BR112021003156A2 - composição, anticorpo que se liga ao tigit humano, formulação farmacêutica, polinucleotídeo isolado, vetor, célula hospedeira, métodos para a produção de um anticorpo que se liga ao tigit humano e de anticorpos afucosilados que se ligam a tigit e para o tratamento de um câncer, e, kit. - Google Patents

composição, anticorpo que se liga ao tigit humano, formulação farmacêutica, polinucleotídeo isolado, vetor, célula hospedeira, métodos para a produção de um anticorpo que se liga ao tigit humano e de anticorpos afucosilados que se ligam a tigit e para o tratamento de um câncer, e, kit. Download PDF

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Abstract

COMPOSIÇÃO, ANTICORPO QUE SE LIGA AO TIGIT HUMANO, FORMULAÇÃO FARMACÊUTICA, POLINUCLEOTÍDEO ISOLADO, VETOR, CÉLULA HOSPEDEIRA, MÉTODOS PARA A PRODUÇÃO DE UM ANTICORPO QUE SE LIGA AO TIGIT HUMANO E DE ANTICORPOS AFUCOSILADOS QUE SE LIGAM A TIGIT E PARA O TRATAMENTO DE UM CÂNCER, E, KIT. A presente invenção provê anticorpos isolados que se ligam a TIGIT humano (Imunorreceptor de células T com domínios Ig e ITIM). Em algumas modalidades, o anticorpo tem uma afinidade de ligação (KD) por TIGIT humano inferior a 5 nM. Em algumas modalidades, o anticorpo anti-TIGIT bloqueia a ligação de CD155 e/ou CD112 a TIGIT. Em algumas modalidades, os anticorpos são afucosilados.

Description

1 / 207 COMPOSIÇÃO, ANTICORPO QUE SE LIGA AO TIGIT HUMANO, FORMULAÇÃO FARMACÊUTICA, POLINUCLEOTÍDEO ISOLADO, VETOR, CÉLULA HOSPEDEIRA, MÉTODOS PARA A PRODUÇÃO DE
UM ANTICORPO QUE SE LIGA AO TIGIT HUMANO E DE
ANTICORPOS AFUCOSILADOS QUE SE LIGAM A TIGIT E PARA O TRATAMENTO DE UM CÂNCER, E, KIT Referência cruzada a pedidos de patente correlatos
[001] Este pedido de patente reivindica o benefício de prioridade deste ao Pedido de Patente dos E.U.A. Provisório No 62/722 063, depositado em 23 de agosto de 2018; ao Pedido de Patente dos E.U.A. Provisório No 62/734 130, depositado em 20 de setembro de 2018; e ao Pedido de Patente dos E.U.A. Provisório No 62/822 674, depositado em 22 de março de 2019; cujos conteúdos são aqui incorporados, em sua totalidade, por referência para qualquer efeito. Campo da invenção
[002] A presente invenção provê anticorpos que se ligam a TIGIT humano (Imunorreceptor de células T com domínios Ig e ITIM) e usos dos mesmos. Fundamentos da invenção
[003] TIGIT (“Imunorreceptor de células T com domínios Ig e ITIM”) é um receptor imune expresso em subconjuntos de células T, tais como células T ativadas, de memória e reguladoras e células natural killer (NK). TIGIT faz parte da família CD28 dentro da superfamília Ig de proteínas e serve como uma molécula coinibidora que limita a proliferação e ativação de células T e a função das células NK. TIGIT medeia seu efeito imunossupressor ao competir com CD226 (também conhecido como Molécula-1 Acessória DNAX ou “DNAM-1”) pelo mesmo conjunto de ligantes: CD155 (também conhecido como receptor do poliovírus ou “PVR”) e CD112 (também conhecido como relacionado 2 ao receptor do poliovírus
2 / 207 ou “PVRL2”). Ver, Levin et al., Eur. J. Immunol., 2011, 41:902-915. Dado que a afinidade de CD155 por TIGIT é maior do que a sua afinidade por CD226, na presença de TIGIT, a sinalização de CD226 é inibida, limitando, com isso, a proliferação e ativação de células T.
[004] Em pacientes com melanoma, a expressão de TIGIT é regulada positivamente em células T CD8+ antígeno-tumoral (TA)-específicas e linfócitos CD8+ infiltrantes de tumor (TILs). O bloqueio de TIGIT na presença de células que expressam o ligante (CD155) de TIGIT aumentou a proliferação, a produção de citocinas e a desgranulação de células T CD8+ TA-específicas e TILs CD8+. Ver, Chauvin et al., J Clin Invest., 2015, 125:2046-2058. Assim, TIGIT representa um alvo terapêutico potencial para estimulação de respostas antitumorais de células T em pacientes, embora ainda exista necessidade de métodos melhorados para o bloqueio de TIGIT e para a promoção de respostas antitumorais. Breve sumário da invenção
[005] Modalidade 1. Uma composição compreendendo anticorpos isolados que se ligam a TIGIT humano (Imunorreceptor de células T com domínios Ig e ITIM), em que os anticorpos têm uma afinidade de ligação (KD) for TIGIT humano inferior a 5 nM e em que pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98% ou pelo menos 99% dos anticorpos na composição são afucosilados.
[006] Modalidade 2. A composição da modalidade 1, em que os anticorpos têm uma KD por TIGIT humano inferior a 1 nM.
[007] Modalidade 3. A composição da modalidade 1, em que os anticorpos têm uma KD por TIGIT humano inferior a 100 pM.
[008] Modalidade 4. A composição de qualquer uma das modalidades 1 a 3, em que os anticorpos exibem reatividade cruzada com TIGIT de macaco Cynomolgus e com TIGIT de camundongo.
3 / 207
[009] Modalidade 5. A composição da modalidade 4, em que os anticorpos exibem reatividade cruzada com TIGIT de macaco Cynomolgus e com TIGIT de camundongo.
[0010] Modalidade 6. A composição de qualquer uma das modalidades 1 a 5, em que os anticorpos bloqueiam a ligação de CD155 a TIGIT.
[0011] Modalidade 7. A composição de qualquer uma das modalidades 1 a 5, em que os anticorpos bloqueiam a ligação de CD112 a TIGIT.
[0012] Modalidade 8. A composição de qualquer uma das modalidades 1 a 5, em que os anticorpos bloqueiam a ligação de CD155 e de CD112 a TIGIT.
[0013] Modalidade 9. A composição de qualquer uma das modalidades 1 to 8, em que os anticorpos competem pela ligação a TIGIT humano com um anticorpo que compreende uma região variável da cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 55 e uma região variável da cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 64.
[0014] Modalidade 10. A composição de qualquer uma das modalidades 1 a 9, em que os anticorpos, quando ligados a TIGIT humano, ligam-se a uma ou a ambas as posições 81 e 82 de aminoácidos.
[0015] Modalidade 11. A composição da modalidade 10, em que os anticorpos se ligam a ambas as posições 81 e 82 de aminoácidos.
[0016] Modalidade 12. A composição da modalidade 10 ou modalidade 11, em que as posições 81 e 82 de aminoácidos são Phe81 e Lys82.
[0017] Modalidade 13. A composição de qualquer uma das modalidades 1 a 12, em que os anticorpos se ligam a um epítopo em TIGIT humano que compreende uma ou ambas as posições 81 e 82 de aminoácidos.
4 / 207
[0018] Modalidade 14. Uma composição que compreende anticorpos isolados que se ligam a TIGIT humano, em que os anticorpos, quando ligados a TIGIT, ligam-se a uma ou a ambas as posições 81 e 82 de aminoácidos e em que pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98% ou pelo menos 99% dos anticorpos na composição são afucosilados.
[0019] Modalidade 15. A composição da modalidade 14, em que os anticorpos se ligam a ambas as posições 81 e 82 de aminoácidos.
[0020] Modalidade 16. A composição da modalidade 14 ou modalidade 15, em que as posições 81 e 82 de aminoácidos são Phe81 e Lys82.
[0021] Modalidade 17. Uma composição compreendendo anticorpos isolados que se ligam a TIGIT humano, em que os anticorpos se ligam a um epítopo em TIGIT humano que compreende uma ou ambas as posições 81 e 82 de aminoácidos e em que pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98% ou pelo menos 99% dos anticorpos na composição são afucosilados.
[0022] Modalidade 18. A composição da modalidade 13 ou modalidade 17, em que o epítopo compreende Phe na posição 81.
[0023] Modalidade 19. A composição de qualquer uma das modalidades 13, 17 e 18, em que o epítopo compreende Lys ou Ser na posição
82.
[0024] Modalidade 20. A composição de qualquer uma das modalidades 13 e 17 a 19, em que o epítopo compreende Phe na posição 81 e Lys ou Ser na posição 82.
[0025] Modalidade 21. A composição da modalidade 20, em que o epítopo compreende Phe81 e Lys82.
5 / 207
[0026] Modalidade 22. A composição de qualquer uma das modalidades 13 e 17 a 21, em que o epítopo é um epítopo descontínuo.
[0027] Modalidade 23. A composição de qualquer uma das modalidades 13 e 17 a 22, em que os anticorpos se ligam a um epítopo em TIGIT humano que compreende ainda uma ou mais das posições de aminoácidos 51, 52, 53, 54, 55, 73, 74, 75, 76, 77, 79, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92 ou 93.
[0028] Modalidade 24. A composição da modalidade 23, em que o epítopo compreende ainda um ou mais resíduos de aminoácidos selecionados a partir do grupo que consiste em Thr51, Ala52, Gln53, Val54, Thr55, Leu73, Gly74, Trp75, His76, Ile77, Pro79, Asp83, Arg84, Val85, Ala86, Pro87, Gly88, Pro89, Gly90, Leu91, Gly92 e Leu93.
[0029] Modalidade 25. A composição da modalidade 24, em que o epítopo compreende os resíduos de aminoácidos Thr51, Ala52, Gln53, Val54, Thr55, Gly74, Trp75, His76, Ile77, Phe81, Lys82, Pro87, Gly88, Pro89, Gly90, Leu91, Gly92 e Leu93.
[0030] Modalidade 26. A composição da modalidade 24, em que o epítopo compreende os resíduos de aminoácidos Ala52, Gln53, Leu73, Gly74, Trp75, Pro79, Phe81, Lys82, Asp83, Arg84, Val85 e Ala86.
[0031] Modalidade 27. A composição de qualquer uma das modalidades 13 e 17 a 26, em que o epítopo compreende a sequência ICNADLGWHISPSFK (SEQ ID NO: 258).
[0032] Modalidade 28. A composição de qualquer uma das modalidades 1 a 27, em que o TIGIT humano compreende a sequência de SEQ ID NO: 218.
[0033] Modalidade 29. A composição de qualquer uma das modalidades 1 a 28, em que cada um dos anticorpos compreende uma ou mais dentre: (a) uma CDR1 da cadeia pesada compreendendo uma
6 / 207 sequência selecionada dentre SEQ ID NO:4, SEQ ID NO:22, SEQ ID NO:40, SEQ ID NO:58, SEQ ID NO:76, SEQ ID NO:94, SEQ ID NO:112, SEQ ID NO:130, SEQ ID NO:148, SEQ ID NO:166, SEQ ID NO:184, SEQ ID NO:202, SEQ ID NO:221, SEQ ID NO:224, SEQ ID NO:226, SEQ ID NO:231, SEQ ID NO:233, SEQ ID NO:239, SEQ ID NO:243, SEQ ID NO:283, SEQ ID NO:284, SEQ ID NO:293, SEQ ID NO:294, SEQ ID NO:289 e SEQ ID NO:290; (b) uma CDR2 da cadeia pesada compreendendo uma sequência selecionada dentre SEQ ID NO:6, SEQ ID NO:24, SEQ ID NO:42, SEQ ID NO:60, SEQ ID NO:78, SEQ ID NO:96, SEQ ID NO:114, SEQ ID NO:132, SEQ ID NO:150, SEQ ID NO:168, SEQ ID NO:186, SEQ ID NO:204, SEQ ID NO:222, SEQ ID NO:225, SEQ ID NO:227, SEQ ID NO:229, SEQ ID NO:232, SEQ ID NO:234, SEQ ID NO:238, SEQ ID NO:240, SEQ ID NO:285, SEQ ID NO:297, SEQ ID NO:291 e SEQ ID NO:295; (c) uma CDR3 da cadeia pesada compreendendo uma sequência selecionada dentre SEQ ID NO:8, SEQ ID NO:26, SEQ ID NO:44, SEQ ID NO:62, SEQ ID NO:80, SEQ ID NO:98, SEQ ID NO:116, SEQ ID NO:134, SEQ ID NO:152, SEQ ID NO:170, SEQ ID NO:188, SEQ ID NO:206, SEQ ID NO:223, SEQ ID NO:228, SEQ ID NO:230, SEQ ID NO:235, SEQ ID NO:236, SEQ ID NO:237, SEQ ID NO:241, SEQ ID NO:242, SEQ ID NO:244, SEQ ID NO:286, SEQ ID NO:292 e SEQ ID NO:296; (d) uma CDR1 da cadeia leve compreendendo uma sequência selecionada dentre SEQ ID NO:13, SEQ ID NO:31, SEQ ID NO:49, SEQ ID NO:67, SEQ ID NO:85, SEQ ID NO:103, SEQ ID NO:121, SEQ ID NO:139, SEQ ID NO:157, SEQ ID NO:175, SEQ ID NO:193, SEQ ID NO:211 e SEQ ID NO:287; (e) uma CDR2 da cadeia leve compreendendo uma sequência
7 / 207 selecionada dentre SEQ ID NO:15, SEQ ID NO:33, SEQ ID NO:51, SEQ ID NO:69, SEQ ID NO:87, SEQ ID NO:105, SEQ ID NO:123, SEQ ID NO:141, SEQ ID NO:159, SEQ ID NO:177, SEQ ID NO:195, SEQ ID NO:213 e SEQ ID NO:288; ou (f) uma CDR3 da cadeia leve compreendendo uma sequência selecionada dentre SEQ ID NO:17, SEQ ID NO:35, SEQ ID NO:53, SEQ ID NO:71, SEQ ID NO:89, SEQ ID NO:107, SEQ ID NO:125, SEQ ID NO:143, SEQ ID NO:161, SEQ ID NO:179, SEQ ID NO:197 e SEQ ID NO:215.
[0034] Modalidade 30. A composição da modalidade 29, em que cada um dos anticorpos compreende: (a) uma sequência de CDR1 da cadeia pesada compreendendo uma sequência de aminoácidos selecionada dentre SEQ ID NO:58, SEQ ID NO:283, SEQ ID NO:284, SEQ ID NO:224, SEQ ID NO:293, SEQ ID NO:294, SEQ ID NO:226, SEQ ID NO:289 e SEQ ID NO:290; (b) uma sequência de CDR2 da cadeia pesada compreendendo uma sequência de aminoácidos selecionada dentre SEQ ID NO:60, SEQ ID NO:285, SEQ ID NO:225, SEQ ID NO:297, SEQ ID NO:227, SEQ ID NO:291, SEQ ID NO:229 e SEQ ID NO:295; (c) uma sequência de CDR3 da cadeia pesada compreendendo uma sequência de aminoácidos selecionada dentre SEQ ID NO:62, SEQ ID NO:286, SEQ ID NO:228, SEQ ID NO:292, SEQ ID NO:230 e SEQ ID NO:296; (d) uma sequência de CDR1 da cadeia leve compreendendo uma sequência de aminoácidos selecionada dentre SEQ ID NO:67 e SEQ ID NO:287; (e) uma sequência de CDR2 da cadeia leve compreendendo uma sequência de aminoácidos selecionada dentre SEQ ID NO:69 e SEQ ID NO:288; e/ou (f) uma sequência de CDR3 da cadeia leve compreendendo a
8 / 207 sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:71.
[0035] Modalidade 31. A composição da modalidade 29 ou modalidade 30, em que cada um dos anticorpos compreende uma CDR1, CDR2 e CDR3 da cadeia pesada e uma CDR1, CDR2 e CDR3 da cadeia leve compreendendo as sequências de: (a) SEQ ID NOs: 4, 6, 8, 13, 15 e 17, respectivamente; ou (b) SEQ ID NOs: 22, 24, 26, 31, 33 e 35, respectivamente; ou (c) SEQ ID NOs: 40, 42, 44, 49, 51 e 53, respectivamente; ou (d) SEQ ID NOs: 58, 60, 62, 67, 69 e 71, respectivamente; ou (e) SEQ ID NOs: 283, 285, 62, 287, 288 e 71, respectivamente; ou (f) SEQ ID NOs: 284, 60, 286, 67, 69 e 71, respectivamente; ou (g) SEQ ID NOs: 76, 78, 80, 85, 87 e 89, respectivamente; ou (h) SEQ ID NOs: 94, 96, 98, 103, 105 e 107, respectivamente; ou (i) SEQ ID NOs: 112, 114, 116, 121, 123 e 125, respectivamente; ou (j) SEQ ID NOs: 130, 132, 134, 139, 141 e 143, respectivamente; ou (k) SEQ ID NOs: 148, 150, 152, 157, 159 e 161, respectivamente; ou (l) SEQ ID NOs: 166, 168, 170, 175, 177 e 179, respectivamente; ou (m) SEQ ID NOs: 184, 186, 188, 193, 195 e 197, respectivamente; ou (n) SEQ ID NOs: 202, 204, 206, 211, 213 e 215, respectivamente; ou (o) SEQ ID NOs: 221, 222, 223, 13, 15 e 17, respectivamente;
9 / 207 ou (p) SEQ ID NOs: 224, 225, 62, 67, 69 e 71, respectivamente; ou (q) SEQ ID NOs: 293, 297, 62, 287, 288 e 71, respectivamente; ou (r) SEQ ID NOs: 294, 225, 286, 67, 69 e 71, respectivamente; ou (s) SEQ ID NOs: 226, 227, 228, 67, 69 e 71, respectivamente; ou (t) SEQ ID NOs: 289, 291, 228, 287, 288 e 71, respectivamente; ou (u) SEQ ID NOs: 290, 227, 292, 67, 69 e 71, respectivamente; ou (v) SEQ ID NOs: 224, 229, 230, 67, 69 e 71, respectivamente; ou (w) SEQ ID NOs: 293, 295, 230, 287, 288 e 71, respectivamente; ou (x) SEQ ID NOs: 294, 229, 296, 67, 69 e 71, respectivamente; ou (y) SEQ ID NOs: 224, 227, 230, 67, 69 e 71, respectivamente; ou (z) SEQ ID NOs: 293, 290, 230, 287, 288 e 71, respectivamente; ou (aa) SEQ ID NOs: 294, 290, 230, 67, 69 e 71, respectivamente; ou (bb) SEQ ID NOs: 231, 232, 235, 103, 105 e 107, respectivamente; ou (cc) SEQ ID NOs: 233, 234, 236, 103, 105 e 107, respectivamente; ou
10 / 207 (dd) SEQ ID NOs: 233, 234, 237, 103, 105 e 107, respectivamente; ou (ee) SEQ ID NOs: 166, 238, 170, 175, 177 e 179, respectivamente; ou (ff) SEQ ID NOs: 239, 240, 170, 175, 177 e 179, respectivamente; ou (gg) SEQ ID NOs: 239, 240, 241, 175, 177 e 179, respectivamente; ou (hh) SEQ ID NOs: 239, 240, 242, 175, 177 e 179, respectivamente; ou (ii) SEQ ID NOs: 243, 168, 244, 175, 177 e 179, respectivamente.
[0036] Modalidade 32. A composição de qualquer uma das modalidades 1 a 31, em que cada um dos anticorpos compreende uma CDR1, CDR2 e CDR3 da cadeia pesada e uma CDR1, CDR2 e CDR3 da cadeia leve compreendendo as sequências de: (a) SEQ ID NOs: 58, 60, 62, 67, 69 e 71, respectivamente; ou (b) SEQ ID NOs: 283, 285, 62, 287, 288 e 71, respectivamente; ou (c) SEQ ID NOs: 284, 60, 286, 67, 69 e 71, respectivamente.
[0037] Modalidade 33. A composição de qualquer uma das modalidades 1 a 32, em que cada um dos anticorpos compreende: (a) uma região variável da cadeia pesada compreendendo uma sequência de aminoácidos com pelo menos 90% de identidade de sequência com SEQ ID NO:1, SEQ ID NO:19, SEQ ID NO:37, SEQ ID NO:55, SEQ ID NO:73, SEQ ID NO:91, SEQ ID NO:109, SEQ ID NO:127, SEQ ID NO:145, SEQ ID NO:163, SEQ ID NO:181, SEQ ID NO:199, SEQ ID NO:245, SEQ ID NO:246, SEQ ID NO:247, SEQ ID NO:248, SEQ ID NO:249, SEQ ID NO:250, SEQ ID NO:251, SEQ ID NO:252, SEQ ID NO:253, SEQ ID
11 / 207 NO:254, SEQ ID NO:255, SEQ ID NO:256 ou SEQ ID NO:257; e/ou (b) uma região variável da cadeia leve compreendendo uma sequência de aminoácidos com pelo menos 90% de identidade de sequência com SEQ ID NO:10, SEQ ID NO:28, SEQ ID NO:46, SEQ ID NO:64, SEQ ID NO:82, SEQ ID NO:100, SEQ ID NO:118, SEQ ID NO:136, SEQ ID NO:154, SEQ ID NO:172, SEQ ID NO:190 ou SEQ ID NO:208.
[0038] Modalidade 34. A composição de qualquer uma das modalidades 1 to 33, em que cada um dos anticorpos compreende: (a) uma região variável da cadeia pesada compreendendo uma sequência de aminoácidos com pelo menos 90% de identidade de sequência com SEQ ID NO:1 ou SEQ ID NO:245 e uma região variável da cadeia leve compreendendo uma sequência de aminoácidos com pelo menos 90% de identidade de sequência com SEQ ID NO:10; ou (b) uma região variável da cadeia pesada compreendendo uma sequência de aminoácidos com pelo menos 90% de identidade de sequência com SEQ ID NO:19 e uma região variável da cadeia leve compreendendo uma sequência de aminoácidos com pelo menos 90% de identidade de sequência com SEQ ID NO:28; ou (c) uma região variável da cadeia pesada compreendendo uma sequência de aminoácidos com pelo menos 90% de identidade de sequência com SEQ ID NO:37 e uma região variável da cadeia leve compreendendo uma sequência de aminoácidos com pelo menos 90% de identidade de sequência com SEQ ID NO:46; ou (d) uma região variável da cadeia pesada compreendendo uma sequência de aminoácidos com pelo menos 90% de identidade de sequência com qualquer uma dentre SEQ ID NO:55, SEQ ID NO:246, SEQ ID NO:247, SEQ ID NO:248 ou SEQ ID NO:249 e uma região variável da cadeia leve compreendendo uma sequência de aminoácidos com pelo menos 90% de identidade de sequência com SEQ ID NO:64; ou
12 / 207
(e) uma região variável da cadeia pesada compreendendo uma sequência de aminoácidos com pelo menos 90% de identidade de sequência com SEQ ID NO:73 e uma região variável da cadeia leve compreendendo uma sequência de aminoácidos com pelo menos 90% de identidade de sequência com SEQ ID NO:82; ou (f) uma região variável da cadeia pesada compreendendo uma sequência de aminoácidos com pelo menos 90% de identidade de sequência com qualquer uma dentre SEQ ID NO:91, SEQ ID NO:250, SEQ ID NO:251 ou SEQ ID NO:252 e uma região variável da cadeia leve compreendendo uma sequência de aminoácidos com pelo menos 90% de identidade de sequência com SEQ ID NO:100; ou (g) uma região variável da cadeia pesada compreendendo uma sequência de aminoácidos com pelo menos 90% de identidade de sequência com SEQ ID NO:109 e uma região variável da cadeia leve compreendendo uma sequência de aminoácidos com pelo menos 90% de identidade de sequência com SEQ ID NO:118; ou (h) uma região variável da cadeia pesada compreendendo uma sequência de aminoácidos com pelo menos 90% de identidade de sequência com SEQ ID NO:127 e uma região variável da cadeia leve compreendendo uma sequência de aminoácidos com pelo menos 90% de identidade de sequência com SEQ ID NO:136; ou (i) uma região variável da cadeia pesada compreendendo uma sequência de aminoácidos com pelo menos 90% de identidade de sequência com SEQ ID NO:145 e uma região variável da cadeia leve compreendendo uma sequência de aminoácidos com pelo menos 90% de identidade de sequência com SEQ ID NO:154; ou (j) uma região variável da cadeia pesada compreendendo uma sequência de aminoácidos com pelo menos 90% de identidade de sequência com qualquer uma dentre SEQ ID NO:163, SEQ ID NO:253, SEQ ID
13 / 207
NO:254, SEQ ID NO:255, SEQ ID NO:256 ou SEQ ID NO:257 e uma região variável da cadeia leve compreendendo uma sequência de aminoácidos com pelo menos 90% de identidade de sequência com SEQ ID NO:172; ou (k) uma região variável da cadeia pesada compreendendo uma sequência de aminoácidos com pelo menos 90% de identidade de sequência com SEQ ID NO:181 e uma região variável da cadeia leve compreendendo uma sequência de aminoácidos com pelo menos 90% de identidade de sequência com SEQ ID NO:190; ou (l) uma região variável da cadeia pesada compreendendo uma sequência de aminoácidos com pelo menos 90% de identidade de sequência com SEQ ID NO:199 e uma região variável da cadeia leve compreendendo uma sequência de aminoácidos com pelo menos 90% de identidade de sequência com SEQ ID NO:208. Modalidade 35. A composição da modalidade 34, em que cada um dos anticorpos compreende: (a) uma região variável da cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:1 ou SEQ ID NO:245 e uma região variável da cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:10; ou (b) uma região variável da cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:19 e uma região variável da cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:28; ou (c) uma região variável da cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:37 e uma região variável da cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:46; ou (d) uma região variável da cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos de qualquer uma dentre SEQ ID NO:55, SEQ ID NO:246, SEQ ID NO:247, SEQ ID NO:248 ou SEQ ID NO:249 e uma região variável da cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ
14 / 207
ID NO:64; ou (e) uma região variável da cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:73 e uma região variável da cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:82; ou (f) uma região variável da cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos de qualquer uma dentre SEQ ID NO:91, SEQ ID NO:250, SEQ ID NO:251 ou SEQ ID NO:252 e uma região variável da cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:100; ou (g) uma região variável da cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:109 e uma região variável da cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:118; ou (h) uma região variável da cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:127 e uma região variável da cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:136; ou (i) uma região variável da cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:145 e uma região variável da cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:154; ou (j) uma região variável da cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos de qualquer uma dentre SEQ ID NO:163, SEQ ID NO:253, SEQ ID NO:254, SEQ ID NO:255, SEQ ID NO:256 ou SEQ ID NO:257 e uma região variável da cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:172; ou (k) uma região variável da cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:181 e uma região variável da cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:190;
15 / 207 ou (l) uma região variável da cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:199 e uma região variável da cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:208.
[0039] Modalidade 36. A composição de qualquer uma das modalidades 1 a 35, em que cada um dos anticorpos compreende uma região variável da cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:55 e uma região variável da cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:64.
[0040] Modalidade 37. A composição de qualquer uma das modalidades 1 a 36, em que os anticorpos são anticorpos IgG.
[0041] Modalidade 38. A composição da modalidade 37, em que os anticorpos são anticorpos IgG1 ou anticorpos IgG3.
[0042] Modalidade 39. A composição de qualquer uma das modalidades 1 a 38, em que cada um dos anticorpos compreende uma cadeia pesada compreendendo uma sequência de aminoácidos selecionada dentre SEQ ID NOs: 260, 262, 264, 266, 268, 270 e 272; e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 274.
[0043] Modalidade 40. A composição da modalidade 39, em que cada um dos anticorpos compreende uma cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOs: 260; e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 274.
[0044] Modalidade 41. A composição da modalidade 39, em que cada um dos anticorpos compreende uma cadeia pesada que consiste na sequência de aminoácidos de SEQ ID NOs: 260; e uma cadeia leve que consiste na sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 274.
[0045] Modalidade 42. Uma composição que compreende anticorpos isolados que se ligam a TIGIT humano, em que pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%,
16 / 207 pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98% ou pelo menos 99% dos anticorpos na composição são afucosilados e em que cada um dos anticorpos compreende uma cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOs: 260; e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 274.
[0046] Modalidade 43. Uma composição que compreende anticorpos isolados que se ligam a TIGIT humano, em que pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98% ou pelo menos 99% dos anticorpos na composição são afucosilados e em que cada um dos anticorpos compreende uma cadeia pesada que consiste na sequência de aminoácidos de SEQ ID NOs: 260; e uma cadeia leve que consiste na sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 274.
[0047] Modalidade 44. A composição de qualquer uma das modalidades 1 to 43, em que os anticorpos exibem sinergia com um anticorpo anti-PD-1 ou um anticorpo anti-PD-L1.
[0048] Modalidade 45. A composição da modalidade 44, em que a sinergia é determinada por meio de um ensaio que compreende colocar em contato uma cocultura compreendendo (i) células Jurkat efetoras que expressam PD-1, TIGIT e CD226, em que as células Jurkat efetoras compreendem um gene repórter luciferase direcionado pelo promotor de IL-2; e (ii) células CHO-K1 apresentadoras de antígeno artificiais (aAPCs) expressando um ativador de TCR, PD-L1 e CD155; com a composição e um anticorpo anti-PD-1 ou um anticorpo anti-PD-L1.
[0049] Modalidade 46. A composição de qualquer uma das modalidades 1 a 45, em que células T reguladoras (Treg) são depletadas de PBMCs humanas quando em contato com a composição.
[0050] Modalidade 47. A composição de qualquer uma das modalidades 1 a 46, em que a expressão de MCP1, IL-8 e MIP1α é
17 / 207 aumentada em PBMCs humanas quando em contato com a composição.
[0051] Modalidade 48. A composição de qualquer uma das modalidades 1 a 47, em que monócitos/macrófagos são ativados quando estão em contato com a composição.
[0052] Modalidade 49. A composição de qualquer uma das modalidades 1 a 48, em que CD86 e MHCII são regulados positivamente quando monócitos/macrófagos CD14+ estão em contato com a composição.
[0053] Modalidade 50. A composição de qualquer uma das modalidades 1 a 49, em que monócitos/macrófagos CD14+ quando em contato com a composição amadurecem tornando-se células apresentadoras de antígeno.
[0054] Modalidade 51. A composição de qualquer uma das modalidades 1 a 50, em que as células T de memória quando em contato com a composição mostram produção aumentada de IFNγ em resposta ao antígeno.
[0055] Modalidade 52. A composição de qualquer uma das modalidades 1 a 51, em que as células T de memória quando em contato com a composição demonstram resposta reforçada ao antígeno.
[0056] Modalidade 53. A composição de qualquer uma das modalidades 1 to 52, em que células T CD8+ efetoras de memória e/ou células T CD4+ efetoras de memória são aumentadas em tumores quando estão em contato com a composição.
[0057] Modalidade 54. A composição de qualquer uma das modalidades 1 a 53, em que a composição reforça uma resposta Th1 em um animal a que foi administrada a composição.
[0058] Modalidade 55. A composição de qualquer uma das modalidades 1 a 54, em que os anticorpos da composição têm menor afinidade de ligação por FcγRIIa e/ou FcγRIIb quando comparado aos mesmos anticorpos anti-TIGIT que não são afucosilados.
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[0059] Modalidade 56. A composição de qualquer uma das modalidades 1 a 55, em que a composição medeia a fagocitose celular dependente de anticorpo (ADCP) de células que expressam TIGIT na presença de monócitos-macrófagos.
[0060] Modalidade 57. The composição de qualquer uma das modalidades 1 a 56, em que os anticorpos são monoclonais.
[0061] Modalidade 58. The composição de qualquer uma das modalidades 1 a 57, em que os anticorpos são anticorpos totalmente humanos.
[0062] Modalidade 59. A composição de qualquer uma das modalidades 1 a 58, em que os anticorpos são anticorpos quiméricos.
[0063] Modalidade 60. A composição de qualquer uma das modalidades 1 a 28 e 44 a 59, em que os anticorpos são humanizados.
[0064] Modalidade 61. A composição de qualquer uma das modalidades 1 a 60, em que os anticorpos são fragmentos de anticorpo.
[0065] Modalidade 62. A composição da modalidade 61, em que os fragmentos de anticorpo são Fab, Fab’, F(ab’)2, scFv ou diabodies.
[0066] Modalidade 63. A composição de qualquer uma das modalidades 1 a 62, em que os anticorpos são anticorpos biespecíficos.
[0067] Modalidade 64. A composição de qualquer uma das modalidades 1 a 63, em que os anticorpos são conjugados anticorpo-fármaco.
[0068] Modalidade 65. Um anticorpo que se liga ao TIGIT humano (Imunorreceptor de células T com domínios Ig e ITIM), em que o anticorpo tem uma afinidade de ligação (KD) por TIGIT humano inferior a 5 nM e em que o anticorpo é afucosilado.
[0069] Modalidade 66. O anticorpo da modalidade 65, em que o anticorpo tem uma KD por TIGIT humano inferior a 1 nM.
[0070] Modalidade 67. O anticorpo da modalidade 66, em que o anticorpo tem uma KD por TIGIT humano inferior a 100 pM.
[0071] Modalidade 68. O anticorpo de qualquer uma das modalidades
19 / 207 65 a 67, em que o anticorpo exibe reatividade cruzada com TIGIT de macaco Cynomolgus e com TIGIT de camundongo.
[0072] Modalidade 69. O anticorpo da modalidade 68, em que o anticorpo exibe reatividade cruzada com TIGIT de macaco Cynomolgus e com TIGIT de camundongo.
[0073] Modalidade 70. O anticorpo de qualquer uma das modalidades 65 a 69, em que o anticorpo bloqueia a ligação de CD155 a TIGIT.
[0074] Modalidade 71. O anticorpo de qualquer uma das modalidades 65 a 70, em que o anticorpo bloqueia a ligação de CD112 a TIGIT.
[0075] Modalidade 72. O anticorpo de qualquer uma das modalidades 65 a 71, em que o anticorpo bloqueia a ligação de CD155 e de CD112 a TIGIT.
[0076] Modalidade 73. O anticorpo de qualquer uma das modalidades 65 a 72, em que o anticorpo compete pela ligação a TIGIT humano com um anticorpo que compreende uma região variável da cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 55 e uma região variável da cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 64.
[0077] Modalidade 74. O anticorpo de qualquer uma das modalidades 65 a 73, em que, quando ligado a TIGIT humano, liga-se a uma ou a ambas as posições 81 e 82 de aminoácidos.
[0078] Modalidade 75. O anticorpo da modalidade 74, em que o anticorpo se liga a ambas as posições 81 e 82 de aminoácidos.
[0079] Modalidade 76. O anticorpo da modalidade 74 ou modalidade 75, em que as posições 81 e 82 de aminoácidos são Phe81 e Lys82.
[0080] Modalidade 77. O anticorpo de qualquer uma das modalidades 65 a 76, em que o anticorpo se liga a um epítopo em TIGIT humano que compreende uma ou ambas as posições 81 e 82 de aminoácidos.
[0081] Modalidade 78. Um anticorpo que se liga ao TIGIT humano,
20 / 207 em que, quando ligado a TIGIT humano, liga-se a uma ou a ambas as posições 81 e 82 de aminoácidos e em que o anticorpo é afucosilado.
[0082] Modalidade 79. O anticorpo da modalidade 78, em que o anticorpo se liga a ambas as posições 81 e 82 de aminoácidos.
[0083] Modalidade 80. O anticorpo da modalidade 78 ou modalidade 79, em que as posições 81 e 82 de aminoácidos são Phe81 e Lys82.
[0084] Modalidade 81. Um anticorpo que se liga ao TIGIT humano, em que o anticorpo se liga a um epítopo em TIGIT humano que compreende uma ou ambas as posições 81 e 82 de aminoácidos e em que o anticorpo é afucosilado.
[0085] Modalidade 82. O anticorpo da modalidade 77 ou modalidade 81, em que o epítopo compreende Phe na posição 81.
[0086] Modalidade 83. O anticorpo de qualquer uma das modalidades 77, 81 e 82, em que o epítopo compreende Lys ou Ser na posição 82.
[0087] Modalidade 84. O anticorpo de qualquer uma das modalidades 77 e 81 a 83, em que o epítopo compreende Phe na posição 81 e Lys ou Ser na posição 82.
[0088] Modalidade 85. O anticorpo da modalidade 84, em que o epítopo compreende Phe81 e Lys82.
[0089] Modalidade 86. O anticorpo de qualquer uma das modalidades 77 e 81 a 85, em que o epítopo é um epítopo descontínuo.
[0090] Modalidade 87. O anticorpo de qualquer uma das modalidades 77 e 81 a 86, em que o anticorpo se liga a um epítopo em TIGIT humano que compreende ainda uma ou mais das posições de aminoácidos 51, 52, 53, 54, 55, 73, 74, 75, 76, 77, 79, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92 ou 93.
[0091] Modalidade 88. O anticorpo da modalidade 87, em que o epítopo compreende ainda um ou mais resíduos de aminoácidos selecionados a partir do grupo que consiste em Thr51, Ala52, Gln53, Val54, Thr55, Leu73, Gly74, Trp75, His76, Ile77, Pro79, Asp83, Arg84, Val85, Ala86, Pro87,
21 / 207 Gly88, Pro89, Gly90, Leu91, Gly92 e Leu93.
[0092] Modalidade 89. O anticorpo da modalidade 88, em que o epítopo compreende os resíduos de aminoácidos Thr51, Ala52, Gln53, Val54, Thr55, Gly74, Trp75, His76, Ile77, Phe81, Lys82, Pro87, Gly88, Pro89, Gly90, Leu91, Gly92 e Leu93.
[0093] Modalidade 90. O anticorpo da modalidade 88, em que o epítopo compreende os resíduos de aminoácidos Ala52, Gln53, Leu73, Gly74, Trp75, Pro79, Phe81, Lys82, Asp83, Arg84, Val85 e Ala86.
[0094] Modalidade 91. O anticorpo de qualquer uma das modalidades 77 e 81 a 90, em que o epítopo compreende a sequência ICNADLGWHISPSFK (SEQ ID NO: 258).
[0095] Modalidade 92. O anticorpo de qualquer uma das modalidades 65 a 91, em que TIGIT humano compreende a sequência de SEQ ID NO: 218.
[0096] Modalidade 93. O anticorpo de qualquer uma das modalidades 65 a 92, em que o anticorpo compreende uma ou mais dentre: (a) uma CDR1 da cadeia pesada compreendendo uma sequência selecionada dentre SEQ ID NO:4, SEQ ID NO:22, SEQ ID NO:40, SEQ ID NO:58, SEQ ID NO:76, SEQ ID NO:94, SEQ ID NO:112, SEQ ID NO:130, SEQ ID NO:148, SEQ ID NO:166, SEQ ID NO:184, SEQ ID NO:202, SEQ ID NO:221, SEQ ID NO:224, SEQ ID NO:226, SEQ ID NO:231, SEQ ID NO:233, SEQ ID NO:239, SEQ ID NO:243, SEQ ID NO:283, SEQ ID NO:284, SEQ ID NO:293, SEQ ID NO:294, SEQ ID NO:289 e SEQ ID NO:290; (b) uma CDR2 da cadeia pesada compreendendo uma sequência selecionada dentre SEQ ID NO:6, SEQ ID NO:24, SEQ ID NO:42, SEQ ID NO:60, SEQ ID NO:78, SEQ ID NO:96, SEQ ID NO:114, SEQ ID NO:132, SEQ ID NO:150, SEQ ID NO:168, SEQ ID NO:186, SEQ ID NO:204, SEQ ID NO:222, SEQ ID NO:225, SEQ ID NO:227, SEQ ID NO:229, SEQ ID NO:232, SEQ ID NO:234, SEQ ID NO:238, SEQ ID
22 / 207 NO:240, SEQ ID NO:285, SEQ ID NO:297, SEQ ID NO:291 e SEQ ID NO:295; (c) uma CDR3 da cadeia pesada compreendendo uma sequência selecionada dentre SEQ ID NO:8, SEQ ID NO:26, SEQ ID NO:44, SEQ ID NO:62, SEQ ID NO:80, SEQ ID NO:98, SEQ ID NO:116, SEQ ID NO:134, SEQ ID NO:152, SEQ ID NO:170, SEQ ID NO:188, SEQ ID NO:206, SEQ ID NO:223, SEQ ID NO:228, SEQ ID NO:230, SEQ ID NO:235, SEQ ID NO:236, SEQ ID NO:237, SEQ ID NO:241, SEQ ID NO:242, SEQ ID NO:244, SEQ ID NO:286, SEQ ID NO:292 e SEQ ID NO:296; (d) uma CDR1 da cadeia leve compreendendo uma sequência selecionada dentre SEQ ID NO:13, SEQ ID NO:31, SEQ ID NO:49, SEQ ID NO:67, SEQ ID NO:85, SEQ ID NO:103, SEQ ID NO:121, SEQ ID NO:139, SEQ ID NO:157, SEQ ID NO:175, SEQ ID NO:193, SEQ ID NO:211 e SEQ ID NO:287; (e) uma CDR2 da cadeia leve compreendendo uma sequência selecionada dentre SEQ ID NO:15, SEQ ID NO:33, SEQ ID NO:51, SEQ ID NO:69, SEQ ID NO:87, SEQ ID NO:105, SEQ ID NO:123, SEQ ID NO:141, SEQ ID NO:159, SEQ ID NO:177, SEQ ID NO:195, SEQ ID NO:213 e SEQ ID NO:288; ou (f) uma CDR3 da cadeia leve compreendendo uma sequência selecionada dentre SEQ ID NO:17, SEQ ID NO:35, SEQ ID NO:53, SEQ ID NO:71, SEQ ID NO:89, SEQ ID NO:107, SEQ ID NO:125, SEQ ID NO:143, SEQ ID NO:161, SEQ ID NO:179, SEQ ID NO:197 e SEQ ID NO:215.
[0097] Modalidade 94. O anticorpo da modalidade 93, em que o anticorpo compreende: (d) uma sequência de CDR1 da cadeia pesada compreendendo uma sequência de aminoácidos selecionada dentre SEQ ID NO:58, SEQ ID NO:283, SEQ ID NO:284, SEQ ID NO:224, SEQ ID NO:293, SEQ ID
23 / 207 NO:294, SEQ ID NO:226, SEQ ID NO:289 e SEQ ID NO:290; (e) uma sequência de CDR2 da cadeia pesada compreendendo uma sequência de aminoácidos selecionada dentre SEQ ID NO:60, SEQ ID NO:285, SEQ ID NO:225, SEQ ID NO:297, SEQ ID NO:227, SEQ ID NO:291, SEQ ID NO:229 e SEQ ID NO:295; (f) uma sequência de CDR3 da cadeia pesada compreendendo uma sequência de aminoácidos selecionada dentre SEQ ID NO:62, SEQ ID NO:286, SEQ ID NO:228, SEQ ID NO:292, SEQ ID NO:230 e SEQ ID NO:296; (g) uma sequência de CDR1 da cadeia leve compreendendo uma sequência de aminoácidos selecionada dentre SEQ ID NO:67 e SEQ ID NO:287; (h) uma sequência de CDR2 da cadeia leve compreendendo uma sequência de aminoácidos selecionada dentre SEQ ID NO:69 e SEQ ID NO:288; e/ou (i) uma sequência de CDR3 da cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:71.
[0098] Modalidade 95. O anticorpo da modalidade 94, em que o anticorpo compreende uma CDR1, CDR2 e CDR3 da cadeia pesada e uma CDR1, CDR2 e CDR3 da cadeia leve compreendendo as sequências de: (a) SEQ ID NOs: 4, 6, 8, 13, 15 e 17, respectivamente; ou (b) SEQ ID NOs: 22, 24, 26, 31, 33 e 35, respectivamente; ou (c) SEQ ID NOs: 40, 42, 44, 49, 51 e 53, respectivamente; ou (d) SEQ ID NOs: 58, 60, 62, 67, 69 e 71, respectivamente; ou (e) SEQ ID NOs: 76, 78, 80, 85, 87 e 89, respectivamente; ou (f) SEQ ID NOs: 94, 96, 98, 103, 105 e 107, respectivamente; ou (g) SEQ ID NOs: 112, 114, 116, 121, 123 e 125, respectivamente; ou
24 / 207
(h) SEQ ID NOs: 130, 132, 134, 139, 141 e 143, respectivamente; ou (i) SEQ ID NOs: 148, 150, 152, 157, 159 e 161, respectivamente; ou (j) SEQ ID NOs: 166, 168, 170, 175, 177 e 179, respectivamente; ou (k) SEQ ID NOs: 184, 186, 188, 193, 195 e 197, respectivamente; ou (l) SEQ ID NOs: 202, 204, 206, 211, 213 e 215, respectivamente; ou (m) SEQ ID NOs: 221, 222, 223, 13, 15 e 17, respectivamente; ou (n) SEQ ID NOs: 224, 225, 62, 67, 69 e 71, respectivamente; ou (o) SEQ ID NOs: 226, 227, 228, 67, 69 e 71, respectivamente; ou (p) SEQ ID NOs: 224, 229, 230, 67, 69 e 71, respectivamente; ou (q) SEQ ID NOs: 224, 227, 230, 67, 69 e 71, respectivamente; ou (r) SEQ ID NOs: 231, 232, 235, 103, 105 e 107, respectivamente; ou (s) SEQ ID NOs: 233, 234, 236, 103, 105 e 107, respectivamente; ou (t) SEQ ID NOs: 233, 234, 237, 103, 105 e 107, respectivamente; ou (u) SEQ ID NOs: 166, 238, 170, 175, 177 e 179, respectivamente; ou (v) SEQ ID NOs: 239, 240, 170, 175, 177 e 179,
25 / 207 respectivamente; ou (w) SEQ ID NOs: 239, 240, 241, 175, 177 e 179, respectivamente; ou (x) SEQ ID NOs: 239, 240, 242, 175, 177 e 179, respectivamente; ou (y) SEQ ID NOs: 243, 168, 244, 175, 177 e 179, respectivamente.
[0099] Modalidade 96. O anticorpo de qualquer uma das modalidades 65 a 95, em que o anticorpo compreende uma CDR1, CDR2 e CDR3 da cadeia pesada e uma CDR1, CDR2 e CDR3 da cadeia leve compreendendo as sequências de: (j) SEQ ID NOs: 58, 60, 62, 67, 69 e 71, respectivamente; ou (k) SEQ ID NOs: 283, 285, 62, 287, 288 e 71, respectivamente; ou (l) SEQ ID NOs: 284, 60, 286, 67, 69 e 71, respectivamente.
[00100] Modalidade 97. O anticorpo de qualquer uma das modalidades 65 a 96, em que o anticorpo compreende: (a) uma região variável da cadeia pesada compreendendo uma sequência de aminoácidos com pelo menos 90% de identidade de sequência com SEQ ID NO:1, SEQ ID NO:19, SEQ ID NO:37, SEQ ID NO:55, SEQ ID NO:73, SEQ ID NO:91, SEQ ID NO:109, SEQ ID NO:127, SEQ ID NO:145, SEQ ID NO:163, SEQ ID NO:181, SEQ ID NO:199, SEQ ID NO:245, SEQ ID NO:246, SEQ ID NO:247, SEQ ID NO:248, SEQ ID NO:249, SEQ ID NO:250, SEQ ID NO:251, SEQ ID NO:252, SEQ ID NO:253, SEQ ID NO:254, SEQ ID NO:255, SEQ ID NO:256 ou SEQ ID NO:257; e/ou (b) uma região variável da cadeia leve compreendendo uma sequência de aminoácidos com pelo menos 90% de identidade de sequência com SEQ ID NO:10, SEQ ID NO:28, SEQ ID NO:46, SEQ ID NO:64, SEQ ID NO:82, SEQ ID NO:100, SEQ ID NO:118, SEQ ID NO:136, SEQ ID
26 / 207 NO:154, SEQ ID NO:172, SEQ ID NO:190 ou SEQ ID NO:208.
[00101] Modalidade 98. O anticorpo de qualquer uma das modalidades 65 a 97, em que o anticorpo compreende: (a) uma região variável da cadeia pesada compreendendo uma sequência de aminoácidos com pelo menos 90% de identidade de sequência com SEQ ID NO:1 ou SEQ ID NO:245 e uma região variável da cadeia leve compreendendo uma sequência de aminoácidos com pelo menos 90% de identidade de sequência com SEQ ID NO:10; ou (b) uma região variável da cadeia pesada compreendendo uma sequência de aminoácidos com pelo menos 90% de identidade de sequência com SEQ ID NO:19 e uma região variável da cadeia leve compreendendo uma sequência de aminoácidos com pelo menos 90% de identidade de sequência com SEQ ID NO:28; ou (c) uma região variável da cadeia pesada compreendendo uma sequência de aminoácidos com pelo menos 90% de identidade de sequência com SEQ ID NO:37 e uma região variável da cadeia leve compreendendo uma sequência de aminoácidos com pelo menos 90% de identidade de sequência com SEQ ID NO:46; ou (d) uma região variável da cadeia pesada compreendendo uma sequência de aminoácidos com pelo menos 90% de identidade de sequência com qualquer uma dentre SEQ ID NO:55, SEQ ID NO:246, SEQ ID NO:247, SEQ ID NO:248 ou SEQ ID NO:249 e uma região variável da cadeia leve compreendendo uma sequência de aminoácidos com pelo menos 90% de identidade de sequência com SEQ ID NO:64; ou (e) uma região variável da cadeia pesada compreendendo uma sequência de aminoácidos com pelo menos 90% de identidade de sequência com SEQ ID NO:73 e uma região variável da cadeia leve compreendendo uma sequência de aminoácidos com pelo menos 90% de identidade de sequência com SEQ ID NO:82; ou
27 / 207
(f) uma região variável da cadeia pesada compreendendo uma sequência de aminoácidos com pelo menos 90% de identidade de sequência com qualquer uma dentre SEQ ID NO:91, SEQ ID NO:250, SEQ ID NO:251 ou SEQ ID NO:252 e uma região variável da cadeia leve compreendendo uma sequência de aminoácidos com pelo menos 90% de identidade de sequência com SEQ ID NO:100; ou (g) uma região variável da cadeia pesada compreendendo uma sequência de aminoácidos com pelo menos 90% de identidade de sequência com SEQ ID NO:109 e uma região variável da cadeia leve compreendendo uma sequência de aminoácidos com pelo menos 90% de identidade de sequência com SEQ ID NO:118; ou (h) uma região variável da cadeia pesada compreendendo uma sequência de aminoácidos com pelo menos 90% de identidade de sequência com SEQ ID NO:127 e uma região variável da cadeia leve compreendendo uma sequência de aminoácidos com pelo menos 90% de identidade de sequência com SEQ ID NO:136; ou (i) uma região variável da cadeia pesada compreendendo uma sequência de aminoácidos com pelo menos 90% de identidade de sequência com SEQ ID NO:145 e uma região variável da cadeia leve compreendendo uma sequência de aminoácidos com pelo menos 90% de identidade de sequência com SEQ ID NO:154; ou (j) uma região variável da cadeia pesada compreendendo uma sequência de aminoácidos com pelo menos 90% de identidade de sequência com qualquer uma dentre SEQ ID NO:163, SEQ ID NO:253, SEQ ID NO:254, SEQ ID NO:255, SEQ ID NO:256 ou SEQ ID NO:257 e uma região variável da cadeia leve compreendendo uma sequência de aminoácidos com pelo menos 90% de identidade de sequência com SEQ ID NO:172; ou (k) uma região variável da cadeia pesada compreendendo uma sequência de aminoácidos com pelo menos 90% de identidade de sequência
28 / 207 com SEQ ID NO:181 e uma região variável da cadeia leve compreendendo uma sequência de aminoácidos com pelo menos 90% de identidade de sequência com SEQ ID NO:190; ou (l) uma região variável da cadeia pesada compreendendo uma sequência de aminoácidos com pelo menos 90% de identidade de sequência com SEQ ID NO:199 e uma região variável da cadeia leve compreendendo uma sequência de aminoácidos com pelo menos 90% de identidade de sequência com SEQ ID NO:208.
[00102] Modalidade 99. O anticorpo da modalidade 98, em que o anticorpo compreende: (a) uma região variável da cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:1 ou SEQ ID NO:245 e uma região variável da cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:10; ou (b) uma região variável da cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:19 e uma região variável da cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:28; ou (c) uma região variável da cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:37 e uma região variável da cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:46; ou (d) uma região variável da cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos de qualquer uma dentre SEQ ID NO:55, SEQ ID NO:246, SEQ ID NO:247, SEQ ID NO:248 ou SEQ ID NO:249 e uma região variável da cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:64; ou (e) uma região variável da cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:73 e uma região variável da cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:82; ou (f) uma região variável da cadeia pesada compreendendo a
29 / 207 sequência de aminoácidos de qualquer uma dentre SEQ ID NO:91, SEQ ID NO:250, SEQ ID NO:251 ou SEQ ID NO:252 e uma região variável da cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:100; ou (g) uma região variável da cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:109 e uma região variável da cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:118; ou (h) uma região variável da cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:127 e uma região variável da cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:136; ou (i) uma região variável da cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:145 e uma região variável da cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:154; ou (j) uma região variável da cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos de qualquer uma dentre SEQ ID NO:163, SEQ ID NO:253, SEQ ID NO:254, SEQ ID NO:255, SEQ ID NO:256 ou SEQ ID NO:257 e uma região variável da cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:172; ou (k) uma região variável da cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:181 e uma região variável da cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:190; ou (l) uma região variável da cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:199 e uma região variável da cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:208.
[00103] Modalidade 100. O anticorpo de qualquer uma das
30 / 207 modalidades 65 a 99, em que o anticorpo compreende uma região variável da cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:55 e uma região variável da cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:64.
[00104] Modalidade 101. O anticorpo de qualquer uma das modalidades 65 a 100, em que o anticorpo é um anticorpo IgG.
[00105] Modalidade 102. O anticorpo da modalidade 101, em que o anticorpo é um anticorpo IgG1 ou um anticorpo IgG3.
[00106] Modalidade 103. O anticorpo de qualquer uma das modalidades 65 a 102, em que o anticorpo compreende uma cadeia pesada compreendendo uma sequência de aminoácidos selecionada dentre SEQ ID NOs: 260, 262, 264, 266, 268, 270 e 272; e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 274.
[00107] Modalidade 104. O anticorpo da modalidade 103, em que o anticorpo compreende uma cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOs: 260; e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 274.
[00108] Modalidade 105. O anticorpo da modalidade 103, em que o anticorpo compreende uma cadeia pesada que consiste na sequência de aminoácidos de SEQ ID NOs: 260; e uma cadeia leve que consiste na sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 274.
[00109] Modalidade 106. Um anticorpo que se liga ao TIGIT humano, em que o anticorpo compreende uma cadeia pesada compreendendo uma sequência de aminoácidos selecionada dentre SEQ ID NOs: 260, 262, 264, 266, 268, 270 e 272; e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 274.
[00110] Modalidade 107. Um anticorpo que se liga ao TIGIT humano, em que o anticorpo compreende uma cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOs: 260; e uma cadeia leve
31 / 207 compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 274.
[00111] Modalidade 108. Um anticorpo que se liga ao TIGIT humano, em que o anticorpo compreende uma cadeia pesada que consiste na sequência de aminoácidos de SEQ ID NOs: 260; e uma cadeia leve que consiste na sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 274.
[00112] Modalidade 109. O anticorpo de qualquer uma das modalidades 65 a 108, em que o anticorpo exibe sinergia com um anticorpo anti-PD-1 ou um anticorpo anti-PD-L1.
[00113] Modalidade 110. O anticorpo da modalidade 109, em que a sinergia é determinada por meio de um ensaio que compreende colocar em contato uma cocultura compreendendo (i) células Jurkat efetoras que expressam PD-1, TIGIT e CD226, em que a células Jurkat efetoras compreendem um gene repórter luciferase direcionado pelo promotor de IL-2; e (ii) células CHO-K1 apresentadoras de antígeno artificiais (aAPCs) expressando um ativador de TCR, PD-L1 e CD155; com a composição e um anticorpo anti-PD-1 ou um anticorpo anti-PD-L1.
[00114] Modalidade 111. O anticorpo de qualquer uma das modalidades 65 a 110, em que células T reguladoras (Treg) são depletadas de PBMCs humanas quando em contato com o anticorpo.
[00115] Modalidade 112. O anticorpo de qualquer uma das modalidades 65 a 111, em que a expressão de MCP1, IL-8 e MIP1α é aumentada em PBMCs humanas quando em contato com o anticorpo.
[00116] Modalidade 113. O anticorpo de qualquer uma das modalidades 65 a 112, em que monócitos/macrófagos são ativados quando estão em contato com o anticorpo.
[00117] Modalidade 114. O anticorpo de qualquer uma das modalidades 65 a 113, em que CD86 e MHCII são regulados positivamente quando monócitos/macrófagos CD14+ estão em contato com o anticorpo.
[00118] Modalidade 115. O anticorpo de qualquer uma das
32 / 207 modalidades 65 a 114, em que monócitos/macrófagos CD14+ quando em contato com o anticorpo amadurecem tornando-se células apresentadoras de antígeno.
[00119] Modalidade 116. O anticorpo de qualquer uma das modalidades 65 a 115, em que as células T de memória quando em contato com o anticorpo mostram produção aumentada de IFNγ em resposta ao antígeno.
[00120] Modalidade 117. O anticorpo de qualquer uma das modalidades 65 a 116, em que as células T de memória quando em contato com o anticorpo demonstram resposta reforçada ao antígeno.
[00121] Modalidade 118. O anticorpo de qualquer uma das modalidades 65 a 117, em que células T CD8+ efetoras de memória e/ou células T CD4+ efetoras de memória são aumentadas em tumores quando estão em contato com o anticorpo.
[00122] Modalidade 119. O anticorpo de qualquer uma das modalidades 65 a 118, em que o anticorpo reforça uma resposta Th1 em um animal a que foi administrado o anticorpo.
[00123] Modalidade 120. O anticorpo de qualquer uma das modalidades 65 a 119, em que o anticorpo tem menor afinidade de ligação por FcγRIIa e/ou FcγRIIb quando comparado ao mesmo anticorpo anti-TIGIT que não é afucosilado.
[00124] Modalidade 121. O anticorpo de qualquer uma das modalidades 65 a 120, em que a composição medeia a fagocitose celular dependente de anticorpo (ADCP) de células que expressam TIGIT na presença de monócitos-macrófagos.
[00125] Modalidade 122. O anticorpo de qualquer uma das modalidades 65 a 121, em que o anticorpo é monoclonal.
[00126] Modalidade 123. O anticorpo de qualquer uma das modalidades 65 a 122, em que o anticorpo é um anticorpo totalmente humano.
33 / 207
[00127] Modalidade 124. O anticorpo de qualquer uma das modalidades 65 a 123, em que o anticorpo é um anticorpo quimérico.
[00128] Modalidade 125. O anticorpo de qualquer uma das modalidades 65 a 92 e 109 a 124, em que o anticorpo é humanizado.
[00129] Modalidade 126. O anticorpo de qualquer uma das modalidades 65 a 125, em que o anticorpo é um fragmento de anticorpo.
[00130] Modalidade 127. O anticorpo da modalidade 126, em que o fragmento de anticorpo é um Fab, um Fab’, um F(ab’)2, um scFv ou um diabody.
[00131] Modalidade 128. O anticorpo de qualquer uma das modalidades 65 a 127, em que o anticorpo é um anticorpo biespecífico.
[00132] Modalidade 129. O anticorpo de qualquer uma das modalidades 65 a 128, em que o anticorpo é um conjugado anticorpo- fármaco.
[00133] Modalidade 130. Uma formulação farmacêutica que compreende a composição de qualquer uma das modalidades 1 a 64 ou o anticorpo de qualquer uma das modalidades 65 a 129 e um veículo farmaceuticamente aceitável.
[00134] Modalidade 131. Um polinucleotídeo isolado que codifica (i) a cadeia pesada do anticorpo de qualquer uma das modalidades 106 a 108; (ii) a cadeia leve do anticorpo de qualquer uma das modalidades 106 a 108; ou (iii) a cadeia pesada e a cadeia leve do anticorpo de qualquer uma das modalidades 106 a 108.
[00135] Modalidade 132. O polinucleotídeo isolado da modalidade 131, em que o polinucleotídeo compreende (i) uma sequência de nucleotídeos selecionada dentre SEQ ID NOs: 259, 261, 163, 265, 267, 269 e 271; ou (ii) uma sequência de nucleotídeos de SEQ ID NO: 273; ou (iii) uma sequência de nucleotídeos selecionada dentre SEQ ID NOs: 259, 261, 263, 265, 267, 269 e 271 e uma sequência de nucleotídeos de SEQ ID NO: 273.
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[00136] Modalidade 133. Um vetor que compreende o polinucleotídeo da modalidade 131 ou modalidade 132.
[00137] Modalidade 134. Uma célula hospedeira isolada que compreende o polinucleotídeo isolado da modalidade 131 ou modalidade 132, ou o vector da modalidade 133.
[00138] Modalidade 135. Uma célula hospedeira isolada que expressa o anticorpo de qualquer uma das modalidades 106-108.
[00139] Modalidade 136. A célula hospedeira da modalidade 134 ou modalidade 135, que é projetada para produzir anticorpos afucosilados.
[00140] Modalidade 137. Um método para a produção de um anticorpo que se liga ao TIGIT humano, o qual compreende incubar a célula hospedeira de qualquer uma das modalidades 134 a 136 sob condições adequadas para a produção do anticorpo.
[00141] Modalidade 138. O método da modalidade 137, em que a célula hospedeira é projetada para produzir anticorpos afucosilados.
[00142] Modalidade 139. O método da modalidade 137, em que a célula hospedeira é cultivada na presença de um análogo de fucose sob condições adequadas para a produção de anticorpos afucosilados.
[00143] Modalidade 140. O método de qualquer uma das modalidades 137 a 139, o qual compreende ainda isolar os anticorpos.
[00144] Modalidade 141. Uma composição de anticorpos isolados que se ligam a TIGIT humano, em que pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98% ou pelo menos 99% dos anticorpos na composição são afucosilados, em que os anticorpos são produzidos pelo método de qualquer uma das modalidades 138 a 140.
[00145] Modalidade 142. Uma composição de anticorpos isolados que se ligam a TIGIT humano, em que pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos
35 / 207 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98% ou pelo menos 99% dos anticorpos na composição são afucosilados, em que os anticorpos são produzidos pelo método compreendendo incubar a célula hospedeira da modalidade 134 ou modalidade 135 sob condições adequadas para a produção de anticorpos afucosilados e isolar os anticorpos para formar a composição de anticorpos isolados.
[00146] Modalidade 143. A composição da modalidade 142, em que a célula hospedeira é projetada para produzir anticorpos afucosilados.
[00147] Modalidade 144. A composição da modalidade 142, em que a célula hospedeira é cultivada na presença de um análogo de fucose sob condições adequadas para a produção de anticorpos afucosilados.
[00148] Modalidade 145. Uma célula hospedeira que compreende um polinucleotídeo compreendendo uma sequência de nucleotídeos que codifica (i) os anticorpos da composição de qualquer uma das modalidades 1 a 63 ou (ii) o anticorpo de qualquer uma das modalidades 65 a 128, em que a célula hospedeira é projetada para produzir anticorpos afucosilados.
[00149] Modalidade 146. A célula hospedeira da modalidade 145, em que o polinucleotídeo é um vetor.
[00150] Modalidade 147. A célula hospedeira que expressa (i) os anticorpos da composição de qualquer uma das modalidades 1 a 63 ou (ii) o anticorpo de qualquer uma das modalidades 65 a 128, em que a célula hospedeira é projetada para produzir anticorpos afucosilados.
[00151] Modalidade 148. A célula hospedeira de qualquer uma das modalidades 145 a 147, em que a célula hospedeira compreende: (a) a sequência de nucleotídeos de SEQ ID NO:2, SEQ ID NO:20, SEQ ID NO:38, SEQ ID NO:56, SEQ ID NO:74, SEQ ID NO:92, SEQ ID NO:110, SEQ ID NO:128, SEQ ID NO:146, SEQ ID NO:164, SEQ ID NO:182, SEQ ID NO:200, SEQ ID NO:259, SEQ ID NO:265, SEQ ID NO:267, SEQ ID NO:269 ou SEQ ID NO:271; e/ou
36 / 207 (b) a sequência de nucleotídeos de SEQ ID NO:11, SEQ ID NO:29, SEQ ID NO:47, SEQ ID NO:65, SEQ ID NO:83, SEQ ID NO:101, SEQ ID NO:119, SEQ ID NO:137, SEQ ID NO:155, SEQ ID NO:173, SEQ ID NO:191, SEQ ID NO:209 ou SEQ ID NO:273.
[00152] Modalidade 149. Um método para a produção de anticorpos afucosilados que se ligam a TIGIT, o qual compreende cultivar a célula hospedeira de qualquer uma das modalidades 145 a 148 sob condições adequadas para a produção dos anticorpos afucosilados.
[00153] Modalidade 150. Um método para a produção de anticorpos afucosilados que se ligam a TIGIT, o qual compreende cultivar uma célula hospedeira na presença de um análogo de fucose sob condições adequadas para a produção de anticorpos afucosilados, em que a célula hospedeira compreende um polinucleotídeo compreendendo uma sequência de nucleotídeos que codifica (i) os anticorpos da composição de qualquer uma das modalidades 1 a 63 ou (ii) o anticorpo de qualquer uma das modalidades 65 a 128.
[00154] Modalidade 151. O método da modalidade 150, em que o polinucleotídeo é um vetor.
[00155] Modalidade 152. Um método para a produção de anticorpos afucosilados que se ligam a TIGIT, o qual compreende cultivar uma célula hospedeira na presença de um análogo de fucose sob condições adequadas para a produção de anticorpos afucosilados, em que a célula hospedeira expressa (i) os anticorpos da composição de qualquer uma das modalidades 1 a 63 ou (ii) o anticorpo de qualquer uma das modalidades 65 a 128.
[00156] Modalidade 153. O método de qualquer uma das modalidades 150 a 152, em que a célula hospedeira compreende: (a) a sequência de nucleotídeos de SEQ ID NO:2, SEQ ID NO:20, SEQ ID NO:38, SEQ ID NO:56, SEQ ID NO:74, SEQ ID NO:92, SEQ ID NO:110, SEQ ID NO:128, SEQ ID NO:146, SEQ ID NO:164, SEQ
37 / 207 ID NO:182, SEQ ID NO:200, SEQ ID NO:259, SEQ ID NO:265, SEQ ID NO:267, SEQ ID NO:269 ou SEQ ID NO:271; e/ou (b) a sequência de nucleotídeos de SEQ ID NO:11, SEQ ID NO:29, SEQ ID NO:47, SEQ ID NO:65, SEQ ID NO:83, SEQ ID NO:101, SEQ ID NO:119, SEQ ID NO:137, SEQ ID NO:155, SEQ ID NO:173, SEQ ID NO:191, SEQ ID NO:209 ou SEQ ID NO:273.
[00157] Modalidade 154. O método de qualquer uma das modalidades 150 a 153, em que o análogo de fucose é 2-fluorofucose.
[00158] Modalidade 155. O método de qualquer uma das modalidades 149 a 154, o qual compreende ainda isolar os anticorpos afucosilados.
[00159] Modalidade 156. Uma composição de anticorpos isolados que se ligam a TIGIT humano, em que pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98% ou pelo menos 99% dos anticorpos na composição são afucosilados, em que os anticorpos são produzidos pelo método de qualquer uma das modalidades 149 a 155.
[00160] Modalidade 157. Uma composição de anticorpos isolados que se ligam a TIGIT humano, em que pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98% ou pelo menos 99% dos anticorpos na composição são afucosilados, em que os anticorpos são produzidos por um método que compreende incubar a célula hospedeira de qualquer uma das modalidades 145 a 147 sob condições adequadas para a produção de anticorpos afucosilados e isolar os anticorpos para formar a composição de anticorpos isolados.
[00161] Modalidade 158. Uma composição de anticorpos isolados que se ligam a TIGIT humano, em que pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98% ou pelo menos 99% dos anticorpos
38 / 207 na composição são afucosilados, em que os anticorpos são produzidos por um método que compreende cultivar uma célula hospedeira na presença de um análogo de fucose sob condições adequadas para a produção de anticorpos afucosilados, em que a célula hospedeira compreende um polinucleotídeo compreendendo uma sequência de nucleotídeos que codifica (i) os anticorpos da composição de qualquer uma das modalidades 1 a 63 ou (ii) o anticorpo de qualquer uma das modalidades 65 a 128.
[00162] Modalidade 159. Uma composição de anticorpos isolados que se ligam a TIGIT humano, em que pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98% ou pelo menos 99% dos anticorpos na composição são afucosilados, em que os anticorpos são produzidos por um método que compreende cultivar uma célula hospedeira na presença de um análogo de fucose sob condições adequadas para a produção de anticorpos afucosilados, em que a célula hospedeira expressa (i) os anticorpos da composição de qualquer uma das modalidades 1 a 63 ou (ii) o anticorpo de qualquer uma das modalidades 65 a 128.
[00163] Modalidade 160. Um kit compreendendo: a composição de qualquer uma das modalidades 1 a 64, o anticorpo de qualquer uma das modalidades 65 a 129 ou a composição farmacêutica da modalidade 130; e um agente terapêutico adicional.
[00164] Modalidade 161. O kit da modalidade 160, em que o agente terapêutico adicional é um agente antineoplásico.
[00165] Modalidade 162. O kit da modalidade 160 ou modalidade 161, em que o agente terapêutico adicional é um anticorpo.
[00166] Modalidade 163. O kit de qualquer uma das modalidades 160 a 162, em que o agente terapêutico adicional é um antagonista ou um inibidor de um coinibidor de células T; um agonista de um coativador de células T;
39 / 207 uma citocina imunoestimuladora; ou SGN-2FF.
[00167] Modalidade 164. O kit de qualquer uma das modalidades 160 a 163, em que o agente terapêutico adicional se liga a uma proteína selecionada dentre CD25, PD-1, PD-L1, Tim3, Lag3, CTLA4, 41BB, OX40, CD3, CD40, CD47M, GM-CSF, CSF1R, TLR, STING, RIGI, TAM receptor quinase, NKG2A, NKG2D, GD2, HER2, EGFR, PDGFRα, SLAMF7, VEGF, CTLA- 4, CD20, cCLB8, KIR e CD52.
[00168] Modalidade 165. O kit de qualquer uma das modalidades 160 a 164, em que o agente terapêutico adicional é selecionado dentre um anticorpo anti-CD25, anticorpo anti-PD-1, anticorpo anti-PD-L1, anticorpo anti-Tim3, anticorpo anti-Lag3, anticorpo anti-CTLA4, anticorpo anti-41BB, anticorpo anti-OX40, anticorpo anti-CD3, anticorpo anti-CD40, anticorpo anti-CD47M, anticorpo anti-CSF1R, anticorpo anti-TLR, anticorpo anti-STING, anticorpo anti-RIGI, anticorpo anti-receptor quinase TAM, anticorpo anti-NKG2A, um anticorpo anti-NKG2D, um anticorpo anti-GD2, um anticorpo anti-HER2, um anticorpo anti-EGFR, um anticorpo anti-PDGFR-α, um anticorpo anti- SLAMF7, um anticorpo anti-VEGF, um anticorpo anti-CTLA-4, um anticorpo anti-CD20, um anticorpo anti-cCLB8, um anticorpo anti-KIR e um anticorpo anti-CD52.
[00169] Modalidade 166. O kit de qualquer uma das modalidades 160 a 165, em que o agente terapêutico adicional compreende uma citocina selecionada dentre IL-15, IL-21, IL-2, GM-CSF, M-CSF, G-CSF, IL-1, IL-3, IL-12 e IFNγ.
[00170] Modalidade 167. O kit de qualquer uma das modalidades 160 a 165, em que o agente terapêutico adicional é selecionado dentre SEA-CD40, avelumabe, durvalumabe, nivolumabe, pembrolizumabe, pidilizumabe, atezolizumabe, Hul4.18K322A, Hu3F8, dinituximabe, trastuzumabe, cetuximabe, olaratumabe, necitumumabe, elotuzumabe, ramucirumabe, pertuzumabe, ipilimumabe, bevacizumabe, rituximabe, obinutuzumabe,
40 / 207 siltuximabe, ofatumumabe, lirilumabe e alentuzumabe.
[00171] Modalidade 168. O kit da modalidade 160 ou modalidade 161, em que o agente terapêutico adicional é selecionado dentre um agente alquilante (p. ex., ciclofosfamida, ifosfamida, clorambucil, bussulfano, melfalano, mecloretamina, uramustina, tiotepa, nitrosureias ou temozolomida), uma antraciclina (p. ex., doxorrubicina, adriamicina, daunorrubicina, epirrubicina ou mitoxantrona), um desorganizador do citoesqueleto (p. ex., paclitaxel ou docetaxel), um inibidor de histona desacetilase (p. ex., vorinostat ou romidepsina), um inibidor de topoisomerase (p. ex., irinotecano, topotecano, ansacrina, etoposídeo ou teniposídeo), um inibidor de quinase (p. ex., bortezomibe, erlotinibe, gefitinibe, imatinibe, vemurafenibe ou vismodegibe), um análogo de nucleosídeo ou análogo do precursor (p. ex., azacitidina, azatioprina, capecitabina, citarabina, fluorouracila, gencitabina, hidroxiureia, mercaptopurina, metotrexato ou tioguanina), um antibiótico peptídico (p. ex., actinomicina ou bleomicina), um agente à base de platina (p. ex., cisplatina, oxaloplatina ou carboplatina) ou um alcaloide de planta (p. ex., vincristina, vimblastina, vinorelbina, vindesina, podofilotoxina, paclitaxel ou docetaxel), galardina, talidomida, lenalidomida e pomalidomida.
[00172] Modalidade 169. Um método para o tratamento de um câncer em um indivíduo, o qual compreende administrar ao indivíduo uma quantidade terapeuticamente eficaz da composição de qualquer uma das modalidades 1 a 64, do anticorpo de qualquer uma das modalidades 65 a 129 ou da composição farmacêutica da modalidade 130.
[00173] Modalidade 170. O método da modalidade 169, em que o câncer é um câncer que é enriquecido com a expressão de CD112 ou CD155.
[00174] Modalidade 171. O método da modalidade 169 ou modalidade 170, em que o câncer é um câncer que é enriquecido com células T ou células natural killer (NK) que expressam TIGIT.
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[00175] Modalidade 172. O método de qualquer uma das modalidades 169 a 171, em que o câncer é câncer de bexiga, câncer de mama, câncer de útero, câncer cervical, câncer de ovário, câncer de próstata, câncer de testículo, câncer de esôfago, câncer gastrointestinal, câncer gástrico, câncer de pâncreas, câncer colorretal, câncer de cólon, câncer de rim, carcinoma renal de células claras, câncer da cabeça e pescoço, câncer de pulmão, adenocarcinoma de pulmão, câncer de estômago, câncer de células germinativas, câncer ósseo, câncer de fígado, câncer de tireoide, câncer de pele, melanoma, neoplasia do sistema nervoso central, mesotelioma, linfoma, leucemia, leucemia linfocítica crônica, linfoma difuso de grandes células B, linfoma folicular, linfoma de Hodgkin, mieloma ou sarcoma.
[00176] Modalidade 173. O método da modalidade 172, em que o câncer é linfoma, leucemia, leucemia linfocítica crônica, linfoma difuso de grandes células B, linfoma folicular ou linfoma de Hodgkin.
[00177] Modalidade 174. O método de qualquer uma das modalidades 169 a 173, o qual compreende ainda administrar ao indivíduo uma quantidade terapeuticamente eficaz de um agente terapêutico adicional.
[00178] Modalidade 175. O método da modalidade 174, em que o agente terapêutico adicional é um agente antineoplásico.
[00179] Modalidade 176. O método da modalidade 174 ou modalidade 175, em que o agente terapêutico adicional é um anticorpo.
[00180] Modalidade 177. O método de qualquer uma das modalidades 174 a 176, em que o agente terapêutico adicional é um antagonista ou um inibidor de um coinibidor de células T; um agonista de um coativador de células T; ou uma citocina imunoestimuladora; ou SGN-2FF.
[00181] Modalidade 178. O método de qualquer uma das modalidades 174 a 177, em que o agente terapêutico adicional se liga a uma proteína selecionada dentre CD25, PD-1, PD-L1, Tim3, Lag3, CTLA4, 41BB, OX40, CD3, CD40, CD47M, GM-CSF, CSF1R, TLR, STING, RIGI, receptor
42 / 207 quinase TAM, NKG2A, NKG2D, GD2, HER2, EGFR, PDGFRα, SLAMF7, VEGF, CTLA-4, CD20, cCLB8, KIR e CD52.
[00182] Modalidade 179. O método da modalidade 178, em que o agente terapêutico adicional é selecionado dentre um anticorpo anti-CD25, anticorpo anti-PD-1, anticorpo anti-PD-L1, anticorpo anti-Tim3, anticorpo anti-Lag3, anticorpo anti-CTLA4, anticorpo anti-41BB, anticorpo anti-OX40, anticorpo anti-CD3, anticorpo anti-CD40, anticorpo anti-CD47M, anticorpo anti-CSF1R, anticorpo anti-TLR, anticorpo anti-STING, anticorpo anti-RIGI, anticorpo anti-receptor quinase TAM, anticorpo anti-NKG2A, um anticorpo anti-NKG2D, um anticorpo anti-GD2, um anticorpo anti-HER2, um anticorpo anti-EGFR, um anticorpo anti-PDGFR-α, um anticorpo anti-SLAMF7, um anticorpo anti-VEGF, um anticorpo anti-CTLA-4, um anticorpo anti-CD20, um anticorpo anti-cCLB8, um anticorpo anti-KIR e um anticorpo anti-CD52.
[00183] Modalidade 180. O método da modalidade 174 ou modalidade 175, em que o agente terapêutico adicional compreende uma citocina selecionada dentre IL-15, IL-21, IL-2, GM-CSF, M-CSF, G-CSF, IL-1, IL-3, IL-12 e IFNγ.
[00184] Modalidade 181 O método de qualquer uma das modalidades 174 a 179, em que o agente terapêutico adicional é selecionado dentre SEA- CD40, avelumabe, durvalumabe, nivolumabe, pembrolizumabe, pidilizumabe, atezolizumabe, Hul4.18K322A, Hu3F8, dinituximabe, trastuzumabe, cetuximabe, olaratumabe, necitumumabe, elotuzumabe, ramucirumabe, pertuzumabe, ipilimumabe, bevacizumabe, rituximabe, obinutuzumabe, siltuximabe, ofatumumabe, lirilumabe e alentuzumabe.
[00185] Modalidade 182. O método da modalidade 174 ou modalidade 175, em que o agente terapêutico adicional é selecionado dentre um agente alquilante (p. ex., ciclofosfamida, ifosfamida, clorambucil, bussulfano, melfalano, mecloretamina, uramustina, tiotepa, nitrosureias ou temozolomida), uma antraciclina (p. ex., doxorrubicina, adriamicina,
43 / 207 daunorrubicina, epirrubicina ou mitoxantrona), um desorganizador do citoesqueleto (p. ex., paclitaxel ou docetaxel), um inibidor de histona desacetilase (p. ex., vorinostat ou romidepsina), um inibidor de topoisomerase (p. ex., irinotecano, topotecano, ansacrina, etoposídeo ou teniposídeo), um inibidor de quinase (p. ex., bortezomibe, erlotinibe, gefitinibe, imatinibe, vemurafenibe ou vismodegibe), um análogo de nucleosídeo ou análogo do precursor (p. ex., azacitidina, azatioprina, capecitabina, citarabina, fluorouracila, gencitabina, hidroxiureia, mercaptopurina, metotrexato ou tioguanina), um antibiótico peptídico (p. ex., actinomicina ou bleomicina), um agente à base de platina (p. ex., cisplatina, oxaloplatina ou carboplatina) ou um alcaloide de planta (p. ex., vincristina, vimblastina, vinorelbina, vindesina, podofilotoxina, paclitaxel ou docetaxel), galardina, talidomida, lenalidomida e pomalidomida.
[00186] Modalidade 183. O método de qualquer uma das modalidades 174 a 182, em que a composição, o anticorpo ou a composição farmacêutica é administrado simultaneamente com o agente terapêutico adicional.
[00187] Modalidade 184. O método de qualquer uma das modalidades 174 a 183, em que a composição, o anticorpo ou a composição farmacêutica é administrado sequencialmente ao agente terapêutico adicional. Breve descrição dos desenhos
[00188] Figura 1. Ligação de 65 clones do anticorpo anti-TIGIT e um anticorpo controle de isótipo irrelevante a células HEK 293 projetadas para expressar TIGIT humano (painel superior), TIGIT de macaco Cynomolgus (painel do meio) e TIGIT de camundongo (painel inferior).
[00189] Figura 2. Ligação de 65 clones do anticorpo anti-TIGIT e um anticorpo controle de isótipo irrelevante a células T humanas primárias (painel superior), células T de macaco Cynomolgus (painel do meio) e células T de camundongo (painel inferior). Para o painel inferior, 35 de 65 clones foram avaliados. Dos 35 clones avaliados, 5 dos 35 não se ligaram à proteína
44 / 207 mTIGIT-Fc (clones 20, 27, 55, 56 e 60), como indicado pelas barras de cor verde claro.
[00190] Figura 3A-3D. (A-C) Valores de titulação da ligação de oito clones do anticorpo anti-TIGIT (clones 2, 5, 13, 16, 17, 20, 25 e 54) a TIGIT humano (A), de camundongo (B) e macaco Cynomolgus (C) expressos em células HEK 293. Os resultados são mostrados para poços em amostra única (singlicate). (D) Valores de EC50 de oito clones do anticorpo anti-TIGIT (clones 2, 5, 13, 16, 17, 20, 25 e 54) contra TIGIT humano, de camundongo e de macaco Cynomolgus expressos em células HEK 293.
[00191] Figura 4. Titulação de ligação dos clones 13 e 25 do anticorpo anti-TIGIT a células T esplênicas ativadas de camundongo. Os resultados são mostrados para poços em amostra única. O Clone 13 obteve uma EC50 de 0,24 µg/mL. O Clone 25 obteve uma EC50 de 2,28 µg/mL.
[00192] Figura 5A-5B. Anticorpos anti-TIGIT bloquearam a interação de CD155 com TIGIT expresso em células HEK 293, tanto a ligação de CD155 humano a células HEK 293 expressando TIGIT humano (A) e a ligação de CD155 de camundongos a células HEK 293 expressando TIGIT de camundongo (B). Os resultados são mostrados para poços em amostra única.
[00193] Figura 6. Anticorpos anti-TIGIT bloquearam a interação de CD112 humano com TIGIT humano expresso em células HEK 293. Os resultados são mostrados para poços em amostra única.
[00194] Figura 7A-7B. (A) Painel superior: Anticorpos anti-TIGIT selecionados bloqueiam efetivamente o envolvimento TIGIT-CD155, resultando na ativação de células T, como medidas por uma indução > 1,5 vez na atividade da luciferase. Aproximadamente 12 clones revelarão indução >1,5 vez no bioensaio. Dois clones não bloquearem a interação TIGIT-CD155 no ensaio ForteBio (barras rosadas). A indução relativa (fold induction) foi medida em relação ao Ab controle. A média e o DP são de duas réplicas de cada experimento; os anticorpos estavam a 20 µg/mL. Barra cinza = hIgG1
45 / 207 como isótipo controle. Barra preta = nenhum anticorpo controle (definido como basal). Painel inferior: Gráfico de correlação do bioensaio de bloqueio TIGIT/CD155 versus afinidade de TIGIT-Fc. A atividade no bioensaio correlacionou-se com a afinidade para a proteína recombinante. (B) Resposta à dose de 12 clones anti-TIGIT selecionados no bioensaio de bloqueio TIGIT/CD155. Os clones 13 e 25, que demonstraram forte ligação a todas as três espécies, revelaram boa atividade no bioensaio. A média e DP são de três réplicas de cada poço.
[00195] Figura 8. Anticorpos anti-TIGIT selecionados atuam em sinergia com anti-PD-1, resultando na ativação de células T. A média e DP são de três réplicas de cada poço. O clone 13 e o clone 25 mostraram sinergia com anti-PD-1 no bioensaio da combinação.
[00196] Figura 9A-9H. (A-D) Titulação da ligação (A-C) e valores de EC50 (D) para ligação a TIGIT humano (A), de camundongo (B) e macaco Cynomolgus (C) expresso em células HEK 293 para o clone 13 anti-TIGIT totalmente humano (“c13 hIgG1”) e quimeras de IgG1 de camundongo (“c13 mIgG1”) e IgG2a de camundongo (“c13 mIgG2a”) do clone 13. A média e DP são de duas réplicas de cada poço. (E-F) Os anticorpos c13 hIgG1, c13 mIgG1 e c13 mIgG2a bloquearam a interação de CD155 com TIGIT expresso em células HEK 293, pela ligação de CD155 humano a células HEK 293 expressando TIGIT humano (E) e a ligação de CD155 de camundongo a células HEK 293 expressando TIGIT de camundongo (F). Os resultados são para poços em amostra única. (G) Os anticorpos c13 hIgG1, c13 mIgG1 e c13 mIgG2a bloquearam a interação de CD112 humano com TIGIT humano expresso em células HEK 293. Os resultados são para poços em amostra única. (H) Resposta à dose do anticorpo parental e dos clones quiméricos anti- TIGIT c13 hIgG1, c13 mIgG1 e c13 mIgG2a no bioensaio de bloqueio TIGIT/CD155. A média e DP são de três réplicas de cada poço.
[00197] Figura 10A-10K. Anticorpos anti-TIGIT que podem envolver
46 / 207 receptores Fcgama ativadores mediaram a eficácia antitumoral em um modelo de tumor singênico CT26 em camundongos. (A) Volume tumoral médio por grupo. (B-K) Volume tumoral individual para os animais dos grupos 1 ao 10. RP = Resposta parcial (o volume tumoral é 50% ou menos do que seu volume no Dia 1 por três medições consecutivas e igual ou maior do que 13,5 mm3 para uma ou mais dessas três medições). RC = Resposta completa (o volume tumoral é inferior a 13,5 mm3 por três medições consecutivas).
[00198] Figura 11. Sensogramas de anticorpos anti-TIGIT titulados pela ligação a FcγRIIIa 158V humano por BLI. Os resultados são mostrados para o clone hIgG1 anti-TIGIT do tipo selvagem, afucosilado e LALA-PG (painéis à esquerda), clone 13 anti-TIGIT mIgG2a do tipo selvagem, afucosilado e LALA-PG (painéis no centro) e clone 13C anti-TIGIT hIgG1 do tipo selvagem (painel à direita).
[00199] Figura 12. Ligação de anticorpos anti-TIGIT mIgG2a a células CHO expressando mCD16 (a forma murina de FcγRIVa). O clone 13 mIgG2a afucosilado (quadrados pretos) ligou-se com afinidade significativamente maior quando comparado ao mIgG2a do tipo selvagem (círculos pretos) ou mIgG2a LALA-PG (triângulos pretos). Os dados sobre a ligação estão resumidos na tabela abaixo.
[00200] Figura 13. Expressão de TIGIT (painel superior), CD226 (painel do meio) e CD155 (painel inferior) por subconjuntos de células T de doadores sadios. Tregs expressaram os níveis mais altos de TIGIT, enquanto todos os conjuntos testados de células T expressaram o receptor ativador CD226. A expressão de CD155 foi em grande parte ausente.
[00201] Figura 14. Depleção de células Treg TIGIT-positivas pelo clone 13 IgG1 do tipo selvagem (círculos pretos), clone 13 IgG1 afucosilado (quadrados pretos), clone 13 IgG1 LALA-PG (triângulos pretos) e uma IgG1 humana de isótipo controle (triângulos cinzas invertidos), em várias concentrações.
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[00202] Figura 15. Depleção de Tregs em experimentos de cocultura de NK/Treg alogênicas pelo clone 13 IgG1 do tipo selvagem (círculos pretos), clone 13 IgG1 afucosilado (quadrados pretos) e clone 13 IgG1 LALA-PG (triângulos pretos). O anticorpo OKT9 afucosilado (círculos claros) foi incluído como controle positivo.
[00203] Figura 16. Produção de citocinas inflamatórias MCP-1 (painel superior), IL-8 (painel do meio) e MIP1α (painel inferior) por PBMCs após o tratamento com o anticorpo clone 13 IgG1 do tipo selvagem (quadrados pretos), o anticorpo clone 13 IgG1 afucosilado (losango preto) ou o anticorpo clone 13 IgG1 LALA-PG (círculos pretos).
[00204] Figura 17. Regulação positiva dose-dependente da expressão de CD86 (painel à esquerda) e MHC classe II (painel à direita) em monócitos CD14+ após o tratamento com o anticorpo clone 13 IgG1 do tipo selvagem (círculos cinzas), o anticorpo clone 13 IgG1 afucosilado (quadrados cinzas) e o anticorpo clone 13 IgG1 LALA-PG (triângulos pretos).
[00205] Figura 18A-18C. Atividade in vivo de anticorpos anti-TIGIT em três modelos diferentes de tumor singênico. A Figura 8A mostra o efeito do clone 13 IgG2a do tipo selvagem, do clone 13 IgG2a afucosilado e do clone 13 IgG2a LALA-PG sobre o volume tumoral no modelo de linfoma singênico A20. A Figura 8B mostra o efeito do clone 13 IgG2a do tipo selvagem, do clone 13 IgG2a afucosilado e do clone 13 IgG2a LALA-PG sobre o volume tumoral no modelo de câncer de cólon singênico CT26. A Figura 8C mostra o efeito do clone 13 IgG2a do tipo selvagem, do clone 13 IgG2a afucosilado e do clone 13 IgG2a LALA-PG sobre o volume tumoral no modelo de câncer de cólon singênico MC38. Em todos os 3 modelos, o clone 13 mIgG2a do tipo selvagem (círculos pretos) e o clone 13 mIGg2a afucosilado (losangos pretos) foram mais eficazes em controlar o tamanho do tumor quando comparados ao clone 13 IgG2a LALPG (quadrados pretos) ou animais não tratados (triângulos cinzas).
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[00206] Figura 19. Atividade ADCC contra células A549 quando em contato com cetuximabe somente (quadrados claros), com a combinação de cetuximabe com o anticorpo anti-TIGIT clone 13 IgG1 (quadrados pretos) e com um anticorpo IgG1 de isótipo controle (triângulos claros).
[00207] Figura 20. Expressão de IFNγ induzida por CMV em PBMCs expostas ao antígeno de memória (recall) do CMV e tratadas com anticorpo anti-PD-1 (o tratamento com pembrolizumabe é mostrado com quadrados cinzas, o tratamento com nivolumabe é mostrado em losangos cinzas) e concentrações crescentes do anticorpo anti-TIGIT clone 13 IgG1. O tratamento com apenas o anticorpo anti-TIGIT clone 13 IgG1 é também mostrado (quadrados pretos).
[00208] Figura 21. Expressão de IFNγ induzida por CMV em PBMCs expostas ao antígeno de memória de CMB e tratadas com concentrações crescentes dos anticorpos anti-TIGIT clone 13 IgG1 tipo selvagem (“Clone 13 IgG1”), afucosilado clone 13 IgG1 (“Clone 13 SEA IgG1”) e clone 13 IgG1 LALA-PG (“Clone 13 LALA IgG1”).
[00209] Figura 22. Expressão de IL2 em PBMCs cocultivadas sem equiparação com HLA, tratadas com concentrações crescentes dos anticorpos anti-TIGIT clone 13 IgG1 do tipo selvagem (“Clone 13 IgG1”), clone 13 IgG1 afucosilado (“Clone 13 SEA IgG1”) e clone 13 IgG1 LALA-PG (“Clone 13 LALA IgG1”).
[00210] Figura 23. Indução de citocinas no plasma e tecidos de camundongos com xenoenxerto CT26 de câncer de cólon em resposta a anticorpos anti-TIGIT. Camundongos com implante de células CT26 de câncer de cólon foram tratados com o clone 13 IgG2a do tipo selvagem (“WT”), o clone 13 IgG1 afucosilado (“SEA”) ou o clone 13 IgG2a LALA- PG (“LALA”), 1 mg/kg, e os níveis de citocinas foram medidos no plasma, baço e lisados do tumor.
[00211] Figura 24. Alterações em subconjuntos de células T CD8+
49 / 207 intratumorais e periféricas em camundongos com xenoenxerto CT26 de câncer de cólon após o tratamento com o anticorpo anti-TIGIT clone 13 IgG2a do tipo selvagem (“TIGIT WT”), clone 13 IgG2a afucosilado (“SEA TIGIT”) ou clone 13 IgG2a LALA-PG (“LALA TIGIT”).
[00212] Figura 25. Alterações em subconjuntos de células T CD4+ intratumorais e periféricas em camundongos com xenoenxerto CT26 de câncer de cólon tratadas com o anticorpo anti-TIGIT clone 13 IgG2a do tipo selvagem (“TIGIT WT”), clone 13 IgG2a afucosilado (“SEA TIGIT”) ou clone 13 IgG2a LALA-PG (“LALA TIGIT”).
[00213] Figura 26A-B. Alterações em subconjuntos de células T CD8+ (A) e CD4+ (B) esplênicas em camundongos com xenoenxerto CT26 de câncer de cólon após seis doses de anticorpo anti-TIGIT clone 13 IgG2a do tipo selvagem (“TIGIT WT”), clone 13 IgG2a afucosilado (“SEA TIGIT”) ou clone 13 IgG2a LALA-PG (“LALA TIGIT”). São mostrados resultados de células CD45+ vivas com gate (seleção) em CD8+ ou CD4+.
[00214] Figura 27. Indução de citocinas no plasma e baço de camundongos com xenoenxerto CT26 de câncer de cólon, tratados com anticorpo anti-TIGIT clone 13 IgG2a do tipo selvagem (“TIGIT WT”), clone 13 IgG2a afucosilado (“SEA TIGIT”) ou clone 13 IgG2a LALA-PG (“LALA TIGIT”).
[00215] Figura 28. Indução de respostas de células T antígeno- específicas em camundongos tratados com anticorpo anti-TIGIT clone 13 IgG2a do tipo selvagem (“TIGIT WT”), clone 13 IgG2a afucosilado (“SEA TIGIT”) ou clone 13 IgG2a LALA-PG (“LALA TIGIT”).
[00216] Figura 29A-C. Atividade in vivo de anticorpos anti-TIGIT em três modelos diferentes de tumor singênico. A Figura 29A mostra o efeito de do clone 13 IgG2a do tipo selvagem (“TIGIT”), 5 mg/kg, e do clone 13 IgG2a afucosilado (“SEA TIGIT”), 0,1 mg/kg, 1 mg/kg e 5 mg/kg, sobre o volume tumoral no modelo EMT6 singênico de câncer de mama. A Figura 29B
50 / 207 mostra o efeito do clone 13 IgG2a do tipo selvagem (“TIGIT”), 5 mg/kg, e do clone 13 IgG2a afucosilado (“SEA TIGIT”), 0,1 mg/kg, 1 mg.kg e 5 mg/kg, sobre o volume tumoral no modelo E0771 singênico de câncer de mama. A Figura 29C mostra o efeito do clone 13 IgG2a do tipo selvagem, 1 mg/mL, sobre o volume tumoral em um modelo CT25 singênico de câncer de cólon mantido externamente.
[00217] Figura 30. Correlação de assinaturas moléculas de célula NK (esquerda) e célula T CD8 ativada (direita) com resposta do modelo de tumor singênico ao tratamento com anticorpo anti-TIGIT.
[00218] Figura 31. Correlação da expressão de TIGIT (esquerda) e CD155 (direita) com resposta do modelo de tumor singênico ao tratamento com anticorpo anti-TIGIT.
[00219] Figura 32. Níveis de IgG1 (painel à esquerda) e IgG2a (painel à direita) anti-OVA em camundongos após a vacinação com OVA e tratamento com anticorpo clone 13 IgG2a do tipo selvagem (“TIGIT WT”), clone 13 mIgG2a afucosilado (“SEA TIGIT”) ou clone 13 mIgG2a LALA-PG (“LALA TIGIT”), 1 mg/kg.
[00220] Figura 33. Expressão de citocinas após reestimulação de esplenócitos ex vivo de camundongos tratados por vacinação com OVA seguida por anticorpo clone 13 IgG2a do tipo selvagem (“TIGIT WT”), clone 13 mIgG2a afucosilado (“SEA TIGIT”) ou clone 13 mIgG2a LALA-PG (“LALA TIGIT”), 1 mg/kg.
[00221] Figura 34. Reexposição (re-challenge) de camundongos que mostraram uma resposta complete no modelo de tumor CT26 singênico após o tratamento com o anticorpo clone 13 mIgG2a afucosilado.
[00222] Figura 35. Depleção de Treg por anticorpos anti-TIGIT clone 13 IgG1 do tipo selvagem (“WT”), clone 13 IgG1 afucosilado (“Clone 13 IgG1 SEA”) ou clone 13 IgG1 DLE (“DLE”).
[00223] Figura 36. Depleção de Treg por anticorpos anti-TIGIT clone
51 / 207 13 IgG1 do tipo selvagem (“Clone 13 WT”), clone 13 IgG1 afucosilado (“Clone 13 IgG1 SEA”) ou clone H5/L4 IgG1.
[00224] Figura 37. Eficácia dos anticorpos anti-TIGIT clone 13 IgG1 do tipo selvagem (“Clone 13 WT” ou “TIGIT WT”), clone 13 IgG1 afucosilado (“Clone 13 SEA” ou “SGN-TGT”), anticorpo anti-PD-1 e combinações de anticorpo anti-PD-1 e clone 13 IgG1 do tipo selvagem ou clone 13 IgG1 afucosilado em um modelo de tumor MC38 em camundongos.
[00225] Figura 38A-38B. Expressão de IL-2 (Figura 38A) ou expressão de IL-10 (Figura 38B) após contato com o superantígeno peptídico enterotoxina B estafilocócica e os anticorpos anti-TIGIT clone 13 IgG1 do tipo selvagem (“Clone 13 WT”), clone 13 IgG1 afucosilado (“Clone 13 SEA”), clone 13 IgG1 DLE (“DLE”) ou clone H5/L4 IgG1.
[00226] Figura 39A-39D. Ligação dos anticorpos anti-TIGIT clone 13 IgG1 do tipo selvagem (“Clone 13 IgG1”), clone 13 IgG1 afucosilado (“Clone 13 SEA”), clone 13 LALA-PG (“Clone 13 LALA”), clone 13 IgG1 DLE (“Clone 13 DLE”) ou clone H5/L4 IgG1 com FcγRI (Figura 39A), FcγRIIIa V/V (Figura 39B), FcγRIIb (Figura 39C) ou FcγRIIa (Figura 39D) expressos na superfície de células CHO.
[00227] Figura 40. Fagocitose de células Jurkat TIGIT-positivas mediada pelos anticorpos anti-TIGIT clone 13 IgG1 do tipo selvagem (“Clone 13”), clone 13 IgG1 afucosilado (“Clone 13 SEA”) e clone 13 IgG1 DLE (“Clone 13 DLE”).
[00228] Figura 41. CDC de células Jurkat TIGIT-positivas mediada pelos anticorpos anti-TIGIT clone 13 IgG1 do tipo selvagem (“Clone 13 IgG1”), clone 13 IgG1 afucosilado (“Clone 13 SEA”), clone 13 LALA-PG (“Clone 13 LALA-PG”), clone 13 IgG1 DLE (“Clone 13 DLE”) ou clone H5/L4 IgG1; e pelo anticorpo hB6h12.3 anti-CD47. Descrição detalhada da invenção I. Introdução
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[00229] São providos anticorpos com alta afinidade por TIGIT humano (Imunorreceptor de células T com domínios Ig e ITIM) e exibindo ainda reatividade cruzada com qualquer ou com ambos, TIGIT de camundongo e TIGIT de macaco Cynomolgus, que foram identificados e inibem a interação entre TIGIT e CD155. Esses anticorpos também exibem sinergia com anticorpos anti-PD-1. Assim, os anticorpos anti-TIGIT aqui descritos podem ser utilizados em diversas aplicações terapêuticas, tais como para o tratamento de vários cânceres, quer como agente único ou em combinação com outro agente terapêutico. Em algumas modalidades, os anticorpos anti-TIGIT são afucosilados.
[00230] Consequentemente, em algumas modalidades, a presente invenção provê composições, kits e métodos de tratamento que compreendem um anticorpo que se liga ao TIGIT humano, em que o anticorpo é afucosilado. II. Definições
[00231] A menos que definidos de outra forma, os termos técnicos e científicos aqui utilizados têm o mesmo significado como comumente entendido por qualquer técnico no assunto. Ver, p. ex., Lackie, Dictionary of Cell and Molecular Biology, Elsevier (4a ed. 2007); Sambrook et al., Molecular Cloning, A Laboratory Manual, Cold Springs Harbor Press (Cold Springs Harbor, NY 1989). Quaisquer métodos, dispositivo e materiais semelhantes ou equivalentes àqueles aqui descritos podem ser utilizados na prática desta invenção.
[00232] Neste relatório descritivo, as formas no singular “um”, “uma”, “o” e “a” incluem referentes no plural a menos que o conteúdo indique claramente o contrário. Assim, por exemplo, uma referência a “um anticorpo” inclui opcionalmente uma combinação de duas ou mais de tais moléculas e similares.
[00233] O termo “aproximadamente”, neste relatório descritivo, refere- se à faixa de erro habitual para o respectivo valor prontamente conhecida pela
53 / 207 pessoa com competência neste campo técnico.
[00234] Neste relatório descritivo, o termo “TIGIT” refere-se ao “Imunorreceptor de células T com domínios Ig e ITIM”. A proteína codificada pelo gene TIGIT pertence à família CD28 dentro da superfamília Ig de proteínas. TIGIT é expresso em diversas classes de células T e em células natural killer (NK) e medeia seu efeito imunossupressor ao competir com CD226 pelos ligantes CD155 e CD112. Ver, Levin et al., Eur. J. Immunol., 2011, 41:902-915. TIGIT é também citado na técnica como WUCAM (Washington University Cell Adhesion Molecule) e VSTM3 (designação HUGO). Ver, Levin et al., Eur J Immunol, 2011, 41:902-915. Assim, uma referência a “TIGIT”, por todo este pedido de patente, também inclui uma referência a WUCAM e/ou VSTM3 a menos que afirmado de outra forma ou evidente pelo contexto. As sequências de nucleotídeos e proteica de TIGIT humano são apresentadas em, p. ex., Nos de Acesso Genbank NM173799 (SEQ ID NO:217) e NP776160 (SEQ ID NO:218), respectivamente.
[00235] O termo “anticorpo” inclui anticorpos intactos e fragmentos de ligação ao antígeno dos mesmos, em que os fragmentos de ligação ao antígeno compreendem a região de ligação ao antígeno e pelo menos uma porção da região constante da cadeia pesada compreendendo asparagina (N) 297, localizada em CH2. Tipicamente, a “região variável” contém a região de ligação ao antígeno do anticorpo e está envolvida na especificidade e afinidade de ligação. Ver, Fundamental Immunology, 7a Edição, Paul, ed., Wolters Kluwer Health/Lippincott Williams & Wilkins (2013). As cadeias leves são tipicamente classificadas em kappa ou lambda. As cadeias pesadas são tipicamente classificadas em gama, mu, alfa, delta ou épsilon, as quais, por sua vez, definem as classes de imunoglobulina, IgG, IgM, IgA, IgD e IgE, respectivamente.
[00236] O termo “anticorpo” também inclui moléculas bivalentes ou
54 / 207 biespecíficas, diabodies, triabodies e tetrabodies. Moléculas bivalentes ou biespecíficas são descritas em, p. ex., Kostelny et al. (1992) J. Immunol. 148:1547, Pack e Pluckthun (1992) Biochemistry 31:1579, Hollinger et al. (1993), PNAS. USA 90:6444, Gruber et al. (1994) J Immunol. 152:5368, Zhu et al. (1997) Protein Sci. 6:781, Hu et al. (1996) Cancer Res. 56:3055, Adams et al. (1993) Cancer Res. 53:4026 e McCartney, et al. (1995) Protein Eng. 8:301.
[00237] O termo “anticorpo” inclui um anticorpo por si só (anticorpo nu (naked)) ou um anticorpo conjugado a um fármaco citotóxico ou citostático.
[00238] Um “anticorpo monoclonal” refere-se a um anticorpo obtido de uma população de anticorpos substancialmente homogêneos, ou seja, os anticorpos individualmente que compõe a população são idênticos, exceto por possíveis mutações ocorridas naturalmente que podem estar presentes em quantidades mínimas. O modificador “monoclonal” indica o caráter do anticorpo de ter sido obtido de uma população substancialmente homogênea de anticorpos e não deverá ser considerado como requisito de que a produção do anticorpo deva ser por qualquer método em particular. Por exemplo, os anticorpos monoclonais a serem utilizados de acordo com a presente invenção podem ser criados pelo método do hibridoma, descrito pela primeira vez por Kohler et al. (1975) Nature 256:495, ou podem ser criados por métodos do DNA recombinante (ver, por exemplo, Patente dos E.U.A. No 4816567). Os “anticorpos monoclonais” podem ser isolados de bibliotecas de anticorpos em fagos, utilizando as técnicas descritas em Clackson et al. (1991) Nature, 352:624-628 e Marks et al. (1991) J. Mol. Biol., 222:581-597, por exemplo, ou podem ser criados por outros métodos. Os anticorpos aqui descritos são anticorpos monoclonais.
[00239] Ligação específica de um anticorpo monoclonal com seu antígeno alvo significa uma afinidade de pelo menos 106, 107, 108, 109 ou 1010
55 / 207 M-1. A ligação específica é detectavelmente de magnitude maior e pode distinguir-se da ligação não específica que ocorre com pelo menos um alvo não relacionado. A ligação específica pode ser resultante da formação de ligações entre grupos funcionais em particular ou de um encaixe espacial em particular (p. ex., tipo chave e fechadura) enquanto a ligação não específica é geralmente o resultado de forças de van der Waals.
[00240] A unidade básica estrutural do anticorpo é um tetrâmetro de subunidades. Cada tetrâmero inclui dois pares idênticos de cadeias polipeptídicas, cada par com uma cadeia “leve” (aproximadamente 25 kDa) e uma cadeia “pesada” (aproximadamente 50-70 kDa). A porção amino- terminal de cada cadeia inclui uma região variável com cerca de 100 a 110 ou mais aminoácidos, responsável primariamente pelo reconhecimento do antígeno. Essa região variável é expressa inicialmente ligada a um peptídeo sinal clivável. A região variável sem o peptídeo sinal é, às vezes, referida como região variável madura. Assim, por exemplo, uma região variável madura da cadeia leve significa uma região variável da cadeia leve sem o peptídeo sinal da cadeia leve. A porção carboxi-terminal de cada cadeia define uma região constante, responsável primariamente pela função efetora.
[00241] As cadeias leves são classificadas em kappa ou lambda. As cadeias pesadas são classificadas em gama, mu, alfa, delta ou épsilon e definem o isótipo do anticorpo como IgG, IgM, IgA, IgD e IgE, respectivamente. Dentro das cadeias leves e pesadas, as regiões variáveis e constantes são unidas por uma região “J” de 12 ou mais aminoácidos, sendo que a cadeia pesada também inclui uma região “D” com cerca de 10 ou mais aminoácidos. (Ver, em geral, Fundamental Immunology (Paul, W., ed., 2a ed. Raven Press, N.Y., 1989, Cap. 7, aqui incorporado, em sua totalidade, por referência para todos os efeitos).
[00242] As regiões variáveis maduras de cada par de cadeias leves/pesadas formam o sítio de ligação do anticorpo. Assim, um anticorpo
56 / 207 intacto possui dois sítios de ligação. Exceto em anticorpos bifuncionais ou biespecíficos, os dois sítios de ligação são iguais. Todas as cadeias exibem a mesma estrutura geral de regiões framework (arcabouço) (FR) relativamente conservadas unidas por três regiões hipervariáveis, também chamadas regiões determinantes de complementaridade ou CDRs. As CDRs das duas cadeias de cada par são alinhadas pelas regiões framework, possibilitando a ligação a um epítopo específico. Do N-terminal ao C-terminal, ambas as cadeias leves e pesadas compreendem os domínios FR1, CDR1, FR2, CDR2, FR3, CDR3 e FR4. A designação de aminoácidos para cada domínio é de acordo com as definições de Kabat, Sequences of Proteins of Immunological Interest (National Institutes of Health, Bethesda, MD, 1987 e 1991), ou Chothia & Lesk, J. Mol. Biol. 196:901-917 (1987); Chothia et al., Nature 342:878-883 (1989), ou um compósito de Kabat e Chothia, ou IMGT (ImMunoGeneTics information system), AbM ou Contact ou outra definição convencional de CDRs. Kabat também fornece uma convenção amplamente utilizada para numeração (Numeração de Kabat) na qual o mesmo número é designado a resíduos correspondentes entre cadeias pesadas diferentes ou entre cadeias leves diferentes. A menos que de outra evidente pelo contexto, a numeração de Kabat é utilizada para designar a posição de aminoácidos nas regiões variáveis. A menos que de outra evidente pelo contexto, a numeração EU é utilizada para designar posições em regiões constantes.
[00243] Um anticorpo “humanizado” é um anticorpo que retém a reatividade de um anticorpo não humano ao mesmo tempo em que é menos imunogênico nos humanos. Isso pode ser conseguido, por exemplo, retendo as regiões CDR não humanas e substituindo as demais partes do anticorpo por seus equivalentes humanos. Ver, p. ex., Morrison et al., PNAS USA, 81:6851- 6855 (1984); Morrison e Oi, Adv. Immunol., 44:65-92 (1988); Verhoeyen et al., Science, 239:1534-1536 (1988); Padlan, Molec. Immun., 28:489-498 (1991); Padlan, Molec. Immun., 31(3):169-217 (1994).
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[00244] Neste relatório descritivo, o termo “anticorpo quimérico” refere-se a uma molécula de anticorpo na qual (a) a região constante, ou uma porção da mesma, é substituída de modo que o sítio de ligação ao antígeno (região variável, CDR, ou porção da mesma) é ligado a um região constante de uma espécie diferente.
[00245] O termo “epítopo” refere-se a um sítio em um antígeno ao qual se liga um anticorpo. Um epítopo pode ser formado por aminoácidos contíguos ou aminoácidos não contíguos justapostos pelo dobramento terciário de uma ou mais proteínas. Os epítopos formados por aminoácidos contíguos são tipicamente retidos quando da exposição a solventes desnaturantes enquanto que os epítopos formados por dobramento terciário são tipicamente perdidos no tratamento com solventes desnaturantes. Tipicamente, um epítopo inclui pelo menos 3 e, mais habitualmente, pelo menos 5 ou 8-10 aminoácidos em uma conformação espacial única. Os métodos para determinação da conformação especial de epítopos incluem, por exemplo, cristalografia de raios-x e ressonância magnética nuclear bidimensional x. Ver, p. ex., Epitope Mapping Protocols, em Methods in Molecular Biology, Vol. 66, Glenn E. Morris, Ed. (1996).
[00246] Anticorpos que reconhecem epítopos iguais ou os que se sobrepõem podem ser identificados em um imunoensaio simples mostrando a capacidade de um anticorpo para competir com outro anticorpo pela ligação a um antígeno alvo. O epítopo de um anticorpo pode também ser definidos por cristalografia de raios-x do anticorpo ligado a seu antígeno para identificar resíduos de contato. Alternativamente, dois anticorpos possuem o mesmo epítopo se todas as mutações de aminoácidos no antígeno que reduzem ou eliminam a ligação de um anticorpo reduzirem ou eliminarem a ligação do outro. Dois anticorpos possuem epítopos sobrepostos se algumas mutações de aminoácidos que reduzem ou eliminam a ligação de um anticorpo reduzirem ou eliminarem a ligação do outro.
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[00247] A competição entre anticorpos é determinada por um ensaio no qual um anticorpo em teste inibe a ligação específica de um anticorpo de referência a um antígeno comum (ver, p. ex., Junghans et al., Cancer Res. 50:1495, 1990). Um anticorpo em teste compete com um anticorpo de referência se um excesso de um anticorpo em teste (p. ex., pelo menos 2x, 5x, 10x, 20x ou 100x) inibir a ligação do anticorpo de referência em pelo menos 50%, mas preferivelmente 75%, 90% ou 99% conforme medido em um ensaio competitivo de ligação. Os anticorpos identificados pelo ensaio de competição (anticorpos em competição) incluem anticorpos que se ligam ao mesmo epítopo que o anticorpo de referência e anticorpos que se ligam a um epítopo adjacente suficientemente próximo ao epítopo ligado pelo anticorpo de referência para que ocorra impedimento estérico.
[00248] A expressão “liga-se especificamente” refere-se a uma molécula (p. ex., anticorpo ou fragmento de anticorpo) que se liga a um alvo com maior afinidade, avidez, mais rapidamente e/ou com duração maior àquele alvo em uma amostra do que se liga a um composto não alvo. Em algumas modalidades, um anticorpo que se liga especificamente a um alvo é um anticorpo que se liga ao alvo com afinidade pelo menos 2 vezes maior do que a compostos não alvo, tais como, por exemplo, com afinidade pelo menos 4 vezes, 5 vezes, 6 vezes, 7 vezes, 8 vezes, 9 vezes, 10 vezes, 20 vezes, 25 vezes, 50 vezes ou 100 vezes maior. Por exemplo, um anticorpo que se liga especificamente a TIGIT, tipicamente, se ligará a TIGIT com afinidade pelo menos a 2 vezes maior do que a um alvo diferente de TIGIT. Será entendido por qualquer técnico no assunto ao ler essa definição, por exemplo, que um anticorpo (ou porção ou epítopo) que se liga de modo específico ou preferencial a um primeiro alvo pode ou não se ligar de modo específico ou preferencial a um segundo alvo. Assim, “ligação específica” não requer necessariamente (embora possa incluir) ligação exclusiva.
[00249] O termo “afinidade de ligação” é usado como uma medida da
59 / 207 força de uma interação não covalente entre duas moléculas, p. ex., um anticorpo, ou fragmento do mesmo, e um antígeno. O termo “afinidade de ligação” é usado para descrever interações monovalentes (atividade intrínseca).
[00250] A afinidade de ligação entre duas moléculas, p. ex., um anticorpo, ou fragmento do mesmo, e um antígeno, através de uma interação monovalente pode ser quantificada determinando-se a constante de dissociação (KD). Por sua vez, KD pode ser determinada medindo-se a cinética de formação e dissociação de um complexo, usando, como um exemplo não limitante, o método da ressonância plasmônica de superfície (SPR) (Biacore™). As constantes da taxa correspondente à associação e à dissociação de um complexo monovalente são referidas como as constantes da taxa de associação ka (ou kon) e a constante da taxa de dissociação kd (ou koff), respectivamente. KD está relacionada a ka e kd através da equação KD = kd / ka. O valor da constante de dissociação pode ser determinado diretamente por métodos bem conhecidos e pode ser computado mesmo para misturas complexas por métodos tais como aqueles, por exemplo, apresentados em Caceci et al. (1984, Byte 9: 340-362). Por exemplo, a KD pode ser estabelecida usando um ensaio de ligação em filtro de nitrocelulose de duplo filtro tal como aquele descrito por Wong & Lohman (1993, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90: 5428-5432). Outros ensaios padrão para avaliar a capacidade para ligação de ligantes, tais como anticorpos para antígenos alvo, são conhecidos na técnica, incluindo, por exemplo, ELISAs, Western blots, RIAs e análise por citometria de fluxo e outros ensaios exemplificados em outro lugar no presente. A cinética de ligação e a afinidade de ligação do anticorpo também podem ser avaliados por ensaios padrão conhecidos na técnica ou como descritos na seção de Exemplos abaixo, tais como Ressonância Plasmônica de Superfície (SPR), p. ex., utilizando um sistema Biacore™; ensaios cinéticos de exclusão tais como KinExA®; e interferometria de
60 / 207 BioLayer (biocamada) (p. ex., usando a plataforma ForteBio® Octet). Em algumas modalidades, a afinidade de ligação é determinada usando um ensaio de interferometria BioLayer. Ver, p. ex., Wilson et al., Biochemistry and Molecular Biology Education, 38:400-407 (2010); Dysinger et al., J. Immunol. Methods, 379:30-41 (2012); e Estep et al., Mabs, 2013, 5:270-278.
[00251] O termo “reatividade cruzada”, neste relatório descritivo, refere-se à capacidade de um anticorpo ligar-se a um antígeno diferente do antígeno contra o qual o anticorpo foi criado. Em algumas modalidades, reatividade cruzada refere-se à capacidade de um anticorpo ligar-se a um antígeno de uma espécie diferente daquela do antígeno contra o qual o anticorpo foi criado. Como um exemplo não limitante, um anticorpo anti- TIGIT como aqui descrito que é criado contra um antígeno de TIGIT humano pode exibir reatividade cruzada com o TIGIT de uma espécie diferente (p. ex., camundongo ou macaco).
[00252] Um anticorpo “isolado” refere-se a um anticorpo que foi identificado e separado e/ou recuperado de componentes de seu ambiente natural e/ou um anticorpo que é produzido por recombinação. Um “anticorpo purificado” é um anticorpo que é tipicamente pelo menos 50% puro m/m de proteínas interferentes e outros contaminantes resultantes de sua produção ou purificação, mas não exclui a possibilidade de que o anticorpo monoclonal seja combinado com um excesso de veículo(s) farmaceuticamente aceitável(is) ou outro veículo destinado a facilitar seu uso. As proteínas interferentes e outros contaminantes podem incluir, por exemplo, componentes celulares das células das quais um anticorpo é isolado ou produzido por recombinação. Às vezes, os anticorpos monoclonais são pelo menos 60%, 70%, 80%, 90%, 95 ou 99% puros m/m de proteínas interferentes e contaminantes provenientes da produção ou purificação. Os anticorpos aqui descritos, incluindo anticorpos de rato, quiméricos, veneered (com superfície remodelada) e humanizados podem ser providos em forma
61 / 207 isolada e/ou purificada.
[00253] O termo “agente imuno-oncológico” refere-se a um agente que reforça, estimula ou regula positivamente uma resposta imune contra um câncer em um indivíduo (p. ex., estimulando uma resposta imune para inibir o crescimento tumoral). Em algumas modalidades, um agente imuno- oncológico é uma pequena molécula, anticorpo, peptídeo, proteína peptídeo circular, peptidomimético, polinucleotídeo, RNA inibidor, aptâmero, composto medicamentoso ou outro composto. Em algumas modalidades, um agente imuno-oncológico é um antagonista ou inibidor de PD-1 ou da via de PD-1.
[00254] “Sujeito”, “paciente”, “indivíduo” e termos semelhantes são usados alternadamente e referem-se, exceto quando indicado, a mamíferos tais como humanos e primatas não humanos, bem como coelhos, ratos, camundongos, cabras, porcos e outras espécies de mamíferos. O termo não indica necessariamente que o indivíduo foi diagnosticado com uma doença em particular, porém, tipicamente, refere-se a um indivíduo sob supervisão médica.
[00255] Os termos “terapia”, “tratamento” e “melhora” referem-se a qualquer redução na gravidade de sintomas. No caso de tratamento do câncer, tratamento pode referir-se a reduzir, p. ex., tamanho do tumor, número de células cancerosas, velocidade de crescimento, atividade metastática, morte celular de células não cancerosas etc. Neste relatório descritivo, os termos “tratar” e “prevenir” não pretendem ser termos absolutos. Tratamento e prevenção podem referir-se a qualquer demora no surgimento, melhora de sintomas, melhoria na sobrevida do paciente, aumento em tempo ou taxa de sobrevida etc. O tratamento e prevenção podem ser completos (sem sintomas detectáveis restantes) ou parciais, tal que os sintomas são menos frequentes ou graves do que em um paciente sem o tratamento aqui descrito. O efeito do tratamento pode ser em comparação a um indivíduo ou grupo de indivíduos
62 / 207 que recebem o tratamento, ou ao mesmo paciente antes do tratamento ou em um momento diferente durante o tratamento. Em alguns aspectos, a gravidade da doença é reduzida em pelo menos 10%, em comparação, p. ex., ao indivíduo antes da administração ou a um indivíduo controle não submetido ao tratamento. Em alguns aspectos, a gravidade da doença é reduzida em pelo menos 25%, 50%, 75%, 80% ou 90% ou, em alguns casos, não é mais detectável utilizando técnicas diagnósticas padrão.
[00256] Neste relatório descritivo, uma “quantidade terapêutica” ou “quantidade terapeuticamente eficaz” de um agente (p. ex., um anticorpo como aqui descrito) é uma quantidade do agente que previne, alivia, abate, melhora ou reduz a gravidade de sintomas de uma doença (p. ex., um câncer) em um indivíduo.
[00257] Os termos “administrar”, “administrado” ou “administra” referem-se a métodos para a entrega de agentes, compostos ou composições no sítio de ação biológica desejado. Esses métodos incluem, entre outros, liberação tópica, liberação parenteral, liberação intravenosa, liberação intradérmica, liberação intramuscular, liberação colônica, liberação retal ou liberação intraperitoneal. Técnicas de administração que são opcionalmente empregadas com os agentes e métodos aqui descritos incluem, p. ex., as discutidas em Goodman e Gilman, The Pharmacological Basis of Therapeutics, edição corrente; Pergamon; e Remington's, Pharmaceutical Sciences (edição corrente), Mack Publishing Co., Easton, PA. III. Anticorpos contra TIGIT
[00258] Em um aspecto, são providos anticorpos que se ligam a TIGIT humano (Imunorreceptor de células T com domínios Ig e ITIM). Tal qual aqui descritos, em algumas modalidades, o anticorpo anti-TIGIT inibe a interação entre TIGIT e um ou ambos os ligantes CD155 e CD112. Em algumas modalidades, o anticorpo anti-TIGIT inibe a interação entre TIGIT e CD155 em um bioensaio funcional, permitindo que ocorra a sinalização CD155-
63 / 207 CD226. Em algumas modalidades, o anticorpo anti-TIGIT exibe sinergia com um agente anti-PD-1 (p. ex., um anticorpo anti-PD-1) ou um agente anti-PD- L1 (p. ex., um anticorpo anti-PD-L1).
[00259] Os presentes inventores verificaram que, surpreendentemente, anticorpos anti-TIGIT com função efetora reforçada, tal como pode ser conseguida com anticorpos afucosilado IgG1 afucosilado, depletam células Treg e mostram eficácia melhorada in vivo. Consequentemente, em várias modalidades, são providos anticorpos anti-TIGIT afucosilados. Características exemplares de anticorpos anti-TIGIT
[00260] Em algumas modalidades, um anticorpo anti-TIGIT, tal como um anticorpo anti-TIGIT afucosilado, liga-se à proteína TIGIT humano (SEQ ID NO:218) ou uma porção desta com alta afinidade. Em algumas modalidades, o anticorpo tem uma afinidade de ligação (KD) por TIGIT humano inferior a 5 nM, inferior a 1 nM, inferior a 500 pM, inferior a 250 pM, inferior a 150 pM, inferior a 100 pM, inferior a 50 pM, inferior a 40 pM, inferior a 30 pM, inferior a 20 pM ou inferior a aproximadamente 10 pM. Em algumas modalidades, o anticorpo tem uma afinidade de ligação (KD) por TIGIT humano inferior a 50 pM. Em algumas modalidades, o anticorpo tem uma KD por TIGIT humano na faixa entre aproximadamente 1 pM e 5 nM, p. ex., entre aproximadamente 1 pM e 1 nM, entre aproximadamente 1 pM e 500 pM, entre aproximadamente 5 pM e 250 pM ou entre aproximadamente 10 pM e 100 pM.
[00261] Em algumas modalidades, além de ligar-se a TIGIT humano com alta afinidade, um anticorpo anti-TIGIT afucosilado exibe reatividade cruzada com TIGIT de macaco Cynomolgus (“cyno”) (p. ex., uma proteína TIGIT cyno com a sequência de SEQ ID NO:219) e/ou TIGIT de camundongo (p. ex., uma proteína TIGIT de camundongo com a sequência de SEQ ID NO:220). Em algumas modalidades, o anticorpo anti-TIGIT liga-se a TIGIT de camundongo (p. ex., um TIGIT de camundongo tendo a sequência
64 / 207 de SEQ ID NO:220) com afinidade de ligação (KD) igual ou inferior a 100 nM. Em algumas modalidades, o anticorpo anti-TIGIT liga-se a TIGIT humano com KD igual ou inferior a 5 nM ou exibe reatividade cruzada com o TIGIT de camundongo com KD igual ou inferior a 100 nM. Em algumas modalidades, um anticorpo anti-TIGIT que se ligam ao TIGIT humano também exibe reatividade cruzada com TIGIT de macaco Cynomolgus e com TIGIT de camundongo.
[00262] Em algumas modalidades, a reatividade cruzada do anticorpo é determinada pela ligação específica detectada do anticorpo anti-TIGIT a TIGIT que é expresso em uma célula (p. ex., uma linhagem celular que expressa TIGIT humano, TIGIT cyno ou TIGIT de camundongo, ou uma célula primária que expressa endogenamente TIGIT, p. ex., células T primárias que expressam endogenamente TIGIT humano, TIGIT cyno ou TIGIT de camundongo). Em algumas modalidades, a ligação do anticorpo e a reatividade cruzada do anticorpo são determinadas pela ligação específica detectada do anticorpo anti-TIGIT a TIGIT purificado ou recombinante (p. ex., TIGIT humano purificado ou recombinante, TIGIT cyno purificado ou recombinante ou TIGIT de camundongo purificado ou recombinante) ou a uma proteína quimérica compreendendo TIGIT (p. ex., uma proteína de fusão com Fc compreendendo TIGIT humano, TIGIT cyno ou TIGIT de camundongo, ou uma proteína com etiqueta His compreendendo TIGIT humano, TIGIT cyno ou TIGIT de camundongo).
[00263] Métodos para a análise de afinidade de ligação, cinética da ligação e reatividade cruzada são conhecidos na técnica. Ver, p. ex., Ernst et al., Determination of Equilibrium Dissociation Constants, Therapeutic Monoclonal Antibodies (Wiley & Sons ed. 2009). Esses métodos incluem, entre outros, ensaios de ligação em fase sólida (p. ex., ensaio ELISA), imunoprecipitação, ressonância plasmônica de superfície (SPR, p. ex., Biacore™ (GE Healthcare, Piscataway, NJ)), ensaios cinéticos de exclusão (p.
65 / 207 ex., KinExA®), citometria de fluxo, separação de células ativadas por fluorescência (FACS), interferometria BioLayer (p. ex., Octet™ (FortéBio, Inc., Menlo Park, CA)) e análise por Western blotting. As técnicas de SPR são revisadas, p. ex., em Hahnfeld et al. Determination of Kinetic Data Using SPR Biosensors, Molecular Diagnosis of Infectious Diseases (2004). Em um experimento típico de SPR, um interatuante (alvo ou agente de direcionamento) é imobilizado em uma lâmina de vidro revestida de ouro SPR-ativa em uma célula de fluxo e uma amostra contendo o outro interatuante é introduzida ao fluxo através da superfície. Quando luz de um dado comprimento de onda é iluminada sobre a superfície, as alterações à refletividade óptica do ouro indica ligação e a cinética de ligação. Em algumas modalidades, ensaios cinéticos de exclusão são usados para determinar a afinidade. Essa técnica é descrita, p. ex., em Darling et al., Assay and Drug Development Technologies Vol. 2, número 6 647-657 (2004). Em algumas modalidades, usam-se ensaios de interferometria BioLayer para determinar a afinidade. Essa técnica é descrita, p. ex., em Wilson et al., Biochemistry and Molecular Biology Education, 38:400-407 (2010); Dysinger et al., J. Immunol. Methods, 379:30-41 (2012).
[00264] Em algumas modalidades, os anticorpos anti-TIGIT aqui providos inibem a interação entre TIGIT e o ligante CD155. Em algumas modalidades, os anticorpos anti-TIGIT aqui providos inibem a interação entre TIGIT e o ligante CD112. Em algumas modalidades, os anticorpos anti- TIGIT aqui providos inibem a interação entre TIGIT e ambos os ligantes CD155 e CD112.
[00265] Em algumas modalidades, a capacidade de um anticorpo anti- TIGIT para inibir interações entre TIGIT e CD155 e/ou CD112 é avaliada medindo se as interações físicas entre TIGIT e CD155 ou CD112 diminuem em um ensaio de ligação. Em algumas modalidades, o ensaio de ligação é um ensaio competitivo de ligação. O ensaio pode ser realizado em vários
66 / 207 formatos, tais como, entre outros, um ensaio ELISA, citometria de fluxo, um ensaio de ressonância plasmônica de superfície (SPR) (p. ex., Biacore™) ou interferometria de BioLayer (p. ex., ForteBio Octet™). Ver, p. ex., Duff et al., Biochem J., 2009, 419:577-584; Dysinger et al., J. Immunol. Methods, 379:30-41 (2012); e Estep et al, Mabs, 2013, 5:270-278.
[00266] Em algumas modalidades, o anticorpo anti-TIGIT inibe a interação entre TIGIT e CD155 em um bioensaio funcional, tal como um ensaio celular funcional no qual a inibição da interação TIGIT/CD155 é avaliada medindo-se a ativação da sinalização de CD155-CD226 na célula (p. ex., através da ativação de um repórter a jusante). Um ensaio celular funcional exemplar é descrito na seção de Exemplos abaixo. Nesse ensaio funcional exemplar, a expressão de luciferase requer o envolvimento de TCR e um sinal coestimulador de CD155-CD226. Uma primeira célula (também referida como “célula T efetora”) expressa um complexo TCR, TIGIT e CD226 na superfície da célula e contém um gene luciferase. Uma segunda célula (também referida como “célula apresentadora de antígeno artificial”) expressa um ativador de TCR e CD155. A cocultura das células na ausência de anticorpo anti-TIGIT resulta em uma interação TIGIT-CD155 que inibe a coestimulação da célula efetora por CD155-CD226, impedindo a expressão de luciferase pela célula efetora. Na presença de um anticorpo anti-TIGIT que inibe a interação entre TIGIT e CD155, CD155 e CD226 são capazes de interagir e produzem um sinal coestimulador que impulsiona a expressão de luciferase na primeira célula. Tais ensaios celulares funcionais são descritos na técnica, p. ex., Cong et al., Genetic Engineering and Biotechnology News, 2015, 35(10):16-17 e estão também disponíveis comercialmente (p. ex., TIGIT/CD155 Blockade Bioassay Kit, Promega Corp., Madison, WI). Em algumas modalidades, um anticorpo anti-TIGIT que inibe a interação entre TIGIT e CD155 aumenta o nível ou volume de ativação da sinalização de CD155-CD226 (p. ex., conforme medido em um ensaio celular tal como o kit
67 / 207 TIGIT/CD155 Blockade Bioassay) em pelo menos 10%, pelo menos 20%, pelo menos 30%, pelo menos 40%, pelo menos 50%, pelo menos 60%, pelo menos 70%, pelo menos 80%, pelo menos 90% ou mais quando comparado ao nível ou volume da sinalização de CD155-CD226 na ausência do anticorpo anti-TIGIT. Em algumas modalidades, um anticorpo anti-TIGIT que inibe a interação entre TIGIT e CD155 aumenta o nível ou volume de ativação da sinalização de CD155-CD226 (p. ex., conforme medido em um ensaio celular tal como o kit TIGIT/CD155 Blockade Bioassay) em pelo menos aproximadamente 1,2 vez, pelo menos aproximadamente 1,5 vez, pelo menos aproximadamente 2 vezes, pelo menos aproximadamente 3 vezes, pelo menos aproximadamente 4 vezes, pelo menos aproximadamente 5 vezes, pelo menos aproximadamente 6 vezes, pelo menos aproximadamente 7 vezes, pelo menos aproximadamente 8 vezes, pelo menos aproximadamente 9 vezes, pelo menos aproximadamente 10 vezes ou mais quando comparado ao nível ou volume da sinalização de CD155-CD226 na ausência do anticorpo anti-TIGIT.
[00267] Em algumas modalidades, um anticorpo anti-TIGIT que se ligam ao TIGIT humano (e opcionalmente exibe reatividade cruzada com TIGIT de macaco Cynomolgus e/ou de camundongo e/ou opcionalmente inibe a interação entre TIGIT e CD155 e/ou CD112) exibe sinergia com um agente anti-PD-1 (p. ex., um anticorpo anti-PD-1). Em algumas modalidades, o anticorpo anti-TIGIT reforça o efeito do agente anti-PD-1 (p. ex., anticorpo anti-PD-1) em pelo menos aproximadamente 1,2 vez, pelo menos aproximadamente 1,5 vez, pelo menos aproximadamente 2 vezes, pelo menos aproximadamente 3 vezes, pelo menos aproximadamente 4 vezes, pelo menos aproximadamente 5 vezes, pelo menos aproximadamente 6 vezes, pelo menos aproximadamente 7 vezes, pelo menos aproximadamente 8 vezes, pelo menos aproximadamente 9 vezes, pelo menos aproximadamente 10 vezes ou mais.
[00268] Em algumas modalidades, o anticorpo anti-TIGIT exibe sinergia com um agente anti-PD-1 (p. ex., um anticorpo anti-PD-1) em um
68 / 207 bioensaio funcional, tal como um ensaio celular funcional no qual a inibição da sinalização de TIGIT e a inibição da sinalização de PD-1 são avaliadas medindo a ativação da sinalização em uma célula efetora. Um ensaio celular funcional exemplar é descrito na seção de Exemplos abaixo. Nesse ensaio funcional exemplar, uma primeira célula (também referida como “célula T efetora”) expressa um complexo de TCR, TIGIT, CD226 e PD-1 na superfície da célula e contém um gene luciferase. Uma segunda célula (também referida como “célula apresentadora de antígeno artificial”) expressa um ativador de TCR, CD155 e PD-L1. A expressão do gene luciferase pela célula efetora é ativada por qualquer ou ambos (1) bloqueio da interação TIGIT-CD155, permitindo assim a interação CD155-CD226 e coestimulação subsequente da expressão de luciferase pela célula efetora ou (2) bloqueio da interação PD- 1/PD-L1, amenizando, assim, a inibição da expressão de luciferase pela célula efetora. O nível de expressão de luciferase na ausência ou presença de anticorpos anti-TIGIT e agentes anti-PD-1 ou agentes anti-PD-L1 pode ser medido e quantificado para determinar se um anticorpo anti-TIGIT exibe sinergia com o agente anti-PD-1 ou o agente anti-PD-L1. Tais ensaios celulares funcionais são descritos na técnica (p. ex., Cong et al., Genetic Engineering and Biotechnology News, 2015, 35(10):16-17) e estão também disponíveis comercialmente (p. ex., PD-1/TIGIT Combination Bioassay Kit, Promega Corp., Madison, WI).
[00269] Em algumas modalidades, a eficácia de um anticorpo anti- TIGIT, bem como se o anticorpo anti-TIGIT inibe sinergicamente com um agente anti-PD-1 (p. ex., um anticorpo anti-PD-1) ou um agente anti-PD-L1 (p. ex., um anticorpo anti-PD-L1), pode ser medida utilizando um modelo in vivo, p. ex., um modelo tumoral in vivo. Por exemplo, a eficácia de um anticorpo anti-TIGIT como aqui descrito, ou a eficácia de um anticorpo anti- TIGIT como aqui descrito quando administrado em combinação com um agente anti-PD-1 ou um agente anti-PD-L1 pode ser avaliada utilizando um
69 / 207 modelo de tumor singênico em camundongo. Modelos adequados de tumor singênico são descritos na técnica. Ver, p. ex., Rios-Doria et al., Neoplasia, 2015, 17:661-670; e Moynihan et al., Nature Medicine, 2016, doi:10.1038/nm.4200. Em algumas modalidades, um anticorpo anti-TIGIT reduz o tamanho de um tumor ou o número global de tumores em um modelo in vivo em pelo menos 10%, pelo menos 20%, pelo menos 30%, pelo menos 40%, pelo menos 50%, pelo menos 60%, pelo menos 70%, pelo menos 80%, pelo menos 90% ou mais quando comparado a um valor controle ou de referência (p. ex., quando comparado ao tamanho do tumor ou número global de tumores em um controle não tratado).
[00270] Em algumas modalidades, um anticorpo anti-TIGIT reconhece um epítopo de TIGIT humano que compreende uma ou ambas as posições 81 e 82 de aminoácidos, como numerados com referência a SEQ ID NO:218. Em algumas modalidades, um anticorpo anti-TIGIT reconhece um epítopo que compreende Phe na posição 81. Em algumas modalidades, um anticorpo anti- TIGIT reconhece um epítopo que compreende Lys ou Ser na posição 82. Em algumas modalidades, um anticorpo anti-TIGIT reconhece um epítopo que compreende Phe na posição 81 e Lys na posição 82. Em algumas modalidades, um anticorpo anti-TIGIT reconhece um epítopo que compreende Phe na posição 81 e Ser na posição 82.
[00271] Em algumas modalidades, um anticorpo anti-TIGIT reconhece um epítopo linear que compreende uma ou ambas as posições 81 e 82 de aminoácidos (p. ex., um epítopo linear que compreende Phe na posição 81 e Lys ou Ser na posição 82). Em algumas modalidades, um anticorpo anti- TIGIT reconhece um epítopo descontínuo que compreende uma ou ambas as posições 81 e 82 de aminoácidos (p. ex., um epítopo descontínuo que compreende Phe na posição 81 e Lys ou Ser na posição 82).
[00272] Em algumas modalidades, um anticorpo anti-TIGIT liga-se a um epítopo em TIGIT humano que compreende ainda uma ou mais (p. ex., 1,
70 / 207 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 12, 13, 14, 15 ou mais) das posições de aminoácido 51, 52, 53, 54, 55, 73, 74, 75, 76, 77, 79, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92 ou 93. Em algumas modalidades, um anticorpo anti-TIGIT liga-se a um epítopo em TIGIT humano que compreende ainda um ou mais (p. ex., 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 12, 13, 14, 15 ou mais) dos seguintes: Thr na posição 51, Ala na posição 52, Glu ou Gln na posição 53, Val na posição 54, Thr na posição 55, Leu na posição 73, Gly na posição 74, Trp na posição 75, His na posição 76, Val ou Ile na posição 77, Ser ou Pro na posição 79, Asp na posição 83, Arg na posição 84, Val na posição 85, Val ou Ala na posição 86, Pro na posição 87, Gly na posição 88, Pro na posição 89, Ser ou Gly na posição 90, Leu na posição 91, Gly na posição 92 ou Leu na posição 93. Em algumas modalidades, um anticorpo anti-TIGIT liga-se a um epítopo em TIGIT humano que compreende ainda um ou mais (p. ex., 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 12, 13, 14, 15 ou mais) dos resíduos de aminoácidos Thr51, Ala52, Gln53, Val54, Thr55, Leu73, Gly74, Trp75, His76, Ile77, Pro79, Asp83, Arg84, Val85, Ala86, Pro87, Gly88, Pro89, Gly90, Leu91, Gly92 e Leu93.
[00273] Em algumas modalidades, um anticorpo anti-TIGIT reconhece um epítopo que compreende Phe na posição 81 e Lys ou Ser na posição 82 e compreende ainda Thr na posição 51, Ala na posição 52, Glu ou Gln na posição 53, Val na posição 54 e/ou Thr na posição 55. Em algumas modalidades, um anticorpo anti-TIGIT reconhece um epítopo que compreende Phe na posição 81 e Lys ou Ser na posição 82 e compreende ainda Gly na posição 74, Trp na posição 75, His na posição 76 e/ou Val ou Ile na posição 77. Em algumas modalidades, um anticorpo anti-TIGIT reconhece um epítopo que compreende Phe na posição 81 e Lys ou Ser na posição 82 e compreende ainda Pro na posição 87, Gly na posição 88, Pro na posição 89, Ser ou Gly na posição 90, Leu na posição 91, Gly na posição 92 e/ou Leu na posição 93. Em algumas modalidades, um anticorpo anti-TIGIT reconhece um epítopo compreendendo os resíduos de aminoácidos Thr51, Ala52, Gln53,
71 / 207 Val54, Thr55, Gly74, Trp75, His76, Ile77, Phe81, Lys82, Pro87, Gly88, Pro89, Gly90, Leu91, Gly92 e Leu93.
[00274] Em algumas modalidades, um anticorpo anti-TIGIT reconhece um epítopo que compreende Phe na posição 81 e Lys ou Ser na posição 82 e compreende ainda Ala na posição 52 e/ou Glu ou Gln na posição 53. Em algumas modalidades, um anticorpo anti-TIGIT reconhece um epítopo que compreende Phe na posição 81 e Lys ou Ser na posição 82 e compreende ainda Leu na posição 73, Gly na posição 74 e/ou Trp na posição 75. Em algumas modalidades, um anticorpo anti-TIGIT reconhece um epítopo que compreende Phe na posição 81 e Lys ou Ser na posição 82 e compreende ainda Asp na posição 83, Arg na posição 84, Val na posição 85 e/ou Val ou Ala na posição 86. Em algumas modalidades, um anticorpo anti-TIGIT reconhece um epítopo compreendendo os resíduos de aminoácidos Ala52, Gln53, Leu73, Gly74, Trp75, Pro79, Phe81, Lys82, Asp83, Arg84, Val85 e Ala86.
[00275] Em algumas modalidades, um anticorpo anti-TIGIT reconhece um epítopo de TIGIT humano compreendendo a sequência ICNADLGWHISPSFK (SEQ ID NO:258), que corresponde aos resíduos 68- 82 de TIGIT humano (SEQ ID NO:218). Em algumas modalidades, um anticorpo anti-TIGIT reconhece um epítopo de TIGIT humano que consiste na sequência ICNADLGWHISPSFK (SEQ ID NO:258). Certas sequências do anticorpo anti-TIGIT
[00276] Em algumas modalidades, um anticorpo anti-TIGIT que se ligam ao TIGIT humano e que exibe opcionalmente reatividade cruzada com TIGIT de macaco Cynomolgus e com TIGIT de camundongo compreende uma sequência da região variável da cadeia leve, ou uma porção da mesma, e/ou uma sequência da região variável da cadeia pesada, ou uma porção da mesma, derivada de qualquer um dos anticorpos seguintes aqui descritos: Clone 2, Clone 2C, Clone 3, Clone 5, Clone 13, Clone 13A, Clone 13B,
72 / 207 Clone 13C, Clone 13D, Clone 14, Clone 16, Clone 16C, Clone 16D, Clone 16E, Clone 18, Clone 21, Clone 22, Clone 25, Clone 25A, Clone 25B, Clone 25C, Clone 25D, Clone 25E, Clone 27 ou Clone 54. As sequências de aminoácidos da CDR, do domínio variável da cadeia leve (VL) e do domínio variável da cadeia pesada (VH) dos anticorpos anti-TIGIT Clone 2, Clone 2C, Clone 3, Clone 5, Clone 13, Clone 13A, Clone 13B, Clone 13C, Clone 13D, Clone 14, Clone 16, Clone 16C, Clone 16D, Clone 16E, Clone 18, Clone 21, Clone 22, Clone 25, Clone 25A, Clone 25B, Clone 25C, Clone 25D, Clone 25E, Clone 27 e Clone 54 são apresentadas na Tabela de sequências abaixo.
[00277] Em algumas modalidades, um anticorpo anti-TIGIT compreende uma região variável da cadeia pesada (VH) compreendendo uma sequência de aminoácidos com pelo menos 90% de identidade de sequência (p. ex., pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98% ou pelo menos 99% de identidade de sequência) com SEQ ID NO:1, SEQ ID NO:19, SEQ ID NO:37, SEQ ID NO:55, SEQ ID NO:73, SEQ ID NO:91, SEQ ID NO:109, SEQ ID NO:127, SEQ ID NO:145, SEQ ID NO:163, SEQ ID NO:181, SEQ ID NO:199, SEQ ID NO:245, SEQ ID NO:246, SEQ ID NO:247, SEQ ID NO:248, SEQ ID NO:249, SEQ ID NO:250, SEQ ID NO:251, SEQ ID NO:252, SEQ ID NO:253, SEQ ID NO:254, SEQ ID NO:255, SEQ ID NO:256 ou SEQ ID NO:257. Em algumas modalidades, um anticorpo anti-TIGIT compreende uma VH compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:1, SEQ ID NO:19, SEQ ID NO:37, SEQ ID NO:55, SEQ ID NO:73, SEQ ID NO:91, SEQ ID NO:109, SEQ ID NO:127, SEQ ID NO:145, SEQ ID NO:163, SEQ ID NO:181, SEQ ID NO:199, SEQ ID NO:245, SEQ ID NO:246, SEQ ID NO:247, SEQ ID NO:248, SEQ ID NO:249, SEQ ID NO:250, SEQ ID NO:251, SEQ ID NO:252, SEQ ID NO:253, SEQ ID NO:254, SEQ ID NO:255, SEQ ID NO:256 ou SEQ ID NO:257. Em algumas modalidades, uma sequência de VH tendo pelo menos
73 / 207 90% de identidade de sequência com uma sequência de referência (p. ex., SEQ ID NO:1, SEQ ID NO:19, SEQ ID NO:37, SEQ ID NO:55, SEQ ID NO:73, SEQ ID NO:91, SEQ ID NO:109, SEQ ID NO:127, SEQ ID NO:145, SEQ ID NO:163, SEQ ID NO:181, SEQ ID NO:199, SEQ ID NO:245, SEQ ID NO:246, SEQ ID NO:247, SEQ ID NO:248, SEQ ID NO:249, SEQ ID NO:250, SEQ ID NO:251, SEQ ID NO:252, SEQ ID NO:253, SEQ ID NO:254, SEQ ID NO:255, SEQ ID NO:256 ou SEQ ID NO:257) contém uma, duas, três, quatro, cinco, seis, sete, oito, nove, dez ou mais substituições (p. ex., substituições conservadoras), inserções ou deleções em relação à sequência de referência, mas retém a capacidade para se ligar a TIGIT humano e, opcionalmente, retém a capacidade para bloquear a ligação de CD155 e/ou CD112 a TIGIT.
[00278] Em algumas modalidades, um anticorpo anti-TIGIT compreende uma região variável da cadeia leve (VL) compreendendo uma sequência de aminoácidos com pelo menos 90% de identidade de sequência (p. ex., pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98% ou pelo menos 99% de identidade de sequência) com SEQ ID NO:10, SEQ ID NO:28, SEQ ID NO:46, SEQ ID NO:64, SEQ ID NO:82, SEQ ID NO:100, SEQ ID NO:118, SEQ ID NO:136, SEQ ID NO:154, SEQ ID NO:172, SEQ ID NO:190 ou SEQ ID NO:208. Em algumas modalidades, um anticorpo anti- TIGIT compreende uma VL compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:10, SEQ ID NO:28, SEQ ID NO:46, SEQ ID NO:64, SEQ ID NO:82, SEQ ID NO:100, SEQ ID NO:118, SEQ ID NO:136, SEQ ID NO:154, SEQ ID NO:172, SEQ ID NO:190 ou SEQ ID NO:208. Em algumas modalidades, uma sequência de VL tendo pelo menos 90% de identidade de sequência com uma sequência de referência (p. ex., SEQ ID NO:10, SEQ ID NO:28, SEQ ID NO:46, SEQ ID NO:64, SEQ ID NO:82, SEQ ID NO:100, SEQ ID NO:118, SEQ ID NO:136, SEQ ID NO:154, SEQ ID NO:172, SEQ
74 / 207 ID NO:190 ou SEQ ID NO:208) contém uma, duas, três, quatro, cinco, seis, sete, oito, nove, dez ou mais substituições (p. ex., substituições conservadoras), inserções ou deleções em relação à sequência de referência, mas retém a capacidade para se ligar a TIGIT humano e, opcionalmente, retém a capacidade para bloquear a ligação de CD155 e/ou CD112 to TIGIT.
[00279] Em algumas modalidades, um anticorpo anti-TIGIT compreende uma região variável da cadeia pesada compreendendo uma sequência de aminoácidos com pelo menos 90% de identidade de sequência (p. ex., pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98% ou pelo menos 99% de identidade de sequência) com SEQ ID NO:1, SEQ ID NO:19, SEQ ID NO:37, SEQ ID NO:55, SEQ ID NO:73, SEQ ID NO:91, SEQ ID NO:109, SEQ ID NO:127, SEQ ID NO:145, SEQ ID NO:163, SEQ ID NO:181, SEQ ID NO:199, SEQ ID NO:245, SEQ ID NO:246, SEQ ID NO:247, SEQ ID NO:248, SEQ ID NO:249, SEQ ID NO:250, SEQ ID NO:251, SEQ ID NO:252, SEQ ID NO:253, SEQ ID NO:254, SEQ ID NO:255, SEQ ID NO:256 ou SEQ ID NO:257 e compreende ainda uma região variável da cadeia leve compreendendo uma sequência de aminoácidos com pelo menos 90% de identidade de sequência (p. ex., pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98% ou pelo menos 99% de identidade de sequência) com SEQ ID NO:10, SEQ ID NO:28, SEQ ID NO:46, SEQ ID NO:64, SEQ ID NO:82, SEQ ID NO:100, SEQ ID NO:118, SEQ ID NO:136, SEQ ID NO:154, SEQ ID NO:172, SEQ ID NO:190 ou SEQ ID NO:208. Em algumas modalidades, um anticorpo anti-TIGIT compreende uma região variável da cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:1, SEQ ID NO:19, SEQ ID NO:37, SEQ ID NO:55, SEQ ID NO:73, SEQ ID NO:91, SEQ ID NO:109, SEQ ID NO:127, SEQ ID NO:145, SEQ ID NO:163, SEQ ID NO:181, SEQ ID
75 / 207 NO:199, SEQ ID NO:245, SEQ ID NO:246, SEQ ID NO:247, SEQ ID NO:248, SEQ ID NO:249, SEQ ID NO:250, SEQ ID NO:251, SEQ ID NO:252, SEQ ID NO:253, SEQ ID NO:254, SEQ ID NO:255, SEQ ID NO:256 ou SEQ ID NO:257 e compreende ainda uma região variável da cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:10, SEQ ID NO:28, SEQ ID NO:46, SEQ ID NO:64, SEQ ID NO:82, SEQ ID NO:100, SEQ ID NO:118, SEQ ID NO:136, SEQ ID NO:154, SEQ ID NO:172, SEQ ID NO:190 ou SEQ ID NO:208.
[00280] Em algumas modalidades, um anticorpo anti-TIGIT compreende: (a) uma VH compreendendo uma sequência de aminoácidos com pelo menos 90% de identidade de sequência (p. ex., pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98% ou pelo menos 99% de identidade de sequência) com SEQ ID NO:1 ou SEQ ID NO:245 e uma VL compreendendo uma sequência de aminoácidos com pelo menos 90% de identidade de sequência (p. ex., pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98% ou pelo menos 99% de identidade de sequência) com SEQ ID NO:10; (b) uma VH compreendendo uma sequência de aminoácidos com pelo menos 90% de identidade de sequência (p. ex., pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98% ou pelo menos 99% de identidade de sequência) com SEQ ID NO:19 e uma VL compreendendo uma sequência de aminoácidos com pelo menos 90% de identidade de sequência (p. ex., pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98% ou pelo menos 99% de identidade de sequência) com SEQ ID NO:28;
76 / 207
(c) uma VH compreendendo uma sequência de aminoácidos com pelo menos 90% de identidade de sequência (p. ex., pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98% ou pelo menos 99% de identidade de sequência) com SEQ ID NO:37 e uma VL compreendendo uma sequência de aminoácidos com pelo menos 90% de identidade de sequência (p. ex., pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98% ou pelo menos 99% de identidade de sequência) com SEQ ID NO:46; (d) uma VH compreendendo uma sequência de aminoácidos com pelo menos 90% de identidade de sequência (p. ex., pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98% ou pelo menos 99% de identidade de sequência) com qualquer uma dentre SEQ ID NO:55, SEQ ID NO:246, SEQ ID NO:247, SEQ ID NO:248 ou SEQ ID NO:249 e uma VL compreendendo uma sequência de aminoácidos com pelo menos 90% de identidade de sequência (p. ex., pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98% ou pelo menos 99% de identidade de sequência) com SEQ ID NO:64; (e) uma VH compreendendo uma sequência de aminoácidos com pelo menos 90% de identidade de sequência (p. ex., pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98% ou pelo menos 99% de identidade de sequência) com SEQ ID NO:73 e uma VL compreendendo uma sequência de aminoácidos com pelo menos 90% de identidade de sequência (p. ex., pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98% ou pelo menos 99% de identidade de sequência) com SEQ ID NO:82;
77 / 207
(f) uma VH compreendendo uma sequência de aminoácidos com pelo menos 90% de identidade de sequência (p. ex., pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98% ou pelo menos 99% de identidade de sequência) com qualquer uma dentre SEQ ID NO:91, SEQ ID NO:250, SEQ ID NO:251 ou SEQ ID NO:252 e uma VL compreendendo uma sequência de aminoácidos com pelo menos 90% de identidade de sequência (p. ex., pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98% ou pelo menos 99% de identidade de sequência) com SEQ ID NO:100; (g) uma VH compreendendo uma sequência de aminoácidos com pelo menos 90% de identidade de sequência (p. ex., pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98% ou pelo menos 99% de identidade de sequência) com SEQ ID NO:109 e uma VL compreendendo uma sequência de aminoácidos com pelo menos 90% de identidade de sequência (p. ex., pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98% ou pelo menos 99% de identidade de sequência) com SEQ ID NO:118; (h) uma VH compreendendo uma sequência de aminoácidos com pelo menos 90% de identidade de sequência (p. ex., pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98% ou pelo menos 99% de identidade de sequência) com SEQ ID NO:127 e uma VL compreendendo uma sequência de aminoácidos com pelo menos 90% de identidade de sequência (p. ex., pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98% ou pelo menos 99% de identidade de sequência) com SEQ ID NO:136; (i) uma VH compreendendo uma sequência de aminoácidos
78 / 207 com pelo menos 90% de identidade de sequência (p. ex., pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98% ou pelo menos 99% de identidade de sequência) com SEQ ID NO:145 e uma VL compreendendo uma sequência de aminoácidos com pelo menos 90% de identidade de sequência (p. ex., pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98% ou pelo menos 99% de identidade de sequência) com SEQ ID NO:154; (j) uma VH compreendendo uma sequência de aminoácidos com pelo menos 90% de identidade de sequência (p. ex., pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98% ou pelo menos 99% de identidade de sequência) com qualquer uma dentre SEQ ID NO:163, SEQ ID NO:253, SEQ ID NO:254, SEQ ID NO:255, SEQ ID NO:256 ou SEQ ID NO:257 e uma VL compreendendo uma sequência de aminoácidos com pelo menos 90% de identidade de sequência (p. ex., pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98% ou pelo menos 99% de identidade de sequência) com SEQ ID NO:172; (k) uma VH compreendendo uma sequência de aminoácidos com pelo menos 90% de identidade de sequência (p. ex., pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98% ou pelo menos 99% de identidade de sequência) com SEQ ID NO:181 e uma VL compreendendo uma sequência de aminoácidos com pelo menos 90% de identidade de sequência (p. ex., pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98% ou pelo menos 99% de identidade de sequência) com SEQ ID NO:190; ou
79 / 207 (l) uma VH compreendendo uma sequência de aminoácidos com pelo menos 90% de identidade de sequência (p. ex., pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98% ou pelo menos 99% de identidade de sequência) to SEQ ID NO:199 e uma VL compreendendo uma sequência de aminoácidos com pelo menos 90% de identidade de sequência (p. ex., pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98% ou pelo menos 99% de identidade de sequência) com SEQ ID NO:208.
[00281] Em algumas modalidades, um anticorpo anti-TIGIT compreende: (a) uma VH compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:1 e uma VL compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:10; (b) uma VH compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:19 e uma VL compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:28; (c) uma VH compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:37 e uma VL compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:46; (d) uma VH compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:55 e uma VL compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:64; (e) uma VH compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:73 e uma VL compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:82; (f) uma VH compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:91 e uma VL compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:100;
80 / 207
(g) uma VH compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:109 e uma VL compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:118; (h) uma VH compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:127 e uma VL compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:136; (i) uma VH compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:145 e uma VL compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:154; (j) uma VH compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:163 e uma VL compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:172; (k) uma VH compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:181 e uma VL compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:190; (l) uma VH compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:199 e uma VL compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:208; ou (m) uma VH compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:245 e uma VL compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:10; ou (n) uma VH compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:246 e uma VL compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:64; ou (o) uma VH compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:247 e uma VL compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:64; ou (p) uma VH compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:248 e uma VL compreendendo a sequência de aminoácidos de
81 / 207 SEQ ID NO:64; (q) uma VH compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:249 e uma VL compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:64; ou (r) uma VH compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:250 e uma VL compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:100; ou (s) uma VH compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:251 e uma VL compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:100; ou (t) uma VH compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:252 e uma VL compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:100; ou (u) uma VH compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:253 e uma VL compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:172; ou (v) uma VH compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:254 e uma VL compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:172; ou (w) uma VH compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:255 e uma VL compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:172; ou (x) uma VH compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:256 e uma VL compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:172; ou (y) uma VH compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:257 e uma VL compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:172.
[00282] Em algumas modalidades, um anticorpo anti-TIGIT
82 / 207 compreende CDR1, CDR2 e CDR3 da cadeia pesada e CDR1, CDR2 e CDR3 da cadeia leve, em que uma ou mais (p. ex., uma, duas, três, quatro, cinco ou seis) das CDRs são selecionadas dentre as CDR1, CDR2 e CDR3 da cadeia pesada e as CDR1, CDR2 e CDR3 da cadeia leve mostradas nas Tabelas A, B, C, D e E. Tabela A: Definições de CDRs alternativas para o Clone 13 Definição de CDR1 de cadeia SEQ ID CDR2 DE HC SEQ ID CDR3 DE HC SEQ ID CDR pesada (HC) NO NO NO Compósito GTFSSYAIS 58 SIIPIFGTANYAQK 60 ARGPSEVGAILGY 62
FQG VWFDP IMGT GGTFSSYA 283 IIPIFGTA 285 ARGPSEVGAILGY 62
VWFDP Kabat SYAIS 284 SIIPIFGTANYAQK 60 GPSEVGAILGYV 286
FQG WFDP Definição de CDR1 de cadeia SEQ ID CDR2 DE LC SEQ ID CDR3 DE LC SEQ ID CDR leve (LC) NO NO NO Compósito RSSQSLLHSNGYN 67 LGSNRAS 69 MQARRIPIT 71
YLD IMGT QSLLHSNGYNY 287 LGS 288 MQARRIPIT 71 Kabat RSSQSLLHSNGYN 67 LGSNRAS 69 MQARRIPIT 71
YLD Tabela B: Definições de CDRs alternativas para o Clone 13A Definição de CDR1 de cadeia SEQ ID CDR2 DE HC SEQ ID CDR3 DE HC SEQ ID NO CDR pesada (HC) NO NO Compósito GTFLSSAIS 224 SLIPYFGTANYAQ 225 ARGPSEVGAILG 62
KFQG YVWFDP IMGT GGTFLSSA 293 LIPYFGTA 297 ARGPSEVGAILG 62
YVWFDP Kabat SSAIS 294 SLIPYFGTANYAQ 225 GPSEVGAILGYV 286
KFQG WFDP Definição de CDR1 de cadeia SEQ ID CDR2 DE LC SEQ ID CDR3 DE LC SEQ ID CDR leve (LC) NO NO NO Compósito RSSQSLLHSNGYN 67 LGSNRAS 69 MQARRIPIT 71
YLD IMGT QSLLHSNGYNY 287 LGS 288 MQARRIPIT 71 Kabat RSSQSLLHSNGYN 67 LGSNRAS 69 MQARRIPIT 71
YLD Tabela C: Definições de CDRs alternativas para o Clone 13B Definição de CDR1 de cadeia SEQ ID CDR2 DE HC SEQ ID CDR3 DE HC SEQ ID CDR pesada (HC) NO NO NO Compósito GTFSAWAIS 226 SIIPYFGKANYAQ 227 ARGPSEVSGILGY 228
KFQG VWFDP IMGT GGTFSAWA 289 IIPYFGKA 291 ARGPSEVSGILGY 228
VWFDP Kabat AWAIS 290 SIIPYFGKANYAQ 227 GPSEVSGILGYV 292
KFQG WFDP Definição de CDR1 de cadeia SEQ ID CDR2 DE LC SEQ ID CDR3 DE LC SEQ ID CDR leve (LC) NO NO NO Compósito RSSQSLLHSNGYN 67 LGSNRAS 69 MQARRIPIT 71
YLD IMGT QSLLHSNGYNY 287 LGS 288 MQARRIPIT 71
83 / 207 Definição de CDR1 de cadeia SEQ ID CDR2 DE HC SEQ ID CDR3 DE HC SEQ ID CDR pesada (HC) NO NO NO Kabat RSSQSLLHSNGYN 67 LGSNRAS 69 MQARRIPIT 71
YLD Tabela D: Definições de CDRs alternativas para o Clone 13C Definição de CDR1 de cadeia SEQ ID CDR2 DE HC SEQ ID CDR3 DE HC SEQ ID CDR pesada (HC) NO NO NO Compósito GTFLSSAIS 224 SIIPLFGKANYAQ 229 ARGPSEVKGILGY 230
KFQG VWFDP IMGT GGTFLSSA 293 IIPLFGKA 295 ARGPSEVKGILGY 230
VWFDP Kabat SSAIS 294 SIIPLFGKANYAQ 229 GPSEVKGILGYV 296
KFQG WFDP Definição de CDR1 de cadeia SEQ ID CDR2 DE LC SEQ ID CDR3 DE LC SEQ ID CDR leve (LC) NO NO NO Compósito RSSQSLLHSNGYN 67 LGSNRAS 69 MQARRIPIT 71
YLD IMGT QSLLHSNGYNY 287 LGS 288 MQARRIPIT 71 Kabat RSSQSLLHSNGYN 67 LGSNRAS 69 MQARRIPIT 71
YLD Tabela E: Definições de CDRs alternativas para o Clone 13D Definição de CDR1 de cadeia SEQ ID CDR2 DE HC SEQ ID CDR3 DE HC SEQ ID CDR pesada (HC) NO NO NO Compósito GTFLSSAIS 224 SIIPYFGKANYAQ 227 ARGPSEVKGILGY 230
KFQG VWFDP IMGT GGTFLSSA 293 IIPYFGKA 290 ARGPSEVKGILGY 230
VWFDP Kabat SSAIS 294 SIIPYFGKANYAQ 227 GPSEVKGILGYV 296
KFQG WFDP Definição de CDR1 de cadeia SEQ ID CDR2 DE LC SEQ ID CDR3 DE LC SEQ ID CDR leve (LC) NO NO NO Compósito RSSQSLLHSNGYN 67 LGSNRAS 69 MQARRIPIT 71
YLD IMGT QSLLHSNGYNY 287 LGS 288 MQARRIPIT 71 Kabat RSSQSLLHSNGYN 67 LGSNRAS 69 MQARRIPIT 71
YLD
[00283] Em algumas modalidades, um anticorpo anti-TIGIT compreende uma ou mais (p. ex., uma, duas, três, quatro, cinco ou seis) de: uma sequência de CDR1 da cadeia pesada compreendendo uma sequência de aminoácidos selecionada dentre SEQ ID NO:58, SEQ ID NO:283, SEQ ID NO:284, SEQ ID NO:224, SEQ ID NO:293, SEQ ID NO:294, SEQ ID NO:226, SEQ ID NO:289 e SEQ ID NO:290; uma sequência de CDR2 da cadeia pesada compreendendo uma sequência de aminoácidos selecionada dentre SEQ ID NO:60, SEQ ID NO:285, SEQ ID NO:225, SEQ ID NO:297, SEQ ID NO:227, SEQ ID NO:291, SEQ ID NO:229 e SEQ ID NO:295;
84 / 207 uma sequência de CDR3 da cadeia pesada compreendendo uma sequência de aminoácidos selecionada dentre SEQ ID NO:62, SEQ ID NO:286, SEQ ID NO:228, SEQ ID NO:292, SEQ ID NO:230 e SEQ ID NO:296; uma sequência de CDR1 da cadeia leve compreendendo uma sequência de aminoácidos selecionada dentre SEQ ID NO:67 e SEQ ID NO:287; uma sequência de CDR2 da cadeia leve compreendendo uma sequência de aminoácidos selecionada dentre SEQ ID NO:69 e SEQ ID NO:288; e/ou uma sequência de CDR3 da cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:71.
[00284] Em algumas modalidades, um anticorpo anti-TIGIT compreende uma sequência de CDR1 da cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos de qualquer uma dentre SEQ ID NO:58, SEQ ID NO:283, SEQ ID NO:284, SEQ ID NO:224, SEQ ID NO:293, SEQ ID NO:294, SEQ ID NO:226, SEQ ID NO:289 ou SEQ ID NO:290; uma sequência de CDR2 da cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos de qualquer uma dentre SEQ ID NO:60, SEQ ID NO:285, SEQ ID NO:225, SEQ ID NO:297, SEQ ID NO:227, SEQ ID NO:291, SEQ ID NO:229 ou SEQ ID NO:295; uma sequência de CDR3 da cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos de qualquer uma dentre SEQ ID NO:62, SEQ ID NO:286, SEQ ID NO:228, SEQ ID NO:292, SEQ ID NO:230 ou SEQ ID NO:296; uma sequência de CDR1 da cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos de qualquer uma dentre SEQ ID NO:67 ou SEQ ID NO:287; uma sequência de CDR2 da cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos de qualquer uma dentre SEQ ID NO:69 ou SEQ ID NO:288; e uma sequência de CDR3 da cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:71.
85 / 207
[00285] Em algumas modalidades, um anticorpo anti-TIGIT compreende uma sequência de CDR1 da cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos de qualquer uma dentre SEQ ID NO:58, SEQ ID NO:283, SEQ ID NO:284, SEQ ID NO:224, SEQ ID NO:293, SEQ ID NO:294, SEQ ID NO:226, SEQ ID NO:289 ou SEQ ID NO:290; uma sequência de CDR2 da cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos de qualquer uma dentre SEQ ID NO:60, SEQ ID NO:285, SEQ ID NO:225, SEQ ID NO:297, SEQ ID NO:227, SEQ ID NO:291, SEQ ID NO:229 ou SEQ ID NO:295; e uma sequência de CDR3 da cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos de qualquer uma dentre SEQ ID NO:62, SEQ ID NO:286, SEQ ID NO:228, SEQ ID NO:292, SEQ ID NO:230 ou SEQ ID NO:296.
[00286] Em algumas modalidades, um anticorpo anti-TIGIT compreende uma sequência de CDR1 da cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos de qualquer uma dentre SEQ ID NO:67 ou SEQ ID NO:287; uma sequência de CDR2 da cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos de qualquer uma dentre SEQ ID NO:69 ou SEQ ID NO:288; e uma sequência de CDR3 da cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:71.
[00287] Em algumas modalidades, um anticorpo anti-TIGIT compreende: (i) uma sequência de CDR1 da cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:58, SEQ ID NO:283 ou SEQ ID NO:284; (ii) uma sequência de CDR2 da cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:60 ou SEQ ID NO:285; (iii) uma sequência de CDR3 da cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:62 ou SEQ ID NO:286; (iv) uma sequência de CDR1 da cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:67 ou SEQ ID NO:287; (v) uma sequência de CDR2 da cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:69 ou SEQ ID
86 / 207 NO:288; e (vi) uma sequência de CDR3 da cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:71.
[00288] Em algumas modalidades, um anticorpo anti-TIGIT compreende: (i) uma sequência de CDR1 da cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:224, SEQ ID NO:293 ou SEQ ID NO:294; (ii) uma sequência de CDR2 da cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:225 ou SEQ ID NO:297; (iii) uma sequência de CDR3 da cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:62 ou SEQ ID NO:286; (iv) uma sequência de CDR1 da cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:67 ou SEQ ID NO:287; (v) uma sequência de CDR2 da cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:69 ou SEQ ID NO:288; e (vi) uma sequência de CDR3 da cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:71.
[00289] Em algumas modalidades, um anticorpo anti-TIGIT compreende: (i) uma sequência de CDR1 da cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:226, SEQ ID NO:289 ou SEQ ID NO:290; (ii) uma sequência de CDR2 da cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:227 ou SEQ ID NO:291; (iii) uma sequência de CDR3 da cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:228 ou SEQ ID NO:292; (iv) uma sequência de CDR1 da cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:67 ou SEQ ID NO:287; (v) uma sequência de CDR2 da cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:69 ou SEQ ID NO:288; e (vi) uma sequência de CDR3 da cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:71.
[00290] Em algumas modalidades, um anticorpo anti-TIGIT compreende: (i) uma sequência de CDR1 da cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:224, SEQ ID NO:293 ou SEQ ID
87 / 207 NO:294; (ii) uma sequência de CDR2 da cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:229 ou SEQ ID NO:295; (iii) uma sequência de CDR3 da cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:230 ou SEQ ID NO:296; (iv) uma sequência de CDR1 da cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:67 ou SEQ ID NO:287; (v) uma sequência de CDR2 da cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:69 ou SEQ ID NO:288; e (vi) uma sequência de CDR3 da cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:71.
[00291] Em algumas modalidades, um anticorpo anti-TIGIT compreende: (i) uma sequência de CDR1 da cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:224, SEQ ID NO:293 ou SEQ ID NO:294; (ii) uma sequência de CDR2 da cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:227 ou SEQ ID NO:290; (iii) uma sequência de CDR3 da cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:230 ou SEQ ID NO:296; (iv) uma sequência de CDR1 da cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:67 ou SEQ ID NO:287; (v) uma sequência de CDR2 da cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:69 ou SEQ ID NO:288; e (vi) uma sequência de CDR3 da cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:71.
[00292] Em algumas modalidades, um anticorpo anti-TIGIT compreende uma ou mais (p. ex., uma, duas, três, quatro, cinco ou seis) dentre: uma sequência de CDR1 da cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos de qualquer uma dentre SEQ ID NO:4, SEQ ID NO:22, SEQ ID NO:40, SEQ ID NO:58, SEQ ID NO:76, SEQ ID NO:94, SEQ ID NO:112, SEQ ID NO:130, SEQ ID NO:148, SEQ ID NO:166, SEQ ID NO:184, SEQ ID NO:202, SEQ ID NO:221, SEQ ID NO:224, SEQ ID
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NO:226, SEQ ID NO:231, SEQ ID NO:233, SEQ ID NO:239, SEQ ID NO:243, SEQ ID NO:283, SEQ ID NO:284, SEQ ID NO:293, SEQ ID NO:294, SEQ ID NO:289 ou SEQ ID NO:290; uma sequência de CDR2 da cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos de qualquer uma dentre SEQ ID NO:6, SEQ ID NO:24, SEQ ID NO:42, SEQ ID NO:60, SEQ ID NO:78, SEQ ID NO:96, SEQ ID NO:114, SEQ ID NO:132, SEQ ID NO:150, SEQ ID NO:168, SEQ ID NO:186, SEQ ID NO:204, SEQ ID NO:222, SEQ ID NO:225, SEQ ID NO:227, SEQ ID NO:229, SEQ ID NO:232, SEQ ID NO:234, SEQ ID NO:238, SEQ ID NO:240, SEQ ID NO:285, SEQ ID NO:297, SEQ ID NO:291 ou SEQ ID NO:295; uma sequência de CDR3 da cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos de qualquer uma dentre SEQ ID NO:8, SEQ ID NO:26, SEQ ID NO:44, SEQ ID NO:62, SEQ ID NO:80, SEQ ID NO:98, SEQ ID NO:116, SEQ ID NO:134, SEQ ID NO:152, SEQ ID NO:170, SEQ ID NO:188, SEQ ID NO:206, SEQ ID NO:223, SEQ ID NO:228, SEQ ID NO:230, SEQ ID NO:235, SEQ ID NO:236, SEQ ID NO:237, SEQ ID NO:241, SEQ ID NO:242, SEQ ID NO:244, SEQ ID NO:286, SEQ ID NO:292 ou SEQ ID NO:296; uma sequência de CDR1 da cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos de qualquer uma dentre SEQ ID NO:13, SEQ ID NO:31, SEQ ID NO:49, SEQ ID NO:67, SEQ ID NO:85, SEQ ID NO:103, SEQ ID NO:121, SEQ ID NO:139, SEQ ID NO:157, SEQ ID NO:175, SEQ ID NO:193, SEQ ID NO:211 ou SEQ ID NO:287; uma sequência de CDR2 da cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos de qualquer uma dentre SEQ ID NO:15, SEQ ID NO:33, SEQ ID NO:51, SEQ ID NO:69, SEQ ID NO:87, SEQ ID NO:105, SEQ ID NO:123, SEQ ID NO:141, SEQ ID NO:159, SEQ ID NO:177, SEQ ID NO:195, SEQ ID NO:213 ou SEQ ID NO:288; e/ou
89 / 207 uma sequência de CDR3 da cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos de qualquer uma dentre SEQ ID NO:17, SEQ ID NO:35, SEQ ID NO:53, SEQ ID NO:71, SEQ ID NO:89, SEQ ID NO:107, SEQ ID NO:125, SEQ ID NO:143, SEQ ID NO:161, SEQ ID NO:179, SEQ ID NO:197 ou SEQ ID NO:215.
[00293] Em algumas modalidades, um anticorpo anti-TIGIT compreende uma sequência de CDR1 da cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos de qualquer uma dentre SEQ ID NO:4, SEQ ID NO:22, SEQ ID NO:40, SEQ ID NO:58, SEQ ID NO:76, SEQ ID NO:94, SEQ ID NO:112, SEQ ID NO:130, SEQ ID NO:148, SEQ ID NO:166, SEQ ID NO:184, SEQ ID NO:202, SEQ ID NO:221, SEQ ID NO:224, SEQ ID NO:226, SEQ ID NO:231, SEQ ID NO:233, SEQ ID NO:239, SEQ ID NO:243, SEQ ID NO:283, SEQ ID NO:284, SEQ ID NO:293, SEQ ID NO:294, SEQ ID NO:289 ou SEQ ID NO:290; uma sequência de CDR2 da cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos de qualquer uma dentre SEQ ID NO:6, SEQ ID NO:24, SEQ ID NO:42, SEQ ID NO:60, SEQ ID NO:78, SEQ ID NO:96, SEQ ID NO:114, SEQ ID NO:132, SEQ ID NO:150, SEQ ID NO:168, SEQ ID NO:186, SEQ ID NO:204, SEQ ID NO:222, SEQ ID NO:225, SEQ ID NO:227, SEQ ID NO:229, SEQ ID NO:232, SEQ ID NO:234, SEQ ID NO:238, SEQ ID NO:240, SEQ ID NO:285, SEQ ID NO:297, SEQ ID NO:291 ou SEQ ID NO:295; e uma sequência de CDR3 da cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos de qualquer uma dentre SEQ ID NO:8, SEQ ID NO:26, SEQ ID NO:44, SEQ ID NO:62, SEQ ID NO:80, SEQ ID NO:98, SEQ ID NO:116, SEQ ID NO:134, SEQ ID NO:152, SEQ ID NO:170, SEQ ID NO:188, SEQ ID NO:206, SEQ ID NO:223, SEQ ID NO:228, SEQ ID NO:230, SEQ ID NO:235, SEQ ID NO:236, SEQ ID NO:237, SEQ ID NO:241, SEQ ID NO:242, SEQ ID NO:244, SEQ ID NO:286, SEQ ID NO:292 ou SEQ ID NO:296.
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[00294] Em algumas modalidades, um anticorpo anti-TIGIT compreende uma sequência de CDR1 da cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos de qualquer uma dentre SEQ ID NO:13, SEQ ID NO:31, SEQ ID NO:49, SEQ ID NO:67, SEQ ID NO:85, SEQ ID NO:103, SEQ ID NO:121, SEQ ID NO:139, SEQ ID NO:157, SEQ ID NO:175, SEQ ID NO:193, SEQ ID NO:211 ou SEQ ID NO:287; uma sequência de CDR2 da cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos de qualquer uma dentre SEQ ID NO:15, SEQ ID NO:33, SEQ ID NO:51, SEQ ID NO:69, SEQ ID NO:87, SEQ ID NO:105, SEQ ID NO:123, SEQ ID NO:141, SEQ ID NO:159, SEQ ID NO:177, SEQ ID NO:195, SEQ ID NO:213 ou SEQ ID NO:288; e uma sequência de CDR3 da cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos de qualquer uma dentre SEQ ID NO:17, SEQ ID NO:35, SEQ ID NO:53, SEQ ID NO:71, SEQ ID NO:89, SEQ ID NO:107, SEQ ID NO:125, SEQ ID NO:143, SEQ ID NO:161, SEQ ID NO:179, SEQ ID NO:197 ou SEQ ID NO:215.
[00295] Em algumas modalidades, um anticorpo anti-TIGIT compreende: (i) uma sequência de CDR1 da cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos de qualquer uma dentre SEQ ID NO:4, SEQ ID NO:22, SEQ ID NO:40, SEQ ID NO:58, SEQ ID NO:76, SEQ ID NO:94, SEQ ID NO:112, SEQ ID NO:130, SEQ ID NO:148, SEQ ID NO:166, SEQ ID NO:184, SEQ ID NO:202, SEQ ID NO:221, SEQ ID NO:224, SEQ ID NO:226, SEQ ID NO:231, SEQ ID NO:233, SEQ ID NO:239, SEQ ID NO:243, SEQ ID NO:283, SEQ ID NO:284, SEQ ID NO:293, SEQ ID NO:294, SEQ ID NO:289 ou SEQ ID NO:290; e (ii) uma sequência de CDR2 da cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos de qualquer uma dentre SEQ ID NO:6, SEQ ID NO:24, SEQ ID NO:42, SEQ ID NO:60, SEQ ID NO:78, SEQ ID NO:96, SEQ ID NO:114, SEQ ID NO:132, SEQ ID NO:150, SEQ ID NO:168, SEQ
91 / 207 ID NO:186, SEQ ID NO:204, SEQ ID NO:222, SEQ ID NO:225, SEQ ID NO:227, SEQ ID NO:229, SEQ ID NO:232, SEQ ID NO:234, SEQ ID NO:238, SEQ ID NO:240, SEQ ID NO:285, SEQ ID NO:297, SEQ ID NO:291 ou SEQ ID NO:295; e (iii) uma sequência de CDR3 da cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos de qualquer uma dentre SEQ ID NO:8, SEQ ID NO:26, SEQ ID NO:44, SEQ ID NO:62, SEQ ID NO:80, SEQ ID NO:98, SEQ ID NO:116, SEQ ID NO:134, SEQ ID NO:152, SEQ ID NO:170, SEQ ID NO:188, SEQ ID NO:206, SEQ ID NO:223, SEQ ID NO:228, SEQ ID NO:230, SEQ ID NO:235, SEQ ID NO:236, SEQ ID NO:237, SEQ ID NO:241, SEQ ID NO:242, SEQ ID NO:244, SEQ ID NO:286, SEQ ID NO:292 ou SEQ ID NO:296; e (iv) uma sequência de CDR1 da cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos de qualquer uma dentre SEQ ID NO:13, SEQ ID NO:31, SEQ ID NO:49, SEQ ID NO:67, SEQ ID NO:85, SEQ ID NO:103, SEQ ID NO:121, SEQ ID NO:139, SEQ ID NO:157, SEQ ID NO:175, SEQ ID NO:193, SEQ ID NO:211 ou SEQ ID NO:287; e (v) uma sequência de CDR2 da cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos de qualquer uma dentre SEQ ID NO:15, SEQ ID NO:33, SEQ ID NO:51, SEQ ID NO:69, SEQ ID NO:87, SEQ ID NO:105, SEQ ID NO:123, SEQ ID NO:141, SEQ ID NO:159, SEQ ID NO:177, SEQ ID NO:195, SEQ ID NO:213 ou SEQ ID NO:288; e (vi) uma sequência de CDR3 da cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos de qualquer uma dentre SEQ ID NO:17, SEQ ID NO:35, SEQ ID NO:53, SEQ ID NO:71, SEQ ID NO:89, SEQ ID NO:107, SEQ ID NO:125, SEQ ID NO:143, SEQ ID NO:161, SEQ ID NO:179, SEQ ID NO:197 ou SEQ ID NO:215.
[00296] Em algumas modalidades, um anticorpo anti-TIGIT compreende: (i) uma sequência de CDR1 da cadeia pesada compreendendo a
92 / 207 sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:4 ou SEQ ID NO:221; (ii) uma sequência de CDR2 da cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:6 ou SEQ ID NO:222; (iii) uma sequência de CDR3 da cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:8 ou SEQ ID NO:223; (iv) uma sequência de CDR1 da cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:13; (v) uma sequência de CDR2 da cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:15; e (vi) uma sequência de CDR3 da cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:17.
[00297] Em algumas modalidades, um anticorpo anti-TIGIT compreende: (i) uma sequência de CDR1 da cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos de qualquer uma dentre SEQ ID NO:58, SEQ ID NO:224 ou SEQ ID NO:226; (ii) uma sequência de CDR2 da cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos de qualquer uma dentre SEQ ID NO:60, SEQ ID NO:225, SEQ ID NO:227 ou SEQ ID NO:229; (iii) uma sequência de CDR3 da cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos de qualquer uma dentre SEQ ID NO:62, SEQ ID NO:228 ou SEQ ID NO:230; (iv) uma sequência de CDR1 da cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:67; (v) uma sequência de CDR2 da cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:69; e (vi) uma sequência de CDR3 da cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:71.
[00298] Em algumas modalidades, um anticorpo anti-TIGIT compreende: (i) uma sequência de CDR1 da cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos de qualquer uma dentre SEQ ID NO:94, SEQ ID NO:231 ou SEQ ID NO:233; (ii) uma sequência de CDR2 da cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos de qualquer uma dentre SEQ ID NO:96, SEQ ID NO:232 ou SEQ ID NO:234; (iii) uma sequência de CDR3 da cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos de qualquer
93 / 207 uma dentre SEQ ID NO:98, SEQ ID NO:235, SEQ ID NO:236 ou SEQ ID NO:237; (iv) uma sequência de CDR1 da cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:103; (v) uma sequência de CDR2 da cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:105; e (vi) uma sequência de CDR3 da cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:107.
[00299] Em algumas modalidades, um anticorpo anti-TIGIT compreende: (i) uma sequência de CDR1 da cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos de qualquer uma dentre SEQ ID NO:166, SEQ ID NO:239 ou SEQ ID NO:243; (ii) uma sequência de CDR2 da cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos de qualquer uma dentre SEQ ID NO:168, SEQ ID NO:238 ou SEQ ID NO:240; (iii) uma sequência de CDR3 da cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos de qualquer uma dentre SEQ ID NO:170, SEQ ID NO:241, SEQ ID NO:242 ou SEQ ID NO:244; (iv) uma sequência de CDR1 da cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:175; (v) uma sequência de CDR2 da cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:177; e (vi) uma sequência de CDR3 da cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:179.
[00300] Em algumas modalidades, um anticorpo anti-TIGIT compreende uma CDR1 da cadeia pesada-3 e uma CDR1 da cadeia leve-3 compreendendo as sequências de aminoácidos de: (a) SEQ ID NOs: 4, 6, 8, 13, 15 e 17, respectivamente; (b) SEQ ID NOs: 22, 24, 26, 31, 33 e 35, respectivamente; (c) SEQ ID NOs: 40, 42, 44, 49, 51 e 53, respectivamente; (d) SEQ ID NOs: 58, 60, 62, 67, 69 e 71, respectivamente; (e) SEQ ID NOs: 76, 78, 80, 85, 87 e 89, respectivamente; (f) SEQ ID NOs: 94, 96, 98, 103, 105 e 107, respectivamente; (g) SEQ ID NOs: 112, 114, 116, 121, 123 e 125,
94 / 207 respectivamente; (h) SEQ ID NOs: 130, 132, 134, 139, 141 e 143, respectivamente; (i) SEQ ID NOs: 148, 150, 152, 157, 159 e 161, respectivamente; (j) SEQ ID NOs: 166, 168, 170, 175, 177 e 179, respectivamente; (k) SEQ ID NOs: 184, 186, 188, 193, 195 e 197, respectivamente; (l) SEQ ID NOs: 202, 204, 206, 211, 213 e 215, respectivamente; ou (m) SEQ ID NOs: 221, 222, 223, 13, 15 e 17, respectivamente; ou (n) SEQ ID NOs: 224, 225, 62, 67, 69 e 71, respectivamente; ou (o) SEQ ID NOs: 226, 227, 228, 67, 69 e 71, respectivamente; ou (p) SEQ ID NOs: 224, 229, 230, 67, 69 e 71, respectivamente; ou (q) SEQ ID NOs: 224, 227, 230, 67, 69 e 71, respectivamente; ou (r) SEQ ID NOs: 231, 232, 235, 103, 105 e 107, respectivamente; ou (s) SEQ ID NOs: 233, 234, 236, 103, 105 e 107, respectivamente; ou (t) SEQ ID NOs: 233, 234, 237, 103, 105 e 107, respectivamente; ou (u) SEQ ID NOs: 166, 238, 170, 175, 177 e 179, respectivamente; ou
95 / 207 (v) SEQ ID NOs: 239, 240, 170, 175, 177 e 179, respectivamente; ou (w) SEQ ID NOs: 239, 240, 241, 175, 177 e 179, respectivamente; ou (x) SEQ ID NOs: 239, 240, 242, 175, 177 e 179, respectivamente; ou (y) SEQ ID NOs: 243, 168, 244, 175, 177 e 179, respectivamente.
[00301] Em algumas modalidades, um anticorpo anti-TIGIT compreende uma ou mais regiões framework da cadeia pesada (FR1, FR2, FR3 e/ou FR4) compreendendo uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:3, SEQ ID NO:5, SEQ ID NO:7, SEQ ID NO:9, SEQ ID NO:21, SEQ ID NO:23, SEQ ID NO:25, SEQ ID NO:27, SEQ ID NO:39, SEQ ID NO:41, SEQ ID NO:43, SEQ ID NO:45, SEQ ID NO:57, SEQ ID NO:59, SEQ ID NO:61, SEQ ID NO:63, SEQ ID NO:75, SEQ ID NO:77, SEQ ID NO:79, SEQ ID NO:81, SEQ ID NO:93, SEQ ID NO:95, SEQ ID NO:97, SEQ ID NO:99, SEQ ID NO:111, SEQ ID NO:113, SEQ ID NO:115, SEQ ID NO:117, SEQ ID NO:129, SEQ ID NO:131, SEQ ID NO:133, SEQ ID NO:135, SEQ ID NO:147, SEQ ID NO:149, SEQ ID NO:151, SEQ ID NO:153, SEQ ID NO:165, SEQ ID NO:167, SEQ ID NO:169, SEQ ID NO:171, SEQ ID NO:183, SEQ ID NO:185, SEQ ID NO:187, SEQ ID NO:189, SEQ ID NO:201, SEQ ID NO:203, SEQ ID NO:205 ou SEQ ID NO:207.
[00302] Em algumas modalidades, um anticorpo anti-TIGIT compreende uma ou mais regiões framework da cadeia leves (FR1, FR2, FR3 e/ou FR4) compreendendo uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:12, SEQ ID NO:14, SEQ ID NO:16, SEQ ID NO:18, SEQ ID NO:30, SEQ ID NO:32, SEQ ID NO:34, SEQ ID NO:36, SEQ ID NO:48, SEQ ID NO:50, SEQ ID NO:52, SEQ ID NO:54, SEQ ID NO:66, SEQ ID NO:68, SEQ ID
96 / 207 NO:70, SEQ ID NO:72, SEQ ID NO:84, SEQ ID NO:86, SEQ ID NO:88, SEQ ID NO:90, SEQ ID NO:102, SEQ ID NO:104, SEQ ID NO:106, SEQ ID NO:108, SEQ ID NO:120, SEQ ID NO:122, SEQ ID NO:124, SEQ ID NO:126, SEQ ID NO:138, SEQ ID NO:140, SEQ ID NO:142, SEQ ID NO:144, SEQ ID NO:156, SEQ ID NO:158, SEQ ID NO:160, SEQ ID NO:162, SEQ ID NO:174, SEQ ID NO:176, SEQ ID NO:178, SEQ ID NO:180, SEQ ID NO:192, SEQ ID NO:194, SEQ ID NO:196, SEQ ID NO:198, SEQ ID NO:210, SEQ ID NO:212, SEQ ID NO:214 ou SEQ ID NO:216.
[00303] Em algumas modalidades, um anticorpo anti-TIGIT compreende uma cadeia pesada compreendendo uma sequência de aminoácidos selecionada dentre SEQ ID NOs: 260, 266, 268, 270 e 272; e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:
274.
[00304] Em algumas modalidades, os anticorpos anti-TIGIT da presente invenção não competem pela ligação com os anticorpos descritos em US 2009/0258013, US 2016/0176963, US 2016/0376365 ou WO 2016/028656. Em algumas modalidades, os anticorpos anti-TIGIT da presente invenção não se ligam ao mesmo epítopo que os anticorpos descritos em US 2009/0258013, US 2016/0176963, US 2016/0376365 ou WO 2016/028656. Preparação de anticorpos
[00305] Para preparar um anticorpo que se liga a TIGIT, podem ser utilizadas muitas técnicas conhecidas no campo. Ver, p. ex., Kohler & Milstein, Nature 256:495-497 (1975); Kozbor et al., Immunology Today 4: 72 (1983); Cole et al., pp. 77-96 em Monoclonal Antibodies and Cancer Therapy, Alan R. Liss, Inc. (1985); Coligan, Current Protocols in Immunology (1991); Harlow & Lane, Antibodies, A Laboratory Manual (1988); e Goding, Monoclonal Antibodies: Principles and Practice (2nd ed. 1986)).
97 / 207
[00306] Os genes que codificam as cadeias pesadas e leves de um anticorpo de interesse podem ser clonados de uma célula, p. ex., os genes que codificam um anticorpo monoclonal podem ser clonados de um hibridoma que expressa o anticorpo e utilizados para produzir um anticorpo monoclonal recombinante. É possível também criar bibliotecas de genes que codificam cadeias pesadas e leves de anticorpos monoclonais a partir de células de hibridoma ou do plasma. Além disso, pode-se utilizar a tecnologia de expressão em fagos ou leveduras para identificar anticorpos e fragmentos Fab heteroméricos que se ligam especificamente aos antígenos selecionados (ver, p. ex., McCafferty et al., Nature 348:552-554 (1990); Marks et al., Biotechnology 10:779-783 (1992); Lou et al. (2010) PEDS 23:311; e Chao et al., Nature Protocols, 1:755-768 (2006)). Alternativamente, anticorpos e sequências de anticorpos podem ser isolados e/ou identificados utilizando um sistema de apresentação de anticorpos baseado em leveduras, tal como aquele descrito em, p. ex., Xu et al., Protein Eng Des Sel, 2013, 26:663-670; WO 2009/036379; WO 2010/105256; e WO 2012/009568. Combinações aleatórias dos produtos gênicos da cadeia pesada e leve geram um grande agrupamento de anticorpos com especificidade antigênica diferente (ver, p. ex., Kuby, Immunology (3a ed. 1997)). Técnicas para a produção de anticorpos de cadeia única ou anticorpos recombinantes (Patente dos E.U.A. 4 946 778, Patente dos E.U.A. No 4 816 567) também podem ser adaptadas para produzir anticorpos. Os anticorpos também ser feitos biespecíficos, ou seja, capazes de reconhecer dois antígenos diferentes (ver, p. ex., WO 93/08829, Traunecker et al., EMBO J. 10:3655-3659 (1991); e Suresh et al., Methods in Enzymology 121:210 (1986)). Os anticorpos podem também ser heteroconjugados, p. ex., dois anticorpos unidos covalentemente, ou anticorpos ligados covalentemente a imunotoxinas (ver, p. ex., Patente dos E.U.A. No 4 676 980, WO 91/00360; e WO 92/200373).
[00307] Os anticorpos podem ser produzidos utilizando diversos
98 / 207 sistemas de expressão, incluindo sistemas de expressão procariótica e eucariótica. Em algumas modalidades, o sistema de expressão é uma célula de mamífero, tal como um hibridoma ou uma célula CHO. Muitos de tais sistemas estão amplamente disponíveis em fornecedores comerciais. Em modalidades nas quais um anticorpo compreende uma cadeia pesada e uma cadeia leve, a cadeia pesada e a cadeia leve podem ser expressas utilizando um único vetor, p. ex., em uma unidade de expressão discistrônica, ou estarem sob o controle de promotores diferentes. Em outras modalidades, uma região da cadeia pesada e da cadeia leve podem ser expressas usando vetores separados. As cadeias pesadas e cadeias leves aqui descritas podem compreender opcionalmente uma metionina no N-terminal.
[00308] Em algumas modalidades, são gerados fragmentos de anticorpos (tais como Fab, Fab’, F(ab’)2, scFv ou diabody). Várias técnicas foram desenvolvidas para a produção de fragmentos de anticorpos. Tradicionalmente, esses fragmentos foram derivados por intermédio da digestão proteolítica de anticorpos intactos (ver, p. ex., Morimoto et al., J. Biochem. Biophys. Meth., 24:107-117 (1992); e Brennan et al., Science, 229:81 (1985)). No entanto, esses fragmentos podem ser agora produzidos diretamente utilizando células hospedeiras recombinantes. Por exemplo, fragmentos de anticorpos podem ser isolados de bibliotecas de anticorpos em fagos. Alternativamente, fragmentos Fab’-SH podem ser recuperados diretamente de células de E. coli e acoplados quimicamente para formar fragmentos F(ab’)2 (ver, p. ex., Carter et al., BioTechnology, 10:163-167 (1992)). De acordo com outra abordagem, F(ab’)2 fragmentos podem ser isolados diretamente de cultura de células hospedeiras recombinantes. Outras técnicas para a produção de fragmentos de anticorpos serão evidentes para os competentes no assunto. Em outras modalidades, o anticorpo de escolha é um fragmento Fv de cadeia única (scFv). Ver, p. ex., a Publicação PCT No WO 93/16185; e Patentes dos E.U.A. Nos 5 571 894 e 5 587 458. O fragmento de
99 / 207 anticorpo pode ser também um anticorpo linear como descrito, p. ex., na Patente dos E.U.A. No 5 641 870.
[00309] Em algumas modalidades, o anticorpo ou fragmento de anticorpo pode ser conjugado a outra molécula, p. ex., polietilenoglicol (PEGuilação) ou albumina sérica, para prolongar a meia-vida in vivo. Exemplos da PEGuilação de fragmentos de anticorpos são fornecidos em Knight et al. Platelets 15:409, 2004 (para abciximabe); Pedley et al., Br. J. Cancer 70:1126, 1994 (para um anticorpo anti-CEA); Chapman et al., Nature Biotech. 17:780, 1999; e Humphreys, et al., Protein Eng. Des. 20: 227, 2007.
[00310] Em algumas modalidades, são providos anticorpos multiespecíficos que compreendem um anticorpo anti-TIGIT como aqui descrito, p. ex., um anticorpo biespecífico. Anticorpos multiespecíficos são anticorpos com especificidades de ligação por pelo menos dois sítios diferentes. Em algumas modalidades, o anticorpo multiespecífico possui uma especificidade de ligação por TIGIT (p. ex., TIGIT humano) e possui uma especificidade de ligação por pelo menos outro antígeno. Métodos para a produção de anticorpos multiespecíficos incluem, entre outros, coexpressão recombinante de dois pares de cadeia pesada e cadeia leve em uma célula hospedeira (ver, p. ex., Zuo et al., Protein Eng Des Sel, 2000, 13:361-367); engenharia do tipo “knobs-into-holes” (protuberância em buracos) (ver, p. ex., Ridgway et al., Protein Eng Des Sel, 1996, 9:617-721); tecnologia de “diabody” (ver, p. ex., Hollinger et al., PNAS (USA), 1993, 90:6444-6448); e trimerização intramolecular (ver, p. ex., Alvarez-Cienfuegos et al., Scientific Reports, 2016, doi:/10.1038/srep28643); Ver também, Spiess et al., Molecular Immunology, 2015, 67(2), Part A:95-106.
[00311] Em algumas modalidades, são providos conjugados anticorpo- fármaco compreendendo um anticorpo anti-TIGIT como aqui descrito. Nos conjugados anticorpo-fármaco, um anticorpo monoclonal com uma especificidade de ligação por um antígeno (p. ex., TIGIT) é ligado
100 / 207 covalentemente a um fármaco citotóxico. Métodos para a produção de conjugados anticorpo-fármaco são descritos, p. ex., em Chudasama et al., Nature Chemistry, 2016, 8:114-119; WO 2013/068874; e US 8,535,678. Seleção de região constante
[00312] Regiões variáveis da cadeia pesada e da leve dos anticorpos anti-TIGIT aqui descritos podem ser ligadas a pelo menos uma porção de uma região constante humana. A escolha da região constante depende, em parte, se forem desejadas citotoxicidade mediada por células dependente de anticorpo, fagocitose celular dependente de anticorpo e/ou citotoxicidade dependente do complemento. Por exemplo, os isótipos IgG1 e IgG3 humanos possuem forte citotoxicidade dependente do complemento, o isótipo IgG2 humano exibe fraca citotoxicidade dependente do complemento e IgG4 humana é desprovida de citotoxicidade dependente do complemento. IgG1 e IgG3 humanas também induzem funções efetoras mais fortes mediadas por células do que IgG2 e IgG4 humanas. As regiões constantes da cadeia leve podem ser lambda ou kappa. Anticorpos podem ser expressos como tetrâmeros contendo duas cadeias leves e duas pesadas, como cadeias pesadas e cadeias leves separadas, como Fab, Fab', F(ab')2 e Fv ou como anticorpos de cadeia única nos quais domínios variáveis de cadeia pesada e leve são ligados através de um espaçador.
[00313] As regiões constantes humanas mostram variação alotípica e variação isoalotípica entre indivíduos diferentes, ou seja, as regiões constantes podem diferir em indivíduos diferentes em uma ou mais posições polimórficas. Isoalotipos diferem de alótipos pelo fato de que o soro que reconhece um isoalotipo se liga a uma região não polimórfica de um ou mais outros isótipos.
[00314] Um ou diversos aminoácidos na terminação amino ou carboxi da cadeia leve e/ou pesada, tal como a lisina C-terminal da cadeia pesada, podem estar ausentes ou serem derivados em uma proporção ou todas as
101 / 207 moléculas. Podem ser feitas substituições nas regiões constantes para reduzir ou aumentar a função efetora, tal como a citotoxicidade mediada pelo complemento ou ADCC (ver, p. ex., Winter et al., Patente dos E.U.A. No 5 624 821; Tso et al., Patente dos E.U.A. No 5 834 597; e Lazar et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 103:4005, 2006), ou para prolongar a meia-vida em humanos (ver, p. ex., Hinton et al., J. Biol. Chem. 279:6213, 2004).
[00315] As substituições exemplares incluem a substituição de aminoácido do aminoácido nativo por um resíduo de cisteína que é introduzido na posição de aminoácido 234, 235, 237, 239, 267, 298, 299, 326, 330, ou 332, de preferência uma mutação S239C em um isótipo IgG1 humano (a numeração é de acordo com o índice EU (Kabat, Sequences of Proteins of Immunological Interest (National Institutes of Health, Bethesda, MD, 1987 e 1991); ver US 20100158909, cujo conteúdo é aqui incorporado por referência). A presença de um resíduo adicional de cisteína pode permitir a formação de ligação dissulfeto intra-cadeia. Tal formação de ligação dissulfeto intra-cadeia pode causar impedimento estérico, reduzindo, assim, a afinidade de ligação por interação região Fc-FcγR. O(s) resíduo(s) cisteína introduzido(s) na proximidade ou na região Fc da região constante de uma IgG pode também servir como sítios para conjugação a agentes terapêuticos (ou seja, o acoplamento de fármacos citotóxicos usando reagentes específicos com tiol tais como derivados maleimida de fármacos. A presença de um agente terapêutico causa impedimento estérico, com isso, reduzindo mais a afinidade de ligação por interação região Fc-FcγR. Outras substituições em qualquer uma das posições 234, 235, 236 e/ou 237 reduzem a afinidade por receptores Fcγ, especialmente o receptor FcγRI (ver, p. ex., US 6 624 821, US 5 624 821). Uma combinação preferida de mutações é S239D, A330L e I332E, que aumenta a afinidade do domínio Fc por FcγRIIIA e, consequentemente, aumenta ADCC.
[00316] A meia-vida in vivo de um anticorpo pode também ter impacto
102 / 207 sobre suas funções efetoras. A meia-vida de um anticorpo pode ser aumentada ou diminuída para modificar suas atividades terapêuticas. FcRn é um receptor estruturalmente semelhante ao antígeno do MHC Classe I que se associa não covalentemente com β2-microglobulina. FcRn regula o catabolismo de IgGs e a transcitose delas através de tecidos (Ghetie e Ward, 2000, Annu. Rev. Immunol. 18:739-766; Ghetie e Ward, 2002, Immunol. Res. 25:97-113). A interação IgG-FcRn ocorre em pH 6,0 (pH de vesículas intracelulares), mas não em pH 7,4 (pH do sangue); essa interação permite que IgGs sejam recicladas de volta para a circulação (Ghetie e Ward, 2000, Ann. Rev. Immunol. 18:739-766; Ghetie e Ward, 2002, Immunol. Res. 25:97-113). A região em IgG1 humana envolvida na ligação com FcRn foi mapeada (Shields et al., 2001, J. Biol. Chem. 276:6591-604). Substituições de alanina nas posições Pro238, Thr256, Thr307, Gln311, Asp312, Glu380, Glu382 ou Asn434 de IgG1 humana reforça a ligação com FcRn (Shields et al., 2001, J. Biol. Chem. 276:6591-604). Moléculas de IgG1 que abrigam essas substituições exibem meias-vidas mais longas no soro. Consequentemente, essas moléculas modificadas de IgG1 podem ser capazes de conduzir as suas funções efetoras e, portanto, exercer as suas eficácias terapêuticas durante um período mais de tempo em comparação a IgG1 não modificada. Outras substituições exemplares para aumentar a ligação a FcRn incluem Gln na posição 250 e/ou Leu na posição 428. A numeração EU é usada para todas as posições na região constante.
[00317] Oligossacarídeos ligados covalentemente ao Asn297 conservado estão envolvidos na capacidade da região Fc de uma IgG para ligar-se a FcγR (Lund et al., 1996, J. Immunol. 157:4963-69; Wright e Morrison, 1997, Trends Biotechnol. 15:26-31). A engenharia dessa glicoforma em IgG pode melhorar significativamente ADCC mediada por IgG. A adição de modificações que bifurcam N-acetilglicosamina (Umana et al., 1999, Nat. Biotechnol. 17:176-180; Davies et al., 2001, Biotech. Bioeng.
103 / 207 74:288-94) a essa glicoforma ou a remoção de fucose (Shields et al., 2002, J. Biol. Chem. 277:26733-40; Shinkawa et al., 2003, J. Biol. Chem. 278:6591- 604; Niwa et al., 2004, Cancer Res. 64:2127-33) dessa glicoforma são dois exemplos de engenharia em Fc da IgG que melhora a ligação entre Fc da IgG e FcγR, reforçando, assim, a atividade ADCC mediada por Ig.
[00318] Uma substituição sistêmica de aminoácidos expostos ao solvente da região Fc de IgG1 humana gerou variantes de IgG com afinidades de ligação ao FcγR alteradas (Shields et al., 2001, J. Biol. Chem. 276:6591- 604). Quando comparado à IgG1 original, um subconjunto dessas variantes envolvendo substituições em Thr256/Ser298, Ser298/Glu333, Ser298/Lys334, ou Ser298/Glu333/Lys334 para Ala demonstram aumentar tanto a afinidade de ligação a FcγR como a atividade ADCC (Shields et al., 2001, J. Biol. Chem. 276:6591-604; Okazaki et al., 2004, J. Mol. Biol. 336:1239-49).
[00319] A atividade de anticorpos de fixação do complemento (tanto ligação a C1q como atividade CDC) pode ser melhoradas por substituições em Lys326 e Glu333 (Idusogie et al., 2001, J. Immunol. 166:2571-2575). As mesmas substituições na cadeia principal (backbone) de IgG2 humana pode converter o isótipo de um anticorpo que se liga pouco a C1q e é gravemente deficiente na atividade de ativação do complemento para um que pode se ligar a C1q e mediar CDC (Idusogie et al., 2001, J. Immunol. 166:2571-75). Diversos outros métodos foram também aplicados para melhorar a atividade de fixação do complemento de anticorpos. Por exemplo, o enxerto de um pedaço na cauda com 18 aminoácidos do terminal carboxila de IgM às terminações carboxila de IgGs reforça em grande medida a sua atividade CDC. Isso é observado mesmo com IgG4, que normalmente não tem atividade CDC detectável (Smith et al., 1995, J. Immunol. 154:2226-36). Além disso, a substituição de Ser444 localizada próxima ao terminal carbóxi da cadeia pesada de IgG1 por Cys induziu dimerização cauda a cauda de IgG1 com 200 vezes de aumento da atividade CDC em relação à IgG1 monomérica
104 / 207 (Shopes et al., 1992, J. Immunol. 148:2918-22). Além disso, uma construção de diabody biespecífico com especificidade por C1q também confere atividade CDC (Kontermann et al., 1997, Nat. Biotech. 15:629-31).
[00320] A atividade no complemento pode ser reduzida por mutação em pelo menos um dos resíduos de aminoácidos 318, 320 e 322 da cadeia pesada para um resíduo com uma cadeia lateral diferente, tal como Ala. Outros resíduos não iônicos substituídos com alquila, tais como Gly, Ile, Leu ou Val, ou resíduos aromáticos não polares tais como Phe, Tyr, Trp e Pro no lugar de qualquer um dos três resíduos também reduz ou abole a ligação a C1q. Ser, Thr, Cys e Met podem ser utilizados nos resíduos 320 e 322, mas não 318, para reduzir ou abolir a atividade de ligação a C1q. A substituição do resíduo 318 (Glu) por um resíduo polar pode modificar, mas não abolir a atividade de ligação a C1q. A substituição do resíduo 297 (Asn) por Ala resulta em remoção da atividade lítica, mas reduz a afinidade apenas levemente (aproximadamente três vezes mais fraca) por C1q. Essa alteração destrói a glicosilação e a presença de carboidrato que é necessária para a ativação do complemento. Qualquer outra substituição nesse sítio também destrói o sítio de glicosilação. As mutações seguintes e qualquer combinação das mesmas também reduz a ligação a C1q: D270A, K322A, P329A e P311S (ver WO 06/036291).
[00321] A referência a uma região constante humana inclui uma região constante com qualquer alotipo natural ou qualquer permutação de resíduos que ocupem posições polimórficas em alótipos naturais. Além disso, até 1, 2, 5 ou 10 mutações podem estar presentes em relação a uma região constante humana natural, tal como aquelas indicadas acima para reduzir a ligação ao receptor Fcγ ou aumentar a ligação a FcRN. Ácidos nucleicos, vetores e células hospedeiras
[00322] Em algumas modalidades, os anticorpos anti-TIGIT como aqui descritos são preparados usando métodos recombinantes. Dessa forma, em
105 / 207 alguns aspectos, a invenção provê ácidos nucleicos isolados que compreendem uma sequência de ácido nucleico que codifica qualquer um dos anticorpos anti-TIGIT aqui descritos (p. ex., qualquer uma ou mais das CDRs aqui descritas); vetores compreendendo tais ácidos nucleicos; e células hospedeiras nas quais os ácidos nucleicos são introduzidos que são usadas para replicar os ácidos nucleicos que codificam os anticorpos e/ou para expressar os anticorpos. Em algumas modalidades, a célula hospedeira é eucariótica, p. ex., uma célula de ovário de hamster chinês (CHO); ou uma célula humana.
[00323] Em algumas modalidades, um polinucleotídeo (p. ex., um polinucleotídeo isolado) compreende uma sequência de nucleotídeos que codifica um anticorpo aqui descrito. Em algumas modalidades, o polinucleotídeo compreende uma sequência de nucleotídeos que codifica uma ou mais sequências de aminoácidos (p. ex., CDR, cadeia pesada, cadeia leve e/ou regiões framework) descritas na Tabela de sequências. Em algumas modalidades, o polinucleotídeo compreende uma sequência de nucleotídeos que codifica uma sequência de aminoácidos com pelo menos 85% de identidade de sequência (p. ex., pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98% ou pelo menos 99% de identidade de sequência) com uma sequência (p. ex., uma sequência de CDR, cadeia pesada, cadeia leve ou região framework) descritas na Tabela de sequências abaixo.
[00324] Em algumas modalidades, um polinucleotídeo (p. ex., um polinucleotídeo isolado) compreende uma sequência de nucleotídeos que codifica uma região variável da cadeia pesada aqui descrita. Em algumas modalidades, um polinucleotídeo compreende uma sequência de nucleotídeos que codifica uma região variável da cadeia pesada compreendendo uma sequência de aminoácidos com pelo menos 90% de identidade de sequência
106 / 207 com SEQ ID NO:1, SEQ ID NO:19, SEQ ID NO:37, SEQ ID NO:55, SEQ ID NO:73, SEQ ID NO:91, SEQ ID NO:109, SEQ ID NO:127, SEQ ID NO:145, SEQ ID NO:163, SEQ ID NO:181, SEQ ID NO:199, SEQ ID NO:245, SEQ ID NO:246, SEQ ID NO:247, SEQ ID NO:248, SEQ ID NO:249, SEQ ID NO:250, SEQ ID NO:251, SEQ ID NO:252, SEQ ID NO:253, SEQ ID NO:254, SEQ ID NO:255, SEQ ID NO:256 ou SEQ ID NO:257. Em algumas modalidades, o polinucleotídeo compreende uma sequência de nucleotídeos com pelo menos 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100% de identidade de sequência com SEQ ID NO:2, SEQ ID NO:20, SEQ ID NO:38, SEQ ID NO:56, SEQ ID NO:74, SEQ ID NO:92, SEQ ID NO:110, SEQ ID NO:128, SEQ ID NO:146, SEQ ID NO:164, SEQ ID NO:182, SEQ ID NO:200, SEQ ID NO:259, SEQ ID NO:265, SEQ ID NO:267, SEQ ID NO:269 ou SEQ ID NO:271.
[00325] Em algumas modalidades, um polinucleotídeo (p. ex., um polinucleotídeo isolado) compreende uma sequência de nucleotídeos que codifica uma região variável da cadeia leve aqui descrita. Em algumas modalidades, um polinucleotídeo compreende uma sequência de nucleotídeos que codifica uma região variável da cadeia leve compreendendo uma sequência de aminoácidos com pelo menos 90% de identidade de sequência com SEQ ID NO:10, SEQ ID NO:28, SEQ ID NO:46, SEQ ID NO:64, SEQ ID NO:82, SEQ ID NO:100, SEQ ID NO:118, SEQ ID NO:136, SEQ ID NO:154, SEQ ID NO:172, SEQ ID NO:190 ou SEQ ID NO:208. Em algumas modalidades, o polinucleotídeo compreende uma sequência de nucleotídeos com pelo menos 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100% de identidade de sequência com SEQ ID NO:11, SEQ ID NO:29, SEQ ID NO:47, SEQ ID NO:65, SEQ ID NO:83, SEQ ID NO:101, SEQ ID NO:119, SEQ ID NO:137, SEQ ID NO:155, SEQ ID NO:173, SEQ ID NO:191, SEQ ID NO:209 ou SEQ ID NO: 273.
[00326] Em algumas modalidades, o polinucleotídeo compreende uma
107 / 207 sequência de nucleotídeos compreendendo uma sequência de nucleotídeos que codifica uma região variável da cadeia pesada e uma região variável da cadeia leve como aqui descritas.
Em algumas modalidades, um polinucleotídeo compreende uma sequência de nucleotídeos que compreende uma região variável da cadeia pesada compreendendo uma sequência de aminoácidos com pelo menos 90% de identidade de sequência com SEQ ID NO:1, SEQ ID NO:19, SEQ ID NO:37, SEQ ID NO:55, SEQ ID NO:73, SEQ ID NO:91, SEQ ID NO:109, SEQ ID NO:127, SEQ ID NO:145, SEQ ID NO:163, SEQ ID NO:181, SEQ ID NO:199, SEQ ID NO:245, SEQ ID NO:246, SEQ ID NO:247, SEQ ID NO:248, SEQ ID NO:249, SEQ ID NO:250, SEQ ID NO:251, SEQ ID NO:252, SEQ ID NO:253, SEQ ID NO:254, SEQ ID NO:255, SEQ ID NO:256 ou SEQ ID NO:257 e que codifica uma região variável da cadeia leve compreendendo uma sequência de aminoácidos com pelo menos 90% de identidade de sequência com SEQ ID NO:10, SEQ ID NO:28, SEQ ID NO:46, SEQ ID NO:64, SEQ ID NO:82, SEQ ID NO:100, SEQ ID NO:118, SEQ ID NO:136, SEQ ID NO:154, SEQ ID NO:172, SEQ ID NO:190 ou SEQ ID NO:208. Em algumas modalidades, o polinucleotídeo compreende uma sequência de nucleotídeos com pelo menos 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100% de identidade de sequência com SEQ ID NO:2, SEQ ID NO:20, SEQ ID NO:38, SEQ ID NO:56, SEQ ID NO:74, SEQ ID NO:92, SEQ ID NO:110, SEQ ID NO:128, SEQ ID NO:146, SEQ ID NO:164, SEQ ID NO:182, SEQ ID NO:200, SEQ ID NO:259, SEQ ID NO:265, SEQ ID NO:267, SEQ ID NO:269 ou SEQ ID NO:271 e compreende ainda uma sequência de nucleotídeos com pelo menos 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100% de identidade de sequência com SEQ ID NO:11, SEQ ID NO:29, SEQ ID NO:47, SEQ ID NO:65, SEQ ID NO:83, SEQ ID NO:101, SEQ ID NO:119, SEQ ID NO:137, SEQ ID NO:155, SEQ ID NO:173, SEQ ID NO:191, SEQ ID NO:209 ou SEQ ID NO: 273.
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[00327] Em um aspecto adicional, são providos métodos para a produção de um anticorpo anti-TIGIT como aqui descrito. Em algumas modalidades, o método inclui cultivar uma célula hospedeira como aqui descrita (p. ex., uma célula hospedeira que expressa um polinucleotídeo ou vetor como aqui descrito) sob condições adequadas para a expressão do anticorpo. Em algumas modalidades, o anticorpo é subsequentemente recuperado da célula hospedeira (ou meio de cultura de células hospedeiras).
[00328] Vetores adequados contendo polinucleotídeos que codificam anticorpos da presente invenção, ou fragmentos dos mesmos, incluem vetores de clonagem e vetores de expressão. Embora o vetor de clonagem possa variar de acordo com a célula hospedeira que se pretende usar, os vetores de clonagem úteis em geral são capazes de auto-replicação, podem possuir um alvo único para uma endonuclease de restrição em particular e/ou podem carregar genes para um marcador que pode ser utilizado para selecionar clones contendo o vetor. Os exemplos incluem plasmídeos, vírus e bactérias, p. ex., pUC18, pUC19, Bluescript (p. ex., pBS SK+) e seus derivados, mpl8, mpl9, pBR322, pMB9, ColE1, pCR1, RP4, DNAs fágicos e vetores condutores (shuttle) tais como pSA3 e pAT28. Vetores de clonagem são disponibilizados por fornecedores comerciais tais como BioRad, Stratagene e Invitrogen.
[00329] Os vetores de expressão são em geral construções de polinucleotídeos replicáveis que contêm um ácido nucleico da presente invenção. O vetor de expressão pode replicar nas células hospedeiras quer como epissomas ou como parte integrante do DNA cromossômico. Os vetores de expressão adequados incluem, entre outros, plasmídeos, vetores virais, incluindo adenovírus, vírus adeno-associados, retrovírus e qualquer outro vetor. Expressão de anticorpos recombinantes
[00330] Anticorpos são tipicamente produzidos por expressão
109 / 207 recombinante. Construções de polinucleotídeos recombinantes incluem tipicamente uma sequência de controle da expressão ligada operacionalmente às sequências de codificação de cadeias do anticorpo, incluindo regiões promotoras associadas naturalmente ou heterólogas. De preferência, as sequências de controle da expressão são sistemas de promotores eucarióticos em vetores capazes de transformar ou transfectar células hospedeiras eucarióticas. Uma vez o vetor tenha sido incorporado no hospedeiro adequado, o hospedeiro é mantido sob condições adequadas para expressão de alto nível das sequências de nucleotídeos e a coleta e purificação dos anticorpos com reatividade cruzada.
[00331] Células de mamíferos são um hospedeiro preferido para a expressão de segmentos nucleotídicos que codificam imunoglobulinas ou fragmentos das mesmas. Ver Winnacker, From Genes to Clones, (VCH Publishers, NY, 1987). Diversas linhagens de células hospedeiras adequadas, capazes de secretar proteínas heterólogas intactas, foram desenvolvidas na técnicas e incluem linhagens de células CHO (p. ex., DG44), várias linhagens de células COS, células HeLa, células HEK293, células L e de mielomas não produtores de anticorpos incluindo Sp2/0 e NS0. De preferência, as células não são humanas. Os vetores de expressão para essas células podem incluir sequências de controle da expressão, tal como uma origem de replicação, um promotor, um reforçador (enhancer) (Queen et al., Immunol. Rev. 89:49 (1986)) e sítios necessários para o processamento de informações, tais como sítios de ligação ao ribossomo, sítios de splicing do RNA, sítios de poliadenilação e sequências terminadoras da transcrição. As sequências preferidas para o controle da expressão são promotores derivados de genes endógenos, do citomegalovírus, SV40, adenovírus, papilomavírus bovino e similares. Ver Co et al., J. Immunol. 148:1149 (1992).
[00332] Uma vez expressos, os anticorpos podem ser purificados de acordo com procedimentos padrão da técnica, incluindo purificação por
110 / 207 HPLC, cromatografia em coluna, eletroforese em gel e similares (ver de modo geral, Scopes, Protein Purification (Springer-Verlag, NY, 1982)). Variantes de glicosilação
[00333] Os anticorpos podem ser glicosilados em posições conservadas nas suas regiões constantes (Jefferis e Lund, (1997) Chem. Immunol. 65:111- 128; Wright e Morrison, (1997) TibTECH 15:26-32). As cadeias laterais de oligossacarídeos das imunoglobulinas afetam a função da proteína (Boyd et al., (1996) Mol. Immunol. 32:1311-1318; Wittwe e Howard, (1990) Biochem. 29:4175-4180) e a interação intramolecular entre porções da glicoproteína que podem afetar a conformação e a superfície tridimensional apresentada da glicoproteína (Hefferis e Lund, supra; Wyss e Wagner, (1996) Current Opin. Biotech. 7:409-416). Oligossacarídeos podem também servir no direcionamento de uma dada glicoproteína para certas moléculas com base em estruturas de reconhecimento específico. Por exemplo, foi relatado que em IgG agalactosilada, a porção oligossacarídeo “vira” para fora do espaço inter- CH2 e resíduos da N-acetilglicosamina terminal tornam-se disponíveis para ligar manose à proteína de ligação (Malhotra et al., (1995) Nature Med. 1:237-243). A remoção pela glicopeptidase dos oligossacarídeos de CAMPATH-1H (um anticorpo IgG1 monoclonal murino humanizado recombinante que reconhece o antígeno CDw52 de linfócitos humano) produzido em células de ovário de hamster chinês (CHO) resultou em redução completa na lise mediada pelo complemento (CMCL) (Boyd et al., (1996) Mol. Immunol. 32:1311-1318), enquanto a remoção seletiva de resíduos de ácido siálico utilizando neuraminidase não resultou em perda alguma de DMCL. Também foi relatado que a glicosilação de anticorpos afeta a citotoxicidade celular dependente de anticorpo (ADCC). Em particular, foi relatado que células CHO com expressão regulada por tetraciclina de β(1,4)- N-acetilglicosaminiltransferase III (GnTIII), uma glicosiltransferase que catalisa a formação de GlcNAc bifurcada, tiveram a atividade ADCC
111 / 207 melhorada (Umana et al. (1999) Mature Biotech. 17:176-180).
[00334] A glicosilação de anticorpos é tipicamente N-ligada ou O- ligada. N-ligada refere-se à ligação da porção carboidrato à cadeia lateral de um resíduo de asparagina. As sequências dos tripeptídeos asparagina-X-serina e asparagina-X-treonina, onde X é qualquer aminoácido exceto prolina, são as sequências de reconhecimento para ligação enzimática da porção carboidrato à cadeia lateral da asparagina. Assim, a presença de qualquer uma dessas sequências tripeptídicas em um polipeptídeo cria um sítio de glicosilação potencial. Glicosilação O-ligada refere-se à ligação de um dos açúcares N- acetilgalactosamina, galactose ou xilose a um hidroxiaminoácido, mais comumente serina ou treonina, embora 5-hidroxiprolina ou 5-hidroxilisina possam também ser utilizadas.
[00335] Variantes de glicosilação de anticorpos são variantes nas quais o padrão de glicosilação de um anticorpo é alterado. Por alterado, entende-se deletar uma ou mais porções carboidrato encontradas no anticorpo, adicionar uma ou mais porções carboidrato ao anticorpo, mudar a composição da glicosilação (padrão de glicosilação), a extensão da glicosilação etc.
[00336] A adição de sítios de glicosilação ao anticorpo pode ser conseguida alterando a sequência de aminoácidos para que ela contenha uma ou mais das sequências tripeptídicas descritas acima (para sítios de glicosilação N-ligada). A alteração pode também ser efetuada pela adição de ou substituição por um ou mais resíduos de serina ou treonina à sequência do anticorpo original (para sítios de glicosilação O-ligada). Do mesmo modo, a remoção de sítios de glicosilação pode ser realizada por alteração dos aminoácidos dentro dos sítios nativos de glicosilação do anticorpo.
[00337] A sequência de aminoácidos é normalmente alterada por alteração da sequência de ácido nucleico subjacente. Esses métodos incluem o isolamento de uma fonte natural (no caso de variantes de sequências de aminoácidos naturais) ou a preparação por mutagênese mediada por
112 / 207 oligonucleotídeos (ou sítio-dirigida), mutagênese por PCR e mutagênese por cassete de uma variante preparada antes ou uma versão não variante do anticorpo.
[00338] A glicosilação (incluindo o padrão de glicosilação) de anticorpos pode também ser alterada sem alterar a sequência de aminoácidos ou a sequência nucleotídica subjacente. A glicosilação depende em grande medida da célula hospedeira usada para expressar o anticorpo. Dado que o tipo de célula usada para expressão de glicoproteínas recombinantes, p. ex., anticorpos, como potenciais agentes terapêuticos, raramente é a célula nativa, é possível prever variações significativas no padrão de glicosilação dos anticorpos. Ver, p. ex., Hse et al., (1997) J. Biol. Chem. 272:9062-9070. Além da escolha de células hospedeiras, os fatores que afetam a glicosilação durante a produção recombinante de anticorpos incluem modo de crescimento, formulação dos meios, densidade da cultura, oxigenação, pH, esquemas de purificação e fatores semelhantes. Vários métodos foram propostos para alterar o padrão de glicosilação alcançado em um determinado organismo hospedeiro, incluindo a introdução ou superexpressão de certas enzimas envolvidas na produção de oligossacarídeos (Patentes dos E.U.A. Nos 5047335; 5510261; 5278299). A glicosilação, ou certos tipos de glicosilação, pode ser removida enzimaticamente da glicoproteína, por exemplo, pelo uso de endoglicosidase H (Endo H). Além disso, a célula hospedeira recombinante pode ser modificada geneticamente, p. ex., tornando-a defeituosa no processamento de certos tipos de polissacarídeos. Essas técnicas e semelhantes são conhecidas no campo.
[00339] A estrutura da glicosilação de anticorpos pode ser prontamente analisada por técnicas convencionais de análise de carboidratos, incluindo cromatografia com lectina, RMN, espectrometria de massas, HPLC, GPC, análise composicional de monossacarídeos, digestão enzimática sequencial e HPAEC-PAD, a qual usa cromatografia de troca aniônica em pH alto para
113 / 207 separar oligossacarídeos com base na carga. Métodos para liberação de oligossacarídeos para fins analíticos são igualmente conhecidos e incluem, sem limitação, tratamento enzimático (realizado comumente utilizando peptídeo-N-glicosidase F/endo-β-galactosidase), eliminação com o uso de ambiente alcalino agressivo para liberar principalmente estruturas O-ligadas e métodos químicos utilizando hidrazina anidra para liberar oligossacarídeos N- e O-ligados.
[00340] Uma forma preferida de modificação da glicosilação de anticorpos é fucosilação do núcleo por redução. “Fucosilação do núcleo” refere-se à adição de fucose (“fucosilação”) a N-acetilglicosamina (“GlcNAc”) no terminal redutor de um glicano N-ligado.
[00341] Uma “cadeia de açúcar complexa N-glicosídeo-ligada” é tipicamente ligada à asparagina 297 (de acordo com o número de Kabat). Neste relatório descritivo, a cadeia de açúcar complexa N-glicosídeo-ligada possui uma cadeia de açúcar composta biantenária, tendo principalmente a seguinte estrutura: onde ± indica que a molécula de açúcar pode estar presente ou ausente e os números indicam a posição de ligações entre as moléculas de açúcar. Na estrutura acima, o terminal da cadeia de açúcar que se liga à asparagina é chamado de terminal redutor (à direita) e o lado oposto é chamado de terminal não redutor. Fucose é normalmente ligada à N- acetilglicosamina (“GlcNAc”) do terminal redutor, tipicamente por uma ligação α1,6 (a posição 6 de GlcNAc é ligada à posição 1 de fucose). “Gal” refere-se a galactose e “Man” refere-se a manose.
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[00342] Uma “cadeia de açúcar complexa N-glicosídeo-ligada” inclui 1) um tipo complexo, no qual o lado terminal não redutor da estrutura do núcleo possui zero, uma ou mais ramificações de galactose-N- acetilglicosamina (também referida como “gal-GlcNAc”) e o lado terminal não redutor de gal-GlcNAc contém opcionalmente um ácido siálico, N- acetilglicosamina bifurcada ou similares; e 2) um tipo híbrido, no qual o lado terminal não redutor da estrutura do núcleo possui ambas as ramificações de uma cadeia de açúcar N-glicosídeo-ligada rica em manose e uma cadeia de açúcar complexa N-glicosídeo-ligada.
[00343] De acordo com os presentes métodos, tipicamente apenas uma quantidade mínima de fucose é incorporada na(s) cadeia(s) de açúcar complexa(s) N-glicosídeo-ligada(s) dos anticorpos anti-TIGIT. Por exemplo, em várias modalidades, menos do que aproximadamente 60%, menos do que aproximadamente 50%, menos do que aproximadamente 40%, menos do que aproximadamente 30%, menos do que aproximadamente 20%, menos do que aproximadamente 15%, menos do que aproximadamente 10%, menos do que aproximadamente 5% ou menos do que aproximadamente 3% dos anticorpos em uma composição exibem fucosilação do núcleo por fucose. Em algumas modalidades, aproximadamente 2% dos anticorpos na composição exibem fucosilação do núcleo por fucose. Em várias modalidades, quando menos do que 60% dos anticorpos em uma composição exibem fucosilação do núcleo por fucose, os anticorpos da composição podem ser referidos como “não fucosilados” ou “afucosilado”. Em algumas modalidades, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98% ou pelo menos 99% dos anticorpos na composição são afucosilados.
[00344] Em certas modalidades, apenas uma quantidade mínima de um análogo da fucose (ou um metabólito ou produto do análogo da fucose) é incorporada na(s) cadeia(s) de açúcar complexa(s) N-glicosídeo-ligada(s). Por
115 / 207 exemplo, em várias modalidades, menos do que aproximadamente 60%, menos do que aproximadamente 50%, menos do que aproximadamente 40%, menos do que aproximadamente 30%, menos do que aproximadamente 20%, menos do que aproximadamente 15%, menos do que aproximadamente 10%, menos do que aproximadamente 5% ou menos do que aproximadamente 3% de anticorpos anti-TIGIT exibem fucosilação do núcleo por um análogo da fucose ou um metabólito ou produto do análogo da fucose. Em algumas modalidades, aproximadamente 2% dos anticorpos anti-TIGIT exibem fucosilação do núcleo por um análogo da fucose ou um metabólito ou produto do análogo da fucose.
[00345] Em algumas modalidades, menos do que aproximadamente 60%, menos do que aproximadamente 50%, menos do que aproximadamente 40%, menos do que aproximadamente 30%, menos do que aproximadamente 20%, menos do que aproximadamente 15%, menos do que aproximadamente 10%, menos do que aproximadamente 5% ou menos do que aproximadamente 3% dos anticorpos em uma composição contêm um resíduo de fucose em uma estrutura de glicano G0, G1 ou G2. (Ver, p. ex., Raju et al., 2012, MAbs 4: 385-391, Figura 3.) Em algumas modalidades, aproximadamente 2% dos anticorpos na composição contêm um resíduo de fucose em uma estrutura de glicano G0, G1 ou G2. Em várias modalidades, quando menos do que 60% dos anticorpos em uma composição contêm um resíduo de fucose em uma estrutura de glicano G0, G1 ou G2, os anticorpos da composição podem ser referidos como “afucosilados”. Em algumas modalidades, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98% ou pelo menos 99% dos anticorpos na composição não contém fucose em uma estrutura de glicano G0, G1 ou G2. Deve-se observar que glicanos G0 incluem glicanos G0-GN. Glicanos G0-GN são glicanos monoantenários com um resíduo GlcNAc terminal. Glicanos G1 incluem glicanos G1-GN.
116 / 207 Glicanos G1-GN são glicanos monoantenários com um resíduo de galactose terminal. Glicanos G0-GN e G1-GN podem ser fucosilados ou não fucosilados.
[00346] Métodos para a produção de anticorpos afucosilados por incubação de células produtoras do anticorpo com um análogo de fucose são descritos, p. ex., em WO2009/135181. Resumidamente, células que foram projetadas para expressar anticorpos anti-TIGIT são incubadas na presença de um análogo de fucose ou de um metabólito intracelular ou produto do análogo da fucose. Um metabólito intracelular pode ser, por exemplo, um análogo modificado por GDP ou um análogo total ou parcialmente desesterificado. Um produto pode ser, por exemplo, um análogo total ou parcialmente desesterificado. Em algumas modalidades, um análogo de fucose pode inibir uma enzima(s) na via de salvamento de fucose. Por exemplo, um análogo da fucose (ou um metabólito intracelular ou produto do análogo da fucose) pode inibir a atividade de fucoquinase, ou GDP-fucose-pirofosforilase. Em algumas modalidades, um análogo da fucose (ou um metabólito intracelular ou produto do análogo da fucose) inibe a fucosiltransferase (de preferência, uma 1,6- fucosiltransferase, p. ex., a proteína FUT8). Em algumas modalidades, um análogo da fucose (ou um metabólito intracelular ou produto do análogo da fucose) pode inibir a atividade de uma enzima na via sintética de novo para fucose. Por exemplo, um análogo da fucose (ou um metabólito intracelular ou produto do análogo da fucose) pode inibir a atividade de GDP-manose 4,6- desidratase e/ou GDP-fucose sintetase. Em algumas modalidades, o análogo da fucose (ou um metabólito intracelular ou produto do análogo da fucose) pode inibir um transportador de fucose (p. ex., transportador de GDP-fucose).
[00347] Em uma modalidade, o análogo de fucose é 2-flurofucose. Métodos para utilização de análogos da fucose no meio de crescimento e outros análogos da fucose são revelados, p. ex., em WO 2009/135181, cujo conteúdo é aqui incorporado por referência.
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[00348] Outros métodos para modificação de linhagens celulares para reduzir a fucosilação do núcleo incluem knock-outs (inativação) de genes, knock-ins (inserções) de genes e interferência por RNA (RNAi). Nos knock- outs gênicos, o gene que codifica FUT8 (enzima 1,6 alfa-fucosiltransferase) é inativado. FUT8 catalisa a transferência de um resíduo fucosilado de GDP- fucose para a posição 6 de GlcNac Asn-ligado (N-ligado) de um N-glicano. FUT8 é relatado por ser a única enzima responsável pela adição de fucose ao carboidrato biantenário N-ligado em Asn297. Os knock-ins gênicos adicionam genes que codificam enzimas, tais como GNTIII ou golgi manosidase alfa II. Um aumento nos níveis de tais enzimas em células faz com que os anticorpos monoclonais se desviem da via de fucosilação (levando à fucosilação diminuída do núcleo), e com quantidade aumentada de N-acetilglicosaminas bifurcadas. RNAi tipicamente também atinge a expressão gênica de FUT8, levando a níveis diminuídos do transcrito de mRNA ou à inativação da expressão gênica inteiramente. Qualquer um desses métodos pode ser utilizado para gerar uma linhagem celular que seja capaz de produzir um anticorpo afucosilado, p. ex., um anticorpo anti-TIGIT.
[00349] Existem muitos métodos disponíveis para determinar o grau de fucosilação em um anticorpo. Os métodos incluem, p. ex., LC-MS via cromatografia PLRP-S, TOF MS com quadrupolo de ionização por electrospray, eletroforese capilar com fluorescência induzida por laser (CE−LIF) e cromatografia por interação hidrofílica com detecção da fluorescência (HILIC). IV. Métodos terapêuticos usando os anticorpos anti-TIGIT
[00350] Em algumas modalidades, são providos métodos para tratar ou prevenir um câncer em um indivíduo. Em algumas modalidades, o método compreende administrar ao indivíduo uma quantidade terapêutica e um anticorpo anti-TIGIT. Em algumas modalidades, o anticorpo anti-TIGIT é afucosilado. Em algumas modalidades, o método compreende administrar ao
118 / 207 indivíduo uma quantidade terapêutica de uma composição farmacêutica compreendendo anticorpos anti-TIGIT, em que pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98% ou pelo menos 99% dos anticorpos na composição são afucosilados. Em algumas modalidades, o indivíduo é um humano.
[00351] Em algumas modalidades, o câncer é um câncer ou célula cancerosa que é enriquecido com a expressão de CD112 e/ou CD155. Em algumas modalidades, cânceres enriquecidos com CD112 e/ou CD155 são identificados com avaliação por imuno-histoquímica de amostras do tumor usando anticorpos específicos contra CD112 ou CD155. Em algumas modalidades, a expressão de CD112 ou CD155 é enriquecida ou aumentada em células tumorais ou em leucócitos infiltrantes de tumor. Em algumas modalidades, o câncer é identificado com base na avaliação dos níveis de mRNA de CD112 e/ou CD155 em amostras do tumor (p. ex., por métodos conhecidos na técnica tais como RT-PCR quantitativa). Em algumas modalidades, medições de CD112 ou CD155 solúvel em amostras de sangue obtidas de pacientes com câncer podem ser utilizadas para identificar se um câncer é enriquecido com a expressão de CD112 e/ou CD155. Em algumas modalidades, o método compreende obter uma amostra de um indivíduo (p. ex., uma amostra do tumor ou uma amostra de sangue), medir o nível de CD112 e/ou CD155 na amostra do indivíduo e comparar o nível de CD112 e/ou CD155 na amostra do indivíduo a um valor controle (p. ex., uma amostra de um indivíduo controle sadio ou um nível de expressão de CD112 e/ou CD155 determinado para uma população de controles sadios). Em algumas modalidades, o método compreende determinar se o nível de CD112 e/ou CD155 na amostra do indivíduo é maior do que um valor controle e subsequentemente administrar ao indivíduo um anticorpo anti-TIGIT como aqui descrito.
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[00352] Em algumas modalidades, o câncer é um câncer ou célula cancerosa que é enriquecido com células T ou células natural killer (NK) que expressam TIGIT. Em algumas modalidades, cânceres enriquecidos com TIGIT são identificados com avaliação por imuno-histoquímica de amostras do tumor utilizando anticorpos específicos para TIGIT. Em algumas modalidades, utiliza-se um anticorpo que é específico para células T ou células NK (p. ex., anti-CD3, anti-CD4, anti-CD8, anti-CD25 ou anti-CD56) para determinar um subconjunto ou subconjuntos de células infiltrantes de tumor que expressam TIGIT. Em algumas modalidades, o câncer é identificado com base na avaliação de níveis do mRNA de TIGIT em amostras do tumor. Em algumas modalidades, medições de TIGIT solúvel em amostras de sangue obtidas de pacientes com câncer podem ser utilizadas (opcionalmente em combinação com um anticorpo que é específico para células T ou células NK) para identificar se um câncer é enriquecido com células T ou células NK que expressam TIGIT. Em algumas modalidades, o método compreende obter uma amostra de um indivíduo (p. ex., uma amostra do tumor ou uma amostra de sangue), medir o nível de TIGIT na amostra do indivíduo, opcionalmente detectando a presença de células T ou células NK (p. ex., utilizando um anticorpo que é específico para células T ou células NK, tal como anti-CD3, anti-CD4, anti-CD8, anti-CD25, ou anti-CD56) e comparar o nível de TIGIT na amostra do indivíduo a um valor controle (p. ex., uma amostra de um indivíduo controle sadio ou um nível de expressão de TIGIT determinado para uma população de controles sadios). Em algumas modalidades, o método compreende determinar se o nível de TIGIT na amostra do indivíduo é maior do que um valor controle e subsequentemente administrar ao indivíduo um anticorpo anti-TIGIT como aqui descrito.
[00353] Em algumas modalidades, o câncer é câncer de bexiga, câncer de mama, câncer de útero, câncer cervical, câncer de ovário, câncer de próstata, câncer de testículo, câncer de esôfago, câncer gastrointestinal, câncer
120 / 207 gástrico, câncer de pâncreas, câncer colorretal, câncer de cólon, câncer de rim, carcinoma renal de células claras, câncer da cabeça e pescoço, câncer de pulmão, adenocarcinoma de pulmão, câncer de estômago, câncer de células germinativas, câncer ósseo, câncer de fígado, câncer de tireoide, câncer de pele, melanoma, neoplasia do sistema nervoso central, mesotelioma, linfoma, leucemia, leucemia linfocítica crônica, linfoma difuso de grandes células B, linfoma folicular, linfoma de Hodgkin, mieloma ou sarcoma. Em algumas modalidades, o câncer é selecionado dentre câncer gástrico, câncer de testículo, câncer de pâncreas, adenocarcinoma de pulmão, câncer de bexiga, câncer da cabeça e pescoço, câncer de próstata, câncer de mama, mesotelioma e carcinoma renal de células claras. Em algumas modalidades, o câncer é linfoma ou leucemia, incluindo, entre outras, leucemia mieloide aguda, mieloide crônica, linfocítica aguda ou linfocítica crônica, linfoma difuso de grandes células B, linfoma folicular, linfoma das células do manto, linfoma linfocítico pequeno, linfoma mediastinal primário de grandes células B, linfoma esplênico de células B da zona marginal ou linfoma extranodal de células B da zona marginal. Em algumas modalidades, o câncer é selecionado dentre leucemia linfocítica crônica, linfoma difuso de grandes células B, linfoma folicular e linfoma de Hodgkin. Em algumas modalidades, o câncer é um câncer metastático.
[00354] Em algumas modalidades, o método compreende ainda administrar ao indivíduo uma quantidade terapêutica de um agente terapêutico adicional. Em algumas modalidades, o agente terapêutico adicional é um agente imuno-oncológico. Em algumas modalidades, o agente imuno- oncológico é um agente (p. ex., um anticorpo, pequena molécula ou peptídeo) que antagoniza ou inibe um componente de uma via de controle imunológico (checkpoint imune), tal como a via de PD-1, a via de CTLA-4, a via de Lag3 ou a via de TIM-3. Em algumas modalidades, o agente imuno-oncológico é um agonista de um coativador de células T (ou seja, um agonista de uma
121 / 207 proteína que estimula a ativação de células T) ao atingir a via de OX-40, a via de 4-1BB (CD137), a via de CD27, a via de ICOS ou a via de GITR.
[00355] Em algumas modalidades, o agente imuno-oncológico é um inibidor da via de PD-1. Em algumas modalidades, o inibidor da via de PD-1 é um anticorpo anti-PD-1 ou anticorpo anti-PD-L1, tal como, entre outros, pembrolizumabe, nivolumabe, durvalumabe, pidilizumabe, avelumabe ou atezolizumabe. Inibidores da via de PD-1 são descritos na técnica. Ver, p. ex., Dolan et al., Cancer Control, 2014, 21:231-237; Luke et al., Oncotarget, 2014, 6:3479-3492; US 2016/0222113; US 2016/0272708; US 2016/0272712; e US 2016/0319019.
[00356] Em algumas modalidades, o agente imuno-oncológico é um agonista de um coativador de células T. Em algumas modalidades, o agente imuno-oncológico é um agonista de CD28, CD28H, CD3, 4-1BB (CD137), ICOS, OX40, GITR, CD27 ou CD40. Em algumas modalidades, o agente imuno-oncológico é uma citocina imunoestimuladora. Em algumas modalidades, a citocinas imune estimuladora imune é fator estimulador de colônias de granulócitos-macrófagos (GM-CSF), fator estimulador de colônias de macrófagos (M-CSF), fator estimulador de colônias de granulócitos (G-CSF), interleucina 1 (IL-1), interleucina 2 (IL-2), interleucina 3 (IL-3), interleucina 12 (IL-12), interleucina 15 (IL-15) ou interferon gama (IFN-γ). Em algumas modalidades, o agente imuno-oncológico é SGN-2FF (Seattle Genetics; ver, p. ex., WO 2009/135181 A2, WO 2012/019165 A2 e WO 2017/096274 A1).
[00357] Em algumas modalidades, o agente terapêutico adicional é selecionado dentre um anticorpo anti-CD25, anticorpo anti-PD-1, anticorpo anti-PD-L1, anticorpo anti-Tim3, anticorpo anti-Lag3, anticorpo anti-CTLA4, anticorpo anti-41BB, anticorpo anti-OX40, anticorpo anti-CD3, anticorpo anti-CD40, anticorpo anti-CD47M, anticorpo anti-CSF1R, anticorpo anti- TLR, anticorpo anti-STING, anticorpo anti-RIGI, anticorpo anti-receptor
122 / 207 quinase TAM, anticorpo anti-NKG2A, um anticorpo anti-NKG2D, um anticorpo anti-GD2, um anticorpo anti-HER2, um anticorpo anti-EGFR, um anticorpo anti-PDGFR-α, um anticorpo anti-SLAMF7, um anticorpo anti- VEGF, um anticorpo anti-CTLA-4, um anticorpo anti-CD20, um anticorpo anti-cCLB8, um anticorpo anti-KIR e um anticorpo anti-CD52. Em algumas modalidades, o agente terapêutico adicional é selecionado dentre SEA-CD40 (Seattle Genetics; ver, p. ex., WO 2006/128103 A2 e WO 2016/069919 A1), avelumabe, durvalumabe, nivolumabe, pembrolizumabe, pidilizumabe, atezolizumabe, Hul4.18K322A (anticorpo anti-GD2, St. Jude), Hu3F8 (anticorpo anti-GD2, MSKCC), dinituximabe, trastuzumabe, cetuximabe, olaratumabe, necitumumabe, elotuzumabe, ramucirumabe, pertuzumabe, ipilimumabe, bevacizumabe, rituximabe, obinutuzumabe, siltuximabe, ofatumumabe e alentuzumabe.
[00358] Em algumas modalidades, o tratamento com um anticorpo anti-TIGIT como aqui descrito é combinado com um ou mais outros tratamentos contra o câncer, tais como cirurgia ou radiação. Em algumas modalidades, o tratamento com um anticorpo anti-TIGIT como aqui descrito é combinado com uma ou mais outros agentes contra o câncer, tais como agentes quimioterápicos. Agentes quimioterápicos exemplares não limitantes incluem um agente alquilante (p. ex., ciclofosfamida, ifosfamida, clorambucil, bussulfano, melfalano, mecloretamina, uramustina, tiotepa, nitrosureias ou temozolomida), uma antraciclina (p. ex., doxorrubicina, adriamicina, daunorrubicina, epirrubicina ou mitoxantrona), um desorganizador do citoesqueleto (p. ex., paclitaxel ou docetaxel), um inibidor de histona desacetilase (p. ex., vorinostat ou romidepsina), um inibidor de topoisomerase (p. ex., irinotecano, topotecano, ansacrina, etoposídeo ou teniposídeo), um inibidor de quinase (p. ex., bortezomibe, erlotinibe, gefitinibe, imatinibe, vemurafenibe ou vismodegibe), um análogo de nucleosídeo ou análogo do precursor (p. ex., azacitidina, azatioprina, capecitabina, citarabina,
123 / 207 fluorouracila, gencitabina, hidroxiureia, mercaptopurina, metotrexato ou tioguanina), um antibiótico peptídico (p. ex., actinomicina ou bleomicina), um agente à base de platina (p. ex., cisplatina, oxaloplatina ou carboplatina) ou um alcaloide de planta (p. ex., vincristina, vimblastina, vinorelbina, vindesina, podofilotoxina, paclitaxel ou docetaxel), galardina, talidomida, lenalidomida e pomalidomida.
[00359] Em algumas modalidades, o anticorpo anti-TIGIT (e opcionalmente um agente terapêutico adicional) é administrado em uma quantidade ou dose terapeuticamente eficaz. Uma faixa para dose diária entre aproximadamente 0,01 mg/kg e 500 mg/kg, entre aproximadamente 0,1 mg/kg e 200 mg/kg, entre aproximadamente 1 mg/kg e 100 mg/kg ou entre aproximadamente 10 mg/kg e 50 mg/kg pode ser utilizada. As doses, no entanto, podem ser variadas de acordo com diversos fatores, incluindo a via de administração escolhida, a formulação da composição, a resposta do paciente, a gravidade da condição, o peso do indivíduo e o juízo do médico responsável. A dose pode ser aumentada ou diminuída ao longo do tempo, conforme requerido por um paciente individual. Em certos casos, é fornecida inicialmente a um paciente uma dose baixa, que é então aumentada até uma dose eficaz tolerável para o paciente. A determinação de uma quantidade eficaz está bem ao alcance dos técnicos no assunto.
[00360] A via de administração de um anticorpo anti-TIGIT ou composição farmacêutica compreendendo um anticorpo anti-TIGIT (e opcionalmente um agente imuno-oncológico ou outro tratamento terapêutico) pode ser liberação oral, intraperitoneal, transdérmica, subcutânea, intravenosa, intramuscular, por inalação, tópica, intralesional, retal, intrabrônquica, nasal, transmucosa, intestinal, ocular ou ótica, ou quaisquer outros métodos conhecidos na técnica. Em algumas modalidades, o anticorpo anti-TIGIT (e opcionalmente um agente imuno-oncológico) é administrado por via oral, intravenosa ou intraperitoneal.
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[00361] Os agentes terapêuticos coadministrados (p. ex., o anticorpo anti-TIGIT e um agente terapêutico adicional) podem ser administrados juntos ou separados, simultaneamente ou em momentos diferentes. Quando administrados, os agentes terapêuticos podem ser administrados independentemente uma vez, duas vezes, três, quatro vezes diariamente ou com mais ou menos frequência, se necessário. Em algumas modalidades, os agentes terapêuticos administrados são administrados uma vez ao dia. Em algumas modalidades, os agentes terapêuticos administrados são administrados no mesmo momento ou momentos, por exemplo, como uma mistura. Em algumas modalidades, um ou mais dos agentes terapêuticos são administrados em uma formulação de liberação sustentada.
[00362] Em algumas modalidades, o anticorpo anti-TIGIT e um agente terapêutico adicional são administrados simultaneamente. Em algumas modalidades, o anticorpo anti-TIGIT e um agente terapêutico adicional são administrados sequencialmente. Por exemplo, em algumas modalidades, um anticorpo anti-TIGIT é administrado primeiramente, por exemplo, por aproximadamente 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 15, 20, 25, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100 dias ou mais antes de administrar um agente terapêutico adicional. Em algumas modalidades, um agente terapêutico adicional é administrado primeiramente, por exemplo, por aproximadamente 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 15, 20, 25, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100 dias ou mais antes de administrar um anticorpo anti-TIGIT.
[00363] Em algumas modalidades, o anticorpo anti-TIGIT (e opcionalmente o agente terapêutico adicional) é administrado ao indivíduo durante um período prolongado de tempo, p. ex., por pelo menos 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 150, 200, 250, 300, 350 dias ou mais. V. Composições e kits
[00364] Em outro aspecto, são providos composições e kits compreendendo um anticorpo anti-TIGIT para uso no tratamento ou
125 / 207 prevenção de um câncer em um indivíduo. Composições farmacêuticas
[00365] Em algumas modalidades, são providas composições farmacêuticas que compreendem um anticorpo anti-TIGIT para uso na administração a um indivíduo portador de um câncer. Em algumas modalidades, o anticorpo anti-TIGIT é como aqui descrito, p. ex., um anticorpo anti-TIGIT com afinidade de ligação, atividade, reatividade cruzada, reconhecimento de epítopo e/ou uma ou mais sequências de CDR, VH e/ou VL como aqui reveladas. Em algumas modalidades, o anticorpo anti- TIGIT é afucosilado.
[00366] Em algumas modalidades, um anticorpo anti-TIGIT e um agente terapêutico adicional são formulados em composições farmacêuticas, juntos ou separadamente, como aqui descrito. Em algumas modalidades, o agente terapêutico adicional é um agente imuno-oncológico, tal como um inibidor da via de PD-1 ou um inibidor da via de CTLA-4. Em algumas modalidades, o agente imuno-oncológico é um agonista de um coativador de células T. Em algumas modalidades, o inibidor da via de PD-1 é um anticorpo anti-PD-1 ou anticorpo anti-PD-L1, tal como, entre outros, pembrolizumabe, nivolumabe, durvalumabe, pidilizumabe ou atezolizumabe.
[00367] Orientação para preparação de formulações para uso na presente invenção é encontrada em, por exemplo, Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 21a Ed., 2006, supra; Martindale: The Complete Drug Reference, Sweetman, 2005, Londres: Pharmaceutical Press; Niazi, Handbook of Pharmaceutical Manufacturing Formulations, 2004, CRC Press; e Gibson, Pharmaceutical Preformulation and Formulation: A Practical Guide from Candidate Drug Selection to Commercial Dosage Form, 2001, Interpharm Press, os quais são aqui incorporados por referência. As composições farmacêuticas aqui descritas podem ser fabricadas de maneira conhecida pelos técnicos no assunto, ou seja, por meio de processos
126 / 207 convencionais de mistura, dissolução, granulação, confecção de drágeas, emulsificação, encapsulação, captura ou liofilização. Os métodos e excipientes a seguir são simplesmente exemplares e de maneira alguma limitantes.
[00368] Em algumas modalidades, um anticorpo anti-TIGIT (e opcionalmente um agente terapêutico adicional) é preparado para entrega em uma formulação de liberação sustentada, liberação controlada, liberação prolongada, liberação cronometrada ou liberação retardada, por exemplo, em matrizes semipermeáveis de polímeros hidrofóbicos sólidos contendo o agente terapêutico. Vários tipos de materiais para liberação sustentada foram estabelecidos e são bem conhecidos pelos técnicos no assunto. As formulações atuais de liberação prolongada incluem comprimidos revestidos com película, sistemas multiparticulados ou em pellet, tecnologias de matrizes utilizando materiais hidrofílicos ou lipofílicos e comprimidos à base de ceras com excipientes formadores de poros (ver, por exemplo, Huang, et al. Drug Dev. Ind. Pharm. 29:79 (2003); Pearnchob, et al. Drug Dev. Ind. Pharm. 29:925 (2003); Maggi, et al. Eur. J. Pharm. Biopharm. 55:99 (2003); Khanvilkar, et al., Drug Dev. Ind. Pharm. 228:601 (2002); e Schmidt, et al., Int. J. Pharm. 216:9 (2001)). Os sistemas para entrega com liberação sustentada podem, dependendo do seu desenho, liberar os compostos ao longo de horas ou dias, por exemplo, ao longo de 4, 6, 8, 10, 12, 16, 20, 24 horas ou mais. Normalmente, formulações de liberação sustentada podem ser preparadas com polímeros naturais ou sintéticos, por exemplo, vinilpirrolidonas poliméricas, tais como polivinilpirrolidona (PVP); polímeros hidrofílicos de carboxivinila; hidrocoloides hidrofóbicos e/ou hidrofílicos, tais como metilcelulose, etilcelulose, hidroxipropilcelulose e hidroxipropilmetilcelulose; e carboxipolimetileno.
[00369] Para administração oral, um anticorpo anti-TIGIT (e opcionalmente um agente terapêutico adicional) pode ser formulado
127 / 207 rapidamente pela combinação com veículos farmaceuticamente aceitáveis que são bem conhecidos na técnica. Tais veículos permitem que os compostos sejam formulados como comprimidos, pílulas, drágeas, cápsulas, emulsões, suspensões lipofílicas e hidrofílicas, líquidos, géis, xaropes, pastas, suspensões e similares, para ingestão oral por um paciente a ser tratado. Preparados farmacêuticos para uso oral podem ser obtidos misturando os compostos com um excipiente sólido, opcionalmente moendo a mistura resultante e processando a mistura de grânulos, depois de adicionados auxiliares adequados, se desejado, para obter comprimidos ou núcleos de drágeas. Os excipientes adequados incluem, por exemplo, cargas tais como açúcares, incluindo lactose, sacarose, manitol ou sorbitol; preparados celulósicos tais como, por exemplo, amido de milho, amido de trigo, amido de arroz, amido de batata, gelatina, goma tragacanta, metilcelulose, hidroxipropilmetilcelulose, carboximetilcelulose sódica e/ou polivinilpirrolidona (PVP). Se desejado, agentes desintegrantes podem ser adicionais, tais como polivinilpirrolidona reticulada, ágar ou ácido algínico ou um sal do mesmo tal como alginato de sódio.
[00370] O anticorpo anti-TIGIT (e opcionalmente o agente terapêutico adicional) podem ser formulados para administração parenteral por injeção, p. ex., por injeção em bólus ou infusão contínua. Para injeção, o composto ou compostos podem ser formulados em preparados por dissolução, suspensão ou emulsificação destes em um solvente aquoso ou não aquoso, tal como óleos vegetais ou outros semelhantes, glicerídeos sintéticos de ácidos alifáticos, ésteres de ácidos alifáticos superiores ou propilenoglicol; e, se desejado, com aditivos convencionais tais como solubilizantes, agentes isotônicos, agentes de suspensão, agentes emulsionantes, estabilizantes e conservantes. Em algumas modalidades, os compostos podem ser formulados em soluções aquosas, de preferência em tampões fisiologicamente compatíveis tais como solução de Hank, solução de Ringer ou solução salina
128 / 207 fisiológica tamponada. As formulações para injeção podem ser apresentadas em forma de dose unitária, p. ex., em ampolas ou em recipientes de doses múltiplas, com um conservante adicionado. As composições podem tomar formas tais como suspensões, soluções ou emulsões em veículos oleosos ou aquosos tais e podem conter agentes de formulação tais como agentes de suspensão, estabilizantes e/ou dispersantes.
[00371] O anticorpo anti-TIGIT (e opcionalmente o agente terapêutico adicional) pode ser administrado sistemicamente por meios transmucoso ou transdérmico. Para administração transmucosa ou transdérmica, são usados penetrantes apropriados para a barreira a ser permeada na formulação. Para administração tópica, os agentes são formulados em pomadas, cremes, salvas, pós e géis. Em uma modalidade, o agente para liberação transdérmica pode ser DMSO. Os sistemas de liberação transdérmica podem incluir, p. ex., adesivos. Para administração transmucosa, usam-se penetrantes apropriados para a barreira a ser permeada na formulação. Tais penetrantes são em geral conhecidos na técnica. Formulações exemplares para liberação transdérmica incluem aquelas descritas nas Patentes dos E.U.A. Nos 6 589 549; 6 544 548; 6 517 864; 6 512 010; 6 465 006; 6 379 696; 6 312 717 e 6 310 177, cujos conteúdos são aqui incorporados por referência.
[00372] Em algumas modalidades, uma composição farmacêutica compreende um veículo e/ou excipientes aceitáveis. Um veículo farmaceuticamente aceitável inclui quaisquer solventes, meios de dispersão ou revestimentos que sejam fisiologicamente compatíveis e que, de preferência, não interfiram ou do contrário inibam a atividade do agente terapêutico. Em algumas modalidades, o veículo é adequado para administração intravenosa, intramuscular, oral, intraperitoneal, transdérmica, tópica ou subcutânea. Veículos farmaceuticamente aceitáveis podem conter um ou mais compostos fisiologicamente aceitáveis que atuam, por exemplo, no sentido de estabilizar a composição ou aumentar ou diminuir a absorção
129 / 207 do(s) agente(s) ativo(s). Os compostos fisiologicamente aceitáveis podem incluir, por exemplo, carboidratos, tais como glicose, sacarose ou dextranos, antioxidantes, tais como ácido ascórbico ou glutationa, agentes quelantes, proteínas de baixo peso molecular, composições que reduzem a depuração ou hidrólise dos agentes ativos, ou excipientes ou outros estabilizantes e/ou tampões. Outros veículos farmaceuticamente aceitáveis e suas formulações são bem conhecidos e em geral descritos em, por exemplo, Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 21a edição, Filadélfia, PA. Lippincott Williams & Wilkins, 2005. Vários excipientes farmaceuticamente aceitáveis são bem conhecidos na técnica e podem ser encontrados em, por exemplo, Handbook of Pharmaceutical Excipients (5a ed., Ed. Rowe et al., Pharmaceutical Press, Washington, D.C.).
[00373] As doses e concentrações desejadas do fármaco de composições farmacêuticas da invenção podem variar dependendo do uso em particular cogitado. A determinação da dose apropriada ou via de administração está ao alcance do técnico no assunto. Doses adequadas são também aqui descritas. Kits
[00374] Em algumas modalidades, são providos kits para uso no tratamento de um indivíduo portador de um câncer. Em algumas modalidades, o kit compreende: um anticorpo anti-TIGIT; e um agente terapêutico adicional.
[00375] Em algumas modalidades, anticorpo anti-TIGIT é como aqui descrito, p. ex., um anticorpo anti-TIGIT com afinidade de ligação, atividade, reatividade cruzada, reconhecimento de epítopo e/ou uma ou mais sequências de CDR, VH e/ou VL como aqui reveladas. Em algumas modalidades, o anticorpo anti-TIGIT é afucosilado. Em algumas modalidades, o agente terapêutico adicional é um agente imuno-oncológico, tal como um inibidor da
130 / 207 via de PD-1 ou um inibidor da via de CTLA-4. Em algumas modalidades, o agente imuno-oncológico é um agonista de um coativador de células T. Em algumas modalidades, o inibidor da via de PD-1 é um anticorpo anti-PD-1 ou anticorpo anti-PD-L1. Em algumas modalidades, o agente imuno-oncológico é pembrolizumabe, nivolumabe, durvalumabe, pidilizumabe ou atezolizumabe.
[00376] Em algumas modalidades, os kits podem compreender ainda materiais instrutivos contendo orientações (ou seja, protocolos) para a prática dos métodos desta invenção (p. ex., instruções sobre o uso do kit para tratar um câncer). Embora compreendam tipicamente materiais redigidos ou impressos, os materiais com instruções não se limitam a isso. Qualquer meio capaz de armazenar tais instruções e comunica-las a um usuário final é contemplado por esta invenção. Tais mídias incluem, entre outros, meios de armazenamento eletrônico (p. ex., discos magnéticos, fitas, cartuchos, chips), mídia óptica (p. ex., CD ROM) e similares. Tais mídias podem incluir endereços de sites na Internet que fornecem tais materiais com instruções. VI. Exemplos
[00377] Os exemplos discutidos abaixo pretendem ser simplesmente exemplares da invenção e não devem ser considerados como limitações à invenção de maneira alguma. Os exemplos não se destinam a declarar que os experimentos abaixo sejam todos ou os únicos experimentos realizados. Foram feitos esforços para assegurar a exatidão em relação aos números usados (por exemplo, quantidades, temperatura etc.), mas alguns erros experimentais e desvios devem ser reconhecidos. A menos que indicado o contrário, as partes são partes em peso, a massa molar é massa molar média, a temperatura é em graus centígrados e a pressão é próxima ou a atmosférica. Exemplo 1: Geração de anticorpos anti-TIGIT
[00378] Anticorpos monoclonais inteiramente humanos anti-TIGIT foram gerados utilizando um sistema de apresentação de anticorpo baseado
131 / 207 em leveduras (ver, p. ex., Xu et al, “Addressing polyspecificity of antibodies selected from an in vitro yeast presentation system: a FACS-based, high- throughput selection and analytical tool”, PEDS, 2013, 26:663-670; WO 2009/036379; WO 2010/105256; e WO 2012/009568). Oito bibliotecas de sintéticos humanos virgens em leveduras, cada uma com ~109 de diversidade foram rastreadas.
Para as duas primeiras rodadas de seleção, empregou-se uma técnica de separação com esfera magnética utilizando o sistema Miltenyi MACS, como descrito anteriormente (ver, p. ex., Siegel et al, “High efficiency recovery and epitope-specific sorting of an scFv yeast display library”, J Immunol Methods, 2004, 286:141-153). Resumidamente, células de levedura (~1010 células/biblioteca) foram incubadas com 5 mL de antígeno de fusão com Fc biotinilado a 10 nM por 30 minutos a 30 ºC em tampão de lavagem (solução salina com tampão fosfato (PBS)/albumina sérica bovina 0,1% (BSA)). Depois de lavado uma vez com 40 mL de tampão de lavagem gelado, o pellet celular foi ressuspenso em 20 mL de tampão de lavagem e MicroBeads de estreptavidina (500 µL) foram adicionadas às leveduras e incubadas por 15 minutos a 4 ºC.
Em seguida, as leveduras foram peletizadas, ressuspensas em 20 mL de tampão de lavagem e carregadas em uma coluna Miltenyi LS.
Depois que os 20 mL foram carregados, a coluna foi lavada 3 vezes com 3 mL de tampão de lavagem.
A coluna foi então removida do campo magnético e a levedura foi eluída com 5 mL de meio de crescimento e então cultivada durante a noite.
Os ciclos seguintes de seleção foram realizados com citometria de fluxo.
Aproximadamente 2×107 leveduras foram peletizadas, lavadas três vezes com tampão de lavagem e incubadas a 30 ºC com antígeno de fusão com Fc 10 nM e concentrações decrescentes do antígeno monomérico biotinilado (100 a 1 nM) sob condições de equilíbrio, antígenos de fusão com Fc biotinilados 10 nM ou antígenos monoméricos 100 nM de espécies diferentes a fim de obter reatividade cruzada entre as espécies, ou com um reagente de depleção de poli-especificidade (PSR) para
132 / 207 remover anticorpos não específicos da seleção. Para a depleção com PSR, as bibliotecas foram incubadas com uma diluição 1:10 de reagente PSR biotinilado como descrito anteriormente (ver, p. ex., Xu et al, supra). As leveduras foram então lavadas duas vezes com tampão de lavagem e coradas com LC-FITC (diluído 1:100) e com os reagentes secundários SA-633 (diluído 1:500) ou EA-PE (extravidina-R-PE, diluído 1:50) por 15 minutos a 4 ºC. Depois de lavados duas vezes com tampão de lavagem, os pellets celulares foram ressuspensos em 0,3 mL de tampão de lavagem e transferidos para tubos de separação com tampa do tipo strainer (filtro). A separação foi realizada utilizando um separador FACS ARIA (BD Biosciences) e gates para separação foram determinados para selecionar anticorpos com as características desejadas. As rodadas de seleção foram repetidas até ter sido obtida uma população com todas as características desejadas. Depois da rodada final de separação, as leveduras foram semeadas e colônias individuais foram coletadas para caracterização.
[00379] Os antígenos incluíram TIGIT humano-Fc dimérico recombinante (Acro Biosystems TIT-H5254), TIGIT humano monomérico (Sino Biological 10917-H08H), TIGIT de camundongo-Fc dimérico (R&D Systems, 7267-TG) e TIGIT de camundongo monomérico (Sino Biologics 50939-M08H).
[00380] Campanha de virgens: 744 clones foram sequenciados produzindo 345 clones únicos (CDRH3 única). 18 linhagens germinativas de VH foram representadas nos clones.
[00381] Campanha para diversificação em batelada de cadeias leves: Plasmídeos da cadeia pesada (VH) de um pool enriquecido com aglutinante do ciclo seis das seleções para verificação de virgens foram extraídos das leveduras pela técnica de Smash e Grab, propagados em e subsequentemente purificados de E. Coli e, a seguir, transformados em uma biblioteca de cadeia leve com diversidade de 107.
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[00382] As seleções foram realizadas sob essencialmente as mesmas condições que as utilizadas para a verificação de virgens.. Resumidamente, uma rodada de enriquecimento com esferas magnéticas foi seguido por três rodadas de seleção por citometria de fluxo. Na rodada de enriquecimento com esferas magnéticas, usou-se o antígeno de fusão com Fc biotinilado 10 nM. O primeiro ciclo no citômetro de fluxo consistiu em uma rodada de seleção positiva utilizando antígeno monovalente bionitilado 100 nM. Este foi seguido por uma segunda rodada, que consistiu em uma rodada de seleção negativa para depleção com PSR. A rodada final (terceira) consistiu em uma rodada de seleção positiva, no qual o antígeno monovalente foi titulado a 100 nM, 10 nM, 1 nM. Para todas as bibliotecas, as leveduras das separações a 1 nM desse terceiro ciclo foram semeadas e colônias individuais foram coletadas e distinguidas. No total, 728 clones foram sequenciados, produzindo 350 combinações HC/LC únicas (93 CDRH3s únicas).
[00383] No total, 695 clones únicos foram identificados entre as campanhas para virgens e em batelada por shuffle (embaralhamento) de cadeias leves. Exemplo 2: Caracterização de anticorpos anti-TIGIT
[00384] 65 clones foram selecionados para produção e avaliação adicional, representando 12 linhagens germinativas de VH e 9 linhagens germinativas de VL. Produção e purificação de anticorpos
[00385] Clones de leveduras foram cultivados até a saturação e, então, induzidos por 48 horas a 30 ºC com agitação. Após a indução, as células de leveduras foram peletizadas e os sobrenadantes foram coletados para purificação. IgGs foram purificadas usando uma coluna com Proteína A e eluídas com ácido acético, pH 2,0. Fragmentos Fab foram gerados por digestão com papaína e purificados com KappaSelect (GE Healthcare LifeSciences).
134 / 207 Ligação de anticorpos anti-TIGIT à proteína humana recombinante e de camundongo
[00386] Foram realizadas medições da afinidade em um Octet RED384 ForteBio em geral como descrito anteriormente (ver, p. ex., Estep et al., “High throughput solution-based measurement of antibody-antigen affinity and epitope binning”, Mabs, 2013, 5:270-278). Resumidamente, medições da afinidade no ForteBio foram realizadas carregando IgGs em linha em sensores AHQ. Os sensores foram equilibrados fora da linha em tampão do ensaio por 30 minutos e então monitorados por 60 segundos para estabelecimento do basal. Sensores com IgGs carregadas foram expostos ao antígeno a 100 nM (antígeno de fusão com Fc dimérico ou antígeno monomérico) por 3 minutos e, depois disso, foram transferidos para tampão do ensaio por 3 minutos para medição da constante (da taxa para) dissociação. Toda a cinética da ligação e dissociação foi analisada utilizando o modelo de ligação 1:1.
[00387] Dos 65 clones de IgG, 43 tinham uma afinidade pelo monômero de TIGIT < 100 nM. Dos 65 clones de IgG, 34 apresentaram reatividade cruzada com TIGIT de camundongo-Fc. A afinidade de ligação de clones selecionados é mostrada na Tabela 1 abaixo. Epitope binning/ensaio de competição por ligante
[00388] Epitope binning/bloqueio de ligantes foi realizado utilizando um ensaio de bloqueio cruzado padrão no formato sanduíche no sistema ForteBio Octet RED384. Anti-IgG alvo controle foi carregada em sensores AHQ e sítios não ocupados para ligação com Fc no sensor foram bloqueados com um anticorpo IgG1 humano irrelevante. Os sensores foram então expostos ao antígeno alvo a 100 nM seguido por um segundo anticorpo anti- alvo ou ligante (CD155-Fc humano (Sino Biological, 10109-H02H)). A ligação adicional pelo segundo anticorpo ou ligante após a associação do antígeno indica um epítopo desocupado (não competidor), enquanto nenhuma ligação indica bloqueio do epítopo (bloqueio pelo competidor ou ligante).
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[00389] Quatro anticorpos binning (competidores) (não mutuamente exclusivos) foram usados para avaliação da competição (bin) e cinco perfis sobrepostos de binning foram identificados. 63 dos 65 anticorpos anti-TIGIT competiram com o ligante pela ligação a hTIGIT-Fc. Os perfis de binning e os resultados da competição com o ligante de clones selecionados são mostrados na Tabela 1 abaixo. Tabela 1. Epitope binning, competição com ligante e dados de afinidade de clones anti-TIGIT selecionados IgG KD TIGIT IgG KD TIGIT de Competição com IgG KD TIGIT Clone Código bin humano monômero camundongo-Fc CD155 humano-Fc (M) (M) (M) 2 1, 2, 3, 4 Sim 9,56E-10 1,01E-08 2,03E-09 3 1, 2, 3, 4 Sim 2,77E-09 7,36E-08 5,64E-09 5 1, 2, 3, 4 Sim 9,85E-10 1,41E-08 3,25E-09 13 1, 2, 3 Sim 5,43E-10 2,56E-09 1,16E-10 14 1, 2, 3 Sim 2,01E-09 5,87E-08 2,43E-09 16 1, 2, 3 Sim 6,90E-10 2,06E-09 1,05E-08 18 1, 2, 3 Sim 2,39E-09 5,08E-08 8,82E-09 21 1, 2, 3 Sim 5,85E-10 2,18E-09 N.B. 22 1, 2, 3 Sim 7,90E-10 1,38E-08 1,05E-08 25 1, 2, 3 Sim 6,20E-10 6,18E-10 1,10E-09 27 1, 2, 3 Sim 5,58E-10 2,32E-09 N.B. 54 1, 2, 3 Sim 6,89E-10 3,49E-09 N.B. Observações: N.B. = Não ligador sob as condições desse ensaio Os dados do código Bin e competição com CD155 foram gerados no sistema ForteBio Octet RED384 usando um ensaio de bloqueio cruzado padrão no formato sanduíche como descrito no Exemplo 2. Os dados de afinidade KD foram gerados no sistema ForteBio Octet RED384 como descrito no Exemplo 2. Ligação de anticorpos anti-TIGIT a TIGIT humano, de camundongo e de macaco Cynomolgus superexpressos em células HEK 293
[00390] Células HEK 293 foram modificadas para expressar estavelmente altos níveis de TIGIT humano, de camundongo e de macaco Cynomolgus por transdução lentiviral. Aproximadamente 100.000 células HEK 293 (TIGIT-negativas) originais ou células HEK 293 com superexpressão de TIGIT humano, de camundongo ou de macaco Cynomolgus foram coradas com 100 nM de cada anticorpo anti-TIGIT por 5 minutos à temperatura ambiente. As células foram então lavadas duas vezes com tampão de lavagem e incubadas com anti-IgG humana conjugado a PE por 15 minutos em gelo. As células foram então lavadas duas vezes com
136 / 207 tampão de lavagem e analisadas por citometria de fluxo em um instrumento FACS Canto II (BD Biosciences). O número de vezes em relação ao fundo (Fold over background, FOB) foi calculado como a mediana da intensidade de fluorescência (MFI) do clone anti-TIGIT ligado a células alvo-positivas, dividido pela MFI do clone anti-TIGIT ligado a células alvo-negativas.
[00391] Como mostrado na Figura 1, todos os 65 anticorpos mostraram ligação específica à linhagem 293-hTIGIT (FOB>10, como indicado pela linha preta horizontal no quadro). 53 clones ligaram-se especificamente à linhagem 293-cyTIGIT enquanto 31 clones ligaram-se especificamente à linhagem 293-mTIGIT. Ensaio com reagente de poliespecificidade (PSR)
[00392] A avaliação da ligação a um reagente de poliespecificidade foi conduzida para determinar a especificidade por TIGIT como descrito anteriormente (ver, p. ex., Xu et al, supra). Resumidamente, o reagente PSR biotinilado, diluído 1:10 do estoque, foi incubado com leveduras apresentadoras de IgG por 20 minutos em gelo. As células foram lavadas e marcadas com EA-PE (extravidina-R-PE) e lidas em um analisador de FACS. A pontuação da ligação poliespecífica é em uma escala de 0 a 1 e correlaciona-se com IgGs controle com baixa, média e alta ligação não específica, com escore de 0 indicando nenhuma ligação e escore de 1 indicando ligação não específica muito alta.
[00393] 62 dos 65 clones foram pontuados como ligadores não poliespecíficos com escore PSR < 0,10. Três clones pontuaram como baixos ligadores poliespecíficos (escore PSR 0,10 – 0,33). Ensaio de cromatografia de interação hidrofóbica
[00394] A cromatografia de interação hidrofóbica (HIC) foi realizada como descrita anteriormente (Estep et al., supra). Resumidamente, 5 μg de amostras de IgG foram dopadas com uma solução de fase móvel A (sulfato de amônio 1,8 M e fosfato de sódio 0,1 M em pH 6,6) para alcançar uma
137 / 207 concentração final de sulfato de amônio de aproximadamente 1 M antes da análise. Uma coluna Sepax Proteomix HIC butyl-NP5 foi usada com gradiente linear da fase móvel A e solução da fase móvel B (fosfato de sódio 0,1 M, pH 6,5) durante 20 minutos a uma vazão de 1 mL/minuto com monitoramento da absorbância UV a 280 nM.
[00395] A retenção aumentada de anticorpos em colunas hidrofóbicas correlacionou-se com hidrofobicidade aumentada e uma propensão para pouca expressão, agregação ou precipitação durante a purificação. Cinco dos 65 clones apresentaram tempo de retenção alto na HIC > 11,5 minutos, 10 clones apresentaram tempo de retenção médio na HIC de 10,5 – 11,5 minutos e o restante dos clones apresentou tempos de retenção baixos na HIC. Exemplo 3: Ligação de anticorpos anti-TIGIT a TIGIT humano, de camundongo e de macaco Cynomolgus expressos endogenamente em células T primárias
[00396] 65 anticorpos que mostraram ser específicos para proteína TIGIT humano recombinante e TIGIT humano expressos em células HEK 293 foram avaliados quando à sua capacidade para ligarem-se ao TIGIT endógeno em células T primárias do sangue periférico humano. Os anticorpos foram também avaliados quanto à reatividade cruzada ao TIGIT de Cynomolgus em células T do sangue periférico e 35 dos 65 clones foram avaliados quanto à reatividade cruzada ao TIGIT de camundongo em células T esplênicas ativadas.
[00397] Células T pan humanas foram isoladas negativamente do produto de leucoférese com 99% de pureza. 100.000 células foram coradas a 4 ºC por 30 minutos com 20 μg/mL de cada anticorpo anti-TIGIT. Os anticorpos anti-TIGIT foram detectados com anti-IgG humana policlonal de cabra, conjugado a PE (Jackson ImmunoResearch 109-116-098). As amostras foram analisadas em um citômetro de fluxo CytoFLEX. O percentual de TIGIT+ da população de linfócitos com gate em FSC/SSC foi determinado
138 / 207 para cada anticorpo usando a coloração somente de anti-IgG humana-PE para determinar o limiar para positividade.
[00398] Leucócitos de Cynomolgus foram isolados do sangue total por lise dos eritrócitos (eBioscience 00-4300). 200.000 células foram coradas a 4 ºC por 30 minutos com 20 μg/mL de cada anticorpo anti-TIGIT. Os anticorpos anti-TIGIT foram detectados com anti-IgG humana policlonal de cabra adsorvido contra imunoglobulinas de macaco conjugadas a AlexaFluor647 (SouthernBiotech 2049-31) e células T foram identificadas por contra-coloração com o clone SP34 anti-CD3 conjugado a FITC (BD Pharmingen 556611). As amostras foram analisadas em um citômetro de fluxo CytoFLEX. O percentual de TIGIT+ da população CD3+ foi determinado para cada anticorpo usando coloração apenas de anti-IgG humana-PE para determinar o limiar para positividade.
[00399] Células T de camundongo BALB/c foram isoladas de baços por seleção negativa (Stem Cell Technologies 19851A) até >99% de pureza. As células foram ativadas por 24 horas com o clone 145-2C11 anti-CD3 ligado à placa (BioLegend 100302) para regulação positiva de TIGIT.
200.000 células ativadas foram coradas a 4 ºC por 30 minutos com 20 μg/mL de cada anticorpo anti-TIGIT (35 de 65 clones testados). Os anticorpos anti- TIGIT foram detectados com anti-IgG humana policlonal de cabra conjugado a PE (Jackson ImmunoResearch 109-116-098). As amostras foram analisadas em um citômetro de fluxo FACSCalibur. A mediana da intensidade de fluorescência da população de linfócitos com gate em FSC/SSC foi determinada para cada anticorpo.
[00400] A Figura 2 mostra a ligação de 65 clones do anticorpo anti- TIGIT e um anticorpo controle de isótipo irrelevante a células T humanas primárias, de macaco Cynomolgus e de camundongo. Os Clones 13 e 25 mostraram forte ligação a todas as três espécies de células T. Ligação titulável de anticorpos anti-TIGIT a TIGIT expresso
139 / 207 na superfície celular
[00401] Células HEK 293 foram modificadas para expressar estavelmente altos níveis de TIGIT humano, de camundongo ou de macaco Cynomolgus por transdução lentiviral. 200.000 células 293-TIGIT foram coradas a 4 ºC por 30 minutos com uma titulação 3 vezes de 10 pontos (30 a 0,002 μg/mL) de cada anticorpo anti-TIGIT. Os anticorpos anti-TIGIT foram detectados com anti-IgG humana policlonal de cabra conjugado a PE (Jackson ImmunoResearch 109-116-098). As amostras foram analisadas em um citômetro de fluxo CytoFLEX. A mediana da intensidade de fluorescência da população com gate em FSC/SSC foi determinada para cada concentração do anticorpo. A regressão não linear de dados transformados em Log(X) foi usada para gerar os valores de EC50 no GraphPad Prism 6. Nenhum dos anticorpos anti-TIGIT mostrou ligação a células HEK 293 originais (TIGIT-) (dados não mostrados). A Figura 3A-C mostra a titulação da ligação e a Figura 3D mostra a EC50 da ligação de oito clones do anticorpo anti-TIGIT (clone 2, clone 5, clone 13, clone 16, clone 17, clone 20, clone 25 e clone 54) a TIGIT humano, de macaco Cynomolgus e de camundongo expressos em células HEK 293.
[00402] Células T de camundongo C57BL/6 foram isoladas de baços por seleção negativa (Stem Cell Technologies 19851A) até >99% de pureza. As células foram ativadas por 24 horas com o clone 145-2C11 anti-CD3 ligado à placa (BioLegend 100302) para regulação positiva de TIGIT.
200.000 células foram coradas a 4 ºC por 30 minutos com uma titulação 3 vezes de 8 pontos (30 a 0,014 μg/mL) de cada anticorpo anti-TIGIT. Os anticorpos anti-TIGIT foram detectados com anti-IgG humana policlonal de cabra conjugado a PE (Jackson ImmunoResearch 109-116-098). As amostras foram analisadas em um citômetro de fluxo FACSCalibur. A mediana da intensidade de fluorescência da população de linfócitos com gate em FSC/SSC foi determinada para cada anticorpo. A regressão não linear de
140 / 207 dados transformados em Log(X) foi usada para gerar valores de EC50 no GraphPad Prism 6. A Figura 4 mostra a titulação da ligação e EC50 a ligação dos clones 13 e 25 anti-TIGIT às células T esplênicas ativadas de camundongo. Exemplo 4: Anticorpos anti-TIGIT bloqueiam a ligação do ligante CD155 e CD112 a TIGIT expresso na superfície celular
[00403] Células HEK 293 foram modificadas para expressar estavelmente altos níveis de TIGIT humano ou de camundongo por transdução lentiviral. hCD155-Fc (Sino Biological 10109-H02H), hCD112-Fc (Sino Biological 10005-H02H) e mCD155-Fc (Sino Biological 50259-M03H) foram conjugados a AlexaFluor647 (ThermoFisher A30009). 200.000 células 293-hTIGIT ou 293-mTIGIT foram coincubadas com CD155-Fc- AlexaFluor647 1 μg/mL ou CD112-Fc-AlexaFluor647 5 μg/mL e uma titulação 2 vezes de 12 pontos (10 a 0,005 μg/mL) de cada anticorpo anti- TIGIT ou um anticorpo de isótipo controle. As amostras foram analisadas em um citômetro de fluxo CytoFLEX. A mediana da intensidade de fluorescência da população com gate em FSC/SSC foi determinada para cada concentração do anticorpo. O bloqueio percentual foi calculado em relação à MFI no controle sem anticorpo. A regressão não linear de dados transformados em Log(X) foi realizada no GraphPad Prism 6.
[00404] Como mostrado na Figura 5A-B, seis clones do anticorpo anti- TIGIT (clone 2, clone 5, clone 13, clone 17, clone 25 e clone 55) foram testados e cinco dos seis clones (clone 2, clone 5, clone 13, clone 17 e clone 25) bloquearam significativamente a interação de CD155 com TIGIT expresso em células HEK 293 para CD155 humano/TIGIT humano e para CD155 de camundongo/TIGIT de camundongo. O clone 55 liga-se especificamente a TIGIT humano, mas não compete com hCD155-Fc pela ligação a hTIGIT-Fc no ensaio de competição com ligante em ForteBio Octet. Do mesmo modo, o clone 55 não bloqueou eficientemente a interação de
141 / 207 hCD155 com a linhagem de células 293-hTIGIT. O clone 2, clone 5, clone 13, clone 17 e clone 25 foram também capazes de interromper a ligação de CD112 humano a TIGIT humano. Como observado para CD155, o clone 55 foi muito menos eficaz no bloqueio da interação CD112-TIGIT. Ver a Figura 6. Exemplo 5: Atividade in vitro de anticorpos anti-TIGIT em um bioensaio de bloqueio TIGIT/CD155
[00405] A atividade de anticorpos anti-TIGIT pode ser distinguida funcionalmente utilizando um bioensaio do bloqueio TIGIT/CD155 (p. ex., TIGIT/CD155 Blockade Bioassay Kit, Promega Corp., Madison, WI), no qual a expressão de um gene repórter é induzida ou reforçada quando um anticorpo bloqueia a interação TIGIT/CD155. O bioensaio do bloqueio TIGIT/CD155 compreende dois tipos de células: uma célula efetora expressando TIGIT, CD226 e um complexo TCR na superfície da célula e contendo um gene repórter luciferase; e uma célula apresentadora de antígeno artificial que expressa CD155 e um ativador de TCR na superfície celular. Nesse bioensaio, a expressão de luciferase requer o envolvimento de TCR mais um sinal coestimulador. A interação CD155-TIGIT tem maior afinidade do que a interação CD155-CD226, resultando em uma sinalização inibidora final e nenhuma expressão de luciferase. O bloqueio da interação CD155-TIGIT permite a coestimulação de CD155-CD226 impulsionando a expressão de luciferase.
[00406] Células Jurkat efetoras, expressando TIGIT e CD226, foram cocultivadas com células CHO-K1 apresentadoras de antígeno artificiais (aAPCs) expressando um ativador de TCR e CD155. As células Jurkat efetoras contêm um gene repórter luciferase direcionado pelo promotor de IL-
2. Na ausência de anticorpos bloqueadores anti-TIGIT, o envolvimento CD155-TIGIT leva à coinibição das células T e nenhuma atividade do promotor de IL-2. Quando da adição de anticorpos anti-TIGIT, a interação
142 / 207 CD155-TIGIT é interrompida permitindo que CD155 se associe com CD226 e enviem um sinal coestimulador e impulsionem a expressão de luciferase.
[00407] aAPCs foram espalhadas em placas com 96 poços e deixadas aderir durante a noite. No dia seguinte, 20 μg/mL de cada anticorpo anti- TIGIT ou um anticorpo de isótipo controle e células Jurkat efetoras foram adicionadas à placa. Após 6 horas de incubação a 37 ºC, as células foram lisadas e o substrato luciferase foi adicionado. A atividade luciferase foi quantificada em um leitor de placas. A atividade luciferase foi calculada como o número de vezes em relação ao sinal no controle sem anticorpo.
[00408] Como mostrado na Figura 7A-7B, 12 clones do anticorpo anti- TIGIT demonstraram bloqueio funcional nesse bioensaio. Exemplo 6: Atividade in vitro de anticorpos anti-TIGIT em um bioensaio da combinação TIGIT/PD-1
[00409] A atividade sinérgica de anticorpos anti-TIGIT em combinação com agentes anti-PD-1 (p. ex., anti-PD-1 anticorpos) pode ser distinguida funcionalmente usando um bioensaio da combinação TIGIT/PD-1, no qual a expressão de um gene repórter é reforçada quando anticorpos bloqueiam a interação TIGIT/CD155 e a interação PD-1/PD-L1. O bioensaio compreende dois tipos de células: uma célula efetora que expressa TIGIT, CD226, PD-1 e um complexo TCR na superfície da célula e contendo um gene repórter luciferase; e uma célula apresentadora de antígeno artificial que expressa CD155, PD-L1 e um ativador de TCR na superfície celular. Nesse bioensaio, a expressão de luciferase requer o envolvimento de TCR mais um sinal coestimulador. A interação CD155-TIGIT tem maior afinidade do que a interação CD155-CD226, resultando em sinalização inibidora final e nenhuma expressão de luciferase. Além disso, a ligação de PD-L1 a PD-1 inibe a expressão de luciferase. O bloqueio da interação CD155-TIGIT e da interação PD-1/PD-L1 ameniza a inibição e permite a coestimulação de CD155-CD226 impulsionando a expressão de luciferase.
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[00410] Células Jurkat efetoras expressando PD-1, TIGIT e CD226 foram cocultivadas com células CHO-K1 apresentadoras de antígeno artificiais (aAPCs) expressando um ativador de TCR, PD-L1 e CD155. As células Jurkat efetoras contêm um gene repórter luciferase direcionado pelo promotor de IL-2. Na ausência de anticorpos bloqueadores anti-TIGIT, o envolvimento de PD-L1-PD-1 e CD155-TIGIT leva à coinibição das células T e nenhuma atividade do promotor de IL-2. Quando da adição de anticorpos anti-PD-1 e anti-TIGIT, a interação PD-L1-PD-1 é bloqueada, amenizando um sinal coinibidor e a interação CD155-TIGIT é interrompida, permitindo que CD155 se associe com CD226 e enviem um sinal coestimulador e impulsionem a produção de luciferase.
[00411] aAPCs foram espalhadas em placas com 96 poços e deixadas aderir durante a noite. No dia seguinte, uma titulação 2,5 vezes de 10 pontos (100 a 0,03 μg/mL) de cada anticorpo anti-TIGIT ou anticorpo anti-PD-1 (clone EH12.2H7, BioLegend, San Diego, CA) sozinhos ou de cada anticorpo anti-TIGIT + anticorpo anti-PD-1 (proporção 1:1) e células Jurkat efetoras foram adicionados à placa. Após 6 horas de incubação a 37 ºC, as células foram lisadas e o substrato de luciferase foi adicionado. A atividade luciferase foi quantificada em um leitor de placas. A atividade luciferase foi calculada como o número de vezes em relação ao sinal no controle sem anticorpo. Como mostrado na Figura 8, nem anti-TIGIT nem anti-PD-1 sozinhos levaram à ativação dramática de células Jurkat, no entanto, a combinação de do clone 13 ou clone 25 anti-TIGIT com anti-PD-1 resultou em forte ativação. Exemplo 7: Atividade in vivo de anticorpos anti-TIGIT em um modelo de tumor singênico CT26 em camundongos BALB/c
[00412] Tendo por base a afinidade por TIGIT murino, o clone 13 anti- TIGIT foi escolhido para avaliação em um modelo de tumor singênico murinho. IgG1 de camundongo e quimeras IgG2a de camundongo do clone 13 anti-TIGIT totalmente humano original foram geradas para experimentos
144 / 207 in vivo a fim de abordar a pergunta se o isótipo Fc tem efeito sobre a eficácia in vivo de anticorpos antagonistas contra TIGIT. In vitro, os anticorpos quiméricos mostraram atividade semelhante ao anticorpo hIgG1 original em relação a (1) a ligação a TIGIT humano, de camundongo e de macaco Cynomolgus, (2) o bloqueio da ligação dos ligantes CD155 e CD112 ao TIGIT expresso na superfície celular e (3) a atividade no bioensaio do bloqueio CD155-TIGIT. Ver a Figura 9A-9H.
[00413] Camundongos BALB/c de 8 semanas de idade com peso corporal médio de 19 g foram obtidos do Charles River Laboratories. Os camundongos foram implantados por via subcutânea com 300.000 células CT26 de carcinoma de cólon no flanco lateral direito. Deixou-se que os tumores progredissem até o volume tumoral do grupo fosse em média 72 mm3 (intervalo de 48-88 mm3) no 7o dia após a inoculação do tumor. Os animais foram alocados em 10 grupos de tratamento de n=10 por par combinado de tal modo que o volume tumoral médio do grupo fosse semelhante entre todos os grupos de tratamento. O comprimento e a largura do tumor foram medidos e o volume tumoral foi calculado pela fórmula: Volume (mm3) = 0,5 * Comprimento * Largura2, onde o comprimento é a dimensão mais longa. O clone 13 mIgG1 anti-TIGIT, o clone 13 mIgG2a anti-TIGIT e o clone RMP1- 14 anti-PD-1 (BioXCell) foram diluídos até a concentração adequada para administração em PBS estéril. PBS estéril foi usado como o veículo controle. Anticorpos contra TIGIT foram administrados nas doses de 5 ou 20 mg/kg via injeção intraperitoneal, duas vezes semanalmente por 3 semanas (6 doses, no total). O anticorpo anti-PD-1 foi administrado na dose de 5 mg/kg via injeção intraperitoneal, duas vezes semanalmente por 2 semanas (4 doses, no total). A administração iniciou no dia da alocação (Dia 1 do estudo). Medições do volume tumoral e peso corporal foram coletadas duas vezes por semana até que os camundongos atingissem um corte para volume tumoral de 2000 mm3. Nenhum dos animais exibiu perda do peso corporal em relação ao peso antes
145 / 207 da dose, indicando tolerabilidade excepcional de todos os agentes em teste.
[00414] Como mostrado na Figura 10A, o anti-mPD-1 sozinho não teve qualquer efeito sobre a progressão do tumor. A quimera mIgG1 anti- TIGIT do clone 13 (“13-1”), que não envolve com eficiência receptores Fc- gama ativadores, não mediou qualquer atividade antitumoral, quer como agente único ou em combinação com anti-PD-1. Em contraste, a quimera mIgG2a do clone 13 (“13-2”), que é capaz de ligar-se a receptores Fc-gama ativadores, desacelerou a progressão do tumor (86,5% (5 mg/kg) ou 74,4% (20 mg/kg) de inibição do crescimento tumoral no Dia 18). Três de dez animais no grupo de 13-2, 5 mg/kg, como agente único mostraram regressões tumorais completas que permaneceram estáveis até o final do estudo (Dia 46 do estudo). No grupo de 13-2, 20 mg/kg, como agente único, dois de dez animais mostraram regressões tumorais parciais (definida como volume tumoral <50% do volume inicial por três medições consecutivas). A Figura 10A mostra que a adição do anti-PD-1 à quimera mIgG2a do clone 13 (13-2) não aumentou a eficácia em relação a 13-2 isoladamente (Inibição do crescimento tumoral no Dia 18 de 53,8% (anti-TIGIT 5 mg/kg + anti-PD-15 mg/kg) versus 86,5% (anti-TIGIT 5 mg/kg isoladamente) e 89,6% (anti- TIGIT 20 mg/kg + anti-PD-15 mg/kg) versus 74,4% (anti-TIGIT 20 mg/kg isoladamente). Números semelhantes de respondedores completos e parciais foram observados nos grupos da combinação. Ver, p. ex., Figura 10B-10K. Exemplo 8: Otimização de anticorpos e caracterização de anticorpos otimizados
[00415] Os clones 2, 13, 16 e 25 de anticorpos, resultantes da verificação primária, foram selecionados para maturação da afinidade adicional. A otimização de anticorpos foi realizada pela introdução de diversidades na região variável da cadeia pesada. Dois ciclos de otimização foram aplicados às linhagens acima. O primeiro ciclo compreendeu uma abordagem para diversificação de CDRH1 e CDRH2, enquanto no segundo
146 / 207 ciclo, aplicou-se uma abordagem de mutagênese em CDRH3.
[00416] Abordagem de CDRH1 e CDRH2: A CDRH3 de um único anticorpo foi recombinada com uma biblioteca pré-obtida com variantes de CDRH1 e CDRH2 com uma diversidade de 1 x 108. Seleções foram então realizadas com uma rodada de MACS e quatro rodadas de FACS como descrito para a verificação de virgens.
[00417] Na primeira rodada de FACS, as bibliotecas foram separadas pela ligação a TIGIT monomérico 1 nM. A segunda rodada de FACS foi uma rodada de depleção com PSR para reduzir a poliespecificidade. As duas rodadas finais foram rodadas de seleção positiva usando o Fab ou IgG original para pressão por alta afinidade. A pressão por Fab/IgG foi realizada como segue: o antígeno foi incubado com dez vezes mais do parental Fab ou IgG original, e então, incubado com as bibliotecas de leveduras. As seleções enriqueceram IgGs com afinidades melhores do que o Fab ou IgG original. A reatividade cruzada entre as espécies foi verificada nas duas últimas rodadas de FACS.
[00418] Mutagênese em CDRH3: Geraram-se bibliotecas com diversificação de CDRH3 por posições distribuídas aleatoriamente em CDRH3. As seleções foram realizadas com uma rodada de MACS e três rodadas de FACS como descrito anteriormente. Seleções por PSR negativo, reatividade cruzada entre espécies, pressão por afinidade e separação foram realizadas visando obter uma população com as características desejadas. Medições de KD em MSD-SET
[00419] Medições da afinidade no equilíbrio foram realizadas em geral como descrito anteriormente (Estep et al., supra). Resumidamente, foram realizadas titulações da solução no equilíbrio (SET) em PBS + BSA livre de IgG 0,1% (PBSF) com o monômero TIGIT humano-His biotinilado mantido constante a 50 pM que foram incubadas com diluições em série de 3 a 5 vezes do anticorpo, iniciando por volta de 5 nM. Os anticorpos (20 nM em PBS)
147 / 207 foram revestidos sobre placas padrão ligação MSD-ECL durante a noite a 4 ºC ou à temperatura ambiente por 30 minutos. As placas foram então bloqueadas com BSA 1% por 30 minutos com agitação a 700 rpm, seguido por três lavagens com tampão de lavagem (PBSF + Tween 20 0,05%). As amostras SET foram aplicadas e incubadas nas placas por 150 segundos com agitação a 700 rpm, seguido por uma lavagem. O antígeno capturado em uma placa foi detectado com estreptavidina marcada com sulftotag 250 ng/mL em PBSF por incubação na placa por 3 minutos. As placas foram lavadas três vezes com tampão de lavagem e depois ligadas em um instrumento MSD Sector Imager 2400 usando 1x Tampão T de leitura com tensoativo. A porcentagem de antígeno livre foi traçada em função de anticorpo titulado no Prism e ajustada a uma equação quadrática para extrair a KD. Para melhorar o rendimento, robôs para o manuseio de líquidos foram utilizados durante os experimentos MSD-SET, incluindo a preparação de amostras SET.
[00420] A ligação dos anticorpos otimizados a TIGIT humano com etiqueta His, TIGIT cyno-Fc e TIGIT de camundongo-Fc foi medida usando o sistema ForteBio como descrito acima. Os anticorpos otimizados foram também testados quanto ao bloqueio de ligantes em um ensaio de competição com o ligante CD155 e quanto à ligação a linhagens de células HEK-TIGIT humano, HEK-TIGIT cyno, HEK-TIGIT de camundongo e células HEK originais, como descrito acima.
[00421] Os dados sobre afinidade dados sobre ligação às células para os anticorpos otimizados para afinidade são mostrados na Tabela 2 abaixo.
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Tabela 2. Dados sobre afinidade e ligação celular de anticorpos otimizados para afinidade Ligação celular a Ligação celular a Ligação celular a célula HEK- ForteBio IgG KD ForteBio IgG KD ForteBio IgG KD MSD IgG KD (M) célula HEK-TIGIT célula HEK-TIGIT de TIGIT humano Índice do clone TIGIT humano-His Cyno TIGIT-Fc Murina TIGIT- TIGIT humano- cyno (FOB, número de camundongo (FOB, (FOB, número de (M) Monovalente (M) Avid Fc (M) Avid His vezes em relação ao número de vezes em vezes em relação fundo) relação ao fundo) ao fundo) 2 8,18E-09 1,34E-09 1,76E-09 NA 158 162 73 2C 5,18E-10 9,84E-10 3,92E-10 1,60E-11 193 224 100 13 2,63E-09 1,04E-09 3,41E-10 NA 212 224 119 13A 6,27E-10 1,12E-09 3,70E-10 2,50E-11 206 240 115 13B 6,10E-10 1,05E-09 3,30E-10 5,30E-12 201 235 102 13C 5,63E-10 1,07E-09 3,29E-10 8,60E-12 194 281 116 13D 5,71E-10 1,16E-09 3,64E-10 5,00E-12 190 245 116 16 2,52E-09 4,67E-09 9,07E-09 NA 192 27 19 16C 9,11E-10 4,25E-09 8,01E-10 6,30E-12 208 157 99
148 / 207 16D 5,96E-10 1,15E-09 2,63E-09 1,30E-11 199 241 63 16E 7,78E-10 1,36E-09 3,70E-09 1,10E-11 195 186 56 25 1,27E-09 1,50E-09 9,67E-10 NA 205 247 117 25A 1,10E-09 1,64E-09 8,23E-10 1,80E-11 207 238 119 25B 1,16E-09 1,40E-09 7,19E-10 2,20E-11 222 291 129 25C 6,97E-10 1,24E-09 4,94E-10 5,60E-12 216 286 124 25D 8,46E-10 1,18E-09 5,80E-10 2,70E-11 225 272 137 25E 8,51E-10 1,18E-09 5,66E-10 1,30E-11 204 252 116
149 / 207 Exemplo 9: Mapeamento de epítopos
[00422] Os epítopos de dois dos anticorpos monoclonais aqui revelados, Clone 13 e Clone 25, foram distinguidos por arranjo de peptídeos. Para reconstrução de epítopos da molécula alvo, uma biblioteca de mímicos de epítopos com base em peptídeos foi sintetizada usando síntese em fase sólida-Fmoc. Um suporte de polipropileno funcionalizado com amino foi obtido por enxerto de uma formulação de polímero hidrofílico de propriedade exclusiva, seguido por reação com t-butiloxicarbonil-hexametilenodiamina (BocHMDA) usando diciclohexilcarbodiimida (DCC) com N- hidroxibenzotriazol (HOBt) e clivagem subsequente dos grupos Boc com ácido trifluoroacético (TFA). A síntese padrão de Fmoc-peptídeos foi empregada para sintetizar peptídeos no suporte sólido funcionalizado com amino por estações de manuseio de líquidos JANUS modificadas sob medida (Perkin Elmer).
[00423] A síntese de mímicos estruturais foi realizada utilizando a tecnologia de propriedade exclusiva Chemically Linked Peptides on Scaffolds (CLIPS) (Pepscan). A tecnologia CLIPS permite estruturar peptídeos em alças únicas, alças duplas, alças triplas, dobramentos do tipo filha, dobramentos do tipo hélice e combinações dos mesmos. Moldes CLIPS são acoplados a resíduos de cisteína. As cadeias laterais de múltiplas cisteínas nos peptídeos são acopladas a um ou dois moldes CLIPS. Por exemplo, uma solução 0,5 mM do P2 CLIPS (2,6-bis(bromometil)piridina) é dissolvida em bicarbonato de amônio (20 mM, pH 7,8)/acetonitrila (1:3(v/v)). Essa solução é adicionada aos arranjos de peptídeos. O molde CLIPS se ligará às cadeias laterais de duas cisteínas se presentes nos peptídeos ligados à fase sólida dos arranjos de peptídeos (placa de 455 poços com poços de 3 µL). Os arranjos de peptídeos são gentilmente agitados na solução por 30 a 60 minutos enquanto completamente cobertos em solução. Finalmente, os arranjos de peptídeos são lavados extensamente com H2O em excesso e sonicados em tampão de
150 / 207 ruptura contendo SDS 1%/beta-mercaptoetanol 0,1% em PBS (pH 7,2) a 70 ºC por 30 minutos, seguido por sonicação em H2O por outros 45 minutos. Os T3 CLIPS carregando peptídeos foram produzidos de maneira semelhante, mas com três cisteínas.
[00424] Conjuntos diferentes de peptídeos foram sintetizados de acordo com os desenhos seguintes. O Conjunto 1 compreendia um conjunto de peptídeos lineares com comprimento de 15 aminoácidos derivados da sequência alvo de TIGIT humano com uma diferença (offset) de um resíduo. O Conjunto 2 compreendia um conjunto de peptídeos lineares do Conjunto 1, mas com os resíduos nas posições 10 e 11 substituídos por Ala. Quando uma Ala nativa ocorria em qualquer uma das posições, ela era substituída por Gly. O Conjunto 3 compreendia um conjunto de peptídeos lineares do Conjunto 1, que continha resíduos Cys. Nesse conjunto, as Cys nativas foram substituídas por Cys-acetamidometila (“Cys-acm”). O Conjunto 4 compreendia um conjunto de peptídeos lineares com comprimento de 17 aminoácidos derivados da sequência alvo de TIGIT humano com uma diferença de um resíduo. Nas posições 1 e 17, estavam resíduos Cys usados para criar mímicos em alça por meio de mP2 CLIPS. Cys nativas foram substituídas por Cys- acm. O Conjunto 6 compreendia um conjunto de peptídeos lineares com comprimento de 22 aminoácidos derivados da sequência alvo de TIGIT humano com uma diferença de um resíduo. Resíduos nas posições 11 e 12 foram substituídos pelo motivo “PG”, enquanto resíduos Cys foram colocados nas posições 1 e 22 para criar um mímico restrito com mP2. Resíduos Cys nativos foram substituídos por Cys-acm. O Conjunto 7 compreendia um conjunto de peptídeos lineares com comprimento de 27 aminoácidos. Nas posições 1-11 e 17-27, estavam sequências peptídicas 11-mer derivadas da sequência alvo e unidas através do linker “GGSGG” (SEQ ID NO: 309). Foram feitas combinações com base nas informações UniProt sobre pontes dissulfeto para TIGIT humano. O Conjunto 8 compreendia um conjunto de
151 / 207 peptídeos combinatórios com comprimento de 33 aminoácidos. Nas posições 2-16 e 18-32, estavam peptídeos 15-mer derivados da sequência alvo de TIGIT humano. Nas posições 1, 17 e 33, estavam resíduos Cys usados para criar mímicos descontínuos por meio de T3 CLIPS.
[00425] A ligação do anticorpo a cada um dos peptídeos sintetizados foi testada por um ensaio ELISA com base em pepscan. Os arranjos de peptídeos foram incubados com a solução do anticorpo primário (durante a noite a 4 ºC). Depois de lavados, os arranjos de peptídeos foram incubados com uma diluição 1/1000 de um conjugado de cabra anti-HRP humano (Southern Biotech) por uma hora a 25 ºC. Após a lavagem, foram adicionados o substrato da peroxidase, sulfonato de 2,2’-azino-di-3-etilbenzotiazolina (ABTS) e 20 µL/mL de H2O2 3 por cento. Depois de uma hora, o desenvolvimento de cor foi medido. O desenvolvimento de cor foi quantificado com uma câmera com dispositivo de carga acoplada (CCD) e um sistema de processamento de imagens. Os valores obtidos pela câmera CCD variam de 0 a 3000 mAU, semelhantes a um leitor padrão de ELISA em placa com 96 poços.
[00426] Para verificar a qualidade dos peptídeos sintetizados, um conjunto separado de peptídeos de controle positivo e negativo foi sintetizado em paralelo. Esses eram os anticorpos comerciais rastreados 3C9 e 57.9 (Posthumus et al., J. Virol., 1990, 64:3304–3309).
[00427] Em relação ao Clone 13, quando testado sob condições de alto rigor, o Clone 13 ligou-se fracamente a mímicos de epítopos descontínuos. O anticorpo foi também testado sob condições de rigor moderado, foi observada ligação detectável do anticorpo. As maiores intensidades do sinal foram registradas com mímicos de epítopos descontínuos contendo os trechos do núcleo 68ICNADLGWHISPSFK82 (SEQ ID NO: 258), 42ILQCHLSSTTAQV54 (SEQ ID NO: 298), 108CIYHTYPDGTYTGRI122 (SEQ ID NO: 299). Além disso, foi observada ligação mais fraca com
152 / 207 peptídeos contendo o trecho peptídico 80SFKDRVAPGPG90 (SEQ ID NO: 300). A ligação do anticorpo a mímicos de epítopos lineares e conformacionais simples foi em geral menor e observada apenas para os motivos 68ICNADLGWHISPSFK82 (SEQ ID NO: 258), 108CIYHTYPDGTYTGRI122 (SEQ ID NO: 299) e 80SFKDRVAPGPG90 (SEQ ID NO: 300).
[00428] Em relação ao Clone 25, quando testado sob condições de alto rigor, o Clone 25 ligou-se detectavelmente a peptídeos de todos os conjuntos. A ligação mais forte foi observada com mímicos de epítopos descontínuos. Embora a ligação a peptídeos contendo resíduos dentro do trecho 68ICNADLGWHISPSFK82 (SEQ ID NO: 258) fosse também observada em outros conjuntos, a ligação ao trecho peptídico 50TTAQVTQ56 (SEQ ID NO: 301) foi somente observada em combinação com 68ICNADLGWHISPSFK82 (SEQ ID NO: 258). Além disso, foi também observada ligação mais fraca com peptídeos contendo o trecho peptídico 80SFKDRVAPGPGLGL93 (SEQ ID NO: 300).
[00429] Com base nos resultados desse mapeamento de epítopos para o Clone 13 e o Clone 25, o mapeamento fino dos epítopos do Clone 13 e do Clone 25 foi realizado utilizando os métodos descritos acima, usando os seguintes conjuntos de peptídeos. O Conjunto 1 compreendia uma biblioteca de mutantes de epítopos de resíduo único baseados na sequência CILQ2HLSSTTAQVTQCI2NADLGWHISPSFKC (SEQ ID NO: 302). os resíduos ADHIQRY (SEQ ID NO: 304) foram submetidos à substituição. As posições 1, 17, 19, 30 e 33 não foram substituídas. Resíduos Cys nativos foram substituídos por Cys-acm (indicado por “2” por toda parte). O Conjunto 2 compreendia uma biblioteca de mutantes Ala duplo móveis derivados da sequência CILQ2HLSSTTAQVTQCI2NADLGWHISPSFKC (SEQ ID NO: 302). AS posições 1, 17 e 33 não foram substituídas. Resíduos Cys nativos foram substituídos por Cys-acm. O Conjunto 3 compreendia uma biblioteca
153 / 207 de mutantes de epítopos de resíduos únicos com base na sequência CKDRVAPGPGLGLTLQCI2NADLGWHISPSFKC (SEQ ID NO: 303). Os resíduos ADHIQRY (SEQ ID NO: 304) foram usados para a substituição. As posições 1, 2, 17, 19, 30 e 33 não foram substituídas. O Conjunto 4 compreendia uma biblioteca de mutantes Ala duplo móveis derivados da sequência CKDRVAPGPGLGLTLQCI2NADLGWHISPSFKC (SEQ ID NO: 303). As posições 1, 17 e 33 não foram substituídas.
[00430] O Clone 13 foi testado com quatro séries de mutantes de epítopos descontínuos derivados dos peptídeos CILQ2HLSSTTAQVTQCI2NADLGWHISPSFKC (SEQ ID NO: 302) e CKDRVAPGPGLGLTLQCI2NADLGWHISPSFKC (SEQ ID NO: 303) sob condições de alto e moderado rigor. A análise de dados indicou que, em todos os casos, as substituições de resíduos 81FK82 quer com resíduos únicos ou com Ala duplo prejudicou a ligação do Clone 13. Mutações únicas de outros resíduos dentro de mímicos de epítopos descontínuos não tiveram efeitos drásticos sobre a ligação. Por outro lado, mutantes de epítopos de Ala duplo exibiram um efeito mais pronunciado sobre a ligação quando comparados com a série de mutantes de resíduos únicos dos mímicos descontínuos correspondentes. Verificou-se também que as substituições de Ala duplo dos resíduos 51TAQVT55 (SEQ ID NO: 305) dentro de CILQ2HLSSTTAQVTQCI2NADLGWHISPSFKC (SEQ ID NO: 302) afetaram notavelmente a ligação do Clone 13. As intensidades do sinal para o Clone 13 com mímicos de epítopos derivados da sequência CKDRVAPGPGLGLTLQCI2NADLGWHISPSFKC (SEQ ID NO: 303) foram menores do que aquelas registradas com CILQ2HLSSTTAQVTQCI2NADLGWHISPSFKC (SEQ ID NO: 302). Foi ainda verificado que, além de 81FK82, substituições de Ala duplo de 74GWHI77 (SEQ ID NO: 306) reduziram notavelmente a ligação do Clone 13. Além disso, mutações de Ala duplo dentro do trecho 87PGPGLGL93 (SEQ ID NO:
154 / 207 307) enfraqueceu um pouco a ligação.
[00431] O Clone 25 foi testado em quatro séries de mutantes de epítopos descontínuos derivados dos peptídeos CILQ2HLSSTTAQVTQCI2NADLGWHISPSFKC (SEQ ID NO: 302) e CKDRVAPGPGLGLTLQCI2NADLGWHISPSFKC (SEQ ID NO: 303) sob condições de alto e moderado rigor. A análise de dados coletados de conjuntos individuais de mutantes de epítopos indicou que substituições únicas e duplas de resíduos 81FK82 afetou drasticamente a ligação. Substituições de um único resíduo por outros outro resíduos dentro de CILQ2HLSSTTAQVTQCI2NADLGWHISPSFKC (SEQ ID NO: 302) e CKDRVAPGPGLGLTLQCI2NADLGWHISPSFKC (SEQ ID NO: 303) não causaram uma diminuição notável em intensidades do sinal. Diversos mutantes de Ala duplo móvel exibiram efeitos mais pronunciados na ligação do Clone 25 ao mímico. Além de 81FK82, substituições de Ala duplo dos resíduos 52AQ53 e P79 também afetou levemente a ligação do anticorpo a mímico do epítopo CILQ2HLSSTTAQVTQCI2NADLGWHISPSFKC (SEQ ID NO: 302). A análise da ligação do Clone 25 à série de mutante Ala duplo derivado de CKDRVAPGPGLGLTLQCI2NADLGWHISPSFKC (SEQ ID NO: 303) confirmou mais uma vez a importância de 81FK82, mas também indicou que substituições de Ala duplo dos resíduos 73LGW75 e 82KDRVA86 (SEQ ID NO: 308) afetaram moderadamente a ligação.
[00432] Em suma, para os anticorpos monoclonais Clone 13 e Clone 25, verificou-se que os resíduos 81FK82 eram fundamentais para a ligação de ambos os anticorpos a mímicos do epítopo de TIGIT. Em relação ao Clone 13, verificou-se também que os resíduos 51TAQVT55 (SEQ ID NO: 305), 74GWHI77 (SEQ ID NO: 306) e 87PGPGLGL93 (SEQ ID NO: 307) contribuem para a ligação. Em relação ao Clone 25, foi verificado também que os resíduos 52AQ53, 73LGW75, P79 e, 82KDRVA86 (SEQ ID NO: 308) contribuem para a ligação.
155 / 207 Exemplo 10: Anticorpos anti-TIGIT com cadeia principal alterada
[00433] A fim de melhorar potencialmente a geração atual de anticorpos anti-TIGIT, um anticorpo anti-TIGIT afucosilado e uma versão mutada com Fc de um anticorpo anti-TIGIT com função efetora reduzida (IgG1 LALA-PG) foram desenvolvidos. Prevê-se que os anticorpos afucosilado e LALA-PG ainda bloquearão as interações de CD155 e CD112 com TIGIT. Sem a intenção de ficar preso a qualquer teoria em particular, foi levantada a hipótese de que um anticorpo anti-TIGIT afucosilado pode ligar- se diretamente a Tregs infiltrados no tumor e levar a maior ADCC e/ou ADCP mediadas por FC e, no final, suscitar uma resposta imune antitumoral maior ou, alternativamente, que a função efetora poderia levar à depleção de células T efetoras, assim, um anticorpo efetor nulo pode permitir a conservação de células T CD8 ativadas. DNA e geração de vetor (Genewiz):
[00434] Sequências de domínios variáveis e constantes de anticorpos são sintetizados usando PCR sem molde. A sequência virtual do gene é convertida em sequências de oligonucleotídeos utilizando a ferramenta de bioinformática de Genewiz. Oligonucleotídeos são sintetizados, agrupados e amplificados por meio de PCR. O amplicon inteiro, resultante da reação PCR, é clonado no vetor e o produto é então transformado em E. coli e colônias únicas são isoladas. As colônias são cultivadas durante a noite em meio líquido e DNA plasmidial isolado, purificado e sua sequência é verificada pelo sequenciamento de Sanger. Cadeias leves e cadeias pesadas são clonadas em vetores pcDNA3.4. Expressão de anticorpos (Seattle Genetics):
[00435] Em proporção 1:1, vetores de cadeia pesada e cadeia leve de anticorpos são diluídos no meio ThermoFisher OptiPRO SFM com o reagente de transfecção ExpiFectamine CHO. O DNA/reagente de transfecção é então
156 / 207 adicionado a uma cultura ExpiCHO e meio ThermoFisher ExpiCHO Expression e cultivados por nove dias com reforçador ExpiCHO adicionado no dia um e alimentações de ExpiCHO adicionadas nos dias um e dois. Para produzir anticorpos com fucosilação do núcleo reduzida no glicano N297 (anticorpos afucosilados), o análogo da fucose 2-fluorofucose é adicionado à cultura ExpiCHO no dia anterior e no dia da transfecção. A cultura é coletada por centrifugação e filtração em 0,2 μm. Purificação de anticorpos (Seattle Genetics):
[00436] Usam-se colunas GE HiTrap mAb Select SuRe para a purificação de cada IgG. Antes da eluição, a resina é lavada com 5CV de PBS+Triton 0,1%, 5CV de PBS+NaCl 0,5M e 7,5CV de PBS. A IgG é eluída com tampão de ácido acético 25 mM, pH3. A amostra tem o tampão trocado para PBS usando colunas 26/60 HiPrep Desalt. A amostra é entrada esterilizada com filtração antes de ser coletada para a caracterização. A caracterização inclui concentração A280, aSEC HPLC, aHIC HPLC e PLRP- MS glicosilada reduzida e desglicosilada (QToF). Exemplo 11: Caracterização de anticorpos com cadeia principal alterada
[00437] In vivo, monócitos, macrófagos, neutrófilos, células dendríticas e células NK podem mediar ADCP (fagocitose mediada por células dependente de anticorpo) e ADCC (citotoxicidade mediada por célula dependente de anticorpo via FcγRI, FcγRIIa, FcγRI e FcγRIIIa). Embora todos os três receptores possam participar em ADCP, acredita-se que FcγRIIIa seja o receptor Fcγ predominante envolvido em ADCC. A afucosilação de anticorpos IgG1 resulta em ligação com maior afinidade ao FcγRIIIa e b e pode aumentar, assim, a atividade ADCC e ADCP.
[00438] Utilizou-se interferometria de bicamada (BLI) para avaliar a cinética de ligação de FcγRIIIa 158V humano a vários anticorpos anti-TIGIT a fim de entender os efeitos de anticorpos afucosilados e das mutações
157 / 207 LALA-PG a 30 ºC. Uma proteína de fusão N-hidroxissuccinimida (NHS)- éster de FcγRIIIa 158V humano biotinilado-mono Fc N297A (expressa na Seattle Genetics) foi carregada em biossensores de estreptavidina de alta precisão (Pall ForteBio) a 3 μg/mL por 300 segundos, após uma verificação do sensor por 300 segundos. Depois de um basal de 200 segundos, anticorpos anti-TIGIT titulados foram associados por 50 segundos e dissociados por 200 segundos. Antes da análise, as referências foram subtraídas em cada ensaio. Os dados foram corrigidos com um alinhamento do eixo Y no início da associação, uma correção da dissociação entre etapas e filtragem de Savitzky- Golay. Um modelo 1:1 do modelo de ajuste global isotérmico de Langmuir foi usado para ajuste das curvas.
[00439] Dados representativos são mostrados na Figura 10. Os sensogramas para as variantes hIgG1 de TIGIT foram semelhantes aqueles que haviam sido observados para ligação de hFcγRIIIa por BLI: IgG1 do tipo selvagem no intervalo 100-200 nM e IgG1 afucosilado cerca de 10-20 nM devido a um aumento de 10 vezes na kon causado por uma entalpia aumentada ou interações aumentadas entre hFcγRIIIa e hIgG1. hIgG1 LALA-PG não exibiu ligação quantificável, mesmo na concentração mais alta de 5000 nM. Os resultados são resumidos na Tabela 3. Tabela 3. Análise de ajuste global da ligação de anticorpos anti-TIGIT a FcγRIIIa 158V humano por BLI usando um modelo isotérmico 1:1 de Langmuir Req/ Rmax Ab KD (M) kon (1/Ms) koff (1/s) RMax Total X^2 Total R^2 (%) Clone13C hIgG1 2,53E-07 1,46E+05 3,71E-02 0,57 89-67 0,18 0,9931 anti-TIGIT Clone13 hIgG1 anti- 3,7E-07 1,29E+05 4,80E-02 0,47 84-5 0,16 0,9900
TIGIT Clone13 hIgG1 afucosilado anti- 1,35E-08 7,31E+05 9,85E-03 0,62 88-6 0,024 0,9993
TIGIT Clone13 hIgG1 LALA-PG anti- NB* - - - - - -
TIGIT *NB (sem ligação). Nenhuma ligação observável de hFcγRIIIa 158V ao Clone13 hIgG1 LALA-PG anti-TIGIT em concentrações de 20 μM
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[00440] Para avaliar o impacto da modificação por Fc de anticorpos anti-TIGIT sobre a atividade antitumoral, foram produzidos anticorpos quiméricos compostos por CDRs humanas e cadeia principal (backbone) de IgG2a murina em versões do tipo selvagem ou com as modificações de afucosilado ou LALA-PG. A afucosilação de anticorpos IgG2a murinos é semelhante à produção da cadeia principal de IgG1 humana afucosilada e resulta em ligação aumentada ao FcγRIV murino, o receptor cognato ao FcγRIV humano. Para avaliar a extensão da ligação alterada ao FcγRIV, a afinidade do anticorpo pelo FcγRIV expresso em células CHO foi determinada por FACS por meio de FITC de anti-IgG de camundongo. Como mostrado na Figura 12, o clone 13 mIgG2a não fucosilado ligou-se em medida significativamente maior a ambas a cadeia principal do tipo selvagem ou modificada LALA-PG. O clone 13 mIgG2a afucosilado ligou-se com uma afinidade de KD 2,37 nM quando comparado ao clone 13 mIgG2a do tipo selvagem, que se ligou com KD de 33,4. Exemplo 12: Expressão de TIGIT em subconjuntos de células T em células T de doadores sadios
[00441] A expressão de TIGIT em subconjuntos de células T em doadores sadios foi avaliada por citometria de fluxo. PBMC congeladas de 12 doadores sadios foram adquiridas da Astarte Biologics (Bothell, Washington) e Folio Conversant (Huntsville, Alabama). As idades dos doadores variavam de 21 a 74 com idade mediana de 48 anos. As células foram coradas com um corante de viabilidade e os seguintes anticorpos anti-humanos após bloqueio de receptores Fc: CD3, CD96, CD226, CCR7, CD25, CD127, CD45RA, CD8, CD4, CD226, CD155 (Biolegend) e TIGIT (eBioscience). As células coradas foram então analisadas em um citômetro de fluxo Attune Nxt (Life Technologies). Subconjuntos de Treg foram definidos pela expressão adequada de CD4, CD25 e CD127 (CD4+CD25+CD127lo). Suconjuntos de células CD4+ e CD8+ efetoras de memória (TEM; CD45RA-CCR7-),
159 / 207 CD45RA+ efetoras de memória (TEMRA; CD45RA+CCR7-), de memória central (TCM; CD45RA-CCR7+) e virgens (TN; CD45RA+CCR7+) foram definidos de acordo com a expressão de CD45RA e CCR7. Como mostrado na Figura 3, a expressão de TIGIT é maior em Tregs, enquanto a expressão do receptor CD226 ativador é menor em subconjuntos de células T CD8 de memória e virgens e mostra níveis semelhantes aos suconjuntos de células T CD4 virgens. A expressão de CD155 é praticamente ausente entre células T, mas foi vista em células apresentadoras de antígeno. Exemplo 13: Clone 13 do anticorpo anti-TIGIT impulsiona a depleção de Tregs
[00442] Para avaliar o efeito de anticorpos anti-TIGIT sobre o número absoluto de Tregs e de outros subconjuntos de células T em PBMC normais, PBMCs de doador sadio de um doador expressando os alelos V/F do receptor FcγRIII (Astarte Biologics) foram isoladas. As células foram cultivadas na presença das versões do tipo selvagem, LALA-PG ou afucosilada do clone 13 do anticorpo anti-TIGIT ou uma IgG1 humana de isótipo controle (Biolegend) em várias concentrações. PBMCs crioconservadas (Astarte Biologics) foram incubadas em RPMI 1640 com FBS 10% em uma placa de fundo redondo com 96 poços a 37 ºC. 2,5x105 PBMC foram plaqueadas por poço em três réplicas por poço com uma titulação de anticorpos anti-TIGIT ou controle. Depois de 24 horas, as células foram lavadas, o bloqueio do receptor Fc foi realizado e as células foram coradas com um corante de viabilidade e os seguintes anticorpos anti-humano: CD3, CD4, CD8, CD25, CD127 e CD45RA (Biolegend). As células coradas foram analisadas em um citômetro de fluxo Attune NxT e subconjuntos de células T foram distinguidos como descrito acima. Como mostrado na Figura 14, Tregs eram 73% positivas para TIGIT no início do ensaio. Depois de 24 horas em cultura, a versão do tipo selvagem do anticorpo clone 13 IgG1 (círculo preenchido de preto) provocou uma diminuição dose- dependente em Tregs TIGIT-positivas, com a depleção
160 / 207 máxima ocorrida a 1 μg/mL. A versão afucosilada do clone 13 (quadrado preenchido de preto) conferiu maior atividade com a depleção máxima de Treg ocorrida a 200 pg/mL. A versão LALA-PG do clone 13 (triângulo preenchido de preto) e a IgG1 humana de isótipo controle (triângulo invertido cinza) não mostraram atividade evidente nesse ensaio.
[00443] Além de avaliar as versões do tipo selvagem, afucosilada e LALA-PG do anticorpo clone 13 anti-TIGIT, uma versão foi preparada compreendendo uma região constante de IgG1 com as mutações S293D/A330L/I332E (“DLE”) que, segundo relatado, reforçam a afinidade por receptores Fcɣ. Ver Lazar, 2006, PNAS 103: 4005-4010. A versão do tipo selvagem, afucosilada, LALA-PG e DLE do clone 13 foram avaliadas quanto à depleção de Tregs substancialmente como descrito acima em PBMCs de doador sadio de um doador expressando os alelos V/V de alta afinidade do receptor FcγRIII.
[00444] Como mostrado na Figura 35, o anticorpo clone 13 IgG1 do tipo selvagem (triângulos) depletou Tregs com IC50 de ~ 0,024 µg/ml, enquanto ambos os anticorpos, o clone 13 IgG1 DLE (quadrados) e o clone 13 IgG1afucosilado (círculos) depletaram Tregs com potência muito maior, com IC50s de 0,0006 µg/mL e 0,0005 µg/mL, respectivamente (Na Figura 35, os dados da IgG1 do tipo selvagem são de um experimento anterior usando PBMCs do mesmo doador).
[00445] Outro anticorpo anti-TIGIT, H5/L4 IgG1 (ver WO 2016/028656 A1), foi também testado quanto a sua capacidade para depletar Tregs de PBMCs de doador sadio de um doador expressando os alelos V/V de alta afinidade do receptor FcγRIII. Como mostrado na Figura 36, o anticorpo clone 13 IgG1 afucosilado foi o mais potente em induzir a depleção de Tregs, enquanto os dois anticorpos IgG1 do tipo selvagem mostraram potências e curvas de depleção muito semelhantes (Na Figura 36, os dados do clone 13 IgG1 do tipo selvagem são de um experimento anterior usando PBMCs do
161 / 207 mesmo doador). Exemplo 14: Avaliação da depleção de Tregs em uma cocultura de NK/Treg alogênica
[00446] Para examinar a potencial citotoxicidade mediada por célula dependente de anticorpo (ADCC) em uma cocultura de células Treg/NK, células T CD4+CD25+ humanas crioconservadas (Stem Cell Technologies) foram descongeladas e estimuladas com partículas CD3/CD28 MACS iBead (Miltenyi Biotec) em proporção 1:2 de esfera:célula em meio RPMI e FBS 10% suplementado com IL-2 humana recombinante 20 ng/mL (R&D systems) por 3 dias para aumentar a expressão de TIGIT. Depois de 3 dias, as células Treg foram avaliadas quanto à expressão de TIGIT na superfície celular por citometria de fluxo e verificou-se que eram ~40% positivas. As células Treg foram então lavadas e marcadas com CFSE (Life Technologies) para distingui-las de células NK após a cocultura. Naquele mesmo dia, células NK humanas purificadas (Astarte Biologics) foram descongeladas e pré-ativadas por 2 horas na presença de IL-2 200 ng/mL. Uma cocultura de células NK cells e Treg em proporção 2,5:1 de NK:Treg foi estabelecida em uma placa de 96 poços na presença de IL-2 100 ng/mL em RPMI 1640 com FBS 10%. As células foram incubadas a 37 ºC com as versões do tipo selvagem, LALA-PG ou afucosilada do clone 13 de anticorpo anti-TIGIT ou uma IgG1 humana de isótipo controle (Biolegend) em três réplicas por poço, ou um anticorpo anti-OKT9 afucosilado, que serviu como controle positivo. Depois de 24 horas, as células foram lavadas, coradas com um corante de viabilidade e analisadas por FACS em um citômetro de fluxo Attune Nxt. Tregs foram identificadas e enumeradas de acordo com o corante de viabilidade e coloração CFSE.
[00447] Os resultados são mostrados na Figura 15. Os níveis de Treg caíram pelo tratamento com o clone 13 IgG1 do tipo selvagem (círculos pretos), demonstrando que a depleção pode ser, em parte, decorrente de
162 / 207 ADCC direta mediada por NK. A capacidade do clone 13 IgG1 do tipo selvagem para depletar células T pareceu máxima a 1 μg/mL de tratamento. A proporção da depleção de Treg foi mais substancial com a versão afucosilada do clone 13 IgG1 (quadrados pretos), com atividade máxima aparecendo a 40 ng/mL. A versão LALA-PG efetora nula do clone 13 IgG1 (triângulos pretos) e a IgG1 humana de isótipo controle (triângulos cinzas invertidos) não mostraram efeito evidente em números de Treg, enquanto o anticorpo SEA contra OKT19 de controle positivo (círculos claros) mostraram a depleção maior. Os resultados são compatíveis com os dados sobre a expressão de TIGIT (Figura 4) que mostraram que Tregs expressaram níveis elevados de TIGIT. Exemplo 15: Anticorpo anti-TIGIT induz produção de citocinas
[00448] Além da ligação com maior afinidade a FcγRIIIa em células NK e impulsionar ADCC, os anticorpos afucosilados também se ligam com maior afinidade a FcγRIIIa e FcγRIIIb em células apresentadoras de antígeno e neutrófilos e podem reforçar ADCP e a ativação de células apresentadoras de antígeno.
[00449] Para investigar o impacto do anticorpo anti-TIGIT e variantes Fc em células apresentadoras de antígeno, PBMCs foram isoladas como segue. O sangue de 3 doadores humanos únicos foi coletado em tubos heparinizados e, dentro de aproximaamente quatro horas da coleta, dividido em alíquotas em tubos cônicos de 50 mL (Falcon) e centrifugados a 200 g em um Eppendorf 5810R (rotor A-4-62) por 20 minutos a 25 ºC sem freios, a fim de separar a fração rica em plaquetas. Após a centrifugação, três camadas distintas formaram-se: camada inferior, eritrócitos (responsável por 50-80% do volume total); camada do meio, faixa muito fina de leucócitos (também chamada “buffy coat” [papa leucocitária]); camada superior, plasma rico em plaquetas de cor palha (PRP). A camada superior na cor palha, que é
163 / 207 enriquecida com plaquetas, foi removida com uma pipeta de 1 mL e descartada. Uma vez removido plasma rico em plaquetas as demais frações foram diluídas com volumes iguais de PBS estéril (Gibco). 15 mL de Histopaque-1077 (Sigma) aquecido até a temperatura ambiente foi espalhado em uma camada inferior abaixo das frações diluídas. As amostras foram centrifugadas a 1500 rpm por 25 minutos a 25 ºC sem freios. Após a centrifugação, três camadas formaram-se novamente: camada inferior, eritrócitos (responsável por 50-80% do volume total); camada do meio, faixa espessa de leucócitos; camada superior, PBS e plaquetas restantes. A camada de PBS/plaqueta foi removida com uma pipeta de 1 mL e descartada. A faixa espessa de leucócitos foi gentilmente removida e colocada em um tubo cônico estéril limpo de 50 mL. Os tubos foram cheios até 50 mL e as células centrifugadas a 800 g por 10 minutos. A solução de lavagem foi removida e os pellets foram ressuspensos em 10 mL de tampão de lise ACK red blood (Gibco) por dez minutos. 35 mL de PBS estéril foram adicionados e as células centrifugadas a 800 g por 10 minutos. A solução de lavagem foi removida e o pellet ressuspenso em 50 mL de PBS. 500 μL de amostra foram removidos e as PBMC foram contadas com um Vi-cell-XR (Beckman Coulter). As células foram centrifugadas mais uma vez a 800 g por dez minutos.
[00450] As células foram ressuspensas a 1 milhão de células/mL em DMEM completo contendo FBS 10% inativado pelo calor (Atlantica Biologics) e 1X penicilina/strepA e 1X glutamina e espalhadas a 100.000 células/poço em uma placa com 96 poços. PBMCs foram expostas a concentrações crescentes (10; 1,0; 0,1; 0,01; 0,001; 0.0001 ou 0 μg/mL) do clone 13 IgG1 do tipo selvagem, do clone 13 IgG1 afucosilado ou do clone 13 IgG1 LALA-PG por 24 horas. Os sobrenadantes da cultura de tecido foram coletados e processados para produção de citocinas usando um Luminex multiplex (Millipore) de acordo com as instruções do fabricante.
[00451] Os resultados são mostrados na Figura 16. O tratamento de
164 / 207 PBMCs com o anticorpo clone 13 IgG1 do tipo selvagem (quadrados pretos) e o anticorpo clone 13 IgG1 afucosilado (losangos pretos) resultou na produção de citocinas inflamatórias, incluindo aquelas associadas com ativação de monócitos/macrófagos tais como MCP1, IL-8 e MIP1α. A exposição das células ao clone 13 IgG1 afucosilado provocou uma resposta mais forte citocinas, enquanto a forma LALA-PG Fc eftora nula resultou em produção muito mínima de citocinas. Exemplo 16: Anticorpo anti-TIGIT induz ativação de marcadores em APCs
[00452] Para avaliar o efeito de anticorpo anti-TIGIT em células apresentadoras de antígeno presentes nas PBMCs, a expressão de moléculas coestimuladoras foi avaliada nos pellets celulares restantes da análise de citocinas descrita acima. Os pellets celulares foram ressuspensos em 50 mL de tampão BD FACS e transferidos para placas de microtitulação de fundo redondo com 96 poços. Os receptores Fc foram bloqueados com fragmentos de Fc humano 100 μg/mL (Millipore) por 30 minutos em gelo. Uma mistura máster composta por anticorpo anti-CD14 (BD), anticorpo anti-CD86 (BD) e anticorpo anti-MHCII (pan anti-DR, DP, DQ antibody, BD), diluídos a1:100, foi preparada em tampão BD FACS contendo fragmentos de Fc humano 100 mg/mL. Cinco μL da mistura máster foram adicinados a cada poço contendo 90 μL de células ressuspensas e as amostras foram incubadas por uma hora em gelo. As células foram então centrifugadas a 400 g em uma centrífuga Eppendorf 5810R pré-aquecida por cinco minutos. Os sobrenadantes foram removidos e as células lavadas com 200 μL de tampão BD FACS. As células foram lavadas duas vezes e então ressuspensas em 200 μL de tampão FACS. As amostras foram coletadas em um citômetro de fluxo LSRII (BD Biosciences) com o software DIVA (BD biosciences). A média da intensidade de fluorescência (MFI) e CD86 e MHCII em monócitos/macrófagos CD14+ foi analisada com o software FlowJo.
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[00453] Os resultados desse experimento são mostrados na Figura 17. O tratamento de monócitos/macrófagos CD14+ com o clone clone 13 IgG1 do tipo selvagem ou com o clone 13 IgG1 afucosilado do anticorpo anti-TIGIT resultou na regulação positiva dos marcadores de ativação CD86 (painel à esquerda) e MHCII (painel à direita), indicando maturação de células apresentadoras de antígeno. O tratamento com o clone 13 IgG1 LALA-PG não aumentou a expressão de CD86 ou MHCII por células CD14+. Exemplo 17: Avaliação in vivo de anticorpos anti-TIGIT com afinidade diferenciada por Fc em modelos de tumor singênico
[00454] A eficácia antitumoral do anticorpo anti-TIGIT afucosilado versus o anticorpo anti-TIGIT de função efetora nula compreendendo a mutação LALA-PG foi investigada. Esse experimento foi delineado para determinar se a função efetora do anticorpo anti-TIGIT (reforçada na versão afucosilada e abolida na versão LALA-PG) está envolvida no mecanismo de ação antitumoral. Foram geradas versões murinas do clone 13 do anticorpo anti-TIGIT com três domínios Fc diferentes: 1) mIgG2a do tipo selvagem; 2) mIgG2a afucosilado; 3) mIgG2a LALA-PG (função efetora reduzida). Os anticorpos foram avaliados nos modelos de tumor singênico CT26 (cólon), A20 (linfoma de células B) e MC38 (cólon), with seis camundongos por grupo de anticorpo por modelo de tumor. Cada anticorpo foi administrado por via intraperitoneal (i.p.) a uma dose de 5 mg/kg fornecida a cada três dias, totalizando seis doses, assim que os tumores atingiam 100 mm3. O comprimento e largura subcutâneos do tumor foram medidos com um paquímetro digital e o volume tumoral foi calculado usando a fórmula V= (L x W2)/2.
[00455] Os resultados desse experimento são mostrados na Figura 18. Cada linha representa a mediana do volume tumoral (mm3) (N=6 por grupo). A Figura 18A mostra que o tratamento do modelo A20 (modelo de linfoma singênico) com os anticorpos anti-TIGIT clone 13 mIgG2a afucosilado, clone
166 / 207 13 mIgG2a do tipo selvagem e clone 13 mIgG2a LALA-PG resultou em 4/6, 2/6 e 0/6 respostas completas, respectivamente. A Figura 18B mostra que o tratamento do modelo CT26WT (carcinoma de cólon murino) com os anticorpos anti-TIGIT clone 13 mIgG2a afucosilado, clone 13 mIgG2a do tipo selvagem e clone 13 mIgG2a LALA-PG resultou em 4/6, 3/6 e 0/6 respostas completas, respectivamente. A Figura 18C mostra que o tratamento do modelo MC38 (carcinoma de cólon murino) com os anticorpos anti-TIGIT clone 13 mIgG2a afucosilado, clone 13 mIgG2a do tipo selvagem e clone 13 mIgG2a LALA-PG resultou em 1/6, 1/6 e 0/6 respostas completas, respectivamente.
[00456] A dicotomia nas respostas induzidas nos diferentes modelos singênicos é interessante à luz de seus perfis imunes diferenciais relatados. Os modelos dos tumores CT26 e A20 são relatados como mais altamente infiltrados por células NK e T, enquanto o modelo MC38 é conhecido por ser mais infiltrado por células supressoras de origem mieloide (Mosely, et al., 2017, Canc. Immunol. Res. 5(1): 29-41). A atividade aumentada dos anticorpos anti-TIGIT nos modelos dos tumores A20 e CT26 respalda a atividade moduladora de células T desses anticorpos e sugere que células T infiltradas podem servir como um biomarcador preditivo positivo para essa terapia. Coletivamente, esses dados demonstram que a atividade antitumoral in vivo de anticorpos anti-TIGIT murinos é dependente da função efetora de Fc e que a IgG2a afucosilada reforçou a eficácia quando comparada ao tipo selvagem. Exemplo 18: Atividade combinatória de anticorpos anti-TIGIT
[00457] TIGIT é expresso não só em células T, mas também em células NK e apresentadoras de antígeno. Dado a expressão pleotrópica, a função de TIGIT pode potencialmente impulsionar atividade multifatorial e os anticorpos anti-TIGIT podem ter impacto sobre múltiplas funções celulares, incluindo, por exemplo, atividade ADCC de células NK, ativação de células T
167 / 207 e respostas ótimas de memória antigênica. Além da atividade de agente único, os anticorpos anti-TIGIT podem amplificar a atividade de células T, NK ou células apresentadoras de antígeno em combinação com outro agentes terapêuticos. TIGIT e CD226 são expressos em células NK e a expressão de TIGIT pode não só inibir ativamente a atividade ótima e o potencial para ADCC de células NK, mas pode também impedir a ativação mediada por CD226. O bloqueio de TIGIT pode, portanto, amplificar ADCC mediada por NK de agentes direcionados de humana IgG1 e agentes terapêuticos direcionados para ADCC podem mostrar atividade reforçada quando combinados com anticorpos anti-TIGIT.
[00458] Para investigar essa possibilidade, a linhagem celular de carcinoma pulmonar de não pequenas células, A549, foi radiomarcada com Na2[51Cr]O4 (100 µCi adicionados às células), lavada e misturada com titulações de cetuximabe isoladamente, ou cetuximabe combinado com anticorpo anti-TIGIT clone 13 hIgG1 do tipo selvagem 10 µg/mL. Um isótipo controle a 10 µg/mL foi igualmente incluído no experimento. Células efetoras foram isoladas de PBMC crioconservadas de doador normal utilizando o kit EasySep Human NK Cell Enrichment (Stem Cell Technologies). As células do doador eram do genótipo FcγRIIIa 158 V/V. Células efetoras foram adicionadas em proporção 10:1 de efetora para célula alvo (50.000:5000). Após 4 horas de incubação, a radioatividade liberada no sobrenadante da cultura foi medida e o percentual de lise de células específicas foi calculado como (com da amostra em teste - com espontânea) / (com total - cmp espontânea) x 100. Os valores de cmp espontânea e total foram determinados a partir dos sobrenadantes de células alvo incubadas no meio apenas e de células alvo lisadas com Triton X-100 1%, respectivamente.
[00459] Como mostrado na Figura 19, o tratamento de células alvo A549 com o anticorpo anti-TIGIT clone 13 IgG1 isoladamente não impulsionou a atividade ADCC, mas quando células alvo A549 foram
168 / 207 colocadas em contato com a combinação de cetuximabe e anticorpo anti- TIGIT clone 13 IgG1, a atividade lítica máxima foi aumentada em relação àquela observada com cetuximabe isoladamente.
[00460] Além de modular a atividade NK, o bloqueio de TIGIT pode aumentar respostas de memória específicas ao antígeno em células T. Anticorpos direcionados para as proteínas de uma via de controle presentes em células T pode, portanto, mostrar atividade reforçada quando combinados com um anticorpo anti-TIGIT.
[00461] Para investigar essa possibilidade, realizaram-se ensaios de memória antigênica em resposta ao citomegalovírus (CMV). PBMCs humanas de um doador reativo ao CMV foram adquiridas da Astarte Bio. Células T de memória desse doador podem ser reativadas in vitro com antígeno de CMV para avaliar a sua resposta específica ao antígeno. PBMCs foram ressuspensas em X-vivo 10 (Lonza) contendo FBS 10% (Atlanta Biologics) e 100.000 células foram espalhadas em placas de fundo redondo com 96 poços. As células foram expostas a 10 μg/ml de antígenos de CMV na presença ou ausência de anticorpos anti-TIGIT e/ou anticorpos anti-PD-1 direcionados. Para avaliar a atividade combinatória, PBMCs foram tratadas com uma dose subótima de anticorpos anti-PD-1 (pembrolizumabe ou nivolumabe) a 1 μg/mL e foram adicionadas concentrações crescentes do anticorpo anti-TIGIT clone 13 IgG1 do tipo selvagem (1 pg/mL a 1 μg/mL). A resposta de evocação da memória ao antígeno do CMV foi deixada prosseguir por 5 dias, depois dos quais, os sobrenadantes da cultura de tecido foram colhidos e as respostas de citocinas determinadas por avaliação no ensaio Luminex (Millipore) de acordo com as instruções do fabricante.
[00462] Como mostrado na Figura 20, o anticorpo anti-TIGIT clone 13 IgG1 reforçou a secreção de IFNγ por PBMCs tratadas com anticorpos anti- PD-1 e expostas a antígenos do CMV, de maneira dose-dependente.
[00463] Para investigar a atividade combinatória in vivo, usou-se um
169 / 207 modelo de tumor singênico em camundongos. Camundongos C57BL/6, 8 por grupo, foram implantados por via subcutânea com 1x106 células tumorais MC38 no flanco. Quando os tumores atingiram ~100 mm3, os animais foram randomizados em grupos e tratados a cada três dias por 3 doses (1x a cada 3 dias x3) com os anticorpos anti-TIGIT clone 13 hIgG1 do tipo selvagem, clone 13 IgG1 afucosilado, 3 mg/kg, anticorpo anti-PD-1 1 mg/kg (anticorpo anti-PD-1 de camundongo, clone 29F.1A12), uma combinação do clone 13 hIgG1 do tipo selvagem/anticorpo anti-PD-1 ou uma combinação do clone 13 IgG1 afucosilado/anticorpo anti-PD-1. O volume tumoral foi monitorado ao longo do temo e os animais foram sacrificados quando a carga tumoral atingiu >1000 mm3.
[00464] Nesse experimento, tanto o clone 13 hIgG1 do tipo selvagem como o clone 13 IgG1 afucosilado demonstraram boa demora do crescimento tumoral, com 4/8 e 3/8 respostas completas para o anticorpo do tipo selvagem e afucosilado, respectivamente. Ver a Figura FIG. 37, superior à esquerda. O anticorpo anti-PD-1 também mostrou boa eficácia nesse experimento. As terapias combinadas mostraram regressão do tumor ainda mais rápida do que os agentes únicos isoladamente, conforme evidenciado pelos volumes tumorais no Dia 15. Figura 37, superior à direita e inferior. Exemplo 19: Atividade de anticorpos anti-TIGIT em células de células T humanas in vitro
[00465] Para investigar a reativação de células T de memória, realizaram-se experimentos de memória antigênica. PBMCs humanas (100.000 células) de um doador HLA-A2 que mostraram anteriormente ser reativos a peptídeos do CMV, foram ressuspensas em RPMI, contendo FBS 10%, 1X penicilina e 1X glutamina, e espalhadas em poços de fundo redondo de uma placa de 96 poços. As células foram estimuladas com peptídeos do CMV na presença ou ausência e concentrações crescentes dos anticorpos anti- TIGIT clone 13 hIgG1 do tipo selvagem, clone 13 IgG1 afucosilado ou clone
170 / 207 13 hIgG1 LALA-PG por cinco dias. Os sobrenadantes de cultura de tecido foram coletados e a produção de citocinas avaliadas por ensaios Luminex multiplex de acordo com as instruções do fabricante.
[00466] Como mostrado na Figura 21, culturas estimuladas com o anticorpo anti-TIGIT mostraram uma resposta aumentada ao antígeno de CMV como visto por um aumento na produção de IFNγ. O clone 13 IgG1 afucosilado resultou em uma resposta amplificada de células T antígeno- específica até abaixo de 1 pg/mL e essa atividade foi mais robusta do que a resposta associada com o clone 13 IgG1 do tipo selvagem. O anticorpo clone 13 IgG1 LALA-PG efetor nulo foi ineficiente em direcionar uma resposta de células T de memória.
[00467] Para investigar a indução de uma resposta de células T efetoras virgens, uma reação de linfócitos mistos (MLR) unidirecional foi realizada. PBMCs humanas (100.000 células) de um doador HLA-A2 foram ressuspensas em RPMI, contendo FBS 10%, 1X penicilina e 1X glutamina, e cultivadas em proporção 1:1 com PBMCs alogênicas irradiadas de HLA não correspondente em uma placa de fundo redondo com 96 poços. As células foram estimuladas com concentrações crescentes do clone 13 hIgG1 do tipo selvagem, do clone 13 hIgG1 afucosilado ou do clone 13 IgG1 LALA-PG por cinco dias. Os sobrenadantes de cultura de tecido foram coletados e a produção de citocinas avaliada por ensaios Luminex multiplex de acordo com as instruções do fabricante.
[00468] Como mostrado na Figura 22, culturas estimuladas com os anticorpos anti-TIGIT mostraram respostas aumentadas de células T efetoras alogênicas como visto por um aumento na produção de IL-2. O clone 13 IgG1 afucosilado resultou em uma resposta amplificada de células T antígeno- específicas abaixo até 100 pg/mL e essa atividade foi mais robusta do que a resposta associada com o clone 13 IgG1 do tipo selvagem. O anticorpo do clone 13 IgG1 LALA-PG efetor nulo foi ineficiente em direcionar uma
171 / 207 resposta de células T de memória.
[00469] Além de investigar a ativação de células T em ensaios de virgem de antígeno e de memória, o peptídeo estafilocócico enterotoxina B foi usado como um superantígeno em combinação com o clone 13 hIgG1 do tipo selvagem, o clone 13 hIgG1 afucosilado, o clone 13 IgG1 DLE e outro anticorpo anti-TIGIT, H5/L4 IgG1. O clone 13 hIgG1 afucosilado foi capaz de induzir a ativação de células T, conforme medido pela indução de IL-2, de modo mais robusto do que o clone 13 hIgG1 do tipo selvagem ou H5/L4. Figura 38A. O clone 13 IgG1 DLE foi também capaz de induzir a produção de IL-2 quase que modo equivalente ao clone 13 hIgG1 do tipo selvagem e ao clone 13 hIgG1 afucosilado. O clone 13 IgG1 DLE demonstrou induzir simultaneamente a produção de IL-10, em contraste com os outros anticorpos. Figura 38B. Esse resultado foi compatível com relatos de que o envolvimento do receptor FcγRIIb resulta na indução de IL-10. Prevê-se que IgG1 DLE envolva FcγRIIb. Exemplo 20: Atividade de anticorpos anti-TIGIT em um modelo de tumor murino
[00470] O tratamento de camundongos portadores de tumor (carcinoma CT26 de cólon) com várias formas de um anticorpo anti-TIGIT, quer IgG2a do tipo selvagem, IgG2a LALA-PG efetora nula ou IgG2a afucosilado, resultou em indução sistêmica e tecido-específica de citocinas. Para examinar efeitos potenciais sistêmicos e tecido-específicos do tratamento com anticorpos anti-TIGIT, seis camundongos Balb/c foram implantados com células CT26 de câncer de cólon no flanco e tratados com os anticorpos anti- TIGIT clone 13 IgG2a do tipo selvagem, clone 13 IgG2a afucosilado, clone 13 IgG2a LALA-PG, 1 mg/kg, uma vez a cada três dias por seis doses, ou nenhum tratamento, após os tumores atingirem 100 mm3. 24 horas depois da 3a dose e anticorpo anti-TIGIT, a metade dos camundongos foi sacrificada e plasma, baço e tecido tumoral foram coletados. A metade de cada baço e
172 / 207 tumor foi lisada em tampão RIPA com ruptura mecânica. Lisados do plasma e tecido foram então analisados para citocinas usando o kit Millipore 25 pre mix Luminex multiplex, o qual permitiu a análise para 25 citocinas inflamatórias diferentes. Os níveis de citocinas no tecido foram normalizados para outro teor da proteína determinado por BCA (ensaio com ácido bicinconínico.
[00471] Como mostrado na Figura 23, a análise de citocinas não mostrou citocinas aumentadas drasticamente no plasma, o que seria indicativo de uma resposta sistêmica, ou nos tecidos em resposta a quaisquer tratamentos com os anticorpos. Números limitados de citocinas foram observados em camundongos não tratados no plasma e tumor com alterações apenas modestas observadas após o tratamento anti-TIGIT, indicando que o tratamento com TIGIT não iniciou uma resposta inflamatória global mesmo com o anticorpo afucosilado.
[00472] Além da análise de níveis de citocinas induzidas por anti- TIGIT, amostras do tumor e da periferia coletadas 24 horas depois da terceira dose do anticorpo anti-TIGIT foram analisadas quanto a alterações globais na proporção de vários subconjuntos de células T por citometria de fluxo. Suspensões de células tumorais e esplênicas isoladas e de PBMCs dos mesmos camundongos Balb/c, como descrito acima para a Figura 23, foram coradas para vários marcadores da superfície celular para delinear subconjuntos CD8+, CD4+ de células T virgens/de memória (virgem CD62L+CD44-, efetora CD62L-CD44-, CD44+CD62L+ de memória central e CD44+CD62L- efetora de memória) e Treg (CD25+CD127-). As amostras foram corridas em um citômetro Attune Acoustic Focusing Cytometer e analisadas com FlowJo. Gates foram estabelecidos em células CD45+ vivas.
[00473] Como mostrado na Figura 24, aumentos em células T CD8+ no tumor foram observadas em resposta aos anticorpos anti-TIGIT clone 13 mIgG2a do tipo selvagem e clone 13 mIgG2a afucosilado, mas não o clone 13
173 / 207 mIgG2a LALA-PG efetor nulo, em comparação a animais não tratados (Figura 24, painel superior). Aumentos mais modestos na porcentagem de células T CD8+ após o tratamento com os anticorpos anti-TIGIT foram observados nas PBMCs e no baço. Alterações intratumorais em células T virgens, efetoras e de memória foram também observadas. Especificamente, os níveis de células T CD8+ virgens intratumorais diminuíram após o tratamento com o clone 13 mIgG2a do tipo selvagem e o clone 13 mIgG2a afucosilado, mas menos com o clone 13 mIgG2a LALA-PG (Figura 24, painel inferior à esquerda). Um aumento na proporção de células CD8+CD44+CD62L- efetoras de memória (Figura 24, painel superior à direita) e células CD8+CD44+CD62L+ de memória central (Figura 24, painel superior à esquerda) foi observado no tumor em resposta aos anticorpos clone 13 mIgG2a do tipo selvagem e afucosilados, mas não em resposta ao anticorpo clone 13 mIgG2a LALA-PG. Essas alterações não foram notadas no baço ou PBMCs, embora algumas alterações leves nesses tecidos tenham ocorrido.
[00474] Subconjuntos de células T CD4+ foram igualmente analisadas por citometria de fluxo quanto a alterações induzidas pelo tratamento com anticorpos anti-TIGIT usando uma estratégia semelhante à descrita acima para células CD8+. Como mostrado na Figura 25 (painel superior à esquerda), o tratamento com o clone 13 mIgG2a do tipo selvagem e anticorpos afucosilados induziu diminuições leves em células CD4+ em comparação ao tratamento com o anticorpo clone 13 mIgG2a LALA-PG ou animais não tratados. Esse efeito não foi visto nas PBMCs ou no baço. Uma diminuição intratumoral em resposta ao clone 13 mIgG2a do tipo selvagem e anticorpos afucosilados, mas não ao anticorpo clone 13 LALA-PG, foi também observado em pequena medida na população de Treg CD4+, sugerindo que o tratamento com os anticorpos anti-TIGIT está diminuindo a população imunossupressora de Treg no tumor, mas não nos tecidos normais. De modo semelhante aos resultados com células T CD8+, células T CD4+ virgens
174 / 207 intratumorais diminuíram após o tratamento com o clone 13 mIgG2a do tipo selvagem e anticorpos afucosilados em comparação a não tratados (Figura 25, painel inferior à esquerda) e esse achado foi simultâneo com um aumento na proporção de células T CD4+ efetoras de memória no tumor (Figura 25, painel no meio à direita). Células T CD4+ e CD8+ efetoras de memória estão envolvidas em suscitar respostas antitumorais e elevação com anticorpos direcionados contra TIGIT pode contribuir para a resposta antitumoral. Muitas dessas alterações na população de células T intratumorais não foram acompanhadas por desvios grandes nessas populações na periferia.
[00475] Após seis doses de anticorpos anti-TIGIT, em aproximadamente 20 dias depois de iniciado o tratamento, os tumores diminuíram e eram quase indetectáveis. Os baços e plasma foram coletados desses camundongos e as células preparadas para citometria de fluxo como descrito acima. Como mostrado na Figura 26A-B, a análise de vários subconjuntos de células T do baço desses camundongos não demonstrou alterações drásticas nos subconjuntos de CD8+ ou CD4+ entre os grupos.
[00476] A indução de citocinas no baço e plasma de camundongos tratados com anticorpos anti-TIGIT foi avaliada por análise multiplex e os resultados são mostrados na Figura 27. Não foi observada produção elevada de citocinas nos baços de animais tratados quando comparados a animais não tratados e, em geral, níveis baixos de citocinas foram detectados no plasma, com a exceção da quimiocina LIX (homólogo de IL8 murino) e eotaxina, as quais foram elevadas em animais não tratados e tratados com certos anticorpos anti-TIGIT.
[00477] A geração de memória antígeno-específica contra o tumor nesses animais foi avaliada usando esplenócitos coletados aproximadamente 20 dias após o início do tratamento com anticorpos anti-TIGIT. Esplenócitos de camundongos tratados com anticorpos anti-TIGIT descritos acima foram ressuspensas em meio de cultura e semeados em poços de uma placa de 96
175 / 207 poços. As células foram deixadas não estimuladas ou voltaram a ser estimuladas com peptídeo AH1 1 µg/mL, que é o alvo dominante para as respostas de células T CD8+ contra o tumor colorretal CT26. Quarenta e oito horas mais tarde, os sobrenadantes de cultura foram coletados e analisados quanto à produção de citocinas via análise multiplex.
[00478] Como mostrado na Figura 28, muito pouca citocina foi produzida na ausência do peptídeo. Uma exceção interessante foi a observação de níveis elevados de IL5 e IL4 produzidas por esplenócitos não estimulados dos animais tratados com o clone 13 mIgG2a afucosilado (Figura 28, painéis inferiores). No entanto, a estimulação de esplenócitos com um peptídeo específico CT-26 resultou na produção robusta de IFNγ e TNFα em animais tratados com o anticorpo clone 13 mIgG2a do tipo selvagem e afucosilado, mas não em animais tratados com o anticorpo clone 13 mIgG2a LALA-PG (Figura 28, painéis superiores), indicando que os tratamentos com os anticorpos clone 13 mIgG2a do tipo selvagem e afucosilado são capazes de estimular uma resposta duradoura de células T CD8+ de memória antígeno- específica. A geração de respostas de células T de memória está envolvida no direcionamento de respostas antitumorais de longo prazo. Aumentos na produção de IL4 após reestimulação com peptídeo dos esplenócitos tratados com os anticorpos clone 13 mIgG2a do tipo selvagem e afucosilado foram também observados (Figura 28, painel inferior à direita). A produção de IL4 e IL5 em esplenócitos não estimulados no grupo do clone 13 mIgG2a afucosilado sem reestimulação pode sugerir indução de uma resposta TH2 por esse anticorpo. Exemplo 21: Atividade de anticorpos anti-TIGIT em modelos adicionais de tumor murino
[00479] Dois modelos de tumor singênico murino, carcinomas de mama EMT6 e E0771, foram tratados com anticorpo anti-TIGIT clone 13, 5 mg/kg, compreendendo mIgG2a do tipo selvagem, ou anticorpo anti-TIGIT
176 / 207 clone 13 0,1 mg/kg, 1 mg/kg ou 5 mg/kg compreendendo mIgG2a afucosilado. O esquema de administração foi uma dose a cada quatro dias, quatro doses, no total (1x 4/4 dias x4). O comprimento e largura do tumor foram medidos e o volume tumoral calculado usando a fórmula Volume (mm3) = 0,5 * Comprimento * Largura2 onde comprimento é a dimensão mais longa.
[00480] Como mostrado na Figura 29A-29B, a resposta antitumoral nos modelos de câncer de mama demonstrou demora no crescimento do tumor, mas respostas curativas mínimas. No modelo EMT6, ambos os anticorpos clone 13 mIgG2a do tipo selvagem e afucosilado a 5 mg/kg demonstraram boa demora no crescimento do tumor com um aumento na sobrevida média de 30,5 dias para 37 e 39 dias, respectivamente (Figura 29A). Grupos de doses adicionais do anticorpo clone 13 mIgG2a afucosilado demonstraram alguma perda de atividade nas doses menores, com sobrevida global de somente 35,2 e 36,8 dias observada com as doses de 1 e 0,1 mg/kg, mas o crescimento tumoral foi ainda retardado em comparação a controles não tratados (Figura 29A).
[00481] No modelo E0771, uma demora mais modesta no crescimento do tumor foi observada para ambos os anticorpos clone 13 mIgG2a do tipo selvagem e afucosilado a 5 mg/kg, com um aumento na sobrevida média de 38,6 dias para 44 e 42 dias, respectivamente (Figura 29B). Além disso, um em seis camundongos pareceram ser curados com o anticorpo clone 13 mIgG2a afucosilado nas doses de 1 mg/kg e 5 mg/kg. Os grupos de doses menores do anticorpo clone 13 mIgG2a afucosilado, 1 mg/kg e 0,1 mg/kg, resultou em sobrevida global média de 39 dias (Figura 29B).
[00482] Além disso, o anticorpo clone 13 mIgG2a do tipo selvagem, 1 mg/kg, foi avaliado em um segundo modelo CT26 de câncer de cólon, que foi obtido de um laboratório externo (MI Bioresearch). Como mostrado na Figura 29C, nesse modelo CT26 de câncer de cólon, o anticorpo clone 13 mIgG2a do
177 / 207 tipo selvagem demonstrou um aumento na sobrevida global média de 30 dias para 40 dias com o tratamento, mas somente induziu uma regressão completa (16%). Como mostrado na Figura 18B, o modelo CT26 de câncer de cólon que foi mantido na Seattle Genetics mostrou 50% (3/6) de regressões completas com o anticorpo clone 13 IgG2a do tipo selvagem, 1 mg/kg. Exemplo 22: Análise RNA-Seq e correlação de resposta in vivo com assinaturas moleculares
[00483] Para avaliar as diferenças nas respostas de dois modelos CT26 de câncer de cólon, bem como outros modelos de câncer singênico, usou análise RNA-seq para identificar alterações subjacentes nos transcriptomas entre os modelos. Leituras brutas de RNA-seq (formato fastq) para tumores representativos não tratados de cada modelo estavam disponíveis como segue. A20 (mantido na Seattle Genetics), 2 réplicas CT26 (mantido na Seattle Genetics), 2 réplicas CT26 (obtido da MIBio), 1 réplica E0771 (obtido da MIBio), 1 réplica EMT-6 (obtido da MIBio), 1 réplica MC38 (mantido na Seattle Genetics), 1 réplica
[00484] Leituras de RNA-seq das amostras foram processadas em um canal (pipeline) padrão que consistia em aparagem do adaptador (cutadapt), alinhamento com o genoma/transcriptoma de camundongo (STAR) e quantificação de transcritos (RSEM). Os valores da expressão de genes normalizados para FPKM (fragmentos por quilobase por milhão de leituras) foram usados para análises subsequentes. Com base na inspeção de curvas de resposta in vivo, os modelos foram classificados como segue em termos da sua resposta global ao tratamento TIGIT WT: respondedores completos = A20 (Seattle Genetics; Figura 18A), CT26 (Seattle Genetics; Figura 18B) e respondedores parciais = CT26 (MIBio; Figura 29C), EMT-6 (MIBio; Figura 29A), E0771 (MIBio; Figura 29B), MC38 (Seattle Genetics; Figura 18C). As
178 / 207 diferenças entre os dois modelos CT26 de câncer de cólon em nível transcricional foram observadas, sugerindo que pode ser importante caracterizar os modelos usados para estudos de eficácia.
[00485] Assinaturas moleculares relacionadas ao microambiente do tumor (TME) que podem se correlacionar com a resposta foram também determinadas pela compilação de assinaturas de genes pertencentes ao sistema imune e a resposta imune de duas fontes publicadas: Mosely et al., “Rational selection of syngeneic preclinical tumor models for immunoutroapeutic drug discovery”, Cancer Immunol Res 2017;5:29-41; e TCIA, The Cancer Immunome Atlas (tcia.at/home), com assinaturas retiradas de Charoentong et al., “Pan-cancer Immunogenomic Analyses Reveal Genotype- Immunophenotype Relationships and Predictors of Response to Checkpoint Blockade”, Cell Rep 2017 Jan 3;18(1):248-262. As assinaturas de genes dessas fontes consistem em listas de genes cuja expressão é alta em um contexto biológico em particular - em células T CD8+, por exemplo. As assinaturas de genes TCIA são derivadas de humanos, de modo que os genes em cada uma dessas assinaturas foram mapeados contra os ortólogos de camundongo, usando a biblioteca R biomaRt. Aproximadamente 50 assinaturas de genes foram consideradas, no total, e cada uma das oito amostras RNA-seq de tumor não tratado foram pontuadas contra cada uma das 50 assinaturas pela soma dos valores de amostras FPKM dos genes na assinatura.
[00486] Para avaliar quantitativamente quais pontuações de assinaturas de genes separavam os respondedores fortes dos respondedores fracos, o vetor de pontuações de assinatura entre todas as amostras foi correlacionado com um vetor de resposta (Correlação de Pearson, 0 para respondedores fracos, 1 para respondedores fortes). As assinaturas com correlação particularmente alta com resposta incluíam células NK e células T CD8 ativada (Figura 30). Nos dois casos, os respondedores mais fortes obtiveram pontuação mais alta
179 / 207 nos subconjuntos imunes quando comparados aos respondedores mais fracos. A Tabela 4 mostra um resumo da correlação entre certos subconjuntos de células imunes e respostas de células tumorais ao tratamento com anticorpos anti-TIGIT. Tabela 4: Assinatura gênica Correlação Valor p Célula T gama delta 0,9262 0,0009 Célula NK 0,9200 0,0012 Célula T CD8 ativada 0,8535 0,0070 DC ativada -0,8437 0,0085 Célula B imatura 0,7875 0,0203 CD96 0,7569 0,0297 Célula T CD8 0,7569 0,0297 Célula natural killer CD56bright 0,7319 0,0390 Célula T helper 17 0,7139 0,0467 Célula T CD4 ativada 0,7092 0,0488
[00487] Sem a intenção de estar preso a qualquer teoria em particular, como o bloqueio de TIGIT pode estimular a morte tumoral mediada por células NK e células T CD8, um pool maior disponível dessas populações de células imunes no TME pode explicar a resposta mais forte nos modelos com pontuação maior para esses subconjuntos.
[00488] Curiosamente, a expressão de TIGIT não foi um diferenciador forte da resposta nessa avaliação, nem foi a expressão de CD155 (Figura 31). Por exemplo, o modelo CT26 de câncer de cólon da Seattle Genetics revelou a maior expressão de CD155 de todos os modelos, enquanto o modelo A20 de linfoma obteve a menor, embora ambos sejam respondedores fortes. Exemplo 23: Anticorpo anti-TIGIT reforça resposta de Th1
[00489] Para avaliar se o anticorpo clone 13 anti-TIGIT ajuda no direcionamento da resposta de células T antígeno-específica, camundongos Balb/c (5 por grupo) foram vacinados uma vez com 100 µg do antígeno modelo ovalbumina (OVA) na presença do adjuvante completo de Freund (CFA) por via subcutânea. Ao mesmo tempo, administrou-se aos camundongos o anticorpo clone 13 IgG2a do tipo selvagem, clone 13 mIgG2a afucosilado ou clone 13 mIgG2a LALA-PG, 1 mg/kg, e então três doses mais
180 / 207 em intervalos de três dias (1x 3/3 dias x4). Quatorze dias após a vacinação, os camundongos foram analisados quanto à indução de imunidade antígeno- específica usando um ensaio ELISA de IgG1 e IgG2a anti-OVA. Os esplenócitos foram reestimulados e avaliados quanto à indução de citocinas.
[00490] Os ensaios ELISA anti-OVA demonstraram que a coadministração de qualquer anticorpo, o clone 13 IgG2a do tipo selvagem ou o clone 13 mIgG2a LALA-PG, enquanto os camundongos eram submetidos ao priming (preparação) antígeno-específico induzido pela vacina, reforçaram os níveis dos anticorpos IgG1 gerados em ~1,5 vez. O anticorpo clone 13 mIgG2a afucosilado não reforçou os níveis de anticorpos IgG1 antígeno- específicos nesse experimento (Figura 32, painel à direita). Esses dados sugerem que o bloqueio de TIGIT é capaz de aumentar o priming de uma resposta de CD4/Th2, mas a função efetora aumentada anula esse efeito. O bloqueio de TIGIT também reforçou os níveis de anticorpos IgG2a antígeno- específicos (Figura 32, painel à direita), mas nesse caso, o anticorpo clone 13 mIgG2a afucosilado mostrou o maior efeito. Em suma, uma correlação inversa foi observada entre níveis de IgG1 e função efetora reforça, enquanto os níveis de IgG2a foram correlacionados diretamente com função efetora aumentada, com o anticorpo clone 13 mIgG2a afucosilado aumentando os níveis de IgG2a anti-OVA em mais de 9 vezes. Os anticorpos clone 13 IgG2a do tipo selvagem e clone 13 mIgG2a LALA-PG também reforçaram os níveis de IgG2a, mas somente em ~4 vezes (Figura 32, painel à direita). Embora o bloqueio de TIGIT isoladamente não fosse suficiente para desviar esse sistema fortemente em favor de Th2, o qual é impulsionado pela linhagem de camundongo e adjuvante utilizados, em direção a Th1 nesse experimento, foi demonstrado que o bloqueio de TIGIT aumenta uma resposta de Th1 e a resposta foi correlacionada com função efetora.
[00491] Além de analisar a produção de anticorpos antígeno- específicos, a indução de células T antígeno-específicas foi também avaliada.
181 / 207 Números equivalentes de esplenócitos de cada camundongo foram reestimulados ex vivo com 1 µg de proteína inteira (OVA) por 72 horas, seguido por análise de citocinas por células T efetoras. A produção da citocinas IL-2 por células T ativadas em resposta à reestimulação com o antígeno (“OVA 1 µg/mL”) foi aumentada no grupo tratado com antígeno/adjuvante em relação a animais não tratados, como esperado, e essa foi aumentada mais em esplenócitos de animais tratados com anticorpo anti- TIGIT de função efetora possibilitada (clone 13 IgG2a do tipo selvagem) ou aumentada (clone 13 mIgG2a afucosilado) durante o priming (Figura 33, painel inferior à direita). Esses resultados são compatíveis com a capacidade de bloqueio de TIGIT para aumentar a geração de uma resposta de células T virgens antígeno-específicas. A análise das citocinas IL-5 e IL-4 de Th2 efetora demonstrou alguma indução adicional após a reestimulação com antígeno em relação ao antígeno/adjuvante isoladamente de animais tratados com anticorpos anti-TIGIT, embora uma correlação menos clara entre função efetora e resposta fosse observada (Figura 33, painéis à esquerda). Para a citocina IFNγ de células Th1/T CD8, o bloqueio de TIGIT durante o evento de priming com o antígeno aumentou mais profundamente a geração de células T antígeno-específicas (Figura 33, painel superior à direita). O reforço mais significativo foi observado em esplenócitos de animais tratados com o anticorpo clone 13 mIgG2a afucosilado efetor aumentado. Exemplo 24: Anticorpo anti-TIGIT induz células T CD8 de memória antitumorais de longa duração
[00492] Camundongos que mostraram uma resposta completa no modelo de tumor singênico CT26 de câncer de cólon após o tratamento com clone 13 mIgG2a afucosilado ou anticorpo não modificado e quatro camundongos não tratados foram reexpostos (re-challenged) a células CT26 de câncer de cólon. Como mostrado na Figura 34, os camundongos que haviam mostrado uma resposta complete após o tratamento 1 mg/kg ou 5
182 / 207 mg/kg tratamento com clone 13 mIgG2a afucosilado ou anticorpo não modificado pareceram ter células T CD8 de memória antitumorais de longa duração que foram capazes de rejeitar células tumorais reexpostas.
[00493] Embora a invenção acima tenha sido descrita em alguns detalhes a título de ilustração e exemplo para efeitos de clareza de entendimento, o técnico no assunto reconhecerá que muitas modificações e variações desta invenção podem ser efetuadas sem que se desviem de seu espírito e alcance. As modalidades específicas aqui descritas são oferecidas a título de exemplo somente e não destinam a ser limitantes de maneira alguma. A intenção é que o relatório descritivo e os exemplos sejam considerados exemplares somente, sendo o verdadeiro alcance e espírito da invenção indicado pelas reivindicações a seguir. Exemplo 25: Ligação de anticorpos anti-TIGIT aos receptores Fcγ
[00494] In vivo, monócitos, macrófagos, neutrófilos, células dendríticas e células natural killer podem mediar ADCP, ADCC e CDC via FcγRI, FcγRII e FcγRIIIa. Para avaliar a ligação ao FcγR celular, células CHO foram transfectada com FcγRI, FcγIIa, FcγIIB humanos ou com receptor FcγRIIIa V/V de alta afinidade. As células foram expostas a concentrações crescentes das versões do anticorpo IgG1 anti-TIGIT do tipo selvagem, afucosilado, LALA-PG ou DLE do clone 13 ou outro anticorpo anti-TIGIT, H5L4. A ligação foi monitorada utilizando um anticorpo secundário anti-Fc humano com etiqueta fluorescente e citometria de fluxo.
[00495] Como mostrado na Figura 39A, todos os anticorpos, exceto a cadeia principal inativa de IgG1 LALA-PG, ligaram-se substancialmente de modo equivalente a FcγRI na superfície de células CHO. As cadeias principais de IgG1 afucosilado e IgG1 DLE exibiram ligação aumentada a FcγRIIIa na superfície de células CHO. Figura 39B. A ligação a FcyRIIa e a FcγRIIb na superfície de células CHO foi maior com a cadeia principal de
183 / 207 IgG1 do tipo selvagem e cadeia principal reforçada de IgG1 DLE efetora. Figura 39C e Figura 39D. A cadeia principal de IgG1 afucosilada apresentou menor afinidade de ligação a FcγRIIa e a FcγRIIb quando comparada à cadeia principal de IgG1 do tipo selvagem, embora sua afinidade de ligação fosse maior do que a cadeia principal de IgG1 LALA-PG. Figura 39C e Figura 39D. Ligação reduzida ao receptor FcγRIIb inibidor pode influenciar a resposta imune mediada pela cadeia principal de IgG1 afucosilada. Exemplo 26: Fagocitose mediada por anticorpo anti-TIGIT
[00496] O termo “fagocitose celular dependente de anticorpo” ou “ADCP” refere-se ao processo pelo qual células ligadas a anticorpos são internalizadas no todo ou em parte, por células imunes fagocitárias (p. ex., por macrófagos, neutrófilos e/ou células dendríticas) que se ligam a uma região Fc de um anticorpo.
[00497] Versões do tipo selvagem, afucosilada e DLE do anticorpo IgG1 anti-TIGIT do clone 13 foram analisadas quanto à fagocitose mediada pelo anticorpo usando monócitos/macrófagos humanos e células T Jurkat TIGIT-positivas. Células T Jurkat TIGIT humano-positivas, marcadas com corante vermelho fluorescente PKH, foram opsonizadas por 30 minutos com concentrações crescentes de anticorpos anti-TIGIT. As células foram lavadas e incubadas em proporção 10:1 com monócitos-macrófagos por 18 horas. As amostras foram lavadas 3 vezes e submetidas à citometria de fluxo para avaliar fagocitose.
[00498] Como mostrado na Figura 40, os anticorpos IgG1 anti-TIGIT do clone 13 do tipo selvagem e afucosilado mediaram níveis semelhantes de fagocitose, enquanto o anticorpo IgG1 DLE do clone 13 foi menos eficaz em mediar a atividade fagocitária.
[00499] Além de ADCC e ADCP, as regiões Fc de anticorpos ligados a células podem também ativar a via clássica do complemento e provocar CDC. C1q do sistema complemento liga-se às regiões Fc de anticorpos quando são
184 / 207 complexados com antígeno. A ligação de C1q a anticorpos ligados a células pode iniciar uma cascata de eventos envolvendo a atividade proteolítica de C4 e C2 para gerar a C3 convertase. A clivagem de C3 em C3b pela C3 convertase torna possível a ativação de componentes terminais do complemento, incluindo C5b, C6, C7, C8 e C9. Coletivamente, essas proteínas formam poros do complexo de ataque à membrana nas células revestidas com anticorpo. Esses poros rompem a integridade da membrana celular, eliminando a célula alvo via citotoxicidade dependente do complemento ou “CDC”.
[00500] As versões do tipo selvagem, afucosilada, LALA-PG e DLE do anticorpo IgG1 anti-TIGIT do clone 13, bem como H5/L4 foram analisadas quanto à atividade CDC usando células T Jurkat TIGIT+ como células alvo. As células Jurkat foram incubadas com doses crescentes dos anticorpos na presença de soro humano (não inativado com calor) por 2 horas a 37 ºC em meio contendo SYTOX® verde, que é excluído de células vivas, mas absorvido quando da ativação de CDC e lise. Depois da incubação, as amostras foram analisadas em um leitor de placas, o sinal de fundo foi subtraído e a % de lise máxima foi calculada determinando o sinal máximo emitido por células mortas com uma solução de Triton X 1%.
[00501] Como mostrado na Figura 41, nenhum dos anticorpos anti- TIGIT testados mediaram atividade CDC. Em contraste, o anticorpo and- CD47 [sic] hB6H12.3 mediou atividade CDC robusta nesse sistema. A indução de CDC por anticorpos é conformacionalmente dependente e frequentemente depende do epítopo que eles ligam. Esses resultados sugerem que o epítopo de TIGIT ligado pelos anticorpos não permite a ligação adequada a C1q.
[00502] Todas as publicações, patentes, pedidos de patente ou outros documentos citados são aqui incorporados, em sua totalidade, por referência para todos os efeitos na mesma medida em que o seria caso cada publicação,
185 / 207 patente, pedido de patente ou outro documento fosse individualmente indicado para ser incorporado por referência para todos os efeitos. Tabela de sequências
SEQ ID Nome Sequência
NO Proteína VH do Clone 2 1 EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSDHYMDWVRQAPG
KGLEWVGRTRNKANSYTTEYAASVKGRFTISRDDSKNSLYLQ MNSLKTEDTAVYYCARGQYYYGSSSRGYYYMDVWGQGTTV
TVSS DNA de VH do Clone 2 2 GAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTTGGTCCAGCC
TGGAGGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCA CCTTCAGTGACCACTACATGGACTGGGTCCGCCAGGCTCCA GGGAAGGGGCTGGAGTGGGTTGGCCGTACTAGAAACAAAG CTAACAGTTACACCACAGAATACGCCGCGTCTGTGAAAGGC AGATTCACCATCTCAAGAGATGATTCAAAGAACTCACTGTA TCTGCAAATGAACAGCCTGAAAACCGAGGACACGGCGGTG TACTACTGCGCCAGAGGCCAGTACTACTACGGCAGCAGCAG CAGAGGTTACTACTACATGGACGTATGGGGCCAGGGAACA
ACCGTCACCGTCTCCTCA FR1 de VH do Clone 2 3 EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASG CDR1 de VH do Clone 2 4 FTFSDHYMD FR2 de VH do Clone 2 5 WVRQAPGKGLEWVG CDR2 de VH do Clone 2 6 RTRNKANSYTTEYAASVKG FR3 de VH do Clone 2 7 RFTISRDDSKNSLYLQMNSLKTEDTAVYYC CDR3 de VH do Clone 2 8 ARGQYYYGSSSRGYYYMDV FR4 de VH do Clone 2 9 WGQGTTVTVSS Proteína VL dos Clones 2 e 10 EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLAWYQQKPGQ 2C APRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYY
CQQAVPSPLTFGGGTKVEIK DNA de VL do Clone 2 11 GAAATTGTGTTGACGCAGTCTCCAGGCACCCTGTCTTTGTCT
CCAGGGGAAAGAGCCACCCTCTCCTGCAGGGCCAGTCAGA GTGTTAGCAGCAGCTACTTAGCCTGGTACCAGCAGAAACCT GGCCAGGCTCCCAGGCTCCTCATCTATGGTGCATCCAGCAG GGCCACTGGCATCCCAGACAGGTTCAGTGGCAGTGGGTCTG GGACAGACTTCACTCTCACCATCAGCAGACTGGAGCCTGAA GATTTTGCAGTGTATTACTGTCAGCAGGCCGTCCCCAGTCCT
CTCACTTTTGGCGGAGGGACCAAGGTTGAGATCAAA FR1 de VL do Clone 2 12 EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSC CDR1 de VL dos Clones 2 13 RASQSVSSSYLA e 2C FR2 de VL do Clone 2 14 WYQQKPGQAPRLLIY CDR2 de VL dos Clones 2 15 GASSRAT e 2C FR3 de VL do Clone 3 16 GIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYC CDR3 de VL dos Clones 2 17 QQAVPSPLT e 2C FR4 de VL do Clone 2 18 FGGGTKVEIK Proteína VH do Clone 3 19 EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSDHYMDWVRQAPG
KGLEWVGRTRNKANSYTTEYAASVKGRFTISRDDSKNSLYLQ MNSLKTEDTAVYYCARGQYYYGSSSRGYYYMDVWGQGTTV TVSS
186 / 207
SEQ ID Nome Sequência
NO DNA de VH do Clone 3 20 GAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTTGGTCCAGCC
TGGAGGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCA CCTTCAGTGACCACTACATGGACTGGGTCCGCCAGGCTCCA GGGAAGGGGCTGGAGTGGGTTGGCCGTACTAGAAACAAAG CTAACAGTTACACCACAGAATACGCCGCGTCTGTGAAAGGC AGATTCACCATCTCAAGAGATGATTCAAAGAACTCACTGTA TCTGCAAATGAACAGCCTGAAAACCGAGGACACGGCGGTG TACTACTGCGCCAGAGGCCAGTACTACTACGGCAGCAGCAG CAGAGGTTACTACTACATGGACGTATGGGGCCAGGGAACA
ACCGTCACCGTCTCCTCA FR1 de VH do Clone 3 21 EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASG CDR1 de VH do Clone 3 22 FTFSDHYMD FR2 de VH do Clone 3 23 WVRQAPGKGLEWVG CDR2 de VH do Clone 3 24 RTRNKANSYTTEYAASVKG FR3 de VH do Clone 3 25 RFTISRDDSKNSLYLQMNSLKTEDTAVYYC CDR3 de VH do Clone 3 26 ARGQYYYGSSSRGYYYMDV FR4 de VH do Clone 3 27 WGQGTTVTVSS Proteína VL do Clone 3 28 EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVRSSYLAWYQQKPGQ
APRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYY
CQQVGPPLTFGGGTKVEIK DNA de VL do Clone 3 29 GAAATTGTGTTGACGCAGTCTCCAGGCACCCTGTCTTTGTCT
CCAGGGGAAAGAGCCACCCTCTCCTGCAGGGCCAGTCAGA GTGTTAGGAGCAGCTACTTAGCCTGGTACCAGCAGAAACCT GGCCAGGCTCCCAGGCTCCTCATCTATGGTGCATCCAGCAG GGCCACTGGCATCCCAGACAGGTTCAGTGGCAGTGGGTCTG GGACAGACTTCACTCTCACCATCAGCAGACTGGAGCCTGAA GATTTTGCAGTGTATTACTGTCAGCAGGTCGGACCCCCCCTC
ACTTTTGGCGGAGGGACCAAGGTTGAGATCAAA FR1 de VL do Clone 3 30 EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSC CDR1 de VL do Clone 3 31 RASQSVRSSYLA FR2 de VL do Clone 3 32 WYQQKPGQAPRLLIY CDR2 de VL do Clone 3 33 GASSRAT FR3 de VL do Clone 3 34 GIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYC CDR3 de VL do Clone 3 35 QQVGPPLT FR4 de VL do Clone 3 36 FGGGTKVEIK Proteína VH do Clone 5 37 EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSTYAMSWVRQAPG
KGLEWVSAISGSGGSTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNS
LRAEDTAVYYCAKGPRYQDRAGMDVWGQGTTVTVSS DNA de VH do Clone 5 38 GAGGTGCAGCTGTTGGAGTCTGGGGGAGGCTTGGTACAGCC
TGGGGGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCA CCTTTAGCACCTATGCCATGAGCTGGGTCCGCCAGGCTCCA GGGAAGGGGCTGGAGTGGGTCTCAGCTATTAGTGGTAGTGG TGGTAGCACATACTACGCAGACTCCGTGAAGGGCCGGTTCA CCATCTCCAGAGACAATTCCAAGAACACGCTGTATCTGCAA ATGAACAGCCTGAGAGCCGAGGACACGGCGGTGTACTACT GCGCCAAGGGCCCCAGATACCAAGACAGGGCAGGAATGGA
CGTATGGGGCCAGGGAACAACTGTCACCGTCTCCTCA FR1 de VH do Clone 5 39 EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASG CDR1 de VH do Clone 5 40 FTFSTYAMS FR2 de VH do Clone 5 41 WVRQAPGKGLEWVS CDR2 de VH do Clone 5 42 AISGSGGSTYYADSVKG FR3 de VH do Clone 5 43 RFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYC CDR3 de VH do Clone 5 44 AKGPRYQDRAGMDV FR4 de VH do Clone 5 45 WGQGTTVTVSS Proteína VL do Clone 5 46 DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSISSYLNWYQQKPGKAP
KLLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQ QSLATPYTFGGGTKVEIK
187 / 207
SEQ ID Nome Sequência
NO DNA de VL do Clone 5 47 GACATCCAGATGACCCAGTCTCCATCCTCCCTGTCTGCATCT
GTAGGAGACAGAGTCACCATCACTTGCCGGGCAAGTCAGA GCATTAGCAGCTATTTAAATTGGTATCAGCAGAAACCAGGG AAAGCCCCTAAGCTCCTGATCTATGCTGCATCCAGTTTGCA AAGTGGGGTCCCATCAAGGTTCAGTGGCAGTGGATCTGGGA CAGATTTCACTCTCACCATCAGCAGTCTGCAACCTGAAGAT TTTGCAACTTACTACTGTCAGCAAAGCCTCGCCACTCCTTAC
ACTTTTGGCGGAGGGACCAAGGTTGAGATCAAA FR1 de VL do Clone 5 48 DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITC CDR1 de VL do Clone 5 49 RASQSISSYLN FR2 de VL do Clone 5 50 WYQQKPGKAPKLLIY CDR2 de VL do Clone 5 51 AASSLQS FR3 de VL do Clone 5 52 GVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYC CDR3 de VL do Clone 5 53 QQSLATPYT FR4 de VL do Clone 5 54 FGGGTKVEIK Proteína VH do Clone 13 55 QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSSYAISWVRQAPG
QGLEWMGSIIPIFGTANYAQKFQGRVTITADESTSTAYMELSSL
RSEDTAVYYCARGPSEVGAILGYVWFDPWGQGTLVTVSS DNA de VH do Clone 13 56 CAGGTGCAGCTGGTGCAGTCTGGGGCTGAGGTGAAGAAGC
CTGGGTCCTCGGTGAAGGTCTCCTGCAAGGCTTCTGGAGGC ACCTTCAGCAGCTATGCTATCAGCTGGGTGCGACAGGCCCC TGGACAAGGGCTTGAGTGGATGGGAAGCATCATCCCTATCT TTGGTACAGCAAACTACGCACAGAAGTTCCAGGGCAGAGTC ACGATTACCGCGGACGAATCCACGAGCACAGCCTACATGG AGCTGAGCAGCCTGAGATCTGAGGACACGGCGGTGTACTAC TGCGCCAGAGGCCCTTCTGAAGTAGGAGCAATACTCGGATA TGTATGGTTCGACCCATGGGGACAGGGTACATTGGTCACCG
TCTCCTCA FR1 de VH do Clone 13 57 QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASG CDR1 de VH do Clone 13 58 GTFSSYAIS FR2 de VH do Clone 13 59 WVRQAPGQGLEWMG CDR2 de VH do Clone 13 60 SIIPIFGTANYAQKFQG FR3 de VH do Clone 13 61 RVTITADESTSTAYMELSSLRSEDTAVYYC CDR3 de VH dos Clones 62 ARGPSEVGAILGYVWFDP 13 e 13A FR4 de VH do Clone 13 63 WGQGTLVTVSS Proteína VL dos Clones 13, 64 DIVMTQSPLSLPVTPGEPASISCRSSQSLLHSNGYNYLDWYLQK 13A, 13B, 13C e 13D PGQSPQLLIYLGSNRASGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDV
GVYYCMQARRIPITFGGGTKVEIK DNA de VL do Clone 13 65 GATATTGTGATGACTCAGTCTCCACTCTCCCTGCCCGTCACC
CCTGGAGAGCCGGCCTCCATCTCCTGCAGGTCTAGTCAGAG CCTCCTGCATAGTAATGGATACAACTATTTGGATTGGTACCT GCAGAAGCCAGGGCAGTCTCCACAGCTCCTGATCTATTTGG GTTCTAATCGGGCCTCCGGGGTCCCTGACAGGTTCAGTGGC AGTGGATCAGGCACAGATTTTACACTGAAAATCAGCAGAGT GGAGGCTGAGGATGTTGGGGTTTATTACTGCATGCAGGCAA GACGAATCCCTATCACTTTTGGCGGAGGGACCAAGGTTGAG
ATCAAA FR1 de VL do Clone 13 66 DIVMTQSPLSLPVTPGEPASISC CDR1 de VL dos Clones 67 RSSQSLLHSNGYNYLD 13, 13A, 13B, 13C e 13D FR2 de VL do Clone 13 68 WYLQKPGQSPQLLIY CDR2 de VL dos Clones 69 LGSNRAS 13, 13A, 13B, 13C e 13D FR3 de VL do Clone 13 70 GVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYC CDR3 de VL dos Clones 71 MQARRIPIT 13, 13A, 13B, 13C e 13D FR4 de VL do Clone 13 72 FGGGTKVEIK
188 / 207
SEQ ID Nome Sequência
NO Proteína VH do Clone 14 73 QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSSYAISWVRQAPG
QGLEWMGSIIPIFGTANYAQKFQGRVTITADESTSTAYMELSSL
RSEDTAVYYCARGPSEVGAILGYVWFDPWGQGTLVTVSS DNA de VH do Clone 14 74 CAGGTGCAGCTGGTGCAGTCTGGGGCTGAGGTGAAGAAGC
CTGGGTCCTCGGTGAAGGTCTCCTGCAAGGCTTCTGGAGGC ACCTTCAGCAGCTATGCTATCAGCTGGGTGCGACAGGCCCC TGGACAAGGGCTTGAGTGGATGGGAAGCATCATCCCTATCT TTGGTACAGCAAACTACGCACAGAAGTTCCAGGGCAGAGTC ACGATTACCGCGGACGAATCCACGAGCACAGCCTACATGG AGCTGAGCAGCCTGAGATCTGAGGACACGGCGGTGTACTAC TGCGCCAGAGGCCCTTCTGAAGTAGGAGCAATACTCGGATA TGTATGGTTCGACCCATGGGGACAGGGTACATTGGTCACCG
TCTCCTCA FR1 de VH do Clone 14 75 QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASG CDR1 de VH do Clone 14 76 GTFSSYAIS FR2 de VH do Clone 14 77 WVRQAPGQGLEWMG CDR2 de VH do Clone 14 78 SIIPIFGTANYAQKFQG FR3 de VH do Clone 14 79 RVTITADESTSTAYMELSSLRSEDTAVYYC CDR3 de VH do Clone 14 80 ARGPSEVGAILGYVWFDP FR4 de VH do Clone 14 81 WGQGTLVTVSS Proteína VL do Clone 14 82 DIVMTQSPLSLPVTPGEPASISCRSSQSLLHSNGYNYLDWYLQK
PGQSPQLLIYLGSNRASGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDV
GVYYCMQAKRLPLTFGGGTKVEIK DNA de VL do Clone 14 83 GATATTGTGATGACTCAGTCTCCACTCTCCCTGCCCGTCACC
CCTGGAGAGCCGGCCTCCATCTCCTGCAGGTCTAGTCAGAG CCTCCTGCATAGTAATGGATACAACTATTTGGATTGGTACCT GCAGAAGCCAGGGCAGTCTCCACAGCTCCTGATCTATTTGG GTTCTAATCGGGCCTCCGGGGTCCCTGACAGGTTCAGTGGC AGTGGATCAGGCACAGATTTTACACTGAAAATCAGCAGAGT GGAGGCTGAGGATGTTGGGGTTTATTACTGCATGCAGGCAA AACGACTCCCTCTCACTTTTGGCGGAGGGACCAAGGTTGAG
ATCAAA FR1 de VL do Clone 14 84 DIVMTQSPLSLPVTPGEPASISC CDR1 de VL do Clone 14 85 RSSQSLLHSNGYNYLD FR2 de VL do Clone 14 86 WYLQKPGQSPQLLIY CDR2 de VL do Clone 14 87 LGSNRAS FR3 de VL do Clone 14 88 GVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYC CDR3 de VL do Clone 14 89 MQAKRLPLT FR4 de VL do Clone 14 90 FGGGTKVEIK Proteína VH do Clone 16 91 QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSSYAISWVRQAPG
QGLEWMGGIIPIFGTASYAQKFQGRVTITADESTSTAYMELSSL
RSEDTAVYYCARQSTWHKLYGTDVWGQGTTVTVSS DNA de VH do Clone 16 92 CAGGTGCAGCTGGTGCAGTCTGGGGCTGAGGTGAAGAAGC
CTGGGTCCTCGGTGAAGGTCTCCTGCAAGGCTTCTGGAGGC ACCTTCAGCAGCTATGCTATCAGCTGGGTGCGACAGGCCCC TGGACAAGGGCTTGAGTGGATGGGAGGGATCATCCCTATCT TTGGTACAGCAAGCTACGCACAGAAGTTCCAGGGCAGAGTC ACGATTACCGCGGACGAATCCACGAGCACAGCCTACATGG AGCTGAGCAGCCTGAGATCTGAGGACACGGCGGTGTACTAC TGCGCAAGACAGAGCACCTGGCACAAATTGTACGGAACGG
ACGTATGGGGCCAGGGAACAACTGTCACCGTCTCCTCA FR1 de VH do Clone 16 93 QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASG CDR1 de VH do Clone 16 94 GTFSSYAIS FR2 de VH do Clone 16 95 WVRQAPGQGLEWMG CDR2 de VH do Clone 16 96 GIIPIFGTASYAQKFQG FR3 de VH do Clone 16 97 RVTITADESTSTAYMELSSLRSEDTAVYYC CDR3 de VH do Clone 16 98 ARQSTWHKLYGTDV FR4 de VH do Clone 16 99 WGQGTTVTVSS
189 / 207
SEQ ID Nome Sequência
NO Proteína VL dos Clones 16, 100 DIQMTQSPSSVSASVGDRVTITCRASQGISSWLAWYQQKPGKA 16C, 16D e 16E PKLLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYC
QQGDSLPPTFGGGTKVEIK DNA de VL do Clone 16 101 GACATCCAGATGACCCAGTCTCCATCTTCCGTGTCTGCATCT
GTAGGAGACAGAGTCACCATCACTTGTCGGGCGAGTCAGG GTATTAGCAGCTGGTTAGCCTGGTATCAGCAGAAACCAGGG AAAGCCCCTAAGCTCCTGATCTATGCTGCATCCAGTTTGCA AAGTGGGGTCCCATCAAGGTTCAGCGGCAGTGGATCTGGGA CAGATTTCACTCTCACCATCAGCAGCCTGCAGCCTGAAGAT TTTGCAACTTATTACTGTCAGCAGGGAGACAGTCTCCCTCCT
ACTTTTGGCGGAGGGACCAAGGTTGAGATCAAA FR1 de VL do Clone 16 102 DIQMTQSPSSVSASVGDRVTITC CDR1 de VL dos Clones 103 RASQGISSWLA 16, 16C, 16D e 16E FR2 de VL do Clone 16 104 WYQQKPGKAPKLLIY CDR2 de VL dos Clones 105 AASSLQS 16, 16C, 16D e 16E FR3 de VL do Clone 16 106 GVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYC CDR3 de VL dos Clones 107 QQGDSLPPT 16, 16C, 16D e 16E FR4 de VL do Clone 16 108 FGGGTKVEIK Proteína VH do Clone 18 109 QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTSYYMSWVRQAP
GQGLEWMGIINPSGGSTSYAQKFQGRVTMTRDTSTSTVYMEL
SSLRSEDTAVYYCARVRYGYADGMDVWGQGTTVTVSS DNA de VH do Clone 18 110 CAGGTGCAGCTGGTGCAGTCTGGGGCTGAGGTGAAGAAGC
CTGGGGCCTCAGTGAAGGTTTCCTGCAAGGCATCTGGATAC ACCTTCACCAGCTACTATATGTCATGGGTGCGACAGGCCCC TGGACAAGGGCTTGAGTGGATGGGAATAATCAACCCTAGTG GTGGTAGCACAAGCTACGCACAGAAGTTCCAGGGCAGAGT CACCATGACCAGGGACACGTCCACGAGCACAGTCTACATGG AGCTGAGCAGCCTGAGATCTGAGGACACGGCGGTGTACTAC TGCGCCAGAGTGAGGTACGGATACGCAGACGGAATGGACG
TATGGGGCCAGGGAACAACTGTCACCGTCTCCTCA FR1 de VH do Clone 18 111 QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASG CDR1 de VH do Clone 18 112 YTFTSYYMS FR2 de VH do Clone 18 113 WVRQAPGQGLEWMG CDR2 de VH do Clone 18 114 IINPSGGSTSYAQKFQG FR3 de VH do Clone 18 115 RVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYC CDR3 de VH do Clone 18 116 ARVRYGYADGMDV FR4 de VH do Clone 18 117 WGQGTTVTVSS Proteína VL do Clone 18 118 DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSISSYLNWYQQKPGKAP
KLLIYGASSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQ
QVYHLPFTFGGGTKVEIK DNA de VL do Clone 18 119 GACATCCAGATGACCCAGTCTCCATCCTCCCTGTCTGCATCT
GTAGGAGACAGAGTCACCATCACTTGCCGGGCAAGTCAGA GCATTAGCAGCTATTTAAATTGGTATCAGCAGAAACCAGGG AAAGCCCCTAAGCTCCTGATCTATGGTGCATCCAGTTTGCA AAGTGGGGTCCCATCAAGGTTCAGTGGCAGTGGATCTGGGA CAGATTTCACTCTCACCATCAGCAGTCTGCAACCTGAAGAT TTTGCAACTTACTACTGTCAGCAAGTATACCACCTCCCTTTC
ACTTTTGGCGGAGGGACCAAGGTTGAGATCAAA FR1 de VL do Clone 18 120 DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITC CDR1 de VL do Clone 18 121 RASQSISSYLN FR2 de VL do Clone 18 122 WYQQKPGKAPKLLIY CDR2 de VL do Clone 18 123 GASSLQS FR3 de VL do Clone 18 124 GVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYC CDR3 de VL do Clone 18 125 QQVYHLPFT FR4 de VL do Clone 18 126 FGGGTKVEIK
190 / 207
SEQ ID Nome Sequência
NO Proteína VH do Clone 21 127 QLQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSISSSSYYWGWIRQPPG
KGLEWIGSIYYSGSTYYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVT
AADTAVYYCARDPLYQDAPFDYWGQGTLVTVSS DNA de VH do Clone 21 128 CAGCTGCAGCTGCAGGAGTCGGGCCCAGGACTGGTGAAGC
CTTCGGAGACCCTGTCCCTCACCTGCACTGTCTCTGGTGGCT CCATCAGCAGTAGTAGTTACTACTGGGGCTGGATCCGCCAG CCCCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGATTGGGAGTATCTATTA TAGTGGGAGCACCTACTACAACCCGTCCCTCAAGAGTCGAG TCACCATATCCGTAGACACGTCCAAGAACCAGTTCTCCCTG AAGCTGAGTTCTGTGACCGCCGCAGACACGGCGGTGTACTA CTGCGCCAGAGATCCTTTGTACCAAGACGCTCCCTTCGACT
ATTGGGGACAGGGTACATTGGTCACCGTCTCCTCA FR1 de VH do Clone 21 129 QLQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSG CDR1 de VH do Clone 21 130 GSISSSSYYWG FR2 de VH do Clone 21 131 WIRQPPGKGLEWIG CDR2 de VH do Clone 21 132 SIYYSGSTYYNPSLKS FR3 de VH do Clone 21 133 RVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYC CDR3 de VH do Clone 21 134 ARDPLYQDAPFDY FR4 de VH do Clone 21 135 WGQGTLVTVSS Proteína VL do Clone 21 136 EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVSSYLAWYQQKPGQA
PRLLIYDASNRATGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYC
QQRANFPTFGGGTKVEIK DNA de VL do Clone 21 137 GAAATTGTGTTGACACAGTCTCCAGCCACCCTGTCTTTGTCT
CCAGGGGAAAGAGCCACCCTCTCCTGCAGGGCCAGTCAGA GTGTTAGCAGCTACTTAGCCTGGTACCAACAGAAACCTGGC CAGGCTCCCAGGCTCCTCATCTATGATGCATCCAACAGGGC CACTGGCATCCCAGCCAGGTTCAGTGGCAGTGGGTCTGGGA CAGACTTCACTCTCACCATCAGCAGCCTAGAGCCTGAAGAT TTTGCAGTTTATTACTGTCAGCAGAGAGCCAACTTCCCTACT
TTTGGCGGAGGGACCAAGGTTGAGATCAAA FR1 de VL do Clone 21 138 EIVLTQSPATLSLSPGERATLSC CDR1 de VL do Clone 21 139 RASQSVSSYLA FR2 de VL do Clone 21 140 WYQQKPGQAPRLLIY CDR2 de VL do Clone 21 141 DASNRAT FR3 de VL do Clone 21 142 GIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYC CDR3 de VL do Clone 21 143 QQRANFPT FR4 de VL do Clone 21 144 FGGGTKVEIK Proteína VH do Clone 22 145 QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCAVSGYSISSGYYWAWIRQPPG
KGLEWIGSIYHSGSTYYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVT
AADTAVYYCARQGYYYGSSGSVDFDLWGRGTLVTVSS DNA de VH do Clone 22 146 CAGGTGCAGCTGCAGGAGTCGGGCCCAGGACTGGTGAAGC
CTTCGGAGACCCTGTCCCTCACCTGCGCTGTCTCTGGTTACT CCATCAGCAGTGGTTACTACTGGGCTTGGATCCGGCAGCCC CCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGATTGGGAGTATCTATCATA GTGGGAGCACCTACTACAACCCGTCCCTCAAGAGTCGAGTC ACCATATCAGTAGACACGTCCAAGAACCAGTTCTCCCTGAA GCTGAGTTCTGTGACCGCCGCAGACACGGCGGTGTACTACT GCGCCAGGCAGGGATACTACTACGGCAGCAGCGGCAGTGT AGACTTCGACCTATGGGGGAGAGGTACCTTGGTCACCGTCT
CCTCA FR1 de VH do Clone 22 147 QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCAVSG CDR1 de VH do Clone 22 148 YSISSGYYWA FR2 de VH do Clone 22 149 WIRQPPGKGLEWIG CDR2 de VH do Clone 22 150 SIYHSGSTYYNPSLKS FR3 de VH do Clone 22 151 RVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYC CDR3 de VH do Clone 22 152 ARQGYYYGSSGSVDFDL FR4 de VH do Clone 22 153 WGRGTLVTVSS
191 / 207
SEQ ID Nome Sequência
NO Proteína VL do Clone 22 154 DIQMTQSPSSVSASVGDRVTITCRASQGISSWLAWYQQKPGKA
PKLLIYAASNLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYC
QQANSLPPWTFGGGTKVEIK DNA de VL do Clone 22 155 GACATCCAGATGACCCAGTCTCCATCTTCCGTGTCTGCATCT
GTAGGAGACAGAGTCACCATCACTTGTCGGGCGAGTCAGG GTATTAGCAGCTGGTTAGCCTGGTATCAGCAGAAACCAGGG AAAGCCCCTAAGCTCCTGATCTATGCTGCATCCAATTTGCA AAGTGGGGTCCCATCAAGGTTCAGCGGCAGTGGATCTGGGA CAGATTTCACTCTCACCATCAGCAGCCTGCAGCCTGAAGAT TTTGCAACTTATTACTGTCAACAGGCAAATAGTCTCCCTCCT
TGGACTTTTGGCGGAGGGACCAAGGTTGAGATCAAA FR1 de VL do Clone 22 156 DIQMTQSPSSVSASVGDRVTITC CDR1 de VL do Clone 22 157 RASQGISSWLA FR2 de VL do Clone 22 158 WYQQKPGKAPKLLIY CDR2 de VL do Clone 22 159 AASNLQS FR3 de VL do Clone 22 160 GVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYC CDR3 de VL do Clone 22 161 QQANSLPPWT FR4 de VL do Clone 22 162 FGGGTKVEIK Proteína VH do Clone 25 163 QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTSYAISWVRQAPG
QGLEWMGWISAYNGNTNYAQKLQGRVTMTTDTSTSTAYMEL
RSLRSDDTAVYYCARDLSSFWSGDVLGAFDIWGQGTMVTVSS DNA de VH do Clone 25 164 CAGGTTCAGCTGGTGCAGTCTGGAGCTGAGGTGAAGAAGCC
TGGGGCCTCAGTGAAGGTCTCCTGCAAGGCTTCTGGTTACA CCTTTACCAGCTATGCCATCAGCTGGGTGCGACAGGCCCCT GGACAAGGGCTTGAGTGGATGGGATGGATCAGCGCTTACA ATGGTAACACAAACTATGCACAGAAGCTCCAGGGCAGAGT CACCATGACCACAGACACATCCACGAGCACAGCCTACATGG AGCTGAGGAGCCTGAGATCTGACGACACGGCGGTGTACTAC TGCGCAAGGGATTTGTCTAGCTTCTGGAGCGGAGACGTGTT AGGAGCCTTCGACATATGGGGTCAGGGTACAATGGTCACCG
TCTCCTCA FR1 de VH do Clone 25 165 QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASG CDR1 de VH dos Clones 166 YTFTSYAIS 25 e 25A FR2 de VH do Clone 25 167 WVRQAPGQGLEWMG CDR2 de VH dos Clones 168 WISAYNGNTNYAQKLQG 25 e 25E FR3 de VH do Clone 25 169 RVTMTTDTSTSTAYMELRSLRSDDTAVYYC CDR3 de VH dos Clones 170 ARDLSSFWSGDVLGAFDI 25, 25A e 25B FR4 de VH do Clone 25 171 WGQGTMVTVSS Proteína VL dos Clones 25, 172 DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSISSYLNWYQQKPGKAP 25A, 25B, 25C, 25D e 25E KLLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQ
QSVPPRTFGGGTKVEIK DNA de VL do Clone 25 173 GACATCCAGATGACCCAGTCTCCATCCTCCCTGTCTGCATCT
GTAGGAGACAGAGTCACCATCACTTGCCGGGCAAGTCAGA GCATTAGCAGCTATTTAAATTGGTATCAGCAGAAACCAGGG AAAGCCCCTAAGCTCCTGATCTATGCTGCATCCAGTTTGCA AAGTGGGGTCCCATCAAGGTTCAGTGGCAGTGGATCTGGGA CAGATTTCACTCTCACCATCAGCAGTCTGCAACCTGAAGAT TTTGCAACTTACTACTGTCAGCAAAGCGTCCCCCCCAGGAC
TTTTGGCGGAGGGACCAAGGTTGAGATCAAA FR1 de VL do Clone 25 174 DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITC CDR1 de VL dos Clones 175 RASQSISSYLN 25, 25A, 25B, 25C, 25D e 25E FR2 de VL do Clone 25 176 WYQQKPGKAPKLLIY
192 / 207
SEQ ID Nome Sequência
NO CDR2 de VL dos Clones 177 AASSLQS 25, 25A, 25B, 25C, 25D e 25E FR3 de VL do Clone 25 178 GVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYC CDR3 de VL dos Clones 179 QQSVPPRT 25, 25A, 25B, 25C, 25D e 25E FR4 de VL do Clone 25 180 FGGGTKVEIK Proteína VH do Clone 27 181 QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTSYAISWVRQAPG
QGLEWMGWISAYNGNTNYAQKLQGRVTMTTDTSTSTAYMEL
RSLRSDDTAVYYCARDLSSFWSGDVLGAFDIWGQGTMVTVSS DNA de VH do Clone 27 182 CAGGTTCAGCTGGTGCAGTCTGGAGCTGAGGTGAAGAAGCC
TGGGGCCTCAGTGAAGGTCTCCTGCAAGGCTTCTGGTTACA CCTTTACCAGCTATGCCATCAGCTGGGTGCGACAGGCCCCT GGACAAGGGCTTGAGTGGATGGGATGGATCAGCGCTTACA ATGGTAACACAAACTATGCACAGAAGCTCCAGGGCAGAGT CACCATGACCACAGACACATCCACGAGCACAGCCTACATGG AGCTGAGGAGCCTGAGATCTGACGACACGGCGGTGTACTAC TGCGCAAGGGATTTGTCTAGCTTCTGGAGCGGAGACGTGTT AGGAGCCTTCGACATATGGGGTCAGGGTACAATGGTCACCG
TCTCCTCA FR1 de VH do Clonec27 183 QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASG CDR1 de VH do Clone 27 184 YTFTSYAIS FR2 de VH do Clone 27 185 WVRQAPGQGLEWMG CDR2 de VH do Clone 27 186 WISAYNGNTNYAQKLQG FR3 de VH do Clone 27 187 RVTMTTDTSTSTAYMELRSLRSDDTAVYYC CDR3 de VH do Clone 27 188 ARDLSSFWSGDVLGAFDI FR4 de VH do Clone 27 189 WGQGTMVTVSS Proteína VL do Clone 27 190 EIVMTQSPATLSVSPGERATLSCRASQSVSSNLAWYQQKPGQA
PRLLIYGASTRATGIPARFSGSGSGTEFTLTISSLQSEDFAVYYC
QQHANHITFGGGTKVEIK DNA de VL do Clone 27 191 GAAATAGTGATGACGCAGTCTCCAGCCACCCTGTCTGTGTC
TCCAGGGGAAAGAGCCACCCTCTCCTGCAGGGCCAGTCAGA GTGTTAGCAGCAACTTAGCCTGGTACCAGCAGAAACCTGGC CAGGCTCCCAGGCTCCTCATCTATGGTGCATCCACCAGGGC CACTGGTATCCCAGCCAGGTTCAGTGGCAGTGGGTCTGGGA CAGAGTTCACTCTCACCATCAGCAGCCTGCAGTCTGAAGAT TTTGCAGTTTATTACTGTCAGCAGCACGCCAATCACATCACT
TTTGGCGGAGGGACCAAGGTTGAGATCAAA FR1 de VL do Clone 27 192 EIVMTQSPATLSVSPGERATLSC CDR1 de VL do Clone 27 193 RASQSVSSNLA FR2 de VL do Clone 27 194 WYQQKPGQAPRLLIY CDR2 de VL do Clone 27 195 GASTRAT FR3 de VL do Clone 27 196 GIPARFSGSGSGTEFTLTISSLQSEDFAVYYC CDR3 de VL do Clone 27 197 QQHANHIT FR4 de VL do Clone 27 198 FGGGTKVEIK Proteína VH do Clone 54 199 QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTSYYMHWVRQAP
GQGLEWMGIINPSGGSTSYAQKFQGRVTMTRDTSTSTVYMEL SSLRSEDTAVYYCARASDSYGVGLYYGMDVWGQGTTVTVSS
193 / 207
SEQ ID Nome Sequência
NO DNA de VH do Clone 54 200 CAGGTGCAGCTGGTGCAGTCTGGGGCTGAGGTGAAGAAGC
CTGGGGCCTCAGTGAAGGTTTCCTGCAAGGCATCTGGATAC ACCTTCACCAGCTACTATATGCACTGGGTGCGACAGGCCCC TGGACAAGGGCTTGAGTGGATGGGAATAATCAACCCTAGTG GTGGTAGCACAAGCTACGCACAGAAGTTCCAGGGCAGAGT CACCATGACCAGGGACACGTCCACGAGCACAGTCTACATGG AGCTGAGCAGCCTGAGATCTGAGGACACGGCGGTGTACTAC TGCGCTAGGGCATCTGACTCCTACGGAGTGGGCCTCTACTA CGGAATGGACGTATGGGGCCAGGGAACAACTGTCACCGTCT
CCTCA FR1 de VH do Clone 54 201 QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASG CDR1 de VH do Clone 54 202 YTFTSYYMH FR2 de VH do Clone 54 203 WVRQAPGQGLEWMG CDR2 de VH do Clone 54 204 IINPSGGSTSYAQKFQG FR3 de VH do Clone 54 205 RVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYC CDR3 de VH do Clone 54 206 ARASDSYGVGLYYGMDV FR4 de VH do Clone 54 207 WGQGTTVTVSS Proteína VL do Clone 54 208 EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVRSSYLAWYQQKPGQ
APRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYY
CQQYYVSPLTFGGGTKVEIK DNA de VL do Clone 54 209 GAAATTGTGTTGACGCAGTCTCCAGGCACCCTGTCTTTGTCT
CCAGGGGAAAGAGCCACCCTCTCCTGCAGGGCCAGTCAGA GTGTTAGGAGCAGCTACTTAGCCTGGTACCAGCAGAAACCT GGCCAGGCTCCCAGGCTCCTCATCTATGGTGCATCCAGCAG GGCCACTGGCATCCCAGACAGGTTCAGTGGCAGTGGGTCTG GGACAGACTTCACTCTCACCATCAGCAGACTGGAGCCTGAA GATTTTGCAGTGTATTACTGTCAGCAGTACTACGTCAGTCCT
CTCACTTTTGGCGGAGGGACCAAGGTTGAGATCAAA FR1 de VL do Clone 54 210 EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSC CDR1 de VL do Clone 54 211 RASQSVRSSYLA FR2 de VL do Clone 54 212 WYQQKPGQAPRLLIY CDR2 de VL do Clone 54 213 GASSRAT FR3 de VL do Clone 54 214 GIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYC CDR3 de VL do Clone 54 215 QQYYVSPLT FR4 de VL do Clone 54 216 FGGGTKVEIK
194 / 207
SEQ ID Nome Sequência
NO Sequência do cDNA de 217 CGTCCTATCTGCAGTCGGCTACTTTCAGTGGCAGAAGAGGC TIGIT humano (No de CACATCTGCTTCCTGTAGGCCCTCTGGGCAGAAGCATGCGC Acesso GenBank TGGTGTCTCCTCCTGATCTGGGCCCAGGGGCTGAGGCAGGC NM_173799.3) TCCCCTCGCCTCAGGAATGATGACAGGCACAATAGAAACAA
CGGGGAACATTTCTGCAGAGAAAGGTGGCTCTATCATCTTA CAATGTCACCTCTCCTCCACCACGGCACAAGTGACCCAGGT CAACTGGGAGCAGCAGGACCAGCTTCTGGCCATTTGTAATG CTGACTTGGGGTGGCACATCTCCCCATCCTTCAAGGATCGA GTGGCCCCAGGTCCCGGCCTGGGCCTCACCCTCCAGTCGCT GACCGTGAACGATACAGGGGAGTACTTCTGCATCTATCACA CCTACCCTGATGGGACGTACACTGGGAGAATCTTCCTGGAG GTCCTAGAAAGCTCAGTGGCTGAGCACGGTGCCAGGTTCCA GATTCCATTGCTTGGAGCCATGGCCGCGACGCTGGTGGTCA TCTGCACAGCAGTCATCGTGGTGGTCGCGTTGACTAGAAAG AAGAAAGCCCTCAGAATCCATTCTGTGGAAGGTGACCTCAG GAGAAAATCAGCTGGACAGGAGGAATGGAGCCCCAGTGCT CCCTCACCCCCAGGAAGCTGTGTCCAGGCAGAAGCTGCACC TGCTGGGCTCTGTGGAGAGCAGCGGGGAGAGGACTGTGCC GAGCTGCATGACTACTTCAATGTCCTGAGTTACAGAAGCCT GGGTAACTGCAGCTTCTTCACAGAGACTGGTTAGCAACCAG AGGCATCTTCTGGAAGATACACTTTTGTCTTTGCTATTATAG ATGAATATATAAGCAGCTGTACTCTCCATCAGTGCTGCGTG TGTGTGTGTGTGTGTATGTGTGTGTGTGTTCAGTTGAGTGAA TAAATGTCATCCTCTTCTCCATCTTCATTTCCTTGGCCTTTTC GTTCTATTCCATTTTGCATTATGGCAGGCCTAGGGTGAGTAA CGTGGATCTTGATCATAAATGCAAAATTAAAAAATATCTTG ACCTGGTTTTAAATCTGGCAGTTTGAGCAGATCCTATGTCTC TGAGAGACACATTCCTCATAATGGCCAGCATTTTGGGCTAC AAGGTTTTGTGGTTGATGATGAGGATGGCATGACTGCAGAG CCATCCTCATCTCATTTTTTCACGTCATTTTCAGTAACTTTCA CTCATTCAAAGGCAGGTTATAAGTAAGTCCTGGTAGCAGCC TCTATGGGGAGATTTGAGAGTGACTAAATCTTGGTATCTGC CCTCAAGAACTTACAGTTAAATGGGGAGACAATGTTGTCAT GAAAAGGTATTATAGTAAGGAGAGAAGGAGACATACACAG GCCTTCAGGAAGAGACGACAGTTTGGGGTGAGGTAGTTGGC ATAGGCTTATCTGTGATGAAGTGGCCTGGGAGCACCAAGGG GATGTTGAGGCTAGTCTGGGAGGAGCAGGAGTTTTGTCTAG GGAACTTGTAGGAAATTCTTGGAGCTGAAAGTCCCACAAAG AAGGCCCTGGCACCAAGGGAGTCAGCAAACTTCAGATTTTA TTCTCTGGGCAGGCATTTCAAGTTTCCTTTTGCTGTGACATA CTCATCCATTAGACAGCCTGATACAGGCCTGTAGCCTCTTCC GGCCGTGTGTGCTGGGGAAGCCCCAGGAAACGCACATGCC CACACAGGGAGCCAAGTCGTAGCATTTGGGCCTTGATCTAC CTTTTCTGCATCAATACACTCTTGAGCCTTTGAAAAAAGAA CGTTTCCCACTAAAAAGAAAATGTGGATTTTTAAAATAGGG ACTCTTCCTAGGGGAAAAAGGGGGGCTGGGAGTGATAGAG GGTTTAAAAAATAAACACCTTCAAACTAACTTCTTCGAACC CTTTTATTCACTCCCTGACGACTTTGTGCTGGGGTTGGGGTA ACTGAACCGCTTATTTCTGTTTAATTGCATTCAGGCTGGATC TTAGAAGACTTTTATCCTTCCACCATCTCTCTCAGAGGAATG AGCGGGGAGGTTGGATTTACTGGTGACTGATTTTCTTTCATG GGCCAAGGAACTGAAAGAGAATGTGAAGCAAGGTTGTGTC TTGCGCATGGTTAAAAATAAAGCATTGTCCTGCTTCCTAAG ACTTAGACTGGGGTTGACAATTGTTTTAGCAACAAGACAAT TCAACTATTTCTCCTAGGATTTTTATTATTATTATTTTTTCAC TTTTCTACCAAATGGGTTACATAGGAAGAATGAACTGAAAT CTGTCCAGAGCTCCAAGTCCTTTGGAAGAAAGATTAGATGA ACGTAAAAATGTTGTTGTTTGCTGTGGCAGTTTACAGCATTT TTCTTGCAAAATTAGTGCAAATCTGTTGGAAATAGAACACA ATTCACAAATTGGAAGTGAACTAAAATGTAATGACGAAAA GGGAGTAGTGTTTTGATTTGGAGGAGGTGTATATTCGGCAG AGGTTGGACTGAGAGTTGGGTGTTATTTAACATAATTATGG
TAATTGGGAAACATTTATAAACACTATTGGGATGGTGATAA Petição 870210016809, de 19/02/2021, pág. 226/350 AATACAAAAGGGCCTATAGATGTTAGAAATGGGTCAGGTTA
CTGAAATGGGATTCAATTTGAAAAAAATTTTTTTAAATAGA
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SEQ ID Nome Sequência
NO Proteína TIGIT humano 218 MRWCLLLIWAQGLRQAPLASGMMTGTIETTGNISAEKGGSIIL (No de Acesso GenBank QCHLSSTTAQVTQVNWEQQDQLLAICNADLGWHISPSFKDRV NP_776160.2) APGPGLGLTLQSLTVNDTGEYFCIYHTYPDGTYTGRIFLEVLES
SVAEHGARFQIPLLGAMAATLVVICTAVIVVVALTRKKKALRI HSVEGDLRRKSAGQEEWSPSAPSPPGSCVQAEAAPAGLCGEQ
RGEDCAELHDYFNVLSYRSLGNCSFFTETG Proteína TIGIT de macaco 219 MAFLVAPPMQFVYLLKTLCVFNMVFAKPGFSETVFSHRLSFTV Cynomolgus LSAVGYFRWQKRPHLLPVSPLGRSMRWCLFLIWAQGLRQAPL
ASGMMTGTIETTGNISAKKGGSVILQCHLSSTMAQVTQVNWE QHDHSLLAIRNAELGWHIYPAFKDRVAPGPGLGLTLQSLTMN DTGEYFCTYHTYPDGTYRGRIFLEVLESSVAEHSARFQIPLLGA MAMMLVVICIAVIVVVVLARKKKSLRIHSVESGLQRKSTGQEE QIPSAPSPPGSCVQAEAAPAGLCGEQQGDDCAELHDYFNVLSY
RSLGSCSFFTETG Proteína TIGIT de 220 MHGWLLLVWVQGLIQAAFLATGATAGTIDTKRNISAEEGGSV camundongo ILQCHFSSDTAEVTQVDWKQQDQLLAIYSVDLGWHVASVFSD
RVVPGPSLGLTFQSLTMNDTGEYFCTYHTYPGGIYKGRIFLKV QESSVAQFQTAPLGGTMAAVLGLICLMVTGVTVLARKKSIRM HSIESGLGRTEAEPQEWNLRSLSSPGSPVQTQTAPAGPCGEQAE
DDYADPQEYFNVLSYRSLESFIAVSKTG CDR1 de VH do Clone 2C 221 FTFTDYYMD CDR2 de VH do Clone 2C 222 RTRNKVNSYYTEYAASVKG CDR3 de VH do Clone 2C 223 ARGQYYYGSDRRGYYYMDV CDR1 de VH dos Clones 224 GTFLSSAIS 13A, 13C e 13D CDR2 de VH do Clone 225 SLIPYFGTANYAQKFQG 13A CDR1 de VH do Clone 13B 226 GTFSAWAIS CDR2 de VH dos Clones 227 SIIPYFGKANYAQKFQG 13B e 13D CDR3 de VH do Clone 13B 228 ARGPSEVSGILGYVWFDP CDR2 de VH do Clone 13C 229 SIIPLFGKANYAQKFQG CDR3 de VH dos Clones 230 ARGPSEVKGILGYVWFDP 13C e 13D CDR1 de VH do Clone 16C 231 GTFREYAIS CDR2 de VH do Clone 16C 232 GIHPIFGTARYAQKFQG CDR1 de VH dos Clones 233 GTFSDYPIS 16D e 16E CDR2 de VH dos Clones 234 GIIPIVGGANYAQKFQG 16B, 16D e 16E CDR3 de VH do Clone 16C 235 TRQSTWHKLYGTDV CDR3 de VH do Clone 236 TRQSTWHKLFGTDV 16D CDR3 de VH do Clone 16E 237 ARQSTWHKVYGTDV CDR2 de VH do Clone 238 WISAYNGNTKYAQKLQG 25A CDR1 de VH dos Clones 239 YTFTSYPIG 25B, 25C e 25D CDR2 de VH dos Clones 240 WISSYNGNTNYAQKLQG 25B, 25C e 25D CDR3 de VH do Clone 25C 241 ARGASSFWSGDVLGAFDI CDR3 de VH do Clone 242 ARDLKSFWSGDVLGAFDI 25D CDR1 de VH do Clone 25E 243 YTFTSYAIA CDR3 de VH do Clone 25E 244 ARSGSSFWSGDVLGAFDI
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SEQ ID Nome Sequência
NO VH do Clone 2C 245 EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFTDYYMDWVRQAP
GKGLEWVGRTRNKVNSYYTEYAASVKGRFTISRDDSKNSLYL QMNSLKTEDTAVYYCARGQYYYGSDRRGYYYMDVWGQGTT
VTVSS VH do Clone 13A 246 QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFLSSAISWVRQAPG
QGLEWMGSLIPYFGTANYAQKFQGRVTITADESTSTAYMELSS
LRSEDTAVYYCARGPSEVGAILGYVWFDPWGQGTLVTVSS VH do Clone 13B 247 QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSAWAISWVRQAPG
QGLEWMGSIIPYFGKANYAQKFQGRVTITADESTSTAYMELSS
LRSEDTAVYYCARGPSEVSGILGYVWFDPWGQGTLVTVSS VH do Clone 13C 248 QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFLSSAISWVRQAPG
QGLEWMGSIIPLFGKANYAQKFQGRVTITADESTSTAYMELSS
LRSEDTAVYYCARGPSEVKGILGYVWFDPWGQGTLVTVSS VH do Clone 13D 249 QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFLSSAISWVRQAPG
QGLEWMGSIIPYFGKANYAQKFQGRVTITADESTSTAYMELSS
LRSEDTAVYYCARGPSEVKGILGYVWFDPWGQGTLVTVSS VH do Clone 16C 250 QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFREYAISWVRQAPG
QGLEWMGGIHPIFGTARYAQKFQGRVTITADESTSTAYMELSS
LRSEDTAVYYCTRQSTWHKLYGTDVWGQGTTVTVSS VH do Clone 16D 251 QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSDYPISWVRQAPG
QGLEWMGGIIPIVGGANYAQKFQGRVTITADESTSTAYMELSS
LRSEDTAVYYCTRQSTWHKLFGTDVWGQGTTVTVSS VH do Clone 16E 252 QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSDYPISWVRQAPG
QGLEWMGGIIPIVGGANYAQKFQGRVTITADESTSTAYMELSS
LRSEDTAVYYCARQSTWHKVYGTDVWGQGTTVTVSS VH do Clone 25A 253 QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTSYAISWVRQAPG
QGLEWMGWISAYNGNTKYAQKLQGRVTMTTDTSTSTAYMEL
RSLRSDDTAVYYCARDLSSFWSGDVLGAFDIWGQGTMVTVSS VH do Clone 25B 254 QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTSYPIGWVRQAPG
QGLEWMGWISSYNGNTNYAQKLQGRVTMTTDTSTSTAYMEL
RSLRSDDTAVYYCARDLSSFWSGDVLGAFDIWGQGTMVTVSS VH do Clone 25C 255 QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTSYPIGWVRQAPG
QGLEWMGWISSYNGNTNYAQKLQGRVTMTTDTSTSTAYMEL
RSLRSDDTAVYYCARGASSFWSGDVLGAFDIWGQGTMVTVSS VH do Clone 25D 256 QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTSYPIGWVRQAPG
QGLEWMGWISSYNGNTNYAQKLQGRVTMTTDTSTSTAYMEL RSLRSDDTAVYYCARDLKSFWSGDVLGAFDIWGQGTMVTVS
S VH do Clone 25E 257 QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTSYAIAWVRQAPG
QGLEWMGWISAYNGNTNYAQKLQGRVTMTTDTSTSTAYMEL
RSLRSDDTAVYYCARSGSSFWSGDVLGAFDIWGQGTMVTVSS Epítopo hTIGIT 68-82 258 ICNADLGWHISPSFK
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SEQ ID Nome Sequência
NO Sequência de nucleotídeos 259 CAGGTGCAGCTGGTGCAGTCTGGGGCTGAGGTGAAGAA da cadeia pesada de hIgG1 GCCTGGGTCCTCTGTGAAGGTCTCCTGCAAGGCTTCTGG do Clone 13 (e hIgG1 AGGCACCTTCAGCAGCTATGCTATCAGCTGGGTGCGAC afucosilado) sequência de AGGCCCCTGGACAAGGGCTTGAGTGGATGGGAAGCATC nucleotídeos; negrito indica ATCCCTATCTTTGGTACAGCAAACTACGCACAGAAGTTC a sequência de nucleotídeos CAGGGCAGAGTCACCATTACTGCTGATGAATCCACCAGC da região variável (VH) ACAGCCTACATGGAGCTGAGCAGCCTGAGATCTGAGGA
CACTGCTGTGTACTACTGTGCCAGAGGCCCTTCTGAAGT AGGAGCAATACTGGGATATGTATGGTTTGACCCATGGG GACAGGGTACATTGGTCACCGTCTCCTCAGCTAGCACCA AGGGCCCATCTGTCTTCCCCCTGGCACCCTCCTCCAAGAGC ACCTCTGGGGGCACAGCTGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGA CTACTTCCCTGAACCTGTGACAGTGTCCTGGAACTCAGGAG CCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAG TCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCC CTCCAGCAGCTTGGGCACCCAGACCTACATCTGCAACGTGA ATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAAAGTTGA GCCCAAATCTTGTGACAAAACTCACACATGCCCACCGTGCC CAGCACCTGAACTCCTGGGGGGACCGTCAGTCTTCCTCTTC CCCCCAAAACCCAAGGACACCCTCATGATCTCCCGGACCCC TGAGGTCACATGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCACGAAGAC CCTGAGGTCAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGT GCATAATGCCAAGACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTACAAC AGCACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCA GGACTGGCTGAATGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCC AACAAAGCCCTCCCAGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAA AGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCACAGGTTTACACCCTG CCCCCATCCCGGGATGAGCTGACCAAGAACCAGGTCAGCCT GACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCG TGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAA GACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCT CTACAGCAAGCTCACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGCAG GGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCA CAACCACTACACACAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCGGGCA
AA Sequência de aminoácidos 260 QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSSYAISWVRQA da cadeia pesada de hIgG1 PGQGLEWMGSIIPIFGTANYAQKFQGRVTITADESTSTAYM do Clone 13 (e hIgG1 ELSSLRSEDTAVYYCARGPSEVGAILGYVWFDPWGQGTLV afucosilado); negrito indica TVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVS
VH WNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICN VNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFP PKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHN AKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKA LPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKG FYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDK SRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
198 / 207
SEQ ID Nome Sequência
NO Sequência de nucleotídeos 261 CAGGTGCAGCTGGTGCAGTCTGGGGCTGAGGTGAAGAA da cadeia pesada de hIgG1 GCCTGGGTCCTCTGTGAAGGTCTCCTGCAAGGCTTCTGG LALA-PG do Clone 13; AGGCACCTTCAGCAGCTATGCTATCAGCTGGGTGCGAC negrito indica a sequência AGGCCCCTGGACAAGGGCTTGAGTGGATGGGAAGCATC de nucleotídeos de VH ATCCCTATCTTTGGTACAGCAAACTACGCACAGAAGTTC
CAGGGCAGAGTCACCATTACTGCTGATGAATCCACCAGC ACAGCCTACATGGAGCTGAGCAGCCTGAGATCTGAGGA CACTGCTGTGTACTACTGTGCCAGAGGCCCTTCTGAAGT AGGAGCAATACTGGGATATGTATGGTTTGACCCATGGG GACAGGGTACATTGGTCACCGTCTCCTCAGCTAGCACCA AGGGCCCATCTGTCTTCCCCCTGGCACCCTCCTCCAAGAGC ACCTCTGGGGGCACAGCTGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGA CTACTTCCCTGAACCTGTGACAGTGTCCTGGAACTCAGGAG CCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAG TCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCC CTCCAGCAGCTTGGGCACCCAGACCTACATCTGCAACGTGA ATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAAAGTTGA GCCCAAATCTTGTGACAAAACTCACACATGCCCACCGTGCC CAGCACCTGAAGCTGCTGGGGGACCGTCAGTCTTCCTCTTC CCCCCAAAACCCAAGGACACCCTCATGATCTCCCGGACCCC TGAGGTCACATGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCACGAAGAC CCTGAGGTCAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGT GCATAATGCCAAGACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTACAAC AGCACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCA GGACTGGCTGAATGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCC AACAAAGCCCTCGGGGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAA AGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCACAGGTTTACACCCTG CCCCCATCCCGGGATGAGCTGACCAAGAACCAGGTCAGCCT GACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCG TGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAA GACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCT CTACAGCAAGCTCACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGCAG GGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCA CAACCACTACACACAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCGGGCA
AA Sequência de aminoácidos 262 QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSSYAISWVRQA da cadeia pesada de hIgG1 PGQGLEWMGSIIPIFGTANYAQKFQGRVTITADESTSTAYM LALA-PG do Clone 13; ELSSLRSEDTAVYYCARGPSEVGAILGYVWFDPWGQGTLV negrito indica VH TVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVS
WNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICN VNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFP PKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHN AKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKA LGAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKG FYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDK SRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
199 / 207
SEQ ID Nome Sequência
NO Sequência de nucleotídeos 263 CAGGTGCAGCTGGTGCAGTCTGGGGCTGAGGTGAAGAA da cadeia pesada de hIgG4 GCCTGGGTCCTCTGTGAAGGTCTCCTGCAAGGCTTCTGG S228P do Clone 13; negrito AGGCACCTTCAGCAGCTATGCTATCAGCTGGGTGCGAC indica a sequência de AGGCCCCTGGACAAGGGCTTGAGTGGATGGGAAGCATC nucleotídeos de VH ATCCCTATCTTTGGTACAGCAAACTACGCACAGAAGTTC
CAGGGCAGAGTCACCATTACTGCTGATGAATCCACCAGC ACAGCCTACATGGAGCTGAGCAGCCTGAGATCTGAGGA CACTGCTGTGTACTACTGTGCCAGAGGCCCTTCTGAAGT AGGAGCAATACTGGGATATGTATGGTTTGACCCATGGG GACAGGGTACATTGGTCACCGTCTCCTCAGCTAGCACCA AGGGCCCATCTGTCTTCCCCCTGGCCCCTTGCTCCAGAAGC ACATCTGAGAGCACAGCGGCCCTGGGATGCCTGGTCAAGG ACTATTTCCCTGAGCCGGTGACCGTAAGCTGGAACTCTGGA GCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCAGCTGTCCTGCA GTCTTCAGGGCTCTACTCCCTCAGCAGTGTGGTGACTGTACC CTCCAGCAGCTTGGGCACCAAGACCTACACCTGCAACGTAG ATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAGAGTTGA GTCCAAATATGGTCCCCCATGCCCACCCTGCCCAGCACCAG AGTTCCTGGGGGGACCATCTGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAAC CCAAGGATACCCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACA TGTGTGGTGGTGGACGTGAGCCAGGAGGACCCCGAGGTCC AGTTCAACTGGTATGTGGATGGCGTGGAAGTGCATAATGCT AAGACAAAGCCACGGGAGGAGCAGTTCAACAGCACCTACC GTGTGGTCAGCGTCCTCACAGTGCTGCACCAGGACTGGCTG AATGGCAAGGAGTACAAATGCAAGGTCTCCAACAAAGGCC TCCCATCCTCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGG CAACCCCGGGAACCACAGGTATACACCCTGCCTCCATCCCA AGAAGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTG GTCAAAGGCTTCTACCCCTCTGACATTGCCGTGGAGTGGGA GAGCAATGGGCAGCCAGAGAACAACTACAAGACCACACCT CCCGTGCTGGACTCCGATGGCTCCTTCTTCCTGTACTCCCGG CTCACAGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGGAGGGAAATGTCT TCTCCTGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTAC
ACACAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCTGGGCAAA Sequência de aminoácidos 264 QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSSYAISWVRQA da cadeia pesada de hIgG4 PGQGLEWMGSIIPIFGTANYAQKFQGRVTITADESTSTAYM S228P do Clone 13; negrito ELSSLRSEDTAVYYCARGPSEVGAILGYVWFDPWGQGTLV indica VH TVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVS
WNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTC NVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKP KDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAK TKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPS SIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYP SDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRW QEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK
200 / 207
SEQ ID Nome Sequência
NO Sequência de nucleotídeos 265 CAGGTGCAGCTGGTGCAGTCTGGGGCTGAGGTGAAGAA da cadeia pesada de hIgG1 GCCTGGGTCCTCTGTGAAGGTCTCCTGCAAGGCTTCTGG (e hIgG1 afucosilado) do AGGCACCTTCCTTAGCTCTGCTATCAGCTGGGTGCGACA Clone 13A; negrito indica a GGCCCCTGGACAAGGGCTTGAGTGGATGGGATCTCTCA sequência de nucleotídeos TCCCTTATTTTGGTACAGCAAACTACGCACAGAAGTTCC de VH AGGGCAGAGTCACCATTACTGCTGATGAATCCACCAGCA
CAGCCTACATGGAGCTGAGCAGCCTGAGATCTGAGGAC ACTGCTGTGTACTACTGTGCCAGAGGCCCTTCTGAAGTA GGAGCAATACTGGGATATGTATGGTTTGACCCATGGGG ACAGGGTACATTGGTCACCGTCTCCTCAGCTAGCACCAA GGGCCCATCTGTCTTCCCCCTGGCACCCTCCTCCAAGAGCA CCTCTGGGGGCACAGCTGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGAC TACTTCCCTGAACCTGTGACAGTGTCCTGGAACTCAGGAGC CCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGT CCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCC TCCAGCAGCTTGGGCACCCAGACCTACATCTGCAACGTGAA TCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAAAGTTGAG CCCAAATCTTGTGACAAAACTCACACATGCCCACCGTGCCC AGCACCTGAACTCCTGGGGGGACCGTCAGTCTTCCTCTTCC CCCCAAAACCCAAGGACACCCTCATGATCTCCCGGACCCCT GAGGTCACATGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCACGAAGACC CTGAGGTCAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTG CATAATGCCAAGACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTACAACA GCACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAG GACTGGCTGAATGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCA ACAAAGCCCTCCCAGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAA GCCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCACAGGTTTACACCCTGCC CCCATCCCGGGATGAGCTGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGA CCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTG GAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGA CCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCT ACAGCAAGCTCACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGCAGGG GAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACA
ACCACTACACACAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCGGGCAAA Sequência de aminoácidos 266 QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFLSSAISWVRQA da cadeia pesada de hIgG1 PGQGLEWMGSLIPYFGTANYAQKFQGRVTITADESTSTAY (e hIgG1 afucosilado) do MELSSLRSEDTAVYYCARGPSEVGAILGYVWFDPWGQGTL Clone 13A; negrito indica VTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTV
VH SWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYIC NVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLF PPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVH NAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNK ALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVK GFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVD KSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
201 / 207
SEQ ID Nome Sequência
NO Sequência de nucleotídeos 267 CAGGTGCAGCTGGTGCAGTCTGGGGCTGAGGTGAAGAA da cadeia pesada de hIgG1 GCCTGGGTCCTCTGTGAAGGTCTCCTGCAAGGCTTCTGG (e hIgG1 afucosilado) do AGGCACCTTCTCTGCCTGGGCTATCAGCTGGGTGCGAC Clone 13B; negrito indica a AGGCCCCTGGACAAGGGCTTGAGTGGATGGGATCCATC sequência de nucleotídeos ATCCCTTATTTTGGTAAGGCAAACTACGCACAGAAGTTC de VH CAGGGCAGAGTCACCATTACTGCTGATGAATCCACCAGC
ACAGCCTACATGGAGCTGAGCAGCCTGAGATCTGAGGA CACTGCTGTGTACTACTGTGCCAGAGGCCCTTCTGAAGT AAGTGGTATACTGGGATATGTATGGTTTGACCCATGGGG ACAGGGTACATTGGTCACCGTCTCCTCAGCTAGCACCAA GGGCCCATCTGTCTTCCCCCTGGCACCCTCCTCCAAGAGCA CCTCTGGGGGCACAGCTGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGAC TACTTCCCTGAACCTGTGACAGTGTCCTGGAACTCAGGAGC CCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGT CCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCC TCCAGCAGCTTGGGCACCCAGACCTACATCTGCAACGTGAA TCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAAAGTTGAG CCCAAATCTTGTGACAAAACTCACACATGCCCACCGTGCCC AGCACCTGAACTCCTGGGGGGACCGTCAGTCTTCCTCTTCC CCCCAAAACCCAAGGACACCCTCATGATCTCCCGGACCCCT GAGGTCACATGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCACGAAGACC CTGAGGTCAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTG CATAATGCCAAGACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTACAACA GCACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAG GACTGGCTGAATGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCA ACAAAGCCCTCCCAGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAA GCCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCACAGGTTTACACCCTGCC CCCATCCCGGGATGAGCTGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGA CCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTG GAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGA CCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCT ACAGCAAGCTCACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGCAGGG GAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACA
ACCACTACACACAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCGGGCAAA Sequência de aminoácidos 268 QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSAWAISWVRQA da cadeia pesada de hIgG1 PGQGLEWMGSIIPYFGKANYAQKFQGRVTITADESTSTAY (e hIgG1 afucosilado) do MELSSLRSEDTAVYYCARGPSEVSGILGYVWFDPWGQGTL Clone 13B; negrito indica VTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTV
VH SWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYIC NVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLF PPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVH NAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNK ALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVK GFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVD KSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
202 / 207
SEQ ID Nome Sequência
NO Sequência de nucleotídeos 269 CAGGTGCAGCTGGTGCAGTCTGGGGCTGAGGTGAAGAA da cadeia pesada de hIgG1 GCCTGGGTCCTCTGTGAAGGTCTCCTGCAAGGCTTCTGG (e hIgG1 afucosilado) do AGGCACCTTCCTTAGCTCTGCTATCAGCTGGGTGCGACA Clone 13C; negrito indica a GGCCCCTGGACAAGGGCTTGAGTGGATGGGAAGTATCA sequência de nucleotídeos TCCCTCTGTTTGGTAAGGCAAACTACGCACAGAAGTTCC de VH AGGGCAGAGTCACCATTACTGCTGATGAATCCACCAGCA
CAGCCTACATGGAGCTGAGCAGCCTGAGATCTGAGGAC ACTGCTGTGTACTACTGTGCCAGAGGCCCTTCTGAAGTA AAGGGTATACTGGGATATGTATGGTTTGACCCATGGGG ACAGGGTACATTGGTCACCGTCTCCTCAGCTAGCACCAA GGGCCCATCTGTCTTCCCCCTGGCACCCTCCTCCAAGAGCA CCTCTGGGGGCACAGCTGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGAC TACTTCCCTGAACCTGTGACAGTGTCCTGGAACTCAGGAGC CCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGT CCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCC TCCAGCAGCTTGGGCACCCAGACCTACATCTGCAACGTGAA TCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAAAGTTGAG CCCAAATCTTGTGACAAAACTCACACATGCCCACCGTGCCC AGCACCTGAACTCCTGGGGGGACCGTCAGTCTTCCTCTTCC CCCCAAAACCCAAGGACACCCTCATGATCTCCCGGACCCCT GAGGTCACATGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCACGAAGACC CTGAGGTCAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTG CATAATGCCAAGACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTACAACA GCACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAG GACTGGCTGAATGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCA ACAAAGCCCTCCCAGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAA GCCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCACAGGTTTACACCCTGCC CCCATCCCGGGATGAGCTGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGA CCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTG GAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGA CCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCT ACAGCAAGCTCACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGCAGGG GAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACA
ACCACTACACACAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCGGGCAAA Sequência de aminoácidos 270 QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFLSSAISWVRQA da cadeia pesada de hIgG1 PGQGLEWMGSIIPLFGKANYAQKFQGRVTITADESTSTAY (e hIgG1 afucosilado) do MELSSLRSEDTAVYYCARGPSEVKGILGYVWFDPWGQGTL Clone 13C; negrito indica VTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTV
VH SWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYIC NVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLF PPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVH NAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNK ALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVK GFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVD KSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
203 / 207
SEQ ID Nome Sequência
NO Sequência de nucleotídeos 271 CAGGTGCAGCTGGTGCAGTCTGGGGCTGAGGTGAAGAA da cadeia pesada de hIgG1 GCCTGGGTCCTCTGTGAAGGTCTCCTGCAAGGCTTCTGG (e hIgG1 afucosilado) do AGGCACCTTCCTTAGCTCTGCTATCAGCTGGGTGCGACA Clone 13D; negrito indica a GGCCCCTGGACAAGGGCTTGAGTGGATGGGATCCATCA sequência de nucleotídeos TCCCTTATTTTGGTAAGGCAAACTACGCACAGAAGTTCC de VH AGGGCAGAGTCACCATTACTGCTGATGAATCCACCAGCA
CAGCCTACATGGAGCTGAGCAGCCTGAGATCTGAGGAC ACTGCTGTGTACTACTGTGCCAGAGGCCCTTCTGAAGTA AAGGGTATACTGGGATATGTATGGTTTGACCCATGGGG ACAGGGTACATTGGTCACCGTCTCCTCAGCTAGCACCAA GGGCCCATCTGTCTTCCCCCTGGCACCCTCCTCCAAGAGCA CCTCTGGGGGCACAGCTGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGAC TACTTCCCTGAACCTGTGACAGTGTCCTGGAACTCAGGAGC CCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGT CCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCC TCCAGCAGCTTGGGCACCCAGACCTACATCTGCAACGTGAA TCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAAAGTTGAG CCCAAATCTTGTGACAAAACTCACACATGCCCACCGTGCCC AGCACCTGAACTCCTGGGGGGACCGTCAGTCTTCCTCTTCC CCCCAAAACCCAAGGACACCCTCATGATCTCCCGGACCCCT GAGGTCACATGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCACGAAGACC CTGAGGTCAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTG CATAATGCCAAGACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTACAACA GCACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAG GACTGGCTGAATGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCA ACAAAGCCCTCCCAGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAA GCCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCACAGGTTTACACCCTGCC CCCATCCCGGGATGAGCTGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGA CCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTG GAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGA CCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCT ACAGCAAGCTCACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGCAGGG GAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACA
ACCACTACACACAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCGGGCAAA Sequência de aminoácidos 272 QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFLSSAISWVRQA da cadeia pesada de hIgG1 PGQGLEWMGSIIPYFGKANYAQKFQGRVTITADESTSTAY (e hIgG1 afucosilado) do MELSSLRSEDTAVYYCARGPSEVKGILGYVWFDPWGQGTL Clone 13D; negrito indica VTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTV
VH SWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYIC NVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLF PPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVH NAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNK ALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVK GFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVD KSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
204 / 207
SEQ ID Nome Sequência
NO Sequência de nucleotídeos 273 GATATTGTGATGACTCAGTCTCCACTCTCCCTGCCCGTC da cadeia leve hkappa do ACCCCTGGAGAGCCGGCCTCCATCTCCTGCAGGTCTAGT Clone 13, 13A, 13B, 13C e CAGAGCCTCCTGCATAGTAATGGATACAACTATTTGGAT 13D (e afucosilado); TGGTACCTGCAGAAGCCAGGGCAGTCTCCACAGCTCCT negrito indica a sequência GATCTATTTGGGTTCTAATCGGGCCTCCGGGGTCCCTGA de nucleotídeos de VL CAGGTTCAGTGGCAGTGGATCAGGCACAGATTTTACACT
GAAAATCAGCAGAGTGGAGGCTGAGGATGTTGGGGTTT ATTACTGCATGCAGGCAAGACGAATCCCTATCACTTTTG GCGGAGGGACCAAGGTTGAGATCAAACGTACGGTGGCTG CACCATCTGTCTTCATCTTCCCGCCATCTGATGAGCAGTTGA AATCTGGAACTGCCTCTGTTGTGTGCCTGCTGAATAACTTCT ATCCCAGAGAGGCCAAAGTACAGTGGAAGGTGGATAACGC CCTCCAATCGGGTAACTCCCAGGAGAGTGTCACAGAGCAGG ACAGCAAGGACAGCACCTACAGCCTCAGCAGCACCCTGAC GCTGAGCAAAGCAGACTACGAGAAACACAAAGTCTACGCC TGCGAAGTCACCCATCAGGGCCTGAGCTCGCCCGTCACAAA
GAGCTTCAACAGGGGAGAGTGT Sequência de aminoácidos 274 DIVMTQSPLSLPVTPGEPASISCRSSQSLLHSNGYNYLDWYL da cadeia leve hkappa do QKPGQSPQLLIYLGSNRASGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVE Clone 13, 13A, 13B, 13C e AEDVGVYYCMQARRIPITFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPS 13D (e afucosilado); DEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQES negrito indica VL VTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPV
TKSFNRGEC Sequência de nucleotídeos 275 CAGGTGCAGCTGGTGCAGTCTGGGGCTGAGGTGAAGAA da cadeia pesada de GCCTGGGTCCTCTGTGAAGGTCTCCTGCAAGGCTTCTGG mIgG2a do Clone 13 (e AGGCACCTTCAGCAGCTATGCTATCAGCTGGGTGCGAC afucosilado); negrito indica AGGCCCCTGGACAAGGGCTTGAGTGGATGGGAAGCATC a sequência de nucleotídeos ATCCCTATCTTTGGTACAGCAAACTACGCACAGAAGTTC de VH CAGGGCAGAGTCACCATTACTGCTGATGAATCCACCAGC
ACAGCCTACATGGAGCTGAGCAGCCTGAGATCTGAGGA CACTGCTGTGTACTACTGTGCCAGAGGCCCTTCTGAAGT AGGAGCAATACTGGGATATGTATGGTTTGACCCATGGG GACAGGGTACATTGGTCACCGTCTCCTCAGCTAAAACAA CAGCCCCATCGGTCTATCCGCTAGCCCCTGTGTGTGGAGAT ACAACTGGCTCCTCGGTGACTCTAGGATGCCTGGTCAAGGG TTATTTCCCTGAGCCAGTGACCTTGACCTGGAACTCTGGATC CCTGTCCAGTGGTGTGCACACCTTCCCAGCTGTCCTGCAGTC TGACCTCTACACCCTCAGCAGCTCAGTGACTGTAACCTCTA GCACCTGGCCCAGCCAGTCCATCACCTGCAATGTGGCCCAC CCGGCAAGCAGCACCAAGGTGGACAAGAAAATTGAGCCCA GAGGGCCCACAATCAAGCCCTGTCCTCCATGCAAATGCCCA GCACCTAACGCTGCTGGTGGACCATCCGTCTTCATCTTCCCT CCAAAGATCAAGGATGTACTCATGATCTCCCTGAGCCCCAT AGTCACATGTGTGGTGGTGGATGTGAGCGAGGATGACCCAG ATGTCCAGATCAGCTGGTTTGTGAACAACGTGGAAGTACAC ACAGCTCAGACACAAACCCATAGAGAGGATTACAACAGTA CTCTCCGGGTGGTCAGTGCCCTCCCCATCCAGCACCAGGAC TGGATGAGTGGCAAGGAGTTCAAATGCAAGGTCAACAACA AAGACCTCGGGGCGCCCATCGAGAGAACCATCTCAAAACC CAAAGGCTCAGTAAGAGCTCCACAGGTATATGTCTTGCCTC CACCAGAAGAAGAGATGACTAAGAAACAGGTCACTCTGAC CTGCATGGTCACAGACTTCATGCCTGAAGACATTTACGTGG AGTGGACCAACAACGGGAAAACAGAGCTAAACTACAAGAA CACTGAACCAGTCCTGGACTCTGATGGTTCTTACTTCATGTA CAGCAAGCTGAGAGTGGAAAAGAAGAACTGGGTGGAAAGA AATAGCTACTCCTGTTCAGTGGTCCACGAGGGTCTGCACAA TCACCACACGACTAAGAGCTTCTCCCGGACTCCGGGCAAA
205 / 207
SEQ ID Nome Sequência
NO Sequência de aminoácidos 276 QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSSYAISWVRQA da cadeia pesada de PGQGLEWMGSIIPIFGTANYAQKFQGRVTITADESTSTAYM mIgG2a do Clone 13 (e ELSSLRSEDTAVYYCARGPSEVGAILGYVWFDPWGQGTLV afucosilado); negrito indica TVSSAKTTAPSVYPLAPVCGDTTGSSVTLGCLVKGYFPEPVTL
VH TWNSGSLSSGVHTFPAVLQSDLYTLSSSVTVTSSTWPSQSITCN VAHPASSTKVDKKIEPRGPTIKPCPPCKCPAPNAAGGPSVFIFPP KIKDVLMISLSPIVTCVVVDVSEDDPDVQISWFVNNVEVHTAQ TQTHREDYNSTLRVVSALPIQHQDWMSGKEFKCKVNNKDLG APIERTISKPKGSVRAPQVYVLPPPEEEMTKKQVTLTCMVTDF MPEDIYVEWTNNGKTELNYKNTEPVLDSDGSYFMYSKLRVEK
KNWVERNSYSCSVVHEGLHNHHTTKSFSRTPGK Sequência de nucleotídeos 277 CAGGTGCAGCTGGTGCAGTCTGGGGCTGAGGTGAAGAA da cadeia pesada de GCCTGGGTCCTCTGTGAAGGTCTCCTGCAAGGCTTCTGG mIgG2a LALA-PG do AGGCACCTTCAGCAGCTATGCTATCAGCTGGGTGCGAC Clone 13; negrito indica a AGGCCCCTGGACAAGGGCTTGAGTGGATGGGAAGCATC sequência de nucleotídeos ATCCCTATCTTTGGTACAGCAAACTACGCACAGAAGTTC de VH CAGGGCAGAGTCACCATTACTGCTGATGAATCCACCAGC
ACAGCCTACATGGAGCTGAGCAGCCTGAGATCTGAGGA CACTGCTGTGTACTACTGTGCCAGAGGCCCTTCTGAAGT AGGAGCAATACTGGGATATGTATGGTTTGACCCATGGG GACAGGGTACATTGGTCACCGTCTCCTCAGCTAAAACAA CAGCCCCATCGGTCTATCCGCTAGCCCCTGTGTGTGGAGAT ACAACTGGCTCCTCGGTGACTCTAGGATGCCTGGTCAAGGG TTATTTCCCTGAGCCAGTGACCTTGACCTGGAACTCTGGATC CCTGTCCAGTGGTGTGCACACCTTCCCAGCTGTCCTGCAGTC TGACCTCTACACCCTCAGCAGCTCAGTGACTGTAACCTCTA GCACCTGGCCCAGCCAGTCCATCACCTGCAATGTGGCCCAC CCGGCAAGCAGCACCAAGGTGGACAAGAAAATTGAGCCCA GAGGGCCCACAATCAAGCCCTGTCCTCCATGCAAATGCCCA GCACCTAACGCTGCTGGTGGACCATCCGTCTTCATCTTCCCT CCAAAGATCAAGGATGTACTCATGATCTCCCTGAGCCCCAT AGTCACATGTGTGGTGGTGGATGTGAGCGAGGATGACCCAG ATGTCCAGATCAGCTGGTTTGTGAACAACGTGGAAGTACAC ACAGCTCAGACACAAACCCATAGAGAGGATTACAACAGTA CTCTCCGGGTGGTCAGTGCCCTCCCCATCCAGCACCAGGAC TGGATGAGTGGCAAGGAGTTCAAATGCAAGGTCAACAACA AAGACCTCGGGGCGCCCATCGAGAGAACCATCTCAAAACC CAAAGGCTCAGTAAGAGCTCCACAGGTATATGTCTTGCCTC CACCAGAAGAAGAGATGACTAAGAAACAGGTCACTCTGAC CTGCATGGTCACAGACTTCATGCCTGAAGACATTTACGTGG AGTGGACCAACAACGGGAAAACAGAGCTAAACTACAAGAA CACTGAACCAGTCCTGGACTCTGATGGTTCTTACTTCATGTA CAGCAAGCTGAGAGTGGAAAAGAAGAACTGGGTGGAAAGA AATAGCTACTCCTGTTCAGTGGTCCACGAGGGTCTGCACAA
TCACCACACGACTAAGAGCTTCTCCCGGACTCCGGGCAAA Sequência de aminoácidos 278 QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSSYAISWVRQA da cadeia pesada de PGQGLEWMGSIIPIFGTANYAQKFQGRVTITADESTSTAYM mIgG2a LALA-PG do ELSSLRSEDTAVYYCARGPSEVGAILGYVWFDPWGQGTLV Clone 13; negrito indica TVSSAKTTAPSVYPLAPVCGDTTGSSVTLGCLVKGYFPEPVTL
VH TWNSGSLSSGVHTFPAVLQSDLYTLSSSVTVTSSTWPSQSITCN VAHPASSTKVDKKIEPRGPTIKPCPPCKCPAPNAAGGPSVFIFPP KIKDVLMISLSPIVTCVVVDVSEDDPDVQISWFVNNVEVHTAQ TQTHREDYNSTLRVVSALPIQHQDWMSGKEFKCKVNNKDLG APIERTISKPKGSVRAPQVYVLPPPEEEMTKKQVTLTCMVTDF MPEDIYVEWTNNGKTELNYKNTEPVLDSDGSYFMYSKLRVEK KNWVERNSYSCSVVHEGLHNHHTTKSFSRTPGK
206 / 207
SEQ ID Nome Sequência
NO Sequência de nucleotídeos 279 CAGGTGCAGCTGGTGCAGTCTGGGGCTGAGGTGAAGAA da cadeia pesada de mIgG1 GCCTGGGTCCTCTGTGAAGGTCTCCTGCAAGGCTTCTGG do Clone 13; negrito indica AGGCACCTTCAGCAGCTATGCTATCAGCTGGGTGCGAC a sequência de nucleotídeos AGGCCCCTGGACAAGGGCTTGAGTGGATGGGAAGCATC de VH ATCCCTATCTTTGGTACAGCAAACTACGCACAGAAGTTC
CAGGGCAGAGTCACCATTACTGCTGATGAATCCACCAGC ACAGCCTACATGGAGCTGAGCAGCCTGAGATCTGAGGA CACTGCTGTGTACTACTGTGCCAGAGGCCCTTCTGAAGT AGGAGCAATACTGGGATATGTATGGTTTGACCCATGGG GACAGGGTACATTGGTCACCGTCTCCTCAGCCAAAACGA CACCCCCATCTGTCTATCCGCTAGCCCCTGGATCTGCTGCCC AAACTAACTCCATGGTGACCCTGGGATGCCTGGTCAAGGGC TATTTCCCTGAGCCAGTGACAGTGACCTGGAACTCTGGATC CCTGTCCAGCGGTGTGCACACCTTCCCAGCTGTCCTGGAGT CTGACCTCTACACTCTGAGCAGCTCAGTGACTGTCCCCTCCA GCCCTCGGCCCAGCGAGACCGTCACCTGCAACGTTGCCCAC CCGGCCAGCAGCACCAAGGTGGACAAGAAAATTGTGCCCA GGGATTGTGGTTGTAAGCCTTGCATCTGTACAGTCCCAGAA GTATCATCTGTCTTCATCTTCCCCCCAAAGCCCAAGGATGTG CTCACCATTACTCTGACTCCTAAGGTCACGTGTGTTGTGGTA GACATCAGCAAGGATGATCCCGAGGTCCAGTTCAGCTGGTT TGTAGATGATGTGGAGGTGCACACAGCTCAGACGCAACCCC GGGAGGAGCAGTTCAACAGCACTTTCCGCTCAGTCAGTGAA CTTCCCATCATGCACCAGGACTGGCTCAATGGCAAGGAGTT CAAATGCAGGGTCAACAGTGCAGCTTTCCCTGCCCCCATCG AGAAAACCATCTCCAAAACCAAAGGCAGACCGAAGGCTCC ACAGGTGTACACCATTCCACCTCCCAAGGAGCAGATGGCCA AGGATAAAGTCAGTCTGACCTGCATGATAACAGACTTCTTC CCTGAAGACATTACTGTGGAGTGGCAGTGGAATGGGCAGCC AGCGGAGAACTACAAGAACACTCAGCCCATCATGAACACG AATGGCTCTTACTTCGTCTACAGCAAGCTCAATGTGCAGAA GAGCAACTGGGAGGCAGGAAATACTTTCACCTGCTCTGTGT TACATGAGGGCCTGCACAACCACCATACTGAGAAGAGCCTC
TCCCACTCTCCTGGCAAA Sequência de aminoácidos 280 QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSSYAISWVRQA da cadeia pesada de mIgG1 PGQGLEWMGSIIPIFGTANYAQKFQGRVTITADESTSTAYM do Clone 13; negrito indica ELSSLRSEDTAVYYCARGPSEVGAILGYVWFDPWGQGTLV
VH TVSSAKTTPPSVYPLAPGSAAQTNSMVTLGCLVKGYFPEPVTV TWNSGSLSSGVHTFPAVLESDLYTLSSSVTVPSSPRPSETVTCN VAHPASSTKVDKKIVPRDCGCKPCICTVPEVSSVFIFPPKPKDV LTITLTPKVTCVVVDISKDDPEVQFSWFVDDVEVHTAQTQPRE EQFNSTFRSVSELPIMHQDWLNGKEFKCRVNSAAFPAPIEKTIS KTKGRPKAPQVYTIPPPKEQMAKDKVSLTCMITDFFPEDITVE WQWNGQPAENYKNTQPIMNTNGSYFVYSKLNVQKSNWEAG NTFTCSVLHEGLHNHHTEKSLSHSPGK
207 / 207
SEQ ID Nome Sequência
NO Sequência de nucleotídeos 281 GATATTGTGATGACTCAGTCTCCACTCTCCCTGCCCGTC da cadeia leve mKappa do ACCCCTGGAGAGCCGGCCTCCATCTCCTGCAGGTCTAGT Clone 13; negrito indica a CAGAGCCTCCTGCATAGTAATGGATACAACTATTTGGAT sequência de nucleotídeos TGGTACCTGCAGAAGCCAGGGCAGTCTCCACAGCTCCT de VH GATCTATTTGGGTTCTAATCGGGCCTCCGGGGTCCCTGA
CAGGTTCAGTGGCAGTGGATCAGGCACAGATTTTACACT GAAAATCAGCAGAGTGGAGGCTGAGGATGTTGGGGTTT ATTACTGCATGCAGGCAAGACGAATCCCTATCACTTTTG GCGGAGGGACCAAGGTTGAGATCAAACGTGCAGATGCGG CGCCAACTGTATCCATCTTCCCACCATCCAGTGAGCAGTTA ACATCTGGAGGTGCCTCAGTCGTGTGCTTCTTGAACAACTTC TACCCCAAAGACATCAATGTCAAGTGGAAGATTGATGGCAG TGAACGACAAAATGGCGTCCTGAACAGTTGGACTGATCAGG ACAGCAAAGACAGCACCTACAGCATGAGCAGCACCCTCAC GTTGACCAAGGACGAGTATGAACGACATAACAGCTATACCT GTGAGGCCACTCACAAGACATCAACTTCACCCATTGTCAAG
AGCTTCAACAGGAATGAGTGT Sequência de aminoácidos 282 DIVMTQSPLSLPVTPGEPASISCRSSQSLLHSNGYNYLDWYL da cadeia leve mKappa do QKPGQSPQLLIYLGSNRASGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVE Clone 13; negrito indica AEDVGVYYCMQARRIPITFGGGTKVEIKRADAAPTVSIFPPS
VL SEQLTSGGASVVCFLNNFYPKDINVKWKIDGSERQNGVLNSW TDQDSKDSTYSMSSTLTLTKDEYERHNSYTCEATHKTSTSPIV KSFNRNEC

Claims (1)

1 / 45
REIVINDICAÇÕES
1. Composição, caracterizada pelo fato de que compreende anticorpos isolados que se ligam a TIGIT humano (Imunorreceptor de células T com domínios Ig e ITIM), em que os anticorpos têm uma afinidade de ligação (KD) por TIGIT humano inferior a 5 nM e em que pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98% ou pelo menos 99% dos anticorpos na composição são afucosilados.
2. Composição de acordo com a reivindicação 1, caracterizada pelo fato de que os anticorpos têm uma KD por TIGIT humano inferior a 1 nM.
3. Composição de acordo com a reivindicação 1, caracterizada pelo fato de que os anticorpos têm uma KD por TIGIT humano inferior a 100 pM.
4. Composição de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 3, caracterizada pelo fato de que os anticorpos exibem reatividade cruzada com TIGIT de macaco Cynomolgus e com TIGIT de camundongo.
5. Composição de acordo com a reivindicação 4, caracterizada pelo fato de que os anticorpos exibem reatividade cruzada com TIGIT de macaco Cynomolgus e com TIGIT de camundongo.
6. Composição de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 5, caracterizada pelo fato de que os anticorpos bloqueiam a ligação de CD155 a TIGIT.
7. Composição de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 5, caracterizada pelo fato de que os anticorpos bloqueiam a ligação de CD112 a TIGIT.
8. Composição de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 5, caracterizada pelo fato de que os anticorpos bloqueiam a
2 / 45 ligação de CD155 e de CD112 a TIGIT.
9. Composição de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 8, caracterizada pelo fato de que os anticorpos competem pela ligação a TIGIT humano com um anticorpo que compreende uma região variável da cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 55 e uma região variável da cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 64.
10. Composição de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 9, caracterizada pelo fato de que os anticorpos, quando ligados a TIGIT humano, ligam-se a uma ou a ambas as posições 81 e 82 de aminoácidos.
11. Composição de acordo com a reivindicação 10, caracterizada pelo fato de que os anticorpos se ligam a ambas as posições 81 e 82 de aminoácidos.
12. Composição de acordo com a reivindicação 10 ou reivindicação 11, caracterizada pelo fato de que as posições 81 e 82 de aminoácidos são Phe81 e Lys82.
13. Composição de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 12, caracterizada pelo fato de que os anticorpos se ligam a um epítopo em TIGIT humano que compreende uma ou ambas as posições 81 e 82 de aminoácidos.
14. Composição, caracterizada pelo fato de que compreende anticorpos isolados que se ligam a TIGIT humano, em que os anticorpos, quando ligados a TIGIT humano, ligam-se a uma ou a ambas as posições 81 e 82 de aminoácidos e em que pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98% ou pelo menos 99% dos anticorpos na composição são afucosilados.
15. Composição de acordo com a reivindicação 14,
3 / 45 caracterizada pelo fato de que os anticorpos se ligam a ambas as posições 81 e 82 de aminoácidos.
16. Composição de acordo com a reivindicação 14 ou 15, caracterizada pelo fato de que as posições 81 e 82 de aminoácidos são Phe81 e Lys82.
17. Composição, caracterizada pelo fato de que compreende anticorpos isolados que se ligam a TIGIT humano, em que os anticorpos se ligam a um epítopo em TIGIT humano que compreende uma ou ambas as posições 81 e 82 de aminoácidos e em que pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98% ou pelo menos 99% dos anticorpos na composição são afucosilados.
18. Composição de acordo com a reivindicação 13 ou 17, caracterizada pelo fato de que o epítopo compreende Phe na posição 81.
19. Composição de acordo com a reivindicação 13, 17 ou 18, caracterizada pelo fato de que o epítopo compreende Lys ou Ser na posição
82.
20. Composição de acordo com qualquer uma das reivindicações 13 ou 17 a 19, caracterizada pelo fato de que o epítopo compreende Phe na posição 81 e Lys ou Ser na posição 82.
21. Composição de acordo com a reivindicação 20, caracterizada pelo fato de que o epítopo compreende Phe81 e Lys82.
22. Composição de acordo com qualquer uma das reivindicações 13 ou 17 a 21, caracterizada pelo fato de que o epítopo é um epítopo descontínuo.
23. Composição de acordo com qualquer uma das reivindicações 13 ou 17 a 22, caracterizada pelo fato de que os anticorpos se ligam a um epítopo em TIGIT humano que compreende ainda uma ou mais das posições de aminoácidos 51, 52, 53, 54, 55, 73, 74, 75, 76, 77, 79, 83, 84,
4 / 45 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92 ou 93.
24. Composição de acordo com a reivindicação 23, caracterizada pelo fato de que o epítopo compreende ainda um ou mais resíduos de aminoácidos selecionados a partir do grupo que consiste em Thr51, Ala52, Gln53, Val54, Thr55, Leu73, Gly74, Trp75, His76, Ile77, Pro79, Asp83, Arg84, Val85, Ala86, Pro87, Gly88, Pro89, Gly90, Leu91, Gly92 e Leu93.
25. Composição de acordo com a reivindicação 24, caracterizada pelo fato de que o epítopo compreende os resíduos de aminoácidos Thr51, Ala52, Gln53, Val54, Thr55, Gly74, Trp75, His76, Ile77, Phe81, Lys82, Pro87, Gly88, Pro89, Gly90, Leu91, Gly92 e Leu93.
26. Composição de acordo com a reivindicação 24, caracterizada pelo fato de que o epítopo compreende os resíduos de aminoácidos Ala52, Gln53, Leu73, Gly74, Trp75, Pro79, Phe81, Lys82, Asp83, Arg84, Val85 e Ala86.
27. Composição de acordo com qualquer uma das reivindicações 13 ou 17 a 26, caracterizada pelo fato de que o epítopo compreende a sequência ICNADLGWHISPSFK (SEQ ID NO: 258).
28. Composição de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 27, caracterizada pelo fato de que TIGIT humano compreende as sequência de SEQ ID NO: 218.
29. Composição de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 28, caracterizada pelo fato de que cada um dos anticorpos compreende uma ou mais dentre: (a) uma CDR1 da cadeia pesada compreendendo uma sequência selecionada dentre SEQ ID NO:4, SEQ ID NO:22, SEQ ID NO:40, SEQ ID NO:58, SEQ ID NO:76, SEQ ID NO:94, SEQ ID NO:112, SEQ ID NO:130, SEQ ID NO:148, SEQ ID NO:166, SEQ ID NO:184, SEQ ID NO:202, SEQ ID NO:221, SEQ ID NO:224, SEQ ID NO:226, SEQ ID
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NO:231, SEQ ID NO:233, SEQ ID NO:239, SEQ ID NO:243, SEQ ID NO:283, SEQ ID NO:284, SEQ ID NO:293, SEQ ID NO:294, SEQ ID NO:289 e SEQ ID NO:290; (b) uma CDR2 da cadeia pesada compreendendo uma sequência selecionada dentre SEQ ID NO:6, SEQ ID NO:24, SEQ ID NO:42, SEQ ID NO:60, SEQ ID NO:78, SEQ ID NO:96, SEQ ID NO:114, SEQ ID NO:132, SEQ ID NO:150, SEQ ID NO:168, SEQ ID NO:186, SEQ ID NO:204, SEQ ID NO:222, SEQ ID NO:225, SEQ ID NO:227, SEQ ID NO:229, SEQ ID NO:232, SEQ ID NO:234, SEQ ID NO:238, SEQ ID NO:240, SEQ ID NO:285, SEQ ID NO:297, SEQ ID NO:291 e SEQ ID NO:295; (c) uma CDR3 da cadeia pesada compreendendo uma sequência selecionada dentre SEQ ID NO:8, SEQ ID NO:26, SEQ ID NO:44, SEQ ID NO:62, SEQ ID NO:80, SEQ ID NO:98, SEQ ID NO:116, SEQ ID NO:134, SEQ ID NO:152, SEQ ID NO:170, SEQ ID NO:188, SEQ ID NO:206, SEQ ID NO:223, SEQ ID NO:228, SEQ ID NO:230, SEQ ID NO:235, SEQ ID NO:236, SEQ ID NO:237, SEQ ID NO:241, SEQ ID NO:242, SEQ ID NO:244, SEQ ID NO:286, SEQ ID NO:292 e SEQ ID NO:296; (d) uma CDR1 da cadeia leve compreendendo uma sequência selecionada dentre SEQ ID NO:13, SEQ ID NO:31, SEQ ID NO:49, SEQ ID NO:67, SEQ ID NO:85, SEQ ID NO:103, SEQ ID NO:121, SEQ ID NO:139, SEQ ID NO:157, SEQ ID NO:175, SEQ ID NO:193, SEQ ID NO:211 e SEQ ID NO:287; (e) uma CDR2 da cadeia leve compreendendo uma sequência selecionada dentre SEQ ID NO:15, SEQ ID NO:33, SEQ ID NO:51, SEQ ID NO:69, SEQ ID NO:87, SEQ ID NO:105, SEQ ID NO:123, SEQ ID NO:141, SEQ ID NO:159, SEQ ID NO:177, SEQ ID NO:195, SEQ ID NO:213 e SEQ ID NO:288; ou
6 / 45 (f) uma CDR3 da cadeia leve compreendendo uma sequência selecionada dentre SEQ ID NO:17, SEQ ID NO:35, SEQ ID NO:53, SEQ ID NO:71, SEQ ID NO:89, SEQ ID NO:107, SEQ ID NO:125, SEQ ID NO:143, SEQ ID NO:161, SEQ ID NO:179, SEQ ID NO:197 e SEQ ID NO:215.
30. Composição de acordo com a reivindicação 29, caracterizada pelo fato de que cada um dos anticorpos compreende: (a) uma sequência de CDR1 da cadeia pesada compreendendo uma sequência de aminoácidos selecionada dentre SEQ ID NO:58, SEQ ID NO:283, SEQ ID NO:284, SEQ ID NO:224, SEQ ID NO:293, SEQ ID NO:294, SEQ ID NO:226, SEQ ID NO:289 e SEQ ID NO:290; (b) uma sequência de CDR2 da cadeia pesada compreendendo uma sequência de aminoácidos selecionada dentre SEQ ID NO:60, SEQ ID NO:285, SEQ ID NO:225, SEQ ID NO:297, SEQ ID NO:227, SEQ ID NO:291, SEQ ID NO:229 e SEQ ID NO:295; (c) uma sequência de CDR3 da cadeia pesada compreendendo uma sequência de aminoácidos selecionada dentre SEQ ID NO:62, SEQ ID NO:286, SEQ ID NO:228, SEQ ID NO:292, SEQ ID NO:230 e SEQ ID NO:296; (d) uma sequência de CDR1 da cadeia leve compreendendo uma sequência de aminoácidos selecionada dentre SEQ ID NO:67 e SEQ ID NO:287; (e) uma sequência de CDR2 da cadeia leve compreendendo uma sequência de aminoácidos selecionada dentre SEQ ID NO:69 e SEQ ID NO:288; e/ou (f) uma sequência de CDR3 da cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:71.
31. Composição de acordo com a reivindicação 29 ou 30, caracterizada pelo fato de que cada um dos anticorpos compreende uma CDR1, CDR2 e CDR3 da cadeia pesada e uma CDR1, CDR2 e CDR3 da
7 / 45 cadeia leve compreendendo as sequências de: (a) SEQ ID NOs: 4, 6, 8, 13, 15 e 17, respectivamente; ou (b) SEQ ID NOs: 22, 24, 26, 31, 33 e 35, respectivamente; ou (c) SEQ ID NOs: 40, 42, 44, 49, 51 e 53, respectivamente; ou (d) SEQ ID NOs: 58, 60, 62, 67, 69 e 71, respectivamente; ou (e) SEQ ID NOs: 283, 285, 62, 287, 288 e 71, respectivamente; ou (f) SEQ ID NOs: 284, 60, 286, 67, 69 e 71, respectivamente; ou (g) SEQ ID NOs: 76, 78, 80, 85, 87 e 89, respectivamente; ou (h) SEQ ID NOs: 94, 96, 98, 103, 105 e 107, respectivamente; ou (i) SEQ ID NOs: 112, 114, 116, 121, 123 e 125, respectivamente; ou (j) SEQ ID NOs: 130, 132, 134, 139, 141 e 143, respectivamente; ou (k) SEQ ID NOs: 148, 150, 152, 157, 159 e 161, respectivamente; ou (l) SEQ ID NOs: 166, 168, 170, 175, 177 e 179, respectivamente; ou (m) SEQ ID NOs: 184, 186, 188, 193, 195 e 197, respectivamente; ou (n) SEQ ID NOs: 202, 204, 206, 211, 213 e 215, respectivamente; ou (o) SEQ ID NOs: 221, 222, 223, 13, 15 e 17, respectivamente; ou (p) SEQ ID NOs: 224, 225, 62, 67, 69 e 71, respectivamente; ou (q) SEQ ID NOs: 293, 297, 62, 287, 288 e 71,
8 / 45 respectivamente; ou (r) SEQ ID NOs: 294, 225, 286, 67, 69 e 71, respectivamente; ou (s) SEQ ID NOs: 226, 227, 228, 67, 69 e 71, respectivamente; ou (t) SEQ ID NOs: 289, 291, 228, 287, 288 e 71, respectivamente; ou (u) SEQ ID NOs: 290, 227, 292, 67, 69 e 71, respectivamente; ou (v) SEQ ID NOs: 224, 229, 230, 67, 69 e 71, respectivamente; ou (w) SEQ ID NOs: 293, 295, 230, 287, 288 e 71, respectivamente; ou (x) SEQ ID NOs: 294, 229, 296, 67, 69 e 71, respectivamente; ou (y) SEQ ID NOs: 224, 227, 230, 67, 69 e 71, respectivamente; ou (z) SEQ ID NOs: 293, 290, 230, 287, 288 e 71, respectivamente; ou (aa) SEQ ID NOs: 294, 290, 230, 67, 69 e 71, respectivamente; ou (bb) SEQ ID NOs: 231, 232, 235, 103, 105 e 107, respectivamente; ou (cc) SEQ ID NOs: 233, 234, 236, 103, 105 e 107, respectivamente; ou (dd) SEQ ID NOs: 233, 234, 237, 103, 105 e 107, respectivamente; ou (ee) SEQ ID NOs: 166, 238, 170, 175, 177 e 179, respectivamente; ou
9 / 45 (ff) SEQ ID NOs: 239, 240, 170, 175, 177 e 179, respectivamente; ou (gg) SEQ ID NOs: 239, 240, 241, 175, 177 e 179, respectivamente; ou (hh) SEQ ID NOs: 239, 240, 242, 175, 177 e 179, respectivamente; ou (ii) SEQ ID NOs: 243, 168, 244, 175, 177 e 179, respectivamente.
32. Composição de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 31, caracterizada pelo fato de que cada um dos anticorpos compreende uma CDR1, CDR2 e CDR3 da cadeia pesada e uma CDR1, CDR2 e CDR3 da cadeia leve compreendendo as sequências de: (a) SEQ ID NOs: 58, 60, 62, 67, 69 e 71, respectivamente; ou (b) SEQ ID NOs: 283, 285, 62, 287, 288 e 71, respectivamente; ou (c) SEQ ID NOs: 284, 60, 286, 67, 69 e 71, respectivamente.
33. Composição de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 32, caracterizada pelo fato de que cada um dos anticorpos compreende: (a) uma região variável da cadeia pesada compreendendo uma sequência de aminoácidos com pelo menos 90% de identidade de sequência com SEQ ID NO:1, SEQ ID NO:19, SEQ ID NO:37, SEQ ID NO:55, SEQ ID NO:73, SEQ ID NO:91, SEQ ID NO:109, SEQ ID NO:127, SEQ ID NO:145, SEQ ID NO:163, SEQ ID NO:181, SEQ ID NO:199, SEQ ID NO:245, SEQ ID NO:246, SEQ ID NO:247, SEQ ID NO:248, SEQ ID NO:249, SEQ ID NO:250, SEQ ID NO:251, SEQ ID NO:252, SEQ ID NO:253, SEQ ID NO:254, SEQ ID NO:255, SEQ ID NO:256 ou SEQ ID NO:257; e/ou (b) uma região variável da cadeia leve compreendendo uma sequência de aminoácidos com pelo menos 90% de identidade de sequência
10 / 45 com SEQ ID NO:10, SEQ ID NO:28, SEQ ID NO:46, SEQ ID NO:64, SEQ ID NO:82, SEQ ID NO:100, SEQ ID NO:118, SEQ ID NO:136, SEQ ID NO:154, SEQ ID NO:172, SEQ ID NO:190 ou SEQ ID NO:208.
34. Composição de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 33, caracterizada pelo fato de que cada um dos anticorpos compreende: (a) uma região variável da cadeia pesada compreendendo uma sequência de aminoácidos com pelo menos 90% de identidade de sequência com SEQ ID NO:1 ou SEQ ID NO:245 e uma região variável da cadeia leve compreendendo uma sequência de aminoácidos com pelo menos 90% de identidade de sequência com SEQ ID NO:10; ou (b) uma região variável da cadeia pesada compreendendo uma sequência de aminoácidos com pelo menos 90% de identidade de sequência com SEQ ID NO:19 e uma região variável da cadeia leve compreendendo uma sequência de aminoácidos com pelo menos 90% de identidade de sequência com SEQ ID NO:28; ou (c) uma região variável da cadeia pesada compreendendo uma sequência de aminoácidos com pelo menos 90% de identidade de sequência com SEQ ID NO:37 e uma região variável da cadeia leve compreendendo uma sequência de aminoácidos com pelo menos 90% de identidade de sequência com SEQ ID NO:46; ou (d) uma região variável da cadeia pesada compreendendo uma sequência de aminoácidos com pelo menos 90% de identidade de sequência com qualquer uma dentre SEQ ID NO:55, SEQ ID NO:246, SEQ ID NO:247, SEQ ID NO:248 ou SEQ ID NO:249 e uma região variável da cadeia leve compreendendo uma sequência de aminoácidos com pelo menos 90% de identidade de sequência com SEQ ID NO:64; ou (e) uma região variável da cadeia pesada compreendendo uma sequência de aminoácidos com pelo menos 90% de identidade de sequência
11 / 45 com SEQ ID NO:73 e uma região variável da cadeia leve compreendendo uma sequência de aminoácidos com pelo menos 90% de identidade de sequência com SEQ ID NO:82; ou (f) uma região variável da cadeia pesada compreendendo uma sequência de aminoácidos com pelo menos 90% de identidade de sequência com qualquer uma dentre SEQ ID NO:91, SEQ ID NO:250, SEQ ID NO:251 ou SEQ ID NO:252 e uma região variável da cadeia leve compreendendo uma sequência de aminoácidos com pelo menos 90% de identidade de sequência com SEQ ID NO:100; ou (g) uma região variável da cadeia pesada compreendendo uma sequência de aminoácidos com pelo menos 90% de identidade de sequência com SEQ ID NO:109 e uma região variável da cadeia leve compreendendo uma sequência de aminoácidos com pelo menos 90% de identidade de sequência com SEQ ID NO:118; ou (h) uma região variável da cadeia pesada compreendendo uma sequência de aminoácidos com pelo menos 90% de identidade de sequência com SEQ ID NO:127 e uma região variável da cadeia leve compreendendo uma sequência de aminoácidos com pelo menos 90% de identidade de sequência com SEQ ID NO:136; ou (i) uma região variável da cadeia pesada compreendendo uma sequência de aminoácidos com pelo menos 90% de identidade de sequência com SEQ ID NO:145 e uma região variável da cadeia leve compreendendo uma sequência de aminoácidos com pelo menos 90% de identidade de sequência com SEQ ID NO:154; ou (j) uma região variável da cadeia pesada compreendendo uma sequência de aminoácidos com pelo menos 90% de identidade de sequência com qualquer uma dentre SEQ ID NO:163, SEQ ID NO:253, SEQ ID NO:254, SEQ ID NO:255, SEQ ID NO:256 ou SEQ ID NO:257 e uma região variável da cadeia leve compreendendo uma sequência de aminoácidos com
12 / 45 pelo menos 90% de identidade de sequência com SEQ ID NO:172; ou (k) uma região variável da cadeia pesada compreendendo uma sequência de aminoácidos com pelo menos 90% de identidade de sequência com SEQ ID NO:181 e uma região variável da cadeia leve compreendendo uma sequência de aminoácidos com pelo menos 90% de identidade de sequência com SEQ ID NO:190; ou (l) uma região variável da cadeia pesada compreendendo uma sequência de aminoácidos com pelo menos 90% de identidade de sequência com SEQ ID NO:199 e uma região variável da cadeia leve compreendendo uma sequência de aminoácidos com pelo menos 90% de identidade de sequência com SEQ ID NO:208.
35. Composição de acordo com a reivindicação 34, caracterizada pelo fato de que cada um dos anticorpos compreende: (a) uma região variável da cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:1 ou SEQ ID NO:245 e uma região variável da cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:10; ou (b) uma região variável da cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:19 e uma região variável da cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:28; ou (c) uma região variável da cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:37 e uma região variável da cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:46; ou (d) uma região variável da cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos de qualquer uma dentre SEQ ID NO:55, SEQ ID NO:246, SEQ ID NO:247, SEQ ID NO:248 ou SEQ ID NO:249 e uma região variável da cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:64; ou (e) uma região variável da cadeia pesada compreendendo a
13 / 45 sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:73 e uma região variável da cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:82; ou (f) uma região variável da cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos de qualquer uma dentre SEQ ID NO:91, SEQ ID NO:250, SEQ ID NO:251 ou SEQ ID NO:252 e uma região variável da cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:100; ou (g) uma região variável da cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:109 e uma região variável da cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:118; ou (h) uma região variável da cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:127 e uma região variável da cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:136; ou (i) uma região variável da cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:145 e uma região variável da cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:154; ou (j) uma região variável da cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos de qualquer uma dentre SEQ ID NO:163, SEQ ID NO:253, SEQ ID NO:254, SEQ ID NO:255, SEQ ID NO:256 ou SEQ ID NO:257 e uma região variável da cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:172; ou (k) uma região variável da cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:181 e uma região variável da cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:190; ou (l) uma região variável da cadeia pesada compreendendo a
14 / 45 sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:199 e uma região variável da cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:208.
36. Composição de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 35, caracterizada pelo fato de que cada um dos anticorpos compreende uma região variável da cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:55 e uma região variável da cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:64.
37. Composição de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 36, caracterizada pelo fato de que os anticorpos são anticorpos IgG.
38. Composição de acordo com a reivindicação 37, caracterizada pelo fato de que os anticorpos são anticorpos IgG1 ou anticorpos IgG3.
39. Composição de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 38, caracterizada pelo fato de que cada um dos anticorpos compreende uma cadeia pesada compreendendo uma sequência de aminoácidos selecionada dentre SEQ ID NOs: 260, 262, 264, 266, 268, 270 e 272; e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 274.
40. Composição de acordo com a reivindicação 39, caracterizada pelo fato de que cada um dos anticorpos compreende uma cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOs: 260; e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 274.
41. Composição de acordo com a reivindicação 39, caracterizada pelo fato de que cada um dos anticorpos compreende uma cadeia pesada que consiste na sequência de aminoácidos de SEQ ID NOs: 260; e uma cadeia leve que consiste na sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 274.
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42. Composição, caracterizada pelo fato de que compreende anticorpos isolados que se ligam a TIGIT humano, em que pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98% ou pelo menos 99% dos anticorpos na composição são afucosilados e em que cada um dos anticorpos compreende uma cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOs: 260; e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 274.
43. Composição, caracterizada pelo fato de que compreende anticorpos isolados que se ligam a TIGIT humano, em que pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98% ou pelo menos 99% dos anticorpos na composição são afucosilados e em que cada um dos anticorpos compreende uma cadeia pesada que consiste na sequência de aminoácidos de SEQ ID NOs: 260; e uma cadeia leve que consiste na sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 274.
44. Composição de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 43, caracterizada pelo fato de que os anticorpos exibem sinergia com um anticorpo anti-PD-1 ou um anticorpo anti-PD-L1.
45. Composição de acordo com a reivindicação 44, caracterizada pelo fato de que a sinergia é determinada por meio de um ensaio que compreende colocar em contato uma cocultura compreendendo (i) células Jurkat efetoras que expressam PD-1, TIGIT e CD226, em que as células Jurkat efetoras compreendem um gene repórter luciferase direcionado pelo promotor de IL-2; e (ii) células CHO-K1 apresentadoras de antígeno artificiais (aAPCs) expressando um ativador de TCR, PD-L1 e CD155; com a composição e um anticorpo anti-PD-1 ou um anticorpo anti-PD-L1.
46. Composição de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 45, caracterizada pelo fato de que células T reguladoras
16 / 45 (Treg) são depletadas de PBMCs humanas quando em contato com a composição.
47. Composição de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 46, caracterizada pelo fato de que a expressão de MCP1, IL-8 e MIP1α é aumentada em PBMCs humanas quando em contato com a composição.
48. Composição de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 47, caracterizada pelo fato de que monócitos/macrófagos são ativados quando em contato com a composição.
49. Composição de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 48, caracterizada pelo fato de que CD86 e MHCII são regulados positivamente quando monócitos/macrófagos CD14+ estão em contato com a composição.
50. Composição de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 49, caracterizada pelo fato de que monócitos/macrófagos CD14+ quando em contato com a composição amadurecem tornando-se células apresentadoras de antígeno.
51. Composição de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 50, caracterizada pelo fato de que as células T de memória quando em contato com a composição mostram produção aumentada de IFNγ em resposta ao antígeno.
52. Composição de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 to 51, caracterizada pelo fato de que as células T de memória quando em contato com a composição demonstram resposta reforçada ao antígeno.
53. Composição de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 52, caracterizada pelo fato de que células T CD8+ efetoras de memória e/ou células T CD4+ efetoras de memória são aumentadas em tumores quando em contato com a composição.
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54. Composição de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 53, caracterizada pelo fato de que a composição reforça uma resposta Th1 em um animal a que foi administrada a composição.
55. Composição de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 54, caracterizada pelo fato de que os anticorpos da composição têm menor afinidade de ligação por FcγRIIa e/ou FcγRIIb quando comparados aos mesmos anticorpos anti-TIGIT que não são afucosilados.
56. Composição de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 55, caracterizada pelo fato de que a composição medeia a fagocitose celular dependente de anticorpo (ADCP) de células que expressam TIGIT na presença de monócitos-macrófagos.
57. Composição de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 56, caracterizada pelo fato de que os anticorpos são monoclonais.
58. Composição de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 57, caracterizada pelo fato de que os anticorpos são anticorpos totalmente humanos.
59. Composição de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 58, caracterizada pelo fato de que os anticorpos são anticorpos quiméricos.
60. Composição de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 28 ou 44 a 59, caracterizada pelo fato de que os anticorpos são humanizados.
61. Composição de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 60, caracterizada pelo fato de que os anticorpos são fragmentos de anticorpo.
62. Composição de acordo com a reivindicação 61, caracterizada pelo fato de que os fragmentos de anticorpo são Fab, Fab’, F(ab’)2, scFv ou diabodies.
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63. Composição de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 62, caracterizada pelo fato de que os anticorpos são anticorpos biespecíficos.
64. Composição de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 63, caracterizada pelo fato de que os anticorpos são conjugados anticorpo-fármaco.
65. Anticorpo que se liga ao TIGIT humano (Imunorreceptor de células T com domínios Ig e ITIM), caracterizado pelo fato de que o anticorpo tem uma afinidade de ligação (KD) por TIGIT humano inferior a 5 nM e em que o anticorpo é afucosilado.
66. Anticorpo de acordo com a reivindicação 65, caracterizado pelo fato de que o anticorpo tem uma KD por TIGIT humano inferior a 1 nM.
67. Anticorpo de acordo com a reivindicação 66, caracterizado pelo fato de que o anticorpo tem uma KD por TIGIT humano inferior a 100 pM.
68. Anticorpo de acordo com qualquer uma das reivindicações 65 a 67, caracterizado pelo fato de que o anticorpo exibe reatividade cruzada com TIGIT de macaco Cynomolgus e/ou com TIGIT de camundongo.
69. Anticorpo de acordo com a reivindicação 68, caracterizado pelo fato de que o anticorpo exibe reatividade cruzada com TIGIT de macaco Cynomolgus e com TIGIT de camundongo.
70. Anticorpo de acordo com qualquer uma das reivindicações 65 a 69, caracterizado pelo fato de que o anticorpo bloqueia a ligação de CD155 a TIGIT.
71. Anticorpo de acordo com qualquer uma das reivindicações 65 a 70, caracterizado pelo fato de que o anticorpo bloqueia a ligação de CD112 a TIGIT.
72. Anticorpo de acordo com qualquer uma das reivindicações 65 a 71, caracterizado pelo fato de que o anticorpo bloqueia a ligação de
19 / 45 ambos, CD155 e CD112, a TIGIT.
73. Anticorpo de acordo com qualquer uma das reivindicações 65 a 72, caracterizado pelo fato de que o anticorpo compete pela ligação a TIGIT humano com um anticorpo que compreende uma região variável da cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 55 e uma região variável da cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 64.
74. Anticorpo de acordo com qualquer uma das reivindicações 65 a 73, caracterizado pelo fato de que, quando ligado a TIGIT humano, liga- se a uma ou a ambas as posições 81 e 82 de aminoácidos.
75. Anticorpo de acordo com a reivindicação 74, caracterizado pelo fato de que o anticorpo se liga a ambas as posições 81 e 82 de aminoácidos.
76. Anticorpo de acordo com a reivindicação 74 ou 75, caracterizado pelo fato de que as posições 81 e 82 de aminoácidos são Phe81 e Lys82.
77. Anticorpo de acordo com qualquer uma das reivindicações 65 a 76, caracterizado pelo fato de que o anticorpo se liga a um epítopo em TIGIT humano que compreende uma ou ambas as posições 81 e 82 de aminoácidos.
78. Anticorpo que se liga ao TIGIT humano, caracterizado pelo fato de que, quando ligado a TIGIT humano, liga-se a uma ou a ambas as posições 81 e 82 de aminoácidos e em que o anticorpo é afucosilado.
79. Anticorpo de acordo com a reivindicação 78, caracterizado pelo fato de que o anticorpo se liga a ambas as posições 81 e 82 de aminoácidos.
80. Anticorpo de acordo com a reivindicação 78 ou 79, caracterizado pelo fato de que as posições 81 e 82 de aminoácidos são Phe81 e Lys82.
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81. Anticorpo que se liga ao TIGIT humano, caracterizado pelo fato de que o anticorpo se liga a um epítopo em TIGIT humano que compreende uma ou ambas as posições 81 e 82 de aminoácidos e em que o anticorpo é afucosilado.
82. Anticorpo de acordo com a reivindicação 77 ou 81, caracterizado pelo fato de que o epítopo compreende Phe na posição 81.
83. Anticorpo de acordo com a reivindicação 77, 81 ou 82, caracterizado pelo fato de que o epítopo compreende Lys ou Ser na posição
82.
84. Anticorpo de acordo com qualquer uma das reivindicações 77 ou 81 a 83, caracterizado pelo fato de que o epítopo compreende Phe na posição 81 e Lys ou Ser na posição 82.
85. Anticorpo de acordo com a reivindicação 84, caracterizado pelo fato de que o epítopo compreende Phe81 e Lys82.
86. Anticorpo de acordo com qualquer uma das reivindicações 77 ou 81 a 85, caracterizado pelo fato de que o epítopo é um epítopo descontínuo.
87. Anticorpo de acordo com qualquer uma das reivindicações 77 ou 81 a 86, caracterizado pelo fato de que o anticorpo se liga a um epítopo em TIGIT humano que compreende ainda uma ou mais das posições de aminoácidos 51, 52, 53, 54, 55, 73, 74, 75, 76, 77, 79, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92 ou 93.
88. Anticorpo de acordo com a reivindicação 87, caracterizado pelo fato de que o epítopo compreende ainda um ou mais resíduos de aminoácidos selecionados a partir do grupo que consiste em Thr51, Ala52, Gln53, Val54, Thr55, Leu73, Gly74, Trp75, His76, Ile77, Pro79, Asp83, Arg84, Val85, Ala86, Pro87, Gly88, Pro89, Gly90, Leu91, Gly92 e Leu93.
89. Anticorpo de acordo com a reivindicação 88, caracterizado pelo fato de que o epítopo compreende os resíduos de aminoácidos Thr51,
21 / 45 Ala52, Gln53, Val54, Thr55, Gly74, Trp75, His76, Ile77, Phe81, Lys82, Pro87, Gly88, Pro89, Gly90, Leu91, Gly92 e Leu93.
90. Anticorpo de acordo com a reivindicação 88, caracterizado pelo fato de que o epítopo compreende os resíduos de aminoácidos Ala52, Gln53, Leu73, Gly74, Trp75, Pro79, Phe81, Lys82, Asp83, Arg84, Val85 e Ala86.
91. Anticorpo de acordo com qualquer uma das reivindicações 77 ou 81 a 90, caracterizado pelo fato de que o epítopo compreende a sequência ICNADLGWHISPSFK (SEQ ID NO: 258).
92. Anticorpo de acordo com qualquer uma das reivindicações 65 a 91, caracterizado pelo fato de que TIGIT humano compreende a sequência de SEQ ID NO: 218.
93. Anticorpo de acordo com qualquer uma das reivindicações 65 a 92, caracterizado pelo fato de que o anticorpo compreende uma ou mais dentre: (a) uma CDR1 da cadeia pesada compreendendo uma sequência selecionada dentre SEQ ID NO:4, SEQ ID NO:22, SEQ ID NO:40, SEQ ID NO:58, SEQ ID NO:76, SEQ ID NO:94, SEQ ID NO:112, SEQ ID NO:130, SEQ ID NO:148, SEQ ID NO:166, SEQ ID NO:184, SEQ ID NO:202, SEQ ID NO:221, SEQ ID NO:224, SEQ ID NO:226, SEQ ID NO:231, SEQ ID NO:233, SEQ ID NO:239, SEQ ID NO:243, SEQ ID NO:283, SEQ ID NO:284, SEQ ID NO:293, SEQ ID NO:294, SEQ ID NO:289 e SEQ ID NO:290; (b) uma CDR2 da cadeia pesada compreendendo uma sequência selecionada dentre SEQ ID NO:6, SEQ ID NO:24, SEQ ID NO:42, SEQ ID NO:60, SEQ ID NO:78, SEQ ID NO:96, SEQ ID NO:114, SEQ ID NO:132, SEQ ID NO:150, SEQ ID NO:168, SEQ ID NO:186, SEQ ID NO:204, SEQ ID NO:222, SEQ ID NO:225, SEQ ID NO:227, SEQ ID NO:229, SEQ ID NO:232, SEQ ID NO:234, SEQ ID NO:238, SEQ ID
22 / 45 NO:240, SEQ ID NO:285, SEQ ID NO:297, SEQ ID NO:291 e SEQ ID NO:295; (c) uma CDR3 da cadeia pesada compreendendo uma sequência selecionada dentre SEQ ID NO:8, SEQ ID NO:26, SEQ ID NO:44, SEQ ID NO:62, SEQ ID NO:80, SEQ ID NO:98, SEQ ID NO:116, SEQ ID NO:134, SEQ ID NO:152, SEQ ID NO:170, SEQ ID NO:188, SEQ ID NO:206, SEQ ID NO:223, SEQ ID NO:228, SEQ ID NO:230, SEQ ID NO:235, SEQ ID NO:236, SEQ ID NO:237, SEQ ID NO:241, SEQ ID NO:242, SEQ ID NO:244, SEQ ID NO:286, SEQ ID NO:292 e SEQ ID NO:296; (d) uma CDR1 da cadeia leve compreendendo uma sequência selecionada dentre SEQ ID NO:13, SEQ ID NO:31, SEQ ID NO:49, SEQ ID NO:67, SEQ ID NO:85, SEQ ID NO:103, SEQ ID NO:121, SEQ ID NO:139, SEQ ID NO:157, SEQ ID NO:175, SEQ ID NO:193, SEQ ID NO:211 e SEQ ID NO:287; (e) uma CDR2 da cadeia leve compreendendo uma sequência selecionada dentre SEQ ID NO:15, SEQ ID NO:33, SEQ ID NO:51, SEQ ID NO:69, SEQ ID NO:87, SEQ ID NO:105, SEQ ID NO:123, SEQ ID NO:141, SEQ ID NO:159, SEQ ID NO:177, SEQ ID NO:195, SEQ ID NO:213 e SEQ ID NO:288; ou (f) uma CDR3 da cadeia leve compreendendo uma sequência selecionada dentre SEQ ID NO:17, SEQ ID NO:35, SEQ ID NO:53, SEQ ID NO:71, SEQ ID NO:89, SEQ ID NO:107, SEQ ID NO:125, SEQ ID NO:143, SEQ ID NO:161, SEQ ID NO:179, SEQ ID NO:197 e SEQ ID NO:215.
94. Anticorpo de acordo com a reivindicação 93, caracterizado pelo fato de que o anticorpo compreende: (a) uma sequência de CDR1 da cadeia pesada compreendendo uma sequência de aminoácidos selecionada dentre SEQ ID NO:58, SEQ ID NO:283, SEQ ID NO:284, SEQ ID NO:224, SEQ ID NO:293, SEQ ID
23 / 45 NO:294, SEQ ID NO:226, SEQ ID NO:289 e SEQ ID NO:290; (b) uma sequência de CDR2 da cadeia pesada compreendendo uma sequência de aminoácidos selecionada dentre SEQ ID NO:60, SEQ ID NO:285, SEQ ID NO:225, SEQ ID NO:297, SEQ ID NO:227, SEQ ID NO:291, SEQ ID NO:229 e SEQ ID NO:295; (c) uma sequência de CDR3 da cadeia pesada compreendendo uma sequência de aminoácidos selecionada dentre SEQ ID NO:62, SEQ ID NO:286, SEQ ID NO:228, SEQ ID NO:292, SEQ ID NO:230 e SEQ ID NO:296; (d) uma sequência de CDR1 da cadeia leve compreendendo uma sequência de aminoácidos selecionada dentre SEQ ID NO:67 e SEQ ID NO:287; (e) uma sequência de CDR2 da cadeia leve compreendendo uma sequência de aminoácidos selecionada dentre SEQ ID NO:69 e SEQ ID NO:288; e/ou (f) uma sequência de CDR3 da cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:71.
95. Anticorpo de acordo com a reivindicação 94, caracterizado pelo fato de que o anticorpo compreende uma CDR1, CDR2 e CDR3 da cadeia pesada e uma CDR1, CDR2 e CDR3 da cadeia leve compreendendo as sequências de: (a) SEQ ID NOs: 4, 6, 8, 13, 15 e 17, respectivamente; ou (b) SEQ ID NOs: 22, 24, 26, 31, 33 e 35, respectivamente; ou (c) SEQ ID NOs: 40, 42, 44, 49, 51 e 53, respectivamente; ou (d) SEQ ID NOs: 58, 60, 62, 67, 69 e 71, respectivamente; ou (e) SEQ ID NOs: 76, 78, 80, 85, 87 e 89, respectivamente; ou (f) SEQ ID NOs: 94, 96, 98, 103, 105 e 107, respectivamente; ou (g) SEQ ID NOs: 112, 114, 116, 121, 123 e 125,
24 / 45 respectivamente; ou (h) SEQ ID NOs: 130, 132, 134, 139, 141 e 143, respectivamente; ou (i) SEQ ID NOs: 148, 150, 152, 157, 159 e 161, respectivamente; ou (j) SEQ ID NOs: 166, 168, 170, 175, 177 e 179, respectivamente; ou (k) SEQ ID NOs: 184, 186, 188, 193, 195 e 197, respectivamente; ou (l) SEQ ID NOs: 202, 204, 206, 211, 213 e 215, respectivamente; ou (m) SEQ ID NOs: 221, 222, 223, 13, 15 e 17, respectivamente; ou (n) SEQ ID NOs: 224, 225, 62, 67, 69 e 71, respectivamente; ou (o) SEQ ID NOs: 226, 227, 228, 67, 69 e 71, respectivamente; ou (p) SEQ ID NOs: 224, 229, 230, 67, 69 e 71, respectivamente; ou (q) SEQ ID NOs: 224, 227, 230, 67, 69 e 71, respectivamente; ou (r) SEQ ID NOs: 231, 232, 235, 103, 105 e 107, respectivamente; ou (s) SEQ ID NOs: 233, 234, 236, 103, 105 e 107, respectivamente; ou (t) SEQ ID NOs: 233, 234, 237, 103, 105 e 107, respectivamente; ou (u) SEQ ID NOs: 166, 238, 170, 175, 177 e 179, respectivamente; ou
25 / 45 (v) SEQ ID NOs: 239, 240, 170, 175, 177 e 179, respectivamente; ou (w) SEQ ID NOs: 239, 240, 241, 175, 177 e 179, respectivamente; ou (x) SEQ ID NOs: 239, 240, 242, 175, 177 e 179, respectivamente; ou (y) SEQ ID NOs: 243, 168, 244, 175, 177 e 179, respectivamente.
96. Anticorpo de acordo com qualquer uma das reivindicações 65 a 95, caracterizado pelo fato de que o anticorpo compreende uma CDR1, CDR2 e CDR3 da cadeia pesada e uma CDR1, CDR2 e CDR3 da cadeia leve compreendendo as sequências de: (a) SEQ ID NOs: 58, 60, 62, 67, 69 e 71, respectivamente; ou (b) SEQ ID NOs: 283, 285, 62, 287, 288 e 71, respectivamente; ou (c) SEQ ID NOs: 284, 60, 286, 67, 69 e 71, respectivamente.
97. Anticorpo de acordo com qualquer uma das reivindicações 65 a 96, caracterizado pelo fato de que o anticorpo compreende: (a) uma região variável da cadeia pesada compreendendo uma sequência de aminoácidos com pelo menos 90% de identidade de sequência com SEQ ID NO:1, SEQ ID NO:19, SEQ ID NO:37, SEQ ID NO:55, SEQ ID NO:73, SEQ ID NO:91, SEQ ID NO:109, SEQ ID NO:127, SEQ ID NO:145, SEQ ID NO:163, SEQ ID NO:181, SEQ ID NO:199, SEQ ID NO:245, SEQ ID NO:246, SEQ ID NO:247, SEQ ID NO:248, SEQ ID NO:249, SEQ ID NO:250, SEQ ID NO:251, SEQ ID NO:252, SEQ ID NO:253, SEQ ID NO:254, SEQ ID NO:255, SEQ ID NO:256 ou SEQ ID NO:257; e/ou (b) uma região variável da cadeia leve compreendendo uma sequência de aminoácidos com pelo menos 90% de identidade de sequência com SEQ ID NO:10, SEQ ID NO:28, SEQ ID NO:46, SEQ ID NO:64, SEQ
26 / 45 ID NO:82, SEQ ID NO:100, SEQ ID NO:118, SEQ ID NO:136, SEQ ID NO:154, SEQ ID NO:172, SEQ ID NO:190 ou SEQ ID NO:208.
98. Anticorpo de acordo com qualquer uma das reivindicações 65 a 97, caracterizado pelo fato de que o anticorpo compreende: (a) uma região variável da cadeia pesada compreendendo uma sequência de aminoácidos com pelo menos 90% de identidade de sequência com SEQ ID NO:1 ou SEQ ID NO:245 e uma região variável da cadeia leve compreendendo uma sequência de aminoácidos com pelo menos 90% de identidade de sequência com SEQ ID NO:10; ou (b) uma região variável da cadeia pesada compreendendo uma sequência de aminoácidos com pelo menos 90% de identidade de sequência com SEQ ID NO:19 e uma região variável da cadeia leve compreendendo uma sequência de aminoácidos com pelo menos 90% de identidade de sequência com SEQ ID NO:28; ou (c) uma região variável da cadeia pesada compreendendo uma sequência de aminoácidos com pelo menos 90% de identidade de sequência com SEQ ID NO:37 e uma região variável da cadeia leve compreendendo uma sequência de aminoácidos com pelo menos 90% de identidade de sequência com SEQ ID NO:46; ou (d) uma região variável da cadeia pesada compreendendo uma sequência de aminoácidos com pelo menos 90% de identidade de sequência com qualquer uma dentre SEQ ID NO:55, SEQ ID NO:246, SEQ ID NO:247, SEQ ID NO:248 ou SEQ ID NO:249 e uma região variável da cadeia leve compreendendo uma sequência de aminoácidos com pelo menos 90% de identidade de sequência com SEQ ID NO:64; ou (e) uma região variável da cadeia pesada compreendendo uma sequência de aminoácidos com pelo menos 90% de identidade de sequência com SEQ ID NO:73 e uma região variável da cadeia leve compreendendo uma sequência de aminoácidos com pelo menos 90% de identidade de
27 / 45 sequência com SEQ ID NO:82; ou (f) uma região variável da cadeia pesada compreendendo uma sequência de aminoácidos com pelo menos 90% de identidade de sequência com qualquer uma dentre SEQ ID NO:91, SEQ ID NO:250, SEQ ID NO:251 ou SEQ ID NO:252 e uma região variável da cadeia leve compreendendo uma sequência de aminoácidos com pelo menos 90% de identidade de sequência com SEQ ID NO:100; ou (g) uma região variável da cadeia pesada compreendendo uma sequência de aminoácidos com pelo menos 90% de identidade de sequência com SEQ ID NO:109 e uma região variável da cadeia leve compreendendo uma sequência de aminoácidos com pelo menos 90% de identidade de sequência com SEQ ID NO:118; ou (h) uma região variável da cadeia pesada compreendendo uma sequência de aminoácidos com pelo menos 90% de identidade de sequência com SEQ ID NO:127 e uma região variável da cadeia leve compreendendo uma sequência de aminoácidos com pelo menos 90% de identidade de sequência com SEQ ID NO:136; ou (i) uma região variável da cadeia pesada compreendendo uma sequência de aminoácidos com pelo menos 90% de identidade de sequência com SEQ ID NO:145 e uma região variável da cadeia leve compreendendo uma sequência de aminoácidos com pelo menos 90% de identidade de sequência com SEQ ID NO:154; ou (j) uma região variável da cadeia pesada compreendendo uma sequência de aminoácidos com pelo menos 90% de identidade de sequência com qualquer uma dentre SEQ ID NO:163, SEQ ID NO:253, SEQ ID NO:254, SEQ ID NO:255, SEQ ID NO:256 ou SEQ ID NO:257 e uma região variável da cadeia leve compreendendo uma sequência de aminoácidos com pelo menos 90% de identidade de sequência com SEQ ID NO:172; ou (k) uma região variável da cadeia pesada compreendendo uma
28 / 45 sequência de aminoácidos com pelo menos 90% de identidade de sequência com SEQ ID NO:181 e uma região variável da cadeia leve compreendendo uma sequência de aminoácidos com pelo menos 90% de identidade de sequência com SEQ ID NO:190; ou (l) uma região variável da cadeia pesada compreendendo uma sequência de aminoácidos com pelo menos 90% de identidade de sequência com SEQ ID NO:199 e uma região variável da cadeia leve compreendendo uma sequência de aminoácidos com pelo menos 90% de identidade de sequência com SEQ ID NO:208.
99. Anticorpo de acordo com a reivindicação 98, caracterizado pelo fato de que o anticorpo compreende: (a) uma região variável da cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:1 ou SEQ ID NO:245 e uma região variável da cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:10; ou (b) uma região variável da cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:19 e uma região variável da cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:28; ou (c) uma região variável da cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:37 e uma região variável da cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:46; ou (d) uma região variável da cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos de qualquer uma dentre SEQ ID NO:55, SEQ ID NO:246, SEQ ID NO:247, SEQ ID NO:248 ou SEQ ID NO:249 e uma região variável da cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:64; ou (e) uma região variável da cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:73 e uma região variável da cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:82; ou
29 / 45
(f) uma região variável da cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos de qualquer uma dentre SEQ ID NO:91, SEQ ID NO:250, SEQ ID NO:251 ou SEQ ID NO:252 e uma região variável da cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:100; ou (g) uma região variável da cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:109 e uma região variável da cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:118; ou (h) uma região variável da cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:127 e uma região variável da cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:136; ou (i) uma região variável da cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:145 e uma região variável da cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:154; ou (j) uma região variável da cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos de qualquer uma dentre SEQ ID NO:163, SEQ ID NO:253, SEQ ID NO:254, SEQ ID NO:255, SEQ ID NO:256 ou SEQ ID NO:257 e uma região variável da cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:172; ou (k) uma região variável da cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:181 e uma região variável da cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:190; ou (l) uma região variável da cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:199 e uma região variável da cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:208.
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100. Anticorpo de acordo com qualquer uma das reivindicações 65 a 99, caracterizado pelo fato de que o anticorpo compreende uma região variável da cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:55 e uma região variável da cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:64.
101. Anticorpo de acordo com qualquer uma das reivindicações 65 a 100, caracterizado pelo fato de que o anticorpo é um anticorpo IgG.
102. Anticorpo de acordo com a reivindicação 101, caracterizado pelo fato de que o anticorpo é um anticorpo IgG1 ou um anticorpo IgG3.
103. Anticorpo de acordo com qualquer uma das reivindicações 65 a 102, caracterizado pelo fato de que o anticorpo compreende uma cadeia pesada compreendendo uma sequência de aminoácidos selecionada dentre SEQ ID NOs: 260, 262, 264, 266, 268, 270 e 272; e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 274.
104. Anticorpo de acordo com a reivindicação 103, caracterizado pelo fato de que o anticorpo compreende uma cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOs: 260; e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 274.
105. Anticorpo de acordo com a reivindicação 103, caracterizado pelo fato de que o anticorpo compreende uma cadeia pesada que consiste na sequência de aminoácidos de SEQ ID NOs: 260; e uma cadeia leve que consiste na sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 274.
106. Anticorpo que se liga ao TIGIT humano, caracterizado pelo fato de que o anticorpo compreende uma cadeia pesada compreendendo uma sequência de aminoácidos selecionada dentre SEQ ID NOs: 260, 262, 264, 266, 268, 270 e 272; e uma cadeia leve compreendendo a sequência de
31 / 45 aminoácidos de SEQ ID NO: 274.
107. Anticorpo que se liga ao TIGIT humano, caracterizado pelo fato de que o anticorpo compreende uma cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOs: 260; e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 274.
108. Anticorpo que se liga ao TIGIT humano, caracterizado pelo fato de que o anticorpo compreende uma cadeia pesada que consiste na sequência de aminoácidos de SEQ ID NOs: 260; e uma cadeia leve que consiste na sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 274.
109. Anticorpo de acordo com qualquer uma das reivindicações 65 a 108, caracterizado pelo fato de que o anticorpo exibe sinergia com um anticorpo anti-PD-1 ou um anticorpo anti-PD-L1.
110. Anticorpo de acordo com a reivindicação 109, caracterizado pelo fato de que a sinergia é determinada por meio de um ensaio que compreende colocar em contato uma cocultura compreendendo (i) células Jurkat efetoras que expressam PD-1, TIGIT e CD226, em que as células Jurkat efetoras compreendem um gene repórter luciferase direcionado pelo promotor de IL-2; e (ii) células CHO-K1 apresentadoras de antígeno artificiais (aAPCs) expressando um ativador de TCR, PD-L1 e CD155; com a composição e um anticorpo anti-PD-1 ou um anticorpo anti-PD-L1.
111. Anticorpo de acordo com qualquer uma das reivindicações 65 a 110, caracterizado pelo fato de que células T reguladoras (Treg) são depletadas de PBMCs humanas quando em contato com o anticorpo.
112. Anticorpo de acordo com qualquer uma das reivindicações 65 a 111, caracterizado pelo fato de que a expressão de MCP1, IL-8 e MIP1α é aumentada em PBMCs humanas quando em contato com o anticorpo.
113. Anticorpo de acordo com qualquer uma das
32 / 45 reivindicações 65 a 112, caracterizado pelo fato de que monócitos/macrófagos são ativados quando estão em contato com o anticorpo.
114. Anticorpo de acordo com qualquer uma das reivindicações 65 a 113, caracterizado pelo fato de que CD86 e MHCII são regulados positivamente quando monócitos/macrófagos CD14+ estão em contato com o anticorpo.
115. Anticorpo de acordo com qualquer uma das reivindicações 65 a 114, caracterizado pelo fato de que monócitos/macrófagos CD14+ quando em contato com o anticorpo amadurecem tornando-se células apresentadoras de antígeno.
116. Anticorpo de acordo com qualquer uma das reivindicações 65 a 115, caracterizado pelo fato de que as células T de memória quando em contato com o anticorpo mostram produção aumentada de IFNγ em resposta ao antígeno.
117. Anticorpo de acordo com qualquer uma das reivindicações 65 a 116, caracterizado pelo fato de que as células T de memória quando em contato com o anticorpo demonstram resposta reforçada ao antígeno.
118. Anticorpo de acordo com qualquer uma das reivindicações 65 a 117, caracterizado pelo fato de que células T CD8+ efetoras de memória e/ou células T CD4+ efetoras de memória são aumentadas em tumores quando estão em contato com o anticorpo.
119. Anticorpo de acordo com qualquer uma das reivindicações 65 a 118, caracterizado pelo fato de que o anticorpo reforça uma resposta Th1 em um animal a que foi administrado o anticorpo.
120. Anticorpo de acordo com qualquer uma das reivindicações 65 a 119, caracterizado pelo fato de que o anticorpo tem menor afinidade de ligação por FcγRIIa e/ou FcγRIIb quando comparado ao mesmo anticorpo anti-TIGIT que não é afucosilado.
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121. Anticorpo de acordo com qualquer uma das reivindicações 65 a 120, caracterizado pelo fato de que a composição medeia a fagocitose celular dependente de anticorpo (ADCP) de células que expressam TIGIT na presença de monócitos-macrófagos.
122. Anticorpo de acordo com qualquer uma das reivindicações 65 a 121, caracterizado pelo fato de que o anticorpo é monoclonal.
123. Anticorpo de acordo com qualquer uma das reivindicações 65 a 122, caracterizado pelo fato de que o anticorpo é um anticorpo totalmente humano.
124. Anticorpo de acordo com qualquer uma das reivindicações 65 a 123, caracterizado pelo fato de que o anticorpo é um anticorpo quimérico.
125. Anticorpo de acordo com qualquer uma das reivindicações 65 a 92 ou109 a 124, caracterizado pelo fato de que o anticorpo é humanizado.
126. Anticorpo de acordo com qualquer uma das reivindicações 65 a 125, caracterizado pelo fato de que o anticorpo é um fragmento de anticorpo.
127. Anticorpo de acordo com a reivindicação 126, caracterizado pelo fato de que o fragmento de anticorpo is a Fab, a Fab’, a F(ab’)2, a scFv, ou a diabody.
128. Anticorpo de acordo com qualquer uma das reivindicações 65 a 127, caracterizado pelo fato de que o anticorpo é um anticorpo biespecífico.
129. Anticorpo de acordo com qualquer uma das reivindicações 65 a 128, caracterizado pelo fato de que o anticorpo é um conjugado anticorpo-fármaco.
130. Formulação farmacêutica, caracterizada pelo fato de que
34 / 45 compreende a composição definida em qualquer uma das reivindicações 1 a 64 ou o anticorpo definido em qualquer uma das reivindicações 65 a 129 e um veículo farmaceuticamente aceitável.
131. Polinucleotídeo isolado, caracterizado pelo fato de que codifica (i) a cadeia pesada do anticorpo definido em qualquer uma das reivindicações 106 a 108; (ii) a cadeia leve do anticorpo definido em qualquer uma das reivindicações 106 a 108; ou (iii) a cadeia pesada e a cadeia leve do anticorpo como definido em qualquer uma das reivindicações 106 a 108.
132. Polinucleotídeo isolado de acordo com a reivindicação 131, caracterizado pelo fato de que o polinucleotídeo compreende (i) uma sequência de nucleotídeos selecionada dentre SEQ ID NOs: 259, 261, 163, 265, 267, 269 e 271; ou (ii) uma sequência de nucleotídeos de SEQ ID NO: 273; ou (iii) uma sequência de nucleotídeos selecionada dentre SEQ ID NOs: 259, 261, 263, 265, 267, 269 e 271 e uma sequência de nucleotídeos de SEQ ID NO: 273.
133. Vetor, caracterizado pelo fato de que compreende o polinucleotídeo como definido na reivindicação 131 ou 132.
134. Célula hospedeira isolada, caracterizada pelo fato de que compreende o polinucleotídeo isolado como definido na reivindicação 131 ou 132 ou o vetor como definido na reivindicação 133.
135. Célula hospedeira isolada, caracterizada pelo fato de que expressa o anticorpo como definido em qualquer uma das reivindicações 106 a 108.
136. Célula hospedeira de acordo com a reivindicação 134 ou 135, caracterizada pelo fato de que é projetada para produzir anticorpos afucosilados.
137. Método para a produção de um anticorpo que se liga ao TIGIT humano, caracterizado pelo fato de que compreende incubar a célula hospedeira como definida em qualquer uma das reivindicações 134 a 136 sob
35 / 45 condições adequadas para a produção do anticorpo.
138. Método de acordo com a reivindicação 137, caracterizado pelo fato de que a célula hospedeira é projetada para produzir anticorpos afucosilados.
139. Método de acordo com a reivindicação 137, caracterizado pelo fato de que a célula hospedeira é cultivada na presença de um análogo de fucose sob condições adequadas para a produção de anticorpos afucosilados.
140. Método de acordo com qualquer uma das reivindicações 137 a 139, caracterizado pelo fato de que compreende ainda isolar os anticorpos.
141. Composição de anticorpos isolados que se ligam a TIGIT humano, caracterizada pelo fato de que pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98% ou pelo menos 99% dos anticorpos na composição são afucosilados, em que os anticorpos são produzidos pelo método como definido em qualquer uma das reivindicações 138 a 140.
142. Composição de anticorpos isolados que se ligam a TIGIT humano, caracterizada pelo fato de que pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98% ou pelo menos 99% dos anticorpos na composição são afucosilados, em que os anticorpos são produzidos pelo método que compreende incubar a célula hospedeira, como definida na reivindicação 134 ou 135, sob condições adequadas para a produção de anticorpos afucosilados e isolar os anticorpos para formar a composição de anticorpos isolados.
143. Composição de acordo com a reivindicação 142, caracterizada pelo fato de que a célula hospedeira é projetada para produzir anticorpos afucosilados.
36 / 45
144. Composição de acordo com a reivindicação 142, caracterizada pelo fato de que a célula hospedeira é cultivada na presença de um análogo de fucose sob condições adequadas para a produção de anticorpos afucosilados.
145. Célula hospedeira, caracterizada pelo fato de que compreende um polinucleotídeo compreendendo uma sequência de nucleotídeos que codifica (i) os anticorpos da composição definida em qualquer uma das reivindicações 1 a 63 ou (ii) o anticorpo com definido em qualquer uma das reivindicações 65 a 128, em que a célula hospedeira é projetada para produzir anticorpos afucosilados.
146. Célula hospedeira de acordo com a reivindicação 145, caracterizada pelo fato de que o polinucleotídeo é um vetor.
147. Célula hospedeira, caracterizada pelo fato de que expressa (i) os anticorpos da composição como definida em qualquer uma das reivindicações 1 a 63 ou (ii) o anticorpo como definido em qualquer uma das reivindicações 65 a 128, em que a célula hospedeira é projetada para produzir anticorpos afucosilados.
148. Célula hospedeira de acordo com qualquer uma das reivindicações 145 a 147, caracterizada pelo fato de que a célula hospedeira compreende: (a) a sequência de nucleotídeos de SEQ ID NO:2, SEQ ID NO:20, SEQ ID NO:38, SEQ ID NO:56, SEQ ID NO:74, SEQ ID NO:92, SEQ ID NO:110, SEQ ID NO:128, SEQ ID NO:146, SEQ ID NO:164, SEQ ID NO:182, SEQ ID NO:200, SEQ ID NO:259, SEQ ID NO:265, SEQ ID NO:267, SEQ ID NO:269 ou SEQ ID NO:271; e/ou (b) a sequência de nucleotídeos de SEQ ID NO:11, SEQ ID NO:29, SEQ ID NO:47, SEQ ID NO:65, SEQ ID NO:83, SEQ ID NO:101, SEQ ID NO:119, SEQ ID NO:137, SEQ ID NO:155, SEQ ID NO:173, SEQ ID NO:191, SEQ ID NO:209 ou SEQ ID NO:273.
37 / 45
149. Método para a produção de anticorpos afucosilados que se ligam a TIGIT, caracterizado pelo fato de que compreende cultivar a célula hospedeira definida em qualquer uma das reivindicações 145 a 148 sob condições adequadas para a produção dos anticorpos afucosilados.
150. Método para a produção de anticorpos afucosilados que se ligam a TIGIT, caracterizado pelo fato de que compreende cultivar uma célula hospedeira na presença de um análogo de fucose sob condições adequadas para a produção de anticorpos afucosilados, em que a célula hospedeira compreende um polinucleotídeo compreendendo uma sequência de nucleotídeos que codifica (i) os anticorpos da composição como definidos em qualquer uma das reivindicações 1 a 63 ou (ii) o anticorpo como definido em qualquer uma das reivindicações 65 a 128.
151. Método de acordo com a reivindicação 150, caracterizado pelo fato de que o polinucleotídeo é um vetor.
152. Método para a produção de anticorpos afucosilados que se ligam a TIGIT, caracterizado pelo fato de que compreende cultivar uma célula hospedeira na presença de um análogo de fucose sob condições adequadas para a produção de anticorpos afucosilados, em que a célula hospedeira expressa (i) os anticorpos da composição como definida em qualquer uma das reivindicações 1 a 63 ou (ii) o anticorpo como definido em qualquer uma das reivindicações 65 a 128.
153. Método de acordo com qualquer uma das reivindicações 150 a 152, caracterizado pelo fato de que a célula hospedeira compreende: (a) a sequência de nucleotídeos de SEQ ID NO:2, SEQ ID NO:20, SEQ ID NO:38, SEQ ID NO:56, SEQ ID NO:74, SEQ ID NO:92, SEQ ID NO:110, SEQ ID NO:128, SEQ ID NO:146, SEQ ID NO:164, SEQ ID NO:182, SEQ ID NO:200, SEQ ID NO:259, SEQ ID NO:265, SEQ ID NO:267, SEQ ID NO:269 ou SEQ ID NO:271; e/ou (b) a sequência de nucleotídeos de SEQ ID NO:11, SEQ ID
38 / 45 NO:29, SEQ ID NO:47, SEQ ID NO:65, SEQ ID NO:83, SEQ ID NO:101, SEQ ID NO:119, SEQ ID NO:137, SEQ ID NO:155, SEQ ID NO:173, SEQ ID NO:191, SEQ ID NO:209 ou SEQ ID NO:273.
154. Método de acordo com qualquer uma das reivindicações 150 a 153, caracterizado pelo fato de que o análogo de fucose é 2- fluorofucose.
155. Método de acordo com qualquer uma das reivindicações 149 a 154, caracterizado pelo fato de que compreende ainda isolar os anticorpos afucosilados.
156. Composição de anticorpos isolados que se ligam a TIGIT humano, caracterizada pelo fato de que pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98% ou pelo menos 99% dos anticorpos na composição são afucosilados, em que os anticorpos são produzidos pelo método como definido em qualquer uma das reivindicações 149 a 155.
157. Composição de anticorpos isolados que se ligam a TIGIT humano, caracterizada pelo fato de que pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98% ou pelo menos 99% dos anticorpos na composição são afucosilados, em que os anticorpos são produzidos por um método que compreende incubar a célula hospedeira, como definida em qualquer uma das reivindicações 145 a 147, sob condições adequadas para a produção de anticorpos afucosilados e isolar os anticorpos para formar a composição de anticorpos isolados.
158. Composição de anticorpos isolados que se ligam a TIGIT humano, caracterizada pelo fato de que pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98% ou pelo menos 99% dos
39 / 45 anticorpos na composição são afucosilados, em que os anticorpos são produzidos por um método que compreende cultivar uma célula hospedeira na presença de um análogo de fucose sob condições adequadas para a produção de anticorpos afucosilados, em que a célula hospedeira compreende um polinucleotídeo compreendendo uma sequência de nucleotídeos que codifica (i) os anticorpos da composição como definida em qualquer uma das reivindicações 1 a 63 ou (ii) o anticorpo como definido em qualquer uma das reivindicações 65 a 128.
159. Composição de anticorpos isolados que se ligam a TIGIT humano, caracterizada pelo fato de que pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98% ou pelo menos 99% dos anticorpos na composição são afucosilados, em que os anticorpos são produzidos por um método que compreende cultivar uma célula hospedeira na presença de um análogo de fucose sob condições adequadas para a produção de anticorpos afucosilados, em que a célula hospedeira expressa (i) os anticorpos da composição como definida em qualquer uma das reivindicações 1 a 63 ou (ii) o anticorpo como definido em qualquer uma das reivindicações 65 a 128.
160. Kit, caracterizado pelo fato de que compreende: a composição como definida em qualquer uma das reivindicações 1 a 64, o anticorpo como definido em qualquer uma das reivindicações 65 a 129 ou a composição farmacêutica como definida na reivindicação 130; e um agente terapêutico adicional.
161. Kit de acordo com a reivindicação 160, caracterizado pelo fato de que o agente terapêutico adicional é um agente antineoplásico.
162. Kit de acordo com a reivindicação 160 ou reivindicação 161, caracterizado pelo fato de que o agente terapêutico adicional é um
40 / 45 anticorpo.
163. Kit de acordo com qualquer uma das reivindicações 160 a 162, caracterizado pelo fato de que o agente terapêutico adicional é um antagonista ou um inibidor de um coinibidor de células T; um agonista de um coativador de células T; uma citocina imunoestimuladora; ou SGN-2FF.
164. Kit de acordo com qualquer uma das reivindicações 160 a 163, caracterizado pelo fato de que o agente terapêutico adicional se liga a uma proteína selecionada dentre CD25, PD-1, PD-L1, Tim3, Lag3, CTLA4, 41BB, OX40, CD3, CD40, CD47M, GM-CSF, CSF1R, TLR, STING, RIGI, TAM receptor quinase, NKG2A, NKG2D, GD2, HER2, EGFR, PDGFRα, SLAMF7, VEGF, CTLA-4, CD20, cCLB8, KIR e CD52.
165. Kit de acordo com qualquer uma das reivindicações 160 a 164, caracterizado pelo fato de que o agente terapêutico adicional é selecionado dentre um anticorpo anti-CD25, anticorpo anti-PD-1, anticorpo anti-PD-L1, anticorpo anti-Tim3, anticorpo anti-Lag3, anticorpo anti-CTLA4, anticorpo anti-41BB, anticorpo anti-OX40, anticorpo anti-CD3, anticorpo anti-CD40, anticorpo anti-CD47M, anticorpo anti-CSF1R, anticorpo anti- TLR, anticorpo anti-STING, anticorpo anti-RIGI, anticorpo anti-receptor quinase TAM, anticorpo anti-NKG2A, um anticorpo anti-NKG2D, um anticorpo anti-GD2, um anticorpo anti-HER2, um anticorpo anti-EGFR, um anticorpo anti-PDGFR-α, um anticorpo anti-SLAMF7, um anticorpo anti- VEGF, um anticorpo anti-CTLA-4, um anticorpo anti-CD20, um anticorpo anti-cCLB8, um anticorpo anti-KIR e um anticorpo anti-CD52.
166. Kit de acordo com qualquer uma das reivindicações 160 a 165, caracterizado pelo fato de que o agente terapêutico adicional compreende uma citocina selecionada dentre IL-15, IL-21, IL-2, GM-CSF, M-CSF, G- CSF, IL-1, IL-3, IL-12 e IFNγ.
167. Kit de acordo com qualquer uma das reivindicações 160 a 165, caracterizado pelo fato de que o agente terapêutico adicional é
41 / 45 selecionado dentre SEA-CD40, avelumabe, durvalumabe, nivolumabe, pembrolizumabe, pidilizumabe, atezolizumabe, Hul4.18K322A, Hu3F8, dinituximabe, trastuzumabe, cetuximabe, olaratumabe, necitumumabe, elotuzumabe, ramucirumabe, pertuzumabe, ipilimumabe, bevacizumabe, rituximabe, obinutuzumabe, siltuximabe, ofatumumabe, lirilumabe e alentuzumabe.
168. Kit de acordo com a reivindicação 160 ou reivindicação 161, caracterizado pelo fato de que o agente terapêutico adicional é selecionado dentre um agente alquilante (p. ex., ciclofosfamida, ifosfamida, clorambucil, bussulfano, melfalano, mecloretamina, uramustina, tiotepa, nitrosureias ou temozolomida), uma antraciclina (p. ex., doxorrubicina, adriamicina, daunorrubicina, epirrubicina ou mitoxantrona), um desorganizador do citoesqueleto (p. ex., paclitaxel ou docetaxel), um inibidor de histona desacetilase (p. ex., vorinostat ou romidepsina), um inibidor de topoisomerase (p. ex., irinotecano, topotecano, ansacrina, etoposídeo ou teniposídeo), um inibidor de quinase (p. ex., bortezomibe, erlotinibe, gefitinibe, imatinibe, vemurafenibe ou vismodegibe), um análogo de nucleosídeo ou análogo do precursor (p. ex., azacitidina, azatioprina, capecitabina, citarabina, fluorouracila, gencitabina, hidroxiureia, mercaptopurina, metotrexato ou tioguanina), um antibiótico peptídico (p. ex., actinomicina ou bleomicina), um agente à base de platina (p. ex., cisplatina, oxaloplatina ou carboplatina) ou um alcaloide de planta (p. ex., vincristina, vimblastina, vinorelbina, vindesina, podofilotoxina, paclitaxel ou docetaxel), galardina, talidomida, lenalidomida e pomalidomida.
169. Método para o tratamento de um câncer em um indivíduo, caracterizado pelo fato de que compreende administrar ao indivíduo uma quantidade terapeuticamente eficaz da composição como definida em qualquer uma das reivindicações 1 a 64, do anticorpo como definido em qualquer uma das reivindicações 65 a 129 ou da composição farmacêutica
42 / 45 como definida na reivindicação 130.
170. Método de acordo com a reivindicação 169, caracterizado pelo fato de que o câncer é um câncer que é enriquecido com a expressão de CD112 ou CD155.
171. Método de acordo com a reivindicação 169 ou 170, caracterizado pelo fato de que o câncer é um câncer que é enriquecido com células T ou células natural killer (NK) que expressam TIGIT.
172. Método de acordo com qualquer uma das reivindicações 169 a 171, caracterizado pelo fato de que o câncer é câncer de bexiga, câncer de mama, câncer de útero, câncer cervical, câncer de ovário, câncer de próstata, câncer de testículo, câncer de esôfago, câncer gastrointestinal, câncer gástrico, câncer de pâncreas, câncer colorretal, câncer de cólon, câncer de rim, carcinoma renal de células claras, câncer da cabeça e pescoço, câncer de pulmão, adenocarcinoma de pulmão, câncer de estômago, câncer de células germinativas, câncer ósseo, câncer de fígado, câncer de tireoide, câncer de pele, melanoma, neoplasia do sistema nervoso central, mesotelioma, linfoma, leucemia, leucemia linfocítica crônica, linfoma difuso de grandes células B, linfoma folicular, linfoma de Hodgkin, mieloma ou sarcoma.
173. Método de acordo com a reivindicação 172, caracterizado pelo fato de que o câncer é linfoma, leucemia, leucemia linfocítica crônica, linfoma difuso de grandes células B, linfoma folicular ou linfoma de Hodgkin.
174. Método de acordo com qualquer uma das reivindicações 169 a 173, caracterizado pelo fato de que compreende ainda administrar ao indivíduo uma quantidade terapeuticamente eficaz de um agente terapêutico adicional.
175. Método de acordo com a reivindicação 174, caracterizado pelo fato de que o agente terapêutico adicional é um agente antineoplásico.
176. Método de acordo com a reivindicação 174 ou
43 / 45 reivindicação 175, caracterizado pelo fato de que o agente terapêutico adicional é um anticorpo.
177. Método de acordo com qualquer uma das reivindicações 174 a 176, caracterizado pelo fato de que o agente terapêutico adicional é um antagonista ou um inibidor de um coinibidor de células T; um agonista de um coativador de células T; ou uma citocina imunoestimuladora; ou SGN-2FF.
178. Método de acordo com qualquer uma das reivindicações 174 a 177, caracterizado pelo fato de que o agente terapêutico adicional se liga a uma proteína selecionada dentre CD25, PD-1, PD-L1, Tim3, Lag3, CTLA4, 41BB, OX40, CD3, CD40, CD47M, GM-CSF, CSF1R, TLR, STING, RIGI, TAM receptor quinase, NKG2A, NKG2D, GD2, HER2, EGFR, PDGFRα, SLAMF7, VEGF, CTLA-4, CD20, cCLB8, KIR e CD52.
179. Método de acordo com a reivindicação 178, caracterizado pelo fato de que o agente terapêutico adicional é selecionado dentre um anticorpo anti-CD25, anticorpo anti-PD-1, anticorpo anti-PD-L1, anticorpo anti-Tim3, anticorpo anti-Lag3, anticorpo anti-CTLA4, anticorpo anti-41BB, anticorpo anti-OX40, anticorpo anti-CD3, anticorpo anti-CD40, anticorpo anti-CD47M, anticorpo anti-CSF1R, anticorpo anti-TLR, anticorpo anti- STING, anticorpo anti-RIGI, anticorpo anti-receptor quinase TAM, anticorpo anti-NKG2A, um anticorpo anti-NKG2D, um anticorpo anti-GD2, um anticorpo anti-HER2, um anticorpo anti-EGFR, um anticorpo anti-PDGFR-α, um anticorpo anti-SLAMF7, um anticorpo anti-VEGF, um anticorpo anti- CTLA-4, um anticorpo anti-CD20, um anticorpo anti-cCLB8, um anticorpo anti-KIR e um anticorpo anti-CD52.
180. Método de acordo com a reivindicação 174 ou reivindicação 175, caracterizado pelo fato de que o agente terapêutico adicional compreende uma citocina selecionada dentre IL-15, IL-21, IL-2, GM-CSF, M-CSF, G-CSF, IL-1, IL-3, IL-12 e IFNγ.
181. Método de acordo com qualquer uma das reivindicações
44 / 45 174 a 179, caracterizado pelo fato de que o agente terapêutico adicional é selecionado dentre SEA-CD40, avelumabe, durvalumabe, nivolumabe, pembrolizumabe, pidilizumabe, atezolizumabe, Hul4.18K322A, Hu3F8, dinituximabe, trastuzumabe, cetuximabe, olaratumabe, necitumumabe, elotuzumabe, ramucirumabe, pertuzumabe, ipilimumabe, bevacizumabe, rituximabe, obinutuzumabe, siltuximabe, ofatumumabe, lirilumabe e alentuzumabe. 182 Método de acordo com a reivindicação 174 ou 175, caracterizado pelo fato de que o agente terapêutico adicional é selecionado dentre um agente alquilante (p. ex., ciclofosfamida, ifosfamida, clorambucil, bussulfano, melfalano, mecloretamina, uramustina, tiotepa, nitrosureias ou temozolomida), uma antraciclina (p. ex., doxorrubicina, adriamicina, daunorrubicina, epirrubicina ou mitoxantrona), um desorganizador do citoesqueleto (p. ex., paclitaxel ou docetaxel), um inibidor de histona desacetilase (p. ex., vorinostat ou romidepsina), um inibidor de topoisomerase (p. ex., irinotecano, topotecano, ansacrina, etoposídeo ou teniposídeo), um inibidor de quinase (p. ex., bortezomibe, erlotinibe, gefitinibe, imatinibe, vemurafenibe ou vismodegibe), um análogo de nucleosídeo ou análogo do precursor (p. ex., azacitidina, azatioprina, capecitabina, citarabina, fluorouracila, gencitabina, hidroxiureia, mercaptopurina, metotrexato ou tioguanina), um antibiótico peptídico (p. ex., actinomicina ou bleomicina), um agente à base de platina (p. ex., cisplatina, oxaloplatina ou carboplatina) ou um alcaloide de planta (p. ex., vincristina, vimblastina, vinorelbina, vindesina, podofilotoxina, paclitaxel ou docetaxel), galardina, talidomida, lenalidomida e pomalidomida.
183. Método de acordo com qualquer uma das reivindicações 174 a 182, caracterizado pelo fato de que a composição, o anticorpo ou a composição farmacêutica é administrado simultaneamente com o agente terapêutico adicional.
45 / 45
184. Método de acordo com qualquer uma das reivindicações 174 a 183, caracterizado pelo fato de que a composição, o anticorpo ou a composição farmacêutica é administrado sequencialmente ao agente terapêutico adicional.
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Families Citing this family (17)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2021113831A1 (en) 2019-12-05 2021-06-10 Compugen Ltd. Anti-pvrig and anti-tigit antibodies for enhanced nk-cell based tumor killing
MX2022012621A (es) 2020-04-10 2023-01-18 Seagen Inc Enlazadores de variantes de carga.
MX2022015157A (es) 2020-06-02 2023-01-16 Arcus Biosciences Inc Anticuerpos para tigit.
WO2021257124A1 (en) 2020-06-18 2021-12-23 Genentech, Inc. Treatment with anti-tigit antibodies and pd-1 axis binding antagonists
CN111718415B (zh) * 2020-07-03 2021-02-23 上海洛启生物医药技术有限公司 一种抗tigit纳米抗体及其应用
TW202216778A (zh) 2020-07-15 2022-05-01 美商安進公司 Ｔｉｇｉｔ及ｃｄ１１２ｒ阻斷
CN111763660A (zh) * 2020-08-07 2020-10-13 南京大学 一种重组溶瘤痘苗病毒及其制备方法和应用
WO2022217026A1 (en) 2021-04-09 2022-10-13 Seagen Inc. Methods of treating cancer with anti-tigit antibodies
AR125396A1 (es) 2021-04-20 2023-07-12 Seagen Inc Modulación de citotoxicidad celular dependiente de anticuerpos
BR112023022367A2 (pt) * 2021-05-04 2024-02-20 Agenus Inc Anticorpos anti-tigit e métodos de uso dos mesmos
WO2022251850A1 (en) 2021-05-28 2022-12-01 Seagen Inc. Anthracycline antibody conjugates
WO2023010094A2 (en) 2021-07-28 2023-02-02 Genentech, Inc. Methods and compositions for treating cancer
TW202321308A (zh) 2021-09-30 2023-06-01 美商建南德克公司 使用抗ｔｉｇｉｔ抗體、抗ｃｄ３８抗體及ｐｄ—１軸結合拮抗劑治療血液癌症的方法
US20230381321A1 (en) 2022-03-17 2023-11-30 Seagan Inc., Camptothecin conjugates
WO2023215719A1 (en) 2022-05-02 2023-11-09 Arcus Biosciences, Inc. Anti-tigit antibodies and uses of the same
WO2023240058A2 (en) 2022-06-07 2023-12-14 Genentech, Inc. Prognostic and therapeutic methods for cancer
WO2023239228A1 (ko) * 2022-06-10 2023-12-14 메디맵바이오 주식회사 항-tigit 항체, 인터류킨-15, 및 인터류킨-15 수용체 알파 스시 도메인을 포함하는 융합 단백질 및 이의 용도

Family Cites Families (187)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4676980A (en) 1985-09-23 1987-06-30 The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Department Of Health And Human Services Target specific cross-linked heteroantibodies
US4946778A (en) 1987-09-21 1990-08-07 Genex Corporation Single polypeptide chain binding molecules
JPH0742304B2 (ja) 1986-12-05 1995-05-10 財団法人微生物化学研究会 新規なアンスラサイクリン誘導体およびその製造法
EP0307434B2 (en) 1987-03-18 1998-07-29 Scotgen Biopharmaceuticals, Inc. Altered antibodies
DE3712350A1 (de) 1987-04-11 1988-10-20 Behringwerke Ag Semisynthetische rhodomycine, verfahren zu ihrer herstellung und ihre verwendung als zytostatika
EP0335369A3 (en) 1988-03-29 1990-03-28 Zaidan Hojin Biseibutsu Kagaku Kenkyu Kai New anthracycline derivatives and processes for the preparation of the same
US5047335A (en) 1988-12-21 1991-09-10 The Regents Of The University Of Calif. Process for controlling intracellular glycosylation of proteins
DK0479909T3 (da) 1989-06-29 1997-04-07 Medarex Inc Bispecifikke reagenser til AIDS-behandling
IE911965A1 (en) 1990-06-11 1991-12-18 Iaf Biochem Internat Heterocyclic anthracyclinone and anthracycline analogs
CA2086417C (en) 1990-06-29 1999-07-06 Biosource Technologies, Inc. Melanin production by transformed organisms
MY106399A (en) 1990-07-24 1995-05-30 Pfizer Cephalosporins and homologeus, preparation and pharmaceutical composition
US5192880A (en) 1990-11-13 1993-03-09 Nec Corporation High-speed emitter coupled logic circuit with large current driving capability
KR100211417B1 (ko) 1990-11-30 1999-10-01 유충식 L-탈로피라노시드 유도체 및 그의 제조방법
US5571894A (en) 1991-02-05 1996-11-05 Ciba-Geigy Corporation Recombinant antibodies specific for a growth factor receptor
NZ241606A (en) 1991-02-28 1994-08-26 Iaf Biochem Int Heteroanthracycline antitumor analogs, preparation and pharmaceutical compositions thereof; intermediates therefor
JP3025056B2 (ja) 1991-03-12 2000-03-27 財団法人微生物化学研究会 ２，６−ジデオキシ−２−フルオロ−ｌ−タロピラノース誘導体の製造法
US5278299A (en) 1991-03-18 1994-01-11 Scripps Clinic And Research Foundation Method and composition for synthesizing sialylated glycosyl compounds
JPH04290891A (ja) 1991-03-19 1992-10-15 Yasumitsu Tamura 新規なアンスラサイクリン系化合物
DE4111971C1 (pt) 1991-04-12 1992-03-12 Wolf-Dieter Dr. 7803 Gundelfingen De Fessner
US5552534A (en) 1991-08-22 1996-09-03 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Non-Peptide peptidomimetics
US5587458A (en) 1991-10-07 1996-12-24 Aronex Pharmaceuticals, Inc. Anti-erbB-2 antibodies, combinations thereof, and therapeutic and diagnostic uses thereof
EP0642526B1 (en) 1991-10-15 1998-12-23 The Scripps Research Institute Production of fucosylated carbohydrates by enzymatic fucosylation synthesis of sugar nucleotides; and in situ regeneration of gdp-fucose
WO1993008829A1 (en) 1991-11-04 1993-05-13 The Regents Of The University Of California Compositions that mediate killing of hiv-infected cells
AU3144193A (en) 1991-11-21 1993-06-15 Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University Controlling degradation of glycoprotein oligosaccharides by extracellular glycosisases
ATE503496T1 (de) 1992-02-06 2011-04-15 Novartis Vaccines & Diagnostic Biosynthetisches bindeprotein für tumormarker
US5278311A (en) 1992-06-05 1994-01-11 E. R. Squibb & Sons, Inc. Nonionic radiographic contrast agents
US5736523A (en) 1992-11-09 1998-04-07 Biochem Pharma Inc. Antineoplastic heteronapthoquinones
DK76193D0 (da) 1993-06-25 1993-06-25 Astra Ab Kulhydratderivater
US5670315A (en) 1993-09-13 1997-09-23 Canon Kabushiki Kaisha Nucleic acid determination employing pyryilium dye
GB9418260D0 (en) 1994-09-09 1994-10-26 Erba Carlo Spa Anthracycline derivatives
US5641870A (en) 1995-04-20 1997-06-24 Genentech, Inc. Low pH hydrophobic interaction chromatography for antibody purification
JPH08286368A (ja) 1995-04-14 1996-11-01 Toyo Ink Mfg Co Ltd 着色画像形成材料およびそれを用いた着色画像形成媒体と着色画像形成方法
US6245347B1 (en) 1995-07-28 2001-06-12 Zars, Inc. Methods and apparatus for improved administration of pharmaceutically active compounds
ES2134576T3 (es) 1995-09-08 1999-10-01 Zaidan Hojin Biseibutsu Derivados de antraciclina que contienen fluor, que tienen grupo(s) hidroxilo mono- o di-o-aminoalquilados en su radical de azucar.
DE19541260A1 (de) 1995-11-06 1997-05-07 Lohmann Therapie Syst Lts Therapeutische Zubereitung zur transdermalen Applikation von Wirkstoffen durch die Haut
US5834597A (en) 1996-05-20 1998-11-10 Protein Design Labs, Inc. Mutated nonactivating IgG2 domains and anti CD3 antibodies incorporating the same
US6512010B1 (en) 1996-07-15 2003-01-28 Alza Corporation Formulations for the administration of fluoxetine
PL182601B1 (pl) 1996-07-17 2002-02-28 Waldpharm Sp Z Oo Sposób otrzymywania antybiotyków antracyklinowych
DE19640969A1 (de) 1996-10-04 1998-04-16 Bayer Ag 20-0-verknüpfte Glycokonjugate von Camptothecin
US5770407A (en) 1996-12-10 1998-06-23 The Scripps Research Institute Process for preparing nucleotide inhibitors of glycosyltransferases
FR2764304B1 (fr) 1997-06-06 1999-07-16 Rhone Poulenc Rorer Sa Nouvelle classe d'agents transfectants cationiques des acides nucleiques
JPH1135593A (ja) 1997-07-18 1999-02-09 Daikin Ind Ltd ２−フルオロフコシル−ｎ−アロイルグルコサミン誘導体及びその中間物、並びにそれらの製造方法
US6248864B1 (en) 1997-12-31 2001-06-19 Adherex Technologies, Inc. Compounds and methods and modulating tissue permeability
DK1071700T3 (da) 1998-04-20 2010-06-07 Glycart Biotechnology Ag Glykosylerings-modifikation af antistoffer til forbedring af antistofafhængig cellulær cytotoksicitet
US6312717B1 (en) 1998-07-07 2001-11-06 Bristol-Myers Squibb Company Method for treatment of anxiety and depression
SE9802864D0 (sv) 1998-08-27 1998-08-27 Pharmacia & Upjohn Ab Transdermally administered tolterodine as antimuscarinic agent for the treatment of overactive bladder
CA2361492A1 (en) 1999-02-05 2000-08-10 Samsung Electronics Co., Ltd. Image texture retrieving method and apparatus thereof
ES2420835T3 (es) 1999-04-09 2013-08-27 Kyowa Hakko Kirin Co., Ltd. Procedimiento para controlar la actividad de las moléculas inmunofuncionales
US6544548B1 (en) 1999-09-13 2003-04-08 Keraplast Technologies, Ltd. Keratin-based powders and hydrogel for pharmaceutical applications
US20080050809A1 (en) 1999-09-28 2008-02-28 Alejandro Abuin Novel human kinases and polynucleotides encoding the same
US20040219521A1 (en) 2000-01-21 2004-11-04 Tang Y. Tom Novel nucleic acids and polypeptides
FR2807767B1 (fr) 2000-04-12 2005-01-14 Lab Francais Du Fractionnement Anticorps monoclonaux anti-d
US6589549B2 (en) 2000-04-27 2003-07-08 Macromed, Incorporated Bioactive agent delivering system comprised of microparticles within a biodegradable to improve release profiles
US6670330B1 (en) 2000-05-01 2003-12-30 Theodore J. Lampidis Cancer chemotherapy with 2-deoxy-D-glucose
US6696081B2 (en) 2000-06-09 2004-02-24 Duke University Carbohydrate based lipid compositions and supramolecular structures comprising same
DE50113892D1 (de) 2000-06-26 2008-06-05 Basf Se Phosphacyclohexane und ihre verwendung in der hydroformylierung von olefinen
US6946292B2 (en) 2000-10-06 2005-09-20 Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. Cells producing antibody compositions with increased antibody dependent cytotoxic activity
NZ592087A (en) 2001-08-03 2012-11-30 Roche Glycart Ag Antibody glycosylation variants having increased antibody-dependent cellular cytotoxicity
AU2002366951A1 (en) 2001-12-10 2003-07-09 Nuvelo,Inc. Novel nucleic acids and polypeptides
AU2003211112A1 (en) 2002-02-13 2003-09-04 Incyte Corporation Secreted proteins
EP1575480A4 (en) 2002-02-22 2008-08-06 Genentech Inc COMPOSITIONS AND METHODS FOR TREATING DISEASES RELATED TO THE IMMUNE SYSTEM
US7193069B2 (en) 2002-03-22 2007-03-20 Research Association For Biotechnology Full-length cDNA
AUPS247502A0 (en) 2002-05-22 2002-06-13 Griffith University An antimicrobial agent
EP2277532A1 (en) 2002-09-11 2011-01-26 Genentech, Inc. Novel composition and methods for the treatment of immune related diseases
AU2003276874B2 (en) 2002-09-11 2009-09-03 Genentech, Inc. Novel compositions and methods for the treatment of immune related diseases
US7074826B2 (en) 2002-10-07 2006-07-11 Encore Pharmaceuticals, Inc. R-NSAID esters and their use
WO2004073656A2 (en) 2003-02-20 2004-09-02 Seattle Genetics, Inc. Anti-cd70 antibody-drug conjugates and their use for the treatment of cancer and immune disorders
EP1613261A4 (en) 2003-04-09 2011-01-26 Novo Nordisk As INTRA-CELLULAR FORMATION OF PEPTIDE CONJUGATES
CN1835962A (zh) 2003-06-03 2006-09-20 加利福尼亚大学董事会 利用乙酰化二糖治疗疾病的组合物与方法
FR2858235B1 (fr) 2003-07-31 2006-02-17 Lab Francais Du Fractionnement Utilisation d'anticorps optimises en adcc pour traiter les patients faibles repondeurs
US20070274928A1 (en) 2003-11-17 2007-11-29 Sergey Selifonov Novel Cyclic Oxygenated Compounds Having Cooling, Fragrance, and Flavor Properties, and Uses Thereof
JP2007515434A (ja) 2003-12-23 2007-06-14 プロジェン インダストリーズ リミテッド グリコサミノグリカン（ｇａｇ）模倣物
PL369253A1 (pl) 2004-07-23 2006-02-06 Zakład Badawczo-Produkcyjny SYNTEX Sp.z o.o. Sposób otrzymywania złożonych 2-deoksy-2-jodopiranozydów o wysokiej czystości, szczególnie Annamycyny o czystości farmaceutycznej
EA016357B1 (ru) 2004-07-30 2012-04-30 Ринат Ньюросайенс Корп. Антитела, направленные против бета-амилоидного пептида, и способы их применения
US20090048203A1 (en) 2004-10-15 2009-02-19 Marta Cavero-Tomas Substituted adenines and the uses thereof
US7632497B2 (en) 2004-11-10 2009-12-15 Macrogenics, Inc. Engineering Fc Antibody regions to confer effector function
WO2006124667A2 (en) 2005-05-12 2006-11-23 Zymogenetics, Inc. Compositions and methods for modulating immune responses
CA2609269C (en) 2005-05-26 2014-08-05 Seattle Genetics, Inc. Humanized anti-cd40 antibodies and their methods of use
EP1963534A2 (en) 2005-12-19 2008-09-03 Genizon Biosciences Inc. Genemap of the human gene associated with crohn's disease
EP1986660A4 (en) 2006-02-24 2009-08-26 Univ Texas HEXOSE-BASED COMPOUNDS FOR TREATING CANCER
EP1991056A4 (en) 2006-02-24 2009-09-02 Univ Miami MANNOSEDERIVATES FOR THE KILLING OF TUMOR CELLS
WO2007124283A2 (en) 2006-04-13 2007-11-01 Zymogenetics, Inc. Tetramerizing polypeptides and methods of use
US20100075377A1 (en) 2006-04-13 2010-03-25 West James W Tetramerizing polypeptides and methods of use
US9149489B2 (en) 2006-04-27 2015-10-06 Board Of Regents, University Of Texas System Inhibitors of glycolysis useful in the treatment of brain tumors
CA2660286A1 (en) 2006-08-09 2008-02-21 Homestead Clinical Corporation Organ-specific proteins and methods of their use
DE102006053635B4 (de) 2006-11-14 2011-06-30 Sanofi-Aventis Deutschland GmbH, 65929 Neue mit Benzylresten substituierte 1,4-Benzothiepin-1,1-Dioxidderivate, diese Verbindungen enthaltende Arzneimittel und deren Verwendung
DE102006053637B4 (de) 2006-11-14 2011-06-30 Sanofi-Aventis Deutschland GmbH, 65929 Neue mit Fluor substituierte 1,4-Benzothiepin-1,1-Dioxidderivate, diese Verbindungen enthaltende Arzneimittel und deren Verwendung
PL2099823T5 (pl) 2006-12-01 2023-02-20 Seagen Inc. Wariant środków wiążących cel i jego zastosowania
WO2008131024A1 (en) 2007-04-17 2008-10-30 Board Of Regents, The University Of Texas System Iodo-hexose compounds useful to treat cancer
GB0714514D0 (en) * 2007-07-26 2007-09-05 Univ City Computer system
US8877688B2 (en) 2007-09-14 2014-11-04 Adimab, Llc Rationally designed, synthetic antibody libraries and uses therefor
EP3753947A1 (en) 2007-09-14 2020-12-23 Adimab, LLC Rationally designed, synthetic antibody libraries and uses therefor
CA2697992C (en) 2007-10-04 2017-08-22 Zymogenetics, Inc. B7 family member zb7h6 and related compositions and methods
US8293720B2 (en) 2007-12-20 2012-10-23 Dogwood Pharmaceuticals, Inc. Substituted 4-{3-[6-amino-9-(3, 4-dihydroxy-tetrahydro-furan-2-yl)-9H-purin-2-yl]-prop-2-ynyl}-piperidine-1-carboxylic acid esters as A2AR agonists
US8178658B2 (en) 2008-02-12 2012-05-15 Dow Agrosciences, Llc Pesticidal compositions
JP5260093B2 (ja) 2008-03-10 2013-08-14 クラレノリタケデンタル株式会社 重合性単量体、重合性組成物及び歯科用材料
JP5501339B2 (ja) 2008-03-21 2014-05-21 ザ ジェネラル ホスピタル コーポレイション アルツハイマー病及び関連疾患の検出及び治療のための化合物及び組成物
CN101555262A (zh) 2008-04-08 2009-10-14 中国科学院生态环境研究中心 六水合三氯化铁(FeCl3·6H2O)选择性脱除糖类化合物异头碳酰基的方法
EP2279412B1 (en) 2008-04-09 2017-07-26 Genentech, Inc. Novel compositions and methods for the treatment of immune related diseases
CA2723197C (en) 2008-05-02 2017-09-19 Seattle Genetics, Inc. Methods and compositions for making antibodies and antibody derivatives with reduced core fucosylation
EP2303282A4 (en) 2008-05-23 2013-02-13 Univ Miami TREATMENT UTILIZING A LOW-DOSE CONTINUOUS APPLICATION OF SUGAR ANALOGS
ES2456873T3 (es) 2009-02-11 2014-04-23 Dow Agrosciences Llc Composiciones pesticidas
CA2755782A1 (en) 2009-03-18 2010-09-23 Simon Barry Peptidase inhibitor 16 (pi16) as a biomarker for regulatory t 9treg) cells and uses therefor
EP2411529A4 (en) 2009-03-27 2012-09-19 Zacharon Pharmaceuticals Inc MODULATORS OF BIOSYNTHESIS OF N-BOUND GLYCANS
CN102803292A (zh) 2009-04-20 2012-11-28 辉瑞公司 蛋白质糖基化的控制及其相关组合物和方法
WO2011019419A1 (en) 2009-08-11 2011-02-17 Arizona Board Of Regents, A Body Corporate Of The State Of Arizona Acting For And On Behalf Of Arizona State University Carbohydrate-mediated tumor targeting
WO2011100131A2 (en) 2010-01-28 2011-08-18 Alnylam Pharmacuticals, Inc. Monomers and oligonucleotides comprising cycloaddition adduct(s)
WO2011137528A1 (en) 2010-05-06 2011-11-10 Simon Fraser University Methods and compounds for inhibiting glycosyltransferases
WO2011156356A1 (en) 2010-06-09 2011-12-15 Zymogenetics, Inc. Dimeric vstm3 fusion proteins and related compositions and methods
US9354228B2 (en) 2010-07-16 2016-05-31 Adimab, Llc Antibody libraries
PT2608796T (pt) 2010-08-05 2019-02-25 Seattle Genetics Inc Inibição de fucosilação de proteínas in vivo utilizando análogos de fucose
WO2012021410A1 (en) 2010-08-12 2012-02-16 Novozymes, Inc. Compositions comprising a polypeptide having cellulolytic enhancing activity and a liquor and uses thereof
TWI410431B (zh) 2010-12-22 2013-10-01 Ind Tech Res Inst 齊敦果酸衍生物在製備預防或治療ｃ型肝炎之藥物的用途
US8923278B2 (en) 2011-01-10 2014-12-30 Vtech Telecommunications Limited Peer-to-peer, internet protocol telephone system with system-wide configuration data
WO2012097052A2 (en) 2011-01-11 2012-07-19 Intertech Bio, Llc Monosaccharide-based compounds for the treatment of proliferative and inflammatory dermatological diseases
US9493452B2 (en) 2011-03-24 2016-11-15 Southern Methodist University Compounds and derivatives of 2H-pyrido (3,2-b)(1, 4) oxazin 3)4H)-ones as raf kinase and LRRK2 inhibitors
BR112013030741A2 (pt) 2011-05-31 2016-12-06 Merck Patent Gmbh compostos contendo ânions de hidreto- triciano-borato
CN103687863B9 (zh) 2011-07-15 2016-07-27 默克专利有限公司 含有烷基-氰基-硼酸根或烷基-氰基-氟硼酸根阴离子的化合物
WO2013068874A1 (en) 2011-11-11 2013-05-16 Pfizer Inc. Antibody-drug conjugates
JP6170999B2 (ja) 2012-03-13 2017-07-26 ソーク インスティテュート フォー バイオロジカル スタディーズ アデノウイルスおよび化学二量体を用いる選択細胞の標的化
EP2833920A2 (en) 2012-04-02 2015-02-11 Moderna Therapeutics, Inc. Modified polynucleotides for the production of biologics and proteins associated with human disease
US9878056B2 (en) 2012-04-02 2018-01-30 Modernatx, Inc. Modified polynucleotides for the production of cosmetic proteins and peptides
US9283287B2 (en) 2012-04-02 2016-03-15 Moderna Therapeutics, Inc. Modified polynucleotides for the production of nuclear proteins
JP6257600B2 (ja) 2012-05-25 2018-01-10 スローン ケタリング インスティテュート フォア キャンサー リサーチ Ｇｉ症候群及び移植片対宿主病の治療方法
EP2858673A4 (en) 2012-06-06 2016-06-22 Oncomed Pharm Inc BINDING AGENTS MODULATING THE HIPPO SIGNALING PATH AND USES THEREOF
EP3508215A3 (en) 2012-12-03 2019-10-02 Bristol-Myers Squibb Company Enhancing anti-cancer activity of immunomodulatory fc fusion proteins
MX2015006973A (es) 2012-12-04 2015-09-28 Oncomed Pharm Inc Inmunoterapia con agentes de enlace.
CN104250302B (zh) 2013-06-26 2017-11-14 上海君实生物医药科技股份有限公司 抗pd‑1抗体及其应用
ES2819209T3 (es) 2013-07-16 2021-04-15 Hoffmann La Roche Procedimientos de tratamiento del cáncer usando antagonistas de unión al eje de PD-1 e inhibidores de TIGIT
US10077305B2 (en) 2013-09-10 2018-09-18 Medimmune Limited Antibodies against PD-1 and uses thereof
AU2014339900B2 (en) 2013-10-25 2019-10-24 Dana-Farber Cancer Institute, Inc. Anti-PD-L1 monoclonal antibodies and fragments thereof
US20150132744A1 (en) 2013-11-13 2015-05-14 Oregon Health And Science University Methods of detecting cells latently infected with hiv
CN106661107B (zh) * 2013-12-24 2021-12-24 杨森制药公司 抗vista抗体及片段
EP3119913B1 (en) 2014-03-21 2021-01-06 The Brigham and Women's Hospital, Inc. Methods and compositions for treatment of immune-related diseases or disorders and/or therapy monitoring
MX2016017288A (es) 2014-07-16 2017-06-27 Genentech Inc Metodos para tratar el cancer con inhibidores de tigit y agentes contra el cancer.
AP2017009765A0 (en) 2014-08-19 2017-02-28 Merck Sharp & Dohme Anti-tigit antibodies
ES2864756T3 (es) 2014-10-29 2021-10-14 Seattle Genetics Inc Dosificación y administración de anticuerpos anti-CD40 no fucosilados
WO2016073704A1 (en) 2014-11-06 2016-05-12 Children's Research Institute, Children's National Medical Center Immunotherapeutics for cancer and autoimmune diseases
CN107073126A (zh) 2014-11-06 2017-08-18 豪夫迈·罗氏有限公司 包含ox40结合激动剂和tigit抑制剂的组合疗法
WO2016073906A2 (en) 2014-11-06 2016-05-12 Scholar Rock, Inc. Transforming growth factor-related immunoassays
PT3220927T (pt) 2014-11-20 2022-02-07 Promega Corp Sistemas e métodos para avaliar moduladores de pontos de verificação imunitária
TWI595006B (zh) 2014-12-09 2017-08-11 禮納特神經系統科學公司 抗ｐｄ－１抗體類和使用彼等之方法
EP3916017A1 (en) 2014-12-22 2021-12-01 PD-1 Acquisition Group, LLC Anti-pd-1 antibodies
CA2971732A1 (en) 2014-12-23 2016-06-30 Bristol-Myers Squibb Company Antibodies to tigit
JP2018502123A (ja) 2015-01-20 2018-01-25 イミューンエクサイト， インコーポレイテッド 癌免疫療法のための組成物及び方法
CN107580500B (zh) 2015-02-19 2023-05-30 康姆普根有限公司 抗pvrig抗体和使用方法
US10550173B2 (en) 2015-02-19 2020-02-04 Compugen, Ltd. PVRIG polypeptides and methods of treatment
WO2016166139A1 (en) 2015-04-14 2016-10-20 Eberhard Karls Universität Tübingen Bispecific fusion proteins for enhancing immune responses of lymphocytes against tumor cells
RS61943B1 (sr) 2015-04-17 2021-07-30 Alpine Immune Sciences Inc Imunomodulatorni proteini sa prilagodljivim afinitetima
WO2016179288A1 (en) 2015-05-04 2016-11-10 University Of Florida Research Foundation, Inc. Novel regulatory-cells, method for their isolation and uses
TWI715587B (zh) 2015-05-28 2021-01-11 美商安可美德藥物股份有限公司 Ｔｉｇｉｔ結合劑和彼之用途
WO2016196389A1 (en) 2015-05-29 2016-12-08 Bristol-Myers Squibb Company Treatment of renal cell carcinoma
WO2016196912A1 (en) 2015-06-03 2016-12-08 Dana-Farber Cancer Institute, Inc. Methods to induce conversion of regulatory t cells into effector t cells for cancer immunotherapy
JO3620B1 (ar) 2015-08-05 2020-08-27 Amgen Res Munich Gmbh مثبطات نقطة فحص مناعية للاستخدام في علاج سرطانات محمولة عبر الدم
JP6976241B2 (ja) * 2015-08-14 2021-12-08 メルク・シャープ・アンド・ドーム・コーポレーションMerck Sharp & Dohme Corp. 抗ｔｉｇｉｔ抗体
US20180244783A1 (en) 2015-08-31 2018-08-30 Oncomed Pharmaceuticals, Inc. Combination therapy for treatment of disease
WO2017040660A1 (en) 2015-08-31 2017-03-09 Oncomed Pharmaceuticals, Inc. Combination therapy for treatment of disease
ES2924071T3 (es) 2015-09-02 2022-10-04 Yissum Res Dev Co Of Hebrew Univ Jerusalem Ltd Anticuerpos específicos para inmunoglobulina de células T humanas y dominio ITIM (TIGIT)
CA2997551A1 (en) 2015-09-04 2017-03-09 Memorial Sloan Kettering Cancer Center Immune cell compositions and methods of use
MX2018003144A (es) 2015-09-14 2018-09-11 Alpine Immune Sciences Inc Dominios de superfamilia de inmunoglobulina de variante ajustable y terapia con células genéticamente modificadas.
US20180251548A1 (en) 2015-09-14 2018-09-06 Compass Therapeutics Llc Compositions and methods for treating cancer via antagonism of the cd155/tigit pathway and tgf-beta
CN108290946B (zh) 2015-09-25 2021-09-28 豪夫迈·罗氏有限公司 抗tigit抗体和使用方法
UA126549C2 (uk) 2015-10-01 2022-11-02 Хіт Байолоджикс, Інк. Композиція і спосіб для з'єднання позаклітинних доменів типу і та типу іі як гетерологічного химерного білка
BR112018006531A2 (pt) 2015-10-01 2018-12-11 Potenza Therapeutics Inc proteína isolada de ligação ao antígeno (abp), polinucleotídeo isolado, vetor, célula hospedeira, método para produzir uma proteína isolada de ligação ao antígeno (abp), composição farmacêutica, método para tratar ou prevenir uma doença ou condição num sujeito em necessidade deste, método para modular uma resposta imune num indivíduo em necessidade deste e kit
JP2019500892A (ja) 2015-11-03 2019-01-17 ヤンセン バイオテツク，インコーポレーテツド Ｔｉｍ−３に特異的に結合する抗体及びその使用
US20180353524A1 (en) 2015-12-04 2018-12-13 Seattle Genetics, Inc. Cancer treatment using 2-deoxy-2-fluoro-l-fucose in combination with a checkpoint inhibitor
WO2017100428A1 (en) 2015-12-09 2017-06-15 Memorial Sloan Kettering Cancer Center Immune cell compositions and methods of using same
EP4043492A1 (en) 2016-03-01 2022-08-17 Yissum Research Development Company of the Hebrew University of Jerusalem Ltd. Antibodies specific to human poliovirus receptor (pvr)
TWI752012B (zh) 2016-03-04 2022-01-11 美商Ｊｎ生物科學有限責任公司 針對tigit之抗體
US11446398B2 (en) 2016-04-11 2022-09-20 Obsidian Therapeutics, Inc. Regulated biocircuit systems
EP3442999A2 (en) 2016-04-15 2019-02-20 Alpine Immune Sciences, Inc. Icos ligand variant immunomodulatory proteins and uses thereof
KR20190006495A (ko) 2016-04-15 2019-01-18 알파인 이뮨 사이언시즈, 인코포레이티드 Cd80 변이체 면역조절 단백질 및 그의 용도
WO2017191274A2 (en) 2016-05-04 2017-11-09 Curevac Ag Rna encoding a therapeutic protein
WO2017193059A1 (en) 2016-05-06 2017-11-09 The Regents Of The University Of California Systems and methods for targeting cancer cells
MX2018013952A (es) 2016-05-16 2019-06-24 Checkmab S R L Marcadores selectivamente desregulados en celulas t reguladoras, infiltrantes de tumores.
RU2769282C2 (ru) 2016-06-20 2022-03-30 Кимаб Лимитед Анти-PD-L1 и IL-2 цитокины
EP3491013A1 (en) 2016-07-28 2019-06-05 Alpine Immune Sciences, Inc. Cd155 variant immunomodulatory proteins and uses thereof
US11834490B2 (en) 2016-07-28 2023-12-05 Alpine Immune Sciences, Inc. CD112 variant immunomodulatory proteins and uses thereof
CN112274637A (zh) 2016-08-17 2021-01-29 康姆普根有限公司 抗tigit抗体、抗pvrig抗体及其组合
CA3034691A1 (en) 2016-08-30 2018-03-08 Memorial Sloan Kettering Cancer Center Immune cell compositions and methods of use for treating viral and other infections
WO2018041120A1 (en) 2016-08-31 2018-03-08 Beijing Biocytogen Co., Ltd Genetically modified non-human animal with human or chimeric tigit
JP7074662B2 (ja) 2016-09-10 2022-05-24 イェダ リサーチ アンド ディベロップメント カンパニー リミテッド Ｃｎｓの疾患および傷害を処置するために全身性調節性ｔ細胞のレベルまたは活性を低下させること
EP3293271A1 (en) 2016-09-12 2018-03-14 The Provost, Fellows, Foundation Scholars, & the other members of Board, of the College of the Holy & Undiv. Trinity of Queen Elizabeth near Dublin Marker and target as a diagnostic variable and target for therapy of metastatic cancer
WO2018058111A1 (en) 2016-09-26 2018-03-29 The Brigham And Women's Hospital, Inc. Regulators of b cell-mediated immunosuppression
US10759855B2 (en) 2016-12-02 2020-09-01 Rigel Pharmaceuticals, Inc. Antigen binding molecules to TIGIT
MX2019010206A (es) * 2017-02-28 2019-12-11 Seattle Genetics Inc Anticuerpos anti inmunorreceptor de linfocitos t con dominios de motivo de inactivación basado en tirosina de inmunorreceptor e inmunoglobulina (tigit).
JOP20190203A1 (ar) 2017-03-30 2019-09-03 Potenza Therapeutics Inc بروتينات رابطة لمولد ضد مضادة لـ tigit وطرق استخدامها

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