JP2020511947A - 抗ニューロピリン抗原結合タンパク質およびその使用の方法 - Google Patents

抗ニューロピリン抗原結合タンパク質およびその使用の方法 Download PDF

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Abstract

ＮＲＰ−１に選択的に結合する抗原結合タンパク質（ＡＢＰ）ならびにそのアイソフォームおよびホモログ、ならびに上記ＡＢＰを含む組成物が、本明細書で提供される。上記ＡＢＰを使用するための方法（例えば、治療法および診断法）がまた、提供される。調節性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）の枯渇は、腫瘍成長を阻害する；しかし、Ｔｒｅｇの完全な枯渇と関連する付随する自己免疫および炎症性障害は、このアプローチの臨床的有用性を制限し得る。本願明細書はこの課題を解決する。

Description

分野
ＮＲＰ−１に対する結合特異性を有する抗原結合タンパク質（ＡＢＰ）およびこのようなＡＢＰを含む組成物（薬学的組成物、診断用組成物が挙げられる）、およびキットが、本明細書で提供される。ＮＲＰ−１ ＡＢＰを作製するための方法、ならびにＮＲＰ−１ ＡＢＰを、例えば、治療目的、診断目的、および研究目的で使用するための方法がまた、提供される。
背景
腫瘍が、免疫監視を逃れ、腫瘍発生を促進するために免疫抑制微小環境を確立し得る多くの研究が示されてきた。調節性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）は、腫瘍環境において免疫抑制環境の重要な構成要素であり、腫瘍関連抗原に対するＴ細胞免疫を低下させることによって働く。従って、Ｔｒｅｇは、有効な抗腫瘍免疫応答を展開するにあたって大きな障害である。がんのマウスモデルにおけるＴｒｅｇの枯渇は、腫瘍成長を阻害する；しかし、Ｔｒｅｇの完全な枯渇と関連する、付随する自己免疫および炎症性障害は、このアプローチの臨床的有用性を制限し得る。Ｔｒｅｇを特異的に標的化するストラテジーは、炎症性の腫瘍微小環境において、現実味のある代替手段であり得る。いくつかの研究所における近年の研究から、ニューロピリン１（ＮＲＰ−１）が末梢においてＴｒｅｇに強い影響を与えることなく腫瘍においてＴｒｅｇ活性を調整するための候補標的として同定された（例えば、Ｃｈａｕｄｈａｒｙ ａｎｄ Ｅｌｋｏｒｄ， Ｖａｃｃｉｎｅｓ （２０１６） Ｓｅｐ；４（３）： ２８； Ｂｏｓら， Ｊ Ｅｘｐ Ｍｅｄ （２０１３） ２１０ （１１）：２４３５−６６； Ｔｅｎｇら， Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ． （２０１０） ７０ （２０）：７８００−を参照のこと）。
ＮＲＰ−１は、２つのＮ末端ＣＵＢドメイン（ａ１およびａ２）、２つの凝固因子Ｖ／ＶＩＩＩ相同性ドメイン（ｂ１およびｂ２）、ならびに単一のＭＡＭドメイン（ｃ）を含む大きな細胞外ドメインを有する、多機能性の１３０−ｋＤａの膜貫通タンパク質である。その細胞質テールは短く、それ自体ではいかなる触媒活性をも示さない。ＮＲＰ−１は、とりわけ、多数の公知のリガンドおよび共レセプター（セマフォリン、ＶＥＧＦ、ＰｌＧＦおよびプレキシンが挙げられる）を有するレセプターである（Ａｐｐｌｅｔｏｎら， Ｅｍｂｏ Ｊ． （２００７） Ｎｏｖ ２８； ２６（２３）： ４９０２−４９１２）。
ＮＲＰ−１は、ヒトおよびマウスＴｒｅｇ上で発現され、この発現は、高度に抑制性のＴｒｅｇ部分セットを同定する。腫瘍微小環境内では、ＮＲＰ−１発現は、Ｔｒｅｇ安定性および機能に必要とされるが、腫瘍の炎症性環境の外ではＴｒｅｇに強い影響を与えない。近年の研究から、免疫細胞が発現したリガンドであるセマフォリン４Ａ（Ｓｅｍａ４ａ）がＮＲＰ−１のさらなるリガンドとして同定されており、ｓｅｍａ４ａ／ＮＲＰ−１相互作用がインビトロでのおよびインビボでの炎症部位でのＴｒｅｇ安定性の重要なメディエーターであることが示された。これらのデータは、ＮＲＰ−１がＴｒｅｇ系統安定性および機能に必要とされることを示唆する（例えば、Ｄｅｌｇｏｆｆｅら， Ｎａｔｕｒｅ （２０１３） Ｓｅｐ １２；５０１（７４６６）：２５２−６を参照のこと）。
いくつかの系統の証拠は、ＮＲＰ−１およびその関連タンパク質の相互作用の標的化、特に、腫瘍において見出された免疫抑制微小環境を調整するためのストラテジーとしてＴｒｅｇ上のＮＲＰ−１／Ｓｅｍａ軸の標的化の有用性を裏付ける。例えば、Ｔｒｅｇ標的化ＮＲＰ−１ノックアウトを有するマウスは、いかなる他の自己免疫表現型もなしに、いくつかのマウス腫瘍モデルにおいて低減した腫瘍成長を示す。さらに、ＮＲＰ−１またはＳｅｍａに対するアンタゴニストは、Ｔｒｅｇ抑制活性を一変させ、自己免疫有害事象の非存在下で抗腫瘍有効性を再び示す。さらに、そのＮＲＰ−１−ＶＥＧＦＡ軸は、腫瘍微小環境へのＴｒｅｇの化学走性を調整する重要な経路として提唱されており、Ｔｒｅｇ上でのこの相互作用を遮断するアンタゴニスト的Ａｂが、腫瘍へのこれら抑制性細胞の流入を阻害できた。
ＮＲＰ−１がヒト腫瘍において免疫細胞の表面上で発現されることを示唆する新規な証拠が存在する。ＮＲＰ−１＋ Ｔｒｅｇは、子宮頚がん患者の排出リンパ節（ｄｒａｉｎｉｎｇ ｌｙｍｐｈ ｎｏｄｅ）（ＤＬＮ）において見出され、術前の化学放射線療法に対する病理学的応答を有する患者において、ＤＬＮ中のＴｒｅｇのパーセンテージの顕著な低下が存在した。さらに、ＮＲＰ−１＋ Ｔｒｅｇは、黒色腫および頭頚部扁平上皮がんを有する患者の腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）において観察された。
従って、自己免疫疾患を誘導することなく、ＮＲＰ−１をアンタゴナイズし得る治療剤が必要である。この必要性を満たすＡＢＰが本明細書で提供される。
Ｃｈａｕｄｈａｒｙ ａｎｄ Ｅｌｋｏｒｄ， Ｖａｃｃｉｎｅｓ （２０１６） Ｓｅｐ；４（３）： ２８ Ｂｏｓら， Ｊ Ｅｘｐ Ｍｅｄ （２０１３） ２１０ （１１）：２４３５−６６ Ｔｅｎｇら， Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ． （２０１０） ７０ （２０）：７８００ Ａｐｐｌｅｔｏｎら， Ｅｍｂｏ Ｊ． （２００７） Ｎｏｖ ２８； ２６（２３）： ４９０２−４９１２ Ｄｅｌｇｏｆｆｅら， Ｎａｔｕｒｅ （２０１３） Ｓｅｐ １２；５０１（７４６６）：２５２−６
要旨
ＮＲＰ−１に特異的に結合するＡＢＰおよびこのようなＡＢＰを使用する方法が本明細書で提供される。
一局面において、ヒトＮＲＰ−１（ｈＮＲＰ−１；配列番号１３０）に特異的に結合する単離された多価抗原結合タンパク質（ＡＢＰ）が本明細書で提供され、ここで上記ＡＢＰは、以下の６つのＣＤＲ配列：
（ａ）配列番号４７に示される配列を有するＣＤＲ−Ｈ３；
（ｂ）配列番号１３６に示されるとおりの配列 Ｘ１ＩＳＧＳＧＧＸ２ＴＹＹＡＤＳＶＸ３Ｇを有するＣＤＲ−Ｈ２であって、ここでＸ１はＩまたはＡであり、Ｘ２はＳまたはＡであり、Ｘ３はＫまたはＥである、ＣＤＲ−Ｈ２；
（ｃ）配列番号１３７に示されるとおりの配列 ＦＴＦＸ１ＳＸ２ＡＭＶを有するＣＤＲ−Ｈ１であって、ここでＸ１はＡ、Ｋ、またはＳであり、Ｘ２はＹまたはＶである、ＣＤＲ−Ｈ１；
（ｄ）配列番号８１に示される配列を有するＣＤＲ−Ｌ３；
（ｅ）配列番号７１に示される配列を有するＣＤＲ−Ｌ２；および
（ｆ）配列番号６３に示される配列を有するＣＤＲ−Ｌ１、
を含む。
一実施形態において、上記ＡＢＰは、配列番号４７のＣＤＲ−Ｈ３、配列番号２７のＣＤＲ−Ｈ２、配列番号１２のＣＤＲ−Ｈ１、配列番号８１のＣＤＲ−Ｌ３、配列番号７１のＣＤＲ−Ｌ２、および配列番号６３のＣＤＲ−Ｌ１；または配列番号４７のＣＤＲ−Ｈ３、配列番号２８のＣＤＲ−Ｈ２、配列番号１３のＣＤＲ−Ｈ１、配列番号８１のＣＤＲ−Ｌ３、配列番号７１のＣＤＲ−Ｌ２、および配列番号６３のＣＤＲ−Ｌ１；または配列番号４７のＣＤＲ−Ｈ３、配列番号２９のＣＤＲ−Ｈ２、配列番号１４のＣＤＲ−Ｈ１、配列番号８１のＣＤＲ−Ｌ３、配列番号７１のＣＤＲ−Ｌ２、および配列番号６３のＣＤＲ−Ｌ１；または配列番号４７のＣＤＲ−Ｈ３、配列番号３０のＣＤＲ−Ｈ２、配列番号１４のＣＤＲ−Ｈ１、配列番号８１のＣＤＲ−Ｌ３、配列番号７１のＣＤＲ−Ｌ２、および配列番号６３のＣＤＲ−Ｌ１を含む。
別の実施形態において、上記ＡＢＰは、配列番号９２のＶＨ配列および配列番号１０４のＶＬ配列；配列番号９３のＶＨ配列および配列番号１０４のＶＬ配列；配列番号９４のＶＨ配列および配列番号１０４のＶＬ配列；配列番号９５のＶＨ配列および配列番号１０４のＶＬ配列；または配列番号９６のＶＨ配列および配列番号１０４のＶＬ配列を含む。
別の実施形態において、上記ＡＢＰは、配列番号１１４の重鎖および配列番号１２６の軽鎖；配列番号１１５の重鎖および配列番号１２６の軽鎖；配列番号１１６の重鎖および配列番号１２６の軽鎖；配列番号１１７の重鎖および配列番号１２６の軽鎖；配列番号１１８の重鎖および配列番号１２６の軽鎖を含む。
別の局面において、ヒトＮＲＰ−１（ｈＮＲＰ−１；配列番号１３０）に特異的に結合する単離された多価抗原結合タンパク質（ＡＢＰ）が提供され、ここで上記ＡＢＰは、以下の６つのＣＤＲ配列：
（ａ）配列番号４１に示される配列を有するＣＤＲ−Ｈ３；
（ｂ）配列番号２３に示される配列を有するＣＤＲ−Ｈ２；
（ｃ）配列番号８に示される配列を有するＣＤＲ−Ｈ１；
（ｄ）配列番号７７に示される配列を有するＣＤＲ−Ｌ３；
（ｅ）配列番号６７に示される配列を有するＣＤＲ−Ｌ２、および
（ｆ）配列番号５９に示される配列を有するＣＤＲ−Ｌ１、
を含む。
一実施形態において、上記ＡＢＰは、配列番号８５のＶＨ配列および配列番号１００のＶＬ配列；または配列番号８６のＶＨ配列および配列番号１００のＶＬ配列を含む。別の実施形態において、上記ＡＢＰは、配列番号１０７の重鎖および配列番号１２２のκ軽鎖；ならびに配列番号１０８の重鎖および配列番号１２２のκ軽鎖を含む。
別の局面において、ヒトＮＲＰ−１（ｈＮＲＰ−１；配列番号１３０）に特異的に結合する単離された多価抗原結合タンパク質（ＡＢＰ）が提供され、ここで上記ＡＢＰは、以下の６つのＣＤＲ配列：
（ａ）配列番号１３８に示されるとおりの配列 ＡＲＤＬＧＹＹＧＳＧＭＨＸを有するＣＤＲ−Ｈ３であって、ここでＸはＡまたはＶである、ＣＤＲ−Ｈ３；
（ａ）配列番号２４に示される配列を有するＣＤＲ−Ｈ２；
（ｂ）配列番号９に示される配列を有するＣＤＲ−Ｈ１；
（ｃ）配列番号７８に示される配列を有するＣＤＲ−Ｌ３；
（ｄ）配列番号６８に示される配列を有するＣＤＲ−Ｌ２；および
（ｅ）配列番号６０に示される配列を有するＣＤＲ−Ｌ１、
を含む。
一実施形態において、上記ＡＢＰは、配列番号４２のＣＤＲ−Ｈ３、配列番号２４のＣＤＲ−Ｈ２、配列番号９のＣＤＲ−Ｈ１、配列番号７８のＣＤＲ−Ｌ３、配列番号６８のＣＤＲ−Ｌ２、および配列番号６０のＣＤＲ−Ｌ１；または配列番号４３のＣＤＲ−Ｈ３、配列番号２４のＣＤＲ−Ｈ２、配列番号９のＣＤＲ−Ｈ１、配列番号７８のＣＤＲ−Ｌ３、配列番号６８のＣＤＲ−Ｌ２、および配列番号６０のＣＤＲ−Ｌ１を含む。別の実施形態において、上記ＡＢＰは、配列番号８７のＶＨ配列および配列番号１０１のＶＬ配列を含むか；または上記ＡＢＰは、配列番号８８のＶＨ配列および配列番号１０１のＶＬ配列を含む。別の実施形態において、上記ＡＢＰは、配列番号１０９の重鎖および配列番号１２３のκ軽鎖を含むか；または上記ＡＢＰは、配列番号１１０の重鎖および配列番号１２３のκ軽鎖を含む。
別の局面において、ヒトＮＲＰ−１（ｈＮＲＰ−１；配列番号１３０）に特異的に結合する単離された多価抗原結合タンパク質（ＡＢＰ）が提供され、ここで上記ＡＢＰは、以下の６つのＣＤＲ配列：
（ａ）（配列番号１３９）に示されるとおりの配列 ＡＲＤＲＧＭＹＹＡＳＧＦＸＰを有するＣＤＲ−Ｈ３であって、ここでＸはＧまたはＮである、ＣＤＲ−Ｈ３；
（ｂ）配列番号２５に示される配列を有するＣＤＲ−Ｈ２；
（ｃ）配列番号１０に示される配列を有するＣＤＲ−Ｈ１；
（ｄ）配列番号７９に示される配列を有するＣＤＲ−Ｌ３；
（ｅ）配列番号６９に示される配列を有するＣＤＲ−Ｌ２；および
（ｆ）配列番号６１に示される配列を有するＣＤＲ−Ｌ１、
を含む。
一実施形態において、上記ＡＢＰは、配列番号４４のＣＤＲ−Ｈ３、配列番号２５のＣＤＲ−Ｈ２、配列番号１０のＣＤＲ−Ｈ１、配列番号７９のＣＤＲ−Ｌ３、配列番号６９のＣＤＲ−Ｌ２、および配列番号６１のＣＤＲ−Ｌ１；または配列番号４５のＣＤＲ−Ｈ３、配列番号２５のＣＤＲ−Ｈ２、配列番号１０のＣＤＲ−Ｈ１、配列番号７９のＣＤＲ−Ｌ３、配列番号６９のＣＤＲ−Ｌ２、および配列番号６１のＣＤＲ−Ｌ１を含む。別の実施形態において、上記ＡＢＰは、配列番号８９のＶＨ配列および配列番号１０２のＶＬ配列；または配列番号９０のＶＨ配列および配列番号１０２のＶＬ配列を含む。別の実施形態において、上記ＡＢＰは、配列番号１１１の重鎖および配列番号１２４のκ軽鎖を含むか；または上記ＡＢＰは、配列番号１１２の重鎖および配列番号１２４のκ軽鎖を含む。
別の局面において、以下の６つのＣＤＲ配列を含む、ヒトＮＲＰ−１（ｈＮＲＰ−１；配列番号１３０）に特異的に結合する単離された多価抗原結合タンパク質（ＡＢＰ）が提供される：
（ａ）配列番号４６に示される配列を有するＣＤＲ−Ｈ３；
（ｂ）配列番号２６に示される配列を有するＣＤＲ−Ｈ２；
（ｃ）配列番号１１に示される配列を有するＣＤＲ−Ｈ１；
（ｄ）配列番号８０に示される配列を有するＣＤＲ−Ｌ３；
（ｅ）配列番号７０に示される配列を有するＣＤＲ−Ｌ２；および
（ｆ）配列番号６２に示される配列を有するＣＤＲ−Ｌ１。
一実施形態において、上記ＡＢＰは、配列番号９１のＶＨ配列および配列番号１０３のＶＬ配列を含む。別の実施形態において、上記ＡＢＰは、配列番号１１３の重鎖および配列番号１２５のκ軽鎖を含む。
別の局面において、以下の６つのＣＤＲ配列を含む、ヒトＮＲＰ−１（ｈＮＲＰ−１；配列番号１３０）に特異的に結合する単離された多価抗原結合タンパク質（ＡＢＰ）が提供される：
（ａ）配列番号４８に示される配列を有するＣＤＲ−Ｈ３；
（ｂ）配列番号３１に示される配列を有するＣＤＲ−Ｈ２；
（ｃ）配列番号１５に示される配列を有するＣＤＲ−Ｈ１；
（ｄ）配列番号８２に示される配列を有するＣＤＲ−Ｌ３；
（ｅ）配列番号６８に示される配列を有するＣＤＲ−Ｌ２；および
（ｆ）配列番号６４に示される配列を有するＣＤＲ−Ｌ１。
一実施形態において、上記ＡＢＰは、配列番号９７のＶＨ配列および配列番号１０５のＶＬ配列、または配列番号９８のＶＨ配列および配列番号１０５のＶＬ配列を含む。別の実施形態において、上記ＡＢＰは、配列番号１１９の重鎖および配列番号１２７のκ軽鎖；または配列番号１２０の重鎖および配列番号１２７のκ軽鎖を含む。
別の局面において、以下の６つのＣＤＲ配列を含む、ヒトＮＲＰ−１（ｈＮＲＰ−１；配列番号１３０）に特異的に結合する単離された多価抗原結合タンパク質（ＡＢＰ）が提供される：
（ａ）配列番号４９に示される配列を有するＣＤＲ−Ｈ３；
（ｂ）配列番号３２に示される配列を有する；ＣＤＲ−Ｈ２；
（ｃ）配列番号１６に示される配列を有するＣＤＲ−Ｈ１；
（ｄ）配列番号８３に示される配列を有するＣＤＲ−Ｌ３；
（ｅ）配列番号７２に示される配列を有するＣＤＲ−Ｌ２；および
（ｆ）配列番号６５に示される配列を有するＣＤＲ−Ｌ１。
一実施形態において、上記ＡＢＰは、配列番号９９のＶＨ配列および配列番号１０６のＶＬ配列を含む。別の実施形態において、上記ＡＢＰは、配列番号１２１の重鎖および配列番号１２８のκ軽鎖を含む。
別の局面において、以下を含む、ヒトＮＲＰ−１（ｈＮＲＰ−１；配列番号１３０）に特異的に結合する単離された抗原結合タンパク質（ＡＢＰ）が提供される：配列番号４１〜４９から選択されるＶＨ領域のＣＤＲ−Ｈ３と少なくとも約８０％の同一性を有するＣＤＲ−Ｈ３；配列番号２３〜３２から選択されるＶＨ領域のＣＤＲ−Ｈ２と少なくとも約８０％の同一性を有するＣＤＲ−Ｈ２；配列番号８〜１６から選択されるＶＨ領域のＣＤＲ−Ｈ１と少なくとも約８０％の同一性を有するＣＤＲ−Ｈ１；配列番号７７〜８３から選択されるＶＬ領域のＣＤＲ−Ｌ３と少なくとも約８０％の同一性を有するＣＤＲ−Ｌ３；配列番号６７〜７２から選択されるＶＬ領域のＣＤＲ−Ｌ２と少なくとも約８０％の同一性を有するＣＤＲ−Ｌ２；および配列番号５９〜６５から選択されるＶＬ領域のＣＤＲ−Ｌ１と少なくとも約８０％の同一性を有するＣＤＲ−Ｌ１。一実施形態において、上記ＣＤＲ−Ｈ３、ＣＤＲ−Ｈ２、ＣＤＲ−Ｈ１、ＣＤＲ−Ｌ３、ＣＤＲ−Ｌ２、およびＣＤＲ−Ｌ１は、Ｋａｂａｔ番号付けスキーム、Ｃｈｏｔｈｉａ番号付けスキーム、またはＩＭＧＴ番号付けスキームから選択される番号付けスキームに従って各々同定される。別の実施形態において、上記ＣＤＲ−Ｈ１は、Ｃｈｏｔｈｉａ番号付けスキームおよびＫａｂａｔ番号付けスキームの両方によって規定されるように（両方の番号付けスキームの境界を含む）同定される。一実施形態において、上記ＣＤＲ−Ｈ３は、配列番号４１〜４９から選択されるＣＤＲ−Ｈ３、または１個、２個、もしくは３個のアミノ酸置換を有するこれらのバリアントを含む；上記ＣＤＲ−Ｈ２は、配列番号２３〜３２から選択されるＣＤＲ−Ｈ３、または１個、２個、もしくは３個のアミノ酸置換を有するこれらのバリアントを含む；上記ＣＤＲ−Ｈ１は、配列番号８〜１６から選択されるＣＤＲ−Ｈ１、または１個もしくは２個のアミノ酸置換を有するこれらのバリアントを含む；上記ＣＤＲ−Ｌ３は、配列番号７７〜８３から選択されるＣＤＲ−Ｌ３、または１個もしくは２個のアミノ酸置換を有するこれらのバリアントを含む；上記ＣＤＲ−Ｌ２は、配列番号６７〜７２から選択されるＣＤＲ−Ｌ２、または１個のアミノ酸置換を有するこれらのバリアントを含む；および上記ＣＤＲ−Ｌ１は、配列番号５９〜６５から選択されるＣＤＲ−Ｌ１、または１個もしくは２個のアミノ酸置換を有するこれらのバリアントを含む。一実施形態において、上記アミノ酸置換は、保存的アミノ酸置換である。
別の局面において、ヒトＮＲＰ−１に特異的に結合するＡＢＰが提供され、ここで上記ＡＢＰは、
（ａ）ＮＲＰ−１への結合に関して、ＭＡＢ１、ＭＡＢ２、ＭＡＢ３、ＭＡＢ４、ＭＡＢ５、ＭＡＢ６、ＭＡＢ７、ＭＡＢ８、ＭＡＢ９、ＭＡＢ１０、ＭＡＢ１１、ＭＡＢ１２、ＭＡＢ１３、ＭＡＢ１４、もしくはＭＡＢ１５から選択される抗体（各々、本開示の付表Ａに提供されるとおり）と競合または交差競合する；
（ｂ）細胞表面ＮＲＰ−１に対して特異的である；
（ｃ）膜貫通セマフォリンポリペプチドへのＮＲＰ−１結合を特異的に遮断する；
（ｄ）ＮＲＰ−１ポリペプチドと血管内皮細胞増殖因子（ＶＥＧＦ）ポリペプチドとの間の相互作用を遮断する；
（ｅ）ヒト被験体におけるＴｒｅｇ抑制を阻害し得る；
（ｆ）エフェクターＴ細胞を、抗原提示細胞からの抗原提示と組み合わせて共刺激する；
（ｇ）調節性Ｔ細胞によるエフェクターＴ細胞の抑制を阻害する；
（ｈ）組織中もしくは全身循環中のエフェクターＴ細胞の数を低減する；
（ｉ）血小板に実質的に結合しない；
（ｊ）患者に投与される場合に、血小板減少症を実質的に引き起こさない；
（ｋ）ＮＲＰ−１へのＳＥＭＡ３結合を遮断する；
（ｌ）ＮＲＰ−１陰性細胞に結合しない；または
（ｍ）（ａ）〜（ｌ）のいずれかの組み合わせが可能である。
一実施形態において、上記ＡＢＰ抗体は、ＭＡＢ１、ＭＡＢ２、ＭＡＢ３、ＭＡＢ４、ＭＡＢ５、ＭＡＢ６、ＭＡＢ７、ＭＡＢ８、ＭＡＢ９、ＭＡＢ１０、ＭＡＢ１１、ＭＡＢ１２、ＭＡＢ１３、ＭＡＢ１４、またはＭＡＢ１５から選択される抗体（各々、本開示の付表Ａに提供されるとおり）との結合に関して、競合または交差競合しない。一実施形態において、上記ＡＢＰは、ＭＡＢ１、ＭＡＢ２、ＭＡＢ３、ＭＡＢ４、ＭＡＢ５、ＭＡＢ６、ＭＡＢ７、ＭＡＢ８、ＭＡＢ９、ＭＡＢ１０、ＭＡＢ１１、ＭＡＢ１２、ＭＡＢ１３、ＭＡＢ１４、またはＭＡＢ１５から選択されるＡＢＰ（各々、本開示の付表Ａに提供されるとおり）である。一実施形態において、上記ＮＲＰ−１は、ｈＮＲＰ−１（配列番号１３０）、ｃＮＲＰ−１（配列番号１３２）、ｍＮＲＰ−１（配列番号１３４）、ｒＮＲＰ−１（配列番号１３５）、およびこれらの組み合わせから選択される。
一実施形態において、上記ＡＢＰは、抗体を含む。一実施形態において、上記抗体は、モノクローナル抗体である。別の実施形態において、上記抗体は、ヒト抗体、ヒト化抗体またはキメラ抗体から選択される。一実施形態において、上記ＡＢＰは多価である。別の実施形態において、上記ＡＢＰは抗体フラグメントを含む。別の実施形態において、上記ＡＢＰは代替の足場を含む。別の実施形態において、上記ＡＢＰは、免疫グロブリン定常領域を含む。別の実施形態において、上記ＡＢＰは、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、またはＩｇＭから選択されるクラスの重鎖定常領域を含む。別の実施形態において、上記ＡＢＰは、クラスＩｇＧおよびＩｇＧ４、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、またはＩｇＧ３から選択されるサブクラスの重鎖定常領域を含む。別の実施形態において、上記ＩｇＧはＩｇＧ４である。別の実施形態において、上記ＩｇＧはＩｇＧ１である。
一実施形態において、上記ＡＢＰは、共通軽鎖抗体、ｋｎｏｂｓ−ｉｎｔｏ−ｈｏｌｅｓ改変を有する抗体、ＩｇＧに結合したｓｃＦｖ、ＩｇＧに結合したＦａｂ、ダイアボディ、四価二重特異的抗体、ＤＶＤ−ＩｇＭＡＢ、ＤＡＲＴＴ Ｍ、ＤｕｏＢｏｄｙ（登録商標）、ＣｏｖＸ−Ｂｏｄｙ、Ｆｃａｂ抗体、ＴａｎｄＡｂ（登録商標）、タンデムＦａｂ、ＺｙｂｏｄｙＭＡＢ、またはこれらの組み合わせを含む。
一実施形態において、上記ＡＢＰは、ＮＲＰ−１へのセマフォリン３Ａ（ＳＥＭＡ３Ａ）の結合を、少なくとも約１０％、少なくとも約２０％、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、または少なくとも約９０％遮断する。一実施形態において、上記ＡＢＰは、ＮＲＰ−１へのセマフォリン３Ａの結合を、少なくとも約５０％低減する。一実施形態において、上記組織は腫瘍である。別の実施形態において、上記ＮＲＰ−１は、標的細胞の表面上で発現される。
一実施形態において、上記ＡＢＰは、そのＮ末端においてピログルタミン酸（ｐＥ）残基を有するポリペプチド配列を含む。別の実施形態において、上記ＡＢＰは、Ｎ末端のＱがｐＥで置換されたＶＨ配列を含む。別の実施形態において、上記ＡＢＰは、Ｎ末端のＥがｐＥで置換されたＶＨ配列を含む。別の実施形態において、上記ＡＢＰは、Ｎ末端のＥがｐＥで置換されたＶＬ配列を含む。別の実施形態において、上記ＡＢＰは、Ｎ末端のＱがｐＥで置換された重鎖配列を含む。別の実施形態において、上記ＡＢＰは、Ｎ末端のＥがｐＥで置換された重鎖配列を含む。別の実施形態において、上記ＡＢＰは、Ｎ末端のＥがｐＥで置換された軽鎖配列を含む。
一実施形態において、上記ＡＢＰは、２０ｎＭ未満、１０ｎＭ未満、５ｎＭ未満、２ｎＭ未満、１ｎＭ未満、０．５ｎＭ未満、または０．２ｎＭ未満のｋＤでヒトＮＲＰ−１に特異的に結合する。別の実施形態において、上記ＡＢＰは、ヒト、マウス、およびカニクイザルに由来するＮＲＰ−１に特異的に結合する。一実施形態において、上記ＡＢＰは、ＳＥＣ１０が結合するＮＲＰ−１上のエピトープとは異なるＮＲＰ−１上のエピトープに結合する。一実施形態において、上記ＡＢＰは、上記ＮＲＰ−１のａ１、ａ２、ｂ１、またはｂ２ドメインに結合する。別の実施形態において、上記ＡＢＰは、ＮＲＰ−１の１より多くのドメインに結合する。別の実施形態において、上記ＡＢＰは、上記ＮＲＰ−１のｂ２ドメインに結合する。別の実施形態において、上記ＡＢＰは、上記ＮＲＰ−１のｂ１ドメインに結合する。
別の局面において、医薬としての使用のための、本明細書で開示されるＡＢＰのうちのいずれかが提供される。別の実施形態において、上記ＡＢＰは、がんまたはウイルス感染の処置における使用のために提供される。一実施形態において、上記がんは、固形腫瘍および血液腫瘍から選択される。
別の局面において、本明細書で開示されるＡＢＰのうちのいずれか、および上記ＡＢＰの使用のための指示を含むキットが提供される。一実施形態において、上記キットは、凍結乾燥されたＡＢＰを含む。別の実施形態において、上記キットは、上記凍結乾燥されたＡＢＰの再構成のための流体を含む。
別の局面において、本明細書で開示されるＡＢＰ、そのＶＨ、そのＶＬ、その軽鎖、その重鎖またはその抗原結合部分をコードする単離されたポリヌクレオチドが提供される。
別の局面において、本明細書で開示されるＡＢＰ、そのＶＨ、そのＶＬ、その軽鎖、その重鎖またはその抗原結合部分をコードする単離されたポリヌクレオチドを含むベクターが提供される。
別の局面において、本明細書で開示されるベクターまたはポリヌクレオチドのうちのいずれかを含む宿主細胞が提供される。一実施形態において、上記宿主細胞は、細菌細胞、真菌細胞、および哺乳動物細胞から選択される。別の実施形態において、上記宿主細胞は、Ｅ．ｃｏｌｉ細胞、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ細胞、およびＣＨＯ細胞から選択される。
別の局面において、本明細書で開示されるベクターまたはポリヌクレオチドのうちのいずれかを含む無細胞発現反応物が提供される。
別の局面において、本明細書で開示されるとおりのＡＢＰを生成するための方法が提供され、上記方法は、上記ＡＢＰを本明細書で開示される宿主細胞において発現する工程および上記発現されたＡＢＰを単離する工程を包含する。
別の局面において、本明細書で開示されるＡＢＰのうちのいずれかおよび薬学的に受容可能な賦形剤を含む薬学的組成物が提供される。一実施形態において、上記ＡＢＰは、腫瘍においてＮＲＰ−１：セマフォリン−４相互作用を局所的に阻害するために有効な量で上記組成物に存在する。一実施形態において、上記抗ＮＲＰ−１抗体は、ヒト被験体に投与される場合、ＮＲＰ−１と膜貫通セマフォリンポリペプチドとの間の相互作用を阻害するために有効な量で上記組成物に存在する。別の実施形態において、上記抗ＮＲＰ−１抗体は、膜貫通セマフォリンポリペプチドへのＮＲＰ−１結合を特異的に遮断する。別の実施形態において、上記抗ＮＲＰ−１抗体は、ＮＲＰ−１ポリペプチドと血管内皮細胞増殖因子（ＶＥＧＦ）ポリペプチドとの間の相互作用を遮断する。別の実施形態において、上記抗ＮＲＰ−１抗体は、セマフォリンポリペプチドの結合を遮断する。一実施形態において、上記抗ＮＲＰ１抗体は、ＳＥＭＡ３結合を遮断する。別の実施形態において、上記抗ＮＲＰ−１抗体は、ＳＥＭＡ４結合を遮断する。別の実施形態において、上記抗体は、ＮＲＰ−１ポリペプチドとＳＥＭＡ３との間の相互作用を遮断する。別の実施形態において、上記抗体は、ＮＲＰ−１ポリペプチドとＶＥＧＦとの間の相互作用を遮断する。一実施形態において、上記抗体は、セマフォリンポリペプチド結合を遮断するが、ＶＥＧＦ結合を遮断しない。別の実施形態において、上記抗ＮＲＰ−１抗体は、ヒト被験体におけるＴｒｅｇ抑制を阻害し得る。別の実施形態において、上記抗ＮＲＰ−１抗体は、ヒト被験体においてＴｒｅｇ生存および／または安定性を減少させ得る。一実施形態において、上記抗ＮＲＰ−１抗体は、腫瘍において上記ＮＲＰ−１：セマフォリン−４相互作用を局所的に阻害するために有効な量で上記組成物に存在する。別の実施形態において、上記抗ＮＲＰ−１抗体は、望ましくない自己免疫の発生および／または炎症発現を防止するために有効な量で上記組成物に存在する。一実施形態において、ヒト被験体は、がんに罹患している。一実施形態において、上記薬学的組成物中のＡＢＰの量は、被験体において、（ａ）調節性Ｔ細胞によるエフェクターＴ細胞の抑制を低減する；（ｂ）エフェクターＴ細胞を活性化する；（ｃ）組織においてまたは全身的に調節性Ｔ細胞の数を低減する；（ｄ）エフェクターＴ細胞の増殖を誘導もしくは増強する；（ｅ）腫瘍成長の速度を阻害する；（ｆ）腫瘍退縮を誘導する；または（ｇ）これらの組み合わせ、のために十分である。
一実施形態において、上記薬学的組成物は、医薬としての使用のためのものである。一実施形態において、上記薬学的組成物は、がんまたはウイルス感染の処置における使用のためのものである。一実施形態において、上記薬学的組成物は、がんの処置における使用のためのものであり、ここで上記がんは、脳、前立腺、乳房、結腸、皮膚、および肺のがんから選択される。一実施形態において、上記薬学的組成物は、薬学的に受容可能な賦形剤を含む。一実施形態において、上記薬学的組成物中のＡＢＰは、被験体において、（ａ）調節性Ｔ細胞によるエフェクターＴ細胞の抑制を低減する；（ｂ）エフェクターＴ細胞を活性化する；（ｃ）組織においてまたは全身的に調節性Ｔ細胞の数を低減する；（ｄ）エフェクターＴ細胞の増殖を誘導もしくは増強する；（ｅ）腫瘍成長の速度を阻害する；（ｆ）腫瘍退縮を誘導する；または（ｇ）これらの組み合わせ、のために十分である。
別の局面において、被験体において調節性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）の機能を阻害するかまたは安定性を減少させるための方法が提供され、上記方法は、上記Ｔｒｅｇをインビボで、上記Ｔｒｅｇにおけるニューロピリン−１（ＮＲＰ−１）：セマフォリン−４Ａ軸の阻害剤に曝露する工程を包含し、ここで有効量の、本明細書で提供されるＡＢＰまたは本明細書で提供される薬学的組成物は、上記被験体に投与される。一実施形態において、上記方法は、有効量の本明細書で提供される薬学的組成物を被験体に投与する工程を包含する、Ｔエフェクター細胞（Ｔｅｆｆ）機能を増大するか、または上記Ｔｅｆｆをインビボで、本明細書で提供されるＡＢＰに曝す工程を包含する。一実施形態において、上記被験体はがんを有する。一実施形態において、上記方法は、がん関連抗原に対する免疫応答を誘導または増強する。一実施形態において、上記ＡＢＰは、（ａ）上記ヒト被験体におけるＴｒｅｇ生存および／または安定性を減少させる；（ｂ）上記ＮＲＰ−１ポリペプチドの細胞外ドメインに結合する；または（ｃ）これらの組み合わせ、が可能である。
一実施形態において、上記方法は、１またはこれより多くのさらなる治療剤を投与する工程をさらに包含する。一実施形態において、上記さらなる治療剤は、放射線、細胞傷害性薬剤、化学療法剤、細胞増殖抑制剤、抗ホルモン剤、ＶＥＧＦ阻害剤、免疫刺激剤、抗血管新生剤、およびこれらの組み合わせから選択される。一実施形態において、上記さらなる治療剤は免疫刺激剤である。一実施形態において、上記免疫刺激剤は、免疫細胞によって発現される阻害性レセプターまたはそのリガンドのシグナル伝達を遮断する薬剤を含む。一実施形態において、上記免疫細胞によって発現される阻害性レセプターまたはそのリガンドは、ＰＶＲＩＧ、ＶＩＳＴＡ、ＣＣＲ４、ＣＤ２７、ＣＴＬＡ−４、ＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１、ＬＡＧ−３、Ｔｉｍ３、ＴＩＧＩＴ、ニューリチン、ＢＴＬＡ、ＫＩＲ、およびこれらの組み合わせから選択される。一実施形態において、上記免疫刺激剤は、免疫細胞によって発現される刺激性レセプターに対するアゴニストを含む。一実施形態において、上記免疫細胞によって発現される刺激性レセプターは、ＯＸ４０、ＧＩＴＲ、ＩＣＯＳ、ＣＤ２８、ＣＤ３７、ＣＤ４０、４−１ＢＢ、およびこれらの組み合わせから選択される。一実施形態において、上記免疫刺激剤はサイトカインを含む。別の実施形態において、上記免疫刺激剤はがん関連抗原に対するワクチンを含む。
別の局面において、免疫応答を調整する必要性のある被験体において免疫応答を調整するための方法が提供され、上記方法は、有効量の本明細書で提供されるＡＢＰを上記被験体に投与する工程を包含する。一実施形態において、上記方法は、１またはこれより多くのさらなる治療剤を上記被験体に投与する工程をさらに包含する。一実施形態において、上記さらなる治療剤は、（ｉ）免疫細胞の刺激性レセプターに対するアゴニストまたは（ｉｉ）免疫細胞の阻害性レセプターに対するアンタゴニストであり、ここで上記免疫細胞のレセプターは、ＯＸ４０、ＣＤ２、ＣＤ２７、ＣＤＳ、ＩＣＡＭ−１、ＬＦＡ−１（ＣＤ１１ａ／ＣＤ１８）、ＩＣＯＳ（ＣＤ２７８）、４−１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＣＤ２８、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＢＡＦＦＲ、ＨＶＥＭ、ＣＤ７、ＬＩＧＨＴ、ＮＫＧ２Ｃ、ＧＩＴＲ、ＳＬＡＭＦ７、ＮＫｐ８０、ＣＤ１６０、Ｂ７−Ｈ３、ＣＤ８３リガンド、およびこれらの組み合わせから選択される。別の実施形態において、上記さらなる治療剤は、単純ヘルペスウイルス、水疱性口内炎ウイルス、アデノウイルス、ニューカッスル病ウイルス、ワクシニアウイルス、マラバウイルス、およびこれらの組み合わせから選択される腫瘍溶解性ウイルスである。一実施形態において、上記さらなる治療剤は、上記ＡＢＰと同じ薬学的組成物中に製剤化される。別の実施形態において、上記さらなる治療剤は、上記ＡＢＰとは異なる薬学的組成物中に製剤化される。
一実施形態において、上記さらなる治療剤は、上記ＡＢＰを投与する前に投与される。別の実施形態において、上記さらなる治療剤は、上記ＡＢＰを投与した後に投与される。別の実施形態において、上記さらなる治療剤は、上記ＡＢＰと同時に投与される。一実施形態において、上記方法は、上記被験体において血小板減少症を実質的に引き起こさない。
別の局面において、配列番号４７からなるＣＤＲ−Ｈ３、配列番号３０からなるＣＤＲ−Ｈ２、および配列番号１４からなるＣＤＲ−Ｈ１を含む重鎖可変領域；ならびに配列番号８１からなるＣＤＲ−Ｌ３、配列番号７１からなるＣＤＲ−Ｌ２、および配列番号６３からなるＣＤＲ−Ｌ１を含む軽鎖可変領域を含む、抗ヒトＮＲＰ−１抗体またはその抗原結合フラグメントが提供される。一実施形態において、上記抗体またはその抗原結合フラグメントは、以下の（１）および（２）のうちのいずれか一方から選択される：
（１）配列番号９６からなる重鎖可変領域および配列番号１０４からなる軽鎖可変領域を含む、抗ヒトＮＲＰ−１抗体またはその抗原結合フラグメント；ならびに
（２）アミノ酸番号１のＥがピログルタミン酸に改変される配列番号９６からなる重鎖可変領域および配列番号１０４からなる軽鎖可変領域を含む、抗ヒトＮＲＰ−１抗体またはその抗原結合フラグメント。
一実施形態において、抗ヒトＮＲＰ−１抗体またはその抗原結合フラグメントを生成するための方法が提供され、上記方法は、以下の（ａ）〜（ｃ）からなる群より選択される宿主細胞を培養して、四価抗ヒトＮＲＰ−１抗体またはその抗原結合フラグメントを発現する工程を包含する：
（ａ）上記の実施形態（１）の抗ヒトＮＲＰ−１抗体またはその抗原結合フラグメントの重鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドおよび上記抗体またはその抗原結合フラグメントの軽鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドを含む発現ベクターで形質転換された宿主細胞；
（ｂ）上記の実施形態（１）の抗ヒトＮＲＰ−１抗体またはその抗原結合フラグメントの重鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドを含む発現ベクターおよび上記抗体またはその抗原結合フラグメントの軽鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドを含む発現ベクターで形質転換された宿主細胞；ならびに
（ｃ）上記の実施形態（１）の抗ヒトＮＲＰ−１抗体またはその抗原結合フラグメントの重鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドを含む発現ベクターで形質転換された宿主細胞および上記抗体またはその抗原結合フラグメントの軽鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドを含む発現ベクターで形質転換された宿主細胞。
別の実施形態において、（１）上記の局面の抗ヒトＮＲＰ−１抗体またはその抗原結合フラグメントの重鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドおよび（２）上記の局面の抗ヒトＮＲＰ−１抗体またはその抗原結合フラグメントの軽鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドが提供される。
別の実施形態において、（ａ）上記の局面の抗ヒトＮＲＰ−１抗体またはその抗原結合フラグメントの重鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド、および／または（ｂ）上記の局面の抗ヒトＮＲＰ−１抗体またはその抗原結合フラグメントの軽鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドを含む発現ベクターが提供される。
別の実施形態において、以下の（ａ）〜（ｄ）からなる群より選択される発現ベクターで形質転換された宿主細胞が提供される：
（ａ）上記の局面の抗ヒトＮＲＰ−１抗体またはその抗原結合フラグメントの重鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドおよび上記抗体またはその抗原結合フラグメントの軽鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドを含む発現ベクターで形質転換された宿主細胞；
（ｂ）上記の局面の抗ヒトＮＲＰ−１抗体またはその抗原結合フラグメントの重鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドを含む発現ベクターおよび上記の局面の上記抗体またはその抗原結合フラグメントの軽鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドを含む発現ベクターで形質転換された宿主細胞；
（ｃ）上記の局面の抗ヒトＮＲＰ−１抗体またはその抗原結合フラグメントの重鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドを含む発現ベクターで形質転換された宿主細胞；ならびに
（ｄ）上記の局面の抗ヒトＮＲＰ−１抗体またはその抗原結合フラグメントの軽鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドを含む発現ベクターで形質転換された宿主細胞。
別の実施形態において、以下の（１）〜（４）からなる群より選択される、上記の局面に従う抗ヒトＮＲＰ−１抗体またはその抗原結合フラグメントが提供される：
（１）配列番号１１８からなる重鎖および配列番号１２６からなる軽鎖を含む、抗ヒトＮＲＰ−１抗体；
（２）アミノ酸番号１のＥがピログルタミン酸に改変される配列番号１１８からなる重鎖および配列番号１２６からなる軽鎖を含む、抗ヒトＮＲＰ−１抗体；
（３）配列番号１１８のアミノ酸番号１〜４５３のアミノ酸配列からなる重鎖および配列番号１２６からなる軽鎖を含む、抗ヒトＮＲＰ−１抗体；ならびに
（４）アミノ酸番号１のＥがピログルタミン酸に改変される配列番号１１８のアミノ酸番号１〜４５３のアミノ酸配列からなる重鎖および配列番号１２６からなる軽鎖を含む、抗ヒトＮＲＰ−１抗体。
一実施形態において、上記抗ヒトＮＲＰ−１抗体は、がんを防止または処置することにおける使用のためのものである。別の実施形態において、上記抗ヒトＮＲＰ−１抗体は、がんを防止または処置するための薬学的組成物の製造のためのものである。
以下の（１）および（２）からなる群より選択されるポリヌクレオチド：
（１）上記の実施形態（１）の抗ヒトＮＲＰ−１抗体の重鎖をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド、および
（２）上記の実施形態（１）の抗ヒトＮＲＰ−１抗体の軽鎖をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド。
以下を含む発現ベクター：
（ａ）上記の実施形態（１）の抗ヒトＮＲＰ−１抗体の重鎖をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド、および／または
（ｂ）上記の実施形態（１）の抗ヒトＮＲＰ−１抗体の軽鎖をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド。
以下の（ａ）〜（ｄ）からなる群より選択される発現ベクターで形質転換された宿主細胞：
（ａ）上記の実施形態（１）の抗ヒトＮＲＰ−１抗体の重鎖をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドおよび上記抗体の軽鎖をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドを含む発現ベクターで形質転換された宿主細胞；
（ｂ）上記の実施形態（１）の抗ヒトＮＲＰ−１抗体の重鎖をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドを含む発現ベクターおよび上記抗体の軽鎖をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドを含む発現ベクターで形質転換された宿主細胞；
（ｃ）上記の実施形態（１）の抗ヒトＮＲＰ−１抗体の重鎖をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドを含む発現ベクターで形質転換された宿主細胞；ならびに
（ｄ）上記の実施形態（１）の抗ヒトＮＲＰ−１抗体の軽鎖をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドを含む発現ベクターで形質転換された宿主細胞。
抗ヒトＮＲＰ−１抗体を生成するための方法であって、上記方法は、以下の（ａ）〜（ｃ）からなる群より選択される宿主細胞を培養して、抗ヒトＮＲＰ−１抗体を発現する工程を包含する、方法：
（ａ）上記の実施形態（１）の抗ヒトＮＲＰ−１抗体の重鎖をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドおよび上記抗体の軽鎖をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドを含む発現ベクターで形質転換された宿主細胞；
（ｂ）上記の実施形態（１）の抗ヒトＮＲＰ−１抗体の重鎖をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドを含む発現ベクターおよび上記抗体の軽鎖をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドを含む発現ベクターで形質転換された宿主細胞；ならびに
（ｃ）上記の実施形態（１）の抗ヒトＮＲＰ−１抗体の重鎖をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドを含む発現ベクターで形質転換された宿主細胞および上記抗体の軽鎖をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドを含む発現ベクターで形質転換された宿主細胞。
一実施形態において、上記の実施形態の抗ヒトＮＲＰ−１抗体および薬学的に受容可能な賦形剤を含む薬学的組成物が提供される。別の実施形態において、上記の実施形態（１）の抗ヒトＮＲＰ−１抗体、上記の実施形態（２）の抗ヒトＮＲＰ−１抗体、上記の実施形態（３）の抗ヒトＮＲＰ−１抗体、および／または上記の実施形態（４）の抗ヒトＮＲＰ−１抗体、ならびに薬学的に受容可能な賦形剤を含む薬学的組成物が提供される。一実施形態において、上記薬学的組成物は、がんを処置するための薬学的組成物である。別の実施形態において、上記組成物は、放射線、細胞傷害性薬剤、化学療法剤、細胞増殖抑制剤、抗ホルモン剤、ＶＥＧＦ阻害剤、免疫刺激剤、抗血管新生剤、またはこれらの組み合わせと組み合わせて投与される。
別の実施形態において、がんを防止または処置するための方法が提供され、上記方法は、治療上有効な量の上記の局面の抗ヒトＮＲＰ−１抗体を投与する工程を包含する。一実施形態において、上記方法は、１またはこれより多くのさらなる治療剤を投与する工程をさらに包含する。一実施形態において、上記さらなる治療剤は、放射線、細胞傷害性薬剤、化学療法剤、細胞増殖抑制剤、抗ホルモン剤、ＶＥＧＦ阻害剤、免疫刺激剤、抗血管新生剤、およびこれらの組み合わせからなる群より選択される。
図１Ａおよび１Ｂは、ＭＡＢ２、ＭＡＢ３、ＭＡＢ４、ＭＡＢ５、ＭＡＢ７、ＭＡＢ１２、ＭＡＢ１３、ＭＡＢ１４、およびＭＡＢ１５のマウスバージョン、ならびに比較因子としてのＩｇＧコントロールおよび抗ＮＲＰ−１抗体ＳＥＣ１０で処置したＣＴ２６腫瘍を有するマウスにおける腫瘍成長阻害を示す２つのグラフである。マウスを、ＭＡＢ単剤療法で（図１Ａ）またはＰＤ−１抗体との組み合わせ（図１Ｂ）において処置した。抗体処置時間（日数）を矢印によって示す。図１Ｃは、単剤療法および本明細書で記載されるとおりの併用療法で処置したＣＴ２６腫瘍を有するマウスにおける腫瘍成長阻害を示すグラフである。ｉ）ＭＡＢ１２のマウスバージョン、ｉｉ）ＰＤ−１阻害剤、およびｉｉｉ）ｍＭＡＢ１２およびＰＤ−１阻害剤の併用が提供される。抗体処置時間（日数）を矢印によって示す。 図１Ａおよび１Ｂは、ＭＡＢ２、ＭＡＢ３、ＭＡＢ４、ＭＡＢ５、ＭＡＢ７、ＭＡＢ１２、ＭＡＢ１３、ＭＡＢ１４、およびＭＡＢ１５のマウスバージョン、ならびに比較因子としてのＩｇＧコントロールおよび抗ＮＲＰ−１抗体ＳＥＣ１０で処置したＣＴ２６腫瘍を有するマウスにおける腫瘍成長阻害を示す２つのグラフである。マウスを、ＭＡＢ単剤療法で（図１Ａ）またはＰＤ−１抗体との組み合わせ（図１Ｂ）において処置した。抗体処置時間（日数）を矢印によって示す。図１Ｃは、単剤療法および本明細書で記載されるとおりの併用療法で処置したＣＴ２６腫瘍を有するマウスにおける腫瘍成長阻害を示すグラフである。ｉ）ＭＡＢ１２のマウスバージョン、ｉｉ）ＰＤ−１阻害剤、およびｉｉｉ）ｍＭＡＢ１２およびＰＤ−１阻害剤の併用が提供される。抗体処置時間（日数）を矢印によって示す。 図１Ａおよび１Ｂは、ＭＡＢ２、ＭＡＢ３、ＭＡＢ４、ＭＡＢ５、ＭＡＢ７、ＭＡＢ１２、ＭＡＢ１３、ＭＡＢ１４、およびＭＡＢ１５のマウスバージョン、ならびに比較因子としてのＩｇＧコントロールおよび抗ＮＲＰ−１抗体ＳＥＣ１０で処置したＣＴ２６腫瘍を有するマウスにおける腫瘍成長阻害を示す２つのグラフである。マウスを、ＭＡＢ単剤療法で（図１Ａ）またはＰＤ−１抗体との組み合わせ（図１Ｂ）において処置した。抗体処置時間（日数）を矢印によって示す。図１Ｃは、単剤療法および本明細書で記載されるとおりの併用療法で処置したＣＴ２６腫瘍を有するマウスにおける腫瘍成長阻害を示すグラフである。ｉ）ＭＡＢ１２のマウスバージョン、ｉｉ）ＰＤ−１阻害剤、およびｉｉｉ）ｍＭＡＢ１２およびＰＤ−１阻害剤の併用が提供される。抗体処置時間（日数）を矢印によって示す。
図２は、ＭＡＢ２、ＭＡＢ３、ＭＡＢ４、ＭＡＢ５、ＭＡＢ７、ＭＡＢ１２、ＭＡＢ１３、ＭＡＢ１４、およびＭＡＢ１５のマウスバージョン、ならびに比較因子としてのＩｇＧコントロールおよびＳＥＣ１０で処置したＭＣ３８腫瘍を有するマウスにおける腫瘍成長阻害を示す３つのグラフである。マウスを、ＭＡＢ単剤療法で（図２Ａ）またはＰＤ−Ｌ１抗体との組み合わせ（図２Ｂ）において処置した。抗体処置時間（日数）を矢印によって示す。ＭＣ３８同系結腸マウス腫瘍モデルにおけるｍＭＡＢ１２単独でのまたはＰＤ−Ｌ１抗体との組み合わせでの抗腫瘍有効性を、図２Ｃに示す。 図２は、ＭＡＢ２、ＭＡＢ３、ＭＡＢ４、ＭＡＢ５、ＭＡＢ７、ＭＡＢ１２、ＭＡＢ１３、ＭＡＢ１４、およびＭＡＢ１５のマウスバージョン、ならびに比較因子としてのＩｇＧコントロールおよびＳＥＣ１０で処置したＭＣ３８腫瘍を有するマウスにおける腫瘍成長阻害を示す３つのグラフである。マウスを、ＭＡＢ単剤療法で（図２Ａ）またはＰＤ−Ｌ１抗体との組み合わせ（図２Ｂ）において処置した。抗体処置時間（日数）を矢印によって示す。ＭＣ３８同系結腸マウス腫瘍モデルにおけるｍＭＡＢ１２単独でのまたはＰＤ−Ｌ１抗体との組み合わせでの抗腫瘍有効性を、図２Ｃに示す。 図２は、ＭＡＢ２、ＭＡＢ３、ＭＡＢ４、ＭＡＢ５、ＭＡＢ７、ＭＡＢ１２、ＭＡＢ１３、ＭＡＢ１４、およびＭＡＢ１５のマウスバージョン、ならびに比較因子としてのＩｇＧコントロールおよびＳＥＣ１０で処置したＭＣ３８腫瘍を有するマウスにおける腫瘍成長阻害を示す３つのグラフである。マウスを、ＭＡＢ単剤療法で（図２Ａ）またはＰＤ−Ｌ１抗体との組み合わせ（図２Ｂ）において処置した。抗体処置時間（日数）を矢印によって示す。ＭＣ３８同系結腸マウス腫瘍モデルにおけるｍＭＡＢ１２単独でのまたはＰＤ−Ｌ１抗体との組み合わせでの抗腫瘍有効性を、図２Ｃに示す。
図３は、抗ＮＲＰ−１抗体ＭＡＢ１２およびＳＥＣ１０に関するエピトープビニングデータを示す２つのグラフである。上のパネルは、抗ヒトＦｃ ＡＨＣセンサー上に固定化された５μｇ／ｍＬ ＭＡＢ１２でのＭＡＢ１２およびＳＥＣ１０に関するビニングデータを示す。下のパネルは、センサー上に固定化された５μｇ／ｍＬ ＳＥＣ１０でのＭＡＢ１２およびＳＥＣ１０に関するビニングデータを示す。ＮＲＰ１タンパク質は、その固定化した抗体に結合され、その第２の抗体の結合が上昇する。その軌跡は、ＭＡＢ１２およびＳＥＣ１０がＮＲＰ１に同時に結合し得ることを示す。
詳細な説明
定義
別段定義されなければ、本明細書で使用される技術、表記法および他の科学技術の全ての用語は、本発明が属する分野の当業者によって一般に理解される意味を有することが意図される。いくらかの場合には、一般に理解される意味を有する用語は、明瞭性のためにおよび／または容易な参照のために本明細書で定義され、本明細書中でのこのような定義の包含は、必ずしも当該分野で一般に理解されるものを超える差異を表すと解釈されるべきではない。本明細書で記載または参照される技術および手順は一般に、十分に理解され、従来の方法論を使用して当業者によって一般的に使用される（例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋら， Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ： Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ 第４版．（２０１２） Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ， Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ， ＮＹに記載される広く利用される分子クローニング方法論など）。適切な場合には、市販のキットおよび試薬の使用に関わる手順は一般に、別段注記されなければ、製造者が規定するプロトコルおよび条件に従って行われる。
本明細書で使用される場合、単数形「１つの、ある（ａ）」、「１つの、ある（ａｎ）」および「上記、この、その（ｔｈｅ）」とは、文脈が明らかに別のことを示さなければ、複数形への言及を包含する。用語「含む、包含する（ｉｎｃｌｕｄｅ）」、「例えば、など、のような（ｓｕｃｈ ａｓ）」などは、別段具体的に言及されなければ、限定なしに包含することを伝えることが意図される。
本明細書で使用される場合、用語「含む、包含する（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」はまた、別段具体的に示されなければ、記載される要素「からなる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ ｏｆ）」実施形態および「から本質的になる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ ｅｓｓｅｎｔｉａｌｌｙ ｏｆ）」実施形態を具体的に含む。
用語「約（ａｂｏｕｔ）」とは、示された値およびその値を上回るおよび下回る範囲を示し、包含する。ある種の実施形態において、用語「約」とは、指定された値±１０％、±５％、または±１％を示す。ある種の実施形態において、適用可能である場合、用語「約」は、指定された値±その値の１標準偏差を示す。
用語「免疫グロブリン」とは、２対のポリペプチド鎖：１対の軽（Ｌ）鎖および１対の重（Ｈ）鎖を概して含む、構造的に関連するタンパク質のクラスをいう。「無傷の免疫グロブリン（ｉｎｔａｃｔ ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎ）では、全４個のこれらの鎖が、ジスルフィド結合によって相互に接続される。免疫グロブリンの構造は、十分に特徴づけられている。例えば、Ｐａｕｌ， Ｆｕｎｄａｍｅｎｔａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ 第７版， 第５章（２０１３） Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ Ｗｉｌｌｉａｍｓ ＆ Ｗｉｌｋｉｎｓ， Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ， ＰＡを参照のこと。簡潔には、各重鎖は、代表的には、重鎖可変領域（ＶＨ）および重鎖定常領域（ＣＨ）を含む。その重鎖定常領域は代表的には、３個のドメイン（ＣＨ１、ＣＨ２、およびＣＨ３と略される）を含む。各軽鎖は代表的には、軽鎖可変領域（ＶＬ）および軽鎖定常領域を含む。その軽鎖定常領域は代表的には、１個のドメイン（ＣＬと略される）を含む。
用語「抗原結合タンパク質（ａｎｔｉｇｅｎ−ｂｉｎｄｉｎｇ ｐｒｏｔｅｉｎ）」（ＡＢＰ）は、抗原またはエピトープに特異的に結合する１またはこれより多くの抗原結合ドメインを含むタンパク質をいう。いくつかの実施形態において、その抗原結合ドメインは、天然に存在する抗体のものに類似の特異性および親和性でその抗原またはエピトープに結合する。いくつかの実施形態において、そのＡＢＰは、抗体を含む。いくつかの実施形態において、そのＡＢＰは、抗体からなる。いくつかの実施形態において、そのＡＢＰは、抗体から本質的になる。いくつかの実施形態において、そのＡＢＰは、代替の足場を含む。いくつかの実施形態において、そのＡＢＰは、代替の足場からなる。いくつかの実施形態において、そのＡＢＰは、代替の足場から本質的になる。いくつかの実施形態において、そのＡＢＰは、抗体フラグメントを含む。いくつかの実施形態において、そのＡＢＰは、抗体フラグメントからなる。いくつかの実施形態において、そのＡＢＰは、抗体フラグメントから本質的になる。「ＮＲＰ−１ ＡＢＰ」、「抗ＮＲＰ−１ ＡＢＰ（ａｎｔｉ−ＮＲＰ−１ ＡＢＰ）」、または「ＮＲＰ−１特異的ＡＢＰ（ＮＲＰ−１−ｓｐｅｃｉｆｉｃ ＡＢＰ）」は、本明細書で提供されるように、その抗原ＮＲＰ−１に特異的に結合するＡＢＰである。いくつかの実施形態において、そのＡＢＰは、ＮＲＰ−１の細胞外ドメインに結合する。ある種の実施形態において、本明細書で提供されるＮＲＰ−１ ＡＢＰは、異なる種に由来するＮＲＰ−１タンパク質の間またはその中で保存されるＮＲＰ−１のエピトープに結合する。
用語「抗体（ａｎｔｉｂｏｄｙ）」は、その最も広い意味において本明細書で使用され、抗原またはエピトープに特異的に結合する１またはこれより多くの抗原結合ドメインを含むある種のタイプの免疫グロブリン分子を包含する。抗体としては、具体的には、無傷の抗体（例えば、無傷の免疫グロブリン）、抗体フラグメント、および多重特異的抗体が挙げられる。抗体は、ＡＢＰの１タイプである。
用語「抗原結合ドメイン（ａｎｔｉｇｅｎ−ｂｉｎｄｉｎｇ ｄｏｍａｉｎ）」とは、抗原またはエピトープに特異的に結合し得るＡＢＰの部分を意味する。抗原結合ドメインの一例は、抗体のＶＨ−ＶＬダイマーによって形成される抗原結合ドメインである。抗原結合ドメインの別の例は、アドネクチンの１０番目のフィブロネクチンタイプＩＩＩドメインに由来するある種のループの多様化によって形成される抗原結合ドメインである。
用語「全長抗体（ｆｕｌｌ ｌｅｎｇｔｈ ａｎｔｉｂｏｄｙ）」、「無傷の抗体（ｉｎｔａｃｔ ａｎｔｉｂｏｄｙ）」、および「完全抗体（ｗｈｏｌｅ ａｎｔｉｂｏｄｙ）」とは、天然に存在する抗体構造に実質的に類似の構造を有しかつＦｃ領域を含む重鎖を有する抗体をいうために本明細書で交換可能に使用される。例えば、ＩｇＧ分子をいうために使用される場合、「全長抗体」は、２つの重鎖および２つの軽鎖を含む抗体である。「抗ヒトＮＲＰ−１抗体（ａｎｔｉ−ｈｕｍａｎ ＮＲＰ−１ ａｎｔｉｂｏｄｙ）」は、ヒトＮＲＰ−１に特異的に結合するインタクトな抗体（本明細書で提供されるとおり）である。
用語「Ｆｃ領域（Ｆｃ ｒｅｇｉｏｎ）」とは、天然に存在する抗体において、Ｆｃレセプターおよび補体系のある種のタンパク質と相互作用する免疫グロブリン重鎖のＣ末端領域を意味する。種々の免疫グロブリンのＦｃ領域の構造、およびその中に含まれるグリコシル化部位は、当該分野で公知である。Ｓｃｈｒｏｅｄｅｒ ａｎｄ Ｃａｖａｃｉｎｉ， Ｊ． Ａｌｌｅｒｇｙ Ｃｌｉｎ． Ｉｍｍｕｎｏｌ．， ２０１０， １２５：Ｓ４１−５２（その全体において参考として援用される）を参照のこと。そのＦｃ領域は、天然に存在するＦｃ領域、または当該分野でもしくは本開示の他の箇所で記載されるように改変されたＦｃ領域であり得る。
そのＶＨおよびＶＬ領域は、より保存された領域が散在した超可変性の領域（「超可変領域（ＨＶＲ）」；「相補性決定領域」（ＣＤＲ）ともいわれる）へとさらに細かく分けられ得る。より保存された領域は、フレームワーク領域（ＦＲ）といわれる。各ＶＨおよびＶＬは一般に、３個のＣＤＲおよび４個のＦＲを含み、以下の順序で配列される（Ｎ末端からＣ末端へと）： ＦＲ１−ＣＤＲ１−ＦＲ２−ＣＤＲ２−ＦＲ３−ＣＤＲ３−ＦＲ４。そのＣＤＲは、抗原結合に関与し、その抗体の抗原特異性および結合親和性に影響を及ぼす。Ｋａｂａｔら， Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ 第５版．（１９９１） Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｅｒｖｉｃｅ， Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ， Ｂｅｔｈｅｓｄａ， ＭＤ（その全体において参考として援用される）を参照のこと。
脊椎動物種に由来する軽鎖は、その定常ドメインの配列に基づいて２つのタイプ（カッパ（κ）およびラムダ（λ）といわれる）のうちの１つに割り当てられ得る。
任意の脊椎動物種に由来する重鎖は、５つの異なるクラス（またはアイソタイプ）： ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、およびＩｇＭのうちの１つに割り当てられ得る。これらのクラスはまた、それぞれ、α、δ、ε、γ、およびμと示される。そのＩｇＧおよびＩｇＡクラスは、配列および機能における差異に基づいて、サブクラスへとさらに細かく分けられる。ヒトは、以下のサブクラスを発現する：ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１、およびＩｇＡ２。
ＣＤＲのアミノ酸配列境界は、多くの公知の番号付けスキームのうちのいずれか（Ｋａｂａｔら，前出（「Ｋａｂａｔ」番号付けスキーム）；Ａｌ−Ｌａｚｉｋａｎｉら， １９９７， Ｊ． Ｍｏｌ． Ｂｉｏｌ．， ２７３：９２７−９４８（「Ｃｈｏｔｈｉａ」番号付けスキーム）；ＭａｃＣａｌｌｕｍら， １９９６， Ｊ． Ｍｏｌ． Ｂｉｏｌ． ２６２：７３２−７４５（「Ｃｏｎｔａｃｔ」番号付けスキーム）；Ｌｅｆｒａｎｃら， Ｄｅｖ． Ｃｏｍｐ． Ｉｍｍｕｎｏｌ．， ２００３， ２７：５５−７７（「ＩＭＧＴ」番号付けスキーム）；およびＨｏｎｅｇｇｅ ａｎｄ Ｐｌｕｅｃｋｔｈｕｎ， Ｊ． Ｍｏｌ． Ｂｉｏｌ．， ２００１， ３０９：６５７−７０（「ＡＨｏ」番号付けスキーム）（これらの各々はその全体において参考として援用される）によって記載されるものが挙げられる）を使用して、当業者によって決定され得る。
表１は、ＫａｂａｔおよびＣｈｏｔｈｉａスキームによって同定されるとおりのＣＤＲ−Ｌ１、ＣＤＲ−Ｌ２、ＣＤＲ−Ｌ３、ＣＤＲ−Ｈ１、ＣＤＲ−Ｈ２、およびＣＤＲ−Ｈ３の位置を提供する。ＣＤＲ−Ｈ１に関しては、残基番号付けは、ＫａｂａｔおよびＣｈｏｔｈｉａ両方の番号付けスキームを使用して提供される。
ＣＤＲは、例えば、抗体番号付けソフトウェア（例えば、ｗｗｗ．ｂｉｏｉｎｆ．ｏｒｇ．ｕｋ／ａｂｓ／ａｂｎｕｍ／において入手可能であり、Ａｂｈｉｎａｎｄａｎ ａｎｄ Ｍａｒｔｉｎ， Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ， ２００８， ４５：３８３２−３８３９（その全体において参考として援用される）に記載されるＡｂｎｕｍ）を使用して割り当てられ得る。
Figure 2020511947
「ＥＵ番号付けスキーム（ＥＵ ｎｕｍｂｅｒｉｎｇ ｓｃｈｅｍｅ）」とは、抗体重鎖定常領域（例えば、Ｋａｂａｔら，前出に報告されるとおり）中の残基に言及する場合に一般に使用される。別段述べられなければ、そのＥＵ番号付けスキームは、本明細書で記載される抗体重鎖定常領域における残基に言及するために使用される。
「抗体フラグメント」または「抗原結合フラグメント」は、無傷の抗体の一部（例えば、無傷の抗体の抗原結合領域または可変領域）を含む。抗体フラグメントとしては、例えば、Ｆｖフラグメント、Ｆａｂフラグメント、Ｆ（ａｂ’）２フラグメント、Ｆａｂ’フラグメント、ｓｃＦｖ（ｓＦｖ）フラグメント、およびｓｃＦｖ−Ｆｃフラグメントが挙げられる。
「Ｆｖ」フラグメントは、１個の重鎖可変ドメインおよび１個の軽鎖可変ドメインの非共有結合的に連結されたダイマーを含む。
「Ｆａｂ」フラグメントは、重鎖および軽鎖可変ドメインに加えて、軽鎖の定常ドメインおよび重鎖の第１の定常ドメイン（ＣＨ１）を含む。Ｆａｂフラグメントは、例えば、組換え法によってまたは全長抗体のパパイン消化によって生成され得る。
「Ｆ（ａｂ’）２」フラグメントは、ヒンジ領域近辺で、ジスルフィド結合によって接続された２個のＦａｂ’フラグメントを含む。Ｆ（ａｂ’）２フラグメントは、例えば、組換え法によって、または無傷の抗体のペプシン消化によって生成され得る。そのＦ（ａｂ’）フラグメントは、例えば、β−メルカプトエタノールでの処理によって解離され得る。
「１本鎖Ｆｖ（ｓｉｎｇｌｅ−ｃｈａｉｎ Ｆｖ）」または「ｓＦｖ」または「ｓｃＦｖ」抗体フラグメントは、単一ペプチド鎖中にＶＨドメインおよびＶＬドメインを含む。そのＶＨおよびＶＬは一般に、ペプチドリンカーによって連結される。Ｐｌuｃｋｔｈｕｎ Ａ． （１９９４）を参照のこと。任意の適切なリンカーが使用され得る。いくつかの実施形態において、そのリンカーは、（ＧＧＧＧＳ）ｎ（配列番号１４０）である。いくつかの実施形態において、ｎ＝１、２、３、４、５、または６である。Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ｆｒｏｍ Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ． Ｉｎ Ｒｏｓｅｎｂｅｒｇ Ｍ． ＆ Ｍｏｏｒｅ Ｇ．Ｐ．（編）， Ｔｈｅ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ ｏｆ Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ｖｏｌ． １１３（ｐｐ． ２６９−３１５）． Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ， Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ（その全体において参考として援用される）を参照のこと。
「ｓｃＦｖ−Ｆｃ」フラグメントは、Ｆｃドメインに結合したｓｃＦｖを含む。例えば、Ｆｃドメインは、そのｓｃＦｖのＣ末端に結合し得る。そのＦｃドメインは、ｓｃＦｖ中の可変ドメインの配向（すなわち、ＶＨ−ＶＬまたはＶＬ−ＶＨ）に依存して、ＶＨまたはＶＬの後ろに続き得る。当該分野で公知であるかまたは本明細書で記載される任意の適切なＦｃドメインが、使用され得る。いくらかの場合には、そのＦｃドメインは、ＩｇＧ４ Ｆｃドメインを含む。
用語「単一ドメイン抗体（ｓｉｎｇｌｅ ｄｏｍａｉｎ ａｎｔｉｂｏｄｙ）」とは、抗体の１個の可変ドメインが他の可変ドメインの存在なしに抗原に特異的に結合する分子をいう。単一ドメイン抗体およびそのフラグメントは、Ａｒａｂｉ Ｇｈａｈｒｏｕｄｉら， ＦＥＢＳ Ｌｅｔｔｅｒｓ， １９９８， ４１４：５２１−５２６およびＭｕｙｌｄｅｒｍａｎｓら， Ｔｒｅｎｄｓ ｉｎ Ｂｉｏｃｈｅｍ． Ｓｃｉ．， ２００１， ２６：２３０−２４５（これらの各々がその全体において参考として援用される）に記載される。単一ドメイン抗体はまた、ｓｄＡｂまたはナノボディとしても公知である。
用語「モノクローナル抗体」とは、実質的に均質な抗体の集団に由来する抗体をいう。実質的に均質な抗体の集団は、そのモノクローナル抗体の生成の間に通常は生じ得るバリアントを除いて、実質的に類似でありかつ同じエピトープ（複数可）に結合する抗体を含む。このようなバリアントは概して、ごく微量に存在する。モノクローナル抗体は代表的には、複数の抗体から単一の抗体を選択することを含むプロセスによって得られる。例えば、その選択プロセスは、複数のクローン（例えば、ハイブリドーマクローン、ファージクローン、酵母クローン、細菌クローン、または他の組換えＤＮＡクローンのプール）からのただ１つのクローンの選択であり得る。その選択された抗体は、例えば、標的に対する親和性を改善するために（「親和性成熟」）、その抗体をヒト化するために、細胞培養物でのその生成を改善するために、および／または被験体におけるその免疫原性を低減するために、さらに変更され得る。
用語「キメラ抗体」とは、その重鎖および／または軽鎖の一部が特定の供給源または種に由来する一方で、その重鎖および／または軽鎖の残りが異なる供給源または種に由来する抗体をいう。
非ヒト抗体の「ヒト化」形態は、非ヒト抗体に由来する最小配列を含むキメラ抗体である。ヒト化抗体は一般に、ヒト抗体（レシピエント抗体）において１またはこれより多くのＣＤＲに由来する残基が非ヒト抗体（ドナー抗体）の１またはこれより多くのＣＤＲに由来する残基によって置き換えられているヒト抗体（レシピエント抗体）である。そのドナー抗体は、任意の適切な非ヒト抗体（例えば、所望の特異性、親和性、または生物学的効果を有するマウス、ラット、ウサギ、ニワトリ、または非ヒト霊長類の抗体）であり得る。場合によっては、そのレシピエント抗体の選択されたフレームワーク領域の残基が、ドナー抗体に由来するその相当するフレームワーク領域の残基によって置き換えられる。ヒト化抗体はそのレシピエント抗体またはそのドナー抗体のいずれにおいても見出されない残基を含むこともある。このような改変は、抗体機能をさらに洗練させるために行われ得る。さらなる詳細については、Ｊｏｎｅｓら， Ｎａｔｕｒｅ， １９８６， ３２１：５２２−５２５； Ｒｉｅｃｈｍａｎｎら， Ｎａｔｕｒｅ， １９８８， ３３２：３２３−３２９；およびＰｒｅｓｔａ， Ｃｕｒｒ． Ｏｐ． Ｓｔｒｕｃｔ． Ｂｉｏｌ．， １９９２， ２：５９３−５９６（これらの各々がその全体において参考として援用される）を参照のこと。
「ヒト抗体」とは、ヒトもしくはヒト細胞によって生成されるか、またはヒト抗体レパートリーもしくはヒト抗体コード配列（例えば、ヒト供給源から得られるかまたは新たにデザインされる）を利用する非ヒト供給源に由来する抗体のアミノ酸配列に相当するアミノ酸配列を有する抗体である。ヒト抗体は、ヒト化抗体を具体的に排除する。
「ＳＥＣ１０」とは、以前にベバシズマブありおよびなしでの固形腫瘍の処置に関する臨床試験における抗ＮＲＰ−１抗体を意味する。例えば、「Ａ Ｓｔｕｄｙ ｏｆ ＭＮＲＰ１６８５Ａ ｉｎ Ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ Ｌｏｃａｌｌｙ Ａｄｖａｎｃｅｄ ｏｒ Ｍｅｔａｓｔａｔｉｃ Ｓｏｌｉｄ Ｔｕｍｏｒｓ」， ｃｌｉｎｉｃａｌｔｒｉａｌｓ．ｇｏｖの識別子ＮＣＴ００７４７７３４を参照のこと。
「ＳＥＣ３」とは、配列番号１４４に示される（例えば、Ａｐｐｌｅｔｏｎら， Ｔｈｅ ＥＭＢＯ Ｊｏｕｒｎａｌ （２００７） ２６， ４９０２−４９１２にも記載される）汎抗ＮＲＰ−１抗体を意味する。
「ＭＡＢ５９９４１」とは、Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ， クローン＃７６１７０４から入手可能な抗マウスニューロピリン−１抗体を意味する。
「単離されたＡＢＰ（ｉｓｏｌａｔｅｄ ＡＢＰ）」または「単離された核酸（ｉｓｏｌａｔｅｄ ｎｕｃｌｅｉｃ ａｃｉｄ）」は、その天然の環境の構成要素から分離および／または回収されているＡＢＰまたは核酸である。その天然の環境の構成要素としては、酵素、ホルモン、および他のタンパク質性または非タンパク質性の物質が挙げられ得る。いくつかの実施形態において、単離されたＡＢＰは、例えば、スピニングカップシークエネーター（ｓｐｉｎｎｉｎｇ ｃｕｐ ｓｅｑｕｅｎａｔｏｒ）を使用することによって、Ｎ末端または内部のアミノ酸配列のうちの少なくとも１５残基を得るために十分な程度まで精製される。いくつかの実施形態において、単離されたＡＢＰは、還元条件または非還元条件下でゲル電気泳動（例えば、ＳＤＳ−ＰＡＧＥ）によって、クーマシー（登録商標）ブルー染色または銀染色による検出を用いて、均質になるまで精製される。いくつかの実施形態において、単離されたＡＢＰは、そのＡＢＰの天然の環境の少なくとも１つの構成要素が存在しないので、組換え細胞内にインサイチュでＡＢＰを含み得る。いくつかの局面において、単離されたＡＢＰまたは単離された核酸は、少なくとも１つの精製工程によって調製される。いくつかの実施形態において、単離されたＡＢＰまたは単離された核酸は、少なくとも８０重量％、８５重量％、９０重量％、９５重量％、または９９重量％へと精製される。いくつかの実施形態において、単離されたＡＢＰまたは単離された核酸は、少なくとも８０容積％、８５容積％、９０容積％、９５容積％、または９９容積％へと精製される。いくつかの実施形態において、単離されたＡＢＰまたは単離された核酸は、重量で少なくとも８５％、９０％、９５％、９８％、９９％〜１００％のＡＢＰまたは核酸を含む溶液として提供される。いくつかの実施形態において、単離されたＡＢＰまたは単離された核酸は、容積で少なくとも８５％、９０％、９５％、９８％、９９％〜１００％のＡＢＰまたは核酸を含む溶液として提供される。
「親和性（ａｆｆｉｎｉｔｙ）」とは、分子（例えば、ＡＢＰ）の単一の結合部位とその結合パートナー（例えば、抗原またはエピトープ）との間の非共有結合的相互作用の合計の強さをいう。別段示されなければ、本明細書で使用される場合、「親和性」は、本質的な結合親和性であって、結合対（例えば、ＡＢＰおよび抗原またはエピトープ）のメンバー間の１：１の相互作用を反映するものをいう。分子Ｘの、そのパートナーＹに対する親和性は、解離平衡定数（ＫＤ）によって表され得る。その解離平衡定数に寄与する動力学的構成要素は、以下でより詳細に記載される。親和性は、当該分野で公知の一般的方法（本明細書で記載されるもの（例えば、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）技術（例えば、ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標））またはバイオレイヤー干渉法（例えば、ＦＯＲＴＥＢＩＯ（登録商標）））が挙げられる）によって測定され得る。
標的分子へのＡＢＰの結合に関して、特定の抗原（例えば、ポリペプチド標的）または特定の抗原上のエピトープに、用語「結合する」、「特異的結合」、「に特異的に結合する」、「に対して特異的」、「選択的に結合する」および「に対して選択的」とは、非特異的または非選択的な相互作用（例えば、非標的分子との）とは、測定可能に異なる結合を意味する。特異的結合は、例えば、標的分子への結合を測定し、これと非標的分子への結合とを比較することによって測定され得る。特異的結合はまた、その標的分子上で認識されるエピトープを模倣するコントロール分子との競合によって決定され得る。その場合、特異的結合は、その標的分子へのＡＢＰの結合がそのコントロール分子によって競合的に阻害される場合に示される。いくつかの局面において、非標的分子に対するＮＲＰ−１ ＡＢＰの親和性は、ＮＲＰ−１に対する親和性の約５０％未満である。いくつかの局面において、非標的分子に対するＮＲＰ−１ ＡＢＰの親和性は、ＮＲＰ−１に対する親和性の約４０％未満である。いくつかの局面において、非標的分子に対するＮＲＰ−１ ＡＢＰの親和性は、ＮＲＰ−１に対する親和性の約３０％未満である。いくつかの局面において、非標的分子に対するＮＲＰ−１ ＡＢＰの親和性は、ＮＲＰ−１に対する親和性の約２０％未満である。いくつかの局面において、非標的分子に対するＮＲＰ−１ ＡＢＰの親和性は、ＮＲＰ−１に対する親和性の約１０％未満である。いくつかの局面において、非標的分子に対するＮＲＰ−１ ＡＢＰの親和性は、ＮＲＰ−１に対する親和性の約１％未満である。いくつかの局面において、非標的分子に対するＮＲＰ−１ ＡＢＰの親和性は、ＮＲＰ−１に対する親和性の約０．１％未満である。
用語「ｋｄ」（ｓｅｃ−１）とは、本明細書で使用される場合、特定のＡＢＰ−抗原相互作用の解離速度定数をいう。その値はまた、ｋｏｆｆ値ともいわれる。
用語「ｋａ」（Ｍ−１×ｓｅｃ−１）とは、本明細書で使用される場合、特定のＡＢＰ−抗原相互作用の会合速度定数をいう。この値は、ｋｏｎ値ともいわれる。
用語「ＫＤ」（Ｍ）とは、本明細書で使用される場合、特定のＡＢＰ−抗原相互作用の解離平衡定数をいう。ＫＤ＝ｋｄ／ｋａ。いくつかの実施形態において、ＡＢＰの親和性は、このようなＡＢＰとその抗原との間の相互作用に関するＫＤの点から記載される。明確性のために、当該分野で公知のように、ＫＤ値が小さいほど、より高い親和性相互作用が示されると同時に、ＫＤ値が大きいほど、より低い親和性相互作用が示される。
用語「ＫＡ」（Ｍ−１）とは、本明細書で使用される場合、特定のＡＢＰ−抗原相互作用の会合平衡定数をいう。ＫＡ＝ｋａ／ｋｄ。
「親和性成熟された（ａｆｆｉｎｉｔｙ ｍａｔｕｒｅｄ）」ＡＢＰは、親ＡＢＰ（すなわち、変更したＡＢＰが由来するかもしくはデザインされるＡＢＰ）に対して、ＡＢＰの、その抗原に対する親和性における改善を生じる１またはこれより多くの変更（例えば、１またはこれより多くのＣＤＲまたはＦＲにおける）を有しない親ＡＢＰと比較して、変更を有するものである。いくつかの実施形態において、親和性成熟されたＡＢＰは、その標的抗原に対してナノモル濃度またはピコモル濃度の親和性を有する。親和性成熟されたＡＢＰは、当該分野で公知の種々の方法を使用して生成され得る。例えば、Ｍａｒｋｓら（Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ， １９９２， １０：７７９−７８３（その全体において参考として援用される））は、ＶＨおよびＶＬドメインシャフリングによる親和性成熟を記載する。ＣＤＲおよび／またはフレームワーク残基のランダム変異誘発は、例えば、Ｂａｒｂａｓら（Ｐｒｏｃ． Ｎａｔ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． Ｕ．Ｓ．Ａ．， １９９４， ９１：３８０９−３８１３）； Ｓｃｈｉｅｒら， Ｇｅｎｅ， １９９５， １６９：１４７−１５５； Ｙｅｌｔｏｎら， Ｊ． Ｉｍｍｕｎｏｌ．， １９９５， １５５：１９９４−２００４； Ｊａｃｋｓｏｎら， Ｊ． Ｉｍｍｕｎｏｌ．， １９９５， １５４：３３１０−３３１９９；およびＨａｗｋｉｎｓら， Ｊ． Ｍｏｌ． Ｂｉｏｌ．， １９９２， ２２６：８８９−８９６（これらの各々はその全体において参考として援用される）によって記載される。
「免疫結合体（ｉｍｍｕｎｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ）」とは、１またはこれより多くの異種分子（例えば、治療剤または診断剤）に結合体化されたＡＢＰである。
「エフェクター機能」とは、抗体のＦｃ領域によって媒介されるそれら生物学的活性であって、その活性が、抗体アイソタイプに依存して変動し得るものをいう。抗体エフェクター機能の例としては、補体依存性細胞傷害性（ＣＤＣ）を活性化するＣ１ｑ結合、抗体依存性細胞傷害性（ＡＤＣＣ）を活性化するＦｃレセプター結合、および抗体依存性細胞性ファゴサイトーシス（ＡＤＣＰ）が挙げられる。
２またはこれより多くのＡＢＰの文脈において本明細書で使用される場合、用語「と競合する（ｃｏｍｐｅｔｅｓ ｗｉｔｈ）」または「と交差競合する（ｃｒｏｓｓ−ｃｏｍｐｅｔｅｓ ｗｉｔｈ）」とは、その２またはこれより多くのＡＢＰが、抗原（例えば、ＮＲＰ−１）への結合に関して競合することを示す。１つの例示的アッセイでは、ＮＲＰ−１は、表面に被覆され、第１のＮＲＰ−１ ＡＢＰと接触され、その後に、第２のＮＲＰ−１ ＡＢＰが添加される。別の例示的アッセイでは、第１のＮＲＰ−１ ＡＢＰは、表面に被覆され、ＮＲＰ−１と接触され、次いで、第２のＮＲＰ−１ ＡＢＰが添加される。その第１のＮＲＰ−１ ＡＢＰの存在が、いずれのアッセイにおいてもその第２のＮＲＰ−１ ＡＢＰの結合を低減する場合、それらＡＢＰは互いと競合する。用語「と競合する」はまた、一方のＡＢＰがもう一方のＡＢＰの結合を低減するが、これらＡＢＰが逆の順序で添加される場合には競合が観察されないＡＢＰの組み合わせを含む。しかし、いくつかの実施形態において、その第１のおよび第２のＡＢＰは、これらの添加される順序に関係なく、互いの結合を阻害する。いくつかの実施形態において、一方のＡＢＰは、その抗原へのもう一方のＡＢＰの結合を、少なくとも２５％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％または少なくとも９５％低減する。当業者は、ＮＲＰ−１に対するそのＡＢＰの親和性およびそのＡＢＰの結合価に基づいて、その競合アッセイにおいて使用される抗体の濃度を選択し得る。この定義に記載されるアッセイは例証であり、当業者は、抗体が互いと競合するか否かを決定するために、任意の適切なアッセイを利用し得る。適切なアッセイは、例えば、Ｃｏｘら，「Ｉｍｍｕｎｏａｓｓａｙ Ｍｅｔｈｏｄｓ」， ｉｎ Ａｓｓａｙ Ｇｕｉｄａｎｃｅ Ｍａｎｕａｌ ［インターネット］、２０１４年１２月２４日に更新（ｗｗｗ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／ｂｏｏｋｓ／ＮＢＫ９２４３４／；２０１５年９月２９日にアクセスした）；Ｓｉｌｍａｎら， Ｃｙｔｏｍｅｔｒｙ， ２００１， ４４：３０−３７；およびＦｉｎｃｏら， Ｊ． Ｐｈａｒｍ． Ｂｉｏｍｅｄ． Ａｎａｌ．， ２０１１， ５４：３５１−３５８（これらの各々は、その全体において参考として援用される）に記載される。
用語「エピトープ」とは、ＡＢＰに特異的に結合する抗原の一部を意味する。エピトープは、頻繁には、表面にアクセス可能なアミノ酸残基および／または糖側鎖からなり、特定の三次元構造的特性ならびに特定の電荷特性を有し得る。立体配座エピトープおよび非立体配座エピトープは、前者（後者ではない）への結合が、変性溶媒の存在下で失われ得るという点で区別される。エピトープは、結合に直接関与するアミノ酸残基、およびその結合には直接関与しない他のアミノ酸残基を含み得る。ＡＢＰが結合するエピトープは、エピトープ決定のための公知の技術（例えば、異なる点変異を有するＮＲＰ−１バリアントへの、またはキメラＮＲＰ−１バリアントへのＡＢＰ結合を試験することなど）を使用して決定され得る。
ポリペプチド配列と参照配列との間のパーセント「同一性」は、それら配列を整列させ、必要であればギャップを導入して、最大のパーセント配列同一性を達成した後に、その参照配列中のアミノ酸残基と同一であるそのポリペプチド配列中のアミノ酸残基のパーセンテージとして定義される。パーセントアミノ酸配列同一性を決定する目的でのアラインメントは、当該分野の技術範囲内である種々の方法において（例えば、公に入手可能なコンピューターソフトウェア（例えば、ＢＬＡＳＴ、ＢＬＡＳＴ−２、ＡＬＩＧＮ、ＭＥＧＡＬＩＧＮ（ＤＮＡＳＴＡＲ）、ＣＬＵＳＴＡＬＷ、ＣＬＵＳＴＡＬ ＯＭＥＧＡ、またはＭＵＳＣＬＥソフトウェア）を使用して）達成され得る。当業者は、比較されている配列の全長に対して最大のアラインメントを達成するために必要とされる任意のアルゴリズムを含む、配列をアラインするために適したパラメーターを決定し得る。
「保存的置換」または「保存的アミノ酸置換」とは、あるアミノ酸を化学的にまたは機能的に類似のアミノ酸で置換することをいう。類似のアミノ酸を提供する保存的置換表は、当該分野で周知である。例示によれば、表２〜４に提供されるアミノ酸の群は、いくつかの実施形態において、互いに対して保存的置換と見做される。
Figure 2020511947
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さらなる保存的置換は、例えば、Ｃｒｅｉｇｈｔｏｎ， Ｐｒｏｔｅｉｎｓ： Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅｓ ａｎｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ 第２版．（１９９３） Ｗ． Ｈ． Ｆｒｅｅｍａｎ ＆ Ｃｏ．， Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ， ＮＹにおいて見出され得る。親ＡＢＰにおいてアミノ酸残基の１またはこれより多くの保存的置換を作製することによって生成されるＡＢＰは、「保存的に改変されたバリアント」といわれる。
用語「アミノ酸」とは、２０個の一般的な天然に存在するアミノ酸をいう。天然に存在するアミノ酸としては、アラニン（Ａｌａ；Ａ）、アルギニン（Ａｒｇ；Ｒ）、アスパラギン（Ａｓｎ；Ｎ）、アスパラギン酸（Ａｓｐ；Ｄ）、システイン（Ｃｙｓ；Ｃ）；グルタミン酸（Ｇｌｕ；Ｅ）、グルタミン（Ｇｌｎ；Ｑ）、グリシン（Ｇｌｙ；Ｇ）；ヒスチジン（Ｈｉｓ；Ｈ）、イソロイシン（Ｉｌｅ；Ｉ）、ロイシン（Ｌｅｕ；Ｌ）、リジン（Ｌｙｓ；Ｋ）、メチオニン（Ｍｅｔ；Ｍ）、フェニルアラニン（Ｐｈｅ；Ｆ）、プロリン（Ｐｒｏ；Ｐ）、セリン（Ｓｅｒ；Ｓ）、スレオニン（Ｔｈｒ；Ｔ）、トリプトファン（Ｔｒｐ；Ｗ）、チロシン（Ｔｙｒ；Ｙ）、およびバリン（Ｖａｌ；Ｖ）が挙げられる。
用語「ベクター」とは、本明細書で使用される場合、ある核酸分子が連結される別の核酸分子を増殖し（propagating）得るその核酸分子をいう。その用語は、自己複製核酸構造としてのベクターならびにベクターが中に導入される宿主細胞のゲノムへと組み込まれるベクターを含む。ある種のベクターは、そのベクターが作動可能に連結される核酸の発現を指向し得る。このようなベクターは、本明細書で「発現ベクター」といわれる。
用語「宿主細胞（ｈｏｓｔ ｃｅｌｌ）」、「宿主細胞株（ｈｏｓｔ ｃｅｌｌ ｌｉｎｅ）」、および「宿主細胞培養物（ｈｏｓｔ ｃｅｌｌ ｃｕｌｔｕｒｅ）」とは、交換可能に使用され、外因性核酸が中に導入されている細胞、およびそのような細胞の子孫をいう。宿主細胞は、「形質転換体（ｔｒａｎｓｆｏｒｍａｎｔ）」（または「形質転換された細胞（ｔｒａｎｓｆｏｒｍｅｄ ｃｅｌｌ）」）および「トランスフェクタント（ｔｒａｎｓｆｅｃｔａｎｔ）」（または「トランスフェクトされた細胞（ｔｒａｎｓｆｅｃｔｅｄ ｃｅｌｌ）」）を含み、これらは各々、初代の形質転換されたまたはトランスフェクトされた細胞およびこれらに由来する子孫を含む。このような子孫は、核酸含有物が親細胞と完全に同一でなくてもよく、変異を含んでいてもよい。
用語「処置する（ｔｒｅａｔｉｎｇ）」（およびそのバリエーション（例えば、「処置する（ｔｒｅａｔ）」または「処置）は、疾患または状態の自然経過を変更する必要性のある被験体において疾患または状態の自然経過を変更しようとする試みにおける臨床介入をいう。処置は、予防のために、および臨床病変の過程の間の両方で行われ得る。処置の望ましい効果としては、疾患の発生または再発の防止、症状の緩和、その疾患の任意の直接的または間接的な病的結果の減少、転移の防止、疾患進行速度の減少、その疾患状態の改善または軽減、および寛解または改善された予後が挙げられる。
本明細書で使用される場合、用語「治療上有効な量」または「有効量」とは、被験体に投与された場合に、疾患または障害を処置するために有効である本明細書で提供されるＡＢＰまたは薬学的組成物の量をいう。
本明細書で使用される場合、用語「被験体（ｓｕｂｊｅｃｔ）」とは、哺乳動物被験体を意味する。例示的な被験体としては、ヒト、サル、イヌ、ネコ、マウス、ラット、ウシ、ウマ、ラクダ、ヤギ、ウサギ、およびヒツジが挙げられる。ある種の実施形態において、その被験体はヒトである。いくつかの実施形態において、その被験体は、本明細書で提供されるＡＢＰで処置され得る疾患または状態を有する。いくつかの局面において、その疾患または状態はがんである。いくつかの局面において、その疾患または状態はウイルス感染である。
用語「添付文書（package insert）」とは、治療用または診断用の製品（例えば、キット）の使用に関する適応症、使用法、投与量、投与、併用療法、禁忌および／または警告に関する情報を含む、このような治療用または診断用の製品の市販のパッケージに慣習的に含まれる指示に言及するために使用される。
用語「細胞傷害性薬剤（ｃｙｔｏｔｏｘｉｃ ａｇｅｎｔ）」とは、本明細書で使用される場合、細胞機能を阻害もしくは防止するおよび／または細胞死もしくは破壊を引き起こす物質をいう。
「化学療法剤」とは、がんの処置において有用な化合物をいう。化学療法剤としては、がんの成長を促進し得るホルモンの効果を調節、低減、遮断、または阻害するように作用する「抗ホルモン剤」または「内分泌治療剤」が挙げられる。
用語「細胞増殖抑制剤」とは、インビトロまたはインビボのいずれかで細胞の成長を停止させる化合物または組成物をいう。いくつかの実施形態において、細胞増殖抑制剤は、Ｓ期にある細胞のパーセンテージを低減する薬剤である。いくつかの実施形態において、細胞増殖抑制剤は、Ｓ期にある細胞のパーセンテージを、少なくとも約２０％、少なくとも約４０％、少なくとも約６０％、または少なくとも約８０％低減する。
用語「腫瘍（ｔｕｍｏｒ）」とは、悪性であろうが、良性であろうが、全ての新生物細胞の成長および増殖、ならびに全ての前がん性およびがん性の細胞および組織に言及する。用語「がん（ｃａｎｃｅｒ）」、「がん性（ｃａｎｃｅｒｏｕｓ）、「細胞増殖性障害（ｃｅｌｌ ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｖｅ ｄｉｓｏｒｄｅｒ）」、「増殖性障害（ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｖｅ ｄｉｓｏｒｄｅｒ）」および「腫瘍」は、本明細書で言及されるように相互に排他的ではない。用語「細胞増殖性障害」および「増殖性障害」は、ある程度の異常な細胞増殖と関連する障害をいう。いくつかの実施形態において、その細胞増殖性障害はがんである。いくつかの局面において、その腫瘍は固形腫瘍である。いくつかの局面において、その腫瘍は血液悪性腫瘍である。
用語「薬学的組成物（ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎ）」とは、その中に含まれる活性成分の生物学的活性が被験体を処置するにあたって有効であることを可能にするような形態にあり、かつその薬学的組成物において提供される量においてその被験体に許容不能に毒性であるさらなる構成要素を含まない調製物に言及する。
用語「調整する（ｍｏｄｕｌａｔｅ）」および「調整（ｍｏｄｕｌａｔｉｏｎ）」とは、記載される変数を低減もしくは阻害する、または代わりに活性化もしくは増大させることに言及する。
用語「増大させる（ｉｎｃｒｅａｓｅ）」および「活性化する（ａｃｔｉｖａｔｅ）」とは、記載される変数において１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、１００％、２倍、３倍、４倍、５倍、１０倍、２０倍、５０倍、１００倍、またはこれより多くの増大に言及する。
用語「低減する（ｒｅｄｕｃｅ）」および「阻害する（ｉｎｈｉｂｉｔ）」とは、記載される変数において１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、２倍、３倍、４倍、５倍、１０倍、２０倍、５０倍、１００倍、またはこれより多くの減少に言及する。
用語「アゴナイズする（ａｇｏｎｉｚｅ）」とは、レセプターの活性化と関連する生物学的応答を誘導する、レセプターシグナル伝達の活性化をいう。「アゴニスト（ａｇｏｎｉｓｔ）」とは、レセプターに結合しかつアゴナイズする実体である。
用語「アンタゴナイズする（ａｎｔａｇｏｎｉｚｅ）」とは、レセプターの活性化と関連する生物学的応答を阻害する、レセプターシグナル伝達の阻害をいう。「アンタゴニスト（ａｎｔａｇｏｎｉｓｔ）」とは、レセプターに結合しかつアンタゴナイズする実体である。アンタゴニストは、一実施形態において、そのレセプターへのリガンドの結合の１００％を遮断する；他の実施形態において、アンタゴニストは、そのレセプターへのリガンドの結合の１％、２％、３％、４％、５％、６％、７％、８％、９％、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％、結合を低減し得る。
用語「セマフォリン分子（ｓｅｍａｐｈｏｒｉｎ ｍｏｌｅｃｕｌｅ）」とは、ＴｒｅｇのＮＲＰ−１：セマフォリン軸のアゴニストとの関連において本明細書で使用される場合、Ｔｒｅｇ上でのＮＲＰ−１との相互作用に関与する膜貫通セマフォリン分子（例えば、Ｓｅｍａ３ａ、Ｓｅｍａ４ａ）、このような分子の種々の表面固定化およびビーズ固定化バージョン、ならびにＴｒｅｇの機能を増強するかまたは安定性を増大させるために使用され得るこのような分子のマルチマー、誘導体、変異体、アナログおよびフラグメントを包含する。このようなアゴニストセマフォリン分子の非限定的な例としては、例えば、ＮＲＰ−１を架橋する、補体を固定できないマルチマー複合体をアセンブリするＩｇＭ由来セマフォリン融合タンパク質が挙げられる。
用語「調節性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）のニューロピリン−１（ＮＲＰ−１）：セマフォリン軸（ｎｅｕｒｏｐｉｌｉｎ−１ （ＮＲＰ−１）：ｓｅｍａｐｈｏｒｉｎ ａｘｉｓ ｏｆ ａ ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ Ｔ ｃｅｌｌ （Ｔｒｅｇ））」とは、本明細書で使用される場合、セマフォリン（例えば、細胞（例えば、従来のＴ細胞のような細胞）によって発現されるセマフォリン、または組換えセマフォリン）によって開始されるシグナル伝達経路、ＮＲＰ−１の連結、およびその後の下流のシグナル伝達に言及する。
用語「エフェクターＴ細胞」とは、Ｔヘルパー（すなわち、ＣＤ４＋）細胞および細胞傷害性（すなわち、ＣＤ８＋）Ｔ細胞を含む。ＣＤ４＋エフェクターＴ細胞は、いくつかの免疫プロセス（形質細胞およびメモリーＢ細胞へのＢ細胞の成熟、ならびに細胞傷害性Ｔ細胞およびマクロファージの活性化が挙げられる）の発達に寄与する。ＣＤ８＋エフェクターＴ細胞は、ウイルス感染細胞および腫瘍細胞を破壊する。エフェクターＴ細胞に関するさらなる情報については、Ｓｅｄｅｒ ａｎｄ Ａｈｍｅｄ， Ｎａｔｕｒｅ Ｉｍｍｕｎｏｌ．， ２００３， ４：８３５−８４２（その全体において参考として援用される）を参照のこと。
用語「調節性Ｔ細胞」とは、例えば、エフェクターＴ細胞を抑制することによって、免疫寛容を調節する細胞を含む。いくつかの局面において、その調節性Ｔ細胞は、ＣＤ４＋ＣＤ２５＋Ｆｏｘｐ３＋表現型を有する。いくつかの局面において、その調節性Ｔ細胞は、ＣＤ８＋ＣＤ２５＋表現型を有する。ＮＲＰ−１を発現する調節性Ｔ細胞に関するさらなる情報については、Ｎｏｃｅｎｔｉｎｉら， Ｂｒ． Ｊ． Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．， ２０１２， １６５：２０８９−２０９９（その全体において参考として援用される）を参照のこと。
用語「樹状細胞」とは、ナイーブＴ細胞を活性化しかつＢ細胞の成長および分化を刺激し得る専門の抗原提示細胞をいう。
２．ＮＲＰ−１抗原結合タンパク質
２．１ ＮＲＰ−１結合および標的細胞
ＮＲＰ−１に特異的に結合するＡＢＰが本明細書で提供される。いくつかの局面において、そのＮＲＰ−１は、ｈＮＲＰ−１（配列番号１３０）である。いくつかの局面において、そのＮＲＰ−１は、ｃＮＲＰ−１（配列番号１３２）である。いくつかの局面において、そのＮＲＰ−１は、配列番号１３４に提供される配列を有するｍＮＲＰ−１である。いくつかの局面において、そのＮＲＰ−１は、配列番号１３５に提供される配列を有するｒＮＲＰ−１である。
いくつかの実施形態において、本明細書で提供されるＡＢＰは、ＮＲＰ−１の細胞外ドメインに特異的に結合する。
いくつかの実施形態において、本明細書で提供されるＡＢＰは、ＮＲＰ−１の細胞外ドメインおよびＰＤ−１の細胞外ドメイン、ＰＤ−Ｌ１、またはＰＤ−Ｌ２に特異的に結合する、すなわち、二重特異的抗体である。
いくつかの実施形態において、本明細書で提供されるＡＢＰは抗体である。いくつかの実施形態において、本明細書で提供されるＡＢＰは抗体フラグメントである。いくつかの実施形態において、本明細書で提供されるＡＢＰは代替の足場である。
そのＮＲＰ−１は、任意の適切な標的細胞の表面上に発現され得る。いくつかの実施形態において、その標的細胞はＴ細胞である。いくつかの実施形態において、その標的細胞はエフェクターＴ細胞である。いくつかの実施形態において、その標的細胞は調節性Ｔ細胞である。いくつかの実施形態において、その標的細胞はナチュラルキラー（ＮＫ）細胞である。いくつかの実施形態において、その標的細胞はナチュラルキラーＴ（ＮＫＴ）細胞である。いくつかの実施形態において、その標的細胞はマクロファージである。他の実施形態において、その標的細胞は樹状細胞である。一実施形態において、その樹状細胞はプラズマ細胞様樹状細胞である。
いくつかの実施形態において、そのＮＲＰ−１は、その細胞の表面上の別のレセプターと会合する。いくつかの実施形態において、そのＮＲＰ−１は、共レセプター複合体の一部である。一実施形態において、そのＮＲＰ−１は、プレキシンと会合する。いくつかの実施形態において、そのＮＲＰ−１は、ＶＥＧＦレセプターと会合する。
いくつかの実施形態において、本明細書で提供されるＡＢＰは、免疫グロブリン分子を含む。いくつかの実施形態において、本明細書で提供されるＡＢＰは、免疫グロブリン分子からなる。いくつかの実施形態において、本明細書で提供されるＡＢＰは、免疫グロブリン分子から本質的になる。いくつかの局面において、その免疫グロブリン分子は、抗体を含む。いくつかの局面において、その免疫グロブリン分子は、抗体からなる。いくつかの局面において、その免疫グロブリン分子は、抗体から本質的になる。
いくつかの実施形態において、本明細書で提供されるＡＢＰは、軽鎖を含む。いくつかの局面において、その軽鎖はカッパ軽鎖である。いくつかの局面において、その軽鎖はラムダ軽鎖である。
いくつかの実施形態において、本明細書で提供されるＡＢＰは、重鎖を含む。いくつかの局面において、その重鎖はＩｇＡである。いくつかの局面において、その重鎖はＩｇＤである。いくつかの局面において、その重鎖はＩｇＥである。いくつかの局面において、その重鎖はＩｇＧである。いくつかの局面において、その重鎖はＩｇＭである。いくつかの局面において、その重鎖はＩｇＧ１である。いくつかの局面において、その重鎖はＩｇＧ２である。いくつかの局面において、その重鎖はＩｇＧ３である。いくつかの局面において、その重鎖はＩｇＧ４である。いくつかの局面において、その重鎖はＩｇＡ１である。いくつかの局面において、その重鎖はＩｇＡ２である。
いくつかの実施形態において、本明細書で提供されるＡＢＰは抗体フラグメントを含む。いくつかの実施形態において、本明細書で提供されるＡＢＰは抗体フラグメントからなる。いくつかの実施形態において、本明細書で提供されるＡＢＰは抗体フラグメントから本質的になる。いくつかの局面において、その抗体フラグメントはＦｖフラグメントである。いくつかの局面において、その抗体フラグメントはＦａｂフラグメントである。いくつかの局面において、その抗体フラグメントはＦ（ａｂ’）２フラグメントである。いくつかの局面において、その抗体フラグメントはＦａｂ’フラグメントである。いくつかの局面において、その抗体フラグメントはｓｃＦｖ（ｓＦｖ）フラグメントである。いくつかの局面において、その抗体フラグメントはｓｃＦｖ−Ｆｃフラグメントである。いくつかの局面において、その抗体フラグメントは単一ドメイン抗体のフラグメントである。
いくつかの実施形態において、本明細書で提供される抗体フラグメントは、本明細書で提供される例証的抗体に由来する。いくつかの実施形態において、本明細書で提供される抗体フラグメントは、本明細書で提供される例証的抗体に由来せず、例えば、抗体フラグメントを得るために本明細書で提供される方法に従って新規に単離されてもよい。
いくつかの実施形態において、提供される抗体フラグメントは、ｈＮＲＰ−１に特異的に結合する。いくつかの実施形態において、本明細書で提供される抗体フラグメントは、ｃＮＲＰ−１に特異的に結合する。いくつかの実施形態において、本明細書で提供される抗体フラグメントは、ｍＮＲＰ−１に特異的に結合する。いくつかの実施形態において、本明細書で提供される抗体フラグメントは、ｈＮＲＰ−１およびｃＮＲＰ−１に特異的に結合する。いくつかの実施形態において、本明細書で提供される抗体フラグメントは、ｈＮＲＰ−１およびｍＮＲＰ−１に特異的に結合する。いくつかの実施形態において、本明細書で提供される抗体フラグメントは、ｃＮＲＰ−１およびｍＮＲＰ−１に特異的に結合する。いくつかの実施形態において、本明細書で提供される抗体フラグメントは、ｈＮＲＰ−１、ｃＮＲＰ−１およびｍＮＲＰ−１に特異的に結合する。
いくつかの実施形態において、本明細書で提供される抗体フラグメントは、本明細書で記載される１もしくはこれより多くのアッセイまたは生物学的効果によって測定される場合、ＮＲＰ−１をアンタゴナイズする能力を保持する。いくつかの実施形態において、本明細書で提供される抗体フラグメントは、本明細書で記載されるように、ＮＲＰ−１を、そのリガンドのうちの１またはこれより多くとの相互作用から防止する能力を保持する。
いくつかの実施形態において、本明細書で提供される抗体フラグメントは、ＮＲＰ−１への結合に関して、ＭＡＢ１、ＭＡＢ２、ＭＡＢ３、ＭＡＢ４、ＭＡＢ５、ＭＡＢ６、ＭＡＢ７、ＭＡＢ８、ＭＡＢ９、ＭＡＢ１０、ＭＡＢ１１、ＭＡＢ１２、ＭＡＢ１３、ＭＡＢ１４、またはＭＡＢ１５から選択される抗体（各々、本開示の付表Ａに提供されるとおり）と競合する。
いくつかの実施形態において、本明細書で提供されるＡＢＰは、細胞表面ＮＲＰ−１に対して特異的である。
いくつかの実施形態において、本明細書で提供されるＡＢＰは、膜貫通セマフォリンポリペプチドへのＮＲＰ−１結合を特異的に遮断する。
いくつかの実施形態において、本明細書で提供されるＡＢＰは、ＮＲＰ−１ポリペプチドと血管内皮細胞増殖因子（ＶＥＧＦ）ポリペプチドとの間の相互作用を遮断する。一実施形態において、そのＶＥＧＦポリペプチドはＶＥＧＦＡである。
いくつかの実施形態において、その抗ＮＲＰ−１抗体はＳＥＭＡ３結合を遮断する。
いくつかの実施形態において、その抗ＮＲＰ−１抗体は、ＳＥＭＡ４結合を遮断する。
いくつかの実施形態において、その抗体は、ＮＲＰ−１ポリペプチドとＳＥＭＡ３との間の相互作用を遮断する。
いくつかの実施形態において、その抗体は、ＮＲＰ−１ポリペプチドとＶＥＧＦとの間の相互作用を遮断する。
いくつかの実施形態において、本明細書で提供されるＡＢＰは、ヒト被験体におけるＴｒｅｇ抑制を阻害し得る。
いくつかの実施形態において、本明細書で提供されるＡＢＰは、抗原提示細胞からの抗原提示と組み合わせてエフェクターＴ細胞を共刺激する。
いくつかの実施形態において、本明細書で提供されるＡＢＰは、調節性Ｔ細胞によるエフェクターＴ細胞の抑制を阻害する。
いくつかの実施形態において、本明細書で提供されるＡＢＰは、組織中または全身循環中のエフェクターＴ細胞の数を低減する。
いくつかの実施形態において、本明細書で提供される抗体のフラグメントは、このような抗体と同じＮＲＰ−１のエピトープに結合する。
いくつかの実施形態において、本明細書で提供されるＡＢＰは、モノクローナル抗体である。いくつかの実施形態において、本明細書で提供されるＡＢＰは、ポリクローナル抗体である。
いくつかの実施形態において、本明細書で提供されるＡＢＰはキメラ抗体を含む。いくつかの実施形態において、本明細書で提供されるＡＢＰはキメラ抗体からなる。いくつかの実施形態において、本明細書で提供されるＡＢＰはキメラ抗体から本質的になる。いくつかの実施形態において、本明細書で提供されるＡＢＰはヒト化抗体を含む。いくつかの実施形態において、本明細書で提供されるＡＢＰはヒト化抗体からなる。いくつかの実施形態において、本明細書で提供されるＡＢＰはヒト化抗体から本質的になる。いくつかの実施形態において、本明細書で提供されるＡＢＰはヒト抗体を含む。いくつかの実施形態において、本明細書で提供されるＡＢＰはヒト抗体からなる。いくつかの実施形態において、本明細書で提供されるＡＢＰはヒト抗体から本質的になる。
いくつかの実施形態において、本明細書で提供されるＡＢＰは、親和性成熟される。いくつかの局面において、親和性成熟されたＡＢＰは、本明細書で提供される例証的ＡＢＰに由来する、親和性成熟されたＡＢＰである。
いくつかの実施形態において、本明細書で提供されるＡＢＰは代替の足場を含む。いくつかの実施形態において、本明細書で提供されるＡＢＰは代替の足場からなる。いくつかの実施形態において、本明細書で提供されるＡＢＰは代替の足場から本質的になる。任意の適切な代替の足場が使用され得る。いくつかの局面において、その代替の足場は、ＡｄｎｅｃｔｉｎＴＭ、ｉＭａｂ、Ａｎｔｉｃａｌｉｎ（登録商標）、ＥＥＴＩ−ＩＩ／ＡＧＲＰ、Ｋｕｎｉｔｚドメイン、チオレドキシンペプチドアプタマー、Ａｆｆｉｂｏｄｙ（登録商標）、ＤＡＲＰｉｎ、Ａｆｆｉｌｉｎ、Ｔｅｔｒａｎｅｃｔｉｎ、Ｆｙｎｏｍｅｒ、およびＡｖｉｍｅｒから選択される。
いくつかの実施形態において、本明細書で提供されるＡＢＰは、膜貫通セマフォリンポリペプチドへのＮＲＰ−１の結合を特異的に遮断する。いくつかの局面において、そのＡＢＰは、膜貫通セマフォリンポリペプチドへのＮＲＰ−１の結合を、少なくとも約５０％阻害する。いくつかの局面において、そのＡＢＰは、膜貫通セマフォリンポリペプチドへのＮＲＰ−１の結合を、少なくとも約７５％阻害する。いくつかの局面において、そのＡＢＰは、膜貫通セマフォリンポリペプチドへのＮＲＰ−１の結合を、少なくとも約９０％阻害する。いくつかの局面において、そのＡＢＰは、膜貫通セマフォリンポリペプチドへのＮＲＰ−１の結合を、少なくとも約９５％阻害する。いくつかの実施形態において、そのセマフォリンポリペプチドは、ＳＥＭＡ３ポリペプチドである。他の実施形態において、そのセマフォリンポリペプチドは、ＳＥＭＡ４ポリペプチドである。
いくつかの実施形態において、本発明のＡＢＰは、本明細書で提供される例証的ＡＢＰと競合するＡＢＰである。いくつかの局面において、本明細書で提供される例証的ＡＢＰと競合するＡＢＰは、本明細書で提供される例証的ＡＢＰと同じエピトープに結合する。
抗体が細胞において発現される場合に、その抗体が翻訳後に修飾されることは、公知である。その翻訳後修飾の例としては、カルボキシペプチダーゼによる重鎖のＣ末端でのリジンの切断；ピログルタミル化によるピログルタミン酸への重鎖および軽鎖のＮ末端でのグルタミンまたはグルタミン酸の改変；グリコシル化；酸化；脱アミド化；および糖化が挙げられ、このような翻訳後修飾が種々の抗体で起こることは、公知である（Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ， ２００８， Ｖｏｌ． ９７， ｐ． ２４２６−２４４７（その全体において参考として援用される）を参照のこと）。いくつかの実施形態において、本発明のＡＢＰは、翻訳後修飾を受けた抗体またはその抗原結合フラグメントである。翻訳後修飾を受けた抗体またはその抗原結合フラグメントの例としては、重鎖可変領域のＮ末端においてピログルタミル化、軽鎖可変領域のＮ末端においてピログルタミル化および／または重鎖のＣ末端においてリジンの欠失を受けた抗体またはその抗原結合フラグメントが挙げられる。Ｎ末端でのピログルタミル化およびＣ末端でのリジンの欠失に起因するこのような翻訳後修飾が、その抗体またはそのフラグメントの活性に何ら影響を及ぼさないことは、当該分野で公知である（Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ， ２００６， Ｖｏｌ． ３４８， ｐ． ２４−３９（その全体において参考として援用される））。
いくつかの実施形態において、本発明のＡＢＰは、配列番号４７からなるＣＤＲ−Ｈ３、配列番号３０からなるＣＤＲ−Ｈ２、および配列番号１４からなるＣＤＲ−Ｈ１を含む重鎖可変領域；ならびに配列番号８１からなるＣＤＲ−Ｌ３、配列番号７１からなるＣＤＲ−Ｌ２、および配列番号６３からなるＣＤＲ−Ｌ１を含む軽鎖可変領域を含む、抗ヒトＮＲＰ−１抗体またはその抗原結合フラグメントである。
一実施形態において、その抗ヒトＮＲＰ−１抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号９６からなる重鎖可変領域および配列番号１０４からなる軽鎖可変領域を含む。
一実施形態において、その抗ヒトＮＲＰ−１抗体またはその抗原結合フラグメントは、アミノ酸番号１のＥがピログルタミン酸に改変される配列番号９６からなる重鎖可変領域、および配列番号１０４からなる軽鎖可変領域を含む。
一実施形態において、その抗ヒトＮＲＰ−１抗体は、配列番号１１８からなる重鎖および配列番号１２６からなる軽鎖を含む。
一実施形態において、その抗ヒトＮＲＰ−１抗体は、アミノ酸番号１のＥがピログルタミン酸に改変される配列番号１１８からなる重鎖、および配列番号１２６からなる軽鎖を含む。
一実施形態において、上記抗ヒトＮＲＰ−１抗体は、配列番号１１８のアミノ酸番号１〜４５３のアミノ酸配列からなる重鎖、および配列番号１２６からなる軽鎖を含む。
一実施形態において、その抗ヒトＮＲＰ−１抗体は、アミノ酸番号１のＥがピログルタミン酸に改変される配列番号１１８のアミノ酸番号１〜４５３のアミノ酸配列からなる重鎖、および配列番号１２６からなる軽鎖を含む。
２．２ ＮＲＰ−１アンタゴニズム
いくつかの実施形態において、本明細書で提供されるＡＢＰは、結合の際にＮＲＰ−１をアンタゴナイズする。
いくつかの実施形態において、本明細書で提供されるＡＢＰによるＮＲＰ−１のアンタゴニズムは、エフェクターＴ細胞の活性化を生じる。いくつかの局面において、そのエフェクターＴ細胞はＣＤ８＋ Ｔ細胞である。いくつかの局面において、そのエフェクターＴ細胞はＣＤ４＋ Ｔ細胞である。
いくつかの実施形態において、本明細書で提供されるＡＢＰによるＮＲＰ−１のアンタゴニズムは、ＮＫ細胞の活性化を生じる。いくつかの実施形態において、本明細書で提供されるＡＢＰによるＮＲＰ−１のアンタゴニズムは、ＮＫＴ細胞の活性化を生じる。いくつかの実施形態において、そのＮＫＴ細胞は、ＩＬ−１７分泌細胞である。
いくつかの実施形態において、本明細書で提供されるＡＢＰによるＮＲＰ−１のアンタゴニズムは、エフェクターＴ細胞に向かう調節性Ｔ細胞の阻害活性の低減を生じる。
いくつかの実施形態において、本明細書で提供されるＡＢＰによるＮＲＰ−１のアンタゴニズムは、標的細胞による、ＩＬ−２、ＩＬ−６、ＧＭ−ＣＳＦ、ＴＮＦ、ＬＴ−α、および／またはＩＦＮ−γの増大した分泌を生じる。
いくつかの実施形態において、本明細書で提供されるＡＢＰによるＮＲＰ−１のアンタゴニズムは、エフェクターＴ細胞の増殖、生存、および／または機能を増大させる。いくつかの局面において、そのエフェクターＴ細胞はＣＤ４＋ エフェクターＴ細胞である。いくつかの局面において、そのエフェクターＴ細胞はＣＤ８＋ エフェクターＴ細胞である。
いくつかの実施形態において、本明細書で提供されるＡＢＰによるＮＲＰ−１のアンタゴニズムは、調節性Ｔ細胞によるエフェクターＴ細胞の抑制を抑止する。いくつかの局面において、その調節性Ｔ細胞はＣＤ４＋ＣＤ２５＋Ｆｏｘｐ３＋ 調節性Ｔ細胞である。いくつかの局面において、その調節性Ｔ細胞はＣＤ８＋ＣＤ２５＋ 調節性Ｔ細胞である。
いくつかの実施形態において、本明細書で提供されるＡＢＰによるＮＲＰ−１のアンタゴニズムは、免疫応答の増強を生じる。
いくつかの実施形態において、本明細書で提供されるＡＢＰによるＮＲＰ−１のアンタゴニズムは、腫瘍の防止を生じる。いくつかの実施形態において、本明細書で提供されるＡＢＰによるＮＲＰ−１のアンタゴニズムは、腫瘍の発生の遅延を生じる。いくつかの実施形態において、本明細書で提供されるＡＢＰによるＮＲＰ−１のアンタゴニズムは、腫瘍のサイズの縮小を生じる。いくつかの実施形態において、本明細書で提供されるＡＢＰによるＮＲＰ−１のアンタゴニズムは、腫瘍の排除を生じる。いくつかの実施形態において、本明細書で提供されるＡＢＰによるＮＲＰ−１のアンタゴニズムは、転移の数の低減を生じる。
いくつかの実施形態において、本明細書で提供されるＡＢＰによるＮＲＰ−１のアンタゴニズムは、ウイルス疾患の防止を生じる。いくつかの実施形態において、本明細書で提供されるＡＢＰによるＮＲＰ−１のアンタゴニズムは、ウイルス疾患の発生の遅延を生じる。いくつかの実施形態において、本明細書で提供されるＡＢＰによるＮＲＰ−１のアンタゴニズムは、被験体におけるウイルス負荷の低減を生じる。いくつかの実施形態において、本明細書で提供されるＡＢＰによるＮＲＰ−１のアンタゴニズムは、ウイルス感染の排除を生じる。
２．３ ＮＲＰ−１に対する抗原結合タンパク質の親和性および動態；効力
いくつかの実施形態において、ＫＤによって示されるとおりのＮＰＲ−１に対する本明細書で提供されるＡＢＰの親和性は、約１０−５Ｍ未満、約１０−６Ｍ未満、約１０−７Ｍ未満、約１０−８Ｍ未満、約１０−９Ｍ未満、約１０−１０Ｍ未満、約１０−１１Ｍ未満、または約１０−１２Ｍ未満である。いくつかの実施形態において、そのＡＢＰの親和性は、約１０−７Ｍ〜１０−１２Ｍの間である。いくつかの実施形態において、そのＡＢＰの親和性は、約１０−７Ｍ〜１０−１１Ｍの間である。いくつかの実施形態において、そのＡＢＰの親和性は、約１０−７Ｍ〜１０−１０Ｍの間である。いくつかの実施形態において、そのＡＢＰの親和性は、約１０−７Ｍ〜１０−９Ｍの間である。いくつかの実施形態において、そのＡＢＰの親和性は、約１０−７Ｍ〜１０−８Ｍの間である。いくつかの実施形態において、そのＡＢＰの親和性は、約１０−８Ｍ〜１０−１２Ｍの間である。いくつかの実施形態において、そのＡＢＰの親和性は、約１０−８Ｍ〜１０−１１Ｍの間である。いくつかの実施形態において、そのＡＢＰの親和性は、約１０−９Ｍ〜１０−１１Ｍの間である。いくつかの実施形態において、そのＡＢＰの親和性は、約１０−１０Ｍ〜１０−１１Ｍの間である。
２．３．１ グリコシル化バリアント
ある種の実施形態において、本明細書で提供されるＡＢＰは、このＡＢＰがグリコシル化される程度を増加、減少または排除するために変更され得る。ポリペプチドのグリコシル化は代表的には、「Ｎ結合型（N-linked）」または「Ｏ結合型（O-linked）」のいずれかである。
「Ｎ結合型」グリコシル化とは、アスパラギン残基の側鎖への炭水化物部分の結合に言及する。トリペプチド配列 アスパラギン−Ｘ−セリンおよびアスパラギン−Ｘ−スレオニン（ここでＸは、プロリンを除く任意のアミノ酸である）は、アスパラギン側鎖への炭水化物部分の酵素による結合のための認識配列である。従って、ポリペプチド中にこれらのトリペプチド配列のいずれかが存在することで、潜在的グリコシル化部位が作り出される。
「Ｏ結合型」グリコシル化とは、ヒドロキシアミノ酸（最も一般的には、セリンまたはスレオニン）への糖であるＮ−アセチルガラクトサミン、ガラクトース、またはキシロースのうちの１つの結合に言及するが、５−ヒドロキシプロリンまたは５−ヒドロキシリジンも使用され得る。
本明細書で提供されるＡＢＰへのＮ結合型グリコシル化部位の付加またはそのＡＢＰからのそのグリコシル化部位の欠失は、上記のトリペプチド配列のうちの１またはこれより多くが作り出されるかまたは除去されるように、そのアミノ酸配列を変更することによって達成され得る。Ｏ結合型グリコシル化部位の付加または欠失は、１またはこれより多くのセリンまたはスレオニン残基を、ＡＢＰの配列の中にまたはそのＡＢＰへと（場合によって）付加、欠失、または置換することによって達成され得る。
いくつかの実施形態において、本明細書で提供されるＡＢＰは、天然に存在するＡＢＰとは異なるグリコシル化モチーフを含む。任意の適切な天然に存在するグリコシル化モチーフは、本明細書で提供されるＡＢＰにおいて改変され得る。免疫グロブリンの構造特性またはグリコシル化特性は、例えば、当該分野で公知であり、例えば、Ｓｃｈｒｏｅｄｅｒ ａｎｄ Ｃａｖａｃｉｎｉ， Ｊ． Ａｌｌｅｒｇｙ Ｃｌｉｎ． Ｉｍｍｕｎｏｌ．， ２０１０， １２５：Ｓ４１−５２（その全体において参考として援用される）において要約されている。
いくつかの実施形態において、本明細書で提供されるＡＢＰは、アスパラギン２９７（Ａｓｎ ２９７）に結合したオリゴサッカリドへの改変を有するＩｇＧ１ Ｆｃ領域を含む。哺乳動物細胞によって生成される天然に存在するＩｇＧ１抗体は代表的には、そのＦｃ領域のＣＨ２ドメインのＡｓｎ ２９７へのＮ結合によって概して結合した分枝状の二分岐型オリゴサッカリドを含む。Ｗｒｉｇｈｔら， ＴＩＢＴＥＣＨ， １９９７， １５：２６−３２（その全体において参考として援用される）を参照のこと。Ａｓｎ ２９７に結合したオリゴサッカリドは、種々の炭水化物（例えば、マンノース、Ｎ−アセチルグルコサミン（ＧｌｃＮＡｃ）、ガラクトース、およびシアル酸、ならびにその二分岐型オリゴサッカリド構造の「ステム（ｓｔｅｍ）」においてＧｌｃＮＡｃに結合したフコース）を含み得る。
いくつかの実施形態において、Ａｓｎ ２９７に結合したオリゴサッカリドは、変更したＡＤＣＣを有するＡＢＰを作り出すために改変される。いくつかの実施形態において、そのオリゴサッカリドは、ＡＤＣＣを改善するために変更される。いくつかの実施形態において、そのオリゴサッカリドは、ＡＤＣＣを低減するために変更される。
いくつかの局面において、本明細書で提供されるＡＢＰは、天然に存在するＩｇＧ１ドメインと比較して、Ａｓｎ ２９７位において低減したフコース含有量を有するＩｇＧ１ドメインを含む。このようなＦｃドメインは、改善されたＡＤＣＣを有することが公知である。Ｓｈｉｅｌｄｓら， Ｊ． Ｂｉｏｌ． Ｃｈｅｍ．， ２００２， ２７７：２６７３３−２６７４０（その全体において参考として援用される）を参照のこと。いくつかの局面において、このようなＡＢＰは、Ａｓｎ ２９７位においていかなるフコースも含まない。フコースの量は、例えば、ＷＯ ２００８／０７７５４６（その全体において参考として援用される）に記載されるとおり、任意の適切な方法を使用して決定され得る。
いくつかの実施形態において、本明細書で提供されるＡＢＰは、バイセクト型オリゴサッカリド（例えば、ＧｌｃＮＡｃによって二分されるＡＢＰのＦｃ領域に結合した二分岐型オリゴサッカリド）を含む。このようなＡＢＰバリアントは、低減したフコシル化および／または改善されたＡＤＣＣ機能を有し得る。このようなＡＢＰバリアントの例は、例えば、ＷＯ ２００３／０１１８７８； 米国特許第６，６０２，６８４号；および米国特許公開番号２００５／０１２３５４６（これらの各々はその全体において参考として援用される）に記載される。
本明細書で提供されるＡＢＰに組み込まれ得る他の例証的なグリコシル化バリアントは、例えば、以下に記載される：米国特許公開番号２００３／０１５７１０８、同２００４／００９３６２１、同２００３／０１５７１０８、同２００３／０１１５６１４、同２００２／０１６４３２８、同２００４／００９３６２１、同２００４／０１３２１４０、同２００４／０１１０７０４、同２００４／０１１０２８２、同２００４／０１０９８６５； 国際特許公開番号２０００／６１７３９、同２００１／２９２４６、同２００３／０８５１１９、同２００３／０８４５７０、同２００５／０３５５８６、同２００５／０３５７７８、同２００５／０５３７４２、同２００２／０３１１４０； Ｏｋａｚａｋｉら， Ｊ． Ｍｏｌ． Ｂｉｏｌ．， ２００４， ３３６：１２３９−１２４９；およびＹａｍａｎｅ−Ｏｈｎｕｋｉら， Ｂｉｏｔｅｃｈ． Ｂｉｏｅｎｇ．， ２００４， ８７： ６１４−６２２（これらの各々はその全体において参考として援用される）。
いくつかの実施形態において、本明細書で提供されるＡＢＰは、Ｆｃ領域に結合したオリゴサッカリド中に少なくとも１個のガラクトース残基を有するＦｃ領域を含む。このようなＡＢＰバリアントは、改善されたＣＤＣ機能を有し得る。このようなＡＢＰバリアントの例は、例えば、ＷＯ １９９７／３００８７； ＷＯ １９９８／５８９６４；およびＷＯ １９９９／２２７６４（これらの各々は、その全体において参考として援用される）に記載される。
脱フコシル化（ｄｅｆｕｃｏｓｙｌａｔｅｄ）ＡＢＰを生成し得る細胞株の例としては、Ｌｅｃ１３ ＣＨＯ細胞（これは、タンパク質フコシル化が欠損している）（Ｒｉｐｋａら， Ａｒｃｈ． Ｂｉｏｃｈｅｍ． Ｂｉｏｐｈｙｓ．， １９８６， ２４９：５３３−５４５； 米国特許公開番号２００３／０１５７１０８； ＷＯ ２００４／０５６３１２（これらの各々はその全体において参考として援用される）を参照のこと）、およびノックアウト細胞株（例えば、α−１，６−フコシルトランスフェラーゼ遺伝子またはＦＵＴ８をノックアウトしたＣＨＯ細胞（Ｙａｍａｎｅ−Ｏｈｎｕｋｉら， Ｂｉｏｔｅｃｈ． Ｂｉｏｅｎｇ．， ２００４， ８７： ６１４−６２２； Ｋａｎｄａら， Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ． Ｂｉｏｅｎｇ．， ２００６， ９４：６８０−６８８；およびＷＯ ２００３／０８５１０７（これらの各々はその全体において参考として援用される）を参照のこと）が挙げられる。
いくつかの実施形態において、本明細書で提供されるＡＢＰは、無グリコシル化ＡＢＰである。無グリコシル化ＡＢＰは、当該分野で公知のまたは本明細書で記載される任意の方法を使用して生成され得る。いくつかの局面において、無グリコシル化ＡＢＰは、ＡＢＰを全てのグリコシル化部位を除去するように改変することによって生成される。いくつかの局面において、そのグリコシル化部位は、ＡＢＰのＦｃ領域からのみ除去される。いくつかの局面において、無グリコシル化ＡＢＰは、グリコシル化ができない生物（例えば、Ｅ．ｃｏｌｉ）においてＡＢＰを発現させることによって、または無細胞反応混合物中でＡＢＰを発現させることによって生成される。
いくつかの実施形態において、本明細書で提供されるＡＢＰは、天然のＩｇＧ１抗体と比較して低下したエフェクター機能を有する定常領域を有する。いくつかの実施形態において、Ｆｃレセプターに対する、本明細書で提供されるＡＢＰのＦｃ領域の定常領域の親和性は、このようなＦｃレセプターに対する天然のＩｇＧ１定常領域の親和性より低い。
２．４ ＮＲＰ−１ドメイン
ＮＲＰ−１は、膜貫通形態および短縮化形態の両方を有する。その膜貫通形態は、以下のとおりである。分泌シグナルの短い範囲（ｓｔｒｅｔｃｈ）の後に、ＮＲＰ−１は、４つの異なるドメインからなる：ＣＵＢドメインの２つのリピート（ａ１／ａ２）、ＦＶ／ＶＩＩＩドメインの２つのリピート（ｂ１／ｂ２）、ＭＡＭ（ｃ）ドメイン、および膜貫通かつ比較的短い４０〜４３アミノ酸の細胞質領域を含む第４のドメイン（ｄ）。その第１のＣＵＢドメインは、補体因子Ｃ１ｓ／Ｃ１ｒ、骨形成タンパク質１（ＢＭＰ１）、およびＴｏｌｌｏｉｄタンパク質と顕著な相同性を有する。その第２のＦＶ／ＶＩＩＩドメインは、凝固因子ＦＶ／ＶＩＩＩ、レセプタータイプチロシンキナーゼＤＤＲのうちの一方、およびディスコイジン−１と相同性を共有する。その第３のドメインＭＡＭは、メプリン、Ａ５（以前の名称はＮＲＰ）、ならびにレセプタープロテイン−チロシンホスファターゼμおよびκ（ｍｅｐｒｉｎ， Ａ５ （ｆｏｒｍｅｒ ｎａｍｅ ｏｆ ＮＲＰ）， ａｎｄ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ｐｒｏｔｅｉｎ−ｔｙｒｏｓｉｎｅ ｐｈｏｓｐｈａｔａｓｅ ｍｕ ａｎｄ ｋａｐｐａ）の略称である。一実施形態において、本明細書で提供されるＡＢＰは、そのａ１ドメインに結合する。別の実施形態において、本明細書で提供されるＡＢＰは、そのａ２ドメインに結合する。別の実施形態において、本明細書で提供されるＡＢＰは、そのｂ１ドメインに結合する。別の実施形態において、本明細書で提供されるＡＢＰは、そのｂ２ドメインに結合する。一実施形態において、本明細書で提供されるＡＢＰは、１より多くのドメインに結合する。
１．１．Ｆｃ領域アミノ酸配列バリアント
ある種の実施形態において、本明細書で提供されるＡＢＰは、天然に存在するＦｃ領域と比較して、１またはこれより多くのアミノ酸置換、挿入、または欠失を有するＦｃ領域を含む。いくつかの局面において、このような置換、挿入、または欠失は、安定性、グリコシル化、または他の特徴が変更されたＡＢＰを生じる。いくつかの局面において、このような置換、挿入、または欠失は、無グリコシル化ＡＢＰを生じる。
いくつかの局面において、本明細書で提供されるＡＢＰのＦｃ領域は、Ｆｃレセプターに対して変更された親和性を有するＡＢＰ、またはより免疫学的に不活性なＡＢＰを生じるように改変される。いくつかの実施形態において、本明細書で提供されるＡＢＰバリアントは、全てではないが、いくつかのエフェクター機能を有する。このようなＡＢＰは、例えば、そのＡＢＰの半減期がインビボで重要である場合に、しかし、ある種のエフェクター機能（例えば、補体活性化およびＡＤＣＣ）が不要または有害である場合に、有用であり得る。
いくつかの実施形態において、本明細書で提供されるＡＢＰのＦｃ領域は、ヒンジ安定化変異Ｓ２２８ＰおよびＬ２３５Ｅのうちの１またはこれより多くを含むヒトＩｇＧ４ Ｆｃ領域である。Ａａｌｂｅｒｓｅら， Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ， ２００２， １０５：９−１９（その全体において参考として援用される）を参照のこと。いくつかの実施形態において、本明細書で提供されるＡＢＰのＦｃ領域は、ヒンジ安定化変異Ｓ２２８Ｐを含むヒトＩｇＧ４ Ｆｃ領域である。いくつかの実施形態において、そのＩｇＧ４ Ｆｃ領域は、以下の変異のうちの１またはこれより多くを含む： Ｅ２３３Ｐ、Ｆ２３４Ｖ、およびＬ２３５Ａ。Ａｒｍｏｕｒら， Ｍｏｌ． Ｉｍｍｕｎｏｌ．， ２００３， ４０：５８５−５９３（その全体において参考として援用される）を参照のこと。いくつかの実施形態において、そのＩｇＧ４ Ｆｃ領域は、Ｇ２３６位における欠失を含む。
いくつかの実施形態において、本明細書で提供されるＡＢＰのＦｃ領域は、Ｆｃレセプター結合を低減するために１またはこれより多くの変異を含むヒトＩｇＧ１ Ｆｃ領域である。いくつかの局面において、その１またはこれより多くの変異は、Ｓ２２８（例えば、Ｓ２２８Ａ）、Ｌ２３４（例えば、Ｌ２３４Ａ）、Ｌ２３５（例えば、Ｌ２３５Ａ）、Ｄ２６５（例えば、Ｄ２６５Ａ）、およびＮ２９７（例えば、Ｎ２９７Ａ）から選択される残基にある。いくつかの局面において、そのＡＢＰは、ＰＶＡ２３６変異を含む。ＰＶＡ２３６は、ＩｇＧ１のアミノ酸２３３〜２３６位のアミノ酸配列ＥＬＬＧまたはＩｇＧ４のＥＦＬＧが、ＰＶＡによって置き換えられることを意味する。米国特許第９，１５０，６４１号（その全体において参考として援用される）を参照のこと。
いくつかの実施形態において、本明細書で提供されるＡＢＰのＦｃ領域は、Ａｒｍｏｕｒら， Ｅｕｒ． Ｊ． Ｉｍｍｕｎｏｌ．， １９９９， ２９：２６１３−２６２４； ＷＯ １９９９／０５８５７２；および／または英国特許出願番号９８０９９５１８（これらの各々はその全体において参考として援用される）に記載されるように改変される。
いくつかの実施形態において、本明細書で提供されるＡＢＰのＦｃ領域は、変異Ａ３３０ＳおよびＰ３３１Ｓのうちの１またはこれより多くを含むヒトＩｇＧ２ Ｆｃ領域である。
いくつかの実施形態において、本明細書で提供されるＡＢＰのＦｃ領域は、２３８位、２６５位、２６９位、２７０位、２９７位、３２７位および３２９位から選択される１またはこれより多くの位置においてアミノ酸置換を有する。米国特許第６，７３７，０５６号（その全体において参考として援用される）を参照のこと。このようなＦｃ変異体は、アミノ酸２６５位、２６９位、２７０位、２９７位および３２７位のうちの２またはこれより多くにおいて置換を有するＦｃ変異体が挙げられる（残基２６５および２９７のアラニンでの置換を有する、いわゆる「ＤＡＮＡ」Ｆｃ変異体が挙げられる）。米国特許第７，３３２，５８１号（その全体において参考として援用される）を参照のこと。いくつかの実施形態において、そのＡＢＰは、アミノ酸２６５位においてアラニンを含む。いくつかの実施形態において、そのＡＢＰは、アミノ酸２９７位においてアラニンを含む。
ある種の実施形態において、本明細書で提供されるＡＢＰは、ＡＤＣＣを改善する１またはこれより多くのアミノ酸置換（例えば、Ｆｃ領域の２９８位、３３３位、および３３４位のうちの１またはこれより多くでの置換）を有するＦｃ領域を含む。いくつかの実施形態において、本明細書で提供されるＡＢＰは、Ｌａｚａｒら， Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． ＵＳＡ， ２００６，１０３：４００５−４０１０（その全体において参考として援用される）に記載されるように、２３９位、３３２位、および３３０位での１またはこれより多くのアミノ酸置換を有するＦｃ領域を含む。
いくつかの実施形態において、本明細書で提供されるＡＢＰは、Ｃ１ｑ結合および／またはＣＤＣを改善または減少させる１またはこれより多くの変更を含む。米国特許第６，１９４，５５１号； ＷＯ ９９／５１６４２；およびＩｄｕｓｏｇｉｅら， Ｊ． Ｉｍｍｕｎｏｌ．， ２０００， １６４：４１７８−４１８４（これらの各々はその全体において参考として援用される）を参照のこと。
いくつかの実施形態において、本明細書で提供されるＡＢＰは、半減期を増大させるために、１またはこれより多くの変更を含む。増大した半減期および新生Ｆｃレセプター（ＦｃＲｎ）への改善された結合を有するＡＢＰが、例えば、Ｈｉｎｔｏｎら， Ｊ． Ｉｍｍｕｎｏｌ．， ２００６， １７６：３４６−３５６；および米国特許第７，３６１，７４０号（これらの各々はその全体において参考として援用される）に記載される。このようなＦｃバリアントとしては、以下のＦｃ領域残基のうちの１またはこれより多くにおいて置換を有するものが挙げられる：ＩｇＧの２３８、２５０、２５６、２６５、２７２、２８６、３０３、３０５、３０７、３１１、３１２、３１４、３１７、３４０、３５６、３６０、３６２、３７６、３７８、３８０、３８２、４１３、４２４、４２８、および４３４。
いくつかの実施形態において、本明細書で提供されるＡＢＰは、米国特許第７，３７１，８２６号、同第５，６４８，２６０号、および同第５，６２４，８２１号；Ｄｕｎｃａｎ ａｎｄ Ｗｉｎｔｅｒ， Ｎａｔｕｒｅ， １９８８， ３２２：７３８−７４０；ならびにＷＯ ９４／２９３５１（これらの各々はその全体において参考として援用される）に記載されるとおりの１またはこれより多くのＦｃ領域バリアントを含む。
１．２．ピログルタミン酸
当該分野で公知であるように、組換えタンパク質のＮ末端におけるグルタミン酸（Ｅ）およびグルタミン（Ｑ）の両方が、自然発生的に環化して、インビトロおよびインビボでピログルタミン酸（ｐＥ）を形成し得る。Ｌｉｕら， Ｊ． Ｂｉｏｌ． Ｃｈｅｍ．， ２０１１， ２８６：１１２１１−１１２１７（その全体において参考として援用される）を参照のこと。
いくつかの実施形態において、Ｎ末端位置においてｐＥ残基を有するポリペプチド配列を含むＡＢＰが、本明細書で提供される。いくつかの実施形態において、Ｎ末端残基がＱからｐＥに変換されているポリペプチド配列を含むＡＢＰが、本明細書で提供される。いくつかの実施形態において、Ｎ末端残基がＥからｐＥに変換されているポリペプチド配列を含むＡＢＰが、本明細書で提供される。
いくつかの実施形態において、Ｎ末端位置においてｐＥ残基を有するＶＨ配列を含むＡＢＰが、本明細書で提供される。いくつかの実施形態において、Ｎ末端残基がＱからｐＥに変換されているＶＨ配列を含むＡＢＰが、本明細書で提供される。いくつかの実施形態において、Ｎ末端のＱ残基がｐＥに変換されている配列番号８５〜９０、９７〜９９から選択されるＶＨ配列を含むＡＢＰが、本明細書で提供される。いくつかの実施形態において、ＡＢＰを含む組成物が本明細書で提供され、ここで上記ＡＢＰは、配列番号８５〜９０、９７〜９９から選択されるＶＨを含み、ここでこのような組成物中のこのようなＶＨのＮ末端残基のうちの少なくとも約２０％、少なくとも約４０％、少なくとも約６０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、または少なくとも約９９％がＱからｐＥに変換されている。
いくつかの実施形態において、Ｎ末端位置においてｐＥ残基を有するＶＨ配列を含むＡＢＰが、本明細書で提供される。いくつかの実施形態において、Ｎ末端残基がＥからｐＥに変換されているＶＨ配列を含むＡＢＰが、本明細書で提供される。いくつかの実施形態において、Ｎ末端のＥ残基がｐＥに変換されている配列番号９１〜９６から選択されるＶＨ配列を含むＡＢＰが、本明細書で提供される。いくつかの実施形態において、ＡＢＰを含む組成物が本明細書で提供され、ここでそのＡＢＰは、配列番号９１〜９６から選択されるＶＨを含み、ここでこのような組成物中のこのようなＶＨのＮ末端残基のうちの少なくとも約２０％、少なくとも約４０％、少なくとも約６０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、または少なくとも約９９％がＥからｐＥに変換されている。
いくつかの実施形態において、Ｎ末端位置においてｐＥ残基を有するＶＬ配列を含むＡＢＰが、本明細書で提供される。いくつかの実施形態において、Ｎ末端残基がＥからｐＥに変換されているＶＬ配列を含むＡＢＰが、本明細書で提供される。いくつかの実施形態において、Ｎ末端のＥ残基がｐＥに変換されている配列番号１２０に示されるＶＬ配列を含むＡＢＰが、本明細書で提供される。いくつかの実施形態において、ＡＢＰを含む組成物が本明細書で提供され、ここでそのＡＢＰは、配列番号１２０に示されるＶＬを含み、ここでこのような組成物中のこのようなＶＬのＮ末端残基のうちの少なくとも約２０％、少なくとも約４０％、少なくとも約６０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、または少なくとも約９９％がＥからｐＥに変換されている。
いくつかの実施形態において、Ｎ末端位置においてｐＥ残基を有する重鎖配列を含むＡＢＰが、本明細書で提供される。いくつかの実施形態において、Ｎ末端残基がＱからｐＥに変換されている重鎖配列を含むＡＢＰが、本明細書で提供される。いくつかの実施形態において、Ｎ末端のＱ残基がｐＥに変換されている配列番号１０７〜１１２、１１９〜１２１から選択される重鎖配列を含むＡＢＰが、本明細書で提供される。いくつかの実施形態において、ＡＢＰを含む組成物が本明細書で提供され、ここでそのＡＢＰは、配列番号１０７〜１１２、１１９〜１２１から選択される重鎖を含み、ここでこのような組成物中のこのような重鎖のＮ末端残基のうちの少なくとも約２０％、少なくとも約４０％、少なくとも約６０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、または少なくとも約９９％がＱからｐＥに変換されている。
いくつかの実施形態において、Ｎ末端位置においてｐＥ残基を有する重鎖配列を含むＡＢＰが、本明細書で提供される。いくつかの実施形態において、Ｎ末端残基がＥからｐＥに変換されている重鎖配列を含むＡＢＰが、本明細書で提供される。いくつかの実施形態において、Ｎ末端のＥ残基がｐＥに変換されている配列番号１１３〜１１８から選択される重鎖配列を含むＡＢＰが、本明細書で提供される。いくつかの実施形態において、ＡＢＰを含む組成物が本明細書で提供され、ここでそのＡＢＰは、配列番号１１３〜１１８から選択される重鎖を含み、ここでこのような組成物中のこのような重鎖のＮ末端残基のうちの少なくとも約２０％、少なくとも約４０％、少なくとも約６０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、または少なくとも約９９％がＥからｐＥに変換されている。
いくつかの実施形態において、Ｎ末端位置においてｐＥ残基を有する軽鎖配列を含むＡＢＰが、本明細書で提供される。いくつかの実施形態において、Ｎ末端残基がＥからｐＥに変換されている軽鎖配列を含むＡＢＰが、本明細書で提供される。いくつかの実施形態において、Ｎ末端のＥ残基がｐＥに変換されている配列番号１２４〜１２５から選択されるκ軽鎖配列を含むＡＢＰが、本明細書で提供される。いくつかの実施形態において、ＡＢＰを含む組成物が本明細書で提供され、ここでそのＡＢＰは、配列番号１２４〜１２５から選択されるκ軽鎖を含み、ここでこのような組成物中のこのような軽鎖のＮ末端残基のうちの少なくとも約２０％、少なくとも約４０％、少なくとも約６０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、または少なくとも約９９％がＥからｐＥに変換されている。
１．３．システイン操作された抗原結合タンパク質バリアント
ある種の実施形態において、システイン操作されたＡＢＰ（「ｔｈｉｏＭＡｂ」としても公知）が本明細書で提供され、そのＡＢＰにおいて、そのＡＢＰのうちの１またはこれより多くの残基が、システイン残基で置換されている。特定の実施形態において、その置換された残基は、そのＡＢＰの溶媒アクセス可能な部位で起こる。このような残基をシステインで置換することによって、反応性チオール基が、そのＡＢＰの溶媒アクセス可能な部位において導入され、そのＡＢＰが他の部分（例えば、薬物部分またはリンカー−薬物部分）へと結合体化するために、例えば、免疫結合体を作り出すために、使用され得る。
ある種の実施形態において、以下の残基のうちのいずれか１またはこれより多くが、システインで置換され得る：軽鎖のＶ２０５；重鎖Ｆｃ領域のＡ１１８；および重鎖Ｆｃ領域のＳ４００。システイン操作されたＡＢＰは、例えば、米国特許第７，５２１，５４１号（これはその全体において参考として援用される）に記載されるように生成され得る。
２．ＮＲＰ−１抗原結合タンパク質を作製するための方法
２．１．ＮＲＰ−１抗原調製
本明細書で提供されるＡＢＰの単離のために使用されるＮＲＰ−１抗原は、無傷のＮＲＰ−１またはＮＲＰ−１のフラグメントであり得る。そのＮＲＰ−１抗原は、例えば、単離されたタンパク質または細胞の表面上に発現されたタンパク質の形態にあり得る。
いくつかの実施形態において、そのＮＲＰ−１抗原は、ＮＲＰ−１の天然に存在しないバリアント（例えば、天然に存在しないアミノ酸配列または翻訳後修飾を有するＮＲＰ−１タンパク質）である。
いくつかの実施形態において、そのＮＲＰ−１抗原は、例えば、細胞内または膜貫通配列、またはシグナル配列の除去によって短縮される。いくつかの実施形態において、そのＮＲＰ−１抗原は、そのＣ末端において、ヒトＩｇＧ１ Ｆｃドメインまたはポリヒスチジンタグに融合される。
２．２．モノクローナル抗体を作製するための方法
モノクローナル抗体は、例えば、Ｋｏｈｌｅｒら， Ｎａｔｕｒｅ， １９７５， ２５６：４９５−４９７（その全体において参考として援用される）によって最初に記載されたハイブリドーマ法を使用して、および／または組換えＤＮＡ法（例えば、米国特許第４，８１６，５６７（その全体において参考として援用される）を参照のこと）によって、得られ得る。モノクローナル抗体はまた、例えば、ファージまたは酵母ベースのライブラリーを使用して得られ得る。例えば、米国特許第８，２５８，０８２号および同第８，６９１，７３０号（これらの各々がその全体において参考として援用される）を参照のこと。
ハイブリドーマ法では、マウスまたは他の適切な宿主動物が、免疫するために使用されるタンパク質に特異的に結合する抗体を生成するかまたは生成し得るリンパ球を誘発するために免疫される。あるいは、リンパ球は、インビトロで免疫され得る。次いで、リンパ球は、適切な融合剤（例えば、ポリエチレングリコール）を使用して骨髄腫細胞と融合して、ハイブリドーマ細胞を形成する。Ｇｏｄｉｎｇ Ｊ．Ｗ．， Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ： Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ 第３版．（１９８６） Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ， Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ， ＣＡ（その全体において参考として援用される）を参照のこと。
そのハイブリドーマ細胞を、その融合させていない親の骨髄腫細胞の成長または生存を阻害する１またはこれより多くの物質を含む適切な培養培地中に播種し成長させる。例えば、その親の骨髄腫細胞が、酵素ヒポキサンチングアニンホスホリボシルトランスフェラーゼ（ＨＧＰＲＴまたはＨＰＲＴ）を欠いている場合、そのハイブリドーマ用の培養培地は代表的には、ヒポキサンチン、アミノプテリン、およびチミジンを含み（ＨＡＴ培地）、これらの物質は、ＨＧＰＲＴ欠損性細胞の成長を防止する。
有用な骨髄腫細胞は、効率的に融合し、その選択された抗体生成細胞による抗体の安定な高レベル生成を支持し、そして鋭敏な培地条件（例えば、ＨＡＴ培地の存在または非存在）であるものである。これらの中でも、好ましい骨髄腫細胞株は、マウス骨髄腫株（例えば、ＭＯＰ−２１およびＭＣ−１１マウス腫瘍（Ｓａｌｋ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ Ｃｅｌｌ Ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ Ｃｅｎｔｅｒ（Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ， ＣＡ）から入手可能）、ならびにＳＰ−２またはＸ６３−Ａｇ８−６５３細胞（アメリカンタイプカルチャーコレクション（Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ， ＭＤ）から入手可能）に由来するもの）である。ヒト骨髄腫細胞株およびマウス−ヒトヘテロ骨髄腫細胞株はまた、ヒトモノクローナル抗体の生成に関して記載されている。例えば、Ｋｏｚｂｏｒ， Ｊ． Ｉｍｍｕｎｏｌ．， １９８４， １３３：３００１（その全体において参考として援用される）を参照のこと。
望ましい特異性、親和性、および／または生物学的活性の抗体を生成するハイブリドーマ細胞の同定の後に、選択されたクローンを、限界希釈手順によってサブクローニングし、標準的方法によって成長させ得る。Ｇｏｄｉｎｇ，前出を参照のこと。この目的に適した培養培地としては、例えば、Ｄ−ＭＥＭまたはＲＰＭＩ−１６４０培地が挙げられる。さらに、そのハイブリドーマ細胞を、動物において、腹水腫瘍としてインビボで成長させ得る。
そのモノクローナル抗体をコードするＤＮＡは、従来の手順を使用して（例えば、そのモノクローナル抗体の重鎖および軽鎖をコードする遺伝子に特異的に結合し得るオリゴヌクレオチドプローブを使用することによって）、容易に単離および配列決定し得る。従って、そのハイブリドーマ細胞は、望ましい特性を有する抗体をコードするＤＮＡの有用な供給源として働き得る。一旦単離された後、そのＤＮＡは、発現ベクターの中に配置され得、そのベクターは、次いで、そのモノクローナル抗体を生成するために、細菌（例えば、Ｅ．ｃｏｌｉ）、酵母（例えば、ＳａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓまたはＰｉｃｈｉａ ｓｐ．）、ＣＯＳ細胞、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞、または別段抗体を生成しない骨髄腫細胞のような宿主細胞へとトランスフェクトされる。
別の局面において、抗ヒトＮＲＰ−１抗体またはその抗原結合フラグメントを生成するための方法が提供され、上記方法は、以下の（ａ）〜（ｃ）からなる群より選択される宿主細胞を培養して、抗ヒトＮＲＰ−１抗体またはその抗原結合フラグメントを発現する工程を包含する：（ａ）本明細書で提供される抗ヒトＮＲＰ−１抗体またはその抗原結合フラグメントの重鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドおよび上記抗体またはその抗原結合フラグメントの軽鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドを含む発現ベクターで形質転換された宿主細胞；（ｂ）本明細書で提供される抗ヒトＮＲＰ−１抗体またはその抗原結合フラグメントの重鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドを含む発現ベクターおよび上記抗体またはその抗原結合フラグメントの軽鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドを含む発現ベクターで形質転換された宿主細胞；ならびに（ｃ）本明細書で提供される抗ヒトＮＲＰ−１抗体またはその抗原結合フラグメントの重鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドを含む発現ベクターで形質転換された宿主細胞および上記抗体またはその抗原結合フラグメントの軽鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドを含む発現ベクターで形質転換された宿主細胞。
別の局面において、抗ヒトＮＲＰ−１抗体を生成するための方法が提供され、上記方法は、以下の（ａ）〜（ｃ）からなる群より選択される宿主細胞を培養して、抗ヒトＮＲＰ−１抗体を発現する工程を包含する：（ａ）本明細書で提供される抗ヒトＮＲＰ−１抗体の重鎖をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドおよび上記抗体の軽鎖をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドを含む発現ベクターで形質転換された宿主細胞；（ｂ）本明細書で提供される抗ヒトＮＲＰ−１抗体の重鎖をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドを含む発現ベクターおよび上記抗体の軽鎖をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドを含む発現ベクターで形質転換された宿主細胞；ならびに（ｃ）本明細書で提供される抗ヒトＮＲＰ−１抗体の重鎖をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドを含む発現ベクターで形質転換された宿主細胞および上記抗体の軽鎖をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドを含む発現ベクターで形質転換された宿主細胞。
２．３．キメラ抗体を作製するための方法
キメラ抗体を作製するための例証的な方法は、例えば、米国特許第４，８１６，５６７号；およびＭｏｒｒｉｓｏｎら， Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． ＵＳＡ， １９８４， ８１：６８５１−６８５５（これらの各々はその全体において参考として援用される）に記載される。いくつかの実施形態において、キメラ抗体は、組換え技術を使用して、非ヒト可変領域（例えば、マウス、ラット、ハムスター、ウサギ、または非ヒト霊長類（例えば、サル）に由来する可変領域）とヒト定常領域とを組み合わせることによって作製される。
２．４．ヒト化抗体を作製するための方法
ヒト化抗体は、非ヒトモノクローナル抗体の構造的部分のうちの大部分、または全てを、相当するヒト抗体配列で置き換えることによって生成され得る。結論として、ハイブリッド分子が生成され、その分子において、抗原特異的可変部分のみ、またはＣＤＲが非ヒト配列から構成される。ヒト化抗体を得るための方法としては、例えば、Ｗｉｎｔｅｒ ａｎｄ Ｍｉｌｓｔｅｉｎ， Ｎａｔｕｒｅ， １９９１， ３４９：２９３−２９９； Ｒａｄｅｒら， Ｐｒｏｃ． Ｎａｔ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． Ｕ．Ｓ．Ａ．， １９９８， ９５：８９１０−８９１５； Ｓｔｅｉｎｂｅｒｇｅｒら， Ｊ． Ｂｉｏｌ． Ｃｈｅｍ．， ２０００， ２７５：３６０７３−３６０７８； Ｑｕｅｅｎら， Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． Ｕ．Ｓ．Ａ．， １９８９， ８６：１００２９−１００３３；ならびに米国特許第５，５８５，０８９号、同第５，６９３，７６１号、同第５，６９３，７６２号、および同第６，１８０，３７０号（これらの各々はその全体において参考として援用される）に記載されるものが挙げられる。
２．５．ヒト抗体を作製するための方法
ヒト抗体は、当該分野で公知の種々の技術によって、例えば、トランスジェニック動物（例えば、ヒト化マウス）を使用することによって生成され得る。例えば、Ｊａｋｏｂｏｖｉｔｓら， Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． Ｕ．Ｓ．Ａ．， １９９３， ９０：２５５１； Ｊａｋｏｂｏｖｉｔｓら， Ｎａｔｕｒｅ， １９９３， ３６２：２５５−２５８； Ｂｒｕｇｇｅｒｍａｎｎら， Ｙｅａｒ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏ．， １９９３， ７：３３；ならびに米国特許第５，５９１，６６９号、同第５，５８９，３６９号および同第５，５４５，８０７号（これらの各々はその全体において参考として援用される）を参照のこと。ヒト抗体はまた、ファージディスプレイライブラリーに由来し得る（例えば、Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍら， Ｊ． Ｍｏｌ． Ｂｉｏｌ．， １９９１， ２２７：３８１−３８８； Ｍａｒｋｓら， Ｊ． Ｍｏｌ． Ｂｉｏｌ．， １９９１， ２２２：５８１−５９７；ならびに米国特許第５，５６５，３３２号および同第５，５７３，９０５号（これらの各々はその全体において参考として援用される）を参照のこと）。ヒト抗体はまた、インビトロで活性化されたＢ細胞によって生成され得る（例えば、米国特許第５，５６７，６１０号および同第５，２２９，２７５号（これらの各々がその全体において参考として援用される）を参照のこと）。ヒト抗体はまた、酵母ベースのライブラリーに由来し得る（例えば、米国特許第８，６９１，７３０（その全体において参考として援用される）を参照のこと）。
２．６．抗体フラグメントを作製するための方法
本明細書で提供される抗体フラグメントは、任意の適切な方法（本明細書で記載される例証的な方法または当該分野で公知の方法が挙げられる）によって作製され得る。適切な方法としては、組換え技術および完全抗体のタンパク質分解性消化が挙げられる。抗体フラグメントを作製するための例証的な方法は、例えば、Ｈｕｄｓｏｎら， Ｎａｔ． Ｍｅｄ．， ２００３， ９：１２９−１３４（その全体において参考として援用される）に記載される。ｓｃＦｖ抗体を作製するための方法は、例えば、Ｐｌｕｅｃｋｔｈｕｎ， ｉｎ Ｔｈｅ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ ｏｆ Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ， ｖｏｌ． １１３， Ｒｏｓｅｎｂｕｒｇ ａｎｄ Ｍｏｏｒｅ編， Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ， Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ， ｐｐ． ２６９−３１５（１９９４）； ＷＯ ９３／１６１８５；ならびに米国特許第５，５７１，８９４号および同第５，５８７，４５８号（これらの各々はその全体において参考として援用される）に記載される。
２．７．代替の足場を作製するための方法
本明細書で提供される代替の足場は、任意の適切な方法（本明細書で記載される例証的な方法または当該分野で公知の方法が挙げられる）によって作製され得る。例えば、ＡｄｎｅｃｔｉｎＴＭを調製するための方法は、Ｅｍａｎｕｅｌら， ｍＡｂｓ， ２０１１， ３：３８−４８（その全体において参考として援用される）に記載される。ｉＭａｂを調製するための方法は、米国特許公開番号２００３／０２１５９１４（その全体において参考として援用される）に記載される。Ａｎｔｉｃａｌｉｎ（登録商標）を調製するための方法は、Ｖｏｇｔ ａｎｄ Ｓｋｅｒｒａ， Ｃｈｅｍ． Ｂｉｏｃｈｅｍ．， ２００４， ５：１９１−１９９（その全体において参考として援用される）に記載される。Ｋｕｎｉｔｚドメインを調製するための方法は、Ｗａｇｎｅｒら， Ｂｉｏｃｈｅｍ． ＆ Ｂｉｏｐｈｙｓ． Ｒｅｓ． Ｃｏｍｍ．， １９９２， １８６：１１８−１１４５（その全体において参考として援用される）に記載される。チオレドキシンペプチドアプタマーを調製するための方法は、Ｇｅｙｅｒ ａｎｄ Ｂｒｅｎｔ， Ｍｅｔｈ． Ｅｎｚｙｍｏｌ．， ２０００， ３２８：１７１−２０８（その全体において参考として援用される）において提供される。Ａｆｆｉｂｏｄｙを調製するための方法は、Ｆｅｒｎａｎｄｅｚ， Ｃｕｒｒ． Ｏｐｉｎｉｏｎ ｉｎ Ｂｉｏｔｅｃｈ．， ２００４， １５：３６４−３７３（その全体において参考として援用される）において提供される。ＤＡＲＰｉｎを調製するための方法は、Ｚａｈｎｄら， Ｊ． Ｍｏｌ． Ｂｉｏｌ．， ２００７， ３６９：１０１５−１０２８（その全体において参考として援用される）において提供される。Ａｆｆｉｌｉｎを調製するための方法は、Ｅｂｅｒｓｂａｃｈら， Ｊ． Ｍｏｌ． Ｂｉｏｌ．， ２００７， ３７２：１７２−１８５（その全体において参考として援用される）において提供される。Ｔｅｔｒａｎｅｃｔｉｎを調製するための方法は、Ｇｒａｖｅｒｓｅｎら， Ｊ． Ｂｉｏｌ． Ｃｈｅｍ．， ２０００， ２７５：３７３９０−３７３９６（その全体において参考として援用される）において提供される。Ａｖｉｍｅｒを調製するための方法は、Ｓｉｌｖｅｒｍａｎら， Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈ．， ２００５， ２３：１５５６−１５６１（その全体において参考として援用される）において提供される。Ｆｙｎｏｍｅｒを調製するための方法は、Ｓｉｌａｃｃｉら， Ｊ． Ｂｉｏｌ． Ｃｈｅｍ．， ２０１４， ２８９：１４３９２−１４３９８（その全体において参考として援用される）において提供される。
代替の足場に関するさらなる情報は、Ｂｉｎｚら， Ｎａｔ． Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．， ２００５ ２３：１２５７−１２６８；およびＳｋｅｒｒａ， Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｏｐｉｎ． ｉｎ Ｂｉｏｔｅｃｈ．， ２００７ １８：２９５−３０４（これらの各々がその全体において参考として援用される）において提供される。
２．８．バリアントを作製するための方法
いくつかの実施形態において、本明細書で提供されるＡＢＰは、親ＡＢＰの親和性成熟されたバリアントであり、これは、例えば、ファージディスプレイベースの親和性成熟化技術を使用して生成され得る。簡潔には、１またはこれより多くのＣＤＲ残基が変異され得、そのバリアントＡＢＰまたはその一部は、ファージ上にディスプレイされ得、親和性に関してスクリーニングされ得る。このような変更は、ＣＤＲ「ホットスポット（ｈｏｔｓｐｏｔ）」、もしくは体細胞成熟化プロセスの間に高頻度で変異を受けるコドンによってコードされる残基（Ｃｈｏｗｄｈｕｒｙ， Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｍｏｌ． Ｂｉｏｌ．， ２００８， ２０７：１７９−１９６（その全体において参考として援用される）を参照のこと）、および／またはその抗原と接触する残基において作製され得る。
任意の適切な方法は、ＡＢＰをコードするポリヌクレオチド配列（複数可）の中に変動性を導入するために使用され得る（エラープローンＰＣＲ、鎖シャフリング、およびオリゴヌクレオチド指向性変異誘発（例えば、トリヌクレオチド指向性変異誘発（ＴＲＩＭ））が挙げられる）。いくつかの局面において、いくつかのＣＤＲ残基（例えば、一度に４〜６残基）がランダム化される。抗原結合に関与するＣＤＲ残基は、例えば、アラニンスキャニング変異誘発またはモデリングを使用して、具体的に同定され得る。ＣＤＲ−Ｈ３およびＣＤＲ−Ｌ３は特に、変異のためにしばしば標的化される。
可変領域および／またはＣＤＲへの多様性の導入は、二次ライブラリーを生成するために使用され得る。その二次ライブラリーは、次いで、改善された親和性を有するＡＢＰバリアントを同定するためにスクリーニングされる。二次ライブラリーから構築および再選択することによる親和性成熟は、例えば、Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍら， Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ， ２００１， １７８：１−３７（その全体において参考として援用される）に記載されている。
２．９．ベクター、宿主細胞、および組換え法
ＮＲＰ−１ ＡＢＰをコードする単離された核酸、その核酸を含むベクター、ならびにそのベクターおよびその核酸を含む宿主細胞、ならびにそのＡＢＰの生成のための組換え技術がまた、提供される。
別の局面において、本明細書で提供される抗ヒトＮＲＰ−１抗体またはその抗原結合フラグメントの重鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドが提供される。別の局面において、本明細書で提供される抗ヒトＮＲＰ−１抗体またはその抗原結合フラグメントの軽鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドが提供される。
別の局面において、本明細書で提供される抗ヒトＮＲＰ−１抗体の重鎖をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドが提供される。別の局面において、本明細書で提供される抗ヒトＮＲＰ−１抗体の軽鎖をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドが提供される。
ＡＢＰの組換え生成のために、そのＡＢＰをコードする核酸（複数可）は、単離され得、さらなるクローニング（すなわち、そのＤＮＡの増幅）または発現のために、複製可能なベクターへと挿入され得る。いくつかの局面において、その核酸は、例えば、米国特許第５，２０４，２４４（その全体において参考として本明細書に援用される）に記載されるように、相同組換えによって生成され得る。
別の局面において、（ａ）本明細書で提供される抗ヒトＮＲＰ−１抗体またはその抗原結合フラグメントの重鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドおよび／または（ｂ）その抗ヒトＮＲＰ−１抗体またはその抗原結合フラグメントの軽鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドを含む発現ベクターが提供される。
別の局面において、（ａ）本明細書で提供される抗ヒトＮＲＰ−１抗体の重鎖をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドおよび／または（ｂ）その抗ヒトＮＲＰ−１抗体の軽鎖をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドを含む発現ベクターが提供される。
多くの異なるベクターは、当該分野で公知である。そのベクター構成要素は一般に、例えば、米国特許第５，５３４，６１５（その全体において参考として援用される）に記載されるように、以下のうちの１またはこれより多くを含む：シグナル配列、複製起点、１またはこれより多くのマーカー遺伝子、エンハンサーエレメント、プロモーター、および転写終結配列。
適切な宿主細胞の例証的な例は、以下に提供される。これらの宿主細胞は、限定であることを意味されず、任意の適切な宿主細胞は、本明細書で提供されるＡＢＰを生成するために使用され得る。
別の局面において、（ａ）〜（ｄ）からなる群より選択される発現ベクターで形質転換された宿主細胞が提供される：（ａ）本明細書で提供される抗ヒトＮＲＰ−１抗体またはその抗原結合フラグメントの重鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドおよびその抗体またはその抗原結合フラグメントの軽鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドを含む発現ベクターで形質転換された宿主細胞；（ｂ）本明細書で提供される抗ヒトＮＲＰ−１抗体またはその抗原結合フラグメントの重鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドを含む発現ベクターおよびその抗体またはその抗原結合フラグメントの軽鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドを含む発現ベクターで形質転換された宿主細胞；（ｃ）本明細書で提供される抗ヒトＮＲＰ−１抗体またはその抗原結合フラグメントの重鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドを含む発現ベクターで形質転換された宿主細胞；ならびに（ｄ）本明細書で提供される抗ヒトＮＲＰ−１抗体またはその抗原結合フラグメントの軽鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドを含む発現ベクターで形質転換された宿主細胞。
別の局面において、（ａ）〜（ｄ）からなる群より選択される発現ベクターで形質転換された宿主細胞が提供される：（ａ）本明細書で提供される抗ヒトＮＲＰ−１抗体の重鎖をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドおよびその抗体の軽鎖をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドを含む発現ベクターで形質転換された宿主細胞；（ｂ）本明細書で提供される抗ヒトＮＲＰ−１抗体の重鎖をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドを含む発現ベクターおよびその抗体の軽鎖をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドを含む発現ベクターで形質転換された宿主細胞；（ｃ）本明細書で提供される抗ヒトＮＲＰ−１抗体の重鎖をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドを含む発現ベクターで形質転換された宿主細胞；ならびに（ｄ）本明細書で提供される抗ヒトＮＲＰ−１抗体の軽鎖をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドを含む発現ベクターで形質転換された宿主細胞。
適切な宿主細胞は、任意の原核生物（例えば、細菌）、下等真核生物（例えば、酵母）、または高等真核生物（例えば、哺乳動物）の細胞を含む。適切な原核生物としては、ユーバクテリア（例えば、グラム陰性またはグラム陽性の生物、例えば、Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒｉａｃｅａｅ（例えば、Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ（Ｅ．ｃｏｌｉ）、Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒ、Ｅｒｗｉｎｉａ、Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ、Ｐｒｏｔｅｕｓ、Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ（Ｓ．ｔｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍ）、Ｓｅｒｒａｔｉａ（Ｓ．ｍａｒｃｅｓｃａｎｓ）、Ｓｈｉｇｅｌｌａ、Ｂａｃｉｌｌｉ（Ｂ．ｓｕｂｔｉｌｉｓおよびＢ．ｌｉｃｈｅｎｉｆｏｒｍｉｓ）、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ（Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）、およびＳｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ））が挙げられる。１つの有用なＥ．ｃｏｌｉクローニング宿主は、Ｅ．ｃｏｌｉ ２９４であるが、他の株（例えば、Ｅ．ｃｏｌｉ Ｂ、Ｅ．ｃｏｌｉ Ｘ１７７６、およびＥ．ｃｏｌｉ Ｗ３１１０）も適切である。
原核生物に加えて、真核生物微生物（例えば、糸状菌または酵母）がまた、ＮＲＰ−１ ＡＢＰコードベクターの適切なクローニング宿主または発現宿主である。Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ、または一般的なパン酵母は、一般的に使用される下等真核生物宿主微生物である。しかし、多くの他の属、種、および株が、利用可能でありかつ有用である（例えば、Ｓｃｈｉｚｏｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｐｏｍｂｅ、Ｋｌｕｙｖｅｒｏｍｙｃｅｓ（Ｋ．ｌａｃｔｉｓ、Ｋ．ｆｒａｇｉｌｉｓ、Ｋ．ｂｕｌｇａｒｉｃｕｓ、Ｋ．ｗｉｃｋｅｒａｍｉｉ、Ｋ．ｗａｌｔｉｉ、Ｋ．ｄｒｏｓｏｐｈｉｌａｒｕｍ、Ｋ．ｔｈｅｒｍｏｔｏｌｅｒａｎｓ、およびＫ．ｍａｒｘｉａｎｕｓ）、Ｙａｒｒｏｗｉａ、Ｐｉｃｈｉａ ｐａｓｔｏｒｉｓ、Ｃａｎｄｉｄａ（Ｃ．ａｌｂｉｃａｎｓ）、Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ ｒｅｅｓｉａ、Ｎｅｕｒｏｓｐｏｒａ ｃｒａｓｓａ、Ｓｃｈｗａｎｎｉｏｍｙｃｅｓ（Ｓ．ｏｃｃｉｄｅｎｔａｌｉｓ）、ならびに糸状菌（例えば、Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ、Ｔｏｌｙｐｏｃｌａｄｉｕｍ、およびＡｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ（Ａ．ｎｉｄｕｌａｎｓおよびＡ．ｎｉｇｅｒ）など）。
本明細書で開示されるＮＲＰ−１ ＡＢＰを生成するために使用される宿主細胞は、種々の培地中で培養され得る。市販の培地（例えば、Ｈａｍ’ｓ Ｆ１０、最小必須培地（ＭＥＭ）、ＲＰＭＩ−１６４０、およびダルベッコ改変イーグル培地（ＤＭＥＭ）など）は、その宿主細胞を培養するために適している。さらに、Ｈａｍら， Ｍｅｔｈ． Ｅｎｚ．， １９７９， ５８：４４； Ｂａｒｎｅｓら， Ａｎａｌ． Ｂｉｏｃｈｅｍ．， １９８０， １０２：２５５；ならびに米国特許第４，７６７，７０４号、同第４，６５７，８６６号、同第４，９２７，７６２号、同第４，５６０，６５５号、および同第５，１２２，４６９号；またはＷＯ ９０／０３４３０およびＷＯ ８７／００１９５に記載される培地のうちのいずれかが使用され得る。前述の参考文献の各々は、その全体において参考として援用される。
これらの培地のうちのいずれかは、必要な場合ホルモンおよび／または他の成長因子（例えば、インスリン、トランスフェリン、または上皮成長因子）、塩（例えば、塩化ナトリウム、カルシウム、マグネシウム、およびホスフェート）、バッファ（例えば、ＨＥＰＥＳ）、ヌクレオチド（例えば、アデノシンおよびチミジン）、抗生物質、微量元素（マイクロモル濃度範囲の最終濃度で通常は存在する無機化合物として定義される）、およびグルコースまたは等価なエネルギー源が補充され得る。任意の他の必要な補充物質がまた、当業者に公知である適切な濃度で含まれ得る。
培養条件（例えば、温度、ｐＨなど）は、発現のために選択される宿主細胞で以前に使用された条件であり、当業者にとって明らかである。
組換え技術を使用する場合、そのＡＢＰは、細胞内で、細胞周辺腔において生成され得るか、または培地へと直接分泌され得る。そのＡＢＰが細胞内で生成される場合、第１の工程として、例えば、遠心分離または限外濾過によって、粒状デブリ（宿主細胞または溶解したフラグメントのいずれか）が除去される。例えば、Ｃａｒｔｅｒら（Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ， １９９２， １０：１６３−１６７（その全体において参考として援用される））は、Ｅ．ｃｏｌｉの細胞周辺腔へと分泌されるＡＢＰを単離するための手順を記載する。簡潔には、細胞ペーストを、酢酸ナトリウム（ｐＨ３．５）、ＥＤＴＡ、およびフェニルメチルスルホニルフルオリド（ＰＭＳＦ）の存在下で約３０分間にわたって解凍する。細胞デブリは、遠心分離によって除去され得る。
いくつかの実施形態において、そのＡＢＰは、無細胞系において生成される。いくつかの局面において、その無細胞系は、Ｙｉｎら， ｍＡｂｓ， ２０１２， ４：２１７−２２５（その全体において参考として援用される）に記載されるとおりのインビトロ転写および翻訳システムである。いくつかの局面において、その無細胞系は、真核生物細胞または原核生物細胞に由来する無細胞抽出物を利用する。いくつかの局面において、その原核生物細胞は、Ｅ．ｃｏｌｉである。そのＡＢＰの無細胞発現は、例えば、そのＡＢＰが不溶性凝集物として細胞中に蓄積する場合またはペリプラズム発現からの収量が低い場合に有用であり得る。
そのＡＢＰが培地へと分泌される場合、このような発現系からの上清は一般に、市販のタンパク質濃縮フィルタ、例えば、Ａｍｉｃｏｎ（登録商標）またはＭｉｌｌｉｐｏｒｅ（登録商標） Ｐｅｌｌｃｏｎ（登録商標）限外濾過ユニットを使用して、まず濃縮される。プロテアーゼ阻害剤（例えば、ＰＭＳＦ）は、タンパク質分解を阻害するために前述の工程のうちのいずれかに含まれ得、抗生物質は、外来の汚染物質の成長を防止するために含まれ得る。
その細胞から調製されるＡＢＰ組成物は、例えば、ヒドロキシルアパタイトクロマトグラフィー、ゲル電気泳動、透析、およびアフィニティークロマトグラフィーを使用して精製され得、アフィニティークロマトグラフィーは、特に有用な精製技術である。親和性リガンドとしてのプロテインＡの適切性は、そのＡＢＰ中に存在する任意の免疫グロブリンＦｃドメインの種およびアイソタイプに依存する。プロテインＡは、ヒトγ１、γ２、またはγ４重鎖を含むＡＢＰを精製するために使用され得る（Ｌｉｎｄｍａｒｋら， Ｊ． Ｉｍｍｕｎｏｌ． Ｍｅｔｈ．， １９８３， ６２：１−１３（その全体において参考として援用される））。プロテインＧは、全てのマウスアイソタイプおよびヒトγ３に有用である（Ｇｕｓｓら， ＥＭＢＯ Ｊ．， １９８６， ５：１５６７−１５７５（その全体において参考として援用される））。
その親和性リガンドが結合されるマトリクスは、最も頻繁にはアガロースであるが、他のマトリクスも利用可能である。機械的に安定なマトリクス（例えば、孔制御ガラスまたはポリ（スチレンジビニル）ベンゼン）は、アガロースで達成され得るより速い流速および短い処理時間を可能にする。そのＡＢＰがＣＨ３ドメインを含む場合、ＢａｋｅｒＢｏｎｄ ＡＢＸ（登録商標）樹脂が精製に有用である。
タンパク質精製の他の技術（例えば、イオン交換カラムでの分画、エタノール沈殿、逆相ＨＰＬＣ、シリカ上でのクロマトグラフィー、ヘパリンＳｅｐｈａｒｏｓｅ（登録商標）上でのクロマトグラフィー、クロマトフォーカシング、ＳＤＳ−ＰＡＧＥ、および硫酸アンモニウム沈殿）がまた利用可能であり、当業者によって適用され得る。
任意の予備的精製工程（複数可）の後に、その目的のＡＢＰおよび汚染物質を含む混合物は、一般には低い塩濃度（例えば、約０〜約０．２５Ｍ 塩）で行われる、約２．５〜約４．５の間のｐＨの溶離緩衝液を使用する低ｐＨ疎水性相互作用クロマトグラフィーに供され得る。
３．アッセイ
当該分野で公知の種々のアッセイが、本明細書で提供されるＮＲＰ−１ ＡＢＰを同定および特徴づけるために使用され得る。
３．１．結合、競合およびエピトープマッピングアッセイ
本明細書で提供されるＡＢＰの特異的抗原結合活性は、任意の適切な方法によって（ＳＰＲ、ＢＬＩ、ＲＩＡ、ＫｉｎＥｘＡ、フローサイトメトリー、およびＭＳＤ−ＳＥＴを使用することが挙げられる）評価され得る。さらに、抗原結合活性は、ＥＬＩＳＡアッセイおよびウェスタンブロットアッセイによって評価され得る。
２種のＡＢＰの間の、またはＡＢＰと別の分子（例えば、ＮＲＰ−１の１またはこれより多くのリガンド）との間の競合を測定するためのアッセイは、本開示の他の箇所で、および例えば、Ｈａｒｌｏｗ ａｎｄ Ｌａｎｅ， Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ： Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ ｃｈ．１４， １９８８， Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ， Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ， Ｎ．Ｙ（その全体において参考として援用される）に記載される。
本明細書で提供されるＡＢＰが結合するエピトープをマッピングするためのアッセイは、例えば、Ｍｏｒｒｉｓ 「Ｅｐｉｔｏｐｅ Ｍａｐｐｉｎｇ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ」， ｉｎ Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ ｖｏｌ． ６６， １９９６， Ｈｕｍａｎａ Ｐｒｅｓｓ， Ｔｏｔｏｗａ， Ｎ．Ｊ．（その全体において参考として援用される）に記載される。いくつかの実施形態において、そのエピトープは、ペプチド競合によって決定される。いくつかの実施形態において、そのエピトープは、質量分析法によって決定される。いくつかの実施形態において、そのエピトープは、結晶学によって決定される。
３．２．ＮＲＰ−１アンタゴニズムアッセイ
いくつかの実施形態において、本明細書で提供されるＡＢＰは、ＮＲＰ−１に対するアンタゴニスト活性を有するＡＢＰを同定するかまたは特徴づけるためにスクリーニングされる。任意の適切なアッセイは、このようなＡＢＰを同定するかまたは特徴づけるために使用され得る。いくつかの局面において、そのアッセイは、エフェクターＴ細胞と本明細書で提供されるＡＢＰとを接触させた後に、そのエフェクターＴ細胞によって分泌されるサイトカインの量を測定する。いくつかの局面において、そのサイトカインは、ＩＬ−２、ＩＬ−６、ＬＴ−α、ＴＮＦ、ＧＭ−ＣＳＦ、ＩＦＮγ、およびこれらの組み合わせから選択される。いくつかの局面において、そのサイトカインは、ｓＣＤ４０Ｌ、ＶＥＧＦ、ＴＧＦ−α、ＲＡＮＴＥＳ、ＰＤＧＦ−ＡＢ／ＢＢ、ＰＤＧＦ−ＡＡ、ＭＩＰ−１β、ＭＩＰ−１α、ＭＤＣ（ＣＣＬ２２）、ＭＣＰ−３、ＭＣＰ−１、ＩＰ−１０、ＩＬ−１７Ａ、ＩＬ−２Ｒα、ＩＬ−１５、ＩＬ−１３、ＩＬ−１２（ｐ７０）、ＩＬ−１２（ｐ４０）、ＩＬ−１０、ＩＬ−９、ＩＬ−８、ＩＬ−７、ＩＬ−５、ＩＬ−４、ＩＬ−３、ＩＬ−２、ＩＬ−２Ｒα、ＩＬ−１ＲＡ、ＩＬ−１β、ＩＬ−１α、ＩＦＮγ、ＩＦＮα２、ＧＲＯ、ＧＭ−ＣＳＦ、Ｇ−ＣＳＦ、フラクタルカイン、Ｆｌｔ−３リガンド、ＦＧＦ−２、エオタキシン、ＥＧＦ、およびこれらの組み合わせから選択される。
いくつかの実施形態において、そのエフェクター細胞は、ＣＤ３のアゴニストで共刺激されて、そのエフェクター細胞によるサイトカインの分泌を促進する。いくつかの局面において、そのＣＤ３アゴニストは、最大未満のレベルで提供される。
いくつかの局面において、このようなアッセイは、エフェクターＴ細胞と本明細書で提供されるＡＢＰとを接触させた後にそのエフェクターＴ細胞の増殖を測定し得る。いくつかの局面において、そのエフェクターＴ細胞の増殖は、色素（例えば、カルボキシフルオレセインジアセテートスクシンイミジルエステル；ＣＦＳＥ）の希釈によって、トリチウムチミジン取り込みによって、ルミネッセント細胞生存性アッセイによって、または当該分野で公知の他のアッセイによって、測定される。
いくつかの局面において、このようなアッセイは、調節性Ｔ細胞と本明細書で提供されるＡＢＰとを接触させた後に、その調節性Ｔ細胞の分化、サイトカイン生成、生存性（例えば、生存（ｓｕｒｖｉｖａｌ））、増殖、または抑制活性を測定し得る。
いくつかの局面において、このようなアッセイは、ＮＫ細胞と本明細書で提供されるＡＢＰとを接触させた後に、そのＮＫ細胞の細胞傷害性活性を測定し得る。いくつかの局面において、そのＮＫ細胞の細胞傷害性活性は、標的細胞（例えば、Ｋ５６２細胞株）のＮＫ媒介性殺滅を定量する細胞傷害性アッセイを使用して測定される。Ｊａｎｇら， Ａｎｎ． Ｃｌｉｎ． Ｌａｂ． Ｓｃｉ．， ２０１２， ４２：４２−４９（その全体において参考として援用される）を参照のこと。
いくつかの局面において、このようなアッセイは、グランザイムＢの量を測定し得る。いくつかの局面において、子のようなアッセイは、パーフォリンの量を測定し得る。
３．３．エフェクター機能のアッセイ
本明細書で提供されるＡＢＰでの処置後のエフェクター機能は、当該分野で公知の種々のインビトロアッセイおよびインビボアッセイ（Ｒａｖｅｔｃｈ ａｎｄ Ｋｉｎｅｔ， Ａｎｎｕ． Ｒｅｖ． Ｉｍｍｕｎｏｌ．， １９９１， ９：４５７−４９２； 米国特許第５，５００，３６２号、同第５，８２１，３３７号； Ｈｅｌｌｓｔｒｏｍら， Ｐｒｏｃ． Ｎａｔ’ｌ Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． ＵＳＡ， １９８６， ８３：７０５９−７０６３； Ｈｅｌｌｓｔｒｏｍら， Ｐｒｏｃ． Ｎａｔ’ｌ Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． ＵＳＡ， １９８５， ８２：１４９９−１５０２； Ｂｒｕｇｇｅｍａｎｎら， Ｊ． Ｅｘｐ． Ｍｅｄ．， １９８７， １６６：１３５１−１３６１； Ｃｌｙｎｅｓら， Ｐｒｏｃ． Ｎａｔ’ｌ Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． ＵＳＡ， １９９８， ９５：６５２−６５６； ＷＯ ２００６／０２９８７９； ＷＯ ２００５／１００４０２； Ｇａｚｚａｎｏ−Ｓａｎｔｏｒｏら， Ｊ． Ｉｍｍｕｎｏｌ． Ｍｅｔｈｏｄｓ， １９９６， ２０２：１６３−１７１； Ｃｒａｇｇら， Ｂｌｏｏｄ， ２００３， １０１：１０４５−１０５２； Ｃｒａｇｇら Ｂｌｏｏｄ， ２００４， １０３：２７３８−２７４３； およびＰｅｔｋｏｖａら， Ｉｎｔ’ｌ． Ｉｍｍｕｎｏｌ．， ２００６， １８：１７５９−１７６９（これらの各々はその全体において参考として援用される）に記載されるものが挙げられる）を使用して評価され得る。
４．薬学的組成物
本明細書で提供されるＡＢＰは、任意の適切な薬学的組成物に製剤化され得、任意の適切な投与経路によって投与され得る。適切な投与経路としては、動脈内、皮内、筋肉内、腹腔内、静脈内、鼻、非経口、肺、および皮下の経路が挙げられるが、これらに限定されない。
別の局面において、本明細書で提供される抗ヒトＮＲＰ−１抗体またはその抗原結合フラグメントおよび薬学的に受容可能な賦形剤を含む薬学的組成物が提供される。
別の局面において、複数種の本明細書で提供される抗ヒトＮＲＰ−１抗体またはその抗原結合フラグメントを含む薬学的組成物が提供される。例えば、その薬学的組成物は、翻訳後修飾を受けていない抗体またはその抗原結合フラグメントおよびその抗体またはその抗原結合フラグメントの翻訳後修飾から得られる抗体またはその抗原結合フラグメントを含む。
一実施形態において、その薬学的組成物は、以下の（１）〜（４）から選択される抗ヒトＮＲＰ−１抗体のうちの少なくとも２種を含む： （１）配列番号１１８からなる重鎖および配列番号１２６からなる軽鎖を含む抗ヒトＮＲＰ−１抗体、（２）アミノ酸番号１のＥがピログルタミン酸に改変される配列番号１１８からなる重鎖および配列番号１２６からなる軽鎖を含む抗ヒトＮＲＰ−１抗体、（３）配列番号１１８のアミノ酸番号１〜４５３のアミノ酸配列からなる重鎖および配列番号１２６からなる軽鎖を含む抗ヒトＮＲＰ−１抗体；ならびに（４）アミノ酸番号１のＥがピログルタミン酸に改変される配列番号１１８のアミノ酸番号１〜４５３のアミノ酸配列からなる重鎖および配列番号１２６からなる軽鎖を含む抗ヒトＮＲＰ−１抗体。
一実施形態において、その薬学的組成物は、配列番号１１８からなる重鎖および配列番号１２６からなる軽鎖を含む抗ヒトＮＲＰ−１抗体、配列番号１１８のアミノ酸番号１〜４５３のアミノ酸配列からなる重鎖および配列番号１２６からなる軽鎖を含む抗ヒトＮＲＰ−１抗体、ならびに薬学的に受容可能な賦形剤を含む。
その薬学的組成物は、１またはこれより多くの薬学的賦形剤を含み得る。任意の適切な薬学的賦形剤が使用され得、当業者は、適切な薬学的賦形剤を選択し得る。よって、以下で提供される薬学的賦形剤は、例証であって、限定ではないことが意図される。さらなる薬学的賦形剤としては、例えば、Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｅｘｃｉｐｉｅｎｔｓ， Ｒｏｗｅら（編） 第６版．（２００９）（その全体において参考として援用される）に記載されるものが挙げられる。
いくつかの実施形態において、その薬学的組成物は、消泡剤を含む。任意の適切な消泡剤が使用され得る。いくつかの局面において、その消泡剤は、アルコール、エーテル、油、ワックス、シリコーン、界面活性剤、およびこれらの組み合わせから選択される。いくつかの局面において、その消泡剤は、ミネラルオイル、植物性油、エチレンビスステアラミド（ｅｔｈｙｌｅｎｅ ｂｉｓ ｓｔｅａｒａｍｉｄｅ）、パラフィンワックス、エステルワックス、脂肪アルコールワックス、長鎖脂肪アルコール、脂肪酸石鹸、脂肪酸エステル、シリコングリコール、フルオロシリコーン、ポリエチレングリコール−ポリプロピレングリコールコポリマー、ポリジメチルシロキサン−二酸化ケイ素、エーテル、オクチルアルコール、カプリルアルコール、ソルビタントリオレエート、エチルアルコール、２−エチル−ヘキサノール、ジメチコン、オレイルアルコール、シメチコン、およびこれらの組み合わせから選択される。
いくつかの実施形態において、その薬学的組成物は、共溶媒を含む。共溶媒の例証的な例としては、エタノール、ポリ（エチレン）グリコール、ブチレングリコール、ジメチルアセトアミド、グリセリン、プロピレングリコール、およびこれらの組み合わせが挙げられる。
いくつかの実施形態において、その薬学的組成物は、バッファを含む。バッファの例証的な例としては、アセテート、ボレート、カーボネート、ラクテート、マレート、ホスフェート、シトレート、ヒドロキシド、ジエタノールアミン、モノエタノールアミン、グリシン、メチオニン、グアーガム、グルタミン酸モノナトリウム、およびこれらの組み合わせが挙げられる。
いくつかの実施形態において、その薬学的組成物は、キャリアまたは充填剤を含む。キャリアまたは充填剤の例証的な例としては、ラクトース、マルトデキストリン、マンニトール、ソルビトール、キトサン、ステアリン酸、キサンタンガム、グアーガム、およびこれらの組み合わせが挙げられる。
いくつかの実施形態において、その薬学的組成物は、界面活性剤を含む。界面活性剤の例証的な例としては、ｄ−αトコフェロール、塩化ベンザルコニウム、塩化ベンゼトニウム、セトリミド、塩化セチルピリジニウム、ドクサートナトリウム、ベヘン酸グリセリル、モノオレイン酸グリセリル、ラウリン酸、マクロゴール１５ヒドロキシステアレート、ミリスチルアルコール、リン脂質、ポリオキシエチレンアルキルエーテル、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル、ポリオキシエチレンステアレート、ポリオキシルグリセリド、ラウリル硫酸ナトリウム、ソルビタンエステル、ビタミンＥポリエチレン（グリコール）スクシネート、およびこれらの組み合わせが挙げられる。
いくつかの実施形態において、その薬学的組成物は、固結防止剤を含む。固結防止剤の例証的な例としては、リン酸カルシウム（三塩基性）、ヒドロキシメチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、酸化マグネシウム、およびこれらの組み合わせが挙げられる。
その薬学的組成物とともに使用され得る他の賦形剤としては、例えば、アルブミン、抗酸化剤、抗細菌剤、抗真菌剤、生体吸収性ポリマー、キレート化剤、放出制御剤、希釈剤、分散化剤、溶解増強剤、乳化剤、ゲル化剤、軟膏基剤、浸透増強剤、保存剤、可溶化剤、溶媒、安定化剤、糖、およびこれらの組み合わせが挙げられる。これら剤の各々の具体例は、例えば、Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｅｘｃｉｐｉｅｎｔｓ， Ｒｏｗｅら（編） 第６版．（２００９）， Ｔｈｅ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｐｒｅｓｓ（その全体において参考として援用される）に記載される。
いくつかの実施形態において、その薬学的組成物は、溶媒を含む。いくつかの局面において、その溶媒は、食塩溶液（例えば、滅菌等張性食塩溶液）またはデキストロース溶液である。いくつかの局面において、その溶媒は、注射用水である。
いくつかの実施形態において、その薬学的組成物は、粒状形態（例えば、微粒子またはナノ粒子）にあり得る。微粒子およびナノ粒子は、任意の適切な材料（例えば、ポリマーまたは脂質）から形成され得る。いくつかの局面において、その微粒子またはナノ粒子は、ミセル、リポソーム、またはポリマーソームである。
水は、いくらかのＡＢＰの分解を促進し得るので、ＡＢＰを含む無水の薬学的組成物および剤形が本明細書でさらに提供される。
本明細書で提供される無水の薬学的組成物および剤形は、無水または低水分含有の成分および低水分または低湿度条件を使用して調製され得る。ラクトースおよび一級アミンまたは二級アミンを含む少なくとも１つの活性成分を含む薬学的組成物および剤形は、製造、パッケージング、および／または貯蔵の間の水分および／または湿気との実質的な接触が予測される場合には、無水であり得る。
無水薬学的組成物は、その無水の性質が維持されるように、調製および貯蔵されるべきである。よって、無水組成物は、それらが適切な処方キット（formulary kit）に含まれ得るように、水への曝露を防止することが公知の材料を使用してパッケージングされ得る。適切なパッケージングの例としては、気密シールホイル、プラスチック、単位用量容器（例えば、バイアル）、ブリスターパック、およびストリップパックが挙げられるが、これらに限定されない。
４．１．非経口剤形
ある種の実施形態において、本明細書で提供されるＡＢＰは、非経口剤形として製剤化される。非経口剤形は、種々の経路（皮下、静脈内（注入およびボーラス注射が挙げられる）、筋肉内、および動脈内が挙げられるが、これらに限定されない）によって被験体に投与され得る。それらの投与は、代表的には汚染物質に対する被験体の天然の防御を回避するので、非経口剤形は代表的には、無菌であるか、または被験体への投与の前に滅菌され得る。非経口剤形の例としては、すぐに注射できる液剤、薬学的に受容可能な注射用ビヒクルにすぐに溶解もしくは懸濁できる乾燥（例えば、凍結乾燥）製品、すぐに注射できる懸濁剤、およびエマルジョンが挙げられるが、これらに限定されない。
非経口剤形を提供するために使用され得る適切なビヒクルは、当業者に周知である。例としては、以下が挙げられるが、これらに限定されない：注射用水ＵＳＰ；水性ビヒクル（例えば、塩化ナトリウム注射用、リンゲル注射用、デキストロース注射用、デキストロースおよび塩化ナトリウム注射用、および乳酸添加リンゲル注射用が挙げられるが、これらに限定されない）；水混和性ビヒクル（例えば、エチルアルコール、ポリエチレングリコール、およびポリプロピレングルコールが挙げられるが、これらに限定されない）；および非水性ビヒクル（例えば、コーン油、綿実油、ラッカセイ油、ゴマ油、オレイン酸エチル、ミリスチン酸イソプロピル、および安息香酸ベンジルが挙げられるが、これらに限定されない）。
本明細書で開示されるＡＢＰのうちの１またはこれより多くの溶解性を増加させる賦形剤はまた、非経口剤形に組み込まれ得る。
いくつかの実施形態において、その非経口剤形は凍結乾燥される。例示的な凍結乾燥製剤は、例えば、米国特許第６，２６７，９５８号および同第６，１７１，５８６号；ならびにＷＯ ２００６／０４４９０８（これらの各々はその全体において参考として援用される）に記載される。
５．投与量および単位剤形
ヒト治療剤において、医師は、防止的処置または治癒的処置に従って、ならびに年齢、体重、状態および処置されるべき被験体に特異的な他の因子に従って、その医師が最も適切と考える薬量（posology）を決定する。
ある種の実施形態において、本明細書で提供される組成物は、薬学的組成物または単一の単位剤形である。本明細書で提供される薬学的組成物および単一の単位剤形は、予防上または治療上有効な量の１またはこれより多くの予防的または治療的ＡＢＰを含む。
障害または１もしくはこれより多くのその症状の防止または処置において有効であるそのＡＢＰまたは組成物の量は、その疾患または状態の性質および重篤度、ならびにそのＡＢＰが投与される経路とともに変動する。その頻度および投与量はまた、投与されるその具体的な治療（例えば、治療剤または予防剤）、その障害、疾患、もしくは状態の重篤度、投与経路、ならびにその被験体の年齢、体重、応答、および過去の病歴に依存して、各被験体に対して特異的な因子に従って変動する。有効用量は、インビトロまたは動物モデル試験系から得られる用量応答曲線から外挿され得る。
ある種の実施形態において、組成物の例示的用量は、被験体の１キログラムまたはサンプル重量あたりのＡＢＰのミリグラム量またはマイクログラム量（例えば、約１０μｇ／ｋｇ〜約５０ｍｇ／ｋｇ、約１００μｇ／ｋｇ〜約２５ｍｇ／ｋｇ、または約１００μｇ／ｋｇ〜約１０ｍｇ／ｋｇ）を含む。ある種の実施形態において、ＡＢＰの重量に基づいて、被験体における障害または１もしくはこれより多くのその症状を防止する、処置する、管理する、または改善するために投与される本明細書で提供されるＡＢＰの投与量は、被験体の体重で０．１ｍｇ／ｋｇ、１ｍｇ／ｋｇ、２ｍｇ／ｋｇ、３ｍｇ／ｋｇ、４ｍｇ／ｋｇ、５ｍｇ／ｋｇ、６ｍｇ／ｋｇ、１０ｍｇ／ｋｇ、１５ｍｇ／ｋｇ、２０ｍｇ／ｋｇ、２５ｍｇ／ｋｇ、３０ｍｇ／ｋｇ、４０ｍｇ／ｋｇ、またはこれより多い。本明細書で開示される範囲の外のＡＢＰの投与量を使用することも、いくつかの症例では、当業者に明らかであるように、必要である。さらに、臨床医または処置する医師が、被験体応答に関連して治療をどのようにしてかついつ中断、調節、または終了するかを知ることが、注記される。
当業者によって容易に知られるように、異なる治療上有効な量が異なる疾患および状態に適用可能であり得る。同様に、このような障害を防止する、管理する、処置するまたは改善するために十分であるが、本明細書で提供されるＡＢＰと関連する有害作用を引き起こすには不十分であるか、または低減するために十分である量はまた、本明細書で提供される投与量および投与頻度スケジュールによって包含される。さらに、被験体が本明細書で提供される組成物の複数の投与量を投与される場合、その投与量の全てが同じである必要はない。例えば、その被験体に投与される投与量は、その組成物の予防的または治療的効果を改善するために増加してよいか、またはそれは、特定の被験体が経験している１またはこれより多くの副作用を低減するために減少させてよい。
ある種の実施形態において、処置または防止は、本明細書で提供されるＡＢＰまたは組成物の１またはこれより多くの負荷用量で開始され、１またはこれより多くの維持用量がこれに続き得る。
ある種の実施形態において、本明細書で提供されるＡＢＰまたは組成物の用量は、その被験体の血液または血清中のＡＢＰの定常状態濃度を達成するために投与され得る。その定常状態濃度は、当業者に利用可能な技術に従う測定によって決定され得るか、または被験体の身体的特徴（例えば、身長、体重および年齢）に基づき得る。
ある種の実施形態において、同じ組成物の投与が反復され得、その投与は、少なくとも１日間、２日間、３日間、５日間、１０日間、１５日間、３０日間、４５日間、２ヶ月間、７５日間、３ヶ月間、または６ヶ月間隔てられ得る。他の実施形態において、同じ組成物の投与が反復され得、その組成物は、１週間に１回、２週間ごとに１回、３週間ごとに１回、または４週間ごとに１回、与えられ得る。ある種の実施形態において、その患者に投与される第１の用量は、「負荷用量（ｌｏａｄｉｎｇ ｄｏｓｅ）」であり得る。負荷用量は、その後の用量より高い用量であり得る。
本開示の他の箇所でより詳細に考察されるように、本明細書で提供されるＡＢＰは必要に応じて、疾患または障害を防止または処置するために有用な１またはこれより多くのさらなる薬剤とともに投与され得る。このようなさらなる薬剤の有効量は、その製剤中に存在するＡＢＰの量、障害または処置のタイプ、および当該分野で公知または本明細書で記載される他の因子に依存し得る。
６．治療適用
治療適用に関して、本発明のＡＢＰは、薬学的に受容可能な剤形（例えば、当該分野で公知のものおよび上記で考察されるものなど）において、哺乳動物（一般にはヒト）に投与される。例えば、本発明のＡＢＰは、ボーラスとしてまたはある期間にわたる連続注入によって静脈内に、筋肉内、腹腔内、脳脊髄内、皮下、関節内、滑液包内、髄腔内（intrathecal）、または腫瘍内の経路によって、ヒトに投与され得る。そのＡＢＰはまた、局所的および全身的な治療効果を発揮するために、腫瘍周辺の、病変内の、または病変周辺の経路によって適切に投与される。腹腔内経路は、例えば、卵巣腫瘍の処置において特に有用であり得る。
本明細書で提供されるＡＢＰは、ＮＲＰ−１が関わる任意の疾患または状態の処置に有用であり得る。いくつかの実施形態において、その疾患または状態は、抗ＮＲＰ−１ ＡＢＰでの処置から利益を受け得る疾患または状態である。いくつかの実施形態において、その疾患または状態は腫瘍である。いくつかの実施形態において、その疾患または状態は細胞増殖性障害である。いくつかの実施形態において、その疾患または状態はがんである。
いくつかの実施形態において、本明細書で提供されるＡＢＰは、医薬としての使用のために提供される。いくつかの実施形態において、本明細書で提供されるＡＢＰは、医薬の製造または調製における使用のために提供される。いくつかの実施形態において、その医薬は、抗ＮＲＰ−１ ＡＢＰから利益を受け得る疾患または状態の処置のためのものである。いくつかの実施形態において、その疾患または状態は、腫瘍である。いくつかの実施形態において、その疾患または状態は、細胞増殖性障害である。いくつかの実施形態において、その疾患または状態は、がんである。いくつかの実施形態において、その疾患または状態は、ウイルス感染である。
いくつかの実施形態において、有効量の本明細書で提供されるＡＢＰを必要性のある被験体に投与することによる、その被験体において疾患または状態を処置するための方法が、本明細書で提供される。いくつかの局面において、その疾患または状態は、がんである。いくつかの局面において、その疾患または状態は、ウイルス感染である。
任意の適切ながんは、本明細書で提供されるＡＢＰで処置され得る。例証的な適切ながんとしては、例えば、以下が挙げられる：急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、副腎皮質癌、肛門がん、虫垂がん、星状細胞腫、基底細胞癌、脳腫瘍、胆管がん、膀胱がん、骨がん、乳がん、気管支腫瘍、原発不明の癌、心臓腫瘍、子宮頚がん、脊索腫、結腸がん、結腸直腸がん、頭蓋咽頭腫、腺管癌、胎児性腫瘍、子宮内膜がん、上衣腫、食道がん、鼻腔神経芽細胞腫、線維性組織球腫、ユーイング肉腫、眼のがん、胚細胞腫瘍、胆嚢がん、胃がん、消化管カルチノイド腫瘍、消化管間質腫瘍、妊娠性絨毛疾患、神経膠腫、頭頚部がん、肝細胞がん、組織球症、ホジキンリンパ腫、下咽頭がん、眼内黒色腫、膵島細胞腫瘍、カポジ肉腫、腎臓がん、ランゲルハンス細胞組織球症、喉頭がん、口唇口腔がん、肝臓がん、上皮内小葉癌、肺がん、マクログロブリン血症、悪性線維性組織球腫、黒色腫、メルケル細胞癌、中皮腫、原発不明転移性扁平上皮性頸部がん、ＮＵＴ遺伝子が関わる正中線癌、口腔がん、多発性内分泌腫瘍症候群、多発性骨髄腫、菌状息肉腫、骨髄異形成症候群、骨髄異形成／骨髄増殖性腫瘍、鼻腔および副鼻腔がん（ｎａｓａｌ ｃａｖｉｔｙ ａｎｄ ｐａｒ ｎａｓａｌ ｓｉｎｕｓ ｃａｎｃｅｒ）、鼻咽頭がん、神経芽細胞腫、非小細胞肺がん、口腔咽頭がん、骨肉腫、卵巣がん、膵臓がん、乳頭腫症、パラガングリオーマ、副甲状腺がん、陰茎がん、咽頭がん、褐色細胞腫、下垂体腫瘍、胸膜肺芽腫、中枢神経系原発リンパ腫、前立腺がん、直腸がん、腎細胞がん、腎盂尿管がん、網膜芽腫、ラブドイド腫瘍、唾液腺がん、セザリー症候群、皮膚がん、小細胞肺がん、小腸がん、軟部組織肉腫、脊髄腫瘍、胃がん、Ｔ細胞リンパ腫、奇形腫様腫瘍、精巣がん、咽喉がん、胸腺腫および胸腺癌、甲状腺がん、尿道がん、子宮がん、膣がん、外陰がん、およびウィルムス腫瘍。
いくつかの実施形態において、有効量の本明細書で提供されるＡＢＰを必要性のある被験体に投与することによる、その被験体の標的細胞においてＮＲＰ−１をアンタゴナイズするための方法が、本明細書で提供される。いくつかの局面において、本明細書で提供されるＡＢＰによるＮＲＰ−１のアンタゴニズムは、標的細胞による、ＩＬ−２、ＬＴ−α、ＩＬ−６、ＴＮＦ、ＧＭ−ＣＳＦ、ＩＦＮγまたはこれらの組み合わせの増大した分泌を生じる。
いくつかの実施形態において、有効量の本明細書で提供されるＡＢＰを必要性のある被験体に投与することによる、その被験体においてエフェクターＴ細胞の増殖、生存、および／または機能を増大するための方法が、本明細書で提供される。いくつかの局面において、そのエフェクターＴ細胞は、ＣＤ４＋ エフェクターＴ細胞である。いくつかの局面において、そのエフェクターＴ細胞は、ＣＤ８＋ エフェクターＴ細胞である。
いくつかの実施形態において、有効量の本明細書で提供されるＡＢＰを必要性のある被験体に投与することによる、その被験体において調節性Ｔ細胞によるエフェクターＴ細胞の抑制を抑止するための方法が、本明細書で提供される。いくつかの局面において、その調節性Ｔ細胞は、ＣＤ４＋ＣＤ２５＋Ｆｏｘｐ３＋ 調節性Ｔ細胞である。いくつかの局面において、その調節性Ｔ細胞は、ＣＤ８＋ＣＤ２５＋ 調節性Ｔ細胞である。
いくつかの実施形態において、有効量の本明細書で提供されるＡＢＰを必要性のある被験体に投与することによる、その被験体においてナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、ナチュラルキラーＴ（ＮＫＴ）細胞、マクロファージ、または樹状細胞（例えば、プラズマ細胞様樹状細胞）の活性を増大させるための方法が、本明細書で提供される。
いくつかの実施形態において、付随する血小板の低減なしに、がんを有する被験体を処置するための方法が、本明細書で提供される。いくつかの局面において、その方法は、被験体において血小板減少の実質的な量を生じない。
いくつかの実施形態において、有効量の本明細書で提供されるＡＢＰを必要性のある被験体に投与することによる、その被験体において免疫応答を増強するための方法が、本明細書で提供される。
いくつかの実施形態において、有効量の本明細書で提供されるＡＢＰを必要性のある被験体に投与することによる、その被験体において腫瘍の発生を遅延させるための方法が、本明細書で提供される。
いくつかの実施形態において、有効量の本明細書で提供されるＡＢＰを必要性のある被験体に投与することによる、その被験体において腫瘍の発生を防止するための方法が、本明細書で提供される。
いくつかの実施形態において、有効量の本明細書で提供されるＡＢＰを必要性のある被験体に投与することによる、その被験体においてがんの発生を遅延させるための方法が、本明細書で提供される。
いくつかの実施形態において、有効量の本明細書で提供されるＡＢＰを必要性のある被験体に投与することによる、その被験体においてがんの発生を防止するための方法が、本明細書で提供される。
いくつかの実施形態において、有効量の本明細書で提供されるＡＢＰを必要性のある被験体に投与することによる、その被験体において腫瘍のサイズを縮小するための方法が、本明細書で提供される。
いくつかの実施形態において、有効量の本明細書で提供されるＡＢＰを必要性のある被験体に投与することによる、その被験体において転移の数を低減するための方法が、本明細書で提供される。
いくつかの実施形態において、有効量の本明細書で提供されるＡＢＰを必要性のある被験体に投与することによる、その被験体においてウイルス力価を低減するための方法が、本明細書で提供される。
いくつかの実施形態において、有効量の本明細書で提供されるＡＢＰを必要性のある被験体に投与することによる、その被験体において全生存期間、メジアン生存時間、または無増悪生存期間を延ばすための方法が、本明細書で提供される。
いくつかの実施形態において、有効量の本明細書で提供されるＡＢＰを標準治療の治療剤に抵抗性になった被験体に投与することによる、その被験体を処置するための方法が、本明細書で提供される。いくつかの実施形態において、その被験体が抵抗性になったその標準治療の治療剤は、ＰＤ−１阻害剤である。他の実施形態において、その被験体が抵抗性になったその標準治療の治療剤は、ＰＤ−Ｌ１阻害剤である。他の実施形態において、その被験体が抵抗性になったその標準治療の治療剤は、ＣＴＬＡ−４阻害剤である。
７．併用療法
いくつかの実施形態において、本明細書で提供されるＡＢＰは、少なくとも１つのさらなる治療剤とともに投与される。任意の適切なさらなる治療剤は、本明細書で提供されるＡＢＰとともに投与され得る。いくつかの局面において、そのさらなる治療剤は、放射線、細胞傷害性薬剤、化学療法剤、細胞増殖抑制剤、抗ホルモン剤、ＥＧＦＲ阻害剤、免疫刺激剤、抗血管新生剤、およびこれらの組み合わせから選択される。
いくつかの実施形態において、そのさらなる治療剤は免疫刺激剤を含む。
いくつかの実施形態において、その免疫刺激剤は、免疫細胞の阻害性レセプターまたはそのリガンドのシグナル伝達を遮断する薬剤である。いくつかの局面において、その阻害性レセプターまたはリガンドは、ＰＶＲＩＧ、ＶＩＳＴＡ、ＣＣＲ４、ＣＤ２７、ＣＴＬＡ−４、ＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１、ＬＡＧ−３、Ｔｉｍ３、ＴＩＧＩＴ、ニューリチン、ＢＴＬＡ、ＫＩＲ、およびこれらの組み合わせから選択される。いくつかの局面において、その薬剤は、抗ＰＤ−１抗体（例えば、ペンブロリズマブまたはニボルマブ）、およびＰＤ−Ｌ１抗体（例えば、アテゾリズマブ）、抗ＣＴＬＡ−４抗体（例えば、イピリムマブ）、およびこれらの組み合わせから選択される。いくつかの局面において、その薬剤は、ペンブロリズマブである。いくつかの局面において、その薬剤は、ニボルマブである。いくつかの局面において、その薬剤は、アテゾリズマブである。
いくつかの実施形態において、そのさらなる治療剤は、ＰＤ−１とＰＤ−Ｌ１との間の相互作用を阻害する薬剤である。いくつかの局面において、ＰＤ−１とＰＤ−Ｌ１との間の相互作用を阻害するそのさらなる治療剤は、抗体、ペプチド模倣物および低分子から選択される。いくつかの局面において、ＰＤ−１とＰＤ−Ｌ１との間の相互作用を阻害するそのさらなる治療剤は、ペンブロリズマブ、ニボルマブ、アテゾリズマブ、アベルマブ、デュルバルマブ、ＢＭＳ−９３６５５９、スルファモノメトキシン１（ｓｕｌｆａｍｏｎｏｍｅｔｈｏｘｉｎｅ １）、およびスルファメチゾール２から選択される。いくつかの実施形態において、ＰＤ−１とＰＤ−Ｌ１との間の相互作用を阻害するそのさらなる治療剤は、例えば、Ｗｅｉｎｍａｎｎら， Ｃｈｅｍ Ｍｅｄ Ｃｈｅｍ， ２０１６， １４：１５７６ （ＤＯＩ： １０．１００２／ｃｍｄｃ．２０１５００５６６）（その全体において参考として援用される）に記載されるように、このような活性を有することが当該分野で公知の任意の治療剤である。いくつかの実施形態において、ＰＤ−１とＰＤ−Ｌ１との間の相互作用を阻害するその薬剤は、本明細書で提供されるＡＢＰと同じ薬学的組成物中に製剤化される。いくつかの実施形態において、ＰＤ−１とＰＤ−Ｌ１との間の相互作用を阻害するその薬剤は、本明細書で提供されるＡＢＰとは異なる薬学的組成物中に製剤化される。いくつかの実施形態において、ＰＤ−１とＰＤ−Ｌ１との間の相互作用を阻害するその薬剤は、本明細書で提供されるＡＢＰを投与する前に投与される。いくつかの実施形態において、ＰＤ−１とＰＤ−Ｌ１との間の相互作用を阻害するその薬剤は、本明細書で提供されるＡＢＰを投与した後に投与される。いくつかの実施形態において、ＰＤ−１とＰＤ−Ｌ１との間の相互作用を阻害するその薬剤は、本明細書で提供されるＡＢＰと同時に投与されるが、その薬剤およびＡＢＰは、別個の薬学的組成物において投与される。
いくつかの実施形態において、その免疫刺激剤は、単独でかつその推奨される投与量で投与される場合、その被験体においてある種の量の血小板減少を生じる薬剤である。いくつかの局面において、このような薬剤は、本明細書で提供されるＡＢＰと組み合わせて、低減した投与量で投与され得る。このような併用療法は、実質的な血小板悪化（ｐｌａｔｅｌｅｔ ｄｅｔｅｒｉｏｒａｔｉｏｎ）または血小板減少症を生じることなく、安全に投与され得る。
いくつかの実施形態において、その免疫刺激剤は、免疫細胞の共刺激レセプターのアゴニストである。いくつかの局面において、その共刺激レセプターは、ＯＸ４０、ＩＣＯＳ、ＣＤ２８、ＣＤ３７、ＧＩＴＲ、ＣＤ４０、および４−１ＢＢ、ならびにこれらの組み合わせから選択される。いくつかの実施形態において、そのアゴニストは、抗体である。
いくつかの実施形態において、その免疫刺激剤はサイトカインである。いくつかの局面において、そのサイトカインは、ＩＬ−２、ＩＬ−５、ＩＬ−７、ＩＬ−１２、ＩＬ−１５、ＩＬ−２１、およびこれらの組み合わせから選択される。
いくつかの実施形態において、その免疫刺激剤は腫瘍溶解性ウイルスである。いくつかの局面において、その腫瘍溶解性ウイルスは、単純ヘルペスウイルス、水疱性口内炎ウイルス、アデノウイルス、ニューカッスル病ウイルス、ワクシニアウイルス、およびマラバウイルスから選択される。
いくつかの実施形態において、その免疫刺激剤は、キメラ抗原レセプターを有するＴ細胞（ＣＡＲ−Ｔ細胞）である。いくつかの実施形態において、その免疫刺激剤は、二重特異的または多重特異的なＴ細胞指向性抗体である。いくつかの実施形態において、その免疫刺激剤は、抗ＴＧＦ−β抗体である。いくつかの実施形態において、その免疫刺激剤は、ＴＧＦ−βトラップである。
いくつかの実施形態において、そのさらなる治療剤は、腫瘍抗原に対するワクチンである。任意の適切な抗原は、その抗原が本明細書で提供される方法によって処置される腫瘍に存在することを条件として、そのワクチンによって標的化され得る。いくつかの局面において、その腫瘍抗原は、正常組織中のその発現レベルとの比較において過剰発現される腫瘍抗原である。いくつかの局面において、その腫瘍抗原は、がん精巣抗原、分化抗原、ＮＹ−ＥＳＯ−１、ＭＡＧＥ−Ａ１、ＭＡＲＴ、およびこれらの組み合わせから選択される。
さらなる治療剤のさらなる例としては、タキサン（例えば、パクリタキセルまたはドセタキセル）；白金薬剤（例えば、カルボプラチン、オキサリプラチン、および／またはシスプラチン）；トポイソメラーゼ阻害剤（例えば、イリノテカン、トポテカン、エトポシド、および／またはミトキサントロン）；フォリン酸（例えば、ロイコボリン）；またはヌクレオシド代謝阻害剤（例えば、フルオロウラシル、カペシタビン、および／またはゲムシタビン）が挙げられる。いくつかの実施形態において、そのさらなる治療剤は、フォリン酸、５−フルオロウラシル、および／またはオキサリプラチンである。いくつかの実施形態において、そのさらなる治療剤は、５−フルオロウラシルおよびイリノテカンである。いくつかの実施形態において、そのさらなる治療剤は、タキサンおよび白金薬剤である。いくつかの実施形態において、そのさらなる治療剤は、パクリタキセルおよびカルボプラチンである。いくつかの実施形態において、そのさらなる治療剤は、ペメトレキセート（pemetrexate）である。いくつかの実施形態において、そのさらなる治療剤は、標的化治療剤（例えば、ＥＧＦＲ、ＲＡＦまたはＭＥＫ標的化薬剤）である。
そのさらなる治療剤は、任意の適切な手段によって投与され得る。いくつかの実施形態において、本明細書で提供されるＡＢＰおよびそのさらなる治療剤は、同じ薬学的組成物の中に含まれる。いくつかの実施形態において、本明細書で提供されるＡＢＰおよびそのさらなる治療剤は、異なる薬学的組成物の中に含まれる。
本明細書で提供されるＡＢＰおよびそのさらなる治療剤が異なる薬学的組成物の中に含まれる実施形態において、そのＡＢＰの投与は、そのさらなる治療剤の投与の前、同時、および／または後に行い得る。いくつかの局面において、本明細書で提供されるＡＢＰおよびそのさらなる治療剤の投与は、互いの約１ヶ月間以内に行う。いくつかの局面において、本明細書で提供されるＡＢＰおよびそのさらなる治療剤の投与は、互いの約１週間以内に行う。いくつかの局面において、本明細書で提供されるＡＢＰおよびそのさらなる治療剤の投与は、互いの約１日間以内に行う。いくつかの局面において、本明細書で提供されるＡＢＰおよびそのさらなる治療剤の投与は、互いの約１２時間以内に行う。いくつかの局面において、本明細書で提供されるＡＢＰおよびそのさらなる治療剤の投与は、互いの約１時間以内に行う。
８．キット
本明細書で提供されるＡＢＰを含むキットも提供される。そのキットは、本明細書で記載されるように、疾患または障害の処置、防止、および／または診断のために使用され得る。
いくつかの実施形態において、そのキットは、容器およびその容器上またはその容器と関連付けられたラベルまたは添付文書を含む。適切な容器としては、例えば、ボトル、バイアル、シリンジ、およびＩＶ液剤バッグが挙げられる。その容器は、種々の材料（例えば、ガラスまたはプラスチック）から形成され得る。その容器は、組成物であって、単独で、または別の組成物と組み合わせられる場合に、疾患または障害の処置、防止、および／または診断に有効である組成物を保持する。その容器は、無菌アクセスポートを有し得る。例えば、その容器が静脈内液剤バッグまたはバイアルである場合、その容器は、針によって穿刺され得るポートを有し得る。その組成物中の少なくとも１つの活性薬剤は、本明細書で提供されるＡＢＰである。そのラベルまたは添付文書は、その組成物が選択された状態を処置するために使用されることを示す。
いくつかの実施形態において、そのキットは、（ａ）本明細書で提供されるＡＢＰを含む第１の組成物をその中に含む第１の容器；および（ｂ）さらなる治療剤を含む第２の組成物をその中に含む第２の容器を含む。本発明のこの実施形態におけるキットは、その組成物が特定の状態を処置するために使用され得ることを示す添付文書をさらに含み得る。
代わりに、またはさらに、そのキットは、薬学的に受容可能な賦形剤を含む第２の（または第３の）容器をさらに含み得る。いくつかの局面において、その賦形剤はバッファである。そのキットは、商業的およびユーザーの観点から望ましい他の材料（フィルタ、針、およびシリンジが挙げられる）をさらに含み得る。
以下は、本発明の方法および組成物の例である。本明細書で提供される一般的記載を考慮すれば、種々の他の実施形態が実施され得ることは、理解される。
実施例１．抗体選択
材料および方法
ＰｉｅｒｃｅのＥＺ−Ｌｉｎｋ Ｓｕｌｆｏ−ＮＨＳ−Ｂｉｏｔｉｎｙｌａｔｉｏｎ Ｋｉｔを使用して、抗原をビオチン化した。ヤギＦ（ａｂ’）２抗ヒトκ−ＦＩＴＣ（ＬＣ−ＦＩＴＣ）、ＥｘｔｒＡｖｉｄｉｎ−ＰＥ（ＥＡ−ＰＥ）およびＳｔｒｅｐｔａｖｉｄｉｎ−ＡＦ６３３（ＳＡ−６３３）を、それぞれ、Ｓｏｕｔｈｅｒｎ Ｂｉｏｔｅｃｈ、Ｓｉｇｍａ、およびＭｏｌｅｃｕｌａｒ Ｐｒｏｂｅｓから得た。Ｓｔｒｅｐｔａｖｉｄｉｎ ＭｉｃｒｏＢｅａｄｓおよびＭＡＣＳ ＬＣ分離カラムを、Ｍｉｌｔｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｅｃから購入した。ヤギ抗ヒトＩｇＧ−ＰＥ（Ｈｕｍａｎ−ＰＥ）を、Ｓｏｕｔｈｅｒｎ Ｂｉｏｔｅｃｈから得た。
ナイーブディスカバリー
８つのナイーブヒト合成酵母ライブラリー（各々約１０９の多様性）を、以前に記載されるように増殖させた（例えば、Ｙ． Ｘｕら， Ａｄｄｒｅｓｓｉｎｇ ｐｏｌｙｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙ ｏｆ ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ｓｅｌｅｃｔｅｄ ｆｒｏｍ ａｎ ｉｎ ｖｉｔｒｏ ｙｅａｓｔ ｐｒｅｓｅｎｔａｔｉｏｎ ｓｙｓｔｅｍ： ａ ＦＡＣＳ−ｂａｓｅｄ， ｈｉｇｈ−ｔｈｒｏｕｇｈｐｕｔ ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ ａｎｄ ａｎａｌｙｔｉｃａｌ ｔｏｏｌ． ＰＥＤＳ ２６．１０， ６６３−７０ （２０１３）； ＷＯ２００９０３６３７９； ＷＯ２０１０１０５２５６；およびＷＯ２０１２００９５６８を参照のこと）。最初の２回の選択ラウンドについては、Ｍｉｌｔｅｎｙｉ ＭＡＣＳシステムを利用する磁性ビーズソート技術を、以前に記載されるように行った（例えば、Ｓｉｅｇｅｌら， Ｈｉｇｈ ｅｆｆｉｃｉｅｎｃｙ ｒｅｃｏｖｅｒｙ ａｎｄ ｅｐｉｔｏｐｅ−ｓｐｅｃｉｆｉｃ ｓｏｒｔｉｎｇ ｏｆ ａｎ ｓｃＦｖ ｙｅａｓｔ ｄｉｓｐｌａｙ ｌｉｂｒａｒｙ．”Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｍｅｔｈｏｄｓ ２８６（１−２）， １４１−１５３ （２００４）を参照のこと）。簡潔には、酵母細胞（約１０１０細胞／ライブラリー）を、５ｍｌの１００ｎＭ ビオチン化抗原とともに３０分間、３０℃において洗浄緩衝液（リン酸緩衝化生理食塩水（ＰＢＳ）／０．１％ ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ））中でインキュベートした。４０ｍｌ 氷冷洗浄緩衝液で１回洗浄した後、その細胞ペレットを、２０ｍＬ 洗浄緩衝液中に再懸濁し、Ｓｔｒｅｐｔａｖｉｄｉｎ ＭｉｃｒｏＢｅａｄｓ（５００μｌ）をその酵母に添加し、１５分間、４℃においてインキュベートした。次に、その酵母をペレットにし、２０ｍＬ 洗浄緩衝液中に再懸濁し、Ｍｉｌｔｅｎｙｉ ＬＳカラムにロードした。その２０ｍＬをロードした後、そのカラムを、３ｍｌ 洗浄緩衝液で３回洗浄した。次いで、そのカラムを磁場から外し、その酵母を５ｍＬの増殖培地で溶離し、次いで、一晩増殖させた。以下の選択ラウンドを、フローサイトメトリーを使用して行った。およそ２×１０７ 酵母をペレットにし、洗浄緩衝液で３回洗浄し、３０℃において、平衡条件下で、漸減濃度のビオチン化抗原（１００〜１ｎＭ）とともに種交差反応性を得るために異なる種の１００ｎＭ ビオチン化抗原とともに、または選択から非特異的抗体を除去するために多重特異性除去試薬（ｐｏｌｙ−ｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙ ｄｅｐｌｅｔｉｏｎ ｒｅａｇｅｎｔ）（ＰＳＲ）とともにインキュベートした。そのＰＳＲ除去のために、そのライブラリーを、以前に記載されるようにビオチン化ＰＳＲ試薬の１：１０希釈物とともにインキュベートした（例えば、Ｙ． Ｘｕら， Ａｄｄｒｅｓｓｉｎｇ ｐｏｌｙｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙ ｏｆ ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ｓｅｌｅｃｔｅｄ ｆｒｏｍ ａｎ ｉｎ ｖｉｔｒｏ ｙｅａｓｔ ｐｒｅｓｅｎｔａｔｉｏｎ ｓｙｓｔｅｍ： ａ ＦＡＣＳ−ｂａｓｅｄ， ｈｉｇｈ−ｔｈｒｏｕｇｈｐｕｔ ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ ａｎｄ ａｎａｌｙｔｉｃａｌ ｔｏｏｌ． ＰＥＤＳ ２６．１０， ６６３−７０ （２０１３）を参照のこと）。次いで、酵母を洗浄緩衝液で２回洗浄し、ＬＣ−ＦＩＴＣ（１：１００希釈）およびＳＡ−６３３（１：５００希釈）またはＥＡＰＥ（１：５０希釈）二次試薬のいずれかで、１５分間、４℃において染色した。洗浄緩衝液で２回洗浄した後に、その細胞ペレットを、０．３ｍＬ 洗浄緩衝液中に再懸濁し、ストレーナーキャップ付きのソートチューブ（ｓｔｒａｉｎｅｒ−ｃａｐｐｅｄ ｓｏｒｔ ｔｕｂｅ）に移した。ＦＡＣＳ ＡＲＩＡソーター（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）を使用してソーティングを行い、ソートゲートを、所望の特徴を有する抗体を選択するために決定した。選択ラウンドを、その所望の特徴の全てを有する集団が得られるまで反復した。最終ラウンドのソーティングの後に、酵母をプレートし、個々のコロニーを特徴付けのために拾い上げた。
抗体最適化
抗体の最適化を、軽鎖多様化プロトコルを介して、次いで、以下に記載されるように重鎖可変領域および軽鎖可変領域へと多様性を導入することによって行った。これらのアプローチのうちのいくつかの組み合わせは、各抗体のために使用した。
軽鎖バッチ多様化プロトコル： ナイーブ選択アウトプットからの重鎖プラスミドを、その酵母からスマッシュアンドグラブ法（ｓｍａｓｈ ａｎｄ ｇｒａｂ）を介して抽出し、Ｅ．ｃｏｌｉ中で増殖させ、その後、Ｅ．ｃｏｌｉから精製し、５×１０６の多様性を有する軽鎖ライブラリーへと形質転換した。ナイーブディスカバリーと同じ条件を使用して、１ラウンドのＭＡＣＳおよび４ラウンドのＦＡＣＳで選択を行った。
ＣＤＲＨ１およびＣＤＲＨ２選択：単一の抗体のＣＤＲＨ３を、１×１０８の多様性のＣＤＲＨ１およびＣＤＲＨ２バリアントを有する予め作製したライブラリーへと組換えて、ナイーブディスカバリーに記載されるように１回のＭＡＣＳラウンドおよび４回のＦＡＣＳラウンドで選択を行った。各ＦＡＣＳラウンドのために、そのライブラリーをＰＳＲ結合、種交差反応性、および親和性圧に関して調べ、所望の特徴を有する集団を得るためにソーティングを行った。
ＶＨ変異体選択： 重鎖可変領域（ＶＨ）を、エラープローンＰＣＲを介して変異誘発した。次いで、そのライブラリーを、この変異誘発したＶＨおよび重鎖発現ベクターを、その親の軽鎖プラスミドを既に含む酵母へと形質転換することによって作り出した。２回のラウンドにわたるＦＡＣＳソートを使用して、以前のサイクルに類似の選択を行った。各ＦＡＣＳラウンドのために、そのライブラリーをＰＳＲ結合、種交差反応性、および親和性圧に関して調べ、所望の特徴を有する集団を得るためにソーティングを行った。
抗体生成および精製
酵母クローンを飽和するまで成長させ、次いで、４８時間、３０℃において振盪しながら誘導した。誘導後、酵母細胞をペレットにし、精製するためにその上清を採取した。プロテインＡカラムを使用し、酢酸（ｐＨ２．０）で溶離して、ＩｇＧを精製した。Ｆａｂフラグメントを、パパイン消化によって生成し、ＫａｐｐａＳｅｌｅｃｔ（登録商標）（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ ＬｉｆｅＳｃｉｅｎｃｅｓ）で精製した。
ＦｏｒｔｅＢｉｏ ＫＤ測定
ＦｏｒｔｅＢｉｏ親和性測定を、概して以前に記載されるようにＯｃｔｅｔＲＥＤ３８４で行った（例えば、Ｅｓｔｅｐら， Ｈｉｇｈ ｔｈｒｏｕｇｈｐｕｔ ｓｏｌｕｔｉｏｎ−ｂａｓｅｄ ｍｅａｓｕｒｅｍｅｎｔ ｏｆ ａｎｔｉｂｏｄｙ−ａｎｔｉｇｅｎ ａｆｆｉｎｉｔｙ ａｎｄ ｅｐｉｔｏｐｅ ｂｉｎｎｉｎｇ． Ｍａｂｓ ５（２）， ２７０−２７８（２０１３）を参照のこと）。簡潔には、ＦｏｒｔｅＢｉｏ親和性測定を、ＩｇＧをＡＨＱセンサーにオンラインで負荷することによって行った。センサーを、アッセイ緩衝液中、オフラインで３０分間平衡化し、次いで、ベースライン確立のために６０秒間オンラインでモニターした。ＩｇＧが負荷されたセンサーを、１００ｎＭ 抗原に３分間曝し、その後、オフ速度（ｏｆｆ−ｒａｔｅ）測定のために３分間アッセイ緩衝液に移した。一価親和性評価のために、ＦａｂをＩｇＧの代わりに使用した。この評価のために、非ビオチン化Ｆｃ融合抗原を、ＡＨＱセンサーにオンラインで負荷した。センサーを、アッセイ緩衝液中、オフラインで３０分間平衡化し、次いで、ベースライン確立のために６０秒間オンラインでモニターした。抗原が負荷されたセンサーを、２００ｎＭ Ｆａｂに３分間曝し、その後、それらをオフ速度測定のために３分間アッセイ緩衝液に移した。全ての動力学を、１：１結合モデルを使用して分析した。
ＦｏｒｔｅＢｉｏエピトープビニング／リガンドブロッキング
エピトープビニング／リガンドブロッキングを、標準的なサンドイッチ形式の交差遮断アッセイを使用して行った。コントロール抗標的ＩｇＧをＡＨＱセンサーに負荷し、そのセンサー上の占有されていないＦｃ−結合部位を、無関係のヒトＩｇＧ１抗体で遮断した。次いで、そのセンサーを、１００ｎＭ 標的抗原に曝し、続いて、第２の抗標的抗体またはリガンドに曝した。抗原会合後のその第２の抗体またはリガンドによるさらなる結合は、占有されていないエピトープ（非競合物（non-competitor））を示す一方で、結合なしは、エピトープ遮断（競合物またはリガンドブロッキング）を示す。
サイズ排除クロマトグラフィー
ＴＳＫｇｅｌ（登録商標） ＳｕｐｅｒＳＷ ｍＡｂ ＨＴＰカラム（２２８５５）を、６分／実行のサイクルタイムで、０．４ｍＬ／分での、哺乳動物が生成したｍＡｂのファストＳＥＣ分析（ｆａｓｔ ＳＥＣ ａｎａｌｙｓｉｓ）のために使用した。２００ｍＭ リン酸ナトリウムおよび２５０ｍＭ 塩化ナトリウムを、移動相として使用した。
ダイナミックスキャニング蛍光定量法
１０μＬの２０× Ｓｙｐｒｏ Ｏｒａｎｇｅを、２０μＬの０．２〜１ｍｇ／ｍＬ ｍＡｂまたはＦａｂ溶液に添加する。ＲＴ−ＰＣＲ機器（ＢｉｏＲａｄ ＣＦＸ９６ ＲＴ ＰＣＲ）を使用して、サンプルプレート温度を４０℃から９５℃へと０．５C刻みで、各温度で２分間平衡化して、徐々に上げる。生データについて負の一次導関数を、Ｔｍを抽出するために使用する。
実施例２．抗体特徴付け
ＦｏｒｔｅＢｉｏ ＫＤ測定： 組換えモノマーヒト、マウス、またはカニクイザルＮＲＰ−１に対する抗体の定量的結合を、ＦＯＲＴＥＢＩＯ（登録商標）を使用するバイオレイヤー干渉法（ＢＬＩ）を使用して測定した。選択された抗体の親和性測定を、Ｅｓｔｅｐら， Ｍａｂｓ， ２０１３， ５：２７０−２７８（その全体において参考として援用される）に一般的に記載されるように行った。ＦＯＲＴＥＢＩＯ親和性測定を、ＩｇＧ（ヒトＩｇＧ１ Ｎ２９７Ａ）をＡＨＱセンサーにオンラインで負荷することによって行った。センサーを、アッセイ緩衝液中、オフラインで３０分間平衡化し、次いで、ベースライン確立のために６０秒間オンラインでモニターした。ＩｇＧが負荷されたセンサーを、単一の濃度の抗原（１００ｎＭ）に３分間曝した。その後、それらをオフ速度（ｏｆｆ−ｒａｔｅ）測定のために３分間アッセイ緩衝液に移した。動力学を、１：１結合モデルを使用して分析した。単一の濃度のヒト、カニクイザル、およびマウスＮＲＰ−１に結合する抗体に関するＫＤ測定値のまとめを、以下の表５に示す。
さらなるＫＤ測定を、多濃度動力学を使用して、８種の抗体（ヒトＩｇＧ４ Ｓ２２８Ｐ）で行った。ヒトＮＲＰ−１−Ｈｉｓ、カニクイザルＮＲＰ−１−Ｈｉｓ、およびマウスＮＲＰ−１−Ｈｉｓに対する結合親和性を、Ｏｃｔｅｔ ＱＫｅ機器（ＦｏｒｔｅＢｉｏ）を使用して測定した。センサー上での抗体の捕捉、続いて、モノマーＮＲＰ−１タンパク質の会合／解離というストラテジーを使用して、そのアッセイにおける結合力効果を回避した。そのＢＬＩ分析を、３０℃において、１× 動力学緩衝液（ＦｏｒｔｅＢｉｏ， Ｉｎｃ．）をアッセイ緩衝液として使用して行った。抗ヒトＩｇＧ Ｆｃ Ｃａｐｔｕｒｅ（ＡＨＣ）バイオセンサー（ＦｏｒｔｅＢｉｏ）を先ず、５分間より長く、アッセイ緩衝液中に予め浸漬した。試験抗体（５μｇ／ｍＬ）を、２５０秒間、センサー上に捕捉した。次いで、センサーをアッセイ緩衝液に６０秒間浸して、ベースラインを確立し、その後、各ＮＲＰ−１タンパク質への結合を測定した。次いで、センサーを、種々の濃度のヒトＮＲＰ−１−Ｈｉｓ（９３．３〜０．７ｎＭ、アッセイ緩衝液中で２倍希釈）、カニクイザルＮＲＰ−１−Ｈｉｓ（９３．３〜１．５ｎＭ、アッセイ緩衝液中で２倍希釈）、またはマウスＮＲＰ−１−Ｈｉｓ（９３．３〜１．５ｎＭ、アッセイ緩衝液中で２倍希釈）へと２５０秒間浸して、会合を測定した。次いで、ＮＲＰ−１の解離を、センサーをアッセイ緩衝液に６００秒間浸すことによって測定した。全ての工程での撹拌は、１０００ｒｐｍであった。動力学的パラメーターを、参照の差し引き（緩衝液への抗体「結合」）、解離ベースの工程内補正、１：１結合モデル、およびグローバルフィット（センサーによって連結されないＲｍａｘ）を使用して、Ｏｃｔｅｔ Ｄａｔａ Ａｎａｌｙｓｉｓ Ｓｏｆｔｗａｒｅ Ｖｅｒｓｉｏｎ ８．２．０．７で生成した。ＫＤ値を、表６に示す。
ＭＳＤ−ＳＥＴ ＫＤ測定： ヒトＮＲＰ−１に結合する選択された抗体の溶液平衡親和性測定を、以前に一般に記載されるように行った。Ｅｓｔｅｐら，前出（その全体において参考として援用される）を参照のこと。簡潔には、溶液平衡滴定（ＳＥＴ）を、ＰＢＳ ＋ ０．１％ ＩｇＧ−Ｆｒｅｅ ＢＳＡ（ＰＢＳＦ）中、１０〜１００ｐＭで一定に保持された抗原とともに行い、１０ｐＭ〜１０ｎＭで出発して、ＦａｂまたはｍＡｂの３〜５倍系列希釈物とともにインキュベートした。抗体（ＰＢＳ中２０ｎＭ）を、標準結合ＭＳＤ−ＥＣＬプレート上に一晩４℃または室温において、３０分間被覆した。次いで、プレートを、ＢＳＡによって３０分間、７００ｒｐｍにおいて振盪しながら遮断し、続いて、洗浄緩衝液（ＰＢＳＦ ＋ ０．０５％ Ｔｗｅｅｎ（登録商標） ２０）で３回洗浄した。ＳＥＴサンプルを適用し、そのプレート上で１５０秒間、７００ｒｐｍにおいて振盪しながらインキュベートし、続いて１回洗浄した。プレート上に捕捉した抗原を、そのプレート上で３分間インキュベートすることによって、ＰＢＳＦ中の２５０ｎｇ／ｍＬ スルホタグ標識したストレプトアビジンで検出した。そのプレートを、洗浄緩衝液で３回洗浄し、次いで、界面活性剤を有する１×Ｒｅａｄ Ｂｕｆｆｅｒ Ｔを使用して、ＭＳＤ Ｓｅｃｔｏｒ Ｉｍａｇｅｒ ２４００機器で読み取った。そのパーセント遊離抗原を、Ｐｒｉｓｍにおいて力価測定された抗体の関数としてプロットし、二次方程式に対してフィットさせて、そのＫＤを導いた。スループットを改善するために、液体取り扱いロボットを、ＳＥＴサンプル調製を含め、ＭＳＤ−ＳＥＴ実験全体を通じて使用した。
Figure 2020511947
Figure 2020511947
 実施例３．９種の抗ＮＲＰ−１ ＭＡＢ単独でのおよびＰＤ−１またはＰＤ−Ｌ１抗体と組み合わせての抗腫瘍有効性
９種の最適化した抗体を、免疫適格性マウスを使用して抗腫瘍有効性に関して評価した。そのアッセイを、ＭＡＢ２、ＭＡＢ３、ＭＡＢ４、ＭＡＢ５、ＭＡＢ７、ＭＡＢ１２、ＭＡＢ１３、ＭＡＢ１４、およびＭＡＢ１５のマウスバージョンの一団、ならびに比較因子としてのＩｇＧコントロールおよびＳＥＣ１０（配列番号１４１〜１４２）で行った。その抗体を、ＡＤＣＣおよびＣＤＣエフェクター細胞を止めるＮ２９７Ａ変異を含むキメラマウスＩｇＧ２ａ抗体として試験した。抗腫瘍有効性を、雌性ＢＡＬＢ／ｃマウスにおいて増殖させたマウス結腸ＣＴ２６同系腫瘍モデルを使用して測定した。３×１０５ マウスＣＴ２６細胞を、１日目に皮下移植した。そのマウスを、体重に基づいてランダム化し、抗体を、腫瘍細胞移植と同日に、示された用量で腹腔内投与した。その抗ＮＲＰ−１抗体を、単剤療法として５００μｇ／用量においてまたは２００μｇ／用量で使用する抗ＰＤ−１免疫チェックポイント阻害剤と組み合わせて投与した。図１Ａは、ＣＴ２６モデルにおける抗体の単剤療法効果を示し、図１Ｂは、抗ＮＲＰ−１抗体と抗ＰＤ−１との併用の効果を示す。水平軸に沿った黒の矢印は、抗体の処置日数を示す。１０匹／群のマウスの平均腫瘍容積を、各処置群に対して示す。
図１Ｃは、マウス結腸ＣＴ２６同系腫瘍モデルにおいてｍＭＡＢ１２単独おとび抗ＰＤ−１チェックポイント抗体との併用を比較する、図１Ａおよび１Ｂからのデータの部分セットを示す。５００μｇ／動物でのｍＭＡＢ１２は、コントロール抗体処置マウスと比較して、腫瘍成長を６１．６％ ＴＧＩ（腫瘍成長阻害）阻害した。この効果は、スチューデントのｔ検定によって統計的に有意であった（ｐ＜０．０５）。２００μｇ／動物で投与したその抗ＰＤ−１チェックポイント抗体は、ｍＭＡＢ１２より効果的ではなかった（３７．８％ ＴＧＩ、ｐ＜０．０５）。しかし、ｍＭＡＢ１２とＰＤ−１抗体との併用は、その単剤療法処置と比較して、相加的な抗腫瘍有効性を生じた（７９．０％ ＴＧＩ、ｐ＜０．００１）。その併用の効果は、ＰＤ−１およびｍＭＡＢ１２と比較した場合に統計的に有意であった（両方の場合でｐ＜０．０５）。ｍＭＡＢ１２群における１つの非処置関連死のマウスを除いて、その処置クールにわたって全て体重が増大した処置マウスは、都合の悪い毒性を示さなかった。
その同じ９種の抗体を、第２の腫瘍モデルであるマウス結腸ＭＣ３８同系モデルにおいて評価した。５×１０５ マウスＭＣ３８細胞を、雌性Ｃ５７Ｂｌ／６マウスへと皮下移植した。そのマウスを、その腫瘍が平均腫瘍容積６０ｍｍ３〜９０ｍｍ３に達した場合に処置群へとランダム化し、続いて、１日目に処置を開始した。その抗ＮＲＰ−１抗体を、５００μｇ／用量での単剤療法または２５０μｇ／用量で使用する抗ＰＤ−Ｌ１免疫チェックポイント阻害剤との併用において投与した。その抗ＰＤ−Ｌ１抗体は、ＰＤ−１抗体と同じチェックポイント経路で機能する。図２Ａは、ＭＣ３８モデルにおける抗体の単剤療法効果を示し、図２Ｂは、抗ＮＲＰ−１抗体と抗ＰＤ−Ｌ１との併用の効果を示す。水平軸に沿った黒の矢印は、処置日数を示す。１０匹のマウス／群の平均腫瘍容積を、各処置群に対して示す。
ＭＣ３８同系結腸マウス腫瘍モデルにおけるｍＭＡＢ１２の抗腫瘍有効性を、図２Ｃに示す。５００μｇ／動物でのｍＭＡＢ１２は、コントロール抗体処置マウスと比較して、腫瘍成長を７７．３％ ＴＧＩ（ｐ＜０．０５）阻害した。そのＭＣ３８モデルは、ＰＤ−１抗体遮断に非常に敏感である。従って、ＰＤ−１抗体と同じ免疫チェックポイント経路において機能する、２５０μｇ／動物でのＰＤ−Ｌ１に対する抗体を使用して、潜在的な併用の利益を示した。予測されるように、ＰＤ−Ｌ１単剤療法は、腫瘍成長を７７．５％ ＴＧＩ（ｐ＜０．０５）において遮断した。しかし、ｍＭＡＢ１２とＰＤ−Ｌ１抗体との併用は、さらなる抗腫瘍利益を示さなかった（７６．２％ ＴＧＩ）。ＣＴ２６モデルと同様に、その処置クールにわたって全て体重が増大した処置マウスは、都合の悪い毒性を示さなかった。４種の抗体（ＭＡＢ２、ＭＡＢ５、ＭＡＢ１２、およびＭＡＢ１３）を、ＣＴ２６およびＭＣ３８研究におけるそれらの有効性に基づいて選択し、ＭＣ３８モデルにおいて同じ条件下で（単独で、および抗ＰＤ−Ｌ１との組み合わせで）再度試験した。その反復ＭＣ３８研究における知見から、有効性および寛容性に関する上記の知見が確認された。
実施例４．ＮＲＰ−１リガンドの遮断の評価
組換えヒトＮＲＰ−１への組換えヒトＳＥＭＡ３ＡおよびヒトＶＥＧＦＡの結合を遮断する抗体の能力を測定する定量的リガンド遮断研究を、遮断ＥＬＩＳＡ（ｂｌｏｃｋｉｎｇ ＥＬＩＳＡ）によって測定した。その抗体がＳＥＭＡ３Ａ／ＮＲＰ−１相互作用を遮断する能力を測定するために、そのアッセイプレートを、ＰＢＳ中２．５μｇ／ｍＬのヒトＳＥＭＡ３Ａで、一晩４℃において被覆した。ビオチン化ヒトＮＲＰ−１（１％ ＢＳＡ／ＰＢＳ中５００ｎｇ／ｍＬ）を、アッセイプレートに添加する前に試験抗体（３０〜０．００２μｇ／ｍＬ、１％ ＢＳＡ／ＰＢＳ中４倍希釈）とともにインキュベートし、次いで、ＨＲＰ結合体化ストレプトアビジン（１％ ＢＳＡ／ＰＢＳ中１：２００）を、ＳＥＭＡ３Ａに結合したＮＲＰ−１の検出に使用した。簡潔には、抗体がそのＶＥＧＦＡ／ＮＲＰ−１相互作用を遮断する能力を測定するために、そのアッセイプレートを、ＰＢＳ中２．５μｇ／ｍＬのヒトＮＲＰ−１で、一晩４℃において被覆した。試験抗体（３０〜０．００２μｇ／ｍＬ、１％ ＢＳＡ／ＰＢＳ中４倍希釈）を、そのアッセイプレートに添加する前に、ＶＥＧＦＡ（１２５ｎｇ／ｍＬ）とともにインキュベートし、ビオチン化抗ＶＥＧＦＡ抗体（１％ ＢＳＡ／ＰＢＳ中０．２μｇ／ｍＬ）を添加し、次いで、ＨＲＰ結合体化ストレプトアビジン（１％ ＢＳＡ／ＰＢＳ中１：２００）を、ＮＲＰ−１に結合したＶＥＧＦＡの検出に使用した。ＳＥＭＡ３Ａ／ＶＥＧＦＡ結合を遮断する１５のＩｇＧ１形式試験抗体に関するそのＩＣ５０値を、表７に示す。
Figure 2020511947
８種のＭＡＢをＩｇＧ４ Ｓ２２８Ｐ形式に変換し、そのアッセイを反復した。その平均のまとめを、表８に示す。
Figure 2020511947
実施例５．ＭＡＢ１２ 対 ＳＥＣ１０のエピトープビニング
ＭＡＢ１２およびＳＥＣ１０のエピトープビニングを、Ｏｃｔｅｔ（登録商標） ＱＫｅ機器（ＦｏｒｔｅＢｉｏ（登録商標））を使用するバイオレイヤー干渉法（ＢＬＩ）を使用して測定した。５μｇ／ｍＬのＭＡＢ１２またはＳＥＣ１０を、抗ヒトＦｃ ＡＨＣセンサー上に３００秒間固定化した。次いで、センサーを、ベースライン決定のために、動力学緩衝液に浸した。次に、センサーを、２００μｇ／ｍｌのヒトＩｇＧに４００秒間浸して、そのセンサー上のＩｇＧ Ｆｃ結合部位の全てを飽和させた。ベースライン決定の後に、そのセンサーを、１００ｎＭ ヒトＮＲＰ−１−ＨＩＳに３００秒間曝して、抗原結合を可能にした。最後に、センサーを、２０μｇ／ｍＬのＭＡＢ１２またはＳＥＣ１０のいずれかを含むウェルに３００秒間移して、抗体結合を分析した。その試験抗体が最後の工程において明らかな結合を示した場合、それは非競合者（異なるエピトープビン）と見做され、その試験抗体が明らかな結合を示さなかった場合、それは競合者（同じエピトープビン）と見做される。
結果を図３に示す。ＭＡＢ１２を捕捉し、次いでＮＲＰ−１を結合しても、ＳＥＣ１０がＮＲＰ−１に結合することを防止しない（上のパネル）。同様に、ＳＥＣ１０を捕捉し、次いでＮＲＰ−１を結合しても、ＭＡＢ１２がＮＲＰ−１に結合することも防止しない（下のパネル）。自己ビニング（例えば、ＭＡＢ１２を捕捉し、ＮＲＰ−１に結合し、ＭＡＢ１２の結合を試験する）は、ビニングに関する陽性コントロールとして働いた。これらのデータは、ＭＡＢ１２およびＳＥＣ１０がＮＲＰ−１に同時に結合し得、従って、異なるエピトープに結合しているはずであることを示す。
実施例６．ＮＲＰ−１ドメインへの抗ＮＲＰ−１抗体の結合
ヒトＮＲＰ−１に結合する工程の近似の結合ドメインを理解するために、抗体がＮＲＰ−１細胞外領域の異なるドメインを含むＮＲＰ−１のフラグメントに結合する能力を、Ｏｃｔｅｔ（登録商標）ＱＫｅ機器（ＦｏｒｔｅＢｉｏ（登録商標））を使用して、ＢＬＩによって測定した。組換えヒトＮＲＰ−１−Ｆｃ融合タンパク質は、ａ１ドメイン、ａ１ａ２ドメイン、ａ１ａ２ｂ１ドメイン、ａ２ｂ１ｂ２ドメイン、またはａ１ａ２ｂ１ｂ２ドメインからなり、各タンパク質への抗体結合におけるその差異は、どの主要ドメインにその抗体が結合するかの決定をもたらした。そのＢＬＩ分析は、アッセイ緩衝液として１×動力学緩衝液（ＦｏｒｔｅＢｉｏ）を使用して、２９℃または３０℃において行った。簡潔には、抗体（５μｇ／ｍＬ）を、抗ヒトＩｇＧ Ｆｃ（ＡＨＣ）バイオセンサー上に２５０秒間捕捉した。次いで、センサーを、アッセイ緩衝液に（１００秒間）浸して、各ＮＲＰ−１タンパク質への結合を測定する前にベースラインを達成した。ヒトＩｇＧ Ｆｃ（実験に依存して、１５０ｎＭ、２５０ｎＭまたは５００ｎＭ）を使用して２５０秒間クエンチする工程を、次に行った。次いで、センサーを、５００ｎＭの各ＮＲＰ−１タンパク質に３００秒間浸し、続いて、アッセイ緩衝液中で９００秒間または１０００秒間、各ＮＲＰ−１タンパク質の解離を行った。全ての工程に対して、実験に依存して９００ｒｐｍまたは１０００ｒｐｍの撹拌を行った。
表９は、上記で記載されるアッセイの結果を示す。各抗体に関する結合ドメインは、最も右の列に示される。
Figure 2020511947
実施例７：エピトープ決定のための変異分析
ヒトＮＲＰ１のｂ１ドメインへのＭＡＢ１２結合のエピトープを同定するために、単一の点変異を、ヒトＮＲＰ１ ｂ１ドメイン内に作製した。アラニン置換またはＮＲＰ２特異的残基のいずれかを使用した（ＭＡＢ１２は、ＮＲＰ２に結合しない）。タンパク質は、ＨＥＫ２９３細胞において発現され、可溶性タンパク質として分泌され、Ｎｉ−ＮＴＡ樹脂上で精製され、ＳＤＳ−ＰＡＧＥによって特徴付けされた。結合を、Ｏｃｔｅｔプラットフォームを使用するバイオレイヤー干渉法（ＢＬＩ）によって評価した。ＭＡＢ１２を抗ヒトＦｃセンサー上に捕捉し、洗浄し、モノマーの野生型ヒトＮＲＰ１ ｂ１ドメインまたはモノマーの変異ＮＲＰ１ ｂ１のいずれかに曝した。その結合エピトープの一部と考えられた残基は、低減した結合（例えば、野生型ヒトＮＲＰ１ ｂ１への結合のものより５倍小さいＫＤ（ご確認ください））または結合なしを示した。単一の点変異Ｐ３１７Ａ、Ｄ３２０Ａ、Ｔ３４９Ａ、Ｋ３５２Ｇ、Ｙ３５３Ａ、Ｙ３５４Ａ、およびＴ４１３Ａは、低減した結合を生じたのに対して、Ｋ３５１ＮおよびＥ４１２Ｈは、結合を生じなかった。
実施例８：ＮＲＰ１と複合体化したＭＡＢ１２の構造決定
結合エピトープを、結晶学的研究を通じても同定した。ＭＡＢ１２ Ｆａｂを、ヒトＮＲＰ１ ｂ１と複合体化し、サイズ排除クロマトグラフィーによって精製し、１０ｍｇ／ｍｌへと濃縮した。結晶を４２％ ＰＥＧ２００、ＨＥＰＥＳ ｐＨ ７から成長させた。Ｘ線データを、Ａｒｇｏｎｎｅ Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ（ＧＭ／ＣＡ ＣＡＴ ２３ＩＤ−Ｄ）において集め、ＣＣＰ４およびＰｈｅｎｉｘを使用して処理した。重鎖および軽鎖から３．８Åの一定距離内のＮＲＰ１ ｂ１残基を、結合エピトープの一部と見做した。これは、Ｙ２９７、Ｔ３１６、Ｄ３２０、Ｅ３４８、Ｔ３４９、Ｋ３５０、Ｋ３５１、Ｋ３５２、Ｙ３５３、Ｙ３５４、Ｅ４１２、Ｔ４１３、Ｇ４１４およびＩ４１５を含む。
実施例９：ＭＡＢ１２のアミノ酸改変の分析
精製ＭＡＢ１２のアミノ酸改変の分析から、重鎖のＣ末端におけるリジンの欠失が精製抗体のうちの大部分で起こり、軽鎖のＮ末端におけるグルタミン酸のピログルタミン化が精製抗体のうちのいくらかで起こることが示唆された。
援用
本明細書で引用される全ての特許および非特許刊行物の全開示は、全ての目的のためにそれらの全体において各々参考として援用される。
他の実施形態
上記で示される開示は、独立した有用性を有する複数の別個の発明を包含し得る。これらの発明の各々がその好ましい形態において開示されてきたが、本明細書で開示されかつ例証されるとおりのこれらの具体的実施形態が、限定する意味で考慮されるべきではない。なぜなら多くのバリエーションが可能だからである。本発明の主題は、本明細書で開示される種々の要素、特徴、機能、および／または特性の全ての新規かつ自明でない組み合わせおよび部分組み合わせを含む。以下の請求項は特に、新規かつ自明でないと考えられるある種の組み合わせおよび部分組み合わせを指し示す。特徴、機能、要素、および／または特性の他の組み合わせおよび部分組み合わせにおいて具現化される発明は、本出願において、本出願からの優先権を主張する出願において、または関連出願において特許請求されうる。このような請求項はまた、異なる発明に関しようが同じ発明に関しようが、そしてその元の請求項との比較において範囲がより広かろうが、より狭かろうが、等しかろうが、異なろうが、本開示の発明の主題の範囲内に含まれると考えられる。
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Claims (132)

  1. ヒトＮＲＰ−１（ｈＮＲＰ−１；配列番号１３０）に特異的に結合する単離された多価抗原結合タンパク質（ＡＢＰ）であって、ここで該ＡＢＰは、以下の６つのＣＤＲ配列：
    （ａ）配列番号４７に示される配列を有するＣＤＲ−Ｈ３；
    （ｂ）配列番号１３６に示されるとおりの配列 Ｘ１ＩＳＧＳＧＧＸ２ＴＹＹＡＤＳＶＸ３Ｇを有するＣＤＲ−Ｈ２であって、ここでＸ１はＩまたはＡであり、Ｘ２はＳまたはＡであり、Ｘ３はＫまたはＥである、ＣＤＲ−Ｈ２；
    （ｃ）配列番号１３７に示されるとおりの配列 ＦＴＦＸ１ＳＸ２ＡＭＶを有するＣＤＲ−Ｈ１であって、ここでＸ１はＡ、Ｋ、またはＳであり、Ｘ２はＹまたはＶである、ＣＤＲ−Ｈ１；
    （ｄ）配列番号８１に示される配列を有するＣＤＲ−Ｌ３；
    （ｅ）配列番号７１に示される配列を有するＣＤＲ−Ｌ２；および
    （ｆ）配列番号６３に示される配列を有するＣＤＲ−Ｌ１
    を含む、多価抗原結合タンパク質。
  2. 前記ＡＢＰは、
    （ａ）配列番号４７のＣＤＲ−Ｈ３、配列番号２７のＣＤＲ−Ｈ２、配列番号１２のＣＤＲ−Ｈ１、配列番号８１のＣＤＲ−Ｌ３、配列番号７１のＣＤＲ−Ｌ２、および配列番号６３のＣＤＲ−Ｌ１；
    （ｂ）配列番号４７のＣＤＲ−Ｈ３、配列番号２８のＣＤＲ−Ｈ２、配列番号１３のＣＤＲ−Ｈ１、配列番号８１のＣＤＲ−Ｌ３、配列番号７１のＣＤＲ−Ｌ２、および配列番号６３のＣＤＲ−Ｌ１；
    （ｃ）配列番号４７のＣＤＲ−Ｈ３、配列番号２９のＣＤＲ−Ｈ２、配列番号１４のＣＤＲ−Ｈ１、配列番号８１のＣＤＲ−Ｌ３、配列番号７１のＣＤＲ−Ｌ２、および配列番号６３のＣＤＲ−Ｌ１；または
    （ｄ）配列番号４７のＣＤＲ−Ｈ３、配列番号３０のＣＤＲ−Ｈ２、配列番号１４のＣＤＲ−Ｈ１、配列番号８１のＣＤＲ−Ｌ３、配列番号７１のＣＤＲ−Ｌ２、および配列番号６３のＣＤＲ−Ｌ１、
    を含む、請求項１に記載のＡＢＰ。
  3. （ａ）請求項２（ａ）のＡＢＰは、配列番号９２のＶＨ配列および配列番号１０４のＶＬ配列を含む；
    （ｂ）請求項２（ｂ）のＡＢＰは、配列番号９３のＶＨ配列および配列番号１０４のＶＬ配列を含む；
    （ｃ）請求項２（ｃ）のＡＢＰは、配列番号９４のＶＨ配列および配列番号１０４のＶＬ配列を含む；
    （ｄ）請求項２（ｄ）のＡＢＰは、配列番号９５のＶＨ配列および配列番号１０４のＶＬ配列を含む；または
    （ｅ）請求項２（ｄ）のＡＢＰは、配列番号９６のＶＨ配列および配列番号１０４のＶＬ配列を含む、
    請求項２に記載のＡＢＰ。
  4. （ａ）請求項２（ａ）のＡＢＰは、（ｉ）配列番号１１４の重鎖および配列番号１２６の軽鎖を含む；
    （ｂ）請求項２（ｂ）のＡＢＰは、（ｉ）配列番号１１５の重鎖および配列番号１２６の軽鎖を含む；
    （ｃ）請求項２（ｃ）のＡＢＰは、（ｉ）配列番号１１６の重鎖および配列番号１２６の軽鎖を含む；
    （ｄ）請求項２（ｄ）のＡＢＰは、（ｉ）配列番号１１７の重鎖および配列番号１２６の軽鎖を含む；または
    （ｅ）請求項２（ｄ）のＡＢＰは、（ｉ）配列番号１１８の重鎖および配列番号１２６の軽鎖を含む、．
    請求項３に記載のＡＢＰ。
  5. ヒトＮＲＰ−１（ｈＮＲＰ−１；配列番号１３０）に特異的に結合する単離された多価抗原結合タンパク質（ＡＢＰ）であって、ここで該ＡＢＰは、以下の６つのＣＤＲ配列：
    （ａ）配列番号４１に示される配列を有するＣＤＲ−Ｈ３；
    （ｂ）配列番号２３に示される配列を有するＣＤＲ−Ｈ２；
    （ｃ）配列番号８に示される配列を有するＣＤＲ−Ｈ１；
    （ｄ）配列番号７７に示される配列を有するＣＤＲ−Ｌ３；
    （ｅ）配列番号６７に示される配列を有するＣＤＲ−Ｌ２、および
    （ｆ）配列番号５９に示される配列を有するＣＤＲ−Ｌ１、
    を含む、多価抗原結合タンパク質。
  6. （ａ）前記ＡＢＰは、配列番号８５のＶＨ配列および配列番号１００のＶＬ配列を含む；または
    （ｂ）前記ＡＢＰは、配列番号８６のＶＨ配列および配列番号１００のＶＬ配列を含む、
    請求項５に記載のＡＢＰ。
  7. （ａ）請求項６（ａ）のＡＢＰは、配列番号１０７の重鎖および配列番号１２２のκ軽鎖を含む；ならびに
    （ｂ）請求項６（ｂ）のＡＢＰは、配列番号１０８の重鎖および配列番号１２２のκ軽鎖を含む、
    請求項６に記載のＡＢＰ。
  8. ヒトＮＲＰ−１（ｈＮＲＰ−１；配列番号１３０）に特異的に結合する単離された多価抗原結合タンパク質（ＡＢＰ）であって、ここで該ＡＢＰは、以下の６つのＣＤＲ配列：
    （ａ）配列番号１３８に示されるとおりの配列 ＡＲＤＬＧＹＹＧＳＧＭＨＸを有するＣＤＲ−Ｈ３であって、ここでＸはＡまたはＶである、ＣＤＲ−Ｈ３；
    （ｂ）配列番号２４に示される配列を有するＣＤＲ−Ｈ２；
    （ｃ）配列番号９に示される配列を有するＣＤＲ−Ｈ１；
    （ｄ）配列番号７８に示される配列を有するＣＤＲ−Ｌ３；
    （ｅ）配列番号６８に示される配列を有するＣＤＲ−Ｌ２；および
    （ｆ）配列番号６０に示される配列を有するＣＤＲ−Ｌ１、
    を含む、多価抗原結合タンパク質。
  9. 前記ＡＢＰは、
    （ａ）配列番号４２のＣＤＲ−Ｈ３、配列番号２４のＣＤＲ−Ｈ２、配列番号９のＣＤＲ−Ｈ１、配列番号７８のＣＤＲ−Ｌ３、配列番号６８のＣＤＲ−Ｌ２、および配列番号６０のＣＤＲ−Ｌ１；または
    （ｂ）配列番号４３のＣＤＲ−Ｈ３、配列番号２４のＣＤＲ−Ｈ２、配列番号９のＣＤＲ−Ｈ１、配列番号７８のＣＤＲ−Ｌ３、配列番号６８のＣＤＲ−Ｌ２、および配列番号６０のＣＤＲ−Ｌ１、
    を含む、請求項８に記載のＡＢＰ。
  10. （ａ）前記ＡＢＰは、配列番号８７のＶＨ配列および配列番号１０１のＶＬ配列を含む；または
    （ｂ）前記ＡＢＰは、配列番号８８のＶＨ配列および配列番号１０１のＶＬ配列を含む、
    請求項８に記載のＡＢＰ。
  11. （ａ）前記ＡＢＰは、配列番号１０９の重鎖および配列番号１２３のκ軽鎖を含む；または
    （ｂ）前記ＡＢＰは、配列番号１１０の重鎖および配列番号１２３のκ軽鎖を含む、
    請求項８に記載のＡＢＰ。
  12. ヒトＮＲＰ−１（ｈＮＲＰ−１；配列番号１３０）に特異的に結合する単離された多価抗原結合タンパク質（ＡＢＰ）であって、ここで該ＡＢＰは、以下の６つのＣＤＲ配列：
    （ａ）（配列番号１３９）に示されるとおりの配列 ＡＲＤＲＧＭＹＹＡＳＧＦＸＰを有するＣＤＲ−Ｈ３であって、ここでＸはＧまたはＮである、ＣＤＲ−Ｈ３；
    （ｂ）配列番号２５に示される配列を有するＣＤＲ−Ｈ２；
    （ｃ）配列番号１０に示される配列を有するＣＤＲ−Ｈ１；
    （ｄ）配列番号７９に示される配列を有するＣＤＲ−Ｌ３；
    （ｅ）配列番号６９に示される配列を有するＣＤＲ−Ｌ２；および
    （ｆ）配列番号６１に示される配列を有するＣＤＲ−Ｌ１、
    を含む、多価抗原結合タンパク質。
  13. 前記ＡＢＰは、
    （ａ）配列番号４４のＣＤＲ−Ｈ３、配列番号２５のＣＤＲ−Ｈ２、配列番号１０のＣＤＲ−Ｈ１、配列番号７９のＣＤＲ−Ｌ３、配列番号６９のＣＤＲ−Ｌ２、および配列番号６１のＣＤＲ−Ｌ１；または
    （ｂ）配列番号４５のＣＤＲ−Ｈ３、配列番号２５のＣＤＲ−Ｈ２、配列番号１０のＣＤＲ−Ｈ１、配列番号７９のＣＤＲ−Ｌ３、配列番号６９のＣＤＲ−Ｌ２、および配列番号６１のＣＤＲ−Ｌ１、
    を含む、請求項１２に記載のＡＢＰ。
  14. （ａ）前記ＡＢＰは、配列番号８９のＶＨ配列および配列番号１０２のＶＬ配列を含む；または
    （ｂ）前記ＡＢＰは、配列番号９０のＶＨ配列および配列番号１０２のＶＬ配列を含む、
    請求項１２に記載のＡＢＰ。
  15. （ａ）前記ＡＢＰは、配列番号１１１の重鎖および配列番号１２４のκ軽鎖を含む；または
    （ｂ）前記ＡＢＰは、配列番号１１２の重鎖および配列番号１２４のκ軽鎖を含む、
    請求項１２に記載のＡＢＰ。
  16. 以下の６つのＣＤＲ配列を含む、ヒトＮＲＰ−１（ｈＮＲＰ−１；配列番号１３０）に特異的に結合する単離された多価抗原結合タンパク質（ＡＢＰ）：
    （ａ）配列番号４６に示される配列を有するＣＤＲ−Ｈ３；
    （ｂ）配列番号２６に示される配列を有するＣＤＲ−Ｈ２；
    （ｃ）配列番号１１に示される配列を有するＣＤＲ−Ｈ１；
    （ｄ）配列番号８０に示される配列を有するＣＤＲ−Ｌ３；
    （ｅ）配列番号７０に示される配列を有するＣＤＲ−Ｌ２；および
    （ｆ）配列番号６２に示される配列を有するＣＤＲ−Ｌ１。
  17. 前記ＡＢＰは、配列番号９１のＶＨ配列および配列番号１０３のＶＬ配列を含む、請求項１６に記載のＡＢＰ。
  18. 前記ＡＢＰは、配列番号１１３の重鎖および配列番号１２５のκ軽鎖を含む、請求項１６または請求項１７に記載のＡＢＰ。
  19. 以下の６つのＣＤＲ配列を含む、ヒトＮＲＰ−１（ｈＮＲＰ−１；配列番号１３０）に特異的に結合する単離された多価抗原結合タンパク質（ＡＢＰ）：
    （ａ）配列番号４８に示される配列を有するＣＤＲ−Ｈ３；
    （ｂ）配列番号３１に示される配列を有するＣＤＲ−Ｈ２；
    （ｃ）配列番号１５に示される配列を有するＣＤＲ−Ｈ１；
    （ｄ）配列番号８２に示される配列を有するＣＤＲ−Ｌ３；
    （ｅ）配列番号６８に示される配列を有するＣＤＲ−Ｌ２；および
    （ｆ）配列番号６４に示される配列を有するＣＤＲ−Ｌ１。
  20. 前記ＡＢＰは、
    （ａ）配列番号９７のＶＨ配列および配列番号１０５のＶＬ配列、または
    （ｂ）配列番号９８のＶＨ配列および配列番号１０５のＶＬ配列
    を含む、請求項１９に記載のＡＢＰ。
  21. 前記ＡＢＰは、
    （ａ）配列番号１１９の重鎖および配列番号１２７のκ軽鎖；または
    （ｂ）配列番号１２０の重鎖および配列番号１２７のκ軽鎖、
    を含む、請求項１９または請求項２０に記載のＡＢＰ。
  22. 以下の６つのＣＤＲ配列を含む、ヒトＮＲＰ−１（ｈＮＲＰ−１；配列番号１３０）に特異的に結合する単離された多価抗原結合タンパク質（ＡＢＰ）：
    （ａ）配列番号４９に示される配列を有するＣＤＲ−Ｈ３；
    （ｂ）配列番号３２に示される配列を有する；ＣＤＲ−Ｈ２；
    （ｃ）配列番号１６に示される配列を有するＣＤＲ−Ｈ１；
    （ｄ）配列番号８３に示される配列を有するＣＤＲ−Ｌ３；
    （ｅ）配列番号７２に示される配列を有するＣＤＲ−Ｌ２；および
    （ｆ）配列番号６５に示される配列を有するＣＤＲ−Ｌ１。
  23. 前記ＡＢＰは、配列番号９９のＶＨ配列および配列番号１０６のＶＬ配列を含む、請求項２２に記載のＡＢＰ。
  24. 前記ＡＢＰは、配列番号１２１の重鎖および配列番号１２８のκ軽鎖を含む、請求項１６または請求項２３に記載のＡＢＰ。
  25. 以下を含む、ヒトＮＲＰ−１（ｈＮＲＰ−１；配列番号１３０）に特異的に結合する単離された抗原結合タンパク質（ＡＢＰ）：
    （ａ）配列番号４１〜４９から選択されるＶＨ領域のＣＤＲ−Ｈ３と少なくとも約８０％の同一性を有するＣＤＲ−Ｈ３；
    （ｂ）配列番号２３〜３２から選択されるＶＨ領域のＣＤＲ−Ｈ２と少なくとも約８０％の同一性を有するＣＤＲ−Ｈ２；
    （ｃ）配列番号８〜１６から選択されるＶＨ領域のＣＤＲ−Ｈ１と少なくとも約８０％の同一性を有するＣＤＲ−Ｈ１；
    （ｄ）配列番号７７〜８３から選択されるＶＬ領域のＣＤＲ−Ｌ３と少なくとも約８０％の同一性を有するＣＤＲ−Ｌ３；
    （ｅ）配列番号６７〜７２から選択されるＶＬ領域のＣＤＲ−Ｌ２と少なくとも約８０％の同一性を有するＣＤＲ−Ｌ２；および
    （ｆ）配列番号５９〜６５から選択されるＶＬ領域のＣＤＲ−Ｌ１と少なくとも約８０％の同一性を有するＣＤＲ−Ｌ１。
  26. 前記ＣＤＲ−Ｈ３、ＣＤＲ−Ｈ２、ＣＤＲ−Ｈ１、ＣＤＲ−Ｌ３、ＣＤＲ−Ｌ２、およびＣＤＲ−Ｌ１は、Ｋａｂａｔ番号付けスキーム、Ｃｈｏｔｈｉａ番号付けスキーム、またはＩＭＧＴ番号付けスキームから選択される番号付けスキームに従って各々同定される、請求項２５に記載のＡＢＰ。
  27. 前記ＣＤＲ−Ｈ１は、Ｃｈｏｔｈｉａ番号付けスキームおよびＫａｂａｔ番号付けスキームの両方によって規定されるように（両方の番号付けスキームの境界を含む）同定される、請求項２５または２６に記載のＡＢＰ。
  28. （ａ）前記ＣＤＲ−Ｈ３は、配列番号４１〜４９から選択されるＣＤＲ−Ｈ３、または１個、２個、もしくは３個のアミノ酸置換を有するこれらのバリアントを含む；
    （ｂ）前記ＣＤＲ−Ｈ２は、配列番号２３〜３２から選択されるＣＤＲ−Ｈ３、または１個、２個、もしくは３個のアミノ酸置換を有するこれらのバリアントを含む；
    （ｃ）前記ＣＤＲ−Ｈ１は、配列番号８〜１６から選択されるＣＤＲ−Ｈ１、または１個もしくは２個のアミノ酸置換を有するこれらのバリアントを含む；
    （ｄ）前記ＣＤＲ−Ｌ３は、配列番号７７〜８３から選択されるＣＤＲ−Ｌ３、または１個もしくは２個のアミノ酸置換を有するこれらのバリアントを含む；
    （ｅ）前記ＣＤＲ−Ｌ２は、配列番号６７〜７２から選択されるＣＤＲ−Ｌ２、または１個のアミノ酸置換を有するこれらのバリアントを含む；および
    （ｆ）前記ＣＤＲ−Ｌ１は、配列番号５９〜６５から選択されるＣＤＲ−Ｌ１、または１個もしくは２個のアミノ酸置換を有するこれらのバリアントを含む、
    請求項２５に記載のＡＢＰ。
  29. 前記アミノ酸置換は、保存的アミノ酸置換である、請求項１〜２８のいずれか１項に記載のＡＢＰ。
  30. ヒトＮＲＰ−１に特異的に結合するＡＢＰであって、ここで該ＡＢＰは、以下のうちの１またはこれより多くを行う、ＡＢＰ：
    （ａ）ＮＲＰ−１への結合に関して、ＭＡＢ１、ＭＡＢ２、ＭＡＢ３、ＭＡＢ４、ＭＡＢ５、ＭＡＢ６、ＭＡＢ７、ＭＡＢ８、ＭＡＢ９、ＭＡＢ１０、ＭＡＢ１１、ＭＡＢ１２、ＭＡＢ１３、ＭＡＢ１４、もしくはＭＡＢ１５から選択される抗体（各々、本開示の付表Ａに提供されるとおり）と競合または交差競合する；
    （ｂ）細胞表面ＮＲＰ−１に対して特異的である；
    （ｃ）膜貫通セマフォリンポリペプチドへのＮＲＰ−１結合を特異的に遮断する；
    （ｄ）ＮＲＰ−１ポリペプチドと血管内皮細胞増殖因子（ＶＥＧＦ）ポリペプチドとの間の相互作用を遮断する；
    （ｅ）ヒト被験体におけるＴｒｅｇ抑制を阻害し得る；
    （ｆ）エフェクターＴ細胞を、抗原提示細胞からの抗原提示と組み合わせて共刺激する；
    （ｇ）調節性Ｔ細胞によるエフェクターＴ細胞の抑制を阻害する；
    （ｈ）組織中もしくは全身循環中のエフェクターＴ細胞の数を低減する；
    （ｉ）血小板に実質的に結合しない；
    （ｊ）患者に投与される場合に、血小板減少症を実質的に引き起こさない；
    （ｋ）ＮＲＰ−１へのＳＥＭＡ３結合を遮断する；
    （ｌ）ＮＲＰ−１陰性細胞に結合しない；
    （ｍ）Ｙ２９７、Ｔ３１６、Ｄ３２０、Ｅ３４８、Ｔ３４９、Ｋ３５０、Ｋ３５１、Ｋ３５２、Ｙ３５３、Ｙ３５４、Ｅ４１２、Ｔ４１３、Ｇ４１４およびＩ４１５からなる群より選択されるＮＲＰ１残基のうちの１もしくはこれより多くに特異的に結合する；または
    （ｎ）（ａ）〜（ｍ）のいずれかの組み合わせが可能である。
  31. 前記ＡＢＰ抗体は、ＭＡＢ１、ＭＡＢ２、ＭＡＢ３、ＭＡＢ４、ＭＡＢ５、ＭＡＢ６、ＭＡＢ７、ＭＡＢ８、ＭＡＢ９、ＭＡＢ１０、ＭＡＢ１１、ＭＡＢ１２、ＭＡＢ１３、ＭＡＢ１４、またはＭＡＢ１５から選択される抗体（各々、本開示の付表Ａに提供されるとおり）との結合に関して、競合または交差競合しない、請求項１〜３０のいずれか１項に記載のＡＢＰ。
  32. 前記ＮＲＰ−１は、ｈＮＲＰ−１（配列番号１３０）、ｃＮＲＰ−１（配列番号１３２）、ｍＮＲＰ−１（配列番号１３４）、ｒＮＲＰ−１（配列番号１３５）、およびこれらの組み合わせから選択される、請求項１〜３１のいずれか１項に記載のＡＢＰ。
  33. 前記ＡＢＰは、抗体を含む、請求項１〜３２のいずれか１項に記載のＡＢＰ。
  34. 前記抗体は、モノクローナル抗体である、請求項３３に記載のＡＢＰ。
  35. 前記抗体は、ヒト抗体、ヒト化抗体またはキメラ抗体から選択される、請求項３３または３４に記載のＡＢＰ。
  36. 前記ＡＢＰは多価である、請求項１〜３５のいずれか１項に記載のＡＢＰ。
  37. 前記ＡＢＰは抗体フラグメントを含む、請求項１〜３５のいずれか１項に記載のＡＢＰ。
  38. 前記ＡＢＰは代替の足場を含む、請求項１〜３７のいずれか１項に記載のＡＢＰ。
  39. 前記ＡＢＰは、免疫グロブリン定常領域を含む、請求項１〜３８のいずれか１項に記載のＡＢＰ。
  40. 前記ＡＢＰは、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、またはＩｇＭから選択されるクラスの重鎖定常領域を含む、請求項３９に記載のＡＢＰ。
  41. 前記ＡＢＰは、クラスＩｇＧおよびＩｇＧ４、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、またはＩｇＧ３から選択されるサブクラスの重鎖定常領域を含む、請求項４０に記載のＡＢＰ。
  42. 前記ＩｇＧはＩｇＧ４である、請求項４１に記載のＡＢＰ。
  43. 前記ＩｇＧはＩｇＧ１である、請求項４１に記載のＡＢＰ。
  44. 前記ＡＢＰは、共通軽鎖抗体、ｋｎｏｂｓ−ｉｎｔｏ−ｈｏｌｅｓ改変を有する抗体、ＩｇＧに結合したｓｃＦｖ、ＩｇＧに結合したＦａｂ、ダイアボディ、四価二重特異的抗体、ＤＶＤ−ＩｇＭＡＢ、ＤＡＲＴＴ Ｍ、ＤｕｏＢｏｄｙ（登録商標）、ＣｏｖＸ−Ｂｏｄｙ、Ｆｃａｂ抗体、ＴａｎｄＡｂ（登録商標）、タンデムＦａｂ、ＺｙｂｏｄｙＭＡＢ、またはこれらの組み合わせを含む、請求項１〜４３のいずれか１項に記載のＡＢＰ。
  45. 前記ＡＢＰは、ＮＲＰ−１へのセマフォリン３Ａの結合を、少なくとも約１０％、少なくとも約２０％、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、または少なくとも約９０％低減する、請求項１〜４３のいずれか１項に記載のＡＢＰ。
  46. 前記ＡＢＰは、ＮＲＰ−１へのセマフォリン３Ａの結合を、少なくとも約１０％、少なくとも約２０％、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、または少なくとも約９０％低減し、該ＡＢＰは、ＮＲＰ−１へのＶＥＧＦの結合を遮断しない、請求項１〜４３のいずれか１項に記載のＡＢＰ。
  47. 前記ＡＢＰは、ＮＲＰ−１へのセマフォリン３Ａの結合を、少なくとも約５０％低減する、請求項４５に記載のＡＢＰ。
  48. 前記組織は腫瘍である、請求項３０（ｈ）に記載のＡＢＰ。
  49. 前記ＮＲＰ−１は、標的細胞の表面上で発現される、請求項１〜４８のいずれか１項に記載のＡＢＰ。
  50. 前記ＡＢＰは、そのＮ末端においてピログルタミン酸（ｐＥ）残基を有するポリペプチド配列を含む、請求項１〜４９のいずれか１項に記載のＡＢＰ。
  51. 前記ＡＢＰは、Ｎ末端のＱがｐＥで置換されたＶＨ配列を含む、請求項１〜５０のいずれか１項に記載のＡＢＰ。
  52. 前記ＡＢＰは、Ｎ末端のＥがｐＥで置換されたＶＬ配列を含む、請求項１〜５１のいずれか１項に記載のＡＢＰ。
  53. 前記ＡＢＰは、Ｎ末端のＱがｐＥで置換された重鎖配列を含む、請求項１〜５２のいずれか１項に記載のＡＢＰ。
  54. 前記ＡＢＰは、Ｎ末端のＥがｐＥで置換された軽鎖配列を含む、請求項１〜５３のいずれか１項に記載のＡＢＰ。
  55. 医薬としての使用のための、請求項１〜５４のいずれか１項に記載のＡＢＰ。
  56. がんまたはウイルス感染の処置における使用のための、請求項１〜５３のいずれか１項に記載のＡＢＰ。
  57. 前記がんは、固形腫瘍および血液腫瘍から選択される、がんの処置における使用のための請求項５６に記載のＡＢＰ。
  58. 請求項１〜５４のいずれか１項に記載のＡＢＰ、および該ＡＢＰの使用のための指示を含む、キット。
  59. 前記ＡＢＰは凍結乾燥される、請求項５８に記載のキット。
  60. 前記凍結乾燥されたＡＢＰの再構成のための流体をさらに含む、請求項５９に記載のキット。
  61. 請求項１〜５４のいずれか１項に記載のＡＢＰ、そのＶＨ、そのＶＬ、その軽鎖、その重鎖またはその抗原結合部分をコードする単離されたポリヌクレオチド。
  62. 請求項６１に記載のポリヌクレオチドを含む、ベクター。
  63. 請求項６１に記載のポリヌクレオチドまたは請求項６２に記載のベクターを含む、宿主細胞。
  64. 前記宿主細胞は、細菌細胞、真菌細胞、および哺乳動物細胞から選択される、請求項６３に記載の宿主細胞。
  65. 前記宿主細胞は、Ｅ．ｃｏｌｉ細胞、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ細胞、およびＣＨＯ細胞から選択される、請求項６３に記載の宿主細胞。
  66. 請求項６１に記載のポリヌクレオチドまたは請求項６２に記載のベクターを含む、無細胞発現反応。
  67. 請求項１〜５４のいずれか１項に記載のＡＢＰを生成するための方法であって、該方法は、該ＡＢＰを請求項６３に記載の宿主細胞において発現する工程および該発現されたＡＢＰを単離する工程を包含する方法。
  68. 請求項１〜５４のいずれか１項に記載のＡＢＰおよび薬学的に受容可能な賦形剤を含む、薬学的組成物。
  69. 前記ＡＢＰは、腫瘍においてＮＲＰ−１：セマフォリン相互作用を局所的に阻害するために有効な量で前記組成物に存在する、請求項６８に記載の薬学的組成物。
  70. 前記抗ＮＲＰ−１抗体は、ヒト被験体に投与される場合、ＮＲＰ−１と膜貫通セマフォリンポリペプチドとの間の相互作用を阻害するために有効な量で前記組成物に存在する、請求項６８に記載の薬学的組成物。
  71. 前記抗ＮＲＰ−１抗体は、膜貫通セマフォリンポリペプチドへのＮＲＰ−１結合を特異的に遮断する、請求項６８に記載の薬学的組成物。
  72. 前記抗ＮＲＰ−１抗体は、ＮＲＰ−１ポリペプチドと血管内皮細胞増殖因子（ＶＥＧＦ）ポリペプチドとの間の相互作用に影響を及ぼさない、請求項６８に記載の薬学的組成物。
  73. 前記抗ＮＲＰ−１抗体は、前記ヒト被験体におけるＴｒｅｇ抑制を阻害し得る、請求項６８に記載の薬学的組成物。
  74. 前記抗ＮＲＰ−１抗体は、前記ヒト被験体におけるＴｒｅｇ生存および／または安定性を減少させ得る、請求項６８に記載の薬学的組成物。
  75. 前記抗ＮＲＰ−１抗体は、腫瘍においてＮＲＰ−１：セマフォリン−４相互作用を局所的に阻害するために有効な量で前記組成物に存在する、請求項６８に記載の薬学的組成物。
  76. 前記抗ＮＲＰ−１抗体は、腫瘍においてＮＲＰ−１：セマフォリン−３相互作用を局所的に阻害するために有効な量で前記組成物に存在する、請求項６８に記載の薬学的組成物。
  77. 前記抗ＮＲＰ−１抗体は、望ましくない自己免疫の発生および／または炎症発現を防止するために有効な量で前記組成物に存在する、請求項６８に記載の薬学的組成物。
  78. 前記ヒト被験体は、がんに罹患している、請求項６８に記載の薬学的組成物。
  79. 前記薬学的組成物中のＡＢＰの量は、被験体において、（ａ）調節性Ｔ細胞によるエフェクターＴ細胞の抑制を低減する；（ｂ）エフェクターＴ細胞を活性化する；（ｃ）組織においてまたは全身的に調節性Ｔ細胞の数を低減する；（ｄ）エフェクターＴ細胞の増殖を誘導もしくは増強する；（ｅ）腫瘍成長の速度を阻害する；（ｆ）腫瘍退縮を誘導する；または（ｇ）これらの組み合わせ、のために十分である、請求項６８に記載の薬学的組成物。
  80. 医薬としての使用のための、請求項６８〜７９のいずれか１項に記載の薬学的組成物。
  81. がんまたはウイルス感染の処置における使用のための、請求項６８〜８０のいずれか１項に記載の薬学的組成物。
  82. 前記がんは、脳、前立腺、乳房、結腸、皮膚、および肺のがんから選択される、がんの処置における使用のための請求項８１に記載の薬学的組成物。
  83. 被験体において調節性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）の機能を阻害するかまたは安定性を減少させるための方法であって、該方法は該Ｔｒｅｇをインビボで、該Ｔｒｅｇにおけるニューロピリン−１（ＮＲＰ−１）：セマフォリン軸の阻害剤に曝露する工程を包含し、ここで有効量の、請求項１〜５４のいずれか１項に記載のＡＢＰまたは請求項６７〜８２のいずれか１項に記載の薬学的組成物は、該被験体に投与される、方法。
  84. Ｔエフェクター細胞（Ｔｅｆｆ）機能を増大するか、または該Ｔｅｆｆをインビボで請求項１〜５４のいずれか１項に記載のＡＢＰに曝露するための方法であって、該方法は、有効量の請求項６８〜８２のいずれか１項に記載の薬学的組成物を被験体に投与する工程を包含する、方法。
  85. 前記被験体はがんを有する、請求項８３または８４に記載の方法。
  86. 前記方法は、がん関連抗原に対する免疫応答を誘導または増強する、請求項８３〜８５のいずれか１項に記載の方法。
  87. 前記ＡＢＰは、（ａ）前記ヒト被験体におけるＴｒｅｇ生存および／または安定性を減少させる；（ｂ）前記ＮＲＰ−１ポリペプチドの細胞外ドメインに結合する；または（ｃ）これらの組み合わせ、が可能である、請求項８３〜８６のいずれか１項に記載の方法。
  88. １またはこれより多くのさらなる治療剤を投与する工程をさらに包含する、請求項８３〜８７のいずれか１項に記載の方法。
  89. 前記さらなる治療剤は、放射線、細胞傷害性薬剤、化学療法剤、細胞増殖抑制剤、抗ホルモン剤、ＶＥＧＦ阻害剤、免疫刺激剤、抗血管新生剤、およびこれらの組み合わせから選択される、請求項８８に記載の方法。
  90. 前記さらなる治療剤は免疫刺激剤である、請求項８８に記載の方法。
  91. 前記さらなる治療剤は、キメラ抗原レセプターＴ細胞である、請求項９０に記載の方法。
  92. 前記免疫刺激剤は、免疫細胞によって発現される阻害性レセプターまたはそのリガンドのシグナル伝達を遮断する薬剤を含む、請求項９０に記載の方法。
  93. 前記免疫細胞によって発現される阻害性レセプターまたはそのリガンドは、ＰＶＲＩＧ、ＶＩＳＴＡ、ＣＣＲ４、ＣＤ２７、ＣＴＬＡ−４、ＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１、ＬＡＧ−３、Ｔｉｍ３、ＴＩＧＩＴ、ニューリチン、ＢＴＬＡ、ＫＩＲ、およびこれらの組み合わせから選択される、請求項９２に記載の方法。
  94. 前記免疫刺激剤は、免疫細胞によって発現される刺激性レセプターに対するアゴニストを含む、請求項９０に記載の方法。
  95. 前記免疫細胞によって発現される刺激性レセプターは、ＯＸ４０、ＩＣＯＳ、ＧＩＴＲ、ＣＤ２８、ＣＤ３７、ＣＤ４０、４−１ＢＢ、およびこれらの組み合わせから選択される、請求項９３に記載の方法。
  96. 前記免疫刺激剤はサイトカインを含む、請求項９０に記載の方法。
  97. 前記免疫刺激剤は、がん関連抗原に対するワクチンを含む、請求項９０に記載の方法。
  98. 免疫応答を調整する必要性のある被験体において免疫応答を調整するための方法であって、該方法は、有効量の、請求項１〜５４のいずれか１項に記載のＡＢＰまたは請求項６７〜８２のいずれか１項に記載の薬学的組成物を該被験体に投与する工程を包含する、方法。
  99. １またはこれより多くのさらなる治療剤を前記被験体に投与する工程をさらに包含する、請求項８３〜９８のいずれか１項に記載の方法。
  100. 前記さらなる治療剤は、（ｉ）免疫細胞の刺激性レセプターに対するアゴニストまたは（ｉｉ）免疫細胞の阻害性レセプターに対するアンタゴニストであり、ここで該免疫細胞のレセプターは、ＯＸ４０、ＣＤ２、ＣＤ２７、ＣＤＳ、ＩＣＡＭ−１、ＬＦＡ−１（ＣＤ１１ａ／ＣＤ１８）、ＩＣＯＳ（ＣＤ２７８）、４−１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＣＤ２８、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＢＡＦＦＲ、ＨＶＥＭ、ＣＤ７、ＬＩＧＨＴ、ＮＫＧ２Ｃ、ＧＩＴＲ、ＳＬＡＭＦ７、ＮＫｐ８０、ＣＤ１６０、Ｂ７−Ｈ３、ＣＤ８３リガンド、およびこれらの組み合わせから選択される、請求項９９に記載の方法。
  101. 前記さらなる治療剤は、単純ヘルペスウイルス、水疱性口内炎ウイルス、アデノウイルス、ニューカッスル病ウイルス、ワクシニアウイルス、マラバウイルス、およびこれらの組み合わせから選択される腫瘍溶解性ウイルスである、請求項９９に記載の方法。
  102. 前記さらなる治療剤は、前記ＡＢＰと同じ薬学的組成物中に製剤化される、請求項９９〜１０１のいずれか１項に記載の方法。
  103. 前記さらなる治療剤は、前記ＡＢＰとは異なる薬学的組成物中に製剤化される、請求項９９〜１０１のいずれか１項に記載の方法。
  104. 前記さらなる治療剤は、前記ＡＢＰを投与する前に投与される、請求項９９〜１０１または１０３のいずれか１項に記載の方法。
  105. 前記さらなる治療剤は、前記ＡＢＰを投与した後に投与される、請求項９９〜１０１または１０３のいずれか１項に記載の方法。
  106. 前記さらなる治療剤は、前記ＡＢＰと同時に投与される、請求項９９〜１０５のいずれか１項に記載の方法
  107. 前記方法は、前記被験体において血小板減少症を実質的に引き起こさない、請求項８３〜１０６のいずれか１項に記載の方法。
  108. 前記ＡＢＰは、２０ｎＭ未満、１０ｎＭ未満、５ｎＭ未満、２ｎＭ未満、１ｎＭ未満、０．５ｎＭ未満、または０．２ｎＭ未満のｋＤでヒトＮＲＰ−１に特異的に結合する、請求項１〜５７のいずれか１項に記載のＡＢＰ。
  109. 前記ＡＢＰは、ヒト、マウス、およびカニクイザルに由来するＮＲＰ−１に特異的に結合する、請求項１〜５７または請求項１０８のいずれか１項に記載のＡＢＰ。
  110. 前記ＡＢＰは、ＳＥＣ１０が結合するＮＲＰ−１上のエピトープとは異なるＮＲＰ−１上のエピトープに結合する、請求項１〜５７または１０８〜１１０のいずれか１項に記載のＡＢＰ。
  111. 前記ＡＢＰは、前記ＮＲＰ−１のｂ１ドメインに結合する、請求項１〜５７または１０８〜１１０のいずれか１項に記載のＡＢＰ。
  112. 前記ＡＢＰは、Ｙ２９７、Ｔ３１６、Ｄ３２０、Ｅ３４８、Ｔ３４９、Ｋ３５０、Ｋ３５１、Ｋ３５２、Ｙ３５３、Ｙ３５４、Ｅ４１２、Ｔ４１３、Ｇ４１４およびＩ４１５からなる群より選択されるＮＲＰ１残基の１つより多くに特異的に結合するものから成る群より選ばれる、ＮＲＰ１（配列番号１３０）上の残基のうちの１またはこれより多くに特異的に結合する、請求項１〜５７または請求項１０８または請求項１０９のいずれか１項に記載のＡＢＰ。
  113. 配列番号４７からなるＣＤＲ−Ｈ３、配列番号３０からなるＣＤＲ−Ｈ２、および配列番号１４からなるＣＤＲ−Ｈ１を含む重鎖可変領域；ならびに
    配列番号８１からなるＣＤＲ−Ｌ３、配列番号７１からなるＣＤＲ−Ｌ２、および配列番号６３からなるＣＤＲ−Ｌ１を含む軽鎖可変領域、
    を含む、抗ヒトＮＲＰ−１抗体またはその抗原結合フラグメント。
  114. 以下の（１）および（２）のうちのいずれか一方から選択される、請求項１に記載の抗ヒトＮＲＰ−１抗体またはその抗原結合フラグメント：
    （１）配列番号９６からなる重鎖可変領域および配列番号１０４からなる軽鎖可変領域を含む、抗ヒトＮＲＰ−１抗体またはその抗原結合フラグメント；ならびに
    （２）アミノ酸番号１のＥがピログルタミン酸に改変される配列番号９６からなる重鎖可変領域、および配列番号１０４からなる軽鎖可変領域を含む、抗ヒトＮＲＰ−１抗体またはその抗原結合フラグメント。
  115. 以下の（１）〜（４）からなる群より選択される、請求項２に記載の抗ヒトＮＲＰ−１抗体またはその抗原結合フラグメント：
    （１）配列番号１１８からなる重鎖および配列番号１２６からなる軽鎖を含む、抗ヒトＮＲＰ−１抗体、
    （２）アミノ酸番号１のＥがピログルタミン酸に改変される配列番号１１８からなる重鎖および配列番号１２６からなる軽鎖を含む、抗ヒトＮＲＰ−１抗体、
    （３）配列番号１１８のアミノ酸番号１〜４５３のアミノ酸配列からなる重鎖および配列番号１２６からなる軽鎖を含む、抗ヒトＮＲＰ−１抗体；ならびに
    （４）アミノ酸番号１のＥがピログルタミン酸に改変される配列番号１１８のアミノ酸番号１〜４５３のアミノ酸配列からなる重鎖および配列番号１２６からなる軽鎖を含む、抗ヒトＮＲＰ−１抗体。
  116. 以下の（１）および（２）からなる群より選択されるポリヌクレオチド：
    （１）請求項１１４（１）の抗ヒトＮＲＰ−１抗体またはその抗原結合フラグメントの重鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド、および
    （２）請求項１１４（１）の抗ヒトＮＲＰ−１抗体またはその抗原結合フラグメントの軽鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド。
  117. 以下の（１）および（２）からなる群より選択されるポリヌクレオチド：
    （１）請求項１１５（１）の抗ヒトＮＲＰ−１抗体の重鎖をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド、および
    （２）請求項１１５（１）の抗ヒトＮＲＰ−１抗体の軽鎖をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド。
  118. 以下を含む発現ベクター：
    （ａ）請求項１１４（１）の抗ヒトＮＲＰ−１抗体またはその抗原結合フラグメントの重鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド、および／または
    （ｂ）請求項１１４（１）の抗ヒトＮＲＰ−１抗体またはその抗原結合フラグメントの軽鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド。
  119. 以下を含む発現ベクター：
    （ａ）請求項１１５（１）の抗ヒトＮＲＰ−１抗体の重鎖をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド、および／または
    （ｂ）請求項１１５（１）の抗ヒトＮＲＰ−１抗体の軽鎖をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド。
  120. （ａ）〜（ｄ）からなる群より選択される発現ベクターで形質転換された宿主細胞：
    （ａ）請求項１１４（１）の抗ヒトＮＲＰ−１抗体またはその抗原結合フラグメントの重鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドおよび該抗体またはその抗原結合フラグメントの軽鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドを含む発現ベクターで形質転換された宿主細胞；
    （ｂ）請求項１１４（１）の抗ヒトＮＲＰ−１抗体またはその抗原結合フラグメントの重鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドを含む発現ベクターおよび該抗体またはその抗原結合フラグメントの軽鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドを含む発現ベクターで形質転換された宿主細胞；
    （ｃ）請求項１１４（１）の抗ヒトＮＲＰ−１抗体またはその抗原結合フラグメントの重鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドを含む発現ベクターで形質転換された宿主細胞；ならびに
    （ｄ）請求項１１４（１）の抗ヒトＮＲＰ−１抗体またはその抗原結合フラグメントの軽鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドを含む発現ベクターで形質転換された宿主細胞。
  121. （ａ）〜（ｄ）からなる群より選択される発現ベクターで形質転換された宿主細胞：
    （ａ）請求項１１５（１）の抗ヒトＮＲＰ−１抗体の重鎖をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドおよび該抗体の軽鎖をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドを含む発現ベクターで形質転換された宿主細胞；
    （ｂ）請求項１１５（１）の抗ヒトＮＲＰ−１抗体の重鎖をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドを含む発現ベクターおよび該抗体の軽鎖をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドを含む発現ベクターで形質転換された宿主細胞；
    （ｃ）請求項１１５（１）の抗ヒトＮＲＰ−１抗体の重鎖をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドを含む発現ベクターで形質転換された宿主細胞；ならびに
    （ｄ）請求項１１５（１）の抗ヒトＮＲＰ−１抗体の軽鎖をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドを含む発現ベクターで形質転換された宿主細胞。
  122. 抗ヒトＮＲＰ−１抗体またはその抗原結合フラグメントを生成するための方法であって、該方法は、以下の（ａ）〜（ｃ）からなる群より選択される宿主細胞を培養して、四価抗ヒトＮＲＰ−１抗体またはその抗原結合フラグメントを発現する工程を包含する方法：
    （ａ）請求項１１４（１）の抗ヒトＮＲＰ−１抗体またはその抗原結合フラグメントの重鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドおよび該抗体またはその抗原結合フラグメントの軽鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドを含む発現ベクターで形質転換された宿主細胞；
    （ｂ）請求項１１４（１）の抗ヒトＮＲＰ−１抗体またはその抗原結合フラグメントの重鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドを含む発現ベクターおよび該抗体またはその抗原結合フラグメントの軽鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドを含む発現ベクターで形質転換された宿主細胞；ならびに
    （ｃ）請求項１１４（１）の抗ヒトＮＲＰ−１抗体またはその抗原結合フラグメントの重鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドを含む発現ベクターで形質転換された宿主細胞および該抗体またはその抗原結合フラグメントの軽鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドを含む発現ベクターで形質転換された宿主細胞。
  123. 抗ヒトＮＲＰ−１抗体を生成するための方法であって、該方法は、以下の（ａ）〜（ｃ）からなる群より選択される宿主細胞を培養して、抗ヒトＮＲＰ−１抗体を発現する工程を包含する方法：
    （ａ）請求項１１５（１）の抗ヒトＮＲＰ−１抗体の重鎖をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドおよび該抗体の軽鎖をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドを含む発現ベクターで形質転換された宿主細胞；
    （ｂ）請求項１１５（１）の抗ヒトＮＲＰ−１抗体の重鎖をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドを含む発現ベクターおよび該抗体の軽鎖をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドを含む発現ベクターで形質転換された宿主細胞；ならびに
    （ｃ）請求項１１５（１）の抗ヒトＮＲＰ−１抗体の重鎖をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドを含む発現ベクターで形質転換された宿主細胞および該抗体の軽鎖をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドを含む発現ベクターで形質転換された宿主細胞。
  124. 請求項１１５の抗ヒトＮＲＰ−１抗体および薬学的に受容可能な賦形剤を含む、薬学的組成物。
  125. 請求項１１５（１）の抗ヒトＮＲＰ−１抗体、請求項１１５（２）の抗ヒトＮＲＰ−１抗体、請求項１１５（３）の抗ヒトＮＲＰ−１抗体、および／または請求項１１５（４）の抗ヒトＮＲＰ−１抗体、ならびに薬学的に受容可能な賦形剤を含む、薬学的組成物。
  126. がんを処置するための薬学的組成物である、請求項１２４および１２５のいずれか１項に記載の薬学的組成物。
  127. 前記組成物は、放射線、細胞傷害性薬剤、化学療法剤、細胞増殖抑制剤、抗ホルモン剤、ＶＥＧＦ阻害剤、免疫刺激剤、抗血管新生剤、およびこれらの組み合わせと組み合わせて投与される、請求項１２４〜１２６のいずれか１項に記載の薬学的組成物。
  128. がんを防止または処置するための、請求項１１５に記載の抗ヒトＮＲＰ−１抗体。
  129. がんを防止または処置するための薬学的組成物の製造のための、請求項１１５に記載の抗ヒトＮＲＰ−１抗体の使用。
  130. 治療上有効な量の請求項１１５に記載の抗ヒトＮＲＰ−１抗体を投与する工程を包含する、がんを防止または処置するための方法。
  131. １またはこれより多くのさらなる治療剤を投与する工程をさらに包含する、請求項１３０に記載の方法。
  132. 前記さらなる治療剤は、放射線、細胞傷害性薬剤、化学療法剤、細胞増殖抑制剤、抗ホルモン剤、ＶＥＧＦ阻害剤、免疫刺激剤、抗血管新生剤、およびこれらの組み合わせからなる群より選択される、請求項１３１に記載の方法。
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