KR20180094859A - 수두 대상포진 바이러스 (vzv)를 위한 핵산 백신 - Google Patents

수두 대상포진 바이러스 (vzv)를 위한 핵산 백신 Download PDF

Info

Publication number
KR20180094859A
KR20180094859A KR1020187014337A KR20187014337A KR20180094859A KR 20180094859 A KR20180094859 A KR 20180094859A KR 1020187014337 A KR1020187014337 A KR 1020187014337A KR 20187014337 A KR20187014337 A KR 20187014337A KR 20180094859 A KR20180094859 A KR 20180094859A
Authority
KR
South Korea
Prior art keywords
vzv
vaccine
seq
polypeptide
rna
Prior art date
Application number
KR1020187014337A
Other languages
English (en)
Inventor
쥬세페 시아라멜라
Original Assignee
모더나티엑스, 인크.
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 모더나티엑스, 인크. filed Critical 모더나티엑스, 인크.
Publication of KR20180094859A publication Critical patent/KR20180094859A/ko

Links

Images

Classifications

    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61KPREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/7088Compounds having three or more nucleosides or nucleotides
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C07ORGANIC CHEMISTRY
    • C07KPEPTIDES
    • C07K14/00Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/005Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from viruses
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61KPREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/12Viral antigens
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61KPREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/12Viral antigens
    • A61K39/245Herpetoviridae, e.g. herpes simplex virus
    • A61K39/25Varicella-zoster virus
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61KPREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/0012Galenical forms characterised by the site of application
    • A61K9/0019Injectable compositions; Intramuscular, intravenous, arterial, subcutaneous administration; Compositions to be administered through the skin in an invasive manner
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61KPREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/48Preparations in capsules, e.g. of gelatin, of chocolate
    • A61K9/50Microcapsules having a gas, liquid or semi-solid filling; Solid microparticles or pellets surrounded by a distinct coating layer, e.g. coated microspheres, coated drug crystals
    • A61K9/51Nanocapsules; Nanoparticles
    • A61K9/5107Excipients; Inactive ingredients
    • A61K9/5123Organic compounds, e.g. fats, sugars
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61PSPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12Antivirals
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61PSPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12Antivirals
    • A61P31/14Antivirals for RNA viruses
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61PSPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12Antivirals
    • A61P31/20Antivirals for DNA viruses
    • A61P31/22Antivirals for DNA viruses for herpes viruses
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61KPREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/51Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising whole cells, viruses or DNA/RNA
    • A61K2039/53DNA (RNA) vaccination
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61KPREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/54Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the route of administration
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61KPREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/545Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the dose, timing or administration schedule
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61KPREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/57Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the type of response, e.g. Th1, Th2
    • A61K2039/575Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the type of response, e.g. Th1, Th2 humoral response
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61KPREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/60Medicinal preparations containing antigens or antibodies characteristics by the carrier linked to the antigen
    • A61K2039/6018Lipids, e.g. in lipopeptides
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61KPREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/60Medicinal preparations containing antigens or antibodies characteristics by the carrier linked to the antigen
    • A61K2039/6031Proteins
    • A61K2039/6056Antibodies
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61KPREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/70Multivalent vaccine
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12NMICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2710/00MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA dsDNA viruses
    • C12N2710/00011Details
    • C12N2710/16011Herpesviridae
    • C12N2710/16711Varicellovirus, e.g. human herpesvirus 3, Varicella Zoster, pseudorabies
    • C12N2710/16722New viral proteins or individual genes, new structural or functional aspects of known viral proteins or genes
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12NMICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2710/00MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA dsDNA viruses
    • C12N2710/00011Details
    • C12N2710/16011Herpesviridae
    • C12N2710/16711Varicellovirus, e.g. human herpesvirus 3, Varicella Zoster, pseudorabies
    • C12N2710/16734Use of virus or viral component as vaccine, e.g. live-attenuated or inactivated virus, VLP, viral protein
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12NMICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2710/00MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA dsDNA viruses
    • C12N2710/00011Details
    • C12N2710/16011Herpesviridae
    • C12N2710/16711Varicellovirus, e.g. human herpesvirus 3, Varicella Zoster, pseudorabies
    • C12N2710/16771Demonstrated in vivo effect
    • YGENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02ATECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
    • Y02A50/00TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
    • Y02A50/30Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Dermatology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Nanotechnology (AREA)
  • Optics & Photonics (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)

Abstract

본 개시내용의 측면은 핵산 백신에 관한 것이다. 백신은 적어도 1종의 수두대상포진 바이러스 (VZV) 항원을 인코딩하는 열린 해독틀을 갖는 적어도 1종의 RNA 폴리뉴클레오타이드를 포함한다. 상기 백신의 제조 및 이용 방법은 또한 기재된다.

Description

수두 대상포진 바이러스 (VZV)를 위한 핵산 백신
관련된 출원
본원은 2015년 10월 22일 출원된, 미국 가출원 번호 62/245,234, 2015년 10월 28일 출원된, 미국 가출원 번호 62/247,697, 2016년 5월 12일 출원된, 미국 가출원 번호 62/335348, 및 2015년 10월 22일 출원된, 미국 가출원 번호 62/245,031의 35 U.S.C. § 119(e)하에 이익을 주장하고, 이들 각각은 참조로 본 명세서에서 그 전문이 편입된다.
배경
수두는 수두대상포진 바이러스 (VZV)에 의해 야기된 급성 감염성 질환이다. 수두대상포진 바이러스는 인간 및 척추동물을 감염시킨다고 공지된 8개 헤르페스바이러스 중 1종이다. VZV는 수두(chickenpox) 바이러스, 수두 바이러스, 대상포진 바이러스, 및 인간 헤르페스바이러스 유형 3 (HHV-3)으로서 또한 공지된다. VZV는 인간에 단지 영향을 주고, 통상적으로 소아, 10대 및 청소년에서 수두 그리고 성인에서 (드물게 소아에서) 대상포진 (대상포진(shingles))를 일으킨다. 수두(chickenpox) (수두)를 초래하는, 1차 VZV 감염은, 바이러스성 또는 2차 세균성 폐렴을 포함하는, 합병증을 초래할 수 있다. 심지어 수두의 임상 증상이 해결된 경우, VZV는 삼차 및 배근 신경절에서 감염된 사람의 신경계에서 휴면기로 남아있다 (바이러스 잠복). 사례의 약 10-20%에서, VZV는, 대상포진(shingles) 또는 대상포진으로서 공지된 질환 (발진)을 생산하는 경우 감각 신경절부터 역으로 피부까지 움직이는, 만년에 재활성화한다. VZV는 또한 무균수막염 내지 뇌염 범위의 수많은 신경 병태를 유발시킬 수 있다. VZV 감염의 다른 심각한 합병증은 포진후 신경통, 몰라렛 수막염, 다발성 대상포진, 혈소판감소증, 심근염, 관절염, 및 뇌졸중, 척수염, 안부 대상포진, 또는 무발진 대상포진으로 이어지는 뇌에서 동맥의 염증을 포함한다. 희귀 사례에서, VZV는 슬상 관절 신경절에 영향을 주어, 안면 신경의 특이적 분지를 따르는 병변을 제공한다. 증상은 한쪽의 안면 약화 및 청력 상실과 함께 혀 및 귀에서 동통성 수포를 포함할 수 있다.
수두 사례는, 주로 백신접종으로 인해, 1995년 이래 97% 쇠퇴되었다. 그러나, 대상포진 (대상포진(shingles))의 추정된 500,000 내지 1 백만회가 바로 미국에서 연간 발생한다. 대상포진의 수명 위험은, 가장 중요한 위험 인자인 가령 및 세포 면역억제로, 적어도 32%인 것으로 추정된다. 사실상, 85세까지 살고 있는 사람의 50%가 대상포진을 발생할 것이 추정된다.
살아있는 약독화된 VZV Oka 균주 백신은 이용가능하고 미국에서 상표명 VARIVAX® (Merck)로 시판된다. 유사한, 그러나 동일하지 않은, VZV 백신은 전반적으로 VARILRIX® (GlaxoSmithKline)로서 시판된다. 1995년에 그것의 승인 이래, 호주, 미국, 및 몇몇 다른 국가에서 소아에 권고된 백신접종 스케줄에 첨가되어 왔다. 2007년에, 백신접종 자문 위원회 (ACIP)는 수두 면역력의 높은 수준의 유지를 확보하기 위해 입학 전 제2 용량의 백신을 권고하였다. 2001-2005년에, 높은 수두 백신접종 적용범위를 가진 학교에서 발발이 보고되었고, 대부분의 소아가 백신접종되었고 백신이 기대된 대로 수행하였던 설정에서조차, 수두 발발이 1-용량 백신접종 정책으로 예방될 수 없다는 것을 나타낸다. 그 결과, 2-용량 백신접종은 채택된 프로토콜이지만; 그러나, 심지어 2 용량의 백신으로, 돌발성 수두의 발병률이 보고된다. 더욱이, 가능하게는 그들의 소아기 면역화로부터 면역력이 쇠퇴함에 따라 더욱 중증 질환에 성인을 취약하게 만드는, 백신에 의해 유도된 면역력이 평생 동안일 수 없는 수두 백신접종은 관심을 상승시켰다.
2005년에, FDA는 나이로 12 개월 내지 12 세의 사람에서 사용을 위하여 조합된 살아있는 약독화된 조합 홍역-볼거리-풍진-수두 (MMRV) 백신 PROQUAD™ (Merck)를 승인하였다. MMRV에서 약독화된 홍역, 볼거리, 및 풍진 백신 바이러스가 동일하고 MMR 백신에서의 것에 동일 역가인 한편, Oka/Merck VZV의 역가는 단일-항원 수두 백신에서 보다 MMRV 백신에서 더 높다.
2006년에, 미국 식품의약국은 60세 이상인 사람에서 대상포진(shingles) (대상포진)의 예방을 위하여 ZOSTAVAX® (Merck)를 승인하였다 ((현재 50-59 세가 승인된다). 농축된 제형이 나이듬에 따라 VZV에 면역력이 쇠퇴하는 노년층에서 면역 반응을 유도하도록 설계됨에 따라, ZOSTAVAX®은 수두 및 MMRV 백신에서, 그러나 이들 백신의 모두에서 존재하는 것보다 훨씬 높은 역가 (>10-배 더 높은 바이러스성 용량)에서 사용된 동일한 Oka/Merck 수두대상포진 바이러스를 함유한다.
수두 백신이 건강한 개체에서 안전한 것으로 나타났어도, 대상포진에 민감한 백신접종된 개체를 더욱 심각한 상태로 만드는, 경시적으로 백신에 의해 부여된 VZV 감염에 면역력이 쇠퇴하는 증거가 있다. 또한, 개체가 수두 백신접종으로부터 수두 또는 대상포진을 발생한다는 보고가 있어 왔다. 백신은, 그 다음 재활성화하여 대상포진을 일으킬 수 있는, 신경절에서 잠재적 감염을 확립시킬 수 있다.
또한, 살아있는 약독화된 바이러스는, 임신한 여성 및 중간 정도 또는 중증 급성 병을 가진 사람을 포함하는, 모든 대상체에 적합하지 않다. 또한, 수두는, 백혈병, 림프종, 일반화된 악성종양, 면역 결핍 질환 또는 면역억제성 요법으로 인해 면역억제를 가진 사람을 포함하는, 면역저하된 환자에 적합하지 않거나 승인되지 않는다. 마찬가지로, 후천성 면역결핍 증후군 (AIDS)으로 진단된 이들을 포함하는 인간 면역결핍 바이러스 (HIV)로 감염에서 비롯하는 중간 정도 또는 중증 세포 면역결핍을 가진 사람은 수두 백신을 받지 않아야 한다. 따라서, 면역저하된 개체에서 대상포진과 관련된 고위험의 이환율 및 사망률에도 불구하고, 상기 모집단은 살아있는 약독화된 백신, 예컨대 ZOSTAVAX®로 백신접종에 적격이 아니다.
매년 미국에서 1백만 사례의 대상포진이 있다. 추정된 $10억이 미국에서 대상포진을 위한 직접적인 의료 비용으로 연간 소비되고 대상포진을 위한 치료는 항상 효과적이지 않거나 이용가능하지 않다.
데옥시리보핵산 (DNA) 백신접종은 외래 항원, 예컨대 VZV 항원에 체액성 및 세포성 면역 반응을 자극시키는데 사용된 1종의 기술이다. 살아있는 숙주 속에 유전자적으로 조작된 DNA (예를 들면, 네이키드 플라스미드 DNA)의 직접적인 주사는 항원을 직접적으로 생산하는 소수의 숙주 세포를 초래하여, 보호성 면역학적 반응을 초래한다. 이 기술로, 그러나, 종양유전자의 활성화 또는 종양 억제인자 유전자의 억제로 이어질 수 있는, 삽입 돌연변이유발의 가능성을 포함하는 잠재적인 문제가 나온다.
요약
RNA (예를 들면, 메신저 RNA (mRNA))가 원상태 단백질부터 세포의 내부 및 외부에서 치료 활성을 가질 수 있는 다른 전적으로 신규한 단백질 및 항체까지, 거의 임의의 관심 단백질을 생산하기 위해 신체의 세포 기구를 안전하게 유도할 수 있다는 지식에서 형성하는 리보핵산 (RNA) 백신이 본 명세서에서 제공된다. 본 개시내용의 수두대상포진 바이러스 (VZV) RNA 백신은, 약독화된 바이러스 백신접종과 관련된 많은 위험 없이, 양쪽 세포성 및 체액성 면역을 포함하는 VZV에 대한 균형있는 면역 반응을 유도하는데 사용될 수 있다.
RNA (예를 들면, mRNA) 백신은 감염의 유병률 또는 미충족 의료 필요의 정도 또는 수준에 의존하여 다양한 설정에서 이용될 수 있다. RNA (예를 들면, mRNA) 백신은 다양한 유전자형, 균주, 및 분리주의 VZV를 치료 및/또는 예방하는데 이용될 수 있다. RNA (예를 들면, mRNA) 백신은 이들이 훨씬 더 큰 항체 역가를 생산하고 상업적으로 입수가능한 항-바이러스성 치료적 처치보다 더 일찍 반응을 생산한다는 점에서 우월한 특성을 갖는다. 이론에 의해 구속되기를 바라지 않으면서, mRNA 폴리뉴클레오타이드로서, RNA 백신이 RNA 백신 코-옵트(co-opt) 천연 세포 기구로서 번역시 적절한 단백질 형태를 생산하도록 더욱 양호하게 설계된다고 믿어진다. 체외 제조되는 그리고 원치않는 세포 반응을 유발시킬 수 있는, 전통 백신과 달리, RNA (예를 들면, mRNA) 백신은 더욱 원상태 방식으로 세포 시스템에 나타난다.
본 개시내용에 의해 포함하는 다양한 VZV 아미노산 서열은 표 1-9에서 제공된다. 본 명세서에서 제공된 바와 같이 RNA (예를 들면, mRNA) 백신은 표 1에서 제공된 VZV 당단백질의 적어도 1종을 인코딩하는 적어도 1종의 RNA 폴리뉴클레오타이드, 또는 이의 단편, (예를 들면, 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 98% 또는 99% 동일성을 갖는) 동족체 또는 변이체 또는 유도체를 포함할 수 있다.
본 개시내용의 일부 구현예는 적어도 1종의 VZV 항원성 폴리펩타이드 또는 이의 면역원성 단편 또는 에피토프를 인코딩하는 열린 해독틀을 갖는 적어도 1종의 리보핵산 (RNA) 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 VZV 백신을 제공한다. 본 개시내용의 일부 구현예는 2 이상의 VZV 항원성 폴리펩타이드 또는 이의 면역원성 단편 또는 에피토프를 인코딩하는 열린 해독틀을 갖는 적어도 1종의 RNA 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 VZV 백신을 제공한다. 본 개시내용의 일부 구현예는 2 이상의 VZV 항원성 폴리펩타이드 또는 이의 면역원성 단편 또는 에피토프를 인코딩하는 열린 해독틀을 갖는 2 이상의 RNA 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 VZV 백신을 제공한다.
일부 구현예에서, 항원성 폴리펩타이드는 VZV 당단백질이다. 예를 들어, VZV 당단백질은 VZV gE, gI, gB, gH, gK, gL, gC, gN, 또는 gM 또는 이들의 면역원성 단편 또는 에피토프일 수 있다. 일부 구현예에서, 항원성 폴리펩타이드는 VZV gE 폴리펩타이드이다. 일부 구현예에서, 항원성 폴리펩타이드는 VZV gI 폴리펩타이드이다. 일부 구현예에서, 항원성 폴리펩타이드는 VZV gB 폴리펩타이드이다. 일부 구현예에서, 항원성 폴리펩타이드는 VZV gH 폴리펩타이드이다. 일부 구현예에서, 항원성 폴리펩타이드는 VZV gK 폴리펩타이드이다. 일부 구현예에서, 항원성 폴리펩타이드는 VZV gL 폴리펩타이드이다. 일부 구현예에서, 항원성 폴리펩타이드는 VZV gC 폴리펩타이드이다. 일부 구현예에서, 항원성 폴리펩타이드는 VZV gN 폴리펩타이드이다. 일부 구현예에서, 항원성 폴리펩타이드는 VZV gM 폴리펩타이드이다. 일부 구현예에서, VZV 당단백질은 서열번호: 1 또는 서열번호: 2의 핵산 서열에 의해 인코딩된다.
일부 구현예에서, VZV 당단백질은 변이체 gE 폴리펩타이드이다. 일부 구현예에서, 변이체 VZV gE 폴리펩타이드는 앵커 도메인 (ER 체류 도메인)이 부족한 절단된 폴리펩타이드이다. 일부 구현예에서, 절단된 VZV gE 폴리펩타이드는 VZV gE 폴리펩타이드의 아미노산 1-561을 포함한다 (또는 상기로 구성된다, 또는 본질적으로 상기로 구성된다). 일부 구현예에서, 절단된 VZV gE 폴리펩타이드는 서열번호: 10의 아미노산 1-561을 포함한다 (또는 상기로 구성된다, 또는 본질적으로 상기로 구성된다). 일부 구현예에서, 절단된 VZV gE 폴리펩타이드는 서열번호: 18의 아미노산 1-573을 포함한다 (또는 상기로 구성된다, 또는 본질적으로 상기로 구성된다). 일부 구현예에서, 절단된 VZV gE 폴리펩타이드는 서열번호: 10의 아미노산 1-573을 포함한다 (또는 상기로 구성된다, 또는 본질적으로 상기로 구성된다). 일부 구현예에서, 변이체 VZV gE 폴리펩타이드는 카복시 말단 꼬리 도메인이 부족한 절단된 폴리펩타이드이다. 일부 구현예에서, 절단된 VZV gE 폴리펩타이드는 VZV gE 폴리펩타이드의 아미노산 1-573을 포함한다 (또는 상기로 구성된다, 또는 본질적으로 상기로 구성된다). 일부 구현예에서, 절단된 VZV gE 폴리펩타이드는 서열번호: 34의 아미노산 1-573을 포함한다 (또는 상기로 구성된다, 또는 본질적으로 상기로 구성된다).
일부 구현예에서, 변이체 VZV gE 폴리펩타이드는 ER 체류와 관련된 1종 이상의 모티프(들)에서 적어도 1종의 돌연변이를 갖고, 여기서 1종 이상의 모티프(들)에서 상기 돌연변이(들)은 ER 및/또는 골지에서 VZV gE 폴리펩타이드의 감소된 체류를 초래한다. 일부 구현예에서, 변이체 VZV gE 폴리펩타이드는 골지 또는 트랜스-골지 네트워크 (TGN)에 gE 표적화와 관련된 1종 이상의 모티프(들)에서 적어도 1종의 돌연변이를 갖고, 여기서 1종 이상의 모티프(들)에서 상기 돌연변이(들)은 골지 또는 TGN에 VZV gE 폴리펩타이드의 감소된 표적화 또는 국재화를 초래한다. 일부 구현예에서, 변이체 VZV gE 폴리펩타이드는 VZV gE의 내재화 또는 gE의 세포내이입과 관련된 1종 이상의 모티프(들)에서 적어도 1종의 돌연변이를 갖고, 여기서 1종 이상의 모티프(들)에서 상기 돌연변이(들)은 VZV gE 폴리펩타이드의 감소된 세포내이입을 초래한다. 일부 구현예에서, 변이체 VZV gE 폴리펩타이드는 1종 이상의 인산화된 산성 모티프(들), 예컨대 SSTT (서열번호: 122)에서 적어도 1종의 돌연변이를 갖는다. 일부 구현예에서, 변이체 VZV gE 폴리펩타이드는 Y582G 돌연변이를 갖는 전장 VZV gE 폴리펩타이드이다. 일부 구현예에서, 변이체 VZV gE 폴리펩타이드는 Y569A 돌연변이를 갖는 전장 VZV gE 폴리펩타이드이다. 일부 구현예에서, 변이체 VZV gE 폴리펩타이드는 Y582G 돌연변이 및 Y569A 돌연변이를 갖는 전장 VZV gE 폴리펩타이드이다. 일부 구현예에서, 변이체 VZV gE 폴리펩타이드는 VZV gE의 아미노산 1-573을 포함하는 및 Y569A 돌연변이를 갖는 항원성 단편이다. 일부 구현예에서, 변이체 VZV gE 폴리펩타이드는 서열번호: 38을 포함하는 항원성 단편이다.
일부 구현예에서, 변이체 VZV gE 폴리펩타이드는 Ig카파 서열을 갖는 전장 VZV gE 폴리펩타이드이다. 일부 구현예에서, 변이체 VZV gE 폴리펩타이드는 서열번호: 14이다. 일부 구현예에서, 변이체 VZV gE 폴리펩타이드는 SESTDT (서열번호: 59)를 대체하는 A-E-A-A-D-A 서열 (서열번호: 58)을 갖는 전장 VZV gE 폴리펩타이드이다. 이것은 Ser/Thr-풍부 "SSTT" (서열번호: 122) 산성 클러스터의 Ala-풍부 서열로의 대체이다. 일부 구현예에서, 변이체 VZV gE 폴리펩타이드는 서열번호: 26이다. VZV gE 폴리펩타이드가 A-E-A-A-D-A 서열 (서열번호: 58)을 갖는 일부 구현예에서, 변이체 VZV gE 폴리펩타이드는 또한 ER/골지 체류, TGN 국재화, 또는 세포내이입과 관련된 1종 이상의 모티프(들)에서 적어도 1종의 돌연변이를 갖고/갖거나 (예를 들면, Y582G 돌연변이, Y569A 돌연변이, 또는 양쪽 Y582G 돌연변이 및 Y569A 돌연변이를 갖고/갖거나) 1종 이상의 인산화된 산성 모티프(들), 예컨대 SSTT (서열번호: 122) 모티프에서 적어도 1종의 돌연변이를 갖는다. 일부 구현예에서, 변이체 VZV gE 폴리펩타이드는 서열번호: 30의 아미노산 서열이거나 상기를 포함한다.
일부 구현예에서, 변이체 VZV gE 폴리펩타이드는 세포 막에 폴리펩타이드 또는 그것의 국재화의 분비를 돕는 C-말단에서 추가의 서열을 갖는 전장 VZV gE 폴리펩타이드이다. 일부 구현예에서, 변이체 VZV gE 폴리펩타이드는 C-말단에서 Ig카파 서열을 갖는 전장 VZV gE 폴리펩타이드이다. 일부 구현예에서, VZV gE 폴리펩타이드는 분비를 돕는C-말단에서 추가의 서열을 갖고 (예를 들면, C-말단에서 Ig카파 서열을 갖고) ER 체류, TGN 국재화, 또는 세포내이입과 관련된 1종 이상의 모티프(들)에서 적어도 1종의 돌연변이를 갖고 (예를 들면, Y582G 돌연변이, Y569A 돌연변이, 또는 양쪽 Y582G 돌연변이 및 Y569A 돌연변이를 갖고) 및/또는 1종 이상의 인산화된 산성 모티프(들), 예컨대 SSTT (서열번호: 122) 모티프에서 적어도 1종의 돌연변이를 갖는다. 일부 구현예에서, 변이체 VZV gE 폴리펩타이드는 앵커 도메인 (ER 체류 도메인)이 부족한 및 폴리펩타이드의 분비를 돕는 C-말단에서 추가의 서열 (예를 들면, C-말단에서 Ig카파 서열)을 갖는 절단된 폴리펩타이드이다. 일부 구현예에서, 절단된 VZV gE 폴리펩타이드는 아미노산 1-561을 포함하고 C-말단에서 Ig카파 서열을 갖는다. 일부 구현예에서, 변이체 폴리펩타이드는 서열번호: 22이다. 일부 구현예에서, 변이체 VZV gE 폴리펩타이드는 카복시 말단 꼬리 도메인이 부족한 및 폴리펩타이드의 분비를 돕는 C-말단에서 추가의 서열을 갖는, 예를 들어, C-말단에서 Ig카파 서열을 갖는 절단된 폴리펩타이드이다. 일부 구현예에서, 절단된 VZV gE 폴리펩타이드는 아미노산 1-573을 포함하고 C-말단에서 Ig카파 서열을 갖는다.
일부 구현예에서, 항원성 폴리펩타이드는 2 이상의 당단백질을 포함한다. 일부 구현예에서, 2 이상의 당단백질은 단일 RNA 폴리뉴클레오타이드에 의해 인코딩된다. 일부 구현예에서, 2 이상의 당단백질은 2 이상의 RNA 폴리뉴클레오타이드에 의해 인코딩되고, 예를 들어, 각각의 당단백질은 별도의 RNA 폴리뉴클레오타이드에 의해 인코딩된다. 일부 구현예에서, 2 이상의 당단백질은 VZV gE, gI, gB, gH, gK, gL, gC, gN, 및 gM 폴리펩타이드의 임의의 조합 또는 이의 면역원성 단편 또는 에피토프일 수 있다. 일부 구현예에서, 2 이상의 당단백질은 VZV gE 및 적어도 1종의 gI, gB, gH, gK, gL, gC, gN, 및 gM 폴리펩타이드의 임의의 조합 또는 이의 면역원성 단편 또는 에피토프일 수 있다. 일부 구현예에서, 2 이상의 당단백질은 VZV gI 및 적어도 1종의 gE, gB, gH, gK, gL, gC, gN, 및 gM 폴리펩타이드의 임의의 조합 또는 이의 면역원성 단편 또는 에피토프일 수 있다. 일부 구현예에서, 2 이상의 당단백질은 VZV gE, gI, 및 적어도 1종의 gB, gH, gK, gL, gC, gN, 및 gM 폴리펩타이드의 임의의 조합 또는 이의 면역원성 단편 또는 에피토프일 수 있다.
일부 구현예에서, 2 이상의 VZV 당단백질은 gE 및 gI이다. 일부 구현예에서, 2 이상의 VZV 당단백질은 gE 및 gB이다. 일부 구현예에서, 2 이상의 VZV 당단백질은 gI 및 gB이다. 일부 구현예에서, 2 이상의 VZV 당단백질은 gE, gI, 및 gB이다. 일부 구현예에서, 2 이상의 VZV 당단백질은 gE 및 gH이다. 일부 구현예에서, 2 이상의 VZV 당단백질은 gI 및 gH이다. 일부 구현예에서, 2 이상의 VZV 당단백질은 gE, gI, 및 gH이다. 일부 구현예에서, 2 이상의 VZV 당단백질은 gE 및 gK이다. 일부 구현예에서, 2 이상의 VZV 당단백질은 gI 및 gK이다. 일부 구현예에서, 2 이상의 VZV 당단백질은 gE, gI, 및 gK이다. 일부 구현예에서, 2 이상의 VZV 당단백질은 gE 및 gL이다. 일부 구현예에서, 2 이상의 VZV 당단백질은 gI 및 gL이다. 일부 구현예에서, 2 이상의 VZV 당단백질은 gE, gI, 및 gL이다. 일부 구현예에서, 2 이상의 VZV 당단백질은 gE 및 gC이다. 일부 구현예에서, 2 이상의 VZV 당단백질은 gI 및 gC이다. 일부 구현예에서, 2 이상의 VZV 당단백질은 gE, gI, 및 gC이다. 일부 구현예에서, 2 이상의 VZV 당단백질은 gE 및 gN이다. 일부 구현예에서, 2 이상의 VZV 당단백질은 gI 및 gN이다. 일부 구현예에서, 2 이상의 VZV 당단백질은 gE, gI, 및 gN이다. 일부 구현예에서, 2 이상의 VZV 당단백질은 gE 및 gM이다. 일부 구현예에서, 2 이상의 VZV 당단백질은 gI 및 gM이다. 일부 구현예에서, 2 이상의 VZV 당단백질은 gE, gI, 및 gM이다.
일부 구현예에서, 백신은 임의의 2 이상의 VZV 당단백질 (예를 들면, 선행 단락에서 및 실시예 및 도면에서 개시된 임의의 변이체 VZV gE)를 포함하고, VZV gE는 변이체 gE, 예컨대 본 명세서에서 개시된 임의의 변이체 VZV gE 당단백질, 예를 들어, 선행 단락에서 및 실시예 및 도면에서 개시된 임의의 변이체 VZV gE이다.
일부 구현예에서, VZV 백신은 (어느 한쪽 단일 RNA 폴리뉴클레오타이드에 의해 인코딩된 또는 2 이상의 RNA 폴리뉴클레오타이드, 예를 들어, 별도의 RNA 폴리뉴클레오타이드에 의해 인코딩된 각각의 당단백질에 의해 인코딩된) 2 이상의 VZV 항원성 폴리펩타이드 또는 이의 면역원성 단편 또는 에피토프를 인코딩하는 열린 해독틀을 갖는 2 이상의 RNA 폴리뉴클레오타이드를 포함하고, 2 이상의 VZV 당단백질은 변이체 gE (예를 들면, 선행 단락에서 본 명세서에서 개시된 임의의 변이체 gE 폴리펩타이드) 및 gI, gB, gH, gK, gL, gC, gN, 및 gM 폴리펩타이드 또는 이의 면역원성 단편 또는 에피토프로부터 선택되는 VZV 당단백질이다. 일부 구현예에서, 2 이상의 VZV 당단백질은 변이체 gE (예를 들면, 선행 단락에서 본 명세서에서 개시된 임의의 변이체 gE 폴리펩타이드) 및 gI이다. 일부 구현예에서, 당단백질은 VZV gI 및 변이체 VZV gE이고, 변이체 VZV gE 폴리펩타이드는 앵커 도메인 (ER 체류 도메인)이 부족한 절단된 폴리펩타이드 (예를 들면, 서열번호: 10의 아미노산 1-561을 포함하는 절단된 VZV gE 폴리펩타이드)이다. 일부 구현예에서, 당단백질은 VZV gI 및 변이체 VZV gE이고, 변이체 VZV gE 폴리펩타이드는 카복시 말단 꼬리 도메인이 부족한 절단된 폴리펩타이드 (예를 들면, 서열번호: 18의 아미노산 1-573을 포함하는 절단된 VZV gE 폴리펩타이드)이다. 일부 구현예에서, 당단백질은 VZV gI 및 변이체 VZV gE이고, 변이체 VZV gE 폴리펩타이드는 ER 체류, TGN 국재화, 및/또는 세포내이입과 관련된 1종 이상의 모티프(들)에서 적어도 1종의 돌연변이를 갖고/갖거나 (예를 들면, 변이체 VZV gE는 Y582G 돌연변이, Y569A 돌연변이, 또는 양쪽 Y582G 돌연변이 및 Y569A 돌연변이를 갖고/갖거나) 1종 이상의 인산화된 산성 모티프(들), 예컨대 SSTT (서열번호: 122) 모티프에서 적어도 1종의 돌연변이를 갖는다. 일부 구현예에서, 당단백질은 VZV gI 및 변이체 VZV gE이고, 변이체 VZV gE 폴리펩타이드는 VZV gE의 아미노산 1-573을 포함하는 및 Y569A 돌연변이를 갖는 항원성 단편이다. 일부 구현예에서, 당단백질은 VZV gI 및 변이체 VZV gE이고, 변이체 VZV gE 폴리펩타이드는 A-E-A-A-D-A (서열번호: 58) 서열을 갖는 전장 VZV gE 폴리펩타이드이다. 일부 구현예에서, 당단백질은 VZV gI 및 변이체 VZV gE이고, VZV gE 폴리펩타이드는 A-E-A-A-D-A (서열번호: 58) 서열 및 Y582G 돌연변이, Y569A 돌연변이, 또는 양쪽 Y582G 돌연변이 및 Y569A 돌연변이를 갖는다. 일부 구현예에서, 당단백질은 VZV gI 및 변이체 VZV gE이고, VZV gE 폴리펩타이드는 폴리펩타이드의 분비를 돕는 C-말단에서 추가의 서열 (예를 들면, Ig카파 서열)을 갖는 전장 VZV gE 폴리펩타이드이다. 일부 구현예에서, 당단백질은 VZV gI 및 변이체 VZV gE이고, VZV gE 폴리펩타이드는 Ig카파 서열 및 Y582G 돌연변이, Y569A 돌연변이, 또는 양쪽 Y582G 돌연변이 및 Y569A 돌연변이를 갖는 전장 VZV gE 폴리펩타이드이다. 일부 구현예에서, 당단백질은 VZV gI 및 변이체 VZV gE이고, VZV gE 폴리펩타이드는 앵커 도메인 (ER 체류 도메인)이 부족한 및 Ig카파 서열을 갖는 절단된 VZV gE 폴리펩타이드이다. 일부 구현예에서, 변이체 VZV gE 폴리펩타이드는 아미노산 1-561 또는 아미노산 1-573을 포함하는 및 C-말단에서 Ig카파 서열을 갖는 절단된 폴리펩타이드이다.
임의의 상기-기재된 구현예에서, VZV 백신은 추가로 살아있는 약독화된 VZV, 전체 불활성화된 VZV, 또는 VZV 바이러스-유사 입자 (VLP)를 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, 살아있는 약독화된 VZV, 전체 불활성화된 VZV, 또는 VZV VLP는 다음과 같은 균주 및 유전자형으로부터 선택 또는 유래된다: VZV E1 균주, 유전자형 E1_32_5, E1_Kel, E1_뒤마, E1_러시아 1999, E1_SD, E1_MSP, E1_36, E1_49, E1_BC, E1_NH29; VZV E2 균주, 유전자형 E2_03-500, E2_2, E2_11, E2_HJO; VZV J 균주, 유전자형 pOka; VZV M1 균주, 유전자형 M1_CA123; VZV M2 균주, 유전자형 M2_8 및 M2_DR; 및 VZV M4 균주, 유전자형 스페인 4242, 프랑스 4415, 및 이탈리아 4053.
VZV의 다른 바이러스성 단백질 성분, 예를 들어, 피막 단백질을 인코딩하는 RNA 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 대안적 RNA 백신은 본 개시내용에 의해 포함된다. 따라서, 본 개시내용의 일부 구현예는 적어도 1종의 VZV 피막 단백질 또는 이의 항원성 단편 또는 에피토프를 인코딩하는 열린 해독틀을 갖는 적어도 1종의 리보핵산 (RNA) 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 VZV 백신을 제공한다. 본 개시내용의 일부 구현예는 적어도 1종의 VZV 피막 단백질 또는 이의 면역원성 단편 또는 에피토프 및 적어도 1종의 VZV 당단백질 또는 이의 면역원성 단편 또는 에피토프를 인코딩하는 열린 해독틀을 갖는 적어도 1종의 RNA 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 VZV 백신을 제공한다. 본 개시내용의 일부 구현예는 적어도 1종의 VZV 피막 단백질 또는 이의 면역원성 단편 또는 에피토프를 인코딩하는 열린 해독틀을 갖는 적어도 1종의 RNA 폴리뉴클레오타이드 및 적어도 1종의 VZV 당단백질 또는 이의 면역원성 단편 또는 에피토프를 인코딩하는 열린 해독틀을 갖는 적어도 1종의 RNA 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 VZV 백신을 제공한다. 일부 구현예에서, RNA 백신은 VZV gE, gI, gB, gH, gK, gL, gC, gN, 및 gM 폴리펩타이드 또는 이의 면역원성 단편 또는 에피토프로부터 선택되는 1종 이상의 VZV 당단백질(들) 및 1종 이상의 VZV 피막 단백질(들)을 인코딩하는 RNA (예를 들면, mRNA) 폴리뉴클레오타이드(들)을 포함한다. 일부 구현예에서, VZV 당단백질은 VZV gE 폴리펩타이드 또는 이의 면역원성 단편 또는 에피토프이다. 일부 구현예에서, VZV 당단백질은 VZV gI 폴리펩타이드 또는 이의 면역원성 단편 또는 에피토프이다. 일부 구현예에서, VZV 당단백질은 변이체 VZV gE 폴리펩타이드, 예컨대 본 명세서에서 개시된 임의의 변이체 VZV gE 폴리펩타이드이다. 일부 구현예에서, VZV 당단백질은 VZV gE 당단백질 및 VZV gI 당단백질 또는 이의 면역원성 단편 또는 에피토프이다.
일부 구현예에서, 적어도 1종의 RNA 폴리뉴클레오타이드는 서열번호: 1, 서열번호: 2, 서열번호: 3, 서열번호: 4, 서열번호: 5, 서열번호: 6, 서열번호: 7, 서열번호: 8, 서열번호: 41로부터 선택되는 적어도 1종의 핵산 서열 및 서열번호: 1-8 및 41로부터 선택되는 핵산 서열과 적어도 80% (예를 들면, 85%, 90%, 95%, 98%, 99%) 동일성을 갖는 동족체에 의해 인코딩된다. 일부 구현예에서, 적어도 1종의 RNA 폴리뉴클레오타이드는 서열번호: 1, 서열번호: 2, 서열번호: 3, 서열번호: 4, 서열번호: 5, 서열번호: 6, 서열번호: 7, 서열번호: 8, 서열번호: 41로부터 선택되는 적어도 1종의 핵산 서열 및 서열번호: 1-8 및 41로부터 선택되는 핵산 서열과 적어도 90% (예를 들면, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 99.8% 또는 99.9%) 동일성을 갖는 동족체에 의해 인코딩된다. 일부 구현예에서, 적어도 1종의 RNA 폴리뉴클레오타이드는 서열번호: 1, 서열번호: 2, 서열번호: 3, 서열번호: 4, 서열번호: 5, 서열번호: 6, 서열번호: 7, 서열번호: 8, 서열번호: 41로부터 선택되는 핵산 서열의 적어도 1종의 단편 (예를 들면, 항원성 서열 또는 적어도 1종의 에피토프를 갖는 단편) 및 서열번호: 1-8 및 41로부터 선택되는 핵산 서열과 적어도 80% (예를 들면, 85%, 90%, 95%, 98%, 99%) 동일성을 갖는 동족체에 의해 인코딩된다. 일부 구현예에서, 적어도 1종의 RNA 폴리뉴클레오타이드는 서열번호: 1, 서열번호: 2, 서열번호: 3, 서열번호: 4, 서열번호: 5, 서열번호: 6, 서열번호: 7, 서열번호: 8 및 서열번호: 41로부터 선택되는 핵산 서열의 적어도 1종의 에피토프에 의해 인코딩된다.
일부 구현예에서, 적어도 1종의 RNA 폴리뉴클레오타이드는 서열번호: 1에 의해 인코딩된 gE 폴리펩타이드이다. 일부 구현예에서, 적어도 1종의 RNA 폴리뉴클레오타이드는 서열번호: 2에 의해 인코딩된 gI 폴리펩타이드이다. 일부 구현예에서, 적어도 1종의 RNA 폴리뉴클레오타이드는 서열번호: 3에 의해 인코딩된 절단된 gE 폴리펩타이드이다. 일부 구현예에서, 적어도 1종의 RNA 폴리뉴클레오타이드는 서열번호: 5에 의해 인코딩된 절단된 gE 폴리펩타이드이다. 일부 구현예에서, 적어도 1종의 RNA 폴리뉴클레오타이드는 서열번호: 6에 의해 인코딩된 Y569A 돌연변이를 갖는 절단된 gE 폴리펩타이드이다. 일부 구현예에서, 적어도 1종의 RNA 폴리뉴클레오타이드는 서열번호: 7에 의해 인코딩된 AEAADA 서열 서열번호: 58을 갖는 gE 폴리펩타이드이다. 일부 구현예에서, 적어도 1종의 RNA 폴리뉴클레오타이드는 서열번호: 8에 의해 인코딩된 Y582G 돌연변이 및 AEAADA 서열 (서열번호: 58)을 갖는 gE 폴리펩타이드이다. 일부 구현예에서, 적어도 1종의 RNA 폴리뉴클레오타이드는 서열번호: 41에 의해 인코딩된 gE 폴리펩타이드이다.
일부 구현예에서, 적어도 1종의 RNA (예를 들면, mRNA) 폴리뉴클레오타이드는 임의의 서열번호: 10, 14, 18, 22, 26, 30, 34, 38, 42 및 45-55의 아미노산 서열에 적어도 90% 동일성을 갖는 항원성 폴리펩타이드를 인코딩한다. 일부 구현예에서, 적어도 1종의 RNA (예를 들면, mRNA) 폴리뉴클레오타이드는 임의의 서열번호: 10, 14, 18, 22, 26, 30, 34, 38, 42 및 45-55의 아미노산 서열에 적어도 95% 동일성을 갖는 항원성 폴리펩타이드를 인코딩한다. 일부 구현예에서, 적어도 1종의 RNA 폴리뉴클레오타이드는 임의의 서열번호: 10, 14, 18, 22, 26, 30, 34, 38, 42 및 45-55의 아미노산 서열에 적어도 96% 동일성을 갖는 항원성 폴리펩타이드를 인코딩한다. 일부 구현예에서, 적어도 1종의 RNA (예를 들면, mRNA) 폴리뉴클레오타이드는 서열번호: 10, 14, 18, 22, 26, 30, 34, 38, 42 및 45-55의 아미노산 서열에 적어도 97% 동일성을 갖는 항원성 폴리펩타이드를 인코딩한다. 일부 구현예에서, 적어도 1종의 RNA (예를 들면, mRNA) 폴리뉴클레오타이드는 임의의 서열번호: 10, 14, 18, 22, 26, 30, 34, 38, 42 및 45-55의 아미노산 서열에 적어도 98% 동일성을 갖는 항원성 폴리펩타이드를 인코딩한다. 일부 구현예에서, 적어도 1종의 RNA (예를 들면, mRNA) 폴리뉴클레오타이드는 임의의 서열번호: 10, 14, 18, 22, 26, 30, 34, 38, 42 및 45-55의 아미노산 서열에 적어도 99% 동일성을 갖는 항원성 폴리펩타이드를 인코딩한다.
일부 구현예에서, VZV 폴리펩타이드가 인코딩되는 개방형 판독은 코돈-최적화된다. 일부 구현예에서, 적어도 1종의 RNA 폴리뉴클레오타이드는 임의의 서열번호: 10, 14, 18, 22, 26, 30, 34, 38, 42 및 45-55의 항원성 단백질을 인코딩하고, 여기서 상기 RNA 폴리뉴클레오타이드는 코돈-최적화된 mRNA이다. 일부 구현예에서, 적어도 1종의 RNA 폴리뉴클레오타이드는 서열번호: 92-108의 어느 하나에 의해 확인된 mRNA 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 서열번호: 92-108의 어느 하나에 의해 확인된 mRNA 서열은, 서열번호: 92-108의 어느 하나에 의해 인코딩된 항원성 VZV 폴리펩타이드와 같은 면역원성, 또는 이보다 더욱 면역원성인 항원성 VZV 폴리펩타이드를 인코딩하기 위해 코돈 최적화된다.
일부 구현예에서, 적어도 1종의 RNA (예를 들면, mRNA) 폴리뉴클레오타이드는 서열번호: 10의 항원성 단백질을 인코딩하고, 여기서 상기 RNA (예를 들면, mRNA) 폴리뉴클레오타이드는 야생형 mRNA 서열에 80% 미만 동일성을 갖는다. 일부 구현예에서, 적어도 1종의 RNA 폴리뉴클레오타이드는 서열번호: 10의 항원성 단백질을 인코딩하고, 여기서 상기 RNA (예를 들면, mRNA) 폴리뉴클레오타이드는 야생형 mRNA 서열에 80% 초과 동일성을 갖지만, 야생형 mRNA 서열을 포함하지 않는다. 일부 구현예에서, 적어도 1종의 RNA (예를 들면, mRNA) 폴리뉴클레오타이드는 서열번호: 42의 항원성 단백질을 인코딩하고, 여기서 상기 RNA 예를 들면, mRNA) 폴리뉴클레오타이드는 야생형 mRNA 서열에 80% 미만 동일성을 갖는다. 일부 구현예에서, 적어도 1종의 RNA (예를 들면, mRNA) 폴리뉴클레오타이드는 서열번호: 42의 항원성 단백질을 인코딩하고, 여기서 상기 RNA 폴리뉴클레오타이드는 야생형 mRNA 서열에 80% 초과 동일성을 갖지만, 야생형 mRNA 서열을 포함하지 않는다. 일부 구현예에서, 적어도 1종의 RNA (예를 들면, mRNA) 폴리뉴클레오타이드는 서열번호: 14의 항원성 단백질을 인코딩하고, 여기서 상기 RNA (예를 들면, mRNA) 폴리뉴클레오타이드는 야생형 mRNA 서열에 80% 미만 동일성을 갖는다. 일부 구현예에서, 적어도 1종의 RNA (예를 들면, mRNA) 폴리뉴클레오타이드는 서열번호: 14의 항원성 단백질을 인코딩하고, 여기서 상기 RNA (예를 들면, mRNA) 폴리뉴클레오타이드는 야생형 mRNA 서열에 80% 초과 동일성을 갖지만, 야생형 mRNA 서열을 포함하지 않는다. 일부 구현예에서, 적어도 1종의 RNA (예를 들면, mRNA) 폴리뉴클레오타이드는 서열번호: 26의 항원성 단백질을 인코딩하고, 여기서 상기 RNA 폴리뉴클레오타이드는 야생형 mRNA 서열에 80% 미만 동일성을 갖는다. 일부 구현예에서, 적어도 1종의 RNA (예를 들면, mRNA) 폴리뉴클레오타이드는 서열번호: 26의 항원성 단백질을 인코딩하고, 여기서 상기 RNA (예를 들면, mRNA) 폴리뉴클레오타이드는 야생형 mRNA 서열에 80% 초과 동일성을 갖지만, 야생형 mRNA 서열을 포함하지 않는다. 일부 구현예에서, 적어도 1종의 RNA (예를 들면, mRNA) 폴리뉴클레오타이드는 서열번호: 30의 항원성 단백질을 인코딩하고, 여기서 상기 RNA 폴리뉴클레오타이드는 야생형 mRNA 서열에 80% 미만 동일성을 갖는다. 일부 구현예에서, 적어도 1종의 RNA 폴리뉴클레오타이드는 서열번호: 30의 항원성 단백질을 인코딩하고, 여기서 상기 RNA (예를 들면, mRNA) 폴리뉴클레오타이드는 야생형 mRNA 서열에 80% 초과 동일성을 갖지만, 야생형 mRNA 서열을 포함하지 않는다. 일부 구현예에서, 적어도 1종의 RNA (예를 들면, mRNA) 폴리뉴클레오타이드는 임의의 서열번호: 1-8 및 서열번호 41로부터 선택되는 서열에 의해 인코딩되고 적어도 1종의 화학적 변형을 포함한다.
일부 구현예에서, VZV 백신은 다가이다. 일부 구현예에서, RNA 폴리뉴클레오타이드는, 예를 들어, 임의의 1종 이상의 유전자형 E1_32_5, E1_Kel, E1_뒤마, E1_러시아 1999, E1_SD, E1_MSP, E1_36, E1_49, E1_BC, 및 E1_NH29를 포함하는, VZV E1 균주로부터 유래된 폴리뉴클레오타이드 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, RNA (예를 들면, mRNA) 폴리뉴클레오타이드는, 예를 들어, 임의의 1종 이상의 유전자형 E2_03-500, E2_2, E2_11, 및 E2_HJO를 포함하는, VZV E2 균주로부터 유래된 폴리뉴클레오타이드 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, RNA (예를 들면, mRNA) 폴리뉴클레오타이드는, 예를 들어, 유전자형 pOka를 포함하는, VZV J 균주로부터 유래된 폴리뉴클레오타이드 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, RNA (예를 들면, mRNA) 폴리뉴클레오타이드는, 예를 들어, 유전자형 M1_CA123을 포함하는, VZV M1 균주로부터 유래된 폴리뉴클레오타이드 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, RNA (예를 들면, mRNA) 폴리뉴클레오타이드는, 예를 들어, 유전자형 M2_8 및 M2_DR을 포함하는, VZV M2 균주로부터 유래된 폴리뉴클레오타이드 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, RNA (예를 들면, mRNA) 폴리뉴클레오타이드는, 예를 들어, 임의의 1종 이상의 유전자형 스페인 4242, 프랑스 4415, 및 이탈리아 4053을 포함하는, VZV M4 균주로부터 유래된 폴리뉴클레오타이드 서열을 포함한다.
본 개시내용의 일부 구현예는 적어도 1종의 VZV 항원성 폴리펩타이드 또는 이의 면역원성 단편을 인코딩하는 열린 해독틀 및 적어도 1종의 5' 말단 캡을 갖는 적어도 1종의 리보핵산 (RNA) 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 VZV 백신을 제공한다. 일부 구현예에서, 5' 말단 캡은 7mG(5')ppp(5')NlmpNp이다. 본 개시내용의 일부 구현예는 적어도 1종의 VZV 항원성 폴리펩타이드 또는 이의 면역원성 단편을 인코딩하는 열린 해독틀을 갖는 적어도 1종의 RNA (예를 들면, mRNA) 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 VZV 백신을 제공하고, 여기서 상기 적어도 1종의 RNA (예를 들면, mRNA) 폴리뉴클레오타이드는 적어도 1종의 화학적 변형을 갖는다. 일부 구현예에서, 적어도 1종의 RNA (예를 들면, mRNA) 폴리뉴클레오타이드는 추가로 제2 화학적 변형을 포함한다. 일부 구현예에서, 적어도 1종의 화학적 변형을 갖는 적어도 1종의 RNA (예를 들면, mRNA) 폴리뉴클레오타이드는 5' 말단 캡을 갖는다. 일부 구현예에서, 적어도 1종의 화학적 변형은 슈도우리딘, N1-메틸슈도우리딘, N1-에틸슈도우리딘, 2-티오우리딘, 4'-티오우리딘, 5-메틸시토신, 2-티오-1-메틸-1-데아자-슈도우리딘, 2-티오-1-메틸-슈도우리딘, 2-티오-5-아자-우리딘, 2-티오-디하이드로슈도우리딘, 2-티오-디하이드로우리딘, 2-티오-슈도우리딘, 4-메톡시-2-티오-슈도우리딘, 4-메톡시-슈도우리딘, 4-티오-1-메틸-슈도우리딘, 4-티오-슈도우리딘, 5-아자-우리딘, 디하이드로슈도우리딘, 5-메톡시우리딘 및 2'-O-메틸 우리딘으로부터 선택된다. 일부 구현예에서, 적어도 1종의 RNA 폴리뉴클레오타이드의 우리딘의 모두 (100%)는 화학적 변형, 예컨대 N1-메틸슈도우리딘 변형 또는 N1-에틸슈도우리딘 변형을 포함한다.
본 개시내용의 일부 구현예는 적어도 1종의 VZV 항원성 폴리펩타이드 또는 이의 면역원성 단편을 인코딩하는 열린 해독틀을 갖는 적어도 1종의 리보핵산 (RNA) 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 VZV 백신을 제공하고, 여기서 열린 해독틀에서 우라실의 적어도 80% (예를 들면, 85%, 90%, 95%, 98%, 99%, 100%)는 화학적 변형을 갖고, 선택적으로 여기서 상기 백신은 지질 나노입자로 제형화된다. 일부 구현예에서, 열린 해독틀에서 우라실의 100%는 화학적 변형을 갖는다. 일부 구현예에서, 화학적 변형은 우라실의 5-위치이다. 일부 구현예에서, 화학적 변형은 N1-메틸 슈도우리딘이다. 일부 구현예에서, 열린 해독틀에서 우라실의 100%는 변형되어 N1-메틸 슈도우리딘을 포함한다.
본 개시내용의 일부 구현예는 양이온성 지질 나노입자 안에서 제형화되는 VZV 백신을 제공한다. 일부 구현예에서, 양이온성 지질 나노입자는 양이온성 지질, PEG-변형된 지질, 스테롤 및 비-양이온성 지질을 포함한다. 일부 구현예에서, 양이온성 지질은 이온화가능한 양이온성 지질이고 비-양이온성 지질은 중성 지질이고, 스테롤은 콜레스테롤이다. 일부 구현예에서, 양이온성 지질은 2,2-디리놀레일-4-디메틸아미노에틸-[1,3]-디옥솔란 (DLin-KC2-DMA), 디리놀레일-메틸-4-디메틸아미노부티레이트 (DLin-MC3-DMA), 디((Z)-논-2-엔-1-일) 9-((4-(디메틸아미노)부타노일)옥시)헵타데칸디오에이트 (L319), (12Z,15Z)-N,N-디메틸-2-노닐헤니코사-12,15-디엔-1-아민 (L608), 및 N,N-디메틸-1-[(1S,2R)-2-옥틸사이클로프로필]헵타데칸-8-아민 (L530)으로 구성되는 군으로부터 선택된다.
일부 구현예에서, 지질은 하기이다:
Figure pct00001
일부 구현예에서, 지질은 하기이다:
Figure pct00002
일부 구현예에서, 양이온성 지질 나노입자는 약 20-60% 양이온성 지질, 약 5-25% 비-양이온성 지질, 약 25-55% 스테롤, 및 약 0.5-15% PEG-변형된 지질의 몰비를 갖는다. 일부 구현예에서, 나노입자는 0.4 미만의 다분산 값을 갖는다. 일부 구현예에서, 나노입자는 중성 pH 값에서 순 중성 전하를 갖는다. 일부 구현예에서, 나노입자는 50-200 nm의 평균 직경을 갖는다.
본 개시내용의 일부 구현예는, 항원 특이적 면역 반응을 생산하는데 효과적인 양으로 VZV RNA (예를 들면, mRNA) 백신을 대상체에 투여하는 것을 포함하는, 대상체에서 항원 특이적 면역 반응의 유도 방법을 제공한다. 일부 구현예에서, 항원 특이적 면역 반응은 T 세포 반응 또는 B 세포 반응을 포함한다. 일부 구현예에서, 항원 특이적 면역 반응은 T 세포 반응 및 B 세포 반응을 포함한다. 일부 구현예에서, 항원 특이적 면역 반응의 생산 방법은 백신의 단일 투여를 포함한다. 일부 구현예에서, 방법은 추가로 대상체에 백신의 부스터 용량 투여를 포함한다. 일부 구현예에서, 백신은 진피내 또는 근육내 주사에 의해 대상체에 투여된다.
대상체에서 항원 특이적 면역 반응의 유도 방법에서 사용을 위한 VZV RNA (예를 들면, mRNA) 백신이 또한 본 명세서에서 제공되고, 상기 방법은 항원 특이적 면역 반응을 생산하는데 효과적인 양으로 대상체에 백신을 투여하는 것을 포함한다.
대상체에서 항원 특이적 면역 반응의 유도 방법에서 사용을 위한 약제의 제조에서 VZV RNA (예를 들면, mRNA) 백신의 용도가 추가로 본 명세서에서 제공되고, 상기 방법은 항원 특이적 면역 반응을 생산하는데 효과적인 양으로 대상체에 백신을 투여하는 것을 포함한다.
본 개시내용의 일부 측면은 대상체에 본 개시내용의 VZV RNA (예를 들면, mRNA) 백신을 투여하는 것을 포함하는 VZV 감염의 예방 또는 치료 방법을 제공한다. 일부 구현예에서, VZV RNA (예를 들면, mRNA) 백신은 대상체에서 항원 특이적 면역 반응을 생산하기 위한 유효량으로 제형화된다.
본 개시내용의 일부 구현예는 대상체에서 항원 특이적 면역 반응의 유도 방법을 제공하고, 상기 방법은 대상체에서 항원 특이적 면역 반응을 생산하기 위한 유효량으로 본 명세서에서 제공된 바와 같이 VZV RNA (예를 들면, mRNA) 백신을 대상체에 투여하는 것을 포함한다.
일부 구현예에서, 대상체에서 생산된 항-VZV 항원성 폴리펩타이드 항체 역가는 대조군에 비해 적어도 1 log만큼 증가된다. 일부 구현예에서, 대상체에서 생산된 항-VZV 항원성 폴리펩타이드 항체 역가는 대조군에 비해 1-3 log만큼 증가된다.
일부 구현예에서, 대상체에서 생산된 항-VZV 항원성 폴리펩타이드 항체 역가는 대조군에 비해 적어도 2 배 증가된다. 일부 구현예에서, 대상체에서 생산된 항-VZV 항원성 폴리펩타이드 항체 역가는 대조군에 비해 적어도 5 배 증가된다. 일부 구현예에서, 대상체에서 생산된 항-VZV 항원성 폴리펩타이드 항체 역가는 대조군에 비해 적어도 10 배 증가된다. 일부 구현예에서, 대상체에서 생산된 항-VZV 항원성 폴리펩타이드 항체 역가는 대조군에 비해 2-10 배 증가된다.
일부 구현예에서, 대조군은 VZV 백신 투여되지 않은 대상체에서 생산된 항-VZV 항원성 폴리펩타이드 항체 역가이다. 일부 구현예에서, 대조군은 살아있는 약독화된 또는 불활성화된 VZV 백신 투여된 대상체에서 생산된 항-VZV 항원성 폴리펩타이드 항체 역가이다. 일부 구현예에서, 대조군은 재조합 또는 정제된 VZV 단백질 백신 투여된 대상체에서 생산된 항-VZV 항원성 폴리펩타이드 항체 역가이다. 일부 구현예에서, 대조군은 VZV 바이러스-유사 입자 (VLP) 백신 투여된 대상체에서 생산된 항-VZV 항원성 폴리펩타이드 항체 역가이다.
일부 구현예에서, 유효량은 재조합 VZV 단백질 백신의 치료 기준 용량에서 적어도 2-배 감소에 맞먹는 용량이고, 여기서 대상체에서 생산된 항-VZV 항원성 폴리펩타이드 항체 역가는 재조합 또는 정제된 VZV 단백질 백신, 살아있는 약독화된 또는 불활성화된 VZV 백신, 또는 VZV VLP 백신의 치료 기준 용량 투여된 대조군 대상체에서 생산된 항-VZV 항원성 폴리펩타이드 항체 역가에 맞먹는다.
일부 구현예에서, 유효량은 재조합 VZV 단백질 백신의 치료 기준 용량에서 적어도 4-배 감소에 맞먹는 용량이고, 여기서 대상체에서 생산된 항-VZV 항원성 폴리펩타이드 항체 역가는 재조합 또는 정제된 VZV 단백질 백신, 살아있는 약독화된 또는 불활성화된 VZV 백신, 또는 VZV VLP 백신의 치료 기준 용량 투여된 대조군 대상체에서 생산된 항-VZV 항원성 폴리펩타이드 항체 역가에 맞먹는다.
일부 구현예에서, 유효량은 재조합 VZV 단백질 백신의 치료 기준 용량에서 적어도 10-배 감소에 맞먹는 용량이고, 여기서 대상체에서 생산된 항-VZV 항원성 폴리펩타이드 항체 역가는 재조합 또는 정제된 VZV 단백질 백신, 살아있는 약독화된 또는 불활성화된 VZV 백신, 또는 VZV VLP 백신의 치료 기준 용량 투여된 대조군 대상체에서 생산된 항-VZV 항원성 폴리펩타이드 항체 역가에 맞먹는다.
일부 구현예에서, 유효량은 재조합 VZV 단백질 백신의 치료 기준 용량에서 적어도 100-배 감소에 맞먹는 용량이고, 여기서 대상체에서 생산된 항-VZV 항원성 폴리펩타이드 항체 역가는 재조합 또는 정제된 VZV 단백질 백신, 살아있는 약독화된 또는 불활성화된 VZV 백신, 또는 VZV VLP 백신의 치료 기준 용량 투여된 대조군 대상체에서 생산된 항-VZV 항원성 폴리펩타이드 항체 역가에 맞먹는다.
일부 구현예에서, 유효량은 재조합 VZV 단백질 백신의 치료 기준 용량에서 적어도 1000-배 감소에 맞먹는 용량이고, 여기서 대상체에서 생산된 항-VZV 항원성 폴리펩타이드 항체 역가는 재조합 또는 정제된 VZV 단백질 백신, 살아있는 약독화된 또는 불활성화된 VZV 백신, 또는 VZV VLP 백신의 치료 기준 용량 투여된 대조군 대상체에서 생산된 항-VZV 항원성 폴리펩타이드 항체 역가에 맞먹는다.
일부 구현예에서, 유효량은 재조합 VZV 단백질 백신의 치료 기준 용량에서 2-배 내지 1000-배 감소에 맞먹는 용량이고, 여기서 대상체에서 생산된 항-VZV 항원성 폴리펩타이드 항체 역가는 재조합 또는 정제된 VZV 단백질 백신, 살아있는 약독화된 또는 불활성화된 VZV 백신, 또는 VZV VLP 백신의 치료 기준 용량 투여된 대조군 대상체에서 생산된 항-VZV 항원성 폴리펩타이드 항체 역가에 맞먹는다.
일부 구현예에서, 유효량은 25 μg 내지 1000 μg, 또는 50 μg 내지 1000 μg 또는 25 내지 200 μg의 총 용량이다. 일부 구현예에서, 유효량은 50 μg, 100 μg, 200 μg, 400 μg, 800 μg, 또는 1000 μg의 총 용량이다. 일부 구현예에서, 유효량은 200 μg의 총 용량이다. 일부 구현예에서, 유효량은 50 μg 내지 400 μg의 총 용량이다. 일부 구현예에서, 유효량은 50 μg, 100 μg, 150 μg, 200 μg, 250 μg, 300 μg, 350 μg 또는 400 μg의 총 용량이다. 일부 구현예에서, 유효량은 총 2회 대상체에 투여된 25 μg의 용량이다. 일부 구현예에서, 유효량은 총 2회 대상체에 투여된 50 μg의 용량이다. 일부 구현예에서, 유효량은 총 2회 대상체에 투여된 100 μg의 용량이다. 일부 구현예에서, 유효량은 총 2회 대상체에 투여된 200 μg의 용량이다. 일부 구현예에서, 유효량은 총 2회 대상체에 투여된 400 μg의 용량이다. 일부 구현예에서, 유효량은 총 2회 대상체에 투여된 500 μg의 용량이다.
일부 구현예에서, VZV에 대한 VZV RNA (예를 들면, mRNA) 백신의 효능 (또는 유효성)은 60% 초과이다.
백신 효능은 표준 분석을 이용하여 평가될 수 있다 (참고, 예를 들면, Weinberg 등, J Infect Dis. 2010 Jun 1;201(11):1607-10). 예를 들어, 백신 효능은 이중맹검, 무작위화된, 임상 제어된 실험에 의해 측정될 수 있다. 백신 효능은 미백신접종된 (ARU) 및 백신접종된 (ARV) 연구 집단 사이 질환 발병률 (AR)에서 비례 감소로서 표현될 수 있고 다음과 같은 식의 이용으로 백신접종된 그룹 중에서 질환의 상대 위험 (RR)로부터 계산될 수 있다:
효능 = (ARU - ARV)/ARU x 100; 및
효능 = (1-RR) x 100.
마찬가지로, 백신 유효성은 표준 분석을 이용하여 평가될 수 있다 (참고, 예를 들면, Weinberg 등, J Infect Dis. 2010 Jun 1;201(11):1607-10). 백신 유효성은 (높은 백신 효능을 갖는 것으로 이미 입증될 수 있는) 백신이 모집단에서 질환을 얼마나 감소시키는지의 평가이다. 이 측정은, 바로 백신 자체가 아닌, 제어된 임상시험에서 보다는 자연 현장 조건하에 백신접종 프로그램의 이익 및 역효과의 순 균형을 평가할 수 있다. 백신 유효성은 백신 효능 (효력)에 비례하고 또한 모집단에서 표적 그룹이 얼마나 양호하게 면역화되는지에 의해, 뿐만 아니라 입원, 보행 방문, 또는 비용의 '실사회' 결과에 영향을 미치는 다른 비-백신-관련된 인자에 의해 영향받는다. 예를 들어, 일련의 감염된 사례 및 적절한 대조군 중에서 백신접종의 비율이 비교되는, 후향적 사례 대조 분석은 사용될 수 있다. 백신 유효성은, 백신접종에도 불구하고 감염 발생에 대한 오즈비 (OR)의 사용으로, 비율 차이로서 표현될 수 있다:
유효성 = (1 - OR) x 100.
일부 구현예에서, VZV에 대한 VZV RNA (예를 들면, mRNA) 백신의 효능 (또는 유효성)은 65% 초과이다. 일부 구현예에서, VZV에 대한 백신의 효능 (또는 유효성)은 70% 초과이다. 일부 구현예에서, VZV에 대한 백신의 효능 (또는 유효성)은 75% 초과이다. 일부 구현예에서, VZV에 대한 백신의 효능 (또는 유효성)은 80% 초과이다. 일부 구현예에서, VZV에 대한 백신의 효능 (또는 유효성)은 85% 초과이다. 일부 구현예에서, VZV에 대한 백신의 효능 (또는 유효성)은 90% 초과이다.
일부 구현예에서, 백신은 최대 1 년 (예를 들면 단일 VZV 시즌 동안) VZV에 대한 대상체를 면역화시킨다. 일부 구현예에서, 백신은 최대 2 년 동안 VZV에 대한 대상체를 면역화시킨다. 일부 구현예에서, 백신은 2 년 초과 동안 VZV에 대한 대상체를 면역화시킨다. 일부 구현예에서, 백신은 3 년 초과 동안 VZV에 대한 대상체를 면역화시킨다. 일부 구현예에서, 백신은 4 년 초과 동안 VZV에 대한 대상체를 면역화시킨다. 일부 구현예에서, 백신은 5-10 년 동안 VZV에 대한 대상체를 면역화시킨다.
일부 구현예에서, VZV RNA (예를 들면, mRNA) 백신 투여된 대상체는 약 12 월령 내지 약 10 세 (예를 들면, 약 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10 세)의 나이 사이이다. 일부 구현예에서, VZV RNA (예를 들면, mRNA) 백신 투여된 대상체는 약 12 월령 내지 약 15 월령 (예를 들면, 약 12, 12.5, 13, 13.5, 14, 14.5 또는 15 월령)의 나이 사이이다. 일부 구현예에서, VZV RNA (예를 들면, mRNA) 백신 투여된 대상체는 약 4 세 내지 약 6 세 (예를 들면, 약 4, 4.5, 5, 5.6, 또는 6 세)의 나이 사이이다.
일부 구현예에서, 대상체는 약 20 세 내지 약 50 세 (예를 들면, 약 20, 25, 30, 35, 40, 45 또는 50 세)의 나이 사이인 청년층이다.
일부 구현예에서, 대상체는 약 60 세, 약 70 세, 또는 초과 (예를 들면, 약 60, 65, 70, 75, 80, 85 또는 90 세) 노년층이다.
일부 구현예에서, 대상체는 VZV에 노출되어 있거나, VZV로 감염되거나 (상기를 갖거나), VZV에 의해 감염의 위험에 처해 있다.
일부 구현예에서, 대상체는 면역저하된다 (손상된 면역계를 갖는다, 예를 들면, 면역 장애 또는 자가면역 장애를 갖는다).
본 개시내용의 일부 측면은 VZV 항원성 폴리펩타이드에 연결된 신호 펩타이드를 함유하는 수두대상포진 바이러스 (VZV) RNA (예를 들면, mRNA) 백신을 제공한다. 따라서, 일부 구현예에서, VZV RNA (예를 들면, mRNA) 백신은 VZV 항원성 펩타이드에 연결된 신호 펩타이드를 인코딩하는 열린 해독틀을 갖는 적어도 1종의 리보핵산 (RNA) 폴리뉴클레오타이드를 함유한다. 본 명세서에서 개시된 VZV RNA (예를 들면, mRNA) 백신을 인코딩하는 핵산은 또한 본 명세서에서 제공된다.
본 개시내용의 다른 측면은 VZV 항원성 폴리펩타이드에 연결된 신호 펩타이드를 함유하는 수두대상포진 바이러스 (VZV) 백신을 제공한다. 일부 구현예에서, VZV 항원성 폴리펩타이드는 VZV 당단백질이다. 일부 구현예에서, VZV 당단백질은 VZV gE, gI, gB, gH, gK, gL, gC, gN, 및 gM으로부터 선택된다. 일부 구현예에서, VZV 당단백질은 VZV gE 또는 변이체 VZV gE 폴리펩타이드이다.
일부 구현예에서, 신호 펩타이드는 IgE 신호 펩타이드이다. 일부 구현예에서, 신호 펩타이드는 IgE HC (Ig 중쇄 엡실론-1) 신호 펩타이드이다. 일부 구현예에서, 신호 펩타이드는 서열 MDWTWILFLVAAATRVHS (서열번호: 56)을 갖는다. 일부 구현예에서, 신호 펩타이드는 IgGκ 신호 펩타이드이다. 일부 구현예에서, 신호 펩타이드는 서열 METPAQLLFLLLLWLPDTTG (서열번호: 57)을 갖는다. 일부 구현예에서, 신호 펩타이드는 하기로부터 선택된다: 일본 뇌염 PRM 신호 서열 (MLGSNSGQRVVFTILLLLVAPAYS; 서열번호: 109), VSVg 단백질 신호 서열 (MKCLLYLAFLFIGVNCA; 서열번호: 110) 및 일본 뇌염 JEV 신호 서열 (MWLVSLAIVTACAGA; 서열번호: 111).
본 명세서에서 개시된 VZV 백신을 인코딩하는 핵산은 추가로 본 명세서에서 제공된다. 그와 같은 VZV 백신은 VZV 항원성 폴리펩타이드에 연결된 신호 펩타이드를 인코딩하는 열린 해독틀을 갖는 적어도 1종의 리보핵산 (RNA) (예를 들면, mRNA) 폴리뉴클레오타이드를 포함한다. 일부 구현예에서, VZV 항원성 펩타이드는 VZV 당단백질이다. 일부 구현예에서, VZV 당단백질은 VZV gE, gI, gB, gH, gK, gL, gC, gN, 및 gM으로부터 선택된다. 일부 구현예에서, VZV 항원성 펩타이드는 gE 폴리펩타이드의 VZV gE 또는 변이체이다.
일부 구현예에서, 유효량의 VZV RNA (예를 들면, mRNA) 백신 (예를 들면, 단일 용량의 VZV 백신)은, 대조군에 비해, VZV에 대한 혈청 중화 항체에서 2 배 내지 200 배 (예를 들면, 약 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 110, 120, 130, 140, 150, 160, 170, 180, 190 또는 200 배) 증가를 초래한다. 일부 구현예에서, 단일 용량의 VZV RNA (예를 들면, mRNA) 백신은, 대조군에 비해, VZV에 대한 혈청 중화 항체에서 약 5 배, 50 배, 또는 150 배 증가를 초래한다. 일부 구현예에서, 단일 용량의 VZV RNA (예를 들면, mRNA) 백신은, 대조군에 비해, VZV에 대한 혈청 중화 항체에서 약 2 배 내지 10 배, 또는 약 40 내지 60 배 증가를 초래한다.
일부 구현예에서, RNA 백신 RNA (예를 들면, mRNA)의 효능은 플라젤린 아쥬반트와 조합된 경우, 특히, 1종 이상의 항원-인코딩 mRNAs가 mRNA 인코딩 플라젤린과 조합되는 경우 상당히 향상될 수 있다.
플라젤린 아쥬반트 (예를 들면, mRNA-인코딩된 플라젤린 아쥬반트)와 조합된 RNA (예를 들면, mRNA) 백신은 이들이 훨씬 더 큰 항체 역가를 생산할 수 있고 상업적으로 입수가능한 백신 제형보다 더 일찍 반응을 생산할 수 있다는 점에서 우월한 특성을 갖는다. 이론에 의해 구속되기를 바라지 않으면서, 예를 들어, mRNA 폴리뉴클레오타이드로서, RNA 백신이 RNA (예를 들면, mRNA) 백신 코-옵트 천연 세포 기구로서 양쪽 항원 및 아쥬반트에 대하여 번역시 적절한 단백질 형태를 생산하기 위해 더욱 양호하게 설계되는 것으로 믿어진다. 생체외 제조되는 및 원치않는 세포 반응을 유발시킬 수 있는, 전통 백신과 달리, RNA (예를 들면, mRNA) 백신은 더욱 원상태 방식으로 세포 시스템에 나타난다.
본 개시내용의 일부 구현예는 적어도 1종의 항원성 폴리펩타이드 또는 이의 면역원성 단편 (예를 들면, 항원성 폴리펩타이드에 면역 반응을 유도할 수 있는 면역원성 단편)을 인코딩하는 열린 해독틀을 갖는 적어도 1종의 RNA (예를 들면, mRNA) 폴리뉴클레오타이드 및 플라젤린 아쥬반트를 인코딩하는 열린 해독틀을 갖는 적어도 1종의 RNA (예를 들면, mRNA 폴리뉴클레오타이드)를 포함하는 RNA (예를 들면, mRNA) 백신을 제공한다.
일부 구현예에서, 적어도 1종의 플라젤린 폴리펩타이드 (예를 들면, 인코딩된 플라젤린 폴리펩타이드)는 플라젤린 단백질이다. 일부 구현예에서, 적어도 1종의 플라젤린 폴리펩타이드 (예를 들면, 인코딩된 플라젤린 폴리펩타이드)는 면역원성 플라젤린 단편이다. 일부 구현예에서, 적어도 1종의 플라젤린 폴리펩타이드 및 적어도 1종의 항원성 폴리펩타이드는 단일 RNA (예를 들면, mRNA) 폴리뉴클레오타이드에 의해 인코딩된다. 다른 구현예에서, 적어도 1종의 플라젤린 폴리펩타이드 및 적어도 1종의 항원성 폴리펩타이드는 상이한 RNA 폴리뉴클레오타이드에 의해 각각 인코딩된다.
일부 구현예에서 적어도 1종의 플라젤린 폴리펩타이드는 임의의 서열번호: 115-117의 서열을 갖는 플라젤린 폴리펩타이드에 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95% 동일성을 갖는다.
일부 구현예에서 본 명세서에서 기재된 핵산 백신은 화학적으로 변형된다. 다른 구현예에서 핵산 백신은 미변형된다.
더욱 다른 측면은, RNA 폴리뉴클레오타이드가 안정화 요소를 포함하지 않고, 아쥬반트가 백신과 공제형화 또는 공-투여되지 않는, 제1 항원성 VZV 폴리펩타이드를 인코딩하는 열린 해독틀을 갖는 1종 이상의 RNA 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 핵산 백신을 대상체에 투여하는 것을 포함하는 대상체 백신접종 방법 및 백신접종용 조성물을 제공한다.
다른 측면에서 본 발명은 핵산 백신의 10 ㎍/kg 내지 400 ㎍/kg의 복용량이 대상체에 투여되는 제1 항원성 폴리펩타이드를 인코딩하는 열린 해독틀을 갖는 1종 이상의 RNA 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 핵산 백신을 대상체에 투여하는 것을 포함하는 대상체 백신접종 방법 및 백신접종용 조성물을 제공한다. 일부 구현예에서 RNA 폴리뉴클레오타이드의 복용량은 1-5 ㎍, 5-10 ㎍, 10-15 ㎍, 15-20 ㎍, 10-25 ㎍, 20-25 ㎍, 20-50 ㎍, 30-50 ㎍, 40-50 ㎍, 40-60 ㎍, 60-80 ㎍, 60-100 ㎍, 50-100 ㎍, 80-120 ㎍, 40-120 ㎍, 40-150 ㎍, 50-150 ㎍, 50-200 ㎍, 80-200 ㎍, 100-200 ㎍, 120-250 ㎍, 150-250 ㎍, 180-280 ㎍, 200-300 ㎍, 50-300 ㎍, 80-300 ㎍, 100-300 ㎍, 40-300 ㎍, 50-350 ㎍, 100-350 ㎍, 200-350 ㎍, 300-350 ㎍, 320-400 ㎍, 40-380 ㎍, 40-100 ㎍, 100-400 ㎍, 200-400 ㎍, 또는 300-400 ㎍ / 용량이다. 일부 구현예에서, 핵산 백신은 진피내 또는 근육내 주사에 의해 대상체에 투여된다. 일부 구현예에서, 핵산 백신은 일 0에 대상체에 투여된다. 일부 구현예에서, 핵산 백신의 제2 용량은 일 21에 대상체에 투여된다.
일부 구현예에서, RNA 폴리뉴클레오타이드의 25 마이크로그램의 복용량은 대상체에 투여된 핵산 백신에서 포함된다. 일부 구현예에서, RNA 폴리뉴클레오타이드의 100 마이크로그램의 복용량은 대상체에 투여된 핵산 백신에서 포함된다. 일부 구현예에서, RNA 폴리뉴클레오타이드의 50 마이크로그램의 복용량은 대상체에 투여된 핵산 백신에서 포함된다. 일부 구현예에서, RNA 폴리뉴클레오타이드의 75 마이크로그램의 복용량은 대상체에 투여된 핵산 백신에서 포함된다. 일부 구현예에서, RNA 폴리뉴클레오타이드의 150 마이크로그램의 복용량은 대상체에 투여된 핵산 백신에서 포함된다. 일부 구현예에서, RNA 폴리뉴클레오타이드의 400 마이크로그램의 복용량은 대상체에 투여된 핵산 백신에서 포함된다. 일부 구현예에서, RNA 폴리뉴클레오타이드의 200 마이크로그램의 복용량은 대상체에 투여된 핵산 백신에서 포함된다. 일부 구현예에서, RNA 폴리뉴클레오타이드는 원위 림프절과 비교로 국부 림프절에서 100 배 더 높은 수준으로 축적한다. 다른 구현예에서 핵산 백신은 화학적으로 변형되고 다른 구현예에서 핵산 백신은 화학적으로 변형되지 않는다.
본 발명의 측면은, RNA 폴리뉴클레오타이드가 안정화 요소, 및 약제학적으로 허용가능한 캐리어 또는 부형제를 포함하지 않고, 아쥬반트가 백신에서 포함되지 않는, 제1 항원성 폴리펩타이드를 인코딩하는 열린 해독틀을 갖는 1종 이상의 RNA 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 핵산 백신을 제공한다. 일부 구현예에서, 안정화 요소는 히스톤 줄기구조이다. 일부 구현예에서, 안정화 요소는 야생형 서열에 비해 증가된 GC 함량을 갖는 핵산 서열이다.
본 발명의 측면은, 인간 대상체의 허용가능한 백분율로 제1 항원에 대하여 혈청방어율용 기준보다 우월한 항체 역가를 부여하는, 숙주에 생체내 투여용 제형에서 RNA 폴리뉴클레오타이드가 존재하는, 제1 항원성 폴리펩타이드를 인코딩하는 열린 해독틀을 갖는 1종 이상의 RNA 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 핵산 백신을 제공한다. 일부 구현예에서, 본 발명의 mRNA 백신에 의해 생산된 항체 역가는 중화 항체 역가이다. 일부 구현예에서 중화 항체 역가는 단백질 백신보다 더 크다. 다른 구현예에서 본 발명의 mRNA 백신에 의해 생산된 중화 항체 역가는 아쥬반트된 단백질 백신보다 더 크다. 더욱 다른 구현예에서 본 발명의 mRNA 백신에 의해 생산된 중화 항체 역가는 1,000-10,000, 1,200-10,000, 1,400-10,000, 1,500-10,000, 1,000-5,000, 1,000-4,000, 1,800-10,000, 2000-10,000, 2,000-5,000, 2,000-3,000, 2,000-4,000, 3,000-5,000, 3,000-4,000, 또는 2,000-2,500이다. 중성화 역가는 플라크의 수에서 50% 감소를 달성하도록 요구된 최고 혈청 희석으로서 전형적으로 표현된다.
안정화 요소를 갖거나 아쥬반트로 제형화되고 제1 항원성 폴리펩타이드를 인코딩하는 mRNA 백신에 의해 유발된 항체 역가보다 더 오래 지속하는 높은 항체 역가 유발을 위하여 숙주에 생체내 투여용 제형에서 RNA 폴리뉴클레오타이드가 존재하는, 제1 항원성 폴리펩타이드를 인코딩하는 열린 해독틀을 갖는 1종 이상의 RNA 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 핵산 백신은 또한 제공된다. 일부 구현예에서, RNA 폴리뉴클레오타이드는 제형화되어 단일 투여의 1 주 이내 중화 항체를 생산한다. 일부 구현예에서, 아쥬반트는 양이온성 펩타이드 및 면역자극성 핵산으로부터 선택된다. 일부 구현예에서, 양이온성 펩타이드는 프로타민이다.
측면은, 숙주에서 항원 발현의 수준이 안정화 요소를 갖거나 아쥬반트로 제형화되고 제1 항원성 폴리펩타이드를 인코딩하는 mRNA 백신에 의해 생산된 항원 발현의 수준을 상당히 능가하는 정도로 숙주에 생체내 투여용 제형에서 RNA 폴리뉴클레오타이드가 존재하는, 열린 해독틀이 제1 항원성 폴리펩타이드를 인코딩하는, 적어도 1종의 화학적 변형 또는 선택적으로 무 화학적 변형을 포함하는 열린 해독틀을 갖는 1종 이상의 RNA 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 핵산 백신을 제공한다.
다른 측면은, 백신이 등가 항체 역가를 생산하기 위해 미변형된 mRNA 백신에 요구되는 것보다 적어도 10 배 적은 RNA 폴리뉴클레오타이드를 갖는, 열린 해독틀이 제1 항원성 폴리펩타이드를 인코딩하는, 적어도 1종의 화학적 변형 또는 선택적으로 무 화학적 변형을 포함하는 열린 해독틀을 갖는 1종 이상의 RNA 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 핵산 백신을 제공한다. 일부 구현예에서, RNA 폴리뉴클레오타이드는 25-100 마이크로그램의 복용량으로 존재한다.
본 발명의 측면은 또한, 인간 대상체에 전달을 위하여 제형화된, 약제학적으로 허용가능한 캐리어 또는 부형제, 그리고 열린 해독틀이 제1 항원성 폴리펩타이드를 인코딩하는, 적어도 1종의 화학적 변형 또는 선택적으로 무 화학적 변형을 포함하는 열린 해독틀을 갖는 1종 이상의 RNA 폴리뉴클레오타이드의 10ug 내지 400 ug을 포함하는, 이용 백신의 유닛을 제공한다. 일부 구현예에서, 백신은 추가로 양이온성 지질 나노입자를 포함한다.
본 발명의 측면은 (a) 상기 열린 해독틀이 일련의 참조 항원성 폴리펩타이드를 인코딩하는, 상기 폴리뉴클레오타이드가 적어도 1종의 화학적 변형 또는 선택적으로 무 화학적 변형 및 2 이상의 코돈-최적화된 열린 해독틀을 포함하는, 적어도 1종의 RNA 폴리뉴클레오타이드, 및 (b) 선택적으로 약제학적으로 허용가능한 캐리어 또는 부형제를 포함하는 항원성 메모리 부스터 핵산 백신을 상기 개체 또는 모집단에 투여하는 것을 포함하는 개체 또는 개체의 모집단에서 VZV 균주에 항원성 메모리의 창출, 유지 또는 회복 방법을 제공한다. 일부 구현예에서, 백신은 근육내 투여, 진피내 투여 및 피하 투여로 구성되는 군으로부터 선택되는 경로를 통해 개체에 투여된다. 일부 구현예에서, 투여 단계는 대상체의 근육 조직을 조성물의 주사에 적합한 디바이스와 접촉시키는 것을 포함한다. 일부 구현예에서, 투여 단계는 대상체의 근육 조직을 전기천공과 조합으로 조성물의 주사에 적합한 디바이스와 접촉시키는 것을 포함한다.
본 발명의 측면은 대상체를 백신접종하기 위해 유효량으로 제1 항원성 폴리펩타이드를 인코딩하는 열린 해독틀을 갖는 1종 이상의 RNA 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 핵산 백신의 25 ug/kg 내지 400 ug/kg의 단일 복용량을 대상체에 투여하는 것을 포함하는 대상체의 백신접종 방법을 제공한다.
다른 측면은, 백신이 등가 항체 역가를 생산하기 위해 미변형된 mRNA 백신에 요구되는 것보다 적어도 10 배 적은 RNA 폴리뉴클레오타이드를 갖는, 열린 해독틀이 제1 항원성 폴리펩타이드를 인코딩하는, 적어도 1종의 화학적 변형을 포함하는 열린 해독틀을 갖는 1종 이상의 RNA 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 핵산 백신을 제공한다. 일부 구현예에서, RNA 폴리뉴클레오타이드는 25-100 마이크로그램의 복용량으로 존재한다.
다른 측면은, 백신이 등가 항체 역가를 생산하기 위해 LNP에서 제형화되지 않은 미변형된 mRNA 백신에 요구되는 것보다 적어도 10 배 적은 RNA 폴리뉴클레오타이드를 갖는, 열린 해독틀이 제1 항원성 폴리펩타이드를 인코딩하는, 무 변형된 (미변형된) 뉴클레오타이드를 포함하는 열린 해독틀을 갖는 LNP 제형화된 RNA 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 핵산 백신을 제공한다. 일부 구현예에서, RNA 폴리뉴클레오타이드는 25-100 마이크로그램의 복용량으로 존재한다.
실시예에서 제시된 데이터는 본 발명의 제형을 이용하여 상당한 향상된 면역 반응을 입증한다. 데이터는 본 발명의 화학적으로 변형된 및 미변형된 RNA 백신 둘 모두의 유효성을 입증하였다. 놀랍게도, 백신의 생산용 캐리어에서 제형화된 화학적으로 미변형된 mRNA를 이용하는 것이 바람직하였다는 선행기술 보고와 대조적으로, 화학적으로 변형된 mRNA-LNP 백신이 미변형된 mRNA보다 훨씬 더 적은 효과적인 mRNA 용량, 즉, LNP 이외 캐리어에서 제형화된 경우 10배 미만 미변형된 mRNA를 요구하였다는 것이 본 명세서에서 발견되었다. 본 발명의 화학적으로 변형된 및 미변형된 RNA 백신 둘 모두는 상이한 지질 캐리어에서 제형화된 mRNA 백신보다 더 나은 면역 반응을 생산한다.
다른 측면에서 본 발명은 대상체를 백신접종하기 위해 유효량으로 VZV 항원성 폴리펩타이드를 인코딩하는 열린 해독틀을 갖는 1종 이상의 RNA 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 핵산 백신을 대상체에 투여하는 것을 포함하는 60세 이상 늙은 대상체의 치료 방법을 포함한다.
다른 측면에서 본 발명은 대상체를 백신접종하기 위해 유효량으로 VZV 항원성 폴리펩타이드를 인코딩하는 열린 해독틀을 갖는 1종 이상의 RNA 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 핵산 백신을 대상체에 투여하는 것을 포함하는 17세 이하 젊은 대상체의 치료 방법을 포함한다.
다른 측면에서 본 발명은 대상체를 백신접종하기 위해 유효량으로 VZV 항원성 폴리펩타이드를 인코딩하는 열린 해독틀을 갖는 1종 이상의 RNA 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 핵산 백신을 대상체에 투여하는 것을 포함하는 성인 대상체의 치료 방법을 포함한다.
RNA 폴리뉴클레오타이드는 서열번호: 1-8 및 41 중 하나이고 적어도 1종의 화학적 변형을 포함한다. 다른 구현예에서 RNA 폴리뉴클레오타이드는 서열번호: 1-8 및 41 중 하나이고 임의의 뉴클레오타이드 변형을 포함하지 않거나, 미변형된다. 더욱 다른 구현예에서 적어도 1종의 RNA 폴리뉴클레오타이드는 임의의 서열번호: 10, 14, 18, 22, 26, 30, 34, 38, 42 및 45-55의 항원성 단백질을 인코딩하고 적어도 1종의 화학적 변형을 포함한다. 다른 구현예에서 RNA 폴리뉴클레오타이드는 임의의 서열번호: 10, 14, 18, 22, 26, 30, 34, 38, 42 및 45-55의 항원성 단백질을 인코딩하고 임의의 뉴클레오타이드 변형을 포함하지 않거나, 미변형된다.
바람직한 측면에서, 본 발명의 백신 (예를 들면, LNP-캡슐화된 mRNA 백신)은 백신접종된 대상체의 혈액 또는 혈청에서 항원-특이적 항체의 예방적으로- 및/또는 치료적으로- 유효한 수준, 농도 및/또는 역가를 생산한다. 본 명세서에서 정의된 바와 같이, 용어 항체 역가는 대상체, 예를 들면, 인간 대상체에서 생산하는 항원-특이적 항체의 양을 지칭한다. 예시적인 구현예에서, 항체 역가는 긍정적인 결과를 여전히 제공하는 (연속 희석으로) 최대 희석의 역수로서 표현된다. 예시적인 구현예에서, 항체 역가는 효소-결합 면역흡착 검정 (ELISA)에 의해 결정 또는 측정된다. 예시적인 구현예에서, 항체 역가는 중화 검정에 의해, 예를 들면, 미세중화 검정에 의해 결정 또는 측정된다. 특정 측면에서, 항체 역가 측정은 비, 예컨대 1:40, 1:100, 등으로서 표현된다.
본 발명의 예시적인 구현예에서, 유효한 백신은 1:40 초과, 1:100 초과, 1:400 초과, 1:1000 초과, 1:2000 초과, 1:3000 초과, 1:4000 초과, 1:500 초과, 1:6000 초과, 1:7500 초과, 1:10000 초과의 항체 역가를 생산한다. 예시적인 구현예에서, 항체 역가는 백신접종 이후 10 일만에, 백신접종 이후 20 일만에, 백신접종 이후 30 일만에, 백신접종 이후 40 일만에, 백신접종 이후 50 일 이상만에 생산 또는 도달된다. 예시적인 구현예에서, 역가는 대상체에 투여된 백신의 단일 용량 이후 생산 또는 도달된다. 다른 구현예에서, 역가는 다중 용량 이후, 예를 들면, 제1 및 제2 용량 (예를 들면, 부스터 용량) 이후 생산 또는 도달된다.
본 발명의 예시적인 측면에서, 항원-특이적 항체는 μg/ml의 단위로 측정되거나 IU/L (국제 단위 / 리터) 또는 mIU/ml (밀리 국제 단위 / mL)의 단위로 측정된다. 본 발명의 예시적인 구현예에서, 유효한 백신은 >0.5 μg/ml, >0.1 μg/ml, >0.2 μg/ml, >0.35 μg/ml, >0.5 μg/ml, >1 μg/ml, >2 μg/ml, >5 μg/ml 또는 >10 μg/ml를 생산한다. 본 발명의 예시적인 구현예에서, 유효한 백신은 >10 mIU/ml, >20 mIU/ml, >50 mIU/ml, >100 mIU/ml, >200 mIU/ml, >500 mIU/ml 또는 > 1000 mIU/ml를 생산한다. 예시적인 구현예에서, 항체 수준 또는 농도는 백신접종 이후 10 일만에, 백신접종 이후 20 일만에, 백신접종 이후 30 일만에, 백신접종 이후 40 일만에, 또는 백신접종 이후 50 일 이상만에 생산 또는 도달된다. 예시적인 구현예에서, 수준 또는 농도는 대상체에 투여된 백신의 단일 용량 이후 생산 또는 도달된다. 다른 구현예에서, 수준 또는 농도는 다중 용량 이후, 예를 들면, 제1 및 제2 용량 (예를 들면, 부스터 용량) 이후 생산 또는 도달된다 예시적인 구현예에서, 항체 수준 또는 농도는 효소-결합 면역흡착 검정 (ELISA)에 의해 결정 또는 측정된다. 예시적인 구현예에서, 항체 수준 또는 농도는 중화 검정에 의해, 예를 들면, 미세중화 검정에 의해 결정 또는 측정된다.
본 발명의 각각의 제한은 본 발명의 다양한 구현예를 포함할 수 있다. 따라서, 임의의 1 요소 또는 요소들의 조합을 포함하는 본 발명의 각각의 제한이 본 발명의 각각의 측면에서 포함될 수 있다는 것이 기대된다. 본 발명은 다음과 같은 설명에서 제시된 또는 도면에서 설명된 구성요소의 구성 및 배열의 세부사항에 그것의 적용에 제한되지 않는다. 본 발명은 다른 구현예를 할 수 있고 다양한 방식으로 실시될 수 있거나 수행될 수 있다.
수반되는 도면들은 척도로 작도되도록 의도되지 않는다. 도면에서, 다양한 도에서 설명되는 각각의 동일한 또는 거의 동일한 성분은 유사 숫자에 의해 표시된다. 명쾌함을 위해, 모든 성분이 모든 도면에서 표지될 수 없다. 도면에서:
도 1은 제안된 수두대상포진 바이러스 경로를 도시하는 도식이다.
도 2는 VZV gE (균주 Oka)를 인코딩하는 작제물의 도식이다.
도 3은 MC3 제형화된 mRNA 인코딩된 VZV gE 항원으로 BALB/C 마우스의 면역화를 위한 연구 설계 및 주사 스케줄을 도시한다.
도 4는 다양한 변이체 VZV gE 항원을 보여주는 도식이다. 상기 도는 최상부부터 최하부까지, 각각 서열번호: 120, 132, 및 58을 도시한다.
도 5는 VARIVAX® 백신과 비교로 다양한 VZV gE mRNAs로 백신접종된 마우스의 혈청에서 항-VZV gE IgG의 수준을 보여주는 ELISA 검정의 결과를 보여주는 그래프이다.
도 6은 VARIVAX® 백신과 비교로 다양한 VZV gE mRNAs로 백신접종된 마우스의 혈청에서 항-VZV gE IgG의 수준을 나타내는 ELISA 검정의 결과를 보여주는 그래프이다.
도 7은 VARIVAX® 백신과 비교로 다양한 VZV gE mRNAs로 백신접종된 마우스의 혈청에서 항-VZV gE IgG의 수준을 나타내는 ELISA 검정의 결과를 보여주는 그래프이다.
도 8A 및 8B는 골지 장치를 보여주기 위해 항체로 염색된 인간 흑색종 (MeWo) 세포의 공초점 현미경검사를 보여준다.
도 9A-9C는 VZV gE 발현 및 이동조절을 보여주기 위해 VZV gE에 대한 항체로 염색된 MeWo 세포의 공초점 현미경검사를 보여준다. 도 9C에서 묘사된 서열 AEAADA는 서열번호: 58이다
도 10A 및 10B는 다양한 VZV 야생형 유전자형을 도시하는 도식이다.
도 11A 및 11B는, ZOSTAVAX® 백신과 비교로 VZV gE 변이체 mRNAs로 백신접종된 마우스의 혈청에서 항-VZV gE IgG의 수준을 보여주는, ELISA 검정의 결과를 보여주는 그래프이다. 도 11A 및 11B 전반에 걸쳐 묘사된 서열 AEAADA는 서열번호: 58이다.
도 12A 및 12B는, ZOSTAVAX® 백신과 비교로 VZV gE 변이체 mRNAs로 백신접종된 마우스의 혈청에서 항-VZV gE IgG의 수준을 보여주는, ELISA 검정의 결과를 보여주는 그래프이다. 도 12A 및 12B 전반에 걸쳐 묘사된 서열 AEAADA는 서열번호: 58이다.
도 13은 VZV gE 변이체 mRNA 백신으로 면역화된 마우스의 혈청에서 항체 역가를 측정하는 ELISA 검정의 결과를 보여주는 그래프이다. 마우스에서 VZV gE 변이체 mRNAs에 의해 유도된 항-VZV gE 반응은 ZOSTAVAX®의 것보다 크다. GE-delete_from_574-Y569A gE 변이체 mRNA는 ZOSTAVAX®보다 1 log 큰 면역 반응을 유도하였다. 도 13 전반에 걸쳐 묘사된 서열 AEAADA는 서열번호: 58이다.
도 14A는, ZOSTAVAX® 백신 (그룹 1-5) 또는 VZV-gE-del_574_Y569A (그룹 6)으로 1차 노출 후 VZV gE 변이체 mRNAs로 백신접종된 마우스의 혈청에서 항-VZV gE IgG의 수준을 보여주는, ELISA 검정의 결과를 보여주는 그래프이다. 도 14A 전반에 걸쳐 묘사된 서열 AEAADA는 서열번호: 58이다. 도 14B는 EC50의 결정을 보여주는 그래프이다.
도 15A 및 15B는 ZOSTAVAX® 백신 (그룹 1-5) 또는 VZV-gE-del_574_Y569A (그룹 6)으로 1차 노출 후 VZV gE 변이체 mRNAs로 백신접종된 마우스의 T 세포 분석의 결과를 보여주는 그래프이다. 도 15A 및 15B 전반에 걸쳐 묘사된 서열 AEAADA는 서열번호: 58이다.
도 16A 및 16B는, VZV-gE-del_574_Y569A 또는 ZOSTAVAX로 1차 노출 후 어느 한쪽 VZV-gE-del_574_Y569A 또는 ZOSTAVAX®로 백신접종된 붉은털원숭이의 혈청에서 항-VZV gE IgG의 수준을 보여주는, ELISA 검정의 결과를 보여주는 그래프이다. 도 16C는 EC50 및 EC10의 결정을 보여주는 그래프이다. 도 16D, 16E, 및 16F는 VZV-gE-del_574_Y569A 또는 ZOSTAVAX®로 1차 노출 후 어느 한쪽 VZV-gE-del_574_Y569A 또는 ZOSTAVAX®로 백신접종된 붉은털원숭이의 T 세포 분석의 결과를 보여주는 그래프이다.
상세한 설명
본 개시내용의 구현예는 수두대상포진 바이러스 (VZV) 항원을 인코딩하는 적어도 1종의 RNA (예를 들면, mRNA) 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 RNA (예를 들면, mRNA) 백신을 제공한다. 수두대상포진 바이러스 (VZV)의 적어도 5 분기군이 있다. 분기군 1 및 3은 유럽/북아메리카 균주를 포함하고; 분기군 2는, 특히 일본으로부터, 아시안 균주를 포함하고; 분기군 5는 인도에 기반하는 것처럼 보인다. 분기군 4는 유럽으로부터 일부 균주를 포함하지만, 그것의 지리학적 기원은 추가 정화를 필요로 한다. VZV 게놈 서열의 계통발생적 분석은 9 유전자형 (E1, E2, J, M1, M2, M3, M4, VIII 및 IX)로 야생형 균주를 분해한다. 18 유럽 국가로부터 342 임상 수두 및 대상포진 시료의 서열 분석은 VZV 유전자형의 다음과 같은 분포를 확인하였다: E1, 221 (65%); E2, 87 (25%); M1, 20 (6%); M2, 3 (1%); M4, 및 11 (3%). M3 또는 J 균주는 관측되지 않았다. 호주 및 뉴질랜드로부터 165 임상 수두 및 대상포진 분리주 중에서, 127 동부 호주 분리주 중 67이 E1이었고, 30이 E2이었고, 16이 J이었고, 10이 M1이었고, 4가 M2이었으며; 38 뉴질랜드 분리주 중 25가 E1이었고, 8이 E2이었고, 5가 M1이었다.
VZV는 대략 200 nm 직경의 구형 다층상 구조로서 존재하는 알파헤르페스바이러스이다. 바이러스성 게놈은 피막 단백질의 비정질 층에 의해 커버되는 단백질 캡시드 구조에 의해 둘러싸인다. 이들 2 구조는, 비리온의 외부에서 표시되는, 각각의 약 8 nm 길이인, 바이러스성 당단백질이 많은, 그리고 20면체 형태로 배열된 162 육량체성 및 오량체성 캡소미어로 구성되는 100 nm 뉴클레오캡시드를 동봉하는 지질 엔빌로프에 의해 둘러싸인다. 바이러스성으로-인코딩된 단백질 및 효소로 구성되는, 피막은 뉴클레오캡시드와 바이러스성 엔빌로프 사이 공간에서 위치한다. 바이러스성 엔빌로프는 숙주 세포 막으로부터 획득되고 바이러스성-인코딩된 당단백질을 함유한다.
VZV 게놈은 적어도 70 열린 해독틀을 갖는 124,884 염기 쌍의 단일, 선형, 이중나선 DNA 분자이다. 게놈은, 90-95%의 총 빈도에 대하여 동일 빈도로 존재하는, S 분절, P (원형) 및 IS (역전된 S)의 배향에 의존하여, 2 우세한 이성질체를 갖는다. 총 4 선형 이성질체 (IL 및 ILS)를 초래하는 L 분절은 또한 역전될 수 있다.
VZV는, 많은 게놈 상동성을 공유하는, 단순 포진 바이러스 (HSV)에 밀접하게 관련된다. VZV 게놈은 인간 헤르페스바이러스의 최소이고 조기 열린 해독틀 (ORF64-62, 각각)을 중복시키는 3 초과 열린 해독틀 (ORF69-ORF71)을 가진 적어도 71 특유의 단백질 (ORF0-ORF68)을 인코딩한다. 인코딩된 단백질의 단지 한 분획은 바이러스 입자의 구조를 형성한다. 그 단백질 중에 9 당단백질이 있다: ORF5 (gK), ORF9A (gN), ORF14 (gC), ORF31 (gB), ORF37 (gH), ORF50 (gM), ORF60 (gL), ORF67 (gI), 및 ORF68 (gE). 공지된 엔빌로프 당단백질 (gB, gC, gE, gH, gI, gK, gL, gN, 및 gM)은 HSV에서의 것과 상응하지만; HSV gD와 등가는 아니다. VZV는 또한 HSV 잠복 확립 (단순 포진 바이러스)에서 중요한 역할을 하는 LAT (잠복-관련된 전사체)를 생산하는데 실패한다. 인코딩된 당단백질 gE, gI, gB, gH, gK, gL, gC, gN, 및 gM은 바이러스 복제 사이클의 상이한 단계에서 기능한다. 감염된 세포에서, 뿐만 아니라 성숙한 비리온에서 발견된 가장 풍부한 당단백질은, 비리온 엔빌로프의 주요 구성요소이고 바이러스 복제에 필수적인, 당단백질 E (gE, ORF 68)이다. 당단백질 I (gI, ORG 67)은, 최종 바이러스성 엔빌로프가 획득되는 트랜스-골지 네트워크 (TGN)에 이들을 유도하고 양쪽 당단백질의 세포내이입을 용이하게 하는, 감염된 세포에서 gE와 복합체를 형성한다. 당단백질 I (gI)은 VZV 엔빌로프먼트를 위하여 그리고 VZV 복제 동안 효율적인 막 융합을 위하여 TGN 안에서 요구된다. VZV gE 및 gI는 감염된 숙주 세포 표면에서 함께 복합체화된 채로 발견된다. 제2 가장 보편적인 당단백질이고 바이러스 침입에서 역할을 한다고 생각되는, 당단백질 B (ORF 31)은 중화 항체에 결합한다. 당단백질 H는 바이러스의 세포 대 세포 확산을 용이하게 하는 융합 기능을 갖는 것으로 생각된다. gE, gB, 및 gH에 대한 항체는 천연 감염 후 및 백신접종 이후 만연하고 시험관내 바이러스성 활성을 중화시키는 것으로 밝혀졌다.
본 개시내용의 구현예는 적어도 1종의 VZV 항원성 폴리펩타이드를 인코딩하는 적어도 1종의 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 RNA (예를 들면, mRNA) 백신을 제공한다. 본 명세서에서 제공된 VZV RNA 백신은, DNA 백신 및 살아있는 약독화된 백신과 관련된 많은 위험 없이, 양쪽 세포성 및 체액성 면역을 포함하는, 균형있는 면역 반응을 유도하는데 사용될 수 있다. 본 명세서에서 개시된 다양한 RNA (예를 들면, mRNA) 백신은 BALB/C 마우스에서 면역 반응을 생산하였고, 이의 결과는 실시예 부문에서 상세히 논의된다. 구체적으로, 1종 이상의 다양한 VZV 항원을 인코딩하는 열린 해독틀을 갖는 RNA (예를 들면, mRNA) 폴리뉴클레오타이드 백신은, 전통 VZV 백신 (예를 들면 약독화된 VZV 바이러스)에 비해, 상당한 면역 반응을 생산하였다. 어느 한쪽 VZV gE 또는 변이체 VZV gE를 인코딩하는 본 명세서에서 개시된 VZV RNA (예를 들면, mRNA) 폴리뉴클레오타이드 백신은 근육내로 (IM) 또는 진피내로 (ID) 투여된 경우 2 투여 후 상당한 면역 반응을 입증하였다. VZV 당단백질 및 피막 단백질은 항원성인 것으로 알려졌다. VZV 당단백질, 이의 단편, 및 이의 에피토프는 본 개시내용 안에 포함된다.
국제 출원 번호 PCT/US2015/02740의 전체 내용은 참조로 본 명세서에서 편입된다.
본 명세서에서 기재된 mRNA 백신이 몇 개의 방식으로 현행 백신보다 우월한 것이 밝혀졌다. 먼저, 지질 나노입자 (LNP) 전달은 문헌에서 기재된 프로타민 기반 접근법을 포함하는 다른 제형보다 우월하고 추가의 아쥬반트는 필요하지 않다. LNPs의 용도는 화학적으로 변형된 또는 미변형된 mRNA 백신의 효과적인 전달을 가능하게 한다. 추가적으로 양쪽 변형된 및 미변형된 LNP 제형화된 mRNA 백신이 상당한 정도만큼 종래의 백신보다 우월하였던 것이 본 명세서에서 입증되었다. 일부 구현예에서 본 발명의 mRNA 백신은 적어도 10 배, 20 배, 40 배, 50 배, 100 배, 500 배 또는 1,000 배의 인수만큼 종래의 백신보다 우월하다.
mRNA 백신 및 자가-복제 RNA 백신을 포함하는, 기능성 RNA 백신을 생산하기 위해 시도하여 왔어도, 이들 RNA 백신의 치료 효능은 아직 완전히 확립되지 않았다. 상당히 놀랍게도, 본 발명자들은, 본 발명의 측면에 따르면, 상당히 향상된, 및 많은 면에서 중화 능력을 가진 기능성 항체 생산 및 향상된 항원 생성을 포함하는 상승작용적, 면역 반응을 초래하는 생체내 mRNA 백신 전달용 제형의 부류를 발견하였다. 이들 결과는 상당히 더 낮은 용량의 mRNA가 지질 기반 제형의 다른 부류에서 사용된 mRNA 용량과 비교로 투여되는 경우 달성될 수 있다. 본 발명의 제형은 예방제 및 치료제로서 기능성 mRNA 백신의 효능을 확립하는데 충분한 상당한 예기치 못한 생체내 면역 반응을 입증하였다. 추가적으로, 자가-복제 RNA 백신은 면역원성 반응을 생산하도록 세포에 충분한 RNA를 전달하기 위해 바이러스 복제 경로에 의존한다. 본 발명의 제형은 강력한 면역 반응을 초래하도록 충분한 단백질을 생산하기 위해 바이러스 복제를 요구하지 않는다. 따라서, 본 발명의 mRNA는 자가-복제 RNA가 아니고 바이러스 복제에 필요한 성분을 포함하지 않는다.
본 발명은, 일부 측면에서, 지질 나노입자 (LNP) 제형이 화학적으로 변형된 및 미변형된 mRNA 백신을 포함하는, mRNA 백신의 유효성을 상당히 향상시킨다는 놀라운 발견을 포함한다. LNP에서 제형화된 mRNA 백신의 효능은 몇 개의 구별되는 항원을 이용하여 생체내 검사되었다. 본 명세서에서 제시된 결과는 다른 상업적으로 입수가능한 백신보다 LNP에서 제형화된 mRNA 백신의 예기치 못한 우월한 효능을 입증한다.
향상된 면역 반응 제공에 더하여, 본 발명의 제형은 시험된 다른 백신보다 더 적은 용량의 항원으로 더욱 급속 면역 반응을 생성한다. 본 발명의 mRNA-LNP 제형은 또한 상이한 캐리어에서 제형화된 백신보다 정량적으로 및 정성적으로 더욱 양호한 면역 반응을 생산한다.
본 명세서에서 기재된 데이터는 본 발명의 제형이, VARIVAX 및 ZOSTAVAX에 비교된 LNP에서 제형화된 mRNA 화학적으로 변형된 및 미변형된 VZV 백신에 의한 IgG 생산의 상당히 더 높은 수준을 포함하는, 현존하는 VZV 항원 백신보다 상당한 예기치 못한 개선을 생산하였다는 것을 입증한다. IgG 생산의 개시는 시험된 미변형된 또는 상업적으로 입수가능한 백신보다 화학적으로 변형된 LNP mRNA 백신에 대하여 상당히 더욱 급속이었다.
추가적으로, 본 발명의 mRNA-LNP 제형은 mRNA의 용량이 다른 백신보다 더 적은 경우조차 다른 백신에 우월하다. 데이터는 전체 gE 변이체 LNP mRNA 백신이 두 10 μg 용량 후 뿐만 아니라 두 2 μg 용량 후 ZOSTAVAX®보다 훨씬 더 강력한 면역 반응을 유도하였다는 것을 입증한다. 혈청이 100 배 초과 희석된 경우, 항체 역가는 ZOSTAVAX® 백신접종된 마우스 혈청에서보다 VZV gE LNP mRNA 백신접종된 마우스 혈청에서 더 높고, VZV gE LNP mRNA 백신이 마우스에서 ZOSTAVAX®보다 훨씬 더 강력한 면역 반응을 유도하였다는 것을 시사한다.
마우스에서 결과는 비-인간 영장류에서 관측된 면역원성과 일치하였다. 붉은털원숭이는 화학적으로 변형된 VZV LNP mRNA 백신 또는 ZOSTAVAX®로 프라이밍되었다. mRNA 백신은 ZOSTAVAX®보다 더 높은 항-gE 역가를 제공하였고, ZOSTAVAX® 그룹과 달리, IFNγ, IL-2 또는 TNFα 세포를 생산하는 CD4 T-세포의 합리적인 빈도를 생산하였다. 데이터는 또한 Zostavax 노출 후 단일 용량의 mRNA 백신접종이 비교할만한 T-세포 반응 유도에서 2 용량의 mRNA 백신접종에 맞먹었다는 것을 입증하였다.
본 명세서에서 기재된 연구에서 사용된 LNP의 일부는 다양한 동물 모델에서 뿐만 아니라 인간에서 siRNA를 전달하기 위해 이전에 사용되어 왔다. LNP 제형의 siRNA 전달에 관련하여 실시된 관찰의 면에서, LNP가 백신에서 유용하다는 사실은 상당히 놀랍다. LNP에서 제형화된 siRNA의 치료 전달이 일시적 IgM 반응과 관련된 바람직하지 않은 염증성 반응을 야기시켜, 전형적으로 항원 생산 및 절충된 면역 반응에서 감소로 이어지는 것이 관측되어 왔다. siRNA로 관측된 발견에 대조적으로, 본 발명의 LNP-mRNA 제형은, 일시적 IgM 반응보다 예방적 및 치료적 방법에 충분한, 향상된 IgG 수준을 생성하기 위해 본 명세서에서 입증된다.
핵산/폴리뉴클레오타이드
본 명세서에서 제공된 바와 같이, 수두대상포진 바이러스 (VZV) 백신은 적어도 1종의 VZV 항원성 폴리펩타이드를 인코딩하는 열린 해독틀을 갖는 적어도 1종의 (1종 이상의) 리보핵산 (RNA, 예를 들면, mRNA) 폴리뉴클레오타이드를 포함한다. 용어 "핵산"은, 그것의 가장 넓은 의미에서, 뉴클레오타이드의 폴리머를 포함하는 임의의 화합물 및/또는 서브스턴스를 포함한다. 이들 폴리머는 폴리뉴클레오타이드로서 지칭된다.
일부 구현예에서, VZV 백신의 적어도 1종의 RNA 폴리뉴클레오타이드는 서열번호: 1, 서열번호: 2, 서열번호: 3, 서열번호: 4, 서열번호: 5, 서열번호: 6, 서열번호: 7, 서열번호: 8, 및 서열번호: 41로부터 선택되는 적어도 1종의 핵산 서열에 의해 인코딩된다.
일부 구현예에서, VZV 백신의 적어도 1종의 RNA (예를 들면, mRNA) 폴리뉴클레오타이드는 서열번호: 1, 서열번호: 2, 서열번호: 3, 서열번호: 4, 서열번호: 5, 서열번호: 6, 서열번호: 7, 서열번호: 8, 및 서열번호: 41로부터 선택되는 핵산 서열의 적어도 1종의 단편 (예를 들면, 항원성 서열 또는 적어도 1종의 에피토프를 갖는 단편)에 의해 인코딩된다.
(또한 폴리뉴클레오타이드로서 지칭된) 핵산은 하기일 수 있거나, 하기를, 예를 들어, 포함할 수 있다: 리보핵산 (RNAs), 데옥시리보핵산 (DNAs), 트레오스 핵산 (TNAs), 글리콜 핵산 (GNAs), 펩타이드 핵산 (PNAs), 잠금 핵산 (β-D-리보 배치형태를 갖는 LNA, α-L-리보 배치형태를 갖는 α-LNA (LNA의 부분입체이성질체), 2'-아미노 작용화를 갖는 2'-아미노-LNA, 및 2'-아미노 작용화를 갖는 2'-아미노-α-LNA를 포함하는, LNAs), 에틸렌 핵산 (ENA), 사이클로헥세닐 핵산 (CeNA) 또는 키메라 또는 이들의 조합.
일부 구현예에서, 본 개시내용의 폴리뉴클레오타이드는 메신저 RNA (mRNA)로서 기능한다. "메신저 RNA" (mRNA)는 (적어도 1종의) 폴리펩타이드 (아미노산의 천연-발생, 비-천연-발생, 또는 변형된 폴리머)를 인코딩하는 그리고 시험관내, 생체내, 위치에서 또는 생체외 인코딩된 폴리펩타이드를 생산하기 위해 번역될 수 있는 임의의 폴리뉴클레오타이드를 지칭한다. 숙련가는, 달리 언급된 경우를 제외하고, 본원에서 제시된 폴리뉴클레오타이드 서열이 대표적인 DNA 서열에서 "T"s를 인용할 것이지만, 서열이 RNA (예를 들면, mRNA)를 나타내는 경우, "T"s가 "U"s로 치환될 것을 인식할 것이다. 따라서, 특정한 서열번호에 의해 확인된 DNA에 의해 인코딩된 임의의 RNA 폴리뉴클레오타이드가 또한, DNA 서열의 각각의 "T"가 "U"로 치환되는 경우, DNA에 의해 인코딩된 상응하는 RNA (예를 들면, mRNA) 서열을 포함할 수 있다.
mRNA 분자의 기초 구성요소는 전형적으로 적어도 1종의 코딩 영역, 5' 미번역된 영역 (UTR), 3' UTR, 5' 캡 및 폴리-A 꼬리를 포함한다. 본 개시내용의 폴리뉴클레오타이드는 mRNA로서 기능할 수 있지만, 핵산 기반 치료제를 이용하여 효과적인 폴리펩타이드 발현의 현존하는 문제를 극복하는 역할을 하는, 그것의 기능성 및/또는 구조적 설계 특징에서 야생형 mRNA와 식별될 수 있다.
일부 구현예에서, VZV 백신의 RNA 폴리뉴클레오타이드 (예를 들면, mRNA)는 2-10, 2-9, 2-8, 2-7, 2-6, 2-5, 2-4, 2-3, 3-10, 3-9, 3-8, 3-7, 3-6, 3-5, 3-4, 4-10, 4-9, 4-8, 4-7, 4-6, 4-5, 5-10, 5-9, 5-8, 5-7, 5-6, 6-10, 6-9, 6-8, 6-7, 7-10, 7-9, 7-8, 8-10, 8-9 또는 9-10 항원성 폴리펩타이드를 인코딩한다. 일부 구현예에서, VZV RNA (예를 들면, mRNA) 백신의 RNA 폴리뉴클레오타이드 (예를 들면, mRNA)는 적어도 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90 또는 100 항원성 폴리펩타이드를 인코딩한다. 일부 구현예에서, VZV 백신의 RNA 폴리뉴클레오타이드 (예를 들면, mRNA)는 적어도 100 항원성 폴리펩타이드, 또는 적어도 200 항원성 폴리펩타이드를 인코딩한다. 일부 구현예에서, VZV 백신의 RNA 폴리뉴클레오타이드 (예를 들면, mRNA)는 1-10, 5-15, 10-20, 15-25, 20-30, 25-35, 30-40, 35-45, 40-50, 1-50, 1-100, 2-50 또는 2-100 항원성 폴리펩타이드를 인코딩한다.
본 개시내용의 폴리뉴클레오타이드 (예를 들면, mRNAs)는, 일부 구현예에서, 코돈 최적화된다. 코돈 최적화 방법은 당해 기술에서 공지되어 있고 본 명세서에서 제공된 바와 같이 사용될 수 있다. 예를 들어, 임의의 1종 이상의 서열 서열번호: 11, 15, 19, 23, 27, 31, 35, 39, 62, 66, 70, 74, 78, 82, 86, 90 또는 서열번호: 92-108의 임의의 1종 이상의 서열은 코돈 최적화될 수 있다. 코돈 최적화는, 일부 구현예에서, 적절한 폴딩을 확보하기 위해 표적 및 숙주 유기체에서 코돈 빈도를 매칭하는데; mRNA 안정성을 증가시키기 위해 또는 2차 구조를 감소시키기 위해 GC 함량을 편향시키는데; 유전자 작제 또는 발현을 손상시킬 수 있는 연쇄 반복 코돈 또는 염기 실행을 최소화하는데; 전사 및 번역 대조 영역을 특화하는데; 단백질 이동조절 서열을 삽입 또는 제거하는데; 인코딩된 단백질내 번역후 변형 부위 (예를 들면, 당화 부위)를 제거/첨가하는데; 단백질 도메인을 첨가, 제거 또는 셔플링하는데; 제한 부위를 삽입 또는 결실시키는데; 리보솜 결합 부위 및 mRNA 열화 부위를 변형시키는데; 단백질의 다양한 도메인을 적절하게 폴딩하도록 하는 번역 속도를 조정하는데; 또는 폴리뉴클레오타이드 안에서 문제 2차 구조를 감소 또는 제거하는데 사용될 수 있다. 코돈 최적화 툴, 알고리즘 및 서비스는 당해 기술에서 공지되어 있고 - 비-제한 예는 GeneArt (Life Technologies), DNA2.0 (Menlo Park CA) 및/또는 전매 방법으로부터 서비스를 포함한다. 일부 구현예에서, 열린 해독틀 (ORF) 서열은 최적화 알고리즘을 이용하여 최적화된다.
일부 구현예에서, 코돈 최적화된 서열 (예를 들면, 서열번호: 92-108의 코돈-최적화된 서열)은 천연-발생 또는 야생형 서열 (예를 들면, 관심 폴리펩타이드 또는 단백질 (예를 들면, 항원성 단백질 또는 폴리펩타이드)를 인코딩하는 천연-발생 또는 야생형 mRNA 서열)에 95% 미만 서열 동일성을 공유한다. 일부 구현예에서, 코돈 최적화된 서열은 천연-발생 또는 야생형 서열 (예를 들면, 관심 폴리펩타이드 또는 단백질 (예를 들면, 항원성 단백질 또는 폴리펩타이드)를 인코딩하는 천연-발생 또는 야생형 mRNA 서열)에 90% 미만 서열 동일성을 공유한다. 일부 구현예에서, 코돈 최적화된 서열은 천연-발생 또는 야생형 서열 (예를 들면, 관심 폴리펩타이드 또는 단백질 (예를 들면, 항원성 단백질 또는 폴리펩타이드)를 인코딩하는 천연-발생 또는 야생형 mRNA 서열)에 85% 미만 서열 동일성을 공유한다. 일부 구현예에서, 코돈 최적화된 서열은 천연-발생 또는 야생형 서열 (예를 들면, 관심 폴리펩타이드 또는 단백질 (예를 들면, 항원성 단백질 또는 폴리펩타이드)를 인코딩하는 천연-발생 또는 야생형 mRNA 서열)에 80% 미만 서열 동일성을 공유한다. 일부 구현예에서, 코돈 최적화된 서열은 천연-발생 또는 야생형 서열 (예를 들면, 관심 폴리펩타이드 또는 단백질 (예를 들면, 항원성 단백질 또는 폴리펩타이드)를 인코딩하는 천연-발생 또는 야생형 mRNA 서열)에 75% 미만 서열 동일성을 공유한다.
일부 구현예에서, 코돈 최적화된 서열은 천연-발생 또는 야생형 서열 (예를 들면, 관심 폴리펩타이드 또는 단백질 (예를 들면, 항원성 단백질 또는 폴리펩타이드)를 인코딩하는 천연-발생 또는 야생형 mRNA 서열)에 65% 내지 85% (예를 들면, 약 67% 내지 약 85% 또는 약 67% 내지 약 80%) 서열 동일성을 공유한다. 일부 구현예에서, 코돈 최적화된 서열은 천연-발생 또는 야생형 서열 (예를 들면, 관심 폴리펩타이드 또는 단백질 (예를 들면, 항원성 단백질 또는 폴리펩타이드)를 인코딩하는 천연-발생 또는 야생형 mRNA 서열)에 65% 내지 75% 또는 약 80% 서열 동일성을 공유한다.
일부 구현예에서, 코돈-최적화된 서열 (예를 들면, 서열번호: 92-108의 코돈-최적화된 서열)은 서열번호: 92-108의 (비-코돈-최적화된) 서열에 의해 인코딩된 항원성 폴리펩타이드 같은 면역원성이거나, 상기보다, (예를 들면, 적어도 10%, 적어도 20%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 100%, 또는 적어도 200% 초과) 더욱 면역원성인 항원성 폴리펩타이드를 인코딩한다.
일부 구현예에서, VZV 백신은 적어도 1종의 변형, 적어도 1종의 5' 말단 캡을 갖는 적어도 1종의 VZV 항원성 폴리펩타이드를 인코딩하는 열린 해독틀을 갖는 적어도 1종의 RNA 폴리뉴클레오타이드를 포함하고, 지질 나노입자 안에서 제형화된다. 폴리뉴클레오타이드의 5'-캡핑은 제조자 프로토콜에 따라 5'-구아노신 캡 구조를 생성하기 위해 다음과 같은 화학적 RNA 캡 유사체를 이용하는 시험관내-전사 반응 동안 수반하여 완료될 수 있다: 3'-O-Me-m7G(5')ppp(5') G [ARCA 캡];G(5')ppp(5')A; G(5')ppp(5')G; m7G(5')ppp(5')A; m7G(5')ppp(5')G (New England BioLabs, Ipswich, MA). 변형된 RNA의 5'-캡핑은 "캡 0" 구조: m7G(5')ppp(5')G (New England BioLabs, Ipswich, MA)를 생성하기 위해 백시니아 바이러스 캡핑 효소를 이용하여 후-전사적으로 완료될 수 있다. 캡 1 구조는 하기를 생성하기 위해 양쪽 백시니아 바이러스 캡핑 효소 및 2'-O 메틸-전달효소를 이용하여 생성될 수 있다: m7G(5')ppp(5')G-2'-O-메틸. 캡 2 구조는 캡 1 구조 이어서 2'-O 메틸-전달효소를 이용하는 5'-끝에서 두 번째 뉴클레오타이드의 2'-O-메틸화로부터 생성될 수 있다. 캡 3 구조는 캡 2 구조 이어서 2'-O 메틸-전달효소를 이용하는 5'-끝에서 두 번째 뉴클레오타이드의 2'-O-메틸화로부터 생성될 수 있다. 효소는 재조합 공급원으로부터 유래될 수 있다.
포유동물 세포 속에 형질감염된 경우, 변형된 mRNAs는 12-18 시간, 또는 18 시간 초과, 예를 들면, 24, 36, 48, 60, 72, 또는 72 시간 초과의 안정성을 갖는다.
일부 구현예에서 코돈 최적화된 RNA는 G/C의 수준이 향상되는 것일 수 있다. 핵산 분자 (예를 들면, mRNA)의 G/C-함량은 RNA의 안정성에 영향을 미칠 수 있다. 구아닌 (G) 및/또는 시토신 (C) 잔기의 증가된 양을 갖는 RNA는 다량의 아데닌 (A) 및 티민 (T) 또는 우라실 (U) 뉴클레오타이드를 함유하는 RNA보다 기능적으로 더욱 안정적일 수 있다. 예로서, WO02/098443은 번역된 영역에서 서열 변형에 의해 안정화된 mRNA를 함유하는 약제학적 조성물을 개시한다. 유전자 암호의 축퇴로 인해, 변형은 수득한 아미노산 변화 없이 더 큰 RNA 안정성을 촉진시키는 것으로 현존하는 코돈 치환에 의해 작동한다. 접근법은 RNA의 코딩 영역에 제한된다.
항원/항원성 폴리펩타이드
일부 구현예에서, 항원성 폴리펩타이드는 VZV 당단백질이다. 예를 들어, VZV 당단백질은 VZV gE, gI, gB, gH, gK, gL, gC, gN, 또는 gM 또는 이의 면역원성 단편 또는 에피토프일 수 있다. 일부 구현예에서, 항원성 폴리펩타이드는 VZV gE 폴리펩타이드이다. 일부 구현예에서, 항원성 폴리펩타이드는 VZV gI 폴리펩타이드이다. 일부 구현예에서, 항원성 폴리펩타이드는 VZV gB 폴리펩타이드이다. 일부 구현예에서, 항원성 폴리펩타이드는 VZV gH 폴리펩타이드이다. 일부 구현예에서, 항원성 폴리펩타이드는 VZV gK 폴리펩타이드이다. 일부 구현예에서, 항원성 폴리펩타이드는 VZV gL 폴리펩타이드이다. 일부 구현예에서, 항원성 폴리펩타이드는 VZV gC 폴리펩타이드이다. 일부 구현예에서, 항원성 폴리펩타이드는 VZV gN 폴리펩타이드이다. 일부 구현예에서, 항원성 폴리펩타이드는 VZV gM 폴리펩타이드이다.
일부 구현예에서, 항원성 폴리펩타이드는 2 이상의 당단백질을 포함한다. 2 이상의 당단백질은 단일 RNA 폴리뉴클레오타이드에 의해 인코딩될 수 있거나 2 이상의 RNA 폴리뉴클레오타이드에 의해 인코딩될 수 있고, 예를 들어, 각각의 당단백질은 별도의 RNA 폴리뉴클레오타이드에 의해 인코딩될 수 있다. 일부 구현예에서, 2 이상의 당단백질은 VZV gE, gI, gB, gH, gK, gL, gC, gN, 및 gM 폴리펩타이드의 임의의 조합 또는 이의 면역원성 단편 또는 에피토프일 수 있다. 일부 구현예에서, 2 이상의 당단백질은 VZV gE 및 gI, gB, gH, gK, gL, gC, gN, 및 gM 폴리펩타이드로부터 선택되는 당단백질의 임의의 조합 또는 이의 면역원성 단편 또는 에피토프일 수 있다. 일부 구현예에서, 2 이상의 당단백질은 VZV gI 및 gE, gB, gH, gK, gL, gC, gN, 및 gM 폴리펩타이드로부터 선택되는 당단백질의 임의의 조합 또는 이의 면역원성 단편 또는 에피토프일 수 있다. 일부 구현예에서, 2 이상의 당단백질은 VZV gE, gI, 및 gB, gH, gK, gL, gC, gN, 및 gM 폴리펩타이드로부터 선택되는 당단백질의 임의의 조합 또는 이의 면역원성 단편 또는 에피토프일 수 있다. 일부 구현예에서, 2 이상의 VZV 당단백질은 gE 및 gI이다. VZV의 다른 바이러스성 단백질 성분, 예를 들어, 피막 단백질을 인코딩하는 RNA 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 대안적 RNA 백신은 본 개시내용에 의해 포함된다. 따라서, 본 개시내용의 일부 구현예는 적어도 1종의 VZV 피막 단백질 또는 이의 항원성 단편 또는 에피토프를 인코딩하는 열린 해독틀을 갖는 적어도 1종의 리보핵산 (RNA) 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 VZV 백신을 제공한다. 일부 구현예에서, 항원성 폴리펩타이드는 VZV 피막 단백질 또는 이의 항원성 단편 또는 에피토프이다. 다른 구현예에서, VZV 백신의 항원성 단편(들)은 적어도 1종의 VZV 피막 폴리펩타이드 및 적어도 1종의 VZV 당단백질 폴리펩타이드, 예를 들어 gE, gI, gB, gH, gK, gL, gC, gN, 및 gM으로부터 선택되는 임의의 VZV 당단백질일 수 있다.
본 개시내용은 변이체 VZV 항원성 폴리펩타이드를 포함한다. 일부 구현예에서, 변이체 VZV 항원성 폴리펩타이드는 변이체 VZV gE 폴리펩타이드이다. 변이체 VZV gE 폴리펩타이드는 폴리펩타이드의 ER/골지 체류를 피하도록 설계되어, 항원의 증가된 표면 발현을 초래한다. 일부 구현예에서, 변이체 gE 폴리펩타이드는 절단되어 폴리펩타이드의 세포질 꼬리 부분 또는 ER 체류 부분을 제거한다. 일부 구현예에서, 변이체 VZV gE 폴리펩타이드는 돌연변이되어 ER/골지/TGN에 VZV 폴리펩타이드 국재화를 감소시킨다. 상기 변형은 ER 트랩핑을 억제시키고, 이와 같이, 세포 막에 이동조절을 촉진시킨다.
따라서, 일부 구현예에서, VZV 당단백질은 변이체 gE 폴리펩타이드이다. VZV gE는 그것의 C-말단에서 TGN에 대하여 표적 서열을 갖고 감염된 및 gE-형질감염된 세포에서 ER부터 TGN까지 수송된다. TGN에서 대부분의 gE는 원형질막으로부터 세포내이입에 의해 회수되고 엔도솜에 의해 TGN에 전달되어, 이어서 원형질막에 재순환되는 것처럼 보인다. gE는 완전히 외피보유한 VZV 비리온의 생산과 관련된 다른 VZV 단백질 (예를 들면, 피막 단백질)과 함께, TGN에서 축적된다. 따라서, TGN 국재화 및 세포내이입을 감소시키기 위한 돌연변이는 세포 막에 gE의 이동조절을 돕는다.
변이체 VZV gE 폴리펩타이드는 앵커 도메인 (ER 체류 도메인)이 부족한 임의의 절단된 폴리펩타이드일 수 있다. 예를 들어, 변이체 VZV gE 폴리펩타이드는, 예를 들어, 아미노산 1-124, 1-140, 1-160, 1-200, 1-250, 1-300, 1-350, 1-360, 1-400, 1-450, 1-500, 1-511, 1-550, 및 1-561을 포함하는, 적어도 아미노산 1- 124를 포함하는 절단된 VZV gE 폴리펩타이드, 뿐만 아니라 인용된 크기 범위 안에서 단편 크기를 갖는 폴리펩타이드 단편일 수 있다. 일 구현예에서, 절단된 VZV gE 폴리펩타이드는 서열번호: 10의 아미노산 1-561을 포함한다. 일부 구현예에서, 변이체 VZV gE 폴리펩타이드는 카복시 말단 꼬리 도메인이 부족한 절단된 폴리펩타이드이다. 따라서 일부 구현예에서, 절단된 VZV gE 폴리펩타이드는 서열번호: 10의 아미노산 1-573을 포함한다.
일부 구현예에서, 변이체 VZV gE 폴리펩타이드는 ER 체류와 관련된 1종 이상의 모티프(들)에서 적어도 1종의 돌연변이를 갖고, 여기서 1종 이상의 모티프(들)에서 돌연변이(들)은 ER 및/또는 골지에서 VZV gE 폴리펩타이드의 감소된 체류를 초래한다. 일부 구현예에서, 변이체 VZV gE 폴리펩타이드는 1종 이상의 인산화된 산성 모티프(들)에서 적어도 1종의 돌연변이를 갖는다. 예를 들어, 변이체 VZV gE 폴리펩타이드는 Y582G 돌연변이, Y569A 돌연변이, 또는 양쪽 Y582G 돌연변이 및 Y569A 돌연변이를 갖는 전장 VZV gE 폴리펩타이드일 수 있다. 대안적으로, 변이체 VZV gE 폴리펩타이드는, 예를 들어, VZV gE의 아미노산 1-573을 포함하는 및 Y569A 돌연변이를 갖는 항원성 단편일 수 있다. 대안적으로, 변이체 VZV gE 폴리펩타이드는 산성 인산화 모티프, 예컨대 SST 모티프에서 돌연변이를 갖는 항원성 단편일 수 있다. 예를 들어, 변이체 VZV gE 폴리펩타이드는 AEAADA 서열 (서열번호: 58)을 갖는 항원성 단편일 수 있다.
일부 구현예에서, 변이체 VZV gE 폴리펩타이드는 폴리펩타이드의 분비를 돕는 C-말단에서 추가의 서열을 갖는 전장 VZV gE 폴리펩타이드이다. 예를 들어, 변이체 VZV gE 폴리펩타이드는 C-말단에서 Ig카파 서열을 갖는 전장 VZV gE 폴리펩타이드일 수 있다. 일부 구현예에서, VZV gE 폴리펩타이드는 분비를 돕는 C-말단에서 추가의 서열 (I., C-말단에서 Ig카파 서열)을 갖고 변이체 VZV gE 폴리펩타이드는 ER 체류, TGN 국재화, 및/또는 세포내이입과 관련된 1종 이상의 모티프(들)에서 적어도 1종의 돌연변이 (예를 들면, Y582G 돌연변이, Y569A 돌연변이, 또는 양쪽 Y582G 돌연변이 및 Y569A 돌연변이) 및/또는 1종 이상의 인산화된 산성 모티프(들)에서 적어도 1종의 돌연변이를 갖는다. 일부 구현예에서, 변이체 VZV gE 폴리펩타이드는 앵커 도메인 (ER 체류 도메인)이 부족한 및 폴리펩타이드의 분비를 돕는 C-말단에서 추가의 서열, 예를 들어, C-말단에서 Ig카파 서열을 갖는 절단된 폴리펩타이드이다. 일부 구현예에서, 절단된 VZV gE 폴리펩타이드는 서열번호: 10의 아미노산 1-561을 포함하고 C-말단에서 Ig카파 서열을 갖는다. 일부 구현예에서, 변이체 VZV gE 폴리펩타이드는 카복시 말단 꼬리 도메인이 부족한 및 폴리펩타이드의 분비를 돕는 C-말단에서 추가의 서열을 갖는 (예를 들면, C-말단에서 Ig카파 서열을 갖는) 절단된 폴리펩타이드이다. 일부 구현예에서, 절단된 VZV gE 폴리펩타이드는 서열번호: 10의 아미노산 1-573을 포함하고 C-말단에서 Ig카파 서열을 갖는다.
일부 구현예에서, VZV 항원성 폴리펩타이드는 25 아미노산보다 길고 50 아미노산보다 짧다. 따라서, 폴리펩타이드는 전술한 것의 유전자 생성물, 자연 발생 폴리펩타이드, 합성 폴리펩타이드, 동족체, 오쏘로그, 파라로그, 단편 및 다른 등가물, 변이체, 및 유사체를 포함한다. 폴리펩타이드는 단일 분자일 수 있거나 다중-분자 복합체 예컨대 이량체, 삼량체 또는 사량체일 수 있다. 폴리펩타이드는 또한 단일 사슬 또는 다사슬 폴리펩타이드 예컨대 항체 또는 인슐린을 포함할 수 있고 회합 또는 연결될 수 있다. 가장 통상적으로, 디설파이드 연결기는 다사슬 폴리펩타이드에서 발견된다. 용어 폴리펩타이드는 또한 적어도 1종의 아미노산 잔기가 상응하는 천연-발생 아미노산의 인공 화학적 유사체인 아미노산 폴리머에 적용할 수 있다.
용어 "폴리펩타이드 변이체"는 그것의 아미노산 서열에서 원상태 또는 참조 서열과 상이한 분자를 지칭한다. 아미노산 서열 변이체는, 원상태 또는 참조 서열에 비교된 경우, 아미노산 서열 안에 특정 위치에서 치환, 결실, 및/또는 삽입을 보유할 수 있다. 통상적으로, 변이체는 원상태 또는 참조 서열에 적어도 50% 동일성을 보유한다. 일부 구현예에서, 변이체는 원상태 또는 참조 서열과 적어도 80%, 또는 적어도 90% 동일성을 공유한다.
일부 구현예에서 "변이체 모방체"는 제공된다. 본 명세서에서 사용된 바와 같이, "변이체 모방체"는 활성화된 서열을 모방할 적어도 1종의 아미노산을 함유한다. 예를 들어, 글루타메이트는 포스포로-트레오닌 및/또는 포스포로-세린용 모방체로서 작용할 수 있다. 대안적으로, 변이체 모방체는 모방체를 함유하는 불활성화된 생성물 또는 탈활성화를 초래할 수 있다. 예를 들어, 페닐알라닌은 티로신에 대하여 불활성화 치환으로서 작용할 수 있거나, 알라닌은 세린에 대하여 불활성화 치환으로서 작용할 수 있다.
"오쏘로그"는 종 형성에 의해 공통 선구 유전자로부터 방출하였던 상이한 종에서 유전자를 지칭한다. 정상적으로, 오쏘로그는 진화의 과정에서 동일한 기능을 보유한다. 오쏘로그의 확인은 새로 서열분석된 게놈에서 유전자 기능의 신뢰할 수 있는 예측에 핵심이다.
"유사체"는 1종 이상의 아미노산 변경, 예를 들어, 모 또는 개시 폴리펩타이드의 1종 이상의 특성을 여전히 유지하는 아미노산 잔기의 치환, 부가 또는 결실에 의해 상이한 폴리펩타이드 변이체를 포함하는 의미이다.
"파라로그"는 게놈 안에서 중복에 의해 관련된 유전자 (또는 단백질)이다. 오쏘로그는 진화의 과정에서 동일한 기능을 보유하고, 반면에 파라로그는, 이들이 최초의 것에 관련되어도, 신규한 기능을 진화시킨다.
본 개시내용은, 변이체 및 유도체를 포함하는, 폴리뉴클레오타이드 또는 폴리펩타이드 기반되는 조성물의 몇몇 유형을 제공한다. 이들은, 예를 들어, 치환형, 삽입, 결실 및 공유 변이체 및 유도체를 포함한다. 용어 "유도체"는 용어 "변이체"와 동의어로 사용되지만, 일반적으로 참조 분자 또는 개시 분자에 비해 어떤 식으로든 변형된 및/또는 변화된 분자를 지칭한다.
이와 같이, 참조 서열, 특히 본 명세서에서 개시된 폴리펩타이드 서열에 대하여 치환, 삽입 및/또는 부가, 결실 및 공유 변형을 함유하는 펩타이드 또는 폴리펩타이드를 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드는 본 개시내용의 범위 안에 포함된다. 예를 들어, 서열 태그 또는 아미노산, 예컨대 1종 이상의 라이신은 펩타이드 서열에 (예를 들면, N-말단 또는 C-말단에서) 부가될 수 있다. 서열 태그는 펩타이드 검출, 정제 또는 국재화에 사용될 수 있다. 라이신은 펩타이드 용해도를 증가시키는데 또는 바이오티닐화를 허용하는데 사용될 수 있다. 대안적으로, 펩타이드 또는 단백질의 아미노산 서열의 카복시 및 아미노 말단 영역에 위치한 아미노산 잔기는 선택적으로 절단된 서열을 제공하여 결실될 수 있다. 특정 아미노산 (예를 들면, C-말단 또는 N-말단 잔기)는, 예를 들어, 가용성인 더 큰 서열의 일부만큼 서열의 발현으로서, 서열의 용도에 의존하여 대안적으로 결실될 수 있거나, 고형 지지체에 연결될 수 있다. 대안적인 구현예에서, 신호 서열, 종료 서열, 막관통 도메인, 링커, 다량체화 도메인 (예컨대, 예를 들면, 폴드온 영역) 및 기타 동종에 대하여 서열 (또는 인코딩)은 동일한 또는 유사한 기능을 달성하는 대안적인 서열로 치환될 수 있다. 상기 서열은 당해 분야의 숙련가에 쉽게 확인가능하다. 본 명세서에서 제공된 서열의 일부가, 예를 들어, RNA (예를 들면, mRNA) 백신의 제조에서 사용에 앞서 결실될 수 있는 (예를 들면, N-말단 또는 C-말단에서) 서열 태그 또는 말단 펩타이드 서열을 함유하는 것이 또한 이해되어야 한다.
폴리펩타이드를 지칭한 경우 "치환형 변이체"는 제거된 원상태 또는 개시 서열에서 적어도 1종의 아미노산 잔기 및 동일한 위치에 그것의 자리에서 삽입된 상이한 아미노산을 갖는 것이다. 분자에서 단 하나의 아미노산이 치환된 경우, 치환은 단일일 수 있거나, 2 이상의 아미노산이 동일한 분자에서 치환된 경우, 이들은 다중일 수 있다.
본 명세서에서 사용된 바와 같이 용어 "보존적 아미노산 치환"은 유사한 크기, 전하, 또는 극성의 상이한 아미노산을 가진 서열에서 정상적으로 존재하는 아미노산의 치환을 지칭한다. 보존적 치환의 예는 무극성 (소수성) 잔기 예컨대 이소류신, 발린 및 류신의 또 다른 무극성 잔기로의 치환을 포함한다. 마찬가지로, 보존적 치환의 예는 하나의 극성 (친수성) 잔기의 또 다른 것 예컨대 아르기닌 내지 라이신, 글루타민 내지 아스파라긴, 및 글리신 내지 세린으로의 치환을 포함한다. 추가적으로, 염기성 잔기, 예컨대 라이신, 아르기닌 또는 히스티딘의 또 다른 것으로의 치환, 또는 하나의 산성 잔기, 예컨대 아스파르트산 또는 글루탐산의 또 다른 산성 잔기로의 치환은 보존적 치환의 추가의 예이다. 비-보존적 치환의 예는 무극성 (소수성) 아미노산 잔기 예컨대 이소류신, 발린, 류신, 알라닌, 메티오닌의 극성 (친수성) 잔기 예컨대 시스테인, 글루타민, 글루탐산 또는 라이신으로의 치환 및/또는 극성 잔기의 무극성 잔기로의 치환을 포함한다.
폴리펩타이드 또는 폴리뉴클레오타이드를 지칭한 경우 "특징"은 분자 각각의 구별되는 아미노산 서열-기반 또는 뉴클레오타이드-기반 성분으로서 정의된다. 폴리뉴클레오타이드에 의해 인코딩된 폴리펩타이드의 특징은 표면 징후, 국부 형태적 형상, 폴드, 루프, 절반-루프, 도메인, 절반-도메인, 부위, 말단 또는 이들의 임의의 조합을 포함한다.
본 명세서에서 사용된 바와 같이 폴리펩타이드를 지칭한 경우 용어 "도메인"은 1종 이상의 확인가능한 구조적 또는 기능성 특징 또는 특성 (예를 들면, 단백질-단백질 상호작용을 위한 부위로서 작용하는, 결합능)을 갖는 폴리펩타이드의 모티프를 지칭한다.
본 명세서에서 사용된 바와 같이, 폴리펩타이드를 지칭한 경우 용어 "부위"는 아미노산 기반 구현예에 관련함에 따라 "아미노산 잔기" 및 "아미노산 측쇄"와 동의어로 사용된다. 본 명세서에서 사용된 바와 같이, 폴리뉴클레오타이드를 지칭한 경우 용어 "부위"는 뉴클레오타이드 기반 구현예에 관련함에 따라, "뉴클레오타이드"와 동의어로 사용된다. 부위는 폴리펩타이드 또는 폴리뉴클레오타이드 기반 분자 안에서 변형, 조작, 변경, 유도 또는 가변될 수 있는 펩타이드 또는 폴리펩타이드 또는 폴리뉴클레오타이드 안에서 위치를 나타낸다.
본 명세서에서 사용된 바와 같이, 용어 "말단들" 또는 "말단"은, 폴리펩타이드 또는 폴리뉴클레오타이드를 지칭한 경우, 폴리펩타이드 또는 폴리뉴클레오타이드 각각의 극단을 지칭한다. 상기 극단은 폴리펩타이드 또는 폴리뉴클레오타이드의 최초 또는 최종 부위에만 제한되지 않지만 말단 영역에서 추가의 아미노산 또는 뉴클레오타이드를 포함할 수 있다. 폴리펩타이드-기반 분자는 (자유 아미노 기 (NH2)를 가진 아미노산에 의해 종료된) N-말단 및 (자유 카복실 기 (COOH)를 가진 아미노산에 의해 종료된) C-말단 둘 모두를 갖는 것으로서 특성규명될 수 있다. 단백질은 일부 경우에 디설파이드 결합에 의해 또는 비-공유결합력 (다량체, 올리고머)에 의해 합쳐진 다중 폴리펩타이드 사슬로 구성된다. 이들 단백질은 다중 N-말단 및 C-말단을 갖는다. 대안적으로, 폴리펩타이드의 말단은, 존재할 수 있는 사례처럼, 비-폴리펩타이드 기반 모이어티 예컨대 유기 콘주게이트로 이들이 시작하거나 종료하는 정도로 변형될 수 있다.
당해 분야의 숙련가에 의해 인식된 바와 같이, 단백질 단편, 기능성 단백질 도메인, 및 상동성 단백질은 또한 관심 폴리펩타이드의 범위 내인 것으로 고려된다. 예를 들어, 참조 단백질 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100 또는 초과 100 아미노산 길이의 (달리 동일한 것을 제외하고 참조 폴리펩타이드 서열보다 짧은 폴리펩타이드 서열 적어도 1종의 아미노산 잔기를 의미하는) 임의의 단백질 단편이 본 명세서에서 제공된다. 또 다른 예에서, 본 명세서에서 기재된 임의의 서열에 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 또는 100% 동일한 20, 30, 40, 50, 또는 100 아미노산의 스트레치를 포함하는 임의의 단백질은 본 개시내용에 따라 이용될 수 있다. 일부 구현예에서, 폴리펩타이드는, 본 명세서에서 제공된 또는 언급된 임의의 서열에서 나타낸 바와 같이, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 또는 초과 돌연변이를 포함한다. 일부 구현예에서, 단백질 단편은 25 아미노산보다 길고 50 아미노산보다 짧다.
본 개시내용의 폴리펩타이드 또는 폴리뉴클레오타이드 분자는 참조 분자 (예를 들면, 참조 폴리펩타이드 또는 참조 폴리뉴클레오타이드)와, 예를 들어, 기술-기재된 분자 (예를 들면, 조작된 또는 설계된 분자 또는 야생형 분자)와 서열 유사성 또는 동일성의 특정 정도를 공유할 수 있다. 용어 "동일성"은, 당해 분야에서 공지된 바와 같이, 서열 비교에 의해 결정된 경우, 2 이상의 폴리펩타이드 또는 폴리뉴클레오타이드의 서열 사이 관계를 지칭한다. 당해 분야에서, 동일성은 또한 2 이상의 아미노산 잔기 또는 핵산 잔기의 스트링 사이 매치의 수에 의해 결정된 경우 이들 사이 서열 관련성의 정도를 의미한다. 동일성은 특정한 수학적 모델 또는 컴퓨터 프로그램 (예를 들면, "알고리즘")에 의해 다루어진 (만일 있다면) 갭 정렬을 가진 2 이상의 서열의 더 작은 것 사이 동일한 매치의 퍼센트를 측정한다. 관련된 펩타이드의 동일성은 공지된 방법에 의해 쉽게 계산될 수 있다. 폴리펩타이드 또는 폴리뉴클레오타이드 서열에 적용함에 따라 "% 동일성"은, 필요하면, 최대 동일성 퍼센트를 달성하기 위해, 서열 정렬 및 갭 도입 후 제2 서열의 핵산 서열 또는 아미노산 서열에서 잔기와 동일한 후보 아미노산 또는 핵산 서열에서 잔기 (아미노산 잔기 또는 핵산 잔기)의 백분율로서 정의된다. 정렬을 위한 방법 및 컴퓨터 프로그램은 당해 기술에서 공지되어 있다. 동일성은 동일성 퍼센트의 계산에 좌우되지만 계산에서 도입된 갭 및 패널티로 인해 값에서 상이할 수 있다는 것이 이해된다. 일반적으로, 특정한 폴리뉴클레오타이드 또는 폴리펩타이드의 변이체는 본 명세서에서 기재된 및 당해 분야의 숙련가에 공지된 서열 정렬 프로그램 및 파라미터에 의해 결정된 경우 그 특정한 참조 폴리뉴클레오타이드 또는 폴리펩타이드에 적어도 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 그러나 100% 미만 서열 동일성을 갖는다. 그와 같은 정렬용 툴은 BLAST 묶음 (Stephen F. Altschul, (1997)". Gapped BLAST and PSI-BLAST: a new generation of protein database search programs", Nucleic Acids Res. 25:3389-3402)의 것을 포함한다. 또 다른 대중적인 국부 정렬 기술은 Smith-Waterman 알고리즘 (Smith, T.F. & Waterman, M.S. (1981) "Identification of common molecular subsequences". J. Mol. Biol. 147:195-197)에 기반된다. 동적 프로그래밍에 기반된 일반 전반적 정렬 기술은 Needleman-Wunsch 알고리즘 (Needleman, S.B. & Wunsch, C.D. (1970) "A general method applicable to the search for similarities in the amino acid sequences of two proteins". J. Mol. Biol. 48:443-453)이다. 더욱 최근에, Needleman-Wunsch 알고리즘을 포함하는, 다른 최적의 전반적인 정렬 방법보다 더 빨리 뉴클레오타이드 및 단백질 서열의 전반적인 정렬을 알려진 대로 생산하는 신속한 최적의 전반적인 서열 정렬 알고리즘 (Fast Optimal Global Sequence Alignment Algorithm; FOGSAA)는 개발되었다. 다른 툴은 본 명세서에서, 구체적으로 아래 "동일성"의 정의에서 기재된다.
본 명세서에서 사용된 바와 같이, 용어 "상동성"은 폴리머 분자 사이, 예를 들면 핵산 분자 (예를 들면 DNA 분자 및/또는 RNA 분자) 사이 및/또는 폴리펩타이드 분자 사이 전반적인 관련성을 지칭한다. 매칭 잔기의 정렬에 의해 결정된 유사성 또는 동일성의 역치 수준을 공유하는 폴리머 분자 (예를 들면 핵산 분자 (예를 들면 DNA 분자 및/또는 RNA 분자) 및/또는 폴리펩타이드 분자)는 일명 상동성이다. 상동성은 분자 사이 관계를 기재하는 정성적 용어이고 정량적 유사성 또는 동일성에 기반될 수 있다. 유사성 또는 동일성은 2개의 비교된 서열 사이 서열 매치의 정도를 정의하는 정량적 용어이다. 일부 구현예에서, 폴리머 분자는 그것의 서열이 적어도 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 또는 99% 동일 또는 유사하면 서로 "상동성"인 것으로 고려된다. 용어 "상동성"은 필연적으로 적어도 2종의 서열 (폴리뉴클레오타이드 또는 폴리펩타이드 서열) 사이 비교를 지칭한다. 2개의 폴리뉴클레오타이드 서열은 이들이 인코딩하는 폴리펩타이드가 적어도 20 아미노산의 적어도 1종의 스트레치에 대하여 적어도 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 또는 심지어 99%이면 상동성으로 고려된다. 일부 구현예에서, 상동성 폴리뉴클레오타이드 서열은 적어도 4-5 특유로 지정된 아미노산의 스트레치를 인코딩하는 능력을 특징으로 한다. 60 미만 뉴클레오타이드 길이의 폴리뉴클레오타이드 서열에 대하여, 상동성은 적어도 4-5 특유로 지정된 아미노산의 스트레치를 인코딩하는 능력에 의해 결정된다. 2개의 단백질 서열은 단백질이 적어도 20 아미노산의 적어도 1종의 스트레치에 대하여 적어도 50%, 60%, 70%, 80%, 또는 90% 동일하면 상동성으로 고려된다.
상동성은 비교된 서열이 공통 기원으로부터 진화에서 갈라진 것을 암시한다. 용어 "동족체"는 공통 선구 서열의 혈통에 의해 제2 아미노산 서열 또는 핵산 서열에 관련되는 제1 아미노산 서열 또는 핵산 서열 (예를 들면, 유전자 (DNA 또는 RNA) 또는 단백질 서열)을 지칭한다. 용어 "동족체"는 종 형성의 이벤트에 의해 분리된 유전자 및/또는 단백질 사이 관계 또는 유전적 중복의 이벤트에 의해 분리된 유전자 및/또는 단백질 사이 관계에 적용할 수 있다.
다단백질 및 다성분 백신
본 개시내용은, 단일 항원성 폴리펩타이드를 각각 인코딩하는, 다중 RNA (예를 들면, mRNA) 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 VZV 백신, 뿐만 아니라 (예를 들면, 융합 폴리펩타이드로서) 1 초과 항원성 폴리펩타이드를 인코딩하는 단일 RNA 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 VZV 백신을 포함한다. 따라서, 제1 VZV 항원성 폴리펩타이드를 인코딩하는 열린 해독틀을 갖는 RNA (예를 들면, mRNA) 폴리뉴클레오타이드 및 제2 VZV 항원성 폴리펩타이드를 인코딩하는 열린 해독틀을 갖는 RNA 폴리뉴클레오타이드 (예를 들면, mRNA)를 포함하는 백신 조성물이 (a) 제1 VZV 항원성 폴리펩타이드를 인코딩하는 제1 RNA 폴리뉴클레오타이드 및 제2 VZV 항원성 폴리펩타이드를 인코딩하는 제2 RNA 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 백신, 및 (b) (예를 들면, 융합 폴리펩타이드로서) 제1 및 제2 VZV 항원성 폴리펩타이드를 인코딩하는 단일 RNA 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 백신을 포함한다는 것이 이해되어야 한다. 본 개시내용의 VZV RNA 백신은, 일부 구현예에서, 2-10 (예를 들면, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10), 또는 초과, 열린 해독틀을 갖는 RNA 폴리뉴클레오타이드를 포함하고, 각각의 이들은 상이한 VZV 항원성 폴리펩타이드를 인코딩한다 (또는 단일 RNA 폴리뉴클레오타이드는 2-10, 또는 초과, 상이한 VZV 항원성 폴리펩타이드를 인코딩함). 일부 구현예에서, VZV RNA 백신은 VZV gE 단백질을 인코딩하는 열린 해독틀을 갖는 RNA 폴리뉴클레오타이드, VZV gI 단백질을 인코딩하는 열린 해독틀을 갖는 RNA 폴리뉴클레오타이드, VZV gB 단백질을 인코딩하는 열린 해독틀을 갖는 RNA 폴리뉴클레오타이드, VZV gH 단백질을 인코딩하는 열린 해독틀을 갖는 RNA 폴리뉴클레오타이드, VZV gK 단백질을 인코딩하는 열린 해독틀을 갖는 RNA 폴리뉴클레오타이드, VZV gL 단백질을 인코딩하는 열린 해독틀을 갖는 RNA 폴리뉴클레오타이드, VZV gC 단백질을 인코딩하는 열린 해독틀을 갖는 RNA 폴리뉴클레오타이드, VZV gN 단백질을 인코딩하는 열린 해독틀을 갖는 RNA 폴리뉴클레오타이드, 및 VZV gM 단백질을 인코딩하는 열린 해독틀을 갖는 RNA 폴리뉴클레오타이드를 포함한다. 일부 구현예에서, VZV RNA 백신은 VZV gE를 인코딩하는 열린 해독틀을 갖는 RNA 폴리뉴클레오타이드 및 VZV gI 단백질을 인코딩하는 열린 해독틀을 갖는 RNA 폴리뉴클레오타이드를 포함한다. 일부 구현예에서, VZV RNA 백신은 VZV gE 단백질 또는 a gE 변이체를 인코딩하는 열린 해독틀을 갖는 RNA 폴리뉴클레오타이드를 포함한다.
일부 구현예에서, RNA 폴리뉴클레오타이드는 신호 펩타이드 (예를 들면, 서열번호: 56, 57, 109, 110, 또는 111)에 융합된 VZV 항원성 폴리펩타이드를 인코딩한다. 신호 펩타이드는 항원성 폴리펩타이드의 N-말단 또는 C-말단에서 융합될 수 있다.
신호 펩타이드
일부 구현예에서, VZV 폴리뉴클레오타이드에 의해 인코딩된 항원성 폴리펩타이드는 신호 펩타이드를 포함한다. 단백질의 N-말단 15-60 아미노산을 포함하는, 신호 펩타이드는 분비성 경로에서 막을 거쳐 전좌에 전형적으로 필요하고, 따라서, 분비성 경로로 진핵생물 및 원핵생물 둘 모두에서 대부분의 단백질의 침입을 보편적으로 제어한다. 신호 펩타이드는 일반적으로 3개 영역을 포함한다: 일반적으로 양으로 하전된 아미노산을 포함하는, 상이한 길이의 N-말단 영역; 소수성 영역; 및 짧은 카복시-말단 펩타이드 영역. 진핵생물에서, 발생기 전구 단백질 (단백질원)의 신호 펩타이드는 조잡한 내형질 망 (ER) 막에 리보솜을 유도하고 가공을 위하여 이를 거쳐 성장 펩타이드 사슬의 수송을 개시한다. 신호 펩타이드는, 그러나, 성숙한 단백질의 최종 목적지를 책임지지 않는다. 그들의 서열에서 추가의 어드레스 태그가 결여된 분비성 단백질은 외부 환경에 분비된 디폴트에 의한 것이다. 신호 펩타이드는 내형질 망 (ER)-상주하는 신호 펩티다아제에 의해 전구 단백질로부터 절단되거나 이들은 절단되지 않고 막 앵커로서 기능한다. 최근 동안, 신호 펩타이드의 더욱 진전된 관점은 진화되어, 특정 신호 펩타이드의 기능 및 면역우세가 이전에 기대된 것보다 훨씬 더 다용도인 것을 보여준다.
신호 펩타이드는 전형적으로 가공용 내형질 망 (ER)에 새로 합성된 단백질의 표적화를 용이하게 하는 기능을 한다. ER 가공은 성숙한 엔빌로프 단백질을 생산하고, 여기서 신호 펩타이드는, 전형적으로 숙주 세포의 신호 펩티다아제에 의해 절단된다. 신호 펩타이드는 또한 단백질의 세포막에의 표적화를 용이하게 할 수 있다. 본 개시내용의 VZV 백신은, 예를 들어, 인공 신호 펩타이드를 인코딩하는 RNA 폴리뉴클레오타이드를 포함할 수 있고, 여기서 신호 펩타이드 코딩 서열은 VZV 항원성 폴리펩타이드의 코딩 서열에 작동가능하게 연결되고 상기와 인프레임된다. 따라서, 본 개시내용의 VZV 백신은, 일부 구현예에서, 신호 펩타이드에 융합된 VZV 항원성 폴리펩타이드를 포함하는 항원성 폴리펩타이드를 생산한다. 일부 구현예에서, 신호 펩타이드는 VZV 항원성 폴리펩타이드의 N-말단에 융합된다. 일부 구현예에서, 신호 펩타이드는 VZV 항원성 폴리펩타이드의 C-말단에 융합된다.
일부 구현예에서, VZV 항원성 폴리펩타이드에 융합된 신호 펩타이드는 인공 신호 펩타이드이다. 일부 구현예에서, VZV RNA (예를 들면, mRNA) 백신에 의해 인코딩된 VZV 항원성 폴리펩타이드에 융합된 인공 신호 펩타이드는 면역글로불린 단백질, 예를 들면, IgE 신호 펩타이드 또는 IgG 신호 펩타이드로부터 수득된다. 일부 구현예에서, VZV RNA (예를 들면, mRNA) 백신에 의해 인코딩된 VZV 항원성 폴리펩타이드에 융합된 신호 펩타이드는 하기의 서열을 갖는 Ig 중쇄 엡실론-1 신호 펩타이드 (IgE HC SP)이다: MDWTWILFLVAAATRVHS (서열번호: 56). 일부 구현예에서, VZV RNA (예를 들면, mRNA) 백신에 의해 인코딩된 VZV 항원성 폴리펩타이드에 융합된 신호 펩타이드는 METPAQLLFLLLLWLPDTTG (서열번호: 57)의 서열을 갖는 IgGk 사슬 V-III 영역 HAH 신호 펩타이드 (IgGk SP)이다. 일부 구현예에서, VZV RNA (예를 들면, mRNA) 백신에 의해 인코딩된 VZV 항원성 폴리펩타이드는 임의의 서열번호: 56, 57, 109, 110 및 111의 신호 펩타이드에 융합된 10, 14, 18, 22, 26, 30, 34, 38, 42 및 45-55 중 하나에서 제시된 아미노산 서열을 갖는다. 본 명세서에서 개시된 예는 제한되는 의미가 아니고 가공을 위한 단백질의 ER에의 표적화 및/또는 단백질의 세포막에의 표적화를 용이하게 하기 위해 당해 분야에서 공지되는 임의의 신호 펩타이드는 본 개시내용에 따라 사용될 수 있다.
신호 펩타이드는 15-60 아미노산의 길이를 가질 수 있다. 예를 들어, 신호 펩타이드는 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 또는 60 아미노산의 길이를 가질 수 있다. 일부 구현예에서, 신호 펩타이드는 20-60, 25-60, 30-60, 35- 60, 40-60, 45- 60, 50-60, 55-60, 15-55, 20-55, 25-55, 30-55, 35-55, 40-55, 45-55, 50-55, 15-50, 20-50, 25-50, 30-50, 35-50, 40-50, 45-50, 15-45, 20-45, 25-45, 30-45, 35-45, 40-45, 15-40, 20-40, 25-40, 30-40, 35-40, 15-35, 20-35, 25-35, 30-35, 15-30, 20-30, 25-30, 15-25, 20-25, 또는 15-20 아미노산의 길이를 가질 수 있다.
신호 펩타이드는 ER 가공 동안 절단 접합에서 발생기 폴리펩타이드로부터 전형적으로 절단된다. 본 개시내용의 VZV RNA 백신에 의해 생산하는 성숙한 VZV 항원성 폴리펩타이드는 전형적으로 신호 펩타이드를 포함하지 않는다.
화학적 변형
본 개시내용의 RNA (예를 들면, mRNA) 백신은, 일부 구현예에서, 적어도 1종의 호흡기 세포융합 바이러스 (VZV) 항원성 폴리펩타이드를 인코딩하는 열린 해독틀을 갖는 적어도 1종의 리보핵산 (RNA) 폴리뉴클레오타이드를 포함하고, 여기서 상기 RNA는 적어도 1종의 화학적 변형을 포함한다.
용어 "화학적 변형" 및 "화학적으로 변형된"은 적어도 1종의 그것의 위치, 패턴, 퍼센트 또는 모집단에서 아데노신 (A), 구아노신 (G), 우리딘 (U), 티미딘 (T) 또는 시티딘 (C) 리보뉴클레오사이드 또는 데옥시리브뉴클레오사이드에 대하여 변형을 지칭한다. 일반적으로, 이들 용어들은 자연 발생 5'-말단 mRNA 캡 모이어티에서 리보뉴클레오타이드 변형을 지칭하지 않는다.
폴리뉴클레오타이드의 변형은, 제한 없이, 본 명세서에서 기재된 것을 포함하고, 명확히 비제한적으로, 화학적 변형을 포함하는 변형을 포함한다. 폴리뉴클레오타이드 (예를 들면, RNA 폴리뉴클레오타이드, 예컨대 mRNA 폴리뉴클레오타이드)는 천연-발생, 비-천연-발생인 변형을 포함할 수 있거나 폴리뉴클레오타이드는 천연-발생 및 비-천연-발생 변형의 조합을 포함할 수 있다. 폴리뉴클레오타이드는 (예를 들면, 연결 포스페이트에, 포스포디에스테르 연결에 또는 포스포디에스테르 골격에), 예를 들어, 당, 핵염기, 또는 뉴클레오사이드간 연결의 임의의 유용한 변형을 포함할 수 있다.
폴리펩타이드에 대하여, 용어 "변형"은 20 아미노산의 표준적 세트에 비해 변형을 지칭한다. 폴리펩타이드는, 본 명세서에서 제공된 바와 같이, 이들이 아미노산 치환, 삽입 또는 치환 및 삽입의 조합을 함유하면 또한 "변형된" 것으로 고려된다.
폴리뉴클레오타이드 (예를 들면, RNA 폴리뉴클레오타이드, 예컨대 mRNA 폴리뉴클레오타이드)는, 일부 구현예에서, 다양한 (1 초과) 상이한 변형을 포함한다. 일부 구현예에서, 폴리뉴클레오타이드의 특정한 영역은 1, 2 또는 초과 (선택적으로 상이한) 뉴클레오사이드 또는 뉴클레오타이드 변형을 함유한다. 일부 구현예에서, 세포 또는 유기체에 도입된, 변형된 RNA 폴리뉴클레오타이드 (예를 들면, 변형된 mRNA 폴리뉴클레오타이드)는, 미변형된 폴리뉴클레오타이드에 비해, 세포 또는 유기체, 각각에서 감소된 열화를 나타낸다. 일부 구현예에서, 세포 또는 유기체에 도입된, 변형된 RNA 폴리뉴클레오타이드 (예를 들면, 변형된 mRNA 폴리뉴클레오타이드)는 세포 또는 유기체, 각각에서 감소된 면역원성 (예를 들면, 감소된 타고난 반응)을 나타낼 수 있다.
폴리뉴클레오타이드 (예를 들면, RNA 폴리뉴클레오타이드, 예컨대 mRNA 폴리뉴클레오타이드)는, 일부 구현예에서, 요망된 기능 또는 특성을 달성하기 위해 폴리뉴클레오타이드의 합성 또는 후-합성 동안 도입되는 비-천연 변형된 뉴클레오타이드를 포함한다. 변형은 뉴클레오타이드간 연결기, 퓨린 또는 피리미딘 염기, 또는 당류에서 존재할 수 있다. 변형은 사슬의 말단에서 또는 사슬에서 다른 어느 곳에서 화학적 합성과 함께 또는 폴리머라제 효소와 함께 도입될 수 있다. 폴리뉴클레오타이드의 임의의 영역은 화학적으로 변형될 수 있다.
본 개시내용은 폴리뉴클레오타이드 (예를 들면, RNA 폴리뉴클레오타이드, 예컨대 mRNA 폴리뉴클레오타이드)의 변형된 뉴클레오사이드 및 뉴클레오타이드를 제공한다. "뉴클레오사이드"는 (또한 본 명세서에서 "핵염기"로서 지칭된) 유기 염기 (예를 들면, 퓨린 또는 피리미딘) 또는 이의 유도체와 조합으로 당 분자 (예를 들면, 펜토스 또는 리보오스) 또는 이의 유도체를 함유하는 화합물을 지칭한다. 뉴클레오타이드"는, 포스페이트 기를 포함하는, 뉴클레오사이드를 지칭한다. 변형된 뉴클레오타이드는, 1종 이상의 변형된 또는 비-천연 뉴클레오사이드를 포함하기 위해, 예컨대, 예를 들어, 화학적으로, 효소적으로, 또는 재조합으로 임의의 유용한 방법에 의해 합성될 수 있다. 폴리뉴클레오타이드는 연결된 뉴클레오사이드의 영역 또는 영역들을 포함할 수 있다. 그와 같은 영역은 가변성 골격 연결기를 가질 수 있다. 연결기는 표준 포스포디에스테르 연결기일 수 있고, 이 경우에 폴리뉴클레오타이드는 뉴클레오타이드의 영역을 포함할 것이다.
변형된 뉴클레오타이드 염기 짝짓기는 표준 아데노신-티민, 아데노신-우라실, 또는 구아노신-시토신 염기 쌍, 뿐만 아니라 비-표준 또는 변형된 염기를 포함하는 뉴클레오타이드 및/또는 변형된 뉴클레오타이드 사이 형성된 염기 쌍을 포함하고, 여기서 수소 결합 공여체 및 수소 결합 수용체의 배열은, 예컨대, 예를 들어, 적어도 1종의 화학적 변형을 갖는 폴리뉴클레오타이드에서 2 상보적 비-표준 기본 구조 사이 비-표준 염기와 표준 염기 사이 수소 결합을 허용한다. 상기 비-표준 염기 짝짓기의 한 예는 변형된 뉴클레오타이드 이노신과 아데닌, 시토신 또는 우라실 사이 염기 짝짓기이다. 염기/당 또는 링커의 임의의 조합은 본 개시내용의 폴리뉴클레오타이드 속에 편입될 수 있다.
본 개시내용의 조성물, 백신, 방법 및 합성 공정에서 유용한, 비제한적으로 화학적 변형을 포함하는, 폴리뉴클레오타이드 (예를 들면, RNA 폴리뉴클레오타이드, 예컨대 mRNA 폴리뉴클레오타이드)의 변형은, 비제한적으로 하기를 포함한다: 2-메틸티오-N6-(시스-하이드록시이소펜테닐)아데노신; 2-메틸티오-N6-메틸아데노신; 2-메틸티오-N6-트레오닐 카바모일아데노신; N6-글리시닐카바모일아데노신; N6-이소펜테닐아데노신; N6-메틸아데노신; N6-트레오닐카바모일아데노신; 1,2'-디메틸아데노신; 1-메틸아데노신; 2'-O-메틸아데노신; 2'-O-리보실아데노신 (포스페이트); 2-메틸아데노신; 2-메틸티오-N6 이소펜테닐아데노신; 2-메틸티오-N6-하이드록시노르발릴 카바모일아데노신; 2'-O-메틸아데노신; 2'-O-리보실아데노신 (포스페이트); 이소펜테닐아데노신; N6-(시스-하이드록시이소펜테닐)아데노신; N6,2'-O-디메틸아데노신; N6,2'-O-디메틸아데노신; N6,N6,2'-O-트리메틸아데노신; N6,N6-디메틸아데노신; N6-아세틸아데노신; N6-하이드록시노르발릴카바모일아데노신; N6-메틸-N6-트레오닐카바모일아데노신; 2-메틸아데노신; 2-메틸티오-N6-이소펜테닐아데노신; 7-데아자-아데노신; N1-메틸-아데노신; N6, N6 (디메틸)아데닌; N6-시스-하이드록시-이소펜테닐-아데노신; α-티오-아데노신; 2 (아미노)아데닌; 2 (아미노프로필)아데닌; 2 (메틸티오) N6 (이소펜테닐)아데닌; 2-(알킬)아데닌; 2-(아미노알킬)아데닌; 2-(아미노프로필)아데닌; 2-(할로)아데닌; 2-(할로)아데닌; 2-(프로필)아데닌; 2'-아미노-2'-데옥시-ATP; 2'-아지도-2'-데옥시-ATP; 2'-데옥시-2'-a-아미노아데노신 TP; 2'-데옥시-2'-a-아지도아데노신 TP; 6 (알킬)아데닌; 6 (메틸)아데닌; 6-(알킬)아데닌; 6-(메틸)아데닌; 7 (데아자)아데닌; 8 (알케닐)아데닌; 8 (알키닐)아데닌; 8 (아미노)아데닌; 8 (티오알킬)아데닌; 8-(알케닐)아데닌; 8-(알킬)아데닌; 8-(알키닐)아데닌; 8-(아미노)아데닌; 8-(할로)아데닌; 8-(하이드록실)아데닌; 8-(티오알킬)아데닌; 8-(티올)아데닌; 8-아지도-아데노신; 아자 아데닌; 데아자 아데닌; N6 (메틸)아데닌; N6-(이소펜틸)아데닌; 7-데아자-8-아자-아데노신; 7-메틸아데닌; 1-데아자아데노신 TP; 2'플루오로-N6-Bz-데옥시아데노신 TP; 2'-OMe-2-아미노-ATP; 2'O-메틸-N6-Bz-데옥시아데노신 TP; 2'-a-에티닐아데노신 TP; 2-아미노아데닌; 2-아미노아데노신 TP; 2-아미노-ATP; 2'-a-트리플루오로메틸아데노신 TP; 2-아지도아데노신 TP; 2'-b-에티닐아데노신 TP; 2-브로모아데노신 TP; 2'-b-트리플루오로메틸아데노신 TP; 2-클로로아데노신 TP; 2'-데옥시-2',2'-디플루오로아데노신 TP; 2'-데옥시-2'-a-머캅토아데노신 TP; 2'-데옥시-2'-a-티오메톡시아데노신 TP; 2'-데옥시-2'-b-아미노아데노신 TP; 2'-데옥시-2'-b-아지도아데노신 TP; 2'-데옥시-2'-b-브로모아데노신 TP; 2'-데옥시-2'-b-클로로아데노신 TP; 2'-데옥시-2'-b-플루오로아데노신 TP; 2'-데옥시-2'-b-아이오도아데노신 TP; 2'-데옥시-2'-b-머캅토아데노신 TP; 2'-데옥시-2'-b-티오메톡시아데노신 TP; 2-플루오로아데노신 TP; 2-아이오도아데노신 TP; 2-머캅토아데노신 TP; 2-메톡시-아데닌; 2-메틸티오-아데닌; 2-트리플루오로메틸아데노신 TP; 3-데아자-3-브로모아데노신 TP; 3-데아자-3-클로로아데노신 TP; 3-데아자-3-플루오로아데노신 TP; 3-데아자-3-아이오도아데노신 TP; 3-데아자아데노신 TP; 4'-아지도아데노신 TP; 4'-탄소환형 아데노신 TP; 4'-에티닐아데노신 TP; 5'-호모-아데노신 TP; 8-아자-ATP; 8-브로모-아데노신 TP; 8-트리플루오로메틸아데노신 TP; 9-데아자아데노신 TP; 2-아미노퓨린; 7-데아자-2,6-디아미노퓨린; 7-데아자-8-아자-2,6-디아미노퓨린; 7-데아자-8-아자-2-아미노퓨린; 2,6-디아미노퓨린; 7-데아자-8-아자-아데닌, 7-데아자-2-아미노퓨린; 2-티오시티딘; 3-메틸시티딘; 5-포르밀시티딘; 5-하이드록시메틸시티딘; 5-메틸시티딘; N4-아세틸시티딘; 2'-O-메틸시티딘; 2'-O-메틸시티딘; 5,2'-O-디메틸시티딘; 5-포르밀-2'-O-메틸시티딘; 라이시딘; N4,2'-O-디메틸시티딘; N4-아세틸-2'-O-메틸시티딘; N4-메틸시티딘; N4,N4-디메틸-2'-OMe-시티딘 TP; 4-메틸시티딘; 5-아자-시티딘; 슈도-이소-시티딘; 피롤로-시티딘; α-티오-시티딘; 2-(티오)시토신; 2'-아미노-2'-데옥시-CTP; 2'-아지도-2'-데옥시-CTP; 2'-데옥시-2'-a-아미노시티딘 TP; 2'-데옥시-2'-a-아지도시티딘 TP; 3 (데아자) 5 (아자)시토신; 3 (메틸)시토신; 3-(알킬)시토신; 3-(데아자) 5 (아자)시토신; 3-(메틸)시티딘; 4,2'-O-디메틸시티딘; 5 (할로)시토신; 5 (메틸)시토신; 5 (프로피닐)시토신; 5 (트리플루오로메틸)시토신; 5-(알킬)시토신; 5-(알키닐)시토신; 5-(할로)시토신; 5-(프로피닐)시토신; 5-(트리플루오로메틸)시토신; 5-브로모-시티딘; 5-아이오도-시티딘; 5-프로피닐 시토신; 6-(아조)시토신; 6-아자-시티딘; 아자 시토신; 데아자 시토신; N4 (아세틸)시토신; 1-메틸-1-데아자-슈도이소시티딘; 1-메틸-슈도이소시티딘; 2-메톡시-5-메틸-시티딘; 2-메톡시-시티딘; 2-티오-5-메틸-시티딘; 4-메톡시-1-메틸-슈도이소시티딘; 4-메톡시-슈도이소시티딘; 4-티오-1-메틸-1-데아자-슈도이소시티딘; 4-티오-1-메틸-슈도이소시티딘; 4-티오-슈도이소시티딘; 5-아자-제불라린; 5-메틸-제불라린; 피롤로-슈도이소시티딘; 제불라린; (E)-5-(2-브로모-비닐)시티딘 TP; 2,2'-안하이드로-시티딘 TP 하이드로클로라이드; 2'플루오르-N4-Bz-시티딘 TP; 2'플루오로-N4-아세틸-시티딘 TP; 2'-O-메틸-N4-아세틸-시티딘 TP; 2'O-메틸-N4-Bz-시티딘 TP; 2'-a-에티닐시티딘 TP; 2'-a-트리플루오로메틸시티딘 TP; 2'-b-에티닐시티딘 TP; 2'-b-트리플루오로메틸시티딘 TP; 2'-데옥시-2',2'-디플루오로시티딘 TP; 2'-데옥시-2'-a-머캅토시티딘 TP; 2'-데옥시-2'-a-티오메톡시시티딘 TP; 2'-데옥시-2'-b-아미노시티딘 TP; 2'-데옥시-2'-b-아지도시티딘 TP; 2'-데옥시-2'-b-브로모시티딘 TP; 2'-데옥시-2'-b-클로로시티딘 TP; 2'-데옥시-2'-b-플루오로시티딘 TP; 2'-데옥시-2'-b-아이오도시티딘 TP; 2'-데옥시-2'-b-머캅토시티딘 TP; 2'-데옥시-2'-b-티오메톡시시티딘 TP; 2'-O-메틸-5-(1-프로피닐)시티딘 TP; 3'-에티닐시티딘 TP; 4'-아지도시티딘 TP; 4'-탄소환형 시티딘 TP; 4'-에티닐시티딘 TP; 5-(1-프로피닐)아라-시티딘 TP; 5-(2-클로로-페닐)-2-티오시티딘 TP; 5-(4-아미노-페닐)-2-티오시티딘 TP; 5-아미노알릴-CTP; 5-시아노시티딘 TP; 5-에티닐아라-시티딘 TP; 5-에티닐시티딘 TP; 5'-호모-시티딘 TP; 5-메톡시시티딘 TP; 5-트리플루오로메틸-시티딘 TP; N4-아미노-시티딘 TP; N4-벤조일-시티딘 TP; 슈도이소시티딘; 7-메틸구아노신; N2,2'디메틸구아노신; N2-메틸구아노신; 와이오신; 1,2'-O-디메틸구아노신; 1-메틸구아노신; 2'-O-메틸구아노신; 2'-O-리보실구아노신 (포스페이트); 2'-O-메틸구아노신; 2'-O-리보실구아노신 (포스페이트); 7-아미노메틸-7-데아자구아노신; 7-시아노-7-데아자구아노신; 아라카에오신; 메틸와이오신; N2,7-디메틸구아노신; N2,N2,2'-O-트리메틸구아노신; N2,N2,7-트리메틸구아노신; N2,N2-디메틸구아노신; N2,7,2'-O-트리메틸구아노신; 6-티오-구아노신; 7-데아자-구아노신; 8-옥소-구아노신; N1-메틸-구아노신; α-티오-구아노신; 2 (프로필)구아닌; 2-(알킬)구아닌; 2'-아미노-2'-데옥시-GTP; 2'-아지도-2'-데옥시-GTP; 2'-데옥시-2'-a-아미노구아노신 TP; 2'-데옥시-2'-a-아지도구아노신 TP; 6 (메틸)구아닌; 6-(알킬)구아닌; 6-(메틸)구아닌; 6-메틸-구아노신; 7 (알킬)구아닌; 7 (데아자)구아닌; 7 (메틸)구아닌; 7-(알킬)구아닌; 7-(데아자)구아닌; 7-(메틸)구아닌; 8 (알킬)구아닌; 8 (알키닐)구아닌; 8 (할로)구아닌; 8 (티오알킬)구아닌; 8-(알케닐)구아닌; 8-(알킬)구아닌; 8-(알키닐)구아닌; 8-(아미노)구아닌; 8-(할로)구아닌; 8-(하이드록실)구아닌; 8-(티오알킬)구아닌; 8-(티올)구아닌; 아자 구아닌; 데아자 구아닌; N (메틸)구아닌; N-(메틸)구아닌; 1-메틸-6-티오-구아노신; 6-메톡시-구아노신; 6-티오-7-데아자-8-아자-구아노신; 6-티오-7-데아자-구아노신; 6-티오-7-메틸-구아노신; 7-데아자-8-아자-구아노신; 7-메틸-8-옥소-구아노신; N2,N2-디메틸-6-티오-구아노신; N2-메틸-6-티오-구아노신; 1-Me-GTP; 2'플루오로-N2-이소부틸-구아노신 TP; 2'O-메틸-N2-이소부틸-구아노신 TP; 2'-a-에티닐구아노신 TP; 2'-a-트리플루오로메틸구아노신 TP; 2'-b-에티닐구아노신 TP; 2'-b-트리플루오로메틸구아노신 TP; 2'-데옥시-2',2'-디플루오로구아노신 TP; 2'-데옥시-2'-a-머캅토구아노신 TP; 2'-데옥시-2'-a-티오메톡시구아노신 TP; 2'-데옥시-2'-b-아미노구아노신 TP; 2'-데옥시-2'-b-아지도구아노신 TP; 2'-데옥시-2'-b-브로모구아노신 TP; 2'-데옥시-2'-b-클로로구아노신 TP; 2'-데옥시-2'-b-플루오로구아노신 TP; 2'-데옥시-2'-b-아이오도구아노신 TP; 2'-데옥시-2'-b-머캅토구아노신 TP; 2'-데옥시-2'-b-티오메톡시구아노신 TP; 4'-아지도구아노신 TP; 4'-탄소환형 구아노신 TP; 4'-에티닐구아노신 TP; 5'-호모-구아노신 TP; 8-브로모-구아노신 TP; 9-데아자구아노신 TP; N2-이소부틸-구아노신 TP; 1-메틸이노신; 이노신; 1,2'-O-디메틸이노신; 2'-O-메틸이노신; 7-메틸이노신; 2'-O-메틸이노신; 에폭시퀘우오신; 갈락토실-퀘우오신; 만노실퀘우오신; 퀘우오신; 알리아미노-티미딘; 아자 티미딘; 데아자 티미딘; 데옥시-티미딘; 2'-O-메틸우리딘; 2-티오우리딘; 3-메틸우리딘; 5-카복시메틸우리딘; 5-하이드록시우리딘; 5-메틸우리딘; 5-타우리노메틸-2-티오우리딘; 5-타우리노메틸우리딘; 디하이드로우리딘; 슈도우리딘; (3-(3-아미노-3-카복시프로필)우리딘; 1-메틸-3-(3-아미노-5-카복시프로필)슈도우리딘; 1-메틸슈두오우리딘; 1-에틸-슈도우리딘; 2'-O-메틸우리딘; 2'-O-메틸슈도우리딘; 2'-O-메틸우리딘; 2-티오-2'-O-메틸우리딘; 3-(3-아미노-3-카복시프로필)우리딘; 3,2'-O-디메틸우리딘; 3-메틸-슈도-우리딘 TP; 4-티오우리딘; 5-(카복시하이드록시메틸)우리딘; 5-(카복시하이드록시메틸)우리딘 메틸 에스테르; 5,2'-O-디메틸우리딘; 5,6-디하이드로-우리딘; 5-아미노메틸-2-티오우리딘; 5-카바모일메틸-2'-O-메틸우리딘; 5-카바모일메틸우리딘; 5-카복시하이드록시메틸우리딘; 5-카복시하이드록시메틸우리딘 메틸 에스테르; 5-카복시메틸아미노메틸-2'-O-메틸우리딘; 5-카복시메틸아미노메틸-2-티오우리딘; 5-카복시메틸아미노메틸-2-티오우리딘; 5-카복시메틸아미노메틸우리딘; 5-카복시메틸아미노메틸우리딘; 5-카바모일메틸우리딘 TP; 5-메톡시카보닐메틸-2'-O-메틸우리딘; 5-메톡시카보닐메틸-2-티오우리딘; 5-메톡시카보닐메틸우리딘; 5-메틸우리딘,), 5-메톡시우리딘; 5-메틸-2-티오우리딘; 5-메틸아미노메틸-2-셀레노우리딘; 5-메틸아미노메틸-2-티오우리딘; 5-메틸아미노메틸우리딘; 5-메틸디하이드로우리딘; 5-옥시아세트산-우리딘 TP; 5-옥시아세트산-메틸 에스테르-우리딘 TP; N1-메틸-슈도-우라실; N1-에틸-슈도-우라실; 우리딘 5-옥시아세트산; 우리딘 5-옥시아세트산 메틸 에스테르; 3-(3-아미노-3-카복시프로필)-우리딘 TP; 5-(이소-펜테닐아미노메틸)- 2-티오우리딘 TP; 5-(이소-펜테닐아미노메틸)-2'-O-메틸우리딘 TP; 5-(이소-펜테닐아미노메틸)우리딘 TP; 5-프로피닐 우라실; α-티오-우리딘; 1 (아미노알킬아미노-카보닐에틸레닐)-2(티오)-슈도우라실; 1 (아미노알킬아미노카보닐에틸레닐)-2,4-(디티오)슈도우라실; 1 (아미노알킬아미노카보닐에틸레닐)-4 (티오)슈도우라실; 1 (아미노알킬아미노카보닐에틸레닐)-슈도우라실; 1 (아미노카보닐에틸레닐)-2(티오)-슈도우라실; 1 (아미노카보닐에틸레닐)-2,4-(디티오)슈도우라실; 1 (아미노카보닐에틸레닐)-4 (티오)슈도우라실; 1 (아미노카보닐에틸레닐)-슈도우라실; 1 치환된 2(티오)-슈도우라실; 1 치환된 2,4-(디티오)슈도우라실; 1 치환된 4 (티오)슈도우라실; 1 치환된 슈도우라실; 1-(아미노알킬아미노-카보닐에틸레닐)-2-(티오)-슈도우라실; 1-메틸-3-(3-아미노-3-카복시프로필) 슈도우리딘 TP; 1-메틸-3-(3-아미노-3-카복시프로필)슈도-UTP; 1-메틸-슈도-UTP; 1-에틸-슈도-UTP; 2 (티오)슈도우라실; 2' 데옥시 우리딘; 2' 플루오로우리딘; 2-(티오)우라실; 2,4-(디티오)프수에도우라실; 2' 메틸, 2'아미노, 2'아지도, 2'플루로-구아노신; 2'-아미노-2'-데옥시-UTP; 2'-아지도-2'-데옥시-UTP; 2'-아지도-데옥시우리딘 TP; 2'-O-메틸슈도우리딘; 2' 데옥시 우리딘; 2' 플루오로우리딘; 2'-데옥시-2'-a-아미노우리딘 TP; 2'-데옥시-2'-a-아지도우리딘 TP; 2-메틸슈도우리딘; 3 (3 아미노-3 카복시프로필)우라실; 4 (티오)슈도우라실; 4-(티오)슈도우라실; 4-(티오)우라실; 4-티오우라실; 5 (1,3-디아졸-1-알킬)우라실; 5 (2-아미노프로필)우라실; 5 (아미노알킬)우라실; 5 (디메틸아미노알킬)우라실; 5 (구아니디늄알킬)우라실; 5 (메톡시카보닐메틸)-2-(티오)우라실; 5 (메톡시카보닐-메틸)우라실; 5 (메틸) 2 (티오)우라실; 5 (메틸) 2,4 (디티오)우라실; 5 (메틸) 4 (티오)우라실; 5 (메틸아미노메틸)-2 (티오)우라실; 5 (메틸아미노메틸)-2,4 (디티오)우라실; 5 (메틸아미노메틸)-4 (티오)우라실; 5 (프로피닐)우라실; 5 (트리플루오로메틸)우라실; 5-(2-아미노프로필)우라실; 5-(알킬)-2-(티오)슈도우라실; 5-(알킬)-2,4 (디티오)슈도우라실; 5-(알킬)-4 (티오)슈도우라실; 5-(알킬)슈도우라실; 5-(알킬)우라실; 5-(알키닐)우라실; 5-(알릴아미노)우라실; 5-(시아노알킬)우라실; 5-(디알킬아미노알킬)우라실; 5-(디메틸아미노알킬)우라실; 5-(구아니디늄알킬)우라실; 5-(할로)우라실; 5-(1,3-디아졸-1-알킬)우라실; 5-(메톡시)우라실; 5-(메톡시카보닐메틸)-2-(티오)우라실; 5-(메톡시카보닐-메틸)우라실; 5-(메틸) 2(티오)우라실; 5-(메틸) 2,4 (디티오)우라실; 5-(메틸) 4 (티오)우라실; 5-(메틸)-2-(티오)슈도우라실; 5-(메틸)-2,4 (디티오)슈도우라실; 5-(메틸)-4 (티오)슈도우라실; 5-(메틸)슈도우라실; 5-(메틸아미노메틸)-2 (티오)우라실; 5-(메틸아미노메틸)-2,4(디티오)우라실; 5-(메틸아미노메틸)-4-(티오)우라실; 5-(프로피닐)우라실; 5-(트리플루오로메틸)우라실; 5-아미노알릴-우리딘; 5-브로모-우리딘; 5-아이오도-우리딘; 5-우라실; 6 (아조)우라실; 6-(아조)우라실; 6-아자-우리딘; 알리아미노-우라실; 아자 우라실; 데아자 우라실; N3 (메틸)우라실; 슈도-UTP-1-2-에탄산; 슈도우라실; 4-티오-슈도-UTP; 1-카복시메틸-슈도우리딘; 1-메틸-1-데아자-슈도우리딘; 1-프로피닐-우리딘; 1-타우리노메틸-1-메틸-우리딘; 1-타우리노메틸-4-티오-우리딘; 1-타우리노메틸-슈도우리딘; 2-메톡시-4-티오-슈도우리딘; 2-티오-1-메틸-1-데아자-슈도우리딘; 2-티오-1-메틸-슈도우리딘; 2-티오-5-아자-우리딘; 2-티오-디하이드로슈도우리딘; 2-티오-디하이드로우리딘; 2-티오-슈도우리딘; 4-메톡시-2-티오-슈도우리딘; 4-메톡시-슈도우리딘; 4-티오-1-메틸-슈도우리딘; 4-티오-슈도우리딘; 5-아자-우리딘; 디하이드로슈도우리딘; (±)1-(2-하이드록시프로필)슈도우리딘 TP; (2R)-1-(2-하이드록시프로필)슈도우리딘 TP; (2S)-1-(2-하이드록시프로필)슈도우리딘 TP; (E)-5-(2-브로모-비닐)아라-우리딘 TP; (E)-5-(2-브로모-비닐)우리딘 TP; (Z)-5-(2-브로모-비닐)아라-우리딘 TP; (Z)-5-(2-브로모-비닐)우리딘 TP; 1-(2,2,2-트리플루오로에틸)-슈도-UTP; 1-(2,2,3,3,3-펜타플루오로프로필)슈도우리딘 TP; 1-(2,2-디에톡시에틸)슈도우리딘 TP; 1-(2,4,6-트리메틸벤질)슈도우리딘 TP; 1-(2,4,6-트리메틸-벤질)슈도-UTP; 1-(2,4,6-트리메틸-페닐)슈도-UTP; 1-(2-아미노-2-카복시에틸)슈도-UTP; 1-(2-아미노-에틸)슈도-UTP; 1-(2-하이드록시에틸)슈도우리딘 TP; 1-(2-메톡시에틸)슈도우리딘 TP; 1-(3,4-비스-트리플루오로메톡시벤질)슈도우리딘 TP; 1-(3,4-디메톡시벤질)슈도우리딘 TP; 1-(3-아미노-3-카복시프로필)슈도-UTP; 1-(3-아미노-프로필)슈도-UTP; 1-(3-사이클로프로필-프로프-2-이닐)슈도우리딘 TP; 1-(4-아미노-4-카복시부틸)슈도-UTP; 1-(4-아미노-벤질)슈도-UTP; 1-(4-아미노-부틸)슈도-UTP; 1-(4-아미노-페닐)슈도-UTP; 1-(4-아지도벤질)슈도우리딘 TP; 1-(4-브로모벤질)슈도우리딘 TP; 1-(4-클로로벤질)슈도우리딘 TP; 1-(4-플루오로벤질)슈도우리딘 TP; 1-(4-아이오도벤질)슈도우리딘 TP; 1-(4-메탄설포닐벤질)슈도우리딘 TP; 1-(4-메톡시벤질)슈도우리딘 TP; 1-(4-메톡시-벤질)슈도-UTP; 1-(4-메톡시-페닐)슈도-UTP; 1-(4-메틸벤질)슈도우리딘 TP; 1-(4-메틸-벤질)슈도-UTP; 1-(4-니트로벤질)슈도우리딘 TP; 1-(4-니트로-벤질)슈도-UTP; 1(4-니트로-페닐)슈도-UTP; 1-(4-티오메톡시벤질)슈도우리딘 TP; 1-(4-트리플루오로메톡시벤질)슈도우리딘 TP; 1-(4-트리플루오로메틸벤질)슈도우리딘 TP; 1-(5-아미노-펜틸)슈도-UTP; 1-(6-아미노-헥실)슈도-UTP; 1,6-디메틸-슈도-UTP; 1-[3-(2-{2-[2-(2-아미노에톡시)-에톡시]-에톡시}-에톡시)-프로피오닐]슈도우리딘 TP; 1-{3-[2-(2-아미노에톡시)-에톡시]-프로피오닐} 슈도우리딘 TP; 1-아세틸슈도우리딘 TP; 1-알킬-6-(1-프로피닐)-슈도-UTP; 1-알킬-6-(2-프로피닐)-슈도-UTP; 1-알킬-6-알릴-슈도-UTP; 1-알킬-6-에티닐-슈도-UTP; 1-알킬-6-호모알릴-슈도-UTP; 1-알킬-6-비닐-슈도-UTP; 1-알릴슈도우리딘 TP; 1-아미노메틸-슈도-UTP; 1-벤조일슈도우리딘 TP; 1-벤질옥시메틸슈도우리딘 TP; 1-벤질-슈도-UTP; 1-바이오티닐-PEG2-슈도우리딘 TP; 1-바이오티닐슈도우리딘 TP; 1-부틸-슈도-UTP; 1-시아노메틸슈도우리딘 TP; 1-사이클로부틸메틸-슈도-UTP; 1-사이클로부틸-슈도-UTP; 1-사이클로헵틸메틸-슈도-UTP; 1-사이클로헵틸-슈도-UTP; 1-사이클로헥실메틸-슈도-UTP; 1-사이클로헥실-슈도-UTP; 1-사이클로옥틸메틸-슈도-UTP; 1-사이클로옥틸-슈도-UTP; 1-사이클로펜틸메틸-슈도-UTP; 1-사이클로펜틸-슈도-UTP; 1-사이클로프로필메틸-슈도-UTP; 1-사이클로프로필-슈도-UTP; 1-에틸-슈도-UTP; 1-헥실-슈도-UTP; 1-호모알릴슈도우리딘 TP; 1-하이드록시메틸슈도우리딘 TP; 1-이소-프로필-슈도-UTP; 1-Me-2-티오-슈도-UTP; 1-Me-4-티오-슈도-UTP; 1-Me-알파-티오-슈도-UTP; 1-메탄설포닐메틸슈도우리딘 TP; 1-메톡시메틸슈도우리딘 TP; 1-메틸-6-(2,2,2-트리플루오로에틸)슈도-UTP; 1-메틸-6-(4-모폴리노)-슈도-UTP; 1-메틸-6-(4-티오모폴리노)-슈도-UTP; 1-메틸-6-(치환된 페닐)슈도-UTP; 1-메틸-6-아미노-슈도-UTP; 1-메틸-6-아지도-슈도-UTP; 1-메틸-6-브로모-슈도-UTP; 1-메틸-6-부틸-슈도-UTP; 1-메틸-6-클로로-슈도-UTP; 1-메틸-6-시아노-슈도-UTP; 1-메틸-6-디메틸아미노-슈도-UTP; 1-메틸-6-에톡시-슈도-UTP; 1-메틸-6-에틸카복실레이트-슈도-UTP; 1-메틸-6-에틸-슈도-UTP; 1-메틸-6-플루오로-슈도-UTP; 1-메틸-6-포르밀-슈도-UTP; 1-메틸-6-하이드록시아미노-슈도-UTP; 1-메틸-6-하이드록시-슈도-UTP; 1-메틸-6-아이오도-슈도-UTP; 1-메틸-6-이소-프로필-슈도-UTP; 1-메틸-6-메톡시-슈도-UTP; 1-메틸-6-메틸아미노-슈도-UTP; 1-메틸-6-페닐-슈도-UTP; 1-메틸-6-프로필-슈도-UTP; 1-메틸-6-tert-부틸-슈도-UTP; 1-메틸-6-트리플루오로메톡시-슈도-UTP; 1-메틸-6-트리플루오로메틸-슈도-UTP; 1-모폴리노메틸슈도우리딘 TP; 1-펜틸-슈도-UTP; 1-페닐-슈도-UTP; 1-피발로일슈도우리딘 TP; 1-프로파르길슈도우리딘 TP; 1-프로필-슈도-UTP; 1-프로피닐-슈도우리딘; 1-p-톨릴-슈도-UTP; 1-tert-부틸-슈도-UTP; 1-티오메톡시메틸슈도우리딘 TP; 1-티오모폴리노메틸슈도우리딘 TP; 1-트리플루오로아세틸슈도우리딘 TP; 1-트리플루오로메틸-슈도-UTP; 1-비닐슈도우리딘 TP; 2,2'-안하이드로-우리딘 TP; 2'-브로모-데옥시우리딘 TP; 2'-F-5-메틸-2'-데옥시-UTP; 2'-OMe-5-Me-UTP; 2'-OMe-슈도-UTP; 2'-a-에티닐우리딘 TP; 2'-a-트리플루오로메틸우리딘 TP; 2'-b-에티닐우리딘 TP; 2'-b-트리플루오로메틸우리딘 TP; 2'-데옥시-2',2'-디플루오로우리딘 TP; 2'-데옥시-2'-a-머캅토우리딘 TP; 2'-데옥시-2'-a-티오메톡시우리딘 TP; 2'-데옥시-2'-b-아미노우리딘 TP; 2'-데옥시-2'-b-아지도우리딘 TP; 2'-데옥시-2'-b-브로모우리딘 TP; 2'-데옥시-2'-b-클로로우리딘 TP; 2'-데옥시-2'-b-플루오로우리딘 TP; 2'-데옥시-2'-b-아이오도우리딘 TP; 2'-데옥시-2'-b-머캅토우리딘 TP; 2'-데옥시-2'-b-티오메톡시우리딘 TP; 2-메톡시-4-티오-우리딘; 2-메톡시우리딘; 2'-O-메틸-5-(1-프로피닐)우리딘 TP; 3-알킬-슈도-UTP; 4'-아지도우리딘 TP; 4'-탄소환형 우리딘 TP; 4'-에티닐우리딘 TP; 5-(1-프로피닐)아라-우리딘 TP; 5-(2-푸라닐)우리딘 TP; 5-시아노우리딘 TP; 5-디메틸아미노우리딘 TP; 5'-호모-우리딘 TP; 5-아이오도-2'-플루오로-데옥시우리딘 TP; 5-페닐에티닐우리딘 TP; 5-트리듀테로메틸-6-듀테로우리딘 TP; 5-트리플루오로메틸-우리딘 TP; 5-비닐아라우리딘 TP; 6-(2,2,2-트리플루오로에틸)-슈도-UTP; 6-(4-모폴리노)-슈도-UTP; 6-(4-티오모폴리노)-슈도-UTP; 6-(치환된-페닐)-슈도-UTP; 6-아미노-슈도-UTP; 6-아지도-슈도-UTP; 6-브로모-슈도-UTP; 6-부틸-슈도-UTP; 6-클로로-슈도-UTP; 6-시아노-슈도-UTP; 6-디메틸아미노-슈도-UTP; 6-에톡시-슈도-UTP; 6-에틸카복실레이트-슈도-UTP; 6-에틸-슈도-UTP; 6-플루오로-슈도-UTP; 6-포르밀-슈도-UTP; 6-하이드록시아미노-슈도-UTP; 6-하이드록시-슈도-UTP; 6-아이오도-슈도-UTP; 6-이소-프로필-슈도-UTP; 6-메톡시-슈도-UTP; 6-메틸아미노-슈도-UTP; 6-메틸-슈도-UTP; 6-페닐-슈도-UTP; 6-페닐-슈도-UTP; 6-프로필-슈도-UTP; 6-tert-부틸-슈도-UTP; 6-트리플루오로메톡시-슈도-UTP; 6-트리플루오로메틸-슈도-UTP; 알파-티오-슈도-UTP; 슈도우리딘 1-(4-메틸벤젠설폰산) TP; 슈도우리딘 1-(4-메틸벤조산) TP; 슈도우리딘 TP 1-[3-(2-에톡시)]프로피온산; 슈도우리딘 TP 1-[3-{2-(2-[2-(2-에톡시)-에톡시]-에톡시)-에톡시}]프로피온산; 슈도우리딘 TP 1-[3-{2-(2-[2-{2(2-에톡시)-에톡시}-에톡시]-에톡시)-에톡시}]프로피온산; 슈도우리딘 TP 1-[3-{2-(2-[2-에톡시]-에톡시)-에톡시}]프로피온산; 슈도우리딘 TP 1-[3-{2-(2-에톡시)-에톡시}]프로피온산; 슈도우리딘 TP 1-메틸포스폰산; 슈도우리딘 TP 1-메틸포스폰산 디에틸 에스테르; 슈도-UTP-N1-3-프로피온산; 슈도-UTP-N1-4-부탄산; 슈도-UTP-N1-5-펜탄산; 슈도-UTP-N1-6-헥산산; 슈도-UTP-N1-7-헵탄산; 슈도-UTP-N1-메틸-p-벤조산; 슈도-UTP-N1-p-벤조산; 와이부토신; 하이드록시와이부토신; 이소와이오신; 퍼옥시와이부토신; 하부변형된 하이드록시와이부토신; 4-데메틸와이오신; 2,6-(디아미노)퓨린; 1-(아자)-2-(티오)-3-(아자)-펜옥사진-1-일: 1,3-(디아자)-2-(옥소)-펜티아진-1-일; 1,3-(디아자)-2-(옥소)-펜옥사진-1-일; 1,3,5-(트리아자)-2,6-(디옥사)-나프탈렌; 2 (아미노)퓨린; 2,4,5-(트리메틸)페닐; 2' 메틸, 2'아미노, 2'아지도, 2'플루로-시티딘; 2' 메틸, 2'아미노, 2'아지도, 2'플루로-아데닌; 2'메틸, 2'아미노, 2'아지도, 2'플루로-우리딘; 2'-아미노-2'-데옥시리보에; 2-아미노-6-클로로-퓨린; 2-아자-이노시닐; 2'-아지도-2'-데옥시리보에; 2'플루오로-2'-데옥시리보에; 2'-플루오로-변형된 염기; 2'-O-메틸-리보오스; 2-옥소-7-아미노피리도피리미딘-3-일; 2-옥소-피리도피리미딘-3-일; 2-피리디논; 3 니트로피롤; 3-(메틸)-7-(프로피닐)이소카르보스티릴릴; 3-(메틸)이소카르보스티릴릴; 4-(플루오로)-6-(메틸)벤즈이미다졸; 4-(메틸)벤즈이미다졸; 4-(메틸)인돌릴; 4,6-(디메틸)인돌릴; 5 니트로인돌; 5 치환된 피리미딘; 5-(메틸)이소카르보스티릴릴; 5-니트로인돌; 6-(아자)피리미딘; 6-(아조)티민; 6-(메틸)-7-(아자)인돌릴; 6-클로로-퓨린; 6-페닐-피롤로-피리미딘-2-온-3-일; 7-(아미노알킬하이드록시)-1-(아자)-2-(티오)-3-(아자)-펜티아진-1-일; 7-(아미노알킬하이드록시)-1-(아자)-2-(티오)-3-(아자)-펜옥사진-1-일; 7-(아미노알킬하이드록시)-1,3-(디아자)-2-(옥소)-펜옥사진-1-일; 7-(아미노알킬하이드록시)-1,3-(디아자)-2-(옥소)-펜티아진-1-일; 7-(아미노알킬하이드록시)-1,3-(디아자)-2-(옥소)-펜옥사진-1-일; 7-(아자)인돌릴; 7-(구아니디늄알킬하이드록시)-1-(아자)-2-(티오)-3-(아자)-펜옥사진1-일; 7-(구아니디늄알킬하이드록시)-1-(아자)-2-(티오)-3-(아자)-펜티아진-1-일; 7-(구아니디늄알킬하이드록시)-1-(아자)-2-(티오)-3-(아자)-펜옥사진-1-일; 7-(구아니디늄알킬하이드록시)-1,3-(디아자)-2-(옥소)-펜옥사진-1-일; 7-(구아니디늄알킬-하이드록시)-1,3-(디아자)-2-(옥소)-펜티아진-1-일; 7-(구아니디늄알킬하이드록시)-1,3-(디아자)-2-(옥소)-펜옥사진-1-일; 7-(프로피닐)이소카르보스티릴릴; 7-(프로피닐)이소카르보스티릴릴, 프로피닐-7-(아자)인돌릴; 7-데아자-이노시닐; 7-치환된 1-(아자)-2-(티오)-3-(아자)-펜옥사진-1-일; 7-치환된 1,3-(디아자)-2-(옥소)-펜옥사진-1-일; 9-(메틸)-이미디조피리디닐; 아미노인돌릴; 안트라세닐; 비스-오르토-(아미노알킬하이드록시)-6-페닐-피롤로-피리미딘-2-온-3-일; 비스-오르토-치환된-6-페닐-피롤로-피리미딘-2-온-3-일; 디플루오로톨릴; 하이포잔틴; 이미디조피리디닐; 이노시닐; 이소카르보스티릴릴; 이소구아니신; N2-치환된 퓨린; N6-메틸-2-아미노-퓨린; N6-치환된 퓨린; N-알킬화된 유도체; 나프탈레닐; 니트로벤즈이미다졸릴; 니트로이미다졸릴; 니트로인다졸릴; 니트로피라졸릴; 뉴불라린; O6-치환된 퓨린; O-알킬화된 유도체; 오르토-(아미노알킬하이드록시)-6-페닐-피롤로-피리미딘-2-온-3-일; 오르토-치환된-6-페닐-피롤로-피리미딘-2-온-3-일; 옥소포마이신 TP; 파라-(아미노알킬하이드록시)-6-페닐-피롤로-피리미딘-2-온-3-일; 파라-치환된-6-페닐-피롤로-피리미딘-2-온-3-일; 펜타세닐; 펜안트라세닐; 페닐; 프로피닐-7-(아자)인돌릴; 피레닐; 피리도피리미딘-3-일; 피리도피리미딘-3-일, 2-옥소-7-아미노-피리도피리미딘-3-일; 피롤로-피리미딘-2-온-3-일; 피롤로피리미디닐; 피롤로피리지닐; 스틸벤질; 치환된 1,2,4-트리아졸; 테트라세닐; 투베르시딘; 잔틴; 크산토신-5'-TP; 2-티오-제불라린; 5-아자-2-티오-제불라린; 7-데아자-2-아미노-퓨린; 피리딘-4-온 리보뉴클레오사이드; 2-아미노-리보사이드-TP; 포마이신 A TP; 포마이신 B TP; 피롤로신 TP; 2'-OH-아라-아데노신 TP; 2'-OH-아라-시티딘 TP; 2'-OH-아라-우리딘 TP; 2'-OH-아라-구아노신 TP; 5-(2-카보메톡시비닐)우리딘 TP; 및 N6-(19-아미노-펜타옥사노나데실)아데노신 TP.
일부 구현예에서, 폴리뉴클레오타이드 (예를 들면, RNA 폴리뉴클레오타이드, 예컨대 mRNA 폴리뉴클레오타이드)는 상기 언급된 변형된 핵염기의 적어도 2 (예를 들면, 2, 3, 4 또는 초과)의 조합을 포함한다.
일부 구현예에서, 폴리뉴클레오타이드 (예를 들면, RNA 폴리뉴클레오타이드, 예컨대 mRNA 폴리뉴클레오타이드)내 변형된 핵염기는 하기로 구성되는 군으로부터 선택된다: 슈도우리딘 (ψ), 2-티오우리딘 (s2U), 4'-티오우리딘, 5-메틸시토신, 2-티오-1-메틸-1-데아자-슈도우리딘, 2-티오-1-메틸-슈도우리딘, 2-티오-5-아자-우리딘, 2-티오-디하이드로슈도우리딘, 2-티오-디하이드로우리딘, 2-티오-슈도우리딘, 4-메톡시-2-티오-슈도우리딘, 4-메톡시-슈도우리딘, 4-티오-1-메틸-슈도우리딘, 4-티오-슈도우리딘, 5-아자-우리딘, 디하이드로슈도우리딘, 5-메틸우리딘, 5-메톡시우리딘, 2'-O-메틸 우리딘, 1-메틸-슈도우리딘 (m1ψ), 1-에틸-슈도우리딘 (e1ψ), 5-메톡시-우리딘 (mo5U), 5-메틸-시티딘 (m5C), α-티오-구아노신, α-티오-아데노신, 5-시아노 우리딘, 4'-티오 우리딘 7-데아자-아데닌, 1-메틸-아데노신 (m1A), 2-메틸-아데닌 (m2A), N6-메틸-아데노신 (m6A), 및 2,6-디아미노퓨린, (I), 1-메틸-이노신 (m1I), 와이오신 (imG), 메틸와이오신 (mimG), 7-데아자-구아노신, 7-시아노-7-데아자-구아노신 (preQ0), 7-아미노메틸-7-데아자-구아노신 (preQ1), 7-메틸-구아노신 (m7G), 1-메틸-구아노신 (m1G), 8-옥소-구아노신, 7-메틸-8-옥소-구아노신, 2,8-디메틸아데노신, 2-제라닐티오우리딘, 2-라이시딘, 2-셀레노우리딘, 3-(3-아미노-3-카복시프로필)-5,6-디하이드로우리딘, 3-(3-아미노-3-카복시프로필)슈도우리딘, 3-메틸슈도우리딘, 5-(카복시하이드록시메틸)-2'-O-메틸우리딘 메틸 에스테르, 5-아미노메틸-2-제라닐티오우리딘, 5-아미노메틸-2-셀레노우리딘, 5-아미노메틸우리딘, 5-카바모일하이드록시메틸우리딘, 5-카바모일메틸-2-티오우리딘, 5-카복시메틸-2-티오우리딘, 5-카복시메틸아미노메틸-2-제라닐티오우리딘, 5-카복시메틸아미노메틸-2-셀레노우리딘, 5-시아노메틸우리딘, 5-하이드록시시티딘, 5-메틸아미노메틸-2-제라닐티오우리딘, 7-아미노카복시프로필-데메틸와이오신, 7-아미노카복시프로필와이오신, 7-아미노카복시프로필와이오신 메틸 에스테르, 8-메틸아데노신, N4,N4-디메틸시티딘, N6-포르밀아데노신, N6-하이드록시메틸아데노신, 아그마티딘, 환형 N6-트레오닐카바모일아데노신, 글루타밀-퀘우오신, 메틸화된 하부변형된 하이드록시와이부토신, N4,N4,2'-O-트리메틸시티딘, 제라닐화된 5-메틸아미노메틸-2-티오우리딘, 제라닐화된 5-카복시메틸아미노메틸-2-티오우리딘, Qbase, preQ0base, preQ1base, 및 2 이상의 이들의 조합. 일부 구현예에서, 적어도 1종의 화학적으로 변형된 뉴클레오사이드는 슈도우리딘, 1-메틸-슈도우리딘, 1-에틸-슈도우리딘, 5-메틸시토신, 5-메톡시우리딘, 및 이들의 조합으로 구성되는 군으로부터 선택된다. 일부 구현예에서, 폴리리보뉴클레오타이드 (예를 들면, RNA 폴리리보뉴클레오타이드, 예컨대 mRNA 폴리리보뉴클레오타이드)는 상기 언급된 변형된 핵염기의 적어도 2 (예를 들면, 2, 3, 4 또는 초과)의 조합을 포함한다. 일부 구현예에서, 폴리뉴클레오타이드 (예를 들면, RNA 폴리뉴클레오타이드, 예컨대 mRNA 폴리뉴클레오타이드)는 상기 언급된 변형된 핵염기의 적어도 2 (예를 들면, 2, 3, 4 또는 초과)의 조합을 포함한다.
일부 구현예에서, 폴리뉴클레오타이드 (예를 들면, RNA 폴리뉴클레오타이드, 예컨대 mRNA 폴리뉴클레오타이드)내 변형된 핵염기는 1-메틸-슈도우리딘 (m1ψ), 1-에틸-슈도우리딘 (e1ψ), 5-메톡시-우리딘 (mo5U), 5-메틸-시티딘 (m5C), 슈도우리딘 (ψ), α-티오-구아노신 및 α-티오-아데노신으로 구성되는 군으로부터 선택된다. 일부 구현예에서, 폴리리보뉴클레오타이드는, 비제한적으로 화학적 변형을 포함하는, 상기 언급된 변형된 핵염기의 적어도 2 (예를 들면, 2, 3, 4 또는 초과)의 조합을 포함한다.
일부 구현예에서, 폴리뉴클레오타이드 (예를 들면, RNA 폴리뉴클레오타이드, 예컨대 mRNA 폴리뉴클레오타이드)는 슈도우리딘 (ψ) 및 5-메틸-시티딘 (m5C)를 포함한다. 일부 구현예에서, 폴리리보뉴클레오타이드 (예를 들면, RNA, 예컨대 mRNA)는 1-메틸-슈도우리딘 (m1ψ)를 포함한다. 일부 구현예에서, 폴리리보뉴클레오타이드 (예를 들면, RNA, 예컨대 mRNA)는 1-에틸-슈도우리딘 (e1ψ)를 포함한다. 일부 구현예에서, 폴리리보뉴클레오타이드 (예를 들면, RNA, 예컨대 mRNA)는 1-메틸-슈도우리딘 (m1ψ) 및 5-메틸-시티딘 (m5C)를 포함한다. 일부 구현예에서, 폴리리보뉴클레오타이드 (예를 들면, RNA, 예컨대 mRNA)는 1-에틸-슈도우리딘 (e1ψ) 및 5-메틸-시티딘 (m5C)를 포함한다. 일부 구현예에서, 폴리리보뉴클레오타이드 (예를 들면, RNA, 예컨대 mRNA)는 2-티오우리딘 (s2U)를 포함한다. 일부 구현예에서, 폴리리보뉴클레오타이드 (예를 들면, RNA, 예컨대 mRNA)는 2-티오우리딘 및 5-메틸-시티딘 (m5C)를 포함한다. 일부 구현예에서, 폴리리보뉴클레오타이드 (예를 들면, RNA, 예컨대 mRNA)는 메톡시-우리딘 (mo5U)를 포함한다. 일부 구현예에서, 폴리리보뉴클레오타이드 (예를 들면, RNA, 예컨대 mRNA)는 5-메톡시-우리딘 (mo5U) 및 5-메틸-시티딘 (m5C)를 포함한다. 일부 구현예에서, 폴리리보뉴클레오타이드 (예를 들면, RNA, 예컨대 mRNA)는 2'-O-메틸 우리딘을 포함한다. 일부 구현예에서, 폴리리보뉴클레오타이드 (예를 들면, RNA, 예컨대 mRNA)는 2'-O-메틸 우리딘 및 5-메틸-시티딘 (m5C)를 포함한다. 일부 구현예에서, 폴리리보뉴클레오타이드 (예를 들면, RNA, 예컨대 mRNA)는 N6-메틸-아데노신 (m6A)를 포함한다. 일부 구현예에서, 폴리리보뉴클레오타이드 (예를 들면, RNA, 예컨대 mRNA)는 N6-메틸-아데노신 (m6A) 및 5-메틸-시티딘 (m5C)를 포함한다.
일부 구현예에서, 폴리뉴클레오타이드 (예를 들면, RNA 폴리뉴클레오타이드, 예컨대 mRNA 폴리뉴클레오타이드)는 특정한 변형에 대하여 균일하게 변형된다 (예를 들면, 완전히 변형된다, 전체 서열 전반에 걸쳐 변형된다). 예를 들어, 폴리뉴클레오타이드는 1-메틸-슈도우리딘으로 균일하게 변형될 수 있고, mRNA 서열에서 전체 우리딘 잔기가 1-메틸-슈도우리딘으로 대체되는 것을 의미한다. 유사하게, 폴리뉴클레오타이드는 변형된 잔기 예컨대 상기에 제시된 것들로 대체에 의해 서열에서 존재하는 임의의 유형의 뉴클레오사이드 잔기에 대하여 균일하게 변형될 수 있다.
변형된 시토신을 갖는 예시적인 핵염기 및 뉴클레오사이드는 N4-아세틸-시티딘 (ac4C), 5-메틸-시티딘 (m5C), 5-할로-시티딘 (예를 들면, 5-아이오도-시티딘), 5-하이드록시메틸-시티딘 (hm5C), 1-메틸-슈도이소시티딘, 2-티오-시티딘 (s2C), 및 2-티오-5-메틸-시티딘을 포함한다.
일부 구현예에서, 변형된 핵염기는 변형된 우리딘이다. 변형된 우리딘을 갖는 예시적인 핵염기 및 뉴클레오사이드는 1-메틸-슈도우리딘 (m1ψ), 1-에틸-슈도우리딘 (e1ψ), 5-메톡시 우리딘, 2-티오 우리딘, 5-시아노 우리딘, 2'-O-메틸 우리딘 및 4'-티오 우리딘을 포함한다.
일부 구현예에서, 변형된 핵염기는 변형된 아데닌이다. 변형된 아데닌을 갖는 예시적인 핵염기 및 뉴클레오사이드는 7-데아자-아데닌, 1-메틸-아데노신 (m1A), 2-메틸-아데닌 (m2A), 및 N6-메틸-아데노신 (m6A)를 포함한다.
일부 구현예에서, 변형된 핵염기는 변형된 구아닌이다. 변형된 구아닌을 갖는 예시적인 핵염기 및 뉴클레오사이드는 이노신 (I), 1-메틸-이노신 (m1I), 와이오신 (imG), 메틸와이오신 (mimG), 7-데아자-구아노신, 7-시아노-7-데아자-구아노신 (preQ0), 7-아미노메틸-7-데아자-구아노신 (preQ1), 7-메틸-구아노신 (m7G), 1-메틸-구아노신 (m1G), 8-옥소-구아노신, 및 7-메틸-8-옥소-구아노신을 포함한다.
본 개시내용의 폴리뉴클레오타이드는 분자의 전체 길이를 따라 부분적으로 또는 완전히 변형될 수 있다. 예를 들어, 1종 이상의 또는 전체 또는 주어진 유형의 뉴클레오타이드 (예를 들면, 퓨린 또는 피리미딘, 또는 임의의 1종 이상의 또는 전체의 A, G, U, C)는 본 발명의 폴리뉴클레오타이드에서, 또는 이의 주어진 예정된 서열 영역에서 (예를 들면, 폴리A 꼬리를 포함하는 또는 배제하는 mRNA에서) 균일하게 변형될 수 있다. 일부 구현예에서, 본 개시내용의 폴리뉴클레오타이드에서 (또는 이의 주어진 서열 영역에서) 전체 뉴클레오타이드 X는 변형된 뉴클레오타이드이고, 여기서 X는 뉴클레오타이드 A, G, U, C 중 임의의 하나, 또는 조합 A+G, A+U, A+C, G+U, G+C, U+C, A+G+U, A+G+C, G+U+C 또는 A+G+C 중 임의의 하나일 수 있다.
폴리뉴클레오타이드는 (어느 한쪽 전반적인 뉴클레오타이드 함량에 관하여, 또는 뉴클레오타이드의 1종 이상의 유형, , A, G, U 또는 C의 임의의 1종 이상에 관하여) 약 1% 내지 약 100% 변형된 뉴클레오타이드 또는 임의의 개입 백분율 (예를 들면, 1% 내지 20%, 1% 내지 25%, 1% 내지 50%, 1% 내지 60%, 1% 내지 70%, 1% 내지 80%, 1% 내지 90%, 1% 내지 95%, 10% 내지 20%, 10% 내지 25%, 10% 내지 50%, 10% 내지 60%, 10% 내지 70%, 10% 내지 80%, 10% 내지 90%, 10% 내지 95%, 10% 내지 100%, 20% 내지 25%, 20% 내지 50%, 20% 내지 60%, 20% 내지 70%, 20% 내지 80%, 20% 내지 90%, 20% 내지 95%, 20% 내지 100%, 50% 내지 60%, 50% 내지 70%, 50% 내지 80%, 50% 내지 90%, 50% 내지 95%, 50% 내지 100%, 70% 내지 80%, 70% 내지 90%, 70% 내지 95%, 70% 내지 100%, 80% 내지 90%, 80% 내지 95%, 80% 내지 100%, 90% 내지 95%, 90% 내지 100%, 및 95% 내지 100%)를 함유할 수 있다. 임의의 남아있는 백분율이 미변형된 A, G, U, 또는 C의 존재에 의해 설명되는 것이 이해될 것이다.
폴리뉴클레오타이드는 최소 1% 및 최대 100% 변형된 뉴클레오타이드, 또는 임의의 개입 백분율, 예컨대 적어도 5% 변형된 뉴클레오타이드, 적어도 10% 변형된 뉴클레오타이드, 적어도 25% 변형된 뉴클레오타이드, 적어도 50% 변형된 뉴클레오타이드, 적어도 80% 변형된 뉴클레오타이드, 또는 적어도 90% 변형된 뉴클레오타이드를 함유할 수 있다. 예를 들어, 폴리뉴클레오타이드는 변형된 피리미딘 예컨대 변형된 우라실 또는 시토신을 함유할 수 있다. 일부 구현예에서, 폴리뉴클레오타이드에서 우라실의 적어도 5%, 적어도 10%, 적어도 25%, 적어도 50%, 적어도 80%, 적어도 90% 또는 100%는 변형된 우라실 (예를 들면, 5-치환된 우라실)로 대체된다. 변형된 우라실은 단일 특유의 구조를 갖는 화합물에 의해 대체될 수 있거나, 상이한 구조 (예를 들면, 2, 3, 4 또는 초과 특유의 구조)를 갖는 복수의 화합물에 의해 대체될 수 있다. 일부 구현예에서, 폴리뉴클레오타이드에서 시토신의 적어도 5%, 적어도 10%, 적어도 25%, 적어도 50%, 적어도 80%, 적어도 90% 또는 100%는 변형된 시토신 (예를 들면, 5-치환된 시토신)으로 대체된다. 변형된 시토신은 단일 특유의 구조를 갖는 화합물에 의해 대체될 수 있거나, 상이한 구조 (예를 들면, 2, 3, 4 또는 초과 특유의 구조)를 갖는 복수의 화합물에 의해 대체될 수 있다.
따라서, 일부 구현예에서, RNA 백신은 5'UTR 요소, 선택적으로 코돈 최적화된 열린 해독틀, 및 3'UTR 요소, 폴리(A) 서열 및/또는 폴리아데닐화 신호를 포함하고 여기서 상기 RNA는 화학적으로 변형되지 않는다.
일부 구현예에서, 변형된 핵염기는 변형된 우라실이다. 변형된 우라실을 갖는 예시적인 핵염기 및 뉴클레오사이드는 하기를 포함한다: 슈도우리딘 (ψ), 피리딘-4-온 리보뉴클레오사이드, 5-아자-우리딘, 6-아자-우리딘, 2-티오-5-아자-우리딘, 2-티오-우리딘 (s2U), 4-티오-우리딘 (s4U), 4-티오-슈도우리딘, 2-티오-슈도우리딘, 5-하이드록시-우리딘 (ho5U), 5-아미노알릴-우리딘, 5-할로-우리딘 (예를 들면, 5-아이오도-우리디노르 5-브로모-우리딘), 3-메틸-우리딘 (m3U), 5-메톡시-우리딘 (mo5U), 우리딘 5-옥시아세트산 (cmo5U), 우리딘 5-옥시아세트산 메틸 에스테르 (mcmo5U), 5-카복시메틸-우리딘 (cm5U), 1-카복시메틸-슈도우리딘, 5-카복시하이드록시메틸-우리딘 (chm5U), 5-카복시하이드록시메틸-우리딘 메틸 에스테르 (mchm5U), 5-메톡시카보닐메틸-우리딘 (mcm5U), 5-메톡시카보닐메틸-2-티오-우리딘 (mcm5s2U), 5-아미노메틸-2-티오-우리딘 (nm5s2U), 5-메틸아미노메틸-우리딘 (mnm5U), 5-메틸아미노메틸-2-티오-우리딘 (mnm5s2U), 5-메틸아미노메틸-2-셀레노-우리딘 (mnm5se2U), 5-카바모일메틸-우리딘 (ncm5U), 5-카복시메틸아미노메틸-우리딘 (cmnm5U), 5-카복시메틸아미노메틸-2-티오-우리딘 (cmnm5s2U), 5-프로피닐-우리딘, 1-프로피닐-슈도우리딘, 5-타우리노메틸-우리딘 (τm5U), 1-타우리노메틸-슈도우리딘, 5-타우리노메틸-2-티오-우리딘(τm5s2U), 1-타우리노메틸-4-티오-슈도우리딘, 5-메틸-우리딘 (m5U, 즉, 핵염기 데옥시티민을 가짐), 1-메틸-슈도우리딘 (m1ψ), 1-에틸-슈도우리딘 (e1ψ), 5-메틸-2-티오-우리딘 (m5s2U), 1-메틸-4-티오-슈도우리딘 (m1s4ψ), 4-티오-1-메틸-슈도우리딘, 3-메틸-슈도우리딘 (m3ψ), 2-티오-1-메틸-슈도우리딘, 1-메틸-1-데아자-슈도우리딘, 2-티오-1-메틸-1-데아자-슈도우리딘, 디하이드로우리딘 (D), 디하이드로슈도우리딘, 5,6-디하이드로우리딘, 5-메틸-디하이드로우리딘 (m5D), 2-티오-디하이드로우리딘, 2-티오-디하이드로슈도우리딘, 2-메톡시-우리딘, 2-메톡시-4-티오-우리딘, 4-메톡시-슈도우리딘, 4-메톡시-2-티오-슈도우리딘, N1-메틸-슈도우리딘, 3-(3-아미노-3-카복시프로필)우리딘 (acp3U), 1-메틸-3-(3-아미노-3-카복시프로필)슈도우리딘 (acp3ψ), 5-(이소펜테닐아미노메틸)우리딘 (inm5U), 5-(이소펜테닐아미노메틸)-2-티오-우리딘 (inm5s2U), α-티오-우리딘, 2'-O-메틸-우리딘 (Um), 5,2'-O-디메틸-우리딘 (m5Um), 2'-O-메틸-슈도우리딘 (ψm), 2-티오-2'-O-메틸-우리딘 (s2Um), 5-메톡시카보닐메틸-2'-O-메틸-우리딘 (mcm5Um), 5-카바모일메틸-2'-O-메틸-우리딘 (ncm5Um), 5-카복시메틸아미노메틸-2'-O-메틸-우리딘 (cmnm5Um), 3,2'-O-디메틸-우리딘 (m3Um), 및 5-(이소펜테닐아미노메틸)-2'-O-메틸-우리딘 (inm5Um), 1-티오-우리딘, 데옥시티미딘, 2'-F-아라-우리딘, 2'-F-우리딘, 2'-OH-아라-우리딘, 5-(2-카보메톡시비닐) 우리딘, 및 5-[3-(1-E-프로페닐아미노)]우리딘.
일부 구현예에서, 변형된 핵염기는 변형된 시토신이다. 변형된 시토신을 갖는 예시적인 핵염기 및 뉴클레오사이드는 하기를 포함한다: 5-아자-시티딘, 6-아자-시티딘, 슈도이소시티딘, 3-메틸-시티딘 (m3C), N4-아세틸-시티딘 (ac4C), 5-포르밀-시티딘 (f5C), N4-메틸-시티딘 (m4C), 5-메틸-시티딘 (m5C), 5-할로-시티딘 (예를 들면, 5-아이오도-시티딘), 5-하이드록시메틸-시티딘 (hm5C), 1-메틸-슈도이소시티딘, 피롤로-시티딘, 피롤로-슈도이소시티딘, 2-티오-시티딘 (s2C), 2-티오-5-메틸-시티딘, 4-티오-슈도이소시티딘, 4-티오-1-메틸-슈도이소시티딘, 4-티오-1-메틸-1-데아자-슈도이소시티딘, 1-메틸-1-데아자-슈도이소시티딘, 제불라린, 5-아자-제불라린, 5-메틸-제불라린, 5-아자-2-티오-제불라린, 2-티오-제불라린, 2-메톡시-시티딘, 2-메톡시-5-메틸-시티딘, 4-메톡시-슈도이소시티딘, 4-메톡시-1-메틸-슈도이소시티딘, 라이시딘 (k2C), α-티오-시티딘, 2'-O-메틸-시티딘 (Cm), 5,2'-O-디메틸-시티딘 (m5Cm), N4-아세틸-2'-O-메틸-시티딘 (ac4Cm), N4,2'-O-디메틸-시티딘 (m4Cm), 5-포르밀-2'-O-메틸-시티딘 (f5Cm), N4,N4,2'-O-트리메틸-시티딘 (m4 2Cm), 1-티오-시티딘, 2'-F-아라-시티딘, 2'-F-시티딘, 및 2'-OH-아라-시티딘.
일부 구현예에서, 변형된 핵염기는 변형된 아데닌이다. 변형된 아데닌을 갖는 예시적인 핵염기 및 뉴클레오사이드는 하기를 포함한다: 2-아미노-퓨린, 2,6-디아미노퓨린, 2-아미노-6-할로-퓨린 (예를 들면, 2-아미노-6-클로로-퓨린), 6-할로-퓨린 (예를 들면, 6-클로로-퓨린), 2-아미노-6-메틸-퓨린, 8-아지도-아데노신, 7-데아자-아데닌, 7-데아자-8-아자-아데닌, 7-데아자-2-아미노-퓨린, 7-데아자-8-아자-2-아미노-퓨린, 7-데아자-2,6-디아미노퓨린, 7-데아자-8-아자-2,6-디아미노퓨린, 1-메틸-아데노신 (m1A), 2-메틸-아데닌 (m2A), N6-메틸-아데노신 (m6A), 2-메틸티오-N6-메틸-아데노신 (ms2m6A), N6-이소펜테닐-아데노신 (i6A), 2-메틸티오-N6-이소펜테닐-아데노신 (ms2i6A), N6-(시스-하이드록시이소펜테닐)아데노신 (io6A), 2-메틸티오-N6-(시스-하이드록시이소펜테닐)아데노신 (ms2io6A), N6-글리시닐카바모일-아데노신 (g6A), N6-트레오닐카바모일-아데노신 (t6A), N6-메틸-N6-트레오닐카바모일-아데노신 (m6t6A), 2-메틸티오-N6-트레오닐카바모일-아데노신 (ms2g6A), N6,N6-디메틸-아데노신 (m6 2A), N6-하이드록시노르발릴카바모일-아데노신 (hn6A), 2-메틸티오-N6-하이드록시노르발릴카바모일-아데노신 (ms2hn6A), N6-아세틸-아데노신 (ac6A), 7-메틸-아데닌, 2-메틸티오-아데닌, 2-메톡시-아데닌, α-티오-아데노신, 2'-O-메틸-아데노신 (Am), N6,2'-O-디메틸-아데노신 (m6Am), N6,N6,2'-O-트리메틸-아데노신 (m6 2Am), 1,2'-O-디메틸-아데노신 (m1Am), 2'-O-리보실아데노신 (포스페이트) (Ar(p)), 2-아미노-N6-메틸-퓨린, 1-티오-아데노신, 8-아지도-아데노신, 2'-F-아라-아데노신, 2'-F-아데노신, 2'-OH-아라-아데노신, 및 N6-(19-아미노-펜타옥사노나데실)-아데노신.
일부 구현예에서, 변형된 핵염기는 변형된 구아닌이다. 변형된 구아닌을 갖는 예시적인 핵염기 및 뉴클레오사이드는 하기를 포함한다: 이노신 (I), 1-메틸-이노신 (m1I), 와이오신 (imG), 메틸와이오신 (mimG), 4-데메틸-와이오신 (imG-14), 이소와이오신 (imG2), 와이부토신 (yW), 퍼옥시와이부토신 (o2yW), 하이드록시와이부토신 (OhyW), 하부변형된 하이드록시와이부토신 (OhyW*), 7-데아자-구아노신, 퀘우오신 (Q), 에폭시퀘우오신 (oQ), 갈락토실-퀘우오신 (galQ), 만노실-퀘우오신 (manQ), 7-시아노-7-데아자-구아노신 (preQ0), 7-아미노메틸-7-데아자-구아노신 (preQ1), 아르차에오신 (G+), 7-데아자-8-아자-구아노신, 6-티오-구아노신, 6-티오-7-데아자-구아노신, 6-티오-7-데아자-8-아자-구아노신, 7-메틸-구아노신 (m7G), 6-티오-7-메틸-구아노신, 7-메틸-이노신, 6-메톡시-구아노신, 1-메틸-구아노신 (m1G), N2-메틸-구아노신 (m2G), N2,N2-디메틸-구아노신 (m2 2G), N2,7-디메틸-구아노신 (m2,7G), N2, N2,7-디메틸-구아노신 (m2,2,7G), 8-옥소-구아노신, 7-메틸-8-옥소-구아노신, 1-메틸-6-티오-구아노신, N2-메틸-6-티오-구아노신, N2,N2-디메틸-6-티오-구아노신, α-티오-구아노신, 2'-O-메틸-구아노신 (Gm), N2-메틸-2'-O-메틸-구아노신 (m2Gm), N2,N2-디메틸-2'-O-메틸-구아노신 (m2 2Gm), 1-메틸-2'-O-메틸-구아노신 (m1Gm), N2,7-디메틸-2'-O-메틸-구아노신 (m2, 7Gm), 2'-O-메틸-이노신 (Im), 1,2'-O-디메틸-이노신 (m1Im), 2'-O-리보실구아노신 (포스페이트) (Gr(p)), 1-티오-구아노신, O6-메틸-구아노신, 2'-F-아라-구아노신, 및 2'-F-구아노신.
RNA (예를 들면, mRNA)의 시험관내 전사
본 개시내용의 VZV 백신은 적어도 1종의 RNA 폴리뉴클레오타이드, 예컨대 mRNA (예를 들면, 변형된 mRNA)를 포함한다. mRNA는, 예를 들어, "시험관내 전사 템플레이트"로서 지칭된, 템플레이트 DNA로부터 시험관내 전사된다. 일부 구현예에서, 적어도 1종의 RNA 폴리뉴클레오타이드는 적어도 1종의 화학적 변형을 갖는다. 적어도 1종의 화학적 변형은, 명확히 비제한적으로, 본 명세서에서 기재된 임의의 변형을 포함할 수 있다.
RNA의 시험관내 전사는 당해 분야에서 공지되고, 참조로 본 명세서에서 그 전문이 편입되는, 국제공개 WO/2014/152027에서 기재된다. 예를 들어, 일부 구현예에서, RNA 전사체는 RNA 전사체를 생성하기 위해 시험관내 전사 반응에서 비-증폭된, 선형화된 DNA 템플레이트를 이용하여 생성된다. 일부 구현예에서 RNA 전사체는 효소 캡핑을 통해 캡핑된다. 일부 구현예에서 RNA 전사체는 크로마토그래피 방법, 예를 들면, 올리고 dT 기질의 이용을 통해 정제된다. 일부 구현예는 DNase의 이용을 배제한다. 일부 구현예에서 RNA 전사체는 요망된 화학의 T7 파아지 RNA 폴리머라제 및 뉴클레오타이드 트리포스페이트를 사용하는 효소 시험관내 전사 반응을 통해 관심 유전자에 대하여 비-증폭된, 선형 DNA 템플레이트 코딩으로부터 합성된다. 임의의 수의 RNA 폴리머라제 또는 변이체는 본 발명의 방법에서 사용될 수 있다. 폴리머라제는, 비제한적으로, 파아지 RNA 폴리머라제, 예를 들면, T7 RNA 폴리머라제, T3 RNA 폴리머라제, SP6 RNA 폴리머라제, 및/또는 돌연변이체 폴리머라제 예컨대, 비제한적으로, 화학적으로 변형된 핵산 및/또는 뉴클레오타이드를 포함하는, 변형된 핵산 및/또는 변형된 뉴클레오타이드를 편입시킬 수 있는 폴리머라제로부터 선택될 수 있다.
일부 구현예에서 비-증폭된, 선형화된 플라스미드 DNA는 시험관내 전사용 템플레이트 DNA로서 이용된다. 일부 구현예에서, 템플레이트 DNA는 단리된 DNA이다. 일부 구현예에서, 템플레이트 DNA는 cDNA이다. 일부 구현예에서, cDNA는 RNA 폴리뉴클레오타이드, 예를 들어, 비제한적으로 VZV RNA, 예를 들면 VZV mRNA의 역전사에 의해 형성된다. 일부 구현예에서, 세포, 예를 들면, 박테리아 세포, 예를 들면, E. 콜리, 예를 들면, DH-1 세포는 플라스미드 DNA 템플레이트로 형질감염된다. 일부 구현예에서, 형질감염된 세포는 그 다음 단리 및 정제되는 플라스미드 DNA를 복제하기 위해 배양된다. 일부 구현예에서, DNA 템플레이트는 관심 유전자에 작동가능하게 연결된 및 5' 위치한 RNA 폴리머라제 프로모터, 예를 들면, T7 프로모터를 포함한다.
일부 구현예에서, 시험관내 전사 템플레이트는 5' 미번역된 (UTR) 영역을 인코딩하고, 열린 해독틀을 함유하고, 3' UTR 및 폴리A 꼬리를 인코딩한다. 시험관내 전사 템플레이트의 특정한 핵산 서열 조성 및 길이는 템플레이트에 의해 인코딩된 mRNA에 의존할 것이다.
"5' 미번역된 영역" (UTR)은 폴리펩타이드를 인코딩하지 않는 개시 코돈 (, 리보솜에 의해 번역된 mRNA 전사체의 제1 코돈)으로부터 직접적으로 업스트림 (, 5')인 mRNA의 영역을 지칭한다.
"3' 미번역된 영역" (UTR)은 폴리펩타이드를 인코딩하지 않는 종결 코돈 (, 번역의 종료를 신호하는 mRNA 전사체의 코돈)으로부터 직접적으로 다운스트림 (, 3')인 mRNA의 영역을 지칭한다.
"열린 해독틀"은 개시 코돈 (예를 들면, 메티오닌 (ATG))로 출발하고, 종결 코돈 (예를 들면, TAA, TAG 또는 TGA)로 종료하는 DNA의 연속 스트레치이고 폴리펩타이드를 인코딩한다.
"폴리A 꼬리"는 다중, 연속적인 아데노신 모노포스페이트를 함유하는 3' UTR로부터, 다운스트림, 예를 들면, 직접적으로 다운스트림 (, 3')인 mRNA의 영역이다. 폴리A 꼬리는 10 내지 300 아데노신 모노포스페이트를 함유할 수 있다. 예를 들어, 폴리A 꼬리는 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 110, 120, 130, 140, 150, 160, 170, 180, 190, 200, 210, 220, 230, 240, 250, 260, 270, 280, 290 또는 300 아데노신 모노포스페이트를 함유할 수 있다. 일부 구현예에서, 폴리A 꼬리는 50 내지 250 아데노신 모노포스페이트를 함유한다. 관련된 생물학적 세팅에서 (예를 들면, 세포에서, 생체내) 폴리(A) 꼬리는, 예를 들면, 세포질에서 효소 분해로부터 mRNA를 보호하는 기능을 하고, 전사 종료, 및/또는 핵으로부터 mRNA의 수출 및 번역을 돕는다.
일부 구현예에서, 폴리뉴클레오타이드는 200 내지 3,000 뉴클레오타이드를 포함한다. 예를 들어, 폴리뉴클레오타이드는 200 내지 500, 200 내지 1000, 200 내지 1500, 200 내지 3000, 500 내지 1000, 500 내지 1500, 500 내지 2000, 500 내지 3000, 1000 내지 1500, 1000 내지 2000, 1000 내지 3000, 1500 내지 3000, 또는 2000 내지 3000 뉴클레오타이드)를 포함할 수 있다.
치료 방법
인간 및 다른 포유동물에서 VZV의 예방 및/또는 치료용 조성물 (예를 들면, 약제학적 조성물), 방법, 키트 및 시약이 본 명세서에서 제공된다. VZV RNA 백신은 치료적 또는 예방적 제제로서 사용될 수 있다. 이들은 감염성 질환을 예방 및/또는 치료하기 위해 의약에서 사용될 수 있다. 예시적인 측면에서, 본 발명의 VZV RNA 백신은 수두 및 대상포진으로부터 예방적 보호를 제공하는데 사용된다. 수두는 VZV에 의해 야기된 급성 감염성 질환이다. 수두(chickenpox) (수두)를 초래하는 1차 수두대상포진 바이러스 감염은, 바이러스성 또는 2차 세균성 폐렴을 포함하는, 합병증을 초래할 수 있다. 수두의 임상 증상이 해결된 경우조차, VZV는 삼차 및 배근 신경절에서 감염된 사람의 신경계에서 휴면기로 남아있고, 대상포진(shingles) 또는 대상포진으로서 공지된 질환 (발진)을 생산하는 경우 피부에 역으로 감각 신경절부터 이동하여, 만년에 재활성화할 수 있고, 또한 무균수막염 내지 뇌염 범위의 수많은 신경 병태를 야기할 수 있다. 본 개시내용의 VZV 백신은 양쪽 1차 감염 (수두) 및 또한 재-활성화된 바이러스성 감염 (대상포진(shingles) 또는 대상포진)을 예방 및/또는 치료하는데 사용될 수 있고 대상포진의 중증도 및/또는 지속기간을 예방하기 위해 또는 감소시키기 위해 면역저하된 및 나이든 환자의 예방 및/또는 치료에 특히 유용할 수 있다.
VZV로부터 예방적 보호는 본 개시내용의 VZV RNA 백신의 투여 이후 달성될 수 있다. 백신은 2회, 3회, 4회 또는 초과 투여될 수 있지만 (선택적으로 단일 부스터에 이어서) 1회 백신을 투여하는 것이 아마 충분하다. 덜 바람직하여도, 치료 반응을 달성하기 위해 감염된 개체에 백신을 투여하는 것이 가능하다. 투약은 따라서 조정되는 것이 필요할 수 있다.
VZV에 대한 대상체에서 면역 반응의 유도 방법은 본 개시내용의 측면에서 제공된다. 상기 방법은 적어도 1종의 VZV 항원성 폴리펩타이드 또는 이의 면역원성 단편을 인코딩하는 열린 해독틀을 갖는 적어도 1종의 RNA (예를 들면, mRNA) 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 VZV RNA 백신을 대상체에 투여하여, 이로써 VZV 항원성 폴리펩타이드 또는 이의 면역원성 단편에 특이적인 면역 반응을 대상체에서 유도하는 것을 포함하고, 여기서 대상체에서 항-항원성 폴리펩타이드 항체 역가는 VZV에 대한 예방적으로 유효 용량의 전통 백신으로 백신접종된 대상체에서 항-항원성 폴리펩타이드 항체 역가에 비해 백신접종 이후 증가된다. "항-항원성 폴리펩타이드 항체"는 항원성 폴리펩타이드에 특이적으로 결합하는 혈청 항체이다.
예방적으로 유효 용량은 임상적으로 허용가능한 수준에서 바이러스로 감염을 예방하는 치료적으로 유효 용량이다. 일부 구현예에서, 치료적으로 유효 용량은 백신용 포장 삽입물에서 열거된 용량이다. 전통 백신은, 본 명세서에서 사용된 바와 같이, 본 개시내용의 mRNA 백신 이외 백신을 지칭한다. 예를 들면, 전통 백신은, 비제한적으로 살아있는 미생물 백신, 죽은 미생물 백신, 서브유닛 백신, 단백질 항원 백신, DNA 백신, VLP 백신, 을 포함한다. 예시적인 구현예에서, 전통 백신은 규제 당국의 승인을 달성한 백신이고/이거나 국가 약물 규제기관, 예를 들어 미국에서 식품의약국 (FDA) 또는 유럽 의약청 (EMA)에 의해 등록된다.
VZV에 대한 대상체에서 면역 반응의 유도 방법은 본 발명의 측면에서 제공된다. 상기 방법은 적어도 1종의 VZV 항원성 폴리펩타이드 또는 이의 면역원성 단편을 인코딩하는 열린 해독틀을 갖는 적어도 1종의 RNA 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 VZV RNA 백신을 대상체에게 투여하여, 이로써 VZV 항원성 폴리펩타이드 또는 이의 면역원성 단편에 특이적인 면역 반응을 대상체에서 유도하는 것을 포함하고, 여기서 대상체에서 항-항원성 폴리펩타이드 항체 역가는 VZV에 대한 예방적으로 유효 용량의 전통 백신으로 백신접종된 대상체에서 항-항원성 폴리펩타이드 항체 역가에 비해 백신접종 이후 증가된다. "항-항원성 폴리펩타이드 항체"는 항원성 폴리펩타이드에 특이적으로 결합하는 혈청 항체이다.
예방적으로 유효 용량은 은 임상적으로 허용가능한 수준에서 바이러스로 감염을 예방하는 치료적으로 유효 용량이다. 일부 구현예에서 치료적으로 유효 용량은 백신용 포장 삽입물에서 열거된 용량이다. 전통 백신은, 본 명세서에서 사용된 바와 같이, 본 발명의 mRNA 백신 이외 백신을 지칭한다. 예를 들면, 전통 백신은 비제한적으로 살아있는 미생물 백신, 죽은 미생물 백신, 서브유닛 백신, 단백질 항원 백신, DNA 백신, 을 포함한다.
일부 구현예에서 대상체에서 항-항원성 폴리펩타이드 항체 역가는 VZV에 대한 예방적으로 유효 용량의 전통 백신으로 백신접종된 대상체에서 항-항원성 폴리펩타이드 항체 역가에 비해 백신접종 이후 1 log 내지 10 log 증가된다.
일부 구현예에서 대상체에서 항-항원성 폴리펩타이드 항체 역가는 VZV에 대한 예방적으로 유효 용량의 전통 백신으로 백신접종된 대상체에서 항-항원성 폴리펩타이드 항체 역가에 비해 백신접종 이후 1 log 증가된다.
일부 구현예에서 대상체에서 항-항원성 폴리펩타이드 항체 역가는 VZV에 대한 예방적으로 유효 용량의 전통 백신으로 백신접종된 대상체에서 항-항원성 폴리펩타이드 항체 역가에 비해 백신접종 이후 2 log 증가된다.
일부 구현예에서 대상체에서 항-항원성 폴리펩타이드 항체 역가는 VZV에 대한 예방적으로 유효 용량의 전통 백신으로 백신접종된 대상체에서 항-항원성 폴리펩타이드 항체 역가에 비해 백신접종 이후 3 log 증가된다.
일부 구현예에서 대상체에서 항-항원성 폴리펩타이드 항체 역가는 VZV에 대한 예방적으로 유효 용량의 전통 백신으로 백신접종된 대상체에서 항-항원성 폴리펩타이드 항체 역가에 비해 백신접종 이후 5 log 증가된다.
일부 구현예에서 대상체에서 항-항원성 폴리펩타이드 항체 역가는 VZV에 대한 예방적으로 유효 용량의 전통 백신으로 백신접종된 대상체에서 항-항원성 폴리펩타이드 항체 역가에 비해 백신접종 이후 10 log 증가된다.
VZV에 대한 대상체에서 면역 반응의 유도 방법은 본 발명의 다른 측면에서 제공된다. 상기 방법은 적어도 1종의 VZV 항원성 폴리펩타이드 또는 이의 면역원성 단편을 인코딩하는 열린 해독틀을 갖는 적어도 1종의 RNA 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 VZV RNA 백신을 대상체에 투여하여, 이로써 VZV 항원성 폴리펩타이드 또는 이의 면역원성 단편에 특이적인 면역 반응을 대상체에서 유도하는 것을 포함하고, 여기서 대상체에서 상기 면역 반응은 RNA 백신에 비해 2 배 내지 100 배 복용량 수준에서 VZV에 대한 전통 백신으로 백신접종된 대상체에서 면역 반응에 맞먹는다.
일부 구현예에서 대상체에서 면역 반응은 VZV RNA 백신에 비해 2배 복용량 수준에서 전통 백신으로 백신접종된 대상체에서 면역 반응에 맞먹는다.
일부 구현예에서 대상체에서 면역 반응은 VZV RNA 백신에 비해 3배 복용량 수준에서 전통 백신으로 백신접종된 대상체에서 면역 반응에 맞먹는다.
일부 구현예에서 대상체에서 면역 반응은 VZV RNA 백신에 비해 4배 복용량 수준에서 전통 백신으로 백신접종된 대상체에서 면역 반응에 맞먹는다.
일부 구현예에서 대상체에서 면역 반응은 VZV RNA 백신에 비해 5배 복용량 수준에서 전통 백신으로 백신접종된 대상체에서 면역 반응에 맞먹는다.
일부 구현예에서 대상체에서 면역 반응은 VZV RNA 백신에 비해 10배 복용량 수준에서 전통 백신으로 백신접종된 대상체에서 면역 반응에 맞먹는다.
일부 구현예에서 대상체에서 면역 반응은 VZV RNA 백신에 비해 50배 복용량 수준에서 전통 백신으로 백신접종된 대상체에서 면역 반응에 맞먹는다.
일부 구현예에서 대상체에서 면역 반응은 VZV RNA 백신에 비해 100배 복용량 수준에서 전통 백신으로 백신접종된 대상체에서 면역 반응에 맞먹는다.
일부 구현예에서 대상체에서 면역 반응은 VZV RNA 백신에 비해 10 배 내지 1000 배 복용량 수준에서 전통 백신으로 백신접종된 대상체에서 면역 반응에 맞먹는다.
일부 구현예에서 대상체에서 면역 반응은 VZV RNA 백신에 비해 100 배 내지 1000 배 복용량 수준에서 전통 백신으로 백신접종된 대상체에서 면역 반응에 맞먹는다.
다른 구현예에서 면역 반응은 대상체에서[단백질] 항체 역가 결정에 의해 평가된다.
다른 측면에서 본 발명은 적어도 1종의 VZV 항원성 폴리펩타이드 또는 이의 면역원성 단편을 인코딩하는 열린 해독틀을 갖는 적어도 1종의 RNA 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 VZV RNA 백신을 대상체에 투여하여, 이로써 VZV 항원성 폴리펩타이드 또는 이의 면역원성 단편에 특이적인 면역 반응을 대상체에서 유도함으로써 VZV에 대한 대상체에서 면역 반응의 유도 방법이고, 여기서 대상체에서 상기 면역 반응은 VZV에 대한 예방적으로 유효 용량의 전통 백신으로 백신접종된 대상체에서 유도된 면역 반응에 비해 2 일 내지 10 주 더 일찍 유도된다. 일부 구현예에서 대상체에서 면역 반응은 RNA 백신에 비해 2 배 내지 100 배 복용량 수준에서 예방적으로 유효 용량의 전통 백신으로 백신접종된 대상체에서 유도된다.
일부 구현예에서 대상체에서 면역 반응은 예방적으로 유효 용량의 전통 백신으로 백신접종된 대상체에서 유도된 면역 반응에 비해 2 일 더 일찍 유도된다.
일부 구현예에서 대상체에서 면역 반응은 예방적으로 유효 용량의 전통 백신으로 백신접종된 대상체에서 유도된 면역 반응에 비해 3 일 더 일찍 유도된다.
일부 구현예에서 대상체에서 면역 반응은 예방적으로 유효 용량의 전통 백신으로 백신접종된 대상체에서 유도된 면역 반응에 비해 1 주 더 일찍 유도된다.
일부 구현예에서 대상체에서 면역 반응은 예방적으로 유효 용량의 전통 백신으로 백신접종된 대상체에서 유도된 면역 반응에 비해 2 주 더 일찍 유도된다.
일부 구현예에서 대상체에서 면역 반응은 예방적으로 유효 용량의 전통 백신으로 백신접종된 대상체에서 유도된 면역 반응에 비해 3 주 더 일찍 유도된다.
일부 구현예에서 대상체에서 면역 반응은 예방적으로 유효 용량의 전통 백신으로 백신접종된 대상체에서 유도된 면역 반응에 비해 5 주 더 일찍 유도된다.
일부 구현예에서 대상체에서 면역 반응은 예방적으로 유효 용량의 전통 백신으로 백신접종된 대상체에서 유도된 면역 반응에 비해 10 주 더 일찍 유도된다.
제1 항원성 폴리펩타이드를 인코딩하는 열린 해독틀을 갖는 VZV RNA 백신을 대상체에 투여함으로써 VZV에 대한 대상체에서 면역 반응의 v 유도 방법, 여기서 상기 RNA 폴리뉴클레오타이드는 안정화 요소를 포함하지 않고, 여기서 아쥬반트는 백신과 공제형화 또는 공-투여되지 않는다.
광범위 스펙트럼 VZV 백신
사람이 VZV의 1 초과 균주로 감염에 대하여 위험에 처한 상황이 있을 수 있다고 예상된다. RNA (예를 들면, mRNA) 치료 백신은, 비제한적으로, 제조 속도, 감지된 지리학적 위협을 수용하기 위해 백신을 빠르게 맞춤화하는 능력, 및 기타 동종을 포함하는 수많은 인자로 인해 조합 백신접종 접근법을 특히 잘 받아들인다. 또한, 백신이 항원성 단백질을 생산하기 위해 인간 신체를 사용하기 때문에, 백신은 인간 대상체에서 적절한 폴딩, 표면 발현, 항원 제시, 을 허용하는, 더 큰, 더 복잡한 항원성 단백질의 생산을 잘 받아들인다. VZV의 1 초과 균주로부터 보호하기 위해, 제1 VZV의 적어도 1종의 항원성 폴리펩타이드 단백질 (또는 이의 항원성 부분)을 인코딩하는 RNA를 포함하는 및 추가로 제2 VZV의 적어도 1종의 항원성 폴리펩타이드 단백질 (또는 이의 항원성 부분)을 인코딩하는 RNA를 포함하는 조합 백신은 투여될 수 있다. RNAs (mRNAs)는, 예를 들어, 단일 지질 나노입자 (LNP)에서 공-제형화될 수 있거나 공-투여로 정해진 별도의 LNPs에서 제형화될 수 있다.
플라젤린 아쥬반트
플라젤린은 박테리아 운동과 관련된 편모를 형성하기 위해 중합하는 대략 500 아미노산 모노머성 단백질이다. 플라젤린은 다양한 편모 박테리아 (살모넬라 타이피뮤리움 예를 들어) 뿐만 아니라 비-편모 박테리아 (예컨대 에스케리치아 콜라이)에 의해 발현된다. 타고난 면역계의 세포 (수지상 세포, 대식세포, )에 의한 플라젤린의 감지는 Toll-유사 수용체 5 (TLR5)에 의해 뿐만 아니라 Nod-유사 수용체 (NLRs) Ipaf 및 Naip5에 의해 매개된다. TLRs 및 NLRs는 타고난 면역 반응 및 적응성 면역 반응의 활성화에서 역할을 하는 것으로서 확인되어 왔다. 이와 같이, 플라젤린은 백신에서 아쥬반트 효과를 제공한다.
공지된 플라젤린 폴리펩타이드를 인코딩하는 뉴클레오타이드 및 아미노산 서열은 NCBI 유전자은행 데이터베이스에서 공공연하게 이용가능하다. 그 중에서도, S. 타이피뮤리움 , H. 파일로리 , V. 콜레라, S. 마르세센스, S. 플렉스네리 , T. 팔리둠 , L. 뉴모필라 , B. 부르그도르페레이, C. 디피실레 , R. 멜리로티 , A. 투메파시엔스, R. 루피니, B. 클라리제이아에 , P. 미라빌리스, B. 서브틸루스, L. 모노사이토게네스 , P. 에어루기노사, 및 E. 콜리로부터 플라젤린 서열은 공지되어 있다.
플라젤린 폴리펩타이드는, 본 명세서에서 사용된 바와 같이, 전장 플라젤린 단백질, 이의 면역원성 단편, 및 플라젤린 단백질 또는 이의 면역원성 단편에 적어도 50% 서열 동일하다를 갖는 펩타이드를 지칭한다. 예시적인 플라젤린 단백질은 살모넬타이피 (UniPro 가입 번호: Q56086), 살모넬라 타이피뮤리움 (A0A0C9DG09), 살모넬라 엔테리티디스 (A0A0C9BAB7), 및 살모넬라 콜레라에수이스 (Q6V2X8), 및 서열번호: 115-117로부터 플라젤린을 포함한다. 일부 구현예에서, 플라젤린 폴리펩타이드는 플라젤린 단백질 또는 이의 면역원성 단편에 적어도 60%, 70%, 75%, 80%, 90%, 95%, 97%, 98%, 또는 99% 서열 동일하다를 갖는다.
일부 구현예에서, 플라젤린 폴리펩타이드는 면역원성 단편이다. 면역원성 단편은 면역 반응을 촉발시키는 플라젤린 단백질의 한 부분이다. 일부 구현예에서, 면역 반응은 TLR5 면역 반응이다. 면역원성 단편의 예는 힌지 영역의 전부 또는 한 부분이 결실되었거나 다른 아미노산으로 대체된 플라젤린 단백질이다. 예를 들어, 항원성 폴리펩타이드는 힌지 영역에서 삽입될 수 있다. 힌지 영역은 플라젤린의 초가변성 영역이다. 플라젤린의 힌지 영역은 또한 "D3 도메인 또는 영역, "프로펠러 도메인 또는 영역", "초가변성 도메인 또는 영역" 및 "가변성 도메인 또는 영역"으로서 지칭된다. "힌지 영역의 적어도 한 부분"은, 본 명세서에서 사용된 바와 같이, 플라젤린의 힌지 영역의 임의의 일부, 또는 힌지 영역의 전체를 지칭한다. 다른 구현예에서 플라젤린의 면역원성 단편은 플라젤린의 20, 25, 30, 35, 또는 40 아미노산 C-말단 단편이다.
플라젤린 모노머는 도메인 D0 내지 D3에 의해 형성된다. 줄기를 형성하는, D0 및 D1은 탠덤 롱 알파 나선으로 구성되고 상이한 박테리아 중에서 고도로 보존된다. D1 도메인은 TLR5 활성화에 유용한 아미노산의 몇 개의 스트레치를 포함한다. 전체 D1 도메인 또는 도메인 내에 활성 영역의 1종 이상은 플라젤린의 면역원성 단편이다. D1 도메인 내에 면역원성 영역의 예는 잔기 88-114 및 잔기 411-431 (살모넬라 타이피뮤리움 FliC 플라젤린내를 포함한다. 88-100 영역에서 13 아미노산 내에, 적어도 6 치환은 TLR5 활성화를 여전히 보존하는 살모넬라 플라젤린과 다른 플라젤린 단백질 사이 허용된다. 따라서, 플라젤린의 면역원성 단편은 FliC (LQRVRELAVQSAN; 서열번호: 118)의 88-100내 살모넬라 서열에 53% 이상 동일한 13 아미노산 모티프를 함유하는 및 TLR5를 활성화시키는 플라젤린 유사 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, RNA (예를 들면, mRNA) 백신은 플라젤린 및 1종 이상의 항원성 폴리펩타이드의 융합 단백질을 인코딩하는 RNA를 포함한다. "융합 단백질"은 본 명세서에서 사용된 바와 같이 작제물의 2 성분의 연결을 지칭한다. 일부 구현예에서, 항원성 폴리펩타이드의 카복시-말단은 플라젤린 폴리펩타이드의 아미노 말단에 융합 또는 연결된다. 다른 구현예에서, 항원성 폴리펩타이드의 아미노-말단은 플라젤린 폴리펩타이드의 카복시-말단에 융합 또는 연결된다. 융합 단백질은, 예를 들어, 1, 2, 3, 4, 5, 6 또는 초과 항원성 폴리펩타이드에 연결된 1, 2, 3, 4, 5, 6 또는 초과 플라젤린 폴리펩타이드를 포함할 수 있다. 2 이상의 플라젤린 폴리펩타이드 및/또는 2 이상의 항원성 폴리펩타이드가 연결되는 경우 상기 작제물은 "다량체"로서 지칭될 수 있다.
융합 단백질의 각각의 성분은 서로 직접적으로 연결될 수 있거나 이들은 링커를 통해 연결될 수 있다. 예를 들면, 링커는 아미노산 링커일 수 있다. 융합 단백질의 성분을 연결하기 위해 RNA (예를 들면, mRNA) 백신에 의해 인코딩된 아미노산 링커는, 예를 들면, 라이신 잔기, 글루탐산 잔기, 세린 잔기 및 아르기닌 잔기로 구성되는 군으로부터 선택되는 적어도 1종의 구성원을 포함할 수 있다. 일부 구현예에서 링커는 1-30, 1-25, 1-25, 5-10, 5, 15, 또는 5-20 아미노산 길이이다.
다른 구현예에서 RNA (예를 들면, mRNA) 백신은 적어도 2개의 별도의 RNA 폴리뉴클레오타이드, 1종 이상의 항원성 폴리펩타이드를 인코딩하는 것 및 플라젤린 폴리펩타이드를 인코딩하는 다른 것을 포함한다. 적어도 2 RNA 폴리뉴클레오타이드는 캐리어 예컨대 지질 나노입자에서 공-제형화될 수 있다.
치료적 및 예방적 조성물
예를 들어, 인간 및 다른 포유동물에서 VZV의 예방, 치료 또는 진단용 조성물 (예를 들면, 약제학적 조성물), 방법, 키트 및 시약이 본 명세서에서 제공된다. VZV RNA (예를 들면, mRNA) 백신은 치료적 또는 예방적 제제로서 사용될 수 있다. 이들은 감염성 질환을 예방 및/또는 치료하기 위해 의약에서 사용될 수 있다. 일부 구현예에서, 본 발명의 VZV 백신은, 예를 들어, 그 다음 대상체 속에 주입되는 (재-주입되는), 생체외 말초 혈액 단핵 세포 (PBMCs)를 활성화시키는 면역 효과기 세포의 촉발에서 사용을 위하여 예상될 수 있다.
예시적인 구현예에서, 본 명세서에서 기재된 바와 같이 RNA 폴리뉴클레오타이드를 함유하는 VZV 백신은 대상체 (예를 들면, 포유동물 대상체, 예컨대 인간 대상체)에 투여될 수 있고, RNA 폴리뉴클레오타이드는 생체내 번역되어 항원성 폴리펩타이드를 생산한다.
VZV RNA 백신은 세포, 조직 또는 유기체에서 폴리펩타이드 (예를 들면, 항원 또는 면역원)의 번역을 위하여 유도될 수 있다. 예시적인 구현예에서, 상기 번역이 생체외, 배양액내 또는 시험관내 발생하는 구현예가 예상될 수 있어도, 상기 번역은 생체내 발생한다. 예시적인 구현예에서, 세포, 조직 또는 유기체는 항원성 폴리펩타이드를 인코딩하는 적어도 1종의 번역가능한 영역을 갖는 폴리뉴클레오타이드를 함유하는 VZV RNA 백신을 함유하는 유효량의 조성물과 접촉된다.
VZV RNA 백신의 "유효량"은, 적어도 부분적으로, 상기 표적 조직, 표적 세포 유형, 투여 수단, VZV RNA 백신의 폴리뉴클레오타이드 (예를 들면, 변형된 뉴클레오사이드의 크기, 및 정도) 및 다른 성분의 물리적 특징, 및 다른 결정인자에 기반하여 제공된다. 일반적으로, 유효량의 VZV RNA 백신 조성물은 세포에서 항원 생산의 기능으로서 유도된 또는 부스팅된 면역 반응을 제공한다. 일반적으로, 적어도 1종의 화학적 변형을 갖는 RNA 폴리뉴클레오타이드를 함유하는 유효량의 VZV RNA 백신은 동일한 항원 또는 펩타이드 항원을 인코딩하는 상응하는 미변형된 폴리뉴클레오타이드를 함유하는 조성물보다 바람직하게는 더욱 효율적이다. 증가된 항원 생산은 증가된 세포 형질감염 (RNA 백신으로 형질감염된 세포의 백분율), 폴리뉴클레오타이드로부터 증가된 단백질 번역, (예를 들어, 변형된 폴리뉴클레오타이드로부터 단백질 번역의 증가된 지속기간에 의해 실증된 바와 같이) 감소된 핵산 열화, 또는 숙주 세포의 변경된 항원 특이적 면역 반응에 의해 입증될 수 있다.
용어 "약제학적 조성물"은, 조성물을 생체내 또는 생체외 진단 또는 치료 용도에, 특히 적합하게 만드는, 불활성 또는 활성, 캐리어와 활성제의 조합을 지칭한다. 대상체에 투여된 후 또는 투여시, "약제학적으로 허용가능한 캐리어"는 바람직하지 않은 생리적 효과를 야기시키지 않는다. 약제학적 조성물에서 캐리어는 활성 성분과 양립가능하고 이것을 안정화시킬 수 있다는 의미에서 또한 "허용가능"해야 한다. 1종 이상의 가용화제는 활성제의 전달용 약제학적 캐리어로서 이용될 수 있다. 약제학적으로 허용가능한 캐리어의 예는, 비제한적으로, 복용량 형태로서 사용가능한 조성물을 달성하기 위해 생체적합성 비히클, 아쥬반트, 첨가제, 및 희석제를 포함한다. 다른 캐리어의 예는 콜로이드성 산화규소, 스테아르산마그네슘, 셀룰로오스, 및 나트륨 라우릴 설페이트를 포함한다. 이의 용도를 위하여 추가의 적합한 약제학적 캐리어 및 희석제, 뿐만 아니라 약제학적 필수품은 Remington's Pharmaceutical Sciences에서 기재된다.
일부 구현예에서, 본 개시내용에 따르면 (폴리뉴클레오타이드 및 그것의 인코딩된 폴리펩타이드를 포함하는) RNA 백신은 VZV의 치료 또는 예방에 사용될 수 있다.
VZV RNA 백신은 인큐베이션 시기 동안 또는 증상의 개시 후 활성 감염 동안 감염에서 조기 또는 건강한 개체에 활성 면역화 반응식의 일부로서 예방적으로 또는 치료적으로 투여될 수 있다. 일부 구현예에서, 세포, 조직 또는 대상체에 제공된 본 개시내용의 RNA 백신의 양은 면역 예방에 효과적인 양일 수 있다.
VZV RNA (예를 들면, mRNA) 백신은 다른 예방적 또는 치료적 화합물과 투여될 수 있다. 비-제한 예로서, 예방적 또는 치료적 화합물은 아쥬반트 또는 부스터일 수 있다. 본 명세서에서 사용된 바와 같이, 예방적 조성물, 예컨대 백신을 지칭하는 경우, 용어 "부스터"는 예방적 (백신) 조성물의 추가의 투여를 지칭한다. 부스터 (또는 부스터 백신)은 예방적 조성물의 조기 투여 후 주어질 수 있다. 예방적 조성물의 초기 투여와 부스터 사이 투여의 시간은, 비제한적으로, 1 분, 2 분, 3 분, 4 분, 5 분, 6 분, 7 분, 8 분, 9 분, 10 분, 15 분, 20 분 35 분, 40 분, 45 분, 50 분, 55 분, 1 시간, 2 시간, 3 시간, 4 시간, 5 시간, 6 시간, 7 시간, 8 시간, 9 시간, 10 시간, 11 시간, 12 시간, 13 시간, 14 시간, 15 시간, 16 시간, 17 시간, 18 시간, 19 시간, 20 시간, 21 시간, 22 시간, 23 시간, 1 일, 36 시간, 2 일, 3 일, 4 일, 5 일, 6 일, 1 주, 10 일, 2 주, 3 주, 1 개월, 2 개월, 3 개월, 4 개월, 5 개월, 6 개월, 7 개월, 8 개월, 9 개월, 10 개월, 11 개월, 1 년, 18 개월, 2 년, 3 년, 4 년, 5 년, 6 년, 7 년, 8 년, 9 년, 10 년, 11 년, 12 년, 13 년, 14 년, 15 년, 16 년, 17 년, 18 년, 19 년, 20 년, 25 년, 30 년, 35 년, 40 년, 45 년, 50 년, 55 년, 60 년, 65 년, 70 년, 75 년, 80 년, 85 년, 90 년, 95 년 또는 99 년 초과일 수 있다. 예시적인 구현예에서, 예방적 조성물의 초기 투여와 부스터 사이 투여의 시간은, 비제한적으로, 1 주, 2 주, 3 주, 1 개월, 2 개월, 3 개월, 6 개월 또는 1 년일 수 있다.
일부 구현예에서, VZV RNA 백신은, 당해 분야에서 공지된 불활성화된 백신의 투여에 유사하게, 근육내로, 비강내로 또는 진피내로 투여될 수 있다.
VZV RNA 백신은 감염의 유병률 또는 미충족 의료 필요의 정도 또는 수준에 의존하여 다양한 설정에서 이용될 수 있다. 비-제한 예로서, RNA 백신은 다양한 감염성 질환을 치료 및/또는 예방하는데 이용될 수 있다. RNA 백신은 이들이 훨씬 더 큰 항체 역가를 생산하고 상업적으로 입수가능한 항-바이러스성보다 일찍 반응을 생산한다는 점에서 우월한 특성을 갖는다.
1종 이상의 약제학적으로 허용가능한 부형제와 조합으로 VZV RNA 백신 및 RNA 백신 조성물 및/또는 복합체 선택적으로 포함하는 약제학적 조성물이 본 명세서에서 제공된다.
VZV RNA (예를 들면, mRNA) 백신은 단독으로 또는 1종 이상의 다른 성분과 함께 제형화 또는 투여될 수 있다. 예를 들면, VZV RNA 백신 (백신 조성물)은, 비제한적으로, 아쥬반트를 포함하는 다른 성분을 포함할 수 있다.
일부 구현예에서, VZV RNA 백신은 아쥬반트를 포함하지 않는다 (이들은 아쥬반트가 없다).
VZV RNA (예를 들면, mRNA) 백신은 1종 이상의 약제학적으로-허용가능한 부형제와 조합으로 제형화 또는 투여될 수 있다. 일부 구현예에서, 백신 조성물은 적어도 1종의 추가의 활성 서브스턴스, 예컨대, 예를 들어, 치료적으로-활성 서브스턴스, 예방적으로-활성 서브스턴스, 또는 양쪽의 조합을 포함한다. 백신 조성물은 멸균될 수 있거나, 무발열원일 수 있거나 양쪽 멸균되고 무발열원일 수 있다. 약제, 예컨대 백신 조성물의 제형화 및/또는 제조에서 일반적인 고려사항들은, 예를 들어, 하기에서 발견될 수 있다: Remington: The Science and Practice of Pharmacy 21st ed., Lippincott Williams & Wilkins, 2005 (본 명세서에서 참조로 그 전문이 편입됨).
일부 구현예에서, VZV RNA 백신은 인간, 인간 환자 또는 대상체에 투여된다. 본 개시내용의 목적으로, 어구 "활성 성분"은 그안에 함유된 RNA 백신 또는 폴리뉴클레오타이드, 예를 들어, 항원성 폴리펩타이드를 인코딩하는 RNA 폴리뉴클레오타이드 (예를 들면, mRNA 폴리뉴클레오타이드)를 일반적으로 지칭한다.
본 명세서에서 기재된 백신 조성물의 제형은 약리학의 당해 분야에서 공지된 또는 이후에 개발된 임의의 방법에 의해 제조될 수 있다. 일반적으로, 상기 준비 방법은 부형제 및/또는 1종 이상의 다른 부속 성분과 활성 성분 (예를 들면, mRNA 폴리뉴클레오타이드)의 회합의 단계, 및 그 다음, 필요하면 및/또는 바람직하면, 요망된 단일- 또는 다중-용량 단위로 생성물의 분할, 성형 및/또는 패키징의 단계를 포함한다.
본 개시내용에 따르면 약제학적 조성물에서 활성 성분, 약제학적으로 허용가능한 부형제, 및/또는 임의의 추가의 성분의 상대량은, 치료된 대상체의 동일성, 크기, 및/또는 조건에 의존하여 그리고 추가로 조성물이 투여되는 경로로 의존하여 다양할 것이다. 예로써, 조성물은 0.1% 내지 100%, 예를 들면, 0.5 내지 50%, 1-30%, 5-80%, 적어도 80% (w/w) 활성 성분을 포함할 수 있다.
VZV RNA 백신은 하기를 위해 1종 이상의 부형제를 이용하여 제형화될 수 있다: (1) 안정성을 증가시키기 위해; (2) 세포 형질감염을 증가시키기 위해; (3) (예를 들면, 데포 제형으로부터) 지속된 또는 지연 방출을 허용하기 위해; (4) 체내분포 (예를 들면, 특이적 조직 또는 세포 유형에 대한 표적)을 변경시키기 위해; (5) 생체내 인코딩된 단백질의 번역을 증가시키기 위해; 및/또는 (6) 생체내 인코딩된 단백질 (항원)의 방출 프로파일을 변경시키기 위해. 전통 부형제 예컨대 임의의 및 모든 용매, 분산매, 희석제, 또는 다른 액체 비히클에 더하여, 분산 또는 현탁 조제, 계면 활성제, 등장제, 증점제 또는 유화제, 보존제, 부형제는, 비제한적으로, 리피도이드, 리포좀, 지질 나노입자, 폴리머, 리포플렉스, 코어-쉘 나노입자, 펩타이드, 단백질, (예를 들면, 대상체 속에 이식을 위하여) VZV RNA 백신으로 형질감염된 세포, 하이알로니다제, 나노입자 모방체 및 이들의 조합을 포함할 수 있다.
안정화 요소
천연-발생 진핵 mRNA 분자는, 다른 구조적 특징, 예컨대 5'-캡 구조 또는 3'-폴리(A) 꼬리에 더하여, 그것의 5'-단부 (5'UTR) 및/또는 그것의 3'-단부 (3'UTR)에서 비제한적으로 미번역된 영역 (UTR)을 포함하는, 안정화 요소를 함유하는 것으로 밝혀졌다. 양쪽 5'UTR 및 3'UTR은 게놈 DNA로부터 전형적으로 전사되고 미성숙한 mRNA의 요소이다. 성숙한 mRNA, 예컨대 5'-캡 및 3'-폴리(A) 꼬리의 특징적인 구조적 특성은 mRNA 처리 동안 전사된 (미성숙한) mRNA에 일반적으로 첨가된다. 3'-폴리(A) 꼬리는 전형적으로 전사된 mRNA의 3'-단부에 첨가된 아데닌 뉴클레오타이드의 스트레치이다. 최대 약 400 아데닌 뉴클레오타이드를 포함할 수 있다. 일부 구현예에서 3'-폴리(A) 꼬리의 길이는 개별 mRNA의 안정성에 대하여 필수적인 요소일 수 있다.
일부 구현예에서 RNA 백신은 1종 이상의 안정화 요소를 포함할 수 있다. 안정화 요소는 예를 들면 히스톤 줄기구조를 포함할 수 있다. 줄기구조 결합 단백질 (SLBP), 32 kDa 단백질은 확인되었다. 양쪽 핵 및 세포질내 히스톤 메신저의 3'-단부에서 히스톤 줄기구조와 관련된다. 그것의 발현 수준은 세포 사이클에 의해 조절되고; 히스톤 mRNA 수준이 또한 상승되는 경우, S-상 동안 정점을 이룬다. 단백질은 U7 snRNP에 의해 히스톤 pre-mRNA의 효율적인 3'-단부 가공에 필수적인 것으로 나타났다. SLBP는 가공 후 줄기구조와 계속해서 관련되고, 그 다음 세포질에서 히스톤 단백질 속으로 성숙한 히스톤 mRNAs의 번역을 자극시킨다. SLBP의 RNA 결합 도메인은 후생동물 및 원생동물을 통해 보존되고; 히스톤 줄기구조에 그것의 결합은 루프의 구조에 좌우된다. 최소 결합 부위는 줄기구조에 비해 적어도 3 뉴클레오타이드 5' 및 2 뉴클레오타이드 3'를 포함한다.
일부 구현예에서, RNA 백신은 코딩 영역, 적어도 1종의 히스톤 줄기구조, 및 선택적으로, 폴리(A) 서열 또는 폴리아데닐화 신호를 포함한다. 폴리(A) 서열 또는 폴리아데닐화 신호는 일반적으로 인코딩된 단백질의 발현 수준을 향상시킬 수 있다. 인코딩된 단백질은, 일부 구현예에서, 히스톤 단백질, 리포터 단백질 (예를 들면 루시퍼라아제, GFP, EGFP, β-갈락토시다아제, EGFP), 또는 마커 또는 선택 단백질 (예를 들면 알파-글로빈, 갈락토키나제 및 잔틴:구아닌 포스포리보실 전달효소 (GPT))가 아니다.
일부 구현예에서, 폴리(A) 서열 또는 폴리아데닐화 신호 및 적어도 1종의 히스톤 줄기구조의 조합은, 양쪽이 자연에서 대안적인 기전을 나타내도, 개별 요소의 어느 한쪽으로 관측된 수준을 넘어 단백질 발현을 증가시키기 위해 상승작용으로 작동한다. 폴리(A) 및 적어도 1종의 히스톤 줄기구조의 조합의 상승작용 효과가 요소의 순서 또는 폴리(A) 서열의 길이에 의존하지 않는다는 것이 밝혀졌다.
일부 구현예에서, RNA 백신은 히스톤 다운스트림 요소(HDE)를 포함하지 않는다. "히스톤 다운스트림 요소" (HDE)는, 히스톤 pre-mRNA의 성숙한 히스톤 mRNA로의 가공에서 관여되는, U7 snRNA용 결합 부위를 나타내는, 자연 발생 줄기구조의 대략 15 내지 20 뉴클레오타이드 3'의 퓨린-풍부 폴리뉴클레오타이드 스트레치를 포함한다. 일부 구현예에서, 핵산은 인트론을 포함하지 않는다.
일부 구현예에서, RNA 백신은, 변형 또는 미변형될 수 있거나 활성화 또는 불활성화될 수 있는, 인핸서 및/또는 프로모터 서열을 함유할 수 있거나 아닐 수 있다. 일부 구현예에서, 히스톤 줄기구조는 히스톤 유전자로부터 일반적으로 유래되고, 구조의 루프를 형성하는, 짧은 서열로 구성되는, 스페이서에 의해 분리된 2개의 이웃한 부분적으로 또는 전적으로 역 상보적 서열의 분자내 염기 짝짓기를 포함한다. 짝짓기되지 않은 루프 영역은 전형적으로 줄기 구조 요소의 어느 한쪽과 염기 짝짓기할 수 없다. RNA에서 더욱 종종 발생하지만, 많은 RNA 2차 구조의 핵심 성분이듯이, 단일-가닥 DNA에서 또한 존재할 수 있다. 줄기구조 구조의 안정성은 일반적으로 길이, 미스매치 또는 튀어나온 것의 수, 및 짝짓기된 영역의 염기 조성물에 좌우된다. 일부 구현예에서, 동요 염기 짝짓기 (비-왓슨-크릭 염기 짝짓기)는 생길 수 있다. 일부 구현예에서, 적어도 1종의 히스톤 줄기구조 서열은 15 내지 45 뉴클레오타이드의 길이를 포함한다.
다른 구현예에서 RNA 백신은 제거된 1종 이상의 AU-풍부 서열을 가질 수 있다. 때때로 AURES로서 지칭된, 이들 서열은 3'UTR에서 발견된 탈안정화 서열이다. AURES는 RNA 백신으로부터 제거될 수 있다. 대안적으로 AURES는 RNA 백신에 남아있을 수 있다.
나노입자 제형
일부 구현예에서, VZV RNA (예를 들면, mRNA) 백신은 나노입자로 제형화된다. 일부 구현예에서, VZV RNA 백신은 지질 나노입자로 제형화된다. 일부 구현예에서, VZV RNA 백신은, 양이온성 지질 나노입자로서 지칭된, 지질-다중양이온 복합체로 제형화된다. 지질 나노입자의 형성은 당해 분야에서 공지된 방법에 의해 및/또는, 참조로 그 전문이 본 명세서에서 편입된, 미국 공개 번호 20120178702에서 기재된 바와 같이 달성될 수 있다. 비-제한 예로서, 다중양이온은 하기를 포함할 수 있다: 양이온성 펩타이드 또는 폴리펩타이드 예컨대, 비제한적으로, 폴리라이신, 폴리오르니틴 및/또는 폴리아르기닌 및 국제 공개 번호 WO2012013326 또는 미국 공개 번호 US20130142818에서 기재된 양이온성 펩타이드; 이들 각각은 본 명세서에서 참조로 그 전문이 편입됨. 일부 구현예에서, VZV RNA 백신은 비-양이온성 지질 예컨대, 비제한적으로, 콜레스테롤 또는 디올레오일 포스파티딜에탄올아민 (DOPE)를 포함하는 지질 나노입자로 제형화된다.
지질 나노입자 제형은, 비제한적으로, 양이온성 지질 성분의 선택, 양이온성 지질 포화의 정도, 페길화의 성질, 전체 성분의 비 및 생체물리학적 파라미터 예컨대 크기에 의해 영향받을 수 있다. Semple (Nature Biotech. 2010 28:172-176; 참조로 그 전문이 본 명세서에서 편입됨)에 의한 일 예에서, 지질 나노입자 제형은 57.1 % 양이온성 지질, 7.1% 디팔미토일포스파티딜콜린, 34.3 % 콜레스테롤, 및 1.4% PEG-c-DMA로 구성된다. 또 다른 예로서, 양이온성 지질의 조성 변화는 다양한 항원 제시 세포에 siRNA를 더 효과적으로 전달하는 것으로 나타났다 (Basha 등 Mol Ther. 2011 19:2186-2200; 참조로 그 전문이 본 명세서에서 편입됨).
일부 구현예에서, 지질 나노입자 제형은 35 내지 45% 양이온성 지질, 40% 내지 50% 양이온성 지질, 50% 내지 60% 양이온성 지질 및/또는 55% 내지 65% 양이온성 지질을 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, 지질 나노입자에서 지질 대 RNA (예를 들면, mRNA)의 비는 5:1 내지 20:1, 10:1 내지 25:1, 15:1 내지 30:1 및/또는 적어도 30:1일 수 있다.
일부 구현예에서, 지질 나노입자 제형에서 PEG의 비는 증가 또는 감소될 수 있고/있거나 PEG 지질의 탄소 사슬 길이는 지질 나노입자 제형의 약동학 및/또는 체내분포를 변경시키기 위해 C14부터 C18까지 변형될 수 있다. 비-제한 예로서, 지질 나노입자 제형은 양이온성 지질, DSPC 및 콜레스테롤에 비교된 경우 (또한 본 명세서에서 PEG-DOMG로서 지칭된) PEG-c-DOMG (R-3-[(ω-메톡시-폴리(에틸렌글리콜)2000)카바모일)]-1,2-디미리스틸옥시프로필-3-아민)의 지질 몰비의 0.5% 내지 3.0%, 1.0% 내지 3.5%, 1.5% 내지 4.0%, 2.0% 내지 4.5%, 2.5% 내지 5.0% 및/또는 3.0% 내지 6.0%를 함유할 수 있다. 일부 구현예에서, PEG-c-DOMG는 PEG 지질 예컨대, 비제한적으로, PEG-DSG (1,2-디스테아로일-sn-글리세롤, 메톡시폴리에틸렌 글리콜), PEG-DMG (1,2-디미리스토일-sn-글리세롤) 및/또는 PEG-DPG (1,2-디팔미토일-sn-글리세롤, 메톡시폴리에틸렌 글리콜)로 대체될 수 있다. 양이온성 지질은 당해 분야에서 공지된 임의의 지질 예컨대, 비제한적으로, DLin-MC3-DMA, DLin-DMA, C12-200 및 DLin-KC2-DMA로부터 선택될 수 있다.
일부 구현예에서, VZV RNA (예를 들면, mRNA) 백신 제형은 적어도 1종의 지질을 포함하는 나노입자이다. 지질은, 비제한적으로, DLin-DMA, DLin-K-DMA, 98N12-5, C12-200, DLin-MC3-DMA, DLin-KC2-DMA, DODMA, PLGA, PEG, PEG-DMG, (12Z,15Z)-N,N-디메틸-2-노닐헤니코사-12,15-디엔-1-아민 (L608), N,N-디메틸-1-[(1S,2R)-2-옥틸사이클로프로필]헵타데칸-8-아민 (L530), 페길화된 지질 및 아미노 알코올 지질로부터 선택될 수 있다.
일부 구현예에서, 지질은 하기이다:
Figure pct00003
일부 구현예에서, 지질은 하기이다:
Figure pct00004
일부 구현예에서, 지질은 양이온성 지질 예컨대, 비제한적으로, DLin-DMA, DLin-D-DMA, DLin-MC3-DMA, DLin-KC2-DMA, DODMA 및 아미노 알코올 지질일 수 있다. 아미노 알코올 양이온성 지질은, 참조로 그 전문이 본 명세서에서 편입된, 미국 공개 번호 US20130150625에서 기재된 방법에 의해 제조된 및/또는 상기에서 기재된 지질일 수 있다. 비-제한 예로서, 양이온성 지질은 2-아미노-3-[(9Z,12Z)-옥타데카-9,12-디엔-1-일옥시]-2-{[(9Z,2Z)-옥타데카-9,12-디엔-1-일옥시]메틸}프로판-1-올 (US20130150625에서 화합물 1); 2-아미노-3-[(9Z)-옥타덱-9-엔-1-일옥시]-2-{[(9Z)-옥타덱-9-엔-1-일옥시]메틸}프로판-1-올 (US20130150625에서 화합물 2); 2-아미노-3-[(9Z,12Z)-옥타데카-9,12-디엔-1-일옥시]-2-[(옥틸옥시)메틸]프로판-1-올 (US20130150625에서 화합물 3); 및 2-(디메틸아미노)-3-[(9Z,12Z)-옥타데카-9,12-디엔-1-일옥시]-2-{[(9Z,12Z)-옥타데카-9,12-디엔-1-일옥시]메틸}프로판-1-올 (US20130150625에서 화합물 4); 또는 임의의 약제학적으로 허용가능한 염 또는 이의 입체이성질체일 수 있다.
지질 나노입자 제형은 전형적으로 지질, 특히, 이온화가능한 양이온성 지질, 예를 들어, 2,2-디리놀레일-4-디메틸아미노에틸-[1,3]-디옥솔란 (DLin-KC2-DMA), 디리놀레일-메틸-4-디메틸아미노부티레이트 (DLin-MC3-DMA), 또는 디((Z)-논-2-엔-1-일) 9-((4-(디메틸아미노)부타노일)옥시)헵타데칸디오에이트 (L319)를 포함하고, 중성 지질, 스테롤 및 입자 응집을 감소시킬 수 있는 분자, 예를 들어 PEG 또는 PEG-변형된 지질을 추가로 포함한다.
일부 구현예에서, 지질 나노입자 제형은 본질적으로 (i) 2,2-디리놀레일-4-디메틸아미노에틸-[1,3]-디옥솔란 (DLin-KC2-DMA), 디리놀레일-메틸-4-디메틸아미노부티레이트 (DLin-MC3-DMA), 및 디((Z)-논-2-엔-1-일) 9-((4-(디메틸아미노)부타노일)옥시)헵타데칸디오에이트 (L319)로 구성되는 군으로부터 선택되는 적어도 1종의 지질; (ii) DSPC, DPPC, POPC, DOPE 및 SM으로부터 선택되는 중성 지질; (iii) 스테롤, 예를 들면, 콜레스테롤; 및 (iv) PEG-지질, 예를 들면, PEG-DMG 또는 PEG-cDMA로, 20-60% 양이온성 지질: 5-25% 중성 지질: 25-55% 스테롤; 0.5-15% PEG-지질의 몰비로 구성된다.
일부 구현예에서, 지질 나노입자 제형은 2,2-디리놀레일-4-디메틸아미노에틸-[1,3]-디옥솔란 (DLin-KC2-DMA), 디리놀레일-메틸-4-디메틸아미노부티레이트 (DLin-MC3-DMA), 및 디((Z)-논-2-엔-1-일) 9-((4-(디메틸아미노)부타노일)옥시)헵타데칸디오에이트 (L319)로 구성되는 군으로부터 선택되는 양이온성 지질의 몰 기준으로 25% 내지 75%, 예를 들면, 몰 기준으로 35 내지 65%, 45 내지 65%, 60%, 57.5%, 50% 또는 40%를 포함한다.
일부 구현예에서, 지질 나노입자 제형은 중성 지질의 몰 기준으로 0.5% 내지 15%, 예를 들면, 몰 기준으로 3 내지 12%, 5 내지 10% 또는 15%, 10%, 또는 7.5%를 포함한다. 중성 지질의 예는, 비제한적으로, DSPC, POPC, DPPC, DOPE 및 SM을 포함한다. 일부 구현예에서, 제형은 스테롤의 몰 기준으로 5% 내지 50% (예를 들면, 몰 기준으로 15 내지 45%, 20 내지 40%, 40%, 38.5%, 35%, 또는 31%를 포함한다. 스테롤의 비-제한 예는 콜레스테롤이다. 일부 구현예에서, 지질 나노입자 제형은 PEG 또는 PEG-변형된 지질의 몰 기준으로 0.5% 내지 20% (예를 들면, 몰 기준으로 0.5 내지 10%, 0.5 내지 5%, 1.5%, 0.5%, 1.5%, 3.5%, 또는 5%를 포함한다. 일부 구현예에서, PEG 또는 PEG 변형된 지질은 2,000 Da의 평균 분자량의 PEG 분자를 포함한다. 일부 구현예에서, PEG 또는 PEG 변형된 지질은 2,000 미만, 예를 들어 대략 1,500 Da, 대략 1,000 Da, 또는 대략 500 Da의 평균 분자량의 PEG 분자를 포함한다. PEG-변형된 지질의 비-제한 예는 (또한 본 명세서에서 PEG-C14 또는 C14-PEG로서 지칭된) PEG-디스테아로일 글리세롤 (PEG-DMG), (이 내용은 참조로 그 전문이 본 명세서에서 편입되는 Reyes 등 J. Controlled Release, 107, 276-287 (2005)에서 추가로 논의된) PEG-cDMA를 포함한다.
일부 구현예에서, 지질 나노입자 제형은 2,2-디리놀레일-4-디메틸아미노에틸-[1,3]-디옥솔란 (DLin-KC2-DMA), 디리놀레일-메틸-4-디메틸아미노부티레이트 (DLin-MC3-DMA), 및 디((Z)-논-2-엔-1-일) 9-((4-(디메틸아미노)부타노일)옥시)헵타데칸디오에이트 (L319)로 구성되는 군으로부터 선택되는 25-75%의 양이온성 지질, 0.5-15%의 중성 지질, 5-50%의 스테롤, 및 0.5-20%의 PEG 또는 PEG-변형된 지질을 몰 기준으로 포함한다.
일부 구현예에서, 지질 나노입자 제형은 2,2-디리놀레일-4-디메틸아미노에틸-[1,3]-디옥솔란 (DLin-KC2-DMA), 디리놀레일-메틸-4-디메틸아미노부티레이트 (DLin-MC3-DMA), 및 디((Z)-논-2-엔-1-일) 9-((4-(디메틸아미노)부타노일)옥시)헵타데칸디오에이트 (L319)로 구성되는 군으로부터 선택되는 35-65%의 양이온성 지질, 3-12%의 중성 지질, 15-45%의 스테롤, 및 0.5-10%의 PEG 또는 PEG-변형된 지질을 몰 기준으로 포함한다.
일부 구현예에서, 지질 나노입자 제형은 2,2-디리놀레일-4-디메틸아미노에틸-[1,3]-디옥솔란 (DLin-KC2-DMA), 디리놀레일-메틸-4-디메틸아미노부티레이트 (DLin-MC3-DMA), 및 디((Z)-논-2-엔-1-일) 9-((4-(디메틸아미노)부타노일)옥시)헵타데칸디오에이트 (L319)로 구성되는 군으로부터 선택되는 45-65%의 양이온성 지질, 5-10%의 중성 지질, 25-40%의 스테롤, 및 0.5-10%의 PEG 또는 PEG-변형된 지질을 몰 기준으로 포함한다.
일부 구현예에서, 지질 나노입자 제형은 2,2-디리놀레일-4-디메틸아미노에틸-[1,3]-디옥솔란 (DLin-KC2-DMA), 디리놀레일-메틸-4-디메틸아미노부티레이트 (DLin-MC3-DMA), 및 디((Z)-논-2-엔-1-일) 9-((4-(디메틸아미노)부타노일)옥시)헵타데칸디오에이트 (L319)로 구성되는 군으로부터 선택되는 60%의 양이온성 지질, 7.5%의 중성 지질, 31 %의 스테롤, 및 1.5%의 PEG 또는 PEG-변형된 지질을 몰 기준으로 포함한다.
일부 구현예에서, 지질 나노입자 제형은 2,2-디리놀레일-4-디메틸아미노에틸-[1,3]-디옥솔란 (DLin-KC2-DMA), 디리놀레일-메틸-4-디메틸아미노부티레이트 (DLin-MC3-DMA), 및 디((Z)-논-2-엔-1-일) 9-((4-(디메틸아미노)부타노일)옥시)헵타데칸디오에이트 (L319)로 구성되는 군으로부터 선택되는 50%의 양이온성 지질, 10%의 중성 지질, 38.5 %의 스테롤, 및 1.5%의 PEG 또는 PEG-변형된 지질을 몰 기준으로 포함한다.
일부 구현예에서, 지질 나노입자 제형은 2,2-디리놀레일-4-디메틸아미노에틸-[1,3]-디옥솔란 (DLin-KC2-DMA), 디리놀레일-메틸-4-디메틸아미노부티레이트 (DLin-MC3-DMA), 및 디((Z)-논-2-엔-1-일) 9-((4-(디메틸아미노)부타노일)옥시)헵타데칸디오에이트 (L319)로 구성되는 군으로부터 선택되는 50%의 양이온성 지질, 10%의 중성 지질, 35 %의 스테롤, 4.5% 또는 5%의 PEG 또는 PEG-변형된 지질, 및 0.5%의 표적화 지질을 몰 기준으로 포함한다.
일부 구현예에서, 지질 나노입자 제형은 2,2-디리놀레일-4-디메틸아미노에틸-[1,3]-디옥솔란 (DLin-KC2-DMA), 디리놀레일-메틸-4-디메틸아미노부티레이트 (DLin-MC3-DMA), 및 디((Z)-논-2-엔-1-일) 9-((4-(디메틸아미노)부타노일)옥시)헵타데칸디오에이트 (L319)로 구성되는 군으로부터 선택되는 40%의 양이온성 지질, 15%의 중성 지질, 40%의 스테롤, 및 5%의 PEG 또는 PEG-변형된 지질을 몰 기준으로 포함한다.
일부 구현예에서, 지질 나노입자 제형은 2,2-디리놀레일-4-디메틸아미노에틸-[1,3]-디옥솔란 (DLin-KC2-DMA), 디리놀레일-메틸-4-디메틸아미노부티레이트 (DLin-MC3-DMA), 및 디((Z)-논-2-엔-1-일) 9-((4-(디메틸아미노)부타노일)옥시)헵타데칸디오에이트 (L319)로 구성되는 군으로부터 선택되는 57.2%의 양이온성 지질, 7.1%의 중성 지질, 34.3%의 스테롤, 및 1.4%의 PEG 또는 PEG-변형된 지질을 몰 기준으로 포함한다.
일부 구현예에서, 지질 나노입자 제형은 PEG-cDMA (PEG-cDMA는 Reyes 등 (J. Controlled Release, 107, 276-287 (2005)에서 추가로 논의되고, 이 내용은 참조로 그 전문이 본 명세서에서 편입됨)인 PEG 지질로부터 선택되는 57.5%의 양이온성 지질, 7.5%의 중성 지질, 31.5 %의 스테롤, 및 3.5%의 PEG 또는 PEG-변형된 지질을 몰 기준으로 포함한다.
일부 구현예에서, 지질 나노입자 제형은 20-70% 양이온성 지질: 5-45% 중성 지질: 20-55% 콜레스테롤: 0.5-15% PEG-변형된 지질의 몰비로 지질 혼합물로 본질적으로 구성된다. 일부 구현예에서, 지질 나노입자 제형은 20-60% 양이온성 지질: 5-25% 중성 지질: 25-55% 콜레스테롤: 0.5-15% PEG-변형된 지질의 몰비로 지질 혼합물로 본질적으로 구성된다.
일부 구현예에서, 몰 지질 비는 하기이다: 50/10/38.5/1.5 (mol% 양이온성 지질/중성 지질, 예를 들면, DSPC/Chol/PEG-변형된 지질, 예를 들면, PEG-DMG, PEG-DSG 또는 PEG-DPG), 57.2/7.1134.3/1.4 (mol% 양이온성 지질/ 중성 지질, 예를 들면, DPPC/Chol/ PEG-변형된 지질, 예를 들면, PEG-cDMA), 40/15/40/5 (mol% 양이온성 지질/ 중성 지질, 예를 들면, DSPC/Chol/ PEG-변형된 지질, 예를 들면, PEG-DMG), 50/10/35/4.5/0.5 (mol% 양이온성 지질/ 중성 지질, 예를 들면, DSPC/Chol/ PEG-변형된 지질, 예를 들면, PEG-DSG), 50/10/35/5 (양이온성 지질/ 중성 지질, 예를 들면, DSPC/Chol/ PEG-변형된 지질, 예를 들면, PEG-DMG), 40/10/40/10 (mol% 양이온성 지질/ 중성 지질, 예를 들면, DSPC/Chol/ PEG-변형된 지질, 예를 들면, PEG-DMG 또는 PEG-cDMA), 35/15/40/10 (mol% 양이온성 지질/ 중성 지질, 예를 들면, DSPC/Chol/ PEG-변형된 지질, 예를 들면, PEG-DMG 또는 PEG-cDMA) 또는 52/13/30/5 (mol% 양이온성 지질/ 중성 지질, 예를 들면, DSPC/Chol/ PEG-변형된 지질, 예를 들면, PEG-DMG 또는 PEG-cDMA).
지질 나노입자 조성물 및 이들의 제조 방법의 비-제한 예는, 예를 들어, 하기에서 기재된다: Semple (2010) Nat. Biotechnol. 28:172-176; Jayarama (2012), Angew . Chem . Int . Ed., 51: 8529-8533; 및 Maier (2013) Molecular Therapy 21, 1570-1578 (이들 각각의 내용은 본 명세서에서 참조로 그 전문이 편입된다).
일부 구현예에서, 지질 나노입자 제형은 양이온성 지질, PEG 지질 및 구조적 지질을 포함할 수 있고 비-양이온성 지질을 선택적으로 포함한다. 비-제한 예로서, 지질 나노입자는 40-60%의 양이온성 지질, 5-15%의 비-양이온성 지질, 1-2%의 PEG 지질 및 30-50%의 구조적 지질을 포함할 수 있다. 또 다른 비-제한 예로서, 지질 나노입자는 50% 양이온성 지질, 10% 비-양이온성 지질, 1.5% PEG 지질 및 38.5% 구조적 지질을 포함할 수 있다. 더욱 또 다른 비-제한 예로서, 지질 나노입자는 55% 양이온성 지질, 10% 비-양이온성 지질, 2.5% PEG 지질 및 32.5% 구조적 지질을 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, 양이온성 지질은 본 명세서에서 기재된 임의의 양이온성 지질 예컨대, 비제한적으로, DLin-KC2-DMA, DLin-MC3-DMA 및 L319일 수 있다.
일부 구현예에서, 본 명세서에서 기재된 지질 나노입자 제형은 4 성분 지질 나노입자일 수 있다. 지질 나노입자는 양이온성 지질, 비-양이온성 지질, PEG 지질 및 구조적 지질을 포함할 수 있다. 비-제한 예로서, 지질 나노입자는 40-60%의 양이온성 지질, 5-15%의 비-양이온성 지질, 1-2%의 PEG 지질 및 30-50%의 구조적 지질을 포함할 수 있다. 또 다른 비-제한 예로서, 지질 나노입자는 50% 양이온성 지질, 10% 비-양이온성 지질, 1.5% PEG 지질 및 38.5% 구조적 지질을 포함할 수 있다. 더욱 또 다른 비-제한 예로서, 지질 나노입자는 55% 양이온성 지질, 10% 비-양이온성 지질, 2.5% PEG 지질 및 32.5% 구조적 지질을 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, 양이온성 지질은 본 명세서에서 기재된 임의의 양이온성 지질 예컨대, 비제한적으로, DLin-KC2-DMA, DLin-MC3-DMA 및 L319일 수 있다.
일부 구현예에서, 본 명세서에서 기재된 지질 나노입자 제형은 양이온성 지질, 비-양이온성 지질, PEG 지질 및 구조적 지질을 포함할 수 있다. 비-제한 예로서, 지질 나노입자는 50%의 양이온성 지질 DLin-KC2-DMA, 10%의 비-양이온성 지질 DSPC, 1.5%의 PEG 지질 PEG-DOMG 및 38.5%의 구조적 지질 콜레스테롤을 포함한다. 비-제한 예로서, 지질 나노입자는 50%의 양이온성 지질 DLin-MC3-DMA, 10%의 비-양이온성 지질 DSPC, 1.5%의 PEG 지질 PEG-DOMG 및 38.5%의 구조적 지질 콜레스테롤을 포함한다. 비-제한 예로서, 지질 나노입자는 50%의 양이온성 지질 DLin-MC3-DMA, 10%의 비-양이온성 지질 DSPC, 1.5%의 PEG 지질 PEG-DMG 및 38.5%의 구조적 지질 콜레스테롤을 포함한다. 더욱 또 다른 비-제한 예로서, 지질 나노입자는 55%의 양이온성 지질 L319, 10%의 비-양이온성 지질 DSPC, 2.5%의 PEG 지질 PEG-DMG 및 32.5%의 구조적 지질 콜레스테롤을 포함한다.
백신 조성물에서 활성 성분, 약제학적으로 허용가능한 부형제, 및/또는 임의의 추가의 성분의 상대량은, 치료받는 대상체의 동일성, 크기, 및/또는 조건에 의존하여 그리고 추가로 조성물이 투여되는 경로에 의존하여 다양할 수 있다. 예를 들어, 조성물은 0.1% 내지 99% (w/w)의 활성 성분을 포함할 수 있다. 예로써, 조성물은 0.1% 내지 100%, 예를 들면, 0.5 내지 50%, 1-30%, 5-80%, 적어도 80% (w/w) 활성 성분을 포함할 수 있다.
일부 구현예에서, RNA 백신 조성물은, MC3, 콜레스테롤, DSPC 및 PEG2000-DMG, 버퍼 트리나트륨 시트레이트, 수크로오스 및 주사용 물을 포함하는 지질 나노입자로 제형화된, 본 명세서에서 기재된 폴리뉴클레오타이드를 포함할 수 있다. 비-제한 예로서, 조성물은 하기를 포함한다: 2.0 mg/mL의 약물 서브스턴스 (예를 들면, 폴리뉴클레오타이드 인코딩 VZV), 21.8 mg/mL의 MC3, 10.1 mg/mL의 콜레스테롤, 5.4 mg/mL의 DSPC, 2.7 mg/mL의 PEG2000-DMG, 5.16 mg/mL의 트리나트륨 시트레이트, 71 mg/mL의 수크로오스 및 1.0 mL의 주사용 물.
일부 구현예에서, 나노입자 (예를 들면, 지질 나노입자)는 10-500 nm, 20-400 nm, 30-300 nm, 40-200 nm의 평균 직경을 갖는다. 일부 구현예에서, 나노입자 (예를 들면, 지질 나노입자)는 50-150 nm, 50-200 nm, 80-100 nm 또는 80-200 nm의 평균 직경을 갖는다.
리포좀, 리포플렉스, 및 지질 나노입자
일부 구현예에서, RNA 백신 약제학적 조성물은 리포좀 예컨대, 비제한적으로, DiLa2 리포좀 (Marina Biotech, Bothell, WA), SMARTICLES® (Marina Biotech, Bothell, WA), 중성 DOPC (1,2-디올레오일-sn-글리세로-3-포스포콜린) 기반 리포좀 (예를 들면, 난소암용 siRNA 전달 (Landen 등 Cancer Biology & Therapy 2006 5(12)1708-1713); 참조로 그 전문이 본 명세서에서 편입됨) 및 하이알루로난-코팅된 리포좀 (Quiet Therapeutics, Israel)으로 제형화될 수 있다.
일부 구현예에서, RNA 백신은, 참조로 그 전문이 본 명세서에서 편입된, 미국 공개 번호 US2012060293에서 기재된 바와 같이 동결건조된 겔-상 리포좀 조성물로 제형화될 수 있다.
나노입자 제형은 포스페이트 콘주게이트를 포함할 수 있다. 포스페이트 콘주게이트는 생체내 순환 시간을 증가시킬 수 있고/있거나 나노입자의 표적화된 전달을 증가시킬 수 있다. 본 발명으로 사용을 위한 포스페이트 콘주게이트는, 이들 각각의 내용은 참조로 그 전문이 본 명세서에서 편입된, 국제 공개 번호 WO2013033438 또는 미국 공개 번호 US20130196948에서 기재된 방법에 의해 제조될 수 있다. 비-제한 예로서, 포스페이트 콘주게이트는, 참조로 그 전문이 본 명세서에서 편입된, 국제 공개 번호 WO2013033438에서 기재된 조제법 중 어느 하나의 화합물을 포함할 수 있다.
나노입자 제형은 폴리머 콘주게이트를 포함할 수 있다. 폴리머 콘주게이트는 수용성 콘주게이트일 수 있다. 폴리머 콘주게이트는, 이 내용은 참조로 그 전문이 본 명세서에서 편입되는, 미국 공개 번호 20130059360에서 기재된 바와 같은 구조를 가질 수 있다. 일부 측면에서, 본 발명의 폴리뉴클레오타이드를 가진 폴리머 콘주게이트는, 참조로 그 전문이 본 명세서에서 편입된, 미국 공개 번호 20130072709에서 기재된 방법 및/또는 분절된 폴리머 시약을 이용하여 제조될 수 있다. 다른 측면에서, 폴리머 콘주게이트는 고리 모이어티 예컨대, 비제한적으로, 이 내용은 참조로 그 전문이 본 명세서에서 편입되는, 미국 공개 번호 US20130196948에서 기재된 폴리머 콘주게이트를 포함하는 현수 측면 기를 가질 수 있다.
나노입자 제형은 대상체에서 본 발명의 나노입자의 전달을 향상시키기 위해 콘주게이트를 포함할 수 있다. 추가로, 콘주게이트는 대상체에서 나노입자의 식세포 청소능을 억제시킬 수 있다. 일부 측면에서, 콘주게이트는 인간 막 단백질 CD47로부터 설계된 "자가" 펩타이드 (예를 들면, 참조로 그 전문이 본 명세서에서 편입된, Rodriguez (Science 2013, 339, 971-975)에 의해 기재된 "자가" 입자)일 수 있다. Rodriguez 에 의해 보여진 바와 같이 자가 펩타이드는 나노입자의 전달을 향상시킨 나노입자의 대식세포-매개된 청소능을 지연시켰다. 다른 측면에서, 콘주게이트는 막 단백질 CD47일 수 있다 (예를 들면, 참조 Rodriguez 등 Science 2013, 339, 971-975, 참조로 그 전문이 본 명세서에서 편입됨). Rodriguez 등은, "자가" 펩타이드에 유사하게, CD47이 스크램블드 펩타이드 및 PEG 코팅된 나노입자에 비교된 경우 대상체에서 순환 입자 비를 증가시킬 수 있다는 것을 보여주었다.
일부 구현예에서, 본 발명의 RNA 백신은 대상체에서 본 발명의 나노입자의 전달을 향상시키기 위해 콘주게이트를 포함하는 나노입자로 제형화된다. 콘주게이트는 CD47 막일 수 있거나 콘주게이트는 CD47 막 단백질, 예컨대 이전에 기재된 "자가" 펩타이드로부터 유래될 수 있다. 다른 구현예에서, 나노입자는 PEG 및 CD47의 콘주게이트 또는 이의 유도체를 포함할 수 있다. 더욱 다른 구현예에서, 나노입자는 상기 기재된 "자가" 펩타이드 및 막 단백질 CD47 양쪽을 포함할 수 있다.
일부 구현예에서, "자가" 펩타이드 및/또는 CD47 단백질은, 본 발명의 RNA 백신의 전달을 위하여 본 명세서에서 기재된 바와 같이, 바이러스-유사 입자 또는 슈도비리온에 접합될 수 있다.
다른 구현예에서, 본 발명의 폴리뉴클레오타이드 및 콘주게이트를 포함하는 RNA 백신 약제학적 조성물은 분해성 연결을 가질 수 있다. 콘주게이트의 비-제한 예는 이온화가능한 수소 원자를 포함하는 방향족 모이어티, 스페이서 모이어티, 및 수용성 폴리머를 포함한다. 비-제한 예로서, 분해성 연결을 가진 콘주게이트를 포함하는 약제학적 조성물 및 상기 약제학적 조성물의 전달 방법은, 이 내용은 참조로 그 전문이 본 명세서에서 편입되는, 미국 공개 번호 US20130184443에서 기재된다.
나노입자 제형은 탄수화물 캐리어 및 RNA 백신을 포함하는 탄수화물 나노입자일 수 있다. 비-제한 예로서, 탄수화물 캐리어는, 비제한적으로, 무수물-변형된 피토글리코겐 또는 글리코겐-형 물질, 프토글리코겐 옥테닐 석시네이트, 피토글리코겐 베타-덱스트린, 무수물-변형된 피토글리코겐 베타-덱스트린을 포함할 수 있다. (참고 예를 들면, 국제 공개 번호 WO2012109121, 이 내용은 참조로 그 전문이 본 명세서에서 편입됨).
본 발명의 나노입자 제형은 입자의 전달을 개선하기 위해 계면활성제 또는 폴리머로 코팅될 수 있다. 일부 구현예에서, 나노입자는 친수성 코팅물 예컨대, 비제한적으로, PEG 코팅물 및/또는 중성 표면 전하를 갖는 코팅물로 코팅될 수 있다. 친수성 코팅물은 중추신경계 안에서 더 큰 적재물 예컨대, 비제한적으로, RNA 백신을 가진 나노입자를 전달하는 것을 도울 수 있다. 비-제한 예로서 친수성 코팅물을 포함하는 나노입자 및 상기 나노입자의 제조 방법은, 이 내용은 참조로 그 전문이 본 명세서에서 편입되는, 미국 공개 번호 US20130183244에서 기재된다.
일부 구현예에서, 본 발명의 지질 나노입자는 친수성 폴리머 입자일 수 있다. 친수성 폴리머 입자 및 친수성 폴리머 입자의 제조 방법의 비-제한 예는, 이 내용은 참조로 그 전문이 본 명세서에서 편입되는, 미국 공개 번호 US20130210991에서 기재된다.
다른 구현예에서, 본 발명의 지질 나노입자는 소수성 폴리머 입자일 수 있다.
지질 나노입자 제형은 빠르게 제거된 지질 나노입자 (reLNP)로서 공지되는 생분해성 양이온성 지질로 양이온성 지질을 대체함으로써 개선될 수 있다. 이온화가능한 양이온성 지질, 예컨대, 비제한적으로, DLinDMA, DLin-KC2-DMA, 및 DLin-MC3-DMA는 혈장 및 조직에서 경시적으로 축적하는 것으로 밝혀졌고 독성의 잠재적인 공급원일 수 있다. 빠르게 제거된 지질의 급속 대사는 랫트에서 1 mg/kg 용량 내지 10 mg/kg 용량의 자릿수만큼 지질 나노입자의 치료 지수 및 내성을 개선할 수있다. 효소적으로 분해된 에스테르 연결의 봉입체는, reLNP 제형의 활성을 여전히 유지하면서, 양이온성 성분의 대사 프로파일 및 열화를 개선할 수 있다. 에스테르 연결은 지질 사슬 안에서 내부적으로 위치할 수 있거나 지질 사슬의 말단 단부에 말단적으로 위치할 수 있다. 내부 에스테르 연결은 지질 사슬에서 임의의 탄소를 대체할 수 있다.
일부 구현예에서, 내부 에스테르 연결은 포화된 카보의 한쪽에서 위치할 수 있다.
일부 구현예에서, 면역 반응은 나노종, 폴리머 및 면역원을 포함할 수 있는 지질 나노입자 전달에 의해 유발될 수 있다. (미국 공개 번호 20120189700 및 국제 공개 번호 WO2012099805, 이들 각각은 참조로 그 전문이 본 명세서에서 편입됨).
폴리머는 나노종을 캡슐화될 수 있거나 나노종을 부분적으로 캡슐화할 수 있다. 면역원은 본 명세서에서 기재된 재조합 단백질, 변형된 RNA 및/또는 폴리뉴클레오타이드일 수 있다. 일부 구현예에서, 지질 나노입자는 병원체에 대한 백신에서 예컨대, 비제한적으로, 제형화될 수 있다.
지질 나노입자는 입자의 표면 특성을 변경하도록 조작될 수 있어서 지질 나노입자는 점막 장벽을 침투할 수 있다. 점액은 점막 조직 예컨대, 비제한적으로, 경구 (예를 들면, 구강 및 식도 막 및 편도 조직), 안과, 위장 (예를 들면, 위, 소장, 대장, 결장, 직장), 비강, 호흡 (예를 들면, 비강, 인두, 기관 및 기관지 막), 생식기 (예를 들면, 질, 자궁경부 및 요도 막)에 위치한다. 더 높은 약물 캡슐화 효율 및 약물의 광범위 배열의 지속된 전달을 제공하는 능력에 바람직한 10-200 nm 보다 큰 나노입자는 점막 장벽을 통해 빠르게 확산하기에 너무 크다고 생각되어 왔다. 점액은 계속해서 분비되거나, 떨어지거나, 폐기되거나 소화되고 재순환되어서 대부분의 포획된 입자는 몇 초 내에 또는 몇 시간 내에 점막 조직으로부터 제거될 수 있다. 저분자량 폴리에틸렌 글리콜 (PEG)로 밀집하여 코팅된 큰 폴리머 나노입자 (200 nm 내지 500 nm 직경)은 물에서 확산하는 동일한 입자보다 단지 4 내지 6-배 낮은 점액을 통해 확산하였다 (Lai PNAS 2007 104(5):1482-487; Lai Adv Drug Deliv Rev. 2009 61(2): 158-171; 이들 각각은 참조로 그 전문이 본 명세서에서 편입됨). 나노입자의 수송은, 비제한적으로, 광표백후 형광 회복 (FRAP) 및 고해상도 다중 입자 추적 (MPT)를 포함하는 형광 현미경검사 기술 및/또는 침투의 비율을 이용하여 결정될 수 있다. 비-제한 예로서, 점막 장벽을 침투할 수 있는 조성물은, 이들 각각의 내용은 참조로 그 전문이 본 명세서에서 편입되는, 미국 특허 번호 8,241,670 또는 국제 공개 번호 WO2013110028에서 기재된 바와 같이 제조될 수 있다.
점액을 침투하도록 조작된 지질 나노입자는 폴리머성 물질 (예를 들면, 폴리머 코어) 및/또는 폴리머-비타민 콘주게이트 및/또는 트리-블록 코-폴리머를 포함할 수 있다. 폴리머성 물질은, 비제한적으로, 폴리아민, 폴리에테르, 폴리아미드, 폴리에스테르, 폴리카바메이트, 폴리우레아, 폴리카보네이트, 폴리(스티렌), 폴리이미드, 폴리설폰, 폴리우레탄, 폴리아세틸렌, 폴리에틸렌, 폴리에티엔이민, 폴리이소시아네이트, 폴리아크릴레이트, 폴리메타크릴레이트, 폴리아크릴로니트릴, 및 폴리아릴레이트를 포함할 수 있다. 폴리머성 물질은 생분해성 및/또는 생체적합성일 수 있다. 생체적합성 폴리머의 비-제한 예는, 이 내용은 참조로 그 전문이 본 명세서에서 편입되는, 국제 공개 번호 WO2013116804에서 기재된다. 폴리머성 물질은 추가적으로 조사될 수 있다. 비-제한 예로서, 폴리머성 물질은 감마 조사될 수 있다 (참고 예를 들면, 국제 공개 번호 WO201282165, 참조로 그 전문이 본 명세서에서 편입됨). 특이적 폴리머의 비-제한 예는 하기를 포함한다: 폴리(카프로락톤) (PCL), 에틸렌 비닐 아세테이트 폴리머 (EVA), 폴리(락트산) (PLA), 폴리(L-락트산) (PLLA), 폴리(글라이콜산) (PGA), 폴리(락트산-코-글라이콜산) (PLGA), 폴리(L-락트산-코-글라이콜산) (PLLGA), 폴리(D,L-락타이드) (PDLA), 폴리(L-락타이드) (PLLA), 폴리(D,L-락타이드-코-카프로락톤), 폴리(D,L-락타이드-코-카프로락톤-코-글라이콜라이드), 폴리(D,L-락타이드-코-PEO-코-D,L-락타이드), 폴리(D,L-락타이드-코-PPO-코-D,L-락타이드), 폴리알킬 시아노아크랄레이트, 폴리우레탄, 폴리-L-라이신 (PLL), 하이드록시프로필 메타크릴레이트 (HPMA), 폴리에틸렌글리콜, 폴리-L-글루탐산, 폴리(하이드록시 산), 폴리무수물, 폴리오르토에스테르, 폴리(에스테르 아미드), 폴리아미드, 폴리(에스테르 에테르), 폴리카보네이트, 폴리알킬렌 예컨대 폴리에틸렌 및 폴리프로필렌, 폴리알킬렌 글리콜 예컨대 폴리(에틸렌 글리콜) (PEG), 폴리알킬렌 옥사이드 (PEO), 폴리알킬렌 테레프탈레이트 예컨대 폴리(에틸렌 테레프탈레이트), 폴리비닐 알코올 (PVA), 폴리비닐 에테르, 폴리비닐 에스테르 예컨대 폴리(비닐 아세테이트), 폴리비닐 할라이드 예컨대 폴리(비닐 클로라이드) (PVC), 폴리비닐피롤리돈, 폴리실록산, 폴리스티렌 (PS), 폴리우레탄, 유도된 셀룰로오스 예컨대 알킬 셀룰로오스, 하이드록시알킬 셀룰로오스, 셀룰로오스 에테르, 셀룰로오스 에스테르, 니트로 셀룰로오스, 하이드록시프로필셀룰로오스, 카복시메틸셀룰로오스, 아크릴산의 폴리머, 예컨대 폴리(메틸(메트)아크릴레이트) (PMMA), 폴리(에틸(메트)아크릴레이트), 폴리(부틸(메트)아크릴레이트), 폴리(이소부틸(메트)아크릴레이트), 폴리(헥실(메트)아크릴레이트), 폴리(이소데실(메트)아크릴레이트), 폴리(라우릴(메트)아크릴레이트), 폴리(페닐(메트)아크릴레이트), 폴리(메틸 아크릴레이트), 폴리(이소프로필 아크릴레이트), 폴리(이소부틸 아크릴레이트), 폴리(옥타데실 아크릴레이트) 및 이의 코폴리머 및 혼합물, 폴리디옥사논 및 그것의 코폴리머, 폴리하이드록시알카노에이트, 폴리프로필렌 푸마레이트, 폴리옥시메틸렌, 폴록사머, 폴리(오르토)에스테르, 폴리(부티르산), 폴리(발레르산), 폴리(락타이드-코-카프로락톤), PEG-PLGA-PEG 및 트리메틸렌 카보네이트, 폴리비닐피롤리돈. 지질 나노입자는 하기로 코팅 또는 회합될 수 있다: 코폴리머 예컨대, 비제한적으로, 블록 코-폴리머 (예컨대 참조로 그 전문이 본 명세서에서 편입된, 국제 공개 번호 WO2013012476에서 기재된 분지형 폴리에테르-폴리아미드 블록 코폴리머), 및 (폴리(에틸렌 글리콜))-(폴리(프로필렌 옥사이드))-(폴리(에틸렌 글리콜)) 트리블록 코폴리머 (참고 예를 들면, 미국 공개 20120121718, 미국 공개 20100003337 및 미국 특허 번호 8,263,665, 이들 각각은 참조로 그 전문이 본 명세서에서 편입됨). 코-폴리머는 안전하다고 일반적으로 여겨지는 (GRAS) 폴리머일 수 있고 지질 나노입자의 형성은 신규한 화학적 독립체가 창출되지 않는 그와 같은 방식으로 될 수 있다. 예를 들어, 지질 나노입자는 여전히 인간 점액을 빠르게 침투할 수 있는 신규한 화학적 독립체 형성 없이 PLGA 나노입자를 코팅하는 폴록사머를 포함할 수 있다 (Yang Angew . Chem . Int . Ed. 2011 50:2597-2600, 이들 내용은 참조로 그 전문이 본 명세서에서 편입됨). 인간 점액을 침투시킬 수 있는 나노입자를 생산하는 비제한적인 확장가능한 방법은 Xu 에 의해 기재된 (참고 예를 들면, J Control Release 2013, 170(2):279-86, 이 내용은 참조로 그 전문이 본 명세서에서 편입됨).
폴리머-비타민 콘주게이트의 비타민은 비타민 E일 수 있다. 콘주게이트의 비타민 부분은 다른 적합한 성분 예컨대, 비제한적으로, 비타민 A, 비타민 E, 다른 비타민, 콜레스테롤, 소수성 모이어티, 또는 다른 계면활성제 (예를 들면, 스테롤 사슬, 지방산, 탄화수소 사슬 및 알킬렌 옥사이드 사슬)의 소수성 성분으로 치환될 수 있다.
일부 구현예에서, RNA (예를 들면, mRNA) 백신 약제학적 조성물은 리포좀 예컨대, 비제한적으로, DiLa2 리포좀 (Marina Biotech, Bothell, WA), SMARTICLES® (Marina Biotech, Bothell, WA), 중성 DOPC (1,2-디올레오일-sn-글리세로-3-포스포콜린) 기반 리포좀 (예를 들면, 난소암용 siRNA 전달 (Landen 등 Cancer Biology & Therapy 2006 5(12)1708-1713); 참조로 그 전문이 본 명세서에서 편입됨) 및 하이알루로난-코팅된 리포좀 (Quiet Therapeutics, Israel)으로 제형화될 수 있다.
일부 구현예에서, RNA 백신은, 참조로 그 전문이 본 명세서에서 편입된, 미국 공개 번호 US2012060293에서 기재된 바와 같이 동결건조된 겔-상 리포좀 조성물로 제형화될 수 있다.
나노입자 제형은 포스페이트 콘주게이트를 포함할 수 있다. 포스페이트 콘주게이트는 생체내 순환 시간을 증가시킬 수 있고/있거나 나노입자의 표적화된 전달을 증가시킬 수 있다. 본 발명으로 사용을 위한 포스페이트 콘주게이트는, 이들 각각의 내용은 참조로 그 전문이 본 명세서에서 편입된, 국제 공개 번호 WO2013033438 또는 미국 공개 번호 US20130196948에서 기재된 방법에 의해 제조될 수 있다. 비-제한 예로서, 포스페이트 콘주게이트는, 참조로 그 전문이 본 명세서에서 편입된, 국제 공개 번호 WO2013033438에서 기재된 조제법 중 어느 하나의 화합물을 포함할 수 있다.
나노입자 제형은 폴리머 콘주게이트를 포함할 수 있다. 폴리머 콘주게이트는 수용성 콘주게이트일 수 있다. 폴리머 콘주게이트는, 이 내용은 참조로 그 전문이 본 명세서에서 편입되는, 미국 출원 번호 20130059360에서 기재된 바와 같은 구조를 가질 수 있다. 일부 측면에서, 본 발명의 폴리뉴클레오타이드를 가진 폴리머 콘주게이트는, 참조로 그 전문이 본 명세서에서 편입된, 미국 특허 출원 번호 20130072709에서 기재된 방법 및/또는 분절된 폴리머 시약을 이용하여 제조될 수 있다. 다른 측면에서, 폴리머 콘주게이트는 고리 모이어티 예컨대, 비제한적으로, 이 내용은 참조로 그 전문이 본 명세서에서 편입되는, 미국 공개 번호 US20130196948에서 기재된 폴리머 콘주게이트를 포함하는 현수 측면 기를 가질 수 있다.
나노입자 제형은 대상체에서 본 발명의 나노입자의 전달을 향상시키기 위해 콘주게이트를 포함할 수 있다. 추가로, 콘주게이트는 대상체에서 나노입자의 식세포 청소능을 억제시킬 수 있다. 일부 측면에서, 콘주게이트는 인간 막 단백질 CD47로부터 설계된 "자가" 펩타이드 (예를 들면, 참조로 그 전문이 본 명세서에서 편입된, Rodriguez (Science 2013, 339, 971-975)에 의해 기재된 "자가" 입자)일 수 있다. Rodriguez 에 의해 보여진 바와 같이 자가 펩타이드는 나노입자의 전달을 향상시킨 나노입자의 대식세포-매개된 청소능을 지연시켰다. 다른 측면에서, 콘주게이트는 막 단백질 CD47일 수 있다 (예를 들면, 참조 Rodriguez 등 Science 2013, 339, 971-975, 참조로 그 전문이 본 명세서에서 편입됨). Rodriguez 등은, "자가" 펩타이드에 유사하게, CD47이 스크램블드 펩타이드 및 PEG 코팅된 나노입자에 비교된 경우 대상체에서 순환 입자 비를 증가시킬 수 있다는 것을 보여주었다.
일부 구현예에서, 본 발명의 RNA 백신은 대상체에서 본 발명의 나노입자의 전달을 향상시키기 위해 콘주게이트를 포함하는 나노입자로 제형화된다. 콘주게이트는 CD47 막일 수 있거나 콘주게이트는 CD47 막 단백질, 예컨대 이전에 기재된 "자가" 펩타이드로부터 유래될 수 있다. 다른 측면에서, 나노입자는 PEG 및 CD47의 콘주게이트 또는 이의 유도체를 포함할 수 있다. 더욱 다른 측면에서, 나노입자는 상기 기재된 "자가" 펩타이드 및 막 단백질 CD47 양쪽을 포함할 수 있다.
다른 측면에서, "자가" 펩타이드 및/또는 CD47 단백질은, 본 발명의 RNA 백신의 전달을 위하여 본 명세서에서 기재된 바와 같이, 바이러스-유사 입자 또는 슈도비리온에 접합될 수 있다.
다른 구현예에서, 본 발명의 폴리뉴클레오타이드 및 콘주게이트를 포함하는 RNA 백신 약제학적 조성물은 분해성 연결을 가질 수 있다. 콘주게이트의 비-제한 예는 이온화가능한 수소 원자를 포함하는 방향족 모이어티, 스페이서 모이어티, 및 수용성 폴리머를 포함한다. 비-제한 예로서, 분해성 연결을 가진 콘주게이트를 포함하는 약제학적 조성물 및 상기 약제학적 조성물의 전달 방법은, 이 내용은 참조로 그 전문이 본 명세서에서 편입되는, 미국 공개 번호 US20130184443에서 기재된다.
나노입자 제형은 탄수화물 캐리어 및 RNA (예를 들면, mRNA) 백신을 포함하는 탄수화물 나노입자일 수 있다. 비-제한 예로서, 탄수화물 캐리어는, 비제한적으로, 무수물-변형된 피토글리코겐 또는 글리코겐-형 물질, 프토글리코겐 옥테닐 석시네이트, 피토글리코겐 베타-덱스트린, 무수물-변형된 피토글리코겐 베타-덱스트린을 포함할 수 있다. (참고 예를 들면, 국제 공개 번호 WO2012109121, 이 내용은 참조로 그 전문이 본 명세서에서 편입됨).
본 발명의 나노입자 제형은 입자의 전달을 개선하기 위해 계면활성제 또는 폴리머로 코팅될 수 있다. 일부 구현예에서, 나노입자는 친수성 코팅물 예컨대, 비제한적으로, PEG 코팅물 및/또는 중성 표면 전하를 갖는 코팅물로 코팅될 수 있다. 친수성 코팅물은 중추신경계 안에서 더 큰 적재물 예컨대, 비제한적으로, RNA 백신을 가진 나노입자를 전달하는 것을 도울 수 있다. 비-제한 예로서 친수성 코팅물을 포함하는 나노입자 및 상기 나노입자의 제조 방법은, 이 내용은 참조로 그 전문이 본 명세서에서 편입되는, 미국 공개 번호 US20130183244에서 기재된다.
일부 구현예에서, 본 발명의 지질 나노입자는 친수성 폴리머 입자일 수 있다. 친수성 폴리머 입자 및 친수성 폴리머 입자의 제조 방법의 비-제한 예는, 이 내용은 참조로 그 전문이 본 명세서에서 편입되는, 미국 공개 번호 US20130210991에서 기재된다.
다른 구현예에서, 본 발명의 지질 나노입자는 소수성 폴리머 입자일 수 있다.
지질 나노입자 제형은 빠르게 제거된 지질 나노입자 (reLNP)로서 공지되는 생분해성 양이온성 지질로 양이온성 지질을 대체함으로써 개선될 수 있다. 이온화가능한 양이온성 지질, 예컨대, 비제한적으로, DLinDMA, DLin-KC2-DMA, 및 DLin-MC3-DMA는 혈장 및 조직에서 경시적으로 축적하는 것으로 밝혀졌고 독성의 잠재적인 공급원일 수 있다. 빠르게 제거된 지질의 급속 대사는 랫트에서 1 mg/kg 용량 내지 10 mg/kg 용량의 자릿수만큼 지질 나노입자의 치료 지수 및 내성을 개선할 수있다. 효소적으로 분해된 에스테르 연결의 봉입체는, reLNP 제형의 활성을 여전히 유지하면서, 양이온성 성분의 대사 프로파일 및 열화를 개선할 수 있다. 에스테르 연결은 지질 사슬 안에서 내부적으로 위치할 수 있거나 지질 사슬의 말단 단부에 말단적으로 위치할 수 있다. 내부 에스테르 연결은 지질 사슬에서 임의의 탄소를 대체할 수 있다.
일부 구현예에서, 내부 에스테르 연결은 포화된 카보의 한쪽에서 위치할 수 있다.
일부 구현예에서, 면역 반응은 나노종, 폴리머 및 면역원을 포함할 수 있는 지질 나노입자 전달에 의해 유발될 수 있다. (미국 공개 번호 20120189700 및 국제 공개 번호 WO2012099805, 이들 각각은 참조로 그 전문이 본 명세서에서 편입됨).
폴리머는 나노종을 캡슐화될 수 있거나 나노종을 부분적으로 캡슐화할 수 있다. 면역원은 본 명세서에서 기재된 재조합 단백질, 변형된 RNA 및/또는 폴리뉴클레오타이드일 수 있다. 일부 구현예에서, 지질 나노입자는 병원체에 대한 백신에서 예컨대, 비제한적으로, 제형화될 수 있다.
지질 나노입자는 입자의 표면 특성을 변경하도록 조작될 수 있어서 지질 나노입자는 점막 장벽을 침투할 수 있다. 점액은 점막 조직 예컨대, 비제한적으로, 경구 (예를 들면, 구강 및 식도 막 및 편도 조직), 안과, 위장 (예를 들면, 위, 소장, 대장, 결장, 직장), 비강, 호흡 (예를 들면, 비강, 인두, 기관 및 기관지 막), 생식기 (예를 들면, 질, 자궁경부 및 요도 막)에 위치한다. 더 높은 약물 캡슐화 효율 및 약물의 광범위 배열의 지속된 전달을 제공하는 능력에 바람직한 10-200 nm 보다 큰 나노입자는 점막 장벽을 통해 빠르게 확산하기에 너무 크다고 생각되어 왔다. 점액은 계속해서 분비되거나, 떨어지거나, 폐기되거나 소화되고 재순환되어서 대부분의 포획된 입자는 몇 초 내에 또는 몇 시간 내에 점막 조직으로부터 제거될 수 있다. 저분자량 폴리에틸렌 글리콜 (PEG)로 밀집하여 코팅된 큰 폴리머 나노입자 (200 nm - 500 nm 직경)은 물에서 확산하는 동일한 입자보다 단지 4 내지 6-배 낮은 점액을 통해 확산하였다 (Lai 등 PNAS 2007 104(5):1482-487; Lai 등 Adv Drug Deliv Rev. 2009 61(2): 158-171; 이들 각각은 참조로 그 전문이 본 명세서에서 편입됨). 나노입자의 수송은, 비제한적으로, 광표백후 형광 회복 (FRAP) 및 고해상도 다중 입자 추적 (MPT)를 포함하는 형광 현미경검사 기술 및/또는 침투의 비율을 이용하여 결정될 수 있다. 비-제한 예로서, 점막 장벽을 침투할 수 있는 조성물은, 이들 각각의 내용은 참조로 그 전문이 본 명세서에서 편입되는, 미국 특허 번호 8,241,670 또는 국제 공개 번호 WO2013110028에서 기재된 바와 같이 제조될 수 있다.
점액을 침투하도록 조작된 지질 나노입자는 폴리머성 물질 (즉, 폴리머 코어) 및/또는 폴리머-비타민 콘주게이트 및/또는 트리-블록 코-폴리머를 포함할 수 있다. 폴리머성 물질은, 비제한적으로, 폴리아민, 폴리에테르, 폴리아미드, 폴리에스테르, 폴리카바메이트, 폴리우레아, 폴리카보네이트, 폴리(스티렌), 폴리이미드, 폴리설폰, 폴리우레탄, 폴리아세틸렌, 폴리에틸렌, 폴리에티엔이민, 폴리이소시아네이트, 폴리아크릴레이트, 폴리메타크릴레이트, 폴리아크릴로니트릴, 및 폴리아릴레이트를 포함할 수 있다. 폴리머성 물질은 생분해성 및/또는 생체적합성일 수 있다. 생체적합성 폴리머의 비-제한 예는, 이 내용은 참조로 그 전문이 본 명세서에서 편입되는, 국제 공개 번호 WO2013116804에서 기재된다. 폴리머성 물질은 추가적으로 조사될 수 있다. 비-제한 예로서, 폴리머성 물질은 감마 조사될 수 있다 (참고 예를 들면, 국제 공개 번호 WO201282165, 참조로 그 전문이 본 명세서에서 편입됨). 특이적 폴리머의 비-제한 예는 하기를 포함한다: 폴리(카프로락톤) (PCL), 에틸렌 비닐 아세테이트 폴리머 (EVA), 폴리(락트산) (PLA), 폴리(L-락트산) (PLLA), 폴리(글라이콜산) (PGA), 폴리(락트산-코-글라이콜산) (PLGA), 폴리(L-락트산-코-글라이콜산) (PLLGA), 폴리(D,L-락타이드) (PDLA), 폴리(L-락타이드) (PLLA), 폴리(D,L-락타이드-코-카프로락톤), 폴리(D,L-락타이드-코-카프로락톤-코-글라이콜라이드), 폴리(D,L-락타이드-코-PEO-코-D,L-락타이드), 폴리(D,L-락타이드-코-PPO-코-D,L-락타이드), 폴리알킬 시아노아크랄레이트, 폴리우레탄, 폴리-L-라이신 (PLL), 하이드록시프로필 메타크릴레이트 (HPMA), 폴리에틸렌글리콜, 폴리-L-글루탐산, 폴리(하이드록시 산), 폴리무수물, 폴리오르토에스테르, 폴리(에스테르 아미드), 폴리아미드, 폴리(에스테르 에테르), 폴리카보네이트, 폴리알킬렌 예컨대 폴리에틸렌 및 폴리프로필렌, 폴리알킬렌 글리콜 예컨대 폴리(에틸렌 글리콜) (PEG), 폴리알킬렌 옥사이드 (PEO), 폴리알킬렌 테레프탈레이트 예컨대 폴리(에틸렌 테레프탈레이트), 폴리비닐 알코올 (PVA), 폴리비닐 에테르, 폴리비닐 에스테르 예컨대 폴리(비닐 아세테이트), 폴리비닐 할라이드 예컨대 폴리(비닐 클로라이드) (PVC), 폴리비닐피롤리돈, 폴리실록산, 폴리스티렌 (PS), 폴리우레탄, 유도된 셀룰로오스 예컨대 알킬 셀룰로오스, 하이드록시알킬 셀룰로오스, 셀룰로오스 에테르, 셀룰로오스 에스테르, 니트로 셀룰로오스, 하이드록시프로필셀룰로오스, 카복시메틸셀룰로오스, 아크릴산의 폴리머, 예컨대 폴리(메틸(메트)아크릴레이트) (PMMA), 폴리(에틸(메트)아크릴레이트), 폴리(부틸(메트)아크릴레이트), 폴리(이소부틸(메트)아크릴레이트), 폴리(헥실(메트)아크릴레이트), 폴리(이소데실(메트)아크릴레이트), 폴리(라우릴(메트)아크릴레이트), 폴리(페닐(메트)아크릴레이트), 폴리(메틸 아크릴레이트), 폴리(이소프로필 아크릴레이트), 폴리(이소부틸 아크릴레이트), 폴리(옥타데실 아크릴레이트) 및 이의 코폴리머 및 혼합물, 폴리디옥사논 및 그것의 코폴리머, 폴리하이드록시알카노에이트, 폴리프로필렌 푸마레이트, 폴리옥시메틸렌, 폴록사머, 폴리(오르토)에스테르, 폴리(부티르산), 폴리(발레르산), 폴리(락타이드-코-카프로락톤), PEG-PLGA-PEG 및 트리메틸렌 카보네이트, 폴리비닐피롤리돈. 지질 나노입자는 하기로 코팅 또는 회합될 수 있다: 코폴리머 예컨대, 비제한적으로, 블록 코-폴리머 (예컨대 참조로 그 전문이 본 명세서에서 편입된, 국제 공개 번호 WO2013012476에서 기재된 분지형 폴리에테르-폴리아미드 블록 코폴리머), 및 (폴리(에틸렌 글리콜))-(폴리(프로필렌 옥사이드))-(폴리(에틸렌 글리콜)) 트리블록 코폴리머 (참고 예를 들면, 미국 공개 20120121718, 미국 공개 20100003337 및 미국 특허 번호 8,263,665, 이들 각각은 참조로 그 전문이 본 명세서에서 편입됨). 코-폴리머는 안전하다고 일반적으로 여겨지는 (GRAS) 폴리머일 수 있고 지질 나노입자의 형성은 신규한 화학적 독립체가 창출되지 않는 그와 같은 방식으로 될 수 있다. 예를 들어, 지질 나노입자는 여전히 인간 점액을 빠르게 침투할 수 있는 신규한 화학적 독립체 형성 없이 PLGA 나노입자를 코팅하는 폴록사머를 포함할 수 있다 (Yang 등 Angew. Chem. Int. Ed. 2011 50:25972600, 이들 내용은 참조로 그 전문이 본 명세서에서 편입됨). 인간 점액을 침투시킬 수 있는 나노입자를 생산하는 비제한적인 확장가능한 방법은 Xu 에 의해 기재된 (참고 예를 들면, J Control Release 2013, 170(2):279-86, 이 내용은 참조로 그 전문이 본 명세서에서 편입됨).
폴리머-비타민 콘주게이트의 비타민은 비타민 E일 수 있다. 콘주게이트의 비타민 부분은 다른 적합한 성분 예컨대, 비제한적으로, 비타민 A, 비타민 E, 다른 비타민, 콜레스테롤, 소수성 모이어티, 또는 다른 계면활성제 (예를 들면, 스테롤 사슬, 지방산, 탄화수소 사슬 및 알킬렌 옥사이드 사슬)의 소수성 성분으로 치환될 수 있다.
점액을 침투시키도록 조작된 지질 나노입자는 하기를 포함할 수 있다: 표면 변경 제제 예컨대, 비제한적으로, 폴리뉴클레오타이드, 음이온성 단백질 (예를 들면, 소 혈청 알부민), 계면활성제 (예를 들면, 양이온성 계면활성제 예컨대 예를 들어 디메틸디옥타데실-암모늄 브로마이드), 당류 또는 당 유도체 (예를 들면, 사이클로덱스트린), 핵산, 폴리머 (예를 들면, 헤파린, 폴리에틸렌 글리콜 및 폴록사머), 점질다당분해 제제 (예를 들면, N-아세틸시스테인, 마그워트, 브로멜라인, 파파인, 클레로덴드럼, 아세틸시스테인, 브롬헥신, 카보시스테인, 에프라지논, 메스나, 암브록솔, 소브레롤, 도미오돌, 레토스테인, 스테프로닌, 티오프로닌, 겔솔린, 티모신 β4 도르나제 알파, 넬테넥신, 에르도스테인) 및 rhDNase를 포함하는 다양한 DNases. 표면 변경 제제는 입자의 표면에서 포매 또는 걸려들 수 있거나 지질 나노입자의 표면에서 (예를 들면, 코팅, 흡착, 공유결합, 또는 다른 공정에 의해) 배치될 수 있다 (참고 예를 들면, 미국 공개 20100215580 및 미국 공개 20080166414 및 US20130164343 이들 각각의 내용은 참조로 그 전문이 본 명세서에서 편입됨).
일부 구현예에서, 점액 침투 지질 나노입자는 본 명세서에서 기재된 적어도 1종의 폴리뉴클레오타이드를 포함할 수 있다. 폴리뉴클레오타이드는 지질 나노입자에서 캡슐화될 수 있고/있거나 입자의 표면에서 배치될 수 있다. 폴리뉴클레오타이드는 지질 나노입자에 공유적으로 커플링될 수 있다. 점액 침투 지질 나노입자의 제형은 복수의 나노입자를 포함할 수 있다. 추가로, 제형은 점액과 상호작용할 수 있고 점막 조직에 점액 침투 지질 나노입자의 전달을 증가시킬 수 있는 점막부착을 감소시키기 위해 주위 점액의 구조적 및/또는 접착 특성을 변경시킬 수 있는 입자를 함유할 수 있다.
다른 구현예에서, 점액 침투 지질 나노입자는 점막 침투 향상 코팅물을 포함하는 저삼투압 제형일 수 있다. 제형은 전달되는 것에 상피에 대하여 저삼투압일 수 있다.
저삼투압 제형의 비-제한 예는 아래에 발견될 수 있다: 국제 공개 번호 WO2013110028, 이 내용은 참조로 그 전문이 본 명세서에서 편입된다.
일부 구현예에서, 점막 장벽을 통해 전달을 향상시키기 위해 RNA 백신 제형은 저삼투압 용액을 포함할 수 있거나 상기일 수 있다. 저삼투압 용액은 점막불활성 입자 예컨대, 비제한적으로, 점액-침투 입자가 질 상피성 표면에 도달할 수 있었던 비율을 증가시키는 것이 알려졌다 (참고 예를 들면, Ensign 등 Biomaterials 2013, 34(28):6922-9, 이 내용은 참조로 그 전문이 본 명세서에서 편입됨).
일부 구현예에서, RNA 백신은 하기로서 제형화된다: 리포플렉스, 예컨대, 비제한적으로, Silence Therapeutics (London, United Kingdom)으로부터 ATUPLEXTM 시스템, DACC 시스템, DBTC 시스템 및 다른 siRNA-리포플렉스 기술, STEMGENT® (Cambridge, MA)로부터 STEMFECTTM, 및 핵산의 폴리에틸렌이민 (PEI) 또는 프로타민-기반 표적화된 및 비-표적화된 전달 (Aleku 등 Cancer Res. 2008 68:9788-9798; Strumberg Int J Clin Pharmacol Ther 2012 50:76-78; Santel 등, Gene Ther 2006 13:1222-1234; Santel 등, Gene Ther 2006 13:1360-1370; Gutbier 등, Pulm Pharmacol. Ther. 2010 23:334-344; Kaufmann Microvasc Res 2010 80:286-293; Weide 등 J Immunother . 2009 32:498-507; Weide 등 J Immunother. 2008 31:180-188; Pascolo, Expert Opin . Biol . Ther. 4:1285-1294; Fotin-Mleczek , 2011 J. Immunother. 34:1-15; Song 등, Nature Biotechnol. 2005, 23:709-717; Peer 등, Proc Natl Acad Sci U S A. 2007 6;104:4095-4100; deFougerolles Hum Gene Ther . 2008 19:125-132; 이들 각각은 참조로 그 전문이본 명세서에서 편입됨).
일부 구현예에서, 이들이 비제한적으로 간세포, 면역 세포, 종양 세포, 내피 세포, 항원 제시 세포, 및 백혈구를 포함하는, 생체내 상이한 세포 유형에 수동적으로 또는 활동적으로 관련되는 정도로 상기 제형은 또한 작제될 수 있거나 조성물은 변경될 수 있다 (Akinc Mol Ther. 2010 18:1357-1364; Song 등, Nat Biotechnol. 2005 23:709-717; Judge 등, J Clin Invest. 2009 119:661-673; Kaufmann 등, Microvasc Res 2010 80:286-293; Santel 등, Gene Ther 2006 13:1222-1234; Santel 등, Gene Ther 2006 13:1360-1370; Gutbier 등, Pulm Pharmacol. Ther . 2010 23:334-344; Basha 등, Mol . Ther. 2011 19:2186-2200; Fenske and Cullis, Expert Opin Drug Deliv. 2008 5:25-44; Peer 등, Science. 2008 319:627-630; Peer and Lieberman, Gene Ther. 2011 18:1127-1133; 이들 각각은 참조로 그 전문이 본 명세서에서 편입됨). 간 세포에 제형의 수동적 표적화의 한 예는 아포지질단백질 E에 결합하고 생체내 간세포 속에 이들 제형의 결합 및 흡수를 촉진시키는 것으로 밝혀진 DLin-DMA, DLin-KC2-DMA 및 DLin-MC3-DMA-기반 지질 나노입자 제형을 포함한다 (Akinc Mol Ther. 2010 18:1357-1364; 참조로 그 전문이 본 명세서에서 편입됨). 제형은 또한 하기에 의해 예시된 바와 같이 그것의 표면에서 상이한 리간드의 발현을 통해 선택적으로 표적화될 수 있다: 비제한적으로, 폴레이트, 트랜스페린, N-아세틸갈락토사민 (GalNAc), 및 항체 표적화된 접근법 (Kolhatkar , Curr Drug Discov Technol . 2011 8:197-206; Musacchio and Torchilin, Front Biosci . 2011 16:1388-1412; Yu 등, Mol Membr Biol . 2010 27:286-298; Patil 등, Crit Rev Ther Drug Carrier Syst. 2008 25:1-61; Benoit 등, Biomacromolecules. 2011 12:2708-2714; Zhao 등, Expert Opin Drug Deliv. 2008 5:309-319; Akinc 등, Mol Ther. 2010 18:1357-1364; Srinivasan 등, Methods Mol Biol. 2012 820:105-116; Ben-Arie 등, Methods Mol Biol. 2012 757:497-507; Peer 2010 J Control Release. 20:63-68; Peer 등, Proc Natl Acad Sci U S A. 2007 104:4095-4100; Kim 등, Methods Mol Biol . 2011 721:339-353; Subramanya 등, Mol Ther . 2010 18:2028-2037; Song 등, Nat Biotechnol. 2005 23:709-717; Peer 등, Science. 2008 319:627-630; Peer and Lieberman, Gene Ther. 2011 18:1127-1133; 이들 각각은 참조로 그 전문이 본 명세서에서 편입됨).
일부 구현예에서, RNA (예를 들면, mRNA) 백신은 고체 지질 나노입자로서 제형화된다. 고체 지질 나노입자 (SLN)은 내지 1000 nm 평균 직경을 가진 구형일 수 있다. SLN은 친유성 분자를 가용화시킬 수 있고 계면활성제 및/또는 유화제로 안정화될 수 있는 고체 지질 코어 매트릭스를 보유한다. 다른 구현예에서, 지질 나노입자는 자가-조립 지질-폴리머 나노입자일 수 있다 (참고 Zhang 등, ACS Nano, 2008, 2 (8), pp 1696-1702; 이 내용은 참조로 그 전문이 본 명세서에서 편입됨). 비-제한 예로서, SLN은, 이 내용은 참조로 그 전문이 본 명세서에서 편입되는, 국제 공개 번호 WO2013105101에서 기재된 SLN일 수 있다. 또 다른 비-제한 예로서, SLN은, 이 내용은 참조로 그 전문이 본 명세서에서 편입되는, 국제 공개 번호 WO2013105101에서 기재된 방법 또는 공정에 의해 제조될 수 있다.
이들 제형이 RNA 백신에 의해 세포 형질감염을 증가시킬 수 있고/있거나; 인코딩된 단백질의 번역을 증가시킬 수 있음에 따라 리포좀, 리포플렉스, 또는 지질 나노입자는 폴리뉴클레오타이드 지향된 단백질 생산의 효능을 개선하는데 사용될 수 있다. 그와 같은 하나의 예는 폴리플렉스 플라스미드 DNA의 효과적인 전신 전달을 가능하게 하는 지질 캡슐화의 용도를 포함한다 (Heyes 등, Mol Ther. 2007 15:713-720; 참조로 그 전문이 본 명세서에서 편입됨). 리포좀, 리포플렉스, 또는 지질 나노입자는 폴리뉴클레오타이드의 안정성을 증가시키는데 또한 사용될 수 있다.
일부 구현예에서, 본 발명의 RNA (예를 들면, mRNA) 백신은 조절 방출 및/또는 표적화된 전달을 위하여 제형화될 수 있다. 본 명세서에서 사용된 바와 같이, "조절 방출"은 치료 결과의 방출 대 효과의 특정한 패턴에 순응하는 약제학적 조성물 또는 화합물 방출 프로파일을 지칭한다. 일부 구현예에서, RNA 백신은 조절 방출 및/또는 표적화된 전달을 위하여 당해 분야에서 공지된 및/또는 본 명세서에서 기재된 전달 제제 속에 캡슐화될 수 있다. 본 명세서에서 사용된 바와 같이, 용어 "캡슐화한다"는 봉입하거나, 둘러싸거나 케이스에 넣는 것을 의미한다. 본 발명의 화합물의 제형에 관련함에 따라, 캡슐화는 실질적, 완전 또는 부분적일 수 있다. 용어 "실질적으로 캡슐화된"은 본 발명의 약제학적 조성물 또는 화합물의 적어도 50, 60, 70, 80, 85, 90, 95, 96, 97, 98, 99, 99.9, 99.9 초과 또는 99.999% 초과가 전달 제제 내에 봉입될 수 있거나, 둘러싸일 수 있거나 케이스에 넣어질 수 있다는 것을 의미한다. "부분적으로 캡슐화"는 본 발명의 약제학적 조성물 또는 화합물의 10 미만, 10, 20, 30, 40 50 이하가 전달 제제 내에 봉입될 수 있거나, 둘러싸일 수 있거나 케이스에 넣어질 수 있다는 것을 의미한다. 유익하게는, 캡슐화는 형광 및/또는 전자 현미경사진을 이용하여 본 발명의 약제학적 조성물 또는 화합물의 누출 또는 활성 측정에 의해 결정될 수 있다. 예를 들어, 본 개시내용의 약제학적 조성물 또는 화합물의 적어도 1, 5, 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 85, 90, 95, 96, 97, 98, 99, 99.9, 99.99 또는 99.99% 초과는 전달 제제에서 캡슐화된다.
일부 구현예에서, 조절 방출 제형은, 비제한적으로, 트리-블록 코-폴리머를 포함할 수 있다. 비-제한 예로서, 제형은 2개의 상이한 유형의 트리-블록 코-폴리머를 포함할 수 있다 (국제 공개 번호 WO2012131104 및 WO2012131106; 이들 각각의 내용은 참조로 그 전문이 본 명세서에서 편입됨).
다른 구현예에서, RNA 백신은 지질 나노입자 또는 빠르게 제거된 지질 나노입자 속에 캡슐화될 수 있고 지질 나노입자 또는 빠르게 제거된 지질 나노입자는 그 다음 본 명세서에서 기재된 및/또는 당해 분야에서 공지된 폴리머, 하이드로겔 및/또는 외과적 밀봉제 속에 캡슐화될 수 있다. 비-제한 예로서, 폴리머, 하이드로겔 또는 외과적 밀봉제는 하기일 수 있다: PLGA, 에틸렌 비닐 아세테이트 (EVAc), 폴록사머, GELSITE® (Nanotherapeutics, Inc. Alachua, FL), HYLENEX® (Halozyme Therapeutics, San Diego CA), 외과적 밀봉제 예컨대 피브리노겐 폴리머 (Ethicon Inc. Cornelia, GA), TISSELL® (Baxter International, Inc Deerfield, IL), PEG-기반 밀봉제, 및 COSEAL® (Baxter International, Inc Deerfield, IL).
다른 구현예에서, 지질 나노입자는 대상체에 주사된 경우 겔을 형성할 수 있는 당해 분야에서 공지된 임의의 폴리머 속에 캡슐화될 수 있다. 또 다른 비-제한 예로서, 지질 나노입자는 생분해성일 수 있는 폴리머 매트릭스 속에 캡슐화될 수 있다.
일부 구현예에서, 조절 방출 및/또는 표적화된 전달용 RNA 백신 제형은 또한 적어도 1종의 조절 방출 코팅물을 포함할 수 있다. 조절 방출 코팅물은, 비제한적으로, 하기를 포함한다: OPADRY®, 폴리비닐피롤리돈/비닐 아세테이트 코폴리머, 폴리비닐피롤리돈, 하이드록시프로필 메틸셀룰로오스, 하이드록시프로필 셀룰로오스, 하이드록시에틸 셀룰로오스, EUDRAGIT RL®, EUDRAGIT RS® 및 셀룰로오스 유도체 예컨대 에틸셀룰로오스 수성 분산물 (AQUACOAT® 및 SURELEASE®).
일부 구현예에서, RNA (예를 들면, mRNA) 백신 조절 방출 및/또는 표적화된 전달 제형은 다중양이온성 측쇄를 함유할 수 있는 적어도 1종의 분해성 폴리에스테르를 포함할 수 있다. 분해성 폴리에스테르는, 비제한적으로, 폴리(세린 에스테르), 폴리(L-락타이드-코-L-라이신), 폴리(4-하이드록시-L-프롤린 에스테르), 및 이들의 조합을 포함한다. 다른 구현예에서, 분해성 폴리에스테르는 페길화된 폴리머를 형성하기 위해 PEG 콘주게이션을 포함할 수 있다.
일부 구현예에서, 적어도 1종의 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 RNA 백신 조절 방출 및/또는 표적화된 전달 제형은, 참조로 그 전문이 본 명세서에서 편입된, 미국 특허 번호 8,404,222에서 기재된 바와 같이 적어도 1종의 PEG 및/또는 PEG 관련된 폴리머 유도체를 포함할 수 있다.
다른 구현예에서, 적어도 1종의 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 RNA 백신 조절 방출 전달 제형은, 참조로 그 전문이 본 명세서에서 편입된, 미국 공개 번호 20130130348에서 기재된 조절 방출폴리머 시스템일 수 있다.
일부 구현예에서, 본 발명의 RNA (예를 들면, mRNA) 백신은, 본 명세서에서 "치료 나노입자 RNA 백신"으로서 지칭된, 치료 나노입자에서 캡슐화될 수 있다. 치료 나노입자는 하기에 의해 제형화될 수 있다: 본 명세서에서 기재된 및 당해 분야에서 공지된 방법 예컨대, 비제한적으로, 국제공개 번호 WO2010005740, WO2010030763, WO2010005721, WO2010005723, WO2012054923, 미국 공개 번호 US20110262491, US20100104645, US20100087337, US20100068285, US20110274759, US20100068286, US20120288541, US20130123351 및 US20130230567 및 미국 특허 번호 8,206,747, 8,293,276, 8,318,208 및 8,318,211, 이들 각각의 내용은 참조로 그 전문이 본 명세서에서 편입됨. 다른 구현예에서, 치료 폴리머 나노입자는 하기에서 기재된 방법에 의해 확인될 수 있다: 미국 공개 번호 US20120140790, 이의 내용은 참조로 그 전문이 본 명세서에서 편입됨.
일부 구현예에서, 치료 나노입자 RNA 백신은 지속 방출을 위하여 제형화될 수 있다. 본 명세서에서 사용된 바와 같이, "지속 방출"은 특이적 기간 동안 방출 속도에 순응하는 약제학적 조성물 또는 화합물을 지칭한다. 기간은, 비제한적으로, 시간, 일, 주, 월 및 년을 포함할 수 있다. 비-제한 예로서, 지속 방출 나노입자는 폴리머 및 치료제 예컨대, 비제한적으로, 본 발명의 폴리뉴클레오타이드를 포함할 수 있다 (참고 국제 공개 번호 2010075072 및 미국 공개 번호 US20100216804, US20110217377 및 US20120201859, 이들 각각은 참조로 그 전문이 본 명세서에서 편입됨). 또 다른 비-제한 예에서, 지속 방출 제형은 지속적 생체이용률을 허용하는 제제 예컨대, 비제한적으로, 결정, 거대분자 겔 및/또는 미립자 현탁액을 포함할 수 있다 (참고 미국 공개 번호 US20130150295, 이 내용은 참조로 그 전문이 본 명세서에서 편입됨).
일부 구현예에서, 치료 나노입자 RNA 백신은 표적 특이적이도록 제형화될 수 있다. 비-제한 예로서, 치료 나노입자는 코르티코스테로이드를 포함할 수 있다 (참고 국제 공개 번호 WO2011084518, 참조로 그 전문이 본 명세서에서 편입됨). 비-제한 예로서, 치료 나노입자는 하기에서 기재된 나노입자로 제형화될 수 있다: 국제공개 번호 WO2008121949, WO2010005726, WO2010005725, WO2011084521 및 미국 공개 번호 US20100069426, US20120004293 및 US20100104655, 이들 각각은 참조로 그 전문이 본 명세서에서 편입됨.
일부 구현예에서, 본 발명의 나노입자는 폴리머 매트릭스를 포함할 수 있다. 비-제한 예로서, 나노입자는 하기를 포함할 수 있다: 2 이상의 폴리머 예컨대, 비제한적으로, 폴리에틸렌, 폴리카보네이트, 폴리무수물, 폴리하이드록시산, 폴리프로필푸메레이트, 폴리카프로락톤, 폴리아미드, 폴리아세탈, 폴리에테르, 폴리에스테르, 폴리(오르토에스테르), 폴리시아노아크릴레이트, 폴리비닐 알코올, 폴리우레탄, 폴리포스파젠, 폴리아크릴레이트, 폴리메타크릴레이트, 폴리시아노아크릴레이트, 폴리우레아, 폴리스티렌, 폴리아민, 폴리라이신, 폴리(에틸렌 이민), 폴리(세린 에스테르), 폴리(L-락타이드-코-L-라이신), 폴리(4-하이드록시-L-프롤린 에스테르) 또는 이들의 조합.
일부 구현예에서, 치료 나노입자는 디블록 코폴리머를 포함한다. 일부 구현예에서, 디블록 코폴리머는 하기와 조합으로 PEG를 포함할 수 있다: 폴리머 예컨대, 비제한적으로, 폴리에틸렌, 폴리카보네이트, 폴리무수물, 폴리하이드록시산, 폴리프로pyl푸메레이트, 폴리카프로락톤, 폴리아미드, 폴리아세탈, 폴리에테르, 폴리에스테르, 폴리(오르토에스테르), 폴리시아노아크릴레이트, 폴리비닐 알코올, 폴리우레탄, 폴리포스파젠, 폴리아크릴레이트, 폴리메타크릴레이트, 폴리시아노아크릴레이트, 폴리우레아, 폴리스티렌, 폴리아민, 폴리라이신, 폴리(에틸렌 이민), 폴리(세린 에스테르), 폴리(L-락타이드-코-L-라이신), 폴리(4-하이드록시-L-프롤린 에스테르) 또는 이들의 조합. 더욱 다른 구현예에서, 디블록 코폴리머는 고-X 디블록 코폴리머 예컨대 하기에서 기재된 것일 수 있다: 국제 공개 번호 WO2013120052, 이 내용은 참조로 그 전문이 본 명세서에서 편입됨.
비-제한 예로서, 치료 나노입자는 PLGA-PEG 블록 코폴리머를 포함한다 (참고 미국 공개 번호 US20120004293 및 미국 특허 번호 8,236,330, 이들 각각은 참조로 그 전문이 본 명세서에서 편입됨). 또 다른 비-제한 예에서, 치료 나노입자는 PEG 및 PLA 또는 PEG 및 PLGA의 디블록 코폴리머를 포함하는 스텔스 나노입자이다 (참고 미국 특허 번호 8,246,968 및 국제 공개 번호 WO2012166923, 이들 각각의 내용은 참조로 그 전문이 본 명세서에서 편입됨). 더욱 또 다른 비-제한 예에서, 치료 나노입자는 하기에서 기재된 바와 같이 스텔스 나노입자 또는 표적-특이적 스텔스 나노입자이다: 미국 공개 번호 20130172406, 이의 내용은 참조로 그 전문이 본 명세서에서 편입됨.
일부 구현예에서, 치료 나노입자는 다중블록 코폴리머를 포함할 수 있다 (참고 예를 들면, 미국 특허 번호 8,263,665 및 8,287,910 및 미국 공개 번호 20130195987, 이들 각각의 내용은 참조로 그 전문이 본 명세서에서 편입됨).
더욱 또 다른 비-제한 예에서, 지질 나노입자는 블록 코폴리머 PEG-PLGA-PEG를 포함한다 (참고 예를 들면, Lee "Thermosensitive Hydrogel as a TGF-β1 Gene Delivery Vehicle Enhances Diabetic Wound Healing." Pharmaceutical Research, 2003 20(12): 1995-2000에서 TGF-beta1 유전자 전달 비히클로서 사용된; 및 Li "Controlled Gene Delivery System Based on Thermosensitive Biodegradable Hydrogel" Pharmaceutical Research 2003 20(6):884- 888; 및 Chang , "Non-ionic amphiphilic Biodegradable PEG-PLGA-PEG copolymer enhances gene delivery efficiency in rat skeletal muscle." J Controlled Release. 2007 118:245-253에서 제어된 유전자 전달 시스템으로서 사용된 감열 하이드로겔 (PEG-PLGA-PEG); 이들 각각은 참조로 그 전문이 본 명세서에서 편입됨). 본 개시내용의 RNA (예를 들면, mRNA) 백신은 PEG-PLGA-PEG 블록 코폴리머를 포함하는 지질 나노입자로 제형화될 수 있다.
일부 구현예에서, 본 명세서에서 기재된 블록 코폴리머는 비-폴리머성 교질입자 및 블록 코폴리머를 포함하는 다이온 복합체에서 포함될 수 있다. (참고 예를 들면, 미국 공개 번호 20120076836, 참조로 그 전문이 본 명세서에서 편입됨).
일부 구현예에서, 치료 나노입자는 적어도 1종의 아크릴 폴리머를 포함할 수 있다. 아크릴 폴리머는 비제한적으로, 하기를 포함한다: 아크릴산, 메타크릴산, 아크릴산 및 메타크릴산 코폴리머, 메틸 메타크릴레이트 코폴리머, 에톡시에틸 메타크릴레이트, 시아노에틸 메타크릴레이트, 아미노 알킬 메타크릴레이트 코폴리머, 폴리(아크릴산), 폴리(메타크릴산), 폴리시아노아크릴레이트 및 이들의 조합.
일부 구현예에서, 치료 나노입자는 적어도 1종의 폴리(비닐 에스테르) 폴리머를 포함할 수 있다. 폴리(비닐 에스테르) 폴리머는 코폴리머 예컨대 랜덤 코폴리머일 수 있다. 비-제한 예로서, 랜덤 코폴리머는 구조 예컨대 하기에서 기재된 것일 수 있다: 국제 공개 번호 WO2013032829 또는 미국 공개 번호 20130121954, 이들 내용은 참조로 그 전문이 본 명세서에서 편입됨. 일부 측면에서, 폴리(비닐 에스테르) 폴리머는 본 명세서에서 기재된 폴리뉴클레오타이드에 접합될 수 있다. 다른 측면에서, 본 발명에 사용될 수 있는 폴리(비닐 에스테르) 폴리머는 기재된 것들일 수 있다.
일부 구현예에서, 치료 나노입자는 적어도 1종의 디블록 코폴리머를 포함할 수 있다. 디블록 코폴리머는, 비제한적으로, 폴리(락트산) 산-폴리(에틸렌)글리콜 코폴리머일 수 있다 (참고 예를 들면, 국제 공개 번호 WO2013044219; 참조로 그 전문이 본 명세서에서 편입됨). 비-제한 예로서, 치료 나노입자는 암을 치료하는데 사용될 수 있다 (참고 국제 공개 번호 WO2013044219, 참조로 그 전문이 본 명세서에서 편입됨).
일부 구현예에서, 치료 나노입자는 본 명세서에서 기재된 및/또는 당해 분야에서 공지된 적어도 1종의 양이온성 폴리머를 포함할 수 있다.
일부 구현예에서, 치료 나노입자는 하기를 포함할 수 있다: 적어도 1종의 아민-함유 폴리머 예컨대, 비제한적으로 폴리라이신, 폴리에틸렌이민, 폴리(아미도아민) 덴드리머, 폴리(베타-아미노 에스테르) (참고 예를 들면, 미국 특허 번호 8,287,849, 참조로 그 전문이 본 명세서에서 편입됨) 및 이들의 조합. 다른 구현예에서, 본 명세서에서 기재된 나노입자는 아민 양이온성 지질 예컨대 이 내용은 참조로 그 전문이 본 명세서에서 편입되는, 국제 공개 번호 WO2013059496에서 기재된 것을 포함할 수 있다. 일부 측면에서 양이온성 지질은 아미노-아민 또는 아미노-아미드 모이어티를 가질 수 있다.
일부 구현예에서, 치료 나노입자는, 다중양이온성 측쇄를 함유할 수 있는, 적어도 1종의 분해성 폴리에스테르를 포함할 수 있다. 분해성 폴리에스테르는, 비제한적으로, 폴리(세린 에스테르), 폴리(L-락타이드-코-L-라이신), 폴리(4-하이드록시-L-프롤린 에스테르), 및 이들의 조합을 포함한다. 다른 구현예에서, 분해성 폴리에스테르는 페길화된 폴리머를 형성하기 위해 PEG 콘주게이션을 포함할 수 있다.
다른 구현예에서, 치료 나노입자는 적어도 1종의 표적 리간드의 콘주게이션을 포함할 수 있다. 표적화 리간드는 당해 분야에서 공지된 임의의 리간드 예컨대, 비제한적으로, 단클론성 항체일 수 있다 (Kirpotin 등, Cancer Res. 2006 66:6732-6740, 참조로 그 전문이 본 명세서에서 편입됨).
일부 구현예에서, 치료 나노입자는, 암을 표적하는데 사용될 수 있는, 수용액으로 제형화될 수 있다 (참고 국제 공개 번호 WO2011084513 및 미국 공개 번호 20110294717, 이들 각각은 참조로 그 전문이 본 명세서에서 편입됨).
일부 구현예에서, 치료 나노입자 RNA 백신, 예를 들면, 적어도 1종의 RNA 백신을 포함하는 치료 나노입자는, 참조로 그 전문이 본 명세서에서 편입되는, 미국 특허 번호 8,404,799에서 Podobinski 에 의해 기재된 방법을 이용하여 제형화될 수 있다.
일부 구현예에서, RNA (예를 들면, mRNA) 백신은 합성 나노캐리어로, 상기에 연결되어 및/또는 상기와 회합하여 캡슐화될 수 있다. 합성 나노캐리어는, 비제한적으로, 하기에서 기재된 것을 포함한다: 국제공개 번호 WO2010005740, WO2012149454 및 WO2013019669, 및 미국 공개 번호 US20110262491, US20100104645, US20100087337 및 US20120244222, 이들 각각은 참조로 그 전문이 본 명세서에서 편입됨. 합성 나노캐리어는 당해 분야에서 공지된 및/또는 본 명세서에서 기재된 방법을 이용하여 제형화될 수 있다. 비-제한 예로서, 합성 나노캐리어는 하기에서 기재된 방법에 의해 제형화될 수 있다: 국제공개 번호 WO2010005740, WO2010030763 및 WO201213501, 및 미국 공개 번호 US20110262491, US20100104645, US20100087337 및 US2012024422, 이들 각각은 참조로 그 전문이 본 명세서에서 편입됨. 다른 구현예에서, 합성 나노캐리어 제형은 하기에서 기재된 방법에 의해 동결건조될 수 있다: 국제 공개 번호 WO2011072218 및 미국 특허 번호 8,211,473, 이들 각각의 내용은 참조로 그 전문이 본 명세서에서 편입됨. 더욱 다른 구현예에서, 비제한적으로, 합성 나노캐리어를 포함하는, 본 발명의 제형은 하기에서 기재된 방법에 의해 동결건조 또는 재구성될 수 있다: 미국 공개 번호 20130230568, 이 내용은 참조로 그 전문이 본 명세서에서 편입됨.
일부 구현예에서, 합성 나노캐리어는 본 명세서에서 기재된 폴리뉴클레오타이드를 방출시키기 위해 반응성 기를 함유할 수 있다 (참고 국제 공개 번호 WO20120952552 및 미국 공개 번호 US20120171229, 이들 각각은 참조로 그 전문이 본 명세서에서 편입됨).
일부 구현예에서, 합성 나노캐리어는 합성 나노캐리어의 전달로부터 면역 반응을 향상시키기 위해 면역자극성 제제를 함유할 수 있다. 비-제한 예로서, 합성 나노캐리어는 면역계의 Th1-기반 반응을 향상시킬 수 있는 Th1 면역자극성 제제를 포함할 수 있다 (참고 국제 공개 번호 WO2010123569 및 미국 공개 번호 20110223201, 이들 각각은 참조로 그 전문이 본 명세서에서 편입됨).
일부 구현예에서, 합성 나노캐리어는 표적 방출을 위하여 제형화될 수 있다. 일부 구현예에서, 합성 나노캐리어는 지정된 pH에서 및/또는 요망된 시간 간격 후 폴리뉴클레오타이드를 방출시키기 위해 제형화된다. 비-제한 예로서, 합성 나노입자는 24 시간 후 및/또는 4.5의 pH에서 RNA 백신을 방출시키기 위해 제형화될 수 있다 (참고 국제공개 번호 WO2010138193 및 WO2010138194 및 미국 공개 번호 US20110020388 및 US20110027217, 이들 각각은 참조로 그들 전문이 본 명세서에서 편입됨).
일부 구현예에서, 합성 나노캐리어는 본 명세서에서 기재된 폴리뉴클레오타이드의 조절 및/또는 지속 방출을 위하여 제형화될 수 있다. 비-제한 예로서, 지속 방출용 합성 나노캐리어는 당해 분야에서 공지된, 본 명세서에서 기재된 및/또는 하기에서 기재된 바와 같은 방법에 의해 제형화될 수 있다: 국제 공개 번호 WO2010138192 및 미국 공개 번호 20100303850, 이들 각각은 참조로 그 전문이 본 명세서에서 편입됨.
일부 구현예에서, RNA 백신은 조절 및/또는 지속 방출을 위하여 제형화될 수 있고 여기서 상기 제형은 결정성 측쇄 (CYSC) 폴리머인 적어도 1종의 폴리머를 포함한다. CYSC 폴리머는, 참조로 그 전문이 본 명세서에서 편입된, 미국 특허 번호 8,399,007에서 기재된다.
일부 구현예에서, 합성 나노캐리어는 백신으로서 사용을 위하여 제형화될 수 있다. 일부 구현예에서, 합성 나노캐리어는 적어도 1종의 항원을 인코딩하는 적어도 1종의 폴리뉴클레오타이드를 캡슐화할 수 있다. 비-제한 예로서, 합성 나노캐리어는 백신 복용 형태를 위하여 적어도 1종의 항원 및 부형제를 포함할 수 있다 (참고 국제 공개 번호 WO2011150264 및 미국 공개 번호 20110293723, 이들 각각은 참조로 그 전문이 본 명세서에서 편입됨). 또 다른 비-제한 예로서, 백신 복용 형태는 동일한 또는 상이한 항원 및 부형제와 적어도 2 합성 나노캐리어를 포함할 수 있다 (참고 국제 공개 번호 WO2011150249 및 미국 공개 번호 20110293701, 이들 각각은 참조로 그 전문이 본 명세서에서 편입됨). 백신 복용 형태는 본 명세서에서 기재된, 당해 분야에서 공지된 및/또는 하기에서 기재된 방법에 의해 선택될 수 있다: 국제 공개 번호 WO2011150258 및 미국 공개 번호 US20120027806, 이들 각각은 참조로 그 전문이 본 명세서에서 편입됨).
일부 구현예에서, 합성 나노캐리어는 적어도 1종의 아쥬반트를 인코딩하는 적어도 1종의 폴리뉴클레오타이드를 포함할 수 있다. 비-제한 예로서, 아쥬반트는 하기를 포함할 수 있다: 디메틸디옥타데실암모늄-브로마이드, 디메틸디옥타데실암모늄-염화물, 디메틸디옥타데실암모늄-포스페이트 또는 디메틸디옥타데실암모늄-아세테이트 (DDA) 및 마이코박테리움의 총 지질의 무극성 분획 또는 상기 무극성 분획의 일부 (참고 예를 들면, 미국 특허 번호 8,241,610; 참조로 그 전문이 본 명세서에서 편입됨). 다른 구현예에서, 합성 나노캐리어는 적어도 1종의 폴리뉴클레오타이드 및 아쥬반트를 포함할 수 있다. 비-제한 예로서, 및 아쥬반트를 포함하는 합성 나노캐리어는 하기에서 기재된 방법에 의해 제형화될 수 있다: 국제 공개 번호 WO2011150240 및 미국 공개 번호 US20110293700, 이들 각각은 참조로 그 전문이 본 명세서에서 편입됨.
일부 구현예에서, 합성 나노캐리어는 바이러스로부터 펩타이드, 단편 또는 영역을 인코딩하는 적어도 1종의 폴리뉴클레오타이드를 캡슐화할 수 있다. 비-제한 예로서, 합성 나노캐리어는, 비제한적으로, 하기에서 기재된 나노캐리어를 포함할 수 있다: 국제공개 번호 WO2012024621, WO201202629, WO2012024632 및 미국 공개 번호 US20120064110, US20120058153 및 US20120058154, 이들 각각은 참조로 그 전문이 본 명세서에서 편입됨.
일부 구현예에서, 합성 나노캐리어는 체액성 및/또는 세포독성 T 림프구 (CTL) 반응을 유발시킬 수 있는 폴리뉴클레오타이드에 커플링될 수 있다 (참고 예를 들면, 국제 공개 번호 WO2013019669, 참조로 그 전문이 본 명세서에서 편입됨).
일부 구현예에서, RNA 백신은 쯔비터이온성 지질로, 상기에 연결되어 및/또는 상기와 회합하여 캡슐화될 수 있다. 쯔비터이온성 지질 및 쯔비터이온성 지질의 이용 방법의 비-제한 예는, 이 내용은 참조로 그 전문이 본 명세서에서 편입되는, 미국 공개 번호 20130216607에서 기재된다. 일부 측면에서, 쯔비터이온성 지질은 본 명세서에서 기재된 리포좀 및 지질 나노입자에서 사용될 수 있다.
일부 구현예에서, RNA 백신은, 이 내용은 참조로 그 전문이 본 명세서에서 편입되는, 미국 공개 번호 20130197100에서 기재된 바와 같이 콜로이드 나노캐리어로 제형화될 수 있다.
일부 구현예에서, 나노입자는 경구 투여를 위하여 최적화될 수 있다. 나노입자는 적어도 1종의 양이온성 생고분자 예컨대, 비제한적으로, 키토산 또는 이의 유도체를 포함할 수 있다. 비-제한 예로서, 나노입자는 하기에서 기재된 방법에 의해 제형화될 수 있다: 미국 공개 번호 20120282343; 참조로 그 전문이 본 명세서에서 편입됨.
일부 구현예에서, LNPs는 지질 KL52 (참조로 그 전문이 본 명세서에서 명확히 편입된 미국 출원 공개 번호 2012/0295832에서 개시된 아미노-지질)을 포함한다. LNP 투여의 (1종 이상의 ALT/AST, 백혈구 카운트 및 사이토카인 유도 검사에 의해 측정된 경우) 활성 및/또는 안전성은 상기 지질의 편입에 의해 개선될 수 있다. KL52를 포함하는 LNPs는 정맥내로 및/또는 1종 이상의 용량으로 투여될 수 있다. 일부 구현예에서, KL52를 포함하는 LNPs의 투여는 MC3을 포함하는 LNPs에 비교된 경우 동일 또는 개선된 mRNA 및/또는 단백질 발현을 초래한다.
일부 구현예에서, RNA 백신은 더 작은 LNPs를 이용하여 전달될 수 있다. 상기 입자는 0.1 μm 미만 최대 100 nm 예컨대, 비제한적으로, 0.1 μm 미만, 1.0 μm 미만, 5 μm 미만, 10 μm 미만, 15 μm 미만, 20 μm 미만, 25 μm 미만, 30 μm 미만, 35 μm 미만, 40 μm 미만, 50 μm 미만, 55 μm 미만, 60 μm 미만, 65 μm 미만, 70 μm 미만, 75 μm 미만, 80 μm 미만, 85 μm 미만, 90 μm 미만, 95 μm 미만, 100 μm 미만, 125 μm 미만, 150 μm 미만, 175 μm 미만, 200 μm 미만, 225 μm 미만, 250 μm 미만, 275 μm 미만, 300 μm 미만, 325 μm 미만, 350 μm 미만, 375 μm 미만, 400 μm 미만, 425 μm 미만, 450 μm 미만, 475 μm 미만, 500 μm 미만, 525 μm 미만, 550 μm 미만, 575 μm 미만, 600 μm 미만, 625 μm 미만, 650 μm 미만, 675 μm 미만, 700 μm 미만, 725 μm 미만, 750 μm 미만, 775 μm 미만, 800 μm 미만, 825 μm 미만, 850 μm 미만, 875 μm 미만, 900 μm 미만, 925 μm 미만, 950 μm, 또는 975 μm 미만의 직경을 포함할 수 있다.
다른 구현예에서, RNA (예를 들면, mRNA) 백신은 약 1 nM 내지 약 100 nm, 약 1 nM 내지 약 10 nm, 약 1 nM 내지 약 20 nm, 약 1 nM 내지 약 30 nm, 약 1 nM 내지 약 40 nm, 약 1 nM 내지 약 50 nm, 약 1 nM 내지 약 60 nm, 약 1 nM 내지 약 70 nm, 약 1 nM 내지 약 80 nm, 약 1 nM 내지 약 90 nm, 약 5 nM 내지 약 from 100 nm, 약 5 nM 내지 약 10 nm, 약 5 nM 내지 약 20 nm, 약 5 nM 내지 약 30 nm, 약 5 nM 내지 약 40 nm, 약 5 nM 내지 약 50 nm, 약 5 nM 내지 약 60 nm, 약 5 nM 내지 약 70 nm, 약 5 nM 내지 약 80 nm, 약 5 nM 내지 약 90 nm, 약 10 내지 약 50 nm, 약 20 내지 약 50 nm, 약 30 내지 약 50 nm, 약 40 내지 약 50 nm, 약 20 내지 약 60 nm, 약 30 내지 약 60 nm, 약 40 내지 약 60 nm, 약 20 내지 약 70 nm, 약 30 내지 약 70 nm, 약 40 내지 약 70 nm, 약 50 내지 약 70 nm, 약 60 내지 약 70 nm, 약 20 내지 약 80 nm, 약 30 내지 약 80 nm, 약 40 내지 약 80 nm, 약 50 내지 약 80 nm, 약 60 내지 약 80 nm, 약 20 내지 약 90 nm, 약 30 내지 약 90 nm, 약 40 내지 약 90 nm, 약 50 내지 약 90 nm, 약 60 내지 약 90 nm 및/또는 약 70 내지 약 90 nm 직경을 포함할 수 있는 더 작은 LNPs를 이용하여 전달될 수 있다.
일부 구현예에서, 상기 LNPs는 미세유체 혼합기를 포함하는 방법을 이용하여 합성된다. 예시적인 미세유체 혼합기는, 비제한적으로 하기를 포함할 수 있다: Microinnova (Allerheiligen bei Wildon, Austria)에 의해 제조된 것을 비제한적으로 포함하는 슬릿 인터디지털 마이크로믹서 및/또는 스태거드 헤링본 마이크로믹서 (SHM) (Zhigaltsev, I.V. , 밀리초 미세유체 혼합을 이용하는 수성 및 트리글리세라이드 코어를 가진 제한 크기 지질 나노입자 시스템의 상향식 설계 및 합성은 공개되었다 (Langmuir. 2012. 28:3633-40; Belliveau, N.M. , Microfluidic synthesis of highly potent limit-size lipid nanoparticles for in vivo delivery of siRNA. Molecular Therapy-Nucleic Acids. 2012. 1:e37; Chen, D. 등, Rapid discovery of potent siRNA-containing lipid nanoparticles enabled by controlled microfluidic formulation. J Am Chem Soc . 2012. 134(16):6948-51; 이들 각각은 참조로 그 전문이 본 명세서에서 편입됨).
일부 구현예에서, SHM을 포함하는 LNP 생성 방법은, 추가로 적어도 2개의 유입 스트림의 혼합을 포함하고 여기서 혼합은 미세구조-유도된 혼돈 이류 (MICA)에 의해 발생한다. 상기 방법에 따르면, 유체 스트림은 회전성 유동을 야기하는 및 서로 주변에 유체를 폴딩시키는 헤링본 패턴에서 존재하는 채널을 통해 유동한다. 상기 방법은 또한 유체 혼합용 표면을 포함할 수 있고 여기서 상기 표면은 유체 사이클링 동안 배향을 변화시킨다. SHM을 이용하는 LNPs 생성 방법은 하기에서 개시된 것을 포함한다: 미국 출원 공개 번호 2004/0262223 및 2012/0276209, 이들 각각은 참조로 그 전문이 본 명세서에서 명확히 편입됨.
일부 구현예에서, 본 발명의 RNA 백신은 마이크로믹서 예컨대, 비제한적으로, Institut fuer Mikrotechnik Mainz GmbH, Mainz Germany로부터) 충돌-제트 (IJMM) 또는 케터필러 (CPMM) 또는 표준 슬릿 인터디지털 마이크로 혼합기 (SSIMM) 또는 슬릿 인터디지털 미세구조화된 혼합기 (SIMM-V2)를 이용하여 창출된 지질 나노입자로 제형화될 수 있다.
일부 구현예에서, 본 개시내용의 RNA (예를 들면, mRNA) 백신은 미세유체 기술을 이용하여 창출된 지질 나노입자로 제형화될 수 있다 (참고 Whitesides, George M. The Origins and the Future of Microfluidics. Nature, 2006 442: 368-373; 및 Abraham Chaotic Mixer for Microchannels. Science, 2002 295: 647-651; 이들 각각은 참조로 그 전문이 본 명세서에서 편입됨). 비-제한 예로서, 제어된 미세유체 제형은 낮은 레이놀즈 수에서 마이크로 채널내 점진적 압력-유도된 유동의 스트림의 수동적인 혼합 방법을 포함한다 (참고 예를 들면, Abraham Chaotic Mixer for Microchannels. Science, 2002 295: 647651; 참조로 그 전문이 본 명세서에서 편입됨).
일부 구현예에서, 본 발명의 RNA (예를 들면, mRNA) 백신은 마이크로믹서 칩 예컨대, 비제한적으로, Harvard Apparatus (Holliston, MA) 또는 Dolomite Microfluidics (Royston, UK)으로부터의 것을 이용하여 창출된 지질 나노입자로 제형화될 수 있다. 마이크로믹서 칩은 분할 및 재조합 기전을 가진 2 이상의 유체 스트림의 급속 혼합을 위하여 사용될 수 있다.
일부 구현예에서, 본 발명의 RNA (예를 들면, mRNA) 백신은 하기에서 기재된 약물 캡슐화 마이크로구형체를 이용하는 전달을 위하여 제형화될 수 있다: 국제 공개 번호 WO2013063468 또는 미국 특허 번호 8,440,614, 이들 각각은 참조로 그 전문이 본 명세서에서 편입됨. 마이크로구형체는, 이 내용은 참조로 그 전문이 본 명세서에서 편입되는, 국제 공개 번호 WO2013063468에서 기재된 바와 같이 식 (I), (II), (III), (IV), (V) 또는 (VI)의 화합물을 포함할 수 있다. 다른 측면에서, 아미노산, 펩타이드, 폴리펩타이드, 지질 (APPL)은 세포에 본 발명의 RNA 백신의 전달에 유용하다 (참고 국제 공개 번호 WO2013063468, 이 내용은 참조로 그 전문이 본 명세서에서 편입됨).
일부 구현예에서, 본 개시내용의 RNA (예를 들면, mRNA) 백신은 직경 약 10 내지 약 100 nm 예컨대, 비제한적으로, 약 10 내지 약 20 nm, 약 10 내지 약 30 nm, 약 10 내지 약 40 nm, 약 10 내지 약 50 nm, 약 10 내지 약 60 nm, 약 10 내지 약 70 nm, 약 10 내지 약 80 nm, 약 10 내지 약 90 nm, 약 20 내지 약 30 nm, 약 20 내지 약 40 nm, 약 20 내지 약 50 nm, 약 20 내지 약 60 nm, 약 20 내지 약 70 nm, 약 20 내지 약 80 nm, 약 20 내지 약 90 nm, 약 20 내지 약 100 nm, 약 30 내지 약 40 nm, 약 30 내지 약 50 nm, 약 30 내지 약 60 nm, 약 30 내지 약 70 nm, 약 30 내지 약 80 nm, 약 30 내지 약 90 nm, 약 30 내지 약 100 nm, 약 40 내지 약 50 nm, 약 40 내지 약 60 nm, 약 40 내지 약 70 nm, 약 40 내지 약 80 nm, 약 40 내지 약 90 nm, 약 40 내지 약 100 nm, 약 50 내지 약 60 nm, 약 50 내지 약 70 nm 약 50 내지 약 80 nm, 약 50 내지 약 90 nm, 약 50 내지 약 100 nm, 약 60 내지 약 70 nm, 약 60 내지 약 80 nm, 약 60 내지 약 90 nm, 약 60 내지 약 100 nm, 약 70 내지 약 80 nm, 약 70 내지 약 90 nm, 약 70 내지 약 100 nm, 약 80 내지 약 90 nm, 약 80 내지 약 100 nm 및/또는 약 90 내지 약 100 nm를 갖는 지질 나노입자로 제형화될 수 있다.
일부 구현예에서, 지질 나노입자는 직경 약 10 내지 500 nm를 가질 수 있다.
일부 구현예에서, 지질 나노입자는 직경 100 nm 초과, 150 nm 초과, 200 nm 초과, 250 nm 초과, 300 nm 초과, 350 nm 초과, 400 nm 초과, 450 nm 초과, 500 nm 초과, 550 nm 초과, 600 nm 초과, 650 nm 초과, 700 nm 초과, 750 nm 초과, 800 nm 초과, 850 nm 초과, 900 nm 초과, 950 nm 초과 또는 1000 nm 초과를 가질 수 있다.
일부 측면에서, 지질 나노입자는, 이 내용은 참조로 그 전문이 본 명세서에서 편입되는, 국제 공개 번호 WO2013059922에서 기재된 제한 크기 지질 나노입자일 수 있다. 제한 크기 지질 나노입자는 수성 코어 또는 소수성 코어를 둘러싸는 지질 이중층을 포함할 수 있고; 여기에서 상기 지질 이중층은 인지질 예컨대, 비제한적으로, 디아실포스파티딜콜린, 디아실포스파티딜에탄올아민, 세라미드, 스핑고미엘린, 디하이드로스핑고미엘린, 세팔린, 세레브로시드, C8-C20 지방산 디아실포파티딜콜린, 및 1-팔미토일-2-올레오일 포스파티딜콜린 (POPC)를 포함할 수 있다. 다른 측면에서 제한 크기 지질 나노입자는 폴리에틸렌 글리콜-지질 예컨대, 비제한적으로, DLPE-PEG, DMPE-PEG, DPPC-PEG 및 DSPE-PEG를 포함할 수 있다.
일부 구현예에서, RNA 백신은, 이 내용은 참조로 그 전문이 본 명세서에서 편입되는, 국제 공개 번호 WO2013063530에서 기재된 전달 방법을 이용하여 특이적 위치에서 전달, 국재화 및/또는 농축될 수 있다. 비-제한 예로서, 대상체는 대상체에 RNA 백신 전달 이전, 동시 또는 이후 비어있는 폴리머 입자가 투여될 수 있다. 비어있는 폴리머 입자는 일단 대상체와 접촉되면 용적에서 변화를 경험하고 대상체에서 특이적 위치에 박히거나, 포매되거나, 고정되거나 포획된다.
일부 구현예에서, RNA 백신은 활성 서브스턴스 방출 시스템에서 제형화될 수 있다 (참고 예를 들면, 미국 공개 번호 US20130102545, 이 내용은 참조로 그 전문이 본 명세서에서 편입됨). 활성 서브스턴스 방출 시스템은 1) 촉매적으로 활성 핵산과 혼성화될 수 있는 올리고뉴클레오타이드 억제제 가닥에 결합된 적어도 1종의 나노입자 및 2) 치료적으로 활성 서브스턴스 (예를 들면, 본 명세서에서 기재된 폴리뉴클레오타이드)에 결합된 적어도 1종의 기질 분자에 결합된 화합물을 포함할 수 있고, 여기에서 치료적으로 활성 서브스턴스는 촉매적으로 활성 핵산에 의한 기질 분자의 절단에 의해 방출된다.
일부 구현예에서, RNA (예를 들면, mRNA) 백신은 비-세포 물질을 포함하는 내부 코어 및 세포 막을 포함하는 외면을 포함하는 나노입자로 제형화될 수 있다. 세포 막은 바이러스로부터 유래된 세포 또는 막으로부터 유래될 수 있다. 비-제한 예로서, 나노입자는, 참조로 그 전문이 본 명세서에서 편입된, 국제 공개 번호 WO2013052167에서 기재된 방법에 의해 제조될 수 있다. 또 다른 비-제한 예로서, 참조로 그 전문이 본 명세서에서 편입된, 국제 공개 번호 WO2013052167에서 기재된 나노입자는 본 명세서에서 기재된 RNA 백신을 전달하는데 사용될 수 있다.
일부 구현예에서, RNA 백신은 다공성 나노입자-지지된 지질 이중층 (프로토셀)로 제형화될 수 있다. 프로토셀은, 이 내용은 참조로 그 전문이 본 명세서에서 편입되는, 국제 공개 번호 WO2013056132에서 기재된다.
일부 구현예에서, 본 명세서에서 기재된 RNA 백신은 하기에서 기재된 바와 같이 또는 하기에서 기재된 방법에 의해 제조된 폴리머 나노입자로 제형화될 수 있다: 미국 특허 번호 8,420,123 및 8,518,963 및 유럽 특허 번호 EP2073848B1, 이들 각각의 내용은 참조로 그 전문이 본 명세서에서 편입됨. 비-제한 예로서, 폴리머 나노입자 예컨대 하기에서 기재된 나노입자 또는 하기에서 기재된 방법에 의해 제조된 나노입자는 높은 유리전이 온도를 가질 수 있다: 미국 특허 번호 8,518,963, 이 내용은 참조로 그 전문이 본 명세서에서 편입됨. 또 다른 비-제한 예로서, 경구 및 비경구 제형용 폴리머 나노입자는, 이 내용은 참조로 그 전문이 본 명세서에서 편입되는, 유럽 특허 번호 EP2073848B1에서 기재된 방법에 의해 제조될 수 있다.
다른 구현예에서, 본 명세서에서 기재된 RNA (예를 들면, mRNA) 백신은 이미지형성에서 사용된 나노입자로 제형화될 수 있다. 나노입자는 리포좀 나노입자 예컨대, 참조로 그 전문이 본 명세서에서 편입된, 미국 공개 번호 20130129636에서 기재된 것일 수 있다. 비-제한 예로서, 리포좀은 가돌리늄(III)2-{4,7-비스-카복시메틸-10-[(N,N-디스테아릴아미도메틸-N'-아미도-메틸]-1,4,7,10-테트라-아자사이클로도데크-1-일}-아세트산 및 중성, 완전 포화된 인지질 성분을 포함할 수 있다 (참고 예를 들면, 미국 공개 번호 US20130129636, 이 내용은 참조로 그 전문이 본 명세서에서 편입됨).
일부 구현예에서, 본 발명에서 사용될 수 있는 나노입자는, 이 내용은 참조로 그 전문이 본 명세서에서 편입되는, 미국 특허 출원 번호 20130130348에서 기재된 방법에 의해 형성된다.
본 발명의 나노입자는 영양소 예컨대, 비제한적으로, 빈혈부터 신경관 결함까지 건강 위험으로 이어질 수 있는 것을 추가로 포함할 수 있다 (참고 예를 들면, 이 내용은 참조로 그 전문이 본 명세서에서 편입되는, 국제 특허 공개 번호 WO2013072929에서 기재된 나노입자). 비-제한 예로서, 영양소는 제일철, 제이철 염 또는 원소 철, 요오드, 엽산, 비타민 또는 미량영양소의 형태로 철일 수 있다.
일부 구현예에서, 본 발명의 RNA (예를 들면, mRNA) 백신은 팽윤성 나노입자로 제형화될 수 있다. 팽윤성 나노입자는, 비제한적으로, 이 내용은 참조로 그 전문이 본 명세서에서 편입되는, 미국 특허 번호 8,440,231에서 기재된 것일 수 있다. 비제한적인 구현예로서, 팽윤성 나노입자는 호흡기계에 본 발명의 RNA (예를 들면, mRNA) 백신의 전달을 위하여 사용될 수 있다 (참고 예를 들면, 미국 특허 번호 8,440,231, 이 내용은 참조로 그 전문이 본 명세서에서 편입됨).
본 발명의 RNA (예를 들면, mRNA) 백신은 폴리무수물 나노입자 예컨대, 비제한적으로, 하기에서 기재된 것으로 제형화될 수 있다: 미국 특허 번호 8,449,916, 이 내용은 참조로 그 전문이 본 명세서에서 편입됨. 본 발명의 나노입자 및 극미립자는 대식세포 및/또는 면역 반응을 조절하도록 기하학적으로 조작될 수 있다. 일부 측면에서, 기하학적으로 조작된 입자는 표적화된 전달 예컨대, 비제한적으로, 폐 전달을 위하여 본 발명의 폴리뉴클레오타이드를 편입시키기 위해 가변형 형상, 크기 및/또는 표면 전하를 가질 수 있다 (참고 예를 들면, 국제 공개 번호 WO2013082111, 이 내용은 참조로 그 전문이 본 명세서에서 편입됨). 다른 물리적 특징 기하학적으로 공학기술 입자는, 비제한적으로, 개창술, 각진 아암, 비대칭 및 표면 조도, 세포 및 조직과 상호작용을 변경시킬 수 있는 전하를 갖는다 포함할 수 있다. 비-제한 예로서, 본 발명의 나노입자는 하기에서 기재된 방법에 의해 제조될 수 있다: 국제공개 번호 WO2013082111, 이 내용은 참조로 그 전문이 본 명세서에서 편입됨.
일부 구현예에서, 본 발명의 나노입자는 수용성 나노입자 예컨대, 비제한적으로, 하기에서 기재된 것들일 수 있다: 국제공개 번호 WO2013090601, 이의 내용은 참조로 그 전문이 본 명세서에 편입됨. 나노입자는 양호한 수용성을 나타내기 위해 압축 및 쯔비터이온성 리간드를 갖는 무기 나노입자일 수 있다. 나노입자는 또한 작은 유체역학적 직경 (HD), 시간에 대하여 안정성, pH, 및 염분 그리고 저수준의 비-특이적 단백질 결합을 가질 수 있다.
일부 구현예에서 본 발명의 나노입자는 하기에서 기재된 방법에 의해 개발될 수 있다: 미국 공개 번호 US20130172406, 이 내용은 참조로 그 전문이 본 명세서에서 편입됨.
일부 구현예에서, 본 발명의 나노입자는 스텔스 나노입자 또는 표적-특이적 스텔스 나노입자 예컨대, 비제한적으로, 하기에서 기재된 것들이다: 미국 공개 번호 20130172406, 이 내용은 참조로 그 전문이 본 명세서에서 편입됨. 본 발명의 나노입자는 하기에서 기재된 방법에 의해 제조될 수 있다: 미국 공개 번호 20130172406, 이 내용은 참조로 그 전문이 본 명세서에서 편입됨.
다른 구현예에서, 스텔스 또는 표적-특이적 스텔스 나노입자는 폴리머 매트릭스를 포함할 수 있다. 폴리머 매트릭스는 하기를 포함할 수 있다: 2 이상의 폴리머 예컨대, 비제한적으로, 폴리에틸렌, 폴리카보네이트, 폴리무수물, 폴리하이드록시산, 폴리프로필푸메레이트, 폴리카프로락톤, 폴리아미드, 폴리아세탈, 폴리에테르, 폴리에스테르, 폴리(오르토에스테르), 폴리시아노아크릴레이트, 폴리비닐 알코올, 폴리우레탄, 폴리포스파젠, 폴리아크릴레이트, 폴리메타크릴레이트, 폴리시아노아크릴레이트, 폴리우레아, 폴리스티렌, 폴리아민, 폴리에스테르, 폴리무수물, 폴리에테르, 폴리우레탄, 폴리메타크릴레이트, 폴리아크릴레이트, 폴리시아노아크릴레이트 또는 이들의 조합.
일부 구현예에서, 나노입자는 고밀도 핵산 층을 갖는 나노입자-핵산 하이브리드 구조일 수 있다. 비-제한 예로서, 나노입자-핵산 하이브리드 구조는 하기에서 기재된 방법에 의해 제조될 수 있다: 미국 공개 번호 20130171646, 이 내용은 참조로 그 전문이 본 명세서에서 편입됨. 나노입자는 핵산 예컨대, 비제한적으로, 본 명세서에서 기재된 및/또는 당해 분야에서 공지된 폴리뉴클레오타이드를 포함할 수 있다.
본 발명의 적어도 1종의 나노입자는 코어 a 나노구조에서 포매될 수 있거나 나노구조의 표면에서 또는 그 안에서 적어도 1종의 적재물을 운반 또는 회합할 수 있는 코팅물 또는 저밀도 다공성 3-D 구조로 코팅될 수 있다. 적어도 1종의 나노입자를 포함하는 나노구조의 비-제한 예는 하기에서 기재된다: 국제 공개 번호 WO2013123523, 이 내용은 참조로 그 전문이 본 명세서에서 편입됨.
백신 투여의 방식
VZV RNA (예를 들면, mRNA) 백신은 치료적으로 효과적인 결과를 초래하는 임의의 경로로 투여될 수 있다. 이들은, 비제한적으로, 진피내, 근육내, 비강내, 및/또는 피하 투여를 포함한다. 본 개시내용은 필요로 하는 대상체에 RNA 백신을 투여하는 것을 포함하는 방법을 제공한다. 요구된 정확한 양은, 종, 연령, 및 대상체의 일반적인 조건, 질환의 중증도, 특정한 조성물, 그것의 투여 방식, 그것의 활성 방식, 및 기타 동종에 의존하여, 대상체부터 대상체까지 다양할 것이다. VZV RNA (예를 들면, mRNA) 백신 조성물은 투여의 용이성 및 복용량의 균일성을 위하여 복용량 단위로 전형적으로 제형화된다. 그러나, 총 1일 사용량의 VZV RNA (예를 들면, mRNA) 백신 조성물이 건전한 의료 판단의 범위 내에서 주치의에 의해 결정될 수 있다는 것이 이해될 것이다. 임의의 특정한 환자에 대하여 특정 치료적으로 효과적인, 예방적으로 효과적인, 또는 적절한 이미지형성 용량 수준은 하기를 포함하는 다양한 인자에 의존할 것이다: 치료받는 장애 및 장애의 중증도; 이용된 특이적 화합물의 활성; 이용된 특이적 조성물; 환자의 연령, 체중, 일반적인 건강, 성별 및 식이; 투여의 시간, 투여의 경로, 및 이용된 특이적 화합물의 배출 속도; 치료의 지속기간; 이용된 특이적 화합물과 조합으로 사용된 또는 일치하는 약물; 및 의술에서 잘 알려진 유사 인자.
일부 구현예에서, VZV RNA (예를 들면, mRNA) 백신 조성물은 요망된 치료적, 진단적, 예방적, 또는 이미지형성 효과를 달성하기 위해 하루에, 주당, 개월당 1회 이상, 일당 0.0001 mg/kg 내지 100 mg/kg, 0.001 mg/kg 내지 0.05 mg/kg, 0.005 mg/kg 내지 0.05 mg/kg, 0.001 mg/kg 내지 0.005 mg/kg, 0.05 mg/kg 내지 0.5 mg/kg, 0.01 mg/kg 내지 50 mg/kg, 0.1 mg/kg 내지 40 mg/kg, 0.5 mg/kg 내지 30 mg/kg, 0.01 mg/kg 내지 10 mg/kg, 0.1 mg/kg 내지 10 mg/kg, 또는 1 mg/kg 내지 25 mg/kg의 대상체 체중을 전달하기에 충분한 복용량 수준에서 투여될 수 있다 (참고 예를 들면, 참조로 그 전문이 본 명세서에서 편입된, 국제 공개 번호 WO2013078199에서 기재된 단위 용량의 범위). 요망된 복용량은 3회 1일, 2회 1일, 1회 1일, 매 2일, 매 3일, 매주, 매 2주, 매 3주, 매 4주, 매 2개월, 매 3개월, 매 6개월 등으로 전달될 수 있다. 특정 구현예에서, 요망된 복용량은 다중 투여 (예를 들면, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 또는 초과 투여)를 이용하여 전달될 수 있다. 다중 투여가 이용되는 경우, 분할 투약 요법 예컨대 본 명세서에서 기재된 것이 사용될 수 있다. 예시적인 구현예에서, VZV RNA (예를 들면, mRNA) 백신 조성물은 0.0005 mg/kg 내지 0.01 mg/kg, 예를 들면, 약 0.0005 mg/kg 내지 약 0.0075 mg/kg, 예를 들면, 약 0.0005 mg/kg, 약 0.001 mg/kg, 약 0.002 mg/kg, 약 0.003 mg/kg, 약 0.004 mg/kg 또는 약 0.005 mg/kg을 전달하는데 충분한 복용량 수준에서 투여될 수 있다.
일부 구현예에서, VZV RNA (예를 들면, mRNA) 백신 조성물은 0.025 mg/kg 내지 0.250 mg/kg, 0.025 mg/kg 내지 0.500 mg/kg, 0.025 mg/kg 내지 0.750 mg/kg, 또는 0.025 mg/kg 내지 1.0 mg/kg을 전달하는데 충분한 복용량 수준에서 1회 또는 2회 (또는 초과) 투여될 수 있다.
일부 구현예에서, VZV RNA (예를 들면, mRNA) 백신 조성물은 0.0100 mg, 0.025 mg, 0.050 mg, 0.075 mg, 0.100 mg, 0.125 mg, 0.150 mg, 0.175 mg, 0.200 mg, 0.225 mg, 0.250 mg, 0.275 mg, 0.300 mg, 0.325 mg, 0.350 mg, 0.375 mg, 0.400 mg, 0.425 mg, 0.450 mg, 0.475 mg, 0.500 mg, 0.525 mg, 0.550 mg, 0.575 mg, 0.600 mg, 0.625 mg, 0.650 mg, 0.675 mg, 0.700 mg, 0.725 mg, 0.750 mg, 0.775 mg, 0.800 mg, 0.825 mg, 0.850 mg, 0.875 mg, 0.900 mg, 0.925 mg, 0.950 mg, 0.975 mg, 또는 1.0 mg의 총 용량을 전달하는데 충분한 복용량 수준에서 또는 상기의 총 용량에서 2회 (예를 들면, 일 0 및 일 7, 일 0 및 일 14, 일 0 및 일 21, 일 0 및 일 28, 일 0 및 일 60, 일 0 및 일 90, 일 0 및 일 120, 일 0 및 일 150, 일 0 및 일 180, 일 0 및 3 개월 후, 일 0 및 6 개월 후, 일 0 및 9 개월 후, 일 0 및 12 개월 후, 일 0 및 18 개월 후, 일 0 및 2 년 후, 일 0 및 5 년 후, 또는 일 0 및 10 년 후) 투여될 수 있다. 더 높은 및 더 낮은 투약량 및 투여의 빈도는 본 개시내용에 의해 포함된다. 예를 들어, VZV RNA (예를 들면, mRNA) 백신 조성물은 3 또는 4회 투여될 수 있다.
일부 구현예에서, VZV RNA (예를 들면, mRNA) 백신 조성물은 0.010 mg, 0.025 mg, 0.100 mg 또는 0.400 mg의 총 용량을 전달하는데 충분한 복용량 수준에서 또는 상기의 총 용량에서 2회 (예를 들면, 일 0 및 일 7, 일 0 및 일 14, 일 0 및 일 21, 일 0 및 일 28, 일 0 및 일 60, 일 0 및 일 90, 일 0 및 일 120, 일 0 및 일 150, 일 0 및 일 180, 일 0 및 3 개월 후, 일 0 및 6 개월 후, 일 0 및 9 개월 후, 일 0 및 12 개월 후, 일 0 및 18 개월 후, 일 0 및 2 년 후, 일 0 및 5 년 후, 또는 일 0 및 10 년 후) 투여될 수 있다.
일부 구현예에서 대상체 백신접종의 방법에서 사용을 위하여 VZV RNA (예를 들면, mRNA) 백신은 대상체를 백신접종하기 위한 유효량으로 핵산 백신의 10 μg/kg 내지 400 μg/kg의 단일 복용량이 대상체에 투여된다. 일부 구현예에서 대상체 백신접종의 방법에서 사용을 위하여 RNA 백신은 대상체를 백신접종하기 위한 유효량으로 핵산 백신의 10 μg 내지 400 μg의 단일 복용량이 대상체에 투여된다. 일부 구현예에서, 대상체 백신접종의 방법에서 사용을 위하여 VZV RNA (예를 들면, mRNA) 백신은 25-1000 μg의 단일 복용량 (예를 들면, VZV 항원을 인코딩하는 mRNA의 단일 복용량)으로서 대상체에 투여된다. 일부 구현예에서, VZV RNA 백신은 25, 50, 100, 150, 200, 250, 300, 350, 400, 450, 500, 550, 600, 650, 700, 750, 800, 850, 900, 950 또는 1000 μg의 단일 복용량으로서 대상체에 투여된다. 예를 들어, VZV RNA 백신은 25-100, 25-500, 50-100, 50-500, 50-1000, 100-500, 100-1000, 250-500, 250-1000, 또는 500-1000 μg의 단일 용량으로서 대상체에 투여될 수 있다. 일부 구현예에서, 대상체 백신접종의 방법에서 사용을 위하여 VZV RNA (예를 들면, mRNA) 백신은 VZV RNA (예를 들면, mRNA) 백신의 25-1000 μg에 맞먹는 조합을, 2개 투약량으로서 대상체에 투여된다.
본 명세서에서 기재된 VZV RNA (예를 들면, mRNA) 백신 약제학적 조성물은 본 명세서에서 기재된 복용 형태로, 예컨대 비강내, 기관내, 또는 주사가능 (예를 들면, 정맥내, 안구내, 초자체내, 근육내, 진피내, 심장내, 복강내, 및 피하) 형태로 제형화될 수 있다.
VZV RNA 백신 제형 및 이용 방법
본 개시내용의 일부 측면은 VZV RNA (예를 들면, mRNA) 백신의 제형을 제공하고, 여기서 상기 VZV RNA 백신은 대상체에서 항원 특이적 면역 반응 (예를 들면, 항-VZV 항원성 폴리펩타이드에 특이적인 항체의 생산)을 생산하기 위한 유효량으로 제형화된다. "유효량"은 항원-특이적 면역 반응을 생산하는데 효과적인 VZV RNA (예를 들면, mRNA) 백신의 용량이다. 대상체에서 항원-특이적 면역 반응의 유도 방법이 또한 본 명세서에서 제공된다.
일부 구현예에서, 항원-특이적 면역 반응은 본 명세서에서 제공된 바와 같이 VZV RNA (예를 들면, mRNA) 백신 투여된 대상체에서 생산된 항-VZV 항원성 폴리펩타이드 항체 역가 측정을 특징으로 한다. 항체 역가는 대상체 내에서 항체, 예를 들어, 특정한 항원 (예를 들면, 항-VZV 항원성 폴리펩타이드) 또는 항원의 에피토프에 특이적인 항체의 양의 측정이다. 항체 역가는 긍정적인 결과를 제공하는 최대 희석의 역수로서 전형적으로 표현된다. 효소-결합 면역흡착 검정 (ELISA)은, 예를 들어, 항체 역가 측정을 위한 흔한 검정이다.
일부 구현예에서, 항체 역가는 대상체가 감염을 갖는지를 평가하는데 또는 면역화가 요구되는지를 결정하는데 사용된다. 일부 구현예에서, 항체 역가는 자가면역 반응의 강도를 결정하는데, 부스터 면역화가 필요한지를 결정하는데, 이전의 백신이 효과적이었는지를 결정하는데, 그리고 임의의 최근 또는 선행 감염을 확인하는데 사용된다. 본 개시내용에 따르면, 항체 역가는 VZV RNA (예를 들면, mRNA) 백신에 의해 대상체에서 유도된 면역 반응의 강도를 결정하는데 사용될 수 있다.
일부 구현예에서, 대상체에서 생산된 항-VZV 항원성 폴리펩타이드 항체 역가는 대조군에 비해 적어도 1 log만큼 증가된다. 예를 들어, 대상체에서 생산된 항-VZV 항원성 폴리펩타이드 항체 역가는 대조군에 비해 적어도 1.5, 적어도 2, 적어도 2.5, 또는 적어도 3 log만큼 증가될 수 있다. 일부 구현예에서, 대상체에서 생산된 항-VZV 항원성 폴리펩타이드 항체 역가는 대조군에 비해 1, 1.5, 2, 2.5 또는 3 log만큼 증가된다. 일부 구현예에서, 대상체에서 생산된 항-VZV 항원성 폴리펩타이드 항체 역가는 대조군에 비해 1-3 log만큼 증가된다. 예를 들어, 대상체에서 생산된 항-VZV 항원성 폴리펩타이드 항체 역가는 대조군에 비해 1-1.5, 1-2, 1-2.5, 1-3, 1.5-2, 1.5-2.5, 1.5-3, 2-2.5, 2-3, 또는 2.5-3 log만큼 증가될 수 있다.
일부 구현예에서, 대상체에서 생산된 항-VZV 항원성 폴리펩타이드 항체 역가는 대조군에 비해 적어도 2 배 증가된다. 예를 들어, 대상체에서 생산된 항-VZV 항원성 폴리펩타이드 항체 역가는 대조군에 비해 적어도 3 배, 적어도 4 배, 적어도 5 배, 적어도 6 배, 적어도 7 배, 적어도 8 배, 적어도 9 배, 또는 적어도 10 배 증가될 수 있다. 일부 구현예에서, 대상체에서 생산된 항-VZV 항원성 폴리펩타이드 항체 역가는 대조군에 비해 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 또는 10 배 증가된다. 일부 구현예에서, 대상체에서 생산된 항-VZV 항원성 폴리펩타이드 항체 역가는 대조군에 비해 2-10 배 증가된다. 예를 들어, 대상체에서 생산된 항-VZV 항원성 폴리펩타이드 항체 역가는 대조군에 비해 2-10, 2-9, 2-8, 2-7, 2-6, 2-5, 2-4, 2-3, 3-10, 3-9, 3-8, 3-7, 3-6, 3-5, 3-4, 4-10, 4-9, 4-8, 4-7, 4-6, 4-5, 5-10, 5-9, 5-8, 5-7, 5-6, 6-10, 6-9, 6-8, 6-7, 7-10, 7-9, 7-8, 8-10, 8-9, 또는 9-10 배 증가될 수 있다.
대조군은, 일부 구현예에서, VZV RNA (예를 들면, mRNA) 백신이 투여되지 않은 대상체에서 생산된 항-VZV 항원성 폴리펩타이드 항체 역가이다. 일부 구현예에서, 대조군은 살아있는 약독화된 VZV 백신이 투여된 대상체에서 생산된 항-VZV 항원성 폴리펩타이드 항체 역가이다. 약독화된 백신은 생존가능한 (살아있는) 것의 발병력을 감소시킴으로써 생산된 백신이다. 약독화된 바이러스는 살아있는, 미변형된 바이러스에 비해 덜 해롭거나 덜 악성으로 만드는 방식으로 변경된다. 일부 구현예에서, 대조군은 불활성화된 VZV 백신 투여된 대상체에서 생산된 항-VZV 항원성 폴리펩타이드 항체 역가이다. 일부 구현예에서, 대조군은 재조합 또는 정제된 VZV 단백질 백신 투여된 대상체에서 생산된 항-VZV 항원성 폴리펩타이드 항체 역가이다. 재조합 단백질 백신은 전형적으로 어느 한쪽 이종성 발현 시스템 (예를 들면, 박테리아 또는 효모)에서 생산된 또는 다량의 병원성 유기체로부터 정제된 단백질 항원을 포함한다. 일부 구현예에서, 대조군은 VZV 바이러스-유사 입자 (VLP) 백신 (예를 들면, 바이러스성 캡시드 단백질을 함유하지만 바이러스성 게놈이 부족하고, 따라서, 자손 바이러스를 복제/생산할 수 없는 입자) 투여된 대상체에서 생산된 항-VZV 항원성 폴리펩타이드 항체 역가이다. 일부 구현예에서, 대조군은 사전융합 또는 사후융합 F 단백질을 포함하는, 또는 상기 2개의 조합을 포함하는 VLP VZV 백신이다.
일부 구현예에서, VZV RNA (예를 들면, mRNA) 백신의 유효량은 재조합 VZV 단백질 백신의 치료 기준 용량에 비교하여 감소되는 용량이다. 본 명세서에서 제공된 바와 같이, "치료 기준"은 의료적 또는 심리적 치료 지침을 지칭하고 일반적 또는 특이적일 수 있다. "치료 기준"은 주어진 병태의 치료에서 관여된 의료 전문가 사이 협력 및 과학적 증거에 기반된 적절한 치료를 특정한다. 의사/임상의가 환자, 병 또는 임상 상황의 특정 유형을 따라야 하는 것이 진단 및 치료 과정이다. "치료 기준 용량"은, 본 명세서에서 제공된 바와 같이, 의사/임상의 또는 다른 의료 전문가가, VZV, 또는 VZV-관련된 병태의 치료 또는 예방용 치료 기준 지침을 따르면서, VZV, 또는 VZV-관련된 병태를 치료 또는 예방하기 위해 대상체에 투여할, 재조합 또는 정제된 VZV 단백질 백신, 또는 살아있는 약독화된 또는 불활성화된 VZV 백신, 또는 VZV VLP 백신의 용량을 지칭한다.
일부 구현예에서, VZV RNA 백신의 유효량 투여된 대상체에서 생산된 항-VZV 항원성 폴리펩타이드 항체 역가는 재조합 또는 정제된 VZV 단백질 백신, 또는 살아있는 약독화된 또는 불활성화된 VZV 백신, 또는 VZV VLP 백신의 치료 기준 용량 투여된 대조군 대상체에서 생산된 항-VZV 항원성 폴리펩타이드 항체 역가에 맞먹는다.
일부 구현예에서, VZV RNA (예를 들면, mRNA) 백신의 유효량은 재조합 또는 정제된 VZV 단백질 백신의 치료 기준 용량에서 적어도 2-배 감소에 맞먹는 용량이다. 예를 들어, VZV RNA 백신의 유효량은 재조합 또는 정제된 VZV 단백질 백신의 치료 기준 용량에서 적어도 3-배, 적어도 4-배, 적어도 5-배, 적어도 6-배, 적어도 7-배, 적어도 8-배, 적어도 9-배, 또는 적어도 10-배 감소에 맞먹는 용량일 수 있다. 일부 구현예에서, VZV RNA 백신의 유효량은 재조합 또는 정제된 VZV 단백질 백신의 치료 기준 용량에서 적어도 적어도 100-배, 적어도 500-배, 또는 적어도 1000-배 감소에 맞먹는 용량이다. 일부 구현예에서, VZV RNA 백신의 유효량은 재조합 또는 정제된 VZV 단백질 백신의 치료 기준 용량에서 2-, 3-, 4-, 5-, 6-, 7-, 8-, 9-, 10-, 20-, 50-, 100-, 250-, 500-, 또는 1000-배 감소에 맞먹는 용량이다. 일부 구현예에서, VZV RNA 백신의 유효량 투여된 대상체에서 생산된 항-VZV 항원성 폴리펩타이드 항체 역가는 재조합 또는 단백질 VZV 단백질 백신, 또는 살아있는 약독화된 또는 불활성화된 VZV 백신, 또는 VZV VLP 백신의 치료 기준 용량 투여된 대조군 대상체에서 생산된 항-VZV 항원성 폴리펩타이드 항체 역가에 맞먹는다. 일부 구현예에서, VZV RNA (예를 들면, mRNA) 백신의 유효량은 재조합 또는 정제된 VZV 단백질 백신의 치료 기준 용량에서 2-배 내지 1000-배 (예를 들면, 2-배 내지 100-배, 10-배 내지 1000-배) 감소에 맞먹는 용량이고, 여기서 대상체에서 생산된 상기 항-VZV 항원성 폴리펩타이드 항체 역가는 재조합 또는 정제된 VZV 단백질 백신, 또는 살아있는 약독화된 또는 불활성화된 VZV 백신, 또는 VZV VLP 백신의 치료 기준 용량 투여된 대조군 대상체에서 생산된 항-VZV 항원성 폴리펩타이드 항체 역가에 맞먹는다.
일부 구현예에서, VZV RNA (예를 들면, mRNA) 백신의 유효량은 재조합 VZV 단백질 백신의 치료 기준 용량에서 하기에 맞먹는 용량이다: 2 내지 1000-, 2 내지 900-, 2 내지 800-, 2 내지 700-, 2 내지 600-, 2 내지 500-, 2 내지 400-, 2 내지 300-, 2 내지 200-, 2 내지 100-, 2 내지 90-, 2 내지 80-, 2 내지 70-, 2 내지 60-, 2 내지 50-, 2 내지 40-, 2 내지 30-, 2 내지 20-, 2 내지 10-, 2 내지 9-, 2 내지 8-, 2 내지 7-, 2 내지 6-, 2 내지 5-, 2 내지 4-, 2 내지 3-, 3 내지 1000-, 3 내지 900-, 3 내지 800-, 3 내지 700-, 3 내지 600-, 3 내지 500-, 3 내지 400-, 3 내지 3 내지 00-, 3 내지 200-, 3 내지 100-, 3 내지 90-, 3 내지 80-, 3 내지 70-, 3 내지 60-, 3 내지 50-, 3 내지 40-, 3 내지 30-, 3 내지 20-, 3 내지 10-, 3 내지 9-, 3 내지 8-, 3 내지 7-, 3 내지 6-, 3 내지 5-, 3 내지 4-, 4 내지 1000-, 4 내지 900-, 4 내지 800-, 4 내지 700-, 4 내지 600-, 4 내지 500-, 4 내지 400-, 4 내지 4 내지 00-, 4 내지 200-, 4 내지 100-, 4 내지 90-, 4 내지 80-, 4 내지 70-, 4 내지 60-, 4 내지 50-, 4 내지 40-, 4 내지 30-, 4 내지 20-, 4 내지 10-, 4 내지 9-, 4 내지 8-, 4 내지 7-, 4 내지 6-, 4 내지 5-, 4 내지 4-, 5 내지 1000-, 5 내지 900-, 5 내지 800-, 5 내지 700-, 5 내지 600-, 5 내지 500-, 5 내지 400-, 5 내지 300-, 5 내지 200-, 5 내지 100-, 5 내지 90-, 5 내지 80-, 5 내지 70-, 5 내지 60-, 5 내지 50-, 5 내지 40-, 5 내지 30-, 5 내지 20-, 5 내지 10-, 5 내지 9-, 5 내지 8-, 5 내지 7-, 5 내지 6-, 6 내지 1000-, 6 내지 900-, 6 내지 800-, 6 내지 700-, 6 내지 600-, 6 내지 500-, 6 내지 400-, 6 내지 300-, 6 내지 200-, 6 내지 100-, 6 내지 90-, 6 내지 80-, 6 내지 70-, 6 내지 60-, 6 내지 50-, 6 내지 40-, 6 내지 30-, 6 내지 20-, 6 내지 10-, 6 내지 9-, 6 내지 8-, 6 내지 7-, 7 내지 1000-, 7 내지 900-, 7 내지 800-, 7 내지 700-, 7 내지 600-, 7 내지 500-, 7 내지 400-, 7 내지 300-, 7 내지 200-, 7 내지 100-, 7 내지 90-, 7 내지 80-, 7 내지 70-, 7 내지 60-, 7 내지 50-, 7 내지 40-, 7 내지 30-, 7 내지 20-, 7 내지 10-, 7 내지 9-, 7 내지 8-, 8 내지 1000-, 8 내지 900-, 8 내지 800-, 8 내지 700-, 8 내지 600-, 8 내지 500-, 8 내지 400-, 8 내지 300-, 8 내지 200-, 8 내지 100-, 8 내지 90-, 8 내지 80-, 8 내지 70-, 8 내지 60-, 8 내지 50-, 8 내지 40-, 8 내지 30-, 8 내지 20-, 8 내지 10-, 8 내지 9-, 9 내지 1000-, 9 내지 900-, 9 내지 800-, 9 내지 700-, 9 내지 600-, 9 내지 500-, 9 내지 400-, 9 내지 300-, 9 내지 200-, 9 내지 100-, 9 내지 90-, 9 내지 80-, 9 내지 70-, 9 내지 60-, 9 내지 50-, 9 내지 40-, 9 내지 30-, 9 내지 20-, 9 내지 10-, 10 내지 1000-, 10 내지 900-, 10 내지 800-, 10 내지 700-, 10 내지 600-, 10 내지 500-, 10 내지 400-, 10 내지 300-, 10 내지 200-, 10 내지 100-, 10 내지 90-, 10 내지 80-, 10 내지 70-, 10 내지 60-, 10 내지 50-, 10 내지 40-, 10 내지 30-, 10 내지 20-, 20 내지 1000-, 20 내지 900-, 20 내지 800-, 20 내지 700-, 20 내지 600-, 20 내지 500-, 20 내지 400-, 20 내지 300-, 20 내지 200-, 20 내지 100-, 20 내지 90-, 20 내지 80-, 20 내지 70-, 20 내지 60-, 20 내지 50-, 20 내지 40-, 20 내지 30-, 30 내지 1000-, 30 내지 900-, 30 내지 800-, 30 내지 700-, 30 내지 600-, 30 내지 500-, 30 내지 400-, 30 내지 300-, 30 내지 200-, 30 내지 100-, 30 내지 90-, 30 내지 80-, 30 내지 70-, 30 내지 60-, 30 내지 50-, 30 내지 40-, 40 내지 1000-, 40 내지 900-, 40 내지 800-, 40 내지 700-, 40 내지 600-, 40 내지 500-, 40 내지 400-, 40 내지 300-, 40 내지 200-, 40 내지 100-, 40 내지 90-, 40 내지 80-, 40 내지 70-, 40 내지 60-, 40 내지 50-, 50 내지 1000-, 50 내지 900-, 50 내지 800-, 50 내지 700-, 50 내지 600-, 50 내지 500-, 50 내지 400-, 50 내지 300-, 50 내지 200-, 50 내지 100-, 50 내지 90-, 50 내지 80-, 50 내지 70-, 50 내지 60-, 60 내지 1000-, 60 내지 900-, 60 내지 800-, 60 내지 700-, 60 내지 600-, 60 내지 500-, 60 내지 400-, 60 내지 300-, 60 내지 200-, 60 내지 100-, 60 내지 90-, 60 내지 80-, 60 내지 70-, 70 내지 1000-, 70 내지 900-, 70 내지 800-, 70 내지 700-, 70 내지 600-, 70 내지 500-, 70 내지 400-, 70 내지 300-, 70 내지 200-, 70 내지 100-, 70 내지 90-, 70 내지 80-, 80 내지 1000-, 80 내지 900-, 80 내지 800-, 80 내지 700-, 80 내지 600-, 80 내지 500-, 80 내지 400-, 80 내지 300-, 80 내지 200-, 80 내지 100-, 80 내지 90-, 90 내지 1000-, 90 내지 900-, 90 내지 800-, 90 내지 700-, 90 내지 600-, 90 내지 500-, 90 내지 400-, 90 내지 300-, 90 내지 200-, 90 내지 100-, 100 내지 1000-, 100 내지 900-, 100 내지 800-, 100 내지 700-, 100 내지 600-, 100 내지 500-, 100 내지 400-, 100 내지 300-, 100 내지 200-, 200 내지 1000-, 200 내지 900-, 200 내지 800-, 200 내지 700-, 200 내지 600-, 200 내지 500-, 200 내지 400-, 200 내지 300-, 300 내지 1000-, 300 내지 900-, 300 내지 800-, 300 내지 700-, 300 내지 600-, 300 내지 500-, 300 내지 400-, 400 내지 1000-, 400 내지 900-, 400 내지 800-, 400 내지 700-, 400 내지 600-, 400 내지 500-, 500 내지 1000-, 500 내지 900-, 500 내지 800-, 500 내지 700-, 500 내지 600-, 600 내지 1000-, 600 내지 900-, 600 내지 800-, 600 내지 700-, 700 내지 1000-, 700 내지 900-, 700 내지 800-, 800 내지 1000-, 800 내지 900-, 또는 900 내지 1000-배 감소. 일부 구현예에서, 예컨대 전술한 것에서, 대상체에서 생산된 항-VZV 항원성 폴리펩타이드 항체 역가는 재조합 또는 정제된 VZV 단백질 백신, 또는 살아있는 약독화된 또는 불활성화된 VZV 백신, 또는 VZV VLP 백신의 치료 기준 용량 투여된 대조군 대상체에서 생산된 항-VZV 항원성 폴리펩타이드 항체 역가에 맞먹는다. 일부 구현예에서, 유효량은 재조합 VZV 단백질 백신의 치료 기준 용량에서 하기에 맞먹는 (또는 적어도 하기에 맞먹는) 용량이다: 2-, 3-, 4-, 5-, 6-, 7-, 8-, 9-, 10-, 20-, 30-, 40-, 50-, 60-, 70-, 80-, 90-, 100-, 110-, 120-, 130-, 140-, 150-, 160-, 170-, 1280-, 190-, 200-, 210-, 220-, 230-, 240-, 250-, 260-, 270-, 280-, 290-, 300-, 310-, 320-, 330-, 340-, 350-, 360-, 370-, 380-, 390-, 400-, 410-, 420-, 430-, 440-, 450-, 4360-, 470-, 480-, 490-, 500-, 510-, 520-, 530-, 540-, 550-, 560-, 5760-, 580-, 590-, 600-, 610-, 620-, 630-, 640-, 650-, 660-, 670-, 680-, 690-, 700-, 710-, 720-, 730-, 740-, 750-, 760-, 770-, 780-, 790-, 800-, 810-, 820--, 830-, 840-, 850-, 860-, 870-, 880-, 890-, 900-, 910-, 920-, 930-, 940-, 950-, 960-, 970-, 980-, 990-, 또는 1000-배 감소. 일부 구현예에서, 예컨대 전술한 것에서, 대상체에서 생산된 항-VZV 항원성 폴리펩타이드 항체 역가는 재조합 또는 정제된 VZV 단백질 백신, 또는 살아있는 약독화된 또는 불활성화된 VZV 백신, 또는 VZV VLP 백신의 치료 기준 용량 투여된 대조군 대상체에서 생산된 항-VZV 항원성 폴리펩타이드 항체 역가에 맞먹는다.
일부 구현예에서, VZV RNA (예를 들면, mRNA) 백신의 유효량은 50-1000 mg의 총 용량이다. 일부 구현예에서, VZV RNA (예를 들면, mRNA) 백신의 유효량은 하기의 총 용량이다: 50-1000, 50- 900, 50-800, 50-700, 50-600, 50-500, 50-400, 50-300, 50-200, 50-100, 50-90, 50-80, 50-70, 50-60, 60-1000, 60- 900, 60-800, 60-700, 60-600, 60-500, 60-400, 60-300, 60-200, 60-100, 60-90, 60-80, 60-70, 70-1000, 70- 900, 70-800, 70-700, 70-600, 70-500, 70-400, 70-300, 70-200, 70-100, 70-90, 70-80, 80-1000, 80- 900, 80-800, 80-700, 80-600, 80-500, 80-400, 80-300, 80-200, 80-100, 80-90, 90-1000, 90- 900, 90-800, 90-700, 90-600, 90-500, 90-400, 90-300, 90-200, 90-100, 100-1000, 100- 900, 100-800, 100-700, 100-600, 100-500, 100-400, 100-300, 100-200, 200-1000, 200-900, 200-800, 200-700, 200-600, 200-500, 200-400, 200-300, 300-1000, 300-900, 300-800, 300-700, 300-600, 300-500, 300-400, 400-1000, 400-900, 400-800, 400-700, 400-600, 400-500, 500-1000, 500-900, 500-800, 500-700, 500-600, 600-1000, 600-900, 600-900, 600-700, 700-1000, 700-900, 700-800, 800-1000, 800-900, 또는 900-1000 μg. 일부 구현예에서, VZV RNA (예를 들면, mRNA) 백신의 유효량은 50, 100, 150, 200, 250, 300, 350, 400, 450, 500, 550, 600, 650, 700, 750, 800, 850, 900, 950 또는 1000 μg의 총 용량이다. 일부 구현예에서, 유효량은 총 2회 대상체에 투여된 25-500 μg의 용량이다. 일부 구현예에서, VZV RNA (예를 들면, mRNA) 백신의 유효량은 총 2회 대상체에 투여된 25-500, 25-400, 25-300, 25-200, 25-100, 25-50, 50-500, 50-400, 50-300, 50-200, 50-100, 100-500, 100-400, 100-300, 100-200, 150-500, 150-400, 150-300, 150-200, 200-500, 200-400, 200-300, 250-500, 250-400, 250-300, 300-500, 300-400, 350-500, 350-400, 400-500 또는 450-500 μg의 용량이다. 일부 구현예에서, VZV RNA (예를 들면, mRNA) 백신의 유효량은 총 2회 대상체에 투여된 25, 50, 100, 150, 200, 250, 300, 350, 400, 450, 또는 500 mg의 총 용량이다.
추가의 구현예
1. 하기를 포함하는, 수두대상포진 바이러스 (VZV) 백신:
5' 말단 캡, 적어도 1종의 VZV 항원성 폴리펩타이드를 인코딩하는 열린 해독틀, 및 3' 폴리A 꼬리를 갖는 적어도 1종의 메신저 리보핵산 (mRNA) 폴리뉴클레오타이드.
2. 상기 적어도 1종의 mRNA 폴리뉴클레오타이드가 서열번호: 11에 의해 확인된 서열에 의해 인코딩되는, 단락 1의 백신.
3. 상기 적어도 1종의 mRNA 폴리뉴클레오타이드가 서열번호: 92에 의해 확인된 서열을 포함하는, 단락 1의 백신.
4. 상기 적어도 1종의 항원성 폴리펩타이드가 서열번호: 10에 의해 확인된 서열을 포함하는, 단락 1의 백신.
5. 상기 적어도 1종의 mRNA 폴리뉴클레오타이드가 서열번호: 15에 의해 확인된 서열에 의해 인코딩되는, 단락 1의 백신.
6. 상기 적어도 1종의 mRNA 폴리뉴클레오타이드가 서열번호: 93에 의해 확인된 서열을 포함하는, 단락 1의 백신.
7. 상기 적어도 1종의 항원성 폴리펩타이드가 서열번호: 14에 의해 확인된 서열을 포함하는, 단락 1의 백신.
8. 상기 적어도 1종의 mRNA 폴리뉴클레오타이드가 서열번호: 19에 의해 확인된 서열에 의해 인코딩되는, 단락 1의 백신.
9. 상기 적어도 1종의 mRNA 폴리뉴클레오타이드가 서열번호: 94에 의해 확인된 서열을 포함하는, 단락 1의 백신.
10 상기 적어도 1종의 항원성 폴리펩타이드가 서열번호: 18에 의해 확인된 서열을 포함하는, 단락 1의 백신.
11. 상기 적어도 1종의 mRNA 폴리뉴클레오타이드가 서열번호: 23에 의해 확인된 서열에 의해 인코딩되는, 단락 1의 백신.
12. 상기 적어도 1종의 mRNA 폴리뉴클레오타이드가 서열번호: 95에 의해 확인된 서열을 포함하는, 단락 1의 백신.
13. 상기 적어도 1종의 항원성 폴리펩타이드가 서열번호: 22에 의해 확인된 서열을 포함하는, 단락 1의 백신.
14. 상기 적어도 1종의 mRNA 폴리뉴클레오타이드가 서열번호: 27에 의해 확인된 서열에 의해 인코딩되는, 단락 1의 백신.
15. 상기 적어도 1종의 mRNA 폴리뉴클레오타이드가 서열번호: 96에 의해 확인된 서열을 포함하는, 단락 1의 백신.
16. 상기 적어도 1종의 항원성 폴리펩타이드가 서열번호: 26에 의해 확인된 서열을 포함하는, 단락 1의 백신.
17. 상기 적어도 1종의 mRNA 폴리뉴클레오타이드가 서열번호: 31에 의해 확인된 서열에 의해 인코딩되는, 단락 1의 백신.
18. 상기 적어도 1종의 mRNA 폴리뉴클레오타이드가 서열번호: 97에 의해 확인된 서열을 포함하는, 단락 1의 백신.
19. 상기 적어도 1종의 항원성 폴리펩타이드가 서열번호: 30에 의해 확인된 서열을 포함하는, 단락 1의 백신.
20. 상기 적어도 1종의 mRNA 폴리뉴클레오타이드가 서열번호: 35에 의해 확인된 서열에 의해 인코딩되는, 단락 1의 백신.
21. 상기 적어도 1종의 mRNA 폴리뉴클레오타이드가 서열번호: 98에 의해 확인된 서열을 포함하는, 단락 1의 백신.
22. 상기 적어도 1종의 항원성 폴리펩타이드가 서열번호: 34에 의해 확인된 서열을 포함하는, 단락 1의 백신.
23. 상기 적어도 1종의 mRNA 폴리뉴클레오타이드가 서열번호: 39에 의해 확인된 서열에 의해 인코딩되는, 단락 1의 백신.
24. 상기 적어도 1종의 mRNA 폴리뉴클레오타이드가 서열번호: 99에 의해 확인된 서열을 포함하는, 단락 1의 백신.
25. 상기 적어도 1종의 항원성 폴리펩타이드가 서열번호: 38에 의해 확인된 서열을 포함하는, 단락 1의 백신.
26. 상기 적어도 1종의 mRNA 폴리뉴클레오타이드가 서열번호: 62에 의해 확인된 서열에 의해 인코딩되는, 단락 1의 백신.
27. 상기 적어도 1종의 mRNA 폴리뉴클레오타이드가 서열번호: 101에 의해 확인된 서열을 포함하는, 단락 1의 백신.
28. 상기 적어도 1종의 항원성 폴리펩타이드가 서열번호: 38에 의해 확인된 서열을 포함하는, 단락 26 또는 27의 백신.
29. 상기 적어도 1종의 mRNA 폴리뉴클레오타이드가 서열번호: 66에 의해 확인된 서열에 의해 인코딩되는, 단락 1의 백신.
30. 상기 적어도 1종의 mRNA 폴리뉴클레오타이드가 서열번호: 102에 의해 확인된 서열을 포함하는, 단락 1의 백신.
31. 상기 적어도 1종의 항원성 폴리펩타이드가 서열번호: 38에 의해 확인된 서열을 포함하는, 단락 30 또는 31의 백신.
32. 상기 적어도 1종의 mRNA 폴리뉴클레오타이드가 서열번호: 70에 의해 확인된 서열에 의해 인코딩되는, 단락 1의 백신.
33. 상기 적어도 1종의 mRNA 폴리뉴클레오타이드가 서열번호: 103에 의해 확인된 서열을 포함하는, 단락 1의 백신.
34. 상기 적어도 1종의 항원성 폴리펩타이드가 서열번호: 38에 의해 확인된 서열을 포함하는, 단락 32 또는 33의 백신.
35. 상기 적어도 1종의 mRNA 폴리뉴클레오타이드가 서열번호: 74에 의해 확인된 서열에 의해 인코딩되는, 단락 1의 백신.
36. 상기 적어도 1종의 mRNA 폴리뉴클레오타이드가 서열번호: 104에 의해 확인된 서열을 포함하는, 단락 1의 백신.
37. 상기 적어도 1종의 항원성 폴리펩타이드가 서열번호: 38에 의해 확인된 서열을 포함하는, 단락 35 또는 36의 백신.
38. 상기 적어도 1종의 mRNA 폴리뉴클레오타이드가 서열번호: 78에 의해 확인된 서열에 의해 인코딩되는, 단락 1의 백신.
39. 상기 적어도 1종의 mRNA 폴리뉴클레오타이드가 서열번호: 105에 의해 확인된 서열을 포함하는, 단락 1의 백신.
40. 상기 적어도 1종의 항원성 폴리펩타이드가 서열번호: 38에 의해 확인된 서열을 포함하는, 단락 38 또는 39의 백신.
41. 상기 적어도 1종의 mRNA 폴리뉴클레오타이드가 서열번호: 82에 의해 확인된 서열에 의해 인코딩되는, 단락 1의 백신.
42. 상기 적어도 1종의 mRNA 폴리뉴클레오타이드가 서열번호: 106에 의해 확인된 서열을 포함하는, 단락 1의 백신.
43. 상기 적어도 1종의 항원성 폴리펩타이드가 서열번호: 38에 의해 확인된 서열을 포함하는, 단락 41 또는 42의 백신.
44. 상기 적어도 1종의 mRNA 폴리뉴클레오타이드가 서열번호: 86에 의해 확인된 서열에 의해 인코딩되는, 단락 1의 백신.
45. 상기 적어도 1종의 mRNA 폴리뉴클레오타이드가 서열번호: 107 또는 134에 의해 확인된 서열을 포함하는, 단락 1의 백신.
46. 상기 적어도 1종의 항원성 폴리펩타이드가 서열번호: 38에 의해 확인된 서열을 포함하는, 단락 44 또는 45의 백신.
47. 상기 적어도 1종의 mRNA 폴리뉴클레오타이드가 서열번호: 90에 의해 확인된 서열에 의해 인코딩되는, 단락 1의 백신.
48. 상기 적어도 1종의 mRNA 폴리뉴클레오타이드가 서열번호: 108에 의해 확인된 서열을 포함하는, 단락 1의 백신.
49. 상기 적어도 1종의 항원성 폴리펩타이드가 서열번호: 38에 의해 확인된 서열을 포함하는, 단락 47 또는 48의 백신.
50. 상기 5' 말단 캡이 7mG(5')ppp(5')NlmpNp이거나 상기를 포함하는, 단락 1-49 중 어느 하나의 백신.
51. 열린 해독틀에서 우라실의 100%가 우라실의 5-위치에서 N1-메틸 슈도우리딘을 포함하도록 변형되는, 단락 1-50 중 어느 하나의 백신.
52. 상기 백신이 하기를 포함하는 지질 나노입자로 제형화되는, 단락 1-51 중 어느 하나의 백신: DLin-MC3-DMA; 콜레스테롤; 1,2-디스테아로일-sn-글리세로-3-포스포콜린 (DSPC); 및 폴리에틸렌 글리콜 (PEG)2000-DMG.
53. 상기 지질 나노입자가 추가로 트리나트륨 시트레이트 버퍼, 수크로오스 및 물을 포함하는, 단락 52의 백신.
54. 하기를 포함하는, 수두대상포진 바이러스 (VZV) 백신:
5' 말단 캡 7mG(5')ppp(5')NlmpNp, 서열번호: 92에 의해 확인된 서열 및 3' 폴리A 꼬리를 갖는 적어도 1종의 메신저 리보핵산 (mRNA) 폴리뉴클레오타이드, 여기서 서열번호: 92에 의해 확인된 서열의 상기 우라실 뉴클레오타이드는 우라실 뉴클레오타이드의 5-위치에서 N1-메틸 슈도우리딘을 포함하도록 변형됨.
55. 하기를 포함하는, 수두대상포진 바이러스 (VZV) 백신:
5' 말단 캡 7mG(5')ppp(5')NlmpNp, 서열번호: 93에 의해 확인된 서열 및 3' 폴리A 꼬리를 갖는 적어도 1종의 메신저 리보핵산 (mRNA) 폴리뉴클레오타이드, 여기서 서열번호: 93에 의해 확인된 서열의 상기 우라실 뉴클레오타이드는 우라실 뉴클레오타이드의 5-위치에서 N1-메틸 슈도우리딘을 포함하도록 변형됨.
56. 하기를 포함하는, 수두대상포진 바이러스 (VZV) 백신:
5' 말단 캡 7mG(5')ppp(5')NlmpNp, 서열번호: 94에 의해 확인된 서열 및 3' 폴리A 꼬리를 갖는 적어도 1종의 메신저 리보핵산 (mRNA) 폴리뉴클레오타이드, 여기서 서열번호: 94에 의해 확인된 서열의 상기 우라실 뉴클레오타이드는 우라실 뉴클레오타이드의 5-위치에서 N1-메틸 슈도우리딘을 포함하도록 변형됨.
57. 하기를 포함하는, 수두대상포진 바이러스 (VZV) 백신:
5' 말단 캡 7mG(5')ppp(5')NlmpNp, 서열번호: 95에 의해 확인된 서열 및 3' 폴리A 꼬리를 갖는 적어도 1종의 메신저 리보핵산 (mRNA) 폴리뉴클레오타이드, 여기서 서열번호: 95에 의해 확인된 서열의 상기 우라실 뉴클레오타이드는 우라실 뉴클레오타이드의 5-위치에서 N1-메틸 슈도우리딘을 포함하도록 변형됨.
58. 하기를 포함하는, 수두대상포진 바이러스 (VZV) 백신:
5' 말단 캡 7mG(5')ppp(5')NlmpNp, 서열번호: 96에 의해 확인된 서열 및 3' 폴리A 꼬리를 갖는 적어도 1종의 메신저 리보핵산 (mRNA) 폴리뉴클레오타이드, 여기서 서열번호: 96에 의해 확인된 서열의 상기 우라실 뉴클레오타이드는 우라실 뉴클레오타이드의 5-위치에서 N1-메틸 슈도우리딘을 포함하도록 변형됨.
59. 하기를 포함하는, 수두대상포진 바이러스 (VZV) 백신:
5' 말단 캡 7mG(5')ppp(5')NlmpNp, 서열번호: 97에 의해 확인된 서열 및 3' 폴리A 꼬리를 갖는 적어도 1종의 메신저 리보핵산 (mRNA) 폴리뉴클레오타이드, 여기서 서열번호: 97에 의해 확인된 서열의 상기 우라실 뉴클레오타이드는 우라실 뉴클레오타이드의 5-위치에서 N1-메틸 슈도우리딘을 포함하도록 변형됨.
60. 하기를 포함하는, 수두대상포진 바이러스 (VZV) 백신:
5' 말단 캡 7mG(5')ppp(5')NlmpNp, 서열번호: 98에 의해 확인된 서열 및 3' 폴리A 꼬리를 갖는 적어도 1종의 메신저 리보핵산 (mRNA) 폴리뉴클레오타이드, 여기서 서열번호: 98에 의해 확인된 서열의 상기 우라실 뉴클레오타이드는 우라실 뉴클레오타이드의 5-위치에서 N1-메틸 슈도우리딘을 포함하도록 변형됨.
61. 하기를 포함하는, 수두대상포진 바이러스 (VZV) 백신:
5' 말단 캡 7mG(5')ppp(5')NlmpNp, 서열번호: 99에 의해 확인된 서열 및 3' 폴리A 꼬리를 갖는 적어도 1종의 메신저 리보핵산 (mRNA) 폴리뉴클레오타이드, 여기서 서열번호: 99에 의해 확인된 서열의 상기 우라실 뉴클레오타이드는 우라실 뉴클레오타이드의 5-위치에서 N1-메틸 슈도우리딘을 포함하도록 변형됨.
62. 하기를 포함하는, 수두대상포진 바이러스 (VZV) 백신:
5' 말단 캡 7mG(5')ppp(5')NlmpNp, 서열번호: 101에 의해 확인된 서열 및 3' 폴리A 꼬리를 갖는 적어도 1종의 메신저 리보핵산 (mRNA) 폴리뉴클레오타이드, 여기서 서열번호: 101에 의해 확인된 서열의 상기 우라실 뉴클레오타이드는 우라실 뉴클레오타이드의 5-위치에서 N1-메틸 슈도우리딘을 포함하도록 변형됨.
63. 하기를 포함하는, 수두대상포진 바이러스 (VZV) 백신:
5' 말단 캡 7mG(5')ppp(5')NlmpNp, 서열번호: 102에 의해 확인된 서열 및 3' 폴리A 꼬리를 갖는 적어도 1종의 메신저 리보핵산 (mRNA) 폴리뉴클레오타이드, 여기서 서열번호: 102에 의해 확인된 서열의 상기 우라실 뉴클레오타이드는 우라실 뉴클레오타이드의 5-위치에서 N1-메틸 슈도우리딘을 포함하도록 변형됨.
64. 하기를 포함하는, 수두대상포진 바이러스 (VZV) 백신:
5' 말단 캡 7mG(5')ppp(5')NlmpNp, 서열번호: 103에 의해 확인된 서열 및 3' 폴리A 꼬리를 갖는 적어도 1종의 메신저 리보핵산 (mRNA) 폴리뉴클레오타이드, 여기서 서열번호: 103에 의해 확인된 서열의 상기 우라실 뉴클레오타이드는 우라실 뉴클레오타이드의 5-위치에서 N1-메틸 슈도우리딘을 포함하도록 변형됨.
65. 하기를 포함하는, 수두대상포진 바이러스 (VZV) 백신:
5' 말단 캡 7mG(5')ppp(5')NlmpNp, 서열번호: 104에 의해 확인된 서열 및 3' 폴리A 꼬리를 갖는 적어도 1종의 메신저 리보핵산 (mRNA) 폴리뉴클레오타이드, 여기서 서열번호: 104에 의해 확인된 서열의 상기 우라실 뉴클레오타이드는 우라실 뉴클레오타이드의 5-위치에서 N1-메틸 슈도우리딘을 포함하도록 변형됨.
66. 하기를 포함하는, 수두대상포진 바이러스 (VZV) 백신:
5' 말단 캡 7mG(5')ppp(5')NlmpNp, 서열번호: 105에 의해 확인된 서열 및 3' 폴리A 꼬리를 갖는 적어도 1종의 메신저 리보핵산 (mRNA) 폴리뉴클레오타이드, 여기서 서열번호: 105에 의해 확인된 서열의 상기 우라실 뉴클레오타이드는 우라실 뉴클레오타이드의 5-위치에서 N1-메틸 슈도우리딘을 포함하도록 변형됨.
67. 하기를 포함하는, 수두대상포진 바이러스 (VZV) 백신:
5' 말단 캡 7mG(5')ppp(5')NlmpNp, 서열번호: 106에 의해 확인된 서열 및 3' 폴리A 꼬리를 갖는 적어도 1종의 메신저 리보핵산 (mRNA) 폴리뉴클레오타이드, 여기서 서열번호: 106에 의해 확인된 서열의 상기 우라실 뉴클레오타이드는 우라실 뉴클레오타이드의 5-위치에서 N1-메틸 슈도우리딘을 포함하도록 변형됨.
68. 하기를 포함하는, 수두대상포진 바이러스 (VZV) 백신:
5' 말단 캡 7mG(5')ppp(5')NlmpNp, 서열번호: 107 또는 134에 의해 확인된 서열 및 3' 폴리A 꼬리를 갖는 적어도 1종의 메신저 리보핵산 (mRNA) 폴리뉴클레오타이드, 여기서 서열번호: 107 또는 134에 의해 확인된 서열의 상기 우라실 뉴클레오타이드는 우라실 뉴클레오타이드의 5-위치에서 N1-메틸 슈도우리딘을 포함하도록 변형됨.
69. 하기를 포함하는, 수두대상포진 바이러스 (VZV) 백신:
5' 말단 캡 7mG(5')ppp(5')NlmpNp, 서열번호: 108에 의해 확인된 서열 및 3' 폴리A 꼬리를 갖는 적어도 1종의 메신저 리보핵산 (mRNA) 폴리뉴클레오타이드, 여기서 서열번호: 108에 의해 확인된 서열의 상기 우라실 뉴클레오타이드는 우라실 뉴클레오타이드의 5-위치에서 N1-메틸 슈도우리딘을 포함하도록 변형됨.
70. 상기 백신이 DLin-MC3-DMA, 콜레스테롤, 1,2-디스테아로일-sn-글리세로-3-포스포콜린 (DSPC), 및 폴리에틸렌 글리콜 (PEG)2000-DMG를 포함하는 지질 나노입자로 제형화되는, 청구항 54-69 중 어느 하나의 백신.
본 발명은 다음과 같은 설명에서 제시된 또는 도면에서 설명된 구성요소의 구성 및 배열의 세부사항에 그것의 적용에서 제한되지 않는다. 본 발명은 다른 구현예일 수 있고 다양한 방식으로 수행 또는 실시될 수 있다. 또한, 본 명세서에서 사용된 어법 및 용어는 설명의 목적을 위한 것이고 제한으로서 여겨지지 않아야 한다. 본 명세서에서 "포함하는", "포괄하는", 또는 "갖는", "함유하는", "연루하는" 및 이의 변동의 사용은 그 후에 열거된 항목 및 이의 등가물 뿐만 아니라 추가의 항목을 포함하는 의미이다.
실시예
실시예 1: 폴리뉴클레오타이드의 제조
본 개시내용에 따르면, 폴리뉴클레오타이드 및/또는 이의 일부 또는 영역의 제조는 하기에서 교시된 방법을 이용하여 달성될 수 있다: 국제공개 WO2014/152027, 명칭 "RNA 전사체의 생산용 제조 방법", 이 내용은 참조로 그 전문이 본 명세서에서 편입됨.
정제 방법은 하기에 교시된 것을 포함할 수 있다: 국제공개 WO2014/152030 및 국제공개 WO2014/152031, 이들 각각은 참조로 그 전문이 본 명세서에서 편입됨.
폴리뉴클레오타이드의 검출 및 특성규명 방법은 참조로 그 전문이 본 명세서에서 편입되는, 국제공개 WO2014/144039에 교시된 대로 수행될 수 있다.
본 개시내용의 폴리뉴클레오타이드의 특성규명은 폴리뉴클레오타이드 맵핑, 역전사효소 서열분석, 전하 분포 분석, RNA 불순물의 검출, 또는 전술한 것 중 2종 이상의 임의의 조합을 이용하여 달성될 수 있다. "특성규명"은 RNA 전사체 서열 결정, RNA 전사체의 순도 결정, 또는 RNA 전사체의 전하 불균질성 결정을, 예를 들면, 포함한다. 그와 같은 방법은, 예를 들면, 하기에 교시된다: 국제공개 WO2014/144711 및 국제공개 WO2014/144767, 이들 각각의 내용은 참조로 그 전문이 본 명세서에서 편입됨.
실시예 2: 키메라 폴리뉴클레오타이드 합성
본 개시내용에 따르면, 키메라성 폴리뉴클레오타이드의 2개 영역 또는 일부는 트리포스페이트 화학을 이용하여 연결 또는 결찰될 수 있다. 100 뉴클레오타이드 이하의 제1 영역 또는 일부는 5' 모노포스페이트 및 말단 3'desOH와 화학적으로 합성되거나 OH를, 예를 들면, 차단시켰다. 영역이 80 뉴클레오타이드보다 길면, 결찰을 위하여 2개의 가닥으로서 합성될 수 있다.
제1 영역 또는 일부가 시험관내 전사 (IVT)를 이용하여 비-위치적으로 변형된 영역 또는 일부로서 합성되면, 3' 말단의 차후의 캡핑으로 5'모노포스페이트의 전환은 뒤따를 수 있다.
모노포스페이트 보호 기는 임의의 당해 분야에서 공지된 것으로부터 선택될 수 있다.
키메라성 폴리뉴클레오타이드의 제2 영역 또는 일부는 어느 한쪽 화학적 합성 또는 IVT 방법을 이용하여 합성될 수 있다. IVT 방법은 변형된 캡을 가진 프라이머를 이용할 수 있는 RNA 폴리머라제를 포함할 수 있다. 대안적으로, 최대 130 뉴클레오타이드의 캡은 화학적으로 합성될 수 있고 IVT 영역 또는 일부에 커플링될 수 있다.
결찰 방법에 대하여, DNA T4 리가제로 결찰, 이어서 DNase로 처리는 연속을 쉽게 피할 수 있다.
전체 키메라성 폴리뉴클레오타이드는 포스페이트-당 골격으로 제조될 필요는 없다. 영역 또는 일부의 한쪽이 폴리펩타이드를 인코딩하면, 그와 같은 영역 또는 일부는 포스페이트-당 골격을 포함할 수 있다.
결찰은 그 다음 임의의 공지된 클릭 화학, 오쏘클릭 화학, 솔루링크, 또는 당해 기술의 숙련가에 공지된 다른 바이오콘주게이트 화학을 이용하여 수행된다.
합성 경로
키메라 폴리뉴클레오타이드는 일련의 개시 분절을 이용하여 만들어질 수 있다. 그와 같은 분절은 하기를 포함한다:
(a) 정상 3'OH을 포함하는 캡핑된 및 보호된 5' 분절 (SEG. 1)
(b) 폴리펩타이드 및 정상 3'OH의 코딩 영역을 포함할 수 있는, 5' 트리포스페이트 분절 (SEG. 2)
(c) 코디세핀 또는 무 3'OH를 포함하는 키메라 폴리뉴클레오타이드의 3' 단부 (예를 들면, 꼬리)용 5' 모노포스페이트 분절 (SEG. 3)
(화학적 또는 IVT) 합성 후, 분절 3 (SEG. 3)은 코디세핀으로 그리고 그 다음 파이로포스파타제로 처리되어 5' 모노포스페이트를 창출할 수 있다.
분절 2 (SEG. 2)는 그 다음 RNA 리가제를 이용하여 SEG. 3에 결찰될 수 있다. 결찰된 폴리뉴클레오타이드는 그 다음 정제되고 파이로포스파타제로 처리되어 디포스페이트를 절단시킨다. 처리된 SEG. 2 - SEG. 3 작제물은 그 다음 정제될 수 있고 SEG. 1은 5' 말단에 결찰된다. 키메라 폴리뉴클레오타이드의 추가 정제 단계는 수행될 수 있다.
키메라 폴리뉴클레오타이드가 폴리펩타이드를 인코딩하는 경우, 결찰된 또는 연결된 분절은 하기로서 표시될 수 있다: 5'UTR (SEG. 1), 열린 해독틀 또는 ORF (SEG. 2) 및 3'UTR+폴리A (SEG. 3).
각각의 단계의 수율은 90-95%만큼일 수 있다.
실시예 3: cDNA 생산용 PCR
cDNA의 제조용 PCR 절차는 Kapa Biosystems (Woburn, MA)에 의한 2x KAPA HIFI™ HotStart ReadyMix를 이용하여 수행될 수 있다. 상기 시스템은 2x KAPA ReadyMix 12.5 μl; 정방향 프라미어 (10 μM) 0.75 μl; 역방향 프라이머 (10 μM) 0.75 μl; 템플레이트 cDNA 100 ng; 및 25.0 μl로 희석된 dH20를 포함한다. 반응 조건은 95 ℃에서 5 분 동안일 수 있다. 반응은 20 초 동안 98 ℃, 그 다음 15 초 동안 58 ℃, 그 다음 45초 동안 72 ℃, 그 다음 5 분 동안 72 ℃, 그 다음 종료까지 4 ℃의 25 사이클 동안 수행될 수 있다.
반응은 제조자의 지침 (최대 5 μg)에 따라 Invitrogen의 PURELINK™ PCR Micro Kit (Carlsbad, CA)를 이용하여 세정될 수 있다. 더 큰 반응은 더 큰 수용력을 가진 생성물을 이용하는 세정을 요구할 수 있다. 세정 이후, cDNA는 NANODROP™을 이용하여 정량화 그리고 아가로스 겔 전기영동에 의해 분석되어 cDNA가 기대된 크기인지를 확인할 수 있다. cDNA는 그 다음 서열분석의 분석을 위하여 제출된 다음 시험관내 전사 반응을 진행할 수 있다.
실시예 4: 시험관내 전사 (IVT)
시험관내 전사 반응은 RNA 폴리뉴클레오타이드를 생성한다. 그와 같은 폴리뉴클레오타이드는, 화학적으로 변형된 RNA (예를 들면, mRNA) 폴리뉴클레오타이드를 포함하는, 본 개시내용의 폴리뉴클레오타이드의 영역 또는 일부를 포함할 수 있다. 화학적으로 변형된 RNA 폴리뉴클레오타이드는 균일하게 변형된 폴리뉴클레오타이드일 수 있다. 시험관내 전사 반응은 뉴클레오타이드 트리포스페이트 (NTPs)의 구입 혼합물을 이용한다. NTPs는 화학적으로 변형된 NTPs, 또는 천연 및 화학적으로 변형된 NTPs의 혼합물, 또는 천연 NTPs를 포함할 수 있다.
전형적인 시험관내 전사 반응은 하기를 포함한다:
1) 템플레이트 cDNA 1.0 μg
2) 10x 전사 버퍼 2.0 μl
(400 mM 트리스-HCl pH 8.0, 190 mM
MgCl2, 50 mM DTT, 10 mM 스페르미딘)
3) 구입 NTPs (25 mM 각각의) 0.2 μl
4) RNase 억제제 20 U
5) T7 RNA 폴리머라제 3000 U
6) dH20 최대 20.0 μl. 및
7) 37 ℃에서 3시간-5 시간 동안 인큐베이션.
조물질 IVT 혼합물은 4 ℃에서 밤새 다음 날 세정을 위하여 저장될 수 있다. 1 U의 RNase 없는 DNase는 그 다음 최초 템플레이트를 소화시키는데 사용될 수 있다. 37 ℃에서 15 분의 인큐베이션 후, mRNA는 제조자의 지침에 따라 Ambion의 MEGACLEAR™ Kit (Austin, TX)를 이용하여 정제될 수 있다. 상기 키트는 RNA의 최대 500 μg을 정제시킬 수 있다. 세정 이후, RNA 폴리뉴클레오타이드는 NANODROP™을 이용하여 정량화 그리고 아가로스 겔 전기영동에 의해 분석되어 RNA 폴리뉴클레오타이드가 적절한 크기인지 그리고 RNA의 열화가 발생하지 않는지를 확인할 수 있다.
실시예 5: 효소 캡핑
RNA 폴리뉴클레오타이드의 캡핑은 혼합물이 하기를 포함하는 아래와 같이 수행된다: IVT RNA 60 μg-180μg 및 dH20 최대 72 μl. 혼합물은 65 ℃에서 5 분 동안 인큐베이션되어 RNA를 변성시키고, 그 다음 얼음에 즉시 전달된다.
프로토콜은 그 다음 10x 캡핑 버퍼 (0.5 M 트리스-HCl (pH 8.0), 60 mM KCl, 12.5 mM MgCl2) (10.0 μl); 20 mM GTP (5.0 μl); 20 mM S-아데노실 메티오닌 (2.5 μl); RNase 억제제 (100 U); 2'-O-메틸전달효소 (400U); 백시니아 캡핑 효소 (구아닐릴 전달효소) (40 U); dH20 (최대 28 μl)의 혼합; 및 37 ℃에서 30 분 동안 60 μg RNA에 대하여 또는 최대 2 시간 180 μg의 RNA에 대하여 인큐베이션을 포함한다.
RNA 폴리뉴클레오타이드는 그 다음 제조자의 지침에 따라 Ambion의 MEGACLEAR™ Kit (Austin, TX)를 이용하여 정제될 수 있다. 세정 이후, RNA는 NANODROP™ (ThermoFisher, Waltham, MA)를 이용하여 정량화 그리고 아가로스 겔 전기영동에 의해 분석되어 RNA 폴리뉴클레오타이드가 적절한 크기인지 그리고 RNA의 열화가 발생하지 않았는지를 확인할 수 있다. RNA 폴리뉴클레오타이드 생성물은 또한 서열분석용 cDNA를 생성하기 위해 역-전사-PCR 운영에 의해 서열분석될 수 있다.
실시예 6: 폴리A 테일링 반응
cDNA에서 폴리-T 없이, 폴리-A 테일링 반응은 최종 생성물 세척 전 수행되어야 한다. 이것은 캡핑된 IVT RNA (100 μl); RNase 억제제 (20 U); 10x 테일링 버퍼 (0.5 M 트리스-HCl (pH 8.0), 2.5 M NaCl, 100 mM MgCl2) (12.0 μl); 20 mM ATP (6.0 μl); 폴리-A 폴리머라제 (20 U); dH20 최대 123.5 μl 혼합 및 37 ℃에서 30 분 동안 인큐베이션에 의해 실시된다. 폴리-A 꼬리가 이미 전사체에 있으면, 테일링 반응은 넘어갈 수 있고 Ambion의 MEGACLEAR™ 키트 (Austin, TX) (최대 500 μg)로 세정에 직접적으로 진행할 수 있다. 폴리-A 폴리머라제는 효모에서 발현된 재조합 효소일 수 있다.
폴리A 테일링 반응의 진행성 또는 완전성이 정확한 크기 폴리A 꼬리를 항상 초래할 수 없다는 것이 이해되어야 한다. 그러므로, 대략 40-200 뉴클레오타이드, 예를 들면, 약 40, 50, 60, 70, 80, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 150-165, 155, 156, 157, 158, 159, 160, 161, 162, 163, 164 또는 165의 폴리A 꼬리는 본 개시내용의 범위 내이다.
실시예 7: 캡핑 검정
단백질 발현 검정
본 명세서에서 교시된 임의의 캡을 함유하는, 폴리펩타이드를 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드 (예를 들면, mRNA)는 동등 농도에서 세포 속에 형질감염될 수 있다. 배양 배지 속에 분비된 단백질의 양은 형질감염후 6, 12, 24 및/또는 36 시간에서 ELISA에 의해 분석될 수 있다. 배지 속에 더 높은 수준의 단백질을 분비하는 합성 폴리뉴클레오타이드는 더 높은 번역적으로-능숙한 캡 구조를 가진 합성 폴리뉴클레오타이드에 상응한다.
순도 분석 합성
본 명세서에서 교시된 임의의 캡을 함유하는, 폴리펩타이드를 인코딩하는 RNA (예를 들면, mRNA) 폴리뉴클레오타이드는 변성 아가로스-우레아 겔 전기영동 또는 HPLC 분석을 이용하여 순도에 대하여 비교될 수 있다. 전기영동에 의해 단일, 합병된 밴드를 가진 RNA 폴리뉴클레오타이드는 다중 밴드 또는 스트리킹 밴드를 가진 폴리뉴클레오타이드에 비교된 더 높은 순도 생성물에 상응한다. 단일 HPLC 피크를 가진 화학적으로 변형된 RNA 폴리뉴클레오타이드는 또한 더 높은 순도 생성물에 상응한다. 더 높은 효율을 가진 캡핑 반응은 더욱 순수한 폴리뉴클레오타이드 모집단을 제공한다.
사이토카인 분석
본 명세서에서 교시된 임의의 캡을 함유하는, 폴리펩타이드를 인코딩하는 RNA (예를 들면, mRNA) 폴리뉴클레오타이드는 다중 농도에서 세포 속에 형질감염될 수 있다. 배양 배지 속에 분비된, 전-염증 사이토카인, 예컨대 TNF-알파 및 IFN-베타의 양은 형질감염후 6, 12, 24 및/또는 36 시간에서 ELISA에 의해 분석될 수 있다. 배지 속에 더 높은 수준의 전-염증 사이토카인의 분비를 초래하는 RNA 폴리뉴클레오타이드는 면역-활성화 캡 구조를 함유하는 폴리뉴클레오타이드에 상응한다.
캡핑 반응 효율
본 명세서에서 교시된 임의의 캡을 함유하는, 폴리펩타이드를 인코딩하는 RNA (예를 들면, mRNA) 폴리뉴클레오타이드는 뉴클레아제 처리후 LC-MS에 의해 캡핑 반응 효율에 대하여 분석될 수 있다. 캡핑된 폴리뉴클레오타이드의 뉴클레아제 처리는 LC-MS에 의해 검출가능한 캡핑된 5'-5-트리포스페이트 캡 구조 및 자유 뉴클레오타이드의 혼합물을 산출한다. LC-MS 스펙트럼에서 캡핑된 생성물의 양은 반응으로부터 총 폴리뉴클레오타이드의 퍼센트로서 표현될 수 있고 캡핑 반응 효율에 상응한다. 더 높은 캡핑 반응 효율을 가진 캡 구조는 LC-MS에 의해 캡핑된 생성물의 더 높은 양을 갖는다.
실시예 8: 변형된 RNA 또는 RT PCR 생성물의 아가로스 겔 전기영동
개별 RNA 폴리뉴클레오타이드 (20 μl 용적내 200-400 ng) 또는 역 전사된 PCR 생성물 (200-400 ng)은 비-변성 1.2% 아가로스 E-겔 (Invitrogen, Carlsbad, CA)에서 웰 속에 장입될 수 있고, 제조자 프로토콜에 따라, 12-15 분 동안 실시될 수 있다.
실시예 9: NANODROP™ 변형된 RNA 정량화 및 UV 스펙트럼 데이터
TE 버퍼 (1 μl)내 화학적으로 변형된 RNA 폴리뉴클레오타이드는 화학적 합성 또는 시험관내 전사 반응으로부터 각각의 폴리뉴클레오타이드의 산출을 정량화하기 위해 NANODROP™ UV 흡광도 판독에 사용된다.
실시예 10: 리피도이드를 이용한 변형된 mRNA의 제형
RNA (예를 들면, mRNA) 폴리뉴클레오타이드는 세포에 첨가에 앞서 세트 비로 폴리뉴클레오타이드를 리피도이드와 혼합시킴으로써 시험관내 실험을 위하여 제형화될 수 있다. 생체내 제형은 신체 전반에 걸쳐 순환을 용이하게 하기 위해 추가의 성분의 첨가를 요구할 수 있다. 생체내 작업에 적합한 입자를 형성하는 이들 리피도이드의 능력을 시험하기 위해, siRNA-리피도이드 제형에 사용된 표준 제형화 공정은 개시점으로서 사용될 수 있다. 입자의 형성 후, 폴리뉴클레오타이드는 첨가되고 복합체를 통합하게 된다. 캡슐화 효율은 표준 염료 제외 검정을 이용하여 결정된다.
실시예 11: VZV 백신에서 사용을 위하여 gE RNA 폴리뉴클레오타이드를 인코딩하는 예시적인 핵산
다음과 같은 서열은 VZV 백신에서 사용을 위하여 VZV RNA 폴리뉴클레오타이드 gE를 인코딩하는데 사용될 수 있는 예시적인 서열이다. VZV 백신은, 예를 들어, 다음과 같은 서열의 적어도 1종에 의해 또는 다음과 같은 서열의 적어도 1종의 단편에 의해 인코딩된 적어도 1종의 RNA 폴리뉴클레오타이드를 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, mRNA는 추가로 5' 캡, 예를 들어, 본 명세서에서 개시된 임의의 캡, 예를 들면, 서열 m7G(5')ppp(5')G-2'-O-메틸을 갖는 캡을 포함한다. 일부 구현예에서, mRNA는 캡 서열을 갖지 않는다. 일부 구현예에서, mRNA는 적어도 1종의 화학적 변형, 예를 들어, 본 명세서에서 개시된 임의의 화학적 변형, 예를 들면, N1-메틸슈도우리딘 변형 또는 N1-에틸슈도우리딘 변형을 갖는다. 다른 구현예에서, mRNA는 화학적 변형을 갖지 않는다.
본 명세서에서 기재된 각각의 서열은 변형된 뉴클레오타이드를 포함하지 않는 미변형된 서열 또는 화학적으로 변형된 서열을 포함한다.
VZV gE -전장 Oka 균주:
TCAAGCTTTTGGACCCTCGTACAGAAGCTAATACGACTCACTATAGGGAAATAAGAGAGAAAAGAAGAGTAAGAAGAAATATAAGAGCCACCATGGGGACAGTGAATAAGCCGGTTGTGGGCGTGCTTATGGGCTTTGGGATTATTACCGGTACATTACGAATTACCAATCCAGTGCGCGCCAGTGTGCTGCGTTACGACGACTTTCACATTGACGAGGATAAGCTGGATACTAACAGCGTGTACGAACCTTATTACCACTCAGATCATGCCGAATCAAGCTGGGTTAATAGAGGAGAAAGCAGCCGAAAAGCCTACGACCACAACTCACCTTATATTTGGCCCAGAAACGATTATGACGGTTTCCTGGAAAACGCACATGAACACCATGGAGTCTACAACCAAGGCAGGGGAATCGACAGTGGCGAGCGTCTTATGCAGCCAACACAGATGTCGGCACAGGAGGATCTCGGTGATGACACCGGCATACACGTGATTCCCACATTAAACGGCGACGACAGACATAAGATCGTCAATGTGGATCAGCGTCAGTATGGGGATGTCTTTAAAGGCGATTTGAATCCAAAGCCCCAAGGACAGAGACTGATCGAGGTCTCTGTAGAAGAAAATCACCCCTTCACTTTGCGCGCTCCAATCCAGAGGATTTACGGGGTGCGTTATACCGAAACTTGGAGTTTCTTGCCGTCACTGACGTGTACGGGGGATGCCGCCCCCGCAATCCAGCACATCTGTCTGAAACACACCACATGCTTTCAGGACGTGGTTGTGGATGTGGATTGCGCGGAAAACACAAAAGAAGACCAACTCGCCGAAATCAGCTATCGTTTTCAGGGTAAAAAAGAGGCCGACCAACCGTGGATTGTTGTGAATACGAGCACGCTCTTCGATGAGCTTGAACTCGATCCCCCGGAAATCGAGCCTGGGGTTCTAAAAGTGTTGAGGACCGAGAAGCAGTACCTCGGGGTTTATATCTGGAATATGAGAGGCTCCGATGGCACCTCTACCTACGCAACGTTTCTGGTTACCTGGAAGGGAGACGAGAAGACACGGAATCCAACGCCCGCTGTGACCCCTCAGCCTAGGGGAGCCGAATTCCACATGTGGAACTATCACTCCCATGTATTCAGTGTGGGTGACACTTTCAGCCTGGCCATGCACCTGCAGTATAAGATTCACGAGGCACCCTTCGACCTCCTGCTGGAGTGGTTGTACGTACCTATTGATCCCACTTGTCAGCCCATGCGCCTGTACTCCACTTGCTTGTACCACCCCAATGCACCACAGTGTCTATCACACATGAACTCCGGGTGTACCTTTACTTCACCCCATCTTGCCCAGCGGGTCGCCAGCACAGTGTATCAGAACTGTGAGCATGCTGACAACTATACTGCTTATTGCCTCGGAATATCCCATATGGAGCCAAGCTTCGGGCTCATACTGCACGATGGTGGTACGACACTCAAGTTCGTGGACACCCCCGAAAGCCTTTCTGGCTTGTACGTGTTCGTGGTCTACTTCAATGGACATGTGGAGGCAGTGGCTTACACAGTGGTTTCGACAGTTGATCACTTTGTAAATGCCATTGAGGAACGCGGCTTCCCGCCTACAGCGGGCCAGCCCCCTGCGACAACAAAACCAAAAGAGATTACGCCCGTTAATCCTGGGACTAGTCCATTGCTGAGGTATGCCGCCTGGACTGGCGGTCTGGCGGCCGTGGTACTTCTGTGTTTAGTCATATTTCTGATCTGTACCGCTAAACGTATGCGGGTCAAGGCTTACCGTGTTGACAAGTCTCCTTACAATCAGTCAATGTACTATGCAGGACTCCCTGTTGACGATTTCGAAGACTCAGAGAGTACAGACACAGAAGAAGAATTCGGAAACGCTATAGGTGGCTCTCACGGAGGTAGCTCGTATACAGTGTACATCGATAAAACCAGATGATAATAGGCTGGAGCCTCGGTGGCCATGCTTCTTGCCCCTTGGGCCTCCCCCCAGCCCCTCCTCCCCTTCCTGCACCCGTACCCCCGTGGTCTTTGAATAAAGTCTGAGTGGGCGGC (서열번호: 1)
VZV gE -전장 Oka 균주 (mRNA):
UCAAGCUUUUGGACCCUCGUACAGAAGCUAAUACGACUCACUAUAGGGAAAUAAGAGAGAAAAGAAGAGUAAGAAGAAAUAUAAGAGCCACCAUGGGGACAGUGAAUAAGCCGGUUGUGGGCGUGCUUAUGGGCUUUGGGAUUAUUACCGGUACAUUACGAAUUACCAAUCCAGUGCGCGCCAGUGUGCUGCGUUACGACGACUUUCACAUUGACGAGGAUAAGCUGGAUACUAACAGCGUGUACGAACCUUAUUACCACUCAGAUCAUGCCGAAUCAAGCUGGGUUAAUAGAGGAGAAAGCAGCCGAAAAGCCUACGACCACAACUCACCUUAUAUUUGGCCCAGAAACGAUUAUGACGGUUUCCUGGAAAACGCACAUGAACACCAUGGAGUCUACAACCAAGGCAGGGGAAUCGACAGUGGCGAGCGUCUUAUGCAGCCAACACAGAUGUCGGCACAGGAGGAUCUCGGUGAUGACACCGGCAUACACGUGAUUCCCACAUUAAACGGCGACGACAGACAUAAGAUCGUCAAUGUGGAUCAGCGUCAGUAUGGGGAUGUCUUUAAAGGCGAUUUGAAUCCAAAGCCCCAAGGACAGAGACUGAUCGAGGUCUCUGUAGAAGAAAAUCACCCCUUCACUUUGCGCGCUCCAAUCCAGAGGAUUUACGGGGUGCGUUAUACCGAAACUUGGAGUUUCUUGCCGUCACUGACGUGUACGGGGGAUGCCGCCCCCGCAAUCCAGCACAUCUGUCUGAAACACACCACAUGCUUUCAGGACGUGGUUGUGGAUGUGGAUUGCGCGGAAAACACAAAAGAAGACCAACUCGCCGAAAUCAGCUAUCGUUUUCAGGGUAAAAAAGAGGCCGACCAACCGUGGAUUGUUGUGAAUACGAGCACGCUCUUCGAUGAGCUUGAACUCGAUCCCCCGGAAAUCGAGCCUGGGGUUCUAAAAGUGUUGAGGACCGAGAAGCAGUACCUCGGGGUUUAUAUCUGGAAUAUGAGAGGCUCCGAUGGCACCUCUACCUACGCAACGUUUCUGGUUACCUGGAAGGGAGACGAGAAGACACGGAAUCCAACGCCCGCUGUGACCCCUCAGCCUAGGGGAGCCGAAUUCCACAUGUGGAACUAUCACUCCCAUGUAUUCAGUGUGGGUGACACUUUCAGCCUGGCCAUGCACCUGCAGUAUAAGAUUCACGAGGCACCCUUCGACCUCCUGCUGGAGUGGUUGUACGUACCUAUUGAUCCCACUUGUCAGCCCAUGCGCCUGUACUCCACUUGCUUGUACCACCCCAAUGCACCACAGUGUCUAUCACACAUGAACUCCGGGUGUACCUUUACUUCACCCCAUCUUGCCCAGCGGGUCGCCAGCACAGUGUAUCAGAACUGUGAGCAUGCUGACAACUAUACUGCUUAUUGCCUCGGAAUAUCCCAUAUGGAGCCAAGCUUCGGGCUCAUACUGCACGAUGGUGGUACGACACUCAAGUUCGUGGACACCCCCGAAAGCCUUUCUGGCUUGUACGUGUUCGUGGUCUACUUCAAUGGACAUGUGGAGGCAGUGGCUUACACAGUGGUUUCGACAGUUGAUCACUUUGUAAAUGCCAUUGAGGAACGCGGCUUCCCGCCUACAGCGGGCCAGCCCCCUGCGACAACAAAACCAAAAGAGAUUACGCCCGUUAAUCCUGGGACUAGUCCAUUGCUGAGGUAUGCCGCCUGGACUGGCGGUCUGGCGGCCGUGGUACUUCUGUGUUUAGUCAUAUUUCUGAUCUGUACCGCUAAACGUAUGCGGGUCAAGGCUUACCGUGUUGACAAGUCUCCUUACAAUCAGUCAAUGUACUAUGCAGGACUCCCUGUUGACGAUUUCGAAGACUCAGAGAGUACAGACACAGAAGAAGAAUUCGGAAACGCUAUAGGUGGCUCUCACGGAGGUAGCUCGUAUACAGUGUACAUCGAUAAAACCAGAUGAUAAUAGGCUGGAGCCUCGGUGGCCAUGCUUCUUGCCCCUUGGGCCUCCCCCCAGCCCCUCCUCCCCUUCCUGCACCCGUACCCCCGUGGUCUUUGAAUAAAGUCUGAGUGGGCGGC (서열번호: 123)
실시예 12: VZV 백신에서 사용을 위하여 gI RNA 폴리뉴클레오타이드를 인코딩하는 예시적인 핵산
다음과 같은 서열은 VZV RNA (예를 들면, mRNA) 백신에서 사용을 위하여 VZV RNA 폴리뉴클레오타이드 gI를 인코딩하는데 사용될 수 있는 예시적인 서열이다. gI 폴리펩타이드는 양쪽 당단백질의 세포내이입을 용이하게 하는 감염된 세포에서 gE와 복합체를 형성하고 최종 바이러스성 엔빌로프가 획득되는 경우 트랜스-골지 네트워크 (TGN)에 이들을 유도한다. VZV 백신은, 예를 들어, 다음과 같은 서열의 적어도 1종에 의해 또는 다음과 같은 서열의 적어도 1종의 단편에 의해 인코딩된 적어도 1종의 RNA (예를 들면, mRNA) 폴리뉴클레오타이드를 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, mRNA는 추가로 5' 캡, 예를 들어, 본 명세서에서 개시된 임의의 캡, 예를 들면, 서열 m7G(5')ppp(5')G-2'-O-메틸을 갖는 캡을 포함한다. 다른 구현예에서, mRNA는 캡 서열을 갖지 않는다. 일부 구현예에서, mRNA는 적어도 1종의 화학적 변형, 예를 들어, 본 명세서에서 개시된 임의의 화학적 변형, 예를 들면, N1-메틸슈도우리딘 변형 또는 N1-에틸슈도우리딘 변형을 갖는다. 다른 구현예에서, mRNA는 화학적 변형을 갖지 않는다.
VZV-GI-전장 (Oka 균주):
TCAAGCTTTTGGACCCTCGTACAGAAGCTAATACGACTCACTATAGGGAAATAAGAGAGAAAAGAAGAGTAAGAAGAAATATAAGAGCCACCATGTTTTTAATCCAATGTTTGATATCGGCCGTTATATTTTACATACAAGTGACCAACGCTTTGATCTTCAAGGGCGACCACGTGAGCTTGCAAGTTAACAGCAGTCTCACGTCTATCCTTATTCCCATGCAAAATGATAATTATACAGAGATAAAAGGACAGCTTGTCTTTATTGGAGAGCAACTACCTACCGGGACAAACTATAGCGGAACACTGGAACTGTTATACGCGGATACGGTGGCGTTTTGTTTCCGGTCAGTACAAGTAATAAGATACGACGGATGTCCCCGGATTAGAACGAGCGCTTTTATTTCGTGTAGGTACAAACATTCGTGGCATTATGGTAACTCAACGGATCGGATATCAACAGAGCCGGATGCTGGTGTAATGTTGAAAATTACCAAACCGGGAATAAATGATGCTGGTGTGTATGTACTTCTTGTTCGGTTAGACCATAGCAGATCCACCGATGGTTTCATTCTTGGTGTAAATGTATATACAGCGGGCTCGCATCACAACATTCACGGGGTTATCTACACTTCTCCATCTCTACAGAATGGATATTCTACAAGAGCCCTTTTTCAACAAGCTCGTTTGTGTGATTTACCCGCGACACCCAAAGGGTCCGGTACCTCCCTGTTTCAACATATGCTTGATCTTCGTGCCGGTAAATCGTTAGAGGATAACCCTTGGTTACATGAGGACGTTGTTACGACAGAAACTAAGTCCGTTGTTAAGGAGGGGATAGAAAATCACGTATATCCAACGGATATGTCCACGTTACCCGAAAAGTCCCTTAATGATCCTCCAGAAAATCTACTTATAATTATTCCTATAGTAGCGTCTGTCATGATCCTCACCGCCATGGTTATTGTTATTGTAATAAGCGTTAAGCGACGTAGAATTAAAAAACATCCAATTTATCGCCCAAATACAAAAACAAGAAGGGGCATACAAAATGCGACACCAGAATCCGATGTGATGTTGGAGGCCGCCATTGCACAACTAGCAACGATTCGCGAAGAATCCCCCCCACATTCCGTTGTAAACCCGTTTGTTAAATAGTGATAATAGGCTGGAGCCTCGGTGGCCATGCTTCTTGCCCCTTGGGCCTCCCCCCAGCCCCTCCTCCCCTTCCTGCACCCGTACCCCCGTGGTCTTTGAATAAAGTCTGAGTGGGCGGC (서열번호: 2)
VZV-GI-전장 (Oka 균주) (mRNA):
UCAAGCUUUUGGACCCUCGUACAGAAGCUAAUACGACUCACUAUAGGGAAAUAAGAGAGAAAAGAAGAGUAAGAAGAAAUAUAAGAGCCACCAUGUUUUUAAUCCAAUGUUUGAUAUCGGCCGUUAUAUUUUACAUACAAGUGACCAACGCUUUGAUCUUCAAGGGCGACCACGUGAGCUUGCAAGUUAACAGCAGUCUCACGUCUAUCCUUAUUCCCAUGCAAAAUGAUAAUUAUACAGAGAUAAAAGGACAGCUUGUCUUUAUUGGAGAGCAACUACCUACCGGGACAAACUAUAGCGGAACACUGGAACUGUUAUACGCGGAUACGGUGGCGUUUUGUUUCCGGUCAGUACAAGUAAUAAGAUACGACGGAUGUCCCCGGAUUAGAACGAGCGCUUUUAUUUCGUGUAGGUACAAACAUUCGUGGCAUUAUGGUAACUCAACGGAUCGGAUAUCAACAGAGCCGGAUGCUGGUGUAAUGUUGAAAAUUACCAAACCGGGAAUAAAUGAUGCUGGUGUGUAUGUACUUCUUGUUCGGUUAGACCAUAGCAGAUCCACCGAUGGUUUCAUUCUUGGUGUAAAUGUAUAUACAGCGGGCUCGCAUCACAACAUUCACGGGGUUAUCUACACUUCUCCAUCUCUACAGAAUGGAUAUUCUACAAGAGCCCUUUUUCAACAAGCUCGUUUGUGUGAUUUACCCGCGACACCCAAAGGGUCCGGUACCUCCCUGUUUCAACAUAUGCUUGAUCUUCGUGCCGGUAAAUCGUUAGAGGAUAACCCUUGGUUACAUGAGGACGUUGUUACGACAGAAACUAAGUCCGUUGUUAAGGAGGGGAUAGAAAAUCACGUAUAUCCAACGGAUAUGUCCACGUUACCCGAAAAGUCCCUUAAUGAUCCUCCAGAAAAUCUACUUAUAAUUAUUCCUAUAGUAGCGUCUGUCAUGAUCCUCACCGCCAUGGUUAUUGUUAUUGUAAUAAGCGUUAAGCGACGUAGAAUUAAAAAACAUCCAAUUUAUCGCCCAAAUACAAAAACAAGAAGGGGCAUACAAAAUGCGACACCAGAAUCCGAUGUGAUGUUGGAGGCCGCCAUUGCACAACUAGCAACGAUUCGCGAAGAAUCCCCCCCACAUUCCGUUGUAAACCCGUUUGUUAAAUAGUGAUAAUAGGCUGGAGCCUCGGUGGCCAUGCUUCUUGCCCCUUGGGCCUCCCCCCAGCCCCUCCUCCCCUUCCUGCACCCGUACCCCCGUGGUCUUUGAAUAAAGUCUGAGUGGGCGGC (서열번호: 124)
실시예 13: VZV 백신에서 사용을 위하여 상이한 C-말단 서열을 갖는 변이체 gE 항원을 인코딩하는 mRNAs
VZV는 트랜스-골지 네트워크에서 외피보유된다. 당단백질 I(gI)은 양쪽 당단백질의 세포내이입을 용이하게 하는 감염된 세포에서 gE와 복합체를 형성하고 최종 바이러스성 엔빌로프가 획득되는 트랜스-골지 네트워크 (TGN)에 이들을 유도한다. 상이한 C-말단 변이체 서열을 갖는 gE 항원을 인코딩하는 mRNAs는, 원형질막에 gE 항원의 국재화에서 증가로 이어지는, ER/골지/TGN에서 포획된 gE를 피하도록 설계되었고 면역-자극 능력을 개선하였다. gE 항원의 도식은 도 4에서 보여진다.
몇 개의 상이한 gE 변이체 mRNA 서열 (Oka 균주)는 조작되었다:
(1) 결실된 C 말단 영역 (서열번호: 17-20)의 말단 62 아미노산을 갖는 절단된 폴리펩타이드를 인코딩하는 gE 변이체 mRNA. 수득한 폴리펩타이드는 트랜스-골지 네트워크에 감소된 국재화 및 감소된 세포내이입을 갖는다.
(2) 결실된 C 말단 영역의 말단 62 아미노산을 갖는 절단된 폴리펩타이드를 인코딩하는 그리고 또한, 절단된 gE 폴리펩타이드 (서열번호: 21-24)의 분비 형태를 초래하는, Ig카파로 대체된 신호 펩타이드를 갖는 gE 변이체 mRNA. 수득한 폴리펩타이드는 트랜스-골지 네트워크에 감소된 국재화 및 감소된 세포내이입을 갖는다.
(3) 결실된 C 말단 영역 (서열번호: 33-36)의 말단 50 아미노산을 갖는 절단된 폴리펩타이드를 인코딩하는 gE 변이체 mRNA. 수득한 폴리펩타이드는 트랜스-골지 네트워크에 감소된 국재화 및 감소된 세포내이입을 갖는다.
(4) 결실된 C 말단 영역의 말단 50 아미노산을 갖는 그리고 또한 점 돌연변이 Y569A (서열번호: 37-40)을 갖는 절단된 폴리펩타이드를 인코딩하는 gE 변이체 mRNA. "AYRV" 모티프 (서열번호: 119)는 트랜스-골지 네트워크에 gE 폴리펩타이드를 표적하는 이동조절 모티프이다. 따라서, AARV 서열 서열번호: 120을 AYRV 서열번호: 119로 돌연변이시키는 것는 트랜스-골지 네트워크에 gE 폴리펩타이드의 감소된 국재화를 초래한다.
(5) AEAADA (서열번호: 58) 서열을 가진 전장 gE 폴리펩타이드 (서열번호: 25-28)을 인코딩하는 gE 변이체 mRNA. A-E-A-A-D-A (서열번호: 58) 서열은 SESTDT (서열번호: 59)를 대체한다. 이것은 Ala-풍부 서열로 Ser/Thr-풍부 "SSTT" (서열번호: 122) 산성 클러스터의 대체이다. 이것은 CKII 인산화를 감소시켜, 차례로 트랜스-골지 네트워크에 gE 폴리펩타이드의 감소된 국재화를 초래한다.
(6) AEAADA (서열번호: 58) 서열을 가진 그리고 또한 점 돌연변이 Y582G (서열번호: 29-32)를 갖는 전장 gE 폴리펩타이드를 인코딩하는 gE 변이체 mRNA. "YAGL" (서열번호: 121) 모티프는 트랜스-골지 네트워크에 gE 폴리펩타이드의 국재화를 향상시키는 세포내이입 모티프이다. 따라서, GAGL 서열 (서열번호: 132)를 YAGL (서열번호: 121)로 돌연변이시키는 것은 수득한 폴리펩타이드의 감소된 세포내이입을 초래한다.
각각의 이들 변이체는 트랜스-골지 네트워크에 인코딩된 gE 단백질의 국재화를 감소시키는 그리고 원형질막에 이동조절을 향상시키는 변형을 갖는다. 표 1은 상이한 C-말단 서열을 갖는 변이체 gE 항원을 인코딩하는 mRNAs를 요약한다. 일부 구현예에서, 변이체 mRNA는 추가로 5' 캡, 예를 들어, 본 명세서에서 개시된 임의의 캡, 예를 들면, 서열 m7G(5')ppp(5')G-2'-O-메틸을 갖는 캡을 포함한다. 일부 구현예에서, 변이체 mRNA는 5' 캡을 갖지 않는다. 일부 구현예에서, 변이체 mRNA는 적어도 1종의 화학적 변형, 예를 들어, 본 명세서에서 개시된 임의의 화학적 변형, 예를 들면, N1-메틸슈도우리딘 변형 또는 N1-에틸슈도우리딘 변형을 갖는다. 일부 구현예에서, mRNA는 화학적 변형을 갖지 않는다. mRNA 변이체를 인코딩하는 서열은 표 밑에 제공된다.
Figure pct00005
Figure pct00006
VZV-GE-delete-562
TCAAGCTTTTGGACCCTCGTACAGAAGCTAATACGACTCACTATAGGGAAATAAGAGAGAAAAGAAGAGTAAGAAGAAATATAAGAGCCACCATGGGGACAGTTAATAAACCTGTGGTGGGGGTATTGATGGGGTTCGGAATTATCACGGGAACGTTGCGTATAACGAATCCGGTCAGAGCATCCGTCTTGCGATACGATGATTTTCACATCGATGAAGACAAACTGGATACAAACTCCGTATATGAGCCTTACTACCATTCAGATCATGCGGAGTCTTCATGGGTAAATCGGGGAGAGTCTTCGCGAAAAGCGTACGATCATAACTCACCTTATATATGGCCACGTAATGATTATGATGGATTTTTAGAGAACGCACACGAACACCATGGGGTGTATAATCAGGGCCGTGGTATCGATAGCGGGGAACGGTTAATGCAACCCACACAAATGTCTGCACAGGAGGATCTTGGGGACGATACGGGCATCCACGTTATCCCTACGTTAAACGGCGATGACAGACATAAAATTGTAAATGTGGACCAACGTCAATACGGTGACGTGTTTAAAGGAGATCTTAATCCAAAACCCCAAGGCCAAAGACTCATTGAGGTGTCAGTGGAAGAAAATCACCCGTTTACTTTACGCGCACCGATTCAGCGGATTTATGGAGTCCGGTACACCGAGACTTGGAGCTTTTTGCCGTCATTAACCTGTACGGGAGACGCAGCGCCCGCCATCCAGCATATATGTTTAAAACATACAACATGCTTTCAAGACGTGGTGGTGGATGTGGATTGCGCGGAAAATACTAAAGAGGATCAGTTGGCCGAAATCAGTTACCGTTTTCAAGGTAAGAAGGAAGCGGACCAACCGTGGATTGTTGTAAACACGAGCACACTGTTTGATGAACTCGAATTAGACCCCCCCGAGATTGAACCGGGTGTCTTGAAAGTACTTCGGACAGAAAAACAATACTTGGGTGTGTACATTTGGAACATGCGCGGCTCCGATGGTACGTCTACCTACGCCACGTTTTTGGTCACCTGGAAAGGGGATGAAAAAACAAGAAACCCTACGCCCGCAGTAACTCCTCAACCAAGAGGGGCTGAGTTTCATATGTGGAATTACCACTCGCATGTATTTTCAGTTGGTGATACGTTTAGCTTGGCAATGCATCTTCAGTATAAGATACATGAAGCGCCATTTGATTTGCTGTTAGAGTGGTTGTATGTCCCCATCGATCCTACATGTCAACCAATGCGGTTATATTCTACGTGTTTGTATCATCCCAACGCACCCCAATGCCTCTCTCATATGAATTCCGGTTGTACATTTACCTCGCCACATTTAGCCCAGCGTGTTGCAAGCACAGTGTATCAAAATTGTGAACATGCAGATAACTACACCGCATATTGTCTGGGAATATCTCATATGGAGCCTAGCTTTGGTCTAATCTTACACGACGGGGGCACCACGTTAAAGTTTGTAGATACACCCGAGAGTTTGTCGGGATTATACGTTTTTGTGGTGTATTTTAACGGGCATGTTGAAGCCGTAGCATACACTGTTGTATCCACAGTAGATCATTTTGTAAACGCAATTGAAGAGCGTGGATTTCCGCCAACGGCCGGTCAGCCACCGGCGACTACTAAACCCAAGGAAATTACCCCCGTAAACCCCGGAACGTCACCACTTCTACGATATGCCGCATGGACCGGAGGGCTTGCAGCAGTAGTACTTTTATGTCTCGTAATATTTTTAATCTGTACGGCTTGATGATAATAGGCTGGAGCCTCGGTGGCCATGCTTCTTGCCCCTTGGGCCTCCCCCCAGCCCCTCCTCCCCTTCCTGCACCCGTACCCCCGTGGTCTTTGAATAAAGTCTGAGTGGGCGGC (서열번호: 3)
VZV-GE-delete-562 (mRNA)
UCAAGCUUUUGGACCCUCGUACAGAAGCUAAUACGACUCACUAUAGGGAAAUAAGAGAGAAAAGAAGAGUAAGAAGAAAUAUAAGAGCCACCAUGGGGACAGUUAAUAAACCUGUGGUGGGGGUAUUGAUGGGGUUCGGAAUUAUCACGGGAACGUUGCGUAUAACGAAUCCGGUCAGAGCAUCCGUCUUGCGAUACGAUGAUUUUCACAUCGAUGAAGACAAACUGGAUACAAACUCCGUAUAUGAGCCUUACUACCAUUCAGAUCAUGCGGAGUCUUCAUGGGUAAAUCGGGGAGAGUCUUCGCGAAAAGCGUACGAUCAUAACUCACCUUAUAUAUGGCCACGUAAUGAUUAUGAUGGAUUUUUAGAGAACGCACACGAACACCAUGGGGUGUAUAAUCAGGGCCGUGGUAUCGAUAGCGGGGAACGGUUAAUGCAACCCACACAAAUGUCUGCACAGGAGGAUCUUGGGGACGAUACGGGCAUCCACGUUAUCCCUACGUUAAACGGCGAUGACAGACAUAAAAUUGUAAAUGUGGACCAACGUCAAUACGGUGACGUGUUUAAAGGAGAUCUUAAUCCAAAACCCCAAGGCCAAAGACUCAUUGAGGUGUCAGUGGAAGAAAAUCACCCGUUUACUUUACGCGCACCGAUUCAGCGGAUUUAUGGAGUCCGGUACACCGAGACUUGGAGCUUUUUGCCGUCAUUAACCUGUACGGGAGACGCAGCGCCCGCCAUCCAGCAUAUAUGUUUAAAACAUACAACAUGCUUUCAAGACGUGGUGGUGGAUGUGGAUUGCGCGGAAAAUACUAAAGAGGAUCAGUUGGCCGAAAUCAGUUACCGUUUUCAAGGUAAGAAGGAAGCGGACCAACCGUGGAUUGUUGUAAACACGAGCACACUGUUUGAUGAACUCGAAUUAGACCCCCCCGAGAUUGAACCGGGUGUCUUGAAAGUACUUCGGACAGAAAAACAAUACUUGGGUGUGUACAUUUGGAACAUGCGCGGCUCCGAUGGUACGUCUACCUACGCCACGUUUUUGGUCACCUGGAAAGGGGAUGAAAAAACAAGAAACCCUACGCCCGCAGUAACUCCUCAACCAAGAGGGGCUGAGUUUCAUAUGUGGAAUUACCACUCGCAUGUAUUUUCAGUUGGUGAUACGUUUAGCUUGGCAAUGCAUCUUCAGUAUAAGAUACAUGAAGCGCCAUUUGAUUUGCUGUUAGAGUGGUUGUAUGUCCCCAUCGAUCCUACAUGUCAACCAAUGCGGUUAUAUUCUACGUGUUUGUAUCAUCCCAACGCACCCCAAUGCCUCUCUCAUAUGAAUUCCGGUUGUACAUUUACCUCGCCACAUUUAGCCCAGCGUGUUGCAAGCACAGUGUAUCAAAAUUGUGAACAUGCAGAUAACUACACCGCAUAUUGUCUGGGAAUAUCUCAUAUGGAGCCUAGCUUUGGUCUAAUCUUACACGACGGGGGCACCACGUUAAAGUUUGUAGAUACACCCGAGAGUUUGUCGGGAUUAUACGUUUUUGUGGUGUAUUUUAACGGGCAUGUUGAAGCCGUAGCAUACACUGUUGUAUCCACAGUAGAUCAUUUUGUAAACGCAAUUGAAGAGCGUGGAUUUCCGCCAACGGCCGGUCAGCCACCGGCGACUACUAAACCCAAGGAAAUUACCCCCGUAAACCCCGGAACGUCACCACUUCUACGAUAUGCCGCAUGGACCGGAGGGCUUGCAGCAGUAGUACUUUUAUGUCUCGUAAUAUUUUUAAUCUGUACGGCUUGAUGAUAAUAGGCUGGAGCCUCGGUGGCCAUGCUUCUUGCCCCUUGGGCCUCCCCCCAGCCCCUCCUCCCCUUCCUGCACCCGUACCCCCGUGGUCUUUGAAUAAAGUCUGAGUGGGCGGC (서열번호: 125)
VZV-GE-delete-562-Ig카파
TCAAGCTTTTGGACCCTCGTACAGAAGCTAATACGACTCACTATAGGGAAATAAGAGAGAAAAGAAGAGTAAGAAGAAATATAAGAGCCACCATGGAAACCCCGGCGCAGCTGCTGTTTCTGCTGCTGCTGTGGCTGCCGGATACCACCGGCTCCGTCTTGCGATACGATGATTTTCACATCGATGAAGACAAACTGGATACAAACTCCGTATATGAGCCTTACTACCATTCAGATCATGCGGAGTCTTCATGGGTAAATCGGGGAGAGTCTTCGCGAAAAGCGTACGATCATAACTCACCTTATATATGGCCACGTAATGATTATGATGGATTTTTAGAGAACGCACACGAACACCATGGGGTGTATAATCAGGGCCGTGGTATCGATAGCGGGGAACGGTTAATGCAACCCACACAAATGTCTGCACAGGAGGATCTTGGGGACGATACGGGCATCCACGTTATCCCTACGTTAAACGGCGATGACAGACATAAAATTGTAAATGTGGACCAACGTCAATACGGTGACGTGTTTAAAGGAGATCTTAATCCAAAACCCCAAGGCCAAAGACTCATTGAGGTGTCAGTGGAAGAAAATCACCCGTTTACTTTACGCGCACCGATTCAGCGGATTTATGGAGTCCGGTACACCGAGACTTGGAGCTTTTTGCCGTCATTAACCTGTACGGGAGACGCAGCGCCCGCCATCCAGCATATATGTTTAAAACATACAACATGCTTTCAAGACGTGGTGGTGGATGTGGATTGCGCGGAAAATACTAAAGAGGATCAGTTGGCCGAAATCAGTTACCGTTTTCAAGGTAAGAAGGAAGCGGACCAACCGTGGATTGTTGTAAACACGAGCACACTGTTTGATGAACTCGAATTAGACCCCCCCGAGATTGAACCGGGTGTCTTGAAAGTACTTCGGACAGAAAAACAATACTTGGGTGTGTACATTTGGAACATGCGCGGCTCCGATGGTACGTCTACCTACGCCACGTTTTTGGTCACCTGGAAAGGGGATGAAAAAACAAGAAACCCTACGCCCGCAGTAACTCCTCAACCAAGAGGGGCTGAGTTTCATATGTGGAATTACCACTCGCATGTATTTTCAGTTGGTGATACGTTTAGCTTGGCAATGCATCTTCAGTATAAGATACATGAAGCGCCATTTGATTTGCTGTTAGAGTGGTTGTATGTCCCCATCGATCCTACATGTCAACCAATGCGGTTATATTCTACGTGTTTGTATCATCCCAACGCACCCCAATGCCTCTCTCATATGAATTCCGGTTGTACATTTACCTCGCCACATTTAGCCCAGCGTGTTGCAAGCACAGTGTATCAAAATTGTGAACATGCAGATAACTACACCGCATATTGTCTGGGAATATCTCATATGGAGCCTAGCTTTGGTCTAATCTTACACGACGGGGGCACCACGTTAAAGTTTGTAGATACACCCGAGAGTTTGTCGGGATTATACGTTTTTGTGGTGTATTTTAACGGGCATGTTGAAGCCGTAGCATACACTGTTGTATCCACAGTAGATCATTTTGTAAACGCAATTGAAGAGCGTGGATTTCCGCCAACGGCCGGTCAGCCACCGGCGACTACTAAACCCAAGGAAATTACCCCCGTAAACCCCGGAACGTCACCACTTCTACGATATGCCGCATGGACCGGAGGGCTTGCAGCAGTAGTACTTTTATGTCTCGTAATATTTTTAATCTGTACGGCTTGATGATAATAGGCTGGAGCCTCGGTGGCCATGCTTCTTGCCCCTTGGGCCTCCCCCCAGCCCCTCCTCCCCTTCCTGCACCCGTACCCCCGTGGTCTTTGAATAAAGTCTGAGTGGGCGGC (서열번호: 4)
VZV-GE-delete-562-Ig카파 (mRNA)
UCAAGCUUUUGGACCCUCGUACAGAAGCUAAUACGACUCACUAUAGGGAAAUAAGAGAGAAAAGAAGAGUAAGAAGAAAUAUAAGAGCCACCAUGGAAACCCCGGCGCAGCUGCUGUUUCUGCUGCUGCUGUGGCUGCCGGAUACCACCGGCUCCGUCUUGCGAUACGAUGAUUUUCACAUCGAUGAAGACAAACUGGAUACAAACUCCGUAUAUGAGCCUUACUACCAUUCAGAUCAUGCGGAGUCUUCAUGGGUAAAUCGGGGAGAGUCUUCGCGAAAAGCGUACGAUCAUAACUCACCUUAUAUAUGGCCACGUAAUGAUUAUGAUGGAUUUUUAGAGAACGCACACGAACACCAUGGGGUGUAUAAUCAGGGCCGUGGUAUCGAUAGCGGGGAACGGUUAAUGCAACCCACACAAAUGUCUGCACAGGAGGAUCUUGGGGACGAUACGGGCAUCCACGUUAUCCCUACGUUAAACGGCGAUGACAGACAUAAAAUUGUAAAUGUGGACCAACGUCAAUACGGUGACGUGUUUAAAGGAGAUCUUAAUCCAAAACCCCAAGGCCAAAGACUCAUUGAGGUGUCAGUGGAAGAAAAUCACCCGUUUACUUUACGCGCACCGAUUCAGCGGAUUUAUGGAGUCCGGUACACCGAGACUUGGAGCUUUUUGCCGUCAUUAACCUGUACGGGAGACGCAGCGCCCGCCAUCCAGCAUAUAUGUUUAAAACAUACAACAUGCUUUCAAGACGUGGUGGUGGAUGUGGAUUGCGCGGAAAAUACUAAAGAGGAUCAGUUGGCCGAAAUCAGUUACCGUUUUCAAGGUAAGAAGGAAGCGGACCAACCGUGGAUUGUUGUAAACACGAGCACACUGUUUGAUGAACUCGAAUUAGACCCCCCCGAGAUUGAACCGGGUGUCUUGAAAGUACUUCGGACAGAAAAACAAUACUUGGGUGUGUACAUUUGGAACAUGCGCGGCUCCGAUGGUACGUCUACCUACGCCACGUUUUUGGUCACCUGGAAAGGGGAUGAAAAAACAAGAAACCCUACGCCCGCAGUAACUCCUCAACCAAGAGGGGCUGAGUUUCAUAUGUGGAAUUACCACUCGCAUGUAUUUUCAGUUGGUGAUACGUUUAGCUUGGCAAUGCAUCUUCAGUAUAAGAUACAUGAAGCGCCAUUUGAUUUGCUGUUAGAGUGGUUGUAUGUCCCCAUCGAUCCUACAUGUCAACCAAUGCGGUUAUAUUCUACGUGUUUGUAUCAUCCCAACGCACCCCAAUGCCUCUCUCAUAUGAAUUCCGGUUGUACAUUUACCUCGCCACAUUUAGCCCAGCGUGUUGCAAGCACAGUGUAUCAAAAUUGUGAACAUGCAGAUAACUACACCGCAUAUUGUCUGGGAAUAUCUCAUAUGGAGCCUAGCUUUGGUCUAAUCUUACACGACGGGGGCACCACGUUAAAGUUUGUAGAUACACCCGAGAGUUUGUCGGGAUUAUACGUUUUUGUGGUGUAUUUUAACGGGCAUGUUGAAGCCGUAGCAUACACUGUUGUAUCCACAGUAGAUCAUUUUGUAAACGCAAUUGAAGAGCGUGGAUUUCCGCCAACGGCCGGUCAGCCACCGGCGACUACUAAACCCAAGGAAAUUACCCCCGUAAACCCCGGAACGUCACCACUUCUACGAUAUGCCGCAUGGACCGGAGGGCUUGCAGCAGUAGUACUUUUAUGUCUCGUAAUAUUUUUAAUCUGUACGGCUUGAUGAUAAUAGGCUGGAGCCUCGGUGGCCAUGCUUCUUGCCCCUUGGGCCUCCCCCCAGCCCCUCCUCCCCUUCCUGCACCCGUACCCCCGUGGUCUUUGAAUAAAGUCUGAGUGGGCGGC (서열번호: 126)
VZV-GE-delete-574
TCAAGCTTTTGGACCCTCGTACAGAAGCTAATACGACTCACTATAGGGAAATAAGAGAGAAAAGAAGAGTAAGAAGAAATATAAGAGCCACCATGGGGACAGTTAATAAACCTGTGGTGGGGGTATTGATGGGGTTCGGAATTATCACGGGAACGTTGCGTATAACGAATCCGGTCAGAGCATCCGTCTTGCGATACGATGATTTTCACATCGATGAAGACAAACTGGATACAAACTCCGTATATGAGCCTTACTACCATTCAGATCATGCGGAGTCTTCATGGGTAAATCGGGGAGAGTCTTCGCGAAAAGCGTACGATCATAACTCACCTTATATATGGCCACGTAATGATTATGATGGATTTTTAGAGAACGCACACGAACACCATGGGGTGTATAATCAGGGCCGTGGTATCGATAGCGGGGAACGGTTAATGCAACCCACACAAATGTCTGCACAGGAGGATCTTGGGGACGATACGGGCATCCACGTTATCCCTACGTTAAACGGCGATGACAGACATAAAATTGTAAATGTGGACCAACGTCAATACGGTGACGTGTTTAAAGGAGATCTTAATCCAAAACCCCAAGGCCAAAGACTCATTGAGGTGTCAGTGGAAGAAAATCACCCGTTTACTTTACGCGCACCGATTCAGCGGATTTATGGAGTCCGGTACACCGAGACTTGGAGCTTTTTGCCGTCATTAACCTGTACGGGAGACGCAGCGCCCGCCATCCAGCATATATGTTTAAAACATACAACATGCTTTCAAGACGTGGTGGTGGATGTGGATTGCGCGGAAAATACTAAAGAGGATCAGTTGGCCGAAATCAGTTACCGTTTTCAAGGTAAGAAGGAAGCGGACCAACCGTGGATTGTTGTAAACACGAGCACACTGTTTGATGAACTCGAATTAGACCCCCCCGAGATTGAACCGGGTGTCTTGAAAGTACTTCGGACAGAAAAACAATACTTGGGTGTGTACATTTGGAACATGCGCGGCTCCGATGGTACGTCTACCTACGCCACGTTTTTGGTCACCTGGAAAGGGGATGAAAAAACAAGAAACCCTACGCCCGCAGTAACTCCTCAACCAAGAGGGGCTGAGTTTCATATGTGGAATTACCACTCGCATGTATTTTCAGTTGGTGATACGTTTAGCTTGGCAATGCATCTTCAGTATAAGATACATGAAGCGCCATTTGATTTGCTGTTAGAGTGGTTGTATGTCCCCATCGATCCTACATGTCAACCAATGCGGTTATATTCTACGTGTTTGTATCATCCCAACGCACCCCAATGCCTCTCTCATATGAATTCCGGTTGTACATTTACCTCGCCACATTTAGCCCAGCGTGTTGCAAGCACAGTGTATCAAAATTGTGAACATGCAGATAACTACACCGCATATTGTCTGGGAATATCTCATATGGAGCCTAGCTTTGGTCTAATCTTACACGACGGGGGCACCACGTTAAAGTTTGTAGATACACCCGAGAGTTTGTCGGGATTATACGTTTTTGTGGTGTATTTTAACGGGCATGTTGAAGCCGTAGCATACACTGTTGTATCCACAGTAGATCATTTTGTAAACGCAATTGAAGAGCGTGGATTTCCGCCAACGGCCGGTCAGCCACCGGCGACTACTAAACCCAAGGAAATTACCCCCGTAAACCCCGGAACGTCACCACTTCTACGATATGCCGCATGGACCGGAGGGCTTGCAGCAGTAGTACTTTTATGTCTCGTAATATTTTTAATCTGTACGGCTAAACGAATGAGGGTTAAAGCCTATAGGGTAGACAAGTGATGATAATAGGCTGGAGCCTCGGTGGCCATGCTTCTTGCCCCTTGGGCCTCCCCCCAGCCCCTCCTCCCCTTCCTGCACCCGTACCCCCGTGGTCTTTGAATAAAGTCTGAGTGGGCGGC (서열번호: 5)
VZV-GE-delete-574 (mRNA)
UCAAGCUUUUGGACCCUCGUACAGAAGCUAAUACGACUCACUAUAGGGAAAUAAGAGAGAAAAGAAGAGUAAGAAGAAAUAUAAGAGCCACCAUGGGGACAGUUAAUAAACCUGUGGUGGGGGUAUUGAUGGGGUUCGGAAUUAUCACGGGAACGUUGCGUAUAACGAAUCCGGUCAGAGCAUCCGUCUUGCGAUACGAUGAUUUUCACAUCGAUGAAGACAAACUGGAUACAAACUCCGUAUAUGAGCCUUACUACCAUUCAGAUCAUGCGGAGUCUUCAUGGGUAAAUCGGGGAGAGUCUUCGCGAAAAGCGUACGAUCAUAACUCACCUUAUAUAUGGCCACGUAAUGAUUAUGAUGGAUUUUUAGAGAACGCACACGAACACCAUGGGGUGUAUAAUCAGGGCCGUGGUAUCGAUAGCGGGGAACGGUUAAUGCAACCCACACAAAUGUCUGCACAGGAGGAUCUUGGGGACGAUACGGGCAUCCACGUUAUCCCUACGUUAAACGGCGAUGACAGACAUAAAAUUGUAAAUGUGGACCAACGUCAAUACGGUGACGUGUUUAAAGGAGAUCUUAAUCCAAAACCCCAAGGCCAAAGACUCAUUGAGGUGUCAGUGGAAGAAAAUCACCCGUUUACUUUACGCGCACCGAUUCAGCGGAUUUAUGGAGUCCGGUACACCGAGACUUGGAGCUUUUUGCCGUCAUUAACCUGUACGGGAGACGCAGCGCCCGCCAUCCAGCAUAUAUGUUUAAAACAUACAACAUGCUUUCAAGACGUGGUGGUGGAUGUGGAUUGCGCGGAAAAUACUAAAGAGGAUCAGUUGGCCGAAAUCAGUUACCGUUUUCAAGGUAAGAAGGAAGCGGACCAACCGUGGAUUGUUGUAAACACGAGCACACUGUUUGAUGAACUCGAAUUAGACCCCCCCGAGAUUGAACCGGGUGUCUUGAAAGUACUUCGGACAGAAAAACAAUACUUGGGUGUGUACAUUUGGAACAUGCGCGGCUCCGAUGGUACGUCUACCUACGCCACGUUUUUGGUCACCUGGAAAGGGGAUGAAAAAACAAGAAACCCUACGCCCGCAGUAACUCCUCAACCAAGAGGGGCUGAGUUUCAUAUGUGGAAUUACCACUCGCAUGUAUUUUCAGUUGGUGAUACGUUUAGCUUGGCAAUGCAUCUUCAGUAUAAGAUACAUGAAGCGCCAUUUGAUUUGCUGUUAGAGUGGUUGUAUGUCCCCAUCGAUCCUACAUGUCAACCAAUGCGGUUAUAUUCUACGUGUUUGUAUCAUCCCAACGCACCCCAAUGCCUCUCUCAUAUGAAUUCCGGUUGUACAUUUACCUCGCCACAUUUAGCCCAGCGUGUUGCAAGCACAGUGUAUCAAAAUUGUGAACAUGCAGAUAACUACACCGCAUAUUGUCUGGGAAUAUCUCAUAUGGAGCCUAGCUUUGGUCUAAUCUUACACGACGGGGGCACCACGUUAAAGUUUGUAGAUACACCCGAGAGUUUGUCGGGAUUAUACGUUUUUGUGGUGUAUUUUAACGGGCAUGUUGAAGCCGUAGCAUACACUGUUGUAUCCACAGUAGAUCAUUUUGUAAACGCAAUUGAAGAGCGUGGAUUUCCGCCAACGGCCGGUCAGCCACCGGCGACUACUAAACCCAAGGAAAUUACCCCCGUAAACCCCGGAACGUCACCACUUCUACGAUAUGCCGCAUGGACCGGAGGGCUUGCAGCAGUAGUACUUUUAUGUCUCGUAAUAUUUUUAAUCUGUACGGCUAAACGAAUGAGGGUUAAAGCCUAUAGGGUAGACAAGUGAUGAUAAUAGGCUGGAGCCUCGGUGGCCAUGCUUCUUGCCCCUUGGGCCUCCCCCCAGCCCCUCCUCCCCUUCCUGCACCCGUACCCCCGUGGUCUUUGAAUAAAGUCUGAGUGGGCGGC (서열번호: 127)
VZV-GE-delete-574-Y569A
TCAAGCTTTTGGACCCTCGTACAGAAGCTAATACGACTCACTATAGGGAAATAAGAGAGAAAAGAAGAGTAAGAAGAAATATAAGAGCCACCATGGGGACAGTTAATAAACCTGTGGTGGGGGTATTGATGGGGTTCGGAATTATCACGGGAACGTTGCGTATAACGAATCCGGTCAGAGCATCCGTCTTGCGATACGATGATTTTCACATCGATGAAGACAAACTGGATACAAACTCCGTATATGAGCCTTACTACCATTCAGATCATGCGGAGTCTTCATGGGTAAATCGGGGAGAGTCTTCGCGAAAAGCGTACGATCATAACTCACCTTATATATGGCCACGTAATGATTATGATGGATTTTTAGAGAACGCACACGAACACCATGGGGTGTATAATCAGGGCCGTGGTATCGATAGCGGGGAACGGTTAATGCAACCCACACAAATGTCTGCACAGGAGGATCTTGGGGACGATACGGGCATCCACGTTATCCCTACGTTAAACGGCGATGACAGACATAAAATTGTAAATGTGGACCAACGTCAATACGGTGACGTGTTTAAAGGAGATCTTAATCCAAAACCCCAAGGCCAAAGACTCATTGAGGTGTCAGTGGAAGAAAATCACCCGTTTACTTTACGCGCACCGATTCAGCGGATTTATGGAGTCCGGTACACCGAGACTTGGAGCTTTTTGCCGTCATTAACCTGTACGGGAGACGCAGCGCCCGCCATCCAGCATATATGTTTAAAACATACAACATGCTTTCAAGACGTGGTGGTGGATGTGGATTGCGCGGAAAATACTAAAGAGGATCAGTTGGCCGAAATCAGTTACCGTTTTCAAGGTAAGAAGGAAGCGGACCAACCGTGGATTGTTGTAAACACGAGCACACTGTTTGATGAACTCGAATTAGACCCCCCCGAGATTGAACCGGGTGTCTTGAAAGTACTTCGGACAGAAAAACAATACTTGGGTGTGTACATTTGGAACATGCGCGGCTCCGATGGTACGTCTACCTACGCCACGTTTTTGGTCACCTGGAAAGGGGATGAAAAAACAAGAAACCCTACGCCCGCAGTAACTCCTCAACCAAGAGGGGCTGAGTTTCATATGTGGAATTACCACTCGCATGTATTTTCAGTTGGTGATACGTTTAGCTTGGCAATGCATCTTCAGTATAAGATACATGAAGCGCCATTTGATTTGCTGTTAGAGTGGTTGTATGTCCCCATCGATCCTACATGTCAACCAATGCGGTTATATTCTACGTGTTTGTATCATCCCAACGCACCCCAATGCCTCTCTCATATGAATTCCGGTTGTACATTTACCTCGCCACATTTAGCCCAGCGTGTTGCAAGCACAGTGTATCAAAATTGTGAACATGCAGATAACTACACCGCATATTGTCTGGGAATATCTCATATGGAGCCTAGCTTTGGTCTAATCTTACACGACGGGGGCACCACGTTAAAGTTTGTAGATACACCCGAGAGTTTGTCGGGATTATACGTTTTTGTGGTGTATTTTAACGGGCATGTTGAAGCCGTAGCATACACTGTTGTATCCACAGTAGATCATTTTGTAAACGCAATTGAAGAGCGTGGATTTCCGCCAACGGCCGGTCAGCCACCGGCGACTACTAAACCCAAGGAAATTACCCCCGTAAACCCCGGAACGTCACCACTTCTACGATATGCCGCATGGACCGGAGGGCTTGCAGCAGTAGTACTTTTATGTCTCGTAATATTTTTAATCTGTACGGCTAAACGAATGAGGGTTAAAGCCGCCAGGGTAGACAAGTGATGATAATAGGCTGGAGCCTCGGTGGCCATGCTTCTTGCCCCTTGGGCCTCCCCCCAGCCCCTCCTCCCCTTCCTGCACCCGTACCCCCGTGGTCTTTGAATAAAGTCTGAGTGGGCGGC (서열번호: 6)
VZV-GE-delete-574-Y569A (mRNA)
UCAAGCUUUUGGACCCUCGUACAGAAGCUAAUACGACUCACUAUAGGGAAAUAAGAGAGAAAAGAAGAGUAAGAAGAAAUAUAAGAGCCACCAUGGGGACAGUUAAUAAACCUGUGGUGGGGGUAUUGAUGGGGUUCGGAAUUAUCACGGGAACGUUGCGUAUAACGAAUCCGGUCAGAGCAUCCGUCUUGCGAUACGAUGAUUUUCACAUCGAUGAAGACAAACUGGAUACAAACUCCGUAUAUGAGCCUUACUACCAUUCAGAUCAUGCGGAGUCUUCAUGGGUAAAUCGGGGAGAGUCUUCGCGAAAAGCGUACGAUCAUAACUCACCUUAUAUAUGGCCACGUAAUGAUUAUGAUGGAUUUUUAGAGAACGCACACGAACACCAUGGGGUGUAUAAUCAGGGCCGUGGUAUCGAUAGCGGGGAACGGUUAAUGCAACCCACACAAAUGUCUGCACAGGAGGAUCUUGGGGACGAUACGGGCAUCCACGUUAUCCCUACGUUAAACGGCGAUGACAGACAUAAAAUUGUAAAUGUGGACCAACGUCAAUACGGUGACGUGUUUAAAGGAGAUCUUAAUCCAAAACCCCAAGGCCAAAGACUCAUUGAGGUGUCAGUGGAAGAAAAUCACCCGUUUACUUUACGCGCACCGAUUCAGCGGAUUUAUGGAGUCCGGUACACCGAGACUUGGAGCUUUUUGCCGUCAUUAACCUGUACGGGAGACGCAGCGCCCGCCAUCCAGCAUAUAUGUUUAAAACAUACAACAUGCUUUCAAGACGUGGUGGUGGAUGUGGAUUGCGCGGAAAAUACUAAAGAGGAUCAGUUGGCCGAAAUCAGUUACCGUUUUCAAGGUAAGAAGGAAGCGGACCAACCGUGGAUUGUUGUAAACACGAGCACACUGUUUGAUGAACUCGAAUUAGACCCCCCCGAGAUUGAACCGGGUGUCUUGAAAGUACUUCGGACAGAAAAACAAUACUUGGGUGUGUACAUUUGGAACAUGCGCGGCUCCGAUGGUACGUCUACCUACGCCACGUUUUUGGUCACCUGGAAAGGGGAUGAAAAAACAAGAAACCCUACGCCCGCAGUAACUCCUCAACCAAGAGGGGCUGAGUUUCAUAUGUGGAAUUACCACUCGCAUGUAUUUUCAGUUGGUGAUACGUUUAGCUUGGCAAUGCAUCUUCAGUAUAAGAUACAUGAAGCGCCAUUUGAUUUGCUGUUAGAGUGGUUGUAUGUCCCCAUCGAUCCUACAUGUCAACCAAUGCGGUUAUAUUCUACGUGUUUGUAUCAUCCCAACGCACCCCAAUGCCUCUCUCAUAUGAAUUCCGGUUGUACAUUUACCUCGCCACAUUUAGCCCAGCGUGUUGCAAGCACAGUGUAUCAAAAUUGUGAACAUGCAGAUAACUACACCGCAUAUUGUCUGGGAAUAUCUCAUAUGGAGCCUAGCUUUGGUCUAAUCUUACACGACGGGGGCACCACGUUAAAGUUUGUAGAUACACCCGAGAGUUUGUCGGGAUUAUACGUUUUUGUGGUGUAUUUUAACGGGCAUGUUGAAGCCGUAGCAUACACUGUUGUAUCCACAGUAGAUCAUUUUGUAAACGCAAUUGAAGAGCGUGGAUUUCCGCCAACGGCCGGUCAGCCACCGGCGACUACUAAACCCAAGGAAAUUACCCCCGUAAACCCCGGAACGUCACCACUUCUACGAUAUGCCGCAUGGACCGGAGGGCUUGCAGCAGUAGUACUUUUAUGUCUCGUAAUAUUUUUAAUCUGUACGGCUAAACGAAUGAGGGUUAAAGCCGCCAGGGUAGACAAGUGAUGAUAAUAGGCUGGAGCCUCGGUGGCCAUGCUUCUUGCCCCUUGGGCCUCCCCCCAGCCCCUCCUCCCCUUCCUGCACCCGUACCCCCGUGGUCUUUGAAUAAAGUCUGAGUGGGCGGC (서열번호: 128)
VZV-gE-전장-AEAADA (서열번호: 58)
TCAAGCTTTTGGACCCTCGTACAGAAGCTAATACGACTCACTATAGGGAAATAAGAGAGAAAAGAAGAGTAAGAAGAAATATAAGAGCCACCATGGGGACAGTTAATAAACCTGTGGTGGGGGTATTGATGGGGTTCGGAATTATCACGGGAACGTTGCGTATAACGAATCCGGTCAGAGCATCCGTCTTGCGATACGATGATTTTCACATCGATGAAGACAAACTGGATACAAACTCCGTATATGAGCCTTACTACCATTCAGATCATGCGGAGTCTTCATGGGTAAATCGGGGAGAGTCTTCGCGAAAAGCGTACGATCATAACTCACCTTATATATGGCCACGTAATGATTATGATGGATTTTTAGAGAACGCACACGAACACCATGGGGTGTATAATCAGGGCCGTGGTATCGATAGCGGGGAACGGTTAATGCAACCCACACAAATGTCTGCACAGGAGGATCTTGGGGACGATACGGGCATCCACGTTATCCCTACGTTAAACGGCGATGACAGACATAAAATTGTAAATGTGGACCAACGTCAATACGGTGACGTGTTTAAAGGAGATCTTAATCCAAAACCCCAAGGCCAAAGACTCATTGAGGTGTCAGTGGAAGAAAATCACCCGTTTACTTTACGCGCACCGATTCAGCGGATTTATGGAGTCCGGTACACCGAGACTTGGAGCTTTTTGCCGTCATTAACCTGTACGGGAGACGCAGCGCCCGCCATCCAGCATATATGTTTAAAACATACAACATGCTTTCAAGACGTGGTGGTGGATGTGGATTGCGCGGAAAATACTAAAGAGGATCAGTTGGCCGAAATCAGTTACCGTTTTCAAGGTAAGAAGGAAGCGGACCAACCGTGGATTGTTGTAAACACGAGCACACTGTTTGATGAACTCGAATTAGACCCCCCCGAGATTGAACCGGGTGTCTTGAAAGTACTTCGGACAGAAAAACAATACTTGGGTGTGTACATTTGGAACATGCGCGGCTCCGATGGTACGTCTACCTACGCCACGTTTTTGGTCACCTGGAAAGGGGATGAAAAAACAAGAAACCCTACGCCCGCAGTAACTCCTCAACCAAGAGGGGCTGAGTTTCATATGTGGAATTACCACTCGCATGTATTTTCAGTTGGTGATACGTTTAGCTTGGCAATGCATCTTCAGTATAAGATACATGAAGCGCCATTTGATTTGCTGTTAGAGTGGTTGTATGTCCCCATCGATCCTACATGTCAACCAATGCGGTTATATTCTACGTGTTTGTATCATCCCAACGCACCCCAATGCCTCTCTCATATGAATTCCGGTTGTACATTTACCTCGCCACATTTAGCCCAGCGTGTTGCAAGCACAGTGTATCAAAATTGTGAACATGCAGATAACTACACCGCATATTGTCTGGGAATATCTCATATGGAGCCTAGCTTTGGTCTAATCTTACACGACGGGGGCACCACGTTAAAGTTTGTAGATACACCCGAGAGTTTGTCGGGATTATACGTTTTTGTGGTGTATTTTAACGGGCATGTTGAAGCCGTAGCATACACTGTTGTATCCACAGTAGATCATTTTGTAAACGCAATTGAAGAGCGTGGATTTCCGCCAACGGCCGGTCAGCCACCGGCGACTACTAAACCCAAGGAAATTACCCCCGTAAACCCCGGAACGTCACCACTTCTACGATATGCCGCATGGACCGGAGGGCTTGCAGCAGTAGTACTTTTATGTCTCGTAATATTTTTAATCTGTACGGCTAAACGAATGAGGGTTAAAGCCTATAGGGTAGACAAGTCCCCGTATAACCAAAGCATGTATTACGCTGGCCTTCCAGTGGACGATTTCGAGGACGCCGAAGCCGCCGATGCCGAAGAAGAGTTTGGTAACGCGATTGGAGGGAGTCACGGGGGTTCGAGTTACACGGTGTATATAGATAAGACCCGGTGATGATAATAGGCTGGAGCCTCGGTGGCCATGCTTCTTGCCCCTTGGGCCTCCCCCCAGCCCCTCCTCCCCTTCCTGCACCCGTACCCCCGTGGTCTTTGAATAAAGTCTGAGTGGGCGGC (서열번호: 7)
VZV-gE-전장-AEAADA (서열번호: 58) (mRNA)
UCAAGCUUUUGGACCCUCGUACAGAAGCUAAUACGACUCACUAUAGGGAAAUAAGAGAGAAAAGAAGAGUAAGAAGAAAUAUAAGAGCCACCAUGGGGACAGUUAAUAAACCUGUGGUGGGGGUAUUGAUGGGGUUCGGAAUUAUCACGGGAACGUUGCGUAUAACGAAUCCGGUCAGAGCAUCCGUCUUGCGAUACGAUGAUUUUCACAUCGAUGAAGACAAACUGGAUACAAACUCCGUAUAUGAGCCUUACUACCAUUCAGAUCAUGCGGAGUCUUCAUGGGUAAAUCGGGGAGAGUCUUCGCGAAAAGCGUACGAUCAUAACUCACCUUAUAUAUGGCCACGUAAUGAUUAUGAUGGAUUUUUAGAGAACGCACACGAACACCAUGGGGUGUAUAAUCAGGGCCGUGGUAUCGAUAGCGGGGAACGGUUAAUGCAACCCACACAAAUGUCUGCACAGGAGGAUCUUGGGGACGAUACGGGCAUCCACGUUAUCCCUACGUUAAACGGCGAUGACAGACAUAAAAUUGUAAAUGUGGACCAACGUCAAUACGGUGACGUGUUUAAAGGAGAUCUUAAUCCAAAACCCCAAGGCCAAAGACUCAUUGAGGUGUCAGUGGAAGAAAAUCACCCGUUUACUUUACGCGCACCGAUUCAGCGGAUUUAUGGAGUCCGGUACACCGAGACUUGGAGCUUUUUGCCGUCAUUAACCUGUACGGGAGACGCAGCGCCCGCCAUCCAGCAUAUAUGUUUAAAACAUACAACAUGCUUUCAAGACGUGGUGGUGGAUGUGGAUUGCGCGGAAAAUACUAAAGAGGAUCAGUUGGCCGAAAUCAGUUACCGUUUUCAAGGUAAGAAGGAAGCGGACCAACCGUGGAUUGUUGUAAACACGAGCACACUGUUUGAUGAACUCGAAUUAGACCCCCCCGAGAUUGAACCGGGUGUCUUGAAAGUACUUCGGACAGAAAAACAAUACUUGGGUGUGUACAUUUGGAACAUGCGCGGCUCCGAUGGUACGUCUACCUACGCCACGUUUUUGGUCACCUGGAAAGGGGAUGAAAAAACAAGAAACCCUACGCCCGCAGUAACUCCUCAACCAAGAGGGGCUGAGUUUCAUAUGUGGAAUUACCACUCGCAUGUAUUUUCAGUUGGUGAUACGUUUAGCUUGGCAAUGCAUCUUCAGUAUAAGAUACAUGAAGCGCCAUUUGAUUUGCUGUUAGAGUGGUUGUAUGUCCCCAUCGAUCCUACAUGUCAACCAAUGCGGUUAUAUUCUACGUGUUUGUAUCAUCCCAACGCACCCCAAUGCCUCUCUCAUAUGAAUUCCGGUUGUACAUUUACCUCGCCACAUUUAGCCCAGCGUGUUGCAAGCACAGUGUAUCAAAAUUGUGAACAUGCAGAUAACUACACCGCAUAUUGUCUGGGAAUAUCUCAUAUGGAGCCUAGCUUUGGUCUAAUCUUACACGACGGGGGCACCACGUUAAAGUUUGUAGAUACACCCGAGAGUUUGUCGGGAUUAUACGUUUUUGUGGUGUAUUUUAACGGGCAUGUUGAAGCCGUAGCAUACACUGUUGUAUCCACAGUAGAUCAUUUUGUAAACGCAAUUGAAGAGCGUGGAUUUCCGCCAACGGCCGGUCAGCCACCGGCGACUACUAAACCCAAGGAAAUUACCCCCGUAAACCCCGGAACGUCACCACUUCUACGAUAUGCCGCAUGGACCGGAGGGCUUGCAGCAGUAGUACUUUUAUGUCUCGUAAUAUUUUUAAUCUGUACGGCUAAACGAAUGAGGGUUAAAGCCUAUAGGGUAGACAAGUCCCCGUAUAACCAAAGCAUGUAUUACGCUGGCCUUCCAGUGGACGAUUUCGAGGACGCCGAAGCCGCCGAUGCCGAAGAAGAGUUUGGUAACGCGAUUGGAGGGAGUCACGGGGGUUCGAGUUACACGGUGUAUAUAGAUAAGACCCGGUGAUGAUAAUAGGCUGGAGCCUCGGUGGCCAUGCUUCUUGCCCCUUGGGCCUCCCCCCAGCCCCUCCUCCCCUUCCUGCACCCGUACCCCCGUGGUCUUUGAAUAAAGUCUGAGUGGGCGGC (서열번호: 129)
VZV-GE-전체-AEAADA (서열번호: 58)-Y582G
TCAAGCTTTTGGACCCTCGTACAGAAGCTAATACGACTCACTATAGGGAAATAAGAGAGAAAAGAAGAGTAAGAAGAAATATAAGAGCCACCATGGGGACAGTTAATAAACCTGTGGTGGGGGTATTGATGGGGTTCGGAATTATCACGGGAACGTTGCGTATAACGAATCCGGTCAGAGCATCCGTCTTGCGATACGATGATTTTCACATCGATGAAGACAAACTGGATACAAACTCCGTATATGAGCCTTACTACCATTCAGATCATGCGGAGTCTTCATGGGTAAATCGGGGAGAGTCTTCGCGAAAAGCGTACGATCATAACTCACCTTATATATGGCCACGTAATGATTATGATGGATTTTTAGAGAACGCACACGAACACCATGGGGTGTATAATCAGGGCCGTGGTATCGATAGCGGGGAACGGTTAATGCAACCCACACAAATGTCTGCACAGGAGGATCTTGGGGACGATACGGGCATCCACGTTATCCCTACGTTAAACGGCGATGACAGACATAAAATTGTAAATGTGGACCAACGTCAATACGGTGACGTGTTTAAAGGAGATCTTAATCCAAAACCCCAAGGCCAAAGACTCATTGAGGTGTCAGTGGAAGAAAATCACCCGTTTACTTTACGCGCACCGATTCAGCGGATTTATGGAGTCCGGTACACCGAGACTTGGAGCTTTTTGCCGTCATTAACCTGTACGGGAGACGCAGCGCCCGCCATCCAGCATATATGTTTAAAACATACAACATGCTTTCAAGACGTGGTGGTGGATGTGGATTGCGCGGAAAATACTAAAGAGGATCAGTTGGCCGAAATCAGTTACCGTTTTCAAGGTAAGAAGGAAGCGGACCAACCGTGGATTGTTGTAAACACGAGCACACTGTTTGATGAACTCGAATTAGACCCCCCCGAGATTGAACCGGGTGTCTTGAAAGTACTTCGGACAGAAAAACAATACTTGGGTGTGTACATTTGGAACATGCGCGGCTCCGATGGTACGTCTACCTACGCCACGTTTTTGGTCACCTGGAAAGGGGATGAAAAAACAAGAAACCCTACGCCCGCAGTAACTCCTCAACCAAGAGGGGCTGAGTTTCATATGTGGAATTACCACTCGCATGTATTTTCAGTTGGTGATACGTTTAGCTTGGCAATGCATCTTCAGTATAAGATACATGAAGCGCCATTTGATTTGCTGTTAGAGTGGTTGTATGTCCCCATCGATCCTACATGTCAACCAATGCGGTTATATTCTACGTGTTTGTATCATCCCAACGCACCCCAATGCCTCTCTCATATGAATTCCGGTTGTACATTTACCTCGCCACATTTAGCCCAGCGTGTTGCAAGCACAGTGTATCAAAATTGTGAACATGCAGATAACTACACCGCATATTGTCTGGGAATATCTCATATGGAGCCTAGCTTTGGTCTAATCTTACACGACGGGGGCACCACGTTAAAGTTTGTAGATACACCCGAGAGTTTGTCGGGATTATACGTTTTTGTGGTGTATTTTAACGGGCATGTTGAAGCCGTAGCATACACTGTTGTATCCACAGTAGATCATTTTGTAAACGCAATTGAAGAGCGTGGATTTCCGCCAACGGCCGGTCAGCCACCGGCGACTACTAAACCCAAGGAAATTACCCCCGTAAACCCCGGAACGTCACCACTTCTACGATATGCCGCATGGACCGGAGGGCTTGCAGCAGTAGTACTTTTATGTCTCGTAATATTTTTAATCTGTACGGCTAAACGAATGAGGGTTAAAGCCTATAGGGTAGACAAGTCCCCGTATAACCAAAGCATGTATGGCGCTGGCCTTCCAGTGGACGATTTCGAGGACGCCGAAGCCGCCGATGCCGAAGAAGAGTTTGGTAACGCGATTGGAGGGAGTCACGGGGGTTCGAGTTACACGGTGTATATAGATAAGACCCGGTGATGATAATAGGCTGGAGCCTCGGTGGCCATGCTTCTTGCCCCTTGGGCCTCCCCCCAGCCCCTCCTCCCCTTCCTGCACCCGTACCCCCGTGGTCTTTGAATAAAGTCTGAGTGGGCGGC (서열번호: 8)
VZV-GE-전체-AEAADA (서열번호: 58)-Y582G (mRNA)
UCAAGCUUUUGGACCCUCGUACAGAAGCUAAUACGACUCACUAUAGGGAAAUAAGAGAGAAAAGAAGAGUAAGAAGAAAUAUAAGAGCCACCAUGGGGACAGUUAAUAAACCUGUGGUGGGGGUAUUGAUGGGGUUCGGAAUUAUCACGGGAACGUUGCGUAUAACGAAUCCGGUCAGAGCAUCCGUCUUGCGAUACGAUGAUUUUCACAUCGAUGAAGACAAACUGGAUACAAACUCCGUAUAUGAGCCUUACUACCAUUCAGAUCAUGCGGAGUCUUCAUGGGUAAAUCGGGGAGAGUCUUCGCGAAAAGCGUACGAUCAUAACUCACCUUAUAUAUGGCCACGUAAUGAUUAUGAUGGAUUUUUAGAGAACGCACACGAACACCAUGGGGUGUAUAAUCAGGGCCGUGGUAUCGAUAGCGGGGAACGGUUAAUGCAACCCACACAAAUGUCUGCACAGGAGGAUCUUGGGGACGAUACGGGCAUCCACGUUAUCCCUACGUUAAACGGCGAUGACAGACAUAAAAUUGUAAAUGUGGACCAACGUCAAUACGGUGACGUGUUUAAAGGAGAUCUUAAUCCAAAACCCCAAGGCCAAAGACUCAUUGAGGUGUCAGUGGAAGAAAAUCACCCGUUUACUUUACGCGCACCGAUUCAGCGGAUUUAUGGAGUCCGGUACACCGAGACUUGGAGCUUUUUGCCGUCAUUAACCUGUACGGGAGACGCAGCGCCCGCCAUCCAGCAUAUAUGUUUAAAACAUACAACAUGCUUUCAAGACGUGGUGGUGGAUGUGGAUUGCGCGGAAAAUACUAAAGAGGAUCAGUUGGCCGAAAUCAGUUACCGUUUUCAAGGUAAGAAGGAAGCGGACCAACCGUGGAUUGUUGUAAACACGAGCACACUGUUUGAUGAACUCGAAUUAGACCCCCCCGAGAUUGAACCGGGUGUCUUGAAAGUACUUCGGACAGAAAAACAAUACUUGGGUGUGUACAUUUGGAACAUGCGCGGCUCCGAUGGUACGUCUACCUACGCCACGUUUUUGGUCACCUGGAAAGGGGAUGAAAAAACAAGAAACCCUACGCCCGCAGUAACUCCUCAACCAAGAGGGGCUGAGUUUCAUAUGUGGAAUUACCACUCGCAUGUAUUUUCAGUUGGUGAUACGUUUAGCUUGGCAAUGCAUCUUCAGUAUAAGAUACAUGAAGCGCCAUUUGAUUUGCUGUUAGAGUGGUUGUAUGUCCCCAUCGAUCCUACAUGUCAACCAAUGCGGUUAUAUUCUACGUGUUUGUAUCAUCCCAACGCACCCCAAUGCCUCUCUCAUAUGAAUUCCGGUUGUACAUUUACCUCGCCACAUUUAGCCCAGCGUGUUGCAAGCACAGUGUAUCAAAAUUGUGAACAUGCAGAUAACUACACCGCAUAUUGUCUGGGAAUAUCUCAUAUGGAGCCUAGCUUUGGUCUAAUCUUACACGACGGGGGCACCACGUUAAAGUUUGUAGAUACACCCGAGAGUUUGUCGGGAUUAUACGUUUUUGUGGUGUAUUUUAACGGGCAUGUUGAAGCCGUAGCAUACACUGUUGUAUCCACAGUAGAUCAUUUUGUAAACGCAAUUGAAGAGCGUGGAUUUCCGCCAACGGCCGGUCAGCCACCGGCGACUACUAAACCCAAGGAAAUUACCCCCGUAAACCCCGGAACGUCACCACUUCUACGAUAUGCCGCAUGGACCGGAGGGCUUGCAGCAGUAGUACUUUUAUGUCUCGUAAUAUUUUUAAUCUGUACGGCUAAACGAAUGAGGGUUAAAGCCUAUAGGGUAGACAAGUCCCCGUAUAACCAAAGCAUGUAUGGCGCUGGCCUUCCAGUGGACGAUUUCGAGGACGCCGAAGCCGCCGAUGCCGAAGAAGAGUUUGGUAACGCGAUUGGAGGGAGUCACGGGGGUUCGAGUUACACGGUGUAUAUAGAUAAGACCCGGUGAUGAUAAUAGGCUGGAGCCUCGGUGGCCAUGCUUCUUGCCCCUUGGGCCUCCCCCCAGCCCCUCCUCCCCUUCCUGCACCCGUACCCCCGUGGUCUUUGAAUAAAGUCUGAGUGGGCGGC (서열번호: 130)
VZV_gE_Oka_hIg카파
TCAAGCTTTTGGACCCTCGTACAGAAGCTAATACGACTCACTATAGGGAAATAAGAGAGAAAAGAAGAGTAAGAAGAAATATAAGAGCCACCATGGAGACTCCCGCTCAGCTACTGTTCCTCCTGCTCCTTTGGCTGCCTGATACTACAGGCTCTGTTTTGCGGTACGACGACTTTCACATCGATGAGGACAAGCTCGACACTAATAGCGTGTATGAGCCCTACTACCATTCAGATCACGCCGAGTCCTCTTGGGTGAACAGGGGTGAAAGTTCTAGGAAAGCCTATGATCACAACAGCCCTTATATTTGGCCACGGAATGATTACGACGGATTTCTCGAAAATGCCCACGAGCATCACGGAGTGTACAACCAGGGCCGTGGAATCGACTCTGGGGAGAGATTGATGCAACCTACACAGATGAGCGCCCAGGAAGATCTCGGGGATGATACAGGAATTCACGTTATCCCTACATTAAACGGAGATGACCGCCACAAAATCGTCAATGTCGATCAAAGACAGTATGGAGATGTGTTCAAAGGCGATCTCAACCCTAAGCCGCAGGGCCAGAGACTCATTGAGGTGTCTGTCGAAGAGAACCACCCTTTCACTCTGCGCGCTCCCATTCAGAGAATCTATGGAGTTCGCTATACGGAGACTTGGTCATTCCTTCCTTCCCTGACATGCACCGGAGACGCCGCCCCTGCCATTCAGCACATATGCCTGAAACATACCACCTGTTTCCAGGATGTGGTGGTTGATGTTGATTGTGCTGAAAATACCAAGGAAGACCAACTGGCCGAGATTAGTTACCGGTTCCAAGGGAAAAAGGAAGCCGACCAGCCATGGATTGTGGTTAATACAAGCACTCTGTTCGATGAGCTCGAGCTGGATCCCCCCGAGATAGAACCCGGAGTTCTGAAAGTGCTCCGGACAGAAAAACAATATCTGGGAGTCTACATATGGAACATGCGCGGTTCCGATGGGACCTCCACTTATGCAACCTTTCTCGTCACGTGGAAGGGAGATGAGAAAACTAGGAATCCCACACCCGCTGTCACACCACAGCCAAGAGGGGCTGAGTTCCATATGTGGAACTATCATAGTCACGTGTTTAGTGTCGGAGATACGTTTTCATTGGCTATGCATCTCCAGTACAAGATTCATGAGGCTCCCTTCGATCTGTTGCTTGAGTGGTTGTACGTCCCGATTGACCCGACCTGCCAGCCCATGCGACTGTACAGCACCTGTCTCTACCATCCAAACGCTCCGCAATGTCTGAGCCACATGAACTCTGGGTGTACTTTCACCAGTCCCCACCTCGCCCAGCGGGTGGCCTCTACTGTTTACCAGAACTGTGAGCACGCCGACAACTACACCGCATACTGCCTCGGTATTTCTCACATGGAACCCTCCTTCGGACTCATCCTGCACGATGGGGGCACTACCCTGAAGTTCGTTGATACGCCAGAATCTCTGTCTGGGCTCTATGTTTTCGTGGTCTACTTCAATGGCCATGTCGAGGCCGTGGCCTATACTGTCGTTTCTACCGTGGATCATTTTGTGAACGCCATCGAAGAACGGGGATTCCCCCCTACGGCAGGCCAGCCGCCTGCAACCACCAAGCCCAAGGAAATAACACCAGTGAACCCTGGCACCTCACCTCTCCTAAGATATGCCGCGTGGACAGGGGGACTGGCGGCAGTGGTGCTCCTCTGTCTCGTGATCTTTCTGATCTGTACAGCCAAGAGGATGAGGGTCAAGGCTTATAGAGTGGACAAGTCCCCCTACAATCAGTCAATGTACTACGCCGGCCTTCCCGTTGATGATTTTGAGGATTCCGAGTCCACAGATACTGAGGAAGAGTTCGGTAACGCTATAGGCGGCTCTCACGGGGGTTCAAGCTACACGGTTTACATTGACAAGACACGCTGATAATAGGCTGGAGCCTCGGTGGCCATGCTTCTTGCCCCTTGGGCCTCCCCCCAGCCCCTCCTCCCCTTCCTGCACCCGTACCCCCGTGGTCTTTGAATAAAGTCTGAGTGGGCGGC (서열번호: 41)
VZV_gE_Oka_hIg카파 (mRNA)
UCAAGCUUUUGGACCCUCGUACAGAAGCUAAUACGACUCACUAUAGGGAAAUAAGAGAGAAAAGAAGAGUAAGAAGAAAUAUAAGAGCCACCAUGGAGACUCCCGCUCAGCUACUGUUCCUCCUGCUCCUUUGGCUGCCUGAUACUACAGGCUCUGUUUUGCGGUACGACGACUUUCACAUCGAUGAGGACAAGCUCGACACUAAUAGCGUGUAUGAGCCCUACUACCAUUCAGAUCACGCCGAGUCCUCUUGGGUGAACAGGGGUGAAAGUUCUAGGAAAGCCUAUGAUCACAACAGCCCUUAUAUUUGGCCACGGAAUGAUUACGACGGAUUUCUCGAAAAUGCCCACGAGCAUCACGGAGUGUACAACCAGGGCCGUGGAAUCGACUCUGGGGAGAGAUUGAUGCAACCUACACAGAUGAGCGCCCAGGAAGAUCUCGGGGAUGAUACAGGAAUUCACGUUAUCCCUACAUUAAACGGAGAUGACCGCCACAAAAUCGUCAAUGUCGAUCAAAGACAGUAUGGAGAUGUGUUCAAAGGCGAUCUCAACCCUAAGCCGCAGGGCCAGAGACUCAUUGAGGUGUCUGUCGAAGAGAACCACCCUUUCACUCUGCGCGCUCCCAUUCAGAGAAUCUAUGGAGUUCGCUAUACGGAGACUUGGUCAUUCCUUCCUUCCCUGACAUGCACCGGAGACGCCGCCCCUGCCAUUCAGCACAUAUGCCUGAAACAUACCACCUGUUUCCAGGAUGUGGUGGUUGAUGUUGAUUGUGCUGAAAAUACCAAGGAAGACCAACUGGCCGAGAUUAGUUACCGGUUCCAAGGGAAAAAGGAAGCCGACCAGCCAUGGAUUGUGGUUAAUACAAGCACUCUGUUCGAUGAGCUCGAGCUGGAUCCCCCCGAGAUAGAACCCGGAGUUCUGAAAGUGCUCCGGACAGAAAAACAAUAUCUGGGAGUCUACAUAUGGAACAUGCGCGGUUCCGAUGGGACCUCCACUUAUGCAACCUUUCUCGUCACGUGGAAGGGAGAUGAGAAAACUAGGAAUCCCACACCCGCUGUCACACCACAGCCAAGAGGGGCUGAGUUCCAUAUGUGGAACUAUCAUAGUCACGUGUUUAGUGUCGGAGAUACGUUUUCAUUGGCUAUGCAUCUCCAGUACAAGAUUCAUGAGGCUCCCUUCGAUCUGUUGCUUGAGUGGUUGUACGUCCCGAUUGACCCGACCUGCCAGCCCAUGCGACUGUACAGCACCUGUCUCUACCAUCCAAACGCUCCGCAAUGUCUGAGCCACAUGAACUCUGGGUGUACUUUCACCAGUCCCCACCUCGCCCAGCGGGUGGCCUCUACUGUUUACCAGAACUGUGAGCACGCCGACAACUACACCGCAUACUGCCUCGGUAUUUCUCACAUGGAACCCUCCUUCGGACUCAUCCUGCACGAUGGGGGCACUACCCUGAAGUUCGUUGAUACGCCAGAAUCUCUGUCUGGGCUCUAUGUUUUCGUGGUCUACUUCAAUGGCCAUGUCGAGGCCGUGGCCUAUACUGUCGUUUCUACCGUGGAUCAUUUUGUGAACGCCAUCGAAGAACGGGGAUUCCCCCCUACGGCAGGCCAGCCGCCUGCAACCACCAAGCCCAAGGAAAUAACACCAGUGAACCCUGGCACCUCACCUCUCCUAAGAUAUGCCGCGUGGACAGGGGGACUGGCGGCAGUGGUGCUCCUCUGUCUCGUGAUCUUUCUGAUCUGUACAGCCAAGAGGAUGAGGGUCAAGGCUUAUAGAGUGGACAAGUCCCCCUACAAUCAGUCAAUGUACUACGCCGGCCUUCCCGUUGAUGAUUUUGAGGAUUCCGAGUCCACAGAUACUGAGGAAGAGUUCGGUAACGCUAUAGGCGGCUCUCACGGGGGUUCAAGCUACACGGUUUACAUUGACAAGACACGCUGAUAAUAGGCUGGAGCCUCGGUGGCCAUGCUUCUUGCCCCUUGGGCCUCCCCCCAGCCCCUCCUCCCCUUCCUGCACCCGUACCCCCGUGGUCUUUGAAUAAAGUCUGAGUGGGCGGC (서열번호: 131)
Figure pct00007
Figure pct00008
Figure pct00009
Figure pct00010
Figure pct00011
Figure pct00012
Figure pct00013
Figure pct00014
Figure pct00015
Figure pct00016
Figure pct00017
Figure pct00018
Figure pct00019
Figure pct00020
Figure pct00021
Figure pct00022
Figure pct00023
Figure pct00024
Figure pct00025
Figure pct00026
Figure pct00027
Figure pct00028
Figure pct00029
Figure pct00030
Figure pct00031
Figure pct00032
Figure pct00033
Figure pct00034
Figure pct00035
Figure pct00036
Figure pct00037
Figure pct00038
Figure pct00039
Figure pct00040
Figure pct00041
Figure pct00042
Figure pct00043
Figure pct00044
Figure pct00045
Figure pct00046
Figure pct00047
Figure pct00048
Figure pct00049
Figure pct00050
Figure pct00051
Figure pct00052
Figure pct00053
Figure pct00054
Figure pct00055
Figure pct00056
Figure pct00057
Figure pct00058
Figure pct00059
Figure pct00060
Figure pct00061
Figure pct00062
Figure pct00063
Figure pct00064
Figure pct00065
Figure pct00066
Figure pct00067
Figure pct00068
G*는 5' 말단 캡, 예를 들면, 7mG(5')ppp(5')NlmpNp를 나타낸다
실시예 14: Vero 및 Mewo 세포에서 변이체 gE 항원 분포
상이한 C 말단 변이체를 갖는 VZV gE 항원의 발현 및 이동조절은 Vero 세포 및 MeWo 세포에서 조사되었다.
Vero 세포는 세포 배양액에서 사용된 세포의 계통이다. 'Vero' 계통은 아프리카 녹색 원숭이로부터 추출된 신장 상피성 세포로부터 단리되었다. MeWo 세포는 VZV 감염에 민감한 인간 악성 흑색종 세포이다. Vero 세포 또는 Mewo 세포는 표 3에서 아래 표시된 작제물로 형질감염되었다. 형질감염된 세포는 gE용 및 골지 마커 GM 130 및 골긴용 항체로 염색되었다. 공초점 현미경검사는 염색된 세포를 시각화하는데 사용되었다. 작제물에 대한 결과는 표 3 ("세포 국재화" 칼럼)에서 기재된다. 도 9는, 다음과 같은 형질감염된 작제물의 결과를 보여주는, 예시적인 실험을 제공한다: (1) (서열번호: 3에 의해 인코딩된) C-말단에서 62 아미노산 결실을 갖는 VZV gE 폴리펩타이드를 인코딩하는 VZV gE mRNA; (2) (서열번호: 7에 의해 인코딩된) AEAADA 서열 (서열번호: 58)을 갖는 VZV gE 폴리펩타이드를 인코딩하는 전장 VZV gE mRNA; 또는 (3) (음성 대조군으로서) PBS. 항-gE 항체를 이용하여, 도 9는 (62 아미노산 C-말단 결실을 갖는) 절단된 VZV gE 폴리펩타이드가 핵주변 위치 및 소기관에 국재화하는 것을 보여준다. AEAADA 서열 (서열번호: 58)을 갖는 전장 VZV gE 폴리펩타이드는 골지 및 핵주변 위치에 국재화되었다. 중요하게는, 몇 개의 작제물, 예를 들면, gE-truncated-delete_from_574 _Y569A, AEAADA (서열번호: 58)을 가진 gE 전장, AEAADA (서열번호: 58)을 가진 gE 전장 및 Y582C 돌연변이, gE-truncated-delete_from_574, 및 Y569A 돌연변이를 가진 gE-truncated-delete_from_574 각각은 세포 막에 국재화하였던 폴리펩타이드를 인코딩하였고, 이들 폴리펩타이드가 향상된 항원성을 가질 수 있다는 것을 나타낸다.
Figure pct00069
Figure pct00070
실시예 15: MC3 제형화된 mRNA 인코딩된 VZV gE 항원으로 BALB /C 마우스의 면역화
면역화 연구는 근육내 또는 진피내 투여 후 BALB/C 마우스에서 면역화를 달성하기 위한 백신 후보로서 VZV 항원을 인코딩하는 MC3-제형화된 mRNAs의 효과의 초기 평가로서 수행되었다.
후보 백신은 아래와 같았다:
(1) 5' 캡: m7G(5')ppp(5')G-2'-O-메틸, N1-메틸슈도우리딘 화학적 변형, 및 추가의 hIg 카파 서열을 갖는 MC3 제형화된 VZVgE-hIg 카파 mRNA.
(2) 5' 캡: m7G(5')ppp(5')G-2'-O-메틸 및 N1-메틸슈도우리딘 화학적 변형을 갖는 MC3 제형화된 VZV gE mRNA.
(3) 5' 캡: m7G(5')ppp(5')G-2'-O-메틸 및 무 화학적 변형을 갖는 MC3 제형화된 VZVgE mRNA.
VZV gE mRNAs 모두는 균주 Oka이었다.
BALB/C 마우스는 어느 한쪽 근육내로 또는 진피내로 MC3 제형화된 VZV gE mRNA (상기 기재된 어느 한쪽 백신 (1), (2), 또는 (3))의 단일 10 μg 용량 또는 두 10 μg 용량 (일 28에서) 주어졌다. G5는 N1-메틸슈도우리딘 화학적 변형을 갖는 mRNA를 지칭한다. G0는 미변형된 mRNA를 지칭한다. 캡 1은 5' 캡: m7G(5')ppp(5')G-2'-O-메틸을 지칭한다. 각각의 처리 그룹은 8마리 마우스를 함유하였다. 양성 대조군은 VARIVAX® 백신이었고 음성 대조군은 PBS이었다.
혈액 샘플은 혈청 단백질 및 항체의 존재/수준을 결정하기 위해 취득되었다. 웨스턴 블랏은 6 시간에 VZV-gE 단백질 발현을 검출하기 위해 수행되었고 ELISAs는 마우스 IgGs를 검출하기 위해 수행되었다. VZV gE (균주 Oka)를 인코딩하는 작제물의 도식은 도 2에서 보여진다. 연구 설계 및 주사의 스케줄의 도식은 도 3 및 표 3에서 보여진다. 표 4는 상이한 샘플의 다양한 수집 시점을 보여준다. 혈액은 혈청 단백질 및 항체 결정을 위하여 수집되었고, 한편 VZV 단백질 발현은 그룹 1-4, 13, 및 14에 대하여 일 0에서 6 시간 투약후, 및 그룹 2, 4, 및 14에 대하여 일 28에서 6 시간 투약후 조사되었다. 항체 검출 검정은 일 -3, 일 14, 일 27, 일 42, 및 일 56에서 수행되었다.
Figure pct00071
Figure pct00072
실시예 16: 면역원성 연구 - ELISA
즉석 연구는 VZV로부터 당단백질을 인코딩하는 mRNA 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 후보 VZV 백신의 BALB/C 마우스에서 면역원성을 시험하기 위해 설계되었다. 마우스는 세트 간격에서 다양한 VZV mRNA 백신 제형으로 면역화되었고, 혈청은 각각의 면역화후 수집되었다. 면역화 스케줄은 실시예 15의 표 2에서 제공된다. 혈청 수집 스케줄은 실시예 15의 표 4에서 제시된다.
효소-결합 면역흡착 검정 (ELISA)
VZV 당단백질 E에 대한 혈청 항체 역가는 표준 방법을 이용하여 효소-결합 면역흡착 검정 (ELISA)에 의해 결정되었다. 일 연구에서, 항-VZV gE 마우스 IgG의 양은 사전-채혈에서 그리고 하기 어느 한쪽의 두 10μg 용량으로 근육내로 백신접종된 마우스에서 백신접종 후 일 14 및 일 42에서 수집된 혈청에서 측정되었다: (1) 5' 캡: m7G(5')ppp(5')G-2'-O-메틸 및 N1-메틸슈도우리딘 화학적 변형을 갖는 VZV-gE-hIg카파 (표 2 및 3에서 #1); (2) 5' 캡: m7G(5')ppp(5')G-2'-O-메틸, 및 무 화학적 변형을 갖는 VZV-gE (표 2 및 3에서 #6); (3) 5' 캡: m7G(5')ppp(5')G-2'-O-메틸 및 N1-메틸슈도우리딘 화학적 변형을 갖는 VZV-gE (표 2 및 3에서 #10); (4) VARIVAX® 백신 (양성 대조군); 또는 (5) PBS (음성 대조군).
도 5-7은 현행 VARIVAX® 백신에 비해 시험된 전체 mRNA 인코딩된 VZV-gE 백신으로 매우 강력한 면역 반응이 있었다는 것을 보여준다. 도 5는 일 14에서, 항-VZV-gE IgG에 대하여 역가가 5' 캡: m7G(5')ppp(5')G-2'-O-메틸 및 N1-메틸슈도우리딘 화학적 변형을 갖는 백신 후보 (1) VZV-gE-hIg카파로 백신접종된 마우스의 혈청에서 약 10μg/mL 및 백신 후보 (3) VZV-gE 5' 캡: m7G(5')ppp(5')G-2'-O-메틸 및 N1-메틸슈도우리딘 화학적 변형으로 백신접종된 마우스의 혈청에서 약 50 μg/mL이었다는 것을 보여준다. VARIVAX®로 백신접종된 마우스의 혈청에서 항-VZV-gE IgG의 수준은 일 14에서 검출가능하지 않았다. 일 42에서, 5' 캡: m7G(5')ppp(5')G-2'-O-메틸 및 N1-메틸슈도우리딘 화학적 변형을 갖는 백신 후보 (1) VZV-gE-hIg카파 또는 5' 캡: m7G(5')ppp(5')G-2'-O-메틸 및 N1-메틸슈도우리딘 화학적 변형을 갖는 백신 후보 (3) VZV-gE로 백신접종된 마우스의 혈청에서 존재하는 항-VZV-gE IgG의 양은 VARIVAX®로 백신접종된 마우스의 혈청에서 존재하는 항-VZV-gE IgG의 양 거의 1000-배 초과이었다. 5' 캡: m7G(5')ppp(5')G-2'-O-메틸 및 무 화학적 변형을 갖는 백신 후보 (2) VZV-gE로 백신접종된 마우스의 혈청에서 존재하는 항-VZV gE IgG의 양은 VARIVAX®로 백신접종된 마우스의 혈청에서 존재하는 항-VZV-gE IgG의 양 거의 100-배 초과이었다. 상기 연구는 시험된 각각의 VZV gE mRNA 백신이 현행 VARIVAX® VZV 백신보다 더욱 면역원성 백신이라는 것을 표시한다.
실시예 17: 면역원성 연구-ELISA
즉석 연구는 VZV로부터 당단백질 gE를 인코딩하는 mRNA 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 후보 VZV 백신의 BALB/C 마우스에서 면역원성을 시험하기 위해 설계되었다. 마우스는 세트 간격에서 다양한 VZV mRNA 백신 제형으로 면역화되었고, 혈청은 각각의 면역화 후 수집되었다. 면역화 스케줄은 실시예 15의 표 4에서 제공된다. 혈청 수집 스케줄은 실시예 15의 표 5에서 제시된다.
VZV 당단백질 E에 대한 혈청 항체 역가는 표준 방법을 이용하여 효소-결합 면역흡착 검정 (ELISA)에 의해 결정되었다. 제2 팽창된 연구에서, 혈청 샘플은 ELISA를 이용한 검출가능성의 범위 내에서 신호를 가져오기 위해 연속으로 희석되었다. 항-VZV gE 마우스 IgG의 양은 하기 어느 한쪽의 두 10μg 용량으로 근육내로 백신접종된 마우스에서 백신접종후 일 42에서 수집된 혈청에서 측정되었다: (1) 5' 캡: m7G(5')ppp(5')G-2'-O-메틸 및 N1-메틸슈도우리딘 화학적 변형을 갖는 VZV-gE-hIg카파 (표 2 및 3에서 #1); (2) 5' 캡: m7G(5')ppp(5')G-2'-O-메틸 및 무 화학적 변형을 갖는 VZV-gE (표 2 및 3에서 #6); (3) 5' 캡: m7G(5')ppp(5')G-2'-O-메틸 및 N1-메틸슈도우리딘 화학적 변형을 갖는 VZV-gE (표 2 및 3에서 #10); (4) VARIVAX® 백신 (양성 대조군); 또는 (5) PBS (음성 대조군). 항-VZV-gE 마우스 IgG의 농도는 10-배 연속 희석에서 측정되었다.
도 6은 가장 강력한 면역 반응이 5' 캡: m7G(5')ppp(5')G-2'-O-메틸 및 N1-메틸슈도우리딘 화학적 변형을 갖는 백신 후보 (1) VZV-gE-hIg카파로 백신접종된 마우스에서 발견되었다는 것을 보여준다. 제2 가장 강력한 반응은 백신 후보 (3) VZV-gE 5' 캡: m7G(5')ppp(5')G-2'-O-메틸 및 N1-메틸슈도우리딘 화학적 변형으로 백신접종된 마우스에서 발견되었다. 제3 가장 강력한 반응은 5' 캡: m7G(5')ppp(5')G-2'-O-메틸 및 무 화학적 변형을 갖는 백신 후보 (2) VZV-gE로 백신접종된 마우스에서 발견되었다. 전체 3 VZV gE mRNA 백신은 VARIVAX® 백신보다 상당히 더 큰 면역 반응을 생성하였다.
도 7은 백신접종후 일 3, 일 14, 및 일 42에서 백신 (1) - (4) 및 (5) 음성 대조군으로 백신접종된 마우스에서 존재하는 항-VZV-gE 마우스 IgG의 양을 보여준다.
실시예 18: 면역원성 연구
즉석 연구는 VZV로부터 변이체 당단백질 gE를 인코딩하는 mRNA 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 후보 VZV 백신의 BALB/C 마우스에서 면역원성을 시험하기 위해 설계된다. 마우스는 세트 간격에서 다양한 VZV mRNA 백신 제형으로 면역화되었고, 혈청은 지시된 시점에서 각각의 면역화 후 수집되었다. 면역화 스케줄은 아래 표 6에서 제공된다. 혈청 수집 스케줄은 아래 표 7에서 제시된다.
항-VZV gE 마우스 IgG의 양은 표시된 작제물의 두 10 μg 또는 2 μg 용량으로 근육내로 백신접종된 마우스에서 백신접종후 표 7에서 표시된 시간에 수집된 혈청에서 측정된다. 사용된 전체 mRNAs는 5' 캡: m7G(5')ppp(5')G-2'-O-메틸 및 N1-메틸슈도우리딘 화학적 변형을 갖는다. ZOSTAVAX®은 양성 대조군으로서 사용되었고 19400 pfu SC의 2회 임상 용량으로 근육내로 마우스에 주사되었다. PBS는 음성 대조군으로서 사용되었다.
표 6에서 표시된 VZV gE 변이체 mRNA 백신으로 면역화된 마우스의 혈청에서 VZV gE 변이체 폴리펩타이드에 대한 항체 역가는 효소-결합 면역흡착 검정 (ELISA)에 의해 결정되었다. ELISA를 수행하기 위해, 플레이트의 웰들은 PBS내 VZV gE 항원 (Abcam: ab43050)으로 코팅되었다. 1, 2, 또는 4 μg/ml의 농도에서 VZV gE 항원의 100 μl는 밤새 4℃에서 코팅을 위하여 사용되었다. 웰들은 그 다음 300 μl의 PBST (0.05% tween을 가진 PBS)로 3회 세정되었다. VZV gE-코팅된 웰들은 실온에서 30 분 동안 PBS내 1% Blotto를 함유하는 200 μl의 차단 버퍼로 차단되었다. 항-VZV gE 항체를 함유하는 마우스 혈청은 1:2000 희석되었고 그 다음 PBST를 이용하여 1:3 연속 희석에 적용되었다. 희석된 혈청은 VZV gE-코팅된 웰들에 첨가되었고 실온에서 1 시간 동안 인큐베이션되었다. 홀스래디쉬 페록시다아제 (HRP, Abcam: ab6728)에 접합된 토끼 항-마우스인, 2차 항체는 PBST에서 1:1000 희석되었고 100 μl의 2차 항체 함유 용액은 웰들에 첨가되었고 실온에서 45 분 동안 인큐베이션되었다. 100 μl의 HRP 기질, KPL TMB은 웰들 첨가되었고 실온에서 3 분 동안 인큐베이션된 다음 100 μl의 정지 용액 (2M H2SO4)은 첨가되어 HRP 반응을 정지시켰다. HRP 기질로부터 생성된 신호는 A450에서 측정되었다. 결과는 도 11A, 11B, 12A, 12B, 13 및 표 8 및 9에서 보여졌다.
도 11A는 전체 gE 변이체가 두 10 μg 용량 후 ZOSTAVAX®보다 훨씬 더 강력한 면역 반응을 유도하였다는 것을 보여준다. 도 11B는 전체 gE 변이체가 두 2 μg 용량 후 ZOSTAVAX®보다 훨씬 더 강력한 면역 반응을 유도하였다는 것을 보여준다. 양쪽 투약량으로, gE 변이체 GE-del_574_Y569A 및 GE-del-562-IgKappaSP는 가장 강력한 면역 반응을 유도하였고 상기 gE 변이체로 면역화된 마우스의 혈청에서 측정된 항체 역가는 ZOSTAVAX®로 면역화된 마우스의 혈청에서 측정된 항체 역가 10 배 초과이고, GE-del_574_Y569A 및 GE-del_562-IgKappaSP mRNAs가 VZV에 대한 우월한 백신 후보인 것을 나타낸다.
도 12A는 표 6에서 기재된 VZV gE mRNA 변이체의 10 μg으로 2회 면역화된 마우스로부터 수집된 적정된 혈청에서 항체의 양을 보여준다. 도 12B는 표 6에서 기재된 VZV gE mRNA 변이체의 2 μg으로 2회 면역화된 마우스로부터 수집된 적정된 혈청에서 항체의 양을 보여준다. 혈청이 100 배 초과 희석된 경우, 항체 역가는 ZOSTAVAX® 백신접종된 마우스 혈청에서보다 VZV gE 변이체 백신접종된 마우스 혈청에서 더 높고, VZV gE mRNA 변이체가 마우스에서 ZOSTAVAX®보다 훨씬 더 강력한 면역 반응을 유도하였다는 것을 시사한다. 시험된 전체 VZV gE mRNA 변이체는 마우스내 면역 반응 유도에서 비교할만한 능력을 보여주었다.
도 13은 ZOSTAVAX®에 비교된 VZV gE 변이체 mRNA 백신에 의해 유도된 항-VZV gE 면역 반응을 보여주는 그래프이다. VZV gE 변이체 GE-delete_from_574-Y569A는 ZOSTAVAX®보다 약 1 log 더 큰 마우스내 면역 반응을 유도하였다.
표 9는 10 μg 또는 2 μg의 각각의 VZV gE mRNAs로 2회 면역화된 마우스로부터 수집된 혈청에서 상호 IgG 역가 (IC50)를 요약한다. GE-delete_from_574-Y569A는 어느 한쪽 10 μg 또는 2 μg 투약량으로 강력한 면역 반응을 유도하였다. 기하 평균 역가 (GMT)는 VZV gE 변이체 mRNA 백신의 면역원성 잠재력을 나타내는데 사용되었다. GE-delete_from_574-Y569A는 최고 GMT 값을 보여주었고, VZV gE에 대한 면역 반응 유도에서 가장 유효하다는 것을 나타낸다.
표 6: 주사 스케줄
Figure pct00073
Figure pct00074
Figure pct00075
표 7: 샘플 수집의 스케줄
Figure pct00076
Figure pct00077
Figure pct00078
Figure pct00079
실시예 19: VZV 시험관내 중화 검정
VZV 시험관내 중화 검정은 VZV 중화에서 항-VZV gE 항체를 평가하기 위해 수행되었다. 항-VZV gE 항체는 VZV gE 변이체 mRNA 백신으로 백신접종된 마우스의 혈청 수집에 의해 수득되었다. 마우스는 표 6에서 기재된 바와 같이 10 μg 또는 2 μg 또는 투약량에서 VZV gE 변이체 mRNA 백신으로 백신접종되었고 혈청은 제2 면역화 2 주 후 수집되었다.
검정을 수행하기 위해, 마우스 혈청은 1:5 희석되었고 그 다음 1:2 연속 희석에 적용되었다. VZV 바이러스는 혈청에 첨가되었고 중화는 실온에서 1 시간 동안 계속하도록 허용되었다. ARPE-19 세포는 1 일전 96-웰에 씨딩되었고 바이러스/혈청 혼합물은 ARPE-19 세포에 50-100 pfu / 웰로 첨가되었다. ARPE-19 세포는 다음날 고정되었고 VZV-특이적 염색은 수행되었다. 플레이트는 스캐닝 및 분석되었다. VZV 시험관내 중화 검정의 결과는 표 10에서 요약되었다. 표 10에서 값은 VZV 바이러스 플라크에 의한 웰-면적 적용범위에서 50% 감소를 보여주는 혈청 희석이다. 플라크 수에서 감소 없음은 관측되었다. 표 10에서 나타낸 바와 같이, GE-delete_from_574-Y569A 변이체 mRNA 백신으로 면역화된 마우스로부터 혈청의 1 복제는 1:80 희석에서 VZV 바이러스 플라크에 의해 웰-면적 적용범위를 감소시킬 수 있었다.
Figure pct00080
실시예 20: 마우스에서의 면역원성
대상포진 (HZ) 또는 대상포진(shingles)은 소포성 발진을 특징으로 하는 쇠약하게 하는 질환이고, 가장 흔한 합병증은 대상포진후 신경통 (PHN)이다. PHN은 피부 발발의 청소후 발생하는 지속적 및 중증 통증이고, 몇 년 동안 지속할 수 있고, 이로써 감염된 개체의 높은 이환율에 기여한다. HZ는 감각 신경절로부터 잠재적 수두-대상포진 바이러스 (VZV)의 재활성화에 의해 야기된다. 1차 VZV 감염 (수두) 동안 생성된 면역 반응은 잠재적 VZV의 재활성화를 예방하는 것으로 밝혀졌다. 그러나, HZ의 발병률은 가령과 강하게 관련된다. 몇 개의 조사는 T 세포-매개된 면역 반응이 가령으로 그리고 면역억제 동안 쇠퇴하여, VZV의 재활성화를 초래한다는 것이 알려졌다. 그럼에도 불구하고, 항-VZV 항체의 수준은 가령으로 상대적으로 안정적으로 남아있고, 체액성 면역 반응이 HZ의 예방에 충분하지 않을 수 있다는 것을 입증한다. 몇 개의 연구는, 기억 반응을 지배하는 CD4+ T 세포와 함께, VZV-특이적 CD4+ 및 CD8+ T 세포의 유도를 보고하였다.
승인된 백신 Zostavax는 50-60세 성인에서 대략 60-70% 효능을 입증하고 나이와 함께 쇠퇴한다. 최근에 서브유닛 아쥬반트화된 백신 (Shingrix: gE 단백질 +ASO1B)는 50+ 성인의 전체 연령 그룹에서 ~90% 효능을 갖는 것으로 알려졌다. 그러나, 상기 백신은 백신접종된 대상체의 10%에서 등급 3 중증 AE를 입증하였다. Shingrix는 Zostavax에 2 용량 후 약 1 log 배 더 나은 T 및 B 세포 반응을 입증하였다. 본 연구에서 gE 작제물로 mRNA 면역화는 마우스에서 면역원성 및 NHP에 대하여 조사되었다.
즉석 연구는 VZV로부터 당단백질 gE를 인코딩하는 mRNA 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 후보 VZV 백신의 BALB/C 마우스에서 면역원성을 시험하기 위해 정의되었다. 마우스는 표 11에서 아래에 제시된 바와 같이 다양한 VZV mRNA 백신 제형으로 면역화되었다. 그룹 1 내지 5는 1차 수두 노출을 모방하기 위해 ZOSTAVAX®로 프라이밍되었고 그룹 6은 mRNA 작제물 VZV-gE-del_574_Y569A로 프라이밍되었다. 전체 그룹 (그룹 1-6)은, 표 11에서 나타낸 바와 같이, 일 28에서 부스팅되었다. 동물은 일 -3, 21, 38 및 42에서 채혈되었다. 혈액 및 비장은 일 38 및 42에서 혈청학적 및 T 세포 분석을 위하여 수집되었다. 도 14A에서 나타낸 바와 같이, 전체 그룹은 더 높이 추구하는 프라임 및 부스트 (그룹 6)에 대하여 mRNA를 받는 동물로 mRNA 백신접종에 비교할만한 항-gE 항체 반응을 제공하였다. 도 15A에서 나타낸 바와 같이, 전체 그룹은 더 높은 반응을 향해 추구하는 mRNA 프라음 및 부스트 (그룹 6)으로 CD4 T-세포 반응을 입증하였다. 도 15B에서 나타낸 바와 같이, 가변성 CD8 T-세포 반응은 최고 CD8 T-세포 빈도를 입증하는 mRNA 프라임 및 부스트 (그룹 6)으로 언급되었다.
Figure pct00081
실시예 21: 비-인간 영장류에서 면역원성
실시예 20에서 데이터에 기반하여, mRNA 작제물 VZV-gE-del_574_Y569A는 비-인간 영장류에서 면역원성에 대하여 추가로 평가되었다. 붉은털원숭이의 3 그룹은 mRNA (VZV-gE-del_574_Y569A) 또는 ZOSTAVAX®로 프라이밍되었고 표 12에서 아래에 제시된 바와 같이 부스팅되었다. 동물은 혈청학적 및 T-세포 분석을 위하여 일 0, 14, 28, 및 42에서 채혈되었다. T-세포 분석은 일 0, 28, 및 42에서 수행되었다. 도 16A 및 16B에서 나타낸 바와 같이, mRNA 프라임 및 부스트 (그룹 1)은 ZOSTAVAX® 프라임, mRNA 부스트 (그룹 2)가 뒤따른 최고 항-gE 역가를 제공하였다. 후자 그룹 (그룹 2) 항-gE 역가는 ZOSTAVAX® 프라임, ZOSTAVAX® 부스트 (그룹 3)보다 대략 10X 더 양호하였다. 도 16C 및 16D에서 나타낸 바와 같이, IFNγ, IL-2 또는 TNFα를 생산하는 CD4-T 세포는 ZOSTAVAX® 프라임, ZOSTAVAX® 부스트 그룹 (그룹 3)에서 검출되지 않았다. 그에 반해서, 도 16C 및 16D에서 나타낸 바와 같이, IFNγ, IL-2 또는 TNFα를 생산하는 CD4 T-세포의 합리적인 빈도는 mRNA 프라임, mRNA 부스트 그룹 (그룹 1) 및 ZOSTAVAX® 프라임, mRNA 부스트 그룹 (그룹 2)에서 검출되었고 통계적으로 미분화되었다. 이들 데이터는 Zostavax 노출 후 mRNA 백신접종의 1 용량이 비교할만한 T-세포 반응 유도에서 mRNA 백신접종의 2 용량에 맞먹었다는 것을 나타낸다.
Figure pct00082
Figure pct00083
Figure pct00084
Figure pct00086
Figure pct00087
Figure pct00088
Figure pct00089
Figure pct00090
Figure pct00091
Figure pct00092
Figure pct00093
Figure pct00094
등가물
당해 분야의 숙련가는, 본 명세서에서 기재된 본 발명의 특정 구현예에 많은 등가물을, 일상적인 실험과정 이하를 이용하여 확인할 수 있거나, 인식할 것이다. 그와 같은 등가물은 다음과 같은 청구항에 의해 포함되도록 의도된다.
본 명세서에서 개시된, 특허 문서를 포함하는, 전체 참조문헌은 참조로 그 전문이 편입된다.
<110> ModernaTX, Inc. <120> NUCLEIC ACID VACCINES FOR VARICELLA ZOSTER VIRUS (VZV) <130> M1378.70014WO00 <150> US 62/245,031 <151> 2015-10-22 <150> US 62/245,234 <151> 2015-10-22 <150> US 62/247,697 <151> 2015-10-28 <150> US 62/335,348 <151> 2016-05-12 <160> 134 <170> KoPatentIn 3.0 <210> 1 <211> 2080 <212> DNA <213> Varicella Zoster Virus <400> 1 tcaagctttt ggaccctcgt acagaagcta atacgactca ctatagggaa ataagagaga 60 aaagaagagt aagaagaaat ataagagcca ccatggggac agtgaataag ccggttgtgg 120 gcgtgcttat gggctttggg attattaccg gtacattacg aattaccaat ccagtgcgcg 180 ccagtgtgct gcgttacgac gactttcaca ttgacgagga taagctggat actaacagcg 240 tgtacgaacc ttattaccac tcagatcatg ccgaatcaag ctgggttaat agaggagaaa 300 gcagccgaaa agcctacgac cacaactcac cttatatttg gcccagaaac gattatgacg 360 gtttcctgga aaacgcacat gaacaccatg gagtctacaa ccaaggcagg ggaatcgaca 420 gtggcgagcg tcttatgcag ccaacacaga tgtcggcaca ggaggatctc ggtgatgaca 480 ccggcataca cgtgattccc acattaaacg gcgacgacag acataagatc gtcaatgtgg 540 atcagcgtca gtatggggat gtctttaaag gcgatttgaa tccaaagccc caaggacaga 600 gactgatcga ggtctctgta gaagaaaatc accccttcac tttgcgcgct ccaatccaga 660 ggatttacgg ggtgcgttat accgaaactt ggagtttctt gccgtcactg acgtgtacgg 720 gggatgccgc ccccgcaatc cagcacatct gtctgaaaca caccacatgc tttcaggacg 780 tggttgtgga tgtggattgc gcggaaaaca caaaagaaga ccaactcgcc gaaatcagct 840 atcgttttca gggtaaaaaa gaggccgacc aaccgtggat tgttgtgaat acgagcacgc 900 tcttcgatga gcttgaactc gatcccccgg aaatcgagcc tggggttcta aaagtgttga 960 ggaccgagaa gcagtacctc ggggtttata tctggaatat gagaggctcc gatggcacct 1020 ctacctacgc aacgtttctg gttacctgga agggagacga gaagacacgg aatccaacgc 1080 ccgctgtgac ccctcagcct aggggagccg aattccacat gtggaactat cactcccatg 1140 tattcagtgt gggtgacact ttcagcctgg ccatgcacct gcagtataag attcacgagg 1200 cacccttcga cctcctgctg gagtggttgt acgtacctat tgatcccact tgtcagccca 1260 tgcgcctgta ctccacttgc ttgtaccacc ccaatgcacc acagtgtcta tcacacatga 1320 actccgggtg tacctttact tcaccccatc ttgcccagcg ggtcgccagc acagtgtatc 1380 agaactgtga gcatgctgac aactatactg cttattgcct cggaatatcc catatggagc 1440 caagcttcgg gctcatactg cacgatggtg gtacgacact caagttcgtg gacacccccg 1500 aaagcctttc tggcttgtac gtgttcgtgg tctacttcaa tggacatgtg gaggcagtgg 1560 cttacacagt ggtttcgaca gttgatcact ttgtaaatgc cattgaggaa cgcggcttcc 1620 cgcctacagc gggccagccc cctgcgacaa caaaaccaaa agagattacg cccgttaatc 1680 ctgggactag tccattgctg aggtatgccg cctggactgg cggtctggcg gccgtggtac 1740 ttctgtgttt agtcatattt ctgatctgta ccgctaaacg tatgcgggtc aaggcttacc 1800 gtgttgacaa gtctccttac aatcagtcaa tgtactatgc aggactccct gttgacgatt 1860 tcgaagactc agagagtaca gacacagaag aagaattcgg aaacgctata ggtggctctc 1920 acggaggtag ctcgtataca gtgtacatcg ataaaaccag atgataatag gctggagcct 1980 cggtggccat gcttcttgcc ccttgggcct ccccccagcc cctcctcccc ttcctgcacc 2040 cgtacccccg tggtctttga ataaagtctg agtgggcggc 2080 <210> 2 <211> 1276 <212> DNA <213> Varicella Zoster Virus <400> 2 tcaagctttt ggaccctcgt acagaagcta atacgactca ctatagggaa ataagagaga 60 aaagaagagt aagaagaaat ataagagcca ccatgttttt aatccaatgt ttgatatcgg 120 ccgttatatt ttacatacaa gtgaccaacg ctttgatctt caagggcgac cacgtgagct 180 tgcaagttaa cagcagtctc acgtctatcc ttattcccat gcaaaatgat aattatacag 240 agataaaagg acagcttgtc tttattggag agcaactacc taccgggaca aactatagcg 300 gaacactgga actgttatac gcggatacgg tggcgttttg tttccggtca gtacaagtaa 360 taagatacga cggatgtccc cggattagaa cgagcgcttt tatttcgtgt aggtacaaac 420 attcgtggca ttatggtaac tcaacggatc ggatatcaac agagccggat gctggtgtaa 480 tgttgaaaat taccaaaccg ggaataaatg atgctggtgt gtatgtactt cttgttcggt 540 tagaccatag cagatccacc gatggtttca ttcttggtgt aaatgtatat acagcgggct 600 cgcatcacaa cattcacggg gttatctaca cttctccatc tctacagaat ggatattcta 660 caagagccct ttttcaacaa gctcgtttgt gtgatttacc cgcgacaccc aaagggtccg 720 gtacctccct gtttcaacat atgcttgatc ttcgtgccgg taaatcgtta gaggataacc 780 cttggttaca tgaggacgtt gttacgacag aaactaagtc cgttgttaag gaggggatag 840 aaaatcacgt atatccaacg gatatgtcca cgttacccga aaagtccctt aatgatcctc 900 cagaaaatct acttataatt attcctatag tagcgtctgt catgatcctc accgccatgg 960 ttattgttat tgtaataagc gttaagcgac gtagaattaa aaaacatcca atttatcgcc 1020 caaatacaaa aacaagaagg ggcatacaaa atgcgacacc agaatccgat gtgatgttgg 1080 aggccgccat tgcacaacta gcaacgattc gcgaagaatc ccccccacat tccgttgtaa 1140 acccgtttgt taaatagtga taataggctg gagcctcggt ggccatgctt cttgcccctt 1200 gggcctcccc ccagcccctc ctccccttcc tgcacccgta cccccgtggt ctttgaataa 1260 agtctgagtg ggcggc 1276 <210> 3 <211> 1897 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Polynucleotide <400> 3 tcaagctttt ggaccctcgt acagaagcta atacgactca ctatagggaa ataagagaga 60 aaagaagagt aagaagaaat ataagagcca ccatggggac agttaataaa cctgtggtgg 120 gggtattgat ggggttcgga attatcacgg gaacgttgcg tataacgaat ccggtcagag 180 catccgtctt gcgatacgat gattttcaca tcgatgaaga caaactggat acaaactccg 240 tatatgagcc ttactaccat tcagatcatg cggagtcttc atgggtaaat cggggagagt 300 cttcgcgaaa agcgtacgat cataactcac cttatatatg gccacgtaat gattatgatg 360 gatttttaga gaacgcacac gaacaccatg gggtgtataa tcagggccgt ggtatcgata 420 gcggggaacg gttaatgcaa cccacacaaa tgtctgcaca ggaggatctt ggggacgata 480 cgggcatcca cgttatccct acgttaaacg gcgatgacag acataaaatt gtaaatgtgg 540 accaacgtca atacggtgac gtgtttaaag gagatcttaa tccaaaaccc caaggccaaa 600 gactcattga ggtgtcagtg gaagaaaatc acccgtttac tttacgcgca ccgattcagc 660 ggatttatgg agtccggtac accgagactt ggagcttttt gccgtcatta acctgtacgg 720 gagacgcagc gcccgccatc cagcatatat gtttaaaaca tacaacatgc tttcaagacg 780 tggtggtgga tgtggattgc gcggaaaata ctaaagagga tcagttggcc gaaatcagtt 840 accgttttca aggtaagaag gaagcggacc aaccgtggat tgttgtaaac acgagcacac 900 tgtttgatga actcgaatta gacccccccg agattgaacc gggtgtcttg aaagtacttc 960 ggacagaaaa acaatacttg ggtgtgtaca tttggaacat gcgcggctcc gatggtacgt 1020 ctacctacgc cacgtttttg gtcacctgga aaggggatga aaaaacaaga aaccctacgc 1080 ccgcagtaac tcctcaacca agaggggctg agtttcatat gtggaattac cactcgcatg 1140 tattttcagt tggtgatacg tttagcttgg caatgcatct tcagtataag atacatgaag 1200 cgccatttga tttgctgtta gagtggttgt atgtccccat cgatcctaca tgtcaaccaa 1260 tgcggttata ttctacgtgt ttgtatcatc ccaacgcacc ccaatgcctc tctcatatga 1320 attccggttg tacatttacc tcgccacatt tagcccagcg tgttgcaagc acagtgtatc 1380 aaaattgtga acatgcagat aactacaccg catattgtct gggaatatct catatggagc 1440 ctagctttgg tctaatctta cacgacgggg gcaccacgtt aaagtttgta gatacacccg 1500 agagtttgtc gggattatac gtttttgtgg tgtattttaa cgggcatgtt gaagccgtag 1560 catacactgt tgtatccaca gtagatcatt ttgtaaacgc aattgaagag cgtggatttc 1620 cgccaacggc cggtcagcca ccggcgacta ctaaacccaa ggaaattacc cccgtaaacc 1680 ccggaacgtc accacttcta cgatatgccg catggaccgg agggcttgca gcagtagtac 1740 ttttatgtct cgtaatattt ttaatctgta cggcttgatg ataataggct ggagcctcgg 1800 tggccatgct tcttgcccct tgggcctccc cccagcccct cctccccttc ctgcacccgt 1860 acccccgtgg tctttgaata aagtctgagt gggcggc 1897 <210> 4 <211> 1867 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Polynucleotide <400> 4 tcaagctttt ggaccctcgt acagaagcta atacgactca ctatagggaa ataagagaga 60 aaagaagagt aagaagaaat ataagagcca ccatggaaac cccggcgcag ctgctgtttc 120 tgctgctgct gtggctgccg gataccaccg gctccgtctt gcgatacgat gattttcaca 180 tcgatgaaga caaactggat acaaactccg tatatgagcc ttactaccat tcagatcatg 240 cggagtcttc atgggtaaat cggggagagt cttcgcgaaa agcgtacgat cataactcac 300 cttatatatg gccacgtaat gattatgatg gatttttaga gaacgcacac gaacaccatg 360 gggtgtataa tcagggccgt ggtatcgata gcggggaacg gttaatgcaa cccacacaaa 420 tgtctgcaca ggaggatctt ggggacgata cgggcatcca cgttatccct acgttaaacg 480 gcgatgacag acataaaatt gtaaatgtgg accaacgtca atacggtgac gtgtttaaag 540 gagatcttaa tccaaaaccc caaggccaaa gactcattga ggtgtcagtg gaagaaaatc 600 acccgtttac tttacgcgca ccgattcagc ggatttatgg agtccggtac accgagactt 660 ggagcttttt gccgtcatta acctgtacgg gagacgcagc gcccgccatc cagcatatat 720 gtttaaaaca tacaacatgc tttcaagacg tggtggtgga tgtggattgc gcggaaaata 780 ctaaagagga tcagttggcc gaaatcagtt accgttttca aggtaagaag gaagcggacc 840 aaccgtggat tgttgtaaac acgagcacac tgtttgatga actcgaatta gacccccccg 900 agattgaacc gggtgtcttg aaagtacttc ggacagaaaa acaatacttg ggtgtgtaca 960 tttggaacat gcgcggctcc gatggtacgt ctacctacgc cacgtttttg gtcacctgga 1020 aaggggatga aaaaacaaga aaccctacgc ccgcagtaac tcctcaacca agaggggctg 1080 agtttcatat gtggaattac cactcgcatg tattttcagt tggtgatacg tttagcttgg 1140 caatgcatct tcagtataag atacatgaag cgccatttga tttgctgtta gagtggttgt 1200 atgtccccat cgatcctaca tgtcaaccaa tgcggttata ttctacgtgt ttgtatcatc 1260 ccaacgcacc ccaatgcctc tctcatatga attccggttg tacatttacc tcgccacatt 1320 tagcccagcg tgttgcaagc acagtgtatc aaaattgtga acatgcagat aactacaccg 1380 catattgtct gggaatatct catatggagc ctagctttgg tctaatctta cacgacgggg 1440 gcaccacgtt aaagtttgta gatacacccg agagtttgtc gggattatac gtttttgtgg 1500 tgtattttaa cgggcatgtt gaagccgtag catacactgt tgtatccaca gtagatcatt 1560 ttgtaaacgc aattgaagag cgtggatttc cgccaacggc cggtcagcca ccggcgacta 1620 ctaaacccaa ggaaattacc cccgtaaacc ccggaacgtc accacttcta cgatatgccg 1680 catggaccgg agggcttgca gcagtagtac ttttatgtct cgtaatattt ttaatctgta 1740 cggcttgatg ataataggct ggagcctcgg tggccatgct tcttgcccct tgggcctccc 1800 cccagcccct cctccccttc ctgcacccgt acccccgtgg tctttgaata aagtctgagt 1860 gggcggc 1867 <210> 5 <211> 1933 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Polynucleotide <400> 5 tcaagctttt ggaccctcgt acagaagcta atacgactca ctatagggaa ataagagaga 60 aaagaagagt aagaagaaat ataagagcca ccatggggac agttaataaa cctgtggtgg 120 gggtattgat ggggttcgga attatcacgg gaacgttgcg tataacgaat ccggtcagag 180 catccgtctt gcgatacgat gattttcaca tcgatgaaga caaactggat acaaactccg 240 tatatgagcc ttactaccat tcagatcatg cggagtcttc atgggtaaat cggggagagt 300 cttcgcgaaa agcgtacgat cataactcac cttatatatg gccacgtaat gattatgatg 360 gatttttaga gaacgcacac gaacaccatg gggtgtataa tcagggccgt ggtatcgata 420 gcggggaacg gttaatgcaa cccacacaaa tgtctgcaca ggaggatctt ggggacgata 480 cgggcatcca cgttatccct acgttaaacg gcgatgacag acataaaatt gtaaatgtgg 540 accaacgtca atacggtgac gtgtttaaag gagatcttaa tccaaaaccc caaggccaaa 600 gactcattga ggtgtcagtg gaagaaaatc acccgtttac tttacgcgca ccgattcagc 660 ggatttatgg agtccggtac accgagactt ggagcttttt gccgtcatta acctgtacgg 720 gagacgcagc gcccgccatc cagcatatat gtttaaaaca tacaacatgc tttcaagacg 780 tggtggtgga tgtggattgc gcggaaaata ctaaagagga tcagttggcc gaaatcagtt 840 accgttttca aggtaagaag gaagcggacc aaccgtggat tgttgtaaac acgagcacac 900 tgtttgatga actcgaatta gacccccccg agattgaacc gggtgtcttg aaagtacttc 960 ggacagaaaa acaatacttg ggtgtgtaca tttggaacat gcgcggctcc gatggtacgt 1020 ctacctacgc cacgtttttg gtcacctgga aaggggatga aaaaacaaga aaccctacgc 1080 ccgcagtaac tcctcaacca agaggggctg agtttcatat gtggaattac cactcgcatg 1140 tattttcagt tggtgatacg tttagcttgg caatgcatct tcagtataag atacatgaag 1200 cgccatttga tttgctgtta gagtggttgt atgtccccat cgatcctaca tgtcaaccaa 1260 tgcggttata ttctacgtgt ttgtatcatc ccaacgcacc ccaatgcctc tctcatatga 1320 attccggttg tacatttacc tcgccacatt tagcccagcg tgttgcaagc acagtgtatc 1380 aaaattgtga acatgcagat aactacaccg catattgtct gggaatatct catatggagc 1440 ctagctttgg tctaatctta cacgacgggg gcaccacgtt aaagtttgta gatacacccg 1500 agagtttgtc gggattatac gtttttgtgg tgtattttaa cgggcatgtt gaagccgtag 1560 catacactgt tgtatccaca gtagatcatt ttgtaaacgc aattgaagag cgtggatttc 1620 cgccaacggc cggtcagcca ccggcgacta ctaaacccaa ggaaattacc cccgtaaacc 1680 ccggaacgtc accacttcta cgatatgccg catggaccgg agggcttgca gcagtagtac 1740 ttttatgtct cgtaatattt ttaatctgta cggctaaacg aatgagggtt aaagcctata 1800 gggtagacaa gtgatgataa taggctggag cctcggtggc catgcttctt gccccttggg 1860 cctcccccca gcccctcctc cccttcctgc acccgtaccc ccgtggtctt tgaataaagt 1920 ctgagtgggc ggc 1933 <210> 6 <211> 1933 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Polynucleotide <400> 6 tcaagctttt ggaccctcgt acagaagcta atacgactca ctatagggaa ataagagaga 60 aaagaagagt aagaagaaat ataagagcca ccatggggac agttaataaa cctgtggtgg 120 gggtattgat ggggttcgga attatcacgg gaacgttgcg tataacgaat ccggtcagag 180 catccgtctt gcgatacgat gattttcaca tcgatgaaga caaactggat acaaactccg 240 tatatgagcc ttactaccat tcagatcatg cggagtcttc atgggtaaat cggggagagt 300 cttcgcgaaa agcgtacgat cataactcac cttatatatg gccacgtaat gattatgatg 360 gatttttaga gaacgcacac gaacaccatg gggtgtataa tcagggccgt ggtatcgata 420 gcggggaacg gttaatgcaa cccacacaaa tgtctgcaca ggaggatctt ggggacgata 480 cgggcatcca cgttatccct acgttaaacg gcgatgacag acataaaatt gtaaatgtgg 540 accaacgtca atacggtgac gtgtttaaag gagatcttaa tccaaaaccc caaggccaaa 600 gactcattga ggtgtcagtg gaagaaaatc acccgtttac tttacgcgca ccgattcagc 660 ggatttatgg agtccggtac accgagactt ggagcttttt gccgtcatta acctgtacgg 720 gagacgcagc gcccgccatc cagcatatat gtttaaaaca tacaacatgc tttcaagacg 780 tggtggtgga tgtggattgc gcggaaaata ctaaagagga tcagttggcc gaaatcagtt 840 accgttttca aggtaagaag gaagcggacc aaccgtggat tgttgtaaac acgagcacac 900 tgtttgatga actcgaatta gacccccccg agattgaacc gggtgtcttg aaagtacttc 960 ggacagaaaa acaatacttg ggtgtgtaca tttggaacat gcgcggctcc gatggtacgt 1020 ctacctacgc cacgtttttg gtcacctgga aaggggatga aaaaacaaga aaccctacgc 1080 ccgcagtaac tcctcaacca agaggggctg agtttcatat gtggaattac cactcgcatg 1140 tattttcagt tggtgatacg tttagcttgg caatgcatct tcagtataag atacatgaag 1200 cgccatttga tttgctgtta gagtggttgt atgtccccat cgatcctaca tgtcaaccaa 1260 tgcggttata ttctacgtgt ttgtatcatc ccaacgcacc ccaatgcctc tctcatatga 1320 attccggttg tacatttacc tcgccacatt tagcccagcg tgttgcaagc acagtgtatc 1380 aaaattgtga acatgcagat aactacaccg catattgtct gggaatatct catatggagc 1440 ctagctttgg tctaatctta cacgacgggg gcaccacgtt aaagtttgta gatacacccg 1500 agagtttgtc gggattatac gtttttgtgg tgtattttaa cgggcatgtt gaagccgtag 1560 catacactgt tgtatccaca gtagatcatt ttgtaaacgc aattgaagag cgtggatttc 1620 cgccaacggc cggtcagcca ccggcgacta ctaaacccaa ggaaattacc cccgtaaacc 1680 ccggaacgtc accacttcta cgatatgccg catggaccgg agggcttgca gcagtagtac 1740 ttttatgtct cgtaatattt ttaatctgta cggctaaacg aatgagggtt aaagccgcca 1800 gggtagacaa gtgatgataa taggctggag cctcggtggc catgcttctt gccccttggg 1860 cctcccccca gcccctcctc cccttcctgc acccgtaccc ccgtggtctt tgaataaagt 1920 ctgagtgggc ggc 1933 <210> 7 <211> 2083 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Polynucleotide <400> 7 tcaagctttt ggaccctcgt acagaagcta atacgactca ctatagggaa ataagagaga 60 aaagaagagt aagaagaaat ataagagcca ccatggggac agttaataaa cctgtggtgg 120 gggtattgat ggggttcgga attatcacgg gaacgttgcg tataacgaat ccggtcagag 180 catccgtctt gcgatacgat gattttcaca tcgatgaaga caaactggat acaaactccg 240 tatatgagcc ttactaccat tcagatcatg cggagtcttc atgggtaaat cggggagagt 300 cttcgcgaaa agcgtacgat cataactcac cttatatatg gccacgtaat gattatgatg 360 gatttttaga gaacgcacac gaacaccatg gggtgtataa tcagggccgt ggtatcgata 420 gcggggaacg gttaatgcaa cccacacaaa tgtctgcaca ggaggatctt ggggacgata 480 cgggcatcca cgttatccct acgttaaacg gcgatgacag acataaaatt gtaaatgtgg 540 accaacgtca atacggtgac gtgtttaaag gagatcttaa tccaaaaccc caaggccaaa 600 gactcattga ggtgtcagtg gaagaaaatc acccgtttac tttacgcgca ccgattcagc 660 ggatttatgg agtccggtac accgagactt ggagcttttt gccgtcatta acctgtacgg 720 gagacgcagc gcccgccatc cagcatatat gtttaaaaca tacaacatgc tttcaagacg 780 tggtggtgga tgtggattgc gcggaaaata ctaaagagga tcagttggcc gaaatcagtt 840 accgttttca aggtaagaag gaagcggacc aaccgtggat tgttgtaaac acgagcacac 900 tgtttgatga actcgaatta gacccccccg agattgaacc gggtgtcttg aaagtacttc 960 ggacagaaaa acaatacttg ggtgtgtaca tttggaacat gcgcggctcc gatggtacgt 1020 ctacctacgc cacgtttttg gtcacctgga aaggggatga aaaaacaaga aaccctacgc 1080 ccgcagtaac tcctcaacca agaggggctg agtttcatat gtggaattac cactcgcatg 1140 tattttcagt tggtgatacg tttagcttgg caatgcatct tcagtataag atacatgaag 1200 cgccatttga tttgctgtta gagtggttgt atgtccccat cgatcctaca tgtcaaccaa 1260 tgcggttata ttctacgtgt ttgtatcatc ccaacgcacc ccaatgcctc tctcatatga 1320 attccggttg tacatttacc tcgccacatt tagcccagcg tgttgcaagc acagtgtatc 1380 aaaattgtga acatgcagat aactacaccg catattgtct gggaatatct catatggagc 1440 ctagctttgg tctaatctta cacgacgggg gcaccacgtt aaagtttgta gatacacccg 1500 agagtttgtc gggattatac gtttttgtgg tgtattttaa cgggcatgtt gaagccgtag 1560 catacactgt tgtatccaca gtagatcatt ttgtaaacgc aattgaagag cgtggatttc 1620 cgccaacggc cggtcagcca ccggcgacta ctaaacccaa ggaaattacc cccgtaaacc 1680 ccggaacgtc accacttcta cgatatgccg catggaccgg agggcttgca gcagtagtac 1740 ttttatgtct cgtaatattt ttaatctgta cggctaaacg aatgagggtt aaagcctata 1800 gggtagacaa gtccccgtat aaccaaagca tgtattacgc tggccttcca gtggacgatt 1860 tcgaggacgc cgaagccgcc gatgccgaag aagagtttgg taacgcgatt ggagggagtc 1920 acgggggttc gagttacacg gtgtatatag ataagacccg gtgatgataa taggctggag 1980 cctcggtggc catgcttctt gccccttggg cctcccccca gcccctcctc cccttcctgc 2040 acccgtaccc ccgtggtctt tgaataaagt ctgagtgggc ggc 2083 <210> 8 <211> 2083 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Polynucleotide <400> 8 tcaagctttt ggaccctcgt acagaagcta atacgactca ctatagggaa ataagagaga 60 aaagaagagt aagaagaaat ataagagcca ccatggggac agttaataaa cctgtggtgg 120 gggtattgat ggggttcgga attatcacgg gaacgttgcg tataacgaat ccggtcagag 180 catccgtctt gcgatacgat gattttcaca tcgatgaaga caaactggat acaaactccg 240 tatatgagcc ttactaccat tcagatcatg cggagtcttc atgggtaaat cggggagagt 300 cttcgcgaaa agcgtacgat cataactcac cttatatatg gccacgtaat gattatgatg 360 gatttttaga gaacgcacac gaacaccatg gggtgtataa tcagggccgt ggtatcgata 420 gcggggaacg gttaatgcaa cccacacaaa tgtctgcaca ggaggatctt ggggacgata 480 cgggcatcca cgttatccct acgttaaacg gcgatgacag acataaaatt gtaaatgtgg 540 accaacgtca atacggtgac gtgtttaaag gagatcttaa tccaaaaccc caaggccaaa 600 gactcattga ggtgtcagtg gaagaaaatc acccgtttac tttacgcgca ccgattcagc 660 ggatttatgg agtccggtac accgagactt ggagcttttt gccgtcatta acctgtacgg 720 gagacgcagc gcccgccatc cagcatatat gtttaaaaca tacaacatgc tttcaagacg 780 tggtggtgga tgtggattgc gcggaaaata ctaaagagga tcagttggcc gaaatcagtt 840 accgttttca aggtaagaag gaagcggacc aaccgtggat tgttgtaaac acgagcacac 900 tgtttgatga actcgaatta gacccccccg agattgaacc gggtgtcttg aaagtacttc 960 ggacagaaaa acaatacttg ggtgtgtaca tttggaacat gcgcggctcc gatggtacgt 1020 ctacctacgc cacgtttttg gtcacctgga aaggggatga aaaaacaaga aaccctacgc 1080 ccgcagtaac tcctcaacca agaggggctg agtttcatat gtggaattac cactcgcatg 1140 tattttcagt tggtgatacg tttagcttgg caatgcatct tcagtataag atacatgaag 1200 cgccatttga tttgctgtta gagtggttgt atgtccccat cgatcctaca tgtcaaccaa 1260 tgcggttata ttctacgtgt ttgtatcatc ccaacgcacc ccaatgcctc tctcatatga 1320 attccggttg tacatttacc tcgccacatt tagcccagcg tgttgcaagc acagtgtatc 1380 aaaattgtga acatgcagat aactacaccg catattgtct gggaatatct catatggagc 1440 ctagctttgg tctaatctta cacgacgggg gcaccacgtt aaagtttgta gatacacccg 1500 agagtttgtc gggattatac gtttttgtgg tgtattttaa cgggcatgtt gaagccgtag 1560 catacactgt tgtatccaca gtagatcatt ttgtaaacgc aattgaagag cgtggatttc 1620 cgccaacggc cggtcagcca ccggcgacta ctaaacccaa ggaaattacc cccgtaaacc 1680 ccggaacgtc accacttcta cgatatgccg catggaccgg agggcttgca gcagtagtac 1740 ttttatgtct cgtaatattt ttaatctgta cggctaaacg aatgagggtt aaagcctata 1800 gggtagacaa gtccccgtat aaccaaagca tgtatggcgc tggccttcca gtggacgatt 1860 tcgaggacgc cgaagccgcc gatgccgaag aagagtttgg taacgcgatt ggagggagtc 1920 acgggggttc gagttacacg gtgtatatag ataagacccg gtgatgataa taggctggag 1980 cctcggtggc catgcttctt gccccttggg cctcccccca gcccctcctc cccttcctgc 2040 acccgtaccc ccgtggtctt tgaataaagt ctgagtgggc ggc 2083 <210> 9 <211> 2080 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Polynucleotide <400> 9 tcaagctttt ggaccctcgt acagaagcta atacgactca ctatagggaa ataagagaga 60 aaagaagagt aagaagaaat ataagagcca ccatggggac agtgaataag ccggttgtgg 120 gcgtgcttat gggctttggg attattaccg gtacattacg aattaccaat ccagtgcgcg 180 ccagtgtgct gcgttacgac gactttcaca ttgacgagga taagctggat actaacagcg 240 tgtacgaacc ttattaccac tcagatcatg ccgaatcaag ctgggttaat agaggagaaa 300 gcagccgaaa agcctacgac cacaactcac cttatatttg gcccagaaac gattatgacg 360 gtttcctgga aaacgcacat gaacaccatg gagtctacaa ccaaggcagg ggaatcgaca 420 gtggcgagcg tcttatgcag ccaacacaga tgtcggcaca ggaggatctc ggtgatgaca 480 ccggcataca cgtgattccc acattaaacg gcgacgacag acataagatc gtcaatgtgg 540 atcagcgtca gtatggggat gtctttaaag gcgatttgaa tccaaagccc caaggacaga 600 gactgatcga ggtctctgta gaagaaaatc accccttcac tttgcgcgct ccaatccaga 660 ggatttacgg ggtgcgttat accgaaactt ggagtttctt gccgtcactg acgtgtacgg 720 gggatgccgc ccccgcaatc cagcacatct gtctgaaaca caccacatgc tttcaggacg 780 tggttgtgga tgtggattgc gcggaaaaca caaaagaaga ccaactcgcc gaaatcagct 840 atcgttttca gggtaaaaaa gaggccgacc aaccgtggat tgttgtgaat acgagcacgc 900 tcttcgatga gcttgaactc gatcccccgg aaatcgagcc tggggttcta aaagtgttga 960 ggaccgagaa gcagtacctc ggggtttata tctggaatat gagaggctcc gatggcacct 1020 ctacctacgc aacgtttctg gttacctgga agggagacga gaagacacgg aatccaacgc 1080 ccgctgtgac ccctcagcct aggggagccg aattccacat gtggaactat cactcccatg 1140 tattcagtgt gggtgacact ttcagcctgg ccatgcacct gcagtataag attcacgagg 1200 cacccttcga cctcctgctg gagtggttgt acgtacctat tgatcccact tgtcagccca 1260 tgcgcctgta ctccacttgc ttgtaccacc ccaatgcacc acagtgtcta tcacacatga 1320 actccgggtg tacctttact tcaccccatc ttgcccagcg ggtcgccagc acagtgtatc 1380 agaactgtga gcatgctgac aactatactg cttattgcct cggaatatcc catatggagc 1440 caagcttcgg gctcatactg cacgatggtg gtacgacact caagttcgtg gacacccccg 1500 aaagcctttc tggcttgtac gtgttcgtgg tctacttcaa tggacatgtg gaggcagtgg 1560 cttacacagt ggtttcgaca gttgatcact ttgtaaatgc cattgaggaa cgcggcttcc 1620 cgcctacagc gggccagccc cctgcgacaa caaaaccaaa agagattacg cccgttaatc 1680 ctgggactag tccattgctg aggtatgccg cctggactgg cggtctggcg gccgtggtac 1740 ttctgtgttt agtcatattt ctgatctgta ccgctaaacg tatgcgggtc aaggcttacc 1800 gtgttgacaa gtctccttac aatcagtcaa tgtactatgc aggactccct gttgacgatt 1860 tcgaagactc agagagtaca gacacagaag aagaattcgg aaacgctata ggtggctctc 1920 acggaggtag ctcgtataca gtgtacatcg ataaaaccag atgataatag gctggagcct 1980 cggtggccat gcttcttgcc ccttgggcct ccccccagcc cctcctcccc ttcctgcacc 2040 cgtacccccg tggtctttga ataaagtctg agtgggcggc 2080 <210> 10 <211> 623 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Polypeptide <400> 10 Met Gly Thr Val Asn Lys Pro Val Val Gly Val Leu Met Gly Phe Gly 1 5 10 15 Ile Ile Thr Gly Thr Leu Arg Ile Thr Asn Pro Val Arg Ala Ser Val 20 25 30 Leu Arg Tyr Asp Asp Phe His Ile Asp Glu Asp Lys Leu Asp Thr Asn 35 40 45 Ser Val Tyr Glu Pro Tyr Tyr His Ser Asp His Ala Glu Ser Ser Trp 50 55 60 Val Asn Arg Gly Glu Ser Ser Arg Lys Ala Tyr Asp His Asn Ser Pro 65 70 75 80 Tyr Ile Trp Pro Arg Asn Asp Tyr Asp Gly Phe Leu Glu Asn Ala His 85 90 95 Glu His His Gly Val Tyr Asn Gln Gly Arg Gly Ile Asp Ser Gly Glu 100 105 110 Arg Leu Met Gln Pro Thr Gln Met Ser Ala Gln Glu Asp Leu Gly Asp 115 120 125 Asp Thr Gly Ile His Val Ile Pro Thr Leu Asn Gly Asp Asp Arg His 130 135 140 Lys Ile Val Asn Val Asp Gln Arg Gln Tyr Gly Asp Val Phe Lys Gly 145 150 155 160 Asp Leu Asn Pro Lys Pro Gln Gly Gln Arg Leu Ile Glu Val Ser Val 165 170 175 Glu Glu Asn His Pro Phe Thr Leu Arg Ala Pro Ile Gln Arg Ile Tyr 180 185 190 Gly Val Arg Tyr Thr Glu Thr Trp Ser Phe Leu Pro Ser Leu Thr Cys 195 200 205 Thr Gly Asp Ala Ala Pro Ala Ile Gln His Ile Cys Leu Lys His Thr 210 215 220 Thr Cys Phe Gln Asp Val Val Val Asp Val Asp Cys Ala Glu Asn Thr 225 230 235 240 Lys Glu Asp Gln Leu Ala Glu Ile Ser Tyr Arg Phe Gln Gly Lys Lys 245 250 255 Glu Ala Asp Gln Pro Trp Ile Val Val Asn Thr Ser Thr Leu Phe Asp 260 265 270 Glu Leu Glu Leu Asp Pro Pro Glu Ile Glu Pro Gly Val Leu Lys Val 275 280 285 Leu Arg Thr Glu Lys Gln Tyr Leu Gly Val Tyr Ile Trp Asn Met Arg 290 295 300 Gly Ser Asp Gly Thr Ser Thr Tyr Ala Thr Phe Leu Val Thr Trp Lys 305 310 315 320 Gly Asp Glu Lys Thr Arg Asn Pro Thr Pro Ala Val Thr Pro Gln Pro 325 330 335 Arg Gly Ala Glu Phe His Met Trp Asn Tyr His Ser His Val Phe Ser 340 345 350 Val Gly Asp Thr Phe Ser Leu Ala Met His Leu Gln Tyr Lys Ile His 355 360 365 Glu Ala Pro Phe Asp Leu Leu Leu Glu Trp Leu Tyr Val Pro Ile Asp 370 375 380 Pro Thr Cys Gln Pro Met Arg Leu Tyr Ser Thr Cys Leu Tyr His Pro 385 390 395 400 Asn Ala Pro Gln Cys Leu Ser His Met Asn Ser Gly Cys Thr Phe Thr 405 410 415 Ser Pro His Leu Ala Gln Arg Val Ala Ser Thr Val Tyr Gln Asn Cys 420 425 430 Glu His Ala Asp Asn Tyr Thr Ala Tyr Cys Leu Gly Ile Ser His Met 435 440 445 Glu Pro Ser Phe Gly Leu Ile Leu His Asp Gly Gly Thr Thr Leu Lys 450 455 460 Phe Val Asp Thr Pro Glu Ser Leu Ser Gly Leu Tyr Val Phe Val Val 465 470 475 480 Tyr Phe Asn Gly His Val Glu Ala Val Ala Tyr Thr Val Val Ser Thr 485 490 495 Val Asp His Phe Val Asn Ala Ile Glu Glu Arg Gly Phe Pro Pro Thr 500 505 510 Ala Gly Gln Pro Pro Ala Thr Thr Lys Pro Lys Glu Ile Thr Pro Val 515 520 525 Asn Pro Gly Thr Ser Pro Leu Leu Arg Tyr Ala Ala Trp Thr Gly Gly 530 535 540 Leu Ala Ala Val Val Leu Leu Cys Leu Val Ile Phe Leu Ile Cys Thr 545 550 555 560 Ala Lys Arg Met Arg Val Lys Ala Tyr Arg Val Asp Lys Ser Pro Tyr 565 570 575 Asn Gln Ser Met Tyr Tyr Ala Gly Leu Pro Val Asp Asp Phe Glu Asp 580 585 590 Ser Glu Ser Thr Asp Thr Glu Glu Glu Phe Gly Asn Ala Ile Gly Gly 595 600 605 Ser His Gly Gly Ser Ser Tyr Thr Val Tyr Ile Asp Lys Thr Arg 610 615 620 <210> 11 <211> 1869 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Polynucleotide <400> 11 atggggacag tgaataagcc ggttgtgggc gtgcttatgg gctttgggat tattaccggt 60 acattacgaa ttaccaatcc agtgcgcgcc agtgtgctgc gttacgacga ctttcacatt 120 gacgaggata agctggatac taacagcgtg tacgaacctt attaccactc agatcatgcc 180 gaatcaagct gggttaatag aggagaaagc agccgaaaag cctacgacca caactcacct 240 tatatttggc ccagaaacga ttatgacggt ttcctggaaa acgcacatga acaccatgga 300 gtctacaacc aaggcagggg aatcgacagt ggcgagcgtc ttatgcagcc aacacagatg 360 tcggcacagg aggatctcgg tgatgacacc ggcatacacg tgattcccac attaaacggc 420 gacgacagac ataagatcgt caatgtggat cagcgtcagt atggggatgt ctttaaaggc 480 gatttgaatc caaagcccca aggacagaga ctgatcgagg tctctgtaga agaaaatcac 540 cccttcactt tgcgcgctcc aatccagagg atttacgggg tgcgttatac cgaaacttgg 600 agtttcttgc cgtcactgac gtgtacgggg gatgccgccc ccgcaatcca gcacatctgt 660 ctgaaacaca ccacatgctt tcaggacgtg gttgtggatg tggattgcgc ggaaaacaca 720 aaagaagacc aactcgccga aatcagctat cgttttcagg gtaaaaaaga ggccgaccaa 780 ccgtggattg ttgtgaatac gagcacgctc ttcgatgagc ttgaactcga tcccccggaa 840 atcgagcctg gggttctaaa agtgttgagg accgagaagc agtacctcgg ggtttatatc 900 tggaatatga gaggctccga tggcacctct acctacgcaa cgtttctggt tacctggaag 960 ggagacgaga agacacggaa tccaacgccc gctgtgaccc ctcagcctag gggagccgaa 1020 ttccacatgt ggaactatca ctcccatgta ttcagtgtgg gtgacacttt cagcctggcc 1080 atgcacctgc agtataagat tcacgaggca cccttcgacc tcctgctgga gtggttgtac 1140 gtacctattg atcccacttg tcagcccatg cgcctgtact ccacttgctt gtaccacccc 1200 aatgcaccac agtgtctatc acacatgaac tccgggtgta cctttacttc accccatctt 1260 gcccagcggg tcgccagcac agtgtatcag aactgtgagc atgctgacaa ctatactgct 1320 tattgcctcg gaatatccca tatggagcca agcttcgggc tcatactgca cgatggtggt 1380 acgacactca agttcgtgga cacccccgaa agcctttctg gcttgtacgt gttcgtggtc 1440 tacttcaatg gacatgtgga ggcagtggct tacacagtgg tttcgacagt tgatcacttt 1500 gtaaatgcca ttgaggaacg cggcttcccg cctacagcgg gccagccccc tgcgacaaca 1560 aaaccaaaag agattacgcc cgttaatcct gggactagtc cattgctgag gtatgccgcc 1620 tggactggcg gtctggcggc cgtggtactt ctgtgtttag tcatatttct gatctgtacc 1680 gctaaacgta tgcgggtcaa ggcttaccgt gttgacaagt ctccttacaa tcagtcaatg 1740 tactatgcag gactccctgt tgacgatttc gaagactcag agagtacaga cacagaagaa 1800 gaattcggaa acgctatagg tggctctcac ggaggtagct cgtatacagt gtacatcgat 1860 aaaaccaga 1869 <210> 12 <211> 2141 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Polynucleotide <400> 12 ggggaaataa gagagaaaag aagagtaaga agaaatataa gagccaccat ggggacagtg 60 aataagccgg ttgtgggcgt gcttatgggc tttgggatta ttaccggtac attacgaatt 120 accaatccag tgcgcgccag tgtgctgcgt tacgacgact ttcacattga cgaggataag 180 ctggatacta acagcgtgta cgaaccttat taccactcag atcatgccga atcaagctgg 240 gttaatagag gagaaagcag ccgaaaagcc tacgaccaca actcacctta tatttggccc 300 agaaacgatt atgacggttt cctggaaaac gcacatgaac accatggagt ctacaaccaa 360 ggcaggggaa tcgacagtgg cgagcgtctt atgcagccaa cacagatgtc ggcacaggag 420 gatctcggtg atgacaccgg catacacgtg attcccacat taaacggcga cgacagacat 480 aagatcgtca atgtggatca gcgtcagtat ggggatgtct ttaaaggcga tttgaatcca 540 aagccccaag gacagagact gatcgaggtc tctgtagaag aaaatcaccc cttcactttg 600 cgcgctccaa tccagaggat ttacggggtg cgttataccg aaacttggag tttcttgccg 660 tcactgacgt gtacggggga tgccgccccc gcaatccagc acatctgtct gaaacacacc 720 acatgctttc aggacgtggt tgtggatgtg gattgcgcgg aaaacacaaa agaagaccaa 780 ctcgccgaaa tcagctatcg ttttcagggt aaaaaagagg ccgaccaacc gtggattgtt 840 gtgaatacga gcacgctctt cgatgagctt gaactcgatc ccccggaaat cgagcctggg 900 gttctaaaag tgttgaggac cgagaagcag tacctcgggg tttatatctg gaatatgaga 960 ggctccgatg gcacctctac ctacgcaacg tttctggtta cctggaaggg agacgagaag 1020 acacggaatc caacgcccgc tgtgacccct cagcctaggg gagccgaatt ccacatgtgg 1080 aactatcact cccatgtatt cagtgtgggt gacactttca gcctggccat gcacctgcag 1140 tataagattc acgaggcacc cttcgacctc ctgctggagt ggttgtacgt acctattgat 1200 cccacttgtc agcccatgcg cctgtactcc acttgcttgt accaccccaa tgcaccacag 1260 tgtctatcac acatgaactc cgggtgtacc tttacttcac cccatcttgc ccagcgggtc 1320 gccagcacag tgtatcagaa ctgtgagcat gctgacaact atactgctta ttgcctcgga 1380 atatcccata tggagccaag cttcgggctc atactgcacg atggtggtac gacactcaag 1440 ttcgtggaca cccccgaaag cctttctggc ttgtacgtgt tcgtggtcta cttcaatgga 1500 catgtggagg cagtggctta cacagtggtt tcgacagttg atcactttgt aaatgccatt 1560 gaggaacgcg gcttcccgcc tacagcgggc cagccccctg cgacaacaaa accaaaagag 1620 attacgcccg ttaatcctgg gactagtcca ttgctgaggt atgccgcctg gactggcggt 1680 ctggcggccg tggtacttct gtgtttagtc atatttctga tctgtaccgc taaacgtatg 1740 cgggtcaagg cttaccgtgt tgacaagtct ccttacaatc agtcaatgta ctatgcagga 1800 ctccctgttg acgatttcga agactcagag agtacagaca cagaagaaga attcggaaac 1860 gctataggtg gctctcacgg aggtagctcg tatacagtgt acatcgataa aaccagatga 1920 taataggctg gagcctcggt ggccatgctt cttgcccctt gggcctcccc ccagcccctc 1980 ctccccttcc tgcacccgta cccccgtggt ctttgaataa agtctgagtg ggcggcaaaa 2040 aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 2100 aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaatcta g 2141 <210> 13 <211> 2050 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Polynucleotide <400> 13 tcaagctttt ggaccctcgt acagaagcta atacgactca ctatagggaa ataagagaga 60 aaagaagagt aagaagaaat ataagagcca ccatggagac tcccgctcag ctactgttcc 120 tcctgctcct ttggctgcct gatactacag gctctgtttt gcggtacgac gactttcaca 180 tcgatgagga caagctcgac actaatagcg tgtatgagcc ctactaccat tcagatcacg 240 ccgagtcctc ttgggtgaac aggggtgaaa gttctaggaa agcctatgat cacaacagcc 300 cttatatttg gccacggaat gattacgacg gatttctcga aaatgcccac gagcatcacg 360 gagtgtacaa ccagggccgt ggaatcgact ctggggagag attgatgcaa cctacacaga 420 tgagcgccca ggaagatctc ggggatgata caggaattca cgttatccct acattaaacg 480 gagatgaccg ccacaaaatc gtcaatgtcg atcaaagaca gtatggagat gtgttcaaag 540 gcgatctcaa ccctaagccg cagggccaga gactcattga ggtgtctgtc gaagagaacc 600 accctttcac tctgcgcgct cccattcaga gaatctatgg agttcgctat acggagactt 660 ggtcattcct tccttccctg acatgcaccg gagacgccgc ccctgccatt cagcacatat 720 gcctgaaaca taccacctgt ttccaggatg tggtggttga tgttgattgt gctgaaaata 780 ccaaggaaga ccaactggcc gagattagtt accggttcca agggaaaaag gaagccgacc 840 agccatggat tgtggttaat acaagcactc tgttcgatga gctcgagctg gatccccccg 900 agatagaacc cggagttctg aaagtgctcc ggacagaaaa acaatatctg ggagtctaca 960 tatggaacat gcgcggttcc gatgggacct ccacttatgc aacctttctc gtcacgtgga 1020 agggagatga gaaaactagg aatcccacac ccgctgtcac accacagcca agaggggctg 1080 agttccatat gtggaactat catagtcacg tgtttagtgt cggagatacg ttttcattgg 1140 ctatgcatct ccagtacaag attcatgagg ctcccttcga tctgttgctt gagtggttgt 1200 acgtcccgat tgacccgacc tgccagccca tgcgactgta cagcacctgt ctctaccatc 1260 caaacgctcc gcaatgtctg agccacatga actctgggtg tactttcacc agtccccacc 1320 tcgcccagcg ggtggcctct actgtttacc agaactgtga gcacgccgac aactacaccg 1380 catactgcct cggtatttct cacatggaac cctccttcgg actcatcctg cacgatgggg 1440 gcactaccct gaagttcgtt gatacgccag aatctctgtc tgggctctat gttttcgtgg 1500 tctacttcaa tggccatgtc gaggccgtgg cctatactgt cgtttctacc gtggatcatt 1560 ttgtgaacgc catcgaagaa cggggattcc cccctacggc aggccagccg cctgcaacca 1620 ccaagcccaa ggaaataaca ccagtgaacc ctggcacctc acctctccta agatatgccg 1680 cgtggacagg gggactggcg gcagtggtgc tcctctgtct cgtgatcttt ctgatctgta 1740 cagccaagag gatgagggtc aaggcttata gagtggacaa gtccccctac aatcagtcaa 1800 tgtactacgc cggccttccc gttgatgatt ttgaggattc cgagtccaca gatactgagg 1860 aagagttcgg taacgctata ggcggctctc acgggggttc aagctacacg gtttacattg 1920 acaagacacg ctgataatag gctggagcct cggtggccat gcttcttgcc ccttgggcct 1980 ccccccagcc cctcctcccc ttcctgcacc cgtacccccg tggtctttga ataaagtctg 2040 agtgggcggc 2050 <210> 14 <211> 613 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Polypeptide <400> 14 Met Glu Thr Pro Ala Gln Leu Leu Phe Leu Leu Leu Leu Trp Leu Pro 1 5 10 15 Asp Thr Thr Gly Ser Val Leu Arg Tyr Asp Asp Phe His Ile Asp Glu 20 25 30 Asp Lys Leu Asp Thr Asn Ser Val Tyr Glu Pro Tyr Tyr His Ser Asp 35 40 45 His Ala Glu Ser Ser Trp Val Asn Arg Gly Glu Ser Ser Arg Lys Ala 50 55 60 Tyr Asp His Asn Ser Pro Tyr Ile Trp Pro Arg Asn Asp Tyr Asp Gly 65 70 75 80 Phe Leu Glu Asn Ala His Glu His His Gly Val Tyr Asn Gln Gly Arg 85 90 95 Gly Ile Asp Ser Gly Glu Arg Leu Met Gln Pro Thr Gln Met Ser Ala 100 105 110 Gln Glu Asp Leu Gly Asp Asp Thr Gly Ile His Val Ile Pro Thr Leu 115 120 125 Asn Gly Asp Asp Arg His Lys Ile Val Asn Val Asp Gln Arg Gln Tyr 130 135 140 Gly Asp Val Phe Lys Gly Asp Leu Asn Pro Lys Pro Gln Gly Gln Arg 145 150 155 160 Leu Ile Glu Val Ser Val Glu Glu Asn His Pro Phe Thr Leu Arg Ala 165 170 175 Pro Ile Gln Arg Ile Tyr Gly Val Arg Tyr Thr Glu Thr Trp Ser Phe 180 185 190 Leu Pro Ser Leu Thr Cys Thr Gly Asp Ala Ala Pro Ala Ile Gln His 195 200 205 Ile Cys Leu Lys His Thr Thr Cys Phe Gln Asp Val Val Val Asp Val 210 215 220 Asp Cys Ala Glu Asn Thr Lys Glu Asp Gln Leu Ala Glu Ile Ser Tyr 225 230 235 240 Arg Phe Gln Gly Lys Lys Glu Ala Asp Gln Pro Trp Ile Val Val Asn 245 250 255 Thr Ser Thr Leu Phe Asp Glu Leu Glu Leu Asp Pro Pro Glu Ile Glu 260 265 270 Pro Gly Val Leu Lys Val Leu Arg Thr Glu Lys Gln Tyr Leu Gly Val 275 280 285 Tyr Ile Trp Asn Met Arg Gly Ser Asp Gly Thr Ser Thr Tyr Ala Thr 290 295 300 Phe Leu Val Thr Trp Lys Gly Asp Glu Lys Thr Arg Asn Pro Thr Pro 305 310 315 320 Ala Val Thr Pro Gln Pro Arg Gly Ala Glu Phe His Met Trp Asn Tyr 325 330 335 His Ser His Val Phe Ser Val Gly Asp Thr Phe Ser Leu Ala Met His 340 345 350 Leu Gln Tyr Lys Ile His Glu Ala Pro Phe Asp Leu Leu Leu Glu Trp 355 360 365 Leu Tyr Val Pro Ile Asp Pro Thr Cys Gln Pro Met Arg Leu Tyr Ser 370 375 380 Thr Cys Leu Tyr His Pro Asn Ala Pro Gln Cys Leu Ser His Met Asn 385 390 395 400 Ser Gly Cys Thr Phe Thr Ser Pro His Leu Ala Gln Arg Val Ala Ser 405 410 415 Thr Val Tyr Gln Asn Cys Glu His Ala Asp Asn Tyr Thr Ala Tyr Cys 420 425 430 Leu Gly Ile Ser His Met Glu Pro Ser Phe Gly Leu Ile Leu His Asp 435 440 445 Gly Gly Thr Thr Leu Lys Phe Val Asp Thr Pro Glu Ser Leu Ser Gly 450 455 460 Leu Tyr Val Phe Val Val Tyr Phe Asn Gly His Val Glu Ala Val Ala 465 470 475 480 Tyr Thr Val Val Ser Thr Val Asp His Phe Val Asn Ala Ile Glu Glu 485 490 495 Arg Gly Phe Pro Pro Thr Ala Gly Gln Pro Pro Ala Thr Thr Lys Pro 500 505 510 Lys Glu Ile Thr Pro Val Asn Pro Gly Thr Ser Pro Leu Leu Arg Tyr 515 520 525 Ala Ala Trp Thr Gly Gly Leu Ala Ala Val Val Leu Leu Cys Leu Val 530 535 540 Ile Phe Leu Ile Cys Thr Ala Lys Arg Met Arg Val Lys Ala Tyr Arg 545 550 555 560 Val Asp Lys Ser Pro Tyr Asn Gln Ser Met Tyr Tyr Ala Gly Leu Pro 565 570 575 Val Asp Asp Phe Glu Asp Ser Glu Ser Thr Asp Thr Glu Glu Glu Phe 580 585 590 Gly Asn Ala Ile Gly Gly Ser His Gly Gly Ser Ser Tyr Thr Val Tyr 595 600 605 Ile Asp Lys Thr Arg 610 <210> 15 <211> 1839 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Polynucleotide <400> 15 atggagactc ccgctcagct actgttcctc ctgctccttt ggctgcctga tactacaggc 60 tctgttttgc ggtacgacga ctttcacatc gatgaggaca agctcgacac taatagcgtg 120 tatgagccct actaccattc agatcacgcc gagtcctctt gggtgaacag gggtgaaagt 180 tctaggaaag cctatgatca caacagccct tatatttggc cacggaatga ttacgacgga 240 tttctcgaaa atgcccacga gcatcacgga gtgtacaacc agggccgtgg aatcgactct 300 ggggagagat tgatgcaacc tacacagatg agcgcccagg aagatctcgg ggatgataca 360 ggaattcacg ttatccctac attaaacgga gatgaccgcc acaaaatcgt caatgtcgat 420 caaagacagt atggagatgt gttcaaaggc gatctcaacc ctaagccgca gggccagaga 480 ctcattgagg tgtctgtcga agagaaccac cctttcactc tgcgcgctcc cattcagaga 540 atctatggag ttcgctatac ggagacttgg tcattccttc cttccctgac atgcaccgga 600 gacgccgccc ctgccattca gcacatatgc ctgaaacata ccacctgttt ccaggatgtg 660 gtggttgatg ttgattgtgc tgaaaatacc aaggaagacc aactggccga gattagttac 720 cggttccaag ggaaaaagga agccgaccag ccatggattg tggttaatac aagcactctg 780 ttcgatgagc tcgagctgga tccccccgag atagaacccg gagttctgaa agtgctccgg 840 acagaaaaac aatatctggg agtctacata tggaacatgc gcggttccga tgggacctcc 900 acttatgcaa cctttctcgt cacgtggaag ggagatgaga aaactaggaa tcccacaccc 960 gctgtcacac cacagccaag aggggctgag ttccatatgt ggaactatca tagtcacgtg 1020 tttagtgtcg gagatacgtt ttcattggct atgcatctcc agtacaagat tcatgaggct 1080 cccttcgatc tgttgcttga gtggttgtac gtcccgattg acccgacctg ccagcccatg 1140 cgactgtaca gcacctgtct ctaccatcca aacgctccgc aatgtctgag ccacatgaac 1200 tctgggtgta ctttcaccag tccccacctc gcccagcggg tggcctctac tgtttaccag 1260 aactgtgagc acgccgacaa ctacaccgca tactgcctcg gtatttctca catggaaccc 1320 tccttcggac tcatcctgca cgatgggggc actaccctga agttcgttga tacgccagaa 1380 tctctgtctg ggctctatgt tttcgtggtc tacttcaatg gccatgtcga ggccgtggcc 1440 tatactgtcg tttctaccgt ggatcatttt gtgaacgcca tcgaagaacg gggattcccc 1500 cctacggcag gccagccgcc tgcaaccacc aagcccaagg aaataacacc agtgaaccct 1560 ggcacctcac ctctcctaag atatgccgcg tggacagggg gactggcggc agtggtgctc 1620 ctctgtctcg tgatctttct gatctgtaca gccaagagga tgagggtcaa ggcttataga 1680 gtggacaagt ccccctacaa tcagtcaatg tactacgccg gccttcccgt tgatgatttt 1740 gaggattccg agtccacaga tactgaggaa gagttcggta acgctatagg cggctctcac 1800 gggggttcaa gctacacggt ttacattgac aagacacgc 1839 <210> 16 <211> 2111 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Polynucleotide <400> 16 ggggaaataa gagagaaaag aagagtaaga agaaatataa gagccaccat ggagactccc 60 gctcagctac tgttcctcct gctcctttgg ctgcctgata ctacaggctc tgttttgcgg 120 tacgacgact ttcacatcga tgaggacaag ctcgacacta atagcgtgta tgagccctac 180 taccattcag atcacgccga gtcctcttgg gtgaacaggg gtgaaagttc taggaaagcc 240 tatgatcaca acagccctta tatttggcca cggaatgatt acgacggatt tctcgaaaat 300 gcccacgagc atcacggagt gtacaaccag ggccgtggaa tcgactctgg ggagagattg 360 atgcaaccta cacagatgag cgcccaggaa gatctcgggg atgatacagg aattcacgtt 420 atccctacat taaacggaga tgaccgccac aaaatcgtca atgtcgatca aagacagtat 480 ggagatgtgt tcaaaggcga tctcaaccct aagccgcagg gccagagact cattgaggtg 540 tctgtcgaag agaaccaccc tttcactctg cgcgctccca ttcagagaat ctatggagtt 600 cgctatacgg agacttggtc attccttcct tccctgacat gcaccggaga cgccgcccct 660 gccattcagc acatatgcct gaaacatacc acctgtttcc aggatgtggt ggttgatgtt 720 gattgtgctg aaaataccaa ggaagaccaa ctggccgaga ttagttaccg gttccaaggg 780 aaaaaggaag ccgaccagcc atggattgtg gttaatacaa gcactctgtt cgatgagctc 840 gagctggatc cccccgagat agaacccgga gttctgaaag tgctccggac agaaaaacaa 900 tatctgggag tctacatatg gaacatgcgc ggttccgatg ggacctccac ttatgcaacc 960 tttctcgtca cgtggaaggg agatgagaaa actaggaatc ccacacccgc tgtcacacca 1020 cagccaagag gggctgagtt ccatatgtgg aactatcata gtcacgtgtt tagtgtcgga 1080 gatacgtttt cattggctat gcatctccag tacaagattc atgaggctcc cttcgatctg 1140 ttgcttgagt ggttgtacgt cccgattgac ccgacctgcc agcccatgcg actgtacagc 1200 acctgtctct accatccaaa cgctccgcaa tgtctgagcc acatgaactc tgggtgtact 1260 ttcaccagtc cccacctcgc ccagcgggtg gcctctactg tttaccagaa ctgtgagcac 1320 gccgacaact acaccgcata ctgcctcggt atttctcaca tggaaccctc cttcggactc 1380 atcctgcacg atgggggcac taccctgaag ttcgttgata cgccagaatc tctgtctggg 1440 ctctatgttt tcgtggtcta cttcaatggc catgtcgagg ccgtggccta tactgtcgtt 1500 tctaccgtgg atcattttgt gaacgccatc gaagaacggg gattcccccc tacggcaggc 1560 cagccgcctg caaccaccaa gcccaaggaa ataacaccag tgaaccctgg cacctcacct 1620 ctcctaagat atgccgcgtg gacaggggga ctggcggcag tggtgctcct ctgtctcgtg 1680 atctttctga tctgtacagc caagaggatg agggtcaagg cttatagagt ggacaagtcc 1740 ccctacaatc agtcaatgta ctacgccggc cttcccgttg atgattttga ggattccgag 1800 tccacagata ctgaggaaga gttcggtaac gctataggcg gctctcacgg gggttcaagc 1860 tacacggttt acattgacaa gacacgctga taataggctg gagcctcggt ggccatgctt 1920 cttgcccctt gggcctcccc ccagcccctc ctccccttcc tgcacccgta cccccgtggt 1980 ctttgaataa agtctgagtg ggcggcaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 2040 aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 2100 aaaaaatcta g 2111 <210> 17 <211> 1897 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Polynucleotide <400> 17 tcaagctttt ggaccctcgt acagaagcta atacgactca ctatagggaa ataagagaga 60 aaagaagagt aagaagaaat ataagagcca ccatggggac agttaataaa cctgtggtgg 120 gggtattgat ggggttcgga attatcacgg gaacgttgcg tataacgaat ccggtcagag 180 catccgtctt gcgatacgat gattttcaca tcgatgaaga caaactggat acaaactccg 240 tatatgagcc ttactaccat tcagatcatg cggagtcttc atgggtaaat cggggagagt 300 cttcgcgaaa agcgtacgat cataactcac cttatatatg gccacgtaat gattatgatg 360 gatttttaga gaacgcacac gaacaccatg gggtgtataa tcagggccgt ggtatcgata 420 gcggggaacg gttaatgcaa cccacacaaa tgtctgcaca ggaggatctt ggggacgata 480 cgggcatcca cgttatccct acgttaaacg gcgatgacag acataaaatt gtaaatgtgg 540 accaacgtca atacggtgac gtgtttaaag gagatcttaa tccaaaaccc caaggccaaa 600 gactcattga ggtgtcagtg gaagaaaatc acccgtttac tttacgcgca ccgattcagc 660 ggatttatgg agtccggtac accgagactt ggagcttttt gccgtcatta acctgtacgg 720 gagacgcagc gcccgccatc cagcatatat gtttaaaaca tacaacatgc tttcaagacg 780 tggtggtgga tgtggattgc gcggaaaata ctaaagagga tcagttggcc gaaatcagtt 840 accgttttca aggtaagaag gaagcggacc aaccgtggat tgttgtaaac acgagcacac 900 tgtttgatga actcgaatta gacccccccg agattgaacc gggtgtcttg aaagtacttc 960 ggacagaaaa acaatacttg ggtgtgtaca tttggaacat gcgcggctcc gatggtacgt 1020 ctacctacgc cacgtttttg gtcacctgga aaggggatga aaaaacaaga aaccctacgc 1080 ccgcagtaac tcctcaacca agaggggctg agtttcatat gtggaattac cactcgcatg 1140 tattttcagt tggtgatacg tttagcttgg caatgcatct tcagtataag atacatgaag 1200 cgccatttga tttgctgtta gagtggttgt atgtccccat cgatcctaca tgtcaaccaa 1260 tgcggttata ttctacgtgt ttgtatcatc ccaacgcacc ccaatgcctc tctcatatga 1320 attccggttg tacatttacc tcgccacatt tagcccagcg tgttgcaagc acagtgtatc 1380 aaaattgtga acatgcagat aactacaccg catattgtct gggaatatct catatggagc 1440 ctagctttgg tctaatctta cacgacgggg gcaccacgtt aaagtttgta gatacacccg 1500 agagtttgtc gggattatac gtttttgtgg tgtattttaa cgggcatgtt gaagccgtag 1560 catacactgt tgtatccaca gtagatcatt ttgtaaacgc aattgaagag cgtggatttc 1620 cgccaacggc cggtcagcca ccggcgacta ctaaacccaa ggaaattacc cccgtaaacc 1680 ccggaacgtc accacttcta cgatatgccg catggaccgg agggcttgca gcagtagtac 1740 ttttatgtct cgtaatattt ttaatctgta cggcttgatg ataataggct ggagcctcgg 1800 tggccatgct tcttgcccct tgggcctccc cccagcccct cctccccttc ctgcacccgt 1860 acccccgtgg tctttgaata aagtctgagt gggcggc 1897 <210> 18 <211> 561 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Polypeptide <400> 18 Met Gly Thr Val Asn Lys Pro Val Val Gly Val Leu Met Gly Phe Gly 1 5 10 15 Ile Ile Thr Gly Thr Leu Arg Ile Thr Asn Pro Val Arg Ala Ser Val 20 25 30 Leu Arg Tyr Asp Asp Phe His Ile Asp Glu Asp Lys Leu Asp Thr Asn 35 40 45 Ser Val Tyr Glu Pro Tyr Tyr His Ser Asp His Ala Glu Ser Ser Trp 50 55 60 Val Asn Arg Gly Glu Ser Ser Arg Lys Ala Tyr Asp His Asn Ser Pro 65 70 75 80 Tyr Ile Trp Pro Arg Asn Asp Tyr Asp Gly Phe Leu Glu Asn Ala His 85 90 95 Glu His His Gly Val Tyr Asn Gln Gly Arg Gly Ile Asp Ser Gly Glu 100 105 110 Arg Leu Met Gln Pro Thr Gln Met Ser Ala Gln Glu Asp Leu Gly Asp 115 120 125 Asp Thr Gly Ile His Val Ile Pro Thr Leu Asn Gly Asp Asp Arg His 130 135 140 Lys Ile Val Asn Val Asp Gln Arg Gln Tyr Gly Asp Val Phe Lys Gly 145 150 155 160 Asp Leu Asn Pro Lys Pro Gln Gly Gln Arg Leu Ile Glu Val Ser Val 165 170 175 Glu Glu Asn His Pro Phe Thr Leu Arg Ala Pro Ile Gln Arg Ile Tyr 180 185 190 Gly Val Arg Tyr Thr Glu Thr Trp Ser Phe Leu Pro Ser Leu Thr Cys 195 200 205 Thr Gly Asp Ala Ala Pro Ala Ile Gln His Ile Cys Leu Lys His Thr 210 215 220 Thr Cys Phe Gln Asp Val Val Val Asp Val Asp Cys Ala Glu Asn Thr 225 230 235 240 Lys Glu Asp Gln Leu Ala Glu Ile Ser Tyr Arg Phe Gln Gly Lys Lys 245 250 255 Glu Ala Asp Gln Pro Trp Ile Val Val Asn Thr Ser Thr Leu Phe Asp 260 265 270 Glu Leu Glu Leu Asp Pro Pro Glu Ile Glu Pro Gly Val Leu Lys Val 275 280 285 Leu Arg Thr Glu Lys Gln Tyr Leu Gly Val Tyr Ile Trp Asn Met Arg 290 295 300 Gly Ser Asp Gly Thr Ser Thr Tyr Ala Thr Phe Leu Val Thr Trp Lys 305 310 315 320 Gly Asp Glu Lys Thr Arg Asn Pro Thr Pro Ala Val Thr Pro Gln Pro 325 330 335 Arg Gly Ala Glu Phe His Met Trp Asn Tyr His Ser His Val Phe Ser 340 345 350 Val Gly Asp Thr Phe Ser Leu Ala Met His Leu Gln Tyr Lys Ile His 355 360 365 Glu Ala Pro Phe Asp Leu Leu Leu Glu Trp Leu Tyr Val Pro Ile Asp 370 375 380 Pro Thr Cys Gln Pro Met Arg Leu Tyr Ser Thr Cys Leu Tyr His Pro 385 390 395 400 Asn Ala Pro Gln Cys Leu Ser His Met Asn Ser Gly Cys Thr Phe Thr 405 410 415 Ser Pro His Leu Ala Gln Arg Val Ala Ser Thr Val Tyr Gln Asn Cys 420 425 430 Glu His Ala Asp Asn Tyr Thr Ala Tyr Cys Leu Gly Ile Ser His Met 435 440 445 Glu Pro Ser Phe Gly Leu Ile Leu His Asp Gly Gly Thr Thr Leu Lys 450 455 460 Phe Val Asp Thr Pro Glu Ser Leu Ser Gly Leu Tyr Val Phe Val Val 465 470 475 480 Tyr Phe Asn Gly His Val Glu Ala Val Ala Tyr Thr Val Val Ser Thr 485 490 495 Val Asp His Phe Val Asn Ala Ile Glu Glu Arg Gly Phe Pro Pro Thr 500 505 510 Ala Gly Gln Pro Pro Ala Thr Thr Lys Pro Lys Glu Ile Thr Pro Val 515 520 525 Asn Pro Gly Thr Ser Pro Leu Leu Arg Tyr Ala Ala Trp Thr Gly Gly 530 535 540 Leu Ala Ala Val Val Leu Leu Cys Leu Val Ile Phe Leu Ile Cys Thr 545 550 555 560 Ala <210> 19 <211> 1686 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Polynucleotide <400> 19 atggggacag ttaataaacc tgtggtgggg gtattgatgg ggttcggaat tatcacggga 60 acgttgcgta taacgaatcc ggtcagagca tccgtcttgc gatacgatga ttttcacatc 120 gatgaagaca aactggatac aaactccgta tatgagcctt actaccattc agatcatgcg 180 gagtcttcat gggtaaatcg gggagagtct tcgcgaaaag cgtacgatca taactcacct 240 tatatatggc cacgtaatga ttatgatgga tttttagaga acgcacacga acaccatggg 300 gtgtataatc agggccgtgg tatcgatagc ggggaacggt taatgcaacc cacacaaatg 360 tctgcacagg aggatcttgg ggacgatacg ggcatccacg ttatccctac gttaaacggc 420 gatgacagac ataaaattgt aaatgtggac caacgtcaat acggtgacgt gtttaaagga 480 gatcttaatc caaaacccca aggccaaaga ctcattgagg tgtcagtgga agaaaatcac 540 ccgtttactt tacgcgcacc gattcagcgg atttatggag tccggtacac cgagacttgg 600 agctttttgc cgtcattaac ctgtacggga gacgcagcgc ccgccatcca gcatatatgt 660 ttaaaacata caacatgctt tcaagacgtg gtggtggatg tggattgcgc ggaaaatact 720 aaagaggatc agttggccga aatcagttac cgttttcaag gtaagaagga agcggaccaa 780 ccgtggattg ttgtaaacac gagcacactg tttgatgaac tcgaattaga cccccccgag 840 attgaaccgg gtgtcttgaa agtacttcgg acagaaaaac aatacttggg tgtgtacatt 900 tggaacatgc gcggctccga tggtacgtct acctacgcca cgtttttggt cacctggaaa 960 ggggatgaaa aaacaagaaa ccctacgccc gcagtaactc ctcaaccaag aggggctgag 1020 tttcatatgt ggaattacca ctcgcatgta ttttcagttg gtgatacgtt tagcttggca 1080 atgcatcttc agtataagat acatgaagcg ccatttgatt tgctgttaga gtggttgtat 1140 gtccccatcg atcctacatg tcaaccaatg cggttatatt ctacgtgttt gtatcatccc 1200 aacgcacccc aatgcctctc tcatatgaat tccggttgta catttacctc gccacattta 1260 gcccagcgtg ttgcaagcac agtgtatcaa aattgtgaac atgcagataa ctacaccgca 1320 tattgtctgg gaatatctca tatggagcct agctttggtc taatcttaca cgacgggggc 1380 accacgttaa agtttgtaga tacacccgag agtttgtcgg gattatacgt ttttgtggtg 1440 tattttaacg ggcatgttga agccgtagca tacactgttg tatccacagt agatcatttt 1500 gtaaacgcaa ttgaagagcg tggatttccg ccaacggccg gtcagccacc ggcgactact 1560 aaacccaagg aaattacccc cgtaaacccc ggaacgtcac cacttctacg atatgccgca 1620 tggaccggag ggcttgcagc agtagtactt ttatgtctcg taatattttt aatctgtacg 1680 gcttga 1686 <210> 20 <211> 1958 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Polynucleotide <400> 20 ggggaaataa gagagaaaag aagagtaaga agaaatataa gagccaccat ggggacagtt 60 aataaacctg tggtgggggt attgatgggg ttcggaatta tcacgggaac gttgcgtata 120 acgaatccgg tcagagcatc cgtcttgcga tacgatgatt ttcacatcga tgaagacaaa 180 ctggatacaa actccgtata tgagccttac taccattcag atcatgcgga gtcttcatgg 240 gtaaatcggg gagagtcttc gcgaaaagcg tacgatcata actcacctta tatatggcca 300 cgtaatgatt atgatggatt tttagagaac gcacacgaac accatggggt gtataatcag 360 ggccgtggta tcgatagcgg ggaacggtta atgcaaccca cacaaatgtc tgcacaggag 420 gatcttgggg acgatacggg catccacgtt atccctacgt taaacggcga tgacagacat 480 aaaattgtaa atgtggacca acgtcaatac ggtgacgtgt ttaaaggaga tcttaatcca 540 aaaccccaag gccaaagact cattgaggtg tcagtggaag aaaatcaccc gtttacttta 600 cgcgcaccga ttcagcggat ttatggagtc cggtacaccg agacttggag ctttttgccg 660 tcattaacct gtacgggaga cgcagcgccc gccatccagc atatatgttt aaaacataca 720 acatgctttc aagacgtggt ggtggatgtg gattgcgcgg aaaatactaa agaggatcag 780 ttggccgaaa tcagttaccg ttttcaaggt aagaaggaag cggaccaacc gtggattgtt 840 gtaaacacga gcacactgtt tgatgaactc gaattagacc cccccgagat tgaaccgggt 900 gtcttgaaag tacttcggac agaaaaacaa tacttgggtg tgtacatttg gaacatgcgc 960 ggctccgatg gtacgtctac ctacgccacg tttttggtca cctggaaagg ggatgaaaaa 1020 acaagaaacc ctacgcccgc agtaactcct caaccaagag gggctgagtt tcatatgtgg 1080 aattaccact cgcatgtatt ttcagttggt gatacgttta gcttggcaat gcatcttcag 1140 tataagatac atgaagcgcc atttgatttg ctgttagagt ggttgtatgt ccccatcgat 1200 cctacatgtc aaccaatgcg gttatattct acgtgtttgt atcatcccaa cgcaccccaa 1260 tgcctctctc atatgaattc cggttgtaca tttacctcgc cacatttagc ccagcgtgtt 1320 gcaagcacag tgtatcaaaa ttgtgaacat gcagataact acaccgcata ttgtctggga 1380 atatctcata tggagcctag ctttggtcta atcttacacg acgggggcac cacgttaaag 1440 tttgtagata cacccgagag tttgtcggga ttatacgttt ttgtggtgta ttttaacggg 1500 catgttgaag ccgtagcata cactgttgta tccacagtag atcattttgt aaacgcaatt 1560 gaagagcgtg gatttccgcc aacggccggt cagccaccgg cgactactaa acccaaggaa 1620 attacccccg taaaccccgg aacgtcacca cttctacgat atgccgcatg gaccggaggg 1680 cttgcagcag tagtactttt atgtctcgta atatttttaa tctgtacggc ttgatgataa 1740 taggctggag cctcggtggc catgcttctt gccccttggg cctcccccca gcccctcctc 1800 cccttcctgc acccgtaccc ccgtggtctt tgaataaagt ctgagtgggc ggcaaaaaaa 1860 aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 1920 aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaatctag 1958 <210> 21 <211> 1867 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Polynucleotide <400> 21 tcaagctttt ggaccctcgt acagaagcta atacgactca ctatagggaa ataagagaga 60 aaagaagagt aagaagaaat ataagagcca ccatggaaac cccggcgcag ctgctgtttc 120 tgctgctgct gtggctgccg gataccaccg gctccgtctt gcgatacgat gattttcaca 180 tcgatgaaga caaactggat acaaactccg tatatgagcc ttactaccat tcagatcatg 240 cggagtcttc atgggtaaat cggggagagt cttcgcgaaa agcgtacgat cataactcac 300 cttatatatg gccacgtaat gattatgatg gatttttaga gaacgcacac gaacaccatg 360 gggtgtataa tcagggccgt ggtatcgata gcggggaacg gttaatgcaa cccacacaaa 420 tgtctgcaca ggaggatctt ggggacgata cgggcatcca cgttatccct acgttaaacg 480 gcgatgacag acataaaatt gtaaatgtgg accaacgtca atacggtgac gtgtttaaag 540 gagatcttaa tccaaaaccc caaggccaaa gactcattga ggtgtcagtg gaagaaaatc 600 acccgtttac tttacgcgca ccgattcagc ggatttatgg agtccggtac accgagactt 660 ggagcttttt gccgtcatta acctgtacgg gagacgcagc gcccgccatc cagcatatat 720 gtttaaaaca tacaacatgc tttcaagacg tggtggtgga tgtggattgc gcggaaaata 780 ctaaagagga tcagttggcc gaaatcagtt accgttttca aggtaagaag gaagcggacc 840 aaccgtggat tgttgtaaac acgagcacac tgtttgatga actcgaatta gacccccccg 900 agattgaacc gggtgtcttg aaagtacttc ggacagaaaa acaatacttg ggtgtgtaca 960 tttggaacat gcgcggctcc gatggtacgt ctacctacgc cacgtttttg gtcacctgga 1020 aaggggatga aaaaacaaga aaccctacgc ccgcagtaac tcctcaacca agaggggctg 1080 agtttcatat gtggaattac cactcgcatg tattttcagt tggtgatacg tttagcttgg 1140 caatgcatct tcagtataag atacatgaag cgccatttga tttgctgtta gagtggttgt 1200 atgtccccat cgatcctaca tgtcaaccaa tgcggttata ttctacgtgt ttgtatcatc 1260 ccaacgcacc ccaatgcctc tctcatatga attccggttg tacatttacc tcgccacatt 1320 tagcccagcg tgttgcaagc acagtgtatc aaaattgtga acatgcagat aactacaccg 1380 catattgtct gggaatatct catatggagc ctagctttgg tctaatctta cacgacgggg 1440 gcaccacgtt aaagtttgta gatacacccg agagtttgtc gggattatac gtttttgtgg 1500 tgtattttaa cgggcatgtt gaagccgtag catacactgt tgtatccaca gtagatcatt 1560 ttgtaaacgc aattgaagag cgtggatttc cgccaacggc cggtcagcca ccggcgacta 1620 ctaaacccaa ggaaattacc cccgtaaacc ccggaacgtc accacttcta cgatatgccg 1680 catggaccgg agggcttgca gcagtagtac ttttatgtct cgtaatattt ttaatctgta 1740 cggcttgatg ataataggct ggagcctcgg tggccatgct tcttgcccct tgggcctccc 1800 cccagcccct cctccccttc ctgcacccgt acccccgtgg tctttgaata aagtctgagt 1860 gggcggc 1867 <210> 22 <211> 551 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Polypeptide <400> 22 Met Glu Thr Pro Ala Gln Leu Leu Phe Leu Leu Leu Leu Trp Leu Pro 1 5 10 15 Asp Thr Thr Gly Ser Val Leu Arg Tyr Asp Asp Phe His Ile Asp Glu 20 25 30 Asp Lys Leu Asp Thr Asn Ser Val Tyr Glu Pro Tyr Tyr His Ser Asp 35 40 45 His Ala Glu Ser Ser Trp Val Asn Arg Gly Glu Ser Ser Arg Lys Ala 50 55 60 Tyr Asp His Asn Ser Pro Tyr Ile Trp Pro Arg Asn Asp Tyr Asp Gly 65 70 75 80 Phe Leu Glu Asn Ala His Glu His His Gly Val Tyr Asn Gln Gly Arg 85 90 95 Gly Ile Asp Ser Gly Glu Arg Leu Met Gln Pro Thr Gln Met Ser Ala 100 105 110 Gln Glu Asp Leu Gly Asp Asp Thr Gly Ile His Val Ile Pro Thr Leu 115 120 125 Asn Gly Asp Asp Arg His Lys Ile Val Asn Val Asp Gln Arg Gln Tyr 130 135 140 Gly Asp Val Phe Lys Gly Asp Leu Asn Pro Lys Pro Gln Gly Gln Arg 145 150 155 160 Leu Ile Glu Val Ser Val Glu Glu Asn His Pro Phe Thr Leu Arg Ala 165 170 175 Pro Ile Gln Arg Ile Tyr Gly Val Arg Tyr Thr Glu Thr Trp Ser Phe 180 185 190 Leu Pro Ser Leu Thr Cys Thr Gly Asp Ala Ala Pro Ala Ile Gln His 195 200 205 Ile Cys Leu Lys His Thr Thr Cys Phe Gln Asp Val Val Val Asp Val 210 215 220 Asp Cys Ala Glu Asn Thr Lys Glu Asp Gln Leu Ala Glu Ile Ser Tyr 225 230 235 240 Arg Phe Gln Gly Lys Lys Glu Ala Asp Gln Pro Trp Ile Val Val Asn 245 250 255 Thr Ser Thr Leu Phe Asp Glu Leu Glu Leu Asp Pro Pro Glu Ile Glu 260 265 270 Pro Gly Val Leu Lys Val Leu Arg Thr Glu Lys Gln Tyr Leu Gly Val 275 280 285 Tyr Ile Trp Asn Met Arg Gly Ser Asp Gly Thr Ser Thr Tyr Ala Thr 290 295 300 Phe Leu Val Thr Trp Lys Gly Asp Glu Lys Thr Arg Asn Pro Thr Pro 305 310 315 320 Ala Val Thr Pro Gln Pro Arg Gly Ala Glu Phe His Met Trp Asn Tyr 325 330 335 His Ser His Val Phe Ser Val Gly Asp Thr Phe Ser Leu Ala Met His 340 345 350 Leu Gln Tyr Lys Ile His Glu Ala Pro Phe Asp Leu Leu Leu Glu Trp 355 360 365 Leu Tyr Val Pro Ile Asp Pro Thr Cys Gln Pro Met Arg Leu Tyr Ser 370 375 380 Thr Cys Leu Tyr His Pro Asn Ala Pro Gln Cys Leu Ser His Met Asn 385 390 395 400 Ser Gly Cys Thr Phe Thr Ser Pro His Leu Ala Gln Arg Val Ala Ser 405 410 415 Thr Val Tyr Gln Asn Cys Glu His Ala Asp Asn Tyr Thr Ala Tyr Cys 420 425 430 Leu Gly Ile Ser His Met Glu Pro Ser Phe Gly Leu Ile Leu His Asp 435 440 445 Gly Gly Thr Thr Leu Lys Phe Val Asp Thr Pro Glu Ser Leu Ser Gly 450 455 460 Leu Tyr Val Phe Val Val Tyr Phe Asn Gly His Val Glu Ala Val Ala 465 470 475 480 Tyr Thr Val Val Ser Thr Val Asp His Phe Val Asn Ala Ile Glu Glu 485 490 495 Arg Gly Phe Pro Pro Thr Ala Gly Gln Pro Pro Ala Thr Thr Lys Pro 500 505 510 Lys Glu Ile Thr Pro Val Asn Pro Gly Thr Ser Pro Leu Leu Arg Tyr 515 520 525 Ala Ala Trp Thr Gly Gly Leu Ala Ala Val Val Leu Leu Cys Leu Val 530 535 540 Ile Phe Leu Ile Cys Thr Ala 545 550 <210> 23 <211> 1656 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Polynucleotide <400> 23 atggaaaccc cggcgcagct gctgtttctg ctgctgctgt ggctgccgga taccaccggc 60 tccgtcttgc gatacgatga ttttcacatc gatgaagaca aactggatac aaactccgta 120 tatgagcctt actaccattc agatcatgcg gagtcttcat gggtaaatcg gggagagtct 180 tcgcgaaaag cgtacgatca taactcacct tatatatggc cacgtaatga ttatgatgga 240 tttttagaga acgcacacga acaccatggg gtgtataatc agggccgtgg tatcgatagc 300 ggggaacggt taatgcaacc cacacaaatg tctgcacagg aggatcttgg ggacgatacg 360 ggcatccacg ttatccctac gttaaacggc gatgacagac ataaaattgt aaatgtggac 420 caacgtcaat acggtgacgt gtttaaagga gatcttaatc caaaacccca aggccaaaga 480 ctcattgagg tgtcagtgga agaaaatcac ccgtttactt tacgcgcacc gattcagcgg 540 atttatggag tccggtacac cgagacttgg agctttttgc cgtcattaac ctgtacggga 600 gacgcagcgc ccgccatcca gcatatatgt ttaaaacata caacatgctt tcaagacgtg 660 gtggtggatg tggattgcgc ggaaaatact aaagaggatc agttggccga aatcagttac 720 cgttttcaag gtaagaagga agcggaccaa ccgtggattg ttgtaaacac gagcacactg 780 tttgatgaac tcgaattaga cccccccgag attgaaccgg gtgtcttgaa agtacttcgg 840 acagaaaaac aatacttggg tgtgtacatt tggaacatgc gcggctccga tggtacgtct 900 acctacgcca cgtttttggt cacctggaaa ggggatgaaa aaacaagaaa ccctacgccc 960 gcagtaactc ctcaaccaag aggggctgag tttcatatgt ggaattacca ctcgcatgta 1020 ttttcagttg gtgatacgtt tagcttggca atgcatcttc agtataagat acatgaagcg 1080 ccatttgatt tgctgttaga gtggttgtat gtccccatcg atcctacatg tcaaccaatg 1140 cggttatatt ctacgtgttt gtatcatccc aacgcacccc aatgcctctc tcatatgaat 1200 tccggttgta catttacctc gccacattta gcccagcgtg ttgcaagcac agtgtatcaa 1260 aattgtgaac atgcagataa ctacaccgca tattgtctgg gaatatctca tatggagcct 1320 agctttggtc taatcttaca cgacgggggc accacgttaa agtttgtaga tacacccgag 1380 agtttgtcgg gattatacgt ttttgtggtg tattttaacg ggcatgttga agccgtagca 1440 tacactgttg tatccacagt agatcatttt gtaaacgcaa ttgaagagcg tggatttccg 1500 ccaacggccg gtcagccacc ggcgactact aaacccaagg aaattacccc cgtaaacccc 1560 ggaacgtcac cacttctacg atatgccgca tggaccggag ggcttgcagc agtagtactt 1620 ttatgtctcg taatattttt aatctgtacg gcttga 1656 <210> 24 <211> 1928 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Polynucleotide <400> 24 ggggaaataa gagagaaaag aagagtaaga agaaatataa gagccaccat ggaaaccccg 60 gcgcagctgc tgtttctgct gctgctgtgg ctgccggata ccaccggctc cgtcttgcga 120 tacgatgatt ttcacatcga tgaagacaaa ctggatacaa actccgtata tgagccttac 180 taccattcag atcatgcgga gtcttcatgg gtaaatcggg gagagtcttc gcgaaaagcg 240 tacgatcata actcacctta tatatggcca cgtaatgatt atgatggatt tttagagaac 300 gcacacgaac accatggggt gtataatcag ggccgtggta tcgatagcgg ggaacggtta 360 atgcaaccca cacaaatgtc tgcacaggag gatcttgggg acgatacggg catccacgtt 420 atccctacgt taaacggcga tgacagacat aaaattgtaa atgtggacca acgtcaatac 480 ggtgacgtgt ttaaaggaga tcttaatcca aaaccccaag gccaaagact cattgaggtg 540 tcagtggaag aaaatcaccc gtttacttta cgcgcaccga ttcagcggat ttatggagtc 600 cggtacaccg agacttggag ctttttgccg tcattaacct gtacgggaga cgcagcgccc 660 gccatccagc atatatgttt aaaacataca acatgctttc aagacgtggt ggtggatgtg 720 gattgcgcgg aaaatactaa agaggatcag ttggccgaaa tcagttaccg ttttcaaggt 780 aagaaggaag cggaccaacc gtggattgtt gtaaacacga gcacactgtt tgatgaactc 840 gaattagacc cccccgagat tgaaccgggt gtcttgaaag tacttcggac agaaaaacaa 900 tacttgggtg tgtacatttg gaacatgcgc ggctccgatg gtacgtctac ctacgccacg 960 tttttggtca cctggaaagg ggatgaaaaa acaagaaacc ctacgcccgc agtaactcct 1020 caaccaagag gggctgagtt tcatatgtgg aattaccact cgcatgtatt ttcagttggt 1080 gatacgttta gcttggcaat gcatcttcag tataagatac atgaagcgcc atttgatttg 1140 ctgttagagt ggttgtatgt ccccatcgat cctacatgtc aaccaatgcg gttatattct 1200 acgtgtttgt atcatcccaa cgcaccccaa tgcctctctc atatgaattc cggttgtaca 1260 tttacctcgc cacatttagc ccagcgtgtt gcaagcacag tgtatcaaaa ttgtgaacat 1320 gcagataact acaccgcata ttgtctggga atatctcata tggagcctag ctttggtcta 1380 atcttacacg acgggggcac cacgttaaag tttgtagata cacccgagag tttgtcggga 1440 ttatacgttt ttgtggtgta ttttaacggg catgttgaag ccgtagcata cactgttgta 1500 tccacagtag atcattttgt aaacgcaatt gaagagcgtg gatttccgcc aacggccggt 1560 cagccaccgg cgactactaa acccaaggaa attacccccg taaaccccgg aacgtcacca 1620 cttctacgat atgccgcatg gaccggaggg cttgcagcag tagtactttt atgtctcgta 1680 atatttttaa tctgtacggc ttgatgataa taggctggag cctcggtggc catgcttctt 1740 gccccttggg cctcccccca gcccctcctc cccttcctgc acccgtaccc ccgtggtctt 1800 tgaataaagt ctgagtgggc ggcaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 1860 aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 1920 aaatctag 1928 <210> 25 <211> 2083 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Polynucleotide <400> 25 tcaagctttt ggaccctcgt acagaagcta atacgactca ctatagggaa ataagagaga 60 aaagaagagt aagaagaaat ataagagcca ccatggggac agttaataaa cctgtggtgg 120 gggtattgat ggggttcgga attatcacgg gaacgttgcg tataacgaat ccggtcagag 180 catccgtctt gcgatacgat gattttcaca tcgatgaaga caaactggat acaaactccg 240 tatatgagcc ttactaccat tcagatcatg cggagtcttc atgggtaaat cggggagagt 300 cttcgcgaaa agcgtacgat cataactcac cttatatatg gccacgtaat gattatgatg 360 gatttttaga gaacgcacac gaacaccatg gggtgtataa tcagggccgt ggtatcgata 420 gcggggaacg gttaatgcaa cccacacaaa tgtctgcaca ggaggatctt ggggacgata 480 cgggcatcca cgttatccct acgttaaacg gcgatgacag acataaaatt gtaaatgtgg 540 accaacgtca atacggtgac gtgtttaaag gagatcttaa tccaaaaccc caaggccaaa 600 gactcattga ggtgtcagtg gaagaaaatc acccgtttac tttacgcgca ccgattcagc 660 ggatttatgg agtccggtac accgagactt ggagcttttt gccgtcatta acctgtacgg 720 gagacgcagc gcccgccatc cagcatatat gtttaaaaca tacaacatgc tttcaagacg 780 tggtggtgga tgtggattgc gcggaaaata ctaaagagga tcagttggcc gaaatcagtt 840 accgttttca aggtaagaag gaagcggacc aaccgtggat tgttgtaaac acgagcacac 900 tgtttgatga actcgaatta gacccccccg agattgaacc gggtgtcttg aaagtacttc 960 ggacagaaaa acaatacttg ggtgtgtaca tttggaacat gcgcggctcc gatggtacgt 1020 ctacctacgc cacgtttttg gtcacctgga aaggggatga aaaaacaaga aaccctacgc 1080 ccgcagtaac tcctcaacca agaggggctg agtttcatat gtggaattac cactcgcatg 1140 tattttcagt tggtgatacg tttagcttgg caatgcatct tcagtataag atacatgaag 1200 cgccatttga tttgctgtta gagtggttgt atgtccccat cgatcctaca tgtcaaccaa 1260 tgcggttata ttctacgtgt ttgtatcatc ccaacgcacc ccaatgcctc tctcatatga 1320 attccggttg tacatttacc tcgccacatt tagcccagcg tgttgcaagc acagtgtatc 1380 aaaattgtga acatgcagat aactacaccg catattgtct gggaatatct catatggagc 1440 ctagctttgg tctaatctta cacgacgggg gcaccacgtt aaagtttgta gatacacccg 1500 agagtttgtc gggattatac gtttttgtgg tgtattttaa cgggcatgtt gaagccgtag 1560 catacactgt tgtatccaca gtagatcatt ttgtaaacgc aattgaagag cgtggatttc 1620 cgccaacggc cggtcagcca ccggcgacta ctaaacccaa ggaaattacc cccgtaaacc 1680 ccggaacgtc accacttcta cgatatgccg catggaccgg agggcttgca gcagtagtac 1740 ttttatgtct cgtaatattt ttaatctgta cggctaaacg aatgagggtt aaagcctata 1800 gggtagacaa gtccccgtat aaccaaagca tgtattacgc tggccttcca gtggacgatt 1860 tcgaggacgc cgaagccgcc gatgccgaag aagagtttgg taacgcgatt ggagggagtc 1920 acgggggttc gagttacacg gtgtatatag ataagacccg gtgatgataa taggctggag 1980 cctcggtggc catgcttctt gccccttggg cctcccccca gcccctcctc cccttcctgc 2040 acccgtaccc ccgtggtctt tgaataaagt ctgagtgggc ggc 2083 <210> 26 <211> 623 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Polypeptide <400> 26 Met Gly Thr Val Asn Lys Pro Val Val Gly Val Leu Met Gly Phe Gly 1 5 10 15 Ile Ile Thr Gly Thr Leu Arg Ile Thr Asn Pro Val Arg Ala Ser Val 20 25 30 Leu Arg Tyr Asp Asp Phe His Ile Asp Glu Asp Lys Leu Asp Thr Asn 35 40 45 Ser Val Tyr Glu Pro Tyr Tyr His Ser Asp His Ala Glu Ser Ser Trp 50 55 60 Val Asn Arg Gly Glu Ser Ser Arg Lys Ala Tyr Asp His Asn Ser Pro 65 70 75 80 Tyr Ile Trp Pro Arg Asn Asp Tyr Asp Gly Phe Leu Glu Asn Ala His 85 90 95 Glu His His Gly Val Tyr Asn Gln Gly Arg Gly Ile Asp Ser Gly Glu 100 105 110 Arg Leu Met Gln Pro Thr Gln Met Ser Ala Gln Glu Asp Leu Gly Asp 115 120 125 Asp Thr Gly Ile His Val Ile Pro Thr Leu Asn Gly Asp Asp Arg His 130 135 140 Lys Ile Val Asn Val Asp Gln Arg Gln Tyr Gly Asp Val Phe Lys Gly 145 150 155 160 Asp Leu Asn Pro Lys Pro Gln Gly Gln Arg Leu Ile Glu Val Ser Val 165 170 175 Glu Glu Asn His Pro Phe Thr Leu Arg Ala Pro Ile Gln Arg Ile Tyr 180 185 190 Gly Val Arg Tyr Thr Glu Thr Trp Ser Phe Leu Pro Ser Leu Thr Cys 195 200 205 Thr Gly Asp Ala Ala Pro Ala Ile Gln His Ile Cys Leu Lys His Thr 210 215 220 Thr Cys Phe Gln Asp Val Val Val Asp Val Asp Cys Ala Glu Asn Thr 225 230 235 240 Lys Glu Asp Gln Leu Ala Glu Ile Ser Tyr Arg Phe Gln Gly Lys Lys 245 250 255 Glu Ala Asp Gln Pro Trp Ile Val Val Asn Thr Ser Thr Leu Phe Asp 260 265 270 Glu Leu Glu Leu Asp Pro Pro Glu Ile Glu Pro Gly Val Leu Lys Val 275 280 285 Leu Arg Thr Glu Lys Gln Tyr Leu Gly Val Tyr Ile Trp Asn Met Arg 290 295 300 Gly Ser Asp Gly Thr Ser Thr Tyr Ala Thr Phe Leu Val Thr Trp Lys 305 310 315 320 Gly Asp Glu Lys Thr Arg Asn Pro Thr Pro Ala Val Thr Pro Gln Pro 325 330 335 Arg Gly Ala Glu Phe His Met Trp Asn Tyr His Ser His Val Phe Ser 340 345 350 Val Gly Asp Thr Phe Ser Leu Ala Met His Leu Gln Tyr Lys Ile His 355 360 365 Glu Ala Pro Phe Asp Leu Leu Leu Glu Trp Leu Tyr Val Pro Ile Asp 370 375 380 Pro Thr Cys Gln Pro Met Arg Leu Tyr Ser Thr Cys Leu Tyr His Pro 385 390 395 400 Asn Ala Pro Gln Cys Leu Ser His Met Asn Ser Gly Cys Thr Phe Thr 405 410 415 Ser Pro His Leu Ala Gln Arg Val Ala Ser Thr Val Tyr Gln Asn Cys 420 425 430 Glu His Ala Asp Asn Tyr Thr Ala Tyr Cys Leu Gly Ile Ser His Met 435 440 445 Glu Pro Ser Phe Gly Leu Ile Leu His Asp Gly Gly Thr Thr Leu Lys 450 455 460 Phe Val Asp Thr Pro Glu Ser Leu Ser Gly Leu Tyr Val Phe Val Val 465 470 475 480 Tyr Phe Asn Gly His Val Glu Ala Val Ala Tyr Thr Val Val Ser Thr 485 490 495 Val Asp His Phe Val Asn Ala Ile Glu Glu Arg Gly Phe Pro Pro Thr 500 505 510 Ala Gly Gln Pro Pro Ala Thr Thr Lys Pro Lys Glu Ile Thr Pro Val 515 520 525 Asn Pro Gly Thr Ser Pro Leu Leu Arg Tyr Ala Ala Trp Thr Gly Gly 530 535 540 Leu Ala Ala Val Val Leu Leu Cys Leu Val Ile Phe Leu Ile Cys Thr 545 550 555 560 Ala Lys Arg Met Arg Val Lys Ala Tyr Arg Val Asp Lys Ser Pro Tyr 565 570 575 Asn Gln Ser Met Tyr Tyr Ala Gly Leu Pro Val Asp Asp Phe Glu Asp 580 585 590 Ala Glu Ala Ala Asp Ala Glu Glu Glu Phe Gly Asn Ala Ile Gly Gly 595 600 605 Ser His Gly Gly Ser Ser Tyr Thr Val Tyr Ile Asp Lys Thr Arg 610 615 620 <210> 27 <211> 1872 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Polynucleotide <400> 27 atggggacag ttaataaacc tgtggtgggg gtattgatgg ggttcggaat tatcacggga 60 acgttgcgta taacgaatcc ggtcagagca tccgtcttgc gatacgatga ttttcacatc 120 gatgaagaca aactggatac aaactccgta tatgagcctt actaccattc agatcatgcg 180 gagtcttcat gggtaaatcg gggagagtct tcgcgaaaag cgtacgatca taactcacct 240 tatatatggc cacgtaatga ttatgatgga tttttagaga acgcacacga acaccatggg 300 gtgtataatc agggccgtgg tatcgatagc ggggaacggt taatgcaacc cacacaaatg 360 tctgcacagg aggatcttgg ggacgatacg ggcatccacg ttatccctac gttaaacggc 420 gatgacagac ataaaattgt aaatgtggac caacgtcaat acggtgacgt gtttaaagga 480 gatcttaatc caaaacccca aggccaaaga ctcattgagg tgtcagtgga agaaaatcac 540 ccgtttactt tacgcgcacc gattcagcgg atttatggag tccggtacac cgagacttgg 600 agctttttgc cgtcattaac ctgtacggga gacgcagcgc ccgccatcca gcatatatgt 660 ttaaaacata caacatgctt tcaagacgtg gtggtggatg tggattgcgc ggaaaatact 720 aaagaggatc agttggccga aatcagttac cgttttcaag gtaagaagga agcggaccaa 780 ccgtggattg ttgtaaacac gagcacactg tttgatgaac tcgaattaga cccccccgag 840 attgaaccgg gtgtcttgaa agtacttcgg acagaaaaac aatacttggg tgtgtacatt 900 tggaacatgc gcggctccga tggtacgtct acctacgcca cgtttttggt cacctggaaa 960 ggggatgaaa aaacaagaaa ccctacgccc gcagtaactc ctcaaccaag aggggctgag 1020 tttcatatgt ggaattacca ctcgcatgta ttttcagttg gtgatacgtt tagcttggca 1080 atgcatcttc agtataagat acatgaagcg ccatttgatt tgctgttaga gtggttgtat 1140 gtccccatcg atcctacatg tcaaccaatg cggttatatt ctacgtgttt gtatcatccc 1200 aacgcacccc aatgcctctc tcatatgaat tccggttgta catttacctc gccacattta 1260 gcccagcgtg ttgcaagcac agtgtatcaa aattgtgaac atgcagataa ctacaccgca 1320 tattgtctgg gaatatctca tatggagcct agctttggtc taatcttaca cgacgggggc 1380 accacgttaa agtttgtaga tacacccgag agtttgtcgg gattatacgt ttttgtggtg 1440 tattttaacg ggcatgttga agccgtagca tacactgttg tatccacagt agatcatttt 1500 gtaaacgcaa ttgaagagcg tggatttccg ccaacggccg gtcagccacc ggcgactact 1560 aaacccaagg aaattacccc cgtaaacccc ggaacgtcac cacttctacg atatgccgca 1620 tggaccggag ggcttgcagc agtagtactt ttatgtctcg taatattttt aatctgtacg 1680 gctaaacgaa tgagggttaa agcctatagg gtagacaagt ccccgtataa ccaaagcatg 1740 tattacgctg gccttccagt ggacgatttc gaggacgccg aagccgccga tgccgaagaa 1800 gagtttggta acgcgattgg agggagtcac gggggttcga gttacacggt gtatatagat 1860 aagacccggt ga 1872 <210> 28 <211> 2144 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Polynucleotide <400> 28 ggggaaataa gagagaaaag aagagtaaga agaaatataa gagccaccat ggggacagtt 60 aataaacctg tggtgggggt attgatgggg ttcggaatta tcacgggaac gttgcgtata 120 acgaatccgg tcagagcatc cgtcttgcga tacgatgatt ttcacatcga tgaagacaaa 180 ctggatacaa actccgtata tgagccttac taccattcag atcatgcgga gtcttcatgg 240 gtaaatcggg gagagtcttc gcgaaaagcg tacgatcata actcacctta tatatggcca 300 cgtaatgatt atgatggatt tttagagaac gcacacgaac accatggggt gtataatcag 360 ggccgtggta tcgatagcgg ggaacggtta atgcaaccca cacaaatgtc tgcacaggag 420 gatcttgggg acgatacggg catccacgtt atccctacgt taaacggcga tgacagacat 480 aaaattgtaa atgtggacca acgtcaatac ggtgacgtgt ttaaaggaga tcttaatcca 540 aaaccccaag gccaaagact cattgaggtg tcagtggaag aaaatcaccc gtttacttta 600 cgcgcaccga ttcagcggat ttatggagtc cggtacaccg agacttggag ctttttgccg 660 tcattaacct gtacgggaga cgcagcgccc gccatccagc atatatgttt aaaacataca 720 acatgctttc aagacgtggt ggtggatgtg gattgcgcgg aaaatactaa agaggatcag 780 ttggccgaaa tcagttaccg ttttcaaggt aagaaggaag cggaccaacc gtggattgtt 840 gtaaacacga gcacactgtt tgatgaactc gaattagacc cccccgagat tgaaccgggt 900 gtcttgaaag tacttcggac agaaaaacaa tacttgggtg tgtacatttg gaacatgcgc 960 ggctccgatg gtacgtctac ctacgccacg tttttggtca cctggaaagg ggatgaaaaa 1020 acaagaaacc ctacgcccgc agtaactcct caaccaagag gggctgagtt tcatatgtgg 1080 aattaccact cgcatgtatt ttcagttggt gatacgttta gcttggcaat gcatcttcag 1140 tataagatac atgaagcgcc atttgatttg ctgttagagt ggttgtatgt ccccatcgat 1200 cctacatgtc aaccaatgcg gttatattct acgtgtttgt atcatcccaa cgcaccccaa 1260 tgcctctctc atatgaattc cggttgtaca tttacctcgc cacatttagc ccagcgtgtt 1320 gcaagcacag tgtatcaaaa ttgtgaacat gcagataact acaccgcata ttgtctggga 1380 atatctcata tggagcctag ctttggtcta atcttacacg acgggggcac cacgttaaag 1440 tttgtagata cacccgagag tttgtcggga ttatacgttt ttgtggtgta ttttaacggg 1500 catgttgaag ccgtagcata cactgttgta tccacagtag atcattttgt aaacgcaatt 1560 gaagagcgtg gatttccgcc aacggccggt cagccaccgg cgactactaa acccaaggaa 1620 attacccccg taaaccccgg aacgtcacca cttctacgat atgccgcatg gaccggaggg 1680 cttgcagcag tagtactttt atgtctcgta atatttttaa tctgtacggc taaacgaatg 1740 agggttaaag cctatagggt agacaagtcc ccgtataacc aaagcatgta ttacgctggc 1800 cttccagtgg acgatttcga ggacgccgaa gccgccgatg ccgaagaaga gtttggtaac 1860 gcgattggag ggagtcacgg gggttcgagt tacacggtgt atatagataa gacccggtga 1920 tgataatagg ctggagcctc ggtggccatg cttcttgccc cttgggcctc cccccagccc 1980 ctcctcccct tcctgcaccc gtacccccgt ggtctttgaa taaagtctga gtgggcggca 2040 aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 2100 aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaat ctag 2144 <210> 29 <211> 2083 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Polynucleotide <400> 29 tcaagctttt ggaccctcgt acagaagcta atacgactca ctatagggaa ataagagaga 60 aaagaagagt aagaagaaat ataagagcca ccatggggac agttaataaa cctgtggtgg 120 gggtattgat ggggttcgga attatcacgg gaacgttgcg tataacgaat ccggtcagag 180 catccgtctt gcgatacgat gattttcaca tcgatgaaga caaactggat acaaactccg 240 tatatgagcc ttactaccat tcagatcatg cggagtcttc atgggtaaat cggggagagt 300 cttcgcgaaa agcgtacgat cataactcac cttatatatg gccacgtaat gattatgatg 360 gatttttaga gaacgcacac gaacaccatg gggtgtataa tcagggccgt ggtatcgata 420 gcggggaacg gttaatgcaa cccacacaaa tgtctgcaca ggaggatctt ggggacgata 480 cgggcatcca cgttatccct acgttaaacg gcgatgacag acataaaatt gtaaatgtgg 540 accaacgtca atacggtgac gtgtttaaag gagatcttaa tccaaaaccc caaggccaaa 600 gactcattga ggtgtcagtg gaagaaaatc acccgtttac tttacgcgca ccgattcagc 660 ggatttatgg agtccggtac accgagactt ggagcttttt gccgtcatta acctgtacgg 720 gagacgcagc gcccgccatc cagcatatat gtttaaaaca tacaacatgc tttcaagacg 780 tggtggtgga tgtggattgc gcggaaaata ctaaagagga tcagttggcc gaaatcagtt 840 accgttttca aggtaagaag gaagcggacc aaccgtggat tgttgtaaac acgagcacac 900 tgtttgatga actcgaatta gacccccccg agattgaacc gggtgtcttg aaagtacttc 960 ggacagaaaa acaatacttg ggtgtgtaca tttggaacat gcgcggctcc gatggtacgt 1020 ctacctacgc cacgtttttg gtcacctgga aaggggatga aaaaacaaga aaccctacgc 1080 ccgcagtaac tcctcaacca agaggggctg agtttcatat gtggaattac cactcgcatg 1140 tattttcagt tggtgatacg tttagcttgg caatgcatct tcagtataag atacatgaag 1200 cgccatttga tttgctgtta gagtggttgt atgtccccat cgatcctaca tgtcaaccaa 1260 tgcggttata ttctacgtgt ttgtatcatc ccaacgcacc ccaatgcctc tctcatatga 1320 attccggttg tacatttacc tcgccacatt tagcccagcg tgttgcaagc acagtgtatc 1380 aaaattgtga acatgcagat aactacaccg catattgtct gggaatatct catatggagc 1440 ctagctttgg tctaatctta cacgacgggg gcaccacgtt aaagtttgta gatacacccg 1500 agagtttgtc gggattatac gtttttgtgg tgtattttaa cgggcatgtt gaagccgtag 1560 catacactgt tgtatccaca gtagatcatt ttgtaaacgc aattgaagag cgtggatttc 1620 cgccaacggc cggtcagcca ccggcgacta ctaaacccaa ggaaattacc cccgtaaacc 1680 ccggaacgtc accacttcta cgatatgccg catggaccgg agggcttgca gcagtagtac 1740 ttttatgtct cgtaatattt ttaatctgta cggctaaacg aatgagggtt aaagcctata 1800 gggtagacaa gtccccgtat aaccaaagca tgtatggcgc tggccttcca gtggacgatt 1860 tcgaggacgc cgaagccgcc gatgccgaag aagagtttgg taacgcgatt ggagggagtc 1920 acgggggttc gagttacacg gtgtatatag ataagacccg gtgatgataa taggctggag 1980 cctcggtggc catgcttctt gccccttggg cctcccccca gcccctcctc cccttcctgc 2040 acccgtaccc ccgtggtctt tgaataaagt ctgagtgggc ggc 2083 <210> 30 <211> 623 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Polypeptide <400> 30 Met Gly Thr Val Asn Lys Pro Val Val Gly Val Leu Met Gly Phe Gly 1 5 10 15 Ile Ile Thr Gly Thr Leu Arg Ile Thr Asn Pro Val Arg Ala Ser Val 20 25 30 Leu Arg Tyr Asp Asp Phe His Ile Asp Glu Asp Lys Leu Asp Thr Asn 35 40 45 Ser Val Tyr Glu Pro Tyr Tyr His Ser Asp His Ala Glu Ser Ser Trp 50 55 60 Val Asn Arg Gly Glu Ser Ser Arg Lys Ala Tyr Asp His Asn Ser Pro 65 70 75 80 Tyr Ile Trp Pro Arg Asn Asp Tyr Asp Gly Phe Leu Glu Asn Ala His 85 90 95 Glu His His Gly Val Tyr Asn Gln Gly Arg Gly Ile Asp Ser Gly Glu 100 105 110 Arg Leu Met Gln Pro Thr Gln Met Ser Ala Gln Glu Asp Leu Gly Asp 115 120 125 Asp Thr Gly Ile His Val Ile Pro Thr Leu Asn Gly Asp Asp Arg His 130 135 140 Lys Ile Val Asn Val Asp Gln Arg Gln Tyr Gly Asp Val Phe Lys Gly 145 150 155 160 Asp Leu Asn Pro Lys Pro Gln Gly Gln Arg Leu Ile Glu Val Ser Val 165 170 175 Glu Glu Asn His Pro Phe Thr Leu Arg Ala Pro Ile Gln Arg Ile Tyr 180 185 190 Gly Val Arg Tyr Thr Glu Thr Trp Ser Phe Leu Pro Ser Leu Thr Cys 195 200 205 Thr Gly Asp Ala Ala Pro Ala Ile Gln His Ile Cys Leu Lys His Thr 210 215 220 Thr Cys Phe Gln Asp Val Val Val Asp Val Asp Cys Ala Glu Asn Thr 225 230 235 240 Lys Glu Asp Gln Leu Ala Glu Ile Ser Tyr Arg Phe Gln Gly Lys Lys 245 250 255 Glu Ala Asp Gln Pro Trp Ile Val Val Asn Thr Ser Thr Leu Phe Asp 260 265 270 Glu Leu Glu Leu Asp Pro Pro Glu Ile Glu Pro Gly Val Leu Lys Val 275 280 285 Leu Arg Thr Glu Lys Gln Tyr Leu Gly Val Tyr Ile Trp Asn Met Arg 290 295 300 Gly Ser Asp Gly Thr Ser Thr Tyr Ala Thr Phe Leu Val Thr Trp Lys 305 310 315 320 Gly Asp Glu Lys Thr Arg Asn Pro Thr Pro Ala Val Thr Pro Gln Pro 325 330 335 Arg Gly Ala Glu Phe His Met Trp Asn Tyr His Ser His Val Phe Ser 340 345 350 Val Gly Asp Thr Phe Ser Leu Ala Met His Leu Gln Tyr Lys Ile His 355 360 365 Glu Ala Pro Phe Asp Leu Leu Leu Glu Trp Leu Tyr Val Pro Ile Asp 370 375 380 Pro Thr Cys Gln Pro Met Arg Leu Tyr Ser Thr Cys Leu Tyr His Pro 385 390 395 400 Asn Ala Pro Gln Cys Leu Ser His Met Asn Ser Gly Cys Thr Phe Thr 405 410 415 Ser Pro His Leu Ala Gln Arg Val Ala Ser Thr Val Tyr Gln Asn Cys 420 425 430 Glu His Ala Asp Asn Tyr Thr Ala Tyr Cys Leu Gly Ile Ser His Met 435 440 445 Glu Pro Ser Phe Gly Leu Ile Leu His Asp Gly Gly Thr Thr Leu Lys 450 455 460 Phe Val Asp Thr Pro Glu Ser Leu Ser Gly Leu Tyr Val Phe Val Val 465 470 475 480 Tyr Phe Asn Gly His Val Glu Ala Val Ala Tyr Thr Val Val Ser Thr 485 490 495 Val Asp His Phe Val Asn Ala Ile Glu Glu Arg Gly Phe Pro Pro Thr 500 505 510 Ala Gly Gln Pro Pro Ala Thr Thr Lys Pro Lys Glu Ile Thr Pro Val 515 520 525 Asn Pro Gly Thr Ser Pro Leu Leu Arg Tyr Ala Ala Trp Thr Gly Gly 530 535 540 Leu Ala Ala Val Val Leu Leu Cys Leu Val Ile Phe Leu Ile Cys Thr 545 550 555 560 Ala Lys Arg Met Arg Val Lys Ala Tyr Arg Val Asp Lys Ser Pro Tyr 565 570 575 Asn Gln Ser Met Tyr Gly Ala Gly Leu Pro Val Asp Asp Phe Glu Asp 580 585 590 Ala Glu Ala Ala Asp Ala Glu Glu Glu Phe Gly Asn Ala Ile Gly Gly 595 600 605 Ser His Gly Gly Ser Ser Tyr Thr Val Tyr Ile Asp Lys Thr Arg 610 615 620 <210> 31 <211> 1872 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Polynucleotide <400> 31 atggggacag ttaataaacc tgtggtgggg gtattgatgg ggttcggaat tatcacggga 60 acgttgcgta taacgaatcc ggtcagagca tccgtcttgc gatacgatga ttttcacatc 120 gatgaagaca aactggatac aaactccgta tatgagcctt actaccattc agatcatgcg 180 gagtcttcat gggtaaatcg gggagagtct tcgcgaaaag cgtacgatca taactcacct 240 tatatatggc cacgtaatga ttatgatgga tttttagaga acgcacacga acaccatggg 300 gtgtataatc agggccgtgg tatcgatagc ggggaacggt taatgcaacc cacacaaatg 360 tctgcacagg aggatcttgg ggacgatacg ggcatccacg ttatccctac gttaaacggc 420 gatgacagac ataaaattgt aaatgtggac caacgtcaat acggtgacgt gtttaaagga 480 gatcttaatc caaaacccca aggccaaaga ctcattgagg tgtcagtgga agaaaatcac 540 ccgtttactt tacgcgcacc gattcagcgg atttatggag tccggtacac cgagacttgg 600 agctttttgc cgtcattaac ctgtacggga gacgcagcgc ccgccatcca gcatatatgt 660 ttaaaacata caacatgctt tcaagacgtg gtggtggatg tggattgcgc ggaaaatact 720 aaagaggatc agttggccga aatcagttac cgttttcaag gtaagaagga agcggaccaa 780 ccgtggattg ttgtaaacac gagcacactg tttgatgaac tcgaattaga cccccccgag 840 attgaaccgg gtgtcttgaa agtacttcgg acagaaaaac aatacttggg tgtgtacatt 900 tggaacatgc gcggctccga tggtacgtct acctacgcca cgtttttggt cacctggaaa 960 ggggatgaaa aaacaagaaa ccctacgccc gcagtaactc ctcaaccaag aggggctgag 1020 tttcatatgt ggaattacca ctcgcatgta ttttcagttg gtgatacgtt tagcttggca 1080 atgcatcttc agtataagat acatgaagcg ccatttgatt tgctgttaga gtggttgtat 1140 gtccccatcg atcctacatg tcaaccaatg cggttatatt ctacgtgttt gtatcatccc 1200 aacgcacccc aatgcctctc tcatatgaat tccggttgta catttacctc gccacattta 1260 gcccagcgtg ttgcaagcac agtgtatcaa aattgtgaac atgcagataa ctacaccgca 1320 tattgtctgg gaatatctca tatggagcct agctttggtc taatcttaca cgacgggggc 1380 accacgttaa agtttgtaga tacacccgag agtttgtcgg gattatacgt ttttgtggtg 1440 tattttaacg ggcatgttga agccgtagca tacactgttg tatccacagt agatcatttt 1500 gtaaacgcaa ttgaagagcg tggatttccg ccaacggccg gtcagccacc ggcgactact 1560 aaacccaagg aaattacccc cgtaaacccc ggaacgtcac cacttctacg atatgccgca 1620 tggaccggag ggcttgcagc agtagtactt ttatgtctcg taatattttt aatctgtacg 1680 gctaaacgaa tgagggttaa agcctatagg gtagacaagt ccccgtataa ccaaagcatg 1740 tatggcgctg gccttccagt ggacgatttc gaggacgccg aagccgccga tgccgaagaa 1800 gagtttggta acgcgattgg agggagtcac gggggttcga gttacacggt gtatatagat 1860 aagacccggt ga 1872 <210> 32 <211> 2144 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Polynucleotide <400> 32 ggggaaataa gagagaaaag aagagtaaga agaaatataa gagccaccat ggggacagtt 60 aataaacctg tggtgggggt attgatgggg ttcggaatta tcacgggaac gttgcgtata 120 acgaatccgg tcagagcatc cgtcttgcga tacgatgatt ttcacatcga tgaagacaaa 180 ctggatacaa actccgtata tgagccttac taccattcag atcatgcgga gtcttcatgg 240 gtaaatcggg gagagtcttc gcgaaaagcg tacgatcata actcacctta tatatggcca 300 cgtaatgatt atgatggatt tttagagaac gcacacgaac accatggggt gtataatcag 360 ggccgtggta tcgatagcgg ggaacggtta atgcaaccca cacaaatgtc tgcacaggag 420 gatcttgggg acgatacggg catccacgtt atccctacgt taaacggcga tgacagacat 480 aaaattgtaa atgtggacca acgtcaatac ggtgacgtgt ttaaaggaga tcttaatcca 540 aaaccccaag gccaaagact cattgaggtg tcagtggaag aaaatcaccc gtttacttta 600 cgcgcaccga ttcagcggat ttatggagtc cggtacaccg agacttggag ctttttgccg 660 tcattaacct gtacgggaga cgcagcgccc gccatccagc atatatgttt aaaacataca 720 acatgctttc aagacgtggt ggtggatgtg gattgcgcgg aaaatactaa agaggatcag 780 ttggccgaaa tcagttaccg ttttcaaggt aagaaggaag cggaccaacc gtggattgtt 840 gtaaacacga gcacactgtt tgatgaactc gaattagacc cccccgagat tgaaccgggt 900 gtcttgaaag tacttcggac agaaaaacaa tacttgggtg tgtacatttg gaacatgcgc 960 ggctccgatg gtacgtctac ctacgccacg tttttggtca cctggaaagg ggatgaaaaa 1020 acaagaaacc ctacgcccgc agtaactcct caaccaagag gggctgagtt tcatatgtgg 1080 aattaccact cgcatgtatt ttcagttggt gatacgttta gcttggcaat gcatcttcag 1140 tataagatac atgaagcgcc atttgatttg ctgttagagt ggttgtatgt ccccatcgat 1200 cctacatgtc aaccaatgcg gttatattct acgtgtttgt atcatcccaa cgcaccccaa 1260 tgcctctctc atatgaattc cggttgtaca tttacctcgc cacatttagc ccagcgtgtt 1320 gcaagcacag tgtatcaaaa ttgtgaacat gcagataact acaccgcata ttgtctggga 1380 atatctcata tggagcctag ctttggtcta atcttacacg acgggggcac cacgttaaag 1440 tttgtagata cacccgagag tttgtcggga ttatacgttt ttgtggtgta ttttaacggg 1500 catgttgaag ccgtagcata cactgttgta tccacagtag atcattttgt aaacgcaatt 1560 gaagagcgtg gatttccgcc aacggccggt cagccaccgg cgactactaa acccaaggaa 1620 attacccccg taaaccccgg aacgtcacca cttctacgat atgccgcatg gaccggaggg 1680 cttgcagcag tagtactttt atgtctcgta atatttttaa tctgtacggc taaacgaatg 1740 agggttaaag cctatagggt agacaagtcc ccgtataacc aaagcatgta tggcgctggc 1800 cttccagtgg acgatttcga ggacgccgaa gccgccgatg ccgaagaaga gtttggtaac 1860 gcgattggag ggagtcacgg gggttcgagt tacacggtgt atatagataa gacccggtga 1920 tgataatagg ctggagcctc ggtggccatg cttcttgccc cttgggcctc cccccagccc 1980 ctcctcccct tcctgcaccc gtacccccgt ggtctttgaa taaagtctga gtgggcggca 2040 aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 2100 aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaat ctag 2144 <210> 33 <211> 1933 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Polynucleotide <400> 33 tcaagctttt ggaccctcgt acagaagcta atacgactca ctatagggaa ataagagaga 60 aaagaagagt aagaagaaat ataagagcca ccatggggac agttaataaa cctgtggtgg 120 gggtattgat ggggttcgga attatcacgg gaacgttgcg tataacgaat ccggtcagag 180 catccgtctt gcgatacgat gattttcaca tcgatgaaga caaactggat acaaactccg 240 tatatgagcc ttactaccat tcagatcatg cggagtcttc atgggtaaat cggggagagt 300 cttcgcgaaa agcgtacgat cataactcac cttatatatg gccacgtaat gattatgatg 360 gatttttaga gaacgcacac gaacaccatg gggtgtataa tcagggccgt ggtatcgata 420 gcggggaacg gttaatgcaa cccacacaaa tgtctgcaca ggaggatctt ggggacgata 480 cgggcatcca cgttatccct acgttaaacg gcgatgacag acataaaatt gtaaatgtgg 540 accaacgtca atacggtgac gtgtttaaag gagatcttaa tccaaaaccc caaggccaaa 600 gactcattga ggtgtcagtg gaagaaaatc acccgtttac tttacgcgca ccgattcagc 660 ggatttatgg agtccggtac accgagactt ggagcttttt gccgtcatta acctgtacgg 720 gagacgcagc gcccgccatc cagcatatat gtttaaaaca tacaacatgc tttcaagacg 780 tggtggtgga tgtggattgc gcggaaaata ctaaagagga tcagttggcc gaaatcagtt 840 accgttttca aggtaagaag gaagcggacc aaccgtggat tgttgtaaac acgagcacac 900 tgtttgatga actcgaatta gacccccccg agattgaacc gggtgtcttg aaagtacttc 960 ggacagaaaa acaatacttg ggtgtgtaca tttggaacat gcgcggctcc gatggtacgt 1020 ctacctacgc cacgtttttg gtcacctgga aaggggatga aaaaacaaga aaccctacgc 1080 ccgcagtaac tcctcaacca agaggggctg agtttcatat gtggaattac cactcgcatg 1140 tattttcagt tggtgatacg tttagcttgg caatgcatct tcagtataag atacatgaag 1200 cgccatttga tttgctgtta gagtggttgt atgtccccat cgatcctaca tgtcaaccaa 1260 tgcggttata ttctacgtgt ttgtatcatc ccaacgcacc ccaatgcctc tctcatatga 1320 attccggttg tacatttacc tcgccacatt tagcccagcg tgttgcaagc acagtgtatc 1380 aaaattgtga acatgcagat aactacaccg catattgtct gggaatatct catatggagc 1440 ctagctttgg tctaatctta cacgacgggg gcaccacgtt aaagtttgta gatacacccg 1500 agagtttgtc gggattatac gtttttgtgg tgtattttaa cgggcatgtt gaagccgtag 1560 catacactgt tgtatccaca gtagatcatt ttgtaaacgc aattgaagag cgtggatttc 1620 cgccaacggc cggtcagcca ccggcgacta ctaaacccaa ggaaattacc cccgtaaacc 1680 ccggaacgtc accacttcta cgatatgccg catggaccgg agggcttgca gcagtagtac 1740 ttttatgtct cgtaatattt ttaatctgta cggctaaacg aatgagggtt aaagcctata 1800 gggtagacaa gtgatgataa taggctggag cctcggtggc catgcttctt gccccttggg 1860 cctcccccca gcccctcctc cccttcctgc acccgtaccc ccgtggtctt tgaataaagt 1920 ctgagtgggc ggc 1933 <210> 34 <211> 573 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Polypeptide <400> 34 Met Gly Thr Val Asn Lys Pro Val Val Gly Val Leu Met Gly Phe Gly 1 5 10 15 Ile Ile Thr Gly Thr Leu Arg Ile Thr Asn Pro Val Arg Ala Ser Val 20 25 30 Leu Arg Tyr Asp Asp Phe His Ile Asp Glu Asp Lys Leu Asp Thr Asn 35 40 45 Ser Val Tyr Glu Pro Tyr Tyr His Ser Asp His Ala Glu Ser Ser Trp 50 55 60 Val Asn Arg Gly Glu Ser Ser Arg Lys Ala Tyr Asp His Asn Ser Pro 65 70 75 80 Tyr Ile Trp Pro Arg Asn Asp Tyr Asp Gly Phe Leu Glu Asn Ala His 85 90 95 Glu His His Gly Val Tyr Asn Gln Gly Arg Gly Ile Asp Ser Gly Glu 100 105 110 Arg Leu Met Gln Pro Thr Gln Met Ser Ala Gln Glu Asp Leu Gly Asp 115 120 125 Asp Thr Gly Ile His Val Ile Pro Thr Leu Asn Gly Asp Asp Arg His 130 135 140 Lys Ile Val Asn Val Asp Gln Arg Gln Tyr Gly Asp Val Phe Lys Gly 145 150 155 160 Asp Leu Asn Pro Lys Pro Gln Gly Gln Arg Leu Ile Glu Val Ser Val 165 170 175 Glu Glu Asn His Pro Phe Thr Leu Arg Ala Pro Ile Gln Arg Ile Tyr 180 185 190 Gly Val Arg Tyr Thr Glu Thr Trp Ser Phe Leu Pro Ser Leu Thr Cys 195 200 205 Thr Gly Asp Ala Ala Pro Ala Ile Gln His Ile Cys Leu Lys His Thr 210 215 220 Thr Cys Phe Gln Asp Val Val Val Asp Val Asp Cys Ala Glu Asn Thr 225 230 235 240 Lys Glu Asp Gln Leu Ala Glu Ile Ser Tyr Arg Phe Gln Gly Lys Lys 245 250 255 Glu Ala Asp Gln Pro Trp Ile Val Val Asn Thr Ser Thr Leu Phe Asp 260 265 270 Glu Leu Glu Leu Asp Pro Pro Glu Ile Glu Pro Gly Val Leu Lys Val 275 280 285 Leu Arg Thr Glu Lys Gln Tyr Leu Gly Val Tyr Ile Trp Asn Met Arg 290 295 300 Gly Ser Asp Gly Thr Ser Thr Tyr Ala Thr Phe Leu Val Thr Trp Lys 305 310 315 320 Gly Asp Glu Lys Thr Arg Asn Pro Thr Pro Ala Val Thr Pro Gln Pro 325 330 335 Arg Gly Ala Glu Phe His Met Trp Asn Tyr His Ser His Val Phe Ser 340 345 350 Val Gly Asp Thr Phe Ser Leu Ala Met His Leu Gln Tyr Lys Ile His 355 360 365 Glu Ala Pro Phe Asp Leu Leu Leu Glu Trp Leu Tyr Val Pro Ile Asp 370 375 380 Pro Thr Cys Gln Pro Met Arg Leu Tyr Ser Thr Cys Leu Tyr His Pro 385 390 395 400 Asn Ala Pro Gln Cys Leu Ser His Met Asn Ser Gly Cys Thr Phe Thr 405 410 415 Ser Pro His Leu Ala Gln Arg Val Ala Ser Thr Val Tyr Gln Asn Cys 420 425 430 Glu His Ala Asp Asn Tyr Thr Ala Tyr Cys Leu Gly Ile Ser His Met 435 440 445 Glu Pro Ser Phe Gly Leu Ile Leu His Asp Gly Gly Thr Thr Leu Lys 450 455 460 Phe Val Asp Thr Pro Glu Ser Leu Ser Gly Leu Tyr Val Phe Val Val 465 470 475 480 Tyr Phe Asn Gly His Val Glu Ala Val Ala Tyr Thr Val Val Ser Thr 485 490 495 Val Asp His Phe Val Asn Ala Ile Glu Glu Arg Gly Phe Pro Pro Thr 500 505 510 Ala Gly Gln Pro Pro Ala Thr Thr Lys Pro Lys Glu Ile Thr Pro Val 515 520 525 Asn Pro Gly Thr Ser Pro Leu Leu Arg Tyr Ala Ala Trp Thr Gly Gly 530 535 540 Leu Ala Ala Val Val Leu Leu Cys Leu Val Ile Phe Leu Ile Cys Thr 545 550 555 560 Ala Lys Arg Met Arg Val Lys Ala Tyr Arg Val Asp Lys 565 570 <210> 35 <211> 1722 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Polynucleotide <400> 35 atggggacag ttaataaacc tgtggtgggg gtattgatgg ggttcggaat tatcacggga 60 acgttgcgta taacgaatcc ggtcagagca tccgtcttgc gatacgatga ttttcacatc 120 gatgaagaca aactggatac aaactccgta tatgagcctt actaccattc agatcatgcg 180 gagtcttcat gggtaaatcg gggagagtct tcgcgaaaag cgtacgatca taactcacct 240 tatatatggc cacgtaatga ttatgatgga tttttagaga acgcacacga acaccatggg 300 gtgtataatc agggccgtgg tatcgatagc ggggaacggt taatgcaacc cacacaaatg 360 tctgcacagg aggatcttgg ggacgatacg ggcatccacg ttatccctac gttaaacggc 420 gatgacagac ataaaattgt aaatgtggac caacgtcaat acggtgacgt gtttaaagga 480 gatcttaatc caaaacccca aggccaaaga ctcattgagg tgtcagtgga agaaaatcac 540 ccgtttactt tacgcgcacc gattcagcgg atttatggag tccggtacac cgagacttgg 600 agctttttgc cgtcattaac ctgtacggga gacgcagcgc ccgccatcca gcatatatgt 660 ttaaaacata caacatgctt tcaagacgtg gtggtggatg tggattgcgc ggaaaatact 720 aaagaggatc agttggccga aatcagttac cgttttcaag gtaagaagga agcggaccaa 780 ccgtggattg ttgtaaacac gagcacactg tttgatgaac tcgaattaga cccccccgag 840 attgaaccgg gtgtcttgaa agtacttcgg acagaaaaac aatacttggg tgtgtacatt 900 tggaacatgc gcggctccga tggtacgtct acctacgcca cgtttttggt cacctggaaa 960 ggggatgaaa aaacaagaaa ccctacgccc gcagtaactc ctcaaccaag aggggctgag 1020 tttcatatgt ggaattacca ctcgcatgta ttttcagttg gtgatacgtt tagcttggca 1080 atgcatcttc agtataagat acatgaagcg ccatttgatt tgctgttaga gtggttgtat 1140 gtccccatcg atcctacatg tcaaccaatg cggttatatt ctacgtgttt gtatcatccc 1200 aacgcacccc aatgcctctc tcatatgaat tccggttgta catttacctc gccacattta 1260 gcccagcgtg ttgcaagcac agtgtatcaa aattgtgaac atgcagataa ctacaccgca 1320 tattgtctgg gaatatctca tatggagcct agctttggtc taatcttaca cgacgggggc 1380 accacgttaa agtttgtaga tacacccgag agtttgtcgg gattatacgt ttttgtggtg 1440 tattttaacg ggcatgttga agccgtagca tacactgttg tatccacagt agatcatttt 1500 gtaaacgcaa ttgaagagcg tggatttccg ccaacggccg gtcagccacc ggcgactact 1560 aaacccaagg aaattacccc cgtaaacccc ggaacgtcac cacttctacg atatgccgca 1620 tggaccggag ggcttgcagc agtagtactt ttatgtctcg taatattttt aatctgtacg 1680 gctaaacgaa tgagggttaa agcctatagg gtagacaagt ga 1722 <210> 36 <211> 1994 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Polynucleotide <400> 36 ggggaaataa gagagaaaag aagagtaaga agaaatataa gagccaccat ggggacagtt 60 aataaacctg tggtgggggt attgatgggg ttcggaatta tcacgggaac gttgcgtata 120 acgaatccgg tcagagcatc cgtcttgcga tacgatgatt ttcacatcga tgaagacaaa 180 ctggatacaa actccgtata tgagccttac taccattcag atcatgcgga gtcttcatgg 240 gtaaatcggg gagagtcttc gcgaaaagcg tacgatcata actcacctta tatatggcca 300 cgtaatgatt atgatggatt tttagagaac gcacacgaac accatggggt gtataatcag 360 ggccgtggta tcgatagcgg ggaacggtta atgcaaccca cacaaatgtc tgcacaggag 420 gatcttgggg acgatacggg catccacgtt atccctacgt taaacggcga tgacagacat 480 aaaattgtaa atgtggacca acgtcaatac ggtgacgtgt ttaaaggaga tcttaatcca 540 aaaccccaag gccaaagact cattgaggtg tcagtggaag aaaatcaccc gtttacttta 600 cgcgcaccga ttcagcggat ttatggagtc cggtacaccg agacttggag ctttttgccg 660 tcattaacct gtacgggaga cgcagcgccc gccatccagc atatatgttt aaaacataca 720 acatgctttc aagacgtggt ggtggatgtg gattgcgcgg aaaatactaa agaggatcag 780 ttggccgaaa tcagttaccg ttttcaaggt aagaaggaag cggaccaacc gtggattgtt 840 gtaaacacga gcacactgtt tgatgaactc gaattagacc cccccgagat tgaaccgggt 900 gtcttgaaag tacttcggac agaaaaacaa tacttgggtg tgtacatttg gaacatgcgc 960 ggctccgatg gtacgtctac ctacgccacg tttttggtca cctggaaagg ggatgaaaaa 1020 acaagaaacc ctacgcccgc agtaactcct caaccaagag gggctgagtt tcatatgtgg 1080 aattaccact cgcatgtatt ttcagttggt gatacgttta gcttggcaat gcatcttcag 1140 tataagatac atgaagcgcc atttgatttg ctgttagagt ggttgtatgt ccccatcgat 1200 cctacatgtc aaccaatgcg gttatattct acgtgtttgt atcatcccaa cgcaccccaa 1260 tgcctctctc atatgaattc cggttgtaca tttacctcgc cacatttagc ccagcgtgtt 1320 gcaagcacag tgtatcaaaa ttgtgaacat gcagataact acaccgcata ttgtctggga 1380 atatctcata tggagcctag ctttggtcta atcttacacg acgggggcac cacgttaaag 1440 tttgtagata cacccgagag tttgtcggga ttatacgttt ttgtggtgta ttttaacggg 1500 catgttgaag ccgtagcata cactgttgta tccacagtag atcattttgt aaacgcaatt 1560 gaagagcgtg gatttccgcc aacggccggt cagccaccgg cgactactaa acccaaggaa 1620 attacccccg taaaccccgg aacgtcacca cttctacgat atgccgcatg gaccggaggg 1680 cttgcagcag tagtactttt atgtctcgta atatttttaa tctgtacggc taaacgaatg 1740 agggttaaag cctatagggt agacaagtga tgataatagg ctggagcctc ggtggccatg 1800 cttcttgccc cttgggcctc cccccagccc ctcctcccct tcctgcaccc gtacccccgt 1860 ggtctttgaa taaagtctga gtgggcggca aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 1920 aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 1980 aaaaaaaaat ctag 1994 <210> 37 <211> 1933 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Polynucleotide <400> 37 tcaagctttt ggaccctcgt acagaagcta atacgactca ctatagggaa ataagagaga 60 aaagaagagt aagaagaaat ataagagcca ccatggggac agttaataaa cctgtggtgg 120 gggtattgat ggggttcgga attatcacgg gaacgttgcg tataacgaat ccggtcagag 180 catccgtctt gcgatacgat gattttcaca tcgatgaaga caaactggat acaaactccg 240 tatatgagcc ttactaccat tcagatcatg cggagtcttc atgggtaaat cggggagagt 300 cttcgcgaaa agcgtacgat cataactcac cttatatatg gccacgtaat gattatgatg 360 gatttttaga gaacgcacac gaacaccatg gggtgtataa tcagggccgt ggtatcgata 420 gcggggaacg gttaatgcaa cccacacaaa tgtctgcaca ggaggatctt ggggacgata 480 cgggcatcca cgttatccct acgttaaacg gcgatgacag acataaaatt gtaaatgtgg 540 accaacgtca atacggtgac gtgtttaaag gagatcttaa tccaaaaccc caaggccaaa 600 gactcattga ggtgtcagtg gaagaaaatc acccgtttac tttacgcgca ccgattcagc 660 ggatttatgg agtccggtac accgagactt ggagcttttt gccgtcatta acctgtacgg 720 gagacgcagc gcccgccatc cagcatatat gtttaaaaca tacaacatgc tttcaagacg 780 tggtggtgga tgtggattgc gcggaaaata ctaaagagga tcagttggcc gaaatcagtt 840 accgttttca aggtaagaag gaagcggacc aaccgtggat tgttgtaaac acgagcacac 900 tgtttgatga actcgaatta gacccccccg agattgaacc gggtgtcttg aaagtacttc 960 ggacagaaaa acaatacttg ggtgtgtaca tttggaacat gcgcggctcc gatggtacgt 1020 ctacctacgc cacgtttttg gtcacctgga aaggggatga aaaaacaaga aaccctacgc 1080 ccgcagtaac tcctcaacca agaggggctg agtttcatat gtggaattac cactcgcatg 1140 tattttcagt tggtgatacg tttagcttgg caatgcatct tcagtataag atacatgaag 1200 cgccatttga tttgctgtta gagtggttgt atgtccccat cgatcctaca tgtcaaccaa 1260 tgcggttata ttctacgtgt ttgtatcatc ccaacgcacc ccaatgcctc tctcatatga 1320 attccggttg tacatttacc tcgccacatt tagcccagcg tgttgcaagc acagtgtatc 1380 aaaattgtga acatgcagat aactacaccg catattgtct gggaatatct catatggagc 1440 ctagctttgg tctaatctta cacgacgggg gcaccacgtt aaagtttgta gatacacccg 1500 agagtttgtc gggattatac gtttttgtgg tgtattttaa cgggcatgtt gaagccgtag 1560 catacactgt tgtatccaca gtagatcatt ttgtaaacgc aattgaagag cgtggatttc 1620 cgccaacggc cggtcagcca ccggcgacta ctaaacccaa ggaaattacc cccgtaaacc 1680 ccggaacgtc accacttcta cgatatgccg catggaccgg agggcttgca gcagtagtac 1740 ttttatgtct cgtaatattt ttaatctgta cggctaaacg aatgagggtt aaagccgcca 1800 gggtagacaa gtgatgataa taggctggag cctcggtggc catgcttctt gccccttggg 1860 cctcccccca gcccctcctc cccttcctgc acccgtaccc ccgtggtctt tgaataaagt 1920 ctgagtgggc ggc 1933 <210> 38 <211> 573 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Polypeptide <400> 38 Met Gly Thr Val Asn Lys Pro Val Val Gly Val Leu Met Gly Phe Gly 1 5 10 15 Ile Ile Thr Gly Thr Leu Arg Ile Thr Asn Pro Val Arg Ala Ser Val 20 25 30 Leu Arg Tyr Asp Asp Phe His Ile Asp Glu Asp Lys Leu Asp Thr Asn 35 40 45 Ser Val Tyr Glu Pro Tyr Tyr His Ser Asp His Ala Glu Ser Ser Trp 50 55 60 Val Asn Arg Gly Glu Ser Ser Arg Lys Ala Tyr Asp His Asn Ser Pro 65 70 75 80 Tyr Ile Trp Pro Arg Asn Asp Tyr Asp Gly Phe Leu Glu Asn Ala His 85 90 95 Glu His His Gly Val Tyr Asn Gln Gly Arg Gly Ile Asp Ser Gly Glu 100 105 110 Arg Leu Met Gln Pro Thr Gln Met Ser Ala Gln Glu Asp Leu Gly Asp 115 120 125 Asp Thr Gly Ile His Val Ile Pro Thr Leu Asn Gly Asp Asp Arg His 130 135 140 Lys Ile Val Asn Val Asp Gln Arg Gln Tyr Gly Asp Val Phe Lys Gly 145 150 155 160 Asp Leu Asn Pro Lys Pro Gln Gly Gln Arg Leu Ile Glu Val Ser Val 165 170 175 Glu Glu Asn His Pro Phe Thr Leu Arg Ala Pro Ile Gln Arg Ile Tyr 180 185 190 Gly Val Arg Tyr Thr Glu Thr Trp Ser Phe Leu Pro Ser Leu Thr Cys 195 200 205 Thr Gly Asp Ala Ala Pro Ala Ile Gln His Ile Cys Leu Lys His Thr 210 215 220 Thr Cys Phe Gln Asp Val Val Val Asp Val Asp Cys Ala Glu Asn Thr 225 230 235 240 Lys Glu Asp Gln Leu Ala Glu Ile Ser Tyr Arg Phe Gln Gly Lys Lys 245 250 255 Glu Ala Asp Gln Pro Trp Ile Val Val Asn Thr Ser Thr Leu Phe Asp 260 265 270 Glu Leu Glu Leu Asp Pro Pro Glu Ile Glu Pro Gly Val Leu Lys Val 275 280 285 Leu Arg Thr Glu Lys Gln Tyr Leu Gly Val Tyr Ile Trp Asn Met Arg 290 295 300 Gly Ser Asp Gly Thr Ser Thr Tyr Ala Thr Phe Leu Val Thr Trp Lys 305 310 315 320 Gly Asp Glu Lys Thr Arg Asn Pro Thr Pro Ala Val Thr Pro Gln Pro 325 330 335 Arg Gly Ala Glu Phe His Met Trp Asn Tyr His Ser His Val Phe Ser 340 345 350 Val Gly Asp Thr Phe Ser Leu Ala Met His Leu Gln Tyr Lys Ile His 355 360 365 Glu Ala Pro Phe Asp Leu Leu Leu Glu Trp Leu Tyr Val Pro Ile Asp 370 375 380 Pro Thr Cys Gln Pro Met Arg Leu Tyr Ser Thr Cys Leu Tyr His Pro 385 390 395 400 Asn Ala Pro Gln Cys Leu Ser His Met Asn Ser Gly Cys Thr Phe Thr 405 410 415 Ser Pro His Leu Ala Gln Arg Val Ala Ser Thr Val Tyr Gln Asn Cys 420 425 430 Glu His Ala Asp Asn Tyr Thr Ala Tyr Cys Leu Gly Ile Ser His Met 435 440 445 Glu Pro Ser Phe Gly Leu Ile Leu His Asp Gly Gly Thr Thr Leu Lys 450 455 460 Phe Val Asp Thr Pro Glu Ser Leu Ser Gly Leu Tyr Val Phe Val Val 465 470 475 480 Tyr Phe Asn Gly His Val Glu Ala Val Ala Tyr Thr Val Val Ser Thr 485 490 495 Val Asp His Phe Val Asn Ala Ile Glu Glu Arg Gly Phe Pro Pro Thr 500 505 510 Ala Gly Gln Pro Pro Ala Thr Thr Lys Pro Lys Glu Ile Thr Pro Val 515 520 525 Asn Pro Gly Thr Ser Pro Leu Leu Arg Tyr Ala Ala Trp Thr Gly Gly 530 535 540 Leu Ala Ala Val Val Leu Leu Cys Leu Val Ile Phe Leu Ile Cys Thr 545 550 555 560 Ala Lys Arg Met Arg Val Lys Ala Ala Arg Val Asp Lys 565 570 <210> 39 <211> 1722 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Polynucleotide <400> 39 atggggacag ttaataaacc tgtggtgggg gtattgatgg ggttcggaat tatcacggga 60 acgttgcgta taacgaatcc ggtcagagca tccgtcttgc gatacgatga ttttcacatc 120 gatgaagaca aactggatac aaactccgta tatgagcctt actaccattc agatcatgcg 180 gagtcttcat gggtaaatcg gggagagtct tcgcgaaaag cgtacgatca taactcacct 240 tatatatggc cacgtaatga ttatgatgga tttttagaga acgcacacga acaccatggg 300 gtgtataatc agggccgtgg tatcgatagc ggggaacggt taatgcaacc cacacaaatg 360 tctgcacagg aggatcttgg ggacgatacg ggcatccacg ttatccctac gttaaacggc 420 gatgacagac ataaaattgt aaatgtggac caacgtcaat acggtgacgt gtttaaagga 480 gatcttaatc caaaacccca aggccaaaga ctcattgagg tgtcagtgga agaaaatcac 540 ccgtttactt tacgcgcacc gattcagcgg atttatggag tccggtacac cgagacttgg 600 agctttttgc cgtcattaac ctgtacggga gacgcagcgc ccgccatcca gcatatatgt 660 ttaaaacata caacatgctt tcaagacgtg gtggtggatg tggattgcgc ggaaaatact 720 aaagaggatc agttggccga aatcagttac cgttttcaag gtaagaagga agcggaccaa 780 ccgtggattg ttgtaaacac gagcacactg tttgatgaac tcgaattaga cccccccgag 840 attgaaccgg gtgtcttgaa agtacttcgg acagaaaaac aatacttggg tgtgtacatt 900 tggaacatgc gcggctccga tggtacgtct acctacgcca cgtttttggt cacctggaaa 960 ggggatgaaa aaacaagaaa ccctacgccc gcagtaactc ctcaaccaag aggggctgag 1020 tttcatatgt ggaattacca ctcgcatgta ttttcagttg gtgatacgtt tagcttggca 1080 atgcatcttc agtataagat acatgaagcg ccatttgatt tgctgttaga gtggttgtat 1140 gtccccatcg atcctacatg tcaaccaatg cggttatatt ctacgtgttt gtatcatccc 1200 aacgcacccc aatgcctctc tcatatgaat tccggttgta catttacctc gccacattta 1260 gcccagcgtg ttgcaagcac agtgtatcaa aattgtgaac atgcagataa ctacaccgca 1320 tattgtctgg gaatatctca tatggagcct agctttggtc taatcttaca cgacgggggc 1380 accacgttaa agtttgtaga tacacccgag agtttgtcgg gattatacgt ttttgtggtg 1440 tattttaacg ggcatgttga agccgtagca tacactgttg tatccacagt agatcatttt 1500 gtaaacgcaa ttgaagagcg tggatttccg ccaacggccg gtcagccacc ggcgactact 1560 aaacccaagg aaattacccc cgtaaacccc ggaacgtcac cacttctacg atatgccgca 1620 tggaccggag ggcttgcagc agtagtactt ttatgtctcg taatattttt aatctgtacg 1680 gctaaacgaa tgagggttaa agccgccagg gtagacaagt ga 1722 <210> 40 <211> 1994 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Polynucleotide <400> 40 ggggaaataa gagagaaaag aagagtaaga agaaatataa gagccaccat ggggacagtt 60 aataaacctg tggtgggggt attgatgggg ttcggaatta tcacgggaac gttgcgtata 120 acgaatccgg tcagagcatc cgtcttgcga tacgatgatt ttcacatcga tgaagacaaa 180 ctggatacaa actccgtata tgagccttac taccattcag atcatgcgga gtcttcatgg 240 gtaaatcggg gagagtcttc gcgaaaagcg tacgatcata actcacctta tatatggcca 300 cgtaatgatt atgatggatt tttagagaac gcacacgaac accatggggt gtataatcag 360 ggccgtggta tcgatagcgg ggaacggtta atgcaaccca cacaaatgtc tgcacaggag 420 gatcttgggg acgatacggg catccacgtt atccctacgt taaacggcga tgacagacat 480 aaaattgtaa atgtggacca acgtcaatac ggtgacgtgt ttaaaggaga tcttaatcca 540 aaaccccaag gccaaagact cattgaggtg tcagtggaag aaaatcaccc gtttacttta 600 cgcgcaccga ttcagcggat ttatggagtc cggtacaccg agacttggag ctttttgccg 660 tcattaacct gtacgggaga cgcagcgccc gccatccagc atatatgttt aaaacataca 720 acatgctttc aagacgtggt ggtggatgtg gattgcgcgg aaaatactaa agaggatcag 780 ttggccgaaa tcagttaccg ttttcaaggt aagaaggaag cggaccaacc gtggattgtt 840 gtaaacacga gcacactgtt tgatgaactc gaattagacc cccccgagat tgaaccgggt 900 gtcttgaaag tacttcggac agaaaaacaa tacttgggtg tgtacatttg gaacatgcgc 960 ggctccgatg gtacgtctac ctacgccacg tttttggtca cctggaaagg ggatgaaaaa 1020 acaagaaacc ctacgcccgc agtaactcct caaccaagag gggctgagtt tcatatgtgg 1080 aattaccact cgcatgtatt ttcagttggt gatacgttta gcttggcaat gcatcttcag 1140 tataagatac atgaagcgcc atttgatttg ctgttagagt ggttgtatgt ccccatcgat 1200 cctacatgtc aaccaatgcg gttatattct acgtgtttgt atcatcccaa cgcaccccaa 1260 tgcctctctc atatgaattc cggttgtaca tttacctcgc cacatttagc ccagcgtgtt 1320 gcaagcacag tgtatcaaaa ttgtgaacat gcagataact acaccgcata ttgtctggga 1380 atatctcata tggagcctag ctttggtcta atcttacacg acgggggcac cacgttaaag 1440 tttgtagata cacccgagag tttgtcggga ttatacgttt ttgtggtgta ttttaacggg 1500 catgttgaag ccgtagcata cactgttgta tccacagtag atcattttgt aaacgcaatt 1560 gaagagcgtg gatttccgcc aacggccggt cagccaccgg cgactactaa acccaaggaa 1620 attacccccg taaaccccgg aacgtcacca cttctacgat atgccgcatg gaccggaggg 1680 cttgcagcag tagtactttt atgtctcgta atatttttaa tctgtacggc taaacgaatg 1740 agggttaaag ccgccagggt agacaagtga tgataatagg ctggagcctc ggtggccatg 1800 cttcttgccc cttgggcctc cccccagccc ctcctcccct tcctgcaccc gtacccccgt 1860 ggtctttgaa taaagtctga gtgggcggca aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 1920 aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 1980 aaaaaaaaat ctag 1994 <210> 41 <211> 2050 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Polynucleotide <400> 41 tcaagctttt ggaccctcgt acagaagcta atacgactca ctatagggaa ataagagaga 60 aaagaagagt aagaagaaat ataagagcca ccatggagac tcccgctcag ctactgttcc 120 tcctgctcct ttggctgcct gatactacag gctctgtttt gcggtacgac gactttcaca 180 tcgatgagga caagctcgac actaatagcg tgtatgagcc ctactaccat tcagatcacg 240 ccgagtcctc ttgggtgaac aggggtgaaa gttctaggaa agcctatgat cacaacagcc 300 cttatatttg gccacggaat gattacgacg gatttctcga aaatgcccac gagcatcacg 360 gagtgtacaa ccagggccgt ggaatcgact ctggggagag attgatgcaa cctacacaga 420 tgagcgccca ggaagatctc ggggatgata caggaattca cgttatccct acattaaacg 480 gagatgaccg ccacaaaatc gtcaatgtcg atcaaagaca gtatggagat gtgttcaaag 540 gcgatctcaa ccctaagccg cagggccaga gactcattga ggtgtctgtc gaagagaacc 600 accctttcac tctgcgcgct cccattcaga gaatctatgg agttcgctat acggagactt 660 ggtcattcct tccttccctg acatgcaccg gagacgccgc ccctgccatt cagcacatat 720 gcctgaaaca taccacctgt ttccaggatg tggtggttga tgttgattgt gctgaaaata 780 ccaaggaaga ccaactggcc gagattagtt accggttcca agggaaaaag gaagccgacc 840 agccatggat tgtggttaat acaagcactc tgttcgatga gctcgagctg gatccccccg 900 agatagaacc cggagttctg aaagtgctcc ggacagaaaa acaatatctg ggagtctaca 960 tatggaacat gcgcggttcc gatgggacct ccacttatgc aacctttctc gtcacgtgga 1020 agggagatga gaaaactagg aatcccacac ccgctgtcac accacagcca agaggggctg 1080 agttccatat gtggaactat catagtcacg tgtttagtgt cggagatacg ttttcattgg 1140 ctatgcatct ccagtacaag attcatgagg ctcccttcga tctgttgctt gagtggttgt 1200 acgtcccgat tgacccgacc tgccagccca tgcgactgta cagcacctgt ctctaccatc 1260 caaacgctcc gcaatgtctg agccacatga actctgggtg tactttcacc agtccccacc 1320 tcgcccagcg ggtggcctct actgtttacc agaactgtga gcacgccgac aactacaccg 1380 catactgcct cggtatttct cacatggaac cctccttcgg actcatcctg cacgatgggg 1440 gcactaccct gaagttcgtt gatacgccag aatctctgtc tgggctctat gttttcgtgg 1500 tctacttcaa tggccatgtc gaggccgtgg cctatactgt cgtttctacc gtggatcatt 1560 ttgtgaacgc catcgaagaa cggggattcc cccctacggc aggccagccg cctgcaacca 1620 ccaagcccaa ggaaataaca ccagtgaacc ctggcacctc acctctccta agatatgccg 1680 cgtggacagg gggactggcg gcagtggtgc tcctctgtct cgtgatcttt ctgatctgta 1740 cagccaagag gatgagggtc aaggcttata gagtggacaa gtccccctac aatcagtcaa 1800 tgtactacgc cggccttccc gttgatgatt ttgaggattc cgagtccaca gatactgagg 1860 aagagttcgg taacgctata ggcggctctc acgggggttc aagctacacg gtttacattg 1920 acaagacacg ctgataatag gctggagcct cggtggccat gcttcttgcc ccttgggcct 1980 ccccccagcc cctcctcccc ttcctgcacc cgtacccccg tggtctttga ataaagtctg 2040 agtgggcggc 2050 <210> 42 <211> 354 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Polypeptide <400> 42 Met Phe Leu Ile Gln Cys Leu Ile Ser Ala Val Ile Phe Tyr Ile Gln 1 5 10 15 Val Thr Asn Ala Leu Ile Phe Lys Gly Asp His Val Ser Leu Gln Val 20 25 30 Asn Ser Ser Leu Thr Ser Ile Leu Ile Pro Met Gln Asn Asp Asn Tyr 35 40 45 Thr Glu Ile Lys Gly Gln Leu Val Phe Ile Gly Glu Gln Leu Pro Thr 50 55 60 Gly Thr Asn Tyr Ser Gly Thr Leu Glu Leu Leu Tyr Ala Asp Thr Val 65 70 75 80 Ala Phe Cys Phe Arg Ser Val Gln Val Ile Arg Tyr Asp Gly Cys Pro 85 90 95 Arg Ile Arg Thr Ser Ala Phe Ile Ser Cys Arg Tyr Lys His Ser Trp 100 105 110 His Tyr Gly Asn Ser Thr Asp Arg Ile Ser Thr Glu Pro Asp Ala Gly 115 120 125 Val Met Leu Lys Ile Thr Lys Pro Gly Ile Asn Asp Ala Gly Val Tyr 130 135 140 Val Leu Leu Val Arg Leu Asp His Ser Arg Ser Thr Asp Gly Phe Ile 145 150 155 160 Leu Gly Val Asn Val Tyr Thr Ala Gly Ser His His Asn Ile His Gly 165 170 175 Val Ile Tyr Thr Ser Pro Ser Leu Gln Asn Gly Tyr Ser Thr Arg Ala 180 185 190 Leu Phe Gln Gln Ala Arg Leu Cys Asp Leu Pro Ala Thr Pro Lys Gly 195 200 205 Ser Gly Thr Ser Leu Phe Gln His Met Leu Asp Leu Arg Ala Gly Lys 210 215 220 Ser Leu Glu Asp Asn Pro Trp Leu His Glu Asp Val Val Thr Thr Glu 225 230 235 240 Thr Lys Ser Val Val Lys Glu Gly Ile Glu Asn His Val Tyr Pro Thr 245 250 255 Asp Met Ser Thr Leu Pro Glu Lys Ser Leu Asn Asp Pro Pro Glu Asn 260 265 270 Leu Leu Ile Ile Ile Pro Ile Val Ala Ser Val Met Ile Leu Thr Ala 275 280 285 Met Val Ile Val Ile Val Ile Ser Val Lys Arg Arg Arg Ile Lys Lys 290 295 300 His Pro Ile Tyr Arg Pro Asn Thr Lys Thr Arg Arg Gly Ile Gln Asn 305 310 315 320 Ala Thr Pro Glu Ser Asp Val Met Leu Glu Ala Ala Ile Ala Gln Leu 325 330 335 Ala Thr Ile Arg Glu Glu Ser Pro Pro His Ser Val Val Asn Pro Phe 340 345 350 Val Lys <210> 43 <211> 1065 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Polynucleotide <400> 43 atgtttttaa tccaatgttt gatatcggcc gttatatttt acatacaagt gaccaacgct 60 ttgatcttca agggcgacca cgtgagcttg caagttaaca gcagtctcac gtctatcctt 120 attcccatgc aaaatgataa ttatacagag ataaaaggac agcttgtctt tattggagag 180 caactaccta ccgggacaaa ctatagcgga acactggaac tgttatacgc ggatacggtg 240 gcgttttgtt tccggtcagt acaagtaata agatacgacg gatgtccccg gattagaacg 300 agcgctttta tttcgtgtag gtacaaacat tcgtggcatt atggtaactc aacggatcgg 360 atatcaacag agccggatgc tggtgtaatg ttgaaaatta ccaaaccggg aataaatgat 420 gctggtgtgt atgtacttct tgttcggtta gaccatagca gatccaccga tggtttcatt 480 cttggtgtaa atgtatatac agcgggctcg catcacaaca ttcacggggt tatctacact 540 tctccatctc tacagaatgg atattctaca agagcccttt ttcaacaagc tcgtttgtgt 600 gatttacccg cgacacccaa agggtccggt acctccctgt ttcaacatat gcttgatctt 660 cgtgccggta aatcgttaga ggataaccct tggttacatg aggacgttgt tacgacagaa 720 actaagtccg ttgttaagga ggggatagaa aatcacgtat atccaacgga tatgtccacg 780 ttacccgaaa agtcccttaa tgatcctcca gaaaatctac ttataattat tcctatagta 840 gcgtctgtca tgatcctcac cgccatggtt attgttattg taataagcgt taagcgacgt 900 agaattaaaa aacatccaat ttatcgccca aatacaaaaa caagaagggg catacaaaat 960 gcgacaccag aatccgatgt gatgttggag gccgccattg cacaactagc aacgattcgc 1020 gaagaatccc ccccacattc cgttgtaaac ccgtttgtta aatag 1065 <210> 44 <211> 1337 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Polynucleotide <400> 44 ggggaaataa gagagaaaag aagagtaaga agaaatataa gagccaccat gtttttaatc 60 caatgtttga tatcggccgt tatattttac atacaagtga ccaacgcttt gatcttcaag 120 ggcgaccacg tgagcttgca agttaacagc agtctcacgt ctatccttat tcccatgcaa 180 aatgataatt atacagagat aaaaggacag cttgtcttta ttggagagca actacctacc 240 gggacaaact atagcggaac actggaactg ttatacgcgg atacggtggc gttttgtttc 300 cggtcagtac aagtaataag atacgacgga tgtccccgga ttagaacgag cgcttttatt 360 tcgtgtaggt acaaacattc gtggcattat ggtaactcaa cggatcggat atcaacagag 420 ccggatgctg gtgtaatgtt gaaaattacc aaaccgggaa taaatgatgc tggtgtgtat 480 gtacttcttg ttcggttaga ccatagcaga tccaccgatg gtttcattct tggtgtaaat 540 gtatatacag cgggctcgca tcacaacatt cacggggtta tctacacttc tccatctcta 600 cagaatggat attctacaag agcccttttt caacaagctc gtttgtgtga tttacccgcg 660 acacccaaag ggtccggtac ctccctgttt caacatatgc ttgatcttcg tgccggtaaa 720 tcgttagagg ataacccttg gttacatgag gacgttgtta cgacagaaac taagtccgtt 780 gttaaggagg ggatagaaaa tcacgtatat ccaacggata tgtccacgtt acccgaaaag 840 tcccttaatg atcctccaga aaatctactt ataattattc ctatagtagc gtctgtcatg 900 atcctcaccg ccatggttat tgttattgta ataagcgtta agcgacgtag aattaaaaaa 960 catccaattt atcgcccaaa tacaaaaaca agaaggggca tacaaaatgc gacaccagaa 1020 tccgatgtga tgttggaggc cgccattgca caactagcaa cgattcgcga agaatccccc 1080 ccacattccg ttgtaaaccc gtttgttaaa tagtgataat aggctggagc ctcggtggcc 1140 atgcttcttg ccccttgggc ctccccccag cccctcctcc ccttcctgca cccgtacccc 1200 cgtggtcttt gaataaagtc tgagtgggcg gcaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 1260 aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 1320 aaaaaaaaaa aatctag 1337 <210> 45 <211> 623 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 45 Met Gly Thr Val Asn Lys Pro Val Val Gly Val Leu Met Gly Phe Gly 1 5 10 15 Ile Ile Thr Gly Thr Leu Arg Ile Thr Asn Pro Val Arg Ala Ser Val 20 25 30 Leu Arg Tyr Asp Asp Phe His Ile Asp Glu Asp Lys Leu Asp Thr Asn 35 40 45 Ser Val Tyr Glu Pro Tyr Tyr His Ser Asp His Ala Glu Ser Ser Trp 50 55 60 Val Asn Arg Gly Glu Ser Ser Arg Lys Ala Tyr Asp His Asn Ser Pro 65 70 75 80 Tyr Ile Trp Pro Arg Asn Asp Tyr Asp Gly Phe Leu Glu Asn Ala His 85 90 95 Glu His His Gly Val Tyr Asn Gln Gly Arg Gly Ile Asp Ser Gly Glu 100 105 110 Arg Leu Met Gln Pro Thr Gln Met Ser Ala Gln Glu Asp Leu Gly Asp 115 120 125 Asp Thr Gly Ile His Val Ile Pro Thr Leu Asn Gly Asp Asp Arg His 130 135 140 Lys Ile Val Asn Val Asp Gln Arg Gln Tyr Gly Asp Val Phe Lys Gly 145 150 155 160 Asp Leu Asn Pro Lys Pro Gln Gly Gln Arg Leu Ile Glu Val Ser Val 165 170 175 Glu Glu Asn His Pro Phe Thr Leu Arg Ala Pro Ile Gln Arg Ile Tyr 180 185 190 Gly Val Arg Tyr Thr Glu Thr Trp Ser Phe Leu Pro Ser Leu Thr Cys 195 200 205 Thr Gly Asp Ala Ala Pro Ala Ile Gln His Ile Cys Leu Lys His Thr 210 215 220 Thr Cys Phe Gln Asp Val Val Val Asp Val Asp Cys Ala Glu Asn Thr 225 230 235 240 Lys Glu Asp Gln Leu Ala Glu Ile Ser Tyr Arg Phe Gln Gly Lys Lys 245 250 255 Glu Ala Asp Gln Pro Trp Ile Val Val Asn Thr Ser Thr Leu Phe Asp 260 265 270 Glu Leu Glu Leu Asp Pro Pro Glu Ile Glu Pro Gly Val Leu Lys Val 275 280 285 Leu Arg Thr Glu Lys Gln Tyr Leu Gly Val Tyr Ile Trp Asn Met Arg 290 295 300 Gly Ser Asp Gly Thr Ser Thr Tyr Ala Thr Phe Leu Val Thr Trp Lys 305 310 315 320 Gly Asp Glu Lys Thr Arg Asn Pro Thr Pro Ala Val Thr Pro Gln Pro 325 330 335 Arg Gly Ala Glu Phe His Met Trp Asn Tyr His Ser His Val Phe Ser 340 345 350 Val Gly Asp Thr Phe Ser Leu Ala Met His Leu Gln Tyr Lys Ile His 355 360 365 Glu Ala Pro Phe Asp Leu Leu Leu Glu Trp Leu Tyr Val Pro Ile Asp 370 375 380 Pro Thr Cys Gln Pro Met Arg Leu Tyr Ser Thr Cys Leu Tyr His Pro 385 390 395 400 Asn Ala Pro Gln Cys Leu Ser His Met Asn Ser Gly Cys Thr Phe Thr 405 410 415 Ser Pro His Leu Ala Gln Arg Val Ala Ser Thr Val Tyr Gln Asn Cys 420 425 430 Glu His Ala Asp Asn Tyr Thr Ala Tyr Cys Leu Gly Ile Ser His Met 435 440 445 Glu Pro Ser Phe Gly Leu Ile Leu His Asp Gly Gly Thr Thr Leu Lys 450 455 460 Phe Val Asp Thr Pro Glu Ser Leu Ser Gly Leu Tyr Val Phe Val Val 465 470 475 480 Tyr Phe Asn Gly His Val Glu Ala Val Ala Tyr Thr Val Val Ser Thr 485 490 495 Val Asp His Phe Val Asn Ala Ile Glu Glu Arg Gly Phe Pro Pro Thr 500 505 510 Ala Gly Gln Pro Pro Ala Thr Thr Lys Pro Lys Glu Ile Thr Pro Val 515 520 525 Asn Pro Gly Thr Ser Pro Leu Leu Arg Tyr Ala Ala Trp Thr Gly Gly 530 535 540 Leu Ala Ala Val Val Leu Leu Cys Leu Val Ile Phe Leu Ile Cys Thr 545 550 555 560 Ala Lys Arg Met Arg Val Lys Ala Tyr Arg Val Asp Lys Ser Pro Tyr 565 570 575 Asn Gln Ser Met Tyr Tyr Ala Gly Leu Pro Val Asp Asp Phe Glu Asp 580 585 590 Ser Glu Ser Thr Asp Thr Glu Glu Glu Phe Gly Asn Ala Ile Gly Gly 595 600 605 Ser His Gly Gly Ser Ser Tyr Thr Val Tyr Ile Asp Lys Thr Arg 610 615 620 <210> 46 <211> 354 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 46 Met Phe Leu Ile Gln Cys Leu Ile Ser Ala Val Ile Phe Tyr Ile Gln 1 5 10 15 Val Thr Asn Ala Leu Ile Phe Lys Gly Asp His Val Ser Leu Gln Val 20 25 30 Asn Ser Ser Leu Thr Ser Ile Leu Ile Pro Met Gln Asn Asp Asn Tyr 35 40 45 Thr Glu Ile Lys Gly Gln Leu Val Phe Ile Gly Glu Gln Leu Pro Thr 50 55 60 Gly Thr Asn Tyr Ser Gly Thr Leu Glu Leu Leu Tyr Ala Asp Thr Val 65 70 75 80 Ala Phe Cys Phe Arg Ser Val Gln Val Ile Arg Tyr Asp Gly Cys Pro 85 90 95 Arg Ile Arg Thr Ser Ala Phe Ile Ser Cys Arg Tyr Lys His Ser Trp 100 105 110 His Tyr Gly Asn Ser Thr Asp Arg Ile Ser Thr Glu Pro Asp Ala Gly 115 120 125 Val Met Leu Lys Ile Thr Lys Pro Gly Ile Asn Asp Ala Gly Val Tyr 130 135 140 Val Leu Leu Val Arg Leu Asp His Ser Arg Ser Thr Asp Gly Phe Ile 145 150 155 160 Leu Gly Val Asn Val Tyr Thr Ala Gly Ser His His Asn Ile His Gly 165 170 175 Val Ile Tyr Thr Ser Pro Ser Leu Gln Asn Gly Tyr Ser Thr Arg Ala 180 185 190 Leu Phe Gln Gln Ala Arg Leu Cys Asp Leu Pro Ala Thr Pro Lys Gly 195 200 205 Ser Gly Thr Ser Leu Phe Gln His Met Leu Asp Leu Arg Ala Gly Lys 210 215 220 Ser Leu Glu Asp Asn Pro Trp Leu His Glu Asp Val Val Thr Thr Glu 225 230 235 240 Thr Lys Ser Val Val Lys Glu Gly Ile Glu Asn His Val Tyr Pro Thr 245 250 255 Asp Met Ser Thr Leu Pro Glu Lys Ser Leu Asn Asp Pro Pro Glu Asn 260 265 270 Leu Leu Ile Ile Ile Pro Ile Val Ala Ser Val Met Ile Leu Thr Ala 275 280 285 Met Val Ile Val Ile Val Ile Ser Val Lys Arg Arg Arg Ile Lys Lys 290 295 300 His Pro Ile Tyr Arg Pro Asn Thr Lys Thr Arg Arg Gly Ile Gln Asn 305 310 315 320 Ala Thr Pro Glu Ser Asp Val Met Leu Glu Ala Ala Ile Ala Gln Leu 325 330 335 Ala Thr Ile Arg Glu Glu Ser Pro Pro His Ser Val Val Asn Pro Phe 340 345 350 Val Lys <210> 47 <211> 556 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Polypeptide <400> 47 Met Gly Thr Val Asn Lys Pro Val Val Gly Val Leu Met Gly Phe Gly 1 5 10 15 Ile Ile Thr Gly Thr Leu Arg Ile Thr Asn Pro Val Arg Ala Ser Val 20 25 30 Leu Arg Tyr Asp Asp Phe His Ile Asp Glu Asp Lys Leu Asp Thr Asn 35 40 45 Ser Val Tyr Glu Pro Tyr Tyr His Ser Asp His Ala Glu Ser Ser Trp 50 55 60 Val Asn Arg Gly Glu Ser Ser Arg Lys Ala Tyr Asp His Asn Ser Pro 65 70 75 80 Tyr Ile Trp Pro Arg Asn Asp Tyr Asp Gly Phe Leu Glu Asn Ala His 85 90 95 Glu His His Gly Val Tyr Asn Gln Gly Arg Gly Ile Asp Ser Gly Glu 100 105 110 Arg Leu Met Gln Pro Thr Gln Met Ser Ala Gln Glu Asp Leu Gly Asp 115 120 125 Asp Thr Gly Val Ile Pro Thr Leu Asn Gly Asp Asp Arg His Lys Ile 130 135 140 Val Asn Val Asp Gln Arg Gln Tyr Gly Asp Val Phe Lys Gly Asp Leu 145 150 155 160 Asn Pro Lys Pro Gln Gly Gln Arg Leu Ile Glu Val Ser Val Glu Glu 165 170 175 Asn His Pro Phe Thr Leu Arg Ala Pro Ile Gln Arg Ile Tyr Gly Val 180 185 190 Arg Tyr Thr Glu Thr Trp Ser Phe Leu Pro Ser Leu Thr Cys Thr Gly 195 200 205 Asp Ala Ala Pro Ala Ile Gln His Ile Cys Leu Lys His Thr Thr Cys 210 215 220 Phe Gln Asp Val Val Val Asp Val Asp Cys Ala Glu Asn Thr Lys Glu 225 230 235 240 Asp Gln Leu Ala Glu Ile Ser Tyr Arg Phe Gln Gly Lys Lys Glu Ala 245 250 255 Asp Gln Pro Trp Ile Val Val Asn Thr Thr Leu Phe Asp Glu Leu Glu 260 265 270 Leu Asp Pro Pro Glu Ile Glu Pro Gly Val Leu Lys Val Leu Arg Thr 275 280 285 Glu Lys Gln Tyr Leu Gly Val Tyr Ile Trp Asn Met Arg Gly Ser Asp 290 295 300 Gly Thr Ser Thr Tyr Ala Thr Phe Leu Val Thr Trp Lys Gly Asp Glu 305 310 315 320 Lys Thr Arg Asn Pro Thr Pro Ala Val Thr Pro Gln Pro Arg Gly Ala 325 330 335 Glu Phe His Met Trp Asn Tyr His Ser His Val Phe Ser Val Gly Asp 340 345 350 Thr Phe Ser Leu Ala Met His Leu Gln Tyr Lys Ile His Glu Ala Pro 355 360 365 Phe Asp Leu Leu Leu Glu Trp Leu Tyr Val Pro Ile Asp Pro Thr Cys 370 375 380 Gln Pro Met Arg Leu Tyr Ser Thr Cys Leu Tyr His Pro Asn Ala Gln 385 390 395 400 Cys Leu Ser His Met Asn Ser Gly Cys Thr Phe Thr Ser Pro His Leu 405 410 415 Ala Gln Arg Val Ala Ser Thr Val Tyr Gln Asn Cys Glu His Ala Asp 420 425 430 Asn Tyr Thr Ala Tyr Cys Leu Gly Ile Ser His Met Glu Pro Ser Phe 435 440 445 Gly Leu Ile Leu His Asp Gly Gly Thr Thr Leu Lys Phe Val Asp Thr 450 455 460 Pro Glu Ser Leu Ser Gly Leu Tyr Val Phe Val Val Tyr Phe Asn Gly 465 470 475 480 His Val Glu Ala Val Ala Tyr Thr Val Val Ser Thr Val Asp His Phe 485 490 495 Val Asn Ala Ile Glu Glu Arg Gly Phe Pro Pro Thr Ala Gly Gln Pro 500 505 510 Pro Ala Thr Thr Lys Pro Lys Glu Ile Thr Pro Val Asn Pro Gly Thr 515 520 525 Ser Pro Leu Leu Arg Tyr Ala Trp Thr Gly Gly Leu Ala Ala Val Val 530 535 540 Leu Leu Cys Leu Val Ile Phe Leu Ile Cys Thr Ala 545 550 555 <210> 48 <211> 574 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 48 Met Lys Arg Ile Gln Ile Asn Leu Ile Leu Thr Ile Ala Cys Ile Gln 1 5 10 15 Leu Ser Thr Glu Ser Gln Pro Thr Pro Val Ser Ile Thr Glu Leu Tyr 20 25 30 Thr Ser Ala Ala Thr Arg Lys Pro Asp Pro Ala Val Ala Pro Thr Ser 35 40 45 Ala Ala Thr Arg Lys Pro Asp Pro Ala Val Ala Pro Thr Ser Ala Ala 50 55 60 Thr Arg Lys Pro Asp Pro Ala Val Ala Pro Thr Ser Ala Ala Thr Arg 65 70 75 80 Lys Pro Asp Pro Ala Val Ala Pro Thr Ser Ala Ala Thr Arg Lys Pro 85 90 95 Asp Pro Ala Val Ala Pro Thr Ser Ala Ala Thr Arg Lys Pro Asp Pro 100 105 110 Ala Val Ala Pro Thr Ser Ala Ala Ser Arg Lys Pro Asp Pro Ala Val 115 120 125 Ala Pro Thr Ser Ala Ala Ser Arg Lys Pro Asp Pro Ala Val Ala Pro 130 135 140 Thr Ser Ala Ala Ser Arg Lys Pro Asp Pro Ala Ala Asn Thr Gln His 145 150 155 160 Ser Gln Pro Pro Phe Leu Tyr Glu Asn Ile Gln Cys Val His Gly Gly 165 170 175 Ile Gln Ser Ile Pro Tyr Phe His Thr Phe Ile Met Pro Cys Tyr Met 180 185 190 Arg Leu Thr Thr Gly Gln Gln Ala Ala Phe Lys Gln Gln Gln Lys Thr 195 200 205 Tyr Glu Gln Tyr Ser Leu Asp Pro Glu Gly Ser Asn Ile Thr Arg Trp 210 215 220 Lys Ser Leu Ile Arg Pro Asp Leu His Ile Glu Val Trp Phe Thr Arg 225 230 235 240 His Leu Ile Asp Pro His Arg Gln Leu Gly Asn Ala Leu Ile Arg Met 245 250 255 Pro Asp Leu Pro Val Met Leu Tyr Ser Asn Ser Ala Asp Leu Asn Leu 260 265 270 Ile Asn Asn Pro Glu Ile Phe Thr His Ala Lys Glu Asn Tyr Val Ile 275 280 285 Pro Asp Val Lys Thr Thr Ser Asp Phe Ser Val Thr Ile Leu Ser Met 290 295 300 Asp Ala Thr Thr Glu Gly Thr Tyr Ile Trp Arg Val Val Asn Thr Lys 305 310 315 320 Thr Lys Asn Val Ile Ser Glu His Ser Ile Thr Val Thr Thr Tyr Tyr 325 330 335 Arg Pro Asn Ile Thr Val Val Gly Asp Pro Val Leu Thr Gly Gln Thr 340 345 350 Tyr Ala Ala Tyr Cys Asn Val Ser Lys Tyr Tyr Pro Pro His Ser Val 355 360 365 Arg Val Arg Trp Thr Ser Arg Phe Gly Asn Ile Gly Lys Asn Phe Ile 370 375 380 Thr Asp Ala Ile Gln Glu Tyr Ala Asn Gly Leu Phe Ser Tyr Val Ser 385 390 395 400 Ala Val Arg Ile Pro Gln Gln Lys Gln Met Asp Tyr Pro Pro Pro Ala 405 410 415 Ile Gln Cys Asn Val Leu Trp Ile Arg Asp Gly Val Ser Asn Met Lys 420 425 430 Tyr Ser Ala Val Val Thr Pro Asp Val Tyr Pro Phe Pro Asn Val Ser 435 440 445 Ile Gly Ile Ile Asp Gly His Ile Val Cys Thr Ala Lys Cys Val Pro 450 455 460 Arg Gly Val Val His Phe Val Trp Trp Val Asn Asp Ser Pro Ile Asn 465 470 475 480 His Glu Asn Ser Glu Ile Thr Gly Val Cys Asp Gln Asn Lys Arg Phe 485 490 495 Val Asn Met Gln Ser Ser Cys Pro Thr Ser Glu Leu Asp Gly Pro Ile 500 505 510 Thr Tyr Ser Cys His Leu Asp Gly Tyr Pro Lys Lys Phe Pro Pro Phe 515 520 525 Ser Ala Val Tyr Thr Tyr Asp Ala Ser Thr Tyr Ala Thr Thr Phe Ser 530 535 540 Val Val Ala Val Ile Ile Gly Val Ile Ser Ile Leu Gly Thr Leu Gly 545 550 555 560 Leu Ile Ala Val Ile Ala Thr Leu Cys Ile Arg Cys Cys Ser 565 570 <210> 49 <211> 159 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 49 Met Ala Ser His Lys Trp Leu Leu Gln Ile Val Phe Leu Lys Thr Ile 1 5 10 15 Thr Ile Ala Tyr Cys Leu His Leu Gln Asp Asp Thr Pro Leu Phe Phe 20 25 30 Gly Ala Lys Pro Leu Ser Asp Val Ser Leu Ile Ile Thr Glu Pro Cys 35 40 45 Val Ser Ser Val Tyr Glu Ala Trp Asp Tyr Ala Ala Pro Pro Val Ser 50 55 60 Asn Leu Ser Glu Ala Leu Ser Gly Ile Val Val Lys Thr Lys Cys Pro 65 70 75 80 Val Pro Glu Val Ile Leu Trp Phe Lys Asp Lys Gln Met Ala Tyr Trp 85 90 95 Thr Asn Pro Tyr Val Thr Leu Lys Gly Leu Ala Gln Ser Val Gly Glu 100 105 110 Glu His Lys Ser Gly Asp Ile Arg Asp Ala Leu Leu Asp Ala Leu Ser 115 120 125 Gly Val Trp Val Asp Ser Thr Pro Ser Ser Thr Asn Ile Pro Glu Asn 130 135 140 Gly Cys Val Trp Gly Ala Asp Arg Leu Phe Gln Arg Val Cys Gln 145 150 155 <210> 50 <211> 435 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 50 Met Gly Thr Gln Lys Lys Gly Pro Arg Ser Glu Lys Val Ser Pro Tyr 1 5 10 15 Asp Thr Thr Thr Pro Glu Val Glu Ala Leu Asp His Gln Met Asp Thr 20 25 30 Leu Asn Trp Arg Ile Trp Ile Ile Gln Val Met Met Phe Thr Leu Gly 35 40 45 Ala Val Met Leu Leu Ala Thr Leu Ile Ala Ala Ser Ser Glu Tyr Thr 50 55 60 Gly Ile Pro Cys Phe Tyr Ala Ala Val Val Asp Tyr Glu Leu Phe Asn 65 70 75 80 Ala Thr Leu Asp Gly Gly Val Trp Ser Gly Asn Arg Gly Gly Tyr Ser 85 90 95 Ala Pro Val Leu Phe Leu Glu Pro His Ser Val Val Ala Phe Thr Tyr 100 105 110 Tyr Thr Ala Leu Thr Ala Met Ala Met Ala Val Tyr Thr Leu Ile Thr 115 120 125 Ala Ala Ile Ile His Arg Glu Thr Lys Asn Gln Arg Val Arg Gln Ser 130 135 140 Ser Gly Val Ala Trp Leu Val Val Asp Pro Thr Thr Leu Phe Trp Gly 145 150 155 160 Leu Leu Ser Leu Trp Leu Leu Asn Ala Val Val Leu Leu Leu Ala Tyr 165 170 175 Lys Gln Ile Gly Val Ala Ala Thr Leu Tyr Leu Gly His Phe Ala Thr 180 185 190 Ser Val Ile Phe Thr Thr Tyr Phe Cys Gly Arg Gly Lys Leu Asp Glu 195 200 205 Thr Asn Ile Lys Ala Val Ala Asn Leu Arg Gln Gln Ser Val Phe Leu 210 215 220 Tyr Arg Leu Ala Gly Pro Thr Arg Ala Val Phe Val Asn Leu Met Ala 225 230 235 240 Ala Leu Met Ala Ile Cys Ile Leu Phe Val Ser Leu Met Leu Glu Leu 245 250 255 Val Val Ala Asn His Leu His Thr Gly Leu Trp Ser Ser Val Ser Val 260 265 270 Ala Met Ser Thr Phe Ser Thr Leu Ser Val Val Tyr Leu Ile Val Ser 275 280 285 Glu Leu Ile Leu Ala His Tyr Ile His Val Leu Ile Gly Pro Ser Leu 290 295 300 Gly Thr Leu Val Ala Cys Ala Thr Leu Gly Thr Ala Ala His Ser Tyr 305 310 315 320 Met Asp Arg Leu Tyr Asp Pro Ile Ser Val Gln Ser Pro Arg Leu Ile 325 330 335 Pro Thr Thr Arg Gly Thr Leu Ala Cys Leu Ala Val Phe Ser Val Val 340 345 350 Met Leu Leu Leu Arg Leu Met Arg Ala Tyr Val Tyr His Arg Gln Lys 355 360 365 Arg Ser Arg Phe Tyr Gly Ala Val Arg Arg Val Pro Glu Arg Val Arg 370 375 380 Gly Tyr Ile Arg Lys Val Lys Pro Ala His Arg Asn Ser Arg Arg Thr 385 390 395 400 Asn Tyr Pro Ser Gln Gly Tyr Gly Tyr Val Tyr Glu Asn Asp Ser Thr 405 410 415 Tyr Glu Thr Asp Arg Glu Asp Glu Leu Leu Tyr Glu Arg Ser Asn Ser 420 425 430 Gly Trp Glu 435 <210> 51 <211> 841 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 51 Met Phe Ala Leu Val Leu Ala Val Val Ile Leu Pro Leu Trp Thr Thr 1 5 10 15 Ala Asn Lys Ser Tyr Val Thr Pro Thr Pro Ala Thr Arg Ser Ile Gly 20 25 30 His Met Ser Ala Leu Leu Arg Glu Tyr Ser Asp Arg Asn Met Ser Leu 35 40 45 Lys Leu Glu Ala Phe Tyr Pro Thr Gly Phe Asp Glu Glu Leu Ile Lys 50 55 60 Ser Leu His Trp Gly Asn Asp Arg Lys His Val Phe Leu Val Ile Val 65 70 75 80 Lys Val Asn Pro Thr Thr His Glu Gly Asp Val Gly Leu Val Ile Phe 85 90 95 Pro Lys Tyr Leu Leu Ser Pro Tyr His Phe Lys Ala Glu His Arg Ala 100 105 110 Pro Phe Pro Ala Gly Arg Phe Gly Phe Leu Ser His Pro Val Thr Pro 115 120 125 Asp Val Ser Phe Phe Asp Ser Ser Phe Ala Pro Tyr Leu Thr Thr Gln 130 135 140 His Leu Val Ala Phe Thr Thr Phe Pro Pro Asn Pro Leu Val Trp His 145 150 155 160 Leu Glu Arg Ala Glu Thr Ala Ala Thr Ala Glu Arg Pro Phe Gly Val 165 170 175 Ser Leu Leu Pro Ala Arg Pro Thr Val Pro Lys Asn Thr Ile Leu Glu 180 185 190 His Lys Ala His Phe Ala Thr Trp Asp Ala Leu Ala Arg His Thr Phe 195 200 205 Phe Ser Ala Glu Ala Ile Ile Thr Asn Ser Thr Leu Arg Ile His Val 210 215 220 Pro Leu Phe Gly Ser Val Trp Pro Ile Arg Tyr Trp Ala Thr Gly Ser 225 230 235 240 Val Leu Leu Thr Ser Asp Ser Gly Arg Val Glu Val Asn Ile Gly Val 245 250 255 Gly Phe Met Ser Ser Leu Ile Ser Leu Ser Ser Gly Pro Pro Ile Glu 260 265 270 Leu Ile Val Val Pro His Thr Val Lys Leu Asn Ala Val Thr Ser Asp 275 280 285 Thr Thr Trp Phe Gln Leu Asn Pro Pro Gly Pro Asp Pro Gly Pro Ser 290 295 300 Tyr Arg Val Tyr Leu Leu Gly Arg Gly Leu Asp Met Asn Phe Ser Lys 305 310 315 320 His Ala Thr Val Asp Ile Cys Ala Tyr Pro Glu Glu Ser Leu Asp Tyr 325 330 335 Arg Tyr His Leu Ser Met Ala His Thr Glu Ala Leu Arg Met Thr Thr 340 345 350 Lys Ala Asp Gln His Asp Ile Asn Glu Glu Ser Tyr Tyr His Ile Ala 355 360 365 Ala Arg Ile Ala Thr Ser Ile Phe Ala Leu Ser Glu Met Gly Arg Thr 370 375 380 Thr Glu Tyr Phe Leu Leu Asp Glu Ile Val Asp Val Gln Tyr Gln Leu 385 390 395 400 Lys Phe Leu Asn Tyr Ile Leu Met Arg Ile Gly Ala Gly Ala His Pro 405 410 415 Asn Thr Ile Ser Gly Thr Ser Asp Leu Ile Phe Ala Asp Pro Ser Gln 420 425 430 Leu His Asp Glu Leu Ser Leu Leu Phe Gly Gln Val Lys Pro Ala Asn 435 440 445 Val Asp Tyr Phe Ile Ser Tyr Asp Glu Ala Arg Asp Gln Leu Lys Thr 450 455 460 Ala Tyr Ala Leu Ser Arg Gly Gln Asp His Val Asn Ala Leu Ser Leu 465 470 475 480 Ala Arg Arg Val Ile Met Ser Ile Tyr Lys Gly Leu Leu Val Lys Gln 485 490 495 Asn Leu Asn Ala Thr Glu Arg Gln Ala Leu Phe Phe Ala Ser Met Ile 500 505 510 Leu Leu Asn Phe Arg Glu Gly Leu Glu Asn Ser Ser Arg Val Leu Asp 515 520 525 Gly Arg Thr Thr Leu Leu Leu Met Thr Ser Met Cys Thr Ala Ala His 530 535 540 Ala Thr Gln Ala Ala Leu Asn Ile Gln Glu Gly Leu Ala Tyr Leu Asn 545 550 555 560 Pro Ser Lys His Met Phe Thr Ile Pro Asn Val Tyr Ser Pro Cys Met 565 570 575 Gly Ser Leu Arg Thr Asp Leu Thr Glu Glu Ile His Val Met Asn Leu 580 585 590 Leu Ser Ala Ile Pro Thr Arg Pro Gly Leu Asn Glu Val Leu His Thr 595 600 605 Gln Leu Asp Glu Ser Glu Ile Phe Asp Ala Ala Phe Lys Thr Met Met 610 615 620 Ile Phe Thr Thr Trp Thr Ala Lys Asp Leu His Ile Leu His Thr His 625 630 635 640 Val Pro Glu Val Phe Thr Cys Gln Asp Ala Ala Ala Arg Asn Gly Glu 645 650 655 Tyr Val Leu Ile Leu Pro Ala Val Gln Gly His Ser Tyr Val Ile Thr 660 665 670 Arg Asn Lys Pro Gln Arg Gly Leu Val Tyr Ser Leu Ala Asp Val Asp 675 680 685 Val Tyr Asn Pro Ile Ser Val Val Tyr Leu Ser Arg Asp Thr Cys Val 690 695 700 Ser Glu His Gly Val Ile Glu Thr Val Ala Leu Pro His Pro Asp Asn 705 710 715 720 Leu Lys Glu Cys Leu Tyr Cys Gly Ser Val Phe Leu Arg Tyr Leu Thr 725 730 735 Thr Gly Ala Ile Met Asp Ile Ile Ile Ile Asp Ser Lys Asp Thr Glu 740 745 750 Arg Gln Leu Ala Ala Met Gly Asn Ser Thr Ile Pro Pro Phe Asn Pro 755 760 765 Asp Met His Gly Asp Asp Ser Lys Ala Val Leu Leu Phe Pro Asn Gly 770 775 780 Thr Val Val Thr Leu Leu Gly Phe Glu Arg Arg Gln Ala Ile Arg Met 785 790 795 800 Ser Gly Gln Tyr Leu Gly Ala Ser Leu Gly Gly Ala Phe Leu Ala Val 805 810 815 Val Gly Phe Gly Ile Ile Gly Trp Met Leu Cys Gly Asn Ser Arg Leu 820 825 830 Arg Glu Tyr Asn Lys Ile Pro Leu Thr 835 840 <210> 52 <211> 661 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 52 Met Phe Tyr Glu Ala Leu Lys Ala Glu Leu Val Tyr Thr Arg Ala Val 1 5 10 15 His Gly Phe Arg Pro Arg Ala Asn Cys Val Val Leu Ser Asp Tyr Ile 20 25 30 Pro Arg Val Ala Cys Asn Met Gly Thr Val Asn Lys Pro Val Val Gly 35 40 45 Val Leu Met Gly Phe Gly Ile Ile Thr Gly Thr Leu Arg Ile Thr Asn 50 55 60 Pro Val Arg Ala Ser Val Leu Arg Tyr Asp Asp Phe His Ile Asp Glu 65 70 75 80 Asp Lys Leu Asp Thr Asn Ser Val Tyr Glu Pro Tyr Tyr His Ser Asp 85 90 95 His Ala Glu Ser Ser Trp Val Asn Arg Gly Glu Ser Ser Arg Lys Ala 100 105 110 Tyr Asp His Asn Ser Pro Tyr Ile Trp Pro Arg Asn Asp Tyr Asp Gly 115 120 125 Phe Leu Glu Asn Ala His Glu His His Gly Val Tyr Asn Gln Gly Arg 130 135 140 Gly Ile Asp Ser Gly Glu Arg Leu Met Gln Pro Thr Gln Met Ser Ala 145 150 155 160 Gln Glu Asp Leu Gly Asp Asp Thr Gly Ile His Val Ile Pro Thr Leu 165 170 175 Asn Gly Asp Asp Arg His Lys Ile Val Asn Val Asp Gln Arg Gln Tyr 180 185 190 Gly Asp Val Phe Lys Gly Asp Leu Asn Pro Lys Pro Gln Gly Gln Arg 195 200 205 Leu Ile Glu Val Ser Val Glu Glu Asn His Pro Phe Thr Leu Arg Ala 210 215 220 Pro Ile Gln Arg Ile Tyr Gly Val Arg Tyr Thr Glu Thr Trp Ser Phe 225 230 235 240 Leu Pro Ser Leu Thr Cys Thr Gly Asp Ala Ala Pro Ala Ile Gln His 245 250 255 Ile Cys Leu Lys His Thr Thr Cys Phe Gln Asp Val Val Val Asp Val 260 265 270 Asp Cys Ala Glu Asn Thr Lys Glu Asp Gln Leu Ala Glu Ile Ser Tyr 275 280 285 Arg Phe Gln Gly Lys Lys Glu Ala Asp Gln Pro Trp Ile Val Val Asn 290 295 300 Thr Ser Thr Leu Phe Asp Glu Leu Glu Leu Asp Pro Pro Glu Ile Glu 305 310 315 320 Pro Gly Val Leu Lys Val Leu Arg Thr Glu Lys Gln Tyr Leu Gly Val 325 330 335 Tyr Ile Trp Asn Met Arg Gly Ser Asp Gly Thr Ser Thr Tyr Ala Thr 340 345 350 Phe Leu Val Thr Trp Lys Gly Asp Glu Lys Thr Arg Asn Pro Thr Pro 355 360 365 Ala Val Thr Pro Gln Pro Arg Gly Ala Glu Phe His Met Trp Asn Tyr 370 375 380 His Ser His Val Phe Ser Val Gly Asp Thr Phe Ser Leu Ala Met His 385 390 395 400 Leu Gln Tyr Lys Ile His Glu Ala Pro Phe Asp Leu Leu Leu Glu Trp 405 410 415 Leu Tyr Val Pro Ile Asp Pro Thr Cys Gln Pro Met Arg Leu Tyr Ser 420 425 430 Thr Cys Leu Tyr His Pro Asn Ala Pro Gln Cys Leu Ser His Met Asn 435 440 445 Ser Gly Cys Thr Phe Thr Ser Pro His Leu Ala Gln Arg Val Ala Ser 450 455 460 Thr Val Tyr Gln Asn Cys Glu His Ala Asp Asn Tyr Thr Ala Tyr Cys 465 470 475 480 Leu Gly Ile Ser His Met Glu Pro Ser Phe Gly Leu Ile Leu His Asp 485 490 495 Gly Gly Thr Thr Leu Lys Phe Val Asp Thr Pro Glu Ser Leu Ser Gly 500 505 510 Leu Tyr Val Phe Val Val Tyr Phe Asn Gly His Val Glu Ala Val Ala 515 520 525 Tyr Thr Val Val Ser Thr Val Asp His Phe Val Asn Ala Ile Glu Glu 530 535 540 Arg Gly Phe Pro Pro Thr Ala Gly Gln Pro Pro Ala Thr Thr Lys Pro 545 550 555 560 Lys Glu Ile Thr Pro Val Asn Pro Gly Thr Ser Pro Leu Leu Arg Tyr 565 570 575 Ala Ala Trp Thr Gly Gly Leu Ala Ala Val Val Leu Leu Cys Leu Val 580 585 590 Ile Phe Leu Ile Cys Thr Ala Lys Arg Met Arg Val Lys Ala Tyr Arg 595 600 605 Val Asp Lys Ser Pro Tyr Asn Gln Ser Met Tyr Tyr Ala Gly Leu Pro 610 615 620 Val Asp Asp Phe Glu Asp Ser Glu Ser Thr Asp Thr Glu Glu Glu Phe 625 630 635 640 Gly Asn Ala Ile Gly Gly Ser His Gly Gly Ser Ser Tyr Thr Val Tyr 645 650 655 Ile Asp Lys Thr Arg 660 <210> 53 <211> 868 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 53 Met Phe Val Thr Ala Val Val Ser Val Ser Pro Ser Ser Phe Tyr Glu 1 5 10 15 Ser Leu Gln Val Glu Pro Thr Gln Ser Glu Asp Ile Thr Arg Ser Ala 20 25 30 His Leu Gly Asp Gly Asp Glu Ile Arg Glu Ala Ile His Lys Ser Gln 35 40 45 Asp Ala Glu Thr Lys Pro Thr Phe Tyr Val Cys Pro Pro Pro Thr Gly 50 55 60 Ser Thr Ile Val Arg Leu Glu Pro Thr Arg Thr Cys Pro Asp Tyr His 65 70 75 80 Leu Gly Lys Asn Phe Thr Glu Gly Ile Ala Val Val Tyr Lys Glu Asn 85 90 95 Ile Ala Ala Tyr Lys Phe Lys Ala Thr Val Tyr Tyr Lys Asp Val Ile 100 105 110 Val Ser Thr Ala Trp Ala Gly Ser Ser Tyr Thr Gln Ile Thr Asn Arg 115 120 125 Tyr Ala Asp Arg Val Pro Ile Pro Val Ser Glu Ile Thr Asp Thr Ile 130 135 140 Asp Lys Phe Gly Lys Cys Ser Ser Lys Ala Thr Tyr Val Arg Asn Asn 145 150 155 160 His Lys Val Glu Ala Phe Asn Glu Asp Lys Asn Pro Gln Asp Met Pro 165 170 175 Leu Ile Ala Ser Lys Tyr Asn Ser Val Gly Ser Lys Ala Trp His Thr 180 185 190 Thr Asn Asp Thr Tyr Met Val Ala Gly Thr Pro Gly Thr Tyr Arg Thr 195 200 205 Gly Thr Ser Val Asn Cys Ile Ile Glu Glu Val Glu Ala Arg Ser Ile 210 215 220 Phe Pro Tyr Asp Ser Phe Gly Leu Ser Thr Gly Asp Ile Ile Tyr Met 225 230 235 240 Ser Pro Phe Phe Gly Leu Arg Asp Gly Ala Tyr Arg Glu His Ser Asn 245 250 255 Tyr Ala Met Asp Arg Phe His Gln Phe Glu Gly Tyr Arg Gln Arg Asp 260 265 270 Leu Asp Thr Arg Ala Leu Leu Glu Pro Ala Ala Arg Asn Phe Leu Val 275 280 285 Thr Pro His Leu Thr Val Gly Trp Asn Trp Lys Pro Lys Arg Thr Glu 290 295 300 Val Cys Ser Leu Val Lys Trp Arg Glu Val Glu Asp Val Val Arg Asp 305 310 315 320 Glu Tyr Ala His Asn Phe Arg Phe Thr Met Lys Thr Leu Ser Thr Thr 325 330 335 Phe Ile Ser Glu Thr Asn Glu Phe Asn Leu Asn Gln Ile His Leu Ser 340 345 350 Gln Cys Val Lys Glu Glu Ala Arg Ala Ile Ile Asn Arg Ile Tyr Thr 355 360 365 Thr Arg Tyr Asn Ser Ser His Val Arg Thr Gly Asp Ile Gln Thr Tyr 370 375 380 Leu Ala Arg Gly Gly Phe Val Val Val Phe Gln Pro Leu Leu Ser Asn 385 390 395 400 Ser Leu Ala Arg Leu Tyr Leu Gln Glu Leu Val Arg Glu Asn Thr Asn 405 410 415 His Ser Pro Gln Lys His Pro Thr Arg Asn Thr Arg Ser Arg Arg Ser 420 425 430 Val Pro Val Glu Leu Arg Ala Asn Arg Thr Ile Thr Thr Thr Ser Ser 435 440 445 Val Glu Phe Ala Met Leu Gln Phe Thr Tyr Asp His Ile Gln Glu His 450 455 460 Val Asn Glu Met Leu Ala Arg Ile Ser Ser Ser Trp Cys Gln Leu Gln 465 470 475 480 Asn Arg Glu Arg Ala Leu Trp Ser Gly Leu Phe Pro Ile Asn Pro Ser 485 490 495 Ala Leu Ala Ser Thr Ile Leu Asp Gln Arg Val Lys Ala Arg Ile Leu 500 505 510 Gly Asp Val Ile Ser Val Ser Asn Cys Pro Glu Leu Gly Ser Asp Thr 515 520 525 Arg Ile Ile Leu Gln Asn Ser Met Arg Val Ser Gly Ser Thr Thr Arg 530 535 540 Cys Tyr Ser Arg Pro Leu Ile Ser Ile Val Ser Leu Asn Gly Ser Gly 545 550 555 560 Thr Val Glu Gly Gln Leu Gly Thr Asp Asn Glu Leu Ile Met Ser Arg 565 570 575 Asp Leu Leu Glu Pro Cys Val Ala Asn His Lys Arg Tyr Phe Leu Phe 580 585 590 Gly His His Tyr Val Tyr Tyr Glu Asp Tyr Arg Tyr Val Arg Glu Ile 595 600 605 Ala Val His Asp Val Gly Met Ile Ser Thr Tyr Val Asp Leu Asn Leu 610 615 620 Thr Leu Leu Lys Asp Arg Glu Phe Met Pro Leu Gln Val Tyr Thr Arg 625 630 635 640 Asp Glu Leu Arg Asp Thr Gly Leu Leu Asp Tyr Ser Glu Ile Gln Arg 645 650 655 Arg Asn Gln Met His Ser Leu Arg Phe Tyr Asp Ile Asp Lys Val Val 660 665 670 Gln Tyr Asp Ser Gly Thr Ala Ile Met Gln Gly Met Ala Gln Phe Phe 675 680 685 Gln Gly Leu Gly Thr Ala Gly Gln Ala Val Gly His Val Val Leu Gly 690 695 700 Ala Thr Gly Ala Leu Leu Ser Thr Val His Gly Phe Thr Thr Phe Leu 705 710 715 720 Ser Asn Pro Phe Gly Ala Leu Ala Val Gly Leu Leu Val Leu Ala Gly 725 730 735 Leu Val Ala Ala Phe Phe Ala Tyr Arg Tyr Val Leu Lys Leu Lys Thr 740 745 750 Ser Pro Met Lys Ala Leu Tyr Pro Leu Thr Thr Lys Gly Leu Lys Gln 755 760 765 Leu Pro Glu Gly Met Asp Pro Phe Ala Glu Lys Pro Asn Ala Thr Asp 770 775 780 Thr Pro Ile Glu Glu Ile Gly Asp Ser Gln Asn Thr Glu Pro Ser Val 785 790 795 800 Asn Ser Gly Phe Asp Pro Asp Lys Phe Arg Glu Ala Gln Glu Met Ile 805 810 815 Lys Tyr Met Thr Leu Val Ser Ala Ala Glu Arg Gln Glu Ser Lys Ala 820 825 830 Arg Lys Lys Asn Lys Thr Ser Ala Leu Leu Thr Ser Arg Leu Thr Gly 835 840 845 Leu Ala Leu Arg Asn Arg Arg Gly Tyr Ser Arg Val Arg Thr Glu Asn 850 855 860 Val Thr Gly Val 865 <210> 54 <211> 340 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 54 Met Gln Ala Leu Gly Ile Lys Thr Glu His Phe Ile Ile Met Cys Leu 1 5 10 15 Leu Ser Gly His Ala Val Phe Thr Leu Trp Tyr Thr Ala Arg Val Lys 20 25 30 Phe Glu His Glu Cys Val Tyr Ala Thr Thr Val Ile Asn Gly Gly Pro 35 40 45 Val Val Trp Gly Ser Tyr Asn Asn Ser Leu Ile Tyr Val Thr Phe Val 50 55 60 Asn His Ser Thr Phe Leu Asp Gly Leu Ser Gly Tyr Asp Tyr Ser Cys 65 70 75 80 Arg Glu Asn Leu Leu Ser Gly Asp Thr Met Val Lys Thr Ala Ile Ser 85 90 95 Thr Pro Leu His Asp Lys Ile Arg Ile Val Leu Gly Thr Arg Asn Cys 100 105 110 His Ala Tyr Phe Trp Cys Val Gln Leu Lys Met Ile Phe Phe Ala Trp 115 120 125 Phe Val Tyr Gly Met Tyr Leu Gln Phe Arg Arg Ile Arg Arg Met Phe 130 135 140 Gly Pro Phe Arg Ser Ser Cys Glu Leu Ile Ser Pro Thr Ser Tyr Ser 145 150 155 160 Leu Asn Tyr Val Thr Arg Val Ile Ser Asn Ile Leu Leu Gly Tyr Pro 165 170 175 Tyr Thr Lys Leu Ala Arg Leu Leu Cys Asp Val Ser Met Arg Arg Asp 180 185 190 Gly Met Ser Lys Val Phe Asn Ala Asp Pro Ile Ser Phe Leu Tyr Met 195 200 205 His Lys Gly Val Thr Leu Leu Met Leu Leu Glu Val Ile Ala His Ile 210 215 220 Ser Ser Gly Cys Ile Val Leu Leu Thr Leu Gly Val Ala Tyr Thr Pro 225 230 235 240 Cys Ala Leu Leu Tyr Pro Thr Tyr Ile Arg Ile Leu Ala Trp Val Val 245 250 255 Val Cys Thr Leu Ala Ile Val Glu Leu Ile Ser Tyr Val Arg Pro Lys 260 265 270 Pro Thr Lys Asp Asn His Leu Asn His Ile Asn Thr Gly Gly Ile Arg 275 280 285 Gly Ile Cys Thr Thr Cys Cys Ala Thr Val Met Ser Gly Leu Ala Ile 290 295 300 Lys Cys Phe Tyr Ile Val Ile Phe Ala Ile Ala Val Val Ile Phe Met 305 310 315 320 His Tyr Glu Gln Arg Val Gln Val Ser Leu Phe Gly Glu Ser Glu Asn 325 330 335 Ser Gln Lys His 340 <210> 55 <211> 87 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 55 Met Gly Ser Ile Thr Ala Ser Phe Ile Leu Ile Thr Met Gln Ile Leu 1 5 10 15 Phe Phe Cys Glu Asp Ser Ser Gly Glu Pro Asn Phe Ala Glu Arg Asn 20 25 30 Phe Trp His Ala Ser Cys Ser Ala Arg Gly Val Tyr Ile Asp Gly Ser 35 40 45 Met Ile Thr Thr Leu Phe Phe Tyr Ala Ser Leu Leu Gly Val Cys Val 50 55 60 Ala Leu Ile Ser Leu Ala Tyr His Ala Cys Phe Arg Leu Phe Thr Arg 65 70 75 80 Ser Val Leu Arg Ser Thr Trp 85 <210> 56 <211> 18 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Polypeptide <400> 56 Met Asp Trp Thr Trp Ile Leu Phe Leu Val Ala Ala Ala Thr Arg Val 1 5 10 15 His Ser <210> 57 <211> 20 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Polypeptide <400> 57 Met Glu Thr Pro Ala Gln Leu Leu Phe Leu Leu Leu Leu Trp Leu Pro 1 5 10 15 Asp Thr Thr Gly 20 <210> 58 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Polypeptide <400> 58 Ala Glu Ala Ala Asp Ala 1 5 <210> 59 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Polypeptide <400> 59 Ser Glu Ser Thr Asp Thr 1 5 <210> 60 <211> 1885 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Polynucleotide <400> 60 gggaaataag agagaaaaga agagtaagaa gaaatataag agccaccatg ggcaccgtga 60 acaagcccgt cgtgggcgtg ctgatgggct tcggcatcat caccggcacc ctgcggatca 120 ccaatcctgt gcgggccagc gtgctgagat acgacgactt ccacatcgac gaggacaagc 180 tggacaccaa cagcgtgtac gagccctact accacagcga ccacgccgag agcagctggg 240 tcaacagagg cgagtccagc cggaaggcct acgaccacaa cagcccctac atctggcccc 300 ggaacgacta cgacggcttc ctggaaaatg cccacgagca ccacggcgtg tacaaccagg 360 gcagaggcat cgacagcggc gagagactga tgcagcccac ccagatgagc gcccaggaag 420 atctgggcga cgacaccggc atccacgtga tccctaccct gaacggcgac gaccggcaca 480 agatcgtgaa cgtggaccag cggcagtacg gcgacgtgtt caagggcgac ctgaacccca 540 agccccaggg acagcggctg attgaggtgt ccgtggaaga gaaccacccc ttcaccctga 600 gagcccctat ccagcggatc tacggcgtgc gctataccga gacttggagc ttcctgccca 660 gcctgacctg tactggcgac gccgctcctg ccatccagca catctgcctg aagcacacca 720 cctgtttcca ggacgtggtg gtggacgtgg actgcgccga gaacaccaaa gaggaccagc 780 tggccgagat cagctaccgg ttccagggca agaaagaggc cgaccagccc tggatcgtcg 840 tgaacaccag caccctgttc gacgagctgg aactggaccc tcccgagatc gaacccgggg 900 tgctgaaggt gctgcggacc gagaagcagt acctgggagt gtacatctgg aacatgcggg 960 gcagcgacgg cacctctacc tacgccacct tcctcgtgac ctggaagggc gacgagaaaa 1020 cccggaaccc tacccctgcc gtgacccctc agcctagagg cgccgagttt cacatgtgga 1080 attaccacag ccacgtgttc agcgtgggcg acaccttctc cctggccatg catctgcagt 1140 acaagatcca cgaggcccct ttcgacctgc tgctggaatg gctgtacgtg cccatcgacc 1200 ctacctgcca gcccatgcgg ctgtactcca cctgtctgta ccaccccaac gcccctcagt 1260 gcctgagcca catgaatagc ggctgcacct tcaccagccc tcacctggct cagagggtgg 1320 ccagcaccgt gtaccagaat tgcgagcacg ccgacaacta caccgcctac tgcctgggca 1380 tcagccacat ggaacccagc ttcggcctga tcctgcacga tggcggcacc accctgaagt 1440 tcgtggacac ccctgagtcc ctgagcggcc tgtacgtgtt cgtggtgtac ttcaacggcc 1500 acgtggaagc cgtggcctac accgtggtgt ccaccgtgga ccacttcgtg aacgccatcg 1560 aggaacgggg cttccctcca actgctggac agcctcctgc caccaccaag cccaaagaaa 1620 tcacccctgt gaaccccggc accagcccac tgctgcgcta tgctgcttgg acaggcggac 1680 tggctgctgt ggtgctgctg tgcctcgtga ttttcctgat ctgcaccgcc aagcggatga 1740 gagtgaaggc cgccagagtg gacaagtgat aataggctgg agcctcggtg gccatgcttc 1800 ttgccccttg ggcctccccc cagcccctcc tccccttcct gcacccgtac ccccgtggtc 1860 tttgaataaa gtctgagtgg gcggc 1885 <210> 61 <211> 573 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Polypeptide <400> 61 Met Gly Thr Val Asn Lys Pro Val Val Gly Val Leu Met Gly Phe Gly 1 5 10 15 Ile Ile Thr Gly Thr Leu Arg Ile Thr Asn Pro Val Arg Ala Ser Val 20 25 30 Leu Arg Tyr Asp Asp Phe His Ile Asp Glu Asp Lys Leu Asp Thr Asn 35 40 45 Ser Val Tyr Glu Pro Tyr Tyr His Ser Asp His Ala Glu Ser Ser Trp 50 55 60 Val Asn Arg Gly Glu Ser Ser Arg Lys Ala Tyr Asp His Asn Ser Pro 65 70 75 80 Tyr Ile Trp Pro Arg Asn Asp Tyr Asp Gly Phe Leu Glu Asn Ala His 85 90 95 Glu His His Gly Val Tyr Asn Gln Gly Arg Gly Ile Asp Ser Gly Glu 100 105 110 Arg Leu Met Gln Pro Thr Gln Met Ser Ala Gln Glu Asp Leu Gly Asp 115 120 125 Asp Thr Gly Ile His Val Ile Pro Thr Leu Asn Gly Asp Asp Arg His 130 135 140 Lys Ile Val Asn Val Asp Gln Arg Gln Tyr Gly Asp Val Phe Lys Gly 145 150 155 160 Asp Leu Asn Pro Lys Pro Gln Gly Gln Arg Leu Ile Glu Val Ser Val 165 170 175 Glu Glu Asn His Pro Phe Thr Leu Arg Ala Pro Ile Gln Arg Ile Tyr 180 185 190 Gly Val Arg Tyr Thr Glu Thr Trp Ser Phe Leu Pro Ser Leu Thr Cys 195 200 205 Thr Gly Asp Ala Ala Pro Ala Ile Gln His Ile Cys Leu Lys His Thr 210 215 220 Thr Cys Phe Gln Asp Val Val Val Asp Val Asp Cys Ala Glu Asn Thr 225 230 235 240 Lys Glu Asp Gln Leu Ala Glu Ile Ser Tyr Arg Phe Gln Gly Lys Lys 245 250 255 Glu Ala Asp Gln Pro Trp Ile Val Val Asn Thr Ser Thr Leu Phe Asp 260 265 270 Glu Leu Glu Leu Asp Pro Pro Glu Ile Glu Pro Gly Val Leu Lys Val 275 280 285 Leu Arg Thr Glu Lys Gln Tyr Leu Gly Val Tyr Ile Trp Asn Met Arg 290 295 300 Gly Ser Asp Gly Thr Ser Thr Tyr Ala Thr Phe Leu Val Thr Trp Lys 305 310 315 320 Gly Asp Glu Lys Thr Arg Asn Pro Thr Pro Ala Val Thr Pro Gln Pro 325 330 335 Arg Gly Ala Glu Phe His Met Trp Asn Tyr His Ser His Val Phe Ser 340 345 350 Val Gly Asp Thr Phe Ser Leu Ala Met His Leu Gln Tyr Lys Ile His 355 360 365 Glu Ala Pro Phe Asp Leu Leu Leu Glu Trp Leu Tyr Val Pro Ile Asp 370 375 380 Pro Thr Cys Gln Pro Met Arg Leu Tyr Ser Thr Cys Leu Tyr His Pro 385 390 395 400 Asn Ala Pro Gln Cys Leu Ser His Met Asn Ser Gly Cys Thr Phe Thr 405 410 415 Ser Pro His Leu Ala Gln Arg Val Ala Ser Thr Val Tyr Gln Asn Cys 420 425 430 Glu His Ala Asp Asn Tyr Thr Ala Tyr Cys Leu Gly Ile Ser His Met 435 440 445 Glu Pro Ser Phe Gly Leu Ile Leu His Asp Gly Gly Thr Thr Leu Lys 450 455 460 Phe Val Asp Thr Pro Glu Ser Leu Ser Gly Leu Tyr Val Phe Val Val 465 470 475 480 Tyr Phe Asn Gly His Val Glu Ala Val Ala Tyr Thr Val Val Ser Thr 485 490 495 Val Asp His Phe Val Asn Ala Ile Glu Glu Arg Gly Phe Pro Pro Thr 500 505 510 Ala Gly Gln Pro Pro Ala Thr Thr Lys Pro Lys Glu Ile Thr Pro Val 515 520 525 Asn Pro Gly Thr Ser Pro Leu Leu Arg Tyr Ala Ala Trp Thr Gly Gly 530 535 540 Leu Ala Ala Val Val Leu Leu Cys Leu Val Ile Phe Leu Ile Cys Thr 545 550 555 560 Ala Lys Arg Met Arg Val Lys Ala Ala Arg Val Asp Lys 565 570 <210> 62 <211> 1719 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Polynucleotide <400> 62 atgggcaccg tgaacaagcc cgtcgtgggc gtgctgatgg gcttcggcat catcaccggc 60 accctgcgga tcaccaatcc tgtgcgggcc agcgtgctga gatacgacga cttccacatc 120 gacgaggaca agctggacac caacagcgtg tacgagccct actaccacag cgaccacgcc 180 gagagcagct gggtcaacag aggcgagtcc agccggaagg cctacgacca caacagcccc 240 tacatctggc cccggaacga ctacgacggc ttcctggaaa atgcccacga gcaccacggc 300 gtgtacaacc agggcagagg catcgacagc ggcgagagac tgatgcagcc cacccagatg 360 agcgcccagg aagatctggg cgacgacacc ggcatccacg tgatccctac cctgaacggc 420 gacgaccggc acaagatcgt gaacgtggac cagcggcagt acggcgacgt gttcaagggc 480 gacctgaacc ccaagcccca gggacagcgg ctgattgagg tgtccgtgga agagaaccac 540 cccttcaccc tgagagcccc tatccagcgg atctacggcg tgcgctatac cgagacttgg 600 agcttcctgc ccagcctgac ctgtactggc gacgccgctc ctgccatcca gcacatctgc 660 ctgaagcaca ccacctgttt ccaggacgtg gtggtggacg tggactgcgc cgagaacacc 720 aaagaggacc agctggccga gatcagctac cggttccagg gcaagaaaga ggccgaccag 780 ccctggatcg tcgtgaacac cagcaccctg ttcgacgagc tggaactgga ccctcccgag 840 atcgaacccg gggtgctgaa ggtgctgcgg accgagaagc agtacctggg agtgtacatc 900 tggaacatgc ggggcagcga cggcacctct acctacgcca ccttcctcgt gacctggaag 960 ggcgacgaga aaacccggaa ccctacccct gccgtgaccc ctcagcctag aggcgccgag 1020 tttcacatgt ggaattacca cagccacgtg ttcagcgtgg gcgacacctt ctccctggcc 1080 atgcatctgc agtacaagat ccacgaggcc cctttcgacc tgctgctgga atggctgtac 1140 gtgcccatcg accctacctg ccagcccatg cggctgtact ccacctgtct gtaccacccc 1200 aacgcccctc agtgcctgag ccacatgaat agcggctgca ccttcaccag ccctcacctg 1260 gctcagaggg tggccagcac cgtgtaccag aattgcgagc acgccgacaa ctacaccgcc 1320 tactgcctgg gcatcagcca catggaaccc agcttcggcc tgatcctgca cgatggcggc 1380 accaccctga agttcgtgga cacccctgag tccctgagcg gcctgtacgt gttcgtggtg 1440 tacttcaacg gccacgtgga agccgtggcc tacaccgtgg tgtccaccgt ggaccacttc 1500 gtgaacgcca tcgaggaacg gggcttccct ccaactgctg gacagcctcc tgccaccacc 1560 aagcccaaag aaatcacccc tgtgaacccc ggcaccagcc cactgctgcg ctatgctgct 1620 tggacaggcg gactggctgc tgtggtgctg ctgtgcctcg tgattttcct gatctgcacc 1680 gccaagcgga tgagagtgaa ggccgccaga gtggacaag 1719 <210> 63 <211> 1990 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Polynucleotide <400> 63 gggaaataag agagaaaaga agagtaagaa gaaatataag agccaccatg ggcaccgtga 60 acaagcccgt cgtgggcgtg ctgatgggct tcggcatcat caccggcacc ctgcggatca 120 ccaatcctgt gcgggccagc gtgctgagat acgacgactt ccacatcgac gaggacaagc 180 tggacaccaa cagcgtgtac gagccctact accacagcga ccacgccgag agcagctggg 240 tcaacagagg cgagtccagc cggaaggcct acgaccacaa cagcccctac atctggcccc 300 ggaacgacta cgacggcttc ctggaaaatg cccacgagca ccacggcgtg tacaaccagg 360 gcagaggcat cgacagcggc gagagactga tgcagcccac ccagatgagc gcccaggaag 420 atctgggcga cgacaccggc atccacgtga tccctaccct gaacggcgac gaccggcaca 480 agatcgtgaa cgtggaccag cggcagtacg gcgacgtgtt caagggcgac ctgaacccca 540 agccccaggg acagcggctg attgaggtgt ccgtggaaga gaaccacccc ttcaccctga 600 gagcccctat ccagcggatc tacggcgtgc gctataccga gacttggagc ttcctgccca 660 gcctgacctg tactggcgac gccgctcctg ccatccagca catctgcctg aagcacacca 720 cctgtttcca ggacgtggtg gtggacgtgg actgcgccga gaacaccaaa gaggaccagc 780 tggccgagat cagctaccgg ttccagggca agaaagaggc cgaccagccc tggatcgtcg 840 tgaacaccag caccctgttc gacgagctgg aactggaccc tcccgagatc gaacccgggg 900 tgctgaaggt gctgcggacc gagaagcagt acctgggagt gtacatctgg aacatgcggg 960 gcagcgacgg cacctctacc tacgccacct tcctcgtgac ctggaagggc gacgagaaaa 1020 cccggaaccc tacccctgcc gtgacccctc agcctagagg cgccgagttt cacatgtgga 1080 attaccacag ccacgtgttc agcgtgggcg acaccttctc cctggccatg catctgcagt 1140 acaagatcca cgaggcccct ttcgacctgc tgctggaatg gctgtacgtg cccatcgacc 1200 ctacctgcca gcccatgcgg ctgtactcca cctgtctgta ccaccccaac gcccctcagt 1260 gcctgagcca catgaatagc ggctgcacct tcaccagccc tcacctggct cagagggtgg 1320 ccagcaccgt gtaccagaat tgcgagcacg ccgacaacta caccgcctac tgcctgggca 1380 tcagccacat ggaacccagc ttcggcctga tcctgcacga tggcggcacc accctgaagt 1440 tcgtggacac ccctgagtcc ctgagcggcc tgtacgtgtt cgtggtgtac ttcaacggcc 1500 acgtggaagc cgtggcctac accgtggtgt ccaccgtgga ccacttcgtg aacgccatcg 1560 aggaacgggg cttccctcca actgctggac agcctcctgc caccaccaag cccaaagaaa 1620 tcacccctgt gaaccccggc accagcccac tgctgcgcta tgctgcttgg acaggcggac 1680 tggctgctgt ggtgctgctg tgcctcgtga ttttcctgat ctgcaccgcc aagcggatga 1740 gagtgaaggc cgccagagtg gacaagtgat aataggctgg agcctcggtg gccatgcttc 1800 ttgccccttg ggcctccccc cagcccctcc tccccttcct gcacccgtac ccccgtggtc 1860 tttgaataaa gtctgagtgg gcggcaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 1920 aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 1980 aaaaatctag 1990 <210> 64 <211> 1885 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Polynucleotide <400> 64 gggaaataag agagaaaaga agagtaagaa gaaatataag agccaccatg gggacagtta 60 ataaacctgt ggtgggggta ttgatggggt tcggaattat cacgggaacg ttgcgtataa 120 cgaatccggt cagagcatcc gtcttgcgat acgatgattt tcacatcgat gaagacaaac 180 tggatacaaa ctccgtatat gagccttact accattcaga tcatgcggag tcttcatggg 240 taaatcgggg agagtcttcg cgaaaagcgt acgatcataa ctcaccttat atatggccac 300 gtaatgatta tgatggattt ttagagaacg cacacgaaca ccatggggtg tataatcagg 360 gccgtggtat cgatagcggg gaacggttaa tgcaacccac acaaatgtct gcacaggagg 420 atcttgggga cgatacgggc atccacgtta tccctacgtt aaacggcgat gacagacata 480 aaattgtaaa tgtggaccaa cgtcaatacg gtgacgtgtt taaaggagat cttaatccaa 540 aaccccaagg ccaaagactc attgaggtgt cagtggaaga aaatcacccg tttactttac 600 gcgcaccgat tcagcggatt tatggagtcc ggtacaccga gacttggagc tttttgccgt 660 cattaacctg tacgggagac gcagcgcccg ccatccagca tatatgttta aaacatacaa 720 catgctttca agacgtggtg gtggatgtgg attgcgcgga aaatactaaa gaggatcagt 780 tggccgaaat cagttaccgt tttcaaggta agaaggaagc ggaccaaccg tggattgttg 840 taaacacgag cacactgttt gatgaactcg aattagaccc ccccgagatt gaaccgggtg 900 tcttgaaagt acttcggaca gagaaacaat acttgggtgt gtacatttgg aacatgcgcg 960 gctccgatgg tacgtctacc tacgccacgt ttttggtcac ctggaaaggg gatgagaaga 1020 caagaaaccc tacgcccgca gtaactcctc aaccaagagg ggctgagttt catatgtgga 1080 attaccactc gcatgtattt tcagttggtg atacgtttag cttggcaatg catcttcagt 1140 ataagataca tgaagcgcca tttgatttgc tgttagagtg gttgtatgtc cccatcgatc 1200 ctacatgtca accaatgcgg ttatattcta cgtgtttgta tcatcccaac gcaccccaat 1260 gcctctctca tatgaattcc ggttgtacat ttacctcgcc acatttagcc cagcgtgttg 1320 caagcacagt gtatcaaaat tgtgaacatg cagataacta caccgcatat tgtctgggaa 1380 tatctcatat ggagcctagc tttggtctaa tcttacacga cgggggcacc acgttaaagt 1440 ttgtagatac acccgagagt ttgtcgggat tatacgtttt tgtggtgtat tttaacgggc 1500 atgttgaagc cgtagcatac actgttgtat ccacagtaga tcattttgta aacgcaattg 1560 aagagcgtgg atttccgcca acggccggtc agccaccggc gactactaaa cccaaggaaa 1620 ttacccccgt aaaccccgga acgtcaccac ttctacgata tgccgcatgg accggagggc 1680 ttgcagcagt agtactttta tgtctcgtaa tatttttaat ctgtacggct aaacgaatga 1740 gggttaaagc cgccagggta gacaagtgat aataggctgg agcctcggtg gccatgcttc 1800 ttgccccttg ggcctccccc cagcccctcc tccccttcct gcacccgtac ccccgtggtc 1860 tttgaataaa gtctgagtgg gcggc 1885 <210> 65 <211> 573 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Polypeptide <400> 65 Met Gly Thr Val Asn Lys Pro Val Val Gly Val Leu Met Gly Phe Gly 1 5 10 15 Ile Ile Thr Gly Thr Leu Arg Ile Thr Asn Pro Val Arg Ala Ser Val 20 25 30 Leu Arg Tyr Asp Asp Phe His Ile Asp Glu Asp Lys Leu Asp Thr Asn 35 40 45 Ser Val Tyr Glu Pro Tyr Tyr His Ser Asp His Ala Glu Ser Ser Trp 50 55 60 Val Asn Arg Gly Glu Ser Ser Arg Lys Ala Tyr Asp His Asn Ser Pro 65 70 75 80 Tyr Ile Trp Pro Arg Asn Asp Tyr Asp Gly Phe Leu Glu Asn Ala His 85 90 95 Glu His His Gly Val Tyr Asn Gln Gly Arg Gly Ile Asp Ser Gly Glu 100 105 110 Arg Leu Met Gln Pro Thr Gln Met Ser Ala Gln Glu Asp Leu Gly Asp 115 120 125 Asp Thr Gly Ile His Val Ile Pro Thr Leu Asn Gly Asp Asp Arg His 130 135 140 Lys Ile Val Asn Val Asp Gln Arg Gln Tyr Gly Asp Val Phe Lys Gly 145 150 155 160 Asp Leu Asn Pro Lys Pro Gln Gly Gln Arg Leu Ile Glu Val Ser Val 165 170 175 Glu Glu Asn His Pro Phe Thr Leu Arg Ala Pro Ile Gln Arg Ile Tyr 180 185 190 Gly Val Arg Tyr Thr Glu Thr Trp Ser Phe Leu Pro Ser Leu Thr Cys 195 200 205 Thr Gly Asp Ala Ala Pro Ala Ile Gln His Ile Cys Leu Lys His Thr 210 215 220 Thr Cys Phe Gln Asp Val Val Val Asp Val Asp Cys Ala Glu Asn Thr 225 230 235 240 Lys Glu Asp Gln Leu Ala Glu Ile Ser Tyr Arg Phe Gln Gly Lys Lys 245 250 255 Glu Ala Asp Gln Pro Trp Ile Val Val Asn Thr Ser Thr Leu Phe Asp 260 265 270 Glu Leu Glu Leu Asp Pro Pro Glu Ile Glu Pro Gly Val Leu Lys Val 275 280 285 Leu Arg Thr Glu Lys Gln Tyr Leu Gly Val Tyr Ile Trp Asn Met Arg 290 295 300 Gly Ser Asp Gly Thr Ser Thr Tyr Ala Thr Phe Leu Val Thr Trp Lys 305 310 315 320 Gly Asp Glu Lys Thr Arg Asn Pro Thr Pro Ala Val Thr Pro Gln Pro 325 330 335 Arg Gly Ala Glu Phe His Met Trp Asn Tyr His Ser His Val Phe Ser 340 345 350 Val Gly Asp Thr Phe Ser Leu Ala Met His Leu Gln Tyr Lys Ile His 355 360 365 Glu Ala Pro Phe Asp Leu Leu Leu Glu Trp Leu Tyr Val Pro Ile Asp 370 375 380 Pro Thr Cys Gln Pro Met Arg Leu Tyr Ser Thr Cys Leu Tyr His Pro 385 390 395 400 Asn Ala Pro Gln Cys Leu Ser His Met Asn Ser Gly Cys Thr Phe Thr 405 410 415 Ser Pro His Leu Ala Gln Arg Val Ala Ser Thr Val Tyr Gln Asn Cys 420 425 430 Glu His Ala Asp Asn Tyr Thr Ala Tyr Cys Leu Gly Ile Ser His Met 435 440 445 Glu Pro Ser Phe Gly Leu Ile Leu His Asp Gly Gly Thr Thr Leu Lys 450 455 460 Phe Val Asp Thr Pro Glu Ser Leu Ser Gly Leu Tyr Val Phe Val Val 465 470 475 480 Tyr Phe Asn Gly His Val Glu Ala Val Ala Tyr Thr Val Val Ser Thr 485 490 495 Val Asp His Phe Val Asn Ala Ile Glu Glu Arg Gly Phe Pro Pro Thr 500 505 510 Ala Gly Gln Pro Pro Ala Thr Thr Lys Pro Lys Glu Ile Thr Pro Val 515 520 525 Asn Pro Gly Thr Ser Pro Leu Leu Arg Tyr Ala Ala Trp Thr Gly Gly 530 535 540 Leu Ala Ala Val Val Leu Leu Cys Leu Val Ile Phe Leu Ile Cys Thr 545 550 555 560 Ala Lys Arg Met Arg Val Lys Ala Ala Arg Val Asp Lys 565 570 <210> 66 <211> 1719 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Polynucleotide <400> 66 atggggacag ttaataaacc tgtggtgggg gtattgatgg ggttcggaat tatcacggga 60 acgttgcgta taacgaatcc ggtcagagca tccgtcttgc gatacgatga ttttcacatc 120 gatgaagaca aactggatac aaactccgta tatgagcctt actaccattc agatcatgcg 180 gagtcttcat gggtaaatcg gggagagtct tcgcgaaaag cgtacgatca taactcacct 240 tatatatggc cacgtaatga ttatgatgga tttttagaga acgcacacga acaccatggg 300 gtgtataatc agggccgtgg tatcgatagc ggggaacggt taatgcaacc cacacaaatg 360 tctgcacagg aggatcttgg ggacgatacg ggcatccacg ttatccctac gttaaacggc 420 gatgacagac ataaaattgt aaatgtggac caacgtcaat acggtgacgt gtttaaagga 480 gatcttaatc caaaacccca aggccaaaga ctcattgagg tgtcagtgga agaaaatcac 540 ccgtttactt tacgcgcacc gattcagcgg atttatggag tccggtacac cgagacttgg 600 agctttttgc cgtcattaac ctgtacggga gacgcagcgc ccgccatcca gcatatatgt 660 ttaaaacata caacatgctt tcaagacgtg gtggtggatg tggattgcgc ggaaaatact 720 aaagaggatc agttggccga aatcagttac cgttttcaag gtaagaagga agcggaccaa 780 ccgtggattg ttgtaaacac gagcacactg tttgatgaac tcgaattaga cccccccgag 840 attgaaccgg gtgtcttgaa agtacttcgg acagagaaac aatacttggg tgtgtacatt 900 tggaacatgc gcggctccga tggtacgtct acctacgcca cgtttttggt cacctggaaa 960 ggggatgaga agacaagaaa ccctacgccc gcagtaactc ctcaaccaag aggggctgag 1020 tttcatatgt ggaattacca ctcgcatgta ttttcagttg gtgatacgtt tagcttggca 1080 atgcatcttc agtataagat acatgaagcg ccatttgatt tgctgttaga gtggttgtat 1140 gtccccatcg atcctacatg tcaaccaatg cggttatatt ctacgtgttt gtatcatccc 1200 aacgcacccc aatgcctctc tcatatgaat tccggttgta catttacctc gccacattta 1260 gcccagcgtg ttgcaagcac agtgtatcaa aattgtgaac atgcagataa ctacaccgca 1320 tattgtctgg gaatatctca tatggagcct agctttggtc taatcttaca cgacgggggc 1380 accacgttaa agtttgtaga tacacccgag agtttgtcgg gattatacgt ttttgtggtg 1440 tattttaacg ggcatgttga agccgtagca tacactgttg tatccacagt agatcatttt 1500 gtaaacgcaa ttgaagagcg tggatttccg ccaacggccg gtcagccacc ggcgactact 1560 aaacccaagg aaattacccc cgtaaacccc ggaacgtcac cacttctacg atatgccgca 1620 tggaccggag ggcttgcagc agtagtactt ttatgtctcg taatattttt aatctgtacg 1680 gctaaacgaa tgagggttaa agccgccagg gtagacaag 1719 <210> 67 <211> 1990 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Polynucleotide <400> 67 gggaaataag agagaaaaga agagtaagaa gaaatataag agccaccatg gggacagtta 60 ataaacctgt ggtgggggta ttgatggggt tcggaattat cacgggaacg ttgcgtataa 120 cgaatccggt cagagcatcc gtcttgcgat acgatgattt tcacatcgat gaagacaaac 180 tggatacaaa ctccgtatat gagccttact accattcaga tcatgcggag tcttcatggg 240 taaatcgggg agagtcttcg cgaaaagcgt acgatcataa ctcaccttat atatggccac 300 gtaatgatta tgatggattt ttagagaacg cacacgaaca ccatggggtg tataatcagg 360 gccgtggtat cgatagcggg gaacggttaa tgcaacccac acaaatgtct gcacaggagg 420 atcttgggga cgatacgggc atccacgtta tccctacgtt aaacggcgat gacagacata 480 aaattgtaaa tgtggaccaa cgtcaatacg gtgacgtgtt taaaggagat cttaatccaa 540 aaccccaagg ccaaagactc attgaggtgt cagtggaaga aaatcacccg tttactttac 600 gcgcaccgat tcagcggatt tatggagtcc ggtacaccga gacttggagc tttttgccgt 660 cattaacctg tacgggagac gcagcgcccg ccatccagca tatatgttta aaacatacaa 720 catgctttca agacgtggtg gtggatgtgg attgcgcgga aaatactaaa gaggatcagt 780 tggccgaaat cagttaccgt tttcaaggta agaaggaagc ggaccaaccg tggattgttg 840 taaacacgag cacactgttt gatgaactcg aattagaccc ccccgagatt gaaccgggtg 900 tcttgaaagt acttcggaca gagaaacaat acttgggtgt gtacatttgg aacatgcgcg 960 gctccgatgg tacgtctacc tacgccacgt ttttggtcac ctggaaaggg gatgagaaga 1020 caagaaaccc tacgcccgca gtaactcctc aaccaagagg ggctgagttt catatgtgga 1080 attaccactc gcatgtattt tcagttggtg atacgtttag cttggcaatg catcttcagt 1140 ataagataca tgaagcgcca tttgatttgc tgttagagtg gttgtatgtc cccatcgatc 1200 ctacatgtca accaatgcgg ttatattcta cgtgtttgta tcatcccaac gcaccccaat 1260 gcctctctca tatgaattcc ggttgtacat ttacctcgcc acatttagcc cagcgtgttg 1320 caagcacagt gtatcaaaat tgtgaacatg cagataacta caccgcatat tgtctgggaa 1380 tatctcatat ggagcctagc tttggtctaa tcttacacga cgggggcacc acgttaaagt 1440 ttgtagatac acccgagagt ttgtcgggat tatacgtttt tgtggtgtat tttaacgggc 1500 atgttgaagc cgtagcatac actgttgtat ccacagtaga tcattttgta aacgcaattg 1560 aagagcgtgg atttccgcca acggccggtc agccaccggc gactactaaa cccaaggaaa 1620 ttacccccgt aaaccccgga acgtcaccac ttctacgata tgccgcatgg accggagggc 1680 ttgcagcagt agtactttta tgtctcgtaa tatttttaat ctgtacggct aaacgaatga 1740 gggttaaagc cgccagggta gacaagtgat aataggctgg agcctcggtg gccatgcttc 1800 ttgccccttg ggcctccccc cagcccctcc tccccttcct gcacccgtac ccccgtggtc 1860 tttgaataaa gtctgagtgg gcggcaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 1920 aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 1980 aaaaatctag 1990 <210> 68 <211> 1885 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Polynucleotide <400> 68 gggaaataag agagaaaaga agagtaagaa gaaatataag agccaccatg gggacagtta 60 ataaacctgt ggtgggggta ttgatggggt tcggaattat cacgggaacg ttgcgtataa 120 cgaatccggt cagagcatcc gtcttgcgat acgatgattt tcacatcgat gaagacaaac 180 tggatacaaa ctccgtatat gagccttact accattcaga tcatgcggag tcttcatggg 240 taaatcgggg agagtcttcg cgaaaagcgt acgatcataa ctcaccttat atatggccac 300 gtaatgatta tgatggattt ttagagaacg cacacgaaca ccatggggtg tataatcagg 360 gccgtggtat cgatagcggg gaacggttaa tgcaacccac acaaatgtct gcacaggagg 420 atcttgggga cgatacgggc atccacgtta tccctacgtt aaacggcgat gacagacata 480 aaattgtaaa tgtggaccaa cgtcaatacg gtgacgtgtt taaaggagat cttaatccaa 540 aaccccaagg ccaaagactc attgaggtgt cagtggaaga aaatcacccg tttactttac 600 gcgcaccgat tcagcggatt tatggagtcc ggtacaccga gacttggagc tttttgccgt 660 cattaacctg tacgggagac gcagcgcccg ccatccagca tatatgttta aaacatacaa 720 catgctttca agacgtggtg gtggatgtgg attgcgcgga aaatactaaa gaggatcagt 780 tggccgaaat cagttaccgt tttcaaggta agaaggaagc ggaccaaccg tggattgttg 840 taaacacgag cacactgttt gatgaactcg aattagaccc acccgagatt gaaccgggtg 900 tcttgaaagt acttcggaca gagaaacaat acttgggtgt gtacatttgg aacatgcgcg 960 gctccgatgg tacgtctacc tacgccacgt ttttggtcac ctggaaaggg gatgagaaga 1020 caagaaaccc tacgcccgca gtaactcctc aaccaagagg ggctgagttt catatgtgga 1080 attaccactc gcatgtattt tcagttggtg atacgtttag cttggcaatg catcttcagt 1140 ataagataca tgaagcgcca tttgatttgc tgttagagtg gttgtatgtc cccatcgatc 1200 ctacatgtca accaatgcgg ttatattcta cgtgtttgta tcatcccaac gcaccccaat 1260 gcctctctca tatgaattcc ggttgtacat ttacctcgcc acatttagcc cagcgtgttg 1320 caagcacagt gtatcaaaat tgtgaacatg cagataacta caccgcatat tgtctgggaa 1380 tatctcatat ggagcctagc tttggtctaa tcttacacga cgggggcacc acgttaaagt 1440 ttgtagatac acccgagagt ttgtcgggat tatacgtttt tgtggtgtat tttaacgggc 1500 atgttgaagc cgtagcatac actgttgtat ccacagtaga tcattttgta aacgcaattg 1560 aagagcgtgg atttccgcca acggccggtc agccaccggc gactactaaa cccaaggaaa 1620 ttacccccgt aaaccccgga acgtcaccac ttctacgata tgccgcatgg accggagggc 1680 ttgcagcagt agtactttta tgtctcgtaa tatttttaat ctgtacggct aaacgaatga 1740 gggttaaagc cgccagggta gacaagtgat aataggctgg agcctcggtg gccatgcttc 1800 ttgccccttg ggcctccccc cagcccctcc tccccttcct gcacccgtac ccccgtggtc 1860 tttgaataaa gtctgagtgg gcggc 1885 <210> 69 <211> 573 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Polypeptide <400> 69 Met Gly Thr Val Asn Lys Pro Val Val Gly Val Leu Met Gly Phe Gly 1 5 10 15 Ile Ile Thr Gly Thr Leu Arg Ile Thr Asn Pro Val Arg Ala Ser Val 20 25 30 Leu Arg Tyr Asp Asp Phe His Ile Asp Glu Asp Lys Leu Asp Thr Asn 35 40 45 Ser Val Tyr Glu Pro Tyr Tyr His Ser Asp His Ala Glu Ser Ser Trp 50 55 60 Val Asn Arg Gly Glu Ser Ser Arg Lys Ala Tyr Asp His Asn Ser Pro 65 70 75 80 Tyr Ile Trp Pro Arg Asn Asp Tyr Asp Gly Phe Leu Glu Asn Ala His 85 90 95 Glu His His Gly Val Tyr Asn Gln Gly Arg Gly Ile Asp Ser Gly Glu 100 105 110 Arg Leu Met Gln Pro Thr Gln Met Ser Ala Gln Glu Asp Leu Gly Asp 115 120 125 Asp Thr Gly Ile His Val Ile Pro Thr Leu Asn Gly Asp Asp Arg His 130 135 140 Lys Ile Val Asn Val Asp Gln Arg Gln Tyr Gly Asp Val Phe Lys Gly 145 150 155 160 Asp Leu Asn Pro Lys Pro Gln Gly Gln Arg Leu Ile Glu Val Ser Val 165 170 175 Glu Glu Asn His Pro Phe Thr Leu Arg Ala Pro Ile Gln Arg Ile Tyr 180 185 190 Gly Val Arg Tyr Thr Glu Thr Trp Ser Phe Leu Pro Ser Leu Thr Cys 195 200 205 Thr Gly Asp Ala Ala Pro Ala Ile Gln His Ile Cys Leu Lys His Thr 210 215 220 Thr Cys Phe Gln Asp Val Val Val Asp Val Asp Cys Ala Glu Asn Thr 225 230 235 240 Lys Glu Asp Gln Leu Ala Glu Ile Ser Tyr Arg Phe Gln Gly Lys Lys 245 250 255 Glu Ala Asp Gln Pro Trp Ile Val Val Asn Thr Ser Thr Leu Phe Asp 260 265 270 Glu Leu Glu Leu Asp Pro Pro Glu Ile Glu Pro Gly Val Leu Lys Val 275 280 285 Leu Arg Thr Glu Lys Gln Tyr Leu Gly Val Tyr Ile Trp Asn Met Arg 290 295 300 Gly Ser Asp Gly Thr Ser Thr Tyr Ala Thr Phe Leu Val Thr Trp Lys 305 310 315 320 Gly Asp Glu Lys Thr Arg Asn Pro Thr Pro Ala Val Thr Pro Gln Pro 325 330 335 Arg Gly Ala Glu Phe His Met Trp Asn Tyr His Ser His Val Phe Ser 340 345 350 Val Gly Asp Thr Phe Ser Leu Ala Met His Leu Gln Tyr Lys Ile His 355 360 365 Glu Ala Pro Phe Asp Leu Leu Leu Glu Trp Leu Tyr Val Pro Ile Asp 370 375 380 Pro Thr Cys Gln Pro Met Arg Leu Tyr Ser Thr Cys Leu Tyr His Pro 385 390 395 400 Asn Ala Pro Gln Cys Leu Ser His Met Asn Ser Gly Cys Thr Phe Thr 405 410 415 Ser Pro His Leu Ala Gln Arg Val Ala Ser Thr Val Tyr Gln Asn Cys 420 425 430 Glu His Ala Asp Asn Tyr Thr Ala Tyr Cys Leu Gly Ile Ser His Met 435 440 445 Glu Pro Ser Phe Gly Leu Ile Leu His Asp Gly Gly Thr Thr Leu Lys 450 455 460 Phe Val Asp Thr Pro Glu Ser Leu Ser Gly Leu Tyr Val Phe Val Val 465 470 475 480 Tyr Phe Asn Gly His Val Glu Ala Val Ala Tyr Thr Val Val Ser Thr 485 490 495 Val Asp His Phe Val Asn Ala Ile Glu Glu Arg Gly Phe Pro Pro Thr 500 505 510 Ala Gly Gln Pro Pro Ala Thr Thr Lys Pro Lys Glu Ile Thr Pro Val 515 520 525 Asn Pro Gly Thr Ser Pro Leu Leu Arg Tyr Ala Ala Trp Thr Gly Gly 530 535 540 Leu Ala Ala Val Val Leu Leu Cys Leu Val Ile Phe Leu Ile Cys Thr 545 550 555 560 Ala Lys Arg Met Arg Val Lys Ala Ala Arg Val Asp Lys 565 570 <210> 70 <211> 1719 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Polynucleotide <400> 70 atggggacag ttaataaacc tgtggtgggg gtattgatgg ggttcggaat tatcacggga 60 acgttgcgta taacgaatcc ggtcagagca tccgtcttgc gatacgatga ttttcacatc 120 gatgaagaca aactggatac aaactccgta tatgagcctt actaccattc agatcatgcg 180 gagtcttcat gggtaaatcg gggagagtct tcgcgaaaag cgtacgatca taactcacct 240 tatatatggc cacgtaatga ttatgatgga tttttagaga acgcacacga acaccatggg 300 gtgtataatc agggccgtgg tatcgatagc ggggaacggt taatgcaacc cacacaaatg 360 tctgcacagg aggatcttgg ggacgatacg ggcatccacg ttatccctac gttaaacggc 420 gatgacagac ataaaattgt aaatgtggac caacgtcaat acggtgacgt gtttaaagga 480 gatcttaatc caaaacccca aggccaaaga ctcattgagg tgtcagtgga agaaaatcac 540 ccgtttactt tacgcgcacc gattcagcgg atttatggag tccggtacac cgagacttgg 600 agctttttgc cgtcattaac ctgtacggga gacgcagcgc ccgccatcca gcatatatgt 660 ttaaaacata caacatgctt tcaagacgtg gtggtggatg tggattgcgc ggaaaatact 720 aaagaggatc agttggccga aatcagttac cgttttcaag gtaagaagga agcggaccaa 780 ccgtggattg ttgtaaacac gagcacactg tttgatgaac tcgaattaga cccacccgag 840 attgaaccgg gtgtcttgaa agtacttcgg acagagaaac aatacttggg tgtgtacatt 900 tggaacatgc gcggctccga tggtacgtct acctacgcca cgtttttggt cacctggaaa 960 ggggatgaga agacaagaaa ccctacgccc gcagtaactc ctcaaccaag aggggctgag 1020 tttcatatgt ggaattacca ctcgcatgta ttttcagttg gtgatacgtt tagcttggca 1080 atgcatcttc agtataagat acatgaagcg ccatttgatt tgctgttaga gtggttgtat 1140 gtccccatcg atcctacatg tcaaccaatg cggttatatt ctacgtgttt gtatcatccc 1200 aacgcacccc aatgcctctc tcatatgaat tccggttgta catttacctc gccacattta 1260 gcccagcgtg ttgcaagcac agtgtatcaa aattgtgaac atgcagataa ctacaccgca 1320 tattgtctgg gaatatctca tatggagcct agctttggtc taatcttaca cgacgggggc 1380 accacgttaa agtttgtaga tacacccgag agtttgtcgg gattatacgt ttttgtggtg 1440 tattttaacg ggcatgttga agccgtagca tacactgttg tatccacagt agatcatttt 1500 gtaaacgcaa ttgaagagcg tggatttccg ccaacggccg gtcagccacc ggcgactact 1560 aaacccaagg aaattacccc cgtaaacccc ggaacgtcac cacttctacg atatgccgca 1620 tggaccggag ggcttgcagc agtagtactt ttatgtctcg taatattttt aatctgtacg 1680 gctaaacgaa tgagggttaa agccgccagg gtagacaag 1719 <210> 71 <211> 1990 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Polynucleotide <400> 71 gggaaataag agagaaaaga agagtaagaa gaaatataag agccaccatg gggacagtta 60 ataaacctgt ggtgggggta ttgatggggt tcggaattat cacgggaacg ttgcgtataa 120 cgaatccggt cagagcatcc gtcttgcgat acgatgattt tcacatcgat gaagacaaac 180 tggatacaaa ctccgtatat gagccttact accattcaga tcatgcggag tcttcatggg 240 taaatcgggg agagtcttcg cgaaaagcgt acgatcataa ctcaccttat atatggccac 300 gtaatgatta tgatggattt ttagagaacg cacacgaaca ccatggggtg tataatcagg 360 gccgtggtat cgatagcggg gaacggttaa tgcaacccac acaaatgtct gcacaggagg 420 atcttgggga cgatacgggc atccacgtta tccctacgtt aaacggcgat gacagacata 480 aaattgtaaa tgtggaccaa cgtcaatacg gtgacgtgtt taaaggagat cttaatccaa 540 aaccccaagg ccaaagactc attgaggtgt cagtggaaga aaatcacccg tttactttac 600 gcgcaccgat tcagcggatt tatggagtcc ggtacaccga gacttggagc tttttgccgt 660 cattaacctg tacgggagac gcagcgcccg ccatccagca tatatgttta aaacatacaa 720 catgctttca agacgtggtg gtggatgtgg attgcgcgga aaatactaaa gaggatcagt 780 tggccgaaat cagttaccgt tttcaaggta agaaggaagc ggaccaaccg tggattgttg 840 taaacacgag cacactgttt gatgaactcg aattagaccc acccgagatt gaaccgggtg 900 tcttgaaagt acttcggaca gagaaacaat acttgggtgt gtacatttgg aacatgcgcg 960 gctccgatgg tacgtctacc tacgccacgt ttttggtcac ctggaaaggg gatgagaaga 1020 caagaaaccc tacgcccgca gtaactcctc aaccaagagg ggctgagttt catatgtgga 1080 attaccactc gcatgtattt tcagttggtg atacgtttag cttggcaatg catcttcagt 1140 ataagataca tgaagcgcca tttgatttgc tgttagagtg gttgtatgtc cccatcgatc 1200 ctacatgtca accaatgcgg ttatattcta cgtgtttgta tcatcccaac gcaccccaat 1260 gcctctctca tatgaattcc ggttgtacat ttacctcgcc acatttagcc cagcgtgttg 1320 caagcacagt gtatcaaaat tgtgaacatg cagataacta caccgcatat tgtctgggaa 1380 tatctcatat ggagcctagc tttggtctaa tcttacacga cgggggcacc acgttaaagt 1440 ttgtagatac acccgagagt ttgtcgggat tatacgtttt tgtggtgtat tttaacgggc 1500 atgttgaagc cgtagcatac actgttgtat ccacagtaga tcattttgta aacgcaattg 1560 aagagcgtgg atttccgcca acggccggtc agccaccggc gactactaaa cccaaggaaa 1620 ttacccccgt aaaccccgga acgtcaccac ttctacgata tgccgcatgg accggagggc 1680 ttgcagcagt agtactttta tgtctcgtaa tatttttaat ctgtacggct aaacgaatga 1740 gggttaaagc cgccagggta gacaagtgat aataggctgg agcctcggtg gccatgcttc 1800 ttgccccttg ggcctccccc cagcccctcc tccccttcct gcacccgtac ccccgtggtc 1860 tttgaataaa gtctgagtgg gcggcaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 1920 aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 1980 aaaaatctag 1990 <210> 72 <211> 1885 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Polynucleotide <400> 72 gggaaataag agagaaaaga agagtaagaa gaaatataag agccaccatg gggacagtta 60 ataaacctgt ggtgggggta ttgatggggt tcggaattat cacgggaacg ttgcgtataa 120 cgaatccggt cagagcatcc gtcttgcgat acgatgattt tcacatcgat gaagacaaac 180 tggatacaaa ctccgtatat gagccttact accattcaga tcatgcggag tcttcatggg 240 taaatcgggg agagtcttcg cgaaaggcgt acgatcataa ctcaccttat atatggccac 300 gtaatgatta tgatggattt ttagagaacg cacacgaaca ccatggggtg tataatcagg 360 gccgtggtat cgatagcggg gaacggttaa tgcaacccac acaaatgtct gcacaggagg 420 atcttgggga cgatacgggc atccacgtta tccctacgtt aaacggcgat gacagacata 480 agattgtaaa tgtggaccaa cgtcaatacg gtgacgtgtt taaaggagat cttaatccaa 540 agccccaagg ccaaagactc attgaggtgt cagtggaaga gaatcacccg tttactttac 600 gcgcaccgat tcagcggatt tatggagtcc ggtacaccga gacttggagc tttttgccgt 660 cattaacctg tacgggagac gcagcgcccg ccatccagca tatatgttta aagcatacaa 720 catgctttca agacgtggtg gtggatgtgg attgcgcgga gaatactaaa gaggatcagt 780 tggccgaaat cagttaccgt tttcaaggta agaaggaagc ggaccaaccg tggattgttg 840 taaacacgag cacactgttt gatgaactcg aattagaccc ccccgagatt gaaccgggtg 900 tcttgaaagt acttcggaca gagaaacaat acttgggtgt gtacatttgg aacatgcgcg 960 gctccgatgg tacgtctacc tacgccacgt ttttggtcac ctggaaaggg gatgagaaga 1020 caagaaaccc tacgcccgca gtaactcctc aaccaagagg ggctgagttt catatgtgga 1080 attaccactc gcatgtattt tcagttggtg atacgtttag cttggcaatg catcttcagt 1140 ataagataca tgaagcgcca tttgatttgc tgttagagtg gttgtatgtc cccatcgatc 1200 ctacatgtca accaatgcgg ttatattcta cgtgtttgta tcatcccaac gcaccccaat 1260 gcctctctca tatgaattcc ggttgtacat ttacctcgcc acatttagcc cagcgtgttg 1320 caagcacagt gtatcagaat tgtgaacatg cagataacta caccgcatat tgtctgggaa 1380 tatctcatat ggagcctagc tttggtctaa tcttacacga cgggggcacc acgttaaagt 1440 ttgtagatac acccgagagt ttgtcgggat tatacgtttt tgtggtgtat tttaacgggc 1500 atgttgaagc cgtagcatac actgttgtat ccacagtaga tcattttgta aacgcaattg 1560 aagagcgtgg atttccgcca acggccggtc agccaccggc gactactaaa cccaaggaaa 1620 ttacccccgt aaaccccgga acgtcaccac ttctacgata tgccgcatgg accggagggc 1680 ttgcagcagt agtactttta tgtctcgtaa tatttttaat ctgtacggct aaacgaatga 1740 gggttaaagc cgccagggta gacaagtgat aataggctgg agcctcggtg gccatgcttc 1800 ttgccccttg ggcctccccc cagcccctcc tccccttcct gcacccgtac ccccgtggtc 1860 tttgaataaa gtctgagtgg gcggc 1885 <210> 73 <211> 573 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Polypeptide <400> 73 Met Gly Thr Val Asn Lys Pro Val Val Gly Val Leu Met Gly Phe Gly 1 5 10 15 Ile Ile Thr Gly Thr Leu Arg Ile Thr Asn Pro Val Arg Ala Ser Val 20 25 30 Leu Arg Tyr Asp Asp Phe His Ile Asp Glu Asp Lys Leu Asp Thr Asn 35 40 45 Ser Val Tyr Glu Pro Tyr Tyr His Ser Asp His Ala Glu Ser Ser Trp 50 55 60 Val Asn Arg Gly Glu Ser Ser Arg Lys Ala Tyr Asp His Asn Ser Pro 65 70 75 80 Tyr Ile Trp Pro Arg Asn Asp Tyr Asp Gly Phe Leu Glu Asn Ala His 85 90 95 Glu His His Gly Val Tyr Asn Gln Gly Arg Gly Ile Asp Ser Gly Glu 100 105 110 Arg Leu Met Gln Pro Thr Gln Met Ser Ala Gln Glu Asp Leu Gly Asp 115 120 125 Asp Thr Gly Ile His Val Ile Pro Thr Leu Asn Gly Asp Asp Arg His 130 135 140 Lys Ile Val Asn Val Asp Gln Arg Gln Tyr Gly Asp Val Phe Lys Gly 145 150 155 160 Asp Leu Asn Pro Lys Pro Gln Gly Gln Arg Leu Ile Glu Val Ser Val 165 170 175 Glu Glu Asn His Pro Phe Thr Leu Arg Ala Pro Ile Gln Arg Ile Tyr 180 185 190 Gly Val Arg Tyr Thr Glu Thr Trp Ser Phe Leu Pro Ser Leu Thr Cys 195 200 205 Thr Gly Asp Ala Ala Pro Ala Ile Gln His Ile Cys Leu Lys His Thr 210 215 220 Thr Cys Phe Gln Asp Val Val Val Asp Val Asp Cys Ala Glu Asn Thr 225 230 235 240 Lys Glu Asp Gln Leu Ala Glu Ile Ser Tyr Arg Phe Gln Gly Lys Lys 245 250 255 Glu Ala Asp Gln Pro Trp Ile Val Val Asn Thr Ser Thr Leu Phe Asp 260 265 270 Glu Leu Glu Leu Asp Pro Pro Glu Ile Glu Pro Gly Val Leu Lys Val 275 280 285 Leu Arg Thr Glu Lys Gln Tyr Leu Gly Val Tyr Ile Trp Asn Met Arg 290 295 300 Gly Ser Asp Gly Thr Ser Thr Tyr Ala Thr Phe Leu Val Thr Trp Lys 305 310 315 320 Gly Asp Glu Lys Thr Arg Asn Pro Thr Pro Ala Val Thr Pro Gln Pro 325 330 335 Arg Gly Ala Glu Phe His Met Trp Asn Tyr His Ser His Val Phe Ser 340 345 350 Val Gly Asp Thr Phe Ser Leu Ala Met His Leu Gln Tyr Lys Ile His 355 360 365 Glu Ala Pro Phe Asp Leu Leu Leu Glu Trp Leu Tyr Val Pro Ile Asp 370 375 380 Pro Thr Cys Gln Pro Met Arg Leu Tyr Ser Thr Cys Leu Tyr His Pro 385 390 395 400 Asn Ala Pro Gln Cys Leu Ser His Met Asn Ser Gly Cys Thr Phe Thr 405 410 415 Ser Pro His Leu Ala Gln Arg Val Ala Ser Thr Val Tyr Gln Asn Cys 420 425 430 Glu His Ala Asp Asn Tyr Thr Ala Tyr Cys Leu Gly Ile Ser His Met 435 440 445 Glu Pro Ser Phe Gly Leu Ile Leu His Asp Gly Gly Thr Thr Leu Lys 450 455 460 Phe Val Asp Thr Pro Glu Ser Leu Ser Gly Leu Tyr Val Phe Val Val 465 470 475 480 Tyr Phe Asn Gly His Val Glu Ala Val Ala Tyr Thr Val Val Ser Thr 485 490 495 Val Asp His Phe Val Asn Ala Ile Glu Glu Arg Gly Phe Pro Pro Thr 500 505 510 Ala Gly Gln Pro Pro Ala Thr Thr Lys Pro Lys Glu Ile Thr Pro Val 515 520 525 Asn Pro Gly Thr Ser Pro Leu Leu Arg Tyr Ala Ala Trp Thr Gly Gly 530 535 540 Leu Ala Ala Val Val Leu Leu Cys Leu Val Ile Phe Leu Ile Cys Thr 545 550 555 560 Ala Lys Arg Met Arg Val Lys Ala Ala Arg Val Asp Lys 565 570 <210> 74 <211> 1719 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Polynucleotide <400> 74 atggggacag ttaataaacc tgtggtgggg gtattgatgg ggttcggaat tatcacggga 60 acgttgcgta taacgaatcc ggtcagagca tccgtcttgc gatacgatga ttttcacatc 120 gatgaagaca aactggatac aaactccgta tatgagcctt actaccattc agatcatgcg 180 gagtcttcat gggtaaatcg gggagagtct tcgcgaaagg cgtacgatca taactcacct 240 tatatatggc cacgtaatga ttatgatgga tttttagaga acgcacacga acaccatggg 300 gtgtataatc agggccgtgg tatcgatagc ggggaacggt taatgcaacc cacacaaatg 360 tctgcacagg aggatcttgg ggacgatacg ggcatccacg ttatccctac gttaaacggc 420 gatgacagac ataagattgt aaatgtggac caacgtcaat acggtgacgt gtttaaagga 480 gatcttaatc caaagcccca aggccaaaga ctcattgagg tgtcagtgga agagaatcac 540 ccgtttactt tacgcgcacc gattcagcgg atttatggag tccggtacac cgagacttgg 600 agctttttgc cgtcattaac ctgtacggga gacgcagcgc ccgccatcca gcatatatgt 660 ttaaagcata caacatgctt tcaagacgtg gtggtggatg tggattgcgc ggagaatact 720 aaagaggatc agttggccga aatcagttac cgttttcaag gtaagaagga agcggaccaa 780 ccgtggattg ttgtaaacac gagcacactg tttgatgaac tcgaattaga cccccccgag 840 attgaaccgg gtgtcttgaa agtacttcgg acagagaaac aatacttggg tgtgtacatt 900 tggaacatgc gcggctccga tggtacgtct acctacgcca cgtttttggt cacctggaaa 960 ggggatgaga agacaagaaa ccctacgccc gcagtaactc ctcaaccaag aggggctgag 1020 tttcatatgt ggaattacca ctcgcatgta ttttcagttg gtgatacgtt tagcttggca 1080 atgcatcttc agtataagat acatgaagcg ccatttgatt tgctgttaga gtggttgtat 1140 gtccccatcg atcctacatg tcaaccaatg cggttatatt ctacgtgttt gtatcatccc 1200 aacgcacccc aatgcctctc tcatatgaat tccggttgta catttacctc gccacattta 1260 gcccagcgtg ttgcaagcac agtgtatcag aattgtgaac atgcagataa ctacaccgca 1320 tattgtctgg gaatatctca tatggagcct agctttggtc taatcttaca cgacgggggc 1380 accacgttaa agtttgtaga tacacccgag agtttgtcgg gattatacgt ttttgtggtg 1440 tattttaacg ggcatgttga agccgtagca tacactgttg tatccacagt agatcatttt 1500 gtaaacgcaa ttgaagagcg tggatttccg ccaacggccg gtcagccacc ggcgactact 1560 aaacccaagg aaattacccc cgtaaacccc ggaacgtcac cacttctacg atatgccgca 1620 tggaccggag ggcttgcagc agtagtactt ttatgtctcg taatattttt aatctgtacg 1680 gctaaacgaa tgagggttaa agccgccagg gtagacaag 1719 <210> 75 <211> 1990 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Polynucleotide <400> 75 gggaaataag agagaaaaga agagtaagaa gaaatataag agccaccatg gggacagtta 60 ataaacctgt ggtgggggta ttgatggggt tcggaattat cacgggaacg ttgcgtataa 120 cgaatccggt cagagcatcc gtcttgcgat acgatgattt tcacatcgat gaagacaaac 180 tggatacaaa ctccgtatat gagccttact accattcaga tcatgcggag tcttcatggg 240 taaatcgggg agagtcttcg cgaaaggcgt acgatcataa ctcaccttat atatggccac 300 gtaatgatta tgatggattt ttagagaacg cacacgaaca ccatggggtg tataatcagg 360 gccgtggtat cgatagcggg gaacggttaa tgcaacccac acaaatgtct gcacaggagg 420 atcttgggga cgatacgggc atccacgtta tccctacgtt aaacggcgat gacagacata 480 agattgtaaa tgtggaccaa cgtcaatacg gtgacgtgtt taaaggagat cttaatccaa 540 agccccaagg ccaaagactc attgaggtgt cagtggaaga gaatcacccg tttactttac 600 gcgcaccgat tcagcggatt tatggagtcc ggtacaccga gacttggagc tttttgccgt 660 cattaacctg tacgggagac gcagcgcccg ccatccagca tatatgttta aagcatacaa 720 catgctttca agacgtggtg gtggatgtgg attgcgcgga gaatactaaa gaggatcagt 780 tggccgaaat cagttaccgt tttcaaggta agaaggaagc ggaccaaccg tggattgttg 840 taaacacgag cacactgttt gatgaactcg aattagaccc ccccgagatt gaaccgggtg 900 tcttgaaagt acttcggaca gagaaacaat acttgggtgt gtacatttgg aacatgcgcg 960 gctccgatgg tacgtctacc tacgccacgt ttttggtcac ctggaaaggg gatgagaaga 1020 caagaaaccc tacgcccgca gtaactcctc aaccaagagg ggctgagttt catatgtgga 1080 attaccactc gcatgtattt tcagttggtg atacgtttag cttggcaatg catcttcagt 1140 ataagataca tgaagcgcca tttgatttgc tgttagagtg gttgtatgtc cccatcgatc 1200 ctacatgtca accaatgcgg ttatattcta cgtgtttgta tcatcccaac gcaccccaat 1260 gcctctctca tatgaattcc ggttgtacat ttacctcgcc acatttagcc cagcgtgttg 1320 caagcacagt gtatcagaat tgtgaacatg cagataacta caccgcatat tgtctgggaa 1380 tatctcatat ggagcctagc tttggtctaa tcttacacga cgggggcacc acgttaaagt 1440 ttgtagatac acccgagagt ttgtcgggat tatacgtttt tgtggtgtat tttaacgggc 1500 atgttgaagc cgtagcatac actgttgtat ccacagtaga tcattttgta aacgcaattg 1560 aagagcgtgg atttccgcca acggccggtc agccaccggc gactactaaa cccaaggaaa 1620 ttacccccgt aaaccccgga acgtcaccac ttctacgata tgccgcatgg accggagggc 1680 ttgcagcagt agtactttta tgtctcgtaa tatttttaat ctgtacggct aaacgaatga 1740 gggttaaagc cgccagggta gacaagtgat aataggctgg agcctcggtg gccatgcttc 1800 ttgccccttg ggcctccccc cagcccctcc tccccttcct gcacccgtac ccccgtggtc 1860 tttgaataaa gtctgagtgg gcggcaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 1920 aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 1980 aaaaatctag 1990 <210> 76 <211> 1885 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Polynucleotide <400> 76 gggaaataag agagaaaaga agagtaagaa gaaatataag agccaccatg gggacagtta 60 ataaacctgt ggtgggggta ttgatggggt tcggaattat cacgggaacg ttgcgtataa 120 cgaatccggt cagagcatcc gtcttgcgat acgatgattt tcacatcgat gaagacaaac 180 tggatacaaa ctccgtatat gagccttact accattcaga tcatgcggag tcttcatggg 240 taaatcgggg agagtcttcg cgaaaggcgt acgatcataa ctcaccttat atatggccac 300 gtaatgatta tgatggattt ttagagaacg cacacgaaca ccatggggtg tataatcagg 360 gccgtggtat cgatagcggg gaacggttaa tgcaacccac acaaatgtct gcacaggagg 420 atcttgggga cgatacgggc atccacgtta tccctacgtt aaacggcgat gacagacata 480 agattgtaaa tgtggaccaa cgtcaatacg gtgacgtgtt taaaggagat cttaatccaa 540 agccccaagg ccaaagactc attgaggtgt cagtggaaga gaatcacccg tttactttac 600 gcgcaccgat tcagcggatt tatggagtcc ggtacaccga gacttggagc tttttgccgt 660 cattaacctg tacgggagac gcagcgcccg ccatccagca tatatgttta aagcatacaa 720 catgctttca agacgtggtg gtggatgtgg attgcgcgga gaatactaaa gaggatcagt 780 tggccgaaat cagttaccgt tttcaaggta agaaggaagc ggaccaaccg tggattgttg 840 taaacacgag cacactgttt gatgaactcg aattagaccc acccgagatt gaaccgggtg 900 tcttgaaagt acttcggaca gagaaacaat acttgggtgt gtacatttgg aacatgcgcg 960 gctccgatgg tacgtctacc tacgccacgt ttttggtcac ctggaaaggg gatgagaaga 1020 caagaaaccc tacgcccgca gtaactcctc aaccaagagg ggctgagttt catatgtgga 1080 attaccactc gcatgtattt tcagttggtg atacgtttag cttggcaatg catcttcagt 1140 ataagataca tgaagcgcca tttgatttgc tgttagagtg gttgtatgtc cccatcgatc 1200 ctacatgtca accaatgcgg ttatattcta cgtgtttgta tcatcccaac gcaccccaat 1260 gcctctctca tatgaattcc ggttgtacat ttacctcgcc acatttagcc cagcgtgttg 1320 caagcacagt gtatcagaat tgtgaacatg cagataacta caccgcatat tgtctgggaa 1380 tatctcatat ggagcctagc tttggtctaa tcttacacga cgggggcacc acgttaaagt 1440 ttgtagatac acccgagagt ttgtcgggat tatacgtttt tgtggtgtat tttaacgggc 1500 atgttgaagc cgtagcatac actgttgtat ccacagtaga tcattttgta aacgcaattg 1560 aagagcgtgg atttccgcca acggccggtc agccaccggc gactactaaa cccaaggaaa 1620 ttacccccgt aaaccccgga acgtcaccac ttctacgata tgccgcatgg accggagggc 1680 ttgcagcagt agtactttta tgtctcgtaa tatttttaat ctgtacggct aaacgaatga 1740 gggttaaagc cgccagggta gacaagtgat aataggctgg agcctcggtg gccatgcttc 1800 ttgccccttg ggcctccccc cagcccctcc tccccttcct gcacccgtac ccccgtggtc 1860 tttgaataaa gtctgagtgg gcggc 1885 <210> 77 <211> 573 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Polypeptide <400> 77 Met Gly Thr Val Asn Lys Pro Val Val Gly Val Leu Met Gly Phe Gly 1 5 10 15 Ile Ile Thr Gly Thr Leu Arg Ile Thr Asn Pro Val Arg Ala Ser Val 20 25 30 Leu Arg Tyr Asp Asp Phe His Ile Asp Glu Asp Lys Leu Asp Thr Asn 35 40 45 Ser Val Tyr Glu Pro Tyr Tyr His Ser Asp His Ala Glu Ser Ser Trp 50 55 60 Val Asn Arg Gly Glu Ser Ser Arg Lys Ala Tyr Asp His Asn Ser Pro 65 70 75 80 Tyr Ile Trp Pro Arg Asn Asp Tyr Asp Gly Phe Leu Glu Asn Ala His 85 90 95 Glu His His Gly Val Tyr Asn Gln Gly Arg Gly Ile Asp Ser Gly Glu 100 105 110 Arg Leu Met Gln Pro Thr Gln Met Ser Ala Gln Glu Asp Leu Gly Asp 115 120 125 Asp Thr Gly Ile His Val Ile Pro Thr Leu Asn Gly Asp Asp Arg His 130 135 140 Lys Ile Val Asn Val Asp Gln Arg Gln Tyr Gly Asp Val Phe Lys Gly 145 150 155 160 Asp Leu Asn Pro Lys Pro Gln Gly Gln Arg Leu Ile Glu Val Ser Val 165 170 175 Glu Glu Asn His Pro Phe Thr Leu Arg Ala Pro Ile Gln Arg Ile Tyr 180 185 190 Gly Val Arg Tyr Thr Glu Thr Trp Ser Phe Leu Pro Ser Leu Thr Cys 195 200 205 Thr Gly Asp Ala Ala Pro Ala Ile Gln His Ile Cys Leu Lys His Thr 210 215 220 Thr Cys Phe Gln Asp Val Val Val Asp Val Asp Cys Ala Glu Asn Thr 225 230 235 240 Lys Glu Asp Gln Leu Ala Glu Ile Ser Tyr Arg Phe Gln Gly Lys Lys 245 250 255 Glu Ala Asp Gln Pro Trp Ile Val Val Asn Thr Ser Thr Leu Phe Asp 260 265 270 Glu Leu Glu Leu Asp Pro Pro Glu Ile Glu Pro Gly Val Leu Lys Val 275 280 285 Leu Arg Thr Glu Lys Gln Tyr Leu Gly Val Tyr Ile Trp Asn Met Arg 290 295 300 Gly Ser Asp Gly Thr Ser Thr Tyr Ala Thr Phe Leu Val Thr Trp Lys 305 310 315 320 Gly Asp Glu Lys Thr Arg Asn Pro Thr Pro Ala Val Thr Pro Gln Pro 325 330 335 Arg Gly Ala Glu Phe His Met Trp Asn Tyr His Ser His Val Phe Ser 340 345 350 Val Gly Asp Thr Phe Ser Leu Ala Met His Leu Gln Tyr Lys Ile His 355 360 365 Glu Ala Pro Phe Asp Leu Leu Leu Glu Trp Leu Tyr Val Pro Ile Asp 370 375 380 Pro Thr Cys Gln Pro Met Arg Leu Tyr Ser Thr Cys Leu Tyr His Pro 385 390 395 400 Asn Ala Pro Gln Cys Leu Ser His Met Asn Ser Gly Cys Thr Phe Thr 405 410 415 Ser Pro His Leu Ala Gln Arg Val Ala Ser Thr Val Tyr Gln Asn Cys 420 425 430 Glu His Ala Asp Asn Tyr Thr Ala Tyr Cys Leu Gly Ile Ser His Met 435 440 445 Glu Pro Ser Phe Gly Leu Ile Leu His Asp Gly Gly Thr Thr Leu Lys 450 455 460 Phe Val Asp Thr Pro Glu Ser Leu Ser Gly Leu Tyr Val Phe Val Val 465 470 475 480 Tyr Phe Asn Gly His Val Glu Ala Val Ala Tyr Thr Val Val Ser Thr 485 490 495 Val Asp His Phe Val Asn Ala Ile Glu Glu Arg Gly Phe Pro Pro Thr 500 505 510 Ala Gly Gln Pro Pro Ala Thr Thr Lys Pro Lys Glu Ile Thr Pro Val 515 520 525 Asn Pro Gly Thr Ser Pro Leu Leu Arg Tyr Ala Ala Trp Thr Gly Gly 530 535 540 Leu Ala Ala Val Val Leu Leu Cys Leu Val Ile Phe Leu Ile Cys Thr 545 550 555 560 Ala Lys Arg Met Arg Val Lys Ala Ala Arg Val Asp Lys 565 570 <210> 78 <211> 1719 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Polynucleotide <400> 78 atggggacag ttaataaacc tgtggtgggg gtattgatgg ggttcggaat tatcacggga 60 acgttgcgta taacgaatcc ggtcagagca tccgtcttgc gatacgatga ttttcacatc 120 gatgaagaca aactggatac aaactccgta tatgagcctt actaccattc agatcatgcg 180 gagtcttcat gggtaaatcg gggagagtct tcgcgaaagg cgtacgatca taactcacct 240 tatatatggc cacgtaatga ttatgatgga tttttagaga acgcacacga acaccatggg 300 gtgtataatc agggccgtgg tatcgatagc ggggaacggt taatgcaacc cacacaaatg 360 tctgcacagg aggatcttgg ggacgatacg ggcatccacg ttatccctac gttaaacggc 420 gatgacagac ataagattgt aaatgtggac caacgtcaat acggtgacgt gtttaaagga 480 gatcttaatc caaagcccca aggccaaaga ctcattgagg tgtcagtgga agagaatcac 540 ccgtttactt tacgcgcacc gattcagcgg atttatggag tccggtacac cgagacttgg 600 agctttttgc cgtcattaac ctgtacggga gacgcagcgc ccgccatcca gcatatatgt 660 ttaaagcata caacatgctt tcaagacgtg gtggtggatg tggattgcgc ggagaatact 720 aaagaggatc agttggccga aatcagttac cgttttcaag gtaagaagga agcggaccaa 780 ccgtggattg ttgtaaacac gagcacactg tttgatgaac tcgaattaga cccacccgag 840 attgaaccgg gtgtcttgaa agtacttcgg acagagaaac aatacttggg tgtgtacatt 900 tggaacatgc gcggctccga tggtacgtct acctacgcca cgtttttggt cacctggaaa 960 ggggatgaga agacaagaaa ccctacgccc gcagtaactc ctcaaccaag aggggctgag 1020 tttcatatgt ggaattacca ctcgcatgta ttttcagttg gtgatacgtt tagcttggca 1080 atgcatcttc agtataagat acatgaagcg ccatttgatt tgctgttaga gtggttgtat 1140 gtccccatcg atcctacatg tcaaccaatg cggttatatt ctacgtgttt gtatcatccc 1200 aacgcacccc aatgcctctc tcatatgaat tccggttgta catttacctc gccacattta 1260 gcccagcgtg ttgcaagcac agtgtatcag aattgtgaac atgcagataa ctacaccgca 1320 tattgtctgg gaatatctca tatggagcct agctttggtc taatcttaca cgacgggggc 1380 accacgttaa agtttgtaga tacacccgag agtttgtcgg gattatacgt ttttgtggtg 1440 tattttaacg ggcatgttga agccgtagca tacactgttg tatccacagt agatcatttt 1500 gtaaacgcaa ttgaagagcg tggatttccg ccaacggccg gtcagccacc ggcgactact 1560 aaacccaagg aaattacccc cgtaaacccc ggaacgtcac cacttctacg atatgccgca 1620 tggaccggag ggcttgcagc agtagtactt ttatgtctcg taatattttt aatctgtacg 1680 gctaaacgaa tgagggttaa agccgccagg gtagacaag 1719 <210> 79 <211> 1990 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Polynucleotide <400> 79 gggaaataag agagaaaaga agagtaagaa gaaatataag agccaccatg gggacagtta 60 ataaacctgt ggtgggggta ttgatggggt tcggaattat cacgggaacg ttgcgtataa 120 cgaatccggt cagagcatcc gtcttgcgat acgatgattt tcacatcgat gaagacaaac 180 tggatacaaa ctccgtatat gagccttact accattcaga tcatgcggag tcttcatggg 240 taaatcgggg agagtcttcg cgaaaggcgt acgatcataa ctcaccttat atatggccac 300 gtaatgatta tgatggattt ttagagaacg cacacgaaca ccatggggtg tataatcagg 360 gccgtggtat cgatagcggg gaacggttaa tgcaacccac acaaatgtct gcacaggagg 420 atcttgggga cgatacgggc atccacgtta tccctacgtt aaacggcgat gacagacata 480 agattgtaaa tgtggaccaa cgtcaatacg gtgacgtgtt taaaggagat cttaatccaa 540 agccccaagg ccaaagactc attgaggtgt cagtggaaga gaatcacccg tttactttac 600 gcgcaccgat tcagcggatt tatggagtcc ggtacaccga gacttggagc tttttgccgt 660 cattaacctg tacgggagac gcagcgcccg ccatccagca tatatgttta aagcatacaa 720 catgctttca agacgtggtg gtggatgtgg attgcgcgga gaatactaaa gaggatcagt 780 tggccgaaat cagttaccgt tttcaaggta agaaggaagc ggaccaaccg tggattgttg 840 taaacacgag cacactgttt gatgaactcg aattagaccc acccgagatt gaaccgggtg 900 tcttgaaagt acttcggaca gagaaacaat acttgggtgt gtacatttgg aacatgcgcg 960 gctccgatgg tacgtctacc tacgccacgt ttttggtcac ctggaaaggg gatgagaaga 1020 caagaaaccc tacgcccgca gtaactcctc aaccaagagg ggctgagttt catatgtgga 1080 attaccactc gcatgtattt tcagttggtg atacgtttag cttggcaatg catcttcagt 1140 ataagataca tgaagcgcca tttgatttgc tgttagagtg gttgtatgtc cccatcgatc 1200 ctacatgtca accaatgcgg ttatattcta cgtgtttgta tcatcccaac gcaccccaat 1260 gcctctctca tatgaattcc ggttgtacat ttacctcgcc acatttagcc cagcgtgttg 1320 caagcacagt gtatcagaat tgtgaacatg cagataacta caccgcatat tgtctgggaa 1380 tatctcatat ggagcctagc tttggtctaa tcttacacga cgggggcacc acgttaaagt 1440 ttgtagatac acccgagagt ttgtcgggat tatacgtttt tgtggtgtat tttaacgggc 1500 atgttgaagc cgtagcatac actgttgtat ccacagtaga tcattttgta aacgcaattg 1560 aagagcgtgg atttccgcca acggccggtc agccaccggc gactactaaa cccaaggaaa 1620 ttacccccgt aaaccccgga acgtcaccac ttctacgata tgccgcatgg accggagggc 1680 ttgcagcagt agtactttta tgtctcgtaa tatttttaat ctgtacggct aaacgaatga 1740 gggttaaagc cgccagggta gacaagtgat aataggctgg agcctcggtg gccatgcttc 1800 ttgccccttg ggcctccccc cagcccctcc tccccttcct gcacccgtac ccccgtggtc 1860 tttgaataaa gtctgagtgg gcggcaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 1920 aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 1980 aaaaatctag 1990 <210> 80 <211> 1885 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Polynucleotide <400> 80 gggaaataag agagaaaaga agagtaagaa gaaatataag agccaccatg gggacagtta 60 ataaacctgt ggtgggggta ttgatggggt tcggaattat cacgggaacg ttgcgtataa 120 cgaatccggt cagagcatcc gtcttgcgat acgatgattt tcacatcgat gaagacaaac 180 tggatacaaa ctccgtatat gagccttact accattcaga tcatgcggag tcttcatggg 240 taaatcgggg agagtcttcg cgaaaagcgt acgatcataa ctcaccttat atatggccac 300 gtaatgatta tgatggattt ttagagaacg cacacgaaca ccatggggtg tataatcagg 360 gccgtggtat cgatagcggg gaacggttaa tgcaacccac acaaatgtct gcacaggagg 420 atcttgggga cgatacgggc atccacgtta tccctacgtt aaacggcgat gacagacata 480 aaattgtaaa tgtggaccaa cgtcaatacg gtgacgtgtt taaaggagat cttaatccaa 540 aaccccaagg ccaaagactc attgaggtgt cagtggaaga aaatcacccg tttactttac 600 gcgcaccgat tcagcggatt tatggagtcc ggtacaccga gacttggagc tttttgccgt 660 cattaacctg tacgggagac gcagcgcccg ccatccagca tatatgttta aagcatacaa 720 catgctttca agacgtggtg gtggatgtgg attgcgcgga aaatactaaa gaggatcagt 780 tggccgaaat cagttaccgt tttcaaggta agaaggaagc ggaccaaccg tggattgttg 840 taaacacgag cacactgttt gatgaactcg aattagaccc ccccgagatt gaaccgggtg 900 tcttgaaagt acttcggaca gagaaacaat acttgggtgt gtacatttgg aacatgcgcg 960 gctccgatgg tacgtctacc tacgccacgt ttttggtcac ctggaaaggg gatgagaaga 1020 caagaaaccc tacgcccgca gtaactcctc aaccaagagg ggctgagttt catatgtgga 1080 attaccactc gcatgtattt tcagttggtg atacgtttag cttggcaatg catcttcagt 1140 ataagataca tgaagcgcca tttgatttgc tgttagagtg gttgtatgtc cccatcgatc 1200 ctacatgtca accaatgcgg ttatattcta cgtgtttgta tcatcccaac gcaccccaat 1260 gcctctctca tatgaattcc ggttgtacat ttacctcgcc acatttagcc cagcgtgttg 1320 caagcacagt gtatcagaat tgtgaacatg cagataacta caccgcatat tgtctgggaa 1380 tatctcatat ggagcctagc tttggtctaa tcttacacga cgggggcacc acgttaaagt 1440 ttgtagatac acccgagagt ttgtcgggat tatacgtttt tgtggtgtat tttaacgggc 1500 atgttgaagc cgtagcatac actgttgtat ccacagtaga tcattttgta aacgcaattg 1560 aagagcgtgg atttccgcca acggccggtc agccaccggc gactactaaa cccaaggaaa 1620 ttacccccgt aaaccccgga acgtcaccac ttctacgata tgccgcatgg accggagggc 1680 ttgcagcagt agtactttta tgtctcgtaa tatttttaat ctgtacggct aaacgaatga 1740 gggttaaagc cgccagggta gacaagtgat aataggctgg agcctcggtg gccatgcttc 1800 ttgccccttg ggcctccccc cagcccctcc tccccttcct gcacccgtac ccccgtggtc 1860 tttgaataaa gtctgagtgg gcggc 1885 <210> 81 <211> 573 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Polypeptide <400> 81 Met Gly Thr Val Asn Lys Pro Val Val Gly Val Leu Met Gly Phe Gly 1 5 10 15 Ile Ile Thr Gly Thr Leu Arg Ile Thr Asn Pro Val Arg Ala Ser Val 20 25 30 Leu Arg Tyr Asp Asp Phe His Ile Asp Glu Asp Lys Leu Asp Thr Asn 35 40 45 Ser Val Tyr Glu Pro Tyr Tyr His Ser Asp His Ala Glu Ser Ser Trp 50 55 60 Val Asn Arg Gly Glu Ser Ser Arg Lys Ala Tyr Asp His Asn Ser Pro 65 70 75 80 Tyr Ile Trp Pro Arg Asn Asp Tyr Asp Gly Phe Leu Glu Asn Ala His 85 90 95 Glu His His Gly Val Tyr Asn Gln Gly Arg Gly Ile Asp Ser Gly Glu 100 105 110 Arg Leu Met Gln Pro Thr Gln Met Ser Ala Gln Glu Asp Leu Gly Asp 115 120 125 Asp Thr Gly Ile His Val Ile Pro Thr Leu Asn Gly Asp Asp Arg His 130 135 140 Lys Ile Val Asn Val Asp Gln Arg Gln Tyr Gly Asp Val Phe Lys Gly 145 150 155 160 Asp Leu Asn Pro Lys Pro Gln Gly Gln Arg Leu Ile Glu Val Ser Val 165 170 175 Glu Glu Asn His Pro Phe Thr Leu Arg Ala Pro Ile Gln Arg Ile Tyr 180 185 190 Gly Val Arg Tyr Thr Glu Thr Trp Ser Phe Leu Pro Ser Leu Thr Cys 195 200 205 Thr Gly Asp Ala Ala Pro Ala Ile Gln His Ile Cys Leu Lys His Thr 210 215 220 Thr Cys Phe Gln Asp Val Val Val Asp Val Asp Cys Ala Glu Asn Thr 225 230 235 240 Lys Glu Asp Gln Leu Ala Glu Ile Ser Tyr Arg Phe Gln Gly Lys Lys 245 250 255 Glu Ala Asp Gln Pro Trp Ile Val Val Asn Thr Ser Thr Leu Phe Asp 260 265 270 Glu Leu Glu Leu Asp Pro Pro Glu Ile Glu Pro Gly Val Leu Lys Val 275 280 285 Leu Arg Thr Glu Lys Gln Tyr Leu Gly Val Tyr Ile Trp Asn Met Arg 290 295 300 Gly Ser Asp Gly Thr Ser Thr Tyr Ala Thr Phe Leu Val Thr Trp Lys 305 310 315 320 Gly Asp Glu Lys Thr Arg Asn Pro Thr Pro Ala Val Thr Pro Gln Pro 325 330 335 Arg Gly Ala Glu Phe His Met Trp Asn Tyr His Ser His Val Phe Ser 340 345 350 Val Gly Asp Thr Phe Ser Leu Ala Met His Leu Gln Tyr Lys Ile His 355 360 365 Glu Ala Pro Phe Asp Leu Leu Leu Glu Trp Leu Tyr Val Pro Ile Asp 370 375 380 Pro Thr Cys Gln Pro Met Arg Leu Tyr Ser Thr Cys Leu Tyr His Pro 385 390 395 400 Asn Ala Pro Gln Cys Leu Ser His Met Asn Ser Gly Cys Thr Phe Thr 405 410 415 Ser Pro His Leu Ala Gln Arg Val Ala Ser Thr Val Tyr Gln Asn Cys 420 425 430 Glu His Ala Asp Asn Tyr Thr Ala Tyr Cys Leu Gly Ile Ser His Met 435 440 445 Glu Pro Ser Phe Gly Leu Ile Leu His Asp Gly Gly Thr Thr Leu Lys 450 455 460 Phe Val Asp Thr Pro Glu Ser Leu Ser Gly Leu Tyr Val Phe Val Val 465 470 475 480 Tyr Phe Asn Gly His Val Glu Ala Val Ala Tyr Thr Val Val Ser Thr 485 490 495 Val Asp His Phe Val Asn Ala Ile Glu Glu Arg Gly Phe Pro Pro Thr 500 505 510 Ala Gly Gln Pro Pro Ala Thr Thr Lys Pro Lys Glu Ile Thr Pro Val 515 520 525 Asn Pro Gly Thr Ser Pro Leu Leu Arg Tyr Ala Ala Trp Thr Gly Gly 530 535 540 Leu Ala Ala Val Val Leu Leu Cys Leu Val Ile Phe Leu Ile Cys Thr 545 550 555 560 Ala Lys Arg Met Arg Val Lys Ala Ala Arg Val Asp Lys 565 570 <210> 82 <211> 1719 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Polynucleotide <400> 82 atggggacag ttaataaacc tgtggtgggg gtattgatgg ggttcggaat tatcacggga 60 acgttgcgta taacgaatcc ggtcagagca tccgtcttgc gatacgatga ttttcacatc 120 gatgaagaca aactggatac aaactccgta tatgagcctt actaccattc agatcatgcg 180 gagtcttcat gggtaaatcg gggagagtct tcgcgaaaag cgtacgatca taactcacct 240 tatatatggc cacgtaatga ttatgatgga tttttagaga acgcacacga acaccatggg 300 gtgtataatc agggccgtgg tatcgatagc ggggaacggt taatgcaacc cacacaaatg 360 tctgcacagg aggatcttgg ggacgatacg ggcatccacg ttatccctac gttaaacggc 420 gatgacagac ataaaattgt aaatgtggac caacgtcaat acggtgacgt gtttaaagga 480 gatcttaatc caaaacccca aggccaaaga ctcattgagg tgtcagtgga agaaaatcac 540 ccgtttactt tacgcgcacc gattcagcgg atttatggag tccggtacac cgagacttgg 600 agctttttgc cgtcattaac ctgtacggga gacgcagcgc ccgccatcca gcatatatgt 660 ttaaagcata caacatgctt tcaagacgtg gtggtggatg tggattgcgc ggaaaatact 720 aaagaggatc agttggccga aatcagttac cgttttcaag gtaagaagga agcggaccaa 780 ccgtggattg ttgtaaacac gagcacactg tttgatgaac tcgaattaga cccccccgag 840 attgaaccgg gtgtcttgaa agtacttcgg acagagaaac aatacttggg tgtgtacatt 900 tggaacatgc gcggctccga tggtacgtct acctacgcca cgtttttggt cacctggaaa 960 ggggatgaga agacaagaaa ccctacgccc gcagtaactc ctcaaccaag aggggctgag 1020 tttcatatgt ggaattacca ctcgcatgta ttttcagttg gtgatacgtt tagcttggca 1080 atgcatcttc agtataagat acatgaagcg ccatttgatt tgctgttaga gtggttgtat 1140 gtccccatcg atcctacatg tcaaccaatg cggttatatt ctacgtgttt gtatcatccc 1200 aacgcacccc aatgcctctc tcatatgaat tccggttgta catttacctc gccacattta 1260 gcccagcgtg ttgcaagcac agtgtatcag aattgtgaac atgcagataa ctacaccgca 1320 tattgtctgg gaatatctca tatggagcct agctttggtc taatcttaca cgacgggggc 1380 accacgttaa agtttgtaga tacacccgag agtttgtcgg gattatacgt ttttgtggtg 1440 tattttaacg ggcatgttga agccgtagca tacactgttg tatccacagt agatcatttt 1500 gtaaacgcaa ttgaagagcg tggatttccg ccaacggccg gtcagccacc ggcgactact 1560 aaacccaagg aaattacccc cgtaaacccc ggaacgtcac cacttctacg atatgccgca 1620 tggaccggag ggcttgcagc agtagtactt ttatgtctcg taatattttt aatctgtacg 1680 gctaaacgaa tgagggttaa agccgccagg gtagacaag 1719 <210> 83 <211> 1990 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Polynucleotide <400> 83 gggaaataag agagaaaaga agagtaagaa gaaatataag agccaccatg gggacagtta 60 ataaacctgt ggtgggggta ttgatggggt tcggaattat cacgggaacg ttgcgtataa 120 cgaatccggt cagagcatcc gtcttgcgat acgatgattt tcacatcgat gaagacaaac 180 tggatacaaa ctccgtatat gagccttact accattcaga tcatgcggag tcttcatggg 240 taaatcgggg agagtcttcg cgaaaagcgt acgatcataa ctcaccttat atatggccac 300 gtaatgatta tgatggattt ttagagaacg cacacgaaca ccatggggtg tataatcagg 360 gccgtggtat cgatagcggg gaacggttaa tgcaacccac acaaatgtct gcacaggagg 420 atcttgggga cgatacgggc atccacgtta tccctacgtt aaacggcgat gacagacata 480 aaattgtaaa tgtggaccaa cgtcaatacg gtgacgtgtt taaaggagat cttaatccaa 540 aaccccaagg ccaaagactc attgaggtgt cagtggaaga aaatcacccg tttactttac 600 gcgcaccgat tcagcggatt tatggagtcc ggtacaccga gacttggagc tttttgccgt 660 cattaacctg tacgggagac gcagcgcccg ccatccagca tatatgttta aagcatacaa 720 catgctttca agacgtggtg gtggatgtgg attgcgcgga aaatactaaa gaggatcagt 780 tggccgaaat cagttaccgt tttcaaggta agaaggaagc ggaccaaccg tggattgttg 840 taaacacgag cacactgttt gatgaactcg aattagaccc ccccgagatt gaaccgggtg 900 tcttgaaagt acttcggaca gagaaacaat acttgggtgt gtacatttgg aacatgcgcg 960 gctccgatgg tacgtctacc tacgccacgt ttttggtcac ctggaaaggg gatgagaaga 1020 caagaaaccc tacgcccgca gtaactcctc aaccaagagg ggctgagttt catatgtgga 1080 attaccactc gcatgtattt tcagttggtg atacgtttag cttggcaatg catcttcagt 1140 ataagataca tgaagcgcca tttgatttgc tgttagagtg gttgtatgtc cccatcgatc 1200 ctacatgtca accaatgcgg ttatattcta cgtgtttgta tcatcccaac gcaccccaat 1260 gcctctctca tatgaattcc ggttgtacat ttacctcgcc acatttagcc cagcgtgttg 1320 caagcacagt gtatcagaat tgtgaacatg cagataacta caccgcatat tgtctgggaa 1380 tatctcatat ggagcctagc tttggtctaa tcttacacga cgggggcacc acgttaaagt 1440 ttgtagatac acccgagagt ttgtcgggat tatacgtttt tgtggtgtat tttaacgggc 1500 atgttgaagc cgtagcatac actgttgtat ccacagtaga tcattttgta aacgcaattg 1560 aagagcgtgg atttccgcca acggccggtc agccaccggc gactactaaa cccaaggaaa 1620 ttacccccgt aaaccccgga acgtcaccac ttctacgata tgccgcatgg accggagggc 1680 ttgcagcagt agtactttta tgtctcgtaa tatttttaat ctgtacggct aaacgaatga 1740 gggttaaagc cgccagggta gacaagtgat aataggctgg agcctcggtg gccatgcttc 1800 ttgccccttg ggcctccccc cagcccctcc tccccttcct gcacccgtac ccccgtggtc 1860 tttgaataaa gtctgagtgg gcggcaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 1920 aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 1980 aaaaatctag 1990 <210> 84 <211> 1885 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Polynucleotide <400> 84 gggaaataag agagaaaaga agagtaagaa gaaatataag agccaccatg gggacagtta 60 ataaacctgt ggtgggggta ttgatggggt tcggaattat cacgggaacg ttgcgtataa 120 cgaatccggt cagagcatcc gtcttgcgat acgatgattt tcacatcgat gaagacaaac 180 tggatacaaa ctccgtatat gagccttact accattcaga tcatgcggag tcttcatggg 240 taaatcgggg agagtcttcg cgaaaagcgt acgatcataa ctcaccttat atatggccac 300 gtaatgatta tgatggattt ttagagaacg cacacgaaca ccatggggtg tataatcagg 360 gccgtggtat cgatagcggg gaacggttaa tgcaacccac acaaatgtct gcacaggagg 420 atcttgggga cgatacgggc atccacgtta tccctacgtt aaacggcgat gacagacata 480 aaattgtaaa tgtggaccaa cgtcaatacg gtgacgtgtt taaaggagat cttaatccaa 540 aaccccaagg ccaaagactc attgaggtgt cagtggaaga aaatcacccg tttactttac 600 gcgcaccgat tcagcggatt tatggagtcc ggtacaccga gacttggagc tttttgccgt 660 cattaacctg tacgggagac gcagcgcccg ccatccagca tatatgttta aagcatacaa 720 catgctttca agacgtggtg gtggatgtgg attgcgcgga aaatactaaa gaggatcagt 780 tggccgaaat cagttaccgt tttcaaggta agaaggaagc ggaccaaccg tggattgttg 840 taaacacgag cacactgttt gatgaactcg aattagaccc acccgagatt gaaccgggtg 900 tcttgaaagt acttcggaca gagaaacaat acttgggtgt gtacatttgg aacatgcgcg 960 gctccgatgg tacgtctacc tacgccacgt ttttggtcac ctggaaaggg gatgagaaga 1020 caagaaaccc tacgcccgca gtaactcctc aaccaagagg ggctgagttt catatgtgga 1080 attaccactc gcatgtattt tcagttggtg atacgtttag cttggcaatg catcttcagt 1140 ataagataca tgaagcgcca tttgatttgc tgttagagtg gttgtatgtc cccatcgatc 1200 ctacatgtca accaatgcgg ttatattcta cgtgtttgta tcatcccaac gcaccccaat 1260 gcctctctca tatgaattcc ggttgtacat ttacctcgcc acatttagcc cagcgtgttg 1320 caagcacagt gtatcagaat tgtgaacatg cagataacta caccgcatat tgtctgggaa 1380 tatctcatat ggagcctagc tttggtctaa tcttacacga cgggggcacc acgttaaagt 1440 ttgtagatac acccgagagt ttgtcgggat tatacgtttt tgtggtgtat tttaacgggc 1500 atgttgaagc cgtagcatac actgttgtat ccacagtaga tcattttgta aacgcaattg 1560 aagagcgtgg atttccgcca acggccggtc agccaccggc gactactaaa cccaaggaaa 1620 ttacccccgt aaaccccgga acgtcaccac ttctacgata tgccgcatgg accggagggc 1680 ttgcagcagt agtactttta tgtctcgtaa tatttttaat ctgtacggct aaacgaatga 1740 gggttaaagc cgccagggta gacaagtgat aataggctgg agcctcggtg gccatgcttc 1800 ttgccccttg ggcctccccc cagcccctcc tccccttcct gcacccgtac ccccgtggtc 1860 tttgaataaa gtctgagtgg gcggc 1885 <210> 85 <211> 573 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Polypeptide <400> 85 Met Gly Thr Val Asn Lys Pro Val Val Gly Val Leu Met Gly Phe Gly 1 5 10 15 Ile Ile Thr Gly Thr Leu Arg Ile Thr Asn Pro Val Arg Ala Ser Val 20 25 30 Leu Arg Tyr Asp Asp Phe His Ile Asp Glu Asp Lys Leu Asp Thr Asn 35 40 45 Ser Val Tyr Glu Pro Tyr Tyr His Ser Asp His Ala Glu Ser Ser Trp 50 55 60 Val Asn Arg Gly Glu Ser Ser Arg Lys Ala Tyr Asp His Asn Ser Pro 65 70 75 80 Tyr Ile Trp Pro Arg Asn Asp Tyr Asp Gly Phe Leu Glu Asn Ala His 85 90 95 Glu His His Gly Val Tyr Asn Gln Gly Arg Gly Ile Asp Ser Gly Glu 100 105 110 Arg Leu Met Gln Pro Thr Gln Met Ser Ala Gln Glu Asp Leu Gly Asp 115 120 125 Asp Thr Gly Ile His Val Ile Pro Thr Leu Asn Gly Asp Asp Arg His 130 135 140 Lys Ile Val Asn Val Asp Gln Arg Gln Tyr Gly Asp Val Phe Lys Gly 145 150 155 160 Asp Leu Asn Pro Lys Pro Gln Gly Gln Arg Leu Ile Glu Val Ser Val 165 170 175 Glu Glu Asn His Pro Phe Thr Leu Arg Ala Pro Ile Gln Arg Ile Tyr 180 185 190 Gly Val Arg Tyr Thr Glu Thr Trp Ser Phe Leu Pro Ser Leu Thr Cys 195 200 205 Thr Gly Asp Ala Ala Pro Ala Ile Gln His Ile Cys Leu Lys His Thr 210 215 220 Thr Cys Phe Gln Asp Val Val Val Asp Val Asp Cys Ala Glu Asn Thr 225 230 235 240 Lys Glu Asp Gln Leu Ala Glu Ile Ser Tyr Arg Phe Gln Gly Lys Lys 245 250 255 Glu Ala Asp Gln Pro Trp Ile Val Val Asn Thr Ser Thr Leu Phe Asp 260 265 270 Glu Leu Glu Leu Asp Pro Pro Glu Ile Glu Pro Gly Val Leu Lys Val 275 280 285 Leu Arg Thr Glu Lys Gln Tyr Leu Gly Val Tyr Ile Trp Asn Met Arg 290 295 300 Gly Ser Asp Gly Thr Ser Thr Tyr Ala Thr Phe Leu Val Thr Trp Lys 305 310 315 320 Gly Asp Glu Lys Thr Arg Asn Pro Thr Pro Ala Val Thr Pro Gln Pro 325 330 335 Arg Gly Ala Glu Phe His Met Trp Asn Tyr His Ser His Val Phe Ser 340 345 350 Val Gly Asp Thr Phe Ser Leu Ala Met His Leu Gln Tyr Lys Ile His 355 360 365 Glu Ala Pro Phe Asp Leu Leu Leu Glu Trp Leu Tyr Val Pro Ile Asp 370 375 380 Pro Thr Cys Gln Pro Met Arg Leu Tyr Ser Thr Cys Leu Tyr His Pro 385 390 395 400 Asn Ala Pro Gln Cys Leu Ser His Met Asn Ser Gly Cys Thr Phe Thr 405 410 415 Ser Pro His Leu Ala Gln Arg Val Ala Ser Thr Val Tyr Gln Asn Cys 420 425 430 Glu His Ala Asp Asn Tyr Thr Ala Tyr Cys Leu Gly Ile Ser His Met 435 440 445 Glu Pro Ser Phe Gly Leu Ile Leu His Asp Gly Gly Thr Thr Leu Lys 450 455 460 Phe Val Asp Thr Pro Glu Ser Leu Ser Gly Leu Tyr Val Phe Val Val 465 470 475 480 Tyr Phe Asn Gly His Val Glu Ala Val Ala Tyr Thr Val Val Ser Thr 485 490 495 Val Asp His Phe Val Asn Ala Ile Glu Glu Arg Gly Phe Pro Pro Thr 500 505 510 Ala Gly Gln Pro Pro Ala Thr Thr Lys Pro Lys Glu Ile Thr Pro Val 515 520 525 Asn Pro Gly Thr Ser Pro Leu Leu Arg Tyr Ala Ala Trp Thr Gly Gly 530 535 540 Leu Ala Ala Val Val Leu Leu Cys Leu Val Ile Phe Leu Ile Cys Thr 545 550 555 560 Ala Lys Arg Met Arg Val Lys Ala Ala Arg Val Asp Lys 565 570 <210> 86 <211> 1719 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Polynucleotide <400> 86 atggggacag ttaataaacc tgtggtgggg gtattgatgg ggttcggaat tatcacggga 60 acgttgcgta taacgaatcc ggtcagagca tccgtcttgc gatacgatga ttttcacatc 120 gatgaagaca aactggatac aaactccgta tatgagcctt actaccattc agatcatgcg 180 gagtcttcat gggtaaatcg gggagagtct tcgcgaaaag cgtacgatca taactcacct 240 tatatatggc cacgtaatga ttatgatgga tttttagaga acgcacacga acaccatggg 300 gtgtataatc agggccgtgg tatcgatagc ggggaacggt taatgcaacc cacacaaatg 360 tctgcacagg aggatcttgg ggacgatacg ggcatccacg ttatccctac gttaaacggc 420 gatgacagac ataaaattgt aaatgtggac caacgtcaat acggtgacgt gtttaaagga 480 gatcttaatc caaaacccca aggccaaaga ctcattgagg tgtcagtgga agaaaatcac 540 ccgtttactt tacgcgcacc gattcagcgg atttatggag tccggtacac cgagacttgg 600 agctttttgc cgtcattaac ctgtacggga gacgcagcgc ccgccatcca gcatatatgt 660 ttaaagcata caacatgctt tcaagacgtg gtggtggatg tggattgcgc ggaaaatact 720 aaagaggatc agttggccga aatcagttac cgttttcaag gtaagaagga agcggaccaa 780 ccgtggattg ttgtaaacac gagcacactg tttgatgaac tcgaattaga cccacccgag 840 attgaaccgg gtgtcttgaa agtacttcgg acagagaaac aatacttggg tgtgtacatt 900 tggaacatgc gcggctccga tggtacgtct acctacgcca cgtttttggt cacctggaaa 960 ggggatgaga agacaagaaa ccctacgccc gcagtaactc ctcaaccaag aggggctgag 1020 tttcatatgt ggaattacca ctcgcatgta ttttcagttg gtgatacgtt tagcttggca 1080 atgcatcttc agtataagat acatgaagcg ccatttgatt tgctgttaga gtggttgtat 1140 gtccccatcg atcctacatg tcaaccaatg cggttatatt ctacgtgttt gtatcatccc 1200 aacgcacccc aatgcctctc tcatatgaat tccggttgta catttacctc gccacattta 1260 gcccagcgtg ttgcaagcac agtgtatcag aattgtgaac atgcagataa ctacaccgca 1320 tattgtctgg gaatatctca tatggagcct agctttggtc taatcttaca cgacgggggc 1380 accacgttaa agtttgtaga tacacccgag agtttgtcgg gattatacgt ttttgtggtg 1440 tattttaacg ggcatgttga agccgtagca tacactgttg tatccacagt agatcatttt 1500 gtaaacgcaa ttgaagagcg tggatttccg ccaacggccg gtcagccacc ggcgactact 1560 aaacccaagg aaattacccc cgtaaacccc ggaacgtcac cacttctacg atatgccgca 1620 tggaccggag ggcttgcagc agtagtactt ttatgtctcg taatattttt aatctgtacg 1680 gctaaacgaa tgagggttaa agccgccagg gtagacaag 1719 <210> 87 <211> 1990 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Polynucleotide <400> 87 gggaaataag agagaaaaga agagtaagaa gaaatataag agccaccatg gggacagtta 60 ataaacctgt ggtgggggta ttgatggggt tcggaattat cacgggaacg ttgcgtataa 120 cgaatccggt cagagcatcc gtcttgcgat acgatgattt tcacatcgat gaagacaaac 180 tggatacaaa ctccgtatat gagccttact accattcaga tcatgcggag tcttcatggg 240 taaatcgggg agagtcttcg cgaaaagcgt acgatcataa ctcaccttat atatggccac 300 gtaatgatta tgatggattt ttagagaacg cacacgaaca ccatggggtg tataatcagg 360 gccgtggtat cgatagcggg gaacggttaa tgcaacccac acaaatgtct gcacaggagg 420 atcttgggga cgatacgggc atccacgtta tccctacgtt aaacggcgat gacagacata 480 aaattgtaaa tgtggaccaa cgtcaatacg gtgacgtgtt taaaggagat cttaatccaa 540 aaccccaagg ccaaagactc attgaggtgt cagtggaaga aaatcacccg tttactttac 600 gcgcaccgat tcagcggatt tatggagtcc ggtacaccga gacttggagc tttttgccgt 660 cattaacctg tacgggagac gcagcgcccg ccatccagca tatatgttta aagcatacaa 720 catgctttca agacgtggtg gtggatgtgg attgcgcgga aaatactaaa gaggatcagt 780 tggccgaaat cagttaccgt tttcaaggta agaaggaagc ggaccaaccg tggattgttg 840 taaacacgag cacactgttt gatgaactcg aattagaccc acccgagatt gaaccgggtg 900 tcttgaaagt acttcggaca gagaaacaat acttgggtgt gtacatttgg aacatgcgcg 960 gctccgatgg tacgtctacc tacgccacgt ttttggtcac ctggaaaggg gatgagaaga 1020 caagaaaccc tacgcccgca gtaactcctc aaccaagagg ggctgagttt catatgtgga 1080 attaccactc gcatgtattt tcagttggtg atacgtttag cttggcaatg catcttcagt 1140 ataagataca tgaagcgcca tttgatttgc tgttagagtg gttgtatgtc cccatcgatc 1200 ctacatgtca accaatgcgg ttatattcta cgtgtttgta tcatcccaac gcaccccaat 1260 gcctctctca tatgaattcc ggttgtacat ttacctcgcc acatttagcc cagcgtgttg 1320 caagcacagt gtatcagaat tgtgaacatg cagataacta caccgcatat tgtctgggaa 1380 tatctcatat ggagcctagc tttggtctaa tcttacacga cgggggcacc acgttaaagt 1440 ttgtagatac acccgagagt ttgtcgggat tatacgtttt tgtggtgtat tttaacgggc 1500 atgttgaagc cgtagcatac actgttgtat ccacagtaga tcattttgta aacgcaattg 1560 aagagcgtgg atttccgcca acggccggtc agccaccggc gactactaaa cccaaggaaa 1620 ttacccccgt aaaccccgga acgtcaccac ttctacgata tgccgcatgg accggagggc 1680 ttgcagcagt agtactttta tgtctcgtaa tatttttaat ctgtacggct aaacgaatga 1740 gggttaaagc cgccagggta gacaagtgat aataggctgg agcctcggtg gccatgcttc 1800 ttgccccttg ggcctccccc cagcccctcc tccccttcct gcacccgtac ccccgtggtc 1860 tttgaataaa gtctgagtgg gcggcaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 1920 aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 1980 aaaaatctag 1990 <210> 88 <211> 1885 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Polynucleotide <400> 88 gggaaataag agagaaaaga agagtaagaa gaaatataag agccaccatg gggacagtta 60 ataaacctgt ggtgggcgta ttgatggggt tcggaattat cacgggaacg ttgcgtataa 120 cgaatccggt cagagcatcc gtcttgcgat acgatgattt tcacatcgat gaagacaaac 180 tggatacaaa ctccgtatat gagccttact accattcaga tcatgcggag tcttcatggg 240 taaatcgggg agagtcttcg cgaaaggcgt acgatcataa ctcaccttat atatggccac 300 gtaatgatta tgatggattc ttagagaacg cacacgaaca ccatggggtg tataatcagg 360 gccgtggtat cgatagcggg gaacggttaa tgcaacccac acaaatgtct gcacaggagg 420 atcttgggga cgatacgggc atccacgtta tccctacgtt aaacggcgat gacagacata 480 agattgtaaa tgtggaccaa cgtcaatacg gtgacgtgtt taaaggagat cttaatccaa 540 agccccaagg ccaaagactc attgaggtgt cagtggaaga gaatcacccg tttactttac 600 gcgcaccgat tcagcggatt tatggagtcc ggtacaccga gacttggagc ttcttgccgt 660 cattaacctg tacgggagac gcagcgcccg ccatccagca tatatgttta aagcatacaa 720 catgctttca agacgtggtg gtggatgtgg attgcgcgga gaatactaaa gaggatcagt 780 tggccgaaat cagttaccgt tttcaaggta agaaggaagc ggaccaaccg tggattgttg 840 taaacacgag cacactgttt gatgaactcg aattagaccc acccgagatt gaaccgggtg 900 tcttgaaagt acttcggaca gagaaacaat acttgggtgt gtacatttgg aacatgcgcg 960 gctccgatgg tacgtctacc tacgccacgt tcttggtcac ctggaaaggg gatgagaaga 1020 caagaaaccc tacgcccgca gtaactcctc aaccaagagg ggctgagttt catatgtgga 1080 attaccactc gcatgtattt tcagttggtg atacgtttag cttggcaatg catcttcagt 1140 ataagataca tgaagcgcca tttgatttgc tgttagagtg gttgtatgtc cccatcgatc 1200 ctacatgtca accaatgcgg ttatattcta cgtgtttgta tcatcccaac gcaccccaat 1260 gcctctctca tatgaattcc ggttgtacat ttacctcgcc acatttagcc cagcgtgttg 1320 caagcacagt gtatcagaat tgtgaacatg cagataacta caccgcatat tgtctgggaa 1380 tatctcatat ggagcctagc tttggtctaa tcttacacga cggaggcacc acgttaaagt 1440 ttgtagatac acccgagagt ttgtcgggat tatacgtctt tgtggtgtat tttaacgggc 1500 atgttgaagc cgtagcatac actgttgtat ccacagtaga tcattttgta aacgcaattg 1560 aagagcgtgg atttccgcca acggccggtc agccaccggc gactactaaa cccaaggaaa 1620 ttacgcccgt aaaccccgga acgtcaccac ttctacgata tgccgcatgg accggagggc 1680 ttgcagcagt agtactttta tgtctcgtaa tattcttaat ctgtacggct aaacgaatga 1740 gggttaaagc cgccagggta gacaagtgat aataggctgg agcctcggtg gccatgcttc 1800 ttgccccttg ggcctccccc cagcccctcc tccccttcct gcacccgtac ccccgtggtc 1860 tttgaataaa gtctgagtgg gcggc 1885 <210> 89 <211> 573 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Polypeptide <400> 89 Met Gly Thr Val Asn Lys Pro Val Val Gly Val Leu Met Gly Phe Gly 1 5 10 15 Ile Ile Thr Gly Thr Leu Arg Ile Thr Asn Pro Val Arg Ala Ser Val 20 25 30 Leu Arg Tyr Asp Asp Phe His Ile Asp Glu Asp Lys Leu Asp Thr Asn 35 40 45 Ser Val Tyr Glu Pro Tyr Tyr His Ser Asp His Ala Glu Ser Ser Trp 50 55 60 Val Asn Arg Gly Glu Ser Ser Arg Lys Ala Tyr Asp His Asn Ser Pro 65 70 75 80 Tyr Ile Trp Pro Arg Asn Asp Tyr Asp Gly Phe Leu Glu Asn Ala His 85 90 95 Glu His His Gly Val Tyr Asn Gln Gly Arg Gly Ile Asp Ser Gly Glu 100 105 110 Arg Leu Met Gln Pro Thr Gln Met Ser Ala Gln Glu Asp Leu Gly Asp 115 120 125 Asp Thr Gly Ile His Val Ile Pro Thr Leu Asn Gly Asp Asp Arg His 130 135 140 Lys Ile Val Asn Val Asp Gln Arg Gln Tyr Gly Asp Val Phe Lys Gly 145 150 155 160 Asp Leu Asn Pro Lys Pro Gln Gly Gln Arg Leu Ile Glu Val Ser Val 165 170 175 Glu Glu Asn His Pro Phe Thr Leu Arg Ala Pro Ile Gln Arg Ile Tyr 180 185 190 Gly Val Arg Tyr Thr Glu Thr Trp Ser Phe Leu Pro Ser Leu Thr Cys 195 200 205 Thr Gly Asp Ala Ala Pro Ala Ile Gln His Ile Cys Leu Lys His Thr 210 215 220 Thr Cys Phe Gln Asp Val Val Val Asp Val Asp Cys Ala Glu Asn Thr 225 230 235 240 Lys Glu Asp Gln Leu Ala Glu Ile Ser Tyr Arg Phe Gln Gly Lys Lys 245 250 255 Glu Ala Asp Gln Pro Trp Ile Val Val Asn Thr Ser Thr Leu Phe Asp 260 265 270 Glu Leu Glu Leu Asp Pro Pro Glu Ile Glu Pro Gly Val Leu Lys Val 275 280 285 Leu Arg Thr Glu Lys Gln Tyr Leu Gly Val Tyr Ile Trp Asn Met Arg 290 295 300 Gly Ser Asp Gly Thr Ser Thr Tyr Ala Thr Phe Leu Val Thr Trp Lys 305 310 315 320 Gly Asp Glu Lys Thr Arg Asn Pro Thr Pro Ala Val Thr Pro Gln Pro 325 330 335 Arg Gly Ala Glu Phe His Met Trp Asn Tyr His Ser His Val Phe Ser 340 345 350 Val Gly Asp Thr Phe Ser Leu Ala Met His Leu Gln Tyr Lys Ile His 355 360 365 Glu Ala Pro Phe Asp Leu Leu Leu Glu Trp Leu Tyr Val Pro Ile Asp 370 375 380 Pro Thr Cys Gln Pro Met Arg Leu Tyr Ser Thr Cys Leu Tyr His Pro 385 390 395 400 Asn Ala Pro Gln Cys Leu Ser His Met Asn Ser Gly Cys Thr Phe Thr 405 410 415 Ser Pro His Leu Ala Gln Arg Val Ala Ser Thr Val Tyr Gln Asn Cys 420 425 430 Glu His Ala Asp Asn Tyr Thr Ala Tyr Cys Leu Gly Ile Ser His Met 435 440 445 Glu Pro Ser Phe Gly Leu Ile Leu His Asp Gly Gly Thr Thr Leu Lys 450 455 460 Phe Val Asp Thr Pro Glu Ser Leu Ser Gly Leu Tyr Val Phe Val Val 465 470 475 480 Tyr Phe Asn Gly His Val Glu Ala Val Ala Tyr Thr Val Val Ser Thr 485 490 495 Val Asp His Phe Val Asn Ala Ile Glu Glu Arg Gly Phe Pro Pro Thr 500 505 510 Ala Gly Gln Pro Pro Ala Thr Thr Lys Pro Lys Glu Ile Thr Pro Val 515 520 525 Asn Pro Gly Thr Ser Pro Leu Leu Arg Tyr Ala Ala Trp Thr Gly Gly 530 535 540 Leu Ala Ala Val Val Leu Leu Cys Leu Val Ile Phe Leu Ile Cys Thr 545 550 555 560 Ala Lys Arg Met Arg Val Lys Ala Ala Arg Val Asp Lys 565 570 <210> 90 <211> 1719 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Polynucleotide <400> 90 atggggacag ttaataaacc tgtggtgggc gtattgatgg ggttcggaat tatcacggga 60 acgttgcgta taacgaatcc ggtcagagca tccgtcttgc gatacgatga ttttcacatc 120 gatgaagaca aactggatac aaactccgta tatgagcctt actaccattc agatcatgcg 180 gagtcttcat gggtaaatcg gggagagtct tcgcgaaagg cgtacgatca taactcacct 240 tatatatggc cacgtaatga ttatgatgga ttcttagaga acgcacacga acaccatggg 300 gtgtataatc agggccgtgg tatcgatagc ggggaacggt taatgcaacc cacacaaatg 360 tctgcacagg aggatcttgg ggacgatacg ggcatccacg ttatccctac gttaaacggc 420 gatgacagac ataagattgt aaatgtggac caacgtcaat acggtgacgt gtttaaagga 480 gatcttaatc caaagcccca aggccaaaga ctcattgagg tgtcagtgga agagaatcac 540 ccgtttactt tacgcgcacc gattcagcgg atttatggag tccggtacac cgagacttgg 600 agcttcttgc cgtcattaac ctgtacggga gacgcagcgc ccgccatcca gcatatatgt 660 ttaaagcata caacatgctt tcaagacgtg gtggtggatg tggattgcgc ggagaatact 720 aaagaggatc agttggccga aatcagttac cgttttcaag gtaagaagga agcggaccaa 780 ccgtggattg ttgtaaacac gagcacactg tttgatgaac tcgaattaga cccacccgag 840 attgaaccgg gtgtcttgaa agtacttcgg acagagaaac aatacttggg tgtgtacatt 900 tggaacatgc gcggctccga tggtacgtct acctacgcca cgttcttggt cacctggaaa 960 ggggatgaga agacaagaaa ccctacgccc gcagtaactc ctcaaccaag aggggctgag 1020 tttcatatgt ggaattacca ctcgcatgta ttttcagttg gtgatacgtt tagcttggca 1080 atgcatcttc agtataagat acatgaagcg ccatttgatt tgctgttaga gtggttgtat 1140 gtccccatcg atcctacatg tcaaccaatg cggttatatt ctacgtgttt gtatcatccc 1200 aacgcacccc aatgcctctc tcatatgaat tccggttgta catttacctc gccacattta 1260 gcccagcgtg ttgcaagcac agtgtatcag aattgtgaac atgcagataa ctacaccgca 1320 tattgtctgg gaatatctca tatggagcct agctttggtc taatcttaca cgacggaggc 1380 accacgttaa agtttgtaga tacacccgag agtttgtcgg gattatacgt ctttgtggtg 1440 tattttaacg ggcatgttga agccgtagca tacactgttg tatccacagt agatcatttt 1500 gtaaacgcaa ttgaagagcg tggatttccg ccaacggccg gtcagccacc ggcgactact 1560 aaacccaagg aaattacgcc cgtaaacccc ggaacgtcac cacttctacg atatgccgca 1620 tggaccggag ggcttgcagc agtagtactt ttatgtctcg taatattctt aatctgtacg 1680 gctaaacgaa tgagggttaa agccgccagg gtagacaag 1719 <210> 91 <211> 1990 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Polynucleotide <400> 91 gggaaataag agagaaaaga agagtaagaa gaaatataag agccaccatg gggacagtta 60 ataaacctgt ggtgggcgta ttgatggggt tcggaattat cacgggaacg ttgcgtataa 120 cgaatccggt cagagcatcc gtcttgcgat acgatgattt tcacatcgat gaagacaaac 180 tggatacaaa ctccgtatat gagccttact accattcaga tcatgcggag tcttcatggg 240 taaatcgggg agagtcttcg cgaaaggcgt acgatcataa ctcaccttat atatggccac 300 gtaatgatta tgatggattc ttagagaacg cacacgaaca ccatggggtg tataatcagg 360 gccgtggtat cgatagcggg gaacggttaa tgcaacccac acaaatgtct gcacaggagg 420 atcttgggga cgatacgggc atccacgtta tccctacgtt aaacggcgat gacagacata 480 agattgtaaa tgtggaccaa cgtcaatacg gtgacgtgtt taaaggagat cttaatccaa 540 agccccaagg ccaaagactc attgaggtgt cagtggaaga gaatcacccg tttactttac 600 gcgcaccgat tcagcggatt tatggagtcc ggtacaccga gacttggagc ttcttgccgt 660 cattaacctg tacgggagac gcagcgcccg ccatccagca tatatgttta aagcatacaa 720 catgctttca agacgtggtg gtggatgtgg attgcgcgga gaatactaaa gaggatcagt 780 tggccgaaat cagttaccgt tttcaaggta agaaggaagc ggaccaaccg tggattgttg 840 taaacacgag cacactgttt gatgaactcg aattagaccc acccgagatt gaaccgggtg 900 tcttgaaagt acttcggaca gagaaacaat acttgggtgt gtacatttgg aacatgcgcg 960 gctccgatgg tacgtctacc tacgccacgt tcttggtcac ctggaaaggg gatgagaaga 1020 caagaaaccc tacgcccgca gtaactcctc aaccaagagg ggctgagttt catatgtgga 1080 attaccactc gcatgtattt tcagttggtg atacgtttag cttggcaatg catcttcagt 1140 ataagataca tgaagcgcca tttgatttgc tgttagagtg gttgtatgtc cccatcgatc 1200 ctacatgtca accaatgcgg ttatattcta cgtgtttgta tcatcccaac gcaccccaat 1260 gcctctctca tatgaattcc ggttgtacat ttacctcgcc acatttagcc cagcgtgttg 1320 caagcacagt gtatcagaat tgtgaacatg cagataacta caccgcatat tgtctgggaa 1380 tatctcatat ggagcctagc tttggtctaa tcttacacga cggaggcacc acgttaaagt 1440 ttgtagatac acccgagagt ttgtcgggat tatacgtctt tgtggtgtat tttaacgggc 1500 atgttgaagc cgtagcatac actgttgtat ccacagtaga tcattttgta aacgcaattg 1560 aagagcgtgg atttccgcca acggccggtc agccaccggc gactactaaa cccaaggaaa 1620 ttacgcccgt aaaccccgga acgtcaccac ttctacgata tgccgcatgg accggagggc 1680 ttgcagcagt agtactttta tgtctcgtaa tattcttaat ctgtacggct aaacgaatga 1740 gggttaaagc cgccagggta gacaagtgat aataggctgg agcctcggtg gccatgcttc 1800 ttgccccttg ggcctccccc cagcccctcc tccccttcct gcacccgtac ccccgtggtc 1860 tttgaataaa gtctgagtgg gcggcaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 1920 aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 1980 aaaaatctag 1990 <210> 92 <211> 2141 <212> RNA <213> Varicella Zoster Virus <400> 92 ggggaaauaa gagagaaaag aagaguaaga agaaauauaa gagccaccau ggggacagug 60 aauaagccgg uugugggcgu gcuuaugggc uuugggauua uuaccgguac auuacgaauu 120 accaauccag ugcgcgccag ugugcugcgu uacgacgacu uucacauuga cgaggauaag 180 cuggauacua acagcgugua cgaaccuuau uaccacucag aucaugccga aucaagcugg 240 guuaauagag gagaaagcag ccgaaaagcc uacgaccaca acucaccuua uauuuggccc 300 agaaacgauu augacgguuu ccuggaaaac gcacaugaac accauggagu cuacaaccaa 360 ggcaggggaa ucgacagugg cgagcgucuu augcagccaa cacagauguc ggcacaggag 420 gaucucggug augacaccgg cauacacgug auucccacau uaaacggcga cgacagacau 480 aagaucguca auguggauca gcgucaguau ggggaugucu uuaaaggcga uuugaaucca 540 aagccccaag gacagagacu gaucgagguc ucuguagaag aaaaucaccc cuucacuuug 600 cgcgcuccaa uccagaggau uuacggggug cguuauaccg aaacuuggag uuucuugccg 660 ucacugacgu guacggggga ugccgccccc gcaauccagc acaucugucu gaaacacacc 720 acaugcuuuc aggacguggu uguggaugug gauugcgcgg aaaacacaaa agaagaccaa 780 cucgccgaaa ucagcuaucg uuuucagggu aaaaaagagg ccgaccaacc guggauuguu 840 gugaauacga gcacgcucuu cgaugagcuu gaacucgauc ccccggaaau cgagccuggg 900 guucuaaaag uguugaggac cgagaagcag uaccucgggg uuuauaucug gaauaugaga 960 ggcuccgaug gcaccucuac cuacgcaacg uuucugguua ccuggaaggg agacgagaag 1020 acacggaauc caacgcccgc ugugaccccu cagccuaggg gagccgaauu ccacaugugg 1080 aacuaucacu cccauguauu cagugugggu gacacuuuca gccuggccau gcaccugcag 1140 uauaagauuc acgaggcacc cuucgaccuc cugcuggagu gguuguacgu accuauugau 1200 cccacuuguc agcccaugcg ccuguacucc acuugcuugu accaccccaa ugcaccacag 1260 ugucuaucac acaugaacuc cggguguacc uuuacuucac cccaucuugc ccagcggguc 1320 gccagcacag uguaucagaa cugugagcau gcugacaacu auacugcuua uugccucgga 1380 auaucccaua uggagccaag cuucgggcuc auacugcacg auggugguac gacacucaag 1440 uucguggaca cccccgaaag ccuuucuggc uuguacgugu ucguggucua cuucaaugga 1500 cauguggagg caguggcuua cacagugguu ucgacaguug aucacuuugu aaaugccauu 1560 gaggaacgcg gcuucccgcc uacagcgggc cagcccccug cgacaacaaa accaaaagag 1620 auuacgcccg uuaauccugg gacuagucca uugcugaggu augccgccug gacuggcggu 1680 cuggcggccg ugguacuucu guguuuaguc auauuucuga ucuguaccgc uaaacguaug 1740 cgggucaagg cuuaccgugu ugacaagucu ccuuacaauc agucaaugua cuaugcagga 1800 cucccuguug acgauuucga agacucagag aguacagaca cagaagaaga auucggaaac 1860 gcuauaggug gcucucacgg agguagcucg uauacagugu acaucgauaa aaccagauga 1920 uaauaggcug gagccucggu ggccaugcuu cuugccccuu gggccucccc ccagccccuc 1980 cuccccuucc ugcacccgua cccccguggu cuuugaauaa agucugagug ggcggcaaaa 2040 aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 2100 aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaucua g 2141 <210> 93 <211> 2111 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Polynucleotide <400> 93 ggggaaauaa gagagaaaag aagaguaaga agaaauauaa gagccaccau ggagacuccc 60 gcucagcuac uguuccuccu gcuccuuugg cugccugaua cuacaggcuc uguuuugcgg 120 uacgacgacu uucacaucga ugaggacaag cucgacacua auagcgugua ugagcccuac 180 uaccauucag aucacgccga guccucuugg gugaacaggg gugaaaguuc uaggaaagcc 240 uaugaucaca acagcccuua uauuuggcca cggaaugauu acgacggauu ucucgaaaau 300 gcccacgagc aucacggagu guacaaccag ggccguggaa ucgacucugg ggagagauug 360 augcaaccua cacagaugag cgcccaggaa gaucucgggg augauacagg aauucacguu 420 aucccuacau uaaacggaga ugaccgccac aaaaucguca augucgauca aagacaguau 480 ggagaugugu ucaaaggcga ucucaacccu aagccgcagg gccagagacu cauugaggug 540 ucugucgaag agaaccaccc uuucacucug cgcgcuccca uucagagaau cuauggaguu 600 cgcuauacgg agacuugguc auuccuuccu ucccugacau gcaccggaga cgccgccccu 660 gccauucagc acauaugccu gaaacauacc accuguuucc aggauguggu gguugauguu 720 gauugugcug aaaauaccaa ggaagaccaa cuggccgaga uuaguuaccg guuccaaggg 780 aaaaaggaag ccgaccagcc auggauugug guuaauacaa gcacucuguu cgaugagcuc 840 gagcuggauc cccccgagau agaacccgga guucugaaag ugcuccggac agaaaaacaa 900 uaucugggag ucuacauaug gaacaugcgc gguuccgaug ggaccuccac uuaugcaacc 960 uuucucguca cguggaaggg agaugagaaa acuaggaauc ccacacccgc ugucacacca 1020 cagccaagag gggcugaguu ccauaugugg aacuaucaua gucacguguu uagugucgga 1080 gauacguuuu cauuggcuau gcaucuccag uacaagauuc augaggcucc cuucgaucug 1140 uugcuugagu gguuguacgu cccgauugac ccgaccugcc agcccaugcg acuguacagc 1200 accugucucu accauccaaa cgcuccgcaa ugucugagcc acaugaacuc uggguguacu 1260 uucaccaguc cccaccucgc ccagcgggug gccucuacug uuuaccagaa cugugagcac 1320 gccgacaacu acaccgcaua cugccucggu auuucucaca uggaacccuc cuucggacuc 1380 auccugcacg augggggcac uacccugaag uucguugaua cgccagaauc ucugucuggg 1440 cucuauguuu ucguggucua cuucaauggc caugucgagg ccguggccua uacugucguu 1500 ucuaccgugg aucauuuugu gaacgccauc gaagaacggg gauucccccc uacggcaggc 1560 cagccgccug caaccaccaa gcccaaggaa auaacaccag ugaacccugg caccucaccu 1620 cuccuaagau augccgcgug gacaggggga cuggcggcag uggugcuccu cugucucgug 1680 aucuuucuga ucuguacagc caagaggaug agggucaagg cuuauagagu ggacaagucc 1740 cccuacaauc agucaaugua cuacgccggc cuucccguug augauuuuga ggauuccgag 1800 uccacagaua cugaggaaga guucgguaac gcuauaggcg gcucucacgg ggguucaagc 1860 uacacgguuu acauugacaa gacacgcuga uaauaggcug gagccucggu ggccaugcuu 1920 cuugccccuu gggccucccc ccagccccuc cuccccuucc ugcacccgua cccccguggu 1980 cuuugaauaa agucugagug ggcggcaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 2040 aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 2100 aaaaaaucua g 2111 <210> 94 <211> 1958 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Polynucleotide <400> 94 ggggaaauaa gagagaaaag aagaguaaga agaaauauaa gagccaccau ggggacaguu 60 aauaaaccug uggugggggu auugaugggg uucggaauua ucacgggaac guugcguaua 120 acgaauccgg ucagagcauc cgucuugcga uacgaugauu uucacaucga ugaagacaaa 180 cuggauacaa acuccguaua ugagccuuac uaccauucag aucaugcgga gucuucaugg 240 guaaaucggg gagagucuuc gcgaaaagcg uacgaucaua acucaccuua uauauggcca 300 cguaaugauu augauggauu uuuagagaac gcacacgaac accauggggu guauaaucag 360 ggccguggua ucgauagcgg ggaacgguua augcaaccca cacaaauguc ugcacaggag 420 gaucuugggg acgauacggg cauccacguu aucccuacgu uaaacggcga ugacagacau 480 aaaauuguaa auguggacca acgucaauac ggugacgugu uuaaaggaga ucuuaaucca 540 aaaccccaag gccaaagacu cauugaggug ucaguggaag aaaaucaccc guuuacuuua 600 cgcgcaccga uucagcggau uuauggaguc cgguacaccg agacuuggag cuuuuugccg 660 ucauuaaccu guacgggaga cgcagcgccc gccauccagc auauauguuu aaaacauaca 720 acaugcuuuc aagacguggu gguggaugug gauugcgcgg aaaauacuaa agaggaucag 780 uuggccgaaa ucaguuaccg uuuucaaggu aagaaggaag cggaccaacc guggauuguu 840 guaaacacga gcacacuguu ugaugaacuc gaauuagacc cccccgagau ugaaccgggu 900 gucuugaaag uacuucggac agaaaaacaa uacuugggug uguacauuug gaacaugcgc 960 ggcuccgaug guacgucuac cuacgccacg uuuuugguca ccuggaaagg ggaugaaaaa 1020 acaagaaacc cuacgcccgc aguaacuccu caaccaagag gggcugaguu ucauaugugg 1080 aauuaccacu cgcauguauu uucaguuggu gauacguuua gcuuggcaau gcaucuucag 1140 uauaagauac augaagcgcc auuugauuug cuguuagagu gguuguaugu ccccaucgau 1200 ccuacauguc aaccaaugcg guuauauucu acguguuugu aucaucccaa cgcaccccaa 1260 ugccucucuc auaugaauuc cgguuguaca uuuaccucgc cacauuuagc ccagcguguu 1320 gcaagcacag uguaucaaaa uugugaacau gcagauaacu acaccgcaua uugucuggga 1380 auaucucaua uggagccuag cuuuggucua aucuuacacg acgggggcac cacguuaaag 1440 uuuguagaua cacccgagag uuugucggga uuauacguuu uuguggugua uuuuaacggg 1500 cauguugaag ccguagcaua cacuguugua uccacaguag aucauuuugu aaacgcaauu 1560 gaagagcgug gauuuccgcc aacggccggu cagccaccgg cgacuacuaa acccaaggaa 1620 auuacccccg uaaaccccgg aacgucacca cuucuacgau augccgcaug gaccggaggg 1680 cuugcagcag uaguacuuuu augucucgua auauuuuuaa ucuguacggc uugaugauaa 1740 uaggcuggag ccucgguggc caugcuucuu gccccuuggg ccucccccca gccccuccuc 1800 cccuuccugc acccguaccc ccguggucuu ugaauaaagu cugagugggc ggcaaaaaaa 1860 aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 1920 aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaucuag 1958 <210> 95 <211> 1928 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Polynucleotide <400> 95 ggggaaauaa gagagaaaag aagaguaaga agaaauauaa gagccaccau ggaaaccccg 60 gcgcagcugc uguuucugcu gcugcugugg cugccggaua ccaccggcuc cgucuugcga 120 uacgaugauu uucacaucga ugaagacaaa cuggauacaa acuccguaua ugagccuuac 180 uaccauucag aucaugcgga gucuucaugg guaaaucggg gagagucuuc gcgaaaagcg 240 uacgaucaua acucaccuua uauauggcca cguaaugauu augauggauu uuuagagaac 300 gcacacgaac accauggggu guauaaucag ggccguggua ucgauagcgg ggaacgguua 360 augcaaccca cacaaauguc ugcacaggag gaucuugggg acgauacggg cauccacguu 420 aucccuacgu uaaacggcga ugacagacau aaaauuguaa auguggacca acgucaauac 480 ggugacgugu uuaaaggaga ucuuaaucca aaaccccaag gccaaagacu cauugaggug 540 ucaguggaag aaaaucaccc guuuacuuua cgcgcaccga uucagcggau uuauggaguc 600 cgguacaccg agacuuggag cuuuuugccg ucauuaaccu guacgggaga cgcagcgccc 660 gccauccagc auauauguuu aaaacauaca acaugcuuuc aagacguggu gguggaugug 720 gauugcgcgg aaaauacuaa agaggaucag uuggccgaaa ucaguuaccg uuuucaaggu 780 aagaaggaag cggaccaacc guggauuguu guaaacacga gcacacuguu ugaugaacuc 840 gaauuagacc cccccgagau ugaaccgggu gucuugaaag uacuucggac agaaaaacaa 900 uacuugggug uguacauuug gaacaugcgc ggcuccgaug guacgucuac cuacgccacg 960 uuuuugguca ccuggaaagg ggaugaaaaa acaagaaacc cuacgcccgc aguaacuccu 1020 caaccaagag gggcugaguu ucauaugugg aauuaccacu cgcauguauu uucaguuggu 1080 gauacguuua gcuuggcaau gcaucuucag uauaagauac augaagcgcc auuugauuug 1140 cuguuagagu gguuguaugu ccccaucgau ccuacauguc aaccaaugcg guuauauucu 1200 acguguuugu aucaucccaa cgcaccccaa ugccucucuc auaugaauuc cgguuguaca 1260 uuuaccucgc cacauuuagc ccagcguguu gcaagcacag uguaucaaaa uugugaacau 1320 gcagauaacu acaccgcaua uugucuggga auaucucaua uggagccuag cuuuggucua 1380 aucuuacacg acgggggcac cacguuaaag uuuguagaua cacccgagag uuugucggga 1440 uuauacguuu uuguggugua uuuuaacggg cauguugaag ccguagcaua cacuguugua 1500 uccacaguag aucauuuugu aaacgcaauu gaagagcgug gauuuccgcc aacggccggu 1560 cagccaccgg cgacuacuaa acccaaggaa auuacccccg uaaaccccgg aacgucacca 1620 cuucuacgau augccgcaug gaccggaggg cuugcagcag uaguacuuuu augucucgua 1680 auauuuuuaa ucuguacggc uugaugauaa uaggcuggag ccucgguggc caugcuucuu 1740 gccccuuggg ccucccccca gccccuccuc cccuuccugc acccguaccc ccguggucuu 1800 ugaauaaagu cugagugggc ggcaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 1860 aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 1920 aaaucuag 1928 <210> 96 <211> 2144 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Polynucleotide <400> 96 ggggaaauaa gagagaaaag aagaguaaga agaaauauaa gagccaccau ggggacaguu 60 aauaaaccug uggugggggu auugaugggg uucggaauua ucacgggaac guugcguaua 120 acgaauccgg ucagagcauc cgucuugcga uacgaugauu uucacaucga ugaagacaaa 180 cuggauacaa acuccguaua ugagccuuac uaccauucag aucaugcgga gucuucaugg 240 guaaaucggg gagagucuuc gcgaaaagcg uacgaucaua acucaccuua uauauggcca 300 cguaaugauu augauggauu uuuagagaac gcacacgaac accauggggu guauaaucag 360 ggccguggua ucgauagcgg ggaacgguua augcaaccca cacaaauguc ugcacaggag 420 gaucuugggg acgauacggg cauccacguu aucccuacgu uaaacggcga ugacagacau 480 aaaauuguaa auguggacca acgucaauac ggugacgugu uuaaaggaga ucuuaaucca 540 aaaccccaag gccaaagacu cauugaggug ucaguggaag aaaaucaccc guuuacuuua 600 cgcgcaccga uucagcggau uuauggaguc cgguacaccg agacuuggag cuuuuugccg 660 ucauuaaccu guacgggaga cgcagcgccc gccauccagc auauauguuu aaaacauaca 720 acaugcuuuc aagacguggu gguggaugug gauugcgcgg aaaauacuaa agaggaucag 780 uuggccgaaa ucaguuaccg uuuucaaggu aagaaggaag cggaccaacc guggauuguu 840 guaaacacga gcacacuguu ugaugaacuc gaauuagacc cccccgagau ugaaccgggu 900 gucuugaaag uacuucggac agaaaaacaa uacuugggug uguacauuug gaacaugcgc 960 ggcuccgaug guacgucuac cuacgccacg uuuuugguca ccuggaaagg ggaugaaaaa 1020 acaagaaacc cuacgcccgc aguaacuccu caaccaagag gggcugaguu ucauaugugg 1080 aauuaccacu cgcauguauu uucaguuggu gauacguuua gcuuggcaau gcaucuucag 1140 uauaagauac augaagcgcc auuugauuug cuguuagagu gguuguaugu ccccaucgau 1200 ccuacauguc aaccaaugcg guuauauucu acguguuugu aucaucccaa cgcaccccaa 1260 ugccucucuc auaugaauuc cgguuguaca uuuaccucgc cacauuuagc ccagcguguu 1320 gcaagcacag uguaucaaaa uugugaacau gcagauaacu acaccgcaua uugucuggga 1380 auaucucaua uggagccuag cuuuggucua aucuuacacg acgggggcac cacguuaaag 1440 uuuguagaua cacccgagag uuugucggga uuauacguuu uuguggugua uuuuaacggg 1500 cauguugaag ccguagcaua cacuguugua uccacaguag aucauuuugu aaacgcaauu 1560 gaagagcgug gauuuccgcc aacggccggu cagccaccgg cgacuacuaa acccaaggaa 1620 auuacccccg uaaaccccgg aacgucacca cuucuacgau augccgcaug gaccggaggg 1680 cuugcagcag uaguacuuuu augucucgua auauuuuuaa ucuguacggc uaaacgaaug 1740 aggguuaaag ccuauagggu agacaagucc ccguauaacc aaagcaugua uuacgcuggc 1800 cuuccagugg acgauuucga ggacgccgaa gccgccgaug ccgaagaaga guuugguaac 1860 gcgauuggag ggagucacgg ggguucgagu uacacggugu auauagauaa gacccgguga 1920 ugauaauagg cuggagccuc gguggccaug cuucuugccc cuugggccuc cccccagccc 1980 cuccuccccu uccugcaccc guacccccgu ggucuuugaa uaaagucuga gugggcggca 2040 aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 2100 aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaau cuag 2144 <210> 97 <211> 2144 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Polynucleotide <400> 97 ggggaaauaa gagagaaaag aagaguaaga agaaauauaa gagccaccau ggggacaguu 60 aauaaaccug uggugggggu auugaugggg uucggaauua ucacgggaac guugcguaua 120 acgaauccgg ucagagcauc cgucuugcga uacgaugauu uucacaucga ugaagacaaa 180 cuggauacaa acuccguaua ugagccuuac uaccauucag aucaugcgga gucuucaugg 240 guaaaucggg gagagucuuc gcgaaaagcg uacgaucaua acucaccuua uauauggcca 300 cguaaugauu augauggauu uuuagagaac gcacacgaac accauggggu guauaaucag 360 ggccguggua ucgauagcgg ggaacgguua augcaaccca cacaaauguc ugcacaggag 420 gaucuugggg acgauacggg cauccacguu aucccuacgu uaaacggcga ugacagacau 480 aaaauuguaa auguggacca acgucaauac ggugacgugu uuaaaggaga ucuuaaucca 540 aaaccccaag gccaaagacu cauugaggug ucaguggaag aaaaucaccc guuuacuuua 600 cgcgcaccga uucagcggau uuauggaguc cgguacaccg agacuuggag cuuuuugccg 660 ucauuaaccu guacgggaga cgcagcgccc gccauccagc auauauguuu aaaacauaca 720 acaugcuuuc aagacguggu gguggaugug gauugcgcgg aaaauacuaa agaggaucag 780 uuggccgaaa ucaguuaccg uuuucaaggu aagaaggaag cggaccaacc guggauuguu 840 guaaacacga gcacacuguu ugaugaacuc gaauuagacc cccccgagau ugaaccgggu 900 gucuugaaag uacuucggac agaaaaacaa uacuugggug uguacauuug gaacaugcgc 960 ggcuccgaug guacgucuac cuacgccacg uuuuugguca ccuggaaagg ggaugaaaaa 1020 acaagaaacc cuacgcccgc aguaacuccu caaccaagag gggcugaguu ucauaugugg 1080 aauuaccacu cgcauguauu uucaguuggu gauacguuua gcuuggcaau gcaucuucag 1140 uauaagauac augaagcgcc auuugauuug cuguuagagu gguuguaugu ccccaucgau 1200 ccuacauguc aaccaaugcg guuauauucu acguguuugu aucaucccaa cgcaccccaa 1260 ugccucucuc auaugaauuc cgguuguaca uuuaccucgc cacauuuagc ccagcguguu 1320 gcaagcacag uguaucaaaa uugugaacau gcagauaacu acaccgcaua uugucuggga 1380 auaucucaua uggagccuag cuuuggucua aucuuacacg acgggggcac cacguuaaag 1440 uuuguagaua cacccgagag uuugucggga uuauacguuu uuguggugua uuuuaacggg 1500 cauguugaag ccguagcaua cacuguugua uccacaguag aucauuuugu aaacgcaauu 1560 gaagagcgug gauuuccgcc aacggccggu cagccaccgg cgacuacuaa acccaaggaa 1620 auuacccccg uaaaccccgg aacgucacca cuucuacgau augccgcaug gaccggaggg 1680 cuugcagcag uaguacuuuu augucucgua auauuuuuaa ucuguacggc uaaacgaaug 1740 aggguuaaag ccuauagggu agacaagucc ccguauaacc aaagcaugua uggcgcuggc 1800 cuuccagugg acgauuucga ggacgccgaa gccgccgaug ccgaagaaga guuugguaac 1860 gcgauuggag ggagucacgg ggguucgagu uacacggugu auauagauaa gacccgguga 1920 ugauaauagg cuggagccuc gguggccaug cuucuugccc cuugggccuc cccccagccc 1980 cuccuccccu uccugcaccc guacccccgu ggucuuugaa uaaagucuga gugggcggca 2040 aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 2100 aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaau cuag 2144 <210> 98 <211> 1994 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Polynucleotide <400> 98 ggggaaauaa gagagaaaag aagaguaaga agaaauauaa gagccaccau ggggacaguu 60 aauaaaccug uggugggggu auugaugggg uucggaauua ucacgggaac guugcguaua 120 acgaauccgg ucagagcauc cgucuugcga uacgaugauu uucacaucga ugaagacaaa 180 cuggauacaa acuccguaua ugagccuuac uaccauucag aucaugcgga gucuucaugg 240 guaaaucggg gagagucuuc gcgaaaagcg uacgaucaua acucaccuua uauauggcca 300 cguaaugauu augauggauu uuuagagaac gcacacgaac accauggggu guauaaucag 360 ggccguggua ucgauagcgg ggaacgguua augcaaccca cacaaauguc ugcacaggag 420 gaucuugggg acgauacggg cauccacguu aucccuacgu uaaacggcga ugacagacau 480 aaaauuguaa auguggacca acgucaauac ggugacgugu uuaaaggaga ucuuaaucca 540 aaaccccaag gccaaagacu cauugaggug ucaguggaag aaaaucaccc guuuacuuua 600 cgcgcaccga uucagcggau uuauggaguc cgguacaccg agacuuggag cuuuuugccg 660 ucauuaaccu guacgggaga cgcagcgccc gccauccagc auauauguuu aaaacauaca 720 acaugcuuuc aagacguggu gguggaugug gauugcgcgg aaaauacuaa agaggaucag 780 uuggccgaaa ucaguuaccg uuuucaaggu aagaaggaag cggaccaacc guggauuguu 840 guaaacacga gcacacuguu ugaugaacuc gaauuagacc cccccgagau ugaaccgggu 900 gucuugaaag uacuucggac agaaaaacaa uacuugggug uguacauuug gaacaugcgc 960 ggcuccgaug guacgucuac cuacgccacg uuuuugguca ccuggaaagg ggaugaaaaa 1020 acaagaaacc cuacgcccgc aguaacuccu caaccaagag gggcugaguu ucauaugugg 1080 aauuaccacu cgcauguauu uucaguuggu gauacguuua gcuuggcaau gcaucuucag 1140 uauaagauac augaagcgcc auuugauuug cuguuagagu gguuguaugu ccccaucgau 1200 ccuacauguc aaccaaugcg guuauauucu acguguuugu aucaucccaa cgcaccccaa 1260 ugccucucuc auaugaauuc cgguuguaca uuuaccucgc cacauuuagc ccagcguguu 1320 gcaagcacag uguaucaaaa uugugaacau gcagauaacu acaccgcaua uugucuggga 1380 auaucucaua uggagccuag cuuuggucua aucuuacacg acgggggcac cacguuaaag 1440 uuuguagaua cacccgagag uuugucggga uuauacguuu uuguggugua uuuuaacggg 1500 cauguugaag ccguagcaua cacuguugua uccacaguag aucauuuugu aaacgcaauu 1560 gaagagcgug gauuuccgcc aacggccggu cagccaccgg cgacuacuaa acccaaggaa 1620 auuacccccg uaaaccccgg aacgucacca cuucuacgau augccgcaug gaccggaggg 1680 cuugcagcag uaguacuuuu augucucgua auauuuuuaa ucuguacggc uaaacgaaug 1740 aggguuaaag ccuauagggu agacaaguga ugauaauagg cuggagccuc gguggccaug 1800 cuucuugccc cuugggccuc cccccagccc cuccuccccu uccugcaccc guacccccgu 1860 ggucuuugaa uaaagucuga gugggcggca aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 1920 aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 1980 aaaaaaaaau cuag 1994 <210> 99 <211> 1994 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Polynucleotide <400> 99 ggggaaauaa gagagaaaag aagaguaaga agaaauauaa gagccaccau ggggacaguu 60 aauaaaccug uggugggggu auugaugggg uucggaauua ucacgggaac guugcguaua 120 acgaauccgg ucagagcauc cgucuugcga uacgaugauu uucacaucga ugaagacaaa 180 cuggauacaa acuccguaua ugagccuuac uaccauucag aucaugcgga gucuucaugg 240 guaaaucggg gagagucuuc gcgaaaagcg uacgaucaua acucaccuua uauauggcca 300 cguaaugauu augauggauu uuuagagaac gcacacgaac accauggggu guauaaucag 360 ggccguggua ucgauagcgg ggaacgguua augcaaccca cacaaauguc ugcacaggag 420 gaucuugggg acgauacggg cauccacguu aucccuacgu uaaacggcga ugacagacau 480 aaaauuguaa auguggacca acgucaauac ggugacgugu uuaaaggaga ucuuaaucca 540 aaaccccaag gccaaagacu cauugaggug ucaguggaag aaaaucaccc guuuacuuua 600 cgcgcaccga uucagcggau uuauggaguc cgguacaccg agacuuggag cuuuuugccg 660 ucauuaaccu guacgggaga cgcagcgccc gccauccagc auauauguuu aaaacauaca 720 acaugcuuuc aagacguggu gguggaugug gauugcgcgg aaaauacuaa agaggaucag 780 uuggccgaaa ucaguuaccg uuuucaaggu aagaaggaag cggaccaacc guggauuguu 840 guaaacacga gcacacuguu ugaugaacuc gaauuagacc cccccgagau ugaaccgggu 900 gucuugaaag uacuucggac agaaaaacaa uacuugggug uguacauuug gaacaugcgc 960 ggcuccgaug guacgucuac cuacgccacg uuuuugguca ccuggaaagg ggaugaaaaa 1020 acaagaaacc cuacgcccgc aguaacuccu caaccaagag gggcugaguu ucauaugugg 1080 aauuaccacu cgcauguauu uucaguuggu gauacguuua gcuuggcaau gcaucuucag 1140 uauaagauac augaagcgcc auuugauuug cuguuagagu gguuguaugu ccccaucgau 1200 ccuacauguc aaccaaugcg guuauauucu acguguuugu aucaucccaa cgcaccccaa 1260 ugccucucuc auaugaauuc cgguuguaca uuuaccucgc cacauuuagc ccagcguguu 1320 gcaagcacag uguaucaaaa uugugaacau gcagauaacu acaccgcaua uugucuggga 1380 auaucucaua uggagccuag cuuuggucua aucuuacacg acgggggcac cacguuaaag 1440 uuuguagaua cacccgagag uuugucggga uuauacguuu uuguggugua uuuuaacggg 1500 cauguugaag ccguagcaua cacuguugua uccacaguag aucauuuugu aaacgcaauu 1560 gaagagcgug gauuuccgcc aacggccggu cagccaccgg cgacuacuaa acccaaggaa 1620 auuacccccg uaaaccccgg aacgucacca cuucuacgau augccgcaug gaccggaggg 1680 cuugcagcag uaguacuuuu augucucgua auauuuuuaa ucuguacggc uaaacgaaug 1740 aggguuaaag ccgccagggu agacaaguga ugauaauagg cuggagccuc gguggccaug 1800 cuucuugccc cuugggccuc cccccagccc cuccuccccu uccugcaccc guacccccgu 1860 ggucuuugaa uaaagucuga gugggcggca aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 1920 aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 1980 aaaaaaaaau cuag 1994 <210> 100 <211> 1337 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Polynucleotide <400> 100 ggggaaauaa gagagaaaag aagaguaaga agaaauauaa gagccaccau guuuuuaauc 60 caauguuuga uaucggccgu uauauuuuac auacaaguga ccaacgcuuu gaucuucaag 120 ggcgaccacg ugagcuugca aguuaacagc agucucacgu cuauccuuau ucccaugcaa 180 aaugauaauu auacagagau aaaaggacag cuugucuuua uuggagagca acuaccuacc 240 gggacaaacu auagcggaac acuggaacug uuauacgcgg auacgguggc guuuuguuuc 300 cggucaguac aaguaauaag auacgacgga uguccccgga uuagaacgag cgcuuuuauu 360 ucguguaggu acaaacauuc guggcauuau gguaacucaa cggaucggau aucaacagag 420 ccggaugcug guguaauguu gaaaauuacc aaaccgggaa uaaaugaugc ugguguguau 480 guacuucuug uucgguuaga ccauagcaga uccaccgaug guuucauucu ugguguaaau 540 guauauacag cgggcucgca ucacaacauu cacgggguua ucuacacuuc uccaucucua 600 cagaauggau auucuacaag agcccuuuuu caacaagcuc guuuguguga uuuacccgcg 660 acacccaaag gguccgguac cucccuguuu caacauaugc uugaucuucg ugccgguaaa 720 ucguuagagg auaacccuug guuacaugag gacguuguua cgacagaaac uaaguccguu 780 guuaaggagg ggauagaaaa ucacguauau ccaacggaua uguccacguu acccgaaaag 840 ucccuuaaug auccuccaga aaaucuacuu auaauuauuc cuauaguagc gucugucaug 900 auccucaccg ccaugguuau uguuauugua auaagcguua agcgacguag aauuaaaaaa 960 cauccaauuu aucgcccaaa uacaaaaaca agaaggggca uacaaaaugc gacaccagaa 1020 uccgauguga uguuggaggc cgccauugca caacuagcaa cgauucgcga agaauccccc 1080 ccacauuccg uuguaaaccc guuuguuaaa uagugauaau aggcuggagc cucgguggcc 1140 augcuucuug ccccuugggc cuccccccag ccccuccucc ccuuccugca cccguacccc 1200 cguggucuuu gaauaaaguc ugagugggcg gcaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 1260 aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 1320 aaaaaaaaaa aaucuag 1337 <210> 101 <211> 1991 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Polynucleotide <400> 101 ggggaaauaa gagagaaaag aagaguaaga agaaauauaa gagccaccau gggcaccgug 60 aacaagcccg ucgugggcgu gcugaugggc uucggcauca ucaccggcac ccugcggauc 120 accaauccug ugcgggccag cgugcugaga uacgacgacu uccacaucga cgaggacaag 180 cuggacacca acagcgugua cgagcccuac uaccacagcg accacgccga gagcagcugg 240 gucaacagag gcgaguccag ccggaaggcc uacgaccaca acagccccua caucuggccc 300 cggaacgacu acgacggcuu ccuggaaaau gcccacgagc accacggcgu guacaaccag 360 ggcagaggca ucgacagcgg cgagagacug augcagccca cccagaugag cgcccaggaa 420 gaucugggcg acgacaccgg cauccacgug aucccuaccc ugaacggcga cgaccggcac 480 aagaucguga acguggacca gcggcaguac ggcgacgugu ucaagggcga ccugaacccc 540 aagccccagg gacagcggcu gauugaggug uccguggaag agaaccaccc cuucacccug 600 agagccccua uccagcggau cuacggcgug cgcuauaccg agacuuggag cuuccugccc 660 agccugaccu guacuggcga cgccgcuccu gccauccagc acaucugccu gaagcacacc 720 accuguuucc aggacguggu gguggacgug gacugcgccg agaacaccaa agaggaccag 780 cuggccgaga ucagcuaccg guuccagggc aagaaagagg ccgaccagcc cuggaucguc 840 gugaacacca gcacccuguu cgacgagcug gaacuggacc cucccgagau cgaacccggg 900 gugcugaagg ugcugcggac cgagaagcag uaccugggag uguacaucug gaacaugcgg 960 ggcagcgacg gcaccucuac cuacgccacc uuccucguga ccuggaaggg cgacgagaaa 1020 acccggaacc cuaccccugc cgugaccccu cagccuagag gcgccgaguu ucacaugugg 1080 aauuaccaca gccacguguu cagcgugggc gacaccuucu cccuggccau gcaucugcag 1140 uacaagaucc acgaggcccc uuucgaccug cugcuggaau ggcuguacgu gcccaucgac 1200 ccuaccugcc agcccaugcg gcuguacucc accugucugu accaccccaa cgccccucag 1260 ugccugagcc acaugaauag cggcugcacc uucaccagcc cucaccuggc ucagagggug 1320 gccagcaccg uguaccagaa uugcgagcac gccgacaacu acaccgccua cugccugggc 1380 aucagccaca uggaacccag cuucggccug auccugcacg auggcggcac cacccugaag 1440 uucguggaca ccccugaguc ccugagcggc cuguacgugu ucguggugua cuucaacggc 1500 cacguggaag ccguggccua caccguggug uccaccgugg accacuucgu gaacgccauc 1560 gaggaacggg gcuucccucc aacugcugga cagccuccug ccaccaccaa gcccaaagaa 1620 aucaccccug ugaaccccgg caccagccca cugcugcgcu augcugcuug gacaggcgga 1680 cuggcugcug uggugcugcu gugccucgug auuuuccuga ucugcaccgc caagcggaug 1740 agagugaagg ccgccagagu ggacaaguga uaauaggcug gagccucggu ggccaugcuu 1800 cuugccccuu gggccucccc ccagccccuc cuccccuucc ugcacccgua cccccguggu 1860 cuuugaauaa agucugagug ggcggcaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 1920 aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 1980 aaaaaaucua g 1991 <210> 102 <211> 1991 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Polynucleotide <400> 102 ggggaaauaa gagagaaaag aagaguaaga agaaauauaa gagccaccau ggggacaguu 60 aauaaaccug uggugggggu auugaugggg uucggaauua ucacgggaac guugcguaua 120 acgaauccgg ucagagcauc cgucuugcga uacgaugauu uucacaucga ugaagacaaa 180 cuggauacaa acuccguaua ugagccuuac uaccauucag aucaugcgga gucuucaugg 240 guaaaucggg gagagucuuc gcgaaaagcg uacgaucaua acucaccuua uauauggcca 300 cguaaugauu augauggauu uuuagagaac gcacacgaac accauggggu guauaaucag 360 ggccguggua ucgauagcgg ggaacgguua augcaaccca cacaaauguc ugcacaggag 420 gaucuugggg acgauacggg cauccacguu aucccuacgu uaaacggcga ugacagacau 480 aaaauuguaa auguggacca acgucaauac ggugacgugu uuaaaggaga ucuuaaucca 540 aaaccccaag gccaaagacu cauugaggug ucaguggaag aaaaucaccc guuuacuuua 600 cgcgcaccga uucagcggau uuauggaguc cgguacaccg agacuuggag cuuuuugccg 660 ucauuaaccu guacgggaga cgcagcgccc gccauccagc auauauguuu aaaacauaca 720 acaugcuuuc aagacguggu gguggaugug gauugcgcgg aaaauacuaa agaggaucag 780 uuggccgaaa ucaguuaccg uuuucaaggu aagaaggaag cggaccaacc guggauuguu 840 guaaacacga gcacacuguu ugaugaacuc gaauuagacc cccccgagau ugaaccgggu 900 gucuugaaag uacuucggac agagaaacaa uacuugggug uguacauuug gaacaugcgc 960 ggcuccgaug guacgucuac cuacgccacg uuuuugguca ccuggaaagg ggaugagaag 1020 acaagaaacc cuacgcccgc aguaacuccu caaccaagag gggcugaguu ucauaugugg 1080 aauuaccacu cgcauguauu uucaguuggu gauacguuua gcuuggcaau gcaucuucag 1140 uauaagauac augaagcgcc auuugauuug cuguuagagu gguuguaugu ccccaucgau 1200 ccuacauguc aaccaaugcg guuauauucu acguguuugu aucaucccaa cgcaccccaa 1260 ugccucucuc auaugaauuc cgguuguaca uuuaccucgc cacauuuagc ccagcguguu 1320 gcaagcacag uguaucaaaa uugugaacau gcagauaacu acaccgcaua uugucuggga 1380 auaucucaua uggagccuag cuuuggucua aucuuacacg acgggggcac cacguuaaag 1440 uuuguagaua cacccgagag uuugucggga uuauacguuu uuguggugua uuuuaacggg 1500 cauguugaag ccguagcaua cacuguugua uccacaguag aucauuuugu aaacgcaauu 1560 gaagagcgug gauuuccgcc aacggccggu cagccaccgg cgacuacuaa acccaaggaa 1620 auuacccccg uaaaccccgg aacgucacca cuucuacgau augccgcaug gaccggaggg 1680 cuugcagcag uaguacuuuu augucucgua auauuuuuaa ucuguacggc uaaacgaaug 1740 aggguuaaag ccgccagggu agacaaguga uaauaggcug gagccucggu ggccaugcuu 1800 cuugccccuu gggccucccc ccagccccuc cuccccuucc ugcacccgua cccccguggu 1860 cuuugaauaa agucugagug ggcggcaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 1920 aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 1980 aaaaaaucua g 1991 <210> 103 <211> 1991 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Polynucleotide <400> 103 ggggaaauaa gagagaaaag aagaguaaga agaaauauaa gagccaccau ggggacaguu 60 aauaaaccug uggugggggu auugaugggg uucggaauua ucacgggaac guugcguaua 120 acgaauccgg ucagagcauc cgucuugcga uacgaugauu uucacaucga ugaagacaaa 180 cuggauacaa acuccguaua ugagccuuac uaccauucag aucaugcgga gucuucaugg 240 guaaaucggg gagagucuuc gcgaaaagcg uacgaucaua acucaccuua uauauggcca 300 cguaaugauu augauggauu uuuagagaac gcacacgaac accauggggu guauaaucag 360 ggccguggua ucgauagcgg ggaacgguua augcaaccca cacaaauguc ugcacaggag 420 gaucuugggg acgauacggg cauccacguu aucccuacgu uaaacggcga ugacagacau 480 aaaauuguaa auguggacca acgucaauac ggugacgugu uuaaaggaga ucuuaaucca 540 aaaccccaag gccaaagacu cauugaggug ucaguggaag aaaaucaccc guuuacuuua 600 cgcgcaccga uucagcggau uuauggaguc cgguacaccg agacuuggag cuuuuugccg 660 ucauuaaccu guacgggaga cgcagcgccc gccauccagc auauauguuu aaaacauaca 720 acaugcuuuc aagacguggu gguggaugug gauugcgcgg aaaauacuaa agaggaucag 780 uuggccgaaa ucaguuaccg uuuucaaggu aagaaggaag cggaccaacc guggauuguu 840 guaaacacga gcacacuguu ugaugaacuc gaauuagacc cacccgagau ugaaccgggu 900 gucuugaaag uacuucggac agagaaacaa uacuugggug uguacauuug gaacaugcgc 960 ggcuccgaug guacgucuac cuacgccacg uuuuugguca ccuggaaagg ggaugagaag 1020 acaagaaacc cuacgcccgc aguaacuccu caaccaagag gggcugaguu ucauaugugg 1080 aauuaccacu cgcauguauu uucaguuggu gauacguuua gcuuggcaau gcaucuucag 1140 uauaagauac augaagcgcc auuugauuug cuguuagagu gguuguaugu ccccaucgau 1200 ccuacauguc aaccaaugcg guuauauucu acguguuugu aucaucccaa cgcaccccaa 1260 ugccucucuc auaugaauuc cgguuguaca uuuaccucgc cacauuuagc ccagcguguu 1320 gcaagcacag uguaucaaaa uugugaacau gcagauaacu acaccgcaua uugucuggga 1380 auaucucaua uggagccuag cuuuggucua aucuuacacg acgggggcac cacguuaaag 1440 uuuguagaua cacccgagag uuugucggga uuauacguuu uuguggugua uuuuaacggg 1500 cauguugaag ccguagcaua cacuguugua uccacaguag aucauuuugu aaacgcaauu 1560 gaagagcgug gauuuccgcc aacggccggu cagccaccgg cgacuacuaa acccaaggaa 1620 auuacccccg uaaaccccgg aacgucacca cuucuacgau augccgcaug gaccggaggg 1680 cuugcagcag uaguacuuuu augucucgua auauuuuuaa ucuguacggc uaaacgaaug 1740 aggguuaaag ccgccagggu agacaaguga uaauaggcug gagccucggu ggccaugcuu 1800 cuugccccuu gggccucccc ccagccccuc cuccccuucc ugcacccgua cccccguggu 1860 cuuugaauaa agucugagug ggcggcaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 1920 aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 1980 aaaaaaucua g 1991 <210> 104 <211> 1991 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Polynucleotide <400> 104 ggggaaauaa gagagaaaag aagaguaaga agaaauauaa gagccaccau ggggacaguu 60 aauaaaccug uggugggggu auugaugggg uucggaauua ucacgggaac guugcguaua 120 acgaauccgg ucagagcauc cgucuugcga uacgaugauu uucacaucga ugaagacaaa 180 cuggauacaa acuccguaua ugagccuuac uaccauucag aucaugcgga gucuucaugg 240 guaaaucggg gagagucuuc gcgaaaggcg uacgaucaua acucaccuua uauauggcca 300 cguaaugauu augauggauu uuuagagaac gcacacgaac accauggggu guauaaucag 360 ggccguggua ucgauagcgg ggaacgguua augcaaccca cacaaauguc ugcacaggag 420 gaucuugggg acgauacggg cauccacguu aucccuacgu uaaacggcga ugacagacau 480 aagauuguaa auguggacca acgucaauac ggugacgugu uuaaaggaga ucuuaaucca 540 aagccccaag gccaaagacu cauugaggug ucaguggaag agaaucaccc guuuacuuua 600 cgcgcaccga uucagcggau uuauggaguc cgguacaccg agacuuggag cuuuuugccg 660 ucauuaaccu guacgggaga cgcagcgccc gccauccagc auauauguuu aaagcauaca 720 acaugcuuuc aagacguggu gguggaugug gauugcgcgg agaauacuaa agaggaucag 780 uuggccgaaa ucaguuaccg uuuucaaggu aagaaggaag cggaccaacc guggauuguu 840 guaaacacga gcacacuguu ugaugaacuc gaauuagacc cccccgagau ugaaccgggu 900 gucuugaaag uacuucggac agagaaacaa uacuugggug uguacauuug gaacaugcgc 960 ggcuccgaug guacgucuac cuacgccacg uuuuugguca ccuggaaagg ggaugagaag 1020 acaagaaacc cuacgcccgc aguaacuccu caaccaagag gggcugaguu ucauaugugg 1080 aauuaccacu cgcauguauu uucaguuggu gauacguuua gcuuggcaau gcaucuucag 1140 uauaagauac augaagcgcc auuugauuug cuguuagagu gguuguaugu ccccaucgau 1200 ccuacauguc aaccaaugcg guuauauucu acguguuugu aucaucccaa cgcaccccaa 1260 ugccucucuc auaugaauuc cgguuguaca uuuaccucgc cacauuuagc ccagcguguu 1320 gcaagcacag uguaucagaa uugugaacau gcagauaacu acaccgcaua uugucuggga 1380 auaucucaua uggagccuag cuuuggucua aucuuacacg acgggggcac cacguuaaag 1440 uuuguagaua cacccgagag uuugucggga uuauacguuu uuguggugua uuuuaacggg 1500 cauguugaag ccguagcaua cacuguugua uccacaguag aucauuuugu aaacgcaauu 1560 gaagagcgug gauuuccgcc aacggccggu cagccaccgg cgacuacuaa acccaaggaa 1620 auuacccccg uaaaccccgg aacgucacca cuucuacgau augccgcaug gaccggaggg 1680 cuugcagcag uaguacuuuu augucucgua auauuuuuaa ucuguacggc uaaacgaaug 1740 aggguuaaag ccgccagggu agacaaguga uaauaggcug gagccucggu ggccaugcuu 1800 cuugccccuu gggccucccc ccagccccuc cuccccuucc ugcacccgua cccccguggu 1860 cuuugaauaa agucugagug ggcggcaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 1920 aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 1980 aaaaaaucua g 1991 <210> 105 <211> 1991 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Polynucleotide <400> 105 ggggaaauaa gagagaaaag aagaguaaga agaaauauaa gagccaccau ggggacaguu 60 aauaaaccug uggugggggu auugaugggg uucggaauua ucacgggaac guugcguaua 120 acgaauccgg ucagagcauc cgucuugcga uacgaugauu uucacaucga ugaagacaaa 180 cuggauacaa acuccguaua ugagccuuac uaccauucag aucaugcgga gucuucaugg 240 guaaaucggg gagagucuuc gcgaaaggcg uacgaucaua acucaccuua uauauggcca 300 cguaaugauu augauggauu uuuagagaac gcacacgaac accauggggu guauaaucag 360 ggccguggua ucgauagcgg ggaacgguua augcaaccca cacaaauguc ugcacaggag 420 gaucuugggg acgauacggg cauccacguu aucccuacgu uaaacggcga ugacagacau 480 aagauuguaa auguggacca acgucaauac ggugacgugu uuaaaggaga ucuuaaucca 540 aagccccaag gccaaagacu cauugaggug ucaguggaag agaaucaccc guuuacuuua 600 cgcgcaccga uucagcggau uuauggaguc cgguacaccg agacuuggag cuuuuugccg 660 ucauuaaccu guacgggaga cgcagcgccc gccauccagc auauauguuu aaagcauaca 720 acaugcuuuc aagacguggu gguggaugug gauugcgcgg agaauacuaa agaggaucag 780 uuggccgaaa ucaguuaccg uuuucaaggu aagaaggaag cggaccaacc guggauuguu 840 guaaacacga gcacacuguu ugaugaacuc gaauuagacc cacccgagau ugaaccgggu 900 gucuugaaag uacuucggac agagaaacaa uacuugggug uguacauuug gaacaugcgc 960 ggcuccgaug guacgucuac cuacgccacg uuuuugguca ccuggaaagg ggaugagaag 1020 acaagaaacc cuacgcccgc aguaacuccu caaccaagag gggcugaguu ucauaugugg 1080 aauuaccacu cgcauguauu uucaguuggu gauacguuua gcuuggcaau gcaucuucag 1140 uauaagauac augaagcgcc auuugauuug cuguuagagu gguuguaugu ccccaucgau 1200 ccuacauguc aaccaaugcg guuauauucu acguguuugu aucaucccaa cgcaccccaa 1260 ugccucucuc auaugaauuc cgguuguaca uuuaccucgc cacauuuagc ccagcguguu 1320 gcaagcacag uguaucagaa uugugaacau gcagauaacu acaccgcaua uugucuggga 1380 auaucucaua uggagccuag cuuuggucua aucuuacacg acgggggcac cacguuaaag 1440 uuuguagaua cacccgagag uuugucggga uuauacguuu uuguggugua uuuuaacggg 1500 cauguugaag ccguagcaua cacuguugua uccacaguag aucauuuugu aaacgcaauu 1560 gaagagcgug gauuuccgcc aacggccggu cagccaccgg cgacuacuaa acccaaggaa 1620 auuacccccg uaaaccccgg aacgucacca cuucuacgau augccgcaug gaccggaggg 1680 cuugcagcag uaguacuuuu augucucgua auauuuuuaa ucuguacggc uaaacgaaug 1740 aggguuaaag ccgccagggu agacaaguga uaauaggcug gagccucggu ggccaugcuu 1800 cuugccccuu gggccucccc ccagccccuc cuccccuucc ugcacccgua cccccguggu 1860 cuuugaauaa agucugagug ggcggcaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 1920 aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 1980 aaaaaaucua g 1991 <210> 106 <211> 1991 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Polynucleotide <400> 106 ggggaaauaa gagagaaaag aagaguaaga agaaauauaa gagccaccau ggggacaguu 60 aauaaaccug uggugggggu auugaugggg uucggaauua ucacgggaac guugcguaua 120 acgaauccgg ucagagcauc cgucuugcga uacgaugauu uucacaucga ugaagacaaa 180 cuggauacaa acuccguaua ugagccuuac uaccauucag aucaugcgga gucuucaugg 240 guaaaucggg gagagucuuc gcgaaaagcg uacgaucaua acucaccuua uauauggcca 300 cguaaugauu augauggauu uuuagagaac gcacacgaac accauggggu guauaaucag 360 ggccguggua ucgauagcgg ggaacgguua augcaaccca cacaaauguc ugcacaggag 420 gaucuugggg acgauacggg cauccacguu aucccuacgu uaaacggcga ugacagacau 480 aaaauuguaa auguggacca acgucaauac ggugacgugu uuaaaggaga ucuuaaucca 540 aaaccccaag gccaaagacu cauugaggug ucaguggaag aaaaucaccc guuuacuuua 600 cgcgcaccga uucagcggau uuauggaguc cgguacaccg agacuuggag cuuuuugccg 660 ucauuaaccu guacgggaga cgcagcgccc gccauccagc auauauguuu aaagcauaca 720 acaugcuuuc aagacguggu gguggaugug gauugcgcgg aaaauacuaa agaggaucag 780 uuggccgaaa ucaguuaccg uuuucaaggu aagaaggaag cggaccaacc guggauuguu 840 guaaacacga gcacacuguu ugaugaacuc gaauuagacc cccccgagau ugaaccgggu 900 gucuugaaag uacuucggac agagaaacaa uacuugggug uguacauuug gaacaugcgc 960 ggcuccgaug guacgucuac cuacgccacg uuuuugguca ccuggaaagg ggaugagaag 1020 acaagaaacc cuacgcccgc aguaacuccu caaccaagag gggcugaguu ucauaugugg 1080 aauuaccacu cgcauguauu uucaguuggu gauacguuua gcuuggcaau gcaucuucag 1140 uauaagauac augaagcgcc auuugauuug cuguuagagu gguuguaugu ccccaucgau 1200 ccuacauguc aaccaaugcg guuauauucu acguguuugu aucaucccaa cgcaccccaa 1260 ugccucucuc auaugaauuc cgguuguaca uuuaccucgc cacauuuagc ccagcguguu 1320 gcaagcacag uguaucagaa uugugaacau gcagauaacu acaccgcaua uugucuggga 1380 auaucucaua uggagccuag cuuuggucua aucuuacacg acgggggcac cacguuaaag 1440 uuuguagaua cacccgagag uuugucggga uuauacguuu uuguggugua uuuuaacggg 1500 cauguugaag ccguagcaua cacuguugua uccacaguag aucauuuugu aaacgcaauu 1560 gaagagcgug gauuuccgcc aacggccggu cagccaccgg cgacuacuaa acccaaggaa 1620 auuacccccg uaaaccccgg aacgucacca cuucuacgau augccgcaug gaccggaggg 1680 cuugcagcag uaguacuuuu augucucgua auauuuuuaa ucuguacggc uaaacgaaug 1740 aggguuaaag ccgccagggu agacaaguga uaauaggcug gagccucggu ggccaugcuu 1800 cuugccccuu gggccucccc ccagccccuc cuccccuucc ugcacccgua cccccguggu 1860 cuuugaauaa agucugagug ggcggcaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 1920 aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 1980 aaaaaaucua g 1991 <210> 107 <211> 1991 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Polynucleotide <400> 107 ggggaaauaa gagagaaaag aagaguaaga agaaauauaa gagccaccau ggggacaguu 60 aauaaaccug uggugggggu auugaugggg uucggaauua ucacgggaac guugcguaua 120 acgaauccgg ucagagcauc cgucuugcga uacgaugauu uucacaucga ugaagacaaa 180 cuggauacaa acuccguaua ugagccuuac uaccauucag aucaugcgga gucuucaugg 240 guaaaucggg gagagucuuc gcgaaaagcg uacgaucaua acucaccuua uauauggcca 300 cguaaugauu augauggauu uuuagagaac gcacacgaac accauggggu guauaaucag 360 ggccguggua ucgauagcgg ggaacgguua augcaaccca cacaaauguc ugcacaggag 420 gaucuugggg acgauacggg cauccacguu aucccuacgu uaaacggcga ugacagacau 480 aaaauuguaa auguggacca acgucaauac ggugacgugu uuaaaggaga ucuuaaucca 540 aaaccccaag gccaaagacu cauugaggug ucaguggaag aaaaucaccc guuuacuuua 600 cgcgcaccga uucagcggau uuauggaguc cgguacaccg agacuuggag cuuuuugccg 660 ucauuaaccu guacgggaga cgcagcgccc gccauccagc auauauguuu aaagcauaca 720 acaugcuuuc aagacguggu gguggaugug gauugcgcgg aaaauacuaa agaggaucag 780 uuggccgaaa ucaguuaccg uuuucaaggu aagaaggaag cggaccaacc guggauuguu 840 guaaacacga gcacacuguu ugaugaacuc gaauuagacc cacccgagau ugaaccgggu 900 gucuugaaag uacuucggac agagaaacaa uacuugggug uguacauuug gaacaugcgc 960 ggcuccgaug guacgucuac cuacgccacg uuuuugguca ccuggaaagg ggaugagaag 1020 acaagaaacc cuacgcccgc aguaacuccu caaccaagag gggcugaguu ucauaugugg 1080 aauuaccacu cgcauguauu uucaguuggu gauacguuua gcuuggcaau gcaucuucag 1140 uauaagauac augaagcgcc auuugauuug cuguuagagu gguuguaugu ccccaucgau 1200 ccuacauguc aaccaaugcg guuauauucu acguguuugu aucaucccaa cgcaccccaa 1260 ugccucucuc auaugaauuc cgguuguaca uuuaccucgc cacauuuagc ccagcguguu 1320 gcaagcacag uguaucagaa uugugaacau gcagauaacu acaccgcaua uugucuggga 1380 auaucucaua uggagccuag cuuuggucua aucuuacacg acgggggcac cacguuaaag 1440 uuuguagaua cacccgagag uuugucggga uuauacguuu uuguggugua uuuuaacggg 1500 cauguugaag ccguagcaua cacuguugua uccacaguag aucauuuugu aaacgcaauu 1560 gaagagcgug gauuuccgcc aacggccggu cagccaccgg cgacuacuaa acccaaggaa 1620 auuacccccg uaaaccccgg aacgucacca cuucuacgau augccgcaug gaccggaggg 1680 cuugcagcag uaguacuuuu augucucgua auauuuuuaa ucuguacggc uaaacgaaug 1740 aggguuaaag ccgccagggu agacaaguga uaauaggcug gagccucggu ggccaugcuu 1800 cuugccccuu gggccucccc ccagccccuc cuccccuucc ugcacccgua cccccguggu 1860 cuuugaauaa agucugagug ggcggcaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 1920 aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 1980 aaaaaaucua g 1991 <210> 108 <211> 1965 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Polynucleotide <400> 108 gagaagaaau auaagagcca ccauggggac aguuaauaaa ccuguggugg gcguauugau 60 gggguucgga auuaucacgg gaacguugcg uauaacgaau ccggucagag cauccgucuu 120 gcgauacgau gauuuucaca ucgaugaaga caaacuggau acaaacuccg uauaugagcc 180 uuacuaccau ucagaucaug cggagucuuc auggguaaau cggggagagu cuucgcgaaa 240 ggcguacgau cauaacucac cuuauauaug gccacguaau gauuaugaug gauucuuaga 300 gaacgcacac gaacaccaug ggguguauaa ucagggccgu gguaucgaua gcggggaacg 360 guuaaugcaa cccacacaaa ugucugcaca ggaggaucuu ggggacgaua cgggcaucca 420 cguuaucccu acguuaaacg gcgaugacag acauaagauu guaaaugugg accaacguca 480 auacggugac guguuuaaag gagaucuuaa uccaaagccc caaggccaaa gacucauuga 540 ggugucagug gaagagaauc acccguuuac uuuacgcgca ccgauucagc ggauuuaugg 600 aguccgguac accgagacuu ggagcuucuu gccgucauua accuguacgg gagacgcagc 660 gcccgccauc cagcauauau guuuaaagca uacaacaugc uuucaagacg ugguggugga 720 uguggauugc gcggagaaua cuaaagagga ucaguuggcc gaaaucaguu accguuuuca 780 agguaagaag gaagcggacc aaccguggau uguuguaaac acgagcacac uguuugauga 840 acucgaauua gacccacccg agauugaacc gggugucuug aaaguacuuc ggacagagaa 900 acaauacuug gguguguaca uuuggaacau gcgcggcucc gaugguacgu cuaccuacgc 960 cacguucuug gucaccugga aaggggauga gaagacaaga aacccuacgc ccgcaguaac 1020 uccucaacca agaggggcug aguuucauau guggaauuac cacucgcaug uauuuucagu 1080 uggugauacg uuuagcuugg caaugcaucu ucaguauaag auacaugaag cgccauuuga 1140 uuugcuguua gagugguugu auguccccau cgauccuaca ugucaaccaa ugcgguuaua 1200 uucuacgugu uuguaucauc ccaacgcacc ccaaugccuc ucucauauga auuccgguug 1260 uacauuuacc ucgccacauu uagcccagcg uguugcaagc acaguguauc agaauuguga 1320 acaugcagau aacuacaccg cauauugucu gggaauaucu cauauggagc cuagcuuugg 1380 ucuaaucuua cacgacggag gcaccacguu aaaguuugua gauacacccg agaguuuguc 1440 gggauuauac gucuuugugg uguauuuuaa cgggcauguu gaagccguag cauacacugu 1500 uguauccaca guagaucauu uuguaaacgc aauugaagag cguggauuuc cgccaacggc 1560 cggucagcca ccggcgacua cuaaacccaa ggaaauuacg cccguaaacc ccggaacguc 1620 accacuucua cgauaugccg cauggaccgg agggcuugca gcaguaguac uuuuaugucu 1680 cguaauauuc uuaaucugua cggcuaaacg aaugaggguu aaagccgcca ggguagacaa 1740 gugauaauag gcuggagccu cgguggccau gcuucuugcc ccuugggccu ccccccagcc 1800 ccuccucccc uuccugcacc cguacccccg uggucuuuga auaaagucug agugggcggc 1860 aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 1920 aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa ucuag 1965 <210> 109 <211> 24 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Polypeptide <400> 109 Met Leu Gly Ser Asn Ser Gly Gln Arg Val Val Phe Thr Ile Leu Leu 1 5 10 15 Leu Leu Val Ala Pro Ala Tyr Ser 20 <210> 110 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Polypeptide <400> 110 Met Lys Cys Leu Leu Tyr Leu Ala Phe Leu Phe Ile Gly Val Asn Cys 1 5 10 15 Ala <210> 111 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Polypeptide <400> 111 Met Trp Leu Val Ser Leu Ala Ile Val Thr Ala Cys Ala Gly Ala 1 5 10 15 <210> 112 <211> 1729 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Polynucleotide <400> 112 tcaagctttt ggaccctcgt acagaagcta atacgactca ctatagggaa ataagagaga 60 aaagaagagt aagaagaaat ataagagcca ccatggcaca agtcattaat acaaacagcc 120 tgtcgctgtt gacccagaat aacctgaaca aatcccagtc cgcactgggc actgctatcg 180 agcgtttgtc ttccggtctg cgtatcaaca gcgcgaaaga cgatgcggca ggacaggcga 240 ttgctaaccg ttttaccgcg aacatcaaag gtctgactca ggcttcccgt aacgctaacg 300 acggtatctc cattgcgcag accactgaag gcgcgctgaa cgaaatcaac aacaacctgc 360 agcgtgtgcg tgaactggcg gttcagtctg cgaatggtac taactcccag tctgacctcg 420 actccatcca ggctgaaatc acccagcgcc tgaacgaaat cgaccgtgta tccggccaga 480 ctcagttcaa cggcgtgaaa gtcctggcgc aggacaacac cctgaccatc caggttggtg 540 ccaacgacgg tgaaactatc gatattgatt taaaagaaat cagctctaaa acactgggac 600 ttgataagct taatgtccaa gatgcctaca ccccgaaaga aactgctgta accgttgata 660 aaactaccta taaaaatggt acagatccta ttacagccca gagcaatact gatatccaaa 720 ctgcaattgg cggtggtgca acgggggtta ctggggctga tatcaaattt aaagatggtc 780 aatactattt agatgttaaa ggcggtgctt ctgctggtgt ttataaagcc acttatgatg 840 aaactacaaa gaaagttaat attgatacga ctgataaaac tccgttggca actgcggaag 900 ctacagctat tcggggaacg gccactataa cccacaacca aattgctgaa gtaacaaaag 960 agggtgttga tacgaccaca gttgcggctc aacttgctgc agcaggggtt actggcgccg 1020 ataaggacaa tactagcctt gtaaaactat cgtttgagga taaaaacggt aaggttattg 1080 atggtggcta tgcagtgaaa atgggcgacg atttctatgc cgctacatat gatgagaaaa 1140 caggtgcaat tactgctaaa accactactt atacagatgg tactggcgtt gctcaaactg 1200 gagctgtgaa atttggtggc gcaaatggta aatctgaagt tgttactgct accgatggta 1260 agacttactt agcaagcgac cttgacaaac ataacttcag aacaggcggt gagcttaaag 1320 aggttaatac agataagact gaaaacccac tgcagaaaat tgatgctgcc ttggcacagg 1380 ttgatacact tcgttctgac ctgggtgcgg ttcagaaccg tttcaactcc gctatcacca 1440 acctgggcaa taccgtaaat aacctgtctt ctgcccgtag ccgtatcgaa gattccgact 1500 acgcaaccga agtctccaac atgtctcgcg cgcagattct gcagcaggcc ggtacctccg 1560 ttctggcgca ggcgaaccag gttccgcaaa acgtcctctc tttactgcgt tgataatagg 1620 ctggagcctc ggtggccatg cttcttgccc cttgggcctc cccccagccc ctcctcccct 1680 tcctgcaccc gtacccccgt ggtctttgaa taaagtctga gtgggcggc 1729 <210> 113 <211> 1518 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Polynucleotide <400> 113 atggcacaag tcattaatac aaacagcctg tcgctgttga cccagaataa cctgaacaaa 60 tcccagtccg cactgggcac tgctatcgag cgtttgtctt ccggtctgcg tatcaacagc 120 gcgaaagacg atgcggcagg acaggcgatt gctaaccgtt ttaccgcgaa catcaaaggt 180 ctgactcagg cttcccgtaa cgctaacgac ggtatctcca ttgcgcagac cactgaaggc 240 gcgctgaacg aaatcaacaa caacctgcag cgtgtgcgtg aactggcggt tcagtctgcg 300 aatggtacta actcccagtc tgacctcgac tccatccagg ctgaaatcac ccagcgcctg 360 aacgaaatcg accgtgtatc cggccagact cagttcaacg gcgtgaaagt cctggcgcag 420 gacaacaccc tgaccatcca ggttggtgcc aacgacggtg aaactatcga tattgattta 480 aaagaaatca gctctaaaac actgggactt gataagctta atgtccaaga tgcctacacc 540 ccgaaagaaa ctgctgtaac cgttgataaa actacctata aaaatggtac agatcctatt 600 acagcccaga gcaatactga tatccaaact gcaattggcg gtggtgcaac gggggttact 660 ggggctgata tcaaatttaa agatggtcaa tactatttag atgttaaagg cggtgcttct 720 gctggtgttt ataaagccac ttatgatgaa actacaaaga aagttaatat tgatacgact 780 gataaaactc cgttggcaac tgcggaagct acagctattc ggggaacggc cactataacc 840 cacaaccaaa ttgctgaagt aacaaaagag ggtgttgata cgaccacagt tgcggctcaa 900 cttgctgcag caggggttac tggcgccgat aaggacaata ctagccttgt aaaactatcg 960 tttgaggata aaaacggtaa ggttattgat ggtggctatg cagtgaaaat gggcgacgat 1020 ttctatgccg ctacatatga tgagaaaaca ggtgcaatta ctgctaaaac cactacttat 1080 acagatggta ctggcgttgc tcaaactgga gctgtgaaat ttggtggcgc aaatggtaaa 1140 tctgaagttg ttactgctac cgatggtaag acttacttag caagcgacct tgacaaacat 1200 aacttcagaa caggcggtga gcttaaagag gttaatacag ataagactga aaacccactg 1260 cagaaaattg atgctgcctt ggcacaggtt gatacacttc gttctgacct gggtgcggtt 1320 cagaaccgtt tcaactccgc tatcaccaac ctgggcaata ccgtaaataa cctgtcttct 1380 gcccgtagcc gtatcgaaga ttccgactac gcaaccgaag tctccaacat gtctcgcgcg 1440 cagattctgc agcaggccgg tacctccgtt ctggcgcagg cgaaccaggt tccgcaaaac 1500 gtcctctctt tactgcgt 1518 <210> 114 <211> 1790 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Polynucleotide <400> 114 ggggaaauaa gagagaaaag aagaguaaga agaaauauaa gagccaccau ggcacaaguc 60 auuaauacaa acagccuguc gcuguugacc cagaauaacc ugaacaaauc ccaguccgca 120 cugggcacug cuaucgagcg uuugucuucc ggucugcgua ucaacagcgc gaaagacgau 180 gcggcaggac aggcgauugc uaaccguuuu accgcgaaca ucaaaggucu gacucaggcu 240 ucccguaacg cuaacgacgg uaucuccauu gcgcagacca cugaaggcgc gcugaacgaa 300 aucaacaaca accugcagcg ugugcgugaa cuggcgguuc agucugcgaa ugguacuaac 360 ucccagucug accucgacuc cauccaggcu gaaaucaccc agcgccugaa cgaaaucgac 420 cguguauccg gccagacuca guucaacggc gugaaagucc uggcgcagga caacacccug 480 accauccagg uuggugccaa cgacggugaa acuaucgaua uugauuuaaa agaaaucagc 540 ucuaaaacac ugggacuuga uaagcuuaau guccaagaug ccuacacccc gaaagaaacu 600 gcuguaaccg uugauaaaac uaccuauaaa aaugguacag auccuauuac agcccagagc 660 aauacugaua uccaaacugc aauuggcggu ggugcaacgg ggguuacugg ggcugauauc 720 aaauuuaaag auggucaaua cuauuuagau guuaaaggcg gugcuucugc ugguguuuau 780 aaagccacuu augaugaaac uacaaagaaa guuaauauug auacgacuga uaaaacuccg 840 uuggcaacug cggaagcuac agcuauucgg ggaacggcca cuauaaccca caaccaaauu 900 gcugaaguaa caaaagaggg uguugauacg accacaguug cggcucaacu ugcugcagca 960 gggguuacug gcgccgauaa ggacaauacu agccuuguaa aacuaucguu ugaggauaaa 1020 aacgguaagg uuauugaugg uggcuaugca gugaaaaugg gcgacgauuu cuaugccgcu 1080 acauaugaug agaaaacagg ugcaauuacu gcuaaaacca cuacuuauac agaugguacu 1140 ggcguugcuc aaacuggagc ugugaaauuu gguggcgcaa augguaaauc ugaaguuguu 1200 acugcuaccg augguaagac uuacuuagca agcgaccuug acaaacauaa cuucagaaca 1260 ggcggugagc uuaaagaggu uaauacagau aagacugaaa acccacugca gaaaauugau 1320 gcugccuugg cacagguuga uacacuucgu ucugaccugg gugcgguuca gaaccguuuc 1380 aacuccgcua ucaccaaccu gggcaauacc guaaauaacc ugucuucugc ccguagccgu 1440 aucgaagauu ccgacuacgc aaccgaaguc uccaacaugu cucgcgcgca gauucugcag 1500 caggccggua ccuccguucu ggcgcaggcg aaccagguuc cgcaaaacgu ccucucuuua 1560 cugcguugau aauaggcugg agccucggug gccaugcuuc uugccccuug ggccuccccc 1620 cagccccucc uccccuuccu gcacccguac ccccgugguc uuugaauaaa gucugagugg 1680 gcggcaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 1740 aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaucuag 1790 <210> 115 <211> 506 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Polypeptide <400> 115 Met Ala Gln Val Ile Asn Thr Asn Ser Leu Ser Leu Leu Thr Gln Asn 1 5 10 15 Asn Leu Asn Lys Ser Gln Ser Ala Leu Gly Thr Ala Ile Glu Arg Leu 20 25 30 Ser Ser Gly Leu Arg Ile Asn Ser Ala Lys Asp Asp Ala Ala Gly Gln 35 40 45 Ala Ile Ala Asn Arg Phe Thr Ala Asn Ile Lys Gly Leu Thr Gln Ala 50 55 60 Ser Arg Asn Ala Asn Asp Gly Ile Ser Ile Ala Gln Thr Thr Glu Gly 65 70 75 80 Ala Leu Asn Glu Ile Asn Asn Asn Leu Gln Arg Val Arg Glu Leu Ala 85 90 95 Val Gln Ser Ala Asn Gly Thr Asn Ser Gln Ser Asp Leu Asp Ser Ile 100 105 110 Gln Ala Glu Ile Thr Gln Arg Leu Asn Glu Ile Asp Arg Val Ser Gly 115 120 125 Gln Thr Gln Phe Asn Gly Val Lys Val Leu Ala Gln Asp Asn Thr Leu 130 135 140 Thr Ile Gln Val Gly Ala Asn Asp Gly Glu Thr Ile Asp Ile Asp Leu 145 150 155 160 Lys Glu Ile Ser Ser Lys Thr Leu Gly Leu Asp Lys Leu Asn Val Gln 165 170 175 Asp Ala Tyr Thr Pro Lys Glu Thr Ala Val Thr Val Asp Lys Thr Thr 180 185 190 Tyr Lys Asn Gly Thr Asp Pro Ile Thr Ala Gln Ser Asn Thr Asp Ile 195 200 205 Gln Thr Ala Ile Gly Gly Gly Ala Thr Gly Val Thr Gly Ala Asp Ile 210 215 220 Lys Phe Lys Asp Gly Gln Tyr Tyr Leu Asp Val Lys Gly Gly Ala Ser 225 230 235 240 Ala Gly Val Tyr Lys Ala Thr Tyr Asp Glu Thr Thr Lys Lys Val Asn 245 250 255 Ile Asp Thr Thr Asp Lys Thr Pro Leu Ala Thr Ala Glu Ala Thr Ala 260 265 270 Ile Arg Gly Thr Ala Thr Ile Thr His Asn Gln Ile Ala Glu Val Thr 275 280 285 Lys Glu Gly Val Asp Thr Thr Thr Val Ala Ala Gln Leu Ala Ala Ala 290 295 300 Gly Val Thr Gly Ala Asp Lys Asp Asn Thr Ser Leu Val Lys Leu Ser 305 310 315 320 Phe Glu Asp Lys Asn Gly Lys Val Ile Asp Gly Gly Tyr Ala Val Lys 325 330 335 Met Gly Asp Asp Phe Tyr Ala Ala Thr Tyr Asp Glu Lys Thr Gly Ala 340 345 350 Ile Thr Ala Lys Thr Thr Thr Tyr Thr Asp Gly Thr Gly Val Ala Gln 355 360 365 Thr Gly Ala Val Lys Phe Gly Gly Ala Asn Gly Lys Ser Glu Val Val 370 375 380 Thr Ala Thr Asp Gly Lys Thr Tyr Leu Ala Ser Asp Leu Asp Lys His 385 390 395 400 Asn Phe Arg Thr Gly Gly Glu Leu Lys Glu Val Asn Thr Asp Lys Thr 405 410 415 Glu Asn Pro Leu Gln Lys Ile Asp Ala Ala Leu Ala Gln Val Asp Thr 420 425 430 Leu Arg Ser Asp Leu Gly Ala Val Gln Asn Arg Phe Asn Ser Ala Ile 435 440 445 Thr Asn Leu Gly Asn Thr Val Asn Asn Leu Ser Ser Ala Arg Ser Arg 450 455 460 Ile Glu Asp Ser Asp Tyr Ala Thr Glu Val Ser Asn Met Ser Arg Ala 465 470 475 480 Gln Ile Leu Gln Gln Ala Gly Thr Ser Val Leu Ala Gln Ala Asn Gln 485 490 495 Val Pro Gln Asn Val Leu Ser Leu Leu Arg 500 505 <210> 116 <211> 698 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Polypeptide <400> 116 Met Ala Gln Val Ile Asn Thr Asn Ser Leu Ser Leu Leu Thr Gln Asn 1 5 10 15 Asn Leu Asn Lys Ser Gln Ser Ala Leu Gly Thr Ala Ile Glu Arg Leu 20 25 30 Ser Ser Gly Leu Arg Ile Asn Ser Ala Lys Asp Asp Ala Ala Gly Gln 35 40 45 Ala Ile Ala Asn Arg Phe Thr Ala Asn Ile Lys Gly Leu Thr Gln Ala 50 55 60 Ser Arg Asn Ala Asn Asp Gly Ile Ser Ile Ala Gln Thr Thr Glu Gly 65 70 75 80 Ala Leu Asn Glu Ile Asn Asn Asn Leu Gln Arg Val Arg Glu Leu Ala 85 90 95 Val Gln Ser Ala Asn Ser Thr Asn Ser Gln Ser Asp Leu Asp Ser Ile 100 105 110 Gln Ala Glu Ile Thr Gln Arg Leu Asn Glu Ile Asp Arg Val Ser Gly 115 120 125 Gln Thr Gln Phe Asn Gly Val Lys Val Leu Ala Gln Asp Asn Thr Leu 130 135 140 Thr Ile Gln Val Gly Ala Asn Asp Gly Glu Thr Ile Asp Ile Asp Leu 145 150 155 160 Lys Gln Ile Asn Ser Gln Thr Leu Gly Leu Asp Thr Leu Asn Val Gln 165 170 175 Gln Lys Tyr Lys Val Ser Asp Thr Ala Ala Thr Val Thr Gly Tyr Ala 180 185 190 Asp Thr Thr Ile Ala Leu Asp Asn Ser Thr Phe Lys Ala Ser Ala Thr 195 200 205 Gly Leu Gly Gly Thr Asp Gln Lys Ile Asp Gly Asp Leu Lys Phe Asp 210 215 220 Asp Thr Thr Gly Lys Tyr Tyr Ala Lys Val Thr Val Thr Gly Gly Thr 225 230 235 240 Gly Lys Asp Gly Tyr Tyr Glu Val Ser Val Asp Lys Thr Asn Gly Glu 245 250 255 Val Thr Leu Ala Gly Gly Ala Thr Ser Pro Leu Thr Gly Gly Leu Pro 260 265 270 Ala Thr Ala Thr Glu Asp Val Lys Asn Val Gln Val Ala Asn Ala Asp 275 280 285 Leu Thr Glu Ala Lys Ala Ala Leu Thr Ala Ala Gly Val Thr Gly Thr 290 295 300 Ala Ser Val Val Lys Met Ser Tyr Thr Asp Asn Asn Gly Lys Thr Ile 305 310 315 320 Asp Gly Gly Leu Ala Val Lys Val Gly Asp Asp Tyr Tyr Ser Ala Thr 325 330 335 Gln Asn Lys Asp Gly Ser Ile Ser Ile Asn Thr Thr Lys Tyr Thr Ala 340 345 350 Asp Asp Gly Thr Ser Lys Thr Ala Leu Asn Lys Leu Gly Gly Ala Asp 355 360 365 Gly Lys Thr Glu Val Val Ser Ile Gly Gly Lys Thr Tyr Ala Ala Ser 370 375 380 Lys Ala Glu Gly His Asn Phe Lys Ala Gln Pro Asp Leu Ala Glu Ala 385 390 395 400 Ala Ala Thr Thr Thr Glu Asn Pro Leu Gln Lys Ile Asp Ala Ala Leu 405 410 415 Ala Gln Val Asp Thr Leu Arg Ser Asp Leu Gly Ala Val Gln Asn Arg 420 425 430 Phe Asn Ser Ala Ile Thr Asn Leu Gly Asn Thr Val Asn Asn Leu Thr 435 440 445 Ser Ala Arg Ser Arg Ile Glu Asp Ser Asp Tyr Ala Thr Glu Val Ser 450 455 460 Asn Met Ser Arg Ala Gln Ile Leu Gln Gln Ala Gly Thr Ser Val Leu 465 470 475 480 Ala Gln Ala Asn Gln Val Pro Gln Asn Val Leu Ser Leu Leu Arg Gly 485 490 495 Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Met Met Ala Pro Asp Pro Asn 500 505 510 Ala Asn Pro Asn Ala Asn Pro Asn Ala Asn Pro Asn Ala Asn Pro Asn 515 520 525 Ala Asn Pro Asn Ala Asn Pro Asn Ala Asn Pro Asn Ala Asn Pro Asn 530 535 540 Ala Asn Pro Asn Ala Asn Pro Asn Ala Asn Pro Asn Ala Asn Pro Asn 545 550 555 560 Ala Asn Pro Asn Ala Asn Pro Asn Ala Asn Pro Asn Ala Asn Pro Asn 565 570 575 Ala Asn Pro Asn Ala Asn Pro Asn Ala Asn Pro Asn Lys Asn Asn Gln 580 585 590 Gly Asn Gly Gln Gly His Asn Met Pro Asn Asp Pro Asn Arg Asn Val 595 600 605 Asp Glu Asn Ala Asn Ala Asn Asn Ala Val Lys Asn Asn Asn Asn Glu 610 615 620 Glu Pro Ser Asp Lys His Ile Glu Gln Tyr Leu Lys Lys Ile Lys Asn 625 630 635 640 Ser Ile Ser Thr Glu Trp Ser Pro Cys Ser Val Thr Cys Gly Asn Gly 645 650 655 Ile Gln Val Arg Ile Lys Pro Gly Ser Ala Asn Lys Pro Lys Asp Glu 660 665 670 Leu Asp Tyr Glu Asn Asp Ile Glu Lys Lys Ile Cys Lys Met Glu Lys 675 680 685 Cys Ser Ser Val Phe Asn Val Val Asn Ser 690 695 <210> 117 <211> 692 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Polypeptide <400> 117 Met Met Ala Pro Asp Pro Asn Ala Asn Pro Asn Ala Asn Pro Asn Ala 1 5 10 15 Asn Pro Asn Ala Asn Pro Asn Ala Asn Pro Asn Ala Asn Pro Asn Ala 20 25 30 Asn Pro Asn Ala Asn Pro Asn Ala Asn Pro Asn Ala Asn Pro Asn Ala 35 40 45 Asn Pro Asn Ala Asn Pro Asn Ala Asn Pro Asn Ala Asn Pro Asn Ala 50 55 60 Asn Pro Asn Ala Asn Pro Asn Ala Asn Pro Asn Ala Asn Pro Asn Ala 65 70 75 80 Asn Pro Asn Lys Asn Asn Gln Gly Asn Gly Gln Gly His Asn Met Pro 85 90 95 Asn Asp Pro Asn Arg Asn Val Asp Glu Asn Ala Asn Ala Asn Asn Ala 100 105 110 Val Lys Asn Asn Asn Asn Glu Glu Pro Ser Asp Lys His Ile Glu Gln 115 120 125 Tyr Leu Lys Lys Ile Lys Asn Ser Ile Ser Thr Glu Trp Ser Pro Cys 130 135 140 Ser Val Thr Cys Gly Asn Gly Ile Gln Val Arg Ile Lys Pro Gly Ser 145 150 155 160 Ala Asn Lys Pro Lys Asp Glu Leu Asp Tyr Glu Asn Asp Ile Glu Lys 165 170 175 Lys Ile Cys Lys Met Glu Lys Cys Ser Ser Val Phe Asn Val Val Asn 180 185 190 Ser Arg Pro Val Thr Met Ala Gln Val Ile Asn Thr Asn Ser Leu Ser 195 200 205 Leu Leu Thr Gln Asn Asn Leu Asn Lys Ser Gln Ser Ala Leu Gly Thr 210 215 220 Ala Ile Glu Arg Leu Ser Ser Gly Leu Arg Ile Asn Ser Ala Lys Asp 225 230 235 240 Asp Ala Ala Gly Gln Ala Ile Ala Asn Arg Phe Thr Ala Asn Ile Lys 245 250 255 Gly Leu Thr Gln Ala Ser Arg Asn Ala Asn Asp Gly Ile Ser Ile Ala 260 265 270 Gln Thr Thr Glu Gly Ala Leu Asn Glu Ile Asn Asn Asn Leu Gln Arg 275 280 285 Val Arg Glu Leu Ala Val Gln Ser Ala Asn Ser Thr Asn Ser Gln Ser 290 295 300 Asp Leu Asp Ser Ile Gln Ala Glu Ile Thr Gln Arg Leu Asn Glu Ile 305 310 315 320 Asp Arg Val Ser Gly Gln Thr Gln Phe Asn Gly Val Lys Val Leu Ala 325 330 335 Gln Asp Asn Thr Leu Thr Ile Gln Val Gly Ala Asn Asp Gly Glu Thr 340 345 350 Ile Asp Ile Asp Leu Lys Gln Ile Asn Ser Gln Thr Leu Gly Leu Asp 355 360 365 Thr Leu Asn Val Gln Gln Lys Tyr Lys Val Ser Asp Thr Ala Ala Thr 370 375 380 Val Thr Gly Tyr Ala Asp Thr Thr Ile Ala Leu Asp Asn Ser Thr Phe 385 390 395 400 Lys Ala Ser Ala Thr Gly Leu Gly Gly Thr Asp Gln Lys Ile Asp Gly 405 410 415 Asp Leu Lys Phe Asp Asp Thr Thr Gly Lys Tyr Tyr Ala Lys Val Thr 420 425 430 Val Thr Gly Gly Thr Gly Lys Asp Gly Tyr Tyr Glu Val Ser Val Asp 435 440 445 Lys Thr Asn Gly Glu Val Thr Leu Ala Gly Gly Ala Thr Ser Pro Leu 450 455 460 Thr Gly Gly Leu Pro Ala Thr Ala Thr Glu Asp Val Lys Asn Val Gln 465 470 475 480 Val Ala Asn Ala Asp Leu Thr Glu Ala Lys Ala Ala Leu Thr Ala Ala 485 490 495 Gly Val Thr Gly Thr Ala Ser Val Val Lys Met Ser Tyr Thr Asp Asn 500 505 510 Asn Gly Lys Thr Ile Asp Gly Gly Leu Ala Val Lys Val Gly Asp Asp 515 520 525 Tyr Tyr Ser Ala Thr Gln Asn Lys Asp Gly Ser Ile Ser Ile Asn Thr 530 535 540 Thr Lys Tyr Thr Ala Asp Asp Gly Thr Ser Lys Thr Ala Leu Asn Lys 545 550 555 560 Leu Gly Gly Ala Asp Gly Lys Thr Glu Val Val Ser Ile Gly Gly Lys 565 570 575 Thr Tyr Ala Ala Ser Lys Ala Glu Gly His Asn Phe Lys Ala Gln Pro 580 585 590 Asp Leu Ala Glu Ala Ala Ala Thr Thr Thr Glu Asn Pro Leu Gln Lys 595 600 605 Ile Asp Ala Ala Leu Ala Gln Val Asp Thr Leu Arg Ser Asp Leu Gly 610 615 620 Ala Val Gln Asn Arg Phe Asn Ser Ala Ile Thr Asn Leu Gly Asn Thr 625 630 635 640 Val Asn Asn Leu Thr Ser Ala Arg Ser Arg Ile Glu Asp Ser Asp Tyr 645 650 655 Ala Thr Glu Val Ser Asn Met Ser Arg Ala Gln Ile Leu Gln Gln Ala 660 665 670 Gly Thr Ser Val Leu Ala Gln Ala Asn Gln Val Pro Gln Asn Val Leu 675 680 685 Ser Leu Leu Arg 690 <210> 118 <211> 13 <212> PRT <213> Salmonella typhimurium <400> 118 Leu Gln Arg Val Arg Glu Leu Ala Val Gln Ser Ala Asn 1 5 10 <210> 119 <211> 4 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Polypeptide <400> 119 Ala Ala Arg Val 1 <210> 120 <211> 4 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Polypeptide <400> 120 Ala Tyr Arg Val 1 <210> 121 <211> 4 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Polypeptide <400> 121 Tyr Ala Gly Leu 1 <210> 122 <211> 4 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Polypeptide <400> 122 Ser Ser Thr Thr 1 <210> 123 <211> 2080 <212> RNA <213> Varicella Zoster Virus <400> 123 ucaagcuuuu ggacccucgu acagaagcua auacgacuca cuauagggaa auaagagaga 60 aaagaagagu aagaagaaau auaagagcca ccauggggac agugaauaag ccgguugugg 120 gcgugcuuau gggcuuuggg auuauuaccg guacauuacg aauuaccaau ccagugcgcg 180 ccagugugcu gcguuacgac gacuuucaca uugacgagga uaagcuggau acuaacagcg 240 uguacgaacc uuauuaccac ucagaucaug ccgaaucaag cuggguuaau agaggagaaa 300 gcagccgaaa agccuacgac cacaacucac cuuauauuug gcccagaaac gauuaugacg 360 guuuccugga aaacgcacau gaacaccaug gagucuacaa ccaaggcagg ggaaucgaca 420 guggcgagcg ucuuaugcag ccaacacaga ugucggcaca ggaggaucuc ggugaugaca 480 ccggcauaca cgugauuccc acauuaaacg gcgacgacag acauaagauc gucaaugugg 540 aucagcguca guauggggau gucuuuaaag gcgauuugaa uccaaagccc caaggacaga 600 gacugaucga ggucucugua gaagaaaauc accccuucac uuugcgcgcu ccaauccaga 660 ggauuuacgg ggugcguuau accgaaacuu ggaguuucuu gccgucacug acguguacgg 720 gggaugccgc ccccgcaauc cagcacaucu gucugaaaca caccacaugc uuucaggacg 780 ugguugugga uguggauugc gcggaaaaca caaaagaaga ccaacucgcc gaaaucagcu 840 aucguuuuca ggguaaaaaa gaggccgacc aaccguggau uguugugaau acgagcacgc 900 ucuucgauga gcuugaacuc gaucccccgg aaaucgagcc ugggguucua aaaguguuga 960 ggaccgagaa gcaguaccuc gggguuuaua ucuggaauau gagaggcucc gauggcaccu 1020 cuaccuacgc aacguuucug guuaccugga agggagacga gaagacacgg aauccaacgc 1080 ccgcugugac cccucagccu aggggagccg aauuccacau guggaacuau cacucccaug 1140 uauucagugu gggugacacu uucagccugg ccaugcaccu gcaguauaag auucacgagg 1200 cacccuucga ccuccugcug gagugguugu acguaccuau ugaucccacu ugucagccca 1260 ugcgccugua cuccacuugc uuguaccacc ccaaugcacc acagugucua ucacacauga 1320 acuccgggug uaccuuuacu ucaccccauc uugcccagcg ggucgccagc acaguguauc 1380 agaacuguga gcaugcugac aacuauacug cuuauugccu cggaauaucc cauauggagc 1440 caagcuucgg gcucauacug cacgauggug guacgacacu caaguucgug gacacccccg 1500 aaagccuuuc uggcuuguac guguucgugg ucuacuucaa uggacaugug gaggcagugg 1560 cuuacacagu gguuucgaca guugaucacu uuguaaaugc cauugaggaa cgcggcuucc 1620 cgccuacagc gggccagccc ccugcgacaa caaaaccaaa agagauuacg cccguuaauc 1680 cugggacuag uccauugcug agguaugccg ccuggacugg cggucuggcg gccgugguac 1740 uucuguguuu agucauauuu cugaucugua ccgcuaaacg uaugcggguc aaggcuuacc 1800 guguugacaa gucuccuuac aaucagucaa uguacuaugc aggacucccu guugacgauu 1860 ucgaagacuc agagaguaca gacacagaag aagaauucgg aaacgcuaua gguggcucuc 1920 acggagguag cucguauaca guguacaucg auaaaaccag augauaauag gcuggagccu 1980 cgguggccau gcuucuugcc ccuugggccu ccccccagcc ccuccucccc uuccugcacc 2040 cguacccccg uggucuuuga auaaagucug agugggcggc 2080 <210> 124 <211> 1276 <212> RNA <213> Varicella Zoster Virus <400> 124 ucaagcuuuu ggacccucgu acagaagcua auacgacuca cuauagggaa auaagagaga 60 aaagaagagu aagaagaaau auaagagcca ccauguuuuu aauccaaugu uugauaucgg 120 ccguuauauu uuacauacaa gugaccaacg cuuugaucuu caagggcgac cacgugagcu 180 ugcaaguuaa cagcagucuc acgucuaucc uuauucccau gcaaaaugau aauuauacag 240 agauaaaagg acagcuuguc uuuauuggag agcaacuacc uaccgggaca aacuauagcg 300 gaacacugga acuguuauac gcggauacgg uggcguuuug uuuccgguca guacaaguaa 360 uaagauacga cggauguccc cggauuagaa cgagcgcuuu uauuucgugu agguacaaac 420 auucguggca uuaugguaac ucaacggauc ggauaucaac agagccggau gcugguguaa 480 uguugaaaau uaccaaaccg ggaauaaaug augcuggugu guauguacuu cuuguucggu 540 uagaccauag cagauccacc gaugguuuca uucuuggugu aaauguauau acagcgggcu 600 cgcaucacaa cauucacggg guuaucuaca cuucuccauc ucuacagaau ggauauucua 660 caagagcccu uuuucaacaa gcucguuugu gugauuuacc cgcgacaccc aaaggguccg 720 guaccucccu guuucaacau augcuugauc uucgugccgg uaaaucguua gaggauaacc 780 cuugguuaca ugaggacguu guuacgacag aaacuaaguc cguuguuaag gaggggauag 840 aaaaucacgu auauccaacg gauaugucca cguuacccga aaagucccuu aaugauccuc 900 cagaaaaucu acuuauaauu auuccuauag uagcgucugu caugauccuc accgccaugg 960 uuauuguuau uguaauaagc guuaagcgac guagaauuaa aaaacaucca auuuaucgcc 1020 caaauacaaa aacaagaagg ggcauacaaa augcgacacc agaauccgau gugauguugg 1080 aggccgccau ugcacaacua gcaacgauuc gcgaagaauc ccccccacau uccguuguaa 1140 acccguuugu uaaauaguga uaauaggcug gagccucggu ggccaugcuu cuugccccuu 1200 gggccucccc ccagccccuc cuccccuucc ugcacccgua cccccguggu cuuugaauaa 1260 agucugagug ggcggc 1276 <210> 125 <211> 1897 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Polynucleotide <400> 125 ucaagcuuuu ggacccucgu acagaagcua auacgacuca cuauagggaa auaagagaga 60 aaagaagagu aagaagaaau auaagagcca ccauggggac aguuaauaaa ccuguggugg 120 ggguauugau gggguucgga auuaucacgg gaacguugcg uauaacgaau ccggucagag 180 cauccgucuu gcgauacgau gauuuucaca ucgaugaaga caaacuggau acaaacuccg 240 uauaugagcc uuacuaccau ucagaucaug cggagucuuc auggguaaau cggggagagu 300 cuucgcgaaa agcguacgau cauaacucac cuuauauaug gccacguaau gauuaugaug 360 gauuuuuaga gaacgcacac gaacaccaug ggguguauaa ucagggccgu gguaucgaua 420 gcggggaacg guuaaugcaa cccacacaaa ugucugcaca ggaggaucuu ggggacgaua 480 cgggcaucca cguuaucccu acguuaaacg gcgaugacag acauaaaauu guaaaugugg 540 accaacguca auacggugac guguuuaaag gagaucuuaa uccaaaaccc caaggccaaa 600 gacucauuga ggugucagug gaagaaaauc acccguuuac uuuacgcgca ccgauucagc 660 ggauuuaugg aguccgguac accgagacuu ggagcuuuuu gccgucauua accuguacgg 720 gagacgcagc gcccgccauc cagcauauau guuuaaaaca uacaacaugc uuucaagacg 780 ugguggugga uguggauugc gcggaaaaua cuaaagagga ucaguuggcc gaaaucaguu 840 accguuuuca agguaagaag gaagcggacc aaccguggau uguuguaaac acgagcacac 900 uguuugauga acucgaauua gacccccccg agauugaacc gggugucuug aaaguacuuc 960 ggacagaaaa acaauacuug gguguguaca uuuggaacau gcgcggcucc gaugguacgu 1020 cuaccuacgc cacguuuuug gucaccugga aaggggauga aaaaacaaga aacccuacgc 1080 ccgcaguaac uccucaacca agaggggcug aguuucauau guggaauuac cacucgcaug 1140 uauuuucagu uggugauacg uuuagcuugg caaugcaucu ucaguauaag auacaugaag 1200 cgccauuuga uuugcuguua gagugguugu auguccccau cgauccuaca ugucaaccaa 1260 ugcgguuaua uucuacgugu uuguaucauc ccaacgcacc ccaaugccuc ucucauauga 1320 auuccgguug uacauuuacc ucgccacauu uagcccagcg uguugcaagc acaguguauc 1380 aaaauuguga acaugcagau aacuacaccg cauauugucu gggaauaucu cauauggagc 1440 cuagcuuugg ucuaaucuua cacgacgggg gcaccacguu aaaguuugua gauacacccg 1500 agaguuuguc gggauuauac guuuuugugg uguauuuuaa cgggcauguu gaagccguag 1560 cauacacugu uguauccaca guagaucauu uuguaaacgc aauugaagag cguggauuuc 1620 cgccaacggc cggucagcca ccggcgacua cuaaacccaa ggaaauuacc cccguaaacc 1680 ccggaacguc accacuucua cgauaugccg cauggaccgg agggcuugca gcaguaguac 1740 uuuuaugucu cguaauauuu uuaaucugua cggcuugaug auaauaggcu ggagccucgg 1800 uggccaugcu ucuugccccu ugggccuccc cccagccccu ccuccccuuc cugcacccgu 1860 acccccgugg ucuuugaaua aagucugagu gggcggc 1897 <210> 126 <211> 1867 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Polynucleotide <400> 126 ucaagcuuuu ggacccucgu acagaagcua auacgacuca cuauagggaa auaagagaga 60 aaagaagagu aagaagaaau auaagagcca ccauggaaac cccggcgcag cugcuguuuc 120 ugcugcugcu guggcugccg gauaccaccg gcuccgucuu gcgauacgau gauuuucaca 180 ucgaugaaga caaacuggau acaaacuccg uauaugagcc uuacuaccau ucagaucaug 240 cggagucuuc auggguaaau cggggagagu cuucgcgaaa agcguacgau cauaacucac 300 cuuauauaug gccacguaau gauuaugaug gauuuuuaga gaacgcacac gaacaccaug 360 ggguguauaa ucagggccgu gguaucgaua gcggggaacg guuaaugcaa cccacacaaa 420 ugucugcaca ggaggaucuu ggggacgaua cgggcaucca cguuaucccu acguuaaacg 480 gcgaugacag acauaaaauu guaaaugugg accaacguca auacggugac guguuuaaag 540 gagaucuuaa uccaaaaccc caaggccaaa gacucauuga ggugucagug gaagaaaauc 600 acccguuuac uuuacgcgca ccgauucagc ggauuuaugg aguccgguac accgagacuu 660 ggagcuuuuu gccgucauua accuguacgg gagacgcagc gcccgccauc cagcauauau 720 guuuaaaaca uacaacaugc uuucaagacg ugguggugga uguggauugc gcggaaaaua 780 cuaaagagga ucaguuggcc gaaaucaguu accguuuuca agguaagaag gaagcggacc 840 aaccguggau uguuguaaac acgagcacac uguuugauga acucgaauua gacccccccg 900 agauugaacc gggugucuug aaaguacuuc ggacagaaaa acaauacuug gguguguaca 960 uuuggaacau gcgcggcucc gaugguacgu cuaccuacgc cacguuuuug gucaccugga 1020 aaggggauga aaaaacaaga aacccuacgc ccgcaguaac uccucaacca agaggggcug 1080 aguuucauau guggaauuac cacucgcaug uauuuucagu uggugauacg uuuagcuugg 1140 caaugcaucu ucaguauaag auacaugaag cgccauuuga uuugcuguua gagugguugu 1200 auguccccau cgauccuaca ugucaaccaa ugcgguuaua uucuacgugu uuguaucauc 1260 ccaacgcacc ccaaugccuc ucucauauga auuccgguug uacauuuacc ucgccacauu 1320 uagcccagcg uguugcaagc acaguguauc aaaauuguga acaugcagau aacuacaccg 1380 cauauugucu gggaauaucu cauauggagc cuagcuuugg ucuaaucuua cacgacgggg 1440 gcaccacguu aaaguuugua gauacacccg agaguuuguc gggauuauac guuuuugugg 1500 uguauuuuaa cgggcauguu gaagccguag cauacacugu uguauccaca guagaucauu 1560 uuguaaacgc aauugaagag cguggauuuc cgccaacggc cggucagcca ccggcgacua 1620 cuaaacccaa ggaaauuacc cccguaaacc ccggaacguc accacuucua cgauaugccg 1680 cauggaccgg agggcuugca gcaguaguac uuuuaugucu cguaauauuu uuaaucugua 1740 cggcuugaug auaauaggcu ggagccucgg uggccaugcu ucuugccccu ugggccuccc 1800 cccagccccu ccuccccuuc cugcacccgu acccccgugg ucuuugaaua aagucugagu 1860 gggcggc 1867 <210> 127 <211> 1933 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Polynucleotide <400> 127 ucaagcuuuu ggacccucgu acagaagcua auacgacuca cuauagggaa auaagagaga 60 aaagaagagu aagaagaaau auaagagcca ccauggggac aguuaauaaa ccuguggugg 120 ggguauugau gggguucgga auuaucacgg gaacguugcg uauaacgaau ccggucagag 180 cauccgucuu gcgauacgau gauuuucaca ucgaugaaga caaacuggau acaaacuccg 240 uauaugagcc uuacuaccau ucagaucaug cggagucuuc auggguaaau cggggagagu 300 cuucgcgaaa agcguacgau cauaacucac cuuauauaug gccacguaau gauuaugaug 360 gauuuuuaga gaacgcacac gaacaccaug ggguguauaa ucagggccgu gguaucgaua 420 gcggggaacg guuaaugcaa cccacacaaa ugucugcaca ggaggaucuu ggggacgaua 480 cgggcaucca cguuaucccu acguuaaacg gcgaugacag acauaaaauu guaaaugugg 540 accaacguca auacggugac guguuuaaag gagaucuuaa uccaaaaccc caaggccaaa 600 gacucauuga ggugucagug gaagaaaauc acccguuuac uuuacgcgca ccgauucagc 660 ggauuuaugg aguccgguac accgagacuu ggagcuuuuu gccgucauua accuguacgg 720 gagacgcagc gcccgccauc cagcauauau guuuaaaaca uacaacaugc uuucaagacg 780 ugguggugga uguggauugc gcggaaaaua cuaaagagga ucaguuggcc gaaaucaguu 840 accguuuuca agguaagaag gaagcggacc aaccguggau uguuguaaac acgagcacac 900 uguuugauga acucgaauua gacccccccg agauugaacc gggugucuug aaaguacuuc 960 ggacagaaaa acaauacuug gguguguaca uuuggaacau gcgcggcucc gaugguacgu 1020 cuaccuacgc cacguuuuug gucaccugga aaggggauga aaaaacaaga aacccuacgc 1080 ccgcaguaac uccucaacca agaggggcug aguuucauau guggaauuac cacucgcaug 1140 uauuuucagu uggugauacg uuuagcuugg caaugcaucu ucaguauaag auacaugaag 1200 cgccauuuga uuugcuguua gagugguugu auguccccau cgauccuaca ugucaaccaa 1260 ugcgguuaua uucuacgugu uuguaucauc ccaacgcacc ccaaugccuc ucucauauga 1320 auuccgguug uacauuuacc ucgccacauu uagcccagcg uguugcaagc acaguguauc 1380 aaaauuguga acaugcagau aacuacaccg cauauugucu gggaauaucu cauauggagc 1440 cuagcuuugg ucuaaucuua cacgacgggg gcaccacguu aaaguuugua gauacacccg 1500 agaguuuguc gggauuauac guuuuugugg uguauuuuaa cgggcauguu gaagccguag 1560 cauacacugu uguauccaca guagaucauu uuguaaacgc aauugaagag cguggauuuc 1620 cgccaacggc cggucagcca ccggcgacua cuaaacccaa ggaaauuacc cccguaaacc 1680 ccggaacguc accacuucua cgauaugccg cauggaccgg agggcuugca gcaguaguac 1740 uuuuaugucu cguaauauuu uuaaucugua cggcuaaacg aaugaggguu aaagccuaua 1800 ggguagacaa gugaugauaa uaggcuggag ccucgguggc caugcuucuu gccccuuggg 1860 ccucccccca gccccuccuc cccuuccugc acccguaccc ccguggucuu ugaauaaagu 1920 cugagugggc ggc 1933 <210> 128 <211> 1933 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Polynucleotide <400> 128 ucaagcuuuu ggacccucgu acagaagcua auacgacuca cuauagggaa auaagagaga 60 aaagaagagu aagaagaaau auaagagcca ccauggggac aguuaauaaa ccuguggugg 120 ggguauugau gggguucgga auuaucacgg gaacguugcg uauaacgaau ccggucagag 180 cauccgucuu gcgauacgau gauuuucaca ucgaugaaga caaacuggau acaaacuccg 240 uauaugagcc uuacuaccau ucagaucaug cggagucuuc auggguaaau cggggagagu 300 cuucgcgaaa agcguacgau cauaacucac cuuauauaug gccacguaau gauuaugaug 360 gauuuuuaga gaacgcacac gaacaccaug ggguguauaa ucagggccgu gguaucgaua 420 gcggggaacg guuaaugcaa cccacacaaa ugucugcaca ggaggaucuu ggggacgaua 480 cgggcaucca cguuaucccu acguuaaacg gcgaugacag acauaaaauu guaaaugugg 540 accaacguca auacggugac guguuuaaag gagaucuuaa uccaaaaccc caaggccaaa 600 gacucauuga ggugucagug gaagaaaauc acccguuuac uuuacgcgca ccgauucagc 660 ggauuuaugg aguccgguac accgagacuu ggagcuuuuu gccgucauua accuguacgg 720 gagacgcagc gcccgccauc cagcauauau guuuaaaaca uacaacaugc uuucaagacg 780 ugguggugga uguggauugc gcggaaaaua cuaaagagga ucaguuggcc gaaaucaguu 840 accguuuuca agguaagaag gaagcggacc aaccguggau uguuguaaac acgagcacac 900 uguuugauga acucgaauua gacccccccg agauugaacc gggugucuug aaaguacuuc 960 ggacagaaaa acaauacuug gguguguaca uuuggaacau gcgcggcucc gaugguacgu 1020 cuaccuacgc cacguuuuug gucaccugga aaggggauga aaaaacaaga aacccuacgc 1080 ccgcaguaac uccucaacca agaggggcug aguuucauau guggaauuac cacucgcaug 1140 uauuuucagu uggugauacg uuuagcuugg caaugcaucu ucaguauaag auacaugaag 1200 cgccauuuga uuugcuguua gagugguugu auguccccau cgauccuaca ugucaaccaa 1260 ugcgguuaua uucuacgugu uuguaucauc ccaacgcacc ccaaugccuc ucucauauga 1320 auuccgguug uacauuuacc ucgccacauu uagcccagcg uguugcaagc acaguguauc 1380 aaaauuguga acaugcagau aacuacaccg cauauugucu gggaauaucu cauauggagc 1440 cuagcuuugg ucuaaucuua cacgacgggg gcaccacguu aaaguuugua gauacacccg 1500 agaguuuguc gggauuauac guuuuugugg uguauuuuaa cgggcauguu gaagccguag 1560 cauacacugu uguauccaca guagaucauu uuguaaacgc aauugaagag cguggauuuc 1620 cgccaacggc cggucagcca ccggcgacua cuaaacccaa ggaaauuacc cccguaaacc 1680 ccggaacguc accacuucua cgauaugccg cauggaccgg agggcuugca gcaguaguac 1740 uuuuaugucu cguaauauuu uuaaucugua cggcuaaacg aaugaggguu aaagccgcca 1800 ggguagacaa gugaugauaa uaggcuggag ccucgguggc caugcuucuu gccccuuggg 1860 ccucccccca gccccuccuc cccuuccugc acccguaccc ccguggucuu ugaauaaagu 1920 cugagugggc ggc 1933 <210> 129 <211> 2083 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Polynucleotide <400> 129 ucaagcuuuu ggacccucgu acagaagcua auacgacuca cuauagggaa auaagagaga 60 aaagaagagu aagaagaaau auaagagcca ccauggggac aguuaauaaa ccuguggugg 120 ggguauugau gggguucgga auuaucacgg gaacguugcg uauaacgaau ccggucagag 180 cauccgucuu gcgauacgau gauuuucaca ucgaugaaga caaacuggau acaaacuccg 240 uauaugagcc uuacuaccau ucagaucaug cggagucuuc auggguaaau cggggagagu 300 cuucgcgaaa agcguacgau cauaacucac cuuauauaug gccacguaau gauuaugaug 360 gauuuuuaga gaacgcacac gaacaccaug ggguguauaa ucagggccgu gguaucgaua 420 gcggggaacg guuaaugcaa cccacacaaa ugucugcaca ggaggaucuu ggggacgaua 480 cgggcaucca cguuaucccu acguuaaacg gcgaugacag acauaaaauu guaaaugugg 540 accaacguca auacggugac guguuuaaag gagaucuuaa uccaaaaccc caaggccaaa 600 gacucauuga ggugucagug gaagaaaauc acccguuuac uuuacgcgca ccgauucagc 660 ggauuuaugg aguccgguac accgagacuu ggagcuuuuu gccgucauua accuguacgg 720 gagacgcagc gcccgccauc cagcauauau guuuaaaaca uacaacaugc uuucaagacg 780 ugguggugga uguggauugc gcggaaaaua cuaaagagga ucaguuggcc gaaaucaguu 840 accguuuuca agguaagaag gaagcggacc aaccguggau uguuguaaac acgagcacac 900 uguuugauga acucgaauua gacccccccg agauugaacc gggugucuug aaaguacuuc 960 ggacagaaaa acaauacuug gguguguaca uuuggaacau gcgcggcucc gaugguacgu 1020 cuaccuacgc cacguuuuug gucaccugga aaggggauga aaaaacaaga aacccuacgc 1080 ccgcaguaac uccucaacca agaggggcug aguuucauau guggaauuac cacucgcaug 1140 uauuuucagu uggugauacg uuuagcuugg caaugcaucu ucaguauaag auacaugaag 1200 cgccauuuga uuugcuguua gagugguugu auguccccau cgauccuaca ugucaaccaa 1260 ugcgguuaua uucuacgugu uuguaucauc ccaacgcacc ccaaugccuc ucucauauga 1320 auuccgguug uacauuuacc ucgccacauu uagcccagcg uguugcaagc acaguguauc 1380 aaaauuguga acaugcagau aacuacaccg cauauugucu gggaauaucu cauauggagc 1440 cuagcuuugg ucuaaucuua cacgacgggg gcaccacguu aaaguuugua gauacacccg 1500 agaguuuguc gggauuauac guuuuugugg uguauuuuaa cgggcauguu gaagccguag 1560 cauacacugu uguauccaca guagaucauu uuguaaacgc aauugaagag cguggauuuc 1620 cgccaacggc cggucagcca ccggcgacua cuaaacccaa ggaaauuacc cccguaaacc 1680 ccggaacguc accacuucua cgauaugccg cauggaccgg agggcuugca gcaguaguac 1740 uuuuaugucu cguaauauuu uuaaucugua cggcuaaacg aaugaggguu aaagccuaua 1800 ggguagacaa guccccguau aaccaaagca uguauuacgc uggccuucca guggacgauu 1860 ucgaggacgc cgaagccgcc gaugccgaag aagaguuugg uaacgcgauu ggagggaguc 1920 acggggguuc gaguuacacg guguauauag auaagacccg gugaugauaa uaggcuggag 1980 ccucgguggc caugcuucuu gccccuuggg ccucccccca gccccuccuc cccuuccugc 2040 acccguaccc ccguggucuu ugaauaaagu cugagugggc ggc 2083 <210> 130 <211> 2083 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Polynucleotide <400> 130 ucaagcuuuu ggacccucgu acagaagcua auacgacuca cuauagggaa auaagagaga 60 aaagaagagu aagaagaaau auaagagcca ccauggggac aguuaauaaa ccuguggugg 120 ggguauugau gggguucgga auuaucacgg gaacguugcg uauaacgaau ccggucagag 180 cauccgucuu gcgauacgau gauuuucaca ucgaugaaga caaacuggau acaaacuccg 240 uauaugagcc uuacuaccau ucagaucaug cggagucuuc auggguaaau cggggagagu 300 cuucgcgaaa agcguacgau cauaacucac cuuauauaug gccacguaau gauuaugaug 360 gauuuuuaga gaacgcacac gaacaccaug ggguguauaa ucagggccgu gguaucgaua 420 gcggggaacg guuaaugcaa cccacacaaa ugucugcaca ggaggaucuu ggggacgaua 480 cgggcaucca cguuaucccu acguuaaacg gcgaugacag acauaaaauu guaaaugugg 540 accaacguca auacggugac guguuuaaag gagaucuuaa uccaaaaccc caaggccaaa 600 gacucauuga ggugucagug gaagaaaauc acccguuuac uuuacgcgca ccgauucagc 660 ggauuuaugg aguccgguac accgagacuu ggagcuuuuu gccgucauua accuguacgg 720 gagacgcagc gcccgccauc cagcauauau guuuaaaaca uacaacaugc uuucaagacg 780 ugguggugga uguggauugc gcggaaaaua cuaaagagga ucaguuggcc gaaaucaguu 840 accguuuuca agguaagaag gaagcggacc aaccguggau uguuguaaac acgagcacac 900 uguuugauga acucgaauua gacccccccg agauugaacc gggugucuug aaaguacuuc 960 ggacagaaaa acaauacuug gguguguaca uuuggaacau gcgcggcucc gaugguacgu 1020 cuaccuacgc cacguuuuug gucaccugga aaggggauga aaaaacaaga aacccuacgc 1080 ccgcaguaac uccucaacca agaggggcug aguuucauau guggaauuac cacucgcaug 1140 uauuuucagu uggugauacg uuuagcuugg caaugcaucu ucaguauaag auacaugaag 1200 cgccauuuga uuugcuguua gagugguugu auguccccau cgauccuaca ugucaaccaa 1260 ugcgguuaua uucuacgugu uuguaucauc ccaacgcacc ccaaugccuc ucucauauga 1320 auuccgguug uacauuuacc ucgccacauu uagcccagcg uguugcaagc acaguguauc 1380 aaaauuguga acaugcagau aacuacaccg cauauugucu gggaauaucu cauauggagc 1440 cuagcuuugg ucuaaucuua cacgacgggg gcaccacguu aaaguuugua gauacacccg 1500 agaguuuguc gggauuauac guuuuugugg uguauuuuaa cgggcauguu gaagccguag 1560 cauacacugu uguauccaca guagaucauu uuguaaacgc aauugaagag cguggauuuc 1620 cgccaacggc cggucagcca ccggcgacua cuaaacccaa ggaaauuacc cccguaaacc 1680 ccggaacguc accacuucua cgauaugccg cauggaccgg agggcuugca gcaguaguac 1740 uuuuaugucu cguaauauuu uuaaucugua cggcuaaacg aaugaggguu aaagccuaua 1800 ggguagacaa guccccguau aaccaaagca uguauggcgc uggccuucca guggacgauu 1860 ucgaggacgc cgaagccgcc gaugccgaag aagaguuugg uaacgcgauu ggagggaguc 1920 acggggguuc gaguuacacg guguauauag auaagacccg gugaugauaa uaggcuggag 1980 ccucgguggc caugcuucuu gccccuuggg ccucccccca gccccuccuc cccuuccugc 2040 acccguaccc ccguggucuu ugaauaaagu cugagugggc ggc 2083 <210> 131 <211> 2050 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Polynucleotide <400> 131 ucaagcuuuu ggacccucgu acagaagcua auacgacuca cuauagggaa auaagagaga 60 aaagaagagu aagaagaaau auaagagcca ccauggagac ucccgcucag cuacuguucc 120 uccugcuccu uuggcugccu gauacuacag gcucuguuuu gcgguacgac gacuuucaca 180 ucgaugagga caagcucgac acuaauagcg uguaugagcc cuacuaccau ucagaucacg 240 ccgaguccuc uugggugaac aggggugaaa guucuaggaa agccuaugau cacaacagcc 300 cuuauauuug gccacggaau gauuacgacg gauuucucga aaaugcccac gagcaucacg 360 gaguguacaa ccagggccgu ggaaucgacu cuggggagag auugaugcaa ccuacacaga 420 ugagcgccca ggaagaucuc ggggaugaua caggaauuca cguuaucccu acauuaaacg 480 gagaugaccg ccacaaaauc gucaaugucg aucaaagaca guauggagau guguucaaag 540 gcgaucucaa cccuaagccg cagggccaga gacucauuga ggugucuguc gaagagaacc 600 acccuuucac ucugcgcgcu cccauucaga gaaucuaugg aguucgcuau acggagacuu 660 ggucauuccu uccuucccug acaugcaccg gagacgccgc cccugccauu cagcacauau 720 gccugaaaca uaccaccugu uuccaggaug uggugguuga uguugauugu gcugaaaaua 780 ccaaggaaga ccaacuggcc gagauuaguu accgguucca agggaaaaag gaagccgacc 840 agccauggau ugugguuaau acaagcacuc uguucgauga gcucgagcug gauccccccg 900 agauagaacc cggaguucug aaagugcucc ggacagaaaa acaauaucug ggagucuaca 960 uauggaacau gcgcgguucc gaugggaccu ccacuuaugc aaccuuucuc gucacgugga 1020 agggagauga gaaaacuagg aaucccacac ccgcugucac accacagcca agaggggcug 1080 aguuccauau guggaacuau cauagucacg uguuuagugu cggagauacg uuuucauugg 1140 cuaugcaucu ccaguacaag auucaugagg cucccuucga ucuguugcuu gagugguugu 1200 acgucccgau ugacccgacc ugccagccca ugcgacugua cagcaccugu cucuaccauc 1260 caaacgcucc gcaaugucug agccacauga acucugggug uacuuucacc aguccccacc 1320 ucgcccagcg gguggccucu acuguuuacc agaacuguga gcacgccgac aacuacaccg 1380 cauacugccu cgguauuucu cacauggaac ccuccuucgg acucauccug cacgaugggg 1440 gcacuacccu gaaguucguu gauacgccag aaucucuguc ugggcucuau guuuucgugg 1500 ucuacuucaa uggccauguc gaggccgugg ccuauacugu cguuucuacc guggaucauu 1560 uugugaacgc caucgaagaa cggggauucc ccccuacggc aggccagccg ccugcaacca 1620 ccaagcccaa ggaaauaaca ccagugaacc cuggcaccuc accucuccua agauaugccg 1680 cguggacagg gggacuggcg gcaguggugc uccucugucu cgugaucuuu cugaucugua 1740 cagccaagag gaugaggguc aaggcuuaua gaguggacaa gucccccuac aaucagucaa 1800 uguacuacgc cggccuuccc guugaugauu uugaggauuc cgaguccaca gauacugagg 1860 aagaguucgg uaacgcuaua ggcggcucuc acggggguuc aagcuacacg guuuacauug 1920 acaagacacg cugauaauag gcuggagccu cgguggccau gcuucuugcc ccuugggccu 1980 ccccccagcc ccuccucccc uuccugcacc cguacccccg uggucuuuga auaaagucug 2040 agugggcggc 2050 <210> 132 <211> 4 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Polypeptide <400> 132 Gly Ala Gly Leu 1 <210> 133 <211> 1844 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Polynucleotide <400> 133 auggggacag uuaauaaacc uguggugggg guauugaugg gguucggaau uaucacggga 60 acguugcgua uaacgaaucc ggucagagca uccgucuugc gauacgauga uuuucacauc 120 gaugaagaca aacuggauac aaacuccgua uaugagccuu acuaccauuc agaucaugcg 180 gagucuucau ggguaaaucg gggagagucu ucgcgaaaag cguacgauaa ucauaacuca 240 ccuuauauau ggccacguaa ugauuaugau ggauuuuuag agaacgcaca cgaacaccau 300 gggguguaua aucagggccg ugguaucgau agcggggaac gguuaaugca acccacacaa 360 augucugcac aggaggaucu uggggacgau acgggcaucc acguuauccc uacguuaaac 420 ggcgaugaca gacauaaaau uguaaaugug gaccaacguc aauacgguga cguguuuaaa 480 ggagaucuua auccaaaacc ccaaggccaa agacucauug aggugucagu ggaagaaaau 540 cacccguuua cuuuacgcgc accgauucag cggauuuaug gaguccggua caccgagacu 600 uggagcuuuu ugccgucauu aaccuguacg ggagacgcag cgcccgccau ccagcauaua 660 uguuuaaaac auacaacaug cuuucaagac gugguggugg auguggauug cgcggaaaau 720 acuaaagagg aucaguuggc cgaaaucagu uaccguuuuc aagguaagaa ggaagcggac 780 caaccgugga uuguuguaaa cacgagcaca cuguuugaug aacucgaauu agaccccccc 840 gagauugaac cgggugucuu gaaaguacuu cggacagaaa aacaauacuu ggguguguac 900 auuuggaaca ugcgcggcuc cgaugguacg ucuaccuacg ccacguuuuu ggucaccugg 960 aaaggggaug aaaaaacaag aaacccuacg cccgcaguaa cuccucaacc aagaggggcu 1020 gaguuucaua uguggaauua ccacucgcau guauuuucag uuggugauac guuuagcuug 1080 gcaaugcauc uucaguauaa gauacaugaa gcgccauuug auuugcuguu agagugguug 1140 uaugucccca ucgauccuac augucaacca augcgguuau auucuacgug uuuguaucau 1200 cccaacgcac cccaaugccu cucucauaug aauuccgguu guacauuuac cucgccacau 1260 uuagcccagc guguugcaag cacaguguau caaaauugug aacaugcaga uaacuacacc 1320 gcauauuguc ugggaauauc ucauauggag ccuagcuuug gucuaaucuu acacgacggg 1380 ggcaccacgu uaaaguuugu agauacaccc gagaguuugu cgggauuaua cguuuuugug 1440 guguauuuua acgggcaugu ugaagccgua gcauacacug uuguauccac aguagaucau 1500 uuuguaaacg caauugaaga gcguggauuu ccgccaacgg ccggucagcc accggcgacu 1560 acuaaaccca aggaaauuac ccccguaaac cccggaacgu caccacuucu acgauaugcc 1620 gcauggaccg gagggcuugc agcaguagua cuuuuauguc ucguaauauu uuuaaucugu 1680 acggcuaaac gaaugagggu uaaagccgcc aggguagaca agugaugaua auaggcugga 1740 gccucggugg ccaugcuucu ugccccuugg gccucccccc agccccuccu ccccuuccug 1800 cacccguacc cccguggucu uugaauaaag ucugaguggg cggc 1844 <210> 134 <211> 1838 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Polynucleotide <400> 134 auggggacag uuaauaaacc uguggugggg guauugaugg gguucggaau uaucacggga 60 acguugcgua uaacgaaucc ggucagagca uccgucuugc gauacgauga uuuucacauc 120 gaugaagaca aacuggauac aaacuccgua uaugagccuu acuaccauuc agaucaugcg 180 gagucuucau ggguaaaucg gggagagucu ucgcgaaaag cguacgauca uaacucaccu 240 uauauauggc cacguaauga uuaugaugga uuuuuagaga acgcacacga acaccauggg 300 guguauaauc agggccgugg uaucgauagc ggggaacggu uaaugcaacc cacacaaaug 360 ucugcacagg aggaucuugg ggacgauacg ggcauccacg uuaucccuac guuaaacggc 420 gaugacagac auaaaauugu aaauguggac caacgucaau acggugacgu guuuaaagga 480 gaucuuaauc caaaacccca aggccaaaga cucauugagg ugucagugga agaaaaucac 540 ccguuuacuu uacgcgcacc gauucagcgg auuuauggag uccgguacac cgagacuugg 600 agcuuuuugc cgucauuaac cuguacggga gacgcagcgc ccgccaucca gcauauaugu 660 uuaaagcaua caacaugcuu ucaagacgug gugguggaug uggauugcgc ggaaaauacu 720 aaagaggauc aguuggccga aaucaguuac cguuuucaag guaagaagga agcggaccaa 780 ccguggauug uuguaaacac gagcacacug uuugaugaac ucgaauuaga cccacccgag 840 auugaaccgg gugucuugaa aguacuucgg acagagaaac aauacuuggg uguguacauu 900 uggaacaugc gcggcuccga ugguacgucu accuacgcca cguuuuuggu caccuggaaa 960 ggggaugaga agacaagaaa cccuacgccc gcaguaacuc cucaaccaag aggggcugag 1020 uuucauaugu ggaauuacca cucgcaugua uuuucaguug gugauacguu uagcuuggca 1080 augcaucuuc aguauaagau acaugaagcg ccauuugauu ugcuguuaga gugguuguau 1140 guccccaucg auccuacaug ucaaccaaug cgguuauauu cuacguguuu guaucauccc 1200 aacgcacccc aaugccucuc ucauaugaau uccgguugua cauuuaccuc gccacauuua 1260 gcccagcgug uugcaagcac aguguaucag aauugugaac augcagauaa cuacaccgca 1320 uauugucugg gaauaucuca uauggagccu agcuuugguc uaaucuuaca cgacgggggc 1380 accacguuaa aguuuguaga uacacccgag aguuugucgg gauuauacgu uuuuguggug 1440 uauuuuaacg ggcauguuga agccguagca uacacuguug uauccacagu agaucauuuu 1500 guaaacgcaa uugaagagcg uggauuuccg ccaacggccg gucagccacc ggcgacuacu 1560 aaacccaagg aaauuacccc cguaaacccc ggaacgucac cacuucuacg auaugccgca 1620 uggaccggag ggcuugcagc aguaguacuu uuaugucucg uaauauuuuu aaucuguacg 1680 gcuaaacgaa ugaggguuaa agccgccagg guagacaagu gauaauaggc uggagccucg 1740 guggccaugc uucuugcccc uugggccucc ccccagcccc uccuccccuu ccugcacccg 1800 uacccccgug gucuuugaau aaagucugag ugggcggc 1838

Claims (112)

  1. 적어도 1종의 VZV 항원성 폴리펩타이드를 인코딩하는 열린 해독틀을 갖는 적어도 1종의 RNA 폴리뉴클레오타이드 및 약제학적으로 허용가능한 캐리어 또는 부형제를 포함하는, 수두대상포진 바이러스 (VZV) 백신.
  2. 청구항 1에 있어서, 상기 적어도 1종의 RNA 폴리뉴클레오타이드가 2 이상의 VZV 항원성 폴리펩타이드를 인코딩하는 열린 해독틀을 갖는, VZV 백신.
  3. 청구항 1 또는 2에 있어서, 상기 적어도 1종의 VZV 항원성 폴리펩타이드가 VZV 당단백질 또는 이의 항원성 단편 또는 에피토프인, VZV 백신.
  4. 청구항 1 또는 2에 있어서, 상기 적어도 1종의 VZV 항원성 폴리펩타이드가 VZV 피막 단백질 또는 이의 항원성 단편 또는 에피토프인, VZV 백신.
  5. 청구항 3에 있어서, 상기 VZV 당단백질이 VZV gE, gI, gB, gH, gK, gL, gC, gN, 및 gM으로부터 선택되는, VZV 백신.
  6. 청구항 5에 있어서, 상기 VZV 당단백질이 VZV gE인, VZV 백신.
  7. 청구항 5에 있어서, 상기 VZV 당단백질이 VZV gI인, VZV 백신.
  8. 청구항 6에 있어서, 상기 VZV 당단백질이 변이체 VZV gE 폴리펩타이드인, VZV 백신.
  9. 청구항 8에 있어서, 상기 변이체 VZV gE 폴리펩타이드가 상기 앵커 도메인 (ER 체류 도메인)이 부족한 절단된 폴리펩타이드인, VZV 백신.
  10. 청구항 8에 있어서, 상기 변이체 VZV gE 폴리펩타이드가 상기 카복시 말단 꼬리 도메인이 부족한 절단된 폴리펩타이드인, VZV 백신.
  11. 청구항 9에 있어서, 상기 VZV 항원성 단편이 서열번호: 10의 아미노산 1-561을 포함하는 절단된 VZV gE 폴리펩타이드인, VZV 백신.
  12. 청구항 10에 있어서, 상기 VZV 항원성 단편이 서열번호: 18의 아미노산 1-573을 포함하는 VZV gE 변이체 폴리펩타이드인, VZV 백신.
  13. 청구항 8에 있어서, 상기 변이체 VZV gE 폴리펩타이드가 ER 체류, 세포내이입, 및/또는 상기 골지 또는 트랜스-골지 네트워크에 국재화와 관련된 적어도 1종의 모티프에서 적어도 1종의 돌연변이를 갖는, VZV 백신.
  14. 청구항 13에 있어서, 상기 변이체 VZV gE 폴리펩타이드가 적어도 1종의 인산화된 산성 모티프(들)에서 적어도 1종의 돌연변이를 갖는, VZV 백신.
  15. 청구항 13에 있어서, 상기 변이체 VZV gE 폴리펩타이드가 서열번호: 10에 대하여 Y582G 돌연변이를 갖는, VZV 백신.
  16. 청구항 13에 있어서, 상기 변이체 VZV gE 폴리펩타이드가 서열번호: 10에 대하여 Y569A 돌연변이를 갖는, VZV 백신.
  17. 청구항 13에 있어서, 상기 변이체 VZV gE 폴리펩타이드가 서열번호: 10에 대하여 Y582G 돌연변이 및 Y569A 돌연변이를 갖는, VZV 백신.
  18. 청구항 12에 있어서, 상기 VZV 항원성 단편이 서열번호: 10에 대하여 Y569A 돌연변이를 갖는, VZV 백신.
  19. 청구항 6, 또는 청구항 13 내지 17 중 어느 한 항에 있어서, 상기 변이체 VZV gE 폴리펩타이드가 A-E-A-A-D-A 서열 (서열번호: 58)을 갖는, VZV 백신.
  20. 청구항 6 또는 청구항 13 내지 17 중 어느 한 항에 있어서, 상기 변이체 VZV gE 폴리펩타이드가 상기 C-말단에서 Ig카파 서열을 갖는, VZV 백신.
  21. 청구항 11 또는 12에 있어서, 상기 VZV gE 항원성 단편이 상기 C-말단에서 Ig카파 서열을 갖는, VZV 백신.
  22. 청구항 5에 있어서, 상기 적어도 1종의 RNA 폴리뉴클레오타이드가 VZV gE 및 gI 항원성 폴리펩타이드를 인코딩하는, VZV 백신.
  23. 청구항 6 또는 청구항 8 내지 21 중 어느 한 항에 있어서, 상기 백신이 gI 항원성 폴리펩타이드를 인코딩하는 열린 해독틀을 갖는 적어도 1종의 RNA 폴리뉴클레오타이드를 포함하는, VZV 백신.
  24. 청구항 6 또는 청구항 8 내지 21 중 어느 한 항에 있어서, 상기 백신이 VZV gB, gH, gK, gL, gC, gN, 및 gM으로부터 선택되는 항원성 폴리펩타이드를 인코딩하는 열린 해독틀을 갖는 적어도 1종의 RNA 폴리뉴클레오타이드를 포함하는, VZV 백신.
  25. 청구항 4에 있어서, 적어도 1종의 RNA 폴리뉴클레오타이드가 VZV gE, gI, gB, gH, gK, gL, gC, gN, 및 gM으로부터 선택되는 VZV 항원성 폴리펩타이드를 인코딩하는 열린 해독틀을 갖는, VZV 백신.
  26. 청구항 5 내지 25 중 어느 한 항에 있어서, 살아있는 약독화된 VZV, 전체 불활성화된 VZV, 또는 VZV VLP를 추가로 포함하는, VZV 백신.
  27. 청구항 1 내지 3 중 어느 한 항에 있어서, 상기 적어도 1종의 RNA 폴리뉴클레오타이드가 적어도 1종의 핵산 서열, 핵산 서열의 적어도 1종의 단편, 또는 서열번호: 1-8 37, 39, 41, 60, 62, 64, 66, 68, 70, 72, 74, 76, 78, 80, 82, 84, 86, 88, 또는 90으로부터 선택되는 핵산 서열의 적어도 1종의 에피토프에 의해 인코딩되는, 또는 상기 적어도 1종의 RNA 폴리뉴클레오타이드가 적어도 1종의 핵산 서열, 핵산 서열의 적어도 1종의 단편, 또는 서열번호: 6, 37, 39, 84, 또는 86으로부터 선택되는 핵산 서열의 적어도 1종의 에피토프 서열에 의해 인코딩되는, VZV 백신.
  28. 청구항 1 내지 3 중 어느 한 항에 있어서, 상기 적어도 1종의 RNA 폴리뉴클레오타이드가 서열번호: 92-108 및 123-131로부터 선택되는 서열을 포함하는, VZV 백신.
  29. 청구항 1 내지 3 중 어느 한 항에 있어서, 상기 적어도 1종의 RNA 폴리뉴클레오타이드가 서열번호: 92-108 및 123-131로부터 선택되는 적어도 1종의 에피토프 mRNA 서열 또는 핵산 서열의 적어도 1종의 단편을 포함하는, VZV 백신.
  30. 청구항 6에 있어서, 상기 적어도 1종의 RNA 폴리뉴클레오타이드가 서열번호: 1에 의해 인코딩되는, VZV 백신.
  31. 청구항 7에 있어서, 상기 적어도 1종의 RNA 폴리뉴클레오타이드가 서열번호: 2에 의해 인코딩되는, VZV 백신.
  32. 청구항 11에 있어서, 상기 적어도 1종의 RNA 폴리뉴클레오타이드가 서열번호: 3에 의해 인코딩되는, VZV 백신.
  33. 청구항 12에 있어서, 상기 적어도 1종의 RNA 폴리뉴클레오타이드가 서열번호: 5에 의해 인코딩되는, VZV 백신.
  34. 청구항 18에 있어서, 상기 적어도 1종의 RNA 폴리뉴클레오타이드가 서열번호: 6, 37, 39, 84, 또는 86에 의해 인코딩되는, VZV 백신.
  35. 청구항 19에 있어서, 상기 적어도 1종의 RNA 폴리뉴클레오타이드가 서열번호: 7에 의해 인코딩되는, VZV 백신.
  36. 청구항 19에 있어서, 상기 RNA 폴리뉴클레오타이드가 서열번호: 8에 의해 인코딩되는, VZV 백신.
  37. 청구항 3에 있어서, 상기 적어도 1종의 RNA 폴리뉴클레오타이드가 임의의 서열번호: 10, 14, 26, 30, 42 및 45-55의 상기 아미노산 서열에 적어도 90% 동일성을 갖는 항원성 폴리펩타이드를 인코딩하는, VZV 백신.
  38. 청구항 3에 있어서, 상기 적어도 1종의 RNA 폴리뉴클레오타이드가 임의의 서열번호: 10, 14, 26, 30, 38, 42 및 45-55의 상기 아미노산 서열에 적어도 95% 동일성을 갖는 항원성 폴리펩타이드를 인코딩하는, VZV 백신.
  39. 청구항 3에 있어서, 상기 적어도 1종의 RNA 폴리뉴클레오타이드가 임의의 서열번호: 10, 14, 26, 30, 38, 42 및 45-55의 상기 아미노산 서열에 적어도 96% 동일성을 갖는 항원성 폴리펩타이드를 인코딩하는, VZV 백신.
  40. 청구항 3에 있어서, 상기 적어도 1종의 RNA 폴리뉴클레오타이드가 임의의 서열번호: 10, 14, 26, 30, 38, 42 및 45-55의 상기 아미노산 서열에 적어도 97% 동일성을 갖는 항원성 폴리펩타이드를 인코딩하는, VZV 백신.
  41. 청구항 3에 있어서, 상기 적어도 1종의 RNA 폴리뉴클레오타이드가 임의의 서열번호: 10, 14, 26, 30, 38, 42 및 45-55의 상기 아미노산 서열에 적어도 98% 동일성을 갖는 항원성 폴리펩타이드를 인코딩하는, VZV 백신.
  42. 청구항 3에 있어서, 상기 적어도 1종의 RNA 폴리뉴클레오타이드가 임의의 서열번호: 10, 14, 26, 30, 38, 42 및 45-55의 상기 아미노산 서열에 적어도 99% 동일성을 갖는 항원성 폴리펩타이드를 인코딩하는, VZV 백신.
  43. 청구항 1 내지 42 중 어느 한 항에 있어서, 상기 폴리뉴클레오타이드가 인코딩되는 상기 열린 판독이 코돈-최적화되는, VZV 백신.
  44. 청구항 1 내지 43 중 어느 한 항에 있어서, 상기 백신이 다가인, VZV 백신.
  45. 청구항 1 내지 43 중 어느 한 항에 있어서, 상기 RNA 폴리뉴클레오타이드가 적어도 1종의 화학적 변형을 포함하는, VZV 백신.
  46. 청구항 45에 있어서, 제2 화학적 변형을 추가로 포함하는, VZV 백신.
  47. 청구항 45 또는 청구항 46에 있어서, 상기 화학적 변형이 슈도우리딘, N1-메틸슈도우리딘, N1-에틸슈도우리딘, 2-티오우리딘, 4'-티오우리딘, 5-메틸시토신, 2-티오-1-메틸-1-데아자-슈도우리딘, 2-티오-1-메틸-슈도우리딘, 2-티오-5-아자-우리딘, 2-티오-디하이드로슈도우리딘, 2-티오-디하이드로우리딘, 2-티오-슈도우리딘, 4-메톡시-2-티오-슈도우리딘, 4-메톡시-슈도우리딘, 4-티오-1-메틸-슈도우리딘, 4-티오-슈도우리딘, 5-아자-우리딘, 디하이드로슈도우리딘, 5-메톡시우리딘, 및 2'-O-메틸 우리딘으로 구성되는 군으로부터 선택되는, VZV 백신.
  48. 청구항 45에 있어서, 상기 열린 해독틀내 상기 우라실의 80%가 화학적 변형을 갖는, VZV 백신.
  49. 청구항 48에 있어서, 상기 열린 해독틀내 상기 우라실의 100%가 화학적 변형을 갖는, VZV 백신.
  50. 청구항 45 내지 49 중 어느 한 항에 있어서, 상기 화학적 변형이 상기 우라실의 상기 5-위치에서인, VZV 백신.
  51. 청구항 50에 있어서, 상기 화학적 변형이 N1-메틸슈도우리딘인, VZV 백신.
  52. 청구항 1 내지 51 중 어느 한 항에 있어서, 상기 백신이 양이온성 지질 나노입자 안에서 제형화되는, VZV 백신.
  53. 청구항 52에 있어서, 상기 양이온성 지질 나노입자가 양이온성 지질, PEG-변형된 지질, 스테롤 및 비-양이온성 지질을 포함하는, VZV 백신.
  54. 청구항 53에 있어서, 상기 양이온성 지질이 이온화가능한 양이온성 지질이고 상기 비-양이온성 지질이 중성 지질이고, 상기 스테롤이 콜레스테롤인, VZV 백신.
  55. 청구항 52에 있어서, 상기 양이온성 지질이 2,2-디리놀레일-4-디메틸아미노에틸-[1,3]-디옥솔란 (DLin-KC2-DMA), 디리놀레일-메틸-4-디메틸아미노부티레이트 (DLin-MC3-DMA), 및 디((Z)-논-2-엔-1-일) 9-((4-(디메틸아미노)부타노일)옥시)헵타데칸디오에이트 (L319)로 구성되는 군으로부터 선택되는, VZV 백신.
  56. 청구항 54에 있어서, 상기 양이온성 지질 나노입자가 약 20-60% 양이온성 지질, 약 5-25% 비-양이온성 지질, 약 25-55% 스테롤, 및 약 0.5-15% PEG-변형된 지질의 몰비를 갖는, VZV 백신.
  57. 청구항 52에 있어서, 상기 나노입자가 0.4 미만의 다분산 값을 갖는, VZV 백신.
  58. 청구항 52에 있어서, 상기 나노입자가 중성 pH에서 순 중성 전하를 갖는, VZV 백신.
  59. 청구항 52에 있어서, 상기 나노입자가 50-200nm의 평균 직경을 갖는, VZV 백신.
  60. 청구항 1 내지 59 중 어느 한 항에 있어서, 대상체에서 항원 특이적 면역 반응의 유도 방법에서 사용을 위한 VZV 백신으로서, 상기 방법이 상기 백신을 상기 대상체에 유효량으로 투여하여 항원 특이적 면역 반응을 생산하는 것을 포함하는, VZV 백신.
  61. 대상체에서 항원 특이적 면역 반응의 유도 방법에서 사용을 위하여 약제의 상기 제조에서 청구항 1 내지 59 중 어느 한 항에 따른 VZV 백신의 용도로서, 상기 방법이 상기 백신을 상기 대상체에 유효량으로 투여하여 항원 특이적 면역 반응을 생산하는 것을 포함하는, 용도.
  62. 대상체에 청구항 1 내지 59 중 어느 한 항에 따른 상기 백신을 투여하는 것을 포함하는 VZV 감염의 예방 또는 치료 방법.
  63. 대상체에서 항원-특이적 면역 반응의 유도 방법으로서, 상기 방법이 상기 대상체에서 항원-특이적 면역 반응을 생산하기에 효과적인 양으로 상기 대상체에 청구항 1 내지 59 중 어느 한 항에 따른 상기 백신을 투여하는 것을 포함하는, 방법.
  64. 청구항 63에 있어서, 상기 항원 특이적 면역 반응이 T 세포 반응 또는 B 세포 반응을 포함하는, 방법.
  65. 청구항 63 또는 64에 있어서, 상기 대상체가 단일 용량의 상기 백신 투여되는, 방법.
  66. 청구항 63 또는 64에 있어서, 상기 대상체가 제1 용량 및 제2 (부스터) 용량의 상기 백신 투여되는, 방법.
  67. 청구항 63 내지 66 중 어느 한 항에 있어서, 상기 백신이 상기 대상체에 피내 주사 또는 근육내 주사에 의해 투여되는, 방법.
  68. 청구항 63 내지 67 중 어느 한 항에 있어서, 상기 대상체에서 생산된 항-항원성 폴리펩타이드 항체 역가가 대조군에 비해 적어도 1 log만큼 증가되는, 방법.
  69. 청구항 63 내지 68 중 어느 한 항에 있어서, 상기 대상체에서 생산된 항-항원성 폴리펩타이드 항체 역가가 대조군에 비해 1-3 log만큼 증가되는, 방법.
  70. 청구항 63 내지 69 중 어느 한 항에 있어서, 상기 대상체에서 생산된 상기 항-항원성 폴리펩타이드 항체 역가가 대조군에 비해 적어도 2 배 증가되는, 방법.
  71. 청구항 63 내지 70 중 어느 한 항에 있어서, 상기 대상체에서 생산된 상기 항-항원성 폴리펩타이드 항체 역가가 대조군에 비해 2-10 배 증가되는, 방법.
  72. 청구항 68 내지 71 중 어느 한 항에 있어서, 상기 대조군이 상기 바이러스에 대한 백신 투여되지 않은 대상체에서 생산된 항-항원성 폴리펩타이드 항체 역가인, 방법.
  73. 청구항 68 내지 71 중 어느 한 항에 있어서, 상기 대조군이 상기 바이러스에 대한 살아있는 약독화된 백신 또는 불활성화된 백신 투여된 대상체에서 생산된 항-항원성 폴리펩타이드 항체 역가인, 방법.
  74. 청구항 68 내지 71 중 어느 한 항에 있어서, 상기 대조군이 상기 바이러스에 대한 재조합 단백질 백신 또는 정제된 단백질 백신 투여된 대상체에서 생산된 항-항원성 폴리펩타이드 항체 역가인, 방법.
  75. 청구항 68 내지 71 중 어느 한 항에 있어서, 상기 대조군이 상기 바이러스에 대한 VLP 백신 투여된 대상체에서 생산된 항-항원성 폴리펩타이드 항체 역가인, 방법.
  76. 청구항 63 내지 75 중 어느 한 항에 있어서, 상기 유효량이 상기 바이러스에 대한 재조합 단백질 백신 또는 정제된 단백질 백신의 상기 치료 기준 용량에서 적어도 2-배 감소에 맞먹는 용량이고, 상기 대상체에서 생산된 항-항원성 폴리펩타이드 항체 역가가 상기 바이러스, 각각에 대한 재조합 단백질 백신 또는 정제된 단백질 백신의 상기 치료 기준 용량 투여된 대조군 대상체에서 생산된 항-항원성 폴리펩타이드 항체 역가에 맞먹는, 방법.
  77. 청구항 63 내지 75 중 어느 한 항에 있어서, 상기 유효량이 상기 바이러스에 대한 살아있는 약독화된 백신 또는 불활성화된 백신의 상기 치료 기준 용량에서 적어도 2-배 감소에 맞먹는 용량이고, 상기 대상체에서 생산된 항-항원성 폴리펩타이드 항체 역가가 상기 바이러스, 각각에 대한 살아있는 약독화된 백신 또는 불활성화된 백신의 상기 치료 기준 용량 투여된 대조군 대상체에서 생산된 항-항원성 폴리펩타이드 항체 역가에 맞먹는, 방법.
  78. 청구항 63 내지 75 중 어느 한 항에 있어서, 상기 유효량이 상기 바이러스에 대한 VLP 백신의 상기 치료 기준 용량에서 적어도 2-배 감소에 맞먹는 용량이고, 상기 대상체에서 생산된 항-항원성 폴리펩타이드 항체 역가가 상기 바이러스에 대한 VLP 백신의 상기 치료 기준 용량 투여된 대조군 대상체에서 생산된 항-항원성 폴리펩타이드 항체 역가인, 방법.
  79. 청구항 63 내지 78 중 어느 한 항에 있어서, 상기 유효량이 50 μg-1000 μg의 총 용량인, 방법.
  80. 청구항 79에 있어서, 상기 유효량이 총 2회 상기 대상체에 투여된 25 μg, 100 μg, 400 μg, 또는 500 μg의 용량인, 방법.
  81. 청구항 63 내지 80 중 어느 한 항에 있어서, 상기 바이러스에 대한 상기 백신의 상기 효능이 65% 초과인, 방법.
  82. 청구항 63 내지 81 중 어느 한 항에 있어서, 상기 백신이 최대 2 년 동안 상기 바이러스에 대한 상기 대상체를 면역화시키는, 방법.
  83. 청구항 63 내지 81 중 어느 한 항에 있어서, 상기 백신이 2 년 초과 동안 상기 바이러스에 대한 상기 대상체를 면역화시키는, 방법.
  84. 청구항 63 내지 83 중 어느 한 항에 있어서, 상기 대상체가 약 1살 내지 약 10살의 나이인, 방법.
  85. 청구항 63 내지 84 중 어느 한 항에 있어서, 상기 대상체가 상기 바이러스에 노출되거나, 상기 대상체가 상기 바이러스로 감염되거나, 상기 대상체가 상기 바이러스에 의해 감염의 위험에 처해 있는, 방법.
  86. 청구항 63 내지 85 중 어느 한 항에 있어서, 상기 대상체가 면역저하되는, 방법.
  87. 청구항 1 내지 59 중 어느 한 항에 따른 백신의 적어도 1종의 RNA 폴리뉴클레오타이드를 인코딩하는, 조작된 핵산.
  88. 적어도 1종의 리보핵산 (RNA) 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 VZV 백신으로서, 상기 RNA 폴리뉴클레오타이드가 (i) 5' 말단 캡, (ii) 적어도 1종의 VZV 항원성 폴리펩타이드를 인코딩하는 열린 해독틀, 및 (iii) 3' 폴리A 꼬리를 갖는, 백신.
  89. 청구항 88에 있어서, 상기 적어도 1종의 mRNA 폴리뉴클레오타이드가 서열번호: 6에 의해 확인된 상기 서열을 포함하는 서열에 의해 인코딩되는, 백신.
  90. 청구항 88에 있어서, 상기 적어도 1종의 mRNA 폴리뉴클레오타이드가 서열번호: 37에 의해 확인된 상기 서열을 포함하는 서열에 의해 인코딩되는, 백신.
  91. 청구항 88에 있어서, 상기 적어도 1종의 mRNA 폴리뉴클레오타이드가 서열번호: 39에 의해 확인된 상기 서열을 포함하는 서열에 의해 인코딩되는, 백신.
  92. 청구항 88에 있어서, 상기 적어도 1종의 mRNA 폴리뉴클레오타이드가 서열번호: 84에 의해 확인된 상기 서열을 포함하는 서열에 의해 인코딩되는, 백신.
  93. 청구항 88에 있어서, 상기 적어도 1종의 mRNA 폴리뉴클레오타이드가 서열번호: 86에 의해 확인된 상기 서열을 포함하는 서열에 의해 인코딩되는, 백신.
  94. 청구항 88에 있어서, 상기 적어도 1종의 mRNA 폴리뉴클레오타이드가 서열번호: 128에 의해 확인된 서열을 포함하는, 백신.
  95. 청구항 88에 있어서, 상기 적어도 1종의 mRNA 폴리뉴클레오타이드가 서열번호: 99 또는 133에 의해 확인된 서열을 포함하는, 백신.
  96. 청구항 88에 있어서, 상기 적어도 1종의 mRNA 폴리뉴클레오타이드가 서열번호: 107 또는 134에 의해 확인된 서열을 포함하는, 백신.
  97. 청구항 88에 있어서, 상기 적어도 1종의 VZV 항원성 폴리펩타이드가 서열번호: 38에 의해 확인된 서열을 포함하는, 백신.
  98. 청구항 88 내지 97 중 어느 한 항에 있어서, 상기 5' 말단 캡이 7mG(5')ppp(5')N1mpNp이거나 상기를 포함하는, 백신.
  99. 청구항 88 내지 98 중 어느 한 항에 있어서, 상기 열린 해독틀내 상기 우라실의 100%가 변형되어 상기 우라실의 상기 5-위치에서 N1-메틸 슈도우리딘을 포함하는, 백신.
  100. 청구항 88 내지 99 중 어느 한 항에 있어서, 상기 백신이 지질 나노입자에서 제형화되는, 백신.
  101. 청구항 100에 있어서, 상기 백신이 트리나트륨 시트레이트 버퍼, 수크로오스 및 물을 추가로 포함하는, 백신.
  102. (i) 5' 말단 캡, (ii) VZV 항원성 폴리펩타이드를 인코딩하는 열린 해독틀, 및 (iii) 3' 폴리A 꼬리를 갖는 서열번호: 99에 의해 확인된 핵산 서열을 포함하는 적어도 1종의 메신저 리보핵산 (mRNA) 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 VZV 백신으로서, 상기 5' 말단 캡이 7mG(5')ppp(5')NlmpNp인, 백신.
  103. 청구항 102에 있어서, 서열번호: 99에 의해 확인된 상기 서열의 상기 우라실 뉴클레오타이드가 변형되어 상기 우라실 뉴클레오타이드의 상기 5-위치에서 N1-메틸 슈도우리딘을 포함하는, VZV 백신.
  104. (i) 5' 말단 캡, (ii) VZV 항원성 폴리펩타이드를 인코딩하는 열린 해독틀, 및 (iii) 3' 폴리A 꼬리를 갖는 서열번호: 133에 의해 확인된 핵산 서열을 포함하는 적어도 1종의 메신저 리보핵산 (mRNA) 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 VZV 백신으로서, 상기 5' 말단 캡이 7mG(5')ppp(5')NlmpNp인, 백신.
  105. 청구항 104에 있어서, 서열번호: 133에 의해 확인된 상기 서열의 상기 우라실 뉴클레오타이드가 변형되어 상기 우라실 뉴클레오타이드의 상기 5-위치에서 N1-메틸 슈도우리딘을 포함하는, VZV 백신.
  106. (i) 5' 말단 캡, (ii) VZV 항원성 폴리펩타이드를 인코딩하는 열린 해독틀, 및 (iii) 3' 폴리A 꼬리를 갖는 서열번호: 107에 의해 확인된 핵산 서열을 포함하는 적어도 1종의 메신저 리보핵산 (mRNA) 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 VZV 백신으로서, 상기 5' 말단 캡이 7mG(5')ppp(5')NlmpNp인, 백신.
  107. 청구항 106에 있어서, 서열번호: 107에 의해 확인된 상기 서열의 상기 우라실 뉴클레오타이드가 변형되어 상기 우라실 뉴클레오타이드의 상기 5-위치에서 N1-메틸 슈도우리딘을 포함하는, VZV 백신.
  108. (i) 5' 말단 캡, (ii) VZV 항원성 폴리펩타이드를 인코딩하는 열린 해독틀, 및 (iii) 3' 폴리A 꼬리를 갖는 서열번호: 134에 의해 확인된 핵산 서열을 포함하는 적어도 1종의 메신저 리보핵산 (mRNA) 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 VZV 백신으로서 상기 5' 말단 캡이 7mG(5')ppp(5')NlmpNp인, 백신.
  109. 청구항 108에 있어서, 서열번호: 134에 의해 확인된 상기 서열의 상기 우라실 뉴클레오타이드가 변형되어 상기 우라실 뉴클레오타이드의 상기 5-위치에서 N1-메틸 슈도우리딘을 포함하는, VZV 백신.
  110. 수두대상포진 바이러스 (VZV) 항원을 인코딩하는 mRNA의 유효 용량을 포함하는 대상체의 백신접종에서 사용을 위한 약제학적 조성물로서, 상기 유효 용량이 투여 후 1-72 시간에 상기 대상체의 혈청에서 측정된 경우 항원의 검출가능한 수준을 생산하는데 충분한, 조성물.
  111. 청구항 110에 있어서, 상기 항원의 상기 컷오프 지수가 1-2인, 조성물.
  112. 수두대상포진 바이러스 (VZV) 항원을 인코딩하는 mRNA의 유효 용량을 포함하는 대상체의 백신접종에서 사용을 위한 약제학적 조성물로서,
    상기 유효 용량이 투여 후 1-72 시간에 상기 대상체의 혈청에서 측정된 경우 상기 항원에 대한 항체 중화에 의해 생산된 1,000-10,000 중성화 역가를 생산하는데 충분한, 조성물.
KR1020187014337A 2015-10-22 2016-10-21 수두 대상포진 바이러스 (vzv)를 위한 핵산 백신 KR20180094859A (ko)

Applications Claiming Priority (9)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201562245031P 2015-10-22 2015-10-22
US201562245234P 2015-10-22 2015-10-22
US62/245,031 2015-10-22
US62/245,234 2015-10-22
US201562247697P 2015-10-28 2015-10-28
US62/247,697 2015-10-28
US201662335348P 2016-05-12 2016-05-12
US62/335,348 2016-05-12
PCT/US2016/058297 WO2017070601A1 (en) 2015-10-22 2016-10-21 Nucleic acid vaccines for varicella zoster virus (vzv)

Publications (1)

Publication Number Publication Date
KR20180094859A true KR20180094859A (ko) 2018-08-24

Family

ID=58558195

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
KR1020187014337A KR20180094859A (ko) 2015-10-22 2016-10-21 수두 대상포진 바이러스 (vzv)를 위한 핵산 백신

Country Status (20)

Country Link
US (3) US11643441B1 (ko)
EP (1) EP3364980A4 (ko)
JP (3) JP6925688B2 (ko)
KR (1) KR20180094859A (ko)
CN (2) CN117731769A (ko)
AU (2) AU2016342371B2 (ko)
BR (1) BR112018008051A2 (ko)
CA (1) CA3002912A1 (ko)
CL (1) CL2018001051A1 (ko)
CO (1) CO2018005265A2 (ko)
EA (1) EA201891001A1 (ko)
IL (1) IL258827A (ko)
MA (1) MA46080A (ko)
MX (1) MX2018004915A (ko)
PE (1) PE20181529A1 (ko)
PH (1) PH12018500858A1 (ko)
SG (1) SG11201803360UA (ko)
TN (1) TN2018000152A1 (ko)
TW (1) TW201729838A (ko)
WO (1) WO2017070601A1 (ko)

Families Citing this family (66)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US9464124B2 (en) 2011-09-12 2016-10-11 Moderna Therapeutics, Inc. Engineered nucleic acids and methods of use thereof
EP3981437A1 (en) 2014-04-23 2022-04-13 ModernaTX, Inc. Nucleic acid vaccines
ES2937963T3 (es) 2015-07-21 2023-04-03 Modernatx Inc Vacunas de enfermedad infecciosa
US11364292B2 (en) 2015-07-21 2022-06-21 Modernatx, Inc. CHIKV RNA vaccines
WO2017031232A1 (en) 2015-08-17 2017-02-23 Modernatx, Inc. Methods for preparing particles and related compositions
SI3718565T1 (sl) 2015-10-22 2022-08-31 Modernatx, Inc. Cepiva za respiratorni virus
AU2016342045A1 (en) 2015-10-22 2018-06-07 Modernatx, Inc. Human cytomegalovirus vaccine
EP3364950A4 (en) 2015-10-22 2019-10-23 ModernaTX, Inc. VACCINES AGAINST TROPICAL DISEASES
EA201891001A1 (ru) 2015-10-22 2018-11-30 МОДЕРНАТиЭкс, ИНК. Вакцины на основе нуклеиновых кислот против вируса ветряной оспы (vzv)
EP3364982A4 (en) 2015-10-22 2019-04-17 ModernaTX, Inc. VACCINES AGAINST SEXUALLY TRANSMITTED DISEASES
WO2017099823A1 (en) 2015-12-10 2017-06-15 Modernatx, Inc. Compositions and methods for delivery of therapeutic agents
US10465190B1 (en) 2015-12-23 2019-11-05 Modernatx, Inc. In vitro transcription methods and constructs
WO2017201340A2 (en) 2016-05-18 2017-11-23 Modernatx, Inc. Polynucleotides encoding relaxin
MX2019002904A (es) 2016-09-14 2019-09-26 Modernatx Inc Composiciones de arn de alta pureza y métodos para su preparación.
JP6980780B2 (ja) 2016-10-21 2021-12-15 モデルナティーエックス, インコーポレイテッド ヒトサイトメガロウイルスワクチン
EP3538146A4 (en) 2016-11-11 2020-07-15 ModernaTX, Inc. INFLUENZA VACCINE
EP3551193A4 (en) 2016-12-08 2020-08-19 Modernatx, Inc. NUCLEIC ACID VACCINES AGAINST RESPIRATORY VIRUSES
US11384352B2 (en) 2016-12-13 2022-07-12 Modernatx, Inc. RNA affinity purification
MA47515A (fr) 2017-02-16 2019-12-25 Modernatx Inc Compositions immunogènes très puissantes
EP3595713A4 (en) 2017-03-15 2021-01-13 ModernaTX, Inc. RESPIRATORY SYNCYTIAL VIRUS VACCINE
US11752206B2 (en) 2017-03-15 2023-09-12 Modernatx, Inc. Herpes simplex virus vaccine
WO2018170270A1 (en) * 2017-03-15 2018-09-20 Modernatx, Inc. Varicella zoster virus (vzv) vaccine
MA52262A (fr) 2017-03-15 2020-02-19 Modernatx Inc Vaccin à large spectre contre le virus de la grippe
US20200030432A1 (en) 2017-03-17 2020-01-30 Modernatx, Inc. Zoonotic disease rna vaccines
EP3607074A4 (en) 2017-04-05 2021-07-07 Modernatx, Inc. REDUCTION OR ELIMINATION OF IMMUNE RESPONSES TO NON-INTRAVENOUS THERAPEUTIC PROTEINS, FOR EXAMPLE SUBCUTANEOUSLY
US20210187098A1 (en) * 2017-04-28 2021-06-24 Glaxosmithkline Biologicals Sa Vaccination
US11786607B2 (en) 2017-06-15 2023-10-17 Modernatx, Inc. RNA formulations
US11866696B2 (en) 2017-08-18 2024-01-09 Modernatx, Inc. Analytical HPLC methods
CN111212905A (zh) 2017-08-18 2020-05-29 摩登纳特斯有限公司 Rna聚合酶变体
WO2019036685A1 (en) 2017-08-18 2019-02-21 Modernatx, Inc. METHODS FOR HPLC ANALYSIS
WO2019046809A1 (en) 2017-08-31 2019-03-07 Modernatx, Inc. METHODS OF MANUFACTURING LIPID NANOPARTICLES
MA50253A (fr) 2017-09-14 2020-07-22 Modernatx Inc Vaccins à arn contre le virus zika
EP3713601A4 (en) * 2017-11-21 2022-03-09 Modernatx, Inc. VACCINES AGAINST EPSTEIN-BARR VIRUS
WO2019148101A1 (en) 2018-01-29 2019-08-01 Modernatx, Inc. Rsv rna vaccines
CN109602901B (zh) * 2019-01-08 2022-05-27 成都迈科康生物科技有限公司 一种带状疱疹病毒疫苗及其制备方法和应用
US11351242B1 (en) 2019-02-12 2022-06-07 Modernatx, Inc. HMPV/hPIV3 mRNA vaccine composition
CN113795579A (zh) 2019-02-20 2021-12-14 摩登纳特斯有限公司 用于共转录加帽的rna聚合酶变体
US11851694B1 (en) 2019-02-20 2023-12-26 Modernatx, Inc. High fidelity in vitro transcription
CN112142829B (zh) * 2019-06-28 2022-02-22 怡道生物科技(苏州)有限公司 水痘-带状疱疹病毒gE蛋白突变体及其表达方法
CN112138153B (zh) * 2019-06-28 2022-08-23 怡道生物科技(苏州)有限公司 一种重组带状疱疹疫苗组合物及其用途
CN112870344B (zh) * 2019-11-29 2022-07-19 北京绿竹生物技术股份有限公司 一种重组水痘带状疱疹病毒疫苗
CN113045670B (zh) * 2019-12-27 2022-11-01 华南农业大学 一种可溶性鸡α干扰素融合蛋白及其生产方法与应用
CN113521268A (zh) 2020-04-22 2021-10-22 生物技术Rna制药有限公司 冠状病毒疫苗
CN111840538A (zh) * 2020-05-29 2020-10-30 中山大学 一种水痘-带状疱疹病毒亚单位纳米疫苗的制备方法和应用
CN115803333A (zh) 2020-07-02 2023-03-14 生命技术公司 三核苷酸帽类似物、其制备和用途
US11406703B2 (en) 2020-08-25 2022-08-09 Modernatx, Inc. Human cytomegalovirus vaccine
CN112386688B (zh) * 2021-01-20 2021-09-24 广东新征程生命科学有限公司 一种用于病毒治疗的含有免疫细胞的药物组合物
CN113144186B (zh) * 2021-02-09 2023-09-29 中国医学科学院医学生物学研究所 一种水痘-带状疱疹疫苗组合物及其制备方法和应用
US11524023B2 (en) 2021-02-19 2022-12-13 Modernatx, Inc. Lipid nanoparticle compositions and methods of formulating the same
CN113372453B (zh) * 2021-06-11 2022-03-04 湖南兀邦生物科技有限公司 一种融合蛋白及猪流行性腹泻病毒s1蛋白重组亚单位疫苗
IL309505A (en) 2021-09-03 2024-02-01 CureVac SE Lipid nanoparticles for nucleic acid delivery
WO2023056912A1 (en) * 2021-10-08 2023-04-13 Suzhou Abogen Biosciences Co., Ltd. Nucleic acid vaccines for vzv
TW202327646A (zh) * 2021-10-15 2023-07-16 美商輝瑞大藥廠 Rna分子
WO2023073228A1 (en) 2021-10-29 2023-05-04 CureVac SE Improved circular rna for expressing therapeutic proteins
CN114081943B (zh) * 2021-11-08 2024-04-02 中国医学科学院医学生物学研究所 一种水痘-带状疱疹mRNA疫苗组合物及其制备方法和应用
CN114113594A (zh) * 2021-11-23 2022-03-01 上海凯创生物技术有限公司 一种抗原稀释液、以及免疫缺陷病毒的检测试剂盒
AU2022397292A1 (en) 2021-11-24 2024-05-30 Flagship Pioneering Innovations Vi, Llc Varicella-zoster virus immunogen compositions and their uses
WO2023145755A1 (ja) * 2022-01-25 2023-08-03 公益財団法人川崎市産業振興財団 経皮投与用のrnaを含む組成物および当該組成物の投与方法
WO2023144330A1 (en) 2022-01-28 2023-08-03 CureVac SE Nucleic acid encoded transcription factor inhibitors
WO2023179588A1 (zh) * 2022-03-21 2023-09-28 厦门大学 截短的水痘-带状疱疹病毒囊膜糖蛋白gE
WO2023227608A1 (en) 2022-05-25 2023-11-30 Glaxosmithkline Biologicals Sa Nucleic acid based vaccine encoding an escherichia coli fimh antigenic polypeptide
US11878055B1 (en) 2022-06-26 2024-01-23 BioNTech SE Coronavirus vaccine
CN117660494A (zh) * 2022-09-07 2024-03-08 远大赛威信生命科学(南京)有限公司 用于表达水痘-带状疱疹病毒抗原蛋白的mRNA及其用途
US20240156949A1 (en) 2022-10-28 2024-05-16 Glaxosmithkline Biologicals Sa Nucleic Acid Based Vaccine
CN116023510B (zh) * 2022-12-01 2023-09-22 北京吉诺卫生物科技有限公司 双佐剂重组带状疱疹疫苗
CN116355917B (zh) * 2023-02-15 2023-12-01 上海臻上医药科技有限公司 一种水痘-带状疱疹病毒mRNA疫苗及其应用

Family Cites Families (257)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6867195B1 (en) 1989-03-21 2005-03-15 Vical Incorporated Lipid-mediated polynucleotide administration to reduce likelihood of subject's becoming infected
DK0465529T3 (da) 1989-03-21 1998-10-05 Vical Inc Ekspression af exogene polynukleotidsekvenser i et hvirveldyr
FR2676072B1 (fr) 1991-05-03 1994-11-18 Transgene Sa Vecteur de delivrance d'arn.
US5795587A (en) 1995-01-23 1998-08-18 University Of Pittsburgh Stable lipid-comprising drug delivery complexes and methods for their production
US6214966B1 (en) 1996-09-26 2001-04-10 Shearwater Corporation Soluble, degradable poly(ethylene glycol) derivatives for controllable release of bound molecules into solution
EP0855184A1 (en) 1997-01-23 1998-07-29 Grayson B. Dr. Lipford Pharmaceutical composition comprising a polynucleotide and an antigen especially for vaccination
US6251665B1 (en) 1997-02-07 2001-06-26 Cem Cezayirli Directed maturation of stem cells and production of programmable antigen presenting dentritic cells therefrom
US6261281B1 (en) 1997-04-03 2001-07-17 Electrofect As Method for genetic immunization and introduction of molecules into skeletal muscle and immune cells
EP1021548A1 (en) 1997-10-07 2000-07-26 University Of Maryland Biotechnology Institute Method for introducing and expressing rna in animal cells
US6432925B1 (en) 1998-04-16 2002-08-13 John Wayne Cancer Institute RNA cancer vaccine and methods for its use
AU2875700A (en) 1999-02-26 2000-09-14 Chiron Corporation Microemulsions with adsorbed macromoelecules and microparticles
US6514948B1 (en) 1999-07-02 2003-02-04 The Regents Of The University Of California Method for enhancing an immune response
EP1619254B1 (en) 1999-09-09 2010-12-22 CureVac GmbH Transfer of mRNA using polycationic compounds
WO2001021810A1 (en) 1999-09-17 2001-03-29 Aventis Pasteur Limited Chlamydia antigens and corresponding dna fragments and uses thereof
US7060291B1 (en) 1999-11-24 2006-06-13 Transave, Inc. Modular targeted liposomal delivery system
PL365385A1 (en) 2000-07-21 2005-01-10 Glaxo Group Limited Codon-optimized papilloma virus sequences
US6998115B2 (en) 2000-10-10 2006-02-14 Massachusetts Institute Of Technology Biodegradable poly(β-amino esters) and uses thereof
US7708915B2 (en) 2004-05-06 2010-05-04 Castor Trevor P Polymer microspheres/nanospheres and encapsulating therapeutic proteins therein
WO2002085434A1 (de) 2001-04-21 2002-10-31 Curevac Gmbh Injektionsgerät für rna applikation
CA2830887C (en) 2001-06-05 2016-11-29 Curevac Gmbh Pharmaceutical composition containing a stabilised mrna optimised for translation in its coding regions
AU2002319668A1 (en) 2001-07-27 2003-02-17 President And Fellows Of Harvard College Laminar mixing apparatus and methods
AU2002332020A1 (en) 2001-10-03 2003-04-14 The Johns Hopkins University Compositions for oral gene therapy and methods of using same
DE10162480A1 (de) 2001-12-19 2003-08-07 Ingmar Hoerr Die Applikation von mRNA für den Einsatz als Therapeutikum gegen Tumorerkrankungen
NZ573064A (en) 2002-04-04 2011-02-25 Coley Pharm Gmbh Immunostimulatory G,U-containing oligoribonucleotides
WO2003092665A2 (en) 2002-05-02 2003-11-13 Massachusetts Eye And Ear Infirmary Ocular drug delivery systems and use thereof
DE10229872A1 (de) 2002-07-03 2004-01-29 Curevac Gmbh Immunstimulation durch chemisch modifizierte RNA
US7410795B2 (en) 2002-12-23 2008-08-12 Vical Incorporated Codon-optimized polynucleotide-based vaccines against human cytomegalovirus infection
EP1651666B1 (en) 2003-07-11 2009-05-27 Alphavax, Inc. Alphavirus-based cytomegalovirus vaccines
DE10347710B4 (de) 2003-10-14 2006-03-30 Johannes-Gutenberg-Universität Mainz Rekombinante Impfstoffe und deren Verwendung
US8957034B2 (en) 2004-01-28 2015-02-17 Johns Hopkins University Drugs and gene carrier particles that rapidly move through mucous barriers
NZ550320A (en) 2004-04-15 2010-02-26 Chiasma Inc Compositions capable of facilitating penetration across a biological barrier
EP1856179B1 (en) 2004-12-10 2013-05-15 Kala Pharmaceuticals, Inc. Functionalized poly (ether-anhydride) block copolymers
GB0504436D0 (en) * 2005-03-03 2005-04-06 Glaxosmithkline Biolog Sa Vaccine
KR101288729B1 (ko) 2005-04-01 2013-07-23 인터자인 테크놀로지스, 인코포레이티드 약물 전달용 중합체성 마이셀
US8273339B2 (en) 2005-04-12 2012-09-25 Nektar Therapeutics Polymer-based compositions and conjugates of antimicrobial agents
EP1896082B1 (en) 2005-06-16 2012-12-26 Nektar Therapeutics Conjugates having a degradable linkage and polymeric reagents useful in preparing such conjugates
SI3611266T1 (sl) 2005-08-23 2023-02-28 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Modificirani nukleozidi, ki vsebujejo RNA, in postopki za njihovo uporabo
DE102006007433A1 (de) 2006-02-17 2007-08-23 Curevac Gmbh Adjuvanz in Form einer Lipid-modifizierten Nukleinsäure
US8309680B2 (en) 2006-02-21 2012-11-13 Nektar Therapeutics Segmented degradable polymers and conjugates made therefrom
WO2007133807A2 (en) 2006-05-15 2007-11-22 Massachusetts Institute Of Technology Polymers for functional particles
WO2008014979A2 (en) 2006-07-31 2008-02-07 Curevac Gmbh NUCLEIC ACID OF FORMULA (I): GIXmGn, OR (II): CIXmCn, IN PARTICULAR AS AN IMMUNE-STIMULATING AGENT/ADJUVANT
JP2010502713A (ja) 2006-09-08 2010-01-28 ザ・ジョンズ・ホプキンス・ユニバーシティー 粘液を通る輸送を増強するための組成物および方法
DE102006051516A1 (de) 2006-10-31 2008-05-08 Curevac Gmbh (Basen-)modifizierte RNA zur Expressionssteigerung eines Proteins
EP2120859B1 (en) 2006-12-21 2013-11-20 Stryker Corporation Sustained-release formulations comprising bmp-7 crystals
DE102007001370A1 (de) 2007-01-09 2008-07-10 Curevac Gmbh RNA-kodierte Antikörper
PT2136788E (pt) 2007-03-30 2012-02-03 Bind Biosciences Inc Direccionamento a células de cancro utilizando nanopartículas
US20100330122A1 (en) * 2007-07-19 2010-12-30 Gale Smith VARICELLA ZOSTER VIRUS VIRUS-LIKE PARTICLES (VLPs) AND ANTIGENS
WO2009030254A1 (en) 2007-09-04 2009-03-12 Curevac Gmbh Complexes of rna and cationic peptides for transfection and for immunostimulation
MX2010003642A (es) 2007-10-12 2010-08-09 Massachusetts Inst Technology Nanotecnologia de vacuna.
CA2721333C (en) 2008-04-15 2020-12-01 Protiva Biotherapeutics, Inc. Novel lipid formulations for nucleic acid delivery
WO2010005721A2 (en) 2008-06-16 2010-01-14 Bind Biosciences, Inc. Drug loaded polymeric nanoparticles and methods of making and using same
WO2010005726A2 (en) 2008-06-16 2010-01-14 Bind Biosciences Inc. Therapeutic polymeric nanoparticles with mtor inhibitors and methods of making and using same
ES2654533T3 (es) 2008-06-16 2018-02-14 Pfizer Inc. Procedimientos para la preparación de copolímeros dibloque funcionalizados con un agente de direccionamiento para su uso en la fabricación de nanopartículas terapéuticas
JP2012501966A (ja) 2008-06-16 2012-01-26 バインド バイオサイエンシズ インコーポレイテッド ビンカアルカロイド含有治療用ポリマーナノ粒子並びにその製造方法及び使用方法
US20100087337A1 (en) 2008-09-10 2010-04-08 Bind Biosciences, Inc. High Throughput Fabrication of Nanoparticles
WO2010037408A1 (en) 2008-09-30 2010-04-08 Curevac Gmbh Composition comprising a complexed (m)rna and a naked mrna for providing or enhancing an immunostimulatory response in a mammal and uses thereof
AU2009303345B2 (en) 2008-10-09 2015-08-20 Arbutus Biopharma Corporation Improved amino lipids and methods for the delivery of nucleic acids
KR102042721B1 (ko) 2008-11-10 2019-11-11 알닐람 파마슈티칼스 인코포레이티드 치료제 운반용 신규 지질 및 조성물
US8734853B2 (en) 2008-11-17 2014-05-27 University Of North Texas Health Science Center At Fort Worth HDL particles for delivery of nucleic acids
US20100216804A1 (en) 2008-12-15 2010-08-26 Zale Stephen E Long Circulating Nanoparticles for Sustained Release of Therapeutic Agents
WO2010088927A1 (en) 2009-02-09 2010-08-12 Curevac Gmbh Use of pei for the improvement of endosomal release and expression of transfected nucleic acids, complexed with cationic or polycationic compounds
JP5622254B2 (ja) 2009-03-31 2014-11-12 国立大学法人東京大学 二本鎖リボ核酸ポリイオンコンプレックス
BRPI1016133A2 (pt) 2009-04-01 2016-04-19 Univ Miami vacina, método para dispensar um antígeno a um mamífero, composição, métodos para dispensar sirna dentro de células que apresentam antígeno profissionais, para inibir a proliferação de células de tumor, e para dispensar um ácido nucleico a uma célula.
WO2010127159A2 (en) 2009-04-30 2010-11-04 Intezyne Technologies, Incorporated Polymeric micelles for polynucleotide encapsulation
US8569256B2 (en) 2009-07-01 2013-10-29 Protiva Biotherapeutics, Inc. Cationic lipids and methods for the delivery of therapeutic agents
WO2011005799A2 (en) 2009-07-06 2011-01-13 Novartis Ag Self replicating rna molecules and uses thereof
JP5823405B2 (ja) 2009-11-04 2015-11-25 ザ ユニバーシティ オブ ブリティッシュ コロンビア 核酸含有脂質粒子および関連方法
WO2011069529A1 (en) 2009-12-09 2011-06-16 Curevac Gmbh Mannose-containing solution for lyophilization, transfection and/or injection of nucleic acids
EP2512487A4 (en) 2009-12-15 2013-08-07 THERAPEUTIC POLYMERNANOPARTICLES WITH CORTICOSTEROIDS AND METHOD FOR THE PRODUCTION AND USE THEREOF
JP5965844B2 (ja) 2009-12-15 2016-08-10 バインド セラピューティックス インコーポレイテッド 高いガラス転移温度または高分子量のコポリマーを有する治療用ポリマーナノ粒子組成物
EA201290498A1 (ru) 2009-12-15 2013-01-30 Байнд Байосайенсиз, Инк. Терапевтические полимерные наночастицы, включающие эпотилон, и способы их получения и применения
JP5988435B2 (ja) 2010-01-24 2016-09-07 ノバルティス アーゲー 放射線照射された生分解性微粒子
US8207290B2 (en) 2010-03-26 2012-06-26 Cerulean Pharma Inc. Methods and systems for generating nanoparticles
US20110262491A1 (en) 2010-04-12 2011-10-27 Selecta Biosciences, Inc. Emulsions and methods of making nanocarriers
EP2387999A1 (en) 2010-05-21 2011-11-23 CureVac GmbH Histidine-containing solution for transfection and/or injection of nucleic acids and uses thereof
WO2011149733A2 (en) 2010-05-24 2011-12-01 Merck Sharp & Dohme Corp. Novel amino alcohol cationic lipids for oligonucleotide delivery
US20130196948A1 (en) 2010-06-25 2013-08-01 Massachusetts Insitute Of Technology Polymers for biomaterials and therapeutics
WO2012006376A2 (en) 2010-07-06 2012-01-12 Novartis Ag Virion-like delivery particles for self-replicating rna molecules
JP5940064B2 (ja) * 2010-07-06 2016-06-29 ノバルティス アーゲー 低用量のrnaを用いた大型哺乳動物の免疫化
MX2013000164A (es) 2010-07-06 2013-03-05 Novartis Ag Liposomas con lipidos que tienen valor de pka ventajoso para suministro de arn.
US9192661B2 (en) 2010-07-06 2015-11-24 Novartis Ag Delivery of self-replicating RNA using biodegradable polymer particles
JP6025721B2 (ja) 2010-07-06 2016-11-16 ノバルティス アーゲー カチオン性水中油型エマルジョン
CA2801523C (en) 2010-07-30 2021-08-03 Curevac Gmbh Complexation of nucleic acids with disulfide-crosslinked cationic components for transfection and immunostimulation
US8822663B2 (en) 2010-08-06 2014-09-02 Moderna Therapeutics, Inc. Engineered nucleic acids and methods of use thereof
WO2012019630A1 (en) 2010-08-13 2012-02-16 Curevac Gmbh Nucleic acid comprising or coding for a histone stem-loop and a poly(a) sequence or a polyadenylation signal for increasing the expression of an encoded protein
WO2012024621A2 (en) * 2010-08-20 2012-02-23 Selecta Biosciences, Inc. Synthetic nanocarrier vaccines comprising peptides obtained or derived from human influenza a virus hemagglutinin
RS63984B1 (sr) 2010-08-31 2023-03-31 Glaxosmithkline Biologicals Sa Mali lipozomi za isporuku rnk koja kodira imunogen
HRP20220695T1 (hr) 2010-08-31 2022-07-08 Glaxosmithkline Biologicals Sa Pegilirani liposomi za isporuku rnk kodirane za imunogen
BR112013004865A2 (pt) 2010-08-31 2016-06-07 Novartis Ag lípidos adequados para entrega lipossomal de codificadores de proteínas rna
WO2012039979A2 (en) 2010-09-10 2012-03-29 The Johns Hopkins University Rapid diffusion of large polymeric nanoparticles in the mammalian brain
CA3162352A1 (en) 2010-10-01 2012-04-05 Modernatx, Inc. Modified nucleosides, nucleotides, and nucleic acids, and uses thereof
KR102162111B1 (ko) * 2010-10-11 2020-10-07 노파르티스 아게 항원 전달 플랫폼
JP2013543844A (ja) 2010-10-22 2013-12-09 バインド セラピューティックス インコーポレイテッド 高分子コポリマーを含む治療用ナノ粒子
WO2012061703A1 (en) 2010-11-05 2012-05-10 The Johns Hopkins University Compositions and methods relating to reduced mucoadhesion
WO2012075040A2 (en) 2010-11-30 2012-06-07 Shire Human Genetic Therapies, Inc. mRNA FOR USE IN TREATMENT OF HUMAN GENETIC DISEASES
WO2012089225A1 (en) 2010-12-29 2012-07-05 Curevac Gmbh Combination of vaccination and inhibition of mhc class i restricted antigen presentation
WO2012099805A2 (en) 2011-01-19 2012-07-26 Ocean Nanotech, Llc Nanoparticle based immunological stimulation
AU2012212264B2 (en) 2011-01-31 2016-01-28 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Nucleic acid molecules encoding novel herpes antigens, vaccine comprising the same, and methods of use thereof
US20140066363A1 (en) 2011-02-07 2014-03-06 Arun K. Bhunia Carbohydrate nanoparticles for prolonged efficacy of antimicrobial peptide
WO2012116715A1 (en) 2011-03-02 2012-09-07 Curevac Gmbh Vaccination in newborns and infants
WO2012113413A1 (en) 2011-02-21 2012-08-30 Curevac Gmbh Vaccine composition comprising complexed immunostimulatory nucleic acids and antigens packaged with disulfide-linked polyethyleneglycol/peptide conjugates
WO2012116714A1 (en) 2011-03-02 2012-09-07 Curevac Gmbh Vaccination in elderly patients
AU2012236099A1 (en) 2011-03-31 2013-10-03 Moderna Therapeutics, Inc. Delivery and formulation of engineered nucleic acids
AU2012237260A1 (en) 2011-03-31 2013-11-14 Ingell Technologies Holding B.V. Biodegradable compositions suitable for controlled release
CA2831471C (en) 2011-03-31 2020-02-25 Ingell Technologies Holding B.V. Biodegradable compositions suitable for controlled release
US8691750B2 (en) 2011-05-17 2014-04-08 Axolabs Gmbh Lipids and compositions for intracellular delivery of biologically active compounds
WO2012158736A1 (en) 2011-05-17 2012-11-22 modeRNA Therapeutics Engineered nucleic acids and methods of use thereof for non-human vertebrates
US20140308363A1 (en) 2011-05-31 2014-10-16 Bind Therapeutics, Inc. Drug loaded polymeric nanoparticles and methods of making and using same
ES2685333T3 (es) 2011-06-02 2018-10-08 The Regents Of The University Of California Nanopartículas encapsuladas en membrana y método de utilización
RU2014104090A (ru) * 2011-07-06 2015-08-20 Новартис Аг Липосомы с эффективным соотношением n:p для доставки молекул phk
EP2729165B1 (en) 2011-07-06 2017-11-08 GlaxoSmithKline Biologicals SA Immunogenic combination compositions and uses thereof
WO2013006837A1 (en) * 2011-07-06 2013-01-10 Novartis Ag Cationic oil-in-water emulsions
JP2014520807A (ja) 2011-07-06 2014-08-25 ノバルティス アーゲー 免疫原性組成物およびその使用
ES2670944T3 (es) 2011-07-21 2018-06-04 Croda International Plc Copolímeros de bloques de poliéter-poliamida ramificados y métodos de preparación y uso de los mismos
US8932572B2 (en) 2011-08-26 2015-01-13 Arrowhead Madison Inc. Poly(vinyl ester) polymers for in vivo nucleic acid delivery
KR20140067070A (ko) 2011-08-31 2014-06-03 말린크로트 엘엘씨 H-포스포네이트에 의한 나노입자 peg 개질
CA2847283C (en) 2011-09-02 2023-03-14 Novartis Ag Organic compositions to treat hsf1-related diseases
EP3384938A1 (en) 2011-09-12 2018-10-10 Moderna Therapeutics, Inc. Engineered nucleic acids and methods of use thereof
US9464124B2 (en) 2011-09-12 2016-10-11 Moderna Therapeutics, Inc. Engineered nucleic acids and methods of use thereof
EP2747761A1 (en) 2011-09-22 2014-07-02 Bind Therapeutics, Inc. Methods of treating cancers with therapeutic nanoparticles
US9375388B2 (en) 2011-09-23 2016-06-28 Indian Institute Of Technology, Bombay Nanoparticle based cosmetic composition
EP2768530A1 (en) * 2011-10-11 2014-08-27 Novartis AG Recombinant self-replicating polycistronic rna molecules
AU2012323937A1 (en) 2011-10-14 2014-06-05 Stc.Unm Porous nanoparticle-supported lipid bilayers (protocells) for targeted delivery including transdermal delivery of cargo and methods thereof
PL3597644T3 (pl) 2011-10-18 2022-01-17 Dicerna Pharmaceuticals, Inc. Aminowe lipidy kationowe i ich zastosowania
CN107522664B (zh) 2011-10-27 2021-03-16 麻省理工学院 能够形成药物包封微球的在n末端上官能化的氨基酸衍生物
WO2013078199A2 (en) 2011-11-23 2013-05-30 Children's Medical Center Corporation Methods for enhanced in vivo delivery of synthetic, modified rnas
US20140308304A1 (en) 2011-12-07 2014-10-16 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Lipids for the delivery of active agents
WO2013130161A1 (en) 2011-12-14 2013-09-06 modeRNA Therapeutics Methods of responding to a biothreat
EP2791160B1 (en) 2011-12-16 2022-03-02 ModernaTX, Inc. Modified mrna compositions
WO2013096709A2 (en) 2011-12-21 2013-06-27 modeRNA Therapeutics Methods of increasing the viability or longevity of an organ or organ explant
CN104936620B (zh) 2012-01-19 2019-08-09 约翰霍普金斯大学 增强粘膜渗透的纳米粒子调配物
WO2013113325A1 (en) 2012-01-31 2013-08-08 Curevac Gmbh Negatively charged nucleic acid comprising complexes for immunostimulation
EP2809702B1 (en) 2012-02-03 2017-12-20 Rutgers, The State University of New Jersey Polymeric biomaterials derived from phenolic monomers and their medical uses
WO2013120052A1 (en) 2012-02-10 2013-08-15 E. I. Du Pont De Nemours And Company Preparation, purification and use of high-x diblock copolymers
AU2013243946A1 (en) 2012-04-02 2014-10-30 Moderna Therapeutics, Inc. Modified polynucleotides for the production of membrane proteins
US10501513B2 (en) 2012-04-02 2019-12-10 Modernatx, Inc. Modified polynucleotides for the production of oncology-related proteins and peptides
US9303079B2 (en) 2012-04-02 2016-04-05 Moderna Therapeutics, Inc. Modified polynucleotides for the production of cytoplasmic and cytoskeletal proteins
US9283287B2 (en) 2012-04-02 2016-03-15 Moderna Therapeutics, Inc. Modified polynucleotides for the production of nuclear proteins
EP2854857B1 (en) 2012-05-25 2018-11-28 CureVac AG Reversible immobilization and/or controlled release of nucleic acid containing nanoparticles by (biodegradable) polymer coatings
EA201492055A1 (ru) 2012-06-08 2015-11-30 Шир Хьюман Дженетик Терапис, Инк. ИНГАЛЯЦИОННАЯ ДОСТАВКА мРНК В НЕЛЕГОЧНЫЕ КЛЕТКИ-МИШЕНИ
EP2885419A4 (en) 2012-08-14 2016-05-25 Moderna Therapeutics Inc ENZYMES AND POLYMERASES FOR RNA SYNTHESIS
US20150307542A1 (en) 2012-10-03 2015-10-29 Moderna Therapeutics, Inc. Modified nucleic acid molecules and uses thereof
WO2014072061A1 (en) 2012-11-09 2014-05-15 Biontech Ag Method for cellular rna expression
WO2014071963A1 (en) 2012-11-09 2014-05-15 Biontech Ag Method for cellular rna expression
LT2922554T (lt) 2012-11-26 2022-06-27 Modernatx, Inc. Terminaliai modifikuota rnr
US9687448B2 (en) 2012-12-07 2017-06-27 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Nucleic acid lipid particle formulations
US20150366997A1 (en) 2012-12-07 2015-12-24 Shire Human Genetics Therapies, Inc. COMPOSITIONS AND METHODS FOR mRNA DELIVERY
EP2931914A4 (en) 2012-12-13 2016-08-17 Moderna Therapeutics Inc MODIFIED POLYNUCLEOTIDES FOR CHANGING THE CELL PHENOTYPE
CA2897858A1 (en) 2013-02-22 2014-08-28 Curevac Gmbh Combination of vaccination and inhibition of the pd-1 pathway
EA030650B1 (ru) * 2013-03-08 2018-09-28 Новартис Аг Липиды и липидные композиции для доставки активных агентов
EP2971010B1 (en) 2013-03-14 2020-06-10 ModernaTX, Inc. Formulation and delivery of modified nucleoside, nucleotide, and nucleic acid compositions
EP3932947A1 (en) * 2013-03-14 2022-01-05 Translate Bio MA, Inc. Methods and compositions for delivering mrna coded antibodies
US20160032316A1 (en) 2013-03-14 2016-02-04 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Purification and Purity Assessment of RNA Molecules Synthesized with Modified Nucleosides
EP2971165A4 (en) 2013-03-15 2016-11-23 Moderna Therapeutics Inc DISSOLUTION OF DNA FRAGMENTS IN MRNA MANUFACTURING METHODS
US10130649B2 (en) * 2013-03-15 2018-11-20 Translate Bio, Inc. Synergistic enhancement of the delivery of nucleic acids via blended formulations
WO2014144039A1 (en) 2013-03-15 2014-09-18 Moderna Therapeutics, Inc. Characterization of mrna molecules
US10590161B2 (en) 2013-03-15 2020-03-17 Modernatx, Inc. Ion exchange purification of mRNA
US20160017313A1 (en) 2013-03-15 2016-01-21 Moderna Therapeutics, Inc. Analysis of mrna heterogeneity and stability
WO2014152031A1 (en) 2013-03-15 2014-09-25 Moderna Therapeutics, Inc. Ribonucleic acid purification
WO2014152027A1 (en) 2013-03-15 2014-09-25 Moderna Therapeutics, Inc. Manufacturing methods for production of rna transcripts
TW201534578A (zh) 2013-07-08 2015-09-16 Daiichi Sankyo Co Ltd 新穎脂質
US10125172B2 (en) 2013-07-25 2018-11-13 Calder Biosciences Inc. Conformationally stabilized RSV pre-fusion F proteins
BR112016003358A2 (pt) 2013-08-21 2017-11-21 Curevac Ag método para aumentar a expressão de proteínas codificadas por rna
CA2915728A1 (en) 2013-08-21 2015-02-26 Thomas Kramps Respiratory syncytial virus (rsv) vaccine
WO2015051169A2 (en) 2013-10-02 2015-04-09 Moderna Therapeutics, Inc. Polynucleotide molecules and uses thereof
US20160243221A1 (en) 2013-10-18 2016-08-25 Moderna Therapeutics, Inc. Compositions and methods for tolerizing cellular systems
EP3110401A4 (en) * 2014-02-25 2017-10-25 Merck Sharp & Dohme Corp. Lipid nanoparticle vaccine adjuvants and antigen delivery systems
EP3981437A1 (en) 2014-04-23 2022-04-13 ModernaTX, Inc. Nucleic acid vaccines
CA2951430A1 (en) 2014-06-13 2015-12-17 Glaxosmithkline Biologicals Sa Immunogenic combinations
WO2015196128A2 (en) 2014-06-19 2015-12-23 Moderna Therapeutics, Inc. Alternative nucleic acid molecules and uses thereof
AU2015289573A1 (en) 2014-07-17 2017-02-02 Modernatx, Inc Terminal modifications of polynucleotides
WO2016096968A1 (en) * 2014-12-18 2016-06-23 Glaxosmithkline Biologicals S.A. Vaccination
WO2016118724A1 (en) 2015-01-21 2016-07-28 Moderna Therapeutics, Inc. Lipid nanoparticle compositions
WO2016164762A1 (en) 2015-04-08 2016-10-13 Moderna Therapeutics, Inc. Polynucleotides encoding low density lipoprotein receptor egf-a and intracellular domain mutants and methods of using the same
AU2016253972B2 (en) 2015-04-27 2020-01-02 Acuitas Therapeutics Inc. Nucleoside-modified RNA for inducing an adaptive immune response
WO2016201377A1 (en) 2015-06-10 2016-12-15 Moderna Therapeutics, Inc. Targeted adaptive vaccines
EP3310384A1 (en) 2015-06-17 2018-04-25 CureVac AG Vaccine composition
ES2937963T3 (es) 2015-07-21 2023-04-03 Modernatx Inc Vacunas de enfermedad infecciosa
WO2017015457A1 (en) 2015-07-21 2017-01-26 Modernatx, Inc. Ebola vaccine
US20190008887A1 (en) 2015-07-30 2019-01-10 ModernaTX Inc. Multimeric mrna
WO2017020026A1 (en) 2015-07-30 2017-02-02 Modernatx, Inc. Concatemeric peptide epitopes rnas
US20180237849A1 (en) 2015-08-17 2018-08-23 Modernatx, Inc. Rna mapping/fingerprinting
WO2017031232A1 (en) 2015-08-17 2017-02-23 Modernatx, Inc. Methods for preparing particles and related compositions
EP3736261B1 (en) 2015-09-17 2023-10-11 ModernaTX, Inc. Compounds and compositions for intracellular delivery of therapeutic agents
AU2016336344A1 (en) 2015-10-05 2018-04-19 Modernatx, Inc. Methods for therapeutic administration of messenger ribonucleic acid drugs
WO2017066789A1 (en) 2015-10-16 2017-04-20 Modernatx, Inc. Mrna cap analogs with modified sugar
MA46317A (fr) 2015-10-22 2019-08-07 Modernatx Inc Vaccin contre le virus respiratoire syncytial
WO2017070623A1 (en) 2015-10-22 2017-04-27 Modernatx, Inc. Herpes simplex virus vaccine
EA201891001A1 (ru) 2015-10-22 2018-11-30 МОДЕРНАТиЭкс, ИНК. Вакцины на основе нуклеиновых кислот против вируса ветряной оспы (vzv)
EP3364950A4 (en) 2015-10-22 2019-10-23 ModernaTX, Inc. VACCINES AGAINST TROPICAL DISEASES
SI3718565T1 (sl) 2015-10-22 2022-08-31 Modernatx, Inc. Cepiva za respiratorni virus
EP3364982A4 (en) 2015-10-22 2019-04-17 ModernaTX, Inc. VACCINES AGAINST SEXUALLY TRANSMITTED DISEASES
CN108430456B (zh) 2015-10-22 2022-01-18 摩登纳特斯有限公司 癌症疫苗
WO2017070620A2 (en) 2015-10-22 2017-04-27 Modernatx, Inc. Broad spectrum influenza virus vaccine
AU2016342045A1 (en) 2015-10-22 2018-06-07 Modernatx, Inc. Human cytomegalovirus vaccine
WO2017099823A1 (en) 2015-12-10 2017-06-15 Modernatx, Inc. Compositions and methods for delivery of therapeutic agents
JP7065036B2 (ja) 2015-12-17 2022-05-11 モダーナティエックス・インコーポレイテッド メチルマロニルCoAムターゼをコードするポリヌクレオチド
US10465190B1 (en) 2015-12-23 2019-11-05 Modernatx, Inc. In vitro transcription methods and constructs
WO2017127750A1 (en) 2016-01-22 2017-07-27 Modernatx, Inc. Messenger ribonucleic acids for the production of intracellular binding polypeptides and methods of use thereof
EP3458106A4 (en) 2016-05-18 2020-03-18 Modernatx, Inc. POLYNUCLEOTIDES ENCODING LIPOPROTEIN LIPASE FOR THE TREATMENT OF HYPERLIPIDEMIA
EP3458081A1 (en) 2016-05-18 2019-03-27 Modernatx, Inc. Polynucleotides encoding citrin for the treatment of citrullinemia type 2
WO2017201340A2 (en) 2016-05-18 2017-11-23 Modernatx, Inc. Polynucleotides encoding relaxin
WO2017201342A1 (en) 2016-05-18 2017-11-23 Modernatx, Inc. Polynucleotides encoding jagged1 for the treatment of alagille syndrome
WO2017201348A1 (en) 2016-05-18 2017-11-23 Modernatx, Inc. Polynucleotides encoding galactose-1-phosphate uridylyltransferase for the treatment of galactosemia type 1
US20190298657A1 (en) 2016-05-18 2019-10-03 Modernatx, Inc. Polynucleotides Encoding Acyl-CoA Dehydrogenase, Very Long-Chain for the Treatment of Very Long-Chain Acyl-CoA Dehydrogenase Deficiency
WO2017201317A1 (en) 2016-05-18 2017-11-23 Modernatx, Inc. Polyribonucleotides containing reduced uracil content and uses thereof
CA3024509A1 (en) 2016-05-18 2017-11-23 Modernatx, Inc. Mrna combination therapy for the treatment of cancer
US11801227B2 (en) 2016-05-18 2023-10-31 Modernatx, Inc. Polynucleotides encoding cystic fibrosis transmembrane conductance regulator for the treatment of cystic fibrosis
CA3024507A1 (en) 2016-05-18 2017-11-23 Modernatx, Inc. Polynucleotides encoding .alpha.-galactosidase a for the treatment of fabry disease
MA45032A (fr) 2016-05-18 2019-03-27 Fundacion Para La Investig Medica Aplicada Polynucléotides codant pour la porphobilinogène désaminase destinés au traitement de la porphyrie intermittente aiguë
JP2019525901A (ja) 2016-06-14 2019-09-12 モデルナティエックス インコーポレイテッドModernaTX,Inc. 脂質ナノ粒子の安定化製剤
MX2019002904A (es) 2016-09-14 2019-09-26 Modernatx Inc Composiciones de arn de alta pureza y métodos para su preparación.
JP6980780B2 (ja) 2016-10-21 2021-12-15 モデルナティーエックス, インコーポレイテッド ヒトサイトメガロウイルスワクチン
AU2017350488B2 (en) 2016-10-26 2022-06-23 Acuitas Therapeutics Inc. Lipid nanoparticle mRNA vaccines
MA46643A (fr) 2016-10-26 2019-09-04 Modernatx Inc Méthodes et compositions pour le mappage d'arn
AU2017347837A1 (en) 2016-10-26 2019-06-06 Modernatx, Inc. Messenger ribonucleic acids for enhancing immune responses and methods of use thereof
EP3538146A4 (en) 2016-11-11 2020-07-15 ModernaTX, Inc. INFLUENZA VACCINE
EP3551193A4 (en) 2016-12-08 2020-08-19 Modernatx, Inc. NUCLEIC ACID VACCINES AGAINST RESPIRATORY VIRUSES
US11384352B2 (en) 2016-12-13 2022-07-12 Modernatx, Inc. RNA affinity purification
US20180243225A1 (en) 2017-01-25 2018-08-30 Modernatx, Inc. Ebola/marburg vaccines
US20190351039A1 (en) 2017-02-01 2019-11-21 Modernatx, Inc. Immunomodulatory therapeutic mrna compositions encoding activating oncogene mutation peptides
AU2017397458A1 (en) 2017-02-01 2019-08-15 Modernatx, Inc. RNA cancer vaccines
WO2018144778A1 (en) 2017-02-01 2018-08-09 Modernatx, Inc. Polynucleotide secondary structure
MA47515A (fr) 2017-02-16 2019-12-25 Modernatx Inc Compositions immunogènes très puissantes
US20200368162A1 (en) 2017-02-24 2020-11-26 Modernatx, Inc. Nucleic Acid-Based Therapy of Muscular Dystrophies
MA52262A (fr) 2017-03-15 2020-02-19 Modernatx Inc Vaccin à large spectre contre le virus de la grippe
WO2018170270A1 (en) 2017-03-15 2018-09-20 Modernatx, Inc. Varicella zoster virus (vzv) vaccine
EP3595713A4 (en) 2017-03-15 2021-01-13 ModernaTX, Inc. RESPIRATORY SYNCYTIAL VIRUS VACCINE
ES2940259T3 (es) 2017-03-15 2023-05-04 Modernatx Inc Compuesto y composiciones para la administración intracelular de agentes terapéuticos
US11752206B2 (en) 2017-03-15 2023-09-12 Modernatx, Inc. Herpes simplex virus vaccine
US20200030432A1 (en) 2017-03-17 2020-01-30 Modernatx, Inc. Zoonotic disease rna vaccines
US20200038499A1 (en) 2017-03-22 2020-02-06 Modernatx, Inc. Rna bacterial vaccines
EP3607074A4 (en) 2017-04-05 2021-07-07 Modernatx, Inc. REDUCTION OR ELIMINATION OF IMMUNE RESPONSES TO NON-INTRAVENOUS THERAPEUTIC PROTEINS, FOR EXAMPLE SUBCUTANEOUSLY
EP3641810A4 (en) 2017-04-26 2021-08-18 Modernatx, Inc. VACCINES AGAINST HERPES SIMPLEX VIRUS
WO2018232355A1 (en) 2017-06-15 2018-12-20 Modernatx, Inc. Rna antibodies
US11786607B2 (en) 2017-06-15 2023-10-17 Modernatx, Inc. RNA formulations
MA50751A (fr) 2017-08-18 2020-06-24 Modernatx Inc Vaccins à base d'arnm efficaces
US11866696B2 (en) 2017-08-18 2024-01-09 Modernatx, Inc. Analytical HPLC methods
WO2019036685A1 (en) 2017-08-18 2019-02-21 Modernatx, Inc. METHODS FOR HPLC ANALYSIS
CN111212905A (zh) 2017-08-18 2020-05-29 摩登纳特斯有限公司 Rna聚合酶变体
MA50253A (fr) 2017-09-14 2020-07-22 Modernatx Inc Vaccins à arn contre le virus zika
US20190192646A1 (en) 2017-11-03 2019-06-27 Modernatx, Inc. Salmonella vaccines
EP3713601A4 (en) 2017-11-21 2022-03-09 Modernatx, Inc. VACCINES AGAINST EPSTEIN-BARR VIRUS
WO2019148101A1 (en) 2018-01-29 2019-08-01 Modernatx, Inc. Rsv rna vaccines
KR20210038886A (ko) 2018-06-27 2021-04-08 모더나티엑스, 인크. 개인화된 암 백신 에피토프 선택
CA3111836A1 (en) 2018-09-13 2020-03-19 Modernatx, Inc. Modified mrna for the treatment of progressive familial intrahepatic cholestasis disorders
CA3113353A1 (en) 2018-09-19 2020-03-26 Modernatx, Inc. High-purity peg lipids and uses thereof
CA3113025A1 (en) 2018-09-19 2020-03-26 Modernatx, Inc. Peg lipids and uses thereof
US20220409536A1 (en) 2018-09-19 2022-12-29 Modernatx, Inc. Compounds and compositions for intracellular delivery of therapeutic agents
JP2022506839A (ja) 2018-11-07 2022-01-17 モデルナティエックス インコーポレイテッド Rnaがんワクチン
CN113795579A (zh) 2019-02-20 2021-12-14 摩登纳特斯有限公司 用于共转录加帽的rna聚合酶变体
WO2020185811A1 (en) 2019-03-11 2020-09-17 Modernatx, Inc. Fed-batch in vitro transcription process
EP3938379A4 (en) 2019-03-15 2023-02-22 ModernaTX, Inc. HIV RNA VACCINE
WO2020243561A1 (en) 2019-05-31 2020-12-03 Modernatx, Inc. Expanded t cell assay
BR112022002548A2 (pt) 2019-08-14 2022-06-14 Modernatx Inc Processos para purificar produtos a jusante de transcrição in vitro
WO2021050864A1 (en) 2019-09-11 2021-03-18 Modernatx, Inc. Human cytomegalovirus vaccine
EP4031666A4 (en) 2019-09-19 2023-11-15 ModernaTX, Inc. CAP GUIDES AND METHODS OF USE FOR RNA MAPPING

Also Published As

Publication number Publication date
JP7330590B2 (ja) 2023-08-22
SG11201803360UA (en) 2018-05-30
BR112018008051A2 (pt) 2018-11-13
AU2023202500A1 (en) 2023-05-18
IL258827A (en) 2018-06-28
CN108472309A (zh) 2018-08-31
JP2021121630A (ja) 2021-08-26
PH12018500858A1 (en) 2018-10-29
CO2018005265A2 (es) 2018-11-22
AU2016342371A1 (en) 2018-06-07
US20230303632A1 (en) 2023-09-28
MX2018004915A (es) 2019-04-01
MA46080A (fr) 2019-07-10
US11643441B1 (en) 2023-05-09
JP2023116608A (ja) 2023-08-22
JP6925688B2 (ja) 2021-08-25
EA201891001A1 (ru) 2018-11-30
TN2018000152A1 (en) 2019-10-04
PE20181529A1 (es) 2018-09-26
US20230374079A1 (en) 2023-11-23
JP2018536022A (ja) 2018-12-06
EP3364980A1 (en) 2018-08-29
WO2017070601A1 (en) 2017-04-27
EP3364980A4 (en) 2019-07-10
CL2018001051A1 (es) 2018-10-19
CA3002912A1 (en) 2017-04-27
TW201729838A (zh) 2017-09-01
CN117731769A (zh) 2024-03-22
AU2016342371B2 (en) 2023-05-11

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US11918644B2 (en) Varicella zoster virus (VZV) vaccine
US20230374079A1 (en) Nucleic acid vaccines for varicella zoster virus (vzv)
US20230114180A1 (en) Respiratory syncytial virus vaccine
US20230390379A1 (en) Respiratory syncytial virus vaccine
US11752206B2 (en) Herpes simplex virus vaccine
AU2016342049B2 (en) Herpes simplex virus vaccine
US20200054737A1 (en) Herpes simplex virus vaccine