CN111050788A - 抗tigit抗体 - Google Patents

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C·比尔斯
S·彼德森
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Abstract

提供了与人TIGIT(具有Ig和ITIM结构域的T细胞免疫受体)结合的分离的抗体或抗原结合部分。在一些实施方案中，所述抗体或其抗原结合部分对人TIGIT的结合亲和力(KD)小于5nM。在一些实施方案中，所述抗TIGIT抗体阻断CD155和/或CD112与TIGIT的结合。

Description

抗TIGIT抗体
发明背景
本申请要求2017年2月28日提交的美国临时专利申请No.62/464,529和2018年1月12日提交的美国临时专利申请No.62/616,779的优先权，所述临时专利申请的全部内容各自以引用方式并入本文。
发明背景
TIGIT(“具有Ig和ITIM结构域的T细胞免疫受体”)是在T细胞亚群(诸如活化T细胞、记忆T细胞和调节T细胞)和自然杀伤(NK)细胞上表达的免疫受体。TIGIT是蛋白质Ig超家族中CD28家族的成员，并且充当限制T细胞增殖和活化以及NK细胞功能的共抑制分子。TIGIT通过与CD226(也称为DNAX辅助分子-1或“DNAM-1”)竞争同一组配体来介导其免疫抑制作用，所述配体是：CD155(也称为脊髓灰质炎病毒受体或“PVR”)和CD112(也称为脊髓灰质炎病毒相关受体2或“PVRL2”)。参见，Levin等人，Eur.J.Immunol.，2011，41：902-915。因为CD155对TIGIT的亲和力高于其对CD226的亲和力，当存在TIGIT时CD226信号传导被抑制，由此限制T细胞增殖和活化。
在患有黑素瘤的患者中，TIGIT表达在肿瘤抗原(TA)特异性CD8+ T细胞和CD8+肿瘤浸润性淋巴细胞(TIL)中上调。在存在TIGIT配体(CD155)表达细胞的情况下，TIGIT阻断使得TA特异性CD8+ T细胞和CD8+ TIL的增殖、细胞因子产生和脱粒增加，参见Chauvin等人，JClin Invest.，2015，125：2046-2058。因此，TIGIT代表了在患者中刺激抗肿瘤T细胞应答的潜在治疗靶标，但仍需要阻断TIGIT以及促进抗肿瘤应答的改进方法。
发明内容
在一个方面，提供了与人TIGIT(具有Ig和ITIM结构域的T细胞免疫受体)结合的分离的抗体或其抗原结合部分。在一些实施方案中，抗体或其抗原结合部分对人TIGIT的结合亲和力(KD)小于5nM。在一些实施方案中，抗体或其抗原结合部分对于人TIGIT的KD小于1nM。在一些实施方案中，抗体或其抗原结合部分对于人TIGIT的KD小于100pM。
在一些实施方案中，抗体或其抗原结合部分表现出与食蟹猴TIGIT和/或小鼠TIGIT的交叉反应性。在一些实施方案中，抗体或其抗原结合部分表现出与食蟹猴TIGIT和小鼠TIGIT两者的交叉反应性。
在一些实施方案中，抗体或其抗原结合部分阻断CD155与TIGIT的结合。在一些实施方案中，抗体或其抗原结合部分阻断CD112与TIGIT的结合。在一些实施方案中，抗体或其抗原结合部分阻断CD155和CD112两者与TIGIT的结合。
在一些实施方案中，抗体或其抗原结合部分与人TIGIT上的表位结合，该表位包含氨基酸位置81和82。在一些实施方案中，表位包含位置81处的Phe和/或位置82处的Lys或Ser。在一些实施方案中，表位包含Phe81和Lys82。
在一些实施方案中，表位是不连续的表位。
在一些实施方案中，抗体或其抗原结合部分与人TIGIT上的表位结合，该表位还包含氨基酸位置51、52、53、54、55、73、74、75、76、77、79、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92或93中的一个或多个。在一些实施方案中，表位还包含选自由以下组成的组的一个或多个氨基酸残基：Thr51、Ala52、Gln53、Val54、Thr55、Leu73、Gly74、Trp75、His76、Ile77、Pro79、Asp83、Arg84、Val85、Ala86、Pro87、Gly88、Pro89、Gly90、Leu91、Gly92和Leu93。在一些实施方案中，表位包含氨基酸残基Thr51、Ala52、Gln53、Val54、Thr55、Gly74、Trp75、His76、Ile77、Phe81、Lys82、Pro87、Gly88、Pro89、Gly90、Leu91、Gly92和Leu93。在一些实施方案中，表位包含氨基酸残基Ala52、Gln53、Leu73、Gly74、Trp75、Pro79、Phe81、Lys82、Asp83、Arg84、Val85和Ala86。在一些实施方案中，表位包含序列ICNADLGWHISPSFK(SEQ ID NO：258)。
在一些实施方案中，抗体或其抗原结合部分包含下表3中列出的一个或多个序列。在一些实施方案中，抗体或其抗原结合部分包含以下中的一个或多个：
(a)重链CDR1，所述重链CDR1包含SEQ ID NO：4、SEQ ID NO：22、SEQ ID NO：40、SEQ IDNO：58、SEQ ID NO：76、SEQ ID NO：94、SEQ ID NO：112、SEQ ID NO：130、SEQ ID NO：148、SEQID NO：166、SEQ ID NO：184、SEQ ID NO：202、SEQ ID NO：221、SEQ ID NO：224、SEQ ID NO：226、SEQ ID NO：231、SEQ ID NO：233、SEQ ID NO：239或SEQ ID NO：243中的任一个的序列；
(b)重链CDR2，所述重链CDR2包含SEQ ID NO：6、SEQ ID NO：24、SEQ ID NO：42、SEQ IDNO：60、SEQ ID NO：78、SEQ ID NO：96、SEQ ID NO：114、SEQ ID NO：132、SEQ ID NO：150、SEQID NO：168、SEQ ID NO：186、SEQ ID NO：204、SEQ ID NO：222、SEQ ID NO：225、SEQ ID NO：227、SEQ ID NO：229、SEQ ID NO：232、SEQ ID NO：234、SEQ ID NO：238或SEQ ID NO：240中的任一个的序列；
(c)重链CDR3，所述重链CDR3包含SEQ ID NO：8、SEQ ID NO：26、SEQ ID NO：44、SEQ IDNO：62、SEQ ID NO：80、SEQ ID NO：98、SEQ ID NO：116、SEQ ID NO：134、SEQ ID NO：152、SEQID NO：170、SEQ ID NO：188、SEQ ID NO：206、SEQ ID NO：223、SEQ ID NO：228、SEQ ID NO：230、SEQ ID NO：235、SEQ ID NO：236、SEQ ID NO：237、SEQ ID NO：241、SEQ ID NO：242或SEQ ID NO：244中的任一个的序列；
(d)轻链CDR1，所述轻链CDR1包含SEQ ID NO：13、SEQ ID NO：31、SEQ ID NO：49、SEQ IDNO：67、SEQ ID NO：85、SEQ ID NO：103、SEQ ID NO：121、SEQ ID NO：139、SEQ ID NO：157、SEQ ID NO：175、SEQ ID NO：193或SEQ ID NO：211中的任一个的序列；
(e)轻链CDR2，所述轻链CDR2包含SEQ ID NO：15、SEQ ID NO：33、SEQ ID NO：51、SEQ IDNO：69、SEQ ID NO：87、SEQ ID NO：105、SEQ ID NO：123、SEQ ID NO：141、SEQ ID NO：159、SEQ ID NO：177、SEQ ID NO：195或SEQ ID NO：213中的任一个的序列；或
(f)轻链CDR3，所述轻链CDR3包含SEQ ID NO：17、SEQ ID NO：35、SEQ ID NO：53、SEQ IDNO：71、SEQ ID NO：89、SEQ ID NO：107、SEQ ID NO：125、SEQ ID NO：143、SEQ ID NO：161、SEQ ID NO：179、SEQ ID NO：197或SEQ ID NO：215中的任一个的序列。
在一些实施方案中，抗体或其抗原结合部分包含重链CDR1、CDR2和CDR3以及轻链CDR1、CDR2和CDR3，所述重链CDR1、CDR2和CDR3以及所述轻链CDR1、CDR2和CDR3：
(a)分别包含SEQ ID NO：4、6、8、13、15和17的序列；或者
(b)分别包含SEQ ID NO：22、24、26、31、33和35的序列；或者
(c)分别包含SEQ ID NO：40、42、44、49、51和53的序列；或者
(d)分别包含SEQ ID NO：58、60、62、67、69和71的序列；或者
(e)分别包含SEQ ID NO：76、78、80、85、87和89的序列；或者
(f)分别包含SEQ ID NO：94、96、98、103、105和107的序列；或者
(g)分别包含SEQ ID NO：112、114、116、121、123和125的序列；或者
(h)分别包含SEQ ID NO：130、132、134、139、141和143的序列；或者
(i)分别包含SEQ ID NO：148、150、152、157、159和161的序列；或者
(j)分别包含SEQ ID NO：166、168、170、175、177和179的序列；或者
(k)分别包含SEQ ID NO：184、186、188、193、195和197的序列；或者
(l)分别包含SEQ ID NO：202、204、206、211、213和215的序列；或者
(m)分别包含SEQ ID NO：221、222、223、13、15和17的序列；或者
(n)分别包含SEQ ID NO：224、225、62、67、69和71的序列；或者
(o)分别包含SEQ ID NO：226、227、228、67、69和71的序列；或者
(p)分别包含SEQ ID NO：224、229、230、67、69和71的序列；或者
(q)分别包含SEQ ID NO：224、227、230、67、69和71的序列；或者
(r)分别包含SEQ ID NO：231、232、235、103、105和107的序列；或者
(s)分别包含SEQ ID NO：233、234、236、103、105和107的序列；或者
(t)分别包含SEQ ID NO：233、234、237、103、105和107的序列；或者
(u)分别包含SEQ ID NO：166、238、170、175、177和179的序列；或者
(v)分别包含SEQ ID NO：239、240、170、175、177和179的序列；或者
(w)分别包含SEQ ID NO：239、240、241、175、177和179的序列；或者
(x)分别包含SEQ ID NO：239、240、242、175、177和179的序列；或者
(y)分别包含SEQ ID NO：243、168、244、175、177和179的序列。
在一些实施方案中，抗体或其抗原结合部分包含：
(a)重链可变区，所述重链可变区包含与SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：19、SEQ ID NO：37、SEQ ID NO：55、SEQ ID NO：73、SEQ ID NO：91、SEQ ID NO：109、SEQ ID NO：127、SEQ ID NO：145、SEQ ID NO：163、SEQ ID NO：181、SEQ ID NO：199、SEQ ID NO：245、SEQ ID NO：246、SEQID NO：247、SEQ ID NO：248、SEQ ID NO：249、SEQ ID NO：250、SEQ ID NO：251、SEQ ID NO：252、SEQ ID NO：253、SEQ ID NO：254、SEQ ID NO：255、SEQ ID NO：256或SEQ ID NO：257具有至少90％序列同一性的氨基酸序列；和/或
(b)轻链可变区，所述轻链可变区包含与SEQ ID NO：10、SEQ ID NO：28、SEQ ID NO：46、SEQ ID NO：64、SEQ ID NO：82、SEQ ID NO：100、SEQ ID NO：118、SEQ ID NO：136、SEQ IDNO：154、SEQ ID NO：172、SEQ ID NO：190或SEQ ID NO：208具有至少90％序列同一性的氨基酸序列。
在一些实施方案中，抗体或其抗原结合部分包含：
(a)重链可变区，所述重链可变区包含与SEQ ID NO：1或SEQ ID NO：245具有至少90％序列同一性的氨基酸序列；和轻链可变区，所述轻链可变区包含与SEQ ID NO：10具有至少90％序列同一性的氨基酸序列；或
(b)重链可变区，所述重链可变区包含与SEQ ID NO：19具有至少90％序列同一性的氨基酸序列；和轻链可变区，所述轻链可变区包含与SEQ ID NO：28具有至少90％序列同一性的氨基酸序列；或
(c)重链可变区，所述重链可变区包含与SEQ ID NO：37具有至少90％序列同一性的氨基酸序列；和轻链可变区，所述轻链可变区包含与SEQ ID NO：46具有至少90％序列同一性的氨基酸序列；或
(d)重链可变区，所述重链可变区包含与SEQ ID NO：55、SEQ ID NO：246、SEQ ID NO：247、SEQ ID NO：248或SEQ ID NO：249中的任一个具有至少90％序列同一性的氨基酸序列；和轻链可变区，所述轻链可变区包含与SEQ ID NO：64具有至少90％序列同一性的氨基酸序列；或
(e)重链可变区，所述重链可变区包含与SEQ ID NO：73具有至少90％序列同一性的氨基酸序列；和轻链可变区，所述轻链可变区包含与SEQ ID NO：82具有至少90％序列同一性的氨基酸序列；或
(f)重链可变区，所述重链可变区包含与SEQ ID NO：91、SEQ ID NO：250、SEQ ID NO：251或SEQ ID NO：252中的任一个具有至少90％序列同一性的氨基酸序列；和轻链可变区，所述轻链可变区包含与SEQ ID NO：100具有至少90％序列同一性的氨基酸序列；或
(g)重链可变区，所述重链可变区包含与SEQ ID NO：109具有至少90％序列同一性的氨基酸序列；和轻链可变区，所述轻链可变区包含与SEQ ID NO：118具有至少90％序列同一性的氨基酸序列；或
(h)重链可变区，所述重链可变区包含与SEQ ID NO：127具有至少90％序列同一性的氨基酸序列；和轻链可变区，所述轻链可变区包含与SEQ ID NO：136具有至少90％序列同一性的氨基酸序列；或
(i)重链可变区，所述重链可变区包含与SEQ ID NO：145具有至少90％序列同一性的氨基酸序列；和轻链可变区，所述轻链可变区包含与SEQ ID NO：154具有至少90％序列同一性的氨基酸序列；或
(j)重链可变区，所述重链可变区包含与SEQ ID NO：163、SEQ ID NO：253、SEQ ID NO：254、SEQ ID NO：255、SEQ ID NO：256或SEQ ID NO：257中的任一个具有至少90％序列同一性的氨基酸序列；和轻链可变区，所述轻链可变区包含与SEQ ID NO：172具有至少90％序列同一性的氨基酸序列；或
(k)重链可变区，所述重链可变区包含与SEQ ID NO：181具有至少90％序列同一性的氨基酸序列；和轻链可变区，所述轻链可变区包含与SEQ ID NO：190具有至少90％序列同一性的氨基酸序列；或
(l)重链可变区，所述重链可变区包含与SEQ ID NO：199具有至少90％序列同一性的氨基酸序列；和轻链可变区，所述轻链可变区包含与SEQ ID NO：208具有至少90％序列同一性的氨基酸序列。
在另一方面，提供了与人TIGIT结合的抗体或其抗原结合部分，其中抗体或其抗原结合部分与人TIGIT上的表位结合，该表位包含氨基酸位置81和82。在一些实施方案中，表位包含位置81处的Phe和/或位置82处的Lys或Ser。在一些实施方案中，表位包含Phe81和Lys82。
在一些实施方案中，表位是不连续的表位。
在一些实施方案中，抗体或其抗原结合部分与人TIGIT上的表位结合，该表位还包含氨基酸位置51、52、53、54、55、73、74、75、76、77、79、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92或93中的一个或多个。在一些实施方案中，表位还包含选自由以下组成的组的一个或多个氨基酸残基：Thr51、Ala52、Gln53、Val54、Thr55、Leu73、Gly74、Trp75、His76、Ile77、Pro79、Asp83、Arg84、Val85、Ala86、Pro87、Gly88、Pro89、Gly90、Leu91、Gly92和Leu93。在一些实施方案中，表位包含氨基酸残基Thr51、Ala52、Gln53、Val54、Thr55、Gly74、Trp75、His76、Ile77、Phe81、Lys82、Pro87、Gly88、Pro89、Gly90、Leu91、Gly92和Leu93。在一些实施方案中，表位包含氨基酸残基Ala52、Gln53、Leu73、Gly74、Trp75、Pro79、Phe81、Lys82、Asp83、Arg84、Val85和Ala86。在一些实施方案中，表位包含序列ICNADLGWHISPSFK(SEQ ID NO：258)。
在另一方面，提供了抗体或其抗原结合部分，其包含如本文所公开的一个或多个序列(例如，下表3中列出的一个或多个序列)。在一些实施方案中，抗体或其抗原结合部分包含如本文所公开的(例如，如下表3中所列出的)一个或多个CDR、重链可变区、轻链可变区或框架区序列。在一些实施方案中，抗体或其抗原结合部分包含以下中的一个或多个：
(a)重链CDR1，所述重链CDR1包含SEQ ID NO：4、SEQ ID NO：22、SEQ ID NO：40、SEQ IDNO：58、SEQ ID NO：76、SEQ ID NO：94、SEQ ID NO：112、SEQ ID NO：130、SEQ ID NO：148、SEQID NO：166、SEQ ID NO：184、SEQ ID NO：202、SEQ ID NO：221、SEQ ID NO：224、SEQ ID NO：226、SEQ ID NO：231、SEQ ID NO：233、SEQ ID NO：239或SEQ ID NO：243中的任一个的序列；
(b)重链CDR2，所述重链CDR2包含SEQ ID NO：6、SEQ ID NO：24、SEQ ID NO：42、SEQ IDNO：60、SEQ ID NO：78、SEQ ID NO：96、SEQ ID NO：114、SEQ ID NO：132、SEQ ID NO：150、SEQID NO：168、SEQ ID NO：186、SEQ ID NO：204、SEQ ID NO：222、SEQ ID NO：225、SEQ ID NO：227、SEQ ID NO：229、SEQ ID NO：232、SEQ ID NO：234、SEQ ID NO：238或SEQ ID NO：240中的任一个的序列；
(c)重链CDR3，所述重链CDR3包含SEQ ID NO：8、SEQ ID NO：26、SEQ ID NO：44、SEQ IDNO：62、SEQ ID NO：80、SEQ ID NO：98、SEQ ID NO：116、SEQ ID NO：134、SEQ ID NO：152、SEQID NO：170、SEQ ID NO：188、SEQ ID NO：206、SEQ ID NO：223、SEQ ID NO：228、SEQ ID NO：230、SEQ ID NO：235、SEQ ID NO：236、SEQ ID NO：237、SEQ ID NO：241、SEQ ID NO：242或SEQ ID NO：244中的任一个的序列；
(d)轻链CDR1，所述轻链CDR1包含SEQ ID NO：13、SEQ ID NO：31、SEQ ID NO：49、SEQ IDNO：67、SEQ ID NO：85、SEQ ID NO：103、SEQ ID NO：121、SEQ ID NO：139、SEQ ID NO：157、SEQ ID NO：175、SEQ ID NO：193或SEQ ID NO：211中的任一个的序列；
(e)轻链CDR2，所述轻链CDR2包含SEQ ID NO：15、SEQ ID NO：33、SEQ ID NO：51、SEQ IDNO：69、SEQ ID NO：87、SEQ ID NO：105、SEQ ID NO：123、SEQ ID NO：141、SEQ ID NO：159、SEQ ID NO：177、SEQ ID NO：195或SEQ ID NO：213中的任一个的序列；或
(f)轻链CDR3，所述轻链CDR3包含SEQ ID NO：17、SEQ ID NO：35、SEQ ID NO：53、SEQ IDNO：71、SEQ ID NO：89、SEQ ID NO：107、SEQ ID NO：125、SEQ ID NO：143、SEQ ID NO：161、SEQ ID NO：179、SEQ ID NO：197或SEQ ID NO：215中的任一个的序列。
在一些实施方案中，抗体或其抗原结合部分包含重链CDR1、CDR2和CDR3以及轻链CDR1、CDR2和CDR3，所述重链CDR1、CDR2和CDR3以及所述轻链CDR1、CDR2和CDR3：
(a)分别包含SEQ ID NO：4、6、8、13、15和17的序列；或者
(b)分别包含SEQ ID NO：22、24、26、31、33和35的序列；或者
(c)分别包含SEQ ID NO：40、42、44、49、51和53的序列；或者
(d)分别包含SEQ ID NO：58、60、62、67、69和71的序列；或者
(e)分别包含SEQ ID NO：76、78、80、85、87和89的序列；或者
(f)分别包含SEQ ID NO：94、96、98、103、105和107的序列；或者
(g)分别包含SEQ ID NO：112、114、116、121、123和125的序列；或者
(h)分别包含SEQ ID NO：130、132、134、139、141和143的序列；或者
(i)分别包含SEQ ID NO：148、150、152、157、159和161的序列；或者
(j)分别包含SEQ ID NO：166、168、170、175、177和179的序列；或者
(k)分别包含SEQ ID NO：184、186、188、193、195和197的序列；或者
(l)分别包含SEQ ID NO：202、204、206、211、213和215的序列；或者
(m)分别包含SEQ ID NO：221、222、223、13、15和17的序列；或者
(n)分别包含SEQ ID NO：224、225、62、67、69和71的序列；或者
(o)分别包含SEQ ID NO：226、227、228、67、69和71的序列；或者
(p)分别包含SEQ ID NO：224、229、230、67、69和71的序列；或者
(q)分别包含SEQ ID NO：224、227、230、67、69和71的序列；或者
(r)分别包含SEQ ID NO：231、232、235、103、105和107的序列；或者
(s)分别包含SEQ ID NO：233、234、236、103、105和107的序列；或者
(t)分别包含SEQ ID NO：233、234、237、103、105和107的序列；或者
(u)分别包含SEQ ID NO：166、238、170、175、177和179的序列；或者
(v)分别包含SEQ ID NO：239、240、170、175、177和179的序列；或者
(w)分别包含SEQ ID NO：239、240、241、175、177和179的序列；或者
(x)分别包含SEQ ID NO：239、240、242、175、177和179的序列；或者
(y)分别包含SEQ ID NO：243、168、244、175、177和179的序列。
在一些实施方案中，抗体或其抗原结合部分包含：
(a)重链可变区，所述重链可变区包含与SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：19、SEQ ID NO：37、SEQ ID NO：55、SEQ ID NO：73、SEQ ID NO：91、SEQ ID NO：109、SEQ ID NO：127、SEQ ID NO：145、SEQ ID NO：163、SEQ ID NO：181、SEQ ID NO：199、SEQ ID NO：245、SEQ ID NO：246、SEQID NO：247、SEQ ID NO：248、SEQ ID NO：249、SEQ ID NO：250、SEQ ID NO：251、SEQ ID NO：252、SEQ ID NO：253、SEQ ID NO：254、SEQ ID NO：255、SEQ ID NO：256或SEQ ID NO：257具有至少90％序列同一性的氨基酸序列；和/或
(b)轻链可变区，所述轻链可变区包含与SEQ ID NO：10、SEQ ID NO：28、SEQ ID NO：46、SEQ ID NO：64、SEQ ID NO：82、SEQ ID NO：100、SEQ ID NO：118、SEQ ID NO：136、SEQ IDNO：154、SEQ ID NO：172、SEQ ID NO：190或SEQ ID NO：208具有至少90％序列同一性的氨基酸序列。
在一些实施方案中，抗体或其抗原结合部分包含：
(a)重链可变区，所述重链可变区包含与SEQ ID NO：1或SEQ ID NO：245具有至少90％序列同一性的氨基酸序列；和轻链可变区，所述轻链可变区包含与SEQ ID NO：10具有至少90％序列同一性的氨基酸序列；或
(b)重链可变区，所述重链可变区包含与SEQ ID NO：19具有至少90％序列同一性的氨基酸序列；和轻链可变区，所述轻链可变区包含与SEQ ID NO：28具有至少90％序列同一性的氨基酸序列；或
(c)重链可变区，所述重链可变区包含与SEQ ID NO：37具有至少90％序列同一性的氨基酸序列；和轻链可变区，所述轻链可变区包含与SEQ ID NO：46具有至少90％序列同一性的氨基酸序列；或
(d)重链可变区，所述重链可变区包含与SEQ ID NO：55、SEQ ID NO：246、SEQ ID NO：247、SEQ ID NO：248或SEQ ID NO：249中的任一个具有至少90％序列同一性的氨基酸序列；和轻链可变区，所述轻链可变区包含与SEQ ID NO：64具有至少90％序列同一性的氨基酸序列；或
(e)重链可变区，所述重链可变区包含与SEQ ID NO：73具有至少90％序列同一性的氨基酸序列；和轻链可变区，所述轻链可变区包含与SEQ ID NO：82具有至少90％序列同一性的氨基酸序列；或
(f)重链可变区，所述重链可变区包含与SEQ ID NO：91、SEQ ID NO：250、SEQ ID NO：251或SEQ ID NO：252中的任一个具有至少90％序列同一性的氨基酸序列；和轻链可变区，所述轻链可变区包含与SEQ ID NO：100具有至少90％序列同一性的氨基酸序列；或
(g)重链可变区，所述重链可变区包含与SEQ ID NO：109具有至少90％序列同一性的氨基酸序列；和轻链可变区，所述轻链可变区包含与SEQ ID NO：118具有至少90％序列同一性的氨基酸序列；或
(h)重链可变区，所述重链可变区包含与SEQ ID NO：127具有至少90％序列同一性的氨基酸序列；和轻链可变区，所述轻链可变区包含与SEQ ID NO：136具有至少90％序列同一性的氨基酸序列；或
(i)重链可变区，所述重链可变区包含与SEQ ID NO：145具有至少90％序列同一性的氨基酸序列；和轻链可变区，所述轻链可变区包含与SEQ ID NO：154具有至少90％序列同一性的氨基酸序列；或
(j)重链可变区，所述重链可变区包含与SEQ ID NO：163、SEQ ID NO：253、SEQ ID NO：254、SEQ ID NO：255、SEQ ID NO：256或SEQ ID NO：257中的任一个具有至少90％序列同一性的氨基酸序列；和轻链可变区，所述轻链可变区包含与SEQ ID NO：172具有至少90％序列同一性的氨基酸序列；或
(k)重链可变区，所述重链可变区包含与SEQ ID NO：181具有至少90％序列同一性的氨基酸序列；和轻链可变区，所述轻链可变区包含与SEQ ID NO：190具有至少90％序列同一性的氨基酸序列；或
(l)重链可变区，所述重链可变区包含与SEQ ID NO：199具有至少90％序列同一性的氨基酸序列；和轻链可变区，所述轻链可变区包含与SEQ ID NO：208具有至少90％序列同一性的氨基酸序列。
在一些实施方案中，如本文所公开的抗体或其抗原结合部分表现出与抗PD1抗体或抗PD-L1抗体的协同作用。
在一些实施方案中，如本文所公开的抗体或其抗原结合部分是单克隆抗体。在一些实施方案中，抗体是人源化抗体。在一些实施方案中，抗体是完全人抗体。在一些实施方案中，抗体是嵌合抗体。在一些实施方案中，抗原结合片段是Fab、F(ab′)2、scFv或二价scFv。
在另一方面，提供了包含如本文所述的分离的抗体或其抗原结合部分和药学上可接受的载体的药物组合物。
在另一方面，提供了包含如本文所述的分离的抗体或其抗原结合部分的双特异性抗体。
在另一方面，提供了包含如本文所述的分离的抗体或其抗原结合部分的抗体-药物缀合物。
在另一方面，提供了分离的多核苷酸。在一些实施方案中，多核苷酸包含编码如本文所述的抗体或其抗原结合部分的一个或多个核苷酸序列。在一些实施方案中，多核苷酸包含编码下表3中公开的多肽的一个或多个核苷酸序列。在一些实施方案中，多核苷酸包含编码与人TIGIT结合的抗体或其抗原结合部分的一个或多个核苷酸序列，其中分离的多核苷酸包含：
(a)SEQ ID NO：2、SEQ ID NO：20、SEQ ID NO：38、SEQ ID NO：56、SEQ ID NO：74、SEQ IDNO：92、SEQ ID NO：110、SEQ ID NO：128、SEQ ID NO：146、SEQ ID NO：164、SEQ ID NO：182或SEQ ID NO：200的核苷酸序列；和/或
(b)SEQ ID NO：11、SEQ ID NO：29、SEQ ID NO：47、SEQ ID NO：65、SEQ ID NO：83、SEQID NO：101、SEQ ID NO：119、SEQ ID NO：137、SEQ ID NO：155、SEQ ID NO：173、SEQ ID NO：191或SEQ ID NO：209的核苷酸序列。
在另一方面，提供了包含如本文所述的多核苷酸的载体和宿主细胞。在另一方面，提供了产生抗体的方法，所述方法包括在适于产生所述抗体的条件下培养如本文所述的宿主细胞。
在另一方面，提供了药盒(例如，用于如本文所述的治疗方法)。在一些实施方案中，药盒包括如本文所述的分离的抗TIGIT抗体或其抗原结合部分、或包含如本文所述的抗TIGIT抗体或其抗原结合部分的药物组合物；并且还包括免疫肿瘤学剂。在一些实施方案中，免疫肿瘤学剂是PD-1途径抑制剂。在一些实施方案中，PD-1途径抑制剂是抗PD1抗体或抗PD-L1抗体。在一些实施方案中，PD-1途径抑制剂是T细胞共抑制剂的拮抗剂或抑制剂。在一些实施方案中，免疫肿瘤学剂是T细胞共活化剂的激动剂。在一些实施方案中，免疫肿瘤学剂是免疫刺激细胞因子。
在另一方面，提供了治疗受试者的癌症的方法。在一些实施方案中，所述方法包括向受试者施用治疗量的如本文所述的分离的抗体或其抗原结合部分、或如本文所述的药物组合物、如本文所述的双特异性抗体、或如本文所述的抗体-药物缀合物。
在一些实施方案中，癌症是富集CD112或CD115表达的癌症。在一些实施方案中，癌症是富集表达TIGIT的T细胞或天然杀伤(NK)细胞的癌症。在一些实施方案中，癌症为膀胱癌、乳腺癌、子宫癌、宫颈癌、卵巢癌、前列腺癌、睾丸癌、食管癌、胃肠癌、胰腺癌、结肠直肠癌、结肠癌、肾癌、头颈癌、肺癌、胃癌、生殖细胞癌、骨癌、肝癌、甲状腺癌、皮肤癌、中枢神经系统赘瘤、淋巴瘤、白血病、骨髓瘤或肉瘤。在一些实施方案中，癌症是淋巴瘤或白血病。
在一些实施方案中，所述方法还包括向受试者施用治疗量的免疫肿瘤学剂。在一些实施方案中，免疫肿瘤学剂是PD-1途径抑制剂。在一些实施方案中，PD-1途径抑制剂是抗PD1抗体或抗PD-L1抗体。在一些实施方案中，PD-1途径抑制剂是T细胞共抑制剂的拮抗剂或抑制剂。在一些实施方案中，免疫肿瘤学剂是T细胞共活化剂的激动剂。在一些实施方案中，免疫肿瘤学剂是免疫刺激细胞因子。在一些实施方案中，分离的抗体、药物组合物、双特异性抗体或抗体-药物缀合物与免疫肿瘤学剂同时施用。在一些实施方案中，分离的抗体、药物组合物、双特异性抗体或抗体-药物缀合物与免疫肿瘤学剂依序施用。
附图说明
图1. 65个抗TIGIT抗体克隆和无关同种型对照抗体与经工程化以表达人TIGIT(上图)、食蟹猴TIGIT(中图)和小鼠TIGIT(下图)的HEK 293细胞的结合。
图2.65个抗TIGIT抗体克隆和无关同种型对照抗体与原代人T细胞(上图)、食蟹猴T细胞(中图)和小鼠T细胞(下图)的结合。对于下图，评估了65个克隆中的35个克隆。在所评估的35个克隆中，35个克隆中的5个克隆与mTIGIT-Fc蛋白(克隆20、27、55、56和60)不结合，如浅绿色条所示。
图3A-图3D.(A-C)8个抗TIGIT抗体克隆(克隆2、5、13、16、17、20、25和54)与在HEK293细胞上表达的人(A)、小鼠(B)和食蟹猴(C)TIGIT的结合滴定值。示出单个孔的结果。(D)8个抗TIGIT抗体克隆(克隆2、5、13、16、17、20、25和54)与在HEK 293细胞上表达的人、小鼠和食蟹猴TIGIT的EC50值。
图4.抗TIGIT抗体克隆13和25与活化的小鼠脾T细胞的结合滴定。示出单个孔的结果。克隆13的EC50为0.24μg/mL。克隆25的EC50为2.28μg/mL。
图5A-图5B.抗TIGIT抗体阻断CD155与在HEK 293细胞上表达的TIGIT的相互作用，对于人CD155与表达人TIGIT的HEK293细胞的结合(A)以及小鼠CD155与表达小鼠TIGIT的HEK293细胞的结合(B)皆如此。示出单个孔的结果。
图6.抗TIGIT抗体阻断人CD112与在HEK 293细胞上表达的人TIGIT的相互作用。示出单个孔的结果。
图7A-图7B.(A)上图：如通过＞1.5的荧光素酶活性诱导倍数所测量的，选择抗TIGIT抗体有效阻断TIGIT-CD155的接合，导致T细胞活化。在生物测定中大约12个克隆显示出＞1.5的诱导倍数。在ForteBio测定中，两个克隆不阻断TIGIT-CD155相互作用(粉红色条)。相比无Ab对照测量诱导倍数。平均值和SD得自一式两份实验；抗体浓度为20μg/mL。灰色条＝hIgG1同种型对照。黑色条＝无抗体对照(定义为基线)。下图：TIGIT/CD155阻断生物测定与TIGIT-Fc亲和力的相关性图。将生物测定中的活性与重组蛋白的亲和力相关联。(B)在TIGIT/CD155阻断生物测定中12个选择的抗TIGIT克隆的剂量响应。克隆13和25在生物测定中显示出良好的活性，它们显示出与所有三种物种的强结合。平均值和SD得自一式三份的孔。
图8.选择与抗PD-1协同作用的抗TIGIT抗体，导致T细胞活化。平均值和SD得自一式三份的孔。克隆13和克隆25均在组合生物测定中显示与抗PD-1的协同作用。
图9A-图9H.(A-D)完全人抗TIGIT克隆13(“c13 hIgG1”)和克隆13的小鼠IgG1(“c13 mIgG1”)和小鼠IgG2a(“c13 mIgG2a”)嵌合体与在HEK 293细胞上表达的人(A)、小鼠(B)和食蟹猴(C)TIGIT的结合的结合滴定(A-C)和EC50值(D)。平均值和SD得自一式两份的孔。(E-F)抗体c13 hIgG1、c13 mIgG1和c13 mIgG2a阻断CD155与在HEK293细胞上表达的TIGIT的相互作用，对于人CD155与表达人TIGIT的HEK293细胞的结合(E)以及小鼠CD155与表达小鼠TIGIT的HEK293细胞的结合(F)皆如此。结果得自单个孔。(G)抗体c13 hIgG1、c13mIgG1和c13 mIgG2a阻断人CD112与在HEK293细胞上表达的人TIGIT的相互作用。结果得自单个孔。(H)在TIGIT/CD155阻断生物测定中亲本和嵌合抗TIGIT抗体克隆c1313hIgG1、c13mIgG1和c13 mIgG2a的剂量响应。平均值和SD得自一式三份的孔。
图10A-图10K.可以接合活化Fcγ受体的抗TIGIT抗体在小鼠的CT26同系肿瘤模型中介导抗肿瘤功效。(A)组平均肿瘤体积。(B-K)第1组至第10组的个体动物肿瘤体积。PR＝部分响应(连续三次测量肿瘤体积为其第1天体积的50％或更少，且在这三次测量中有一次或多次，肿瘤体积等于或大于13.5mm3)。CR＝完全响应(连续三次测量肿瘤体积小于13.5mm3)。
具体实施方式
I.引言
如本文所述，已鉴定出对人TIGIT(具有Ig和ITIM结构域的T细胞免疫受体)具有高亲和力并且进一步与小鼠TIGIT和食蟹猴TIGIT中的任一者或两者具有交叉反应性的抗体，所述抗体抑制TIGIT与CD155之间的相互作用。这些抗体还表现出与抗PD-1抗体的协同作用。因此，本文所述的抗TIGIT抗体可用于许多治疗应用，如作为单一剂或与另一种治疗剂诸如抗PD-1剂或抗PD-L1剂组合用于治疗各种癌症。
因此，在一个方面，本发明提供了包含与人TIGIT结合的抗体或抗体的抗原结合部分的组合物、药盒和治疗方法。
II.定义
除非另外定义，否则本文使用的技术术语和科学术语具有与本领域普通技术人员通常所理解的含义相同的含义。参见例如Lackie，DICTIONARY OF CELL AND MOLECULARBIOLOGY，Elsevier(第4版2007)；Sambrook等人，MOLECULAR CLONING，ALABORATORYMANUAL，Cold Springs Harbor Press(Cold Springs Harbor，NY 1989)。与本文描述的那些相似或等效的任何方法、装置和材料都可以用于本发明的实践中。提供以下定义以便于理解本文频繁使用的某些术语，并不意在限制本公开的范围。
如本文所用，除非内容另有明确说明，否则单数形式“一个/一种(a/an)”和“所述/该(the)”包括复数个指代物。因此，例如，提及“一个/种抗体”任选地包括两个/种或更多个/种这样的分子的组合等。
如本文所用，术语“约”是指本技术领域的技术人员容易知道的相应值的常见误差范围。
如本文所用，术语“TIGIT”是指“具有Ig和ITIM结构域的T细胞免疫受体”。由TIGIT基因编码的蛋白质是蛋白质Ig超家族中CD28家族的成员。TIGIT在几类T细胞和自然杀伤(NK)细胞上表达，并通过与CD226竞争配体CD155和CD112来介导其免疫抑制作用。参见，Levin等人，Eur.J.Immunol.，2011，41：902-915。TIGIT在本领域中也称为WUCAM(Washington University Cell Adhesion Molecule，华盛顿大学细胞粘附分子)和VSTM3(HUGO名称)。参见Levin等人，Eur J Immunol，2011，41：902-915。因此，在本申请通篇中对“TIGIT”的引用还包括对WUCAM和/或VSTM3的引用，除非另有说明或从上下文中显而易见。人TIGIT核苷酸和蛋白质序列分别以例如Genbank登录号NM173799(SEQ ID NO：217)和NP776160(SEQ ID NO：218)示出。
术语“癌症”是指以异常细胞不受控制的生长为特征的疾病。该术语包括所有已知的癌症和肿瘤疾患，无论是恶性的、良性的、软组织的还是实体的都包括在内，还有所有阶段和等级的癌症，包括转移前和转移后癌症。不同类型的癌症的实例包括但不限于：消化道和胃肠道癌症，诸如胃癌(gastric cancer)(例如胃癌(stomach cancer))、结肠直肠癌、胃肠道间质瘤、胃肠道类癌肿瘤、结肠癌、直肠癌、肛门癌、胆管癌、小肠癌和食道癌；乳腺癌；肺癌；胆囊癌；肝癌；胰腺癌；阑尾癌；前列腺癌；卵巢癌；肾癌；中枢神经系统癌症；皮肤癌(例如黑色素瘤)；淋巴瘤；胶质瘤；绒毛膜癌；头颈部癌症；成骨肉瘤；和血癌。如本文所用，“肿瘤”包含一种或多种癌细胞。
术语“抗体”是指由免疫球蛋白基因或其功能片段编码的多肽，其特异性地结合并识别抗原(例如人TIGIT)、特定细胞表面标记物或任何所需靶标。通常，“可变区”含有抗体的抗原结合区(或其功能等效物)，并且在结合的特异性和亲和力方面是最关键的。参见，Fundamental Immunology第7版，Paul编，Wolters Kluwer Health/Lippincott Williams&Wilkins(2013)。公认的免疫球蛋白基因包括κ、λ、α、γ、δ、ε和μ恒定区基因，以及无数的免疫球蛋白可变区基因。轻链被归类为κ或λ。重链被归类为γ、μ、α、δ或ε，继而分别定义免疫球蛋白类别IgG、IgM、IgA、IgD和IgE。
示例性免疫球蛋白(抗体)结构单元包含四聚体。每个四聚体由两对相同的多肽链组成，每一对具有一条“轻”链(约25kD)和一条“重”链(约50-70kD)。每条链的N-末端结构域定义具有约100至110个或更多个氨基酸的主要负责抗原识别的可变区。术语可变轻链(VL)和可变重链(VH)分别指代这些轻链和重链。
“同种型”是由重链恒定区定义的抗体类别。免疫球蛋白基因包括κ、λ、α、γ、δ、ε和μ恒定区基因。轻链被归类为κ或λ。重链被归类为γ、μ、α、δ或ε，继而分别定义同种型类别IgG、IgM、IgA、IgD和IgE。
如本文所用，“互补决定区(CDR)”是指中断由轻链可变区和重链可变区建立的四个“框架”区的每条链中的三个高变区。CDR主要负责结合抗原的表位。每条链的CDR从N-末端开始顺序编号通常被称为CDR1、CDR2和CDR3，并且通常也通过特定CDR所在的链来识别。因此，VH CDR3位于其所在的抗体的重链的可变结构域中，而VL CDR1是来自其所在的抗体的轻链的可变结构域的CDR1。
不同轻链或重链的框架区的序列在物种内是相对保守的。抗体的框架区，即构成性轻链和重链的组合框架区，用于在三维空间中定位和对准CDR。
CDR和框架区的氨基酸序列可以使用本领域中各种众所周知的定义来确定，所述定义例如Kabat，Chothia，国际ImMunoGeneTics数据库(IMGT)和AbM(参见例如Johnson和Wu，Nucleic Acids Res.2000年1月1日；28(1)：214-218；和Johnson等人，Nucleic AcidsRes.，29：205-206(2001)；Chothia&Lesk，(1987)J.Mol.Biol.196，901-917；Chothia等人(1989)Nature 342，877-883；Chothia等人(1992)J.Mol.Biol.227，799-817；Al-Lazikani等人，J.Mol.Biol 1997，273(4))。除非另有说明，否则CDR根据Kabat确定。抗原结合位点的定义也在下面描述：Ruiz等人Nucleic Acids Res.，28，219-221(2000)；和LefrancNucleic Acids Res.1月1日；29(1)：207-9(2001)；MacCallum等人，J.Mol.Biol.，262：732-745(1996)；和Martin等人，Proc.Natl Acad.Sci.USA，86，9268-9272(1989)；Martin等人，Methods Enzymol.，203：121-153，(1991)；Pedersen等人，Immunomethods，1，126，(1992)；以及Rees等人，In Sternberg M.J.E.(编)，Protein Structure Prediction.OxfordUniversity Press，Oxford，141-172 1996)。
术语“抗原结合部分”或“抗原结合片段”在本文中可互换使用，并且是指抗体的保留了与抗原(例如TIGIT)特异性地结合的能力的一个或多个片段。已显示可由全长抗体的片段执行抗体的抗原结合功能。抗原结合片段的实例包括但不限于Fab片段(由VL、VH、CL和CH1结构域组成的单价片段)、F(ab)2片段(包含通过铰链区的二硫桥连接的两个Fab片段的二价片段)、单链Fv(scFv)、互补决定区(CDR)、VL(轻链可变区)、VH(重链可变区)、二硫键连接的Fvs(dsFv)以及能够与靶抗原结合的免疫球蛋白肽的那些或任何其他功能部分的任何组合(参见例如Fundamental Immunology，见上文)。如本领域技术人员所理解的，可通过多种方法获得各种抗体片段，所述方法例如用酶诸如胃蛋白酶消化完整抗体；或从头合成。通常通过化学方法或通过使用重组DNA方法从头合成抗体片段。因此，如本文所用，术语抗体包括通过修饰全抗体产生的抗体片段，或使用重组DNA方法从头合成的抗体片段(例如单链Fv)，或使用噬菌体展示文库和基于酵母的文库呈递系统鉴定的抗体片段(参见例如McCafferty等人，(1990)Nature 348：552；Y.Xu等人，PEDS，2013，26：663-670；WO 2009/036379；WO 2010/105256；以及WO 2012/009568)。术语“抗体”还包括二价或双特异性分子、双抗体、三抗体和四抗体。二价和双特异性分子描述于例如Kostelny等人(1992)J.Immunol.148：1547，Pack and Pluckthun(1992)Biochemistry 31：1579；Hollinger等人(1993)，PNAS.USA 90：6444；Gruber等人(1994)J Immunol.152：5368；Zhu等人(1997)Protein Sci.6：781；Hu等人(1996)Cancer Res.56：3055；Adams等人(1993)CancerRes.53：4026；以及McCartney等人(1995)Protein Eng.8：301中。
“单克隆抗体”是指对抗原上的给定表位具有单一结合特异性和亲和力的抗体的克隆制剂。“多克隆抗体”是指针对单一抗原而产生但具有不同结合特异性和亲和力的抗体制剂。
“人源化”抗体是保留非人抗体的反应性同时在人中具有较低免疫原性的抗体。例如，这可以通过保留非人CDR区并用其人对应物替换抗体的其余部分来实现。参见例如Morrison等人，PNAS USA，81：6851-6855(1984)；Morrison和Oi，Adv.Immunol.，44：65-92(1988)；Verhoeyen等人，Science，239：1534-1536(1988)；Padlan，Molec.Immun.，28：489-498(1991)；Padlan，Molec.Immun.，31(3)：169-217(1994)。
如本文所用，术语“嵌合抗体”是指这样的抗体分子，其中(a)恒定区或其部分被改变、替换或交换，使得抗原结合位点(可变区、CDR或其部分)与具有不同或改变的类别、效应子功能和/或物种的恒定区连接，或与向嵌合抗体赋予新特性的完全不同的分子(例如酶、毒素、激素、生长因子、药物等)连接；或(b)可变区或其部分被改变、替换或交换为具有不同或改变的抗原特异性的可变区(例如来自不同物种的CDR和框架区)。
术语“表位”是指抗体所特异性地结合的抗原的区域或区，即与抗体发生物理接触的区域或区，并且可包括几个氨基酸或几个氨基酸的部分，例如5个或6个或更多个，例如20个或更多个氨基酸，或那些氨基酸的部分。在一些情况下，表位包括例如来自碳水化合物、核酸或脂质的非蛋白质组分。在一些情况下，表位是三维部分。因此，例如，在靶标是蛋白质的情况下，表位可以包含连续的氨基酸，或来自通过蛋白质折叠而接近的蛋白质的不同部分的氨基酸(例如不连续的表位)。对于形成三维结构的其他类型的靶分子而言也是如此。
短语“特异性地结合”是指相比与非靶标化合物的结合，分子(例如抗体或抗体片段)与样品中靶标的结合的亲和力、亲合力更大，更容易，并且/或者持续时间更长。在一些实施方案中，特异性地结合靶标的抗体或其抗原结合部分是相比结合非靶标化合物以至少2倍的亲和力例如至少4倍、5倍、6倍、7倍、8倍、9倍、10倍、20倍、25倍、50倍或100倍的亲和力结合靶标的抗体或抗原结合部分。例如，特异性地结合TIGIT的抗体其结合TIGIT的亲和力通常是其结合非TIGIT靶标的亲和力的至少2倍。本领域普通技术人员通过阅读该定义应理解，例如特异性或优先结合第一靶标的抗体(或部分或表位)可以或不可以特异性或优先结合第二靶标。
术语“结合亲和力”在本文中用作两种分子例如抗体或其片段与抗原之间的非共价相互作用的强度的量度。术语“结合亲和力”用于描述单价相互作用(内在活性)。
通过单价相互作用实现的两种分子例如抗体或其片段与抗原之间的结合亲和力可以通过确定解离常数(KD)来量化。KD继而可以通过使用例如表面等离子体共振(SPR)方法(BiacoreTM)测量复合物形成和解离的动力学来确定。对应于单价复合物的缔合和解离的速率常数分别称为缔合速率常数ka(或kon)和解离速率常数kd(或koff)。KD通过等式KD＝kd/ka与ka和kd相关。解离常数的值可以通过众所周知的方法直接确定，并且甚至可以针对复杂混合物通过诸如例如在Caceci等人(1984，Byte 9：340-362)中陈述的方法计算得出。例如，可以使用诸如由Wong&Lohman(1993，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 90：5428-5432)公开的双滤膜硝酸纤维素滤膜结合测定建立KD。用于评估配体诸如抗体对靶抗原的结合能力的其他标准测定在本领域中是已知的，这些测定包括例如ELISA、蛋白质印迹、RIA和流式细胞术分析，以及本文其他地方所例示的其他测定。抗体的结合动力学和结合亲和力还可以通过本领域已知的或如下面实施例部分所述的标准测定来评定，这些测定诸如表面等离子体共振(SPR)(例如通过使用BiacoreTM系统)；动力学排除测定诸如
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和BioLayer干涉测量法(例如使用
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Octet平台)。在一些实施方案中，使用BioLayer干涉测量法测定确定结合亲和力。参见例如Wilson等人，Biochemistry and Molecular Biology Education，38：400-407(2010)；Dysinger等人，J.Immunol.Methods，379：30-41(2012)；和Estep等人，Mabs，2013，5：270-278。
如本文所用，术语“交叉反应”是指抗体与除该抗体所针对其而产生的抗原之外的抗原结合的能力。在一些实施方案中，交叉反应性是指抗体与来自非该抗体所针对其而产生的抗原的另一物种的抗原结合的能力。作为非限制性实例，针对人TIGIT抗原而产生的如本文所述的抗TIGIT抗体可以表现出与来自不同物种(例如小鼠或猴)的TIGIT的交叉反应性。
术语“多肽”、“肽”和“蛋白质”在本文中可互换使用，以指代氨基酸残基的聚合物。该术语适用于其中一个或多个氨基酸残基是相应的天然存在的氨基酸的人工化学模拟物的氨基酸聚合物，以及天然存在的氨基酸聚合物和非天然存在的氨基酸聚合物。如本文所用，该术语涵盖包括全长蛋白质在内的任何长度的氨基酸链，其中氨基酸残基通过共价肽键相连接。
术语“氨基酸”是指天然存在的氨基酸和合成的氨基酸，以及以类似于天然存在的氨基酸的方式起作用的氨基酸类似物和氨基酸模拟物。天然存在的氨基酸是由遗传密码编码的那些氨基酸，以及稍后被修饰的那些氨基酸，例如羟脯氨酸、γ-羧基谷氨酸和O-磷酸丝氨酸。氨基酸类似物是指与天然存在的氨基酸具有相同的基本化学结构(即α碳结合至氢、羧基基团、氨基基团和R基)的化合物，例如高丝氨酸、正亮氨酸、甲硫氨酸亚砜、甲硫氨酸甲基锍。此类类似物具有修饰的R基团(例如正亮氨酸)或修饰的肽主链，但保留了与天然存在的氨基酸相同的基本化学结构。“氨基酸模拟物”是指具有与氨基酸的一般化学结构不同的结构、但其作用的方式类似于天然存在的氨基酸的化学化合物。
在本文中可通过通常已知的三字母符号或通过IUPAC-IUB生物化学命名委员会推荐的单字母符号来提到氨基酸。同样地，可通过普遍接受的单字母代码来提到核苷酸。
如本文所用，术语“核酸”和“多核苷酸”可互换地指任何长度的核苷酸链，并且包括DNA和RNA。核苷酸可以是脱氧核糖核苷酸、核糖核苷酸、经修饰的核苷酸或碱基和/或它们的类似物，或可通过DNA或RNA聚合酶并入至链中的任何底物。多核苷酸可以包括经修饰的核苷酸，诸如甲基化核苷酸以及它们的类似物。本文考虑的多核苷酸的实例包括单链和双链DNA、单链和双链RNA以及具有单链和双链DNA和RNA混合物的杂交分子。
相对于核酸或蛋白质(例如抗体)使用的术语“分离的”表示该核酸或蛋白质基本上不含与其天然状态相关的其他细胞组分。它优选处于均质状态。它可以是干燥或水性溶液。通常使用分析化学技术诸如聚丙烯酰胺凝胶电泳或高效液相色谱法来测定纯度和均质性。为制剂中存在的主要物质的蛋白质是基本上纯化的。具体地，分离的基因与该基因侧翼的开放阅读框分开，并且编码除目标基因编码的蛋白质以外的蛋白质。术语“纯化的”表示核酸或蛋白质在电泳凝胶中产生基本上一个条带。具体地，这意味着核酸或蛋白质的纯度为至少85％，纯度更优选为至少95％，且纯度最优选为至少99％。
术语“免疫肿瘤学剂”是指增强、刺激或上调受试者中针对癌症的免疫应答(例如，刺激免疫应答以抑制肿瘤生长)的剂。在一些实施方案中，免疫肿瘤学剂是小分子、抗体、肽、蛋白质、环肽、拟肽、多核苷酸、抑制性RNA、适体、药物化合物或其他化合物。在一些实施方案中，免疫肿瘤学剂是PD-1或PD-1途径的拮抗剂或抑制剂。
“受试者”、“患者”、“个体”和类似术语可互换使用，并且除非另有说明，否则指哺乳动物诸如人和非人灵长类动物，以及兔、大鼠、小鼠、山羊、猪和其他哺乳动物物种。该术语不一定表示受试者已被诊断患有特定疾病，而是通常指代处于医疗监督之下的个体。患者可以是寻求治疗、监测、调整或修改现有治疗方案等的个体。
术语“疗法”、“治疗”和“改善”是指症状严重程度的任何降低。就治疗癌症而言，治疗可以指降低例如肿瘤大小、癌细胞数量、生长速率、转移活性、非癌细胞的细胞死亡等。如本文所用，术语“治疗”和“预防”并非旨在是绝对的术语。治疗和预防可以指发病的任何延迟、症状的改善、患者存活的改善、存活时间或速率的增加等。治疗和预防可以是完全的(没有可检测的剩余症状)或部分的，使得相较于未经历本文所述治疗的患者症状得以减少或减轻。可以将治疗效果与未接受治疗的个体或个体库或治疗前或治疗期间的不同时间的相同患者进行比较。在一些方面，与例如施用之前的个体或未经历治疗的对照个体相比，疾病的严重程度降低至少10％。在一些方面，疾病的严重程度降低至少25％、50％、75％、80％或90％；或者在一些情况下，使用标准诊断技术不再可检测到。
如本文所用，剂(例如，如本文所述的抗体)的“治疗量”或“治疗有效量”是预防、缓解、减轻或降低受试者的疾病(例如癌症)的症状的严重程度的剂的量。例如，对于给定参数，治疗有效量将显示出至少5％、10％、15％、20％、25％、40％、50％、60％、75％、80％、90％或至少100％的治疗效果的增加或减少。治疗功效还可表示为“倍数”增加或减少。例如，治疗有效量可以比对照具有至少1.2倍、1.5倍、2倍、5倍或更多的效果。
术语“施用”是指将剂、化合物或组合物递送至所需生物作用部位的方法。这些方法包括但不限于局部递送、肠胃外递送、静脉内递送、皮内递送、肌内递送、结肠递送、直肠递送或腹膜内递送。任选与本文所述的剂和方法一起使用的施用技术包括例如如Goodman和Gilman，The Pharmacological Basis of Therapeutics(当前版本)；Pergamon和Remington，Pharmaceutical Sciences(当前版本)，Mack Publishing Co.，Easton，PA中所讨论的技术。
III.针对TIGIT的抗体
在一个方面，提供了与人TIGIT(具有Ig和ITIM结构域的T细胞免疫受体)结合的抗体和抗体的抗原结合部分。如本文所述，在一些实施方案中，抗TIGIT抗体抑制TIGIT与配体CD155和CD112中的一者或两者之间的相互作用。在一些实施方案中，抗TIGIT抗体在功能性生物测定中抑制TIGIT与CD155之间的相互作用，使得CD155-CD226信号传导发生。在一些实施方案中，抗TIGIT抗体与抗PD-1剂(例如抗PD-1抗体)或抗PD-L1剂(例如抗PD-L1抗体)显示出协同作用。
抗TIGIT抗体的特征
在一些实施方案中，抗TIGIT抗体以高亲和力与人TIGIT蛋白(SEQ ID NO：218)或其部分结合。在一些实施方案中，抗体对人TIGIT的结合亲和力(KD)小于5nM、小于1nM、小于500pM、小于250pM、小于150pM、小于100pM、小于50pM、小于40pM、小于30pM、小于20pM或小于约10pM。在一些实施方案中，抗体对人TIGIT的结合亲和力(KD)小于50pM。在一些实施方案中，抗体对人TIGIT的KD的范围为约1pM至约5nM，例如约1pM至约1nM、约1pM至约500pM、约5pM至约250pM或约10pM至约100pM。
在一些实施方案中，除了以高亲和力与人TIGIT结合之外，抗TIGIT抗体表现出与食蟹猴(“cyno”)TIGIT(例如，具有SEQ ID NO：219序列的cyno TIGIT蛋白)和/或小鼠TIGIT(例如，具有SEQ ID NO：220序列的小鼠TIGIT蛋白)的交叉反应性。在一些实施方案中，抗TIGIT抗体以100nM或更低的结合亲和力(KD)与小鼠TIGIT(例如，具有SEQ ID NO：220序列的小鼠TIGIT)结合。在一些实施方案中，抗TIGIT抗体以5nM或更低的KD与人TIGIT结合，并以100nM或更低的KD与小鼠TIGIT交叉反应。在一些实施方案中，与人TIGIT结合的抗TIGIT抗体还表现出与食蟹猴TIGIT和小鼠TIGIT的交叉反应性。
在一些实施方案中，通过检测抗TIGIT抗体与在细胞(例如表达人TIGIT、cynoTIGIT或小鼠TIGIT的细胞系，或内源性表达TIGIT的原代细胞，例如内源性表达人TIGIT、cyno TIGIT或小鼠TIGIT的原代T细胞)上表达的TIGIT的特异性结合来确定抗体交叉反应性。在一些实施方案中，通过检测抗TIGIT抗体与纯化或重组TIGIT(例如纯化或重组人TIGIT、纯化或重组cyno TIGIT、或纯化或重组小鼠TIGIT)或包含TIGIT的嵌合蛋白(例如包含人TIGIT、cyno TIGIT或小鼠TIGIT的Fc融合蛋白，或包含人TIGIT、cyno TIGIT或小鼠TIGIT的带His标签蛋白)的特异性结合来确定抗体结合和抗体交叉反应性。
用于分析结合亲和力、结合动力学和交叉反应性的方法在本领域中是已知的。参见例如Ernst等人，Determination of Equilibrium Dissociation Constants，Therapeutic Monoclonal Antibodies (Wiley&Sons编2009)。这些方法包括但不限于固相结合测定(例如ELISA测定)、免疫沉淀、表面等离子体共振(SPR，例如BiacoreTM(GEHealthcare，Piscataway，NJ))、动力学排除测定(例如
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)、流式细胞术、荧光活化细胞分选(FACS)、BioLayer干涉测量法(例如OctetTM(FortéBio，Inc.，Menlo Park，CA))和蛋白质印迹分析。SPR技术在例如Hahnfeld等人Determination of Kinetic Data UsingSPR Biosensors，Molecular Diagnosis of Infectious Diseases(2004)中有所评述。在典型的SPR实验中，将一种相互作用物(靶标或靶向剂)固定在流动池中的SPR活性镀金载玻片上，并引入含有其他相互作用物的样品流过表面。当将给定波长的光照射在表面上时，金的光学反射率的变化指示结合以及结合的动力学。在一些实施方案中，使用动力学排除测定确定亲和力。该技术在例如Darling等人，Assay and Drug Development Technologies第2卷，第6647-657期(2004)中有所描述。在一些实施方案中，使用BioLayer干涉测量法测定确定亲和力。该技术在Wilson等人，Biochemistry and Molecular Biology Education，38：400-407(2010)；Dysinger等人，J.Immunol.Methods，379：30-41(2012)中有所描述。
在一些实施方案中，本公开的抗TIGIT抗体及其抗原结合部分抑制TIGIT与配体CD155之间的相互作用。在一些实施方案中，抗TIGIT抗体及其抗原结合部分抑制TIGIT与配体CD112之间的相互作用。在一些实施方案中，抗TIGIT抗体及其抗原结合部分抑制TIGIT与配体CD155和CD112两者之间的相互作用。
在一些实施方案中，通过在结合测定中测量TIGIT与CD155或CD112之间的物理相互作用是否降低来评估抗TIGIT抗体抑制TIGIT与CD155和/或CD112之间相互作用的能力。在一些实施方案中，结合测定是竞争性结合测定。该测定可以以各种形式进行，这些形式诸如但不限于ELISA测定、流式细胞术、表面等离子体共振(SPR)测定(例如BiacoreTM)或BioLayer干涉测量法(例如ForteBio OctetTM)。参见例如Duff等人，Biochem J.，2009，419：577-584；Dysinger等人，J.Immunol.Methods，379：30-41(2012)；以及Estep等人，Mabs，2013，5：270-278。
在一些实施方案中，抗TIGIT抗体在功能性生物测定诸如功能性细胞测定中抑制TIGIT与CD155之间的相互作用，在所述功能性细胞测定中通过测量细胞中CD155-CD226信号传导的活化(例如，经由下游报告分子的活化)来评估TIGIT/CD155相互作用的抑制。在下面的实施例部分中描述了非限制性示例性功能性细胞测定。在该示例性功能测定中，荧光素酶表达需要TCR接合和来自CD155-CD226的共刺激信号。第一细胞(也称为“T效应细胞”)在细胞表面上表达TCR复合物、TIGIT和CD226，并含有荧光素酶基因。第二细胞(也称为“人工抗原呈递细胞”)表达TCR活化剂和CD155。在不存在抗TIGIT抗体的情况下细胞的共培养导致TIGIT-CD155相互作用，这抑制CD155-CD226对效应细胞的共刺激，因此阻止效应细胞表达荧光素酶。在存在抑制TIGIT与CD155之间相互作用的抗TIGIT抗体的情况下，CD155和CD226能够相互作用并产生共刺激信号，该共刺激信号驱动第一细胞中的荧光素酶表达。此类功能性细胞测定在本领域中在例如Cong等人，Genetic Engineering andBiotechnology News，2015，35(10)：16-17中有所描述，并且也是可商购获得的(例如，TIGIT/CD155阻断生物测定药盒，Promega Corp.，Madison，WI)。在一些实施方案中，与不存在抗TIGIT抗体的情况下CD155-CD226信号传导的水平或量相比，抑制TIGIT与CD155之间相互作用的抗TIGIT抗体使CD155-CD226信号传导的活化水平或量增加(例如，如在细胞测定诸如TIGIT/CD155阻断生物测定药盒中测量的)至少10％、至少20％、至少30％、至少40％、至少50％、至少60％、至少70％、至少80％、至少90％或更多。在一些实施方案中，与不存在抗TIGIT抗体的情况下CD155-CD226信号传导的水平或量相比，抑制TIGIT与CD155之间相互作用的抗TIGIT抗体使CD155-CD226信号传导的活化水平或量增加(例如，如在细胞测定诸如TIGIT/CD155阻断生物测定药盒中测量的)至少约1.2倍、至少约1.5倍、至少约2倍、至少约3倍、至少约4倍、至少约5倍、至少约6倍、至少约7倍、至少约8倍、至少约9倍、至少约10倍或更多。
在一些实施方案中，与人TIGIT(并且任选地表现出与食蟹猴和/或小鼠TIGIT的交叉反应性和/或任选地抑制TIGIT与CD155和/或CD112之间的相互作用)结合的抗TIGIT抗体与抗PD-1剂(例如抗PD-1抗体)表现出协同作用。在一些实施方案中，抗TIGIT抗体将抗PD-1剂(例如抗PD-1抗体)的作用增强至少约1.2倍、至少约1.5倍、至少约2倍、至少约3倍、至少约4倍、至少约5倍、至少约6倍、至少约7倍、至少约8倍、至少约9倍、至少约10倍或更多。
在一些实施方案中，抗TIGIT抗体在功能性生物测定诸如功能性细胞测定中与抗PD-1剂(例如抗PD-1抗体)表现出协同作用，在所述功能性细胞测定中中通过测量效应细胞中信号传导的活化来评估TIGIT信号传导的抑制和PD-1信号传导的抑制。在下面的实施例部分中描述了非限制性示例性功能性细胞测定。在该示例性功能性测定中，第一细胞(也称为“T效应细胞”)在细胞表面上表达TCR复合物、TIGIT、CD226和PD-1，并含有荧光素酶基因。第二细胞(也称为“人工抗原呈递细胞”)表达TCR活化剂、CD155和PD-L1。通过以下中的一者或两者来活化效应细胞的荧光素酶基因表达：(1)阻断TIGIT-CD155的相互作用，从而允许CD155-CD226相互作用并随后共刺激效应细胞的荧光素酶表达，或(2)阻断PD-1/PD-L1的相互作用，从而减轻对效应细胞的荧光素酶表达的抑制。可以测量和定量在不存在或存在抗TIGIT抗体和抗PD-1剂或抗PD-L1剂的情况下荧光素酶的表达水平，以便确定抗TIGIT抗体是否与抗PD-1剂或抗PD-L1剂表现出协同作用。此类功能性细胞测定在本领域中(例如Cong等人，Genetic Engineering and Biotechnology News，2015，35(10)：16-17)中有所描述，并且也是可商购获得的(例如，PD-1/TIGIT组合生物测定药盒，Promega Corp.，Madison，WI)。
在一些实施方案中，可以使用体内模型例如体内肿瘤模型来测量抗TIGIT抗体的功效，以及测量抗TIGIT抗体是否与抗PD-1剂(例如抗PD-1抗体)或抗PD-L1剂(例如抗PD-L1抗体)以协同方式抑制。例如，可以使用同系小鼠肿瘤模型评估如本文所述的抗TIGIT抗体的功效，或当与抗PD-1剂或抗PD-L1剂组合施用时如本文所述的抗TIGIT抗体的功效。合适的同系肿瘤模型在本领域中有所描述。参见例如Rios-Doria等人，Neoplasia，2015，17：661-670；和Moynihan等人，Nature Medicine，2016，doi：10.1038/nm.4200。在一些实施方案中，与对照或参考值相比(例如，与未治疗对照中的肿瘤大小或肿瘤总数相比)，在体内模型中抗TIGIT抗体将肿瘤大小或肿瘤总数减少至少10％、至少20％、至少30％、至少40％、至少50％、至少60％、至少70％、至少80％、至少90％或更多。
在一些实施方案中，抗TIGIT抗体识别人TIGIT的表位，该表位包含氨基酸位置81和82(如参考SEQ ID NO：218编号的)中的一个或两个。在一些实施方案中，抗TIGIT抗体识别表位，该表位包含位置81处的Phe。在一些实施方案中，抗TIGIT抗体识别表位，该表位包含位置82处的Lys或Ser。在一些实施方案中，抗TIGIT抗体识别表位，该表位包含位置81处的Phe和位置82处的Lys。在一些实施方案中，抗TIGIT抗体识别表位，该表位包含位置81处的Phe和位置82处的Ser。
在一些实施方案中，抗TIGIT抗体识别包含氨基酸位置81和82中的一个或两个的线性表位(例如，包含位置81处的Phe和位置82处的Lys或Ser的不连续表位)。在一些实施方案中，抗TIGIT抗体识别包含氨基酸位置81和82中的一个或两个的不连续表位(例如，包含位置81处的Phe和位置82处的Lys或Ser的不连续表位)。
在一些实施方案中，抗TIGIT抗体与人TIGIT上的表位结合，该表位还包含氨基酸位置51、52、53、54、55、73、74、75、76、77、79、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92或93中的一个或多个(例如，1个、2个、3个、4个、5个、6个、7个、8个、9个、10个、12个、13个、14个、15个或更多个)。在一些实施方案中，抗TIGIT抗体与人TIGIT上的表位结合，该表位还包含以下中的一个或多个(例如，1个、2个、3个、4个、5个、6个、7个、8个、9个、10个、12个、13个、14个、15个或更多个)：位置51处的Thr、位置52处的Ala、位置53处的Glu或Gln、位置54处的Val、位置55处的Thr、位置73处的Leu、位置74处的Gly、位置75处的Trp、位置76处的His、位置77处的Val或Ile、位置79处的Ser或Pro、位置83处的Asp、位置84处的Arg、位置85处的Val、位置86处的Val或Ala、位置87处的Pro、位置88处的Gly、位置89处的Pro、位置90处的Ser或Gly、位置91处的Leu、位置92处的Gly、或位置93处的Leu。在一些实施方案中，抗TIGIT抗体与人TIGIT上的表位结合，该表位还包含氨基酸残基Thr51、Ala52、Gln53、Val54、Thr55、Leu73、Gly74、Trp75、His76、Ile77、Pro79、Asp83、Arg84、Val85、Ala86、Pro87、Gly88、Pro89、Gly90、Leu91、Gly92和Leu93中的一个或多个(例如，1个、2个、3个、4个、5个、6个、7个、8个、9个、10个、12个、13个、14个、15个或更多个)。
在一些实施方案中，抗TIGIT抗体识别表位，该表位包含位置81处的Phe和位置82处的Lys或Ser，并且还包含位置51处的Thr、位置52处的Ala、位置53处的Glu或Gln、位置54处的Val和/或位置55处的Thr。在一些实施方案中，抗TIGIT抗体识别表位，该表位包含位置81处的Phe和位置82处的Lys或Ser，并且还包含位置74处的Gly、位置75处的Trp、位置76处的His和/或位置77处的Val或Ile。在一些实施方案中，抗TIGIT抗体识别表位，该表位包含位置81处的Phe和位置82处的Lys或Ser，并且还包含位置87处的Pro、位置88处的Gly、位置89处的Pro、位置90处的Ser或Gly、位置91处的Leu、位置92处的Gly和/或位置93处的Leu。在一些实施方案中，抗TIGIT抗体识别表位，该表位包含氨基酸残基Thr51、Ala52、Gln53、Val54、Thr55、Gly74、Trp75、His76、Ile77、Phe81、Lys82、Pro87、Gly88、Pro89、Gly90、Leu91、Gly92和Leu93。
在一些实施方案中，抗TIGIT抗体识别表位，该表位包含位置81处的Phe和位置82处的Lys或Ser，并且还包含位置52处的Ala和/或位置53处的Glu或Gln。在一些实施方案中，抗TIGIT抗体识别表位，该表位包含位置81处的Phe和位置82处的Lys或Ser，并且还包含位置73处的Leu、位置74处的Gly和/或位置75处的Trp。在一些实施方案中，抗TIGIT抗体识别表位，该表位包含位置81处的Phe和位置82处的Lys或Ser，并且还包含位置83处的Asp、位置84处的Arg、位置85处的Val和/或位置86处的Val或Ala。在一些实施方案中，抗TIGIT抗体识别表位，该表位包含氨基酸残基Ala52、Gln53、Leu73、Gly74、Trp75、Pro79、Phe81、Lys82、Asp83、Arg84、Val85和Ala86。
在一些实施方案中，抗TIGIT抗体识别人TIGIT的表位，该表位包含序列ICNADLGWHISPSFK(SEQ ID NO：258)，其对应于人TIGIT(SEQ ID NO：218)的残基68-82。在一些实施方案中，抗TIGIT抗体识别人TIGIT的表位，该表位由序列ICNADLGWHISPSFK(SEQ IDNO：258)组成。
抗TIGIT抗体序列
在一些实施方案中，与人TIGIT结合并且任选地表现出与食蟹猴TIGIT和/或小鼠TIGIT的交叉反应性的抗TIGIT抗体包含来源于本文所述的任何以下抗体的轻链序列或其部分和/或重链序列或其部分：克隆2、克隆2C、克隆3、克隆5、克隆13、克隆13A、克隆13B、克隆13C、克隆13D、克隆14、克隆16、克隆16C、克隆16D、克隆16E、克隆18、克隆21、克隆22、克隆25、克隆25A、克隆25B、克隆25C、克隆25D、克隆25E、克隆27或克隆54。抗TIGIT抗体克隆2、克隆2C、克隆3、克隆5、克隆13、克隆13A、克隆13B、克隆13C、克隆13D、克隆14、克隆16、克隆16C、克隆16D、克隆16E、克隆18、克隆21、克隆22、克隆25、克隆25A、克隆25B、克隆25C、克隆25D、克隆25E、克隆27和克隆54的CDR、轻链可变结构域(VL)和重链可变结构域(VH)的氨基酸序列列于下表3中。
在一些实施方案中，抗TIGIT抗体包含重链可变区(VH)，所述重链可变区(VH)包含与SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：19、SEQ ID NO：37、SEQ ID NO：55、SEQ ID NO：73、SEQ ID NO：91、SEQ ID NO：109、SEQ ID NO：127、SEQ ID NO：145、SEQ ID NO：163、SEQ ID NO：181、SEQID NO：199、SEQ ID NO：245、SEQ ID NO：246、SEQ ID NO：247、SEQ ID NO：248、SEQ ID NO：249、SEQ ID NO：250、SEQ ID NO：251、SEQ ID NO：252、SEQ ID NO：253、SEQ ID NO：254、SEQID NO：255、SEQ ID NO：256或SEQ ID NO：257具有至少90％序列同一性(例如，至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性)的氨基酸序列。在一些实施方案中，抗TIGIT抗体包含VH，所述VH包含SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：19、SEQ ID NO：37、SEQ ID NO：55、SEQ ID NO：73、SEQ ID NO：91、SEQ ID NO：109、SEQ ID NO：127、SEQ ID NO：145、SEQ ID NO：163、SEQ ID NO：181、SEQ ID NO：199、SEQID NO：245、SEQ ID NO：246、SEQ ID NO：247、SEQ ID NO：248、SEQ ID NO：249、SEQ ID NO：250、SEQ ID NO：251、SEQ ID NO：252、SEQ ID NO：253、SEQ ID NO：254、SEQ ID NO：255、SEQID NO：256或SEQ ID NO：257的氨基酸序列。在一些实施方案中，与参考序列(例如，SEQ IDNO：1、SEQ ID NO：19、SEQ ID NO：37、SEQ ID NO：55、SEQ ID NO：73、SEQ ID NO：91、SEQ IDNO：109、SEQ ID NO：127、SEQ ID NO：145、SEQ ID NO：163、SEQ ID NO：181、SEQ ID NO：199、SEQ ID NO：245、SEQ ID NO：246、SEQ ID NO：247、SEQ ID NO：248、SEQ ID NO：249、SEQ IDNO：250、SEQ ID NO：251、SEQ ID NO：252、SEQ ID NO：253、SEQ ID NO：254、SEQ ID NO：255、SEQ ID NO：256或SEQ ID NO：257)具有至少90％序列同一性的VH序列相对于参考序列含有一个、两个、三个、四个、五个、六个、七个、八个、九个、十个或更多个取代(例如保守取代)、插入或缺失，但保留了与人TIGIT结合的能力，并且任选地保留了阻断CD155和/或CD112与TIGIT结合的能力。
在一些实施方案中，抗TIGIT抗体包含轻链可变区(VL)，所述轻链可变区(VL)包含与SEQ ID NO：10、SEQ ID NO：28、SEQ ID NO：46、SEQ ID NO：64、SEQ ID NO：82、SEQ ID NO：100、SEQ ID NO：118、SEQ ID NO：136、SEQ ID NO：154、SEQ ID NO：172、SEQ ID NO：190或SEQ ID NO：208具有至少90％序列同一性(例如，至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性)的氨基酸序列。在一些实施方案中，抗TIGIT抗体包含VL，所述VL包含SEQ ID NO：10、SEQ ID NO：28、SEQ ID NO：46、SEQ ID NO：64、SEQ ID NO：82、SEQ ID NO：100、SEQ ID NO：118、SEQ ID NO：136、SEQ IDNO：154、SEQ ID NO：172、SEQ ID NO：190或SEQ ID NO：208的氨基酸序列。在一些实施方案中，与参考序列(例如，SEQ ID NO：10、SEQ ID NO：28、SEQ ID NO：46、SEQ ID NO：64、SEQ IDNO：82、SEQ ID NO：100、SEQ ID NO：118、SEQ ID NO：136、SEQ ID NO：154、SEQ ID NO：172、SEQ ID NO：190或SEQ ID NO：208)具有至少90％序列同一性的VH序列相对于参考序列含有一个、两个、三个、四个、五个、六个、七个、八个、九个、十个或更多个取代(例如保守取代)、插入或缺失，但保留了与人TIGIT结合的能力，并且任选地保留了阻断CD155和/或CD112与TIGIT结合的能力。
在一些实施方案中，抗TIGIT抗体包含重链可变区，所述重链可变区包含与SEQ IDNO：1、SEQ ID NO：19、SEQ ID NO：37、SEQ ID NO：55、SEQ ID NO：73、SEQ ID NO：91、SEQ IDNO：109、SEQ ID NO：127、SEQ ID NO：145、SEQ ID NO：163、SEQ ID NO：181、SEQ ID NO：199、SEQ ID NO：245、SEQ ID NO：246、SEQ ID NO：247、SEQ ID NO：248、SEQ ID NO：249、SEQ IDNO：250、SEQ ID NO：251、SEQ ID NO：252、SEQ ID NO：253、SEQ ID NO：254、SEQ ID NO：255、SEQ ID NO：256或SEQ ID NO：257具有至少90％序列同一性(例如，至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性)的氨基酸序列；并且还包含轻链可变区，所述轻链可变区包含与SEQ ID NO：10、SEQ ID NO：28、SEQ ID NO：46、SEQ ID NO：64、SEQ ID NO：82、SEQ ID NO：100、SEQ ID NO：118、SEQ ID NO：136、SEQ ID NO：154、SEQ ID NO：172、SEQ ID NO：190或SEQ ID NO：208具有至少90％序列同一性(例如，至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性)的氨基酸序列。在一些实施方案中，抗TIGIT抗体包含重链可变区，所述重链可变区包含SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：19、SEQ ID NO：37、SEQ ID NO：55、SEQ ID NO：73、SEQ ID NO：91、SEQ ID NO：109、SEQ ID NO：127、SEQ ID NO：145、SEQ IDNO：163、SEQ ID NO：181、SEQ ID NO：199、SEQ ID NO：245、SEQ ID NO：246、SEQ ID NO：247、SEQ ID NO：248、SEQ ID NO：249、SEQ ID NO：250、SEQ ID NO：251、SEQ ID NO：252、SEQ IDNO：253、SEQ ID NO：254、SEQ ID NO：255、SEQ ID NO：256或SEQ ID NO：257的氨基酸序列；并且还包含轻链可变区，所述轻链可变区包含SEQ ID NO：10、SEQ ID NO：28、SEQ ID NO：46、SEQ ID NO：64、SEQ ID NO：82、SEQ ID NO：100、SEQ ID NO：118、SEQ ID NO：136、SEQ IDNO：154、SEQ ID NO：172、SEQ ID NO：190或SEQ ID NO：208的氨基酸序列。
在一些实施方案中，抗TIGIT抗体包含：
(a)VH，所述VH包含与SEQ ID NO：1或SEQ ID NO：245具有至少90％序列同一性(例如，至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性)的氨基酸序列；和VL，所述VL包含与SEQ ID NO：10具有至少90％序列同一性(例如，至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性)的氨基酸序列；
(b)VH，所述VH包含与SEQ ID NO：19具有至少90％序列同一性(例如，至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性)的氨基酸序列；和VL，所述VL包含与SEQ ID NO：28具有至少90％序列同一性(例如，至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性)的氨基酸序列；
(c)VH，所述VH包含与SEQ ID NO：37具有至少90％序列同一性(例如，至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性)的氨基酸序列；和VL，所述VL包含与SEQ ID NO：46具有至少90％序列同一性(例如，至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性)的氨基酸序列；
(d)VH，所述VH包含与SEQ ID NO：55、SEQ ID NO：246、SEQ ID NO：247、SEQ ID NO：248或SEQ ID NO：249中的任一个具有至少90％序列同一性(例如，至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性)的氨基酸序列；和VL，所述VL包含与SEQ ID NO：64具有至少90％序列同一性(例如，至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性)的氨基酸序列；
(e)VH，所述VH包含与SEQ ID NO：73具有至少90％序列同一性(例如，至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性)的氨基酸序列；和VL，所述VL包含与SEQ ID NO：82具有至少90％序列同一性(例如，至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性)的氨基酸序列；
(f)VH，所述VH包含与SEQ ID NO：91、SEQ ID NO：250、SEQ ID NO：251或SEQ ID NO：252中的任一个具有至少90％序列同一性(例如，至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性)的氨基酸序列；和VL，所述VL包含与SEQ ID NO：100具有至少90％序列同一性(例如，至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性)的氨基酸序列；
(g)VH，所述VH包含与SEQ ID NO：109具有至少90％序列同一性(例如，至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性)的氨基酸序列；和VL，所述VL包含与SEQ ID NO：118具有至少90％序列同一性(例如，至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性)的氨基酸序列；
(h)VH，所述VH包含与SEQ ID NO：127具有至少90％序列同一性(例如，至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性)的氨基酸序列；和VL，所述VL包含与SEQ ID NO：136具有至少90％序列同一性(例如，至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性)的氨基酸序列；
(i)VH，所述VH包含与SEQ ID NO：145具有至少90％序列同一性(例如，至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性)的氨基酸序列；和VL，所述VL包含与SEQ ID NO：154具有至少90％序列同一性(例如，至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性)的氨基酸序列；
(j)VH，所述VH包含与SEQ ID NO：163、SEQ ID NO：253、SEQ ID NO：254、SEQ ID NO：255、SEQ ID NO：256或SEQ ID NO：257中的任一个具有至少90％序列同一性(例如，至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性)的氨基酸序列；和VL，所述VL包含与SEQ ID NO：172具有至少90％序列同一性(例如，至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性)的氨基酸序列；
(k)VH，所述VH包含与SEQ ID NO：181具有至少90％序列同一性(例如，至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性)的氨基酸序列；和VL，所述VL包含与SEQ ID NO：190具有至少90％序列同一性(例如，至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性)的氨基酸序列；或
(l)VH，所述VH包含与SEQ ID NO：199具有至少90％序列同一性(例如，至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性)的氨基酸序列；和VL，所述VL包含与SEQ ID NO：208具有至少90％序列同一性(例如，至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性)的氨基酸序列。
在一些实施方案中，抗TIGIT抗体包含：
(a)包含SEQ ID NO：1的氨基酸序列的VH和包含SEQ ID NO：10的氨基酸序列的VL；
(b)包含SEQ ID NO：19的氨基酸序列的VH和包含SEQ ID NO：28的氨基酸序列的VL；
(c)包含SEQ ID NO：37的氨基酸序列的VH和包含SEQ ID NO：46的氨基酸序列的VL；
(d)包含SEQ ID NO：55的氨基酸序列的VH和包含SEQ ID NO：64的氨基酸序列的VL；
(e)包含SEQ ID NO：73的氨基酸序列的VH和包含SEQ ID NO：82的氨基酸序列的VL；
(f)包含SEQ ID NO：91的氨基酸序列的VH和包含SEQ ID NO：100的氨基酸序列的VL；
(g)包含SEQ ID NO：109的氨基酸序列的VH和包含SEQ ID NO：118的氨基酸序列的VL；
(h)包含SEQ ID NO：127的氨基酸序列的VH和包含SEQ ID NO：136的氨基酸序列的VL；
(i)包含SEQ ID NO：145的氨基酸序列的VH和包含SEQ ID NO：154的氨基酸序列的VL；
(j)包含SEQ ID NO：163的氨基酸序列的VH和包含SEQ ID NO：172的氨基酸序列的VL；
(k)包含SEQ ID NO：181的氨基酸序列的VH和包含SEQ ID NO：190的氨基酸序列的VL；
(l)包含SEQ ID NO：199的氨基酸序列的VH和包含SEQ ID NO：208的氨基酸序列的VL；或
(m)包含SEQ ID NO：245的氨基酸序列的VH和包含SEQ ID NO：10的氨基酸序列的VL；或
(n)包含SEQ ID NO：246的氨基酸序列的VH和包含SEQ ID NO：64的氨基酸序列的VL；或
(o)包含SEQ ID NO：247的氨基酸序列的VH和包含SEQ ID NO：64的氨基酸序列的VL；或
(p)包含SEQ ID NO：248的氨基酸序列的VH和包含SEQ ID NO：64的氨基酸序列的VL；
(q)包含SEQ ID NO：249的氨基酸序列的VH和包含SEQ ID NO：64的氨基酸序列的VL；或
(r)包含SEQ ID NO：250的氨基酸序列的VH和包含SEQ ID NO：100的氨基酸序列的VL；或
(s)包含SEQ ID NO：251的氨基酸序列的VH和包含SEQ ID NO：100的氨基酸序列的VL；或
(t)包含SEQ ID NO：252的氨基酸序列的VH和包含SEQ ID NO：100的氨基酸序列的VL；或
(u)包含SEQ ID NO：253的氨基酸序列的VH和包含SEQ ID NO：172的氨基酸序列的VL；或
(v)包含SEQ ID NO：254的氨基酸序列的VH和包含SEQ ID NO：172的氨基酸序列的VL；或
(w)包含SEQ ID NO：255的氨基酸序列的VH和包含SEQ ID NO：172的氨基酸序列的VL；或
(x)包含SEQ ID NO：256的氨基酸序列的VH和包含SEQ ID NO：172的氨基酸序列的VL；或
(y)包含SEQ ID NO：257的氨基酸序列的VH和包含SEQ ID NO：172的氨基酸序列的VL。
在一些实施方案中，抗TIGIT抗体包含以下中的一个或多个(例如，一个、两个、三个、四个、五个或更多个)：
重链CDR1序列，所述重链CDR1序列包含SEQ ID NO：4、SEQ ID NO：22、SEQ ID NO：40、SEQ ID NO：58、SEQ ID NO：76、SEQ ID NO：94、SEQ ID NO：112、SEQ ID NO：130、SEQ ID NO：148、SEQ ID NO：166、SEQ ID NO：184、SEQ ID NO：202、SEQ ID NO：221、SEQ ID NO：224、SEQID NO：226、SEQ ID NO：231、SEQ ID NO：233、SEQ ID NO：239或SEQ ID NO：243中的任一个的氨基酸序列；
重链CDR2序列，所述重链CDR2序列包含SEQ ID NO：6、SEQ ID NO：24、SEQ ID NO：42、SEQ ID NO：60、SEQ ID NO：78、SEQ ID NO：96、SEQ ID NO：114、SEQ ID NO：132、SEQ ID NO：150、SEQ ID NO：168、SEQ ID NO：186、SEQ ID NO：204、SEQ ID NO：222、SEQ ID NO：225、SEQID NO：227、SEQ ID NO：229、SEQ ID NO：232、SEQ ID NO：234、SEQ ID NO：238或SEQ ID NO：240中的任一个的氨基酸序列；
重链CDR3序列，所述重链CDR3序列包含SEQ ID NO：8、SEQ ID NO：26、SEQ ID NO：44、SEQ ID NO：62、SEQ ID NO：80、SEQ ID NO：98、SEQ ID NO：116、SEQ ID NO：134、SEQ ID NO：152、SEQ ID NO：170、SEQ ID NO：188、SEQ ID NO：206、SEQ ID NO：223、SEQ ID NO：228、SEQID NO：230、SEQ ID NO：235、SEQ ID NO：236、SEQ ID NO：237、SEQ ID NO：241、SEQ ID NO：242或SEQ ID NO：244中的任一个的氨基酸序列；
轻链CDR1序列，所述轻链CDR1序列包含SEQ ID NO：13、SEQ ID NO：31、SEQ ID NO：49、SEQ ID NO：67、SEQ ID NO：85、SEQ ID NO：103、SEQ ID NO：121、SEQ ID NO：139、SEQ IDNO：157、SEQ ID NO：175、SEQ ID NO：193或SEQ ID NO：211中的任一个的氨基酸序列；
轻链CDR2序列，所述轻链CDR2序列包含SEQ ID NO：15、SEQ ID NO：33、SEQ ID NO：51、SEQ ID NO：69、SEQ ID NO：87、SEQ ID NO：105、SEQ ID NO：123、SEQ ID NO：141、SEQ IDNO：159、SEQ ID NO：177、SEQ ID NO：195或SEQ ID NO：213中的任一个的氨基酸序列；和/或
轻链CDR3序列，所述轻链CDR3序列包含SEQ ID NO：17、SEQ ID NO：35、SEQ ID NO：53、SEQ ID NO：71、SEQ ID NO：89、SEQ ID NO：107、SEQ ID NO：125、SEQ ID NO：143、SEQ IDNO：161、SEQ ID NO：179、SEQ ID NO：197或SEQ ID NO：215中的任一个的氨基酸序列。
在一些实施方案中，抗TIGIT抗体包含重链CDR1序列，所述重链CDR1序列包含SEQID NO：4、SEQ ID NO：22、SEQ ID NO：40、SEQ ID NO：58、SEQ ID NO：76、SEQ ID NO：94、SEQID NO：112、SEQ ID NO：130、SEQ ID NO：148、SEQ ID NO：166、SEQ ID NO：184、SEQ ID NO：202、SEQ ID NO：221、SEQ ID NO：224、SEQ ID NO：226、SEQ ID NO：231、SEQ ID NO：233、SEQID NO：239或SEQ ID NO：243中的任一个的氨基酸序列；重链CDR2序列，所述重链CDR2序列包含SEQ ID NO：6、SEQ ID NO：24、SEQ ID NO：42、SEQ ID NO：60、SEQ ID NO：78、SEQ IDNO：96、SEQ ID NO：114、SEQ ID NO：132、SEQ ID NO：150、SEQ ID NO：168、SEQ ID NO：186、SEQ ID NO：204、SEQ ID NO：222、SEQ ID NO：225、SEQ ID NO：227、SEQ ID NO：229、SEQ IDNO：232、SEQ ID NO：234、SEQ ID NO：238或SEQ ID NO：240中的任一个的氨基酸序列；以及重链CDR3序列，所述重链CDR3序列包含SEQ ID NO：8、SEQ ID NO：26、SEQ ID NO：44、SEQ IDNO：62、SEQ ID NO：80、SEQ ID NO：98、SEQ ID NO：116、SEQ ID NO：134、SEQ ID NO：152、SEQID NO：170、SEQ ID NO：188、SEQ ID NO：206、SEQ ID NO：223、SEQ ID NO：228、SEQ ID NO：230、SEQ ID NO：235、SEQ ID NO：236、SEQ ID NO：237、SEQ ID NO：241、SEQ ID NO：242或SEQ ID NO：244中的任一个的氨基酸序列。
在一些实施方案中，抗TIGIT抗体包含轻链CDR1序列，所述轻链CDR1序列包含SEQID NO：13、SEQ ID NO：31、SEQ ID NO：49、SEQ ID NO：67、SEQ ID NO：85、SEQ ID NO：103、SEQ ID NO：121、SEQ ID NO：139、SEQ ID NO：157、SEQ ID NO：175、SEQ ID NO：193或SEQ IDNO：211中的任一个的氨基酸序列；轻链CDR2序列，所述轻链CDR2序列包含SEQ ID NO：15、SEQ ID NO：33、SEQ ID NO：51、SEQ ID NO：69、SEQ ID NO：87、SEQ ID NO：105、SEQ ID NO：123、SEQ ID NO：141、SEQ ID NO：159、SEQ ID NO：177、SEQ ID NO：195或SEQ ID NO：213的任一个的氨基酸序列；以及轻链CDR3序列，所述轻链CDR3序列包含SEQ ID NO：17、SEQ IDNO：35、SEQ ID NO：53、SEQ ID NO：71、SEQ ID NO：89、SEQ ID NO：107、SEQ ID NO：125、SEQID NO：143、SEQ ID NO：161、SEQ ID NO：179、SEQ ID NO：197或SEQ ID NO：215中的任一个的氨基酸序列。
在一些实施方案中，抗TIGIT抗体包含：
(i)重链CDR1序列，所述重链CDR1序列包含SEQ ID NO：4、SEQ ID NO：22、SEQ ID NO：40、SEQ ID NO：58、SEQ ID NO：76、SEQ ID NO：94、SEQ ID NO：112、SEQ ID NO：130、SEQ IDNO：148、SEQ ID NO：166、SEQ ID NO：184、SEQ ID NO：202、SEQ ID NO：221、SEQ ID NO：224、SEQ ID NO：226、SEQ ID NO：231、SEQ ID NO：233、SEQ ID NO：239或SEQ ID NO：243中的任一个的氨基酸序列；以及
(ii)重链CDR2序列，所述重链CDR2序列包含SEQ ID NO：6、SEQ ID NO：24、SEQ ID NO：42、SEQ ID NO：60、SEQ ID NO：78、SEQ ID NO：96、SEQ ID NO：114、SEQ ID NO：132、SEQ IDNO：150、SEQ ID NO：168、SEQ ID NO：186、SEQ ID NO：204、SEQ ID NO：222、SEQ ID NO：225、SEQ ID NO：227、SEQ ID NO：229、SEQ ID NO：232、SEQ ID NO：234、SEQ ID NO：238或SEQ IDNO：240中的任一个的氨基酸序列；以及
(iii)重链CDR3序列，其包含SEQ ID NO：8，SEQ ID NO：26，SEQ ID NO：44，SEQ ID NO：62，SEQ ID NO：80，SEQ ID NO：98，SEQ ID NO：116，SEQ ID NO：134，SEQ ID NO：152，SEQ IDNO：170，SEQ ID NO：188，SEQ ID NO：206，SEQ ID NO：223，SEQ ID NO：228，SEQ ID NO：230，SEQ ID NO：235，SEQ ID NO：236中的任一种的氨基酸序列，SEQ ID NO：237，SEQ ID NO：241，SEQ ID NO：242或SEQ ID NO：244；以及
(iv)轻链CDR1序列，所述轻链CDR1序列包含SEQ ID NO：13、SEQ ID NO：31、SEQ ID NO：49、SEQ ID NO：67、SEQ ID NO：85、SEQ ID NO：103、SEQ ID NO：121、SEQ ID NO：139、SEQ IDNO：157、SEQ ID NO：175、SEQ ID NO：193或SEQ ID NO：211中的任一个的氨基酸序列；以及
(v)轻链CDR2序列，所述轻链CDR2序列包含SEQ ID NO：15、SEQ ID NO：33、SEQ ID NO：51、SEQ ID NO：69、SEQ ID NO：87、SEQ ID NO：105、SEQ ID NO：123、SEQ ID NO：141、SEQ IDNO：159、SEQ ID NO：177、SEQ ID NO：195或SEQ ID NO：213中的任一个的氨基酸序列；以及
(vi)轻链CDR3序列，所述轻链CDR3序列包含SEQ ID NO：17、SEQ ID NO：35、SEQ ID NO：53、SEQ ID NO：71、SEQ ID NO：89、SEQ ID NO：107、SEQ ID NO：125、SEQ ID NO：143、SEQ IDNO：161、SEQ ID NO：179、SEQ ID NO：197或SEQ ID NO：215中的任一个的氨基酸序列。
在一些实施方案中，抗TIGIT抗体包含：(i)重链CDR1序列，所述重链CDR1序列包含SEQ ID NO：4或SEQ ID NO：221的氨基酸序列；(ii)重链CDR2序列，所述重链CDR2序列包含SEQ ID NO：6或SEQ ID NO：222的氨基酸序列；(iii)重链CDR3序列，所述重链CDR3序列包含SEQ ID NO：8或SEQ ID NO：223的氨基酸序列；(iv)轻链CDR1序列，所述轻链CDR1序列包含SEQ ID NO：13的氨基酸序列；(v)轻链CDR2序列，所述轻链CDR2序列包含SEQ ID NO：15的氨基酸序列；以及(vi)轻链CDR3序列，所述轻链CDR3序列包含SEQ ID NO：17的氨基酸序列。
在一些实施方案中，抗TIGIT抗体包含：(i)重链CDR1序列，所述重链CDR1序列包含SEQ ID NO：58、SEQ ID NO：224或SEQ ID NO：226中的任一个的氨基酸序列；(ii)重链CDR2序列，所述重链CDR2序列包含SEQ ID NO：60、SEQ ID NO：225、SEQ ID NO：227或SEQ ID NO：229中的任一个的氨基酸序列；(iii)重链CDR3序列，所述重链CDR3序列包含SEQ ID NO：62、SEQ ID NO：228或SEQ ID NO：230中的任一个的氨基酸序列；(iv)轻链CDR1序列，所述轻链CDR1序列包含SEQ ID NO：67的氨基酸序列；(v)轻链CDR2序列，所述轻链CDR2序列包含SEQID NO：69的氨基酸序列；以及(vi)轻链CDR3序列，所述轻链CDR3序列包含SEQ ID NO：71的氨基酸序列。
在一些实施方案中，抗TIGIT抗体包含：(i)重链CDR1序列，所述重链CDR1序列包含SEQ ID NO：94、SEQ ID NO：231或SEQ ID NO：233中的任一个的氨基酸序列；(ii)重链CDR2序列，所述重链CDR2序列包含SEQ ID NO：96、SEQ ID NO：232或SEQ ID NO：234中的任一个的氨基酸序列；(iii)重链CDR3序列，所述重链CDR3序列包含SEQ ID NO：98、SEQ ID NO：235、SEQ ID NO：236或SEQ ID NO：237中的任一个的氨基酸序列；(iv)轻链CDR1序列，所述轻链CDR1序列包含SEQ ID NO：103的氨基酸序列；(v)轻链CDR2序列，所述轻链CDR2序列包含SEQ ID NO：105的氨基酸序列；以及(vi)轻链CDR3序列，所述轻链CDR3序列包含SEQ IDNO：107的氨基酸序列。
在一些实施方案中，抗TIGIT抗体包含：(i)重链CDR1序列，所述重链CDR1序列包含SEQ ID NO：166、SEQ ID NO：239或SEQ ID NO：243中的任一个的氨基酸序列；(ii)重链CDR2序列，所述重链CDR2序列包含SEQ ID NO：168、SEQ ID NO：238或SEQ ID NO：240中的任一个的氨基酸序列；(iii)重链CDR3序列，所述重链CDR3序列包含SEQ ID NO：170、SEQ ID NO：241、SEQ ID NO：242或SEQ ID NO：244中的任一个的氨基酸序列；(iv)轻链CDR1序列，所述轻链CDR1序列包含SEQ ID NO：175的氨基酸序列；(v)轻链CDR2序列，所述轻链CDR2序列包含SEQ ID NO：177的氨基酸序列；以及(vi)轻链CDR3序列，所述轻链CDR3序列包含SEQ IDNO：179的氨基酸序列。
在一些实施方案中，抗TIGIT抗体包含重链CDR1-3和轻链CDR1-3，所述重链CDR1-3和所述轻链CDR1-3：
(a)分别包含SEQ ID NO：4、6、8、13、15和17的氨基酸序列；
(b)分别包含SEQ ID NO：22、24、26、31、33和35的氨基酸序列；
(c)分别包含SEQ ID NO：40、42、44、49、51和53的氨基酸序列；
(d)分别包含SEQ ID NO：58、60、62、67、69和71的氨基酸序列；
(e)分别包含SEQ ID NO：76、78、80、85、87和89的氨基酸序列；
(f)分别包含SEQ ID NO：94、96、98、103、105和107的氨基酸序列；
(g)分别包含SEQ ID NO：112、114、116、121、123和125的氨基酸序列；
(h)分别包含SEQ ID NO：130、132、134、139、141和143的氨基酸序列；
(i)分别包含SEQ ID NO：148、150、152、157、159和161的氨基酸序列；
(j)分别包含SEQ ID NO：166、168、170、175、177和179的氨基酸序列；
(k)分别包含SEQ ID NO：184、186、188、193、195和197的氨基酸序列；
(l)分别包含SEQ ID NO：202、204、206、211、213和215的氨基酸序列；或者
(m)分别包含SEQ ID NO：221、222、223、13、15和17的氨基酸序列；或者
(n)分别包含SEQ ID NO：224、225、62、67、69和71的氨基酸序列；或者
(o)分别包含SEQ ID NO：226、227、228、67、69和71的氨基酸序列；或者
(p)分别包含SEQ ID NO：224、229、230、67、69和71的氨基酸序列；或者
(q)分别包含SEQ ID NO：224、227、230、67、69和71的氨基酸序列；或者
(r)分别包含SEQ ID NO：231、232、235、103、105和107的氨基酸序列；或者
(s)分别包含SEQ ID NO：233、234、236、103、105和107的氨基酸序列；或者
(t)分别包含SEQ ID NO：233、234、237、103、105和107的氨基酸序列；或者
(u)分别包含SEQ ID NO：166、238、170、175、177和179的氨基酸序列；或者
(v)分别包含SEQ ID NO：239、240、170、175、177和179的氨基酸序列；或者
(w)分别包含SEQ ID NO：239、240、241、175、177和179的氨基酸序列；或者
(x)分别包含SEQ ID NO：239、240、242、175、177和179的氨基酸序列；或者
(y)分别包含SEQ ID NO：243、168、244、175、177和179的氨基酸序列
在一些实施方案中，抗体还包括框架，诸如人免疫球蛋白框架。例如，在一些实施方案中，抗体包含如本文所述的CDR，并且还包含受体人框架，例如人免疫球蛋白框架或人共有框架。人免疫球蛋白框架可以是人抗体的一部分，或者可以通过用一个或多个人框架区替换一个或多个内源性框架来人源化非人抗体。可用于人源化的人框架区包括但不限于：使用“最适匹配(best-fit)”方法选择的框架区(参见例如Sims等人，J.Immunol.151：2296(1993))；来源于轻链可变区或重链可变区的特定亚组的人抗体的共有序列的框架区(参见例如Carter等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，89：4285(1992)；和Presta等人，J.Immunol.，151：2623(1993))；人成熟(体细胞突变)框架区或人种系框架区(参见例如Almagro和Fransson，Front.Biosci.13：1619-1633(2008))；以及来源于筛选FR文库的框架区(参见例如Baca等人，J.Biol.Chem.272：10678-10684(1997)和Rosok等人，J.Biol.Chem.271：22611-22618(1996))。框架序列可以从包括种系抗体基因序列的公共DNA数据库或公开参考文献获得。例如，人重链可变区和轻链可变区基因的种系DNA序列可以在人和小鼠序列的“VBASE2”种系可变基因序列数据库中找到。
在一些实施方案中，抗TIGIT抗体包含一个或多个重链框架区(FR1、FR2、FR3和/或FR4)，所述一个或多个重链框架区包含SEQ ID NO：3、SEQ ID NO：5、SEQ ID NO：7、SEQ IDNO：9、SEQ ID NO：21、SEQ ID NO：23、SEQ ID NO：25、SEQ ID NO：27、SEQ ID NO：39、SEQ IDNO：41、SEQ ID NO：43、SEQ ID NO：45、SEQ ID NO：57、SEQ ID NO：59、SEQ ID NO：61、SEQ IDNO：63、SEQ ID NO：75、SEQ ID NO：77、SEQ ID NO：79、SEQ ID NO：81、SEQ ID NO：93、SEQ IDNO：95、SEQ ID NO：97、SEQ ID NO：99、SEQ ID NO：111、SEQ ID NO：113、SEQ ID NO：115、SEQID NO：117、SEQ ID NO：129、SEQ ID NO：131、SEQ ID NO：133、SEQ ID NO：135、SEQ ID NO：147、SEQ ID NO：149、SEQ ID NO：151、SEQ ID NO：153、SEQ ID NO：165、SEQ ID NO：167、SEQID NO：169、SEQ ID NO：171、SEQ ID NO：183、SEQ ID NO：185、SEQ ID NO：187、SEQ ID NO：189、SEQ ID NO：201、SEQ ID NO：203、SEQ ID NO：205或SEQ ID NO：207的氨基酸序列。
在一些实施方案中，抗TIGIT抗体包含一个或多个轻链框架区(FR1、FR2、FR3和/或FR4)，所述一个或多个轻链框架区包含SEQ ID NO：12、SEQ ID NO：14、SEQ ID NO：16、SEQID NO：18、SEQ ID NO：30、SEQ ID NO：32、SEQ ID NO：34、SEQ ID NO：36、SEQ ID NO：48、SEQID NO：50、SEQ ID NO：52、SEQ ID NO：54、SEQ ID NO：66、SEQ ID NO：68、SEQ ID NO：70、SEQID NO：72、SEQ ID NO：84、SEQ ID NO：86、SEQ ID NO：88、SEQ ID NO：90、SEQ ID NO：102、SEQ ID NO：104、SEQ ID NO：106、SEQ ID NO：108、SEQ ID NO：120、SEQ ID NO：122、SEQ IDNO：124、SEQ ID NO：126、SEQ ID NO：138、SEQ ID NO：140、SEQ ID NO：142、SEQ ID NO：144、SEQ ID NO：156、SEQ ID NO：158、SEQ ID NO：160、SEQ ID NO：162、SEQ ID NO：174、SEQ IDNO：176、SEQ ID NO：178、SEQ ID NO：180、SEQ ID NO：192、SEQ ID NO：194、SEQ ID NO：196、SEQ ID NO：198、SEQ ID NO：210、SEQ ID NO：212、SEQ ID NO：214或SEQ ID NO：216的氨基酸序列。
在一些实施方案中，本公开的抗TIGIT抗体不与US 2009/0258013、US 2016/0176963、US 2016/0376365或WO 2016/028656中描述的抗体竞争结合。在一些实施方案中，本公开的抗TIGIT抗体不与US 2009/0258013、US 2016/0176963、US 2016/0376365或WO2016/028656中描述的抗体结合相同的表位。
抗体的制备
为了制备与TIGIT结合的抗体，可以使用本领域已知的许多技术。参见例如Kohler&Milstein，Nature 256：495-497(1975)；Kozbor等人，Immunology Today 4：72(1983)；Cole等人，Monoclonal Antibodies and Cancer Therapy，第77-96页，AlanR.Liss，Inc.(1985)；Coligan，Current Protocols in Immunology(1991)；Harlow&Lane，Antibodies，A Laboratory Manual(1988)；以及Goding，Monoclonal Antibodies：Principles and Practice(第2版1986))。
编码目标抗体的重链和轻链的基因可以从细胞克隆，例如，编码单克隆抗体的基因可以从杂交瘤克隆并用于产生重组单克隆抗体。编码单克隆抗体的重链和轻链的基因文库也可以由杂交瘤或浆细胞制备。另外，可以使用噬菌体或酵母展示技术鉴定与选定抗原特异性地结合的抗体和异聚Fab片段(参见例如McCafferty等人，Nature 348：552-554(1990)；Marks等人，Biotechnology 10：779-783(1992)；Lou等人(2010)PEDS 23：311；以及Chao等人，Nature Protocols，1：755-768(2006))。或者，可以使用基于酵母的抗体呈递系统，诸如在例如Xu等人，Protein Eng Des Sel，2013，26：663-670；WO 2009/036379；WO2010/105256；和WO 2012/009568中公开的抗体呈递系统分离和/或鉴定抗体和抗体序列。重链和轻链基因产物的随机组合产生大量具有不同抗原特异性的抗体(参见例如Kuby，Immunology(第3版1997))。用于产生单链抗体或重组抗体的技术(美国专利4,946,778、美国专利号4,816,567)也可适用于产生抗体。抗体还可以被制为双特异性的，即能够识别两种不同的抗原(参见例如WO 93/08829；Traunecker等人，EMBO J.10：3655-3659(1991；以及Suresh等人，Methods in Enzymology 121：210(1986))。抗体也可以是异源缀合物，例如两个共价连接的抗体，或与免疫毒素共价结合的抗体(参见例如美国专利号4,676,980、WO91/00360；和WO 92/200373)。
可以使用任何数量的表达系统产生抗体，所述表达系统包括原核和真核表达系统。在一些实施方案中，表达系统是哺乳动物细胞，诸如杂交瘤或CHO细胞。许多这样的系统可广泛从商业供应商处获得。在抗体包含VH区和VL区的实施方案中，VH区和VL区可以例如在双顺反子表达单元中使用单个载体表达，或者受不同启动子控制。在其他实施例中，VH区和VL区可以使用单独的载体表达。如本文所述的VH区或VL区可任选地在N-末端包含甲硫氨酸。
用于人源化或灵长类源化(primatizing)非人抗体的方法在本领域中也是已知的。通常，人源化的抗体具有一个或多个从非人来源引入至其中的氨基酸残基。这些非人氨基酸残基经常被称为引入残基，所述引入残基通常取自引入可变结构域。人源化基本上可以根据Winter和合作者的方法进行(参见例如Jones等人，Nature 321：522-525(1986)；Riechmann等人，Nature 332：323-327(1988)；Verhoeyen等人，Science 239：1534-1536(1988)和Presta，Curr.Op.Struct.Biol.2：593-596(1992))，所述方法通过将啮齿动物CDR或CDR序列取代为对应的人抗体序列。此类人源化抗体是嵌合抗体(美国专利号4,816,567)，其中显著小于完整的人可变结构域已被来自非人物种的对应序列取代。在实施中，人源化的抗体通常为人抗体，其中一些CDR残基以及可能地一些FR残基被来自啮齿动物抗体的相似位点的残基取代。可以使用转基因小鼠或其他生物诸如其他哺乳动物来表达人源化或人抗体(参见例如美国专利号5,545,807；5,545,806；5,569,825；5,625,126；5,633,425；5,661,016；Marks等人，Bio/Technology 10：779-783(1992)；Lonberg等人，Nature 368：856-859(1994)；Morrison，Nature 368：812-13(1994)；Fishwild等人，NatureBiotechnology 14：845-51(1996)；Neuberger，Nature Biotechnology 14：826(1996)；以及Lonberg&Huszar，Intern.Rev.Immunol.13：65-93(1995))。
作为人源化的替代形式，可以产生人类抗体。作为非限制性实例，可以产生转基因动物(例如小鼠)，所述转基因小鼠在免疫后能够在缺乏内源性免疫球蛋白产生的情况下产生完整的人抗体组库。例如，已经描述到嵌合和种系突变小鼠中抗体重链连接区(JH)基因的纯合缺失导致对内源性抗体产生的完全抑制。在这种种系突变小鼠中转移人种系免疫球蛋白基因阵列将使得在抗原攻击后产生人抗体。参见例如Jakobovits等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，90：2551(1993)；Jakobovits等人，Nature，362：255-258(1993)；Bruggermann等人，Year in Immun.，7：33(1993)；以及美国专利号5,591,669、5,589,369和5,545,807。
在一些实施方案中，产生抗体片段(诸如Fab、Fab′、F(ab′)2、scFv或双抗体)。已经开发了用于产生抗体片段的各种技术。传统上，这些片段是通过完整抗体的蛋白水解消化得到的(参见例如Morimoto等人，J.Biochem.Biophys.Meth.，24：107-117(1992)；和Brennan等人，Science，229：81(1985))。然而，现在可以直接使用重组宿主细胞产生这些片段。例如，可以从抗体噬菌体文库中分离抗体片段。或者，可以从大肠杆菌细胞中回收Fab′-SH片段并将这些片段化学偶联以形成F(ab′)2片段(参见例如Carter等人，BioTechnology，10：163-167(1992))。根据另一种方法，可以直接从重组宿主细胞培养物中分离F(ab′)2片段。用于产生抗体片段的其他技术对于本领域技术人员而言是显而易见的。在其他实施方案中，选择的抗体是单链Fv片段(scFv)。参见例如PCT公开号WO 93/16185；以及美国专利号5,571,894和5,587,458。抗体片段也可以是如例如美国专利号5,641,870中所述的线性抗体。
在一些实施方案中，抗体或抗体片段可以与另一分子例如聚乙二醇(PEG化)或血清白蛋白缀合，以提供延长的体内半衰期。抗体片段的聚乙二醇化的实例提供于Knight等人Platelets 15：409，2004(针对阿昔单抗)；Pedley等人，Br.J.Cancer 70：1126，1994(针对抗CEA抗体)；Chapman等人，Nature Biotech.17：780，1999；以及Humphreys等人，ProteinEng.Des.20：227，2007)。
在一些实施方案中，提供了包含如本文所述的抗TIGIT抗体或抗原结合片段的多特异性抗体，例如双特异性抗体。多特异性抗体是对至少两个不同位点具有结合特异性的抗体。在一些实施方案中，多特异性抗体对TIGIT(例如人TIGIT)具有结合特异性，并且对至少一种其他抗原具有结合特异性。用于制备多特异性抗体的方法包括但不限于宿主细胞中两对重链和轻链的重组共表达(参见例如Zuo等人，Protein Eng Des Sel，2000，13：361-367)；“旋钮入孔洞(knob-into-hole)”工程改造(参见例如Ridgway等人，Protein Eng DesSel，1996，9：617-721)；“双抗体”技术(参见例如Hollinger等人，PNAS(USA)，1993，90：6444-6448)；和分子内三聚化(参见例如Alvarez-Cienfuegos等人，Scientific Reports，2016，doi:/10.1038/srep28643)；另外参见Spiess等人，Molecular Immunology，2015，67(2)，部分A：95-106。
在一些实施方案中，提供了包含如本文所述的抗TIGIT抗体或抗原结合片段的抗体-药物缀合物。在抗体-药物缀合物中，对抗原(例如TIGIT)具有结合特异性的单克隆抗体与细胞毒性药物共价连接。用于制备抗体-药物缀合物的方法描述于例如Chudasama等人，Nature Chemistry，2016，8：114-119；WO 2013/068874；以及US 8,535,678中。
核酸、载体和宿主细胞
在一些实施方案中，使用重组方法制备如本文所述的抗TIGIT抗体。因此，在一些方面，本发明提供了分离的核酸，所述分离的核酸包含编码如本文所述的任何抗TIGIT抗体(例如本文所述的任何一种或多种CDR)的核酸序列；包含此类核酸的载体；引入核酸的宿主细胞，所述宿主细胞用于复制编码抗体的核酸和/或表达抗体。在一些实施方案中，宿主细胞是真核细胞，例如中国仓鼠卵巢(CHO)细胞：或人类细胞。
在一些实施方案中，多核苷酸(例如分离的多核苷酸)包含编码如本文所述(例如，如上文标题为“抗TIGIT抗体序列”的部分中所述)的抗体或其抗原结合部分的核苷酸序列。在一些实施方案中，多核苷酸包含编码下表3中公开的一个或多个氨基酸序列(例如CDR、重链、轻链和/或框架区)的核苷酸序列。在一些实施方案中，多核苷酸包含核苷酸序列，所述核苷酸序列编码与下表3中公开的序列(例如CDR、重链、轻链或框架区序列)具有至少85％序列同一性(例如至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性)的氨基酸序列。
在一些实施方案中，多核苷酸(例如分离的多核苷酸)包含编码如本文所述的重链可变区的核苷酸序列。在一些实施方案中，多核苷酸包含编码重链可变区的核苷酸序列，所述重链可变区包含与SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：19、SEQ ID NO：37、SEQ ID NO：55、SEQ IDNO：73、SEQ ID NO：91、SEQ ID NO：109、SEQ ID NO：127、SEQ ID NO：145、SEQ ID NO：163、SEQ ID NO：181、SEQ ID NO：199、SEQ ID NO：245、SEQ ID NO：246、SEQ ID NO：247、SEQ IDNO：248、SEQ ID NO：249、SEQ ID NO：250、SEQ ID NO：251、SEQ ID NO：252、SEQ ID NO：253、SEQ ID NO：254、SEQ ID NO：255、SEQ ID NO：256或SEQ ID NO：257具有至少90％序列同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，多核苷酸包含SEQ ID NO：2、SEQ ID NO：20、SEQ IDNO：38、SEQ ID NO：56、SEQ ID NO：74、SEQ ID NO：92、SEQ ID NO：110、SEQ ID NO：128、SEQID NO：146、SEQ ID NO：164、SEQ ID NO：182或SEQ ID NO：200的核苷酸序列。
在一些实施方案中，多核苷酸(例如分离的多核苷酸)包含编码如本文所述的轻链可变区的核苷酸序列。在一些实施方案中，多核苷酸包含编码轻链可变区的核苷酸序列，所述轻链可变区包含与SEQ ID NO：10、SEQ ID NO：28、SEQ ID NO：46、SEQ ID NO：64、SEQ IDNO：82、SEQ ID NO：100、SEQ ID NO：118、SEQ ID NO：136、SEQ ID NO：154、SEQ ID NO：172、SEQ ID NO：190或SEQ ID NO：208具有至少90％序列同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，多核苷酸包含SEQ ID NO：11、SEQ ID NO：29、SEQ ID NO：47、SEQ ID NO：65、SEQ ID NO：83、SEQ ID NO：101、SEQ ID NO：119、SEQ ID NO：137、SEQ ID NO：155、SEQ ID NO：173、SEQID NO：191或SEQ ID NO：209的核苷酸序列。
在一些实施方案中，多核苷酸包含编码的核苷酸序列，包含编码如本文所述的重链可变区和轻链可变区的核苷酸序列。在一些实施方案中，多核苷酸包含编码重链可变区以及编码轻链可变区的核苷酸序列，所述重链可变区包含与SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：19、SEQ ID NO：37、SEQ ID NO：55、SEQ ID NO：73、SEQ ID NO：91、SEQ ID NO：109、SEQ ID NO：127、SEQ ID NO：145、SEQ ID NO：163、SEQ ID NO：181、SEQ ID NO：199、SEQ ID NO：245、SEQID NO：246、SEQ ID NO：247、SEQ ID NO：248、SEQ ID NO：249、SEQ ID NO：250、SEQ ID NO：251、SEQ ID NO：252、SEQ ID NO：253、SEQ ID NO：254、SEQ ID NO：255、SEQ ID NO：256或SEQ ID NO：257具有至少90％序列同一性的氨基酸序列，所述轻链可变区包含与SEQ IDNO：10、SEQ ID NO：28、SEQ ID NO：46、SEQ ID NO：64、SEQ ID NO：82、SEQ ID NO：100、SEQID NO：118、SEQ ID NO：136、SEQ ID NO：154、SEQ ID NO：172、SEQ ID NO：190或SEQ ID NO：208具有至少90％序列同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，多核苷酸包含SEQ ID NO：2、SEQ ID NO：20、SEQ ID NO：38、SEQ ID NO：56、SEQ ID NO：74、SEQ ID NO：92、SEQ ID NO：110、SEQ ID NO：128、SEQ ID NO：146、SEQ ID NO：164、SEQ ID NO：182或SEQ ID NO：200的核苷酸序列，并且还包含SEQ ID NO：11、SEQ ID NO：29、SEQ ID NO：47、SEQ ID NO：65、SEQID NO：83、SEQ ID NO：101、SEQ ID NO：119、SEQ ID NO：137、SEQ ID NO：155、SEQ ID NO：173、SEQ ID NO：191或SEQ ID NO：209的核苷酸序列。
在另一方面，提供了制备如本文所述的抗TIGIT抗体的方法。在一些实施方案中，所述方法包括在适于表达抗体的条件下培养如本文所述的宿主细胞(例如表达如本文所述的多核苷酸或载体的宿主细胞)。在一些实施方案中，随后从宿主细胞(或宿主细胞培养基)中回收抗体。
含有编码本公开的抗体的多核苷酸或其片段的合适载体包括克隆载体和表达载体。虽然所选的克隆载体可根据预期使用的宿主细胞而变化，但可用的克隆载体通常具有自我复制能力，可具有特定限制性核酸内切酶的单个靶标，和/或可携带可用于选择包含载体的克隆的标记物的基因。实例包括质粒和细菌病毒例如pUC18、pUC19、Bluescript(例如pBS SK+)及其衍生物mpl8、mpl9、pBR322、pMB9、ColE1、pCR1、RP4、噬菌体DNA和穿梭载体诸如pSA3和pAT28。克隆载体可从商业供应商诸如BioRad、Stratagene和Invitrogen获得。
表达载体通常是可复制的多核苷酸构建体，其含有本公开的核酸。表达载体可以作为附加体或作为染色体DNA的整体部分在宿主细胞中复制。合适的表达载体包括但不限于质粒、病毒载体(包括腺病毒、腺相关病毒、逆转录病毒)以及任何其他载体。
IV.使用抗TIGIT抗体的治疗方法
在另一方面，提供了用于治疗或预防受试者的癌症的方法。在一些实施方案中，所述方法包括向受试者施用治疗量的如本文所述的抗TIGIT抗体或抗原结合片段或包含如本文所述的抗TIGIT抗体或抗原结合片段的药物组合物。在一些实施方案中，受试者是人类，例如人类成人或人类儿童。
在一些实施方案中，癌症是富集CD112和/或CD155表达的癌症或癌细胞。在一些实施方案中，通过使用对CD112或CD155具有特异性的抗体对肿瘤样品进行免疫组织化学评定来鉴定富集CD112和/或CD155的癌症。在一些实施方案中，CD112或CD155表达在肿瘤细胞或肿瘤浸润性白细胞中富集或增加。在一些实施方案中，基于对肿瘤样品中CD112和/或CD155mRNA水平的评定(例如，通过本领域已知的方法诸如定量RT-PCR)来鉴定癌症。在一些实施方案中，可以使用从癌症患者获得的血液样品中的可溶性CD112或CD155的测量值来鉴定富集CD112和/或CD155表达的癌症。在一些实施方案中，所述方法包括从受试者获得样品(例如肿瘤样品或血液样品)，测量来自受试者的样品中的CD112和/或CD155的水平，以及将来自受试者的样品中的CD112和/或CD155的水平与对照值(例如，来自健康对照受试者的样品或针对健康对照群体确定的CD112和/或CD155表达的水平)进行比较。在一些实施方案中，所述方法包括确定来自受试者的样品中的CD112和/或CD155的水平高于对照值，并随后向受试者施用如本文所述的抗TIGIT抗体。
在一些实施方案中，癌症是富集表达TIGIT的T细胞或天然杀伤(NK)细胞的癌症或癌细胞。在一些实施方案中，通过使用对TIGIT具有特异性的抗体对肿瘤样品进行免疫组织化学评定来鉴定富集TIGIT的癌症。在一些实施方案中，使用对T细胞或NK细胞具有特异性的抗体(例如抗CD3、抗CD4、抗CD8、抗CD25或抗CD56)来确定表达TIGIT的肿瘤浸润性细胞的一个或多个亚群。在一些实施方案中，基于对肿瘤样品中TIGIT mRNA水平的评定来鉴定癌症。在一些实施方案中，可以使用从癌症患者获得的血液样品中的可溶性TIGIT的测量值(任选地与对T细胞或NK细胞具有特异性的抗体组合)来鉴定富集表达TIGIT的T细胞或NK细胞的癌症。在一些实施方案中，所述方法包括从受试者获得样品(例如肿瘤样品或血液样品)，测量来自受试者的样品中的TIGIT的水平，任选地检测T细胞或NK细胞的存在(例如，使用对T细胞或NK细胞具有特异性的抗体诸如抗CD3、抗CD4、抗CD8、抗CD25或抗CD56)，以及将来自受试者的样品中的TIGIT的水平与对照值(例如，来自健康对照受试者的样品或针对健康对照群体确定的TIGIT表达的水平)进行比较。在一些实施方案中，所述方法包括确定来自受试者的样品中的TIGIT的水平高于对照值，并随后向受试者施用如本文所述的抗TIGIT抗体。
在一些实施方案中，癌症为膀胱癌、乳腺癌、子宫癌、宫颈癌、卵巢癌、前列腺癌、睾丸癌、食管癌、胃肠癌、胰腺癌、结肠直肠癌、结肠癌、肾癌、头颈癌、肺癌、胃癌、生殖细胞癌、骨癌、肝癌、甲状腺癌、皮肤癌(例如黑素瘤)、中枢神经系统赘瘤、淋巴瘤、白血病、骨髓瘤或肉瘤。在一些实施方案中，癌症是胃癌。在一些实施方案中，癌症是肺癌。在一些实施方案中，癌症是皮肤癌(例如黑素瘤)。在一些实施方案中，癌症是转移性癌症。在一些实施方案中，癌症是淋巴瘤或白血病，包括但不限于急性髓细胞、慢性髓细胞、急性淋巴细胞白血病或慢性淋巴细胞白血病、弥漫性大B细胞淋巴瘤、滤泡性淋巴瘤、套细胞淋巴瘤、小淋巴细胞淋巴瘤、原发性纵隔大B细胞淋巴瘤、脾边缘区B细胞淋巴瘤或结外边缘区B细胞淋巴瘤。
在一些实施方案中，所述方法还包括向受试者施用治疗量的免疫肿瘤学剂。在一些实施方案中，免疫肿瘤学剂是拮抗或抑制免疫检查点途径(诸如PD-1途径、CTLA-4途径、Lag3途径或TIM-3途径)的组分的剂(例如抗体、小分子或肽)。在一些实施方案中，免疫肿瘤学剂是通过靶向OX-40途径、4-1BB(CD137)途径、CD27途径、ICOS途径或GITR途径的T细胞共活化剂的激动剂(即，刺激T细胞活化的蛋白质的激动剂)。
在一些实施方案中，免疫肿瘤学剂是PD-1途径抑制剂。在一些实施方案中，PD-1途径抑制剂是抗PD-1抗体或抗PD-L1抗体，诸如但不限于派姆单抗(pembrolizumab)、纳武单抗(nivolumab)、度伐单抗(durvalumab)、皮地利珠单抗(pidilizumab)或阿特珠单抗(atezolizumab)。PD-1途径抑制剂在本领域中有所描述。参见例如Dolan等人，CancerControl，2014，21：231-237；Luke等人，Oncotarget，2014，6：3479-3492；US 2016/0222113；US 2016/0272708；US 2016/0272712；和US 2016/0319019。
在一些实施方案中，免疫肿瘤学剂是T细胞共活化剂的激动剂。在一些实施方案中，免疫肿瘤学剂是CD28、CD28H、CD3、4-1BB(CD137)、ICOS、OX40、GITR、CD27或CD40的激动剂。在一些实施方案中，免疫肿瘤学剂是免疫刺激细胞因子。在一些实施方案中，免疫刺激细胞因子是粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)、巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF)、粒细胞集落刺激因子(G-CSF)、白细胞介素1(IL-1)、白细胞介素2(IL-2)、白细胞介素3(IL-3)、白细胞介素12(IL-12)、白细胞介素15(IL-15)或干扰素γ(IFN-γ)。
在一些实施方案中，用如本文所述的抗TIGIT抗体治疗与一种或多种其他癌症治疗(诸如手术、放射或化学疗法)组合。在一些实施方案中，化学治疗剂是烷化剂(例如环磷酰胺、异环磷酰胺、苯丁酸氮芥、白消安、美法仑、双氯乙基甲胺、乌拉莫司汀、噻替哌、亚硝基脲或替莫唑胺)、蒽环类药物(例如多柔比星、阿霉素、道诺霉素、表多柔比星或米托蒽醌)、细胞骨架破坏剂(例如紫杉醇或多西他赛)、组蛋白脱乙酰酶抑制剂(例如伏立诺他或罗米地辛)、拓扑异构酶抑制剂(例如伊立替康、拓扑替康、安吖啶、依托泊苷或替尼泊苷)、激酶抑制剂(例如硼替佐米、厄洛替尼、吉非替尼、伊马替尼、维莫非尼或维莫德吉(vismodegib))、核苷类似物或前体类似物(例如阿扎胞苷、硫唑嘌呤、卡培他滨、阿糖胞苷、氟尿嘧啶、吉西他滨、羟基脲、巯基嘌呤、甲氨蝶呤或硫鸟嘌呤)、肽抗生素(例如放线菌素或博来霉素)、基于铂的剂(例如顺铂、奥沙利铂或卡铂)、或植物生物碱(例如长春新碱、长春碱、长春瑞滨、长春地辛、鬼臼毒素、紫杉醇或多西他赛)。
在一些实施方案中，抗TIGIT抗体(和任选的免疫肿瘤学剂或其他治疗性治疗)以治疗有效量或剂量施用。可以使用为约0.01mg/kg至约500mg/kg、或约0.1mg/kg至约200mg/kg、或约1mg/kg至约100mg/kg、或约10mg/kg至约50mg/kg的日剂量范围。然而，剂量可根据若干因素而变化，这些因素包括所选的施用途径、组合物的制剂、患者反应、疾患的严重程度、受试者的体重和处方医师的判断。根据个体患者的要求，剂量可以随时间增加或减少。在某些情况下，最初给予患者低剂量，然后将该剂量增加至患者可耐受的有效剂量。有效量的确定完全在本领域技术人员的能力范围内。
包含抗TIGIT抗体(和任选的免疫肿瘤学剂或其他治疗性治疗)的抗TIGIT抗体或药物组合物的施用途径可以是口服、腹膜内、透皮、皮下、静脉内、肌肉内、吸入、局部、病灶内、直肠、支气管内、鼻、透粘膜、肠、眼或耳递送或本领域已知的任何其他方法。在一些实施方案中，抗TIGIT抗体(和任选的免疫肿瘤学剂)经口服、静脉内或腹膜内施用。
共同施用的治疗剂(例如抗TIGIT抗体和免疫肿瘤学剂或其他治疗性治疗)可以一起或分开、在同一时间或在不同时间施用。当施用时，根据需要，治疗剂可以每天一次、两次、三次、四次或更多次或更少次地施用。在一些实施方案中，施用的治疗剂每天施用一次。在一些实施方案中，施用的治疗剂例如作为混合物在相同的一个或多个时间施用。在一些实施方案中，一种或多种治疗剂在持续释放制剂中施用。
在一些实施方案中，抗TIGIT抗体和另一种治疗性治疗(例如免疫肿瘤学剂)同时施用。在一些实施方案中，抗TIGIT抗体和另一种治疗性治疗(例如免疫肿瘤学剂)依序施用。例如，在一些实施方案中，首先施用抗TIGIT抗体，在例如约1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25、30、40、50、60、70、80、90、100天或更长时间之后再施用免疫肿瘤学剂。在一些实施方案中，首先施用免疫肿瘤学剂，在例如约1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25、30、40、50、60、70、80、90、100天或更长时间之后再施用抗TIGIT抗体。
在一些实施方案中，抗TIGIT抗体(和任选的免疫肿瘤学剂)在延长的时间段内施用于受试者，例如持续至少30、40、50、60、70、80、90、100、150、200、250、300、350天或更长时间。
V.组合物和药盒
在另一方面，提供了包含抗TIGIT抗体的组合物和药盒，其用于治疗或预防受试者的癌症。
药物组合物
在一些实施方案中，提供了包含抗TIGIT抗体的药物组合物，其用于施用于患有癌症的受试者。在一些实施方案中，抗TIGIT抗体如上文第III部分中所述，例如如上文第III部分中所公开的具有结合亲和力、活性、交叉反应性、表位识别和/或一个或多个CDR、VH和/或VL序列的抗TIGIT抗体。
在一些实施方案中，如本文所述，将抗TIGIT抗体和免疫肿瘤学剂(例如，如本文所述的PD-1途径抑制剂)一起或分开地配制成药物组合物。在一些实施方案中，免疫肿瘤学剂是PD-1途径抑制剂或CTLA-4途径抑制剂。在一些实施方案中，免疫肿瘤学剂是T细胞共活化剂的激动剂。在一些实施方案中，PD-1途径抑制剂是抗PD-1抗体或抗PD-L1抗体，诸如但不限于派姆单抗、纳武单抗、度伐单抗、皮地利珠单抗或阿特珠单抗。
用于制备在本发明中使用的制剂的指导参见例如Remington：The Science andPractice of Pharmacy，第21版，2006，同上；Martindale：The Complete Drug Reference，Sweetman，2005，London：Pharmaceutical Press；Niazi，Handbook of PharmaceuticalManufacturing Formulations，2004，CRC Press；以及Gibson，PharmaceuticalPreformulation and Formulation：A Practical Guide from Candidate DrugSelection to Commercial Dosage Form，2001，Interpharm Press，这些文献以引用方式并入本文。本文所述的药物组合物可以以本领域技术人员已知的方式制备，即通过常规混合、溶解、制粒、制糖衣、乳化、包封、包埋或冻干方法制备。以下方法和赋形剂仅为示例性而决非限制性的。
在一些实施方案中，制备抗TIGIT抗体(和任选的免疫肿瘤学剂)以便在持续释放、控制释放、延长释放、定时释放或延迟释放制剂中递送，例如在含有治疗剂的固体疏水性聚合物的半渗透性基质中递送。已经建立了各种类型的持续释放材料，这些材料是本领域技术人员所熟知的。目前的延长释放制剂包括薄膜包衣片剂、多颗粒或丸剂系统、使用亲水性或亲脂性材料的基质技术以及具有成孔赋形剂的蜡基片剂(参见例如Huang等人DrugDev.Ind.Pharm.29：79(2003)；Pearnchob等人Drug Dev.Ind.Pharm.29：925(2003)；Maggi等人Eur.J.Pharm.Biopharm.55：99(2003)；Khanvilkar等人，Drug Dev.Ind.Pharm.228：601(2002)；以及Schmidt等人，Int.J.Pharm.216：9(2001))。持续释放递送系统可以根据其设计在数小时或数天的过程中释放化合物，例如在4、6、8、10、12、16、20、24小时或更长时间内释放。通常，可以使用天然存在的或合成的聚合物来制备持续释放制剂，这些聚合物是例如聚合乙烯基吡咯烷酮，诸如聚乙烯吡咯烷酮(PVP)；羧乙烯基亲水性聚合物；疏水性和/或亲水性水胶体，诸如甲基纤维素、乙基纤维素、羟丙基纤维素和羟丙基甲基纤维素；以及聚羧乙烯。
对于口服施用，可以通过与本领域众所周知的药学上可接受的载体组合来容易地配制抗TIGIT抗体(和任选的免疫肿瘤学剂)。这些载体使得化合物能够被配制成片剂、丸剂、糖衣剂、胶囊、乳剂、亲脂性和亲水性悬浮液、液体、凝胶、糖浆、浆液、悬浮液等，供待治疗患者口服摄取。用于经口使用的药物制剂可通过以下操作获得：将化合物与固体赋形剂混合，任选地研磨所得混合物，并且如果需要的话在添加合适的助剂之后加工颗粒混合物，以获得片剂或糖衣剂核心。合适的赋形剂包括例如填充剂，诸如糖，包括乳糖、蔗糖、甘露糖醇或山梨糖醇；纤维素制剂，例如像玉米淀粉、小麦淀粉、稻米淀粉、马铃薯淀粉、明胶、黄蓍胶、甲基纤维素、羟丙基甲基纤维素、羧甲基纤维素钠和/或聚乙烯吡咯烷酮(PVP)。如果需要的话，可添加崩解剂，诸如交联的聚乙烯吡咯烷酮、琼脂或海藻酸或其盐如海藻酸钠。
抗TIGIT抗体(和任选的免疫肿瘤学剂)可以被配制来用于通过注射例如通过弹丸式注射或连续输注进行肠胃外施用。对于注射，可通过以下操作将一种或多种化合物配制成制剂：使化合物溶解、悬浮或乳化于水性或非水性溶剂(诸如植物或其他类似油、合成脂肪酸甘油酯、高级脂肪酸或丙二醇的酯)中；并且如果需要的话，具有常规添加剂诸如增溶剂、等渗剂、助悬剂、乳化剂、稳定剂和防腐剂。在一些实施方案中，可以将化合物配制在水性溶液中，优选配制在生理上相容的缓冲液诸如汉克氏溶液、林格氏溶液或生理盐水缓冲液中。用于注射的制剂可以单位剂型提供，例如提供在安瓿瓶或多剂量容器中，并加入防腐剂。组合物可采取例如悬浮液、溶液或溶于油性或水性媒介物的乳液的形式，并且可包含配制剂诸如悬浮剂、稳定剂和/或分散剂。
抗TIGIT抗体(和任选的免疫肿瘤学剂)可以通过透粘膜或透皮方式全身施用。对于透粘膜或透皮施用，在制剂中使用适合于待渗透的屏障的渗透剂。对于局部施用，将剂配制成软膏、乳膏、油膏、粉末和凝胶。在一个实施方案中，透皮递送剂可以是DMSO。透皮递送系统可包括例如贴剂。对于透粘膜施用，在制剂中使用适合于待渗透的屏障的渗透剂。此类渗透剂通常在本领域中是公知的。示例性的透皮递送制剂包括美国专利号6,589,549；6,544,548；6,517,864；6,512,010；6,465,006；6,379,696；6,312,717和6,310,177中描述的那些，所述专利各自以引用方式并入本文。
在一些实施方案中，药物组合物包含可接受的载体和/或赋形剂。药学上可接受的载体包括生理上相容的并且优选不干扰或以其他方式抑制治疗剂的活性的任何溶剂、分散介质或包衣。在一些实施方案中，载体适用于静脉内、肌肉内、口服、腹膜内、透皮、局部或皮下施用。药学上可接受的载体可含有一种或多种生理学上可接受的化合物，这些化合物用于例如使组合物稳定或增加或减少一种或多种活性剂的吸收。生理学上可接受的化合物可包括例如碳水化合物(诸如葡萄糖、蔗糖或葡聚糖)、抗氧化剂(诸如抗坏血酸或谷胱甘肽)、螯合剂、低分子量蛋白质、降低活性剂的清除或水解的组合物、或赋形剂或其他稳定剂和/或缓冲剂。其他药学上可接受的载体及其制剂是众所周知的，并且通常描述于例如Remington：The Science and Practice of Pharmacy，第21版，Philadelphia，PA.Lippincott Williams&Wilkins，2005。各种药学上可接受的赋形剂在本领域中是众所周知的，并且可见于例如Handbook of Pharmaceutical Excipients(第5版，Rowe等人编，Pharmaceutical Press，Washington，D.C.)。
本公开的药物组合物的剂量和所需药物浓度可根据设想的特定用途而变化。确定适当的剂量或施用途径完全在本领域技术人员的技能范围内。合适的剂量在上文第IV部分中也有所描述。
药盒
在一些实施方案中，提供了用于治疗患有癌症的受试者的药盒。在一些实施方案中，药盒包括：
抗TIGIT抗体；和
免疫肿瘤学剂。
在一些实施方案中，抗TIGIT抗体如上文第III部分中所述，例如如上文第1II部分中所公开的具有结合亲和力、活性、交叉反应性、表位识别和/或一个或多个CDR、VH和/或VL序列的抗TIGIT抗体。在一些实施方案中，免疫肿瘤学剂是PD-1途径抑制剂或CTLA-4途径抑制剂。在一些实施方案中，免疫肿瘤学剂是T细胞共活化剂的激动剂。在一些实施方案中，PD-1途径抑制剂是抗PD-1抗体或抗PD-L1抗体。在一些实施方案中，免疫肿瘤学剂是派姆单抗、纳武单抗、度伐单抗、皮地利珠单抗或阿特珠单抗。
在一些实施方案中，药盒可还包括含有用于实施本发明方法的指导(即方案)的说明材料(例如，使用该药盒来治疗癌症的说明书)。虽然说明材料通常包括书面或印刷材料，但是所述说明材料并不限于此。本发明设想了能够存储这些说明并将它们传送给最终使用者的任何介质。此类介质包括但不限于电子存储介质(例如磁盘、磁带、盒式磁带、芯片)、光学介质(例如CD ROM)等。此类介质可以包括提供这些说明材料的互联网网站的地址。
VI.实施例
提供以下实施例来说明而非限制所要求保护的发明。
实施例1：抗TIGIT抗体的产生
使用基于酵母的抗体呈递系统产生完全人抗-TIGIT单克隆抗体(参见例如Xu等人，“Addressing polyspecificity of antibodies selected from an in vitro yeastpresentation system：a FACS-based，high-throughput selection and analyticaltool，”PEDS，2013，26：663-670；WO 2009/036379；WO 2010/105256；和WO 2012/009568)。筛选了8个初始人类合成酵母文库，每个文库具有～109的多样性。对于前两轮选择，如前所述进行利用Miltenyi MACS系统的磁珠分选技术(参见例如Siegel等人，“High efficiencyrecovery and epitope-specific sorting of an scFv yeast display library，”JImmunol Methods，2004，286：141-153)。简而言之，将酵母细胞(～1010个细胞/文库)与5mL10nM生物素化的Fc融合抗原在30℃下在洗涤缓冲液(磷酸盐缓冲盐水(PBS)/0.1％牛血清白蛋白(BSA))中一起孵育30分钟。用40mL冰冷的洗涤缓冲液洗涤一次后，将细胞团块重悬于20mL洗涤缓冲液中，并将链霉抗生物素蛋白微珠(500μL)加入酵母中，并在4℃下孵育15分钟。接下来，将酵母沉淀，重悬于20mL洗涤缓冲液中，并上样到Miltenyi LS柱上。上样20mL后，用3mL洗涤缓冲液将柱洗涤3次。然后从磁场中取出柱，将酵母用5mL生长培养基洗脱，然后生长过夜。使用流式细胞术进行以后轮次的选择。将大约2×107个酵母沉淀，用洗涤缓冲液洗涤三次，并在30℃下与10nM Fc融合抗原和降低浓度的生物素化单体抗原(100至1nM)在平衡条件下一起孵育，与10nM生物素化的Fc融合抗原或100nM不同物种的单体抗原一起孵育以便获得物种交叉反应性，或与多特异性耗尽试剂(PSR)一起孵育以从选择中除去非特异性抗体。对于PSR耗尽，如前所述将文库与1∶10稀释的生物素化PSR试剂一起孵育(参见例如Xu等人，同上)。然后将酵母用洗涤缓冲液洗涤两次，并在4℃下用LC-FITC(1∶100稀释)和SA-633(1∶500稀释)或EA-PE(extravidin-R-PE，1∶50稀释)次级试剂染色15分钟。用洗涤缓冲液洗涤两次后，将细胞团块重悬于0.3mL洗涤缓冲液中并转移至带滤盖的分选管中。使用FACS ARIA分选仪(BD Biosciences)进行分选，并确定分选门以选择具有所需特征的抗体。重复选择轮次，直至获得具有所有所需特征的群体。在最后一轮分选后，将酵母铺板并挑选单个菌落用于表征。
抗原包括重组二聚体人TIGIT-Fc(Acro Biosystems TIT-H5254)、单体人TIGIT(Sino Biological 10917-H08H)、二聚体小鼠TIGIT-Fc(R&D Systems，7267-TG)和单体小鼠TIGIT(Sino Biologics 50939-M08H)。
初始竞选(
Figure BDA0002246518640000701
campaign)：对744个克隆进行测序，产生345个独特的克隆(独特的CDRH3)。代表了克隆中18个VH种系。
轻链批次多样化竞选：将来自第六轮初始发现选择的富集结合物库的重链(VH)质粒通过粉碎和抓取从酵母中提取，在大肠杆菌繁殖并随后从大肠杆菌中纯化，然后转化为多样性为107的轻链文库。
在与初始发现的条件大体上相同的条件下进行选择。简而言之，在一轮磁珠富集后，通过流式细胞术进行三轮选择。在磁珠富集轮次中，使用10nM生物素化的Fc融合抗原。流式细胞仪上的第一轮由使用100nM生物素化的单价抗原的阳性选择轮次组成。接下来是第二轮，其由用于PSR耗尽的阴性选择轮次组成。最后一轮(第三轮)由阳性选择轮次组成，其中单价抗原以100nM、10nM、1nM滴定。对于所有文库，将来自此第三轮的1nM分类的酵母铺板，并挑选单个菌落并进行表征。总共对728个克隆进行测序，产生350种独特的HC/LC组合(93种独特的CDRH3)。
在初始竞选和轻链批次变换竞选之间共鉴定出总共695个独特的克隆。
实施例2：抗TIGIT抗体的表征
选择65个克隆用于产生和进一步评估，所述65个克隆代表了12个VH种系和9个VL种系。
抗体产生和纯化
使酵母克隆生长至饱和状态，然后在摇荡下在30℃下诱导48小时。诱导后，沉淀酵母细胞，并收获上清液用于纯化。使用蛋白A柱纯化IgG，并用pH 2.0的乙酸洗脱。通过木瓜蛋白酶消化产生Fab片段，并通过KappaSelect(GE Healthcare LifeSciences)纯化。
抗TIGIT抗体与重组人和小鼠蛋白的结合
通常如前所述在Octet RED384上进行ForteBio亲和力测量(参见例如Estep等人，“High throughput solution-based measurement of antibody-antigen affinity andepitope binning，”Mabs，2013，5：270-278)。简而言之，通过将IgG在线上样到AHQ传感器上进行ForteBio亲和力测量。将传感器在测定缓冲液中离线平衡30分钟，然后在线监测60秒以进行基线建立。将具有上样的IgG的传感器暴露于100nM抗原(二聚体Fc融合抗原或单体抗原)持续3分钟，然后将其转移至测定缓冲液保持3分钟以进行解离速率测量。使用1∶1结合模型分析所有结合和解离动力学。
在65个IgG克隆中，43个对TIGIT单体的亲和力＜100nM。在65个IgG克隆中，34个与小鼠TIGIT-Fc交叉反应。在下表1中示出所选克隆的结合亲和力。
表位框并(Epitope binning)/配体竞争测定
在ForteBio Octet RED384系统上使用标准夹心形式交叉阻断测定进行表位框并/配体阻断。将对照抗靶IgG上样到AHQ传感器上，并用不相关的人IgG1抗体阻断传感器上未被占用的Fc结合位点。然后将传感器暴露于100nM靶抗原，接着暴露于第二抗靶抗体或配体(人CD155-Fc(Sino Biological，10109-H02H))。抗原缔合后第二抗体或配体的额外结合指示未被占用的表位(非竞争者)，而没有结合指示表位阻断(竞争者或配体阻断)。
使用四种框并抗体(不相互排斥)进行框评定，鉴定出五个重叠的框并谱。在65种抗TIGIT抗体中，有63种与配体竞争结合hTIGIT-Fc。所选克隆的框并谱和配体竞争结果在下表1中示出。
表1.所选抗TIGIT克隆的表位框并、配体竞争和亲和力数据
Figure BDA0002246518640000721
Figure BDA0002246518640000731
注释：
N.B.＝在该测定条件下的非结合物
如实施例2中所述，使用标准夹心形式交叉阻断测定在ForteBio Octet RED384系统上产生框代码和CD155竞争数据。
如实施例2中所述，在ForteBio Octet RED384系统上产生KD亲和力数据。
抗TIGIT抗体与在HEK 293细胞中过表达的人、小鼠和食蟹猴TIGIT的结合
通过慢病毒转导将HEK 293细胞工程化以稳定表达高水平的人、小鼠或食蟹猴TIGIT。将大约100,000个亲本HEK 293(TIGIT阴性)细胞或过表达人、小鼠或食蟹猴的HEK293细胞用100nM的每种抗TIGIT抗体在室温下染色5分钟。然后将细胞用洗涤缓冲液洗涤两次，并与缀合至PE的抗人IgG一起在冰上孵育15分钟。然后将细胞用洗涤缓冲液洗涤两次，并在FACS Canto II仪器(BD Biosciences)上通过流式细胞术进行分析。将相比背景的倍数(FOB)计算为与靶阳性细胞结合的抗TIGIT克隆的中值荧光强度(MFI)除以与靶阴性细胞结合的抗TIGIT克隆的MFI。
如图1所示，所有65种抗体均显示出与293-hTIGIT系的特异性地结合(FOB＞10，如图表中水平黑线所示)。53个克隆特异性地结合293-cyTIGIT系，而31个克隆特异性地结合293-mTIGIT系。
多特异性试剂(PSR)测定
如前所述进行与多特异性试剂的结合的评定以确定对TIGIT的特异性(参见例如Xu等人，同上)。简而言之，将来自原液的1∶10稀释的生物素化PSR试剂与IgG呈递酵母一起在冰上孵育20分钟。洗涤细胞并用EA-PE(extravidin-R-PE)标记，并在FACS分析仪上读数。多特异性结合的评分为0至1级，该评分与具有低、中和高非特异性结合的对照IgG相关，其中分数为0指示无结合，分数为1指示非常高的非特异性结合。
在65个克隆中有62个被评分为非多特异性结合物，其中PSR分数＜0.10。有三个克隆被评分为低多特异性结合物(PSR分数为0.10-0.33)。
疏水相互作用色谱法测定
如前所述进行疏水相互作用色谱法(HIC)(Estep等人，同上)。简而言之，将5μgIgG样品掺入流动相A溶液(1.8M硫酸铵和0.1M磷酸钠，pH 6.6)中，以在分析前达到约1M的最终硫酸铵浓度。使用Sepax Proteomix HIC丁基-NP5柱以及流动相A和流动相B溶液(0.1M磷酸钠，pH 6.5)的线性梯度超过20分钟，流速为1mL/分钟，在280nM下进行UV吸光度监测。
疏水性柱上增加的抗体保留与增加的疏水性和纯化过程中不良表达、聚集或沉淀的倾向相关联。在65个克隆中，5个克隆具有＞11.5分钟的高HIC保留时间，10个克隆具有10.5-11.5分钟的中等HIC保留时间，而其余克隆具有低HIC保留时间。
实施例3：抗TIGIT抗体与在原代T细胞上内源性表达的人、小鼠和食蟹猴TIGIT的结合65种抗体
显示出对人TIGIT重组蛋白和在HEK 293细胞上表达的人TIGIT具有特异性，对所述抗体评估其结合在原代人外周血T细胞上的内源性TIGIT的能力。还评估了抗体与外周血T细胞上的食蟹猴TIGIT的交叉反应性，并评估了65个克隆中的35个克隆与活化脾T细胞上的小鼠TIGIT的交叉反应性。
将人pan T细胞从白细胞分离产物中阴性分离至99％纯度。将100,000个细胞在4℃下用20μg/mL的每种抗TIGIT抗体染色30分钟。用缀合至PE的多克隆山羊抗人IgG(Jackson ImmunoResearch 109-116-098)检测抗TIGIT抗体。在CytoFLEX流式细胞仪上分析样品。使用仅抗人IgG-PE染色测定每种抗体的FSC/SSC门控淋巴细胞群的TIGIT+百分比，以确定阳性的阈值。
通过红细胞裂解(eBioscience 00-4300)从全血中分离食蟹猴白细胞。将200,000个细胞在4℃下用20μg/mL的每种抗TIGIT抗体染色30分钟。用吸附于与AlexaFluor647(SouthernBiotech 2049-31)缀合的猴免疫球蛋白的多克隆山羊抗人IgG检测抗TIGIT抗体，并通过用FITC缀合的抗CD3克隆SP34(BD Pharmingen 556611)进行复染来鉴定T细胞。在CytoFLEX流式细胞仪上分析样品。使用仅抗人IgG-PE染色测定每种抗体的CD3+群的TIGIT+百分比，以确定阳性的阈值。
通过阴性选择(Stem Cell Technologies 19851 A)从脾中分离BALB/c小鼠T细胞至＞99％纯度。用板结合的抗CD3克隆145-2C11(BioLegend 100302)将细胞活化24小时以上调TIGIT。将200,000个活化的细胞在4℃下用20μg/mL的每种抗TIGIT抗体染色30分钟(测试65个克隆中的35个克隆)。用缀合至PE的多克隆山羊抗人IgG(Jackson ImmunoResearch109-116-098)检测抗TIGIT抗体。在FACSCalibur流式细胞仪上分析样品。测定每种抗体的FSC/SSC门控淋巴细胞群的中值荧光强度。
图2示出65个抗TIGIT抗体克隆和无关的同种型对照抗体与原代人、食蟹猴和小鼠T细胞的结合。克隆13和25均显示出与所有三种T细胞的强结合。
抗TIGIT抗体与细胞表面表达的TIGIT的可滴定结合
通过慢病毒转导将HEK 293细胞工程化以稳定表达高水平的人、小鼠或食蟹猴TIGIT。将200,000个293-TIGIT细胞在4℃下用10点、3倍滴定(30至0.002μg/mL)的每种抗TIGIT抗体染色30分钟。用缀合至PE的多克隆山羊抗人IgG(Jackson ImmunoResearch 109-116-098)检测抗TIGIT抗体。在CytoFLEX流式细胞仪上分析样品。测定每种抗体浓度的FSC/SSC门控群体的中值荧光强度。在GraphPad Prism 6中进行Log(X)转换数据的非线性回归以产生EC 50值。没有抗TIGIT抗体显示与亲本HEK 293细胞(TIGIT-)结合(数据未示出)。图3A-图3C示出结合滴定，并且图3D示出八个抗TIGIT抗体克隆(克隆2、克隆5、克隆13、克隆16、克隆17、克隆20、克隆25和克隆54)与在HEK 293细胞上表达的人、食蟹猴和小鼠TIGIT的结合的EC50。
通过阴性选择(Stem Cell Technologies 19851A)从脾中分离C57BL/6小鼠T细胞至＞99％纯度。用板结合的抗CD3克隆145-2C11(BioLegend 100302)将细胞活化24小时以上调TIGIT。将200,000个细胞在4℃下用8点、3倍滴定(30至0.014μg/mL)的每种抗TIGIT抗体染色30分钟。用缀合至PE的多克隆山羊抗人IgG(Jackson ImmunoResearch 109-116-098)检测抗TIGIT抗体。在FACSCalibur流式细胞仪上分析样品。测定每种抗体的FSC/SSC门控淋巴细胞群的中值荧光强度。在GraphPad Prism 6中进行Log(X)转换数据的非线性回归以产生EC 50值。图4示出了抗TIGIT克隆13和25与活化的小鼠脾T细胞结合的结合滴定和EC50。
实施例4：抗TIGIT抗体阻断CD155和CD112配体与细胞表面表达的TIGIT的结合
通过慢病毒转导将HEK 293细胞工程化以稳定表达高水平的人或小鼠TIGIT。将hCD155-Fc(Sino Biological 10109-H02H)、hCD112-Fc(Sino Biological 10005-H02H)和mCD155-Fc(Sino Biological 50259-M03H)缀合至AlexaFluor647(ThermoFisherA30009)。将200,000个293-hTIGIT或293-mTIGIT细胞与1μg/mLCD155-Fc-AlexaFluor647或5μg/mL CD112-Fc-AlexaFluor647以及12点、2倍滴定(10至0.005μg/mL)的每种抗TIGIT抗体或同种型对照抗体共孵育。在CytoFLEX流式细胞仪上分析样品。测定每种抗体浓度的FSC/SSC门控群体的中值荧光强度。相对于无抗体对照的MFI计算阻断百分比。在GraphPadPrism 6中进行Log(X)转换数据的非线性回归。
如图5A-图5B所示，测试了六个抗TIGIT抗体克隆(克隆2、克隆5、克隆13、克隆17、克隆25和克隆55)，且对于人CD155/人TIGIT和小鼠CD155/小鼠TIGIT，六个克隆中的五个克隆(克隆2、克隆5、克隆13、克隆17和克隆25)显著阻断CD155与HEK 293细胞上表达的TIGIT的相互作用。克隆55特异性地结合人TIGIT，但在ForteBio Octet配体竞争测定中不与hCD155-Fc竞争结合hTIGIT-Fc。类似地，克隆55不能有效阻断hCD155与293-hTIGIT细胞系的相互作用。克隆2、克隆5、克隆13、克隆17和克隆25也能够中断人CD112与人TIGIT的结合。如针对CD155所观察到的，克隆55在阻断CD112-TIGIT相互作用方面效果差得多。参见图6。
实施例5：抗TIGIT抗体在TIGIT/CD155阻断生物测定中的体外活性
可以使用TIGIT/CD155阻断生物测定(例如TIGIT/CD155阻断生物测定试剂盒，Promega Corp.，Madison，WI)在功能上表征抗TIGIT抗体的活性，其中当抗体阻断TIGIT/CD155相互作用时，报告基因的表达被诱导或增强。TIGIT/CD155阻断生物测定包括两种细胞类型：在细胞表面上表达TIGIT、CD226和TCR复合物并含有荧光素酶报告基因的效应细胞；和在细胞表面上表达CD155和TCR活化剂的人工抗原呈递细胞。在该生物测定中，荧光素酶表达需要TCR接合加上共刺激信号。CD155-TIGIT相互作用的亲和力高于CD155-CD226相互作用，导致净抑制性信号传导且无荧光素酶表达。CD155-TIGIT相互作用的阻断允许CD155-CD226共刺激驱动荧光素酶表达。
将表达TIGIT和CD226两者的Jurkat效应细胞与表达TCR活化剂和CD155的CHO-K1人工抗原呈递细胞(aAPC)共培养。Jurkat效应细胞含有由IL-2启动子驱动的荧光素酶报告基因。在不存在阻断性抗TIGIT抗体的情况下，CD155-TIGIT接合导致T细胞共抑制且无IL-2启动子活性。加入抗TIGIT抗体后，CD155-TIGIT相互作用被中断，使得CD155与CD226缔合，以发送共刺激信号并驱动荧光素酶表达。
将aAPC铺在96孔板中并使其粘附过夜。第二天，将20μg/mL的每种抗TIGIT抗体或同种型对照抗体和Jurkat效应细胞加入板中。在37℃下孵育6小时后，使细胞裂解并加入荧光素酶底物。在板读数器上定量荧光素酶活性。荧光素酶活性计算为相比无抗体对照中的信号的倍数。
如图7A-图7B所示，在该生物测定中12个抗TIGIT抗体克隆展示了功能性阻断。
实施例6：抗TIGIT抗体在TIGIT/PD-1组合生物测定中的体外活性
可以使用TIGIT/PD-1组合生物测定在功能上表征抗TIGIT抗体与抗PD-1剂(例如抗PD-1抗体)的组合的协同活性，其中当抗体阻断TIGIT/CD155相互作用和PD-1/PD-L1相互作用时，报告基因的表达被增强。该生物测定包括两种细胞类型：在细胞表面上表达TIGIT、CD226、PD-1和TCR复合物并含有荧光素酶报告基因的效应细胞；和在细胞表面上表达CD155、PD-L1和TCR活化剂的人工抗原呈递细胞。在该生物测定中，荧光素酶表达需要TCR接合加上共刺激信号。CD155-TIGIT相互作用的亲和力高于CD155-CD226相互作用，导致净抑制性信号传导且无荧光素酶表达。另外，PD-L1与PD-1的结合抑制荧光素酶表达。CD155-TIGIT相互作用和PD-1/PD-L1相互作用两者的阻断减轻了抑制并允许CD155-CD226共刺激驱动荧光素酶表达。
将表达PD-1、TIGIT和CD226的Jurkat效应细胞与表达TCR活化剂、PD-L1和CD155的CHO-K1人工抗原呈递细胞(aAPC)共培养。Jurkat效应细胞含有由IL-2启动子驱动的荧光素酶报告基因。在不存在阻断性抗TIGIT抗体的情况下，PD-L1-PD-1和CD155-TIGIT接合导致T细胞共抑制且无IL-2启动子活性。加入抗PD-1和抗TIGIT抗体后，PD-L1-PD-1相互作用被阻断，减轻一种共抑制信号，而CD155-TIGIT相互作用被中断，使得CD155与CD226缔合，以发送共刺激信号并驱动荧光素酶产生。
将aAPC铺在96孔板中并使其粘附过夜。第二天，将单独的10点、2.5倍滴定(100至0.03μg/mL)的每种抗TIGIT抗体，或抗PD-1抗体(克隆EH12.2H7，BioLegend，San Diego，CA)，或每种抗TIGIT抗体+抗PD-1抗体(1∶1比例)和Jurkat效应细胞加入板中。在37℃下孵育6小时后，裂解细胞并加入荧光素酶底物。在板读数器上定量荧光素酶活性。荧光素酶活性计算为相比无抗体对照中的信号的倍数。如图8所示，单独的抗TIGIT和抗PD-1都不会导致显著的Jurkat活化，然而，抗TIGIT克隆13或克隆25与抗PD-1的组合产生强烈的活化。
实施例7：抗TIGIT抗体在BALB/c小鼠的CT26同系肿瘤模型中的体内活性
基于对鼠TIGIT的亲和力，选择抗TIGIT克隆13用于在鼠同系肿瘤模型中进行评估。产生亲本完全人抗TIGIT克隆13的小鼠IgG1和小鼠IgG2a嵌合体用于体内实验，以便解决Fc同种型是否对拮抗性TIGIT抗体的体内功效有影响的问题。在体外，嵌合抗体在以下方面显示出与亲本hIgG1抗体相似的活性：(1)与人、小鼠和食蟹猴TIGIT结合；(2)阻断CD155和CD112配体与细胞表面表达的TIGIT的结合；以及(3)在CD155-TIGIT阻断生物测定中的活性。参见图9A-图9H。
从Charles River Laboratories获得平均体重为19g的8周龄BALB/c小鼠。在小鼠的右侧腹皮下植入300,000个CT26结肠癌细胞。在肿瘤接种后第7天，允许肿瘤进展直至组平均肿瘤体积为72mm3(范围为48-88mm3)。通过配对匹配将动物分配到10个治疗组(n＝10)中，使得所有治疗组的组平均肿瘤体积相似。测量肿瘤长度和宽度，并使用以下公式计算肿瘤体积：体积(mm3)＝0.5*长度*宽度2，其中长度是较长的尺寸。将抗TIGIT克隆13mIgG1、抗TIGIT克隆13mIgG2a和抗PD-1克隆RMP1-14(BioXCell)稀释至合适的浓度，用于在无菌PBS中给药。无菌PBS用作媒介物对照。通过腹膜内注射以5或20mg/kg给予TIGIT抗体，每周两次，持续3周(总共6剂)。通过腹膜内注射以5mg/kg给予抗PD-1抗体，每周两次，持续2周(总共4剂)。在分配当天(研究第1天)开始给药。每周两次收集肿瘤体积和体重测量值，直至小鼠达到2000mm3的肿瘤体积截止值。相对于给药前体重，没有动物表现出体重减轻，表明所有测试剂的特殊耐受性。
如图10A所示，单独的抗mPD-1对肿瘤进展没有任何影响。克隆13的mIgG1抗TIGIT嵌合体(“13-1”)(其不能有效地接合活化的Fcγ受体接合)不作为单一剂或与抗PD-1组合介导任何抗肿瘤活性。相比之下，克隆13的mIgG2a嵌合体(“1-2”)(其能够结合活化的Fcγ受体)减缓肿瘤进展(在第18天肿瘤生长抑制为86.5％(5mg/kg)或74.4％(20mg/kg))。在5mg/kg 13-2单一剂组中，在10只动物中有3只显示出完全的肿瘤消退，直至研究结束时(研究第46天)都是稳定的。在20mg/kg 13-2单一剂组中，在10只动物中有2只显示出部分肿瘤消退(定义为连续三次测量肿瘤体积<初始体积的50％)。图10A显示向mIgG2a克隆13嵌合体(13-2)中加入抗PD-1相对于单独的13-2没有增加功效(第18天肿瘤生长抑制为：53.8％(5mg/kg抗TIGIT+5mg/kg抗PD1)对比86.5％(单独的5mg/kg抗TIGIT)和89.6％(20mg/kg抗TIGIT+5mg/kg抗PD-1)对比74.4％(单独的20mg/kg抗TIGIT)。在组合组中观察到相似数量的完全和部分响应者。参见例如图10B-图10K。
实施例8：抗体优化和优化抗体的表征
选择来自初级发现输出的抗体克隆2、13、16和25用于进一步的亲和力成熟。通过将多样性引入重链可变区来进行抗体优化。对上述谱系应用两个优化循环。第一个循环包括CDRH1和CDRH2多样化方法，而在第二个循环中应用CDRH3诱变方法。
CDRH1和CDRH2方法：将单个抗体的CDRH3重组到具有1x108多样性的CDRH1和CDRH2变体的预制文库中。然后如对于初始发现所述的，用一轮MACS和四轮FACS进行选择。
在第一轮FACS中，针对1nM单体TIGIT结合对文库进行分类。第二轮FACS是PSR耗尽轮次，是为了降低多特异性。最后两轮是阳性选择轮次，使用亲本Fab或IgG加压以获得高亲和力。Fab/IgG压力如下进行：将抗原与10倍亲本Fab或IgG一起孵育，然后与酵母文库一起孵育。选择使具有比亲本Fab或IgG更好的亲和力的IgG富集。在最后两轮FACS中检查物种交叉反应性。
CDRH3诱变：通过随机化CDRH3中的位置使CDRH3多样化来产生文库。如前所述，用一轮MACS和三轮FACS进行选择。进行PSR阴性选择、物种交叉反应性、亲和压力和分选以获得具有所需特征的群体。
MSD-SET KD测量
通常如前所述进行平衡亲和力测量(Estep等人，同上)。简而言之，在PBS+0.1％无IgG BSA(PBSF)中进行溶液平衡滴定(SET)，其中将生物素化的人TIGIT-His单体在50pM保持恒定，并与从约5nM开始3至5倍连续稀释的抗体一起孵育。将抗体(20nM，在PBS中)涂覆在标准结合MSD-ECL板上在4℃下过夜或在室温下保持30分钟。然后将板用1％BSA封闭30分钟，同时以700rpm摇荡，然后用洗涤缓冲液(PBSF+0.05％Tween 20)洗涤三次。将SET样品涂布在板上并孵育150秒，同时以700rpm摇荡，然后洗涤一次。通过在板上孵育3分钟，用PBSF中的250ng/ml磺基标签标记的链霉抗生物素蛋白检测在板上捕获的抗原。将板用洗涤缓冲液洗涤三次，然后使用含表面活性剂的1x读数缓冲液T在MSD Sector Imager 2400仪器上读数。在Prism中将游离抗原百分比作为滴定抗体的函数作图，并拟合至二次方程以提取KD。为了提高产量，在整个MSD-SET实验(包括SET样品制备)中使用液体处理机器人。
使用如上所述的ForteBio系统测量优化的抗体与带His标签的人TIGIT、cynoTIGIT-Fc和小鼠TIGIT-Fc的结合。如上所述，还测试了优化的抗体在CD155配体竞争测定中的配体阻断，以及与人TIGIT HEK、cyno TIGIT HEK、小鼠TIGIT HEK和亲本HEK细胞系的结合。
亲和力优化的抗体的亲和力数据和细胞结合数据在下表2中示出。
Figure BDA0002246518640000831
实施例9：表位作图
通过肽阵列表征本文所公开的两种单克隆抗体克隆13和克隆25的表位。为了重建靶分子的表位，使用固相Fmoc合成来合成基于肽的表位模拟物的文库。通过以下操作获得氨基官能化聚丙烯载体：用专有亲水性聚合物制剂接枝，然后使用二环己基碳二亚胺(DCC)及N-羟基苯并三唑(HOBt)与叔丁氧基羰基-六亚甲基二胺(BocHMDA)反应，然后使用三氟乙酸(TFA)裂解Boc-基团。利用标准的Fmoc-肽合成，通过定制改良的JANUS液体处理站(Perkin Elmer)在氨基官能化的固体支持物上合成肽。
使用专有的支架上化学连接肽(Chemically Linked Peptides on Scaffolds，CLIPS)技术(Pepscan)进行结构模拟物的合成。CLIPS技术允许将肽结构化为单环、双环、三环、片状折叠、螺旋状折叠以及它们的组合。将CLIPS模板偶联至半胱氨酸残基。将肽中多个半胱氨酸的侧链偶联至一个或两个CLIPS模板。例如，将0.5mM的P2 CLIPS溶液(2，6-双(溴甲基)吡啶)溶解在碳酸氢铵(20mM，pH 7.8)/乙腈(1∶3(v/v))中。将该溶液加至肽阵列上。CLIPS模板将结合存在于肽阵列(具有3μl孔的455孔板)的固相结合肽中的两个半胱氨酸的侧链。将肽阵列完全覆盖在溶液中，同时在所述溶液中温和摇荡30至60分钟。最后，将肽阵列用过量的H2O彻底洗涤，并在含有溶于PBS的1％SDS/0.1％β-巯基乙醇的破碎缓冲液(pH7.2)中在70℃下超声处理30分钟，然后在H2O中再超声处理45分钟。以类似的方式制成携带肽的T3 CLIPS，但这次具有三个半胱氨酸。
根据以下设计合成不同组的肽。第1组包含一组长度为15个氨基酸的线性肽，所述线性肽来源于人TIGIT的靶序列，具有一个残基的偏移。第2组包含第1组的一组线性肽，但位置10和11处的残基被Ala替换。当天然Ala在任一位置出现时，它被Gly替换。第3组包含第1组的一组线性肽，其含有Cys残基。在该组中，天然Cys被Cys-乙酰氨基甲基(“Cys-acm”)替换。第4组包含一组长度为17个氨基酸的线性肽，所述线性肽来源于人TIGIT的靶序列，具有一个残基的偏移。位置1和17上是Cys残基，其用于通过mP2 CLIPS产生环状模拟物。将天然Cys用Cys-acm替换。第6组包含一组长度为22个氨基酸的线性肽，所述线性肽来源于人TIGIT的靶序列，具有一个残基的偏移。将位置11和12上的残基替换为“PG”基序，同时将Cys残基置于位置1和22上以产生具有mP2的受约束的模拟物。将天然Cys残基用Cys-acm替换。第7组含有一组长度为27个氨基酸的线性肽。位置1-11和17-27上是11-mer肽序列，其来源于靶序列且通过“GGSGG”接头连接。基于UniProt关于人TIGIT的二硫键桥接的信息进行组合。第8组包含一组长度为33个氨基酸的组合肽。位置2-16和18-32上是来源于人TIGIT靶序列的15-mer肽。位置1、17和33上是Cys残基，其用于通过T3 CLIPS产生不连续的模拟物。
在基于pepscan的ELISA中测试抗体与每种合成肽的结合。将肽阵列与一抗溶液一起孵育(在4℃下过夜)。洗涤后，将肽阵列与1/1000稀释的山羊抗人HRP缀合物(SouthernBiotech)在25℃下一起孵育1小时。洗涤后，加入过氧化物酶底物2，2′-连氮基-二-3-乙基苯并噻唑啉磺酸盐(ABTS)和20μl/ml的3％H2O2。一小时后，测量显色。电荷耦合装置(CCD)-相机和图像处理系统定量显色。从CCD相机获得的值范围为0至3000mAU，这与标准96孔ELISA酶标仪类似。
为了验证合成肽的质量，并行合成一组单独的阳性和阴性对照肽。用商业抗体3C9和57.9筛选这些肽(Posthumus等人，J.Virol.，1990，64：3304-3309)。
对于克隆13，当在高严格条件下测试时，克隆13微弱地结合不连续表位模拟物。另外在中等严格条件下测试抗体，并观察到可检测的抗体结合。对于含有核心段68ICNADLGWHISPSFK82、42ILQCHLSSTTAQV54、108CIYHTYPDGTYTGRI122的不连续表位模拟物，记录到最高信号强度。另外，对于含有肽段80SFKDRVAPGPG90的肽，观察到较弱的结合。抗体与线性和简单构象表位模拟物的结合通常较低，且仅在基序68ICNADLGWHISPSFK82、108CIYHTYPDGTYTGRI122和80SFKDRVAPGPG90上观察到。
对于克隆25，当在高严格条件下测试时，克隆25可检测地结合来自所有组的肽。对于不连续的表位模拟物，观察到最强的结合。虽然在其他组中也观察到与含有段68ICNADLGWHISPSFK82内残基的肽的结合，但仅与68ICNADLGWHISPSFK82组合时才观察到与肽段50TTAQVTQ56的结合。另外，对于含有肽段80SFKDRVAPGPGLGL93的肽，也观察到较弱的结合。
基于克隆13和克隆25的这些表位作图结果，使用以下几组肽利用上述方对克隆13和克隆25的表位进行精细作图。第1组包含基于序列CILQ2HLSSTTAQVTQCI2NADLGWHISPSFKC的单残基表位突变体文库。对残基ADHIQRY进行替换。位置1、17、19、30和33未被替换。天然Cys残基被Cys-acm替换(整个表示为“2”)。第2组包含来源于序列CILQ2HLSSTTAQVTQCI2NADLGWHISPSFKC的步移双Ala突变体文库。位置1、17和33未被替换。天然Cys残基被Cys-acm替换。第3组包含基于序列CKDRVAPGPGLGLTLQCI2NADLGWHISPSFKC的单残基表位突变体文库。残基ADHIQRY用于替换。位置1、2、17、19、30和33未被替换。第4组包含来源于序列CKDRVAPGPGLGLTLQCI2NADLGWHISPSFKC的步移双Ala突变体文库。位置1、17和33未被替换。
在高严格条件和中等严格条件下，针对来源于肽CILQ2HLSSTTAQVTQCI2NADLGWHISPSFKC和CKDRVAPGPGLGLTLQCI2NADLGWHISPSFKC的四个系列的不连续表位突变体测试克隆13。数据分析指示，在所有情况下，用单个残基或双Ala替换残基81FK82会损害克隆13的结合。不连续表位模拟物中其他残基的单突变对结合没有显著影响。相比之下，与对应的不连续模拟物的一系列单残基突变体相比，双Ala表位突变体对结合显示出更明显的影响。还发现CILQ2HLSSTTAQVTQCI2NADLGWHISPSFKC内残基51TAQVT55的双Ala替换显著影响克隆13的结合。对于具有来源于序列CKDRVAPGPGLGLTLQCI2NADLGWHISPSFKC的表位模拟物的克隆13记录的信号强度低于对于CILQ2HLSSTTAQVTQCI2NADLGWHISPSFKC记录的信号强度。进一步发现除了81FK82之外，74GWHI77的双Ala替换显著降低克隆13的结合。另外，段87PGPGLGL93内的双Ala突变一定程度地减弱了结合。
在高严格条件和中等严格条件下，针对来源于肽CILQ2HLSSTTAQVTQCI2NADLGWHISPSFKC和CKDRVAPGPGLGLTLQCI2NADLGWHISPSFKC的四个系列的不连续表位突变体测试克隆25。对从各组表位突变体收集的数据的分析指示，残基81FK82的单或双替换显著影响结合。CILQ2HLSSTTAQVTQCI2NADLGWHISPSFKC和CKDRVAPGPGLGLTLQCI2NADLGWHISPSFKC内的其他残基的单残基替换未明显降低信号强度。一系列双步移Ala突变体对克隆25与模拟物的结合展示出更明显的影响。除了81FK82之外，残基52AQ53和P79的双Ala替换也轻微地影响抗体与表位模拟物CILQ2HLSSTTAQVTQCI2NADLGWHISPSFKC的结合。对克隆25与来源于CKDRVAPGPGLGLTLQCI2NADLGWHISP SFKC的双Ala突变体系列的结合的分析再次证实了81FK82的重要性，但也表明残基73LGW75和82KDRVA86的双Ala替换中等程度地影响了结合。
总之，对于单克隆抗体克隆13和克隆25，发现残基81FK82对于两种抗体与TIGIT表位模拟物的结合是至关重要的。对于克隆13，发现残基51TAQVT55、74GWHI77和87PGPGLGL93也有助于结合。对于克隆25，发现残基52AQ53、73LGW75、P79和82KDRVA86也有助于结合。
表3.非正式序列表
Figure BDA0002246518640000871
Figure BDA0002246518640000881
Figure BDA0002246518640000891
Figure BDA0002246518640000901
Figure BDA0002246518640000911
Figure BDA0002246518640000921
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Figure BDA0002246518640000941
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Figure BDA0002246518640000961
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Figure BDA0002246518640000981
Figure BDA0002246518640000991
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Figure BDA0002246518640001021
Figure BDA0002246518640001031
Figure BDA0002246518640001041
尽管为了清晰和理解的目的已通过说明和举例详细描述了前述发明内容，但本领域技术人员将理解在不脱离本发明的精神和范围的情况下，可以对本发明进行许多修改和变化。本文所述的具体实施方案仅作为示例提供，并不意味着以任何方式进行限制。旨在将本说明书和实施例仅视为示例性的，其中本发明的真实范围和精神由所附权利要求书来指示。
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Claims (69)

1.一种分离的抗体或其抗原结合部分，所述抗体或其抗原结合部分与人TIGIT(具有Ig和ITIM结构域的T细胞免疫受体)结合，其中所述抗体或其抗原结合部分对人TIGIT的结合亲和力(KD)小于5nM。
2.如权利要求1所述的分离的抗体，其中所述抗体或其抗原结合部分对人TIGIT的KD小于1nM。
3.如权利要求1所述的分离的抗体，其中所述抗体或其抗原结合部分对人TIGIT的KD小于100pM。
4.如权利要求1至3中任一项所述的分离的抗体，其中所述抗体或其抗原结合部分表现出与食蟹猴TIGIT和/或小鼠TIGIT的交叉反应性。
5.如权利要求4所述的分离的抗体，其中所述抗体或其抗原结合部分表现出与食蟹猴TIGIT和小鼠TIGIT两者的交叉反应性。
6.如权利要求1至5中任一项所述的分离的抗体，其中所述抗体或其抗原结合部分阻断CD155与TIGIT的结合。
7.如权利要求1至5中任一项所述的分离的抗体，其中所述抗体或其抗原结合部分阻断CD112与TIGIT的结合。
8.如权利要求1至5中任一项所述的分离的抗体，其中所述抗体或其抗原结合部分阻断CD155和CD112两者与TIGIT的结合。
9.如权利要求1至8中任一项所述的分离的抗体，其中所述抗体或其抗原结合部分与人TIGIT上的表位结合，所述表位包含氨基酸位置81和82中的一者或两者。
10.如权利要求9所述的分离的抗体，其中所述表位包含位置81处的Phe。
11.如权利要求8所述的分离的抗体，其中所述表位包含位置82处的Lys或Ser。
12.如权利要求9至11中任一项所述的分离的抗体，其中所述表位包含位置81处的Phe和位置82处的Lys或Ser。
13.如权利要求12所述的分离的抗体，其中所述表位包含Phe81和Lys82。
14.如权利要求9至13中任一项所述的分离的抗体，其中所述表位是不连续的表位。
15.如权利要求9至14中任一项所述的分离的抗体，其中所述抗体或其抗原结合部分与人TIGIT上的表位结合，所述表位还包含氨基酸位置51、52、53、54、55、73、74、75、76、77、79、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92或93中的一个或多个。
16.如权利要求15所述的分离的抗体，其中所述表位还包含选自由以下组成的组的一个或多个氨基酸残基：Thr51、Ala52、Gln53、Val54、Thr55、Leu73、Gly74、Trp75、His76、Ile77、Pro79、Asp83、Arg84、Val85、Ala86、Pro87、Gly88、Pro89、Gly90、Leu91、Gly92和Leu93。
17.如权利要求16所述的分离的抗体，其中所述表位包含氨基酸残基Thr51、Ala52、Gln53、Val54、Thr55、Gly74、Trp75、His76、Ile77、Phe81、Lys82、Pro87、Gly88、Pro89、Gly90、Leu91、Gly92和Leu93。
18.如权利要求16所述的分离的抗体，其中所述表位包含所述氨基酸残基Ala52、Gln53、Leu73、Gly74、Trp75、Pro79、Phe81、Lys82、Asp83、Arg84、Val85和Ala86。
19.如权利要求9至18中任一项所述的分离的抗体，其中所述表位包含序列ICNADLGWHISPSFK。
20.如权利要求1至19中任一项所述的分离的抗体，其中所述抗体或其抗原结合部分包含以下中的一个或多个：
(a)重链CDR1，所述重链CDR1包含SEQ ID NO：4、SEQ ID NO：22、SEQ ID NO：40、SEQ IDNO：58、SEQ ID NO：76、SEQ ID NO：94、SEQ ID NO：112、SEQ ID NO：130、SEQ ID NO：148、SEQID NO：166、SEQ ID NO：184、SEQ ID NO：202、SEQ ID NO：221、SEQ ID NO：224、SEQ ID NO：226、SEQ ID NO：231、SEQ ID NO：233、SEQ ID NO：239或SEQ ID NO：243中的任一个的序列；
(b)重链CDR2，所述重链CDR2包含SEQ ID NO：6、SEQ ID NO：24、SEQ ID NO：42、SEQ IDNO：60、SEQ ID NO：78、SEQ ID NO：96、SEQ ID NO：114、SEQ ID NO：132、SEQ ID NO：150、SEQID NO：168、SEQ ID NO：186、SEQ ID NO：204、SEQ ID NO：222、SEQ ID NO：225、SEQ ID NO：227、SEQ ID NO：229、SEQ ID NO：232、SEQ ID NO：234、SEQ ID NO：238或SEQ ID NO：240中的任一个的序列；
(c)重链CDR3，所述重链CDR3包含SEQ ID NO：8、SEQ ID NO：26、SEQ ID NO：44、SEQ IDNO：62、SEQ ID NO：80、SEQ ID NO：98、SEQ ID NO：116、SEQ ID NO：134、SEQ ID NO：152、SEQID NO：170、SEQ ID NO：188、SEQ ID NO：206、SEQ ID NO：223、SEQ ID NO：228、SEQ ID NO：230、SEQ ID NO：235、SEQ ID NO：236、SEQ ID NO：237、SEQ ID NO：241、SEQ ID NO：242或SEQ ID NO：244中的任一个的序列；
(d)轻链CDR1，所述轻链CDR1包含SEQ ID NO：13、SEQ ID NO：31、SEQ ID NO：49、SEQ IDNO：67、SEQ ID NO：85、SEQ ID NO：103、SEQ ID NO：121、SEQ ID NO：139、SEQ ID NO：157、SEQ ID NO：175、SEQ ID NO：193或SEQ ID NO：211中的任一个的序列；
(e)轻链CDR2，所述轻链CDR2包含SEQ ID NO：15、SEQ ID NO：33、SEQ ID NO：51、SEQ IDNO：69、SEQ ID NO：87、SEQ ID NO：105、SEQ ID NO：123、SEQ ID NO：141、SEQ ID NO：159、SEQ ID NO：177、SEQ ID NO：195或SEQ ID NO：213中的任一个的序列；或
(f)轻链CDR3，所述轻链CDR3包含SEQ ID NO：17、SEQ ID NO：35、SEQ ID NO：53、SEQ IDNO：71、SEQ ID NO：89、SEQ ID NO：107、SEQ ID NO：125、SEQ ID NO：143、SEQ ID NO：161、SEQ ID NO：179、SEQ ID NO：197或SEQ ID NO：215中的任一个的序列。
21.如权利要求20所述的分离的抗体，其中所述抗体或其抗原结合部分包含重链CDR1、CDR2和CDR3以及轻链CDR1、CDR和CDR3，所述重链CDR1、CDR2和CDR3以及所述轻链CDR1、CDR和CDR3：
(a)分别包含SEQ ID NO：4、6、8、13、15和17的序列；或者
(b)分别包含SEQ ID NO：22、24、26、31、33和35的序列；或者
(c)分别包含SEQ ID NO：40、42、44、49、51和53的序列；或者
(d)分别包含SEQ ID NO：58、60、62、67、69和71的序列；或者
(e)分别包含SEQ ID NO：76、78、80、85、87和89的序列；或者
(f)分别包含SEQ ID NO：94、96、98、103、105和107的序列；或者
(g)分别包含SEQ ID NO：112、114、116、121、123和125的序列；或者
(h)分别包含SEQ ID NO：130、132、134、139、141和143的序列；或者
(i)分别包含SEQ ID NO：148、150、152、157、159和161的序列；或者
(j)分别包含SEQ ID NO：166、168、170、175、177和179的序列；或者
(k)分别包含SEQ ID NO：184、186、188、193、195和197的序列；或者
(l)分别包含SEQ ID NO：202、204、206、211、213和215的序列；或者
(m)分别包含SEQ ID NO：221、222、223、13、15和17的序列；或者
(n)分别包含SEQ ID NO：224、225、62、67、69和71的序列；或者
(o)分别包含SEQ ID NO：226、227、228、67、69和71的序列；或者
(p)分别包含SEQ ID NO：224、229、230、67、69和71的序列；或者
(q)分别包含SEQ ID NO：224、227、230、67、69和71的序列；或者
(r)分别包含SEQ ID NO：231、232、235、103、105和107的序列；或者
(s)分别包含SEQ ID NO：233、234、236、103、105和107的序列；或者
(t)分别包含SEQ ID NO：233、234、237、103、105和107的序列；或者
(u)分别包含SEQ ID NO：166、238、170、175、177和179的序列；或者
(v)分别包含SEQ ID NO：239、240、170、175、177和179的序列；或者
(w)分别包含SEQ ID NO：239、240、241、175、177和179的序列；或者
(x)分别包含SEQ ID NO：239、240、242、175、177和179的序列；或者
(y)分别包含SEQ ID NO：243、168、244、175、177和179的序列。
22.如权利要求1至21中任一项所述的分离的抗体，其中所述抗体或其抗原结合部分包含：
(a)重链可变区，所述重链可变区包含与SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：19、SEQ ID NO：37、SEQ ID NO：55、SEQ ID NO：73、SEQ ID NO：91、SEQ ID NO：109、SEQ ID NO：127、SEQ ID NO：145、SEQ ID NO：163、SEQ ID NO：181、SEQ ID NO：199、SEQ ID NO：245、SEQ ID NO：246、SEQID NO：247、SEQ ID NO：248、SEQ ID NO：249、SEQ ID NO：250、SEQ ID NO：251、SEQ ID NO：252、SEQ ID NO：253、SEQ ID NO：254、SEQ ID NO：255、SEQ ID NO：256或SEQ ID NO：257具有至少90％序列同一性的氨基酸序列；和/或
(b)轻链可变区，所述轻链可变区包含与SEQ ID NO：10、SEQ ID NO：28、SEQ ID NO：46、SEQ ID NO：64、SEQ ID NO：82、SEQ ID NO：100、SEQ ID NO：118、SEQ ID NO：136、SEQ IDNO：154、SEQ ID NO：172、SEQ ID NO：190或SEQ ID NO：208具有至少90％序列同一性的氨基酸序列。
23.如权利要求22所述的分离的抗体，其中所述抗体或其抗原结合部分包含：
(a)重链可变区，所述重链可变区包含与SEQ ID NO：1或SEQ ID NO：245具有至少90％序列同一性的氨基酸序列；和轻链可变区，所述轻链可变区包含与SEQ ID NO：10具有至少90％序列同一性的氨基酸序列；或
(b)重链可变区，所述重链可变区包含与SEQ ID NO：19具有至少90％序列同一性的氨基酸序列；和轻链可变区，所述轻链可变区包含与SEQ ID NO：28具有至少90％序列同一性的氨基酸序列；或
(c)重链可变区，所述重链可变区包含与SEQ ID NO：37具有至少90％序列同一性的氨基酸序列；和轻链可变区，所述轻链可变区包含与SEQ ID NO：46具有至少90％序列同一性的氨基酸序列；或
(d)重链可变区，所述重链可变区包含与SEQ ID NO：55、SEQ ID NO：246、SEQ ID NO：247、SEQ ID NO：248或SEQ ID NO：249中的任一个具有至少90％序列同一性的氨基酸序列；和轻链可变区，所述轻链可变区包含与SEQ ID NO：64具有至少90％序列同一性的氨基酸序列；或
(e)重链可变区，所述重链可变区包含与SEQ ID NO：73具有至少90％序列同一性的氨基酸序列；和轻链可变区，所述轻链可变区包含与SEQ ID NO：82具有至少90％序列同一性的氨基酸序列；或
(f)重链可变区，所述重链可变区包含与SEQ ID NO：91、SEQ ID NO：250、SEQ ID NO：251或SEQ ID NO：252中的任一个具有至少90％序列同一性的氨基酸序列；和轻链可变区，所述轻链可变区包含与SEQ ID NO：100具有至少90％序列同一性的氨基酸序列；或
(g)重链可变区，所述重链可变区包含与SEQ ID NO：109具有至少90％序列同一性的氨基酸序列；和轻链可变区，所述轻链可变区包含与SEQ ID NO：118具有至少90％序列同一性的氨基酸序列；或
(h)重链可变区，所述重链可变区包含与SEQ ID NO：127具有至少90％序列同一性的氨基酸序列；和轻链可变区，所述轻链可变区包含与SEQ ID NO：1 36具有至少90％序列同一性的氨基酸序列；或
(i)重链可变区，所述重链可变区包含与SEQ ID NO：145具有至少90％序列同一性的氨基酸序列；和轻链可变区，所述轻链可变区包含与SEQ ID NO：154具有至少90％序列同一性的氨基酸序列；或
(j)重链可变区，所述重链可变区包含与SEQ ID NO：163、SEQ ID NO：253、SEQ ID NO：254、SEQ ID NO：255、SEQ ID NO：256或SEQ ID NO：257中的任一个具有至少90％序列同一性的氨基酸序列；和轻链可变区，所述轻链可变区包含与SEQ ID NO：172具有至少90％序列同一性的氨基酸序列；或
(k)重链可变区，所述重链可变区包含与SEQ ID NO：181具有至少90％序列同一性的氨基酸序列；和轻链可变区，所述轻链可变区包含与SEQ ID NO：190具有至少90％序列同一性的氨基酸序列；或
(l)重链可变区，所述重链可变区包含与SEQ ID NO：199具有至少90％序列同一性的氨基酸序列；和轻链可变区，所述轻链可变区包含与SEQ ID NO：208具有至少90％序列同一性的氨基酸序列。
24.如权利要求1至23中任一项所述的分离的抗体，其中所述抗体或其抗原结合部分表现出与抗PD1抗体或抗PD-L1抗体的协同作用。
25.一种与人TIGIT结合的分离的抗体或其抗原结合部分，其中所述抗体或其抗原结合部分与人TIGIT上的表位结合，所述表位包含氨基酸位置81和82。
26.如权利要求25所述的分离的抗体，其中所述表位包含位置81处的Phe和/或位置82处的Lys或Ser。
27.如权利要求26所述的分离的抗体，其中所述表位包含Phe81和Lys82。
28.如权利要求25至27中任一项所述的分离的抗体，其中所述表位是不连续的表位。
29.如权利要求25至28中任一项所述的分离的抗体，其中所述抗体或其抗原结合部分与人TIGIT上的表位结合，所述表位还包含氨基酸位置51、52、53、54、55、73、74、75、76、77、79、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92或93中的一个或多个。
30.如权利要求29所述的分离的抗体，其中所述表位还包含选自由以下组成的组的一个或多个氨基酸残基：Thr51、Ala52、Gln53、Val54、Thr55、Leu73、Gly74、Trp75、His76、Ile77、Pro79、Asp83、Arg84、Val85、Ala86、Pro87、Gly88、Pro89、Gly90、Leu91、Gly92和Leu93。
31.如权利要求30所述的分离的抗体，其中所述表位包含所述氨基酸残基Thr51、Ala52、Gln53、Val54、Thr55、Gly74、Trp75、His76、I1e77、Phe81、Lys82、Pro87、Gly88、Pro89、Gly90、Leu91、Gly92和Leu93。
32.如权利要求30所述的分离的抗体，其中所述表位包含所述氨基酸残基Ala52、Gln53、Leu73、Gly74、Trp75、Pro79、Phe81、Lys82、Asp83、Arg84、Val85和Ala86。
33.如权利要求25至32中任一项所述的分离的抗体，其中所述表位包含序列ICNADLGWHISPSFK。
34.如权利要求25至32中任一项所述的分离的抗体，其中所述抗体或其抗原结合部分包含以下中的一个或多个：
(a)重链CDR1，所述重链CDR1包含SEQ ID NO：4、SEQ ID NO：22、SEQ ID NO：40、SEQ IDNO：58、SEQ ID NO：76、SEQ ID NO：94、SEQ ID NO：112、SEQ ID NO：130、SEQ ID NO：148、SEQID NO：166、SEQ ID NO：184、SEQ ID NO：202、SEQ ID NO：221、SEQ ID NO：224、SEQ ID NO：226、SEQ ID NO：231、SEQ ID NO：233、SEQ ID NO：239或SEQ ID NO：243中的任一个的序列；
(b)重链CDR2，所述重链CDR2包含SEQ ID NO：6、SEQ ID NO：24、SEQ ID NO：42、SEQ IDNO：60、SEQ ID NO：78、SEQ ID NO：96、SEQ ID NO：114、SEQ ID NO：132、SEQ ID NO：150、SEQID NO：168、SEQ ID NO：186、SEQ ID NO：204、SEQ ID NO：222、SEQ ID NO：225、SEQ ID NO：227、SEQ ID NO：229、SEQ ID NO：232、SEQ ID NO：234、SEQ ID NO：238或SEQ ID NO：240中的任一个的序列；
(c)重链CDR3，所述重链CDR3包含SEQ ID NO：8、SEQ ID NO：26、SEQ ID NO：44、SEQ IDNO：62、SEQ ID NO：80、SEQ ID NO：98、SEQ ID NO：116、SEQ ID NO：134、SEQ ID NO：152、SEQID NO：170、SEQ ID NO：188、SEQ ID NO：206、SEQ ID NO：223、SEQ ID NO：228、SEQ ID NO：230、SEQ ID NO：235、SEQ ID NO：236、SEQ ID NO：237、SEQ ID NO：241、SEQ ID NO：242或SEQ ID NO：244中的任一个的序列；
(d)轻链CDR1，所述轻链CDR1包含SEQ ID NO：13、SEQ ID NO：31、SEQ ID NO：49、SEQ IDNO：67、SEQ ID NO：85、SEQ ID NO：103、SEQ ID NO：121、SEQ ID NO：139、SEQ ID NO：157、SEQ ID NO：175、SEQ ID NO：193或SEQ ID NO：211中的任一个的序列；
(e)轻链CDR2，所述轻链CDR2包含SEQ ID NO：15、SEQ ID NO：33、SEQ ID NO：51、SEQ IDNO：69、SEQ ID NO：87、SEQ ID NO：105、SEQ ID NO：123、SEQ ID NO：141、SEQ ID NO：159、SEQ ID NO：177、SEQ ID NO：195或SEQ ID NO：213中的任一个的序列；或
(f)轻链CDR3，所述轻链CDR3包含SEQ ID NO：17、SEQ ID NO：35、SEQ ID NO：53、SEQ IDNO：71、SEQ ID NO：89、SEQ ID NO：107、SEQ ID NO：125、SEQ ID NO：143、SEQ ID NO：161、SEQ ID NO：179、SEQ ID NO：197或SEQ ID NO：215中的任一个的序列。
35.如权利要求34所述的分离的抗体，其中所述抗体或其抗原结合部分包含重链CDR1、CDR2和CDR3以及轻链CDR1、CDR和CDR3，所述重链CDR1、CDR2和CDR3以及所述轻链CDR1、CDR和CDR3：
(a)分别包含SEQ ID NO：4、6、8、13、15和17的序列；或者
(b)分别包含SEQ ID NO：22、24、26、31、33和35的序列；或者
(c)分别包含SEQ ID NO：40、42、44、49、51和53的序列；或者
(d)分别包含SEQ ID NO：58、60、62、67、69和71的序列；或者
(e)分别包含SEQ ID NO：76、78、80、85、87和89的序列；或者
(f)分别包含SEQ ID NO：94、96、98、103、105和107的序列；或者
(g)分别包含SEQ ID NO：112、114、116、121、123和125的序列；或者
(h)分别包含SEQ ID NO：130、132、134、139、141和143的序列；或者
(i)分别包含SEQ ID NO：148、150、152、157、159和161的序列；或者
(j)分别包含SEQ ID NO：166、168、170、175、177和179的序列；或者
(k)分别包含SEQ ID NO：184、186、188、193、195和197的序列；或者
(l)分别包含SEQ ID NO：202、204、206、211、213和215的序列；或者
(m)分别包含SEQ ID NO：221、222、223、13、15和17的序列；或者
(n)分别包含SEQ ID NO：224、225、62、67、69和71的序列；或者
(o)分别包含SEQ ID NO：226、227、228、67、69和71的序列；或者
(p)分别包含SEQ ID NO：224、229、230、67、69和71的序列；或者
(q)分别包含SEQ ID NO：224、227、230、67、69和71的序列；或者
(r)分别包含SEQ ID NO：231、232、235、103、105和107的序列；或者
(s)分别包含SEQ ID NO：233、234、236、103、105和107的序列；或者
(t)分别包含SEQ ID NO：233、234、237、103、105和107的序列；或者
(u)分别包含SEQ ID NO：166、238、170、175、177和179的序列；或者
(v)分别包含SEQ ID NO：239、240、170、175、177和179的序列；或者
(w)分别包含SEQ ID NO：239、240、241、175、177和179的序列；或者
(x)分别包含SEQ ID NO：239、240、242、175、177和179的序列；或者
(y)分别包含SEQ ID NO：243、168、244、175、177和179的序列。
36.如权利要求34所述的分离的抗体，其中所述抗体或其抗原结合部分包含：
(a)重链可变区，所述重链可变区包含与SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：19、SEQ ID NO：37、SEQ ID NO：55、SEQ ID NO：73、SEQ ID NO：91、SEQ ID NO：109、SEQ ID NO：127、SEQ ID NO：145、SEQ ID NO：163、SEQ ID NO：181、SEQ ID NO：199、SEQ ID NO：245、SEQ ID NO：246、SEQID NO：247、SEQ ID NO：248、SEQ ID NO：249、SEQ ID NO：250、SEQ ID NO：251、SEQ ID NO：252、SEQ ID NO：253、SEQ ID NO：254、SEQ ID NO：255、SEQ ID NO：256或SEQ ID NO：257具有至少90％序列同一性的氨基酸序列；和/或
(b)轻链可变区，所述轻链可变区包含与SEQ ID NO：10、SEQ ID NO：28、SEQ ID NO：46、SEQ ID NO：64、SEQ ID NO：82、SEQ ID NO：100、SEQ ID NO：118、SEQ ID NO：136、SEQ IDNO：154、SEQ ID NO：172、SEQ ID NO：190或SEQ ID NO：208具有至少90％序列同一性的氨基酸序列。
37.如权利要求36所述的分离的抗体，其中所述抗体或其抗原结合部分包含：
(a)重链可变区，所述重链可变区包含与SEQ ID NO：1或SEQ ID NO：245具有至少90％序列同一性的氨基酸序列；和轻链可变区，所述轻链可变区包含与SEQ ID NO：10具有至少90％序列同一性的氨基酸序列；或
(b)重链可变区，所述重链可变区包含与SEQ ID NO：19具有至少90％序列同一性的氨基酸序列；和轻链可变区，所述轻链可变区包含与SEQ ID NO：28具有至少90％序列同一性的氨基酸序列；或
(c)重链可变区，所述重链可变区包含与SEQ ID NO：37具有至少90％序列同一性的氨基酸序列；和轻链可变区，所述轻链可变区包含与SEQ ID NO：46具有至少90％序列同一性的氨基酸序列；或
(d)重链可变区，所述重链可变区包含与SEQ ID NO：55、SEQ ID NO：246、SEQ ID NO：247、SEQ ID NO：248或SEQ ID NO：249中的任一个具有至少90％序列同一性的氨基酸序列；和轻链可变区，所述轻链可变区包含与SEQ ID NO：64具有至少90％序列同一性的氨基酸序列；或
(e)重链可变区，所述重链可变区包含与SEQ ID NO：73具有至少90％序列同一性的氨基酸序列；和轻链可变区，所述轻链可变区包含与SEQ ID NO：82具有至少90％序列同一性的氨基酸序列；或
(f)重链可变区，所述重链可变区包含与SEQ ID NO：91、SEQ ID NO：250、SEQ ID NO：251或SEQ ID NO：252中的任一个具有至少90％序列同一性的氨基酸序列；和轻链可变区，所述轻链可变区包含与SEQ ID NO：100具有至少90％序列同一性的氨基酸序列；或
(g)重链可变区，所述重链可变区包含与SEQ ID NO：109具有至少90％序列同一性的氨基酸序列；和轻链可变区，所述轻链可变区包含与SEQ ID NO：118具有至少90％序列同一性的氨基酸序列；或
(h)重链可变区，所述重链可变区包含与SEQ ID NO：127具有至少90％序列同一性的氨基酸序列；和轻链可变区，所述轻链可变区包含与SEQ ID NO：136具有至少90％序列同一性的氨基酸序列；或
(i)重链可变区，所述重链可变区包含与SEQ ID NO：145具有至少90％序列同一性的氨基酸序列；和轻链可变区，所述轻链可变区包含与SEQ ID NO：154具有至少90％序列同一性的氨基酸序列；或
(j)重链可变区，所述重链可变区包含与SEQ ID NO：163、SEQ ID NO：253、SEQ ID NO：254、SEQ ID NO：255、SEQ ID NO：256或SEQ ID NO：257中的任一个具有至少90％序列同一性的氨基酸序列；和轻链可变区，所述轻链可变区包含与SEQ ID NO：172具有至少90％序列同一性的氨基酸序列；或
(k)重链可变区，所述重链可变区包含与SEQ ID NO：1 81具有至少90％序列同一性的氨基酸序列；和轻链可变区，所述轻链可变区包含与SEQ ID NO：190具有至少90％序列同一性的氨基酸序列；或
(l)重链可变区，所述重链可变区包含与SEQ ID NO：199具有至少90％序列同一性的氨基酸序列；和轻链可变区，所述轻链可变区包含与SEQ ID NO：208具有至少90％序列同一性的氨基酸序列。
38.如权利要求1至37中任一项所述的分离的抗体，其中所述抗体是单克隆抗体。
39.如权利要求1至38中任一项所述的分离的抗体，其中所述抗体是人源化抗体。
40.如权利要求1至38中任一项所述的分离的抗体，其中所述抗体是完全人抗体。
41.如权利要求1至38中任一项所述的分离的抗体，其中所述抗体是嵌合抗体。
42.如权利要求1至38中任一项所述的分离的抗体，其中所述抗原结合片段是Fab、F(ab′)2、scFv或二价scFv。
43.一种药物组合物，其包含如权利要求1至42中任一项所述的分离的抗体和药学上可接受的载体。
44.一种双特异性抗体，其包含如权利要求1至42中任一项所述的抗体。
45.一种抗体-药物缀合物，其包含如权利要求1至42中任一项所述的抗体。
46.一种分离的多核苷酸，其包含编码如权利要求1至42中任一项所述的抗体的核苷酸序列。
47.一种分离的多核苷酸，其包含编码与人TIGIT结合的抗体或其抗原结合部分的核苷酸序列，其中所述分离的多核苷酸包含：
(a)SEQ ID NO：2、SEQ ID NO：20、SEQ ID NO：38、SEQ ID NO：56、SEQ ID NO：74、SEQ IDNO：92、SEQ ID NO：110、SEQ ID NO：128、SEQ ID NO：146、SEQ ID NO：164、SEQ ID NO：182或SEQ ID NO：200的核苷酸序列；和/或
(b)SEQ ID NO：11、SEQ ID NO：29、SEQ ID NO：47、SEQ ID NO：65、SEQ ID NO：83、SEQID NO：101、SEQ ID NO：119、SEQ ID NO：137、SEQ ID NO：155、SEQ ID NO：173、SEQ ID NO：191或SEQ ID NO：209的核苷酸序列。
48.一种载体，其包含如权利要求46或权利要求47所述的多核苷酸。
49.一种宿主细胞，其包含如权利要求46或权利要求47所述的多核苷酸或如权利要求48所述的载体。
50.一种产生抗体的方法，所述方法包括在适于产生所述抗体的条件下培养如权利要求49所述的宿主细胞。
51.一种药盒，其包括：
如权利要求1至42中任一项所述的分离的抗体、如权利要求43所述的药物组合物；以及
免疫肿瘤学剂。
52.如权利要求51所述的药盒，其中所述免疫肿瘤学剂是PD-1途径抑制剂。
53.如权利要求52所述的药盒，其中所述PD-1途径抑制剂是抗PD1抗体或抗PD-L1抗体。
54.如权利要求51所述的药盒，其中所述免疫肿瘤学剂是T细胞共抑制剂的拮抗剂或抑制剂。
55.如权利要求51所述的药盒，其中所述免疫肿瘤学剂是T细胞共活化剂的激动剂。
56.如权利要求51所述的药盒，其中所述免疫肿瘤学剂是免疫刺激细胞因子。
57.一种治疗受试者的癌症的方法，所述方法包括向所述受试者施用治疗量的如权利要求1至42中任一项所述的分离的抗体、如权利要求43所述的药物组合物、如权利要求44所述的双特异性抗体或如权利要求45所述的抗体-药物缀合物。
58.如权利要求57所述的方法，其中所述癌症是富集CD112或CD155表达的癌症。
59.如权利要求57所述的方法，其中所述癌症是富集表达TIGIT的T细胞或天然杀伤(NK)细胞的癌症。
60.如权利要求57至59中任一项所述的方法，其中所述癌症是膀胱癌、乳腺癌、子宫癌、宫颈癌、卵巢癌、前列腺癌、睾丸癌、食管癌、胃肠癌、胰腺癌、结肠直肠癌、结肠癌、肾癌、头颈癌、肺癌、胃癌、生殖细胞癌、骨癌、肝癌、甲状腺癌、皮肤癌、中枢神经系统赘瘤、淋巴瘤、白血病、骨髓瘤或肉瘤。
61.如权利要求60所述的方法，其中所述癌症是淋巴瘤或白血病。
62.如权利要求57至61中任一项所述的方法，其还包括向所述受试者施用治疗量的免疫肿瘤学剂。
63.如权利要求62所述的方法，其中所述免疫肿瘤学剂是PD-1途径抑制剂。
64.如权利要求63所述的方法，其中所述PD-1途径抑制剂是抗PD1抗体或抗PD-L1抗体。
65.如权利要求62所述的方法，其中所述免疫肿瘤学剂是T细胞共抑制剂的拮抗剂或抑制剂。
66.如权利要求62所述的方法，其中所述免疫肿瘤学剂是T细胞共活化剂的激动剂。
67.如权利要求62所述的方法，其中所述免疫肿瘤学剂是免疫刺激细胞因子。
68.如权利要求62至67中任一项所述的方法，其中所述分离的抗体、所述药物组合物、所述双特异性抗体或所述抗体-药物缀合物与所述免疫肿瘤学剂同时施用。
69.如权利要求62至67中任一项所述的方法，其中所述分离的抗体、所述药物组合物、所述双特异性抗体或所述抗体-药物缀合物与所述免疫肿瘤学剂依序施用。
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