일 때까지 종양이 진행되도록 허용하였다. 군 평균 종양 부피가 모든 처리 군에 걸쳐 유사하도록 쌍 매칭에 의해 동물을 n=10의 10개의 처리 군 내로 할당하였다. 종양 길이 및 폭을 측정하고, 부피 (㎣) = 0.5 × 길이 × 폭2 [식 중, 길이는 더 긴 치수이다]의 공식을 사용하여 종양 부피를 계산하였다. 항-TIGIT 클론 13 mIgG1, 항-TIGIT 클론 13 mIgG2a 및 항-PD-1 클론 RMP1-14 (바이오엑스셀(BioXCell))를 멸균 PBS에서 적합한 투약용 농도로 희석하였다. 멸균 PBS가 비히클 대조군으로서 사용되었다. TIGIT 항체를 5 또는 20 mg/kg로 복막내 주사를 통해 3주 동안 주 2회로 투약하였다 (총 6회 용량). 항-PD-1 항체를 5 mg/kg으로 복막내 주사를 통해 2주 동안 주 2회로 투약하였다 (총 4회 용량). 할당일 (연구 제1일)에 투약을 시작하였다. 마우스가 2000 ㎣의 종양 부피 차단값에 도달할 때까지 종양 부피 및 체중 치수를 주 2회로 수집하였다. 어떠한 동물도 투약 전 체중과 비교하여 체중 감소를 나타내지 않았고, 이는 모든 테스트 작용제의 탁월한 내약성을 나타낸다.
도 10a에 제시된 바와 같이, 항-mPD-1 단독은 종양 진행에 어떠한 효과도 없었다. 활성화 Fc감마 수용체와 효율적으로 맞물리지 않는 클론 13의 mIgG1 항-TIGIT 키메라 ("13-1")는 단일 작용제로서 또는 항-PD-1과 조합되어 어떠한 항종양 활성도 매개하지 않았다. 대조적으로, 활성화 Fc감마 수용체에 결합할 수 있는 클론 13의 mIgG2a 키메라 ("13-2")는 종양 진행을 느리게 하였다 (제18일의 86.5% (5 mg/kg) 또는 74.4% (20 mg/kg) 종양 성장 억제). 5 mg/kg 13-2 단일 작용제 군의 10마리의 동물 중 3마리가 완전한 종양 퇴행을 나타냈고, 이는 연구 종료 (연구 제46일)까지 안정적이었다. 20 mg/kg 13-2 단일 작용제 군에서는, 10마리의 동물 중 2마리가 부분적인 종양 퇴행 (3회 연속 측정에 대해 초기 부피의 <50%의 종양 부피로 정의됨)을 나타냈다. 도 10a는 mIgG2a 클론 13 키메라 (13-2)에 항-PD-1을 부가하는 것이 13-2 단독에 비교하여 효능을 증가시키지 않았다는 것을 나타낸다 (53.8% (5 mg/kg 항-TIGIT + 5 mg/kg 항-PD-1) 대 86.5% (5 mg/kg 항-TIGIT 단독) 및 89.6% (20 mg/kg 항-TIGIT + 5 mg/kg 항-PD-1) 대 74.4% (20 mg/kg 항-TIGIT 단독)의 제18일 종양 성장 억제). 조합 군에서 유사한 수의 완전 및 부분적 반응자가 관찰되었다. 예를 들어, 도 10b-10k를 참조한다.
실시예 8: 항체 최적화 및 최적화된 항체의 특성화
1차 발견 출력물로부터의 항체 클론 2, 13, 16, 및 25를 추가 친화도 성숙을 위해 선택하였다. 중쇄 가변 영역 내로 다양성을 도입하는 것을 통해 항체 최적화를 수행하였다. 2 사이클의 최적화가 상기 계통에 적용되었다. 제1 사이클은 CDRH1 및 CDRH2 다양화 접근법으로 구성된 한편, 제2 사이클에서는 CDRH3 돌연변이유발 접근법이 적용되었다.
CDRH1 및 CDRH2 접근법: 단일 항체의 CDRH3를 1 x 108의 다양성의 CDRH1 및 CDRH2 변이체를 갖는 미리 제조된 라이브러리 내로 재조합하였다. 그 후, 나이브 발견에 대해 기술된 바와 같이 1 라운드의 MACS 및 4 라운드의 FACS로 선택을 수행하였다.
제1 FACS 라운드에서, 라이브러리를 1 nM 단량체성 TIGIT 결합에 대해 분류하였다. 제2 FACS 라운드는 다중-특이성을 감소시키기 위한 PSR 고갈 라운드였다. 최종 2 라운드는 높은 친화도에 대해 압박하기 위해 모체 Fab 또는 IgG를 사용하는 양성 선택 라운드였다. Fab/IgG 압박을 하기와 같이 수행하였다: 항원을 10배 모체 Fab 또는 IgG와 함께 인큐베이션한 후, 효모 라이브러리와 함께 인큐베이션하였다. 모체 Fab 또는 IgG보다 더 양호한 친화도를 갖는 IgG에 대해 선택이 강화되었다. 마지막 2 라운드의 FACS에서 종 교차-반응성을 점검하였다.
CDRH3 돌연변이유발: CDRH3 내의 위치를 무작위화함으로써 CDRH3 다양화로 라이브러리가 생성되었다. 기존에 기술된 바와 같이 1 라운드의 MACS 및 3 라운드의 FACS로 선택을 수행하였다. 원하는 특성을 갖는 집단을 수득하기 위해 PSR 음성 선택, 종 교차-반응성, 친화도 압박, 및 분류를 수행하였다.
MSD-SET K D 측정
일반적으로 기존에 기술된 바와 같이 평형 친화도 측정을 수행하였다 (상기 문헌 [Estep et al.]). 간략하게, 50 pM으로 일정하게 유지되고 약 5 nM에서 시작되는 항체의 3-내지 5배 단계 희석물과 함께 인큐베이션된 비오틴화 인간 TIGIT-His 단량체로 PBS + 0.1% IgG-프리 BSA (PBSF)에서 용액 평형 적정 (SET)을 수행하였다. 항체 (PBS 내의 20 nM)를 표준 결합 MSD-ECL 플레이트 상에 철야로 4℃에서 또는 실온에서 30분 동안 코팅하였다. 그 후, 700 rpm에서 진탕하면서 플레이트를 1% BSA로 30분 동안 차단한 뒤, 세정 완충제 (PBSF + 0.05% 트윈 20)로 3회 세정하였다. SET 샘플을 적용하고, 700 rpm에서 진탕하면서 플레이트 상에서 150초 동안 인큐베이션한 뒤, 1회 세정하였다. 플레이트에 포착된 항원을 플레이트 상에서의 3분 인큐베이션에 의해 PBSF 내의 250 ng/ml 술포태그(sulfotag)-표지 스트렙타비딘으로 검출하였다. 플레이트를 세정 완충제로 3회 세정한 후, 계면활성제가 있는 1x 판독 완충제 T를 사용하여 MSD 섹터 이미저(Sector Imager) 2400 기기 상에서 판독하였다. 퍼센트 유리 항원을 프리즘에서 적정 항체의 함수로서 플롯팅하고, 이차 방정식에 피팅하여 KD를 추출하였다. 처리량을 개선하기 위해, SET 샘플 제조를 포함하여 MSD-SET 실험 전반에 걸쳐 액체 취급 로봇을 사용하였다.
His-태그부착 인간 TIGIT, 시노 TIGIT-Fc, 및 마우스 TIGIT-Fc에 대한 최적화된 항체의 결합을 상기 기술된 바와 같이 포르테바이오 시스템을 사용하여 측정하였다. 최적화된 항체를 또한 CD155 리간드 경쟁 검정법에서 리간드 차단에 대해서, 그리고 인간 TIGIT HEK, 시노 TIGIT HEK, 마우스 TIGIT HEK, 및 모체 HEK 세포주에 결합하는 것에 대해 상기 기술된 바와 같이 테스트하였다.
친화도 최적화 항체에 대한 친화도 데이터 및 세포 결합 데이터가 하기 표 2에서 제시된다.
표 2. 친화도 최적화 항체에 대한 친화도 및 세포 결합 데이터
Figure pct00008
실시예 9: 에피토프 맵핑
본원에 개시된 모노클로날 항체 중 2개인 클론 13 및 클론 25의 에피토프를 펩티드 어레이에 의해 특성화하였다. 표적 분자의 에피토프를 재구축하기 위해, 펩티드 기반 에피토프 모방체의 라이브러리를 고체-상 Fmoc 합성을 사용하여 합성하였다. 독점적인 친수성 중합체 제형의 그래프팅에 이어지는 디시클로헥실카르보디이미드 (DCC)와 N히드록시벤조트리아졸 (HOBt)을 이용한 t-부틸옥시카르보닐-헥사메틸렌디아민 (BocHMDA)과의 반응 및 트리플루오로아세트산 (TFA)을 이용한 Boc-기의 후속 절단에 의해 아미노 관능화 폴리프로필렌 지지체를 수득하였다. 표준 Fmoc-펩티드 합성을 사용하여, 맞춤 변형 JANUS 액체 취급 스테이션 (퍼킨 엘머(Perkin Elmer))에 의해 아미노-관능화 고체 지지체 상에서 펩티드를 합성하였다.
독점적인, 스캐폴드 상의 화학적으로 연결된 펩티드 (CLIPS) 기술 (펩스캔(Pepscan))을 사용하여 구조적 모방체의 합성을 수행하였다. CLIPS 기술은 펩티드를 단일 루프, 이중-루프, 삼중 루프, 시트-유사 폴드, 나선-유사 폴드 및 그의 조합으로 구조화하는 것을 허용한다. 시스테인 잔기에 CLIPS 주형이 커플링된다. 펩티드 내의 다중 시스테인의 측쇄가 1개 또는 2개의 CLIPS 주형에 커플링된다. 예를 들어, P2 CLIPS (2,6-비스(브로모메틸)피리딘)의 0.5 mM 용액이 중탄산나암모늄 (20 mM, pH 7.8)/아세토니트릴 (1:3(v/v))에 용해된다. 이러한 용액을 펩티드 어레이 상에 첨가한다. CLIPS 주형이 펩티드-어레이 (3 ㎕ 웰이 있는 455개 웰 플레이트)의 고체-상에 결합된 펩티드 내에 존재하는 바와 같은 2개의 시스테인의 측쇄에 결합할 것이다. 펩티드 어레이를 용액 내에 완전히 커버된 상태로 용액에서 30 내지 60분 동안 부드럽게 진탕시킨다. 마지막으로, 펩티드 어레이를 과량의 H2O로 광범위하게 세정하고, 70℃에서 30분 동안 PBS (pH 7.2) 내의 1 % SDS/0.1 % 베타-메르캅토에탄올을 함유하는 파괴-완충제에서 초음파처리한 후, H2O에서 또 다른 45분 동안 초음파처리하였다. T3 CLIPS를 보유하는 펩티드를 유사한 방식으로, 그러나 3개의 시스테인으로 제조하였다.
하기 디자인에 따라 상이한 펩티드 세트들을 합성하였다. 세트 1은 1개의 잔기가 오프셋된 인간 TIGIT의 표적 서열로부터 유래된 아미노산 15개의 길이를 갖는 선형 펩티드들의 세트를 포함하였다. 세트 2는 세트 1의 선형 펩티드들의 세트를 포함하였지만, 위치 10 및 11의 잔기가 Ala로 교체되었다. 천연 Ala가 어느 한쪽 위치에서 발생하는 경우, 이는 Gly로 교체되었다. 세트 3은 Cys 잔기를 함유한, 세트 1의 선형 펩티드들의 세트를 포함하였다. 이러한 세트에서, 천연 Cys가 Cys-아세트아미도메틸 ("Cys-acm")로 교체되었다. 세트 4는 1개의 잔기가 오프셋된 인간 TIGIT의 표적 서열로부터 유래된 아미노산 17개의 길이를 갖는 선형 펩티드들의 세트를 포함하였다. 위치 1 및 17에는 mP2 CLIPS에 의해 루프형 모방체를 생성시키는 데 사용된 Cys 잔기가 있었다. 천연 Cys가 Cys-acm으로 교체되었다. 세트 6은 1개의 잔기가 오프셋된 인간 TIGIT의 표적 서열로부터 유래된 아미노산 22개의 길이를 갖는 선형 펩티드들의 세트를 포함하였다. 위치 11 및 12의 잔기는 "PG" 모티프로 교체된 한편, mP2로 구속 모방체를 생성시키기 위해 Cys 잔기가 위치 1 및 22에 배치되었다. 천연 Cys 잔기가 Cys-acm에 의해 교체되었다. 세트 7은 아미노산 27개의 길이를 갖는 선형 펩티드들의 세트를 함유하였다. 위치 1-11 및 17-27에는 표적 서열로부터 유래되고 "GGSGG" (서열식별번호: 309) 링커를 통해 연결된 11량체 펩티드 서열이 있었다. 인간 TIGIT에 대한 디술피드 가교에 대한 UniProt 정보를 기초로 조합이 이루어졌다. 세트 8은 아미노산 33개 길이를 갖는 조합형 펩티드들의 세트를 포함하였다. 위치 2-16 및 18-32에는 인간 TIGIT의 표적 서열로부터 유래된 15량체 펩티드가 있었다. 위치 1, 17 및 33에는 T3 CLIPS에 의해 불연속 모방체를 생성시키는 데 사용된 Cys 잔기가 있었다.
각각의 합성된 펩티드에 대한 항체의 결합을 펩스캔-기반 ELISA에서 테스트하였다. 펩티드 어레이를 1차 항체 용액과 함께 인큐베이션하였다 (철야, 4℃). 세정 후, 펩티드 어레이를 염소 항-인간 HRP 접합체 (서던 바이오테크)의 1/1000 희석물과 함께 1시간 동안 25℃에서 인큐베이션하였다. 세정 후, 퍼옥시다제 기질 2,2'-아지노-디-3-에틸벤즈티아졸린 술포네이트 (ABTS) 및 20 ㎕/ml의 3 퍼센트 H2O2를 첨가하였다. 1시간 후, 발색을 측정하였다. 전하 결합 소자 (CCD) - 카메라 및 영상 프로세싱 시스템으로 발색을 정량하였다. CCD 카메라로부터 수득된 값은 표준 96-웰 플레이트 ELISA-판독기와 유사한 0 내지 3000 mAU 범위이다.
합성된 펩티드의 품질을 확인하기 위해, 양성 및 음성 대조군 펩티드의 별개의 세트를 병행으로 합성하였다. 이들을 상업용 항체 3C9 및 57.9로 스크리닝하였다 (Posthumus et al., J. Virol., 1990, 64:3304-3309).
클론 13의 경우, 높은 엄격도 조건 하에 테스트되었을 때, 클론 13이 불연속 에피토프 모방체에 약하게 결합하였다. 항체를 중등도 엄격도 조건 하에 또한 테스트하였고, 항체의 검출가능한 결합이 관찰되었다. 가장 높은 신호 강도가 코어 신장물 68ICNADLGWHISPSFK82 (서열식별번호: 258), 42ILQCHLSSTTAQV54 (서열식별번호: 298), 108CIYHTYPDGTYTGRI122 (서열식별번호: 299)를 함유하는 불연속 에피토프 모방체로 기록되었다. 추가적인 더 약한 결합이 펩티드 신장물 80SFKDRVAPGPG90 (서열식별번호: 300)을 함유하는 펩티드로 관찰되었다. 선형 및 단순 형상 에피토프 모방체에 대한 항체의 결합은 일반적으로 더 낮았고, 모티프 68ICNADLGWHISPSFK82 (서열식별번호: 258), 108CIYHTYPDGTYTGRI122 (서열식별번호: 299) 및 80SFKDRVAPGPG90 (서열식별번호: 300)에 대해서만 관찰되었다.
클론 25의 경우, 높은 엄격도 조건 하에 테스트되었을 때, 클론 25가 모든 세트로부터의 펩티드에 검출가능하게 결합하였다. 불연속 에피토프 모방체로 가장 강한 결합이 관찰되었다. 신장물 68ICNADLGWHISPSFK82 (서열식별번호: 258) 내의 잔기를 함유하는 펩티드에 대한 결합이 다른 세트에서 또한 관찰된 한편, 펩티드 신장물 50TTAQVTQ56 (서열식별번호: 301)에 대한 결합은 68ICNADLGWHISPSFK82 (서열식별번호: 258)와의 조합에서만 관찰되었다. 추가적인 더 약한 결합이 펩티드 신장물 80SFKDRVAPGPGLGL93 (서열식별번호: 300)을 함유하는 펩티드로 또한 관찰되었다.
클론 13 및 클론 25에 대한 이러한 에피토프 맵핑 결과를 기초로, 클론 13 및 클론 25의 에피토프의 정밀한 맵핑을 하기 펩티드 세트를 사용하여 상기 기술된 방법을 사용하여 수행하였다. 세트 1은 서열 CILQ2HLSSTTAQVTQCI2NADLGWHISPSFKC (서열식별번호: 302)를 기초로 하는 단일 잔기 에피토프 돌연변이체의 라이브러리를 포함하였다. 잔기 ADHIQRY (서열식별번호: 304)가 교체에 적용되었다. 위치 1, 17, 19, 30 및 33은 교체되지 않았다. 천연 Cys 잔기가 Cys-acm (전반적으로 "2"로 표기됨)에 의해 교체되었다. 세트 2는 서열 CILQ2HLSSTTAQVTQCI2NADLGWHISPSFKC (서열식별번호: 302)로부터 유래된 보행 이중 Ala 돌연변이체의 라이브러리를 포함하였다. 위치 1, 17 및 33은 교체되지 않았다. 천연 Cys 잔기가 Cys-acm에 의해 교체되었다. 세트 3은 서열 CKDRVAPGPGLGLTLQCI2NADLGWHISPSFKC (서열식별번호: 303)를 기초로 하는 단일 잔기 에피토프 돌연변이체의 라이브러리를 포함하였다. 잔기 ADHIQRY (서열식별번호: 304)가 교체에 사용되었다. 위치 1, 2, 17, 19, 30 및 33은 교체되지 않았다. 세트 4는 서열 CKDRVAPGPGLGLTLQCI2NADLGWHISPSFKC (서열식별번호: 303)로부터 유래된 보행 이중 Ala 돌연변이체의 라이브러리를 포함하였다. 위치 1, 17 및 33은 교체되지 않았다.
클론 13을 높은 엄격도 및 중등도 엄격도 조건 하에 펩티드 CILQ2HLSSTTAQVTQCI2NADLGWHISPSFKC (서열식별번호: 302) 및 CKDRVAPGPGLGLTLQCI2NADLGWHISPSFKC (서열식별번호: 303)로부터 유래된 불연속 에피토프 돌연변이체의 4개의 시리즈로 테스트하였다. 데이터 분석은 모든 경우에, 잔기 81FK82를 단일 잔기 또는 이중 Ala로 교체하는 것이 클론 13의 결합을 손상시켰다는 것을 지시하였다. 불연속 에피토프 모방체 내의 다른 잔기의 단일 돌연변이는 결합에 대한 강렬한 효과가 없었다. 반면에, 이중 Ala 에피토프 돌연변이체는 상응하는 불연속 모방체에 대해 단일 잔기 돌연변이체의 시리즈와 비교했을 때 결합에 대한 더욱 뚜렷한 효과를 나타냈다. CILQ2HLSSTTAQVTQCI2NADLGWHISPSFKC (서열식별번호: 302) 내의 잔기 51TAQVT55 (서열식별번호: 305)의 이중 Ala 교체가 클론 13의 결합에 현저하게 영향을 미쳤다는 것이 또한 밝혀졌다. 서열 CKDRVAPGPGLGLTLQCI2NADLGWHISPSFKC (서열식별번호: 303)로부터 유래된 에피토프 모방체로 클론 13에 대해 기록된 신호 강도는 CILQ2HLSSTTAQVTQCI2NADLGWHISPSFKC (서열식별번호: 302)로 기록된 것보다 낮았다. 81FK82에 더하여, 74GWHI77 (서열식별번호: 306)의 이중 Ala 교체가 클론 13의 결합을 현저하게 감소시킨다는 것이 추가로 밝혀졌다. 추가적으로, 신장물 87PGPGLGL93 (서열식별번호: 307) 내에서의 이중 Ala 돌연변이가 결합을 다소 약화시켰다.
클론 25를 높은 엄격도 및 중등도 엄격도 조건 하에 펩티드 CILQ2HLSSTTAQVTQCI2NADLGWHISPSFKC (서열식별번호: 302) 및 CKDRVAPGPGLGLTLQCI2NADLGWHISPSFKC (서열식별번호: 303)로부터 유래된 불연속 에피토프 돌연변이체의 4개의 시리즈 상에서 테스트하였다. 에피토프 돌연변이체의 개별적인 세트로부터 수집된 데이터의 분석은 잔기 81FK82의 단일 또는 이중 교체가 강렬하게 결합에 영향을 미쳤다는 것을 지시하였다. CILQ2HLSSTTAQVTQCI2NADLGWHISPSFKC (서열식별번호: 302) 및 CKDRVAPGPGLGLTLQCI2NADLGWHISPSFKC (서열식별번호: 303) 내의 다른 잔기의 단일 잔기 교체는 신호 강도에서의 현저한 감소를 야기하지 않았다. 이중 보행 Ala 돌연변이체 시리즈는 클론 25가 모방체에 결합하는 것에 대한 더욱 뚜렷한 효과를 나타냈다. 81FK82에 더하여, 잔기 52AQ53 및 P79의 이중 Ala 교체 또한 에피토프 모방체 CILQ2HLSSTTAQVTQCI2NADLGWHISPSFKC (서열식별번호: 302)에 대한 항체의 결합에 경미하게 영향을 미쳤다. CKDRVAPGPGLGLTLQCI2NADLGWHISPSFKC (서열식별번호: 303)로부터 유래된 이중 Ala 돌연변이체 시리즈에 대한 클론 25의 결합의 분석은 81FK82의 중요성을 다시 확증하였을 뿐만 아니라, 잔기 73LGW75 및 82KDRVA86 (서열식별번호: 308)의 이중 Ala 교체가 중등도로 결합에 영향을 미쳤다는 것을 또한 지시하였다.
요약하면, 모노클로날 항체 클론 13 및 클론 25의 경우, 잔기 81FK82가 항체 둘 다의 TIGIT 에피토프 모방체에 대한 결합에 결정적이었다는 것이 밝혀졌다. 클론 13의 경우, 잔기 51TAQVT55 (서열식별번호: 305), 74GWHI77 (서열식별번호: 306), 및 87PGPGLGL93 (서열식별번호: 307)이 또한 결합에 기여하는 것으로 밝혀졌다. 클론 25의 경우, 잔기 52AQ53, 73LGW75, P79, 및 82KDRVA86 (서열식별번호: 308)이 또한 결합에 기여하는 것으로 밝혀졌다.
실시예 10: 백본-변경 항-TIGIT 항체
현세대의 항-TIGIT 항체를 잠재적으로 개선하기 위해, 비-푸코실화 항-TIGIT 항체 및 이펙터 기능이 감소된 Fc 돌연변이 버전의 항-TIGIT 항체 (IgG1 LALA-PG)가 개발되었다. 비-푸코실화 및 LALA-PG 항체가 여전히 TIGIT와의 CD155 및 CD112 상호작용을 차단할 것으로 예상된다. 임의의 특정 이론에 제한되기를 원치 않으면서, 비-푸코실화 항-TIGIT 항체가 종양 침윤 Treg에 직접적으로 결합할 수 있고, 더 큰 Fc 매개 ADCC 및/또는 ADCP에 이를 수 있으며, 궁극적으로 더 큰 항종양 면역 반응을 유발할 수 있거나, 또는 대안적으로 이펙터 기능이 이펙터 T 세포의 고갈로 이어져, 이펙터 무효 항체가 활성화된 CD8 T 세포의 보존을 허용할 수 있을 것으로 가설되었다.
DNA & 벡터 생성 (제네위즈(Genewiz)):
비-주형 PCR을 사용하여 항체 가변 및 불변 도메인 서열을 합성한다. 실제 유전자 서열이 제네위즈의 생물정보학 도구를 사용하여 올리고뉴클레오티드 서열로 전환된다. 올리고뉴클레오티드를 합성하고, 풀링하고, PCR을 사용하여 증폭시킨다. PCR 반응으로부터의 전장 앰플리콘을 벡터 내로 클로닝한 후, 생성물을 이. 콜라이 내로 형질전환시키고, 고유한 콜로니를 단리한다. 콜로니를 액체 배지에서 철야로 성장시키고, 플라스미드 DNA를 단리하고, 정제하고, 생어 시퀀싱을 사용하여 서열을 확인한다. 경쇄 및 중쇄를 pcDNA3.4 벡터 내로 클로닝한다.
항체 발현 (시애틀 제네틱스):
1:1 비의 항체 중쇄 및 경쇄 벡터를 엑스피펙타민(ExpiFectamine) CHO 형질감염 시약이 있는 써모피셔 OptiPRO SFM 배지 내로 희석한다. 그 후, DNA/형질감염 시약을 써모피셔 ExpiCHO 발현 배지 내의 ExpiCHO 배양물에 첨가하고, 제1일에 첨가된 ExpiCHO 인핸서 및 제1일 및 제2일에 첨가된 ExpiCHO 공급물과 함께 9일 동안 배양한다. N297 글리칸 상에서의 코어 푸코실화가 감소된 항체 (비-푸코실화 항체)를 제조하기 위해, 푸코스 유사체 2-플루오로푸코스를 형질감염 전날 및 형질감염일에 ExpiCHO 배양물에 첨가한다. 원심분리 및 0.2 ㎛ 여과에 의해 배양물을 수확한다.
항체 정제 (시애틀 제네틱스):
GE 하이트랩 mAb 셀렉트 슈어(GE HiTrap mAb Select SuRe) 칼럼이 각각의 IgG의 정제에 사용된다. 용출 전에, 수지를 5CV PBS+0.1% 트리톤(Triton), 5CV PBS+0.5M NaCl, 및 7.5CV의 PBS로 세정한다. 25 mM 아세트산 pH 3 완충제를 사용하여 IgG를 용출시킨다. 26/60 하이프렙(HiPrep) 탈염 칼럼을 사용하여 샘플을 PBS 내로 완충제 교환한다. 그 후, 샘플을 필터 멸균한 후, 특성화를 위해 샘플을 취한다. 특성화는 A280 농도, aSEC HPLC, aHIC HPLC, 및 감소된 글리코실화 및 탈글리코실화 PLRP-MS (QToF)를 포함한다.
실시예 11: 백본-변경 항체 특성화
생체 내에서, 단핵구, 대식세포, 호중구, 수지상 세포, 및 NK 세포는 FcγRI, FcγRIIa, FcγRI 및 FcγRIIIa를 통해 ADCP (항체-의존적 세포-매개 포식작용) 및 ADCC (항체-의존적 세포-매개 세포독성)를 매개할 수 있다. 3개의 수용체 모두가 ADCP에 참여할 수 있지만, FcγRIIIa가 ADCC에서 수반되는 우세한 Fcγ 수용체인 것으로 여겨진다. IgG1 항체의 비-푸코실화는 FcγRIIIa 및 b에 대한 더 높은 친화도의 결합을 초래하고, 따라서 ADCC 및 ADCP 활성을 증가시킬 수 있다.
바이오레이어 간섭법 (BLI)이 30℃에서 비-푸코실화 항체 및 LALA-PG 돌연변이의 효과를 이해하기 위해 다양한 항-TIGIT 항체에 대한 인간 FcγRIIIa 158V의 결합 동역학을 평가하는 데 활용되었다. N-히드록시숙신이미드 (NHS)-에스테르 비오틴화 인간 FcγRIIIa 158V-모노 Fc N297A 융합 단백질 (시애틀 제네틱스에서 발현됨)을 고-정확도 스트렙타비딘 바이오센서 (폴 포르테바이오(Pall ForteBio)) 상에 300초 동안 3 ㎍/mL로 로딩한 후, 300초 센서 점검이 이어졌다. 200초 기준선 후, 적정된 항-TIGIT 항체가 50초 동안 회합되고, 200초 동안 해리되었다. 분석 전에, 기준값을 각각의 검정법에서 차감하였다. 회합 시작 시의 Y축 정렬, 단계간 해리 보정 및 사비츠키-골레이 필터링으로 데이터를 보정하였다. 1:1 랭뮤어 등온 글로벌 피트 모델을 사용하여 곡선을 피팅하였다.
대표적인 데이터가 도 10에서 제시된다. TIGIT hIgG1 변이체에 대한 센서그램이 BLI에 의해 hFcγRIIIa 결합에 대해 전형적으로 관찰된 것과 유사하였다: 야생형 IgG1는 100-200 nM 범위이고, 비-푸코실화 IgG1은 hFcγRIIIa와 hIgG1 사이의 증가된 상호작용 또는 증가된 엔탈피에 의해 야기된 kon의 10배 증가로 인해 약 10-20 nM이다. hIgG1 LALA-PG는 5000 nM의 최고 농도에서도 정량가능한 결합이 없었다. 결과가 표 3에서 요약된다.
표 3. 1:1 랭뮤어 등온 모델을 사용한 BLI에 의한 인간 FcγRIIIa 158V에 결합하는 항-TIGIT 항체의 글로벌 피트 분석.
Figure pct00009
항종양 활성에 대한 항-TIGIT 항체의 Fc 변형의 영향을 평가하기 위해, 야생형에서의 인간 CDR 및 뮤린 IgG2a 백본으로 구성되거나 또는 비-푸코실화 또는 LALA-PG 변형이 있는 키메라 항체를 제조하였다. 뮤린 IgG2a 항체의 비-푸코실화는 비-푸코실화 인간 IgG1 백본의 생산과 유사하고, 인간 FcγRIV에 대한 동족 수용체인 뮤린 FcγRIV에 대한 증가된 결합을 초래한다. 변경된 FcγRIV 결합의 정도를 평가하기 위해, CHO 세포 상에서 발현된 FcγRIV에 대한 항체 친화도를 항-마우스 IgG FITC를 사용하여 FACS에 의해 결정하였다. 도 12에 제시된 바와 같이, 비-푸코실화 클론 13 mIgG2a가 야생형 또는 LALA-PG 변형 백본 둘 다보다 유의하게 더 큰 정도로 결합하였다. 비-푸코실화 클론 13 mIgG2a는 33.4의 KD로 결합한 야생형 클론 13 mIgG2a에 비교하여 KD 2.37 nM의 친화도로 결합하였다.
실시예 12: 건강한 공여자 T 세포 내의 T 세포 서브세트 상에서의 TIGIT 발현
건강한 공여자에서의 T 세포 서브세트 상에서의 TIGIT 발현을 유동 세포측정법에 의해 평가하였다. 12명의 건강한 공여자로부터의 냉동된 PBMC를 아스타르테 바이오로직스(Astarte Biologics) (워싱턴주 보텔) 및 폴리오 컨버전트(Folio Conversant) (알라바마주 헌츠빌)로부터 구입하였다. 공여자 연령은 21 내지 74세 범위이고, 중앙값 연령은 48세였다. 세포를 Fc 수용체 차단 후에 생존도 염료 및 하기의 항-인간 항체로 염색하였다: CD3, CD96, CD226, CCR7, CD25, CD127, CD45RA, CD8, CD4, CD226, CD155 (바이오레전드), 및 TIGIT (이바이오사이언스). 그 후, 염색된 세포를 어튠(Attune) Nxt 유동 세포측정기 (라이프 테크놀러지즈(Life Technologies))에서 분석하였다. Treg 서브세트가 CD4, CD25 및 CD127의 적합한 발현에 의해 정의되었다 (CD4+CD25+CD127lo). CD4+ 및 CD8+ 이펙터 기억 (TEM; CD45RA-CCR7-), CD45RA+ 이펙터 기억 (TEMRA; CD45RA+CCR7-), 중심 기억 (TCM; CD45RA-CCR7+), 및 나이브 (TN; CD45RA+CCR7+) 세포 서브세트가 CD45RA 및 CCR7 발현에 따라 정의되었다. 도 3에 제시된 바와 같이, TIGIT 발현이 Treg 상에서 가장 높은 한편, 활성화 수용체 CD226 발현이 기억 및 나이브 CD8 T 세포 서브세트 둘 다에서 더 낮으며, 나이브 CD4 T 세포 서브세트와 유사한 수준을 나타낸다. CD155 발현은 T 세포에서 대부분 부재하지만, 항원 제시 세포 상에서 나타났다.
실시예 13: 항-TIGIT 항체 클론 13이 Treg의 고갈을 구동시킨다
정상 PBMC 내의 Treg 및 기타 T 세포 서브세트의 절대 개수에 대한 항-TIGIT 항체의 효과를 평가하기 위해, FcγRIII 수용체의 V/F 대립유전자를 발현하는 공여자로부터의 건강한 공여자 PBMC (아스타르테 바이오로직스)를 단리하였다. 세포를 다양한 농도의 야생형, LALA-PG, 또는 비-푸코실화 버전의 클론 13 항-TIGIT 항체 또는 인간 IgG1 이소형 대조군 (바이오레전드)의 존재 하에 배양하였다. 냉동보존된 PBMC (아스타르테 바이오로직스)를 37℃에서 96-웰 둥근바닥 플레이트에서 RPMI 1640 + 10% FBS에서 인큐베이션하였다. 항-TIGIT 또는 대조군 항체를 적정하면서 삼중 웰에 웰 당 2.5×105개의 PBMC를 플레이팅하였다. 24시간 후, 세포를 세정하고, Fc 수용체 차단을 수행하고, 세포를 생존도 염색 및 하기의 항-인간 항체로 염색하였다: CD3, CD4, CD8, CD25, CD127 및 CD45RA (바이오레전드). 염색된 세포를 어튠 NxT 유동 세포측정기에서 분석하고, T 세포 서브세트를 상기 기술된 바와 같이 특성화하였다. 도 14에 제시된 바와 같이, Treg가 검정법 시작 시 TIGIT에 대해 73% 양성이었다. 24시간 배양 후, 야생형 버전의 클론 13 IgG1 항체 (흑색으로 채워진 원)가 TIGIT-양성 Treg의 용량 의존적-감소를 유발하였고, 최대 고갈이 1 ㎍/ml에서 발생하였다. 비-푸코실화 버전의 클론 13 (흑색으로 채워진 사각형)은 더 큰 활성을 부여하였고, 최대 Treg 고갈이 200 pg/ml에서 발생하였다. LALA-PG 버전의 클론 13 (흑색으로 채워진 삼각형) 및 인간 IgG1 이소형 대조군 (회색 역삼각형)은 이러한 검정법에서 명백한 활성을 나타내지 않았다.
야생형, 비-푸코실화, 및 LALA-PG 버전의 클론 13 항-TIGIT 항체를 평가하는 것에 더하여, Fcγ 수용체에 대한 친화도를 강화하는 것으로 기존에 보고된 S293D/A330L/I332E ("DLE") 돌연변이가 있는 IgG1 불변 영역을 포함하는 버전을 제조하였다. 문헌 [Lazar, 2006, PNAS 103: 4005-4010]을 참조한다. 야생형, 비-푸코실화, LALA-PG, 및 DLE 버전의 클론 13을 FcγRIII 수용체의 고-친화도 V/V 대립유전자를 발현하는 공여자로부터의 건강한 공여자 PBMC에서 실질적으로 상기 기술된 바와 같이 Treg의 고갈에 대해 평가하였다.
도 35에 제시된 바와 같이, 클론 13 IgG1 야생형 항체 (삼각형)는 ~ 0.024 ㎍/ml의 IC50으로 Treg를 고갈시킨 한편, 클론 13 IgG1 DLE 항체 (사각형) 및 클론 13 IgG1 비-푸코실화 항체 (원) 둘 다는 각각 0.0006 ㎍/ml 및 0.0005 ㎍/ml의 IC50으로 훨씬 더 큰 효력으로 Treg를 고갈시켰다. (도 35에서, IgG1 야생형 데이터는 동일한 공여자로부터의 PBMC를 사용한 이전 실험으로부터의 것이다.)
또 다른 항-TIGIT 항체인 H5/L4 IgG1 (WO 2016/028656 A1 참조)을 FcγRIII 수용체의 고-친화도 V/V 대립유전자를 발현하는 공여자로부터의 건강한 공여자 PBMC에서 Treg를 고갈시키는 능력에 대해 또한 테스트하였다. 도 36에 제시된 바와 같이, 클론 13 IgG1 비-푸코실화 항체가 Treg의 고갈을 유도하는 데 가장 강력했던 한편, 2개의 IgG1 야생형 항체는 매우 유사한 효력 및 고갈 곡선을 나타냈다. (도 36에서, 클론 13 IgG1 야생형 데이터는 동일한 공여자로부터의 PBMC를 사용한 이전 실험으로부터의 것이다.)
실시예 14: 동종이형 NK/Treg 공동-배양에서의 Treg 고갈의 평가
Treg/NK 세포 공동-배양에서의 잠재적인 항체 의존적 세포-매개 세포독성 (ADCC)을 탐색하기 위해, 냉동보존된 인간 CD4+CD25+ T 세포 (스템 셀 테크놀러지즈)를 해동시키고, 20 ng/ml 재조합 인간 IL-2 (R&D 시스템즈)가 보충된 RPMI 10% FBS 배지에서 1:2 비드:세포 비로 CD3/CD28 MACS 아이비드(iBead) 입자 (밀테니이 바이오텍(Miltenyi Biotec))로 3일 동안 자극하여, TIGIT 발현을 증가시켰다. 3일 후, Treg를 세포 표면 TIGIT 발현에 대해 유동 세포측정법을 통해 평가하였고, 이는 ~40% 양성인 것으로 밝혀졌다. 그 후, Treg를 세정하고, 공동-배양 후에 이들을 NK 세포로부터 구별하기 위해 CFSE (라이프 테크놀러지즈)로 표지하였다. 같은 날에, 정제된 인간 NK 세포 (아스타르테 바이오로직스)를 해동시키고, 2시간 동안 200 ng/ml IL-2의 존재 하에 예비-활성화시켰다. 2.5:1 NK:Treg 비의 NK 세포 및 Treg의 공동-배양물을 RPMI 1640 + 10% FBS 내의 100 ng/ml IL-2의 존재 하에 96-웰 플레이트에 설정하였다. 세포를 삼중 웰 내의 야생형, LALA-PG, 또는 비-푸코실화 버전의 클론 13 항-TIGIT 항체 또는 인간 IgG1 이소형 대조군 (바이오레전드), 또는 양성 대조군으로서의 역할을 한 비-푸코실화 항-OKT9 항체와 함께 37℃에서 인큐베이션하였다. 24시간 후, 세포를 세정하고, 생존도 염료로 염색하고, 어튠 Nxt 유동 세포측정기 상에서 FACS를 통해 분석하였다. 생존도 염료 및 CFSE 염색에 따라 Treg를 확인하고 계수하였다.
결과가 도 15에 제시된다. Treg 수준이 클론 13 IgG1 야생형 처리 (흑색으로 채워진 원)로 하락하였고, 이는 고갈이 부분적으로 직접적인 NK-매개 ADCC에 기인할 수 있다는 것을 입증한다. 클론 13 IgG1 야생형이 T 세포를 고갈시키는 능력은 1 ㎍/ml의 처리에서 최대로 나타났다. Treg 고갈의 비율이 클론 13 IgG1 비-푸코실화 버전 (흑색으로 채워진 사각형)으로 더욱 실질적이었고, 최대 활성이 40 ng/ml에서 나타났다. 이펙터-무효 LALA-PG 버전의 클론 13 IgG1 (흑색으로 채워진 삼각형) 및 인간 IgG1 이소형 대조군 (회색 역삼각형)은 Treg 수에 대한 명백한 효과를 나타내지 않은 한편, 양성 대조군 SEA OKT9 항체 (빈 원)는 최대 고갈을 나타냈다. 결과는 Treg가 높은 수준의 TIGIT를 발현하였다는 것을 나타낸 TIGIT 발현 데이터 (도 4)와 일관된다.
실시예 15: 항-TIGIT 항체가 시토카인 생산을 유도한다
NK 세포 상의 FcγRIIIa에 더 높은 친화도로 결합하고 ADCC를 구동시키는 것에 더하여, 비-푸코실화 항체는 또한 호중구 및 항원-제시 세포 상의 FcγRIIIa 및 FcγRIIIb에 더 높은 친화도로 결합하고, ADCP 및 항원-제시 세포 활성화를 강화할 수 있다.
항원 제시 세포에 대한 항-TIGIT 항체 및 Fc 변이체의 영향을 조사하기 위해, PBMC를 하기와 같이 단리하였다. 3명의 고유한 인간 공여자로부터의 혈액을 헤파린 튜브 내로 수집하고, 수집으로부터 약 4시간 이내에, 50 ml 원뿔형 튜브 (팔콘(Falcon)) 내로 분취하고, 혈소판-풍부 분획을 분리하기 위해 제동 없이 20분 동안 25℃에서 에펜도르프(Eppendorf) 5810R (A-4-62 로터)에서 200g로 스피닝시켰다. 원심분리 후, 3개의 별개의 층이 형성되었다: 바닥층, 적혈구 (총 부피의 50-80%를 차지함); 중간층, 매우 얇은 백혈구 밴드 ("백혈구 연층"으로도 칭해짐); 최상층, 밀짚색의 혈소판 풍부 혈장 (PRP). 혈소판이 풍부한 상부의 밀짚색 층을 1 ml 파이펫으로 제거하고, 폐기하였다. 혈소판 풍부 혈장이 제거되었으면, 나머지 분획을 동일한 부피의 멸균 PBS (깁코(Gibco))로 희석하였다. 실온으로 가온된 15 ml의 히스토파크(Histopaque)-1077 (시그마(Sigma))을 희석된 분획 아래에 하층화시켰다. 샘플을 제동 없이 25℃에서 25분 동안 1500 rpm으로 스피닝시켰다. 원심분리 후, 다시 3개의 층이 형성되었다: 바닥층, 적혈구 (총 부피의 50-80%를 차지함); 중간층, 두꺼운 백혈구 밴드; 최상층, PBS 및 나머지 혈소판. 상부의 PBS/혈소판 층을 1 ml 파이펫으로 제거하고, 폐기하였다. 두꺼운 백혈구 밴드를 부드럽게 제거하고, 깨끗한 50 ml 멸균 원뿔형 튜브 내에 놓았다. 튜브를 50 ml로 채우고, 세포를 10분 동안 800g로 스피닝시켰다. 세정 용액을 제거하고, 펠릿을 10 ml의 ACK 적혈 용해 완충제 (깁코)에 10분 동안 재현탁시켰다. 35 ml 멸균 PBS를 첨가하고, 세포를 10분 동안 800g로 스피닝시켰다. 세정 용액을 제거하고, 펠릿을 50 ml PBS에 재현탁시켰다. 500 ㎕의 샘플을 제거하고, PBMC를 바이-셀-XR(Vi-cell-XR) (벡맨 쿨터(Beckman Coulter))로 카운팅하였다. 세포를 다시 10분 동안 800g로 스피닝시켰다.
세포를 100만개의 세포/ml로 10% 열 불활성화 FBS (아틀란티카 바이오로직스(Atlantica Biologics)) 및 1X 페니실린/스트렙A, 및 1X 글루타민을 함유하는 완전 DMEM에 재현탁시키고, 96웰 플레이트에 100,000개의 세포/웰로 플레이팅하였다. PBMC를 증가되는 농도 (10, 1.0, 0.1, 0.01, 0.001, 0.0001 또는 0 ㎍/ml)의 클론 13 IgG1 야생형, 클론 13 IgG1 비-푸코실화, 또는 클론 13 IgG1 LALA-PG에 24시간 동안 노출시켰다. 조직 배양 상청액을 수집하고, 제조사의 설명서에 따라 루미넥스 멀티플렉스(Luminex multiplex) (밀리포어(Millipore))를 사용하여 시토카인 생산에 대해 프로세싱하였다.
결과가 도 16에 제시된다. 클론 13 IgG1 야생형 항체 (흑색으로 채워진 사각형) 및 클론 13 IgG1 비-푸코실화 항체 (흑색으로 채워진 다이아몬드)로의 PBMC 처리는 단핵구/대식세포 활성화와 연관된 것들 예컨대 MCP1, IL-8, 및 MIP1α를 포함하여 염증성 시토카인 생산을 초래하였다. 클론 13 IgG1 비-푸코실화에 대한 세포 노출은 더 강한 시토카인 반응을 유발한 한편, LALA-PG Fc 이펙터 무효 형태는 매우 최소한의 시토카인 생산을 초래하였다.
실시예 16: 항-TIGIT 항체가 APC 상의 활성화 마커를 유도한다
PBMC 내에 존재하는 항원-제시 세포에 대한 항-TIGIT 항체의 효과를 평가하기 위해, 공동-자극 분자의 발현을 상기 기술된 시토카인 분석으로부터 남은 세포 펠릿 상에서 평가하였다. 세포 펠릿을 50 ml의 BD FACS 완충제에 재현탁시키고, 96웰 둥근바닥 미량역가 플레이트로 옮겼다. Fc 수용체를 얼음에서 30분 동안 인간 100 ㎍/ml Fc 단편 (밀리포어)으로 차단하였다. 1:100 희석된 항-CD14 항체 (BD), 항-CD86 항체 (BD), 및 항-MHCII 항체 (범-항-DR,DP,DQ 항체, BD)로 구성된 마스터 믹스를 100 mg/ml 인간 Fc 단편을 함유하는 BD FACS 완충제에서 제조하였다. 5 ㎕의 마스터 믹스를 90 ㎕의 재현탁된 세포를 함유하는 각각의 웰에 첨가하고, 샘플을 1시간 동안 얼음 상에서 인큐베이션하였다. 그 후, 세포를 미리 냉각된 에펜도르프 5810R 원심분리기에서 5분 동안 400g로 스피닝시켰다. 상청액을 제거하고, 세포를 200 ㎕의 BD FACS 완충제로 세정하였다. 세포를 2회 세정한 후, 200 ㎕의 FACS 완충제에 재현탁시켰다. 샘플을 DIVA 소프트웨어 (BD 바이오사이언시즈)로 LSRII 유동 세포측정기 (BD 바이오사이언시즈) 상에서 수집하였다. 플로우조(FlowJo) 소프트웨어를 사용하여 CD14+ 단핵구/대식세포 상의 CD86 및 MHCII의 평균 형광 강도 (MFI)를 분석하였다.
이러한 실험의 결과가 도 17에서 제시된다. 항-TIGIT 항체 클론 13 IgG1 야생형 또는 클론 13 IgG1 비-푸코실화로의 CD14+ 단핵구/대식세포의 처리가 활성화 마커 CD86 (왼쪽 패널) 및 MHCII (오른쪽 패널)의 상향조절을 초래하였고, 이는 항원 제시 세포의 성숙을 지시한다. 클론 13 IgG1 LALA-PG로의 처리는 CD14+ 세포에 의한 CD86 또는 MHCII의 발현을 증가시키지 않았다.
실시예 17: 동계 종양 모델에서의 차별화된 Fc 친화도를 갖는 항-TIGIT 항체의 생체 내 평가
비-푸코실화 항-TIGIT 항체 대 LALA-PG 돌연변이를 포함하는 이펙터 기능 무효 항-TIGIT 항체의 항종양 효능을 조사하였다. 이러한 실험은 항-TIGIT 항체의 이펙터 기능 (비-푸코실화 버전에서 강화되고 LALA-PG 버전에서 폐지됨)이 항종양 작용 메커니즘에서 수반되는지 여부를 결정하기 위해 디자인되었다. 3개의 상이한 Fc 도메인을 갖는 뮤린 버전의 항-TIGIT 항체 클론 13이 생성되었다: 1) 야생형 mIgG2a; 2) 비-푸코실화 mIgG2a; 3) mIgG2a LALA-PG (감소된 이펙터 기능). CT26 (결장), A20 (B 세포 림프종), 및 MC38 (결장) 동계 종양 모델에서 항체를 평가하였고, 종양 모델 당 항체 군 당 6마리의 마우스가 있었다. 각각의 항체를 종양이 100 ㎣에 도달하면 6회의 용량에 대해 3일마다 제공되는 5 mg/kg의 용량으로 복막내 (i.p.) 투여하였다. 디지털 캘리퍼를 사용하여 피하 종양 길이 및 폭을 측정하고, 공식 V= (L x W2)/2를 사용하여 종양 부피를 계산하였다.
이러한 실험의 결과가 도 18에서 제시된다. 각각의 선은 중앙값 종양 부피 (㎣)를 나타낸다 (N = 군 당 6마리). 도 18a는 항-TIGIT 항체 클론 13 mIgG2a 비-푸코실화, 클론 13 mIgG2a 야생형, 및 클론 13 mIgG2a LALA-PG로의 A20 (동계 림프종 모델) 모델의 처리가 각각 4/6, 2/6, 및 0/6 완전 반응을 초래하였음을 나타낸다. 도 18b는 항-TIGIT 항체 클론 13 mIgG2a 비-푸코실화, 클론 13 mIgG2a 야생형, 및 클론 13 mIgG2a LALA-PG로의 CT26WT (뮤린 결장 암종) 모델의 처리가 각각 4/6, 3/6, 및 0/6 완전 반응을 초래하였음을 나타낸다. 도 18c는 항-TIGIT 항체 클론 13 mIgG2a 비-푸코실화, 클론 13 mIgG2a 야생형, 및 클론 13 mIgG2a LALA-PG로의 MC38 (뮤린 결장 암종) 모델의 처리가 각각 1/6, 1/6, 및 0/6 완전 반응을 초래하였음을 나타낸다.
상이한 동계 모델들에서 유도된 반응의 양분이 이들의 보고된 차등적인 면역 프로파일의 견지에서 흥미롭다. CT26 및 A20 종양 모델은 NK 및 T 세포가 더욱 고도로 침윤되는 것으로 보고된 한편, MC38 모델은 골수-유래 억제제 세포가 더욱 침윤되는 것으로 공지되어 있다 (Mosely, et al., 2017, Canc. Immunol. Res. 5(1): 29-41). A20 및 CT26 종양 모델에서의 항-TIGIT 항체의 증가된 활성은 이러한 항체의 T 세포 조정 활성을 지지하고, 침윤된 T 세포가 이러한 요법에 대한 양성 예측 바이오마커로서의 역할을 할 수 있다는 것을 시사한다. 총괄적으로, 이러한 데이터는 뮤린 항-TIGIT 항체의 생체 내에서의 항종양 활성이 Fc 이펙터 기능에 의존적이라는 것과 비-푸코실화 IgG2a가 야생형에 비교하여 강화된 효능을 갖는다는 것을 입증한다.
실시예 18: 항-TIGIT 항체의 조합 활성
TIGIT는 T 세포뿐만 아니라, NK 및 항원-제시 세포에서 또한 발현된다. 다면발현성 발현을 고려하여, TIGIT 기능은 잠재적으로 다인자 활성을 구동시킬 수 있고, 항-TIGIT 항체가 예를 들어 NK 세포 ADCC 활성, T 세포 활성화, 및 최적의 항원 회상 반응을 포함하는 다양한 세포 기능에 영향을 미칠 수 있다. 단일 작용제 활성에 더하여, 항-TIGIT 항체는 다른 치료제와 조합되어 T 세포, NK, 또는 항원 제시 세포의 활성을 증폭시킬 수 있다. TIGIT 및 CD226은 NK 세포에서 발현되고, TIGIT 발현은 최적의 NK 활성 및 ADCC 잠재력을 활발하게 억제할 수 있을 뿐만 아니라, CD226 매개 활성화를 방지할 수도 있다. 따라서 TIGIT의 차단은 인간 IgG1 표적화 작용제의 NK 매개 ADCC를 증폭시킬 수 있고, 항-TIGIT 항체와 조합되었을 때 ADCC 지정 치료제가 강화된 활성을 나타낼 수 있다.
이러한 가능성을 조사하기 위해, 비-소세포 폐 암종 세포주 A549를 Na2[51Cr]O4로 방사성 표지하고 (세포에 100 μCi를 첨가함), 세정하고, 세툭시맙 단독 또는 10 ㎍/mL 항-TIGIT 항체 클론 13 hIgG1 야생형과 조합된 세툭시맙의 적정물과 혼합하였다. 10 ㎍/mL의 이소형 대조군이 실험에 또한 포함되었다. 이펙터 세포를 냉동보존된 정상 공여자 PBMC로부터 이지셉(EasySep) 인간 NK 세포 강화 키트 (스템 셀 테크놀러지즈)를 사용하여 단리하였다. 공여자 세포는 FcγRIIIa 158 V/V 유전자형의 것이었다. 이펙터 세포를 10:1 (50,000:5000)의 이펙터-대-표적 세포 비로 첨가하였다. 4시간 인큐베이션 후, 배양 상청액 내로 방출된 방사능을 측정하고, 퍼센트 특이적 세포 용해를 (테스트 샘플 cpm - 자발적 cpm) / (총 cpm - 자발적 cpm) x 100으로서 계산하였다. 자발적 및 총 cpm 값은 배지 단독에서 인큐베이션된 표적 세포의 상청액 및 1% 트리톤 X-100으로 용해된 표적 세포로부터 각각 결정되었다.
도 19에 제시된 바와 같이, 항-TIGIT 항체 클론 13 IgG1 항체 단독으로의 A549 표적 세포의 처리는 ADCC 활성을 구동시키지 않았지만, A549 표적 세포가 세툭시맙 및 항-TIGIT 항체 클론 13 IgG1의 조합물과 접촉된 경우, 세툭시맙 단독으로 관찰된 것에 비해 최대 용해 활성이 증가되었다.
NK 활성을 조정하는 것에 더하여, TIGIT 차단이 T 세포에서 항원 특이적 기억 반응을 증가시킬 수 있다. 따라서, T 세포 상에 존재하는 관문 단백질을 표적화하는 항체가 항-TIGIT 항체와 조합될 때 강화된 활성을 나타낼 수 있다.
이러한 가능성을 조사하기 위해, 사이토메갈로바이러스 (CMV)에 반응하는 항원 회상 검정법이 수행되었다. CMV 반응성 공여자로부터의 인간 PBMC를 아스타르테 바이오로부터 구입하였다. 이러한 공여자로부터의 기억 T 세포를 이들의 항원-특이적 반응을 평가하기 위해 시험관 내에서 CMV 항원으로 재활성화시킬 수 있다. PBMC를 10% FBS (아틀란타 바이오로직스(Atlanta Biologics))를 함유하는 엑스-비보(X-vivo) 10 (론자(Lonza))에 재현탁시키고, 100,000개의 세포를 둥근바닥 96웰 플레이트에 플레이팅하였다. 세포를 항-TIGIT 항체 및/또는 항-PD-1 지정 항체의 존재 또는 부재 하에 10 ㎍/ml의 CMV 항원에 노출시켰다. 조합 활성을 평가하기 위해, PBMC를 1 ㎍/ml의 준최적 용량의 항-PD-1 항체 (펨브롤리주맙 또는 니볼루맙)로 처리하고, 증가되는 농도의 항-TIGIT 항체 클론 13 IgG1 야생형 (1 pg/ml 내지 1 ㎍/ml)을 첨가하였다. CMV 항원에 대한 기억 회상 반응을 5일 동안 진행되도록 허용한 후, 조직 배양 상청액을 수확하고, 제조사의 설명서에 따라 루미넥스 검정법 평가 (밀리포어)에 의해 시토카인 반응을 결정하였다.
도 20에 제시된 바와 같이, 항-TIGIT 항체 클론 13 IgG1이 항-PD-1 항체로 처리되고 CMV 항원에 노출된 PBMC에 의한 IFNγ 분비를 용량 의존적 방식으로 부스팅시켰다.
생체 내에서의 조합 활성을 조사하기 위해, 동계 마우스 종양 모델을 사용하였다. 군 당 8마리의 C57BL/6 마우스에 1x106개의 MC38 종양 세포를 옆구리에 피하 이식하였다. 종양이 ~100 ㎣에 도달했을 때, 동물을 군으로 무작위화하고, 3회 용량에 대해 3일마다 (Q3dx3) 0.3 mg/kg 항-TIGIT 항체 클론 13 hIgG1 야생형, 비-푸코실화 클론 13 IgG1, 1 mg/kg 항-PD-1 항체 (항-마우스 PD-1 항체 클론 29F.1A12), 클론 13 hIgG1 야생형/항-PD-1 항체의 조합물, 또는 비-푸코실화 클론 13 IgG1/항-PD-1 항체의 조합물로 처리하였다. 종양 부피를 경시적으로 모니터링하고, 종양 부담이 >1000 ㎣에 도달했을 때 동물을 안락사시켰다.
이러한 실험에서, 야생형 및 비-푸코실화 항체에 대한 각각 4/8 및 3/8 완전 반응으로 클론 13 hIgG1 야생형 및 비-푸코실화 클론 13 IgG1 둘 다 양호한 종양 성장 지연을 입증하였다. 도 37의 왼쪽 상단을 참조한다. 항-PD-1 항체 또한 이러한 실험에서 양호한 효능을 나타냈다. 제15일에 측정된 종양 부피에 의해 증명된 바와 같이, 조합 요법은 단일 작용제 단독보다 훨씬 더 빠른 종양 퇴행을 나타냈다. 도 37의 상단 오른쪽 및 하단.
실시예 19: 시험관 내에서의 인간 T 세포 반응에 대한 항-TIGIT 항체의 활성
기억 T 세포 재활성화를 조사하기 위해, 항원 회상 실험을 수행하였다. 기존에 CMV 펩티드에 대해 반응성인 것으로 나타난 HLA-A2 공여자로부터의 인간 PBMC (100,000개의 세포)를 10% FBS, 1X 페니실린 및 1X 글루타민을 함유하는 RPMI에 재현탁시키고, 96웰 플레이트의 둥근바닥 웰 내로 플레이팅하였다. 세포를 5일 동안 증가되는 농도의 항-TIGIT 항체 클론 13 hIgG1 야생형, 비-푸코실화 클론 13 IgG1, 또는 클론 13 hIgG1 LALA-PG의 존재 또는 부재 하에 CMV 펩티드로 자극하였다. 조직 배양 상청액을 수집하고, 시토카인 생산을 제조사의 설명서에 따라 루미넥스 멀티플렉스 검정법에 의해 평가하였다.
도 21에 제시된 바와 같이, 항-TIGIT 항체로 자극된 배양물이 IFNγ 생산의 증가에 의해 나타난 바와 같이 CMV 항원에 대한 증가된 반응을 나타냈다. 비-푸코실화 클론 13 IgG1은 1 pg/ml로 낮추는 증폭된 항원 특이적 T-세포 반응을 초래하였고, 이러한 활성은 클론 13 IgG1 야생형과 연관된 반응보다 더 강건하였다. 이펙터-무효 클론 13 IgG1 LALA-PG 항체는 기억 T 세포 반응을 구동시키는 데 비효율적이었다.
나이브 이펙터 T 세포 반응의 유도를 조사하기 위해, 일원 혼합 림프구 반응 (MLR)을 수행하였다. HLA-A2 공여자로부터의 인간 PBMC (100,000개의 세포)를 10% FBS, 1X 페니실린, 및 1X 글루타민을 함유하는 RPMI에 재현탁시키고, 둥근바닥 96웰 플레이트에서 방사선이 조사된 HLA 미스-매치 동종이형 PBMC와 1:1 비로 배양하였다. 세포를 5일 동안 증가되는 농도의 클론 13 hIgG1 야생형, 비-푸코실화 클론 13 hIgG1, 또는 클론 13 IgG1 LALA-PG로 자극하였다. 조직 배양 상청액을 수집하고, 제조사의 설명서에 따라 루미넥스 멀티플렉스 검정법에 의해 시토카인 생산을 평가하였다.
도 22에 제시된 바와 같이, 항-TIGIT 항체로 자극된 배양물이 IL2 생산의 증가에 의해 나타난 바와 같이 증가된 동종 이펙터 T 세포 반응을 나타냈다. 비-푸코실화 클론 13 IgG1은 100 pg/ml로 낮추는 증폭된 항원 특이적 T-세포 반응을 초래하였고, 이러한 활성은 클론 13 IgG1 야생형과 연관된 반응보다 더 강건하였다. 이펙터 무효 클론 13 IgG1 LALA-PG 항체는 기억 T 세포 반응을 구동시키는 데 비효율적이었다.
항원-나이브 및 기억 검정법에서 T 세포의 활성화를 조사하는 것에 더하여, 스타필로코쿠스 장독소 B 펩티드를 클론 13 hIgG1 야생형, 클론 13 hIgG1 비-푸코실화, 클론 13 IgG1 DLE, 및 또 다른 항-TIGIT 항체인 H5/L4 IgG1과 조합하여 초항원으로서 사용하였다. 비-푸코실화 클론 13 hIgG1은 IL-2의 유도에 의해 측정된 바와 같이 클론 13 hIgG1 야생형 또는 H5/L4보다 더욱 강건하게 T 세포의 활성화를 유도할 수 있었다. 도 38a. 클론 13 IgG1 DLE 또한 클론 13 hIgG1 야생형 및 클론 13 hIgG1 비-푸코실화 둘 다와 거의 동등하게 IL-2 생산을 유도할 수 있었다. 클론 13 IgG1 DLE는 다른 항체와 대조적으로 IL-10의 생산을 동반적으로 유도하는 것으로 밝혀졌다. 도 38b. 이러한 결과는 FcγRIIb 수용체의 맞물림이 IL-10의 유도를 초래한다는 보고와 일관된다. IgG1 DLE는 FcγRIIb와 맞물릴 것으로 예상된다.
실시예 20: 뮤린 종양 모델에서의 항-TIGIT 항체의 활성
종양-보유 (CT26 결장 암종) 마우스를 다양한 형태의 항-TIGIT 항체인 야생형 IgG2a, 이펙터 무효 IgG2a LALA-PG 또는 비-푸코실화 IgG2a로 처리하는 것이 전신 및 조직 특이적 시토카인 유도 둘 모두를 초래하였다. 항-TIGIT 항체 처리의 잠재적인 전신 및 조직-특이적 효과를 검사하기 위해, 6마리의 Balb/c 마우스에 CT26 결장암 세포를 옆구리에 이식하고, 종양이 100 ㎣에 도달한 후, 6회의 용량에 대해 3일마다 1회로 1 mg/kg 항-TIGIT 항체 클론 13 IgG2a 야생형, 비-푸코실화 클론 13 IgG2a, 클론 13 IgG2a LALA-PG로 처리하거나 또는 처리하지 않았다. 항-TIGIT 항체의 3차 용량 24시간 후, 마우스 절반을 희생시키고, 혈장, 비장, 및 종양 조직을 수집하였다. 각각의 비장 및 종양의 절반을 기계적으로 파괴하면서 RIPA 완충제에 용해시켰다. 그 후, 혈장 및 조직 용해물을 밀리포어 25 프리 믹스 루미넥스 멀티플렉스 키트를 사용하여 시토카인에 대해 분석하였고, 이는 25개의 상이한 염증성 시토카인의 분석을 허용하였다. 조직 시토카인 수준을 BCA (바이신코닌산 검정법)로 결정된 단백질 함량을 통해 서로에 대해 정규화하였다.
도 23에 제시된 바와 같이, 시토카인 분석은 임의의 항체 처리에 반응하여 전신 반응을 지시할 혈장에서 또는 조직에서 강렬하게 증가된 시토카인을 나타내지 않았다. 항-TIGIT 처리 후 수수한 변화만 관찰되면서 미처리 마우스의 혈장 및 종양에서 제한된 시토카인이 관찰되었고, 이는 비-푸코실화 항체로도 TIGIT 처리가 전반적인 염증 반응을 개시시키지 않았음을 지시한다.
항-TIGIT로 유도된 시토카인 수준의 분석에 더하여, 항-TIGIT 항체의 3차 용량 24시간 후에 수확된 종양 및 말초 샘플을 유동 세포측정법에 의해 다양한 T 세포 서브세트의 비율에서의 전반적인 변화에 대해 분석하였다. 도 23에 대해 상기 기술된 것과 동일한 Balb/c 마우스로부터의 종양 및 비장 단일 세포 현탁액 및 PBMC를 다양한 세포 표면 마커에 대해 염색하여, 나이브/기억 T 세포의 CD8+, CD4+ 서브세트 (CD62L+CD44- 나이브, CD62L-CD44- 이펙터, CD44+CD62L+ 중심 기억, 및 CD44+CD62L- 이펙터 기억), 및 Treg (CD25+CD127-)를 파악하였다. 샘플을 어튠 어쿠스틱 포커싱 사이토미터(Attune Acoustic Focusing Cytometer)에서 실행시키고, 플로우조를 사용하여 분석하였다. 게이트는 CD45+ 살아있는 세포에 설정되었다.
도 24에 제시된 바와 같이, 미처리 동물에 비교했을 때, 항-TIGIT 항체 클론 13 mIgG2a 야생형 및 비-푸코실화 클론 13 mIgG2a 항체에 반응하여 종양 내의 CD8+ T 세포의 증가가 관찰되었지만, 이펙터 무효 클론 13 mIgG2a LALA-PG는 그렇지 않았다 (도 24 상부 패널). 항-TIGIT 항체 처리 후의 CD8+ 세포의 백분율에서의 더욱 수수한 증가가 PBMC 및 비장에서 관찰되었다. 나이브, 이펙터, 및 기억 T 세포의 종양내 변화 또한 주목되었다. 구체적으로, 종양내 나이브 CD8+ T 세포의 수준이 클론 13 mIgG2a 야생형 및 비-푸코실화 클론 13 mIgG2a로의 처리 후에 감소되었지만, 클론 13 mIgG2a LALA-PG로는 덜 그러하였다 (도 24, 왼쪽 하부 패널). CD8+CD44+CD62L- 이펙터 기억 세포 (도 24, 오른쪽 상부 패널) 및 CD8+CD44+CD62L+ 중심 기억 세포 (도 24, 왼쪽 상부 패널)의 비율의 증가가 클론 13 mIgG2a 야생형 및 비-푸코실화 항체에 반응하여 종양에서 관찰되었지만, 클론 13 mIgG2a LALA-PG 항체에 대한 반응에서는 그렇지 않았다. 이러한 변화는 비장 또는 PBMC에서 주목되지 않았지만, 이러한 조직에서의 약간의 경미한 변화가 발생하였다.
CD8+ 세포에 대해 상기 기술된 것과 유사한 전략을 사용하여 항-TIGIT 항체 처리에 의해 유도된 변화에 대해 CD4+ T 세포 서브세트를 유동 세포측정법에 의해 또한 분석하였다. 도 25 (왼쪽 상부 패널)에 제시된 바와 같이, 클론 13 mIgG2a 야생형 및 비-푸코실화 항체로의 처리가 클론 13 mIgG2a LALA-PG 항체로의 처리 또는 미처리 동물에 비교하여 종양내 CD4+ 세포의 경미한 감소를 유도하였다. 이러한 효과는 PBMC 또는 비장에서는 나타나지 않았다. 클론 13 mIgG2a 야생형 및 비-푸코실화 항체에 반응한 종양내 감소가 CD4+ Treg 집단에서 소량으로 또한 관찰되었지만, 클론 13 LALA-PG 항체는 그렇지 않았고, 이는 항-TIGIT 항체 처리가 종양에서 면역억제성 Treg 집단을 감소시키지만 정상 조직에서는 그렇지 않다는 것을 시사한다. CD8+ T 세포로의 결과와 유사하게, 종양내 CD4+ 나이브 T 세포가 미처리에 비교하여 클론 13 mIgG2a 야생형 및 비-푸코실화 항체로의 처리 후에 감소하였고 (도 25 왼쪽 하부 패널), 이러한 발견에 종양 내의 이펙터 기억 CD4+ T 세포의 비율의 증가가 동반되었다 (도 25, 오른쪽 중간 패널). 이펙터 기억 CD4+ 및 CD8+ T 세포는 항종양 반응을 유발하는데 수반되고, TIGIT 지정 항체로의 상승이 항종양 반응에 기여할 수 있다. 다수의 이러한 현저한 종양내 T 세포 집단 변화에 말초에서의 이러한 집단의 큰 변이가 동반되지 않았다.
항-TIGIT 항체의 6회 용량 후, 처리를 시작하고 나서 약 20일에, 종양이 감소되었고, 거의 검출불가능하였다. 이러한 마우스로부터 비장 및 혈장을 수확하고, 상기 기술된 바와 같이 유동 세포측정법을 위해 세포를 제조하였다. 도 26a-b에 제시된 바와 같이, 이러한 마우스의 비장으로부터의 다양한 T 세포 서브세트의 분석은 군들 간에 CD8+ 또는 CD4+ 서브세트의 강렬한 변화가 없음을 입증하였다.
항-TIGIT 항체로 처리된 마우스의 비장 및 혈장에서의 시토카인의 유도를 다중 분석을 사용하여 평가하였고, 결과가 도 27에서 제시된다. 미처리 동물과 비교했을 때 처리된 동물의 비장에서 상승된 시토카인 생산이 관찰되지 않았고, 미처리 동물 및 특정한 항-TIGIT 항체로 처리된 동물에서 상승된 케모카인 LIX (뮤린 IL8 호모로그) 및 에오탁신을 제외하고는, 일반적으로 낮은 수준의 시토카인이 혈장에서 검출되었다.
이러한 동물에서의 종양에 대한 항원-특이적 기억의 생성을 항-TIGIT 항체 처리를 개시하고 나서 약 20일 후에 수확된 비장세포를 사용하여 평가하였다. 상기 기술된 항-TIGIT 항체로 처리된 마우스로부터의 비장세포를 배양 배지에 재현탁시키고, 96-웰 플레이트의 웰에 이중으로 플레이팅하였다. 세포를 자극하지 않고 두거나 또는 CT26 결장직장 종양에 대한 CD8+ T 세포 반응에 대한 우세한 표적인 1 ㎍/ml AH1 펩티드로 재자극하였다. 48시간 후, 배양 상청액을 수집하고, 다중 분석을 통해 시토카인 생산에 대해 분석하였다.
도 28에 제시된 바와 같이, 펩티드의 부재 하에 매우 적은 시토카인이 생산되었다. 흥미로운 예외는 비-푸코실화 클론 13 mIgG2a 처리 동물로부터의 미자극 비장세포에 의해 생산된 상승된 수준의 IL5 및 IL4의 관찰이었다 (도 28, 하부 패널). 그러나, CT-26 특이적 펩티드로의 비장세포의 자극이 클론 13 mIgG2a 야생형 및 비-푸코실화 항체 처리 동물에서 강건한 IFNγ 및 TNFα 생산을 초래하였지만, 클론 13 mIgG2a LALA-PG 항체 처리 동물에서는 그렇지 않았고 (도 28, 상부 패널), 이는 클론 13 mIgG2a 야생형 및 비-푸코실화 항체 처리가 오래 지속되는 항원-특이적 기억 CD8+ T 세포 반응을 자극할 수 있다는 것을 지시한다. 기억 T 세포 반응의 생성은 장기적인 항종양 반응을 구동시키는 것에서 수반된다. 클론 13 mIgG2a 야생형 및 비-푸코실화 항체 처리 비장세포의 펩티드 재자극 후의 IL4 생산 증가가 또한 관찰되었다 (도 28, 오른쪽 하부 패널). 재자극이 없는 비-푸코실화 클론 13 mIgG2a 군의 미자극 비장세포에서의 IL4 및 IL5 생산은 이러한 항체에 의한 TH2 반응의 유도를 시사할 수 있다.
실시예 21: 추가적인 뮤린 종양 모델에서의 항-TIGIT 항체의 활성
2가지 뮤린 동계 종양 모델인 EMT6 및 E0771 유방 암종을 5 mg/kg의 야생형 mIgG2a를 포함하는 항-TIGIT 클론 13 항체 또는 0.1 mg/kg, 1 mg/kg, 또는 5 mg/kg의 비-푸코실화 mIgG2a를 포함하는 항-TIGIT 클론 13 항체로 처리하였다. 투약 일정은 q4dx4였다 (4일마다 1회 용량; 총 4회 용량). 종양 길이 및 폭을 측정하고, 공식 부피 (㎣) = 0.5 * 길이 * 폭2 [식 중, 길이는 더 긴 치수이다]를 사용하여 종양 부피를 계산하였다.
도 29a-29b에 제시된 바와 같이, 유방암 모델에서의 항종양 반응은 종양 성장 지연을 나타냈지만, 최소의 치유 반응을 나타냈다. EMT6 모델에서, 각각 30.5일에서 37일 및 39일로의 평균 생존이 증가되면서 5 mg/kg의 클론 13 mIgG2a 야생형 및 비-푸코실화 항체 둘 다 양호한 종양 성장 지연을 입증하였다 (도 29a). 클론 13 mIgG2a 비-푸코실화 항체에 대한 추가적인 용량 군은 1 및 0.1 mg/kg 용량으로 35.2일 및 36.8일뿐인 평균 전체 생존이 관찰되면서 더 낮은 용량에서 약간의 활성 손실을 입증하였지만, 미처리 대조군에 비교하여 종양 성장이 여전히 지연되었다 (도 29a).
E0771 모델에서, 각각 38.6일에서 44일 및 42일로 평균 생존이 증가되면서 5 mg/kg의 클론 13 mIgG2a 야생형 및 비-푸코실화 항체 둘 다에 대해 더욱 수수한 종양 성장 지연이 관찰되었다 (도 29b). 또한, 6마리 중 1마리의 마우스가 1 mg/kg 및 5 mg/kg 용량의 클론 13 mIgG2a 비-푸코실화 항체로 치유된 것으로 보였다. 클론 13 mIgG2a 비-푸코실화 항체에 대한 더 낮은 용량 군인 1 mg/kg 및 0.1 mg/kg은 39일의 평균 전체 생존을 초래하였다 (도 29b).
추가적으로, 1 mg/kg 클론 13 mIgG2a 야생형 항체를 외부 실험실 (MI 바이오리서치(MI Bioresearch))로부터 수득된 제2 CT26 결장암 모델에서 평가하였다. 도 29c에 제시된 바와 같이, 이러한 CT26 결장암 모델에서, 클론 13 mIgG2a 야생형 항체는 치료로 30일에서 40일로의 평균 전체 생존의 증가를 입증하였지만, 하나의 완전 퇴행만을 유도하였다 (16%). 도 18b에 제시된 바와 같이, 시애틀 제네틱스에서 유지된 CT26 결장암 모델은 1 mg/kg 클론 13 IgG2a 야생형 항체로 50% (3/6) 완전 퇴행을 나타냈다.
실시예 22: RNA-Seq 분석 및 생체 내 반응과 분자 서명의 상관관계
2개의 CT26 결장암 모델, 뿐만 아니라 다른 동계 암 모델의 반응에서의 차이를 평가하기 위해, RNA-seq 분석을 사용하여 모델 간의 트랜스크립톰의 근원적인 변화를 확인하였다. 각각의 모델에 대한 대표적인 미처리 종양에 대한 RNA-seq 원시 판독물 (fastq 양식)이 하기와 같이 이용가능하였다.
A20 (시애틀 제네틱스에서 유지됨), 2개의 사본
CT26 (시애틀 제네틱스에서 유지됨), 2개의 사본
CT26 (MIBio로부터 수득됨), 1개의 사본
E0771 (MIBio로부터 수득됨), 1개의 사본
EMT-6 (MIBio로부터 수득됨), 1개의 사본
MC38 (시애틀 제네틱스에서 유지됨), 1개의 사본
샘플에 대한 RNA-seq 판독물을 어댑터 트리밍 (컷어댑트(cutadapt)), 마우스 게놈/트랜스크립톱에 대한 정렬 (STAR), 및 전사체 정량 (RSEM)으로 이루어진 표준 파이프라인에서 프로세싱하였다. FPKM (백만개의 판독물 당 킬로베이스 당 단편)에 대해 정규화된 유전자 발현 값을 후속 분석에 사용하였다. 생체 내 반응 곡선의 검사를 기초로, 모델이 WT TIGIT 처리에 대한 이들의 전반적인 반응의 관점에서 하기와 같이 분류되었다: 완전 반응자 = A20 (시애틀 제네틱스; 도 18a), CT26 (시애틀 제네틱스; 도 18b) 및 부분적 반응자 = CT26 (MIBio; 도 29c), EMT-6 (MIBio; 도 29a), E0771 (MIBio; 도 29b), MC38 (시애틀 제네틱스; 도 18c). 전사 수준에서의 2개의 CT26 결장암 모델 간의 차이가 관찰되었고, 이는 효능 연구에 사용된 모델을 특성화하는 것이 중요할 수 있다는 것을 시사한다.
반응과 상호관련될 수 있는 종양 미세환경 (TME)과 관련된 분자 서명이 2개의 공개된 출처인 문헌 [Mosely et al., "Rational selection of syngeneic preclinical tumor models for immunotherapeutic drug discovery", Cancer Immunol Res 2017;5:29-41]; 및 TCIA (The Cancer Immunome Atlas) (tcia.at/home)로부터의 면역계 및 면역 반응에 관한 유전자 서명을 문헌 [Charoentong et al., "Pan-cancer Immunogenomic Analyses Reveal Genotype-Immunophenotype Relationships and Predictors of Response to Checkpoint Blockade", Cell Rep 2017 Jan 3;18(1):248-262]으로부터 취해진 서명과 함께 컴파일링함으로써 또한 결정되었다. 이러한 출처들로부터의 유전자 서명은 유전자의 발현이 특정 생물학적 맥락, 예를 들어, CD8+ T 세포에서 높은 유전자의 목록으로 이루어진다. TCIA 유전자 서명은 인간에서 유래되고, 따라서 각각의 이러한 서명 내의 유전자가 R 라이브러리 biomaRt를 사용하여 마우스 오르토로그에 맵핑되었다. 총 약 50개의 유전자 서명이 고려되었고, 서명 내의 유전자의 샘플 FPKM 값을 합산함으로써 50개의 서명 각각에 대해 8개의 RNA-seq 미처리 종양 샘플 각각이 채점되었다.
어떤 유전자 서명 점수가 강한 반응자를 약한 반응자로부터 분리하였는지를 정량적으로 평가하기 위해, 모든 샘플에 걸친 서명 점수의 벡터가 반응자 벡터와 상호관련되었다 (피어슨 상관관계, 약한 반응자의 경우 0, 강한 반응자의 경우 1). 반응과의 상관관계가 특히 높은 서명은 NK 세포 및 활성화된 CD8 T 세포를 포함하였다 (도 30). 둘 다의 경우에, 더 강한 반응자가 더 약한 반응자에 비교하여 면역 서브세트에서 더 높게 채점되었다. 표 4는 특정 면역 세포 서브세트와 항-TIGIT 항체 처리에 대한 종양 세포의 반응 사이의 상관관계의 요약을 나타낸다.
표 4:
Figure pct00010
임의의 특정 이론에 제한되기를 원치 않으면서, TIGIT 차단이 NK-세포 및 CD8 T-세포-매개 종양 살해 둘 다를 자극할 수 있기 때문에, TME 내의 이러한 면역 세포 집단의 더 큰 입수가능한 풀이 이러한 서브세트에 대해 더 높게 채점된 모델에서 더 강한 반응을 설명할 수 있다.
흥미롭게도, TIGIT 발현은 이러한 평가에서의 반응의 강한 차별 요소가 아니였고, CD155 발현도 아니였다 (도 31). 예를 들어, 둘 다 강한 반응자이지만, 시애틀 제네틱스 CT26 결장암 모델은 모든 모델 중에서 가장 높은 CD155 발현을 나타낸 한편, A20 림프종 모델은 가장 낮았다.
실시예 23: 항-TIGIT 항체가 Th1 반응을 강화한다
클론 13 항-TIGIT 항체가 나이브 항원-특이적 T 세포 반응을 구동시키는 것을 보조하는지 여부를 평가하기 위해, balb/c 마우스 (군 당 5마리)에 피하로 완전 프로인트 아주반트 (CFA)의 존재 하의 100 ㎍의 모델 항원 오브알부민 (OVA)을 1회 백신 접종하였다. 동시에, 마우스에 1 mg/kg 클론 13 IgG2a 야생형, 클론 13 mIgG2a 비-푸코실화, 또는 클론 13 mIgG2a LALA-PG 항체를 투여한 후, 3일 간격으로 3회 용량을 더 투여하였다 (q3dx4). 백신 접종 14일 후, 마우스를 항-OVA IgG1 및 IgG2a ELISA를 사용하여 항원-특이적 면역의 유도에 대해 분석하였다. 비장세포를 재자극하고, 시토카인 유도에 대해 평가하였다.
항-OVA ELISA는 마우스가 백신-유도 항원-특이적 프라이밍을 겪는 동안 클론 13 IgG2a 야생형 또는 클론 13 mIgG2a LALA-PG 항체를 공동-투여하는 것이 생성된 IgG1 항체의 수준을 ~1.5배만큼 부스팅시켰음을 입증하였다. 클론 13 mIgG2a 비-푸코실화 항체는 이러한 실험에서 항원-특이적 IgG1 항체 수준을 부스팅시키지 않았다 (도 32, 오른쪽 패널). 이러한 데이터는 TIGIT 차단이 CD4/Th2 반응의 프라이밍을 증가시킬 수 있지만, 강화된 이펙터 기능이 이러한 효과를 폐지시킨다는 것을 시사한다. TIGIT 차단은 IgG2a 항원-특이적 항체의 수준을 또한 부스팅시켰지만 (도 32, 오른쪽 패널), 이러한 경우, 클론 13 mIgG2a 비-푸코실화 항체가 가장 큰 효과를 나타냈다. 요약하면, IgG1 수준과 강화된 이펙터 기능 사이에 역상관관계가 관찰된 한편, IgG2a 수준은 강화된 이펙터 기능과 직접적으로 상호관련되었고, 클론 13 mIgG2a 비-푸코실화 항체가 항-OVA IgG2a 수준을 9배 초과만큼 증가시켰다. 클론 13 IgG2a 야생형 및 클론 13 mIgG2a LALA-PG 항체 또한 IgG2a 수준을 부스팅시켰지만, ~4배만큼뿐이었다 (도 32, 오른쪽 패널). TIGIT 차단 단독이 이러한 실험에서 사용된 마우스 품종 및 아주반트에 의해 구동되는 이러한 과한 Th2-선호 시스템을 Th1으로 빗나가게 하는 데 충분하지 않은 한편, TIGIT 차단이 Th1 반응을 강화하는 것으로 나타났고, 반응이 이펙터 기능과 상호관련되었다.
항원-특이적 항체 생산을 분석하는 것에 더하여, 항원-특이적 T 세포의 유도를 또한 평가하였다. 각각의 마우스로부터의 동등한 개수의 비장세포를 72시간 동안 1 ㎍ 전체 단백질 (OVA)로 생체 외에서 재자극한 후, T 이펙터 시토카인을 분석하였다. 항원 재자극 ("1 ㎍/ml OVA")에 반응한 활성화된 T 세포 시토카인 IL-2의 생산이 예상대로 미처리 동물에 비해 항원/아주반트 처리 군에서 증가하였고, 이는 프라이밍 동안 이펙터 기능이 가능하거나 (클론 13 IgG2a 야생형) 또는 강화된 (클론 13 mIgG2a 비-푸코실화) 항-TIGIT 항체로 처리된 동물로부터의 비장세포에서 추가로 증가되었다 (도 33, 오른쪽 하부 패널). 이러한 결과는 나이브 항원-특이적 T 세포 반응의 생성을 강화하는 TIGIT 차단의 능력과 일관된다. 이펙터 기능과 반응 사이의 덜 명확한 상관관계가 관찰되었지만, Th2 이펙터 시토카인 IL-5 및 IL-4의 분석은 항-TIGIT 항체로 처리된 동물로부터 항원/아주반트 단독에 비해 항원 재자극 후의 약간의 추가적인 시토카인 유도를 입증하였다 (도 33, 왼쪽 패널). Th1/CD8 T 세포 시토카인 IFNγ의 경우, 항원 프라이밍 이벤트 동안의 TIGIT 차단이 항원-특이적 T 세포의 생성을 더욱 지대하게 강화시켰다 (도 33, 오른쪽 상부 패널). 이펙터가 강화된 클론 13 mIgG2a 비-푸코실화 항체로 처리된 동물로부터의 비장세포에서 가장 현저한 부스팅이 관찰되었다.
실시예 24: 항-TIGIT 항체가 오래 지속되는 항종양 기억 CD8 T 세포를 유도한다
클론 13 mIgG2a 비-푸코실화 또는 미변형 항체로의 처리 후 CT26 결장암 동계 종양 모델에서 완전 반응을 나타낸 마우스 및 4마리의 미처리 마우스에 CT26 결장암 세포를 다시 챌린지하였다. 도 34에 제시된 바와 같이, 클론 13 mIgG2a 비-푸코실화 또는 미변형 항체로의 1 mg/kg 또는 5 mg/kg 처리 후 완전 반응을 나타낸 마우스는 다시 챌린지된 종양 세포를 거부할 수 있는 오래 지속되는 항종양 기억 CD8 T 세포를 갖는 것으로 나타났다.
상기 발명이 이해를 명료하게 하기 위한 목적으로 설명 및 예의 방식으로 일부 상세하게 기술되었지만, 관련 기술 분야의 통상의 기술자는 본 발명의 많은 변형 및 변경이 이의 취지 및 범주를 벗어나지 않으면서 이루어질 수 있다는 것을 이해할 것이다. 본원에 기술된 구체적인 실시양태는 예로서만 제공되고, 어떠한 방식으로도 제한적인 것으로 의도되지 않는다. 본 발명의 진정한 범주 및 취지가 하기 청구범위에 의해 지시되면서, 명세서 및 예가 예시적인 것으로서만 고려되는 것이 의도된다.
실시예 25: Fcγ 수용체에 대한 항-TIGIT 항체 결합
생체 내에서, 단핵구, 대식세포, 호중구, 수지상 세포, 및 자연 킬러 세포는 FcγRI, FcγRII, 및 FcγRIIIa를 통해 ADCP, ADCC, 및 CDC를 매개할 수 있다. 세포성 FcγR 결합을 평가하기 위해, CHO 세포를 인간 FcγRI, FcγIIa, FcγIIB, 또는 고친화도 FcγRIIIa V/V 수용체로 형질감염시켰다. 세포를 증가되는 농도의 야생형, 비-푸코실화, LALA-PG, 또는 DLE 버전의 클론 13 IgG1 항-TIGIT 항체, 또는 또 다른 항-TIGIT 항체인 H5L4에 노출시켰다. 형광-태그부착 항-인간 Fc 2차 항체 및 유동 세포측정법을 사용하여 결합을 모니터링하였다.
도 39a에 제시된 바와 같이, IgG1 LALA-PG 불활성 백본을 제외한 모든 항체가 CHO 세포의 표면 상의 FcγRI에 실질적으로 동등하게 결합하였다. IgG1 비-푸코실화 및 IgG1 DLE 백본은 CHO 세포의 표면 상의 FcγRIIIa에 대한 증가된 결합을 나타냈다. 도 39b. CHO 세포의 표면 상의 FcyRIIa 및 FcγRIIb 둘 다에 대한 결합은 야생형 IgG1 백본 및 IgG1 DLE 이펙터 강화 백본으로 가장 높았다. 도 39c 및 도 39d. 비-푸코실화 IgG1 백본은 IgG1 야생형 백본에 비교했을 때 FcγRIIa 및 FcγRIIb 둘 다에 대한 결합 친화도가 더 낮았지만, 이의 결합 친화도는 IgG1 LALA-PG 백본보다 더 컸다. 도 39c 및 도 39d. 억제성 FcγRIIb 수용체에 대한 감소된 결합은 비-푸코실화 IgG1 백본에 의해 매개되는 면역 반응에 영향을 미칠 수 있다.
실시예 26: 항-TIGIT 항체 매개 포식작용
용어 "항체-의존적 세포성 포식작용" 또는 "ADCP"는 항체-결합 세포가 항체의 Fc 영역에 결합하는 포식 면역 세포 (예를 들어, 대식세포, 호중구 및/또는 수지상 세포)에 의해 전체적으로 또는 부분적으로 내재화되는 프로세스를 지칭한다.
야생형, 비-푸코실화, 및 DLE 버전의 클론 13 IgG1 항-TIGIT 항체를 인간 단핵구/대식세포 및 TIGIT-양성 저캣 T 세포를 사용하여 항체-매개 포식작용에 대해 검정하였다. 형광 적색 PKH 염료로 표지된 인간 TIGIT-양성 저캣 T 세포를 30분 동안 증가되는 농도의 항-TIGIT 항체로 옵소닌화시켰다. 세포를 세정하고, 18시간 동안 10:1 비로 단핵구 대식세포와 함께 인큐베이션하였다. 샘플을 3회 세정하고, 유동 세포측정법에 적용하여 포식작용을 평가하였다.
도 40에 제시된 바와 같이, 야생형 및 비-푸코실화 IgG1 클론 13 항-TIGIT 항체가 유사한 수준의 포식작용을 매개한 한편, 클론 13 IgG1 DLE 항체는 포식 활성을 매개하는 것에서 덜 효과적이었다.
ADCC 및 ADCP에 더하여, 세포-결합 항체의 Fc 영역은 또한 보체 고전적 경로를 활성화시킬 수 있고, CDC를 유발할 수 있다. 항체가 항원과 복합체를 형성하였을 때 항체의 Fc 영역에 보체 시스템의 C1q가 결합한다. 세포-결합 항체에 대한 C1q의 결합은 C3 컨버타제를 생성시키는 C4 및 C2의 단백질분해성 활성화를 수반하는 일련의 이벤트를 개시시킬 수 있다. C3 컨버타제에 의한 C3의 C3b로의 절단은 C5b, C6, C7, C8 및 C9를 포함하는 말단 보체 성분의 활성화를 가능하게 한다. 총괄적으로, 이러한 단백질들은 항체-코팅 세포 상에 막-공격 복합체 포어를 형성시킨다. 이러한 포어는 세포 막 통합성을 파괴하여, 표적 세포를 보체-의존적 세포독성 또는 "CDC"를 통해 살해한다.
TIGIT+ 저캣 T 세포를 표적 세포로 사용하여 야생형, 비-푸코실화, LALA-PG, 및 DLE 버전의 클론 13 IgG1 항-TIGIT 항체, 뿐만 아니라 H5/L4를 CDC 활성에 대해 검정하였다. 저캣 세포를 37℃에서 2시간 동안 살아있는 세포로부터는 배제되지만 CDC 활성화 및 용해 시 흡수되는 사이톡스® 그린(SYTOX® green)을 함유하는 배지에서 인간 혈청 (열 불활성화되지 않음)의 존재 하에 증가되는 용량의 항체와 함께 인큐베이션하였다. 인큐베이션 후, 샘플을 플레이트 판독기에서 분석하고, 배경 신호를 차감하고, 1% 트리톤 X 용액으로 살해된 세포로부터의 최대 신호를 결정하는 것에 의해 최대 용해의 %를 계산하였다.
도 41에 제시된 바와 같이, 테스트된 항-TIGIT 항체 중 어느 것도 CDC 활성을 매개하지 않았다. 대조적으로, 항-CD47 항체 hB6H12.3은 이러한 시스템에서 강건한 CDC 활성을 매개하였다. 항체에 의한 CDC 유도는 입체형상적으로 의존적이고, 종종 항체가 결합하는 에피토프에 의존적이다. 이러한 결과들은 항체에 의해 결합된 TIGIT 에피토프가 적합한 C1q 결합을 허용하지 않는다는 것을 시사한다.
본원에서 인용된 모든 간행물, 특허, 특허 출원 또는 기타 문서는 이에 의해 각각의 개별적인 간행물, 특허, 특허 출원 또는 기타 문서가 모든 목적을 위해 참조로 포함되는 것으로 개별적으로 지시된 것과 동일한 정도로 모든 목적을 위해 그의 전문이 참조로 포함된다.
서열 표
Figure pct00011
Figure pct00012
Figure pct00013
Figure pct00014
Figure pct00015
Figure pct00016
Figure pct00017
Figure pct00018
Figure pct00019
Figure pct00020
Figure pct00021
Figure pct00022
Figure pct00023
Figure pct00024
Figure pct00025
Figure pct00026
Figure pct00027
Figure pct00028
SEQUENCE LISTING <110> SEATTLE GENETICS, INC. <120> ANTI-TIGIT ANTIBODIES <130> 01218-0001-00PCT <150> US 62/722,063 <151> 2018-08-23 <150> US 62/734,130 <151> 2018-09-20 <150> US 62/822,674 <151> 2019-03-22 <160> 309 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 128 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: Clone 2 VH Protein <400> 1 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp His 20 25 30 Tyr Met Asp Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Gly Arg Thr Arg Asn Lys Ala Asn Ser Tyr Thr Thr Glu Tyr Ala Ala 50 55 60 Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Ser 65 70 75 80 Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr 85 90 95 Tyr Cys Ala Arg Gly Gln Tyr Tyr Tyr Gly Ser Ser Ser Arg Gly Tyr 100 105 110 Tyr Tyr Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 115 120 125 <210> 2 <211> 384 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: Clone 2 VH DNA <400> 2 gaggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc ttggtccagc ctggagggtc cctgagactc 60 tcctgtgcag cctctggatt caccttcagt gaccactaca tggactgggt ccgccaggct 120 ccagggaagg ggctggagtg ggttggccgt actagaaaca aagctaacag ttacaccaca 180 gaatacgccg cgtctgtgaa aggcagattc accatctcaa gagatgattc aaagaactca 240 ctgtatctgc aaatgaacag cctgaaaacc gaggacacgg cggtgtacta ctgcgccaga 300 ggccagtact actacggcag cagcagcaga ggttactact acatggacgt atggggccag 360 ggaacaaccg tcaccgtctc ctca 384 <210> 3 <211> 26 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: Clone 2 VH FR1 <400> 3 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly 20 25 <210> 4 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: Clone 2 VH CDR1 <400> 4 Phe Thr Phe Ser Asp His Tyr Met Asp 1 5 <210> 5 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: Clone 2 VH FR2 <400> 5 Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Gly 1 5 10 <210> 6 <211> 19 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: Clone 2 VH CDR2 <400> 6 Arg Thr Arg Asn Lys Ala Asn Ser Tyr Thr Thr Glu Tyr Ala Ala Ser 1 5 10 15 Val Lys Gly <210> 7 <211> 30 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: Clone 2 VH FR3 <400> 7 Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Ser Leu Tyr Leu Gln 1 5 10 15 Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 20 25 30 <210> 8 <211> 19 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: Clone 2 VH CDR3 <400> 8 Ala Arg Gly Gln Tyr Tyr Tyr Gly Ser Ser Ser Arg Gly Tyr Tyr Tyr 1 5 10 15 Met Asp Val <210> 9 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: Clone 2 VH FR4 <400> 9 Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 1 5 10 <210> 10 <211> 108 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: Clones 2 and 2C VL Protein <400> 10 Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly 1 5 10 15 Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Ser 20 25 30 Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu 35 40 45 Ile Tyr Gly Ala Ser Ser Arg Ala Thr Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser 50 55 60 Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu 65 70 75 80 Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Ala Val Pro Ser Pro 85 90 95 Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 <210> 11 <211> 324 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: Clone 2 VL DNA <400> 11 gaaattgtgt tgacgcagtc tccaggcacc ctgtctttgt ctccagggga aagagccacc 60 ctctcctgca gggccagtca gagtgttagc agcagctact tagcctggta ccagcagaaa 120 cctggccagg ctcccaggct cctcatctat ggtgcatcca gcagggccac tggcatccca 180 gacaggttca gtggcagtgg gtctgggaca gacttcactc tcaccatcag cagactggag 240 cctgaagatt ttgcagtgta ttactgtcag caggccgtcc ccagtcctct cacttttggc 300 ggagggacca aggttgagat caaa 324 <210> 12 <211> 23 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: Clone 2 VL FR1 <400> 12 Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly 1 5 10 15 Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys 20 <210> 13 <211> 12 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: Clones 2 and 2C VL CDR1 <400> 13 Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Ser Tyr Leu Ala 1 5 10 <210> 14 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: Clone 2 VL FR2 <400> 14 Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile Tyr 1 5 10 15 <210> 15 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: Clones 2 and 2C VL CDR2 <400> 15 Gly Ala Ser Ser Arg Ala Thr 1 5 <210> 16 <211> 32 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: Clone 2 VL FR3 <400> 16 Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr 1 5 10 15 Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys 20 25 30 <210> 17 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: Clones 2 and 2CVL CDR3 <400> 17 Gln Gln Ala Val Pro Ser Pro Leu Thr 1 5 <210> 18 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: Clone 2 VL FR4 <400> 18 Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 1 5 10 <210> 19 <211> 128 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: Clone 3 VH Protein <400> 19 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp His 20 25 30 Tyr Met Asp Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Gly Arg Thr Arg Asn Lys Ala Asn Ser Tyr Thr Thr Glu Tyr Ala Ala 50 55 60 Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Ser 65 70 75 80 Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr 85 90 95 Tyr Cys Ala Arg Gly Gln Tyr Tyr Tyr Gly Ser Ser Ser Arg Gly Tyr 100 105 110 Tyr Tyr Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 115 120 125 <210> 20 <211> 384 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: Clone 3 VH DNA <400> 20 gaggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc ttggtccagc ctggagggtc cctgagactc 60 tcctgtgcag cctctggatt caccttcagt gaccactaca tggactgggt ccgccaggct 120 ccagggaagg ggctggagtg ggttggccgt actagaaaca aagctaacag ttacaccaca 180 gaatacgccg cgtctgtgaa aggcagattc accatctcaa gagatgattc aaagaactca 240 ctgtatctgc aaatgaacag cctgaaaacc gaggacacgg cggtgtacta ctgcgccaga 300 ggccagtact actacggcag cagcagcaga ggttactact acatggacgt atggggccag 360 ggaacaaccg tcaccgtctc ctca 384 <210> 21 <211> 26 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: Clone 3 VH FR1 <400> 21 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly 20 25 <210> 22 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: Clone 3 VH CDR1 <400> 22 Phe Thr Phe Ser Asp His Tyr Met Asp 1 5 <210> 23 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: Clone 3 VH FR2 <400> 23 Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Gly 1 5 10 <210> 24 <211> 19 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: Clone 3 VH CDR2 <400> 24 Arg Thr Arg Asn Lys Ala Asn Ser Tyr Thr Thr Glu Tyr Ala Ala Ser 1 5 10 15 Val Lys Gly <210> 25 <211> 30 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: Clone 3 VH FR3 <400> 25 Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Ser Leu Tyr Leu Gln 1 5 10 15 Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 20 25 30 <210> 26 <211> 19 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: Clone 3 VH CDR3 <400> 26 Ala Arg Gly Gln Tyr Tyr Tyr Gly Ser Ser Ser Arg Gly Tyr Tyr Tyr 1 5 10 15 Met Asp Val <210> 27 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: Clone 3 VH FR4 <400> 27 Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 1 5 10 <210> 28 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: Clone 3 VL Protein <400> 28 Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly 1 5 10 15 Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Arg Ser Ser 20 25 30 Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu 35 40 45 Ile Tyr Gly Ala Ser Ser Arg Ala Thr Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser 50 55 60 Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu 65 70 75 80 Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Val Gly Pro Pro Leu 85 90 95 Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 <210> 29 <211> 321 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: Clone 3 VL DNA <400> 29 gaaattgtgt tgacgcagtc tccaggcacc ctgtctttgt ctccagggga aagagccacc 60 ctctcctgca gggccagtca gagtgttagg agcagctact tagcctggta ccagcagaaa 120 cctggccagg ctcccaggct cctcatctat ggtgcatcca gcagggccac tggcatccca 180 gacaggttca gtggcagtgg gtctgggaca gacttcactc tcaccatcag cagactggag 240 cctgaagatt ttgcagtgta ttactgtcag caggtcggac cccccctcac ttttggcgga 300 gggaccaagg ttgagatcaa a 321 <210> 30 <211> 23 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: Clone 3 VL FR1 <400> 30 Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly 1 5 10 15 Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys 20 <210> 31 <211> 12 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: Clone 3 VL CDR1 <400> 31 Arg Ala Ser Gln Ser Val Arg Ser Ser Tyr Leu Ala 1 5 10 <210> 32 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: Clone 3 VL FR2 <400> 32 Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile Tyr 1 5 10 15 <210> 33 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: Clone 3VL CDR2 <400> 33 Gly Ala Ser Ser Arg Ala Thr 1 5 <210> 34 <211> 32 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: Clone 3 VL FR3 <400> 34 Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr 1 5 10 15 Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys 20 25 30 <210> 35 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: Clone 3 VL CDR3 <400> 35 Gln Gln Val Gly Pro Pro Leu Thr 1 5 <210> 36 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: Clone 3 VL FR4 <400> 36 Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 1 5 10 <210> 37 <211> 121 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: Clone 5 VH Protein <400> 37 Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Thr Tyr 20 25 30 Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ser Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Lys Gly Pro Arg Tyr Gln Asp Arg Ala Gly Met Asp Val Trp Gly 100 105 110 Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 38 <211> 363 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: Clone 5 VH DNA <400> 38 gaggtgcagc tgttggagtc tgggggaggc ttggtacagc ctggggggtc cctgagactc 60 tcctgtgcag cctctggatt cacctttagc acctatgcca tgagctgggt ccgccaggct 120 ccagggaagg ggctggagtg ggtctcagct attagtggta gtggtggtag cacatactac 180 gcagactccg tgaagggccg gttcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat 240 ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggcggtgt actactgcgc caagggcccc 300 agataccaag acagggcagg aatggacgta tggggccagg gaacaactgt caccgtctcc 360 tca 363 <210> 39 <211> 26 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: Clone 5 VH FR1 <400> 39 Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly 20 25 <210> 40 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: Clone 5 VH CDR1 <400> 40 Phe Thr Phe Ser Thr Tyr Ala Met Ser 1 5 <210> 41 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: Clone 5 VH FR2 <400> 41 Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ser 1 5 10 <210> 42 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: Clone 5 VH CDR2 <400> 42 Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys 1 5 10 15 Gly <210> 43 <211> 30 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: Clone 5 VH FR3 <400> 43 Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gln 1 5 10 15 Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 20 25 30 <210> 44 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: Clone 5 VH CDR3 <400> 44 Ala Lys Gly Pro Arg Tyr Gln Asp Arg Ala Gly Met Asp Val 1 5 10 <210> 45 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: Clone 5 VH FR4 <400> 45 Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 1 5 10 <210> 46 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: Clone 5 VL Protein <400> 46 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Tyr 20 25 30 Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Leu Ala Thr Pro Tyr 85 90 95 Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 <210> 47 <211> 321 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: Clone 5 VL DNA <400> 47 gacatccaga tgacccagtc tccatcctcc ctgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60 atcacttgcc gggcaagtca gagcattagc agctatttaa attggtatca gcagaaacca 120 gggaaagccc ctaagctcct gatctatgct gcatccagtt tgcaaagtgg ggtcccatca 180 aggttcagtg gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccatcagcag tctgcaacct 240 gaagattttg caacttacta ctgtcagcaa agcctcgcca ctccttacac ttttggcgga 300 gggaccaagg ttgagatcaa a 321 <210> 48 <211> 23 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: Clone 5 VL FR1 <400> 48 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys 20 <210> 49 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: Clone 5 VL CDR1 <400> 49 Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Tyr Leu Asn 1 5 10 <210> 50 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: Clone 5 VL FR2 <400> 50 Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr 1 5 10 15 <210> 51 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: Clone 5 VL CDR2 <400> 51 Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser 1 5 <210> 52 <211> 32 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: Clone 5 VL FR3 <400> 52 Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr 1 5 10 15 Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys 20 25 30 <210> 53 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: Clone 5 VL CDR3 <400> 53 Gln Gln Ser Leu Ala Thr Pro Tyr Thr 1 5 <210> 54 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: Clone 5 VL FR4 <400> 54 Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 1 5 10 <210> 55 <211> 125 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: Clone 13 VH Protein <400> 55 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Ala Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Ser Ile Ile Pro Ile Phe Gly Thr Ala Asn Tyr Ala Gln Lys Phe 50 55 60 Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Pro Ser Glu Val Gly Ala Ile Leu Gly Tyr Val Trp Phe 100 105 110 Asp Pro Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 125 <210> 56 <211> 375 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: Clone 13 VH DNA <400> 56 caggtgcagc tggtgcagtc tggggctgag gtgaagaagc ctgggtcctc ggtgaaggtc 60 tcctgcaagg cttctggagg caccttcagc agctatgcta tcagctgggt gcgacaggcc 120 cctggacaag ggcttgagtg gatgggaagc atcatcccta tctttggtac agcaaactac 180 gcacagaagt tccagggcag agtcacgatt accgcggacg aatccacgag cacagcctac 240 atggagctga gcagcctgag atctgaggac acggcggtgt actactgcgc cagaggccct 300 tctgaagtag gagcaatact cggatatgta tggttcgacc catggggaca gggtacattg 360 gtcaccgtct cctca 375 <210> 57 <211> 26 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: Clone 13 VH FR1 <400> 57 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly 20 25 <210> 58 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: Clone 13 VH CDR1 <400> 58 Gly Thr Phe Ser Ser Tyr Ala Ile Ser 1 5 <210> 59 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: Clone 13 VH FR2 <400> 59 Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met Gly 1 5 10 <210> 60 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: Clone 13 VH CDR2 <400> 60 Ser Ile Ile Pro Ile Phe Gly Thr Ala Asn Tyr Ala Gln Lys Phe Gln 1 5 10 15 Gly <210> 61 <211> 30 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: Clone 13 VH FR3 <400> 61 Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr Met Glu 1 5 10 15 Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 20 25 30 <210> 62 <211> 18 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: Clones 13 and 13A VH CDR3 <400> 62 Ala Arg Gly Pro Ser Glu Val Gly Ala Ile Leu Gly Tyr Val Trp Phe 1 5 10 15 Asp Pro <210> 63 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: Clone 13 VH FR4 <400> 63 Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 1 5 10 <210> 64 <211> 112 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: Clones 13, 13A, 13B, 13C, and 13D VL Protein <400> 64 Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly 1 5 10 15 Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Leu His Ser 20 25 30 Asn Gly Tyr Asn Tyr Leu Asp Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser 35 40 45 Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Leu Gly Ser Asn Arg Ala Ser Gly Val Pro 50 55 60 Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile 65 70 75 80 Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Met Gln Ala 85 90 95 Arg Arg Ile Pro Ile Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 110 <210> 65 <211> 336 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: Clone 13 VL DNA <400> 65 gatattgtga tgactcagtc tccactctcc ctgcccgtca cccctggaga gccggcctcc 60 atctcctgca ggtctagtca gagcctcctg catagtaatg gatacaacta tttggattgg 120 tacctgcaga agccagggca gtctccacag ctcctgatct atttgggttc taatcgggcc 180 tccggggtcc ctgacaggtt cagtggcagt ggatcaggca cagattttac actgaaaatc 240 agcagagtgg aggctgagga tgttggggtt tattactgca tgcaggcaag acgaatccct 300 atcacttttg gcggagggac caaggttgag atcaaa 336 <210> 66 <211> 23 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: Clone 13 VL FR1 <400> 66 Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly 1 5 10 15 Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys 20 <210> 67 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: Clones 13, 13A, 13B, 13C, and 13D VL CDR1 <400> 67 Arg Ser Ser Gln Ser Leu Leu His Ser Asn Gly Tyr Asn Tyr Leu Asp 1 5 10 15 <210> 68 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: Clone 13 VL FR2 <400> 68 Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Gln Leu Leu Ile Tyr 1 5 10 15 <210> 69 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: Clones 13, 13A, 13B, 13C, and 13D VL CDR2 <400> 69 Leu Gly Ser Asn Arg Ala Ser 1 5 <210> 70 <211> 32 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: Clone 13 VL FR3 <400> 70 Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr 1 5 10 15 Leu Lys Ile Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys 20 25 30 <210> 71 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: Clones 13, 13A, 13B, 13C, and 13D VL CDR3 <400> 71 Met Gln Ala Arg Arg Ile Pro Ile Thr 1 5 <210> 72 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: Clone 13 VL FR4 <400> 72 Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 1 5 10 <210> 73 <211> 125 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: Clone 14 VH Protein <400> 73 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Ala Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Ser Ile Ile Pro Ile Phe Gly Thr Ala Asn Tyr Ala Gln Lys Phe 50 55 60 Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Pro Ser Glu Val Gly Ala Ile Leu Gly Tyr Val Trp Phe 100 105 110 Asp Pro Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 125 <210> 74 <211> 375 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: Clone 14 VH DNA <400> 74 caggtgcagc tggtgcagtc tggggctgag gtgaagaagc ctgggtcctc ggtgaaggtc 60 tcctgcaagg cttctggagg caccttcagc agctatgcta tcagctgggt gcgacaggcc 120 cctggacaag ggcttgagtg gatgggaagc atcatcccta tctttggtac agcaaactac 180 gcacagaagt tccagggcag agtcacgatt accgcggacg aatccacgag cacagcctac 240 atggagctga gcagcctgag atctgaggac acggcggtgt actactgcgc cagaggccct 300 tctgaagtag gagcaatact cggatatgta tggttcgacc catggggaca gggtacattg 360 gtcaccgtct cctca 375 <210> 75 <211> 26 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: Clone 14 VH FR1 <400> 75 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly 20 25 <210> 76 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: Clone 14 VH CDR1 <400> 76 Gly Thr Phe Ser Ser Tyr Ala Ile Ser 1 5 <210> 77 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: Clone 14 VH FR2 <400> 77 Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met Gly 1 5 10 <210> 78 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: Clone 14 VH CDR2 <400> 78 Ser Ile Ile Pro Ile Phe Gly Thr Ala Asn Tyr Ala Gln Lys Phe Gln 1 5 10 15 Gly <210> 79 <211> 30 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: Clone 14 VH FR3 <400> 79 Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr Met Glu 1 5 10 15 Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 20 25 30 <210> 80 <211> 18 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: Clone 14 VH CDR3 <400> 80 Ala Arg Gly Pro Ser Glu Val Gly Ala Ile Leu Gly Tyr Val Trp Phe 1 5 10 15 Asp Pro <210> 81 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: Clone 14 VH FR4 <400> 81 Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 1 5 10 <210> 82 <211> 112 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: Clone 14 VL Protein <400> 82 Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly 1 5 10 15 Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Leu His Ser 20 25 30 Asn Gly Tyr Asn Tyr Leu Asp Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser 35 40 45 Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Leu Gly Ser Asn Arg Ala Ser Gly Val Pro 50 55 60 Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile 65 70 75 80 Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Met Gln Ala 85 90 95 Lys Arg Leu Pro Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 110 <210> 83 <211> 336 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: Clone 14 VL DNA <400> 83 gatattgtga tgactcagtc tccactctcc ctgcccgtca cccctggaga gccggcctcc 60 atctcctgca ggtctagtca gagcctcctg catagtaatg gatacaacta tttggattgg 120 tacctgcaga agccagggca gtctccacag ctcctgatct atttgggttc taatcgggcc 180 tccggggtcc ctgacaggtt cagtggcagt ggatcaggca cagattttac actgaaaatc 240 agcagagtgg aggctgagga tgttggggtt tattactgca tgcaggcaaa acgactccct 300 ctcacttttg gcggagggac caaggttgag atcaaa 336 <210> 84 <211> 23 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: Clone 14 VL FR1 <400> 84 Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly 1 5 10 15 Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys 20 <210> 85 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: Clone 14 VL CDR1 <400> 85 Arg Ser Ser Gln Ser Leu Leu His Ser Asn Gly Tyr Asn Tyr Leu Asp 1 5 10 15 <210> 86 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: Clone 14 VL FR2 <400> 86 Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Gln Leu Leu Ile Tyr 1 5 10 15 <210> 87 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: Clone 14 VL CDR2 <400> 87 Leu Gly Ser Asn Arg Ala Ser 1 5 <210> 88 <211> 32 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: Clone 14 VL FR3 <400> 88 Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr 1 5 10 15 Leu Lys Ile Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys 20 25 30 <210> 89 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: Clone 14 VL CDR3 <400> 89 Met Gln Ala Lys Arg Leu Pro Leu Thr 1 5 <210> 90 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: Clone 14 VL FR4 <400> 90 Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 1 5 10 <210> 91 <211> 121 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: Clone 16 VH Protein <400> 91 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Ala Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Gly Ile Ile Pro Ile Phe Gly Thr Ala Ser Tyr Ala Gln Lys Phe 50 55 60 Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gln Ser Thr Trp His Lys Leu Tyr Gly Thr Asp Val Trp Gly 100 105 110 Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 92 <211> 363 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: Clone 16 VH DNA <400> 92 caggtgcagc tggtgcagtc tggggctgag gtgaagaagc ctgggtcctc ggtgaaggtc 60 tcctgcaagg cttctggagg caccttcagc agctatgcta tcagctgggt gcgacaggcc 120 cctggacaag ggcttgagtg gatgggaggg atcatcccta tctttggtac agcaagctac 180 gcacagaagt tccagggcag agtcacgatt accgcggacg aatccacgag cacagcctac 240 atggagctga gcagcctgag atctgaggac acggcggtgt actactgcgc aagacagagc 300 acctggcaca aattgtacgg aacggacgta tggggccagg gaacaactgt caccgtctcc 360 tca 363 <210> 93 <211> 26 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: Clone 16 VH FR1 <400> 93 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly 20 25 <210> 94 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: Clone 16 VH CDR1 <400> 94 Gly Thr Phe Ser Ser Tyr Ala Ile Ser 1 5 <210> 95 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: Clone 16 VH FR2 <400> 95 Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met Gly 1 5 10 <210> 96 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: Clone 16 VH CDR2 <400> 96 Gly Ile Ile Pro Ile Phe Gly Thr Ala Ser Tyr Ala Gln Lys Phe Gln 1 5 10 15 Gly <210> 97 <211> 30 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: Clone 16 VH FR3 <400> 97 Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr Met Glu 1 5 10 15 Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 20 25 30 <210> 98 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: Clone 16 VH CDR3 <400> 98 Ala Arg Gln Ser Thr Trp His Lys Leu Tyr Gly Thr Asp Val 1 5 10 <210> 99 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: Clone 16 VH FR4 <400> 99 Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 1 5 10 <210> 100 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: Clones 16, 16C, 16D, and 16E VL Protein <400> 100 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Val Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Trp 20 25 30 Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Gly Asp Ser Leu Pro Pro 85 90 95 Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 <210> 101 <211> 321 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: Clone 16 VL DNA <400> 101 gacatccaga tgacccagtc tccatcttcc gtgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60 atcacttgtc gggcgagtca gggtattagc agctggttag cctggtatca gcagaaacca 120 gggaaagccc ctaagctcct gatctatgct gcatccagtt tgcaaagtgg ggtcccatca 180 aggttcagcg gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccatcagcag cctgcagcct 240 gaagattttg caacttatta ctgtcagcag ggagacagtc tccctcctac ttttggcgga 300 gggaccaagg ttgagatcaa a 321 <210> 102 <211> 23 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: Clone 16 VL FR1 <400> 102 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Val Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys 20 <210> 103 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: Clones 16, 16C, 16D, and 16E VL CDR1 <400> 103 Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Trp Leu Ala 1 5 10 <210> 104 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: Clone 16 VL FR2 <400> 104 Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr 1 5 10 15 <210> 105 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: Clones 16, 16C, 16D, and 16E VL CDR2 <400> 105 Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser 1 5 <210> 106 <211> 32 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: Clone 16 VL FR3 <400> 106 Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr 1 5 10 15 Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys 20 25 30 <210> 107 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: Clones 16, 16C, 16D, and 16E VL CDR3 <400> 107 Gln Gln Gly Asp Ser Leu Pro Pro Thr 1 5 <210> 108 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: Clone 16 VL FR4 <400> 108 Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 1 5 10 <210> 109 <211> 120 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: Clone 18 VH Protein <400> 109 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr 20 25 30 Tyr Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Ile Ile Asn Pro Ser Gly Gly Ser Thr Ser Tyr Ala Gln Lys Phe 50 55 60 Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Val Arg Tyr Gly Tyr Ala Asp Gly Met Asp Val Trp Gly Gln 100 105 110 Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 110 <211> 360 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: Clone 18 VH DNA <400> 110 caggtgcagc tggtgcagtc tggggctgag gtgaagaagc ctggggcctc agtgaaggtt 60 tcctgcaagg catctggata caccttcacc agctactata tgtcatgggt gcgacaggcc 120 cctggacaag ggcttgagtg gatgggaata atcaacccta gtggtggtag cacaagctac 180 gcacagaagt tccagggcag agtcaccatg accagggaca cgtccacgag cacagtctac 240 atggagctga gcagcctgag atctgaggac acggcggtgt actactgcgc cagagtgagg 300 tacggatacg cagacggaat ggacgtatgg ggccagggaa caactgtcac cgtctcctca 360 <210> 111 <211> 26 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: Clone 18 VH FR1 <400> 111 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly 20 25 <210> 112 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: Clone 18 VH CDR1 <400> 112 Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr Tyr Met Ser 1 5 <210> 113 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: Clone 18 VH FR2 <400> 113 Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met Gly 1 5 10 <210> 114 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: Clone 18 VH CDR2 <400> 114 Ile Ile Asn Pro Ser Gly Gly Ser Thr Ser Tyr Ala Gln Lys Phe Gln 1 5 10 15 Gly <210> 115 <211> 30 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: Clone 18 VH FR3 <400> 115 Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr Met Glu 1 5 10 15 Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 20 25 30 <210> 116 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: Clone 18 VH CDR3 <400> 116 Ala Arg Val Arg Tyr Gly Tyr Ala Asp Gly Met Asp Val 1 5 10 <210> 117 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: Clone 18 VH FR4 <400> 117 Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 1 5 10 <210> 118 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: Clone 18 VL Protein <400> 118 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Tyr 20 25 30 Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Gly Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Val Tyr His Leu Pro Phe 85 90 95 Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 <210> 119 <211> 321 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: Clone 18 VL DNA <400> 119 gacatccaga tgacccagtc tccatcctcc ctgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60 atcacttgcc gggcaagtca gagcattagc agctatttaa attggtatca gcagaaacca 120 gggaaagccc ctaagctcct gatctatggt gcatccagtt tgcaaagtgg ggtcccatca 180 aggttcagtg gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccatcagcag tctgcaacct 240 gaagattttg caacttacta ctgtcagcaa gtataccacc tccctttcac ttttggcgga 300 gggaccaagg ttgagatcaa a 321 <210> 120 <211> 23 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: Clone 18 VL FR1 <400> 120 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys 20 <210> 121 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: Clone 18 VL CDR1 <400> 121 Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Tyr Leu Asn 1 5 10 <210> 122 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: Clone 18 VL FR2 <400> 122 Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr 1 5 10 15 <210> 123 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: Clone 18 VL CDR2 <400> 123 Gly Ala Ser Ser Leu Gln Ser 1 5 <210> 124 <211> 32 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: Clone 18 VL FR3 <400> 124 Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr 1 5 10 15 Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys 20 25 30 <210> 125 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: Clone 18 VL CDR3 <400> 125 Gln Gln Val Tyr His Leu Pro Phe Thr 1 5 <210> 126 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: Clone 18 VL FR4 <400> 126 Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 1 5 10 <210> 127 <211> 121 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: Clone 21 VH Protein <400> 127 Gln Leu Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu 1 5 10 15 Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser Ile Ser Ser Ser 20 25 30 Ser Tyr Tyr Trp Gly Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu 35 40 45 Trp Ile Gly Ser Ile Tyr Tyr Ser Gly Ser Thr Tyr Tyr Asn Pro Ser 50 55 60 Leu Lys Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe 65 70 75 80 Ser Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr 85 90 95 Cys Ala Arg Asp Pro Leu Tyr Gln Asp Ala Pro Phe Asp Tyr Trp Gly 100 105 110 Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 128 <211> 363 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: Clone 21 VH DNA <400> 128 cagctgcagc tgcaggagtc gggcccagga ctggtgaagc cttcggagac cctgtccctc 60 acctgcactg tctctggtgg ctccatcagc agtagtagtt actactgggg ctggatccgc 120 cagcccccag ggaaggggct ggagtggatt gggagtatct attatagtgg gagcacctac 180 tacaacccgt ccctcaagag tcgagtcacc atatccgtag acacgtccaa gaaccagttc 240 tccctgaagc tgagttctgt gaccgccgca gacacggcgg tgtactactg cgccagagat 300 cctttgtacc aagacgctcc cttcgactat tggggacagg gtacattggt caccgtctcc 360 tca 363 <210> 129 <211> 26 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: Clone 21 VH FR1 <400> 129 Gln Leu Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu 1 5 10 15 Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly 20 25 <210> 130 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: Clone 21 VH CDR1 <400> 130 Gly Ser Ile Ser Ser Ser Ser Tyr Tyr Trp Gly 1 5 10 <210> 131 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: Clone 21 VH FR2 <400> 131 Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile Gly 1 5 10 <210> 132 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: Clone 21 VH CDR2 <400> 132 Ser Ile Tyr Tyr Ser Gly Ser Thr Tyr Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Ser 1 5 10 15 <210> 133 <211> 30 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: Clone 21 VH FR3 <400> 133 Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu Lys 1 5 10 15 Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 20 25 30 <210> 134 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: Clone 21 VH CDR3 <400> 134 Ala Arg Asp Pro Leu Tyr Gln Asp Ala Pro Phe Asp Tyr 1 5 10 <210> 135 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: Clone 21 VH FR4 <400> 135 Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 1 5 10 <210> 136 <211> 106 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: Clone 21 VL Protein <400> 136 Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly 1 5 10 15 Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Tyr 20 25 30 Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Asp Ala Ser Asn Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Arg Ala Asn Phe Pro Thr 85 90 95 Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 <210> 137 <211> 318 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: Clone 21 VL DNA <400> 137 gaaattgtgt tgacacagtc tccagccacc ctgtctttgt ctccagggga aagagccacc 60 ctctcctgca gggccagtca gagtgttagc agctacttag cctggtacca acagaaacct 120 ggccaggctc ccaggctcct catctatgat gcatccaaca gggccactgg catcccagcc 180 aggttcagtg gcagtgggtc tgggacagac ttcactctca ccatcagcag cctagagcct 240 gaagattttg cagtttatta ctgtcagcag agagccaact tccctacttt tggcggaggg 300 accaaggttg agatcaaa 318 <210> 138 <211> 23 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: Clone 21 VL FR1 <400> 138 Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly 1 5 10 15 Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys 20 <210> 139 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: Clone 21 VL CDR1 <400> 139 Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Tyr Leu Ala 1 5 10 <210> 140 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: Clone 21 VL FR2 <400> 140 Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile Tyr 1 5 10 15 <210> 141 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: Clone 21 VL CDR2 <400> 141 Asp Ala Ser Asn Arg Ala Thr 1 5 <210> 142 <211> 32 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: Clone 21 VL FR3 <400> 142 Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr 1 5 10 15 Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys 20 25 30 <210> 143 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: Clone 21 VL CDR3 <400> 143 Gln Gln Arg Ala Asn Phe Pro Thr 1 5 <210> 144 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: Clone 21 VL FR4 <400> 144 Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 1 5 10 <210> 145 <211> 124 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: Clone 22 VH Protein <400> 145 Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu 1 5 10 15 Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Val Ser Gly Tyr Ser Ile Ser Ser Gly 20 25 30 Tyr Tyr Trp Ala Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp 35 40 45 Ile Gly Ser Ile Tyr His Ser Gly Ser Thr Tyr Tyr Asn Pro Ser Leu 50 55 60 Lys Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser 65 70 75 80 Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gln Gly Tyr Tyr Tyr Gly Ser Ser Gly Ser Val Asp Phe Asp 100 105 110 Leu Trp Gly Arg Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 146 <211> 372 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: Clone 22 VH DNA <400> 146 caggtgcagc tgcaggagtc gggcccagga ctggtgaagc cttcggagac cctgtccctc 60 acctgcgctg tctctggtta ctccatcagc agtggttact actgggcttg gatccggcag 120 cccccaggga aggggctgga gtggattggg agtatctatc atagtgggag cacctactac 180 aacccgtccc tcaagagtcg agtcaccata tcagtagaca cgtccaagaa ccagttctcc 240 ctgaagctga gttctgtgac cgccgcagac acggcggtgt actactgcgc caggcaggga 300 tactactacg gcagcagcgg cagtgtagac ttcgacctat gggggagagg taccttggtc 360 accgtctcct ca 372 <210> 147 <211> 26 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: Clone 22 VH FR1 <400> 147 Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu 1 5 10 15 Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Val Ser Gly 20 25 <210> 148 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: Clone 22 VH CDR1 <400> 148 Tyr Ser Ile Ser Ser Gly Tyr Tyr Trp Ala 1 5 10 <210> 149 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: Clone 22 VH FR2 <400> 149 Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile Gly 1 5 10 <210> 150 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: Clone 22 VH CDR2 <400> 150 Ser Ile Tyr His Ser Gly Ser Thr Tyr Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Ser 1 5 10 15 <210> 151 <211> 30 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: Clone 22 VH FR3 <400> 151 Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu Lys 1 5 10 15 Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 20 25 30 <210> 152 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: Clone 22 VH CDR3 <400> 152 Ala Arg Gln Gly Tyr Tyr Tyr Gly Ser Ser Gly Ser Val Asp Phe Asp 1 5 10 15 Leu <210> 153 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: Clone 22 VH FR4 <400> 153 Trp Gly Arg Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 1 5 10 <210> 154 <211> 108 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: Clone 22 VL Protein <400> 154 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Val Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Trp 20 25 30 Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Ala Ala Ser Asn Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ala Asn Ser Leu Pro Pro 85 90 95 Trp Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 <210> 155 <211> 324 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: Clone 22 VL DNA <400> 155 gacatccaga tgacccagtc tccatcttcc gtgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60 atcacttgtc gggcgagtca gggtattagc agctggttag cctggtatca gcagaaacca 120 gggaaagccc ctaagctcct gatctatgct gcatccaatt tgcaaagtgg ggtcccatca 180 aggttcagcg gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccatcagcag cctgcagcct 240 gaagattttg caacttatta ctgtcaacag gcaaatagtc tccctccttg gacttttggc 300 ggagggacca aggttgagat caaa 324 <210> 156 <211> 23 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: Clone 22 VL FR1 <400> 156 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Val Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys 20 <210> 157 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: Clone 22 VL CDR1 <400> 157 Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Trp Leu Ala 1 5 10 <210> 158 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: Clone 22 VL FR2 <400> 158 Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr 1 5 10 15 <210> 159 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: Clone 22 VL CDR2 <400> 159 Ala Ala Ser Asn Leu Gln Ser 1 5 <210> 160 <211> 32 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: Clone 22 VL FR3 <400> 160 Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr 1 5 10 15 Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys 20 25 30 <210> 161 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: Clone 22 VL CDR3 <400> 161 Gln Gln Ala Asn Ser Leu Pro Pro Trp Thr 1 5 10 <210> 162 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: Clone 22 VL FR4 <400> 162 Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 1 5 10 <210> 163 <211> 125 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: Clone 25 VH Protein <400> 163 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr 20 25 30 Ala Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Trp Ile Ser Ala Tyr Asn Gly Asn Thr Asn Tyr Ala Gln Lys Leu 50 55 60 Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Thr Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Asp Leu Ser Ser Phe Trp Ser Gly Asp Val Leu Gly Ala Phe 100 105 110 Asp Ile Trp Gly Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser 115 120 125 <210> 164 <211> 375 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: Clone 25 VH DNA <400> 164 caggttcagc tggtgcagtc tggagctgag gtgaagaagc ctggggcctc agtgaaggtc 60 tcctgcaagg cttctggtta cacctttacc agctatgcca tcagctgggt gcgacaggcc 120 cctggacaag ggcttgagtg gatgggatgg atcagcgctt acaatggtaa cacaaactat 180 gcacagaagc tccagggcag agtcaccatg accacagaca catccacgag cacagcctac 240 atggagctga ggagcctgag atctgacgac acggcggtgt actactgcgc aagggatttg 300 tctagcttct ggagcggaga cgtgttagga gccttcgaca tatggggtca gggtacaatg 360 gtcaccgtct cctca 375 <210> 165 <211> 26 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: Clone 25 VH FR1 <400> 165 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly 20 25 <210> 166 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: Clones 25 and 25A VH CDR1 <400> 166 Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr Ala Ile Ser 1 5 <210> 167 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: Clone 25 VH FR2 <400> 167 Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met Gly 1 5 10 <210> 168 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: Clones 25 and 25E VH CDR2 <400> 168 Trp Ile Ser Ala Tyr Asn Gly Asn Thr Asn Tyr Ala Gln Lys Leu Gln 1 5 10 15 Gly <210> 169 <211> 30 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: Clone 25 VH FR3 <400> 169 Arg Val Thr Met Thr Thr Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr Met Glu 1 5 10 15 Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 20 25 30 <210> 170 <211> 18 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: Clones 25, 25A, and 25B VH CDR3 <400> 170 Ala Arg Asp Leu Ser Ser Phe Trp Ser Gly Asp Val Leu Gly Ala Phe 1 5 10 15 Asp Ile <210> 171 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: Clone 25 VH FR4 <400> 171 Trp Gly Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser 1 5 10 <210> 172 <211> 106 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: Clones 25, 25A, 25B, 25C, 25D, and 25E VL Protein <400> 172 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Tyr 20 25 30 Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Val Pro Pro Arg Thr 85 90 95 Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 <210> 173 <211> 318 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: Clone 25 VL DNA <400> 173 gacatccaga tgacccagtc tccatcctcc ctgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60 atcacttgcc gggcaagtca gagcattagc agctatttaa attggtatca gcagaaacca 120 gggaaagccc ctaagctcct gatctatgct gcatccagtt tgcaaagtgg ggtcccatca 180 aggttcagtg gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccatcagcag tctgcaacct 240 gaagattttg caacttacta ctgtcagcaa agcgtccccc ccaggacttt tggcggaggg 300 accaaggttg agatcaaa 318 <210> 174 <211> 23 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: Clone 25 VL FR1 <400> 174 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys 20 <210> 175 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: Clones 25, 25A, 25B, 25C, 25D, and 25E VL CDR1 <400> 175 Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Tyr Leu Asn 1 5 10 <210> 176 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: Clone 25 VL FR2 <400> 176 Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr 1 5 10 15 <210> 177 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: Clones 25, 25A, 25B, 25C, 25D, and 25E VL CDR2 <400> 177 Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser 1 5 <210> 178 <211> 32 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: Clone 25 VL FR3 <400> 178 Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr 1 5 10 15 Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys 20 25 30 <210> 179 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: Clones 25, 25A, 25B, 25C, 25D, and 25E VL CDR3 <400> 179 Gln Gln Ser Val Pro Pro Arg Thr 1 5 <210> 180 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: Clone 25 VL FR4 <400> 180 Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 1 5 10 <210> 181 <211> 125 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: Clone 27 VH Protein <400> 181 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr 20 25 30 Ala Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Trp Ile Ser Ala Tyr Asn Gly Asn Thr Asn Tyr Ala Gln Lys Leu 50 55 60 Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Thr Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Asp Leu Ser Ser Phe Trp Ser Gly Asp Val Leu Gly Ala Phe 100 105 110 Asp Ile Trp Gly Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser 115 120 125 <210> 182 <211> 375 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: Clone 27 VH DNA <400> 182 caggttcagc tggtgcagtc tggagctgag gtgaagaagc ctggggcctc agtgaaggtc 60 tcctgcaagg cttctggtta cacctttacc agctatgcca tcagctgggt gcgacaggcc 120 cctggacaag ggcttgagtg gatgggatgg atcagcgctt acaatggtaa cacaaactat 180 gcacagaagc tccagggcag agtcaccatg accacagaca catccacgag cacagcctac 240 atggagctga ggagcctgag atctgacgac acggcggtgt actactgcgc aagggatttg 300 tctagcttct ggagcggaga cgtgttagga gccttcgaca tatggggtca gggtacaatg 360 gtcaccgtct cctca 375 <210> 183 <211> 26 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: Clone 27 VH FR1 <400> 183 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly 20 25 <210> 184 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: Clone 27 VH CDR1 <400> 184 Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr Ala Ile Ser 1 5 <210> 185 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: Clone 27 VH FR2 <400> 185 Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met Gly 1 5 10 <210> 186 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: Clone 27 VH CDR2 <400> 186 Trp Ile Ser Ala Tyr Asn Gly Asn Thr Asn Tyr Ala Gln Lys Leu Gln 1 5 10 15 Gly <210> 187 <211> 30 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: Clone 27 VH FR3 <400> 187 Arg Val Thr Met Thr Thr Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr Met Glu 1 5 10 15 Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 20 25 30 <210> 188 <211> 18 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: Clone 27 VH CDR3 <400> 188 Ala Arg Asp Leu Ser Ser Phe Trp Ser Gly Asp Val Leu Gly Ala Phe 1 5 10 15 Asp Ile <210> 189 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: Clone 27 VH FR4 <400> 189 Trp Gly Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser 1 5 10 <210> 190 <211> 106 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: Clone 27 VL Protein <400> 190 Glu Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Ser Pro Gly 1 5 10 15 Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Asn 20 25 30 Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Gly Ala Ser Thr Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Ser 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln His Ala Asn His Ile Thr 85 90 95 Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 <210> 191 <211> 318 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: Clone 27 VL DNA <400> 191 gaaatagtga tgacgcagtc tccagccacc ctgtctgtgt ctccagggga aagagccacc 60 ctctcctgca gggccagtca gagtgttagc agcaacttag cctggtacca gcagaaacct 120 ggccaggctc ccaggctcct catctatggt gcatccacca gggccactgg tatcccagcc 180 aggttcagtg gcagtgggtc tgggacagag ttcactctca ccatcagcag cctgcagtct 240 gaagattttg cagtttatta ctgtcagcag cacgccaatc acatcacttt tggcggaggg 300 accaaggttg agatcaaa 318 <210> 192 <211> 23 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: Clone 27 VL FR1 <400> 192 Glu Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Ser Pro Gly 1 5 10 15 Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys 20 <210> 193 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: Clone 27 VL CDR1 <400> 193 Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Asn Leu Ala 1 5 10 <210> 194 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: Clone 27 VL FR2 <400> 194 Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile Tyr 1 5 10 15 <210> 195 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: Clone 27 VL CDR2 <400> 195 Gly Ala Ser Thr Arg Ala Thr 1 5 <210> 196 <211> 32 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: Clone 27 VL FR3 <400> 196 Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr 1 5 10 15 Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Ser Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys 20 25 30 <210> 197 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: Clone 27 VL CDR3 <400> 197 Gln Gln His Ala Asn His Ile Thr 1 5 <210> 198 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: Clone 27 VL FR4 <400> 198 Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 1 5 10 <210> 199 <211> 124 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: Clone 54 VH Protein <400> 199 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr 20 25 30 Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Ile Ile Asn Pro Ser Gly Gly Ser Thr Ser Tyr Ala Gln Lys Phe 50 55 60 Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Ala Ser Asp Ser Tyr Gly Val Gly Leu Tyr Tyr Gly Met Asp 100 105 110 Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 200 <211> 372 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: Clone 54 VH DNA <400> 200 caggtgcagc tggtgcagtc tggggctgag gtgaagaagc ctggggcctc agtgaaggtt 60 tcctgcaagg catctggata caccttcacc agctactata tgcactgggt gcgacaggcc 120 cctggacaag ggcttgagtg gatgggaata atcaacccta gtggtggtag cacaagctac 180 gcacagaagt tccagggcag agtcaccatg accagggaca cgtccacgag cacagtctac 240 atggagctga gcagcctgag atctgaggac acggcggtgt actactgcgc tagggcatct 300 gactcctacg gagtgggcct ctactacgga atggacgtat ggggccaggg aacaactgtc 360 accgtctcct ca 372 <210> 201 <211> 26 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: Clone 54 VH FR1 <400> 201 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly 20 25 <210> 202 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: Clone 54 VH CDR1 <400> 202 Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr Tyr Met His 1 5 <210> 203 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: Clone 54 VH FR2 <400> 203 Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met Gly 1 5 10 <210> 204 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: Clone 54 VH CDR2 <400> 204 Ile Ile Asn Pro Ser Gly Gly Ser Thr Ser Tyr Ala Gln Lys Phe Gln 1 5 10 15 Gly <210> 205 <211> 30 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: Clone 54 VH FR3 <400> 205 Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr Met Glu 1 5 10 15 Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 20 25 30 <210> 206 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: Clone 54 VH CDR3 <400> 206 Ala Arg Ala Ser Asp Ser Tyr Gly Val Gly Leu Tyr Tyr Gly Met Asp 1 5 10 15 Val <210> 207 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: Clone 54 VH FR4 <400> 207 Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 1 5 10 <210> 208 <211> 108 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: Clone 54 VL Protein <400> 208 Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly 1 5 10 15 Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Arg Ser Ser 20 25 30 Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu 35 40 45 Ile Tyr Gly Ala Ser Ser Arg Ala Thr Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser 50 55 60 Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu 65 70 75 80 Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Tyr Val Ser Pro 85 90 95 Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 <210> 209 <211> 324 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: Clone 54 VL DNA <400> 209 gaaattgtgt tgacgcagtc tccaggcacc ctgtctttgt ctccagggga aagagccacc 60 ctctcctgca gggccagtca gagtgttagg agcagctact tagcctggta ccagcagaaa 120 cctggccagg ctcccaggct cctcatctat ggtgcatcca gcagggccac tggcatccca 180 gacaggttca gtggcagtgg gtctgggaca gacttcactc tcaccatcag cagactggag 240 cctgaagatt ttgcagtgta ttactgtcag cagtactacg tcagtcctct cacttttggc 300 ggagggacca aggttgagat caaa 324 <210> 210 <211> 23 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: Clone 54 VL FR1 <400> 210 Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly 1 5 10 15 Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys 20 <210> 211 <211> 12 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: Clone 54 VL CDR1 <400> 211 Arg Ala Ser Gln Ser Val Arg Ser Ser Tyr Leu Ala 1 5 10 <210> 212 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: Clone 54 VL FR2 <400> 212 Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile Tyr 1 5 10 15 <210> 213 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: Clone 54 VL CDR2 <400> 213 Gly Ala Ser Ser Arg Ala Thr 1 5 <210> 214 <211> 32 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: Clone 54 VL FR3 <400> 214 Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr 1 5 10 15 Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys 20 25 30 <210> 215 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: Clone 54 VL CDR3 <400> 215 Gln Gln Tyr Tyr Val Ser Pro Leu Thr 1 5 <210> 216 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: Clone 54 VL FR4 <400> 216 Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 1 5 10 <210> 217 <211> 2978 <212> DNA <213> Homo sapiens <220> <221> misc_feature <223> Human TIGIT cDNA sequence <400> 217 cgtcctatct gcagtcggct actttcagtg gcagaagagg ccacatctgc ttcctgtagg 60 ccctctgggc agaagcatgc gctggtgtct cctcctgatc tgggcccagg ggctgaggca 120 ggctcccctc gcctcaggaa tgatgacagg cacaatagaa acaacgggga acatttctgc 180 agagaaaggt ggctctatca tcttacaatg tcacctctcc tccaccacgg cacaagtgac 240 ccaggtcaac tgggagcagc aggaccagct tctggccatt tgtaatgctg acttggggtg 300 gcacatctcc ccatccttca aggatcgagt ggccccaggt cccggcctgg gcctcaccct 360 ccagtcgctg accgtgaacg atacagggga gtacttctgc atctatcaca cctaccctga 420 tgggacgtac actgggagaa tcttcctgga ggtcctagaa agctcagtgg ctgagcacgg 480 tgccaggttc cagattccat tgcttggagc catggccgcg acgctggtgg tcatctgcac 540 agcagtcatc gtggtggtcg cgttgactag aaagaagaaa gccctcagaa tccattctgt 600 ggaaggtgac ctcaggagaa aatcagctgg acaggaggaa tggagcccca gtgctccctc 660 acccccagga agctgtgtcc aggcagaagc tgcacctgct gggctctgtg gagagcagcg 720 gggagaggac tgtgccgagc tgcatgacta cttcaatgtc ctgagttaca gaagcctggg 780 taactgcagc ttcttcacag agactggtta gcaaccagag gcatcttctg gaagatacac 840 ttttgtcttt gctattatag atgaatatat aagcagctgt actctccatc agtgctgcgt 900 gtgtgtgtgt gtgtgtatgt gtgtgtgtgt tcagttgagt gaataaatgt catcctcttc 960 tccatcttca tttccttggc cttttcgttc tattccattt tgcattatgg caggcctagg 1020 gtgagtaacg tggatcttga tcataaatgc aaaattaaaa aatatcttga cctggtttta 1080 aatctggcag tttgagcaga tcctatgtct ctgagagaca cattcctcat aatggccagc 1140 attttgggct acaaggtttt gtggttgatg atgaggatgg catgactgca gagccatcct 1200 catctcattt tttcacgtca ttttcagtaa ctttcactca ttcaaaggca ggttataagt 1260 aagtcctggt agcagcctct atggggagat ttgagagtga ctaaatcttg gtatctgccc 1320 tcaagaactt acagttaaat ggggagacaa tgttgtcatg aaaaggtatt atagtaagga 1380 gagaaggaga catacacagg ccttcaggaa gagacgacag tttggggtga ggtagttggc 1440 ataggcttat ctgtgatgaa gtggcctggg agcaccaagg ggatgttgag gctagtctgg 1500 gaggagcagg agttttgtct agggaacttg taggaaattc ttggagctga aagtcccaca 1560 aagaaggccc tggcaccaag ggagtcagca aacttcagat tttattctct gggcaggcat 1620 ttcaagtttc cttttgctgt gacatactca tccattagac agcctgatac aggcctgtag 1680 cctcttccgg ccgtgtgtgc tggggaagcc ccaggaaacg cacatgccca cacagggagc 1740 caagtcgtag catttgggcc ttgatctacc ttttctgcat caatacactc ttgagccttt 1800 gaaaaaagaa cgtttcccac taaaaagaaa atgtggattt ttaaaatagg gactcttcct 1860 aggggaaaaa ggggggctgg gagtgataga gggtttaaaa aataaacacc ttcaaactaa 1920 cttcttcgaa cccttttatt cactccctga cgactttgtg ctggggttgg ggtaactgaa 1980 ccgcttattt ctgtttaatt gcattcaggc tggatcttag aagactttta tccttccacc 2040 atctctctca gaggaatgag cggggaggtt ggatttactg gtgactgatt ttctttcatg 2100 ggccaaggaa ctgaaagaga atgtgaagca aggttgtgtc ttgcgcatgg ttaaaaataa 2160 agcattgtcc tgcttcctaa gacttagact ggggttgaca attgttttag caacaagaca 2220 attcaactat ttctcctagg atttttatta ttattatttt ttcacttttc taccaaatgg 2280 gttacatagg aagaatgaac tgaaatctgt ccagagctcc aagtcctttg gaagaaagat 2340 tagatgaacg taaaaatgtt gttgtttgct gtggcagttt acagcatttt tcttgcaaaa 2400 ttagtgcaaa tctgttggaa atagaacaca attcacaaat tggaagtgaa ctaaaatgta 2460 atgacgaaaa gggagtagtg ttttgatttg gaggaggtgt atattcggca gaggttggac 2520 tgagagttgg gtgttattta acataattat ggtaattggg aaacatttat aaacactatt 2580 gggatggtga taaaatacaa aagggcctat agatgttaga aatgggtcag gttactgaaa 2640 tgggattcaa tttgaaaaaa atttttttaa atagaactca ctgaactaga ttctcctctg 2700 agaaccagag aagaccattt catagttgga ttcctggaga catgcgctat ccaccacgta 2760 gccactttcc acatgtggcc atcaaccact taagatgggg ttagtttaaa tcaagatgtg 2820 ctgttataat tggtataagc ataaaatcac actagattct ggagatttaa tatgaataat 2880 aagaatacta tttcagtagt tttggtatat tgtgtgtcaa aaatgataat attttggatg 2940 tattgggtga aataaaatat taacattaaa aaaaaaaa 2978 <210> 218 <211> 244 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <221> misc_feature <223> Human TIGIT protein <400> 218 Met Arg Trp Cys Leu Leu Leu Ile Trp Ala Gln Gly Leu Arg Gln Ala 1 5 10 15 Pro Leu Ala Ser Gly Met Met Thr Gly Thr Ile Glu Thr Thr Gly Asn 20 25 30 Ile Ser Ala Glu Lys Gly Gly Ser Ile Ile Leu Gln Cys His Leu Ser 35 40 45 Ser Thr Thr Ala Gln Val Thr Gln Val Asn Trp Glu Gln Gln Asp Gln 50 55 60 Leu Leu Ala Ile Cys Asn Ala Asp Leu Gly Trp His Ile Ser Pro Ser 65 70 75 80 Phe Lys Asp Arg Val Ala Pro Gly Pro Gly Leu Gly Leu Thr Leu Gln 85 90 95 Ser Leu Thr Val Asn Asp Thr Gly Glu Tyr Phe Cys Ile Tyr His Thr 100 105 110 Tyr Pro Asp Gly Thr Tyr Thr Gly Arg Ile Phe Leu Glu Val Leu Glu 115 120 125 Ser Ser Val Ala Glu His Gly Ala Arg Phe Gln Ile Pro Leu Leu Gly 130 135 140 Ala Met Ala Ala Thr Leu Val Val Ile Cys Thr Ala Val Ile Val Val 145 150 155 160 Val Ala Leu Thr Arg Lys Lys Lys Ala Leu Arg Ile His Ser Val Glu 165 170 175 Gly Asp Leu Arg Arg Lys Ser Ala Gly Gln Glu Glu Trp Ser Pro Ser 180 185 190 Ala Pro Ser Pro Pro Gly Ser Cys Val Gln Ala Glu Ala Ala Pro Ala 195 200 205 Gly Leu Cys Gly Glu Gln Arg Gly Glu Asp Cys Ala Glu Leu His Asp 210 215 220 Tyr Phe Asn Val Leu Ser Tyr Arg Ser Leu Gly Asn Cys Ser Phe Phe 225 230 235 240 Thr Glu Thr Gly <210> 219 <211> 312 <212> PRT <213> Macaca fascicularis <220> <221> misc_feature <223> Cynomolgus monkey TIGIT protein <400> 219 Met Ala Phe Leu Val Ala Pro Pro Met Gln Phe Val Tyr Leu Leu Lys 1 5 10 15 Thr Leu Cys Val Phe Asn Met Val Phe Ala Lys Pro Gly Phe Ser Glu 20 25 30 Thr Val Phe Ser His Arg Leu Ser Phe Thr Val Leu Ser Ala Val Gly 35 40 45 Tyr Phe Arg Trp Gln Lys Arg Pro His Leu Leu Pro Val Ser Pro Leu 50 55 60 Gly Arg Ser Met Arg Trp Cys Leu Phe Leu Ile Trp Ala Gln Gly Leu 65 70 75 80 Arg Gln Ala Pro Leu Ala Ser Gly Met Met Thr Gly Thr Ile Glu Thr 85 90 95 Thr Gly Asn Ile Ser Ala Lys Lys Gly Gly Ser Val Ile Leu Gln Cys 100 105 110 His Leu Ser Ser Thr Met Ala Gln Val Thr Gln Val Asn Trp Glu Gln 115 120 125 His Asp His Ser Leu Leu Ala Ile Arg Asn Ala Glu Leu Gly Trp His 130 135 140 Ile Tyr Pro Ala Phe Lys Asp Arg Val Ala Pro Gly Pro Gly Leu Gly 145 150 155 160 Leu Thr Leu Gln Ser Leu Thr Met Asn Asp Thr Gly Glu Tyr Phe Cys 165 170 175 Thr Tyr His Thr Tyr Pro Asp Gly Thr Tyr Arg Gly Arg Ile Phe Leu 180 185 190 Glu Val Leu Glu Ser Ser Val Ala Glu His Ser Ala Arg Phe Gln Ile 195 200 205 Pro Leu Leu Gly Ala Met Ala Met Met Leu Val Val Ile Cys Ile Ala 210 215 220 Val Ile Val Val Val Val Leu Ala Arg Lys Lys Lys Ser Leu Arg Ile 225 230 235 240 His Ser Val Glu Ser Gly Leu Gln Arg Lys Ser Thr Gly Gln Glu Glu 245 250 255 Gln Ile Pro Ser Ala Pro Ser Pro Pro Gly Ser Cys Val Gln Ala Glu 260 265 270 Ala Ala Pro Ala Gly Leu Cys Gly Glu Gln Gln Gly Asp Asp Cys Ala 275 280 285 Glu Leu His Asp Tyr Phe Asn Val Leu Ser Tyr Arg Ser Leu Gly Ser 290 295 300 Cys Ser Phe Phe Thr Glu Thr Gly 305 310 <210> 220 <211> 241 <212> PRT <213> Mus musculus <220> <221> misc_feature <223> Mouse TIGIT protein <400> 220 Met His Gly Trp Leu Leu Leu Val Trp Val Gln Gly Leu Ile Gln Ala 1 5 10 15 Ala Phe Leu Ala Thr Gly Ala Thr Ala Gly Thr Ile Asp Thr Lys Arg 20 25 30 Asn Ile Ser Ala Glu Glu Gly Gly Ser Val Ile Leu Gln Cys His Phe 35 40 45 Ser Ser Asp Thr Ala Glu Val Thr Gln Val Asp Trp Lys Gln Gln Asp 50 55 60 Gln Leu Leu Ala Ile Tyr Ser Val Asp Leu Gly Trp His Val Ala Ser 65 70 75 80 Val Phe Ser Asp Arg Val Val Pro Gly Pro Ser Leu Gly Leu Thr Phe 85 90 95 Gln Ser Leu Thr Met Asn Asp Thr Gly Glu Tyr Phe Cys Thr Tyr His 100 105 110 Thr Tyr Pro Gly Gly Ile Tyr Lys Gly Arg Ile Phe Leu Lys Val Gln 115 120 125 Glu Ser Ser Val Ala Gln Phe Gln Thr Ala Pro Leu Gly Gly Thr Met 130 135 140 Ala Ala Val Leu Gly Leu Ile Cys Leu Met Val Thr Gly Val Thr Val 145 150 155 160 Leu Ala Arg Lys Lys Ser Ile Arg Met His Ser Ile Glu Ser Gly Leu 165 170 175 Gly Arg Thr Glu Ala Glu Pro Gln Glu Trp Asn Leu Arg Ser Leu Ser 180 185 190 Ser Pro Gly Ser Pro Val Gln Thr Gln Thr Ala Pro Ala Gly Pro Cys 195 200 205 Gly Glu Gln Ala Glu Asp Asp Tyr Ala Asp Pro Gln Glu Tyr Phe Asn 210 215 220 Val Leu Ser Tyr Arg Ser Leu Glu Ser Phe Ile Ala Val Ser Lys Thr 225 230 235 240 Gly <210> 221 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: Clone 2C VH CDR1 <400> 221 Phe Thr Phe Thr Asp Tyr Tyr Met Asp 1 5 <210> 222 <211> 19 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: Clone 2C VH CDR2 <400> 222 Arg Thr Arg Asn Lys Val Asn Ser Tyr Tyr Thr Glu Tyr Ala Ala Ser 1 5 10 15 Val Lys Gly <210> 223 <211> 19 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: Clone 2C VH CDR3 <400> 223 Ala Arg Gly Gln Tyr Tyr Tyr Gly Ser Asp Arg Arg Gly Tyr Tyr Tyr 1 5 10 15 Met Asp Val <210> 224 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: Clones 13A, 13C, and 13D VH CDR1 <400> 224 Gly Thr Phe Leu Ser Ser Ala Ile Ser 1 5 <210> 225 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: Clone 13A VH CDR2 <400> 225 Ser Leu Ile Pro Tyr Phe Gly Thr Ala Asn Tyr Ala Gln Lys Phe Gln 1 5 10 15 Gly <210> 226 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: Clone 13B VH CDR1 <400> 226 Gly Thr Phe Ser Ala Trp Ala Ile Ser 1 5 <210> 227 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: Clones 13B and 13D VH CDR2 <400> 227 Ser Ile Ile Pro Tyr Phe Gly Lys Ala Asn Tyr Ala Gln Lys Phe Gln 1 5 10 15 Gly <210> 228 <211> 18 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: Clone 13B VH CDR3 <400> 228 Ala Arg Gly Pro Ser Glu Val Ser Gly Ile Leu Gly Tyr Val Trp Phe 1 5 10 15 Asp Pro <210> 229 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: Clone 13C VH CDR2 <400> 229 Ser Ile Ile Pro Leu Phe Gly Lys Ala Asn Tyr Ala Gln Lys Phe Gln 1 5 10 15 Gly <210> 230 <211> 18 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: Clones 13C and 13D VH CDR3 <400> 230 Ala Arg Gly Pro Ser Glu Val Lys Gly Ile Leu Gly Tyr Val Trp Phe 1 5 10 15 Asp Pro <210> 231 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: Clone 16C VH CDR1 <400> 231 Gly Thr Phe Arg Glu Tyr Ala Ile Ser 1 5 <210> 232 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: Clone 16C VH CDR2 <400> 232 Gly Ile His Pro Ile Phe Gly Thr Ala Arg Tyr Ala Gln Lys Phe Gln 1 5 10 15 Gly <210> 233 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: Clones 16D and 16E VH CDR1 <400> 233 Gly Thr Phe Ser Asp Tyr Pro Ile Ser 1 5 <210> 234 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: Clones 16B, 16D, and 16E VH CDR2 <400> 234 Gly Ile Ile Pro Ile Val Gly Gly Ala Asn Tyr Ala Gln Lys Phe Gln 1 5 10 15 Gly <210> 235 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: Clone 16C VH CDR3 <400> 235 Thr Arg Gln Ser Thr Trp His Lys Leu Tyr Gly Thr Asp Val 1 5 10 <210> 236 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: Clone 16D VH CDR3 <400> 236 Thr Arg Gln Ser Thr Trp His Lys Leu Phe Gly Thr Asp Val 1 5 10 <210> 237 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: Clone 16E VH CDR3 <400> 237 Ala Arg Gln Ser Thr Trp His Lys Val Tyr Gly Thr Asp Val 1 5 10 <210> 238 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: Clone 25A VH CDR2 <400> 238 Trp Ile Ser Ala Tyr Asn Gly Asn Thr Lys Tyr Ala Gln Lys Leu Gln 1 5 10 15 Gly <210> 239 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: Clones 25B, 25C, and 25D VH CDR1 <400> 239 Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr Pro Ile Gly 1 5 <210> 240 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: Clones 25B, 25C, and 25D VH CDR2 <400> 240 Trp Ile Ser Ser Tyr Asn Gly Asn Thr Asn Tyr Ala Gln Lys Leu Gln 1 5 10 15 Gly <210> 241 <211> 18 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: Clone 25C VH CDR3 <400> 241 Ala Arg Gly Ala Ser Ser Phe Trp Ser Gly Asp Val Leu Gly Ala Phe 1 5 10 15 Asp Ile <210> 242 <211> 18 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: Clone 25D VH CDR3 <400> 242 Ala Arg Asp Leu Lys Ser Phe Trp Ser Gly Asp Val Leu Gly Ala Phe 1 5 10 15 Asp Ile <210> 243 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: Clone 25E VH CDR1 <400> 243 Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr Ala Ile Ala 1 5 <210> 244 <211> 18 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: Clone 25E VH CDR3 <400> 244 Ala Arg Ser Gly Ser Ser Phe Trp Ser Gly Asp Val Leu Gly Ala Phe 1 5 10 15 Asp Ile <210> 245 <211> 128 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: Clone 2C VH <400> 245 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Thr Asp Tyr 20 25 30 Tyr Met Asp Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Gly Arg Thr Arg Asn Lys Val Asn Ser Tyr Tyr Thr Glu Tyr Ala Ala 50 55 60 Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Ser 65 70 75 80 Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr 85 90 95 Tyr Cys Ala Arg Gly Gln Tyr Tyr Tyr Gly Ser Asp Arg Arg Gly Tyr 100 105 110 Tyr Tyr Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 115 120 125 <210> 246 <211> 125 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: Clone 13A VH <400> 246 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Thr Phe Leu Ser Ser 20 25 30 Ala Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Ser Leu Ile Pro Tyr Phe Gly Thr Ala Asn Tyr Ala Gln Lys Phe 50 55 60 Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Pro Ser Glu Val Gly Ala Ile Leu Gly Tyr Val Trp Phe 100 105 110 Asp Pro Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 125 <210> 247 <211> 125 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: Clone 13B VH <400> 247 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Thr Phe Ser Ala Trp 20 25 30 Ala Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Ser Ile Ile Pro Tyr Phe Gly Lys Ala Asn Tyr Ala Gln Lys Phe 50 55 60 Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Pro Ser Glu Val Ser Gly Ile Leu Gly Tyr Val Trp Phe 100 105 110 Asp Pro Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 125 <210> 248 <211> 125 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: Clone 13C VH <400> 248 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Thr Phe Leu Ser Ser 20 25 30 Ala Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Ser Ile Ile Pro Leu Phe Gly Lys Ala Asn Tyr Ala Gln Lys Phe 50 55 60 Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Pro Ser Glu Val Lys Gly Ile Leu Gly Tyr Val Trp Phe 100 105 110 Asp Pro Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 125 <210> 249 <211> 125 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: Clone 13D VH <400> 249 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Thr Phe Leu Ser Ser 20 25 30 Ala Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Ser Ile Ile Pro Tyr Phe Gly Lys Ala Asn Tyr Ala Gln Lys Phe 50 55 60 Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Pro Ser Glu Val Lys Gly Ile Leu Gly Tyr Val Trp Phe 100 105 110 Asp Pro Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 125 <210> 250 <211> 121 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: Clone 16C VH <400> 250 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Thr Phe Arg Glu Tyr 20 25 30 Ala Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Gly Ile His Pro Ile Phe Gly Thr Ala Arg Tyr Ala Gln Lys Phe 50 55 60 Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Thr Arg Gln Ser Thr Trp His Lys Leu Tyr Gly Thr Asp Val Trp Gly 100 105 110 Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 251 <211> 121 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: Clone 16D VH <400> 251 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Thr Phe Ser Asp Tyr 20 25 30 Pro Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Gly Ile Ile Pro Ile Val Gly Gly Ala Asn Tyr Ala Gln Lys Phe 50 55 60 Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Thr Arg Gln Ser Thr Trp His Lys Leu Phe Gly Thr Asp Val Trp Gly 100 105 110 Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 252 <211> 121 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: Clone 16E VH <400> 252 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Thr Phe Ser Asp Tyr 20 25 30 Pro Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Gly Ile Ile Pro Ile Val Gly Gly Ala Asn Tyr Ala Gln Lys Phe 50 55 60 Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gln Ser Thr Trp His Lys Val Tyr Gly Thr Asp Val Trp Gly 100 105 110 Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 253 <211> 125 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: Clone 25A VH <400> 253 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr 20 25 30 Ala Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Trp Ile Ser Ala Tyr Asn Gly Asn Thr Lys Tyr Ala Gln Lys Leu 50 55 60 Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Thr Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Asp Leu Ser Ser Phe Trp Ser Gly Asp Val Leu Gly Ala Phe 100 105 110 Asp Ile Trp Gly Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser 115 120 125 <210> 254 <211> 125 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: Clone 25B VH <400> 254 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr 20 25 30 Pro Ile Gly Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Trp Ile Ser Ser Tyr Asn Gly Asn Thr Asn Tyr Ala Gln Lys Leu 50 55 60 Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Thr Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Asp Leu Ser Ser Phe Trp Ser Gly Asp Val Leu Gly Ala Phe 100 105 110 Asp Ile Trp Gly Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser 115 120 125 <210> 255 <211> 125 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: Clone 25C VH <400> 255 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr 20 25 30 Pro Ile Gly Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Trp Ile Ser Ser Tyr Asn Gly Asn Thr Asn Tyr Ala Gln Lys Leu 50 55 60 Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Thr Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Ala Ser Ser Phe Trp Ser Gly Asp Val Leu Gly Ala Phe 100 105 110 Asp Ile Trp Gly Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser 115 120 125 <210> 256 <211> 125 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: Clone 25D VH <400> 256 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr 20 25 30 Pro Ile Gly Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Trp Ile Ser Ser Tyr Asn Gly Asn Thr Asn Tyr Ala Gln Lys Leu 50 55 60 Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Thr Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Asp Leu Lys Ser Phe Trp Ser Gly Asp Val Leu Gly Ala Phe 100 105 110 Asp Ile Trp Gly Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser 115 120 125 <210> 257 <211> 125 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: Clone 25E VH <400> 257 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr 20 25 30 Ala Ile Ala Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Trp Ile Ser Ala Tyr Asn Gly Asn Thr Asn Tyr Ala Gln Lys Leu 50 55 60 Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Thr Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Ser Gly Ser Ser Phe Trp Ser Gly Asp Val Leu Gly Ala Phe 100 105 110 Asp Ile Trp Gly Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser 115 120 125 <210> 258 <211> 15 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <221> misc_feature <223> hTIGIT 68-82 epitope <400> 258 Ile Cys Asn Ala Asp Leu Gly Trp His Ile Ser Pro Ser Phe Lys 1 5 10 15 <210> 259 <211> 1365 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: Clone 13 heavy chain hIgG1 (and hIgG1 afucosylated) nucleotide sequence <400> 259 caggtgcagc tggtgcagtc tggggctgag gtgaagaagc ctgggtcctc tgtgaaggtc 60 tcctgcaagg cttctggagg caccttcagc agctatgcta tcagctgggt gcgacaggcc 120 cctggacaag ggcttgagtg gatgggaagc atcatcccta tctttggtac agcaaactac 180 gcacagaagt tccagggcag agtcaccatt actgctgatg aatccaccag cacagcctac 240 atggagctga gcagcctgag atctgaggac actgctgtgt actactgtgc cagaggccct 300 tctgaagtag gagcaatact gggatatgta tggtttgacc catggggaca gggtacattg 360 gtcaccgtct cctcagctag caccaagggc ccatctgtct tccccctggc accctcctcc 420 aagagcacct ctgggggcac agctgccctg ggctgcctgg tcaaggacta cttccctgaa 480 cctgtgacag tgtcctggaa ctcaggagcc ctgaccagcg gcgtgcacac cttcccggct 540 gtcctacagt cctcaggact ctactccctc agcagcgtgg tgaccgtgcc ctccagcagc 600 ttgggcaccc agacctacat ctgcaacgtg aatcacaagc ccagcaacac caaggtggac 660 aagaaagttg agcccaaatc ttgtgacaaa actcacacat gcccaccgtg cccagcacct 720 gaactcctgg ggggaccgtc agtcttcctc ttccccccaa aacccaagga caccctcatg 780 atctcccgga cccctgaggt cacatgcgtg gtggtggacg tgagccacga agaccctgag 840 gtcaagttca actggtacgt ggacggcgtg gaggtgcata atgccaagac aaagccgcgg 900 gaggagcagt acaacagcac gtaccgtgtg gtcagcgtcc tcaccgtcct gcaccaggac 960 tggctgaatg gcaaggagta caagtgcaag gtctccaaca aagccctccc agcccccatc 1020 gagaaaacca tctccaaagc caaagggcag ccccgagaac cacaggttta caccctgccc 1080 ccatcccggg atgagctgac caagaaccag gtcagcctga cctgcctggt caaaggcttc 1140 tatcccagcg acatcgccgt ggagtgggag agcaatgggc agccggagaa caactacaag 1200 accacgcctc ccgtgctgga ctccgacggc tccttcttcc tctacagcaa gctcaccgtg 1260 gacaagagca ggtggcagca ggggaacgtc ttctcatgct ccgtgatgca tgaggctctg 1320 cacaaccact acacacagaa gagcctctcc ctgtctccgg gcaaa 1365 <210> 260 <211> 455 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: Clone 13 heavy chain hIgG1 (and hIgG1 afucosylated) amino acid sequence <400> 260 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Ala Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Ser Ile Ile Pro Ile Phe Gly Thr Ala Asn Tyr Ala Gln Lys Phe 50 55 60 Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Pro Ser Glu Val Gly Ala Ile Leu Gly Tyr Val Trp Phe 100 105 110 Asp Pro Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr 115 120 125 Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser 130 135 140 Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu 145 150 155 160 Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His 165 170 175 Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser 180 185 190 Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys 195 200 205 Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu 210 215 220 Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro 225 230 235 240 Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys 245 250 255 Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val 260 265 270 Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp 275 280 285 Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr 290 295 300 Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp 305 310 315 320 Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu 325 330 335 Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg 340 345 350 Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys 355 360 365 Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp 370 375 380 Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys 385 390 395 400 Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser 405 410 415 Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser 420 425 430 Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser 435 440 445 Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 450 455 <210> 261 <211> 1365 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: Clone 13 heavy chain hIgG1 LALA-PG nucleotide sequence <400> 261 caggtgcagc tggtgcagtc tggggctgag gtgaagaagc ctgggtcctc tgtgaaggtc 60 tcctgcaagg cttctggagg caccttcagc agctatgcta tcagctgggt gcgacaggcc 120 cctggacaag ggcttgagtg gatgggaagc atcatcccta tctttggtac agcaaactac 180 gcacagaagt tccagggcag agtcaccatt actgctgatg aatccaccag cacagcctac 240 atggagctga gcagcctgag atctgaggac actgctgtgt actactgtgc cagaggccct 300 tctgaagtag gagcaatact gggatatgta tggtttgacc catggggaca gggtacattg 360 gtcaccgtct cctcagctag caccaagggc ccatctgtct tccccctggc accctcctcc 420 aagagcacct ctgggggcac agctgccctg ggctgcctgg tcaaggacta cttccctgaa 480 cctgtgacag tgtcctggaa ctcaggagcc ctgaccagcg gcgtgcacac cttcccggct 540 gtcctacagt cctcaggact ctactccctc agcagcgtgg tgaccgtgcc ctccagcagc 600 ttgggcaccc agacctacat ctgcaacgtg aatcacaagc ccagcaacac caaggtggac 660 aagaaagttg agcccaaatc ttgtgacaaa actcacacat gcccaccgtg cccagcacct 720 gaagctgctg ggggaccgtc agtcttcctc ttccccccaa aacccaagga caccctcatg 780 atctcccgga cccctgaggt cacatgcgtg gtggtggacg tgagccacga agaccctgag 840 gtcaagttca actggtacgt ggacggcgtg gaggtgcata atgccaagac aaagccgcgg 900 gaggagcagt acaacagcac gtaccgtgtg gtcagcgtcc tcaccgtcct gcaccaggac 960 tggctgaatg gcaaggagta caagtgcaag gtctccaaca aagccctcgg ggcccccatc 1020 gagaaaacca tctccaaagc caaagggcag ccccgagaac cacaggttta caccctgccc 1080 ccatcccggg atgagctgac caagaaccag gtcagcctga cctgcctggt caaaggcttc 1140 tatcccagcg acatcgccgt ggagtgggag agcaatgggc agccggagaa caactacaag 1200 accacgcctc ccgtgctgga ctccgacggc tccttcttcc tctacagcaa gctcaccgtg 1260 gacaagagca ggtggcagca ggggaacgtc ttctcatgct ccgtgatgca tgaggctctg 1320 cacaaccact acacacagaa gagcctctcc ctgtctccgg gcaaa 1365 <210> 262 <211> 455 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: Clone 13 heavy chain hIgG1 LALA-PG amino acid sequence <400> 262 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Ala Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Ser Ile Ile Pro Ile Phe Gly Thr Ala Asn Tyr Ala Gln Lys Phe 50 55 60 Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Pro Ser Glu Val Gly Ala Ile Leu Gly Tyr Val Trp Phe 100 105 110 Asp Pro Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr 115 120 125 Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser 130 135 140 Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu 145 150 155 160 Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His 165 170 175 Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser 180 185 190 Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys 195 200 205 Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu 210 215 220 Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro 225 230 235 240 Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys 245 250 255 Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val 260 265 270 Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp 275 280 285 Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr 290 295 300 Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp 305 310 315 320 Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu 325 330 335 Gly Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg 340 345 350 Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys 355 360 365 Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp 370 375 380 Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys 385 390 395 400 Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser 405 410 415 Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser 420 425 430 Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser 435 440 445 Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 450 455 <210> 263 <211> 1356 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: Clone 13 heavy chain hIgG4 S228P nucleotide sequence <400> 263 caggtgcagc tggtgcagtc tggggctgag gtgaagaagc ctgggtcctc tgtgaaggtc 60 tcctgcaagg cttctggagg caccttcagc agctatgcta tcagctgggt gcgacaggcc 120 cctggacaag ggcttgagtg gatgggaagc atcatcccta tctttggtac agcaaactac 180 gcacagaagt tccagggcag agtcaccatt actgctgatg aatccaccag cacagcctac 240 atggagctga gcagcctgag atctgaggac actgctgtgt actactgtgc cagaggccct 300 tctgaagtag gagcaatact gggatatgta tggtttgacc catggggaca gggtacattg 360 gtcaccgtct cctcagctag caccaagggc ccatctgtct tccccctggc cccttgctcc 420 agaagcacat ctgagagcac agcggccctg ggatgcctgg tcaaggacta tttccctgag 480 ccggtgaccg taagctggaa ctctggagcc ctgaccagcg gcgtgcacac cttcccagct 540 gtcctgcagt cttcagggct ctactccctc agcagtgtgg tgactgtacc ctccagcagc 600 ttgggcacca agacctacac ctgcaacgta gatcacaagc ccagcaacac caaggtggac 660 aagagagttg agtccaaata tggtccccca tgcccaccct gcccagcacc agagttcctg 720 gggggaccat ctgtcttcct cttcccccca aaacccaagg ataccctcat gatctcccgg 780 acccctgagg tcacatgtgt ggtggtggac gtgagccagg aggaccccga ggtccagttc 840 aactggtatg tggatggcgt ggaagtgcat aatgctaaga caaagccacg ggaggagcag 900 ttcaacagca cctaccgtgt ggtcagcgtc ctcacagtgc tgcaccagga ctggctgaat 960 ggcaaggagt acaaatgcaa ggtctccaac aaaggcctcc catcctccat cgagaaaacc 1020 atctccaaag ccaaagggca accccgggaa ccacaggtat acaccctgcc tccatcccaa 1080 gaagagatga ccaagaacca ggtcagcctg acctgcctgg tcaaaggctt ctacccctct 1140 gacattgccg tggagtggga gagcaatggg cagccagaga acaactacaa gaccacacct 1200 cccgtgctgg actccgatgg ctccttcttc ctgtactccc ggctcacagt ggacaagagc 1260 aggtggcagg agggaaatgt cttctcctgc tccgtgatgc atgaggctct gcacaaccac 1320 tacacacaga agagcctctc cctgtctctg ggcaaa 1356 <210> 264 <211> 452 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: Clone 13 heavy chain hIgG4 S228P amino acid sequence <400> 264 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Ala Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Ser Ile Ile Pro Ile Phe Gly Thr Ala Asn Tyr Ala Gln Lys Phe 50 55 60 Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Pro Ser Glu Val Gly Ala Ile Leu Gly Tyr Val Trp Phe 100 105 110 Asp Pro Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr 115 120 125 Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser 130 135 140 Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu 145 150 155 160 Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His 165 170 175 Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser 180 185 190 Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys 195 200 205 Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu 210 215 220 Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe Leu 225 230 235 240 Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu 245 250 255 Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser 260 265 270 Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu 275 280 285 Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr 290 295 300 Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn 305 310 315 320 Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser 325 330 335 Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln 340 345 350 Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val 355 360 365 Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val 370 375 380 Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro 385 390 395 400 Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr 405 410 415 Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val 420 425 430 Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu 435 440 445 Ser Leu Gly Lys 450 <210> 265 <211> 1365 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: Clone 13A heavy chain hIgG1 (and hIgG1 afucosylated) nucleotide sequence <400> 265 caggtgcagc tggtgcagtc tggggctgag gtgaagaagc ctgggtcctc tgtgaaggtc 60 tcctgcaagg cttctggagg caccttcctt agctctgcta tcagctgggt gcgacaggcc 120 cctggacaag ggcttgagtg gatgggatct ctcatccctt attttggtac agcaaactac 180 gcacagaagt tccagggcag agtcaccatt actgctgatg aatccaccag cacagcctac 240 atggagctga gcagcctgag atctgaggac actgctgtgt actactgtgc cagaggccct 300 tctgaagtag gagcaatact gggatatgta tggtttgacc catggggaca gggtacattg 360 gtcaccgtct cctcagctag caccaagggc ccatctgtct tccccctggc accctcctcc 420 aagagcacct ctgggggcac agctgccctg ggctgcctgg tcaaggacta cttccctgaa 480 cctgtgacag tgtcctggaa ctcaggagcc ctgaccagcg gcgtgcacac cttcccggct 540 gtcctacagt cctcaggact ctactccctc agcagcgtgg tgaccgtgcc ctccagcagc 600 ttgggcaccc agacctacat ctgcaacgtg aatcacaagc ccagcaacac caaggtggac 660 aagaaagttg agcccaaatc ttgtgacaaa actcacacat gcccaccgtg cccagcacct 720 gaactcctgg ggggaccgtc agtcttcctc ttccccccaa aacccaagga caccctcatg 780 atctcccgga cccctgaggt cacatgcgtg gtggtggacg tgagccacga agaccctgag 840 gtcaagttca actggtacgt ggacggcgtg gaggtgcata atgccaagac aaagccgcgg 900 gaggagcagt acaacagcac gtaccgtgtg gtcagcgtcc tcaccgtcct gcaccaggac 960 tggctgaatg gcaaggagta caagtgcaag gtctccaaca aagccctccc agcccccatc 1020 gagaaaacca tctccaaagc caaagggcag ccccgagaac cacaggttta caccctgccc 1080 ccatcccggg atgagctgac caagaaccag gtcagcctga cctgcctggt caaaggcttc 1140 tatcccagcg acatcgccgt ggagtgggag agcaatgggc agccggagaa caactacaag 1200 accacgcctc ccgtgctgga ctccgacggc tccttcttcc tctacagcaa gctcaccgtg 1260 gacaagagca ggtggcagca ggggaacgtc ttctcatgct ccgtgatgca tgaggctctg 1320 cacaaccact acacacagaa gagcctctcc ctgtctccgg gcaaa 1365 <210> 266 <211> 455 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: Clone 13A heavy chain hIgG1 (and hIgG1 afucosylated) amino acid sequence <400> 266 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Thr Phe Leu Ser Ser 20 25 30 Ala Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Ser Leu Ile Pro Tyr Phe Gly Thr Ala Asn Tyr Ala Gln Lys Phe 50 55 60 Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Pro Ser Glu Val Gly Ala Ile Leu Gly Tyr Val Trp Phe 100 105 110 Asp Pro Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr 115 120 125 Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser 130 135 140 Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu 145 150 155 160 Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His 165 170 175 Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser 180 185 190 Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys 195 200 205 Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu 210 215 220 Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro 225 230 235 240 Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys 245 250 255 Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val 260 265 270 Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp 275 280 285 Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr 290 295 300 Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp 305 310 315 320 Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu 325 330 335 Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg 340 345 350 Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys 355 360 365 Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp 370 375 380 Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys 385 390 395 400 Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser 405 410 415 Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser 420 425 430 Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser 435 440 445 Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 450 455 <210> 267 <211> 1365 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: Clone 13B heavy chain hIgG1 (and hIgG1 afucosylated) nucleotide sequence <400> 267 caggtgcagc tggtgcagtc tggggctgag gtgaagaagc ctgggtcctc tgtgaaggtc 60 tcctgcaagg cttctggagg caccttctct gcctgggcta tcagctgggt gcgacaggcc 120 cctggacaag ggcttgagtg gatgggatcc atcatccctt attttggtaa ggcaaactac 180 gcacagaagt tccagggcag agtcaccatt actgctgatg aatccaccag cacagcctac 240 atggagctga gcagcctgag atctgaggac actgctgtgt actactgtgc cagaggccct 300 tctgaagtaa gtggtatact gggatatgta tggtttgacc catggggaca gggtacattg 360 gtcaccgtct cctcagctag caccaagggc ccatctgtct tccccctggc accctcctcc 420 aagagcacct ctgggggcac agctgccctg ggctgcctgg tcaaggacta cttccctgaa 480 cctgtgacag tgtcctggaa ctcaggagcc ctgaccagcg gcgtgcacac cttcccggct 540 gtcctacagt cctcaggact ctactccctc agcagcgtgg tgaccgtgcc ctccagcagc 600 ttgggcaccc agacctacat ctgcaacgtg aatcacaagc ccagcaacac caaggtggac 660 aagaaagttg agcccaaatc ttgtgacaaa actcacacat gcccaccgtg cccagcacct 720 gaactcctgg ggggaccgtc agtcttcctc ttccccccaa aacccaagga caccctcatg 780 atctcccgga cccctgaggt cacatgcgtg gtggtggacg tgagccacga agaccctgag 840 gtcaagttca actggtacgt ggacggcgtg gaggtgcata atgccaagac aaagccgcgg 900 gaggagcagt acaacagcac gtaccgtgtg gtcagcgtcc tcaccgtcct gcaccaggac 960 tggctgaatg gcaaggagta caagtgcaag gtctccaaca aagccctccc agcccccatc 1020 gagaaaacca tctccaaagc caaagggcag ccccgagaac cacaggttta caccctgccc 1080 ccatcccggg atgagctgac caagaaccag gtcagcctga cctgcctggt caaaggcttc 1140 tatcccagcg acatcgccgt ggagtgggag agcaatgggc agccggagaa caactacaag 1200 accacgcctc ccgtgctgga ctccgacggc tccttcttcc tctacagcaa gctcaccgtg 1260 gacaagagca ggtggcagca ggggaacgtc ttctcatgct ccgtgatgca tgaggctctg 1320 cacaaccact acacacagaa gagcctctcc ctgtctccgg gcaaa 1365 <210> 268 <211> 455 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: Clone 13B heavy chain hIgG1 (and hIgG1 afucosylated) amino acid sequence <400> 268 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Thr Phe Ser Ala Trp 20 25 30 Ala Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Ser Ile Ile Pro Tyr Phe Gly Lys Ala Asn Tyr Ala Gln Lys Phe 50 55 60 Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Pro Ser Glu Val Ser Gly Ile Leu Gly Tyr Val Trp Phe 100 105 110 Asp Pro Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr 115 120 125 Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser 130 135 140 Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu 145 150 155 160 Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His 165 170 175 Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser 180 185 190 Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys 195 200 205 Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu 210 215 220 Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro 225 230 235 240 Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys 245 250 255 Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val 260 265 270 Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp 275 280 285 Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr 290 295 300 Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp 305 310 315 320 Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu 325 330 335 Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg 340 345 350 Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys 355 360 365 Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp 370 375 380 Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys 385 390 395 400 Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser 405 410 415 Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser 420 425 430 Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser 435 440 445 Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 450 455 <210> 269 <211> 1365 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: Clone 13C heavy chain hIgG1 (and hIgG1 afucosylated) nucleotide sequence <400> 269 caggtgcagc tggtgcagtc tggggctgag gtgaagaagc ctgggtcctc tgtgaaggtc 60 tcctgcaagg cttctggagg caccttcctt agctctgcta tcagctgggt gcgacaggcc 120 cctggacaag ggcttgagtg gatgggaagt atcatccctc tgtttggtaa ggcaaactac 180 gcacagaagt tccagggcag agtcaccatt actgctgatg aatccaccag cacagcctac 240 atggagctga gcagcctgag atctgaggac actgctgtgt actactgtgc cagaggccct 300 tctgaagtaa agggtatact gggatatgta tggtttgacc catggggaca gggtacattg 360 gtcaccgtct cctcagctag caccaagggc ccatctgtct tccccctggc accctcctcc 420 aagagcacct ctgggggcac agctgccctg ggctgcctgg tcaaggacta cttccctgaa 480 cctgtgacag tgtcctggaa ctcaggagcc ctgaccagcg gcgtgcacac cttcccggct 540 gtcctacagt cctcaggact ctactccctc agcagcgtgg tgaccgtgcc ctccagcagc 600 ttgggcaccc agacctacat ctgcaacgtg aatcacaagc ccagcaacac caaggtggac 660 aagaaagttg agcccaaatc ttgtgacaaa actcacacat gcccaccgtg cccagcacct 720 gaactcctgg ggggaccgtc agtcttcctc ttccccccaa aacccaagga caccctcatg 780 atctcccgga cccctgaggt cacatgcgtg gtggtggacg tgagccacga agaccctgag 840 gtcaagttca actggtacgt ggacggcgtg gaggtgcata atgccaagac aaagccgcgg 900 gaggagcagt acaacagcac gtaccgtgtg gtcagcgtcc tcaccgtcct gcaccaggac 960 tggctgaatg gcaaggagta caagtgcaag gtctccaaca aagccctccc agcccccatc 1020 gagaaaacca tctccaaagc caaagggcag ccccgagaac cacaggttta caccctgccc 1080 ccatcccggg atgagctgac caagaaccag gtcagcctga cctgcctggt caaaggcttc 1140 tatcccagcg acatcgccgt ggagtgggag agcaatgggc agccggagaa caactacaag 1200 accacgcctc ccgtgctgga ctccgacggc tccttcttcc tctacagcaa gctcaccgtg 1260 gacaagagca ggtggcagca ggggaacgtc ttctcatgct ccgtgatgca tgaggctctg 1320 cacaaccact acacacagaa gagcctctcc ctgtctccgg gcaaa 1365 <210> 270 <211> 455 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: Clone 13C heavy chain hIgG1 (and hIgG1 afucosylated) amino acid sequence <400> 270 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Thr Phe Leu Ser Ser 20 25 30 Ala Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Ser Ile Ile Pro Leu Phe Gly Lys Ala Asn Tyr Ala Gln Lys Phe 50 55 60 Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Pro Ser Glu Val Lys Gly Ile Leu Gly Tyr Val Trp Phe 100 105 110 Asp Pro Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr 115 120 125 Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser 130 135 140 Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu 145 150 155 160 Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His 165 170 175 Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser 180 185 190 Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys 195 200 205 Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu 210 215 220 Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro 225 230 235 240 Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys 245 250 255 Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val 260 265 270 Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp 275 280 285 Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr 290 295 300 Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp 305 310 315 320 Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu 325 330 335 Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg 340 345 350 Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys 355 360 365 Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp 370 375 380 Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys 385 390 395 400 Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser 405 410 415 Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser 420 425 430 Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser 435 440 445 Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 450 455 <210> 271 <211> 1365 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: Clone 13D heavy chain hIgG1 (and hIgG1 afucosylated) nucleotide sequence <400> 271 caggtgcagc tggtgcagtc tggggctgag gtgaagaagc ctgggtcctc tgtgaaggtc 60 tcctgcaagg cttctggagg caccttcctt agctctgcta tcagctgggt gcgacaggcc 120 cctggacaag ggcttgagtg gatgggatcc atcatccctt attttggtaa ggcaaactac 180 gcacagaagt tccagggcag agtcaccatt actgctgatg aatccaccag cacagcctac 240 atggagctga gcagcctgag atctgaggac actgctgtgt actactgtgc cagaggccct 300 tctgaagtaa agggtatact gggatatgta tggtttgacc catggggaca gggtacattg 360 gtcaccgtct cctcagctag caccaagggc ccatctgtct tccccctggc accctcctcc 420 aagagcacct ctgggggcac agctgccctg ggctgcctgg tcaaggacta cttccctgaa 480 cctgtgacag tgtcctggaa ctcaggagcc ctgaccagcg gcgtgcacac cttcccggct 540 gtcctacagt cctcaggact ctactccctc agcagcgtgg tgaccgtgcc ctccagcagc 600 ttgggcaccc agacctacat ctgcaacgtg aatcacaagc ccagcaacac caaggtggac 660 aagaaagttg agcccaaatc ttgtgacaaa actcacacat gcccaccgtg cccagcacct 720 gaactcctgg ggggaccgtc agtcttcctc ttccccccaa aacccaagga caccctcatg 780 atctcccgga cccctgaggt cacatgcgtg gtggtggacg tgagccacga agaccctgag 840 gtcaagttca actggtacgt ggacggcgtg gaggtgcata atgccaagac aaagccgcgg 900 gaggagcagt acaacagcac gtaccgtgtg gtcagcgtcc tcaccgtcct gcaccaggac 960 tggctgaatg gcaaggagta caagtgcaag gtctccaaca aagccctccc agcccccatc 1020 gagaaaacca tctccaaagc caaagggcag ccccgagaac cacaggttta caccctgccc 1080 ccatcccggg atgagctgac caagaaccag gtcagcctga cctgcctggt caaaggcttc 1140 tatcccagcg acatcgccgt ggagtgggag agcaatgggc agccggagaa caactacaag 1200 accacgcctc ccgtgctgga ctccgacggc tccttcttcc tctacagcaa gctcaccgtg 1260 gacaagagca ggtggcagca ggggaacgtc ttctcatgct ccgtgatgca tgaggctctg 1320 cacaaccact acacacagaa gagcctctcc ctgtctccgg gcaaa 1365 <210> 272 <211> 455 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: Clone 13D heavy chain hIgG1 (and hIgG1 afucosylated) amino acid sequence <400> 272 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Thr Phe Leu Ser Ser 20 25 30 Ala Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Ser Ile Ile Pro Tyr Phe Gly Lys Ala Asn Tyr Ala Gln Lys Phe 50 55 60 Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Pro Ser Glu Val Lys Gly Ile Leu Gly Tyr Val Trp Phe 100 105 110 Asp Pro Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr 115 120 125 Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser 130 135 140 Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu 145 150 155 160 Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His 165 170 175 Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser 180 185 190 Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys 195 200 205 Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu 210 215 220 Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro 225 230 235 240 Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys 245 250 255 Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val 260 265 270 Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp 275 280 285 Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr 290 295 300 Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp 305 310 315 320 Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu 325 330 335 Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg 340 345 350 Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys 355 360 365 Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp 370 375 380 Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys 385 390 395 400 Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser 405 410 415 Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser 420 425 430 Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser 435 440 445 Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 450 455 <210> 273 <211> 657 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: Clone 13, 13A, 13B, 13C, and 13D light chain hkappa (and afucosylated) nucleotide sequence <400> 273 gatattgtga tgactcagtc tccactctcc ctgcccgtca cccctggaga gccggcctcc 60 atctcctgca ggtctagtca gagcctcctg catagtaatg gatacaacta tttggattgg 120 tacctgcaga agccagggca gtctccacag ctcctgatct atttgggttc taatcgggcc 180 tccggggtcc ctgacaggtt cagtggcagt ggatcaggca cagattttac actgaaaatc 240 agcagagtgg aggctgagga tgttggggtt tattactgca tgcaggcaag acgaatccct 300 atcacttttg gcggagggac caaggttgag atcaaacgta cggtggctgc accatctgtc 360 ttcatcttcc cgccatctga tgagcagttg aaatctggaa ctgcctctgt tgtgtgcctg 420 ctgaataact tctatcccag agaggccaaa gtacagtgga aggtggataa cgccctccaa 480 tcgggtaact cccaggagag tgtcacagag caggacagca aggacagcac ctacagcctc 540 agcagcaccc tgacgctgag caaagcagac tacgagaaac acaaagtcta cgcctgcgaa 600 gtcacccatc agggcctgag ctcgcccgtc acaaagagct tcaacagggg agagtgt 657 <210> 274 <211> 219 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: Clone 13, 13A, 13B, 13C, and 13D light chain hkappa (and afucosylated) amino acid sequence <400> 274 Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly 1 5 10 15 Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Leu His Ser 20 25 30 Asn Gly Tyr Asn Tyr Leu Asp Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser 35 40 45 Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Leu Gly Ser Asn Arg Ala Ser Gly Val Pro 50 55 60 Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile 65 70 75 80 Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Met Gln Ala 85 90 95 Arg Arg Ile Pro Ile Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 110 Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu 115 120 125 Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe 130 135 140 Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln 145 150 155 160 Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser 165 170 175 Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu 180 185 190 Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser 195 200 205 Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210 215 <210> 275 <211> 1365 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: Clone 13 heavy chain mIgG2a (and afucosylated) nucleotide sequence <400> 275 caggtgcagc tggtgcagtc tggggctgag gtgaagaagc ctgggtcctc tgtgaaggtc 60 tcctgcaagg cttctggagg caccttcagc agctatgcta tcagctgggt gcgacaggcc 120 cctggacaag ggcttgagtg gatgggaagc atcatcccta tctttggtac agcaaactac 180 gcacagaagt tccagggcag agtcaccatt actgctgatg aatccaccag cacagcctac 240 atggagctga gcagcctgag atctgaggac actgctgtgt actactgtgc cagaggccct 300 tctgaagtag gagcaatact gggatatgta tggtttgacc catggggaca gggtacattg 360 gtcaccgtct cctcagctaa aacaacagcc ccatcggtct atccgctagc ccctgtgtgt 420 ggagatacaa ctggctcctc ggtgactcta ggatgcctgg tcaagggtta tttccctgag 480 ccagtgacct tgacctggaa ctctggatcc ctgtccagtg gtgtgcacac cttcccagct 540 gtcctgcagt ctgacctcta caccctcagc agctcagtga ctgtaacctc tagcacctgg 600 cccagccagt ccatcacctg caatgtggcc cacccggcaa gcagcaccaa ggtggacaag 660 aaaattgagc ccagagggcc cacaatcaag ccctgtcctc catgcaaatg cccagcacct 720 aacgctgctg gtggaccatc cgtcttcatc ttccctccaa agatcaagga tgtactcatg 780 atctccctga gccccatagt cacatgtgtg gtggtggatg tgagcgagga tgacccagat 840 gtccagatca gctggtttgt gaacaacgtg gaagtacaca cagctcagac acaaacccat 900 agagaggatt acaacagtac tctccgggtg gtcagtgccc tccccatcca gcaccaggac 960 tggatgagtg gcaaggagtt caaatgcaag gtcaacaaca aagacctcgg ggcgcccatc 1020 gagagaacca tctcaaaacc caaaggctca gtaagagctc cacaggtata tgtcttgcct 1080 ccaccagaag aagagatgac taagaaacag gtcactctga cctgcatggt cacagacttc 1140 atgcctgaag acatttacgt ggagtggacc aacaacggga aaacagagct aaactacaag 1200 aacactgaac cagtcctgga ctctgatggt tcttacttca tgtacagcaa gctgagagtg 1260 gaaaagaaga actgggtgga aagaaatagc tactcctgtt cagtggtcca cgagggtctg 1320 cacaatcacc acacgactaa gagcttctcc cggactccgg gcaaa 1365 <210> 276 <211> 455 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: Clone 13 heavy chain mIgG2a (and afucosylated) amino acid sequence <400> 276 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Ala Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Ser Ile Ile Pro Ile Phe Gly Thr Ala Asn Tyr Ala Gln Lys Phe 50 55 60 Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Pro Ser Glu Val Gly Ala Ile Leu Gly Tyr Val Trp Phe 100 105 110 Asp Pro Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Lys Thr 115 120 125 Thr Ala Pro Ser Val Tyr Pro Leu Ala Pro Val Cys Gly Asp Thr Thr 130 135 140 Gly Ser Ser Val Thr Leu Gly Cys Leu Val Lys Gly Tyr Phe Pro Glu 145 150 155 160 Pro Val Thr Leu Thr Trp Asn Ser Gly Ser Leu Ser Ser Gly Val His 165 170 175 Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Asp Leu Tyr Thr Leu Ser Ser Ser 180 185 190 Val Thr Val Thr Ser Ser Thr Trp Pro Ser Gln Ser Ile Thr Cys Asn 195 200 205 Val Ala His Pro Ala Ser Ser Thr Lys Val Asp Lys Lys Ile Glu Pro 210 215 220 Arg Gly Pro Thr Ile Lys Pro Cys Pro Pro Cys Lys Cys Pro Ala Pro 225 230 235 240 Asn Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Lys Ile Lys 245 250 255 Asp Val Leu Met Ile Ser Leu Ser Pro Ile Val Thr Cys Val Val Val 260 265 270 Asp Val Ser Glu Asp Asp Pro Asp Val Gln Ile Ser Trp Phe Val Asn 275 280 285 Asn Val Glu Val His Thr Ala Gln Thr Gln Thr His Arg Glu Asp Tyr 290 295 300 Asn Ser Thr Leu Arg Val Val Ser Ala Leu Pro Ile Gln His Gln Asp 305 310 315 320 Trp Met Ser Gly Lys Glu Phe Lys Cys Lys Val Asn Asn Lys Asp Leu 325 330 335 Gly Ala Pro Ile Glu Arg Thr Ile Ser Lys Pro Lys Gly Ser Val Arg 340 345 350 Ala Pro Gln Val Tyr Val Leu Pro Pro Pro Glu Glu Glu Met Thr Lys 355 360 365 Lys Gln Val Thr Leu Thr Cys Met Val Thr Asp Phe Met Pro Glu Asp 370 375 380 Ile Tyr Val Glu Trp Thr Asn Asn Gly Lys Thr Glu Leu Asn Tyr Lys 385 390 395 400 Asn Thr Glu Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Tyr Phe Met Tyr Ser 405 410 415 Lys Leu Arg Val Glu Lys Lys Asn Trp Val Glu Arg Asn Ser Tyr Ser 420 425 430 Cys Ser Val Val His Glu Gly Leu His Asn His His Thr Thr Lys Ser 435 440 445 Phe Ser Arg Thr Pro Gly Lys 450 455 <210> 277 <211> 1365 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: Clone 13 heavy chain mIgG2a LALA-PG nucleotide sequence <400> 277 caggtgcagc tggtgcagtc tggggctgag gtgaagaagc ctgggtcctc tgtgaaggtc 60 tcctgcaagg cttctggagg caccttcagc agctatgcta tcagctgggt gcgacaggcc 120 cctggacaag ggcttgagtg gatgggaagc atcatcccta tctttggtac agcaaactac 180 gcacagaagt tccagggcag agtcaccatt actgctgatg aatccaccag cacagcctac 240 atggagctga gcagcctgag atctgaggac actgctgtgt actactgtgc cagaggccct 300 tctgaagtag gagcaatact gggatatgta tggtttgacc catggggaca gggtacattg 360 gtcaccgtct cctcagctaa aacaacagcc ccatcggtct atccgctagc ccctgtgtgt 420 ggagatacaa ctggctcctc ggtgactcta ggatgcctgg tcaagggtta tttccctgag 480 ccagtgacct tgacctggaa ctctggatcc ctgtccagtg gtgtgcacac cttcccagct 540 gtcctgcagt ctgacctcta caccctcagc agctcagtga ctgtaacctc tagcacctgg 600 cccagccagt ccatcacctg caatgtggcc cacccggcaa gcagcaccaa ggtggacaag 660 aaaattgagc ccagagggcc cacaatcaag ccctgtcctc catgcaaatg cccagcacct 720 aacgctgctg gtggaccatc cgtcttcatc ttccctccaa agatcaagga tgtactcatg 780 atctccctga gccccatagt cacatgtgtg gtggtggatg tgagcgagga tgacccagat 840 gtccagatca gctggtttgt gaacaacgtg gaagtacaca cagctcagac acaaacccat 900 agagaggatt acaacagtac tctccgggtg gtcagtgccc tccccatcca gcaccaggac 960 tggatgagtg gcaaggagtt caaatgcaag gtcaacaaca aagacctcgg ggcgcccatc 1020 gagagaacca tctcaaaacc caaaggctca gtaagagctc cacaggtata tgtcttgcct 1080 ccaccagaag aagagatgac taagaaacag gtcactctga cctgcatggt cacagacttc 1140 atgcctgaag acatttacgt ggagtggacc aacaacggga aaacagagct aaactacaag 1200 aacactgaac cagtcctgga ctctgatggt tcttacttca tgtacagcaa gctgagagtg 1260 gaaaagaaga actgggtgga aagaaatagc tactcctgtt cagtggtcca cgagggtctg 1320 cacaatcacc acacgactaa gagcttctcc cggactccgg gcaaa 1365 <210> 278 <211> 455 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: Clone 13 heavy chain mIgG2a LALA-PG amino acid sequence <400> 278 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Ala Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Ser Ile Ile Pro Ile Phe Gly Thr Ala Asn Tyr Ala Gln Lys Phe 50 55 60 Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Pro Ser Glu Val Gly Ala Ile Leu Gly Tyr Val Trp Phe 100 105 110 Asp Pro Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Lys Thr 115 120 125 Thr Ala Pro Ser Val Tyr Pro Leu Ala Pro Val Cys Gly Asp Thr Thr 130 135 140 Gly Ser Ser Val Thr Leu Gly Cys Leu Val Lys Gly Tyr Phe Pro Glu 145 150 155 160 Pro Val Thr Leu Thr Trp Asn Ser Gly Ser Leu Ser Ser Gly Val His 165 170 175 Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Asp Leu Tyr Thr Leu Ser Ser Ser 180 185 190 Val Thr Val Thr Ser Ser Thr Trp Pro Ser Gln Ser Ile Thr Cys Asn 195 200 205 Val Ala His Pro Ala Ser Ser Thr Lys Val Asp Lys Lys Ile Glu Pro 210 215 220 Arg Gly Pro Thr Ile Lys Pro Cys Pro Pro Cys Lys Cys Pro Ala Pro 225 230 235 240 Asn Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Lys Ile Lys 245 250 255 Asp Val Leu Met Ile Ser Leu Ser Pro Ile Val Thr Cys Val Val Val 260 265 270 Asp Val Ser Glu Asp Asp Pro Asp Val Gln Ile Ser Trp Phe Val Asn 275 280 285 Asn Val Glu Val His Thr Ala Gln Thr Gln Thr His Arg Glu Asp Tyr 290 295 300 Asn Ser Thr Leu Arg Val Val Ser Ala Leu Pro Ile Gln His Gln Asp 305 310 315 320 Trp Met Ser Gly Lys Glu Phe Lys Cys Lys Val Asn Asn Lys Asp Leu 325 330 335 Gly Ala Pro Ile Glu Arg Thr Ile Ser Lys Pro Lys Gly Ser Val Arg 340 345 350 Ala Pro Gln Val Tyr Val Leu Pro Pro Pro Glu Glu Glu Met Thr Lys 355 360 365 Lys Gln Val Thr Leu Thr Cys Met Val Thr Asp Phe Met Pro Glu Asp 370 375 380 Ile Tyr Val Glu Trp Thr Asn Asn Gly Lys Thr Glu Leu Asn Tyr Lys 385 390 395 400 Asn Thr Glu Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Tyr Phe Met Tyr Ser 405 410 415 Lys Leu Arg Val Glu Lys Lys Asn Trp Val Glu Arg Asn Ser Tyr Ser 420 425 430 Cys Ser Val Val His Glu Gly Leu His Asn His His Thr Thr Lys Ser 435 440 445 Phe Ser Arg Thr Pro Gly Lys 450 455 <210> 279 <211> 1347 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: Clone 13 heavy chain mIgG1 nucleotide sequence <400> 279 caggtgcagc tggtgcagtc tggggctgag gtgaagaagc ctgggtcctc tgtgaaggtc 60 tcctgcaagg cttctggagg caccttcagc agctatgcta tcagctgggt gcgacaggcc 120 cctggacaag ggcttgagtg gatgggaagc atcatcccta tctttggtac agcaaactac 180 gcacagaagt tccagggcag agtcaccatt actgctgatg aatccaccag cacagcctac 240 atggagctga gcagcctgag atctgaggac actgctgtgt actactgtgc cagaggccct 300 tctgaagtag gagcaatact gggatatgta tggtttgacc catggggaca gggtacattg 360 gtcaccgtct cctcagccaa aacgacaccc ccatctgtct atccgctagc ccctggatct 420 gctgcccaaa ctaactccat ggtgaccctg ggatgcctgg tcaagggcta tttccctgag 480 ccagtgacag tgacctggaa ctctggatcc ctgtccagcg gtgtgcacac cttcccagct 540 gtcctggagt ctgacctcta cactctgagc agctcagtga ctgtcccctc cagccctcgg 600 cccagcgaga ccgtcacctg caacgttgcc cacccggcca gcagcaccaa ggtggacaag 660 aaaattgtgc ccagggattg tggttgtaag ccttgcatct gtacagtccc agaagtatca 720 tctgtcttca tcttcccccc aaagcccaag gatgtgctca ccattactct gactcctaag 780 gtcacgtgtg ttgtggtaga catcagcaag gatgatcccg aggtccagtt cagctggttt 840 gtagatgatg tggaggtgca cacagctcag acgcaacccc gggaggagca gttcaacagc 900 actttccgct cagtcagtga acttcccatc atgcaccagg actggctcaa tggcaaggag 960 ttcaaatgca gggtcaacag tgcagctttc cctgccccca tcgagaaaac catctccaaa 1020 accaaaggca gaccgaaggc tccacaggtg tacaccattc cacctcccaa ggagcagatg 1080 gccaaggata aagtcagtct gacctgcatg ataacagact tcttccctga agacattact 1140 gtggagtggc agtggaatgg gcagccagcg gagaactaca agaacactca gcccatcatg 1200 aacacgaatg gctcttactt cgtctacagc aagctcaatg tgcagaagag caactgggag 1260 gcaggaaata ctttcacctg ctctgtgtta catgagggcc tgcacaacca ccatactgag 1320 aagagcctct cccactctcc tggcaaa 1347 <210> 280 <211> 449 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: Clone 13 heavy chain mIgG1 amino acid sequence <400> 280 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Ala Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Ser Ile Ile Pro Ile Phe Gly Thr Ala Asn Tyr Ala Gln Lys Phe 50 55 60 Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Pro Ser Glu Val Gly Ala Ile Leu Gly Tyr Val Trp Phe 100 105 110 Asp Pro Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Lys Thr 115 120 125 Thr Pro Pro Ser Val Tyr Pro Leu Ala Pro Gly Ser Ala Ala Gln Thr 130 135 140 Asn Ser Met Val Thr Leu Gly Cys Leu Val Lys Gly Tyr Phe Pro Glu 145 150 155 160 Pro Val Thr Val Thr Trp Asn Ser Gly Ser Leu Ser Ser Gly Val His 165 170 175 Thr Phe Pro Ala Val Leu Glu Ser Asp Leu Tyr Thr Leu Ser Ser Ser 180 185 190 Val Thr Val Pro Ser Ser Pro Arg Pro Ser Glu Thr Val Thr Cys Asn 195 200 205 Val Ala His Pro Ala Ser Ser Thr Lys Val Asp Lys Lys Ile Val Pro 210 215 220 Arg Asp Cys Gly Cys Lys Pro Cys Ile Cys Thr Val Pro Glu Val Ser 225 230 235 240 Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Val Leu Thr Ile Thr 245 250 255 Leu Thr Pro Lys Val Thr Cys Val Val Val Asp Ile Ser Lys Asp Asp 260 265 270 Pro Glu Val Gln Phe Ser Trp Phe Val Asp Asp Val Glu Val His Thr 275 280 285 Ala Gln Thr Gln Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Phe Arg Ser 290 295 300 Val Ser Glu Leu Pro Ile Met His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu 305 310 315 320 Phe Lys Cys Arg Val Asn Ser Ala Ala Phe Pro Ala Pro Ile Glu Lys 325 330 335 Thr Ile Ser Lys Thr Lys Gly Arg Pro Lys Ala Pro Gln Val Tyr Thr 340 345 350 Ile Pro Pro Pro Lys Glu Gln Met Ala Lys Asp Lys Val Ser Leu Thr 355 360 365 Cys Met Ile Thr Asp Phe Phe Pro Glu Asp Ile Thr Val Glu Trp Gln 370 375 380 Trp Asn Gly Gln Pro Ala Glu Asn Tyr Lys Asn Thr Gln Pro Ile Met 385 390 395 400 Asn Thr Asn Gly Ser Tyr Phe Val Tyr Ser Lys Leu Asn Val Gln Lys 405 410 415 Ser Asn Trp Glu Ala Gly Asn Thr Phe Thr Cys Ser Val Leu His Glu 420 425 430 Gly Leu His Asn His His Thr Glu Lys Ser Leu Ser His Ser Pro Gly 435 440 445 Lys <210> 281 <211> 657 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: Clone 13 light chain mKappa nucleotide sequence <400> 281 gatattgtga tgactcagtc tccactctcc ctgcccgtca cccctggaga gccggcctcc 60 atctcctgca ggtctagtca gagcctcctg catagtaatg gatacaacta tttggattgg 120 tacctgcaga agccagggca gtctccacag ctcctgatct atttgggttc taatcgggcc 180 tccggggtcc ctgacaggtt cagtggcagt ggatcaggca cagattttac actgaaaatc 240 agcagagtgg aggctgagga tgttggggtt tattactgca tgcaggcaag acgaatccct 300 atcacttttg gcggagggac caaggttgag atcaaacgtg cagatgcggc gccaactgta 360 tccatcttcc caccatccag tgagcagtta acatctggag gtgcctcagt cgtgtgcttc 420 ttgaacaact tctaccccaa agacatcaat gtcaagtgga agattgatgg cagtgaacga 480 caaaatggcg tcctgaacag ttggactgat caggacagca aagacagcac ctacagcatg 540 agcagcaccc tcacgttgac caaggacgag tatgaacgac ataacagcta tacctgtgag 600 gccactcaca agacatcaac ttcacccatt gtcaagagct tcaacaggaa tgagtgt 657 <210> 282 <211> 219 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: Clone 13 light chain mKappa amino acid sequence <400> 282 Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly 1 5 10 15 Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Leu His Ser 20 25 30 Asn Gly Tyr Asn Tyr Leu Asp Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser 35 40 45 Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Leu Gly Ser Asn Arg Ala Ser Gly Val Pro 50 55 60 Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile 65 70 75 80 Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Met Gln Ala 85 90 95 Arg Arg Ile Pro Ile Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 110 Arg Ala Asp Ala Ala Pro Thr Val Ser Ile Phe Pro Pro Ser Ser Glu 115 120 125 Gln Leu Thr Ser Gly Gly Ala Ser Val Val Cys Phe Leu Asn Asn Phe 130 135 140 Tyr Pro Lys Asp Ile Asn Val Lys Trp Lys Ile Asp Gly Ser Glu Arg 145 150 155 160 Gln Asn Gly Val Leu Asn Ser Trp Thr Asp Gln Asp Ser Lys Asp Ser 165 170 175 Thr Tyr Ser Met Ser Ser Thr Leu Thr Leu Thr Lys Asp Glu Tyr Glu 180 185 190 Arg His Asn Ser Tyr Thr Cys Glu Ala Thr His Lys Thr Ser Thr Ser 195 200 205 Pro Ile Val Lys Ser Phe Asn Arg Asn Glu Cys 210 215 <210> 283 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 283 Gly Gly Thr Phe Ser Ser Tyr Ala 1 5 <210> 284 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 284 Ser Tyr Ala Ile Ser 1 5 <210> 285 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 285 Ile Ile Pro Ile Phe Gly Thr Ala 1 5 <210> 286 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 286 Gly Pro Ser Glu Val Gly Ala Ile Leu Gly Tyr Val Trp Phe Asp Pro 1 5 10 15 <210> 287 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 287 Gln Ser Leu Leu His Ser Asn Gly Tyr Asn Tyr 1 5 10 <210> 288 <211> 3 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 288 Leu Gly Ser 1 <210> 289 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 289 Gly Gly Thr Phe Ser Ala Trp Ala 1 5 <210> 290 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 290 Ala Trp Ala Ile Ser 1 5 <210> 291 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 291 Ile Ile Pro Tyr Phe Gly Lys Ala 1 5 <210> 292 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 292 Gly Pro Ser Glu Val Ser Gly Ile Leu Gly Tyr Val Trp Phe Asp Pro 1 5 10 15 <210> 293 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 293 Gly Gly Thr Phe Leu Ser Ser Ala 1 5 <210> 294 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 294 Ser Ser Ala Ile Ser 1 5 <210> 295 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 295 Ile Ile Pro Leu Phe Gly Lys Ala 1 5 <210> 296 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 296 Gly Pro Ser Glu Val Lys Gly Ile Leu Gly Tyr Val Trp Phe Asp Pro 1 5 10 15 <210> 297 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 297 Leu Ile Pro Tyr Phe Gly Thr Ala 1 5 <210> 298 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 298 Ile Leu Gln Cys His Leu Ser Ser Thr Thr Ala Gln Val 1 5 10 <210> 299 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 299 Cys Ile Tyr His Thr Tyr Pro Asp Gly Thr Tyr Thr Gly Arg Ile 1 5 10 15 <210> 300 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 300 Ser Phe Lys Asp Arg Val Ala Pro Gly Pro Gly 1 5 10 <210> 301 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 301 Thr Thr Ala Gln Val Thr Gln 1 5 <210> 302 <211> 33 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <220> <221> misc_feature <222> (5)..(5) <223> Xaa is Cys-acm <220> <221> misc_feature <222> (19)..(19) <223> Xaa is Cys-acm <400> 302 Cys Ile Leu Gln Xaa His Leu Ser Ser Thr Thr Ala Gln Val Thr Gln 1 5 10 15 Cys Ile Xaa Asn Ala Asp Leu Gly Trp His Ile Ser Pro Ser Phe Lys 20 25 30 Cys <210> 303 <211> 33 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <220> <221> misc_feature <222> (19)..(19) <223> Xaa is Cys-acm <400> 303 Cys Lys Asp Arg Val Ala Pro Gly Pro Gly Leu Gly Leu Thr Leu Gln 1 5 10 15 Cys Ile Xaa Asn Ala Asp Leu Gly Trp His Ile Ser Pro Ser Phe Lys 20 25 30 Cys <210> 304 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 304 Ala Asp His Ile Gln Arg Tyr 1 5 <210> 305 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 305 Thr Ala Gln Val Thr 1 5 <210> 306 <211> 4 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 306 Gly Trp His Ile 1 <210> 307 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 307 Pro Gly Pro Gly Leu Gly Leu 1 5 <210> 308 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 308 Lys Asp Arg Val Ala 1 5 <210> 309 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 309 Gly Gly Ser Gly Gly 1 5

Claims (184)

  1. 인간 TIGIT (Ig 및 ITIM 도메인을 갖는 T-세포 면역수용체)에 결합하는 단리된 항체를 포함하는 조성물이고, 여기서 항체가 5 nM 미만의 인간 TIGIT에 대한 결합 친화도 (KD)를 갖고, 조성물 내의 항체의 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99%가 비-푸코실화된 것인 조성물.
  2. 제1항에 있어서, 항체가 1 nM 미만의 인간 TIGIT에 대한 KD를 갖는 것인 조성물.
  3. 제1항에 있어서, 항체가 100 pM 미만의 인간 TIGIT에 대한 KD를 갖는 것인 조성물.
  4. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, 항체가 시노몰거스 원숭이 TIGIT 및/또는 마우스 TIGIT와의 교차-반응성을 나타내는 것인 조성물.
  5. 제4항에 있어서, 항체가 시노몰거스 원숭이 TIGIT 및 마우스 TIGIT 둘 다와의 교차-반응성을 나타내는 것인 조성물.
  6. 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서, 항체가 TIGIT에 대한 CD155의 결합을 차단하는 것인 조성물.
  7. 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서, 항체가 TIGIT에 대한 CD112의 결합을 차단하는 것인 조성물.
  8. 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서, 항체가 TIGIT에 대한 CD155 및 CD112 둘 다의 결합을 차단하는 것인 조성물.
  9. 제1항 내지 제8항 중 어느 한 항에 있어서, 항체가 인간 TIGIT에 결합하는 것에 대해 서열식별번호(SEQ ID NO): 55의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열식별번호: 64의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는 항체와 경쟁하는 것인 조성물.
  10. 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서, 인간 TIGIT에 결합된 경우의 항체가 아미노산 위치 81 및 82 중 하나 또는 둘 다에 결합하는 것인 조성물.
  11. 제10항에 있어서, 항체가 아미노산 위치 81 및 82 둘 다에 결합하는 것인 조성물.
  12. 제10항 또는 제11항에 있어서, 아미노산 위치 81 및 82가 Phe81 및 Lys82인 조성물.
  13. 제1항 내지 제12항 중 어느 한 항에 있어서, 항체가 아미노산 위치 81 및 82 중 하나 또는 둘 다를 포함하는 인간 TIGIT 상의 에피토프에 결합하는 것인 조성물.
  14. 인간 TIGIT에 결합하는 단리된 항체를 포함하는 조성물이고, 여기서 인간 TIGIT에 결합된 경우의 항체가 아미노산 위치 81 및 82 중 하나 또는 둘 다에 결합하고, 조성물 내의 항체의 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99%가 비-푸코실화된 것인 조성물.
  15. 제14항에 있어서, 항체가 아미노산 위치 81 및 82 둘 다에 결합하는 것인 조성물.
  16. 제14항 또는 제15항에 있어서, 아미노산 위치 81 및 82가 Phe81 및 Lys82인 조성물.
  17. 인간 TIGIT에 결합하는 단리된 항체를 포함하는 조성물이고, 여기서 항체가 아미노산 위치 81 및 82 중 하나 또는 둘 다를 포함하는 인간 TIGIT 상의 에피토프에 결합하고, 조성물 내의 항체의 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99%가 비-푸코실화된 것인 조성물.
  18. 제13항 또는 제17항에 있어서, 에피토프가 위치 81의 Phe을 포함하는 것인 조성물.
  19. 제13항, 제17항, 및 제18항 중 어느 한 항에 있어서, 에피토프가 위치 82의 Lys 또는 Ser을 포함하는 것인 조성물.
  20. 제13항 및 제17항 내지 제19항 중 어느 한 항에 있어서, 에피토프가 위치 81의 Phe 및 위치 82의 Lys 또는 Ser을 포함하는 것인 조성물.
  21. 제20항에 있어서, 에피토프가 Phe81 및 Lys82를 포함하는 것인 조성물.
  22. 제13항 및 제17항 내지 제21항 중 어느 한 항에 있어서, 에피토프가 불연속 에피토프인 조성물.
  23. 제13항 및 제17항 내지 제22항 중 어느 한 항에 있어서, 항체가 아미노산 위치 51, 52, 53, 54, 55, 73, 74, 75, 76, 77, 79, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 또는 93 중 하나 이상을 추가로 포함하는 인간 TIGIT 상의 에피토프에 결합하는 것인 조성물.
  24. 제23항에 있어서, 에피토프가 Thr51, Ala52, Gln53, Val54, Thr55, Leu73, Gly74, Trp75, His76, Ile77, Pro79, Asp83, Arg84, Val85, Ala86, Pro87, Gly88, Pro89, Gly90, Leu91, Gly92, 및 Leu93으로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 아미노산 잔기를 추가로 포함하는 것인 조성물.
  25. 제24항에 있어서, 에피토프가 아미노산 잔기 Thr51, Ala52, Gln53, Val54, Thr55, Gly74, Trp75, His76, Ile77, Phe81, Lys82, Pro87, Gly88, Pro89, Gly90, Leu91, Gly92, 및 Leu93을 포함하는 것인 조성물.
  26. 제24항에 있어서, 에피토프가 아미노산 잔기 Ala52, Gln53, Leu73, Gly74, Trp75, Pro79, Phe81, Lys82, Asp83, Arg84, Val85, 및 Ala86을 포함하는 것인 조성물.
  27. 제13항 및 제17항 내지 제26항 중 어느 한 항에 있어서, 에피토프가 서열 ICNADLGWHISPSFK (서열식별번호: 258)를 포함하는 것인 조성물.
  28. 제1항 내지 제27항 중 어느 한 항에 있어서, 인간 TIGIT가 서열식별번호: 218의 서열을 포함하는 것인 조성물.
  29. 제1항 내지 제28항 중 어느 한 항에 있어서, 각각의 항체가
    (a) 서열식별번호: 4, 서열식별번호: 22, 서열식별번호: 40, 서열식별번호: 58, 서열식별번호: 76, 서열식별번호: 94, 서열식별번호: 112, 서열식별번호: 130, 서열식별번호: 148, 서열식별번호: 166, 서열식별번호: 184, 서열식별번호: 202, 서열식별번호: 221, 서열식별번호: 224, 서열식별번호: 226, 서열식별번호: 231, 서열식별번호: 233, 서열식별번호: 239, 서열식별번호: 243, 서열식별번호: 283, 서열식별번호: 284, 서열식별번호: 293, 서열식별번호: 294, 서열식별번호: 289, 및 서열식별번호: 290으로부터 선택된 서열을 포함하는 중쇄 CDR1;
    (b) 서열식별번호: 6, 서열식별번호: 24, 서열식별번호: 42, 서열식별번호: 60, 서열식별번호: 78, 서열식별번호: 96, 서열식별번호: 114, 서열식별번호: 132, 서열식별번호: 150, 서열식별번호: 168, 서열식별번호: 186, 서열식별번호: 204, 서열식별번호: 222, 서열식별번호: 225, 서열식별번호: 227, 서열식별번호: 229, 서열식별번호: 232, 서열식별번호: 234, 서열식별번호: 238, 서열식별번호: 240, 서열식별번호: 285, 서열식별번호: 297, 서열식별번호: 291, 및 서열식별번호: 295로부터 선택된 서열을 포함하는 중쇄 CDR2;
    (c) 서열식별번호: 8, 서열식별번호: 26, 서열식별번호: 44, 서열식별번호: 62, 서열식별번호: 80, 서열식별번호: 98, 서열식별번호: 116, 서열식별번호: 134, 서열식별번호: 152, 서열식별번호: 170, 서열식별번호: 188, 서열식별번호: 206, 서열식별번호: 223, 서열식별번호: 228, 서열식별번호: 230, 서열식별번호: 235, 서열식별번호: 236, 서열식별번호: 237, 서열식별번호: 241, 서열식별번호: 242, 서열식별번호: 244, 서열식별번호: 286, 서열식별번호: 292, 및 서열식별번호: 296으로부터 선택된 서열을 포함하는 중쇄 CDR3;
    (d) 서열식별번호: 13, 서열식별번호: 31, 서열식별번호: 49, 서열식별번호: 67, 서열식별번호: 85, 서열식별번호: 103, 서열식별번호: 121, 서열식별번호: 139, 서열식별번호: 157, 서열식별번호: 175, 서열식별번호: 193, 서열식별번호: 211, 및 서열식별번호: 287로부터 선택된 서열을 포함하는 경쇄 CDR1;
    (e) 서열식별번호: 15, 서열식별번호: 33, 서열식별번호: 51, 서열식별번호: 69, 서열식별번호: 87, 서열식별번호: 105, 서열식별번호: 123, 서열식별번호: 141, 서열식별번호: 159, 서열식별번호: 177, 서열식별번호: 195, 서열식별번호: 213, 및 서열식별번호: 288로부터 선택된 서열을 포함하는 경쇄 CDR2; 또는
    (f) 서열식별번호: 17, 서열식별번호: 35, 서열식별번호: 53, 서열식별번호: 71, 서열식별번호: 89, 서열식별번호: 107, 서열식별번호: 125, 서열식별번호: 143, 서열식별번호: 161, 서열식별번호: 179, 서열식별번호: 197, 및 서열식별번호: 215로부터 선택된 서열을 포함하는 경쇄 CDR3
    중 하나 이상을 포함하는 것인 조성물.
  30. 제29항에 있어서, 각각의 항체가
    (a) 서열식별번호: 58, 서열식별번호: 283, 서열식별번호: 284, 서열식별번호: 224, 서열식별번호: 293, 서열식별번호: 294, 서열식별번호: 226, 서열식별번호: 289, 및 서열식별번호: 290으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR1 서열;
    (b) 서열식별번호: 60, 서열식별번호: 285, 서열식별번호: 225, 서열식별번호: 297, 서열식별번호: 227, 서열식별번호: 291, 서열식별번호: 229, 및 서열식별번호: 295로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR2 서열;
    (c) 서열식별번호: 62, 서열식별번호: 286, 서열식별번호: 228, 서열식별번호: 292, 서열식별번호: 230, 및 서열식별번호: 296으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR3 서열;
    (d) 서열식별번호: 67 및 서열식별번호: 287로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR1 서열;
    (e) 서열식별번호: 69 및 서열식별번호: 288로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR2 서열; 및/또는
    (f) 서열식별번호: 71의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR3 서열
    을 포함하는 것인 조성물.
  31. 제29항 또는 제30항에 있어서, 각각의 항체가
    (a) 각각 서열식별번호: 4, 6, 8, 13, 15, 및 17; 또는
    (b) 각각 서열식별번호: 22, 24, 26, 31, 33, 및 35; 또는
    (c) 각각 서열식별번호: 40, 42, 44, 49, 51, 및 53; 또는
    (d) 각각 서열식별번호: 58, 60, 62, 67, 69, 및 71; 또는
    (e) 각각 서열식별번호: 283, 285, 62, 287, 288, 및 71; 또는
    (f) 각각 서열식별번호: 284, 60, 286, 67, 69, 및 71; 또는
    (g) 각각 서열식별번호: 76, 78, 80, 85, 87, 및 89; 또는
    (h) 각각 서열식별번호: 94, 96, 98, 103, 105, 및 107; 또는
    (i) 각각 서열식별번호: 112, 114, 116, 121, 123, 및 125; 또는
    (j) 각각 서열식별번호: 130, 132, 134, 139, 141, 및 143; 또는
    (k) 각각 서열식별번호: 148, 150, 152, 157, 159, 및 161; 또는
    (l) 각각 서열식별번호: 166, 168, 170, 175, 177, 및 179; 또는
    (m) 각각 서열식별번호: 184, 186, 188, 193, 195, 및 197; 또는
    (n) 각각 서열식별번호: 202, 204, 206, 211, 213, 및 215; 또는
    (o) 각각 서열식별번호: 221, 222, 223, 13, 15, 및 17; 또는
    (p) 각각 서열식별번호: 224, 225, 62, 67, 69, 및 71; 또는
    (q) 각각 서열식별번호: 293, 297, 62, 287, 288, 및 71; 또는
    (r) 각각 서열식별번호: 294, 225, 286, 67, 69, 및 71; 또는
    (s) 각각 서열식별번호: 226, 227, 228, 67, 69, 및 71; 또는
    (t) 각각 서열식별번호: 289, 291, 228, 287, 288, 및 71; 또는
    (u) 각각 서열식별번호: 290, 227, 292, 67, 69, 및 71; 또는
    (v) 각각 서열식별번호: 224, 229, 230, 67, 69, 및 71; 또는
    (w) 각각 서열식별번호: 293, 295, 230, 287, 288, 및 71; 또는
    (x) 각각 서열식별번호: 294, 229, 296, 67, 69, 및 71; 또는
    (y) 각각 서열식별번호: 224, 227, 230, 67, 69, 및 71; 또는
    (z) 각각 서열식별번호: 293, 290, 230, 287, 288, 및 71; 또는
    (aa) 각각 서열식별번호: 294, 290, 230, 67, 69, 및 71; 또는
    (bb) 각각 서열식별번호: 231, 232, 235, 103, 105, 및 107; 또는
    (cc) 각각 서열식별번호: 233, 234, 236, 103, 105, 및 107; 또는
    (dd) 각각 서열식별번호: 233, 234, 237, 103, 105, 및 107; 또는
    (ee) 각각 서열식별번호: 166, 238, 170, 175, 177, 및 179; 또는
    (ff) 각각 서열식별번호: 239, 240, 170, 175, 177, 및 179; 또는
    (gg) 각각 서열식별번호: 239, 240, 241, 175, 177, 및 179; 또는
    (hh) 각각 서열식별번호: 239, 240, 242, 175, 177, 및 179; 또는
    (ii) 각각 서열식별번호: 243, 168, 244, 175, 177, 및 179
    의 서열을 포함하는 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 및 경쇄 CDR1, CDR 및 CDR3을 포함하는 것인 조성물.
  32. 제1항 내지 제31항 중 어느 한 항에 있어서, 각각의 항체가
    (a) 각각 서열식별번호: 58, 60, 62, 67, 69, 및 71; 또는
    (b) 각각 서열식별번호: 283, 285, 62, 287, 288, 및 71; 또는
    (c) 각각 서열식별번호: 284, 60, 286, 67, 69, 및 71
    의 서열을 포함하는 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 및 경쇄 CDR1, CDR 및 CDR3을 포함하는 것인 조성물.
  33. 제1항 내지 제32항 중 어느 한 항에 있어서, 각각의 항체가
    (a) 서열식별번호: 1, 서열식별번호: 19, 서열식별번호: 37, 서열식별번호: 55, 서열식별번호: 73, 서열식별번호: 91, 서열식별번호: 109, 서열식별번호: 127, 서열식별번호: 145, 서열식별번호: 163, 서열식별번호: 181, 서열식별번호: 199, 서열식별번호: 245, 서열식별번호: 246, 서열식별번호: 247, 서열식별번호: 248, 서열식별번호: 249, 서열식별번호: 250, 서열식별번호: 251, 서열식별번호: 252, 서열식별번호: 253, 서열식별번호: 254, 서열식별번호: 255, 서열식별번호: 256, 또는 서열식별번호: 257에 대한 적어도 90%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역; 및/또는
    (b) 서열식별번호: 10, 서열식별번호: 28, 서열식별번호: 46, 서열식별번호: 64, 서열식별번호: 82, 서열식별번호: 100, 서열식별번호: 118, 서열식별번호: 136, 서열식별번호: 154, 서열식별번호: 172, 서열식별번호: 190, 또는 서열식별번호: 208에 대한 적어도 90%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역
    을 포함하는 것인 조성물.
  34. 제1항 내지 제33항 중 어느 한 항에 있어서, 각각의 항체가
    (a) 서열식별번호: 1 또는 서열식별번호: 245에 대한 적어도 90%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열식별번호: 10에 대한 적어도 90%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역; 또는
    (b) 서열식별번호: 19에 대한 적어도 90%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열식별번호: 28에 대한 적어도 90%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역; 또는
    (c) 서열식별번호: 37에 대한 적어도 90%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열식별번호: 46에 대한 적어도 90%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역; 또는
    (d) 서열식별번호: 55, 서열식별번호: 246, 서열식별번호: 247, 서열식별번호: 248, 또는 서열식별번호: 249 중 어느 하나에 대한 적어도 90%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열식별번호: 64에 대한 적어도 90%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역; 또는
    (e) 서열식별번호: 73에 대한 적어도 90%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열식별번호: 82에 대한 적어도 90%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역; 또는
    (f) 서열식별번호: 91, 서열식별번호: 250, 서열식별번호: 251, 또는 서열식별번호: 252 중 어느 하나에 대한 적어도 90%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열식별번호: 100에 대한 적어도 90%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역; 또는
    (g) 서열식별번호: 109에 대한 적어도 90%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열식별번호: 118에 대한 적어도 90%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역; 또는
    (h) 서열식별번호: 127에 대한 적어도 90%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열식별번호: 136에 대한 적어도 90%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역; 또는
    (i) 서열식별번호: 145에 대한 적어도 90%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열식별번호: 154에 대한 적어도 90%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역; 또는
    (j) 서열식별번호: 163, 서열식별번호: 253, 서열식별번호: 254, 서열식별번호: 255, 서열식별번호: 256, 또는 서열식별번호: 257 중 어느 하나에 대한 적어도 90%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열식별번호: 172에 대한 적어도 90%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역; 또는
    (k) 서열식별번호: 181에 대한 적어도 90%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열식별번호: 190에 대한 적어도 90%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역; 또는
    (l) 서열식별번호: 199에 대한 적어도 90%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열식별번호: 208에 대한 적어도 90%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역
    을 포함하는 것인 조성물.
  35. 제34항에 있어서, 각각의 항체가
    (a) 서열식별번호: 1 또는 서열식별번호: 245의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열식별번호: 10의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역; 또는
    (b) 서열식별번호: 19의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열식별번호: 28의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역; 또는
    (c) 서열식별번호: 37의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열식별번호: 46의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역; 또는
    (d) 서열식별번호: 55, 서열식별번호: 246, 서열식별번호: 247, 서열식별번호: 248, 또는 서열식별번호: 249 중 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열식별번호: 64의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역; 또는
    (e) 서열식별번호: 73의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열식별번호: 82의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역; 또는
    (f) 서열식별번호: 91, 서열식별번호: 250, 서열식별번호: 251, 또는 서열식별번호: 252 중 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열식별번호: 100의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역; 또는
    (g) 서열식별번호: 109의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열식별번호: 118의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역; 또는
    (h) 서열식별번호: 127의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열식별번호: 136의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역; 또는
    (i) 서열식별번호: 145의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열식별번호: 154의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역; 또는
    (j) 서열식별번호: 163, 서열식별번호: 253, 서열식별번호: 254, 서열식별번호: 255, 서열식별번호: 256, 또는 서열식별번호: 257 중 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열식별번호: 172의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역; 또는
    (k) 서열식별번호: 181의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열식별번호: 190의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역; 또는
    (l) 서열식별번호: 199의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열식별번호: 208의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역
    을 포함하는 것인 조성물.
  36. 제1항 내지 제35항 중 어느 한 항에 있어서, 각각의 항체가 서열식별번호: 55의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역, 및 서열식별번호: 64의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는 것인 조성물.
  37. 제1항 내지 제36항 중 어느 한 항에 있어서, 항체가 IgG 항체인 조성물.
  38. 제37항에 있어서, 항체가 IgG1 항체 또는 IgG3 항체인 조성물.
  39. 제1항 내지 제38항 중 어느 한 항에 있어서, 각각의 항체가 서열식별번호: 260, 262, 264, 266, 268, 270, 및 272로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄; 및 서열식별번호: 274의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하는 것인 조성물.
  40. 제39항에 있어서, 각각의 항체가 서열식별번호: 260의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄; 및 서열식별번호: 274의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하는 것인 조성물.
  41. 제39항에 있어서, 각각의 항체가 서열식별번호: 260의 아미노산 서열로 이루어진 중쇄; 및 서열식별번호: 274의 아미노산 서열로 이루어진 경쇄를 포함하는 것인 조성물.
  42. 인간 TIGIT에 결합하는 단리된 항체를 포함하는 조성물이고, 여기서 조성물 내의 항체의 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99%가 비-푸코실화되고, 각각의 항체가 서열식별번호: 260의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄; 및 서열식별번호: 274의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하는 것인 조성물.
  43. 인간 TIGIT에 결합하는 단리된 항체를 포함하는 조성물이고, 여기서 조성물 내의 항체의 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99%가 비-푸코실화되고, 각각의 항체가 서열식별번호: 260의 아미노산 서열로 이루어진 중쇄; 및 서열식별번호: 274의 아미노산 서열로 이루어진 경쇄를 포함하는 것인 조성물.
  44. 제1항 내지 제43항 중 어느 한 항에 있어서, 항체가 항-PD-1 항체 또는 항-PD-L1 항체와의 상승작용을 나타내는 것인 조성물.
  45. 제44항에 있어서, 상승작용이 (i) PD-1, TIGIT 및 CD226을 발현하는 저캣(Jurkat) 이펙터 세포이며, 여기서 저캣 이펙터 세포가 IL-2 프로모터에 의해 구동되는 루시퍼라제 리포터 유전자를 포함하는 것인 저캣 이펙터 세포; 및 (ii) TCR 활성자, PD-L1 및 CD155를 발현하는 CHO-K1 인공 항원 제시 세포 (aAPC)를 포함하는 공동-배양물을 조성물 및 항-PD-1 항체 또는 항-PD-L1 항체와 접촉시키는 것을 포함하는 검정법을 사용하여 결정되는 것인 조성물.
  46. 제1항 내지 제45항 중 어느 한 항에 있어서, 조절 T (Treg) 세포가 조성물과 접촉된 인간 PBMC로부터 고갈되는 것인 조성물.
  47. 제1항 내지 제46항 중 어느 한 항에 있어서, 조성물과 접촉된 인간 PBMC에서 MCP1, IL-8, 및 MIP1α의 발현이 증가되는 것인 조성물.
  48. 제1항 내지 제47항 중 어느 한 항에 있어서, 조성물과 접촉된 경우에 단핵구/대식세포가 활성화되는 것인 조성물.
  49. 제1항 내지 제48항 중 어느 한 항에 있어서, CD14+ 단핵구/대식세포가 조성물과 접촉되는 경우에 CD86 및 MHCII가 상향조절되는 것인 조성물.
  50. 제1항 내지 제49항 중 어느 한 항에 있어서, 조성물과 접촉된 CD14+ 단핵구/대식세포가 항원 제시 세포로 성숙되는 것인 조성물.
  51. 제1항 내지 제50항 중 어느 한 항에 있어서, 조성물과 접촉된 기억 T 세포가 항원에 반응하여 증가된 IFNγ 생산을 나타내는 것인 조성물.
  52. 제1항 내지 제51항 중 어느 한 항에 있어서, 조성물과 접촉된 기억 T 세포가 항원에 대한 강화된 반응을 입증하는 것인 조성물.
  53. 제1항 내지 제52항 중 어느 한 항에 있어서, 이펙터 기억 CD8+ T 세포 및/또는 이펙터 기억 CD4+ T 세포가 조성물과 접촉된 종양에서 증가되는 것인 조성물.
  54. 제1항 내지 제53항 중 어느 한 항에 있어서, 조성물이 투여된 동물에서 조성물이 Th1 반응을 강화시키는 것인 조성물.
  55. 제1항 내지 제54항 중 어느 한 항에 있어서, 조성물의 항체가 비-푸코실화되지 않은 동일한 항-TIGIT 항체에 비교하여 FcγRIIa 및/또는 FcγRIIb에 대한 더 낮은 결합 친화도를 갖는 것인 조성물.
  56. 제1항 내지 제55항 중 어느 한 항에 있어서, 조성물이 단핵구 대식세포의 존재 하에 TIGIT를 발현하는 세포의 항체-의존적 세포성 포식작용 (ADCP)을 매개하는 것인 조성물.
  57. 제1항 내지 제56항 중 어느 한 항에 있어서, 항체가 모노클로날인 조성물.
  58. 제1항 내지 제57항 중 어느 한 항에 있어서, 항체가 완전 인간 항체인 조성물.
  59. 제1항 내지 제58항 중 어느 한 항에 있어서, 항체가 키메라 항체인 조성물.
  60. 제1항 내지 제28항 및 제44항 내지 제59항 중 어느 한 항에 있어서, 항체가 인간화된 것인 조성물.
  61. 제1항 내지 제60항 중 어느 한 항에 있어서, 항체가 항체 단편인 조성물.
  62. 제61항에 있어서, 항체 단편이 Fab, Fab', F(ab')2, scFv, 또는 디아바디인 조성물.
  63. 제1항 내지 제62항 중 어느 한 항에 있어서, 항체가 이중특이적 항체인 조성물.
  64. 제1항 내지 제63항 중 어느 한 항에 있어서, 항체가 항체-약물 접합체인 조성물.
  65. 인간 TIGIT (Ig 및 ITIM 도메인을 갖는 T-세포 면역수용체)에 결합하는 항체이고, 여기서 항체가 5 nM 미만의 인간 TIGIT에 대한 결합 친화도 (KD)를 갖고, 항체가 비-푸코실화된 것인 항체.
  66. 제65항에 있어서, 항체가 1 nM 미만의 인간 TIGIT에 대한 KD를 갖는 것인 항체.
  67. 제66항에 있어서, 항체가 100 pM 미만의 인간 TIGIT에 대한 KD를 갖는 것인 항체.
  68. 제65항 내지 제67항 중 어느 한 항에 있어서, 항체가 시노몰거스 원숭이 TIGIT 및/또는 마우스 TIGIT와의 교차-반응성을 나타내는 것인 항체.
  69. 제68항에 있어서, 항체가 시노몰거스 원숭이 TIGIT 및 마우스 TIGIT 둘 다와의 교차-반응성을 나타내는 것인 항체.
  70. 제65항 내지 제69항 중 어느 한 항에 있어서, 항체가 TIGIT에 대한 CD155의 결합을 차단하는 것인 항체.
  71. 제65항 내지 제70항 중 어느 한 항에 있어서, 항체가 TIGIT에 대한 CD112의 결합을 차단하는 것인 항체.
  72. 제65항 내지 제71항 중 어느 한 항에 있어서, 항체가 TIGIT에 대한 CD155 및 CD112 둘 다의 결합을 차단하는 것인 항체.
  73. 제65항 내지 제72항 중 어느 한 항에 있어서, 항체가 인간 TIGIT에 결합하는 것에 대해 서열식별번호: 55의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열식별번호: 64의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는 항체와 경쟁하는 것인 항체.
  74. 제65항 내지 제73항 중 어느 한 항에 있어서, 인간 TIGIT에 결합된 경우에 아미노산 위치 81 및 82 중 하나 또는 둘 다에 결합하는 항체.
  75. 제74항에 있어서, 항체가 아미노산 위치 81 및 82 둘 다에 결합하는 것인 항체.
  76. 제74항 또는 제75항에 있어서, 아미노산 위치 81 및 82가 Phe81 및 Lys82인 항체.
  77. 제65항 내지 제76항 중 어느 한 항에 있어서, 항체가 아미노산 위치 81 및 82 중 하나 또는 둘 다를 포함하는 인간 TIGIT 상의 에피토프에 결합하는 것인 항체.
  78. 인간 TIGIT에 결합하는 항체이고, 여기서 인간 TIGIT에 결합된 경우에 아미노산 위치 81 및 82 중 하나 또는 둘 다에 결합하고, 항체가 비-푸코실화된 것인 항체.
  79. 제78항에 있어서, 항체가 아미노산 위치 81 및 82 둘 다에 결합하는 것인 항체.
  80. 제78항 또는 제79항에 있어서, 아미노산 위치 81 및 82가 Phe81 및 Lys82인 항체.
  81. 인간 TIGIT에 결합하는 항체이고, 여기서 항체가 아미노산 위치 81 및 82 중 하나 또는 둘 다를 포함하는 인간 TIGIT 상의 에피토프에 결합하고, 항체가 비-푸코실화된 것인 항체.
  82. 제77항 또는 제81항에 있어서, 에피토프가 위치 81의 Phe을 포함하는 것인 항체.
  83. 제77항, 제81항, 및 제82항 중 어느 한 항에 있어서, 에피토프가 위치 82의 Lys 또는 Ser을 포함하는 것인 항체.
  84. 제77항 및 제81항 내지 제83항 중 어느 한 항에 있어서, 에피토프가 위치 81의 Phe 및 위치 82의 Lys 또는 Ser을 포함하는 것인 항체.
  85. 제84항에 있어서, 에피토프가 Phe81 및 Lys82를 포함하는 것인 항체.
  86. 제77항 및 제81항 내지 제85항 중 어느 한 항에 있어서, 에피토프가 불연속 에피토프인 항체.
  87. 제77항 및 제81항 내지 제86항 중 어느 한 항에 있어서, 항체가 아미노산 위치 51, 52, 53, 54, 55, 73, 74, 75, 76, 77, 79, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 또는 93 중 하나 이상을 추가로 포함하는 인간 TIGIT 상의 에피토프에 결합하는 것인 항체.
  88. 제87항에 있어서, 에피토프가 Thr51, Ala52, Gln53, Val54, Thr55, Leu73, Gly74, Trp75, His76, Ile77, Pro79, Asp83, Arg84, Val85, Ala86, Pro87, Gly88, Pro89, Gly90, Leu91, Gly92, 및 Leu93으로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 아미노산 잔기를 추가로 포함하는 것인 항체.
  89. 제88항에 있어서, 에피토프가 아미노산 잔기 Thr51, Ala52, Gln53, Val54, Thr55, Gly74, Trp75, His76, Ile77, Phe81, Lys82, Pro87, Gly88, Pro89, Gly90, Leu91, Gly92, 및 Leu93을 포함하는 것인 항체.
  90. 제88항에 있어서, 에피토프가 아미노산 잔기 Ala52, Gln53, Leu73, Gly74, Trp75, Pro79, Phe81, Lys82, Asp83, Arg84, Val85, 및 Ala86을 포함하는 것인 항체.
  91. 제77항 및 제81항 내지 제90항 중 어느 한 항에 있어서, 에피토프가 서열 ICNADLGWHISPSFK (서열식별번호: 258)를 포함하는 것인 항체.
  92. 제65항 내지 제91항 중 어느 한 항에 있어서, 인간 TIGIT가 서열식별번호: 218의 서열을 포함하는 것인 항체.
  93. 제65항 내지 제92항 중 어느 한 항에 있어서, 항체가
    (a) 서열식별번호: 4, 서열식별번호: 22, 서열식별번호: 40, 서열식별번호: 58, 서열식별번호: 76, 서열식별번호: 94, 서열식별번호: 112, 서열식별번호: 130, 서열식별번호: 148, 서열식별번호: 166, 서열식별번호: 184, 서열식별번호: 202, 서열식별번호: 221, 서열식별번호: 224, 서열식별번호: 226, 서열식별번호: 231, 서열식별번호: 233, 서열식별번호: 239, 서열식별번호: 243, 서열식별번호: 283, 서열식별번호: 284, 서열식별번호: 293, 서열식별번호: 294, 서열식별번호: 289, 및 서열식별번호: 290으로부터 선택된 서열을 포함하는 중쇄 CDR1;
    (b) 서열식별번호: 6, 서열식별번호: 24, 서열식별번호: 42, 서열식별번호: 60, 서열식별번호: 78, 서열식별번호: 96, 서열식별번호: 114, 서열식별번호: 132, 서열식별번호: 150, 서열식별번호: 168, 서열식별번호: 186, 서열식별번호: 204, 서열식별번호: 222, 서열식별번호: 225, 서열식별번호: 227, 서열식별번호: 229, 서열식별번호: 232, 서열식별번호: 234, 서열식별번호: 238, 서열식별번호: 240, 서열식별번호: 285, 서열식별번호: 297, 서열식별번호: 291, 및 서열식별번호: 295로부터 선택된 서열을 포함하는 중쇄 CDR2;
    (c) 서열식별번호: 8, 서열식별번호: 26, 서열식별번호: 44, 서열식별번호: 62, 서열식별번호: 80, 서열식별번호: 98, 서열식별번호: 116, 서열식별번호: 134, 서열식별번호: 152, 서열식별번호: 170, 서열식별번호: 188, 서열식별번호: 206, 서열식별번호: 223, 서열식별번호: 228, 서열식별번호: 230, 서열식별번호: 235, 서열식별번호: 236, 서열식별번호: 237, 서열식별번호: 241, 서열식별번호: 242, 서열식별번호: 244, 서열식별번호: 286, 서열식별번호: 292, 및 서열식별번호: 296으로부터 선택된 서열을 포함하는 중쇄 CDR3;
    (d) 서열식별번호: 13, 서열식별번호: 31, 서열식별번호: 49, 서열식별번호: 67, 서열식별번호: 85, 서열식별번호: 103, 서열식별번호: 121, 서열식별번호: 139, 서열식별번호: 157, 서열식별번호: 175, 서열식별번호: 193, 서열식별번호: 211, 및 서열식별번호: 287로부터 선택된 서열을 포함하는 경쇄 CDR1;
    (e) 서열식별번호: 15, 서열식별번호: 33, 서열식별번호: 51, 서열식별번호: 69, 서열식별번호: 87, 서열식별번호: 105, 서열식별번호: 123, 서열식별번호: 141, 서열식별번호: 159, 서열식별번호: 177, 서열식별번호: 195, 서열식별번호: 213, 및 서열식별번호: 288로부터 선택된 서열을 포함하는 경쇄 CDR2; 또는
    (f) 서열식별번호: 17, 서열식별번호: 35, 서열식별번호: 53, 서열식별번호: 71, 서열식별번호: 89, 서열식별번호: 107, 서열식별번호: 125, 서열식별번호: 143, 서열식별번호: 161, 서열식별번호: 179, 서열식별번호: 197, 및 서열식별번호: 215로부터 선택된 서열을 포함하는 경쇄 CDR3
    중 하나 이상을 포함하는 것인 항체.
  94. 제93항에 있어서, 항체가
    (a) 서열식별번호: 58, 서열식별번호: 283, 서열식별번호: 284, 서열식별번호: 224, 서열식별번호: 293, 서열식별번호: 294, 서열식별번호: 226, 서열식별번호: 289, 및 서열식별번호: 290으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR1 서열;
    (b) 서열식별번호: 60, 서열식별번호: 285, 서열식별번호: 225, 서열식별번호: 297, 서열식별번호: 227, 서열식별번호: 291, 서열식별번호: 229, 및 서열식별번호: 295로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR2 서열;
    (c) 서열식별번호: 62, 서열식별번호: 286, 서열식별번호: 228, 서열식별번호: 292, 서열식별번호: 230, 및 서열식별번호: 296으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR3 서열;
    (d) 서열식별번호: 67 및 서열식별번호: 287로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR1 서열;
    (e) 서열식별번호: 69 및 서열식별번호: 288로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR2 서열; 및/또는
    (f) 서열식별번호: 71의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR3 서열
    을 포함하는 것인 항체.
  95. 제94항에 있어서, 항체가
    (a) 각각 서열식별번호: 4, 6, 8, 13, 15, 및 17; 또는
    (b) 각각 서열식별번호: 22, 24, 26, 31, 33, 및 35; 또는
    (c) 각각 서열식별번호: 40, 42, 44, 49, 51, 및 53; 또는
    (d) 각각 서열식별번호: 58, 60, 62, 67, 69, 및 71; 또는
    (e) 각각 서열식별번호: 76, 78, 80, 85, 87, 및 89; 또는
    (f) 각각 서열식별번호: 94, 96, 98, 103, 105, 및 107; 또는
    (g) 각각 서열식별번호: 112, 114, 116, 121, 123, 및 125; 또는
    (h) 각각 서열식별번호: 130, 132, 134, 139, 141, 및 143; 또는
    (i) 각각 서열식별번호: 148, 150, 152, 157, 159, 및 161; 또는
    (j) 각각 서열식별번호: 166, 168, 170, 175, 177, 및 179; 또는
    (k) 각각 서열식별번호: 184, 186, 188, 193, 195, 및 197; 또는
    (l) 각각 서열식별번호: 202, 204, 206, 211, 213, 및 215; 또는
    (m) 각각 서열식별번호: 221, 222, 223, 13, 15, 및 17; 또는
    (n) 각각 서열식별번호: 224, 225, 62, 67, 69, 및 71; 또는
    (o) 각각 서열식별번호: 226, 227, 228, 67, 69, 및 71; 또는
    (p) 각각 서열식별번호: 224, 229, 230, 67, 69, 및 71; 또는
    (q) 각각 서열식별번호: 224, 227, 230, 67, 69, 및 71; 또는
    (r) 각각 서열식별번호: 231, 232, 235, 103, 105, 및 107; 또는
    (s) 각각 서열식별번호: 233, 234, 236, 103, 105, 및 107; 또는
    (t) 각각 서열식별번호: 233, 234, 237, 103, 105, 및 107; 또는
    (u) 각각 서열식별번호: 166, 238, 170, 175, 177, 및 179; 또는
    (v) 각각 서열식별번호: 239, 240, 170, 175, 177, 및 179; 또는
    (w) 각각 서열식별번호: 239, 240, 241, 175, 177, 및 179; 또는
    (x) 각각 서열식별번호: 239, 240, 242, 175, 177, 및 179; 또는
    (y) 각각 서열식별번호: 243, 168, 244, 175, 177, 및 179
    의 서열을 포함하는 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 및 경쇄 CDR1, CDR 및 CDR3을 포함하는 것인 항체.
  96. 제65항 내지 제95항 중 어느 한 항에 있어서, 항체가
    (a) 각각 서열식별번호: 58, 60, 62, 67, 69, 및 71; 또는
    (b) 각각 서열식별번호: 283, 285, 62, 287, 288, 및 71; 또는
    (c) 각각 서열식별번호: 284, 60, 286, 67, 69, 및 71
    의 서열을 포함하는 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 및 경쇄 CDR1, CDR 및 CDR3을 포함하는 것인 항체.
  97. 제65항 내지 제96항 중 어느 한 항에 있어서, 항체가
    (a) 서열식별번호: 1, 서열식별번호: 19, 서열식별번호: 37, 서열식별번호: 55, 서열식별번호: 73, 서열식별번호: 91, 서열식별번호: 109, 서열식별번호: 127, 서열식별번호: 145, 서열식별번호: 163, 서열식별번호: 181, 서열식별번호: 199, 서열식별번호: 245, 서열식별번호: 246, 서열식별번호: 247, 서열식별번호: 248, 서열식별번호: 249, 서열식별번호: 250, 서열식별번호: 251, 서열식별번호: 252, 서열식별번호: 253, 서열식별번호: 254, 서열식별번호: 255, 서열식별번호: 256, 또는 서열식별번호: 257에 대한 적어도 90%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역; 및/또는
    (b) 서열식별번호: 10, 서열식별번호: 28, 서열식별번호: 46, 서열식별번호: 64, 서열식별번호: 82, 서열식별번호: 100, 서열식별번호: 118, 서열식별번호: 136, 서열식별번호: 154, 서열식별번호: 172, 서열식별번호: 190, 또는 서열식별번호: 208에 대한 적어도 90%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역
    을 포함하는 것인 항체.
  98. 제65항 내지 제97항 중 어느 한 항에 있어서, 항체가
    (a) 서열식별번호: 1 또는 서열식별번호: 245에 대한 적어도 90%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열식별번호: 10에 대한 적어도 90%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역; 또는
    (b) 서열식별번호: 19에 대한 적어도 90%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열식별번호: 28에 대한 적어도 90%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역; 또는
    (c) 서열식별번호: 37에 대한 적어도 90%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열식별번호: 46에 대한 적어도 90%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역; 또는
    (d) 서열식별번호: 55, 서열식별번호: 246, 서열식별번호: 247, 서열식별번호: 248, 또는 서열식별번호: 249 중 어느 하나에 대한 적어도 90%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열식별번호: 64에 대한 적어도 90%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역; 또는
    (e) 서열식별번호: 73에 대한 적어도 90%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열식별번호: 82에 대한 적어도 90%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역; 또는
    (f) 서열식별번호: 91, 서열식별번호: 250, 서열식별번호: 251, 또는 서열식별번호: 252 중 어느 하나에 대한 적어도 90%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열식별번호: 100에 대한 적어도 90%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역; 또는
    (g) 서열식별번호: 109에 대한 적어도 90%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열식별번호: 118에 대한 적어도 90%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역; 또는
    (h) 서열식별번호: 127에 대한 적어도 90%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열식별번호: 136에 대한 적어도 90%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역; 또는
    (i) 서열식별번호: 145에 대한 적어도 90%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열식별번호: 154에 대한 적어도 90%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역; 또는
    (j) 서열식별번호: 163, 서열식별번호: 253, 서열식별번호: 254, 서열식별번호: 255, 서열식별번호: 256, 또는 서열식별번호: 257 중 어느 하나에 대한 적어도 90%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열식별번호: 172에 대한 적어도 90%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역; 또는
    (k) 서열식별번호: 181에 대한 적어도 90%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열식별번호: 190에 대한 적어도 90%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역; 또는
    (l) 서열식별번호: 199에 대한 적어도 90%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열식별번호: 208에 대한 적어도 90%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역
    을 포함하는 것인 항체.
  99. 제98항에 있어서, 항체가
    (a) 서열식별번호: 1 또는 서열식별번호: 245의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열식별번호: 10의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역; 또는
    (b) 서열식별번호: 19의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열식별번호: 28의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역; 또는
    (c) 서열식별번호: 37의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열식별번호: 46의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역; 또는
    (d) 서열식별번호: 55, 서열식별번호: 246, 서열식별번호: 247, 서열식별번호: 248, 또는 서열식별번호: 249 중 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열식별번호: 64의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역; 또는
    (e) 서열식별번호: 73의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열식별번호: 82의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역; 또는
    (f) 서열식별번호: 91, 서열식별번호: 250, 서열식별번호: 251, 또는 서열식별번호: 252 중 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열식별번호: 100의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역; 또는
    (g) 서열식별번호: 109의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열식별번호: 118의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역; 또는
    (h) 서열식별번호: 127의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열식별번호: 136의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역; 또는
    (i) 서열식별번호: 145의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열식별번호: 154의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역; 또는
    (j) 서열식별번호: 163, 서열식별번호: 253, 서열식별번호: 254, 서열식별번호: 255, 서열식별번호: 256, 또는 서열식별번호: 257 중 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열식별번호: 172의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역; 또는
    (k) 서열식별번호: 181의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열식별번호: 190의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역; 또는
    (l) 서열식별번호: 199의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열식별번호: 208의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역
    을 포함하는 것인 항체.
  100. 제65항 내지 제99항 중 어느 한 항에 있어서, 항체가 서열식별번호: 55의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역, 및 서열식별번호: 64의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는 것인 항체.
  101. 제65항 내지 제100항 중 어느 한 항에 있어서, 항체가 IgG 항체인 항체.
  102. 제101항에 있어서, 항체가 IgG1 항체 또는 IgG3 항체인 항체.
  103. 제65항 내지 제102항 중 어느 한 항에 있어서, 항체가 서열식별번호: 260, 262, 264, 266, 268, 270, 및 272로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄; 및 서열식별번호: 274의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하는 것인 항체.
  104. 제103항에 있어서, 항체가 서열식별번호: 260의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄; 및 서열식별번호: 274의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하는 것인 항체.
  105. 제103항에 있어서, 항체가 서열식별번호: 260의 아미노산 서열로 이루어진 중쇄; 및 서열식별번호: 274의 아미노산 서열로 이루어진 경쇄를 포함하는 것인 항체.
  106. 인간 TIGIT에 결합하는 항체이고, 여기서 항체가 서열식별번호: 260, 262, 264, 266, 268, 270, 및 272로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄; 및 서열식별번호: 274의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하는 것인 항체.
  107. 인간 TIGIT에 결합하는 항체이고, 여기서 항체가 서열식별번호: 260의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄; 및 서열식별번호: 274의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하는 것인 항체.
  108. 인간 TIGIT에 결합하는 항체이고, 여기서 항체가 서열식별번호: 260의 아미노산 서열로 이루어진 중쇄; 및 서열식별번호: 274의 아미노산 서열로 이루어진 경쇄를 포함하는 것인 항체.
  109. 제65항 내지 제108항 중 어느 한 항에 있어서, 항체가 항-PD-1 항체 또는 항-PD-L1 항체와의 상승작용을 나타내는 것인 항체.
  110. 제109항에 있어서, 상승작용이 (i) PD-1, TIGIT 및 CD226을 발현하는 저캣 이펙터 세포이며, 여기서 저캣 이펙터 세포가 IL-2 프로모터에 의해 구동되는 루시퍼라제 리포터 유전자를 포함하는 것인 저캣 이펙터 세포; 및 (ii) TCR 활성자, PD-L1 및 CD155를 발현하는 CHO-K1 인공 항원 제시 세포 (aAPC)를 포함하는 공동-배양물을 조성물 및 항-PD-1 항체 또는 항-PD-L1 항체와 접촉시키는 것을 포함하는 검정법을 사용하여 결정되는 것인 항체.
  111. 제65항 내지 제110항 중 어느 한 항에 있어서, 조절 T (Treg) 세포가 항체와 접촉된 인간 PBMC로부터 고갈되는 것인 항체.
  112. 제65항 내지 제111항 중 어느 한 항에 있어서, 항체와 접촉된 인간 PBMC에서 MCP1, IL-8, 및 MIP1α의 발현이 증가되는 것인 항체.
  113. 제65항 내지 제112항 중 어느 한 항에 있어서, 항체와 접촉된 경우에 단핵구/대식세포가 활성화되는 것인 항체.
  114. 제65항 내지 제113항 중 어느 한 항에 있어서, CD14+ 단핵구/대식세포가 항체와 접촉되는 경우에 CD86 및 MHCII가 상향조절되는 것인 항체.
  115. 제65항 내지 제114항 중 어느 한 항에 있어서, 항체와 접촉된 CD14+ 단핵구/대식세포가 항원 제시 세포로 성숙되는 것인 항체.
  116. 제65항 내지 제115항 중 어느 한 항에 있어서, 항체와 접촉된 기억 T 세포가 항원에 반응하여 증가된 IFNγ 생산을 나타내는 것인 항체.
  117. 제65항 내지 제116항 중 어느 한 항에 있어서, 항체와 접촉된 기억 T 세포가 항원에 대한 강화된 반응을 입증하는 것인 항체.
  118. 제65항 내지 제117항 중 어느 한 항에 있어서, 이펙터 기억 CD8+ T 세포 및/또는 이펙터 기억 CD4+ T 세포가 항체와 접촉된 종양에서 증가되는 것인 항체.
  119. 제65항 내지 제118항 중 어느 한 항에 있어서, 항체가 투여된 동물에서 항체가 Th1 반응을 강화시키는 것인 항체.
  120. 제65항 내지 제119항 중 어느 한 항에 있어서, 항체가 비-푸코실화되지 않은 동일한 항-TIGIT 항체에 비교하여 FcγRIIa 및/또는 FcγRIIb에 대한 더 낮은 결합 친화도를 갖는 것인 항체.
  121. 제65항 내지 제120항 중 어느 한 항에 있어서, 조성물이 단핵구 대식세포의 존재 하에 TIGIT를 발현하는 세포의 항체-의존적 세포성 포식작용 (ADCP)을 매개하는 것인 항체.
  122. 제65항 내지 제121항 중 어느 한 항에 있어서, 항체가 모노클로날인 항체.
  123. 제65항 내지 제122항 중 어느 한 항에 있어서, 항체가 완전 인간 항체인 항체.
  124. 제65항 내지 제123항 중 어느 한 항에 있어서, 항체가 키메라 항체인 항체.
  125. 제65항 내지 제92항 및 제109항 내지 제124항 중 어느 한 항에 있어서, 항체가 인간화된 것인 항체.
  126. 제65항 내지 제125항 중 어느 한 항에 있어서, 항체가 항체 단편인 항체.
  127. 제126항에 있어서, 항체 단편이 Fab, Fab', F(ab')2, scFv, 또는 디아바디인 항체.
  128. 제65항 내지 제127항 중 어느 한 항에 있어서, 항체가 이중특이적 항체인 항체.
  129. 제65항 내지 제128항 중 어느 한 항에 있어서, 항체가 항체-약물 접합체인 항체.
  130. 제1항 내지 제64항 중 어느 한 항의 조성물 또는 제65항 내지 제129항 중 어느 한 항의 항체, 및 제약상 허용되는 담체를 포함하는 제약 제형.
  131. (i) 제106항 내지 제108항 중 어느 한 항의 항체의 중쇄; (ii) 제106항 내지 제108항 중 어느 한 항의 항체의 경쇄; 또는 (iii) 제106항 내지 제108항 중 어느 한 항의 항체의 중쇄 및 경쇄를 코딩하는 단리된 폴리뉴클레오티드.
  132. 제131항에 있어서, 폴리뉴클레오티드가 (i) 서열식별번호: 259, 261, 163, 265, 267, 269, 및 271로부터 선택된 뉴클레오티드 서열; 또는 (ii) 서열식별번호: 273의 뉴클레오티드 서열; 또는 (iii) 서열식별번호: 259, 261, 263, 265, 267, 269, 및 271로부터 선택된 뉴클레오티드 서열, 및 서열식별번호: 273의 뉴클레오티드 서열을 포함하는 것인 단리된 폴리뉴클레오티드.
  133. 제131항 또는 제132항의 폴리뉴클레오티드를 포함하는 벡터.
  134. 제131항 또는 제132항의 단리된 폴리뉴클레오티드, 또는 제133항의 벡터를 포함하는 단리된 숙주 세포.
  135. 제106항 내지 제108항 중 어느 한 항의 항체를 발현하는 단리된 숙주 세포.
  136. 제134항 또는 제135항에 있어서, 비-푸코실화 항체를 생산하도록 조작된 숙주 세포.
  137. 제134항 내지 제136항 중 어느 한 항의 숙주 세포를 항체를 생산하는 데 적절한 조건 하에 인큐베이션하는 것을 포함하는, 인간 TIGIT에 결합하는 항체를 생산하는 방법.
  138. 제137항에 있어서, 숙주 세포가 비-푸코실화 항체를 생산하도록 조작된 것인 방법.
  139. 제137항에 있어서, 숙주 세포가 비-푸코실화 항체를 생산하는 데 적절한 조건 하에 푸코스 유사체의 존재 하에 배양되는 것인 방법.
  140. 제137항 내지 제139항 중 어느 한 항에 있어서, 항체를 단리하는 것을 추가로 포함하는 방법.
  141. 인간 TIGIT에 결합하는 단리된 항체의 조성물이고, 여기서 조성물 내의 항체의 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99%가 비-푸코실화되고, 항체가 제138항 내지 제140항 중 어느 한 항의 방법에 생산되는 것인 조성물.
  142. 인간 TIGIT에 결합하는 단리된 항체의 조성물이고, 여기서 조성물 내의 항체의 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99%가 비-푸코실화되고, 항체가 제134항 또는 제135항의 숙주 세포를 비-푸코실화 항체를 생산하는 데 적절한 조건 하에 인큐베이션하고, 항체를 단리하여 단리된 항체의 조성물을 형성시키는 것을 포함하는 방법에 의해 생산되는 것인 조성물.
  143. 제142항에 있어서, 숙주 세포가 비-푸코실화 항체를 생산하도록 조작된 것인 조성물.
  144. 제142항에 있어서, 숙주 세포가 비-푸코실화 항체를 생산하는 데 적절한 조건 하에 푸코스 유사체의 존재 하에 배양되는 것인 조성물.
  145. (i) 제1항 내지 제63항 중 어느 한 항의 조성물의 항체, 또는 (ii) 제65항 내지 제128항 중 어느 한 항의 항체를 코딩하는 뉴클레오티드 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 숙주 세포이고, 여기서 숙주 세포가 비-푸코실화 항체를 생산하도록 조작된 것인 숙주 세포.
  146. 제145항에 있어서, 폴리뉴클레오티드가 벡터인 숙주 세포.
  147. (i) 제1항 내지 제63항 중 어느 한 항의 조성물의 항체, 또는 (ii) 제65항 내지 제128항 중 어느 한 항의 항체를 발현하는 숙주 세포이고, 여기서 숙주 세포가 비-푸코실화 항체를 생산하도록 조작된 것인 숙주 세포.
  148. 제145항 내지 제147항 중 어느 한 항에 있어서, 숙주 세포가
    (a) 서열식별번호: 2, 서열식별번호: 20, 서열식별번호: 38, 서열식별번호: 56, 서열식별번호: 74, 서열식별번호: 92, 서열식별번호: 110, 서열식별번호: 128, 서열식별번호: 146, 서열식별번호: 164, 서열식별번호: 182, 서열식별번호: 200, 서열식별번호: 259, 서열식별번호: 265, 서열식별번호: 267, 서열식별번호: 269, 또는 서열식별번호: 271의 뉴클레오티드 서열; 및/또는
    (b) 서열식별번호: 11, 서열식별번호: 29, 서열식별번호: 47, 서열식별번호: 65, 서열식별번호: 83, 서열식별번호: 101, 서열식별번호: 119, 서열식별번호: 137, 서열식별번호: 155, 서열식별번호: 173, 서열식별번호: 191, 서열식별번호: 209, 또는 서열식별번호: 273의 뉴클레오티드 서열
    을 포함하는 것인 숙주 세포.
  149. 제145항 내지 제148항 중 어느 한 항의 숙주 세포를 비-푸코실화 항체를 생산하는 데 적절한 조건 하에 배양하는 것을 포함하는, TIGIT에 결합하는 비-푸코실화 항체를 생산하는 방법.
  150. 숙주 세포를 비-푸코실화 항체를 생산하는 데 적절한 조건 하에 푸코스 유사체의 존재 하에 배양하는 것을 포함하는, TIGIT에 결합하는 비-푸코실화 항체를 생산하는 방법이고, 여기서 숙주 세포가 (i) 제1항 내지 제63항 중 어느 한 항의 조성물의 항체, 또는 (ii) 제65항 내지 제128항 중 어느 한 항의 항체를 코딩하는 뉴클레오티드 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 것인 방법.
  151. 제150항에 있어서, 폴리뉴클레오티드가 벡터인 방법.
  152. 숙주 세포를 비-푸코실화 항체를 생산하는 데 적절한 조건 하에 푸코스 유사체의 존재 하에 배양하는 것을 포함하는, TIGIT에 결합하는 비-푸코실화 항체를 생산하는 방법이고, 여기서 숙주 세포가 (i) 제1항 내지 제63항 중 어느 한 항의 조성물의 항체, 또는 (ii) 제65항 내지 제128항 중 어느 한 항의 항체를 발현하는 것인 방법.
  153. 제150항 내지 제152항 중 어느 한 항에 있어서, 숙주 세포가
    (a) 서열식별번호: 2, 서열식별번호: 20, 서열식별번호: 38, 서열식별번호: 56, 서열식별번호: 74, 서열식별번호: 92, 서열식별번호: 110, 서열식별번호: 128, 서열식별번호: 146, 서열식별번호: 164, 서열식별번호: 182, 서열식별번호: 200, 서열식별번호: 259, 서열식별번호: 265, 서열식별번호: 267, 서열식별번호: 269, 또는 서열식별번호: 271의 뉴클레오티드 서열; 및/또는
    (b) 서열식별번호: 11, 서열식별번호: 29, 서열식별번호: 47, 서열식별번호: 65, 서열식별번호: 83, 서열식별번호: 101, 서열식별번호: 119, 서열식별번호: 137, 서열식별번호: 155, 서열식별번호: 173, 서열식별번호: 191, 서열식별번호: 209, 또는 서열식별번호: 273의 뉴클레오티드 서열
    을 포함하는 것인 방법.
  154. 제150항 내지 제153항 중 어느 한 항에 있어서, 푸코스 유사체가 2-플루오로푸코스인 방법.
  155. 제149항 내지 제154항 중 어느 한 항에 있어서, 비-푸코실화 항체를 단리하는 것을 추가로 포함하는 방법.
  156. 인간 TIGIT에 결합하는 단리된 항체의 조성물이고, 여기서 조성물 내의 항체의 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99%가 비-푸코실화되고, 항체가 제149항 내지 제155항 중 어느 한 항의 방법에 의해 생산되는 것인 조성물.
  157. 인간 TIGIT에 결합하는 단리된 항체의 조성물이고, 여기서 조성물 내의 항체의 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99%가 비-푸코실화되고, 항체가 제145항 내지 제147항 중 어느 한 항의 숙주 세포를 비-푸코실화 항체를 생산하는 데 적절한 조건 하에 인큐베이션하고, 항체를 단리하여 단리된 항체의 조성물을 형성시키는 것을 포함하는 방법에 의해 생산되는 것인 조성물.
  158. 인간 TIGIT에 결합하는 단리된 항체의 조성물이고, 여기서 조성물 내의 항체의 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99%가 비-푸코실화되고, 항체가 비-푸코실화 항체를 생산하는 데 적절한 조건 하에 푸코스 유사체의 존재 하에 숙주 세포를 배양하는 것을 포함하는 방법에 의해 생산되고, 숙주 세포가 (i) 제1항 내지 제63항 중 어느 한 항의 조성물의 항체, 또는 (ii) 제65항 내지 제128항 중 어느 한 항의 항체를 코딩하는 뉴클레오티드 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 것인 조성물.
  159. 인간 TIGIT에 결합하는 단리된 항체의 조성물이고, 여기서 조성물 내의 항체의 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99%가 비-푸코실화되고, 항체가 비-푸코실화 항체를 생산하는 데 적절한 조건 하에 푸코스 유사체의 존재 하에 숙주 세포를 배양하는 것을 포함하는 방법에 의해 생산되고, 숙주 세포가 (i) 제1항 내지 제63항 중 어느 한 항의 조성물의 항체, 또는 (ii) 제65항 내지 제128항 중 어느 한 항의 항체를 발현하는 것인 조성물.
  160. 제1항 내지 제64항 중 어느 한 항의 조성물, 제65항 내지 제129항 중 어느 한 항의 항체, 또는 제130항의 제약 조성물; 및
    추가적인 치료제
    를 포함하는 키트.
  161. 제160항에 있어서, 추가적인 치료제가 항암제인 키트.
  162. 제160항 또는 제161항에 있어서, 추가적인 치료제가 항체인 키트.
  163. 제160항 내지 제162항 중 어느 한 항에 있어서, 추가적인 치료제가 T 세포 공동억제제의 길항제 또는 억제제; T 세포 공동활성자의 효능제; 면역 자극 시토카인; 또는 SGN-2FF인 키트.
  164. 제160항 내지 제163항 중 어느 한 항에 있어서, 추가적인 치료제가 CD25, PD-1, PD-L1, Tim3, Lag3, CTLA4, 41BB, OX40, CD3, CD40, CD47M, GM-CSF, CSF1R, TLR, STING, RIGI, TAM 수용체 키나제, NKG2A, NKG2D, GD2, HER2, EGFR, PDGFRα, SLAMF7, VEGF, CTLA-4, CD20, cCLB8, KIR, 및 CD52로부터 선택된 단백질에 결합하는 것인 키트.
  165. 제160항 내지 제164항 중 어느 한 항에 있어서, 추가적인 치료제가 항-CD25 항체, 항-PD-1 항체, 항-PD-L1 항체, 항-Tim3 항체, 항-Lag3 항체, 항-CTLA4 항체, 항-41BB 항체, 항-OX40 항체, 항-CD3 항체, 항-CD40 항체, 항-CD47M 항체, 항-CSF1R 항체, 항-TLR 항체, 항-STING 항체, 항-RIGI 항체, 항-TAM 수용체 키나제 항체, 항-NKG2A 항체, 항-NKG2D 항체, 항-GD2 항체, 항-HER2 항체, 항-EGFR 항체, 항-PDGFR-α-항체, 항-SLAMF7 항체, 항-VEGF 항체, 항-CTLA-4 항체, 항-CD20 항체, 항-cCLB8 항체, 항-KIR 항체, 및 항-CD52 항체로부터 선택되는 것인 키트.
  166. 제160항 내지 제165항 중 어느 한 항에 있어서, 추가적인 치료제가 IL-15, IL-21, IL-2, GM-CSF, M-CSF, G-CSF, IL-1, IL-3, IL-12, 및 IFNγ로부터 선택된 시토카인을 포함하는 것인 키트.
  167. 제160항 내지 제165항 중 어느 한 항에 있어서, 추가적인 치료제가 SEA-CD40, 아벨루맙, 더발루맙, 니볼루맙, 펨브롤리주맙, 피딜리주맙, 아테졸리주맙, Hul4.18K322A, Hu3F8, 디니툭시맙, 트라스투주맙, 세툭시맙, 올라라투맙, 네시투무맙, 엘로투주맙, 라무시루맙, 퍼투주맙, 이필리무맙, 베바시주맙, 리툭시맙, 오비누투주맙, 실툭시맙, 오파투무맙, 리릴루맙, 및 알렘투주맙으로부터 선택되는 것인 키트.
  168. 제160항 또는 제161항에 있어서, 추가적인 치료제가 알킬화제 (예를 들어, 시클로포스파미드, 이포스파미드, 클로람부실, 부술판, 멜팔란, 메클로레타민, 우라무스틴, 티오테파, 니트로소우레아, 또는 테모졸로미드), 안트라사이클린 (예를 들어, 독소루비신, 아드리아마이신, 다우노루비신, 에피루비신, 또는 미톡산트론), 세포골격 파괴제 (예를 들어, 파클리탁셀 또는 도세탁셀), 히스톤 데아세틸라제 억제제 (예를 들어, 보리노스탯 또는 로미뎁신), 토포이소머라제의 억제제 (예를 들어, 이리노테칸, 토포테칸, 암사크린, 에토포시드, 또는 테니포시드), 키나제 억제제 (예를 들어, 보르테조밉, 에를로티닙, 제피티닙, 이마티닙, 베무라페닙, 또는 비스모데깁), 뉴클레오시드 유사체 또는 전구물질 유사체 (예를 들어, 아자시티딘, 아자티오프린, 카페시타빈, 시타라빈, 플루오로우라실, 젬시타빈, 히드록시우레아, 메르캅토퓨린, 메토트렉세이트, 또는 티오구아닌), 펩티드 항생제 (예를 들어, 악티노마이신 또는 블레오마이신), 백금-기반 작용제 (예를 들어, 시스플라틴, 옥살로플라틴, 또는 카르보플라틴), 또는 식물 알칼로이드 (예를 들어, 빈크리스틴, 빈블라스틴, 비노렐빈, 빈데신, 포도필로톡신, 파클리탁셀, 또는 도세탁셀), 갈라딘, 탈리도미드, 레날리도미드, 및 포말리도미드로부터 선택되는 것인 키트.
  169. 치료적 유효량의 제1항 내지 제64항 중 어느 한 항의 조성물, 제65항 내지 제129항 중 어느 한 항의 항체, 또는 제130항의 제약 조성물을 대상체에게 투여하는 것을 포함하는, 대상체에서 암을 치료하는 방법.
  170. 제169항에 있어서, 암이 CD112 또는 CD155의 발현에 대해 강화된 암인 방법.
  171. 제169항 또는 제170항에 있어서, 암이 TIGIT를 발현하는 T 세포 또는 자연 킬러 (NK) 세포에 대해 강화된 암인 방법.
  172. 제169항 내지 제171항 중 어느 한 항에 있어서, 암이 방광암, 유방암, 자궁암, 자궁경부암, 난소암, 전립선암, 고환암, 식도암, 위장암, 위암, 췌장암, 결장직장암, 결장암, 신장암, 투명세포 신장 암종, 두경부암, 폐암, 폐 선암종, 위암, 생식세포암, 골암, 간암, 갑상선암, 피부암, 흑색종, 중추신경계의 신생물, 중피종, 림프종, 백혈병, 만성 림프구성 백혈병, 미만성 거대 B 세포 림프종, 소포 림프종, 호지킨 림프종, 골수종, 또는 육종인 방법.
  173. 제172항에 있어서, 암이 림프종, 백혈병, 만성 림프구성 백혈병, 미만성 거대 B 세포 림프종, 소포 림프종, 또는 호지킨 림프종인 방법.
  174. 제169항 내지 제173항 중 어느 한 항에 있어서, 대상체에게 치료적 유효량의 추가적인 치료제를 투여하는 것을 추가로 포함하는 방법.
  175. 제174항에 있어서, 추가적인 치료제가 항암제인 방법.
  176. 제174항 또는 제175항에 있어서, 추가적인 치료제가 항체인 방법.
  177. 제174항 내지 제176항 중 어느 한 항에 있어서, 추가적인 치료제가 T 세포 공동억제제의 길항제 또는 억제제; T 세포 공동활성자의 효능제; 또는 면역 자극 시토카인; 또는 SGN-2FF인 방법.
  178. 제174항 내지 제177항 중 어느 한 항에 있어서, 추가적인 치료제가 CD25, PD-1, PD-L1, Tim3, Lag3, CTLA4, 41BB, OX40, CD3, CD40, CD47M, GM-CSF, CSF1R, TLR, STING, RIGI, TAM 수용체 키나제, NKG2A, NKG2D, GD2, HER2, EGFR, PDGFRα, SLAMF7, VEGF, CTLA-4, CD20, cCLB8, KIR, 및 CD52로부터 선택된 단백질에 결합하는 것인 방법.
  179. 제178항에 있어서, 추가적인 치료제가 항-CD25 항체, 항-PD-1 항체, 항-PD-L1 항체, 항-Tim3 항체, 항-Lag3 항체, 항-CTLA4 항체, 항-41BB 항체, 항-OX40 항체, 항-CD3 항체, 항-CD40 항체, 항-CD47M 항체, 항-CSF1R 항체, 항-TLR 항체, 항-STING 항체, 항-RIGI 항체, 항-TAM 수용체 키나제 항체, 항-NKG2A 항체, 항-NKG2D 항체, 항-GD2 항체, 항-HER2 항체, 항-EGFR 항체, 항-PDGFR-α-항체, 항-SLAMF7 항체, 항-VEGF 항체, 항-CTLA-4 항체, 항-CD20 항체, 항-cCLB8 항체, 항-KIR 항체, 및 항-CD52 항체로부터 선택되는 것인 방법.
  180. 제174항 또는 제175항에 있어서, 추가적인 치료제가 IL-15, IL-21, IL-2, GM-CSF, M-CSF, G-CSF, IL-1, IL-3, IL-12, 및 IFNγ로부터 선택된 시토카인을 포함하는 것인 방법.
  181. 제174항 내지 제179항 중 어느 한 항에 있어서, 추가적인 치료제가 SEA-CD40, 아벨루맙, 더발루맙, 니볼루맙, 펨브롤리주맙, 피딜리주맙, 아테졸리주맙, Hul4.18K322A, Hu3F8, 디니툭시맙, 트라스투주맙, 세툭시맙, 올라라투맙, 네시투무맙, 엘로투주맙, 라무시루맙, 퍼투주맙, 이필리무맙, 베바시주맙, 리툭시맙, 오비누투주맙, 실툭시맙, 오파투무맙, 리릴루맙, 및 알렘투주맙으로부터 선택되는 것인 방법.
  182. 제174항 또는 제175항에 있어서, 추가적인 치료제가 알킬화제 (예를 들어, 시클로포스파미드, 이포스파미드, 클로람부실, 부술판, 멜팔란, 메클로레타민, 우라무스틴, 티오테파, 니트로소우레아, 또는 테모졸로미드), 안트라사이클린 (예를 들어, 독소루비신, 아드리아마이신, 다우노루비신, 에피루비신, 또는 미톡산트론), 세포골격 파괴제 (예를 들어, 파클리탁셀 또는 도세탁셀), 히스톤 데아세틸라제 억제제 (예를 들어, 보리노스탯 또는 로미뎁신), 토포이소머라제의 억제제 (예를 들어, 이리노테칸, 토포테칸, 암사크린, 에토포시드, 또는 테니포시드), 키나제 억제제 (예를 들어, 보르테조밉, 에를로티닙, 제피티닙, 이마티닙, 베무라페닙, 또는 비스모데깁), 뉴클레오시드 유사체 또는 전구물질 유사체 (예를 들어, 아자시티딘, 아자티오프린, 카페시타빈, 시타라빈, 플루오로우라실, 젬시타빈, 히드록시우레아, 메르캅토퓨린, 메토트렉세이트, 또는 티오구아닌), 펩티드 항생제 (예를 들어, 악티노마이신 또는 블레오마이신), 백금-기반 작용제 (예를 들어, 시스플라틴, 옥살로플라틴, 또는 카르보플라틴), 또는 식물 알칼로이드 (예를 들어, 빈크리스틴, 빈블라스틴, 비노렐빈, 빈데신, 포도필로톡신, 파클리탁셀, 또는 도세탁셀), 갈라딘, 탈리도미드, 레날리도미드, 및 포말리도미드로부터 선택되는 것인 방법.
  183. 제174항 내지 제182항 중 어느 한 항에 있어서, 조성물, 항체 또는 제약 조성물이 추가적인 치료제와 동반적으로 투여되는 것인 방법.
  184. 제174항 내지 제183항 중 어느 한 항에 있어서, 조성물, 항체 또는 제약 조성물이 추가적인 치료제에 대해 순차적으로 투여되는 것인 방법.
KR1020217008379A 2018-08-23 2019-08-22 항-tigit 항체 KR20210057053A (ko)

Applications Claiming Priority (7)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201862722063P 2018-08-23 2018-08-23
US62/722,063 2018-08-23
US201862734130P 2018-09-20 2018-09-20
US62/734,130 2018-09-20
US201962822674P 2019-03-22 2019-03-22
US62/822,674 2019-03-22
PCT/US2019/047607 WO2020041541A2 (en) 2018-08-23 2019-08-22 Anti-tigit antibodies

Publications (1)

Publication Number Publication Date
KR20210057053A true KR20210057053A (ko) 2021-05-20

Family

ID=67841280

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
KR1020217008379A KR20210057053A (ko) 2018-08-23 2019-08-22 항-tigit 항체

Country Status (14)

Country Link
US (2) US11401339B2 (ko)
EP (1) EP3841123A2 (ko)
JP (2) JP2021534196A (ko)
KR (1) KR20210057053A (ko)
CN (1) CN112638944A (ko)
AU (1) AU2019324170A1 (ko)
BR (1) BR112021003156A2 (ko)
CA (1) CA3107596A1 (ko)
IL (1) IL280780A (ko)
MA (1) MA53434A (ko)
MX (1) MX2021002002A (ko)
SG (1) SG11202101429YA (ko)
TW (1) TW202023625A (ko)
WO (1) WO2020041541A2 (ko)

Families Citing this family (20)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20230057899A1 (en) 2019-12-05 2023-02-23 Compugen Ltd. Anti-pvrig and anti-tigit antibodies for enhanced nk-cell based tumor killing
US20230173093A1 (en) 2020-04-10 2023-06-08 Seagen Inc. Charge variant linkers
AU2021284273A1 (en) 2020-06-02 2022-12-15 Arcus Biosciences, Inc. Antibodies to TIGIT
KR20230024368A (ko) 2020-06-18 2023-02-20 제넨테크, 인크. 항-tigit 항체 및 pd-1 축 결합 길항제를 사용한 치료
CN111718415B (zh) * 2020-07-03 2021-02-23 上海洛启生物医药技术有限公司 一种抗tigit纳米抗体及其应用
TW202216778A (zh) 2020-07-15 2022-05-01 美商安進公司 Ｔｉｇｉｔ及ｃｄ１１２ｒ阻斷
CN111763660A (zh) * 2020-08-07 2020-10-13 南京大学 一种重组溶瘤痘苗病毒及其制备方法和应用
US12036286B2 (en) 2021-03-18 2024-07-16 Seagen Inc. Selective drug release from internalized conjugates of biologically active compounds
MX2023011796A (es) 2021-04-09 2024-01-08 Seagen Inc Métodos de tratamiento del cáncer con anticuerpos inmunorreceptor de células t con dominios ig e itim (anti-tigit).
JP2024514673A (ja) 2021-04-20 2024-04-02 シージェン インコーポレイテッド 抗体依存性細胞傷害の調節
MX2023012707A (es) * 2021-05-04 2023-11-06 Agenus Inc Anticuerpos de la proteina inmunorreceptora de celulas t con dominios ig e itim (anti-tigit) y metodos de uso de estos.
CA3221398A1 (en) 2021-05-28 2022-12-01 Seagen Inc. Anthracycline antibody conjugates
EP4377350A2 (en) 2021-07-28 2024-06-05 Genentech, Inc. Methods and compositions for treating cancer
TW202321308A (zh) 2021-09-30 2023-06-01 美商建南德克公司 使用抗ｔｉｇｉｔ抗體、抗ｃｄ３８抗體及ｐｄ—１軸結合拮抗劑治療血液癌症的方法
WO2023178289A2 (en) 2022-03-17 2023-09-21 Seagen Inc. Camptothecin conjugates
WO2023215719A1 (en) 2022-05-02 2023-11-09 Arcus Biosciences, Inc. Anti-tigit antibodies and uses of the same
WO2023240058A2 (en) 2022-06-07 2023-12-14 Genentech, Inc. Prognostic and therapeutic methods for cancer
KR20230171885A (ko) * 2022-06-10 2023-12-21 메디맵바이오 주식회사 항-tigit 항체, 인터류킨-15, 및 인터류킨-15 수용체 알파 스시 도메인을 포함하는 융합 단백질 및 이의 용도
WO2024129756A1 (en) 2022-12-13 2024-06-20 Seagen Inc. Site-specific engineered cysteine antibody drug conjugates
WO2024191807A1 (en) 2023-03-10 2024-09-19 Seagen Inc. Methods of treating cancer with anti-tigit antibodies

Family Cites Families (188)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4816567A (en) 1983-04-08 1989-03-28 Genentech, Inc. Recombinant immunoglobin preparations
US4676980A (en) 1985-09-23 1987-06-30 The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Department Of Health And Human Services Target specific cross-linked heteroantibodies
US4946778A (en) 1987-09-21 1990-08-07 Genex Corporation Single polypeptide chain binding molecules
JPH0742304B2 (ja) 1986-12-05 1995-05-10 財団法人微生物化学研究会 新規なアンスラサイクリン誘導体およびその製造法
JP3101690B2 (ja) 1987-03-18 2000-10-23 エス・ビィ・２・インコーポレイテッド 変性抗体の、または変性抗体に関する改良
DE3712350A1 (de) 1987-04-11 1988-10-20 Behringwerke Ag Semisynthetische rhodomycine, verfahren zu ihrer herstellung und ihre verwendung als zytostatika
EP0335369A3 (en) 1988-03-29 1990-03-28 Zaidan Hojin Biseibutsu Kagaku Kenkyu Kai New anthracycline derivatives and processes for the preparation of the same
US5047335A (en) 1988-12-21 1991-09-10 The Regents Of The University Of Calif. Process for controlling intracellular glycosylation of proteins
ATE144793T1 (de) 1989-06-29 1996-11-15 Medarex Inc Bispezifische reagenzien für die aids-therapie
AP340A (en) 1990-06-11 1994-05-13 Iaf Biochem Int Heterocyclic anathracyclinone and anathracycline analogs
AU8295491A (en) 1990-06-29 1992-01-23 Biosource Technologies Incorporated Melanin production by transformed microorganisms
MY106399A (en) 1990-07-24 1995-05-30 Pfizer Cephalosporins and homologeus, preparation and pharmaceutical composition
US5192880A (en) 1990-11-13 1993-03-09 Nec Corporation High-speed emitter coupled logic circuit with large current driving capability
KR100211417B1 (ko) 1990-11-30 1999-10-01 유충식 L-탈로피라노시드 유도체 및 그의 제조방법
US5571894A (en) 1991-02-05 1996-11-05 Ciba-Geigy Corporation Recombinant antibodies specific for a growth factor receptor
NZ241606A (en) 1991-02-28 1994-08-26 Iaf Biochem Int Heteroanthracycline antitumor analogs, preparation and pharmaceutical compositions thereof; intermediates therefor
JP3025056B2 (ja) 1991-03-12 2000-03-27 財団法人微生物化学研究会 ２，６−ジデオキシ−２−フルオロ−ｌ−タロピラノース誘導体の製造法
US5278299A (en) 1991-03-18 1994-01-11 Scripps Clinic And Research Foundation Method and composition for synthesizing sialylated glycosyl compounds
JPH04290891A (ja) 1991-03-19 1992-10-15 Yasumitsu Tamura 新規なアンスラサイクリン系化合物
DE4111971C1 (ko) 1991-04-12 1992-03-12 Wolf-Dieter Dr. 7803 Gundelfingen De Fessner
US5552534A (en) 1991-08-22 1996-09-03 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Non-Peptide peptidomimetics
US5587458A (en) 1991-10-07 1996-12-24 Aronex Pharmaceuticals, Inc. Anti-erbB-2 antibodies, combinations thereof, and therapeutic and diagnostic uses thereof
ES2129458T3 (es) 1991-10-15 1999-06-16 Scripps Research Inst Produccion de carbohidratos fucosilados por sintesis con fucosilacion enzimatica de nucleotidos de azucares y regeneracion in situ de gdp-fucosa.
WO1993008829A1 (en) 1991-11-04 1993-05-13 The Regents Of The University Of California Compositions that mediate killing of hiv-infected cells
WO1993010260A1 (en) 1991-11-21 1993-05-27 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University Controlling degradation of glycoprotein oligosaccharides by extracellular glycosisases
CA2372813A1 (en) 1992-02-06 1993-08-19 L.L. Houston Biosynthetic binding protein for cancer marker
US5278311A (en) 1992-06-05 1994-01-11 E. R. Squibb & Sons, Inc. Nonionic radiographic contrast agents
US5736523A (en) 1992-11-09 1998-04-07 Biochem Pharma Inc. Antineoplastic heteronapthoquinones
DK76193D0 (da) 1993-06-25 1993-06-25 Astra Ab Kulhydratderivater
CA2126391C (en) 1993-09-13 2002-01-08 Nobuko Yamamoto Determination of nucleic acid by pcr, measurement of number of microbial cells, genes, or gene-copies by pcr, and measuring-kit employed for the same
GB9418260D0 (en) 1994-09-09 1994-10-26 Erba Carlo Spa Anthracycline derivatives
US5641870A (en) 1995-04-20 1997-06-24 Genentech, Inc. Low pH hydrophobic interaction chromatography for antibody purification
JPH08286368A (ja) 1995-04-14 1996-11-01 Toyo Ink Mfg Co Ltd 着色画像形成材料およびそれを用いた着色画像形成媒体と着色画像形成方法
US6245347B1 (en) 1995-07-28 2001-06-12 Zars, Inc. Methods and apparatus for improved administration of pharmaceutically active compounds
DE69601908T2 (de) 1995-09-08 1999-07-29 Zaidan Hojin Biseibutsu Kagaku Kenkyu Kai, Tokio/Tokyo Fluorenthaltende Anthracyclinderivate mit Mono- oder Di-0-aminoalkanoylaten Hydroxylgruppen in dem Zuckerrest
DE19541260A1 (de) 1995-11-06 1997-05-07 Lohmann Therapie Syst Lts Therapeutische Zubereitung zur transdermalen Applikation von Wirkstoffen durch die Haut
US5834597A (en) 1996-05-20 1998-11-10 Protein Design Labs, Inc. Mutated nonactivating IgG2 domains and anti CD3 antibodies incorporating the same
US6512010B1 (en) 1996-07-15 2003-01-28 Alza Corporation Formulations for the administration of fluoxetine
PL182601B1 (pl) 1996-07-17 2002-02-28 Waldpharm Sp Z Oo Sposób otrzymywania antybiotyków antracyklinowych
DE19640969A1 (de) 1996-10-04 1998-04-16 Bayer Ag 20-0-verknüpfte Glycokonjugate von Camptothecin
US5770407A (en) 1996-12-10 1998-06-23 The Scripps Research Institute Process for preparing nucleotide inhibitors of glycosyltransferases
FR2764304B1 (fr) 1997-06-06 1999-07-16 Rhone Poulenc Rorer Sa Nouvelle classe d'agents transfectants cationiques des acides nucleiques
JPH1135593A (ja) 1997-07-18 1999-02-09 Daikin Ind Ltd ２−フルオロフコシル−ｎ−アロイルグルコサミン誘導体及びその中間物、並びにそれらの製造方法
US6248864B1 (en) 1997-12-31 2001-06-19 Adherex Technologies, Inc. Compounds and methods and modulating tissue permeability
US20030175884A1 (en) 2001-08-03 2003-09-18 Pablo Umana Antibody glycosylation variants having increased antibody-dependent cellular cytotoxicity
AU3657899A (en) 1998-04-20 1999-11-08 James E. Bailey Glycosylation engineering of antibodies for improving antibody-dependent cellular cytotoxicity
US6312717B1 (en) 1998-07-07 2001-11-06 Bristol-Myers Squibb Company Method for treatment of anxiety and depression
SE9802864D0 (sv) 1998-08-27 1998-08-27 Pharmacia & Upjohn Ab Transdermally administered tolterodine as antimuscarinic agent for the treatment of overactive bladder
WO2000046750A1 (en) 1999-02-05 2000-08-10 Samsung Electronics Co., Ltd. Image texture retrieving method and apparatus thereof
ES2571230T3 (es) 1999-04-09 2016-05-24 Kyowa Hakko Kirin Co Ltd Procedimiento para controlar la actividad de una molécula inmunofuncional
US6544548B1 (en) 1999-09-13 2003-04-08 Keraplast Technologies, Ltd. Keratin-based powders and hydrogel for pharmaceutical applications
US20080050809A1 (en) 1999-09-28 2008-02-28 Alejandro Abuin Novel human kinases and polynucleotides encoding the same
US20040219521A1 (en) 2000-01-21 2004-11-04 Tang Y. Tom Novel nucleic acids and polypeptides
FR2807767B1 (fr) 2000-04-12 2005-01-14 Lab Francais Du Fractionnement Anticorps monoclonaux anti-d
US6589549B2 (en) 2000-04-27 2003-07-08 Macromed, Incorporated Bioactive agent delivering system comprised of microparticles within a biodegradable to improve release profiles
US6670330B1 (en) 2000-05-01 2003-12-30 Theodore J. Lampidis Cancer chemotherapy with 2-deoxy-D-glucose
US6696081B2 (en) 2000-06-09 2004-02-24 Duke University Carbohydrate based lipid compositions and supramolecular structures comprising same
CN1444590A (zh) 2000-06-26 2003-09-24 巴斯福股份公司 磷杂环已烷类化合物及其在烯烃醛化中的用途
US6946292B2 (en) 2000-10-06 2005-09-20 Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. Cells producing antibody compositions with increased antibody dependent cytotoxic activity
EP1504099A4 (en) 2001-12-10 2006-05-10 Nuvelo Inc NEW NUCLEIC ACIDS AND POLYPEPTIDES
WO2003068943A2 (en) 2002-02-13 2003-08-21 Incyte Corporation Secreted proteins
JP2005535290A (ja) 2002-02-22 2005-11-24 ジェネンテック・インコーポレーテッド 免疫関連疾患の治療のための組成物と方法
US7193069B2 (en) 2002-03-22 2007-03-20 Research Association For Biotechnology Full-length cDNA
AUPS247502A0 (en) 2002-05-22 2002-06-13 Griffith University An antimicrobial agent
US20040121370A1 (en) 2002-09-11 2004-06-24 Genentech, Inc. Novel composition and methods for the treatment of immune related diseases
JP2006521082A (ja) 2002-09-11 2006-09-21 ジェネンテック・インコーポレーテッド 免疫関連疾患の治療のための新規組成物と方法
CA2501239A1 (en) 2002-10-07 2004-04-22 Encore Pharmaceuticals, Inc. R-nsaid esters and their use
AU2004213053C1 (en) 2003-02-20 2009-07-16 Seagen Inc. Anti-CD70 antibody-drug conjugates and their use for the treatment of cancer and immune disorders
EP1613261A4 (en) 2003-04-09 2011-01-26 Novo Nordisk As INTRA-CELLULAR FORMATION OF PEPTIDE CONJUGATES
CA2528152A1 (en) 2003-06-03 2005-01-06 The Regents Of The University Of California Compositions and methods for treatment of disease with acetylated disaccharides
FR2858235B1 (fr) 2003-07-31 2006-02-17 Lab Francais Du Fractionnement Utilisation d'anticorps optimises en adcc pour traiter les patients faibles repondeurs
WO2005049562A2 (en) 2003-11-17 2005-06-02 Aromagen Corporation Novel cyclic oxygenated compounds having cooling, fragrance, and flavor properties, and uses thereof
WO2005061523A1 (en) 2003-12-23 2005-07-07 Progen Industries Limited Glycosaminoglycan (gag) mimetics
PL369253A1 (pl) 2004-07-23 2006-02-06 Zakład Badawczo-Produkcyjny SYNTEX Sp.z o.o. Sposób otrzymywania złożonych 2-deoksy-2-jodopiranozydów o wysokiej czystości, szczególnie Annamycyny o czystości farmaceutycznej
JP5042828B2 (ja) 2004-07-30 2012-10-03 ライナット ニューロサイエンス コーポレイション アミロイド−ベータ・ペプチドに対して向けられる抗体、および該抗体を用いる方法
WO2006040558A1 (en) 2004-10-15 2006-04-20 Astrazeneca Ab Substituted adenines and the use thereof
CA2587766A1 (en) 2004-11-10 2007-03-01 Macrogenics, Inc. Engineering fc antibody regions to confer effector function
EP1891107B1 (en) 2005-05-12 2011-07-06 ZymoGenetics, Inc. Compositions and methods for modulating immune responses
WO2006128103A2 (en) 2005-05-26 2006-11-30 Seattle Genetics, Inc. Humanized anti-cd40 antibodies and their methods of use
CA2634146A1 (en) 2005-12-19 2007-06-28 Genizon Biosciences Inc. Genemap of the human genes associated with crohn's disease
EP1986660A4 (en) 2006-02-24 2009-08-26 Univ Texas HEXOSE-BASED COMPOUNDS FOR TREATING CANCER
EP1991056A4 (en) 2006-02-24 2009-09-02 Univ Miami MANNOSEDERIVATES FOR THE KILLING OF TUMOR CELLS
US20100075377A1 (en) 2006-04-13 2010-03-25 West James W Tetramerizing polypeptides and methods of use
WO2007124283A2 (en) 2006-04-13 2007-11-01 Zymogenetics, Inc. Tetramerizing polypeptides and methods of use
US9149489B2 (en) 2006-04-27 2015-10-06 Board Of Regents, University Of Texas System Inhibitors of glycolysis useful in the treatment of brain tumors
EP2057465A4 (en) 2006-08-09 2010-04-21 Homestead Clinical Corp SPECIFIC ORGAN PROTEINS AND METHODS OF USE
DE102006053635B4 (de) 2006-11-14 2011-06-30 Sanofi-Aventis Deutschland GmbH, 65929 Neue mit Benzylresten substituierte 1,4-Benzothiepin-1,1-Dioxidderivate, diese Verbindungen enthaltende Arzneimittel und deren Verwendung
DE102006053637B4 (de) 2006-11-14 2011-06-30 Sanofi-Aventis Deutschland GmbH, 65929 Neue mit Fluor substituierte 1,4-Benzothiepin-1,1-Dioxidderivate, diese Verbindungen enthaltende Arzneimittel und deren Verwendung
ES2523915T5 (es) 2006-12-01 2022-05-26 Seagen Inc Agentes de unión a la diana variantes y usos de los mismos
WO2008131024A1 (en) 2007-04-17 2008-10-30 Board Of Regents, The University Of Texas System Iodo-hexose compounds useful to treat cancer
GB0714514D0 (en) * 2007-07-26 2007-09-05 Univ City Computer system
US8691730B2 (en) 2007-09-14 2014-04-08 Adimab, Llc Rationally designed, synthetic antibody libraries and uses therefor
US8877688B2 (en) 2007-09-14 2014-11-04 Adimab, Llc Rationally designed, synthetic antibody libraries and uses therefor
CA2971794C (en) 2007-10-04 2020-03-24 Zymogenetics, Inc. B7 family member zb7h6 and related compositions and methods
US8293720B2 (en) 2007-12-20 2012-10-23 Dogwood Pharmaceuticals, Inc. Substituted 4-{3-[6-amino-9-(3, 4-dihydroxy-tetrahydro-furan-2-yl)-9H-purin-2-yl]-prop-2-ynyl}-piperidine-1-carboxylic acid esters as A2AR agonists
CN104356177A (zh) 2008-02-12 2015-02-18 陶氏益农公司 杀虫组合物
JP5260093B2 (ja) 2008-03-10 2013-08-14 クラレノリタケデンタル株式会社 重合性単量体、重合性組成物及び歯科用材料
CA2978149C (en) 2008-03-21 2019-02-12 The General Hospital Corporation Inositol derivatives for the detection and treatment of alzheimer's disease and related disorders
CN101555262A (zh) 2008-04-08 2009-10-14 中国科学院生态环境研究中心 六水合三氯化铁(FeCl3·6H2O)选择性脱除糖类化合物异头碳酰基的方法
MX364200B (es) 2008-04-09 2019-04-16 Genentech Inc Composiciones y metodos novedosos para el tratamiento de las enfermedades relacionadas con la inmunidad.
CA2723197C (en) 2008-05-02 2017-09-19 Seattle Genetics, Inc. Methods and compositions for making antibodies and antibody derivatives with reduced core fucosylation
WO2009143515A2 (en) 2008-05-23 2009-11-26 University Of Miami Treatment using continuous low dose application of sugar analogs
UA107566C2 (uk) 2009-02-11 2015-01-26 ДАУ АГРОСАЙЄНСІЗ ЕлЕлСі Пестицидні композиції
AU2010225456B2 (en) 2009-03-18 2016-03-17 Carina Biotech Pty Ltd Biomarkers and uses thereof
EP2411529A4 (en) 2009-03-27 2012-09-19 Zacharon Pharmaceuticals Inc MODULATORS OF BIOSYNTHESIS OF N-BOUND GLYCANS
AU2010240569A1 (en) 2009-04-20 2011-10-20 Pfizer Inc. Control of protein glycosylation and compositions and methods relating thereto
WO2011019419A1 (en) 2009-08-11 2011-02-17 Arizona Board Of Regents, A Body Corporate Of The State Of Arizona Acting For And On Behalf Of Arizona State University Carbohydrate-mediated tumor targeting
US9198972B2 (en) 2010-01-28 2015-12-01 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Monomers and oligonucleotides comprising cycloaddition adduct(s)
WO2011137528A1 (en) 2010-05-06 2011-11-10 Simon Fraser University Methods and compounds for inhibiting glycosyltransferases
EP2580238A1 (en) 2010-06-09 2013-04-17 Zymogenetics, Inc. Dimeric vstm3 fusion proteins and related compositions and methods
EP2593594B1 (en) 2010-07-16 2017-09-27 Adimab, LLC Antibody libraries
US9504702B2 (en) 2010-08-05 2016-11-29 Seattle Genetics, Inc. Methods of inhibition of protein fucosylation in vivo using fucose analogs
WO2012021396A1 (en) 2010-08-12 2012-02-16 Novozymes, Inc. Compositions comprising a polypeptide having cellulolytic enhancing activity and an organic compound and uses thereof
TWI410431B (zh) 2010-12-22 2013-10-01 Ind Tech Res Inst 齊敦果酸衍生物在製備預防或治療ｃ型肝炎之藥物的用途
US8923278B2 (en) 2011-01-10 2014-12-30 Vtech Telecommunications Limited Peer-to-peer, internet protocol telephone system with system-wide configuration data
CA2824175A1 (en) 2011-01-11 2012-07-19 The University Of Texas M.D. Anderson Cancer Monosaccharide-based compounds for the treatment of proliferative and inflammatory dermatological diseases
US9493452B2 (en) 2011-03-24 2016-11-15 Southern Methodist University Compounds and derivatives of 2H-pyrido (3,2-b)(1, 4) oxazin 3)4H)-ones as raf kinase and LRRK2 inhibitors
SG195086A1 (en) 2011-05-31 2013-12-30 Merck Patent Gmbh Compounds containing hydrido-tricyano-borate anions
JP5980918B2 (ja) 2011-07-15 2016-08-31 メルク パテント ゲゼルシャフト ミット ベシュレンクテル ハフツングＭｅｒｃｋ Ｐａｔｅｎｔ Ｇｅｓｅｌｌｓｃｈａｆｔ ｍｉｔ ｂｅｓｃｈｒａｅｎｋｔｅｒ Ｈａｆｔｕｎｇ アルキル−シアノ−ボレートまたはアルキル−シアノ−フルオロボレートアニオンを含む化合物
WO2013068874A1 (en) 2011-11-11 2013-05-16 Pfizer Inc. Antibody-drug conjugates
CA2867129C (en) 2012-03-13 2023-11-21 Salk Institute For Biological Studies Selective cell targeting using adenovirus and chemical dimers
EP2833923A4 (en) 2012-04-02 2016-02-24 Moderna Therapeutics Inc MODIFIED POLYNUCLEOTIDES FOR THE PRODUCTION OF PROTEINS
US9283287B2 (en) 2012-04-02 2016-03-15 Moderna Therapeutics, Inc. Modified polynucleotides for the production of nuclear proteins
US9878056B2 (en) 2012-04-02 2018-01-30 Modernatx, Inc. Modified polynucleotides for the production of cosmetic proteins and peptides
EP2854850B1 (en) 2012-05-25 2021-05-26 Sloan Kettering Institute For Cancer Research Compositions for treating or preventing radiation disease and gi syndrome
JP2015520192A (ja) 2012-06-06 2015-07-16 オンコメッド ファーマシューティカルズ インコーポレイテッド Ｈｉｐｐｏ経路を調節する結合剤およびその使用
EP3508215A3 (en) 2012-12-03 2019-10-02 Bristol-Myers Squibb Company Enhancing anti-cancer activity of immunomodulatory fc fusion proteins
KR20150090919A (ko) 2012-12-04 2015-08-06 온코메드 파마슈티칼스, 인크. 결합제를 사용한 면역요법
CN104250302B (zh) 2013-06-26 2017-11-14 上海君实生物医药科技股份有限公司 抗pd‑1抗体及其应用
JP6636920B2 (ja) 2013-07-16 2020-01-29 ジェネンテック， インコーポレイテッド Ｐｄ−１軸結合アンタゴニスト及びｔｉｇｉｔ阻害剤を使用するがんの治療方法
WO2015036394A1 (en) 2013-09-10 2015-03-19 Medimmune Limited Antibodies against pd-1 and uses thereof
EP3060581A4 (en) 2013-10-25 2017-06-07 Dana-Farber Cancer Institute, Inc. Anti-pd-l1 monoclonal antibodies and fragments thereof
WO2015073682A1 (en) 2013-11-13 2015-05-21 Oregon Health And Science University Methods of detecting cells latently infected with hiv
DK3087098T3 (da) * 2013-12-24 2020-06-08 Janssen Pharmaceutica Nv Anti-Vista-antistoffer og -fragmenter
US20170107300A1 (en) 2014-03-21 2017-04-20 The Brigham And Women's Hospital, Inc. Methods and compositions for treatment of immune-related diseases or disorders and/or therapy monitoring
AU2015289621A1 (en) 2014-07-16 2017-01-12 Genentech, Inc. Methods of treating cancer using TIGIT inhibitors and anti-cancer agents
AU2015305754B2 (en) 2014-08-19 2018-10-25 Merck Sharp & Dohme Llc Anti-tigit antibodies
IL299075A (en) 2014-10-29 2023-02-01 Seagen Inc Dosage and administration of non-fucosylated anti-CD40 antibodies
AU2015343494A1 (en) 2014-11-06 2017-04-27 Genentech, Inc. Combination therapy comprising OX40 binding agonists and TIGIT inhibitors
WO2016073906A2 (en) 2014-11-06 2016-05-12 Scholar Rock, Inc. Transforming growth factor-related immunoassays
JP2018501302A (ja) 2014-11-06 2018-01-18 チルドレンズ リサーチ インスティテュート、チルドレンズ ナショナル メディカル センター 癌及び自己免疫疾患のための免疫療法剤
DK3220927T3 (en) 2014-11-20 2022-02-14 Promega Corp Systems and methods for assessing modulators of immune checkpoints
TWI595006B (zh) 2014-12-09 2017-08-11 禮納特神經系統科學公司 抗ｐｄ－１抗體類和使用彼等之方法
EP3916017A1 (en) 2014-12-22 2021-12-01 PD-1 Acquisition Group, LLC Anti-pd-1 antibodies
JP6180663B2 (ja) 2014-12-23 2017-08-16 ブリストル−マイヤーズ スクイブ カンパニーＢｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂ Ｃｏｍｐａｎｙ Ｔｉｇｉｔに対する抗体
EP3247408A4 (en) 2015-01-20 2018-08-22 Immunexcite, Inc. Compositions and methods for cancer immunotherapy
EP3259597B1 (en) 2015-02-19 2022-04-06 Compugen Ltd. Pvrig polypeptides and methods of treatment
RU2732042C2 (ru) 2015-02-19 2020-09-10 Компьюджен Лтд. Анти-pvrig антитела и способы применения
WO2016166139A1 (en) 2015-04-14 2016-10-20 Eberhard Karls Universität Tübingen Bispecific fusion proteins for enhancing immune responses of lymphocytes against tumor cells
WO2016168771A2 (en) 2015-04-17 2016-10-20 Alpine Immune Sciences, Inc. Immunomodulatory proteins with tunable affinities
WO2016179288A1 (en) 2015-05-04 2016-11-10 University Of Florida Research Foundation, Inc. Novel regulatory-cells, method for their isolation and uses
TWI715587B (zh) 2015-05-28 2021-01-11 美商安可美德藥物股份有限公司 Ｔｉｇｉｔ結合劑和彼之用途
WO2016196389A1 (en) 2015-05-29 2016-12-08 Bristol-Myers Squibb Company Treatment of renal cell carcinoma
WO2016196912A1 (en) 2015-06-03 2016-12-08 Dana-Farber Cancer Institute, Inc. Methods to induce conversion of regulatory t cells into effector t cells for cancer immunotherapy
JO3620B1 (ar) 2015-08-05 2020-08-27 Amgen Res Munich Gmbh مثبطات نقطة فحص مناعية للاستخدام في علاج سرطانات محمولة عبر الدم
CA2994555A1 (en) * 2015-08-14 2017-02-23 Merck Sharp & Dohme Corp. Anti-tigit antibodies
US20180244783A1 (en) 2015-08-31 2018-08-30 Oncomed Pharmaceuticals, Inc. Combination therapy for treatment of disease
WO2017040660A1 (en) 2015-08-31 2017-03-09 Oncomed Pharmaceuticals, Inc. Combination therapy for treatment of disease
EP3344658B1 (en) 2015-09-02 2022-05-11 Yissum Research Development Company of The Hebrew University of Jerusalem Ltd. Antibodies specific to human t-cell immunoglobulin and itim domain (tigit)
EP3344284A1 (en) 2015-09-04 2018-07-11 Memorial Sloan Kettering Cancer Center Immune cell compositions and methods of use
US20180256644A1 (en) 2015-09-14 2018-09-13 Alpine Immune Sciences, Inc. Tunable variant immunoglobulin superfamily domains and engineered cell therapy
JP2018531914A (ja) 2015-09-14 2018-11-01 コンパス セラピューティクス リミテッド ライアビリティ カンパニー ＣＤ１５５／ＴＩＧＩＴ経路およびＴＧＦ−βのアンタゴニストを介してがんを処置するための組成物および方法
CN113912724A (zh) * 2015-09-25 2022-01-11 豪夫迈·罗氏有限公司 抗tigit抗体和使用方法
JP6981973B2 (ja) 2015-10-01 2021-12-17 ヒート バイオロジクス，インコーポレイテッド Ｉ型及びｉｉ型細胞外ドメインを異種キメラタンパク質として連結する組成物及び方法
WO2017059095A1 (en) 2015-10-01 2017-04-06 Potenza Therapeutics, Inc. Anti-tigit antigen-binding proteins and methods of use thereof
CR20180234A (es) 2015-11-03 2018-09-11 Janssen Biotech Inc Anticuerpos que se unen especificamente a pd-1 y sus usos
MX2018006674A (es) 2015-12-04 2018-11-09 Seattle Genetics Inc Tratamiento de cancer usando 2-desoxi-2-fluoro-l-fucosa en combinacion con un inhibidor del punto de control.
CN109072194B (zh) 2015-12-09 2022-12-27 纪念斯隆-凯特林癌症中心 免疫细胞组合物及其使用方法
MX2018010445A (es) 2016-03-01 2019-10-17 Yissum Res Dev Co Of Hebrew Univ Jerusalem Ltd Anticuerpos especificos del receptor de poliovirus humano (rvp).
TWI752012B (zh) 2016-03-04 2022-01-11 美商Ｊｎ生物科學有限責任公司 針對tigit之抗體
US11446398B2 (en) 2016-04-11 2022-09-20 Obsidian Therapeutics, Inc. Regulated biocircuit systems
US11078282B2 (en) 2016-04-15 2021-08-03 Alpine Immune Sciences, Inc. CD80 variant immunomodulatory proteins and uses thereof
AU2017250358B2 (en) 2016-04-15 2023-06-01 Alpine Immune Sciences, Inc. ICOS ligand variant immunomodulatory proteins and uses thereof
WO2017191274A2 (en) 2016-05-04 2017-11-09 Curevac Ag Rna encoding a therapeutic protein
WO2017193059A1 (en) 2016-05-06 2017-11-09 The Regents Of The University Of California Systems and methods for targeting cancer cells
US20190391152A1 (en) 2016-05-16 2019-12-26 Checkmab S.R.L. Markers selectively deregulated in tumor-infiltrating regulatory t cells
WO2017220990A1 (en) 2016-06-20 2017-12-28 Kymab Limited Anti-pd-l1 antibodies
CA3032120A1 (en) 2016-07-28 2018-02-01 Alpine Immune Sciences, Inc. Cd155 variant immunomodulatory proteins and uses thereof
US11834490B2 (en) 2016-07-28 2023-12-05 Alpine Immune Sciences, Inc. CD112 variant immunomodulatory proteins and uses thereof
KR102585976B1 (ko) 2016-08-17 2023-10-05 컴퓨젠 엘티디. 항-tigit 항체, 항-pvrig 항체 및 이들의 조합
AU2017319151B2 (en) 2016-08-30 2024-01-11 Memorial Sloan Kettering Cancer Center Immune cell compositions and methods of use for treating viral and other infections
WO2018041120A1 (en) 2016-08-31 2018-03-08 Beijing Biocytogen Co., Ltd Genetically modified non-human animal with human or chimeric tigit
IL311841A (en) 2016-09-10 2024-05-01 Yeda Res & Dev Reduction of the level of regulatory T cells or their activity for the treatment of diseases and damages in the central nervous system
EP3293271A1 (en) 2016-09-12 2018-03-14 The Provost, Fellows, Foundation Scholars, & the other members of Board, of the College of the Holy & Undiv. Trinity of Queen Elizabeth near Dublin Marker and target as a diagnostic variable and target for therapy of metastatic cancer
US20190225701A1 (en) 2016-09-26 2019-07-25 The Brigham And Women's Hospital, Inc. Regulators of b cell-mediated immunosuppression
US10759855B2 (en) 2016-12-02 2020-09-01 Rigel Pharmaceuticals, Inc. Antigen binding molecules to TIGIT
CN111050788A (zh) 2017-02-28 2020-04-21 西雅图基因公司 抗tigit抗体
JOP20190203A1 (ar) 2017-03-30 2019-09-03 Potenza Therapeutics Inc بروتينات رابطة لمولد ضد مضادة لـ tigit وطرق استخدامها

Also Published As

Publication number Publication date
WO2020041541A9 (en) 2020-08-06
JP2023182854A (ja) 2023-12-26
AU2019324170A1 (en) 2021-02-18
US20200062859A1 (en) 2020-02-27
MX2021002002A (es) 2021-05-31
US11401339B2 (en) 2022-08-02
WO2020041541A3 (en) 2020-03-26
JP2021534196A (ja) 2021-12-09
CA3107596A1 (en) 2020-02-27
IL280780A (en) 2021-04-29
SG11202101429YA (en) 2021-03-30
US20230050440A1 (en) 2023-02-16
CN112638944A (zh) 2021-04-09
TW202023625A (zh) 2020-07-01
BR112021003156A2 (pt) 2021-05-11
WO2020041541A2 (en) 2020-02-27
MA53434A (fr) 2021-12-01
EP3841123A2 (en) 2021-06-30

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US11401339B2 (en) Anti-TIGIT antibodies
JP7277047B2 (ja) 抗ヒトｖｉｓｔａ抗体およびその使用
KR102379464B1 (ko) 항-pd-l1 항체
KR102365972B1 (ko) 항-pd-1 항체 및 이의 용도
EP3152235B1 (en) Tri-specific binding molecules and methods of use thereof
AU2014268298B2 (en) Anti-B7-H5 antibodies and their uses
TWI654201B (zh) Ｐｄ－１抗體、其抗原結合片段及其醫藥用途
JP2023519254A (ja) がんを処置するための抗ｃｃｒ８抗体
JP6976322B2 (ja) 新規抗ｃｔｌａ４抗体
CN110267989B (zh) 抗cd40抗体、其抗原结合片段及其医药用途
EP3956034A1 (en) Antagonists anti-cd7 antibodies
AU2018240117A1 (en) Methods for preventing and treating heart disease
KR20210104064A (ko) 항-il-27 항체 및 그의 용도
TW202039564A (zh) 抗ｃｄ９６抗體及其使用方法
KR20220008820A (ko) Cd40과 fap에 결합하는 이중 특이적 항체
KR20230104611A (ko) 항-cd94 항체 및 이의 사용 방법
TW201121569A (en) Treatment of cancer involving mutated KRAS or BRAF genes
AU2021400733A1 (en) Cd40 binding molecules and uses thereof
TWI806870B (zh) 抗pd-1抗體及其用途
WO2024199454A1 (en) Antibodies and variants thereof against human cluster of differentiation 3 protein
RU2779128C2 (ru) Антитело к cd40, его антигенсвязывающий фрагмент и его медицинское применение
KR20230110523A (ko) 델타-유사 리간드 3(dll3) 항원 결합 영역을 포함하는 단백질 및 그의 용도
TW202411252A (zh) 抗pd-1抗體及其用途