KR20230171885A - 항-tigit 항체, 인터류킨-15, 및 인터류킨-15 수용체 알파 스시 도메인을 포함하는 융합 단백질 및 이의 용도 - Google Patents
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Abstract
TIGIT에 특이적으로 결합하는 항-TIGIT 항체 또는 이의 항원결합단편, 인터류킨-15(IL-15), 및 인터류킨-15 수용체 알파(IL-15Rα) 스시 도메인을 포함하는 융합 단백질, 및 상기 융합 단백질의 의약 용도가 제공된다.
Description
TIGIT에 특이적으로 결합하는 항-TIGIT 항체 또는 이의 항원결합단편, 인터류킨-15(IL-15), 및 인터류킨-15 수용체 알파(IL-15Rα) 스시 도메인을 포함하는 융합 단백질, 및 상기 융합 단백질의 의약 용도에 관한 것이다.
암 면역요법은 체내 면역작용을 이용해서 암을 치료하는 방법으로, 화학요법, 외과요법, 방사선 요법에 이어 암의 제4 치료법으로 불린다. 암 면역요법은 면역계를 활성화시켜 종양 세포에 대한 인식 및 반응을 증가시키는 메커니즘을 필요로 한다. 면역계 활성화는 항원-특이적 반응의 개시에 중요한 항원-제시 세포 및 종양 세포 파괴를 담당하는 이펙터(effector) 세포 등과 같은 다양한 세포의 기능을 수반하는 복잡한 메카니즘이다.
상기 이펙터 세포의 대표적인 예로서 세포독성 T 세포를 들 수 있다.
한편, TIGIT (T cell immunoglobulin and ITIM (immunoreceptor tyrosine-based inhibition motif) domain)은 WUCAM, VSIG9 또는 Vstm3로도 지칭되며, NK, CD8+ 및 CD4+ T 세포뿐만 아니라 조절 T 세포 (regulatory T cell; "Treg")에서도 우선적으로 발현되는 공동-억제 수용체이다. TIGIT는 세포 내의 ITIM 도메인, 막관통 도메인, 및 면역글로불린 가변 도메인을 포함하는 막관통 단백질이다.
TIGIT 발현은 종양 침윤 림프구(tumour infiltrating lymphocyte, TIL) 및 감염과 같은 질병 환경에서 증가된다. TIGIT 발현은 TIGIT 음성 세포와 비교하여 낮은 이펙터 기능을 갖는 exhausted T 세포의 표지가 될 수 있다. 또한, TIGIT를 발현하는 Treg 세포는 TIGIT 음성 Treg 집단과 비교하여 향상된 면역억제 활성을 나타낸다.
이러한 점에 기초할 때, TIGIT에 대하여 길항작용을 하는 약물 (예컨대, 길항성 항-TIGIT 항체 등)은 면역계 활성화를 유도하고 암 등의 질병상태에서의 면역 반응을 증진시켜 질병 치료에 유리한 효과를 나타낼 것으로 기대된다.
한편, 사이토카인(cytokines)의 면역활성 및 항암 효과에 기반하여, 이를 모사한 단백질들의 면역활성제 및 면역항암제로서 개발되고 있지만, 생체내에서의 면역원으로서의 작용 위험이 검증되지 않은 상황이다.
이러한 상황에서, 생체내에서 면역원성으로 작용하지 않고 안전하면서 우수한 면역활성 효과를 가지는 약물의 개발이 요구된다.
일 예는 (1) TIGIT을 특이적으로 인식하는 항-TIGIT 항체 또는 이의 항원결합단편, 및 (2) 사이토카인 유사 폴리펩타이드를 포함하는 융합 단백질을 제공한다.
상기 융합 단백질에 있어서, 상기 사이토카인 유사 폴리펩타이드는 항-TIGIT 항체 또는 이의 항원결합단편의 중쇄 (중쇄 불변영역 또는 중쇄 가변영역) 또는 경쇄 (경쇄 불변영역 또는 경쇄 가변영역)의 C-말단 및/또는 N-말단에 링커 (제1 링커)를 통하여 연결되거나 링커 없이 직접 연결될 수 있다.
상기 사이토카인 유사 폴리펩타이드는 (a) 인터류킨-15 수용체 알파(IL-15Rα) 스시 도메인 및 (b) 인터류킨-15(IL-15)을 포함하는 융합 폴리펩타이드일 수 있다.
상기 사이토카인 유사 폴리펩타이드는 인터류킨-15가 인터류킨-15 수용체 알파 스시 도메인의 C-말단 및/또는 N-말단에 링커(제2 링커)를 통하여 연결되거나 링커 없이 직접 연결된 것일 수 있다. 예를 들어, 상기 사이토카인 유사 폴리펩타이드는, N-말단에서 C-말단 방향으로 순서대로, 인터류킨-15 수용체 알파 스시 도메인 및 인터류킨-15를 포함하거나, 인터류킨-15 수용체 알파 스시 도메인, 링커(제2 링커), 및 인터류킨-15를 포함하는 것일 수 있다.
상기 제1 링커(항-TIGIT 항체 또는 이의 항원결합단편 및 사이토카인 유사 폴리펩타이드 연결) 및/또는 제2 링커(인터류킨-15 및 인터류킨-15 수용체 알파 스시 도메인 연결)는 펩타이드 링커일 수 있고, 상기 항-TIGIT 항체 또는 이의 항원결합단편와 사이토카인 유사 폴리펩타이드 간 및/또는 인터류킨-15 및 인터류킨-15 수용체 알파 스시 도메인 간의 연결은 펩타이드 결합에 의한 것일 수 있다.
다른 예는 상기 융합 단백질을 암호화하는 핵산 분자를 제공한다.
다른 예는 상기 융합 단백질을 암호화하는 핵산 분자를 포함하는 재조합 벡터를 제공한다.
다른 예는 상기 핵산 분자 또는 재조합 벡터를 포함하는 재조합 세포를 제공한다.
다른 예는 상기 융합 단백질, 상기 융합 단백질을 암호화하는 핵산 분자, 상기 핵산 분자를 포함하는 재조합 벡터, 및 상기 핵산 분자 또는 재조합 벡터를 포함하는 재조합 세포로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상을 유효성분으로 포함하는 면역증강제 또는 면역증강용 약학 조성물을 제공한다.
다른 예는 상기 융합 단백질, 상기 융합 단백질을 암호화하는 핵산 분자, 상기 핵산 분자를 포함하는 재조합 벡터, 및 상기 핵산 분자 또는 재조합 벡터를 포함하는 재조합 세포로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상을 유효성분으로 포함하는 면역 관련 질병의 예방 및/또는 치료용 약학 조성물을 제공한다.
다른 예는 상기 융합 단백질, 상기 융합 단백질을 암호화하는 핵산 분자, 상기 핵산 분자를 포함하는 재조합 벡터, 및 상기 핵산 분자 또는 재조합 벡터를 포함하는 재조합 세포로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상을 유효성분으로 포함하는 항암제 또는 암의 예방 및/또는 치료용 약학 조성물을 제공한다.
다른 예는 상기 융합 단백질, 상기 융합 단백질을 암호화하는 핵산 분자, 상기 핵산 분자를 포함하는 재조합 벡터, 및 상기 핵산 분자 또는 재조합 벡터를 포함하는 재조합 세포로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상의 약학적 유효량을 면역증강을 필요로 하는 대상에게 투여하는 단계를 포함하는 면역증강 방법을 제공한다.
다른 예는 상기 융합 단백질, 상기 융합 단백질을 암호화하는 핵산 분자, 상기 핵산 분자를 포함하는 재조합 벡터, 및 상기 핵산 분자 또는 재조합 벡터를 포함하는 재조합 세포로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상의 약학적 유효량을 면역 관련 질병의 예방 및/또는 치료를 필요로 하는 대상에게 투여하는 단계를 포함하는 면역 관련 질병의 예방 및/또는 치료 방법을 제공한다.
다른 예는 상기 융합 단백질, 상기 융합 단백질을 암호화하는 핵산 분자, 상기 핵산 분자를 포함하는 재조합 벡터, 및 상기 핵산 분자 또는 재조합 벡터를 포함하는 재조합 세포로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상의 약학적 유효량을 암의 예방 및/또는 치료를 필요로 하는 대상에게 투여하는 단계를 포함하는, 암의 예방 및/또는 치료 방법을 제공한다.
다른 예는 상기 융합 단백질, 상기 융합 단백질을 암호화하는 핵산 분자, 상기 핵산 분자를 포함하는 재조합 벡터, 및 상기 핵산 분자 또는 재조합 벡터를 포함하는 재조합 세포로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상의 면역증강 용도 또는 면역증강제 제조를 위한 용도를 제공한다.
다른 예는 상기 융합 단백질, 상기 융합 단백질을 암호화하는 핵산 분자, 상기 핵산 분자를 포함하는 재조합 벡터, 및 상기 핵산 분자 또는 재조합 벡터를 포함하는 재조합 세포로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상의 면역 관련 질병의 예방 및/또는 치료를 위한 용도 또는 면역 관련 질병의 예방 및/또는 치료용 약물의 제조를 위한 용도를 제공한다.
다른 예는 상기 융합 단백질, 상기 융합 단백질을 암호화하는 핵산 분자, 상기 핵산 분자를 포함하는 재조합 벡터, 및 상기 핵산 분자 또는 재조합 벡터를 포함하는 재조합 세포로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상의 암의 예방 및/또는 치료를 위한 용도 또는 암의 예방 및/또는 치료용 약물의 제조를 위한 용도를 제공한다.
본 명세서에서, TIGIT에 결합하는 항-TIGIT 항체 또는 이의 항원결합단편, 및 사이토카인 유사 폴리펩타이드를 포함하는 융합 단백질 및 이의 의약 용도가 제공된다. 상기 융합 단백질은 (1) 항-TIGIT 항체 또는 이의 항원결합단편에 의하여 TIGIT의 작용을 봉쇄하여 면역을 활성화 (e.g., 이펙터 T세포 기능 강화, Treg 활성 제어, 면역세포(T 세포, NK 세포 등)의 사이토카인 분비 증가 등)시키는 활성을 가지며, (2) 사이토카인 유사 폴리펩타이드에 의하여 야생형 인터류킨-15/인터류킨-2 대비 수용체와의 결합력이 우수하면서도 면역원성이 낮은 이점을 가질 수 있어서, 다양한 면역 활성화제 및/또는 면역 치료제로서 적용될 수 있다.
이하, 보다 상세히 설명한다.
용어의 정의
본 명세서에서, 핵산 분자("폴리뉴클레오타이드" 또는 "유전자"와 혼용될 수 있음) 또는 폴리펩타이드("단백질"과 혼용될 수 있음)가 "특정 핵산 서열 또는 아미노산 서열을 포함한다 또는 특정 핵산 서열 또는 아미노산 서열로 이루어진다 또는 표현된다" 함은 상기 핵산 분자 또는 폴리펩타이드가 상기 특정 핵산 서열 또는 아미노산 서열을 필수적으로 포함하는 것을 의미할 수 있으며, 상기 핵산 분자 또는 폴리펩타이드의 본래의 기능 및/또는 목적하는 기능을 유지하는 범위에서 상기 특정 핵산 서열 또는 아미노산 서열에 변이(결실, 치환, 변형, 및/또는 부가)가 가해진 "실질적으로 동등한 서열"을 포함하는 것(또는 상기 변이를 배제하지 않는 것)으로 해석될 수 있다.
일 예에서, 본 명세서에서 제공되는 핵산 서열 또는 아미노산 서열은 이들의 본래의 기능 또는 목적하는 기능을 유지하는 범위에서 통상적인 돌연변이 유발법, 예를 들면 방향성 진화법(direct evolution) 및/또는 부위특이적 돌연변이법(site-directed mutagenesis) 등에 의하여 변형된 것을 포함할 수 있다. 일 예에서, 핵산 분자 또는 폴리펩타이드가 "특정 핵산 서열 또는 아미노산 서열을 포함한다, 또는 상기 서열로 이루어진다 또는 표현된다" 함은 상기 핵산 분자 또는 폴리펩타이드가 (i) 상기 특정 핵산 서열 또는 아미노산 서열을 필수적으로 포함하거나, 또는 (ii) 상기 특정 핵산 서열 또는 아미노산 서열과 60% 이상, 70% 이상, 80% 이상, 85% 이상, 90% 이상, 91% 이상, 92% 이상, 93% 이상, 94% 이상, 95% 이상, 96% 이상, 97% 이상, 98% 이상, 99% 이상, 99.5% 이상, 또는 99.9% 이상의 상동성을 갖는 아미노산 서열로 이루어지거나 이를 필수적으로 포함하고 본래의 기능 및/또는 목적하는 기능을 유지하는 것을 의미할 수 있다.
본 명세서에 기재된 핵산 서열은 코돈의 축퇴성(degeneracy)으로 인하여 상기 단백질을 발현시키고자 하는 미생물에서 선호되는 코돈을 고려하여, 코딩영역으로부터 발현되는 단백질의 아미노산 서열 및/또는 기능을 변화시키지 않는 범위 내에서 코딩영역에 다양한 변형이 이루어질 수 있다.
본 명세서에서, 용어 "상동성"은 주어진 핵산 서열 또는 아미노산 서열과 일치하는 정도를 의미하며 백분율(%)로 표시될 수 있다. 핵산 서열에 대한 상동성의 경우, 예를 들면, 잘 알려진 알고리즘 BLAST 또는 FASTA 등을 사용하여 결정할 수 있으며, 이러한 알고리즘 BLAST에 기초하여, BLASTN이나 BLASTX라고 불리는 프로그램이 개발되어 있다(참조: http://www.ncbi.nlm.nih.gov).
융합 단백질
본 명세서에서, 일 예는 (1) TIGIT을 특이적으로 인식하는 항-TIGIT 항체 또는 이의 항원결합단편 및 (2) 사이토카인 유사 폴리펩타이드를 포함하는 융합 단백질을 제공한다.
상기 융합 단백질에 있어서, 상기 항-TIGIT 항체 또는 이의 항원결합단편은 TIGIT의 작용을 봉쇄하여 면역을 활성화 (e.g., 이펙터 T세포 기능 강화, Treg 활성 제어, 면역세포(T 세포, NK 세포 등)의 사이토카인 분비 증가 등)시키는 활성을 가지는 것일 수 있다. 또한, 상기 사이토카인 유사 폴리펩타이드는 인터류킨-15 및/또는 인터류킨-2와 유사한 활성을 가지면서 야생형 인터류킨-15/인터류킨-2 대비 수용체와의 결합력이 우수하고 면역원성이 낮아서, 생체에 투여시 면역증강 효과가 우수하면서도 이를 면역원으로 인식하는 면역반응 유발 위험이 낮은 안전한 폴리펩타이드일 수 있다. 따라서, 상기 융합 단백질은 다양한 면역 활성화제 및/또는 면역 치료제로서 적용될 수 있다.
일 예에서, 상기 융합 단백질에 있어서, 상기 사이토카인 유사 폴리펩타이드는 항-TIGIT 항체 또는 이의 항원결합단편의 중쇄 (중쇄 불변영역 또는 중쇄 가변영역) 또는 경쇄 (경쇄 불변영역 또는 경쇄 가변영역)의 C-말단 및/또는 N-말단에 링커(제1 링커)를 통하여 연결되거나 링커 없이 직접 연결될 수 있다.
보다 구체적으로, 상기 융합 단백질은, (1) 항-TIGIT 항체 (예컨대, 두 개의 중쇄 및 두 개의 경쇄를 포함하는 IgG 타입 항체) 및 (2) 사이토카인 유사 폴리펩타이드를 하나 포함하고, 상기 사이토카인 유사 폴리펩타이드는 상기 항-TIGIT 항체의 2개의 중쇄 중 어느 하나 또는 2개의 경쇄 중 어느 하나의 C-말단 (불변영역의 C-말단) 또는 N-말단에 펩타이드 링커(제1 링커)를 통하거나 통하지 않고 연결된 것일 수 있다.
다른 구체예에서, 상기 융합 단백질은, (1) 항-TIGIT 항체 (예컨대, 두 개의 중쇄 및 두 개의 경쇄를 포함하는 IgG 타입 항체) 및 (2) 2 개의 사이토카인 유사 폴리펩타이드를 포함하고, 상기 2개의 사이토카인 유사 폴리펩타이드는 상기 항-TIGIT 항체의 2개의 중쇄 또는 2개의 경쇄의 C-말단 또는 N-말단에 각각 펩타이드 링커(제1 링커)를 통하거나 통하지 않고 연결된 것일 수 있다.
예컨대, 상기 융합 단백질에 있어서,
(i) 상기 2개의 사이토카인 유사 폴리펩타이드 중 어느 하나는 상기 항-TIGIT 항체의 2개의 중쇄 중 어느 하나의 C-말단 (즉, 중쇄 불변영역(예컨대, Fc)의 C-말단) 또는 N-말단 (즉, 중쇄 가변영역의 N 말단)에, 다른 하나는 상기 항-TIGIT 항체의 다른 하나의 중쇄의 C-말단 (즉, 중쇄 불변영역(예컨대, Fc)의 C-말단) 또는 N-말단 (즉, 중쇄 가변영역의 N 말단)에, 링커(제1 링커)를 통하거나 통하지 않고 연결되거나, 또는
(ii) 상기 2개의 사이토카인 유사 폴리펩타이드 중 어느 하나는 상기 항-TIGIT 항체의 2개의 경쇄 중 어느 하나의 C-말단 (즉, 경쇄 불변영역의 C-말단) 또는 N-말단 (즉, 경쇄 가변영역의 N-말단)에, 다른 하나는 상기 항-TIGIT 항체의 다른 하나의 경쇄의 C-말단 (즉, 경쇄 불변영역의 C-말단) 또는 N-말단 (즉, 경쇄 가변영역의 N-말단)에, 링커(제1 링커)를 통하거나 통하지 않고 연결된 것일 수 있다.
보다 구체적으로, 상기 융합 단백질에 있어서,
(i) 상기 2개의 사이토카인 유사 폴리펩타이드 중 어느 하나는 상기 항-TIGIT 항체의 2개의 중쇄 중 어느 하나의 Fc의 C-말단에, 다른 하나는 상기 항-TIGIT 항체의 다른 하나의 Fc의 C-말단에, 링커(제1 링커)를 통하거나 통하지 않고 연결되거나, 또는
(ii) 상기 2개의 사이토카인 유사 폴리펩타이드 중 어느 하나는 상기 항-TIGIT 항체의 2개의 경쇄 중 어느 하나의 불변영역의 C-말단에, 다른 하나는 상기 항-TIGIT 항체의 다른 하나의 경쇄의 불변영역의 C-말단에, 링커(제1 링커)를 통하거나 통하지 않고 연결된 것일 수 있다.
상기 제1 링커는 펩타이드 링커일 수 있으며, 일 예에서, 1 내지 50개, 1 내지 40개, 1 내지 35개, 1 내지 30개, 1 내지 25개, 1 내지 20개, 1 내지 18개, 1 내지 15개, 1 내지 10개, 2 내지 50개, 2 내지 40개, 2 내지 35개, 2 내지 30개, 2 내지 25개, 2 내지 20개, 2 내지 18개, 2 내지 15개, 2 내지 10개, 5 내지 50개, 5 내지 40개, 5 내지 35개, 5 내지 30개, 5 내지 25개, 5 내지 20개, 5 내지 18개, 5 내지 15개, 5 내지 10개, 10 내지 50개, 10 내지 40개, 10 내지 35개, 10 내지 30개, 10 내지 25개, 10 내지 20개, 10 내지 18개, 10 내지 15개, 20 내지 50개, 20 내지 40개, 20 내지 35개, 20 내지 30개, 20 내지 25개, 30 내지 50개, 30 내지 40개, 30 내지 35개, 32 내지 50개, 32 내지 40개, 32개 내지 35개, 35 내지 50개, 또는 35 내지 40개의 아미노산을 포함하는 것일 수 있다. 예컨대, 상기 제1 링커는 [(G)mS]l (m은 아미노산 G(Gly)의 개수로서 1 내지 10의 정수(예컨대, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 또는 10)이고, l은 [(G)mS]의 개수로서 1 내지 10의 정수(예컨대, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 또는 10)임; 예컨대, GGGGS(서열번호 96), GGGGSGGGGS(서열번호 97), GGGGSGGGGSGGGGS (서열번호 85), GS, GSGS(서열번호 98), GSGSGS(서열번호 99), GSGSGSGS(서열번호 100), GSGSGSGSGS(서열번호 101) 등), [(S)o(G)pS]q[XQ]r (o는 아미노산 S(Ser)의 개수로서 0(absent) 또는 1이고, p는 아미노산 G(Gly)의 개수로서 1 내지 5의 정수(예컨대, 1, 2, 3, 4, 또는 5)이고, q는 단위체 [(S)o(G)pS]의 개수로서 1 내지 5의 정수(예컨대, 1, 2, 3, 4, 또는 5)이고, 상기 단위체가 2개 이상인 경우 (q가 2, 3, 4, 또는 5인 경우) 각 단위체는 서로 동일하거나 다를 수 있으며, X는 류신(Leu; I) 또는 이소류신(Ile; I)이고, r은 디펩타이드 [XQ]의 개수로서 0(absent) 또는 1임; 예컨대, GGGGSGGGGSLQ(서열번호 102), GSGGGGSGGGGSLQ(서열번호 103), GGGGSGGGGSIQ(서열번호 104), GSGGGGSGGGGSIQ(서열번호 105), SGGSGGGGSGGGSGGGGSIQ(서열번호 106), SGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGSIQ(서열번호 107), SGGSGGGGSGGGSGGGGSLQ(서열번호 108), SGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGSLQ(서열번호 109)), SGGGGSGGGSGGGGGSGG(서열번호 110), SGGGGSGGGSGGGGGSGGGSG(서열번호 111) 등) [EAAAK]n (n은 [EAAAK](서열번호 112)의 개수로서 1 내지 5의 정수(예컨대, 1, 2, 3, 4, 또는 5)임; 예컨대, EAAAKEAAAKEAAAK (서열번호 44) 등), A EAAAK A(서열번호 113), A EAAAK EAAAK A(서열번호 114), A EAAAK EAAAK EAAAK A(서열번호 115), A EAAAK EAAAK EAAAK EAAAK A(서열번호 116), A EAAAK EAAAK EAAAK EAAAK EAAAK A(서열번호 117), AEAAAKEAAAKAG(서열번호 118), AEAAAKEAAAKAGS(서열번호 119), GGGGG(서열번호 120), GGAGG(서열번호 121), GGGGGGGG(서열번호 122), GAGAGAGAGA(서열번호 123), RPLSYRPPFPFGFPSVRP(서열번호 124), YPRSIYIRRRHPSPSLTT(서열번호 125), TPSHLSHILPSFGLPTFN(서열번호 126), RPVSPFTFPRLSNSWLPA(서열번호 127), SPAAHFPRSIPRPGPIRT(서열번호 128), APGPSAPSHRSLPSRAFG(서열번호 129), PRNSIHFLHPLLVAPLGA(서열번호 130), MPSLSGVLQVRYLSPPDL(서열번호 131), SPQYPSPLTLTLPPHPSL(서열번호 132), NPSLNPPSYLHRAPSRIS(서열번호 133), LPWRTSLLPSLPLRRRP(서열번호 134), PPLFAKGPVGLLSRSFPP(서열번호 135), VPPAPVVSLRSAHARPPY(서열번호 136), LRPTPPRVRSYTCCPTP(서열번호 137), PNVAHVLPLL TVPWDNLR(서열번호 138), CNPLLPLCARSPAVRTFP(서열번호 139), LGTPTPTPTPTGEF(서열번호 140), EDFTRGKL(서열번호 141), L EAAAR EAAAR EAAAR EAAAR(서열번호 142), L EAAAR EAAAR EAAAR(서열번호 143), L EAAAR(서열번호 144), L EAAAR EAAAR(서열번호 145), EAAAR EAAAR EAAAR EAAAR(서열번호 146), EAAAR EAAAR EAAAR(서열번호 147), EAAAR EAAAR(서열번호 148), EAAAR(서열번호 149), LTEEQQEGGG(서열번호 150), TEEQQEGGG LTEEQQEGGG(서열번호 151), LAKLKQKTEQLQDRIAGGG(서열번호 152), LELKTPLGDT(서열번호 153), THTCPRCPEP(서열번호 154), KSCDTPPPCP(서열번호 155), RCPEPKSCDT(서열번호 156), PPPCPRCPEP(서열번호 157), KSCDTPPPCP(서열번호 158), RCPGG(서열번호 159), 및 LEPKSSDKTHTSPPSPGG(서열번호 160) 등으로 이루어진 군에서 선택 1종 이상일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다. 일 구체예에서, 상기 제1 링커는 강직성 펩타이드 링커 (예컨대, [EAAAK]n (n은 [EAAAK]의 개수로서 1 내지 5의 정수(예컨대, 1, 2, 3, 4, 또는 5)임; 예컨대, EAAAKEAAAKEAAAK (서열번호 44)) 또는 유연성 펩타이드 링커 (예컨대, [(G)mS]l (m은 아미노산 G(Gly)의 개수로서 1 내지 10의 정수(예컨대, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 또는 10)이고, l은 [(G)mS]의 개수로서 1 내지 10의 정수(예컨대, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 또는 10)임; 예컨대, GGGGS(서열번호 96), GGGGSGGGGS(서열번호 97, GGGGSGGGGSGGGGS (서열번호 85), GS, GSGS(서열번호 98), GSGSGS(서열번호 99), GSGSGSGS(서열번호 100), GSGSGSGSGS(서열번호 101) 등))일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
항-TIGIT 항체 또는 이의 항원결합단편
상기 항-TIGIT 항체 또는 이의 항원결합단편은,
서열번호 1, 2, 또는 3의 아미노산 서열을 포함하는 폴리펩타이드 (CDR-H1),
서열번호 4, 5, 또는 6의 아미노산 서열을 포함하는 폴리펩타이드 (CDR-H2),
서열번호 7, 8, 또는 9의 아미노산 서열을 포함하는 폴리펩타이드 (CDR-H3),
서열번호 10, 13, 또는 14의 아미노산 서열을 포함하는 폴리펩타이드 (CDR-L1),
서열번호 15, 16, 또는 17의 아미노산 서열을 포함하는 폴리펩타이드 (CDR-L2), 및
서열번호 18, 19, 또는 20의 아미노산 서열을 포함하는 폴리펩타이드 (CDR-L3)
를 포함하는 것일 수 있다.
상기 서열번호 10의 아미노산 서열을 포함하는 폴리펩타이드 (CDR-L1)는 서열번호 11 또는 서열번호 12의 아미노산 서열을 포함하는 것일 수 있다.
본 명세서에 있어서, 상보성결정부위 (CDR)는 kabat system에 따른 CDR 정의를 기준으로 결정된다.
일 구체예에서, 본 명세서에서 제공되는 항-TIGIT 항체 또는 이의 항원결합단편에 포함 가능한 6개 CDR (CDR-L1, CDR-L2, CDR-L3, CDR-H1, CDR-H2, 및 CDR-H3)을 아래의 표 1에 정리하였다:
| 서열 | 서열번호 | |
| CDR-H1 | SDYAWN | 1 |
| CDR-H1 | GSTFTEYTMH | 2 |
| CDR-H1 | GYSFTDYIMN | 3 |
| CDR-H2 | YISYSGSARYNPSLKS | 4 |
| CDR-H2 | GLNPNNGGTSYNQRFKD | 5 |
| CDR-H2 | LSIPYNGGTSYNQKFEG | 6 |
| CDR-H3 | KGYPAYFAY | 7 |
| CDR-H3 | GTYYDYSFAY | 8 |
| CDR-H3 | GIKGYFAMDY | 9 |
| CDR-L1 | XASQDVSTAVA (X=K or R) | 10 |
| CDR-L1 | KASQDVSTAVA | 11 |
| CDR-L1 | RASQDVSTAVA | 12 |
| CDR-L1 | KASHYVSTAVA | 13 |
| CDR-L1 | RSSQSLVNSFGKTYLS | 14 |
| CDR-L2 | SASYRYT | 15 |
| CDR-L2 | SPSYRYT | 16 |
| CDR-L2 | GVSNRFS | 17 |
| CDR-L3 | QHHYSTPYT | 18 |
| CDR-L3 | HQHYSTPWT | 19 |
| CDR-L3 | LQGTHQPWT | 20 |
(상기 표 1에서, CDR-H1, CDR-H2, 및 CDR-H3는 중쇄 상보성결정부위를 의미하고, CDR-L1, CDR-L2, 및 CDR-L3는 경쇄 상보성결정부위를 의미한다)
구체예에서, 상기 항-TIGIT 항체 또는 이의 항원결합단편은,
서열번호 1, 2, 또는 3의 CDR-H1, 서열번호 4, 5, 또는 6의 CDR-H2, 및 서열번호 7, 8, 또는 9의 CDR-H3를 포함하는 중쇄 가변영역, 및
서열번호 10 (예컨대, 서열번호 11 또는 서열번호 12), 13, 또는 14의 CDR-L1, 서열번호 15, 16, 또는 17의 CDR-L2, 및 서열번호 18, 19, 또는 20의 CDR-L3를 포함하는 경쇄 가변영역
을 포함하는 것일 수 있다.
보다 구체적으로, 상기 항-TIGIT 항체 또는 이의 항원결합단편은,
서열번호 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 또는 28의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변영역, 및
서열번호 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 또는 36의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변영역
을 포함하는 것일 수 있다.
경우에 따라서(예컨대, 재조합적으로 제작시), 상기 중쇄 가변영역 및/또는 경쇄 가변영역은 N 말단에 적절한 신호서열을 추가로 포함할 수 있다.
본 명세서에서 제공되는 항-TIGIT 항체 또는 이의 항원결합단편에 포함 가능한 중쇄 가변영역 및 경쇄 가변영역의 아미노산 서열을 아래의 표 2에 예시하였다:
| 가변영역 | 아미노산 서열(N→C) | 서열번호 |
| 중쇄가변영역 (VH0) | DVQLQESGPGLVKPSQSLSLTCTVTGYSITSDYAWNWIRQFPGNKLEWMGYISYSGSARYNPSLKSRISITRDTSMNQFFLQLNSVTAEDTATYYCARKGYPAYFAYWGQGTLVTVSS | 21 |
| 중쇄가변영역 (VH1) | DVQLQESGPGLVKPSQTLSLTCTVTGYSITSDYAWNWIRQPPGKGLEWMGYISYSGSARYNPSLKSRITISRDTSMNQFSLKLNSVTAEDTATYYCARKGYPAYFAYWGQGTLVTVSS | 22 |
| 중쇄가변영역 (VH2) | DVQLQESGPGLVKPSQTLSLTCTVTGYSITSDYAWNWIRQPPGKGLEWMGYISYSGSARYNPSLKSRITISRDTSKNQFSLKLSSVTAEDTATYYCARKGYPAYFAYWGQGTLVTVSS | 23 |
| 중쇄가변영역(VH3) | QVQLQESGPGLVKPSQTLSLTCTVTGYSITSDYAWNWIRQPPGKGLEWMGYISYSGSARYNPSLKSRVTISRDTSKNQFSLKLSSVTAEDTATYYCARKGYPAYFAYWGQGTLVTVSS | 24 |
| 중쇄가변영역 (VH4) | QVQLQESGPGLVKPSQTLSLTCTVTGYSITSDYAWNWIRQPPGKGLEWMGYISYSGSARYNPSLKSRVTISRDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARKGYPAYFAYWGQGTLVTVSS | 25 |
| 중쇄가변영역 (VH5) | QVQLQESGPGLVKPSQTLSLTCTVTGYSITSDYAWNWIRQPPGKGLEWMGYISYSGSARYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARKGYPAYFAYWGQGTLVTVSS | 26 |
| 중쇄가변영역 | EVQLQQSGPELVKPGASVKISCKTSGSTFTEYTMHWVKQSHGKSLEWIGGLNPNNGGTSYNQRFKDRATLTVDKSSSTAYMELRSLTSEDSAVYYCTRGTYYDYSFAYWGQGTLVTVSA | 27 |
| 중쇄가변영역 | EVQLQQSGPELVKPGASMKISCKASGYSFTDYIMNWVKQSHGKNLEWIGLSIPYNGGTSYNQKFEGKATLTVDKSSSTAYMELLSLTSEDSAVYYCARGIKGYFAMDYWGQGTSVTVSS | 28 |
| 경쇄가변영역 (Vk0) | DIVMTQSHKFMSTSVGDRVSISCKASQDVSTAVAWYQQKPGQSPELLIYSASYRYTGVPDRFTGSGSGTDFTFTISSVQAEDLAVYYCQHHYSTPYTFGGGTKLEMK | 29 |
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| 경쇄가변영역 | DIVMTQSHKFMSTSVGDRVSITCKASHYVSTAVAWYQQKPGQSPKLLIYSPSYRYTGVPDRFTGSGSGTDFTFTISSVQAEDLAVYYCHQHYSTPWTFGGGTKLEIK | 35 |
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(표 2에서, 밑줄로 표시된 영역은 순서대로 중쇄 및 경쇄의 CDR1, CDR2, 및 CDR3을 나타냄)
일 예에서, 본 명세서에서 제공되는 항-TIGIT 항체 또는 이의 항원결합단편은 TIGIT 단백질, 예컨대, 인간 TIGIT 단백질(NCBI Reference Sequence NP_776160.2; UniProtKB/SwissProt Q495A1-1)의 아미노산 잔기 51-70 영역(TAQVTQVNWEQQDQLLAICN; 서열번호 38) 중 선택되는 하나 이상 또는 2개 이상(예컨대, 연속하여 위치함)의 아미노산에 결합하는 것일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
[인간 TIGIT 단백질(서열번호 37)]
1 MRWCLLLIWA QGLRQAPLAS GMMTGTIETT GNISAEKGGS IILQCHLSST TAQVTQVNWE
61 QQDQLLAICN ADLGWHISPS FKDRVAPGPG LGLTLQSLTV NDTGEYFCIY HTYPDGTYTG
121 RIFLEVLESS VAEHGARFQI PLLGAMAATL VVICTAVIVV VALTRKKKAL RIHSVEGDLR
181 RKSAGQEEWS PSAPSPPGSC VQAEAAPAGL CGEQRGEDCA ELHDYFNVLS YRSLGNCSFF
241 TETG
본 명세서에서 "항체"라 함은, 특정 항원에 특이적으로 결합하는 단백질을 총칭하는 것으로서, 면역계 내에서 항원의 자극에 의하여 만들어지는 단백질 또는 이를 화학적 합성 또는 재조합적으로 제조한 단백질일 수 있으며, 그 종류는 특별히 제한되지 않는다. 상기 항체는 비자연적으로 생성된 것, 예컨대, 재조합적 또는 합성적으로 생성된 것일 수 있다. 상기 항체는 동물 항체 (예컨대, 마우스 항체 등), 키메라 항체, 인간화 항체, 또는 인간 항체일 수 있다. 상기 항체는 단클론 항체 또는 다클론 항체일 수 있다.
본 명세서에서 제공되는 항-TIGIT 항체 또는 이의 항원결합단편에서 앞서 정의한 중쇄 CDR 및 경쇄 CDR 부위, 또는 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역을 제외한 나머지 부위는 모든 서브타입의 면역글로불린(예컨대, IgA, IgD, IgE, IgG (IgG1, IgG2, IgG3, 또는 IgG4), IgM, 등)으로부터 유래한 것일 수 있고, 예컨대, 상기 모든 서브타입의 면역글로불린의 프레임워크 부위, 및/또는 경쇄 불변 영역 및/또는 중쇄 불변 영역으로부터 유래한 것일 수 있다. 일 예에서, 본 명세서에서 제공되는 항-TIGIT 항체는 인간 IgG형 항체, 예컨대, IgG1, IgG2, IgG3, 또는 IgG4 형태의 항체일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
완전한 항체(예컨대, IgG형)는 2개의 전장(full length) 경쇄 및 2개의 전장 중쇄를 가지는 구조이며 각각의 경쇄는 중쇄와 이황화 결합으로 연결되어 있다. 항체의 불변 영역은 중쇄 불변 영역과 경쇄 불변 영역으로 나뉘어지며, 중쇄 불변 영역은 감마(γ), 뮤(μ), 알파(α), 델타(δ) 및 엡실론(ε) 타입을 가지고, 서브클래스로 감마1(γ1), 감마2(γ2), 감마3(γ3), 감마4(γ4), 알파1(α1) 및 알파2(α2)를 가진다. 경쇄의 불변 영역은 카파(κ) 및 람다(λ) 타입을 가진다.
일 예에서, 본 명세서에서 제공되는 항-TIGIT 항체는 중쇄 불변영역으로서 IgG의 불변영역, 경쇄 불변영역으로서 카파 불변영역을 포함할 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
일 구체예에서, 상기 IgG(예컨대, 인간 IgG1)의 불변영역은 야생형일 수 있다. 다른 구체예에서, 상기 IgG의 불변영역은, 인간 IgG1을 기준으로, S240D(240번째 아미노산인 S가 D로 치환됨, 이하 아미노산 변이는 동일한 방식으로 표현됨), A331L, I333E, N298A, S299A, E334A, K335A, L235A, L236A 및 P330G로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상의 변이를 포함하는 변이형일 수 있으며, 예컨대, 다음의 변이를 포함하는 변이형일 수 있다:
(1) S240D, A331L, 및 I333E;
(2) N298A;
(3) S299A, E334A, 및 K335A; 또는
(4) L235A, L236A 및 P330G.
용어, "중쇄(heavy chain)"는 항원에 특이성을 부여하기 위해 충분한 가변영역 서열을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 가변영역 도메인 VH 및 3개의 불변 영역 도메인 CH1, CH2 및 CH3과 힌지(hinge)를 포함하는 전장 중쇄 및 이의 단편을 모두 포함하는 의미로 해석된다. 또한, 용어 "경쇄(light chain)"는 항원에 특이성을 부여하기 위한 충분한 가변영역 서열을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 가변영역 도메인 VL 및 불변 영역 도메인 CL을 포함하는 전장 경쇄 및 이의 단편을 모두 포함하는 의미로 해석된다.
용어, "CDR(complementarity determining region)"은 항체의 가변 부위 중에서 항원과의 결합 특이성을 부여하는 부위를 의미하는 것으로, 면역글로불린의 중쇄 및 경쇄의 고가변영역(hypervariable region)의 아미노산 서열을 의미한다. 중쇄 및 경쇄는 각각 3개의 CDR을 포함할 수 있다(CDRH1, CDRH2, CDRH3 및 CDRL1, CDRL2, CDRL3). 상기 CDR은 항체가 항원 또는 에피토프에 결합하는 데 있어서 주요한 접촉 잔기를 제공할 수 있다. 한편, 본 명세서에 있어서, 용어, "특이적으로 결합" 또는 "특이적으로 인식"은 당업자에게 통상적으로 공지되어 있는 의미와 동일한 것으로서, 항원 및 항체가 특이적으로 상호작용하여 면역학적 반응을 하는 것을 의미한다.
본 명세서에 기재된 상보성결정부위 (CDR)는 kabat system에 따른 CDR 정의를 기준으로 결정된 것이다.
본 명세서에서 항체는, 특별한 언급이 없는 한, 항원 결합능을 보유하는 항체의 항원결합단편을 포함하는 것으로 이해될 수 있다.
용어, "항원결합단편"은 항원이 결합할 수 있는 부분(예컨대, 본 명세서에서 정의된 6개의 CDR)을 포함하는 모든 형태의 폴리펩타이드를 의미한다. 예를 들어, 항체의 scFv, scFv-Fc, (scFv)2, Fab, Fab' 또는 F(ab')2일 수 있으나, 이에 한정되지 않는다.
상기 항원결합단편 중, Fab는 경쇄 및 중쇄의 가변영역과 경쇄의 불변 영역 및 중쇄의 첫 번째 불변 영역(CH1)을 가지는 구조로 1개의 항원 결합 부위를 가진다.
Fab'는 중쇄 CH1 도메인의 C-말단에 하나 이상의 시스테인 잔기를 포함하는 힌지 영역(hinge region)을 가진다는 점에서 Fab와 차이가 있다.
F(ab')2 항체는 Fab'의 힌지 영역의 시스테인 잔기가 디설파이드 결합을 이루면서 생성된다. Fv는 중쇄 가변부위 및 경쇄 가변부위만을 가지고 있는 최소의 항체조각으로 Fv 단편을 생성하는 재조합 기술은 당업계에 널리 공지되어 있다.
이중쇄 Fv(two-chain Fv)는 비공유 결합으로 중쇄 가변부위와 경쇄 가변부위가 연결되어 있고 단쇄 Fv(single-chain Fv)는 일반적으로 펩타이드 링커를 통하여 중쇄의 가변영역과 단쇄의 가변영역이 공유 결합으로 연결되거나 또는 C-말단에서 바로 연결되어 있어서 이중쇄 Fv와 같이 다이머와 같은 구조를 이룰 수 있다.
상기 항원결합단편은 단백질 가수분해 효소를 이용해서 얻을 수 있고(예를 들어, 전체 항체를 파파인으로 제한 절단하면 Fab를 얻을 수 있고 펩신으로 절단하면 F(ab')2 단편을 얻을 수 있다), 유전자 재조합 기술을 통하여 제작할 수 있다.
용어 "힌지 영역(hinge region)"은 항체의 중쇄에 포함되어 있는 영역으로서, CH1 및 CH2 영역 사이에 존재하며, 항체 내 항원 결합 부위의 유연성(flexibility)를 제공하는 기능을 하는 영역을 의미한다.
본 명세서에서 제공되는 항체는 단클론 항체일 수 있다. 단클론 항체는 당 업계에 널리 알려진 방법대로 제조될 수 있다. 예컨대, phage display 기법을 이용해서 제조될 수 있다. 또는, 상기 항체는 통상의 방법에 의하여 동물 (예컨대, 마우스) 유래의 단클론 항체로 제조될 수 있다.
한편, 전형적인 ELISA(Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay) 포맷을 이용하여 TIGIT의 수용체 결합 도메인과의 결합능에 기초하여 개별 단클론 항체들을 스크리닝할 수 있다. 결합체들에 대해 분자적 상호작용을 검정하기 위한 경쟁적 ELISA(Competitive ELISA)와 같은 기능성 분석 또는 세포-기반 분석(cell-based assay)과 같은 기능성 분석을 통해 저해 활성에 대해 검정할 수 있다. 그런 다음 강한 저해 활성에 기초하여 선택된 단클론항체 멤버들에 대해 TIGIT의 수용체 결합 도메인에 대한 각각의 친화도(Kd values)를 검정할 수 있다.
최종 선택된 항체들은 항원결합부위를 제외한 나머지 부분이 인간의 면역글로블린 항체화된 항체뿐만 아니라, 인간화 항체로서 제조하여 사용할 수 있다. 인간화 항체의 제조방법은 당 업계에 잘 알려져 있다.
본 명세서에서 제공되는 항-TIGIT 항체의 항원결합단편은 상기 항-TIGIT 항체에서 유래하고 항원(TIGIT)에 대한 결합력을 보유하는 단편을 의미하는 것으로, 상기한 항-TIGIT 항체의 6개의 CDR을 포함하는 임의의 폴리펩타이드, 예를 들어 scFv, scFv-Fc, scFv-Ck(카파 불변영역), scFv-Cλ(람다 불변영역), (scFv)2, Fab, Fab' 또는 F(ab')2일 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다. 일 예에서, 상기 항원결합단편은 scFv, 또는 scFv가 면역글로불린 (예컨대, IgG1, IgG2, IgG3, IgG4 등)의 Fc 부위와 융합된 융합 폴리펩타이드 (scFv-Fc) 또는 경쇄의 불변 영역 (예컨대, 카파 또는 람다)와 융합된 융합 폴리펩타이드 (scFv-Ck 또는 scFv-Cλ)일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
본 명세서에서, 항체(예컨대, CDR, 가변영역, 또는 중쇄/경쇄, 항원결합단편 등)가 "특정 아미노산 서열을 포함한다, 또는 특정 아미노산 서열로 이루어진다 또는 포함된다" 함은 상기 아미노산 서열을 필수적으로 포함하는 경우, 및 상기 아미노산 서열에 항체 활성 (예컨대, 항원 친화도, 약리적 활성 등)에 유의한 영향이 없는 무의미한 변이(예컨대, 아미노산 잔기의 치환, 결실, 및/또는 추가)가 도입된 경우를 모두 의미하는 것일 수 있다.
본 명세서에서 제공되는 항-TIGIT 항체 또는 이의 항원결합단편은 TIGIT (e.g., 인간 TIGIT)에 대한 결합 친화도 (KD)가, 예를 들어, 표면 플라스몬 공명 (Surface plasmon resonance, SPR)으로 측정된 경우를 기준으로, 10mM 이하, 5 mM 이하, 1mM 이하, 0.5mM 이하, 0.2mM 이하, 0.1mM 이하, 0.05mM 이하, 0.01mM 이하, 0.005mM 이하, 또는 0.001mM 이하일 수 있으며, 예를 들어, 0.0001nM 내지 10mM, 0.0005nM 내지 10mM, 0.001nM 내지 10mM, 0.005nM 내지 10mM, 0.01nM 내지 10mM, 0.05nM 내지 10mM, 0.1nM 내지 10mM, 0.5nM 내지 10mM, 1nM 내지 10mM, 0.0001nM 내지 5mM, 0.0005nM 내지 5mM, 0.001nM 내지 5mM, 0.005nM 내지 5mM, 0.01nM 내지 5mM, 0.05nM 내지 5mM, 0.1nM 내지 5mM, 0.5nM 내지 5mM, 1nM 내지 5mM, 0.0001nM 내지 1mM, 0.0005nM 내지 1mM, 0.001nM 내지 1mM, 0.005nM 내지 1mM, 0.01nM 내지 1mM, 0.05nM 내지 1mM, 0.1nM 내지 1mM, 0.5nM 내지 1mM, 1nM 내지 1mM, 0.0001nM 내지 0.5mM, 0.0005nM 내지 0.5mM, 0.001nM 내지 0.5mM, 0.005nM 내지 0.5mM, 0.01nM 내지 0.5mM, 0.05nM 내지 0.5mM, 0.1nM 내지 0.5mM, 0.5nM 내지 0.5mM, 1nM 내지 0.5mM, 0.0001nM 내지 0.2mM, 0.0005nM 내지 0.2mM, 0.001nM 내지 0.2mM, 0.005nM 내지 0.2mM, 0.01nM 내지 0.2mM, 0.05nM 내지 0.2mM, 0.1nM 내지 0.2mM, 0.5nM 내지 0.2mM, 1nM 내지 0.2mM, 0.0001nM 내지 0.1mM, 0.0005nM 내지 0.1mM, 0.001nM 내지 0.1mM, 0.005nM 내지 0.1mM, 0.01nM 내지 0.1mM, 0.05nM 내지 0.1mM, 0.1nM 내지 0.1mM, 0.5nM 내지 0.1mM, 1nM 내지 0.1mM, 0.0001nM 내지 0.05mM, 0.0005nM 내지 0.05mM, 0.001nM 내지 0.05mM, 0.005nM 내지 0.05mM, 0.01nM 내지 0.05mM, 0.05nM 내지 0.05mM, 0.1nM 내지 0.05mM, 0.5nM 내지 0.05mM, 1nM 내지 0.05mM, 0.0001nM 내지 0.01mM, 0.0005nM 내지 0.01mM, 0.001nM 내지 0.01mM, 0.005nM 내지 0.01mM, 0.01nM 내지 0.01mM, 0.05nM 내지 0.01mM, 0.1nM 내지 0.01mM, 0.5nM 내지 0.01mM, 또는 1nM 내지 0.01mM일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
사이토카인 유사 폴리펩타이드
상기 사이토카인 유사 폴리펩타이드는,
(a) 인터류킨-15 수용체 알파(IL-15Rα) 스시 도메인, 및
(b) 인터류킨-15(IL-15)
을 포함하는 융합 폴리펩타이드이다.
상기 사이토카인 유사 폴리펩타이드, (a) 인터류킨-15 수용체 알파(IL-15Rα) 스시 도메인 및 (b) 인터류킨-15에 더하여, 펩타이드 링커(제2 링커)를 추가로 포함할 수 있다. 상기 제2 링커는 인터류킨-15과 인터류킨-15 수용체 알파 스시 도메인 사이에 위치하여 이들을 연결하는 것일 수 있다.
일 예에서, 사이토카인 유사 폴리펩타이드는, N-말단에서 C-말단 방향으로 순서대로,
인터류킨-15 수용체 알파 스시 도메인 및 인터류킨-15를 포함하거나,
인터류킨-15 수용체 알파 스시 도메인, 펩타이드 링커(제2 링커), 및 인터류킨-15를 포함하는 것일 수 있다.
일 구체예에서, 상기 인터류킨-15 수용체 알파 스시 도메인은 서열번호 39 또는 서열번호 88의 아미노산 서열, 또는 이와 60% 이상, 70% 이상, 80% 이상, 85% 이상, 90% 이상, 95% 이상, 96% 이상, 97% 이상, 98% 이상, 또는 99% 이상의 서열상동성(identity)을 가지는 아미노산 서열을 포함하는 것일 수 있다.
[서열번호 39]
ITCPPPMSVEHADIWVKSYSLYSRERYICNSGFKRKAGTSSLTECVLNKATNVAHWTTPSLKCIRDPALVHQRPAPP
[서열번호 88]
ITCPPPMSVEHADIWVKSYSLYSRERYICNSGFKRKAGTSSLTECVLNKATNVAHWTTPSLKCIRDPALVHQRPAPPS
상기 인터류킨-15는 인간 인터류킨-15 (야생형) 또는 인간 인터류킨-15의 변이형일 수 있으며, 상기 인간 인터류킨-15의 변이형은 서열번호 40의 아미노산 서열, 또는 이와 60% 이상, 70% 이상, 80% 이상, 85% 이상, 90% 이상, 95% 이상, 96% 이상, 97% 이상, 98% 이상, 또는 99% 이상의 서열상동성(identity)을 가지는 아미노산 서열을 포함하는 것일 수 있다.
[서열번호 40]
NWVNVISDLKKIEDLIQSMHIDATLYTESDVHPSCKVTAMKCFLLELQVISLESGDASIHDTVENLIILANNSLSSNGNVTESGCKECEELEEKNIKEFLQSFVHIVQMFINTS
인터류킨-15(IL-15)와 인터류킨-2(IL-2)는 서로 구조적 유사성을 가지며, IL-2/IL-15 수용체 베타 체인 (CD122) 및 공통된 감마 체인 (gamma-C, CD132) 복합체에 결합하고 이를 통하여 신호전달에 관여한다. 일 예에서, 인터류킨-15는 인간 유래의 것일 수 있으며, 예컨대, NCBI Accession No. NP_000576.1 (아미노산 잔기 49~162 부위) 등일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다. 인터류킨-2는 인간 유래의 것일 수 있으며, 예컨대, NCBI Accession No. NP_000577.2 등일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
상기 사이토카인 유사 폴리펩타이드는 부가적 목적을 위하여 위한 추가의 올리고펩타이드를 포함할 수 있으며, 예컨대, 단백질 정제 편의를 위하여, N-말단에 표지를 위한 Tag (예컨대, MAPRRARGCRTLGLPALLLLLLLRPPATRGDYKDDDDKIEGR (서열번호 89) 등) 등을 추가로 포함할 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
상기 사이토카인 유사 폴리펩타이드는 인터류킨-15/인터류킨-2 단백질을 기본 골격으로 하는 합성 단백질 (engineered protein)으로서, 인터류킨-15의 활성을 가지면서, 인터류킨-15의 활성을 가지는 다른 합성 단백질과 비교하여 체내 투여시 면역원성이 낮은 것을 특징으로 한다.
상기 제2 링커는 펩타이드 링커일 수 있으며, 일 예에서, 1 내지 50개, 1 내지 40개, 1 내지 35개, 1 내지 30개, 1 내지 25개, 1 내지 20개, 1 내지 18개, 1 내지 15개, 1 내지 10개, 2 내지 50개, 2 내지 40개, 2 내지 35개, 2 내지 30개, 2 내지 25개, 2 내지 20개, 2 내지 18개, 2 내지 15개, 2 내지 10개, 5 내지 50개, 5 내지 40개, 5 내지 35개, 5 내지 30개, 5 내지 25개, 5 내지 20개, 5 내지 18개, 5 내지 15개, 5 내지 10개, 10 내지 50개, 10 내지 40개, 10 내지 35개, 10 내지 30개, 10 내지 25개, 10 내지 20개, 10 내지 18개, 10 내지 15개, 20 내지 50개, 20 내지 40개, 20 내지 35개, 20 내지 30개, 20 내지 25개, 30 내지 50개, 30 내지 40개, 30 내지 35개, 32 내지 50개, 32 내지 40개, 32개 내지 35개, 35 내지 50개, 또는 35 내지 40개의 아미노산을 포함하는 것일 수 있다. 예컨대, 상기 제2 링커는 [(G)mS]l (m은 아미노산 G(Gly)의 개수로서 1 내지 10의 정수(예컨대, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 또는 10)이고, l은 [(G)mS]의 개수로서 1 내지 10의 정수(예컨대, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 또는 10)임; 예컨대, GGGGS(서열번호 96), GGGGSGGGGS(서열번호 97), GGGGSGGGGSGGGGS (서열번호 85), GS, GSGS(서열번호 98), GSGSGS(서열번호 99), GSGSGSGS(서열번호 100), GSGSGSGSGS(서열번호 101) 등), [(S)o(G)pS]q[XQ]r (o는 아미노산 S(Ser)의 개수로서 0(absent) 또는 1이고, p는 아미노산 G(Gly)의 개수로서 1 내지 5의 정수(예컨대, 1, 2, 3, 4, 또는 5)이고, q는 단위체 [(S)o(G)pS]의 개수로서 1 내지 5의 정수(예컨대, 1, 2, 3, 4, 또는 5)이고, 상기 단위체가 2개 이상인 경우 (q가 2, 3, 4, 또는 5인 경우) 각 단위체는 서로 동일하거나 다를 수 있으며, X는 류신(Leu; I) 또는 이소류신(Ile; I)이고, r은 디펩타이드 [XQ]의 개수로서 0(absent) 또는 1임; 예컨대, GGGGSGGGGSLQ(서열번호 102), GSGGGGSGGGGSLQ(서열번호 103), GGGGSGGGGSIQ(서열번호 104), GSGGGGSGGGGSIQ(서열번호 105), SGGSGGGGSGGGSGGGGSIQ(서열번호 106), SGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGSIQ(서열번호 107), SGGSGGGGSGGGSGGGGSLQ(서열번호 108), SGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGSLQ(서열번호 109)), SGGGGSGGGSGGGGGSGG(서열번호 110), SGGGGSGGGSGGGGGSGGGSG(서열번호 111) 등) [EAAAK]n (n은 [EAAAK](서열번호 112)의 개수로서 1 내지 5의 정수(예컨대, 1, 2, 3, 4, 또는 5)임; 예컨대, EAAAKEAAAKEAAAK (서열번호 44) 등), A EAAAK A(서열번호 113), A EAAAK EAAAK A(서열번호 114), A EAAAK EAAAK EAAAK A(서열번호 115), A EAAAK EAAAK EAAAK EAAAK A(서열번호 116), A EAAAK EAAAK EAAAK EAAAK EAAAK A(서열번호 117), AEAAAKEAAAKAG(서열번호 118), AEAAAKEAAAKAGS(서열번호 119), GGGGG(서열번호 120), GGAGG(서열번호 121), GGGGGGGG(서열번호 122), GAGAGAGAGA(서열번호 123), RPLSYRPPFPFGFPSVRP(서열번호 124), YPRSIYIRRRHPSPSLTT(서열번호 125), TPSHLSHILPSFGLPTFN(서열번호 126), RPVSPFTFPRLSNSWLPA(서열번호 127), SPAAHFPRSIPRPGPIRT(서열번호 128), APGPSAPSHRSLPSRAFG(서열번호 129), PRNSIHFLHPLLVAPLGA(서열번호 130), MPSLSGVLQVRYLSPPDL(서열번호 131), SPQYPSPLTLTLPPHPSL(서열번호 132), NPSLNPPSYLHRAPSRIS(서열번호 133), LPWRTSLLPSLPLRRRP(서열번호 134), PPLFAKGPVGLLSRSFPP(서열번호 135), VPPAPVVSLRSAHARPPY(서열번호 136), LRPTPPRVRSYTCCPTP(서열번호 137), PNVAHVLPLL TVPWDNLR(서열번호 138), CNPLLPLCARSPAVRTFP(서열번호 139), LGTPTPTPTPTGEF(서열번호 140), EDFTRGKL(서열번호 141), L EAAAR EAAAR EAAAR EAAAR(서열번호 142), L EAAAR EAAAR EAAAR(서열번호 143), L EAAAR(서열번호 144), L EAAAR EAAAR(서열번호 145), EAAAR EAAAR EAAAR EAAAR(서열번호 146), EAAAR EAAAR EAAAR(서열번호 147), EAAAR EAAAR(서열번호 148), EAAAR(서열번호 149), LTEEQQEGGG(서열번호 150), TEEQQEGGG LTEEQQEGGG(서열번호 151), LAKLKQKTEQLQDRIAGGG(서열번호 152), LELKTPLGDT(서열번호 153), THTCPRCPEP(서열번호 154), KSCDTPPPCP(서열번호 155), RCPEPKSCDT(서열번호 156), PPPCPRCPEP(서열번호 157), KSCDTPPPCP(서열번호 158), RCPGG(서열번호 159), 및 LEPKSSDKTHTSPPSPGG(서열번호 160) 등으로 이루어진 군에서 선택 1종 이상일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다. 일 예에서, 상기 제2 링커는 SGGSGGGGSGGGSGGGGSLQ (서열번호 108), GGGGSGGGGSGGGGS (서열번호 85), GSGGGGSGGGGSLQ (서열번호 103), GSGGGGSGGGGSIQ (서열번호 105), SGGGGSGGGSGGGGGSGG (서열번호 110), SGGGGSGGGSGGGGGSGGGSG(서열번호 111) 등으로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상일 수 있다.
일 구체예에서, 상기 상기 사이토카인 유사 폴리펩타이드는 서열번호 41, 서열번호 52, 서열번호 53, 또는 서열번호 54의 아미노산 서열, 또는 이와 60% 이상, 70% 이상, 80% 이상, 85% 이상, 90% 이상, 95% 이상, 96% 이상, 97% 이상, 98% 이상, 또는 99% 이상의 서열상동성(identity)을 가지는 아미노산 서열을 포함하는 것일 수 있다.
[서열번호 41] (RS15.0)
ITCPPPMSVEHADIWVKSYSLYSRERYICNSGFKRKAGTSSLTECVLNKATNVAHWTTPSLKCIRDPALVHQRPAPP
SGGSGGGGSGGGSGGGGSLQ
NWVNVISDLKKIEDLIQSMHIDATLYTESDVHPSCKVTAMKCFLLELQVISLESGDASIHDTVENLIILANNSLSSNGNVTESGCKECEELEEKNIKEFLQSFVHIVQMFINTS
[서열번호 52] (RS15.1)
ITCPPPMSVEHADIWVKSYSLYSRERYICNSGFKRKAGTSSLTECVLNKATNVAHWTTPSLKCIRDPALVHQRPAPP
GGGGSGGGGSGGGGS
NWVNVISDLKKIEDLIQSMHIDATLYTESDVHPSCKVTAMKCFLLELQVISLESGDASIHDTVENLIILANNSLSSNGNVTESGCKECEELEEKNIKEFLQSFVHIVQMFINTS
[서열번호 53] (RS15.2)
ITCPPPMSVEHADIWVKSYSLYSRERYICNSGFKRKAGTSSLTECVLNKATNVAHWTTPSLKCIRDPALVHQRPAPP
GSGGGGSGGGGSLQ
NWVNVISDLKKIEDLIQSMHIDATLYTESDVHPSCKVTAMKCFLLELQVISLESGDASIHDTVENLIILANNSLSSNGNVTESGCKECEELEEKNIKEFLQSFVHIVQMFINTS
[서열번호 54] (RS15.3)
ITCPPPMSVEHADIWVKSYSLYSRERYICNSGFKRKAGTSSLTECVLNKATNVAHWTTPSLKCIRDPALVHQRPAPP
GSGGGGSGGGGSIQ
NWVNVISDLKKIEDLIQSMHIDATLYTESDVHPSCKVTAMKCFLLELQVISLESGDASIHDTVENLIILANNSLSSNGNVTESGCKECEELEEKNIKEFLQSFVHIVQMFINTS
[서열번호 64] (RS15.4)
ITCPPPMSVEHADIWVKSYSLYSRERYICNSGFKRKAGTSSLTECVLNKATNVAHWTTPSLKCIRDPALVHQRPAPP
SGGGGSGGGSGGGGGSGG
NWVNVISDLKKIEDLIQSMHIDATLYTESDVHPSCKVTAMKCFLLELQVISLESGDASIHDTVENLIILANNSLSSNGNVTESGCKECEELEEKNIKEFLQSFVHIVQMFINTS
[서열번호 65] (RS15.5)
ITCPPPMSVEHADIWVKSYSLYSRERYICNSGFKRKAGTSSLTECVLNKATNVAHWTTPSLKCIRDPALVHQRPAPP
SGGGGSGGGSGGGGGSGGGSG
NWVNVISDLKKIEDLIQSMHIDATLYTESDVHPSCKVTAMKCFLLELQVISLESGDASIHDTVENLIILANNSLSSNGNVTESGCKECEELEEKNIKEFLQSFVHIVQMFINTS
(IL-15R 알파 스시 도메인: 볼드체; 제2 링커: 이탤릭체; IL-15: 밑줄)
핵산 분자, 재조합 벡터, 및 재조합 세포
다른 예는 상기 융합 단백질을 암호화하는 핵산 분자를 제공한다.
다른 예는 상기 핵산 분자를 포함하는 재조합 벡터를 제공한다. 상기 벡터는 상기 핵산 분자의 발현 벡터로 사용될 수 있다.
다른 예는 상기 핵산 분자 또는 이를 포함하는 재조합 벡터를 포함하는 재조합 세포를 제공한다. 상기 세포는 상기 융합 단백질의 생산에 사용될 수 있다.
다른 예는 상기 핵산 분자를 적절한 숙주 세포에서 발현시키는 단계를 포함하는, 상기 융합 단백질의 제조 방법을 제공한다. 상기 핵산 분자를 적절한 숙주 세포에서 발현시키는 단계는 앞서 설명한 재조합 세포를 통상의 조건에서 배양하는 단계를 포함하는 것일 수 있다.
용어 "벡터(vector)"는 숙주 세포에서 목적 유전자를 발현시키기 위한 수단을 의미한다. 예를 들어, 플라스미드 벡터, 코즈미드 벡터 및 박테리오파아지 벡터, 아데노바이러스 벡터, 레트로바이러스 벡터 및 아데노-연관 바이러스 벡터와 같은 바이러스 벡터를 포함한다. 상기 재조합 벡터로 사용될 수 있는 벡터는 당업계에서 종종 사용되는 플라스미드 (예를 들면, pSC101, pGV1106, pACYC177, ColE1, pKT230, pME290, pBR322, pUC8/9, pUC6, pBD9, pHC79, pIJ61, pLAFR1, pHV14, pGEX 시리즈, pET 시리즈 및 pUC19 등), 파지 (예를 들면, λgt4λB, λ-Charon, λΔz1 및 M13 등) 또는 바이러스 (예를 들명, SV40 등)를 조작하여 제작될 수 있다.
상기 재조합 벡터에서 상기 융합 단백질을 암호화하는 핵산 분자는 프로모터에 작동 가능하게 연결된 것일 수 있다. 용어 "작동 가능하게 연결된(operatively linked)"은 뉴클레오타이드 발현 조절 서열(예를 들어, 프로모터 서열)과 다른 뉴클레오타이드 서열 사이의 기능적인 결합을 의미한다. 상기 조절 서열은 "작동 가능하게 연결(operatively linked)"됨으로써 다른 뉴클레오타이드 서열의 전사 및/또는 해독을 조절할 수 있다.
상기 재조합 벡터는, 전형적으로 클로닝을 위한 벡터 또는 발현을 위한 벡터로서 구축될 수 있다. 상기 발현용 벡터는 당업계에서 식물, 동물 또는 미생물에서 외래의 단백질을 발현하는 데 사용되는 통상의 것을 사용할 수 있다. 상기 재조합 벡터는 당업계에 공지된 다양한 방법을 통해 구축될 수 있다.
상기 재조합 벡터는 원핵 세포 또는 진핵 세포를 숙주로 하여 구축될 수 있다. 예를 들어, 사용되는 벡터가 발현 벡터이고, 원핵 세포를 숙주로 하는 경우에는, 전사를 진행시킬 수 있는 강력한 프로모터 (예를 들어, pLλ 프로모터, CMV 프로모터, trp 프로모터, lac 프로모터, tac 프로모터, T7 프로모터 등), 해독의 개시를 위한 라이보좀 결합 자리 및 전사/해독 종결 서열을 포함하는 것이 일반적이다. 진핵 세포를 숙주로 하는 경우에는, 벡터에 포함되는 진핵 세포에서 작동하는 복제원점은 f1 복제원점, SV40 복제원점, pMB1 복제원점, 아데노 복제원점, AAV 복제원점 및 BBV 복제원점 등을 포함하나, 이에 한정되는 것은 아니다. 또한, 포유동물 세포의 게놈으로부터 유래된 프로모터 (예를 들어, 메탈로티오닌 프로모터) 또는 포유동물 바이러스로부터 유래된 프로모터 (예를 들어, 아데노바이러스 후기 프로모터, 백시니아 바이러스 7.5K 프로모터, SV40 프로모터, 사이토메갈로바이러스 프로모터 및 HSV의 tk 프로모터)가 이용될 수 있으며, 전사 종결 서열로서 폴리아데닐화 서열을 일반적으로 갖는다.
상기 재조합 세포는 상기 재조합 벡터를 적절한 숙주 세포에 도입시킴으로써 얻어진 것일 수 있다. 상기 숙주세포는 상기 재조합 벡터를 안정되면서 연속적으로 클로닝 또는 발현시킬 수 있는 세포로서 당업계에 공지된 어떠한 숙주 세포도 이용할 수 있으며, 원핵 세포로는, 예를 들어, E. coli JM109, E. coli BL21, E. coli RR1, E. coli LE392, E. coli B, E. coli X 1776, E. coli W3110, 바실러스 서브틸리스, 바실러스 츄린겐시스와 같은 바실러스 속 균주, 그리고 살모넬라 티피무리움, 세라티아 마르세슨스 및 다양한 슈도모나스 종과 같은 장내균과 균주 등이 있으며, 진핵 세포에 형질 전환시키는 경우에는 숙주 세포로서, 효모(Saccharomyce cerevisiae), 곤충 세포, 식물 세포 및 동물 세포, 예를 들어, Sp2/0, CHO(Chinese hamster ovary) K1, CHO, DG44, PER.C6, W138, BHK, COS-7, 293, HepG2, Huh7, 3T3, RIN, MDCK 세포주 등이 이용될 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
상기 핵산 분자 또는 이를 포함하는 재조합 벡터의 숙주 세포 내로의 운반(도입)은, 당업계에 널리 알려진 운반 방법을 사용할 수 있다. 상기 운반 방법은 예를 들어, 숙주 세포가 원핵 세포인 경우, CaCl2 방법 또는 전기 천공 방법 등을 사용할 수 있고, 숙주 세포가 진핵 세포인 경우에는, 미세 주입법, 칼슘 포스페이트 침전법, 전기 천공법, 리포좀-매개 형질감염법 및 유전자 밤바드먼트 등을 사용할 수 있으나, 이에 한정하지는 않는다.
상기 형질 전환(재조합 벡터 도입)된 숙주 세포를 선별하는 방법은 선택 표지에 의해 발현되는 표현형을 이용하여, 당업계에 널리 알려진 방법에 따라 용이하게 실시할 수 있다. 예를 들어, 상기 선택 표지가 특정 항생제 내성 유전자인 경우에는, 상기 항생제가 함유된 배지에서 배양함으로써 재조합 벡터가 도입된 재조합 세포를 용이하게 선별할 수 있다.
의약 용도
본 명세서에서 제공되는 융합 단백질에 포함된 항-TIGIT 항체 또는 이의 항원결합단편은 TIGIT의 작용(예컨대, TIGIT과 이의 리간드인 CD155(PVR)와의 상호작용 등)을 봉쇄하여 면역을 활성화 (e.g., 이펙터 T세포 기능 강화, Treg 활성 제어, 면역세포(T 세포, NK 세포 등)의 사이토카인 분비 증가 등)시키는 기능을 가질 뿐 아니라 우수한 항암 효과 (예컨대, 암세포 사멸, 암세포 증식 억제 등)를 가진다. 또한 사이토카인 유사 폴리펩타이드는 인터류킨-15와 유사한 활성을 가지면서, 아생형 인터류킨-15와 비교하여, 수용체(IL-2/IL-15 수용체)와의 결합력이 우수하고 면역원성이 낮아서, 생체에 투여시 사이토카인 분비 증가 등의 면역증강 효과가 우수하면서도 면역원으로 작용하지 않아서 이를 면역원으로 인식하는 면역반응 유발 위험이 낮아 안전성이 확보될 수 있다는 이점을 가질 뿐 아니라, 우수한 항암효과 (예컨대, 암세포 사멸, 암세포 증식 억제 등)를 가진다. 따라서, 상기 융합 펩타이드는 상기 항-TIGIT 항체 또는 이의 항원결합단편과 사이토카인 유사 폴리펩타이드의 이점을 모두 가지며, 면역증강, 면역관련 질병의 예방 및/또는 치료, 특히 암의 예방 및/또는 치료에 유용하게 적용될 수 있다.
일 예는 상기 융합 단백질, 상기 융합 단백질을 암호화하는 핵산 분자, 상기 핵산 분자를 포함하는 재조합 벡터, 및 상기 핵산 분자 또는 재조합 벡터를 포함하는 재조합 세포로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상을 유효성분으로 포함하는 면역증강제 또는 면역증강용 약학 조성물을 제공한다.
다른 예는 상기 융합 단백질, 상기 융합 단백질을 암호화하는 핵산 분자, 상기 핵산 분자를 포함하는 재조합 벡터, 및 상기 핵산 분자 또는 재조합 벡터를 포함하는 재조합 세포로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상을 유효성분으로 포함하는 면역 관련 질병의 예방 및/또는 치료용 약학 조성물을 제공한다.
다른 예는 상기 융합 단백질, 상기 융합 단백질을 암호화하는 핵산 분자, 상기 핵산 분자를 포함하는 재조합 벡터, 및 상기 핵산 분자 또는 재조합 벡터를 포함하는 재조합 세포로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상을 유효성분으로 포함하는 항암제 또는 암의 예방 및/또는 치료용 약학 조성물을 제공한다.
다른 예는 상기 융합 단백질, 상기 융합 단백질을 암호화하는 핵산 분자, 상기 핵산 분자를 포함하는 재조합 벡터, 및 상기 핵산 분자 또는 재조합 벡터를 포함하는 재조합 세포로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상의 약학적 유효량을 면역증강을 필요로 하는 대상에게 투여하는 단계를 포함하는 면역증강 방법을 제공한다. 상기 면역증강 방법은, 상기 투여하는 단계 이전에, 면역증강을 필요로 하는 대상을 확인하는 단계를 추가로 포함할 수 있다.
다른 예는 상기 융합 단백질, 상기 융합 단백질을 암호화하는 핵산 분자, 상기 핵산 분자를 포함하는 재조합 벡터, 및 상기 핵산 분자 또는 재조합 벡터를 포함하는 재조합 세포로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상의 약학적 유효량을 면역 관련 질병의 예방 및/또는 치료를 필요로 하는 대상에게 투여하는 단계를 포함하는 면역 관련 질병의 예방 및/또는 치료 방법을 제공한다. 상기 면역 관련 질병의 예방 및/또는 치료 방법은, 상기 투여하는 단계 이전에, 면역 관련 질병의 예방 및/또는 치료를 필요로 하는 대상을 확인하는 단계를 추가로 포함할 수 있다.
다른 예는 상기 융합 단백질, 상기 융합 단백질을 암호화하는 핵산 분자, 상기 핵산 분자를 포함하는 재조합 벡터, 및 상기 핵산 분자 또는 재조합 벡터를 포함하는 재조합 세포로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상의 약학적 유효량을 암의 예방 및/또는 치료를 필요로 하는 대상에게 투여하는 단계를 포함하는, 암의 예방 및/또는 치료 방법을 제공한다. 상기 암의 예방 및/또는 치료 방법은, 상기 투여하는 단계 이전에, 암의 예방 및/또는 치료를 필요로 하는 대상을 확인하는 단계를 추가로 포함할 수 있다.
다른 예는 상기 융합 단백질, 상기 융합 단백질을 암호화하는 핵산 분자, 상기 핵산 분자를 포함하는 재조합 벡터, 및 상기 핵산 분자 또는 재조합 벡터를 포함하는 재조합 세포로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상의 면역증강, 면역 관련 질병의 예방 및/또는 치료, 및/또는 암의 예방 및/또는 치료를 위한 용도, 또는 면역증강, 면역 관련 질병의 예방 및/또는 치료, 및/또는 암의 예방 및/또는 치료를 위한 약학 조성물의 제조를 위한 용도를 제공한다.
본 명세서에서, 용어 "면역증강"은 항원에 대한 초기 면역반응을 유도하거나 기존의 면역반응을 증가시키는 것을 의미할 수 있으며, 면역강화, 면역활성화 등의 용어와 동등한 의미로 호환될 수 있다. 보다 구체적으로, 본 명세서에서 제공되는 융합 단백질의 “면역증강 효과”는 면역세포(NK 세포, NKT 세포, CD3+ T 세포, 이펙터 T 세포 (CD4+ T 세포), 세포독성 T 세포 (CD8+ T 세포) 등))의 기능 강화(활성화) 및/또는 증식, 조절 T (Treg) 세포의 활성 억제 및/또는 소거(depletion), 면역단백질(예컨대, 사이토카인(IL-2, IFN-gamma 등) 등) 생산 및/또는 분비 증가 등일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
본 명세서에서, 용어 "면역 관련 질병"은 면역계의 장애 및/또는 불충분한 활성에 의하여 유발되는 모든 질병을 포괄하는 것으로, 예를 들어, 암, 감염질환, 자가면역질환, 염증성질환 등으로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
상기 암은 고형암 또는 혈액암일 수 있으며, 이에 제한되지 않지만, 편평상피세포암, 폐암 (예컨대, 소세포폐암, 비소세포폐암, 폐의 선암, 폐의 편평상피암 등), 복막암, 피부암, 흑색종 (예컨대, 피부 또는 안구내 흑색종 등), 직장암, 식도암, 소장암, 내분비선암, 갑상선암, 부갑상선암, 부신암, 연조직 육종, 요도암, 만성 또는 급성 백혈병, 림프구 림프종, 간암, 위암, 췌장암, 교아종, 경부암, 난소암, 방광암, 유방암, 결장암, 대장암, 자궁내막 또는 자궁암, 침샘암, 신장암, 전립선암, 음문암, 두경부암, 뇌암, 골육종 등으로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상일 수 있다.
상기 암의 예방 및/또는 치료 효과(항암 효과 또는 항종양 효과)는 암세포의 발생 및/또는 성장을 억제하는 효과뿐 아니라, 이동(migration), 침습(invasion), 전이(metastasis) 등으로 인한 암의 악화를 억제하는 효과를 포함한다.
상기 감염성 질환, 자가면역 질환, 및 염증성 질환은 앞서 설명한 면역 강화(예컨대, 면역세포(NK세포, CD3+ T 세포, 이펙터 T 세포 (CD4+ T 세포), 세포독성 T 세포 (CD8+ T 세포) 등))의 기능 강화(활성화) 및/또는 증식, 조절 T (Treg) 세포의 활성 억제 및/또는 소거(depletion), 면역단백질(예컨대, 사이토카인(IL-2, IFN-gamma 등) 등) 생산 및/또는 분비 증가 등)에 의하여 치료, 완화, 및/또는 예방 가능한 모든 감염성 질환, 자가면역 질환, 및 염증성 질환 중에서 선택된 것일 수 있다. 예를 들어, 상기 감염성 질환은 바이러스(예, 인플루엔자 바이러스, 코로나 바이러스(예컨대, Severe Acute Respiratory Syndrome(SARS) 바이러스(SARS-CoV, SARS-CoV-2 등), Middle East Respiratory Syndrome(MERS) 바이러스(MERS-CoV), Cytomegalovirus (CMV), Epstein-Barr virus (EBV) 등), 세균, 진균, 기생충과 같이 질병을 일으키는 병원체가 생물체(예, 인간을 포함하는 동물) 내에 전파, 침입하여 발생하는 질병을 총칭하는 것으로, 바이러스, 세균, 진균, 기생충 등으로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상의 병원체의 감염 또는 상기 감염으로 인한 질병(감염증)일 수 있다. 상기 자가면역 질환은 류마티스 관절염, 1형 당뇨병, 크론병, 궤양성 대장염, 베체트 증후군, 루푸스, 쇼그랜 증후군, 중증근무력증, 경피증, 갑상선기증저하증, 갑상선기능항진증, 건선, 백반증, 다발성경화증, 자가면역성 간염, 자가면역성 신장염, 자가면역성 췌장염, 자가면역성 뇌염, 사이토카인 폭풍 등으로 이루어진 군에서 선택될 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다. 상기 염증성 질환은 염증(예, 만성 염증 또는 급성 염증) 또는 염증으로 인한 질병을 총칭하는 것으로, 예를 들어, 심장 염증(예, 관상동맥질환, 협심증, 심근경색, 심장막염, 심근염 등), 혈관 염증(예, 죽상경화증, 혈관염, 파종성혈관내응고(DIC), 면역성혈소판감소자반증(ITP), 혈전성혈소판감소자반증(TTP), 빈혈 등), 상기도 염증(예, 급성 비인두염, 알레르기비염, 부비동염, 인두염, 편도염, 후두염 등), 하기도 및/또는 폐 염증(예, 기관지염, 기관지확장증, 천식, 만성폐홰성폐질환(COPD), 폐렴, 간질성 폐질환, 결핵 등), 상부 위장관 염증(예, 위염, 식도염 등), 하부 위장관 염증(예, 소장염, 궤양성 대장염, 크론병, 셀리악병, 게실염, 과민성대장증후군, 맹장염, 치루 등), 간, 담도 및/또는 췌장 염증(예, 간염, 지방간, 담관염, 담낭염, 췌장염, 제1형 당뇨병 등), 신장(상부요로) 염증(예, 신우신염, 사구체신염, 요로감염증 등), 하부요로 염증(예, 요로감염증, 요관염, 요도염, 방광염, 전립선염/만성골반통증후군 등), 갑상선 및/또는 부갑상선 염증(예, 갑상선염, 부갑상선염 등), 부신 염증(예, 부신염 등), 생식기관 염증(예, 골반내 염증성 질환, 난소염, 고환염, 부고환염 등), 뼈 및/또는 관절 염증(예, 골관절염, 류마티스 관절염, 골수염, 활막염 등), 피부 염증(예, 피부: 연조직염, 단독(Erysipelas), 어루러기, 무좀, 여드름 등), 근육 염증(예, 근염 등), 뇌 염증(예, 뇌염, 주요우울장애 등), 신경 염증(예, 눈, 귀 등 다양한 부위의 신경염, 복합부위 통증 증후군, 길랑-바레 증후군 등), 눈 염증(예, 다래끼, 포도막염, 결막염 등), 귀 염증(예, 중이염, 유양돌기염 등), 구강 염증(예, 구내염, 치주염, 치은염 등), 전신성 염증(예, 전신성 염증반응 증후군(패혈증 등), 대사증후군 관련 질환 등), 복막염, 재관류 손상, 이식거부반응, 과민반응 등으로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
본 명세서에서 제공되는 융합 단백질, 및/또는 약학 조성물의 투여 대상은 모든 동물 또는 세포일수 있으며, 예컨대, 인간, 원숭이 등의 영장류, 래트, 마우스, 등의 설치류 등을 포함하는 포유류에서 선택되는 동물, 또는 상기 동물로부터 유래하는(분리된) 세포, 조직, 체액 (예컨대 혈청), 또는 이의 배양물일 수 있으며, 예컨대, 인간 또는 인간으로부터 분리된 세포, 조직, 체액 (예컨대 혈청)일 수 있다.
상기 약학적 조성물은, 유효성분으로서의 융합 단백질, 핵산 분자, 벡터 및/또는 세포에 더하여, 약학적으로 허용 가능한 담체를 추가로 포함할 수 있으며, 상기 담체는 단백질 약물의 제제화에 통상적으로 이용되는 것으로서, 락토스, 덱스트로스, 수크로스, 솔비톨, 만니톨, 전분, 아카시아 고무, 인산 칼슘, 알기네이트, 젤라틴, 규산 칼슘, 미세결정성 셀룰로스, 폴리비닐피롤리돈, 셀룰로스, 물, 시럽, 메틸 셀룰로스, 메틸히드록시벤조에이트, 프로필히드록시벤조에이트, 활석, 스테아르산 마그네슘, 미네랄 오일 등으로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상일 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다. 상기 약학적 조성물은 또한 약학 조성물 제조에 통상적으로 사용되는 희석제, 부형제, 윤활제, 습윤제, 감미제, 향미제, 유화제, 현탁제, 보존제 등으로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상을 추가로 포함할 수 있다.
상기 약학적 조성물 내의 유효성분으로서의 융합 단백질, 핵산 분자, 벡터 및/또는 세포의 함량은, 전체 조성물 중량 기준으로, 0.00001 내지 99 중량%, 0.0001 내지 99 중량%, 0.001 내지 99 중량%, 0.01 내지 99 중량%, 0.1 내지 99 중량%, 1 내지 99 중량%, 10 내지 99 중량%, 15 내지 99 중량%, 20 내지 99 중량%, 25 내지 99 중량%, 30 내지 99 중량%, 35 내지 99 중량%, 40 내지 99 중량%, 45 내지 99 중량%, 또는 50 내지 99 중량%일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
상기 융합 단백질, 핵산 분자, 벡터, 세포, 및/또는 약학 조성물의 투여는 경구 또는 비경구 경로를 통할 수 있다. 비경구 투여인 경우에는 정맥내 주입, 피하 주입, 근육 주입, 복강 주입, 내피 투여, 국소 투여, 비내 투여, 폐내 투여 및 직장내 투여 등으로 투여할 수 있다. 경구 투여시, 단백질 또는 펩타이드는 소화가 되기 때문에 경구용 조성물은 활성 약제를 코팅하거나 위에서의 분해로부터 보호되도록 제형화 되어야 한다.
또한, 융합 단백질, 핵산 분자, 벡터, 세포, 및/또는 약학 조성물은 오일 또는 수성 매질중의 용액, 현탁액, 시럽제 또는 유화액 형태이거나 엑스제, 산제, 분말제, 과립제, 정제 또는 캅셀제, 주사제 등의 형태로 제형화될 수 있으며, 제형화를 위하여 분산제 또는 안정화제를 추가적으로 포함할 수 있다.
상기 약학 조성물 내의 유효성분인 융합 단백질, 핵산 분자, 벡터, 및/또는 세포의 함유량은 제제화 방법, 투여 방식, 환자의 연령, 체중, 성, 병적 상태, 음식, 투여 시간, 투여 간격, 투여 경로, 배설 속도 및 반응 감응성과 같은 요인들에 의해 다양하게 처방될 수 있다. 상기 약학 조성물의 1일 투여량은 유효성분(융합 단백질, 핵산 분자, 벡터, 세포)을 기준으로 0.00001 내지 1000㎎/kg, 0.00001 내지 500㎎/kg, 0.00001 내지 100㎎/kg, 0.00001 내지 50㎎/kg, 0.0001 내지 1000㎎/kg, 0.0001 내지 500㎎/kg, 0.0001 내지 100㎎/kg, 0.0001 내지 50㎎/kg, 0.001 내지 1000㎎/kg, 0.001 내지 500㎎/kg, 0.001 내지 100㎎/kg, 0.001 내지 50㎎/kg, 0.01 내지 1000㎎/kg, 0.01 내지 500㎎/kg, 0.01 내지 100㎎/kg, 0.01 내지 50㎎/kg, 0.1 내지 1000㎎/kg, 0.1 내지 500㎎/kg, 0.1 내지 100㎎/kg, 또는 0.1 내지 50㎎/kg 범위일 수 있으나 이에 제한되는 것은 아니다. 상기 1일 투여량은 단위 용량 형태로 하나의 제제로 제제화되거나, 적절하게 분량하여 제제화되거나, 다용량 용기 내에 내입시켜 제조될 수 있다. 또한 본 명세서에서 약학적 유효량은 유효성분이 목적하는 약학적 활성을 나타낼 수 있는 유효성분의 양을 의미하는 것으로, 상기한 투여량 범위일 수 있다.
다른 예는 상기 융합 단백질, 상기 융합 단백질을를 암호화하는 핵산 분자, 상기 핵산 분자를 포함하는 재조합 벡터, 및 상기 핵산 분자 또는 재조합 벡터를 포함하는 재조합 세포로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상을 유효성분으로 포함하는 면역증강용, 또는 신진대사 증진용 건강기능식품을 제공한다.
다른 예는 상기 융합 단백질, 상기 융합 단백질을 암호화하는 핵산 분자, 상기 핵산 분자를 포함하는 재조합 벡터, 및 상기 핵산 분자 또는 재조합 벡터를 포함하는 재조합 세포로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상을 유효성분으로 포함하는 면역 관련 질병의 예방 및/또는 개선용 건강기능식품을 제공한다.
다른 예는 상기 융합 단백질, 상기 융합 단백질을 암호화하는 핵산 분자, 상기 핵산 분자를 포함하는 재조합 벡터, 및 상기 핵산 분자 또는 재조합 벡터를 포함하는 재조합 세포로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상을 유효성분으로 포함하는 암의 예방 및/또는 개선용 건강기능식품을 제공한다.
'건강기능식품'은 일상 식사에서 결핍되기 쉬운 영양소나 인체에 유용한 기능을 가진 원료나 성분(이하, '기능성 원료')을 사용하여 제조(가공)한 식품으로, 건강을 유지하거나 소정의 질병 또는 증상을 예방 및/또는 개선하는데 도움을 주는 모든 식품을 의미하며, 최종 제품 형태에는 특별한 제한이 없다. 예컨대, 상기 건강 기능성 식품은 각종 식품, 음료, 식품 첨가제 등으로 이루어진 군에서 선택된 것일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
상기 식품 조성물은 허용 가능한 식품 보조 첨가제를 포함할 수 있으며, 건강기능식품의 제조에 통상적으로 사용되는 적절한 담체, 부형제 및 희석제를 더욱 포함할 수 있다.
상기 식품 조성물을 식품 첨가제로 사용할 경우, 상기 조성물을 그대로 첨가하거나 다른 식품 또는 식품 성분과 함께 사용할 수 있고, 통상적인 방법에 따라 적절하게 사용될 수 있다.
상기 식품 조성물에 함유된 유효성분의 함량은 식품의 형태, 소망하는 효과, 목적 등에 따라 적절하게 특별한 제한이 없이 결정될 수 있으며, 예컨대, 전체 식품 중량의 0.00001 내지 99 중량%, 0.0001 내지 99 중량%, 0.001 내지 99 중량%, 0.01 내지 99 중량%, 0.1 내지 99 중량%, 1 내지 99 중량%, 또는 10 내지 99 중량% 일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
본 명세서에서 제공되는 융합 단백질은 항-TIGIT 항체 또는 이의 항원결합단편과 사이토카인 유사 폴리펩타이드의 이점을 모두 가지며, 면역증강, 면역관련 질병의 예방 및/또는 치료, 및 항암 효과(예컨대, 암세포 사멸, 암세포 증식 억제 등)를 가지므로, 면역증강제 및 항암제로서 유용하게 적용될 수 있다.
도 1a 및 1b는 일 실시예에 따른 융합 단백질의 인간 TIGIT에 대한 결합 친화도를 보여주는 그래프이다.
도 2는 일 실시예에 따른 융합 단백질의 면역세포 표면으로의 이동능을 보여주는 그래프이다.
도 3은 일 실시예에 따른 융합 단백질의 IL2RB/IL2RG의 이량체화를 보여주는 그래프이다.
도 4a 내지 4d는 일 실시예에 따른 융합 단백질의 면역세포에서의 STAT5의 인산화 효과를 보여주는 그래프이다 (4a: CD8+ T 세포, 4b: CD4+ T 세포, 4c: CD56+ NK 세포, 4d: NK 세포).
도 5a 및 5b는 일 실시예에 따른 융합 단백질의 PBMC에서의 사이토카인 생성 효과를 비교 항체와 비교하여 보여주는 그래프이다 (5a: IL-2, 5b: IFN-γ).
도 6a 내지 6c는 일 실시예에 따른 융합 단백질의 면역세포에서의 사이토카인 생성 효과를 비교 융합 단백질와 비교하여 보여주는 그래프이다 (6a: CD4+ T 세포, 6b: CD8+ T 세포, 6c: CD56+ NK 세포).
도 7a 내지 7h는 일 실시예에 따른 다양한 링커를 가지는 융합 단백질들의 면역세포에서의 사이토카인 생성 효과를 보여주는 그래프이다.
도 8a 내지 8c는 일 실시예에 따른 융합 단백질의 면역세포에서의 사이토카인 생성 효과를 항-TIGIT 항체와 비교하여 보여주는 그래프이다 (8a: CD4+ T 세포, 8b: CD8+ T 세포, 8c: CD56+ NK 세포).
도 9a 내지 9c는 일 실시예에 따른 융합 단백질의 면역세포에서의 사이토카인 생성 효과를 병용 처리와 비교하여 보여주는 그래프이다 (9a: CD4+ T 세포, 9b: CD8+ T 세포, 9c: CD56+ NK 세포).
도 10은 일 실시예에 따른 융합 단백질의 암환자 유래 면역세포에서의 사이토카인 생성 효과를 보여주는 그래프이다.
도 11은 일 실시예에 따른 융합 단백질의 NK 세포를 통한 암세포에 대한 세포 독성을 보여주는 결과이다.
도 12a 내지 12b는 일 실시예에 따른 융합 단백질을 투여한 마우스에서의 종양크기변화(12a), 체중변화(12b)를 보여주는 그래프이다.
도 13a 내지 13c는 일 실시예에 따른 융합 단백질을 투여한 마우스에서의 체중변화(13a), AST 및 ALT 수준 (13b), 및 전체 혈구 수(Complete Blood Counts; CBC) (13c)를 보여주는 그래프이다.
도 2는 일 실시예에 따른 융합 단백질의 면역세포 표면으로의 이동능을 보여주는 그래프이다.
도 3은 일 실시예에 따른 융합 단백질의 IL2RB/IL2RG의 이량체화를 보여주는 그래프이다.
도 4a 내지 4d는 일 실시예에 따른 융합 단백질의 면역세포에서의 STAT5의 인산화 효과를 보여주는 그래프이다 (4a: CD8+ T 세포, 4b: CD4+ T 세포, 4c: CD56+ NK 세포, 4d: NK 세포).
도 5a 및 5b는 일 실시예에 따른 융합 단백질의 PBMC에서의 사이토카인 생성 효과를 비교 항체와 비교하여 보여주는 그래프이다 (5a: IL-2, 5b: IFN-γ).
도 6a 내지 6c는 일 실시예에 따른 융합 단백질의 면역세포에서의 사이토카인 생성 효과를 비교 융합 단백질와 비교하여 보여주는 그래프이다 (6a: CD4+ T 세포, 6b: CD8+ T 세포, 6c: CD56+ NK 세포).
도 7a 내지 7h는 일 실시예에 따른 다양한 링커를 가지는 융합 단백질들의 면역세포에서의 사이토카인 생성 효과를 보여주는 그래프이다.
도 8a 내지 8c는 일 실시예에 따른 융합 단백질의 면역세포에서의 사이토카인 생성 효과를 항-TIGIT 항체와 비교하여 보여주는 그래프이다 (8a: CD4+ T 세포, 8b: CD8+ T 세포, 8c: CD56+ NK 세포).
도 9a 내지 9c는 일 실시예에 따른 융합 단백질의 면역세포에서의 사이토카인 생성 효과를 병용 처리와 비교하여 보여주는 그래프이다 (9a: CD4+ T 세포, 9b: CD8+ T 세포, 9c: CD56+ NK 세포).
도 10은 일 실시예에 따른 융합 단백질의 암환자 유래 면역세포에서의 사이토카인 생성 효과를 보여주는 그래프이다.
도 11은 일 실시예에 따른 융합 단백질의 NK 세포를 통한 암세포에 대한 세포 독성을 보여주는 결과이다.
도 12a 내지 12b는 일 실시예에 따른 융합 단백질을 투여한 마우스에서의 종양크기변화(12a), 체중변화(12b)를 보여주는 그래프이다.
도 13a 내지 13c는 일 실시예에 따른 융합 단백질을 투여한 마우스에서의 체중변화(13a), AST 및 ALT 수준 (13b), 및 전체 혈구 수(Complete Blood Counts; CBC) (13c)를 보여주는 그래프이다.
이하에서는 실시예를 들어 본 발명을 더욱 구체적으로 설명하고자 하나, 이는 예시적인 것에 불과할 뿐 본 발명의 범위를 제한하고자 함이 아니다. 아래 기재된 실시예들은 발명의 본질적인 요지를 벗어나지 않는 범위에서 변형될 수 있음은 당 업자들에게 있어 자명하다.
실시예 1. 항-TIGIT 항체(TIGIT mAb) 및 사이토카인(IL-15) 유사 폴리펩타이드(RS15) 융합 단백질의 제조
1.1. 융합 단백질의 발현 및 정제
항-TIGIT 항체 (7A6(7A6_VH3/Vk5), 2B7, 또는 3F8) 및 사이토카인(IL-15) 유사 폴리펩타이드 (IL-15Rα 스시 도메인 및 IL-15의 융합 폴리펩타이드(RS15); RS15.0, RS15.1, RS15.2, RS15.3, RS15.4, 또는 RS15.5)이 링커 (유연성 링커 또는 강직성 링커)를 통하거나 통하지 않고 융합된 융합 단백질을 아래의 표 3의 구조를 가지도록 설계하였다:
| Fusion protein name | Structure | Linker |
| 7A6-RS15 (Fusion protein of TIGIT mAb7A6 with RS15 at LC linking) |
TIGIT mAb-(LC-(EAAAK)3- RS15)2 | RS15 fused to LC C-terminus (LC variant) with rigid linker |
| TIGIT mAb-(LC-(GGGGS)3- RS15)2 | RS15 fused to LC C-terminus (LC variant) with flexible linker | |
| 7A6-RS15-Fc (Fusion protein of TIGIT mAb7A6 with RS15 at Fc linking) |
TIGIT mAb-Fc-(RS15)2 | RS15fused to Fc C-terminus (Fc variant) without linker |
| TIGIT mAb-Fc-((EAAAK)3- RS15)2 | RS15 fused to Fc C-terminus (Fc variant) with rigid linker | |
| TIGIT mAb-Fc-((GGGGS)3- RS15)2 | RS15 fused to Fc C-terminus (Fc variant) with flexible linker | |
| 2B7-RS15 (Fusion protein of TIGIT mAb2B7 with RS15 at LC linking) |
TIGIT mAb-(LC-(EAAAK)3- RS15)2 | RS15fused to LC C-terminus (LC variant) with rigid linker |
| TIGIT mAb-(LC-(GGGGS)3- RS15)2 | RS15 fused to LC C-terminus (LC variant) with flexible linker | |
| 2B7-RS15-Fc (Fusion protein of TIGIT mAb2B7 with RS15 at Fc linking) |
TIGIT mAb-Fc-(RS15)2 | RS15fused to Fc C-terminus (Fc variant) without linker |
| TIGIT mAb-Fc-((EAAAK)3- RS15)2 | RS15 fused to Fc C-terminus (Fc variant) with rigid linker | |
| TIGIT mAb-Fc-((GGGGS)3- RS15)2 | RS15 fused to Fc C-terminus (Fc variant) with flexible linker | |
| 3F8-RS15 (Fusion protein of TIGIT mAb3F8 with RS15 at LC linking) |
TIGIT mAb-(LC-(EAAAK)3- RS15)2 | RS15fused to LC C-terminus (LC variant) with rigid linker |
| TIGIT mAb-(LC-(GGGGS)3- RS15)2 | RS15 fused to LC C-terminus (LC variant) with flexible linker | |
| 3F8-RS15-Fc (Fusion protein of TIGIT mAb3F8 with RS15 at Fc linking) |
TIGIT mAb-Fc-(RS15)2 | RS15fused to Fc C-terminus (Fc variant) without linker |
| TIGIT mAb-Fc-((EAAAK)3- RS15)2 | RS15 fused to Fc C-terminus (Fc variant) with rigid linker | |
| TIGIT mAb-Fc-((GGGGS)3- RS15)2 | RS15 fused to Fc C-terminus (Fc variant) with flexible linker |
(상기 표 3에서,항-TIGIT 단클론 항체(TIGIT mAb): 7A6(7A6_VH3/Vk5), 2B7, 3F8;
RS15 (IL-15Rα 스시 도메인 및 IL-15의 융합 폴리펩타이드); RS15.0, RS15.1, RS15.2, RS15.3, RS15.4, 또는 RS15.5;
LC variant: RS15가 항체의 경쇄 불변영역(LC)의 C-말단에 융합;
Fc variants: RS15가 항체의 중쇄 불변영역(Fc; ΔK478 변이 포함)의 C-말단에 융합)
융합 단백질 생산을 위하여, TIGIT mAb의 중쇄를 포함하는 중쇄 가닥 및 경쇄 가변영역을 포함하는 경쇄 가닥 (RS15는 중쇄 가닥 또는 경쇄 가닥에 포함됨; 표 4-27 참조)을 암호화하는 유전자를 합성하고, pcDNA3.1 (Invitrogen) 벡터에 클로닝하였다. CHO-K1 세포 (ATCC)를 plate에 시딩하여 70-90%가 되도록 배양한 다음, 상기 유전자 DNA 1 μg/μl와 Lipofectamine reagent (Thermo)를 각각 Opti-MEM 배양액에 희석하고 1:1로 혼합하였다. 5분 동안 incubation한 뒤, DNA-lipid complex를 CHO-K1세포에 떨어뜨렸다. 이 후 세포를 37℃에서 배양하여 일시적으로 발현시켰다. 배양 상청액을 Protein A 및 preparative SEC으로 정제하였다. 생성된 단백질을 PBS로 버퍼 교환하고, OD280nm 측정으로 정량하고 SDS-PAGE로 분석하였다.
융합 단백질 제조에 사용된 IL-15 유사 폴리펩타이드(RS15)를 아래에 정리하였다:
[RS15.0 (서열번호 41)]
ITCPPPMSVEHADIWVKSYSLYSRERYICNSGFKRKAGTSSLTECVLNKATNVAHWTTPSLKCIRDPALVHQRPAPP SGGSGGGGSGGGSGGGGSLQ NWVNVISDLKKIEDLIQSMHIDATLYTESDVHPSCKVTAMKCFLLELQVISLESGDASIHDTVENLIILANNSLSSNGNVTESGCKECEELEEKNIKEFLQSFVHIVQMFINTS (DNA 서열 (서열번호 90): ATCACCTGCCCCCCCCCCATGAGCGTGGAGCACGCCGACATCTGGGTGAAGAGCTACAGCCTGTACAGCAGGGAGAGGTACATCTGCAACAGCGGCTTCAAGAGGAAGGCCGGCACCAGCAGCCTGACCGAGTGCGTGCTGAACAAGGCCACCAACGTGGCCCACTGGACCACCCCCAGCCTGAAGTGCATCAGGGACCCCGCCCTGGTGCACCAGAGGCCCGCCCCCCCCAGCGGCGGCAGCGGCGGCGGCGGCAGCGGCGGCGGCAGCGGCGGCGGCGGCAGCCTGCAGAACTGGGTGAACGTGATCAGCGACCTGAAGAAGATCGAGGACCTGATCCAGAGCATGCACATCGACGCCACCCTGTACACCGAGAGCGACGTGCACCCCAGCTGCAAGGTGACCGCCATGAAGTGCTTCCTGCTGGAGCTGCAGGTGATCAGCCTGGAGAGCGGCGACGCCAGCATCCACGACACCGTGGAGAACCTGATCATCCTGGCCAACAACAGCCTGAGCAGCAACGGCAACGTGACCGAGAGCGGCTGCAAGGAGTGCGAGGAGCTGGAGGAGAAGAACATCAAGGAGTTCCTGCAGAGCTTCGTGCACATCGTGCAGATGTTCATCAACACCAGC)
[RS15.1 (서열번호 52)]
ITCPPPMSVEHADIWVKSYSLYSRERYICNSGFKRKAGTSSLTECVLNKATNVAHWTTPSLKCIRDPALVHQRPAPP GGGGSGGGGSGGGGS NWVNVISDLKKIEDLIQSMHIDATLYTESDVHPSCKVTAMKCFLLELQVISLESGDASIHDTVENLIILANNSLSSNGNVTESGCKECEELEEKNIKEFLQSFVHIVQMFINTS (DNA 서열 (서열번호 91): ATCACCTGCCCCCCCCCCATGAGCGTGGAGCACGCCGACATCTGGGTGAAGAGCTACAGCCTGTACAGCAGGGAGAGGTACATCTGCAACAGCGGCTTCAAGAGGAAGGCCGGCACCAGCAGCCTGACCGAGTGCGTGCTGAACAAGGCCACCAACGTGGCCCACTGGACCACCCCCAGCCTGAAGTGCATCAGGGACCCCGCCCTGGTGCACCAGAGGCCCGCCCCCCCCGGCGGCGGCGGCAGCGGCGGCGGCGGCAGCGGCGGCGGCGGCAGCAACTGGGTGAACGTGATCAGCGACCTGAAGAAGATCGAGGACCTGATCCAGAGCATGCACATCGACGCCACCCTGTACACCGAGAGCGACGTGCACCCCAGCTGCAAGGTGACCGCCATGAAGTGCTTCCTGCTGGAGCTGCAGGTGATCAGCCTGGAGAGCGGCGACGCCAGCATCCACGACACCGTGGAGAACCTGATCATCCTGGCCAACAACAGCCTGAGCAGCAACGGCAACGTGACCGAGAGCGGCTGCAAGGAGTGCGAGGAGCTGGAGGAGAAGAACATCAAGGAGTTCCTGCAGAGCTTCGTGCACATCGTGCAGATGTTCATCAACACCAGC)
[RS15.2 (서열번호 53)]
ITCPPPMSVEHADIWVKSYSLYSRERYICNSGFKRKAGTSSLTECVLNKATNVAHWTTPSLKCIRDPALVHQRPAPP GSGGGGSGGGGSLQ NWVNVISDLKKIEDLIQSMHIDATLYTESDVHPSCKVTAMKCFLLELQVISLESGDASIHDTVENLIILANNSLSSNGNVTESGCKECEELEEKNIKEFLQSFVHIVQMFINTS (DNA 서열(서열번호 92): ATCACCTGCCCCCCCCCCATGAGCGTGGAGCACGCCGACATCTGGGTGAAGAGCTACAGCCTGTACAGCAGGGAGAGGTACATCTGCAACAGCGGCTTCAAGAGGAAGGCCGGCACCAGCAGCCTGACCGAGTGCGTGCTGAACAAGGCCACCAACGTGGCCCACTGGACCACCCCCAGCCTGAAGTGCATCAGGGACCCCGCCCTGGTGCACCAGAGGCCCGCCCCCCCCGGCAGCGGCGGCGGCGGCAGCGGCGGCGGCGGCAGCCTGCAGAACTGGGTGAACGTGATCAGCGACCTGAAGAAGATCGAGGACCTGATCCAGAGCATGCACATCGACGCCACCCTGTACACCGAGAGCGACGTGCACCCCAGCTGCAAGGTGACCGCCATGAAGTGCTTCCTGCTGGAGCTGCAGGTGATCAGCCTGGAGAGCGGCGACGCCAGCATCCACGACACCGTGGAGAACCTGATCATCCTGGCCAACAACAGCCTGAGCAGCAACGGCAACGTGACCGAGAGCGGCTGCAAGGAGTGCGAGGAGCTGGAGGAGAAGAACATCAAGGAGTTCCTGCAGAGCTTCGTGCACATCGTGCAGATGTTCATCAACACCAGC)
[RS15.3 (서열번호 54)]
ITCPPPMSVEHADIWVKSYSLYSRERYICNSGFKRKAGTSSLTECVLNKATNVAHWTTPSLKCIRDPALVHQRPAPP GSGGGGSGGGGSIQ NWVNVISDLKKIEDLIQSMHIDATLYTESDVHPSCKVTAMKCFLLELQVISLESGDASIHDTVENLIILANNSLSSNGNVTESGCKECEELEEKNIKEFLQSFVHIVQMFINTS (DNA 서열(서열번호 93): ATCACCTGCCCCCCCCCCATGAGCGTGGAGCACGCCGACATCTGGGTGAAGAGCTACAGCCTGTACAGCAGGGAGAGGTACATCTGCAACAGCGGCTTCAAGAGGAAGGCCGGCACCAGCAGCCTGACCGAGTGCGTGCTGAACAAGGCCACCAACGTGGCCCACTGGACCACCCCCAGCCTGAAGTGCATCAGGGACCCCGCCCTGGTGCACCAGAGGCCCGCCCCCCCCGGCAGCGGCGGCGGCGGCAGCGGCGGCGGCGGCAGCATCCAGAACTGGGTGAACGTGATCAGCGACCTGAAGAAGATCGAGGACCTGATCCAGAGCATGCACATCGACGCCACCCTGTACACCGAGAGCGACGTGCACCCCAGCTGCAAGGTGACCGCCATGAAGTGCTTCCTGCTGGAGCTGCAGGTGATCAGCCTGGAGAGCGGCGACGCCAGCATCCACGACACCGTGGAGAACCTGATCATCCTGGCCAACAACAGCCTGAGCAGCAACGGCAACGTGACCGAGAGCGGCTGCAAGGAGTGCGAGGAGCTGGAGGAGAAGAACATCAAGGAGTTCCTGCAGAGCTTCGTGCACATCGTGCAGATGTTCATCAACACCAGC)
[RS15.4 (서열번호 64)]
ITCPPPMSVEHADIWVKSYSLYSRERYICNSGFKRKAGTSSLTECVLNKATNVAHWTTPSLKCIRDPALVHQRPAPP SGGGGSGGGSGGGGGSGG NWVNVISDLKKIEDLIQSMHIDATLYTESDVHPSCKVTAMKCFLLELQVISLESGDASIHDTVENLIILANNSLSSNGNVTESGCKECEELEEKNIKEFLQSFVHIVQMFINTS (DNA 서열(서열번호 94): ATCACCTGCCCCCCCCCCATGAGCGTGGAGCACGCCGACATCTGGGTGAAGAGCTACAGCCTGTACAGCAGGGAGAGGTACATCTGCAACAGCGGCTTCAAGAGGAAGGCCGGCACCAGCAGCCTGACCGAGTGCGTGCTGAACAAGGCCACCAACGTGGCCCACTGGACCACCCCCAGCCTGAAGTGCATCAGGGACCCCGCCCTGGTGCACCAGAGGCCCGCCCCCCCCAGCGGCGGCGGCGGCAGCGGCGGCGGCAGCGGCGGCGGCGGCGGCAGCGGCGGCAACTGGGTGAACGTGATCAGCGACCTGAAGAAGATCGAGGACCTGATCCAGAGCATGCACATCGACGCCACCCTGTACACCGAGAGCGACGTGCACCCCAGCTGCAAGGTGACCGCCATGAAGTGCTTCCTGCTGGAGCTGCAGGTGATCAGCCTGGAGAGCGGCGACGCCAGCATCCACGACACCGTGGAGAACCTGATCATCCTGGCCAACAACAGCCTGAGCAGCAACGGCAACGTGACCGAGAGCGGCTGCAAGGAGTGCGAGGAGCTGGAGGAGAAGAACATCAAGGAGTTCCTGCAGAGCTTCGTGCACATCGTGCAGATGTTCATCAACACCAGC)
[RS15.5 (서열번호 65)]
ITCPPPMSVEHADIWVKSYSLYSRERYICNSGFKRKAGTSSLTECVLNKATNVAHWTTPSLKCIRDPALVHQRPAPP SGGGGSGGGSGGGGGSGGGSG NWVNVISDLKKIEDLIQSMHIDATLYTESDVHPSCKVTAMKCFLLELQVISLESGDASIHDTVENLIILANNSLSSNGNVTESGCKECEELEEKNIKEFLQSFVHIVQMFINTS (DNA 서열(서열번호 95): ATCACCTGCCCCCCCCCCATGAGCGTGGAGCACGCCGACATCTGGGTGAAGAGCTACAGCCTGTACAGCAGGGAGAGGTACATCTGCAACAGCGGCTTCAAGAGGAAGGCCGGCACCAGCAGCCTGACCGAGTGCGTGCTGAACAAGGCCACCAACGTGGCCCACTGGACCACCCCCAGCCTGAAGTGCATCAGGGACCCCGCCCTGGTGCACCAGAGGCCCGCCCCCCCCAGCGGCGGCGGCGGCAGCGGCGGCGGCAGCGGCGGCGGCGGCGGCAGCGGCGGCGGCAGCGGCAACTGGGTGAACGTGATCAGCGACCTGAAGAAGATCGAGGACCTGATCCAGAGCATGCACATCGACGCCACCCTGTACACCGAGAGCGACGTGCACCCCAGCTGCAAGGTGACCGCCATGAAGTGCTTCCTGCTGGAGCTGCAGGTGATCAGCCTGGAGAGCGGCGACGCCAGCATCCACGACACCGTGGAGAACCTGATCATCCTGGCCAACAACAGCCTGAGCAGCAACGGCAACGTGACCGAGAGCGGCTGCAAGGAGTGCGAGGAGCTGGAGGAGAAGAACATCAAGGAGTTCCTGCAGAGCTTCGTGCACATCGTGCAGATGTTCATCAACACCAGC)
(IL-15R alpha sushi domain: bold font;
Linker2: Italic font;
IL-15: underlined)
항-TIGIT 항체-RS15 융합 단백질의 설계
다음의 구조를 가지는 융합 단백질을 설계 및 제조하였다:
(N-말단)-[항-TIGIT 항체]-[제1 링커(항체의 경쇄 C-말단에 연결)]-[IL-15 수용체 알파 스시 도메인]-[제2 링커]-[hIL-15]-(C-말단)
본 실시예에서 제조된 항-TIGIT 항체-RS15 융합 단백질에 포함된 제1 링커 (항체와 RS15 연결)는 다음과 같이 명명하였다:
TL-1: 항체의 경쇄 C-말단에 연결된 유연성 링커 (GGGGSGGGGSGGGGS (서열번호 85); GGCGGCGGCGGCAGCGGCGGCGGCGGCAGCGGCGGCGGCGGCAGC (서열번호 86))
TL-2: 항체의 경쇄 C-말단에 연결된 강직성 링커 (EAAAKEAAAKEAAAK (서열번호 44); GAGGCCGCCGCCAAGGAGGCCGCCGCCAAGGAGGCCGCCGCCAAG (서열번호 87))
본 실시예에서 제조된 항-TIGIT 항체-RS15 융합 단백질은 제1 링커 및 제2 링커 (RS15 내부 링커)의 종류에 따라서 다음과 같이 명명하였다:
7A6RS15TL-2 (7A6-RS15.0) (제1 링커: EAAAKEAAAKEAAAK (서열번호 44); 제2 링커: SGGSGGGGSGGGSGGGGSLQ (서열번호 108));
7A6RS15TL-2DL-2 (7A6-RS15.1) (제1 링커: EAAAKEAAAKEAAAK (서열번호 44); 제2 링커: GGGGSGGGGSGGGGS (서열번호 85));
7A6RS15TL-2DL-1 (7A6-RS15.2) (제1 링커: EAAAKEAAAKEAAAK (서열번호 44); 제2 링커: GSGGGGSGGGGSLQ (서열번호 103));
7A6RS15TL-2DL-0 (7A6-RS15.3) (제1 링커: EAAAKEAAAKEAAAK(서열번호 44); 제2 링커: GSGGGGSGGGGSIQ (서열번호 105));
7A6RS15TL-2DL-3 (7A6-RS15.4) (제1 링커: EAAAKEAAAKEAAAK(서열번호 44); 제2 링커: SGGGGSGGGSGGGGGSGG (서열번호 110));
7A6RS15TL-2DL-4 (7A6-RS15.5) (제1 링커: EAAAKEAAAKEAAAK(서열번호 44); 제2 링커: SGGGGSGGGSGGGGGSGGGSG(서열번호 111));
7A6RS15TL-1 (7A6-RS15.0) (제1 링커: GGGGSGGGGSGGGGS(서열번호 85); 제2 링커: SGGSGGGGSGGGSGGGGSLQ(서열번호 108));
7A6RS15TL-1DL-2 (7A6-RS15.1) (제1 링커: GGGGSGGGGSGGGGS(서열번호 85); 제2 링커: GGGGSGGGGSGGGGS(서열번호 85));
7A6RS15TL-1DL-1 (7A6-RS15.2) (제1 링커: GGGGSGGGGSGGGGS(서열번호 85); 제2 링커: GSGGGGSGGGGSLQ(서열번호 103));
7A6RS15TL-1DL-0 (7A6-RS15.3) (제1 링커: GGGGSGGGGSGGGGS(서열번호 85); 제2 링커: GSGGGGSGGGGSIQ(서열번호 105));
7A6RS15TL-1DL-3 (7A6-RS15.4) (제1 링커: GGGGSGGGGSGGGGS(서열번호 85); 제2 링커: SGGGGSGGGSGGGGGSGG(서열번호 110));
7A6RS15TL-1DL-4 (7A6-RS15.5) (제1 링커: GGGGSGGGGSGGGGS(서열번호 85); 제2 링커: SGGGGSGGGSGGGGGSGGGSG(서열번호 111)).
본 실시예에서 제조된 융합 단백질을 아래의 표 4 내지 27에 정리하였다:
| 7A6-RS15 또는 7A6RS15TL-2 | 아미노산 서열(N→C) 또는 핵산서열 (5'→3') | 서열 번호 | |
| 중쇄 가닥 (anti-TIGIT 중쇄(IgG1)) | anti-TIGIT 중쇄가변영역 | QVQLQESGPGLVKPSQTLSLTCTVTGYSITSDYAWNWIRQPPGKGLEWMGYISYSGSARYNPSLKSRVTISRDTSKNQFSLKLSSVTAEDTATYYCARKGYPAYFAYWGQGTLVTVSS | 24 |
| CAGGTGCAGCTGCAGGAGAGCGGCCCCGGCCTGGTGAAGCCCAGCCAGACCCTGAGCCTGACCTGCACCGTGACCGGCTACAGCATCACCAGCGACTACGCCTGGAACTGGATCAGGCAGCCCCCCGGCAAGGGCCTGGAGTGGATGGGCTACATCAGCTACAGCGGCAGCGCCAGGTACAACCCCAGCCTGAAGAGCAGGGTGACCATCAGCAGGGACACCAGCAAGAACCAGTTCAGCCTGAAGCTGAGCAGCGTGACCGCCGAGGACACCGCCACCTACTACTGCGCCAGGAAGGGCTACCCCGCCTACTTCGCCTACTGGGGCCAGGGCACCCTGGTGACCGTGAGCAGC | 77 | ||
| anti-TIGIT 중쇄불변영역 | ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK | 42 | |
| GCCAGCACCAAGGGCCCCAGCGTGTTCCCCCTGGCCCCCAGCAGCAAGAGCACCAGCGGCGGCACCGCCGCCCTGGGCTGCCTGGTGAAGGACTACTTCCCCGAGCCCGTGACCGTGAGCTGGAACAGCGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCCGCCGTGCTGCAGAGCAGCGGCCTGTACAGCCTGAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCAGCAGCAGCCTGGGCACCCAGACCTACATCTGCAACGTGAACCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAGGGTGGAGCCCAAGAGCTGCGACAAGACCCACACCTGCCCCCCCTGCCCCGCCCCCGAGCTGCTGGGCGGCCCCAGCGTGTTCCTGTTCCCCCCCAAGCCCAAGGACACCCTGATGATCAGCAGGACCCCCGAGGTGACCTGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCACGAGGACCCCGAGGTGAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCACAACGCCAAGACCAAGCCCAGGGAGGAGCAGTACAACAGCACCTACAGGGTGGTGAGCGTGCTGACCGTGCTGCACCAGGACTGGCTGAACGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTGAGCAACAAGGCCCTGCCCGCCCCCATCGAGAAGACCATCAGCAAGGCCAAGGGCCAGCCCAGGGAGCCCCAGGTGTACACCCTGCCCCCCAGCAGGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTGAGCCTGACCTGCCTGGTGAAGGGCTTCTACCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAACGGCCAGCCCGAGAACAACTACAAGACCACCCCCCCCGTGCTGGACAGCGACGGCAGCTTCTTCCTGTACAGCAAGCTGACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGCAGGGCAACGTGTTCAGCTGCAGCGTGATGCACGAGGCCCTGCACAACCACTACACCCAGAAGAGCCTGAGCCTGAGCCCCGGCAAG | 79 | ||
| Anti-TIGIT 중쇄 | QVQLQESGPGLVKPSQTLSLTCTVTGYSITSDYAWNWIRQPPGKGLEWMGYISYSGSARYNPSLKSRVTISRDTSKNQFSLKLSSVTAEDTATYYCARKGYPAYFAYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK | 45 | |
| 경쇄 가닥 ([Anti-TIGIT 경쇄(kappk)]-[링커]-[사이토카인 유사 폴리펩타이드]) | Anti-TIGIT 경쇄가변영역 | DIQMTQSPSSLSASVGDRVSITCKASQDVSTAVAWYQQKPGQAPRLLIYSASYRYTGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQHHYSTPYTFGQGTKLEIK | 34 |
| GACATCCAGATGACCCAGAGCCCCAGCAGCCTGAGCGCCAGCGTGGGCGACAGGGTGAGCATCACCTGCAAGGCCAGCCAGGACGTGAGCACCGCCGTGGCCTGGTACCAGCAGAAGCCCGGCCAGGCCCCCAGGCTGCTGATCTACAGCGCCAGCTACAGGTACACCGGCGTGCCCGACAGGTTCAGCGGCAGCGGCAGCGGCACCGACTTCACCCTGACCATCAGCAGCCTGCAGCCCGAGGACTTCGCCACCTACTACTGCCAGCACCACTACAGCACCCCCTACACCTTCGGCCAGGGCACCAAGCTGGAGATCAAG | 78 | ||
| Anti-TIGIT 경쇄불변영역 | RTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC | 43 | |
| AGGACCGTGGCCGCCCCCAGCGTGTTCATCTTCCCCCCCAGCGACGAGCAGCTGAAGAGCGGCACCGCCAGCGTGGTGTGCCTGCTGAACAACTTCTACCCCAGGGAGGCCAAGGTGCAGTGGAAGGTGGACAACGCCCTGCAGAGCGGCAACAGCCAGGAGAGCGTGACCGAGCAGGACAGCAAGGACAGCACCTACAGCCTGAGCAGCACCCTGACCCTGAGCAAGGCCGACTACGAGAAGCACAAGGTGTACGCCTGCGAGGTGACCCACCAGGGCCTGAGCAGCCCCGTGACCAAGAGCTTCAACAGGGGCGAGTGC | 80 | ||
| 링커 | EAAAKEAAAKEAAAK | 44 | |
| 사이토카인 유사 폴리펩타이드(RS15) | ITCPPPMSVEHADIWVKSYSLYSRERYICNSGFKRKAGTSSLTECVLNKATNVAHWTTPSLKCIRDPALVHQRPAPPSGGSGGGGSGGGSGGGGSLQNWVNVISDLKKIEDLIQSMHIDATLYTESDVHPSCKVTAMKCFLLELQVISLESGDASIHDTVENLIILANNSLSSNGNVTESGCKECEELEEKNIKEFLQSFVHIVQMFINTS | 41 | |
| 경쇄 가닥 | DIQMTQSPSSLSASVGDRVSITCKASQDVSTAVAWYQQKPGQAPRLLIYSASYRYTGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQHHYSTPYTFGQGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGECEAAAKEAAAKEAAAKITCPPPMSVEHADIWVKSYSLYSRERYICNSGFKRKAGTSSLTECVLNKATNVAHWTTPSLKCIRDPALVHQRPAPPSGGSGGGGSGGGSGGGGSLQNWVNVISDLKKIEDLIQSMHIDATLYTESDVHPSCKVTAMKCFLLELQVISLESGDASIHDTVENLIILANNSLSSNGNVTESGCKECEELEEKNIKEFLQSFVHIVQMFINTS | 46 | |
| 7A6-RS15 또는 7A6RS15TL-1 | 아미노산 서열(N→C) 또는 핵산서열 (5'→3') | 서열 번호 | |
| 중쇄 가닥 (anti-TIGIT 중쇄(IgG1)) | anti-TIGIT 중쇄가변영역 | QVQLQESGPGLVKPSQTLSLTCTVTGYSITSDYAWNWIRQPPGKGLEWMGYISYSGSARYNPSLKSRVTISRDTSKNQFSLKLSSVTAEDTATYYCARKGYPAYFAYWGQGTLVTVSS | 24 |
| anti-TIGIT 중쇄불변영역 | ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK | 42 | |
| Anti-TIGIT 중쇄 | QVQLQESGPGLVKPSQTLSLTCTVTGYSITSDYAWNWIRQPPGKGLEWMGYISYSGSARYNPSLKSRVTISRDTSKNQFSLKLSSVTAEDTATYYCARKGYPAYFAYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK | 45 | |
| 경쇄 가닥 ([Anti-TIGIT 경쇄(kappk)]-[링커]-[사이토카인 유사 폴리펩타이드]) | Anti-TIGIT 경쇄가변영역 | DIQMTQSPSSLSASVGDRVSITCKASQDVSTAVAWYQQKPGQAPRLLIYSASYRYTGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQHHYSTPYTFGQGTKLEIK | 34 |
| Anti-TIGIT 경쇄불변영역 | RTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC | 43 | |
| 링커 | GGGGSGGGGSGGGGS | 85 | |
| 사이토카인 유사 폴리펩타이드(RS15) | ITCPPPMSVEHADIWVKSYSLYSRERYICNSGFKRKAGTSSLTECVLNKATNVAHWTTPSLKCIRDPALVHQRPAPPSGGSGGGGSGGGSGGGGSLQNWVNVISDLKKIEDLIQSMHIDATLYTESDVHPSCKVTAMKCFLLELQVISLESGDASIHDTVENLIILANNSLSSNGNVTESGCKECEELEEKNIKEFLQSFVHIVQMFINTS | 41 | |
| 경쇄 가닥 | DIQMTQSPSSLSASVGDRVSITCKASQDVSTAVAWYQQKPGQAPRLLIYSASYRYTGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQHHYSTPYTFGQGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGECGGGGSGGGGSGGGGSITCPPPMSVEHADIWVKSYSLYSRERYICNSGFKRKAGTSSLTECVLNKATNVAHWTTPSLKCIRDPALVHQRPAPPSGGSGGGGSGGGSGGGGSLQNWVNVISDLKKIEDLIQSMHIDATLYTESDVHPSCKVTAMKCFLLELQVISLESGDASIHDTVENLIILANNSLSSNGNVTESGCKECEELEEKNIKEFLQSFVHIVQMFINTS | 47 | |
| 2B7-RS15 | 아미노산 서열(N→C) 또는 핵산서열 (5'→3') | 서열 번호 | |
| 중쇄 가닥 (anti-TIGIT 중쇄(IgG1)) | anti-TIGIT 중쇄가변영역 | EVQLQQSGPELVKPGASVKISCKTSGSTFTEYTMHWVKQSHGKSLEWIGGLNPNNGGTSYNQRFKDRATLTVDKSSSTAYMELRSLTSEDSAVYYCTRGTYYDYSFAYWGQGTLVTVSA | 27 |
| GAGGTGCAGCTGCAGCAGAGCGGCCCCGAGCTGGTGAAGCCCGGCGCCAGCGTGAAGATCAGCTGCAAGACCAGCGGCAGCACCTTCACCGAGTACACCATGCACTGGGTGAAGCAGAGCCACGGCAAGAGCCTGGAGTGGATCGGCGGCCTGAACCCCAACAACGGCGGCACCAGCTACAACCAGAGGTTCAAGGACAGGGCCACCCTGACCGTGGACAAGAGCAGCAGCACCGCCTACATGGAGCTGAGGAGCCTGACCAGCGAGGACAGCGCCGTGTACTACTGCACCAGGGGCACCTACTACGACTACAGCTTCGCCTACTGGGGCCAGGGCACCCTGGTGACCGTGAGCGCC | 81 | ||
| anti-TIGIT 중쇄불변영역 | ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK | 42 | |
| Anti-TIGIT 중쇄 | EVQLQQSGPELVKPGASVKISCKTSGSTFTEYTMHWVKQSHGKSLEWIGGLNPNNGGTSYNQRFKDRATLTVDKSSSTAYMELRSLTSEDSAVYYCTRGTYYDYSFAYWGQGTLVTVSAASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK | 48 | |
| 경쇄 가닥 ([Anti-TIGIT 경쇄(kappk)]-[링커]-[사이토카인 유사 폴리펩타이드]) | Anti-TIGIT 경쇄가변영역 | DIVMTQSHKFMSTSVGDRVSITCKASHYVSTAVAWYQQKPGQSPKLLIYSPSYRYTGVPDRFTGSGSGTDFTFTISSVQAEDLAVYYCHQHYSTPWTFGGGTKLEIK | 35 |
| GACATCGTGATGACCCAGAGCCACAAGTTCATGAGCACCAGCGTGGGCGACAGGGTGAGCATCACCTGCAAGGCCAGCCACTACGTGAGCACCGCCGTGGCCTGGTACCAGCAGAAGCCCGGCCAGAGCCCCAAGCTGCTGATCTACAGCCCCAGCTACAGGTACACCGGCGTGCCCGACAGGTTCACCGGCAGCGGCAGCGGCACCGACTTCACCTTCACCATCAGCAGCGTGCAGGCCGAGGACCTGGCCGTGTACTACTGCCACCAGCACTACAGCACCCCCTGGACCTTCGGCGGCGGCACCAAGCTGGAGATCAAG | 82 | ||
| Anti-TIGIT 경쇄불변영역 | RTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC | 43 | |
| 링커 | EAAAKEAAAKEAAAK | 44 | |
| 사이토카인 유사 폴리펩타이드(RS15) | ITCPPPMSVEHADIWVKSYSLYSRERYICNSGFKRKAGTSSLTECVLNKATNVAHWTTPSLKCIRDPALVHQRPAPPSGGSGGGGSGGGSGGGGSLQNWVNVISDLKKIEDLIQSMHIDATLYTESDVHPSCKVTAMKCFLLELQVISLESGDASIHDTVENLIILANNSLSSNGNVTESGCKECEELEEKNIKEFLQSFVHIVQMFINTS | 41 | |
| 경쇄 가닥 | DIVMTQSHKFMSTSVGDRVSITCKASHYVSTAVAWYQQKPGQSPKLLIYSPSYRYTGVPDRFTGSGSGTDFTFTISSVQAEDLAVYYCHQHYSTPWTFGGGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGECEAAAKEAAAKEAAAKITCPPPMSVEHADIWVKSYSLYSRERYICNSGFKRKAGTSSLTECVLNKATNVAHWTTPSLKCIRDPALVHQRPAPPSGGSGGGGSGGGSGGGGSLQNWVNVISDLKKIEDLIQSMHIDATLYTESDVHPSCKVTAMKCFLLELQVISLESGDASIHDTVENLIILANNSLSSNGNVTESGCKECEELEEKNIKEFLQSFVHIVQMFINTS | 49 | |
| 3F8-RS15 | 아미노산 서열(N→C) 또는 핵산서열 (5'→3') | 서열 번호 | |
| 중쇄 가닥 (anti-TIGIT 중쇄(IgG1)) | anti-TIGIT 중쇄가변영역 | EVQLQQSGPELVKPGASMKISCKASGYSFTDYIMNWVKQSHGKNLEWIGLSIPYNGGTSYNQKFEGKATLTVDKSSSTAYMELLSLTSEDSAVYYCARGIKGYFAMDYWGQGTSVTVSS | 28 |
| GAGGTGCAGCTGCAGCAGAGCGGCCCCGAGCTGGTGAAGCCCGGCGCCAGCATGAAGATCAGCTGCAAGGCCAGCGGCTACAGCTTCACCGACTACATCATGAACTGGGTGAAGCAGAGCCACGGCAAGAACCTGGAGTGGATCGGCCTGAGCATCCCCTACAACGGCGGCACCAGCTACAACCAGAAGTTCGAGGGCAAGGCCACCCTGACCGTGGACAAGAGCAGCAGCACCGCCTACATGGAGCTGCTGAGCCTGACCAGCGAGGACAGCGCCGTGTACTACTGCGCCAGGGGCATCAAGGGCTACTTCGCCATGGACTACTGGGGCCAGGGCACCAGCGTGACCGTGAGCAGC | 83 | ||
| anti-TIGIT 중쇄불변영역 | ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK | 42 | |
| Anti-TIGIT 중쇄 | EVQLQQSGPELVKPGASMKISCKASGYSFTDYIMNWVKQSHGKNLEWIGLSIPYNGGTSYNQKFEGKATLTVDKSSSTAYMELLSLTSEDSAVYYCARGIKGYFAMDYWGQGTSVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK | 50 | |
| 경쇄 가닥 ([Anti-TIGIT 경쇄(kappk)]-[링커]-[사이토카인 유사 폴리펩타이드]) | Anti-TIGIT 경쇄가변영역 | DVVVTQTPLSLPVSFGDQVSISCRSSQSLVNSFGKTYLSWFLHKPGQSPQLIMYGVSNRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISTIKPEDLGMYYCLQGTHQPWTFGGGTKLEIK | 36 |
| GACGTGGTGGTGACCCAGACCCCCCTGAGCCTGCCCGTGAGCTTCGGCGACCAGGTGAGCATCAGCTGCAGGAGCAGCCAGAGCCTGGTGAACAGCTTCGGCAAGACCTACCTGAGCTGGTTCCTGCACAAGCCCGGCCAGAGCCCCCAGCTGATCATGTACGGCGTGAGCAACAGGTTCAGCGGCGTGCCCGACAGGTTCAGCGGCAGCGGCAGCGGCACCGACTTCACCCTGAAGATCAGCACCATCAAGCCCGAGGACCTGGGCATGTACTACTGCCTGCAGGGCACCCACCAGCCCTGGACCTTCGGCGGCGGCACCAAGCTGGAGATCAAG | 84 | ||
| Anti-TIGIT 경쇄불변영역 | RTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC | 43 | |
| 링커 | EAAAKEAAAKEAAAK | 44 | |
| 사이토카인 유사 폴리펩타이드(RS15) | ITCPPPMSVEHADIWVKSYSLYSRERYICNSGFKRKAGTSSLTECVLNKATNVAHWTTPSLKCIRDPALVHQRPAPPSGGSGGGGSGGGSGGGGSLQNWVNVISDLKKIEDLIQSMHIDATLYTESDVHPSCKVTAMKCFLLELQVISLESGDASIHDTVENLIILANNSLSSNGNVTESGCKECEELEEKNIKEFLQSFVHIVQMFINTS | 41 | |
| 경쇄 가닥 | DVVVTQTPLSLPVSFGDQVSISCRSSQSLVNSFGKTYLSWFLHKPGQSPQLIMYGVSNRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISTIKPEDLGMYYCLQGTHQPWTFGGGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGECEAAAKEAAAKEAAAKITCPPPMSVEHADIWVKSYSLYSRERYICNSGFKRKAGTSSLTECVLNKATNVAHWTTPSLKCIRDPALVHQRPAPPSGGSGGGGSGGGSGGGGSLQNWVNVISDLKKIEDLIQSMHIDATLYTESDVHPSCKVTAMKCFLLELQVISLESGDASIHDTVENLIILANNSLSSNGNVTESGCKECEELEEKNIKEFLQSFVHIVQMFINTS | 51 | |
| 7A6-RS15.1 | 아미노산 서열(N→C) 또는 핵산서열 (5'→3') | 서열 번호 | |
| 중쇄 가닥 (anti-TIGIT 중쇄(IgG1)) | anti-TIGIT 중쇄가변영역 | QVQLQESGPGLVKPSQTLSLTCTVTGYSITSDYAWNWIRQPPGKGLEWMGYISYSGSARYNPSLKSRVTISRDTSKNQFSLKLSSVTAEDTATYYCARKGYPAYFAYWGQGTLVTVSS | 24 |
| anti-TIGIT 중쇄불변영역 | ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK | 42 | |
| Anti-TIGIT 중쇄 | QVQLQESGPGLVKPSQTLSLTCTVTGYSITSDYAWNWIRQPPGKGLEWMGYISYSGSARYNPSLKSRVTISRDTSKNQFSLKLSSVTAEDTATYYCARKGYPAYFAYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK | 45 | |
| 경쇄 가닥 ([Anti-TIGIT 경쇄(kappk)]-[링커]-[사이토카인 유사 폴리펩타이드]) | Anti-TIGIT 경쇄가변영역 | DIQMTQSPSSLSASVGDRVSITCKASQDVSTAVAWYQQKPGQAPRLLIYSASYRYTGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQHHYSTPYTFGQGTKLEIK | 34 |
| Anti-TIGIT 경쇄불변영역 | RTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC | 43 | |
| 링커 | EAAAKEAAAKEAAAK | 44 | |
| 사이토카인 유사 폴리펩타이드(RS15.1) | ITCPPPMSVEHADIWVKSYSLYSRERYICNSGFKRKAGTSSLTECVLNKATNVAHWTTPSLKCIRDPALVHQRPAPPGGGGSGGGGSGGGGSNWVNVISDLKKIEDLIQSMHIDATLYTESDVHPSCKVTAMKCFLLELQVISLESGDASIHDTVENLIILANNSLSSNGNVTESGCKECEELEEKNIKEFLQSFVHIVQMFINTS | 52 | |
| 경쇄 가닥 | DIQMTQSPSSLSASVGDRVSITCKASQDVSTAVAWYQQKPGQAPRLLIYSASYRYTGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQHHYSTPYTFGQGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGECEAAAKEAAAKEAAAKITCPPPMSVEHADIWVKSYSLYSRERYICNSGFKRKAGTSSLTECVLNKATNVAHWTTPSLKCIRDPALVHQRPAPPGGGGSGGGGSGGGGSNWVNVISDLKKIEDLIQSMHIDATLYTESDVHPSCKVTAMKCFLLELQVISLESGDASIHDTVENLIILANNSLSSNGNVTESGCKECEELEEKNIKEFLQSFVHIVQMFINTS | 55 | |
| 7A6-RS15.1 또는 7A6RS15TL-1DL-2 | 아미노산 서열(N→C) 또는 핵산서열 (5'→3') | 서열 번호 | |
| 중쇄 가닥 (anti-TIGIT 중쇄(IgG1)) | anti-TIGIT 중쇄가변영역 | QVQLQESGPGLVKPSQTLSLTCTVTGYSITSDYAWNWIRQPPGKGLEWMGYISYSGSARYNPSLKSRVTISRDTSKNQFSLKLSSVTAEDTATYYCARKGYPAYFAYWGQGTLVTVSS | 24 |
| anti-TIGIT 중쇄불변영역 | ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK | 42 | |
| Anti-TIGIT 중쇄 | QVQLQESGPGLVKPSQTLSLTCTVTGYSITSDYAWNWIRQPPGKGLEWMGYISYSGSARYNPSLKSRVTISRDTSKNQFSLKLSSVTAEDTATYYCARKGYPAYFAYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK | 45 | |
| 경쇄 가닥 ([Anti-TIGIT 경쇄(kappk)]-[링커]-[사이토카인 유사 폴리펩타이드]) | Anti-TIGIT 경쇄가변영역 | DIQMTQSPSSLSASVGDRVSITCKASQDVSTAVAWYQQKPGQAPRLLIYSASYRYTGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQHHYSTPYTFGQGTKLEIK | 34 |
| Anti-TIGIT 경쇄불변영역 | RTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC | 43 | |
| 링커 | GGGGSGGGGSGGGGS | 85 | |
| 사이토카인 유사 폴리펩타이드(RS15.1) | ITCPPPMSVEHADIWVKSYSLYSRERYICNSGFKRKAGTSSLTECVLNKATNVAHWTTPSLKCIRDPALVHQRPAPPGGGGSGGGGSGGGGSNWVNVISDLKKIEDLIQSMHIDATLYTESDVHPSCKVTAMKCFLLELQVISLESGDASIHDTVENLIILANNSLSSNGNVTESGCKECEELEEKNIKEFLQSFVHIVQMFINTS | 52 | |
| 경쇄 가닥 | DIQMTQSPSSLSASVGDRVSITCKASQDVSTAVAWYQQKPGQAPRLLIYSASYRYTGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQHHYSTPYTFGQGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGECGGGGSGGGGSGGGGSITCPPPMSVEHADIWVKSYSLYSRERYICNSGFKRKAGTSSLTECVLNKATNVAHWTTPSLKCIRDPALVHQRPAPPGGGGSGGGGSGGGGSNWVNVISDLKKIEDLIQSMHIDATLYTESDVHPSCKVTAMKCFLLELQVISLESGDASIHDTVENLIILANNSLSSNGNVTESGCKECEELEEKNIKEFLQSFVHIVQMFINTS | 72 | |
| 2B7-RS15.1 | 아미노산 서열(N→C) 또는 핵산서열 (5'→3') | 서열 번호 | |
| 중쇄 가닥 (anti-TIGIT 중쇄(IgG1)) | anti-TIGIT 중쇄가변영역 | EVQLQQSGPELVKPGASVKISCKTSGSTFTEYTMHWVKQSHGKSLEWIGGLNPNNGGTSYNQRFKDRATLTVDKSSSTAYMELRSLTSEDSAVYYCTRGTYYDYSFAYWGQGTLVTVSA | 27 |
| anti-TIGIT 중쇄불변영역 | ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK | 42 | |
| Anti-TIGIT 중쇄 | EVQLQQSGPELVKPGASVKISCKTSGSTFTEYTMHWVKQSHGKSLEWIGGLNPNNGGTSYNQRFKDRATLTVDKSSSTAYMELRSLTSEDSAVYYCTRGTYYDYSFAYWGQGTLVTVSAASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK | 47 | |
| 경쇄 가닥 ([Anti-TIGIT 경쇄(kappk)]-[링커]-[사이토카인 유사 폴리펩타이드]) | Anti-TIGIT 경쇄가변영역 | DIVMTQSHKFMSTSVGDRVSITCKASHYVSTAVAWYQQKPGQSPKLLIYSPSYRYTGVPDRFTGSGSGTDFTFTISSVQAEDLAVYYCHQHYSTPWTFGGGTKLEIK | 35 |
| Anti-TIGIT 경쇄불변영역 | RTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC | 43 | |
| 링커 | EAAAKEAAAKEAAAK | 44 | |
| 사이토카인 유사 폴리펩타이드(RS15.1) | ITCPPPMSVEHADIWVKSYSLYSRERYICNSGFKRKAGTSSLTECVLNKATNVAHWTTPSLKCIRDPALVHQRPAPPGGGGSGGGGSGGGGSNWVNVISDLKKIEDLIQSMHIDATLYTESDVHPSCKVTAMKCFLLELQVISLESGDASIHDTVENLIILANNSLSSNGNVTESGCKECEELEEKNIKEFLQSFVHIVQMFINTS | 52 | |
| 경쇄 가닥 | DIVMTQSHKFMSTSVGDRVSITCKASHYVSTAVAWYQQKPGQSPKLLIYSPSYRYTGVPDRFTGSGSGTDFTFTISSVQAEDLAVYYCHQHYSTPWTFGGGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGECEAAAKEAAAKEAAAKITCPPPMSVEHADIWVKSYSLYSRERYICNSGFKRKAGTSSLTECVLNKATNVAHWTTPSLKCIRDPALVHQRPAPPGGGGSGGGGSGGGGSNWVNVISDLKKIEDLIQSMHIDATLYTESDVHPSCKVTAMKCFLLELQVISLESGDASIHDTVENLIILANNSLSSNGNVTESGCKECEELEEKNIKEFLQSFVHIVQMFINTS | 56 | |
| 3F8-RS15.1 | 아미노산 서열(N→C) 또는 핵산서열 (5'→3') | 서열 번호 | |
| 중쇄 가닥 (anti-TIGIT 중쇄(IgG1)) | anti-TIGIT 중쇄가변영역 | EVQLQQSGPELVKPGASMKISCKASGYSFTDYIMNWVKQSHGKNLEWIGLSIPYNGGTSYNQKFEGKATLTVDKSSSTAYMELLSLTSEDSAVYYCARGIKGYFAMDYWGQGTSVTVSS | 28 |
| anti-TIGIT 중쇄불변영역 | ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK | 42 | |
| Anti-TIGIT 중쇄 | EVQLQQSGPELVKPGASMKISCKASGYSFTDYIMNWVKQSHGKNLEWIGLSIPYNGGTSYNQKFEGKATLTVDKSSSTAYMELLSLTSEDSAVYYCARGIKGYFAMDYWGQGTSVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK | 49 | |
| 경쇄 가닥 ([Anti-TIGIT 경쇄(kappk)]-[링커]-[사이토카인 유사 폴리펩타이드]) | Anti-TIGIT 경쇄가변영역 | DVVVTQTPLSLPVSFGDQVSISCRSSQSLVNSFGKTYLSWFLHKPGQSPQLIMYGVSNRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISTIKPEDLGMYYCLQGTHQPWTFGGGTKLEIK | 36 |
| Anti-TIGIT 경쇄불변영역 | RTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC | 43 | |
| 링커 | EAAAKEAAAKEAAAK | 44 | |
| 사이토카인 유사 폴리펩타이드(RS15.1) | ITCPPPMSVEHADIWVKSYSLYSRERYICNSGFKRKAGTSSLTECVLNKATNVAHWTTPSLKCIRDPALVHQRPAPPGGGGSGGGGSGGGGSNWVNVISDLKKIEDLIQSMHIDATLYTESDVHPSCKVTAMKCFLLELQVISLESGDASIHDTVENLIILANNSLSSNGNVTESGCKECEELEEKNIKEFLQSFVHIVQMFINTS | 52 | |
| 경쇄 가닥 | DVVVTQTPLSLPVSFGDQVSISCRSSQSLVNSFGKTYLSWFLHKPGQSPQLIMYGVSNRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISTIKPEDLGMYYCLQGTHQPWTFGGGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGECEAAAKEAAAKEAAAKITCPPPMSVEHADIWVKSYSLYSRERYICNSGFKRKAGTSSLTECVLNKATNVAHWTTPSLKCIRDPALVHQRPAPPGGGGSGGGGSGGGGSNWVNVISDLKKIEDLIQSMHIDATLYTESDVHPSCKVTAMKCFLLELQVISLESGDASIHDTVENLIILANNSLSSNGNVTESGCKECEELEEKNIKEFLQSFVHIVQMFINTS | 57 | |
| 7A6-RS15.2 또는 7A6RS15TL-2DL-1 | 아미노산 서열(N→C) 또는 핵산서열 (5'→3') | 서열 번호 | |
| 중쇄 가닥 (anti-TIGIT 중쇄(IgG1)) | anti-TIGIT 중쇄가변영역 | QVQLQESGPGLVKPSQTLSLTCTVTGYSITSDYAWNWIRQPPGKGLEWMGYISYSGSARYNPSLKSRVTISRDTSKNQFSLKLSSVTAEDTATYYCARKGYPAYFAYWGQGTLVTVSS | 24 |
| anti-TIGIT 중쇄불변영역 | ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK | 42 | |
| Anti-TIGIT 중쇄 | QVQLQESGPGLVKPSQTLSLTCTVTGYSITSDYAWNWIRQPPGKGLEWMGYISYSGSARYNPSLKSRVTISRDTSKNQFSLKLSSVTAEDTATYYCARKGYPAYFAYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK | 45 | |
| 경쇄 가닥 ([Anti-TIGIT 경쇄(kappk)]-[링커]-[사이토카인 유사 폴리펩타이드]) | Anti-TIGIT 경쇄가변영역 | DIQMTQSPSSLSASVGDRVSITCKASQDVSTAVAWYQQKPGQAPRLLIYSASYRYTGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQHHYSTPYTFGQGTKLEIK | 34 |
| Anti-TIGIT 경쇄불변영역 | RTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC | 43 | |
| 링커 | EAAAKEAAAKEAAAK | 44 | |
| 사이토카인 유사 폴리펩타이드(RS15.2) | ITCPPPMSVEHADIWVKSYSLYSRERYICNSGFKRKAGTSSLTECVLNKATNVAHWTTPSLKCIRDPALVHQRPAPPGSGGGGSGGGGSLQNWVNVISDLKKIEDLIQSMHIDATLYTESDVHPSCKVTAMKCFLLELQVISLESGDASIHDTVENLIILANNSLSSNGNVTESGCKECEELEEKNIKEFLQSFVHIVQMFINTS | 53 | |
| 경쇄 가닥 | DIQMTQSPSSLSASVGDRVSITCKASQDVSTAVAWYQQKPGQAPRLLIYSASYRYTGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQHHYSTPYTFGQGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGECEAAAKEAAAKEAAAKITCPPPMSVEHADIWVKSYSLYSRERYICNSGFKRKAGTSSLTECVLNKATNVAHWTTPSLKCIRDPALVHQRPAPPGSGGGGSGGGGSLQNWVNVISDLKKIEDLIQSMHIDATLYTESDVHPSCKVTAMKCFLLELQVISLESGDASIHDTVENLIILANNSLSSNGNVTESGCKECEELEEKNIKEFLQSFVHIVQMFINTS | 58 | |
| 7A6-RS15.2 또는 7A6RS15TL-1DL-1 | 아미노산 서열(N→C) 또는 핵산서열 (5'→3') | 서열 번호 | |
| 중쇄 가닥 (anti-TIGIT 중쇄(IgG1)) | anti-TIGIT 중쇄가변영역 | QVQLQESGPGLVKPSQTLSLTCTVTGYSITSDYAWNWIRQPPGKGLEWMGYISYSGSARYNPSLKSRVTISRDTSKNQFSLKLSSVTAEDTATYYCARKGYPAYFAYWGQGTLVTVSS | 24 |
| anti-TIGIT 중쇄불변영역 | ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK | 42 | |
| Anti-TIGIT 중쇄 | QVQLQESGPGLVKPSQTLSLTCTVTGYSITSDYAWNWIRQPPGKGLEWMGYISYSGSARYNPSLKSRVTISRDTSKNQFSLKLSSVTAEDTATYYCARKGYPAYFAYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK | 45 | |
| 경쇄 가닥 ([Anti-TIGIT 경쇄(kappk)]-[링커]-[사이토카인 유사 폴리펩타이드]) | Anti-TIGIT 경쇄가변영역 | DIQMTQSPSSLSASVGDRVSITCKASQDVSTAVAWYQQKPGQAPRLLIYSASYRYTGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQHHYSTPYTFGQGTKLEIK | 34 |
| Anti-TIGIT 경쇄불변영역 | RTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC | 43 | |
| 링커 | GGGGSGGGGSGGGGS | 85 | |
| 사이토카인 유사 폴리펩타이드(RS15.2) | ITCPPPMSVEHADIWVKSYSLYSRERYICNSGFKRKAGTSSLTECVLNKATNVAHWTTPSLKCIRDPALVHQRPAPPGSGGGGSGGGGSLQNWVNVISDLKKIEDLIQSMHIDATLYTESDVHPSCKVTAMKCFLLELQVISLESGDASIHDTVENLIILANNSLSSNGNVTESGCKECEELEEKNIKEFLQSFVHIVQMFINTS | 53 | |
| 경쇄 가닥 | DIQMTQSPSSLSASVGDRVSITCKASQDVSTAVAWYQQKPGQAPRLLIYSASYRYTGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQHHYSTPYTFGQGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGECGGGGSGGGGSGGGGSITCPPPMSVEHADIWVKSYSLYSRERYICNSGFKRKAGTSSLTECVLNKATNVAHWTTPSLKCIRDPALVHQRPAPPGSGGGGSGGGGSLQNWVNVISDLKKIEDLIQSMHIDATLYTESDVHPSCKVTAMKCFLLELQVISLESGDASIHDTVENLIILANNSLSSNGNVTESGCKECEELEEKNIKEFLQSFVHIVQMFINTS | 73 | |
| 2B7-RS15.2 | 아미노산 서열(N→C) 또는 핵산서열 (5'→3') | 서열 번호 | |
| 중쇄 가닥 (anti-TIGIT 중쇄(IgG1)) | anti-TIGIT 중쇄가변영역 | EVQLQQSGPELVKPGASVKISCKTSGSTFTEYTMHWVKQSHGKSLEWIGGLNPNNGGTSYNQRFKDRATLTVDKSSSTAYMELRSLTSEDSAVYYCTRGTYYDYSFAYWGQGTLVTVSA | 27 |
| anti-TIGIT 중쇄불변영역 | ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK | 42 | |
| Anti-TIGIT 중쇄 | EVQLQQSGPELVKPGASVKISCKTSGSTFTEYTMHWVKQSHGKSLEWIGGLNPNNGGTSYNQRFKDRATLTVDKSSSTAYMELRSLTSEDSAVYYCTRGTYYDYSFAYWGQGTLVTVSAASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK | 47 | |
| 경쇄 가닥 ([Anti-TIGIT 경쇄(kappk)]-[링커]-[사이토카인 유사 폴리펩타이드]) | Anti-TIGIT 경쇄가변영역 | DIVMTQSHKFMSTSVGDRVSITCKASHYVSTAVAWYQQKPGQSPKLLIYSPSYRYTGVPDRFTGSGSGTDFTFTISSVQAEDLAVYYCHQHYSTPWTFGGGTKLEIK | 35 |
| Anti-TIGIT 경쇄불변영역 | RTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC | 43 | |
| 링커 | EAAAKEAAAKEAAAK | 44 | |
| 사이토카인 유사 폴리펩타이드(RS15.2) | ITCPPPMSVEHADIWVKSYSLYSRERYICNSGFKRKAGTSSLTECVLNKATNVAHWTTPSLKCIRDPALVHQRPAPPGSGGGGSGGGGSLQNWVNVISDLKKIEDLIQSMHIDATLYTESDVHPSCKVTAMKCFLLELQVISLESGDASIHDTVENLIILANNSLSSNGNVTESGCKECEELEEKNIKEFLQSFVHIVQMFINTS | 53 | |
| 경쇄 가닥 | DIVMTQSHKFMSTSVGDRVSITCKASHYVSTAVAWYQQKPGQSPKLLIYSPSYRYTGVPDRFTGSGSGTDFTFTISSVQAEDLAVYYCHQHYSTPWTFGGGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGECEAAAKEAAAKEAAAKITCPPPMSVEHADIWVKSYSLYSRERYICNSGFKRKAGTSSLTECVLNKATNVAHWTTPSLKCIRDPALVHQRPAPPGSGGGGSGGGGSLQNWVNVISDLKKIEDLIQSMHIDATLYTESDVHPSCKVTAMKCFLLELQVISLESGDASIHDTVENLIILANNSLSSNGNVTESGCKECEELEEKNIKEFLQSFVHIVQMFINTS | 59 | |
| 3F8-RS15.2 | 아미노산 서열(N→C) 또는 핵산서열 (5'→3') | 서열 번호 | |
| 중쇄 가닥 (anti-TIGIT 중쇄(IgG1)) | anti-TIGIT 중쇄가변영역 | EVQLQQSGPELVKPGASMKISCKASGYSFTDYIMNWVKQSHGKNLEWIGLSIPYNGGTSYNQKFEGKATLTVDKSSSTAYMELLSLTSEDSAVYYCARGIKGYFAMDYWGQGTSVTVSS | 28 |
| anti-TIGIT 중쇄불변영역 | ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK | 42 | |
| Anti-TIGIT 중쇄 | EVQLQQSGPELVKPGASMKISCKASGYSFTDYIMNWVKQSHGKNLEWIGLSIPYNGGTSYNQKFEGKATLTVDKSSSTAYMELLSLTSEDSAVYYCARGIKGYFAMDYWGQGTSVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK | 49 | |
| 경쇄 가닥 ([Anti-TIGIT 경쇄(kappk)]-[링커]-[사이토카인 유사 폴리펩타이드]) | Anti-TIGIT 경쇄가변영역 | DVVVTQTPLSLPVSFGDQVSISCRSSQSLVNSFGKTYLSWFLHKPGQSPQLIMYGVSNRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISTIKPEDLGMYYCLQGTHQPWTFGGGTKLEIK | 36 |
| Anti-TIGIT 경쇄불변영역 | RTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC | 43 | |
| 링커 | EAAAKEAAAKEAAAK | 44 | |
| 사이토카인 유사 폴리펩타이드(RS15.2) | ITCPPPMSVEHADIWVKSYSLYSRERYICNSGFKRKAGTSSLTECVLNKATNVAHWTTPSLKCIRDPALVHQRPAPPGSGGGGSGGGGSLQNWVNVISDLKKIEDLIQSMHIDATLYTESDVHPSCKVTAMKCFLLELQVISLESGDASIHDTVENLIILANNSLSSNGNVTESGCKECEELEEKNIKEFLQSFVHIVQMFINTS | 53 | |
| 경쇄 가닥 | DVVVTQTPLSLPVSFGDQVSISCRSSQSLVNSFGKTYLSWFLHKPGQSPQLIMYGVSNRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISTIKPEDLGMYYCLQGTHQPWTFGGGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGECEAAAKEAAAKEAAAKITCPPPMSVEHADIWVKSYSLYSRERYICNSGFKRKAGTSSLTECVLNKATNVAHWTTPSLKCIRDPALVHQRPAPPGSGGGGSGGGGSLQNWVNVISDLKKIEDLIQSMHIDATLYTESDVHPSCKVTAMKCFLLELQVISLESGDASIHDTVENLIILANNSLSSNGNVTESGCKECEELEEKNIKEFLQSFVHIVQMFINTS | 60 | |
| 7A6-RS15.3 또는 7A6RS15TL-2DL-0 | 아미노산 서열(N→C) 또는 핵산서열 (5'→3') | 서열 번호 | |
| 중쇄 가닥 (anti-TIGIT 중쇄(IgG1)) | anti-TIGIT 중쇄가변영역 | QVQLQESGPGLVKPSQTLSLTCTVTGYSITSDYAWNWIRQPPGKGLEWMGYISYSGSARYNPSLKSRVTISRDTSKNQFSLKLSSVTAEDTATYYCARKGYPAYFAYWGQGTLVTVSS | 24 |
| anti-TIGIT 중쇄불변영역 | ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK | 42 | |
| Anti-TIGIT 중쇄 | QVQLQESGPGLVKPSQTLSLTCTVTGYSITSDYAWNWIRQPPGKGLEWMGYISYSGSARYNPSLKSRVTISRDTSKNQFSLKLSSVTAEDTATYYCARKGYPAYFAYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK | 45 | |
| 경쇄 가닥 ([Anti-TIGIT 경쇄(kappk)]-[링커]-[사이토카인 유사 폴리펩타이드]) | Anti-TIGIT 경쇄가변영역 | DIQMTQSPSSLSASVGDRVSITCKASQDVSTAVAWYQQKPGQAPRLLIYSASYRYTGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQHHYSTPYTFGQGTKLEIK | 34 |
| Anti-TIGIT 경쇄불변영역 | RTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC | 43 | |
| 링커 | EAAAKEAAAKEAAAK | 44 | |
| 사이토카인 유사 폴리펩타이드(RS15.3) | ITCPPPMSVEHADIWVKSYSLYSRERYICNSGFKRKAGTSSLTECVLNKATNVAHWTTPSLKCIRDPALVHQRPAPPGSGGGGSGGGGSIQNWVNVISDLKKIEDLIQSMHIDATLYTESDVHPSCKVTAMKCFLLELQVISLESGDASIHDTVENLIILANNSLSSNGNVTESGCKECEELEEKNIKEFLQSFVHIVQMFINTS | 54 | |
| 경쇄 가닥 | DIQMTQSPSSLSASVGDRVSITCKASQDVSTAVAWYQQKPGQAPRLLIYSASYRYTGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQHHYSTPYTFGQGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGECEAAAKEAAAKEAAAKITCPPPMSVEHADIWVKSYSLYSRERYICNSGFKRKAGTSSLTECVLNKATNVAHWTTPSLKCIRDPALVHQRPAPPGSGGGGSGGGGSIQNWVNVISDLKKIEDLIQSMHIDATLYTESDVHPSCKVTAMKCFLLELQVISLESGDASIHDTVENLIILANNSLSSNGNVTESGCKECEELEEKNIKEFLQSFVHIVQMFINTS | 61 | |
| 7A6-RS15.3 또는 7A6RS15TL-1DL-0 | 아미노산 서열(N→C) 또는 핵산서열 (5'→3') | 서열 번호 | |
| 중쇄 가닥 (anti-TIGIT 중쇄(IgG1)) | anti-TIGIT 중쇄가변영역 | QVQLQESGPGLVKPSQTLSLTCTVTGYSITSDYAWNWIRQPPGKGLEWMGYISYSGSARYNPSLKSRVTISRDTSKNQFSLKLSSVTAEDTATYYCARKGYPAYFAYWGQGTLVTVSS | 24 |
| anti-TIGIT 중쇄불변영역 | ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK | 42 | |
| Anti-TIGIT 중쇄 | QVQLQESGPGLVKPSQTLSLTCTVTGYSITSDYAWNWIRQPPGKGLEWMGYISYSGSARYNPSLKSRVTISRDTSKNQFSLKLSSVTAEDTATYYCARKGYPAYFAYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK | 45 | |
| 경쇄 가닥 ([Anti-TIGIT 경쇄(kappk)]-[링커]-[사이토카인 유사 폴리펩타이드]) | Anti-TIGIT 경쇄가변영역 | DIQMTQSPSSLSASVGDRVSITCKASQDVSTAVAWYQQKPGQAPRLLIYSASYRYTGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQHHYSTPYTFGQGTKLEIK | 34 |
| Anti-TIGIT 경쇄불변영역 | RTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC | 43 | |
| 링커 | GGGGSGGGGSGGGGS | 85 | |
| 사이토카인 유사 폴리펩타이드(RS15.3) | ITCPPPMSVEHADIWVKSYSLYSRERYICNSGFKRKAGTSSLTECVLNKATNVAHWTTPSLKCIRDPALVHQRPAPPGSGGGGSGGGGSIQNWVNVISDLKKIEDLIQSMHIDATLYTESDVHPSCKVTAMKCFLLELQVISLESGDASIHDTVENLIILANNSLSSNGNVTESGCKECEELEEKNIKEFLQSFVHIVQMFINTS | 54 | |
| 경쇄 가닥 | DIQMTQSPSSLSASVGDRVSITCKASQDVSTAVAWYQQKPGQAPRLLIYSASYRYTGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQHHYSTPYTFGQGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC GGGGSGGGGSGGGGSITCPPPMSVEHADIWVKSYSLYSRERYICNSGFKRKAGTSSLTECVLNKATNVAHWTTPSLKCIRDPALVHQRPAPPGSGGGGSGGGGSIQNWVNVISDLKKIEDLIQSMHIDATLYTESDVHPSCKVTAMKCFLLELQVISLESGDASIHDTVENLIILANNSLSSNGNVTESGCKECEELEEKNIKEFLQSFVHIVQMFINTS | 74 | |
| 2B7-RS15.3 | 아미노산 서열(N→C) 또는 핵산서열 (5'→3') | 서열 번호 | |
| 중쇄 가닥 (anti-TIGIT 중쇄(IgG1)) | anti-TIGIT 중쇄가변영역 | EVQLQQSGPELVKPGASVKISCKTSGSTFTEYTMHWVKQSHGKSLEWIGGLNPNNGGTSYNQRFKDRATLTVDKSSSTAYMELRSLTSEDSAVYYCTRGTYYDYSFAYWGQGTLVTVSA | 27 |
| anti-TIGIT 중쇄불변영역 | ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK | 42 | |
| Anti-TIGIT 중쇄 | EVQLQQSGPELVKPGASVKISCKTSGSTFTEYTMHWVKQSHGKSLEWIGGLNPNNGGTSYNQRFKDRATLTVDKSSSTAYMELRSLTSEDSAVYYCTRGTYYDYSFAYWGQGTLVTVSAASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK | 47 | |
| 경쇄 가닥 ([Anti-TIGIT 경쇄(kappk)]-[링커]-[사이토카인 유사 폴리펩타이드]) | Anti-TIGIT 경쇄가변영역 | DIVMTQSHKFMSTSVGDRVSITCKASHYVSTAVAWYQQKPGQSPKLLIYSPSYRYTGVPDRFTGSGSGTDFTFTISSVQAEDLAVYYCHQHYSTPWTFGGGTKLEIK | 35 |
| Anti-TIGIT 경쇄불변영역 | RTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC | 43 | |
| 링커 | EAAAKEAAAKEAAAK | 44 | |
| 사이토카인 유사 폴리펩타이드(RS15.3) | ITCPPPMSVEHADIWVKSYSLYSRERYICNSGFKRKAGTSSLTECVLNKATNVAHWTTPSLKCIRDPALVHQRPAPPGSGGGGSGGGGSIQNWVNVISDLKKIEDLIQSMHIDATLYTESDVHPSCKVTAMKCFLLELQVISLESGDASIHDTVENLIILANNSLSSNGNVTESGCKECEELEEKNIKEFLQSFVHIVQMFINTS | 54 | |
| 경쇄 가닥 | DIVMTQSHKFMSTSVGDRVSITCKASHYVSTAVAWYQQKPGQSPKLLIYSPSYRYTGVPDRFTGSGSGTDFTFTISSVQAEDLAVYYCHQHYSTPWTFGGGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGECEAAAKEAAAKEAAAKITCPPPMSVEHADIWVKSYSLYSRERYICNSGFKRKAGTSSLTECVLNKATNVAHWTTPSLKCIRDPALVHQRPAPPGSGGGGSGGGGSIQNWVNVISDLKKIEDLIQSMHIDATLYTESDVHPSCKVTAMKCFLLELQVISLESGDASIHDTVENLIILANNSLSSNGNVTESGCKECEELEEKNIKEFLQSFVHIVQMFINTS | 62 | |
| 3F8-RS15.3 | 아미노산 서열(N→C) 또는 핵산서열 (5'→3') | 서열 번호 | |
| 중쇄 가닥 (anti-TIGIT 중쇄(IgG1)) | anti-TIGIT 중쇄가변영역 | EVQLQQSGPELVKPGASMKISCKASGYSFTDYIMNWVKQSHGKNLEWIGLSIPYNGGTSYNQKFEGKATLTVDKSSSTAYMELLSLTSEDSAVYYCARGIKGYFAMDYWGQGTSVTVSS | 28 |
| anti-TIGIT 중쇄불변영역 | ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK | 42 | |
| Anti-TIGIT 중쇄 | EVQLQQSGPELVKPGASMKISCKASGYSFTDYIMNWVKQSHGKNLEWIGLSIPYNGGTSYNQKFEGKATLTVDKSSSTAYMELLSLTSEDSAVYYCARGIKGYFAMDYWGQGTSVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK | 49 | |
| 경쇄 가닥 ([Anti-TIGIT 경쇄(kappk)]-[링커]-[사이토카인 유사 폴리펩타이드]) | Anti-TIGIT 경쇄가변영역 | DVVVTQTPLSLPVSFGDQVSISCRSSQSLVNSFGKTYLSWFLHKPGQSPQLIMYGVSNRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISTIKPEDLGMYYCLQGTHQPWTFGGGTKLEIK | 36 |
| Anti-TIGIT 경쇄불변영역 | RTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC | 43 | |
| 링커 | EAAAKEAAAKEAAAK | 44 | |
| 사이토카인 유사 폴리펩타이드(RS15.3) | ITCPPPMSVEHADIWVKSYSLYSRERYICNSGFKRKAGTSSLTECVLNKATNVAHWTTPSLKCIRDPALVHQRPAPPGSGGGGSGGGGSIQNWVNVISDLKKIEDLIQSMHIDATLYTESDVHPSCKVTAMKCFLLELQVISLESGDASIHDTVENLIILANNSLSSNGNVTESGCKECEELEEKNIKEFLQSFVHIVQMFINTS | 54 | |
| 경쇄 가닥 | DVVVTQTPLSLPVSFGDQVSISCRSSQSLVNSFGKTYLSWFLHKPGQSPQLIMYGVSNRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISTIKPEDLGMYYCLQGTHQPWTFGGGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGECEAAAKEAAAKEAAAKITCPPPMSVEHADIWVKSYSLYSRERYICNSGFKRKAGTSSLTECVLNKATNVAHWTTPSLKCIRDPALVHQRPAPPGSGGGGSGGGGSIQNWVNVISDLKKIEDLIQSMHIDATLYTESDVHPSCKVTAMKCFLLELQVISLESGDASIHDTVENLIILANNSLSSNGNVTESGCKECEELEEKNIKEFLQSFVHIVQMFINTS | 63 | |
| 7A6-RS15.4 또는 7A6RS15TL-2DL-3 | 아미노산 서열(N→C) 또는 핵산서열 (5'→3') | 서열 번호 | |
| 중쇄 가닥 (anti-TIGIT 중쇄(IgG1)) | anti-TIGIT 중쇄가변영역 | QVQLQESGPGLVKPSQTLSLTCTVTGYSITSDYAWNWIRQPPGKGLEWMGYISYSGSARYNPSLKSRVTISRDTSKNQFSLKLSSVTAEDTATYYCARKGYPAYFAYWGQGTLVTVSS | 24 |
| anti-TIGIT 중쇄불변영역 | ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK | 42 | |
| Anti-TIGIT 중쇄 | QVQLQESGPGLVKPSQTLSLTCTVTGYSITSDYAWNWIRQPPGKGLEWMGYISYSGSARYNPSLKSRVTISRDTSKNQFSLKLSSVTAEDTATYYCARKGYPAYFAYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK | 45 | |
| 경쇄 가닥 ([Anti-TIGIT 경쇄(kappk)]-[링커]-[사이토카인 유사 폴리펩타이드]) | Anti-TIGIT 경쇄가변영역 | DIQMTQSPSSLSASVGDRVSITCKASQDVSTAVAWYQQKPGQAPRLLIYSASYRYTGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQHHYSTPYTFGQGTKLEIK | 34 |
| Anti-TIGIT 경쇄불변영역 | RTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC | 43 | |
| 링커 | EAAAKEAAAKEAAAK | 44 | |
| 사이토카인 유사 폴리펩타이드(RS15.4) | ITCPPPMSVEHADIWVKSYSLYSRERYICNSGFKRKAGTSSLTECVLNKATNVAHWTTPSLKCIRDPALVHQRPAPPSGGGGSGGGSGGGGGSGGNWVNVISDLKKIEDLIQSMHIDATLYTESDVHPSCKVTAMKCFLLELQVISLESGDASIHDTVENLIILANNSLSSNGNVTESGCKECEELEEKNIKEFLQSFVHIVQMFINTS | 64 | |
| 경쇄 가닥 | DIQMTQSPSSLSASVGDRVSITCKASQDVSTAVAWYQQKPGQAPRLLIYSASYRYTGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQHHYSTPYTFGQGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGECEAAAKEAAAKEAAAKITCPPPMSVEHADIWVKSYSLYSRERYICNSGFKRKAGTSSLTECVLNKATNVAHWTTPSLKCIRDPALVHQRPAPPSGGGGSGGGSGGGGGSGGNWVNVISDLKKIEDLIQSMHIDATLYTESDVHPSCKVTAMKCFLLELQVISLESGDASIHDTVENLIILANNSLSSNGNVTESGCKECEELEEKNIKEFLQSFVHIVQMFINTS | 66 | |
| 7A6-RS15.4 또는 7A6RS15TL-1DL-3 | 아미노산 서열(N→C) 또는 핵산서열 (5'→3') | 서열 번호 | |
| 중쇄 가닥 (anti-TIGIT 중쇄(IgG1)) | anti-TIGIT 중쇄가변영역 | QVQLQESGPGLVKPSQTLSLTCTVTGYSITSDYAWNWIRQPPGKGLEWMGYISYSGSARYNPSLKSRVTISRDTSKNQFSLKLSSVTAEDTATYYCARKGYPAYFAYWGQGTLVTVSS | 24 |
| anti-TIGIT 중쇄불변영역 | ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK | 42 | |
| Anti-TIGIT 중쇄 | QVQLQESGPGLVKPSQTLSLTCTVTGYSITSDYAWNWIRQPPGKGLEWMGYISYSGSARYNPSLKSRVTISRDTSKNQFSLKLSSVTAEDTATYYCARKGYPAYFAYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK | 45 | |
| 경쇄 가닥 ([Anti-TIGIT 경쇄(kappk)]-[링커]-[사이토카인 유사 폴리펩타이드]) | Anti-TIGIT 경쇄가변영역 | DIQMTQSPSSLSASVGDRVSITCKASQDVSTAVAWYQQKPGQAPRLLIYSASYRYTGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQHHYSTPYTFGQGTKLEIK | 34 |
| Anti-TIGIT 경쇄불변영역 | RTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC | 43 | |
| 링커 | GGGGSGGGGSGGGGS | 85 | |
| 사이토카인 유사 폴리펩타이드(RS15.4) | ITCPPPMSVEHADIWVKSYSLYSRERYICNSGFKRKAGTSSLTECVLNKATNVAHWTTPSLKCIRDPALVHQRPAPPSGGGGSGGGSGGGGGSGGNWVNVISDLKKIEDLIQSMHIDATLYTESDVHPSCKVTAMKCFLLELQVISLESGDASIHDTVENLIILANNSLSSNGNVTESGCKECEELEEKNIKEFLQSFVHIVQMFINTS | 64 | |
| 경쇄 가닥 | DIQMTQSPSSLSASVGDRVSITCKASQDVSTAVAWYQQKPGQAPRLLIYSASYRYTGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQHHYSTPYTFGQGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGECGGGGSGGGGSGGGGSITCPPPMSVEHADIWVKSYSLYSRERYICNSGFKRKAGTSSLTECVLNKATNVAHWTTPSLKCIRDPALVHQRPAPPSGGGGSGGGSGGGGGSGGNWVNVISDLKKIEDLIQSMHIDATLYTESDVHPSCKVTAMKCFLLELQVISLESGDASIHDTVENLIILANNSLSSNGNVTESGCKECEELEEKNIKEFLQSFVHIVQMFINTS | 75 | |
| 2B7-RS15.4 | 아미노산 서열(N→C) 또는 핵산서열 (5'→3') | 서열 번호 | |
| 중쇄 가닥 (anti-TIGIT 중쇄(IgG1)) | anti-TIGIT 중쇄가변영역 | EVQLQQSGPELVKPGASVKISCKTSGSTFTEYTMHWVKQSHGKSLEWIGGLNPNNGGTSYNQRFKDRATLTVDKSSSTAYMELRSLTSEDSAVYYCTRGTYYDYSFAYWGQGTLVTVSA | 27 |
| anti-TIGIT 중쇄불변영역 | ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK | 42 | |
| Anti-TIGIT 중쇄 | EVQLQQSGPELVKPGASVKISCKTSGSTFTEYTMHWVKQSHGKSLEWIGGLNPNNGGTSYNQRFKDRATLTVDKSSSTAYMELRSLTSEDSAVYYCTRGTYYDYSFAYWGQGTLVTVSAASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK | 47 | |
| 경쇄 가닥 ([Anti-TIGIT 경쇄(kappk)]-[링커]-[사이토카인 유사 폴리펩타이드]) | Anti-TIGIT 경쇄가변영역 | DIVMTQSHKFMSTSVGDRVSITCKASHYVSTAVAWYQQKPGQSPKLLIYSPSYRYTGVPDRFTGSGSGTDFTFTISSVQAEDLAVYYCHQHYSTPWTFGGGTKLEIK | 35 |
| Anti-TIGIT 경쇄불변영역 | RTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC | 43 | |
| 링커 | EAAAKEAAAKEAAAK | 44 | |
| 사이토카인 유사 폴리펩타이드(RS15.4) | ITCPPPMSVEHADIWVKSYSLYSRERYICNSGFKRKAGTSSLTECVLNKATNVAHWTTPSLKCIRDPALVHQRPAPPSGGGGSGGGSGGGGGSGGNWVNVISDLKKIEDLIQSMHIDATLYTESDVHPSCKVTAMKCFLLELQVISLESGDASIHDTVENLIILANNSLSSNGNVTESGCKECEELEEKNIKEFLQSFVHIVQMFINTS | 64 | |
| 경쇄 가닥 | DIVMTQSHKFMSTSVGDRVSITCKASHYVSTAVAWYQQKPGQSPKLLIYSPSYRYTGVPDRFTGSGSGTDFTFTISSVQAEDLAVYYCHQHYSTPWTFGGGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGECEAAAKEAAAKEAAAKITCPPPMSVEHADIWVKSYSLYSRERYICNSGFKRKAGTSSLTECVLNKATNVAHWTTPSLKCIRDPALVHQRPAPPSGGGGSGGGSGGGGGSGGNWVNVISDLKKIEDLIQSMHIDATLYTESDVHPSCKVTAMKCFLLELQVISLESGDASIHDTVENLIILANNSLSSNGNVTESGCKECEELEEKNIKEFLQSFVHIVQMFINTS | 67 | |
| 3F8-RS15.4 | 아미노산 서열(N→C) 또는 핵산서열 (5'→3') | 서열 번호 | |
| 중쇄 가닥 (anti-TIGIT 중쇄(IgG1)) | anti-TIGIT 중쇄가변영역 | EVQLQQSGPELVKPGASMKISCKASGYSFTDYIMNWVKQSHGKNLEWIGLSIPYNGGTSYNQKFEGKATLTVDKSSSTAYMELLSLTSEDSAVYYCARGIKGYFAMDYWGQGTSVTVSS | 28 |
| anti-TIGIT 중쇄불변영역 | ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK | 42 | |
| Anti-TIGIT 중쇄 | EVQLQQSGPELVKPGASMKISCKASGYSFTDYIMNWVKQSHGKNLEWIGLSIPYNGGTSYNQKFEGKATLTVDKSSSTAYMELLSLTSEDSAVYYCARGIKGYFAMDYWGQGTSVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK | 49 | |
| 경쇄 가닥 ([Anti-TIGIT 경쇄(kappk)]-[링커]-[사이토카인 유사 폴리펩타이드]) | Anti-TIGIT 경쇄가변영역 | DVVVTQTPLSLPVSFGDQVSISCRSSQSLVNSFGKTYLSWFLHKPGQSPQLIMYGVSNRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISTIKPEDLGMYYCLQGTHQPWTFGGGTKLEIK | 36 |
| Anti-TIGIT 경쇄불변영역 | RTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC | 43 | |
| 링커 | EAAAKEAAAKEAAAK | 44 | |
| 사이토카인 유사 폴리펩타이드(RS15.4) | ITCPPPMSVEHADIWVKSYSLYSRERYICNSGFKRKAGTSSLTECVLNKATNVAHWTTPSLKCIRDPALVHQRPAPPSGGGGSGGGSGGGGGSGGNWVNVISDLKKIEDLIQSMHIDATLYTESDVHPSCKVTAMKCFLLELQVISLESGDASIHDTVENLIILANNSLSSNGNVTESGCKECEELEEKNIKEFLQSFVHIVQMFINTS | 64 | |
| 경쇄 가닥 | DVVVTQTPLSLPVSFGDQVSISCRSSQSLVNSFGKTYLSWFLHKPGQSPQLIMYGVSNRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISTIKPEDLGMYYCLQGTHQPWTFGGGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGECEAAAKEAAAKEAAAKITCPPPMSVEHADIWVKSYSLYSRERYICNSGFKRKAGTSSLTECVLNKATNVAHWTTPSLKCIRDPALVHQRPAPPSGGGGSGGGSGGGGGSGGNWVNVISDLKKIEDLIQSMHIDATLYTESDVHPSCKVTAMKCFLLELQVISLESGDASIHDTVENLIILANNSLSSNGNVTESGCKECEELEEKNIKEFLQSFVHIVQMFINTS | 68 | |
| 7A6-RS15.5 또는 7A6RS15TL-2DL-4 | 아미노산 서열(N→C) 또는 핵산서열 (5'→3') | 서열 번호 | |
| 중쇄 가닥 (anti-TIGIT 중쇄(IgG1)) | anti-TIGIT 중쇄가변영역 | QVQLQESGPGLVKPSQTLSLTCTVTGYSITSDYAWNWIRQPPGKGLEWMGYISYSGSARYNPSLKSRVTISRDTSKNQFSLKLSSVTAEDTATYYCARKGYPAYFAYWGQGTLVTVSS | 24 |
| anti-TIGIT 중쇄불변영역 | ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK | 42 | |
| Anti-TIGIT 중쇄 | QVQLQESGPGLVKPSQTLSLTCTVTGYSITSDYAWNWIRQPPGKGLEWMGYISYSGSARYNPSLKSRVTISRDTSKNQFSLKLSSVTAEDTATYYCARKGYPAYFAYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK | 45 | |
| 경쇄 가닥 ([Anti-TIGIT 경쇄(kappk)]-[링커]-[사이토카인 유사 폴리펩타이드]) | Anti-TIGIT 경쇄가변영역 | DIQMTQSPSSLSASVGDRVSITCKASQDVSTAVAWYQQKPGQAPRLLIYSASYRYTGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQHHYSTPYTFGQGTKLEIK | 34 |
| Anti-TIGIT 경쇄불변영역 | RTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC | 43 | |
| 링커 | EAAAKEAAAKEAAAK | 44 | |
| 사이토카인 유사 폴리펩타이드(RS15.5) | ITCPPPMSVEHADIWVKSYSLYSRERYICNSGFKRKAGTSSLTECVLNKATNVAHWTTPSLKCIRDPALVHQRPAPPSGGGGSGGGSGGGGGSGGGSGNWVNVISDLKKIEDLIQSMHIDATLYTESDVHPSCKVTAMKCFLLELQVISLESGDASIHDTVENLIILANNSLSSNGNVTESGCKECEELEEKNIKEFLQSFVHIVQMFINTS | 65 | |
| 경쇄 가닥 | DIQMTQSPSSLSASVGDRVSITCKASQDVSTAVAWYQQKPGQAPRLLIYSASYRYTGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQHHYSTPYTFGQGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGECEAAAKEAAAKEAAAKITCPPPMSVEHADIWVKSYSLYSRERYICNSGFKRKAGTSSLTECVLNKATNVAHWTTPSLKCIRDPALVHQRPAPPSGGGGSGGGSGGGGGSGGGSGNWVNVISDLKKIEDLIQSMHIDATLYTESDVHPSCKVTAMKCFLLELQVISLESGDASIHDTVENLIILANNSLSSNGNVTESGCKECEELEEKNIKEFLQSFVHIVQMFINTS | 69 | |
| 7A6-RS15.5 또는 7A6RS15TL-1DL-4 | 아미노산 서열(N→C) 또는 핵산서열 (5'→3') | 서열 번호 | |
| 중쇄 가닥 (anti-TIGIT 중쇄(IgG1)) | anti-TIGIT 중쇄가변영역 | QVQLQESGPGLVKPSQTLSLTCTVTGYSITSDYAWNWIRQPPGKGLEWMGYISYSGSARYNPSLKSRVTISRDTSKNQFSLKLSSVTAEDTATYYCARKGYPAYFAYWGQGTLVTVSS | 24 |
| anti-TIGIT 중쇄불변영역 | ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK | 42 | |
| Anti-TIGIT 중쇄 | QVQLQESGPGLVKPSQTLSLTCTVTGYSITSDYAWNWIRQPPGKGLEWMGYISYSGSARYNPSLKSRVTISRDTSKNQFSLKLSSVTAEDTATYYCARKGYPAYFAYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK | 45 | |
| 경쇄 가닥 ([Anti-TIGIT 경쇄(kappk)]-[링커]-[사이토카인 유사 폴리펩타이드]) | Anti-TIGIT 경쇄가변영역 | DIQMTQSPSSLSASVGDRVSITCKASQDVSTAVAWYQQKPGQAPRLLIYSASYRYTGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQHHYSTPYTFGQGTKLEIK | 34 |
| Anti-TIGIT 경쇄불변영역 | RTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC | 43 | |
| 링커 | GGGGSGGGGSGGGGS | 85 | |
| 사이토카인 유사 폴리펩타이드(RS15.5) | ITCPPPMSVEHADIWVKSYSLYSRERYICNSGFKRKAGTSSLTECVLNKATNVAHWTTPSLKCIRDPALVHQRPAPPSGGGGSGGGSGGGGGSGGGSGNWVNVISDLKKIEDLIQSMHIDATLYTESDVHPSCKVTAMKCFLLELQVISLESGDASIHDTVENLIILANNSLSSNGNVTESGCKECEELEEKNIKEFLQSFVHIVQMFINTS | 65 | |
| 경쇄 가닥 | DIQMTQSPSSLSASVGDRVSITCKASQDVSTAVAWYQQKPGQAPRLLIYSASYRYTGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQHHYSTPYTFGQGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGECGGGGSGGGGSGGGGSITCPPPMSVEHADIWVKSYSLYSRERYICNSGFKRKAGTSSLTECVLNKATNVAHWTTPSLKCIRDPALVHQRPAPPSGGGGSGGGSGGGGGSGGGSGNWVNVISDLKKIEDLIQSMHIDATLYTESDVHPSCKVTAMKCFLLELQVISLESGDASIHDTVENLIILANNSLSSNGNVTESGCKECEELEEKNIKEFLQSFVHIVQMFINTS | 76 | |
| 2B7-RS15.5 | 아미노산 서열(N→C) 또는 핵산서열 (5'→3') | 서열 번호 | |
| 중쇄 가닥 (anti-TIGIT 중쇄(IgG1)) | anti-TIGIT 중쇄가변영역 | EVQLQQSGPELVKPGASVKISCKTSGSTFTEYTMHWVKQSHGKSLEWIGGLNPNNGGTSYNQRFKDRATLTVDKSSSTAYMELRSLTSEDSAVYYCTRGTYYDYSFAYWGQGTLVTVSA | 27 |
| anti-TIGIT 중쇄불변영역 | ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK | 42 | |
| Anti-TIGIT 중쇄 | EVQLQQSGPELVKPGASVKISCKTSGSTFTEYTMHWVKQSHGKSLEWIGGLNPNNGGTSYNQRFKDRATLTVDKSSSTAYMELRSLTSEDSAVYYCTRGTYYDYSFAYWGQGTLVTVSAASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK | 47 | |
| 경쇄 가닥 ([Anti-TIGIT 경쇄(kappk)]-[링커]-[사이토카인 유사 폴리펩타이드]) | Anti-TIGIT 경쇄가변영역 | DIVMTQSHKFMSTSVGDRVSITCKASHYVSTAVAWYQQKPGQSPKLLIYSPSYRYTGVPDRFTGSGSGTDFTFTISSVQAEDLAVYYCHQHYSTPWTFGGGTKLEIK | 35 |
| Anti-TIGIT 경쇄불변영역 | RTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC | 43 | |
| 링커 | EAAAKEAAAKEAAAK | 44 | |
| 사이토카인 유사 폴리펩타이드(RS15.5) | ITCPPPMSVEHADIWVKSYSLYSRERYICNSGFKRKAGTSSLTECVLNKATNVAHWTTPSLKCIRDPALVHQRPAPPSGGGGSGGGSGGGGGSGGGSGNWVNVISDLKKIEDLIQSMHIDATLYTESDVHPSCKVTAMKCFLLELQVISLESGDASIHDTVENLIILANNSLSSNGNVTESGCKECEELEEKNIKEFLQSFVHIVQMFINTS | 65 | |
| 경쇄 가닥 | DIVMTQSHKFMSTSVGDRVSITCKASHYVSTAVAWYQQKPGQSPKLLIYSPSYRYTGVPDRFTGSGSGTDFTFTISSVQAEDLAVYYCHQHYSTPWTFGGGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGECEAAAKEAAAKEAAAKITCPPPMSVEHADIWVKSYSLYSRERYICNSGFKRKAGTSSLTECVLNKATNVAHWTTPSLKCIRDPALVHQRPAPPSGGGGSGGGSGGGGGSGGGSGNWVNVISDLKKIEDLIQSMHIDATLYTESDVHPSCKVTAMKCFLLELQVISLESGDASIHDTVENLIILANNSLSSNGNVTESGCKECEELEEKNIKEFLQSFVHIVQMFINTS | 70 | |
| 3F8-RS15.3 | 아미노산 서열(N→C) 또는 핵산서열 (5'→3') | 서열 번호 | |
| 중쇄 가닥 (anti-TIGIT 중쇄(IgG1)) | anti-TIGIT 중쇄가변영역 | EVQLQQSGPELVKPGASMKISCKASGYSFTDYIMNWVKQSHGKNLEWIGLSIPYNGGTSYNQKFEGKATLTVDKSSSTAYMELLSLTSEDSAVYYCARGIKGYFAMDYWGQGTSVTVSS | 28 |
| anti-TIGIT 중쇄불변영역 | ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK | 42 | |
| Anti-TIGIT 중쇄 | EVQLQQSGPELVKPGASMKISCKASGYSFTDYIMNWVKQSHGKNLEWIGLSIPYNGGTSYNQKFEGKATLTVDKSSSTAYMELLSLTSEDSAVYYCARGIKGYFAMDYWGQGTSVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK | 49 | |
| 경쇄 가닥 ([Anti-TIGIT 경쇄(kappk)]-[링커]-[사이토카인 유사 폴리펩타이드]) | Anti-TIGIT 경쇄가변영역 | DVVVTQTPLSLPVSFGDQVSISCRSSQSLVNSFGKTYLSWFLHKPGQSPQLIMYGVSNRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISTIKPEDLGMYYCLQGTHQPWTFGGGTKLEIK | 36 |
| Anti-TIGIT 경쇄불변영역 | RTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC | 43 | |
| 링커 | EAAAKEAAAKEAAAK | 44 | |
| 사이토카인 유사 폴리펩타이드(RS15.5) | ITCPPPMSVEHADIWVKSYSLYSRERYICNSGFKRKAGTSSLTECVLNKATNVAHWTTPSLKCIRDPALVHQRPAPPSGGGGSGGGSGGGGGSGGGSGNWVNVISDLKKIEDLIQSMHIDATLYTESDVHPSCKVTAMKCFLLELQVISLESGDASIHDTVENLIILANNSLSSNGNVTESGCKECEELEEKNIKEFLQSFVHIVQMFINTS | 65 | |
| 경쇄 가닥 | DVVVTQTPLSLPVSFGDQVSISCRSSQSLVNSFGKTYLSWFLHKPGQSPQLIMYGVSNRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISTIKPEDLGMYYCLQGTHQPWTFGGGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGECEAAAKEAAAKEAAAKITCPPPMSVEHADIWVKSYSLYSRERYICNSGFKRKAGTSSLTECVLNKATNVAHWTTPSLKCIRDPALVHQRPAPPSGGGGSGGGSGGGGGSGGGSGNWVNVISDLKKIEDLIQSMHIDATLYTESDVHPSCKVTAMKCFLLELQVISLESGDASIHDTVENLIILANNSLSSNGNVTESGCKECEELEEKNIKEFLQSFVHIVQMFINTS | 71 | |
참고예: 비교 항체(reference antibodies) 및 비교 융합 단백질 (reference fusion proteins)의 준비
하기 실시예에 비교를 위하여 사용된 비교 융합 단백질들은 하기의 항-TIGIT 항체를 사이토카인 유사 폴리펩타이드 RS15.0과 융합하여 준비하였다 (313M32-RS15 및 4.1D3-RS15): 상기 항체들은 각각 대응하는 특허에 기재된 서열정보를 기초로 만들거나 제조사로부터 입수하였다. 각 항체들의 대응 특허 또는 제조사를 아래에 요약하였다:
4.1D3(Genentech): WO2017/053748 A2,
313M32(Mereo): US2016/0376365 A1.
또한, 하기 실시예에 비교를 위하여 사용된 비교 항체들(Reference antibodies)도 각각 대응하는 특허에 기재된 서열정보를 기초로 만들거나 제조사로부터 입수하였다. 각 항체들의 대응 특허 또는 제조사를 아래에 요약하였다:
22G2(BMS): US2016/0176963 A1,
31C6 (Merck): WO2016028656 A1,
TIG1(Arcus): WO2017/152088 A1,
4.1D3(Genentech): WO2017/053748 A2,
10A7(Genentech): Creative Biolabs으로부터 입수.
실시예 2. 융합 단백질의 특성 평가
2.1. 인간 TIGIT에 대한 Binding Affinity 측정
2.1.1. multi-cycle kinetic analysis을 이용한 Fusion proteins의 Affinity 측정
실시예 1에서 준비된 Fusion proteins의 인간 TIGIT 항원에 대한 결합 친화도를 측정하기 위하여, 정제된 단백질(fusion proteins) 7A6-RS15(7A6과 RS15.0 융합), 2B7-RS15(2B7과 RS15.0 융합) 및 3F8-RS15(3F8과 RS15.0 융합)에 대한 multi-cycle kinetic analysis를 수행하였다. Kinetic experiments는 25°C에서 Biacore T200 Control software V2.0.1 및 Evaluation software V3.0를 실행하는 Biacore T200(GE Healthcare, Uppsala, Sweden)를 사용하여 수행하였다.
1% BSA w/v(Sigma, Dorset, UK)이 보충된 HBS-P+(GE Healthcare, Uppsala, Sweden)를 running buffer로 사용하고, 리간드와 분석물 희석에도 사용하였다. 정제된 선도 fusion protein들을 running buffer에서 1μg/mL까지 희석하고, 각 사이클의 개시 시에, anti-human IgG CM5 sensor chip(GE Healthcare, Little Chalfont, UK) 상의 Fc2, Fc3 및 Fc4에 로딩하였다. 항체들을 10 μl/min 유속으로 캡쳐하여 고정화 수준(RL)이 ~150 RU가 되도록 하였다. 그 후, 표면이 안정화되도록 두었다. 잠재적 mass transfer effect를 최소화하기 위하여 50μl/min 유속으로 주입된 재조합 인간 TIGIT(acrobiosystems, China)을 analyte로 사용하여 Multi-cycle kinetic 데이터를 얻었다. 항원(TIGIT)은 running buffer에 0.406 nM 내지 30 nM 농도 범위에서 2배씩 희석(7개 지점)하였다. 각 농도 사이에 regeneration이 없게 하여 사용하였다. 각 농도에서, 240초 동안 association phases를 모니터링하고, 900초 동안 dissociation phase를 측정하였다. 3 M MgCl2를 2회 injection하여 사이클 사이에 센서칩 표면 재생을 수행하였다. kinetic cycles에 걸쳐 표면과 analyte 모두의 안정성을 확인하기 위하여, blank의 다회 반복 및 단일 농도의 analyte의 반복을 kinetic run으로 프로그래밍하였다. 7A6-RS15, 2B7-RS15과 3F8-RS15 fusion protein에 대한 결과를 대표로 표 28에 나타내었다:
| Fusion antibody | K a (1/Ms) | K d (1/s) | K D (M) | R MAX | Chi 2 (RU 2 ) |
| Parental Ab ( 7A6) | 1.78E+06 | 1.58E-03 | 8.84E-10 | 24.2 | 0.12 |
| 7A6-RS15 | 2.37E+06 | 1.79E-03 | 7.56E-10 | 18.1 | 0.13 |
| 2B7-RS15 | 2.61E+05 | 3.86E-04 | 1.48E-09 | 30.9 | 0.0925 |
| 3F8-RS15 | 1.89E+05 | 2.16E-04 | 1.14E-09 | 26 | 0.048 |
상기 표 28은 1:1 model fitted curves로부터 결정된 kinetic constants를 보여준다. 표 28에 나타난 바와 같이, 인간 TIGIT 단백질에 대한 결합친화도(KD)는 7A6-RS15의 경우 756 pM, 2B7-RS15의 경우 1.48 nM이고 3F8-RS15의 경우 1.14 nM을 나타내었으며, 3종의 융합 단백질 모두 RS15가 융합되지 않은 모항체와 동등 정도의 결합친화도를 나타내었다.
2.1.2. 다양한 RS15 내부 링커를 가지는 융합 단백질의 TIGIT에 대한 결합친화도 측정 (ELISA)
ELISA PVC 플레이트를 1μg/mL 농도의 재조합 인간 TIGIT 단백질(Acro Biosystems; in PBS)로 코팅하고 4℃에서 밤새 인큐베이션 하였다. 코팅 용액을 제거하고 PBS(Gibco)에 희석된 0.5% Tween-20(Sigma)을 함유하는 세척 완충액 200μL로 웰을 채워 플레이트를 3회 세척하였다. 웰을 빠르게 뒤집어 상층액을 제거하였다. PBS에 희석된 3% 탈지유(Daeil Bio)를 포함하는 차단 완충액을 각 웰당 200 μL의 양으로 사용하여 1시간 동안 비특이적 결합을 차단하였다. 세척 완충액 200 μL로 웰을 채워서 플레이트를 3회 세척하였다. 다양한 종류의 RS15 내부 링커를 가지는 항-TIGIT 항체-RS15 융합 단백질 (7A6RS15TL-2, 7A6RS15TL-2DL-0, 7A6RS15TL-2DL-1, 7A6RS15TL-2DL-2, 7A6RS15TL-2DL-3, 7A6RS15TL-2DL-4) 또는 모항체(7A6 VH3/Vκ5 (7A6))을 PBS에 시작 농도 61.097 nM에서부터 1:3 연속 희석하여 준비하였다.
상기 희석된 융합 단백질 또는 항체 100μL를 상기 준비된 플레이트에 첨가한 후 실온에서 1시간동안 0.65 x g으로 진탕배양하였다. 항-마우스/인간 IgG-HRP 항체(1:10000, Promega) 100μL를 각 웰에 첨가하였다. 플레이트를 black microplate lid로 덮고 실온에서 1시간 동안 0.65xg으로 진탕하였다. HRP-접합된 항체를 제거하고 플레이트를 세척 완충액으로 3회 세척하였다. 플레이트를 TMB(tetramethylbenzidine)로 전개하고 1N HCl로 정지시켰다. GloMax® Explorer Fully Loaded로 450nM에서의 OD값(흡광도)를 측정하였다.
상기 얻어진 결과를 도 1a 및 1b에 나타내었다 (도 1b는 7A6RS15TL-2 및 7A6에 대하여 동일한 과정으로 반복시험한 결과를 나타냄). 도 1a 및 1b에 나타난 바와 같이, 시험된 모든 다양한 RS15 내부 링커를 가지는 항-TIGIT-RS15 융합 단백질은 모항체(7A6 VH3/Vκ5)와 유사한 정도의 높은 인간 TIGIT에 대한 결합 친화도를 보였다. 이러한 결과는 항-TIGIT 항체에 IL-15 superagonist가 융합된 융합 단백질에 있어서, IL-15 추가가 상기 융합 단백질의 항원 (TIGIT) 결합 영역을 방해하지 않아서, 융합 단백질이 모항체가 가지는 모든 기능적 특성을 유지할 수 있음을 보여준다.
2.2. 다양한 인간 Fc 수용체 (FcγR)에 대한 Binding Affinity 측정 (SPR analysis)
MabSelect SuRe (Cytiva, Little Chalfont, UK)을 사용하여 융합 단백질(7A6RS15: 7A6RS15TL-2)을 CHO 세포 배양 상청액으로부터 정제하였다. 컬럼을 DPBS(Dulbecco's phosphate-buffered saline)로 세척하고 0.1 M sodium citrate를 사용하여 pH 3.0 조건에서 단백질을 용출시켰다. 용출 후, 100mM L-Arginine을 함유하는 PBS로 관련 분획들의 버퍼를 교환하였다. 단백질을 여과하고 다음의 두 가지 방법으로 준비하였다: i) 융합 단백질(7A6RS15TL-2)을 pH 6.0 PBS 버퍼에 직접 희석; 및 ii) 실험 셋업 전에 융합 단백질을 pH 6.0 PBS 버퍼로 버퍼 교환. 융합 단백질(7A6RS15TL-2)의 다른 FcγR에 대한 결합능은 정제된 단백질과 단일 사이클 Biacore 분석을 사용하여 측정하였다. Trastuzumab (IgG1)을 양성 대조군으로 사용하였다. 시험에 사용된 human Fc receptors, FcγRI, FcγRIIa (167R and 167H polymorphisms), FcγRIIb, FcγRIIIa (176F and 176V polymorphisms), 및 FcγRIIIb는 모두 Sino Biological (Beijing, China)에서 얻었다.
얻어진 결과를 표 29에 나타내었다:
|
CD16A
(176 Phe) |
CD16A
(176 Val) |
CD16B |
CD32A
(167 Arg) |
CD32A
(167 His) |
CD32B | CD64 | |
| FcgRIIIA176F | FcgRIIIA176V | FcgRIIIB | FcgRIIA167R | FcgRIIA167H | FcgRIIB | FcgRI | |
| Trastuzumab | 1.79E-06 | 7.02E-07 | 5.35E-06 | 1.38E-05 | 1.14E-05 | 2.21E-05 | 3.93E-09 |
| 7A6RS15 | 3.01E-06 | 1.10E-06 | 4.46E-06 | 4.89E-06 | 7.60E-06 | 8.52E-06 | 5.19E-09 |
표 29에 나타난 바와 같이, 융합 단백질(7A6RS15TL-2)에 포함된 RS15는 인간 Fc 수용체에 대한 결합 친화도를 저해하지 않고, 트라스투주맙과 동등한 정도의 높은 친화도로 시험된 모든 Fc 감마 수용체에 결합하였다. 이는 항-TIGIT-RS15 융합 단백질이 모항체인 항-TIGIT 항체의 Fc 수용체 매개능을 유지할 수 있다 것을 시사한다.
2.3. 융합 단백질의 면역세포 표면으로의 이동 측정
본 출원에서 제공되는 융합 단백질에 있어서, 항-TIGIT 항체가 RS15에 융합됨으로써 RS15를 면역 세포(인간 CD4+ T 세포, CD8+ T 세포, CD56+ NK 세포)의 표면으로의 이동시킴을 확인하였다.
상기와 같은 RS15 이동능을 측정하기 위해, 인간 유래의 말초혈액단핵세포(PBMC; Stemcell technologies)를 약 0.5 x 106 cells/well의 양으로 24개 웰에 플레이팅하고, 회전시켜, 상층액은 제거하고, 펠렛은 볼텍싱하여 파쇄하였다. 얻어진 세포를 10%(v/v) FCS(fetal calf serum), 페니실린 및 스트렙토마이신이 보충된 RPMI 배지 50 μl에서 재현탁시켰다.
7A6RS15 융합 단백질(RS15.0 및 제1 링커 EAAAKEAAAKEAAAK (서열번호 44) 포함)을 연속희석하여 준비하였다. 상기 각각의 희석된 융합 단백질 50 μl을 상기 준비된 PBMC를 포함하는 웰에 첨가하였다. 상기 융합 단백질의 최종 농도는 10μg/ml, 1μg/ml, 0.5 μg/ml, 50ng/ml, 5ng/ml, 또는 0μg/ml이 되도록 하였다. 상기 융합 단백질이 첨가된 세포(PBMC)를 상온에서 10분간 배양하였다. PBS 200 μl를 첨가하고, 상기 플레이트를 5분간 500 x g 속도로 회전시키고, 상층액을 제거함으로써 결합하지 않은 항체를 제거하였다. 모든 웰에 RS15에 결합할 수 있는 항-IL-15-PE 항체(Thermo fisher; clone 34559, cat# MA5-23561) (1.25 ml PBS + 50 μl anti-IL-15 (1/25))를 넣고 10분간 상온에서 배양하여 세포를 염색한 뒤, PBS 200 μl를 첨가하고 회전시켜 상층액을 제거하였다. 상기 세포를 항-CD3 항체 (Biolegend, at 1:50), 항-CD4 항체 (Biolegend, at 1:50), 항-CD8 항체 (Biolegend, at 1:50), 및 항-CD56-BV421 (Biolegend, at 1:50)를 포함하는 염색 버퍼에 재현탁시켰다. 상기 융합 단백질 중 3개(7A6RS15TL-3, 7A6RS15TL-4, 7A6RS15TL-5)의 경우에는 항-TIGIT-PE-Cy7(Biolegend, 1/50)도 함께 처리하여 TIGIT을 염색하였다. 상기 세포를 상기한 항체들과 함께 상온에서 10분간 배양한 후, PBS 200 μl에서 세척하였다. 상기 세포를 PBS 100 μl에 재현탁시키고, 유세포분석기(CytoFLEX, Beckman Coulter)로 각 세포의 표면 마커 표지와 TIGIT에 대한 형광 표지를 측정하였다. 얻어진 데이터는 Flowjo software(BD Biosciences)로 분석 및 GraphPad Prism 9 software(Dotmatics)로 도식화하였다.
상기 결과를 도 2에 나타내었다. 도 2에 나타난 바와 같이, 시험된 모든 융합 단백질들은 용량 의존적으로 RS15를 CD4+ 및 CD8+ T 세포와 CD56+ NK 세포 표면으로 운반하였다. 항-TIGIT-PE-Cy7 항체가 함께 처리된 경우를 통해 융합단백질이 처리된 경우 세포 표면의 free-TIGIT의 양이 줄어듦을 확인하였다. 따라서 항체의 세포 표면의 TIGIT에 대한 융합단백질의 결합과 면역 세포로의 RS15의 운반이 연관성이 있음을 확인하였다.
상기 얻어진 결과는 본 출원에서 제공되는 융합 단백질이 TIGIT 결합을 통해 면역세포 (이펙터 T 세포와 NK 세포)로의 RS15의 운반 효과를 가짐을 시사한다.
2.4. 융합 단백질에 의한
IL12RB1/IL12RB2 이합체화
세포(PathHunter eXpress Dimerization Cells, PathHunter® eXpress Dimerization Assay Kit (Discoverx))를 96-well plate에 플레이팅하고, 세포 시딩을 위해 37°C, 5% CO2에서 배양하였다. 그런 다음 세포를 도 1c에 표시된 농도의 7A6RS15TL-2 융합 단백질로 자극하였다. 자극 후, PathHunter® eXpress IL2RB/IL2RG/IL2RA and IL2RB/IL2RG Dimerization Assay (Eurofins Discoverx, USA)를 사용하여 제조사 프로토콜에 따라 신호를 측정하였다. PathHunter® eXpress functional assay는 IL-15 수용체 계열의 두 개의 서브유닛의 리간드 유도 이합체화를 검출한다. 리간드가 하나의 수용체 서브유닛에 결합하면 이의 이종이량체 파트너와의 상호작용을 유도하여 각 수용체 서브유닛에 연결된 두 효소 단편이 상호보완되도록 하고, 그 결과 기질을 가수분해하여 화학발광 신호를 생성하는 기능성 효소의 복합체가 생성된다.
상기 어세이 결과를 도 3에 나타내었다 (Buffer: PBS (융합단백질 무처리군). 상기 결과에서 보여지는 바와 같이, 리간드로서 7A6RS15TL-2 융합 단백질을 첨가하면 용량 의존적으로 발광이 유도되었으며, 이는 IL2RB/IL2RG의 이량체화를 나타낸다. 이량체화의 EC50 값은 0.248 nM이었다. 상기 결과는 상기 융합 단백질이 IL-15의 기능적 활성을 유지함을 보여준다.
2.5. 융합 단백질에 의한 STAT5 인산화 유도
2.5.1.
융합 단백질에 의한 면역세포에서의 STAT5 인산화 유도 (1)
세포(인간 PBMC)를 해동하고 웰당 500,000개의 세포를 100μl R10 배지 (10%(v/v) FBS(Gibco), Penicillin-Streptomycin (Sigma), L-glutamine (Sigma)를 함유하는 RPMI1640 배지(Gibco))에 시딩하였다. 융합 단백질 7A6RS15TL-2를 68.7 nM로 희석하고, 이 농도를 시작 농도로 하여 69fM까지 10배 연속희석 하였다. 상기 세포와 융합 단백질을 피펫팅하여 잘 섞은 후, 37℃에서 15분간 배양하였다. 배양 후, 세포를 4℃에서 3분간 400 x g으로 원심분리하여 펠렛화하였다. 상층액은 제거하고, 펠렛은 볼텍싱하여 파쇄한한 후, 세포를 viability marker(eBioScience, 1:500), 항-CD3 항체(Biolegend, 1:50), 항-CD4 항체(Biolegend, 1:50), 항-CD56 항체(Biolegend, 1:50) 및 항-CD8 항체(Biolegend, 1:50)를 함유하는 PBS에 재현탁하였다. 세포를 4℃에서 10분간 염색한 후, 400 x g에서 3분간 원심분리하여 세포를 펠렛화 하였다. 상층액은 제거하고, 펠렛은 볼텍싱하여 파쇄한 다음, 세포를 37℃에서 예열된 Fixation Buffer (Biolegend) 200 μL에 실온에서 15분 동안 재현탁하였다. 그런 다음, 세포를 다시 400 x g에서 3분간 원심분리하여 펠렛화하였다. 상층액은 제거하고, 펠렛은 볼텍싱하여 파쇄한 다음, 세포를 ice-cold True-Phos 1X Perm Buffer (Biolegend) 200μL에 재현탁 하였다. 그런 다음, 세포를 냉동고에서 1시간 동안 보관한 후, 400 x g에서 3분간 원심분리하여 세포를 펠렛화하였다. 상층액은 제거하고, 펠렛은 볼텍싱하여 파쇄한 후, 세포를 항-pSTAT5 항체(Biolegend, 1:50)가 포함된 염색 버퍼에 실온에서 15분 동안 재현탁하였다. 세포를 400 x g에서 3분간 원심분리하여 펠렛화 하였다. 상층액은 제거하고, 펠렛은 볼텍싱하여 파쇄한 후, 세포를 PBS에 재현탁하고, 앞서 기재한 바와 같이 다시 펠렛화하였다. 마지막으로, 세포를 PBS 100μl에 재현탁하고, 유세포 분석기(CytoFlex, BeckmanCoulter)로 데이터를 획득하였다. 데이터는 FlowJo(BD, USA)로 분석하였다.
68.7nM에서의 pSTAT5 신호를 100%로 설정하고, 상기 얻어진 데이터를 68.7nM 조건으로 정규화하였다. Graphpad Prism 9를 이용하여 비선형회귀곡선(Non-linear regression curves)을 계산하였으며, 그래프상에 표시하였다.
얻어진 결과를 도 4a (CD8+ T 세포), 4b (CD4+ T 세포), 및 4c (CD56+ NK 세포)에 나타내었다. 일차 세포(primary cell)에서 수용체 이종이합체화는 세포막을 가로지르는 신호 전달을 유도하여야 한다. IL-15의 신호전달은 STAT5의 인산화로 평가할 수 있다. 도 4a 내지 4c에서 보여지는 바와 같이, 항-TIGIT 단클론 항체에 연결된 IL-15 유사 폴리펩타이드(RS15)를 포함하는 융합 단백질(7A6RS15TL-2)은 T 세포 (CD8+ T 세포, CD4+ T 세포) 및 NK 세포 모두에서 STAT5 인산화를 유도하였다. 이는 IL-15 유사 폴리펩타이드가 항-TIGIT 항체에 연결된 경우에도 효과적으로 신호를 전달하는 능력이 저해되지 않음을 보여준다.
2.5.2.
융합 단백질에 의한 면역세포에서의 STAT5 인산화 유도 (2)
인간 PBMC를 웰당 대략 500,000개의 양으로 플레이팅하였다. 상기 실시예 2.5.1을 참조하여 세포를 펠렛화하고, 상층액을 제거하고, 펠렛을 볼텍싱하여 파쇄하였다. 세포를 10 %(v/v) FCS, penicillin, 및 streptomycin이 보충된 RPMI 배지 50 μl에 재현탁하였다. 융합 단백질 7A6RS15TL-2 및 IL-15(control)를 각각 1938 pmol 및 3876 pmol 농도로 희석하여 상기 준비된 PBMC에 각각 첨가하였다. 상기 PBMCs를 상기 융합 단백질 또는 IL-15의 존재 또는 부재 하에서 37℃ 온도 조건으로 1시간 동안 배양한 후 5회 세척하였다. 또한, IL-15 continuous control well에는 IL-15를 최종농도 3876 pmol로 24시간 동안 첨가하였다.
모든 세포를 10 %(v/v) FCS, penicillin, 및 streptomycin이 보충된 RPMI 배지 200 μl에 재현탁하고 37℃에서 24시간 더 배양하였다. 그 후, 세포를 펠렛화하고, 상층액은 제거하고, 펠렛은 볼텍싱하여 파쇄한 다음, 세포를 PBS에 재현탁하고, 500 x g에서 원심분리 하여 펠렛화하였다. 상기 과정을 2회 더 반복하였다. 최종적으로, 세포를 viability marker(eBioScience, 1:500), 항-CD3 항체(Biolegend, 1:50), 항-CD4 항체(Biolegend, 1:50), 항-CD8 항체(Biolegend, 1:50), 및 항-CD56-BV421 항체(Biolegend, 1:50)를 함유하는 염색 버퍼(50 μl/well)에 재현탁하고, 암조건 및 실온에서 30분 더 배양하였다. 그런 다음, 세포를 PBS 100 μL로 세척하고, 암조건의 실온에서 예열된 Fixation Buffer (Biolegend, UK)에 30분 동안 재현탁하였다. True-Nuclear 1X Perm Buffer (Biolegend) 200 μL를 각 웰에 첨가한 후, -20℃에서 최소 1시간동안 인큐베이팅하였다. 그 후, 세포를 펠렛화하고, 항-pSTAT5 항체(Biolegned, at 1:25)를 포함하는 염색 버퍼 (50μL/well)에 재현탁하였다. 세포를 암조건의 실온에서 15분간 더 인큐베이팅한 후, PBS 200 μL로 세척하였다. 마지막으로, 세포를 PBS 100 μL에 재현탁하고, 유세포 분석기(CytoFlex, Beckman Coulter)로 데이터를 획득하였다. 데이터는 FlowJo(BD, USA)로 분석하였다.
얻어진 결과를 도 4d에 나타내었다. 상기 결과에서 보여지는 바와 같이, 융합 단백질 7A6RS15TL-2로 1시간 자극한 경우, 24시간이 지난 후에도 T 세포와 NK 세포에서 STAT5 인산화(pSTAT5)가 검출되었다. 그러나 초기 자극이 IL-15로 수행된 경우에는 pSTAT5가 유의미하게 검출되지 않았다. 또한, 상기 융합 단백질로 1시간 동안 자극 만으로도 IL-15를 24시간 지속적으로 자극한 것과 동등한 pSTAT5 수준을 유도할 수 있는 것으로 나타났다. 이러한 결과는, IL-15 유도 pSTAT5 수준은 24시간 후에 크게 감소하여 신호가 사라지는 반면, 상기 융합 단백질은 장기간(처리 후 24시간 동안) IL-15 수용체 복합체를 통한 지속적인 신호를 제공함을 보여준다.
실시예 3. 융합 단백질의 면역 강화 효과
3.1. 융합 단백질의 비교항체 대비 우수한 사이토카인 분비 증가 효과 (Multiplex Array)
융합 단백질 처리에 의한 면역 세포에서의 사이토카인 분비를 시험하기 위하여, 건강한 공여자로부터 얻은 인간 PBMC(Stemcell Technologies)를 10%(v/v) FBS (Gibco), Penicilin-Streptomycin (Sigma), L-glutamine (Sigma) 및 HEPES (Sigma)을 함유하는 PRMI1640 배지(Gibco)에 재현탁하고, 96웰 플레이트에 시딩하였다. T 세포의 활성화를 위해, PBMC를 항-CD3 단클론 항체(BD Biosciences, clone HIT3) 3 μg/ml로 자극하였다. 항-CD3 항체로 자극시에, 융합 단백질 7A6RS15TL-2 또는 5종의 비교 항-TIGIT 단클론 항체(참고예 참조)도 PBMC에 함께 처리하였다. PBMC를 37℃ 및 5% CO2에서 44시간 동안 인큐베이션하였다(항체 농도; 13.76 nM, 34.39 nM, 및 68.79 nM). 배양된 세포를 4℃에서 10분 동안 400 x g으로 원심분리하면서 인큐베이션한 후 수확하였다. 각 상층액을 1.5 ml microcentrifuge tube에 수집하여 각 개체에 대한 모든 샘플을 확보하고, -80 ℃의 급속 냉동고에 보관하였다. 상기와 같이 얻어진 PBMC 상층액에 대하여 제조자 프로토콜에 따라서 BioPlex200 (Luminex™ instrument)를 사용하여 multiplex array를 수행하여 사이토카인 수준을 측정하였다.
상기 얻어진 결과를 도 5a (IL-2) 및 5b (IFN-γ)에 나타내었다(Benchmark mAb1: 22G2, Benchmark mAb2: 31C6 (Merck), Benchmark mAb3: TIG1, Benchmark mAb4: 4.1D3, Benchmark mAb5: 10A7 클론). 상기 결과에서 보여지는 바와 같이, 융합 단백질(7A6RS15TL-2)은, 비교 항체들과 비교하여, 보다 높은 수준의 인간 PBMC에서의 사이토카인 (IL-2 및 IFN-γ) 분비를 유도하였다.
3.2. 융합 단백질의 비교 융합 단백질 대비 우수한 사이토카인 분비 증가 효과
건강한 공여자로부터 얻은 인간 PBMCs(Stemcell technologies)를 융합 단백질 7A6RS15TL-2 (6.65 ug/ml) 존재 하에서 항-CD3 단클론 항체(BD Biosciences, 0.2ug/ml) 및 항-CD28 단클론 항체(BD Biosciences, 1ug/ml)와 함께 배양하였다. 비교군으로는 항-TIGIT 7A6(5ug/ml; 중쇄: 서열번호 45; 경쇄: 서열번호 34+43) 항체, 313M32(5ug/ml) 항체, 단독 IL-15 (775pM) (Peprotech), 단독 RS15 (RS15.0) 단백질 (775pM), 313M32RS15TL-2 융합 단백질(313M32-RS15.0 융합; 6.65ug/ml; 참고예)을 사용하였다. 항-TIGIT 항체, 사이토카인(IL-15), 융합 단백질들을 처리하지 않은 군(항-CD3 항체 및 항-CD28 항체만 처리)을 대조군으로 하였다. 인간 CD4+ T와 CD8+ T 세포 및 CD56+ NK세포에서의 사이토카인 생산을 측정하였다. 배양 후, 세포들을 4℃에서 10분간 400 x g에서 스핀다운하고, T 세포와 NK 세포 내의 사이토카인 농도를 측정하였다. 이를 위하여 다음의 방법으로 세포 내 사이토카인을 염색하였다: 세포를 Zombie Aqua fixable dead cell dye solution(Biolegend)으로 염색하고, 30분 동안 얼음 위에서 CD4+ T 와 CD8+ T 세포 표면 마커에 대한 플루오로포어(fluorophore)-접합 항체로 표지하였다. 이 때 사용된 항-CD3 항체, 항-CD4 항체, 항-CD8 항체, 항-CD56 항체는 모두 Biolegend에서 입수하였다.
eBioscience™ Foxp3/Transcription Factor Fixation/Permeabilization Concentrate and Diluent kit(eBiosciences)를 사용하여 제조자 지침에 따라서 세포를 고정화하고 침투화시켰다(permeabilized). 상기 세포를 세포 내 IFNγ 대한 플루오로포어-접합 항체(Biolegend) 로 염색하였다. 상기 세포들을 유세포분석기(CytoFLEX, Beckman Coulter)로 분석하고, 데이터는 Flowjo software(BD Biosciences)로 분석하였다.
상기 결과를 도 6a (CD4+ T 세포), 6b (CD8+ T 세포), 6c (CD56+ NK 세포)에 각각 나타내었다. 상기 결과에서 보여지는 바와 같이, 본 출원의 융합 단백질 (7A6RS15TL-2)은 CD4+ T 세포, CD8+ T 세포 및 CD56+ NK 세포 내에서의 Th1/Tc1 사이토카인(IFN-gamma) 생산 증가시키고, 이를 통하여 면역반응을 강화시킴을 확인하였다. 상기 얻어진 결과는 본 출원의 융합 단백질이 항-TIGIT 항체보다 더 강력한 이펙터 T 세포의 기능 증진 효과를 가짐을 시사한다. 또한, 본 출원의 융합 단백질은 IL-15 단독 또는 RS15 보다 더 강력한 이펙터 T 세포의 기능 증진 효과를 가짐을 보여준다. 또한, 본 출원의 융합 단백질은 비교군 (313M32RS15TL-2)보다 높은 IFN-gamma level을 보여주었으며 이는, 본 출원의 융합 단백질이 RS15이 다른 reference TIGIT 항체에 결합된 융합 단백질보다 더 우월한 면역증진 효과를 가짐을 시사한다.
3.3. 다양한 RS15 내부 링커를 가지는 융합 단백질의 사이토카인 생산 효과
다양한 RS15 내부 링커를 가지는 7A6-RS15 융합 단백질을 처리한 인간 PBMC에서의 사이토카인 생성을 확인하였다. 이를 위하여, 건강한 공여자로부터 얻은 인간 PBMC(STEMCELL)를 10%(v/v) FBS(Gibco), Penicilin-Streptomycin(Sigma), L-glutamine(Sigma), 및 HEPES(Sigma)를 포함하는 PRMI1640 배지(Gibco)에 재현탁시키고, 96웰 플레이트에 시딩하였다. T 세포 활성화를 위하여, PBMC를 0.2μg/mL의 항-CD3 단클론 항체(BD Biosciences, clone HIT3) 및 1μg/mL의 항-CD28 단클론 항체(BD Biosciences, clone CD28.2)로 자극하였다. 항-CD3/CD28로 자극 시에, 항-TIGIT 항체-RS15 융합 단백질(7A6RS15TL-2, 7A6RS15TL-2DL-0, 7A6RS15TL-2DL-1, 7A6RS15TL-2DL-2, 7A6RS15TL-2DL-3, 7A6RS15TL-2DL-4)도 PBMC에 처리하였다 (융합 단백질 처리 농도: 13.76 nM, 34.39 nM, 및 68.79 nM).
PBMC를 37℃ 및 5% CO2 조건에서 4시간 동안 배양한 후, Brefeldin A(Sigma)를 첨가한 뒤, 추가로 15시간 동안 배양하였다. 배양된 세포를 4℃에서 6분 동안 400xg로 원심분리하여 스핀다운시켜 배양한 후 수확하였다. 상층액을 제거하고 동일한 원심분리 조건으로 PBS(phosphate-buffered saline)(Thermo)로 세포를 2회 세척하였다. 상기 세포를 PBS에 1:400으로 희석된 Zombie Aqua fixable dead cell dye solution(Biolegend)으로 실온에서 20분 동안 염색하였다. 상기 세포를 FACS 완충액(1% FBS를 포함하는 PBS)으로 세척하고, 항-CD3 항체(Biolegend, 1:100), 항-CD4 항체(Biolegend, 1:100), CD8 항체(Biolegend, at 1:100), 및 항-CD56 항체(Biolegend, at 1:100)를 포함하는 fluorophore-접합 항체들로 표지하였다 (for 30 min in the dark on ice). 세포를 FACS 완충액으로 세척한 후, 실온의 암실에서 45분 동안 Fixation/perm buffer(Thermo)에 재현탁하였다. 그런 다음, 세포를 permeabilization wash buffer(Thermo)로 두 번 세척하고, 10분 동안 400xg으로 원심분리하여 펠릿화하였다. 사이토카인 염색을 위해, 세포를 항-IL-2 항체(Biolegend, 1:50), 항-IFN-γ 항체(Biolegned, 1:50) 및 항-TNF-α 항체(Biolegned, 1:50)를 함유하는 permeabilization wash buffer (Thermo)에 재현탁하였다. 세포를 실온의 암실에서 30분 동안 인큐베이션하였다. 세포를 FACS 버퍼로 세척한 후, 유세포 분석기(CytoFLEX, Beckman Coulter)로 형광 강도를 측정하여 분석하고 Flowjo software(BD)를 사용하여 데이터를 분석하였다. 사이토카인 생산은 CD4+ T 세포(CD3+CD4+CD8-), CD8+ T 세포(CD3+CD8+CD4-) 및 CD56+ NK 세포(CD3-CD56+)에서 측정하였다.
상기 얻어진 결과를 도 7a~7h에 나타내었다 (융합 단백질 처리 농도 - Bright bar: 34.39 nM, Dark bar: 68.79 nM). 도 7a~7h에 나타난 바와 같이, 시험된 모든 융합 단백질은, RS15 내부 링커 종류와 크게 상관 없이, CD4+ T 세포 및 CD8+ T 세포 모두에서 대조군 (융합 단백질 미처리) 대비 사이토카인(예, IL-2, IFN-γ, TNF-α) 생산을 증가시켰으며, 또한 CD3-CD56+ NK 세포에서도 대조군 대비 우수한 사이토카인 (예, IL-2, IFN-γ, TNF-α) 생산 증가 효과를 보였다.
3.4. 항-TIGIT 항체 대비 융합 단백질의 사이토카인 분비
증가 효과
인간 CD3+ T 세포와 CD56+ NK 세포에서의 사이토카인 생산을 측정하기 위해, 건강한 공여자 유래의 500,000 인간 PBMCs(Stemcell technologies)를 항-TIGIT (7A6) 항체(10 μg/ml) 또는 융합 단백질 (7A6RS15TL-2, 68.79nM) 존재 하에서 항-CD3 단클론 항체(BD Biosciences, 0.2 μg/ml) 및 항-CD28 단클론 항체(BD Biosciences, 1μg/ml)와 함께 배양하였다. 항-TIGIT 항체 및 융합 단백질을 처리하지 않은 군을 대조군으로 하였다. 37℃, 5% CO2 배양기에서 4시간 배양 후, 사이토카인의 분비를 막기 위해 Brefeldin A(10 μg/ml)를 처리하고 다시 배양기에서 15시간 배양하여, 총 19시간 배양하였다.
사이토카인을 생성하는 세포의 비율을 분석하기 위해, 세포들을 4℃에서 10분간 400 x g에서 스핀다운하는 세척 방법을 두 번 반복한 뒤, 다음의 방법으로 세포를 염색하였다: 세포를 Zombie Aqua fixable dead cell dye solution(Biolegend)으로 20분간 상온에서 염색한 뒤, 10분간 400 x g에서 스핀다운하여 세척한다. 그리고 30분 동안 얼음 위에서 CD3+ T 세포 또는 CD56+ NK 세포 표면 마커에 대한 플루오로포어(fluorophore)-접합 항체로 표지하였다. 이 때 사용된 항-CD3 항체, 항-CD56 항체는 모두 Biolegend에서 입수하였다.
eBioscience™ Foxp3/Transcription Factor Fixation/Permeabilization Concentrate and Diluent kit(eBiosciences)를 사용하여 제조자 지침에 따라서 세포를 고정화하고 침투화시켰다(permeabilized). 상기 세포를 세포 내 IFN-γ 및 TNF-α에 대한 플루오로포어-접합 항체(Biolegend) 로 30분간 상온에서 염색하였다. 상기 세포들을 세척한 뒤, 유세포분석기(CytoFLEX, Beckman Coulter)로 각 세포의 표면 마커 표지 및 사이토카인의 플루오로포어 형광을 탐지하였다. 데이터는 Flowjo software(BD Biosciences)로 분석 및 GraphPad Prism 9 software(Dotmatics)로 도식화하였다(통계분석: One-Way ANOVA corrected for multiple comparisons with a Dunnett’s test (n=7), * P≤0.05, ** P≤0.01, *** P≤0.001, **** P≤0.0001)).
상기 결과를 도 8a (CD4+ T 세포)와 8b (CD8+ T 세포) 및 8c (CD56+ NK 세포)에 나타내었다. 상기 결과에 나타난 바와 같이, 본원의 융합 단백질은 T 세포와 NK 세포 내에서의 Th1/Tc1 사이토카인(IFN-gamma)과 TNF-alpha의 생산을 증가시키고, 이를 통하여 면역반응을 강화시킴을 확인하였다. 상기 얻어진 결과는 7A6RS15TL-2는 항-TIGIT (7A6) 항체보다 더 강력하고 용량-의존적인 이펙터 T 세포와 NK세포 기능 증진 효과를 가짐을 시사한다.
3.5. 병용 처리 대비 융합 단백질의 사이토카인 분비 증가 효과
건강한 공여자로부터 얻은 인간 PBMCs(Stemcell technologies)를 융합 단백질 7A6RS15TL-2 (2μg/ml) 존재 하에서 항-CD3 단클론 항체(BD Biosciences, 0.2μg/ml) 및 항-CD28 단클론 항체(BD Biosciences, 1ug/ml)와 함께 배양하였다. 비교군으로는 단독 IL-15 (775pM) (Peprotech), 단독 RS15 단백질 (RS15.0; 775pM), 항-TIGIT 항체 (7A6; 중쇄: 서열번호 45; 경쇄: 서열번호 34+43; 2μg/ml)를 사용하였다. 항-TIGIT 항체, IL-15 cytokine, 융합 단백질들을 처리하지 않은 군을 대조군으로 하였다. 인간 CD4+ T 세포와 CD8+ T 세포 및 CD56+ NK세포에서의 사이토카인 생산을 측정하였다. 배양 후, 세포들을 4℃에서 10분간 400 x g에서 스핀다운하고, T 세포와 NK 세포 내의 사이토카인 농도를 측정하였다. 이를 위하여 다음의 방법으로 세포 내 사이토카인을 염색하였다: 세포를 Zombie Aqua fixable dead cell dye solution(Biolegend)으로 염색하고, 30분 동안 얼음 위에서 CD4+ T 와 CD8+ T 세포 표면 마커에 대한 플루오로포어(fluorophore)-접합 항체로 표지하였다. 이 때 사용된 항-CD3 항체, 항-CD4 항체, 항-CD8 항체, 항-CD56 항체는 모두 Biolegend에서 입수하였다.
eBioscience™ Foxp3/Transcription Factor Fixation/Permeabilization Concentrate and Diluent kit(eBiosciences)를 사용하여 제조자 지침에 따라서 세포를 고정화하고 침투화시켰다(permeabilized). 상기 세포를 세포 내 IFNγ 대한 플루오로포어-접합 항체(Biolegend) 로 염색하였다. 상기 세포들을 유세포분석기(CytoFLEX, Beckman Coulter)로 분석하고, 데이터는 Flowjo software(BD Biosciences)로 분석하였다.
상기 결과를 도 9a (CD4+ T 세포), 9b (CD8+ T 세포), 및 9c (CD56+ NK 세포)에 각각 나타내었다. 상기 결과에 나타난 바와 같이, 본원의 융합 단백질은, 이를 구성하는 항-TIGIT 항체와 RS15 단백질을 병용(combination) 처리하는 경우와 비교하여, CD4+ T, CD8+ T 세포 및 CD56+ NK 내에서의 Th1/Tc1 사이토카인(IFN-gamma) 생산을 보다 높은 수준으로 증가시키고, 이를 통하여 T 세포와 NK 세포의 면역반응을 보다 강화시킬 수 있음을 확인하였다.
3.6. 암환자 유래 PBMC에서의 융합 단백질의 면역 증강 효과
본 실시예에서는 융합 단백질의 암환자 유래 PBMC에서의 사이토카인 생산능을 모항체와 비교하였다.
이를 위하여, 간세포암(HCC) 환자 유래의 인간 PBMC(Cureline)를 10%(v/v) FBS(Gibco), Penicilin-Streptomycin(Sigma), L-glutamine(Sigma), 및 HEPES(Sigma)를 포함하는 PRMI1640 배지(Gibco)에 재현탁하고, 96웰 플레이트에 시딩하였다. T 세포 활성화를 위하여, PBMC를 0.2μg/mL의 항-CD3 단클론 항체(BD Biosciences, clone HIT3) 및 1μg/mL의 항-CD28 단클론 항체(BD Biosciences, clone CD28.2)로 자극하였다. 항-CD3/CD28로 자극 시에, 융합 단백질(7A6RS15TL-2, 10 μg/ml) 또는 모항체 (7A6, 10 μg/ml)도 PBMC에 함께 처리하였다.
PBMC를 37℃ 및 5% CO2 조건에서 4시간 동안 배양한 후, Brefeldin A(Sigma)를 첨가한 뒤, 추가로 15시간 동안 배양하였다. 배양된 세포를 4℃에서 6분 동안 400xg로 원심분리하여 스핀다운시켜 배양한 후 수확하였다. 상층액을 제거하고 동일한 원심분리 조건으로 PBS(phosphate-buffered saline)(Thermo)로 세포를 2회 세척하였다. 상기 세포를 PBS에 1:400으로 희석된 Zombie Aqua fixable dead cell dye solution(Biolegend)으로 실온에서 20분 동안 염색하였다. 상기 세포를 FACS 완충액(1% FBS를 포함하는 PBS)으로 세척하고, 항-CD3 항체(Biolegend, 1:100), 항-CD4 항체(Biolegend, 1:100), CD8 항체(Biolegend, at 1:100), 및 항-CD56 항체(Biolegend, at 1:100)를 포함하는 fluorophore-접합 항체들로 표지하였다 (for 30 min in the dark on ice). 세포를 FACS 완충액으로 세척한 후, 실온의 암실에서 45분 동안 Fixation/perm buffer(Thermo)에 재현탁하였다. 그런 다음, 세포를 permeabilization wash buffer(Thermo)로 두 번 세척하고, 10분 동안 400xg으로 원심분리하여 펠렛화하였다. 사이토카인 염색을 위해, 세포를 항-IL-2 항체(Biolegend, 1:50), 항-IFN-γ 항체(Biolegned, 1:50) 및 항-TNF-α 항체(Biolegned, 1:50)를 함유하는 permeabilization wash buffer (Thermo)에 재현탁하였다. 세포를 실온의 암실에서 30분 동안 인큐베이션하였다. 세포를 FACS 버퍼로 세척한 후, 유세포 분석기(CytoFLEX, Beckman Coulter)로 형광 강도를 측정하여 분석하고 Flowjo software(BD)를 사용하여 데이터를 분석하였다. 사이토카인 생산은 CD4+ T 세포(CD3+CD4+CD8-), CD8+ T 세포(CD3+CD8+CD4-) 및 CD56+ NK 세포(CD3-CD56+)에서 측정하였다.
상기 얻어진 결과를 도 10에 나타내었다. 상기 결과에서 보여지는 바와 같이, 본 출원의 융합 단백질은, 암환자 유래의 CD4+ T 세포 및 CD8+ T 세포 모두에서, 모항체 대비 우수한 사이토카인 (예, IL-2, IFN-γ, TNF-α) 생산 증가 효과를 보였다.
실시예 4. 융합 단백질의 항암 효과
4.1. NK 세포에 의한 암세포 사멸 효과 (
in vitro
)
제조사 지침에 따라서 NK cell isolation kit (Miltenyi)를 사용하여 건강한 인간 PBMC로부터 NK 세포를 분리하였다. NK 세포를 R10(10%(v/v) FBS(Gibco), Penicilin-Streptomycin(Sigma), L-glutamine(Sigma), 및 HEPES(Sigma)를 포함하는 PRMI1640 배지(Gibco))에 96-웰 U-바닥 플레이트에 200,000 cells/well의 양으로 시딩하였다. 세포를 37℃ 및 5% CO2에서 3.876 nM 농도의 융합 단백질 7A6RS15TL-2 또는 IL-15로 1시간 동안 자극한 다음, 400 x g에서 3분 동안 원심분리한 후, R10으로 5회 세척하였다. 상기 세포를 37℃ 및 5% CO2에서 24시간 동안 그대로 두었다(resting).
GFP를 발현하는 MCF7 유방암 세포주(MacroPhox Ltd)를 10,000 cells/well(in 50 μl R10)의 양으로 시딩하였다. 세포를 2시간 동안 플레이트에 부착시킨 다음, 자극된 PBMC를 각 웰 라인에 첨가하였다 (100,000 PBMCs per well in 50 μl R10). 그런 다음 세포를 37℃ 및 5% CO2에서 120시간 동안 IncuCyte에서 배양하였다. 각 웰에서 4시간마다 4개의 이미지를 10x 배율로 촬영하였다. 0시간 시점으로 정규화한 웰당 표적 세포 면적의 Log2 Fold 값을 구하여 세포독성을 평가하였다. Raw data는 Incucyte 2021A software를 사용하여 처리하고, GraphPad Prism 9를 사용하여 그래프 생성 및 통계처리를 수행하였다.
상기 결과를 도 11에 나타내었다. 도 11에서 보여지는 바와 같이, 융합 단백질 7A6RS15TL-2은, 가용성 IL-15와 모항체 (7A6)를 병용 처리한 경우와 비교하여, 장기간 지속되는 우수한 종양 세포 사멸 효과를 나타내었다. 이러한 결과는 본 출원의 융합 단백질이, 그 구성 성분들의 병용 처리와 비교하여, 종양 세포 성장을 제어하는 NK 세포에 장기간 지속되는 신호를 제공함에 따른 것이라고 할 수 있다.
4.2. 대장암 모델에서의 항암 효과 (
in vivo
)
대장암 세포주인 CT-26 종양 세포(CrownBio)를 37°C 및 5% CO2 대기 조건에서 10%(v/v) FBS가 보충된 RPMI1640 배지에 보관하였다. 대수기(exponential growth phase)의 세포를 수확하고, 종양세포 접종 전에 세포 계수기로 정량화하였다.
BALB/c hTIGIT knock-in mouse (GemPharmatech Co.,Ltd)의 우측 뒤편 옆구리 부분에 상기 준비된 종양세포 용액 (5x105 tumor cells in 0.1 mL of PBS solution)을 피하 접종하고 종양을 성장시켰다. 종양 접종일을 "Day 0"으로 하였다. 종양 평균 크기(부피)가 70-100 mm3이 된 때 무작위화(randomization)를 수행하였다. 본 시험에 총 30마리의 마우스를 사용하였고, 이들을 무작위로 5개 군으로 나누었다(5 mice/group). 종양 세포 접종 후, 상기 동물들의 체중을 측정하였다.
PBS 용액을 비히클로 사용하고(대조군; 그룹 1), 융합 단백질 7A6RS15TL-1 각각 2mg/kg, 3mg/kg 용량으로 처리(각각 그룹 2 및 그룹 3)하였다.
비히클 처리군(대조군)은 mean tumor burden이 3000 mm3된 17일째에, 그 외 실험군은 24일째에 시험을 종료하였다(표 30 참조).
| Group | Treatment | Dose level (mg/kg) |
ROA | Dosing Frequency & Duration |
| 1 | Vehicle | - | i.v. | 1QW x 3 weeks |
| 2 | 7A6RS15TL-1 | 2 | i.v. | 1QW x 3 weeks |
| 3 | 7A6RS15TL-1 | 3 | i.v. | 1 administration at first dosing |
QW: weekly(once a week)TGI%는 다음의 수식으로 계산하였다:
TGI(%) =100 x(1-T/C)
(T 및 C는 각각 특정 날의 시험군(T) 및 대조군(C)의 평균 종양 부피(또는 무게)).
시험기간 동안 측정된 종양 크기 (mm3)를 도 12a에 나타내었다. 상기 결과에서 보여지는 바와 같이, 24일째에, 융합 단백질 7A6RS15TL-1의 2mg/kg 처리군 및 3mg/kg 처리군 모두에서 각각 TGI 90.06%와 95.26%의 종양 성장 감소가 관찰되었다. 24일째의 2mg/kg 7A6RS15TL-1 처리군(2 마리)과 3mg/kg 7A6RS15TL-1 처리군(4 마리)에서 100 mm3 이하의 완전한 종양 제거가 관찰되었다.
또한, 시험기간 중 측정된 마우스의 체중 변화를 도 12b에 나타내었다. 도 12b에 나타난 바와 같이, 융합 단백질(7A6RS15TL-1)을 처리한 시험군들에서 유의미한 체중 차이는 없었다. 일반적인 사이토카인 치료법의 부작용이 현저한 체중 감소인 것을 고려할 때, 상기 결과는 본 출원의 융합 단백질은 기존의 사이토카인 치료법과 비교하여 유리한 효과를 가짐을 보여준다.
실시예 5.
융합 단백질의 Tolerability
본 출원의 융합 단백질을 투여한 마우스의 체중(A), AST/ALT 수준(B) 및 전체 혈구 수(C)를 분석하여, 상기 융합 단백질의 생체 허용성 (tolerability)을 평가하였다.
이를 위하여, 건강한 wild type BALB/c 마우스(8주~10주령의 암컷; Beijing Vital River Laboratory Animal Technology Co.,Ltd)에 하기 표 31에 기재된 바와 같이 융합 단백질 (7A6RS15TL-1) 또는 비히클(PBS)을 주사하였다.
| Group | No | Treatment | Dose level (mg/kg) |
concentration (mg/mL) |
Dosing Volume (μL/g) |
ROA | Dosing Frequency & Duration |
| 1 | 3 | Vehicle (PBS) | - | - | 10 | i.v. | QW x 1 week |
| 2 | 3 | 7A6RS15TL-1 fusion antibody | 3 | 0.3 | 10 | i.v. | QW x 1 week |
| 3 | 3 | 7A6RS15TL-1 fusion antibody | 1 | 0.1 | 10 | i.p. | QW x 2 weeks |
상기와 같이 준비된 Group 1~3의 체중, AST (aspartate transaminase) 수준, ALT (alanine transferase) 수준 및 전체 혈구 수(complete blood cell count)를 매일 측정하였다. AST, ALT, 및 혈구수는 혈액을 체취하고 혈액검사를 수행하여 측정하였다. 체중 측정은 StudyDirectorTM software (version 3.1.399.19)를 사용하여 측정한 Laminar Flow Cabinet에서 수행하였다.
상기 얻어진 결과를 도 13a (체중), 13b (AST 및 ALT 수준), 및 13c (전체 혈구 수)에 나타내었다. 시험 기간 동안 모든 그룹에서 미미한 정도의 체중 감소가 관찰되었다 (group 1 max. loss or gain = -2.3%, +1.9%, group 2 max. loss or gain = -3.2%, +1.7%, group 3 max. loss or gain = -0.6%, +9.6%). 또한, 대조군(Group 1)과 비교하여, 모든 시험군 (Group 2 & 3)에서 AST 및 ALT 수준의 유의한 차이는 관찰되지 않았다. AST 및 ALT 수준은 8주 내지 10주령의 암컷 마우스에 대해 예상되는 정상 범위 내에 잘 유지되었다 (ALT low 40, high 170; AST low 67, high 381). 또한, 전체 혈구 수(Complete Blood Counts; CBC)도 8주 내지 10주령 암컷 마우스의 정상 예상 범위 내로 측정되었다 (White blood cells (WBC) low 5.69 K/μL, high 14.84 K/μL; Lymphocytes (LYM) low 3.6 K/μL, 11.56 K/μL; Monocytes (MON) low 0.34 K/μL, high 1.37 K/μL; Neutrophils (NEU) low 0.74 K/μL, high 3.01 K/μL). 상기 결과는 본 출원의 융합 단백질이 생체에 약해를 가하지 않고 허용가능함을 시사한다.
Claims (22)
- (1) 항-TIGIT 항체 또는 이의 항원결합단편 및
(2) 인터류킨-15(IL-15) 유사 폴리펩타이드
를 포함하는 융합 단백질로서,
상기 인터류킨-15 유사 폴리펩타이드는 (a) 인터류킨-15 수용체 알파(IL-15Rα) 스시 도메인, 및 (b) 인터류킨-15을 포함하는 것인,
융합 단백질. - 제1항에 있어서, 상기 항-TIGIT 항체 또는 이의 항원결합단편은,
서열번호 1, 2, 또는 3의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1,
서열번호 4, 5, 또는 6의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2,
서열번호 7, 8, 또는 9의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3,
서열번호 10, 13, 또는 14의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1,
서열번호 15, 16, 또는 17의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2, 및
서열번호 18, 19, 또는 20의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3
를 포함하는 것인,
융합 단백질 - 제1항에 있어서, 상기 항-TIGIT 항체 또는 이의 항원결합단편은,
서열번호 1의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, 서열번호 4의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2, 서열번호 7의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3, 서열번호 11 또는 12의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, 서열번호 15의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2, 및 서열번호 18의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3;
서열번호 2의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, 서열번호 5의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2, 서열번호 8의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3, 서열번호 13의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, 서열번호 16의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2, 및 서열번호 19의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3; 또는
서열번호 3의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, 서열번호 6의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2, 서열번호 9의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3, 서열번호 14의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, 서열번호 17의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2, 및 서열번호 20의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3
를 포함하는 것인, 융합 단백질. - 제1항에 있어서, 상기 항-TIGIT 항체 또는 이의 항원결합단편은,
서열번호 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 또는 28의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변영역, 및
서열번호 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 또는 36의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변영역
을 포함하는 것인, 융합 단백질. - 제1항에 있어서, 상기 항-TIGIT 항체는 동물 항체, 키메라 항체, 또는 인간화 항체인, 융합 단백질.
- 제1항에 있어서, 상기 항원결합단편은 상기 항-TIGIT 항체의 scFv, scFv-Fc, (scFv)2, Fab, Fab', 또는 F(ab')2인, 융합 단백질.
- 제1항에 있어서, 상기 인터류킨-15 수용체 알파 스시 도메인은 서열번호 39 또는 서열번호 88의 아미노산 서열을 포함하는 것인, 융합 단백질.
- 제1항에 있어서, 상기 인터류킨-15는 서열번호 40의 아미노산 서열을 포함하는 것인, 융합 단백질.
- 제1항에 있어서, 항-TIGIT 항체 또는 이의 항원결합단편 및 인터류킨-15 유사 폴리펩타이드 사이에 펩타이드 링커를 포함하지 않는, 융합 단백질.
- 제1항에 있어서, 항-TIGIT 항체 또는 이의 항원결합단편 및 인터류킨-15 유사 폴리펩타이드 사이에 펩타이드 링커(제1 링커)를 포함하는, 융합 단백질.
- 제10항에 있어서, 상기 제1 링커는 [EAAAK]n (n은 [EAAAK]의 개수로서 1 내지 5의 정수임) 또는 [(G)mS]l (m은 G의 개수로서 1 내지 5의 정수임, l은 [(G)mS]의 개수로서 1 내지 5의 정수임)인, 융합 단백질.
- 제1항에 있어서, 인터류킨-15 수용체 알파(IL-15Rα) 스시 도메인 및 인터류킨-15 사이에 펩타이드 링커(제2 링커)를 포함하는, 융합 단백질.
- 제12항에 있어서, 상기 제2 링커는 [(G)mS]l (m은 G의 개수로서 1 내지 5의 정수임, l은 [(G)mS]의 개수로서 1 내지 5의 정수임) 또는 [(S)o(G)pS]q[XQ]r (o는 S의 개수로서 0 또는 1이고, p는 G의 개수로서 1 내지 5의 정수이고, q는 단위체 [(S)o(G)pS]의 개수로서 1 내지 5의 정수이고, 상기 단위체가 2개 이상인 경우 각 단위체는 서로 동일하거나 다를 수 있으며, X는 류신(Leu; I) 또는 이소류신(Ile; I)이고, r은 디펩타이드 [XQ]의 개수로서 0 또는 1임)인, 융합 단백질.
- 제12항에 있어서, 상기 제2 링커는 SGGSGGGGSGGGSGGGGSLQ (서열번호 108), GGGGSGGGGSGGGGS (서열번호 85), GSGGGGSGGGGSLQ(서열번호 103), GSGGGGSGGGGSIQ(서열번호 105), SGGGGSGGGSGGGGGSGG(서열번호 110), 또는 SGGGGSGGGSGGGGGSGGGSG(서열번호 111)인, 융합 단백질.
- 제1항 내지 제14항 중 어느 한 항의 융합 단백질을 암호화하는 핵산 분자.
- 제15항의 핵산 분자를 포함하는 재조합 벡터.
- 제15항의 핵산 분자 또는 이를 포함하는 재조합 벡터를 포함하는 재조합 세포.
- 제1항 내지 제14항 중 어느 한 항의 융합 단백질을 포함하는 암의 예방 또는 치료용 약학 조성물.
- 제18항에 있어서, 상기 암은 고형암 또는 혈액암인, 암의 예방 또는 치료용 약학 조성물.
- 제1항 내지 제14항 중 어느 한 항의 융합 단백질을 포함하는, 면역 증강용 약학 조성물.
- 제1항 내지 제14항 중 어느 한 항의 융합 단백질을 포함하는, 면역관련 질병의 예방 또는 치료용 약학 조성물.
- 제21항에 있어서, 상기 면역관련 질병은 감염성 질환, 염증성 질환, 또는 자가면역 질환인, 면역관련 질병의 예방 또는 치료용 약학 조성물.
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