CN115087671A - 抗il-27抗体及其用途 - Google Patents

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Abstract

本公开涉及抗IL‑27抗体及其抗原结合部分。本公开还涉及通过施用所述抗体或其抗原结合部分来治疗或缓解诸如癌症的疾病的一种或多种症状的方法。本公开还涉及用于检测例如受试者或样品中的IL‑27的方法。

Description

抗IL-27抗体及其用途
经由EFS-WEB以电子方式提交的序列表的引用
呈ASCII文本文件以电子方式与本申请一起提交的序列表(名称：4416_009PC02_Seqlisting_ST25.txt；大小：156,863字节；和创建日期：2020年9月25日)的内容以引用方式整体并入本文。
相关申请的交叉引用
本PCT申请要求2019年9月25日提交的美国临时申请第62/906,008号和2020年9月22日提交的美国临时申请第63/081,705号的优先权权益；所述申请各自以引用方式整体并入本文。
技术领域
本公开总体上涉及用于调节IL-27信号传导的组合物和方法。更具体地，本公开涉及结合至IL-27并调节IL-27信号传导的免疫原性组合物(例如，抗体、抗体片段等)。
背景技术
近年来，越来越多的证据表明，免疫系统是肿瘤形成和发展的重要障碍。在癌症患者中存在具有抗肿瘤潜力或活性的天然存在的T细胞的原理使肿瘤学中免疫治疗方法的发展合理化。免疫细胞，如T细胞、巨噬细胞和自然杀伤细胞可表现出抗肿瘤活性并且有效地控制恶性肿瘤的发生和生长。肿瘤特异性或肿瘤相关抗原能够诱导免疫细胞识别并消除恶性肿瘤(Chen&Mellman,(2013)Immunity 39(1):1-10)。尽管存在肿瘤特异性免疫响应，但恶性肿瘤通常通过各种免疫调节机制逃避或避免免疫攻击，从而导致无法控制肿瘤发生和发展(Motz&Coukos,(2013)Immunity 39(1):61-730)。实际上，癌症的新兴特征是这些免疫调节机制的利用和抗肿瘤免疫响应的失能，从而导致肿瘤逃避和免疫杀伤逃脱(Hanahan和Weinberg(2011)Cell 144(5):646-674)。
IL-27是由两个亚基(EBI3和IL-27p28)组成的异二聚体细胞因子。IL-27在结构上与IL-12和IL-6细胞因子家族两者有关。IL-27结合至由IL-27Rα(WSX1)和gp130链组成的异二聚体受体并通过所述异二聚体受体介导信号传导，其主要通过STAT1和STAT3介导信号传导。初始报告将IL-27表征为免疫增强细胞因子，其支持CD4+ T细胞增殖、T辅助(Th)1细胞分化和IFN-γ产生，通常与IL-12协同作用。随后的研究表明，IL-27展示复杂免疫调节功能，取决于所使用的生物学环境和实验模型而导致促炎性或抗炎作用。IL-27可驱动人癌细胞中不同免疫调控分子的表达，这可能支持体内免疫响应的局部紊乱(Fabbi等人,(2017)Mediators Inflamm 3958069.2017年2月1日在线公开doi:10.1155/2017/3958069，以及其中包含的参考文献)。
尽管在癌症治疗和管理方面取得了重大进展，但是仍然持续需要用于治疗和管理癌症的新的且有效的疗法。
发明内容
本文公开了抗体或其抗原结合部分，所述抗体或其抗原结合部分拮抗IL-27并且特异性地结合至包含以下中的一个或多个氨基酸的表位：(i)对应于SEQ ID NO:2(IL-27p28)的氨基酸37至56，(ii)对应于SEQ ID NO:2(IL-27p28)的氨基酸142至164，或(iii)(i)和(ii)两者。在一些方面，抗体或其抗原结合部分特异性地结合至包含SEQ ID NO:2(IL-27p28)的Gln37、Leu38、Glu42、Glu46、Val49、Ser50、Leu53、Lys56、Leu142、Asp143、Arg145、Asp146、Leu147、Arg149、His150、Arg152、Phe153、Leu156、Ala157、Gly159、Phe160、Asn161、Leu162、Pro163或Glu164中的一个或多个氨基酸的表位。
在一些方面，本公开的抗体或其抗原结合部分特异性地结合至包含SEQ ID NO:2(IL-27p28)的Asp146、Arg149和/或Phe153的表位。在一些方面，表位还包含SEQ ID NO:2(IL-27p28)的His150和/或Leu156。在一些方面，表位还包含SEQ ID NO:2(IL-27p28)的Gln37、Leu38、Glu42、Leu142和/或Glu164。在一些方面，表位还包含SEQ ID NO:2(IL-27p28)的Glu46、Val49、Ser50和/或Leu162。在一些方面，表位还包含SEQ ID NO:2(IL-27p28)的Leu53、Lys56、Asp143、Arg145、Leu147、Arg152、Ala157、Gly159、Phe160、Asn161或Pro163中的一个或多个氨基酸。
在一些方面，本公开的抗体或其抗原结合部分特异性地结合至由SEQ ID NO:2(IL-27p28)的Gln37、Leu38、Glu42、Glu46、Val49、Ser50、Leu142、Asp146、Arg149、His150、Phe153、Leu156、Leu162和Glu164组成或基本上由其组成的表位。
在一些方面，本公开的抗体或其抗原结合部分特异性地结合至由SEQ ID NO:2(IL-27p28)的Gln37、Leu38、Glu42、Glu46、Val49、Ser50、Leu53、Lys56、Leu142、Asp143、Arg145、Asp146、Leu147、Arg149、His150、Arg152、Phe153、Leu156、Ala157、Gly159、Phe160、Asn161、Leu162、Pro163和Glu164组成或基本上由其组成的表位。
在其他方面，特异性地结合至包含SEQ ID NO:2(IL-27p28)的Gln37、Leu38、Glu42、Glu46、Val49、Ser50、Leu53、Lys56、Leu142、Asp143、Arg145、Asp146、Leu147、Arg149、His150、Arg152、Phe153、Leu156、Ala157、Gly159、Phe160、Asn161、Leu162、Pro163和Glu164中的一个或多个氨基酸的表位的抗体或其抗原结合部分不包含选自由以下组成的组的重链CDR和轻链CDR：(i)分别示于SEQ ID NO:9、10和11中的重链CDR1、CDR2和CDR3序列，和分别示于SEQ ID NO:、18和19中的轻链CDR1、CDR2和CDR3序列；(ii)分别示于SEQ IDNO:31、32和33中的重链CDR1、CDR2和CDR3序列，和分别示于SEQ ID NO:39、40和41中的轻链CDR1、CDR2和CDR3序列；(iii)分别示于SEQ ID NO:53、54和55中的重链CDR1、CDR2和CDR3序列，和分别示于SEQ ID NO:61、62和63中的轻链CDR1、CDR2和CDR3序列；(iv)分别示于SEQID NO:75、76和77中的重链CDR1、CDR2和CDR3序列，和分别示于SEQ ID NO:83、84和85中的轻链CDR1、CDR2和CDR3序列；(v)分别示于SEQ ID NO:97、98和99中的重链CDR1、CDR2和CDR3序列，和分别示于SEQ ID NO:105、106和107中的轻链CDR1、CDR2和CDR3序列；或(vi)分别示于SEQ ID NO:119、120和121中的重链CDR1、CDR2和CDR3序列，和分别示于SEQ ID NO:127、128和129中的轻链CDR1、CDR2和CDR3序列。
在其他方面，特异性地结合至包含SEQ ID NO:2(IL-27p28)的Gln37、Leu38、Glu42、Glu46、Val49、Ser50、Leu53、Lys56、Leu142、Asp143、Arg145、Asp146、Leu147、Arg149、His150、Arg152、Phe153、Leu156、Ala157、Gly159、Phe160、Asn161、Leu162、Pro163和Glu164中的一个或多个氨基酸的表位的抗体或其抗原结合部分不包含选自由以下组成的组的重链CDR和轻链CDR：(i)分别示于SEQ ID NO:12、13和14中的重链CDR1、CDR2和CDR3序列，和分别示于SEQ ID NO:20、21和22中的轻链CDR1、CDR2和CDR3序列；(ii)分别示于SEQID NO:34、35和36中的重链CDR1、CDR2和CDR3序列，和分别示于SEQ ID NO:42、43和44中的轻链CDR1、CDR2和CDR3序列；(iii)分别示于SEQ ID NO:56、57和58中的重链CDR1、CDR2和CDR3序列，和分别示于SEQ ID NO:64、65和66中的轻链CDR1、CDR2和CDR3序列；(iv)分别示于SEQ ID NO:78、79和80中的重链CDR1、CDR2和CDR3序列，和分别示于SEQ ID NO:86、87和88中的轻链CDR1、CDR2和CDR3序列；(v)分别示于SEQ ID NO:100、101和102中的重链CDR1、CDR2和CDR3序列，和分别示于SEQ ID NO:108、109和110中的轻链CDR1、CDR2和CDR3序列；或(vi)分别示于SEQ ID NO:122、123和124中的重链CDR1、CDR2和CDR3序列，和分别示于SEQID NO:130、131和132中的轻链CDR1、CDR2和CDR3序列。
在一些方面，抗体或其抗原结合部分的重链CDR1不由N-GFTF[S/A/R][S/R][T/Y][G/S]-C(SEQ ID NO:144)组成并且/或者重链CDR2不由N-ISSS[S/G][S/A]YI-C(SEQ IDNO:146)组成。在一些方面，抗体或其抗原结合部分的重链CDR1不由N-FTF[S/A/R][S/R][T/Y][G/S]MN-C(SEQ ID NO:148)组成并且/或者重链CDR2不由N-[G/S]ISSS[S/G][S/A]YI[L/Y]YADSVKG-C(SEQ ID NO:149)组成。
在其他方面，特异性地结合至包含SEQ ID NO:2(IL-27p28)的Gln37、Leu38、Glu42、Glu46、Val49、Ser50、Leu53、Lys56、Leu142、Asp143、Arg145、Asp146、Leu147、Arg149、His150、Arg152、Phe153、Leu156、Ala157、Gly159、Phe160、Asn161、Leu162、Pro163和Glu164中的一个或多个氨基酸的表位的抗体或其抗原结合部分不包含：(i)由N-GFTFXXXX-C(SEQ ID NO:145)组成的重链CDR1、由N-ISSSXXYI-C(SEQ ID NO:147)组成的重链CDR2和示于SEQ ID NO:121中的重链CDR3序列；以及分别示于SEQ ID NO:127、128和129中的轻链CDR1、CDR2和CDR3序列；或(ii)由N-FTFXXXXMN-C(SEQ ID NO:150)组成的重链CDR1、由N-XISSSXXYIXYADSVKG-C(SEQ ID NO:151)组成的重链CDR2和示于SEQ ID NO:124中的重链CDR3序列；以及分别示于SEQ ID NO:130、131和132示出的轻链CDR1、CDR2和CDR3序列。
在一些方面，特异性地结合至包含SEQ ID NO:2(IL-27p28)的Gln37、Leu38、Glu42、Glu46、Val49、Ser50、Leu53、Lys56、Leu142、Asp143、Arg145、Asp146、Leu147、Arg149、His150、Arg152、Phe153、Leu156、Ala157、Gly159、Phe160、Asn161、Leu162、Pro163和Glu164中的一个或多个氨基酸的表位的抗体或其抗原结合部分不包含：由N-GFTFXXXX-C(SEQ ID NO:145)组成的重链CDR1、由N-IXXXXXXX-C(SEQ ID NO:152)组成的重链CDR2和由N-AR[X]n＝6-15DX-C(SEQ ID NO:153)组成的重链CDR3序列；以及分别由N-QS[X]n＝1-3SS[X]n＝0-4Y-C(SEQ ID NO:154)组成的轻链CDR1、由N-XXS-C(SEQ ID NO:155)组成的轻链CDR2和由N-QQXXXXP[X]n＝0-1T-C(SEQ ID NO:156)组成的轻链CDR3序列。
本文公开了表现出以下性质中的至少一者或多者的抗体或其抗原结合部分：(i)以15nM或更小的平衡解离常数(KD)结合至人IL-27；(ii)阻断IL-27与IL-27受体的结合；(iii)抑制或减少细胞中的STAT1和/或STAT3磷酸化；(iv)抑制或减轻细胞中IL-27介导的对CD161表达的抑制；(v)抑制或减少细胞中IL-27介导的PD-L1和/或TIM-3表达；和(vi)诱导或增强PD-1介导的一种或多种细胞因子从细胞的分泌。
在一些方面，分离的抗体或其抗原结合部分以15nM或更小的平衡解离常数(KD)结合至人IL-27。
在其他方面，分离的抗体或其抗原结合部分抑制或减少细胞中的STAT1和/或STAT3磷酸化。在一些方面，分离的抗体或其抗原结合部分减少免疫细胞或癌细胞中的STAT1和/或STAT3磷酸化。
在一些方面，分离的抗体或其抗原结合部分抑制或减轻细胞中对CD161表达的抑制。在一些方面，分离的抗体或其抗原结合部分抑制或减少免疫细胞中对CD161表达的抑制。
在其他方面，分离的抗体或其抗原结合部分抑制或减少细胞中的PD-L1和/或TIM-3表达。在一些方面，分离的抗体或其抗原结合部分抑制或减少免疫细胞或癌细胞中的PD-L1和/或TIM-3表达。在一些方面，分离的抗体或其抗原结合部分抑制或减少癌细胞中的PD-L1表达。
在一些方面，分离的抗体或其抗原结合部分诱导或增强PD1介导的一种或多种细胞因子从细胞的分泌。在一些方面，一种或多种细胞因子是IFNg(IFNγ)、IL-17、TNFa(TNFα)或IL-6。在一些方面，抗体或其抗原结合部分选自由以下组成的组：IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgM、IgA1、IgA2、IgD和IgE抗体。在其他方面，抗体或其抗原结合部分是IgG1抗体或IgG4抗体。在一些方面，抗体或其抗原结合部分包含含有至少一个突变的Fc结构域。本文还公开了药物组合物，所述药物组合物所描述的分离的抗体或其抗原结合部分中任一者，和药学上可接受的载体。还公开了包含编码分离的抗体或其抗原结合部分的轻链、重链或轻链和重链两者的核苷酸序列的核酸。本文公开了包含所述核酸的表达载体。还公开了用所述表达载体转化的细胞。
本公开提供了一种用于产生特异性地结合人IL-27的抗体或其抗原结合部分的方法，所述方法将用所述表达载体转化的细胞维持在允许所述抗体或其抗原结合部分的表达的条件下。在一些方面，所述方法还包括获得抗体或其抗原结合部分。
本文公开了抑制或减少细胞中的STAT1和/或STAT3磷酸化的方法，所述方法包括使所述细胞与所述抗体或其抗原结合部分接触，其中所述抗体或其抗原结合部分抑制或减少细胞中的STAT1和/或STAT3磷酸化。
还公开了抑制或减轻细胞中对CD161表达的抑制的方法，所述方法包括使所述细胞与所述抗体或其抗原结合部分接触，其中所述抗体或其抗原结合部分抑制或减轻细胞中对CD161表达的抑制。
还公开了抑制或减少细胞中的PD-L1和/或TIM-3表达的方法，所述方法包括使所述细胞与所述抗体或其抗原结合部分接触，其中所述抗体或其抗原结合部分抑制细胞中的PD-L1和/或TIM-3表达。
还公开了诱导或增强一种或多种细胞因子从细胞的分泌的方法，所述方法包括使所述细胞与所述抗体或其抗原结合部分接触，其中所述抗体或其抗原结合部分诱导或增强PD-1介导的一种或多种细胞因子从细胞的分泌。
还公开了刺激受试者中的免疫响应的方法，所述方法包括向所述受试者施用有效量的所公开的分离的抗体或抗原结合片段或所公开的药物组合物。
还公开了治疗受试者的癌症的方法，所述方法包括向所述受试者施用有效量的所公开的分离的抗体或抗原结合片段或所公开的药物组合物。
本文公开了刺激受试者中的免疫响应或治疗受试者的癌症的方法。所述方法包括向所述受试者施用有效量的所公开的分离的抗体或其抗原结合部分或所公开的药物组合物，其中所述抗体、其抗原结合部分或药物组合物抑制或减少细胞中的STAT1和/或STAT3磷酸化，从而刺激免疫响应或治疗癌症。
还公开了刺激受试者中的免疫响应或治疗受试者的癌症的方法。所述方法包括向所述受试者施用有效量的所公开的分离的抗体或其抗原结合部分或所公开的药物组合物，其中所述抗体、其抗原结合部分或药物组合物抑制或减轻细胞中对CD161表达的抑制，从而刺激免疫响应或治疗癌症。
还公开了刺激受试者中的免疫响应或治疗受试者的癌症的方法。所述方法包括向所述受试者施用有效量的所公开的分离的抗体或其抗原结合部分或所公开的药物组合物，其中所述抗体、其抗原结合部分或药物组合物抑制或减少细胞上的PD-L1和/或TIM-3表达，从而刺激免疫响应或治疗癌症。
还公开了刺激受试者中的免疫响应或治疗受试者的癌症的方法。所述方法包括向所述受试者施用有效量的所公开的分离的抗体或其抗原结合部分或所公开的药物组合物，其中所述抗体、其抗原结合部分或药物组合物诱导或增强PD-1介导的一种或多种细胞因子从细胞的分泌，从而刺激免疫响应或治疗癌症。
在一些方面，通过所述方法治疗的癌症选自肺癌(例如，非小细胞肺癌)、肉瘤、睾丸癌、卵巢癌、胰腺癌、乳腺癌(例如，三阴性乳腺癌)、黑素瘤、头颈癌(例如，鳞状头颈癌)、结肠直肠癌、膀胱癌、子宫内膜癌、前列腺癌、甲状腺癌、肝细胞癌、胃癌、脑癌、淋巴瘤(例如，DL-BCL)、白血病(例如，AML)或肾癌(例如，肾细胞癌，例如，肾透明细胞癌)。
本文公开了增强抗PD-1抗体的一种或多种活性(例如，增强PD-1介导的细胞因子分泌；增强抗PD-1介导的TNFα分泌；增强抗PD-1介导的IL-6从暴露于抗PD-1抗体的细胞的分泌)的方法。所述方法包括与抗PD-1抗体同时或依序，使细胞暴露于所公开的抗体或其抗原结合部分，从而增强抗PD1抗体的一种或多种活性。
还公开了药物组合物，所述药物组合物包含抗PD-1抗体、所公开的抗体或其抗原结合部分和药学上可接受的载体。
还公开了药盒，所述药盒包含同时或依序施用的抗PD-1抗体和所公开的抗体或其抗原结合部分，以及其使用说明书。
本文公开了刺激免疫响应或治疗癌症的所公开方法中的任一者，其中所公开的分离的抗体或其抗原结合部分与一种或多种另外的治疗剂或程序组合施用。第二治疗剂或程序选自由以下组成的组：化学疗法、靶向抗癌疗法、溶瘤药物、细胞毒性剂、基于免疫的疗法、细胞因子、手术程序、放射程序、共刺激分子的活化剂、抑制性分子的抑制剂、疫苗或细胞免疫疗法，或它们的组合。在一些方面，一种或多种另外的治疗剂是PD-1拮抗剂、PD-L1抑制剂、TIM-3抑制剂、LAG-3抑制剂、TIGIT抑制剂、CD112R抑制剂、TAM抑制剂、STING激动剂、4-1BB激动剂、酪氨酸激酶抑制剂、靶向腺苷轴的剂(例如CD39拮抗剂、CD73拮抗剂或A2AR、A2BR或双重A2AR/A2BR拮抗剂)、CCR8拮抗剂、CTLA4拮抗剂、VEG-F抑制剂或它们的组合。在其他方面，一种或多种另外的治疗剂是PD-1拮抗剂。在一些方面，PD-1拮抗剂选自由以下组成的组：PDR001、纳武单抗、派姆单抗、匹地利珠单抗、MEDI0680、REGN2810、TSR-042、PF-06801591和AMP-224。在一些方面，PD-L1抑制剂选自由以下组成的组：FAZ053、阿特珠单抗、阿维鲁单抗、德瓦鲁单抗和BMS-936559。在其他方面，其中所述一种或多种另外的治疗剂选自由以下组成的组：舒尼替尼
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卡博替尼
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阿西替尼
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乐伐替尼
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依维莫司
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贝伐单抗
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依多司他、NKTR-214(CD-122偏向性激动剂)、替伏扎尼
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艾贝司他、伊匹单抗
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曲美木单抗、帕唑帕尼
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索拉非尼
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西罗莫司
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雷莫芦单抗
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尼拉帕尼、萨沃利替尼、沃洛拉尼(vorolanib)(X-82)、瑞格非尼
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多纳非尼(多激酶抑制剂)、卡瑞利珠单抗(SHR-1210)、迪-培萨替莫近(pexastimogene devacirepvec)(JX-594)、雷莫芦单抗
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阿帕替尼(YN968D1)、包封的阿霉素
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替万替尼(ARQ197)、ADI-PEG 20、比美替尼、甲磺酸阿帕替尼、尼达尼布、利瑞鲁单抗、纳武单抗
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派姆单抗
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阿特珠单抗
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阿维单抗
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德瓦鲁单抗
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西米普利单抗-rwlc
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替雷利珠单抗和斯巴达珠单抗。在一些方面，一种或多种另外的治疗剂是TIM-3抑制剂，任选地其中所述TIM-3抑制剂是MGB453或TSR-022。在一些方面，一种或多种另外的治疗剂是LAG-3抑制剂，任选地其中所述LAG-3抑制剂选自由以下组成的组：LAG525、BMS-986016和TSR-033。在一些方面，一种或多种另外的治疗剂是TIGIT抑制剂。在其他方面，一种或多种另外的治疗剂是CD112R抑制剂。在一些方面，一种或多种另外的治疗剂是TAM(Axl、Mer、Tyro)抑制剂。在一些方面，其中一种或多种另外的治疗剂是4-1BB激动剂。在其他方面，一种或多种另外的治疗剂是酪氨酸激酶抑制剂(TKI)。在一些方面，TKI选自伊马替尼(imatinib)、达沙替尼(dasatinib)、尼罗替尼(nilotinib)、博舒替尼(bosutinib)或普纳替尼(ponatinib)。在一些方面，一种或多种另外的剂是靶向腺苷轴的剂。在一些方面，靶向腺苷轴的剂选自CD39拮抗剂、CD73拮抗剂、A2AR拮抗剂、A2BR拮抗剂或双重A2AR/A2BR拮抗剂。在一些方面，一种或多种另外的治疗剂是CD39拮抗剂。CD39拮抗剂的实例包括在US2019/0284295(Surface Oncology,Inc.)(其以引用方式并入本文)中描述的那些。在一些方面，一种或多种另外的治疗剂是CD73拮抗剂。CD73拮抗剂的实例包括小分子CD73抑制剂诸如AB421(Arcus)，结合至CD73的CD73抗体或其抗原结合部分，诸如MEDI9447(Medimmune)、BMS-986179(Bristol Meyers Squibb)，或诸如US2018/0009899(Corvus)(其以引用方式整体并入本文)中所述的那些。在一些方面，一种或多种另外的治疗剂是A2AR拮抗剂、A2BR拮抗剂或双重A2AR/A2BR拮抗剂。A2AR、A2BR和双重A2AR/A2BR拮抗剂的实例包括瑞德南特(prelad enant)/SCH 420814(Merck/Schering,CAS登记号：377727-87-2)，其描述于Hodgson等人，(2009)J Pharmacol Exp Ther 330(1):294-303中并且以引用方式整体并入本文；ST-4206(Leadiant Biosciences)，其描述于美国专利第9,133,197号中并且以引用方式整体并入本文；KW-6356(Kyowa Hakko Kogyo)、妥德南特(Tozadenant)/SYN-115(Acorda)、伊曲茶碱(Istradefylline)/KW-6002(Kyowa HakkoKogyo,CAS登记号：155270-99-8)，其描述于LeWitt等人，(2008)Ann Neurol 63(3):295-302中并且以引用方式整体并入本文；茶碱(theophylline)(CAS登记号：58-55-9)、NIR178(Novartis)；AB928(Arcus Biosciences)、GBV-2034(Globavir)、维巴德南(Vipadenant)(Redox/Juno)、AZD4635/HTL-1071(AstraZeneca/Heptares)，其描述于WO2011/095625中并且以引用方式整体并入本文；CPI-444/V81444(Corvus/Genentech)，其描述于WO 2009/156737中并且以引用方式整体并入本文；PBF509(Palobiofarma/Novartis)，其描述于US8,796,284和WO 2017/025918中并且以引用方式整体并入本文；A2AR拮抗剂，其描述于US8114845、US9029393、US20170015758或US20160129108中，全部以引用方式整体并入本文；和ATL-444、MSX-3、SCH-58261、SCH-412,348、SCH-442,416、VER-6623、VER-6947、VER-7835、CGS-15943或ZM-241,385。在一些方面，一种或多种另外的治疗剂是CCR8拮抗剂。在一些方面，CCR8拮抗剂选自小分子和抗体。在一些方面，一种或多种另外的治疗剂是CTLA4拮抗剂。在一些方面，CTLA4拮抗剂选自由以下组成的组：
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(伊匹单抗或抗体10D1，其描述于PCT公布WO 01/14424中)，曲美木单抗(以前的替西木单抗(ticilimumab)，CP-675,206)，在任何以下公布中描述的单克隆或抗CTLA-4抗体：WO 98/42752；WO 00/37504；美国专利第6,207,156号；Hurwitz等人(1998)Pro.Natl.Acad.Sci.USA 95(17):10067-10071；Camacho等人(2004)J.Clin.Oncology 22(145):antibodies tract No.2505(antibodyCP-675206)；和Mokyr等人(1998)Cancer Res.58:5301-5304。还可使用在WO2013/173223中公开的任何抗CTLA-4抗体。在一些方面，一种或多种另外的治疗剂是VEG-F抑制剂。在一些方面，VEG-F抑制剂选自卡博替尼、帕唑帕尼(paopanib)、贝伐单抗、舒尼替尼、阿西替尼、伦伐替尼(lenvantinib)、索拉非尼、瑞格非尼、普纳替尼、卡博替尼、凡德他尼(vandetanib)、雷莫芦单抗或贝伐单抗。
本文公开了所公开的抗体或其抗原结合部分或所公开的药物组合物用于刺激受试者中的免疫响应或用于治疗受试者的癌症、任选地用于与一种或多种另外的治疗剂或程序组合使用的用途。
还公开了药盒，所述药盒包含所公开的抗体或其抗原结合部分或所公开的药物组合物，以及刺激受试者中的免疫响应或治疗受试者的癌症的使用说明书，任选地具有与一种或多种另外的治疗剂或程序组合的使用说明书。
还公开了药盒，所述药盒包含所公开的抗体或其抗原结合部分，以及检测来自受试者的样品中的IL-27的使用说明书，任选地具有检测受试者的IL-27相关癌症的使用说明书。
定义
除非另有说明，否则如下所示定义权利要求书和说明书中使用的术语。
必须注意的是，除非上下文另有明确规定，否则如说明书和所附权利要求书中所使用的，单数形式“一个/种(a)”、“一个/种(an)”和“所述(the)”包括复数指代物。
如本文所用，“约”将被普通技术人员理解，并且将根据其中使用其的上下文在一定程度上变化。如果所述术语的使用对于普通技术人员来说不清楚，给出其中使用其的上下文，“约”将表示达到特定值的正负10％。
如本文所用，术语“激动剂”是指部分或完全促进、诱导、增加和/或活化本文公开的天然多肽的生物活性的任何分子。合适的激动剂分子具体地包括激动剂抗体或抗体片段、天然多肽的片段或氨基酸序列变体、肽或蛋白质等。在一些方面，以剂量依赖性方式观察到在激动剂存在下的活化。在一些方面，测量的信号(例如，生物活性)比在可比较的条件下利用阴性对照测量的信号高至少约5％、至少约10％、至少约15％、至少约20％、至少约25％、至少约30％、至少约35％、至少约40％、至少约45％、至少约50％、至少约55％、至少约60％、至少约65％、至少约70％、至少约75％、至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％或至少约100％。本文还公开了鉴定适用于本公开方法的激动剂的方法。例如，这些方法包括但不限于结合测定，如酶联免疫吸附测定(ELISA)、FORTE
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系统和放射免疫测定(RIA)。这些测定确定激动剂结合目标多肽(例如受体或配体)的能力，并且因此指示激动剂促进、增加或活化多肽活性的能力。激动剂的功效也可使用功能测定来确定，如激动剂活化或促进多肽功能的能力。例如，功能测定可包括将多肽与候选激动剂分子接触，并测量通常与多肽相关的一种或多种生物活性的可检测变化。激动剂的效力通常由其EC50值(活化50％激动剂响应所需的浓度)来定义。EC50值越低，激动剂的效力越大，并且活化最大生物响应所需的浓度越低。
如本文所用，术语“丙氨酸扫描”是指用于确定特定野生型残基对给定蛋白质或多肽的稳定性或一种或多种功能(例如，结合亲和力)的贡献的技术。所述技术包括用丙氨酸残基取代多肽中的野生型残基，然后评估丙氨酸取代的衍生物或突变多肽的稳定性或一种或多种功能(例如，结合亲和力)，并与野生型多肽进行比较。用丙氨酸取代多肽中的野生型残基的技术是本领域已知的。
术语“改善”是指治疗疾病状态(例如，癌症)中的任何治疗上有益的结果，包括其预防、严重度或进展的减轻、缓解或治愈。
如本文所用，术语“氨基酸”指天然存在的和合成的氨基酸，以及以类似于天然存在的氨基酸的方式起作用的氨基酸类似物和氨基酸模拟物。天然存在的氨基酸是那些由遗传密码编码的氨基酸，以及那些后来被修饰的氨基酸，例如羟脯氨酸、γ-羧基谷氨酸和O-磷酸丝氨酸。氨基酸类似物是指具有与天然存在的氨基酸相同的基本化学结构(即与氢、羧基、氨基和R基团结合的碳)的化合物，例如高丝氨酸、正亮氨酸、甲硫氨酸亚砜、甲硫氨酸甲基锍。所述类似物具有修饰的R基团(例如，正亮氨酸)或修饰的肽骨架，但保留了与天然存在的氨基酸相同的基本化学结构。氨基酸模拟物是指其结构不同于氨基酸的一般化学结构，但其功能与天然存在的氨基酸相似的化合物。
氨基酸在本文中可通过它们通常已知的三个字母符号或由IUPAC-IUB生化命名委员会推荐的一个字母符号来指代。同样，核苷酸也可用它们普遍接受的单字母代码来指代。
如本文所用，“氨基酸取代”是指用第二不同的“替代”氨基酸残基替代预定氨基酸序列(起始多肽的氨基酸序列)中的至少一个现存氨基酸残基。“氨基酸插入”是指将至少一个另外的氨基酸掺入预定的氨基酸序列中。虽然插入通常由一个或两个氨基酸残基的插入组成，但也可进行更大的“肽插入”，例如插入约3至约5个或甚至高达约10、15或20个氨基酸残基。如上所公开的，一个或多个插入的残基可以是天然存在的或非天然存在的。“氨基酸缺失”是指从预定的氨基酸序列中去除至少一个氨基酸残基。
如本文所用，术语“量”或“水平”在最广泛的意义上使用，并且是指物质(例如，代谢物、小分子、蛋白质、mRNA、标志物)的量、浓度或丰度。当提到代谢物或小分子(例如药物)时，术语“量”、“水平”和“浓度”通常可互换使用，并且通常指生物样品中的可检测量。“升高的水平”或“提高的水平”是指样品中物质的数量、浓度或丰度相对于对照样品(诸如来自未患有疾病或病症(例如，癌症)的一个或多个个体)或内部对照的增加。在一些方面，样品中物质(例如，药物)的升高的水平是指相对于对照样品中物质的量，物质的量增加约5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％，如通过本领域已知的技术(例如，HPLC)所测定的。“降低的水平”是指个体中物质(例如，药物)的数量、浓度或丰度相对于对照(诸如来自未患有疾病或病症(例如，癌症)的一个或多个个体)或内部对照的降低。在一些方面，降低的水平很少或为不可检测的量、浓度或丰度。在一些方面，样品中物质(例如，药物)的降低的水平是指相对于对照样品中物质的量，物质的量减少约5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％，如通过本领域已知的技术(例如，HPLC)所测定的。
当提及蛋白质、mRNA或标志物(诸如本文所述的那些)时，术语“表达的水平”或“表达水平”通常可互换使用，并且通常指生物样品中蛋白质、mRNA或标志物的可检测量。在一些方面，蛋白质、mRNA或标志物的可检测量或可检测水平与对剂(诸如本文所述的那些)的响应可能性相关。“表达”通常是指借以将基因中包含的信息转化为细胞中存在并起作用的结构(例如，蛋白质标志物，诸如PD-L1)的过程。因此，如本文所用，“表达”可指转录成多核苷酸、翻译成多肽，或者甚至多核苷酸和/或多肽修饰(例如，多肽的翻译后修饰)。转录的多核苷酸、翻译的多肽、或多核苷酸和/或多肽修饰(例如，多肽的翻译后修饰)的片段也应被认为是表达的，无论它们来源于由选择性剪接或降解的转录物产生的转录物，还是来源于多肽的翻译后加工(例如通过蛋白水解)。“表达的基因”包括转录成多核苷酸(作为mRNA)的基因，然后翻译成多肽的那些基因，也包括转录成核糖核酸但不翻译成多肽(例如，转运RNA和核糖体RNA)的那些基因。“升高的表达”、“升高的表达水平”或“升高的水平”是指样品中的物质相对于对照样品(诸如未患疾病或病症(例如，癌症)的一个或多个个体)或内部对照的表达增加或水平升高。在一些方面，样品中物质(例如，蛋白质标志物，诸如PD-L1)的升高的表达是指相对于对照样品中物质的量，物质的量增加约5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％，如通过本领域已知的技术(例如，FACS)测定的。“减少的表达”、“降低的表达水平”或“降低的水平”是指个体中的物质(例如，蛋白质标志物)相对于对照(诸如未患疾病或病症(例如，癌症)的一个或多个个体)或内部对照的减少的表达或降低的水平。在一些方面，减少的表达是很少或没有表达。在一些方面，样品中物质(例如，蛋白质标志物)的减少的表达是指相对于对照样品中物质的量，物质的量减少了约5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％，如通过本领域已知的技术(例如，FACS)所测定的。
如本文所用，术语“血管生成”或“新血管形成”是指新血管从先前存在的血管发育的过程(Varner等人,(1999)Angiogen.3:53-60；Mousa等人,(2000)Angiogen.Stim.Inhib.35:42-44；Kim等人,(2000)Amer.J.Path.156:1345-1362；Kim等人,(2000)J.Biol.Chem.275:33920-33928；Kumar等人(2000)Angiogenesis:From Molecularto Integrative Pharm.169-180)。来自先前存在的血管或循环内皮干细胞的内皮细胞(Takahashi等人,(1995)Nat.Med.5:434-438；Isner等人,(1999)J.Clin.Invest.103:1231-1236)响应于生长因子或激素信号或缺氧或缺血性疾患变得活化以迁移、增殖并分化成具有腔的结构，从而形成新血管。在局部缺血期间，如在癌症中发生的，增加氧合和营养递送的需求显然引起受影响组织分泌血管生成因子；这些因子刺激新血管形成。其他几个术语与血管生成有关。
如本文所用，术语“拮抗剂”是指靶分子的抑制剂并且可在本文中与术语“抑制剂”同义使用。如本文所用，术语“拮抗剂”是指部分或完全阻断、抑制或中和本文所公开的天然多肽的生物活性的任何分子。合适的拮抗剂分子具体包括拮抗剂抗体或抗体片段、天然多肽的片段或氨基酸序列变体、肽或蛋白质等。在一些方面，以剂量依赖性方式观察到在拮抗剂存在下的抑制。在一些方面，测量的信号(例如，生物活性)比在可比较的条件下利用阴性对照测量的信号低至少约5％、至少约10％、至少约15％、至少约20％、至少约25％、至少约30％、至少约35％、至少约40％、至少约45％、至少约50％、至少约55％、至少约60％、至少约65％、至少约70％、至少约75％、至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％或至少约100％。本文还公开了鉴定适用于本公开方法的拮抗剂的方法。例如，这些方法包括但不限于结合测定，如酶联免疫吸附测定(ELISA)、
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系统、放射免疫测定(RIA)、MesoScale Discovery测定(例如Meso Scale Discovery电化学发光(MSD-ECL)和基于珠粒的
Figure GDA0003745251250000172
测定。这些测定确定拮抗剂结合目标多肽(例如受体或配体)的能力，并且因此指示拮抗剂抑制、中和或阻断多肽活性的能力。拮抗剂抗体的功效还可使用功能测定(诸如拮抗剂抑制多肽或激动剂功能的能力)来测定。例如，功能测定可包括将多肽与候选拮抗剂分子接触，并测量通常与多肽相关的一种或多种生物活性的可检测变化。拮抗剂的效力通常由其IC50值(抑制50％激动剂响应所需的浓度)来定义。IC50值越低，拮抗剂的效力越大，并且抑制最大生物响应所需的浓度越低。
如本文所用，短语“拮抗人IL-27的抗体或其抗原结合部分”是指拮抗人IL-27的至少一种本领域公认的活性(例如，IL-27生物活性和/或通过IL-27信号传导介导的一种或多种下游途径或其他IL-27介导的功能)，例如涉及人IL-27活性减少(或降低)至少5％、10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％或更多。IL-27生物活性和/或通过IL-27信号传导介导的一种或多种下游途径或其他IL-27介导的功能的另外实例在下文和本文其他地方进行了更详细的描述。
如本文所用，术语“抗IL-27拮抗剂抗体”(可互换地称为“抗IL-27抗体”)是指特异性地结合至IL-27并抑制IL-27生物活性和/或通过IL-27信号传导介导的一种或多种下游途径或其他IL-27介导的功能的抗体。抗IL-27拮抗剂抗体包括阻断、拮抗、阻抑、抑制或降低IL-27生物活性(例如，配体结合、酶活性)(包括通过IL-27信号传导或功能介导的下游途径，诸如受体结合和/或引发对IL-27或其代谢物的细胞响应)的抗体。在一些方面，本公开提供的抗IL-27拮抗剂抗体结合至人IL-27并预防、阻断或抑制人IL-27与其同源或正常受体(例如，IL-27受体)或一个或多个受体亚基(例如gp130和/或IL-27Rα(也称为WSX1/TCCR))的结合。在一些方面，抗IL-27拮抗剂抗体预防、阻断或抑制人IL-27与gp130的结合。在一些方面，抗IL-27拮抗剂抗体预防、阻断或抑制人IL-27与IL-27Rα的结合。在一些方面，抗IL-27拮抗剂抗体预防、阻断或抑制IL-27单体的二聚化。在一些方面，抗IL-27抗体不特异性地结合至EBI3单体。在一些方面，抗IL-27抗体特异性地结合至IL-27p28单体。在一些实施方案中，抗IL-27抗体特异性地结合至包含P28的非连续表位，但是不结合至EBI3单体。在一些方面，抗IL-27抗体抑制或减少细胞中的STAT1和/或STAT3磷酸化。在一些方面，抗IL-27抗体抑制或减轻细胞中对CD161表达的抑制(例如，改善或缓解细胞中IL-27介导的对CD161表达的抑制)。在一些方面，抗IL-27抗体抑制或减少细胞中的PD-L1和/或TIM-3表达。在一些方面，抗IL-27诱导或增强PD-1介导的一种或多种细胞因子从细胞的分泌。在一些方面，抗IL-27拮抗剂抗体结合至人IL-27并刺激或增强抗肿瘤响应。在一些方面，抗IL-27拮抗剂抗体以15nM或更小的亲和力结合至人IL-27。在一些方面，抗IL-27拮抗剂抗体结合至人IL-27，并且包含野生型或突变型IgG1重链恒定区或野生型或突变型IgG4重链恒定区。本文提供了抗IL-27拮抗剂抗体的实例。
如本文所用，术语“抗体”是指包含两个轻链多肽和两个重链多肽的完整抗体。完整抗体包括不同的抗体同种型，包括IgM、IgG、IgA、IgD和IgE抗体。术语“抗体”包括多克隆抗体、单克隆抗体、嵌合(chimerized)或嵌合(chimeric)抗体、人源化抗体、灵长类化抗体(primatized antibody)、去免疫化抗体和完全人抗体。抗体可在多种物种中的任何一种中制备或源自多种物种中的任一种，所述物种是例如哺乳动物诸如人、非人灵长类动物(例如，猩猩、狒狒或黑猩猩)、马、牛、猪、绵羊、山羊、狗、猫、兔、豚鼠、沙鼠、仓鼠、大鼠和小鼠。抗体可以是纯化的或重组的抗体。如本文所用，术语“抗体片段”、“抗原结合片段”或类似术语是指保留与靶抗原(例如，IL-27)结合并抑制所述靶抗原活性的能力的抗体片段。此类片段包括例如单链抗体、单链Fv片段(scFv)、Fd片段、Fab片段、Fab’片段或F(ab’)2片段。scFv片段是单个多肽链，其包括scFv所源自的抗体的重链和轻链可变区两者。另外，抗体的定义中还包括胞内抗体、微型抗体、三抗体(triabody)和双抗体(diabody)，所述抗体适用于本文所述的方法。参见，例如，Todorovska等人，(2001)J.Immunol.Methods 248(1):47-66；Hudson和Kortt,(1999)J.Immunol.Methods231(1):177-189；Poljak,(1994)Structure 2(12):1121-1123；Rondon和Marasco,(1997)Annu.Rev.Microbiol.51:257-283，所述文献的每一篇的公开内容以引用方式整体并入本文。
如本文所用，术语“抗体片段”还包括，例如，单结构域抗体，诸如骆驼化单结构域抗体。参见，例如，Muyldermans等人，(2001)Trends Biochem.Sci.26:230-235；Nuttall等人，(2000)Curr.Pharm.Biotech.1:253-263；Reichmann等人，(1999)J.Immunol.Meth.231:25-38；PCT申请公布第WO 94/04678号和第WO 94/25591号；以及美国专利第6,005,079号，其全部以引用方式整体并入本文。在一些方面，本公开提供了包含两个具有修饰的VH结构域(使得能形成单结构域抗体)的单结构域抗体。
在一些方面，抗原结合片段包括重链多肽的可变区和轻链多肽的可变区。在一些方面，本文所述的抗原结合片段包含抗体的轻链和重链多肽的CDR。
术语“抗原呈递细胞”或“APC”是在其表面显示与MHC复合的外来抗原的细胞。T细胞通过T细胞受体(TCR)识别这种复合物。APC细胞的实例包括但不限于：B细胞、树突细胞(DC)、外周血单核细胞(PBMC)、单核细胞(诸如THP-1)、B淋巴母细胞样细胞(诸如C1R.A2,1518B-LCL)和单核细胞来源的树突细胞(DC)。一些APC通过吞噬作用或受体介导的内吞作用将抗原内化。
术语“抗原呈递”是指APC借以捕获抗原并使其能够例如作为MHC-I和/或MHC-II缀合物的组分被T细胞识别的过程。
如本文所用，术语“细胞凋亡”是指发生在多细胞生物(例如人)中的程序性细胞死亡过程。导致细胞凋亡的受高度调节的生化和分子事件可导致对细胞的可观察到的和特有的形态学变化，包括膜泡化、细胞体积皱缩、染色体DNA凝缩和断裂以及mRNA衰变。鉴定经历细胞凋亡的细胞(包括T细胞)的常用方法是将细胞暴露于缀合有荧光团的蛋白(膜联蛋白V)。膜联蛋白V通常用于通过其与质膜外小叶上的磷脂酰丝氨酸结合的能力来检测凋亡细胞，与质膜外小叶上的磷脂酰丝氨酸结合是细胞正在经历细胞凋亡过程的早期指标。
如本文所用，术语“B细胞”(或者“B淋巴细胞”)是指淋巴细胞亚型的一种类型的白细胞。B细胞通过分泌抗体在适应性免疫系统的体液免疫成分中发挥作用。B细胞也呈现抗原并分泌细胞因子。B细胞，与另外两类淋巴细胞(T细胞和天然杀伤细胞)不同，在它们的细胞膜上表达B细胞受体(BCR)。BCR允许B细胞结合至特定抗原，其将启动针对所述抗原的抗体响应。
如本文所用，术语“结合至固定的IL-27”是指本公开的抗体与IL-27(例如，在细胞表面表达的或附着于固体支持物的IL-27)结合的能力。
如本文所用，术语“双特异性”或“双功能抗体”是指具有两个不同重/轻链对和两个不同结合位点的人工杂交抗体。双特异性抗体可通过包括杂交瘤的融合或Fab’片段的连接在内的多种方法产生。参见，例如，Songsivilai&Lachmann,(1990)Clin.Exp.Immunol.79:315-321；Kostelny等人，(1992)J.Immunol.148:1547-1553。
传统上，双特异性抗体的重组产生是基于两个免疫球蛋白重链/轻链对的共表达，其中两个重链/轻链对具有不同的特异性(Milstein和Cuello,(1983)Nature 305:537-539)。可将具有所需结合特异性(抗体-抗原结合性位点)的抗体可变结构域与免疫球蛋白恒定结构域序列融合。优选将重链可变区与免疫球蛋白重链恒定区(包括铰链区、CH2区和CH3区的至少一部分)融合。关于目前已知的用于产生双特异性抗体的说明性方法的进一步细节，参见例如Suresh等人，(1986)Methods Enzymol.121:210；PCT公布第WO 96/27011号；Brennan等人，(1985)Science 229:81；Shalaby等人，J.Exp.Med.(1992)175:217-225；Kostelny等人，(1992)J.Immunol.148(5):1547-1553；Hollinger等人，(1993)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 90:6444-6448；Gruber等人，(1994)J.Immunol.152:5368以及Tutt等人，(1991)J.Immunol.147:60。双特异性抗体还包括交联或异源缀合的抗体。异源缀合的抗体可使用任何方便的交联方法制备。合适的交联剂是本领域公知的，并与许多交联技术一起公开于美国专利第4,676,980号中。
还描述了直接从重组细胞培养物中制备和分离双特异性抗体片段的各种技术。例如，使用亮氨酸拉链已经产生了双特异性抗体。参见，例如，Kostelny等人(1992)J Immunol148(5):1547-1553。可通过基因融合将来自Fos和Jun蛋白的亮氨酸拉链肽与两种不同抗体的Fab’部分连接。可在铰链区将抗体同二聚体还原形成单体，然后再氧化形成抗体异二聚体。所述方法也可用于生产抗体同二聚体。Hollinger等人(1993)Proc Natl Acad Sci USA90:6444-6448描述的“双抗体”技术为制备双特异性抗体片段提供了替代机制。所述片段包含通过接头与轻链可变结构域(VL)连接的重链可变结构域(VH)，所述接头太短而不能使同一链上的两个结构域之间配对。因此，一个片段的VH和VL结构域被迫与另一个片段的互补VL和VH结构域配对，从而形成两个抗原结合位点。还报道了用于通过使用单链Fv(scFv)二聚体制备双特异性抗体片段的另一种策略。参见，例如，Gruber等人(1994)J Immunol 152:5368。或者，抗体可以是如例如Zapata等人(1995)Protein Eng.8(10):1057-1062中所述的“线性抗体”。简言之，这些抗体包含一对串联Fd区段(VH-CH1-VH-CH1)，它们形成一对抗原结合区。线性抗体可以是双特异性的或单特异性的。
在例如Tutt等人(1991)J Immunol 147:60中设想和描述具有两个以上效价的抗体(例如，三特异性抗体)。
本公开还包括多特异性抗体的变体形式，诸如Wu等人(2007)Nat Biotechnol 25(11):1290-1297中描述的双重可变结构域免疫球蛋白(DVD-Ig)分子。DVD-Ig分子被设计成使得来自两种不同亲本抗体的两个不同轻链可变结构域(VL)直接串联连接或通过重组DNA技术经由短接头连接，随后是轻链恒定结构域。类似地，重链包含两个串联连接的不同重链可变结构域(VH)，随后是恒定区CH1和Fc区。从两种亲本抗体制备DVD-Ig分子的方法在例如PCT公布第WO 08/024188号和第WO 07/024715号中有进一步描述。在一些方面，双特异性抗体是Fab串联免疫球蛋白，其中具有第二特异性的轻链可变区与完整抗体的重链可变区融合。此类抗体描述于例如国际专利申请公布第WO 2015/103072号中。
如本文所用，“癌症抗原”或“肿瘤抗原”是指(i)肿瘤特异性抗原，(ii)肿瘤相关抗原，(iii)表达肿瘤特异性抗原的细胞，(iv)表达肿瘤相关抗原的细胞，(v)肿瘤上的胚胎抗原，(vi)自体肿瘤细胞，(vii)肿瘤特异性膜抗原，(viii)肿瘤相关膜抗原，(ix)生长因子受体，(x)生长因子配体，和(xi)与癌症相关的任何其他类型的抗原或抗原呈递细胞或材料。
如本文所用，术语“癌症特异性免疫响应”是指由肿瘤、癌细胞或癌症抗原的存在诱导的免疫响应。在某些方面，响应包括癌症抗原特异性淋巴细胞的增殖。在某些方面，响应包括抗体和T细胞受体的表达和上调以及淋巴因子、趋化因子和细胞因子的形成和释放。先天免疫系统和获得性免疫系统相互作用，以启动针对肿瘤、癌细胞或癌症抗原的抗原响应。在某些方面，癌症特异性免疫响应是T细胞响应。
术语“癌”是本领域承认的，指上皮或内分泌组织的恶性肿瘤，包括呼吸系统癌、胃肠系统癌、泌尿生殖系统癌、睾丸癌、乳腺癌、前列腺癌、内分泌系统癌和黑素瘤。本文所述的抗IL-27抗体可用于治疗患有、怀疑患有任何类型的癌症(包括肾癌或黑素瘤)或任何病毒性疾病或可能有发生所述癌症或病毒性疾病的高风险的患者。示例性癌包括由子宫颈、肺、前列腺、乳房、头和颈、结肠和卵巢的组织形成的那些癌。该术语还包括癌肉瘤，其包括由癌瘤性组织和肉瘤组织组成的恶性肿瘤。“腺癌”是指源自腺组织或其中肿瘤细胞形成可识别的腺体结构的癌。
如本文所用，术语“CD112R”是指脊髓灰质炎病毒受体样蛋白的成员，并且是人T细胞的共抑制受体。CD112R是主要由T细胞和NK细胞表达的抑制性受体并且与活化受体CD226竞争CD112结合。CD112与CD112R的相互作用比与CD226的相互作用具有更高亲和力，并且由此有效地调控CD226介导的细胞活化。阻断与CD112相互作用的抗CD112R拮抗剂限制直接在CD112R下游的抑制性信号传导，而同时通过增加CD226与CD112相互作用来促进更大的免疫细胞活化。如本文所用，术语“CD112R抑制剂”是指破坏、阻断或抑制CD112R的生物功能或活性的剂。
如本文所用，术语“CD137”(或者“4-1BB”)是指肿瘤坏死因子(TNF)受体超家族的成员。4-1BB是共刺激免疫检查点分子，主要针对活化的T细胞。CD137的交联可增强T细胞增殖、IL-2分泌、存活和溶细胞活性。如本文所用，术语“4-1BB激动剂”是指刺激、诱导或增加4-1BB的一种或多种功能的剂。示例性4-1BB激动剂是乌托鲁单抗(PF-05082566)，它是靶向此4-1BB以刺激T细胞的完全人IgG2单克隆抗体。
如本文所用，术语“CD161”(或者称为杀伤细胞凝集素样受体亚家族B，成员1(KLRB1)；NK1.1或NKR-P1A)是指C型凝集素超家族的成员。CD161是T细胞的标志物，并且对于许多不同的癌症类型，CD161表达一直与T细胞浸润到肿瘤微环境中相关。CD161在Fergusson等人,(2014)Cell Reports 9(3):1075-1088中进一步描述，所述文献以引用的方式整体并入本文。
如本文所用，术语“IL-27”或“白介素27”是指IL-27细胞因子。IL-27与IL-6/IL-12细胞因子家族有关，并且是包含称为爱泼斯坦-巴尔病毒诱导基因3(EBI3；也称为IL-27亚基β和IL-27B)的第一亚基和称为IL-27p28(也称为IL30、IL-27亚基α和IL-27A)的第二亚基的异二聚体细胞因子。IL-27主要由活化的抗原呈递细胞(包括单核细胞、内皮细胞和树突状细胞)合成(Jankowski等人(2010)Arch Immunol.Ther.Exp.58:417-425；Diakowski等人(2013)Adv.Clin.Exp.Med.(2013)22(5):683-691)。尽管IL-27可具有促炎作用，但许多研究表明IL-27作为免疫抑制剂的重要作用(Shimizu等人(2006)J.Immunol.176:7317-7324；Hisada等人(2004)Cancer Res.64:1152-1156；Diakowski(2013)同上)。尽管最初将IL-27描述为促进Th1响应启动的因素，但后来发现IL-27通过限制Th1响应、抑制Th2和Th17细胞分化以及调控Tr1和其他T调控性细胞群体的发育而起主要的T细胞阻抑功能(Dietrich等人(2014)J.Immunol.192:5382-5389)。除了其作为免疫调控剂的作用外，IL-27还调控血管生成、造血作用和破骨细胞生成(同上)。
IL-27通过异二聚体I型细胞因子受体(IL-27受体或IL-27R)发出信号，所述异二聚体I型细胞因子受体包含称为WSX1(也称为IL-27受体亚基α、IL-27RA、T细胞细胞因子受体1型(TCCR)和细胞因子受体样1(CRL1))的第一亚基和称为gp130(也称为白介素-6信号转导子(IL6ST)、白介素-6受体亚基β(IL-6RB)和制瘤素M受体)的第二亚基。gp130还是IL-6家族细胞因子的受体亚基(Liu等人(2008)Scan.J.Immunol.68:22-299,Diakowski(2013)同上)。通过IL-27R进行的IL-27信号传导活化多个信号传导级联，包括JAK-STAT和p38 MAPK途径。
还认为EBI3具有独立于p28或IL-27异二聚体的生物功能。例如，EBI3还与p35相互作用以形成异二聚体细胞因子IL-35(Yoshida等人(2015)Annu.Rev Immunol.33:417-43)，并且已经显示在某些细胞类型中选择性地过表达而没有p28或IL-27表达的相应增加(Larousserie等人(2005)Am.J.Pathol.166(4):1217-28)。
示例性人EBI3蛋白的氨基酸序列提供于SEQ ID NO:1(NCBI参考序列：NP_005746.2；N-mtpqlllalvlwascppcsgrkgppaaltlprvqcrasrypiavdcswtlppapnstspvsfiatyrlgmaarghswpclqqtptstsctitdvqlfsmapyvlnvtavhpwgssssfvpfitehiikpdppegvrlsplaerqlqvqweppgswpfpeifslkywirykrqgaarfhrvgpieatsfilravrpraryyvqvaaqdltdygelsdwslpatatmslgk-C)中。示例性人p28蛋白的氨基酸序列提供于SEQ ID NO:2(NCBI参考序列：NP_663634.2；N-mgqtagdlgwrlsllllplllvqagvwgfprppgrpqlslqelrreftvslhlarkllsevrgqahrfaeshlpgvnlyllplgeqlpdvsltfqawrrlsdperlcfisttlqpfhallgglgtqgrwtnmermqlwamrldlrdlqrhlrfqvlaagfnlpeeeeeeeeeeeeerkgllpgalgsalqgpaqvswpqllstyrllhslelvlsravrellllskaghsvwplgfptlspqp-C)中。示例性人WSX1蛋白的氨基酸序列提供于SEQ IDNO:3(NCBI参考序列：NP_004834.1；N-mrggrgapfwlwplpklallpllwvlfqrtrpqgsagplqcygvgplgdlncsweplgdlgapselhlqsqkyrsnktqtvavaagrswvaipreqltmsdkllvwgtkagqplwppvfvnletqmkpnaprlgpdvdfseddpleatvhwapptwpshkvlicqfhyrrcqeaawtllepelktipltpveiqdlelatgykvygrcrmekeedlwgewspilsfqtppsapkdvwvsgnlcgtpggeeplllwkapgpcvqvsykvwfwvggrelspegitcccslipsgaewarvsavnatswepltnlslvcldsasaprsvavssiagstellvtwqpgpgeplehvvdwardgdpleklnwvrlppgnlsallpgnftvgvpyritvtavsasglasassvwgfreelaplvgptlwrlqdappgtpaiawgevprhqlrghlthytlcaqsgtspsvcmnvsgntqsvtlpdlpwgpcelwvtastiagqgppgpilrlhlpdntlrwkvlpgilflwglfllgcglslatsgrcyhlrhkvlprwvwekvpdpansssgqphmeqvpeaqplgdlpileveemepppvmessqpaqatapldsgyekhflptpeelgllgpprpqvla-C)中。示例性人gp130蛋白的氨基酸序列提供于SEQ ID NO:4(NCBI参考序列：NP_002175.2；N-mltlqtwlvqalfiflttestgelldpcgyispespvvqlhsnftavcvlkekcmdyfhvnanyivwktnhftipkeqytiinrtassvtftdiaslniqltcniltfgqleqnvygitiisglppekpknlscivnegkkmrcewdggrethletnftlksewathkfadckakrdtptsctvdystvyfvnievwveaenalgkvtsdhinfdpvykvkpnpphnlsvinseelssilkltwtnpsiksviilkyniqyrtkdastwsqippedtastrssftvqdlkpfteyvfrircmkedgkgywsdwseeasgityedrpskapsfwykidpshtqgyrtvqlvwktlppfeangkildyevtltrwkshlqnytvnatkltvnltndrylatltvrnlvgksdaavltipacdfqathpvmdlkafpkdnmlwvewttpresvkkyilewcvlsdkapcitdwqqedgtvhrtylrgnlaeskcylitvtpvyadgpgspesikaylkqappskgptvrtkkvgkneavlewdqlpvdvqngfirnytifyrtiignetavnvdsshteytlssltsdtlymvrmaaytdeggkdgpeftfttpkfaqgeieaivvpvclafllttllgvlfcfnkrdlikkhiwpnvpdpskshiaqwsphtpprhnfnskdqmysdgnftdvsvveieandkkpfpedlksldlfkkekinteghssgiggsscmsssrpsisssdenessqntsstvqystvvhsgyrhqvpsvqvfsrsestqplldseerpedlqlvdhvdggdgilprqqyfkqncsqhesspdishferskqvssvneedfvrlkqqisdhisqscgsgqmkmfqevsaadafgpgtegqverfetvgmeaatdegmpksylpqtvrqggympq-C)中。
如本文所用，术语“竞争”，当在竞争对相同表位的结合的抗原结合蛋白(例如，免疫球蛋白、抗体或其抗原结合片段)的上下文中使用时，是指通过测定(例如，竞争性结合测定；交叉阻断测定)确定的抗原结合蛋白之间的相互作用，其中测试抗原结合蛋白(例如，测试抗体)抑制(例如，减少或阻断)参考抗原结合蛋白(例如，参考抗体)与共同抗原(例如，IL-27或其片段)的特异性结合。
“源自”指定多肽或蛋白质的多肽或氨基酸序列是指多肽的来源。优选地，源自特定序列的多肽或氨基酸序列具有与该序列或其部分(其中所述部分由至少10-20个氨基酸，优选至少20-30个氨基酸，更优选至少30-50个氨基酸组成)基本同一，或者另外地可被本领域普通技术人员识别为源自该序列的氨基酸序列。源自另一种肽的多肽相对于起始多肽可具有一个或多个突变，例如，已被另一种氨基酸残基取代或者已具有一个或多个氨基酸残基插入或缺失的一个或多个氨基酸残基。
多肽可包含非天然存在的氨基酸序列。此类变体必须与起始分子具有小于100％的序列同一性或相似性。在某些方面，变体将具有例如在变体分子的长度上与起始多肽的氨基酸序列具有约75％至小于100％，更优选约80％至小于100％，更优选约85％至小于100％，更优选约90％至小于100％(例如，91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％)，最优选约95％至小于100％的氨基酸序列同一性或相似性的氨基酸序列。
在某些方面，本公开的抗体由核苷酸序列编码。本发明的核苷酸序列可用于多种应用，包括克隆、基因疗法、蛋白质表达和纯化、突变引入、有此需要的宿主的DNA疫苗接种、抗体生成(对于，例如，被动免疫)、PCR、引物和探针生成等。
本领域普通技术人员还将理解，适用于本文公开的方法的抗体可以被改变，使得它们在序列上不同于它们所源自的天然存在的或天然的序列，同时保留天然序列的所需活性。例如，可进行导致“非必需”氨基酸残基处的保守取代或改变的核苷酸或氨基酸取代。可通过标准技术(诸如定点诱变和PCR介导的诱变)引入突变。
适用于本文公开的方法的抗体可在一个或多个氨基酸残基处，例如在必需或非必需氨基酸残基处包含保守氨基酸取代。“保守氨基酸取代”是其中氨基酸残基被具有相似侧链的氨基酸残基取代的氨基酸取代。本领域已经定义了具有相似侧链的氨基酸残基的家族，包括碱性侧链(例如，赖氨酸、精氨酸、组氨酸)、酸性侧链(例如，天冬氨酸、谷氨酸)、不带电荷的极性侧链(例如，甘氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、丝氨酸、苏氨酸、酪氨酸、半胱氨酸)、非极性侧链(例如，丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、甲硫氨酸、色氨酸)、β-支链侧链(例如，苏氨酸、缬氨酸、异亮氨酸)和芳香族侧链(例如，酪氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、组氨酸)。因此，结合多肽中的非必需氨基酸残基优选被来自相同侧链家族的另一种氨基酸残基替代。在某些方面，一段氨基酸可被结构相似的段替代，所述段在顺序和/或侧链家族成员的组成上不同。或者，在某些方面，可沿着编码序列的全部或部分随机引入突变，例如通过饱和诱变，并且可将所得的突变体掺入本发明的结合多肽中，并筛选它们与所需靶标结合的能力。
如本文所用，术语抗原“交叉呈递”是指通过APC上的MHC I类和II类分子向T细胞呈递外源蛋白抗原。
如本文所用，术语“交叉反应”是指本公开的抗体结合至来自不同物种的IL-27的能力。例如，结合人IL-27的本公开的抗体也可结合另一物种的IL-27。如本文所用，通过在结合测定(例如，SPR、ELISA)中检测与纯化的抗原的特异性反应性，或通过检测与生理表达IL-27的细胞的结合或以其他方式与所述细胞的功能性相互作用来测量交叉反应性。用于确定交叉反应性的方法包括本文所述的标准结合测定，例如，通过BiacoreTM表面等离子体共振(SPR)分析，使用BiacoreTM 2000SPR仪(Biacore AB,Uppsala,Sweden)或流式细胞技术。
如本文所用，术语“细胞毒性T淋巴细胞(CTL)响应”是指由细胞毒性T细胞诱导的免疫响应。CTL响应主要由CD8+ T细胞介导。
如本文所用，术语“树突细胞”或“DC”是指为骨髓(BM)源性白细胞，并且为最强效的抗原呈递细胞类型的抗原呈递细胞的类型。DC捕获并处理抗原，将蛋白质转化为肽，呈现在T细胞所识别的主要组织相容性复合体(MHC)分子上。DC是异质性的，例如髓样和浆细胞样DC；尽管所有DC都能够摄取抗原、处理抗原并呈递给初始T细胞，但DC亚型具有不同的标志物，并在定位、迁移途径、详细的免疫功能以及对感染或炎症刺激(针对其生成)的依赖性方面有所不同。在适应性免疫响应的发展过程中，DC的表型和功能在启动耐受性、记忆和极化的T-辅助细胞1(Th1)、Th2和Th17分化中起作用。
如本文所用，术语“树突细胞活化”是指从未成熟树突细胞向成熟树突细胞的转变；并且活化的树突细胞包括成熟的树突细胞和转变过程中的树突细胞，其中诱导共刺激信号的CD80和CD86的表达被活化刺激升高。成熟的人树突细胞是对CD40、CD80、CD86和HLA-II类(例如，HLA-DR)的表达呈阳性的细胞。例如，基于选自由CD80和CD86组成的组的标志物，可以将未成熟树突细胞与成熟树突细胞区分开来。未成熟树突细胞对这些标志物呈弱阳性，优选为阴性，而成熟树突细胞呈阳性。成熟树突细胞的区别由本领域技术人员常规地进行，并且上述各自的标志物和测量其表达的方法也是本领域技术人员公知的。
如本文所用，术语“EC50”是指抗体或其抗原结合部分在体外或体内测定中诱导为最大响应的50％(即，在最大响应与基线之间的一半处)的响应的浓度。
如本文所用，术语“有效剂量(effective dose)”或“有效剂量(effectivedosage)”被定义为足以实现或至少部分实现所需效果的量。术语“治疗有效剂量”被定义为足以治愈或至少部分阻止已经患有疾病的患者的疾病及其并发症的量。对于这种用途的有效的量取决于所治疗病症的严重程度和患者自身免疫系统的一般状态。
如本文所用，术语“表位”或“抗原决定簇”是指抗原上免疫球蛋白或抗体所特异性结合的位点。术语“表位作图”是指鉴定抗体或其抗原结合片段在其靶蛋白抗原上的结合位点或表位的过程或方法。本文提供了表位作图方法和技术。表位既可由连续氨基酸形成，也可由通过蛋白质的三级折叠而紧靠的非连续氨基酸形成。由连续氨基酸形成的表位在暴露于变性溶剂时通常得以保留，然而由三级折叠形成的表位在用变性溶剂处理时通常丢失。表位通常以独特的空间构象包括至少3个、4个、5个、6个、7个、8个、9个、10个、11个、12个、13个、14个或15个氨基酸。用于确定给定抗体结合哪些表位的方法(即，表位作图)在本领域中是公知的，包括例如免疫印迹和免疫沉淀测定，其中测试IL-27的重叠或连续肽与给定抗IL-27抗体的反应性。确定表位空间构象的方法包括本领域的技术和本文所述的技术，例如，x射线晶体学和二维核磁共振(参见，例如，Epitope Mapping Protocols in Methodsin Molecular Biology,第66卷，G.E.Morris，编辑(1996))。
本公开还包括与IL-27上的表位结合的抗体，所述表位包含本文所述的特定抗体所识别的表位的全部或部分(例如，相同或重叠的区域或所述区域之间或跨越所述区域的区域)。
本公开还包括结合相同表位的抗体和/或与本文所述抗体竞争结合至人IL-27的抗体。识别相同表位或竞争结合的抗体可使用常规技术来进行鉴定。此类技术包括，例如，免疫测定，其显示一种抗体阻断另一种抗体与靶抗原结合的能力，即，竞争性结合测定。在其中所测试的免疫球蛋白抑制参考抗体与共同抗原(诸如IL-27)的特异性结合的测定中测定竞争性结合。许多类型的竞争性结合测定是已知的，例如：固相直接或间接放射免疫测定(RIA)、固相直接或间接酶免疫测定(EIA)、夹心竞争测定(参见Stahli等人，Methods inEnzymology 9:242(1983))；solid phase direct biotin-avidin EIA(参见Kirkland等人，J.Immunol.137:3614(1986))；固相直接标记测定、固相直接标记夹心测定(参见Harlow和Lane,Antibodies:A Laboratory Manual,Cold Spring Harbor Press(1988))；使用I-125标记物的固相直接标记RIA(参见Morel等人，Mol.Immunol.25(1):7(1988))；固相直接生物素-抗生物素蛋白EIA(Cheung等人，Virology 176:546(1990))；和直接标记的RIA。(Moldenhauer等人，Scand.J.Immunol.32:77(1990))。典型地，这种测定包括使用与固体表面结合的纯化抗原或带有这两者之一的细胞、未标记的测试免疫球蛋白和标记的参考免疫球蛋白。通过在测试免疫球蛋白存在的情况下测定与固体表面或细胞结合的标记物的量来测量竞争性抑制。通常测试免疫球蛋白过量存在。通常，当竞争抗体过量存在时，其将抑制参考抗体与共同抗原的特异性结合至少50-55％、55-60％、60-65％、65-70％、70-75％或更多。
其他技术包括，例如，表位作图方法，诸如，抗原:抗体复合物晶体的x射线分析，其提供表位的原子分辨率，以及与氢/氘(H/D)交换组合的质谱分析，其研究抗原:抗体相互作用的构象和动力学。其他方法监测抗体与抗原片段或抗原的突变形式的结合，其中由于抗原序列中氨基酸残基的修饰而导致的结合丧失通常被认为是表位组分的指示。另外，还可使用用于表位作图的计算组合方法。这些方法依赖于目标抗体从组合噬菌体展示肽库中亲和分离特定短肽的能力。然后将肽视为对应于用于筛选肽文库的抗体的表位定义的前导。对于表位作图，也已开发了计算算法，所述算法已经被证明能对构象不连续的表位作图。
如本文所用，术语“Fc介导的效应子功能”或“Fc效应子功能”是指除抗体的主要功能和目的外的抗体的生物活性。例如，治疗性激动性抗体(therapeutic agnosticantibody)的效应子功能是除活化靶蛋白或途径外的生物活性。抗体效应功能的实例包括C1q结合和补体依赖性细胞毒性；Fc受体结合；抗体依赖性细胞介导的细胞毒性(ADCC)；吞噬作用；细胞表面受体(例如，B细胞受体)的下调；表达Fc受体的血小板的活化的缺乏；和B细胞活化。许多效应子功能始于Fc与Fcγ受体的结合。在一些方面，靶向肿瘤抗原的抗体具有效应子功能，例如ADCC活性。在一些方面，本文所述的靶向肿瘤抗原的抗体包含相对于恒定区的未修饰形式具有增强的效应子功能(例如，增强的介导ADCC的能力)的变体恒定区。
如本文所用，术语“Fc受体”是指在免疫效应细胞表面上发现的多肽，其被抗体的Fc区结合。在一些方面，Fc受体是Fcγ受体。Fcγ受体有三个亚类：FcγRI(CD64)、FcγRII(CD32)和FγcRIII(CD16)。所有四种IgG同种型(IgG1、IgG2、IgG3和IgG4)结合并活化Fc受体FcγRI、FcγRIIA和FcγRIIIA。FcγRIIB是抑制性受体，因此与该受体结合的抗体不会活化补体和细胞响应。FcγRI是以单体形式与IgG结合的高亲和力受体，而FcγRIIA和FcγRIIA是仅以多聚体形式结合IgG且亲和力稍低的低亲和力受体。抗体与Fc受体和/或C1q的结合受Fc区内特定残基或结构域的控制。结合还取决于位于铰链区内和抗体的CH2部分内的残基。在一些方面，本文所述抗体的激动和/或治疗活性依赖于Fc区与Fc受体(例如，FcγR)的结合。在一些方面，本文所述抗体的激动和/或治疗活性通过Fc区与Fc受体(例如，FcγR)的结合而提高。
在本公开中采用的某些Fc受体序列的列表如以下表13所示。
如本文所用，术语“糖基化模式”被定义为与蛋白质、更具体地与免疫球蛋白共价连接的碳水化合物单元的模式。当本领域普通技术人员将异源抗体的糖基化模式识别为与转基因的CH基因所来源的物种比，与非人转基因动物物种中的所述糖基化模式更相似时，异源抗体的糖基化模式可被表征为与非人转基因动物物种产生的抗体上天然存在的糖基化模式基本相似。
如本文所用，术语“人抗体”包括具有人种系免疫球蛋白序列的可变区和恒定区(如果存在的话)的抗体。本公开的人抗体可包括不由人种系免疫球蛋白序列编码的氨基酸残基(例如，通过体外随机或位点特异性诱变或通过体内体细胞突变引入的突变)(参见，例如，Lonberg等人，(1994)Nature 368(6474):856-859)；Lonberg,(1994)Handbook ofExperimental Pharmacology 113:49-101；Lonberg&Huszar,(1995)Intern.Rev.Immunol.13:65-93，和Harding&Lonberg,(1995)Ann.N.Y.Acad.Sci.764:536-546)。然而，术语“人抗体”不包括其中源自另一种哺乳动物物种(诸如小鼠)的种系的CDR序列已经被移植到人框架序列上的抗体(即人源化抗体)。
如本文所用，术语“异源抗体”是相对于产生这种抗体的转基因非人生物定义的。该术语是指具有氨基酸序列或编码核酸序列的抗体，所述氨基酸序列或编码核酸序列对应于在不由转基因非人动物组成的生物体中发现的氨基酸序列或编码核酸序列，并且通常来自除转基因非人动物外的物种。
术语“诱导免疫响应”和“提高免疫响应”可互换使用，是指对特定抗原的免疫响应的刺激(即，被动或适应性的)。关于诱导CDC或ADCC所使用的术语“诱导”是指对特定直接细胞杀伤机制的刺激。
如本文所用，术语“免疫原性细胞死亡”(或者称为“免疫原性细胞凋亡”)是指与一种或多种信号传导途径的活化相关的细胞死亡方式，所述信号传导途径诱导来自肿瘤细胞的损伤相关分子模式(DAMP)分子(例如，三磷酸腺苷，ATP)的死亡前表达和释放，从而导致肿瘤细胞免疫原性的增强和肿瘤细胞以免疫原性方式(例如，通过吞噬作用)死亡。如本文所用，术语“免疫原性细胞死亡诱导剂”是指诱导免疫原性细胞死亡过程、途径或方式的化学、生物学或药理学剂。
如本文所用，术语“抑制”、“减少”或“阻断”(例如，涉及抑制或减少细胞中人IL-27介导的STAT1和/或STAT3磷酸化)可互换施用并且涵盖部分和完全抑制/阻断。IL-27的抑制/阻断降低或改变在没有抑制或阻断的情况下发生的活性的正常水平或类型。抑制和阻断也旨在包括与IL-27不与抗IL-27抗体接触相比，在与抗IL-27抗体接触时，IL-27的结合亲和力的任何可测量的降低，例如，将IL-27的结合抑制至少约10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％。
如本文所用，术语“抑制血管生成”、“减少血管生成”和“降低血管生成”是指将组织中血管生成的水平降低至相应对照组织中的量的至少10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、99％或低于相应对照组织中的量并且最优选与对照组织中观察到的水平相同的量。
如本文所用，术语“抑制生长”(例如，涉及细胞)旨在包括细胞生长的任何可测量的降低，例如将细胞生长抑制至少约10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、99％或100％。
如本文所用，“需要预防的”、“需要治疗的”或“有需要的”受试者是指根据适当的从业医生(例如，在人的情况下，医生、护士或护理人员；在非人哺乳动物的情况下，兽医)的判断将合理地受益于给定治疗(诸如用包含抗IL-27抗体的组合物治疗)的受试者。
术语“体内”是指发生在活生物体中的过程。
如本文所用，术语“分离的抗体”是指基本上不含具有不同抗原特异性的其他抗体的抗体(例如，特异性地结合至人IL-27的分离的抗体基本上不含特异性地结合除IL-27外的抗原的抗体)。然而，特异性地结合至表位的分离的抗体可与来自不同物种的其他IL-27蛋白具有交叉反应性。然而，在如本文所述的特异性结合测定中，抗体继续显示与人IL-27的特异性结合。另外，分离的抗体通常基本上不含其他细胞物质和/或化学物质。在一些方面，将具有不同IL-27特异性的“分离的”抗体的组合组合在明确定义的组合物中。
如本文所用，术语“分离的核酸分子”是指编码与IL-27结合的抗体或抗体部分(例如，VH、VL、CDR3)的核酸，旨在指其中编码抗体或抗体部分的核苷酸序列不含编码结合除IL-27外的抗原的抗体或抗体部分的其他核苷酸序列的核酸分子，所述其他序列可天然地在人基因组DNA中位于所述核酸的两侧。例如，选自表12中所示的序列的序列对应于包含本文所述的抗IL-27抗体单克隆抗体的重链(VH)和轻链(VL)可变区的核苷酸序列。
如本文所用，“同种型”是指由重链恒定区基因编码的抗体类别(例如IgM或IgG1)。在一些方面，本公开的人单克隆抗体是IgG1同种型。在一些方面，本公开的人单克隆抗体是IgG2同种型。在一些方面，本公开的人单克隆抗体是IgG3同种型。在一些方面，本公开的人单克隆抗体是IgG4同种型。对本领域技术人员显而易见的是，抗体同种型(例如IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgM、IgA1、IgA2、IgD和IgE)的鉴定是本领域中常规的，并且通常涉及与已知抗体、公开的Fc变体序列和保守序列的序列比对的组合。
如本文所用，术语“同种型转换”是指抗体的种类或同种型从一种Ig种类变为另一种Ig种类的现象。
如本文所用，术语“KD”或“KD”是指抗体与抗原之间的结合反应的平衡解离常数。KD的值是抗体解离速率常数(kd)与抗体结合速率常数(ka)之比的数值表示。KD的值与抗体对抗原的结合亲和力成反比。KD值越小，抗体对其抗原的亲和力越大。亲和力是单个分子与其配体结合的强度，通常通过平衡解离常数(KD)来测量和报告，该常数用于评估和排列双分子相互作用的排序强度。
如本文所用，术语“kd”或“kd”(或者“koff”或“koff”)旨在指抗体从抗体/抗原复合物中解离的解离速率常数。kd的值每秒衰变或解离的复合物的分数的数值表示，以秒-1为单位表示。
如本文所用，术语“ka”或“ka”(或者“kon”或“kon”)旨在指抗体与抗原缔合的结合速率常数。ka的值是在1摩尔(1M)抗体和抗原溶液中每秒钟形成的抗体/抗原复合物数量的数值表示，以M-1sec-1为单位表示。
如本文所用，术语“白细胞(leukocyte)”是指参与保护身体免受感染性生物体和外来物质侵害的一种类型的白血细胞。白细胞在骨髓中产生。白细胞有5种主要类型，分为两大类：多形核白细胞(中性粒细胞、嗜酸性粒细胞、嗜碱性粒细胞)和单核白细胞(单核细胞和淋巴细胞)。
如本文所用，术语“淋巴细胞”是指参与身体的免疫防御的一种类型的白细胞或白血细胞。淋巴细胞有两种主要类型：B细胞和T细胞。
如本文所用，术语“连接的”、“融合的”或“融合”可互换使用。这些术语是指通过任何方式，包括化学缀合或重组方式，将两个或更多个元件或组分或结构域连接在一起。化学缀合的方法(例如，使用异双官能交联剂)是本领域已知的。
如本文所用，“局部施用”或“局部递送”是指不依赖于经由血管系统将组合物或剂转运至其预定靶组织或位点的递送。例如，可通过注射或植入组合物或剂或通过注射或植入包含组合物或剂的装置来递送组合物。在靶组织或部位附近局部施用后，组合物或剂或其一种或多种组分可以扩散到预期的靶组织或部位。
如本文所用，“MHC分子”指两种类型的分子：MHC I类和MHC II类。MHC I类分子向特异性CD8+ T细胞呈递抗原，MHC II类分子向特异性CD4+ T细胞呈递抗原。外源性递送至APC的抗原主要被加工用于与MHC II类缔合。相反地，内源性递送至APC的抗原主要被加工用于与MHC I类缔合。
如本文所用，术语“单克隆抗体”是指表现出对特定表位的单一结合特异性和亲和力的抗体。因此，术语“人单克隆抗体”是指表现出单一结合特异性并且具有源自人种系免疫球蛋白序列的可变区和任选的恒定区的抗体。在一些方面，人单克隆抗体由杂交瘤产生，所述杂交瘤包括与永生化细胞融合的获自转基因非人动物(例如，转基因小鼠)的B细胞，所述动物具有包含人重链转基因和轻链转基因的基因组。
如本文所用，术语“单核细胞”是指一种类型的白细胞，其可分化为巨噬细胞和树突细胞以实现免疫响应。
如本文所用，术语“天然杀伤(NK)细胞”是指一种类型的细胞毒性淋巴细胞。这些是大的、通常是颗粒状的非T、非B淋巴细胞，它们杀死某些肿瘤细胞，并在针对病毒和其他细胞内病原体的先天免疫方面以及在抗体依赖性细胞介导的细胞毒性(ADCC)方面起着重要作用。
如本文所用，应用于对象的术语“天然存在的”是指对象可以存在于自然界中的事实。例如，存在于生物体(包括病毒)中的多肽或多核苷酸序列是天然存在的，所述多肽或多核苷酸序列可以从自然界的来源中分离出来，并且在实验室中未被人有意修饰过。
如本文所用，术语“非转换的同种型”是指当没有发生同种型转换时产生的重链的同种型类别；编码非转换的同种型的CH基因通常是紧接在功能重排的VDJ基因下游的第一个CH基因。同型转换分为经典同型转换或非经典同型转换。经典同种型转换通过涉及转基因中至少一个转换序列区的重组事件而发生。非经典同种型转换可通过例如人与人σμ之间的同源重组(∑μ-相关缺失)来发生。δ替代的非经典转换机制，诸如基因间和/或染色体间重组等，可以发生并实现同种型转换。
如本文所用，术语“核酸”是指以单链或双链形式存在的脱氧核糖核苷酸或核糖核苷酸及其聚合物。除非特别限定，否则该术语包括含有已知天然核苷酸类似物的核酸，所述核酸具有与参考核酸相似的结合性质，并且以与天然存在的核苷酸相似的方式代谢。除非另外指出，否则特定的核酸序列还隐含地包括其保守修饰的变体(例如，简并密码子替换)和互补序列以及明确指出的序列。具体而言，简并密码子替换可通过产生序列来实现，在所述序列中一个或多个选择的(或所有的)密码子的第三位被混合碱基和/或脱氧肌苷残基取代取代(Batzer等人，Nucleic Acid Res.19:5081,1991；Ohtsuka等人，Biol.Chem.260:2605-2608,1985；以及Cassol等人，1992；Rossolini等人，Mol.Cell.Probes 8:91-98,1994)。对于精氨酸和亮氨酸，第二碱基处的修饰也可以是保守的。术语核酸可与基因、cDNA和由基因编码的mRNA互换使用。
本文使用的多核苷酸可以由任何多核糖核苷酸或多脱氧核糖核苷酸组成，其可以是未修饰的RNA或DNA或经修饰的RNA或DNA。例如，多核苷酸可由单链和双链DNA、为单链区和双链区的混合物的DNA、单链和双链RNA以及为单链区和双链区的混合物的RNA、包含可为单链区或更常见地双链区或者单链区和双链区的混合物的DNA和RNA的杂交分子组成。另外，多核苷酸可由包含RNA或DNA或RNA和DNA的三链区组成。多核苷酸还可包含一个或多个经修饰的碱基或为了稳定性或其他原因而修饰的DNA或RNA骨架。“经修饰的”碱基包括，例如，三苯甲基化碱基和稀有碱基，诸如肌苷。可对DNA和RNA进行各种修饰；因此，“多核苷酸”包括化学、酶促或代谢修饰的形式。
当核酸与另一种核酸序列处于某一功能关系中时，其为“可操作地连接的”。例如，如果启动子或增强子影响序列的转录，则其与编码序列可操作地连接。就转录调控序列而言，可操作地连接的意味着被连接的DNA序列是连续的，并且在必要时连接两个蛋白质编码区(所述两个蛋白质编码区是连续的并且在读框中)。对于转换序列，可操作地连接表示该序列能够实现转换重组。
如本文所用，“肠胃外施用”、“肠胃外施用的”和其他语法上等同的短语是指除肠内和局部施用外的施用方式，通常通过注射，包括但不限于静脉内、鼻内、眼内、肌内、动脉内、鞘内、囊内、眶内、心内、皮内、腹膜内、经气管、皮下、表皮下、关节内、包膜下、蛛网膜下、脊柱内、硬膜外、大脑内、颅内、颈内动脉内和胸骨内注射和输注。
如本文所用，术语“患者”包括接受预防性或治疗性治疗的人和其他哺乳动物受试者。
如本文所用，术语“PD-1拮抗剂”是指抑制PD-1信号传导途径或以其他方式抑制细胞(例如免疫细胞)中的PD-1功能的任何化合物或生物分子。在一些方面，PD-1拮抗剂阻断PD-L1与PD-1和/或PD-L2与PD-1的结合。在一些方面，PD-1拮抗剂特异性地结合PD-1。在一些方面，PD-1拮抗剂特异性地结合PD-L1。
在两个或更多个核酸或多肽序列的上下文中，术语“同一性百分比”是指当就最大一致性进行比较和比对时，具有如使用下述序列比较算法(例如，BLASTP和BLASTN或本领域技术人员可用的其他算法)之一或通过目测测量的特定百分比的相同的核苷酸或氨基酸的两个或更多个序列或子序列。取决于应用，“同一性百分比”可存在于被比较序列的区域上，例如，存在于功能结构域上，或者，存在于待比较的两个序列的全长上。对于序列比较，通常地，一个序列充当与测试序列进行比较的参考序列。当使用序列比较算法时，将测试和参考序列输入到计算机中，如果需要，指定子序列坐标，并且指定序列算法程序参数。然后，序列比较算法根据指定的程序参数，计算一个或多个测试序列相对于参考序列的序列同一性百分比。
用于比较的序列的最佳比对可以例如通过Smith&Waterman,Adv.Appl.Math.2:482(1981)的局部同源性算法，通过Needleman&Wunsch,J.Mol.Biol.48:443(1970)的同源性比对算法，通过Pearson&Lipman,Proc.Nat'l.Acad.Sci.USA 85:2444(1988)的相似性搜索方法，通过这些算法的计算机化执行(Wisconsin Genetics软件包中的GAP、BESTFIT、FASTA和TFASTA，Genetics Computer Group,575Science Dr.,Madison,Wis.)，或通过目测(通常参见Ausubel等人，在下文中)来进行。
适于测定序列同一性百分比和序列相似性的算法的一个实例是BLAST算法，所述算法描述于Altschul等人，J.Mol.Biol.215:403-410(1990)中。用于进行BLAST分析的软件可通过国家生物技术信息中心网站公开获得。
如本文通常所用的，“药学上可接受的”是指在合理的医学判断范围内，适于与人类和动物的组织、器官和/或体液接触使用而没有过度毒性、刺激、过敏反应或与合理的效益/风险比相称的其他问题或并发症的那些化合物、材料、组合物和/或剂型。
如本文所用，“药学上可接受的载体”是指并包括生理上相容的任何和所有的溶剂、分散介质、包衣、抗细菌和抗真菌剂、等渗剂和吸收延迟剂等。所述组合物可包括药学上可接受的盐，例如酸加成盐或碱加成盐(参见，例如，Berge等人(1977)J Pharm Sci 66:1-19)。
如本文所用，术语“多肽”、“肽”和“蛋白质”可互换使用，指氨基酸残基的聚合物。所述术语适用于其中一个或多个氨基酸残基是相应的天然存在的氨基酸的人工化学模拟物的氨基酸聚合物，以及天然存在的氨基酸聚合物和非天然存在的氨基酸聚合物。
如本文所用，术语“预防”，当结合疾患使用时，是指相对于未接受组合物的受试者，降低受试者的疾患的症状的频率或延迟其发作的组合物的施用。
如本文所用，用于本文所述的任何蛋白质(抗体或片段)的术语“纯化的”或“分离的”是指从天然伴随其的组分(例如，蛋白质或其他天然存在的生物或有机分子)(例如，表达所述蛋白质的原核生物中的其他蛋白质、脂质和核酸)中分离或纯化的多肽。通常，当多肽构成按重量计至少60％(例如，至少65％、70％、75％、80％、85％、90％、92％、95％、97％或99％)的样品中的总蛋白质时，所述多肽被纯化。
如本文所用，术语“程序性细胞死亡蛋白1”或“PD-1”是指程序性细胞死亡蛋白1多肽(一种属于CD28家族的免疫抑制性受体)，并且由人中的PDCD1基因编码。PD-1的替代名称或同义词包括：PDCD1、PD1、CD279和SLEB2。PD-1主要在体内在先前活化的T细胞、B细胞和髓样细胞上表达，并与两种配体PD-L1和PD-L2结合。如本文所用，术语“PD-1”包括人PD-1(hPD-1)、hPD-1的变体、同种型和物种同源物，以及与hPD-1具有至少一个共同表位的类似物。完整的hPD-1序列可在GenBank登录号AAC51773下找到。
如本文所用，术语“程序性死亡配体-1”或“PD-L1”是PD-1的两种细胞表面糖蛋白配体之一(另一种是PD-L2)，其在与PD-1结合时下调T细胞活化和细胞因子分泌。PD-L1的替代名称和同义词包括：PDCD1L1、PDL1、B7H1、B7-4、CD274和B7-H。如本文所用的术语“PD-L1”包括人PD-L1(hPD-L1)、hPD-L1的变体、同种型和物种同源物，以及与hPD-L1具有至少一个共同表位的类似物。完整的hPD-L1序列可在GenBank登录号Q9NZQ7下找到。
PD-1被称为免疫抑制蛋白，其负向调节TCR信号(Ishida,Y.等人(1992)EMBOJ.11:3887-3895；Blank,C.等人(Epub 2006年12月29日)Immunol.Immunother.56(5):739-745)。PD-1与PD-L1之间的相互作用可充当免疫检查点，其可导致T细胞受体介导的增殖降低(Dong等人(2003)J.Mol.Med.81:281-7；Blank等人(2005)CancerImmunol.Immunother.54:307-314；Konishi等人(2004)Clin.Cancer Res.10:5094-100)。免疫抑制可通过抑制PD-1与PD-L1或PD-L2的局部相互作用来逆转；当PD-1与PD-L2的相互作用也被阻断时，所述效应是累加的(Iwai等人(2002)Proc.Nat'l.Acad.Sci.USA 99:12293-7；Brown等人(2003)J.Immunol.170:1257-66)。
对于几种癌症，肿瘤的存活和增殖是由肿瘤介导的免疫检查点调节维持的。这种调节可导致抗癌免疫系统功能的破坏。例如，最近的研究表明，肿瘤细胞表达免疫检查点受体配体，诸如PD-L1或PD-L2，可以特别地通过抑制T细胞来下调肿瘤微环境中的免疫系统活性并促进癌症免疫逃避。PD-L1在多种人癌症中大量表达(Dong等人，(2002)Nat Med 8:787-789)。PD-L1受体PD-1在淋巴细胞(例如，活化的T细胞)上表达，通常参与下调(特别地通过抑制T细胞)免疫系统和促进自身耐受性。然而，当在T细胞上表达的PD-1受体与肿瘤细胞上的同源PD-L1配体结合时，所产生的T细胞抑制导致针对肿瘤的免疫响应受损(例如，肿瘤浸润性淋巴细胞降低或癌细胞建立免疫逃避)。
在例如卵巢癌、肾癌、结直肠癌、胰腺癌、肝癌和黑素瘤的大样本组中，已表明，无论后续治疗如何，PD-L1表达均与预后不良和总存活率降低相关(参见，例如，Dong等人，(2002)Nat Med 8(8):793-800；Yang等人，(2008)Invest Ophthalmol Vis Sci 49(6):2518-2525；Ghebeh等人，(2006)Neoplasia 8:190-198；Hamanishi等人，(2007)Proc NatAcad Sci USA 104:3360-3365；Thompson等人，(2006)Clin Genitourin Cancer 5:206-211；Nomi等人，(2005)Clin Cancer Res 11:2947-2953；Inman等人，(2007)Cancer 109:1499-1505；Shimauchi等人，(2007)Int J Cancer 121:2585-2590；Gao等人，(2009)ClinCancer Res 15:971-979；Nakanishi等人，(2007)Cancer Immunol Immunother 56:1173-1182；Hino等人，(2010)Cancer 116(7):1757-1766)。类似地，发现肿瘤淋巴细胞上的PD-1表达标志着乳腺癌(Kitano等人，(2017)ESMO Open 2(2):e000150)和黑素瘤(Kleffel等人，(2015)Cell 162(6):1242-1256)中的功能失调的T细胞。PD-1拮抗剂，诸如影响PD-1/PD-L1/PD-L2信号传导轴的功能和/或破坏PD-1与PD-L1和/或PD-L2之间相互作用的那些拮抗剂，已被开发出来，并且代表了一类新型的抗肿瘤抑制剂，其通过调节免疫细胞-肿瘤细胞相互作用发挥作用。
如本文所用，术语“重排的”是指重链或轻链免疫球蛋白基因座的构型，在所述构型中V区段以分别编码基本上完整的VH或VL结构域的构象紧邻D-J或J区段。通过与种系DNA比较，可以鉴定重排的免疫球蛋白基因座；重排的基因座将具有至少一个重组的七聚体/九聚体同源元件。
如本文所用，术语“重组宿主细胞”(或简称为“宿主细胞”)旨在指已向其中引入了重组表达载体的细胞。应当理解，此类术语不仅指特定的受试细胞，还指这种细胞的后代。在接续传代中由于突变或环境影响而可能发生某些修饰，因此此类后代可能实际上并不等同于亲代细胞，但其仍包括在本文所用术语“宿主细胞”的范围内。
如本文所用，术语“重组人抗体”包括通过重组手段制备、表达、产生或分离的所有人抗体，诸如(a)从动物(例如，小鼠)或由其制备的杂交瘤中分离的抗体，所述动物对于人免疫球蛋白基因而言是转基因的或跨染色体的，(b)从经转化以表达所述抗体的宿主细胞，例如从转染瘤中分离的抗体，(c)从重组组合人抗体文库中分离的抗体，和(d)通过涉及将人免疫球蛋白基因序列剪接到其他DNA序列的任何其他手段制备、表达、产生或分离的抗体。此类重组人抗体包含利用特定人种系免疫球蛋白序列的可变区和恒定区，所述可变区和恒定区序列由种系基因编码，但包括随后例如在抗体成熟过程中发生的重排和突变。如本领域所知的(参见，例如，Lonberg(2005)Nature Biotech.23(9):1117-1125)，可变区包含抗原结合结构域，其由各种基因编码，所述基因重排形成对外来抗原特异的抗体。除了重排以外，可变区还可通过多个单个氨基酸变化(称为体细胞突变或超突变)被进一步修饰，以增加抗体对外来抗原的亲和力。恒定区将随着对抗原的进一步相应而改变(即，同种型转换)。因此，响应于抗原而重排和体细胞突变的编码轻链和重链免疫球蛋白多肽的核酸分子可能与原始核酸分子不具有完全同一性的序列，而是具有基本上同一或相似(即，具有至少80％的同一性)。
如本文所用，术语“参考抗体”(可与“参考mAb”互换使用)或“参考抗原结合蛋白”是与IL-27上的特定表位结合并用于建立其自身与一种或多种不同抗体之间的关系的抗体或其抗原结合片段，其中所述关系是参考抗体和一种或多种不同抗体与IL-27上相同表位的结合。如本文所用，所述术语意指抗IL-27抗体，其可用于测试或测定，诸如本文所述的那些测试或分析(例如，竞争性结合测定)，用作竞争者，其中所述测定可用于发现、鉴定或开发一种或多种与相同表位结合的不同抗体。
如本文所用，术语“特异性结合”、“选择性结合”、“选择性地结合”和“特异性地结合”是指抗体与预定抗原上的表位的结合。通常，当使用重组人IL-27作为分析物并且抗体作为配体在BIACORE 2000仪器中通过表面等离子体共振(SPR)技术测定时，抗体以约小于10-6M，诸如大约小于10-7、10-8M、10-9M或10-10M或甚至更低的平衡解离常数(KD)结合，并且其与预定抗原结合的亲和力为其与除所述预定抗原或密切相关的抗原外的非特异性抗原(例如，BSA、酪蛋白)结合的亲和力的至少两倍。在某些方面，当使用重组人IL-27作为分析物并且抗体作为配体在BIACORE 2000仪器中通过表面等离子体共振(SPR)技术测定时，特异性地结合至IL-27的抗体以大约小于100nM(10-7M)、任选地大约小于50nM(5x10-8M)、任选地大约小于15nM(1.5x10-8M)、任选地大约小于10nM(10-8M)、任选地大约小于5nM(5x10-9M)、任选地大约小于1nM(10-9M)、任选选地大约小于0.1nM(10-10M)、任选地大约小于0.01nM(10-11M)或甚至更低的平衡解离常数(KD)结合，其中结合至预定抗原以比所述抗体对结合至除预定抗原或紧密相关的抗原以外的非特异性抗原(例如，BSA、酪蛋白)的亲和力大至少两倍的亲和力发生。短语“识别抗原的抗体”和“对抗原具有特异性的抗体”在本文中与术语“特异性地结合至抗原的抗体”互换使用。
如本文所用，术语“STAT1磷酸化”是指信号转导子和转录活化因子1(STAT1)多肽(其是人中由STAT1基因编码的转录因子)的磷酸化。STAT分子通过受体相关激酶磷酸化，所述激酶通过形成同或异二聚体而引起活化和二聚化，所述同或异二聚体易位至细胞核以起转录因子的作用。STAT1可响应于经由包括IL-27的几种配体的信号传导而被活化(即磷酸化)。通过IL-27R的IL-27信号传导导致STAT1(pSTAT1)磷酸化。STAT1在涉及细胞的存活、活力或病原体响应的基因表达中起关键作用。确定由于IL-27信号传导引起的STAT1磷酸化的方法包括但不限于用特异性地识别磷酸化STAT1的抗体标记的细胞的流式细胞术分析(参见例如，Tochizawa等人,(2006)J Immunol Methods 313(1-2):29-37)。
如本文所用，术语“STAT3磷酸化”是指信号转导子和转录活化因子3(STAT3)多肽(其是人中由STAT3基因编码的转录因子)的磷酸化。STAT3响应于细胞刺激介导多种基因的表达，并且因此在许多细胞过程(如细胞生长和凋亡)中起着关键作用。确定由于IL-27信号传导引起的STAT3磷酸化的方法包括但不限于对用特异性地识别磷酸化STAT3的抗体标记的细胞或细胞提取物的分析(参见例如，Fursov等人,(2011)Assay Drug Dev Technol 9(4):420-429)。
如本文所用，术语“转换序列”是指负责转换重组的那些DNA序列。“转换供体”序列，通常为μ转换区，将处于转换重组过程中待缺失的构建体区域的5’(即，上游)。“转换受体”区域将位于待缺失的构建体区域与替换恒定区(例如，γ、ε等)之间。由于不存在总是发生重组的特定位点，因此最终的基因序列通常不能从构建体中预测。
如本文所用，术语“受试者”包括任何人或非人动物。例如，本发明的方法和组合物可用于治疗患有免疫病症的受试者。术语“非人动物”包括所有脊椎动物，例如哺乳动物和非哺乳动物，诸如非人灵长类动物、绵羊、狗、牛、鸡、两栖动物、爬行动物等。
对于核酸，术语“实质同源性”表示两个核酸或其指定的序列，当被最佳比对和比较时，在具有适当的核苷酸插入或缺失的情况下，在至少约80％的核苷酸中，通常至少约90％至95％，更优选至少约98％至99.5％的核苷酸中是同一的。或者，当区段在选择性杂交条件下与链的互补序列杂交时，存在实质同源性。
两个序列之间的同一性百分比是序列所共享的相同位置的数量的函数(即，同源性％＝相同位置的数量/位置总数×100)，其中考虑了需要被引入以进行两个序列的最佳比对的空位的数量和每个空位的长度。序列的比较和两个序列之间同一性百分比的确定可使用如以下非限制性实例中所述的数学算法来完成。
两个核苷酸序列之间的同一性百分比可使用GCG软件包(可在http://www.gcg.com上获得)中的GAP程序，使用NWSgapdna.CMP矩阵以及为40、50、60、70或80的空位权重和为1、2、3、4、5或6的长度权重来确定。两个核苷酸或氨基酸序列之间的同一性百分比也可使用已并入ALIGN程序(2.0版)的E.Meyers和W.Miller(CABIOS,4:11-17(1989))的算法，使用PAM120权重残基表、为12的空位长度罚分、为4的空位罚分来确定。另外，两个氨基酸序列之间的同一性百分比可使用已并入GCG软件包(可在http://www.gcg.com上获得)中的GAP程序中的Needleman和Wunsch(J.Mol.Biol.(48):444-453(1970))算法，使用Blossum 62矩阵或PAM250矩阵、为16、14、12、10、8、6或4的空位权重、为1、2、3、4、5或6的长度权重来确定。
可将本公开的核酸和蛋白质序列进一步用作“查询序列”，以针对公共数据库执行搜索，以例如鉴定相关序列。此类搜索可使用Altschul,等人(1990)J.Mol.Biol.215:403-10的NBLAST和XBLAST程序(2.0版)来进行。可用NBLAST程序、得分＝100、字长＝12来进行BLAST核苷酸搜索，以获得与本发明核酸分子同源的核苷酸序列。可用XBLAST程序、得分＝50、字长＝3来进行BLAST蛋白质搜索，以获得与本发明蛋白质分子同源的氨基酸序列。为了获得用于比较目的的空位比对，可利用如Altschul等人,(1997)Nucleic Acids Res.25(17):3389-3402中描述的空位BLAST程序。当利用BLAST和空位BLAST程序时，可使用相应程序(例如XBLAST和NBLAST)的默认参数。参见http://www.ncbi.nlm.nih.gov。
核酸可以以完整细胞、细胞裂解物或部分纯化或基本上纯的形式存在。当通过标准技术(包括碱性/SDS处理、CsCl显带、柱色谱法、琼脂糖凝胶电泳和本领域公知的其他技术)从其他细胞组分或其他污染物(例如，其他细胞核酸或蛋白质)中纯化出来时，核酸是“分离的”或“基本上纯的”。参见，F.Ausubel,等人,编Current Protocols in MolecularBiology,Greene Publishing and Wiley Interscience,New York(1987)。
可根据提供基因序列的标准技术，对来自cDNA、基因组或其混合物的本公开的核酸组合物(尽管通常是天然序列(除经修饰的限制性位点等外))进行突变。对于编码序列，这些突变可以根据需要影响氨基酸序列。特别地，设想了与天然V序列、D序列、J序列、恒定序列、转换序列和本文所述的其他此类序列基本上同源或源自所述序列的DNA序列(其中“源自”表示序列与另一个序列相同或从另一个序列修饰而来)。
如本文所用，术语“STING”(或者TMEM173)是指干扰素基因刺激因子，其是一种充当直接细胞溶质DNA传感器和衔接蛋白两者的蛋白质。在人中，STING由TMEM173基因编码。STING在先天免疫中起重要作用。当细胞感染细胞内病原体(如病毒、分枝杆菌和细胞内寄生虫)时，STING诱导I型干扰素产生。由STING介导的I型干扰素通过结合至分泌它的同一细胞和附近细胞而保护受感染的细胞和附近细胞免受局部感染。STING的示例性氨基酸序列由NCBI Genbank数据库以登录号NP_001288667提供。
术语“T细胞”是指可由于在细胞表面上存在T细胞受体而区别于其他白细胞的白细胞类型。存在T细胞的多个亚群，包括但不限于T辅助细胞(又称TH细胞或CD4+ T细胞)和亚型，包括TH1、TH2、TH3、TH17、TH9和TFH细胞；细胞毒性T细胞(又称TC细胞、CD8+ T细胞、细胞毒性T淋巴细胞、T杀伤细胞、杀伤性T细胞)；记忆T细胞和亚型，包括中心记忆T细胞(TCM细胞)、效应记忆T细胞(TEM和TEMRA细胞)和驻留记忆T细胞(TRM细胞)；调控性T细胞(又称Treg细胞或抑制性T细胞)和亚型，包括CD4+FOXP3+ Treg细胞、CD4+FOXP3-Treg细胞、Tr1细胞、Th3细胞和Treg17细胞；自然杀伤T细胞(又称NKT细胞)；粘膜相关非变异T细胞(MAIT)和γδT细胞(γδT细胞)，包括Vγ9/Vδ2T细胞。任何一种或多种前述或未提及的T细胞可以是用于本发明的使用方法的靶细胞类型。
如本文所用，术语“T细胞介导的响应”是指由T细胞(包括但不限于效应T细胞(例如，CD8+细胞)和辅助T细胞(例如，CD4+细胞))介导的任何响应。T细胞介导的响应包括，例如，T细胞的细胞毒性和增殖。
如本文所用，术语“治疗有效量”或“治疗有效剂量”或本文所用的类似术语旨在表示将引发所需生物或医学响应(例如，癌症的一个或多个症状的改善)的剂(例如，抗IL-27抗体或其抗原结合片段)的量。
如本文所用，术语“TAM受体”是指TAM受体蛋白酪氨酸激酶(TYRO3、AXL和MER)。TAM受体参与免疫系统稳态的调控。在癌症环境中，TAM受体具有双重调控作用，从而控制肿瘤发展的起始和进展，并且同时控制各种免疫细胞的相关抗肿瘤响应。TAM受体的进一步描述在Paolino和Penninger(2016)Cancers 8(97):doi:10.3390/cancers8100097)中找到。如本文所用，术语“TAM受体抑制剂”或“TAM抑制剂”是指抑制、阻断或降低TAM受体的功能或活性的剂。
如本文所用，除非另有指示，否则术语“TIGIT”或“具有Ig和ITIM结构域的T细胞免疫受体”是指来自任何脊椎动物来源，包括哺乳动物，诸如灵长类动物(例如，人)和啮齿类动物(例如，小鼠和大鼠)的任何天然TIGIT。TIGIT在本领域中也称为DKFZp667A205、FLJ39873、含V组和免疫球蛋白结构域的蛋白9、含V组和跨膜结构域的蛋白3、VSIG9、VSTM3和WUCAM。所述术语还涵盖TIGIT的天然存在的变体，例如剪接变体或等位基因变体。示例性人TIGIT的氨基酸序列可在UniProt登录号Q495A1下找到。
如本文所用，术语“治疗”是指本文中描述的治疗或预防措施。“治疗”的方法采用向需要这种治疗的受试者(例如，需要针对特定抗原的增强的免疫响应的受试者或最终可能获得这种病症的受试者)施用本公开的人抗体，以预防、治愈、延迟病症或复发性病症、降低其严重程度或改善其一种或多种症状，或者延长受试者的存活期以超出无此治疗时的预期存活期。
如本文所用，术语“肿瘤微环境”(或者“癌症微环境”；缩写为TME)是指肿瘤或赘生物存在于其中的细胞环境或背景，包括周围血管以及非癌细胞，包括但不限于免疫细胞、成纤维细胞、骨髓源性炎症细胞和淋巴细胞。信号传导分子和细胞外基质也构成了TME。肿瘤和周围的微环境密切相关，并不断相互作用。肿瘤可通过释放细胞外信号、促进肿瘤血管生成和诱导外周免疫耐受来影响微环境，而微环境中的免疫细胞可影响肿瘤细胞的生长和进化。
如本文所用，术语“未重排的”或“种系构型”是指V区段的构型，在所述构型中V片段不重组从而与D或J区段紧密相邻。
如本文所用，术语“载体”旨在指能够转运与其相连的另一核酸的核酸分子。一种类型的载体是“质粒”，其是指可接合另外的DNA区段的环状双链DNA环。另一种类型的载体是病毒载体，其中另外的DNA片区段可接合至病毒基因组。某些载体能够在它们被引入至其中的宿主细胞中自主复制(例如，具有细菌复制起点的细菌载体以及附加型哺乳动物载体)。其他载体(例如，非附加型哺乳动物载体)可以在引入到宿主细胞中后整合到宿主细胞的基因组中，并且由此与宿主基因组一起复制。此外，某些载体能够指导与它们可操作地连接的基因表达。此类载体在本文中称为“重组表达载体”(或简称为“表达载体”)。通常，重组DNA技术中有用的表达载体通常以质粒的形式存在。在本说明书中，“质粒”和“载体”可互换使用，因为质粒是最常用的载体形式。然而，本发明旨在包括表达载体的此类其他形式，诸如病毒载体(例如，复制缺陷型逆转录病毒、腺病毒和腺相关病毒)，其具有等同的功能。
除非另有定义，否则本文所用的所有技术和科学术语具有与本公开所属领域的普通技术人员通常理解的含义相同的含义。下面描述了优选方法和材料，尽管与本文所述的方法和材料相似或等效的方法和材料也可用于目前公开的方法和组合物的实践或测试。本文提及的所有公布、专利申请、专利以及其他参考文献以引用的方式整体并入。
附图说明
图1是提供能够结合至包含SEQ ID NO:2(IL-27p28)的Gln37、Leu38、Glu42、Glu46、Val49、Ser50、Leu142、Asp146、Arg149、His150、Phe153、Leu156、Leu162和Glu164中的一个或多个氨基酸的表位的抗IL-27抗体的亲和力数据的表。亲和力测量使用ForteBio和Meso Scale Discovery方法进行。
图2A是描绘如所指示如通过流式细胞术测量的抗IL-27抗体对人PBMC中IL-27介导的STAT1磷酸化的抑制的图。图2B是描绘如所指示如通过流式细胞术测量的抗IL-27抗体对U937细胞中IL-27介导的STAT1磷酸化的抑制的图。图2C是描绘如所指示如通过流式细胞术测量的抗IL-27抗体对HUT-78细胞中IL-27介导的STAT1磷酸化的抑制的图。
图3是示出本公开的抗IL-27抗体(“抗IL-27 Ab1”)抑制人全血T细胞中IL-27介导的pSTAT1的图。
图4是描绘如所指示一系列浓度的抗IL-27抗体逆转T细胞中IL-27介导的对CD161表达的抑制的图。使用流式细胞术测定CD161表达。
图5A是描绘如通过ELISA测量的抗IL-27抗体增强人PBMC中PD-1介导的TNFα分泌的程度的图。图5B是描绘如通过ELISA测量的抗IL-27抗体增强人PBMC中PD-1介导的IL-6分泌的程度的图。图5C至图5D示出在PD-1阻断后IL-27抑制细胞因子产生(IL-17A，图5C；和IFNγ，图5D)，并且与抗IL-27 Ab1组合得以恢复(缩写：Ctrl＝对照，ns＝不显著，PBMC＝外周血单核细胞，rhIL-27＝重组人IL-27)。图5E至图5H总结了在来自包括健康对照和患有RCC、HCC和卵巢癌的患者的若干个别供体的活化PBMC培养物中的TNFα(图5E)、IFNγ(图5F)、IL-6(图5G)和IL-17A(图5H)的所观测到的细胞因子诱导，其中这些细胞与抗IL-27Ab1抗体、αPD-1抗体或抗IL-27 Ab1与αPD-1抗体的组合接触。
图6A是描绘如通过流式细胞术测定的用抗IL-27抗体处理人单核细胞对IL-27介导的PD-L1表达的抑制的图。图6B是描绘如通过流式细胞术测定的用抗IL-27抗体处理人单核细胞对IL-27介导的TIM3表达的抑制的图。图6C是描绘如通过流式细胞术测定的用抗IL-27抗体处理静息人T细胞对IL-27介导的PD-L1表达的抑制的图。
图7A是描绘如所指示如通过目测计数从小鼠分离的肺中的结节测定的来自用抗IL27抗体(抗IL-27 Ab1)、同种型对照抗体、αWSX-1抗体或组合的αPD-1和αCTLA-4抗体处理的B16F10荷瘤小鼠的表面肺B16F10转移性结节(肺结节)的数量的点图。图7B提供描绘如通过生物发光成像分析测定的在用抗IL-27抗体(抗IL-27 Ab1)或同种型对照抗体处理的小鼠中的生物发光B16-Luc肿瘤的生长动力学的图。图7C至图7F示出用如所指示从用抗IL27抗体(抗IL-27 Ab1)(图7D)、同种型对照抗体(图7C)、αWSX-1抗体(图7E)或组合的αPD-1和αCTLA-4抗体(图7F)处理的B16F10荷瘤小鼠分离的用苏木精和曙红染色的固定、切片的肺组织的一系列图像。图7G是描绘如所指示如通过图像分析软件测定的从用抗IL27抗体(抗IL-27 Ab1)、同种型对照抗体、αWSX-1抗体或组合的αPD-1和αCTLA-4抗体处理的B16F10荷瘤小鼠分离的用苏木精和曙红染色的固定、切片的肺组织B16F10肿瘤组织的作为总组织面积百分比的总肿瘤面积的点图。用IL-27RA(WSX-1)介导的抗体阻断和用抗PD-1+抗CTLA-4组合疗法观察到表面肺转移数量和总肿瘤面积的相似减少。
图8A提供描绘从用IL-27微环处理后过表达IL-27的小鼠分离的脾细胞中具有>1.0log2倍数变化的表达变化(黑点)的基因的微阵列数据的火山图。x轴示出基因表达的log2倍数变化(IL-27微环处理相比于对照)。y轴是示出各基因的倍数变化的概率的t检验p值。图8B提供描绘如图8A中的脾细胞中，如所指示的选择的免疫调节基因的表达水平的图。图8C至图8F示出人IL-27的异位表达在体内诱导鼠T细胞上的抑制性受体表达(通过流式细胞术分析)，并且抗IL-27 Ab1在IL-27微环处理后降低体内T细胞上的抑制性受体表达。向六周龄的雌性Balb/c小鼠注射空载体(对照)或hIL-27微环(图8C和图8D)。转染5天后收集PBMC和(图8E和图8F)总脾细胞，并且将细胞染色并通过流式细胞术进行分析。分析CD4+ T细胞(图8C和图8E)和CD8+ T细胞(图8D和图8F)上所指示标志物的表达。使用FlowJo软件进行分析。图8G示出抗IL-27 Ab1抑制鼠血浆中微环来源的人IL-27的检测。
图9是使用分子置换软件Phaser(McCoy等人,(2007)J.Appl.Cyrst.40:658-74)和Molrep(Vagin等人,(1997)J.Appl.Cyrst.30:1022-25)测定的IL-27–抗IL-27 Ab1复合物的晶体带状结构。重链、轻链、p28和EBI-3分别以黄色、红色、灰色和绿色着色。图9示出抗IL-27 Ab1结合至IL-27的p28分子。
图10A至图10B是示出如通过表面等离子体共振测量的在存在(深灰色线)或不存在(浅灰色线)抗IL-27 Ab1时，人IL-27异二聚体与WSX-1(图10A)和gp130(图10B)的结合亲和力的图。
图11是p28的带状图解，示出其中抗IL-27 Ab1结合p28的残基。LC＝抗IL-27 Ab1的轻链；HC＝抗IL-27 Ab1的重链
图12是IL-27/抗IL-27 Ab1 Fab与IL-23/IL-23R(PDB ID:5MZV)的结构对准的带状图解。使用p28和p19的复合物的堆叠在3维空间中对准。
图13是IL-27/抗IL-27 Ab1 Fab与IL-6/IL-6Ra/gp130的结构对准的带状图解。使用p28和IL-6的复合物的堆叠在3维空间中对准。
图14A至图14B是p28和EBI3的结合界面的带状图解，其中图14B示出图14A的放大以便说明p28与EBI3之间的盐桥相互作用和芳香族/疏水性相互作用的位置。
图15A至图15B是在若干动物物种之间的p28(图15A)和EBI3(图15B)的序列比对的图像。如所指示，箭头指向保守盐桥接氨基酸和保守疏水性氨基酸。
图16A是示出IL-27异二聚体与IL-6/IL-6Ra的结构对准的带状图解。图16B至图16C是IL-27与IL-6/IL-6Ra的序列比对。箭头指向保守盐桥接氨基酸和保守疏水性氨基酸。图16D是示出对于IL-6Ra而言保守的若干p28与EBI3的相互作用的带状图解。
图17是呈现人IL-27与gp130、WSX-1和抗p28抗体的结合亲和力数据的表。
图18A是小鼠和人p28氨基酸序列的序列比对。图18B是集中于残基162(在人序列中为Leu，且在小鼠序列中为Cys)处的带状图解。
图19A示出人IL-27的静电表面电位。图19B示出人IL-27的主要序列，示出αA、αB、αC、αD螺旋，和具有poly-Glu序列的未拆分CD环。
图20A是示出在RCC肿瘤(1)和正常肾组织(2)中的EBI3、IL-27p28和IL-27RA的差异表达的图形表示。图20B至图20D是按照EBI3(图20B)、IL-27p28(图20C)和IL-27RA(图20D)的高(1)或低(2)表达来分级的RCC患者的Kaplan-Meier曲线(以天为单位的无死亡存活百分比)。如前所述，使用TCGA来产生数据(参见，例如，Li等人,Cancer Research.2017；77(21):e108-e110；Li等人,Genome Biology2016；17(1):174)。
图21A至21B示出在活化人CD4+ T细胞中的IL-27诱导的基因表达印记(signature)。图21A是对于两个单独供体，如与未处理对照相比，IL-27处理的CD4+ T细胞的倍数变化散点图。图21B示出CD4+ T细胞中的IL-27印记中的首要31种基因。31种基因中的十五种(用星形标记)与不良结果相关。使用TCGA产生数据。
图22A至图22B是在RCC(图22A)和BRCA(图22B)肿瘤样品中，与IL-27印记基因的表达相关的全基因组风险比率的图形表示。使用TCGA产生数据。
图23A是如使用EBI3特异性抗体对测量的如与健康供体血清和来自怀孕雌性的血清(阳性对照)相比，RCC患者中的EBI3血浆水平的图形表示。图23B示出通过肿瘤分期来分组的单独RCC患者群组中的EBI3水平。图23C示出按照血清EBI3水平来分级的RCC患者中的总体存活并且图23D示出无疾病存活。
图24A至图24B是抗IL-27 Ab1对于原位Renca模型中的肿瘤生长和肺转移的效应的图形表示。图24A和图24B示出对照和抗IL-27Ab1处理的Renca小鼠中的净原发性肿瘤重量(肾)和肺转移数量。(*P<0.05；未配对t检验)
图25A至图25B示出在原位Hepa1-6-luc肿瘤模型(图25A)中，如与同种型对照相比，作为单一剂的抗IL-27 Ab1对于随着时间的平均原位Hepa1-6肿瘤通量的效应(图25B)。误差棒指示标准误差。
图26A至图26F示出在连续施用抗IL-27 Ab1之后对原位Hepa1-6肿瘤生长的剂量依赖性抑制(图26A)。图26B示出对于给予对照和抗IL-27 Ab1(5mg/kg、25mg/kg和50mg/kg)，在植入后5、8、13和16天的平均生物发光成像(“BLI”，光子/秒)。图26C至图26F示出在对照(图26C)和抗IL-27 Ab1 5mg/kg(图26D)、25mg/kg(图26E)和50mg/kg组(图26F)中，个别动物在植入后5、8、13和16天的BLI(光子/秒)。
图27A至图27C示出在施用抗IL-27 Ab1之后，Hepa1-6肝脏中的基因表达的调节(图27A和图27B)。图27C是通过施用抗IL-27Ab1来调节的基因的火山图。以下表11A至表11B提供图27B表示的上调和下调基因的列表。
图28A至图28E是示出在施用抗IL-27 Ab1之后，各种IL-27组分基因(图28A)；CD274、TIGIT、LAG3、HAVCR2和PDCD1(图28B)；TGFA和TGFB1(图28C)；AFP(图28D)；和TNFRSF10B、TNFRSF1A和PDGFA(图28E)的表达的图形表示。
图29A至图29B是在施用抗IL-27 Ab1之后，肿瘤微环境(TME)中的各种巨噬细胞和NK转录物标记基因的相对表达的图形表示。
图30是在施用抗IL-27 Ab1或同种型对照之后，NK相关受体的表达的图形表示。
图31示出如与IgG同种型对照相比，在施用抗IL-27 Ab1之后，各种细胞表面标志物的相对表达。通过将靶标志物转录水平相对于PTPRC水平来归一化而获得比率。方向性表示为抗IL-27 Ab1比率与IgG比率之间的差异。
图32A至图32D是示出在存在或不存在IL-27(100ng/mL)时，在用抗CD3(0.25μg/mL)刺激3天的培养PBMC中，IL17A(图32A)、IFNg(IFNγ)(图32B)、TNFa(TNFα)(图32C)和IL-10(图32D)的表达的条形图。
图33A至图33D是示出在存在或不存在抗IL-27 Ab1(1μg/mL)时，在用抗CD3(0.25μg/mL)刺激4天的培养PBMC中，IL17A(图33A)、IFNg(IFNγ)(图33B)、TNFa(TNFα)(图33C)和IL-10(图33D)的表达的散点图。
图34是代表与对照相比的在IL-27抑制之后基因表达的log2倍数变化(x轴)相比于与对照相比的在用抗IL-27 Ab1处理之后基因表达变化的显著性(p值)(y轴)的火山图。
图35是示出在抗IL-27 Ab1或同种型对照(IgG)中培养之后，在活化PBMC中的TNFSF15表达的散点图。
图36A至图36B是示出在两个不同批次的抗IL-27 Ab1(1μg/mL)或同种型对照存在下培养的活化(图36A)和静息(图36B)PBMC中的TNFSF15表达的条形图。
图37是示出如所指示在各种细胞类型中与同种型对照相比用抗IL-27 Ab1进行IL-27抑制之后TNFSF15转录物的倍数变化的条形图。
图38是示出如所指示用抗IL-27 Ab1、抗CD39抗体和两种抗CD112R抗体治疗之后TNFSF15转录物的倍数表达的条形图。
图39A至图39B是示出在活化PBMC中用抗IL-27 Ab1阻断IL-27之后的TNFSF15转录物(图39A)和所分泌的TNFSF15蛋白(图39B)的条形图，其中具有延迟动力学。
具体实施方式
本公开至少部分地提供了以高亲和力和特异性结合至人IL-27p28上的特异性表位的抗体分子。如本文所用的术语“IL-27”和“IL27”可互换地指由两个不同亚基组成的异二聚体细胞因子IL-27，所述亚基由两个不同基因编码：爱泼斯坦-巴尔病毒诱导基因3(EBI3)和IL-27p28。IL-27具有促炎性质和抗炎性质，对造血和非造血细胞具有不同作用。
因此，在一方面，本公开提供了特异性地结合至并拮抗人IL-27的分离抗体或其抗原结合部分，其中抗体或其抗原结合部分特异性地结合至本文所公开的表位并且表现出以下性质中的至少一者或多者：
(i)以15nM或更小的平衡解离常数(KD)结合至人IL-27；
(ii)阻断IL-27与IL-27受体的结合；
(iii)抑制或减少细胞中的STAT1和/或STAT3磷酸化；
(iv)抑制或减轻细胞中IL-27介导的对CD161表达的抑制；
(v)抑制或减少细胞中IL-27介导的PD-L1和/或TIM-3表达；
(vi)诱导或增强PD-1介导的一种或多种细胞因子从细胞的分泌；以及
(vii)(i)-(vi)的组合。
本发明的其他方面包括编码抗体分子的核酸分子、表达载体、宿主细胞以及用于制备抗体分子的方法。还提供了免疫缀合物、多或双特异性分子以及包含抗体分子的药物组合物。本文公开的抗IL-27抗体分子可用于治疗、预防和/或诊断癌性或恶性病症，例如实体瘤和液体瘤(例如白血病，例如淋巴瘤，例如AML)、肺癌(例如，非小细胞肺癌)、胰腺癌、乳腺癌(例如，三阴性乳腺癌)、黑素瘤、睾丸癌、肉瘤、头颈癌(例如，鳞状头颈癌)、肝癌(例如，肝细胞癌(HCC))、结肠直肠癌、卵巢癌、脑癌(例如，多多形性成胶质细胞瘤)或肾癌(例如，肾细胞癌，例如肾透明细胞癌)。
抗IL-27抗体及其抗原结合片段
本公开提供了特异性地结合至IL-27p28并拮抗IL-27(特别是人IL-27)的抗体及其抗原结合部分。
本公开涉及拮抗人IL-27的分离抗体或其抗原结合部分，其中抗体或其抗原结合部分特异性地结合至包含以下中的一个或多个氨基酸的表位：(i)对应于SEQ ID NO:2(IL-27p28)的氨基酸37至56，(ii)对应于SEQ ID NO:2(IL-27p28)的氨基酸142至164，或(iii)(i)和(ii)两者。在一些方面，拮抗人IL-27的本公开的分离抗体或其抗原结合部分特异性地结合至包含SEQ ID NO:2(IL-27p28)的Gln37、Leu38、Glu42、Glu46、Val49、Ser50、Leu53、Lys56、Leu142、Asp143、Arg145、Asp146、Leu147、Arg149、His150、Arg152、Phe153、Leu156、Ala157、Gly159、Phe160、Asn161、Leu162、Pro163或Glu164中的一个或多个氨基酸的表位。
在一些方面，本公开的抗体或其抗原结合部分特异性地结合至包含SEQ ID NO:2(IL-27p28)的Asp146、Arg149和/或Phe153的表位。在一些方面，本公开的抗体或其抗原结合部分特异性地结合至包含SEQ ID NO:2(IL-27p28)的Asp146、Arg149和Phe153的表位。在一些方面，表位包含SEQ ID NO:2(IL-27p28)的Asp146、Arg149、His150和Phe153。在一些方面，表位包含SEQ ID NO:2(IL-27p28)的Asp146、Arg149、Phe153和Leu156。在一些方面，表位包含SEQ ID NO:2(IL-27p28)的Asp146、Arg149、His150、Phe153和Leu156。
在一些方面，本公开的抗体或其抗原结合部分特异性地结合至包含SEQ ID NO:2(IL-27p28)的Leu142、Asp146、Arg149、His150、Phe153、Leu156和Glu164的表位。在一些方面，表位包含SEQ ID NO:2(IL-27p28)的Gln37、Leu38、Glu42、Asp146、Arg149、His150、Phe153和Leu156。在一些方面，本公开的抗体或其抗原结合部分特异性地结合至包含SEQID NO:2(IL-27p28)的Gln37、Leu38、Glu42、Leu142、Asp146、Arg149、His150、Phe153、Leu156和Glu164的表位。
在一些方面，本公开的抗体或其抗原结合部分特异性地结合至包含SEQ ID NO:2(IL-27p28)的Leu142、Asp146、Arg149、His150、Phe153、Leu156、Leu162和Glu164的表位。在一些方面，本公开的抗体或其抗原结合部分特异性地结合至包含SEQ ID NO:2(IL-27p28)的Glu46、Val49、Ser50、Leu142、Asp146、Arg149、His150、Phe153、Leu156和Glu164的表位。在一些方面，本公开的抗体或其抗原结合部分特异性地结合至包含SEQ ID NO:2(IL-27p28)的Gln37、Leu38、Glu42、Glu46、Val49、Ser50、Leu142、Asp146、Arg149、His150、Phe153、Leu156、Leu162和Glu164的表位。
在一些方面，本公开的抗体或其抗原结合部分特异性地结合至由SEQ ID NO:2(IL-27p28)的Gln37、Leu38、Glu42、Glu46、Val49、Ser50、Leu142、Asp146、Arg149、His150、Phe153、Leu156、Leu162和Glu164组成或基本上由其组成的表位。
在一些方面，本公开的抗体或其抗原结合部分特异性地结合至包含SEQ ID NO:2(IL-27p28)的Gln37、Leu38、Glu42、Glu46、Val49、Ser50、Leu142、Asp146、Arg149、His150、Phe153、Leu156、Leu162和Glu164和至少一个选自由SEQ ID NO:2(IL-27p28)的Leu53、Lys56、Asp143、Leu147、Arg152、Ala157、Gly159、Phe160或Asn161组成的组的残基的表位。
在一些方面，本公开的抗体或其抗原结合部分特异性地结合至包含SEQ ID NO:2(IL-27p28)的Gln37、Leu38、Glu42、Glu46、Val49、Ser50、Leu142、Asp146、Arg149、His150、Phe153、Leu156、Leu162和Glu164和至少一个选自由SEQ ID NO:2(IL-27p28)的Leu53、Lys56、Asp143、Arg145、Leu147、Arg152、Ala157、Gly159、Phe160、Asn161或Pro163组成的组的残基的表位。
在一些方面，本公开的抗体或其抗原结合部分特异性地结合至由SEQ ID NO:2(IL-27p28)的Gln37、Leu38、Glu42、Glu46、Val49、Ser50、Leu53、Lys56、Leu142、Asp143、Asp146、Leu147、Arg149、His150、Arg152、Phe153、Leu156、Ala157、Gly159、Phe160、Asn161、Leu162和Glu164组成或基本上由其组成的表位。
在一些方面，本公开的抗体或其抗原结合部分特异性地结合至由SEQ ID NO:2(IL-27p28)的Gln37、Leu38、Glu42、Glu46、Val49、Ser50、Leu53、Lys56、Leu142、Asp143、Arg145、Asp146、Leu147、Arg149、His150、Arg152、Phe153、Leu156、Ala157、Gly159、Phe160、Asn161、Leu162、Pro163和Glu164组成或基本上由其组成的表位。
在一些方面，本公开提供了特异性地结合至包含SEQ ID NO:2(IL-27p28)的Gln37、Leu38、Glu42、Glu46、Val49、Ser50、Leu53、Lys56、Leu142、Asp143、Arg145、Asp146、Leu147、Arg149、His150、Arg152、Phe153、Leu156、Ala157、Gly159、Phe160、Asn161、Leu162、Pro163和Glu164中的一个或多个氨基酸的表位并且拮抗人IL-27的分离抗体或其抗原结合部分，其中抗体或其抗原结合部分表现出以下性质中的一者或多者：(i)以15nM或更小的平衡解离常数(KD)结合至人IL-27；(ii)阻断IL-27与IL-27受体的结合；(iii)抑制或减少细胞中的STAT1和/或STAT3磷酸化；(iv)抑制或减轻细胞中对CD161表达的抑制；(v)抑制或减少细胞中的PD-L1和/或TIM-3表达；(vi)诱导或增强PD-1介导的一种或多种细胞因子从细胞的分泌；以及(vii)(i)-(vi)的组合。
在一些方面，分离的抗体或其抗原结合部分以15nM或更小的平衡解离常数(KD)结合至SEQ ID NO:2(人IL-27p28)的Gln37、Leu38、Glu42、Glu46、Val49、Ser50、Leu53、Lys56、Leu142、Asp143、Arg145、Asp146、Leu147、Arg149、His150、Arg152、Phe153、Leu156、Ala157、Gly159、Phe160、Asn161、Leu162、Pro163和Glu164中的一个或多个氨基酸的表位。
在一些方面，分离的抗体或其抗原结合部分结合至重组人IL-27p28或鼠IL-27p28。
在一些方面，分离的抗体或其抗原结合部分抑制或减少细胞中的STAT1和/或STAT3磷酸化。在一些方面，细胞是免疫细胞。在一些方面，细胞是癌细胞。
在一些方面，分离的抗体或其抗原结合部分抑制或减轻细胞中对CD161表达的抑制(例如改善或缓解细胞中对CD161表达的抑制)。在一些方面，细胞是免疫细胞。
在一些方面，分离的抗体或其抗原结合部分抑制或减少细胞中的PD-L1和/或TIM-3表达。在一些方面，PD-L1表达被抑制或降低。在一些方面，TIM-3表达被抑制或降低。在一些方面，PD-L1表达和TIM-3表达两者均被降低。在一些方面，细胞是免疫细胞。在一些方面，抗体是单克隆抗体。
在一些方面，分离的抗体或其抗原结合部分诱导或增强PD-1介导的一种或多种细胞因子从细胞的分泌。在一些方面，一种或多种细胞因子是TNFα。在一些方面，一种或多种细胞因子是IL-6。在一些方面，一种或多种细胞因子是TNFα和IL-6。在一些方面，细胞是免疫细胞。
在一些方面，分离的抗体或其抗原结合部分选自由以下组成的组：IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgM、IgA1、IgA2、IgD和IgE抗体。在一些方面，抗体是IgG1抗体或IgG4抗体。在一些方面，抗体包含野生型IgG1重链恒定区。在一些方面，抗体包含野生型IgG4重链恒定区。在一些方面，抗体包含含有至少一个突变的Fc结构域。在一些方面，抗体包含突变型IgG1重链恒定区。在一些方面，抗体包含突变型IgG4重链恒定区。在一些方面，根据EU编号，突变型IgG4重链恒定区包含取代S228P、L235E、L235A中的任一者或它们的组合。
在一些方面，本公开提供了分离的抗体或其抗原结合部分，所述抗体或其抗原结合部分与根据前述方面中任一项所述的抗体或其抗原结合部分结合至IL-27上的基本上相同的表位。
在一些方面，本公开提供了分离的抗体或其抗原结合部分，所述抗体或其抗原结合部分结合至由根据前述方面中任一项所述的抗体或其抗原结合部分所结合的选自由SEQID NO:2(IL-27p28)的Gln37、Leu38、Glu42、Glu46、Val49、Ser50、Leu53、Lys56、Leu142、Asp143、Arg145、Asp146、Leu147、Arg149、His150、Arg152、Phe153、Leu156、Ala157、Gly159、Phe160、Asn161、Leu162、Pro163和Glu164组成的组的氨基酸残基中的至少一者。
在一些方面，本公开提供了分离的抗体或其抗原结合部分，其中由所述抗体或其抗原结合部分所结合的表位(SEQ ID NO:2(IL-27p28)的Gln37、Leu38、Glu42、Glu46、Val49、Ser50、Leu53、Lys56、Leu142、Asp143、Arg145、Asp146、Leu147、Arg149、His150、Arg152、Phe153、Leu156、Ala157、Gly159、Phe160、Asn161、Leu162、Pro163和Glu164)的突变抑制、减少或阻断与所述抗体或其抗原结合部分和根据前述方面中任一项所述的抗体或其抗原结合部分两者的结合。
在一些方面，抗体或其抗原结合部分包含重链CDR1、重链CDR2、重链CDR3、轻链CDR1、轻链CDR2和轻链CDR3，其中轻链CDR1由N-XXXXXXLFSSNXKXYXX-C组成。在一些方面，抗体或其抗原结合部分包含重链CDR1、重链CDR2、重链CDR3、轻链CDR1、轻链CDR2和轻链CDR3，其中轻链CDR3由N-XXXASAXXX-C组成。在一些方面，抗体或其抗原结合部分包含重链CDR1、重链CDR2、重链CDR3、轻链CDR1、轻链CDR2和轻链CDR3，其中重链CDR2由N-XXSSSXSYXYXXXXXXX-C组成。在一些方面，抗体或其抗原结合部分包含重链CDR1、重链CDR2、重链CDR3、轻链CDR1、轻链CDR2和轻链CDR3，其中重链CDR3由N-XXXXGRTSYTATXHNXXXX-C组成，其中X为任何氨基酸。
在一些方面，抗体或其抗原结合部分包含重链CDR1、重链CDR2、重链CDR3、轻链CDR1、轻链CDR2和轻链CDR3，其中轻链CDR1由N-XXXXXXLFSSNXKXYXX-C组成并且轻链CDR3由N-XXXASAXXX-C组成。在一些方面，抗体或其抗原结合部分包含重链CDR1、重链CDR2、重链CDR3、轻链CDR1、轻链CDR2和轻链CDR3，其中重链CDR2由N-XXSSSXSYXYXXXXXXX-C组成并且重链CDR3由N-XXXXGRTSYTATXHNXXXX-C组成，其中X为任何氨基酸。
在一些方面，抗体或其抗原结合部分包含重链CDR1、重链CDR2、重链CDR3、轻链CDR1、轻链CDR2和轻链CDR3，其中轻链CDR1由N-XXXXXXLFSSNXKXYXX-C组成，轻链CDR3由N-XXXASAXXX-C组成，重链CDR2由N-XXSSSXSYXYXXXXXXX-C组成，并且重链CDR3由N-XXXXGRTSYTATXHNXXXX-C组成，其中X为任何氨基酸。
在一些方面，本公开提供了特异性地结合至包含SEQ ID NO:2(IL-27p28)的Gln37、Leu38、Glu42、Glu46、Val49、Ser50、Leu53、Lys56、Leu142、Asp143、Arg145、Asp146、Leu147、Arg149、His150、Arg152、Phe153、Leu156、Ala157、Gly159、Phe160、Asn161、Leu162、Pro163和Glu164中的一个或多个氨基酸的表位的分离的抗体或其抗原结合部分，其中抗体或其抗原结合部分不包含选自由以下组成的组的重链CDR和轻链CDR：
(i)分别示于SEQ ID NO:9、10和11中的重链CDR1、CDR2和CDR3序列，以及分别示于SEQ ID NO:17、18和19中的轻链CDR1、CDR2和CDR3序列；
(ii)分别示于SEQ ID NO:31、32和33中的重链CDR1、CDR2和CDR3序列，以及分别示于SEQ ID NO:39、40和41中的轻链CDR1、CDR2和CDR3序列；
(iii)分别示于SEQ ID NO:53、54和55中的重链CDR1、CDR2和CDR3序列，以及分别示于SEQ ID NO:61、62和63中的轻链CDR1、CDR2和CDR3序列；
(iv)分别示于SEQ ID NO:75、76和77中的重链CDR1、CDR2和CDR3序列，以及分别示于SEQ ID NO:83、84和85中的轻链CDR1、CDR2和CDR3序列；
(v)分别示于SEQ ID NO:97、98和99中的重链CDR1、CDR2和CDR3序列，以及分别示于SEQ ID NO:105、106和107中的轻链CDR1、CDR2和CDR3序列；或
(vi)分别示于SEQ ID NO:119、120和121中的重链CDR1、CDR2和CDR3序列，以及分别示于SEQ ID NO:127、128和129中的轻链CDR1、CDR2和CDR3序列。
在一些方面，本公开提供了特异性地结合至包含或由SEQ ID NO:2(IL-27p28)的Gln37、Leu38、Glu42、Glu46、Val49、Ser50、Leu142、Asp146、Arg149、His150、Phe153、Leu156、Leu162和Glu164组成的表位的分离的抗体或其抗原结合部分，其中抗体或其抗原结合部分不包含选自由以下组成的组的重链CDR和轻链CDR：
(i)分别示于SEQ ID NO:9、10和11中的重链CDR1、CDR2和CDR3序列，以及分别示于SEQ ID NO:17、18和19中的轻链CDR1、CDR2和CDR3序列；
(ii)分别示于SEQ ID NO:31、32和33中的重链CDR1、CDR2和CDR3序列，以及分别示于SEQ ID NO:39、40和41中的轻链CDR1、CDR2和CDR3序列；
(iii)分别示于SEQ ID NO:53、54和55中的重链CDR1、CDR2和CDR3序列，以及分别示于SEQ ID NO:61、62和63中的轻链CDR1、CDR2和CDR3序列；
(iv)分别示于SEQ ID NO:75、76和77中的重链CDR1、CDR2和CDR3序列，以及分别示于SEQ ID NO:83、84和85中的轻链CDR1、CDR2和CDR3序列；
(v)分别示于SEQ ID NO:97、98和99中的重链CDR1、CDR2和CDR3序列，以及分别示于SEQ ID NO:105、106和107中的轻链CDR1、CDR2和CDR3序列；或
(vi)分别示于SEQ ID NO:119、120和121中的重链CDR1、CDR2和CDR3序列，以及分别示于SEQ ID NO:127、128和129中的轻链CDR1、CDR2和CDR3序列。
在一些方面，本公开提供了特异性地结合至包含或由SEQ ID NO:2(IL-27p28)的Gln37、Leu38、Glu42、Glu46、Val49、Ser50、Leu53、Lys56、Leu142、Asp143、Arg145、Asp146、Leu147、Arg149、His150、Arg152、Phe153、Leu156、Ala157、Gly159、Phe160、Asn161、Leu162、Pro163和Glu164组成的表位的分离的抗体或其抗原结合部分，其中抗体或其抗原结合部分不包含选自由以下组成的组的重链CDR和轻链CDR：
(i)分别示于SEQ ID NO:9、10和11中的重链CDR1、CDR2和CDR3序列，以及分别示于SEQ ID NO:17、18和19中的轻链CDR1、CDR2和CDR3序列；
(ii)分别示于SEQ ID NO:31、32和33中的重链CDR1、CDR2和CDR3序列，以及分别示于SEQ ID NO:39、40和41中的轻链CDR1、CDR2和CDR3序列；
(iii)分别示于SEQ ID NO:53、54和55中的重链CDR1、CDR2和CDR3序列，以及分别示于SEQ ID NO:61、62和63中的轻链CDR1、CDR2和CDR3序列；
(iv)分别示于SEQ ID NO:75、76和77中的重链CDR1、CDR2和CDR3序列，以及分别示于SEQ ID NO:83、84和85中的轻链CDR1、CDR2和CDR3序列；
(v)分别示于SEQ ID NO:97、98和99中的重链CDR1、CDR2和CDR3序列，以及分别示于SEQ ID NO:105、106和107中的轻链CDR1、CDR2和CDR3序列；或
(vi)分别示于SEQ ID NO:119、120和121中的重链CDR1、CDR2和CDR3序列，以及分别示于SEQ ID NO:127、128和129中的轻链CDR1、CDR2和CDR3序列。
在一些方面，本公开提供了特异性地结合至包含SEQ ID NO:2(IL-27p28)的Gln37、Leu38、Glu42、Glu46、Val49、Ser50、Leu53、Lys56、Leu142、Asp143、Arg145、Asp146、Leu147、Arg149、His150、Arg152、Phe153、Leu156、Ala157、Gly159、Phe160、Asn161、Leu162、Pro163和Glu164中的一个或多个氨基酸的表位的分离的抗体或其抗原结合部分，其中抗体或其抗原结合部分不包含选自由以下组成的组的重链CDR和轻链CDR：
(i)分别示于SEQ ID NO:12、13和14中的重链CDR1、CDR2和CDR3序列，以及分别示于SEQ ID NO:20、21和22中的轻链CDR1、CDR2和CDR3序列；
(ii)分别示于SEQ ID NO:34、35和36中的重链CDR1、CDR2和CDR3序列，以及分别示于SEQ ID NO:42、43和44中的轻链CDR1、CDR2和CDR3序列；
(iii)分别示于SEQ ID NO:56、57和58中的重链CDR1、CDR2和CDR3序列，以及分别示于SEQ ID NO:64、65和66中的轻链CDR1、CDR2和CDR3序列；
(iv)分别示于SEQ ID NO:78、79和80中的重链CDR1、CDR2和CDR3序列，以及分别示于SEQ ID NO:86、88和89中的轻链CDR1、CDR2和CDR3序列；
(v)分别示于SEQ ID NO:100、101和102中的重链CDR1、CDR2和CDR3序列，以及分别示于SEQ ID NO:108、109和110中的轻链CDR1、CDR2和CDR3序列；或
(vi)分别示于SEQ ID NO:122、123和124中的重链CDR1、CDR2和CDR3序列，以及分别示于SEQ ID NO:130、131和132中的轻链CDR1、CDR2和CDR3序列。
在一些方面，本公开提供了特异性地结合至包含或由SEQ ID NO:2(IL-27p28)的Gln37、Leu38、Glu42、Glu46、Val49、Ser50、Leu142、Asp146、Arg149、His150、Phe153、Leu156、Leu162和Glu164组成的表位的分离的抗体或其抗原结合部分，其中抗体或其抗原结合部分不包含选自由以下组成的组的重链CDR和轻链CDR：
(i)分别示于SEQ ID NO:12、13和14中的重链CDR1、CDR2和CDR3序列，以及分别示于SEQ ID NO:20、21和22中的轻链CDR1、CDR2和CDR3序列；
(ii)分别示于SEQ ID NO:34、35和36中的重链CDR1、CDR2和CDR3序列，以及分别示于SEQ ID NO:42、43和44中的轻链CDR1、CDR2和CDR3序列；
(iii)分别示于SEQ ID NO:56、57和58中的重链CDR1、CDR2和CDR3序列，以及分别示于SEQ ID NO:64、65和66中的轻链CDR1、CDR2和CDR3序列；
(iv)分别示于SEQ ID NO:78、79和80中的重链CDR1、CDR2和CDR3序列，以及分别示于SEQ ID NO:86、88和89中的轻链CDR1、CDR2和CDR3序列；
(v)分别示于SEQ ID NO:100、101和102中的重链CDR1、CDR2和CDR3序列，以及分别示于SEQ ID NO:108、109和110中的轻链CDR1、CDR2和CDR3序列；或
(vi)分别示于SEQ ID NO:122、123和124中的重链CDR1、CDR2和CDR3序列，以及分别示于SEQ ID NO:130、131和132中的轻链CDR1、CDR2和CDR3序列。
在一些方面，本公开提供了特异性地结合至包含或由SEQ ID NO:2(IL-27p28)的Gln37、Leu38、Glu42、Glu46、Val49、Ser50、Leu53、Lys56、Leu142、Asp143、Arg145、Asp146、Leu147、Arg149、His150、Arg152、Phe153、Leu156、Ala157、Gly159、Phe160、Asn161、Leu162、Pro163和Glu164组成的表位的分离的抗体或其抗原结合部分，其中抗体或其抗原结合部分不包含选自由以下组成的组的重链CDR和轻链CDR：
(i)分别示于SEQ ID NO:12、13和14中的重链CDR1、CDR2和CDR3序列，以及分别示于SEQ ID NO:20、21和22中的轻链CDR1、CDR2和CDR3序列；
(ii)分别示于SEQ ID NO:34、35和36中的重链CDR1、CDR2和CDR3序列，以及分别示于SEQ ID NO:42、43和44中的轻链CDR1、CDR2和CDR3序列；
(iii)分别示于SEQ ID NO:56、57和58中的重链CDR1、CDR2和CDR3序列，以及分别示于SEQ ID NO:64、65和66中的轻链CDR1、CDR2和CDR3序列；
(iv)分别示于SEQ ID NO:78、79和80中的重链CDR1、CDR2和CDR3序列，以及分别示于SEQ ID NO:86、88和89中的轻链CDR1、CDR2和CDR3序列；
(v)分别示于SEQ ID NO:100、101和102中的重链CDR1、CDR2和CDR3序列，以及分别示于SEQ ID NO:108、109和110中的轻链CDR1、CDR2和CDR3序列；或
(vi)分别示于SEQ ID NO:122、123和124中的重链CDR1、CDR2和CDR3序列，以及分别示于SEQ ID NO:130、131和132中的轻链CDR1、CDR2和CDR3序列。
在一些方面，本公开提供了特异性地结合至包含SEQ ID NO:2(IL-27p28)的Gln37、Leu38、Glu42、Glu46、Val49、Ser50、Leu53、Lys56、Leu142、Asp143、Arg145、Asp146、Leu147、Arg149、His150、Arg152、Phe153、Leu156、Ala157、Gly159、Phe160、Asn161、Leu162、Pro163和Glu164中的一个或多个氨基酸的表位的分离的抗体或其抗原结合部分，其中抗体或其抗原结合部分包含重链CDR1、重链CDR2、重链CDR3、轻链CDR1、轻链CDR2和轻链CDR3，并且其中重链CDR1不由N-GFTF[S/A/R][S/R][T/Y][G/S]-C(SEQ ID NO:144)组成并且/或者重链CDR2不由N-ISSS[S/G][S/A]YI-C(SEQ ID NO:146)组成。
在一些方面，本公开提供了特异性地结合至包含或由SEQ ID NO:2(IL-27p28)的Gln37、Leu38、Glu42、Glu46、Val49、Ser50、Leu142、Asp146、Arg149、His150、Phe153、Leu156、Leu162和Glu164组成的表位的分离的抗体或其抗原结合部分，其中抗体或其抗原结合部分包含重链CDR1、重链CDR2、重链CDR3、轻链CDR1、轻链CDR2和轻链CDR3，并且其中重链CDR1不由N-GFTF[S/A/R][S/R][T/Y][G/S]-C(SEQ ID NO:144)组成并且/或者重链CDR2不由N-ISSS[S/G][S/A]YI-C(SEQ ID NO:146)组成。
在一些方面，本公开提供了特异性地结合至包含或由SEQ ID NO:2(IL-27p28)的Gln37、Leu38、Glu42、Glu46、Val49、Ser50、Leu53、Lys56、Leu142、Asp143、Arg145、Asp146、Leu147、Arg149、His150、Arg152、Phe153、Leu156、Ala157、Gly159、Phe160、Asn161、Leu162、Pro163和Glu164组成的表位的分离的抗体或其抗原结合部分，其中抗体或其抗原结合部分包含重链CDR1、重链CDR2、重链CDR3、轻链CDR1、轻链CDR2和轻链CDR3，并且其中重链CDR1不由N-GFTF[S/A/R][S/R][T/Y][G/S]-C(SEQ ID NO:144)组成并且/或者重链CDR2不由N-ISSS[S/G][S/A]YI-C(SEQ ID NO:146)组成。
在一些方面，本公开提供了特异性地结合至包含SEQ ID NO:2(IL-27p28)的Gln37、Leu38、Glu42、Glu46、Val49、Ser50、Leu53、Lys56、Leu142、Asp143、Arg145、Asp146、Leu147、Arg149、His150、Arg152、Phe153、Leu156、Ala157、Gly159、Phe160、Asn161、Leu162、Pro163和Glu164中的一个或多个氨基酸的表位的分离的抗体或其抗原结合部分，其中抗体或其抗原结合部分包含重链CD R1、重链CDR2、重链CDR3、轻链CDR1、轻链CDR2和轻链CD R3，并且其中重链CDR1不包含N-FTF[S/A/R][S/R][T/Y][G/S]MN-C(SEQ ID NO:148)并且/或者重链CDR2不包含N-[G/S]ISSS[S/G][S/A]YI[L/Y]YADSVKG-C(SEQ ID NO:149)。
在一些方面，本公开提供了特异性地结合至包含或由SEQ ID NO:2(IL-27p28)的Gln37、Leu38、Glu42、Glu46、Val49、Ser50、Leu142、Asp146、Arg149、His150、Phe153、Leu156、Leu162和Glu164组成的表位的分离的抗体或其抗原结合部分，其中抗体或其抗原结合部分包含重链CDR1、重链CDR2、重链CDR3、轻链CDR1、轻链CDR2和轻链CDR3，并且其中重链CDR1不包含N-FTF[S/A/R][S/R][T/Y][G/S]MN-C(SEQ ID NO:148)并且/或者重链CDR2不包含N-[G/S]ISSS[S/G][S/A]YI[L/Y]YADSVKG-C(SEQ ID NO:149)。
在一些方面，本公开提供了特异性地结合至包含或由SEQ ID NO:2(IL-27p28)的Gln37、Leu38、Glu42、Glu46、Val49、Ser50、Leu53、Lys56、Leu142、Asp143、Arg145、Asp146、Leu147、Arg149、His150、Arg152、Phe153、Leu156、Ala157、Gly159、Phe160、Asn161、Leu162、Pro163和Glu164组成的表位的分离的抗体或其抗原结合部分，其中抗体或其抗原结合部分包含重链CDR1、重链CDR2、重链CDR3、轻链CDR1、轻链CDR2和轻链CDR3，并且其中重链CDR1不包含N-FTF[S/A/R][S/R][T/Y][G/S]MN-C(SEQ ID NO:148)并且/或者重链CDR2不包含N-[G/S]ISSS[S/G][S/A]YI[L/Y]YADSVKG-C(SEQ ID NO:149)。
在一些方面，本公开提供了特异性地结合至包含SEQ ID NO:2(IL-27p28)的Gln37、Leu38、Glu42、Glu46、Val49、Ser50、Leu53、Lys56、Leu142、Asp143、Arg145、Asp146、Leu147、Arg149、His150、Arg152、Phe153、Leu156、Ala157、Gly159、Phe160、Asn161、Leu162、Pro163和Glu164中的一个或多个氨基酸的表位的分离的抗体或其抗原结合部分，其中抗体或其抗原结合部分不包含：
(i)由N-GFTFXXXX-C(SEQ ID NO:145)组成的重链CDR1、由N-ISSSXXYI-C(SEQ IDNO:147)组成的重链CDR2和示于SEQ ID NO:121中的重链CDR3序列；以及分别示于SEQ IDNO:127、128和129中的轻链CDR1、CDR2和CDR3序列；或
(ii)由N-FTFXXXXMN-C(SEQ ID NO:150)组成的重链CDR1、由N-XISSSXXYIXYADSVKG-C(SEQ ID NO:151)组成的重链CDR2和示于SEQ ID NO:124中的重链CDR3序列；以及分别示于SEQ ID NO:130、131和132中的轻链CDR1、CDR2和CDR3序列。
在一些方面，本公开提供了特异性地结合至包含或由SEQ ID NO:2(IL-27p28)的Gln37、Leu38、Glu42、Glu46、Val49、Ser50、Leu142、Asp146、Arg149、His150、Phe153、Leu156、Leu162和Glu164组成的表位的分离的抗体或其抗原结合部分，其中抗体或其抗原结合部分不包含：
(i)由N-GFTFXXXX-C(SEQ ID NO:145)组成的重链CDR1、由N-ISSSXXYI-C(SEQ IDNO:147)组成的重链CDR2和示于SEQ ID NO:121中的重链CDR3序列；以及分别示于SEQ IDNO:127、128和129中的轻链CDR1、CDR2和CDR3序列；或
(ii)由N-FTFXXXXMN-C(SEQ ID NO:150)组成的重链CDR1、由N-XISSSXXYIXYADSVKG-C(SEQ ID NO:151)组成的重链CDR2和示于SEQ ID NO:124中的重链CDR3序列；以及分别示于SEQ ID NO:130、131和132中的轻链CDR1、CDR2和CDR3序列。
在一些方面，本公开提供了特异性地结合至包含或由SEQ ID NO:2(IL-27p28)的Gln37、Leu38、Glu42、Glu46、Val49、Ser50、Leu53、Lys56、Leu142、Asp143、Arg145、Asp146、Leu147、Arg149、His150、Arg152、Phe153、Leu156、Ala157、Gly159、Phe160、Asn161、Leu162、Pro163和Glu164组成的表位的分离的抗体或其抗原结合部分，其中抗体或其抗原结合部分不包含：
(i)由N-GFTFXXXX-C(SEQ ID NO:145)组成的重链CDR1、由N-ISSSXXYI-C(SEQ IDNO:147)组成的重链CDR2和示于SEQ ID NO:121中的重链CDR3序列；以及分别示于SEQ IDNO:127、128和129中的轻链CDR1、CDR2和CDR3序列；或
(ii)由N-FTFXXXXMN-C(SEQ ID NO:150)组成的重链CDR1、由N-XISSSXXYIXYADSVKG-C(SEQ ID NO:151)组成的重链CDR2和示于SEQ ID NO:124中的重链CDR3序列；以及分别示于SEQ ID NO:130、131和132中的轻链CDR1、CDR2和CDR3序列。
在一些方面，本公开提供了特异性地结合至包含SEQ ID NO:2(IL-27p28)的Gln37、Leu38、Glu42、Glu46、Val49、Ser50、Leu53、Lys56、Leu142、Asp143、Arg145、Asp146、Leu147、Arg149、His150、Arg152、Phe153、Leu156、Ala157、Gly159、Phe160、Asn161、Leu162、Pro163和Glu164中的一个或多个氨基酸的表位的分离的抗体或其抗原结合部分，其中抗体或其抗原结合部分不包含：由N-GFTFXXXX-C(SEQ ID NO:145)组成的重链CDR1、由N-IXXXXXXX-C(SEQ ID NO:152)组成的重链CDR2和由N-AR[X]n＝6-15DX-C(SEQ ID NO:153)组成的重链CDR3序列；以及分别由N-QS[X]n＝1-3SS[X]n＝0-4Y-C(SEQ ID NO:154)组成的轻链CDR1、由N-XXS-C(SEQ ID NO:155)组成的轻链CDR2和由N-QQXXXXP[X]n＝0-1T-C(SEQ ID NO:156)组成的轻链CDR3序列。
在一些方面，本公开提供了特异性地结合至包含或由SEQ ID NO:2(IL-27p28)的Gln37、Leu38、Glu42、Glu46、Val49、Ser50、Leu142、Asp146、Arg149、His150、Phe153、Leu156、Leu162和Glu164组成的表位的分离的抗体或其抗原结合部分，其中抗体或其抗原结合部分不包含：由N-GFTFXXXX-C(SEQ ID NO:145)组成的重链CDR1、由N-IXXXXXXX-C(SEQID NO:152)组成的重链CDR2和由N-AR[X]n＝6-15DX-C(SEQ ID NO:153)组成的重链CDR3序列；以及分别由N-QS[X]n＝1-3SS[X]n＝0-4Y-C(SEQ ID NO:154)组成的轻链CDR1、由N-XXS-C(SEQID NO:155)组成的轻链CDR2和由N-QQXXXXP[X]n＝0-1T-C(SEQ ID NO:156)组成的轻链CDR3序列。
在一些方面，本公开提供了特异性地结合至包含或由SEQ ID NO:2(IL-27p28)的Gln37、Leu38、Glu42、Glu46、Val49、Ser50、Leu53、Lys56、Leu142、Asp143、Arg145、Asp146、Leu147、Arg149、His150、Arg152、Phe153、Leu156、Ala157、Gly159、Phe160、Asn161、Leu162、Pro163和Glu164组成的表位的分离的抗体或其抗原结合部分，其中抗体或其抗原结合部分不包含：由N-GFTFXXXX-C(SEQ ID NO:145)组成的重链CDR1、由N-IXXXXXXX-C(SEQ ID NO:152)组成的重链CDR2和由N-AR[X]n＝6-15DX-C(SEQ ID NO:153)组成的重链CDR3序列；以及分别由N-QS[X]n＝1-3SS[X]n＝0-4Y-C(SEQ ID NO:154)组成的轻链CDR1、由N-XXS-C(SEQ ID NO:155)组成的轻链CDR2和由N-QQXXXXP[X]n＝0-1T-C(SEQ ID NO:156)组成的轻链CDR3序列。
在一些方面，本公开提供了拮抗IL-27并且特异性地结合至包含SEQ ID NO:2(IL-27p28)的Gln37、Leu38、Glu42、Glu46、Val49、Ser50、Leu53、Lys56、Leu142、Asp143、Arg145、Asp146、Leu147、Arg149、His150、Arg152、Phe153、Leu156、Ala157、Gly159、Phe160、Asn161、Leu162、Pro163和Glu164中的一个或多个氨基酸的表位的分离的抗体或其抗原结合部分，其中抗体或其抗原结合部分包含重链可变区和轻链可变区，其中重链可变区不包含选自由SEQ ID NO:15、37、59、81、103和125组成的组的氨基酸序列；并且其中轻链可变区不包含选自由SEQ ID NO:23、45、67、89、111和133组成的组的氨基酸序列。
在一些方面，本公开提供了拮抗IL-27并且特异性地结合至包含SEQ ID NO:2(IL-27p28)的Gln37、Leu38、Glu42、Glu46、Val49、Ser50、Leu53、Lys56、Leu142、Asp143、Arg145、Asp146、Leu147、Arg149、His150、Arg152、Phe153、Leu156、Ala157、Gly159、Phe160、Asn161、Leu162、Pro163和Glu164中的一个或多个氨基酸的表位的分离的抗体或其抗原结合部分，其中抗体或其抗原结合部分包含重链可变区和轻链可变区，其中重链可变区和轻链可变区分别不是选自由以下组成的组的氨基酸序列：
(i)SEQ ID NO:15和65；
(ii)SEQ ID NO:37和45；
(iii)SEQ ID NO:59和67；
(iv)SEQ ID NO:81和89；
(v)SEQ ID NO:103和111；和
(vi)SEQ ID NO:125和133。
在一些方面，本公开提供了拮抗IL-27并且特异性地结合至包含SEQ ID NO:2(IL-27p28)的Gln37、Leu38、Glu42、Glu46、Val49、Ser50、Leu53、Lys56、Leu142、Asp143、Arg145、Asp146、Leu147、Arg149、His150、Arg152、Phe153、Leu156、Ala157、Gly159、Phe160、Asn161、Leu162、Pro163和Glu164中的一个或多个氨基酸的表位的分离的抗体或其抗原结合部分，其中抗体或其抗原结合部分包含重链可变区和轻链可变区，其中重链可变区不包含与选自由SEQ ID NO:15、37、59、81、103和125组成的组的氨基酸序列至少90％同一的氨基酸序列；并且其中轻链可变区不包含与选自由SEQ ID NO:23、45、67、89、111和133组成的组的氨基酸序列至少90％同一的氨基酸序列。
在一些方面，本公开提供了拮抗IL-27并且特异性地结合至包含SEQ ID NO:2(IL-27p28)的Gln37、Leu38、Glu42、Glu46、Val49、Ser50、Leu53、Lys56、Leu142、Asp143、Arg145、Asp146、Leu147、Arg149、His150、Arg152、Phe153、Leu156、Ala157、Gly159、Phe160、Asn161、Leu162、Pro163和Glu164中的一个或多个氨基酸的表位的分离的抗体或其抗原结合部分，其中抗体或其抗原结合部分包含重链可变区和轻链可变区，其中重链可变区和轻链可变区分别不包含与选自由以下组成的组的氨基酸序列至少90％同一的氨基酸序列：
(i)SEQ ID NO:15和65；
(ii)SEQ ID NO:37和45；
(iii)SEQ ID NO:59和67；
(iv)SEQ ID NO:81和89；
(v)SEQ ID NO:103和111；和
(vi)SEQ ID NO:125和133。
在一些方面，本公开提供了拮抗IL-27并且特异性地结合至包含SEQ ID NO:2(IL-27p28)的Gln37、Leu38、Glu42、Glu46、Val49、Ser50、Leu53、Lys56、Leu142、Asp143、Arg145、Asp146、Leu147、Arg149、His150、Arg152、Phe153、Leu156、Ala157、Gly159、Phe160、Asn161、Leu162、Pro163和Glu164中的一个或多个氨基酸的表位的分离的抗体或其抗原结合部分，其中抗体或其抗原结合部分包含重链和轻链，其中重链不包含选自由SEQ ID NO:25、47、69、91、113和135组成的组的氨基酸序列；并且其中轻链不包含选自由SEQ ID NO:20、42、71、93和1115组成的组的氨基酸序列。
在一些方面，本公开提供了拮抗IL-27并且特异性地结合至包含SEQ ID NO:2(IL-27p28)的Gln37、Leu38、Glu42、Glu46、Val49、Ser50、Leu53、Lys56、Leu142、Asp143、Arg145、Asp146、Leu147、Arg149、His150、Arg152、Phe153、Leu156、Ala157、Gly159、Phe160、Asn161、Leu162、Pro163和Glu164中的一个或多个氨基酸的表位的分离的抗体或其抗原结合部分，其中抗体或其抗原结合部分包含重链和轻链，其中重链不包含与选自由SEQ ID NO:25、47、69、91、113和135组成的组的氨基酸序列至少90％同一的氨基酸序列；并且其中轻链不包含与选自由SEQ ID NO:20、42、71、93和115组成的组的氨基酸序列至少90％同一的氨基酸序列。
在一些方面，本公开提供了拮抗IL-27并且特异性地结合至包含SEQ ID NO:2(IL-27p28)的Gln37、Leu38、Glu42、Glu46、Val49、Ser50、Leu53、Lys56、Leu142、Asp143、Arg145、Asp146、Leu147、Arg149、His150、Arg152、Phe153、Leu156、Ala157、Gly159、Phe160、Asn161、Leu162、Pro163和Glu164中的一个或多个氨基酸的表位的分离的抗体或其抗原结合部分，其中抗体或其抗原结合部分包含重链和轻链，其中重链不包含选自由SEQ ID NO:29、51、73、95、117和139组成的组的氨基酸序列；并且其中轻链不包含选自由SEQ ID NO:71、49、71、93、115和137组成的组的氨基酸序列。
在一些方面，本公开提供了拮抗IL-27并且特异性地结合至包含SEQ ID NO:2(IL-27p28)的Gln37、Leu38、Glu42、Glu46、Val49、Ser50、Leu53、Lys56、Leu142、Asp143、Arg145、Asp146、Leu147、Arg149、His150、Arg152、Phe153、Leu156、Ala157、Gly159、Phe160、Asn161、Leu162、Pro163和Glu164中的一个或多个氨基酸的表位的分离的抗体或其抗原结合部分，其中抗体或其抗原结合部分包含重链和轻链，其中重链不包含与选自由SEQ ID NO:29、51、73、95、117和139组成的组的氨基酸序列至少90％同一的氨基酸序列；并且其中轻链不包含与选自由SEQ ID NO:71、49、71、93、115和137组成的组的氨基酸序列至少90％同一的氨基酸序列。
在一些方面，本公开提供了拮抗IL-27并且特异性地结合至包含SEQ ID NO:2(IL-27p28)的Gln37、Leu38、Glu42、Glu46、Val49、Ser50、Leu53、Lys56、Leu142、Asp143、Arg145、Asp146、Leu147、Arg149、His150、Arg152、Phe153、Leu156、Ala157、Gly159、Phe160、Asn161、Leu162、Pro163和Glu164中的一个或多个氨基酸的表位的分离的抗体或其抗原结合部分，其中抗体或其抗原结合部分包含重链和轻链，并且其中重链和轻链分别不包含与选自由以下组成的组的氨基酸序列：
(i)SEQ ID NO:25和27；
(ii)SEQ ID NO:47和49；
(iii)SEQ ID NO:69和71；
(iv)SEQ ID NO:91和93；
(v)SEQ ID NO:113和115；和
(vi)SEQ ID NO:135和137。
在一些方面，本公开提供了拮抗IL-27并且特异性地结合至包含SEQ ID NO:2(IL-27p28)的Gln37、Leu38、Glu42、Glu46、Val49、Ser50、Leu53、Lys56、Leu142、Asp143、Arg145、Asp146、Leu147、Arg149、His150、Arg152、Phe153、Leu156、Ala157、Gly159、Phe160、Asn161、Leu162、Pro163和Glu164中的一个或多个氨基酸的表位的分离的抗体或其抗原结合部分，其中抗体或其抗原结合部分包含重链和轻链，并且其中重链和轻链分别不包含与选自由以下组成的组的氨基酸序列至少90％同一的氨基酸序列：
(i)SEQ ID NO:25和27；
(ii)SEQ ID NO:47和49；
(iii)SEQ ID NO:69和71；
(iv)SEQ ID NO:91和93；
(v)SEQ ID NO:113和115；和
(vi)SEQ ID NO:135和137。
在一些方面，本公开提供了拮抗IL-27并且特异性地结合至包含SEQ ID NO:2(IL-27p28)的Gln37、Leu38、Glu42、Glu46、Val49、Ser50、Leu53、Lys56、Leu142、Asp143、Arg145、Asp146、Leu147、Arg149、His150、Arg152、Phe153、Leu156、Ala157、Gly159、Phe160、Asn161、Leu162、Pro163和Glu164中的一个或多个氨基酸的表位的分离的抗体或其抗原结合部分，其中抗体或其抗原结合部分包含重链和轻链，并且其中重链和轻链分别不包含与选自由以下组成的组的氨基酸序列：
(i)SEQ ID NO:29和27；
(ii)SEQ ID NO:51和49；
(iii)SEQ ID NO:73和72；
(iv)SEQ ID NO:95和93；
(v)SEQ ID NO:117和115；和
(vi)SEQ ID NO:139和137。
在一些方面，本公开提供了拮抗IL-27并且特异性地结合至包含SEQ ID NO:2(IL27-p28)的Gln37、Leu38、Glu42、Glu46、Val49、Ser50、Leu53、Lys56、Leu142、Asp143、Arg145、Asp146、Leu147、Arg149、His150、Arg152、Phe153、Leu156、Ala157、Gly159、Phe160、Asn161、Leu162、Pro163和Glu164中的一个或多个氨基酸的表位的分离的抗体或其抗原结合部分，其中抗体或其抗原结合部分包含重链和轻链，并且其中重链和轻链分别不包含与选自由以下组成的组的氨基酸序列至少90％同一的氨基酸序列：
(i)SEQ ID NO:29和27；
(ii)SEQ ID NO:51和49；
(iii)SEQ ID NO:73和72；
(iv)SEQ ID NO:95和93；
(v)SEQ ID NO:117和115；和
(vi)SEQ ID NO:139和137。
用于产生抗IL-27抗体及其抗原结合片段的方法
本公开的特征还在于用于产生本文所述的任何抗IL-27抗体或其抗原结合片段的方法。在一些方面，制备本文所述抗体的方法可包括用合适的免疫原免疫受试者(例如，非人哺乳动物)。本文阐述了用于产生本文所述的任何抗体的合适免疫原。例如，为了产生结合至IL-27p28的抗体，技术人员可用IL-27免疫合适的受试者(例如，非人哺乳动物，诸如大鼠、小鼠、沙鼠、仓鼠、狗、猫、猪、山羊、马或非人灵长类动物)。在一些方面，将包含示于SEQID NO:2中的氨基酸序列的全长人IL-27p28单体多肽用作免疫原。
可用合适的抗原对合适的受试者(例如，非人哺乳动物)进行免疫，同时随后进行足以引发哺乳动物产生抗体的多次加强免疫。可将免疫原与佐剂一起向受试者(例如，非人哺乳动物)施用。用于在受试者中产生抗体的佐剂包括但不限于蛋白质佐剂；细菌佐剂，例如完整细菌(BCG、厌氧短棒杆菌(Corynebacterium parvum)或明尼苏达沙门菌(Salmonella minnesota))和细菌组分，包括细胞壁骨架、海藻糖二霉菌酸酯、单磷酰基脂质A、结核杆菌(tubercle bacillus)的甲醇可提取残留物(MER)、完全或不完全弗氏佐剂；病毒佐剂；化学佐剂，例如氢氧化铝以及碘乙酸盐和胆固醇半琥珀酸酯。可用于诱导免疫响应的方法中的其他佐剂包括，例如，霍乱毒素和副痘病毒蛋白。还参见Bieg等人(1999)Autoimmunity 31(1):15-24。还参见例如，Lodmell等人(2000)Vaccine 18:1059-1066；Johnson等人(1999)J Med Chem 42:4640-4649；Baldridge等人(1999)Methods 19:103-107；以及Gupta等人(1995)Vaccine 13(14):1263-1276。
在一些方面，所述方法包括制备分泌与免疫原结合的单克隆抗体的杂交瘤细胞系。例如，用如上所述的IL-27多肽免疫合适的哺乳动物诸如实验室小鼠。可在免疫原的至少一次强化免疫后2至4天分离免疫哺乳动物的抗体产生细胞(例如，脾脏的B细胞)，然后将其在与合适的骨髓瘤细胞系的细胞融合之前在培养中短暂生长。可将细胞在融合启动子(诸如痘苗病毒或聚乙二醇)存在下融合。克隆在融合中获得的杂交细胞，并选择分泌所需抗体的细胞克隆。例如，可将用合适的免疫原免疫的Balb/c小鼠的脾细胞与骨髓瘤细胞系PAI或骨髓瘤细胞系Sp2/0-Ag 14的细胞融合。融合后，将细胞在合适的培养基中扩增，以规则的间隔为所述培养基补充选择培养基，例如HAT培养基，以防止正常骨髓瘤细胞生长超过所需的杂交瘤细胞。然后筛选获得的杂交细胞的所需抗体(例如与人IL-27结合的抗体)的分泌，并且在一些方面，技术人员可从美国专利第6,300,064号(属于Knappik等人；Morphosys AG)和Schoonbroodt等人(2005)Nucleic Acids Res 33(9):e81中描述的非免疫偏向的文库中鉴定抗IL-27抗体。
在一些方面，本文所述的方法可涉及例如噬菌体展示技术、细菌展示、酵母表面展示、真核生物病毒展示、哺乳动物细胞展示和无细胞(例如，核糖体展示)抗体筛选技术或与所述技术结合使用(参见例如，Etz等人(2001)J Bacteriol 183:6924-6935；Cornelis(2000)Curr Opin Biotechnol 11:450-454；Klemm等人(2000)Microbiology 146:3025-3032；Kieke等人(1997)Protein Eng 10:1303-1310；Yeung等人(2002)Biotechnol Prog18:212-220；Boder等人(2000)Methods Enzymology 328:430-444；Grabherr等人(2001)Comb Chem High Throughput Screen 4:185-192；Michael等人(1995)Gene Ther 2:660-668；Pereboev等人(2001)J Virol 75:7107-7113；Schaffitzel等人(1999)J ImmunolMethods 231:119-135；以及Hanes等人(2000)Nat Biotechnol 18:1287-1292)。
使用各种噬菌体展示方法鉴定抗体的方法是本领域已知的。在噬菌体展示方法中，将功能性抗体结构域展示在携带编码它们的多核苷酸序列的噬菌体颗粒的表面上。这种噬菌体可用于展示抗体的抗原结合结构域，例如Fab、Fv或二硫键稳定的Fv抗体片段，其从文库或组合抗体文库(例如，人或鼠)中表达。这些方法中使用的噬菌体通常是丝状噬菌体，诸如fd和M13。抗原结合结构域表达为与噬菌体外壳蛋白pIII、pVIII或pIX中的任一种重组融合的蛋白质。参见例如，Shi等人(2010)JMB 397:385-396。本文所述的可用于制备免疫球蛋白或其片段的噬菌体展示方法的实例包括以下文献中公开的那些：Brinkman等人(1995)J Immunol Methods 182:41-50；Ames等人(1995)J Immunol Methods 184:177-186；Kettleborough等人(1994)Eur J Immunol 24:952-958；Persic等人(1997)Gene 187:9-18；Burton等人(1994)Advances in Immunology 57:191-280；以及PCT公布第WO 90/02809号、第WO 91/10737号、第WO 92/01047号、第WO 92/18619号、第WO 93/11236号、第WO95/15982和第WO 95/20401号。合适的方法也描述在例如美国专利第5,698,426号、第5,223,409号、第5,403,484号、第5,580,717号、第5,427,908号、第5,750,753号、第5,821,047号、第5,571,698号、第5,427,908号、第5,516,637号、第5,780,225号、第5,658,727号、第5,733,743号和第5,969,108号中。
在一些方面，噬菌体展示抗体库可使用从免疫哺乳动物的B细胞收集的mRNA来产生。例如，可从用如上所述的IL-27多肽免疫的小鼠中分离包含B细胞的脾细胞样品。可从细胞中分离出mRNA，并使用标准分子生物学技术将其转化为cDNA。参见例如，Sambrook等人(1989)“Molecular Cloning:A Laboratory Manual,第2版,”Cold Spring HarborLaboratory Press,Cold Spring Harbor,N.Y.；Harlow和Lane(1988),同上；Benny K.C.Lo(2004),同上；以及Borrebaek(1995),同上。将编码免疫球蛋白重链和轻链多肽的可变区的cDNA用于构建噬菌体展示文库。用于产生这种文库的方法描述于，例如，Merz等人(1995)JNeurosci Methods 62(1-2):213-9；Di Niro等人(2005)Biochem J 388(Pt 3):889–894；以及Engberg等人(1995)Methods Mol Biol 51:355-376中。
在一些方面，选择和筛选的组合可用于从例如杂交瘤产生的抗体群体或噬菌体展示抗体文库中鉴定目标抗体。合适的方法在本领域中是已知的，并且描述于例如Hoogenboom(1997)Trends in Biotechnology 15:62-70；Brinkman等人(1995),同上；Ames等人(1995),同上；Kettleborough等人(1994),同上；Persic等人(1997),同上；以及Burton等人(1994),同上中。例如，使用标准分子生物学技术产生多种噬菌粒载体(每种噬菌粒载体编码噬菌体外壳蛋白(例如，M13噬菌体的pIII、pVIII或pIX)与不同抗原结合区的融合蛋白)，然后将其引入细菌群体(例如，大肠杆菌)中。在一些方面，细菌中噬菌体的表达可能需要使用辅助噬菌体。在一些方面，不需要辅助噬菌体(参见，例如，Chasteen等人,(2006)Nucleic Acids Res 34(21):e145)。回收从细菌产生的噬菌体，然后将其与例如与固体支持物结合的(固定的)靶抗原接触。还可将噬菌体与溶液中的抗原接触，随后使复合物结合到固体支持物上。
可使用本领域已知的任何基于免疫学或生物化学的方法来表征使用上述方法筛选的抗体亚群的对特定抗原(例如，人IL-27p28)的特异性和结合亲和力。例如，抗体与IL-27p28的特异性结合可以例如使用基于免疫学或生物化学的方法来确定，所述方法是诸如但不限于，如上所述的ELISA测定法、SPR测定、免疫沉淀测定、亲和色谱和平衡透析。可用于分析抗体的免疫特异性结合和交叉反应性的免疫测定包括但不限于竞争性和非竞争性测定系统，其使用诸如蛋白质印迹、RIA、ELISA(酶联免疫吸附测定)、“夹心”免疫分析、免疫沉淀测定、免疫扩散测定、凝集测定、补体结合测定、免疫放射测定、荧光免疫测定和蛋白A免疫测定等技术。此类测定是常规的并且在本领域中是公知的。
在其中选择的CDR氨基酸序列是短序列(例如，长度少于10-15个氨基酸)的方面，可如例如Shiraishi等人(2007)Nucleic Acids Symposium Series 51(1):129-130和美国专利第6,995,259号中所述，化学合成编码CDR的核酸。对于编码受者抗体的给定核酸序列，编码CDR的核酸序列的区域可使用标准分子生物学技术，利用化学合成的核酸来替换。可以合成化学合成的核酸的5’和3’末端以包含粘性末端限制性酶切位点，用于将核酸克隆到编码供体抗体的可变区的核酸中。
在一些方面，本文所述的抗IL-27抗体包含改变的重链恒定区，所述改变的重链恒定区相对于其相应的未改变的恒定区具有降低的(或无)效应子功能。涉及抗IL-27抗体的恒定区的效应子功能可通过改变恒定区或Fc区的性质来调整。改变的效应子功能包括，例如，以下活性中的一种或多种的调节：抗体依赖性细胞毒性(ADCC)、补体依赖性细胞毒性(CDC)、细胞凋亡、与一种或多种Fc受体的结合以及促炎响应。调节是指与恒定区的未改变形式的活性相比，包含改变的恒定区的受试抗体所表现出的效应子功能活性的增强、降低或消除。在特定方面，调节包括其中活性被消除或完全不存在的情况。
在一方面，本文所述的抗IL-27抗体包含IgG4重链恒定区。在一方面，IgG4重链恒定区是野生型IgG4重链恒定区。在另一方面，例如，根据EU编号(Kabat,E.A.等人，同上)，IgG4恒定区包含突变，例如，S228P和L235E或L235A之一或两者。在一方面，本文所述的抗IL-27抗体包含IgG1恒定区。在一方面，IgG1重链恒定区是野生型IgG1重链恒定区。在另一方面，IgG1重链恒定区包含突变。
具有改变的FcR结合亲和力和/或ADCC活性和/或改变的CDC活性的改变的恒定区是这样的多肽，所述多肽与恒定区的未改变形式相比具有提高或降低的FcR结合活性和/或ADCC活性和/或CDC活性。显示与FcR结合增强的改变的恒定区以比未改变的多肽更大的亲和力结合至少一种FcR。显示与FcR结合降低的改变的恒定区以比恒定区的未改变形式更低的亲和力结合至少一种FcR。此类显示出与FcR的结合降低的变体可具有很少或不明显的与FcR的结合，例如，与天然序列免疫球蛋白恒定区或Fc区与FcR的结合水平相比，0至50％(例如，小于50％、49％、48％、47％、46％、45％、44％、43％、42％、41％、40％、39％、38％、37％、36％、35％、34％、33％、32％、31％、30％、29％、28％、27％、26％、25％、24％、23％、22％、21％、20％、19％、18％、17％、16％、15％、14％、13％、12％、11％、10％、9％、8％、7％、6％、5％、4％、3％、2％或1％)的与FcR的结合。类似地，与未改变的恒定区相比，显示经调整的ADCC和/或CDC活性的改变的恒定区可显示出增强的或降低的ADCC和/或CDC活性。例如，在一些方面，包含改变的恒定区的抗IL-27抗体可表现出恒定区的未改变形式的ADCC和/或CDC活性的约0至50％(例如，小于50％、49％、48％、47％、46％、45％、44％、43％、42％、41％、40％、39％、38％、37％、36％、35％、34％、33％、32％、31％、30％、29％、28％、27％、26％、25％、24％、23％、22％、21％、20％、19％、18％、17％、16％、15％、14％、13％、12％、11％、10％、9％、8％、7％、6％、5％、4％、3％、2％或1％)。表现出降低的ADCC和/或CDC的包含改变的恒定区的本文所述的抗IL-27抗体可表现出降低的ADCC和/或CDC活性或无ADCC和/或CDC活性。
在一些方面，本文所述的抗IL-27抗体表现出降低的效应子功能或无效应子功能。在一些方面，抗IL-27抗体包含杂交恒定区或其部分，诸如G2/G4杂交恒定区(参见，例如，Burton等人(1992)Adv Immun 51:1-18；Canfield等人(1991)J Exp Med 173:1483-1491；以及Mueller等人(1997)Mol Immunol 34(6):441-452)。参见上文。
在一些方面，抗IL-27抗体可包含表现出增强或降低的补体依赖性细胞毒性(CDC)的改变的恒定区。可通过在抗体的Fc区中引入一个或多个氨基酸取代、插入或缺失来调整CDC活性。参见，例如美国专利第6,194,551号。可选地或另外地，可在Fc区中引入一个或多个半胱氨酸残基，从而允许在该区域中形成链间二硫键。如此产生的同二聚体抗体可能具有提高或降低的内化能力和/或增强或降低的补体介导的细胞杀伤。参见例如，Caron等人(1992)J Exp Med 176:1191-1195和Shopes(1992)Immunol 148:2918-2922；PCT公布第WO99/51642号和第WO 94/29351号；Duncan和Winter(1988)Nature 322:738-40；以及美国专利第5,648,260号和第5,624,821号。
重组抗体的表达和纯化
本文所述的抗体或其抗原结合片段可使用分子生物学和蛋白质化学领域中已知的多种技术来生产。例如，可将编码抗体的重链和轻链多肽中的一种或两种的核酸插入包含转录和翻译调控序列的表达载体中，所述调控序列包括例如启动子序列、核糖体结合位点、转录起始和终止序列、翻译起始和终止序列、转录终止子信号、多腺苷酸化信号和增强子或活化因子序列。调控序列包括启动子以及转录起始和终止序列。另外，表达载体可包括一个以上的复制系统，使得其可在两种不同的生物体中得以保持，例如在哺乳动物或昆虫细胞中进行表达，以及在原核宿主中进行克隆和扩增。
几种可能的载体系统可用于在哺乳动物细胞中表达从核酸克隆的重链和轻链多肽。一类载体依赖于将所需基因序列整合到宿主细胞基因组中。具有稳定整合的DNA的细胞可通过同时引入药物抗性基因诸如大肠杆菌gpt(Mulligan和Berg(1981)Proc Natl AcadSci USA 78:2072)或Tn5 neo(Southern和Berg(1982)Mol Appl Genet 1:327)来选择。可将选择标记基因与待表达的DNA序列连接，或者可通过共转染将可选择标记基因引入同一细胞(Wigler等人(1979)Cell 16:77)。第二类载体利用赋予染色体外质粒自主复制能力的DNA元件。这些载体可源自动物病毒，诸如牛乳头瘤病毒(Sarver等人(1982)Proc NatlAcad Sci USA,79:7147)、巨细胞病毒、多瘤病毒(Deans等人(1984)Proc Natl Acad SciUSA 81:1292)或SV40病毒(Lusky和Botchan(1981)Nature 293:79)。
可将表达载体以适合核酸后续表达的方式引入细胞。如下所论述的，引入方法主要由靶细胞类型决定。示例性方法包括CaPO4沉淀、脂质体融合、阳离子脂质体、电穿孔、病毒感染、葡聚糖介导的转染、凝聚胺介导的转染、原生质体融合和直接显微注射。
用于表达抗体或其抗原结合片段的合适宿主细胞包括酵母、细菌、昆虫、植物和哺乳动物细胞。特别感兴趣的是细菌诸如大肠杆菌、真菌诸如酿酒酵母和毕赤酵母、昆虫细胞诸如SF9、哺乳动物细胞系(例如，人细胞系)以及原代细胞系。
在一些方面，抗体或其片段可以在转基因动物(例如，转基因哺乳动物)中表达并从其纯化。例如，如在例如Houdebine(2002)Curr Opin Biotechnol 13(6):625-629；vanKuik-Romeijn等人(2000)Transgenic Res 9(2):155-159；和Pollock等人(1999)JImmunol Methods 231(1-2):147-157中所述，可在转基因非人哺乳动物(例如，啮齿动物)中产生抗体，并从乳汁中分离所述抗体。
抗体及其片段可通过在足以允许蛋白质表达的条件下培养用含有编码抗体或片段的核酸的表达载体转化的宿主细胞，持续一定量的时间而从细胞中产生。用于蛋白质表达的此类条件将随表达载体和宿主细胞的选择而变化，并且将由本领域技术人员通过常规实验来容易地确定。例如，可将在大肠杆菌中表达的抗体从包涵体中重新折叠(参见例如，Hou等人(1998)Cytokine 10:319-30)。细菌表达系统及其使用方法在本领域中是公知的(参见Current Protocols in Molecular Biology,Wiley&Sons,and MolecularCloning--A Laboratory Manual--第3版，Cold Spring Harbor Laboratory Press,NewYork(2001))。密码子、合适的表达载体和合适的宿主细胞的选择将根据许多因素而变化，并且可以根据需要容易地进行优化。本文所述的抗体(或其片段)可在哺乳动物细胞或其他表达系统(包括但不限于酵母、杆状病毒)和体外表达系统(参见例如，Kaszubska等人(2000)Protein Expression and Purification 18:213-220)中表达。
表达后，可以分离抗体及其片段。抗体或其片段可用本领域技术人员已知的多种方法分离或纯化，这取决于样品中存在的其他组分。标准纯化方法包括电泳技术、分子技术、免疫学技术和色谱技术，包括离子交换色谱、疏水色谱、亲和色谱和反相HPLC色谱。例如，可使用标准抗-抗体柱(例如，蛋白-A或蛋白-G柱)纯化抗体。与蛋白质浓缩结合的超滤和渗滤技术也是有用的。参见例如，Scopes(1994)“Protein Purification，第3版，”Springer-Verlag,New York City,New York。必需的纯化程度将根据所需的用途而变化。在一些情况下，所表达的抗体或其片段的纯化不是必需的。
测定纯化抗体或其片段的产率或纯度的方法在本领域中是已知的，包括例如Bradford测定、紫外光谱学、双缩脲蛋白测定、Lowry蛋白测定、氨基黑蛋白测定、高压液相色谱(HPLC)、质谱(MS)和凝胶电泳方法(例如，使用蛋白染色剂诸如考马斯蓝或胶体银染色)。
抗体或其抗原结合片段的修饰
可在表达和纯化后修饰抗体或其抗原结合片段。修饰可以是共价或非共价修饰。此类修饰可通过例如多肽的靶向氨基酸残基与能够与选定的侧链或末端残基反应的有机衍生剂反应而引入抗体或片段中。可使用多个标准(包括例如抗体或片段的结构分析或氨基酸序列分析)中的任一个选择合适的修饰位点。
在一些方面，可将抗体或其抗原结合片段与异源部分缀合。异源部分可以是例如异源多肽、治疗剂(例如，毒素或药物)或可检测标记，诸如但不限于放射性标记、酶促标记、荧光标记、重金属标记、发光标记或亲和标签诸如生物素或链霉抗生物素蛋白。合适的异源多肽包括，例如，抗原标签(FLAG(DYKDDDDK(SEQ ID NO:141))、聚组氨酸(6-His；HHHHHH(SEQ ID NO:142))、血凝素(HA；YPYDVPDYA(SEQ ID NO:143))、谷胱甘肽-S-转移酶(GST)或麦芽糖结合蛋白(MBP)，用于纯化抗体或片段。异源多肽还包括用作诊断或可检测标志物的多肽(例如酶)，例如萤光素酶、荧光蛋白(例如，绿色荧光蛋白(GFP))或氯霉素乙酰转移酶(CAT)。合适的放射性标记包括例如32P、33P、14C、125I、131I、35S和3H。合适的荧光标记包括但不限于荧光素、异硫氰酸荧光素(FITC)、绿色荧光蛋白(GFP)、DyLightTM488、藻红蛋白(PE)、碘化丙啶(PI)、PerCP、PE-Alexa
Figure GDA0003745251250000891
700、Cy5、别藻蓝蛋白和Cy7。发光标记包括，例如，多种发光镧系元素(例如，铕或铽)螯合物中的任一种。例如，合适的铕螯合物包括二乙烯三胺五乙酸(DTPA)或四氮杂环十二烷-1,4,7,10-四乙酸(DOTA)的铕螯合物。酶促标记包括例如碱性磷酸酶、CAT、萤光素酶和辣根过氧化物酶。
两种蛋白质(例如，抗体和异源部分)可使用许多已知的化学交联剂中的任一种进行交联。此类交联剂的实例是通过包含“受阻的”二硫键的键联连接两个氨基酸残基的那些交联剂。在这些键联中，交联单元内的二硫键被保护(通过阻碍二硫键两侧上的基团)免受通过例如还原型谷胱甘肽或二硫化物还原酶的作用进行的还原。一种合适的试剂4-琥珀酰亚胺基氧基羰基-α-甲基-α(2-吡啶基二硫代)甲苯(SMPT)利用一种蛋白质上的末端赖氨酸和另一种蛋白质上的末端半胱氨酸在两个蛋白质之间形成这种键联。还可使用通过每个蛋白质上不同的偶联部分交联的异双功能试剂。其他有用的交联剂包括但不限于连接两个氨基(例如，N-5-叠氮基-2-硝基苯甲酰基氧基琥珀酰亚胺)、两个巯基(例如，1,4-双-马来酰亚胺基丁烷)、氨基和巯基(例如，间-马来酰亚胺基苯甲酰基-N-羟基琥珀酰亚胺酯)、氨基和羧基(例如，4-[对-叠氮基水杨酰胺基]丁胺)以及氨基和存在于精氨酸的侧链中的胍基(例如，对-叠氮基苯基乙二醛一水合物)的试剂。
在一些方面，可将放射性标记直接与抗体的氨基酸骨架直接缀合。或者，可将放射性标记物作为更大分子的一部分(例如，间-[125I]碘代苯基-N-羟基琥珀酰亚胺([125I]mIPNHS)中的125I)包含，其与游离氨基结合以形成相关蛋白质的间碘代苯基(mIP)衍生物(参见例如，Rogers等人(1997)J Nucl Med 38:1221-1229)或螯合物(例如，与DOTA或DTPA的螯合物)，然后又将其与蛋白质骨架结合。将放射性标记物或含有它们的更大的分子/螯合物与本文所述的抗体或抗原结合片段缀合的方法是本领域已知的。此类方法涉及在有利于放射性标记物或螯合剂与蛋白质结合的条件(例如，pH、盐浓度和/或温度)下将蛋白质与放射性标记物一起孵育(例如，参见美国专利第6,001,329号)。
将荧光标记(有时称为“荧光团”)与蛋白质(例如，抗体)缀合的方法在蛋白质化学领域中是已知的。例如，可使用连接到荧光团的琥珀酰亚胺(NHS)酯或四氟苯基(TFP)酯部分，将荧光团与蛋白质的游离氨基(例如，赖氨酸的)或巯基(例如，半胱氨酸的)缀合。在一些方面，可将荧光团与异双官能交联剂部分(诸如磺基-SMCC)缀合。合适的缀合方法涉及在促进荧光团与蛋白质结合的条件下，将抗体蛋白质或其片段与荧光团一起孵育。参见，例如，Welch和Redvanly(2003)“Handbook of Radiopharmaceuticals:Radiochemistry andApplications,”John Wiley和Sons(ISBN 0471495603)。
在一些方面，可以例如用改善抗体在循环中(例如，在血液、血清或其他组织中)的稳定性和/或保留的部分修饰抗体或片段。例如，可如例如Lee等人(1999)Bioconjug Chem10(6):973-8；Kinstler等人(2002)Advanced Drug Deliveries Reviews 54:477-485；和Roberts等人(2002)Advanced Drug Delivery Reviews 54:459-476中所述对抗体或片段进行聚乙二醇化，或者可对所述对抗体或片段进行羟乙基化(HESylated)(FreseniusKabi,Germany；参见例如
Figure GDA0003745251250000901
等人(2010)Int J Pharm 387(1-2):110-119)。稳定化部分可将抗体(或片段)的稳定性或保留性提高至少1.5倍(例如，至少2倍、5倍、10倍、15倍、20倍、25倍、30倍、40倍或50倍或更多倍)。
在一些方面，可以糖基化本文所述的抗体或其抗原结合片段。在一些方面，可将本文所述的抗体或其抗原结合片段进行酶促或化学处理，或者从细胞中产生所述抗体或其抗原结合片段，使得所述抗体或片段具有减少的糖基化或不存在糖基化。用于产生糖基化减少的抗体的方法是本领域已知的，并且描述于例如美国专利第6,933,368号；Wright等人(1991)EMBO J 10(10):2717-2723；和Co等人(1993)Mol Immunol 30:1361。
药物组合物和制剂
在某些方面，本发明提供了包含抗IL-27抗体和药学上可接受的稀释剂、载体、增溶剂、乳化剂、防腐剂和/或佐剂的药物组合物。
在某些方面，可接受的制剂材料优选在所采用的剂量和浓度下对受者无毒。在某些方面，一种或多种制剂材料用于皮下和/或静脉内施用。在某些方面，药物组合物可包含用于改变、维持或保存例如组合物的pH、重量摩尔渗透压浓度、粘度、澄清度、颜色、等渗性、气味、无菌性、稳定性、溶出或释放速率、吸附或渗透的制剂材料。在某些方面，合适的制剂材料包括但不限于氨基酸(诸如甘氨酸、谷氨酰胺、天冬酰胺、精氨酸或赖氨酸)；抗菌剂；抗氧化剂(诸如抗坏血酸、亚硫酸钠或亚硫酸氢钠)；缓冲剂(诸如硼酸盐、碳酸氢盐、Tris-HCl、柠檬酸盐、磷酸盐或其他有机酸)；填充剂(诸如甘露醇或甘氨酸)；螯合剂(诸如乙二胺四乙酸(EDTA))；络合剂(诸如咖啡因、聚乙烯吡咯烷酮、β-环糊精或羟基丙基-β-环糊精)；填充物；单糖；二糖；和其他碳水化合物(诸如葡萄糖、甘露糖或糊精)；蛋白质(诸如血清白蛋白、明胶或免疫球蛋白)；着色剂、调味剂和稀释剂；乳化剂；亲水聚合物(诸如聚乙烯吡咯烷酮)；低分子量多肽；成盐抗衡离子(诸如钠)；防腐剂(诸如苯扎氯铵、苯甲酸、水杨酸、硫柳汞、苯乙醇、对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸丙酯、氯己定、山梨酸或过氧化氢)；溶剂(诸如甘油、丙二醇或聚乙二醇)；糖醇(诸如甘露醇或山梨醇)；悬浮剂；表面活性剂或湿润剂(诸如普流尼克、PEG、脱水山梨醇酯、聚山梨醇酯诸如聚山梨醇酯20、聚山梨醇酯80、triton、氨丁三醇、卵磷脂、胆固醇、泰洛沙泊)；稳定性增强剂(诸如蔗糖或山梨醇)；张力增强剂(诸如碱金属卤化物，优选氯化钠或氯化钾，甘露醇山梨醇)；递送媒介物；稀释剂；赋形剂和/或药物佐剂。(Remington's Pharmaceutical Sciences，第18版，A.R.Gennaro，编辑，Mack Publishing Company(1995)。在某些方面，制剂包含PBS；20mM NaOAC(pH 5.2)、50mMNaCl；和/或10mM NAOAC(pH 5.2)、9％的蔗糖。在某些方面，最佳药物组合物将由本领域技术人员根据例如预期的施用途径、递送形式和所需剂量来确定。参见例如，Remington'sPharmaceutical Sciences，同上。在某些方面，此类组合物可影响抗IL-27抗体的物理状态、稳定性、体内释放速率和/或体内清除速率。
在某些方面，药物组合物中的主要媒介物或载体本质上可以是水性或非水性的。例如，在某些方面，合适的媒介物或载体可以是注射用水、生理盐水溶液或人工脑脊液，其可能补充有用于肠胃外施用的组合物中常用的其他材料。在某些方面，盐水包含等渗磷酸盐缓冲盐水。在某些方面，中性缓冲盐水或与血清白蛋白混合的盐水是进一步的示例性媒介物。在某些方面，药物组合物包含pH为约7.0-8.5的Tris缓冲液，或pH为约4.0-5.5的乙酸盐缓冲液，其还可包含山梨醇或其合适的替代物。在某些方面，可通过将所选的具有所需纯度的组合物与任选的配制剂(Remington's Pharmaceutical Sciences，同上)以冻干饼或水溶液的形式混合来制备包含抗IL-27抗体的组合物以用于储存。另外，在某些方面，可使用合适的赋形剂诸如蔗糖将包含抗IL-27抗体的组合物配制成冻干物。
在某些方面，可选择药物组合物用于肠胃外递送。在某些方面，可选择组合物用于吸入或通过消化道(诸如口服)递送。此类药学上可接受的组合物的制备在本领域技术人员的能力范围内。
在某些方面，制剂组分以施用部位可接受的浓度存在。在某些方面，缓冲液用于将组合物保持在生理pH或稍低的pH下，通常在约5至约8的pH范围内。
在某些方面，当设想肠胃外施用时，治疗性组合物可以以无热原、肠胃外可接受的水溶液的形式存在于药学上可接受的媒介物中，所述水溶液包含抗IL-27抗体。在某些方面，用于肠胃外注射的媒介物是无菌蒸馏水，其中抗IL-27抗体被配制成无菌等渗溶液，并被适当保存。在某些方面，所述制备可涉及将所需分子与剂(诸如可注射微球、生物可侵蚀颗粒、聚合化合物(诸如聚乳酸或聚乙醇酸)、珠粒或脂质体)一起配制，所述剂可提供产品的受控或持续释放，所述产品然后可通过储库注射进行递送。在某些方面，还可使用透明质酸，所述透明质酸可具有促进循环中的持续时间的作用。在某些方面，可植入药物递送装置可用于引入所需的分子。
在某些方面，药物组合物可以被配制用于吸入。在某些方面，抗IL-27抗体可被配制成干粉用于吸入。在某些方面，可用用于气雾剂递送的推进剂配制包含抗IL-27抗体的吸入溶液。在某些方面，可将溶液雾化。在PCT申请第PCT/US94/001875号(其描述了经化学修饰的蛋白质的肺部递送)中进一步描述了肺部施用。
在某些方面，设想了可以口服施用制剂。在某些方面，可以用或可以不用通常用于配制固体剂型诸如片剂和胶囊剂的那些载体来配制以这种方式施用的抗IL-27抗体。在某些方面，胶囊剂可被设计成在胃肠道中在生物利用度被最大化且体系前降解被最小化时的点释放制剂的活性部分。在某些方面，可包括至少一种另外的剂以促进抗IL-27抗体的吸收。在某些方面，还可使用稀释剂、调味剂、低熔点蜡、植物油、润滑剂、悬浮剂、片剂崩解剂和粘合剂。
在某些方面，药物组合物可包含有效量的抗IL-27抗体与适合于片剂生产的无毒赋形剂的混合物。在某些方面，通过将片剂溶解在无菌水或另一种合适的媒介物中，可以单位剂量形式制备溶液。在某些方面，合适的赋形剂包括但不限于惰性稀释剂，诸如碳酸钙、碳酸钠或碳酸氢钠、乳糖或磷酸钙；或粘合剂，诸如淀粉、明胶或阿拉伯胶；或润滑剂，诸如硬脂酸镁、硬脂酸或滑石。
其他药物组合物对本领域技术人员来说是显而易见的，包括在持续或受控释放制剂中包含抗IL-27抗体的制剂。在某些方面，用于配制多种其他持续或受控递送部件(诸如脂质体载体、可生物消蚀的微粒或多孔珠粒和储库注射剂)的技术对于本领域技术人员来说也是已知的。参见例如描述用于递送药物组合物的多孔聚合物微粒的受控释放的PCT申请第PCT/US93/00829号。在某些方面，持续释放制剂可包括成型制品形式(例如薄膜或微胶囊)的半透性聚合物基质。持续释放基质可包括聚酯、水凝胶、聚丙交酯(美国专利第3,773,919和EP 058,481)、L-谷氨酸和γ-乙基-L-谷氨酸的共聚物(Sidman等人，Biopolymers,22:547-556(1983))、聚(2-羟基乙基-甲基丙烯酸酯)(Langer等人，J.Biomed.Mater.Res.,15:167-277(1981)和Langer,Chem.Tech.,12:98-105(1982))、乙烯乙酸乙烯酯(Langer等人，同上)或聚-D(-)-3-羟基丁酸(EP 133,988)。在某些方面，持续释放组合物还可包含脂质体，其可通过本领域已知的几种方法中的任一种来制备。参见，例如，Eppstein等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA,82:3688-3692(1985)；EP 036,676；EP 088,046和EP 143,949。
用于体内施用的药物组合物通常是无菌的。在某些方面，这可以通过无菌过滤膜过滤来实现。在某些方面，当冻干组合物时，使用该方法的灭菌可以在冻干和复原之前或之后进行。在某些方面，用于肠胃外施用的组合物可以以冻干形式或溶液形式储存。在某些方面，通常将肠胃外组合物置于具有无菌入口的容器中，例如，具有可被皮下注射针头刺穿的塞子的静脉内注射溶液袋或小瓶。
在某些方面，一旦配制了药物组合物，就可将其以溶液、悬浮液、凝胶、乳液、固体的形式或作为脱水或冻干粉末储存在无菌小瓶中。在某些方面，可将此类制剂以即用型或施用复原的形式(例如，冻干的)储存。
在某些方面，提供了用于产生单剂量施用单位的药盒。在某些方面，药盒可包含含有干燥蛋白质的第一容器和含有水性制剂的第二容器。在某些方面，包括了包含单室和多室预填充注射器(例如，液体注射器和冻干注射器)的药盒。
在某些方面，待治疗性使用的包含抗IL-27抗体的药物组合物的有效量将取决于例如治疗背景和目标。本领域技术人员将理解，根据某些方面，用于治疗的合适剂量水平将因此部分取决于所递送的分子、对其使用抗IL-27抗体的适应症、施用途径和患者的尺寸(体重、身体表面积或器官尺寸)和/或状况(年龄和一般健康状况)而变化。在某些方面，临床医生可滴定剂量并修改施用途径以获得最佳治疗效果。
在某些方面，给药频率将考虑所用制剂中抗IL-27抗体的药代动力学参数。在某些方面，临床医生将施用该组合物，直至达到实现期望效果的剂量。在某些方面，所述组合物因此可以随时间以单剂量或两个或更多个剂量(其可以包含或可以不包含相同量的所需分子)施用，或者作为经由植入装置或导管的连续输注施用。适当剂量的进一步细化由本领域普通技术人员常规进行，并且在他们常规执行的任务的范围内。在某些方面，可通过使用适当的剂量-反应数据来确定适当的剂量。
在某些方面，药物组合物的施用途径依照已知的方法，例如口服，通过经由静脉内、腹膜内、脑内(实质内)、脑室内、肌内、皮下、眼内、动脉内、门静脉内或病变内途径的注射；通过持续释放系统或植入装置。在某些方面，组合物可通过推注注射施用或通过输注连续施用，或通过植入装置施用。在某些方面，组合疗法的单个成分可以通过不同的途径施用。
在某些方面，可通过植入其上已吸附或包封了所需分子的膜、海绵或另一种合适的材料来局部施用所述组合物。在某些方面，在使用植入装置的情况下，可将所述装置植入任何合适的组织或器官中，并且所需分子的递送可通过扩散、定时释放推注或连续施用来进行。在某些方面，可希望以离体方式使用包含抗IL-27抗体的药物组合物。在此类情况下，将从患者取出的细胞、组织和/或器官暴露于包含抗IL-27抗体的药物组合物中，之后将所述细胞、组织和/或器官植入回患者体内。
在某些方面，可通过使用方法(诸如本文所述的那些方法)植入某些已被遗传工程化的细胞以表达和分泌多肽来递送抗IL-27抗体。在某些方面，此类细胞可以是动物或人细胞，并且可以是自体的、异源的或异种的。在某些方面，可使细胞永生化。在某些方面，为了减少免疫响应的机会，可包封细胞以避免对周围组织的浸润。在某些方面，包封材料通常是生物相容的、半透性的聚合物外壳或膜，其允许一种或多种蛋白质产物的释放，但防止细胞被患者的免疫系统或来自周围组织的其他有害因素破坏。
应用
本文所述的组合物可用于多种诊断和治疗应用。例如，可检测标记的抗原结合分子可用于检测靶抗原在样品(例如，生物样品)中的存在或量的测定。所述组合物可用于研究靶抗原功能的抑制的体外测定。在例如其中所述组合物与补体蛋白结合并抑制补体蛋白的一些方面，所述组合物可在测定中用作阳性对照，所述测定被设计成鉴定抑制补体活性或以其他方式用于治疗补体相关病症的其他新型化合物。例如，IL-27抑制组合物可在测定中用作阳性对照，以鉴定减少或消除IL-27产生的其他化合物(例如，小分子、适体或抗体)。所述组合物也可用于下文详述的治疗方法。
在一些方面，本公开提供了检测生物样品或受试者中IL-27的方法，包括(i)在允许抗体分子和IL-27发生相互作用的条件下，使样品或受试者(和任选的参考样品或受试者)与本文所述的任何抗体接触，以及(ii)检测抗体分子与样品或受试者(和任选的参考样品或受试者)之间复合物的形成。
药盒
药盒可包括如本文公开的抗IL-27抗体和使用说明书。药盒可在适当的容器中包含抗IL-27抗体、一种或多种对照和各种缓冲液、试剂、酶以及本领域公知的其他标准成分。在一些方面，本公开提供了药盒，其包括本文公开的抗IL-27抗体或抗原结合部分，以及刺激受试者中的免疫响应或治疗受试者的癌症的使用说明书，任选地具有与本文所述的一种或多种另外的治疗剂或程序组合的使用说明书。
容器可包括至少一个可将抗IL-27抗体放入其中以及在一些情况下适当地将抗IL-27抗体在其中等分的小瓶、孔、试管、烧瓶、瓶子、注射器或其他容器装置。如果提供了另外的部件，药盒可含有可将这种部件放入其中的另外的容器。所述药盒还可包括以密封方式容纳抗IL-27抗体和任何其他试剂容器的装置以用于商业销售。此类容器可包括将所需小瓶保持在其中的注塑成型或吹塑成型塑料容器。容器和/或药盒可包括带有使用说明书和/或警告的标签。
使用方法
本发明的组合物具有许多体外和体内用途，包括IL-27和/或对IL-27功能的拮抗的检测和/或定量。
在一些方面，本公开提供了抑制或减少细胞中的STAT1和/或STAT3磷酸化的方法，所述方法包括使所述细胞与本公开所提供的分离的抗体或抗原结合片段接触，其中所述抗体或其抗原结合部分抑制或减少细胞中的STAT1和/或STAT3磷酸化。
在一些方面，本公开提供了抑制或减轻细胞中对CD161表达的抑制的方法，所述方法包括使所述细胞与本公开所提供的分离的抗体或抗原结合片段接触，其中所述抗体或其抗原结合部分抑制或减轻细胞中对CD161表达的抑制。
在一些方面，本公开提供了抑制或减少细胞中的PD-L1和/或TIM-3表达的方法，所述方法包括使所述细胞与本公开所提供的分离的抗体或抗原结合片段接触，其中所述抗体或其抗原结合部分抑制或细胞中的PD-L1和/或TIM-3表达。
在一些方面，本公开提供了诱导或增强一种或多种细胞因子从细胞的分泌的方法，所述方法包括使所述细胞与本公开所提供的分离的抗体或抗原结合片段接触，其中所述抗体或其抗原结合部分诱导或增强PD-1介导的一种或多种细胞因子从细胞的分泌。
在一些方面，本公开提供了刺激受试者中的免疫响应的方法，所述方法包括向所述受试者施用有效量的本公开所提供的特异性地结合至并拮抗人IL-27的分离的抗体或其抗原结合部分，或包含所述抗体或其抗原结合部分以及药学上可接受的载体的药物组合物。
在一些方面，本公开提供了治疗受试者的癌症的方法，所述方法包括向所述受试者施用有效量的本公开所提供的特异性地结合至并拮抗IL-27的分离的抗体或其抗原结合部分，或包含所述抗体或其抗原结合部分以及药学上可接受的载体的药物组合物。
在一些方面，本公开提供了刺激受试者中的免疫响应或治疗受试者的癌症的方法，所述方法包括向所述受试者施用有效量的本公开所提供的分离的抗体或抗原结合片段，或包含所述抗体或其抗原结合部分和药学上可接受的载体的药物组合物，其中所述抗体或其抗原结合部分或药物组合物抑制或减少细胞中的STAT1和/或STAT3磷酸化，从而刺激免疫响应或治疗癌症。
在一些方面，本公开提供了刺激受试者中的免疫响应或治疗受试者的癌症的方法，所述方法包括向所述受试者施用有效量的本公开所提供的分离的抗体或抗原结合片段，或包含所述抗体或其抗原结合部分和药学上可接受的载体的药物组合物，其中所述抗体或其抗原结合部分或药物组合物抑制或减轻细胞中对CD161表达的抑制，从而刺激免疫响应或治疗癌症。
在一些方面，本公开提供了刺激受试者中的免疫响应或治疗受试者的癌症的方法，所述方法包括向所述受试者施用有效量的本公开所提供的分离的抗体或抗原结合片段，或包含所述抗体或其抗原结合部分和药学上可接受的载体的药物组合物，其中所述抗体或其抗原结合部分或药物组合物抑制或减少细胞中的PD-L1和/或TIM-3表达，从而刺激免疫响应或治疗癌症。
在一些方面，本公开提供了刺激受试者中的免疫响应或治疗受试者的癌症的方法，所述方法包括向所述受试者施用有效量的本公开所提供的分离的抗体或抗原结合片段，或包含所述抗体或其抗原结合部分和药学上可接受的载体的药物组合物，其中所述抗体或其抗原结合部分或药物组合物诱导或增强PD-1介导的一种或多种细胞因子从细胞的分泌，从而刺激免疫响应或治疗癌症。
在一些方面，所述癌症选自肺癌(例如，非小细胞肺癌)、肉瘤、睾丸癌、卵巢癌、胰腺癌、乳腺癌(例如，三阴性乳腺癌)、黑素瘤、头颈癌(例如，鳞状头颈癌)、结肠直肠癌、膀胱癌、子宫内膜癌、前列腺癌、甲状腺癌、肝细胞癌、胃癌、脑癌、淋巴瘤(例如，DL-BCL)、白血病(例如，AML)或肾癌(例如，肾细胞癌，例如，肾透明细胞癌)。
上述组合物尤其可用于治疗或预防受试者的多种癌症的方法。可使用多种部分取决于施用途径的方法向受试者(例如人受试者)施用组合物。所述途径可以是例如静脉内注射或输注(IV)、皮下注射(SC)、腹膜内(IP)注射、肌内注射(IM)或鞘内注射(IT)。注射可以是推注或连续输注。
施用可通过例如局部输注、注射或通过植入来实现。植入物可以是多孔的、无孔的或凝胶状的材料，包括膜，诸如硅橡胶膜或纤维。植入物可被配置用于向受试者持续或定期释放组合物。参见，例如美国专利申请公布第20080241223号；美国专利第5,501,856号、第4,863,457号和第3,710,795号；EP488401；以及EP 430539，所述专利申请和专利中的每一项以引用方式整体并入本文。可通过基于例如扩散系统、可侵蚀系统或对流系统的可植入装置(例如，渗透泵、生物可降解的植入物、电扩散系统、电渗系统、蒸汽压泵、电解泵、起泡泵、压电泵、基于侵蚀的系统或机电系统)向受试者递送组合物。
在一些方面，通过局部施用将抗IL-27抗体或其抗原结合片段治疗性地递送给受试者。
本文所述的抗体或其片段的合适剂量(所述剂量能够治疗或预防受试者的癌症)可取决于多种因素，包括例如待治疗的受试者的年龄、性别和体重以及所用的特定抑制剂化合物。例如，与治疗同一受试者所需的IL-27结合Fab’抗体片段的剂量相比，治疗患有癌症的受试者可能需要不同剂量的完整抗IL-27抗体。影响向受试者施用的剂量的其他因素包括，例如，癌症的类型或严重程度。例如，与患有胶质母细胞瘤的受试者相比，患有转移性黑素瘤的受试者可能需要施用不同剂量的抗IL-27抗体。其他因素可包括，例如，同时或之前影响受试者的其他医学病症、受试者的一般健康状况、受试者的遗传倾向、饮食、施用时间、排泄速率、药物组合以及向受试者施用的任何其他另外的治疗剂。还应当理解，任何特定受试者的具体剂量和治疗方案也将取决于从业医生(例如，医生或护士)的判断。本文描述了合适的剂量。
药物组合物可包含治疗有效量的本文所述的抗IL-27抗体或其抗原结合片段。如果使用一种以上的剂，本领域普通技术人员可以部分地基于所施用的抗体的效果或者抗体与一种或多种另外的活性剂的组合效果，来容易地确定这样的有效量。本文所述的抗体或其片段的治疗有效量也可以根据诸如个体的疾病状态、年龄、性别和体重以及抗体(和一种或多种另外的活性剂)在个体中引发期望的响应(例如，肿瘤生长减少)的能力等因素而变化。例如，治疗有效量的抗IL-27抗体可以抑制(减轻其严重程度或消除其发生)和/或预防特定病症和/或本领域已知或本文所述的特定病症的任一种症状。治疗有效量也是其中组合物的任何毒性或有害作用被治疗有益效果所超过的量。
可在例如I期剂量升级研究中进一步评估本文所述的任何抗体或其片段的合适的人剂量。参见例如，van Gurp等人(2008)Am J Transplantation 8(8):1711-1718；Hanouska等人(2007)Clin Cancer Res 13(2,part 1):523-531；以及Hetherington等人(2006)Antimicrobial Agents and Chemotherapy 50(10):3499-3500。
在一些方面，组合物包含本文所述的任何抗体或其抗原结合片段以及一种或多种(例如，两种、三种、四种、五种、六种、七种、八种、九种、10种或11种或更多种)另外的治疗剂，使得组合物整体上是治疗有效的。例如，组合物可包含本文所述的抗IL-27抗体和烷化剂，其中抗体和剂各自的浓度在组合时对治疗或预防受试者的癌症(例如，黑素瘤)是治疗上有效的。
此类组合物的毒性和治疗效果可通过细胞培养物或实验动物(例如，本文所述的任何癌症的动物模型)中的已知制药程序来确定。这些程序可用于，例如，确定LD50(50％群体的致死剂量)和ED50(50％群体的治疗有效剂量)。毒性和治疗效果之间的剂量比率是治疗指数，并且可以表达为比率LD50/ED50。表现出高治疗指数的抗体或其抗原结合片段是优选的。虽然可使用显示出毒副作用的组合物，但应当注意设计将此类化合物靶向到受累组织部位并使对正常细胞的潜在损伤降至最低，从而减小副作用的递送系统。
从细胞培养测定和动物研究中获得的数据可用于配制在人中使用的一系列剂量。此类抗体或其抗原结合片段的剂量通常在包括ED50的抗体或片段的循环浓度范围内，且毒性很小或没有毒性。剂量可在这个范围内变化，这取决于所用的剂型和所用的施用途径。对于本文所述的抗IL-27抗体，治疗有效剂量可以最初从细胞培养测定中估计。可在动物模型中配制剂量，以达到包括如在细胞培养物中确定的IC50(即，达到症状的半最大抑制的抗体浓度)的循环血浆浓度范围。此类信息可用于更准确地确定人体内的有用剂量。血浆中的水平可以例如通过高效液相色谱来测量。在一些方面，例如，在需要局部施用(例如，至眼睛或关节)的情况下，可将细胞培养或动物建模用于确定在局部部位内达到治疗有效浓度所需的剂量。
在一些方面，可将所述方法与癌症的其他疗法结合进行。例如，可将组合物在进行放射、手术、靶向或细胞毒性化学疗法、化学放射疗法、激素疗法、免疫疗法、基因疗法、细胞移植疗法、精准医学、基因组编辑疗法或其他药物疗法的同时、之前或之后向受试者施用。
如上所述，本文所述的组合物(例如，抗IL-27组合物)可用于治疗多种癌症，诸如但不限于：卡波西氏肉瘤、白血病、急性淋巴细胞白血病、急性髓细胞白血病、成髓细胞早幼粒细胞髓单核细胞红白血病(myeloblasts promyelocyte myelomonocytic monocyticerythroleukemia)、慢性白血病、慢性髓细胞性(粒细胞)白血病、慢性淋巴细胞性白血病、套细胞淋巴瘤、原发性中枢神经系统淋巴瘤、伯基特淋巴瘤和边缘区B细胞淋巴瘤、真性红细胞增多性淋巴瘤、霍奇金病、非霍奇金病、多发性骨髓瘤、沃尔登斯特伦巨球蛋白血症、重链疾病、实体瘤、肉瘤和癌、纤维肉瘤、粘液肉瘤、脂肪肉瘤、软骨肉瘤、成骨肉瘤、骨肉瘤、脊索瘤、血管肉瘤、内皮肉瘤、淋巴管肉瘤、淋巴管内皮肉瘤、滑膜瘤、间皮瘤、尤因氏瘤、平滑肌肉瘤、横纹肌肉瘤、结肠肉瘤、结直肠癌、胰腺癌、乳腺癌、卵巢癌、前列腺癌、鳞状细胞癌、基底细胞癌、腺癌、汗腺癌、皮脂腺癌、乳头状癌、乳头状腺癌、囊腺癌、髓样癌、支气管癌、肾细胞癌、肝细胞癌(HCC)、肝细胞瘤、胆管癌、绒毛膜癌、精原细胞瘤、胚胎性癌、肾母细胞瘤、宫颈癌、子宫癌、睾丸肿瘤、肺癌、小细胞肺癌、非小细胞肺癌、膀胱癌、上皮癌、神经胶质瘤、星形细胞瘤、髓母细胞瘤、颅咽管瘤、室管膜瘤、松果体瘤、血管母细胞瘤、听神经瘤、少突神经胶质瘤、脑膜瘤、黑素瘤、神经母细胞瘤、视网膜母细胞瘤、鼻咽癌、食道癌、基底细胞癌、胆道癌、膀胱癌、骨癌、脑和中枢神经系统(CNS)癌、宫颈癌、绒毛膜癌、结直肠癌、结缔组织癌、消化系统癌、子宫内膜癌、食道癌、眼癌、头颈癌、胃癌、上皮内肿瘤、肾癌、喉癌、肝癌、肺癌(小细胞、大细胞)、黑素瘤、神经母细胞瘤；口腔癌(例如唇、舌、口和咽)、卵巢癌、胰腺癌、视网膜母细胞瘤、横纹肌肉瘤、直肠癌；呼吸系统癌症、肉瘤、皮肤癌、胃癌、睾丸癌、甲状腺癌、子宫癌和泌尿系统癌。
组合疗法
在一些方面，可将由本公开提供的抗IL-27抗体或其抗原结合部分与一种或多种另外的治疗剂或治疗(例如癌症的另一种治疗剂或治疗)组合。例如，可将抗IL-27抗体或其抗原结合部分与一种或多种另外的治疗剂组合向受试者(例如，人患者)施用，其中所述组合为患有癌症或有患癌风险的受试者提供治疗益处。
在一些方面，在同一时间(例如，同时地)施用抗IL-27抗体或其抗原结合部分和一种或多种另外的治疗剂。在其他方面，在第一时间施用抗IL-27抗体或其抗原结合部分，在第二时间(例如，依序地)施用一种或多种另外的治疗剂。在一些方面，在第一时间施用一种或多种另外的治疗剂，在第二时间施用抗IL-27抗体。
本文所述的抗IL-27抗体或其抗原结合片段可替代或增强先前或当前施用的疗法。例如，在用抗IL-27抗体或其抗原结合片段治疗后，可停止或减少一种或多种另外的治疗剂的施用，例如，以较低的水平施用一种或多种另外的治疗剂。在一些方面，可以维持先前疗法的施用。在一些方面，将维持先前的疗法，直至抗IL-27抗体的水平达到足以提供治疗效果的水平。
在一些方面，本公开提供了治疗受试者的癌症的方法，所述方法包括向受试者施用有效量的与一种或多种另外的治疗剂或程序组合的由本公开提供的特异性地结合至并拮抗IL-27的分离的抗体或其抗原结合部分，其中第二治疗剂或程序选自由以下组成的组：化学疗法、靶向抗癌治疗、溶瘤药物、细胞毒性剂、基于免疫的疗法、细胞因子、手术程序、放射程序、共刺激分子的活化剂、抑制分子的抑制剂、疫苗或细胞免疫疗法或它们的组合。
在一些方面，一种或多种另外的治疗剂是PD-1拮抗剂、TIM-3抑制剂、LAG-3抑制剂、TIGIT抑制剂、CD112R抑制剂、TAM抑制剂、STING激动剂、4-1BB激动剂或它们的组合。在一些方面，一种或多种另外的治疗剂是CD39拮抗剂、CD73拮抗剂、CCR8拮抗剂或它们的组合。在一些方面，抗CD73是公开于例如美国公布第2019/0031766A1号(其以引用方式整体并入本文)中的任何抗CD73抗体。在一些方面，抗CD39是公开于例如国际公布第WO2019/178269A2号(其以引用方式整体并入本文)中的任何抗CD39抗体。
在一些方面，一种或多种另外的治疗剂是PD-1拮抗剂。在一些方面，PD-1拮抗剂选自由以下组成的组：PDR001、纳武单抗、派姆单抗、匹地利珠单抗、MEDI0680、REGN2810、TSR-042、PF-06801591和AMP-224。在某些方面，一种或多种另外的治疗剂是PD-L1抑制剂。在一些方面，PD-L1抑制剂选自由以下组成的组：FAZ053、阿特珠单抗、阿维鲁单抗、德瓦鲁单抗和BMS-936559。在一些方面，本公开提供了增强抗PD-1抗体的一种或多种活性(例如，增强PD-1介导的细胞因子分泌；增强抗PD-1介导的TNFα分泌；增强抗PD-1介导的IL-6从暴露于抗PD-1抗体的细胞的分泌)的方法，所述方法包括使细胞暴露于本公开所提供的抗体或其抗原结合部分，同时或依序暴露于抗PD-1抗体，从而增强抗PD1抗体的一种或多种活性。
在一些方面，一种或多种另外的治疗剂是舒尼替尼
Figure GDA0003745251250001041
卡博替尼
Figure GDA0003745251250001051
阿西替尼
Figure GDA0003745251250001052
乐伐替尼
Figure GDA0003745251250001053
依维莫司
Figure GDA0003745251250001054
贝伐单抗
Figure GDA0003745251250001055
依多司他、NKTR-214(CD-122偏向性激动剂)、替伏扎尼
Figure GDA0003745251250001056
艾贝司他、伊匹单抗
Figure GDA0003745251250001057
曲美木单抗、帕唑帕尼
Figure GDA0003745251250001058
索拉非尼
Figure GDA0003745251250001059
西罗莫司
Figure GDA00037452512500010510
雷莫芦单抗
Figure GDA00037452512500010511
尼拉帕尼、沃利替尼、沃洛拉尼(X-82)、瑞格非尼
Figure GDA00037452512500010512
多纳非尼(多激酶抑制剂)、卡瑞利珠单抗(SHR-1210)、迪-培萨替莫近(JX-594)、雷莫芦单抗
Figure GDA00037452512500010513
阿帕替尼(YN968D1)、包封的阿霉素
Figure GDA00037452512500010514
替万替尼(ARQ197)、ADI-PEG 20、比美替尼、甲磺酸阿帕替尼、尼达尼布、利瑞鲁单抗、纳武单抗
Figure GDA00037452512500010515
派姆单抗
Figure GDA00037452512500010516
阿特珠单抗
Figure GDA00037452512500010517
阿维单抗
Figure GDA00037452512500010518
德瓦鲁单抗
Figure GDA00037452512500010519
西米普利单抗-rwlc
Figure GDA00037452512500010520
替雷利珠单抗和/或斯巴达珠单抗。
在一些方面，一种或多种另外的治疗剂是TIM-3抑制剂，任选地其中所述TIM-3抑制剂是MGB453或TSR-022。
在一些方面，一种或多种另外的治疗剂是LAG-3抑制剂，任选地其中所述LAG-3抑制剂选自由以下组成的组：LAG525、BMS-986016和TSR-033。
在一些方面，一种或多种另外的治疗剂是TIGIT抑制剂。在一些方面，一种或多种另外的治疗剂是CD112R抑制剂。在一些方面，一种或多种另外的治疗剂是TAM(Axl、Mer、Tyro)抑制剂。在一些方面，一种或多种另外的治疗剂是STING激动剂。在一些方面，一种或多种另外的治疗剂是4-1BB激动剂。
在一些方面，一种或多种另外的治疗剂是酪氨酸激酶抑制剂、靶向腺苷轴的剂(例如CD39拮抗剂、CD73拮抗剂或A2AR、A2BR或双重A2AR/A2BR拮抗剂)、CCR8拮抗剂、CTLA4拮抗剂、VEG-F抑制剂或它们的组合。
与化学治疗剂的组合
适用于与本发明的组合物组合和/或共施用的化学治疗剂包括，例如：紫杉醇、细胞松弛素B、短杆菌肽D、溴化乙锭、依米丁、丝裂霉素、依托泊苷、替诺泊苷、长春新碱、长春碱、秋水仙碱、多柔比星、柔红霉素、二羟基蒽二酮(dihydroxyanthrancindione)、米托蒽醌、光神霉素、放线菌素D、1-去氢睾酮、糖皮质激素、普鲁卡因、丁卡因、利多卡因、普萘洛尔和嘌呤霉素及其类似物或同系物。其他剂包括，例如，抗代谢物(例如，甲氨蝶呤、6-巯基嘌呤、6-硫代鸟嘌呤、阿糖胞苷、5-氟尿嘧啶氨烯咪胺)、烷化剂(例如，氮芥、噻替派、苯丁酸氮芥、美法仑、卡莫司汀(BSNU)、洛莫司汀(CCNU)、环磷酰胺、白消安、二溴甘露醇、链佐霉素、丝裂霉素C、顺式-二氯二胺铂(II)(DDP)、丙卡巴肼(procarbazine)、六甲蜜胺、顺铂、卡铂、奥沙利铂、奈达铂、赛特铂或三铂四硝酸酯)、蒽环类药物(例如柔红霉素(原称道诺霉素)和多柔比星)、抗生素(例如更生霉素(原称放线菌素)、博莱霉素、光神霉素和氨茴霉素(AMC))和抗有丝分裂剂(例如长春新碱和长春碱)和替莫唑胺。
与PD-1/PD-L1拮抗剂的组合
在一些方面，由本公开提供的抗IL-27抗体或其抗原结合部分与一种或多种PD-1拮抗剂组合(例如，组合施用)，所述PD-1拮抗剂特异性地结合至人PD-1或PD-L1并抑制PD-1/PD-L1生物活性和/或通过人PD-1/PD-L1信号传导介导的一种或多种下游途径和/或细胞加工或其他人PD-1/PD-L1介导的功能。
因此，本文提供了PD-1拮抗剂，所述PD-1拮抗剂直接或变构阻断、拮抗、阻抑、抑制或降低PD-1/PD-L1生物活性，包括通过PD-1/PD-L1信号传导介导的下游途径和/或细胞过程，诸如受体结合和/或引发对PD-1/PD-L1的细胞响应。本文还提供了减少细胞或受试者产生的人PD-1或PD-L1的数量或量的PD-1拮抗剂。
在一些方面，本公开提供了结合人PD-1并防止、抑制或减少PD-L1与PD-1的结合的PD-1拮抗剂。在一些方面，PD-1拮抗剂与编码PD-1或PD-L1的mRNA结合并阻止翻译。在一些方面，PD-1拮抗剂与编码PD-1或PD-L1的mRNA结合，并导致降解和/或周转。
在一些方面，PD-1拮抗剂抑制PD-1信号传导或功能。在一些方面，PD-1拮抗剂阻断PD-1与PD-L1、PD-L2或PD-L1和PD-L2的结合。在一些方面，PD-1拮抗剂阻断PD-1与PD-L1的结合。在一些方面，PD-1拮抗剂阻断PD-1与PD-L2的结合。在一些方面，PD-1拮抗剂阻断PD-1与PD-L1和PD-L2的结合。在一些方面，PD-1拮抗剂特异性地结合PD-1。在一些方面，PD-1拮抗剂特异性地结合PD-L1。在一些方面，PD-1拮抗剂特异性地结合PD-L2。
在一些方面，PD-1拮抗剂抑制PD-1与其同源配体的结合。在一些方面，PD-1拮抗剂抑制PD-1与PD-L1、PD-1与PD-L2或PD-1与PD-L1和PD-L2的结合。在一些方面，PD-1拮抗剂不抑制PD-1与其同源配体的结合。
在一些方面，PD-1拮抗剂是特异性地结合至PD-1或PD-L1的分离的单克隆抗体(mAb)或其抗原结合片段。在一些方面，PD-1拮抗剂是特异性地结合至人PD-1的抗体或其抗原结合片段。在一些方面，PD-1拮抗剂是特异性地结合至人PD-L1的抗体或其抗原结合片段。在一些方面，PD-1拮抗剂是与人PD-L1结合并抑制PD-L1与PD-1结合的抗体或抗原结合片段。在一些方面，PD-1拮抗剂是与人PD-1结合并抑制PD-L1与PD-1结合的抗体或抗原结合片段。
几种抑制或破坏PD-1与其配体PD-L1和PD-L2之一或两者之间的相互作用的免疫检查点拮抗剂正在临床开发中，或目前可由临床医生用来治疗癌症。
可在由本公开提供的组合物、方法和用途中的任一项中包含PD-1拮抗剂的抗人PD-1抗体或其抗原结合片段的实例包括但不限于：
Figure GDA0003745251250001081
(派姆单抗、MK-3475、h409A11；参见US8952136、US8354509、US8900587和EP2170959，其全部以引用方式整体并入本文；Merck),
Figure GDA0003745251250001082
(纳武单抗、BMS-936558,MDX-1106,ONO-4538；参见US7595048、US8728474、US9073994、US9067999、EP1537878、US8008449、US8779105和EP2161336，其全部以引用方式整体并入本文；Bristol Myers Squibb)、MEDI0680(AMP-514)、BGB-A317和BGB-108(BeiGene)、244C8和388D4(参见WO2016106159，其以引用方式整体并入本文；EnumeralBiomedical)、PDR001(Novartis)和REGN2810(Regeneron)。因此，在一些方面，PD-1拮抗剂是派姆单抗。在一些方面，PD-1拮抗剂是纳武单抗。
可在由本公开提供的组合物、方法和用途中的任一项中包含PD-1拮抗剂的抗人PD-L1抗体或其抗原结合片段的实例包括但不限于：
Figure GDA0003745251250001083
(阿维单抗、MSB0010718C，参见WO2013/79174，其以引用方式整体并入本文；Merck/Pfizer)、
Figure GDA0003745251250001084
(德瓦鲁单抗、MEDI4736)、
Figure GDA0003745251250001085
(阿特珠单抗、MPDL3280A、RG7446；参见WO2010/077634，其以引用方式整体并入本文；Roche)、MDX-1105(BMS-936559、12A4；参见US7943743和WO2013/173223，这两者以引用方式整体并入本文；Medarex/BMS)和FAZ053(Novartis)。因此，在一些方面，PD-1拮抗剂是阿维鲁单抗。在一些方面，PD-1拮抗剂是德瓦鲁单抗。在一些方面，PD-1拮抗剂是阿特珠单抗。
在一些方面，PD-1拮抗剂是特异性地结合至人PD-1或人PD-L1的免疫粘附素，例如，包含与免疫球蛋白分子的恒定区(诸如Fc区)融合的PD-L1或PD-L2的胞外部分或PD-1结合部分的融合蛋白。特异性地结合至PD-1的免疫粘附素的实例描述于WO2010/027827和WO2011/066342中，这两者以引用的方式整体并入本文。在一些方面，PD-1拮抗剂是AMP-224(也称为B7-DCIg)，其是特异性地结合至人PD-1的PD-L2-FC融合蛋白。
本领域普通技术人员将理解，任何与PD-1或PD-L1结合并破坏PD-1/PD-L1信号传导途径的PD-1拮抗剂都适用于本文公开的组合物、方法和用途。
在一些方面，PD-1/PD-L1拮抗剂是小分子、核酸、肽、肽模拟物、蛋白质、碳水化合物、碳水化合物衍生物或糖聚合物。示例性小分子PD-1抑制剂描述于Zhan等人，(2016)DrugDiscov Today 21(6):1027-1036中。
与TIM-3抑制剂的组合
在一些方面，将由本公开提供的抗IL-27抗体或其抗原结合部分与TIM-3抑制剂组合(例如，组合施用)。TIM-3抑制剂可以是抗体、其抗原结合片段、免疫粘附素、融合蛋白或寡肽。在一些方面，TIM-3抑制剂选自MGB453(Novartis)、TSR-022(Tesaro)或LY3321367(Eli Lilly)。在一些方面，将抗IL-27抗体或其抗原结合部分与MGB453组合施用。在一些方面，将抗IL-27抗体或其抗原结合部分与TSR-022组合施用。
与LAG-3抑制剂的组合
在一些方面，将由本公开提供的抗IL-27抗体或其抗原结合部分与LAG-3抑制剂组合(例如，组合施用)。LAG-3抑制剂可以是抗体、其抗原结合片段、免疫粘附素、融合蛋白或寡肽。在一些方面，LAG-3抑制剂选自LAG525(Novartis)、BMS-986016(Bristol-MyersSquibb)、TSR-033(Tesaro)、MK-4280(Merck&Co)或REGN3767(Regeneron)。
其他组合
在一些方面，将本公开所述提供的抗IL-27抗体或其抗原结合部分与TIGIT抑制剂、激酶抑制剂(例如，酪氨酸激酶抑制剂(TKI))、CD112R抑制剂、TAM受体抑制剂、STING激动剂和/或4-1BB激动剂或它们的组合。在一些方面，由本公开提供的抗IL-27抗体或其抗原结合部分与酪氨酸激酶抑制剂、靶向腺苷轴的剂(例如CD39拮抗剂、CD73拮抗剂或A2AR、A2BR或双重A2AR/A2BR拮抗剂)、CCR8拮抗剂、CTLA4拮抗剂、VEG-F抑制剂或它们的组合进行组合(例如，组合施用)。
检测方法
在一些实施方案中，本文所述的抗IL-27抗体或其抗原结合片段可用于检测和/或定量生物样品中人IL-27的方法。因此，本文所述的抗IL-27抗体或其抗原结合片段可用于诊断、预后患者的疾病(例如，癌症)和/或确定所述疾病的进展。
如本文所定义的，监测受试者(例如，人患者)的癌症改善意味着评估受试者的疾病参数的变化，例如肿瘤生长的减少。在一些实施方案中，在施用后至少一(1)小时，例如至少2小时、4小时、6小时、8小时、12小时、24小时或48小时，或至少1天、2天、4天、10天、13天、20天或更长时间，或至少1周、2周、4周、10周、13周、20周或更长时间，进行评估。可在以下时期中的一个或多个时期评估受试者：治疗开始前；治疗期间；或者在已经施用了一种或多种治疗成分之后。评估可包括评估对进一步治疗的需要，例如，评估是否应该改变剂量、施用频率或治疗持续时间。其还可包括评估对添加或撤消所选治疗方式的需要，例如添加或撤消本文所述的任何癌症治疗。
在一些实施方案中，本公开提供了一种检测来自受试者的样品中的IL-27的方法，所述方法包括：(a)使来自所述受试者的样品与检测抗体在允许所述检测抗体在所述样品中存在IL-27的情况下形成检测抗体-IL-27复合物的条件下接触，其中所述检测抗体是本公开所提供的抗体或其抗原结合片段；以及(b)检测在步骤(a)中产生的复合物(如果有的话)的存在。
在一些实施方案中，本公开提供了一种检测受试者的IL-27相关癌症的方法，所述方法包括以下步骤：(a)使来自疑似患有IL-27相关癌症的受试者的样品与检测抗体在允许所述检测抗体在所述样品中存在IL-27的情况下形成检测抗体-IL-27复合物的条件下接触，其中所述检测抗体是本公开所提供的抗体或其抗原结合部分；以及(b)检测在步骤(a)中产生的复合物(如果有的话)的存在。在一些实施方案中，所述检测抗体与可检测标记偶联。在一些实施方案中，所述方法还包括使所述样品与捕获抗体接触以在所述样品中存在IL-27的情况下产生包含IL-27和所述捕获抗体的复合物，其中所述捕获抗体是本公开所提供的抗体或其抗原结合部分。
在一些实施方案中，所述捕获抗体被固定在固体支持物上。在一些实施方案中，使所述样品在所述检测抗体之前与所述捕获抗体接触。在一些实施方案中，所述样品是体液样品。在一些实施方案中，所述体液样品是血液、血清、血浆、细胞裂解物或组织裂解物。
在一些实施方案中，所述癌症选自肾细胞癌(RCC)、肝细胞癌、肺癌、胃食管癌、卵巢癌、子宫内膜癌、黑素瘤、白血病和淋巴瘤。在一些实施方案中，癌症是肾细胞癌(RCC)。在其他实施方案中，癌症是肝细胞癌(HCC)。在一些实施方案中，癌症选自白血病和淋巴瘤。在一些实施方案中，癌症是急性骨髓性白血病(AML)。
实施例
虽然已经参照本公开的具体方面描述了本公开，但本领域技术人员应该理解，在不脱离本公开的真实精神和范围的情况下，可进行各种改变，并且可以替换等同物。另外，可进行许多修改以使特定情况、材料、物质组成、过程、过程步骤适应本公开的目标、精神和范围。所有此类修改都旨在本公开的范围内。
实施例1：在酵母中产生特异性地结合至人IL-27的P28亚基的抗IL-27抗体
使用下文描述的方法，从八个初始人合成酵母文库中选择了代表多个表位分组(epitope bin)的抗IL-27抗体。
材料和方法
如前所述繁殖各自约109多样性的八个初始人合成酵母文库(参见例如，Xu等人,(2013)Protein Eng Des Sel 26(10):663-670；WO2009036379；WO2010105256；和WO2012009568，所述文献全部以引用的方式整体并入本文)。对于前两轮选择，如前所述，进行利用Miltenyi MACS系统的磁珠分选技术(参见例如，Siegel等人(2004)J ImmunolMethods 286(1-2):141-153，所述文献以引用的方式整体并入本文)。
简言之，在30℃将酵母细胞(约1010个细胞/文库)与3mL的100nM生物素化抗原(重组人IL-27；R&D Systems)于洗涤缓冲液(磷酸盐缓冲盐水(PBS)/0.1％牛血清白蛋白(BSA))中一起孵育30分钟。用40mL冰冷的洗涤缓冲液洗涤一次后，将细胞沉淀重悬于20mL洗涤缓冲液中，并将链霉抗生物素蛋白微珠(500μL)加入酵母中，并在4℃孵育15分钟。接下来，将酵母细胞沉淀，重悬于20mL洗涤缓冲液中，并装载到Miltenyi LS柱上。负载20mL后，用3mL洗涤缓冲液洗涤柱3次。然后将柱从磁场中移走，用5mL生长培养基洗脱酵母细胞，然后生长过夜。使用流式细胞术进行以下轮选择。将大约2×107个酵母细胞沉淀，用洗涤缓冲液洗涤三次，并在30℃下于平衡条件下与浓度递减的生物素化抗原(100至1nM)、30nM不同物种的生物素化抗原一起孵育，以获得物种交叉反应性，或者与多特异性耗减试剂(PSR)一起孵育，以从选择中去除非特异性抗体。对于PSR耗减，将文库与生物素化PSR试剂的1:10稀释液一起孵育。
然后用洗涤缓冲液洗涤酵母细胞两次，用LC-FITC(1:100稀释的)和SA-633(1:500稀释的)或EAPE(1:50稀释的)次级试剂在4℃下染色15分钟。用洗涤缓冲液洗涤两次后，将细胞沉淀重悬于0.3mL洗涤缓冲液中，并转移到带滤网的分选管中。使用FACS ARIA分选仪(BD Biosciences)进行分选，并确定分选门以选择具有所需特征的抗体。重复选择轮次，直至获得具有全部所需特征的群体。在最后一轮分选后，将酵母细胞铺板，挑选出单个集落进行表征。
轻链多样化
在初步发现阶段使用轻链多样化方案，以进一步发现和改进抗体。
轻链批量多样化方案：通过粉碎和抓取从酵母中提取来自初始选择输出(
Figure GDA0003745251250001131
selection output)的重链质粒，将所述重链质粒在大肠杆菌中繁殖并随后从大肠杆菌纯化，然后转化到具有5x106种多样性的轻链文库中。采用与初始发现中的相同条件，利用一轮MACS和四轮FACS进行选择。
抗体优化
如下所述，通过将多样性引入重链和轻链可变区中来进行抗体的优化。
CDRH1和CDRH2选择：将单个抗体的CDRH3重组到多样性为1x108的具有CDRH1和CDRH2变体的预制文库中，并且如初始发现中所述，用一轮MACS和四轮FACS进行选择。在不同的FACS轮次中，通过滴定或亲本Fab预复合观察文库的PSR结合、物种交叉反应性和亲和压力，并进行分选以获得具有所需特征的群体。
抗体的产生和纯化
将酵母克隆生长至饱和，然后在30℃下振荡诱导48小时。诱导后，将酵母细胞沉淀，收集上清液以进行纯化。使用蛋白A柱纯化IgG，并用乙酸(pH 2.0)洗脱。通过木瓜蛋白酶消化产生Fab片段，然后通过KappaSelect(GE Healthcare LifeSciences)纯化所述Fab片段。
ForteBio KD测量
如前所述，通常对Octet RED384进行ForteBio亲和力测量(参见，例如，Estep等人，High throughput solution-based measurement of antibody-antigen affinityand epitope binning.Mabs 5(2),270-278(2013)，所述文献以引用的方式整体并入本文)。简言之，通过将IgG在线装载到AHQ传感器上来进行ForteBio亲和力测量。将传感器在测定缓冲液中离线平衡30分钟，然后在线监测60秒以建立基线。将装载有IgG的传感器暴露于100nM抗原3分钟，然后转移到测定缓冲液中3分钟，以测量解离速率。使用1:1结合模型分析所有动力学。重组人IL-27蛋白(R&D Systems目录号：2526-IL)用作抗原。抗IL-27抗体的亲和力测量值示于图1中。
ForteBio表位分组(Epitope Binning)/配体阻断
使用标准夹心式交叉阻断测定进行表位分组/配体阻断。将对照抗靶IgG装载到AHQ传感器上，用不相关的人IgG1抗体阻断传感器上未被占据的Fc-结合位点。然后将传感器暴露于100nM靶抗原，接着暴露于第二抗靶抗体或配体。抗原缔合后第二抗体或配体的额外结合表示未被占据的表位(非竞争者)，而没有结合表示表位阻断(竞争者或配体阻断)。
MSD-SET动力学测定
如前所述进行平衡亲和力测量(Estep等人，2013年)。在PBS+0.1％不含IgG的BSA(PBSF)中进行溶液平衡滴定(SET)，其中将抗原保持恒定在10-100pM并与始于5-100nM的抗体的3-5倍系列稀释液一起孵育(实验条件取决于样品)。将抗体(于PBS中的20nM)涂布在标准结合MSD-ECL板上，在4℃下过夜或在室温下持续30分钟。然后在以700rpm摇动的条件下将板封闭30分钟，接着用洗涤缓冲液(PBSF+0.05％Tween 20)洗涤三次。施加SET样品，在以700rpm摇动的条件下于板上孵育150s，然后进行一次洗涤。通过在板上孵育3分钟，用在PBSF中的250ng/mL磺基标签标记的链霉抗生物素蛋白检测捕获在板上的抗原。用洗涤缓冲液将板洗涤三次，然后使用含表面活性剂的1x读取缓冲液T在MSD Sector Imager 2400仪上进行读取。在Prism中将游离抗原百分比绘制为滴定的抗体的函数，并将其与二次方程拟合以推断出KD。为了提高通量，在整个MSD-SET实验(包括SET样品制备)中使用了液体处理机器人。
实施例2：抗IL-27抗体与重组人IL-27的结合
通过ELISA评估实施例1中描述的抗IL-27抗体结合至重组人IL-27的能力。简言之，将Nunc MaxiSorp ELISA板(Affymetrix#44-2404-21)用100μL/孔重组人IL-27(R&DSystems#2526-IL/CF)(于PBS中稀释的0.5μg/mL)包被，密封并在4℃孵育过夜。将板用100μL/孔的洗涤缓冲液(PBS+0.01％Tween)洗涤3次。然后在室温(RT)振荡下，用200μL/孔的封闭缓冲液(PBS+0.1％BSA+0.01％Tween)封闭板1小时。倾析封闭缓冲液，并如所示每孔添加100μL稀释的对照抗体和抗IL-27抗体。通过从最高浓度1μg/mL开始1:10稀释抗体，针对每种抗体创建10点系列稀释液。将板在室温下振荡孵育1-2小时。用100μL/孔的洗涤缓冲液洗涤板3次。添加100μL/孔的抗人IgG第二抗体(SouthernBiotech；目录号2014-05)(在封闭缓冲液中1:5000稀释)。然后将板在室温下振荡孵育1小时。在孵育1小时后，将板用100μL/孔的洗涤缓冲液洗涤3次。为了使板显影，添加了100μL/孔的TMB缓冲液(Life Technologies#00-2023)。观察到标准曲线孔中的蓝色显影，并且一旦稀释的对照抗体的最高浓度达到深蓝色(5-10分钟)，就添加50μL/孔终止溶液(Thermo Fisher#SS04)(颜色将变为黄色)。在终止反应的30分钟内，在450nm(对于波长校正为负570nm)处读取显影的板。
例如，生物化学亲和力和特异性研究表明抗IL-27抗体抗IL-27Ab1结合至异二聚体细胞因子IL-27的p28亚基(但不结合至EBI3亚基)。抗IL-27 Ab1结合至人、非人灵长类动物和啮齿类动物重组IL-27，并且结合的程度在物种之间有所不同。抗IL-27 Ab1对IL-27的结合特异性通过对一组约4500个细胞表面和可溶性分子进行测试来证实，并且未观察到脱靶结合。还证实了IL-27对其受体IL-27RA(WSX-1)的结合特异性；没有其他细胞表面受体结合的人IL-27。通过表面等离子体共振证实了抗IL-27 Ab1阻断人IL-27与IL-27RA(WSX-1)之间的相互作用的能力。
在多种模型系统中评估了本文公开的抗体的结合。由于人IL-27在小鼠细胞上具有生物活性，因此利用使用DNA微环递送在小鼠中进行人IL-27的系统性过表达，以通过全基因组微阵列分析、流式细胞术和血清细胞因子分析来分析体内IL-27介导的效应。在体内通过IL-27调节的许多标志物与基于人细胞的测定中的发现一致。还在播散性B16肿瘤模型中评价了抗IL-27 Ab3。在那种情况下，用抗IL-27 Ab3进行处理显示与在缺乏IL-27配体(IL-27p28，EBI3)或受体(IL-27RA)的各种组分的小鼠中观察到的表型一致的结果。
总体而言，这些研究证明，抗IL-27 Ab1(及其同胞抗IL-27 Ab3)可表型复制小鼠中的IL 27缺乏，特异性地且以高亲和力结合至IL-27，并且能够单独或与PD-L1阻断剂组合来抑制其免疫抑制作用。
实施例3：抗IL27抗体在体外抑制STAT1的磷酸化
通过IL-27受体(IL-27R)的IL-27信号传导导致信号转导子和转录活化因子1(STAT1)多肽(pSTAT1)的磷酸化。通过流式细胞术测试了实施例1中描述的抗IL-27抗体抑制人全血、人PBMC、U937骨髓细胞(组织细胞淋巴瘤细胞系)和HUT-78T细胞淋巴瘤中IL-27介导的STAT1磷酸化的能力。
测试了抗IL-27抗体抑制人全血中IL-27介导的STAT1磷酸化的能力。简言之，将EDTA抗凝全人血液储存在室温下，用于此测定中。将45μL血液分配到深孔圆底板(Phenix#850356)的每个孔中，并在加热板(EchoTherm IC20)上在37℃下或在37℃的孵育箱中加热30分钟。在聚丙烯V底板(Corning#3363)中的无内毒素的PBS(Teknova#P0300)中将抗IL-27抗体稀释至10倍最高浓度。根据需要在无内毒素的PBS中连续稀释抗IL-27抗体。仅将PBS添加至未刺激的对照和刺激的对照的孔中。将5μL的每种稀释液添加至45μL血液的孔中，并在板振荡器上以1000RPM(Eppendorf Mix Mate)振荡15秒进行混合。将板在加热板上在37℃下或在37℃的孵育箱中孵育60分钟。
通过添加100μL PBS+0.1％BSA(由10％BSA Sigma#A1595制成)，将10μg小瓶的重组人IL-27(R&D Systems#2526-IL)重构至100μg/mL。通过在无内毒素的PBS中稀释至200ng/mL来制备重组hIL-27(rhIL-27)的工作储备液。孵育60分钟后，将5μL的200ng/mLrhIL-27添加至经刺激血液的每个孔中。将5μL PBS添加至未刺激的对照孔。将板在板振荡器上以1000RPM振荡15秒。将板在37℃下孵育30分钟。
孵育30分钟后，将细胞固定。将裂解/固定试剂(BD#558049)在无菌水(Hyclone#SH3052902)中1:5稀释，并在水浴中加热至37℃。将500μL的裂解/固定试剂添加至深孔板的每个孔中，并将板在板振荡器上以1000RPM混合15秒。将板在37℃下孵育15分钟。
孵育15分钟后，将板在室温下以1500RPM离心5分钟(Eppendorf离心机5810R)，并通过轻弹丢弃上清液。每孔添加1mL无内毒素的PBS，并将板在板振荡器上以1000RPM振荡15秒。将板在室温下以1500RPM离心5分钟(Eppendorf离心机5810R)，并通过轻弹丢弃上清液。细胞沉淀保留在板中。
将细胞沉淀重悬于FACS缓冲液(PBS，Gibco#14190-144/2％FBS，Sigma#F8317/1mMEDTA，Fisher#BP2482)中的50μL 1:200CD14-Pacific Blue(Biolegend#325616)中并转移至U-底96孔板(Costar#3799)。将板用板密封件(VWR#89134-432)密封，并在黑暗中在室温下孵育30分钟。
孵育30分钟后，将150μL FACS缓冲液添加至每个孔中，并将板在室温下以1500RPM离心5分钟。然后通过移液将细胞沉淀重悬于100μL Perm III(储存在-20℃)(BD#558050)中，并用板密封件和盖将板密封。将板在-20℃下孵育过夜或在4℃下孵育15分钟。
在孵育后，添加150μL PBS，并将板在室温下以1500RPM离心5分钟。通过轻弹从板中丢弃上清液，并将板重悬于50μL染色混合物中，所述混合物如以下表6中所述而制备：
表6
BD目录号 抗体 颜色 稀释度
561807 CD3 FITC 1:10
562069 pSTAT1 Y701 PE 1:100
562071 pSTAT3 Y705 APC 1:20
将所述板在黑暗中在室温下孵育1小时。孵育1小时后，添加100μL的FACS缓冲液，并将板在室温下以1500RPM离心5分钟。通过轻弹将上清液从板中丢弃，并将板重悬于100μLFACS缓冲液中，用于通过流式细胞术进行分析。
通过流式细胞术测试了实施例1中所述的抗IL-27抗体抑制合并的人PBMC中IL-27介导的STAT1磷酸化的能力。简言之，将从血沉棕黄层获得的人PBMC(外周血单核细胞)的冷冻冷冻小瓶从液氮储存中取出，并在37℃水浴中迅速解冻。用P1000移液管取出每个冷冻小瓶的内容物，并转移至15mL锥形falcon管中。将2-3mL完全RPMI-1640(Gibco，61870-036)缓慢添加至解冻的细胞中，将细胞轻轻涡旋或轻弹以使其悬浮。用完全RPMI-1640将锥形管装满至10mL，然后倒转以进行混合。将锥形管在室温下以1400RPM离心8分钟。
将PBMC细胞以每mL 400万个细胞的密度重悬于温热的无血清RPMI-1640中，并以每孔200,000个细胞(50μL)的密度涂铺在圆底96孔板(Costar，3799)中。将抗IL-27抗体在96孔聚丙烯板第一行中的无血清RPMI-1640中稀释至最高浓度40μg/mL(最终将为10μg/mL)。在板的前10行的其余部分中进行所需的系列稀释(1:2、1:3等)。将五十微升(μL)的抗体储备液(4x)添加至圆底板中PBMC细胞板的前10行中。在第11和12行中，添加了50μL的无血清RPMI-1640细胞培养基。然后在37℃下将平板孵育2小时。
在孵育2小时后，将100μ在无血清RPMI-1640细胞培养基中稀释的50ng/ml重组人IL-27(R&D Systems,2526-IL)天爱至每个孔中(对照孔除外，所述对照孔包括单独的无血清培养基或单独的抗体)，最终浓度为25ng/ml。将100μL无血清RPMI-1640细胞培养基添加至对照孔或仅含抗体的孔。将板在37℃下孵育20分钟。
在孵育20分钟后，将50μL的去离子水中的4％PFA(Pierce,28906)直接添加至每个孔中，并将板在37℃下孵育5分钟以固定细胞。将板以2000RPM离心5分钟。通过轻弹丢弃培养基，并用150μL DPBS洗涤板。将洗涤步骤再重复两次。使用12通道移液管将稀释于H2O中的50μ冰冷90％甲醇(MeOH)(Sigma，439193)快速添加至每个孔中。当添加MeOH时，要特别小心地混合每个孔。将板在20℃下孵育至少15分钟。将100μL的DPBS添加至90％甲醇上方的每个孔中，并将板以2000RPM离心5分钟。通过轻弹丢弃板内容物，并且如前所述将板洗涤3次。最后一次洗涤后，细胞沉淀保留在板的孔中。
将沉淀的PBMC在室温下在黑暗中用FACS缓冲液(2％FBS，2mM EDTA于DPBS中)缓冲液中的pSTAT1 PE(BD Phosflow，526069)1:100染色45分钟。在添加着色剂时要格外小心将每个孔与12通道移液管混合。孵育45分钟后，将100μL FACS缓冲液添加至每个孔中，并将板以2000RPM离心5分钟。通过轻弹丢弃上清液，并如前所述将板洗涤2次。将细胞重悬于100μLFACS缓冲液中，并通过流式细胞术进行分析。
如图2A所示，抗IL-27抗体抑制人合并的PBMC中STAT1的磷酸化。抗IL-27抗体抗IL-27 Ab3抑制合并的人PBMC中STAT1的磷酸化，平均IC50为140.5ng/mL(n＝2)。抗IL-27抗体抗IL-27 Ab1抑制合并的人PBMC中STAT1的磷酸化，平均IC50为58.3ng/mL(n＝3)。
基本上如针对图2A所述，通过流式细胞术进一步测试了抗IL-27抗体抑制U937细胞(已知表达Fc受体的细胞系)中IL-27介导的STAT1磷酸化的能力。如图2B所示，抗IL-27抗体抑制U-937细胞中STAT1的磷酸化，如所指示。抗IL-27 Ab3抑制U937细胞中STAT1的磷酸化，平均IC50为81ng/mL(n＝2)。抗IL-27 Ab1抑制U937细胞中STAT1的磷酸化，平均IC50为96ng/mL(n＝2)。
基本上如针对图2A所述，通过流式细胞术测试了抗IL-27抗体抑制皮肤T细胞淋巴瘤细胞系HUT-78中IL-27介导的STAT1磷酸化的能力，所述皮肤T细胞淋巴瘤细胞系不表达细胞表面Fc受体。如图2C所示，抗IL-27抗体抑制HUT-78细胞中STAT1的磷酸化。抗IL-27Ab3抑制HUT-78细胞中STAT1的磷酸化，平均IC50为80ng/mL(n＝1)。抗IL-27 Ab1抑制HUT-78细胞中STAT1的磷酸化，平均IC50为95ng/mL(n＝1)。
本公开还评估了全血测定中跨物种的抗IL-27 Ab1对IL-27的抑制。为了表征跨物种的抗IL-27 Ab1活性，测试了来自人、食蟹猴、大鼠和小鼠的重组IL-27刺激从这些物种获得的全血样品的T淋巴细胞中的pSTAT1信号传导(数据未示出)。
简言之，将全血温至37℃，然后与抗IL-27 Ab1一起预孵育60分钟，并且添加20ng/mL的人IL-27。将样品孵育另外30分钟。将白细胞固定，并使红细胞裂解。洗涤后，将固定的细胞透化并用抗CD3和抗磷酸STAT1(Y701)染色。孵育1小时后，将样品洗涤并重悬以进行流式细胞术。使用刺激和未刺激的对照孔计算抑制百分比，并使用GraphPad Prism计算IC50值。
人T细胞中抗IL-27 Ab1信号传导抑制的代表性数据显示在图3中。与关于抗IL-27Ab1对不同物种的亲和力的观察结果一致，抗IL-27 Ab1对IL-27信号传导抑制的效力在人中最强，其次是食蟹猴、大鼠和小鼠(参见例如，表7)。
表7：来自不同物种的外周血T细胞中的抗IL-27 Ab1 IC50值
物种 评价IC<sub>50</sub>，ng/mL 标准偏差 数量
人 78.4 35 7
食蟹猴 118.1 36.4 4
大鼠 273.2 133.5 8
小鼠 1721 N/A 1(10个的池)
缩写：IC50＝最大抑制浓度的一半，N/A＝不适用
实施例4：通过抗IL-27抗体减轻IL-27介导的对CD161的抑制C型凝集素CD161是T细胞的标志物，其表达受IL-27阻抑。通过流式细胞术测试了实施例1中描述的抗IL-27抗体逆转合并的人PBMC细胞中IL-27介导的对CD161的抑制的能力。简言之，将从血沉棕黄层获得的合并的人PBMC(外周血单核细胞)的冷冻冷冻小瓶从液氮储存中取出，并在37℃水浴中迅速解冻。用P1000移液管取出每个冷冻小瓶的内容物，并转移至15mL锥形falcon管中。将2-3mL完全RPMI-1640(Gibco，61870-036)缓慢添加至解冻的细胞中，将细胞轻轻涡旋或轻弹以使其悬浮。用完全RPMI-1640将锥形管装满至10mL，然后倒转以进行混合。将锥形管在室温下以1400RPM离心8分钟。
避免使用外壁，以使5天测定过程中的蒸发效应最小化。外孔应填充200μL/孔的DPBS(Gibco，14190-144)。将PBMC细胞以200万个细胞/mL的密度重悬于温热的完全RPMI-1640中。以0.5μg/mL的浓度(这是2倍最终浓度)添加纯化的人抗CD3抗体(Biolegend，UCTH1，#300402)。将100μL/孔的这种细胞混合物(每孔200,000个细胞)涂铺在在圆底96孔板(Costar，3799)中。
将抗IL-27抗体在96孔聚丙烯板第一行中的完全RPMI-1640中稀释至最高浓度40μg/mL(最终将为10ug/mL)。在板的前10行的其余部分中进行所需的系列稀释(1:2、1:3等)。将50μL抗体储备液(4x)添加至圆底板中PBMC细胞板的前10行中。在第11和12行中，添加50μL的完全RPMI-1640。
添加抗IL-27抗体后，将在完全RPMI-1640中稀释的50μL的100ng/mL重组人IL-27(R&D Systems，#2526-IL)添加至每个孔中(对照孔除外，所述对照孔包含无血清培养基或单独抗体)，最终浓度为25ng/mL。将50μL的完全RPMI-1640添加至对照孔中。将板在组织培养箱中在最小干扰在37℃下孵育5天。
在5天孵育后，将板从孵育箱中移除并在板振荡器上以600RPM搅拌30秒。将板以1800RPM离心5分钟。除去培养基并放置用于另外的测定，并将板用150μL DPBS(Gibco，#14190-144)洗涤。洗涤步骤再重复2次。如以下表8所述，将细胞沉淀用50μL/孔染色混合物染色：
表8
Figure GDA0003745251250001221
Figure GDA0003745251250001231
将板在板振荡器上以600RPM搅拌30秒，并将板在黑暗中在室温下孵育30分钟。
孵育30分钟后，将板离心，并通过轻弹丢弃上清液。如前所述，将板洗涤2次。最后一次洗涤后，通过在室温下添加50μL去离子水中的4％PFA(Pierce，28906)来固定细胞沉淀10分钟。向每个孔中添加100μL FASC缓冲液，并将板以1800RPM离心5分钟。将细胞重悬于100μL FACS缓冲液中，并通过流式细胞术读取。
如图4所示，如所指示的抗IL-27抗体减轻IL-27介导的对CD161的抑制。
实施例5：抗IL-27抗体增强PD-1介导的TNFα、IL-6和其他细胞因子的分泌，包括抗IL-27抗体的额外体外表征
测试了抗IL-27抗体增强来自癌症患者的人PBMC细胞中PD-1介导的TNFα和IL-6分泌的能力。基本上如实施例4中所述培养来自癌症患者的人PBMC细胞，并添加接受如所指示的1μg/mL抗PD-1抗体的孔。使用人CBA Th1/Th2/Th17试剂盒(BD，560484)分析了来自测定的上清液中的TNFα和IL-6。如图5A和图5B所示，抗IL-27抗体增强合并的人PBMC细胞中PD-1介导的TNFα和IL-6的分泌。
本文的技术还显示抗IL-27 Ab1单一疗法以及与抗PD-1组合在人PBMC中的细胞因子诱导活性。已知IL-27负调控几种炎性细胞因子的表达。为了确定IL-27阻断对细胞因子产生的影响，在存在或不存在抗IL-27 Ab1的情况下，将来自健康供体、RCC患者和卵巢癌患者的人PBMC用抗CD3活化几天，并测试分泌的细胞因子(包括IL-17、IFNγ(IFNg)、TNFα(TNFa)和IL-6)的水平。简言之，在不存在或存在抗IL-27 Ab1(1μg/mL)、抗PD 1(派姆单抗，1μg/mL)或两种抗体的情况下，通过0.25μg/mL抗CD3抗体活化从来自4名健康供体、5名RCC患者和2名卵巢癌患者的新鲜全血分离的PBMC。5天后，收集上清液并通过MSD或CBA测试TNFα(A)或IFNγ(B)的水平。所示的数据代表与单独抗CD3刺激相比，细胞因子产生的倍数变化。统计数据通过配对t检验(*p<0.005)进行计算。
抗PD-1抗体在这些测定中用作对照，并且如图5C所示还探索了PD-1和IL-27阻断的组合。抗IL-27 Ab1处理导致所测试的11份PBMC样品中的6份(包括4名健康供体中的2名，5名RCC患者中的3名和2名卵巢癌患者中的1名)中的TNFα产生增加(由>2倍增加确定)。在一部分供体中进行测试时，这种活性是抗IL-27 Ab1剂量依赖性的(数据未示出)。抗PD-1(派姆单抗)处理显示所测试的11个供体中的2个中的TNFα增加(5名RCC中的1名和2名卵巢癌中的1名)，而抗IL-27 Ab1与抗PD-1的组合导致11个供体中的10个中的增加。在组合处理条件下观察到的TNFα增加似乎是10名响应者中8名的累加。在抗IL-27 Ab1和抗PD-1处理后(11个供体中的10个)，在这些培养物中观察到了IFNγ产生的累加效应；然而，与抗IL-27 Ab1(11个供体中的2个)相比，对仅抗PD-1处理的响应更为常见(11个供体中的10个)。总之，这些数据表明，抗IL-27 Ab1增加来自健康供体和癌症患者的活化PBMC培养物中的TNFα水平，并且与单独的任一种处理相比，抗IL-27 Ab1与抗PD-1处理的组合导致更高的TNFα和IFNγ水平。
为了进一步探索IL-27和PD-1阻断的作用，使用了相同的活化PBMC培养系统来确定IL-27是否能够直接抵消由PD-1阻断引起的细胞因子产生增加的影响。简言之，通过0.25μg/mL的抗CD3抗体活化从人全血中新鲜分离的PBMC。在37℃下将细胞用对照IgG1(1μg/mL)、αPD-1抗体(派姆单抗，1μg/mL)、rhIL-27(25ng/mL)加αPD-1或rhIL-27加αPD-1与抗IL-27 Ab1(1μg/mL)处理细胞5天。收集上清液用于CBA检测。来自4个健康供体的示例性细胞因子(IL-17A和IFNγ)显示为相对于对照的倍数变化。描绘了平均值和标准偏差。统计数据通过配对t检验(*p<0.05，**p<0.01)进行计算。在来自患有RCC的患者的PBMC中也观察到了相似的结果。PD-1阻断增加这些培养物中的IL-17和IFNγ，并且IL-27能够完全抑制这种活性，其是在存在抗IL-27 Ab1的情况下被逆转的一种响应，如图5D所示。这些数据表明IL-27能够减弱抗PD-1处理对细胞因子产生的影响。
因此，IL-27被证明抑制活化的人PBMC中抗PD-1介导的促炎性细胞因子产生，其是被抗IL-27 Ab1阻断的一种性质。此外，将抗IL-27 Ab1与PD-1阻断剂组合使来自健康供体和RCC患者的活化PBMC中的细胞因子产生增加。因此，通过阻断IL-27，抗IL-27 Ab1通过改变免疫调控受体表达并增加炎性细胞因子产生而增强免疫细胞活化。
在存在抗IL-27抗体(此处为抗IL-27 Ab1)、αPD-1抗体或组合的抗IL-27和αPD-1抗体的情况下对单独抗IL-27抗体的额外表征中，进行了细胞因子诱导/分泌(图5E至图5H，特别是针对TNFα、IFNγ、IL-6和IL-17A)的进一步表征。
实施例6：抗IL-27抗体对IL-27介导的PD-L1和TIM3表达的抑制
通过流式细胞术测试了实施例1中描述的抗IL-27抗体抑制合并的人单核细胞中IL-27介导的PD-L1和TIM-3表达的能力。
使用ROSETTESEPTM人单核细胞富集混合物(Stemcell#15068)从人血沉棕黄层中分离新鲜单核细胞。
避免使用外壁，以使5天测定过程中的蒸发效应最小化。外孔应填充200μL/孔的DPBS(Gibco，14190-144)。
将单核细胞以200万个细胞/mL的密度重悬于温热的完全RPMI-1640中。将100μL/孔的这种细胞混合物涂铺(每孔200,000个细胞)在圆底96孔板(Costar，3799)中。
将抗IL-27抗体在96孔聚丙烯板第一行中的完全RPMI-1640中稀释至最高浓度40μg/ml(10μg/mL最终浓度)。在板的前10行的其余部分中进行所需的系列稀释(1:2、1:3等)。将50μL抗体储备液(4x)添加至圆底板中PBMC细胞板的前10行中。在第11和12行中，添加1250μL的完全RPMI-1640。
添加抗IL-27抗体后，将在完全RPMI-1640中稀释的50μL的80ng/ml重组人IL-27(R&D Systems，2526-IL)添加至每个孔中(对照孔除外，所述对照孔包含无血清培养基或单独抗体)，最终浓度为20ng/mL。将100μL无血清RPMI-1640添加至对照孔。将板在37℃在最小干扰下孵育3天。
在3天孵育后，将板从孵育箱中移除并在板振荡器上以600RPM搅拌30秒。将板以1800RPM离心5分钟。通过轻弹丢弃培养基，并用150μL DPBS(Gibco，14190-144)洗涤板。洗涤步骤重复两次。如以下表9所述，将细胞沉淀用50μL/孔染色混合物染色：
表9
Figure GDA0003745251250001261
将板在板振荡器上以600RPM搅拌30秒，并将板在黑暗中在4℃下孵育30分钟。
孵育30分钟后，将板离心，并通过轻弹丢弃上清液。如前所述，将板洗涤2次。最后一次洗涤后，通过在室温下添加50μL去离子(DI)水中的4％PFA(Pierce，28906)来固定细胞沉淀10分钟。向每个孔中添加100μL FACS缓冲液，并将板以1800RPM离心5分钟。将细胞重悬于100μL FACS缓冲液中，并通过流式细胞术进行分析。
如图6A和图6B所示，抗IL-27抗体有效地抑制IL-27介导的合并的人单核细胞中PD-L1和TIM3的表达。
基本上如针对图6A和图6B所述，进一步测试了抗IL-27抗体抑制静息T细胞(灭活)中IL-27介导的PD-L1表达的能力。使用ROSETTESEPTM人T细胞富集混合物(Stemcell#15061)从人血沉棕黄层中分离静息T细胞。
在测定结束时，如以下表10所述，将细胞沉淀用50μL/孔染色混合物染色：
表10
Figure GDA0003745251250001271
将板在板振荡器上以600RPM搅拌30秒，并将板在黑暗中在4℃下孵育30分钟。
孵育30分钟后，将板离心，并通过轻弹丢弃上清液。如前所述，将板洗涤2次。最后一次洗涤后，通过在室温下添加50μL去离子水中的4％PFA(Pierce，28906)来固定细胞沉淀10分钟。向每个孔中添加100μL FACS缓冲液，并将板以1800RPM离心5分钟。将细胞重悬于100μL FACS缓冲液中，并通过流式细胞术读取。如图6C所示，抗IL-27抗体有效地抑制合并的人静息T细胞中IL-27介导的PD-L1表达。
实施例7：抗IL-27抗体在播散性B16F10黑素瘤模型中的体内功效
使用临床候选抗IL-27 Ab1，黑素瘤肺转移模型用于评估IL-27阻断剂的抗肿瘤活性。播散性B16F10肺转移的生长已知在缺乏EBI3和Il27ra(Wsx-1)的小鼠中显著降低(Sauer等人,J.Immunology 181:6148-6157)。由于肺结节大小和生长动力学取决于转移的B16F10细胞的数量，并且能够可变且快速地进展，因此研究了抗PD-1与抗CTLA-4的组合作为治疗活性的基准。抗IL-27 Ab1预处理产生总体肿瘤负担的显著降低。
简言之，通过尾静脉向六至八周龄的雌性C57BL/6小鼠(n＝10只/组)静脉内(i.v.)接种200μL磷酸盐缓冲盐水(PBS)中的2.5x105个B16F10细胞或1x105个B16-Luc细胞。向动物腹膜内(i.p.)注射抗IL-27 Ab1(1mg剂量)(Wuxi；批次2108SD170316K01X01I01)或多克隆人IgG同种型对照(1mg剂量)(Bioxcell；BE0092；批次658417D1)。从肿瘤注射前7天开始，每周一次给予抗体，总计四个剂量(第-7天、第0天、第7天和第14天)。为了目测肺转移，在肿瘤细胞注射后18天，通过CO2窒息对B16F10荷瘤小鼠进行安乐死，并将肺通过心脏穿刺用PBS灌注，取出并固定在10％中性缓冲福尔马林中24小时。然后将固定的肺转移至70％乙醇中，并且目测计数表面肺转移。为了进行免疫组织化学分析，将福尔马林固定的肺(n＝5/组)用石蜡包埋，切片并用苏木精和曙红染色，以定量肿瘤总面积作为各切片中总组织面积的百分比。为了对肺转移进行体内肿瘤成像，通过尾静脉向B16-Luc荷瘤动物每周两次静脉内注射3mg的200μL PBS(Promega)中的VivoGlo D-荧光素。荧光素注射后五分钟，将动物麻醉，并使用IVIS Lumina LT Series III成像仪进行生物发光成像。使用LivingImage(版本4.5.5)软件分析图像，并表示为以光子/秒为单位的总通量测量值。
如图7A至图7G所示，用抗IL-27抗体抗IL-27 Ab1处理B16F10荷瘤小鼠产生总体肿瘤负担的显著降低，如通过表面肺转移的总计数(肺结节数量，图7A)和通过免疫组织化学(IHC)分析肺组织切片中的肿瘤面积减小(图7C至图7F和图7G)所测量。与同种型对照处理相比，用抗IL-27 Ab1阻断p28使得肺B16结节数量减少42％。与同种型对照相比，抗IL-27Ab1处理显著抑制(p＝0.0079)B16F10肺转移的生长(分别为21.6±8.4对比37.6±10.9个肺结节)。如通过IHC所测量，抗IL-27 Ab1处理使得总体肺肿瘤转移面积减小83％(同种型对照组中16.43％±1.39％对比抗IL-27 Ab1处理组中2.83％±1.45％)。类似地，生物发光成像显示，抗IL-27 Ab1处理显著(p＝0.0062)延迟了B16-Luc肺转移的生长(图7B)。用IL-27RA(WSX-1)介导的抗体阻断和用抗PD-1+抗CTLA-4组合疗法观察到表面肺转移数量和总肿瘤面积的相似减少，如图7G所示。这些数据来自2个独立的实验，其中抗PD-1和抗CTLA-4基准组合显示出抗肿瘤活性。将B16F10细胞(2.5x105个)静脉注射到C57BL/6小鼠(n＝10只/组)中。将小鼠用1mg的抗IL-27 Ab1、抗IL-27RA(WSX-1)或人IgG同种型对照抗体对小鼠进行腹膜内处理(第-7天、第0天、第7天、第14天)。用抗PD-1和抗CTLA-4对一些动物进行腹膜内处理(第0天、第4天、第7天和第11天)。从如上所述处理的携带B16F10肺转移的动物(n＝5只/组)中收集肺，将其切片并用H&E染色。在来自经处理动物的H&E染色的肺切片中，从正常肺组织描绘出B16F10肿瘤组织(图7A)。将肿瘤面积计算为总肺面积的百分比(图7G)。通过t检验计算统计数据。总体而言，这些数据表明抗IL-27 Ab1可在肿瘤模型中表型复制Il27ra(WSX-1)和EBI3缺乏，并且显示出与组合阻断PD-1和CTLA-4相似的活性。
这些数据证明，用抗IL-27抗体(抗IL-27 Ab1)治疗产生抗肿瘤作用，从而与用不结合IL-27的同种型对照抗体治疗相比，使肿瘤生长和转移降低至更大程度。
实施例8：来自用人IL-27小环流体动力学转染的小鼠的鼠脾细胞的基因表达谱分析
为了检查IL-27对体内T细胞表型的影响，使用编码IL-27的DNA微环在小鼠中过表达IL-27，并通过RNA-Seq和流式细胞术评估T细胞应答。已知人IL-27具有物种交叉反应性，并且可在体外诱导鼠脾细胞中的pSTAT1信号传导和PD L1。这种物种交叉反应性用于研究小鼠中人IL-27过表达的影响及抗IL-27 Ab1对其的抑制。为此，如下文所述，通过流体动力学转染将编码人IL-27的DNA质粒微环(通过甘氨酸丝氨酸接头栓系至EBI3的p28)施用于小鼠，其导致IL-27的高全身性水平。
人IL-27微环的流体动力学转染
在5秒过程中通过尾静脉向六周龄的雌性BALB/c小鼠注射20μg的2mL 0.9％生理盐水中的空载体或连接的人IL-27微环DNA(System Biosciences,Palo Alto,CA)。将注射的动物转移至带有加热垫的空笼中以恢复5分钟。在微环注射后24小时，将全血收集到K2-EDTA管中进行血浆分离，并通过ELISA确认血浆IL-27水平。转染5天后收集PBMC和总脾细胞，并且将细胞染色并通过流式细胞术进行分析。在CD4+ T细胞和CD8+ T细胞上分析了所指示标志物的表达。使用FlowJo软件进行分析。
基因表达谱分析
通过机械分解整个脾脏、然后红细胞的ACK裂解来制备小鼠脾细胞。用
Figure GDA0003745251250001301
小型试剂盒(Qiagen，目录号：74104)从脾细胞中提取总RNA，并在无核酸酶的水(Qiagen，目录号：19101)中调节至20ng/uL。基因表达谱分析是在Affymetrix GENECHIPTM小鼠基因2.0ST阵列(Applied Biosystems，目录号：902118)上进行的。使用波士顿大学微阵列和测序资源(Boston University Microarray and Sequencing Resource)(BUMSR)的标准Affymetrix GENECHIPTM方案进行RNA样品的加工，杂交和阵列扫描。所有CEL文件均通过稳健的多阵列平均值(RMA)进行归一化(Irizarry等人,2003)，并通过去除未表达的探针并丢弃了具有较高重复间变异系数的转录物来对基因表达数据进行预处理。随后的分析(平均表达、倍数变化、t检验)在R(R 3.6.2版)中进行。
流式细胞术分析
微环注射五天后从小鼠收集全血和脾脏。转染5天后，从表达IL 27的小鼠中收集脾细胞。通过在40μm尼龙细胞过滤器上进行机械解离、然后在ACK缓冲液中进行红细胞裂解来制备单细胞脾细胞悬浮液。根据制造商的说明书(BD Biosciences,San Jose,CA)，将全血细胞直接染色，然后将红细胞裂解并固定在BD Phosflow裂解/固定缓冲液中。将FcγRIII/II通过在含有2％FBS和2mM EDTA的PBS中与大鼠抗小鼠CD16/CD32 mAb(每百万细胞1μg；Biolegend，San Diego，CA)一起预孵育来封闭。将细胞用针对鼠CD4(克隆GK1.5)、CD8(53-6.7)、PD-L1(10F.9G2)、TIM3(RMT3-23)、LAG3(C9B7W)和TIGIT(1G9)的APC-、PE-、亮紫510-和亮紫711-缀合的mAb染色(Biolegend)。使用LSRFortessa X-20流式细胞仪(BDBiosciences)测量细胞相关荧光，并使用FlowJo软件(Tree Star，Ashland，OR)进行分析。
统计分析
如所示，使用GraphPad Prism软件通过配对、未配对或比率学生t检验来确定统计显著性。当使用比率t检验时，将0.1添加至零值以使它们为非零。小于0.05的P值被认为是显著的。
IL-27在体内促进T细胞对抑制性受体的表达
如图8A所示，响应于IL-27的施用，超过400种基因改变≥Log2倍。这些基因的一部分在表11A至表11B中示出。在这些基因中，有编码在免疫响应中起关键作用的免疫抑制性受体的那些基因。如图8B所示，响应于IL-27，Ly6a(编码Sca-1)、Lag3、Tigit和Il10在脾细胞上上调。还存在朝向IL-27介导的Ctla4和Cd274(编码PD-L1)上调对于1倍诱导的趋势(数据未示出)。为了验证表达数据，利用流式细胞术来评估来自这些小鼠的T细胞上PD-L1、LAG-3、TIGIT和TIM-3的蛋白质表达。IL-27微环的施用使得脾脏(脾)和外周血(PBMC)CD4+T细胞中PD-L1、LAG-3和TIGIT上调。在CD8+ T细胞中，IL-27微环上调了PD-L1、LAG-3、TIGIT和TIM-3。如图8C至图8F所示，施用IL-27微环使得脾和外周血CD4+ T细胞中PD-L1、Lag-3和Tigit上调。在CD8+ T细胞中，IL-27微环上调了PD-L1、Lag-3、Tigit和Tim-3。这些数据表明IL-27可在体内驱动免疫调控受体表达中发挥关键作用。
为了研究抗IL-27 Ab1在体内阻断微环来源的人IL-27的能力，研究了通过酶联免疫吸附测定(ELISA)进行的靶标接合以及脾细胞中的免疫调控受体表达。在IL-27转染并用抗IL-27 Ab1(50mg/kg)处理后五天，从小鼠收集血浆以通过Meso Scale Discovery(MSD)分析IL-27异二聚体和EBI3水平。IL-27异二聚体测定利用交叉阻断抗IL-27Ab1的p28捕获抗体和人特异性EBI3检测抗体；因此，如果抗IL-27Ab1结合至IL-27，则其检测将被掩蔽。EBI3测定利用对人EBI3的2个不同表位具有特异性的捕获抗体和检测抗体，并且由于微环来源的IL-27是束缚的异二聚体，因此这一测定法允许检测总IL 27，而与抗IL-27 Ab1结合无关。
简言之，向六周龄的雌性Balb/c小鼠注射空载体(对照)或人IL-27。在微环转染前7天和当天(第-7天和第0天)，用1mg的抗IL-27Ab1或抗DNP IgG1同种型对照抗体处理小鼠。收集全血，并通过Meso Scale Discovery分析血浆中的IL-27(图8G)。图8G示出通过MSD，抗IL-27 Ab1处理完全抑制血浆中IL-27的检测。当测试剂量为25mg/kg的抗IL-27 Ab1时，可观察到类似的数据。这些数据表明，剂量为25mg/kg或更高的抗IL-27 Ab1可在体内使微环来源的IL-27完全饱和。在pSTAT1功能测定中也证实了这种完全靶标接合。
为了评估抗IL-27 Ab1体内阻断IL-27活性的能力，通过流式细胞术分析了鼠PBMC和脾细胞中PD L1、Tim-3、Lag-3和Tigit的表达。抗IL-27 Ab1显著阻断IL 27诱导的CD4+PBMC中的PD-L1和Lag 3表达，以及CD8+PBMC中的PD-L1、Tim-3、Lag-3和Tigit表达。抗IL-27Ab1处理还阻断了IL 27诱导的CD4+脾细胞中的PD-L1、Lag-3和Tigit表达以及CD8+脾细胞中的PD-L1和Lag 3表达。这些数据表明，抗IL-27 Ab1可在体内参与和阻断人IL-27的活性。
这些结果证明，IL-27在体内的异位表达导致脾细胞中T细胞和其他几种具有免疫调节活性的分子对多种抑制性受体的上调。这些数据表明IL-27拮抗作用(例如，通过用抗IL-27抗体治疗)将减少T细胞上抑制剂受体的表达，从而增加免疫响应。
表11A：响应于IL-27施用而上调的基因
Figure GDA0003745251250001331
Figure GDA0003745251250001341
Figure GDA0003745251250001351
Figure GDA0003745251250001361
表11B：响应于IL-27施用而下调的基因
Figure GDA0003745251250001362
Figure GDA0003745251250001371
Figure GDA0003745251250001381
表12：序列表
Figure GDA0003745251250001382
Figure GDA0003745251250001391
Figure GDA0003745251250001401
Figure GDA0003745251250001411
Figure GDA0003745251250001421
Figure GDA0003745251250001431
Figure GDA0003745251250001441
Figure GDA0003745251250001451
Figure GDA0003745251250001461
Figure GDA0003745251250001471
Figure GDA0003745251250001481
Figure GDA0003745251250001491
Figure GDA0003745251250001501
Figure GDA0003745251250001511
Figure GDA0003745251250001521
Figure GDA0003745251250001531
Figure GDA0003745251250001541
Figure GDA0003745251250001551
Figure GDA0003745251250001561
Figure GDA0003745251250001571
Figure GDA0003745251250001581
Figure GDA0003745251250001591
Figure GDA0003745251250001601
Figure GDA0003745251250001611
表13：Fc序列(＝CH2+CH3)
Figure GDA0003745251250001612
Figure GDA0003745251250001621
实施例9：抗IL-27 Ab1结合性质和IL-27受体阻断
确定了浓度范围为0至5.0μg/mL的重组人IL-27与浓度为1μg/mL的抗IL-27 Ab1的缔合和解离。最终的结合动力学参数与结合模型拟合参数(R2和c2)一起显示在表14中，所述参数证明模型良好拟合至数据。
人IL-27对本研究中测试的所有物种的抗IL-27 Ab1表现出最强的结合亲和力(3.86pM)。重组大鼠和食蟹猴IL-27也显示出对抗IL-27 Ab1的强亲和力，值分别为80.9和37.4pM，尽管比人蛋白弱一些。与人蛋白质相比，重组小鼠IL-27对抗IL-27 Ab1的亲和力最弱，值在nM范围内(4.43nM)，如通过其较慢结合速率和较快解离速率所指示。
表14：IL-27与抗IL-27 Ab1的结合和物种交叉反应性的数据总结
分析物 K<sub>D</sub>(M) k<sub>a</sub>(1/Ms) k<sub>d</sub>(1/s) 全χ<sup>2</sup> 全R<sup>2</sup>
人IL-27 3.86E-12 5.10E+05 1.97E-06 0.4055 0.9991
小鼠IL-27 4.43E-09 5.50E+04 2.44E-04 0.6732 0.9963
大鼠IL-27 8.09E-11 2.34E+06 1.89E-04 0.4685 0.9945
食蟹猴IL-27 3.74E-11 3.18E+05 1.19E-05 1.3431 0.9979
缩写：IL-27＝白介素27，ka＝缔合常数，kd＝解离常数，KD＝结合亲和力
注意：R2值＞0.95和χ2值＜3.0证明模型与数据的良好拟合。
实施例10：CDR序列比对
本公开的抗IL-27抗体的许多亚选择在它们的CDR区域上共有序列同源性，从而提供已被证实为保留功能性的多种变体CDR序列。本文中明确预期，以下共有CDR序列完全由本公开支持，并且因此在本公开的范围内。
对于抗IL-27 Ab1、抗IL-27 Ab3、抗IL-27 Ab4、抗IL-27 Ab5、抗IL-27 Ab6和抗IL-27 Ab7抗体，这些抗IL-27抗体各自的CDR序列的比对揭示广泛同源性，其中插入可变残基。特别地，重链CDR1比对揭示以下可变残基：
HCDR1(IMGT)
CLUSTAL O(1.2.4)多重序列比对
Figure GDA0003745251250001631
因此这些同源抗体的共有重链CDR1(IMGT)序列是N-GFTF[S/A/R][S/R][T/Y][G/S]-C(SEQ ID NO：144)，并且因此，在本文中作为共有重链CDR1(IMGT)序列更一般地考虑的是N-GFTFXXXX-C(SEQ ID NO：145)，其中X是任何氨基酸残基。
抗IL-27 Ab1、抗IL-27 Ab3、抗IL-27 Ab4、抗IL-27 Ab5、抗IL-27 Ab6和抗IL-27Ab7抗体重链CDR2(IMGT)序列的比对揭示以下：
HCDR2(IMGT)
CLUSTAL O(1.2.4)多重序列比对
Figure GDA0003745251250001641
因此这些同源抗体的共有重链CDR2(IMGT)序列是N-ISSS[S/G][S/A]YI-C(SEQ IDNO：146)，并且因此，在本文中作为共有重链CDR2(IMGT)序列更一般地考虑的是N-ISSSXXYI-C(SEQ ID NO：147)，其中X是任何氨基酸残基。
人CDR1(NT)与人CDR2(NT)序列的比对还揭示以下：
HCDR1(NT)
CLUSTAL O(1.2.4)多重序列比对
Figure GDA0003745251250001651
HCDR2(NT)
CLUSTAL O(1.2.4)多重序列比对
Figure GDA0003745251250001652
因此这些同源抗体的共有重链CDR1(NT)和CDR2(NT)序列分别是N-FTF[S/A/R][S/R][T/Y][G/S]MN-C(SEQ ID NO：148)和N-[G/S]ISSS[S/G][S/A]YI[L/Y]YADSVKG-C(SEQ IDNO：149)。鉴于这些共有序列，本文更一般考虑的是共有重链CDR1(NT)和CDR2(NT)序列分别是N-FTFXXXXMN-C(SEQ ID NO：150)和N-XISSSXXYIXYADSVKG-C(SEQ ID NO：151)，其中X是任何氨基酸残基。
重链CDR3(IMGT或NT)和轻链CDR CDR1(IMGT或NT)、CDR2(IMGT或NT)和CDR3(IMGT或NT)在抗IL-27 Ab1、抗IL-27 Ab3、抗IL-27 Ab4、抗IL-27 Ab5、抗IL-27 Ab6和抗IL-27Ab7之间完全保守。
实施例11：IL-27–抗IL-27 Ab1 Fab复合物的结晶和表位测定
初步结晶试验使用25mM Tris pH 7.5、约30mM氯化钠和5％甘油中的10.1mg/ml的人IL-27–抗IL-27 Ab1 Fab复合物来建立。预先结晶条件使用PACT筛选(Newman等人,(2005)Acta Cryst.D 61:1426)来鉴定。
在多种条件下获得晶体，包括PACT A2(0.1M SPG(琥珀酸、磷酸二氢钠和甘氨酸)pH 5和25％PEG 1500)。这些晶体用于制得新的种子原液并且使用JCSG+筛选来建立微矩阵播种(MMS)实验(D’Arcy等人,(2007)Acta Cryst.D Biol Cryst.63:550-54)。
在100K下、在配备有Eiger2 XE 16M检测器的station I04,Diamond LightSource,Didcot,England
Figure GDA0003745251250001663
处收集数据集。数据使用autoPROC(Kabash,(2010)Acta.Cryst.D.Biol.Cyrst.66:125-32；Vonrhein等人,(2011)ActaCryst.Biol.Cryst.67:292-302)来处理并且使用STARANISO软件(Tickle等人,STRANISO.Cambridge,United Kingdon:Global Phasing Ltd.(2018))还包括Aimless程序(Evans等人,(2013)Acta Cryst.Biol.Cryst.69:1204-14)来各向异性地截略。
结构使用分子置换软件Phaser(McCoy等人,(2007)J.Appl.Cyrst.40:658-74)和Molrep(Vagin等人,(1997)J.Appl.Cyrst.30:1022-25)来测定(图9)。如图9所示，抗IL-27Ab1 Fab结合至IL-27的p28分子。完整表位-抗体结合部位区域的电子密度是明确定义的。抗IL-27 Ab1与p28之间的相互作用在表15中示出。
表15：抗IL-27 Ab1与p28的相互作用图
Figure GDA0003745251250001661
Figure GDA0003745251250001662
Figure GDA0003745251250001671
实施例12：额外表位作图研究
进一步表位作图研究使用IL-27–抗IL-27 Ab1 Fab复合物晶体结构来执行。抗IL-27 Ab1 Fab分子与IL-27之间的相互作用区域使用CCP4套件中的Qt-PISA和NCONT程序来研究(Winn等人,(2011)Acta Cryst.D Biol.Cryst.67:235-42)。使用Coot(Emsley等人,(2010)Acta Cryst.D Biol.Cyrst.66:486-501)进行数据分析。
表位残基定义为使用CCP4中的NCONT来评估，具有Fab原子的
Figure GDA0003745251250001672
内的原子的IL-27氨基酸。连同先前在表15中鉴定并列出的残基，这些研究发现额外表位残基。在
Figure GDA0003745251250001673
内的IL-27p28与抗IL-27Ab1 Fab之间的所有相互作用在以下表16A中示出。
表16A：
Figure GDA0003745251250001681
对于人IL-27异二聚体，通过SPR来执行对于WSX-1和gp130两者的结合和阻断研究。人IL-27以高亲和力结合至WSX-1，并且抗IL-27 Ab1能够完全抑制结合(图10A)。人IL-27以更低亲和力结合至gp130，并且抗IL-27 Ab1不抑制IL-27结合至gp130(图10B)。
抗IL-27 Ab1与poly-Glu序列的αA和αC螺旋和初始部分相互作用(图11)。重链CDR2和CDR 3与p28具有最广泛接触(表16B)。
表16B：IL27-p28与抗IL-27 Ab1之间的接触.
Figure GDA0003745251250001691
Figure GDA0003745251250001701
图12示出为了在3维空间中对准，使用p28和IL6的IL27/抗IL-27 Ab1与IL23/IL23R的复合物的堆叠。IL6上的gp130结合位点与p28上的抗IL-27 Ab1结合位点重叠。然而，p19上的IL23R结合位点不与p28上的抗IL-27 Ab1结合位点重叠。
图13示出为了在3维空间中对准，使用p28和IL6的IL27/抗IL-27 Ab1与IL6/IL6Ra/gp130的复合物的堆叠。在此处，IL6上的gp130结合位点再次与p28上的抗IL-27 Ab1结合位点重叠。另外，IL6Ra与EBI-3对准。
在各个动物之间的序列比对揭示涉及与EBI3的特异性相互作用的p28残基是完全保守的，并且涉及与p28的特异性相互作用的EBI3残基同样如此(图14A至图15B)。这包括通过箭头标记的若干保守盐桥氨基酸残基和若干保守疏水氨基酸残基。
IL-27异二聚体与IL6/IL6RA的结构对准显示对于两种异二聚体，次级结构、结构域和α碳骨架良好对准(图16A至图16D)，并且对于IL6RA，与EBI3的若干p28相互作用是潜在保守的(图16D)。
人IL-27的结合亲和力数据指示p28与单独的gp130或WSX-1的结合较弱或没有结合(图17)。EBI3对于单独gp130不结合，但是对于WSX-1具有中度结合亲和力。对于人IL27的高亲和力结合仅在组装异二聚体时观测到。EBI3对于p28的亲和力为5nM。
在小鼠序列中，与抗IL-27 Ab1结合相互作用的人p28中的氨基酸大部分为保守的(图18A)；然而，抗IL-27 Ab1与人p28的Gln37和Leu162相互作用，并且Gln37不存在于小鼠序列中，并且Leu162对应于小鼠序列中的Cys(图18B)。小鼠p28中的额外二硫键还可干扰抗IL-27 Ab1 LC结合的局部结构性表位。
还存在具有poly-Glu序列的未拆分CD环，包括来自αC螺旋中的Arg残基的正电荷的较大区域(图19A至图19B)。
实施例13：靶向肾细胞癌中的IL-27表达
在肾细胞癌(RCC)中，IL-27的表达增加，并且相对于正常肾组织中EBI3、IL-27p28和IL-27RA的表达，RCC肿瘤组织中各者的水平增加(图20A)。如与这些转录物中各者的低表达相比，EBI3(图20B)、IL-27RA(图20C)和IL-27p28(图20D)中的各者的高表达与人受试者中的存活概率减小相关。
IL-27诱导活化人CD4+ T细胞中的可重现基因表达特征。来自个别供体的外周血液单核细胞(PBMC)用抗CD3±重组人IL-27(rhIL-27)活化3天。对CD4+ T细胞进行FACS分选并且通过微阵列分析基因表达。在用CD3和rhIL-27活化的T细胞中，观测到多个基因上调或下调，包括上调的PDCD1、HAVCR2、CD274、LGALS9、GBP5、LAMP3、RGS1、IL12RB2、RSAD2、IFIT3和IFI44L的表达增加，和下调的GZMA和CD200表达增加(图21A)。CD4+ T细胞中的IL-27特征中的首要31种基因在图21B中列出。值得注意地，31种基因中的15种与不良结果相关，即AIM2、ALPK1、APOL1、GBP5、IFI44、IRF1、LAMP3、LOC400696、PARP3、RGS1、SAMD9L、SOCS1、STAT1、TNFSF13B和XAF1。十二种首要特征基因(包括STAT1、GBP5、IFI44、XAF1和SOCS1)与RCC中的不良结果相关(图22A)，但是这些相同基因不与乳腺癌(BRCA)中的不良结果相关(图22B)。
此外，RCC患者中的EBI3的血浆水平可预测结果。在肾切除手术时，从RCC患者中收集血清样品，并且使用EBI3特异性抗体对来测量EBI3水平。与来自健康供体的血清比较，RCC患者的血清中的平均EBI3水平升高(图23A)。包括来自怀孕供体的血清作为阳性对照。相对于阶段2或阶段3，阶段4RCC受试者中的EBI3水平为最高的(图23B)；并且在具有低血清EBI3水平的RCC患者中，总体存活(图23C)和无疾病存活(图23D)为较高的。
为了测试抗IL-27 Ab1治疗在鼠RCC模型中的体内功效，将Renca细胞原位植入左肾中。植入后三天，小鼠用抗IL-27 Ab1或人IgG1同种型对照(50mg/kg每周两次)腹膜内治疗2周。21天之后，收获组织，将两个肾脏称重以便计算净肿瘤重量，并且将肺转移在视觉上计数。虽然平均肿瘤重量保持基本上恒定(图24A)，但是如与同种型对照处理的小鼠相比，在抗IL-27 Ab1处理的小鼠中，肺转移显著降低(图24B)。
这些数据显示RCC患者的肿瘤中的增加的IL-27p28、EBI3和IL-27RA转录物水平与不良预后相关。抗IL-27 Ab1在体内原位RCC模型中展示单一剂活性，并且对于具有高水平循环EBI3的RCC患者，用抗IL-27 Ab1阻断IL-27代表有希望的策略。
实施例14：在原位Hepa1-6 HCC小鼠模型中使用抗IL-27 Ab1体内靶向IL-27
为了研究抗IL-27 Ab1抗体在肝癌模型中的体内功效，将Hepa1-6-Luc肿瘤细胞注射到小鼠的肝脏中，并且在植入后第5天、第8天、第12天和第15天，通过IP注射，给予动物50mg/kg抗IL-27 Ab1(图25A)。如与hIgG1同种型对照处理的小鼠相比，在抗IL-27 Ab1处理的小鼠中，总通量降低至接近基线(图25B)。
小鼠模型中的对于抗IL-27 Ab1的反应性是剂量依赖性的。在植入后第5天、第8天、第12天和第15天，小鼠用同种型对照、5mg/kg抗IL-27 Ab1、25mg/kg抗IL-27 Ab1或50mg/kg抗IL-27 Ab1治疗(图26A)。在用25或50mg/kg抗IL-27 Ab1处理的小鼠中，肿瘤生长最低，接近基线(图26B至图26F)。
为了测定是否先前定义的由抗IL-27 Ab1诱导的基因表达的临床前变化在此模型中为相关的，在施用抗IL-27 Ab1之后，分析一系列生物标志物基因的表达(图27A至图27C)。首要200种受阻抑的基因在表17A中示出，并且首要200种受诱导的基因在表17B中示出。上调和下调基因的完整列表在以上表11A至表11B中提供。
表17A：在抗IL-27 Ab1施用之后Hepa1-6小鼠肝脏中的首要200种受阻抑的基因.
Figure GDA0003745251250001731
Figure GDA0003745251250001741
Figure GDA0003745251250001751
Figure GDA0003745251250001761
表17B：在抗IL-27 Ab1施用之后Hepa1-6小鼠肝脏中的首要200种经诱导的基因.
Figure GDA0003745251250001762
Figure GDA0003745251250001771
Figure GDA0003745251250001781
Figure GDA0003745251250001791
值得注意地，发现抗IL-27 Ab1下调若干关键抑制性基因，包括PD-L1、TIGIT和AFP表达(图28B至图28D)，并且EBI3、IL-27和IL27RA的表达没有显著变化(图28A)。还发现在抗IL-27 Ab1施用之后，TGFβ途径被抑制，并且TNFRSF10B、TNFRSF1a和PDGFA的表达减少(图28C和图28E)。
此外，使用抗IL-27 Ab1进行的治疗改变肿瘤免疫细胞浸润。抗IL-27 Ab1促进肿瘤微环境中的巨噬细胞和NK转录物丰度(TME；图29A)。具体而言，抗IL-27 Ab1使CD206和CD163(其为关键巨噬细胞相关标志物)丰富(图29B)；并且发现抗IL-27 Ab1调节特异性NK相关受体(图30)。NK标志物调节中的不均匀性表明抗IL-27 Ab1影响NK功能而不是仅影响HEPA1-6肿瘤中的浸润。另外，在用抗IL-27 Ab1治疗之后，各种其他细胞表面标志物显示受调节的表达(图31)。
实施例15：TNFSF15作为IL-27抑制的生物标志物
TNFSF15(肿瘤坏死因子可溶性因子15)，还称为TL1A(TNF样配体1A)或VEGFI(血管内皮生长因子抑制剂)，是已知在抑制血管生成中起作用的肿瘤坏死因子家族内的细胞因子(参考文献：VEGI,a novel cytokine of the tumor necrosis factor family,is anangiogenesis inhibitor that suppresses the growth of colon carcinomas invivo.FASEB J.1999Human Genome Sciences,Inc.)并且可通过诱导炎性细胞因子的产生来充当T细胞辅助刺激因子(参见Migone等人,Immunity 16(3):479-92(2002年3月)；Jin等人,Mucosal Immunology 6:886-99(2012年12月19日))。在用IL-27抑制剂治疗之后，在阻断IL-27之后，显示TNFSF15上调，确立其在评估施用意欲抑制IL-27的治疗剂之后的IL-27抑制的有效性方面作为生物标志物的效用。
IL-27抑制活化PBMC中的细胞因子IL-17A、IFNγ(或IFNg)和TNFα(或TNFa)的产生。在存在或不存在IL-27(100ng/mL)时，将来自3个供体的合并的人PBMC用抗CD3(0.25μg/mL)刺激3天。将上清液收获并且通过流式细胞仪珠粒阵列来测试对于IL-17A、IFNγ、TNFα和IL-10的效应；IL-27导致IL-17A、IFNγ和TNFα的产生减少并且对于IL-10的产生没有效应(图32A至图32D)。
相反地，在活化PBMC中用抗IL-27 Ab1阻断IL-27导致细胞因子产生增加。在存在或不存在抗IL-27 Ab1(1μg/mL)时，将来自3至4个个别供体的PBMC用抗CD3(0.25μg/mL)刺激4天。将上清液收获并且通过流式细胞仪珠粒阵列来测试对于IL-17A、IFNγ、TNFα和IL-10的效应；抗IL-27 Ab1导致IL-17A、IFNγ和TNFα的产生增加(图33A至图33D)。
为了测定可作为抗IL-27 Ab1活性的药效动力学或生物标志物来跟踪的其他基因表达变化，在活化PBMC中通过微阵列分析执行基因表达谱分析。在具有或不具有抗IL-27Ab1(1μg/mL)的情况下，将来自三个个别供体的PBMC用抗CD3(0.25μg/mL)刺激24小时。将来自各样品的RNA分离并且加工以便通过微阵列来进行基因表达谱分析，以测定IL-27抑制的效应。通过火山图分析，如与包括MMP1、MMP10和TNFSF15的同种型对照相比，在用抗IL-27Ab1抑制IL-27之后，多种基因差异性地表达，如表18所示。图34显示代表与对照相比的在IL-27抑制之后基因表达的log2倍数变化(x轴)相比于与对照相比的在用抗IL-27 Ab1处理之后基因表达变化的显著性(p值)(y轴)的火山图。在IL-27阻断之后，TNFSF15转录物显著增加。在所有3个个别供体中，与用同种型对照治疗相比，用抗IL-27 Ab1治疗之后，TNFSF15显示基因表达水平的可重现增加，如图35所示。
表18：在体外在IL-27抑制之后来自PBMC的转录谱
Figure GDA0003745251250001811
Figure GDA0003745251250001821
Figure GDA0003745251250001831
Figure GDA0003745251250001841
Figure GDA0003745251250001851
Figure GDA0003745251250001861
在后续实验中，在两个不同批次抗IL-27 Ab1(1μg/mL)或同种型对照存在下，将合并的人PBMC用抗CD3(0.25μg/ml)刺激24小时或保持未刺激。收获RNA，并且通过qPCR，使用基因特异性Taqman探针来测量TNFSF15转录物，从而测定TNFSF15相对数量(RQ)。结果证实在IL-27抑制之后TNFSF15表达增加，并且发现其依赖于免疫细胞活化，因为在静息PBMC中，用抗IL-27 Ab1治疗之后，TNFSF15表达不增加，如图36A至图36B所示。
在将单核细胞补充至PBMC培养物中时，TNFSF15转录物的相对增加进一步增强。合并的人PBMC是保持静息的(静息PBMC)、补充有1:2比率的从PBMC富集的单核细胞的PBMC(静息PBMC+单核细胞)、保持静息的单独单核细胞(静息单核细胞)、用抗CD3活化的PBMC(0.25μg/mL)(活化PMBC)或补充有1:2比率的单核细胞并且用抗CD3(0.25μg/mL)活化的PBMC(活化PMBC+单核细胞)。将细胞培养24小时，然后分离RNA以便通过qPCR测定TNFSF15水平。图37中的值表示与同种型对照相比，用抗IL-27 Ab1抑制IL-27之后的TNFSF15转录物的倍数变化。
增强TNFSF15转录物的效应对于IL-27阻断为特异性的，并且对于靶向CD39或CD112R的其他抗体而言，未观测到此效应，如图38所示。在此处，在IgG1对照抗体、抗IL-27抗体(抗IL-27 Ab1，1μg/mL)、抗CD39 IgG4抗体(1μg/mL)、抗CD112R IgG1抗体(1μg/mL)或抗CD112R IgG4抗体(1μg/mL)存在下，将合并的人PBMC用单核细胞源性巨噬细胞补充并且用抗CD3(0.25μg/mL)刺激24小时。在24小时处收获RNA；使用人TL1A/TNFSF15 DuoSetELISA(R&D Systems)，测量细胞培养上清液中的TNFSF15转录物。
此外，如图39A和图39B所示，在活化PBMC中，在用抗IL-27 Ab1阻断IL-27之后还发现所分泌的TNFSF15蛋白增加，相较于转录物动力学延迟(图39A至图39B)。在IgG1对照或抗IL-27抗体(抗IL-27 Ab1，1μg/mL)存在下，将合并的人PBMC用单核细胞源性巨噬细胞补充并且用抗CD3(0.25μg/mL)刺激。在第1天、第2天和第5天，收获RNA，并且对于各时间点，通过qPCR测定TNFSF15转录物相对数量(RQ)。在不同时间收获培养物上清液；使用夹心ELISA测量TNFSF15蛋白。
序列表
<110> 表面肿瘤学公司(SURFACE ONCOLOGY, INC.)
<120> 抗IL-27抗体及其用途
<130> 4416.009PC02
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<150> US 62/906,008
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<160> 156
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<210> 1
<211> 229
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人EBI3蛋白
<400> 1
Met Thr Pro Gln Leu Leu Leu Ala Leu Val Leu Trp Ala Ser Cys Pro
1 5 10 15
Pro Cys Ser Gly Arg Lys Gly Pro Pro Ala Ala Leu Thr Leu Pro Arg
20 25 30
Val Gln Cys Arg Ala Ser Arg Tyr Pro Ile Ala Val Asp Cys Ser Trp
35 40 45
Thr Leu Pro Pro Ala Pro Asn Ser Thr Ser Pro Val Ser Phe Ile Ala
50 55 60
Thr Tyr Arg Leu Gly Met Ala Ala Arg Gly His Ser Trp Pro Cys Leu
65 70 75 80
Gln Gln Thr Pro Thr Ser Thr Ser Cys Thr Ile Thr Asp Val Gln Leu
85 90 95
Phe Ser Met Ala Pro Tyr Val Leu Asn Val Thr Ala Val His Pro Trp
100 105 110
Gly Ser Ser Ser Ser Phe Val Pro Phe Ile Thr Glu His Ile Ile Lys
115 120 125
Pro Asp Pro Pro Glu Gly Val Arg Leu Ser Pro Leu Ala Glu Arg Gln
130 135 140
Leu Gln Val Gln Trp Glu Pro Pro Gly Ser Trp Pro Phe Pro Glu Ile
145 150 155 160
Phe Ser Leu Lys Tyr Trp Ile Arg Tyr Lys Arg Gln Gly Ala Ala Arg
165 170 175
Phe His Arg Val Gly Pro Ile Glu Ala Thr Ser Phe Ile Leu Arg Ala
180 185 190
Val Arg Pro Arg Ala Arg Tyr Tyr Val Gln Val Ala Ala Gln Asp Leu
195 200 205
Thr Asp Tyr Gly Glu Leu Ser Asp Trp Ser Leu Pro Ala Thr Ala Thr
210 215 220
Met Ser Leu Gly Lys
225
<210> 2
<211> 243
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人p28蛋白
<400> 2
Met Gly Gln Thr Ala Gly Asp Leu Gly Trp Arg Leu Ser Leu Leu Leu
1 5 10 15
Leu Pro Leu Leu Leu Val Gln Ala Gly Val Trp Gly Phe Pro Arg Pro
20 25 30
Pro Gly Arg Pro Gln Leu Ser Leu Gln Glu Leu Arg Arg Glu Phe Thr
35 40 45
Val Ser Leu His Leu Ala Arg Lys Leu Leu Ser Glu Val Arg Gly Gln
50 55 60
Ala His Arg Phe Ala Glu Ser His Leu Pro Gly Val Asn Leu Tyr Leu
65 70 75 80
Leu Pro Leu Gly Glu Gln Leu Pro Asp Val Ser Leu Thr Phe Gln Ala
85 90 95
Trp Arg Arg Leu Ser Asp Pro Glu Arg Leu Cys Phe Ile Ser Thr Thr
100 105 110
Leu Gln Pro Phe His Ala Leu Leu Gly Gly Leu Gly Thr Gln Gly Arg
115 120 125
Trp Thr Asn Met Glu Arg Met Gln Leu Trp Ala Met Arg Leu Asp Leu
130 135 140
Arg Asp Leu Gln Arg His Leu Arg Phe Gln Val Leu Ala Ala Gly Phe
145 150 155 160
Asn Leu Pro Glu Glu Glu Glu Glu Glu Glu Glu Glu Glu Glu Glu Glu
165 170 175
Arg Lys Gly Leu Leu Pro Gly Ala Leu Gly Ser Ala Leu Gln Gly Pro
180 185 190
Ala Gln Val Ser Trp Pro Gln Leu Leu Ser Thr Tyr Arg Leu Leu His
195 200 205
Ser Leu Glu Leu Val Leu Ser Arg Ala Val Arg Glu Leu Leu Leu Leu
210 215 220
Ser Lys Ala Gly His Ser Val Trp Pro Leu Gly Phe Pro Thr Leu Ser
225 230 235 240
Pro Gln Pro
<210> 3
<211> 636
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人WSX1
<400> 3
Met Arg Gly Gly Arg Gly Ala Pro Phe Trp Leu Trp Pro Leu Pro Lys
1 5 10 15
Leu Ala Leu Leu Pro Leu Leu Trp Val Leu Phe Gln Arg Thr Arg Pro
20 25 30
Gln Gly Ser Ala Gly Pro Leu Gln Cys Tyr Gly Val Gly Pro Leu Gly
35 40 45
Asp Leu Asn Cys Ser Trp Glu Pro Leu Gly Asp Leu Gly Ala Pro Ser
50 55 60
Glu Leu His Leu Gln Ser Gln Lys Tyr Arg Ser Asn Lys Thr Gln Thr
65 70 75 80
Val Ala Val Ala Ala Gly Arg Ser Trp Val Ala Ile Pro Arg Glu Gln
85 90 95
Leu Thr Met Ser Asp Lys Leu Leu Val Trp Gly Thr Lys Ala Gly Gln
100 105 110
Pro Leu Trp Pro Pro Val Phe Val Asn Leu Glu Thr Gln Met Lys Pro
115 120 125
Asn Ala Pro Arg Leu Gly Pro Asp Val Asp Phe Ser Glu Asp Asp Pro
130 135 140
Leu Glu Ala Thr Val His Trp Ala Pro Pro Thr Trp Pro Ser His Lys
145 150 155 160
Val Leu Ile Cys Gln Phe His Tyr Arg Arg Cys Gln Glu Ala Ala Trp
165 170 175
Thr Leu Leu Glu Pro Glu Leu Lys Thr Ile Pro Leu Thr Pro Val Glu
180 185 190
Ile Gln Asp Leu Glu Leu Ala Thr Gly Tyr Lys Val Tyr Gly Arg Cys
195 200 205
Arg Met Glu Lys Glu Glu Asp Leu Trp Gly Glu Trp Ser Pro Ile Leu
210 215 220
Ser Phe Gln Thr Pro Pro Ser Ala Pro Lys Asp Val Trp Val Ser Gly
225 230 235 240
Asn Leu Cys Gly Thr Pro Gly Gly Glu Glu Pro Leu Leu Leu Trp Lys
245 250 255
Ala Pro Gly Pro Cys Val Gln Val Ser Tyr Lys Val Trp Phe Trp Val
260 265 270
Gly Gly Arg Glu Leu Ser Pro Glu Gly Ile Thr Cys Cys Cys Ser Leu
275 280 285
Ile Pro Ser Gly Ala Glu Trp Ala Arg Val Ser Ala Val Asn Ala Thr
290 295 300
Ser Trp Glu Pro Leu Thr Asn Leu Ser Leu Val Cys Leu Asp Ser Ala
305 310 315 320
Ser Ala Pro Arg Ser Val Ala Val Ser Ser Ile Ala Gly Ser Thr Glu
325 330 335
Leu Leu Val Thr Trp Gln Pro Gly Pro Gly Glu Pro Leu Glu His Val
340 345 350
Val Asp Trp Ala Arg Asp Gly Asp Pro Leu Glu Lys Leu Asn Trp Val
355 360 365
Arg Leu Pro Pro Gly Asn Leu Ser Ala Leu Leu Pro Gly Asn Phe Thr
370 375 380
Val Gly Val Pro Tyr Arg Ile Thr Val Thr Ala Val Ser Ala Ser Gly
385 390 395 400
Leu Ala Ser Ala Ser Ser Val Trp Gly Phe Arg Glu Glu Leu Ala Pro
405 410 415
Leu Val Gly Pro Thr Leu Trp Arg Leu Gln Asp Ala Pro Pro Gly Thr
420 425 430
Pro Ala Ile Ala Trp Gly Glu Val Pro Arg His Gln Leu Arg Gly His
435 440 445
Leu Thr His Tyr Thr Leu Cys Ala Gln Ser Gly Thr Ser Pro Ser Val
450 455 460
Cys Met Asn Val Ser Gly Asn Thr Gln Ser Val Thr Leu Pro Asp Leu
465 470 475 480
Pro Trp Gly Pro Cys Glu Leu Trp Val Thr Ala Ser Thr Ile Ala Gly
485 490 495
Gln Gly Pro Pro Gly Pro Ile Leu Arg Leu His Leu Pro Asp Asn Thr
500 505 510
Leu Arg Trp Lys Val Leu Pro Gly Ile Leu Phe Leu Trp Gly Leu Phe
515 520 525
Leu Leu Gly Cys Gly Leu Ser Leu Ala Thr Ser Gly Arg Cys Tyr His
530 535 540
Leu Arg His Lys Val Leu Pro Arg Trp Val Trp Glu Lys Val Pro Asp
545 550 555 560
Pro Ala Asn Ser Ser Ser Gly Gln Pro His Met Glu Gln Val Pro Glu
565 570 575
Ala Gln Pro Leu Gly Asp Leu Pro Ile Leu Glu Val Glu Glu Met Glu
580 585 590
Pro Pro Pro Val Met Glu Ser Ser Gln Pro Ala Gln Ala Thr Ala Pro
595 600 605
Leu Asp Ser Gly Tyr Glu Lys His Phe Leu Pro Thr Pro Glu Glu Leu
610 615 620
Gly Leu Leu Gly Pro Pro Arg Pro Gln Val Leu Ala
625 630 635
<210> 4
<211> 918
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人gp130蛋白
<400> 4
Met Leu Thr Leu Gln Thr Trp Leu Val Gln Ala Leu Phe Ile Phe Leu
1 5 10 15
Thr Thr Glu Ser Thr Gly Glu Leu Leu Asp Pro Cys Gly Tyr Ile Ser
20 25 30
Pro Glu Ser Pro Val Val Gln Leu His Ser Asn Phe Thr Ala Val Cys
35 40 45
Val Leu Lys Glu Lys Cys Met Asp Tyr Phe His Val Asn Ala Asn Tyr
50 55 60
Ile Val Trp Lys Thr Asn His Phe Thr Ile Pro Lys Glu Gln Tyr Thr
65 70 75 80
Ile Ile Asn Arg Thr Ala Ser Ser Val Thr Phe Thr Asp Ile Ala Ser
85 90 95
Leu Asn Ile Gln Leu Thr Cys Asn Ile Leu Thr Phe Gly Gln Leu Glu
100 105 110
Gln Asn Val Tyr Gly Ile Thr Ile Ile Ser Gly Leu Pro Pro Glu Lys
115 120 125
Pro Lys Asn Leu Ser Cys Ile Val Asn Glu Gly Lys Lys Met Arg Cys
130 135 140
Glu Trp Asp Gly Gly Arg Glu Thr His Leu Glu Thr Asn Phe Thr Leu
145 150 155 160
Lys Ser Glu Trp Ala Thr His Lys Phe Ala Asp Cys Lys Ala Lys Arg
165 170 175
Asp Thr Pro Thr Ser Cys Thr Val Asp Tyr Ser Thr Val Tyr Phe Val
180 185 190
Asn Ile Glu Val Trp Val Glu Ala Glu Asn Ala Leu Gly Lys Val Thr
195 200 205
Ser Asp His Ile Asn Phe Asp Pro Val Tyr Lys Val Lys Pro Asn Pro
210 215 220
Pro His Asn Leu Ser Val Ile Asn Ser Glu Glu Leu Ser Ser Ile Leu
225 230 235 240
Lys Leu Thr Trp Thr Asn Pro Ser Ile Lys Ser Val Ile Ile Leu Lys
245 250 255
Tyr Asn Ile Gln Tyr Arg Thr Lys Asp Ala Ser Thr Trp Ser Gln Ile
260 265 270
Pro Pro Glu Asp Thr Ala Ser Thr Arg Ser Ser Phe Thr Val Gln Asp
275 280 285
Leu Lys Pro Phe Thr Glu Tyr Val Phe Arg Ile Arg Cys Met Lys Glu
290 295 300
Asp Gly Lys Gly Tyr Trp Ser Asp Trp Ser Glu Glu Ala Ser Gly Ile
305 310 315 320
Thr Tyr Glu Asp Arg Pro Ser Lys Ala Pro Ser Phe Trp Tyr Lys Ile
325 330 335
Asp Pro Ser His Thr Gln Gly Tyr Arg Thr Val Gln Leu Val Trp Lys
340 345 350
Thr Leu Pro Pro Phe Glu Ala Asn Gly Lys Ile Leu Asp Tyr Glu Val
355 360 365
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370 375 380
Thr Lys Leu Thr Val Asn Leu Thr Asn Asp Arg Tyr Leu Ala Thr Leu
385 390 395 400
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405 410 415
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Ser Val Lys Lys Tyr Ile Leu Glu Trp Cys Val Leu Ser Asp Lys Ala
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Pro Cys Ile Thr Asp Trp Gln Gln Glu Asp Gly Thr Val His Arg Thr
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485 490 495
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500 505 510
Tyr Leu Lys Gln Ala Pro Pro Ser Lys Gly Pro Thr Val Arg Thr Lys
515 520 525
Lys Val Gly Lys Asn Glu Ala Val Leu Glu Trp Asp Gln Leu Pro Val
530 535 540
Asp Val Gln Asn Gly Phe Ile Arg Asn Tyr Thr Ile Phe Tyr Arg Thr
545 550 555 560
Ile Ile Gly Asn Glu Thr Ala Val Asn Val Asp Ser Ser His Thr Glu
565 570 575
Tyr Thr Leu Ser Ser Leu Thr Ser Asp Thr Leu Tyr Met Val Arg Met
580 585 590
Ala Ala Tyr Thr Asp Glu Gly Gly Lys Asp Gly Pro Glu Phe Thr Phe
595 600 605
Thr Thr Pro Lys Phe Ala Gln Gly Glu Ile Glu Ala Ile Val Val Pro
610 615 620
Val Cys Leu Ala Phe Leu Leu Thr Thr Leu Leu Gly Val Leu Phe Cys
625 630 635 640
Phe Asn Lys Arg Asp Leu Ile Lys Lys His Ile Trp Pro Asn Val Pro
645 650 655
Asp Pro Ser Lys Ser His Ile Ala Gln Trp Ser Pro His Thr Pro Pro
660 665 670
Arg His Asn Phe Asn Ser Lys Asp Gln Met Tyr Ser Asp Gly Asn Phe
675 680 685
Thr Asp Val Ser Val Val Glu Ile Glu Ala Asn Asp Lys Lys Pro Phe
690 695 700
Pro Glu Asp Leu Lys Ser Leu Asp Leu Phe Lys Lys Glu Lys Ile Asn
705 710 715 720
Thr Glu Gly His Ser Ser Gly Ile Gly Gly Ser Ser Cys Met Ser Ser
725 730 735
Ser Arg Pro Ser Ile Ser Ser Ser Asp Glu Asn Glu Ser Ser Gln Asn
740 745 750
Thr Ser Ser Thr Val Gln Tyr Ser Thr Val Val His Ser Gly Tyr Arg
755 760 765
His Gln Val Pro Ser Val Gln Val Phe Ser Arg Ser Glu Ser Thr Gln
770 775 780
Pro Leu Leu Asp Ser Glu Glu Arg Pro Glu Asp Leu Gln Leu Val Asp
785 790 795 800
His Val Asp Gly Gly Asp Gly Ile Leu Pro Arg Gln Gln Tyr Phe Lys
805 810 815
Gln Asn Cys Ser Gln His Glu Ser Ser Pro Asp Ile Ser His Phe Glu
820 825 830
Arg Ser Lys Gln Val Ser Ser Val Asn Glu Glu Asp Phe Val Arg Leu
835 840 845
Lys Gln Gln Ile Ser Asp His Ile Ser Gln Ser Cys Gly Ser Gly Gln
850 855 860
Met Lys Met Phe Gln Glu Val Ser Ala Ala Asp Ala Phe Gly Pro Gly
865 870 875 880
Thr Glu Gly Gln Val Glu Arg Phe Glu Thr Val Gly Met Glu Ala Ala
885 890 895
Thr Asp Glu Gly Met Pro Lys Ser Tyr Leu Pro Gln Thr Val Arg Gln
900 905 910
Gly Gly Tyr Met Pro Gln
915
<210> 5
<211> 232
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人IgG1
<400> 5
Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala
1 5 10 15
Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro
20 25 30
Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val
35 40 45
Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val
50 55 60
Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln
65 70 75 80
Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln
85 90 95
Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala
100 105 110
Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro
115 120 125
Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr
130 135 140
Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser
145 150 155 160
Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr
165 170 175
Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr
180 185 190
Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe
195 200 205
Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys
210 215 220
Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
225 230
<210> 6
<211> 229
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人IgG4
<400> 6
Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Ser Cys Pro Ala Pro Glu Phe
1 5 10 15
Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr
20 25 30
Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val
35 40 45
Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val
50 55 60
Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser
65 70 75 80
Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu
85 90 95
Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser
100 105 110
Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro
115 120 125
Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln
130 135 140
Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala
145 150 155 160
Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr
165 170 175
Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu
180 185 190
Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser
195 200 205
Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser
210 215 220
Leu Ser Leu Gly Lys
225
<210> 7
<211> 229
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人IgG4 (S228P)
<400> 7
Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe
1 5 10 15
Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr
20 25 30
Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val
35 40 45
Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val
50 55 60
Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser
65 70 75 80
Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu
85 90 95
Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser
100 105 110
Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro
115 120 125
Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln
130 135 140
Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala
145 150 155 160
Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr
165 170 175
Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu
180 185 190
Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser
195 200 205
Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser
210 215 220
Leu Ser Leu Gly Lys
225
<210> 8
<211> 229
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人IgG4 (S228P / L235E)
<400> 8
Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe
1 5 10 15
Glu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr
20 25 30
Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val
35 40 45
Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val
50 55 60
Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser
65 70 75 80
Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu
85 90 95
Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser
100 105 110
Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro
115 120 125
Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln
130 135 140
Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala
145 150 155 160
Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr
165 170 175
Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu
180 185 190
Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser
195 200 205
Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser
210 215 220
Leu Ser Leu Gly Lys
225
<210> 9
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 重链CDR1
<400> 9
Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Ser
1 5
<210> 10
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 重链CDR2
<400> 10
Ile Ser Ser Ser Ser Ser Tyr Ile
1 5
<210> 11
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 重链CDR3
<400> 11
Ala Arg Asp Gly Gly Arg Thr Ser Tyr Thr Ala Thr Ala His Asn Trp
1 5 10 15
Phe Asp Pro
<210> 12
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 重链CDR1
<400> 12
Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Ser Met Asn
1 5
<210> 13
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 重链CDR2
<400> 13
Ser Ile Ser Ser Ser Ser Ser Tyr Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 14
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 重链CDR3
<400> 14
Ala Arg Asp Gly Gly Arg Thr Ser Tyr Thr Ala Thr Ala His Asn Trp
1 5 10 15
Phe Asp Pro
<210> 15
<211> 126
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 重链
<400> 15
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Ser Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Ser Ile Ser Ser Ser Ser Ser Tyr Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Asp Gly Gly Arg Thr Ser Tyr Thr Ala Thr Ala His Asn Trp
100 105 110
Phe Asp Pro Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
<210> 16
<211> 378
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> DNA重链
<400> 16
gaggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc ctggtcaagc ctggggggtc cctgagactc 60
tcctgtgcag cctctggatt caccttcagt agctatagca tgaactgggt ccgccaggct 120
ccagggaagg ggctggagtg ggtctcatcc attagtagta gtagtagtta catatactac 180
gcagactcag tgaagggccg attcaccatc tccagagaca acgccaagaa ctcactgtat 240
ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggcggtgt actactgcgc cagagatggt 300
ggaagaacgt cctacaccgc cacagcccac aattggttcg acccctgggg acagggtaca 360
ttggtcaccg tctcctca 378
<210> 17
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 轻链CDR1
<400> 17
Gln Ser Val Leu Phe Ser Ser Asn Asn Lys Asn Tyr
1 5 10
<210> 18
<211> 3
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 轻链CDR2
<400> 18
Trp Ala Ser
1
<210> 19
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 轻链CDR3
<400> 19
Gln Gln His Ala Ser Ala Pro Pro Thr
1 5
<210> 20
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 轻链CDR1
<400> 20
Lys Ser Ser Gln Ser Val Leu Phe Ser Ser Asn Asn Lys Asn Tyr Leu
1 5 10 15
Ala
<210> 21
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 轻链CDR2
<400> 21
Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser
1 5
<210> 22
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 轻链CDR3
<400> 22
Gln Gln His Ala Ser Ala Pro Pro Thr
1 5
<210> 23
<211> 113
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 轻链
<400> 23
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Gln Ser Val Leu Phe Ser
20 25 30
Ser Asn Asn Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln
35 40 45
Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val
50 55 60
Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr
65 70 75 80
Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln
85 90 95
His Ala Ser Ala Pro Pro Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile
100 105 110
Lys
<210> 24
<211> 339
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> DNA轻链
<400> 24
gacatcgtga tgacccagtc tccagactcc ctggctgtgt ctctgggcga gagggccacc 60
atcaactgca agtccagcca gagtgtttta ttcagctcca acaataagaa ctacttagct 120
tggtaccagc agaaaccagg acagcctcct aagctgctca tttactgggc atctacccgg 180
gaatccgggg tccctgaccg attcagtggc agcgggtctg ggacagattt cactctcacc 240
atcagcagcc tgcaggctga agatgtggca gtttattact gtcagcagca cgccagtgcc 300
cctcctactt ttggcggagg gaccaaggtt gagatcaaa 339
<210> 25
<211> 456
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 重链
<400> 25
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Ser Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Ser Ile Ser Ser Ser Ser Ser Tyr Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Asp Gly Gly Arg Thr Ser Tyr Thr Ala Thr Ala His Asn Trp
100 105 110
Phe Asp Pro Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser
115 120 125
Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr
130 135 140
Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro
145 150 155 160
Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val
165 170 175
His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser
180 185 190
Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile
195 200 205
Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val
210 215 220
Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala
225 230 235 240
Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro
245 250 255
Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val
260 265 270
Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val
275 280 285
Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln
290 295 300
Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln
305 310 315 320
Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala
325 330 335
Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro
340 345 350
Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr
355 360 365
Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser
370 375 380
Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr
385 390 395 400
Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr
405 410 415
Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe
420 425 430
Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys
435 440 445
Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
450 455
<210> 26
<211> 1368
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> DNA重链
<400> 26
gaggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc ctggtcaagc ctggggggtc cctgagactc 60
tcctgtgcag cctctggatt caccttcagt agctatagca tgaactgggt ccgccaggct 120
ccagggaagg ggctggagtg ggtctcatcc attagtagta gtagtagtta catatactac 180
gcagactcag tgaagggccg attcaccatc tccagagaca acgccaagaa ctcactgtat 240
ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggcggtgt actactgcgc cagagatggt 300
ggaagaacgt cctacaccgc cacagcccac aattggttcg acccctgggg acagggtaca 360
ttggtcaccg tctcctcagc gagcaccaaa ggcccgagcg tgtttccgct ggcgccgagc 420
agcaaaagca ccagcggcgg caccgcggcg ctgggctgcc tggtgaaaga ttattttccg 480
gaaccggtga ccgtgagctg gaacagcggc gcgctgacca gcggcgtgca tacctttccg 540
gcggtgctgc agagcagcgg cctgtatagc ctgagcagcg tggtgaccgt gccgagcagc 600
agcctgggca cccagaccta tatttgcaac gtgaaccata aaccgagcaa caccaaagtg 660
gataaaaaag tggaaccgaa aagctgcgat aaaacccata cctgcccgcc gtgcccggcg 720
ccggaactgc tgggcggccc gagcgtgttt ctgtttccgc cgaaaccgaa agataccctg 780
atgattagcc gcaccccgga agtgacctgc gtggtggtgg atgtgagcca tgaagatccg 840
gaagtgaaat ttaactggta tgtggatggc gtggaagtgc ataacgcgaa aaccaaaccg 900
cgcgaagaac agtataacag cacctatcgc gtggtgagcg tgctgaccgt gctgcatcag 960
gattggctga acggcaaaga atataaatgc aaagtgagca acaaagcgct gccggcgccg 1020
attgaaaaaa ccattagcaa agcgaaaggc cagccgcgcg aaccgcaggt gtataccctg 1080
ccgccgagcc gcgatgaact gaccaaaaac caggtgagcc tgacctgcct ggtgaaaggc 1140
ttttatccga gcgatattgc ggtggaatgg gaaagcaacg gccagccgga aaacaactat 1200
aaaaccaccc cgccggtgct ggatagcgat ggcagctttt ttctgtatag caaactgacc 1260
gtggataaaa gccgctggca gcagggcaac gtgtttagct gcagcgtgat gcatgaagcg 1320
ctgcataacc attataccca gaaaagcctg agcctgagcc cgggcaaa 1368
<210> 27
<211> 220
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 轻链
<400> 27
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Gln Ser Val Leu Phe Ser
20 25 30
Ser Asn Asn Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln
35 40 45
Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val
50 55 60
Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr
65 70 75 80
Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln
85 90 95
His Ala Ser Ala Pro Pro Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile
100 105 110
Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp
115 120 125
Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn
130 135 140
Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu
145 150 155 160
Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp
165 170 175
Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr
180 185 190
Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser
195 200 205
Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210 215 220
<210> 28
<211> 660
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> DNA轻链
<400> 28
gacatcgtga tgacccagtc tccagactcc ctggctgtgt ctctgggcga gagggccacc 60
atcaactgca agtccagcca gagtgtttta ttcagctcca acaataagaa ctacttagct 120
tggtaccagc agaaaccagg acagcctcct aagctgctca tttactgggc atctacccgg 180
gaatccgggg tccctgaccg attcagtggc agcgggtctg ggacagattt cactctcacc 240
atcagcagcc tgcaggctga agatgtggca gtttattact gtcagcagca cgccagtgcc 300
cctcctactt ttggcggagg gaccaaggtt gagatcaaac gtacggtggc cgctccctcc 360
gtgttcatct tcccaccctc cgacgagcag ctgaagtccg gcaccgcctc cgtcgtgtgc 420
ctgctgaaca acttctaccc tcgcgaggcc aaagtgcagt ggaaagtgga caacgccctg 480
cagtccggca actcccagga atccgtcacc gagcaggact ccaaggacag cacctactcc 540
ctgtcctcca ccctgaccct gtccaaggcc gactacgaga agcacaaagt gtacgcctgc 600
gaagtgaccc accagggcct gtccagcccc gtgaccaagt ccttcaaccg gggcgagtgc 660
<210> 29
<211> 452
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 重链
<400> 29
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Ser Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Ser Ile Ser Ser Ser Ser Ser Tyr Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Asp Gly Gly Arg Thr Ser Tyr Thr Ala Thr Ala His Asn Trp
100 105 110
Phe Asp Pro Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser
115 120 125
Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr
130 135 140
Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro
145 150 155 160
Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val
165 170 175
His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser
180 185 190
Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr Tyr Thr
195 200 205
Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val
210 215 220
Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Ser Cys Pro Ala Pro Glu Phe
225 230 235 240
Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr
245 250 255
Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val
260 265 270
Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val
275 280 285
Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser
290 295 300
Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu
305 310 315 320
Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser
325 330 335
Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro
340 345 350
Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln
355 360 365
Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala
370 375 380
Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr
385 390 395 400
Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu
405 410 415
Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser
420 425 430
Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser
435 440 445
Leu Ser Leu Gly
450
<210> 30
<211> 1356
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> DNA重链
<400> 30
gaggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc ctggtcaagc ctggggggtc cctgagactc 60
tcctgtgcag cctctggatt caccttcagt agctatagca tgaactgggt ccgccaggct 120
ccagggaagg ggctggagtg ggtctcatcc attagtagta gtagtagtta catatactac 180
gcagactcag tgaagggccg attcaccatc tccagagaca acgccaagaa ctcactgtat 240
ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggcggtgt actactgcgc cagagatggt 300
ggaagaacgt cctacaccgc cacagcccac aattggttcg acccctgggg acagggtaca 360
ttggtcaccg tctcctcagc ttccaccaag ggcccctccg tgttccctct ggccccttgc 420
tcccggtcca cctccgagtc taccgccgct ctgggctgcc tcgtgaagga ctacttcccc 480
gagcccgtga ccgtgtcctg gaactctggc gccctgacct ccggcgtgca caccttccct 540
gccgtgctgc agtcctccgg cctgtactcc ctgtccagcg tcgtgaccgt gccctcctcc 600
agcctgggca ccaagaccta cacctgtaac gtggaccaca agccctccaa caccaaagtg 660
gacaagcggg tggaatctaa gtacggccct ccctgccctt cctgccctgc ccctgagttc 720
ctgggcggac cttccgtgtt cctgttccct ccaaagccca aggacaccct gatgatctcc 780
cggacccctg aagtgacctg cgtggtggtg gacgtgtccc aggaagatcc cgaagtccag 840
ttcaattggt acgtggacgg cgtggaagtg cacaacgcca agaccaagcc cagagaggaa 900
cagttcaact ccacctaccg ggtggtgtcc gtgctgaccg tgctgcacca ggactggctg 960
aacggcaaag agtacaagtg caaagtgtcc aacaagggcc tgccctccag catcgaaaag 1020
accatctcca aggccaaggg ccagccccgc gagccccaag tgtacaccct gcctcccagc 1080
caggaagaga tgaccaagaa tcaagtgtcc ctgacttgtc tggtcaaggg cttctacccc 1140
tccgatatcg ccgtggagtg ggagtccaac ggccagcccg agaacaacta caagaccacc 1200
cctcccgtgc tggactccga cggctccttc ttcctgtact ctcggctgac cgtggacaag 1260
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cactacaccc agaagtccct gtccctgtct ctgggc 1356
<210> 31
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 重链CDR1
<400> 31
Gly Phe Thr Phe Arg Ser Tyr Gly
1 5
<210> 32
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 重链CDR2
<400> 32
Ile Ser Ser Ser Ser Ser Tyr Ile
1 5
<210> 33
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 重链CDR3
<400> 33
Ala Arg Asp Gly Gly Arg Thr Ser Tyr Thr Ala Thr Ala His Asn Trp
1 5 10 15
Phe Asp Pro
<210> 34
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 重链CDR1
<400> 34
Phe Thr Phe Arg Ser Tyr Gly Met Asn
1 5
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<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 重链CDR2
<400> 35
Ser Ile Ser Ser Ser Ser Ser Tyr Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 36
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 重链CDR3
<400> 36
Ala Arg Asp Gly Gly Arg Thr Ser Tyr Thr Ala Thr Ala His Asn Trp
1 5 10 15
Phe Asp Pro
<210> 37
<211> 126
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 重链
<400> 37
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Arg Ser Tyr
20 25 30
Gly Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Ser Ile Ser Ser Ser Ser Ser Tyr Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Asp Gly Gly Arg Thr Ser Tyr Thr Ala Thr Ala His Asn Trp
100 105 110
Phe Asp Pro Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
<210> 38
<211> 378
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> DNA重链
<400> 38
gaggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc ctggtcaagc ctggggggtc cctgagactc 60
tcctgtgcag cctctggatt caccttccgg agctatggga tgaactgggt ccgccaggct 120
ccagggaagg ggctggagtg ggtctcatcc attagtagta gtagtagtta catatactac 180
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ggaagaacgt cctacaccgc cacagcccac aattggttcg acccctgggg acagggtaca 360
ttggtcaccg tctcctca 378
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<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 轻链CDR1
<400> 39
Gln Ser Val Leu Phe Ser Ser Asn Asn Lys Asn Tyr
1 5 10
<210> 40
<211> 3
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 轻链CDR2
<400> 40
Trp Ala Ser
1
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<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 轻链CDR3
<400> 41
Gln Gln His Ala Ser Ala Pro Pro Thr
1 5
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<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 轻链CDR1
<400> 42
Lys Ser Ser Gln Ser Val Leu Phe Ser Ser Asn Asn Lys Asn Tyr Leu
1 5 10 15
Ala
<210> 43
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 轻链CDR2
<400> 43
Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser
1 5
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<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 轻链CDR3
<400> 44
Gln Gln His Ala Ser Ala Pro Pro Thr
1 5
<210> 45
<211> 113
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 轻链
<400> 45
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Gln Ser Val Leu Phe Ser
20 25 30
Ser Asn Asn Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln
35 40 45
Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val
50 55 60
Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr
65 70 75 80
Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln
85 90 95
His Ala Ser Ala Pro Pro Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile
100 105 110
Lys
<210> 46
<211> 339
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> DNA轻链
<400> 46
gacatcgtga tgacccagtc tccagactcc ctggctgtgt ctctgggcga gagggccacc 60
atcaactgca agtccagcca gagtgtttta ttcagctcca acaataagaa ctacttagct 120
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atcagcagcc tgcaggctga agatgtggca gtttattact gtcagcagca cgccagtgcc 300
cctcctactt ttggcggagg gaccaaggtt gagatcaaa 339
<210> 47
<211> 456
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 重链
<400> 47
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Arg Ser Tyr
20 25 30
Gly Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Ser Ile Ser Ser Ser Ser Ser Tyr Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Asp Gly Gly Arg Thr Ser Tyr Thr Ala Thr Ala His Asn Trp
100 105 110
Phe Asp Pro Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser
115 120 125
Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr
130 135 140
Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro
145 150 155 160
Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val
165 170 175
His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser
180 185 190
Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile
195 200 205
Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val
210 215 220
Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala
225 230 235 240
Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro
245 250 255
Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val
260 265 270
Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val
275 280 285
Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln
290 295 300
Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln
305 310 315 320
Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala
325 330 335
Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro
340 345 350
Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr
355 360 365
Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser
370 375 380
Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr
385 390 395 400
Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr
405 410 415
Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe
420 425 430
Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys
435 440 445
Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
450 455
<210> 48
<211> 1368
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> DNA重链
<400> 48
gaggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc ctggtcaagc ctggggggtc cctgagactc 60
tcctgtgcag cctctggatt caccttccgg agctatggga tgaactgggt ccgccaggct 120
ccagggaagg ggctggagtg ggtctcatcc attagtagta gtagtagtta catatactac 180
gcagactcag tgaagggccg attcaccatc tccagagaca acgccaagaa ctcactgtat 240
ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggcggtgt actactgcgc cagagatggt 300
ggaagaacgt cctacaccgc cacagcccac aattggttcg acccctgggg acagggtaca 360
ttggtcaccg tctcctcagc gagcaccaaa ggcccgagcg tgtttccgct ggcgccgagc 420
agcaaaagca ccagcggcgg caccgcggcg ctgggctgcc tggtgaaaga ttattttccg 480
gaaccggtga ccgtgagctg gaacagcggc gcgctgacca gcggcgtgca tacctttccg 540
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agcctgggca cccagaccta tatttgcaac gtgaaccata aaccgagcaa caccaaagtg 660
gataaaaaag tggaaccgaa aagctgcgat aaaacccata cctgcccgcc gtgcccggcg 720
ccggaactgc tgggcggccc gagcgtgttt ctgtttccgc cgaaaccgaa agataccctg 780
atgattagcc gcaccccgga agtgacctgc gtggtggtgg atgtgagcca tgaagatccg 840
gaagtgaaat ttaactggta tgtggatggc gtggaagtgc ataacgcgaa aaccaaaccg 900
cgcgaagaac agtataacag cacctatcgc gtggtgagcg tgctgaccgt gctgcatcag 960
gattggctga acggcaaaga atataaatgc aaagtgagca acaaagcgct gccggcgccg 1020
attgaaaaaa ccattagcaa agcgaaaggc cagccgcgcg aaccgcaggt gtataccctg 1080
ccgccgagcc gcgatgaact gaccaaaaac caggtgagcc tgacctgcct ggtgaaaggc 1140
ttttatccga gcgatattgc ggtggaatgg gaaagcaacg gccagccgga aaacaactat 1200
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gtggataaaa gccgctggca gcagggcaac gtgtttagct gcagcgtgat gcatgaagcg 1320
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<210> 49
<211> 220
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 轻链
<400> 49
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Gln Ser Val Leu Phe Ser
20 25 30
Ser Asn Asn Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln
35 40 45
Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val
50 55 60
Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr
65 70 75 80
Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln
85 90 95
His Ala Ser Ala Pro Pro Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile
100 105 110
Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp
115 120 125
Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn
130 135 140
Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu
145 150 155 160
Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp
165 170 175
Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr
180 185 190
Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser
195 200 205
Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210 215 220
<210> 50
<211> 660
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> DNA轻链
<400> 50
gacatcgtga tgacccagtc tccagactcc ctggctgtgt ctctgggcga gagggccacc 60
atcaactgca agtccagcca gagtgtttta ttcagctcca acaataagaa ctacttagct 120
tggtaccagc agaaaccagg acagcctcct aagctgctca tttactgggc atctacccgg 180
gaatccgggg tccctgaccg attcagtggc agcgggtctg ggacagattt cactctcacc 240
atcagcagcc tgcaggctga agatgtggca gtttattact gtcagcagca cgccagtgcc 300
cctcctactt ttggcggagg gaccaaggtt gagatcaaac gtacggtggc cgctccctcc 360
gtgttcatct tcccaccctc cgacgagcag ctgaagtccg gcaccgcctc cgtcgtgtgc 420
ctgctgaaca acttctaccc tcgcgaggcc aaagtgcagt ggaaagtgga caacgccctg 480
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gaagtgaccc accagggcct gtccagcccc gtgaccaagt ccttcaaccg gggcgagtgc 660
<210> 51
<211> 452
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 重链
<400> 51
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Arg Ser Tyr
20 25 30
Gly Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Ser Ile Ser Ser Ser Ser Ser Tyr Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Asp Gly Gly Arg Thr Ser Tyr Thr Ala Thr Ala His Asn Trp
100 105 110
Phe Asp Pro Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser
115 120 125
Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr
130 135 140
Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro
145 150 155 160
Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val
165 170 175
His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser
180 185 190
Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr Tyr Thr
195 200 205
Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val
210 215 220
Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Ser Cys Pro Ala Pro Glu Phe
225 230 235 240
Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr
245 250 255
Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val
260 265 270
Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val
275 280 285
Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser
290 295 300
Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu
305 310 315 320
Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser
325 330 335
Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro
340 345 350
Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln
355 360 365
Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala
370 375 380
Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr
385 390 395 400
Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu
405 410 415
Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser
420 425 430
Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser
435 440 445
Leu Ser Leu Gly
450
<210> 52
<211> 1356
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> DNA重链
<400> 52
gaggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc ctggtcaagc ctggggggtc cctgagactc 60
tcctgtgcag cctctggatt caccttccgg agctatggga tgaactgggt ccgccaggct 120
ccagggaagg ggctggagtg ggtctcatcc attagtagta gtagtagtta catatactac 180
gcagactcag tgaagggccg attcaccatc tccagagaca acgccaagaa ctcactgtat 240
ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggcggtgt actactgcgc cagagatggt 300
ggaagaacgt cctacaccgc cacagcccac aattggttcg acccctgggg acagggtaca 360
ttggtcaccg tctcctcagc ttccaccaag ggcccctccg tgttccctct ggccccttgc 420
tcccggtcca cctccgagtc taccgccgct ctgggctgcc tcgtgaagga ctacttcccc 480
gagcccgtga ccgtgtcctg gaactctggc gccctgacct ccggcgtgca caccttccct 540
gccgtgctgc agtcctccgg cctgtactcc ctgtccagcg tcgtgaccgt gccctcctcc 600
agcctgggca ccaagaccta cacctgtaac gtggaccaca agccctccaa caccaaagtg 660
gacaagcggg tggaatctaa gtacggccct ccctgccctt cctgccctgc ccctgagttc 720
ctgggcggac cttccgtgtt cctgttccct ccaaagccca aggacaccct gatgatctcc 780
cggacccctg aagtgacctg cgtggtggtg gacgtgtccc aggaagatcc cgaagtccag 840
ttcaattggt acgtggacgg cgtggaagtg cacaacgcca agaccaagcc cagagaggaa 900
cagttcaact ccacctaccg ggtggtgtcc gtgctgaccg tgctgcacca ggactggctg 960
aacggcaaag agtacaagtg caaagtgtcc aacaagggcc tgccctccag catcgaaaag 1020
accatctcca aggccaaggg ccagccccgc gagccccaag tgtacaccct gcctcccagc 1080
caggaagaga tgaccaagaa tcaagtgtcc ctgacttgtc tggtcaaggg cttctacccc 1140
tccgatatcg ccgtggagtg ggagtccaac ggccagcccg agaacaacta caagaccacc 1200
cctcccgtgc tggactccga cggctccttc ttcctgtact ctcggctgac cgtggacaag 1260
tcccggtggc aggaaggcaa cgtcttctcc tgctccgtga tgcacgaggc cctgcacaac 1320
cactacaccc agaagtccct gtccctgtct ctgggc 1356
<210> 53
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 重链CDR1
<400> 53
Gly Phe Thr Phe Ser Arg Thr Gly
1 5
<210> 54
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 重链CDR2
<400> 54
Ile Ser Ser Ser Ser Ser Tyr Ile
1 5
<210> 55
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 重链CDR3
<400> 55
Ala Arg Asp Gly Gly Arg Thr Ser Tyr Thr Ala Thr Ala His Asn Trp
1 5 10 15
Phe Asp Pro
<210> 56
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 重链CDR1
<400> 56
Phe Thr Phe Ser Arg Thr Gly Met Asn
1 5
<210> 57
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 重链CDR2
<400> 57
Ser Ile Ser Ser Ser Ser Ser Tyr Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 58
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 重链CDR3
<400> 58
Ala Arg Asp Gly Gly Arg Thr Ser Tyr Thr Ala Thr Ala His Asn Trp
1 5 10 15
Phe Asp Pro
<210> 59
<211> 126
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 重链
<400> 59
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Arg Thr
20 25 30
Gly Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Ser Ile Ser Ser Ser Ser Ser Tyr Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Asp Gly Gly Arg Thr Ser Tyr Thr Ala Thr Ala His Asn Trp
100 105 110
Phe Asp Pro Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
<210> 60
<211> 378
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> DNA重链
<400> 60
gaggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc ctggtcaagc ctggggggtc cctgagactc 60
tcctgtgcag cctctggatt caccttcagt aggactggga tgaactgggt ccgccaggct 120
ccagggaagg ggctggaatg ggtctcatcc attagtagta gtagtagtta catatactac 180
gcagactcag tgaagggccg attcaccatc tccagagaca acgccaagaa ctcactgtat 240
ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggcggtgt actactgcgc cagagatggt 300
ggaagaacgt cctacaccgc cacagcccac aattggttcg acccctgggg acagggtaca 360
ttggtcaccg tctcctca 378
<210> 61
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 轻链CDR1
<400> 61
Gln Ser Val Leu Phe Ser Ser Asn Asn Lys Asn Tyr
1 5 10
<210> 62
<211> 3
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 轻链CDR2
<400> 62
Trp Ala Ser
1
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<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 轻链CDR3
<400> 63
Gln Gln His Ala Ser Ala Pro Pro Thr
1 5
<210> 64
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 轻链CDR1
<400> 64
Lys Ser Ser Gln Ser Val Leu Phe Ser Ser Asn Asn Lys Asn Tyr Leu
1 5 10 15
Ala
<210> 65
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 轻链CDR2
<400> 65
Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser
1 5
<210> 66
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 轻链CDR3
<400> 66
Gln Gln His Ala Ser Ala Pro Pro Thr
1 5
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<211> 113
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 轻链
<400> 67
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Gln Ser Val Leu Phe Ser
20 25 30
Ser Asn Asn Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln
35 40 45
Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val
50 55 60
Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr
65 70 75 80
Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln
85 90 95
His Ala Ser Ala Pro Pro Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile
100 105 110
Lys
<210> 68
<211> 339
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> DNA轻链
<400> 68
gacatcgtga tgacccagtc tccagactcc ctggctgtgt ctctgggcga gagggccacc 60
atcaactgca agtccagcca gagtgtttta ttcagctcca acaataagaa ctacttagct 120
tggtaccagc agaaaccagg acagcctcct aagctgctca tttactgggc atctacccgg 180
gaatccgggg tccctgaccg attcagtggc agcgggtctg ggacagattt cactctcacc 240
atcagcagcc tgcaggctga agatgtggca gtttattact gtcagcagca cgccagtgcc 300
cctcctactt ttggcggagg gaccaaggtt gagatcaaa 339
<210> 69
<211> 456
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 重链
<400> 69
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Arg Thr
20 25 30
Gly Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Ser Ile Ser Ser Ser Ser Ser Tyr Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Asp Gly Gly Arg Thr Ser Tyr Thr Ala Thr Ala His Asn Trp
100 105 110
Phe Asp Pro Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser
115 120 125
Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr
130 135 140
Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro
145 150 155 160
Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val
165 170 175
His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser
180 185 190
Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile
195 200 205
Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val
210 215 220
Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala
225 230 235 240
Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro
245 250 255
Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val
260 265 270
Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val
275 280 285
Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln
290 295 300
Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln
305 310 315 320
Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala
325 330 335
Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro
340 345 350
Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr
355 360 365
Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser
370 375 380
Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr
385 390 395 400
Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr
405 410 415
Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe
420 425 430
Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys
435 440 445
Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
450 455
<210> 70
<211> 1368
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> DNA重链
<400> 70
gaggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc ctggtcaagc ctggggggtc cctgagactc 60
tcctgtgcag cctctggatt caccttcagt aggactggga tgaactgggt ccgccaggct 120
ccagggaagg ggctggaatg ggtctcatcc attagtagta gtagtagtta catatactac 180
gcagactcag tgaagggccg attcaccatc tccagagaca acgccaagaa ctcactgtat 240
ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggcggtgt actactgcgc cagagatggt 300
ggaagaacgt cctacaccgc cacagcccac aattggttcg acccctgggg acagggtaca 360
ttggtcaccg tctcctcagc gagcaccaaa ggcccgagcg tgtttccgct ggcgccgagc 420
agcaaaagca ccagcggcgg caccgcggcg ctgggctgcc tggtgaaaga ttattttccg 480
gaaccggtga ccgtgagctg gaacagcggc gcgctgacca gcggcgtgca tacctttccg 540
gcggtgctgc agagcagcgg cctgtatagc ctgagcagcg tggtgaccgt gccgagcagc 600
agcctgggca cccagaccta tatttgcaac gtgaaccata aaccgagcaa caccaaagtg 660
gataaaaaag tggaaccgaa aagctgcgat aaaacccata cctgcccgcc gtgcccggcg 720
ccggaactgc tgggcggccc gagcgtgttt ctgtttccgc cgaaaccgaa agataccctg 780
atgattagcc gcaccccgga agtgacctgc gtggtggtgg atgtgagcca tgaagatccg 840
gaagtgaaat ttaactggta tgtggatggc gtggaagtgc ataacgcgaa aaccaaaccg 900
cgcgaagaac agtataacag cacctatcgc gtggtgagcg tgctgaccgt gctgcatcag 960
gattggctga acggcaaaga atataaatgc aaagtgagca acaaagcgct gccggcgccg 1020
attgaaaaaa ccattagcaa agcgaaaggc cagccgcgcg aaccgcaggt gtataccctg 1080
ccgccgagcc gcgatgaact gaccaaaaac caggtgagcc tgacctgcct ggtgaaaggc 1140
ttttatccga gcgatattgc ggtggaatgg gaaagcaacg gccagccgga aaacaactat 1200
aaaaccaccc cgccggtgct ggatagcgat ggcagctttt ttctgtatag caaactgacc 1260
gtggataaaa gccgctggca gcagggcaac gtgtttagct gcagcgtgat gcatgaagcg 1320
ctgcataacc attataccca gaaaagcctg agcctgagcc cgggcaaa 1368
<210> 71
<211> 220
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 轻链
<400> 71
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Gln Ser Val Leu Phe Ser
20 25 30
Ser Asn Asn Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln
35 40 45
Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val
50 55 60
Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr
65 70 75 80
Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln
85 90 95
His Ala Ser Ala Pro Pro Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile
100 105 110
Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp
115 120 125
Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn
130 135 140
Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu
145 150 155 160
Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp
165 170 175
Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr
180 185 190
Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser
195 200 205
Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210 215 220
<210> 72
<211> 660
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> DNA轻链
<400> 72
gacatcgtga tgacccagtc tccagactcc ctggctgtgt ctctgggcga gagggccacc 60
atcaactgca agtccagcca gagtgtttta ttcagctcca acaataagaa ctacttagct 120
tggtaccagc agaaaccagg acagcctcct aagctgctca tttactgggc atctacccgg 180
gaatccgggg tccctgaccg attcagtggc agcgggtctg ggacagattt cactctcacc 240
atcagcagcc tgcaggctga agatgtggca gtttattact gtcagcagca cgccagtgcc 300
cctcctactt ttggcggagg gaccaaggtt gagatcaaac gtacggtggc cgctccctcc 360
gtgttcatct tcccaccctc cgacgagcag ctgaagtccg gcaccgcctc cgtcgtgtgc 420
ctgctgaaca acttctaccc tcgcgaggcc aaagtgcagt ggaaagtgga caacgccctg 480
cagtccggca actcccagga atccgtcacc gagcaggact ccaaggacag cacctactcc 540
ctgtcctcca ccctgaccct gtccaaggcc gactacgaga agcacaaagt gtacgcctgc 600
gaagtgaccc accagggcct gtccagcccc gtgaccaagt ccttcaaccg gggcgagtgc 660
<210> 73
<211> 452
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 重链
<400> 73
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Arg Thr
20 25 30
Gly Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Ser Ile Ser Ser Ser Ser Ser Tyr Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Asp Gly Gly Arg Thr Ser Tyr Thr Ala Thr Ala His Asn Trp
100 105 110
Phe Asp Pro Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser
115 120 125
Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr
130 135 140
Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro
145 150 155 160
Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val
165 170 175
His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser
180 185 190
Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr Tyr Thr
195 200 205
Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val
210 215 220
Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Ser Cys Pro Ala Pro Glu Phe
225 230 235 240
Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr
245 250 255
Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val
260 265 270
Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val
275 280 285
Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser
290 295 300
Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu
305 310 315 320
Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser
325 330 335
Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro
340 345 350
Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln
355 360 365
Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala
370 375 380
Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr
385 390 395 400
Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu
405 410 415
Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser
420 425 430
Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser
435 440 445
Leu Ser Leu Gly
450
<210> 74
<211> 1356
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> DNA重链
<400> 74
gaggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc ctggtcaagc ctggggggtc cctgagactc 60
tcctgtgcag cctctggatt caccttcagt aggactggga tgaactgggt ccgccaggct 120
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ttggtcaccg tctcctcagc ttccaccaag ggcccctccg tgttccctct ggccccttgc 420
tcccggtcca cctccgagtc taccgccgct ctgggctgcc tcgtgaagga ctacttcccc 480
gagcccgtga ccgtgtcctg gaactctggc gccctgacct ccggcgtgca caccttccct 540
gccgtgctgc agtcctccgg cctgtactcc ctgtccagcg tcgtgaccgt gccctcctcc 600
agcctgggca ccaagaccta cacctgtaac gtggaccaca agccctccaa caccaaagtg 660
gacaagcggg tggaatctaa gtacggccct ccctgccctt cctgccctgc ccctgagttc 720
ctgggcggac cttccgtgtt cctgttccct ccaaagccca aggacaccct gatgatctcc 780
cggacccctg aagtgacctg cgtggtggtg gacgtgtccc aggaagatcc cgaagtccag 840
ttcaattggt acgtggacgg cgtggaagtg cacaacgcca agaccaagcc cagagaggaa 900
cagttcaact ccacctaccg ggtggtgtcc gtgctgaccg tgctgcacca ggactggctg 960
aacggcaaag agtacaagtg caaagtgtcc aacaagggcc tgccctccag catcgaaaag 1020
accatctcca aggccaaggg ccagccccgc gagccccaag tgtacaccct gcctcccagc 1080
caggaagaga tgaccaagaa tcaagtgtcc ctgacttgtc tggtcaaggg cttctacccc 1140
tccgatatcg ccgtggagtg ggagtccaac ggccagcccg agaacaacta caagaccacc 1200
cctcccgtgc tggactccga cggctccttc ttcctgtact ctcggctgac cgtggacaag 1260
tcccggtggc aggaaggcaa cgtcttctcc tgctccgtga tgcacgaggc cctgcacaac 1320
cactacaccc agaagtccct gtccctgtct ctgggc 1356
<210> 75
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 重链CDR1
<400> 75
Gly Phe Thr Phe Ser Arg Tyr Gly
1 5
<210> 76
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 重链CDR2
<400> 76
Ile Ser Ser Ser Ser Ala Tyr Ile
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<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 重链CDR3
<400> 77
Ala Arg Asp Gly Gly Arg Thr Ser Tyr Thr Ala Thr Ala His Asn Trp
1 5 10 15
Phe Asp Pro
<210> 78
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 重链CDR1
<400> 78
Phe Thr Phe Ser Arg Tyr Gly Met Asn
1 5
<210> 79
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 重链CDR2
<400> 79
Ser Ile Ser Ser Ser Ser Ala Tyr Ile Leu Tyr Ala Asp Ser Val Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 80
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 重链CDR3
<400> 80
Ala Arg Asp Gly Gly Arg Thr Ser Tyr Thr Ala Thr Ala His Asn Trp
1 5 10 15
Phe Asp Pro
<210> 81
<211> 126
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 重链
<400> 81
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Arg Tyr
20 25 30
Gly Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Ser Ile Ser Ser Ser Ser Ala Tyr Ile Leu Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Asp Gly Gly Arg Thr Ser Tyr Thr Ala Thr Ala His Asn Trp
100 105 110
Phe Asp Pro Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
<210> 82
<211> 378
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> DNA重链
<400> 82
gaggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc ctggtcaagc ctggggggtc cctgagactc 60
tcctgtgcag cctctggatt caccttcagt aggtatggga tgaactgggt ccgccaggct 120
ccagggaagg ggctggagtg ggtctcatcc attagtagta gtagtgctta catactgtac 180
gcagactcag tgaagggccg attcaccatc tccagagaca acgccaagaa ctcactgtat 240
ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggcggtgt actactgcgc cagagatggt 300
ggaagaacgt cctacaccgc cacagcccac aattggttcg acccctgggg acagggtaca 360
ttggtcaccg tctcctca 378
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<211> 12
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<220>
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1 5 10
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<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 轻链CDR2
<400> 84
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1
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<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 轻链CDR3
<400> 85
Gln Gln His Ala Ser Ala Pro Pro Thr
1 5
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<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 轻链CDR1
<400> 86
Lys Ser Ser Gln Ser Val Leu Phe Ser Ser Asn Asn Lys Asn Tyr Leu
1 5 10 15
Ala
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<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 轻链CDR2
<400> 87
Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser
1 5
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<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 轻链CDR3
<400> 88
Gln Gln His Ala Ser Ala Pro Pro Thr
1 5
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<211> 113
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 轻链
<400> 89
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Gln Ser Val Leu Phe Ser
20 25 30
Ser Asn Asn Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln
35 40 45
Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val
50 55 60
Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr
65 70 75 80
Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln
85 90 95
His Ala Ser Ala Pro Pro Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile
100 105 110
Lys
<210> 90
<211> 339
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> DNA轻链
<400> 90
gacatcgtga tgacccagtc tccagactcc ctggctgtgt ctctgggcga gagggccacc 60
atcaactgca agtccagcca gagtgtttta ttcagctcca acaataagaa ctacttagct 120
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cctcctactt ttggcggagg gaccaaggtt gagatcaaa 339
<210> 91
<211> 456
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 重链
<400> 91
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Arg Tyr
20 25 30
Gly Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Ser Ile Ser Ser Ser Ser Ala Tyr Ile Leu Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Asp Gly Gly Arg Thr Ser Tyr Thr Ala Thr Ala His Asn Trp
100 105 110
Phe Asp Pro Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser
115 120 125
Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr
130 135 140
Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro
145 150 155 160
Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val
165 170 175
His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser
180 185 190
Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile
195 200 205
Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val
210 215 220
Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala
225 230 235 240
Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro
245 250 255
Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val
260 265 270
Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val
275 280 285
Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln
290 295 300
Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln
305 310 315 320
Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala
325 330 335
Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro
340 345 350
Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr
355 360 365
Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser
370 375 380
Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr
385 390 395 400
Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr
405 410 415
Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe
420 425 430
Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys
435 440 445
Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
450 455
<210> 92
<211> 1368
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> DNA重链
<400> 92
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tcctgtgcag cctctggatt caccttcagt aggtatggga tgaactgggt ccgccaggct 120
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ttggtcaccg tctcctcagc gagcaccaaa ggcccgagcg tgtttccgct ggcgccgagc 420
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<211> 220
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 轻链
<400> 93
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
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20 25 30
Ser Asn Asn Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln
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Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val
50 55 60
Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr
65 70 75 80
Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln
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His Ala Ser Ala Pro Pro Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile
100 105 110
Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp
115 120 125
Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn
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Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu
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Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp
165 170 175
Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr
180 185 190
Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser
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Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> DNA轻链
<400> 94
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atcagcagcc tgcaggctga agatgtggca gtttattact gtcagcagca cgccagtgcc 300
cctcctactt ttggcggagg gaccaaggtt gagatcaaac gtacggtggc cgctccctcc 360
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<210> 95
<211> 452
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 重链
<400> 95
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Arg Tyr
20 25 30
Gly Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Ser Ile Ser Ser Ser Ser Ala Tyr Ile Leu Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Asp Gly Gly Arg Thr Ser Tyr Thr Ala Thr Ala His Asn Trp
100 105 110
Phe Asp Pro Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser
115 120 125
Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr
130 135 140
Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro
145 150 155 160
Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val
165 170 175
His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser
180 185 190
Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr Tyr Thr
195 200 205
Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val
210 215 220
Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Ser Cys Pro Ala Pro Glu Phe
225 230 235 240
Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr
245 250 255
Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val
260 265 270
Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val
275 280 285
Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser
290 295 300
Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu
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Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser
325 330 335
Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro
340 345 350
Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln
355 360 365
Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala
370 375 380
Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr
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Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu
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Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser
420 425 430
Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser
435 440 445
Leu Ser Leu Gly
450
<210> 96
<211> 1356
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> DNA重链
<400> 96
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<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 重链CDR1
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<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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<223> 重链CDR2
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<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 重链CDR3
<400> 99
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<220>
<223> 重链CDR1
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Phe Thr Phe Ala Ser Tyr Gly Met Asn
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<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 重链CDR2
<400> 101
Ser Ile Ser Ser Ser Ser Ser Tyr Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 102
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 重链CDR3
<400> 102
Ala Arg Asp Gly Gly Arg Thr Ser Tyr Thr Ala Thr Ala His Asn Trp
1 5 10 15
Phe Asp Pro
<210> 103
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<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 重链
<400> 103
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ala Ser Tyr
20 25 30
Gly Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Ser Ile Ser Ser Ser Ser Ser Tyr Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Asp Gly Gly Arg Thr Ser Tyr Thr Ala Thr Ala His Asn Trp
100 105 110
Phe Asp Pro Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
<210> 104
<211> 378
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> DNA重链
<400> 104
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<210> 105
<211> 12
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<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 轻链CDR1
<400> 105
Gln Ser Val Leu Phe Ser Ser Asn Asn Lys Asn Tyr
1 5 10
<210> 106
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<220>
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<400> 106
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1
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<211> 9
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<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
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<400> 107
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<211> 17
<212> PRT
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<220>
<223> 轻链CDR1
<400> 108
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Ala
<210> 109
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<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 轻链CDR2
<400> 109
Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser
1 5
<210> 110
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 轻链CDR3
<400> 110
Gln Gln His Ala Ser Ala Pro Pro Thr
1 5
<210> 111
<211> 113
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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<223> 轻链
<400> 111
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Gln Ser Val Leu Phe Ser
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Lys
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<211> 339
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> DNA轻链
<400> 112
gacatcgtga tgacccagtc tccagactcc ctggctgtgt ctctgggcga gagggccacc 60
atcaactgca agtccagcca gagtgtttta ttcagctcca acaataagaa ctacttagct 120
tggtaccagc agaaaccagg acagcctcct aagctgctca tttactgggc atctacccgg 180
gaatccgggg tccctgaccg attcagtggc agcgggtctg ggacagattt cactctcacc 240
atcagcagcc tgcaggctga agatgtggca gtttattact gtcagcagca cgccagtgcc 300
cctcctactt ttggcggagg gaccaaggtt gagatcaaa 339
<210> 113
<211> 456
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 重链
<400> 113
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ala Ser Tyr
20 25 30
Gly Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Ser Ile Ser Ser Ser Ser Ser Tyr Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Asp Gly Gly Arg Thr Ser Tyr Thr Ala Thr Ala His Asn Trp
100 105 110
Phe Asp Pro Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser
115 120 125
Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr
130 135 140
Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro
145 150 155 160
Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val
165 170 175
His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser
180 185 190
Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile
195 200 205
Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val
210 215 220
Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala
225 230 235 240
Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro
245 250 255
Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val
260 265 270
Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val
275 280 285
Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln
290 295 300
Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln
305 310 315 320
Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala
325 330 335
Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro
340 345 350
Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr
355 360 365
Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser
370 375 380
Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr
385 390 395 400
Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr
405 410 415
Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe
420 425 430
Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys
435 440 445
Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
450 455
<210> 114
<211> 1368
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> DNA重链
<400> 114
gaggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc ctggtcaagc ctggggggtc cctgagactc 60
tcctgtgcag cctctggatt caccttcgct agctatggga tgaactgggt ccgccaggct 120
ccagggaagg ggctggagtg ggtctcatcc attagtagtt ctagtagtta catatactac 180
gcagactcag tgaagggccg attcaccatc tccagagaca acgccaagaa ctcactgtat 240
ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggcggtgt actactgcgc cagagatggt 300
ggaagaacgt cctacaccgc cacagcccac aattggttcg acccctgggg acagggtaca 360
ttggtcaccg tctcctcagc gagcaccaaa ggcccgagcg tgtttccgct ggcgccgagc 420
agcaaaagca ccagcggcgg caccgcggcg ctgggctgcc tggtgaaaga ttattttccg 480
gaaccggtga ccgtgagctg gaacagcggc gcgctgacca gcggcgtgca tacctttccg 540
gcggtgctgc agagcagcgg cctgtatagc ctgagcagcg tggtgaccgt gccgagcagc 600
agcctgggca cccagaccta tatttgcaac gtgaaccata aaccgagcaa caccaaagtg 660
gataaaaaag tggaaccgaa aagctgcgat aaaacccata cctgcccgcc gtgcccggcg 720
ccggaactgc tgggcggccc gagcgtgttt ctgtttccgc cgaaaccgaa agataccctg 780
atgattagcc gcaccccgga agtgacctgc gtggtggtgg atgtgagcca tgaagatccg 840
gaagtgaaat ttaactggta tgtggatggc gtggaagtgc ataacgcgaa aaccaaaccg 900
cgcgaagaac agtataacag cacctatcgc gtggtgagcg tgctgaccgt gctgcatcag 960
gattggctga acggcaaaga atataaatgc aaagtgagca acaaagcgct gccggcgccg 1020
attgaaaaaa ccattagcaa agcgaaaggc cagccgcgcg aaccgcaggt gtataccctg 1080
ccgccgagcc gcgatgaact gaccaaaaac caggtgagcc tgacctgcct ggtgaaaggc 1140
ttttatccga gcgatattgc ggtggaatgg gaaagcaacg gccagccgga aaacaactat 1200
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<210> 115
<211> 220
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 轻链
<400> 115
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Gln Ser Val Leu Phe Ser
20 25 30
Ser Asn Asn Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln
35 40 45
Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val
50 55 60
Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr
65 70 75 80
Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln
85 90 95
His Ala Ser Ala Pro Pro Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile
100 105 110
Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp
115 120 125
Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn
130 135 140
Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu
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Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp
165 170 175
Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr
180 185 190
Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser
195 200 205
Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210 215 220
<210> 116
<211> 660
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> DNA轻链
<400> 116
gacatcgtga tgacccagtc tccagactcc ctggctgtgt ctctgggcga gagggccacc 60
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ctgctgaaca acttctaccc tcgcgaggcc aaagtgcagt ggaaagtgga caacgccctg 480
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gaagtgaccc accagggcct gtccagcccc gtgaccaagt ccttcaaccg gggcgagtgc 660
<210> 117
<211> 452
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 重链
<400> 117
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ala Ser Tyr
20 25 30
Gly Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Ser Ile Ser Ser Ser Ser Ser Tyr Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Asp Gly Gly Arg Thr Ser Tyr Thr Ala Thr Ala His Asn Trp
100 105 110
Phe Asp Pro Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser
115 120 125
Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr
130 135 140
Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro
145 150 155 160
Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val
165 170 175
His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser
180 185 190
Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr Tyr Thr
195 200 205
Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val
210 215 220
Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Ser Cys Pro Ala Pro Glu Phe
225 230 235 240
Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr
245 250 255
Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val
260 265 270
Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val
275 280 285
Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser
290 295 300
Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu
305 310 315 320
Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser
325 330 335
Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro
340 345 350
Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln
355 360 365
Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala
370 375 380
Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr
385 390 395 400
Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu
405 410 415
Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser
420 425 430
Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser
435 440 445
Leu Ser Leu Gly
450
<210> 118
<211> 1356
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> DNA重链
<400> 118
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tcctgtgcag cctctggatt caccttcgct agctatggga tgaactgggt ccgccaggct 120
ccagggaagg ggctggagtg ggtctcatcc attagtagtt ctagtagtta catatactac 180
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agcctgggca ccaagaccta cacctgtaac gtggaccaca agccctccaa caccaaagtg 660
gacaagcggg tggaatctaa gtacggccct ccctgccctt cctgccctgc ccctgagttc 720
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cggacccctg aagtgacctg cgtggtggtg gacgtgtccc aggaagatcc cgaagtccag 840
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tccgatatcg ccgtggagtg ggagtccaac ggccagcccg agaacaacta caagaccacc 1200
cctcccgtgc tggactccga cggctccttc ttcctgtact ctcggctgac cgtggacaag 1260
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<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 重链CDR1
<400> 119
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1 5
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<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 重链CDR2
<400> 120
Ile Ser Ser Ser Gly Ser Tyr Ile
1 5
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<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 重链CDR3
<400> 121
Ala Arg Asp Gly Gly Arg Thr Ser Tyr Thr Ala Thr Ala His Asn Trp
1 5 10 15
Phe Asp Pro
<210> 122
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 重链CDR1
<400> 122
Phe Thr Phe Arg Ser Tyr Gly Met Asn
1 5
<210> 123
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 重链CDR2
<400> 123
Gly Ile Ser Ser Ser Gly Ser Tyr Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 124
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 重链CDR3
<400> 124
Ala Arg Asp Gly Gly Arg Thr Ser Tyr Thr Ala Thr Ala His Asn Trp
1 5 10 15
Phe Asp Pro
<210> 125
<211> 126
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 重链
<400> 125
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Arg Ser Tyr
20 25 30
Gly Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Gly Ile Ser Ser Ser Gly Ser Tyr Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Asp Gly Gly Arg Thr Ser Tyr Thr Ala Thr Ala His Asn Trp
100 105 110
Phe Asp Pro Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
<210> 126
<211> 378
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> DNA重链
<400> 126
gaggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc ctggtcaagc ctggggggtc cctgagactc 60
tcctgtgcag cctctggatt caccttccgt agctatggga tgaactgggt ccgccaggct 120
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ttggtcaccg tctcctca 378
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<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 轻链CDR1
<400> 127
Gln Ser Val Leu Phe Ser Ser Asn Asn Lys Asn Tyr
1 5 10
<210> 128
<211> 3
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 轻链CDR2
<400> 128
Trp Ala Ser
1
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<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 轻链CDR3
<400> 129
Gln Gln His Ala Ser Ala Pro Pro Thr
1 5
<210> 130
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 轻链CDR1
<400> 130
Lys Ser Ser Gln Ser Val Leu Phe Ser Ser Asn Asn Lys Asn Tyr Leu
1 5 10 15
Ala
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<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 轻链CDR2
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Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser
1 5
<210> 132
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 轻链CDR3
<400> 132
Gln Gln His Ala Ser Ala Pro Pro Thr
1 5
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<211> 113
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 轻链
<400> 133
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Gln Ser Val Leu Phe Ser
20 25 30
Ser Asn Asn Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln
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Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val
50 55 60
Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr
65 70 75 80
Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln
85 90 95
His Ala Ser Ala Pro Pro Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile
100 105 110
Lys
<210> 134
<211> 339
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> DNA轻链
<400> 134
gacatcgtga tgacccagtc tccagactcc ctggctgtgt ctctgggcga gagggccacc 60
atcaactgca agtccagcca gagtgtttta ttcagctcca acaataagaa ctacttagct 120
tggtaccagc agaaaccagg acagcctcct aagctgctca tttactgggc atctacccgg 180
gaatccgggg tccctgaccg attcagtggc agcgggtctg ggacagattt cactctcacc 240
atcagcagcc tgcaggctga agatgtggca gtttattact gtcagcagca cgccagtgcc 300
cctcctactt ttggcggagg gaccaaggtt gagatcaaa 339
<210> 135
<211> 456
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 重链
<400> 135
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Arg Ser Tyr
20 25 30
Gly Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Gly Ile Ser Ser Ser Gly Ser Tyr Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Asp Gly Gly Arg Thr Ser Tyr Thr Ala Thr Ala His Asn Trp
100 105 110
Phe Asp Pro Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser
115 120 125
Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr
130 135 140
Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro
145 150 155 160
Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val
165 170 175
His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser
180 185 190
Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile
195 200 205
Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val
210 215 220
Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala
225 230 235 240
Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro
245 250 255
Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val
260 265 270
Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val
275 280 285
Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln
290 295 300
Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln
305 310 315 320
Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala
325 330 335
Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro
340 345 350
Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr
355 360 365
Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser
370 375 380
Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr
385 390 395 400
Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr
405 410 415
Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe
420 425 430
Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys
435 440 445
Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
450 455
<210> 136
<211> 1368
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> DNA重链
<400> 136
gaggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc ctggtcaagc ctggggggtc cctgagactc 60
tcctgtgcag cctctggatt caccttccgt agctatggga tgaactgggt ccgccaggct 120
ccagggaagg ggctggagtg ggtctcaggt attagtagta gtggtagtta catatactac 180
gcagactcag tgaagggccg attcaccatc tccagagaca acgccaagaa ctcactgtat 240
ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggcggtgt actactgcgc cagagatggt 300
ggaagaacgt cctacaccgc cacagcccac aattggttcg acccctgggg acagggtaca 360
ttggtcaccg tctcctcagc gagcaccaaa ggcccgagcg tgtttccgct ggcgccgagc 420
agcaaaagca ccagcggcgg caccgcggcg ctgggctgcc tggtgaaaga ttattttccg 480
gaaccggtga ccgtgagctg gaacagcggc gcgctgacca gcggcgtgca tacctttccg 540
gcggtgctgc agagcagcgg cctgtatagc ctgagcagcg tggtgaccgt gccgagcagc 600
agcctgggca cccagaccta tatttgcaac gtgaaccata aaccgagcaa caccaaagtg 660
gataaaaaag tggaaccgaa aagctgcgat aaaacccata cctgcccgcc gtgcccggcg 720
ccggaactgc tgggcggccc gagcgtgttt ctgtttccgc cgaaaccgaa agataccctg 780
atgattagcc gcaccccgga agtgacctgc gtggtggtgg atgtgagcca tgaagatccg 840
gaagtgaaat ttaactggta tgtggatggc gtggaagtgc ataacgcgaa aaccaaaccg 900
cgcgaagaac agtataacag cacctatcgc gtggtgagcg tgctgaccgt gctgcatcag 960
gattggctga acggcaaaga atataaatgc aaagtgagca acaaagcgct gccggcgccg 1020
attgaaaaaa ccattagcaa agcgaaaggc cagccgcgcg aaccgcaggt gtataccctg 1080
ccgccgagcc gcgatgaact gaccaaaaac caggtgagcc tgacctgcct ggtgaaaggc 1140
ttttatccga gcgatattgc ggtggaatgg gaaagcaacg gccagccgga aaacaactat 1200
aaaaccaccc cgccggtgct ggatagcgat ggcagctttt ttctgtatag caaactgacc 1260
gtggataaaa gccgctggca gcagggcaac gtgtttagct gcagcgtgat gcatgaagcg 1320
ctgcataacc attataccca gaaaagcctg agcctgagcc cgggcaaa 1368
<210> 137
<211> 220
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 轻链
<400> 137
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Gln Ser Val Leu Phe Ser
20 25 30
Ser Asn Asn Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln
35 40 45
Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val
50 55 60
Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr
65 70 75 80
Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln
85 90 95
His Ala Ser Ala Pro Pro Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile
100 105 110
Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp
115 120 125
Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn
130 135 140
Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu
145 150 155 160
Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp
165 170 175
Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr
180 185 190
Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser
195 200 205
Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210 215 220
<210> 138
<211> 660
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> DNA轻链
<400> 138
gacatcgtga tgacccagtc tccagactcc ctggctgtgt ctctgggcga gagggccacc 60
atcaactgca agtccagcca gagtgtttta ttcagctcca acaataagaa ctacttagct 120
tggtaccagc agaaaccagg acagcctcct aagctgctca tttactgggc atctacccgg 180
gaatccgggg tccctgaccg attcagtggc agcgggtctg ggacagattt cactctcacc 240
atcagcagcc tgcaggctga agatgtggca gtttattact gtcagcagca cgccagtgcc 300
cctcctactt ttggcggagg gaccaaggtt gagatcaaac gtacggtggc cgctccctcc 360
gtgttcatct tcccaccctc cgacgagcag ctgaagtccg gcaccgcctc cgtcgtgtgc 420
ctgctgaaca acttctaccc tcgcgaggcc aaagtgcagt ggaaagtgga caacgccctg 480
cagtccggca actcccagga atccgtcacc gagcaggact ccaaggacag cacctactcc 540
ctgtcctcca ccctgaccct gtccaaggcc gactacgaga agcacaaagt gtacgcctgc 600
gaagtgaccc accagggcct gtccagcccc gtgaccaagt ccttcaaccg gggcgagtgc 660
<210> 139
<211> 452
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 重链
<400> 139
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Arg Ser Tyr
20 25 30
Gly Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Gly Ile Ser Ser Ser Gly Ser Tyr Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Asp Gly Gly Arg Thr Ser Tyr Thr Ala Thr Ala His Asn Trp
100 105 110
Phe Asp Pro Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser
115 120 125
Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr
130 135 140
Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro
145 150 155 160
Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val
165 170 175
His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser
180 185 190
Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr Tyr Thr
195 200 205
Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val
210 215 220
Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Ser Cys Pro Ala Pro Glu Phe
225 230 235 240
Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr
245 250 255
Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val
260 265 270
Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val
275 280 285
Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser
290 295 300
Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu
305 310 315 320
Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser
325 330 335
Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro
340 345 350
Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln
355 360 365
Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala
370 375 380
Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr
385 390 395 400
Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu
405 410 415
Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser
420 425 430
Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser
435 440 445
Leu Ser Leu Gly
450
<210> 140
<211> 1356
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> DNA重链
<400> 140
gaggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc ctggtcaagc ctggggggtc cctgagactc 60
tcctgtgcag cctctggatt caccttccgt agctatggga tgaactgggt ccgccaggct 120
ccagggaagg ggctggagtg ggtctcaggt attagtagta gtggtagtta catatactac 180
gcagactcag tgaagggccg attcaccatc tccagagaca acgccaagaa ctcactgtat 240
ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggcggtgt actactgcgc cagagatggt 300
ggaagaacgt cctacaccgc cacagcccac aattggttcg acccctgggg acagggtaca 360
ttggtcaccg tctcctcagc ttccaccaag ggcccctccg tgttccctct ggccccttgc 420
tcccggtcca cctccgagtc taccgccgct ctgggctgcc tcgtgaagga ctacttcccc 480
gagcccgtga ccgtgtcctg gaactctggc gccctgacct ccggcgtgca caccttccct 540
gccgtgctgc agtcctccgg cctgtactcc ctgtccagcg tcgtgaccgt gccctcctcc 600
agcctgggca ccaagaccta cacctgtaac gtggaccaca agccctccaa caccaaagtg 660
gacaagcggg tggaatctaa gtacggccct ccctgccctt cctgccctgc ccctgagttc 720
ctgggcggac cttccgtgtt cctgttccct ccaaagccca aggacaccct gatgatctcc 780
cggacccctg aagtgacctg cgtggtggtg gacgtgtccc aggaagatcc cgaagtccag 840
ttcaattggt acgtggacgg cgtggaagtg cacaacgcca agaccaagcc cagagaggaa 900
cagttcaact ccacctaccg ggtggtgtcc gtgctgaccg tgctgcacca ggactggctg 960
aacggcaaag agtacaagtg caaagtgtcc aacaagggcc tgccctccag catcgaaaag 1020
accatctcca aggccaaggg ccagccccgc gagccccaag tgtacaccct gcctcccagc 1080
caggaagaga tgaccaagaa tcaagtgtcc ctgacttgtc tggtcaaggg cttctacccc 1140
tccgatatcg ccgtggagtg ggagtccaac ggccagcccg agaacaacta caagaccacc 1200
cctcccgtgc tggactccga cggctccttc ttcctgtact ctcggctgac cgtggacaag 1260
tcccggtggc aggaaggcaa cgtcttctcc tgctccgtga tgcacgaggc cctgcacaac 1320
cactacaccc agaagtccct gtccctgtct ctgggc 1356
<210> 141
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> FLAG
<400> 141
Asp Tyr Lys Asp Asp Asp Asp Lys
1 5
<210> 142
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 6-HIS
<400> 142
His His His His His His
1 5
<210> 143
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成HA
<400> 143
Tyr Pro Tyr Asp Val Pro Asp Tyr Ala
1 5
<210> 144
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 共有重链CDR1
<220>
<221> misc_feature
<222> (5)..(5)
<223> 其中Xaa可以是Ser、Ala或Arg
<220>
<221> misc_feature
<222> (6)..(6)
<223> 其中Xaa可以是Ser或Arg
<220>
<221> misc_feature
<222> (7)..(7)
<223> 其中Xaa可以是Thr或Tyr
<220>
<221> misc_feature
<222> (8)..(8)
<223> 其中Xaa可以是Gly或Ser
<220>
<221> misc_feature
<222> (9)..(9)
<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸
<400> 144
Asn Gly Phe Thr Phe Xaa Xaa Xaa Xaa
1 5
<210> 145
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 共有重链CDR1
<220>
<221> misc_feature
<222> (5)..(8)
<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸
<400> 145
Gly Phe Thr Phe Xaa Xaa Xaa Xaa
1 5
<210> 146
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 共有重链CDR2
<220>
<221> misc_feature
<222> (5)..(5)
<223> 其中Xaa可以是Ser或Gly
<220>
<221> misc_feature
<222> (6)..(6)
<223> 其中Xaa可以是Ser或ALa
<400> 146
Ile Ser Ser Ser Xaa Xaa Tyr Ile
1 5
<210> 147
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 共有重链CDR2
<220>
<221> misc_feature
<222> (5)..(6)
<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸
<400> 147
Ile Ser Ser Ser Xaa Xaa Tyr Ile
1 5
<210> 148
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 共有重链CDR1
<220>
<221> misc_feature
<222> (4)..(4)
<223> 其中Xaa可以是Ser、Ala或Arg
<220>
<221> misc_feature
<222> (5)..(5)
<223> 其中Xaa可以是Ser或Arg
<220>
<221> misc_feature
<222> (6)..(6)
<223> 其中Xaa可以是Thr或Tyr
<220>
<221> misc_feature
<222> (6)..(6)
<223> 其中Xaa可以是Gly或Ser
<220>
<221> misc_feature
<222> (7)..(7)
<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸
<400> 148
Phe Thr Phe Xaa Xaa Xaa Xaa Met Asn
1 5
<210> 149
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 共有重链CDR2
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(1)
<223> 其中Xaa可以是Gly或Ser
<220>
<221> misc_feature
<222> (6)..(6)
<223> 其中Xaa可以是Gly或Ser
<220>
<221> misc_feature
<222> (7)..(7)
<223> 其中Xaa可以是Ser或Ala
<220>
<221> misc_feature
<222> (10)..(10)
<223> 其中Xaa可以是Leu或Tyr
<400> 149
Xaa Ile Ser Ser Ser Xaa Xaa Tyr Ile Xaa Tyr Ala Asp Ser Val Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 150
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 共有重链CDR1
<220>
<221> misc_feature
<222> (4)..(7)
<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸
<400> 150
Phe Thr Phe Xaa Xaa Xaa Xaa Met Asn
1 5
<210> 151
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 共有重链CDR2
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(1)
<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸
<220>
<221> misc_feature
<222> (6)..(7)
<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸
<220>
<221> misc_feature
<222> (10)..(10)
<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸
<400> 151
Xaa Ile Ser Ser Ser Xaa Xaa Tyr Ile Xaa Tyr Ala Asp Ser Val Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 152
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 重链CDR2
<220>
<221> misc_feature
<222> (2)..(8)
<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸
<400> 152
Ile Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa
1 5
<210> 153
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 重链CDR3
<220>
<221> misc_Feature
<222> (3)..(3)
<223> 其中Xaa可以是任何氨基酸并且自身重复6至15次
<220>
<221> misc_feature
<222> (5)..(5)
<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸
<400> 153
Ala Arg Xaa Asp Xaa Cys
1 5
<210> 154
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 轻链CDR1
<220>
<221> Misc_feature
<222> (3)..(3)
<223> 其中Xaa可以是任何氨基酸并且自身重复1至3次
<220>
<221> Misc_feature
<222> (6)..(6)
<223> 其中Xaa可以是任何氨基酸并且自身重复0至4次
<400> 154
Gln Ser Xaa Ser Ser Xaa Tyr
1 5
<210> 155
<211> 3
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 轻链CDR2
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(2)
<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸
<400> 155
Xaa Xaa Ser
1
<210> 156
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 轻链CDR3
<220>
<221> misc_feature
<222> (3)..(6)
<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸
<220>
<221> misc_feature
<222> (8)..(8)
<223> 其中Xaa可以是任何氨基酸并且自身重复0至1次
<400> 156
Gln Gln Xaa Xaa Xaa Xaa Pro Xaa Thr
1 5

Claims (80)

1.一种拮抗人IL-27的分离的抗体或其抗原结合部分，其中所述抗体或其抗原结合部分特异性地结合至包含以下中的一个或多个氨基酸的表位：(i)对应于SEQ ID NO:2(IL-27p28)的氨基酸37至56，(ii)对应于SEQ ID NO:2(IL-27p28)的氨基酸142至164，或(iii)(i)和(ii)两者。
2.如权利要求1所述的抗体或其抗原结合部分，其中所述表位包含SEQ ID NO:2(IL-27p28)的Gln37、Leu38、Glu42、Glu46、Val49、Ser50、Leu53、Lys56、Leu142、Asp143、Arg145、Asp146、Leu147、Arg149、His150、Arg152、Phe153、Leu156、Ala157、Gly159、Phe160、Asn161、Leu162、Pro163或Glu164中的一个或多个氨基酸。
3.如权利要求1或2所述的抗体或其抗原结合部分，其中所述表位包含SEQ ID NO:2(IL-27p28)的Asp146、Arg149和/或Phe153。
4.如权利要求3所述的抗体或其抗原结合部分，其中所述表位还包含SEQ ID NO:2(IL-27p28)的His150和/或Leu156。
5.如权利要求3或4所述的抗体或其抗原结合部分，其中所述表位还包含SEQ ID NO:2(IL-27p28)的Gln37、Leu38、Glu42、Leu142和/或Glu164。
6.如权利要求3至5中任一项所述的抗体或其抗原结合部分，其中所述表位还包含SEQID NO:2(IL-27p28)的Glu46、Val49、Ser50和/或Leu162。
7.如权利要求1至6中任一项所述的抗体或其抗原结合部分，其中所述表位由SEQ IDNO:2(IL-27p28)的Gln37、Leu38、Glu42、Glu46、Val49、Ser50、Leu142、Asp146、Arg149、His150、Phe153、Leu156、Leu162和Glu164组成或基本上由其组成。
8.如权利要求1至6中任一项所述的抗体或其抗原结合部分，其中所述表位还包含SEQID NO:2(IL-27p28)的Leu53、Lys56、Asp143、Leu147、Arg152、Ala157、Gly159、Phe160或Asn161中的一个或多个氨基酸。
9.如权利要求1至6中任一项所述的抗体或其抗原结合部分，其中所述表位还包含SEQID NO:2(IL-27p28)的Leu53、Lys56、Asp143、Arg145、Leu147、Arg152、Ala157、Gly159、Phe160、Asn161或Pro163中的一个或多个氨基酸。
10.如权利要求1至6中任一项所述的抗体或其抗原结合部分，其中所述表位由SEQ IDNO:2(IL-27p28)的Gln37、Leu38、Glu42、Glu46、Val49、Ser50、Leu53、Lys56、Leu142、Asp143、Asp146、Leu147、Arg149、His150、Arg152、Phe153、Leu156、Ala157、Gly159、Phe160、Asn161、Leu162和Glu164组成或基本上由其组成。
11.如权利要求1至6中任一项所述的抗体或其抗原结合部分，其中所述表位由SEQ IDNO:2(IL-27p28)的Gln37、Leu38、Glu42、Glu46、Val49、Ser50、Leu53、Lys56、Leu142、Asp143、Arg145、Asp146、Leu147、Arg149、His150、Arg152、Phe153、Leu156、Ala157、Gly159、Phe160、Asn161、Leu162、Pro163和Glu164组成或基本上由其组成。
12.如权利要求1至11中任一项所述的抗体或其抗原结合部分，所述抗体或其抗原结合部分包含重链CDR1、重链CDR2、重链CDR3、轻链CDR1、轻链CDR2和轻链CDR3，其中(i)轻链CDR1由N-XXXXXXLFSSNXKXYXX-C组成，轻链CDR3由N-XXXASAXXX-C组成，重链CDR2由N-XXSSSXSYXYXXXXXXX-C组成，并且重链CDR3由N-XXXXGRTSYTATXHNXXXX-C组成，其中X为任何氨基酸。
13.如权利要求1至12中任一项所述的抗体或其抗原结合部分，其中所述抗体或其抗原结合部分不包含选自由以下组成的组的重链CDR和轻链CDR：
(i)分别示于SEQ ID NO:9、10和11中的重链CDR1、CDR2和CDR3序列，以及分别示于SEQID NO:17、18和19中的轻链CDR1、CDR2和CDR3序列；
(ii)分别示于SEQ ID NO:31、32和33中的重链CDR1、CDR2和CDR3序列，以及分别示于SEQ ID NO:39、40和41中的轻链CDR1、CDR2和CDR3序列；
(iii)分别示于SEQ ID NO:53、54和55中的重链CDR1、CDR2和CDR3序列，以及分别示于SEQ ID NO:61、62和63中的轻链CDR1、CDR2和CDR3序列；
(iv)分别示于SEQ ID NO:75、76和77中的重链CDR1、CDR2和CDR3序列，以及分别示于SEQ ID NO:83、84和85中的轻链CDR1、CDR2和CDR3序列；
(v)分别示于SEQ ID NO:97、98和99中的重链CDR1、CDR2和CDR3序列，以及分别示于SEQID NO:105、106和107中的轻链CDR1、CDR2和CDR3序列；或
(vi)分别示于SEQ ID NO:119、120和121中的重链CDR1、CDR2和CDR3序列，以及分别示于SEQ ID NO:127、128和129中的轻链CDR1、CDR2和CDR3序列。
14.如权利要求1至12中任一项所述的抗体或其抗原结合部分，其中所述抗体或其抗原结合部分不包含选自由以下组成的组的重链CDR和轻链CDR：
(i)分别示于SEQ ID NO:12、13和14中的重链CDR1、CDR2和CDR3序列，以及分别示于SEQID NO:20、21和22中的轻链CDR1、CDR2和CDR3序列；
(ii)分别示于SEQ ID NO:34、35和36中的重链CDR1、CDR2和CDR3序列，以及分别示于SEQ ID NO:42、43和44中的轻链CDR1、CDR2和CDR3序列；
(iii)分别示于SEQ ID NO:56、57和58中的重链CDR1、CDR2和CDR3序列，以及分别示于SEQ ID NO:64、65和66中的轻链CDR1、CDR2和CDR3序列；
(iv)分别示于SEQ ID NO:78、79和80中的重链CDR1、CDR2和CDR3序列，以及分别示于SEQ ID NO:86、87和88中的轻链CDR1、CDR2和CDR3序列；
(v)分别示于SEQ ID NO:100、101和102中的重链CDR1、CDR2和CDR3序列，以及分别示于SEQ ID NO:108、109和110中的轻链CDR1、CDR2和CDR3序列；或
(vi)分别示于SEQ ID NO:122、123和124中的重链CDR1、CDR2和CDR3序列，以及分别示于SEQ ID NO:130、131和132中的轻链CDR1、CDR2和CDR3序列。
15.如权利要求1至14中任一项所述的抗体或其抗原结合部分，其中所述重链CDR1不由N-GFTF[S/A/R][S/R][T/Y][G/S]-C(SEQ ID NO:144)组成并且/或者所述重链CDR2不由N-ISSS[S/G][S/A]YI-C(SEQ ID NO:146)组成。
16.如权利要求1至15中任一项所述的抗体或其抗原结合部分，其中所述重链CDR1不由N-FTF[S/A/R][S/R][T/Y][G/S]MN-C(SEQ ID NO:148)组成并且/或者所述重链CDR2不由N-[G/S]ISSS[S/G][S/A]YI[L/Y]YADSVKG-C(SEQ ID NO:149)组成。
17.如权利要求1至16中任一项所述的抗体或其抗原结合部分，其中所述抗体或其抗原结合部分不包含：
(i)由N-GFTFXXXX-C(SEQ ID NO:145)组成的重链CDR1、由N-ISSSXXYI-C(SEQ ID NO:147)组成的重链CDR2和示于SEQ ID NO:121中的重链CDR3序列；以及分别示于SEQ ID NO:127、128和129中的轻链CDR1、CDR2和CDR3序列；或
(ii)由N-FTFXXXXMN-C(SEQ ID NO:150)组成的重链CDR1、由N-XISSSXXYIXYADSVKG-C(SEQ ID NO:151)组成的重链CDR2和示于SEQ ID NO:124中的重链CDR3序列；以及分别示于SEQ ID NO:130、131和132中的轻链CDR1、CDR2和CDR3序列。
18.如权利要求1至17中任一项所述的抗体或其抗原结合部分，其中所述抗体或其抗原结合部分不包含：由N-GFTFXXXX-C(SEQ ID NO:145)组成的重链CDR1、由N-IXXXXXXX-C(SEQID NO:152)组成的重链CDR2和由N-AR[X]n＝6-15DX-C(SEQ ID NO:153)组成的重链CDR3序列；以及分别由N-QS[X]n＝1-3SS[X]n＝0-4Y-C(SEQ ID NO:154)组成的轻链CDR1、由N-XXS-C(SEQID NO:155)组成的轻链CDR2和由N-QQXXXXP[X]n＝0-1T-C(SEQ ID NO:156)组成的轻链CDR3序列。
19.如权利要求1至18中任一项所述的抗体或其抗原结合部分，其中所述抗体或其抗原结合部分表现出以下性质中的至少一者或多者：
(i)以15nM或更小的平衡解离常数(KD)结合至人IL-27；
(ii)阻断IL-27与IL-27受体的结合；
(iii)抑制或减少细胞中的STAT1和/或STAT3磷酸化；
(iv)抑制或减轻细胞中IL-27介导的对CD161表达的抑制；
(v)抑制或减少细胞中IL-27介导的PD-L1和/或TIM-3表达；和
(vi)诱导或增强PD-1介导的一种或多种细胞因子从细胞的分泌。
20.如权利要求1至19中任一项所述的分离的抗体或其抗原结合部分，其中所述抗体或其抗原结合部分以15nM或更小的平衡解离常数(KD)结合至人IL-27。
21.如权利要求1至20中任一项所述的分离的抗体或其抗原结合部分，其中所述抗体或其抗原结合部分抑制或减少细胞中的STAT1和/或STAT3磷酸化。
22.如权利要求21所述的分离的抗体或其抗原结合部分，其中所述细胞是免疫细胞或癌细胞。
23.如权利要求1至22中任一项所述的分离的抗体或其抗原结合部分，其中所述抗体或其抗原结合部分抑制或减轻细胞中对CD161表达的抑制。
24.如权利要求23所述的分离的抗体或其抗原结合部分，其中所述细胞是免疫细胞。
25.如权利要求1至24中任一项所述的分离的抗体或其抗原结合部分，其中所述抗体或其抗原结合部分抑制或减少细胞中的PD-L1和/或TIM-3表达。
26.如权利要求25所述的分离的抗体或其抗原结合部分，其中所述细胞是免疫细胞。
27.如权利要求26所述的分离的抗体或其抗原结合部分，其中所述细胞是癌细胞。
28.如权利要求27所述的分离的抗体或其抗原结合部分，其中所述细胞是癌细胞，其中所述抗体或其抗原结合部分抑制或减少癌细胞中的PD-L1表达。
29.如权利要求1至28中任一项所述的分离的抗体或其抗原结合部分，其中所述抗体或其抗原结合部分诱导或增强所述PD-1介导的一种或多种细胞因子从细胞的分泌。
30.如权利要求29所述的分离的抗体或其抗原结合部分，其中所述一种或多种细胞因子是IFNg(或IFNγ)、IL-17或TNFa(或TNFα)。
31.如权利要求1至30中任一项所述的分离的抗体或其抗原结合部分，其中所述抗体选自由以下组成的组：IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgM、IgA1、IgA2、IgD和IgE抗体。
32.根据权利要求31所述的分离的抗体或其抗原结合部分，其中所述抗体是IgG1抗体或IgG4抗体。
33.如权利要求1至32中任一项所述的分离的抗体或其抗原结合部分，其中所述抗体包含含有至少一个突变的Fc结构域。
34.一种药物组合物，所述药物组合物包含前述权利要求中任一项所述的分离的抗体或其抗原结合部分以及药学上可接受的载体。
35.一种核酸，所述核酸包含编码权利要求1至33中任一项所述的分离的抗体或其抗原结合部分的轻链、重链或轻链和重链两者的核苷酸序列。
36.一种表达载体，所述表达载体包含权利要求35所述的核酸。
37.一种细胞，所述细胞用权利要求36所述的表达载体转化。
38.一种用于产生特异性地结合人IL-27的抗体或其抗原结合部分的方法，所述方法包括将根据权利要求37所述的细胞维持在允许所述单克隆抗体或其抗原结合部分的表达的条件下。
39.如权利要求38所述的方法，所述方法还包括获得所述抗体或其抗原结合部分。
40.一种抑制或减少细胞中的STAT1和/或STAT3磷酸化的方法，所述方法包括使所述细胞与权利要求1至33中任一项所述的分离的抗体或抗原结合片段接触，其中所述抗体或其抗原结合部分抑制或减少细胞中的STAT1和/或STAT3磷酸化。
41.一种抑制或减轻细胞中对CD161表达的抑制的方法，所述方法包括使所述细胞与权利要求1至33中任一项所述的分离的抗体或抗原结合片段接触，其中所述抗体或其抗原结合部分抑制或减轻细胞中对CD161表达的抑制。
42.一种抑制或减少细胞中的PD-L1和/或TIM-3表达的方法，所述方法包括使所述细胞与权利要求1至33中任一项所述的分离的抗体或抗原结合片段接触，其中所述抗体或其抗原结合部分抑制或细胞中的PD-L1和/或TIM-3表达。
43.一种诱导或增强一种或多种细胞因子从细胞的分泌的方法，所述方法包括使所述细胞与权利要求1至33中任一项所述的分离的抗体或抗原结合片段接触，其中所述抗体或其抗原结合部分诱导或增强PD-1介导的一种或多种细胞因子从细胞的分泌。
44.一种刺激受试者中的免疫响应的方法，所述方法包括向所述受试者施用有效量的权利要求1至33中任一项所述的分离的抗体或抗原结合片段或权利要求34所述的药物组合物。
45.一种治疗受试者的癌症的方法，所述方法包括向所述受试者施用有效量的权利要求1至33中任一项所述的分离的抗体或抗原结合片段或权利要求34所述的药物组合物。
46.一种刺激受试者中的免疫响应或治疗受试者的癌症的方法，所述方法包括向所述受试者施用有效量的权利要求1至33中任一项所述的分离的抗体或抗原结合片段或权利要求34所述的药物组合物，其中所述抗体或其抗原结合部分或所述药物组合物抑制或减少细胞中的STAT1和/或STAT3磷酸化，从而刺激所述免疫响应或治疗所述癌症。
47.一种刺激受试者中的免疫响应或治疗受试者的癌症的方法，所述方法包括向所述受试者施用有效量的权利要求1至33中任一项所述的分离的抗体或抗原结合片段或权利要求34所述的药物组合物，其中所述抗体或其抗原结合部分或所述药物组合物抑制或减轻细胞中对CD161表达的抑制，从而刺激所述免疫响应或治疗所述癌症。
48.一种刺激受试者中的免疫响应或治疗受试者的癌症的方法，所述方法包括向所述受试者施用有效量的权利要求1至33中任一项所述的分离的抗体或抗原结合片段或权利要求34所述的药物组合物，其中所述抗体或其抗原结合部分或所述药物组合物抑制或减少细胞上的PD-L1和/或TIM-3表达，从而刺激所述免疫响应或治疗所述癌症。
49.一种刺激受试者中的免疫响应或治疗受试者的癌症的方法，所述方法包括向所述受试者施用有效量的权利要求1至33中任一项所述的分离的抗体或抗原结合片段或权利要求34所述的药物组合物，其中所述抗体或其抗原结合部分或所述药物组合物诱导或增强PD-1介导的一种或多种细胞因子从细胞的分泌，从而刺激所述免疫响应或治疗所述癌症。
50.如权利要求45至49中任一项所述的方法，其中所述癌症选自肺癌(例如，非小细胞肺癌)、肉瘤、睾丸癌、卵巢癌、胰腺癌、乳腺癌(例如，三阴性乳腺癌)、黑素瘤、头颈癌(例如，鳞状头颈癌)、结肠直肠癌、膀胱癌、子宫内膜癌、前列腺癌、甲状腺癌、肝细胞癌、胃癌、脑癌、淋巴瘤(例如，DL-BCL)、白血病(例如，AML)或肾癌(例如，肾细胞癌，例如，肾透明细胞癌)。
51.一种增强抗PD-1抗体的一种或多种活性(例如，增强PD-1介导的细胞因子分泌；增强抗PD-1介导的TNFα分泌；增强抗PD-1介导的IL-6从暴露于抗PD-1抗体的细胞的分泌)的方法，所述方法包括使细胞暴露于权利要求1至33中任一项所述的抗体或其抗原结合部分，同时或依序暴露于抗PD-1抗体，从而增强抗PD1抗体的一种或多种活性。
52.一种药物组合物，所述药物组合物包含抗PD-1抗体和权利要求1至33中任一项所述的抗体或其抗原结合部分以及药学上可接受的载体。
53.一种药盒，所述药盒包含用于同时或依序施用的抗PD-1抗体和权利要求1至33中任一项所述的抗体或其抗原结合部分以及其使用说明书。
54.如权利要求44至50中任一项所述的方法，其中将所述分离的抗体或其抗原结合部分与一种或多种另外的治疗剂或程序组合施用，其中所述第二治疗剂或程序选自由以下组成的组：化学疗法、靶向抗癌疗法、溶瘤药物、细胞毒性剂、基于免疫的疗法、细胞因子、手术程序、放射程序、共刺激分子的活化剂、抑制性分子的抑制剂、疫苗或细胞免疫疗法，或它们的组合。
55.如权利要求54所述的方法，其中所述一种或多种另外的治疗剂是PD-1拮抗剂、PD-L1抑制剂、TIM-3抑制剂、LAG-3抑制剂、TIGIT抑制剂、CD112R抑制剂、TAM抑制剂、STING激动剂、4-1BB激动剂或它们的组合。
56.如权利要求55所述的方法，其中所述一种或多种另外的治疗剂是PD-1拮抗剂。
57.如权利要求56所述的方法，其中所述PD-1拮抗剂选自由以下组成的组：PDR001、纳武单抗、派姆单抗、匹地利珠单抗、MEDI0680、REGN2810、TSR-042、PF-06801591和AMP-224。
58.如权利要求55所述的方法，其中所述PD-L1抑制剂选自由以下组成的组：FAZ053、阿特珠单抗、阿维鲁单抗、德瓦鲁单抗和BMS-936559。
59.如权利要求55所述的方法，其中所述一种或多种另外的治疗剂选自由以下组成的组：舒尼替尼
Figure FDA0003553735840000111
卡博替尼(CABO
Figure FDA0003553735840000112
)、阿西替尼
Figure FDA0003553735840000113
乐伐替尼
Figure FDA0003553735840000114
依维莫司
Figure FDA0003553735840000115
贝伐单抗
Figure FDA0003553735840000116
依多司他、NKTR-214(CD-122偏向性激动剂)、替伏扎尼
Figure FDA0003553735840000117
艾贝司他、伊匹单抗
Figure FDA0003553735840000118
曲美木单抗、帕唑帕尼
Figure FDA0003553735840000119
索拉非尼
Figure FDA00035537358400001110
Figure FDA00035537358400001111
西罗莫司
Figure FDA00035537358400001112
雷莫芦单抗
Figure FDA00035537358400001113
尼拉帕尼、沃利替尼、沃洛拉尼(X-82)、瑞格非尼
Figure FDA00035537358400001114
多纳非尼(多激酶抑制剂)、卡瑞利珠单抗(SHR-1210)、迪-培萨替莫近(JX-594)、雷莫芦单抗
Figure FDA00035537358400001115
阿帕替尼(YN968D1)、包封的阿霉素
Figure FDA00035537358400001116
替万替尼(ARQ197)、ADI-PEG 20、比美替尼、甲磺酸阿帕替尼、尼达尼布、利瑞鲁单抗、纳武单抗
Figure FDA00035537358400001117
Figure FDA00035537358400001118
派姆单抗
Figure FDA00035537358400001119
阿特珠单抗
Figure FDA00035537358400001120
阿维单抗
Figure FDA00035537358400001121
德瓦鲁单抗
Figure FDA00035537358400001122
西米普利单抗-rwlc
Figure FDA00035537358400001123
Figure FDA00035537358400001124
替雷利珠单抗和斯巴达珠单抗。
60.如权利要求55所述的方法，其中所述一种或多种另外的治疗剂是TIM-3抑制剂，任选地其中所述TIM-3抑制剂是MGB453或TSR-022。
61.如权利要求55所述的方法，其中所述一种或多种另外的治疗剂是LAG-3抑制剂，任选地其中所述LAG-3抑制剂选自由以下组成的组：LAG525、BMS-986016和TSR-033。
62.如权利要求55所述的方法，其中所述一种或多种另外的治疗剂是TIGIT抑制剂。
63.如权利要求55所述的方法，其中所述一种或多种另外的治疗剂是CD112R抑制剂。
64.如权利要求55所述的方法，其中所述一种或多种另外的治疗剂是TAM(Axl、Mer、Tyro)抑制剂。
65.如权利要求55所述的方法，其中所述一种或多种另外的治疗剂是4-1BB激动剂。
66.如权利要求55所述的方法，其中所述一种或多种另外的治疗剂是酪氨酸激酶抑制剂(TKI)。
67.权利要求1至33中任一项所述的分离的单克隆抗体或其抗原结合部分或权利要求34所述的药物组合物用于刺激受试者中的免疫响应或用于治疗受试者的癌症、任选地用于与一种或多种另外的治疗剂或程序组合使用的用途。
68.一种药盒，所述药盒包含权利要求1至33中任一项所述的分离的单克隆抗体或其抗原结合部分或权利要求34所述的药物组合物以及刺激受试者中的免疫响应或治疗受试者的癌症的使用说明书，任选地具有与一种或多种另外的治疗剂或程序组合的使用说明书。
69.一种药盒，所述药盒包含权利要求1至33中任一项所述的分离的单克隆抗体或其抗原结合部分以及检测来自受试者的样品中的IL-27的使用说明书，任选地具有检测受试者的IL-27相关癌症的使用说明书。
70.如权利要求54所述的方法，其中所述一或多种另外的治疗剂是酪氨酸激酶抑制剂、CD39拮抗剂、CD73拮抗剂、A2AR拮抗剂、A2BR拮抗剂、双重A2AR/A2BR拮抗剂、CCR8拮抗剂、CTLA4拮抗剂、VEG-F抑制剂或它们的组合。
71.如权利要求54所述的方法，其中所述一或多种另外的治疗剂是PD-1拮抗剂、PD-L1抑制剂、TIM-3抑制剂、LAG-3抑制剂、TIGIT抑制剂、CD112R抑制剂、TAM抑制剂、STING激动剂、4-1BB激动剂、酪氨酸激酶抑制剂、CD39拮抗剂、CD73拮抗剂、A2AR拮抗剂、A2BR拮抗剂、双重A2AR/A2BR拮抗剂、CCR8拮抗剂、CTLA4拮抗剂、VEG-F抑制剂或它们的组合。
72.如权利要求71所述的方法，其中所述一种或多种另外的治疗剂是PD-1拮抗剂、PD-L1抑制剂、VEG-F抑制剂或它们的组合。
73.如权利要求44至51、54至66和70至72中任一项所述的方法，所述方法还包括在所述施用之后测量TNFSF15的表达。
74.如权利要求73所述的方法，所述方法还包括在所述施用之前测量TNFSF15的表达。
75.如权利要求75所述的方法，所述方法包括向与所述施用之前的TNFSF15的表达相比，在所述施用后表现出TNFSF15的表达无变化或减少的受试者施用另外的剂量。
76.如权利要求74所述的方法，所述方法包括向与所述施用之前的TNFSF15的表达相比，在所述施用后表现出TNFSF15的表达增加的受试者施用另外的剂量。
77.一种测定拮抗人IL-27的剂的功效的方法，所述方法包括测量从受试者获得的样品中TNFSF15的表达，向所述受试者施用所述拮抗人IL-27的剂，以及测量在所述施用之后从所述受试者获得的样品中TNFSF15的表达。
78.一种测定拮抗人IL-27的剂的功效的方法，所述方法包括测量细胞培养物中TNFSF15的表达，使所述细胞培养物中的一个或多个细胞与施用于所述受试者的所述拮抗人IL-27的剂接触，以及测量在所述接触之后所述细胞培养物中TNFSF15的表达。
79.如权利要求73至78中任一项所述的方法，其中通过测量mRNA水平、蛋白质水平或它们的任何组合来测量TNFSF15的表达。
80.如权利要求73至79中任一项所述的方法，其中通过定量PCR(“qPCR”)、原位杂交、免疫组织化学或它们的任何组合来测量TNFSF15的表达。
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