KR20190099254A

KR20190099254A - 항-뉴로필린 항원-결합 단백질 및 그의 사용 방법

Info

Publication number: KR20190099254A
Application number: KR1020197020999A
Authority: KR
Inventors: 다니엘 히클린; 신시아 자이델-두간; 윌리엄 윈스톤; 호세-안드레스 살메론-가르시아; 넬스 피. 닐슨; 헤더 브로드킨
Original assignee: 포텐자 테라퓨틱스, 인코포레이티드
Priority date: 2016-12-23
Filing date: 2017-12-21
Publication date: 2019-08-26
Also published as: WO2018119171A1; TWI797100B; US20220098312A1; PH12019501405A1; MX2019007554A; US20180186886A1; CN110167590A; US10227413B2; SG10201913855TA; AR110659A1; TW201829466A; US20190119389A1; ZA202003695B; JOP20190134A1; IL267097A; CA3046313A1; EP3558365B1; MA47113A; EP3558365A1; ES2963746T3

Abstract

NRP-1에 선택적으로 결합하는 항원-결합 단백질 (ABP) 및 그의 이소형 및 동족체, 및 ABP를 포함하는 조성물이 본원에서 제공된다. 또한, ABP를 사용하는 방법, 예컨대 치료 및 진단 방법이 제공된다.

Description

항-뉴로필린 항원-결합 단백질 및 그의 사용 방법

NRP-1에 대한 결합 특이성을 갖는 항원-결합 단백질 (ABP) 및 제약 조성물, 진단 조성물을 비롯한 이러한 ABP를 포함하는 조성물, 및 키트가 본원에서 제공된다. 또한, NRP-1 ABP를 제조하는 방법, 및 예를 들어, 치료 목적, 진단 목적, 및 연구 목적으로 NRP-1 ABP를 사용하는 방법이 제공된다.

다수의 연구는 종양이 면역 감시를 회피하고 종양 발달을 촉진시키는 면역억제성 미세환경을 확립할 수 있음을 입증하였다. 조절성 T 세포 (Treg)는 종양 환경에서 면역억제성 환경의 중요한 성분이며, 종양 연관된 항원에 대한 T 세포 면역을 약화시킴으로써 작동한다. 따라서, Treg는 효과적인 항-종양 면역 반응을 실시하는 데 있어서 주요한 장애물이다. 암의 뮤린 모델에서 Treg의 고갈은 종양 성장을 억제하지만; Treg의 완전한 고갈과 연관된 수반되는 자가면역 및 염증성 장애는 이 접근법의 임상적 유용성을 제한할 수 있다. Treg를 특이적으로 표적화하는 전략은 염증성 종양 미세환경에서 실행가능한 대안일 수 있다. 몇몇 실험실에서의 최근의 연구는 주변부에서 Treg에 영향을 미치지 않고 종양에서의 Treg 활성을 조정하기 위한 후보 표적으로서 뉴로필린 (Neuropilin) 1 (NRP-1)을 확인하였다 (예를 들어, 문헌 [Chaudhary and Elkord, Vaccines (2016) Sep;4(3): 28]; [Bos et al., J Exp Med (2013) 210 (11):2435-66]; [Teng et al., Cancer Res. (2010) 70 (20):7800-] 참조).

NRP-1은 2개의 N-말단 CUB 도메인 (a1 및 a2), 2개의 응고 인자 V/VIII 상동성 도메인 (b1 및 b2) 및 단일 MAM 도메인 (c)을 함유하는 큰 세포외 도메인을 갖는 다기능성 130-kDa 막횡단 단백질이다. 세포질 꼬리는 짧고, 그 자신에 대해 임의의 촉매 활성을 나타내지 않는다. NRP-1은 다른 것들 중에서 세마포린, VEGF, PlGF 및 플렉신을 비롯한 다수의 공지된 리간드 및 공-수용체를 갖는 수용체이다 (Appleton et al., Embo J. (2007) Nov 28; 26(23): 4902-4912).

NRP-1은 인간 및 뮤린 Treg 상에 발현되며, 이 발현은 매우-억제성 Treg 하위세트를 확인한다. 종양 미세환경 내에서, NRP-1 발현은 Treg 안정성 및 기능을 위해 요구되지만, 종양의 염증성 환경 외부에서 Treg에 영향을 미치지 않는다. 최근의 연구는 NRP-1에 대한 추가의 리간드로서 면역 세포-발현된 리간드 세마포린 4A (Sema4a)를 확인하였으며, sema4a/NRP-1 상호작용이 시험관내에서 및 생체내에서 염증 부위에서 Treg 안정성의 중요한 매개자임을 입증하였다. 이들 데이터는 NRP-1이 Treg 계통 안정성 및 기능을 위해 요구됨을 시사한다 (예를 들어, 문헌 [Delgoffe et al., Nature (2013) Sep 12;501(7466):252-6] 참조).

몇몇 증거는 종양에서 발견되는 면역억제성 미세환경을 조정하기 위한 전략으로서 Treg에 대한, NRP-1 및 그의 연관된 단백질의 상호작용의 표적화, 특히 NRP-1/Sema 축의 표적화의 유용성을 뒷받침한다. 예를 들어, Treg 표적화된 NRP-1 넉-아웃을 갖는 마우스는 임의의 다른 자가면역 표현형 없이 몇몇 뮤린 종양 모델에서 감소된 종양 성장을 나타낸다. 추가적으로, NRP-1 또는 Sema에 대한 길항제는 Treg 억제 활성을 반전시키며, 자가면역 유해 사건의 부재 하에서 항-종양 효능을 다시 입증한다. 더욱이, NRP-1-VEGFA 축은 종양 미세-환경 내로의 Treg의 화학축을 조절하는 중요한 경로로서 제안되었으며, Treg에 대한 이 상호작용을 차단하는 길항제성 Ab는 종양 내로의 이들 억제성 세포의 유입을 억제할 수 있다.

NRP-1이 인간 종양에서 면역 세포의 표면 상에 발현됨을 시사하는 최근에 나타난 증거가 있다. NRP-1+ Treg는 자궁경부암 환자로부터의 배출 림프절 (DLN)에서 발견되며, 수술전 화학방사선에 대한 병리학적 반응을 갖는 환자에서 DLN에서의 Treg의 백분율의 유의한 강하가 있었다. 또한, NRP-1+ Treg는 흑색종 및 두경부 편평 세포 암종을 갖는 환자에서의 종양 침윤 림프구 (TIL)에서 관찰되었다.

따라서, 자가면역 질환을 유도하지 않고 NRP-1을 길항작용할 수 있는 치료제에 대한 필요가 있다. 이 필요를 충족시키는 ABP가 본원에서 제공된다.

요약

NRP-1에 특이적으로 결합하는 ABP 및 이러한 ABP를 사용하는 방법이 본원에서 제공된다.

한 측면에서, 하기 6개의 CDR 서열을 포함하는, 인간 NRP-1 (hNRP-1; 서열식별번호 (SEQ ID NO): 130)에 특이적으로 결합하는 단리된 다가 항원 결합 단백질 (ABP)이 본원에서 제공된다:

(a) 서열식별번호: 47에 제시된 서열을 갖는 CDR-H3;

(b) 서열식별번호: 136에 제시된 바와 같은 서열 X₁ISGSGGX₂TYYADSVX₃G (여기서, X₁은 I 또는 A이고, X₂는 S 또는 A이고, X₃은 K 또는 E임)를 갖는 CDR-H2;

(c) 서열식별번호: 137에 제시된 바와 같은 서열 FTFX₁SX₂AMV (여기서, X₁은 A, K, 또는 S이고, X₂는 Y 또는 V임)를 갖는 CDR-H1;

(d) 서열식별번호: 81에 제시된 서열을 갖는 CDR-L3;

(e) 서열식별번호: 71에 제시된 서열을 갖는 CDR-L2; 및

(f) 서열식별번호: 63에 제시된 서열을 갖는 CDR-L1.

한 실시양태에서, ABP는 서열식별번호: 47의 CDR-H3, 서열식별번호: 27의 CDR-H2, 서열식별번호: 12의 CDR-H1, 서열식별번호: 81의 CDR-L3, 서열식별번호: 71의 CDR-L2, 및 서열식별번호: 63의 CDR-L1; 또는 서열식별번호: 47의 CDR-H3, 서열식별번호: 28의 CDR-H2, 서열식별번호: 13의 CDR-H1, 서열식별번호: 81의 CDR-L3, 서열식별번호: 71의 CDR-L2, 및 서열식별번호: 63의 CDR-L1; 또는 서열식별번호: 47의 CDR-H3, 서열식별번호: 29의 CDR-H2, 서열식별번호: 14의 CDR-H1, 서열식별번호: 81의 CDR-L3, 서열식별번호: 71의 CDR-L2, 및 서열식별번호: 63의 CDR-L1; 또는 서열식별번호: 47의 CDR-H3, 서열식별번호: 30의 CDR-H2, 서열식별번호: 14의 CDR-H1, 서열식별번호: 81의 CDR-L3, 서열식별번호: 71의 CDR-L2, 및 서열식별번호: 63의 CDR-L1을 포함한다.

또 다른 실시양태에서, ABP는 서열식별번호: 92의 V_H 서열 및 서열식별번호: 104의 V_L 서열; 서열식별번호: 93의 V_H 서열 및 서열식별번호: 104의 V_L 서열; 서열식별번호: 94의 V_H 서열 및 서열식별번호: 104의 V_L 서열; 서열식별번호: 95의 V_H 서열 및 서열식별번호: 104의 V_L 서열; 또는 서열식별번호: 96의 V_H 서열 및 서열식별번호: 104의 V_L 서열을 포함한다.

또 다른 실시양태에서, ABP는 서열식별번호: 114의 중쇄 및 서열식별번호: 126의 경쇄; 서열식별번호: 115의 중쇄 및 서열식별번호: 126의 경쇄; 서열식별번호: 116의 중쇄 및 서열식별번호: 126의 경쇄; 서열식별번호: 117의 중쇄 및 서열식별번호: 126의 경쇄; 또는 서열식별번호: 118의 중쇄 및 서열식별번호: 126의 경쇄를 포함한다.

또 다른 측면에서, 하기 6개의 CDR 서열을 포함하는, 인간 NRP-1 (hNRP-1; 서열식별번호: 130)에 특이적으로 결합하는 단리된 다가 항원 결합 단백질 (ABP)이 제공된다:

(a) 서열식별번호: 41에 제시된 서열을 갖는 CDR-H3;

(b) 서열식별번호: 23에 제시된 서열을 갖는 CDR-H2;

(c) 서열식별번호: 8에 제시된 서열을 갖는 CDR-H1;

(d) 서열식별번호: 77에 제시된 서열을 갖는 CDR-L3;

(e) 서열식별번호: 67에 제시된 서열을 갖는 CDR-L2, 및

(f) 서열식별번호: 59에 제시된 서열을 갖는 CDR-L1.

한 실시양태에서, ABP는 서열식별번호: 85의 V_H 서열 및 서열식별번호: 100의 V_L 서열; 또는 서열식별번호: 86의 V_H 서열 및 서열식별번호: 100의 V_L 서열을 포함한다. 또 다른 실시양태에서, ABP는 서열식별번호: 107의 중쇄 및 서열식별번호: 122의 카파 경쇄; 및 서열식별번호: 108의 중쇄 및 서열식별번호: 122의 카파 경쇄를 포함한다.

(a) 서열식별번호: 138에 제시된 바와 같은 서열 ARDLGYYGSGMHX (여기서, X는 A 또는 V임)를 갖는 CDR-H3;

(a) 서열식별번호: 24에 제시된 서열을 갖는 CDR-H2;

(b) 서열식별번호: 9에 제시된 서열을 갖는 CDR-H1;

(c) 서열식별번호: 78에 제시된 서열을 갖는 CDR-L3;

(d) 서열식별번호: 68에 제시된 서열을 갖는 CDR-L2; 및

(e) 서열식별번호: 60에 제시된 서열을 갖는 CDR-L1.

한 실시양태에서, ABP는 서열식별번호: 42의 CDR-H3, 서열식별번호: 24의 CDR-H2, 서열식별번호: 9의 CDR-H1, 서열식별번호: 78의 CDR-L3, 서열식별번호: 68의 CDR-L2, 및 서열식별번호: 60의 CDR-L1; 또는 서열식별번호: 43의 CDR-H3, 서열식별번호: 24의 CDR-H2, 서열식별번호: 9의 CDR-H1, 서열식별번호: 78의 CDR-L3, 서열식별번호: 68의 CDR-L2, 및 서열식별번호: 60의 CDR-L1을 포함한다. 또 다른 실시양태에서, ABP는 서열식별번호: 87의 V_H 서열 및 서열식별번호: 101의 V_L 서열을 포함하거나; ABP는 서열식별번호: 88의 V_H 서열 및 서열식별번호: 101의 V_L 서열을 포함한다. 또 다른 실시양태에서, ABP는 서열식별번호: 109의 중쇄 및 서열식별번호: 123의 카파 경쇄를 포함하거나; ABP는 서열식별번호: 110의 중쇄 및 서열식별번호: 123의 카파 경쇄를 포함한다.

(a) 서열식별번호: 139에 제시된 바와 같은 서열 ARDRGMYYASGFXP (여기서, X는 G 또는 N임)를 갖는 CDR-H3;

(b) 서열식별번호: 25에 제시된 서열을 갖는 CDR-H2;

(c) 서열식별번호: 10에 제시된 서열을 갖는 CDR-H1;

(d) 서열식별번호: 79에 제시된 서열을 갖는 CDR-L3;

(e) 서열식별번호: 69에 제시된 서열을 갖는 CDR-L2; 및

(f) 서열식별번호: 61에 제시된 서열을 갖는 CDR-L1.

한 실시양태에서, ABP는 서열식별번호: 44의 CDR-H3, 서열식별번호: 25의 CDR-H2, 서열식별번호: 10의 CDR-H1, 서열식별번호: 79의 CDR-L3, 서열식별번호: 69의 CDR-L2, 및 서열식별번호: 61의 CDR-L1; 또는 서열식별번호: 45의 CDR-H3, 서열식별번호: 25의 CDR-H2, 서열식별번호: 10의 CDR-H1, 서열식별번호: 79의 CDR-L3, 서열식별번호: 69의 CDR-L2, 및 서열식별번호: 61의 CDR-L1을 포함한다. 또 다른 실시양태에서, ABP는 서열식별번호: 89의 V_H 서열 및 서열식별번호: 102의 V_L 서열; 또는 서열식별번호: 90의 V_H 서열 및 서열식별번호: 102의 V_L 서열을 포함한다. 또 다른 실시양태에서, ABP는 서열식별번호: 111의 중쇄 및 서열식별번호: 124의 카파 경쇄를 포함하거나; ABP는 서열식별번호: 112의 중쇄 및 서열식별번호: 124의 카파 경쇄를 포함한다.

(a) 서열식별번호: 46에 제시된 서열을 갖는 CDR-H3;

(b) 서열식별번호: 26에 제시된 서열을 갖는 CDR-H2;

(c) 서열식별번호: 11에 제시된 서열을 갖는 CDR-H1;

(d) 서열식별번호: 80에 제시된 서열을 갖는 CDR-L3;

(e) 서열식별번호: 70에 제시된 서열을 갖는 CDR-L2; 및

(f) 서열식별번호: 62에 제시된 서열을 갖는 CDR-L1.

한 실시양태에서, ABP는 서열식별번호: 91의 V_H 서열 및 서열식별번호: 103의 V_L 서열을 포함한다. 또 다른 실시양태에서, ABP는 서열식별번호: 113의 중쇄 및 서열식별번호: 125의 카파 경쇄를 포함한다.

(a) 서열식별번호: 48에 제시된 서열을 갖는 CDR-H3;

(b) 서열식별번호: 31에 제시된 서열을 갖는 CDR-H2;

(c) 서열식별번호: 15에 제시된 서열을 갖는 CDR-H1;

(d) 서열식별번호: 82에 제시된 서열을 갖는 CDR-L3;

(e) 서열식별번호: 68에 제시된 서열을 갖는 CDR-L2; 및

(f) 서열식별번호: 64에 제시된 서열을 갖는 CDR-L1.

한 실시양태에서, ABP는 서열식별번호: 97의 V_H 서열 및 서열식별번호: 105의 V_L 서열, 또는 서열식별번호: 98의 V_H 서열 및 서열식별번호: 105의 V_L 서열을 포함한다. 또 다른 실시양태에서, ABP는 서열식별번호: 119의 중쇄 및 서열식별번호: 127의 카파 경쇄; 또는 서열식별번호: 120의 중쇄 및 서열식별번호: 127의 카파 경쇄를 포함한다.

(a) 서열식별번호: 49에 제시된 서열을 갖는 CDR-H3;

(b) 서열식별번호: 32에 제시된 서열을 갖는 CDR-H2;

(c) 서열식별번호: 16에 제시된 서열을 갖는 CDR-H1;

(d) 서열식별번호: 83에 제시된 서열을 갖는 CDR-L3;

(e) 서열식별번호: 72에 제시된 서열을 갖는 CDR-L2; 및

(f) 서열식별번호: 65에 제시된 서열을 갖는 CDR-L1.

한 실시양태에서, ABP는 서열식별번호: 99의 V_H 서열 및 서열식별번호: 106의 V_L 서열을 포함한다. 또 다른 실시양태에서, ABP는 서열식별번호: 121의 중쇄 및 서열식별번호: 128의 카파 경쇄를 포함한다.

또 다른 측면에서, 서열식별번호: 41 내지 49로부터 선택되는 V_H 영역의 CDR-H3과 적어도 약 80％ 동일성을 갖는 CDR-H3; 서열식별번호: 23 내지 32로부터 선택되는 V_H 영역의 CDR-H2와 적어도 약 80％ 동일성을 갖는 CDR-H2; 서열식별번호: 8 내지 16으로부터 선택되는 V_H 영역의 CDR-H1과 적어도 약 80％ 동일성을 갖는 CDR-H1; 서열식별번호: 77 내지 83으로부터 선택되는 V_L 영역의 CDR-L3과 적어도 약 80％ 동일성을 갖는 CDR-L3; 서열식별번호: 67 내지 72로부터 선택되는 V_L 영역의 CDR-L2와 적어도 약 80％ 동일성을 갖는 CDR-L2; 및 서열식별번호: 59 내지 65로부터 선택되는 V_L 영역의 CDR-L1과 적어도 약 80％ 동일성을 갖는 CDR-L1을 포함하는, 인간 NRP-1 (hNRP-1; 서열식별번호: 130)에 특이적으로 결합하는 단리된 항원 결합 단백질 (ABP)이 제공된다. 한 실시양태에서, CDR-H3, CDR-H2, CDR-H1, CDR-L3, CDR-L2, 및 CDR-L1은 각각 카바트 (Kabat) 넘버링 방식, 코티아 (Chothia) 넘버링 방식, 또는 IMGT 넘버링 방식으로부터 선택되는 넘버링 방식에 따라 확인된다. 또 다른 실시양태에서, CDR-H1은 둘 다의 넘버링 방식의 경계를 포함하여, 코티아 및 카바트 넘버링 방식 둘 다에 의해 정의된 바와 같이 확인된다. 한 실시양태에서, CDR-H3은 서열식별번호: 41 내지 49로부터 선택되는 CDR-H3, 또는 1, 2, 또는 3개의 아미노산 치환을 갖는 그의 변이체를 포함하고; CDR-H2는 서열식별번호: 23 내지 32로부터 선택되는 CDR-H3, 또는 1, 2, 또는 3개의 아미노산 치환을 갖는 그의 변이체를 포함하고; CDR-H1은 서열식별번호: 8 내지 16으로부터 선택되는 CDR-H1, 또는 1 또는 2개의 아미노산 치환을 갖는 그의 변이체를 포함하고; CDR-L3은 서열식별번호: 77 내지 83으로부터 선택되는 CDR-L3, 또는 1 또는 2개의 아미노산 치환을 갖는 그의 변이체를 포함하고; CDR-L2는 서열식별번호: 67 내지 72로부터 선택되는 CDR-L2, 또는 1개의 아미노산 치환을 갖는 그의 변이체를 포함하고; CDR-L1은 서열식별번호: 59 내지 65로부터 선택되는 CDR-L1, 또는 1 또는 2개의 아미노산 치환을 갖는 그의 변이체를 포함한다. 한 실시양태에서, 아미노산 치환은 보존적 아미노산 치환이다.

또 다른 측면에서,

(a) NRP-1에의 결합에 대해 각각 본 개시내용의 부록 A에 제공된 바와 같은 MAB1, MAB2, MAB3, MAB4, MAB5, MAB6, MAB7, MAB8, MAB9, MAB10, MAB11, MAB12, MAB13, MAB14, 또는 MAB15로부터 선택되는 항체와 경쟁하거나 교차-경쟁하거나;

(b) 세포 표면 NRP-1에 대해 특이적이거나;

(c) 막횡단 세마포린 폴리펩티드에의 NRP-1 결합을 특이적으로 차단하거나;

(d) NRP-1 폴리펩티드 및 혈관 내피 세포 성장 인자 (VEGF) 폴리펩티드 사이의 상호작용을 차단하거나;

(e) 인간 대상체에서 Treg 억제를 억제할 수 있거나;

(f) 항원-제시 세포로부터의 항원 제시와 조합되어 이펙터 T 세포를 공동-자극하거나;

(g) 조절성 T 세포에 의한 이펙터 T 세포의 억제를 억제하거나;

(h) 조직에서 또는 전신 순환에서 이펙터 T 세포의 수를 감소시키거나;

(i) 혈소판에 실질적으로 결합하지 않거나;

(j) 환자에게 투여되는 경우 혈소판감소를 실질적으로 유발하지 않거나;

(k) NRP-1에의 SEMA3 결합을 차단하거나;

(l) NRP-1-음성 세포에 결합하지 않거나;

(m) (a) 내지 (l)의 임의의 조합이 가능한, 인간 NRP-1에 특이적으로 결합하는 ABP가 제공된다.

한 실시양태에서, ABP 항체는 결합에 대해 각각 본 개시내용의 부록 A에 제공된 바와 같은 MAB1, MAB2, MAB3, MAB4, MAB5, MAB6, MAB7, MAB8, MAB9, MAB10, MAB11, MAB12, MAB13, MAB14, 또는 MAB15로부터 선택되는 항체와 경쟁하거나 교차-경쟁하지 않는다. 한 실시양태에서, ABP는 각각 본 개시내용의 부록 A에 제공된 바와 같은 MAB1, MAB2, MAB3, MAB4, MAB5, MAB6, MAB7, MAB8, MAB9, MAB10, MAB11, MAB12, MAB13, MAB14, 또는 MAB15로부터 선택되는 ABP이다. 한 실시양태에서, NRP-1은 hNRP-1 (서열식별번호: 130), cNRP-1 (서열식별번호: 132), mNRP-1 (서열식별번호: 134), rNRP-1 (서열식별번호: 135), 및 이들의 조합으로부터 선택된다.

한 실시양태에서, ABP는 항체를 포함한다. 한 실시양태에서, 항체는 모노클로날 항체이다. 또 다른 실시양태에서, 항체는 인간 항체, 인간화 항체 또는 키메라 항체로부터 선택된다. 한 실시양태에서, ABP는 다가이다. 또 다른 실시양태에서, ABP는 항체 단편을 포함한다. 또 다른 실시양태에서, ABP는 대체 스캐폴드를 포함한다. 또 다른 실시양태에서, ABP는 이뮤노글로불린 불변 영역을 포함한다. 또 다른 실시양태에서, ABP는 IgA, IgD, IgE, IgG, 또는 IgM으로부터 선택되는 부류의 중쇄 불변 영역을 포함한다. 또 다른 실시양태에서, ABP는 부류 IgG 및 IgG4, IgG1, IgG2, 또는 IgG3으로부터 선택되는 하위부류의 중쇄 불변 영역을 포함한다. 또 다른 실시양태에서, IgG는 IgG4이다. 또 다른 실시양태에서, IgG는 IgG1이다.

한 실시양태에서, ABP는 공통 경쇄 항체, 놉-인투-홀 (knobs-into-holes) 변형을 갖는 항체, IgG에 부착된 scFv, IgG에 부착된 Fab, 디아바디, 4가 이중특이적 항체, DVD-IgMAB, DARTT M, 듀오바디 (DuoBody)^®, CovX-바디, Fcab 항체, 탠드앱 (TandAb)^®, 탠덤 Fab, 자이바디 (Zybody)^MAB, 또는 이들의 조합을 포함한다.

한 실시양태에서, ABP는 NRP-1에의 세마포린 3A (SEMA3A)의 결합을 적어도 약 10％, 적어도 약 20％, 적어도 약 30％, 적어도 약 40％, 적어도 약 50％, 적어도 약 60％, 적어도 약 70％, 적어도 약 80％, 또는 적어도 약 90％ 차단한다. 한 실시양태에서, ABP는 NRP-1에의 세마포린 3A의 결합을 적어도 약 50％ 감소시킨다. 한 실시양태에서, 조직은 종양이다. 또 다른 실시양태에서, NRP-1은 표적 세포의 표면 상에 발현된다.

한 실시양태에서, ABP는 그의 N-말단에 피로글루타메이트 (pE) 잔기를 갖는 폴리펩티드 서열을 포함한다. 또 다른 실시양태에서, ABP는 N-말단 Q가 pE로 치환된 V_H 서열을 포함한다. 또 다른 실시양태에서, ABP는 N-말단 E가 pE로 치환된 V_H 서열을 포함한다. 또 다른 실시양태에서, ABP는 N-말단 E가 pE로 치환된 V_L 서열을 포함한다. 또 다른 실시양태에서, ABP는 N-말단 Q가 pE로 치환된 중쇄 서열을 포함한다. 또 다른 실시양태에서, ABP는 N-말단 E가 pE로 치환된 중쇄 서열을 포함한다. 또 다른 실시양태에서, ABP는 N-말단 E가 pE로 치환된 경쇄 서열을 포함한다.

한 실시양태에서, ABP는 20 nM 미만, 10 nM 미만, 5 nM 미만, 2 nM 미만, 1 nM 미만, 0.5 nM 미만, 또는 0.2 nM 미만의 kD로 인간 NRP-1에 특이적으로 결합한다. 또 다른 실시양태에서, ABP는 인간, 마우스, 및 시노몰거스 원숭이로부터의 NRP-1에 특이적으로 결합한다. 한 실시양태에서, ABP는 SEC10이 결합하는 NRP-1 상의 에피토프와 상이한 NRP-1 상의 에피토프에 결합한다. 한 실시양태에서, ABP는 NRP-1의 a1, a2, b1, 또는 b2 도메인에 결합한다. 또 다른 실시양태에서, ABP는 NRP-1의 1개 초과의 도메인에 결합한다. 또 다른 실시양태에서, ABP는 NRP-1의 b2 도메인에 결합한다. 또 다른 실시양태에서, ABP는 NRP-1의 b1 도메인에 결합한다.

또 다른 측면에서, 의약으로서 사용하기 위한 본원에 개시된 ABP 중 임의의 것이 제공된다. 또 다른 실시양태에서, 암 또는 바이러스 감염의 치료에 사용하기 위한 ABP가 제공된다. 한 실시양태에서, 암은 고형 종양 및 혈액 종양으로부터 선택된다.

또 다른 측면에서, 본원에 개시된 ABP 중 임의의 것, 및 ABP의 사용을 위한 지침서를 포함하는 키트가 제공된다. 한 실시양태에서, 키트는 동결건조된 ABP를 포함한다. 또 다른 실시양태에서, 키트는 동결건조된 ABP의 재구성을 위한 유체를 포함한다.

또 다른 측면에서, 본원에 개시된 ABP, 그의 V_H, 그의 V_L, 그의 경쇄, 그의 중쇄 또는 그의 항원-결합 부분을 코딩하는 단리된 폴리뉴클레오티드가 제공된다.

또 다른 측면에서, 본원에 개시된 ABP, 그의 V_H, 그의 V_L, 그의 경쇄, 그의 중쇄 또는 그의 항원-결합 부분을 코딩하는 단리된 폴리뉴클레오티드를 포함하는 벡터가 제공된다.

또 다른 측면에서, 본원에 개시된 벡터 또는 폴리뉴클레오티드 중 임의의 것을 포함하는 숙주 세포가 제공된다. 한 실시양태에서, 숙주 세포는 박테리아 세포, 진균 세포, 및 포유동물 세포로부터 선택된다. 또 다른 실시양태에서, 숙주 세포는 이. 콜라이 (E. coli) 세포, 사카로미세스 세레비지아에 (Saccharomyces cerevisiae) 세포, 및 CHO 세포로부터 선택된다.

또 다른 측면에서, 본원에 개시된 벡터 또는 폴리뉴클레오티드 중 임의의 것을 포함하는 무세포 발현 반응이 제공된다.

또 다른 측면에서, ABP를 본원에 개시된 숙주 세포에서 발현시키고, 발현된 ABP를 단리하는 것을 포함하는, 본원에 개시된 ABP를 제조하는 방법이 제공된다.

또 다른 측면에서, 본원에 개시된 ABP 중 임의의 것 및 제약상 허용되는 부형제를 포함하는 제약 조성물이 제공된다. 한 실시양태에서, ABP는 종양에서 NRP-1:세마포린-4 상호작용을 국소적으로 억제하는 데 유효한 양으로 조성물에 존재한다. 한 실시양태에서, 항-NRP-1 항체는 인간 대상체에게 투여되는 경우 NRP-1 및 막횡단 세마포린 폴리펩티드 사이의 상호작용을 억제하는 데 유효한 양으로 조성물에 존재한다. 또 다른 실시양태에서, 항-NRP-1 항체는 막횡단 세마포린 폴리펩티드에의 NRP-1 결합을 특이적으로 차단한다. 또 다른 실시양태에서, 항-NRP-1 항체는 NRP-1 폴리펩티드 및 혈관 내피 세포 성장 인자 (VEGF) 폴리펩티드 사이의 상호작용을 차단한다. 또 다른 실시양태에서, 항-NRP-1 항체는 세마포린 폴리펩티드의 결합을 차단한다. 한 실시양태에서, 항-NRP1 항체는 SEMA3 결합을 차단한다. 또 다른 실시양태에서, 항-NRP-1 항체는 SEMA4 결합을 차단한다. 또 다른 실시양태에서, 항체는 NRP-1 폴리펩티드 및 SEMA3 사이의 상호작용을 차단한다. 또 다른 실시양태에서, 항체는 NRP-1 폴리펩티드 및 VEGF 사이의 상호작용을 차단한다. 한 실시양태에서, 항체는 세마포린 폴리펩티드 결합을 차단하지만, VEGF 결합을 차단하지 않는다. 또 다른 실시양태에서, 항-NRP-1 항체는 인간 대상체에서 Treg 억제를 억제할 수 있다. 또 다른 실시양태에서, 항-NRP-1 항체는 인간 대상체에서 Treg 생존 및/또는 안정성을 감소시킬 수 있다. 한 실시양태에서, 항-NRP-1 항체는 종양에서 NRP-1:세마포린-4 상호작용을 국소적으로 억제하는 데 유효한 양으로 조성물에 존재한다. 또 다른 실시양태에서, 항-NRP-1 항체는 바람직하지 않은 자가면역 및/또는 염증성 징후의 발생을 예방하는 데 유효한 양으로 조성물에 존재한다. 한 실시양태에서, 인간 대상체는 암을 앓고 있다. 한 실시양태에서, 제약 조성물 중의 ABP의 양은 대상체에서 (a) 조절성 T 세포에 의한 이펙터 T 세포의 억제를 감소시키거나; (b) 이펙터 T 세포를 활성화시키거나; (c) 조직에서 또는 전신적으로 조절성 T 세포의 수를 감소시키거나; (d) 이펙터 T 세포의 증식을 유도하거나 향상시키거나; (e) 종양 성장의 속도를 억제하거나; (f) 종양 퇴행을 유도하거나; (g) 이들의 조합에 충분한 것이다.

한 실시양태에서, 제약 조성물은 의약으로서 사용하기 위한 것이다. 한 실시양태에서, 제약 조성물은 암 또는 바이러스 감염의 치료에 사용하기 위한 것이다. 한 실시양태에서, 제약 조성물은 암의 치료에 사용하기 위한 것이고, 암은 뇌암, 전립선암, 유방암, 결장암, 피부암, 및 폐암으로부터 선택된다. 한 실시양태에서, 제약 조성물은 제약상 허용되는 부형제를 포함한다. 한 실시양태에서, 제약 조성물 중의 ABP는 대상체에서 (a) 조절성 T 세포에 의한 이펙터 T 세포의 억제를 감소시키거나; (b) 이펙터 T 세포를 활성화시키거나; (c) 조직에서 또는 전신적으로 조절성 T 세포의 수를 감소시키거나; (d) 이펙터 T 세포의 증식을 유도하거나 향상시키거나; (e) 종양 성장의 속도를 억제하거나; (f) 종양 퇴행을 유도하거나; (g) 이들의 조합에 충분하다.

또 다른 측면에서, 조절성 T 세포 (Treg)를 생체내에서 Treg에서의 뉴로필린-1 (NRP-1):세마포린-4A 축의 억제제에 노출시키는 것을 포함하며, 본원에서 제공된 ABP 또는 본원에서 제공된 제약 조성물의 유효량이 대상체에게 투여되는 것인, 대상체에서 Treg의 기능을 억제하거나 안정성을 감소시키는 방법이 제공된다. 한 실시양태에서, 방법은 대상체에게 본원에서 제공된 제약 조성물의 유효량을 투여하는 것을 포함하는, T 이펙터 세포 (T_eff) 기능을 증가시키거나, T_eff를 생체내에서 본원에서 제공된 ABP에 노출시키는 것을 포함한다. 한 실시양태에서, 대상체는 암을 갖는다. 한 실시양태에서, 방법은 암-연관된 항원에 대한 면역 반응을 유도하거나 향상시킨다. 한 실시양태에서, ABP는 (a) 인간 대상체에서 Treg 생존 및/또는 안정성을 감소시킬 수 있거나; (b) NRP-1 폴리펩티드의 세포외 도메인에 결합할 수 있거나; (c) 이들의 조합이 가능하다.

한 실시양태에서, 방법은 1종 이상의 추가의 치료제를 투여하는 것을 더 포함한다. 한 실시양태에서, 추가의 치료제는 방사선, 세포독성제, 화학치료제, 세포정지제, 항-호르몬제, VEGF 억제제, 면역자극제, 항-혈관신생제, 및 이들의 조합으로부터 선택된다. 한 실시양태에서, 추가의 치료제는 면역자극제이다. 한 실시양태에서, 면역자극제는 면역 세포에 의해 발현되는 억제성 수용체 또는 그의 리간드의 신호화를 차단하는 작용제를 포함한다. 한 실시양태에서, 면역 세포에 의해 발현되는 억제성 수용체 또는 그의 리간드는 PVRIG, VISTA, CCR4, CD27, CTLA-4, PD-1, PD-L1, LAG-3, Tim3, TIGIT, 뉴리틴, BTLA, KIR, 및 이들의 조합으로부터 선택된다. 한 실시양태에서, 면역자극제는 면역 세포에 의해 발현되는 자극성 수용체에 대한 효능제를 포함한다. 한 실시양태에서, 면역 세포에 의해 발현되는 자극성 수용체는 OX40, GITR, ICOS, CD28, CD37, CD40, 4-1BB, 및 이들의 조합으로부터 선택된다. 한 실시양태에서, 면역자극제는 시토카인을 포함한다. 또 다른 실시양태에서, 면역자극제는 암-연관된 항원에 대한 백신을 포함한다.

또 다른 측면에서, 면역 반응의 조정을 필요로 하는 대상체에게 유효량의 본원에서 제공된 ABP를 투여하는 것을 포함하는, 상기 대상체에서 면역 반응을 조정하는 방법이 제공된다. 한 실시양태에서, 방법은 1종 이상의 추가의 치료제를 대상체에게 투여하는 것을 더 포함한다. 한 실시양태에서, 추가의 치료제는 (i) 면역 세포의 자극성 수용체에 대한 효능제 또는 (ii) 면역 세포의 억제성 수용체의 길항제이며, 면역 세포의 수용체는 OX40, CD2, CD27, CDS, ICAM-1, LFA-1 (CD11a/CD18), ICOS (CD278), 4-1BB (CD137), CD28, CD30, CD40, BAFFR, HVEM, CD7, LIGHT, NKG2C, GITR, SLAMF7, NKp80, CD160, B7-H3, CD83 리간드, 및 이들의 조합으로부터 선택된다. 또 다른 실시양태에서, 추가의 치료제는 단순 포진 바이러스, 소수포 구내염 바이러스, 아데노바이러스, 뉴캐슬병 바이러스, 우두 바이러스, 마라바 바이러스, 및 이들의 조합으로부터 선택되는 종양용해 바이러스이다. 한 실시양태에서, 추가의 치료제는 ABP와 동일한 제약 조성물에 제형화된다. 또 다른 실시양태에서, 추가의 치료제는 ABP와 상이한 제약 조성물에 제형화된다.

한 실시양태에서, 추가의 치료제는 ABP를 투여하기 전에 투여된다. 또 다른 실시양태에서, 추가의 치료제는 ABP를 투여한 후에 투여된다. 또 다른 실시양태에서, 추가의 치료제는 ABP와 동시에 투여된다. 한 실시양태에서, 방법은 대상체에서 혈소판감소를 실질적으로 유발하지 않는다.

또 다른 측면에서, 서열식별번호: 47로 이루어진 CDR-H3, 서열식별번호: 30으로 이루어진 CDR-H2, 및 서열식별번호: 14로 이루어진 CDR-H1을 포함하는 중쇄 가변 영역, 및 서열식별번호: 81로 이루어진 CDR-L3, 서열식별번호: 71로 이루어진 CDR-L2, 및 서열식별번호: 63으로 이루어진 CDR-L1을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는 항-인간 NRP-1 항체 또는 그의 항원-결합 단편이 제공된다. 한 실시양태에서, 항체 또는 항원-결합 단편은 하기 (1) 및 (2) 중 어느 하나로부터 선택된다:

(1) 서열식별번호: 96으로 이루어진 중쇄 가변 영역, 및 서열식별번호: 104로 이루어진 경쇄 가변 영역을 포함하는 항-인간 NRP-1 항체 또는 그의 항원-결합 단편; 및

(2) 아미노산 번호 1의 E가 피로글루타메이트로 변형된 서열식별번호: 96으로 이루어진 중쇄 가변 영역, 및 서열식별번호: 104로 이루어진 경쇄 가변 영역을 포함하는 항-인간 NRP-1 항체 또는 그의 항원-결합 단편.

한 실시양태에서, 하기 (a) 내지 (c)로 이루어진 군으로부터 선택되는 숙주 세포(들)를 배양하여 4가 항-인간 NRP-1 항체 또는 그의 항원-결합 단편을 발현시키는 것을 포함하는, 항-인간 NRP-1 항체 또는 그의 항원-결합 단편을 제조하는 방법이 제공된다:

(a) 상기 실시양태 (1)의 항-인간 NRP-1 항체 또는 그의 항원-결합 단편의 중쇄 가변 영역을 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드, 및 항체 또는 그의 항원-결합 단편의 경쇄 가변 영역을 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 발현 벡터로 형질전환된 숙주 세포;

(b) 상기 실시양태 (1)의 항-인간 NRP-1 항체 또는 그의 항원-결합 단편의 중쇄 가변 영역을 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 발현 벡터, 및 항체 또는 그의 항원-결합 단편의 경쇄 가변 영역을 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 발현 벡터로 형질전환된 숙주 세포; 및

(c) 청구항 상기 실시양태 (1)의 항-인간 NRP-1 항체 또는 그의 항원-결합 단편의 중쇄 가변 영역을 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 발현 벡터로 형질전환된 숙주 세포, 및 항체 또는 그의 항원-결합 단편의 경쇄 가변 영역을 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 발현 벡터로 형질전환된 숙주 세포.

또 다른 실시양태에서, (1) 상기 측면의 항-인간 NRP-1 항체 또는 그의 항원-결합 단편의 중쇄 가변 영역을 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드, 및 (2) 상기 측면의 항-인간 NRP-1 항체 또는 그의 항원-결합 단편의 경쇄 가변 영역을 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드가 제공된다.

또 다른 실시양태에서, (a) 상기 측면의 항-인간 NRP-1 항체 또는 그의 항원-결합 단편의 중쇄 가변 영역을 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드, 및/또는 (b) 상기 측면의 항-인간 NRP-1 항체 또는 그의 항원-결합 단편의 경쇄 가변 영역을 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 발현 벡터가 제공된다.

또 다른 실시양태에서, (a) 내지 (d)로 이루어진 군으로부터 선택되는 발현 벡터로 형질전환된 숙주 세포가 제공된다:

(a) 상기 측면의 항-인간 NRP-1 항체 또는 그의 항원-결합 단편의 중쇄 가변 영역을 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드, 및 항체 또는 그의 항원-결합 단편의 경쇄 가변 영역을 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 발현 벡터로 형질전환된 숙주 세포;

(b) 상기 측면의 항-인간 NRP-1 항체 또는 그의 항원-결합 단편의 중쇄 가변 영역을 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 발현 벡터, 및 상기 측면의 항체 또는 그의 항원-결합 단편의 경쇄 가변 영역을 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 발현 벡터로 형질전환된 숙주 세포;

(c) 상기 측면의 항-인간 NRP-1 항체 또는 그의 항원-결합 단편의 중쇄 가변 영역을 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 발현 벡터로 형질전환된 숙주 세포; 및

(d) 상기 측면의 항-인간 NRP-1 항체 또는 그의 항원-결합 단편의 경쇄 가변 영역을 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 발현 벡터로 형질전환된 숙주 세포.

또 다른 실시양태에서, (1) 내지 (4)로 이루어진 군으로부터 선택되는 상기 측면에 따른 항-인간 NRP-1 항체 또는 그의 항원-결합 단편이 제공된다:

(1) 서열식별번호: 118로 이루어진 중쇄 및 서열식별번호: 126으로 이루어진 경쇄를 포함하는 항-인간 NRP-1 항체;

(2) 아미노산 번호 1의 E가 피로글루타메이트로 변형된 서열식별번호: 118로 이루어진 중쇄, 및 서열식별번호: 126으로 이루어진 경쇄를 포함하는 항-인간 NRP-1 항체;

(3) 서열식별번호: 118의 아미노산 번호 1 내지 453의 아미노산 서열로 이루어진 중쇄, 및 서열식별번호: 126으로 이루어진 경쇄를 포함하는 항-인간 NRP-1 항체; 및

(4) 아미노산 번호 1의 E가 피로글루타메이트로 변형된 서열식별번호: 118의 아미노산 번호 1 내지 453의 아미노산 서열로 이루어진 중쇄, 및 서열식별번호: 126으로 이루어진 경쇄를 포함하는 항-인간 NRP-1 항체.

한 실시양태에서, 항-인간 NRP-1 항체는 암을 예방하거나 치료하는 데 사용하기 위한 것이다. 또 다른 실시양태에서, 항-인간 NRP-1 항체는 암을 예방하거나 치료하기 위한 제약 조성물의 제조를 위한 것이다.

(1) 및 (2)로 이루어진 군으로부터 선택되는 폴리뉴클레오티드:

(1) 상기 실시양태 (1)에 따른 항-인간 NRP-1 항체의 중쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드, 및

(2) 상기 실시양태 (1)에 따른 항-인간 NRP-1 항체의 경쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드.

(a) 상기 실시양태 (1)의 항-인간 NRP-1 항체의 중쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드, 및/또는

(b) 상기 실시양태 (1)의 항-인간 NRP-1 항체의 경쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드

를 포함하는 발현 벡터.

(a) 내지 (d)로 이루어진 군으로부터 선택되는 발현 벡터로 형질전환된 숙주 세포:

(a) 상기 실시양태 (1)의 항-인간 NRP-1 항체의 중쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드, 및 항체의 경쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 발현 벡터로 형질전환된 숙주 세포;

(b) 상기 실시양태 (1)의 항-인간 NRP-1 항체의 중쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 발현 벡터, 및 항체의 경쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 발현 벡터로 형질전환된 숙주 세포;

(c) 상기 실시양태 (1)의 항-인간 NRP-1 항체의 중쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 발현 벡터로 형질전환된 숙주 세포; 및

(d) 상기 실시양태 (1)의 항-인간 NRP-1 항체의 경쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 발현 벡터로 형질전환된 숙주 세포.

하기 (a) 내지 (c)로 이루어진 군으로부터 선택되는 숙주 세포(들)를 배양하여 항-인간 NRP-1 항체를 발현시키는 것을 포함하는, 항-인간 NRP-1 항체를 제조하는 방법:

(b) 상기 실시양태 (1)의 항-인간 NRP-1 항체의 중쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 발현 벡터, 및 항체의 경쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 발현 벡터로 형질전환된 숙주 세포; 및

(c) 상기 실시양태 (1)의 항-인간 NRP-1 항체의 중쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 발현 벡터로 형질전환된 숙주 세포, 및 항체의 경쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 발현 벡터로 형질전환된 숙주 세포.

한 실시양태에서, 상기 실시양태의 항-인간 NRP-1 항체 및 제약상 허용되는 부형제를 포함하는 제약 조성물이 제공된다. 또 다른 실시양태에서, 상기 실시양태 (1)의 항-인간 NRP-1 항체, 상기 실시양태 (2)의 항-인간 NRP-1 항체, 상기 실시양태 (3)의 항-인간 NRP-1 항체, 및/또는 상기 실시양태 (4)의 항-인간 NRP-1 항체, 및 제약상 허용되는 부형제를 포함하는 제약 조성물이 제공된다. 한 실시양태에서, 제약 조성물은 암을 치료하기 위한 제약 조성물이다. 또 다른 실시양태에서, 조성물은 방사선, 세포독성제, 화학치료제, 세포정지제, 항-호르몬제, VEGF 억제제, 면역자극제, 항-혈관신생제, 또는 이들의 조합과 조합되어 투여된다.

또 다른 실시양태에서, 치료 유효량의 상기 측면의 항-인간 NRP-1 항체를 투여하는 것을 포함하는, 암을 예방하거나 치료하는 방법이 제공된다. 한 실시양태에서, 방법은 1종 이상의 추가의 치료제를 투여하는 것을 더 포함한다. 한 실시양태에서, 추가의 치료제는 방사선, 세포독성제, 화학치료제, 세포정지제, 항-호르몬제, VEGF 억제제, 면역자극제, 항-혈관신생제, 및 이들의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택된다.

도 1a 및 1b는 MAB 2, 3, 4, 5, 7, 12, 13, 14, 및 15의 뮤린 버전, 뿐만 아니라 비교자로서 IgG 대조군 및 항-NRP-1 항체 SEC10으로 처리된 CT26 종양-함유 마우스에서의 종양 성장 억제를 나타내는 2가지 그래프이다. 마우스를 MAB 단독요법으로 (도 1a) 또는 PD-1 항체와 조합하여 (도 1b) 처리하였다. 항체 처리 시간 (일)은 화살표로 나타내어진다. 도 1c는 상기 기재된 바와 같은 단독요법 및 조합 요법으로 처리된 CT26 종양-함유 마우스에서의 종양 성장 억제를 나타내는 그래프이다. i) MAB12의 뮤린 버전, ii) PD-1 억제제, 및 iii) mMAB12 및 PD-1 억제제의 조합이 제공된다. 항체 처리 시간 (일)은 화살표로 나타내어진다.
도 2는 MAB 2, 3, 4, 5, 7, 12, 13, 14, 및 15의 뮤린 버전, 뿐만 아니라 비교자로서 IgG 대조군 및 SEC10으로 처리된 MC38 종양-함유 마우스에서의 종양 성장 억제를 나타내는 3가지 그래프이다. 마우스를 MAB 단독요법으로 (도 2a) 또는 PD-L1 항체와 조합하여 (도 2b) 처리하였다. 항체 처리 시간 (일)은 화살표로 나타내어진다. MC38 동계 결장 마우스 종양 모델에서의 단독으로 또는 PD-L1 항체와의 조합으로의 mMAB12의 항-종양 효능을 도 2c에 나타낸다.
도 3은 항-NRP-1 항체 MAB12 및 SEC10에 대한 에피토프 비닝 데이터를 나타내는 2가지 그래프이다. 상부 패널은 항-인간 Fc AHC 센서 상에 고정화된 5 μg/mL MAB12를 갖는 MAB12 및 SEC10에 대한 비닝 데이터를 나타낸다. 하부 패널은 센서 상에 고정화된 5 μg/mL SEC10을 갖는 MAB12 및 SEC10에 대한 비닝 데이터를 나타낸다. NRP1 단백질을 고정화된 항체에 결합시키고, 제2 항체의 결합을 평가한다. 자취는 MAB12 및 SEC10이 NRP1에 동시에 결합할 수 있음을 나타낸다.

정의

달리 정의되지 않는다면, 본원에 사용된 기술분야의 모든 용어, 기호 및 다른 과학 용어는 이 발명이 속하는 관련 기술분야의 통상의 기술자에 의해 통상적으로 이해되는 의미를 갖는 것으로 의도된다. 일부의 경우, 통상적으로 이해되는 의미를 갖는 용어는 명확성을 위해 및/또는 용이한 참조를 위해 본원에서 정의되며, 본원의 이러한 정의의 포함은 반드시 관련 기술분야에서 일반적으로 이해되는 것에 비해 차이를 나타내는 것으로 해석되지 않아야 한다. 본원에 기재되거나 언급된 기법 및 절차는 일반적으로 널리 이해되며, 관련 기술분야의 통상의 기술자에 의한 통상적인 방법론, 예컨대, 예를 들어, 문헌 [Sambrook et al., Molecular Cloning: A Laboratory Manual 4th ed. (2012) Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY]에 기재된 폭넓게 이용되는 분자 클로닝 방법론을 사용하여 통상적으로 채택된다. 적절할 경우, 시판되는 키트 및 시약의 사용을 포함하는 절차는 일반적으로 달리 언급되지 않는다면 제조자-정의된 프로토콜 및 조건에 따라 수행된다.

본원에 사용된 바와 같은 단수 형태는 맥락이 명백하게 달리 지시하지 않는다면 복수 언급대상을 포함한다. 용어 "포함하다", "예컨대" 등은 달리 구체적으로 지시되지 않는다면, 제한 없는 포함을 전하는 것으로 의도된다.

본원에 사용된 바와 같은 용어 "포함하는"은 또한 달리 구체적으로 지시되지 않는다면, 인용된 요소"로 이루어진" 및 "로 본질적으로 이루어진" 실시양태를 구체적으로 포함한다.

용어 "약"은 지시된 값 및 그 값 초과 및 미만의 범위를 지시하며 포괄한다. 특정 실시양태에서, 용어 "약"은 지정된 값 ± 10％, ± 5％, 또는 ± 1％를 지시한다. 특정 실시양태에서, 적용가능한 경우, 용어 "약"은 지정된 값(들) ± 그 값(들)의 한 표준 편차를 지시한다.

용어 "이뮤노글로불린"은 일반적으로 2쌍의 폴리펩티드 쇄를 포함하는 구조적으로 관련된 단백질의 부류를 지칭한다: 한 쌍의 경 (L) 쇄 및 한 쌍의 중 (H) 쇄. "무손상 이뮤노글로불린"에서, 이들 쇄의 모든 4개는 디술피드 결합에 의해 상호연결된다. 이뮤노글로불린의 구조는 널리 특징화되었다. 예를 들어, 문헌 [Paul, Fundamental Immunology 7th ed., Ch. 5 (2013) Lippincott Williams & Wilkins, Philadelphia, PA]을 참조한다. 간략하게, 각각의 중쇄는 전형적으로 중쇄 가변 영역 (V_H) 및 중쇄 불변 영역 (C_H)을 포함한다. 중쇄 불변 영역은 전형적으로 C_H1, C_H2, 및 C_H3으로 약칭되는 3개의 도메인을 포함한다. 각각의 경쇄는 전형적으로 경쇄 가변 영역 (V_L) 및 경쇄 불변 영역을 포함한다. 경쇄 불변 영역은 전형적으로 C_L로 약칭되는 1개의 도메인을 포함한다.

용어 "항원-결합 단백질" (ABP)은 항원 또는 에피토프에 특이적으로 결합하는 1개 이상의 항원-결합 도메인을 포함하는 단백질을 지칭한다. 일부 실시양태에서, 항원-결합 도메인은 천연 발생 항체의 그것과 유사한 특이성 및 친화도로 항원 또는 에피토프에 결합한다. 일부 실시양태에서, ABP는 항체를 포함한다. 일부 실시양태에서, ABP는 항체로 이루어진다. 일부 실시양태에서, ABP는 항체로 본질적으로 이루어진다. 일부 실시양태에서, ABP는 대체 스캐폴드를 포함한다. 일부 실시양태에서, ABP는 대체 스캐폴드로 이루어진다. 일부 실시양태에서, ABP는 대체 스캐폴드로 본질적으로 이루어진다. 일부 실시양태에서, ABP는 항체 단편을 포함한다. 일부 실시양태에서, ABP는 항체 단편으로 이루어진다. 일부 실시양태에서, ABP는 항체 단편으로 본질적으로 이루어진다. "NRP-1 ABP", "항-NRP-1 ABP", 또는 "NRP-1-특이적 ABP"는 항원 NRP-1에 특이적으로 결합하는 본원에서 제공된 바와 같은 ABP이다. 일부 실시양태에서, ABP는 NRP-1의 세포외 도메인에 결합한다. 특정 실시양태에서, 본원에서 제공된 NRP-1 ABP는 상이한 종으로부터의 NRP-1 단백질 사이에 또는 중에서 보존된 NRP-1의 에피토프에 결합한다.

용어 "항체"는 본원에서 그의 가장 넓은 의미로 사용되며, 항원 또는 에피토프에 특이적으로 결합하는 1개 이상의 항원-결합 도메인을 포함하는 특정 유형의 이뮤노글로불린 분자를 포함한다. 항체는 구체적으로 무손상 항체 (예를 들어, 무손상 이뮤노글로불린), 항체 단편, 및 다중-특이적 항체를 포함한다. 항체는 ABP의 한 유형이다.

용어 "항원-결합 도메인"은 항원 또는 에피토프에 특이적으로 결합할 수 있는 ABP의 부분을 의미한다. 항원-결합 도메인의 한 예는 항체의 V_H-V_L 이량체에 의해 형성된 항원-결합 도메인이다. 항원-결합 도메인의 또 다른 예는 아드넥틴의 제10 피브로넥틴 유형 III 도메인으로부터의 특정 루프의 유도체화에 의해 형성된 항원-결합 도메인이다.

용어 "전장 항체", "무손상 항체", 및 "전체 항체"는 천연 발생 항체 구조와 실질적으로 유사한 구조를 가지며, Fc 영역을 포함하는 중쇄를 갖는 항체를 지칭하기 위해 본원에서 상호교환가능하게 사용된다. 예를 들어, IgG 분자를 지칭하는 데 사용되는 경우, "전장 항체"는 2개의 중쇄 및 2개의 경쇄를 포함하는 항체이다. "항-인간 NRP-1 항체"는 본원에서 제공된 바와 같이, 인간 NRP-1에 특이적으로 결합하는 무손상 항체이다.

용어 "Fc 영역"은 천연 발생 항체에서 Fc 수용체 및 보체계의 특정 단백질과 상호작용하는 이뮤노글로불린 중쇄의 C-말단 영역을 의미한다. 다양한 이뮤노글로불린의 Fc 영역의 구조, 및 그에 함유된 글리코실화 부위는 관련 기술분야에 공지되어 있다. 그 전문이 참조로 포함되는 문헌 [Schroeder and Cavacini, J. Allergy Clin. Immunol., 2010, 125:S41-52]을 참조한다. Fc 영역은 천연 발생 Fc 영역, 또는 관련 기술분야에 또는 본 개시내용의 다른 곳에 기재된 바와 같이 변형된 Fc 영역일 수 있다.

V_H 및 V_L 영역은 초가변성의 영역 ("초가변 영역 (HVR)"; 또한 보다 보존된 영역 사이에 배치된 "상보성 결정 영역" (CDR)으로 지칭됨)으로 더 세분될 수 있다. 보다 보존된 영역은 프레임워크 영역 (FR)으로 지칭된다. 각각의 V_H 및 V_L은 일반적으로 하기 순서로 (N-말단에서 C-말단으로) 배열된 3개의 CDR 및 4개의 FR을 포함한다: FR1 - CDR1 - FR2 - CDR2 - FR3 - CDR3 - FR4. CDR은 항원 결합에 관여하며, 항체의 항원 특이성 및 결합 친화도에 영향을 미친다. 그 전문이 참조로 포함되는 문헌 [Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest 5th ed. (1991) Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD]을 참조한다.

임의의 척추동물 종으로부터의 경쇄는 그의 불변 도메인의 서열에 기초하여, 카파 (κ) 및 람다 (λ)로 지칭되는 2가지 유형 중 하나로 할당될 수 있다.

임의의 척추동물 종으로부터의 중쇄는 5가지 상이한 부류 (또는 이소형) 중 하나로 할당될 수 있다: IgA, IgD, IgE, IgG, 및 IgM. 이들 부류는 또한 각각 α, δ, ε, γ, 및 μ로 지정된다. IgG 및 IgA 부류는 서열 및 기능의 차이에 기초하여 하위부류로 더 나누어진다. 인간은 하기 하위부류를 발현한다: IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA1, 및 IgA2.

CDR의 아미노산 서열 경계는 각각 그 전문이 참조로 포함되는 카바트 등, 상기 문헌 ("카바트" 넘버링 방식); 문헌 [Al-Lazikani et al., 1997, J. Mol. Biol., 273:927-948] ("코티아" 넘버링 방식); [MacCallum et al., 1996, J. Mol. Biol. 262:732-745] ("콘택트 (Contact)" 넘버링 방식); 문헌 [Lefranc et al., Dev. Comp. Immunol., 2003, 27:55-77] ("IMGT" 넘버링 방식); 및 문헌 [Honegge and Plueckthun, J. Mol. Biol., 2001, 309:657-70] ("AHo" 넘버링 방식)에 의해 기재된 것들을 비롯한, 다수의 공지된 넘버링 방식 중 임의의 것을 사용하여 관련 기술분야의 통상의 기술자에 의해 결정될 수 있다.

표 1은 카바트 및 코티아 방식에 의해 확인된 바와 같은 CDR-L1, CDR-L2, CDR-L3, CDR-H1, CDR-H2, 및 CDR-H3의 위치를 제공한다. CDR-H1에 대해, 잔기 넘버링은 카바트 및 코티아 넘버링 방식 둘 다를 사용하여 제공된다.

CDR은 예를 들어, 항체 넘버링 소프트웨어, 예컨대 www.bioinf.org.uk/abs/abnum/에서 이용가능하고, 그 전문이 참조로 포함되는 문헌 [Abhinandan and Martin, Immunology, 2008, 45:3832-3839]에 기재된 앱넘 (Abnum)을 사용하여 할당될 수 있다.

<표 1>

카바트 및 코티아 넘버링 방식에 따른 CDR에서의 잔기.

^* CDR-H1의 C-말단은, 카바트 넘버링 관례를 사용하여 넘버링되는 경우, CDR의 길이에 따라 H32 내지 H34로 다양하다.

"EU 넘버링 방식"은 일반적으로 항체 중쇄 불변 영역에서의 잔기를 지칭하는 경우 사용된다 (예를 들어, 카바트 등, 상기 문헌에 보고된 바와 같음). 달리 언급되지 않는다면, EU 넘버링 방식은 본원에 기재된 항체 중쇄 불변 영역에서의 잔기를 지칭하는 데 사용된다.

"항체 단편" 또는 "항원-결합 단편"은 무손상 항체의 부분, 예컨대 무손상 항체의 항원-결합 또는 가변 영역을 포함한다. 항체 단편으로는 예를 들어, Fv 단편, Fab 단편, F(ab')₂ 단편, Fab' 단편, scFv (sFv) 단편, 및 scFv-Fc 단편을 들 수 있다.

"Fv" 단편은 1개의 중쇄 가변 도메인 및 1개의 경쇄 가변 도메인의 비-공유적으로-연결된 이량체를 포함한다.

"Fab" 단편은 중쇄 및 경쇄 가변 도메인 외에도, 경쇄의 불변 도메인 및 중쇄의 제1 불변 도메인 (C_H1)을 포함한다. Fab 단편은 예를 들어, 재조합 방법에 의해 또는 전장 항체의 파파인 소화에 의해 생성될 수 있다.

"F(ab')₂" 단편은 힌지 영역 부근에 디술피드 결합에 의해 연결된 2개의 Fab' 단편을 함유한다. F(ab')₂ 단편은 예를 들어, 재조합 방법에 의해 또는 무손상 항체의 펩신 소화에 의해 생성될 수 있다. F(ab') 단편은 예를 들어, β-머캅토에탄올로의 처리에 의해 해리될 수 있다.

"단일-쇄 Fv" 또는 "sFv" 또는 "scFv" 항체 단편은 단일 폴리펩티드 쇄에 V_H 도메인 및 V_L 도메인을 포함한다. V_H 및 V_L은 일반적으로 펩티드 링커에 의해 연결된다. 문헌 [Plueckthun A. (1994)]을 참조한다. 임의의 적합한 링커가 사용될 수 있다. 일부 실시양태에서, 링커는 (GGGGS)_n(서열식별번호: 140)이다. 일부 실시양태에서, n = 1, 2, 3, 4, 5, 또는 6이다. 그 전문이 참조로 포함되는 문헌 [Antibodies from Escherichia coli. In Rosenberg M. & Moore G.P. (Eds.), The Pharmacology of Monoclonal Antibodies vol. 113 (pp. 269-315). Springer-Verlag, New York]을 참조한다.

"scFv-Fc" 단편은 Fc 도메인에 부착된 scFv를 포함한다. 예를 들어, Fc 도메인은 scFv의 C-말단에 부착될 수 있다. Fc 도메인은 scFv에서의 가변 도메인의 배향 (즉, V_H -V_L 또는 V_L -V_H)에 따라 V_H 또는 V_L을 따를 수 있다. 관련 기술분야에 공지되거나 본원에 기재된 임의의 적합한 Fc 도메인이 사용될 수 있다. 일부의 경우, Fc 도메인은 IgG4 Fc 도메인을 포함한다.

용어 "단일 도메인 항체"는 항체의 하나의 가변 도메인이 다른 가변 도메인의 존재 없이 항원에 특이적으로 결합하는 분자를 지칭한다. 단일 도메인 항체, 및 그의 단편은 문헌 [Arabi Ghahroudi et al., FEBS Letters, 1998, 414:521-526] 및 [Muyldermans et al., Trends in Biochem. Sci., 2001, 26:230-245]에 기재되어 있으며, 이들의 각각은 그 전문이 참조로 포함된다. 단일 도메인 항체는 또한 sdAb 또는 나노바디로 공지되어 있다.

용어 "모노클로날 항체"는 실질적으로 동종 항체의 집단으로부터의 항체를 지칭한다. 실질적으로 동종 항체의 집단은 모노클로날 항체의 생산 동안 정상적으로 발생할 수 있는 변이체를 제외하고는, 실질적으로 유사하고, 동일한 에피토프(들)에 결합하는 항체를 포함한다. 이러한 변이체는 일반적으로 단지 소량으로 존재한다. 모노클로날 항체는 전형적으로 복수의 항체로부터의 단일 항체의 선별을 포함하는 공정에 의해 얻어진다. 예를 들어, 선별 공정은 복수의 클론, 예컨대 하이브리도마 클론, 파지 클론, 효모 클론, 박테리아 클론, 또는 다른 재조합 DNA 클론의 풀로부터의 고유한 클론의 선별일 수 있다. 선별된 항체는 예를 들어, 표적에 대한 친화도를 개선시키도록 ("친화도 성숙"), 항체를 인간화하도록, 세포 배양에서의 그의 생산을 개선시키도록, 및/또는 대상체에서의 그의 면역원성을 감소시키도록 추가로 변경될 수 있다.

용어 "키메라 항체"는 중쇄 및/또는 경쇄의 부분이 특정 공급원 또는 종으로부터 유래된 반면, 중쇄 및/또는 경쇄의 나머지는 상이한 공급원 또는 종으로부터 유래된 항체를 지칭한다.

비-인간 항체의 "인간화" 형태는 비-인간 항체로부터 유래된 최소 서열을 함유하는 키메라 항체이다. 인간화 항체는 일반적으로 1개 이상의 CDR로부터의 잔기가 비-인간 항체 (공여자 항체)의 1개 이상의 CDR로부터의 잔기에 의해 대체된 인간 항체 (수용자 항체)이다. 공여자 항체는 바람직한 특이성, 친화도, 또는 생물학적 효과를 갖는 임의의 적합한 비-인간 항체, 예컨대 마우스, 래트, 토끼, 닭, 또는 비-인간 영장류 항체일 수 있다. 일부 예에서, 수용자 항체의 선택된 프레임워크 영역 잔기는 공여자 항체로부터의 상응하는 프레임워크 영역 잔기에 의해 대체된다. 인간화 항체는 또한 수용자 항체 또는 공여자 항체 중 어느 하나에서 발견되지 않는 잔기를 포함할 수 있다. 이러한 변형은 항체 기능을 추가로 개량하도록 이루어질 수 있다. 추가의 상세사항에 대해서는, 문헌 [Jones et al., Nature, 1986, 321:522-525]; [Riechmann et al., Nature, 1988, 332:323-329]; 및 [Presta, Curr. Op. Struct. Biol., 1992, 2:593-596]을 참조하며, 이들의 각각은 그 전문이 참조로 포함된다.

"인간 항체"는 인간 또는 인간 세포에 의해 생산된 항체의 그것에 상응하는 아미노산 서열을 소유하거나, 인간 항체 레퍼토리 또는 인간 항체-코딩 서열을 이용하는 비-인간 공급원으로부터 유래된 (예를 들어, 인간 공급원으로부터 얻어지거나, 데 노보 설계된) 것이다. 인간 항체는 구체적으로 인간화 항체를 배제한다.

"SEC10"은 베바시주맙을 갖거나 갖지 않는, 고형 종양의 치료에 대해 이전에 임상 시험에서 항-NRP-1 항체를 의미한다. 예를 들어, 문헌 ["A Study of MNRP1685A in Patients with Locally Advanced or Metastatic Solid Tumors," clinicaltrials.gov Identifier NCT00747734]을 참조한다.

"SEC3"은 또한 예를 들어, 문헌 [Appleton, et al., The EMBO Journal (2007) 26, 4902-4912]에 기재된 서열식별번호: 144에 제시된 pan-항-NRP-1 항체를 의미한다.

"MAB59941"은 R&D 시스템즈 (R&D Systems), 클론 # 761704로부터 이용가능한 항-마우스 뉴로필린-1 항체를 의미한다.

"단리된 ABP" 또는 "단리된 핵산"은 그의 천연 환경의 성분으로부터 분리되고/거나 회수된 ABP 또는 핵산이다. 천연 환경의 성분은 효소, 호르몬, 및 다른 단백질성 또는 비단백질성 물질을 포함할 수 있다. 일부 실시양태에서, 단리된 ABP는 예를 들어 스피닝 컵 서열분석기의 사용에 의해 N-말단 또는 내부 아미노산 서열의 적어도 15개의 잔기를 얻는 데 충분한 정도로 정제된다. 일부 실시양태에서, 단리된 ABP는 쿠마시 (Coomassie) 블루 또는 은 염색에 의한 검출로, 환원 또는 비환원 조건 하에서 겔 전기영동 (예를 들어, SDS-PAGE)에 의해 균질성까지 정제된다. 일부 실시양태에서, 단리된 ABP는 ABP의 천연 환경의 적어도 하나의 성분이 존재하지 않기 때문에, 재조합 세포 내의 계내의 ABP를 포함할 수 있다. 일부 측면에서, 단리된 ABP 또는 단리된 핵산은 적어도 하나의 정제 단계에 의해 제조된다. 일부 실시양태에서, 단리된 ABP 또는 단리된 핵산은 적어도 80 중량％, 85 중량％, 90 중량％, 95 중량％, 또는 99 중량％까지 정제된다. 일부 실시양태에서, 단리된 ABP 또는 단리된 핵산은 적어도 80 부피％, 85 부피％, 90 부피％, 95 부피％, 또는 99 부피％까지 정제된다. 일부 실시양태에서, 단리된 ABP 또는 단리된 핵산은 적어도 85 중량％, 90 중량％, 95 중량％, 98 중량％, 99 중량％ 내지 100 중량％ ABP 또는 핵산을 포함하는 용액으로서 제공된다. 일부 실시양태에서, 단리된 ABP 또는 단리된 핵산은 적어도 85 부피％, 90 부피％, 95 부피％, 98 부피％, 99 부피％ 내지 100 부피％ ABP 또는 핵산을 포함하는 용액으로서 제공된다.

"친화도"는 분자 (예를 들어, ABP) 및 그의 결합 상대 (예를 들어, 항원 또는 에피토프)의 단일 결합 부위 사이의 비-공유 상호작용의 총 합의 강도를 지칭한다. 달리 지시되지 않는다면, 본원에 사용된 바와 같은 "친화도"는 결합 쌍의 구성원 (예를 들어, ABP 및 항원 또는 에피토프) 사이의 1:1 상호작용을 반영하는 내재적 결합 친화도를 지칭한다. 분자 X의 그의 상대 Y에 대한 친화도는 해리 평형 상수 (K_D)에 의해 나타내어질 수 있다. 해리 평형 상수에 기여하는 동역학 성분은 하기에 보다 상세하게 기재된다. 친화도는 본원에 기재된 것들을 비롯한 관련 기술분야에 공지된 통상적인 방법, 예컨대 표면 플라스몬 공명 (SPR) 기술 (예를 들어, 비아코어 (BIACORE)^®) 또는 생물층 간섭측정 (예를 들어, 포르테바이오 (FORTEBIO)^®)에 의해 측정될 수 있다.

표적 분자에의 ABP의 결합에 관하여, 용어 특정 항원 (예를 들어, 폴리펩티드 표적) 또는 특정 항원 상의 에피토프에 "결합하다", "특이적 결합", "특이적으로 결합하다", "특이적인", "선택적으로 결합하다", 및 "선택적인"은 비-특이적 또는 비-선택적 상호작용과는 (예를 들어, 비-표적 분자와는) 측정가능하게 상이한 결합을 의미한다. 특이적 결합은 예를 들어, 표적 분자에의 결합을 측정하고, 이를 비-표적 분자에의 결합과 비교함으로써 측정될 수 있다. 특이적 결합은 또한 표적 분자 상에 인식된 에피토프를 모방하는 대조군 분자와의 경쟁에 의해 측정될 수 있다. 그 경우, 특이적 결합은 표적 분자에의 ABP의 결합이 대조군 분자에 의해 경쟁적으로 억제되는 경우 지시된다. 일부 측면에서, 비-표적 분자에 대한 NRP-1 ABP의 친화도는 NRP-1에 대한 친화도의 약 50％ 미만이다. 일부 측면에서, 비-표적 분자에 대한 NRP-1 ABP의 친화도는 NRP-1에 대한 친화도의 약 40％ 미만이다. 일부 측면에서, 비-표적 분자에 대한 NRP-1 ABP의 친화도는 NRP-1에 대한 친화도의 약 30％ 미만이다. 일부 측면에서, 비-표적 분자에 대한 NRP-1 ABP의 친화도는 NRP-1에 대한 친화도의 약 20％ 미만이다. 일부 측면에서, 비-표적 분자에 대한 NRP-1 ABP의 친화도는 NRP-1에 대한 친화도의 약 10％ 미만이다. 일부 측면에서, 비-표적 분자에 대한 NRP-1 ABP의 친화도는 NRP-1에 대한 친화도의 약 1％ 미만이다. 일부 측면에서, 비-표적 분자에 대한 NRP-1 ABP의 친화도는 NRP-1에 대한 친화도의 약 0.1％ 미만이다.

본원에 사용된 바와 같은 용어 "k_d" (sec^-1)는 특정 ABP-항원 상호작용의 해리 속도 상수를 지칭한다. 이 값은 또한 k_off 값으로 지칭된다.

본원에 사용된 바와 같은 용어 "k_a" (M^-1×sec^-1)는 특정 ABP-항원 상호작용의 회합 속도 상수를 지칭한다. 이 값은 또한 k_on 값으로 지칭된다.

본원에 사용된 바와 같은 용어 "K_D" (M)는 특정 ABP-항원 상호작용의 해리 평형 상수를 지칭한다. K_D = k_d/k_a. 일부 실시양태에서, ABP의 친화도는 이러한 ABP 및 그의 항원 사이의 상호작용에 대한 K_D의 관점에서 기재된다. 명확성을 위해, 관련 기술분야에 공지된 바와 같이, 보다 작은 K_D 값은 보다 높은 친화도 상호작용을 지시하는 반면, 보다 큰 K_D 값은 보다 낮은 친화도 상호작용을 지시한다.

본원에 사용된 바와 같은 용어 "K_A" (M^-1)는 특정 ABP-항원 상호작용의 회합 평형 상수를 지칭한다. K_A = k_a/k_d.

"친화도 성숙된" ABP는 변경(들)을 소유하지 않는 모 ABP에 비해 그의 항원에 대한 ABP의 친화도의 개선을 발생시키는, 모 ABP (즉, 변경된 ABP가 유래되거나 설계되는 ABP)에 비해 1개 이상의 변경 (예를 들어, 1개 이상의 CDR 또는 FR에서)을 갖는 ABP이다. 일부 실시양태에서, 친화도 성숙된 ABP는 표적 항원에 대해 나노몰 또는 피코몰 친화도를 갖는다. 친화도 성숙된 ABP는 관련 기술분야에 공지된 다양한 방법을 사용하여 제조될 수 있다. 예를 들어, 막스 (Marks) 등 (Bio/Technology, 1992, 10:779-783, 그 전문이 참조로 포함됨)은 V_H 및 V_L 도메인 셔플링에 의한 친화도 성숙을 기재한다. CDR 및/또는 프레임워크 잔기의 무작위 돌연변이유발은 예를 들어, 문헌 [Barbas et al. (Proc. Nat. Acad. Sci. U.S.A., 1994, 91:3809-3813)]; [Schier et al., Gene, 1995, 169:147-155]; [Yelton et al., J. Immunol., 1995, 155:1994-2004]; [Jackson et al., J. Immunol., 1995, 154:3310-33199]; 및 [Hawkins et al., J. Mol. Biol., 1992, 226:889-896]에 의해 기재되어 있으며; 이들의 각각은 그 전문이 참조로 포함된다.

"면역접합체"는 1개 이상의 이종 분자(들), 예컨대 치료제 또는 진단제에 접합된 ABP이다.

"이펙터 기능"은 활성이 항체 이소형에 따라 다양할 수 있는, 항체의 Fc 영역에 의해 매개되는 생물학적 활성을 지칭한다. 항체 이펙터 기능의 예로는 보체 의존적 세포독성 (CDC)을 활성화시키는 C1q 결합, 항체-의존적 세포성 세포독성 (ADCC), 및 항체 의존적 세포성 포식작용 (ADCP)을 활성화시키는 Fc 수용체 결합을 들 수 있다.

2개 이상의 ABP의 맥락에서 본원에 사용되는 경우, 용어 "과 경쟁하다" 또는 "과 교차-경쟁하다"는 2개 이상의 ABP가 항원 (예를 들어, NRP-1)에의 결합에 대해 경쟁하는 것을 지시한다. 한 예시적인 검정에서, NRP-1을 표면 상에 코팅하고, 제1 NRP-1 ABP와 접촉시키고, 그 후, 제2 NRP-1 ABP를 첨가한다. 또 다른 예시적인 검정에서, 제1 NRP-1 ABP를 표면 상에 코팅하고, NRP-1과 접촉시킨 후, 제2 NRP-1 ABP를 첨가한다. 제1 NRP-1 ABP의 존재가 제2 NRP-1 ABP의 결합을 감소시키는 경우, 모든 검정에서, ABP는 서로 경쟁한다. 용어 "과 경쟁하다"는 또한 한 ABP가 또 다른 ABP의 결합을 감소시키지만, ABP가 역순으로 첨가되는 경우 경쟁이 관찰되지 않는 ABP의 조합을 포함한다. 그러나, 일부 실시양태에서, 제1 및 제2 ABP는 그들이 첨가되는 순서와 무관하게 서로의 결합을 억제한다. 일부 실시양태에서, 한 ABP는 그의 항원에의 또 다른 ABP의 결합을 적어도 25％, 적어도 50％, 적어도 60％, 적어도 70％, 적어도 80％, 적어도 85％, 적어도 90％, 또는 적어도 95％ 감소시킨다. 통상의 기술자는 NRP-1에 대한 ABP의 친화도 및 ABP의 결합가에 기초하여 경쟁 검정에서 사용되는 항체의 농도를 선택할 수 있다. 이 정의에 기재된 검정은 예시적이며, 통상의 기술자는 항체가 서로 경쟁하는 지를 측정하기 위한 임의의 적합한 검정을 이용할 수 있다. 적합한 검정은 예를 들어, 문헌 [Cox et al., "Immunoassay Methods," in Assay Guidance Manual [Internet], Updated December 24, 2014 (www.ncbi.nlm.nih.gov/books/NBK92434/; accessed September 29, 2015)]; [Silman et al., Cytometry, 2001, 44:30-37]; 및 [Finco et al., J. Pharm. Biomed. Anal., 2011, 54:351-358]에 기재되어 있으며; 이들의 각각은 그 전문이 참조로 포함된다.

용어 "에피토프"는 ABP에 특이적으로 결합하는 항원의 부분을 의미한다. 에피토프는 빈번히 표면-접근가능한 아미노산 잔기 및/또는 당 측쇄로 이루어지며, 특이적 3차원 구조적 특징, 뿐만 아니라 특이적 전하 특징을 가질 수 있다. 형태적 및 비-형태적 에피토프는 후자는 그렇지 않지만 전자에의 결합은 변성 용매의 존재 하에서 소실될 수 있다는 점에서 구별된다. 에피토프는 결합에 직접적으로 관여하는 아미노산 잔기, 및 결합에 직접적으로 관여하지 않는 다른 아미노산 잔기를 포함할 수 있다. ABP가 결합하는 에피토프는 에피토프 결정을 위한 공지된 기법, 예컨대, 예를 들어, 상이한 점-돌연변이를 갖는 NRP-1 변이체에의, 또는 키메라 NRP-1 변이체에의 ABP 결합에 대한 시험을 사용하여 결정될 수 있다.

폴리펩티드 서열 및 참조 서열 사이의 퍼센트 "동일성"은 서열을 정렬하고, 필요할 경우 갭을 도입하여 최대 퍼센트 서열 동일성을 달성한 후, 참조 서열에서의 아미노산 잔기와 동일한 폴리펩티드 서열에서의 아미노산 잔기의 백분율로서 정의된다. 퍼센트 아미노산 서열 동일성을 측정하는 목적을 위한 정렬은 관련 기술분야의 기술 내에 있는 다양한 방법으로, 예를 들어, 공개적으로 이용가능한 컴퓨터 소프트웨어, 예컨대 BLAST, BLAST-2, ALIGN, MEGALIGN (DNASTAR), CLUSTALW, CLUSTAL OMEGA, 또는 MUSCLE 소프트웨어를 사용하여 달성될 수 있다. 관련 기술분야의 통상의 기술자는 비교되는 서열의 전장에 걸쳐 최대 정렬을 달성하는 데 필요한 임의의 알고리듬을 비롯한, 서열을 정렬하기 위한 적절한 파라미터를 결정할 수 있다.

"보존적 치환" 또는 "보존적 아미노산 치환"은 화학적으로 또는 기능적으로 유사한 아미노산으로의 아미노산의 치환을 지칭한다. 유사한 아미노산을 제공하는 보존적 치환 표는 관련 기술분야에 널리 공지되어 있다. 예로서, 표 2 내지 4에서 제공된 아미노산의 군은 일부 실시양태에서, 서로에 대해 보존적 치환으로 간주된다.

<표 2>

특정 실시양태에서, 서로에 대해 보존적 치환으로 간주되는 아미노산의 선택된 군.

<표 3>

특정 실시양태에서, 서로에 대해 보존적 치환으로 간주되는 아미노산의 추가의 선택된 군.

<표 4>

추가의 보존적 치환은 예를 들어, 문헌 [Creighton, Proteins: Structures and Molecular Properties 2nd ed. (1993) W. H. Freeman & Co., New York, NY]에서 발견될 수 있다. 모 ABP에서 아미노산 잔기의 1개 이상의 보존적 치환을 생성함으로써 생성된 ABP는 "보존적으로 변형된 변이체"로 지칭된다.

용어 "아미노산"은 20개의 통상적인 천연 발생 아미노산을 지칭한다. 천연 발생 아미노산은 알라닌 (Ala; A), 아르기닌 (Arg; R), 아스파라긴 (Asn; N), 아스파르트산 (Asp; D), 시스테인 (Cys; C); 글루탐산 (Glu; E), 글루타민 (Gln; Q), 글리신 (Gly; G); 히스티딘 (His; H), 이소류신 (Ile; I), 류신 (Leu; L), 리신 (Lys; K), 메티오닌 (Met; M), 페닐알라닌 (Phe; F), 프롤린 (Pro; P), 세린 (Ser; S), 트레오닌 (Thr; T), 트립토판 (Trp; W), 티로신 (Tyr; Y), 및 발린 (Val; V)을 포함한다.

본원에 사용된 바와 같은 용어 "벡터"는 그것이 연결되는 또 다른 핵산을 증식시킬 수 있는 핵산 분자를 지칭한다. 상기 용어는 자기-복제 핵산 구조로서의 벡터 뿐만 아니라 그것이 도입된 숙주 세포의 게놈 내로 혼입된 벡터를 포함한다. 특정 벡터는 그들이 작동적으로 연결되는 핵산의 발현을 지정할 수 있다. 이러한 벡터는 본원에서 "발현 벡터"로 지칭된다.

용어 "숙주 세포", "숙주 세포주", 및 "숙주 세포 배양물"은 상호교환가능하게 사용되며, 외인성 핵산이 도입된 세포, 및 이러한 세포의 자손을 지칭한다. 숙주 세포는 "형질전환체" (또는 "형질전환된 세포") 및 "형질감염체" (또는 "형질감염된 세포")를 포함하며, 이들은 각각 1차 형질전환된 또는 형질감염된 세포 및 그로부터 유래된 자손을 포함한다. 이러한 자손은 모 세포와 핵산 함량에 있어서 완전히 동일하지 않을 수 있으며, 돌연변이를 함유할 수 있다.

용어 "치료하는" (및 그의 변형어, 예컨대 "치료하다" 또는 "치료")은 이를 필요로 하는 대상체에서 질환 또는 상태의 자연적 과정을 변경시키려는 시도에서의 임상적 개입을 지칭한다. 치료는 예방을 위해 및 임상적 병리학의 과정 동안 둘 다 수행될 수 있다. 치료의 바람직한 효과는 질환의 발생 또는 재발의 예방, 증상의 경감, 질환의 임의의 직접적 또는 간접적 병리학적 결과의 감소, 전이의 예방, 질환 진행의 속도의 감소, 질환 상태의 개선 또는 호전, 및 완화 또는 개선된 예후를 포함한다.

본원에 사용된 바와 같은 용어 "치료 유효량" 또는 "유효량"은 대상체에게 투여되는 경우 질환 또는 상태를 치료하는 데 유효한 본원에서 제공된 ABP 또는 제약 조성물의 양을 지칭한다.

본원에 사용된 바와 같은 용어 "대상체"는 포유동물 대상체를 의미한다. 예시적인 대상체로는 인간, 원숭이, 개, 고양이, 마우스, 래트, 소, 말, 낙타, 염소, 토끼, 및 양을 들 수 있다. 특정 실시양태에서, 대상체는 인간이다. 일부 실시양태에서, 대상체는 본원에서 제공된 ABP로 치료될 수 있는 질환 또는 상태를 갖는다. 일부 측면에서, 질환 또는 상태는 암이다. 일부 측면에서, 질환 또는 상태는 바이러스 감염이다.

용어 "패키지 삽입물"은 이러한 치료 또는 진단 생성물의 사용에 관한 적응증, 용법, 투여량, 투여, 조합 요법, 금기 및/또는 경고에 대한 정보를 함유하는 치료 또는 진단 생성물의 상업적 패키지 (예를 들어, 키트)에 통상적으로 포함되는 지침서를 지칭하기 위해 사용된다.

본원에 사용된 바와 같은 용어 "세포독성제"는 세포 기능을 억제하거나 방지하고/거나, 세포 사멸 또는 파괴를 유발하는 물질을 지칭한다.

"화학치료제"는 암의 치료에 유용한 화학 화합물을 지칭한다. 화학치료제는 암의 성장을 촉진시킬 수 있는 호르몬의 효과를 조절하거나, 감소시키거나, 차단하거나, 억제하도록 작용하는 "항-호르몬제" 또는 "내분비 치료제"를 포함한다.

용어 "세포정지제"는 세포의 성장을 시험과내에서 또는 생체내에서 정지시키는 화합물 또는 조성물을 지칭한다. 일부 실시양태에서, 세포정지제는 S기의 세포의 백분율을 감소시키는 작용제이다. 일부 실시양태에서, 세포정지제는 S기에서의 세포의 백분율을 적어도 약 20％, 적어도 약 40％, 적어도 약 60％, 또는 적어도 약 80％ 감소시킨다.

용어 "종양"은 악성이든 양성이든 모든 신생물성 세포 성장 및 증식, 및 모든 전암성 및 암성 세포 및 조직을 지칭한다. 용어 "암", "암성", "세포 증식성 장애", "증식성 장애" 및 "종양"은 본원에서 지칭되는 바와 같이 상호 배타적이지 않다. 용어 "세포 증식성 장애" 및 "증식성 장애"는 일부 정도의 비정상적 세포 증식과 연관된 장애를 지칭한다. 일부 실시양태에서, 세포 증식성 장애는 암이다. 일부 측면에서, 종양은 고형 종양이다. 일부 측면에서, 종양은 혈액 악성종양이다.

용어 "제약 조성물"은 그에 함유된 활성 성분의 생물학적 활성을 대상체를 치료하는 데 유효하도록 허용하도록 하는 형태이며, 제약 조성물에 제공되는 양으로 대상체에게 비허용가능하게 독성인 추가의 성분을 함유하지 않는 제제를 지칭한다.

용어 "조정하다" 및 "조정"은 인용된 변수를 감소시키거나 억제하거나, 대안적으로, 활성화시키거나 증가시키는 것을 지칭한다.

용어 "증가시키다" 및 "활성화시키다"는 인용된 변수의 10％, 20％, 30％, 40％, 50％, 60％, 70％, 75％, 80％, 85％, 90％, 95％, 100％, 2배, 3배, 4배, 5배, 10배, 20배, 50배, 100배 이상의 증가를 지칭한다.

용어 "감소시키다" 및 "억제하다"는 인용된 변수의 10％, 20％, 30％, 40％, 50％, 60％, 70％, 75％, 80％, 85％, 90％, 95％, 2배, 3배, 4배, 5배, 10배, 20배, 50배, 100배 이상의 감소를 지칭한다.

용어 "효능작용하다"는 수용체의 활성화와 연관된 생물학적 반응을 유도하는 수용체 신호화의 활성화를 지칭한다. "효능제"는 수용체에 결합하고 이를 효능작용하는 실체이다.

용어 "길항작용하다"는 수용체의 활성화와 연관된 생물학적 반응을 억제하는 수용체 신호화의 억제를 지칭한다. "길항제"는 수용체에 결합하고 이를 길항작용하는 실체이다. 길항제는 한 실시양태에서 그의 수용체에의 리간드의 결합을 100％ 차단하고; 다른 실시양태에서, 길항제는 그의 수용체에의 리간드의 결합의 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 또는 100％만큼 결합을 감소시킬 수 있다.

Treg의 NRP-1:세마포린 축의 효능제와 관련하여 본원에 사용된 바와 같은 용어 "세마포린 분자"는 Treg의 기능을 향상시키거나 안정성을 증가시키는 데 사용될 수 있는 Treg 상의 NRP-1과의 상호작용에 관여하는 막횡단 세마포린 분자 (예를 들어, Sema3a, Sema4a), 이러한 분자의 다양한 표면- 및 비드-고정화된 버전, 뿐만 아니라 이러한 분자의 다량체, 유도체, 돌연변이체, 유사체, 및 단편을 포괄한다. 이러한 효능제 세마포린 분자의 비-제한적 예로는 예를 들어, NRP-1을 가교하는, 보체를 고정시킬 수 없는 다량체성 복합체를 어셈블리하는 IgM-유래된 세마포린 융합 단백질을 들 수 있다.

본원에 사용된 바와 같은 용어 "조절성 T 세포 (Treg)의 뉴로필린-1 (NRP-1):세마포린 축"은 세마포린 (예를 들어, 세포, 예컨대, 예를 들어, 통상적인 T 세포에 의해 발현되는 세마포린, 또는 재조합 세마포린)에 의해 개시되는 신호화 경로, NRP-1의 라이게이션, 및 후속의 하류 신호화를 지칭한다.

용어 "이펙터 T 세포"는 T 헬퍼 (즉, CD4+) 세포 및 세포독성 (즉, CD8+) T 세포를 포함한다. CD4+ 이펙터 T 세포는 B 세포의 형질 세포 및 기억 B 세포로의 성숙, 및 세포독성 T 세포 및 대식세포의 활성화를 비롯한 몇몇 면역학적 프로세스의 발달에 기여한다. CD8+ 이펙터 T 세포는 바이러스-감염된 세포 및 종양 세포를 파괴한다. 이펙터 T 세포에 대한 추가의 정보에 대해서는, 그 전문이 참조로 포함되는 문헌 [Seder and Ahmed, Nature Immunol., 2003, 4:835-842]을 참조한다.

용어 "조절성 T 세포"는 예를 들어, 이펙터 T 세포를 억제함으로써 면역학적 내성을 조절하는 세포를 포함한다. 일부 측면에서, 조절성 T 세포는 CD4+CD25+Foxp3+ 표현형을 갖는다. 일부 측면에서, 조절성 T 세포는 CD8+CD25+ 표현형을 갖는다. NRP-1을 발현하는 조절성 T 세포에 대한 추가의 정보에 대해서는, 그 전문이 참조로 포함되는 문헌 [Nocentini et al., Br. J. Pharmacol., 2012, 165:2089-2099]을 참조한다.

용어 "수지상 세포"는 나이브 T 세포를 활성화시키고, B 세포의 성장 및 분화를 자극할 수 있는 전문적인 항원-제시 세포를 지칭한다.

2. NRP-1 항원-결합 단백질

2.1 NRP-1 결합 및 표적 세포

NRP-1에 특이적으로 결합하는 ABP가 본원에서 제공된다. 일부 측면에서, NRP-1은 hNRP-1 (서열식별번호: 130)이다. 일부 측면에서, NRP-1은 cNRP-1 (서열식별번호: 132)이다. 일부 측면에서, NRP-1은 서열식별번호: 134에 제공된 서열을 갖는 mNRP-1이다. 일부 측면에서, NRP-1은 서열식별번호: 135에 제공된 서열을 갖는 rNRP-1이다.

일부 실시양태에서, 본원에서 제공된 ABP는 NRP-1의 세포외 도메인에 특이적으로 결합한다.

일부 실시양태에서, 본원에서 제공된 ABP는 NRP-1의 세포외 도메인 및 PD-1, PD-L1, 또는 PD-L2의 세포외 도메인에 특이적으로 결합하며, 즉, 이중특이적 항체이다.

일부 실시양태에서, 본원에서 제공된 ABP는 항체이다. 일부 실시양태에서, 본원에서 제공된 ABP는 항체 단편이다. 일부 실시양태에서, 본원에서 제공된 ABP는 대체 스캐폴드이다.

NRP-1은 임의의 적합한 표적 세포의 표면 상에 발현될 수 있다. 일부 실시양태에서, 표적 세포는 T 세포이다. 일부 실시양태에서, 표적 세포는 이펙터 T 세포이다. 일부 실시양태에서, 표적 세포는 조절성 T 세포이다. 일부 실시양태에서, 표적 세포는 자연 살해 (NK) 세포이다. 일부 실시양태에서, 표적 세포는 자연 살해 T (NKT) 세포이다. 일부 실시양태에서, 표적 세포는 대식세포이다. 다른 실시양태에서, 표적 세포는 수지상 세포이다. 한 실시양태에서, 수지상 세포는 형질세포양 수지상 세포이다.

일부 실시양태에서, NRP-1은 세포의 표면 상의 또 다른 수용체와 회합된다. 일부 실시양태에서, NRP-1은 공-수용체 복합체의 부분이다. 한 실시양태에서, NRP-1은 플렉신과 회합된다. 일부 실시양태에서, NRP-1은 VEGF 수용체와 회합된다.

일부 실시양태에서, 본원에서 제공된 ABP는 이뮤노글로불린 분자를 포함한다. 일부 실시양태에서, 본원에서 제공된 ABP는 이뮤노글로불린 분자로 이루어진다. 일부 실시양태에서, 본원에서 제공된 ABP는 이뮤노글로불린 분자로 본질적으로 이루어진다. 일부 측면에서, 이뮤노글로불린 분자는 항체를 포함한다. 일부 측면에서, 이뮤노글로불린 분자는 항체로 이루어진다. 일부 측면에서, 이뮤노글로불린 분자는 항체로 본질적으로 이루어진다.

일부 실시양태에서, 본원에서 제공된 ABP는 경쇄를 포함한다. 일부 측면에서, 경쇄는 카파 경쇄이다. 일부 측면에서, 경쇄는 람다 경쇄이다.

일부 실시양태에서, 본원에서 제공된 ABP는 중쇄를 포함한다. 일부 측면에서, 중쇄는 IgA이다. 일부 측면에서, 중쇄는 IgD이다. 일부 측면에서, 중쇄는 IgE이다. 일부 측면에서, 중쇄는 IgG이다. 일부 측면에서, 중쇄는 IgM이다. 일부 측면에서, 중쇄는 IgG1이다. 일부 측면에서, 중쇄는 IgG2이다. 일부 측면에서, 중쇄는 IgG3이다. 일부 측면에서, 중쇄는 IgG4이다. 일부 측면에서, 중쇄는 IgA1이다. 일부 측면에서, 중쇄는 IgA2이다.

일부 실시양태에서, 본원에서 제공된 ABP는 항체 단편을 포함한다. 일부 실시양태에서, 본원에서 제공된 ABP는 항체 단편으로 이루어진다. 일부 실시양태에서, 본원에서 제공된 ABP는 항체 단편으로 본질적으로 이루어진다. 일부 측면에서, 항체 단편은 Fv 단편이다. 일부 측면에서, 항체 단편은 Fab 단편이다. 일부 측면에서, 항체 단편은 F(ab')₂ 단편이다. 일부 측면에서, 항체 단편은 Fab' 단편이다. 일부 측면에서, 항체 단편은 scFv (sFv) 단편이다. 일부 측면에서, 항체 단편은 scFv-Fc 단편이다. 일부 측면에서, 항체 단편은 단일 도메인 항체의 단편이다.

일부 실시양태에서, 본원에서 제공된 항체 단편은 본원에서 제공된 예시적인 항체로부터 유래된다. 일부 실시양태에서, 본원에서 제공된 항체 단편은 본원에서 제공된 예시적인 항체로부터 유래되지 않으며, 예를 들어, 항체 단편을 얻기 위한 본원에서 제공된 방법에 따라 데 노보 단리될 수 있다.

일부 실시양태에서, 제공된 항체 단편은 hNRP-1에 특이적으로 결합한다. 일부 실시양태에서, 본원에서 제공된 항체 단편은 cNRP-1에 특이적으로 결합한다. 일부 실시양태에서, 본원에서 제공된 항체 단편은 mNRP-1에 특이적으로 결합한다. 일부 실시양태에서, 본원에서 제공된 항체 단편은 hNRP-1 및 cNRP-1에 특이적으로 결합한다. 일부 실시양태에서, 본원에서 제공된 항체 단편은 hNRP-1 및 mNRP-1에 특이적으로 결합한다. 일부 실시양태에서, 본원에서 제공된 항체 단편은 cNRP-1 및 mNRP-1에 특이적으로 결합한다. 일부 실시양태에서, 본원에서 제공된 항체 단편은 hNRP-1, cNRP-1 및 mNRP-1에 특이적으로 결합한다.

일부 실시양태에서, 본원에서 제공된 항체 단편은 본원에 기재된 1종 이상의 검정 또는 생물학적 효과에 의해 측정된 바와 같이, NRP-1을 길항작용하는 능력을 보유한다. 일부 실시양태에서, 본원에서 제공된 항체 단편은 본원에 기재된 바와 같이, NRP-1을 그의 리간드 중 1종 이상과의 상호작용으로부터 방지하는 능력을 보유한다.

일부 실시양태에서, 본원에서 제공된 항체 단편은 NRP-1에의 결합에 대해 각각 본 개시내용의 부록 A에 제공된 바와 같은 MAB1, MAB2, MAB3, MAB4, MAB5, MAB6, MAB7, MAB8, MAB9, MAB10, MAB11, MAB12, MAB13, MAB14, 또는 MAB15로부터 선택되는 항체와 경쟁한다.

일부 실시양태에서, 본원에서 제공된 ABP는 세포 표면 NRP-1에 대해 특이적이다.

일부 실시양태에서, 본원에서 제공된 ABP는 막횡단 세마포린 폴리펩티드에의 NRP-1 결합을 특이적으로 차단한다.

일부 실시양태에서, 본원에서 제공된 ABP는 NRP-1 폴리펩티드 및 혈관 내피 세포 성장 인자 (VEGF) 폴리펩티드 사이의 상호작용을 차단한다. 한 실시양태에서, VEGF 폴리펩티드는 VEGFA이다.

일부 실시양태에서, 항-NRP-1 항체는 SEMA3 결합을 차단한다.

일부 실시양태에서, 항-NRP-1 항체는 SEMA4 결합을 차단한다.

일부 실시양태에서, 항체는 NRP-1 폴리펩티드 및 SEMA3 사이의 상호작용을 차단한다.

일부 실시양태에서, 항체는 NRP-1 폴리펩티드 및 VEGF 사이의 상호작용을 차단한다.

일부 실시양태에서, 본원에서 제공된 ABP는 인간 대상체에서 Treg 억제를 억제할 수 있다.

일부 실시양태에서, 본원에서 제공된 ABP는 항원-제시 세포로부터의 항원 제시와 조합되어 이펙터 T 세포를 공동-자극한다.

일부 실시양태에서, 본원에서 제공된 ABP는 조절성 T 세포에 의한 이펙터 T 세포의 억제를 억제한다.

일부 실시양태에서, 본원에서 제공된 ABP는 조직에서 또는 전신 순환에서 이펙터 T 세포의 수를 감소시킨다.

일부 실시양태에서, 본원에서 제공된 항체의 단편은 이러한 항체와 동일한 NRP-1의 에피토프에 결합한다.

일부 실시양태에서, 본원에서 제공된 ABP는 모노클로날 항체이다. 일부 실시양태에서, 본원에서 제공된 ABP는 폴리클로날 항체이다.

일부 실시양태에서, 본원에서 제공된 ABP는 키메라 항체를 포함한다. 일부 실시양태에서, 본원에서 제공된 ABP는 키메라 항체로 이루어진다. 일부 실시양태에서, 본원에서 제공된 ABP는 키메라 항체로 본질적으로 이루어진다. 일부 실시양태에서, 본원에서 제공된 ABP는 인간화 항체를 포함한다. 일부 실시양태에서, 본원에서 제공된 ABP는 인간화 항체로 이루어진다. 일부 실시양태에서, 본원에서 제공된 ABP는 인간화 항체로 본질적으로 이루어진다. 일부 실시양태에서, 본원에서 제공된 ABP는 인간 항체를 포함한다. 일부 실시양태에서, 본원에서 제공된 ABP는 인간 항체로 이루어진다. 일부 실시양태에서, 본원에서 제공된 ABP는 인간 항체로 본질적으로 이루어진다.

일부 실시양태에서, 본원에서 제공된 ABP는 친화도 성숙된다. 일부 측면에서, 친화도 성숙된 ABP는 본원에서 제공된 예시적인 ABP로부터 유래된 친화도 성숙된 ABP이다.

일부 실시양태에서, 본원에서 제공된 ABP는 대체 스캐폴드를 포함한다. 일부 실시양태에서, 본원에서 제공된 ABP는 대체 스캐폴드로 이루어진다. 일부 실시양태에서, 본원에서 제공된 ABP는 대체 스캐폴드로 본질적으로 이루어진다. 임의의 적합한 대체 스캐폴드가 사용될 수 있다. 일부 측면에서, 대체 스캐폴드는 아드넥틴 (Adnectin)™, iMab, 안티칼린 (Anticalin)^®, EETI-II/AGRP, 쿠니츠 (Kunitz) 도메인, 티오레독신 펩티드 압타머, 아피바디 (Affibody)^®, DARPin, 아필린 (Affilin), 테트라넥틴 (Tetranectin), 피노머 (Fynomer), 및 아비머 (Avimer)로부터 선택된다.

일부 실시양태에서, 본원에서 제공된 ABP는 막횡단 세마포린 폴리펩티드에의 NRP-1의 결합을 특이적으로 차단한다. 일부 측면에서, ABP는 막횡단 세마포린 폴리펩티드에의 NRP-1의 결합을 적어도 약 50％ 억제한다. 일부 측면에서, ABP는 막횡단 세마포린 폴리펩티드에의 NRP-1의 결합을 적어도 약 75％ 억제한다. 일부 측면에서, ABP는 막횡단 세마포린 폴리펩티드에의 NRP-1의 결합을 적어도 약 90％ 억제한다. 일부 측면에서, ABP는 막횡단 세마포린 폴리펩티드에의 NRP-1의 결합을 적어도 약 95％ 억제한다. 일부 실시양태에서, 세마포린 폴리펩티드는 SEMA3 폴리펩티드이다. 다른 실시양태에서, 세마포린 폴리펩티드는 SEMA4 폴리펩티드이다.

일부 실시양태에서, 본 발명의 ABP는 본원에서 제공된 예시적인 ABP와 경쟁하는 ABP이다. 일부 측면에서, 본원에서 제공된 예시적인 ABP와 경쟁하는 ABP는 본원에서 제공된 예시적인 ABP와 동일한 에피토프에 결합한다.

항체가 세포에서 발현되는 경우, 항체는 번역 후에 변형됨이 공지되어 있다. 번역후 변형의 예로는 카르복시펩티다제에 의한 중쇄의 C 말단에서의 리신의 절단; 피로글루타밀화에 의한 중쇄 및 경쇄의 N 말단에서의 글루타민 또는 글루탐산의 피로글루탐산으로의 변형; 글리코실화; 산화; 탈아미드화; 및 당화를 들 수 있으며, 이러한 번역후 변형은 다양한 항체에서 일어남이 공지되어 있다 (그 전문이 참조로 포함되는 문헌 [Journal of Pharmaceutical Sciences, 2008, Vol. 97, p. 2426-2447] 참조). 일부 실시양태에서, 본 발명의 ABP는 번역후 변형을 겪은 항체 또는 그의 항원-결합 단편이다. 번역후 변형을 겪은 항체 또는 그의 항원-결합 단편의 예로는 중쇄 가변 영역의 N 말단에서의 피로글루타밀화, 경쇄 가변 영역의 N 말단에서의 피로글루타밀화, 및/또는 중쇄의 C 말단에서의 리신의 결실을 겪은 항체 또는 그의 항원-결합 단편을 들 수 있다. N 말단에서의 피로글루타밀화 및 C 말단에서의 리신의 결실로 인한 이러한 번역후 변형은 항체 또는 그의 단편의 활성에 대해 임의의 영향을 갖지 않음이 관련 기술분야에 공지되어 있다 (그 전문이 참조로 포함되는 문헌 [Analytical Biochemistry, 2006, Vol. 348, p. 24-39]).

일부 실시양태에서, 본 발명의 ABP는 서열식별번호: 47로 이루어진 CDR-H3, 서열식별번호: 30으로 이루어진 CDR-H2, 및 서열식별번호: 14로 이루어진 CDR-H1을 포함하는 중쇄 가변 영역; 및 서열식별번호: 81로 이루어진 CDR-L3, 서열식별번호: 71로 이루어진 CDR-L2, 및 서열식별번호: 63으로 이루어진 CDR-L1을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는 항-인간 NRP-1 항체 또는 그의 항원-결합 단편이다.

한 실시양태에서, 항-인간 NRP-1 항체 또는 그의 항원-결합 단편은 서열식별번호: 96으로 이루어진 중쇄 가변 영역, 및 서열식별번호: 104로 이루어진 경쇄 가변 영역을 포함한다.

한 실시양태에서, 항-인간 NRP-1 항체 또는 그의 항원-결합 단편은 아미노산 번호 1의 E가 피로글루타메이트로 변형된 서열식별번호: 96으로 이루어진 중쇄 가변 영역, 및 서열식별번호: 104로 이루어진 경쇄 가변 영역을 포함한다.

한 실시양태에서, 항-인간 NRP-1 항체는 서열식별번호: 118로 이루어진 중쇄, 및 서열식별번호: 126으로 이루어진 경쇄를 포함한다.

한 실시양태에서, 항-인간 NRP-1 항체는 아미노산 번호 1의 E가 피로글루타메이트로 변형된 서열식별번호: 118로 이루어진 중쇄, 및 서열식별번호: 126으로 이루어진 경쇄를 포함한다.

한 실시양태에서, 항-인간 NRP-1 항체는 서열식별번호: 118의 아미노산 번호 1 내지 453의 아미노산 서열로 이루어진 중쇄, 및 서열식별번호: 126으로 이루어진 경쇄를 포함한다.

한 실시양태에서, 항-인간 NRP-1 항체는 아미노산 번호 1의 E가 피로글루타메이트로 변형된 서열식별번호: 118의 아미노산 번호 1 내지 453의 아미노산 서열로 이루어진 중쇄, 및 서열식별번호: 126으로 이루어진 경쇄를 포함한다.

2.2 NRP-1 길항작용

일부 실시양태에서, 본원에서 제공된 ABP는 결합 시 NRP-1을 길항작용한다.

일부 실시양태에서, 본원에서 제공된 ABP에 의한 NRP-1의 길항작용은 이펙터 T 세포의 활성화를 발생시킨다. 일부 측면에서, 이펙터 T 세포는 CD8+ T 세포이다. 일부 측면에서, 이펙터 T 세포는 CD4+ T 세포이다.

일부 실시양태에서, 본원에서 제공된 ABP에 의한 NRP-1의 길항작용은 NK 세포의 활성화를 발생시킨다. 일부 실시양태에서, 본원에서 제공된 ABP에 의한 NRP-1의 길항작용은 NKT 세포의 활성화를 발생시킨다. 일부 실시양태에서, NKT 세포는 IL-17-분비 세포이다.

일부 실시양태에서, 본원에서 제공된 ABP에 의한 NRP-1의 길항작용은 이펙터 T 세포에 대한 조절성 T 세포의 억제 활성의 감소를 발생시킨다.

일부 실시양태에서, 본원에서 제공된 ABP에 의한 NRP-1의 길항작용은 표적 세포에 의한 IL-2, IL-6, GM-CSF, TNF, LT-α, 및/또는 IFN-γ의 증가된 분비를 발생시킨다.

일부 실시양태에서, 본원에서 제공된 ABP에 의한 NRP-1의 길항작용은 이펙터 T 세포의 증식, 생존, 및/또는 기능을 증가시킨다. 일부 측면에서, 이펙터 T 세포는 CD4+ 이펙터 T 세포이다. 일부 측면에서, 이펙터 T 세포는 CD8+ 이펙터 T 세포이다.

일부 실시양태에서, 본원에서 제공된 ABP에 의한 NRP-1의 길항작용은 조절성 T 세포에 의한 이펙터 T 세포의 억제를 무효화한다. 일부 측면에서, 조절성 T 세포는 CD4+CD25+Foxp3+ 조절성 T 세포이다. 일부 측면에서, 조절성 T 세포는 CD8+CD25+ 조절성 T 세포이다.

일부 실시양태에서, 본원에서 제공된 ABP에 의한 NRP-1의 길항작용은 면역 반응의 향상을 발생시킨다.

일부 실시양태에서, 본원에서 제공된 ABP에 의한 NRP-1의 길항작용은 종양의 예방을 발생시킨다. 일부 실시양태에서, 본원에서 제공된 ABP에 의한 NRP-1의 길항작용 종양의 발병의 지연을 발생시킨다. 일부 실시양태에서, 본원에서 제공된 ABP에 의한 NRP-1의 길항작용은 종양의 크기의 감소를 발생시킨다. 일부 실시양태에서, 본원에서 제공된 ABP에 의한 NRP-1의 길항작용은 종양의 제거를 발생시킨다. 일부 실시양태에서, 본원에서 제공된 ABP에 의한 NRP-1의 길항작용은 전이의 수의 감소를 발생시킨다.

일부 실시양태에서, 본원에서 제공된 ABP에 의한 NRP-1의 길항작용은 바이러스성 질환의 예방을 발생시킨다. 일부 실시양태에서, 본원에서 제공된 ABP에 의한 NRP-1의 길항작용은 바이러스성 질환의 발병의 지연을 발생시킨다. 일부 실시양태에서, 본원에서 제공된 ABP에 의한 NRP-1의 길항작용은 대상체에서 바이러스 로드의 감소를 발생시킨다. 일부 실시양태에서, 본원에서 제공된 ABP에 의한 NRP-1의 길항작용은 바이러스 감염의 제거를 발생시킨다.

2.3 NRP-1에 대한 항원-결합 단백질의 친화도 및 동역학; 효능

일부 실시양태에서, K_D에 의해 지시된 바와 같은 NRP-1에 대한 본원에서 제공된 ABP의 친화도는 약 10^-5 M 미만, 약 10^-6 M 미만, 약 10^-7 M 미만, 약 10^-8 M 미만, 약 10^-9 M 미만, 약 10^-10 M 미만, 약 10^-11 M 미만, 또는 약 10^-12 M 미만이다. 일부 실시양태에서, ABP의 친화도는 약 10^-7 M 내지 10^-12 M이다. 일부 실시양태에서, ABP의 친화도는 약 10^-7 M 내지 10^-11 M이다. 일부 실시양태에서, ABP의 친화도는 약 10^-7 M 내지 10^-10 M이다. 일부 실시양태에서, ABP의 친화도는 약 10^-7 M 내지 10^-9 M이다. 일부 실시양태에서, ABP의 친화도는 약 10^-7 M 내지 10^-8 M이다. 일부 실시양태에서, ABP의 친화도는 약 10^-8 M 내지 10^-12 M이다. 일부 실시양태에서, ABP의 친화도는 약 10^-8 M 내지 10^-11 M이다. 일부 실시양태에서, ABP의 친화도는 약 10^-9 M 내지 10^-11 M이다. 일부 실시양태에서, ABP의 친화도는 약 10^-10 M 내지 10^-11 M이다.

2.3.1 글리코실화 변이체

특정 실시양태에서, 본원에서 제공된 ABP는 그것이 글리코실화되는 정도를 증가시키거나, 감소시키거나, 제거하도록 변경될 수 있다. 폴리펩티드의 글리코실화는 전형적으로 "N-연결된" 또는 "O-연결된" 중 어느 하나이다.

"N-연결된" 글리코실화는 아스파라긴 잔기의 측쇄에의 탄수화물 모이어티의 부착을 지칭한다. 트리펩티드 서열 아스파라긴-X-세린 및 아스파라긴-X-트레오닌 (여기서, X는 프롤린을 제외한 임의의 아미노산임)은 아스파라긴 측쇄에의 탄수화물 모이어티의 효소적 부착을 위한 인식 서열이다. 따라서, 폴리펩티드에서의 이들 트리펩티드 서열 중 어느 하나의 존재는 잠재적 글리코실화 부위를 생성한다.

"O-연결된" 글리코실화는 5-히드록시프롤린 또는 5-히드록시리신이 또한 사용될 수 있지만, 히드록시아미노산, 가장 통상적으로 세린 또는 트레오닌에의 당 N-아세틸갈락토스아민, 갈락토스, 또는 크실로스 중 하나의 부착을 지칭한다.

본원에서 제공된 ABP에의 또는 그로부터의 N-연결된 글리코실화 부위의 부가 또는 결실은 상기 기재된 트리펩티드 서열 중 1개 이상이 생성되거나 제거되도록 아미노산 서열을 변경시킴으로써 달성될 수 있다. O-연결된 글리코실화 부위의 부가 또는 결실은 ABP의 서열에서의 또는 그에의 (경우에 따라) 1개 이상의 세린 또는 트레오닌 잔기의 부가, 결실, 또는 치환에 의해 달성될 수 있다.

일부 실시양태에서, 본원에서 제공된 ABP는 천연 발생 ABP와는 상이한 글리코실화 모티프를 포함한다. 임의의 적합한 천연 발생 글리코실화 모티프는 본원에서 제공된 ABP에서 변형될 수 있다. 이뮤노글로불린의 구조적 및 글리코실화 특성은 예를 들어, 관련 기술분야에 공지되어 있으며, 예를 들어, 그 전문이 참조로 포함되는 문헌 [Schroeder and Cavacini, J. Allergy Clin. Immunol., 2010, 125:S41-52]에 요약되어 있다.

일부 실시양태에서, 본원에서 제공된 ABP는 아스파라긴 297 (Asn 297)에 부착된 올리고당류에 대한 변형을 갖는 IgG1 Fc 영역을 포함한다. 포유동물 세포에 의해 생산된 천연 발생 IgG1 항체는 전형적으로 일반적으로 Fc 영역의 C_H2 도메인의 Asn 297에 N-연결에 의해 부착된 분지된 비안테너리 (biantennary) 올리고당류를 포함한다. 그 전문이 참조로 포함되는 문헌 [Wright et al., TIBTECH, 1997, 15:26-32]을 참조한다. Asn 297에 부착된 올리고당류는 다양한 탄수화물, 예컨대 만노스, N-아세틸 글루코스아민 (GlcNAc), 갈락토스, 및 시알산, 뿐만 아니라 비안테너리 올리고당류 구조의 "줄기"에서 GlcNAc에 부착된 푸코스를 포함할 수 있다.

일부 실시양태에서, Asn 297에 부착된 올리고당류는 변경된 ADCC를 갖는 ABP를 생성하도록 변형된다. 일부 실시양태에서, 올리고당류는 ADCC를 개선시키도록 변경된다. 일부 실시양태에서, 올리고당류는 ADCC를 감소시키도록 변경된다.

일부 측면에서, 본원에서 제공된 ABP는 천연 발생 IgG1 도메인에 비해 위치 Asn 297에서 감소된 푸코스 함량을 갖는 IgG1 도메인을 포함한다. 이러한 Fc 도메인은 개선된 ADCC를 갖는 것으로 공지되어 있다. 그 전문이 참조로 포함되는 문헌 [Shields et al., J. Biol. Chem., 2002, 277:26733-26740]을 참조한다. 일부 측면에서, 이러한 ABP는 위치 Asn 297에 임의의 푸코스를 포함하지 않는다. 푸코스의 양은 예를 들어 그 전문이 참조로 포함되는 WO 2008/077546에 기재된 바와 같은 임의의 적합한 방법을 사용하여 측정될 수 있다.

일부 실시양태에서, 본원에서 제공된 ABP는 GlcNAc에 의해 이등분된 ABP의 Fc 영역에 부착된 이등분된 올리고당류, 예컨대 비안테너리 올리고당류를 포함한다. 이러한 ABP 변이체는 감소된 푸코실화 및/또는 개선된 ADCC 기능을 가질 수 있다. 이러한 ABP 변이체의 예는 예를 들어, WO 2003/011878; 미국 특허 제6,602,684호; 및 미국 특허 공개 제2005/0123546호에 기재되어 있으며; 이들의 각각은 그 전문이 참조로 포함된다.

본원에서 제공된 ABP 내로 혼입될 수 있는 다른 예시적인 글리코실화 변이체는 예를 들어, 미국 특허 공개 제2003/0157108호, 제2004/0093621호, 제2003/0157108호, 제2003/0115614호, 제2002/0164328호, 제2004/0093621호, 제2004/0132140호, 제2004/0110704호, 제2004/0110282호, 제2004/0109865호; 국제 특허 공개 제2000/61739호, 제2001/29246호, 제2003/085119호, 제2003/084570호, 제2005/035586호, 제2005/035778호; 제2005/053742호, 제2002/031140호; 문헌 [Okazaki et al., J. Mol. Biol., 2004, 336:1239-1249]; 및 [Yamane-Ohnuki et al., Biotech. Bioeng., 2004, 87: 614-622]에 기재되어 있으며; 이들의 각각은 그 전문이 참조로 포함된다.

일부 실시양태에서, 본원에서 제공된 ABP는 Fc 영역에 부착된 올리고당류에 적어도 1개의 갈락토스 잔기를 갖는 Fc 영역을 포함한다. 이러한 ABP 변이체는 개선된 CDC 기능을 가질 수 있다. 이러한 ABP 변이체의 예는 예를 들어, WO 1997/30087; WO 1998/58964; 및 WO 1999/22764에 기재되어 있으며; 이들의 각각은 그 전문이 참조로 포함된다.

탈푸코실화된 ABP를 생산할 수 있는 세포주의 예로는 단백질 푸코실화가 결핍된 Lec13 CHO 세포 (문헌 [Ripka et al., Arch. Biochem. Biophys., 1986, 249:533-545]; 미국 특허 공개 제2003/0157108호; WO 2004/056312 참조; 이들의 각각은 그 전문이 참조로 포함됨), 및 넉아웃 세포주, 예컨대 알파-1,6-푸코실트랜스퍼라제 유전자 또는 FUT8 넉아웃 CHO 세포 (문헌 [Yamane-Ohnuki et al., Biotech. Bioeng., 2004, 87: 614-622]; [Kanda et al., Biotechnol. Bioeng., 2006, 94:680-688]; 및 WO 2003/085107 참조; 이들의 각각은 그 전문이 참조로 포함됨)를 들 수 있다.

일부 실시양태에서, 본원에서 제공된 ABP는 비글리코실화된 ABP이다. 비글리코실화된 ABP는 관련 기술분야에 공지되어 있거나 본원에 기재된 임의의 방법을 사용하여 제조될 수 있다. 일부 측면에서, 비글리코실화된 ABP는 ABP를 모든 글리코실화 부위를 제거하도록 변형시킴으로써 제조된다. 일부 측면에서, 글리코실화 부위는 단지 ABP의 Fc 영역으로부터만 제거된다. 일부 측면에서, 비글리코실화된 ABP는 글리코실화가 가능하지 않은 유기체, 예컨대 이. 콜라이에서 ABP를 발현시킴으로써, 또는 무세포 반응 혼합물에서 ABP를 발현시킴으로써 제조된다.

일부 실시양태에서, 본원에서 제공된 ABP는 천연 IgG1 항체에 비해 감소된 이펙터 기능을 갖는 불변 영역을 갖는다. 일부 실시양태에서, Fc 수용체에 대한 본원에서 제공된 ABP의 Fc 영역의 불변 영역의 친화도는 이러한 Fc 수용체에 대한 천연 IgG1 불변 영역의 친화도보다 적다.

2.4 NRP-1 도메인

NRP-1은 막횡단 및 말단절단된 형태 둘 다를 갖는다. 막횡단 형태는 하기와 같다. 분비 신호의 짧은 스트레치 다음에, NRP-1은 4개의 상이한 도메인으로 이루어진다: CUB 도메인의 2개의 반복부 (a1/a2), FV/VIII 도메인의 2개의 반복부 (b1/b2), MAM (c) 도메인, 및 막횡단 및 상대적으로 짧은 40 내지 43 아미노산 세포질 영역을 함유하는 제4 도메인 (d). 제1 CUB 도메인은 보체 인자 C1s/C1r, 골 형태형성 단백질 (Bone Morphogenetic Protein) 1 (BMP1), 및 톨로이드 (Tolloid) 단백질과 상당한 상동성을 갖는다. 제2 FV/VIII 도메인은 응고 인자 FV/VIII, 수용체 유형 티로신 키나제 DDR 중 하나, 및 디스코이딘-1과 상동성을 공유한다. 제3 도메인 MAM은 메프린, A5 (NRP의 이전 명칭), 및 수용체 단백질-티로신 포스파타제 뮤 및 카파의 약어이다. 한 실시양태에서, 본원에서 제공된 ABP는 a1 도메인에 결합한다. 또 다른 실시양태에서, 본원에서 제공된 ABP는 a2 도메인에 결합한다. 또 다른 실시양태에서, 본원에서 제공된 ABP는 b1 도메인에 결합한다. 또 다른 실시양태에서, 본원에서 제공된 ABP는 b2 도메인에 결합한다. 한 실시양태에서, 본원에서 제공된 ABP는 1개 초과의 도메인에 결합한다.

1.1. Fc 영역 아미노산 서열 변이체

특정 실시양태에서, 본원에서 제공된 ABP는 천연 발생 Fc 영역과 비교하여 1개 이상의 아미노산 치환, 삽입, 또는 결실을 갖는 Fc 영역을 포함한다. 일부 측면에서, 이러한 치환, 삽입, 또는 결실은 변경된 안정성, 글리코실화, 또는 다른 특징을 갖는 ABP를 생성한다. 일부 측면에서, 이러한 치환, 삽입, 또는 결실은 비글리코실화된 ABP를 생성한다.

일부 측면에서, 본원에서 제공된 ABP의 Fc 영역은 Fc 수용체에 대한 변경된 친화도를 갖는 ABP, 또는 보다 면역학적으로 불활성인 ABP를 생성하도록 변형된다. 일부 실시양태에서, 본원에서 제공된 ABP 변이체는 전부는 아니지만 일부의 이펙터 기능을 소유한다. 이러한 ABP는 예를 들어, ABP의 반감기가 생체내에서 중요하지만, 특정 이펙터 기능 (예를 들어, 보체 활성화 및 ADCC)이 비필수적이거나 해로운 경우 유용할 수 있다.

일부 실시양태에서, 본원에서 제공된 ABP의 Fc 영역은 힌지 안정화 돌연변이 S228P 및 L235E 중 하나 이상을 포함하는 인간 IgG4 Fc 영역이다. 그 전문이 참조로 포함되는 문헌 [Aalberse et al., Immunology, 2002, 105:9-19]을 참조한다. 일부 실시양태에서, 본원에서 제공된 ABP의 Fc 영역은 힌지 안정화 돌연변이 S228P를포함하는 인간 IgG4 Fc 영역이다. 일부 실시양태에서, IgG4 Fc 영역은 하기 돌연변이 중 1개 이상을 포함한다: E233P, F234V, 및 L235A. 그 전문이 참조로 포함되는 문헌 [Armour et al., Mol. Immunol., 2003, 40:585-593]을 참조한다. 일부 실시양태에서, IgG4 Fc 영역은 위치 G236에 결실을 포함한다.

일부 실시양태에서, 본원에서 제공된 ABP의 Fc 영역은 Fc 수용체 결합을 감소시키는 1개 이상의 돌연변이를 포함하는 인간 IgG1 Fc 영역이다. 일부 측면에서, 1개 이상의 돌연변이는 S228 (예를 들어, S228A), L234 (예를 들어, L234A), L235 (예를 들어, L235A), D265 (예를 들어, D265A), 및 N297 (예를 들어, N297A)로부터 선택되는 잔기에 있다. 일부 측면에서, ABP는 PVA236 돌연변이를 포함한다. PVA236은 IgG1의 아미노산 위치 233 내지 236의 아미노산 서열 ELLG 또는 IgG4의 EFLG가 PVA에 의해 대체된 것을 의미한다. 그 전문이 참조로 포함되는 문헌 미국 특허 제9,150,641호를 참조한다.

일부 실시양태에서, 본원에서 제공된 ABP의 Fc 영역은 문헌 [Armour et al., Eur. J. Immunol., 1999, 29:2613-2624]; WO 1999/058572; 및/또는 영국 특허 출원 제98099518호 (이들의 각각은 그 전문이 참조로 포함됨)에 기재된 바와 같이 변형된다.

일부 실시양태에서, 본원에서 제공된 ABP의 Fc 영역은 돌연변이 A330S 및 P331S 중 1개 이상을 포함하는 인간 IgG2 Fc 영역이다.

일부 실시양태에서, 본원에서 제공된 ABP의 Fc 영역은 238, 265, 269, 270, 297, 327 및 329로부터 선택되는 1개 이상의 위치에 아미노산 치환을 갖는다. 그 전문이 참조로 포함되는 미국 특허 제6,737,056호를 참조한다. 이러한 Fc 돌연변이체는 알라닌으로의 잔기 265 및 297의 치환을 갖는 소위 "DANA" Fc 돌연변이체를 비롯한, 아미노산 위치 265, 269, 270, 297 및 327 중 2개 이상에 치환을 갖는 Fc 돌연변이체를 포함한다. 그 전문이 참조로 포함되는 미국 특허 제7,332,581호를 참조한다. 일부 실시양태에서, ABP는 아미노산 위치 265에 알라닌을 포함한다. 일부 실시양태에서, ABP는 아미노산 위치 297에 알라닌을 포함한다.

특정 실시양태에서, 본원에서 제공된 ABP는 ADCC를 개선시키는 1개 이상의 아미노산 치환, 예컨대 Fc 영역의 위치 298, 333, 및 334 중 1개 이상에 치환을 갖는 Fc 영역을 포함한다. 일부 실시양태에서, 본원에서 제공된 ABP는 그 전문이 참조로 포함되는 문헌 [Lazar et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 2006,103:4005-4010]에 기재된 바와 같이, 위치 239, 332, 및 330에 1개 이상의 아미노산 치환을 갖는 Fc 영역을 포함한다.

일부 실시양태에서, 본원에서 제공된 ABP는 C1q 결합 및/또는 CDC를 개선시키거나 감소시키는 1개 이상의 변경을 포함한다. 미국 특허 제6,194,551호; WO 99/51642; 및 문헌 [Idusogie et al., J. Immunol., 2000, 164:4178-4184]을 참조하며; 이들의 각각은 그 전문이 참조로 포함된다.

일부 실시양태에서, 본원에서 제공된 ABP는 반감기를 증가시키는 1개 이상의 변경을 포함한다. 증가된 반감기 및 신생아 Fc 수용체 (FcRn)에의 개선된 결합을 갖는 ABP는 예를 들어, 문헌 [Hinton et al., J. Immunol., 2006, 176:346-356]; 및 미국 특허 제7,361,740호에 기재되어 있으며; 이들의 각각은 그 전문이 참조로 포함된다. 이러한 Fc 변이체로는 IgG의 Fc 영역 잔기 중 1개 이상에 치환을 갖는 것들을 들 수 있다: 238, 250, 256, 265, 272, 286, 303, 305, 307, 311, 312, 314, 317, 340, 356, 360, 362, 376, 378, 380, 382, 413, 424, 428, 및 434.

일부 실시양태에서, 본원에서 제공된 ABP는 미국 특허 제7,371,826호, 제5,648,260호, 및 제5,624,821호; 문헌 [Duncan and Winter, Nature, 1988, 322:738-740]; 및 WO 94/29351 (이들의 각각은 그 전문이 참조로 포함됨)에 기재된 바와 같은 1개 이상의 Fc 영역 변이체를 포함한다.

1.2. 피로글루타메이트

관련 기술분야에 공지된 바와 같이, 재조합 단백질의 N-말단에서의 글루타메이트 (E) 및 글루타민 (Q) 둘 다는 자발적으로 원형화되어 시험관내에서 및 생체내에서 피로글루타메이트 (pE)를 형성한다. 그 전문이 참조로 포함되는 문헌 [Liu et al., J. Biol. Chem., 2011, 286:11211-11217]을 참조한다.

일부 실시양태에서, N-말단 위치에 pE 잔기를 갖는 폴리펩티드 서열을 포함하는 ABP가 본원에서 제공된다. 일부 실시양태에서, N-말단 잔기가 Q로부터 pE로 전환된 폴리펩티드 서열을 포함하는 ABP가 본원에서 제공된다. 일부 실시양태에서, N-말단 잔기가 E로부터 pE로 전환된 폴리펩티드 서열을 포함하는 ABP가 본원에서 제공된다.

일부 실시양태에서, N-말단 위치에 pE 잔기를 갖는 V_H 서열을 포함하는 ABP가 본원에서 제공된다. 일부 실시양태에서, N-말단 잔기가 Q로부터 pE로 전환된 V_H 서열을 포함하는 ABP가 본원에서 제공된다. 일부 실시양태에서, N-말단 Q 잔기가 pE로 전환된 서열식별번호: 85 내지 90, 97 내지 99로부터 선택되는 V_H 서열을 포함하는 ABP가 본원에서 제공된다. 일부 실시양태에서, ABP를 포함하는 조성물이 본원에서 제공되며, 여기서, ABP는 이러한 조성물에서의 이러한 V_H의 N-말단 잔기의 적어도 약 20％, 적어도 약 40％, 적어도 약 60％, 적어도 약 80％, 적어도 약 90％, 적어도 약 95％, 또는 적어도 약 99％가 Q로부터 pE로 전환된 서열식별번호: 85 내지 90, 97 내지 99로부터 선택되는 V_H를 포함한다.

일부 실시양태에서, N-말단 위치에 pE 잔기를 갖는 V_H 서열을 포함하는 ABP가 본원에서 제공된다. 일부 실시양태에서, N-말단 잔기가 E로부터 pE로 전환된 V_H 서열을 포함하는 ABP가 본원에서 제공된다. 일부 실시양태에서, N-말단 E 잔기가 pE로 전환된 서열식별번호: 91 내지 96으로부터 선택되는 V_H 서열을 포함하는 ABP가 본원에서 제공된다. 일부 실시양태에서, ABP를 포함하는 조성물이 본원에서 제공되며, 여기서, ABP는 이러한 조성물에서의 이러한 V_H의 N-말단 잔기의 적어도 약 20％, 적어도 약 40％, 적어도 약 60％, 적어도 약 80％, 적어도 약 90％, 적어도 약 95％, 또는 적어도 약 99％가 E로부터 pE로 전환된 서열식별번호: 91 내지 96으로부터 선택되는 V_H를 포함한다.

일부 실시양태에서, N-말단 위치에 pE 잔기를 갖는 V_L 서열을 포함하는 ABP가 본원에서 제공된다. 일부 실시양태에서, N-말단 잔기가 E로부터 pE로 전환된 V_L 서열을 포함하는 ABP가 본원에서 제공된다. 일부 실시양태에서, N-말단 E 잔기가 pE로 전환된 서열식별번호: 120에 제시된 V_L 서열을 포함하는 ABP가 본원에서 제공된다. 일부 실시양태에서, ABP를 포함하는 조성물이 본원에서 제공되며, 여기서, ABP는 이러한 조성물에서의 이러한 V_L의 N-말단 잔기의 적어도 약 20％, 적어도 약 40％, 적어도 약 60％, 적어도 약 80％, 적어도 약 90％, 적어도 약 95％, 또는 적어도 약 99％가 E로부터 pE로 전환된 서열식별번호: 120에 제시된 V_L을 포함한다.

일부 실시양태에서, N-말단 위치에 pE 잔기를 갖는 중쇄 서열을 포함하는 ABP가 본원에서 제공된다. 일부 실시양태에서, N-말단 잔기가 Q로부터 pE로 전환된 중쇄 서열을 포함하는 ABP가 본원에서 제공된다. 일부 실시양태에서, N-말단 Q 잔기가 pE로 전환된 서열식별번호: 107 내지 112, 119 내지 121로부터 선택되는 중쇄 서열을 포함하는 ABP가 본원에서 제공된다. 일부 실시양태에서, ABP를 포함하는 조성물이 본원에서 제공되며, 여기서, ABP는 이러한 조성물에서의 이러한 중쇄의 N-말단 잔기의 적어도 약 20％, 적어도 약 40％, 적어도 약 60％, 적어도 약 80％, 적어도 약 90％, 적어도 약 95％, 또는 적어도 약 99％가 Q로부터 pE로 전환된 서열식별번호: 107 내지 112, 119 내지 121로부터 선택되는 중쇄를 포함한다.

일부 실시양태에서, N-말단 위치에 pE 잔기를 갖는 중쇄 서열을 포함하는 ABP가 본원에서 제공된다. 일부 실시양태에서, N-말단 잔기가 E로부터 pE로 전환된 중쇄 서열을 포함하는 ABP가 본원에서 제공된다. 일부 실시양태에서, N-말단 E 잔기가 pE로 전환된 서열식별번호: 113 내지 118로부터 선택되는 중쇄 서열을 포함하는 ABP가 본원에서 제공된다. 일부 실시양태에서, ABP를 포함하는 조성물이 본원에서 제공되며, 여기서, ABP는 이러한 조성물에서의 이러한 중쇄의 N-말단 잔기의 적어도 약 20％, 적어도 약 40％, 적어도 약 60％, 적어도 약 80％, 적어도 약 90％, 적어도 약 95％, 또는 적어도 약 99％가 E로부터 pE로 전환된 서열식별번호: 113 내지 118로부터 선택되는 중쇄를 포함한다.

일부 실시양태에서, N-말단 위치에 pE 잔기를 갖는 경쇄 서열을 포함하는 ABP가 본원에서 제공된다. 일부 실시양태에서, N-말단 잔기가 E로부터 pE로 전환된 경쇄 서열을 포함하는 ABP가 본원에서 제공된다. 일부 실시양태에서, N-말단 E 잔기가 pE로 전환된 서열식별번호: 124 내지 125로부터 선택되는 카파 경쇄 서열을 포함하는 ABP가 본원에서 제공된다. 일부 실시양태에서, ABP를 포함하는 조성물이 본원에서 제공되며, 여기서, ABP는 이러한 조성물에서의 이러한 경쇄의 N-말단 잔기의 적어도 약 20％, 적어도 약 40％, 적어도 약 60％, 적어도 약 80％, 적어도 약 90％, 적어도 약 95％, 또는 적어도 약 99％가 E로부터 pE로 전환된 서열식별번호: 124 내지 125로부터 선택되는 카파 경쇄를 포함한다.

1.3. 시스테인 조작된 항원-결합 단백질 변이체

특정 실시양태에서, ABP의 1개 이상의 잔기가 시스테인 잔기로 치환된, "티오MAb"로도 공지된 시스테인 조작된 ABP가 본원에서 제공된다. 특정 실시양태에서, 치환된 잔기는 ABP의 용매 접근가능한 부위에서 발생한다. 이러한 잔기를 시스테인으로 치환함으로써, 반응성 티올 기가 ABP의 용매 접근가능한 부위에 도입되며, ABP를 다른 모이어티, 예컨대 약물 모이어티 또는 링커-약물 모이어티에 접합시켜 예를 들어, 면역접합체를 생성하는 데 사용될 수 있다.

특정 실시양태에서, 하기 잔기 중 임의의 1개 이상은 시스테인으로 치환될 수 있다: 경쇄의 V205; 중쇄 Fc 영역의 A118; 및 중쇄 Fc 영역의 S400. 시스테인 조작된 ABP는 예를 들어, 그 전문이 참조로 포함되는 미국 특허 제7,521,541호에 기재된 바와 같이 생성될 수 있다.

2. NRP-1 항원-결합 단백질을 제조하는 방법

2.1. NRP-1 항원 제조

본원에서 제공된 ABP의 단리에 사용되는 NRP-1 항원은 무손상 NRP-1 또는 NRP-1의 단편일 수 있다. NRP-1 항원은 예를 들어, 단리된 단백질 또는 세포의 표면 상에 발현된 단백질의 형태일 수 있다.

일부 실시양태에서, NRP-1 항원은 NRP-1의 비-천연 발생 변이체, 예컨대 자연에서 발생하지 않는 아미노산 서열 또는 번역후 변형을 갖는 NRP-1 단백질이다.

일부 실시양태에서, NRP-1 항원은 예를 들어, 세포내 또는 막-스패닝 서열, 또는 신호 서열의 제거에 의해 말단절단된다. 일부 실시양태에서, NRP-1 항원은 그의 C-말단에서 인간 IgG1 Fc 도메인 또는 폴리히스티딘 태그에 융합된다.

2.2. 모노클로날 항체를 제조하는 방법

모노클로날 항체는 예를 들어, 문헌 [Kohler et al., Nature, 1975, 256:495-497] (그 전문이 참조로 포함됨)에 최초로 기재된 하이브리도마 방법을 사용하여, 및/또는 재조합 DNA 방법 (예를 들어, 그 전문이 참조로 포함되는 미국 특허 제4,816,567호 참조)에 의해 얻어질 수 있다. 모노클로날 항체는 또한 예를 들어, 파지 또는 효모-기재 라이브러리를 사용하여 얻어질 수 있다. 예를 들어, 미국 특허 제8,258,082호 및 제8,691,730호를 참조하며, 이들의 각각은 그 전문이 참조로 포함된다.

하이브리도마 방법에서, 마우스 또는 다른 적절한 숙주 동물은 면역화에 사용되는 단백질에 특이적으로 결합할 것인 항체를 생산하거나 생산할 수 있는 림프구를 유발하도록 면역화된다. 대안적으로, 림프구는 시험관내에서 면역화될 수 있다. 그 후, 림프구는 적합한 융합제, 예컨대 폴리에틸렌 글리콜을 사용하여 골수종 세포와 융합되어 하이브리도마 세포를 형성한다. 그 전문이 참조로 포함되는 문헌 [Goding J.W., Monoclonal Antibodies: Principles and Practice 3^rd ed. (1986) Academic Press, San Diego, CA]을 참조한다.

하이브리도마 세포는 비융합된 모 골수종 세포의 성장 또는 생존을 억제하는 1종 이상의 물질을 함유하는 적합한 배양 배지에서 시딩되고, 성장된다. 예를 들어, 모 골수종 세포가 효소 히포크산틴 구아닌 포스포리보실 트랜스퍼라제 (HGPRT 또는 HPRT)가 결여되는 경우, 하이브리도마를 위한 배양 배지는 전형적으로 히포크산틴, 아미노프테린, 및 티미딘을 포함할 것이며 (HAT 배지), 이 물질은 HGPRT-결핍성 세포의 성장을 방지한다.

유용한 골수종 세포는 효율적으로 융합되고, 선택된 항체-생산 세포에 의한 항체의 안정한 고-수준 생산을 뒷받침하며, 민감성 배지 조건, 예컨대 HAT 배지의 존재 또는 부재인 것들이다. 이들 중에서, 바람직한 골수종 세포주는 뮤린 골수종 주, 예컨대 MOP-21 및 MC-11 마우스 종양 (미국 캘리포니아주 샌 디에고에 소재하는 소크 인스티튜트 셀 디스트리뷰션 센터 (Salk Institute Cell Distribution Center)로부터 이용가능함), 및 SP-2 또는 X63-Ag8-653 세포 (미국 메릴랜드주 록빌에 소재하는 아메리칸 타입 컬쳐 콜렉션 (American Type Culture Collection)으로부터 이용가능함)으로부터 유래된 것들이다. 인간 골수종 및 마우스-인간 이종골수종 세포주는 또한 인간 모노클로날 항체의 생산에 대해 기재되었다. 예를 들어, 그 전문이 참조로 포함되는 문헌 [Kozbor, J. Immunol., 1984, 133:3001]을 참조한다.

바람직한 특이성, 친화도, 및/또는 생물학적 활성의 항체를 생산하는 하이브리도마 세포의 확인 후, 선별된 클론은 제한 희석 절차에 의해 서브클로닝되고, 표준 방법에 의해 성장될 수 있다. 고드닝 (Goding)의 상기 문헌을 참조한다. 이 목적을 위한 적합한 배양 배지로는 예를 들어, D-MEM 또는 RPMI-1640 배지를 들 수 있다. 또한, 하이브리도마 세포는 동물에서 복수 종양으로서 생체내에서 성장될 수 있다.

모노클로날 항체를 코딩하는 DNA는 통상적인 절차를 사용하여 (예를 들어, 모노클로날 항체의 중쇄 및 경쇄를 코딩하는 유전자에 특이적으로 결합할 수 있는 올리고뉴클레오티드 프로브를 사용함으로써) 용이하게 단리되고, 시퀀싱될 수 있다. 따라서, 하이브리도마 세포는 바람직한 특성을 갖는 항체를 코딩하는 DNA의 유용한 공급원으로서 기능할 수 있다. 단리되면, DNA는 발현 벡터 내로 정치될 수 있으며, 이는 그 후 숙주 세포, 예컨대 그렇지 않다면 항체를 생산하지 않는 박테리아 (예를 들어, 이. 콜라이), 효모 (예를 들어, 사카로미세스 (Saccharomyces) 또는 피키아 (Pichia) 종), COS 세포, 중국 햄스터 난소 (CHO) 세포, 또는 골수종 세포 내로 형질감염되어 모노클로날 항체를 생산한다.

또 다른 측면에서, 하기 (a) 내지 (c)로 이루어진 군으로부터 선택되는 숙주 세포(들)를 배양하여 항-인간 NRP-1 항체 또는 그의 항원-결합 단편을 발현시키는 것을 포함하는, 항-인간 NRP-1 항체 또는 그의 항원-결합 단편을 제조하는 방법이 제공된다: (a) 본원에서 제공된 항-인간 NRP-1 항체 또는 그의 항원-결합 단편의 중쇄 가변 영역을 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드, 및 항체 또는 그의 항원-결합 단편의 경쇄 가변 영역을 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 발현 벡터로 형질전환된 숙주 세포; (b) 본원에서 제공된 항-인간 NRP-1 항체 또는 그의 항원-결합 단편의 중쇄 가변 영역을 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 발현 벡터, 및 항체 또는 그의 항원-결합 단편의 경쇄 가변 영역을 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 발현 벡터로 형질전환된 숙주 세포; 및 (c) 본원에서 제공된 항-인간 NRP-1 항체 또는 그의 항원-결합 단편의 중쇄 가변 영역을 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 발현 벡터로 형질전환된 숙주 세포, 및 항체 또는 그의 항원-결합 단편의 경쇄 가변 영역을 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 발현 벡터로 형질전환된 숙주 세포.

또 다른 측면에서, 하기 (a) 내지 (c)로 이루어진 군으로부터 선택되는 숙주 세포(들)를 배양하여 항-인간 NRP-1 항체를 발현시키는 것을 포함하는, 항-인간 NRP-1 항체를 제조하는 방법이 제공된다: (a) 본원에서 제공된 항-인간 NRP-1 항체의 중쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드, 및 항체의 경쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 발현 벡터로 형질전환된 숙주 세포; (b) 본원에서 제공된 항-인간 NRP-1 항체의 중쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 발현 벡터, 및 항체의 경쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 발현 벡터로 형질전환된 숙주 세포; 및 (c) 본원에서 제공된 항-인간 NRP-1 항체의 중쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 발현 벡터로 형질전환된 숙주 세포, 및 항체의 경쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 발현 벡터로 형질전환된 숙주 세포.

2.3. 키메라 항체를 제조하는 방법

키메라 항체를 제조하는 예시적인 방법은 예를 들어, 미국 특허 제4,816,567호; 및 문헌 [Morrison et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1984, 81:6851-6855]에 기재되어 있으며; 이들의 각각은 그 전문이 참조로 포함된다. 일부 실시양태에서, 키메라 항체는 비-인간 가변 영역 (예를 들어, 마우스, 래트, 햄스터, 토끼, 또는 비-인간 영장류, 예컨대 원숭이로부터 유래된 가변 영역)을 인간 불변 영역과 조합하는 재조합 기법을 사용하여 제조된다.

2.4. 인간화 항체를 제조하는 방법

인간화 항체는 비-인간 모노클로날 항체의 구조적 부분의 대부분, 또는 전부를 상응하는 인간 항체 서열로 대체함으로써 생성될 수 있다. 결과적으로, 단지 항원-특이적 가변, 또는 CDR이 비-인간 서열로 구성된 혼성체 분자가 생성된다. 인간화 항체를 얻는 방법으로는 예를 들어, 문헌 [Winter and Milstein, Nature, 1991, 349:293-299]; [Rader et al., Proc. Nat. Acad. Sci. U.S.A., 1998, 95:8910-8915]; [Steinberger et al., J. Biol. Chem., 2000, 275:36073-36078]; [Queen et al., Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A., 1989, 86:10029-10033]; 및 미국 특허 제5,585,089호, 제5,693,761호, 제5,693,762호, 및 제6,180,370호에 기재된 것들을 들 수 있으며; 이들의 각각은 그 전문이 참조로 포함된다.

2.5. 인간 항체를 제조하는 방법

인간 항체는 관련 기술분야에 공지된 다양한 기법에 의해, 예를 들어 트랜스제닉 동물 (예를 들어, 인간화 마우스)을 사용함으로써 생성될 수 있다. 예를 들어, 문헌 [Jakobovits et al., Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A., 1993, 90:2551]; [Jakobovits et al., Nature, 1993, 362:255-258]; [Bruggermann et al., Year in Immuno., 1993, 7:33]; 및 미국 특허 제5,591,669호, 제5,589,369호 및 제5,545,807호를 참조하며; 이들의 각각은 그 전문이 참조로 포함된다. 인간 항체는 또한 파지-제시 라이브러리로부터 유래될 수 있다 (예를 들어, 문헌 [Hoogenboom et al., J. Mol. Biol., 1991, 227:381-388]; [Marks et al., J. Mol. Biol., 1991, 222:581-597]; 및 미국 특허 제5,565,332호 및 제5,573,905호 참조; 이들의 각각은 그 전문이 참조로 포함됨). 인간 항체는 또한 시험관내에서 활성화된 B 세포에 의해 생성될 수 있다 (예를 들어, 미국 특허 제5,567,610호 및 5,229,275호 참조, 이들의 각각은 그 전문이 참조로 포함됨). 인간 항체는 또한 효모-기재 라이브러리로부터 유래될 수 있다 (예를 들어, 그 전문이 참조로 포함되는 미국 특허 제8,691,730호 참조).

2.6. 항체 단편을 제조하는 방법

본원에서 제공된 항체 단편은 본원에 기재된 예시적인 방법 또는 관련 기술분야에 공지된 것들을 비롯한 임의의 적합한 방법에 의해 제조될 수 있다. 적합한 방법으로는 재조합 기법 및 전체 항체의 단백질분해적 소화를 들 수 있다. 항체 단편을 제조하는 예시적인 방법은 예를 들어, 그 전문이 참조로 포함되는 문헌 [Hudson et al., Nat. Med., 2003, 9:129-134]에 기재되어 있다. scFv 항체를 제조하는 방법은 예를 들어, 문헌 [Plueckthun, in The Pharmacology of Monoclonal Antibodies, vol. 113, Rosenburg and Moore eds., Springer-Verlag, New York, pp. 269-315 (1994)]; WO 93/16185; 및 미국 특허 제5,571,894호 및 제5,587,458호에 기재되어 있으며; 이들의 각각은 그 전문이 참조로 포함된다.

2.7. 대체 스캐폴드를 제조하는 방법

본원에서 제공된 대체 스캐폴드는 본원에 기재된 예시적인 방법 또는 관련 기술분야에 공지된 것들을 비롯한 임의의 적합한 방법에 의해 제조될 수 있다. 예를 들어, 아드넥틴™을 제조하는 방법은 그 전문이 참조로 포함되는 문헌 [Emanuel et al., mAbs, 2011, 3:38-48]에 기재되어 있다. iMab을 제조하는 방법은 그 전문이 참조로 포함되는 미국 특허 공개 제2003/0215914호에 기재되어 있다. 안티칼린^®을 제조하는 방법은 그 전문이 참조로 포함되는 문헌 [Vogt and Skerra, Chem. Biochem., 2004, 5:191-199]에 기재되어 있다. 쿠니츠 도메인을 제조하는 방법은 그 전문이 참조로 포함되는 문헌 [Wagner et al., Biochem. & Biophys. Res. Comm., 1992, 186:118-1145]에 기재되어 있다. 티오레독신 펩티드 압타머를 제조하는 방법은 그 전문이 참조로 포함되는 문헌 [Geyer and Brent, Meth. Enzymol., 2000, 328:171-208]에서 제공된다. 아피바디를 제조하는 방법은 그 전문이 참조로 포함되는 문헌 [Fernandez, Curr. Opinion in Biotech., 2004, 15:364-373]에서 제공된다. DARPin을 제조하는 방법은 그 전문이 참조로 포함되는 문헌 [Zahnd et al., J. Mol. Biol., 2007, 369:1015-1028]에서 제공된다. 아필린을 제조하는 방법은 그 전문이 참조로 포함되는 문헌 [Ebersbach et al., J. Mol. Biol., 2007, 372:172-185]에서 제공된다. 테트라넥틴을 제조하는 방법은 그 전문이 참조로 포함되는 문헌 [Graversen et al., J. Biol. Chem., 2000, 275:37390-37396]에서 제공된다. 아비머를 제조하는 방법은 그 전문이 참조로 포함되는 문헌 [Silverman et al., Nature Biotech., 2005, 23:1556-1561]에서 제공된다. 피노머를 제조하는 방법은 그 전문이 참조로 포함되는 문헌 [Silacci et al., J. Biol. Chem., 2014, 289:14392-14398]에서 제공된다.

대체 스캐폴드에 대한 추가의 정보는 문헌 [Binz et al., Nat. Biotechnol., 2005 23:1257-1268]; 및 [Skerra, Current Opin. in Biotech., 2007 18:295-304]에서 제공되며, 이들의 각각은 그 전문이 참조로 포함된다.

2.8. 변이체를 제조하는 방법

일부 실시양태에서, 본원에서 제공된 ABP는 예를 들어, 파지 제시-기재 친화도 성숙 기법을 사용하여 생성될 수 있는, 모 ABP의 친화도 성숙된 변이체이다. 간략하게, 1개 이상의 CDR 잔기를 돌연변이시키고, 변이체 ABP, 또는 그의 부분을 파지 상에 제시하고, 친화도에 대해 스크리닝할 수 있다. 이러한 변경은 CDR "핫스팟" 또는 체세포 성숙 프로세스 동안 높은 빈도로 돌연변이를 겪는 코돈에 의해 코딩되는 잔기 (그 전문이 참조로 포함되는 문헌 [Chowdhury, Methods Mol. Biol., 2008, 207:179-196] 참조), 및/또는 항원에 접촉하는 잔기에서 이루어질 수 있다.

오류-유발 PCR, 쇄 셔플링, 및 올리고뉴클레오티드-지정 돌연변이유발, 예컨대 트리뉴클레오티드-지정 돌연변이유발 (TRIM)을 비롯한 임의의 적합한 방법은 ABP를 코딩하는 폴리뉴클레오티드 서열(들) 내로 가변성을 도입하는 데 사용될 수 있다. 일부 측면에서, 몇몇 CDR 잔기 (예를 들어, 한 번에 4 내지 6개의 잔기)는 무작위화된다. 항원 결합에 관여하는 CDR 잔기는 예를 들어, 알라닌 스캐닝 돌연변이유발 또는 모델링을 사용하여 구체적으로 확인될 수 있다. CDR-H3 및 CDR-L3은 특히 종종 돌연변이를 위해 표적화된다.

가변 영역 및/또는 CDR 내로의 다양성의 도입은 2차 라이브러리를 생성하는 데 사용될 수 있다. 그 후, 2차 라이브러리를 스크리닝하여 개선된 친화도를 갖는 ABP 변이체를 확인한다. 2차 라이브러리로부터의 구축 및 재선택에 의한 친화도 성숙은 예를 들어, 그 전문이 참조로 포함되는 문헌 [Hoogenboom et al., Methods in Molecular Biology, 2001, 178:1-37]에 기재되었다.

2.9. 벡터, 숙주 세포, 및 재조합 방법

또한, NRP-1 ABP를 코딩하는 단리된 핵산, 상기 핵산을 포함하는 벡터, 상기 벡터 및 핵산을 포함하는 숙주 세포, 뿐만 아니라 ABP의 제조를 위한 재조합 기법이 제공된다.

또 다른 측면에서, 본원에서 제공된 항-인간 NRP-1 항체 또는 그의 항원-결합 단편의 중쇄 가변 영역을 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드가 제공된다. 또 다른 측면에서, 본원에서 제공된 항-인간 NRP-1 항체 또는 그의 항원-결합 단편의 경쇄 가변 영역을 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드가 제공된다.

또 다른 측면에서, 본원에서 제공된 항-인간 NRP-1 항체의 중쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드가 제공된다. 또 다른 측면에서, 본원에서 제공된 항-인간 NRP-1 항체의 경쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드가 제공된다.

ABP의 재조합 제조를 위해, 이를 코딩하는 핵산(들)을 단리하고, 추가의 클로닝 (즉, DNA의 증폭) 또는 발현을 위한 복제가능한 벡터 내로 삽입할 수 있다. 일부 측면에서, 핵산은 예를 들어 그 전문이 본원에 참조로 포함되는 미국 특허 제5,204,244호에 기재된 바와 같이 상동성 재조합에 의해 생성될 수 있다.

또 다른 측면에서, (a) 본원에서 제공된 항-인간 NRP-1 항체 또는 그의 항원-결합 단편의 중쇄 가변 영역을 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드 및/또는 (b) 항-인간 NRP-1 항체 또는 그의 항원-결합 단편의 경쇄 가변 영역을 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 발현 벡터가 제공된다.

또 다른 측면에서, (a) 본원에서 제공된 항-인간 NRP-1 항체의 중쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드 및/또는 (b) 항-인간 NRP-1 항체의 경쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 발현 벡터가 제공된다.

많은 상이한 벡터가 관련 기술분야에 공지되어 있다. 벡터 성분은 일반적으로 예를 들어 그 전문이 참조로 포함되는 미국 특허 제5,534,615호에 기재된 바와 같이, 하기 중 1종 이상을 포함한다: 신호 서열, 복제 원점, 1개 이상의 마커 유전자, 인핸서 요소, 프로모터, 및 전사 종결 서열.

적합한 숙주 세포의 예시적인 예는 하기에 제공된다. 이들 숙주 세포는 제한인 것으로 의미되지 않으며, 임의의 적합한 숙주 세포가 본원에서 제공된 ABP를 제조하는 데 사용될 수 있다.

또 다른 측면에서, (a) 내지 (d)로 이루어진 군으로부터 선택되는 발현 벡터로 형질전환된 숙주 세포가 제공된다: (a) 본원에서 제공된 항-인간 NRP-1 항체 또는 그의 항원-결합 단편의 중쇄 가변 영역을 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드, 및 항체 또는 그의 항원-결합 단편의 경쇄 가변 영역을 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 발현 벡터로 형질전환된 숙주 세포; (b) 본원에서 제공된 항-인간 NRP-1 항체 또는 그의 항원-결합 단편의 중쇄 가변 영역을 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 발현 벡터, 및 항체 또는 그의 항원-결합 단편의 경쇄 가변 영역을 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 발현 벡터로 형질전환된 숙주 세포; (c) 본원에서 제공된 항-인간 NRP-1 항체 또는 그의 항원-결합 단편의 중쇄 가변 영역을 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 발현 벡터로 형질전환된 숙주 세포; 및 (d) 본원에서 제공된 항-인간 NRP-1 항체 또는 그의 항원-결합 단편의 경쇄 가변 영역을 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 발현 벡터로 형질전환된 숙주 세포.

또 다른 측면에서, (a) 내지 (d)로 이루어진 군으로부터 선택되는 발현 벡터로 형질전환된 숙주 세포가 제공된다: (a) 본원에서 제공된 항-인간 NRP-1 항체의 중쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드, 및 항체의 경쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 발현 벡터로 형질전환된 숙주 세포; (b) 본원에서 제공된 항-인간 NRP-1 항체의 중쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 발현 벡터, 및 항체의 경쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 발현 벡터로 형질전환된 숙주 세포; (c) 본원에서 제공된 항-인간 NRP-1 항체의 중쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 발현 벡터로 형질전환된 숙주 세포; 및 (d) 본원에서 제공된 항-인간 NRP-1 항체의 경쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 발현 벡터로 형질전환된 숙주 세포.

적합한 숙주 세포로는 임의의 원핵생물 (예를 들어, 박테리아), 하등 진핵생물 (예를 들어, 효모), 또는 고등 진핵생물 (예를 들어, 포유동물) 세포를 들 수 있다. 적합한 원핵생물로는 진정세균, 예컨대 그람-음성 또는 그람-양성 유기체, 예를 들어, 엔테로박테리아세아에 (Enterobacteriaceae), 예컨대 에스케리키아 (Escherichia) (이. 콜라이), 엔테로박터 (Enterobacter), 에르위니아 (Erwinia), 클레브시엘라 (Klebsiella), 프로테우스 (Proteus), 살모넬라 (Salmonella) (에스. 티피무리움 (S. typhimurium)), 세라티아 (Serratia) (에스. 마르세스칸스 (S. marcescans)), 시겔라 (Shigella), 바실리 (Bacilli) (비. 서브틸리스 (B. subtilis) 및 비. 리케니포르미스 (B. licheniformis)), 슈도모나스 (Pseudomonas) (피. 아에루기노사 (P. aeruginosa)), 및 스트렙토미세스 (Streptomyces)를 들 수 있다. 한 유용한 이. 콜라이 클로닝 숙주는 이. 콜라이 294이지만, 다른 균주, 예컨대 이. 콜라이 B, 이. 콜라이 X1776, 및 이. 콜라이 W3110도 또한 적합하다.

원핵생물 외에도, 진핵생물 미생물, 예컨대 필라멘트성 진균 또는 효모는 또한 NRP-1 ABP-코딩 벡터를 위한 적합한 클로닝 또는 발현 숙주이다. 사카로미세스 세레비지아에, 또는 통상적인 빵 효모는 통상적으로 사용되는 하등 진핵생물 숙주 미생물이다. 그러나, 다수의 다른 속, 종, 및 균주, 예컨대 쉬조사카로미세스 폼베 (Schizosaccharomyces pombe), 클루이베로미세스 (Kluyveromyces) (케이. 락티스 (K. lactis), 케이. 프라길리스 (K. fragilis), 케이. 불가리쿠스 (K. bulgaricus), 케이. 위케라미이 (K. wickeramii), 케이. 왈티이 (K. waltii), 케이. 드로소필라룸 (K. drosophilarum), 케이. 써모톨레란스 (K. thermotolerans), 및 케이. 마르크시아누스 (K. marxianus)), 야로위아 (Yarrowia), 피키아 파스토리스 (Pichia pastoris), 칸디다 (Candida) (씨. 알비칸스 (C. albicans)), 트리코더마 리시아 (Trichoderma reesia), 뉴로스포라 크라사 (Neurospora crassa), 쉬와니오미세스 (Schwanniomyces) (에스. 옥시덴탈리스 (S. occidentalis)), 및 필라멘트성 진균, 예컨대, 예를 들어 페니실리움 (Penicillium), 톨리포클라디움 (Tolypocladium), 및 아스페르길루스 (Aspergillus) (에이. 니둘란스 (A. nidulans) 및 에이. 니거 (A. niger))는 이용가능하며 유용하다.

본원에 개시된 NRP-1 ABP를 제조하는 데 사용되는 숙주 세포는 다양한 배지에서 배양될 수 있다. 시판되는 배지, 예컨대, 예를 들어, 햄 (Ham's) F10, 최소 필수 배지 (Minimal Essential Medium) (MEM), RPMI-1640, 및 둘베코 변형 이글 배지 (Dulbecco's Modified Eagle's Medium) (DMEM)는 숙주 세포를 배양하는 데 적합하다. 또한, 문헌 [Ham et al., Meth. Enz., 1979, 58:44]; [Barnes et al., Anal. Biochem., 1980, 102:255]; 및 미국 특허 제4,767,704호, 제4,657,866호, 제4,927,762호, 제4,560,655호, 및 제5,122,469호; 또는 WO 90/03430 및 WO 87/00195에 기재된 배지 중 임의의 것이 사용될 수 있다. 상기 참고문헌의 각각은 그 전문이 본원에 참조로 포함된다.

이들 배지 중 임의의 것은 필요에 따라 호르몬 및/또는 다른 성장 인자 (예컨대 인슐린, 트랜스페린, 또는 표피 성장 인자), 염 (예컨대 염화나트륨, 칼슘, 마그네슘, 및 포스페이트), 완충제 (예컨대 HEPES), 뉴클레오티드 (예컨대 아데노신 및 티미딘), 항생제, 흔적량 원소 (통상적으로 마이크로몰 범위의 최종 농도로 존재하는 무기 화합물로서 정의됨), 및 글루코스 또는 등가의 에너지 공급원으로 보충될 수 있다. 임의의 다른 필요한 보충물은 또한 관련 기술분야의 통상의 기술자에게 공지되어 있을 적절한 농도로 포함될 수 있다.

배양 조건, 예컨대 온도, pH 등은 발현을 위해 선택되는 숙주 세포와 함께 이전에 사용된 것들이며, 관련 기술분야의 통상의 기술자에게 명백할 것이다.

재조합 기법을 사용하는 경우, ABP는 주변세포질 공간에서 세포내로 생성되거나, 배지 내로 직접적으로 분비될 수 있다. ABP가 세포내로 생성되는 경우, 제1 단계로서, 숙주 세포 또는 용해된 단편 중 어느 하나인 미립자 데브리스는 예를 들어, 원심분리 또는 한외여과에 의해 제거된다. 예를 들어, 카터 (Carter) 등 (Bio/Technology, 1992, 10:163-167, 그 전문이 참조로 포함됨)은 이. 콜라이의 주변세포질 공간으로 분비된 ABP를 단리하는 절차를 기재한다. 간략하게, 세포 페이스트를 아세트산나트륨 (pH 3.5), EDTA, 및 페닐메틸술포닐플루오라이드 (PMSF)의 존재 하에서 약 30분에 걸쳐 해동시킨다. 세포 데브리스는 원심분리에 의해 제거될 수 있다.

일부 실시양태에서, ABP는 무세포 시스템에서 생성된다. 일부 측면에서, 무세포 시스템은 그 전문이 참조로 포함되는 문헌 [Yin et al., mAbs, 2012, 4:217-225]에 기재된 바와 같은 시험관내 전사 및 번역 시스템이다. 일부 측면에서, 무세포 시스템은 진핵생물 세포로부터의 또는 원핵생물 세포로부터의 무세포 추출물을 이용한다. 일부 측면에서, 원핵생물 세포는 이. 콜라이이다. ABP의 무세포 발현은 예를 들어, ABP가 불용성 응집체로서 세포에서 축적되는 경우, 또는 주변세포질 발현으로부터의 수율이 낮은 경우 유용할 수 있다.

ABP가 배지 내로 분비되는 경우, 이러한 발현 시스템으로부터의 상청액을 일반적으로 먼저 시판되는 단백질 농축 필터, 예를 들어, 아미콘 (Amicon)^® 또는 밀리포어 (Millipore)^® 펠콘 (Pellcon)^® 한외여과 유닛을 사용하여 농축시킨다. 프로테아제 억제제, 예컨대 PMSF는 단백질분해를 억제하기 위해 상기 단계 중 임의의 것에 포함될 수 있으며, 항생제는 우발적인 오염물의 성장을 방지하기 위해 포함될 수 있다.

세포로부터 제조된 ABP 조성물은 예를 들어, 수산화인회석 크로마토그래피, 겔 전기영동, 투석, 및 친화도 크로마토그래피를 사용하여 정제될 수 있으며, 친화도 크로마토그래피가 특히 유용한 정제 기법이다. 친화도 리간드로서 단백질 A의 적합성은 ABP에 존재하는 임의의 이뮤노글로불린 Fc 도메인의 종 및 이소형에 의존한다. 단백질 A는 인간 γ1, γ2, 또는 γ4 중쇄를 포함하는 ABP를 정제하는 데 사용될 수 있다 (문헌 [Lindmark et al., J. Immunol. Meth., 1983, 62:1-13], 그 전문이 참조로 포함됨). 단백질 G는 모든 마우스 이소형에 및 인간 γ3에 유용하다 (문헌 [Guss et al., EMBO J., 1986, 5:1567-1575], 그 전문이 참조로 포함됨).

친화도 리간드가 부착되는 매트릭스는 대부분 아가로스이지만, 다른 매트릭스는 이용가능하다. 기계적으로 안정한 매트릭스, 예컨대 제어된 기공 유리 또는 폴리(스티렌디비닐)벤젠은 아가로스로 달성될 수 있는 것보다 더 빠른 유속 및 더 짧은 프로세싱 시간을 허용한다. ABP가 C_H3 도메인을 포함하는 경우, 베이커본드 (BakerBond) ABX^® 수지는 정제에 유용하다.

단백질 정제를 위한 다른 기법, 예컨대 이온-교환 컬럼 상의 분획화, 에탄올 침전, 역상 HPLC, 실리카 상의 크로마토그래피, 헤파린 세파로스 (Sepharose)^®상의 크로마토그래피, 크로마토포커싱, SDS-PAGE, 및 황산암모늄 침전은 또한 이용가능하며, 관련 기술분야의 통상의 기술자에 의해 적용될 수 있다.

임의의 예비 정제 단계(들) 후에, 관심의 ABP 및 오염물을 포함하는 혼합물을 일반적으로 저 염 농도 (예를 들어, 약 0 내지 약 0.25 M 염)에서 수행되는 약 2.5 내지 약 4.5의 pH에서 용리 완충제를 사용한 저 pH 소수성 상호작용 크로마토그래피로 처리할 수 있다.

3. 검정

관련 기술분야에 공지된 다양한 검정은 본원에서 제공된 NRP-1 ABP를 확인하고 특징화하는 데 사용될 수 있다.

3.1. 결합, 경쟁, 및 에피토프 지도화 검정

본원에서 제공된 ABP의 특이적 항원-결합 활성은 SPR, BLI, RIA, KinExA, 유동 세포측정, 및 MSD-SET를 비롯한 임의의 적합한 방법에 의해 평가될 수 있다. 추가적으로, 항원-결합 활성은 ELISA 검정 및 웨스턴 블롯 검정에 의해 평가될 수 있다.

2가지 ABP, 또는 ABP 및 또 다른 분자 (예를 들어, NRP-1의 1종 이상의 리간드) 사이의 경쟁을 측정하는 검정은 본 개시내용의 다른 곳에, 및 예를 들어, 그 전문이 참조로 포함되는 문헌 [Harlow and Lane, Antibodies: A Laboratory Manual ch.14, 1988, Cold Spring Harbor Laboratory, Cold Spring Harbor, N.Y]에 기재되어 있다.

본원에서 제공된 ABP가 결합하는 에피토프를 지도화하기 위한 검정은 예를 들어, 그 전문이 참조로 포함되는 문헌 [Morris "Epitope Mapping Protocols," in Methods in Molecular Biology vol. 66, 1996, Humana Press, Totowa, N.J.]에 기재되어 있다. 일부 실시양태에서, 에피토프는 펩티드 경쟁에 의해 결정된다. 일부 실시양태에서, 에피토프는 질량 분광법에 의해 결정된다. 일부 실시양태에서, 에피토프는 결정학에 의해 결정된다.

3.2. NRP-1 길항작용 검정

일부 실시양태에서, 본원에서 제공된 ABP는 NRP-1에 대한 길항제성 활성을 갖는 ABP를 확인하거나 특징화하기 위해 스크리닝된다. 임의의 적합한 검정은 이러한 ABP를 확인하거나 특징화하는 데 사용될 수 있다. 일부 측면에서, 검정은 이펙터 T 세포를 본원에서 제공된 ABP와 접촉시킨 후에 이펙터 T 세포에 의해 분비되는 시토카인의 양을 측정한다. 일부 측면에서, 시토카인은 IL-2, IL-6, LT-α, TNF, GM-CSF, IFNγ, 및 이들의 조합으로부터 선택된다. 일부 측면에서, 시토카인은 sCD40L, VEGF, TGF-α, RANTES, PDGF-AB/BB, PDGF-AA, MIP-1β, MIP-1α, MDC (CCL22), MCP-3, MCP-1, IP-10, IL-17A, IL-2Rα, IL-15, IL-13, IL-12 (p70), IL-12 (p40), IL-10, IL-9, IL-8, IL-7, IL-5, IL-4, IL-3, IL-2, IL-2Rα, IL-1RA, IL-1β, IL-1α, IFNγ, IFNα2, GRO, GM-CSF, G-CSF, 프락탈킨, Flt-3 리간드, FGF-2, 에오탁신, EGF, 및 이들의 조합으로부터 선택된다.

일부 실시양태에서, 이펙터 세포는 CD3의 효능제로 공동-자극되어 이펙터 세포에 의한 시토카인의 분비를 촉진시킨다. 일부 측면에서, CD3 효능제는 준최대 수준으로 제공된다.

일부 측면에서, 이러한 검정은 이펙터 T 세포를 본원에서 제공된 ABP와 접촉시킨 후에 이펙터 T 세포의 증식을 측정할 수 있다. 일부 측면에서, 이펙터 T 세포의 증식은 염료 (예를 들어, 카르복시플루오레세인 디아세테이트 숙신이미딜 에스테르; CFSE)의 희석에 의해, 3중수소화된 티미딘 흡수에 의해, 발광 세포 생존력 검정에 의해, 또는 관련 기술분야에 공지된 다른 검정에 의해 측정된다.

일부 측면에서, 이러한 검정은 조절성 T 세포를 본원에서 제공된 ABP와 접촉시킨 후에 조절성 T 세포의 분화, 시토카인 생산, 생존력 (예를 들어, 생존), 증식, 또는 억제 활성을 측정할 수 있다.

일부 측면에서, 이러한 검정은 NK 세포를 본원에서 제공된 ABP와 접촉시킨 후에 NK 세포의 세포독성 활성을 측정할 수 있다. 일부 측면에서, NK 세포의 세포독성 활성은 표적 세포 (예를 들어, K562 세포주)의 NK-매개된 살해를 정량화하는 세포독성 검정을 사용하여 측정된다. 그 전문이 참조로 포함되는 문헌 [Jang et al., Ann. Clin. Lab. Sci., 2012, 42:42-49]을 참조한다.

일부 측면에서, 이러한 검정은 그란자임 B의 양을 측정할 수 있다. 일부 측면에서, 이러한 검정은 퍼포린의 양을 측정할 수 있다.

3.3. 이펙터 기능에 대한 검정

본원에서 제공된 ABP로 처리한 후의 이펙터 기능은 문헌 [Ravetch and Kinet, Annu. Rev. Immunol., 1991, 9:457-492]; 미국 특허 제5,500,362호, 제5,821,337호; 문헌 [Hellstrom et al., Proc. Nat'l Acad. Sci. USA, 1986, 83:7059-7063]; [Hellstrom et al., Proc. Nat'l Acad. Sci. USA, 1985, 82:1499-1502]; [Bruggemann et al., J. Exp. Med., 1987, 166:1351-1361]; [Clynes et al., Proc. Nat'l Acad. Sci. USA, 1998, 95:652-656]; WO 2006/029879; WO 2005/100402; 문헌 [Gazzano-Santoro et al., J. Immunol. Methods, 1996, 202:163-171]; [Cragg et al., Blood, 2003, 101:1045-1052]; [Cragg et al. Blood, 2004, 103:2738-2743]; 및 [Petkova et al., Int'l. Immunol., 2006, 18:1759-1769]에 기재된 것들을 비롯한 관련 기술분야에 공지된 다양한 시험관내 및 생체내 검정을 사용하여 평가될 수 있으며; 이들의 각각은 그 전문이 참조로 포함된다.

4. 제약 조성물

본원에서 제공된 ABP는 임의의 적절한 제약 조성물로 제형화되고, 임의의 적합한 투여 경로에 의해 투여될 수 있다. 적합한 투여 경로로는 동맥내, 진피내, 근육내, 복강내, 정맥내, 비내, 비경구, 폐, 및 피하 경로를 들 수 있으나, 이에 제한되지는 않는다.

또 다른 측면에서, 본원에서 제공된 항-인간 NRP-1 항체 또는 그의 항원-결합 단편 및 제약상 허용되는 부형제를 포함하는 제약 조성물이 제공된다.

또 다른 측면에서, 본원에서 제공된 항-인간 NRP-1 항체 또는 그의 항원-결합 단편의 복수 종류를 포함하는 제약 조성물이 제공된다. 예를 들어, 제약 조성물은 번역후 변형을 겪지 않은 항체 또는 그의 항원-결합 단편, 및 항체 또는 그의 항원-결합 단편의 번역후 변형으로부터 유래된 항체 또는 그의 항원-결합 단편을 포함한다.

한 실시양태에서, 제약 조성물은 (1) 내지 (4)로부터 선택되는 항-인간 NRP-1 항체 중 적어도 2가지 종류를 포함한다: (1) 서열식별번호: 118로 이루어진 중쇄, 및 서열식별번호: 126으로 이루어진 경쇄를 포함하는 항-인간 NRP-1 항체, (2) 아미노산 번호 1의 E가 피로글루타메이트로 변형된 서열식별번호: 118로 이루어진 중쇄, 및 서열식별번호: 126으로 이루어진 경쇄를 포함하는 항-인간 NRP-1 항체, (3) 서열식별번호: 118의 아미노산 번호 1 내지 453의 아미노산 서열로 이루어진 중쇄, 및 서열식별번호: 126으로 이루어진 경쇄를 포함하는 항-인간 NRP-1 항체; 및 (4) 아미노산 번호 1의 E가 피로글루타메이트로 변형된 서열식별번호: 118의 아미노산 번호 1 내지 453의 아미노산 서열로 이루어진 중쇄, 및 서열식별번호: 126으로 이루어진 경쇄를 포함하는 항-인간 NRP-1 항체.

한 실시양태에서, 제약 조성물은 서열식별번호: 118로 이루어진 중쇄, 및 서열식별번호: 126으로 이루어진 경쇄를 포함하는 항-인간 NRP-1 항체, 서열식별번호: 118의 아미노산 번호 1 내지 453의 아미노산 서열로 이루어진 중쇄, 및 서열식별번호: 126으로 이루어진 경쇄를 포함하는 항-인간 NRP-1 항체, 및 제약상 허용되는 부형제를 포함한다.

제약 조성물은 1종 이상의 제약 부형제를 포함할 수 있다. 임의의 적합한 제약 부형제가 사용될 수 있으며, 관련 기술분야의 통상의 기술자는 적합한 제약 부형제를 선택할 수 있다. 따라서, 하기 제공되는 제약 부형제는 예시적이며, 제한이 아닌 것으로 의도된다. 추가의 제약 부형제로는 예를 들어, 그 전문이 참조로 포함되는 문헌 [Handbook of Pharmaceutical Excipients, Rowe et al. (Eds.) 6th Ed. (2009)]에 기재된 것들을 들 수 있다.

일부 실시양태에서, 제약 조성물은 발포 방지제를 포함한다. 임의의 적합한 발포 방지제가 사용될 수 있다. 일부 측면에서, 발포 방지제는 알콜, 에테르, 오일, 왁스, 실리콘, 계면활성제, 및 이들의 조합으로부터 선택된다. 일부 측면에서, 발포 방지제는 광물유, 식물유, 에틸렌 비스 스테아르아미드, 파라핀 왁스, 에스테르 왁스, 지방 알콜 왁스, 장쇄 지방 알콜, 지방산 비누, 지방산 에스테르, 규소 글리콜, 플루오로실리콘, 폴리에틸렌 글리콜-폴리프로필렌 글리콜 공중합체, 폴리디메틸실록산-이산화규소, 에테르, 옥틸 알콜, 카프릴 알콜, 소르비탄 트리올레에이트, 에틸 알콜, 2-에틸-헥산올, 디메티콘, 올레일 알콜, 시메티콘, 및 이들의 조합으로부터 선택된다.

일부 실시양태에서, 제약 조성물은 공용매를 포함한다. 공용매의 예시적인 예로는 에탄올, 폴리(에틸렌) 글리콜, 부틸렌 글리콜, 디메틸아세트아미드, 글리세린, 프로필렌 글리콜, 및 이들의 조합을 들 수 있다.

일부 실시양태에서, 제약 조성물은 완충제를 포함한다. 완충제의 예시적인 예로는 아세테이트, 보레이트, 카르보네이트, 락테이트, 말레이트, 포스페이트, 시트레이트, 히드록시드, 디에탄올아민, 모노에탄올아민, 글리신, 메티오닌, 구아 검, 모노나트륨 글루타메이트, 및 이들의 조합을 들 수 있다.

일부 실시양태에서, 제약 조성물은 담체 또는 충전제를 포함한다. 담체 또는 충전제의 예시적인 예로는 락토스, 말토덱스트린, 만니톨, 소르비톨, 키토산, 스테아르산, 크산탄 검, 구아 검, 및 이들의 조합을 들 수 있다.

일부 실시양태에서, 제약 조성물은 계면활성제를 포함한다. 계면활성제의 예시적인 예로는 d-알파 토코페롤, 벤즈알코늄 클로라이드, 벤즈에토늄 클로라이드, 세트리미드, 세틸피리디늄 클로라이드, 도쿠세이트 나트륨, 글리세릴 베헤네이트, 글리세릴 모노올레에이트, 라우르산, 마크로골 15 히드록시스테아레이트, 미리스틸 알콜, 인지질, 폴리옥시에틸렌 알킬 에테르, 폴리옥시에틸렌 소르비탄 지방산 에스테르, 폴리옥시에틸렌 스테아레이트, 폴리옥시글리세리드, 나트륨 라우릴 술페이트, 소르비탄 에스테르, 비타민 E 폴리에틸렌(글리콜) 숙시네이트, 및 이들의 조합을 들 수 있다.

일부 실시양태에서, 제약 조성물은 케이킹 방지제를 포함한다. 케이킹 방지제의 예시적인 예로는 인산칼슘 (3염기성), 히드록시메틸 셀룰로스, 히드록시프로필 셀룰로스, 산화마그네슘, 및 이들의 조합을 들 수 있다.

제약 조성물과 함께 사용될 수 있는 다른 부형제로는 예를 들어, 알부민, 항산화제, 항박테리아제, 항진균제, 생체흡수성 중합체, 킬레이트화제, 제어 방출제, 희석제, 분산제, 용해 증진제, 유화제, 겔화제, 연고 베이스, 침투 증진제, 보존제, 가용화제, 용매, 안정화제, 당, 및 이들의 조합을 들 수 있다. 이들 작용제의 각각의 구체적인 예는 예를 들어, 그 전문이 참조로 포함되는 문헌 [Handbook of Pharmaceutical Excipients, Rowe et al. (Eds.) 6th Ed. (2009), The Pharmaceutical Press]에 기재되어 있다.

일부 실시양태에서, 제약 조성물은 용매를 포함한다. 일부 측면에서, 용매는 염수 용액, 예컨대 멸균 등장성 염수 용액 또는 덱스트로스 용액이다. 일부 측면에서, 용매는 주사용수이다.

일부 실시양태에서, 제약 조성물은 미립자 형태, 예컨대 미세입자 또는 나노입자이다. 미세입자 및 나노입자는 임의의 적합한 물질, 예컨대 중합체 또는 지질로부터 형성될 수 있다. 일부 측면에서, 미세입자 또는 나노입자는 미셀, 리포솜, 또는 폴리머솜이다.

추가로, 물이 일부 ABP의 분해를 용이하게 할 수 있기 때문에, ABP를 포함하는 무수 제약 조성물 및 투여 형태가 본원에서 제공된다.

본원에서 제공된 무수 제약 조성물 및 투여 형태는 무수 또는 저수분 함유 성분 및 저수분 또는 저습기 조건을 사용하여 제조될 수 있다. 락토스 및 1차 또는 2차 아민을 포함하는 적어도 1종의 활성 성분을 포함하는 제약 조성물 및 투여 형태는 제조, 패키징, 및/또는 저장 동안 수분 및/또는 습기와의 실질적인 접촉이 예상되는 경우 무수일 수 있다.

무수 제약 조성물은 그의 무수 성질이 유지되도록 제조되고 저장되어야 한다. 따라서, 무수 조성물은 이들이 적합한 처방 키트에 포함될 수 있도록 물에의 노출을 방지하는 것으로 공지된 물질을 사용하여 패키징될 수 있다. 적합한 패키징의 예로는 기밀하게 밀봉된 호일, 플라스틱, 단위 용량 용기 (예를 들어, 바이알), 블리스터 팩, 및 스트립 팩을 들 수 있으나, 이에 제한되지는 않는다.

4.1. 비경구 투여 형태

특정 실시양태에서, 본원에서 제공된 ABP는 비경구 투여 형태로서 제형화된다. 비경구 투여 형태는 피하, 정맥내 (주입 및 볼루스 주사를 포함함), 근육내, 및 동맥내를 포함하나 이에 제한되지 않는 다양한 경로에 의해 대상체에게 투여될 수 있다. 그들의 투여가 전형적으로 오염물에 대한 대상체의 자연 방어를 우회하기 때문에, 비경구 투여 형태는 전형적으로 멸균성이거나, 대상체에게 투여하기 전에 멸균될 수 있다. 비경구 투여 형태의 예로는 주사가 용이한 용액, 제약상 허용되는 주사용 비히클에 용해되거나 현탁되기 용이한 건조 (예를 들어, 동결건조된) 생성물, 주사가 용이한 현탁액, 및 에멀젼을 들 수 있으나, 이에 제한되지는 않는다.

비경구 투여 형태를 제공하는 데 사용될 수 있는 적합한 비히클은 관련 기술분야의 통상의 기술자에게 널리 공지되어 있다. 예로는 주사용수 USP; 수성 비히클, 예컨대, 염화나트륨 주사, 링거 주사, 덱스트로스 주사, 덱스트로스 및 염화나트륨 주사, 및 락테이트화된 링거 주사 (그러나, 이에 제한되지는 않음); 수혼화성 비히클, 예컨대, 에틸 알콜, 폴리에틸렌 글리콜, 및 폴리프로필렌 글리콜 (그러나, 이에 제한되지는 않음); 및 비-수성 비히클, 예컨대 옥수수유, 면실유, 땅콩유, 참깨유, 에틸 올레에이트, 이소프로필 미리스테이트, 및 벤질 벤조에이트 (그러나, 이에 제한되지는 않음)를 들 수 있으나, 이에 제한되지는 않는다.

본원에 개시된 ABP 중 1종 이상의 용해도를 증가시키는 부형제는 또한 비경구 투여 형태 내로 혼입될 수 있다.

일부 실시양태에서, 비경구 투여 형태는 동결건조된다. 예시적인 동결건조된 제형은 예를 들어, 미국 특허 제6,267,958호 및 제6,171,586호; 및 WO 2006/044908에 기재되어 있으며; 이들의 각각은 그 전문이 참조로 포함된다.

5. 투여량 및 단위 투여 형태

인간 치료제에서, 의사는 그가 예방적 또는 치유적 치료에 따라 및 치료되는 대상체에 특이적인 연령, 중량, 상태 및 다른 인자에 따라 가장 적절하다고 간주하는 약용량을 결정할 것이다.

특정 실시양태에서, 본원에서 제공된 조성물은 제약 조성물 또는 단일 단위 투여 형태이다. 본원에서 제공된 제약 조성물 및 단일 단위 투여 형태는 1종 이상의 예방적 또는 치료적 ABP의 예방학적 또는 치료 유효량을 포함한다.

장애 또는 그의 1종 이상의 증상의 예방 또는 치료에 유효할 것인 ABP 또는 조성물의 양은 질환 또는 상태의 성질 및 중증도, 및 ABP가 투여되는 경로에 따라 다양할 것이다. 빈도 및 투여량은 또한 투여되는 구체적인 요법 (예를 들어, 치료제 또는 예방제), 장애, 질환, 또는 상태의 중증도, 투여 경로, 뿐만 아니라 대상체의 연령, 신체, 중량, 반응, 및 과거 의학적 병력에 따라 각각의 대상체에 특이적인 인자에 따라 다양할 것이다. 유효 용량은 시험관내 또는 동물 모델 시험 시스템으로부터 유래된 용량-반응 곡선으로부터 추정될 수 있다.

특정 실시양태에서, 조성물의 예시적인 용량으로는 대상체 또는 샘플 중량의 킬로그램 당 ABP의 밀리그램 또는 마이크로그램 양 (예를 들어, 킬로그램 당 약 10 마이크로그램 내지 킬로그램 당 약 50 밀리그램, 킬로그램 당 약 100 마이크로그램 내지 킬로그램 당 약 25 밀리그램, 또는 킬로그램 당 약 100 마이크로그램 내지 킬로그램 당 약 10 밀리그램)을 들 수 있다. 특정 실시양태에서, 대상체에서 장애, 또는 그의 1종 이상의 증상을 예방하거나, 치료하거나, 관리하거나, 개선시키기 위해 투여되는, ABP의 중량에 기초한 본원에서 제공된 ABP의 투여량은 대상체의 체중의 0.1 mg/kg, 1 mg/kg, 2 mg/kg, 3 mg/kg, 4 mg/kg, 5 mg/kg, 6 mg/kg, 10 mg/kg, 15 mg/kg, 20 mg/kg, 25 mg/kg, 30 mg/kg, 40 mg/kg 이상이다.

일부의 경우, 관련 기술분야의 통상의 기술자에게 명백할 것인 바와 같이, 본원에 개시된 범위 밖의 ABP의 투여량을 사용하는 것이 필요할 수 있다. 더욱이, 임상의 또는 치료하는 의사는 대상체 반응과 함께 요법을 중단하거나, 조정하거나, 종결하는 방법 및 시기를 알 것이다.

상이한 치료 유효량은 관련 기술분야의 통상의 기술자에 의해 용이하게 공지될 것인 바와 같이, 상이한 질환 및 상태에 대해 적용가능할 수 있다. 유사하게, 이러한 장애를 예방하거나, 관리하거나, 치료하거나, 개선시키는 데 충분하지만, 본원에서 제공된 ABP와 연관된 유해 효과를 유발하는 데 불충분하거나, 감소시키는 데 충분한 양은 또한 본원에서 제공된 투여량 양 및 용량 빈도 스케줄에 의해 포괄된다. 또한, 대상체가 본원에서 제공된 조성물의 다중 투여량이 투여되는 경우, 투여량의 전부가 동일할 필요는 없다. 예를 들어, 대상체에게 투여되는 투여량은 조성물의 예방 또는 치료 효과를 개선시키기 위해 증가될 수 있거나, 이는 특정 대상체가 경험하고 있는 1종 이상의 부작용을 감소시키기 위해 감소될 수 있다.

특정 실시양태에서, 치료 또는 예방은 본원에서 제공된 ABP 또는 조성물의 1개 이상의 로딩 용량으로 개시한 후, 1개 이상의 유지 용량이 이어질 수 있다.

특정 실시양태에서, 본원에서 제공된 ABP 또는 조성물의 용량은 대상체의 혈액 또는 혈청 중 ABP의 안정-상태 농도를 달성하도록 투여될 수 있다. 안정-상태 농도는 통상의 기술자에게 이용가능한 기법에 따른 측정에 의해 결정될 수 있거나, 대상체의 신체적 특징, 예컨대 신장, 중량 및 연령에 기초할 수 있다.

특정 실시양태에서, 동일한 조성물의 투여는 반복될 수 있으며, 투여는 적어도 1일, 2일, 3일, 5일, 10일, 15일, 30일, 45일, 2개월, 75일, 3개월, 또는 6개월만큼 분리될 수 있다. 다른 실시양태에서, 동일한 조성물의 투여는 반복될 수 있으며, 조성물은 1주 1회, 2주마다 1회, 3주마다 1회, 또는 4주마다 1회 주어질 수 있다. 특정 실시양태에서, 환자에게 투여되는 제1 용량은 "로딩 용량"일 수 있다. 로딩 용량은 후속 용량보다 더 높은 용량일 수 있다.

본 개시내용의 다른 곳에서 보다 상세하게 논의된 바와 같이, 본원에서 제공된 ABP는 임의로 질환 또는 장애를 예방하거나 치료하는 데 유용한 1종 이상의 추가의 작용제와 함께 투여될 수 있다. 이러한 추가의 작용제의 유효량은 제형에 존재하는 ABP의 양, 장애 또는 치료의 유형, 및 관련 기술분야에 공지되거나 본원에 기재된 다른 인자에 의존할 수 있다.

6. 치료 적용

치료 적용을 위해, 본 발명의 ABP는 포유동물, 일반적으로 인간에게 제약상 허용되는 투여 형태, 예컨대 관련 기술분야에 공지된 것들 및 상기 논의된 것들로 투여된다. 예를 들어, 본 발명의 ABP는 인간에게 볼루스로서 또는 시간의 기간에 걸친 연속 주입에 의해 정맥내로, 근육내, 복강내, 뇌척수내, 피하, 관절내, 윤활막내, 경막내, 또는 종양내 경로에 의해 투여될 수 있다. ABP는 또한 국소적 뿐만 아니라 전신적 치료 효과를 발휘하기 위해 종양주변, 병변내, 또는 병변주변 경로에 의해 적합하게 투여된다. 복강내 경로는 예를 들어, 난소 종양의 치료에서 특히 유용할 수 있다.

본원에서 제공된 ABP는 NRP-1을 포함하는 임의의 질환 또는 상태의 치료에 유용할 수 있다. 일부 실시양태에서, 질환 또는 상태는 항-NRP-1 ABP로의 치료로부터 유익을 얻을 수 있는 질환 또는 상태이다. 일부 실시양태에서, 질환 또는 상태는 종양이다. 일부 실시양태에서, 질환 또는 상태는 세포 증식성 장애이다. 일부 실시양태에서, 질환 또는 상태는 암이다.

일부 실시양태에서, 본원에서 제공된 ABP는 의약으로서 사용하기 위해 제공된다. 일부 실시양태에서, 본원에서 제공된 ABP는 의약의 제작 또는 제조에 사용하기 위해 제공된다. 일부 실시양태에서, 의약은 항-NRP-1 ABP로부터 유익을 얻을 수 있는 질환 또는 상태의 치료를 위한 것이다. 일부 실시양태에서, 질환 또는 상태는 종양이다. 일부 실시양태에서, 질환 또는 상태는 세포 증식성 장애이다. 일부 실시양태에서, 질환 또는 상태는 암이다. 일부 실시양태에서, 질환 또는 상태는 바이러스 감염이다.

일부 실시양태에서, 대상체에게 유효량의 본원에서 제공된 ABP를 투여함으로써 이를 필요로 하는 대상체에서 질환 또는 상태를 치료하는 방법이 본원에서 제공된다. 일부 측면에서, 질환 또는 상태는 암이다. 일부 측면에서, 질환 또는 상태는 바이러스 감염이다.

임의의 적합한 암은 본원에서 제공된 ABP로 치료될 수 있다. 예시적인 적합한 암으로는 예를 들어, 급성 림프모구성 백혈병 (ALL), 급성 골수성 백혈병 (AML), 부신피질선 암종, 항문암, 충수암, 별아교세포종, 기저 세포 암종, 뇌 종양, 담관암, 방광암, 골암, 유방암, 기관지 종양, 미지의 1차 기원의 암종, 심장 종양, 자궁경부암, 척삭종, 결장암, 결장직장암, 두개인두종, 관상 암종, 배아 종양, 자궁내막암, 뇌실막종, 식도암, 감각신경모세포종, 섬유성 조직구종, 유잉 육종, 안암, 생식 세포 종양, 담낭암, 위암, 위장 카르시노이드 종양, 위장 위 종양, 임신 영양막 질환, 신경아교종, 두경부암, 간세포암, 조직구증, 호지킨 림프종, 하인두암, 안구내 흑색종, 도세포 종양, 카포시 육종, 신장암, 랑게르한스 세포 조직구증, 후두암, 입술구강암, 간암, 상피내 소엽 암종, 폐암, 마크로글로불린혈증, 악성 섬유성 조직구종, 흑색종, 머켈 세포 암종, 중피종, 잠재 원발성을 갖는 전이성 편평 경부암, NUT 유전자와 관련된 중간선 관 암종, 구강암, 다발성 내분비 신생물 증후군, 다발 골수종, 균상 식육종, 골수형성이상 증후군, 골수형성이상/골수증식성 신생물, 비강 부비동암, 비인두암, 신경모세포종, 비-소세포 폐암, 구인두암, 골육종, 난소암, 췌장암, 유두종증, 부신경절종, 부갑상선암, 음경암, 인두암, 크롬친화세포종, 뇌하수체 종양, 흉막폐 모세포종, 원발성 중추 신경계 림프종, 전립선암, 직장암, 신세포암, 신우 요관암, 망막모세포종, 간상 종양, 타액선암, 세자리 증후군, 피부암, 소세포 폐암, 소장암, 연조직 육종, 척수 종양, 위암, T-세포 림프종, 기형 종양, 고환암, 인후암, 흉선종 및 흉선 암종, 갑상선암, 요도암, 자궁암, 질암, 외음부암, 및 윌름스 종양을 들 수 있다.

일부 실시양태에서, 유효량의 본원에서 제공된 ABP를 대상체에게 투여함으로써 이를 필요로 하는 대상체에서 표적 세포에서 NRP-1을 길항작용하는 방법이 본원에서 제공된다. 일부 측면에서, 본원에서 제공된 ABP에 의한 NRP-1의 길항작용은 표적 세포에 의한 IL-2, LT-α, IL-6, TNF, GM-CSF, IFNγ 또는 이들의 조합의 증가된 분비를 발생시킨다.

일부 실시양태에서, 유효량의 본원에서 제공된 ABP를 대상체에게 투여함으로써 이를 필요로 하는 대상체에서 이펙터 T 세포의 증식, 생존, 및/또는 기능을 증가시키는 방법이 본원에서 제공된다. 일부 측면에서, 이펙터 T 세포는 CD4+ 이펙터 T 세포이다. 일부 측면에서, 이펙터 T 세포는 CD8+ 이펙터 T 세포이다.

일부 실시양태에서, 유효량의 본원에서 제공된 ABP를 대상체에게 투여함으로써 이를 필요로 하는 대상체에서 조절성 T 세포에 의한 이펙터 T 세포의 억제를 무효화하는 방법이 본원에서 제공된다. 일부 측면에서, 조절성 T 세포는 CD4+CD25+Foxp3+ 조절제 T 세포이다. 일부 측면에서, 조절성 T 세포는 CD8+CD25+ 조절성 T 세포이다.

일부 실시양태에서, 유효량의 본원에서 제공된 ABP를 대상체에게 투여함으로써 이를 필요로 하는 대상체에서 자연 살해 (NK) 세포, 자연 살해 T (NKT) 세포, 대식세포, 또는 수지상 세포 (예를 들어, 형질세포양 수지상 세포)의 활성을 증가시키는 방법이 본원에서 제공된다.

일부 실시양태에서, 수반되는 혈소판 감소 없이 암을 갖는 대상체를 치료하는 방법이 본원에서 제공된다. 일부 측면에서, 방법은 대상체에서 실질적인 양의 혈소판감소를 초래하지 않는다.

일부 실시양태에서, 유효량의 본원에서 제공된 ABP를 대상체에게 투여함으로써 이를 필요로 하는 대상체에서 면역 반응을 향상시키는 방법이 본원에서 제공된다.

일부 실시양태에서, 유효량의 본원에서 제공된 ABP를 대상체에게 투여함으로써 이를 필요로 하는 대상체에서 종양의 발병을 지연시키는 방법이 본원에서 제공된다.

일부 실시양태에서, 유효량의 본원에서 제공된 ABP를 대상체에게 투여함으로써 이를 필요로 하는 대상체에서 종양의 발병을 예방하는 방법이 본원에서 제공된다.

일부 실시양태에서, 유효량의 본원에서 제공된 ABP를 대상체에게 투여함으로써 이를 필요로 하는 대상체에서 암의 발병을 지연시키는 방법이 본원에서 제공된다.

일부 실시양태에서, 유효량의 본원에서 제공된 ABP를 대상체에게 투여함으로써 이를 필요로 하는 대상체에서 암의 발병을 예방하는 방법이 본원에서 제공된다.

일부 실시양태에서, 유효량의 본원에서 제공된 ABP를 대상체에게 투여함으로써 이를 필요로 하는 대상체에서 종양의 크기를 감소시키는 방법이 본원에서 제공된다.

일부 실시양태에서, 유효량의 본원에서 제공된 ABP를 대상체에게 투여함으로써 이를 필요로 하는 대상체에서 전이의 수를 감소시키는 방법이 본원에서 제공된다.

일부 실시양태에서, 유효량의 본원에서 제공된 ABP를 대상체에게 투여함으로써 이를 필요로 하는 대상체에서 바이러스 역가를 감소시키는 방법이 본원에서 제공된다.

일부 실시양태에서, 유효량의 본원에서 제공된 ABP를 대상체에게 투여함으로써 이를 필요로 하는 대상체에서 전체적 생존, 중위 생존 시간, 또는 무진행 생존의 기간을 연장시키는 방법이 본원에서 제공된다.

일부 실시양태에서, 유효량의 본원에서 제공된 ABP를 대상체에게 투여함으로써 치료의 표준 치료제에 저항성이 되었던 대상체를 치료하는 방법이 본원에서 제공된다. 일부 실시양태에서, 대상체가 저항성이 되었던 치료의 표준 치료제는 PD-1 억제제이다. 다른 실시양태에서, 대상체가 저항성이 되었던 치료의 표준 치료제는 PD-L1 억제제이다. 다른 실시양태에서, 대상체가 저항성이 되었던 치료의 표준 치료제는 CTLA-4 억제제이다.

7. 조합 요법

일부 실시양태에서, 본원에서 제공된 ABP는 적어도 1종의 추가의 치료제와 함께 투여된다. 임의의 적합한 추가의 치료제는 본원에서 제공된 ABP와 함께 투여될 수 있다. 일부 측면에서, 추가의 치료제는 방사선, 세포독성제, 화학치료제, 세포정지제, 항-호르몬제, EGFR 억제제, 면역자극제, 항-혈관신생제, 및 이들의 조합으로부터 선택된다.

일부 실시양태에서, 추가의 치료제는 면역자극제를 포함한다.

일부 실시양태에서, 면역자극제는 면역 세포의 억제성 수용체, 또는 그의 리간드의 신호화를 차단하는 작용제이다. 일부 측면에서, 억제성 수용체 또는 리간드는 PVRIG, VISTA, CCR4, CD27, CTLA-4, PD-1, PD-L1, LAG-3, Tim3, TIGIT, 뉴리틴, BTLA, KIR, 및 이들의 조합으로부터 선택된다. 일부 측면에서, 작용제는 항-PD-1 항체 (예를 들어, 펨브롤리주맙 또는 니볼루맙), 및 항-PD-L1 항체 (예를 들어, 아테졸리주맙), 항-CTLA-4 항체 (예를 들어, 이필리무맙), 및 이들의 조합으로부터 선택된다. 일부 측면에서, 작용제는 펨브롤리주맙이다. 일부 측면에서, 작용제는 니볼루맙이다. 일부 측면에서, 작용제는 아테졸리주맙이다.

일부 실시양태에서, 추가의 치료제는 PD-1 및 PD-L1 사이의 상호작용을 억제하는 작용제이다. 일부 측면에서, PD-1 및 PD-L1 사이의 상호작용을 억제하는 추가의 치료제는 항체, 펩티드모방체 및 소분자로부터 선택된다. 일부 측면에서, PD-1 및 PD-L1 사이의 상호작용을 억제하는 추가의 치료제는 펨브롤리주맙, 니볼루맙, 아테졸리주맙, 아벨루맙, 두르발루맙, BMS-936559, 술파모노메톡신 1, 및 술파메티졸 2로부터 선택된다. 일부 실시양태에서, PD-1 및 PD-L1 사이의 상호작용을 억제하는 추가의 치료제는 예를 들어 그 전문이 참조로 포함되는 문헌 [Weinmann et al., Chem Med Chem, 2016, 14:1576 (DOI: 10.1002/cmdc.201500566)]에 기재된 바와 같은 이러한 활성을 갖는 것으로 관련 기술분야에 공지된 임의의 치료제이다. 일부 실시양태에서, PD-1 및 PD-L1 사이의 상호작용을 억제하는 작용제는 본원에서 제공된 ABP와 동일한 제약 조성물에 제형화된다. 일부 실시양태에서, PD-1 및 PD-L1 사이의 상호작용을 억제하는 작용제는 본원에서 제공된 ABP와 상이한 제약 조성물에 제형화된다. 일부 실시양태에서, PD-1 및 PD-L1 사이의 상호작용을 억제하는 작용제는 본원에서 제공된 ABP의 투여 전에 투여된다. 일부 실시양태에서, PD-1 및 PD-L1 사이의 상호작용을 억제하는 작용제는 본원에서 제공된 ABP의 투여 후에 투여된다. 일부 실시양태에서, PD-1 및 PD-L1 사이의 상호작용을 억제하는 작용제는 본원에서 제공된 ABP와 동시에 투여되지만, 작용제 및 ABP는 별개의 제약 조성물로 투여된다.

일부 실시양태에서, 면역자극제는 단독으로 및 그의 권고된 투여량으로 투여되는 경우 대상체에서 특정 양의 혈소판감소를 초래하는 작용제이다. 일부 측면에서, 이러한 작용제는 감소된 투여량으로 본원에서 제공된 ABP와 조합되어 투여될 수 있다. 이러한 조합 요법은 실질적인 혈소판 저하 또는 혈소판감소를 초래하지 않고 안전하게 투여될 수 있다.

일부 실시양태에서, 면역자극제는 면역 세포의 공동-자극성 수용체의 효능제이다. 일부 측면에서, 공동-자극성 수용체는 OX40, ICOS, CD28, CD37, GITR, CD40, 및 4-1BB, 및 이들의 조합으로부터 선택된다. 일부 실시양태에서, 효능제는 항체이다.

일부 실시양태에서, 면역자극제는 시토카인이다. 일부 측면에서, 시토카인은 IL-2, IL-5, IL-7, IL-12, IL-15, IL-21, 및 이들의 조합으로부터 선택된다.

일부 실시양태에서, 면역자극제는 종양용해 바이러스이다. 일부 측면에서, 종양용해 바이러스는 단순 포진 바이러스, 소수포 구내염 바이러스, 아데노바이러스, 뉴캐슬병 바이러스, 우두 바이러스, 및 마라바 바이러스로부터 선택된다.

일부 실시양태에서, 면역자극제는 키메라 항원 수용체를 갖는 T 세포 (CAR-T 세포)이다. 일부 실시양태에서, 면역자극제는 이중- 또는 다중-특이적 T 세포 지정된 항체이다. 일부 실시양태에서, 면역자극제는 항-TGF-β 항체이다. 일부 실시양태에서, 면역자극제는 TGF-β 트랩이다.

일부 실시양태에서, 추가의 치료제는 종양 항원에 대한 백신이다. 임의의 적합한 항원은 그것이 본원에서 제공된 방법에 의해 치료되는 종양에 존재하는 한, 백신에 의해 표적화될 수 있다. 일부 측면에서, 종양 항원은 정상 조직에서의 그의 발현 수준에 비해 과발현된 종양 항원이다. 일부 측면에서, 종양 항원은 암 고환 항원, 분화 항원, NY-ESO-1, MAGE-A1, MART, 및 이들의 조합으로부터 선택된다.

추가의 치료제의 추가의 예로는 탁산 (예를 들어, 파클리탁셀 또는 도세탁셀); 백금제 (예를 들어, 카르보플라틴, 옥살리플라틴, 및/또는 시스플라틴); 토포이소머라제 억제제 (예를 들어, 이리노테칸, 토포테칸, 에토포시드, 및/또는 미토크산트론); 폴린산 (예를 들어, 류코보린); 또는 뉴클레오시드 대사 억제제 (예를 들어, 플루오로우라실, 카페시타빈, 및/또는 겜시타빈)를 들 수 있다. 일부 실시양태에서, 추가의 치료제는 폴린산, 5-플루오로우라실, 및/또는 옥살리플라틴이다. 일부 실시양태에서, 추가의 치료제는 5-플루오로우라실 및 이리노테칸이다. 일부 실시양태에서, 추가의 치료제는 탁산 및 백금제이다. 일부 실시양태에서, 추가의 치료제는 파클리탁셀 및 카르보플라틴이다. 일부 실시양태에서, 추가의 치료제는 페메트렉세이트이다. 일부 실시양태에서, 추가의 치료제는 표적화된 치료제, 예컨대 EGFR, RAF 또는 MEK-표적화된 작용제이다.

추가의 치료제는 임의의 적합한 수단에 의해 투여될 수 있다. 일부 실시양태에서, 본원에서 제공된 ABP 및 추가의 치료제는 동일한 제약 조성물에 포함된다. 일부 실시양태에서, 본원에서 제공된 ABP 및 추가의 치료제는 상이한 제약 조성물에 포함된다.

본원에서 제공된 ABP 및 추가의 치료제가 상이한 제약 조성물에 포함되는 실시양태에서, ABP의 투여는 추가의 치료제의 투여 전에, 동시에, 및/또는 후에 일어날 수 있다. 일부 측면에서, 본원에서 제공된 ABP 및 추가의 치료제의 투여는 서로의 약 1개월 내에 일어난다. 일부 측면에서, 본원에서 제공된 ABP 및 추가의 치료제의 투여는 서로의 약 1주 내에 일어난다. 일부 측면에서, 본원에서 제공된 ABP 및 추가의 치료제의 투여는 서로의 약 1일 내에 일어난다. 일부 측면에서, 본원에서 제공된 ABP 및 추가의 치료제의 투여는 서로의 약 12시간 내에 일어난다. 일부 측면에서, 본원에서 제공된 ABP 및 추가의 치료제의 투여는 서로의 약 1시간 내에 일어난다.

8. 키트

또한, 본원에서 제공된 ABP를 포함하는 키트가 제공된다. 키트는 본원에 기재된 바와 같은 질환 또는 장애의 치료, 예방, 및/또는 진단에 사용될 수 있다.

일부 실시양태에서, 키트는 용기 및 용기 상의 또는 그에 결합된 라벨 또는 패키지 삽입물을 포함한다. 적합한 용기로는 예를 들어, 병, 바이알, 주사기, 및 IV 용액 백을 들 수 있다. 용기는 다양한 물질, 예컨대 유리 또는 플라스틱으로 형성될 수 있다. 용기는 그것만으로인, 또는 또 다른 조성물과 조합되는 경우, 질환 또는 장애의 치료, 예방 및/또는 진단에 유효한 조성물을 보유한다. 용기는 멸균 접근 포트를 가질 수 있다. 예를 들어, 용기가 정맥내 용액 백 또는 바이알인 경우, 이는 바늘에 의해 천공될 수 있는 포트를 가질 수 있다. 조성물 중의 적어도 1종의 활성제는 본원에서 제공된 ABP이다. 라벨 또는 패키지 삽입물은 조성물이 선택된 상태를 치료하는 데 사용됨을 지시한다.

일부 실시양태에서, 키트는 (a) 그 안에 함유된 본원에서 제공된 ABP를 포함하는 제1 조성물을 갖는 제1 용기; 및 (b) 그 안에 함유된 추가의 치료제를 포함하는 제2 조성물을 갖는 제2 용기를 포함한다. 본 발명의 이 실시양태에서의 키트는 조성물이 특정 상태를 치료하는 데 사용될 수 있음을 지시하는 패키지 삽입물을 더 포함할 수 있다.

대안적으로, 또는 추가적으로, 키트는 제약상-허용되는 부형제를 포함하는 제2 (또는 제3) 용기를 더 포함할 수 있다. 일부 측면에서, 부형제는 완충제이다. 키트는 필터, 바늘, 및 주사기를 비롯한 상업적 및 사용자 관점에서 바람직한 다른 물질을 더 포함할 수 있다.

실시예

하기는 본 발명의 방법 및 조성물의 실시예이다. 본원에서 제공된 일반적 설명이 주어진다면, 다양한 다른 실시양태가 실시될 수 있음이 이해된다.

실시예 1: 항체 선택

물질 및 방법

항원을 피어스 (Pierce)로부터의 EZ-링크 술포-NHS-비오티닐화 키트 (EZ-Link Sulfo-NHS-Biotinylation Kit)를 사용하여 비오티닐화하였다. 염소 F(ab')₂ 항-인간 카파-FITC (LC-FITC), 엑스트라비딘 (ExtrAvidin)-PE (EA-PE) 및 스트렙타비딘 (Streptavidin)-AF633 (SA-633)은 각각 서던 바이오테크 (Southern Biotech), 시그마 (Sigma), 및 몰리큘라 프로브즈 (Molecular Probes)로부터 얻었다. 스트렙타비딘 마이크로비드 (Streptavidin MicroBeads) 및 MACS LC 분리 컬럼은 밀테니 바이오텍 (Miltenyi Biotec)으로부터 구입하였다. 염소 항-인간 IgG-PE (인간-PE)는 서던 바이오테크로부터 얻었다.

나이브 발견

각각 약 10⁹ 다양성의 8개의 나이브 인간 합성 효모 라이브러리를 이전에 기재된 바와 같이 증식시켰다 (예를 들어, 문헌 [Y. Xu et al., Addressing polyspecificity of antibodies selected from an in vitro yeast presentation system: a FACS-based, high-throughput selection and analytical tool. PEDS 26.10, 663-70 (2013)]; WO2009036379; WO2010105256; 및 WO2012009568 참조). 첫번째 2 라운드의 선택을 위해, 밀테니 MACS 시스템을 이용하는 자기 비드 분류 기법을 이전에 기재된 바와 같이 수행하였다 (예를 들어, 문헌 [Siegel et al., High efficiency recovery and epitope-specific sorting of an scFv yeast display library." J Immunol Methods 286(1-2), 141-153 (2004)] 참조). 간략하게, 효모 세포 (약 10¹⁰개 세포/라이브러리)를 5 ml의 100 nM 비오티닐화된 항원과 함께 30℃에서 30분 동안 세척 완충제 (포스페이트-완충 염수 (PBS)/0.1％ 소 혈청 알부민 (BSA))에서 인큐베이션하였다. 40 ml 빙냉된 세척 완충제로 1회 세척한 후, 세포 펠릿을 20 mL 세척 완충제에 재현탁시키고, 스트렙타비딘 마이크로비드 (500 μl)를 효모에 첨가하고, 4℃에서 15분 동안 인큐베이션하였다. 다음으로, 효모를 펠릿화하고, 20 mL 세척 완충제에 재현탁시키고, 밀테니 LS 컬럼 상으로 로딩하였다. 20 mL를 로딩한 후, 컬럼을 3 ml 세척 완충제로 3회 세척하였다. 그 후, 컬럼을 자기장으로부터 제거하고, 효모를 5 mL의 성장 배지로 용리한 후, 밤새 성장시켰다. 하기 라운드의 선택을 유동 세포측정을 사용하여 수행하였다. 대략 2x10⁷개의 효모를 펠릿화하고, 세척 완충제로 3회 세척하고, 30℃에서 평형 조건 하에서 감소하는 농도의 비오티닐화된 항원 (100 내지 1 nM), 종 교차-반응성을 얻기 위해 상이한 종의 100 nM 비오티닐화된 항원 중 어느 하나와 함께, 또는 비-특이적 항체를 선택으로부터 제거하기 위해 다중-특이성 고갈 시약 (PSR)과 함께 인큐베이션하였다. PSR 고갈을 위해, 라이브러리를 이전에 기재된 바와 같이 1:10 희석의 비오티닐화된 PSR 시약과 함께 인큐베이션하였다 (예를 들어, 문헌 [Y. Xu et al., Addressing polyspecificity of antibodies selected from an in vitro yeast presentation system: a FACS-based, high-throughput selection and analytical tool. PEDS 26.10, 663-70 (2013)] 참조). 그 후, 효모를 세척 완충제로 2회 세척하고, LC-FITC (1:100 희석됨) 및 SA-633 (1:500 희석됨) 또는 EAPE (1:50 희석됨) 2차 시약 중 어느 하나로 4℃에서 15분 동안 염색하였다. 세척 완충제로 2회 세척한 후, 세포 펠릿을 0.3 mL 세척 완충제에 재현탁시키고, 여과기-캡핑된 분류 튜브로 옮겼다. 분류를 FACS ARIA 분류기 (BD 바이오사이언시즈 (BD Biosciences))를 사용하여 수행하고, 분류 게이트를 측정하여 바람직한 특징을 갖는 항체에 대해 선택하였다. 선택 라운드를 바람직한 특징 모두를 갖는 집단이 얻어질 때까지 반복하였다. 분류의 최종 라운드 후, 효모를 플레이팅하고, 개별적 콜로니를 특징화를 위해 피킹하였다.

항체 최적화

항체의 최적화를 경쇄 다양화 프로토콜을 통해, 그 후 다양성을 하기 기재된 바와 같이 중쇄 및 경쇄 가변 영역 내로 도입함으로써 수행하였다. 이들 접근법의 일부의 조합을 각각의 항체에 대해 사용하였다.

경쇄 배치 다양화 프로토콜: 나이브 선택 산출물로부터의 중쇄 플라스미드를 스매쉬 및 그랩을 통해 효모로부터 추출하고, 이. 콜라이에서 번식시키고, 이어서 그로부터 정제하고, 5 x 10⁶의 다양성을 갖는 경쇄 라이브러리 내로 형질전환시켰다. 선택을 나이브 발견과 동일한 조건을 채택하여 1 라운드의 MACS 및 4 라운드의 FACS로 수행하였다.

CDRH1 및 CDRH2 선택: 단일 항체의 CDRH3을 1 x 10⁸의 다양성의 CDRH1 및 CDRH2 변이체와 사전제작 라이브러리 내로 재조합하고, 선택을 나이브 발견에 기재된 바와 같이 1 라운드의 MACS 및 4 라운드의 FACS로 수행하였다. 각각의 FACS 라운드에 대해, 라이브러리를 PSR 결합, 종 교차-반응성, 및 친화도 압력에 대해 조사하고, 바람직한 특징을 갖는 집단을 얻기 위해 분류를 수행하였다.

V_H 돌연변이체 선택: 중쇄 가변 영역 (V_H)을 오류 유발 PCR을 통해 돌연변이유발하였다. 그 후, 이 돌연변이유발된 V_H 및 중쇄 발현 벡터를 이미 모체의 경쇄 플라스미드를 함유하는 효모 내로 형질전환시킴으로써 라이브러리를 생성하였다. 선택을 2 라운드 동안의 FACS 분류를 사용하여 이전의 사이클과 유사하게 수행하였다. 각각의 FACS 라운드에 대해, 라이브러리를 PSR 결합, 종 교차-반응성, 및 친화도 압력에 대해 조사하고, 바람직한 특징을 갖는 집단을 얻기 위해 분류를 수행하였다.

항체 제조 및 정제

효모 클론을 포화까지 성장시킨 후, 진탕하면서 30℃에서 48시간 동안 유도하였다. 유도 후, 효모 세포를 펠릿화하고, 상청액을 정제를 위해 수확하였다. IgG를 단백질 A 컬럼을 사용하여 정제하고, 아세트산 (pH 2.0)으로 용리하였다. Fab 단편을 파파인 소화에 의해 생성하고, 카파셀렉트 (KappaSelect)® (GE 헬스케어 라이프사이언시즈 (GE Healthcare LifeSciences)) 상에서 정제하였다.

포르테바이오 K _D 측정

포르테바이오 친화도 측정을 일반적으로 이전에 기재된 바와 같이 옥텟 (Octet) RED384 상에서 수행하였다 (예를 들어, 문헌 [Estep et al., High throughput solution-based measurement of antibody-antigen affinity and epitope binning. Mabs 5(2), 270-278 (2013)] 참조). 간략하게, 포르테바이오 친화도 측정을 IgG를 AHQ 센서 상으로 온-라인에서 로딩함으로써 수행하였다. 센서를 검정 완충제에서 30분 동안 오프-라인에서 평형화시킨 후, 기준선 확립을 위해 60초 동안 온-라인에서 모니터링하였다. 로딩된 IgG를 갖는 센서를 100 nM 항원에 3분 동안 노출시킨 후, 오프-레이트 측정을 위해 검정 완충제로 3분 동안 옮겼다. 1가 친화도 평가를 위해, Fab를 IgG 대신 사용하였다. 이 평가를 위해, 비-비오티닐화된 Fc 융합 항원을 AHQ 센서 상으로 온-라인에서 로딩하였다. 센서를 검정 완충제에서 30분 동안 오프-라인에서 평형화시킨 후, 기준선 확립을 위해 60초 동안 온-라인에서 모니터링하였다. 로딩된 항원을 갖는 센서를 200 nM Fab에 3분 동안 노출시킨 후, 오프-레이트 측정을 위해 검정 완충제로 3분 동안 옮겼다. 모든 동역학을 1:1 결합 모델을 사용하여 분석하였다.

포르테바이오 에피토프 비닝/리간드 차단

에피토프 비닝/리간드 차단을 표준 샌드위치 포맷 교차-차단 검정을 사용하여 수행하였다. 대조군 항-표적 IgG를 AHQ 센서 상으로 로딩하고, 센서 상의 비점유된 Fc-결합 부위를 무관한 인간 IgG1 항체로 차단하였다. 그 후, 센서를 100 nM 표적 항원, 이어서 제2 항-표적 항체 또는 리간드에 노출시켰다. 항원 회합 후의 제2 항체 또는 리간드에 의한 추가의 결합은 비점유된 에피토프 (비-경쟁자)를 지시하는 반면, 결합 없음은 에피토프 차단 (경쟁자 또는 리간드 차단)을 지시한다.

크기 배제 크로마토그래피

TSK겔 (TSKgel)® 수퍼 (Super)SW mAb HTP 컬럼 (22855)을 6 분/실행의 사이클 시간으로 0.4 mL/분에서 포유동물 생산된 mAb의 고속 SEC 분석에 사용하였다. 200 mM 인산나트륨 및 250 mM 염화나트륨을 이동상으로서 사용하였다.

동적 주사 형광측정

10 μL의 20x 시프로 오렌지 (Sypro Orange)를 20 μL의 0.2 내지 1 mg/mL mAb 또는 Fab 용액에 첨가한다. RT-PCR 기기 (바이오래드 (BioRad) CFX96 RT PCR)를 사용하여 샘플 플레이트 온도를 40℃에서 95℃로 0.5℃ 증분으로 증가시키고, 각각의 온도에서 2분 평형화시킨다. 원 데이터에 대한 음의 1차 도함수를 사용하여 Tm을 도출한다.

실시예 2. 항체 특징화

포르테바이오 K _D 측정: 재조합 단량체성 인간, 마우스, 또는 시노몰거스 원숭이 NRP-1에의 항체의 정량적 결합을 포르테바이오®를 사용한 생물층 간섭측정 (BLI)을 사용하여 측정하였다. 선택된 항체의 친화도 측정을 일반적으로 그 전문이 참조로 포함되는 문헌 [Estep et al., Mabs, 2013, 5:270-278]에 기재된 바와 같이 수행하였다. 포르테바이오 친화도 측정을 IgG (인간 IgG1 N297A)를 AHQ 센서 상으로 온-라인에서 로딩함으로써 수행하였다. 센서를 검정 완충제에서 30분 동안 오프-라인에서 평형화시킨 후, 기준선 확립을 위해 60초 동안 온-라인에서 모니터링하였다. 로딩된 IgG를 갖는 센서를 단일 농도의 항원 (100 nM)에 3분 동안 노출시켰다. 그 후, 이들을 오프-레이트 측정을 위해 검정 완충제로 3분 동안 옮겼다. 동역학을 1:1 결합 모델을 사용하여 분석하였다. 단일 농도의 인간, 시노몰거스 원숭이, 및 마우스 NRP-1에 결합하는 항체에 대한 K_D 측정의 요약을 하기 표 5에 나타낸다.

추가의 K_D 측정을 다중-농도 동역학을 사용하여 8개의 항체 (인간 IgG4 S228P)로 수행하였다. 인간 NRP-1-His, 시노몰거스 원숭이 NRP-1-His, 및 마우스 NRP-1-His에 대한 결합 친화도를 옥텟 QKe 기기 (포르테바이오)를 사용하여 측정하였다. 센서 상의 항체의 포획, 이어서 단량체성 NRP-1 단백질의 회합/해리의 전략을 사용하여 검정에서 결합력 효과를 회피하였다. BLI 분석을 30℃에서 검정 완충제로서 1X 동역학 완충제 (포르테바이오)를 사용하여 수행하였다. 항-인간 IgG Fc 포획 (AHC) 바이오센서 (포르테바이오)를 먼저 검정 완충제에 5분 초과 동안 예비침지시켰다. 시험 항체 (5 μg/mL)를 센서 상에 250초 동안 포획하였다. 그 후, 센서를 검정 완충제에 60초 동안 디핑하여 각각의 NRP-1 단백질에의 결합을 측정하기 전에 기준선을 확립하였다. 그 후, 센서를 다양한 농도의 인간 NRP-1-His (93.3 내지 0.7 nM, 검정 완충제에서 2배 희석), 시노몰거스 원숭이 NRP-1-His (93.3 내지 1.5 nM, 검정 완충제에서 2배 희석), 또는 마우스 NRP-1-His (93.3 내지 1.5 nM, 검정 완충제에서 2배 희석) 내로 250초 동안 디핑함으로써 회합을 측정하였다. 그 후, 센서를 검정 완충제 내로 600초 동안 디핑함으로써 NRP-1의 해리를 측정하였다. 모든 단계에서의 교반은 1000 rpm이었다. 동역학 파라미터를 참조 삭감 (완충제에의 항체 "결합"), 해리 기재 단계간 보정, 1 대 1 결합 모델, 및 글로벌 피트 (센서에 의해 비연결된 Rmax)를 사용하여 옥텟 데이터 분석 소프트웨어 버전 (Octet Data Analysis Software Version) 8.2.0.7로 생성하였다. K_D 값을 표 6에 나타낸다.

MSD-SET K _D 측정 : 인간 NRP-1에 결합하는 선택된 항체의 용액 평형 친화도 측정을 일반적으로 이전에 기재된 바와 같이 수행하였다. 그 전문이 참조로 포함되는 에스텝 (Estep) 등, 상기 문헌을 참조한다. 간략하게, 용액 평형 적정 (SET)을 10 내지 100 pM에서 일정하게 유지된 항원을 갖는 PBS + 0.1％ IgG-무함유 BSA (PBSF)에서 수행하고, 10 pM 내지 10 nM에서 시작하여 Fab 또는 mAb의 3 내지 5배 계열 희석액과 함께 인큐베이션하였다. 항체 (PBS 중 20 nM)를 표준 결합 MSD-ECL 플레이트 상으로 4℃에서 밤새 또는 실온에서 30분 동안 코팅하였다. 그 후, 플레이트를 700 rpm에서 진탕하면서 BSA에 의해 30분 동안 차단하고, 이어서 세척 완충제 (PBSF + 0.05％ 트윈 (Tween)® 20)로 3회 세척하였다. SET 샘플을 적용하고, 700 rpm에서 진탕하면서 플레이트 상에서 150초 동안 인큐베이션하고, 이어서 1회 세척하였다. 플레이트 상에 포획된 항원을 PBSF 중 250 ng/mL 술포태그-표지된 스트렙타비딘으로 플레이트 상에서 3분 동안 인큐베이션함으로써 검출하였다. 플레이트를 세척 완충제로 3회 세척한 후, 계면활성제를 갖는 1x 판독 완충제 (Read Buffer) T를 사용하여 MSD 섹터 이미저 (Sector Imager) 2400 기기 상에서 판독하였다. 퍼센트 유리 항원을 프리즘 (Prism)에서 적정된 항체의 함수로서 플롯팅하고, 2차 방정식으로 피팅하여 K_D를 도출하였다. 처리량을 개선시키기 위해, 액체 취급 로봇을 SET 샘플 제조를 비롯한 MSD-SET 실험 전반에 걸쳐 사용하였다.

<표 5>

항체 결합 친화도 - 단일 농도 동역학

<표 6>

항체 결합 친화도 - 다중 농도 동역학

실시예 3. 단독으로 및 PD-1 또는 PD-L1 항체와의 조합으로의 9가지 항-NRP-1 MAB의 항-종양 효능

9가지 최적화된 항체를 면역적격 마우스를 사용하여 항-종양 효능에 대해 평가하였다. 검정을 MAB 2, 3, 4, 5, 7, 12, 13, 14, 및 15의 뮤린 버전, 뿐만 아니라 비교자로서 IgG 대조군 및 SEC10 (서열식별번호: 141 내지 142)의 패널로 수행하였다. 항체를 ADCC 및 CDC 이펙터 기능을 폐지하는 N297A 돌연변이를 함유하는 키메라 마우스 IgG2a 항체로서 시험하였다. 항-종양 효능을 암컷 BALB/c 마우스에서 성장된 마우스 결장 CT26 동계 종양 모델을 사용하여 측정하였다. 3x10⁵개의 마우스 CT26 세포를 제1일에 피하로 삽입하였다. 마우스를 체중에 기초하여 무작위화하고, 항체를 종양 세포 삽입과 동일한 날에 지시된 용량으로 복강내로 투여하였다. 항-NRP-1 항체를 500 μg/용량으로 단독요법으로서 또는 200 μg/용량으로 사용된 항-PD-1 면역 검사점 억제제와 조합하여 투여하였다. 도 1a는 CT26 모델에서 항체의 단독요법 효과를 나타내고, 도 1b는 항-NRP-1 항체와 항-PD-1의 조합의 효과를 나타낸다. 수평축을 따른 흑색 화살표는 항체의 처리 일을 지시한다. 군 당 10마리의 마우스로부터의 평균 종양 부피를 각각의 처리군에 대해 나타낸다.

도 1c는 마우스 결장 CT26 동계 종양 모델에서의 단독으로 및 항-PD-1 검사점 항체와의 조합으로의 mMAB12를 비교하는 도 1a 및 1b로부터의 데이터의 하위세트를 나타낸다. 500 μg/동물의 mMAB12는 대조군 항체-처리된 마우스에 비해 종양 성장을 61.6％ TGI (종양 성장 억제) 억제하였다. 이 효과는 스튜던트 (Student) t 검정에 의해 통계적으로 유의하였다 (p<0.05). 200 μg/동물로 투여된 항-PD-1 검사점 항체는 mMAB12보다 덜 유효하였다 (37.8％ TGI, p<0.05). 그러나, mMAB12와 PD-1 항체의 조합은 단독요법 처리에 비해 상가적 항-종양 효능 (79.0％ TGI, p<0.001)을 발생시켰다. 조합의 효과는 PD-1 및 mMAB12와 비교할 경우 통계적으로 유의하였다 (둘 다의 경우에 p<0.05). mMAB12 군에서 1 마리의 비-처리-관련된 죽은 마우스를 제외하고는, 모두가 처리의 과정에 걸쳐 중량이 증가한 처리된 마우스에 의해 나타난 별다른 독성은 없었다.

동일한 9가지 항체를 제2 종양 모델인 마우스 결장 MC38 동계 모델에서 평가하였다. 5x10⁵개의 마우스 MC38 세포를 암컷 C57Bl/6 마우스 내로 피하로 삽입하였다. 종양이 60 mm³ 내지 90 mm³의 평균 종양 부피에 도달하였을 때 마우스를 처리군으로 무작위화하고, 이어서 제1일에 처리를 개시하였다. 항-NRP-1 항체를 500 μg/용량으로 단독요법으로서 또는 250 μg/용량으로 사용된 항-PD-L1 면역 검사점 억제제와 조합하여 투여하였다. 항-PD-L1 항체는 PD-1 항체와 동일한 면역 검사점 경로에서 작동한다. 도 2a는 MC38 모델에서의 항체의 단독요법 효과를 나타내고, 도 2b는 항-NRP-1 항체와 항-PD-L1의 조합의 효과를 나타낸다. 수평축을 따른 흑색 화살표는 처리 일을 지시한다. 군 당 10마리의 마우스로부터의 평균 종양 부피를 각각의 처리군에 대해 나타낸다.

MC38 동계 결장 마우스 종양 모델에서의 mMAB12의 항-종양 효능을 도 2c에 나타낸다. 500 μg/동물의 mMAB12는 대조군 항체-처리된 마우스에 비해 종양 성장을 77.3％ TGI (p<0.05) 억제하였다. MC38 모델은 PD-1 항체 차단에 매우 민감성이다. 따라서, PD-1 항체와 동일한 면역 검사점 경로에서 작동하는 250 μg/동물의 PD-L1에 대한 항체를 사용하여 잠재적 조합 유익을 입증하였다. 예상된 바와 같이, PD-L1 단독요법은 종양 성장을 77.5％ TGI에서 차단하였다 (p<0.05). 그러나, mMAB12와 PD-L1 항체의 조합은 추가의 항-종양 유익을 입증하지 않았다 (76.2％ TGI). CT26 모델과 같이, 모두가 처리의 과정에 걸쳐 중량이 증가한 처리된 마우스에 의해 나타난 별다른 독성은 없었다. 4가지 항체 (MAB 2, 5, 12, 및 13)를 CT26 및 MC38 연구에서의 그들의 효능에 기초하여 선택하고, MC38 모델에서 동일한 조건 하에서 재시험하였다 (단독으로 및 항-PD-L1과의 조합으로). 반복 MC38 연구에서의 발견은 효능 및 내약성에 대한 상기 발견을 확인시켜 주었다.

실시예 4. NRP-1 리간드의 차단의 평가

재조합 인간 NRP-1에의 재조합 인간 SEMA3A 및 인간 VEGFA의 결합을 차단하는 항체의 능력을 측정하는 정량적 리간드 차단 연구를 차단 ELISA에 의해 측정하였다. SEMA3A/NRP-1 상호작용을 차단하는 항체의 능력을 측정하기 위해, 검정 플레이트를 PBS 중 2.5 μg/mL의 인간 SEMA3A로 4℃에서 밤새 코팅하였다. 비오티닐화된 인간 NRP-1 (1％ BSA/PBS 중 500 ng/mL)을 검정 플레이트에 첨가하기 전에 시험 항체 (30 내지 0.002 μg/mL, 1％ BSA/PBS 중 4배 희석)와 함께 인큐베이션한 후, HRP 접합된 스트렙타비딘 (1％ BSA/PBS 중 1:200)을 SEMA3A에 결합된 NRP-1의 검출에 사용하였다. 간략하게, VEGFA/NRP-1 상호작용을 차단하는 항체의 능력을 측정하기 위해, 검정 플레이트를 PBS 중 2.5 μg/mL의 인간 NRP-1로 4℃에서 밤새 코팅하였다. 시험 항체 (30 내지 0.002 μg/mL, 1％ BSA/PBS 중 4배 희석)를 검정 플레이트에 첨가하기 전에 VEGFA (125 ng/mL)와 함께 인큐베이션하고, 비오티닐화된 항-VEGFA 항체 (1％ BSA/PBS 중 0.2 μg/mL)를 첨가한 후, HRP 접합된 스트렙타비딘 (1％ BSA/PBS 중 1:200)을 NRP-1에 결합된 VEGFA의 검출에 사용하였다. SEMA3A/VEGFA 결합을 차단하는 15가지 IgG1 포맷 시험 항체에 대한 IC₅₀ 값을 표 7에 나타낸다.

<표 7>

IgG1 포맷 항체로의 차단 검정에 대한 IC₅₀ 값

8가지 MAB를 IgG4 S228P 포맷으로 전환시키고, 검정을 반복하였다. 평균의 요약을 표 8에 나타낸다.

<표 8>

IgG4 포맷 항체로의 차단 검정에 대한 평균

^* 인간화 부위-지정된 돌연변이

실시예 5. MAB12 대 SEC10의 에피토프 비닝

MAB12 및 SEC10에 대한 에피토프 비닝을 옥텟® QKe 기기 (포르테바이오®)를 사용한 생물층 간섭측정 (BLI)을 사용하여 측정하였다. 5 μg/mL의 MAB12 또는 SEC10을 항-인간 Fc AHC 센서 상에 300초 동안 고정화하였다. 그 후, 센서를 기준선 측정을 위해 동역학 완충제에 디핑하였다. 다음으로, 센서를 200 μg/ml의 인간 IgG에 400초 동안 디핑하여 센서 상의 모든 IgG Fc 결합 부위를 포화시켰다. 기준선 측정 후, 센서를 100 nM 인간 NRP-1-HIS에 300초 동안 노출시켜 항원 결합을 허용하였다. 마지막으로, 센서를 20 μg/mL의 MAB12 또는 SEC10 중 어느 하나를 함유하는 웰로 300초 동안 옮겨 항체 결합을 분석하였다. 시험 항체가 마지막 단계에서 명백한 결합을 나타낸 경우, 이는 비-경쟁자 (상이한 에피토프 빈)로 간주되었고, 시험 항체가 명백한 결합을 나타내지 않은 경우, 이는 경쟁자 (동일한 에피토프 빈)로 간주되었다.

결과를 도 3에 나타낸다. MAB12를 포획한 후, NRP-1에 결합시키는 것은 SEC10을 또한 NRP-1에 결합하는 것으로부터 방지하지 않는다 (상부 패널). 유사하게, SEC10을 포획한 후, NRP-1에 결합시키는 것은 MAB12를 또한 NRP-1에 결합하는 것으로부터 방지하지 않는다 (하부 패널). 자기-비닝 (예를 들어, MAB12를 포획하고, NRP-1에 결합시키고, MAB12의 시험 결합)은 비닝에 대한 양성 대조군으로서 기능하였다. 이들 데이터는 MAB12 및 SEC10이 NRP-1에 동시에 결합할 수 있으며, 따라서, 상이한 에피토프에 결합해야 함을 나타낸다.

실시예 6. NRP-1 도메인에의 항-NRP-1 항체의 결합

인간 NRP-1에 결합하는 항체에 대한 대략적 결합 도메인을 이해하기 위해, NRP-1 세포외 영역의 상이한 도메인을 함유한 NRP-1의 단편에 결합하는 항체의 능력을 옥텟® QKe 기기 (포르테바이오®)를 사용한 BLI에 의해 측정하였다. 재조합 인간 NRP-1-Fc 융합 단백질은 a1, a1a2, a1a2b1, a2b1b2, 또는 a1a2b1b2 도메인으로 이루어졌으며, 각각의 단백질에의 항체 결합의 차이는 항체가 결합하는 1차 도메인의 측정을 발생시켰다. BLI 분석을 29℃ 또는 30℃에서 검정 완충제로서 1X 동역학 완충제 (포르테바이오)를 사용하여 수행하였다. 간략하게, 항체 (5 μg/mL)를 항-인간 IgG Fc (AHC) 바이오센서 상으로 250초 동안 포획하였다. 그 후, 각각의 NRP-1 단백질에의 결합을 측정하기 전에 센서를 검정 완충제 내로 디핑하여 (100초) 기준선을 달성하였다. 다음으로 250초 동안 인간 IgG Fc (150 nM, 250 nM 또는 500 nM, 실험에 따라)를 사용한 켄칭 단계를 수행하였다. 그 후, 센서를 500 nM의 각각의 NRP-1 단백질 내로 300초 동안 디핑하고, 이어서 검정 완충제에서 900 또는 1000초 동안 각각의 NRP-1 단백질을 해리시켰다. 교반을 실험에 따라 모든 단계에 대해 900 rpm 또는 1000 rpm에서 수행하였다.

표 9는 상기 기재된 검정의 결과를 나타낸다. 각각의 항체에 대한 결합 도메인을 최우측 열에 나타낸다.

<표 9>

NRP1 도메인 결합 특이성

^*서열식별번호: 141 내지 142

^** 문헌 [Appleton, et al., The EMBO Journal (2007) 26, 4902-4912]에 기재됨.

^*** 문헌 [Delgoffe GM, Woo S-R, Turnis ME, Gravano DM, Guy C, Overacre AE, et al. Stability and function of regulatory T cells is maintained by a neuropilin-1-semaphorin-4a axis. Nature 501(7466):252-6]에 기재됨. R&D 시스템즈로부터 이용가능함.

실시예 7: 에피토프 결정을 위한 돌연변이 분석

인간 NRP1의 b1 도메인에 결합하는 MAB12에 대한 에피토프를 확인하기 위해, 단일 점 돌연변이를 인간 NRP1 b1 도메인 내에서 생성하였다. 알라닌 치환 또는 NRP2 특이적 잔기 중 어느 하나를 사용하였다 (MAB12는 NRP2에 결합하지 않음). 단백질을 HEK293 세포에서 발현시키고, 가용성 단백질로서 분비시키고, Ni-NTA 수지 상에서 정제하고, SDS-PAGE에 의해 특징화하였다. 결합을 옥텟 플랫폼을 사용한 생물층 간섭측정 (BLI)에 의해 평가하였다. MAB12를 항-인간 Fc 센서 상에서 포획하고, 세척하고, 단량체성 야생형 인간 NRP1 b1 도메인에 또는 단량체성 돌연변이체 NRP1 b1에 노출시켰다. 결합 에피토프의 부분으로 간주된 잔기는 감소된 결합 (예를 들어, 야생형 인간 NRP1 b1에의 결합의 그것보다 5배 초과 더 빈약한 K_D) 또는 결합 없음을 입증하였다. 단일 점 돌연변이체 P317A, D320A, T349A, K352G, Y353A, Y354A, 및 T413A는 감소된 결합을 발생시킨 반면, K351N 및 E412H는 결합 없음을 발생시켰다.

실시예 8: NRP1과 복합체화된 MAB12의 구조 측정

결합 에피토프를 또한 결정학 연구를 통해 확인하였다. MAB12 Fab를 인간 NRP1 b1과 복합체화하고, 크기 배제 크로마토그래피에 의해 정제하고, 10 mg/ml로 농축시켰다. 결정을 42％ PEG200, HEPES pH 7로부터 성장시켰다. X-선 데이터를 아르곤 내셔널 래버러토리즈 (Argonne National Laboratories) (GM/CA CAT 23ID-D)로부터 수집하고, CCP4 및 페닉스 (Phenix)를 사용하여 가공하였다. 중쇄 및 경쇄로부터 3.8 Å의 접촉 거리 내의 NRP1 b1 잔기는 결합 에피토프의 부분으로 간주되었으며, Y297, T316, D320, E348, T349, K350, K351, K352, Y353, Y354, E412, T413, G414 및 I415를 포함한다.

실시예 9: MAB12의 아미노산 변형의 분석

정제된 MAB12의 아미노산 변형의 분석은 중쇄의 C 말단에서의 리신의 결실이 정제된 항체의 대부분에서 발생하였으며, 경쇄의 N 말단에서의 글루탐산의 피로글루타밀화가 정제된 항체의 일부에서 발생하였음을 시사하였다.

참조로 포함

본원에 인용된 모든 특허 및 비-특허 간행물의 전체 개시내용은 각각 모든 목적을 위해 그 전문이 참조로 포함된다.

다른 실시양태

상기 제시된 개시내용은 독립적인 유용성을 갖는 다수의 별개의 발명을 포괄할 수 있다. 이들 발명의 각각은 그의 바람직한 형태(들)로 개시되었지만, 본원에 개시되고 예시된 바와 같은 그의 구체적인 실시양태는 다수의 변형이 가능하기 때문에 제한적 의미로 간주되지 않아야 한다. 본 발명의 대상은 본원에 개시된 다양한 요소, 특색, 기능, 및/또는 특성의 모든 신규하고 비자명한 조합 및 하위조합을 포함한다. 하기 청구범위는 특히 신규하고 비자명한 것으로 간주되는 특정 조합 및 하위조합을 지적한다. 특색, 기능, 요소, 및/또는 특성의 다른 조합 및 하위조합에서 구현된 발명은 이 출원에서, 이 출원으로부터 우선권을 주장하는 출원에서, 또는 관련된 출원에서 청구될 수 있다. 이러한 청구항은 상이한 발명에 관한 것이든지 동일한 발명에 관한 것이든지, 및 원래 청구항과 비교하여 범위에서 더 넓든지, 더 좁든지, 동등하든지, 상이하든지, 또한 본 개시내용의 발명의 대상 내에 포함되는 것으로 간주된다.

부록 A: 서열 참조 표

SEQUENCE LISTING <110> POTENZA THERAPEUTICS, INC. <120> ANTI-NEUROPILIN ANTIGEN-BINDING PROTEINS AND METHODS OF USE THEREOF <130> 32248-39302/PCT <140> PCT/US2017/067782 <141> 2017-12-21 <150> 62/438,733 <151> 2016-12-23 <160> 148 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 26 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 1 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Gly Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly 20 25 <210> 2 <211> 26 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 2 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly 20 25 <210> 3 <211> 26 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 3 Gln Ala Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly 20 25 <210> 4 <211> 26 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 4 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Lys Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly 20 25 <210> 5 <211> 26 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 5 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly 20 25 <210> 6 <211> 26 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 6 Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly 20 25 <210> 7 <211> 26 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 7 Gln Val Gln Leu Gln Gln Trp Gly Ala Gly Leu Leu Lys Pro Ser Glu 1 5 10 15 Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Val Tyr Gly 20 25 <210> 8 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 8 Tyr Thr Phe Arg Ser Tyr Tyr Met Leu 1 5 <210> 9 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 9 Tyr Thr Phe Ser Arg Tyr Tyr Met His 1 5 <210> 10 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 10 Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr Tyr Met His 1 5 <210> 11 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 11 Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Trp Met Glu 1 5 <210> 12 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 12 Phe Thr Phe Ala Ser Tyr Ala Met Val 1 5 <210> 13 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 13 Phe Thr Phe Lys Ser Tyr Ala Met Val 1 5 <210> 14 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 14 Phe Thr Phe Ser Ser Val Ala Met Val 1 5 <210> 15 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 15 Gly Ser Phe Arg Gly Tyr Tyr Trp Glu 1 5 <210> 16 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 16 Gly Ser Phe Val Lys Tyr Tyr Trp Ser 1 5 <210> 17 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 17 Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met Gly 1 5 10 <210> 18 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 18 Trp Val Arg Gln Val Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met Gly 1 5 10 <210> 19 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 19 Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ala 1 5 10 <210> 20 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 20 Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ser 1 5 10 <210> 21 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 21 Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile Gly 1 5 10 <210> 22 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 22 Trp Ser Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile Gly 1 5 10 <210> 23 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 23 Ile Ile Asp Pro Ser Asp Gly Ser Thr Ser Tyr Ala Gln Lys Phe Gln 1 5 10 15 Gly <210> 24 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 24 Ile Ile Asn Pro Leu Gly Gly Ser Thr Leu Tyr Ala Gln Lys Phe Gln 1 5 10 15 Gly <210> 25 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 25 Ile Ile Asn Pro Gln Gly Gly Asp Thr Ser Tyr Ala Gln Lys Phe Gln 1 5 10 15 Gly <210> 26 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 26 Arg Ile Lys Arg Asp Gly Ser Glu Lys Tyr Tyr Val Asp Ser Val Lys 1 5 10 15 Gly <210> 27 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 27 Ile Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys 1 5 10 15 Gly <210> 28 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 28 Ile Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ala Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys 1 5 10 15 Gly <210> 29 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 29 Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ala Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys 1 5 10 15 Gly <210> 30 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 30 Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ala Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Glu 1 5 10 15 Gly <210> 31 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 31 Glu Ile Ser His Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Ser 1 5 10 15 <210> 32 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 32 Asp Ile Trp His Ser Gly Met Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Ser 1 5 10 15 <210> 33 <211> 30 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide" <400> 33 Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Pro Thr Ser Thr Val Tyr Met Glu 1 5 10 15 Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 20 25 30 <210> 34 <211> 30 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide" <400> 34 Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Ala Ser Thr Ser Thr Val Tyr Met Glu 1 5 10 15 Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 20 25 30 <210> 35 <211> 30 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide" <400> 35 Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr Met Glu 1 5 10 15 Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 20 25 30 <210> 36 <211> 30 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide" <400> 36 Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr Leu Gln 1 5 10 15 Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 20 25 30 <210> 37 <211> 30 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide" <400> 37 Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gln 1 5 10 15 Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 20 25 30 <210> 38 <211> 30 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide" <400> 38 Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gln 1 5 10 15 Met Ser Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 20 25 30 <210> 39 <211> 30 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide" <400> 39 Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu Lys 1 5 10 15 Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 20 25 30 <210> 40 <211> 30 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide" <400> 40 Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu Lys 1 5 10 15 Leu Ser Pro Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 20 25 30 <210> 41 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 41 Ala Arg Gly Ala Arg Arg Ile Thr Gly Tyr Gly Met Asp Val 1 5 10 <210> 42 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 42 Ala Arg Asp Leu Gly Tyr Tyr Gly Ser Gly Met His Ala 1 5 10 <210> 43 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 43 Ala Arg Asp Leu Gly Tyr Tyr Gly Ser Gly Met His Val 1 5 10 <210> 44 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 44 Ala Arg Asp Arg Gly Met Tyr Tyr Ala Ser Gly Phe Gly Pro 1 5 10 <210> 45 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 45 Ala Arg Asp Arg Gly Met Tyr Tyr Ala Ser Gly Phe Asn Pro 1 5 10 <210> 46 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 46 Ala Arg Asp Gln Gly Tyr Lys Thr Pro Thr Asp Phe Asp Leu 1 5 10 <210> 47 <211> 20 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 47 Ala Lys Asp Pro Gly Tyr Asp Ser Ser Arg Tyr Tyr Tyr Ser Asn Tyr 1 5 10 15 Gly Met Asp Val 20 <210> 48 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 48 Ala Arg Ala Arg Pro Tyr Arg Glu Pro Tyr Gly Met Asp Val 1 5 10 <210> 49 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 49 Ala Arg Gly Pro Gly Tyr Asp Ser Ser Gly Tyr Ser Arg Arg Phe Asp 1 5 10 15 Pro <210> 50 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 50 Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 1 5 10 <210> 51 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 51 Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Ile Val Ser Ser 1 5 10 <210> 52 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 52 Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 1 5 10 <210> 53 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 53 Trp Gly Arg Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 1 5 10 <210> 54 <211> 23 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 54 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Val Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys 20 <210> 55 <211> 23 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 55 Glu Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly 1 5 10 15 Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys 20 <210> 56 <211> 23 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 56 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys 20 <210> 57 <211> 23 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 57 Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Val Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys 20 <210> 58 <211> 23 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 58 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Thr Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys 20 <210> 59 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 59 Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Trp Leu Ala 1 5 10 <210> 60 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 60 Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Arg Trp Leu Ala 1 5 10 <210> 61 <211> 12 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 61 Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Ser Tyr Leu Ala 1 5 10 <210> 62 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 62 Gln Ala Ser Gln Asp Ile Thr Asn Tyr Leu Asn 1 5 10 <210> 63 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 63 Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Tyr Leu Asn 1 5 10 <210> 64 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 64 Arg Ala Ser Gln Asp Ile Ser Ser Trp Leu Ala 1 5 10 <210> 65 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 65 Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Trp Leu Ala 1 5 10 <210> 66 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 66 Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr 1 5 10 15 <210> 67 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 67 Ala Ala Ser Asn Leu Gln Ser 1 5 <210> 68 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 68 Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser 1 5 <210> 69 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 69 Gly Ala Ser Asn Arg Ala Thr 1 5 <210> 70 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 70 Asp Ala Ser Asn Leu Glu Thr 1 5 <210> 71 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 71 Gly Ala Ser Ser Leu Gln Ser 1 5 <210> 72 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 72 Lys Ala Ser Ser Leu Glu Ser 1 5 <210> 73 <211> 32 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide" <400> 73 Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr 1 5 10 15 Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys 20 25 30 <210> 74 <211> 32 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide" <400> 74 Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr 1 5 10 15 Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys 20 25 30 <210> 75 <211> 32 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide" <400> 75 Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr 1 5 10 15 Phe Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr Cys 20 25 30 <210> 76 <211> 32 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide" <400> 76 Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr 1 5 10 15 Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Asp Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys 20 25 30 <210> 77 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 77 Gln Gln Ala Ser Val Phe Pro Phe Thr 1 5 <210> 78 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 78 Gln Gln Ala Asn Leu Leu Pro Phe Thr 1 5 <210> 79 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 79 Gln Gln Leu Ser Ser Phe Pro Ile Thr 1 5 <210> 80 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 80 Gln Gln Ser Asp Val Leu Pro Ile Thr 1 5 <210> 81 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 81 Gln Gln Thr Tyr Ser Leu Tyr Thr 1 5 <210> 82 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 82 Gln Gln Glu Leu Ala Phe Pro Arg Thr 1 5 <210> 83 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 83 Gln Gln Leu Asn Ser Tyr Pro Pro Thr 1 5 <210> 84 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 84 Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 1 5 10 <210> 85 <211> 121 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide" <400> 85 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Gly Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Arg Ser Tyr 20 25 30 Tyr Met Leu Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Ile Ile Asp Pro Ser Asp Gly Ser Thr Ser Tyr Ala Gln Lys Phe 50 55 60 Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Pro Thr Ser Thr Val Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Ala Arg Arg Ile Thr Gly Tyr Gly Met Asp Val Trp Gly 100 105 110 Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 86 <211> 121 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide" <400> 86 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Arg Ser Tyr 20 25 30 Tyr Met Leu Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Ile Ile Asp Pro Ser Asp Gly Ser Thr Ser Tyr Ala Gln Lys Phe 50 55 60 Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Ala Ser Thr Ser Thr Val Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Ala Arg Arg Ile Thr Gly Tyr Gly Met Asp Val Trp Gly 100 105 110 Gln Gly Thr Thr Val Ile Val Ser Ser 115 120 <210> 87 <211> 120 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide" <400> 87 Gln Ala Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Ser Arg Tyr 20 25 30 Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Ile Ile Asn Pro Leu Gly Gly Ser Thr Leu Tyr Ala Gln Lys Phe 50 55 60 Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Asp Leu Gly Tyr Tyr Gly Ser Gly Met His Ala Trp Gly Gln 100 105 110 Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 88 <211> 120 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide" <400> 88 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Ser Arg Tyr 20 25 30 Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Ile Ile Asn Pro Leu Gly Gly Ser Thr Leu Tyr Ala Gln Lys Phe 50 55 60 Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Asp Leu Gly Tyr Tyr Gly Ser Gly Met His Val Trp Gly Gln 100 105 110 Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 89 <211> 121 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide" <400> 89 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr 20 25 30 Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Ile Ile Asn Pro Gln Gly Gly Asp Thr Ser Tyr Ala Gln Lys Phe 50 55 60 Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Asp Arg Gly Met Tyr Tyr Ala Ser Gly Phe Gly Pro Trp Gly 100 105 110 Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 90 <211> 121 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide" <400> 90 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Lys Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr 20 25 30 Tyr Met His Trp Val Arg Gln Val Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Ile Ile Asn Pro Gln Gly Gly Asp Thr Ser Tyr Ala Gln Lys Phe 50 55 60 Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Asp Arg Gly Met Tyr Tyr Ala Ser Gly Phe Asn Pro Trp Gly 100 105 110 Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 91 <211> 121 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide" <400> 91 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Trp Met Glu Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Arg Ile Lys Arg Asp Gly Ser Glu Lys Tyr Tyr Val Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Asp Gln Gly Tyr Lys Thr Pro Thr Asp Phe Asp Leu Trp Gly 100 105 110 Arg Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 92 <211> 127 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide" <400> 92 Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ala Ser Tyr 20 25 30 Ala Met Val Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ser Ile Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Lys Asp Pro Gly Tyr Asp Ser Ser Arg Tyr Tyr Tyr Ser Asn Tyr 100 105 110 Gly Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 115 120 125 <210> 93 <211> 127 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide" <400> 93 Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Lys Ser Tyr 20 25 30 Ala Met Val Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ser Ile Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ala Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Lys Asp Pro Gly Tyr Asp Ser Ser Arg Tyr Tyr Tyr Ser Asn Tyr 100 105 110 Gly Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 115 120 125 <210> 94 <211> 127 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide" <400> 94 Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Val 20 25 30 Ala Met Val Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ser Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ala Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Lys Asp Pro Gly Tyr Asp Ser Ser Arg Tyr Tyr Tyr Ser Asn Tyr 100 105 110 Gly Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 115 120 125 <210> 95 <211> 127 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide" <400> 95 Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Val 20 25 30 Ala Met Val Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ser Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ala Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Glu Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Ser Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Lys Asp Pro Gly Tyr Asp Ser Ser Arg Tyr Tyr Tyr Ser Asn Tyr 100 105 110 Gly Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 115 120 125 <210> 96 <211> 127 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide" <400> 96 Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Val 20 25 30 Ala Met Val Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ser Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ala Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Glu Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Lys Asp Pro Gly Tyr Asp Ser Ser Arg Tyr Tyr Tyr Ser Asn Tyr 100 105 110 Gly Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 115 120 125 <210> 97 <211> 120 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide" <400> 97 Gln Val Gln Leu Gln Gln Trp Gly Ala Gly Leu Leu Lys Pro Ser Glu 1 5 10 15 Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Val Tyr Gly Gly Ser Phe Arg Gly Tyr 20 25 30 Tyr Trp Glu Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Glu Ile Ser His Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys 50 55 60 Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu 65 70 75 80 Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala 85 90 95 Arg Ala Arg Pro Tyr Arg Glu Pro Tyr Gly Met Asp Val Trp Gly Gln 100 105 110 Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 98 <211> 120 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide" <400> 98 Gln Val Gln Leu Gln Gln Trp Gly Ala Gly Leu Leu Lys Pro Ser Glu 1 5 10 15 Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Val Tyr Gly Gly Ser Phe Arg Gly Tyr 20 25 30 Tyr Trp Glu Trp Ser Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Glu Ile Ser His Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys 50 55 60 Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu 65 70 75 80 Lys Leu Ser Pro Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala 85 90 95 Arg Ala Arg Pro Tyr Arg Glu Pro Tyr Gly Met Asp Val Trp Gly Gln 100 105 110 Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 99 <211> 123 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide" <400> 99 Gln Val Gln Leu Gln Gln Trp Gly Ala Gly Leu Leu Lys Pro Ser Glu 1 5 10 15 Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Val Tyr Gly Gly Ser Phe Val Lys Tyr 20 25 30 Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Asp Ile Trp His Ser Gly Met Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys 50 55 60 Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu 65 70 75 80 Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala 85 90 95 Arg Gly Pro Gly Tyr Asp Ser Ser Gly Tyr Ser Arg Arg Phe Asp Pro 100 105 110 Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 100 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide" <400> 100 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Val Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Trp 20 25 30 Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Ala Ala Ser Asn Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ala Ser Val Phe Pro Phe 85 90 95 Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 <210> 101 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide" <400> 101 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Val Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Arg Trp 20 25 30 Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ala Asn Leu Leu Pro Phe 85 90 95 Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 <210> 102 <211> 108 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide" <400> 102 Glu Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly 1 5 10 15 Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Ser 20 25 30 Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu 35 40 45 Ile Tyr Gly Ala Ser Asn Arg Ala Thr Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser 50 55 60 Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu 65 70 75 80 Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Leu Ser Ser Phe Pro 85 90 95 Ile Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 <210> 103 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide" <400> 103 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Gln Ala Ser Gln Asp Ile Thr Asn Tyr 20 25 30 Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Asp Ala Ser Asn Leu Glu Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Phe Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Asp Val Leu Pro Ile 85 90 95 Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 <210> 104 <211> 106 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide" <400> 104 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Tyr 20 25 30 Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Gly Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Thr Tyr Ser Leu Tyr Thr 85 90 95 Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 <210> 105 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide" <400> 105 Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Val Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp Ile Ser Ser Trp 20 25 30 Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Glu Leu Ala Phe Pro Arg 85 90 95 Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 <210> 106 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide" <400> 106 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Thr Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Trp 20 25 30 Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Lys Ala Ser Ser Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Asp Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Leu Asn Ser Tyr Pro Pro 85 90 95 Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 <210> 107 <211> 448 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide" <400> 107 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Gly Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Arg Ser Tyr 20 25 30 Tyr Met Leu Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Ile Ile Asp Pro Ser Asp Gly Ser Thr Ser Tyr Ala Gln Lys Phe 50 55 60 Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Pro Thr Ser Thr Val Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Ala Arg Arg Ile Thr Gly Tyr Gly Met Asp Val Trp Gly 100 105 110 Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser 115 120 125 Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala 130 135 140 Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val 145 150 155 160 Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala 165 170 175 Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val 180 185 190 Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His 195 200 205 Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly 210 215 220 Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser 225 230 235 240 Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg 245 250 255 Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro 260 265 270 Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala 275 280 285 Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val 290 295 300 Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr 305 310 315 320 Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr 325 330 335 Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu 340 345 350 Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys 355 360 365 Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser 370 375 380 Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp 385 390 395 400 Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser 405 410 415 Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala 420 425 430 Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys 435 440 445 <210> 108 <211> 448 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide" <400> 108 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Arg Ser Tyr 20 25 30 Tyr Met Leu Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Ile Ile Asp Pro Ser Asp Gly Ser Thr Ser Tyr Ala Gln Lys Phe 50 55 60 Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Ala Ser Thr Ser Thr Val Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Ala Arg Arg Ile Thr Gly Tyr Gly Met Asp Val Trp Gly 100 105 110 Gln Gly Thr Thr Val Ile Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser 115 120 125 Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala 130 135 140 Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val 145 150 155 160 Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala 165 170 175 Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val 180 185 190 Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His 195 200 205 Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly 210 215 220 Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser 225 230 235 240 Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg 245 250 255 Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro 260 265 270 Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala 275 280 285 Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val 290 295 300 Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr 305 310 315 320 Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr 325 330 335 Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu 340 345 350 Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys 355 360 365 Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser 370 375 380 Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp 385 390 395 400 Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser 405 410 415 Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala 420 425 430 Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys 435 440 445 <210> 109 <211> 447 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide" <400> 109 Gln Ala Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Ser Arg Tyr 20 25 30 Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Ile Ile Asn Pro Leu Gly Gly Ser Thr Leu Tyr Ala Gln Lys Phe 50 55 60 Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Asp Leu Gly Tyr Tyr Gly Ser Gly Met His Ala Trp Gly Gln 100 105 110 Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val 115 120 125 Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala 130 135 140 Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser 145 150 155 160 Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val 165 170 175 Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro 180 185 190 Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys 195 200 205 Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro 210 215 220 Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val 225 230 235 240 Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr 245 250 255 Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu 260 265 270 Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys 275 280 285 Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser 290 295 300 Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys 305 310 315 320 Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile 325 330 335 Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro 340 345 350 Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu 355 360 365 Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn 370 375 380 Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser 385 390 395 400 Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg 405 410 415 Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu 420 425 430 His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys 435 440 445 <210> 110 <211> 447 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide" <400> 110 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Ser Arg Tyr 20 25 30 Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Ile Ile Asn Pro Leu Gly Gly Ser Thr Leu Tyr Ala Gln Lys Phe 50 55 60 Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Asp Leu Gly Tyr Tyr Gly Ser Gly Met His Val Trp Gly Gln 100 105 110 Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val 115 120 125 Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala 130 135 140 Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser 145 150 155 160 Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val 165 170 175 Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro 180 185 190 Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys 195 200 205 Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro 210 215 220 Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val 225 230 235 240 Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr 245 250 255 Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu 260 265 270 Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys 275 280 285 Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser 290 295 300 Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys 305 310 315 320 Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile 325 330 335 Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro 340 345 350 Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu 355 360 365 Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn 370 375 380 Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser 385 390 395 400 Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg 405 410 415 Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu 420 425 430 His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys 435 440 445 <210> 111 <211> 448 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide" <400> 111 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr 20 25 30 Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Ile Ile Asn Pro Gln Gly Gly Asp Thr Ser Tyr Ala Gln Lys Phe 50 55 60 Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Asp Arg Gly Met Tyr Tyr Ala Ser Gly Phe Gly Pro Trp Gly 100 105 110 Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser 115 120 125 Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala 130 135 140 Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val 145 150 155 160 Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala 165 170 175 Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val 180 185 190 Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His 195 200 205 Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly 210 215 220 Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser 225 230 235 240 Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg 245 250 255 Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro 260 265 270 Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala 275 280 285 Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val 290 295 300 Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr 305 310 315 320 Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr 325 330 335 Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu 340 345 350 Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys 355 360 365 Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser 370 375 380 Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp 385 390 395 400 Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser 405 410 415 Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala 420 425 430 Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys 435 440 445 <210> 112 <211> 448 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide" <400> 112 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Lys Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr 20 25 30 Tyr Met His Trp Val Arg Gln Val Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Ile Ile Asn Pro Gln Gly Gly Asp Thr Ser Tyr Ala Gln Lys Phe 50 55 60 Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Asp Arg Gly Met Tyr Tyr Ala Ser Gly Phe Asn Pro Trp Gly 100 105 110 Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser 115 120 125 Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala 130 135 140 Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val 145 150 155 160 Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala 165 170 175 Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val 180 185 190 Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His 195 200 205 Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly 210 215 220 Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser 225 230 235 240 Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg 245 250 255 Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro 260 265 270 Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala 275 280 285 Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val 290 295 300 Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr 305 310 315 320 Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr 325 330 335 Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu 340 345 350 Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys 355 360 365 Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser 370 375 380 Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp 385 390 395 400 Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser 405 410 415 Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala 420 425 430 Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys 435 440 445 <210> 113 <211> 448 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide" <400> 113 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Trp Met Glu Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Arg Ile Lys Arg Asp Gly Ser Glu Lys Tyr Tyr Val Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Asp Gln Gly Tyr Lys Thr Pro Thr Asp Phe Asp Leu Trp Gly 100 105 110 Arg Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser 115 120 125 Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala 130 135 140 Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val 145 150 155 160 Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala 165 170 175 Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val 180 185 190 Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His 195 200 205 Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly 210 215 220 Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser 225 230 235 240 Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg 245 250 255 Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro 260 265 270 Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala 275 280 285 Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val 290 295 300 Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr 305 310 315 320 Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr 325 330 335 Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu 340 345 350 Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys 355 360 365 Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser 370 375 380 Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp 385 390 395 400 Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser 405 410 415 Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala 420 425 430 Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys 435 440 445 <210> 114 <211> 454 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide" <400> 114 Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ala Ser Tyr 20 25 30 Ala Met Val Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ser Ile Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Lys Asp Pro Gly Tyr Asp Ser Ser Arg Tyr Tyr Tyr Ser Asn Tyr 100 105 110 Gly Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala 115 120 125 Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser 130 135 140 Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe 145 150 155 160 Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly 165 170 175 Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu 180 185 190 Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr Tyr 195 200 205 Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg 210 215 220 Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu 225 230 235 240 Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp 245 250 255 Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp 260 265 270 Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly 275 280 285 Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn 290 295 300 Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp 305 310 315 320 Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro 325 330 335 Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu 340 345 350 Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn 355 360 365 Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile 370 375 380 Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr 385 390 395 400 Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg 405 410 415 Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys 420 425 430 Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu 435 440 445 Ser Leu Ser Leu Gly Lys 450 <210> 115 <211> 454 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide" <400> 115 Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Lys Ser Tyr 20 25 30 Ala Met Val Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ser Ile Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ala Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Lys Asp Pro Gly Tyr Asp Ser Ser Arg Tyr Tyr Tyr Ser Asn Tyr 100 105 110 Gly Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala 115 120 125 Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser 130 135 140 Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe 145 150 155 160 Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly 165 170 175 Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu 180 185 190 Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr Tyr 195 200 205 Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg 210 215 220 Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu 225 230 235 240 Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp 245 250 255 Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp 260 265 270 Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly 275 280 285 Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn 290 295 300 Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp 305 310 315 320 Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro 325 330 335 Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu 340 345 350 Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn 355 360 365 Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile 370 375 380 Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr 385 390 395 400 Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg 405 410 415 Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys 420 425 430 Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu 435 440 445 Ser Leu Ser Leu Gly Lys 450 <210> 116 <211> 454 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide" <400> 116 Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Val 20 25 30 Ala Met Val Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ser Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ala Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Lys Asp Pro Gly Tyr Asp Ser Ser Arg Tyr Tyr Tyr Ser Asn Tyr 100 105 110 Gly Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala 115 120 125 Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser 130 135 140 Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe 145 150 155 160 Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly 165 170 175 Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu 180 185 190 Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr Tyr 195 200 205 Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg 210 215 220 Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu 225 230 235 240 Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp 245 250 255 Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp 260 265 270 Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly 275 280 285 Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn 290 295 300 Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp 305 310 315 320 Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro 325 330 335 Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu 340 345 350 Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn 355 360 365 Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile 370 375 380 Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr 385 390 395 400 Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg 405 410 415 Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys 420 425 430 Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu 435 440 445 Ser Leu Ser Leu Gly Lys 450 <210> 117 <211> 454 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide" <400> 117 Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Val 20 25 30 Ala Met Val Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ser Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ala Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Glu Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Ser Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Lys Asp Pro Gly Tyr Asp Ser Ser Arg Tyr Tyr Tyr Ser Asn Tyr 100 105 110 Gly Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala 115 120 125 Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser 130 135 140 Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe 145 150 155 160 Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly 165 170 175 Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu 180 185 190 Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr Tyr 195 200 205 Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg 210 215 220 Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu 225 230 235 240 Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp 245 250 255 Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp 260 265 270 Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly 275 280 285 Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn 290 295 300 Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp 305 310 315 320 Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro 325 330 335 Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu 340 345 350 Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn 355 360 365 Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile 370 375 380 Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr 385 390 395 400 Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg 405 410 415 Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys 420 425 430 Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu 435 440 445 Ser Leu Ser Leu Gly Lys 450 <210> 118 <211> 454 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide" <400> 118 Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Val 20 25 30 Ala Met Val Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ser Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ala Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Glu Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Lys Asp Pro Gly Tyr Asp Ser Ser Arg Tyr Tyr Tyr Ser Asn Tyr 100 105 110 Gly Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala 115 120 125 Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser 130 135 140 Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe 145 150 155 160 Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly 165 170 175 Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu 180 185 190 Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr Tyr 195 200 205 Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg 210 215 220 Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu 225 230 235 240 Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp 245 250 255 Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp 260 265 270 Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly 275 280 285 Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn 290 295 300 Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp 305 310 315 320 Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro 325 330 335 Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu 340 345 350 Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn 355 360 365 Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile 370 375 380 Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr 385 390 395 400 Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg 405 410 415 Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys 420 425 430 Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu 435 440 445 Ser Leu Ser Leu Gly Lys 450 <210> 119 <211> 447 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide" <400> 119 Gln Val Gln Leu Gln Gln Trp Gly Ala Gly Leu Leu Lys Pro Ser Glu 1 5 10 15 Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Val Tyr Gly Gly Ser Phe Arg Gly Tyr 20 25 30 Tyr Trp Glu Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Glu Ile Ser His Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys 50 55 60 Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu 65 70 75 80 Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala 85 90 95 Arg Ala Arg Pro Tyr Arg Glu Pro Tyr Gly Met Asp Val Trp Gly Gln 100 105 110 Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val 115 120 125 Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala 130 135 140 Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser 145 150 155 160 Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val 165 170 175 Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro 180 185 190 Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys 195 200 205 Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro 210 215 220 Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val 225 230 235 240 Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr 245 250 255 Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu 260 265 270 Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys 275 280 285 Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser 290 295 300 Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys 305 310 315 320 Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile 325 330 335 Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro 340 345 350 Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu 355 360 365 Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn 370 375 380 Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser 385 390 395 400 Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg 405 410 415 Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu 420 425 430 His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys 435 440 445 <210> 120 <211> 447 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide" <400> 120 Gln Val Gln Leu Gln Gln Trp Gly Ala Gly Leu Leu Lys Pro Ser Glu 1 5 10 15 Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Val Tyr Gly Gly Ser Phe Arg Gly Tyr 20 25 30 Tyr Trp Glu Trp Ser Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Glu Ile Ser His Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys 50 55 60 Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu 65 70 75 80 Lys Leu Ser Pro Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala 85 90 95 Arg Ala Arg Pro Tyr Arg Glu Pro Tyr Gly Met Asp Val Trp Gly Gln 100 105 110 Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val 115 120 125 Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala 130 135 140 Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser 145 150 155 160 Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val 165 170 175 Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro 180 185 190 Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys 195 200 205 Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro 210 215 220 Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val 225 230 235 240 Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr 245 250 255 Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu 260 265 270 Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys 275 280 285 Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser 290 295 300 Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys 305 310 315 320 Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile 325 330 335 Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro 340 345 350 Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu 355 360 365 Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn 370 375 380 Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser 385 390 395 400 Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg 405 410 415 Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu 420 425 430 His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys 435 440 445 <210> 121 <211> 450 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide" <400> 121 Gln Val Gln Leu Gln Gln Trp Gly Ala Gly Leu Leu Lys Pro Ser Glu 1 5 10 15 Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Val Tyr Gly Gly Ser Phe Val Lys Tyr 20 25 30 Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Asp Ile Trp His Ser Gly Met Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys 50 55 60 Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu 65 70 75 80 Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala 85 90 95 Arg Gly Pro Gly Tyr Asp Ser Ser Gly Tyr Ser Arg Arg Phe Asp Pro 100 105 110 Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly 115 120 125 Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser 130 135 140 Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val 145 150 155 160 Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe 165 170 175 Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val 180 185 190 Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys Asn Val 195 200 205 Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Ser Lys 210 215 220 Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe Leu Gly Gly 225 230 235 240 Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile 245 250 255 Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu 260 265 270 Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His 275 280 285 Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg 290 295 300 Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys 305 310 315 320 Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu 325 330 335 Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr 340 345 350 Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu 355 360 365 Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp 370 375 380 Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val 385 390 395 400 Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp 405 410 415 Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His 420 425 430 Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu 435 440 445 Gly Lys 450 <210> 122 <211> 214 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide" <400> 122 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Val Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Trp 20 25 30 Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Ala Ala Ser Asn Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ala Ser Val Phe Pro Phe 85 90 95 Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala 100 105 110 Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly 115 120 125 Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala 130 135 140 Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln 145 150 155 160 Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser 165 170 175 Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr 180 185 190 Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser 195 200 205 Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210 <210> 123 <211> 214 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide" <400> 123 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Val Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Arg Trp 20 25 30 Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ala Asn Leu Leu Pro Phe 85 90 95 Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala 100 105 110 Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly 115 120 125 Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala 130 135 140 Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln 145 150 155 160 Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser 165 170 175 Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr 180 185 190 Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser 195 200 205 Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210 <210> 124 <211> 215 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide" <400> 124 Glu Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly 1 5 10 15 Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Ser 20 25 30 Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu 35 40 45 Ile Tyr Gly Ala Ser Asn Arg Ala Thr Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser 50 55 60 Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu 65 70 75 80 Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Leu Ser Ser Phe Pro 85 90 95 Ile Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala 100 105 110 Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser 115 120 125 Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu 130 135 140 Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser 145 150 155 160 Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu 165 170 175 Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val 180 185 190 Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys 195 200 205 Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210 215 <210> 125 <211> 214 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide" <400> 125 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Gln Ala Ser Gln Asp Ile Thr Asn Tyr 20 25 30 Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Asp Ala Ser Asn Leu Glu Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Phe Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Asp Val Leu Pro Ile 85 90 95 Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala 100 105 110 Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly 115 120 125 Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala 130 135 140 Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln 145 150 155 160 Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser 165 170 175 Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr 180 185 190 Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser 195 200 205 Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210 <210> 126 <211> 213 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide" <400> 126 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Tyr 20 25 30 Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Gly Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Thr Tyr Ser Leu Tyr Thr 85 90 95 Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro 100 105 110 Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr 115 120 125 Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys 130 135 140 Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu 145 150 155 160 Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser 165 170 175 Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala 180 185 190 Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe 195 200 205 Asn Arg Gly Glu Cys 210 <210> 127 <211> 214 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide" <400> 127 Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Val Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp Ile Ser Ser Trp 20 25 30 Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Glu Leu Ala Phe Pro Arg 85 90 95 Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala 100 105 110 Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly 115 120 125 Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala 130 135 140 Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln 145 150 155 160 Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser 165 170 175 Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr 180 185 190 Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser 195 200 205 Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210 <210> 128 <211> 214 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide" <400> 128 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Thr Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Trp 20 25 30 Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Lys Ala Ser Ser Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Asp Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Leu Asn Ser Tyr Pro Pro 85 90 95 Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala 100 105 110 Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly 115 120 125 Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala 130 135 140 Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln 145 150 155 160 Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser 165 170 175 Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr 180 185 190 Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser 195 200 205 Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210 <210> 129 <211> 2772 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 129 atggagaggg ggctgccgct cctctgcgcc gtgctcgccc tcgtcctcgc cccggccggc 60 gcttttcgca acgataaatg tggcgatact ataaaaattg aaagccccgg gtaccttaca 120 tctcctggtt atcctcattc ttatcaccca agtgaaaaat gcgaatggct gattcaggct 180 ccggacccat accagagaat tatgatcaac ttcaaccctc acttcgattt ggaggacaga 240 gactgcaagt atgactacgt ggaagtcttc gatggagaaa atgaaaatgg acattttagg 300 ggaaagttct gtggaaagat agcccctcct cctgttgtgt cttcagggcc atttcttttt 360 atcaaatttg tctctgacta cgaaacacat ggtgcaggat tttccatacg ttatgaaatt 420 ttcaagagag gtcctgaatg ttcccagaac tacacaacac ctagtggagt gataaagtcc 480 cccggattcc ctgaaaaata tcccaacagc cttgaatgca cttatattgt ctttgcgcca 540 aagatgtcag agattatcct ggaatttgaa agctttgacc tggagcctga ctcaaatcct 600 ccagggggga tgttctgtcg ctacgaccgg ctagaaatct gggatggatt ccctgatgtt 660 ggccctcaca ttgggcgtta ctgtggacag aaaacaccag gtcgaatccg atcctcatcg 720 ggcattctct ccatggtttt ttacaccgac agcgcgatag caaaagaagg tttctcagca 780 aactacagtg tcttgcagag cagtgtctca gaagatttca aatgtatgga agctctgggc 840 atggaatcag gagaaattca ttctgaccag atcacagctt cttcccagta tagcaccaac 900 tggtctgcag agcgctcccg cctgaactac cctgagaatg ggtggactcc cggagaggat 960 tcctaccgag agtggataca ggtagacttg ggccttctgc gctttgtcac ggctgtcggg 1020 acacagggcg ccatttcaaa agaaaccaag aagaaatatt atgtcaagac ttacaagatc 1080 gacgttagct ccaacgggga agactggatc accataaaag aaggaaacaa acctgttctc 1140 tttcagggaa acaccaaccc cacagatgtt gtggttgcag tattccccaa accactgata 1200 actcgatttg tccgaatcaa gcctgcaact tgggaaactg gcatatctat gagatttgaa 1260 gtatacggtt gcaagataac agattatcct tgctctggaa tgttgggtat ggtgtctgga 1320 cttatttctg actcccagat cacatcatcc aaccaagggg acagaaactg gatgcctgaa 1380 aacatccgcc tggtaaccag tcgctctggc tgggcacttc cacccgcacc tcattcctac 1440 atcaatgagt ggctccaaat agacctgggg gaggagaaga tcgtgagggg catcatcatt 1500 cagggtggga agcaccgaga gaacaaggtg ttcatgagga agttcaagat cgggtacagc 1560 aacaacggct cggactggaa gatgatcatg gatgacagca aacgcaaggc gaagtctttt 1620 gagggcaaca acaactatga tacacctgag ctgcggactt ttccagctct ctccacgcga 1680 ttcatcagga tctaccccga gagagccact catggcggac tggggctcag aatggagctg 1740 ctgggctgtg aagtggaagc ccctacagct ggaccgacca ctcccaacgg gaacttggtg 1800 gatgaatgtg atgacgacca ggccaactgc cacagtggaa caggtgatga cttccagctc 1860 acaggtggca ccactgtgct ggccacagaa aagcccacgg tcatagacag caccatacaa 1920 tcagagtttc caacatatgg ttttaactgt gaatttggct ggggctctca caagaccttc 1980 tgccactggg aacatgacaa tcacgtgcag ctcaagtgga gtgtgttgac cagcaagacg 2040 ggacccattc aggatcacac aggagatggc aacttcatct attcccaagc tgacgaaaat 2100 cagaagggca aagtggctcg cctggtgagc cctgtggttt attcccagaa ctctgcccac 2160 tgcatgacct tctggtatca catgtctggg tcccacgtcg gcacactcag ggtcaaactg 2220 cgctaccaga agccagagga gtacgatcag ctggtctgga tggccattgg acaccaaggt 2280 gaccactgga aggaagggcg tgtcttgctc cacaagtctc tgaaacttta tcaggtgatt 2340 ttcgagggcg aaatcggaaa aggaaacctt ggtgggattg ctgtggatga cattagtatt 2400 aataaccaca tttcacaaga agattgtgca aaaccagcag acctggataa aaagaaccca 2460 gaaattaaaa ttgatgaaac agggagcacg ccaggatacg aaggtgaagg agaaggtgac 2520 aagaacatct ccaggaagcc aggcaatgtg ttgaagacct tagaccccat cctcatcacc 2580 atcatagcca tgagtgccct gggggtcctc ctgggggctg tctgtggggt cgtgctgtac 2640 tgtgcctgtt ggcataatgg gatgtcagaa agaaacttgt ctgccctgga gaactataac 2700 tttgaacttg tggatggtgt gaagttgaaa aaagacaaac tgaatacaca gagtacttat 2760 tcggaggcat ga 2772 <210> 130 <211> 923 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 130 Met Glu Arg Gly Leu Pro Leu Leu Cys Ala Val Leu Ala Leu Val Leu 1 5 10 15 Ala Pro Ala Gly Ala Phe Arg Asn Asp Lys Cys Gly Asp Thr Ile Lys 20 25 30 Ile Glu Ser Pro Gly Tyr Leu Thr Ser Pro Gly Tyr Pro His Ser Tyr 35 40 45 His Pro Ser Glu Lys Cys Glu Trp Leu Ile Gln Ala Pro Asp Pro Tyr 50 55 60 Gln Arg Ile Met Ile Asn Phe Asn Pro His Phe Asp Leu Glu Asp Arg 65 70 75 80 Asp Cys Lys Tyr Asp Tyr Val Glu Val Phe Asp Gly Glu Asn Glu Asn 85 90 95 Gly His Phe Arg Gly Lys Phe Cys Gly Lys Ile Ala Pro Pro Pro Val 100 105 110 Val Ser Ser Gly Pro Phe Leu Phe Ile Lys Phe Val Ser Asp Tyr Glu 115 120 125 Thr His Gly Ala Gly Phe Ser Ile Arg Tyr Glu Ile Phe Lys Arg Gly 130 135 140 Pro Glu Cys Ser Gln Asn Tyr Thr Thr Pro Ser Gly Val Ile Lys Ser 145 150 155 160 Pro Gly Phe Pro Glu Lys Tyr Pro Asn Ser Leu Glu Cys Thr Tyr Ile 165 170 175 Val Phe Ala Pro Lys Met Ser Glu Ile Ile Leu Glu Phe Glu Ser Phe 180 185 190 Asp Leu Glu Pro Asp Ser Asn Pro Pro Gly Gly Met Phe Cys Arg Tyr 195 200 205 Asp Arg Leu Glu Ile Trp Asp Gly Phe Pro Asp Val Gly Pro His Ile 210 215 220 Gly Arg Tyr Cys Gly Gln Lys Thr Pro Gly Arg Ile Arg Ser Ser Ser 225 230 235 240 Gly Ile Leu Ser Met Val Phe Tyr Thr Asp Ser Ala Ile Ala Lys Glu 245 250 255 Gly Phe Ser Ala Asn Tyr Ser Val Leu Gln Ser Ser Val Ser Glu Asp 260 265 270 Phe Lys Cys Met Glu Ala Leu Gly Met Glu Ser Gly Glu Ile His Ser 275 280 285 Asp Gln Ile Thr Ala Ser Ser Gln Tyr Ser Thr Asn Trp Ser Ala Glu 290 295 300 Arg Ser Arg Leu Asn Tyr Pro Glu Asn Gly Trp Thr Pro Gly Glu Asp 305 310 315 320 Ser Tyr Arg Glu Trp Ile Gln Val Asp Leu Gly Leu Leu Arg Phe Val 325 330 335 Thr Ala Val Gly Thr Gln Gly Ala Ile Ser Lys Glu Thr Lys Lys Lys 340 345 350 Tyr Tyr Val Lys Thr Tyr Lys Ile Asp Val Ser Ser Asn Gly Glu Asp 355 360 365 Trp Ile Thr Ile Lys Glu Gly Asn Lys Pro Val Leu Phe Gln Gly Asn 370 375 380 Thr Asn Pro Thr Asp Val Val Val Ala Val Phe Pro Lys Pro Leu Ile 385 390 395 400 Thr Arg Phe Val Arg Ile Lys Pro Ala Thr Trp Glu Thr Gly Ile Ser 405 410 415 Met Arg Phe Glu Val Tyr Gly Cys Lys Ile Thr Asp Tyr Pro Cys Ser 420 425 430 Gly Met Leu Gly Met Val Ser Gly Leu Ile Ser Asp Ser Gln Ile Thr 435 440 445 Ser Ser Asn Gln Gly Asp Arg Asn Trp Met Pro Glu Asn Ile Arg Leu 450 455 460 Val Thr Ser Arg Ser Gly Trp Ala Leu Pro Pro Ala Pro His Ser Tyr 465 470 475 480 Ile Asn Glu Trp Leu Gln Ile Asp Leu Gly Glu Glu Lys Ile Val Arg 485 490 495 Gly Ile Ile Ile Gln Gly Gly Lys His Arg Glu Asn Lys Val Phe Met 500 505 510 Arg Lys Phe Lys Ile Gly Tyr Ser Asn Asn Gly Ser Asp Trp Lys Met 515 520 525 Ile Met Asp Asp Ser Lys Arg Lys Ala Lys Ser Phe Glu Gly Asn Asn 530 535 540 Asn Tyr Asp Thr Pro Glu Leu Arg Thr Phe Pro Ala Leu Ser Thr Arg 545 550 555 560 Phe Ile Arg Ile Tyr Pro Glu Arg Ala Thr His Gly Gly Leu Gly Leu 565 570 575 Arg Met Glu Leu Leu Gly Cys Glu Val Glu Ala Pro Thr Ala Gly Pro 580 585 590 Thr Thr Pro Asn Gly Asn Leu Val Asp Glu Cys Asp Asp Asp Gln Ala 595 600 605 Asn Cys His Ser Gly Thr Gly Asp Asp Phe Gln Leu Thr Gly Gly Thr 610 615 620 Thr Val Leu Ala Thr Glu Lys Pro Thr Val Ile Asp Ser Thr Ile Gln 625 630 635 640 Ser Glu Phe Pro Thr Tyr Gly Phe Asn Cys Glu Phe Gly Trp Gly Ser 645 650 655 His Lys Thr Phe Cys His Trp Glu His Asp Asn His Val Gln Leu Lys 660 665 670 Trp Ser Val Leu Thr Ser Lys Thr Gly Pro Ile Gln Asp His Thr Gly 675 680 685 Asp Gly Asn Phe Ile Tyr Ser Gln Ala Asp Glu Asn Gln Lys Gly Lys 690 695 700 Val Ala Arg Leu Val Ser Pro Val Val Tyr Ser Gln Asn Ser Ala His 705 710 715 720 Cys Met Thr Phe Trp Tyr His Met Ser Gly Ser His Val Gly Thr Leu 725 730 735 Arg Val Lys Leu Arg Tyr Gln Lys Pro Glu Glu Tyr Asp Gln Leu Val 740 745 750 Trp Met Ala Ile Gly His Gln Gly Asp His Trp Lys Glu Gly Arg Val 755 760 765 Leu Leu His Lys Ser Leu Lys Leu Tyr Gln Val Ile Phe Glu Gly Glu 770 775 780 Ile Gly Lys Gly Asn Leu Gly Gly Ile Ala Val Asp Asp Ile Ser Ile 785 790 795 800 Asn Asn His Ile Ser Gln Glu Asp Cys Ala Lys Pro Ala Asp Leu Asp 805 810 815 Lys Lys Asn Pro Glu Ile Lys Ile Asp Glu Thr Gly Ser Thr Pro Gly 820 825 830 Tyr Glu Gly Glu Gly Glu Gly Asp Lys Asn Ile Ser Arg Lys Pro Gly 835 840 845 Asn Val Leu Lys Thr Leu Asp Pro Ile Leu Ile Thr Ile Ile Ala Met 850 855 860 Ser Ala Leu Gly Val Leu Leu Gly Ala Val Cys Gly Val Val Leu Tyr 865 870 875 880 Cys Ala Cys Trp His Asn Gly Met Ser Glu Arg Asn Leu Ser Ala Leu 885 890 895 Glu Asn Tyr Asn Phe Glu Leu Val Asp Gly Val Lys Leu Lys Lys Asp 900 905 910 Lys Leu Asn Thr Gln Ser Thr Tyr Ser Glu Ala 915 920 <210> 131 <211> 2772 <212> DNA <213> Macaca fascicularis <400> 131 atggagaagg ggttgccgct cctctgcgcc gcgctcgccc tcgccctcgc cccggccggc 60 gcttttcgca acgataaatg tggcgatact ataaaaattg aaagccccgg gtaccttaca 120 tctcctggtt atcctcattc ttatcaccca agtgaaaaat gtgaatggct gattcaggct 180 ccggacccat accagagaat tatgatcaac ttcaaccctc acttcgattt ggaggacaga 240 gattgcaagt atgactacgt ggaagtcttc gatggagaaa atgaaaatgg acgtttatgg 300 ggaaagttct gtggaaagat agcccctcct cctgttgtgt cttcagggca atttcttttt 360 atcaaatttg tctctgacta cgaaacacac ggtgcaggat tttccatacg ttatgaaatt 420 ttcaagagag gtcctgaatg ttcccagaac tacacaacac ctagtggagt gataaagtcc 480 cccggattcc ctgaaaaata tcccaacagc cttgaatgca cttatattgt ctttgcacca 540 aagatgtcag agattatcct ggaatttgaa agctttgacc tggagcctga ctcaaatcct 600 ccagggggga tgttctgtcg ctacgaccgg ctggaaatct gggatggatt ccctgacgtt 660 ggccctcaca ttgggcgtta ctgtggacag aaaacaccag gtcgaatccg atcctcatcg 720 ggcattctct ccatggtttt ttacaccgac agcgcaatag caaaagaagg tttctcagca 780 aactacagtg tcttgcagag cagtgtctca gaagatttca aatgtatgga agctgtgggc 840 atggaatcag gagaaattca ttctgaccag atcacagctt cttcccagta cagcaccaac 900 tggtctgcag agcgctcccg cctgaactat cctgagaatg ggtggactcc cggagaagat 960 tcctaccgag agtggataca ggtggacttg ggccttctac gcttcgttac ggctgtcggg 1020 acacagggcg ccatttcaaa agaaaccaag aagaaatatt atgtcaagac ttacaaaatt 1080 gacattagct ccaacgggga agactggatc accataaaag aaggaaacaa acctgttctc 1140 tttcagggaa acaccaaccc cacagacgtt gtggttgcag tattccccaa gccactgata 1200 actcgatttg tccgaatcaa gcctgcaact tgggaaactg gcatatctct gagatttgaa 1260 gtatatggtt gcaagataac agattatcct tgctccggaa tgttgggtat ggtgtctgga 1320 cttatttctg actcccagat cacatcatcc aaccaagggg acagaaactg gatgcctgaa 1380 aacatccgcc tggtaaccag tcgctccggc tgggcactgc cacccgcacc tcattcctac 1440 gtcaatgagt ggctccaaat agacctgggg gaggagaaga tcgtgagggg catcatcatt 1500 cagggtggga agcaccgaga gaacaaggta ttcatgagga agttcaagat cgggtacagc 1560 aacaacggct ccgactggaa gatgatcatg gacgacagca aacgcaaggc aaagtctttt 1620 gagggcaaca acaactatga cacacctgag ctgcggactt ttccagctct ctccacgcga 1680 ttcatcagga tctaccccga gagagccact catggcggac tggggctccg aatggagctg 1740 ctgggctgtg aagtggaagc ccctacagct ggaccgacca ctcccaacgg gaacccggtg 1800 gatgaatgtg atgacgacca ggccaactgc cacagtggaa caggtgatga cttccagctc 1860 acaggtggca ccactgtgct ggccacagaa aagcccacgg tcatagacag caccatacaa 1920 tcagagtttc ctacatatgg ttttaactgt gaatttggct ggggctctca caagaccttc 1980 tgccactggg aacatgacaa tcacgtgcag ctcaagtgga gtgtgttgac cagcaagacg 2040 ggacccattc aggatcacac aggagatggc aacttcatct attcccaagc tgatgaaaat 2100 cagaagggca aagtggctcg cctggtgagc cctgtggttt attcccagaa ctctgcccac 2160 tgcatgacct tctggtatca catgtctggg tcccacgtcg gcacactcag ggtcaaactg 2220 cgctaccaga agccagagga gtacgatcag ctggtctgga tggccattgg acaccaaggt 2280 gaccactgga aggaagggcg tgtcttgctt cacaagtctc tgaaacttta tcaggtgatt 2340 ttcgagggcg aaatcggaaa aggaaacctt ggtgggattg ctgtggatga cattagtatc 2400 aataaccaca tttcacaaga agattgtgca aaaccagcag acctggataa aaagaaccca 2460 gaaattaaaa ttgatgaaac agggagcaca ccaggatatg aaggtgaagg agaaggtgac 2520 aagaacatct ccaggaaacc aggcaatgtg ttgaagacct tagaccccat cctcatcacc 2580 atcatagcca tgagcgccct gggggtcctc ctgggggctg tgtgcggggt cgtgctgtac 2640 tgtgcctgtt ggcataatgg gatgtcagaa agaaacttgt ctgccctgga gaactataac 2700 tttgaacttg tggacggtgt gaagttgaaa aaagacaaac tgaatacaca gagtacttat 2760 tcggaggcat ga 2772 <210> 132 <211> 923 <212> PRT <213> Macaca fascicularis <400> 132 Met Glu Lys Gly Leu Pro Leu Leu Cys Ala Ala Leu Ala Leu Ala Leu 1 5 10 15 Ala Pro Ala Gly Ala Phe Arg Asn Asp Lys Cys Gly Asp Thr Ile Lys 20 25 30 Ile Glu Ser Pro Gly Tyr Leu Thr Ser Pro Gly Tyr Pro His Ser Tyr 35 40 45 His Pro Ser Glu Lys Cys Glu Trp Leu Ile Gln Ala Pro Asp Pro Tyr 50 55 60 Gln Arg Ile Met Ile Asn Phe Asn Pro His Phe Asp Leu Glu Asp Arg 65 70 75 80 Asp Cys Lys Tyr Asp Tyr Val Glu Val Phe Asp Gly Glu Asn Glu Asn 85 90 95 Gly Arg Leu Trp Gly Lys Phe Cys Gly Lys Ile Ala Pro Pro Pro Val 100 105 110 Val Ser Ser Gly Gln Phe Leu Phe Ile Lys Phe Val Ser Asp Tyr Glu 115 120 125 Thr His Gly Ala Gly Phe Ser Ile Arg Tyr Glu Ile Phe Lys Arg Gly 130 135 140 Pro Glu Cys Ser Gln Asn Tyr Thr Thr Pro Ser Gly Val Ile Lys Ser 145 150 155 160 Pro Gly Phe Pro Glu Lys Tyr Pro Asn Ser Leu Glu Cys Thr Tyr Ile 165 170 175 Val Phe Ala Pro Lys Met Ser Glu Ile Ile Leu Glu Phe Glu Ser Phe 180 185 190 Asp Leu Glu Pro Asp Ser Asn Pro Pro Gly Gly Met Phe Cys Arg Tyr 195 200 205 Asp Arg Leu Glu Ile Trp Asp Gly Phe Pro Asp Val Gly Pro His Ile 210 215 220 Gly Arg Tyr Cys Gly Gln Lys Thr Pro Gly Arg Ile Arg Ser Ser Ser 225 230 235 240 Gly Ile Leu Ser Met Val Phe Tyr Thr Asp Ser Ala Ile Ala Lys Glu 245 250 255 Gly Phe Ser Ala Asn Tyr Ser Val Leu Gln Ser Ser Val Ser Glu Asp 260 265 270 Phe Lys Cys Met Glu Ala Val Gly Met Glu Ser Gly Glu Ile His Ser 275 280 285 Asp Gln Ile Thr Ala Ser Ser Gln Tyr Ser Thr Asn Trp Ser Ala Glu 290 295 300 Arg Ser Arg Leu Asn Tyr Pro Glu Asn Gly Trp Thr Pro Gly Glu Asp 305 310 315 320 Ser Tyr Arg Glu Trp Ile Gln Val Asp Leu Gly Leu Leu Arg Phe Val 325 330 335 Thr Ala Val Gly Thr Gln Gly Ala Ile Ser Lys Glu Thr Lys Lys Lys 340 345 350 Tyr Tyr Val Lys Thr Tyr Lys Ile Asp Ile Ser Ser Asn Gly Glu Asp 355 360 365 Trp Ile Thr Ile Lys Glu Gly Asn Lys Pro Val Leu Phe Gln Gly Asn 370 375 380 Thr Asn Pro Thr Asp Val Val Val Ala Val Phe Pro Lys Pro Leu Ile 385 390 395 400 Thr Arg Phe Val Arg Ile Lys Pro Ala Thr Trp Glu Thr Gly Ile Ser 405 410 415 Leu Arg Phe Glu Val Tyr Gly Cys Lys Ile Thr Asp Tyr Pro Cys Ser 420 425 430 Gly Met Leu Gly Met Val Ser Gly Leu Ile Ser Asp Ser Gln Ile Thr 435 440 445 Ser Ser Asn Gln Gly Asp Arg Asn Trp Met Pro Glu Asn Ile Arg Leu 450 455 460 Val Thr Ser Arg Ser Gly Trp Ala Leu Pro Pro Ala Pro His Ser Tyr 465 470 475 480 Val Asn Glu Trp Leu Gln Ile Asp Leu Gly Glu Glu Lys Ile Val Arg 485 490 495 Gly Ile Ile Ile Gln Gly Gly Lys His Arg Glu Asn Lys Val Phe Met 500 505 510 Arg Lys Phe Lys Ile Gly Tyr Ser Asn Asn Gly Ser Asp Trp Lys Met 515 520 525 Ile Met Asp Asp Ser Lys Arg Lys Ala Lys Ser Phe Glu Gly Asn Asn 530 535 540 Asn Tyr Asp Thr Pro Glu Leu Arg Thr Phe Pro Ala Leu Ser Thr Arg 545 550 555 560 Phe Ile Arg Ile Tyr Pro Glu Arg Ala Thr His Gly Gly Leu Gly Leu 565 570 575 Arg Met Glu Leu Leu Gly Cys Glu Val Glu Ala Pro Thr Ala Gly Pro 580 585 590 Thr Thr Pro Asn Gly Asn Pro Val Asp Glu Cys Asp Asp Asp Gln Ala 595 600 605 Asn Cys His Ser Gly Thr Gly Asp Asp Phe Gln Leu Thr Gly Gly Thr 610 615 620 Thr Val Leu Ala Thr Glu Lys Pro Thr Val Ile Asp Ser Thr Ile Gln 625 630 635 640 Ser Glu Phe Pro Thr Tyr Gly Phe Asn Cys Glu Phe Gly Trp Gly Ser 645 650 655 His Lys Thr Phe Cys His Trp Glu His Asp Asn His Val Gln Leu Lys 660 665 670 Trp Ser Val Leu Thr Ser Lys Thr Gly Pro Ile Gln Asp His Thr Gly 675 680 685 Asp Gly Asn Phe Ile Tyr Ser Gln Ala Asp Glu Asn Gln Lys Gly Lys 690 695 700 Val Ala Arg Leu Val Ser Pro Val Val Tyr Ser Gln Asn Ser Ala His 705 710 715 720 Cys Met Thr Phe Trp Tyr His Met Ser Gly Ser His Val Gly Thr Leu 725 730 735 Arg Val Lys Leu Arg Tyr Gln Lys Pro Glu Glu Tyr Asp Gln Leu Val 740 745 750 Trp Met Ala Ile Gly His Gln Gly Asp His Trp Lys Glu Gly Arg Val 755 760 765 Leu Leu His Lys Ser Leu Lys Leu Tyr Gln Val Ile Phe Glu Gly Glu 770 775 780 Ile Gly Lys Gly Asn Leu Gly Gly Ile Ala Val Asp Asp Ile Ser Ile 785 790 795 800 Asn Asn His Ile Ser Gln Glu Asp Cys Ala Lys Pro Ala Asp Leu Asp 805 810 815 Lys Lys Asn Pro Glu Ile Lys Ile Asp Glu Thr Gly Ser Thr Pro Gly 820 825 830 Tyr Glu Gly Glu Gly Glu Gly Asp Lys Asn Ile Ser Arg Lys Pro Gly 835 840 845 Asn Val Leu Lys Thr Leu Asp Pro Ile Leu Ile Thr Ile Ile Ala Met 850 855 860 Ser Ala Leu Gly Val Leu Leu Gly Ala Val Cys Gly Val Val Leu Tyr 865 870 875 880 Cys Ala Cys Trp His Asn Gly Met Ser Glu Arg Asn Leu Ser Ala Leu 885 890 895 Glu Asn Tyr Asn Phe Glu Leu Val Asp Gly Val Lys Leu Lys Lys Asp 900 905 910 Lys Leu Asn Thr Gln Ser Thr Tyr Ser Glu Ala 915 920 <210> 133 <211> 2772 <212> DNA <213> Mus musculus <400> 133 atggagaggg ggctgccgtt gctgtgcgcc acgctcgccc ttgccctcgc cctggcgggc 60 gctttccgca gcgacaaatg tggcgggacc ataaaaatcg aaaacccagg gtacctcaca 120 tctcccggtt accctcattc ttaccatcca agtgagaagt gtgaatggct aatccaagct 180 ccggaaccct accagagaat catgatcaac ttcaacccac atttcgattt ggaggacaga 240 gactgcaagt atgactacgt ggaagtaatc gatggggaga atgaaggcgg ccgcctgtgg 300 gggaagttct gtgggaagat tgcaccttct cctgtggtgt cttcagggcc ctttctcttc 360 atcaaatttg tctctgacta tgagacacat ggggcagggt tttccatccg ctatgaaatc 420 ttcaagagag ggcccgaatg ttctcagaac tatacagcac ctactggagt gataaagtcc 480 cctgggttcc ctgaaaaata ccccaacagc ttggagtgca cctacatcat ctttgcacca 540 aagatgtctg agataatcct ggagtttgaa agttttgacc tggagcaaga ctcgaatcct 600 cccggaggaa tgttctgtcg ctatgaccgg ctggagatct gggatggatt ccctgaagtt 660 ggccctcaca ttgggcgtta ttgtgggcag aaaactcctg gccggatccg ctcctcttca 720 ggcgttctat ccatggtctt ttacactgac agcgcaatag caaaagaagg tttctcagcc 780 aactacagtg tgctacagag cagcatctct gaagatttta agtgtatgga ggctctgggc 840 atggaatctg gagagatcca ttctgatcag atcactgcat cttcacagta tggtaccaac 900 tggtctgtag agcgctcccg cctgaactac cctgaaaatg ggtggactcc aggagaagac 960 tcctacaagg agtggatcca ggtggacttg ggcctcctgc gattcgttac tgctgtaggg 1020 acacagggtg ccatttccaa ggaaaccaag aagaaatatt atgtcaagac ttacagagta 1080 gacatcagct ccaacggaga ggactggatc tccctgaaag agggaaataa agccattatc 1140 tttcagggaa acaccaaccc cacagatgtt gtcttaggag ttttctccaa accactgata 1200 actcgatttg tccgaatcaa acctgtatcc tgggaaactg gtatatctat gagatttgaa 1260 gtttatggct gcaagataac agattatcct tgctctggaa tgttgggcat ggtgtctgga 1320 cttatttcag actcccagat tacagcatcc aatcaagccg acaggaattg gatgccagaa 1380 aacatccgtc tggtgaccag tcgtaccggc tgggcactgc caccctcacc ccacccatac 1440 accaatgaat ggctccaagt ggacctggga gatgagaaga tagtaagagg tgtcatcatt 1500 cagggtggga agcaccgaga aaacaaggtg ttcatgagga agttcaagat cgcctatagt 1560 aacaatggct ctgactggaa aactatcatg gatgacagca agcgcaaggc taagtcgttc 1620 gaaggcaaca acaactatga cacacctgag cttcggacgt tttcacctct ctccacaagg 1680 ttcatcagga tctaccctga gagagccaca cacagtgggc ttgggctgag gatggagcta 1740 ctgggctgtg aagtggaagc acctacagct ggaccaacca cacccaatgg gaacccagtg 1800 gatgagtgtg acgacgacca ggccaactgc cacagtggca caggtgatga cttccagctc 1860 acaggaggca ccactgtcct ggccacagag aagccaacca ttatagacag caccatccaa 1920 tcagagttcc cgacatacgg ttttaactgc gagtttggct ggggctctca caagacattc 1980 tgccactggg agcatgacag ccatgcacag ctcaggtgga gtgtgctgac cagcaagaca 2040 gggccgattc aggaccatac aggagatggc aacttcatct attcccaagc tgatgaaaat 2100 cagaaaggca aagtagcccg cctggtgagc cctgtggtct attcccagag ctctgcccac 2160 tgtatgacct tctggtatca catgtccggc tctcatgtgg gtacactgag ggtcaaacta 2220 cgctaccaga agccagagga atatgatcaa ctggtctgga tggtggttgg gcaccaagga 2280 gaccactgga aagaaggacg tgtcttgctg cacaaatctc tgaaactata tcaggttatt 2340 tttgaaggtg aaatcggaaa aggaaacctt ggtggaattg ctgtggatga tatcagtatt 2400 aacaaccata tttctcagga agactgtgca aaaccaacag acctagataa aaagaacaca 2460 gaaattaaaa ttgatgaaac agggagcact ccaggatatg aaggagaagg ggaaggtgac 2520 aagaacatct ccaggaagcc aggcaatgtg cttaagaccc tggatcccat cctgatcacc 2580 atcatagcca tgagtgccct gggagtactc ctgggtgcag tctgtggagt tgtgctgtac 2640 tgtgcctgtt ggcacaatgg gatgtcagaa aggaacctat ctgccctgga gaactataac 2700 tttgaacttg tggatggtgt aaagttgaaa aaagataaac tgaacccaca gagtaattac 2760 tcagaggcgt ga 2772 <210> 134 <211> 923 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 134 Met Glu Arg Gly Leu Pro Leu Leu Cys Ala Thr Leu Ala Leu Ala Leu 1 5 10 15 Ala Leu Ala Gly Ala Phe Arg Ser Asp Lys Cys Gly Gly Thr Ile Lys 20 25 30 Ile Glu Asn Pro Gly Tyr Leu Thr Ser Pro Gly Tyr Pro His Ser Tyr 35 40 45 His Pro Ser Glu Lys Cys Glu Trp Leu Ile Gln Ala Pro Glu Pro Tyr 50 55 60 Gln Arg Ile Met Ile Asn Phe Asn Pro His Phe Asp Leu Glu Asp Arg 65 70 75 80 Asp Cys Lys Tyr Asp Tyr Val Glu Val Ile Asp Gly Glu Asn Glu Gly 85 90 95 Gly Arg Leu Trp Gly Lys Phe Cys Gly Lys Ile Ala Pro Ser Pro Val 100 105 110 Val Ser Ser Gly Pro Phe Leu Phe Ile Lys Phe Val Ser Asp Tyr Glu 115 120 125 Thr His Gly Ala Gly Phe Ser Ile Arg Tyr Glu Ile Phe Lys Arg Gly 130 135 140 Pro Glu Cys Ser Gln Asn Tyr Thr Ala Pro Thr Gly Val Ile Lys Ser 145 150 155 160 Pro Gly Phe Pro Glu Lys Tyr Pro Asn Ser Leu Glu Cys Thr Tyr Ile 165 170 175 Ile Phe Ala Pro Lys Met Ser Glu Ile Ile Leu Glu Phe Glu Ser Phe 180 185 190 Asp Leu Glu Gln Asp Ser Asn Pro Pro Gly Gly Met Phe Cys Arg Tyr 195 200 205 Asp Arg Leu Glu Ile Trp Asp Gly Phe Pro Glu Val Gly Pro His Ile 210 215 220 Gly Arg Tyr Cys Gly Gln Lys Thr Pro Gly Arg Ile Arg Ser Ser Ser 225 230 235 240 Gly Val Leu Ser Met Val Phe Tyr Thr Asp Ser Ala Ile Ala Lys Glu 245 250 255 Gly Phe Ser Ala Asn Tyr Ser Val Leu Gln Ser Ser Ile Ser Glu Asp 260 265 270 Phe Lys Cys Met Glu Ala Leu Gly Met Glu Ser Gly Glu Ile His Ser 275 280 285 Asp Gln Ile Thr Ala Ser Ser Gln Tyr Gly Thr Asn Trp Ser Val Glu 290 295 300 Arg Ser Arg Leu Asn Tyr Pro Glu Asn Gly Trp Thr Pro Gly Glu Asp 305 310 315 320 Ser Tyr Lys Glu Trp Ile Gln Val Asp Leu Gly Leu Leu Arg Phe Val 325 330 335 Thr Ala Val Gly Thr Gln Gly Ala Ile Ser Lys Glu Thr Lys Lys Lys 340 345 350 Tyr Tyr Val Lys Thr Tyr Arg Val Asp Ile Ser Ser Asn Gly Glu Asp 355 360 365 Trp Ile Ser Leu Lys Glu Gly Asn Lys Ala Ile Ile Phe Gln Gly Asn 370 375 380 Thr Asn Pro Thr Asp Val Val Leu Gly Val Phe Ser Lys Pro Leu Ile 385 390 395 400 Thr Arg Phe Val Arg Ile Lys Pro Val Ser Trp Glu Thr Gly Ile Ser 405 410 415 Met Arg Phe Glu Val Tyr Gly Cys Lys Ile Thr Asp Tyr Pro Cys Ser 420 425 430 Gly Met Leu Gly Met Val Ser Gly Leu Ile Ser Asp Ser Gln Ile Thr 435 440 445 Ala Ser Asn Gln Ala Asp Arg Asn Trp Met Pro Glu Asn Ile Arg Leu 450 455 460 Val Thr Ser Arg Thr Gly Trp Ala Leu Pro Pro Ser Pro His Pro Tyr 465 470 475 480 Thr Asn Glu Trp Leu Gln Val Asp Leu Gly Asp Glu Lys Ile Val Arg 485 490 495 Gly Val Ile Ile Gln Gly Gly Lys His Arg Glu Asn Lys Val Phe Met 500 505 510 Arg Lys Phe Lys Ile Ala Tyr Ser Asn Asn Gly Ser Asp Trp Lys Thr 515 520 525 Ile Met Asp Asp Ser Lys Arg Lys Ala Lys Ser Phe Glu Gly Asn Asn 530 535 540 Asn Tyr Asp Thr Pro Glu Leu Arg Thr Phe Ser Pro Leu Ser Thr Arg 545 550 555 560 Phe Ile Arg Ile Tyr Pro Glu Arg Ala Thr His Ser Gly Leu Gly Leu 565 570 575 Arg Met Glu Leu Leu Gly Cys Glu Val Glu Ala Pro Thr Ala Gly Pro 580 585 590 Thr Thr Pro Asn Gly Asn Pro Val Asp Glu Cys Asp Asp Asp Gln Ala 595 600 605 Asn Cys His Ser Gly Thr Gly Asp Asp Phe Gln Leu Thr Gly Gly Thr 610 615 620 Thr Val Leu Ala Thr Glu Lys Pro Thr Ile Ile Asp Ser Thr Ile Gln 625 630 635 640 Ser Glu Phe Pro Thr Tyr Gly Phe Asn Cys Glu Phe Gly Trp Gly Ser 645 650 655 His Lys Thr Phe Cys His Trp Glu His Asp Ser His Ala Gln Leu Arg 660 665 670 Trp Ser Val Leu Thr Ser Lys Thr Gly Pro Ile Gln Asp His Thr Gly 675 680 685 Asp Gly Asn Phe Ile Tyr Ser Gln Ala Asp Glu Asn Gln Lys Gly Lys 690 695 700 Val Ala Arg Leu Val Ser Pro Val Val Tyr Ser Gln Ser Ser Ala His 705 710 715 720 Cys Met Thr Phe Trp Tyr His Met Ser Gly Ser His Val Gly Thr Leu 725 730 735 Arg Val Lys Leu Arg Tyr Gln Lys Pro Glu Glu Tyr Asp Gln Leu Val 740 745 750 Trp Met Val Val Gly His Gln Gly Asp His Trp Lys Glu Gly Arg Val 755 760 765 Leu Leu His Lys Ser Leu Lys Leu Tyr Gln Val Ile Phe Glu Gly Glu 770 775 780 Ile Gly Lys Gly Asn Leu Gly Gly Ile Ala Val Asp Asp Ile Ser Ile 785 790 795 800 Asn Asn His Ile Ser Gln Glu Asp Cys Ala Lys Pro Thr Asp Leu Asp 805 810 815 Lys Lys Asn Thr Glu Ile Lys Ile Asp Glu Thr Gly Ser Thr Pro Gly 820 825 830 Tyr Glu Gly Glu Gly Glu Gly Asp Lys Asn Ile Ser Arg Lys Pro Gly 835 840 845 Asn Val Leu Lys Thr Leu Asp Pro Ile Leu Ile Thr Ile Ile Ala Met 850 855 860 Ser Ala Leu Gly Val Leu Leu Gly Ala Val Cys Gly Val Val Leu Tyr 865 870 875 880 Cys Ala Cys Trp His Asn Gly Met Ser Glu Arg Asn Leu Ser Ala Leu 885 890 895 Glu Asn Tyr Asn Phe Glu Leu Val Asp Gly Val Lys Leu Lys Lys Asp 900 905 910 Lys Leu Asn Pro Gln Ser Asn Tyr Ser Glu Ala 915 920 <210> 135 <211> 922 <212> PRT <213> Rattus norvegicus <400> 135 Met Glu Arg Gly Leu Pro Leu Leu Cys Ala Thr Leu Ala Leu Ala Leu 1 5 10 15 Ala Leu Ala Gly Ala Phe Arg Ser Asp Lys Cys Gly Gly Thr Ile Lys 20 25 30 Ile Glu Asn Pro Gly Tyr Leu Thr Ser Pro Gly Tyr Pro His Ser Tyr 35 40 45 His Pro Ser Glu Lys Cys Glu Trp Leu Ile Gln Ala Pro Glu Pro Tyr 50 55 60 Gln Arg Ile Met Ile Asn Phe Asn Pro His Phe Asp Leu Glu Asp Arg 65 70 75 80 Asp Cys Lys Tyr Asp Tyr Val Glu Val Ile Asp Gly Glu Asn Glu Gly 85 90 95 Gly Arg Leu Trp Gly Lys Phe Cys Gly Lys Ile Ala Pro Ser Pro Val 100 105 110 Val Ser Ser Gly Pro Phe Leu Phe Ile Lys Phe Val Ser Asp Tyr Glu 115 120 125 Thr His Gly Ala Gly Phe Ser Ile Arg Tyr Glu Ile Phe Lys Arg Gly 130 135 140 Pro Glu Cys Ser Gln Asn Tyr Thr Ala Pro Thr Gly Val Ile Lys Ser 145 150 155 160 Pro Gly Phe Pro Glu Lys Tyr Pro Asn Ser Leu Glu Cys Thr Tyr Ile 165 170 175 Ile Phe Ala Pro Lys Met Ser Glu Ile Ile Leu Glu Phe Glu Ser Phe 180 185 190 Asp Leu Glu Gln Asp Ser Asn Pro Pro Gly Gly Val Phe Cys Arg Tyr 195 200 205 Asp Arg Leu Glu Ile Trp Asp Gly Phe Pro Glu Val Gly Pro His Ile 210 215 220 Gly Arg Tyr Cys Gly Gln Lys Thr Pro Gly Arg Ile Arg Ser Ser Ser 225 230 235 240 Gly Ile Leu Ser Met Val Phe Tyr Thr Asp Ser Ala Ile Ala Lys Glu 245 250 255 Gly Phe Ser Ala Asn Tyr Ser Val Leu Gln Ser Ser Ile Ser Glu Asp 260 265 270 Phe Lys Cys Met Glu Ala Leu Gly Met Glu Ser Gly Glu Ile His Ser 275 280 285 Asp Gln Ile Thr Ala Ser Ser Gln Tyr Gly Thr Asn Trp Ser Val Glu 290 295 300 Arg Ser Arg Leu Asn Tyr Pro Glu Asn Gly Trp Thr Pro Gly Glu Asp 305 310 315 320 Ser Tyr Arg Glu Trp Ile Gln Val Asp Leu Gly Leu Leu Arg Phe Val 325 330 335 Thr Ala Val Gly Thr Gln Gly Ala Ile Ser Lys Glu Thr Lys Lys Lys 340 345 350 Tyr Tyr Val Lys Thr Tyr Arg Val Asp Ile Ser Ser Asn Gly Glu Asp 355 360 365 Trp Ile Thr Leu Lys Glu Gly Asn Lys Ala Ile Ile Phe Gln Gly Asn 370 375 380 Thr Asn Pro Thr Asp Val Val Phe Gly Val Phe Pro Lys Pro Leu Ile 385 390 395 400 Thr Arg Phe Val Arg Ile Lys Pro Ala Ser Trp Glu Thr Gly Ile Ser 405 410 415 Met Arg Phe Glu Val Tyr Gly Cys Lys Ile Thr Asp Tyr Pro Cys Ser 420 425 430 Gly Met Leu Gly Met Val Ser Gly Leu Ile Ser Asp Ser Gln Ile Thr 435 440 445 Ala Ser Asn Gln Gly Asp Arg Asn Trp Met Pro Glu Asn Ile Arg Leu 450 455 460 Val Thr Ser Arg Thr Gly Trp Ala Leu Pro Pro Ser Pro His Pro Tyr 465 470 475 480 Ile Asn Glu Trp Leu Gln Val Asp Leu Gly Asp Glu Lys Ile Val Arg 485 490 495 Gly Val Ile Ile Gln Gly Gly Lys His Arg Glu Asn Lys Val Phe Met 500 505 510 Arg Lys Phe Lys Ile Ala Tyr Ser Asn Asn Gly Ser Asp Trp Lys Met 515 520 525 Ile Met Asp Asp Ser Lys Arg Lys Ala Lys Ser Phe Glu Gly Asn Asn 530 535 540 Asn Tyr Asp Thr Pro Glu Leu Arg Ala Phe Thr Pro Leu Ser Thr Arg 545 550 555 560 Phe Ile Arg Ile Tyr Pro Glu Arg Ala Thr His Ser Gly Leu Gly Leu 565 570 575 Arg Met Glu Leu Leu Gly Cys Glu Val Glu Val Pro Thr Ala Gly Pro 580 585 590 Thr Thr Pro Asn Gly Asn Pro Val Asp Glu Cys Asp Asp Asp Gln Ala 595 600 605 Asn Cys His Ser Gly Thr Gly Asp Asp Phe Gln Leu Thr Gly Gly Thr 610 615 620 Thr Val Leu Ala Thr Glu Lys Pro Thr Ile Ile Asp Ser Thr Ile Gln 625 630 635 640 Ser Glu Phe Pro Thr Tyr Gly Phe Asn Cys Glu Phe Gly Trp Gly Ser 645 650 655 His Lys Thr Phe Cys His Trp Glu His Asp Ser His Ala Gln Leu Arg 660 665 670 Trp Arg Val Leu Thr Ser Lys Thr Gly Pro Ile Gln Asp His Thr Gly 675 680 685 Asp Gly Asn Phe Ile Tyr Ser Gln Ala Asp Glu Asn Gln Lys Gly Lys 690 695 700 Val Ala Arg Leu Val Ser Pro Val Val Tyr Ser Gln Ser Ser Ala His 705 710 715 720 Cys Met Thr Phe Trp Tyr His Met Ser Gly Ser His Val Gly Thr Leu 725 730 735 Arg Val Lys Leu His Tyr Gln Lys Pro Glu Glu Tyr Asp Gln Leu Val 740 745 750 Trp Met Val Val Gly His Gln Gly Asp His Trp Lys Glu Gly Arg Val 755 760 765 Leu Leu His Lys Ser Leu Lys Leu Tyr Gln Val Ile Phe Glu Gly Glu 770 775 780 Ile Gly Lys Gly Asn Leu Gly Gly Ile Ala Val Asp Asp Ile Ser Ile 785 790 795 800 Asn Asn His Ile Pro Gln Glu Asp Cys Ala Lys Pro Thr Asp Leu Asp 805 810 815 Lys Lys Asn Thr Glu Ile Lys Ile Asp Glu Thr Gly Ser Thr Pro Gly 820 825 830 Tyr Glu Glu Gly Lys Gly Asp Lys Asn Ile Ser Arg Lys Pro Gly Asn 835 840 845 Val Leu Lys Thr Leu Asp Pro Ile Leu Ile Thr Ile Ile Ala Met Ser 850 855 860 Ala Leu Gly Val Leu Leu Gly Ala Val Cys Gly Val Val Leu Tyr Cys 865 870 875 880 Ala Cys Trp His Asn Gly Met Ser Glu Arg Asn Leu Ser Ala Leu Glu 885 890 895 Asn Tyr Asn Phe Glu Leu Val Asp Gly Val Lys Leu Lys Lys Asp Lys 900 905 910 Leu Asn Pro Gln Ser Asn Tyr Ser Glu Ala 915 920 <210> 136 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <220> <221> VARIANT <222> (1)..(1) <223> /replace="Ala" <220> <221> VARIANT <222> (8)..(8) <223> /replace="Ala" <220> <221> VARIANT <222> (16)..(16) <223> /replace="Glu" <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1)..(17) <223> /note="Variant residues given in the sequence have no preference with respect to those in the annotations for variant positions" <400> 136 Ile Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys 1 5 10 15 Gly <210> 137 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <220> <221> VARIANT <222> (4)..(4) <223> /replace="Lys" or "Ser" <220> <221> VARIANT <222> (6)..(6) <223> /replace="Val" <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1)..(9) <223> /note="Variant residues given in the sequence have no preference with respect to those in the annotations for variant positions" <400> 137 Phe Thr Phe Ala Ser Tyr Ala Met Val 1 5 <210> 138 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <220> <221> VARIANT <222> (13)..(13) <223> /replace="Val" <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1)..(13) <223> /note="Variant residues given in the sequence have no preference with respect to those in the annotations for variant positions" <400> 138 Ala Arg Asp Leu Gly Tyr Tyr Gly Ser Gly Met His Ala 1 5 10 <210> 139 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <220> <221> VARIANT <222> (13)..(13) <223> /replace="Asn" <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1)..(14) <223> /note="Variant residues given in the sequence have no preference with respect to those in the annotations for variant positions" <400> 139 Ala Arg Asp Arg Gly Met Tyr Tyr Ala Ser Gly Phe Gly Pro 1 5 10 <210> 140 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 140 Gly Gly Gly Gly Ser 1 5 <210> 141 <211> 453 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide" <400> 141 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ser Gln Ile Ser Pro Ala Gly Gly Tyr Thr Asn Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Ala Asp Thr Ser Lys Asn Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Glu Leu Pro Tyr Tyr Arg Met Ser Lys Val Met Asp Val 100 105 110 Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly 115 120 125 Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly 130 135 140 Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val 145 150 155 160 Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe 165 170 175 Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val 180 185 190 Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val 195 200 205 Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys 210 215 220 Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu 225 230 235 240 Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr 245 250 255 Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val 260 265 270 Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val 275 280 285 Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser 290 295 300 Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu 305 310 315 320 Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala 325 330 335 Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro 340 345 350 Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln 355 360 365 Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala 370 375 380 Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr 385 390 395 400 Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu 405 410 415 Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser 420 425 430 Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser 435 440 445 Leu Ser Pro Gly Lys 450 <210> 142 <211> 214 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide" <400> 142 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Tyr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Gly Ala Ser Ser Arg Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Leu Gly Ser Pro Pro 85 90 95 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala 100 105 110 Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly 115 120 125 Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala 130 135 140 Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln 145 150 155 160 Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser 165 170 175 Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr 180 185 190 Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser 195 200 205 Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210 <210> 143 <211> 923 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 143 Met Glu Arg Gly Leu Pro Leu Leu Cys Ala Val Leu Ala Leu Val Leu 1 5 10 15 Ala Pro Ala Gly Ala Phe Arg Asn Asp Lys Cys Gly Asp Thr Ile Lys 20 25 30 Ile Glu Ser Pro Gly Tyr Leu Thr Ser Pro Gly Tyr Pro His Ser Tyr 35 40 45 His Pro Ser Glu Lys Cys Glu Trp Leu Ile Gln Ala Pro Asp Pro Tyr 50 55 60 Gln Arg Ile Met Ile Asn Phe Asn Pro His Phe Asp Leu Glu Asp Arg 65 70 75 80 Asp Cys Lys Tyr Asp Tyr Val Glu Val Phe Asp Gly Glu Asn Glu Asn 85 90 95 Gly His Phe Arg Gly Lys Phe Cys Gly Lys Ile Ala Pro Pro Pro Val 100 105 110 Val Ser Ser Gly Pro Phe Leu Phe Ile Lys Phe Val Ser Asp Tyr Glu 115 120 125 Thr His Gly Ala Gly Phe Ser Ile Arg Tyr Glu Ile Phe Lys Arg Gly 130 135 140 Pro Glu Cys Ser Gln Asn Tyr Thr Thr Pro Ser Gly Val Ile Lys Ser 145 150 155 160 Pro Gly Phe Pro Glu Lys Tyr Pro Asn Ser Leu Glu Cys Thr Tyr Ile 165 170 175 Val Phe Val Pro Lys Met Ser Glu Ile Ile Leu Glu Phe Glu Ser Phe 180 185 190 Asp Leu Glu Pro Asp Ser Asn Pro Pro Gly Gly Met Phe Cys Arg Tyr 195 200 205 Asp Arg Leu Glu Ile Trp Asp Gly Phe Pro Asp Val Gly Pro His Ile 210 215 220 Gly Arg Tyr Cys Gly Gln Lys Thr Pro Gly Arg Ile Arg Ser Ser Ser 225 230 235 240 Gly Ile Leu Ser Met Val Phe Tyr Thr Asp Ser Ala Ile Ala Lys Glu 245 250 255 Gly Phe Ser Ala Asn Tyr Ser Val Leu Gln Ser Ser Val Ser Glu Asp 260 265 270 Phe Lys Cys Met Glu Ala Leu Gly Met Glu Ser Gly Glu Ile His Ser 275 280 285 Asp Gln Ile Thr Ala Ser Ser Gln Tyr Ser Thr Asn Trp Ser Ala Glu 290 295 300 Arg Ser Arg Leu Asn Tyr Pro Glu Asn Gly Trp Thr Pro Gly Glu Asp 305 310 315 320 Ser Tyr Arg Glu Trp Ile Gln Val Asp Leu Gly Leu Leu Arg Phe Val 325 330 335 Thr Ala Val Gly Thr Gln Gly Ala Ile Ser Lys Glu Thr Lys Lys Lys 340 345 350 Tyr Tyr Val Lys Thr Tyr Lys Ile Asp Val Ser Ser Asn Gly Glu Asp 355 360 365 Trp Ile Thr Ile Lys Glu Gly Asn Lys Pro Val Leu Phe Gln Gly Asn 370 375 380 Thr Asn Pro Thr Asp Val Val Val Ala Val Phe Pro Lys Pro Leu Ile 385 390 395 400 Thr Arg Phe Val Arg Ile Lys Pro Ala Thr Trp Glu Thr Gly Ile Ser 405 410 415 Met Arg Phe Glu Val Tyr Gly Cys Lys Ile Thr Asp Tyr Pro Cys Ser 420 425 430 Gly Met Leu Gly Met Val Ser Gly Leu Ile Ser Asp Ser Gln Ile Thr 435 440 445 Ser Ser Asn Gln Gly Asp Arg Asn Trp Met Pro Glu Asn Ile Arg Leu 450 455 460 Val Thr Ser Arg Ser Gly Trp Ala Leu Pro Pro Ala Pro His Ser Tyr 465 470 475 480 Ile Asn Glu Trp Leu Gln Ile Asp Leu Gly Glu Glu Lys Ile Val Arg 485 490 495 Gly Ile Ile Ile Gln Gly Gly Lys His Arg Glu Asn Lys Val Phe Met 500 505 510 Arg Lys Phe Lys Ile Gly Tyr Ser Asn Asn Gly Ser Asp Trp Lys Met 515 520 525 Ile Met Asp Asp Ser Lys Arg Lys Ala Lys Ser Phe Glu Gly Asn Asn 530 535 540 Asn Tyr Asp Thr Pro Glu Leu Arg Thr Phe Pro Ala Leu Ser Thr Arg 545 550 555 560 Phe Ile Arg Ile Tyr Pro Glu Arg Ala Thr His Gly Gly Leu Gly Leu 565 570 575 Arg Met Glu Leu Leu Gly Cys Glu Val Glu Ala Pro Thr Ala Gly Pro 580 585 590 Thr Thr Pro Asn Gly Asn Leu Val Asp Glu Cys Asp Asp Asp Gln Ala 595 600 605 Asn Cys His Ser Gly Thr Gly Asp Asp Phe Gln Leu Thr Gly Gly Thr 610 615 620 Thr Val Leu Ala Thr Glu Lys Pro Thr Val Ile Asp Ser Thr Ile Gln 625 630 635 640 Ser Glu Phe Pro Thr Tyr Gly Phe Asn Cys Glu Phe Gly Trp Gly Ser 645 650 655 His Lys Thr Phe Cys His Trp Glu His Asp Asn His Val Gln Leu Lys 660 665 670 Trp Ser Val Leu Thr Ser Lys Thr Gly Pro Ile Gln Asp His Thr Gly 675 680 685 Asp Gly Asn Phe Ile Tyr Ser Gln Ala Asp Glu Asn Gln Lys Gly Lys 690 695 700 Val Ala Arg Leu Val Ser Pro Val Val Tyr Ser Gln Asn Ser Ala His 705 710 715 720 Cys Met Thr Phe Trp Tyr His Met Ser Gly Ser His Val Gly Thr Leu 725 730 735 Arg Val Lys Leu Arg Tyr Gln Lys Pro Glu Glu Tyr Asp Gln Leu Val 740 745 750 Trp Met Ala Ile Gly His Gln Gly Asp His Trp Lys Glu Gly Arg Val 755 760 765 Leu Leu His Lys Ser Leu Lys Leu Tyr Gln Val Ile Phe Glu Gly Glu 770 775 780 Ile Gly Lys Gly Asn Leu Gly Gly Ile Ala Val Asp Asp Ile Ser Ile 785 790 795 800 Asn Asn His Ile Ser Gln Glu Asp Cys Ala Lys Pro Ala Asp Leu Asp 805 810 815 Lys Lys Asn Pro Glu Ile Lys Ile Asp Glu Thr Gly Ser Thr Pro Gly 820 825 830 Tyr Glu Gly Glu Gly Glu Gly Asp Lys Asn Ile Ser Arg Lys Pro Gly 835 840 845 Asn Val Leu Lys Thr Leu Asp Pro Ile Leu Ile Thr Ile Ile Ala Met 850 855 860 Ser Ala Leu Gly Val Leu Leu Gly Ala Val Cys Gly Val Val Leu Tyr 865 870 875 880 Cys Ala Cys Trp His Asn Gly Met Ser Glu Arg Asn Leu Ser Ala Leu 885 890 895 Glu Asn Tyr Asn Phe Glu Leu Val Asp Gly Val Lys Leu Lys Lys Asp 900 905 910 Lys Leu Asn Thr Gln Ser Thr Tyr Ser Glu Ala 915 920 <210> 144 <211> 214 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide" <400> 144 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp Val Ser Thr Ala 20 25 30 Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Ser Ala Ser Phe Leu Tyr Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ala Trp Ala Tyr Leu Pro 85 90 95 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala 100 105 110 Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly 115 120 125 Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala 130 135 140 Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln 145 150 155 160 Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser 165 170 175 Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr 180 185 190 Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser 195 200 205 Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210 <210> 145 <211> 454 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide" <400> 145 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Ile Ser Gly Tyr 20 25 30 Gly Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Tyr Ile Tyr Pro Asp Ser Gly Tyr Thr Asp Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Ala Asp Thr Ser Lys Asn Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Glu Asp Phe Arg Asn Arg Arg Arg Leu Trp Tyr Val Met Asp 100 105 110 Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys 115 120 125 Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly 130 135 140 Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro 145 150 155 160 Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr 165 170 175 Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val 180 185 190 Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn 195 200 205 Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro 210 215 220 Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu 225 230 235 240 Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp 245 250 255 Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp 260 265 270 Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly 275 280 285 Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn 290 295 300 Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp 305 310 315 320 Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro 325 330 335 Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu 340 345 350 Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn 355 360 365 Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile 370 375 380 Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr 385 390 395 400 Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys 405 410 415 Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys 420 425 430 Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu 435 440 445 Ser Leu Ser Pro Gly Lys 450 <210> 146 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 146 Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile Tyr 1 5 10 15 <210> 147 <211> 4 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 147 Glu Leu Leu Gly 1 <210> 148 <211> 4 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 148 Glu Phe Leu Gly 1

Claims

하기 6개의 CDR 서열을 포함하는, 인간 NRP-1 (hNRP-1; 서열식별번호 (SEQ ID NO): 130)에 특이적으로 결합하는 단리된 다가 항원 결합 단백질 (ABP):
(a) 서열식별번호: 47에 제시된 서열을 갖는 CDR-H3;
(b) 서열식별번호: 136에 제시된 바와 같은 서열 X₁ISGSGGX₂TYYADSVX₃G (여기서, X₁은 I 또는 A이고, X₂는 S 또는 A이고, X₃은 K 또는 E임)를 갖는 CDR-H2;
(c) 서열식별번호: 137에 제시된 바와 같은 서열 FTFX₁SX₂AMV (여기서, X₁은 A, K, 또는 S이고, X₂는 Y 또는 V임)를 갖는 CDR-H1;
(d) 서열식별번호: 81에 제시된 서열을 갖는 CDR-L3;
(e) 서열식별번호: 71에 제시된 서열을 갖는 CDR-L2; 및
(f) 서열식별번호: 63에 제시된 서열을 갖는 CDR-L1.
제1항에 있어서,
(a) 서열식별번호: 47의 CDR-H3, 서열식별번호: 27의 CDR-H2, 서열식별번호: 12의 CDR-H1, 서열식별번호: 81의 CDR-L3, 서열식별번호: 71의 CDR-L2, 및 서열식별번호: 63의 CDR-L1;
(b) 서열식별번호: 47의 CDR-H3, 서열식별번호: 28의 CDR-H2, 서열식별번호: 13의 CDR-H1, 서열식별번호: 81의 CDR-L3, 서열식별번호: 71의 CDR-L2, 및 서열식별번호: 63의 CDR-L1;
(c) 서열식별번호: 47의 CDR-H3, 서열식별번호: 29의 CDR-H2, 서열식별번호: 14의 CDR-H1, 서열식별번호: 81의 CDR-L3, 서열식별번호: 71의 CDR-L2, 및 서열식별번호: 63의 CDR-L1; 또는
(d) 서열식별번호: 47의 CDR-H3, 서열식별번호: 30의 CDR-H2, 서열식별번호: 14의 CDR-H1, 서열식별번호: 81의 CDR-L3, 서열식별번호: 71의 CDR-L2, 및 서열식별번호: 63의 CDR-L1
을 포함하는 ABP.
제2항에 있어서,
(a) 제2항의 (a)의 ABP가 서열식별번호: 92의 V_H 서열 및 서열식별번호: 104의 V_L 서열을 포함하거나;
(b) 제2항의 (b)의 ABP가 서열식별번호: 93의 V_H 서열 및 서열식별번호: 104의 V_L 서열을 포함하거나;
(c) 제2항의 (c)의 ABP가 서열식별번호: 94의 V_H 서열 및 서열식별번호: 104의 V_L 서열을 포함하거나;
(d) 제2항의 (d)의 ABP가 서열식별번호: 95의 V_H 서열 및 서열식별번호: 104의 V_L 서열을 포함하거나;
(e) 제2항의 (d)의 ABP가 서열식별번호: 96의 V_H 서열 및 서열식별번호: 104의 V_L 서열을 포함하는 것인 ABP.
제3항에 있어서,
(a) 제2항의 (a)의 ABP가 (i) 서열식별번호: 114의 중쇄 및 서열식별번호: 126의 경쇄를 포함하거나;
(b) 제2항의 (b)의 ABP가 (i) 서열식별번호: 115의 중쇄 및 서열식별번호: 126의 경쇄를 포함하거나;
(c) 제2항의 (c)의 ABP가 (i) 서열식별번호: 116의 중쇄 및 서열식별번호: 126의 경쇄를 포함하거나;
(d) 제2항의 (d)의 ABP가 (i) 서열식별번호: 117의 중쇄 및 서열식별번호: 126의 경쇄를 포함하거나;
(e) 제2항의 (d)의 ABP가 (i) 서열식별번호: 118의 중쇄 및 서열식별번호: 126의 경쇄를 포함하는 것인 ABP.
하기 6개의 CDR 서열을 포함하는, 인간 NRP-1 (hNRP-1; 서열식별번호: 130)에 특이적으로 결합하는 단리된 다가 항원 결합 단백질 (ABP):
(a) 서열식별번호: 41에 제시된 서열을 갖는 CDR-H3;
(b) 서열식별번호: 23에 제시된 서열을 갖는 CDR-H2;
(c) 서열식별번호: 8에 제시된 서열을 갖는 CDR-H1;
(d) 서열식별번호: 77에 제시된 서열을 갖는 CDR-L3;
(e) 서열식별번호: 67에 제시된 서열을 갖는 CDR-L2, 및
(f) 서열식별번호: 59에 제시된 서열을 갖는 CDR-L1.
제5항에 있어서,
(a) ABP가 서열식별번호: 85의 V_H 서열 및 서열식별번호: 100의 V_L 서열을 포함하거나;
(b) ABP가 서열식별번호: 86의 V_H 서열 및 서열식별번호: 100의 V_L 서열을 포함하는 것인 ABP.
제6항에 있어서,
(a) 제6항의 (a)의 ABP가 서열식별번호: 107의 중쇄 및 서열식별번호: 122의 카파 경쇄를 포함하고;
(b) 제6항의 (b)의 ABP가 서열식별번호: 108의 중쇄 및 서열식별번호: 122의 카파 경쇄를 포함하는 것인 ABP.
하기 6개의 CDR 서열을 포함하는, 인간 NRP-1 (hNRP-1; 서열식별번호: 130)에 특이적으로 결합하는 단리된 다가 항원 결합 단백질 (ABP):
(a) 서열식별번호: 138에 제시된 바와 같은 서열 ARDLGYYGSGMHX (여기서, X는 A 또는 V임)를 갖는 CDR-H3;
(b) 서열식별번호: 24에 제시된 서열을 갖는 CDR-H2;
(c) 서열식별번호: 9에 제시된 서열을 갖는 CDR-H1;
(d) 서열식별번호: 78에 제시된 서열을 갖는 CDR-L3;
(e) 서열식별번호: 68에 제시된 서열을 갖는 CDR-L2; 및
(f) 서열식별번호: 60에 제시된 서열을 갖는 CDR-L1.
제8항에 있어서,
(a) 서열식별번호: 42의 CDR-H3, 서열식별번호: 24의 CDR-H2, 서열식별번호: 9의 CDR-H1, 서열식별번호: 78의 CDR-L3, 서열식별번호: 68의 CDR-L2, 및 서열식별번호: 60의 CDR-L1; 또는
(b) 서열식별번호: 43의 CDR-H3, 서열식별번호: 24의 CDR-H2, 서열식별번호: 9의 CDR-H1, 서열식별번호: 78의 CDR-L3, 서열식별번호: 68의 CDR-L2, 및 서열식별번호: 60의 CDR-L1
을 포함하는 ABP.
제8항에 있어서,
(a) ABP가 서열식별번호: 87의 V_H 서열 및 서열식별번호: 101의 V_L 서열을 포함하거나;
(b) ABP가 서열식별번호: 88의 V_H 서열 및 서열식별번호: 101의 V_L 서열을 포함하는 것인 ABP.
제8항에 있어서,
(a) ABP가 서열식별번호: 109의 중쇄 및 서열식별번호: 123의 카파 경쇄를 포함하거나;
(b) ABP가 서열식별번호: 110의 중쇄 및 서열식별번호: 123의 카파 경쇄를 포함하는 것인 ABP.
하기 6개의 CDR 서열을 포함하는, 인간 NRP-1 (hNRP-1; 서열식별번호: 130)에 특이적으로 결합하는 단리된 다가 항원 결합 단백질 (ABP):
(a) 서열식별번호: 139에 제시된 바와 같은 서열 ARDRGMYYASGFXP (여기서, X는 G 또는 N임)를 갖는 CDR-H3;
(b) 서열식별번호: 25에 제시된 서열을 갖는 CDR-H2;
(c) 서열식별번호: 10에 제시된 서열을 갖는 CDR-H1;
(d) 서열식별번호: 79에 제시된 서열을 갖는 CDR-L3;
(e) 서열식별번호: 69에 제시된 서열을 갖는 CDR-L2; 및
(f) 서열식별번호: 61에 제시된 서열을 갖는 CDR-L1.
제12항에 있어서,
(a) 서열식별번호: 44의 CDR-H3, 서열식별번호: 25의 CDR-H2, 서열식별번호: 10의 CDR-H1, 서열식별번호: 79의 CDR-L3, 서열식별번호: 69의 CDR-L2, 및 서열식별번호: 61의 CDR-L1; 또는
(b) 서열식별번호: 45의 CDR-H3, 서열식별번호: 25의 CDR-H2, 서열식별번호: 10의 CDR-H1, 서열식별번호: 79의 CDR-L3, 서열식별번호: 69의 CDR-L2, 및 서열식별번호: 61의 CDR-L1
을 포함하는 ABP.
제12항에 있어서,
(a) ABP가 서열식별번호: 89의 V_H 서열 및 서열식별번호: 102의 V_L 서열을 포함하거나;
(b) ABP가 서열식별번호: 90의 V_H 서열 및 서열식별번호: 102의 V_L 서열을 포함하는 것인 ABP.
제12항에 있어서,
(a) ABP가 서열식별번호: 111의 중쇄 및 서열식별번호: 124의 카파 경쇄를 포함하거나;
(b) ABP가 서열식별번호: 112의 중쇄 및 서열식별번호: 124의 카파 경쇄를 포함하는 것인 ABP.
하기 6개의 CDR 서열을 포함하는, 인간 NRP-1 (hNRP-1; 서열식별번호: 130)에 특이적으로 결합하는 단리된 다가 항원 결합 단백질 (ABP):
(a) 서열식별번호: 46에 제시된 서열을 갖는 CDR-H3;
(b) 서열식별번호: 26에 제시된 서열을 갖는 CDR-H2;
(c) 서열식별번호: 11에 제시된 서열을 갖는 CDR-H1;
(d) 서열식별번호: 80에 제시된 서열을 갖는 CDR-L3;
(e) 서열식별번호: 70에 제시된 서열을 갖는 CDR-L2; 및
(f) 서열식별번호: 62에 제시된 서열을 갖는 CDR-L1.
제16항에 있어서, 서열식별번호: 91의 V_H 서열 및 서열식별번호: 103의 V_L 서열을 포함하는 ABP.
제16항 또는 제17항에 있어서, 서열식별번호: 113의 중쇄 및 서열식별번호: 125의 카파 경쇄를 포함하는 ABP.
하기 6개의 CDR 서열을 포함하는, 인간 NRP-1 (hNRP-1; 서열식별번호: 130)에 특이적으로 결합하는 단리된 다가 항원 결합 단백질 (ABP):
(a) 서열식별번호: 48에 제시된 서열을 갖는 CDR-H3;
(b) 서열식별번호: 31에 제시된 서열을 갖는 CDR-H2;
(c) 서열식별번호: 15에 제시된 서열을 갖는 CDR-H1;
(d) 서열식별번호: 82에 제시된 서열을 갖는 CDR-L3;
(e) 서열식별번호: 68에 제시된 서열을 갖는 CDR-L2; 및
(f) 서열식별번호: 64에 제시된 서열을 갖는 CDR-L1.
제19항에 있어서,
(a) 서열식별번호: 97의 V_H 서열 및 서열식별번호: 105의 V_L 서열, 또는
(b) 서열식별번호: 98의 V_H 서열 및 서열식별번호: 105의 V_L 서열
을 포함하는 ABP.
제19항 또는 제20항에 있어서,
(a) 서열식별번호: 119의 중쇄 및 서열식별번호: 127의 카파 경쇄; 또는
(b) 서열식별번호: 120의 중쇄 및 서열식별번호: 127의 카파 경쇄
를 포함하는 ABP.
하기 6개의 CDR 서열을 포함하는, 인간 NRP-1 (hNRP-1; 서열식별번호: 130)에 특이적으로 결합하는 단리된 다가 항원 결합 단백질 (ABP):
(a) 서열식별번호: 49에 제시된 서열을 갖는 CDR-H3;
(b) 서열식별번호: 32에 제시된 서열을 갖는 CDR-H2;
(c) 서열식별번호: 16에 제시된 서열을 갖는 CDR-H1;
(d) 서열식별번호: 83에 제시된 서열을 갖는 CDR-L3;
(e) 서열식별번호: 72에 제시된 서열을 갖는 CDR-L2; 및
(f) 서열식별번호: 65에 제시된 서열을 갖는 CDR-L1.
제22항에 있어서, 서열식별번호: 99의 V_H 서열 및 서열식별번호: 106의 V_L 서열을 포함하는 ABP.
제16항 또는 제23항에 있어서, 서열식별번호: 121의 중쇄 및 서열식별번호: 128의 카파 경쇄를 포함하는 ABP.
(a) 서열식별번호: 41 내지 49로부터 선택되는 V_H 영역의 CDR-H3과 적어도 약 80％ 동일성을 갖는 CDR-H3;
(b) 서열식별번호: 23 내지 32로부터 선택되는 V_H 영역의 CDR-H2와 적어도 약 80％ 동일성을 갖는 CDR-H2;
(c) 서열식별번호: 8 내지 16으로부터 선택되는 V_H 영역의 CDR-H1과 적어도 약 80％ 동일성을 갖는 CDR-H1;
(d) 서열식별번호: 77 내지 83으로부터 선택되는 V_L 영역의 CDR-L3과 적어도 약 80％ 동일성을 갖는 CDR-L3;
(e) 서열식별번호: 67 내지 72로부터 선택되는 V_L 영역의 CDR-L2와 적어도 약 80％ 동일성을 갖는 CDR-L2; 및
(f) 서열식별번호: 59 내지 65로부터 선택되는 V_L 영역의 CDR-L1과 적어도 약 80％ 동일성을 갖는 CDR-L1
을 포함하는, 인간 NRP-1 (hNRP-1; 서열식별번호: 130)에 특이적으로 결합하는 단리된 항원 결합 단백질 (ABP).
제25항에 있어서, CDR-H3, CDR-H2, CDR-H1, CDR-L3, CDR-L2, 및 CDR-L1이 각각 카바트 (Kabat) 넘버링 방식, 코티아 (Chothia) 넘버링 방식, 또는 IMGT 넘버링 방식으로부터 선택되는 넘버링 방식에 따라 확인되는 것인 ABP.
제25항 또는 제26항에 있어서, CDR-H1이 둘 다의 넘버링 방식의 경계를 포함하여, 코티아 및 카바트 넘버링 방식 둘 다에 의해 정의되는 바와 같이 확인되는 것인 ABP.
제25항에 있어서,
(a) CDR-H3이 서열식별번호: 41 내지 49로부터 선택되는 CDR-H3, 또는 1, 2, 또는 3개의 아미노산 치환을 갖는 그의 변이체를 포함하고;
(b) CDR-H2가 서열식별번호: 23 내지 32로부터 선택되는 CDR-H3, 또는 1, 2, 또는 3개의 아미노산 치환을 갖는 그의 변이체를 포함하고;
(c) CDR-H1이 서열식별번호: 8 내지 16으로부터 선택되는 CDR-H1, 또는 1 또는 2개의 아미노산 치환을 갖는 그의 변이체를 포함하고;
(d) CDR-L3이 서열식별번호: 77 내지 83으로부터 선택되는 CDR-L3, 또는 1 또는 2개의 아미노산 치환을 갖는 그의 변이체를 포함하고;
(e) CDR-L2가 서열식별번호: 67 내지 72로부터 선택되는 CDR-L2, 또는 1개의 아미노산 치환을 갖는 그의 변이체를 포함하고;
(f) CDR-L1이 서열식별번호: 59 내지 65로부터 선택되는 CDR-L1, 또는 1 또는 2개의 아미노산 치환을 갖는 그의 변이체를 포함하는 것인 ABP.
제1항 내지 제28항 중 어느 한 항에 있어서, 아미노산 치환이 보존적 아미노산 치환인 ABP.
하기 중 하나 이상을 수행하는, 인간 NRP-1에 특이적으로 결합하는 ABP:
(a) NRP-1에의 결합에 대해 각각 본 개시내용의 부록 A에 제공된 바와 같은 MAB1, MAB2, MAB3, MAB4, MAB5, MAB6, MAB7, MAB8, MAB9, MAB10, MAB11, MAB12, MAB13, MAB14, 또는 MAB15로부터 선택되는 항체와 경쟁하거나 교차-경쟁하거나;
(b) 세포 표면 NRP-1에 대해 특이적이거나;
(c) 막횡단 세마포린 폴리펩티드에의 NRP-1 결합을 특이적으로 차단하거나;
(d) NRP-1 폴리펩티드 및 혈관 내피 세포 성장 인자 (VEGF) 폴리펩티드 사이의 상호작용을 차단하거나;
(e) 인간 대상체에서 Treg 억제를 억제할 수 있거나;
(f) 항원-제시 세포로부터의 항원 제시와 조합되어 이펙터 T 세포를 공동-자극하거나;
(g) 조절성 T 세포에 의한 이펙터 T 세포의 억제를 억제하거나;
(h) 조직에서 또는 전신 순환에서 이펙터 T 세포의 수를 감소시키거나;
(i) 혈소판에 실질적으로 결합하지 않거나;
(j) 환자에게 투여되는 경우 혈소판감소를 실질적으로 유발하지 않거나;
(k) NRP-1에의 SEMA3 결합을 차단하거나;
(l) NRP-1-음성 세포에 결합하지 않거나;
(m) Y297, T316, D320, E348, T349, K350, K351, K352, Y353, Y354, E412, T413, G414 및 I415로 이루어진 군으로부터 선택되는 NRP1 잔기 중 1종 이상에 특이적으로 결합하거나;
(n) (a) 내지 (m)의 임의의 조합이 가능함.
제1항 내지 제30항 중 어느 한 항에 있어서, ABP 항체가 결합에 대해 각각 본 개시내용의 부록 A에 제공된 바와 같은 MAB1, MAB2, MAB3, MAB4, MAB5, MAB6, MAB7, MAB8, MAB9, MAB10, MAB11, MAB12, MAB13, MAB14, 또는 MAB15로부터 선택되는 항체와 경쟁하거나 교차-경쟁하지 않는 것인 ABP.
제1항 내지 제31항 중 어느 한 항에 있어서, NRP-1이 hNRP-1 (서열식별번호: 130), cNRP-1 (서열식별번호: 132), mNRP-1 (서열식별번호: 134), rNRP-1 (서열식별번호: 135), 및 이들의 조합으로부터 선택되는 것인 ABP.
제1항 내지 제32항 중 어느 한 항에 있어서, 항체를 포함하는 ABP.
제33항에 있어서, 항체가 모노클로날 항체인 ABP.
제33항 또는 제34항에 있어서, 항체가 인간 항체, 인간화 항체 또는 키메라 항체로부터 선택되는 것인 ABP.
제1항 내지 제35항 중 어느 한 항에 있어서, 다가인 ABP.
제1항 내지 제35항 중 어느 한 항에 있어서, 항체 단편을 포함하는 ABP.
제1항 내지 제37항 중 어느 한 항에 있어서, 대체 스캐폴드를 포함하는 ABP.
제1항 내지 제38항 중 어느 한 항에 있어서, 이뮤노글로불린 불변 영역을 포함하는 ABP.
제39항에 있어서, IgA, IgD, IgE, IgG, 또는 IgM으로부터 선택되는 부류의 중쇄 불변 영역을 포함하는 ABP.
제40항에 있어서, 부류 IgG 및 IgG4, IgG1, IgG2, 또는 IgG3으로부터 선택되는 하위부류의 중쇄 불변 영역을 포함하는 ABP.
제41항에 있어서, IgG가 IgG4인 ABP.
제41항에 있어서, IgG가 IgG1인 ABP.
제1항 내지 제43항 중 어느 한 항에 있어서, 공통 경쇄 항체, 놉-인투-홀 (knobs-into-holes) 변형을 갖는 항체, IgG에 부착된 scFv, IgG에 부착된 Fab, 디아바디, 4가 이중특이적 항체, DVD-IgMAB, DARTT M, 듀오바디 (DuoBody)^®, CovX-바디, Fcab 항체, 탠드앱 (TandAb)^®, 탠덤 Fab, 자이바디 (Zybody)^MAB, 또는 이들의 조합을 포함하는 ABP.
제1항 내지 제43항 중 어느 한 항에 있어서, NRP-1에의 세마포린 3A의 결합을 적어도 약 10％, 적어도 약 20％, 적어도 약 30％, 적어도 약 40％, 적어도 약 50％, 적어도 약 60％, 적어도 약 70％, 적어도 약 80％, 또는 적어도 약 90％ 감소시키는 ABP.
제1항 내지 제43항 중 어느 한 항에 있어서, NRP-1에의 세마포린 3A의 결합을 적어도 약 10％, 적어도 약 20％, 적어도 약 30％, 적어도 약 40％, 적어도 약 50％, 적어도 약 60％, 적어도 약 70％, 적어도 약 80％, 또는 적어도 약 90％ 감소시키고, NRP-1에의 VEGF의 결합은 차단하지 않는 ABP.
제45항에 있어서, NRP-1에의 세마포린 3A의 결합을 적어도 약 50％ 감소시키는 ABP.
제30항에 있어서, (h)에서, 조직이 종양인 ABP.
제1항 내지 제48항 중 어느 한 항에 있어서, NRP-1이 표적 세포의 표면 상에 발현되는 것인 ABP.
제1항 내지 제49항 중 어느 한 항에 있어서, 그의 N-말단에 피로글루타메이트 (pE) 잔기를 갖는 폴리펩티드 서열을 포함하는 ABP.
제1항 내지 제50항 중 어느 한 항에 있어서, N-말단 Q가 pE로 치환된 V_H 서열을 포함하는 ABP.
제1항 내지 제51항 중 어느 한 항에 있어서, N-말단 E가 pE로 치환된 V_L 서열을 포함하는 ABP.
제1항 내지 제52항 중 어느 한 항에 있어서, N-말단 Q가 pE로 치환된 중쇄 서열을 포함하는 ABP.
제1항 내지 제53항 중 어느 한 항에 있어서, N-말단 E가 pE로 치환된 경쇄 서열을 포함하는 ABP.
제1항 내지 제54항 중 어느 한 항에 있어서, 의약으로서 사용하기 위한 ABP.
제1항 내지 제53항 중 어느 한 항에 있어서, 암 또는 바이러스 감염의 치료에 사용하기 위한 ABP.
제56항에 있어서, 암이 고형 종양 및 혈액 종양으로부터 선택되는 것인 암의 치료에 사용하기 위한 ABP.
제1항 내지 제54항 중 어느 한 항의 ABP, 및 ABP의 사용을 위한 지침서를 포함하는 키트.
제58항에 있어서, ABP가 동결건조된 것인 키트.
제59항에 있어서, 동결건조된 ABP의 재구성을 위한 유체를 더 포함하는 키트.
제1항 내지 제54항 중 어느 한 항의 ABP, 그의 V_H, 그의 V_L, 그의 경쇄, 그의 중쇄 또는 그의 항원-결합 부분을 코딩하는 단리된 폴리뉴클레오티드.
제61항의 폴리뉴클레오티드를 포함하는 벡터.
제61항의 폴리뉴클레오티드 또는 제62항의 벡터를 포함하는 숙주 세포.
제63항에 있어서, 박테리아 세포, 진균 세포, 및 포유동물 세포로부터 선택되는 숙주 세포.
제63항에 있어서, 이. 콜라이 (E. coli) 세포, 사카로미세스 세레비지아에 (Saccharomyces cerevisiae) 세포, 및 CHO 세포로부터 선택되는 숙주 세포.
제61항의 폴리뉴클레오티드 또는 제62항의 벡터를 포함하는 무세포 발현 반응.
제1항 내지 제54항 중 어느 한 항의 ABP를 제조하는 방법이며, ABP를 제63항의 숙주 세포에서 발현시키고, 발현된 ABP를 단리하는 것을 포함하는 방법.
제1항 내지 제54항 중 어느 한 항의 ABP 및 제약상 허용되는 부형제를 포함하는 제약 조성물.
제68항에 있어서, ABP가 종양에서 NRP-1:세마포린 상호작용을 국소적으로 억제하는 데 유효한 양으로 조성물에 존재하는 것인 제약 조성물.
제68항에 있어서, 항-NRP-1 항체가 인간 대상체에게 투여되는 경우 NRP-1 및 막횡단 세마포린 폴리펩티드 사이의 상호작용을 억제하는 데 유효한 양으로 조성물에 존재하는 것인 제약 조성물.
제68항에 있어서, 항-NRP-1 항체가 막횡단 세마포린 폴리펩티드에의 NRP-1 결합을 특이적으로 차단하는 것인 제약 조성물.
제68항에 있어서, 항-NRP-1 항체가 NRP-1 폴리펩티드 및 혈관 내피 세포 성장 인자 (VEGF) 폴리펩티드 사이의 상호작용에 영향을 미치지 않는 것인 제약 조성물.
제68항에 있어서, 항-NRP-1 항체가 인간 대상체에서 Treg 억제를 억제할 수 있는 것인 제약 조성물.
제68항에 있어서, 항-NRP-1 항체가 인간 대상체에서 Treg 생존 및/또는 안정성을 감소시킬 수 있는 것인 제약 조성물.
제68항에 있어서, 항-NRP-1 항체가 종양에서 NRP-1:세마포린-4 상호작용을 국소적으로 억제하는 데 유효한 양으로 조성물에 존재하는 것인 제약 조성물.
제68항에 있어서, 항-NRP-1 항체가 종양에서 NRP-1:세마포린-3 상호작용을 국소적으로 억제하는 데 유효한 양으로 조성물에 존재하는 것인 제약 조성물.
제68항에 있어서, 항-NRP-1 항체가 바람직하지 않은 자가면역 및/또는 염증성 징후의 발생을 예방하는 데 유효한 양으로 조성물에 존재하는 것인 제약 조성물.
제68항에 있어서, 인간 대상체가 암을 앓고 있는 것인 제약 조성물.
제68항에 있어서, 제약 조성물 중의 ABP의 양이 대상체에서 (a) 조절성 T 세포에 의한 이펙터 T 세포의 억제를 감소시키거나; (b) 이펙터 T 세포를 활성화시키거나; (c) 조직에서 또는 전신적으로 조절성 T 세포의 수를 감소시키거나; (d) 이펙터 T 세포의 증식을 유도하거나 향상시키거나; (e) 종양 성장의 속도를 억제하거나; (f) 종양 퇴행을 유도하거나; (g) 이들의 조합에 충분한 것인 제약 조성물.
제68항 내지 제79항 중 어느 한 항에 있어서, 의약으로서 사용하기 위한 제약 조성물.
제68항 내지 제80항 중 어느 한 항에 있어서, 암 또는 바이러스 감염의 치료에 사용하기 위한 제약 조성물.
제81항에 있어서, 암이 뇌암, 전립선암, 유방암, 결장암, 피부암, 및 폐암으로부터 선택되는 것인 암의 치료에 사용하기 위한 제약 조성물.
조절성 T 세포 (Treg)를 생체내에서 Treg에서의 뉴로필린-1 (NRP-1):세마포린 축의 억제제에 노출시키는 것을 포함하며, 제1항 내지 제54항 중 어느 한 항의 ABP, 또는 제67항 내지 제82항 중 어느 한 항의 제약 조성물의 유효량이 대상체에게 투여되는 것인, 대상체에서 Treg의 기능을 억제하거나 안정성을 감소시키는 방법.
대상체에게 제68항 내지 제82항 중 어느 한 항의 제약 조성물의 유효량을 투여하는 것을 포함하는, T 이펙터 세포 (T_eff) 기능을 증가시키거나, T_eff를 생체내에서 제1항 내지 제54항 중 어느 한 항의 ABP에 노출시키는 방법.
제83항 또는 제84항에 있어서, 대상체가 암을 갖는 것인 방법.
제83항 내지 제85항 중 어느 한 항에 있어서, 암-연관된 항원에 대한 면역 반응을 유도하거나 향상시키는 방법.
제83항 내지 제86항 중 어느 한 항에 있어서, ABP가 (a) 인간 대상체에서 Treg 생존 및/또는 안정성을 감소시킬 수 있거나; (b) NRP-1 폴리펩티드의 세포외 도메인에 결합할 수 있거나; (c) 이들의 조합이 가능한 것인 방법.
제83항 내지 제87항 중 어느 한 항에 있어서, 1종 이상의 추가의 치료제를 투여하는 것을 더 포함하는 방법.
제88항에 있어서, 추가의 치료제가 방사선, 세포독성제, 화학치료제, 세포정지제, 항-호르몬제, VEGF 억제제, 면역자극제, 항-혈관신생제, 및 이들의 조합으로부터 선택되는 것인 방법.
제88항에 있어서, 추가의 치료제가 면역자극제인 방법.
제90항에 있어서, 추가의 치료제가 키메라 항원 수용체 T 세포인 방법.
제90항에 있어서, 면역자극제가 면역 세포에 의해 발현되는 억제성 수용체 또는 그의 리간드의 신호화를 차단하는 작용제를 포함하는 것인 방법.
제92항에 있어서, 면역 세포에 의해 발현되는 억제성 수용체 또는 그의 리간드가 PVRIG, VISTA, CCR4, CD27, CTLA-4, PD-1, PD-L1, LAG-3, Tim3, TIGIT, 뉴리틴, BTLA, KIR, 및 이들의 조합으로부터 선택되는 것인 방법.
제90항에 있어서, 면역자극제가 면역 세포에 의해 발현되는 자극성 수용체에 대한 효능제를 포함하는 것인 방법.
제93항에 있어서, 면역 세포에 의해 발현되는 자극성 수용체가 OX40, ICOS, GITR, CD28, CD37, CD40, 4-1BB, 및 이들의 조합으로부터 선택되는 것인 방법.
제90항에 있어서, 면역자극제가 시토카인을 포함하는 것인 방법.
제90항에 있어서, 면역자극제가 암-연관된 항원에 대한 백신을 포함하는 것인 방법.
면역 반응의 조정을 필요로 하는 대상체에게 제1항 내지 제54항 중 어느 한 항의 ABP 또는 제67항 내지 제82항 중 어느 한 항의 제약 조성물의 유효량을 투여하는 것을 포함하는, 상기 대상체에서 면역 반응을 조정하는 방법.
제83항 내지 제98항 중 어느 한 항에 있어서, 1종 이상의 추가의 치료제를 대상체에게 투여하는 것을 더 포함하는 방법.
제99항에 있어서, 추가의 치료제가 (i) 면역 세포의 자극성 수용체에 대한 효능제 또는 (ii) 면역 세포의 억제성 수용체에 대한 길항제이고, 면역 세포의 수용체가 OX40, CD2, CD27, CDS, ICAM-1, LFA-1 (CD11a/CD18), ICOS (CD278), 4-1BB (CD137), CD28, CD30, CD40, BAFFR, HVEM, CD7, LIGHT, NKG2C, GITR, SLAMF7, NKp80, CD160, B7-H3, CD83 리간드, 및 이들의 조합으로부터 선택되는 것인 방법.
제99항에 있어서, 추가의 치료제가 단순 포진 바이러스, 소수포 구내염 바이러스, 아데노바이러스, 뉴캐슬병 바이러스, 우두 바이러스, 마라바 바이러스, 및 이들의 조합으로부터 선택되는 종양용해 바이러스인 방법.
제99항 내지 제101항 중 어느 한 항에 있어서, 추가의 치료제가 ABP와 동일한 제약 조성물에 제형화되는 것인 방법.
제99항 내지 제101항 중 어느 한 항에 있어서, 추가의 치료제가 ABP와 상이한 제약 조성물에 제형화되는 것인 방법.
제99항 내지 제101항 및 제103항 중 어느 한 항에 있어서, 추가의 치료제가 ABP를 투여하기 전에 투여되는 것인 방법.
제99항 내지 제101항 및 제103항 중 어느 한 항에 있어서, 추가의 치료제가 ABP를 투여한 후에 투여되는 것인 방법.
제99항 내지 제105항 중 어느 한 항에 있어서, 추가의 치료제가 ABP와 동시에 투여되는 것인 방법.
제83항 내지 제106항 중 어느 한 항에 있어서, 대상체에서 혈소판감소를 실질적으로 유발하지 않는 방법.
제1항 내지 제57항 중 어느 한 항에 있어서, 20 nM 미만, 10 nM 미만, 5 nM 미만, 2 nM 미만, 1 nM 미만, 0.5 nM 미만, 또는 0.2 nM 미만의 k_D로 인간 NRP-1에 특이적으로 결합하는 ABP.
제1항 내지 제57항 및 제108항 중 어느 한 항에 있어서, 인간, 마우스 및 시노몰거스 원숭이로부터의 NRP-1에 특이적으로 결합하는 ABP.
제1항 내지 제57항 및 제108항 내지 제110항 중 어느 한 항에 있어서, SEC10이 결합하는 NRP-1 상의 에피토프와 상이한 NRP-1 상의 에피토프에 결합하는 ABP.
제1항 내지 제57항 및 제108항 내지 제110항 중 어느 한 항에 있어서, NRP-1의 b1 도메인에 결합하는 ABP.
제1항 내지 제57항, 제108항 및 제109항 중 어느 한 항에 있어서, Y297, T316, D320, E348, T349, K350, K351, K352, Y353, Y354, E412, T413, G414 및 I415로 이루어진 군으로부터 선택되는 NRP1 잔기 중 1종 이상에 특이적으로 결합하는 것으로 이루어진 군으로부터 선택되는 NRP1 (서열식별번호: 130) 상의 1개 이상의 잔기에 특이적으로 결합하는 ABP.
서열식별번호: 47로 이루어진 CDR-H3, 서열식별번호: 30으로 이루어진 CDR-H2, 및 서열식별번호: 14로 이루어진 CDR-H1을 포함하는 중쇄 가변 영역; 및
서열식별번호: 81로 이루어진 CDR-L3, 서열식별번호: 71로 이루어진 CDR-L2, 및 서열식별번호: 63으로 이루어진 CDR-L1을 포함하는 경쇄 가변 영역
을 포함하는 항-인간 NRP-1 항체 또는 그의 항원-결합 단편.
제1항에 있어서, 하기 (1) 및 (2) 중 어느 하나로부터 선택되는 항-인간 NRP-1 항체 또는 그의 항원-결합 단편:
(1) 서열식별번호: 96으로 이루어진 중쇄 가변 영역, 및 서열식별번호: 104로 이루어진 경쇄 가변 영역을 포함하는 항-인간 NRP-1 항체 또는 그의 항원-결합 단편; 및
(2) 아미노산 번호 1의 E가 피로글루타메이트로 변형된 서열식별번호: 96으로 이루어진 중쇄 가변 영역, 및 서열식별번호: 104로 이루어진 경쇄 가변 영역을 포함하는 항-인간 NRP-1 항체 또는 그의 항원-결합 단편.
제2항에 있어서, (1) 내지 (4)로 이루어진 군으로부터 선택되는 항-인간 NRP-1 항체 또는 그의 항원-결합 단편:
(1) 서열식별번호: 118로 이루어진 중쇄 및 서열식별번호: 126으로 이루어진 경쇄를 포함하는 항-인간 NRP-1 항체,
(2) 아미노산 번호 1의 E가 피로글루타메이트로 변형된 서열식별번호: 118로 이루어진 중쇄, 및 서열식별번호: 126으로 이루어진 경쇄를 포함하는 항-인간 NRP-1 항체,
(3) 서열식별번호: 118의 아미노산 번호 1 내지 453의 아미노산 서열로 이루어진 중쇄, 및 서열식별번호: 126으로 이루어진 경쇄를 포함하는 항-인간 NRP-1 항체; 및
(4) 아미노산 번호 1의 E가 피로글루타메이트로 변형된 서열식별번호: 118의 아미노산 번호 1 내지 453의 아미노산 서열로 이루어진 중쇄, 및 서열식별번호: 126으로 이루어진 경쇄를 포함하는 항-인간 NRP-1 항체.
(1) 및 (2)로 이루어진 군으로부터 선택되는 폴리뉴클레오티드:
(1) 제114항의 (1)에 따른 항-인간 NRP-1 항체 또는 그의 항원-결합 단편의 중쇄 가변 영역을 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드, 및
(2) 제114항의 (1)에 따른 항-인간 NRP-1 항체 또는 그의 항원-결합 단편의 경쇄 가변 영역을 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드.
(1) 및 (2)로 이루어진 군으로부터 선택되는 폴리뉴클레오티드:
(1) 제115항의 (1)에 따른 항-인간 NRP-1 항체의 중쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드, 및
(2) 제115항의 (1)에 따른 항-인간 NRP-1 항체의 경쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드.
(a) 제114항의 (1)의 항-인간 NRP-1 항체 또는 그의 항원-결합 단편의 중쇄 가변 영역을 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드, 및/또는
(b) 제114항의 (1)의 항-인간 NRP-1 항체 또는 그의 항원-결합 단편의 경쇄 가변 영역을 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드
를 포함하는 발현 벡터.
(a) 제115항의 (1)의 항-인간 NRP-1 항체의 중쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드, 및/또는
(b) 제115항의 (1)의 항-인간 NRP-1 항체의 경쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드
를 포함하는 발현 벡터.
(a) 내지 (d)로 이루어진 군으로부터 선택되는 발현 벡터로 형질전환된 숙주 세포:
(a) 제114항의 (1)의 항-인간 NRP-1 항체 또는 그의 항원-결합 단편의 중쇄 가변 영역을 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드, 및 항체 또는 그의 항원-결합 단편의 경쇄 가변 영역을 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 발현 벡터로 형질전환된 숙주 세포;
(b) 제114항의 (1)의 항-인간 NRP-1 항체 또는 그의 항원-결합 단편의 중쇄 가변 영역을 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 발현 벡터, 및 항체 또는 그의 항원-결합 단편의 경쇄 가변 영역을 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 발현 벡터로 형질전환된 숙주 세포;
(c) 제114항의 (1)의 항-인간 NRP-1 항체 또는 그의 항원-결합 단편의 중쇄 가변 영역을 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 발현 벡터로 형질전환된 숙주 세포; 및
(d) 제114항의 (1)의 항-인간 NRP-1 항체 또는 그의 항원-결합 단편의 경쇄 가변 영역을 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 발현 벡터로 형질전환된 숙주 세포.
(a) 내지 (d)로 이루어진 군으로부터 선택되는 발현 벡터로 형질전환된 숙주 세포:
(a) 제115항의 (1)의 항-인간 NRP-1 항체의 중쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드, 및 항체의 경쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 발현 벡터로 형질전환된 숙주 세포;
(b) 제115항의 (1)의 항-인간 NRP-1 항체의 중쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 발현 벡터, 및 항체의 경쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 발현 벡터로 형질전환된 숙주 세포;
(c) 제115항의 (1)의 항-인간 NRP-1 항체의 중쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 발현 벡터로 형질전환된 숙주 세포; 및
(d) 제115항의 (1)의 항-인간 NRP-1 항체의 경쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 발현 벡터로 형질전환된 숙주 세포.
하기 (a) 내지 (c)로 이루어진 군으로부터 선택되는 숙주 세포(들)를 배양하여 4가 항-인간 NRP-1 항체 또는 그의 항원-결합 단편을 발현시키는 것을 포함하는, 항-인간 NRP-1 항체 또는 그의 항원-결합 단편을 제조하는 방법:
(a) 제114항의 (1)의 항-인간 NRP-1 항체 또는 그의 항원-결합 단편의 중쇄 가변 영역을 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드, 및 항체 또는 그의 항원-결합 단편의 경쇄 가변 영역을 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 발현 벡터로 형질전환된 숙주 세포;
(b) 제114항의 (1)의 항-인간 NRP-1 항체 또는 그의 항원-결합 단편의 중쇄 가변 영역을 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 발현 벡터, 및 항체 또는 그의 항원-결합 단편의 경쇄 가변 영역을 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 발현 벡터로 형질전환된 숙주 세포; 및
(c) 제114항의 (1)의 항-인간 NRP-1 항체 또는 그의 항원-결합 단편의 중쇄 가변 영역을 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 발현 벡터로 형질전환된 숙주 세포, 및 항체 또는 그의 항원-결합 단편의 경쇄 가변 영역을 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 발현 벡터로 형질전환된 숙주 세포.
하기 (a) 내지 (c)로 이루어진 군으로부터 선택되는 숙주 세포(들)를 배양하여 항-인간 NRP-1 항체를 발현시키는 것을 포함하는, 항-인간 NRP-1 항체를 제조하는 방법:
(a) 제115항의 (1)의 항-인간 NRP-1 항체의 중쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드, 및 항체의 경쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 발현 벡터로 형질전환된 숙주 세포;
(b) 제115항의 (1)의 항-인간 NRP-1 항체의 중쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 발현 벡터, 및 항체의 경쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 발현 벡터로 형질전환된 숙주 세포; 및
(c) 제115항의 (1)의 항-인간 NRP-1 항체의 중쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 발현 벡터로 형질전환된 숙주 세포, 및 항체의 경쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 발현 벡터로 형질전환된 숙주 세포.
제115항의 항-인간 NRP-1 항체 및 제약상 허용되는 부형제를 포함하는 제약 조성물.
제115항의 (1)의 항-인간 NRP-1 항체, 제115항의 (2)의 항-인간 NRP-1 항체, 제115항의 (3)의 항-인간 NRP-1 항체, 및/또는 제115항의 (4)의 항-인간 NRP-1 항체, 및 제약상 허용되는 부형제를 포함하는 제약 조성물.
제124항 또는 제125항에 있어서, 암을 치료하기 위한 제약 조성물인 제약 조성물.
제124항 내지 제126항 중 어느 한 항에 있어서, 방사선, 세포독성제, 화학치료제, 세포정지제, 항-호르몬제, VEGF 억제제, 면역자극제, 항-혈관신생제, 및 이들의 조합과 조합되어 투여되는 제약 조성물.
제115항에 있어서, 암을 예방하거나 치료하기 위한 항-인간 NRP-1 항체.
암을 예방하거나 치료하기 위한 제약 조성물의 제조를 위한 제115항의 항-인간 NRP-1 항체의 용도.
치료 유효량의 제115항의 항-인간 NRP-1 항체를 투여하는 것을 포함하는, 암을 예방하거나 치료하는 방법.
제130항에 있어서, 1종 이상의 추가의 치료제를 투여하는 것을 더 포함하는 방법.
제131항에 있어서, 추가의 치료제가 방사선, 세포독성제, 화학치료제, 세포정지제, 항-호르몬제, VEGF 억제제, 면역자극제, 항-혈관신생제, 및 이들의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인 방법.