EA030650B1 - Липиды и липидные композиции для доставки активных агентов - Google Patents

Липиды и липидные композиции для доставки активных агентов Download PDF

Info

Publication number
EA030650B1
EA030650B1 EA201591662A EA201591662A EA030650B1 EA 030650 B1 EA030650 B1 EA 030650B1 EA 201591662 A EA201591662 A EA 201591662A EA 201591662 A EA201591662 A EA 201591662A EA 030650 B1 EA030650 B1 EA 030650B1
Authority
EA
Eurasian Patent Office
Prior art keywords
bis
methyl
oxy
dimethylamino
phenylene
Prior art date
Application number
EA201591662A
Other languages
English (en)
Other versions
EA201591662A1 (ru
Inventor
Джереми Ли Бариза
Роан Эрик Джон Беквит
Кит Боуман
Кристал Байерс
Танзина Фазал
Гэбриэл Грант Гэмбер
Кэмерон Чак-Манн Ли
Ритеш Бханудасджи Тичкуле
Чандра Варджис
Шуанси Ван
Лора Вест
Томас Забава
Цзюньпин Чжао
Original Assignee
Новартис Аг
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Новартис Аг filed Critical Новартис Аг
Publication of EA201591662A1 publication Critical patent/EA201591662A1/ru
Publication of EA030650B1 publication Critical patent/EA030650B1/ru

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
    • A61K47/16—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite containing nitrogen, e.g. nitro-, nitroso-, azo-compounds, nitriles, cyanates
    • A61K47/18—Amines; Amides; Ureas; Quaternary ammonium compounds; Amino acids; Oligopeptides having up to five amino acids
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/7088—Compounds having three or more nucleosides or nucleotides
    • A61K31/713—Double-stranded nucleic acids or oligonucleotides
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • A61K38/22—Hormones
    • A61K38/2264—Obesity-gene products, e.g. leptin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
    • A61K47/22—Heterocyclic compounds, e.g. ascorbic acid, tocopherol or pyrrolidones
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/0012—Galenical forms characterised by the site of application
    • A61K9/0019—Injectable compositions; Intramuscular, intravenous, arterial, subcutaneous administration; Compositions to be administered through the skin in an invasive manner
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/10—Dispersions; Emulsions
    • A61K9/127—Liposomes
    • A61K9/1271—Non-conventional liposomes, e.g. PEGylated liposomes, liposomes coated with polymers
    • A61K9/1272—Non-conventional liposomes, e.g. PEGylated liposomes, liposomes coated with polymers with substantial amounts of non-phosphatidyl, i.e. non-acylglycerophosphate, surfactants as bilayer-forming substances, e.g. cationic lipids
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/48—Preparations in capsules, e.g. of gelatin, of chocolate
    • A61K9/50—Microcapsules having a gas, liquid or semi-solid filling; Solid microparticles or pellets surrounded by a distinct coating layer, e.g. coated microspheres, coated drug crystals
    • A61K9/51—Nanocapsules; Nanoparticles
    • A61K9/5107—Excipients; Inactive ingredients
    • A61K9/5123—Organic compounds, e.g. fats, sugars
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A61P11/02—Nasal agents, e.g. decongestants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A61P11/06—Antiasthmatics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A61P11/16—Central respiratory analeptics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A61P17/06—Antipsoriatics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A61P17/14—Drugs for dermatological disorders for baldness or alopecia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/02—Drugs for skeletal disorders for joint disorders, e.g. arthritis, arthrosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P21/00—Drugs for disorders of the muscular or neuromuscular system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P21/00—Drugs for disorders of the muscular or neuromuscular system
    • A61P21/04—Drugs for disorders of the muscular or neuromuscular system for myasthenia gravis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/08—Antiepileptics; Anticonvulsants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/14—Drugs for disorders of the nervous system for treating abnormal movements, e.g. chorea, dyskinesia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/28—Drugs for disorders of the nervous system for treating neurodegenerative disorders of the central nervous system, e.g. nootropic agents, cognition enhancers, drugs for treating Alzheimer's disease or other forms of dementia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P27/00—Drugs for disorders of the senses
    • A61P27/02—Ophthalmic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P27/00—Drugs for disorders of the senses
    • A61P27/02—Ophthalmic agents
    • A61P27/06—Antiglaucoma agents or miotics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P27/00—Drugs for disorders of the senses
    • A61P27/16—Otologicals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/04—Anorexiants; Antiobesity agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/08—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis
    • A61P3/10—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis for hyperglycaemia, e.g. antidiabetics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/04—Antibacterial agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/10—Antimycotics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P33/00—Antiparasitic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A61P35/02—Antineoplastic agents specific for leukemia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A61P37/06—Immunosuppressants, e.g. drugs for graft rejection
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/08—Antiallergic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A61P7/06—Antianaemics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/04—Inotropic agents, i.e. stimulants of cardiac contraction; Drugs for heart failure
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/06—Antiarrhythmics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/10—Drugs for disorders of the cardiovascular system for treating ischaemic or atherosclerotic diseases, e.g. antianginal drugs, coronary vasodilators, drugs for myocardial infarction, retinopathy, cerebrovascula insufficiency, renal arteriosclerosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/12—Antihypertensives
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C217/00—Compounds containing amino and etherified hydroxy groups bound to the same carbon skeleton
    • C07C217/54—Compounds containing amino and etherified hydroxy groups bound to the same carbon skeleton having etherified hydroxy groups bound to carbon atoms of at least one six-membered aromatic ring and amino groups bound to acyclic carbon atoms or to carbon atoms of rings other than six-membered aromatic rings of the same carbon skeleton
    • C07C217/56—Compounds containing amino and etherified hydroxy groups bound to the same carbon skeleton having etherified hydroxy groups bound to carbon atoms of at least one six-membered aromatic ring and amino groups bound to acyclic carbon atoms or to carbon atoms of rings other than six-membered aromatic rings of the same carbon skeleton with amino groups linked to the six-membered aromatic ring, or to the condensed ring system containing that ring, by carbon chains not further substituted by singly-bound oxygen atoms
    • C07C217/58—Compounds containing amino and etherified hydroxy groups bound to the same carbon skeleton having etherified hydroxy groups bound to carbon atoms of at least one six-membered aromatic ring and amino groups bound to acyclic carbon atoms or to carbon atoms of rings other than six-membered aromatic rings of the same carbon skeleton with amino groups linked to the six-membered aromatic ring, or to the condensed ring system containing that ring, by carbon chains not further substituted by singly-bound oxygen atoms with amino groups and the six-membered aromatic ring, or the condensed ring system containing that ring, bound to the same carbon atom of the carbon chain
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C219/00—Compounds containing amino and esterified hydroxy groups bound to the same carbon skeleton
    • C07C219/02—Compounds containing amino and esterified hydroxy groups bound to the same carbon skeleton having esterified hydroxy groups and amino groups bound to acyclic carbon atoms of the same carbon skeleton
    • C07C219/04—Compounds containing amino and esterified hydroxy groups bound to the same carbon skeleton having esterified hydroxy groups and amino groups bound to acyclic carbon atoms of the same carbon skeleton the carbon skeleton being acyclic and saturated
    • C07C219/06—Compounds containing amino and esterified hydroxy groups bound to the same carbon skeleton having esterified hydroxy groups and amino groups bound to acyclic carbon atoms of the same carbon skeleton the carbon skeleton being acyclic and saturated having the hydroxy groups esterified by carboxylic acids having the esterifying carboxyl groups bound to hydrogen atoms or to acyclic carbon atoms of an acyclic saturated carbon skeleton
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C229/00—Compounds containing amino and carboxyl groups bound to the same carbon skeleton
    • C07C229/02—Compounds containing amino and carboxyl groups bound to the same carbon skeleton having amino and carboxyl groups bound to acyclic carbon atoms of the same carbon skeleton
    • C07C229/04—Compounds containing amino and carboxyl groups bound to the same carbon skeleton having amino and carboxyl groups bound to acyclic carbon atoms of the same carbon skeleton the carbon skeleton being acyclic and saturated
    • C07C229/06—Compounds containing amino and carboxyl groups bound to the same carbon skeleton having amino and carboxyl groups bound to acyclic carbon atoms of the same carbon skeleton the carbon skeleton being acyclic and saturated having only one amino and one carboxyl group bound to the carbon skeleton
    • C07C229/10—Compounds containing amino and carboxyl groups bound to the same carbon skeleton having amino and carboxyl groups bound to acyclic carbon atoms of the same carbon skeleton the carbon skeleton being acyclic and saturated having only one amino and one carboxyl group bound to the carbon skeleton the nitrogen atom of the amino group being further bound to acyclic carbon atoms or to carbon atoms of rings other than six-membered aromatic rings
    • C07C229/12—Compounds containing amino and carboxyl groups bound to the same carbon skeleton having amino and carboxyl groups bound to acyclic carbon atoms of the same carbon skeleton the carbon skeleton being acyclic and saturated having only one amino and one carboxyl group bound to the carbon skeleton the nitrogen atom of the amino group being further bound to acyclic carbon atoms or to carbon atoms of rings other than six-membered aromatic rings to carbon atoms of acyclic carbon skeletons
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C229/00—Compounds containing amino and carboxyl groups bound to the same carbon skeleton
    • C07C229/02—Compounds containing amino and carboxyl groups bound to the same carbon skeleton having amino and carboxyl groups bound to acyclic carbon atoms of the same carbon skeleton
    • C07C229/04—Compounds containing amino and carboxyl groups bound to the same carbon skeleton having amino and carboxyl groups bound to acyclic carbon atoms of the same carbon skeleton the carbon skeleton being acyclic and saturated
    • C07C229/06—Compounds containing amino and carboxyl groups bound to the same carbon skeleton having amino and carboxyl groups bound to acyclic carbon atoms of the same carbon skeleton the carbon skeleton being acyclic and saturated having only one amino and one carboxyl group bound to the carbon skeleton
    • C07C229/10—Compounds containing amino and carboxyl groups bound to the same carbon skeleton having amino and carboxyl groups bound to acyclic carbon atoms of the same carbon skeleton the carbon skeleton being acyclic and saturated having only one amino and one carboxyl group bound to the carbon skeleton the nitrogen atom of the amino group being further bound to acyclic carbon atoms or to carbon atoms of rings other than six-membered aromatic rings
    • C07C229/14—Compounds containing amino and carboxyl groups bound to the same carbon skeleton having amino and carboxyl groups bound to acyclic carbon atoms of the same carbon skeleton the carbon skeleton being acyclic and saturated having only one amino and one carboxyl group bound to the carbon skeleton the nitrogen atom of the amino group being further bound to acyclic carbon atoms or to carbon atoms of rings other than six-membered aromatic rings to carbon atoms of carbon skeletons containing rings
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C235/00—Carboxylic acid amides, the carbon skeleton of the acid part being further substituted by oxygen atoms
    • C07C235/42—Carboxylic acid amides, the carbon skeleton of the acid part being further substituted by oxygen atoms having carbon atoms of carboxamide groups bound to carbon atoms of six-membered aromatic rings and singly-bound oxygen atoms bound to the same carbon skeleton
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D205/00—Heterocyclic compounds containing four-membered rings with one nitrogen atom as the only ring hetero atom
    • C07D205/02—Heterocyclic compounds containing four-membered rings with one nitrogen atom as the only ring hetero atom not condensed with other rings
    • C07D205/04—Heterocyclic compounds containing four-membered rings with one nitrogen atom as the only ring hetero atom not condensed with other rings having no double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D213/00—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D213/02—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D213/04—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having no bond between the ring nitrogen atom and a non-ring member or having only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom
    • C07D213/60—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having no bond between the ring nitrogen atom and a non-ring member or having only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals, directly attached to ring carbon atoms
    • C07D213/62—Oxygen or sulfur atoms
    • C07D213/69—Two or more oxygen atoms
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D213/00—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D213/02—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D213/04—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having no bond between the ring nitrogen atom and a non-ring member or having only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom
    • C07D213/60—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having no bond between the ring nitrogen atom and a non-ring member or having only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals, directly attached to ring carbon atoms
    • C07D213/78—Carbon atoms having three bonds to hetero atoms, with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals
    • C07D213/79—Acids; Esters
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D295/00—Heterocyclic compounds containing polymethylene-imine rings with at least five ring members, 3-azabicyclo [3.2.2] nonane, piperazine, morpholine or thiomorpholine rings, having only hydrogen atoms directly attached to the ring carbon atoms
    • C07D295/04—Heterocyclic compounds containing polymethylene-imine rings with at least five ring members, 3-azabicyclo [3.2.2] nonane, piperazine, morpholine or thiomorpholine rings, having only hydrogen atoms directly attached to the ring carbon atoms with substituted hydrocarbon radicals attached to ring nitrogen atoms
    • C07D295/08—Heterocyclic compounds containing polymethylene-imine rings with at least five ring members, 3-azabicyclo [3.2.2] nonane, piperazine, morpholine or thiomorpholine rings, having only hydrogen atoms directly attached to the ring carbon atoms with substituted hydrocarbon radicals attached to ring nitrogen atoms substituted by singly bound oxygen or sulfur atoms
    • C07D295/096—Heterocyclic compounds containing polymethylene-imine rings with at least five ring members, 3-azabicyclo [3.2.2] nonane, piperazine, morpholine or thiomorpholine rings, having only hydrogen atoms directly attached to the ring carbon atoms with substituted hydrocarbon radicals attached to ring nitrogen atoms substituted by singly bound oxygen or sulfur atoms with the ring nitrogen atoms and the oxygen or sulfur atoms separated by carbocyclic rings or by carbon chains interrupted by carbocyclic rings
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D317/00—Heterocyclic compounds containing five-membered rings having two oxygen atoms as the only ring hetero atoms
    • C07D317/08—Heterocyclic compounds containing five-membered rings having two oxygen atoms as the only ring hetero atoms having the hetero atoms in positions 1 and 3
    • C07D317/10—Heterocyclic compounds containing five-membered rings having two oxygen atoms as the only ring hetero atoms having the hetero atoms in positions 1 and 3 not condensed with other rings
    • C07D317/14—Heterocyclic compounds containing five-membered rings having two oxygen atoms as the only ring hetero atoms having the hetero atoms in positions 1 and 3 not condensed with other rings with substituted hydrocarbon radicals attached to ring carbon atoms
    • C07D317/28—Radicals substituted by nitrogen atoms
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
    • C12N15/113—Non-coding nucleic acids modulating the expression of genes, e.g. antisense oligonucleotides; Antisense DNA or RNA; Triplex- forming oligonucleotides; Catalytic nucleic acids, e.g. ribozymes; Nucleic acids used in co-suppression or gene silencing
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K48/00—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/10—Type of nucleic acid
    • C12N2310/14—Type of nucleic acid interfering N.A.
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2320/00—Applications; Uses
    • C12N2320/30—Special therapeutic applications
    • C12N2320/32—Special delivery means, e.g. tissue-specific

Abstract

Данное изобретение представляет соединение формулы (I)или его фармацевтически приемлемую соль, в которой R-R, L и X определены в описании изобретения. Соединения формулы (I) и их фармацевтически приемлемые соли представляют собой катионные липиды, пригодные для доставки биологически активных агентов в клетки и ткани.

Description

изобретение относится к соединениям катионных липидов и к композициям, содержащим такие соединения. Данное изобретение также относится к способам получения таких соединений и композиций и к способам и применениям таких соединений и композиций, например, для доставки биологически активных агентов, таких как агенты РНКи в клетки и ткани.
Уровень техники
Доставка биологически активных агентов (включая терапевтически подходящие соединения) к объектам часто осложняется трудностями в соединениях, достигающих целевую клетку или ткань. В частности, доставка многих биологически активных агентов в живые клетки сильно ограничивается сложной мембранной системой клеток. Данные ограничения могут привести к необходимости применения более высоких концентраций биологически активных агентов, что является желательным для достижения результата, что повышает риск развития токсических эффектов и побочных эффектов. Одним из решений данной проблемы является применение конкретных молекул-носителей, которые обеспечивают селективный вход в клетку. Липидные носители, биоразлагаемые полимеры и различные конъюгированные системы могут быть использованы для улучшения доставки биологически активных агентов в клетки.
Один из классов биологически активных агентов, который является наиболее трудным для доставки в клетки, представляет собой биотерапевтические средства (включая нуклеозиды, нуклеотиды, полинуклеотиды, нуклеиновые кислоты и производные, такие как агенты РНКи). Обычно нуклеиновые кислоты являются стабильными в течение только ограниченного периода в клетках или плазме. Развитие РНКинтерференции, РНКи-терапии, РНК-лекарственных средств, антисенс-терапии и генной терапии, в том числе, увеличило потребность в эффективных средствах введения активных агентов на основе нуклеиновых кислот в клетки. По этим причинам композиции, которые могут стабилизировать и доставлять агенты на основе нуклеиновых кислот в клетки, представляют особый интерес.
Наиболее хорошо изученные подходы для улучшения транспорта чужеродных нуклеиновых кислот в клетки включают использование вирусных векторов или катионных липидов. Вирусные векторы могут быть использованы для переноса генов эффективно в некоторые типы клеток, но они, как правило, не могут быть использованы для введения химически синтезированных молекул в клетки.
Альтернативный подход состоит в применении доставки композиций, содержащих катионные липиды, которые взаимодействуют с биологически активным агентом в одной части и взаимодействуют с мембранной системой в другой части (для обзора см. Feigner, 1990, Advanced Drug Delivery Reviews, 5, 162-187 и Feigner, 1993, J. Liposome Res., 3, 3-16). Такие композиции, как сообщается, содержат липосомы.
С первого описания липосом в 1965 году Bangham (J. Mol. Biol. 13, 238-252) наблюдался устойчивый интерес и усилия в разработке систем-носителей на основе липидов для доставки биологически активных агентов. Способ введения функциональных нуклеиновых кислот в культивируемые клетки с помощью использования положительно заряженных липосом был впервые описан Philip Feigner et al., Proc. Natl. Acad. Sci., USA, 84, 7413-7417 (1987). Способ был позже продемонстрирован in vivo K. L. Brigham et al., Am. J. Med. Sci., 298, 278-281 (1989).
Липосомы представляют собой привлекательные носители, поскольку они защищают биологические молекулы от разрушения, при этом улучшая их клеточное поглощение. Из различных классов липосом липосомы, которые содержат катионные липиды, обычно используются для доставки полианионов (например, нуклеиновых кислот). Такие липосомы могут быть получены с использованием катионных липидов самих по себе, и необязательно включая другие липиды и амфифилы, такие как фосфатидилэтаноламин. Хорошо известно в данной области техники, что как композиция липидного состава, также как и способ его получения влияет на структуру и размер полученного агрегата.
Применение катионных липидов для клеточной доставки биологически активных агентов имеет несколько преимуществ. Инкапсулирование анионных соединений с использованием катионных липидов является по существу количественным вследствие электростатического взаимодействия. Кроме того, полагают, что катионные липиды взаимодействуют с отрицательно заряженными клеточными мембранами, инициируя клеточно-мембранный транспорт (Akhtar et al., 1992, Trends Cell Bio., 2, 139; Xu et al., 1996, Biochemistry 35, 5616).
Существует потребность в дополнительных катионных липидах, которые облегчают системную и местную доставку биологически активных агентов, таких как агенты РНКи в клетки. Существует также потребность в катионных липидах, которые по сравнению с теми катионными липидами, которые известны в данной области техники, улучшают системную и местную доставку биологически активных агентов в клетки. Существует дополнительная потребность в составах липидов, которые имеют оптимизированные физические характеристики для улучшенной системной и местной доставки биологически активных агентов в определенные органы и опухоли, в частности, опухоли за пределами печени.
Сущность изобретения
В одном аспекте данное изобретение предоставляет соединение формулы (I)
- 1 030650
или его фармацевтически приемлемую соль, в которой R1-R4, L и X определены в настоящем описании. Соединения формулы (I) и их фармацевтически приемлемые соли представляют собой катионные липиды, используемые при доставке биологически активных агентов в клетки и ткани.
Во втором аспекте данное изобретение предоставляет липидную композицию, содержащую соединение в соответствии с формулой (I) (т.е. липидную композицию изобретения) или его фармацевтически приемлемую соль. В другом варианте осуществления присутствует, по меньшей мере, один другой липидный компонент. В другом варианте осуществления липидная композиция также содержит биологически активный агент, необязательно в комбинации с одним или более другими липидными компонентами. В другом варианте осуществления липидная композиция находится в форме липосомы. В другом варианте осуществления липидная композиция находится в форме липидной наночастицы (ЛНЧ). В другом варианте осуществления липидная композиция пригодна для доставки в печень. В другом варианте осуществления липидная композиция пригодна для доставки в опухоль. В другом варианте осуществления липидная композиция пригодна в целях иммунизации.
В третьем аспекте данное изобретение предоставляет фармацевтическую композицию (т.е. состав), содержащую липидную композицию по изобретению и фармацевтически приемлемый носитель или эксципиент. В другом варианте осуществления по меньшей мере один другой липидный компонент присутствует в липидной композиции. В другом варианте осуществления липидная композиция находится в форме липосомы. В другом варианте осуществления липидная композиция находится в форме липидной наночастицы. В другом варианте осуществления липидная композиция пригодна для доставки в печень. В другом варианте осуществления липидная композиция пригодна для доставки в опухоль. В другом варианте осуществления биологически активный агент представляет собой ДНК или РНК. В другом варианте осуществления биологически активный агент представляет собой киРНК. В другом варианте осуществления биологически активный агент представляет собой мРНК. В другом варианте осуществления липидная композиция пригодна в целях иммунизации, и биологически активный агент представляет собой РНК, которая кодирует иммуноген.
В четвертом аспекте данное изобретение предоставляет способ лечения заболевания или состояния, включающий стадию введения терапевтически эффективного количества липидной композиции по изобретению пациенту, нуждающемуся в таком лечении. В одном варианте осуществления заболевание или состояние поддается лечению с помощью введения агента миРНК. В другом варианте осуществления заболевание или состояние поддается лечению с помощью введения агента мРНК.
В пятом аспекте данное изобретение предоставляет применение липидной композиции по изобретению для лечения заболевания или состояния у пациента. В одном варианте осуществления заболевание или состояние поддается лечению с помощью введения агента РНКи. В другом варианте осуществления заболевание или состояние поддается лечению с помощью введения агента мРНК.
В шестом аспекте данное изобретение предоставляет способ иммунизации объекта в отношении представляющего интерес иммуногена, включающий стадию введения иммунологически эффективного количества липидной композиции по изобретению объекту в комбинации с РНК, которая кодирует иммуноген.
В седьмом аспекте данное изобретение предоставляет применение липидной композиции по изобретению для иммунизации объекта в отношении представляющего интерес иммуногена. Липид используется в комбинации с РНК, которая кодирует иммуноген.
Подробное описание изобретения
Настоящее изобретение предоставляет соединение формулы (I)
в которой
L представляет собой С1-6алкилен, С2-6алкенилен, С2-6алкинилен, - (СН2)г-С3-7циклоалкилен- (CH2)s-, -(СН2)8-С3-7циклоалкенилен- (CH2)s-, -(СН2Д-С3-7циклоалкинилен- (CH2)s-, *-С1-4алкилен^2-, *-С1-4ал- 2 030650
Г )-Ns
"fVA° '
"А
-L2j0vs
килен-Ь2- С 1-4алкилен-,
в которой
* обозначает присоединение фрагмента к NR1R2 группе;
L2, присоединенный в любом направлении, представляет собой -O-, -S-, -C(O)-, -C(O)O-, -OC(O)O-, -CONH-, S(O)2NH-, NHCONH-или -NHCSNH-;
каждый s представляет собой независимо 0,1 или 2; каждый t представляет собой независимо 0, 1, 2, 3 или 4; u представляет собой 0, 1, 2, 3, 4, 5 или 6;
R1 и R2 представляют собой каждый независимо необязательно замещенный C-6 алкил, необязательно замещенный ^^алкенил, необязательно замещенный ^^алкинил, необязательно замещенный C3-7циклоалкил-(CH2)s-, необязательно замещенный C3-7циклоалкенил-(CH2)s-, необязательно замещенный C37циклоалкинил-(CH2)s- или необязательно замещенный фенил-(CH2)s-; где указанный C1-6алкил, ^^алкенил, ^^алкинил, C3-7циклоалкил, C3-7циклоалкенил, C3-7циклоалкинил и фенил необязательно замещены одним или двумя заместителями, каждый независимо выбран из группы, состоящей из OH, C1-3алкокси, COOH и СОО^^алкила, или
R1 и R2 соединены вместе, образуя необязательно замещенное 4-12-членное гетероциклическое кольцо, причем указанное гетероциклическое кольцо необязательно замещено одним-тремя заместителями, каждый независимо выбран из группы, состоящей из: OH, гало, ^-3алкила, ^^алкокси, диметиламино, -COO-C1-4алкила, фенила, пиперидинила и морфолинила;
R3 и R4 представляют собой каждый независимо:
(a) -Z1-Ra,
(b) -Z1-Rb-Z2-Ra,
(c) -Z1-Rb-Z2-Rb-Z3-Ra,
(d) -Z1-Rb-Z2-Rb-Z3-Rb-Z4-Ra,
(e) -Rb-Z1-Ra,
(f) -Rb-Z1-Rb-Z2-Ra,
(g) -Rb-Z1-Rb-Z2-Rb-Z3-Ra,
(h) -Rb-Z'-Rb-Z2-Rb-Z'-Rb-Z4-Ra,
(i) -Rc,
(j ) -Z1-Rb-Rc или
(k) -Rb-Z1-Rb-Rc;
где Z1, Z2, Z3 и Z4, присоединенные в любом направлении, представляют собой каждый независимо
-O-, -C(O)O-, -ОС(О)О- или -CONH-;
Ra представляет собой ^^алкил, ^^алкенил или Q-^алкинил;
каждый Rb представляет собой независимо ^^алкилен, С2-20алкенилен или ^^алкинилен; Rc представляет собой
- 3 030650
или
- 4 030650
R представляет собой С5_22алкил, С5_22алкенил или С5-22алкинил;
n представляет собой 0-12;
m, p и q представляют собой каждый независимо 0, 1, 2, 3 или 4;
при условии, что цепи (а)-(й) имеют 12-30 атомов углерода и цепи (i)-(k) имеют 12-70 атомов углерода;
X представляет собой CR6 или N; и
R6 представляет собой H, гало, C^Mm или R4.
Варианты осуществления
В одном варианте осуществления R1 и R2 представляют собой каждый независимо необязательно замещенный Д^алкил. В другом варианте осуществления R1 и R2 представляют собой каждый независимо необязательно замещенный метил или необязательно замещенный этил. В другом варианте осуществления R1 представляет собой метил и R2 представляет собой необязательно замещенный этил. В другом варианте осуществления R1 и R2 оба представляют собой метил.
В другом варианте осуществления R1 и R2 соединены вместе, образуя необязательно замещенное 47-членное гетероциклическое кольцо. В другом варианте осуществления 4-7-членное гетероциклическое кольцо представляет собой необязательно замещенный азетидинил, необязательно замещенный пирролил или необязательно замещенный пиперидинил. В другом варианте осуществления 4-7-членное гетероциклическое кольцо представляет собой азетидинил, пирролил или пиперидинил, каждый из которых необязательно замещен одной OH-группой. В другом варианте осуществления 4-7-членное гетероциклическое кольцо представляет собой азетидинил, пирролил или пиперидинил.
В другом варианте осуществления L представляет собой Д^алкилен, *-С1-4алкилен^2-, *-С1-4-
алкилен^2-С1-4алкилен-, иЛИ .
В другом варианте осуществления L представляет собой *-Д-3алкилен^2-, *-С1-4алкилен^2-С1-2-
* ГУи
алкилен, --0^ 4, где
s представляет собой 0 и
u представляет собой 1, или <
где s представляет собой 0, t представляет собой 1 и u представляет собой 1.
В другом варианте осуществления L представляет собой метилен, этилен или пропилен. В другом варианте осуществления L представляет собой метилен.
В другом варианте осуществления L2, присоединенный в любом направлении, представляет собой -C(O)O-, -OCOO- или -CONH-.
В другом варианте осуществления L представляет собой *-Cl-3алкилен-О-C(O)-.
В другом варианте осуществления L представляет собой *-Cl-4алкилен-L2-Сl-2алкилен, где L2, присоединенный в любом направлении, представляет собой -C(O)Q- или -OC(O)O-.
В другом варианте осуществления L представляет собой
- 5 030650
В одном варианте осуществления L-NR1R2-rpynny формулы (I) выбирают из списка в табл. 1. Таблица 1. L-NR1R2-гpyппы формулы (I), где пунктирная линия указывает на точку присоединения
к формуле (I)
Структура Структура Структура
и у "Ά
но он у -..... <°
<° "А V э /2 <°
ζ CY° 2 А а^'-а 7
·,,ί 2 Ύ° Ζ с
Η°-γ° ^α ) τ > °т° X )
- 6 030650
В другом варианте осуществления L-NR1R2-rpynny формулы (I) выбирают из списка в табл. 2.
- 7 030650
Таблица 2. L-NR1 иХгруппы формулы (I), где пунктирная линия указывает на точку присоединения
- 8 030650
ΗΟγ° ) / V У °γ° / V АГ У ΗΝ^ 1 У °γ° V ^ΝΗ ОН А 1 1 У °γ° γ Υ V ) 0' V γ V L О О У
В другом варианте осуществления R3 и R4 представляют собой каждый независимо:
(a) -Z’-Ra,
(b) -Z’-Rb-Z2-Ra,
(c) -Z'-Rb-Z2-Rb-Z3-Ra,
(e) -RbZ'Ra,
(f) -Rb-Z‘-Rb-Z2-Ra,
(g) -Rb-Z'-Rb-Z'-Rb-Z'-Ra,
(i) -Rc или
(j) -Z‘-Rb-Rc.
В другом варианте осуществления R3 и R4 представляют собой каждый независимо:
(a) -Z’-Ra,
(b) -Z'-Rb-Z2-Ra,
(c) -Z'-Rb-Z2-Rb-Z3-Ra,
(e) -Rb-Z’-Ra,
(f) -Rb-Z‘-Rb-Z2-Ra или
(g) -Rb-Z'-Rb-Z2-Rb-Z3-Ra.
В другом варианте осуществления R3 и R4 представляют собой каждый независимо:
- 9 030650
(a) -Z1-Ra.
(b) -Z1-Rb-Z2-Ra или
(f) -Rb-Z1-Rb-Z2-Ra.
В другом варианте осуществления R3 и R4 представляют собой каждый независимо: (a) -Z1-Ra, где Ra представляет собой С12-18алкенил.
В другом варианте осуществления R3 и R4 представляют собой каждый независимо: (a) -Z1-Ra, где Ra представляет собой С16-18алкенил.
В другом варианте осуществления R3 и R4 представляют собой каждый независимо (b) -Z1 -Rb-Z2-Ra.
В другом варианте осуществления R3 и R4 представляют собой каждый независимо (f) -Rb-Z1-Rb-Z2Ra.
В другом варианте осуществления R3 и R4 представляют собой каждый независимо (i) -Rc или (j) Z1-Rb-Rc.
В другом варианте осуществления R4=R3.
В другом варианте осуществления Ra представляет собой С2-22алкил или С2-22алкенил. В другом варианте осуществления Ra представляет собой С4-20алкил. В другом варианте осуществления Ra представляет собой С5-18алкил. В другом варианте осуществления Ra представляет собой С2-22алкенил, содержащий от одной до трех двойных связей. В другом варианте осуществления Ra представляет собой С1020алкенил, содержащий от одной до трех двойных связей, предпочтительно содержащий одну или две двойные связи. В другом варианте осуществления Ra представляет собой С мщлкенил. содержащий от одной до трех двойных связей, предпочтительно одну или две двойные связи, предпочтительно две двойные связи. В другом варианте осуществления Ra представляет собой С12-18алкенил, содержащий от одной до трех двойных связей. предпочтительно одну или две двойные связи. предпочтительно две двойные связи. В другом варианте осуществления Ra представляет собой С16-18алкенил. содержащий от одной до трех двойных связей. предпочтительно одну или две двойные связи. предпочтительно две двойные связи.
В другом варианте осуществления каждый Rb представляет собой независимо С1-20алкилен. В другом варианте осуществления каждый Rb представляет собой независимо С1-15алкилен. предпочтительно С1-10алкилен.
В другом варианте осуществления Rc представляет собой (c1) или (с3). В другом варианте осуществления Rc представляет собой (c1) или (с3). где n представляет собой 1 или 2; m представляет собой 0 или 1 и p представляет собой 1.
В другом варианте осуществления Z1 представляет собой -O-. -ОСО- или -ί',ΌΝΗ-. Предпочтительно Z1 представляет собой -О-. Предпочтительно Z1 представляет собой -ОСО-.
В другом варианте осуществления Z2 представляет собой -ОСО-. -СОО-. -ΝΗί',’Ο- или -ОСОО-. Предпочтительно Z2 представляет собой -ОСО- или -СОО-. Предпочтительно Z2 представляет собой -ОСО-.
В другом варианте осуществления Z3 представляет собой -ОСО- или -СОО-.
В другом варианте осуществления R3 и R4 представляют собой каждый независимо (a) -Z1-Ra. (b) Z1-Rb-Z2-Ra или (с) -Z1-Rb-Z2-Rb-Z3-Ra. где Z1 представляет собой -О-.
В другом варианте осуществления R3 и R4 представляют собой каждый независимо (е) -Rb-Z1 -Ra. (f) -Rb-Z1-Rb-Z2-Ra или (g) -Rb-Z1-Rb-Z2-Rb-Z3-Ra. где Z1 представляет собой -ОСО-.
В другом варианте осуществления R3 и R4 представляют собой каждый независимо (a) -Z1-Ra. где Z1 представляет собой -О-. ОСО- или -СОКИ- и Ra представляет собой С12-18алкенил. предпочтительно С1518алкенил. содержащий от одной до трех двойных связей. предпочтительно одну или две двойные связи. предпочтительно две двойные связи. Предпочтительно R4=R3.
В другом варианте осуществления R3 и R4 представляют собой каждый независимо (b) -Z1-Rb-Z2-Ra. где Z1 представляет собой -О-. Z2 представляет собой -ОСО-. Rb представляет собой С1-15алкилен. предпочтительно С2-10алкилен и Ra представляет собой С5-18алкил или С11-18алкенил. содержащий от одной до трех двойных связей. Предпочтительно R4=R3.
В другом варианте осуществления R3 и R4 равны и представляют собой каждый (b) -Z1-Rb-Z2-Ra. где Z1 представляет собой -О-. Z2 представляет собой -ОСО-. Rb представляет собой С3-9алкилен и Ra представляет собой С16-18алкенил. содержащий две двойные связи. В другом варианте осуществления R3 и R4 равны и представляют собой каждый (b) -Z1-Rb-Z2-Ra. где Z1 представляет собой -О-. Z2 представляет собой -ОСО-. Rb представляет собой С3-9алкилен и Ra представляет собой С7-11 алкил.
В другом варианте осуществления R3 и R4 представляют собой каждый независимо (с) -Z1-Rb-Z2-RbZ3-Ra. гдей Z1 представляет собой -О-. Z2 представляет собой -О- или -ОСО-. Z3 представляет собой -О-. каждый Rb представляет собой независимо С2-7алкилен и Ra представляет собой С8-9алкил или С17алкенил. содержащий две двойные связи. Предпочтительно R4=R3.
В другом варианте осуществления R3 и R4 представляют собой каждый независимо (е) -Rb-Z1-Ra. где Z1 представляет собой -ОСО-. Rb представляет собой метилен и Ra представляет собой С12-18алкил или С17алкенил. содержащий две двойные связи. Предпочтительно R4=R3.
В другом варианте осуществления R3 и R4 представляют собой каждый независимо (f) -Rb-Z1-Rb-Z2
- 10 030650
Ra, где Z1 представляет собой -OCO-, Z2 представляет собой -COO-, -NHCO-, -OCO-, -OCOO-, каждый Rb представляет собой независимо ^^алкилен и Ra представляет собой ^^алкил или С17-С18алкенил, содержащий две двойные связи. Предпочтительно R4=R3.
В другом варианте осуществления X представляет собой CR6, где R6 представляет собой H, хлор, бром или CkwLikhj. Предпочтительно X представляет собой СН.
В другом варианте осуществления X представляет собой N.
Один из вариантов осуществления настоящего изобретения представляет собой соединение, выбранное из группы, состоящей из
1-(3,5-бис ( (Z)-октадец-9-ен-1-илокси)фенил)-Ν,Νдиме тилме т анамин а;
1-(3,5-бис ((9Ζ,12Ζ)-октадека-9,12-диен-1-илокси)фенил)Ν,N-диметилметанамина;
2,2 ' - ( (3,5-бис ( (9Ζ,12Ζ)-октадека-9,12-диен-1илокси)бензил)азанедиил)диэтанола;
1-(3,5-бис ( (9Ζ,12Ζ)-октадека-9,12-диен-1илокси)бензил)пирролидина;
1-(3,5-бис ( (9Ζ,12Ζ)-октадека-9,12-диен-1илокси)бензил)азетидин-3-ола;
этил-2-( (3,5-бис ( (Ζ)-октадец-9-ен-1илокси)бензил)(метил)амино)ацетата;
1- (3,5-бис ( (Ζ)-октадец-9-ен-1-илокси)бензил)пирролидина;
2- ((3,5-бис ( (Z)-октадец-9-ен-1илокси)бензил)(метил)амино)уксусной кислоты;
1-( (2-(3,5-бис ( (Z)-октадец-9-ен-1-илокси)фенил)-1,3диоксолан-4-ил)метил)пирролидина;
1-(2-(3,5-бис ( (9Z,12Z)-октадека-9,12-диен-1-илокси)фенил) 1,З-диоксолан-4-ил)-N,N-диметилметанамина;
1- ( (2-(3,5-бис ( (9Z,12Z)-октадека-9,12-диен-1илокси)фенил)-1,З-диоксолан-4-ил)метил)пиперидина;
(2-(3,5-бис ( (Z)-октадец-9-ен-1-илокси)фенил)-1,3диоксолан-4-ил)метил-2-(диметиламино)ацетата;
3,5-бис ( (9Z,12Z)-октадека-9,12-диен-1-илокси)бензил-4(диметиламино)бутаноата;
3,5-бис ( (9Z,12Z)-октадека-9,12-диен-1-илокси)бензил-3(диметиламино)пропаноата;
3,5-бис ( (9Z,12Z)-октадека-9,12-диен-1-илокси)бензил-2(диметиламино)ацетата;
4-метил-З,5-бис ( (9Z,12Z)-октадека-9,12-диен-1илокси)бензил-3-(диметиламино)пропаноата;
3,5-бис ( (9Z,12Z)-октадека-9,12-диен-1-илокси)бензил-3(диметиламино)-2-метилпропаноата;
2- (диметиламино)этил-2,6-бис ( (9Z,12Z)-октадека-9,12-диен1-илокси)изоникотината;
3- (диметиламино)пропил-2,6-бис ( (9Z,12Z)-октадека-9, 12диен-1-илокси)изоникотината;
(9Z,9’Ζ,12Z,12’Z)-5- ( ( (3(диметиламино)пропаноил)окси)метил)-1,3-фенилен-бис(октадека9,12-диеноата);
(9Z,9’Ζ,12Z,12’Z)-5- ( ( (4(диметиламино)бутаноил)окси)метил)-1,3-фенилен-бис(октадека9,12-диеноата);
- 11 030650
(2,б-бис ( (9Ζ,12Ζ)-октадека-9,12-диен-1-илокси)пиридин-4ил)метил-3-(диэтиламино)пропаноата;
(2,б-бис((9Ζ,12Ζ)-октадека-9,12-диен-1-илокси)пиридин-4ил)метил-4-(диметиламино)бутаноата;
(2,б-бис((9Ζ,12Ζ)-октадека-9,12-диен-1-илокси)пиридин-4ил)метил-3-(диметиламино)пропаноата;
1- (2,б-бис((9Ζ,12Ζ)-октадека-9,12-диен-1-илокси)пиридин-4ил)-Ν,N-диметилметанамина;
ди((9Ζ,12Ζ)-октадека-9,12-диен-1-ил)-5-(((3(диметиламино)пропаноил)окси)метил)изофталата;
3,5-бис ( (9Ζ,12Ζ)-октадека-9,12-диен-1-илкарбамоил)бензил3- (диметиламино)пропаноата;
3,5-бис ( (9Ζ,12Ζ)-октадека-9,12-диен-1-илкарбамоил)бензил4- (диметиламино)бутаноата;
3,5-бис ( (9Ζ,12Ζ)-октадека-9,12-диен-1-илокси)фенэтил-3(диметиламино)пропаноата;
3,5-бис ( (9Ζ,12Ζ)-октадека-9,12-диен-1-илокси)бензил-(3(диметиламино)пропил)карбоната;
(9Ζ,9’Ζ,12Ζ,12’Ζ)-5- ( ( ( (2(диметиламино)этокси)карбонил)окси)метил)-1,3-фениленбис(октадека-9,12-диеноата);
3- (диметиламино)пропил-4-изопропил-3,5-бис ( (9Ζ,12Ζ)октадека-9,12-диен-1-илокси)бензилкарбоната;
4- бром-З,5-бис ( (9Ζ,12Ζ)-октадека-9,12-диен-1илокси)бензил-(3-(диметиламино)пропил)карбоната;
4-хлор-З,5-бис ( (9Ζ,12Ζ)-октадека-9,12-диен-1илокси)бензил-(3-(диметиламино)пропил)карбоната;
Ν-(3,5-бис ( (9Ζ,12Ζ)-октадека-9,12-диен-1-илокси)бензил)-2(диметиламино)ацетамида;
3-(3,5-бис ( (9Ζ,12Ζ)-октадека-9,12-диен-1илокси)фенил)пропил-3-(диметиламино)пропаноата;
Ν,Ы-диметил-1-(3,4,5-трис ( (9Ζ,12Ζ)-октадека-9,12-диен-1илокси)фенил)метанамина;
2- (3,5-бис ((9Ζ,12Ζ)-октадека-9,12-диен-1-илокси)фенил)Ν,N-диметилэтанамина и
3- (3,5-бис ( (9Ζ, 12Ζ) -октадека-9, 12-диен-1-илокси) фенил) - К,К-диметилпропан-1-амина.
Другой вариант осуществления настоящего изобретения представляет собой соединение, выбранное из группы, состоящей из:
- 12 030650
(9Z,9’Z, 12Z, 12 ’ Z) - ( (5- ( ( (3 (диметиламино)пропаноил)окси)метил)-1,3фенилен)бис(окси))бис(этан-2,1-диил)бис(октадека-9,12диеноата);
(9Z, 9’ Z, 12Z, 12 ’ Z) - ( (5- ( ( (3(диметиламино)пропаноил)окси)метил)-1,3фенилен)бис(окси))бис(пропан-3,1-диил)бис(октадека-9,12диеноата);
(9Z,9'Z,12Z,12'Z)-((5-((2-(диметиламино)ацетокси)метил)1.3- фенилен)бис(окси))бис(пропан-3,1-диил)бис(октадека-9,12диеноата);
(9Z,9'Z,12Z,12'Z)-( (5 —( (2-(диметиламино)ацетокси)метил)1.3- фенилен)бис(окси))бис(бутан-4,1-диил)бис(октадека-9,12диеноата);
(9Z,9'Z,12Z,12'Z)- ((5-(( (3(диметиламино)пропаноил)окси)метил)-1,3фенилен)бис(окси))бис(бутан-4,1-диил)бис(октадека-9,12диеноата);
(9Z,9'Z,12Z,12'Z)- ((5-(( (4(диметиламино)бутаноил)окси)метил)-1,3фенилен)бис(окси))бис(этан-2,1-диил)бис(октадека-9,12диеноата);
(9Z,9'Z,12Z,12'Z)-((5-((диметиламино)метил)-1,3фенилен)бис(окси))бис(бутан-4,1-диил)бис(октадека-9,12диеноата);
(9Z,9'Z, 12Z, 12' Z)-( (5 —( (диметиламино)метил)-1,3фенилен) бис(окси))бис(пропан-3,1-диил)бис(октадека-9,12диеноата);
(9Z,9'Z,12Z, 12' Z)-( (5-( (диметиламино)метил)-1,3фенилен)бис(окси))бис(этан-2,1-диил)бис(октадека-9,12диеноата);
((5-((диметиламино)метил)-1,3-фенилен)бис(окси))бис(октан8,1-диил)дигексаноата;
- 13 030650
((5-((диметиламино)метил)-1,3-фенилен)бис(окси))бис(октан8.1- диил)диоктаноата;
((5-((диметиламино)метил)-1,3-фенилен)бис(окси))бис(декан10, 1-диил)диоктаноата;
((5-((диметиламино)метил)-1,3-фенилен)бис(окси))бис(декан10, 1-диил)дигексаноата;
(9Z,9'Ζ,12Z,12'Z)-((5—((диметиламино)метил)-1,3фенилен)бис(окси))бис(гексан-б,1-диил)бис(октадека-9, 12диеноата);
(9Z,9'Z,12Z,12'Z)-((5 —((диметиламино)метил)-1,3фенилен) бис(окси))бис(октан-8,1-диил)бис(октадека-9, 12диеноата);
((5-((диметиламино)метил)-1,3фенилен) бис(окси))бис(гексан-б,1-диил)бис(деканоата) ;
((5-((диметиламино)метил)-1,3фенилен)бис(окси))бис(гексан-б,1-диил)диоктаноата;
(9Z,9'Ζ,12Z,12'Z)-( (5 —( (З-гидроксиазетидин-1-ил)метил)1,3-фенилен)бис(окси))бис(бутан-4,1-диил)бис(октадека-9,12диеноата);
(8Z,8'Z)- ( (5-( (диметиламино)метил)-1,3фенилен)бис(окси))бис(гексан-б,1-диил)бис(додец-8-еноата);
(9Z,9'Z,12Z,12'Z)-( (5 —( (диметиламино)метил)-2-метил-1,3фенилен)бис(окси))бис(бутан-4,1-диил)бис(октадека-9,12диеноата);
((5-((диметиламино)метил)-1,3-фенилен)бис(окси))бис(октан8.1- диил)бис(деканоата);
((5-((диметиламино)метил)-1,3-фенилен)бис(окси))бис(октан8.1- диил)дидодеканоата;
(9Z,9'Z,12Z,12'Z)-( (5 —( (диэтиламино)метил)-2-метил-1,3фенилен)бис(окси))бис(бутан-4,1-диил)бис(октадека-9,12диеноата);
((5-((диметиламино)метил)-1,3фенилен) бис(окси))бис(пропан-3,1-диил)бис(3-октилундеканоата); дидецил-8,8'-((5-((диметиламино)метил)-1,3фенилен)бис(окси))диоктаноата;
((5-((диметиламино)метил)-1,3- 14 030650
фенилен)бис(окси))бис(гексан-6,1-диил)дидодеканоата;
(Z) — ((5-((диметиламино)метил)-1,3фенилен) бис(окси))бис(бутан-4,1-диил)диолеата;
((5-((диметиламино)метил)-1,3-фенилен)бис(окси))бис(бутан·
4,1-диил)дитетрадеканоата;
(9Z,9'Z,12Z,12'Z,15Z,15’Z)- ( (5-( (диметиламино)метил)-1,3фенилен) бис(окси))бис(бутан-4,1-диил)бис(октадека-9,12,15триеноата);
(9Z,12Z)-4-(3-((диметиламино)метил)-5-(4(олеоилокси)бутокси)фенокси)бутилоктадека-9,12-диеноата;
(9Z,12Z,15Z)-4-(3-((диметиламино)метил)-5-(4-((9Z,12Z)октадека-9,12-диеноилокси)бутокси)фенокси)бутилоктадека9,12,15-триеноата;
ди((9Z,12Z)-октадека-9,12-диен-1-ил)-5,5'- ( (5((диметиламино)метил)-1,3-фенилен)бис(окси))дипентаноата;
дидодецил-б,6'-((5-((диметиламино)метил)-1,3фенилен) бис(окси))дигексаноата;
(9Z,12Z)-3-(3-((диметиламино)метил)-5-(3-((3октилундеканоил)окси)пропокси)фенокси)пропилоктадека-9,12диеноата;
((5-((диметиламино)метил)бензол-1,2,3триил)трис(окси))трис(декан-10,1-диил)триоктаноата;
((5-((диэтиламино)метил)бензол-1,2,3триил)трис(окси))трис(декан-10,1-диил)триоктаноата;
(9Z,12Z)-4- (3- ( (диметиламино)метил)-5-(4-( (Z)-додец-8еноилокси)бутокси)фенокси)бутилоктадека-9,12-диеноата;
(9Z,12Z)-4- (3- ( (диметиламино)метил)-5-(4-( (3октилундеканоил)окси)бутокси)фенокси)бутилоктадека-9,12диеноата;
(9Z,9'Z,12Z,12'Z)- ( (5-(пирролидин-1-илметил)-1,3фенилен) бис(окси))бис(бутан-4,1-диил)бис(октадека-9, 12диеноата) ;
((5-((диметиламино)метил)-1,3-фенилен)бис(окси))бис(бутан· 4, 1-диил)бис(7-гексилтридеканоата) ;
((5-((диметиламино)метил)-1,3-фенилен)бис(окси))бис(бутан·
4, 1-диил)бис(9-пентилтетрадеканоата);
((5-((диметиламино)метил)-1,3-фенилен)бис(окси))бис(бутан4.1- диил)бис(5-гептилдодеканоата);
((5-((диметиламино)метил)-1,3-фенилен)бис(окси))бис(бутан4.1- диил)бис(3-октилундеканоата);
(9Z,9'Z,12Z,12'Z)-( (5 —(3 —(пиперидин-1-ил)пропил)-1,3фенилен) бис(окси))бис(бутан-4,1-диил)бис(октадека-9,12диеноата) ;
(9Z,9'Z,12Z,12'Z)- ( (5-(3-(диметиламино)пропил)-1,3фенилен)бис(окси))бис(бутан-4,1-диил)бис(октадека-9,12диеноата) ;
(9Z,9'Z,12Z,12'Z)- ( (5-(3-морфолинопропил)-1,3фенилен) бис(окси))бис(бутан-4,1-диил)бис(октадека-9,12диеноата) ;
((5-(((3-(диметиламино)пропаноил)окси)метил)-1,3фенилен)бис(окси))бис(октан-8,1-диил)бис(деканоата); и
((5-(((4-(диметиламино)бутаноил)окси)метил)-1,3фенилен)бис(окси))бис(октан-8,1-диил)бис(деканоата).
- 15 030650
Другой вариант осуществления настоящего изобретения представляет собой соединение, выбранное из группы, состоящей из:
(9Z,9'Ζ,12Z,12'Z)-(5-(((3(диметиламино)пропаноил)окси)метил)-1,3фенилен)бис(метилен)бис(октадека-9,12-диеноата);
(9Z,9'Ζ,12Z,12'Z)- (5- ( (диметиламино)метил)-1,3фенилен) бис(метилен)бис(октадека-9,12-диеноата);
(5-((диметиламино)метил)-1,3фенилен)бис(метилен)дитридеканоата;
(5-((диметиламино)метил)-1,3-фенилен)бис(метилен)бис(3октилундеканоата);
( 9Ζ,12Z)-3- ( (диметиламино)метил)-5-( ( (3октилундеканоил)окси)метил)бензилоктадека-9,12-диеноата;
( 9Z,9'Ζ,12Z,12'Z)- ( 5-((((3(диэтиламино)пропокси)карбонил)окси)метил)-1,3фенилен)бис(метилен)бис(октадека-9, 12-диеноата) ;
(9Z,9'Ζ,12Z,12'Z)-(5-((( (2(диметиламино)этокси)карбонил)окси)метил)-1,3фенилен) бис(метилен)бис(октадека-9,12-диеноата);
(9Z, 9' Ζ, 12Z,12'Z)- (5-((( (3(диметиламино)пропокси)карбонил)окси)метил)-1,3фенилен) бис(метилен)бис(октадека-9,12-диеноата);
(5-((диметиламино)метил)-1,3-фенилен)бис(метилен)бис(5гептилдодеканоата);
(5-((диметиламино)метил)-1,3-фенилен)бис(метилен)бис(7гексилтридеканоата); и
(5-((диметиламино)метил)-1,3-фенилен)бис(метилен)бис(9пентилтетрадеканоата).
Другой вариант осуществления настоящего изобретения представляет собой соединение, выбранное из группы, состоящей из:
О,0'-((5-((диметиламино)метил)-1,3фенилен)бис(метилен))ди((9Z,12Z)-октадека-9,12-диен-1ил) дисукцината ,Ο, О' - ( (5-((диметиламино)метил)-1,3фенилен)бис(метилен))бис(10-(октаноилокси)децил)дисукцината;
0'1, О1-((5-((диметиламино)метил)-1,3-фенилен)бис(метилен)8- динонилдиоктандиоата;
0'1, О1-((5-((диметиламино)метил)-1,3-фенилен)бис(метилен))9- диоктилдинонандиоата;
(9Z,9'Ζ,12Z,12'Z)-( ( (5 —( (диметиламино)метил)-1,3фенилен) бис(метилен))бис(окси))бис(4-оксобутан-4,1-диил)бис(октадека-9,12-диеноата);
(((5-((диметиламино)метил)-1,3фенилен)бис(метилен))бис(окси))бис(8-оксооктан-8,1диил)бис(деканоата);
(((5-((диметиламино)метил)-1,3фенилен)бис(метилен))бис(окси))бис(4-оксобутан-4,1диил)диоктаноата;
(((5-((диметиламино)метил)-1,3фенилен)бис(метилен))бис(окси))бис(б-оксогексан-б,1диил)диоктаноата;
(5-((диметиламино)метил)-1,3-фенилен)бис(метилен)бис(10—
(октаноилокси)деканоата);
(5-((диметиламино)метил)-1,3-фенилен)бис(метилен)бис(8(октаноилокси)октаноата);
- 16 030650
(((5-((диметиламино)метил)-1,3фенилен) бис(метилен))бис(окси) )бис(6-оксогексан-6, 1диил)бис(деканоата) ;
(5-((диметиламино)метил)-1,3-фенилен)бис(метилен)бис(8деканамидооктаноата); и
(5-((диметиламино)метил)-1,3-фенилен)бис(метилен)бис(6( ( (нонилокси)карбонил)окси)гексаноата) .
Другой вариант осуществления настоящего изобретения представляет собой соединение, выбранное из группы, состоящей из:
(9Z, 9' Z, 12Z, 12' Z)-( ( ( (5-( (диметиламино)метил)-1,3фенилен)бис(окси))бис(этан-2,1-диил))бис(окси))бис(этан-2,1диил)бис(октадека-9,12-диеноата);
(9Z,9'Ζ,12Z,12'Z)-( ( ( (5 —( (диэтиламино)метил)-1,3фенилен) бис(окси))бис(этан-2,1-диил))бис(окси))бис(этан-2,1диил)бис(октадека-9,12-диеноата);
((((5-((диметиламино)метил)-1,3фенилен)бис(окси))бис(пропан-3,1-диил))бис(окси))бис(4оксобутан-4,1-диил)бис(деканоата); и
0'1, О1-( ( (5-( (диметиламино)метил)-1,3фенилен)бис(окси))бис(пропан-3,1-диил))-9-диоктилдинонандиоата.
Другой вариант осуществления настоящего изобретения представляет собой соединение, выбранное из группы, состоящей
из:
4,4'- ( (5-( (диметиламино)метил)-1,3фенилен)бис(окси))бис(бутан-1,2-диил)тетраоктаноата;
(R) -4-(3-((S)-3,4-бис(октаноилокси)бутокси)-5((диметиламино)метил)фенокси)бутан-1,2-диилдиоктаноата;
(S) -4-(3-((S)-3,4-бис(октаноилокси)бутокси)-5((диметиламино)метил)фенокси)бутан-1,2-диилдиоктаноата;
(R)-4-(3-((R)-3,4-бис(октаноилокси)бутокси)-5((диметиламино)метил)фенокси)бутан-1,2-диилдиоктаноата;
2 - (3- (4 - (5-( (диметиламино)метил)-2-метил-З-( (9Z,12Z)октадека-9,12-диен-1-илокси)фенокси)бутокси)-3оксопропил)пропан-1,3-диилдигексаноата;
(((5-((диметиламино)метил)-1,3фенилен)бис(окси))бис(бутан-4,1-диил))бис(пропан-3,2,1триил)тетраоктаноата;
(((5-((диметиламино)метил)-1,3фенилен)бис(окси))бис(метилен))бис(пропан-3,2,1триил)тетраоктаноата; и
((((5-((диметиламино)метил)-1,3фенилен)бис(окси))бис(бутан-4,1-диил))бис(окси))бис(пропан3,2, 1-триил)тетраоктаноата.
В контексте настоящего описания термин "алкил" относится к полностью насыщенной разветвленной или неразветвленной углеводородной цепи, содержащей определенное число атомов углерода. Например, C 1-6ап<ил относится к алкильной группе, содержащей от 1 до 6 атомов углерода. Алкильные группы могут быть необязательно замещенными одним или более заместителями, как определено в формуле (I). Типичные примеры алкила включают, но не ограничиваются ими, метил, этил, н-пропил, изопропил, н-бутил, втор-бутил, изобутил, трет-бутил, н-пентил, изопентил, неопентил, н-гексил, 3метилгексил, 2,2-диметилпентил, 2,3-диметилпентил, н-гептил, н-октил, н-нонил, н-децил, н-ундеканил, н-додеканил, н-тридеканил, 9-метилгептадеканил и подобные.
В контексте настоящего описания термин "алкилен" относится к двухвалентной алкильной группе, как определено выше в настоящем описании. Типичные примеры алкилена включают, но не ограничиваются ими, метилен, этилен, н-пропилен, изопропилен, н-бутилен, втор-бутилен, изобутилен, трет- 17 030650
бутилен, н-пентилен, изопентилен, неопентилен, н-гексилен, 3-метилгексилен, 2,2-диметилпентилен, 2,3диметилпентилен, н-гептилен, н-октилен, н-нонилен, н-децилен и подобные.
В контексте настоящего описания термин "алкенил" относится к ненасыщенной разветвленной или неразветвленной углеводородной цепи, содержащей определенное число атомов углерода и одну или более углерод-углеродных двойных связей в цепи. Например, С2-6алкенил относится к алкенильной группе, содержащей от 2 до 6 атомов углерода с одной или более углерод-углеродными двойными связями в цепи. В некоторых вариантах осуществления алкенильные группы содержат одну углеродуглеродную двойную связь в цепи. В других вариантах осуществления алкенильные группы содержат более чем одну углерод-углеродную двойную связь в цепи. Алкенильные группы могут быть необязательно замещенными одним или более заместителями, как определено в формуле (I). Типичные примеры алкенила включают, но не ограничиваются ими, этиленил, пропенил, бутенил, пентенил, гексенил и подобные. Другие примеры алкенила включают, но не ограничиваются ими 2-октадец-9-енил, 2-ундец-7енил, 2-гептадека-8-енил, (9Z, 122)-октадека-9,12-диенил, (8Z, 112)-гептадека-8,11-диенил и (8Z,11Z,14Z)-гептадека-8,11,14-триенил.
В контексте настоящего описания термин "алкенилен" относится к двухвалентной алкенильной группе, как определено выше в настоящем описании. Типичные примеры алкенилена включают, но не ограничиваются ими, этенилен, пропенилен, бутенилен, пентенилен, гексенилен и подобные.
В контексте настоящего описания термин "алкинил" относится к ненасыщенной разветвленной или неразветвленной углеводородной цепи, содержащей определенное число атомов углерода и одну или более углерод-углеродных тройных связей. Например, С2-6алкинил относится к алкинильной группе, содержащей от 2 до 6 атомов углерода с одной или более углерод-углеродными тройными связями в цепи. В некоторых вариантах осуществления алкинильные группы содержат одну углерод-углеродную тройную связь в цепи. В других вариантах осуществления алкинильные группы содержат более чем одну углерод-углеродную тройную связь в цепи. Алкинильные группы могут быть необязательно замещенными одним или более заместителями, как определено в формуле (I). Типичные примеры алкинила включают, но не ограничиваются ими, этинил, 1-пропинил, пропаргил, бутинил, пентинил, гексинил и подобные.
В контексте настоящего описания термин "алкинилен" относится к двухвалентной алкинильной группе, как определено выше в настоящем описании. Типичные примеры алкинилена включают, но не ограничиваются ими, этиниленпропинилен, пропаргилен, бутинилен, пентинилен, гексинилен и подобные.
В контексте настоящего описания термин "алкокси" относится к любому алкильному фрагменту, присоединенному через кислородный мостик (т.е. -О-С1,3-алкильной группе, в которой С1,3-алкил представляет собой, как определено в настоящем описании). Примеры таких групп включают, но не ограничиваются ими, метокси, этокси и пропокси.
В контексте настоящего описания термин "циклоалкил" относится к насыщенному моноциклическому, бициклическому или трициклическому углеводородному кольцу, содержащему определенное число атомов углерода. Например, С3-7циклоалкил относится к циклоалкильному кольцу, содержащему от 3 до 7 атомов углерода. Циклоалкильные группы могут быть необязательно замещенными одним или более заместителями, как определено в формуле (I). Типичные примеры циклоалкила включают, но не ограничиваются ими, циклопропил, циклобутил, циклопентил, циклогексил, бицикло[2.1.1]гексил, бицикло[2.2.1]гептил, адамантил и подобные.
В контексте настоящего описания термин "циклоалкилен" относится к двухвалентной циклоалкильной группой, как определено выше.
В контексте настоящего описания термин "циклоалкенил" относится к неароматическому, ненасыщенному моноциклическому, бициклическому или трициклическому углеводородному кольцу, содержащему определенное число атомов углерода и одну или более углерод-углеродных двойных связей. Например, С3-7циклоалкенил относится к циклоалкенильной группе, содержащей от 3 до 7 атомов углерода и одну или более углерод-углеродных двойных связей. В некоторых вариантах осуществления циклоалкенильные группы имеют одну углерод-углеродную двойную связь в кольце. В других вариантах осуществления циклоалкенильные группы имеют более чем одну углерод-углеродную двойную связь в кольце. Типичные примеры циклоалкенила включают, но не ограничиваются ими, циклопропенил, циклобутенил, циклопентенил, циклогексенил, циклогептенил и подобные.
В контексте настоящего описания термин "циклоалкенилен" относится к двухвалентной циклоалкенильной группе, как определено выше в настоящем описании.
В контексте настоящего описания термин "циклоалкинил" относится к ненасыщенному моноциклическому, бициклическому или трициклическому углеводородному кольцу, содержащему определенное число атомов углерода и одну или более углерод-углеродных тройных связей. Например, С3-7циклоалкинил относится к циклоалкинильной группе, содержащей от 3 до 7 атомов углерода. В некоторых вариантах осуществления циклоалкинильные группы имеют одну углерод-углеродную тройную связь в кольце. В других вариантах осуществления циклоалкинильные группы имеют более чем одну углерод-углеродную тройную связь в кольце. Типичные примеры циклоалкинила включают, но не ограничиваются ими, циклопропинил, циклобутинил, циклопентинил, циклогексинил, циклогептинил и по- 18 030650
добные.
В контексте настоящего описания термин "циклоалкинилен" относится к двухвалентной циклоалкинильной группе, как определено выше в настоящем описании.
В контексте настоящего описания термин "галоген" относится к фтору, хлору, брому и иоду.
В контексте настоящего описания термин "гетероциклический" относится к 4-12-членному насыщенному или ненасыщенному моноциклическому или бициклическому кольцу, содержащему от 1 до 4 гетероатомов. Гетероциклические кольцевые системы не являются ароматическими. Гетероциклические группы, содержащие более одного гетероатома, могут содержать различные гетероатомы. Гетероциклические группы могут быть необязательно замещенными одним или более заместителями, как определено в формуле (I). Гетероциклические группы представляют собой моноциклические, спиро, или конденсированные, или мостиковые бициклические кольцевые системы. Примеры моноциклических гетероциклических групп включают тетрагидрофуранил, дигидрофуранил, 1,4-диоксанил, морфолинил, 1,4дитианил, азетидинил, пиперазинил, пиперидинил, 1,3-диоксоланил, имидазолидинил, имидазолинил, пирролинил, пирролидинил, тетрагидропиранил, дигидропиранил, 1,2,3,6-тетрагидропиридинил, оксатиоланил, дитиоланил, 1,3-диоксанил, 1,3-дитианил, оксатианил, тиоморфолинил, 1,4,7-триокса-10азациклододеканил, азапанил и подобные.
Примеры спирогетероциклических колец включают, но не ограничиваются ими, 1,5-диокса-9азаспиро[5.5]ундеканил, 1,4-диокса-8-азаспиро[4.5]деканил, 2-окса-7-азаспиро[3.5]нонанил и подобные. Конденсированные гетероциклические кольцевые системы имеют от 8 до 11 кольцевых атомов и включают группы, в которых гетероциклическое кольцо конденсировано с фенильным кольцом. Примеры конденсированных гетероциклических колец включают, но не ограничиваются ими, декагидрохинилинил, (4аБ,8аК)-декагидроизохинолинил, (4аБ,8аБ)-декагидроизохинолинил, октагидроциклопента[с]пирролил, изоинолинил, (3аК,7аБ)-гексагидро-[1,3]диоксоло[4,5-с]пиридинил, октагидро-1Нпирроло[3,4-Ь]пиридинил, тетрагидроизохинолинил и подобные.
В контексте настоящего описания термин "оптический изомер" или "стереоизомер" относится к любой из различных стереоизомерных конфигураций, которые могут существовать для данного соединения по настоящему изобретению, и включает геометрические изомеры. Следует понимать, что заместитель может быть присоединен к хиральному центру атома углерода. Термин "хиральная" относится к молекулам, которые обладают свойством неналожимости зеркальных изображений молекулы, тогда как термин "ахиральная" относится к молекулам, зеркальные изображения которых можно наложить друг на друга. Следовательно, изобретение включает энантиомеры, диастереомеры или рацематы соединения. "Энантиомеры" представляют собой пару стереоизомеров, которые не являются зеркальными изображениями, которые можно наложить друг на друга. Смесь 1:1 пары энантиомеров представляет собой "рацемическую" смесь. Термин используется для обозначения рацемической смеси в случае необходимости. "Диастереоизомеры" представляют собой стереоизомеры, которые содержат, по меньшей мере, два асимметричных атома, но которые не являются зеркальными отображениями друг друга. Абсолютная стереохимия указана в соответствии с R-S-системой Кана-Ингольда-Прелога. Когда соединение представляет собой чистый энантиомер, стереохимия у каждого хирального атома углерода может быть определена или R, или S. Разделенные соединения, абсолютная конфигурация которых неизвестна, могут быть обозначены (+) или (-) в зависимости от направления (право- или левовращающие), в котором они вращают плоскость поляризованного света при длине волны D-линии натрия. Некоторые соединения, описанные в настоящей заявке, содержат один или более асимметрических центров или осей и могут, таким образом, образовывать энантиомеры, диастереомеры и другие стереоизомерные формы, которые могут быть определены исходя из абсолютной стереохимии, как (R)- или (S)-.
В зависимости от выбора исходных материалов и методик соединения могут присутствовать в форме одного из возможных изомеров или в виде их смесей, например, в виде чистых оптических изомеров или в виде смесей изомеров, таких как рацематы и диастереоизомерные смеси, в зависимости от количества асимметрических атомов углерода. Настоящее изобретение предусматривает включение всех таких возможных изомеров, включая рацемические смеси, диастереоизомерные смеси и оптически чистые формы. Оптически активные (R)- и (Ъ)-изомеры могут быть получены с использованием хиральных синтонов или хиральных реагентов или разделены с использованием стандартных методик. Если соединение содержит двойную связь, заместитель может быть E или Z-конфигурации. Если соединение содержит дизамещенный циклоалкил, циклоалкильный заместитель может иметь цис- или транс-конфигурацию. Все таутомерные формы также должны быть включены.
Любой асимметрический атом (например, углерод или подобные) соединения(й) по настоящему изобретению может быть представлен в рацемической или энантиомерно обогащенной, например (R)-, (S)- или (РА)-конфигурации. В некоторых вариантах осуществления каждый асимметрический атом имеет по меньшей мере 50% энантиомерного избытка, по меньшей мере 60% энантиомерного избытка, по меньшей мере 70% энантиомерного избытка, по меньшей мере 80% энантиомерного избытка, по меньшей мере 90% энантиомерного избытка, по меньшей мере 95% энантиомерного избытка или по меньшей мере 99% энантиомерного избытка в (R)- или ^-конфигурации. Заместители на атомах с ненасыщенными двойными связями могут, если возможно, находиться в цис- (Z)- или транс- (Е)-форме.
- 19 030650
Соответственно, используемое в данном описании соединение по настоящему изобретению может находиться в форме одного из возможных изомеров, ротамеров, атропоизомеров, таутомеров или их смесей, например, как по существу чистые геометрические (цис- или транс-) изомеры, диастереомеры, оптические изомеры (антиподы), рацематы или их смеси.
Любые полученные смеси изомеров могут быть разделены на основе физико-химических различий составляющих на чистые или по существу чистые геометрические или оптические изомеры, диастереомеры, рацематы, например, с помощью хроматографии и/или фракционной кристаллизации.
Любые полученные рацематы конечных продуктов или интермедиатов могут быть разделены на оптические антиподы с помощью известных способов, например, с помощью разделения их диастереомерных солей, полученных с оптически активной кислотой или основанием, и высвобождения оптически активного кислотного или основного соединения. В частности, основный фрагмент может быть использован таким образом для разделения соединений по настоящему изобретению на их оптические антиподы, например, с помощью фракционной кристаллизации соли, образованной с оптически активной кислотой, например, винной кислотой, дибензоилвинной кислотой, диацетилвинной кислотой, ди-О,О'-птолуоилвинной кислотой, миндальной кислотой, яблочной кислотой или камфор-10-сульфоновой кислотой. Рацемические продукты также могут быть разделены с помощью хиральной хроматографии, например, высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) с использованием хирального адсорбента.
В контексте настоящего описания термины "соль" или "соли" относятся к кислотно-аддитивной или основно-аддитивной соли соединения изобретения. "Соли" включают в частности "фармацевтически приемлемые соли". Термин "фармацевтически приемлемые соли" относится к солям, которые сохраняют биологическую эффективность и свойства соединений данного изобретения и которые, как правило, не являются биологически или иным образом нежелательными. Во многих случаях соединения по настоящему изобретению способны образовывать кислотные и/или основные соли за счет наличия амино и/или карбоксильных групп или подобных им групп.
Фармацевтически приемлемые кислотно-аддитивные соли могут быть образованы с неорганическими кислотами и органическими кислотами, например, ацетат, аспартат, бензоат, безилат, бромид/гидробромид, бикарбонат/карбонат, бисульфат/сульфат, камфорсульфонат, хлорид/гидрохлорид, хлортеофиллонат, цитрат, этандисульфонат, фумарат, глюцептат, глюконат, глюкуронат, гиппурат, гидроиодид/иодид, изетионат, лактат, лактобионат, лаурилсульфат, малат, малеат, малонат, манделат, мезилат, метилсульфат, нафтоат, напзилат, никотинат, нитрат, октадеканоат, олеат, оксалат, пальмитат, памоат, фосфат/гидрофосфат/дигидрофосфат, полигалактуронат, пропионат, стеарат, сукцинат, сульфосалицилат, тартрат, тозилат и трифторацетат.
Неорганические кислоты, из которых могут быть получены соли, включают, например, хлористоводородную кислоту, бромисто-водородную кислоту, серную кислоту, азотную кислоту, фосфорную кислоту и подобные.
Органические кислоты, из которых могут быть получены соли, включают, например, уксусную кислоту, пропионовую кислоту, гликолевую кислоту, щавелевую кислоту, малеиновую кислоту, малоновую кислоту, янтарную кислоту, фумаровую кислоту, винную кислоту, лимонную кислоту, бензойную кислоту, миндальную кислоту, метансульфоновую кислоту, этансульфоновую кислоту, толуолсульфоновую кислоту, сульфосалициловую кислоту и подобные. Фармацевтически приемлемые основноаддитивные соли могут быть образованы с неорганическими и органическими основаниями.
Неорганические основания, из которых могут быть получены соли, включают, например, соли аммония и металлов групп I-XII Периодической системы. В некоторых вариантах осуществления соли получают из натрия, калия, аммония, кальция, магния, железа, серебра, цинка и меди; наиболее предпочтительными являются соли аммония, калия, натрия, кальция и магния.
Органические основания, из которых могут быть получены соли, включают, например, первичные, вторичные и третичные амины, замещенные амины, включая замещенные амины природного происхождения, циклические амины, основные ионообменные смолы и подобные. Некоторые органические амины включают изопропиламин, бензатин, холинат, диэтаноламин, диэтиламин, лизин, меглумин, пиперазин и трометамин.
Фармацевтически приемлемые соли по настоящему изобретению могут быть синтезированы из основного или кислотного фрагмента с помощью стандартных химических способов. Как правило, такие соли могут быть получены с помощью взаимодействия форм свободной кислоты данных соединений со стехиометрическим количеством соответствующего основания (такого как гидроксид, карбонат, бикарбонат Na, Ca, Mg или K или подобные) или с помощью взаимодействия форм свободного основания данных соединений со стехиометрическим количеством соответствующей кислоты. Такие реакции обычно проводят в воде, или в органическом растворителе, или в смеси двух. Как правило, использование неводных сред, таких как эфир, этилацетат, этанол, изопропанол или ацетонитрил является желательным при наличии соответствующей возможности. Списки дополнительных пригодных солей могут быть найдены, например, в "Remington's Pharmaceutical Sciences", 20th ed., Mack Publishing Company, Easton, Pa., (1985); и в "Handbook of Pharmaceutical Salts: Properties, Selection, and Use" by Stahl and Wermuth (Wiley-VCH, Weinheim, Germany, 2002).
- 20 030650
Общие способы синтеза катионных липидов
Настоящее изобретение также включает способы получения соединений формулы (I). В описанных реакциях может быть необходимо защитить реакционноспособные функциональные группы, например гидроксильные, амино, имино, тио или карбоксигруппы, где они являются желательными в конечном продукте, чтобы избежать их нежелательного участия в реакциях.
Соединения и способы по настоящему изобретению будут более понятны с использованием следующих схем синтеза, которые предназначены только для иллюстрации способов, с помощью которых соединения обычно могут быть получены, и не предназначены для ограничения объема изобретения, как определено в формуле изобретения.
Конечные соединения формулы (I) могут быть получены, как описано в схеме I.
Схема I
2
Соединение формулы (I) может быть получено с помощью взаимодействия соединения формулы 2 с соединением формулы 3 с использованием соответствующего восстанавливающего агента (например, ацетоксиборгидрида натрия и подобного) и необязательно кислоты Льюиса (например, тетраизопропоксида титана и подобного) в соответствующем растворителе, таком как этанол. Реакция может быть проведена при температуре от комнатной температуры до 80°C и может занимать до 24 ч до завершения.
Соединения формулы (I) также могут быть получены с помощью методики, как описано в схеме II. Схема II
н
Ri 5 R2
4 R3 i R3
Соединение формулы (I) может быть получено с помощью взаимодействия соединения формулы 4, где Y представляет собой хлор, бром, иод, мезил, тозил или другую уходящую группу, с соединением формулы 5 в ДМФ или другом соответствующем растворителе при температуре от 20 до 180°C.
Конечные соединения формулы (Ia) могут быть получены, как описано в схеме III.
Схема III
Соединение формулы (Ia) может быть получено с помощью взаимодействия спирта формулы 6 с кислотой формулы 7 в дихлорметане или другом соответствующем растворителе с использованием EDC или другого соответствующего связывающего агента с необязательным основанием или катализатором, таким как ДМАП при температуре от 20 до 150°C.
Соединения формулы 4 и 6 могут быть получены из соответствующего прекурсора формулы 7 с помощью способов, известных специалисту в данной области техники, например, как описано в схеме
IV.
Соединение формулы 6 может быть получено с помощью взаимодействия соединения формулы 2 с боргидридом натрия или другим соответствующим восстанавливающим агентом (например, гидридом диизобутилалюминия, боргидридом лития и т.д.) в этаноле или другом соответствующем растворителе при температуре от -20 до 150°C. Соединение формулы 4 может быть получено из соединения формулы 6 с помощью реакции с мезилангидридом или другим соответствующим активирующим агентом (например, тозилхлоридом, оксихлоридом фосфора и т.д.) в дихлорметане или другом соответствующем растворителе при температуре от -20 до 80°C.
Соединения формулы 2 могут быть получены, как описано в схеме V.
- 21 030650
Соединение формулы 2 может быть получено из соединения формулы 8 с помощью взаимодействия с соединением формулы 9 в присутствии DIAD или другого соответствующего диазосоединения (например, DEAD и т.д.) с трифенилфосфином или другим соответствующим фосфином (например, триметилфосфином) в дихлорметане или другом соответствующем растворителе при температуре от -20 до 50°С.
Альтернативно, соединения формулы 2 могут быть получены в соответствии со схемой VI.
Схема VI
Y—Ra
8 2
НО—Ra _Y—Ra
9 10
Соединение формулы 2 может быть получено из соединения формулы 8 с помощью взаимодействия с соединением формулы 10, где Y представляет собой галоген, мезилат или другую подходящую уходящую группу, в присутствии карбоната калия или другого соответствующего основания (например, карбоната цезия, ортофосфата калия и т.д.) в ДМФ или другом соответствующем растворителе при температуре от 20 до 180°С. Соединение формулы 10 может быть получено из соединения формулы 9 с помощью взаимодействия с мезилхлоридом или другим соответствующим активирующим агентом (например, тозилхлоридом, оксихлоридом фосфора и т.д.) в присутствии пиридина или другого соответствующего основания в дихлорметане или другом соответствующем растворителе при температуре от -20°С до 180°С.
Альтернативно, соединения формулы 2 могут быть получены в соответствии со схемой VII.
Схема VII
о
Соединение формулы 2 может быть получено из соединения формулы 11 с помощью взаимодействия с соединением формулы 12 и EDC или другим соответствующим связывающим агентом (например, DIC, HATU и т.д.) в присутствии ДМАП или другого соответствующего катализатора и ДИЭА или другого соответствующего основания в дихлорметане или другом соответствующем растворителе (например, ДМФ, ДХЭ и т.д.) при температуре от 0 до 180°С.
Альтернативно, соединения формулы 2 могут быть получены в соответствии со схемой VIII.
Соединение формулы 2 может быть получено из соединения формулы 13 с помощью взаимодействия с соединением формулы 14 и EDC или другим соответствующим связывающим агентом (например, DIC, HATU и т.д.) в присутствии ДМАП или другого соответствующего катализатора и ДИЭА или другого соответствующего основания в дихлорметане или другом соответствующем растворителе (например, ДМФ, ДХЭ и т.д.) при температуре от 0 до 180°С.
рКа для катионных липидов
Соединения формулы (I) представляют собой катионные липиды, используемые для доставки биологически активных агентов в клетки и ткани. Было обнаружено, что липидные композиции для доставки биологически активных агентов могут быть приспособлены преимущественно для целевого одного типа клеток или органа по сравнению с другим, изменяя только катионный липид в составе. Например, катионный липид с рКа от приблизительно 5, 1 до приблизительно 7,4, как правило, эффективен при использовании в составе для доставки в печень. В одном варианте осуществления рКа катионного липида составляет от приблизительно 5,1 до приблизительно 7,4 для доставки в печень. В другом варианте осуществления рКа катионного липида составляет от приблизительно 5,3 до приблизительно 7,0 для доставки в печень. В другом варианте осуществления рКа катионного липида составляет от приблизительно 5,3 до приблизительно 6,6 для доставки в печень. Для доставки в опухоль катионный липид с рКа от приблизительно 5,3 до приблизительно 6,4 является наиболее эффективным при использовании в составе для доставки биологически активного агента в опухоль. Таким образом, в одном варианте осуществления рКа катионного липида составляет от приблизительно 5,3 до приблизительно 6,4 для доставки в опухоли. В другом варианте осуществления рКа катионного липида составляет от приблизительно 5,4 до приблизительно 6,2 для доставки в опухоли. В другом варианте осуществления рКа катионного липида составляет от приблизительно 5,8 до приблизительно 6,1 для доставки в опухоли. В целях иммунизации рКа
- 22 030650
катионного липида является эффективным от 5,0 до 7,6, например, от 5,7 до 5,9 (см. WO2012/006378).
Липидные композиции
Настоящее изобретение предоставляет липидную композицию, содержащую по меньшей мере одно соединение формулы (I), т.е. липидную композицию изобретения. В одном варианте осуществления присутствует по меньшей мере один другой липидный компонент. Такие композиции также могут содержать биологически активный агент, необязательно в комбинации с одним или более другими липидными компонентами.
Один вариант осуществления настоящего изобретения предоставляет липидную композицию, содержащую соединение формулы (I) и другой липидный компонент. Такие другие липидные компоненты включают, но не ограничиваются ими, катионные липиды, нейтральные липиды, анионные липиды, хелперные липиды и скрытые липиды.
Катионные липиды, пригодные для использования в липидной композиции по изобретению включают, но не ограничиваются ими, Н,Н-диолеил-Н,Н-диметиламмония хлорид (DODAC), Ν,Ν-дистеарилΝ,Ν-диметиламмония бромид (DDAB), №(1-(2,3-диолеоилокси)пропил)-Л4,№триметиламмония хлорид (DOTAP), 1,2-диолеоил-3-диметиламмоний-пропан (DODAP), №(1-(2,3-диолеилокси)пропил)-Л44триметиламмония хлорид (ДОТМА), 1,2-диолеоилкарбамил-3-диметиламмония-пропан (DOCDAP), 1,2дилинеоил-3-диметиламмония-пропан (DLINDAP), дилаурил (C12:0) триметиламмония пропан (DLTAP), диоктадециламидоглицилспермин (DOGS), DC-Chol, диолеоилокси-Л-(2-(сперминкарбоксамидо)этил)4№диметил-1-пропанаминия трифторацетат (DOSPA), 1,2-димиристилоксипропил-3-диметилгидроксиэтиламмиония бромид (DMRIE), 3-диметиламино-2-(холест-5-ен-3-бета-оксибутан-4-окси)-1(цис,цис-9,12-октадекадиенокси)пропан (CLinDMA), 4№диметил-2,3-диолеилокси)пропиламин (DODMA), 2-[5'-(холест-5-ен-3[бета]-окси)-3'-оксапентокси)-3-диметил-1-(цис,цис-9',12'-октадекадиенокси)пропан (CpLinDMA), и Н№диметил-3,4-диолеилоксибензиламин (DMOBA), и 1,2-N,N'диолеилкарбамил-3-диметиламинопропан (DOcarbDAP). В одном варианте осуществления катионный липид представляет DOTAP или DLTAP.
Нейтральные липиды, пригодные для использования в липидной композиции изобретения, включают, например, различные нейтральные, незаряженные или цвиттер-ионные липиды. Примеры нейтральных фосфолипидов, пригодных для использования в настоящем изобретении, включают, но не ограничиваются ими: 5-гептадецилбензол-1,3-диол (резорцин), холестерина гемисукцинат (CHEMS), дипальмитоилфосфатидилхолин (ДПФХ), дистеароилфосфатидилхолин (ДСФХ), фосфохолин (ДОФХ), димиристоилфосфатидилхолин (ДМФХ), фосфатидилхолин (ПЛФХ), 1,2-дистеароил^шглицеро-3фосфохолин (DAPC), фосфатидилэтаноламин (ФЭ), яичный фосфатидилхолин (ЯФХ), дилаурилоилфосфатидилхолин (ДЛФХ), димиристоилфосфатидилхолин (ДМФХ), 1-миристоил-2-пальмитоилфосфатидилхолин (МПФХ), 1-пальмитоил-2-миристоилфосфатидилхолин (ПМФХ), 1-пальмитоил-2стеароилфосфатидилхолин (ПСФХ), 1,2-диарахидоил^шглицеро-3-фосфохолин (DBPC), 1-стеароил-2пальмитоилфосфатидилхолин (СПФХ), 1,2-диэйкозеноил^шглицеро-3-фосфохолин (ДЭФХ), пальмитоилолеоилфосфатидилхолин (ПОФХ), лизофосфатидилхолин, диолеоилфосфатидилэтаноламин (ДОФЭ), дилинолеоилфосфатидилхолин, дистеароилфосфатидилэтаноламин (ДСФЭ), димиристоилфосфатидилэтаноламин (ДМФЭ), дипальмитоилфосфатидилэтаноламин (ДПФЭ), пальмитоилолеоилфосфатидилэтаноламин (ПОФЭ), лизофосфатидилэтаноламин и их комбинации. В одном варианте осуществления нейтральный фосфолипид выбран из группы, состоящей из дистеароилфосфатидилхолина (ДСФХ) и димиристоилфосфатидилэтаноламина (ДМФЭ).
Анионные липиды, пригодные для использования в настоящем изобретении, включают, но не ограничиваются ими, фосфатидилглицерин, кардиолипин, диацилфосфатидилсерин, диацилфосфатидную кислоту, N-додеканоилфосфатидилэтаноламин, N-сукцинилфосфатидилэтаноламин, N-глутарилфосфатидилэтаноламин и лизилфосфатидилглицерин.
Подходящие нейтральные и анионные липиды также включают описанные в US 2009/0048197.
Хелперные липиды представляют собой липиды, которые до некоторой степени усиливают трансфекцию (например, трансфекцию наночастицы, включающей биологически активный агент). Механизм, с помощью которого хелперный липид усиливает трансфекцию, может включать, например, повышение стабильности частиц и/или усиление мембранной фузогенности. Хелперные липиды включают стероиды и алкилрезорцины. Хелперные липиды, пригодные для использования в настоящем изобретении, включают, но не ограничиваются ими, холестерин, 5-гептадецилрезорцин и холестерина гемисукцинат.
Скрытые липиды представляют собой липиды, которые увеличивают период времени, в течение которого наночастицы могут существовать in vivo (например, в крови). Скрытые липиды, пригодные для использования в липидной композиции изобретения, включают, но не ограничиваются ими, скрытые липиды, содержащие гидрофильную головку, связанную с липидным фрагментом. Примеры таких скрытых липидов включают соединения формулы (XI), как описано в WO 2011/076807
- 23 030650
или их соль или фармацевтически приемлемое производное, где
Z представляет собой компонент гидрофильной головки, выбранный из ПЭГ и полимеров на основе поли(оксазолина), поли(этиленоксида), поли(винилового спирта), поли(глицерина), поли(К-винилпирролидона), поли[Ы-(2-гидроксипропил)метакриламида], полисахаридов и поли(аминокислот), в котором полимер может быть линейным или разветвленным и в котором полимер может быть необязательно замещенным;
в которой Z полимеризован с помощью n субъединиц;
n представляет собой среднечисловую степень полимеризации от 10 до 200 единиц Z, где n оптимизирован для различных типов полимеров;
L1 необязательно замещен С1-10алкиленовым или С1-10гетероалкиленовым линкером, включая ноль, один, два или более из простого эфира (например, -O-), сложного эфира (например, -С(О)О-), сукцината (например, -О(О) С-СН2-СН2-С(О)О-)), карбамата (например, -OC(O)-NR'-), карбоната (например, -ОС(О)О-), кетона (например, -С-С(О)-С-), карбонила (например, -С(О)-), мочевины (например, -NRC^NR’-), амина (например, -NR'-), амида (например, -C(O)NR'-), имина (например, -C(NR')-), тиоэфира (например, -S-), ксантата (например, -ОС(8)8-) и фосфодиэфира (например, -ОР(О)2О-); любой из которых может быть замещен нулевой, одной или более Z группами;
где R' независимо выбран из -Н, -NH-, -NH2, -О-, -S-, фосфата или необязательно замещенного С1-10алкилена;
X1 и Х2 независимо выбраны из углерода или гетероатома, выбранного из -NH-, -О-, -S- или фосфата;
A1 и А2 независимо выбраны из С6-30алкила, С6-30алкенила и С6-30алкинила, где A1 и А2 могут быть одинаковыми или различными,
или где A1 и А2 вместе с атомом углерода, к которому они присоединены, образуют необязательно замещенный стероид.
Определенные скрытые липиды включают, но не ограничиваются ими, липиды, перечисленные в табл. 3.
Таблица 3. Скрытые липиды
Скрытый липид Липид
S001 \ о
S002
S003 , ГнТ2/ )— г „ Ί ? 1 Τ Η I А п
S004
S005 Q - N 0
- 24 030650
S006 θ г"··"'”'-"·""""· L J45 H
S007 Q Д0----''~'<-·--·'-'· H
S008
S009 ,. V -00 .
SO1O +°^0^d°XCCCCCCr
SOU +ο-Ά'^·-'χji"<a ΧΧΧΧΧΧΧ0
S012 г 1^ d ? ГУа<1 0
S013 4Ο«1θ'·'«'»ΑθΓν4Ζνννχ
S014 θД" о ''''' '1 '"^ ο v-^'-'·^4'-'''
S015 Д ^УУСССОУ
S016 Д5'о^-^ы
S017 -ΨΛ L В- H
- 25 030650
Другие скрытые липиды, пригодные для использования в липидной композиции по настоящему изобретению, и информацию о биохимии таких липидов можно найти в Romberg et al., Pharmaceutical Research, vol. 25, No. 1, 2008, p. 55-71 и Hoekstra et al., Biochimica et Biophysica Acta 1660 (2004) 41-52.
- 26 030650
В одном варианте осуществления подходящий скрытый липид содержит группу, выбранную из ПЭГ (иногда называемого как поли(этиленоксид) и полимеров на основе поли(оксазолина), поливинилового спирта), поли(глицерина), поли(Хвинилпирролидона), полиаминокислот и поли[Х(2гидроксипропил)метакриламида]. Дополнительные подходящие ПЭГ-липиды раскрыты, например, в WO 2006/007712.
Определенные подходящие скрытые липиды включают полиэтиленгликоль-диацилглицерин или полиэтиленгликоль-диацилгликамид (ПЭГ-DAG) конъюгаты, включая содержащие диалкилглицериновую или диалкилгликамидную группу, имеющую длину алкильной цепи, независимо содержащей от приблизительно C4 до приблизительно C40 насыщенных или ненасыщенных атомов углерода. Диалкилглицериновая или диалкилгликамидная группа может дополнительно содержать одну или более замещенных алкильных групп. В любом из вариантов осуществления, описанных в настоящей заявке, конъюгат ПЭГ может быть выбран из ПЭГ-дилаурилглицерина, ПЭГ-димиристилглицерина (ПЭГ-DMG) (каталожный # GM-020 от NOF, Токио, Япония), ПЭГ-дипальмитоилглицерина, ПЭГ-дистерилглицерина, ПЭГ-дилаурилгликамида, ПЭГ-димиристилгликамида, ПЭГ-дипальмитоилгликамида и ПЭГдистерилгликамида, ПЭГ-холестерина (1-[8'-(холест-5-ен-3[бета]окси)карбоксамидо-3',6'-диоксаоктанил] карбамоил-[омега] метил-поли(этиленгликоля), ПЭГ-DMB (3,4-дитетрадекоксибензил-[омега]метилполи(этиленгликолевого)эфира), 1,2-димиpистоил-sn-глицеpо-3-фосфоэтаноламин-N-[метокси(полиэтиленгликоля)-2000] (каталожный # 880150Р от Avanti Polar Lipids, Alabaster, Алабама, США).
В одном варианте осуществления скрытый липид представляет собой S010, S011 или S024.
В другом варианте осуществления скрытый липид представляет собой ПЭГ-димиристилглицерин (ПЭГ-DMG).
Если не указано иное, в контексте настоящего описания термин "ПЭГ" означает любой полимер полиэтиленгликоля или другого полиалкиленового эфира. В одном варианте осуществления ПЭГ представляет собой необязательно замещенный линейный или разветвленный полимер этиленгликоля или этиленоксида. В одном варианте осуществления ПЭГ является незамещенным. В одном варианте осуществления ПЭГ является замещенным, например, одной или более алкильными, алкокси, ацильными или арильными группами. В одном варианте осуществления термин включает сополимеры ПЭГ, такие как ПЭГ-полиуретан или ПЭГ-полипропилен (см., например, J. Milton Harris, Poly(ethylene glycol) chemistry: biotechnical and biomedical applications (1992)); в другом варианте осуществления термин не включает сополимеры ПЭГ. В одном варианте осуществления ПЭГ имеет молекулярную массу от приблизительно 130 до приблизительно 50000, в подварианте осуществления от приблизительно 150 до приблизительно 30000, в подварианте осуществления от приблизительно 150 до приблизительно 20000, в подварианте осуществления от приблизительно 150 до приблизительно 15000, в подварианте осуществления от приблизительно 150 до приблизительно 10000, в подварианте осуществления от приблизительно 150 до приблизительно 6000, в подварианте осуществления от приблизительно 150 до приблизительно 5000, в подварианте осуществления от приблизительно 150 до приблизительно 4000, в подварианте осуществления от приблизительно 150 до приблизительно 3000, в подварианте осуществления от приблизительно 300 до приблизительно 3000, в подварианте осуществления от приблизительно 1000 до приблизительно 3000 и в подварианте осуществления от приблизительно 1500 до приблизительно 2500.
В некоторых вариантах осуществления ПЭГ представляет собой "ПЭГ-2К", также называемый "ПЭГ 2000", который имеет среднюю молекулярную массу приблизительно 2000 дальтон. ПЭГ-2К представлен в настоящем описании с помощью следующей формулы (XIIa), в которой n представляет собой 45, подразумевая, что среднечисловая степень полимеризации составляет приблизительно 45 субъединиц. Однако другие варианты осуществления ПЭГ, известные в данной области техники, могут быть использованы, включая, например, такие, в которых среднечисловая степень полимеризации составляет приблизительно 23 субъединицы (n=23) и/или 68 субъединиц (n=68).
Липидные композиции по изобретению также могут содержать один или более биологически активных агентов, включая, но не ограничиваясь ими, антитела (например, моноклональные, химерные, гуманизированные, нанотела и их фрагменты и т.д.), холестерин, гормоны, пептиды, белки, химиотерапевтические и другие виды противоопухолевых агентов, низкомолекулярные лекарственные средства, витамины, кофакторы, нуклеозиды, нуклеотиды, олигонуклеотиды, ферментативные нуклеиновые кислоты, антисмысловые нуклеиновые кислоты, триплекс-образующие олигонуклеотиды, антисмысловые ДНК или РНК-композиции, химерные ДНК: РНК-композиции, аллозимы, аптамеры, рибозим, ловушки и их аналоги, плазмиды и другие типы экспрессионных векторов, и небольшие молекулы нуклеиновых кислот, агенты РНКи, молекулы короткой интерферирующей нуклеиновой кислоты (киНК), короткой интерферирующей РНК (киРНК), двухцепочечной РНК (дцРНК), микро-РНК (миРНК) и короткой шпилечной РНК (кшРНК), пептидо-нуклеиновую кислоту (ПНК), рибонуклеотид запертой нуклеиновой кислоты (ЗНК), морфолинонуклеотид, треозо-нуклеиновую кислоту (ТНК), гликоль-нуклеиновую кислоту (ГНК), квсиРНК (короткую внутренне сегментированную интерферирующую РНК), аиРНК (асимметри- 27 030650
ческую интерферирующую РНК) и миРНК с 1, 2 или более несоответствиями между смысловой и антисмысловой нитью в соответствующих клетках и/или тканях, таких как в клеточной культуре, объекте или организме. Липидные композиции по изобретению также могут включать мРНК (матричную РНК) в качестве биологически активного агента. Такие соединения могут быть очищенными или частично очищенными, и могут быть встречающимися в природе или синтетическими, и могут быть химически модифицированными. В одном варианте осуществления биологически активный агент представляет собой агент РНКи, молекулу короткой интерферирующей нуклеиновой кислоты (киНК), короткой интерферирующей РНК (киРНК), двухцепочечной РНК (дцРНК), микро-РНК (миРНК) или короткой шпилечной РНК (кшРНК). В одном варианте осуществления биологически активный агент представляет собой агент РНКи, пригодный для опосредования РНК-интерференции (РНКи). В другом варианте осуществления биологически активный агент представляет собой агент миРНК. В другом варианте осуществления биологически активный агент представляет собой мРНК.
Различные способы загрузки биологически активных агентов в липидные композиции, такие как липосомы и липидные наночастицы доступны в данной области техники, включая как пассивные, так и активные способы загрузки. Используемый точный способ может быть выбран на основе многочисленных факторов, которые включают, но не ограничиваются ими, например, биологически активный агент, который должен быть загружен, способ хранения, который используют после загрузки, размер полученной частицы и предполагаемый режим дозирования. Способы включают, например, механическое перемешивание лекарственного средства и липидов во время образования или восстановления липосом, растворение всех компонентов в органическом растворителе и концентрирование их в сухой пленке, образование pH или ионного градиента для внедрения активного агента во внутреннюю часть липосомы, создавая трансмембранный потенциал, и ионофор-опосредованную загрузку. См., например, PCT публикацию WO 95/08986, патент США № 5837282, патент США № 5837282 и патент США № 7811602.
Под "липидной наночастицей" подразумевают частицу, которая содержит множество (т.е. более одной) липидных молекул, физически связанных друг с другом с помощью сил межмолекулярного взаимодействия. Липидные наночастицы могут представлять собой, например, микросферы (включая однослойные и многослойные везикулы, например, липосомы), дисперсную фазу в эмульсии, мицеллы или дисперсную фазу в суспензии.
Липидные наночастицы имеют размер от приблизительно 1 до приблизительно 2500 нм, от приблизительно 1 до приблизительно 1500 нм, от приблизительно 1 до приблизительно 1000 нм, в подварианте осуществления от приблизительно 50 до приблизительно 600 нм, в подварианте осуществления от приблизительно от 50 до 400 нм, в подварианте осуществления от приблизительно 50 до приблизительно 250 нм и в подварианте осуществления от приблизительно 50 до приблизительно 150 нм. Если не указано иное, все размеры, упоминаемые в настоящем описании, представляют собой средние размеры (диаметры) полностью образованной наночастицы, как измерено с помощью метода динамического рассеяния света на Malvern Zetasizer. Образец наночастиц разбавляют в фосфатно-солевом буферном растворе (ФСБ), так что интенсивность представляет собой приблизительно 200-400 кимп. Данные представлены как средневзвешенное значение измерения интенсивности.
Один вариант осуществления настоящего изобретения предоставляет липидную композицию, содержащую соединение формулы (I) и другой липидный компонент. Другой вариант осуществления предоставляет липидную композицию, содержащую соединение формулы (I) и хелперный липид, например, холестерин. Другой вариант осуществления предоставляет липидную композицию, содержащую соединение формулы (I), хелперный липид, например, холестерин и нейтральный липид, например, ДСФХ. Другой вариант осуществления настоящего изобретения предоставляет липидную композицию, содержащую соединение формулы (I), хелперный липид, например, холестерин, нейтральный липид, например, ДСФХ и скрытый липид, например, ПЭГ-DMG, S010, S011 или S024. Другой вариант осуществления настоящего изобретения предоставляет липидную композицию, содержащую соединение формулы (I), хелперный липид, например, холестерин, нейтральный липид, например, ДСФХ, скрытый липид, например, ПЭГ-DMG, S010, S011 или S024 и биологически активный агент, например, киРНК. Другой вариант осуществления настоящего изобретения предоставляет липидную композицию, содержащую соединение формулы (I), хелперный липид, например, холестерин, нейтральный липид, например, ДСФХ, скрытый липид, например, ПЭГ-DMG, S010, S011 или S024 и биологически активный агент, например, мРНК. Другой вариант осуществления настоящего изобретения предоставляет липидную наночастицу, содержащую соединение формулы (I), хелперный липид, например холестерин, нейтральный липид, например ДСФХ, и скрытый липид, например ПЭГ-DMG, S010, S011 или S024, и биологически активный агент, например киРНК. Другой вариант осуществления настоящего изобретения предоставляет липидную наночастицу, содержащую соединение формулы (I), хелперный липид, например, холестерин, нейтральный липид, например ДСФХ, и скрытый липид, например ПЭГ-DMG, S010, S011 или S024, и биологически активный агент, например мРНК.
Варианты осуществления настоящего изобретения также предоставляют липидные композиции, описанные согласно соответствующим молярным соотношениям компонентов липидов в составе, в котором косая черта ("/") обозначает соответствующие компоненты, как предусмотрено в настоящем опи- 28 030650
сании.
Другой вариант осуществления настоящего изобретения представляет собой липидную композицию, содержащую соединение формулы (I) и хелперный липид, например холестерин в липидном молярном соотношении 55-40 соединения формулы (I)/55-40 хелперного липида. Другой вариант осуществления предоставляет липидную композицию, содержащую соединение формулы (I), хелперный липид, например, холестерин и нейтральный липид, например, ДСФХ в липидном молярном соотношении 55-40 соединения формулы (I)/55-40 хелперного липида/15-5 нейтрального липида. Другой вариант осуществления предоставляет липидную композицию, содержащую соединение формулы (I), хелперный липид, например, холестерин, нейтральный липид, например, ДСФХ и скрытый липид, например, ПЭГ-DMG, S010, S011 или S024 в липидном молярном соотношении 55-40 соединения формулы (I)/55-40 хелперного липида/15-5 нейтрального липида/10-1 скрытого липида.
Другой вариант осуществления настоящего изобретения представляет собой липидную композицию, содержащую соединение формулы (I) и хелперный липид, например, холестерин в липидном молярном соотношении 50-40 соединения формулы (I)/50-40 хелперного липида. Другой вариант осуществления предоставляет липидную композицию, содержащую соединение формулы (I), хелперный липид, например, холестерин и нейтральный липид, например, ДСФХ в липидном молярном соотношении 50-40 соединения формулы (I)/50-40 хелперного липида/15-5 нейтрального липида. Другой вариант осуществления предоставляет липидную композицию, содержащую соединение формулы (I), хелперный липид, например, холестерин, нейтральный липид, например, ДСФХ, скрытый липид, например, ПЭГ-DMG, S010, S011 или S024 в липидном молярном соотношении 50-40 соединения формулы (I)/50-40 хелперного липида/15-5 нейтрального липида/5-1 скрытого липида.
Другой вариант осуществления настоящего изобретения представляет собой липидную композицию, содержащую соединение формулы (I) и хелперный липид, например, холестерин в липидном молярном соотношении 47-43 соединения формулы (I)/47-43 хелперного липида. Другой вариант осуществления предоставляет липидную композицию, содержащую соединение формулы (I), хелперный липид, например, холестерин и нейтральный липид, например, ДСФХ в липидном молярном соотношении 47-43 соединения формулы (I)/47-43 хелперного липида/12-7 нейтрального липида. Другой вариант осуществления предоставляет липидную композицию, содержащую соединение формулы (I), хелперный липид, например, холестерин, нейтральный липид, например, ДСФХ, скрытый липид, например, ПЭГ-DMG, S010, S011 или S024 в липидном молярном соотношении 47-43 соединения формулы (I)/47-43 хелперного липида/12-7 нейтрального липида/4-1 скрытого липида.
Другой вариант осуществления настоящего изобретения представляет собой липидную композицию, содержащую соединение формулы (I) и хелперный липид, например, холестерин в липидном молярном соотношении приблизительно 45 соединения формулы (^/приблизительно 44 хелперного липида. Другой вариант осуществления предоставляет липидную композицию, содержащую соединение формулы (I), хелперный липид, например, холестерин и нейтральный липид, например, ДСФХ в липидном молярном соотношении приблизительно 4 5 соединения формулы (^/приблизительно 44 хелперного липида/приблизительно 9 нейтрального липида. Другой вариант осуществления предоставляет липидную композицию, содержащую соединение формулы (I), хелперный липид, например, холестерин, нейтральный липид, например, ДСФХ, скрытый липид, например, ПЭГ-DMG, S010, S011 или S024 в липидном молярном соотношении приблизительно 45 соединения формулы (^/приблизительно 44 хелперного липида/приблизительно 9 нейтрального липида/приблизительно 2 скрытого липида, например, ПЭГ-DMG, S010, S011 или S024.
Предпочтительные соединения формулы (I) для применения в вышеуказанных липидных композициях приведены в примерах 38, 40, 41, 42, 43, 44, 47, 52, 62, 63, 92, 93, 94 и 112. Наиболее предпочтительные соединения приведены в примерах 38 и 52. Предпочтительные биологически активные агенты для применения в вышеуказанных липидных композициях представляют собой киРНК. Другой предпочтительный биологически активный агент для применения в вышеуказанных липидных композициях представляет собой мРНК.
Липидные композиции по настоящему изобретению могут быть дополнительно оптимизированы специалистом в данной области техники с помощью комбинирования катионных липидов с желательным диапазоном рКа, скрытых липидов, хелперных липидов и нейтральных липидов в составах, включая, например, липосомные составы, составы липидных наночастиц (ЛНЧ) и подобные, для доставки в определенные клетки и ткани in vivo. В одном варианте осуществления дополнительную оптимизацию получают с помощью регулирования липидного молярного соотношения между данными различными типами липидов. В одном варианте осуществления дополнительную оптимизацию получают с помощью регулирования одного или более из: желательного размера частиц, соотношения N/P, способов получения и/или режима дозирования (например, количества доз, вводимых в течение некоторого времени, фактической дозы в мг/кг, регулирования времени дозирования, комбинирования с другими терапевтическими средствами и т.д.). Различные методики оптимизации, известные специалисту в данной области техники, относящиеся к вышеперечисленным вариантам осуществления, рассматриваются как часть данного изобретения.
- 29 030650
Общие способы получения липидных наночастиц
Следующие способы могут быть использованы для создания липидных наночастиц изобретения. Для достижения уменьшения размера и/или для повышения однородности размера частиц специалист в данной области техники может использовать стадии способа, изложенные ниже, экспериментируя с различными комбинациями. Кроме того, специалист в данной области техники может применять обработку ультразвуком, фильтрацию или другие методики разделения по размерам, которые используются в липосомальных составах.
Способ получения композиции по изобретению обычно включает предоставление водного раствора, такого как цитратный буфер, содержащего биологически активный агент в первом резервуаре, предоставление второго резервуара, содержащего органический раствор, такой как органический спирт, например, этанол, липида(ов) и затем смешивание водного раствора с органическим раствором липида. Первый резервуар необязательно находится в гидравлическом сообщении со вторым резервуаром. Стадия смешивания необязательно сопровождается стадией инкубирования, стадией фильтрации и стадией разбавления и/или концентрирования. Стадия инкубирования включает выдерживание раствора из стадии смешивания в сосуде в течение от приблизительно 0 до приблизительно 100 ч (предпочтительно от приблизительно 0 до приблизительно 24 ч) при приблизительно комнатной температуре и необязательно в защищенном от света месте. В одном варианте осуществления стадия разбавления следует за стадией инкубирования. Стадия разбавления может включать разбавление водным буфером (например, цитратным буфером), например, с использованием насоса (например, перистальтического насоса). Стадия фильтрации представляет собой ультрафильтрацию. Ультрафильтрация включает концентрирование разбавленного раствора с последующей диафильтрацией, например, с использованием подходящей насосной системы (например, насоса, такого как перистальтический насос или его эквивалент) в сочетании с подходящей ультрафильтрационной мембраной (например, картриджи GE из полых волокон или эквивалент).
В одном варианте осуществления стадия смешивания предоставляет прозрачную единственную фазу.
В одном варианте осуществления после стадии смешивания органический растворитель удаляют для получения суспензии частиц, в которой биологически активный агент инкапсулирован в липид(ы), например, в липидный бислой.
Выбор органического растворителя обычно будет включать рассмотрение полярности растворителя и легкости, с которой растворитель может быть удален при последующих стадиях образования частиц. Органический растворитель, который также используется в качестве солюбилизирующего агента, находится предпочтительно в количестве, достаточном для обеспечения прозрачной однофазной смеси биологически активных агентов и липидов. Органический растворитель может быть выбран из одного или более (например, двух) из хлороформа, дихлорметана, диэтилового эфира, циклогексана, циклопентана, бензола, толуола, метанола и других алифатических спиртов (например, C1-C8), таких как этанол, пропанол, изопропанол, бутанол, трет-бутанол, изобутанол, пентанол и гексанол.
Стадия смешивания может проводиться с помощью любых способов, например, с помощью механических средств, таких как вихревой смеситель.
Способы, используемые для удаления органического растворителя, обычно будут включать диафильтрацию, или испарение при пониженном давлении, или продувку потока инертного газа (например, азота или аргона) через смесь.
В других вариантах осуществления способ дополнительно включает добавление нелипидных поликатионов, которые являются пригодными для осуществления трансформации клеток с применением настоящих композиций. Примеры подходящих нелипидных поликатионов включают, но ограничиваются ими, гексадиметрина бромид (продаваемый под торговым названием ПОЛИБРЕН® от Aldrich Chemical Co., Милуоки, Висконсин, США) или другие соли гексадиметрина. Другие подходящие поликатионы включают, например, соли поли-Ь-орнитина, поли-Ь-аргинина, поли-Ь-лизина, поли^-лизина, полиаллиламина и полиэтиленимина. В некоторых вариантах осуществления образование липидных наночастиц могут проводить или в однофазной системе (например, однофазной Bligh и Dyer или аналогичной смеси водных и органических растворителей), или в двухфазной системе с подходящим перемешиванием.
Липидная наночастица может быть образована в одно- или двухфазной системе. В однофазной системе катионный липид(ы) и биологически активный агент каждый растворяют в объеме однофазной смеси. Объединение двух растворов обеспечивает единую смесь, в которой образуются комплексы. В двухфазной системе катионные липиды связываются с биологически активным агентом (который присутствует в водной фазе) и "втягивают" его в органическую фазу. В одном варианте осуществления липидные наночастицы получают с помощью способа, который включает: (а) взаимодействие биологически активного агента с раствором, содержащим некатионные липиды и детергент, с образованием смеси соединение-липид; (b) взаимодействие катионных липидов со смесью соединение-липид для нейтрализации части отрицательного заряда биологически активного агента и образования заряд-нейтрализованной смеси биологически активного агента и липидов; и (c) удаление детергента из заряд-нейтрализованной смеси.
В одной группе вариантов осуществления раствор нейтральных липидов и детергента представляет
- 30 030650
собой водный раствор. Взаимодействие биологически активного агента с раствором нейтральных липидов и детергента обычно осуществляется с помощью смешивания вместе первого раствора биологически активного агента и второго раствора липидов и детергента. Предпочтительно, раствор биологически активного агента представляет собой также раствор детергента. Количество нейтрального липида, которое используется в настоящем способе, обычно определяется на основе количества используемого катионного липида и обычно представляет собой от приблизительно 0,2 до 5-кратного количества катионного липида, предпочтительно от приблизительно 0,5 до приблизительно 2-кратного количества используемого катионного липида.
Полученная таким образом смесь биологически активного агента-липида взаимодействует с катионными липидами для нейтрализации части отрицательного заряда, который связан с представляющей интерес молекулой (или другими полианионными материалами). Количество используемых катионных липидов обычно представляет собой количество, достаточное для нейтрализации по меньшей мере 50% отрицательного заряда биологически активного агента. Предпочтительно отрицательный заряд будет представлять собой по меньшей мере 70% нейтрализованного, более предпочтительно по меньшей мере 90% нейтрализованного.
Способы, используемые для удаления детергента, обычно включают диализ. Когда присутствуют органические растворители, удаление обычно осуществляют с помощью диафильтрации или испарения при пониженном давлении или с помощью продувки потока инертного газа (например, азота или аргона) через смесь.
В настоящем описании раскрыто устройство для получения композиции по настоящему изобретению. Устройство обычно включает первый резервуар для хранения водного раствора, содержащего биологически активный агент, и второй резервуар для хранения органического раствора липидов. Устройство также обычно включает механизм насоса, способный перекачать водный и органический липидный растворы в область для смешивания или камеру для смешивания по существу при равной скорости потока. В одном варианте осуществления область для смешивания или камера для смешивания включает Tобразный патрубок или его эквивалент, который позволяет водному и органическому потокам жидкости объединиться в качестве вводимых материалов в T-образный соединитель и полученным объединенным водным и органическим растворам выйти из T-образного соединителя в резервуар для сбора или его эквивалент.
Способы доставки биологически активных агентов и лечения заболевания
Катионные липиды формулы (I) и их липидные композиции являются пригодными в фармацевтических композициях или составах, используемых для доставки биологически активных агентов. Составы, содержащие катионные липиды формулы (I) или их липидные композиции, могут находиться в различных формах, включая, но не ограничиваясь ими, агенты, образующие доставку частиц, включая микрочастицы, наночастицы, и трансфекционные агенты, которые являются пригодными для доставки различных молекул в клетки. Определенные составы являются эффективными при трансфекции или доставке биологически активных агентов, таких как антитела (например, моноклональные, химерные, гуманизированные, нанотела и их фрагменты и т.д.), холестерин, гормоны, пептиды, белки, химиотерапевтические и другие виды противоопухолевых агентов, низкомолекулярные лекарственные средства, витамины, кофакторы, нуклеозиды, нуклеотиды, олигонуклеотиды, ферментативные нуклеиновые кислоты, антисмысловые нуклеиновые кислоты, триплекс-образующие олигонуклеотиды, антисмысловые ДНК или РНКкомпозиции, химерные ДНК:РНК-композиции, аллозимы, аптамеры, рибозим, ловушки и их аналоги, плазмиды и другие типы экспрессионных векторов, и небольшие молекулы нуклеиновой кислоты, агенты РНКи, молекулы короткой интерферирующей нуклеиновой кислоты (киНК), короткой интерферирующей РНК (киРНК), двухцепочечной РНК (дцРНК), микро-РНК (миРНК) и короткой шпилечной РНК (кшРНК), молекулы пептидо-нуклеиновой кислоты (ПНК), рибонуклеотид запертой нуклеиновой кислоты (ЗНК), морфолинонуклеотид, треозо-нуклеиновая кислота (ТНК), гликоль-нуклеиновая кислота (ГНК), квсиРНК (короткая внутренне сегментированная интерферирующая РНК), аиРНК (асимметрическая интерферирующая РНК) и миРНК с 1, 2 или более несоответствиями между смысловой и антисмысловой нитью в соответствующих клетках и/или тканях, таких как в клеточной культуре, объекте или организме. Вышеизложенный список биологически активных агентов является только примерным и не предназначен для ограничения. Например, липидные составы также являются эффективными при трансфекции или доставке агентов мРНК в клетку. Такие соединения могут быть очищенными или частично очищенными, и могут быть встречающимися в природе или синтетическими, и могут быть химически модифицированными.
Такие составы, содержащие биологически активные агенты, являются пригодными, например, в предоставлении композиций для предотвращения, ингибирования или лечения заболеваний, состояний или признаков в клетке, объекте или организме. Заболевания, состояния или признаки включают, но не ограничиваются ими, пролиферативные заболевания, включая рак, воспалительное заболевание, отторжение трансплантата и/или ткани, аутоиммунные заболевания или состояния, связанное с возрастом заболевание, неврологическое или нейродегенеративное заболевание, респираторное заболевание, сердечно-сосудистое заболевание, глазное заболевание, метаболическое заболевание, дерматологическое забо- 31 030650
левание, слуховое заболевание, заболевание печени, заболевание почек и т.д.
Количество активного агента, вводимого в одной дозе, представляет собой количество выше минимальной терапевтической дозы, но ниже токсической дозы. Фактическое количество в дозе может быть определено лечащим врачом в зависимости от ряда факторов, таких как история болезни пациента, применение других терапий, биологически активный агент, который предоставляют, и природа заболевания. Количество вводимого биологически активного агента можно регулировать во время лечения в зависимости от ответа пациента на лечение и присутствия или тяжести любых связанных с лечением побочных эффектов. Примерные дозировки и лечение для соединений, которые были одобрены соответствующим надзорным органом, известны и доступны специалисту в данной области техники. Смотри, например, Physician's Desk Reference, 64th ed., Physician's Desk Reference Inc. (2010), Remington's Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing Company, Philadelphia, Pa. (1985) и Remington The Science and Practice of Pharmacy, 21st ed., Lippincott Williams & Williams Publishers (2005).
В одном варианте осуществления однократную дозу биологически активного агента вводят пациенту, нуждающемуся в таком лечении. В одном варианте осуществления вводят многократные дозы, в котором многократные дозы могут вводить одновременно, последовательно или попеременно. В одном варианте осуществления одинаковый состав вводят за несколько доз. В одном варианте осуществления составы отличаются на несколько доз. В различных вариантах осуществления дозы могут вводить один раз в день или в течение одного, двух, трех, четырех или более последующих дней. В одном варианте осуществления дозы вводят один раз в неделю. В одном варианте осуществления дозы вводят один раз в две недели. В одном варианте осуществления пациенты получают, по меньшей мере, два курса лечения и потенциально больше в зависимости от ответа пациента на лечение. В режимах единичного агента общие курсы лечения определяются пациентом и лечащим врачом, основываясь на наблюдаемых ответах и токсичности. Вышеуказанные режимы дозирования должны рассматриваться как неограничивающие примеры. Другие режимы дозирования рассматриваются как находящиеся в пределах объема изобретения и зависят от желаемого терапевтического эффекта.
Изобретение также предоставляет способ лечения заболевания или состояния, включающий стадию введения терапевтически эффективного количества липидной композиции по изобретению пациенту, нуждающемуся в таком лечении. В одном варианте осуществления заболевание или состояние поддается лечению с помощью введения агента киРНК. В другом варианте осуществления заболевание или состояние поддается лечению с помощью введения агента мРНК.
Изобретение также предоставляет применение липидной композиции по изобретению для лечения заболевания или состояния у пациента. В одном варианте осуществления заболевание или состояние поддается лечению с помощью введения агента киРНК. В другом варианте осуществления заболевание или состояние поддается лечению с помощью введения агента мРНК.
Общее количество липидов в композиции, которую вводят, представляет собой в одном варианте осуществления от приблизительно 5 до приблизительно 30 мг липида на мг биологически активного агента (например, киРНК), в другом варианте осуществления от приблизительно 5 до приблизительно 25 мг липида на мг биологически активного агента (например, киРНК), в другом варианте осуществления от приблизительно 7 до приблизительно 25 мг липида на мг биологически активного агента (например, киРНК) и в одном варианте осуществления от приблизительно 7 до приблизительно 15 мг липида на мг биологически активного агента (например, киРНК).
В другом варианте осуществления общее количество липидов в композиции, которую вводят, представляет собой от приблизительно 5 до приблизительно 30 мг липида на мг биологически активного агента (например, мРНК), в другом варианте осуществления от приблизительно 5 до приблизительно 25 мг липида на мг биологически активного агента (например, мРНК), в другом варианте осуществления от приблизительно 7 до приблизительно 25 мг липида на мг биологически активного агента (например, мРНК) и в одном варианте осуществления от приблизительно 7 до приблизительно 15 мг липида на мг биологически активного агента (например, мРНК).
В контексте настоящего описания "лечение" включает улучшающее, радикальное и профилактическое лечение. В контексте настоящего описания "пациент" означает животное, предпочтительно млекопитающее, предпочтительно человека, нуждающегося в лечении.
Термин "терапевтически эффективное количество" относится к количеству соединения по изобретению и биологически активного агента (например, терапевтического соединения), необходимому для лечения или облегчения целевого заболевания или состояния.
Термин "иммунологически эффективное количество" относится к количеству соединения по изобретению и РНК, которая кодирует иммуноген, необходимый для вызывания иммунного ответа, который распознает иммуноген (например, применительно к патогену). Термин "иммуноген" относится к любому веществу или организму, который вызывает иммунный ответ при введении в организм. Фраза "РНК, которая кодирует иммуноген" относится к полинуклеотиду, такому как матричная РНК или репликон, который клетка или организм способен перевести в полипептид в соответствии с последовательностью кодонов таких РНК.
Под используемым в настоящем описании "пролиферативным заболеванием" подразумевают любое
- 32 030650
заболевание, состояние, признак, генотип или фенотип, охарактеризованный нерегулируемым ростом клеток или репликацией, как известно в данной области техники. В одном варианте осуществления пролиферативное заболевание представляет собой рак. В одном варианте осуществления пролиферативное заболевание представляет собой опухоль. В одном варианте осуществления пролиферативное заболевание включает, но не ограничивается ими, например жидкие опухоли, такие как, например, лейкозы, например, острый миелогенный лейкоз (ОМЛ), хронический миелогенный лейкоз (ХМЛ), острый лимфоцитарный лейкоз (ОЛЛ), множественная миелома и хронический лимфоцитарный лейкоз; и солидные опухоли, например, СПИД-ассоциированный рак, такой как саркома Капоши; рак молочной железы; рак костей; рак мозга; рак головы и шеи, неходжкинскую лимфому, аденому, плоскоклеточную карциному, рак гортани, рак желчного пузыря и желчных протоков, рак сетчатки, рак пищевода, рак желудочнокишечного тракта, рак яичников, рак матки, рак щитовидной железы, рак яичек, рак эндометрия, меланому, рак толстой и прямой кишки, рак легких, рак мочевого пузыря, рак предстательной железы, рак легких (включая немелкоклеточную карциному легких), рак поджелудочной железы, саркомы, опухоль Вильмса, рак шейки матки, рак головы и шеи, рак кожи, назофарингеальную карциному, липосаркому, эпителиальную карциному, почечно-клеточную карциному, аденокарциному желчного пузыря, эндометриальную саркому, мультирезистентный рак. В одном варианте осуществления пролиферативное заболевание включает неоваскуляризацию, связанную с ангиогенезом опухоли, макулярную дегенерацию (например, влажную/сухую возрастную макулярную дегенерацию), неоваскуляризацию роговицы, диабетическую ретинопатию, неоваскулярную глаукому, миопическую дегенерацию. В одном варианте осуществления пролиферативное заболевание включает рестеноз и поликистоз почек.
Под используемым в настоящем описании "аутоиммунным заболеванием" подразумевают любое заболевание, состояние, признак, генотип или фенотип, охарактеризованный аутоиммунитетом, как известно в данной области техники. Аутоиммунные заболевания включают, но не ограничиваются ими, например, рассеянный склероз, сахарный диабет, волчанку, склеродерму, фибромиалгию, отторжение при трансплантации (например, профилактический эффект в отношении отторжения аллотрансплантата), пернициозную анемию, ревматоидный артрит, системную красную волчанку, дерматомиозит, тяжелую миастению, эритематозную волчанку, рассеянный склероз и болезнь Грейвса.
Под "инфекционным заболеванием" подразумевают любое заболевание, нарушение или состояние, связанное с инфекционным агентом, таким как вирус, бактерия, гриб, прион или паразит.
Изобретение может быть использовано для иммунизации в отношении патогенов, которые вызывают инфекционное заболевание. Примеры таких патогенов приведены ниже.
Под "неврологическим заболеванием" подразумевают любое заболевание, нарушение или состояние, поражающее центральную или периферическую нервную систему. Неврологические заболевания включают, но не ограничиваются ими, заболевания или нарушения или периферической, или центральной нервной системы, включая, например, болезнь Альцгеймера, аневризму, повреждение мозга, синдром запястного канала, аневризму сосудов головного мозга, хроническую боль, болезнь КрейтцфельдаЯкоба, эпилепсию, хорею Гентингтона, менингит, эпилепсию и другие неврологические заболевания, нарушения и синдромы.
Под "респираторным заболеванием" подразумевают любое заболевание или состояние, поражающее дыхательные пути. Респираторные заболевания включают, но не ограничиваются ими, например, астму, хроническую обструктивную болезнь легких (ХОБЛ), аллергический ринит, синусит, аллергические реакции, затрудненное дыхание, респираторный дистресс-синдром, муковисцидоз, легочную гипертензию или вазоконстрикцию и эмфизему.
Под "сердечно-сосудистым заболеванием" подразумевают заболевание или состояние, поражающее сердце и сосудистую систему. Сердечно-сосудистые заболевания включают, но не ограничиваются ими, например, ишемическую болезнь сердца (ИБС), цереброваскулярную болезнь (ЦВБ), аортальный стеноз, заболевание периферических сосудов, инфаркт миокарда (сердечный приступ), аритмию и застойную сердечную недостаточность.
Под используемым в настоящем описании "глазным заболеванием" подразумевают любое заболевание, состояние, признак, генотип или фенотип глаз и связанных с ними структур. Глазные заболевания включают, но не ограничиваются ими, например, кистозный макулярный отек, диабетическую ретинопатию, решетчатую дистрофию, окклюзию вены сетчатки, окклюзию артерии сетчатки, макулярную дегенерацию (например, возрастную макулярную дегенерацию, такую как влажная ВМД или сухая ВМД), токсоплазмоз, пигментный ретинит, конъюнктивальный разрыв, разрыв роговицы, глаукому и подобные.
Под "метаболическим заболеванием" подразумевают любое заболевание или состояние, поражающее метаболические пути. Метаболическое заболевание может привести к ненормальному метаболическому процессу или врожденному вследствие наследственного нарушения фермента (врожденное нарушение обмена веществ) или приобретенному вследствие заболевания эндокринного органа или недостаточности метаболически важного органа, такого как печень. В одном варианте осуществления метаболическое заболевание включает ожирение, резистентность к инсулину и диабет (например, 1-ого типа и/или диабет 11-ого типа).
Под "дерматологическим заболеванием" подразумевают любое заболевание или состояние кожи,
- 33 030650
дермы или любой подструктуры в ней, такой как волосы, фолликула и т.д. Дерматологические заболевания, нарушения, состояния и признаки могут включать псориаз, эктопический дерматит, рак кожи, такой как меланома и базально-клеточная карцинома, выпадение волос, удаление волос и изменения в пигментации.
Под "слуховым заболеванием" подразумевают любое заболевание или состояние слуховой системы, включая ухо, такое как внутреннее ухо, среднее ухо, наружное ухо, слуховой нерв и любые подструктуры в нем. Слуховые заболевания, нарушения, условия и признаки могут включать потерю слуха, глухоту, шум в ушах, головокружение, нарушение равновесия и координации движения.
В контексте настоящего описания термин "короткая интерферирующая нуклеиновая кислота" (киНК) относится к любой молекуле нуклеиновой кислоты, способной ингибировать или подавлять экспрессию генов или репликацию вируса с помощью опосредования РНК-интерференции (РНКи) или сайленсинга генов последовательно-специфическим образом. Она включает молекулы короткой интерферирующей РНК (киРНК), микроРНК (миРНК), коротких интерферирующих олигонуклеотидов и химически модифицированной короткой интерферирующей нуклеиновой кислоты. киРНК ответственны за РНКинтерференцию, процесс последовательно-специфического посттранскрипционного сайленсинга генов у животных и растений. киРНК генерируются рибонуклеазой III расщепления из более длинной двухцепочечной РНК (дцРНК), которая является гомологичной или специфичной для целевого подавляемого гена.
Термин "РНК-интерференция" (РНКи) представляет собой методику посттранскрипционного целевого сайленсинга генов, которая использует агент РНКи для расщепления матричной РНК (мРНК), содержащей последовательность, которая является такой же как или подобной агенту РНКи. См.: Zamore and Haley, 2005, Science, 309, 1519-1524; Zamore et al., 2000, Cell, 101, 25-33; Elbashir et al., 2001, Nature, 411, 494-498; и Kreutzer et al., PCT Publication WO 00/44895; Fire, PCT Publication WO 99/32619; Mello and Fire, PCT Publication WO 01/29058; и подобные.
В контексте настоящего описания РНКи соответствует другим терминам, применяемым для описания последовательно-специфической РНК-интерференции, таким как посттранскрипционный сайленсинг генов, ингибирование трансляции, ингибирование транскрипции или эпигенетика. Например, составы, содержащие липиды изобретения, могут быть использованы в сочетании с молекулами киНК для эпигенетически подавления генов или на посттранскрипционном уровне и/или предтранскрипционном уровне. В неограничивающем примере модуляция экспрессии генов с помощью молекул киНК может происходить в результате киНК-опосредованного расщепления РНК (или кодирующей, или некодирующей РНК) с помощью RISC или альтернативно ингибирования трансляции, как известно в данной области техники. В другом варианте осуществления модуляция экспрессии генов с помощью киНК может происходить в результате ингибирования транскрипции, такой как сообщается, например, в Janowski et al., 2005, Nature Chemical Biology, 1, 216-222.
Термин "ингибитор РНКи" представляет собой любую молекулу, которая может подавлять (например, снижать или ингибировать) функцию или активность РНК-интерференции в клетке или у пациента. Ингибитор РНКи может подавлять, снижать или ингибировать РНКи (например, РНКи-опосредованное расщепление целевого полинуклеотида, ингибирование трансляции или подавление транскрипции) с помощью взаимодействия или вмешательства в функцию любого компонента пути РНКи, включая белковые компоненты, такие как RISC или компоненты нуклеиновых кислот, такие как миРНК или киРНК. Ингибитор РНКи может представлять собой молекулу киНК, антисмысловую молекулу, аптамер или небольшую молекулу, которая взаимодействует или вмешивается в функцию RISC, миРНК, или киРНК, или любой другой компонент пути РНКи в клетке или у пациента. При ингибировании РНКи (например, РНКи-опосредованном расщеплении целевого полинуклеотида, ингибировании трансляции или подавлении транскрипции) ингибитор РНКи может быть использован для модуляции (например, активации или подавления) экспрессии целевого гена. В одном варианте осуществления ингибитор РНК используется для активации экспрессии генов с помощью вмешательства (например, уменьшения или предотвращения) в эндогенное подавление или ингибирование экспрессии генов через ингибирование трансляции, ингибирование транскрипции или RISC-опосредованное расщепление полинуклеотида (например, мРНК). Сталкиваясь с механизмами эндогенной репрессии, сайленсинга или ингибирования экспрессии генов, ингибиторы РНКи изобретения, следовательно, могут быть использованы для активации экспрессии генов для лечения заболеваний или состояний, возникающих в результате потери функции. Термин "ингибитор РНКи" используют взаимозаменяемо с термином "киРНК" в различных вариантах осуществления в настоящем описании.
Термин "матричная рибонуклеиновая кислота" (матричная РНК, мРНК) относится к молекуле рибонуклеиновой кислоты (РНК), которая опосредует перенос генетической информации к рибосомам в цитоплазме, где она служит в качестве основы для синтеза белка. Она синтезируется из матричной ДНК в течение процесса транскрипции. См. The American Heritage® Dictionary of the English Language, Fourth Edition (Updated in 2009). Houghton Mifflin Company.
"Рибонуклеиновая кислота" (РНК) представляет собой полимер нуклеотидов, соединенных фосфодиэфирной связью, в котором каждый нуклеотид содержит рибозу или ее модификацию в качестве компонента сахара. Каждый нуклеотид содержит аденин (А), гуанин (G), цитозин (С), урацил (U) или их мо- 34 030650
дификации в качестве основания. Генетическая информация в молекуле мРНК закодирована в последовательности нуклеотидных оснований молекулы мРНК. которые расположены в кодонах. состоящих из трех нуклеотидных оснований каждый. Каждый кодон кодирует определенную аминокислоту полипептида за исключением стоп-кодонов. которые останавливают трансляцию (синтез белка). В живой клетке мРНК транспортируется в рибосому. место синтеза белка. где она предоставляет генетическую информацию для синтеза белка (трансляции). Для подробного описания см. Alberts В et al. (2007) Molecular Biology of the СеИ. Fifth Edition. Garland Science.
В эукариотах мРНК транскрибируется in vivo в хромосомах с помощью клеточного фермента РНКполимеразы. Во время или после транскрипции in vivo 5'-кэп (также называемый РНК-кэп. РНК-7метилгуанозин-кэп или РНК m7G кэп) добавляют in vivo к 5'-концу мРНК. 5'-кэп представляет собой конечный 7-метилгуанозиновый остаток. который связан через 5'-5'-трифосфатную связь с первым транскрибируемым нуклеотидом. Кроме того. большинство эукариотических молекул мРНК имеют полиаденилильный фрагмент ("поли(А)хвост") на 3'-конце молекулы мРНК. In vivo эукариотическая клетка добавляет поли(А)хвост после транскрипции часто длиной приблизительно 250 остатков аденозина. Таким образом. типичная зрелая эукариотическая мРНК имеет структуру. которая начинается в 5'-конце мРНК кэп нуклеотида с последующей 5'-нетранслируемой областью (5'UTR) нуклеотидов. затем открытой рамкой считывания. которая начинается с инициирующего кодона. который представляет собой триплет AUG нуклеотидных оснований. то есть кодирующую последовательность для белка. и которая заканчивается стоп-кодоном. который может представлять собой триплет UAA. UAG или UGA нуклеотидных оснований. затем 3'-нетранслируемой областью (3'UTR) нуклеотидов и заканчивая полиаденозиновым хвостом. Принимая во внимание. что характерные особенности типичной зрелой эукариотической мРНК выработаны естественным образом в эукариотической клетке in vivo. такие же или структурно и функционально эквивалентные характерные особенности могут быть получены in vitro с использованием методов молекулярной биологии. Соответственно. любая РНК. имеющая структуру. подобную типичной зрелой эукариотической мРНК. может функционировать как мРНК и находится в рамках термина "матричная рибонуклеиновая кислота".
Молекула мРНК обычно имеет размер. при котором она может быть инкапсулирована в липидную наночастицу изобретения. В то время как размер молекулы мРНК варьируется в природе в зависимости от идентификации видов мРНК. которая кодирует определенный белок. средний размер молекулы мРНК составляет 500-10000 оснований.
В контексте настоящего описания термин "ферментативная нуклеиновая кислота" относится к молекуле нуклеиновой кислоты. которая обладает комплементарностью в субстрат-связывающей области к определенному целевому гену и также имеет ферментативную активность. которая действует для специфического расщепления целевой РНК. при этом инактивируя молекулу целевой РНК. Комплементарные участки обеспечивают достаточную гибридизацию молекулы ферментативной нуклеиновой кислоты к целевой РНК и таким образом допускают расщепление. Комплементарность 100% является предпочтительной. но комплементарность только 50-75% также может быть пригодной в данном изобретении (см. например. Werner and Uhlenbeck. 1995. Nucleic Acids Research. 23. 2092-2096; Hammann et al.. 1999. Antisense and Nucleic Acid Drug Dev.. 9. 25-31). Нуклеиновые кислоты могут быть модифицированы в основании. сахаре и/или фосфатных группах. Термин ферментативная нуклеиновая кислота используется взаимозаменяемо с фразами. такими как рибозимы. каталитическая РНК. ферментативная РНК. каталитическая ДНК. аптазим или аптамер-связывающий рибозим. способный к регулированию рибозим. каталитические олигонуклеотиды. нуклеозим. ДНКзим. РНК-фермент. эндорибонуклеаза. эндонуклеаза. минизим. лидзим. олигозим или ДНК-фермент. Все данные терминологии описывают молекулы нуклеиновой кислоты с ферментативной активностью. Основные особенности молекулы ферментативной нуклеиновой кислоты заключаются в том. что она имеет специфический субстрат-связывающий участок. который является комплементарным к одной или более целевым областям нуклеиновых кислот. и что она имеет нуклеотидные последовательности в пределах или окружающие тот субстрат-связывающий участок. которые придают активность расщепления и/или лигирования нуклеиновой кислоты молекуле (см. например. Cech et al.. патент США 4987071; Cech et al.. 1988. 260 JAMA 3030). Рибозимы и молекулы ферментативной нуклеиновой кислоты по изобретению могут быть химически модифицированными. например. как описано в данной области техники и далее в настоящей заявке.
В контексте настоящего описания термин "антисмысловая нуклеиновая кислота" относится к молекуле неферментативной нуклеиновой кислоты. которая связывается с целевой РНК посредством РНКРНК. или РНК-ДНК. или РНК-ПНК (пептидная нуклеиновая кислота; Egholm et al.. 1993 Nature 365. 566) взаимодействий и изменяет активность целевой РНК (для обзора см. Stein and Gieng. 1993 Science 261. 1004 и Woolf et al.. патент США 5849902). Антисмысловая ДНК может быть синтезирована химически или экспрессирована с помощью использования экспрессионного вектора одноцепочечной ДНК или его эквивалента. Антисмысловые молекулы по изобретению могут быть химически модифицированными. например. как описано в данной области техники.
В контексте настоящего описания термин "активирующая область РНазы Н". относится к области (обычно более чем или равной 4-25 нуклеотидов в длину. предпочтительно 5-11 нуклеотидов в длину)
- 35 030650
молекулы нуклеиновой кислоты, способной связываться с целевой РНК с образованием нековалентного комплекса, который распознается клеточным ферментом РНазой Н (см., например, Arrow et al., патент США 5849902; Arrow et al., патент США 5989912). Фермент РНаза Н связывается с комплексом молекулы нуклеиновой кислоты - целевой РНК и расщепляет последовательность целевой РНК.
В контексте настоящего описания термин "2-5А антисмысловая химера" относится к антисмысловому олигонуклеотиду, содержащему 5'-фосфорилированный 2'-5'-связанный аденилатный остаток. Данные химеры связываются с целевой РНК последовательно-специфическим образом и активируют клеточную 2-5А-зависимую рибонуклеазу, которая, в свою очередь, расщепляет целевую РНК (Torrence et al., 1993 Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90, 1300; Silverman et al., 2000, Methods Enzymol., 313, 522-533; Player and Torrence, 1998, Pharmacol. Ther., 78, 55-113). Молекулы 2-5A антисмысловой химеры могут быть химически модифицированными, например, как описано в данной области техники.
В контексте настоящего описания термин "триплекс-образующие олигонуклеотиды" означает олигонуклеотид, который может связываться с двухцепочечной ДНК последовательно-специфическим образом для получения трехниточной спирали. Было показано, что образование такой структуры тройной спирали ингибирует транскрипцию целевого гена (Duval-Valentin et al., 1992 Proc. Natl. Acad. Sci. USA 89, 504; Fox, 2000, Curr. Med. Chem., 7, 17-37; Praseuth et. al., 2000, Biochim. Biophys. Acta, 1489, 181-206). Молекулы триплекс-образующего олигонуклеотида по изобретению могут быть химически модифицированными, например, как описано в данной области техники.
В контексте настоящего описания термин "ловушка РНК" относится к молекуле РНК или аптамеру, который предназначен для предпочтительного связывания с предварительно определенным лигандом. Такое связывание может привести к ингибированию или активации целевой молекулы. Ловушка РНК или аптамер может конкурировать с встречающейся в природе связывающей мишенью за связывание определенного лиганда. Подобным образом ловушка РНК может быть предназначена для связывания с рецептором и блокировать связывание эффекторной молекулы или может быть предназначена для связывания с представляющим интерес рецептором и предотвратить взаимодействие с рецептором. Молекулы ловушки по изобретению могут быть химически модифицированными, например, как описано в данной области техники.
В контексте настоящего описания термин "одноцепочечная ДНК" (оцДНК) относится к встречающейся в природе или синтетической молекуле дезоксирибонуклеиновой кислоты, содержащей линейную одиночную цепь, например, оцДНК может быть смысловой и антисмысловой последовательностью гена или EST (экспрессирующейся маркерной последовательностью).
В контексте настоящего описания термин "аллозим" относится к молекуле аллостерической ферментативной нуклеиновой кислоты, включая, например, патент США № 5834186, 5741679, 5589332, 5871914 и публикации PCT № WO 00/24931, WO 00/26226, WO 98/27104 и WO 99/29842.
В контексте настоящего описания термин "аптамер" подразумевает полинуклеотидную композицию, которая специфически связывается с целевой молекулой, в которой полинуклеотид имеет последовательность, которая отличается от последовательности, обычно распознаваемой целевой молекулой в клетке. С другой стороны, аптамер может представлять собой молекулу нуклеиновой кислоты, которая связывается с целевой молекулой, в которой целевая молекула естественным образом не связывается с нуклеиновой кислотой. Целевая молекула может быть любой представляющей интерес молекулой. Молекулы аптамера по изобретению могут быть химически модифицированными, например, как описано в данной области техники.
Состав липидных композиций
Для фармацевтического применения липидные композиции по изобретению могут вводить энтеральными или парентеральными путями, включая внутривенное, внутримышечное, подкожное, чрескожное, через дыхательные пути (аэрозоль), пероральное, интраназальное, ректальное, вагинальное, буккальное, носоглоточное, желудочно-кишечное или сублингвальное введение. Введение может быть системным или местным. Местное введение может включать, например, катетеризацию, имплантацию, осмотический насос, прямую инъекцию, кожное/чрескожное применение, стентирование, ушные/глазные капли или введение в воротную вену. Соединения формулы (I) должны быть оценены в отношении их биофармацевтических свойств, таких как растворимость и стабильность раствора (через pH), проницаемость и т. д., чтобы выбрать наиболее подходящую лекарственную форму и путь введения для лечения предполагаемого показания.
Композиции по изобретению обычно, но не обязательно, будут введены в виде состава в сочетании с одним или более фармацевтически приемлемыми эксципиентами. Термин "эксципиент" включает любой ингредиент, отличный от соединения(й) изобретения, другой липидный компонент(ы) и биологически активный агент. Эксципиент может придать или функциональные (например, контроль скорости высвобождения лекарственного средства) и/или нефункциональные (например, вспомогательное вещество или разбавитель) характерные особенности составам. Выбор эксципиента в значительной степени будет зависеть от таких факторов, как определенный способ введения, влияние эксципиента на растворимость и стабильность, и особенность лекарственной формы.
Типичные фармацевтически приемлемые эксципиенты включают
- 36 030650
разбавители, например, лактозу, декстрозу, сахарозу, маннит, сорбит, целлюлозу и/или глицин; смазывающие вещества, например диоксид кремния, тальк, стеариновую кислоту, ее соль магния
или кальция и/или полиэтиленгликоль;
связывающие вещества, например алюмосиликат магния, крахмальную пасту, желатин, трагант, метилцеллюлозу, натрий-карбоксиметилцеллюлозу и/или поливинилпирролидон;
разрыхлители, например крахмалы, агар, альгиновую кислоту, или ее натриевую соль, или шипучие смеси; и/или
абсорбенты, красители, ароматизаторы и/или подсластители.
Эксципиент может представлять собой носитель водного раствора, который может необязательно содержать буферный раствор (например, буферный раствор ФСБ) и/или сахар.
Всестороннее обсуждение фармацевтически приемлемых эксципиентов является доступным в Gennaro, Remington: The Science and Practice of Pharmacy 2000, 20th edition (ISBN: 0683306472).
Композиции по изобретению могут вводить перорально. Пероральное введение может включать глотание, так что соединение поступает в желудочно-кишечный тракт и/или буккальное, лингвальное или сублингвальное введение, с помощью которого соединение попадает в кровоток непосредственно из ротовой полости.
Композиции по изобретению могут вводить парентерально. Соединения и композиции по изобретению могут вводить непосредственно в кровоток, в подкожную ткань, в мышцу или во внутренний орган. Подходящие способы введения включают внутривенное, внутриартериальное, интратекальное, интравентрикулярное, интрауретральное, интрастернальное, интракраниальное, внутримышечное, внутрисуставное и подкожное. Подходящие устройства для введения включают игольные (в том числе микроигольные) инъекторы, безыгольные инъекторы и методики инфузии.
Парентеральные составы обычно представляют собой водные или масляные растворы. Когда раствор является водным, эксципиенты представляют собой, такие как сахара (включая, но не ограничиваясь ими, глюкозу, маннит, сорбит и т. д.), соли, углеводы и буферные агенты (предпочтительно pH от 3 до 9), но для некоторых применений они могут быть более подходяще приготовлены в виде стерильного неводного раствора или в виде сухой формы, которые будут использоваться в сочетании с подходящим наполнителем, таким как стерильная апирогенная вода (ВДИ).
Парентеральные составы могут включать импланты, полученные из разлагаемых полимеров, таких как полиэфиры (т. е. полимолочная кислота, полилактид, полилактид-ко-гликолид, поликапролактон, полигидроксибутират), полиортоэфиры и полиангидриды. Данные составы могут вводить через хирургический разрез в подкожную ткань, мышечную ткань или непосредственно в определенные органы.
Получение парентеральных составов в стерильных условиях, например, с помощью лиофилизации может быть легко осуществлено с использованием стандартных фармацевтических методик, хорошо известных специалисту в данной области техники.
Растворимость соединений и композиций, используемых при получении парентеральных растворов, может быть увеличена с помощью использования соответствующих методик получения, таких как включение сорастворителей и/или повышающих растворимость агентов, таких как поверхностноактивные вещества, мицеллярные структуры и циклодекстрины.
Композиции по изобретению могут вводить интраназально или с помощью ингаляции, обычно в форме сухого порошка (или отдельно, в виде смеси, например, в сухой смеси с лактозой, или в виде частиц смешанных компонентов, например, в смеси с фосфолипидами, такими как фосфатидилхолин) из ингалятора сухого порошка, в форме аэрозольного спрея из герметичного контейнера, насоса, разбрызгивателя, распылителя (предпочтительно распылителя с использованием электрогидродинамики для получения мелкодисперсного тумана) или небулайзера с использованием или без использования подходящего пропеллента, такого как 1,1,1,2-тетрафторэтан или 1,1,1,2,3,3,3-гептафторпропан или в форме назальных капель. Для интраназального применения порошок может содержать биоадгезивный агент, например, хитозан или циклодекстрин.
Герметичный контейнер, насос, разбрызгиватель, распылитель или небулайзер содержит раствор или суспензию соединения(й) по изобретению, содержащую, например, этанол, водный этанол или подходящий альтернативный агент для диспергирования, солюбилизации или продления высвобождения композиций изобретения, пропеллент(ы) в качестве растворителя и необязательное поверхностноактивное вещество, такое как сорбитан триолеат, олеиновая кислота или олигомолочная кислота.
Перед использованием в составе сухого порошка или суспензии композицию тонко измельчают до размера, подходящего для доставки с помощью ингаляции (обычно менее 5 микрон). Это может быть достигнуто любым подходящим способом измельчения, таким как размол на спиральной струйной мельнице, размол на струйной мельнице с псевдоожиженным слоем, обработка сверхкритической жидкостью для образования наночастиц, гомогенизация под высоким давлением или сушка распылением.
Капсулы (полученные, например, из желатина или гидроксипропилметилцеллюлозы), блистеры и картриджи для применения в ингаляторе или инсуффляторе могут содержать порошкообразную смесь соединения или композиции изобретения, подходящее порошкообразное основание, такое как лактоза или крахмал и модификатор характеристик, такой как лейцин, маннит или стеарат магния. Лактоза мо- 37 030650
жет быть безводной или в форме моногидрата, предпочтительно последнее. Другие подходящие эксципиенты включают декстран, глюкозу, мальтозу, сорбит, ксилит, фруктозу, сахарозу и трегалозу.
Составы для ингаляционного/интраназального введения могут быть получены для немедленного и/или модифицированного высвобождения, используя, например, PGLA. Составы с модифицированным высвобождением включают отсроченное, замедленное, прерывистое, контролируемое, направленное и запрограммированное высвобождение.
Подходящие составы для трансдермального применения включают терапевтически эффективное количество соединения или композиции по изобретению с носителем. Предпочтительные носители включают легко поглощаемые фармакологически приемлемые растворители, способствующие проникновению через кожу организма-хозяина. Характерно, трансдермальные устройства находятся в виде повязки, содержащей поддерживающий элемент, резервуар, содержащий соединение необязательно в смеси с носителями, необязательно регулирующий скорость барьер для доставки соединения в кожу организма-хозяина с контролируемой и предварительно определенной скоростью в течение длительного периода времени и средства для доставки устройства в кожу.
Липидные композиции по изобретению вводят с помощью любого из ряда способов, включая парентеральный, внутривенный, системный, местный, пероральный, внутриопухолевый, внутримышечный, подкожный, внутрибрюшинный, ингаляционный или любой такой способ доставки. В одном варианте осуществления композиции вводят парентерально, т. е. внутрисуставно, внутривенно, внутрибрюшинно, подкожно или внутримышечно. В определенном варианте осуществления липосомальные композиции вводят с помощью внутривенной инфузии или внутрибрюшинно с помощью болюсной инъекции.
Липидные композиции по изобретению могут быть получены в виде фармацевтических композиций, пригодных для доставки объекту. Фармацевтические композиции по изобретению будут часто дополнительно содержать один или более буферных растворов (например, нейтральный забуференный раствор или фосфатно-солевой буферный раствор), углеводы (например, глюкозу, маннозу, сахарозу, декстрозу или декстраны), маннит, белки, полипептиды или аминокислоты, такие как глицин, антиоксиданты, бактериостатические средства, хелатирующие агенты, такие как ЭДТА или глутатион, адъюванты (например, гидроксид алюминия), растворенные вещества, которые делают состав изотоническим, гипотоническим или слабо гипертоническим по отношению к крови реципиента, суспендирующие агенты, загущающие агенты и/или консерванты. Альтернативно, композиции по настоящему изобретению могут быть получены в виде лиофилизата.
Подходящие составы для использования в настоящем изобретении могут быть найдены, например, в Remington's Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing Company, Philadelphia, Pa., 17.sup.th Ed. (1985). Часто внутривенные композиции будут содержать раствор липосом, суспендированных в приемлемом носителе, таком как водный носитель.
В одном варианте осуществления данное изобретение предоставляет фармацевтическую композицию (т. е. состав), содержащую липидную композицию по изобретению и фармацевтически приемлемый носитель или эксципиент. В другом варианте осуществления, по меньшей мере, один другой липидный компонент присутствует в липидной композиции. В другом варианте осуществления липидная композиция находится в форме липосомы. В другом варианте осуществления липидная композиция находится в форме липидной наночастицы. В другом варианте осуществления липидная композиция пригодна для доставки в печень. В другом варианте осуществления липидная композиция пригодна для доставки в опухоль. В другом варианте осуществления биологически активный агент представляет собой ДНК или РНК. В другом варианте осуществления биологически активный агент представляет собой киРНК. В другом варианте осуществления биологически активный агент представляет собой мРНК.
В целях иммунизации композицию обычно получают в виде инъекционного лекарственного средства и будут вводить с помощью инъекции (например, с помощью внутримышечной инъекции).
Изобретение также предоставляет устройство для доставки (например, шприц, небулайзер, распылитель, ингалятор, кожный пластырь и т.д.), содержащее композицию по изобретению. Данное устройство может быть использовано для введения фармацевтической композиции объекту, например человеку для иммунизации.
Клетки и органы, на которые направлено изобретение
Соединения, композиции, способы и применения по изобретению могут быть использованы для доставки биологически активного агента в одно или более из следующего у пациента:
печень или клетки печени (например, гепатоциты); почку или клетки почки; опухоль или клетки опухоли;
ЦНС или клетки ЦНС (центральную нервную систему, например, мозг и/или спинной мозг);
ПНС или клетки ПНС (периферическую нервную систему); легкое или клетки легкого;
сосудистую систему или клетки сосудистой системы;
кожу или клетки кожи (например, клетки дермы и/или фолликулярные клетки);
глаз или клетки глаз (например, желтое пятно, ямку, роговицу, сетчатку) и ухо или клетки уха (на- 38 030650
пример, клетки внутреннего уха, среднего уха и/или наружного уха).
Соединения, композиции, способы и применения по изобретению также могут быть использованы для доставки биологически активного агента (например, РНК, которая кодирует иммуноген) в клетки иммунной системы.
В одном варианте осуществления соединения, композиции, способы и применения по изобретению служат для доставки биологически активного агента в клетки печени (например, гепатоциты). В одном варианте осуществления соединения, композиции, способы и применения по изобретению служат для доставки биологически активного агента в опухоль или клетки опухоли (например, клетки первичной опухоли или метастатического рака).
Для доставки биологически активного агента в печень или клетки печени в одном варианте осуществления композиция по изобретению взаимодействует с печенью или клетками печени пациента, как общеизвестно в данной области техники, например, посредством парентерального введения (например, внутривенного, внутримышечного, подкожного введения) или местного введения (например, прямой инъекции, инъекции в воротную вену, катетеризации, стентирования), чтобы облегчить доставку.
Для доставки биологически активного агента в почку или клетки почки в одном варианте осуществления композиция по изобретению взаимодействует с почкой или клетками почки пациента, как общеизвестно в данной области техники, например, посредством парентерального введения (например, внутривенного, внутримышечного, подкожного введения) или местного введения (например, прямой инъекции, катетеризации, стентирования), чтобы облегчить доставку.
Для доставки биологически активного агента в опухоль или клетки опухоли в одном варианте осуществления композиция по изобретению взаимодействует с опухолью или клетками опухоли пациента, как общеизвестно в данной области техники, например, посредством парентерального введения (например, внутривенного, внутримышечного, подкожного введения) или местного введения (например, прямой инъекции, катетеризации, стентирования), чтобы облегчить доставку.
Для доставки биологически активного агента в ЦНС или клетки ЦНС (например, клетки головного мозга и/или клетки спинного мозга) в одном варианте осуществления композиция по изобретению взаимодействует с ЦНС или клетками ЦНС (например, клетками головного мозга и/или клетками спинного мозга) пациента, как общеизвестно в данной области техники, например, посредством парентерального введения (например, внутривенного, внутримышечного, подкожного введения) или местного введения (например, прямой инъекции, катетеризации, стентирования, введения осмотического насоса (например, интратекального или вентрикулярного)), чтобы облегчить доставку.
Для доставки биологически активного агента в ПНС или клетки ПНС в одном варианте осуществления композиция по изобретению взаимодействует с ПНС или клетками ПНС пациента, как общеизвестно в данной области техники, например, посредством парентерального введения (например, внутривенного, внутримышечного, подкожного введения) или местного введения (например, прямой инъекции), чтобы облегчить доставку.
Для доставки биологически активного агента в легкое или клетки легкого в одном варианте осуществления композиция по изобретению взаимодействует с легким или клетками легкого пациента, как общеизвестно в данной области техники, например, посредством парентерального введения (например, внутривенного, внутримышечного, подкожного введения) или местного введения (например, ингаляционного введения непосредственно в ткани и клетки легкого), чтобы облегчить доставку.
Для доставки биологически активного агента в сосудистую систему или клетки сосудистой системы в одном варианте осуществления композиция по изобретению взаимодействует с сосудистой системой или клетками сосудистой системой пациента, как общеизвестно в данной области техники, например, посредством парентерального введения (например, внутривенного, внутримышечного, подкожного введения) или местного введения (например, зажима, катетеризации, стентирования), чтобы облегчить доставку.
Для доставки биологически активного агента в кожу или клетки кожи (например, клетки дермы и/или фолликулярные клетки) в одном варианте осуществления композиция по изобретению взаимодействует с кожей или клетками кожи (например, клетками дермы и/или фолликулярными клетками) пациента, как общеизвестно в данной области техники, например, посредством парентерального введения (например, внутривенного, внутримышечного, подкожного введения) или местного введения (например, непосредственного нанесения на кожу, ионофореза), чтобы облегчить доставку.
Для доставки биологически активного агента в глаз или клетки глаза (например, желтое пятно, ямку, роговицу, сетчатку) в одном варианте осуществления композиция по изобретению взаимодействует с глазом или клетками глаза (например, желтым пятном, ямкой, роговицей, сетчаткой) пациента, как общеизвестно в данной области техники, например, посредством парентерального введения (например, внутривенного, внутримышечного, подкожного введения) или местного введения (например, прямой инъекции, внутриглазной инъекции, окологлазной инъекции, субретинального введения, ионофореза, применения глазных капель, имплантатов), чтобы облегчить доставку.
Для доставки биологически активного агента в ухо или клетки уха (например, клетки внутреннего уха, среднего уха и/или наружного уха) в одном варианте осуществления композиция по изобретению
- 39 030650
взаимодействует с ухом или клетками уха (например, клетками внутреннего уха, среднего уха и/или наружного уха) пациента, как общеизвестно в данной области техники, например, посредством парентерального введения (например, внутривенного, внутримышечного, подкожного введения) или местного введения (например, прямой инъекции), чтобы облегчить доставку.
Для доставки биологически активного агента (например, РНК, кодирующей иммуноген) в клетки иммунной системы (например, антигенпредставляющие клетки, включая профессиональные антигенпредставляющие клетки) в одном варианте осуществления композиция по изобретению доставляется внутримышечно, после чего иммунные клетки могут проникнуть в место доставки и обработать доставленную РНК. Такие иммунные клетки могут включать макрофаги (например, полученные из костного мозга макрофаги), дендритные клетки (например, полученные из костного мозга плазмацитоидные дендритные клетки и/или полученные из костного мозга миелоидные дендритные клетки), моноциты (например, моноциты периферической крови человека) и т.д. (например, см. WO 2012/006372).
Иммунизация в соответствии с изобретением
В целях иммунизации изобретение включает доставку РНК, которая кодирует иммуноген. Иммуноген вызывает иммунный ответ, который распознает иммуноген, и поэтому может быть использован для обеспечения иммунитета в отношении патогена, или в отношении аллергена, или в отношении опухолевого антигена. Иммунизация в отношении заболевания и/или инфекции, вызванной патогеном, является предпочтительной.
РНК доставляется с липидной композицией по изобретению (например, с липосомой или ЛНЧ), и обычно изобретение использует липосомы или ЛНЧ, в которые инкапсулируется иммуногенкодирующая РНК. Инкапсулирование в липосомы может защитить РНК от расщепления РНазой.
В одном варианте осуществления изобретение предоставляет липосому, имеющую липидный бислой, инкапсулирующий водное ядро, в которой: (i) липидный бислой содержит липид по изобретению; и (ii) водное ядро включает РНК, которая кодирует иммуноген. Если композиция содержит популяцию липосом с различными диаметрами, в целях иммунизации она может быть полезной, если: (i) по меньшей мере 80% от количества липосом имеют диаметры в диапазоне от 60 до 180 нм и предпочтительно в диапазоне от 80 до 160 нм и/или (ii) средний диаметр (по интенсивности, например, Z-среднее значение) популяции находится в диапазоне от 60 до 180 нм и предпочтительно в диапазоне от 80 до 160 нм. Диаметры в пределах множества в идеале должны иметь коэффициент полидисперсности <0,2.
После введения in vivo композиции для иммунизации доставленная РНК высвобождается и транслируется в клетке, чтобы предоставить иммуноген in situ. РНК является плюс ("+") нитевой, так что она может транслироваться клетками без необходимости каких-либо промежуточных стадий репликации, таких как обратная транскрипция. Она также может связываться с рецепторами TLR7, экспрессированными иммунными клетками, таким образом инициируя адъювантный эффект.
Предпочтительные плюс (+)- нитевые РНК являются самореплицирующимися. Самореплицирующаяся молекула РНК (репликон) при доставке в клетку позвоночных даже без каких-либо белков может привести к получению множества дочерних РНК с помощью транскрипции из себя (через антисмысловую копию, которую она генерирует из себя). Самореплицирующаяся молекула РНК, таким образом, представляет собой обычно ± нитевую молекулу, которая может быть непосредственно транслирована после доставки в клетку, и данная трансляция дает РНК-зависимую РНК-полимеразу, которая затем производит как антисмысловые, так и смысловые транскрипты из доставленной РНК. Таким образом, доставленная РНК приводит к образованию множества дочерних РНК. Данные дочерние РНК, также как коллинеарные субгеномные транскрипты могут быть транслированы сами по себе, чтобы обеспечить in situ экспрессию кодированного иммуногена, или могут быть транскрибированы, чтобы обеспечить дополнительные транскрипты с таким же смыслом, как доставленная РНК, которая транслируется, чтобы обеспечить in situ экспрессию иммуногена. Общий результат данной последовательности транскрипций представляет собой огромную амплификацию в числе вводимых репликонов РНК, и таким образом кодированный иммуноген становится основным полипептидным продуктом клеток.
Одной подходящей системой для достижения саморепликации является применение РНКрепликона на основе альфа-вируса. Данные ± нитевые репликоны транслируются после доставки в клетку с получением репликазы (или репликазы-транскриптазы). Репликаза транслируется как полипротеин, который саморасщепляется, чтобы обеспечить репликационный комплекс, который создает геномные нитевые копии ± нитевой доставленной РНК. Данные -нитевые транскрипты могут сами транскрибироваться для получения дополнительных копий ± нитевой родительской РНК и также для получения субгеномного транскрипта, который кодирует иммуноген. Трансляция субгеномного транскрипта, таким образом, приводит к in situ экспрессии иммуногена инфицированной клеткой. Подходящие репликоны альфавируса могут использовать репликазу из вируса Синдбис, вируса леса Семлики, вируса восточного энцефалита лошадей, вируса венесуэльского энцефалита лошадей и т.д. Последовательности вирусов мутантного или дикого типа могут быть использованы, например, аттенуированный ТС83-мутант VEEV был использован в репликонах.
Предпочтительная самореплицирующаяся молекула РНК, таким образом, кодирует (i) РНК- 40 030650
зависимую РНК-полимеразу, которая может транскрибировать РНК из самореплицирующейся молекулы РНК и (ii) иммуноген. Полимераза может представлять собой репликазу альфа-вируса, например, содержащую один или более белков альфа-вируса nsP1, nsP2, nsP3 и nsP4.
В то время как природные геномы альфа-вируса кодируют структурные вирионные белки в дополнение к неструктурному полипротеину репликазы, предпочтительно, что самореплицирующаяся молекула РНК по изобретению не кодирует структурные белки альфа-вируса. Таким образом, предпочтительная самореплицирующаяся РНК может привести к получению копий геномной РНК себя в клетке, но не к получению РНК-содержащих вирионов. Неспособность получить данные вирионы означает, что в отличие от дикого типа альфа-вируса самореплицирующаяся молекула РНК не может сохранить себя в инфекционной форме. Структурные белки альфа-вируса, которые являются необходимыми для сохранения в вирусах дикого типа, отсутствуют из самореплицирующихся РНК по изобретению и их положение берется из гена(ов), кодирующего представляющий интерес иммуноген, таким образом, что субгеномный транскрипт кодирует иммуноген, а не структурные вирионные белки альфа-вируса.
Таким образом, пригодная самореплицирующаяся молекула РНК по изобретению может иметь две открытые рамки считывания. Первая (5') открытая рамка считывания кодирует репликазу; вторая (3') открытая рамка считывания кодирует иммуноген. В некоторых вариантах осуществления РНК может иметь дополнительные (например, по ходу транскрипции) открытые рамки считывания, например, для кодирования дополнительных иммуногенов (смотри ниже) или для кодирования дополнительных полипептидов.
Самореплицирующаяся молекула РНК может иметь 5'-последовательность, которая является совместимой с закодированной репликазой.
Самореплицирующиеся молекулы РНК могут иметь различные длины, но обычно они представляют собой 5000-25000 нуклеотидов длиной, например, 8000-15000 нуклеотидов или 9000-12000 нуклеотидов. Таким образом, РНК длиннее, чем наблюдаемые при доставке киРНК.
Молекула РНК может иметь 5'-кэп (например, 7-метилгуанозин). Данный кэп может усилить трансляцию РНК in vivo.
Пригодный 5'-нуклеотид молекулы РНК по изобретению может иметь 5'-трифосфатную группу. В кэпированных РНК она может быть связана с 7-метилгуанозином через 5'-5' мост. 5'-трифосфат может усилить связывание RIG-I и таким образом активировать адъювантные эффекты.
Молекула РНК может иметь 3'-поли(А)-хвост. Она может также включать последовательность распознавания поли(А)-полимеразы (например, AAUAAA) вблизи ее 3'-конца.
Пригодная молекула РНК по изобретению в целях иммунизации, как правило, будет одноцепочечной. Одноцепочечные РНК обычно могут инициировать адъювантный эффект с помощью связывания с TLR7, TLR8, РНК-хеликазами и/или PKR. Доставленная РНК в двухцепочечной форме (дцРНК) может связываться с TLR3, и данный рецептор также может активизироваться дцРНК, которая образуется или в процессе репликации одноцепочечной РНК или в пределах вторичной структуры одноцепочечной РНК.
Молекулы РНК в целях иммунизации могут быть легко получены с помощью транскрипции in vitro (IVT). При IVT могут использовать созданную матричную (кДНК) и распространенную в форме плазмид в бактериях или полученную синтетически (например, с помощью синтеза генов и/или инженерных методов полимеразной цепной реакции (ПЦР)). Например, ДНК-зависимую РНК-полимеразу (такую как бактериофаг Т7, Т3 или SP6 РНК-полимеразы) могут использовать, чтобы транскрибировать РНК из матричной ДНК. Соответствующее кэппирование и реакции поли-А присоединения могут быть использованы по мере необходимости (хотя поли-А репликона обычно кодируется в матричной ДНК). Данные РНК-полимеразы могут иметь строгие требования в отношении транскрибируемого 5'-нуклеотида(ов), и в некоторых вариантах осуществления данные требования должны соответствовать требованиям кодируемой репликазы, чтобы гарантировать, что IVT-транскрибированная РНК может эффективно функционировать в качестве субстрата для ее самокодируемой репликазы.
Как обсуждалось в WO 2011/005799, самореплицирующаяся РНК может включать (в дополнение к любой 5'-кэп-структуре) один или более нуклеотидов, имеющих модифицированное нуклеооснование. Например, самореплицирующаяся РНК может включать один или более модифицированных нуклеооснований пиримидина, таких как остатки псевдоуридина и/или 5-метилцитозина. В некоторых вариантах осуществления, однако, РНК содержит немодифицированные нуклеооснования и может включать немодифицированные нуклеотиды, т.е. все нуклеотиды в РНК являются стандартными рибонуклеотидами А, С, G и U (за исключением любой 5'-кэп-структуры, которая может включать 7'-метилгуанозин). В других вариантах осуществления РНК может включать любой 5'-кэп содержащий 7'-метилгуанозин и первые 1, 2 или 3 5'-рибонуклеотиды могут быть метилированными в 2'-положении рибозы.
Используемая в изобретении РНК в целях иммунизации в идеале включает только фосфодиэфирные связи между нуклеозидами, но в некоторых вариантах осуществления она может содержать фосфорамидатные, фосфортиоатные и/или метилфосфонатные связи.
Количество РНК в липосоме может варьироваться. Количество индивидуальных самореплицирующихся молекул РНК в липосоме представляет собой обычно <50, например <20, <10, <5 или 1-4 в липосоме.
- 41 030650
Используемые в изобретении молекулы РНК в целях иммунизации кодируют полипептидный иммуноген. После введения РНК транслируется in vivo и иммуноген может вызвать иммунный ответ у реципиента. Иммуноген может вызвать иммунный ответ в отношении патогена (например, бактерии, вируса, грибка или паразита), но в некоторых вариантах осуществления он вызывает иммунный ответ в отношении аллергена или опухолевого антигена. Иммунный ответ может включать гуморальный иммунный ответ (обычно включая IgG) и/или клеточно-опосредованный иммунный ответ. Полипептидный иммуноген обычно будет вызывать иммунный ответ, который распознает соответствующий полипептид патогена (или аллерген, или опухоль), но в некоторых вариантах осуществления полипептид может действовать как мимеотоп, чтобы вызывать иммунный ответ, который распознает сахарид. Иммуноген обычно будет представлять собой поверхностный полипептид, например, адгезии, гемагглютинин, гликопротеин оболочки, спайковый гликопротеин и т.д.
Молекула РНК может кодировать единичный полипептидный иммуноген или многочисленные полипептиды. Многочисленные иммуногены могут быть представлены в виде единичного полипептидного иммуногена (объединенного полипептида) или в виде отдельных полипептидов. Если иммуногены экспрессированы в виде отдельных полипептидов из репликона, тогда один или более из них могут иметь 3'5'-направление IRES или дополнительный элемент вирусного промотора. Кроме того, многочисленные иммуногены могут быть экспрессированы из полипротеина, который кодирует отдельные иммуногены, соединенные с короткой аутокаталитической протеазой (например, белок 2А вируса ящура), или как интеины.
В некоторых вариантах осуществления иммуноген вызывает иммунный ответ в отношении одной из данных бактерий:
Neisseria meningitidis: пригодные иммуногены включают, но не ограничиваются ими, мембранные белки, такие как адгезины, аутотранспортеры, токсины, связывающие железо белки и фактор Нсвязывающий белок. Комбинация трех пригодных полипептидов раскрыта в Giuliani et al. (2006) Proc Natl Acad Sci USA 103(29): 10834-9.
Streptococcus pneumoniae: пригодные полипептидные иммуногены раскрыты в WO 2009/016515. Они включают, но не ограничиваются ими, RrgB пилус субъединицу, предшественник бета-Ы-ацетилгексозаминидазы (spr0057), spr0096, общий стресс-белок GSP-781 (spr2021, SP2216), серин/треонинкиназу StkP (SP1732) и пневмококковый поверхностный адгезии PsaA.
Streptococcus pyogenes: пригодные иммуногены включают, но не ограничиваются ими, полипептиды, раскрытые в WO 02/34771 и WO 2005/032582.
Moraxella catarrhalis.
Bordetella pertussis: Пригодные иммуногены коклюша включают, но не ограничиваются ими, коклюшный токсин или анатоксин (РТ), филаментозный гемагглютинин (ФГА), пертактин и агглютиногены 2 и 3.
Staphylococcus aureus: Пригодные иммуногены включают, но не ограничиваются ими, полипептиды, раскрытые в WO2010/119343, такие как гемолизин, esxA, esxB, феррихром-связывающий белок (sta006) и/или липопротеин sta011.
Clostridium tetani: типичный иммуноген представляет собой столбнячный анатоксин.
Cornynebacterium diphtheriae: типичный иммуноген представляет собой дифтерийный анатоксин.
Haemophilus influenzae: Пригодные иммуногены включают, но не ограничиваются ими, полипептиды, раскрытые в WO 2006/110413 и WO 2005/111066.
Pseudomonas aeruginosa.
Streptococcus agalactiae: пригодные иммуногены включают, но не ограничиваются ими, полипептиды, раскрытые в WO02/34771.
Chlamydia trachomatis: Пригодные иммуногены включают, но не ограничиваются ими, PepA, LcrE, ArtE, DnaK, CT398, OmpH-подобный, L7/L12, OmcA, AtoS, CT547, Eno, HtrA и MurG (например, как раскрыто в WO 2005/002619). LcrE (WO 2006/138004) и HtrA (WO 2009/109860) представляют собой два предпочтительных иммуногена.
Chlamydia pneumoniae: Пригодные иммуногены включают, но не ограничиваются ими, полипептиды, раскрытые в WO02/02606.
Helicobacter pylori: Пригодные иммуногены включают, но не ограничиваются ими, CagA, VacA, NAP и/или уреазу (WO 03/018054).
Escherichia coli: Пригодные иммуногены включают, но не ограничиваются ими, иммуногены, полученные из энтеротоксигенной E.coli (ЕТЕС), энтероагрегирующейся E.coli (EAggEC), диффузноадгезивной E.coli (DAEC), энтеропатогенной E.coli (EPEC), внекишечной патогенной E.coli (ExPEC) и/или энтерогеморрагической E.coli (EHEC). Штаммы ЕхРЕС включают уропатогенную E.coli (UPEC) и менингит/сепсис-ассоциированную E.coli (MNEC). Пригодные иммуногены UPEC раскрыты в WO 2006/091517 и WO 2008/020330. Пригодные иммуногены MNEC раскрыты в WO 2006/089264. Пригодный иммуноген для некоторых типов E.coli представляет собой AcfD (WO 2009/104092).
- 42 030650
Bacillus anthracis.
Yersinia pestis: Пригодные иммуногены включают, но не ограничиваются ими, раскрытые в WO 2007/049155 и WO 2009/031043.
Staphylococcus epidermis
Clostridium perfringens или Clostridium botulinums Legionella pneumophila Coxiella burnetii
Brucella, такая как В. abortus, B.canis, В.melitensis,
B.neotomae, B.ovis, B.suis, В.pinnipediae.
Francisella, такая как F.novicida, F. philomiragia,
F. tularensis.
Neisseria gonorrhoeae Treponema pallidum Haemophilus ducreyi
Enterococcus faecalis или Enterococcus faecium
Staphylococcus saprophyticus
Yersinia enterocolitica
Mycobacterium tuberculosis
Rickettsia
Listeria monocytogenes Vibrio cholerae Salmonella typhi Borrelia burgdorferi Porphyromonas gingivalis Klebsiella
В некоторых вариантах осуществления иммуноген вызывает иммунный ответ в отношении одного из данных вирусов:
Ортомиксовирус: Пригодные иммуногены могут происходить от вируса гриппа А, В или С, включая гемагглютинин, нейраминидазу или матриксные белки М2. Где иммуноген представляет собой гемагглютинин вируса гриппа А, он может быть из любого подтипа, например, H1, H2, H3, H4, H5, H6, H7, H8, H9, H10, H11, H12, H13, H14, H15 или H16.
Парамиксовирусы: иммуногены включают, но не ограничиваются ими, полученные из пневмовирусов (например, респираторно-синцитиального вируса, PCB), рубулавирусов (например, вируса эпидемического паротита), парамиксовирусов (например, вируса парагриппа), метапневмовирусов и морбилливирусов (например, вируса кори).
Поксвирусы: иммуногены включают, но не ограничиваются ими, полученные из ортопоксвируса, такого как натуральная оспа, включая, но не ограничиваясь ими, Variola major и Variola minor.
Пикорнавирус: иммуногены включают, но не ограничиваются ими, полученные из пикорнавирусов, таких как энтеровирусы, риновирусы, гепарнавирус, кардиовирусы и афтовирусы. В одном варианте осуществления энтеровирус представляет собой полиовирус, например, полиовирус 1-го типа, 2-го типа и/или 3-го типа. В другом варианте осуществления энтеровирус представляет собой энтеровирус EV71. В другом варианте осуществления энтеровирус представляет собой вирус коксаки А или В.
Буньявирус: иммуногены включают, но не ограничиваются ими, полученные из ортобуньявируса, такого как вирус калифорнийского энцефалита, флебовируса, такого как вирус лихорадки долины Рифт или наировируса, такого как вирус конго-крымской геморрагической лихорадки.
Гепарнавирус: иммуногены включают, но не ограничиваются ими, полученные из гепарнавируса, такого как вирус гепатита А (ВГА).
Филовирус: иммуногены включают, но не ограничиваются ими, полученные из филовируса, такого как вирус Эбола (включая эболавирус Заир, Берег Слоновой Кости, Рестон или Судан) или вирус Марбург.
Тогавирус: иммуногены включают, но не ограничиваются ими, полученные из тогавируса, такого как рубивирус, альфавирус или артеривирус. Он включает вирус краснухи.
Флавивирус: иммуногены включают, но не ограничиваются ими, полученные из флавивируса, такого как вирус клещевого энцефалита (ВКЭ), вирус денге (1-го, 2-го, 3-го или 4-го типа), вирус желтой лихорадки, вирус японского энцефалита, вирус кьясанурской лесной болезни, вирус лихорадки Западного Нила, вирус энцефалита Сент-Луис, вирус российского весенне-летнего энцефалита, вирус энцефалита Повассан.
- 43 030650
Пестивирус: иммуногены включают, но не ограничиваются ими, полученные из пестивируса, такого как вирус диареи крупного рогатого скота (BVDV), классическая чума свиней (КЧС) или пограничная болезнь овец (ПБО).
Гепаднавирус: иммуногены включают, но не ограничиваются ими, полученные из гепаднавируса, такого как вирус гепатита В. Композиция может включать поверхностный антиген вируса гепатита В (HBsAg).
Другие вирусы гепатита: Композиция может включать иммуноген из вируса гепатита С, вируса гепатита дельта, вируса гепатита Е или вируса гепатита G.
Рабдовирус: иммуногены включают, но не ограничиваются ими, полученные из рабдовируса, такого как лиссавирус (например, вирус бешенства) и везикуловирус (VSV).
Калицивирус: иммуногены включают, но не ограничиваются ими, полученные из калицивируса, такого как вирус Норволк (норовирус) и Норволк-подобные вирусы, такие как вирус Гавайи и вирус Снежных гор.
Коронавирус: иммуногены включают, но не ограничиваются ими, полученные из коронавируса ТОРС, инфекционного бронхита птиц (ИБП), вируса гепатита мышей (MHV) и вируса трансмиссивного гастроэнтерита свиней (ТГС). Иммуноген коронавируса может представлять собой спайковый полипептид.
Ретровирус: иммуногены включают, но не ограничиваются ими, полученные из онковируса, лентивируса (например, ВИЧ-1 или ВИЧ-2) или спумавируса.
Реовирус: иммуногены включают, но не ограничиваются ими, полученные из ортореовируса, ротавируса, орбивируса или колтивируса.
Парвовирус: иммуногены включают, но не ограничиваются ими, полученные из парвовируса В19.
Герпесвирус: иммуногены включают, но не ограничиваются ими, полученные из вируса герпеса человека, такого как исключительно для примера вирус простого герпеса (ВПГ) (например, типа ВПГ 1 и 2), вирус ветряной оспы (ВВО), вирус Эпштейна-Барра (ВЭБ), цитомегаловирус (ЦМВ), вирус герпеса человека б-го типа (ВГЧ-6), вирус герпеса человека 7-го типа (ВГЧ-7) и вирус герпеса человека 8-го типа (ВГЧ-8).
Паповавирусы: иммуногены включают, но не ограничиваются ими, полученные из папилломавирусов и полиомавирусов. Вирус папилломы (человека) может быть серотипа 1, 2, 4, 5, 6, 8, 11, 13, 16, 18, 31, 33, 35, 39, 41, 42, 47, 51, 57, 58, 63 или 65, например, одного или более серотипов 6, 11, 16 и/или 18.
Аденовирус: иммуногены включают полученные из серотипа 36 (Ad-36).
В некоторых вариантах осуществления иммуноген вызывает иммунный ответ в отношении вируса, который инфицирует рыбу, такого как: вирус инфекционной анемии лососевых (ISAV), вирус заболевания поджелудочной железы лососевых (SPDV), вирус инфекционного некроза поджелудочной железы (IPNV), вирусная болезнь канального сома (CCV), вирус лимфоцистоза рыб (FLDV), вирус инфекционного некроза гемопоэтической ткани лососевых (ИНГТЛ), герпес кои, пикорна-подобный вирус лососевых (также известный как пикорна-подобный вирус атлантического лосося), вирус пресноводного лосося (LSV), ротавирус атлантического лосося (ASR), вирус заболевания чешуи радужной форели (TSD), онкогенный вирус кижуча (CSTV) или вирусная геморрагическая септицемия (ВГС).
Грибковые иммуногены могут быть получены из дерматофитов, включая:
- 44 030650
Epidermophyton floccusum, Microsporum audouini, Microsporum canis, Microsporum distortum, Microsporum equinum,
Microsporum
concentricum,
Trichophyton
nanum, Trichophyton Trichophyton gallinae, megnini, Trichophyton
gypsum, Microsporum Trichophyton equinum, gypseum, Trichophyton
mentagrophytes, Trichophyton quinckeanum, Trichophyton rubrum, Trichophyton schoenleini, Trichophyton tonsurans, Trichophyton verrucosum, T. verrucosum var. album, var. discoides, var. ochraceum, Trichophyton violaceum и/или Trichophyton faviforme; или из Aspergillus fumigatus, Aspergillus flavus, Aspergillus niger, Aspergillus nidulans, Aspergillus terreus, Aspergillus sydowi, Aspergillus flavatus, Aspergillus glaucus, Blastoschizomyces capitatus, Candida albicans, Candida enolase, Candida tropicalis, Candida glabrata, Candida krusei, Candida parapsilosis, Candida stellatoidea, Candida kusei, Candida parakwsei, Candida lusitaniae, Candida pseudotropicalis,
Candida guilliermondi, Cladosporium carrionii, Coccidioides
dermatidis, Cryptococcus neoformans,
Histoplasma capsulatum, Klebsiella
Microsporidia, Encephalitozoon spp., Septata
и Enterocytozoon bieneusi; наименее
immitis, Blastomyces Geotrichum clavatum, pneumoniae,
intestinalis
распространенными являются Brachiola spp, Microsporidium spp.,
Nosema spp., Pleistophora spp., Trachipleistophora spp.,
Vittaforma spp Paracoccidioides brasiliensis, Pneumocystis carinii, Pythiumn insidiosum, Pityrosporum ovale, Sacharomyces cerevisae, Saccharomyces boulardii, Saccharomyces pombe, Scedosporium apiosperum, Sporothrix schenckii, Trichosporon beigelii, Toxoplasma gondii, Penicillium marneffei, Malassezia spp., Fonsecaea spp., Wangiella spp., Sporothrix spp., Basidiobolus spp., Conidiobolus spp., Rhizopus spp, Mucor spp,
Absidia spp, Mortierella spp, Cunninghamella spp, Saksenaea spp., Alternaria spp, Curvularia spp, Helminthosporium spp,
Fusarium spp, Aspergillus spp, Penicillium spp, Monolinia spp,
Rhizoctonia spp, Paecilomyces spp, Pithomyces spp и Cladosporium spp.
В некоторых вариантах осуществления иммуноген вызывает иммунный ответ в отношении паразита из рода плазмодии, такого как P. falciparum, P.vivax, P.malariae или P.ovale. Таким образом, изобретение может быть использовано для иммунизации в отношении малярии. В некоторых вариантах осуществления иммуноген вызывает иммунный ответ в отношении паразита из семейства Caligidae, в частности из родов Lepeophtheirus и Caligus, например, морских вшей, таких как Lepeophtheirus salmonis или Caligus rogercresseyi.
В некоторых вариантах осуществления иммуноген вызывает иммунный ответ в отношении: пыльцевых аллергенов (пыльцевых аллергенов деревьев, ароматической травы, растений и травы); аллергенов насекомых или паукообразных (аллергенов вдыхаемых, слюны и яда, например, клещевых аллергенов, аллергенов тараканов и мошек, аллергенов яда перепончатокрылых насекомых); аллергенов шерсти и перхоти животных (например, от собаки, кошки, лошади, крысы, мыши и т.д.); и пищевых аллергенов (например, глиадина). Важными аллергенами пыльцы деревьев, трав и растений являются те, которые происходят из таксономических отрядов Fagales, Oleales Pinales и platanaceae, включая, но не ограничиваясь ими, березу (Betula), ольху (Alnus), орешник (Corylus), граб (Carpinus) и оливу (Olea), кедр (Cryptomeria и Juniperus), платан (Platanus), отряда Poales, включая травы родов Lolium, Phleum, Poa, Cynodon, Dactylis, Holcus, Phalaris, Secale и Sorghum, отрядов Asterales и Urticales, включая растения родов Ambro- 45 030650
sia, Artemisia и Parietaria. Другими важными вдыхаемыми аллергенами являются такие, которые происходят от клещей домашней пыли рода Dermatophagoides и Euroglyphus, амбарных клещей, например, Lepidoglyphys, Glycyphagus и Tyrophagus, которые происходят от тараканов, мошек и блох, например, Blatella, Periplaneta, Chironomus и Ctenocepphalides и которые происходят от животных, таких как кошка, собака и лошадь, аллергенов ядов, включая такие, которые происходят от жалящих или кусающихся насекомых, таких как те, которые происходят от таксономического отряда Hymenoptera, включая пчел (Apidae), ос (Vespidea) и муравьев (Formicoidae).
В некоторых вариантах осуществления иммуноген представляет собой опухолевый антиген, выбранный из:
(a) антигенов рака семенников, таких как NY-ESO-1, SSX2, SCP1, также как полипептидов семейств RAGE, BAGE, GAGE и MAGE, например, GAGE-1, GAGE-2, MAGE-1, MAGE-2, MAGE-3, MAGE-4, MAGE-5, MAGE-6 и MAGE-12 (которые могут быть использованы, например, для направления на меланому, опухоли легких, головы и шеи, NSCLC, опухоли молочных желез, желудочно-кишечные и мочевого пузыря),
(b) мутированных антигенов, например, р53 (связанного с различными солидными опухолями, например, раком прямой кишки, легких, головы и шеи), p21/Ras (связанного, например, с меланомой, раком поджелудочной железы и раком прямой кишки), CDK4 (связанного, например, с меланомой), MUM1 (связанного, например, с меланомой), каспазы-8 (связанной, например, с раком головы и шеи), CIA 0205 (связанного, например, с раком мочевого пузыря), HLA-A2-R1701, бета-катенина (связанного, например, с меланомой), TCR (связанного, например, с Т-клеточной неходжкинской лимфомой), BCR-abl (связанного, например, с хронической миелогенной лейкемией), триозофосфат изомеразы, KIA 0205, CDC-27 и LDLR-FUT,
(c) сверхэкспрессированных антигенов, например Галектина 4 (связанного, например, с раком прямой кишки), Галектина 9 (связанного, например, с болезнью Ходжкина), протеиназы 3 (связанной, например, с хронической миелогенной лейкемией), WT 1 (связанного, например, с различными лейкемиями), карбоангидразы (связанной, например, с раком почки), альдолазы А (связанной, например, с раком легких), PRAME (связанного, например, с меланомой), HER-2/neu (связанного, например, с раком молочной железы, толстой кишки, легких и яичников), маммаглобина, альфа-фетопротеина (связанного, например, с гепатомой), KSA (связанного, например, с раком прямой кишки), гастрина (связанного, например, с раком поджелудочной железы и желудка), теломеразного каталитического протеина, MUC-1 (связанного, например, с раком молочной железы и яичников), G-250 (связанного, например, с карциномой клеток почек), р53 (связанного, например, с раком молочной железы и толстой кишки) и карциноэмбрионного антигена (связанного, например, с раком молочной железы, раком легких и раком желудочнокишечного тракта, таким как рак прямой кишки),
(d) являющихся общими антигенов, например, антигенов меланома-меланоцитной дифференциации, таких как MART-1/Melan A, gp100, MC1R, меланоцит-стимулирующий рецептор гормонов, тирозиназа, тирозиназа-связанный протеин-1/TRP1 и тирозиназа-связанный протеин-2/TRP2 (ассоциированные, например, с меланомой),
(e) ассоциированных с простатой антигенов, таких как PAP, PSA, PSMA, PSH-P1, PSM-P1, PSM-P2, связанных, например, с раком простаты,
(f) иммуноглобулиновых идиотипов (связанных с миеломой и В-клеточной лимфомой, например). В некоторых вариантах осуществления опухолевые иммуногены включают, но не ограничиваются ими, р15, Hom/Mel-40, H-Ras, E2A-PRL, H4-RET, IGH-IGK, MYL-RAR, антигены вируса Эпштейна-Барра, EBNA, антигены вируса папилломы человека (ВПЧ), включая Е6 и Е7, антигены вируса гепатита В и С, антигены Т-лимфотропного вируса человека,
TSP-180, pl85erbB2, pl80erbB-3, c-met, mn-23Hl, TAG72-4, СА 19-9, СА 72-4, САМ 17.1, NuMa, K-ras, р1б, TAGE, PSCA,
СТ7, 43-9F, 5Т4, 791 Тдр72, beta-HCG, ВСА225, ВТАА, СА 125, СА
15-3 (СА 27.29\ВСАА), СА 195, СА 242, СА-50, САМ43, CD68\KP1,
CO-029, FGF-5, Ga733 (ЕрСАМ), НТдр-175, М344, МА-50, MG7-Ag,
MOV18, NB/70K, NY-CO-1, RCAS1, SDCCAG16, ТА-90 (Мас-2связывающий белок/циклофилин С-ассоциированный белок), TAAL6, TAG72, TLP, TPS и подобные.
Фармацевтическая композиция изобретения, в частности одна, пригодная для иммунизации, может включать один или более низкомолекулярных иммуностимуляторов. Например, композиция может включать агонист TLR2 (например, Pam3CSK4), агонист TLR4 (например, аминоалкилглюкозаминидфосфат, такой как Е6020), агонист TLR7 (например, имиквимод), агонист TLR8 (например, резиквимод) и/или агонист TLR9 (например, IC31). Любой такой агонист в идеале имеет молекулярную массу <2000 Да. Такой агонист(ы) в некоторых вариантах осуществления может быть инкапсулирован с РНК в липосомы, но в других вариантах осуществления они являются неинкапсулированными.
- 46 030650
Примеры
Катионные липиды формулы (I).
Следующие примеры предназначены для иллюстрации изобретения и не должны истолковываться как его ограничение. Температуры представлены в градусах по Цельсию. Если не указано иное, все испарительные концентрации осуществляются при пониженном давлении, предпочтительно от приблизительно 15 до 100 мм рт.ст. (=20-133 мбар). Структуру конечных продуктов, интермедиатов и исходных материалов подтверждают с помощью стандартных аналитических методов, например, микроанализа или спектральных характеристик, например, МС, ИК или ЯМР. Используемые сокращения являются стандартными в данной области техники, некоторые из которых описаны ниже.
Очистку на флэш-колонке предпочтительно проводят на силикагеле с использованием соответствующего элюента изократической или градиентной композиции.
Анализ ВЭЖХ проводят на колонке Waters Atlantis dC18 (4,6x150 мм, 3 мм) с градиентным элюированием (от 0% до 95% ацетонитрила в воде, модифицированной 0,1% об/об трифторуксусной кислотой, более 20 мин и скоростью потока 1,4 мл/мин), если не указано иное.
Спектры 1 Н-ЯМР регистрировали на спектрометре Bruker Avance II 400 МГц. Все химические сдвиги приведены в миллионных долях (δ) относительно тетраметилсилана. Следующие сокращения используются для обозначения модели сигнала: с=синглет, д=дублет, т=триплет, к=квартет, кв=квинтет, м=мультиплет, уш=уширенный. Данные ЭР-МС регистрировали с использованием масс-спектрометра Waters LTC Premier с двойным источником электрораспылительной ионизации на жидкостном хроматографе Agilent 1100. Сульфадиметоксин [Sigma, m/z=311,0814 (M+1)] использовали в качестве стандарта, вводимого через канал LockSpray™ каждое третье сканирование.
Сокращения
С - Цельсий
ДХМ - дихлорметан град - градусы
ДИЭА - ^^диизопропилэтиламин
ДИПЭА - ^^диизопропилэтиламин
ДМАП - 4-диметиламинопиридин
ДМФ - Х^диметилформамид
ДМСО - диметилсульфоксид
EDC - 1-этил-3-(3-диметиламинопропил)карбодиимид
ЭР-МС - масс-спектрометрия с электрораспылением
EtOAc - этилацетат
EtOH - этанол г - грамм ч - час(ы)
HATU 2-(1Н-7-азабензотриазол-1-ил)-1,1,3,3-тетраметилурония гексафторфосфат
HOBt - гидроксибензотриазол
ВЭЖХ - высокоэффективная жидкостная хроматография кг - килограмм л - литр
ЛАГ - литийалюминийгидрид
ЖХ - жидкостная хроматография
ЖХ-МС - жидкостная хроматография и масс-спектрометрия
MeOH - метанол
МС - масс-спектрометрия
мбар - миллибар
мин - минуты
мл - миллилитр(ы)
мм - миллиметр
мкМ - микромолярный
m/z - отношение массы к заряду
нм - нанометр
нМ - наномолярный
N - нормальный
NaOEt - этилат натрия
NMP - N-метилпирролидон
ЯМР - ядерный магнитный резонанс
Pd/C - палладий на угле
PdCl2(dppf)-CH2Cl2 - 1,1'-бис(дифенилфосфино)ферроцен-палладий (II) дихлорида дихлорметановый комплекс
- 47 030650
фунт/кв. дюйм - фунт на квадратный дюйм
м.д. - миллионные доли
pTsOH - п-толуолсульфоновая кислота
квин - квинтуплет
рац - рацемический
Rt - время удерживания
ТБАФ - фторид тетрабутиламмония
TBDPS - трет-бутилдифенилсилильный эфир
TBTU - О-(Бензотриазол-1-ил)-НН^,^-тетраметилурония тетрафторборат ТСЕР - трис(2-карбоксиэтил)фосфин TEA - триэтиламин
ТФУК - трифторуксусная кислота
ТГФ - тетрагидрофуран
ТГП - тетрагидропиран
ТСХ - тонкослойная хроматография
TMS-CN - триметилсилилцианид
TsOH - толуолсульфоновая кислота
Синтез примера 1:
Интермедиат 1а: 3,5-бис(^)-октадец-9-ен-1-илокси)бензальдегид
н
В колбу, содержащую ДМФ (40 мл), добавляли 3,5-дигидроксибензальдегид (2 г, 14,2 ммоль), карбонат калия (5,88 г, 42,6 ммоль) и олеилмезилат (11,3 г, 32,6 ммоль). Полученную смесь нагревали до 80°C в течение ночи при перемешивании. Реакционную смесь охлаждали и добавляли воду и EtOAc. Органический слой собирали, промывали солевым раствором и высушивали над сульфатом магния. Смесь отфильтровывали и фильтрат концентрировали при пониженном давлении с получением неочищенного продукта, который очищали на силикагеле с использованием смеси гептан/EtOAc в качестве элюента, обеспечивая 8,53 г целевого продукта.
ТСХ (силикагель, 10% EtOAc в гептане): Rf=0,56.
Соединение примера 1: 1-(3,5-бис(^)-октадец-9-ен-1-илокси)фенил)-К,№диметилметанамин
Интермедиат 1а (4 г, 6,26 ммоль) перемешивали в EtOH (25 мл) и добавляли гидрохлорид диметиламина (1,02 г, 12,5 ммоль) с последующим добавлением TEA (1,21 мл, 8,76 ммоль) и тетраизопропоксида титана (1,8 мл, 6,3 ммоль). Полученную смесь перемешивали в течение 3 ч при комнатной температуре и добавляли боргидрид натрия (355 мг, 9,39 ммоль) в виде одной порции. Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. Реакционную смесь гасили 7 N аммиаком в MeOH (8,94 мл, 62,6 ммоль) и полученную белую суспензию отфильтровывали через целит с промыванием ДХМ. Фильтрат концентрировали при пониженном давлении с получением неочищенного продукта, который очищали на силикагеле от 0 до 50% EtOAc в гептане, обеспечивая 2,66 г целевого продукта.
1H ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ: 6,46 (д, J=2,0 Гц, 2Н), 6,36 (т, J=2,5 Гц, 1Н), 5,41-5,31 (м, 4Н), 3,93 (т, J=6,9 Гц 4Н), 3,34 (с, 2Н), 2,24 (с, 6Н), 2,09-1,98 (м, 8Н), 1,81-1,69 (м, 4Н), 1,50-1,21 (м, 44Н), 0,89 (т, J=7,0 Гц, 6Н) м.д.
ЭР-МС m/z=668,8 (MH+).
Примеры 2-7 могут быть получены с использованием способов, аналогичных тем, которые применяются для получения примера 1.
Пример 2: 1-(3,5-бис((9Z,12Z)-октадека-9,12-диен-1 -илокси)фенил)-Н^диметилметанамин
1H ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ: 6,46 (д, J=2,5 Гц, 2Н), 6,35 (т, J=2,3 Гц, 1Н), 5,44-5,30 (м, 8Н), 3,93 (т, J=6,5 Гц, 4Н), 3,34 (с, 2Н), 2,78 (т, J=6,2 Гц, 4Н), 2,24 (с, 6Н), 2,13-1,99 (м, 8Н), 1,81-1,71 (м, 4Н), 1,49-1,23 (м, 32Н), 0,90 (т, J=6,8 Гц, 6Н) м. д.
ЭР-МС m/z=664,9 (MH+).
Пример 3: 2,2'-((3,5 -6uo((9Z,1 2Z)-октадека-9,12-диен-1 -илокси)бензил)азанедиил)диэтанол
- 48 030650
1H ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ: 6,46-6,44 (м, 2Н), 6,38-6,34 (м, 1Н), 5,44-5,29 (м, 8Н), 3,92 (т, J=6,5 Гц, 4Н), 3,69-3,63 (м, 6Н), 2,82-2,71 (м, 8Н), 2,12-2,00 (м, 8Н), 1,82-1,70 (м, 4Н), 1,51-1,22 (м, 32Н), 0,90 (т, J=6,9 Гц, 6Н) м.д.
ЭР-МС m/z=724,6 (MH+).
Пример 4: 1-(3,5-бис((9Х., 12Z)-октадека-9,12-диен-1 -илокси)бензил)пирролидин
1H ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ: 6,52-6,47 (м, 2Н), 6,36-6,32 (м, 1Н), 5,47-5,26 (м, 8Н), 3,93 (т, J=6,6 Гц, 4Н), 3,55 (с, 2Н), 2,83-2,74 (м, 4Н), 2,57-2,47 (м, 4Н), 2,14-2,00 (м, 8Н), 1,86-1,70 (м, 8Н), 1,52-1,21 (м, 32Н), 0,90 (т, J=6,8 Гц, 6Н) м.д.
ЭР-МС m/z=690,5 (MH+).
Пример 5: 1-(3,5-бис((9Z,12Z)-октадека-9,12-диен-1-илокси)бензил)азетидин-3-ол
1H ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ: 6,49 (д, J=2,0 Гц, 2Н), 6,42 (т, J=2,1 Гц, 1Н), 5,33-5,47 (м, 1H), 4,46 (тт, J=6,7, 3,6 Гц, 1Н), 3,94 (т, J=6,7 Гц, 4Н), 3,76-3,85 (м, 4Н), 3,59 (д, J=10,3 Гц, 2Н), 2,80 (т, J=6,5 Гц, 4Н), 2,00-2,12 (м, 8Н), 1,78 (дтд, J=7,8, 6,8, 5,8 Гц, 4Н), 1,41-1,51 (м, 4Н), 1,25-1,41 (м, 27Н), 0,83-0,95 (м, J=6,8, 6,8 Гц, 5Н) м.д.
ЭР-МС m/z=692,5 (MH+).
Пример 6: этил-2-((3,5-бис(^)-октадец-9-ен-1-илокси)бензил)(метил)амино)ацетат
1H ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ: 6,50 (с, 2Н), 6,36 (с, 1Н), 5,39-5,32 (м, 4Н), 4,18 (к, J=7,0 Гц 2Н), 3,92 (т, J=6,5 Гц, 4Н), 3,60 (с, 2Н), 3,24 (с, 2Н), 2,40 (с, 3Н), 2,10-1,95 (м, 8Н), 1,80-1,60 (м, 4Н), 1,50-1,15 (м, 47Н), 0,88 (т, J=7,0 Гц, 6Н) м.д.
ЭР-МС m/z=7 4 0,9 (MH+).
Пример 7: 1-(3,5-бис(^)-октадец-9-ен-1-илокси)бензил)пирролидин
1H ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ: 6,53 (с, 2Н), 6,35 (с, 1Н), 5,38-5,30 (м, 4Н), 3,92 (т, J=6,5 Гц, 4Н), 3,62 (уш.с, 2Н), 2,62 (м, 4Н), 2,10-1,95 (м, 8Н), 1,90-1,80 (м, 4Н), 1,80-1,65 (м, 4Н), 1,50-1,20 (м, 43 Н), 0,87 (т, J=7,0 Гц, 6Н) м.д.
ЭР-МС m/z=694,9 (MH+).
Пример 8: 2-((3,5-бис(^)-октадец-9-ен-1-илокси)бензил)(метил)амино)уксусная кислота
К раствору соединения из примера 6 (160 мг, 0,22 ммоль) в диоксане (7 мл) добавляли 50% HCl в воде (6,57 мл). Смесь нагревали до кипения с обратным холодильником в течение ночи и затем охлаждали до комнатной температуры. Летучие вещества удаляли при пониженном давлении, и полученный продукт очищали с использованием сильной катионообменной смолы с последующей колоночной хроматографией на силикагеле с использованием ДХМ/MeOH в качестве элюента, обеспечивая 123 мг целевого продукта.
1H ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ: 10,34 (уш.с 1Н), 6,57 (с, 2Н), 6,42 (с, 1Н), 5,38-5,30 (м, 4Н), 4,17 (с, 2Н), 3,87 (т, J=6,5 Гц, 4Н), 3,51 (с, 2Н), 2,77 (с, 3Н), 2,10-1,95 (м, 8Н), 1,80-1,60 (м, 4Н), 1,50-1,15 (м, 44Н), 0,87 (т, J=7,0 Гц, 6Н) м.д.
13С ЯМР (100 МГц, CDCl3) δ: 168,6, 160,6, 132,3, 129,9, 129,7, 109,0, 101,8, 68,1, 60,0, 57,6, 41,1, 31,8, 29,7, 29,5, 29,5, 29,4, 29,4, 29,2, 29,2, 27,2, 26,0, 22,6, 14,1 м.д.
Синтез примера 9:
Интермедиат 9а: ((2-(3,5-бис(^)-октадец-9-ен-1-илокси)фенил)-1,3-диоксолан-4-ил)метокси)(третбутил)дифенилсилан
- 49 030650
К Интермедиату 1а (1 г. 1.56 ммоль) в MePh (30 мл) добавляли TBDPS-защищенный глицерин (0.52 г. 1.5 6 ммоль) и моногидрат TsOH (0.03 г. 0.16 ммоль). Смесь нагревали с обратным холодильником в течение ночи и затем охлаждали до комнатной температуры. Летучие вещества удаляли при пониженном давлении. и полученный продукт очищали на силикагеле с использованием смеси гептан/EtOAc в качестве элюента. обеспечивая 1.28 г смеси. содержащей целевой продукт.
ТСХ (силикагель. 10% EtOAc в гептане): Rf=0.45.
Интермедиат 9b: (2-(3.5-бис(^)-октадец-9-ен-1-илокси)фенил)-1.3-диоксолан-4-ил)метанол
К раствору Интермедиата 9а (1.28 г. 1.34 ммоль) в ТГФ (10 мл) добавляли ТБАФ (9.9 мл. 1.0 М в ТГФ. 9.93 ммоль). Полученный раствор перемешивали в течение ночи при комнатной температуре. Летучие вещества удаляли при пониженном давлении. и полученный продукт очищали на силикагеле с использованием смеси гептан/EtOAc в качестве элюента. обеспечивая 638 мг (67%) целевого продукта.
ТСХ (силикагель. 50% EtOAc в гептане): Rf=0.65.
Интермедиат 9с: (2-(3.5-бис(^)-октадец-9-ен-1 -илокси)фенил)- 1.3-диоксолан-4-ил)метилметансульфонат
К раствору Интермедиата 9b (638 мг. 0.8 95 ммоль) в ДХМ (20 мл) добавляли ДИЭА (0.78 мл. 4.5 ммоль) и Msd (0.35 мл. 4.5 ммоль). Полученный раствор перемешивали в течение 30 мин. Летучие вещества удаляли при пониженном давлении и полученный продукт использовали без дополнительной очистки.
ЭР-МС m/z=791.4 (MH+). Соединение примера
ил)метил)пирролидин
9: 1 -((2-(3.5-бис(^)-октадец-9-ен-1 -илокси)фенил)-1.3-диоксолан-4-
Раствор Интермедиата 9с (708 мг. 0.895 ммоль) растворяли в пирролидине (3.0 мл. 36.2 ммоль) и нагревали до 140°С в микроволновом реакторе. Летучие вещества удаляли при пониженном давлении. и полученный продукт очищали на силикагеле с использованием смеси гептан/EtOAc в качестве элюента. обеспечивая 292 мг целевого продукта.
1Н ЯМР (400 МГц. CDClз) δ: 6. 62 (дд. J=6.0 Гц. 2.5 Гц. 2Н). 6.44-6.42 (м. 1Н). 5.89 (с. 0.50Н). 5.75 (с. 0.50Н). 5.37-5.35 (м. 4Н). 4.42-4.33 (м. 1Н). 4.26-4.23 (м. 0.50Н). 4.12 (дд. J=7.8 Гц. 6.8 Гц. 0.50Н). 3.93 (т. J=6.3 Гц. 4Н). 3.80 (дд. J=7.8 Гц. 6.8 Гц. 0.50Н). 3.71-3.67 (м. 0.50Н). 2.81-2.73 (м. 2Н). 2.65-2.57 (м. 4Н). 2.05-2.00 (м. 8Н). 1.81-1.73 (м. 8Н). 1.48-1.27 (м. 44Н). 0.89 (м. 6Н) м.д.
ЭР-МС m/z=7 6 6.6 (MH+).
Примеры 10 и 11 могут быть получены с использованием способов. аналогичных тем. которые применяются для получения примера 9.
Пример 10: 1 -(2-(3.5 - бис ((9Z. 12Z)-октадека-9.12-диен-1-илокси)фенил)-1.3-диоксолан-4-ил )-N.Nдиметилметанамин
Л ЯМР (400 МГц. CDClз) δ: 6.59-6.65 (м. 2Н). 6.44 (т. J=2.3 Гц. 1Н). 5.75 (с. 1Н). 5.32-5.44 (м. 6Н). 4.32-4.42 (м. 1Н). 4.08-4.18 (м. 1Н). 3.94 (т. J=6.5 Гц. 4Н). 3.78 (дд. J=8.0. 6.5 Гц. 1Н). 2.74-2.83 (м. 4Н). 2.51-2.66 (м. 2Н). 2.31-2.37 (м. 6Н). 2.00-2.11 (м. 8Н). 1.68-1.85 (м. 6Н). 1.20-1.50 (м. 32Н). 0.84-0.93 (м. 6Н) м.д.
ЭР-МС m/z=7 3 6.5 (MH+).
Пример 11: 1-((2-(3.5-бис((9Z.12Z)-октадека-9.12-диен-1-илокси)фенил)-1.3-диоксолан-4-ил)метил)пиперидин
Л ЯМР (400 МГц. CDClз) δ 6.63 (д. J=2.0 Гц. 2Н). 6.45 (т. J=2.3 Гц. 1H). 5.74 (с. 1H). 5.29-5.48 (м. 8H). 4.38 (т. J=6.1 Гц. 1Н). 4.07-4.15 (м. 1Н). 3.96 (т. J=6.6 Гц. 4Н). 3.78 (дд. J=8.1. 6.6 Гц. 1Н). 2.80 (т. J=6.3 Гц. 4Н). 2.62-2.72 (м. 1Н). 2.50-2.62 (м. 4Н). 2.40-2.50 (м. 2Н). 2.08 (д. J=7.1 Гц. 4Н). 1.70-1.83 (м.
- 50 030650
4Н), 1,53-1,70 (м, 7Н), 1,23-1,53 (м, 34Н), 0,91 (т, J=7,1 Гц, 6Н) м.д.
ЭР-МС m/z 7 7 6,7 (МН+).
Пример 12: (2-(3,5 -бис((2)-октадец-9-ен-1 -илокси)фенил)-1,3 - диоксолан-4-ил)метил-2-(диметиламино)ацетат
К раствору Интермедиата 9b (2,42 г, 3,39 ммоль) в ДХМ (30 мл) добавляли Ν,Ν-диметилглицин (0,38 г, 3,73 ммоль) с последующим добавлением HATU (1,55 г, 4,07 ммоль) и пиридина (1,1 мл, 13 ммоль). Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. Летучие вещества удаляли при пониженном давлении, и полученный продукт очищали на силикагеле с использованием смеси гептан/EtOAc в качестве элюента, обеспечивая 1,14 г целевого продукта.
1Н ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ: 6,60 (дт, J=8,8 Гц, 2,0 Гц, 2Н), 6,44-6,41 (м, 1Н), 5,87 (с, 0,33Н), 5,73 (с, 0,33Н), 5,45 (с, 0,33Н), 5,36-5,30 (м, 4Н), 4,74 (м, 0,33Н), 3,91 (м, 0,33Н), 3,76 (м, 0,33Н), 4,50-4,06 (м, 4Н), 3,91 (т, J=6,5 Гц, 4Н), 3,31 (с, 0,66Н), 3,22 (с, 0,66Н), 3,19 (с, 0,66Н), 2,38 (с, 2Н), 2,36 (с, 2Н), 2,34 (с, 2Н), 2,04-1,99 (м, 8Н), 1,78-1,71 (м, 4Н), 1,50-1,26 (м, 44Н), 0,87 (т, J=7,0 Гц, 6Н) м.д.
ЭР-МС m/z=798,5 (MH+).
Синтез примера 13:
Интермедиат 13 а: (3,5-бис((92,122)-октадека-9,12-диен-1 -илокси)фенил)метанол
К Интермедиату 1а (1,5 г, 2,4 ммоль) в ТГФ (10 мл) и MeOH (5 мл) добавляли боргидрид натрия (0,116 г, 3,07 ммоль). Полученную смесь перемешивали в течение ночи и затем гасили MeOH и водой. Полученный продукт экстрагировали EtOAc, и органические слои высушивали над сульфатом натрия. Продукт декантировали, и летучие вещества удаляли при пониженном давлении. Продукт использовали на следующей стадии без дополнительной очистки.
Соединение примера 13: 3,5-бис((92,122)-октадека-9,12-диен-1 -илокси)бензил-4-(диметиламино)бутаноат
К Интермедиату 13а (486 мг, 0,762 ммоль) в ДХМ (5 мл) добавляли 4-диметиламинобутановую кислоту (100 мг, 0,762 ммоль) с последующим добавлением ДИЭА (0,32 мл, 1,83 ммоль), ДМАП (50 мг, 0,41 ммоль) и EDC (175 мг, 0,92 ммоль). Полученную смесь перемешивали в течение ночи при комнатной температуре и очищали непосредственно на силикагеле с использованием смеси гептан/EtOAc в качестве элюента, обеспечивая 319 мг (56%) целевого продукта.
1H ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ: 6,48-6,45 (м, 2Н), 6,41-6,38 (м, 1Н), 5,44-5,29 (м, 8Н), 5,04 (с, 2Н), 3,92 (т, J=6,5 Гц, 4Н), 2,81-2,75 (м, 4Н), 2,41 (т, J=7,5 Гц, 2Н), 2,29 (т, J=7,3 Гц, 2Н), 2,21 (с, 6Н), 2,10-2,00 (м, 8Н), 1,87-1,71 (м, 6Н), 1,51-1,23 (м, 32Н), 0,90 (т, J=6,8 Гц, 6Н) м.д.
ЭР-МС m/z=750,7 (MH+).
Примеры 14-17 могут быть получены с использованием способов, аналогичных тем, которые применяются для получения примера 13.
Пример 14: 3,5-бис((92,122)-октадека-9,12-диен-1 -илокси)бензил-3-(диметиламино)пропаноат
1H ЯМР (400 МГц, CDCla) δ: 6,49-6,46 (м, 2Н), 6,42-6,39 (м, 1Н), 5,44-5,29 (м, 8Н), 5,05 (с, 2Н), 3,93 (т, J=6,8 Гц, 4Н), 2,82-2,75 (м, 4Н), 2,68-2,61 (м, 2Н), 2,59-2,52 (м, 2Н), 2,25 (с, 6Н), 2,12-2,01 (м, 8Н), 1,821,71 (м, 4Н), 1,52-1,23 (м, 32Н), 0,90 (т, J=6,8 Гц, 6Н) м.д.
ЭР-МС m/z=7 3 6,8 (MH+).
Пример 15: 3,5-бис((92,122)-октадека-9,12-диен-1-илокси)бензил-2-(диметиламино)ацетат
1H ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ: 6,51-6,46 (м, 2Н), 6,42-6,39 (м, 1Н), 5,46-5,29 (м, 8Н), 5,09 (с, 2Н), 3,92 (т, J=6,5 Гц, 4Н), 3,23 (с, 2Н), 2,83-2,75 (м, 4Н), 2,37 (с, 6Н), 2,12-2,00 (м, 8Н), 1,83-1,70 (м, 4Н), 1,50-1,23 (м, 32Н), 0,89 (т, J=6, 8 Гц, 6Н) м.д.
ЭР-МС m/z=722,4 (MH+).
- 51 030650
Пример 16: 4-метил-3,5-бис((9Z,12Z)-октадека-9,12-диен-1-илокси)бензил-3-(диметиламино)пропаноат
1H ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ: 6,51 (с, 2Н), 5,31-5,45 (м, 8Н), 5,07 (с, 2Н), 3,97 (т, J=6,6 Гц, 4Н), 2,80 (дд, J=6,3, 6,3 Гц, 4Н), 2,68 (т, J=7,1 Гц, 2Н), 2,54 (т, J=7,3 Гц, 2Н), 2,27 (с, 6Н), 2,04-2,13 (м, 11Н), 1,761,85 (м, 4Н), 1,46-1,53 (м, 4Н), 1,26-1,45 (м, 32Н), 0,92 (т, J=6,8 Гц, 5Н), 0,93 (уш.с, 1Н) м. д.
ЭР-МС m/z=750,5 (MH+).
Пример 17: 3,5-бис((9Z,12Z)-октадека-9,12-диен-1-илокси)бензил-3-(диметиламино)-2-метилпропаноат
1H ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ: 6,40 (д, J=2,0 Гц, 2Н), 6,34-6,29 (м, 1Н), 5,36-5,21 (м, 8Н), 4,98 (с, 2Н), 3,85 (т, J=6,6 Гц, 4Н), 2,70 (т, J=6,3 Гц, 4Н), 2,66-2,54 (м, 2Н), 2,14 (с, 6Н), 1,98 (к, J=6,6 Гц, 8Н), 1,72-1,64 (м, 4Н), 1,42-1,34 (м, 4Н), 1,33-1,16 (м, 36Н), 1,10 (д, J=6,6 Гц, 3Н), 0,85-0,79 (м, 6Н) м. д.
ЭР-МС m/z=750,3 (MH+).
Синтез примера 18:
Интермедиат 18а: (9Z,12Z)-2-гидроксиэтил-октадека-9,12-диеноат
Линолевую кислоту (5,0 г, 17,83 ммоль) растворяли в 39,9 мл этиленгликоля при перемешивании. К смеси добавляли EDC (5,136 г, 26,7 ммоль) и HOBt (4,10 г, 26,7 ммоль) с последующим добавлением триэтиламина (7,45 мл, 53,5 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 48 ч и контролировали завершение реакции с помощью ТСХ. Неочищенное вещество разбавляли 100 мл дихлорметана и промывали 50 мл воды и 50 мл солевого раствора. Органический слой отделяли и высушивали над безводным сульфатом натрия. Неочищенный продукт наносили сухим на целит и очищали с помощью хроматографии на силикагеле с градиентом от 10 до 40% EtOAc в гептане. Продукт восстанавливали в виде прозрачного масла (3,884 г, 67,1%). ТСХ (силикагель, 20% EtOAc в гептане): Rf=0,22.
Интермедиат 18b: (9Z,9'Z, 12Z, 12'Z)-((5 -формил-1,3 -фенилен)бис(окси))бис(этан-2,1 - диил)бис(октадека-9,12-диеноат)
Интермедиат 18а (1,5 г, 4,62 ммоль), 3,5-дигидроксибензальдегид (0,319 г, 2,311 ммоль) и трифенилфосфин (1,273 г, 4,85 ммоль) растворяли в 19 мл безводного ТГФ. Добавляли DIAD (0,944 мл, 4,85 ммоль) и реакционную смесь оставляли перемешиваться 48 ч при комнатной температуре. Реакционную смесь непосредственно концентрировали на целите и очищали с помощью хроматографии на силикагеле с градиентом от 10 до 20% EtOAc в гептане. Продукт выделяли в виде бесцветного масла (1,077 г, 62,1%).
1H ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ: 9,92 (с, 1Н), 7,06 (д, J=2,3 Гц, 2Н), 6,76 (т, J=2,3 Гц, 1Н), 5,31-5,43 (м, 8Н), 4,43-4,49 (м, 4Н), 4,20-4,26 (м, 4Н), 2,78 (т, J=6,4 Гц, 4Н), 2,37 (т, J=7,7 Гц, 4Н), 2,01-2,11 (м, 8Н), 1,58-1,71 (м, 5Н), 1,24-1,42 (м, 30H), 0,90 (т, J=6,8 Гц, 6Н) м.д.
Интермедиат 18с: (9Z,9'Z, 12Z, 12'Z)-((5-(гидроксиметил)- 1,3-фенилен)бис(окси))бис(этан-2,1 диил)бис(октадека-9,12-диеноат)
о
Интермедиат 18b (465,2 мг, 0,619 ммоль) растворяли в 4,1 мл сухого этанола в атмосфере азота. Боргидрид натрия (46,9 мг, 1,239 ммоль) добавляли в виде одной порции и перемешивали при комнатной температуре в течение 30 мин. Завершение реакции контролировали с помощью ТСХ. Реакционную смесь гасили уксусной кислотой, и разбавляли 10 мл воды, и экстрагировали в 30 мл ДХМ. Полученные органические слои объединяли, высушивали над сульфатом натрия, отфильтровывали и концентрировали. Продукт восстанавливали в виде 429 мг прозрачного масла.
ТСХ (силикагель, 30% EtOAc в гептане): Rf=0,55
Соединение примера 18: (9Z,9'Z, 12Z, 12^)-((5-(((3-(диметиламино)пропаноил)окси)метил)-1,3фенилен)бис(окси))бис(этан-2,1-диил)бис(октадека-9,12-диеноат)
- 52 030650
Интермедиат 18с (50 мг, 0,066 ммоль) и Н^диметиламинопропионовую кислоту (10,20 мг, 0,066 ммоль) растворяли в 4 мл ДХМ. Добавляли HATU (37,9 мг, 0,100 ммоль) с последующим добавлением триэтиламина (9,25 мкл, 0,066 ммоль). Реакционную смесь перемешивали 18 ч при комнатной температуре и контролировали с помощью ЖХМС. Реакционную смесь разбавляли 100 мл ДХМ и 50 мл воды. Органические слои разделяли, затем промывали солевым раствором, высушивали над сульфатом натрия, отфильтровывали и концентрировали.
Неочищенный продукт очищали на силикагеле метанолом и дихлорметаном в качестве элюента. Продукт дополнительно очищали с помощью ВЭЖХ (колонка Waters Sunfire С8 с от 5 до 100% 1:1 ацетонитрила: изопропанола в воде, модифицированной 0,1% ТФУК). Фракции, содержащие продукт, распределяли между дихлорметаном и насыщенным водным раствором бикарбоната натрия в течение одного часа. Дихлорметановый слой высушивали над сульфатом натрия и отфильтровывали. Фильтрат концентрировали при пониженном давлении с получением целевого соединения.
1H ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ: 6,54 (д, J=2,26 Гц, 2Н), 6,45 (т, J=2,26 Гц, 1Н), 5,28-5,49 (м, 8Н), 5,07 (с, 2Н), 4,35-4,48 (м, 4Н), 4,08-4,22 (м, 4Н), 2,79 (т, J=6,53 Гц, 4Н), 2,60-2,72 (м, 2Н), 2,49-2,60 (м, 2Н), 2,37 (т, J=7,65 Гц, 4Н), 2,27 (с, 6Н), 1,97-2,14 (м, 8Н), 1,56-1,74 (м, 4Н), 1,23-1,44 (м, 28Н), 0,85-0,97 (м, 6Н)
м.д.
ЭР-МС m/z=852,7 (MH+).
Примеры 19-23 могут быть получены с использованием способов, аналогичных тем, которые применяются для получения примера 18.
Пример 19: (9Z,9'Z, 12Z, 12^)-((5-(((3-(диметиламино)пропаноил)окси)метил)- 1,3-фенилен)бис(окси))бис(пропан-3,1-диил)бис(октадека-9,12-диеноат)
1H ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ: 6,50 (д, J=2,3 Гц, 2Н), 6,41 (т, J=2,3 Гц, 1Н), 5,33-5,44 (м, 8Н), 5,07 (с, 2Н), 4,27 (т, J=6,4 Гц, 4Н), 4,03 (т, J=6,1 Гц, 4Н), 2,73-2,78 (м, 4Н), 2,64 (д, J=7,3 Гц, 2Н), 2,29-2,37 (м, 10Н), 2,12 (дд, J=6,3, 6,3 Гц, 4Н), 2,02-2,10 (м, 8Н), 1,63 (дд, J=7,3, 7,3 Гц, 5Н), 1,25-1,41 (м, 32Н), 0,91 (т, J=6,8 Гц, 6Н) м.д.
ЭР-МС m/z=8 8 0,4 (MH+).
Пример 20: (9Z,9'Z, 12Z, 12'Z)-((5 -((2-(диметиламино)ацетокси)метил)- 1,3-фенилен)бис(окси))бис(пропан-3,1-диил)бис(октадека-9,12-диеноат)
1H ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ: 6,51 (д, J=2,0 Гц, 2Н), 6,42 (т, J=2,0 Гц, 1Н), 5,27-5,47 (м, 8Н), 5,11 (с, 2Н), 4,27 (дд, J=6,4, 6,4 Гц, 4Н), 4,03 (дд, J=6,1, 6,1 Гц, 4Н), 3,30 (с, 2Н), 2,79 (дд, J=6,4, 6,4 Гц, 4Н), 2,44 (с, 6Н), 2,32 (дд, J=7,5, 7,5 Гц, 4Н), 2,03-2,15 (м, 12Н), 1,53-1,77 (м, 14Н), 1,25-1,43 (м, 32Н), 0,91 (т, J=6,8 Гц, 6Н) м.д.
ЭР-МС m/z=866,4 (MH+).
Пример 21: (9Z,9'Z,12Z,12'Z)-((5-((2-(диметиламино)ацетокси)метил)-1,3-фенилен)бис(окси))бис(бутан-4,1 -диил)бис(октадека-9,12-диеноат)
1H ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ: 6,48 (д, J=2,3 Гц, 2Н), 6,40 (т, J=2,1 Гц, 1Н), 5,43-5,32 (м, 8Н), 5,11 (с, 2Н), 4,17-4,10 (м, 4Н), 3,96 (дд, J=5,6, 5,6 Гц, 4Н), 3,54 (с, 2Н), 3,20-3,27 (м, J=7,3 Гц, 3Н), 2,81 (с, 22Н), 2,77 (дд, J=6,7, 6,7 Гц, 4Н), 2,63 (с, 6Н), 2,30 (дд, J=7,7, 7,7 Гц, 4Н), 2,01-2,08 (м, 8Н), 1,86-1,78 (м, 8Н), 1,66-1,58 (м, 5Н), 1,42-1,37 (м, 7Н), 1,37-1,23 (м, 36Н), 0,91-0,87 (м, 6Н) м.д.
ЭР-МС m/z=894,5 (MH+).
Пример 22: (9Z,9'Z, 12Z, 12^)-((5-(((3-(диметиламино)пропаноил)окси)метил)- 1,3-фенилен)бис(окси))бис(бутан-4,1 -диил)бис(октадека-9,12-диеноат)
1H ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ: 6,48 (д, J=2,3 Гц, 2Н), 6,40 (уш.с, 1Н), 5,32-5,43 (м, 8Н), 5,11 (с, 2Н), 4,10-4,17 (м, 4Н), 3,96 (т, J=5,6 Гц, 4Н), 3,54 (с, 2Н), 3,23 (к, J=7,3 Гц, 2Н), 2,77 (дд, J=6,7, 6,7 Гц, 4Н), 2,63 (с, 6Н), 2,30 (дд, J=7,7, 7,7 Гц, 4Н), 2,02-2,07 (м, 8Н), 1,79-1,88 (м, 8Н), 1,58-1,68 (м, 5Н), 1,23-1,39 (м,
- 53 030650
38Н), 0,89 (т, J=6,5 Гц, 7Н) м.д.
ЭР-МС m/z=908,7 (MH+).
Пример 23: (9Z,9'Z, 12Z, 12'Z)-((5 -(((4-(диметиламино)бутаноил)окси)метил)- 1,3-фенилен)бис(окси))бис(этан-2,1 -диил)бис(октадека-9,12-диеноат)
1H ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ: 6,84 (с, 1Н), 6,74 (д, J=1,5 Гц, 2Н), 5,21-5,35 (м, 8Н), 5,07 (с, 2Н), 4,31 (т, J=4,8 Гц, 4Н), 4,03-4,08 (м, 4Н), 2,69 (т, J=6,1 Гц, 4Н), 2,47-2,58 (м, 8Н), 2,35-2,41 (м, 7Н), 2,23-2,28 (м, 5Н), 1,95-2,00 (м, 8Н), 1,79-1,86 (м, 2Н), 1,52-1,59 (м, 5Н), 1,17-1,32 (м, 37Н), 0,82 (т, J=6,8 Гц, 6Н) м.д.
ЭР-МС m/z=866,4 (MH+).
Синтез примера 24:
Интермедиат 24а: (9Z, 12Z)-октадека-9,12-диен-1 -ил-2,6-бис((97,1 2Z)-октадека-9,12-диен-1 -илокси)изоникотинат
Раствор цитразиновой кислоты (1,8 г, 11,6 ммоль) в ДМФ (60 мл) перемешивали при комнатной температуре и добавляли линолеилмезилат (16,0 г, 46,4 ммоль) и карбонат калия (8,02 г, 58,0 ммоль). Смесь нагревали до 80°C в течение ночи, затем охлаждали до комнатной температуры и добавляли воду (50 мл) и EtOAc (100 мл). Органическую фазу собирали, высушивали над сульфатом натрия и затем летучие вещества удаляли при пониженном давлении. Полученный неочищенный продукт очищали на силикагеле с использованием смеси гептан/EtOAc в качестве элюента, обеспечивая 5,2 г целевого продукта.
13С ЯМР (100 МГц, CDCl3) δ: 165,3, 163,5, 142,9, 130,2, 130,1, 130,1, 120,8, 127,9, 101,2, 66,6, 65,7,
31,6, 29,7, 29,7, 29,5, 29,4, 29,4, 29,3, 29,3, 29,1, 28,6, 27,2, 26,1, 26,0, 25,6, 22,6, 14,1 м.д.
Интермедиат 24b: 2,6-бис((9Z,12Z)-октадека-9,12-диен-1-илокси)изоникотиновая кислота
о
Интермедиат 24а (3,06 г, 3,40 ммоль) перемешивали в EtOH (15 мл) и добавляли гидроксид калия (329 мг, 5,10 ммоль). Мутный раствор становился прозрачным и добавляли воду (10 мл) и ТГФ (8 мл). Полученную смесь перемешивали в течение ночи при комнатной температуре и затем летучие вещества удаляли при пониженном давлении. Полученный остаток очищали на силикагеле с использованием смеси гептан/EtOAc в качестве элюента, обеспечивая 1,6 г целевого продукта.
ЭР-МС m/z=652,4 (MH+).
Соединение примера 24: 2-(диметиламино)этил-2,6-бис((9Z,12Z)-октадека-9,12-диен-1-илокси)изоникотинат
Интермедиат 24b (311 мг, 0,477 ммоль) перемешивали в ДМФ (15 мл) и добавляли HBTU (651 мг, 1,717 ммоль), HOBt (12 0 мг, 0,444 ммоль) и ДИЭА (0,582 мл, 3,34 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение ночи, реакционную смесь выливали в воду (50 мл) и полученную смесь экстрагировали EtOAc. Органические фазы собирали, высушивали над сульфатом натрия и затем концентрировали при пониженном давлении. Полученный неочищенный продукт очищали на силикагеле с использованием смеси гептан/EtOAc в качестве элюента, обеспечивая 207 мг целевого продукта.
1H ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ: 6,85 (с, 2Н), 5,32-5,44 (м, 8Н), 4,42 (т, J=8 Гц, 2Н), 4,27 (т, J=8 Гц, 2Н),
2,79 (т, J=8 Гц, 2Н), 2,71 (т, J=8 Гц, 2Н), 2,34 (с, 6Н), 2,07 (дд, J=8 Гц, 8Н), 1,78 (к, J=8 Гц, 4Н), 1,27-1,48 (м, 32Н), 0,91 (т, J=8 Гц, 6Н) м. д.
ЭР-МС m/z=723,4 (MH+).
Пример 25: 3-(диметиламино)пропил-2,6-бис((9Z,12Z)-октадека-9,12-диен-1 -илокси)изоникотинат
Пример 25 может быть получен с использованием способов, аналогичных тем, которые применяются для получения примера 24.
1H ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ: 6,84 (с, 2Н), 5,32-5,44 (м, 8Н), 4,37 (т, J=8 Гц, 2Н), 4,28 (т, J=8 Гц, 4Н),
2,79 (т, J=8 Гц, 4Н), 2,45 (т, J=8 Гц, 2Н), 2,29 (с, 6Н), 2,07 (дд, J=8 Гц, 8Н), 1,97 (к, J=5 Гц, 2Н), 1,78 (к, J=8 Гц, 6Н), 1,27-1,48 (м, 32Н), 0,90 (т, J=8 Гц, 6Н) м.д.
- 54 030650
ЭР-МС m/z=737,5 (MH+).
Синтез примера 26:
Интермедиат 26а: (9Z,9'Z,12Z,12'Z)-5-формил-1,3-фенилен-бис(октадека-9,12-диеноат)
Раствор 3,5-дигидроксибензальдегида (500 мг, 3,62 ммоль) в DCE (9 мл) помещали в микроволновую виалу и добавляли линолевую кислоту (2,03 г, 7,24 ммоль), ДИЭА (1,26 мл, 7,24 ммоль), ДМАП (442 мг, 3,62 ммоль) и EDC (1,74 г, 9,05 ммоль). Реакционную смесь нагревали до 80°С в микроволновом реакторе в течение 20 мин и затем хранили при 4°С в течение 2 дней. Летучие вещества удаляли при пониженном давлении и полученный продукт очищали на силикагеле с использованием смеси гептан/EtOAc в качестве элюента, обеспечивая 1,44 г целевого продукта.
13С ЯМР (100 МГц, CDCl3) δ 190,2, 171,6, 151,7, 138, 130,3, 130,0, 128,1, 127,9, 121,5, 119,9, 34,3, 31,5, 29,6, 29,4, 29,2, 29,1, 29,1, 27,2, 27,2, 25,6, 24,8, 22,6, 14,1 м.д.
Интермедиат 26b: (9Z,9'Z,12Z,12'Z)-5-(гидроксиметил)- 1,3-фенилен-бис(октадека-9,12-диеноат)
Интермедиат 26а (1,44 г, 2,17 ммоль) перемешивали в ТГФ (18 мл) и EtOH (18 мл) и полученный раствор охлаждали на ледяной бане. Добавляли боргидрид натрия (25 мг, 0,65 ммоль) и реакционную смесь перемешивали при 0°C в течение 1 ч. Реакционную смесь разбавляли EtOAc и дважды промывали водой. Полученный органический слой высушивали над сульфатом натрия и затем летучие вещества удаляли при пониженном давлении. Неочищенный продукт очищали на силикагеле с использованием смеси гептан/EtOAc с последующим использованием смеси ДХМ/MeOH в качестве элюента, обеспечивая 850 мг (59%) целевого продукта.
1H ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ 7,01-6,97 (м, 2Н), 6,82-6,80 (м, 1Н), 5,45-5,30 (м, 8Н), 4,71 (с, 2Н), 2,822,75 (м, 4Н), 2,58-2,51 (м, 4Н), 2,12-2,01 (м, 8Н), 1,80-1,70 (м, 4Н), 1,45-1,23 (м, 28Н), 0,93-0,86 (м, 6Н)
м.д.
Соединение примера 26: (9Z,9'Z,12Z,12'Z)-5-(((3-(диметиламино)пропаноил)окси)метил)-1,3фенилен-бис(октадека-9,12-диеноат)
о
К Интермедиату 26b (33 0 мг, 0,4 96 ммоль) в ДХМ (30 мл) добавляли 3-диметиламинопропионовой кислоты гидрохлорид (114 мг, 0,744 ммоль), EDC (143 мг, 0,744 ммоль), ДМАП (6 мг, 0,05 ммоль) и TEA (0,277 мл, 1,98 ммоль). Полученную смесь перемешивали в течение ночи при комнатной температуре, затем очищали непосредственно на модифицированном муравьиной кислотой силикагеле с использованием смеси гептан/EtOAc с последующим использованием смеси ДХМ/MeOH в качестве элюента, обеспечивая 428 мг целевого продукта в виде соли муравьиной кислоты и 697 мг в виде свободного основания. Характеристика соли муравьиной кислоты.
1H ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ: 8,41 (д, J=1,26 Гц, 0,5Н, формиат), 6,99 (д, J=2,01 Гц, 2Н), 6,89 (т, J=2,13 Гц, 1Н), 5,26-5,48 (м, 8Н), 5,13 (с, 2Н), 2,93 (к, J=7,03 Гц, 2Н), 2,80 (т, J=6,80 Гц, 4Н), 2,67-2,77 (м, 2Н), 2,56 (т, J=7,53 Гц, 4Н), 2,45 (д, J=5,52 Гц, 6Н), 1,97-2,17 (м, 8Н), 1,75 (кв, J=7,47 Гц, 4Н), 1,23-1,50 (м, 28Н), 0,81-0,98 (м, 6Н) м.д. ЭР-МС m/z=7 64,6 (MH+).
Пример 27: (9Z,9'Z, 12Z, 12'Z)-5-(((4-(диметиламино)бутаноил)окси)метил)- 1,3-фенилен-бис(октадека-9,12-диеноат)
о
Пример 27 может быть получен с использованием способов, аналогичных тем, которые применяются для получения примера 26.
1H ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ: 6,97 (д, J=2,0 Гц, 2Н), 6,87 (т, J=2,1 Гц, 1Н), 5,27-5,48 (м, 8Н), 5,10 (с, 2Н), 2,78 (т, J=6,5 Гц, 4Н), 2,54 (т, J=7,5 Гц, 4Н), 2,41 (т, J=7,4 Гц, 2Н), 2,27-2,35 (м, 2Н), 2,22 (с, 6Н), 2,002,12 (м, 8Н), 1,82 (кв, J=7,3 Гц, 2Н), 1,74 (кв, J=7,5 Гц, 4Н), 1,23-1,46 (м, 28Н), 0,89 (т, J=7,0 Гц, 6Н) м.д.
ЭР-МС m/z=778,5 (MH+).
Синтез примера 28:
Интермедиат 28а: (2,6-бис((9Z,12Z)-октадека-9,12-диен-1-илокси)пиридин-4-ил)метанол
- 55 030650
Интермедиат 24b (3,5 г, 3,89 ммоль) перемешивали в ТГФ (50 мл) и раствор охлаждали на ледяной бане. К данному холодному раствору медленно добавляли литийалюминийгидрид (570 мг, 15 ммоль). После добавления реакционную смесь оставляли нагреваться до комнатной температуры и перемешивали в течение ночи. Осторожно добавляли лед и полученную смесь экстрагировали EtOAc. Органические слои собирали, и высушивали над сульфатом натрия, и затем концентрировали при пониженном давлении. Полученный неочищенный продукт очищали на силикагеле с использованием смеси гептан/EtOAc в качестве элюента, обеспечивая 1,3 г целевого продукта.
1H ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ: 6,27 (с, 2Н), 5,44-5,27 (м, 8Н), 4,63 (с, 2Н), 4,23 (т, J=5,7 Гц, 4Н), 2,822,75 (м, 4Н), 2,10-2,02 (м, 8Н), 1,80-1,72 (м, 4Н), 1,47-1,23 (м, 32Н), 0,93-0,86 (м, 6Н) м.д.
Соединение примера 28: (2,6-бис((97,12Z)-октадека-9,12-диен-1 -илокси)пиридин-4-ил)метил-3 (диэтиламино)пропаноат
о
Интермедиат 28а (334 мг, 0,52 3 ммоль) перемешивали в ДХМ (20 мл) с 3диэтиламинопропионовой кислоты гидрохлоридом (143 мг, 0,785 ммоль). Добавляли HATU (397 мг, 1,05 ммоль) и реакционную смесь перемешивали в течение ночи при комнатной температуре. Летучие вещества удаляли при пониженном давлении, и неочищенный продукт очищали на силикагеле с использованием смеси гептан/EtOAc в качестве элюента, обеспечивая 171 мг целевого продукта.
1H ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ 6,25 (с, 2Н), 5,32-5,44 (м, 8Н), 5,04 (с, 2Н), 4,24 (т, J=8 Гц, 4Н), 2,78-2,87 (м, 6Н), 2,55 (дд, J=8 Гц, 6Н), 2,07 (дд, J=8 Гц, 8Н), 1,78 (к, J=8 Гц, 4Н), 1,27-1,48 (м, 32Н), 1,05 (т, J=8 Гц, 6Н), 0,91 (т, J=8 Гц, 6Н) м. д.
ЭР-МС m/z=765,7 (MH+).
Пример 29: (9Z,9'Z, 12Z, 12'Z)-(5 -(((3 -(диметиламино)пропаноил)окси)метил)- 1,3-фенилен)бис(метилен)бис(октадека-9,12-диеноат)
Пример 29 может быть получен с использованием способов, аналогичных тем, которые применяются для получения Интермедиата 33а и примера 18.
1H ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ: 7,30 (с, 3Н), 5,28-5,45 (м, 8Н), 5,14 (с, 2Н), 5,11 (с, 4Н), 2,77 (т, J=6,5 Гц, 4Н), 2,61-2,70 (м, 2Н), 2,51-2,59 (м, 2Н), 2,37 (т, J=7,5 Гц, 4Н), 2,25 (с, 6Н), 2,05 (к, J=6,9 Гц, 8Н), 1,591,73 (м, 6Н), 1,22-1,43 (м, 26Н), 0,89 (т, J=7,0 Гц, 6Н) м.д.
ЭР-МС m/z=7 92,4 (MH+).
Примеры 30-31 могут быть получены с использованием способов, аналогичных тем, которые применяются для получения примера 28.
Пример 3 0: (2,6-6u^(9Z, 12Z)-октадека-9,12-диен-1 -илокси)пиридин-4-ил)метил-4-(диметиламино)бутаноат
1H ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ: 6,24 (с, 2Н), 5,46-5,33 (м, 8Н), 5,05 (с, 2Н), 4,24 (т, J=6,7 Гц, 4Н), 2,812,72 (м, 7H), 2,66-2,61 (м, 2Н), 2,34 (с, 6Н), 2,02-2,11 (м, 8Н), 1,80-1,72 (м, 4Н), 1,49-1,40 (м, J=6,0, 13,8 Гц, 5Н), 1,40-1,25 (м, 32Н), 0,90 (т, J=6,9 Гц, 6Н) м.д.
ЭР-МС m/z=751,7 (MH+).
Пример 31: (2,6-бис((9Z,12Z)-октадека-9,12-диен-1-илокси)пиридин-4-ил)метил-3-(диметиламино)пропаноат
1H ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ: 6,51 (д, J=2,0 Гц, 2Н), 6,42 (т, J=2,0 Гц, 1Н), 5,44-5,30 (м, 8Н), 5,11 (с, 2Н), 4,27 (т, J=6,4 Гц, 4Н), 4,03 (т, J=6,1 Гц, 4Н), 3,30 (с, 2Н), 2,79 (т, J=6,4 Гц, 4Н), 2,44 (с, 6Н), 2,32 (т, J=7,5 Гц, 4Н), 2,17-2,10 (м, 4Н), 2,09-2,03 (м, 9Н), 1,68-1,57 (м, 10Н), 1,42-1,26 (м, 34Н), 0,91 (т, J=6, 8 Гц, 6Н).
- 56 030650
ЭР-МС m/z=737,5 (MH+).
Синтез примера 32:
Интермедиат 32а: ^^-Sn^^Z, 12Z)-октадека-9,12-диен-1 -илокси)пиридин-4-ил)метилметансульфонат
Интермедиат 28а (330 мг, 0,517 ммоль) перемешивали в ДХМ (30 мл) с TEA (0,290 мл, 2,07 ммоль) и полученный раствор охлаждали на ледяной бане. Добавляли MsCl (0,08 мл, 1,0 ммоль) и полученную смесь оставляли нагреваться до комнатной температуры при перемешивании в течение 4 ч. Реакционную смесь обрабатывали HCl (30 мл, 1M в воде) и ДХМ (50 мл) и органический слой собирали. Продукт высушивали над сульфатом натрия, и летучие вещества удаляли при пониженном давлении с получением 360 мг продукта, который использовали без дополнительной очистки.
XH ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ 6,27-6,36 (с, 2Н), 5,32-5,44 (м, 10Н), 5,14 (с, 1Н), 4,39-4,50 (м, 1Н), 4,174,30 (м, 5Н), 3,41 (к, J=7,03 Гц, 1Н), 3,01-3,06 (м, 2Н), 2,74-2,84 (м, 5Н), 2,07 (к, J=6,86 Гц, 10Н), 1,70-1,87 (м, 5Н), 1,66 (с, 2Н), 1,24-1,55 (м, 34Н), 0,91 (т, J=6,78 Гц, 6Н) м.д.
Соединение примера 32: 1-(2,6-бис((9Z,12Z)-октадека-9,12-диен-1-илокси)пиридин-4-ил)-N,Nдиметилметанамин
Интермедиат 32а (360 мг, 0,503 ммоль) перемешивали в ДМФ (3 мл) с диметиламином (3 мл, 2 М, 11,9 ммоль) и смесь нагревали в микроволновом реакторе до 140°C в течение 30 мин. Данное нагревание повторяли, пока не прореагировал весь исходный материал, как определяли с помощью ТСХ. Летучие вещества удаляли при пониженном давлении, и полученный неочищенный продукт очищали на силикагеле с использованием смеси гептан/EtOAc в качестве элюента, обеспечивая 123 мг целевого продукта.
XH ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ: 6,27 (с, 2Н), 5,32-5,44 (м, 8Н), 4,26 (т, J=8 Гц, 4Н), 3,33 (с, 2Н) 2,80 (т, J=8 Гц, 4Н), 2,26 (с, 6Н), 2,07 (дд, J=8 Гц, 8Н), 1,78 (к, J=5 Гц, 4Н), 1,27-1,48 (м, 32Н), 0,92 (т, J=8 Гц, 6Н)
м.д.
ЭР-МС m/z=665,5 (MH+).
Синтез примера 33:
Интермедиат 33а: (9Z,9'Z,12Z,12'Z)-(5-(гидроксиметил)-1,3-фенилен)бис(метилен)бис(октадека9,12-диеноат)
Линолевую кислоту (3,42 г, 12,19 ммоль) перемешивали с EDC (2,33 г, 12,2 ммоль) в ДХМ (30 мл). После растворения добавляли ДИЭА (2,60 мл, 14,9 ммоль) и ДМАП (145 мг, 1,19 ммоль). После 10 мин перемешивания добавляли бензол-1,3,5-триилтриметанол (1,0 г, 6,0 ммоль) и полученную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 3 дней. Летучие вещества удаляли при пониженном давлении, и полученный неочищенный продукт очищали на силикагеле с использованием смеси гептан/EtOAc в качестве элюента, обеспечивая 1,36 г целевого продукта.
ТСХ (силикагель, 20% EtOAc в гептане): Rf=0,12.
Интермедиат 33b: (9Z,9'Z,12Z,12'Z)-(5-формил-1,3-фенилен)бис(метилен)бис(октадека-9,12-диеноат)
Интермедиат 33а (214 мг, 0,309 ммоль) перемешивали в ДХМ (30 мл) и добавляли PDC (244 мг, 0,648 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. Летучие вещества удаляли при пониженном давлении, и полученный неочищенный продукт очищали на силикагеле с использованием смеси гептан/EtOAc в качестве элюента, обеспечивая 210 мг целевого продукта.
ТСХ (силикагель, 20% EtOAc в гептане): Rf=0,44.
Соединение примера 33: (9Z,9'Z, 12Z, 12^)-(5-((диметиламино)метил)- 1,3-фенилен)бис(метилен)бис(октадека-9,12-диеноат)
- 57 030650
Интермедиат 33b (210 мг, 0,30 ммоль) перемешивали в DCE (10 мл) и добавляли диметиламин (0,53 мл, 2,0 М в ТГФ, 1,06 ммоль). Добавляли уксусную кислоту (0,017 мл, 0,304 ммоль) и триацетоксиборгидрид натрия (129 мг, 0,608 ммоль) и продукт перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. Летучие вещества удаляли при пониженном давлении, и полученный неочищенный продукт очищали на силикагеле с использованием смеси гептан/EtOAc с последующим использованием смеси ДХМ/MeOH в качестве элюента, обеспечивая 186 мг целевого продукта.
1H ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ: 7,29-7,25 (м, 2н), 7,25-7,22 (м, 1Н), 5,44-5,27 (м, 8Н), 5,10 (с, 4Н), 3,44 (с, 2Н), 2,81-2,74 (м, 4Н), 2,36 (т, J=7,5 Гц, 4Н), 2,25 (с, 6н), 2,10-2,01 (м, 8н), 1,70-1,58 (м, 4Н), 1,42-1,21 (м, 28Н), 0,89 (т, J=6,9 Гц, 6Н) м.д.
ЭР-МС m/z=721,1 (МН+).
Примеры 34-36 могут быть получены с использованием способов, аналогичных тем, которые применяются для получения примера 33.
Пример 34: (5-((диметиламино)метил)- 1,3-фенилен)бис(метилен)дитридеканоат
1H ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ: 7,21 (с, 2Н); 7,18 (с, 1Н), 5,03 (с, 4Н); 3,42 (уш.с, 2Н); 2,28 (т, J=7,5 Гц, 4Н); 2,22 (с, 6Н); 1,61-1,53 (м, 4Н); 1,27-1,15 (м, 36Н); 0,81 (т, J=6,8 Гц, 6Н) м.д.
ЭР-МС m/z=588,5 (MH+).
Пример 35: (5-((диметиламино)метил)- 1,3-фенилен)бис(метилен)бис(3-октилундеканоат)
1H ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ: 7,26 (с, 2Н), 7,24 (с, 1Н), 5,10 (с, 4Н), 3,43 (с, 2Н), 2,29 (д, J=7,4 Гц, 2Н), 2,25 (с, 6Н), 1,87 (м, 2Н), 1,31-1,25 (м, 58Н), 0,91-0,87 (м, 12Н) м.д.
ЭР-МС m/z=756,6 (MH+).
Пример 36: (9Z,12Z)-3-((диметиламино)метил)-5-(((3-октилундеканоил)окси)метил)бензилоктадека9,12-диеноат
1H ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ: 7,28-7,25 (м, 2Н), 7,25-7,22 (м, 1Н), 5,44-5,29 (м, 4Н), 5,10 (с, 4Н), 3,43 (с, 2Н), 2,83-2,73 (м, 2Н), 2,36 (т, J=7,5 Гц, 2Н), 2,29 (д, J=6,8 Гц, 2Н), 2,25 (с, 6Н), 2,10-2,00 (м, 4Н), 1,921,80 (м, 1Н), 1,71-1,57 (м, 2Н), 1,43-1,17 (м, 42Н), 0,94-0,83 (м, 9Н) м.д.
ЭР-МС t/z=736,6 (МН+).
Синтез примера 37:
Интермедиат 37а: 5-формилизофталевая кислота
К раствору 3-формил-5-(метоксикарбонил)бензойной кислоты (1 г, 4,80 ммоль) в ТГФ (25 мл) добавляли LiOH (12,01 мл, 24,02 ммоль) и перемешивали при комнатной температуре в течение 16 ч. Наблюдали частичный гидролиз. Реакционную смесь нагревали до 50°C в течение дополнительных 16 ч. Реакционную смесь разбавляли EtOAc (50 мл) и водой (50 мл) и pH доводили до нейтрального с помощью 1 N HCl. Органический слой собирали, промывали водой (2x50 мл) и высушивали над сульфатом натрия. Летучие вещества удаляли при пониженном давлении, и полученный продукт использовали без дополнительной очистки.
Интермедиат 37b: ди((9Z,12Z)-октадека-9,12-диен-1-ил)-5-формилизофталат
- 58 030650
Интермедиат 37а (700 мг, 0,36 ммоль) перемешивали в ДХМ (15 мл) и добавляли оксалилхлорид (3,16 мл, 36 ммоль) вместе с каплей ДМФ. Полученную смесь перемешивали в течение ночи при комнатной температуре. Летучие вещества удаляли при пониженном давлении, и полученный остаток повторно растворяли в ТГФ (10 мл). Добавляли линолеиловый спирт (2,02 г, 7,57 ммоль) с последующим добавлением TEA (2,51 мл, 18,0 ммоль) и полученную смесь перемешивали на ледяной бане в течение 3 ч. Реакционную смесь разбавляли EtOAc (50 мл) и водой (50 мл). Органический слой собирали, промывали водой (2x50 мл) и высушивали над сульфатом натрия. Летучие вещества удаляли при пониженном давлении, и полученный неочищенный продукт очищали на силикагеле с использованием смеси гептан/EtOAc в качестве элюента, обеспечивая 350 мг целевого продукта.
1H ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ: 8,66 (с, 1Н), 8,26 (с, 2Н), 5,25-5,53 (м, 8Н), 4,16-4,43 (м, 4Н), 3,47-3,67 (м, 1Н), 2,77 (т, J=5,68 Гц, 4Н), 2,05 (д, J=6,32 Гц, 7Н), 1,91 (уш.с, 2Н), 1,65-1,85 (м, 4Н), 1,37-1,53 (м, 5Н), 1,09-1,37 (м, 28Н), 0,88 (т, J=6,19 Гц, 6Н) м.д.
Интермедиат 37с: ди ((9Z,12Z)-октадека-9,12-диен-1-ил)-5-(гидроксиметил)изофталат
К раствору Интермедиата 37b (250 мг, 0,36 ммоль) в ТГФ (30 мл) и EtOH (15 мл) добавляли боргидрид натрия (17,8 мг, 0,47 ммоль). Реакционную смесь перемешивали в течение 30 мин при комнатной температуре и затем разбавляли EtOAc (50 мл) и водой (50 мл). Органический слой собирали, промывали водой (2x50 мл) и высушивали над сульфатом натрия. Летучие вещества удаляли при пониженном давлении, и полученный неочищенный продукт очищали на силикагеле с использованием смеси гептан/EtOAc в качестве элюента, обеспечивая 260 мг целевого продукта.
1H ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ: 8,60 (т, J=1,51 Гц, 1Н), 8,13-8,32 (м, 2Н), 5,22-5,46 (м, 8Н), 4,82 (д, J=5,77 Гц, 2Н), 4,34 (т, J=6,78 Гц, 4Н), 2,77 (т, J=6,53 Гц, 4Н), 1,93-2,13 (м, 9Н), 1,70-1,86 (м, 4Н), 1,201,49 (м, 32Н), 0,76-1,00 (м, 6Н) м.д.
Соединение примера 37: ди((9Z,12Z)-октадека-9,12-диен-1-ил)-5-(((3-(диметиламино)пропаноил)окси)метил)изофталат
К раствору 3-диметиламинопропионовой кислоты (25 мг, 0,16 ммоль) в ДХМ (3 мл) добавляли EDC (31 мг, 0,16 ммоль) и ДМАП (1,32 мг, 0,011 ммоль) с последующим добавлением TEA (0,06 мл, 0,43 ммоль). Полученный раствор перемешивали в течение 30 мин при комнатной температуре и добавляли Интермедиат 37с (75 мг, 0,11 ммоль). Реакционную смесь перемешивали в течение 16 ч и затем разбавляли ДХМ (20 мл) и водой (20 мл). Органический слой собирали, и промывали водой (2x20 мл), и затем высушивали над сульфатом магния. Летучие вещества удаляли при пониженном давлении, и полученный неочищенный продукт очищали на силикагеле с использованием смеси гептан/EtOAc в качестве элюента, обеспечивая 41 мг целевого продукта.
1H ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ: 8,63 (т, J=1,6 Гц, 1Н), 8,20 (д, J=1,8 Гц, 2Н), 5,47-5,26 (м, 8Н), 5,22 (с, 2Н), 4,35 (т, J=6, 8 Гц, 4Н), 2,89-2,74 (м, 6Н), 2,74-2,65 (м, J=7,0 Гц, 2Н), 2,39 (с, 6Н), 2,12-1,95 (м, 8Н), 1,87-1,71 (м, 4Н), 1,49-1,19 (м, 33Н), 0,89 (т, J=7,0 Гц, 6Н) м.д.
ЭР-МС m/z=7 92,4 (MH+).
Синтез примера 38:
Интермедиат 38а: 4-(винилокси)бутилметансульфонат
Раствор 4-(винилокси)бутан-1-ола (50 г, 430 ммоль) в ДХМ (430 мл) охлаждали на ледяной бане. К данному раствору добавляли TEA (90 мл, 646 ммоль) с последующим добавлением по каплям метансульфонилхлорида (36,9 мл, 473 ммоль). В течение второй половины добавления образовывался белый осадок, и как добавление завершалось, реакционная смесь становилась бледно-оранжевой. Реакционную смесь перемешивали в течение ночи, позволяя льду расплавиться и реакционной смеси дойти до темпе- 59 030650
ратуры окружающей среды. Реакционную смесь выливали в делительную воронку и разбавляли 400 мл насыщенного раствора бикарбоната натрия (водн.) и 400 мл EtOAc. Слои разделяли, и водный слой экстрагировали 300 мл EtOAc еще два раза. Слои EtOAc промывали 200 мл насыщенного раствора бикарбоната натрия, затем водой, и слой EtOAc затем высушивали над сульфатом натрия, и отфильтровывали. Фильтрат концентрировали при пониженном давлении с получением 84 г (100%) целевого продукта.
1H ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ: 6,47 (дд, J=6,8, 14,3 Гц, 1Н), 4,29 (т, J=6,3 Гц, 2Н), 4,19 (дд, J=2,0, 14,3 Гц, 1Н), 4,02 (дд, J=2,0, 6,8 Гц, 1Н), 3,74 (т, J=5,9 Гц, 2Н), 3,03 (с, 3Н), 1,96-1,85 (м, 2Н), 1,86-1,73 (м, 2Н)
м.д.
Интермедиат 38b: 3,5-бис(4-(винилокси)бутокси)бензальдегид н
Интермедиат 38а (84 г, 435 ммоль) перемешивали в ДМФ (4 00 мл) и добавляли 3,5дигидроксибензальдегид (27,3 г, 198 ммоль) с последующим добавлением карбоната калия (109 мг, 791 ммоль). Реакционную смесь нагревали до 80°C в течение ночи. После охлаждения до комнатной температуры реакционную смесь разбавляли EtOAc (600 мл) и водой (700 мл). Органический слой собирали, и водный слой снова экстрагировали EtOAc (300 мл). Органические слои объединяли и промывали водой (4x300 мл), высушивали над сульфатом натрия и затем летучие вещества удаляли при пониженном давлении. Полученный неочищенный продукт очищали на силикагеле с использованием смеси гептан/EtOAc в качестве элюента, обеспечивая 56 г целевого продукта.
ЭР-МС m/z=335,1 (MH+).
Интермедиат 38с: 1-(3,5-бис(4-(винилокси)бутокси)фенил)-М^-диметилметанамин
Интермедиат 38b (37 г, 111 ммоль) перемешивали с диметиламином (116 мл, 2 M в ТГФ, 332 ммоль) и уксусной кислотой (6,33 мл, 111 ммоль) в ДХМ (400 мл). К данной смеси добавляли триацетоксиборгидрид натрия (58,6 г, 277 ммоль) и реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. К реакционной смеси добавляли насыщенный раствор бикарбоната натрия (800 мл) и EtOAc (1000 мл). Органическую фазу собирали и водную фазу экстрагировали EtOAc (500 мл). Объединенные органические фазы высушивали над сульфатом натрия, и летучие вещества удаляли при пониженном давлении. Полученный неочищенный продукт очищали на силикагеле с использованием смеси гептан/EtOAc в качестве элюента, обеспечивая 34 г целевого продукта.
ЭР-МС m/z=364,9 (MH+).
Интермедиат 38d: 4,4'-((5-((диметиламино)метил)- 1,3-фенилен)бис(окси))бис(бутан-1 -ол)
К раствору Интермедиата 38с (42 г, 116 ммоль) в EtOAc (200 мл) добавляли HCl (87 мл, 4M в диоксане, 348 ммоль). После завершения реакции при контролировании с помощью ТСХ добавляли насыщенный водный раствор бикарбоната натрия (500 мл) и pH доводили до 10 с помощью добавления твердого карбоната калия. Добавляли EtOAc (600 мл) и органический слой собирали. Водный слой экстрагировали EtOAc (3x500 мл) и объединенные органические слои высушивали над сульфатом натрия. Летучие вещества удаляли при пониженном давлении с получением 35 г продукта, который использовали без дополнительной очистки.
1H ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ 6,50 (д, J=2,2, Гц, 2Н), 6,37 (т, J=2,3 Гц, 1Н), 4,01 (т, J=6,1 Гц, 4Н), 3,793,68 (м, 6Н), 3,36 (с, 2Н), 2,26 (с, 6Н), 1,93-1,82 (м, 4Н), 1,82-1,67 (м, 4Н) м. д.
Соединение примера 38: (9Z,9'Z,12Z,12'Z)-((5-((диметиламино)метил)-1,3-фенилен)бис(окси))бис(бутан-4,1 -диил)бис(октадека-9,12-диеноат)
о
К раствору Интермедиата 36 (10 г, 32 ммоль) в ДХМ (161 мл) добавляли ДМАП (3 92 мг, 3,21 ммоль), ДИЭА (16,8 мл, 96 ммоль) и линолевую кислоту (18,9 г, 67,4 ммоль). Добавляли EDC (14,8 г, 77 ммоль) и вещество оставляли перемешиваться при комнатной температуре в течение ночи. Добавляли насыщенный водный раствор бикарбоната натрия (500 мл) и полученную смесь экстрагировали EtOAc (3x600 мл). Объединенные органические слои высушивали над сульфатом натрия, и затем летучие вещества удаляли при пониженном давлении. Полученный неочищенный продукт очищали на силикагеле с
- 60 030650
использованием смеси гептан/EtOAc в качестве элюента с получением 18,6 г целевого продукта.
*H ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ: 6,50 (уш.с, 2Н), 6,36 (уш.с, 1Н), 5,28-5,45 (м, 8Н), 4,14 (т, J=6, 05 Гц,
4Н), 3,98 (т, J=5,70 Гц, 4Н), 3,39 (уш.с, 2Н), 2,78 (т, J=6,55 Гц, 4Н), 2,16-2,41 (м, 10Н), 1,98-2,12 (м, 8Н), 1,77-1,90 (м, 8Н), 1,52-1,71 (м, 4Н), 1,20-1,43 (м, 28Н), 0,90 (т, J=6,85 Гц, 6Н) м.д.
ЭР-МС m/z=836,7 (MH+).
Синтез примера 39:
Интермедиат 39а: (9Z,9'Z,12Z, 12^)-((5-формил-1,3-фенилен)бис(окси))бис(пропан-3,1 - диил)бис(октадека-9,12-диеноат)
Интермедиат 39а может быть получен способом, аналогичным получению Интермедиата 18b с использованием линолевой кислоты и 1,3-пропандиола в качестве исходных материалов.
ТСХ (силикагель, 40% EtOAc в гептане): Rf=0,74.
Соединение примера 39: (9Z,9'Z,12Z,12'Z)-((5-((диметиламино)метил)-1,3-фенилен)бис(окси))бис(пропан-3,1-диил)бис(октадека-9,12-диеноат)
К раствору Интермедиата 39а (2,42 г, 3,11 ммоль) в DCE (20 мл) добавляли диметиламин (3,25 мл, 2,0 М в ТГФ, 6,5 ммоль) и уксусную кислоту (0,18 мл, 3,1 ммоль) с последующим добавлением триацетоксиборгидрида натрия (1,32 г, 6,21 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение ночи и затем добавляли насыщенный водный раствор бикарбоната натрия с последующим добавлением ДХМ. Органический слой собирали и затем промывали дополнительным насыщенным водным раствором бикарбоната натрия. Полученный водный слой снова экстрагировали ДХМ, органические слои объединяли и высушивали над сульфатом натрия. Летучие вещества удаляли при пониженном давлении. Полученный неочищенный продукт очищали на силикагеле с использованием смеси гептан/EtOAc с последующим использованием смеси ДХМ/MeOH в качестве элюента с получением 1,4 г целевого продукта.
1H ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ 0,89 (т, J=8,00 Гц, 6Н) 1,21-1,43 (м, 28Н) 1,55-1,71 (м, 4Н) 1,98-2,14 (м, 12Н) 2,25 (с, 6Н) 2,30 (т, J=7,65 Гц, 4Н) 2,77 (т, J=8,00 Гц, 4Н) 3,35 (с, 2Н) 4,02 (т, J=6,15 Гц, 4Н) 4,25 (т, J=6,40 Гц, 4Н) 5,24-5,52 (м, 8Н) 6,35 (т, J=2,26 Гц, 1Н) 6,48 (д, J=2,26 Гц, 2Н) м.д.
ЭР-МС m/z=809,2 (MH+).
Примеры 40-64 могут быть получены с использованием способов, аналогичных тем, которые применяются для получения примера 38, примера 39 и примера 52.
Пример 40: (9Z,9'Z, 12Z, 12^)-((5-((диметиламино)метил)- 1,3-фенилен)бис(окси))бис(этан-2,1 диил)бис(октадека-9,12-диеноат)
1H ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ: 0,88 (т, J=8,00 Гц, 6Н) 1,22-1,42 (м, 28Н) 1,56-1,71 (м, 4Н) 1,98-2,10 (м, 8Н) 2,23 (с, 6Н) 2,34 (т, J=7,53 Гц, 4Н) 2,76 (т, J=6,53 Гц, 4Н) 3,34 (с, 2Н), 4,08-4,20 (м, 4Н) 4,35-4,46 (м, 4Н) 5,26-5,44 (м, 8Н), 6,38 (т, J=2,26 Гц, 1Н) 6,51 (д, J=2,26 Гц, 2Н) м.д.
ЭР-МС m/z=781,3 (МН+).
Пример 41: ((5-((диметиламино)метил)-1,3-фенилен)бис(окси))бис(октан-8,1-диил)дигексаноат
1H ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ: 0,90 (т, J=8,00 Гц, 6Н) 1,29-1,52 (м, 24Н) 1,63 (кв, J=7,45 Гц, 8Н) 1,711,82 (м, 4Н) 2,26 (с, 6Н) 2,30 (т, J=7,58 Гц, 4Н) 3,37 (с, 2Н), 3,93 (т, J=6,57 Гц, 4Н) 4,06 (т, J=6,69 Гц, 4Н) 6,35 (т, J=2,27 Гц, 1Н) 6,47 (д, J=2,27 Гц, 3Н) м.д.
ЭР-МС m/z=620,2 (MH+).
Пример 42: ((5-((диметиламино)метил)-1,3-фенилен)бис(окси))бис(октан-8,1-диил)диоктаноат
1H ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ: 0,88 (т, J=8,00 Гц, 6Н) 1,19-1,50 (м, 32Н) 1,55-1,68 (м, 8Н) 1,71-1,85 (м, 4Н) 2,21-2,39 (м, 10Н) 3,40 (уш.с, 2Н) 3,94 (т, J=6,44 Гц, 4Н) 4,07 (т, J=6,69 Гц, 4Н) 6,36 (т, J=2,27 Гц, 1Н)
6,49 (д, J=2,02 Гц, 2Н) м.д.
- 61 030650
ЭР-МС m/z=676,6 (MH+).
Пример 43: ((5-((диметиламино)метил)-1,3-фенилен )бис(окси))бис(декан-10,1-диил)диоктаноат
'H ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ: 0,88 (т, J=8,00 Гц, 6Н) 1,21-1,50 (м, 40Н) 1,62 (кв, J=6,95 Гц, 8Н) 1,701,82 (м, 4Н) 2,25 (с, 6Н) 2,29 (т, J=7,58 Гц, 4Н) 3,35 (с, 2Н), 3,93 (т, J=6,57 Гц, 4Н) 4,06 (т, J=6,82 Гц, 4Н) 6,35 (т, J=2,27 Гц, 1Н) 6,46 (д, J=2,27 Гц, 2Н) м.д.
ЭР-МС m/z=732,1 (MH+).
Пример 44: ((5-((диметиламино)метил)-1,3-фенилен)бис(окси))бис(декан-10,1-диил)дигексаноат
'H ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ: 0,89 (т, J=8,00 Гц, 6Н) 1,23-1,51 (м, 32Н) 1,57-1,69 (м, 8Н) 1,70-1,82 (м, 4Н) 2,24-2,39 (м, 10Н) 3,43 (уш.с, 2Н) 3,94 (т, J=6,57 Гц, 4Н) 4,06 (т, J=6,69 Гц, 4Н) 6,37 (т, J=2,15 Гц, 1Н)
6,50 (д, J=1,52 Гц, 2Н) м.д.
ЭР-МС m/z=676,6 (MH+).
Пример 45: (9Z,9'Z, 12Z, 12^)-((5-((диметиламино)метил)- 1,3-фенилен)бис(окси))бис(гексан-6,1 диил)бис(октадека-9,12-диеноат)
Л ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ: 0,90 (т, J=8,00 Гц, 6Н) 1,23-1,52 (м, 36Н) 1,65 (дт, J=14,59, 7,48 Гц, 8Н) 1,73-1,83 (м, 4Н) 1,99-2,11 (м, 8Н) 2,24 (с, 6Н) 2,30 (т, J=7,58 Гц, 4Н) 2,78 (т, J=6,57 Гц, 4Н) 3,39 (уш.с, 2Н) 3,94 (т, J=6,44 Гц, 4Н) 4,08 (т, J=6,69 Гц, 4Н) 5,25-5,49 (м, 8Н) 6,35 (т, J=2,27 Гц, 1Н) 6,46 (д, J=2,27 Гц, 2Н) м.д.
ЭР-МС m/z=8 92,8 (MH+).
Пример 46: (9Z,9'Z, 12Z, 12^)-((5-((диметиламино)метил)- 1,3-фенилен)бис(окси))бис(октан-8,1 диил)бис(октадека-9,12-диеноат)
'H ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ: 0,89 (т, J=8,00 Гц, 6Н) 1,23-1,51 (м, 44Н) 1,55-1,69 (м, 8Н) 1,71-1,82 (м, 4Н) 1,99-2,11 (м, 8Н) 2,24 (с, 6Н) 2,30 (т, J=7,58 Гц, 4Н) 2,78 (т, J=6,57 Гц, 4Н) 3,35 (с, 2Н), 3,93 (т, J=6,57 Гц, 4Н) 4,07 (т, J=6,69 Гц, 4Н) 5,28-5,45 (м, 8Н) 6,35 (т, J=2,27 Гц, 1Н) 6,46 (д, J=2,27 Гц, 2Н) м.д.
ЭР-МС m/z=948,8 (MH+).
Пример 47: ((5-((диметиламино)метил)-1,3-фенилен)бис(окси))бис(гексан-6,1-диил)бис(деканоат)
1H ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ: 6,49-6,43 (м, 2Н), 6,37-6,32 (м, 1Н), 4,07 (т, J=6,6 Гц, 4Н), 3,93 (т, J=6,4 Гц, 4Н), 3,35 (с, 2Н), 2,29 (т, J=7,6 Гц, 4Н), 2,25 (с, 6Н), 1,84-1,72 (м, 4Н), 1,72-1,55 (м, 8Н), 1,55-1,36 (м, 8Н), 1,36-1,16 (м, 24Н), 0,88 (т, J=6,8 Гц, 6Н) м.д.
ЭР-МС m/z=676,4 (MH+).
Пример 48: ((5-((диметиламино)метил)-1,3-фенилен)бис(окси))бис(гексан-6,1 -диил)диоктаноат
'H ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ: 6,65-6,58 (м, 2Н), 6,44-6,39 (м, 1Н), 4,07 (т, J=6,6 Гц, 4Н), 3,96 (т, J=6,3 Гц, 4Н), 3,72 (с, 2Н), 2,52 (с, 6Н), 2,29 (т, J=7,5 Гц, 4Н), 1,84-1,73 (м, 4Н), 1,72-1,56 (м, 8Н), 1,55-1,36 (м, 8Н), 1,36-1,18 (м, 16Н), 0,91-0,84 (м, 6Н) м.д.
ЭР-МС m/z=620,4 (MH+).
Пример 49: (9Z,9'Z, 12Z, 12^)-((5-((3-гидроксиазетидин-1-ил)метил)- 1,3-фенилен)бис(окси))бис(бутан-4,1-диил)бис(октадека-9,12-диеноат)
- 62 030650
1H ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ 6,45 (д, J=2,01 Гц, 2Н) 6,35 (т, J=1,00 Гц 1Н), 5,31-5,44 (м, 8Н), 4,11-4,19 (м, 5Н), 3,97 (т, J=1,00 Гц, 4Н), 3,65-3,76 (м, 2Н), 3,60 (с, 2Н), 2,79 (т, J=1,00 Гц, 4Н), 2,32 (т, J=7,53 Гц, 4Н), 2,07 (к, J=6,78 Гц, 8Н), 1,80-1,89 (м, 8Н), 1,64 (д, J=16,81 Гц, 6Н), 1,24-43 (м, 31Н), 0,91 (т, J=1,00 Гц, 6Н) м.д.
ЭР-МС m/z=864,6 (MH+).
Пример 50: (8Z,8'Z)-((5-((диметиламино)метил)-1,3-фенилен)бис(окси))бис(гексан-6,1-диил)бис(додец-8-еноат)
1H ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ: 6,48 (д, J=2,0 Гц, 2Н), 6,35 (т, J=2,2 Гц, 1Н), 5,43-5,25 (м, 4Н), 4,08 (т, J=6,8 Гц, 4Н), 3,94 (т, J=6,4 Гц, 4Н), 3,38 (с, 2Н), 2,30 (т, J=7,6 Гц, 4Н), 2,27 (с, 6Н), 2,07-1,90 (м, 8Н), 1,851,70 (м, 4Н), 1,71-1,55 (м, 8Н), 1,55-1,29 (м, 24Н), 0,90 (т, J=7,4 Гц, 6Н) м.д. ЭР-МС m/z=728,5 (MH+).
Пример 51: (9Z,9'Z,12Z,12'Z)-((5-((диметиламино)метил)-2-метил-1,3-фенилен)бис(окси))бис(бутан4,1-диил)бис(октадека-9,12-диеноат)
1H ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ: 6,48 (с, 2Н), 5,32-5,44 (м, 8Н), 4,17 (т, J=8 Гц, 4Н), 4,01 (т, J=8 Гц, 4Н), 3,37 (с, 2Н), 2,79 (т, J=8 Гц, 4Н), 2,32 (т, J=8 Гц, 4Н), 2,25 (с, 6Н), 2,10 (с, 3Н), 2,08 (дд, J=8 Гц, 8Н), 1,87 (к, J=5 Гц, 8Н), 1,64 (м, 4Н), 1,27-1,48 (м, 28Н), 0,90 (т, J=8 Гц, 6Н) м.д.
ЭР-МС m/z=850,6 (MH+).
Синтез примера 52:
Интермедиат 52а: 8-гидроксиоктилдеканоат
о
В круглодонной колбе смешивали октан-1,8-диол (21,90 г, 150 ммоль), этилдеканоат (10 г, 49,9 ммоль) и тригидрат п-толуолсульфоновой кислоты (0,4 г, 2,103 ммоль). Колбу помещали на роторный испаритель при пониженном давлении (100 мбар) и медленно вращали при 100°C на масляной бане с образованием прозрачного расплава. После 6 ч давление снижали до 10 мбар и реакционную смесь выдерживали в течение 15 мин. Затем реакционную смесь разбавляли 150 мл гептана и перемешивали, пока не начал затвердевать октан-диол. Реакционную смесь помещали на ледяную баню и перемешивали 10 мин, затем отфильтровывали. Остаток промывали дополнительным количеством 150 мл гептана и объединенные фильтраты переносили в делительную воронку. Слой гептана промывали 3x150 мл воды, затем объединенную промывную воду снова экстрагировали 100 мл гептана. Объединенные экстракты гептана высушивали над сульфатом магния, отфильтровывали и концентрировали при пониженном давлении с получением целевого продукта (с примесью бис-ацилированного продукта), который использовали без дополнительной очистки.
Кроме того, Интермедиат 52а может быть синтезирован следующим образом. В круглодонной колбе октан-1,8-диол (58,5 г, 400 ммоль) растворяли в пиридине (100 мл). К полученному раствору по каплям добавляли деканоилхлорид (41,5 мл, 200 ммоль). Реакционную смесь перемешивали в течение ночи при температуре окружающей среды. Реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении с получением твердого остатка. Добавляли гептан (300 мл) и полученную суспензию энергично перемешивали в течение 30 мин. Реакционную смесь отфильтровывали, и остаток промывали 500 мл дополнительного количества гептана. Фильтрат промывали 1 N водным раствором HCl (3x200 мл) и объединенные водные слои снова экстрагировали 150 мл гептана. Объединенные слои гептана высушивали над сульфатом магния и отфильтровывали. Фильтрат концентрировали при пониженном давлении с получением целевого продукта (с примесью бис-ацилированного продукта), который использовали без дополнительной очистки.
ЭР-МС m/z=301,6 (MH+).
Интермедиат 52b: 8-((метилсульфонил)окси)октилдеканоат
о
В круглодонной колбе Интермедиат 52а (62,7 г, 210 ммоль Интермедиата 52а) и триэтиламин (32,2 мл, 231 ммоль) помещали в дихлорметан (безводный, 400 мл). Раствор охлаждали на ледяной бане и до- 63 030650
бавляли по каплям метансульфонилхлорид (16,38 мл, 210 ммоль) более 5 мин. Реакционную смесь перемешивали на ледяной бане в течение 2 ч, после этого времени охлаждающую баню удаляли и реакционную смесь нагревали до температуры окружающей среды. Реакционную смесь переносили в делительную воронку и промывали 1N водным раствором HCl (3x200 мл). Объединенные водные промывные растворы снова экстрагировали 100 мл дихлорметана. Объединенные экстракты ДХМ высушивали над сульфатом магния и отфильтровывали. Фильтрат концентрировали при пониженном давлении с получением целевого соединения (68% массовая чистота), которое использовали без дополнительной очистки.
ЭР-МС m/z=378,7 (MH+).
Интермедиат 52с: ((5-формил-1,3-фенилен)бис(окси))бис(октан-8,1-диил)бис(деканоат)
В круглодонной колбе Интермедиат 52b (78,0 г, 206 ммоль Интермедиата 52b), 3,5дигидроксибензальдегид (12,5 г, 91 ммоль) и карбонат цезия (88 г, 2 72 ммоль) помещали в ДМФ (500 мл). Реакционную смесь нагревали на масляной бане от температуры окружающей среды до 80°C. После 16 ч при 80°C реакционную смесь охлаждали до температуры окружающей среды, переносили в делительную воронку и разбавляли 500 мл этилацетата, 500 мл гептана и 1500 мл воды. Полный объем реакционной смеси отфильтровывали через слой целита, который отдельно промывали 500 мл этилацетата и 500 мл гептана. Фильтрат разделяли на слои и водный слой экстрагировали промывным раствором целита после фильтрования с последующим количеством 1000 мл гептана. Объединенные органические слои промывали 500 мл воды, высушивали над сульфатом магния и отфильтровывали, темно-коричневый фильтрат концентрировали при пониженном давлении. Продукт очищали на силикагеле этилацетатом и гептаном в качестве элюента с получением целевого соединения.
ЭР-МС m/z=703,4 (MH+).
Соединение примера 52: ((5-((диметиламино)метил)-1,3-фенилен)бис(окси))бис(октан-8,1диил)бис(деканоат)
В круглодонной колбе Интермедиат 52с (47,5 г, 67,6 ммоль) помещали в дихлорметан (300 мл) с последующим добавлением диметиламина (2М в ТГФ, 203 мл, 406 ммоль) и уксусной кислоты (3,87 мл, 67,6 ммоль). К полученному раствору добавляли триацетоксиборгидрид натрия (35,8 г, 169 ммоль). После 16 ч при температуре окружающей среды реакционную смесь гасили 300 мл насыщенного водного раствора бикарбоната натрия и 300 мл воды и полученные слои разделяли. Органический слой промывали 2x200 мл насыщенного водного раствора бикарбоната натрия. Объединенные водные слои экстрагировали 2x300 мл дихлорметана. Объединенные экстракты дихлорметана высушивали над сульфатом магния и отфильтровывали. Фильтрат концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали на силикагеле ацетоном и гептаном в качестве элюента с получением целевого соединения.
1H ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ: 0,88 (т, J=8,00 Гц, 6Н) 1,18-1,50 (м, 40Н) 1,56-1,70 (м, 8Н) 1,70-1,81 (м, 4Н) 2,24 (с, 6Н) 2,30 (т, J=7,53 Гц, 4Н) 3,34 (с, 2Н), 3,93 (т, J=6,53 Гц, 4Н) 4,06 (т, J=6,78 Гц, 4Н) 6,35 (т, J=2,26 Гц, 1Н) 6,46 (д, J=2,26 Гц, 2Н) м.д.
ЭР-МС m/z=732,5 (MH+).
Пример 53: ((5-((диметиламино)метил)-1,3-фенилен)бис(окси))бис(октан-8,1 -диил)дидодеканоат
1H ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ: 0,83-0,97 (м, 6Н) 1,19-1,51 (м, 48Н) 1,56-1,68 (м, 8Н) 1,71-1,83 (м, 4Н) 2,24 (с, 6Н) 2,30 (т, J=7,53 Гц, 4Н) 3,34 (с, 2Н) 3,93 (т, J=6,53 Гц, 4Н) 4,06 (т, J=6,78 Гц, 4Н) 6,35 (т, J=2,26 Гц, 1Н) 6,46 (д, J=2,01 Гц, 2Н) м. д.
ЭР-МС m/z=788,6 (MH+).
Пример 54: (9Z,9'Z, 12Z, 12'Z) - ((((5 -((диметиламино)метил)- 1,3-фенилен)бис(окси))бис(этан-2,1 диил))бис(окси))бис(этан-2,1 - диил)бис(октадека-9,12-диеноат)
1H ЯМР (400 МГц, CDCls) δ: 6,59 (уш.с, 2Н), 6,44 (уш.с, 1Н), 5,27-5,44 (м, 8Н), 4,26 (т, J=4,9 Гц, 4Н), 4,13 (т, J=4,65 Гц, 4Н), 3,85 (т, J=4,65 Гц, 4Н), 3,77 (т, J=4,9 Гц, 4Н), 3,50 (уш.с, 2Н), 2,77 (т, J=6,65 Гц,
- 64 030650
4Н), 2,21-2,52 (м, 10Н), 1,96-2,12 (м, 8Н), 1,55-1,70 (м, 4Н), 1,19-1,45 (м, 28Н), 0,89 (т, J=6,90 Гц, 6Н) м.д. ЭР-МС m/z=868,9 (MH+).
Пример 5 5: (9Z,9'Z, 12Z, 12^)-((5-((диэтиламино)метил-2-метил-1,3-фенилен)бис(окси))бис(бутан4,1-диил )бис(октадека-9,12-диеноат)
1H ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ 6,52 (с, 2Н), 5,32-5,44 (м, 8Н), 4,16 (т, J=8 Гц, 4Н), 4,00 (т, J=8 Гц, 4Н), 3,52 (с, 2Н), 2,79 (т, J=8 Гц, 4Н), 2,54 (дд, J=8 Гц, 4Н), 2,32 (т, J=8 Гц, 4Н), 2,09 (с, 3Н), 2,08 (дд, J=8 Гц, 8Н), 1,87 (к, J=5 Гц, 8Н), 1,64 (м, 4Н), 1,27-1,48 (м, 28Н), 1,06 (т, J=8 Гц, 6Н), 0,91 (т, J=8 Гц, 6Н) м.д.
ЭР-МС m/z=878,6 (MH+).
Пример 56: ((5 -((диметиламино)метил)- 1,3-фенилен)бис(окси))бис(пропан-3,1 - диил)бис(3-октилундеканоат)
1H ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ: 6,48 (д, J=2,02 Гц, 2Н) 6,35 (т, J=2,27 Гц, 1Н) 4,25 (т, J=6,32 Гц, 4Н) 4,03 (т, J=6,19 Гц, 4Н) 3,35 (с, 2Н), 2,20-2,30 (м, 10Н) 2,10 (кв, J=6,25 Гц, 4Н) 1,84 (уш.с, 2Н) 1,19-1,36 (м, 56Н) 0,81-0,97 (м, 12Н) м.д.
ЭР-МС m/z=844,7 (MH+).
Пример 57: дидецил-8,8'-((5-((диметиламино)метил)-1,3-фенилен)бис(окси))диоктаноат
1H ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ: 6,51-6,45 (м, 2Н), 6,38-6,33 (м, 1Н), 4,06 (т, J=6,8 Гц, 4Н), 3,93 (т, J=6,5 Гц, 4Н), 3,40 (с, 2Н), 2,30 (т, J=7,5 Гц, 4Н), 2,28 (с, 6Н), 1,82-1,71 (м, 4Н), 1,70-1,56 (м, 8Н), 1,54-1,20 (м, 40Н), 0,93-0,84 (м, 6Н) м.д.
ЭР-МС m/z=732,4 (MH+).
Пример 58: (9Z,9'Z,12Z,12'Z)-((((5-((диэтиламино)метил)-1,3-фенилен)бис(окси))бис(этан-2,1диил))бис(окси))бис(этан-2,1 -диил)бис(октадека-9,12-диеноат)
1H ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ: 6,54 (д, J=2,3 Гц, 2Н), 6,37 (т, J=2,25 Гц, 1Н), 5,25-5,46 (м, 8Н), 4,26 (т, J=4,8 Гц, 4Н), 4,11 (т, J=4,75 Гц, 4Н), 3,85 (т, J=4,75 Гц, 4Н), 3,77 (т, J=4,9 Гц, 4Н), 3,48 (с, 2Н), 2,77 (т, J=6,5 Гц, 4Н), 2,50 (к, J=7,1 Гц, 4Н), 2,34 (т, J=7,7 Гц, 4Н), 1,98-2,13 (м, 8Н), 1,55-1,70 (м, 4Н), 1,22-1,42 (м, 28Н), 1,03 (т, J=7,2 Гц, 6Н), 0,89 (т, J=6,9 Гц, 6Н) м.д.
ЭР-МС m/z=896,8 (MH+).
Пример 59: ((5-((диметиламино)метил)-1,3-фенилен)бис(окси))бис(гексан-6,1-диил)дидодеканоат
1H ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ: 6,48 (д, J=2,26 Гц, 2Н) 6,36 (т, J=2,51 Гц, 1Н) 4,08 (т, J=6,65 Гц, 4Н) 3,94 (т, J=6,40 Гц, 4Н) 3,43 (с, 2Н) 2,23-2,35 (м, 10Н) 2,03 (с, 1Н) 1,78 (ддт, J=14,05, 13,30, 7,53, 7,53 Гц, 4Н) 1,57-1,70 (м, 8Н) 1,38-1,53 (м, 8Н) 1,22-1,34 (м, 33Н) 0,88 (т, J=6,02 Гц, 6Н) м.д.
ЭР-МС m/z=732,6 (MH+).
Пример 60: ^)-((5-((диметиламино)метил)- 1,3-фенилен)бис(окси))бис(бутан-4,1 -диил)диолеат
1H ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ: 6,49 (уш.с, 2Н), 6,36 (т, J=2,0 Гц, 1Н), 5,44-5,28 (м, 4Н), 4,15 (т, J=5, 8 Гц, 4Н), 3,98 (т, J=5,8 Гц, 4Н), 3,36 (уш.с, 2Н), 2,38-2,18 (м, 10Н), 2,10-1,95 (м, 8Н), 1,92-1,76 (м, 8Н), 1,711,56 (м, J=7,3, 7,3 Гц, 4Н), 1,30 (д, J=15,6 Гц, 40Н), 0,90 (т, J=6,5 Гц, 6Н) м.д.
ЭР-МС m/z=840,7 (MH+).
Пример 61: ((5-((диметиламино)метил)-1,3 -фенилен)бис(окси))бис(бутан-4,1 -диил )дитетрадеканоат
- 65 030650
XH ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ: 6,54 (уш.с, 2Н), 6,37 (уш.с, 1Н) 4,14 (т, J=6,30 Гц, 4Н) 3,98 (т, J=5,65 Гц, 4Н) 3,48 (уш.с, 2Н) 2,22-2,51 (м, 10Н) 1,73-1,93 (м, 8Н) 1,62 (м, 4Н) 1,19-1,49 (м, 40Н) 0,88 (т, J=6,9 Гц, 6Н) м.д.
ЭР-МС m/z=732,7 (MH+).
Пример 62: (9Z,9'Z, 12Z, 12'Z, 15Z, 15^)-((5-((диметиламино)метил)- 1,3-фенилен)бис(окси))бис(бутан-4, 1-диил)бис(октадека-9,12,15-триеноат)
XH ЯМР (400 МГц, CDC0) δ: 6,51 (д, J=1,8 Гц, 2Н), 6,36 (т, J=2,3 Гц, 1Н), 5,55-5,18 (м, 12Н), 4,15 (т, J=5,5 Гц, 4Н), 3,98 (т, J=5,6 Гц, 4Н), 3,41 (уш.с, 2Н), 2,82 (т, J=6, 0 Гц, 8Н), 2,39-2,22 (м, 10Н), 2,17-2,00 (м, 8Н), 1,92-1,74 (м, 9Н), 1,71-1,55 (м, 4Н), 1,45-1,22 (м, 16Н), 0,99 (т, J=7,5 Гц, 6Н) м.д.
ЭР-МС m/z=833,0 (MH+).
Пример 63: (9Z, 12Z)-4 - (3 -((диметиламино)метил)-5-(4-(олеоилокси)бутокси)фенокси)бутилоктадека-9,12-диеноат
XH ЯМР (400 МГц, CDC0) δ: 6,51 (с, 2Н), 6,37 (т, J=2,0 Гц, 1Н), 5,49-5,23 (м, 6Н), 4,15 (т, J=6,5 Гц, 4Н), 3,99 (т, J=5, 6 Гц, 4Н), 3,42 (уш.с, 2Н), 2,79 (т, J=6,7 Гц, 2Н), 2,39-2,21 (м, 10Н), 2,18-1,95 (м, 8Н), 1,94-1,73 (м, 8Н), 1,73-1,55 (м, 4Н), 1,44-1,19 (м, 34Н), 0,95-0,86 (м, J=4,0, 6,8, 6,8 Гц, 6Н) м.д.
ЭР-МС m/z=838,7 (MH+).
Пример 64: (9Z, 12Z, 15Z)-4-(3 -((диметиламино)метил)-5-(4-((9Z, 12Z)-октадека-9,12-диеноилокси)бутокси)фенокси)бутилоктадека-9,12,15-триеноат
XH ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ: 6,48 (д, J=2,0 Гц, 2Н), 6,35 (т, J=2,3 Гц, 1Н), 5,48-5,27 (м, 10Н), 4,15 (т, J=5,8 Гц, 4Н), 3,98 (т, J=5,8 Гц, 4Н), 3,36 (с, 2Н), 2,90-2,73 (м, 6Н), 2,32 (т, J=7,7 Гц, 4Н), 2,26 (с, 6Н), 2,162,00 (м, 8Н), 1,93-1,75 (м, 8Н), 1,64 (т, J=7,3 Гц, 4Н), 1,44-1,22 (м, 22Н), 0,99 (т, J=7,5 Гц, 3Н), 0,91 (т, J=7,0 Гц, 3Н) м.д.
ЭР-МС m/z=835,0 (MH+).
Синтез примера 65: Интермедиат 65а: 5-(гидроксиметил)изофталевая кислота
К раствору диэтил-5-(гидроксиметил)изофталата (509 мг, 2,02 ммоль) в ТГФ (5 мл) добавляли NaOH (5,04 мл, 1,0 М в воде, 5,04 ммоль). Реакционную смесь перемешивали в течение 3 дней при комнатной температуре. Летучие вещества удаляли при пониженном давлении, и полученный продукт использовали без дополнительной очистки.
Интермедиат 65b: 5-(гидpоксиметил)-N1,N3-ди((9Z,12Z)-октадека-9,12-диен-1 -ил)изофталамид
Интермедиат 65а (168 мг, 0,694 ммоль) перемешивали в ДХМ (25 мл) и добавляли EDC (399 мг, 2,08 ммоль) и HOBt (319 мг, 2,08 ммоль) с последующим добавлением TEA (0,481 мл, 3,47 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 5 мин и добавляли линолеиламина гидрохлорид (419 мг, 1,39 ммоль). Реакционную смесь перемешивали в течение ночи при комнатной температуре и затем разбавляли ДХМ (100 мл) и водой (100 мл). Органический слой собирали и промывали водой (2x50 мл) и высушивали над сульфатом магния. Летучие вещества удаляли при пониженном давлении. Полученный неочищенный продукт очищали на силикагеле с использованием смеси гептан/EtOAc в качестве элюента, обеспечивая 150 мг целевого продукта.
ЭР-МС m/z=691,4 (MH+).
Соединение примера 65: 3,5-бис((9Z,12Z)-октадека-9,12-диен-1-илкаpбамоил)бензил-3-(диметиламино)пропаноат
- 66 030650
Пример 65 может быть получен из Интермедиата 65b с использованием условий, аналогичных тем, которые применяются для получения примера 37.
*H ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ: 8,11 (т, J=1,5 Гц, 1Н), 7,89 (д, J=1,5 Гц, 2Н), 6,43 (т, J=5,6 Гц, 2Н), 5,255,48 (м, 8Н), 5,19 (с, 2Н), 3,33-3,53 (м, 4Н), 2,77 (т, J=6,5 Гц, 4Н), 2,60-2,70 (м, 2Н), 2,49-2,60 (м, 2Н), 2,26 (с, 6Н), 2,05 (к, J=6,9 Гц, 8Н), 1,55-1,71 (м, 4Н), 1,18-1,47 (м, 32Н), 0,89 (т, J=7,0 Гц, 6Н) м. д.
ЭР-МС m/z=790,4 (MH+).
Пример 66: 3,5-бис((92,122)-октадека-9,12-диен-1-илкарбамоил)бензил-4-(диметиламино)бутаноат
Пример 66 может быть получен с использованием способов, аналогичных тем, которые применяются для получения примера 65.
*H ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ: 8,11 (т, J=1,6 Гц, 1Н), 7,88 (д, J=1,5 Гц, 2Н), 6,50 (т, J=5,6 Гц, 2Н), 5,205,48 (м, 8Н), 5,15 (с, 2Н), 3,31-3,55 (м, 4Н), 2,66-2,85 (м, 4Н), 2,41 (т, J=7,4 Гц, 2Н), 2,28 (т, J=7,3 Гц, 2Н), 2,20 (с, 6Н), 2,04 (к, J=6,9 Гц, 8Н), 1,82 (к, J=7,4 Гц, 2Н), 1,54-1,67 (м, 4Н), 1,17-1,45 (м, 32Н), 0,88 (т, J=7,0 Гц, 6Н) м.д.
ЭР-МС m/z=804,5 (MH+).
Синтез примера 67:
Интермедиат 67а: метил-2-(3,5-бис((92,122)-октадека-9,12-диен-1-илокси)фенил)ацетат
К раствору метил-3-(3,5-дигидроксифенил)ацетата (1,0 г, 5,4 ммоль) в ДМФ (25 мл) добавляли линолеилмезилат (4,16 г, 12,1 ммоль) и карбонат калия (3,0 г, 21,6 ммоль). Реакционную смесь нагревали до 100°C в течение 4 ч, после чего реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры и добавляли воду (100 мл). Полученную смесь экстрагировали EtOAc (3x50 мл). Органические слои объединяли, промывали солевым раствором, высушивали над сульфатом натрия и летучие вещества удаляли при пониженном давлении. Полученный неочищенный продукт очищали на силикагеле с использованием смеси н-гексан/EtOAc в качестве элюента с получением 3,3 г целевого продукта.
ЭР-МС m/z=680 (MH+).
Интермедиат 67b: 2-(3,5-бис((92,122)-октадека-9,12-диен-1-илокси)фенил)этанол
НС/ у-у у-у у-
Интермедиат 67а (3,3 г, 4,8 ммоль) перемешивали в ТГФ (50 мл) и охлаждали на ледяной бане. Раствор литийалюминийгидрида (370 мг, 97 ммоль) в ТГФ (3 мл) медленно добавляли к перемешиваемой реакционной смеси. После добавления реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 3 ч. Продукт затем снова охлаждали на ледяной бане и добавляли воду (5 мл) и EtOAc (5 мл). Через 10 мин полученную суспензию отфильтровывали через целит, и фильтрат концентрировали при пониженном давлении с получением 2,8 г продукта, который использовали без дополнительной очистки.
Соединение примера 67: 3,5-бис((92,122)-октадека-9,12-диен-1-илокси)фенэтил-3-(диметиламино)пропаноат
I
К Интермедиату 67b (75 мг, 0,12 ммоль) в ДХМ (3 мл) добавляли 3-диметиламинопропионовой кислоты гидрохлорид (26 мг, 0,17 ммоль) и HATU (88 мг, 0,23 ммоль) с последующим добавлением TEA (0,016 мл, 0,12 ммоль). Реакционную смесь перемешивали в течение ночи при комнатной температуре и затем добавляли воду (2 мл). Смесь экстрагировали ДХМ (3x5 мл) и объединенные органические слои высушивали над сульфатом натрия. Летучие вещества удаляли при пониженном давлении, и полученный неочищенный продукт очищали на силикагеле с использованием смеси ДХМ/MeOH в качестве элюента с получением 72 мг целевого продукта.
1H ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ 6,32-6,37 (м, 3Н), 5,28-5,44 (м, 8Н), 4,37 (т, J=7,2 Гц, 2Н), 3,92 (т, J=6,6 Гц, 4Н), 3,36 (т, J=6,4 Гц, 2Н), 2,86-2,92 (м, 8Н), 2,75-2,81 (м, 6Н), 2,06 (ддд, J=6,7, 6,7, 6,7 Гц, 8Н), 1,711,80 (м, 4Н), 1,41-1,49 (м, 4Н), 1,24-1,41 (м, 32Н), 0,90 (т, J=7,1 Гц, 6Н) м.д.
ЭР-МС m/z=750,5 (MH+).
- 67 030650
Пример 68: 3 ,5-бис((9/,1 2Z)-октадека-9,12-диен-1 -илокси)бензил(3 -(диметиламино)пропил)карбонат
Интермедиат 13а (82,5 мг, 0,130 ммоль) растворяли в сухом CDCl3 (2 мл) добавляли 4нитрофенилхлорформиат (28,7 мг, 0,142 ммоль) с последующим добавлением пиридина (0,011 мл, 0,129 ммоль). Полученную смесь перемешивали при 50°C в течение 30 мин. По истечении этого времени нагревание выключали и реакционную смесь оставляли перемешиваться в течение ночи при комнатной температуре. Реакцию контролировали с помощью ТСХ, которая показывала полный расход ИВ (исходного вещества). Интермедиат концентрировали и повторно растворяли в дихлорметане (3 мл) добавляли 3-(диметиламино)пропан-1-ол (66,8 мг, 0,648 ммоль) с последующим добавлением ДМАП (3,16 мг, 0,026 ммоль). Реакционную смесь перемешивали 72 ч при комнатной температуре. Реакционную смесь гасили водой (2 мл) и экстрагировали дополнительным количеством ДХМ (3x5 мл). Органические слои концентрировали. Неочищенный продукт очищали на силикагеле с использованием от 0 до 6% MeOH в ДХМ в качестве элюента с получением 47 мг целевого продукта.
1H ЯМР (400 МГц, CDCh) δ 6,51 (д, J=2,3 Гц, 2Н), 6,42 (т, J=2,3 Гц, 1Н), 5,32-5,48 (м, 8Н), 5,09 (с, 2Н), 4,23 (т, J=6,7 Гц, 2Н), 3,94 (т, J=6,5 Гц, 4Н), 2,80 (дд, J=6,4, 6,4 Гц, 4Н), 2,37 (т, J=7,0 Гц, 2Н), 2,24 (с, 6Н), 1,99-2,16 (м, 8Н), 1,82-1,91 (м, 2Н), 1,72-1,82 (м, 4Н), 1,41-1,50 (м, 5Н), 1,27-1,41 (м, 29Н), 0,83-0,97 (м, J=6,8, 6,8 Гц, 5Н) м.д.
ЭР-МС m/z=766,5 (МН+).
Пример 69: (9Z,9'Z, 12Z, 12'Z)-(5-((((3 -(диэтиламино)пропокси)карбонил)окси)метил)-1,3фенилен)бис(метилен)бис(октадека-9,12-диеноат)
Пример 69 может быть получен с использованием способов, аналогичных тем, которые описаны для Интермедиата 33а и примера 68.
1H ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ 7,33 (с, 2Н), 7,31 (с, 1Н), 5,25-5,45 (м, 8Н), 5,16 (с, 2Н), 5,11 (с, 4Н), 4,22 (т, J=6,5 Гц, 2Н), 2,73-2,82 (м, 4Н), 2,43-2,55 (м, 6Н), 2,37 (т, J=7,5 Гц, 4Н), 2,01-2,09 (м, 8Н), 1,83 (кв, J=6,5 Гц, 2Н), 1,57-1,71 (м, 5Н), 1,21-1,42 (м, 28Н), 1,01 (т, J=7,2 Гц, 6Н), 0,89 (т, J=6,8 Гц, 6Н) м.д.
ЭР-МС m/z=850,6 (MH+).
Примеры 70 и 71 могут быть получены с использованием способов, аналогичных тем, которые применяются для получения примера 69.
Пример 7 0: (9Z,9'Z, 12Z, 12'Z)-(5 -((((2-(диметиламино)этокси)карбонил)окси)метил)- 1,3-фенилен)бис(метилен)бис(октадека-9,12-диеноат)
1H ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ 7,33 (с, 2Н), 7,30 (с, 1Н), 5,29-5,43 (м, 8Н), 5,16 (с, 2Н), 5,11 (с, 4Н), 4,25 (т, J=5,8 Гц, 2Н), 2,77 (т, J=6,5 Гц, 4Н), 2,60 (т, J=5,8 Гц, 2Н), 2,37 (т, J=7,7 Гц, 4Н), 2,29 (с, 6Н), 2,05 (к, J=6,8 Гц, 8Н), 1,52-1,75 (м, 4Н), 1,24-1,40 (м, 29Н), 0,88 (т, J=6,8 Гц, 5Н) м.д.
ЭР-МС m/z=808,5 (MH+).
Пример 71: (9Z,9'Z,12Z,12'Z)-(5-((((3-(диметиламино)пропокси)карбонил)окси)метил)-1,3-фенилен)бис(метилен)бис(октадека-9,12-диеноат)
1H ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ 7,34 (с, 2Н), 7,32 (с, 1Н), 5,29-5,45 (м, 8Н), 5,17 (с, 2Н), 5,12 (с, 4Н), 4,24 (т, J=6,5 Гц, 2Н), 2,79 (т, J=6,5 Гц, 4Н), 2,34-2,41 (м, 6Н), 2,24 (с, 6Н), 2,06 (к, J=6,7 Гц, 8Н), 1,87 (кв, J=6,5 Гц, 2Н), 1,61-1,72 (м, 4Н), 1,25-1,42 (м, 29Н), 0,91 (т, J=7,0 Гц, 6Н) м.д.
ЭР-МС m/z=822,6 (MH+).
Пример 72: (9Z,9'Z, 12Z, 12'Z)-5 -((((2-(диметиламино)этокси)карбонил)окси)метил)-1,3 -фениленбис(октадека-9,12-диеноат)
- 68 030650
Пример 72 может быть получен с использованием способов, аналогичных тем, которые применяются в синтезе Интермедиата 26b и примера 68.
!H ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ 7,01 (д, J=2,0 Гц, 2Н), 6,89 (т, J=2,1 Гц, 1Н), 5,30-5,46 (м, 8Н), 5,14 (с, 2Н), 4,26 (т, J=5,8 Гц, 2Н), 2,79 (т, J=6,4 Гц, 4Н), 2,61 (т, J=5,8 Гц, 2Н), 2,54 (т, J=7,5 Гц, 4Н), 2,29 (с, 6Н), 2,01-2,11 (м, 8Н), 1,74 (дт, J=14,7, 7,5 Гц, 4Н), 1,24-1,46 (м, 31Н), 0,90 (т, J=7,0 Гц, 6Н) м.д.
ЭР-МС m/z=780,4 (MH+).
Синтез примера 73:
Интермедиат 73а: метил-4-бром-3,5-диметоксибензоат о
К раствору 4-бром-3,5-дигидроксибензойной кислоты (28 г, 120,7 ммоль) в ацетоне (300 мл) добавляли диметилсульфат (53 г, 422,4 ммоль) и карбонат калия (58 г, 422,4 ммоль). Реакционную смесь кипятили с обратным холодильником в течение 4 ч, затем охлаждали до температуры окружающей среды. Реакционную смесь отфильтровывали, и фильтрат концентрировали при пониженном давлении. Остаток перекристаллизовывали из метанола с получением целевого соединения.
ТСХ (силикагель, 10% этилацетата в гексане): Rf=0,82
Интермедиат 73b: метил-3,5-диметокси-4-(проп-1-ен-2-ил)бензоат
К раствору Интермедиата 73а (6,0 г, 21,9 ммоль) в ДМФ (100 мл) добавляли изопропенилтрибутилстаннан (7,98 г, 24,1 ммоль), фторид цезия (6,66 г, 43,8 ммоль) и Pd[(трет-бутил)зР]4 (225 мг, 0,44 ммоль). Реакционную смесь нагревали на бане при 100°C в течение 3 ч, затем охлаждали до температуры окружающей среды. Реакционную смесь разбавляли водой и экстрагировали этилацетатом (2x100 мл). Объединенные органические экстракты промывали солевым раствором, высушивали над сульфатом натрия и отфильтровывали. Фильтрат концентрировали при пониженном давлении, и остаток очищали на силикагеле с использованием этилацетата и гексана в качестве элюента с получением целевого соединения.
ТСХ (силикагель, 10% этилацетата в гексане): Rf=0,45
Интермедиат 73 с: метил-4-изопропил-3,5-диметоксибензоат о
К раствору Интермедиата 73b (4,0 г, 16,94 ммоль) в метаноле (200 мл) добавляли 10% Pd/C (4,0 г) и формиат аммония (21,35 г, 339,0 ммоль). Реакционную смесь нагревали при 90°C на нагревательной бане в течение 48 ч. Реакционную смесь охлаждали до температуры окружающей среды и отфильтровывали через целит. Фильтрат концентрировали при пониженном давлении, и остаток разбавляли водой и экстрагировали дихлорметаном (2x100 мл), объединенные экстракты ДХМ промывали солевым раствором, высушивали над сульфатом натрия и отфильтровывали. Фильтрат концентрировали при пониженном давлении, и остаток очищали на силикагеле с использованием этилацетата и гексана в качестве элюента с получением целевого соединения.
ТСХ (силикагель, 10% этилацетата в гексане): Rf=0,50
Интермедиат 73d: метил-3,5-дигидрокси-4-изопропилбензоат о
К раствору Интермедиата 73с (2,0 г, 8,40 ммоль) в дихлорметане (200 мл), охлаждаемому на ледяной бане, добавляли трибромид бора (42 мл, 1M в ДХМ, 42 ммоль) и иодид тетрабутиламмония (15,53 г, 42,01 ммоль). Через 3 ч реакционную смесь выливали в насыщенный водный раствор хлорида аммония. Реакционную смесь экстрагировали дихлорметаном (2x100 мл) и объединенные экстракты ДХМ промывали солевым раствором, высушивали над сульфатом натрия и отфильтровывали. Фильтрат концентрировали при пониженном давлении и остаток очищали на силикагеле с использованием этилацетата и гексана в качестве элюента с получением целевого соединения.
ТСХ (силикагель, 10% этилацетата в гексане): Rf=0,05
Интермедиат 73е: метил-4-изопропил-3,5-бис((9Z,12Z)-октадека-9,12-диен-1-илокси)бензоат
- 69 030650
К раствору Интермедиата 73d (1,4 г, 6,66 ммоль) в ДМФ (60 мл) добавляли линолеилмезилат (5,05 г, 14,66 ммоль) и карбонат калия (3,68 г, 26,66 ммоль). Реакционную смесь нагревали на масляной бане при 100°C в течение 2 ч, затем охлаждали до температуры окружающей среды. Реакционную смесь разбавляли водой и экстрагировали этилацетатом (2x200 мл). Объединенные органические экстракты промывали солевым раствором, высушивали над сульфатом натрия и отфильтровывали. Фильтрат концентрировали при пониженном давлении, и остаток очищали на силикагеле с использованием этилацетата и гексана в качестве элюента с получением целевого соединения.
ТСХ (силикагель, 10% этилацетата в гексане): Rf=0,82
Интермедиат 73f: (4-изопропил-3,5-бис((9Z,12Z)-октадека-9,12-диен-1-илокси)фенил)метанол
К раствору Интермедиата 73е (3,8 г, 5,38 ммоль) в ТГФ (80 мл), охлаждаемому на ледяной бане, добавляли литийалюминийгидрид (410 мг, 10,76 ммоль). Реакционную смесь перемешивали в течение 30 мин, затем гасили водой. Реакционную смесь отфильтровывали через целит и фильтрат экстрагировали этилацетатом (2x150 мл). Объединенные органические экстракты промывали солевым раствором, высушивали над сульфатом натрия и отфильтровывали. Фильтрат концентрировали при пониженном давлении, и остаток очищали на силикагеле с использованием этилацетата и гексана в качестве элюента с получением целевого соединения.
ТСХ (силикагель, 10% этилацетата в гексане): Rf=0,21
Соединение примера 73: 3-(диметиламино)пропил-4-изопропил-3,5-бис((9Z,12Z)-октадека-9,12диен-1 -илокси)бензилкарбонат
о
Пример 73 может быть получен из Интермедиата 73f с использованием способов, аналогичных тем, которые применяются в синтезе примера 68.
1H ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ 6,52 (с, 2Н), 5,50-5,25 (м, 8Н), 5,07 (с, 2Н), 4,21 (т, J=6,5 Гц, 2Н), 3,93 (т, J=6,4 Гц, 4Н), 3,63 (кв, J=7,1 Гц, 1Н), 2,79 (т, J=6,4 Гц, 4Н), 2,36 (т, J=7,5 Гц, 2Н), 2,22 (с, 6Н), 2,06 (к, J=6,8 Гц, 8Н), 1,92-1,71 (м, 6Н), 1,56-1,41 (м, 4Н), 1,41-1,20 (м, 34Н), 0,90 (т, J=6,8 Гц, 3Н) м.д.
ЭР-МС m/z=808,8 (MH+).
Синтез примера 74:
Интермедиат 74а: метил-4-бром-3,5-дигидроксибензоат
К раствору 4-бром-3,5-дигидроксибензойной кислоты (7,0 г, 30,2 ммоль) в метаноле добавляли хлортриметилсилан (8,11 г, 75,4 ммоль). Реакционную смесь нагревали с обратным холодильником в течение 3 ч, затем охлаждали до температуры окружающей среды. Реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении, остаток разбавляли водой и экстрагировали этилацетатом (2x50 мл). Объединенные органические экстракты промывали насыщенным водн. раствором бикарбоната натрия и солевым раствором, высушивали над сульфатом натрия и отфильтровывали. Фильтрат концентрировали при пониженном давлении с получением целевого соединения, которое использовали без дополнительной очистки.
ТСХ (силикагель, 30% этилацетата в гексане): Rf=0,33
Интермедиат 74b: метил-4-бром-3,5-бис((9Z,12Z)-октадека-9,12-диен-1-илокси)бензоат
Интермедиат 74b может быть получен из Интермедиата 74а с использованием способов, аналогичных тем, которые применяются в синтезе Интермедиата 73е.
ТСХ (силикагель, 10% этилацетата в гексане): Rf=0,70
Интермедиат 74с: (4-бром-3,5-бис((9Z,12Z)-октадека-9,12-диен-1-илокси)фенил)метанол
- 70 030650
К раствору Интермедиата 74b (500 мг. 0.67 ммоль) в дихлорметане (20 мл). охлаждаемому на бане сухой лед/ацетон. добавляли DIBAL-H (25% в толуоле. 0.96 мл). Реакционную смесь перемешивали в течение 15 мин. затем гасили насыщенным водным раствором хлорида аммония. Реакционную смесь отфильтровывали через целит. и фильтрат экстрагировали дихлорметаном (2x50 мл). Объединенные экстракты ДХМ промывали солевым раствором. высушивали над сульфатом натрия и отфильтровывали. Фильтрат концентрировали при пониженном давлении и остаток очищали на силикагеле с использованием этилацетата и гексана в качестве элюента с получением целевого соединения.
ТСХ (силикагель. 20% этилацетата в гексане): Rf=0.49
Соединение примера 74: 4-бром-3.5-бис((9Z.12Z)-октадека-9.12-диен-1-илокси)бензил(3(диметиламино)пропил)карбонат
о
Пример 74 может быть получен из Интермедиата 74с с использованием способов. аналогичных тем. которые применяются в синтезе примера 68.
1H ЯМР (400 МГц. CDCl3) δ 6.55 (с. 2Н). 5.44-5.30 (м. 8Н). 5.08 (с. 2Н). 4.22 (т. J=6.7 Гц. 2Н). 4.02 (т. J=6.5 Гц. 4Н). 2.78 (т. J=6.3 Гц. 4Н). 2.35 (т. J=7.4 Гц. 2Н). 2.22 (с. 6Н). 2.06 (к. J=6.7 Гц. 8Н). 1.90-1.77 (м. 6Н). 1.55-1.46 (м. 4Н). 1.42-1.22 (м. 28Н). 0.89 (т. J=6.8 Гц. 6Н) м.д.
ЭР-МС m/z=844.4 (MH+). наблюдали изотопное распределение брома.
Синтез примера 75: Интермедиат 75а: 4-хлор-3.5-дигидроксибензойная кислота
К раствору 3.5-дигидроксибензойной кислоты (4 г. 26.0 ммоль) в метаноле (25 мл) добавляли раствор N-хлорсукцинимида (3.64 г. 27.3 ммоль) в метаноле (10 мл) более 1 ч. После 16 ч реакционную смесь выливали в холодную воду и экстрагировали этилацетатом (2x50 мл). Объединенные органические экстракты промывали солевым раствором. высушивали над сульфатом натрия и отфильтровывали. Фильтрат концентрировали при пониженном давлении с получением целевого соединения. которое использовали без дополнительной очистки.
ТСХ (силикагель. 10% этилацетата в гексане): Rf=0.15
Пример 75 может быть получен из Интермедиата 75а с использованием способов. аналогичных тем. которые применяются в синтезе примера 74.
1H ЯМР (400 МГц. CDClз) δ 6.59 (д. J=2.8 Гц. 1Н). 6.48 (д. J=2.8 Гц. 1H). 5.51-5.29 (м. 8H). 5.26 (с. 2Н). 4.25 (т. J=6.5 Гц. 2Н). 4.00 (т. J=6.5 Гц. 2Н). 3.94 (т. J=6.5 Гц. 2Н). 2.80 (т. J=6.4 Гц. 4Н). 2.38 (т. J=7.0 Гц. 2Н). 2.24 (с. 6Н). 2.07 (к. J=6.7 Гц. 8Н). 1.91-1.75 (м. 6Н). 1.55-1.44 (м. 4Н). 1.44-1.24 (м. 30Н). 0.91 (т. J=6.8 Гц. 6Н) м.д.
ЭР-МС m/z=800.6 (MH+). наблюдали изотопное распределение хлора.
Синтез примера 76: Интермедиат 76а: 2-(3.5-бис((9Z.12Z)-октадека-9.12-диен-1илокси)бензил)изоиндолин-1.3-дион
о
Интермедиат 13а (120 мг. 0.188 ммоль). изоиндолин-1.3-дион (34.6 мг. 0.235 ммоль) и трифенилфосфин (64.2 мг. 0.245 ммоль) растворяли в ТГФ (1.5 мл). Затем по каплям добавляли ДИАД (0.044 мл. 0.226 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 16 ч. Завершение реакции контролировали с помощью ЖХМС. Реакционную смесь концентрировали. затем промывали водой. затем солевым раствором. высушивали над сульфатом натрия и повторно концентрировали. Целевой продукт получали в виде смеси с трифенилфосфиноксидом с получением 144.0 мг продукта.
Интермедиат 76b: (3.5-бис((9Z.12Z)-октадека-9.12-диен-1-илокси)фенил)метанамин
- 71 030650
Интермедиат 76а (144 мг, 0,188 ммоль, смесь) растворяли в EtOH (3,7 мл). Добавляли гидразин (0,030мл, 0,940 ммоль) и реакционную смесь нагревали в течение 4 ч при 50°C. Завершение реакции контролировали с помощью ЖХМС. Реакционную смесь концентрировали и суспендировали в ДХМ (10 мл). Реакционную смесь отфильтровывали. Затем фильтрат загружали на ДХМ предварительно уравновешенную колонку BondElute SCX. Колонку промывали 3CV ДХМ и затем продукт элюировали смесью ДХМ + 5% 7N аммиака в метаноле, чтобы восстановить 57 мг целевого продукта.
ЭР-МС m/z=636,5 (MH+).
Соединение примера 76: N-(3,5-бис((9Z,12Z)-октадека-9,12-диен-1-илокси)бензил)-2-(диметиламино)ацетамид
Интермедиат 76Ь (36,1 мг, 0,057 ммоль), 2-(диметиламино)уксусной кислоты гидрохлорид (23,77 мг, 0,170 ммоль) и HATU (43,2 мг, 0,114 ммоль) растворяли в ДХМ (4 мл). Затем добавляли триэтиламин (0,032 мл, 0,227 ммоль) и реакционную смесь перемешивали в течение 18 ч при комнатной температуре и проверяли с помощью ЖХМС. Реакционную смесь гасили водой (2 мл) и экстрагировали дополнительным количеством ДХМ (3x5 мл). Реакционную смесь очищали с помощью хроматографии на силикагеле 0 до 5% MeOH в ДХМ с получением 20 мг целевого продукта.
Ί( ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ 7,34 (уш.с, 1Н), 6,43 (д, J=2,0 Гц, 2Н), 6,40-6,33 (м, 1Н), 5,54-5,30 (м, 8Н), 4,40 (д, J=6,1 Гц, 2Н), 3,94 (т, J=6,6 Гц, 4Н), 3,01 (с, 2Н), 2,80 (т, J=6,3 Гц, 4Н), 2,30 (с, 6Н), 2,13-1,98 (м, 8Н), 1,70-1,82 (м, J=6,6 Гц, 4Н), 1,53-1,23 (м, 41Н), 0,91 (т, J=7,1 Гц, 6Н) м.д.
ЭР-МС m/z=721,5 (МН+).
Синтез примера 77:
Интермедиат 77а: диэтил-5-((диметиламино)метил)изофталат
В круглодонной колбе диэтил-5-(гидроксиметил)изофталат (15,53 г, 47,6 ммоль) и ДИПЭА (10,39 мл, 59,5 ммоль) помещали в хлороформ (40 мл). Полученную суспензию перемешивали в течение 1 ч. К полученной суспензии добавляли ангидрид толуолсульфоновой кислоты (10 г, 39,6 ммоль) и реакционную смесь перемешивали при температуре окружающей среды. Через 20 ч реакционный раствор добавляли по каплям к диметиламину (60 мл, 120 ммоль) более ~30 мин, чтобы контролировать экзотермическую реакцию ниже температуры кипения с обратным холодильником. Реакционную смесь перемешивали при температуре окружающей среды в течение 3 ч. Реакционную смесь разбавляли дихлорметаном (200 мл), насыщенным водным раствором бикарбоната натрия (200 мл) и водой (50 мл). Слои разделяли, и водный слой экстрагировали дихлорметаном (3x100 мл). Объединенные органические слои промывали насыщенным водным раствором бикарбоната натрия (3x100 мл). Органические слои высушивали над сульфатом натрия, отфильтровывали и концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали с помощью флэш-хроматографии (силикагель, 0%-10% метанола в дихлорметане) с последующей флэшхроматографией (силикагель, 0%-100% этилацетата в дихлорметане, 0%-10% метанола в этилацетате) с получением 7,3 г целевого продукта.
Ί( ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ 1,44 (т, J=7,2 Гц, 6Н); 2,29 (с, 6Н); 3,55 (с, 2Н); 4,43 (к, J=7,1 Гц, 4Н); 8,20 (д, J=1,5 Гц, 2Н); 8,61 (т, J=1,5 Гц, 1Н) м.д.
Интермедиат 77Ь: (5-((диметиламино)метил)-1,3-фенилен)диметанол
В круглодонной колбе ЛАГ (2,480 г, 65,3 ммоль) загружали в тетрагидрофуран (50 мл) и реакционную смесь помещали на водяную баню с температурой окружающей среды. Интермедиат 77а (7,3 г, 26,1 ммоль) растворяли в ТГФ (10 мл) и добавляли по каплям более 10 мин к суспензии ЛАГ для поддержания экзотермической реакции ниже температуры кипения с обратным холодильником. Полученную зеленую суспензию перемешивали в течение ночи при температуре окружающей среды, после этого времени цвет изменялся до темно-серого. Реакционную смесь разбавляли до 150 мл дополнительным коли- 72 030650
чеством ТГФ и гасили водой (2,5 мл) с помощью добавления по каплям для поддержания температуры ниже температуры кипения с обратным холодильником. После перемешивания при температуре окружающей среды в течение 15 мин реакционную смесь дополнительно гасили 2,5 М водным NaOH (5 мл) с помощью добавления по каплям более 5 мин. Реакционную смесь перемешивали при температуре окружающей среды в течение 5 мин и добавляли по каплям воду (7,5 мл) более 1 мин, в результате чего суспензия становилась белой. Реакционную смесь перемешивали при температуре окружающей среды в течение 2 ч, после чего соли отфильтровывали через целит с промыванием этилацетатом. Фильтрат собирали и концентрировали при пониженном давлении с получением вязкого бесцветного масла. Вещество растворяли в дихлорметане и очищали с помощью колоночной флэш-хроматографии (силикагель 0%50% метанола в дихлорметане). Фракции продукта собирали, и растворители удаляли при пониженном давлении с получением бесцветного масла. Вещество растворяли в дихлорметане (100 мл) и отфильтровывали. Промывание остатка этилацетатом приводило к дополнительному осадку. Растворители удаляли при пониженном давлении, и вещество повторно растворяли в этилацетате (100 мл), отфильтровывали и растворители удаляли при пониженном давлении с получением 4 г целевого продукта.
1H ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ 2,21 (с, 6Н); 3,37 (с, 2Н); 3,77 (уш.с, 2Н); 4,56 (с, 4Н); 7,16 (с, 2Н); 7,21 (с, 1Н) м.д.
Интермедиат 77с: 4-((9Z,12Z)-октадека-9,12-диен-1-илокси)-4-оксобутановая кислота
о
Во флаконе из боросиликатного стекла линолеиловый спирт (2 г, 7,51 ммоль) и ДМАП (0,046 г, 0,375 ммоль) перемешивали в хлороформе (7 мл). Добавляли янтарный ангидрид (1,127 г, 11,26 ммоль), и реакционную смесь перемешивали при температуре окружающей среды. Через 3 дня реакционную смесь непосредственно очищали с помощью колоночной флэш-хроматографии (силикагель, 0-10% метанола в дихлорметане), которая обеспечивала 2,73 г целевого продукта.
1H ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ 0,91 (т, J=7,0 Гц, 3Н); 1,27-1,41 (м, 17Н); 1,64 (м, 2Н); 2,07 (дд, J=7,0,
13,8 Гц, 4Н); 2,62-2,73 (м, 4Н); 2,79 (т, J=6,7 Гц, 2Н); 4,11 (т, J=6,8 Гц, 2Н); 5,32-5,44 (м, 4Н) м.д.
Соединение примера 77: O,O'-((5-((диметиламино)метил)-1,3-фенилен)бис(метилен))ди((9Z,12Z)октадека-9,12-диен-1 -ил)дисукцинат
Во флаконе из боросиликатного стекла Интермедиат 77b (250 мг, 1,280 ммоль) перемешивали в дихлорметане (10 мл). Последовательно добавляли ДИПЭА (0,671 мл, 3,84 ммоль), ДМАП (15,64 мг, 0,128 ммоль), EDC (736 мг, 3,84 ммоль) и вещество из Интермедиата 77с (1032 мг, 2,82 ммоль). Реакционную смесь герметично закрывали и перемешивали при температуре окружающей среды. Через 2 дня реакционную смесь непосредственно очищали с помощью колоночной флэш-хроматографии (силикагель, уравновешенный 1% муравьиной кислотой в дихлорметане, очищение 0-10% метанола в дихлорметане) с получением 916 мг целевого продукта.
1H ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ 8,24 (с, 0,5Н, формиат); 7,55 (с, 2Н); 7,41 (с, 1Н); 5,43-5,31 (м, 8Н); 5,20 (с, 4Н); 4,16 (с, 2Н); 4,08 (т, J=6,8 Гц, 4Н); 2,79 (т, J=6,8 Гц, 4Н); 2,75 (с, 6Н); 2,75-2,66 (м, 8Н); 2,06 (к, J=6,6 Гц, 8Н); 1,66-1,59 (м, 4Н); 1,40-1,27 (м, 32Н); 0,90 (т, J=6,5 Гц, 6Н) м.д.
ЭР-МС m/z=8 92,7 (MH+).
Пример 78: O,O'-((5-((диметиламино)метил)-1,3 -фенилен)бис(метилен))бис(10-(октаноилокси)децил)дисукцинат
Пример 78 может быть получен с использованием способов, аналогичных тем, которые применяются в синтезе Интермедиата 18а и примера 77.
1H ЯМР (400 МГц, CDCl·,) δ 8,37 (с, 1,6Н, формиат); 7,42 (с, 2Н); 7,38 (с, 1Н); 5,18 (с, 4Н); 4,10-4,05 (м, 10H); 2,74-2,65 (м, 14Н); 2,31 (т, J=7,5 Гц, 4Н); 1,66-1,59 (м, 12Н); 1,40-1,25 (м, 40Н); 0,90 (т, J=7,0 Гц,
6Н) м.д.
ЭР-МС m/z=960,9 (MH+)
Синтез примера 79: Интермедиат 79а: 8-(нонилокси)-8-оксооктановая кислота
- 73 030650
В 250 мл круглодонной колбе, снабженной магнитной мешалкой, субериновую кислоту (5 г, 28,7 ммоль) и EDC (6,60 г, 34,4 ммоль) растворяли в ДХМ (150 мл). Добавляли ДИПЭА (15,04 мл, 86 ммоль) с последующим добавлением ДМАП (1,403 г, 11,48 ммоль) и смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 1 ч перед добавлением 1-нонанола (5,01 мл, 28,7 ммоль). Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. Летучие вещества удаляли при пониженном давлении и полученный продукт очищали с помощью хроматографии на силикагеле с использованием смеси гептан/EtOAc в качестве элюента с получением 1 г целевого продукта.
Соединение примера 79: O1,O1-((5-((диметиламино)метил)-1,3-фенилен)бис(метилен)-8динонилдиоктандиоат
Пример 79 может быть получен с использованием способов, аналогичных тем, которые применяются для примера 77.
1H ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ 7,26 (с, 2Н), 7,23 (с, 1Н), 5,10 (с, 4Н), 4,05 (т, J=6,8 Гц, 4Н), 3,44 (с, 2Н), 2,36 (т, J=7,7 Гц, 4Н), 2,31-2,25 (м, 10H), 1,69-1,58 (м, 12Н), 1,36-1,27 (м, 32Н), 0,88 (т, J=7,0 Гц, 6Н) м.д.
ЭР-МС m/z=760,4 (MH+).
Пример 80: 01,O1-((5-((диметиламино)метил)-1,3-фенилен)бис(метилен))-9-диоктилдинонандиоат
Пример 80 может быть получен с использованием способов, аналогичных тем, которые применяются для получения примера 79.
1H ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ 7,27 (с, 2Н), 7,24 (с, 1Н), 5,11 (с, 4Н), 4,07 (т, J=6,8 Гц, 4Н), 3,44 (с, 2Н), 2,37 (т, J=7,7 Гц, 4Н), 2,30 (т, J=7,5 Гц, 4Н), 2,26 (с, 6Н), 1,67-1,59 (м, 12Н), 1,33-1,29 (м, 32Н), 0,90 (т, J=8,0 Гц, 6Н) м.д.
ЭР-МС m/z=760,4 (MH+).
Синтез примера 81: Интермедиат 81а: метил-3-(3,5-бис((9Z,12Z)-октадека-9,12-диен-1илокси)фенил)акрилат
О
Триметилфосфоноацетат (357 мг, 1,96 ммоль) добавляли к суспензии NaH (78 мг, 1,96 ммоль) в ТГФ (10 мл), которую перемешивали на ледяной бане. Через 10 мин исходный альдегид (1 г, 1,63 ммоль), полученный с использованием методики, аналогичной описанной в примере 1а, растворяли в ТГФ (5 мл) и медленно добавляли. Реакционную смесь перемешивали в течение 1 ч, затем добавляли охлажденную льдом воду (5 мл) и полученную смесь экстрагировали EtOAc (3x30 мл). Объединенные органические слои высушивали над сульфатом натрия и концентрировали при пониженном давлении. Полученный продукт очищали с помощью хроматографии на силикагеле с использованием смеси гептан/EtOAc в качестве элюента с получением 1,2 г целевого продукта.
ТСХ (силикагель, 10% этилацетата в гексане): Rf=0,77.
Интермедиат 81b: 3-(3,5- бис ((9Z, 12Z)-октадека-9,12-диен-1-илокси)фенил)пропан-1-ол
Интермедиат 81а (2,6 г, 3,7 ммоль) в ТГФ (75 мл) охлаждали на ледяной бане и добавляли порциями литийалюминийгидрид (300 мг, 7,9 ммоль). Реакционную смесь перемешивали в течение 45 мин на охлаждающей бане и затем гасили охлажденной льдом водой. Полученный продукт отфильтровывали через целит и фильтрат концентрировали при пониженном давлении. Полученный продукт очищали с помощью хроматографии на силикагеле с использованием смеси гептан/EtOAc в качестве элюента с получением 2,5 г целевого продукта.
ТСХ (силикагель, 10% EtOAc в гексане): Rf=0,21
Соединение примера 81: 3 -(3,5 -бис((9Z,12Z)-октадека-9,12-диен-1 -илокси)фенил)пропил-3(диметиламино)пропаноат
- 74 030650
Пример 81 может быть получен из Интермедиата 81b с использованием способов, аналогичных тем, которые применяются для синтеза примера 13.
1H ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ 6,34 (д, J=2,0 Гц, 2Н), 6,32 (д, J=2,3 Гц, 1Н), 5,27-5,47 (м, 8Н), 4,16 (т, J=6,5 Гц, 2Н), 3,93 (т, J=6,5 Гц, 4Н), 2,92-3,03 (м, 2Н), 2,80 (дд, J=6,4, 6,4 Гц, 4Н), 2,61-2,69 (м, 4Н), 2,58 (с, 6Н), 2,07 (к, J=6,9 Гц, 8Н), 1,91-2,03 (м, 2Н), 1,71-1,85 (м, J=7,8 Гц, 4Н), 1,42-1,52 (м, 4Н), 1,23-1,41 (м, 29Н), 0,91 (т, J=6,8 Гц, 6Н) м.д.
ЭР-МС m/z=764,6 (MH+).
Синтез примера 82: Интермедиат 82а: 4-((9Z,12Z)-октадека-9,12-диеноилокси)бутановая кислота
Исходный спирт, (9Z,12Z)-4-гидроксибутилоктадека-9,12-диеноат (1,0 г, 2,8 ммоль), полученный с использованием методики как для Интермедиата 18а, перемешивали в ацетоне (25 мл) и охлаждали на ледяной бане. Добавляли по каплям реактив Джонса (2,27 мл, 2,5 М, 5,67 ммоль) и ледяную баню удаляли. После 1 ч перемешивания добавляли MeOH (5 мл) с последующим добавлением EtOAc (220 мл). Полученную смесь промывали смесью 1:1 вода:солевой раствор и затем солевым раствором. Полученный органический слой высушивали над сульфатом натрия и затем летучие вещества удаляли при пониженном давлении. Неочищенный продукт очищали с помощью хроматографии на силикагеле с использованием смеси гептан/EtOAc в качестве элюента с получением 672 мг целевого продукта.
13С ЯМР (100 МГц, CDCl3) δ 6. 178,3, 173,8, 130,2, 130,0, 128,0, 127,9, 63,0, 34,2, 31,5, 30,4, 29,6, 29,3, 29,2, 29,1, 27,2, 25,6, 24,9, 23,7, 22,5, 14,1 м.д.
Соединение примера 82: (9Z,9'Z, 12Z, 12'Z)-(((5 -((диметиламино)метил)- 1,3-фенилен)бис(метилен))бис(окси))бис(4-оксобутан-4,1 -диил)бис(октадека-9,12-диеноат)
Интермедиат 82а (672 мг, 1,83 ммоль) перемешивали в DCE (40 мл). Добавляли EDC (501 мг, 2,6 ммоль) с последующим добавлением вещества из Интермедиата 77b (170 мг, 0,87 ммоль) в виде раствора в DCE (10 мл). Добавляли TEA (0,485 мл, 3,48 ммоль) и ДМАП (21 мг, 0,17 ммоль) и реакционную смесь перемешивали в течение 3 дней при комнатной температуре. Реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении и неочищенный продукт очищали с помощью хроматографии на силикагеле с использованием смеси гептан/EtOAc в качестве элюента с получением 359 мг целевого продукта.
1H ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ 7,31-7,28 (м, 2Н), 7,25-7,23 (м, 1Н), 5,44-5,28 (м, 8Н), 5,12 (с, 4Н), 4,11 (т, J=6,4 Гц, 4Н), 2,81-2,73 (м, 4Н), 2,46 (т, J=7,4 Гц, 4Н), 2,32-2,24 (м, 9Н), 2,09-1,94 (м, 12Н), 1,69-1,51 (м, 5Н), 1,42-1,22 (м, 28Н), 0,89 (т, J=6,9 Гц, 6Н) м.д.
ЭР-МС m/z=8 92,7 (MH+).
Примеры 83-88 могут быть получены с использованием способов, аналогичных тем, которые применяются для получения примера 82.
Пример 83: (((5-((диметиламино)метил)-1,3-фенилен)бис(метилен))бис(окси))бис(8-оксооктан-8,1диил)бис(деканоат)
1H ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ 7,28-7,25 (м, 2Н), 7,24-7,21 (м, 1Н), 5,10 (с, 4Н), 4,05 (т, J=6,8 Гц, 4Н), 3,43 (с, 2Н), 2,36 (т, J=7,6 Гц, 4Н), 2,29 (т, J=7,6 Гц, 4Н), 2,25 (с, 6Н), 1,72-1,52 (м, 12Н), 1,42-1,14 (м, З6Н), 0,95-0,75 (м, 6Н) м.д.
ЭР-МС m/z=788,4 (MH+).
Пример 84: (((5-((диметиламино)метил)-1,3-фенилен)бис(метилен))бис(окси))бис(4-оксобутан-4,1диил)диоктаноат
Пример 84 был охарактеризован как соль муравьиной кислоты.
1H ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ 8,33 (с, 1Н, формиат); 7,54 (с, 2Н); 7,39 (с, 1Н); 5,17 (с, 4Н); 4,15 (с, 2Н),
- 75 030650
4,12 (т, J=6,4 Гц, 4Н); 2,74 (с, 6Н); 2,50 (т, J=7,4 Гц, 4Н); 2,30 (т, J=7,5 Гц, 4Н); 2,04-1,97 (м, 4Н); 1,65-1,58 (м, 4Н); 1,34-1,23 (м, 16Н); 0,88 (т, J=6,7 Гц, 6Н) м.д.
ЖХМС m/z=620,2 (MH+).
Пример 85: (((5-((диметиламино)метил)- 1,3-фенилен)бис(метилен))бис(окси))бис(6-оксогексан-6,1диил)диоктаноат
1H ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ 8,30 (с, 0,6Н, формиат); 7,54 (с, 2Н); 7,40 (с, 1Н); 5,15 (с, 4Н); 4,15 (с, 2Н); 4,06 (т, J=6,5 Гц, 4Н); 2,74 (с, 6Н); 2,42 (т, J=7,5 Гц, 4Н); 2,29 (т, J=7,5 Гц, 4Н); 1,73-1,58 (м, 12Н); 1,44-1,36 (м, 4Н); 1,34-1,23 (м, 16Н); 0,88 (т, J=6,3 Гц, 6Н) м.д.
ЖХМС m/z=676,2 (MH+).
Пример 86: (5-((диметиламино)метил)- 1,3-фенилен)бис(метилен)бис(10-(октаноилокси)деканоат)
1H ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ 7,50 (с, 2Н); 7,38 (с, 1Н); 5,14 (с, 4Н); 4,06 (т, J=6,8 Гц, 4Н); 3,97 (с, 2Н); 2,63 (с, 6Н); 2,39 (т, J=7,7 Гц, 4Н); 2,30 (т, J=7,5 Гц, 4Н); 1,69-1,59 (м, 12Н); 1,38-1,25 (м, 36Н); 0,89 (т, J=7,0, 6H) м.д.
ЖХМС m/z=7 8 8,8 (MH+).
Пример 87: (5-((диметиламино)метил)- 1,3-фенилен)бис(метилен)бис(8-(октаноилокси)октаноат)
1H ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ 7,52 (с, 2Н); 7,38 (с, 1Н); 5,15 (с, 4Н); 4,06 (т, J=6,7 Гц, 4Н); 3,99 (с, 2Н); 2,65 (с, 6Н); 2,40 (т, J=7,5 Гц, 4Н); 2,30 (т, J=7,5 Гц, 4Н); 1,70-1,59 (м, 12Н); 1,38-1,25 (м, 28Н); 0,89 (т, J=6,8 Гц, 6Н) м.д.
ЖХМС m/z=732,8 (MH+).
Пример 88: (((5-((диметиламино)метил)- 1,3-фенилен)бис(метилен))бис(окси))бис(6-оксогексан-6,1диил)бис(деканоат)
1H ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ 7,54 (с, 2Н); 7,38 (с, 1Н); 5,15 (с, 4Н); 4,07 (т, J=6,7 Гц, 4Н); 4,02 (с, 2Н); 2,66 (с, 6Н); 2,42 (т, J=7,5 Гц, 4Н); 2,30 (т, J=7,7 Гц, 4Н); 1,74-1,58 (м, 12Н); 1,45-1,37 (м, 4Н); 1,35-1,22 (м, 24Н); 0,89 (т, J=7,0 Гц, 6Н) м.д.
ЖХМС m/z=732,8 (MH+).
Синтез примера 89: Интермедиат 89а: диметил-5,5'-((5-формил-1,3-фенилен)бис(окси))дипентаноат
К раствору 3,5-дигидроксибензальдегида (1,0 г, 7,24 ммоль) в ацетоне (35 мл) добавляли метил-5бромпентаноат (3,53 г, 18,1 ммоль). Добавляли карбонат калия (3,0 г, 22 ммоль) и реакционную смесь нагревали с обратным холодильником на масляной бане. После нагревания в течение ночи реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры и перемешивали в течение 4 дней. Летучие вещества удаляли при пониженном давлении и продукт повторно суспендировали в ДХМ. Полученную смесь отфильтровывали и фильтрат концентрировали при пониженном давлении с получением неочищенного продукта, который очищали с помощью хроматографии на силикагеле с использованием смеси гептан/EtOAc в качестве элюента с получением 824 мг целевого продукта.
Л ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ 9,89 (с, 1Н), 6,99 (с, 2Н), 6, 68 (с, 1Н), 4,01 (м, 4Н), 3,68 (с, 6Н), 2,41 (м, 4Н), 1,84 (м, 8Н) м. д.
Интермедиат 89b: 5,5'-((5-формил-1,3-фенилен)бис(окси))дипентановая кислота
- 76 030650
Интермедиат 89а (824 мг, 2,25 ммоль) перемешивали в EtOH (15 мл). Добавляли гидроксид калия (505 мг, 9,0 ммоль) и воду (5 мл) и реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 3 ч. Затем продукт разбавляли EtOAc (100 мл) и промывали 1 М HCl (2x50 мл). Полученную органическую фазу высушивали над сульфатом натрия и концентрировали при пониженном давлении с получением 710 мг целевого продукта.
’H ЯМР (400 МГц, ДМСО-de) δ 9,90 (с, 1Н), 7,03 (с, 2Н), 6,81 (с, 1Н), 4,02 (м, 4Н), 2,29 (м, 4Н), 1,61,8 (м, 8Н) м.д.
Интермедиат 89с: ди((9Z,12Z)-октадека-9,12-диен-1-ил)-5,5'-((5-формил-1,3-фенилен)бис(окси) )дипентаноат
Интермедиат 89b (710 мг, 2,1 ммоль) перемешивали в ДХМ (20 мл). Линолеиловый спирт (1,40 г, 5,25 ммоль) добавляли вместе с ДМАП (64 мг, 0,52 ммоль) и моногидратом паратолуолсульфоновой кислоты (100 мг, 0,52 ммоль). Затем добавляли EDC (1,0 г, 5,25 ммоль) и реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 48 ч. Продукт очищали непосредственно с помощью хроматографии на силикагеле с использованием смеси гептан/EtOAc в качестве элюента с получением 1,32 г продукта, содержащего целевой продукт и приблизительно 30% линолеилового спирта. Продукт использовали без дополнительной очистки.
Соединение примера 89: ди((9Z,12Z)-октадека-9,12-диен-1-ил)-5,5'-((5-((диметиламино)метил)-1,3фенилен)бис(окси))дипентаноат
Пример 89 может быть получен из Интермедиата 89с с использованием способов, аналогичных тем, которые описаны в примере 33.
1H ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ 6,46 (д, J=2,20 Гц, 2Н), 6,33 (т, J=2,30 Гц, 1Н), 5,27-5,45 (м, 8Н), 4,07 (т, J=6,80 Гц, 4Н), 3,88-4,01 (м, 4Н), 3,34 (с, 2Н), 2,78 (т, J=6,65 Гц, 4Н), 2,33-2,44 (м, 4Н), 2,24 (с, 6Н), 1,982,13 (м, 8Н), 1,75-1,88 (м, 8Н), 1,55-1,70 (м, 4Н), 1,22-1,43 (м, 32Н), 0,90 (т, J=6,90 Гц, 6Н) м. д.
ЭР-МС m/z=864,5 (MH+).
Пример 90: дидодецил-6,6'-((5-((диметиламино)метил)-1,3-фенилен)бис(окси))дигексаноат
Пример 90 может быть получен с использованием способов, аналогичных тем, которые применяются для получения примера 89.
'H ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ 6,48 (уш.с, 2Н) 6,35 (уш.с, 1Н) 4,00-4,11 (м, 4Н) 3,94 (т, J=6,44 Гц, 4Н) 2,34 (т, J=7,45 Гц, 5Н) 2,27 (уш.с, 3Н) 1,57-1,85 (м, 12Н) 1,40-1,57 (м, 4Н) 1,20-1,39 (м, 40Н) 0,80-0,98 (м, 6Н) м.д.
ЭР-МС m/z=732,1 (MH+).
Синтез примера 91:
Интермедиат 91а: 2-(2,2-диметил-1,3-диоксолан-4-ил)этил-4-метилбензолсульфонат
К суспензии 2-(2,2-диметил-1,3-диоксолан-4-ил)этанола (10 г, 68,4 ммоль) в ДХМ (100 мл) добавляли пиридин (25 мл). Добавляли ангидрид толуолсульфоновой кислоты (26,8 г, 82 ммоль) и реакционную смесь перемешивали в течение ночи при комнатной температуре. Летучие вещества удаляли при пониженном давлении и полученный продукт очищали с помощью хроматографии на силикагеле с использованием смеси гептан/EtOAc в качестве элюента с получением 8,92 г целевого продукта.
'H ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ 7,82-7,77 (м, 2Н), 7,38-7,32 (м, 2Н), 4,21-4,07 (м, 3Н), 4,05-3,99 (м, 1Н), 3,55-3,49 (м, 1Н), 2,45 (с, 3Н), 1,97-1,83 (м, 2Н), 1,34 (с, 3Н), 1,29 (с, 3Н) м.д.
Интермедиат 91b: 3,5-бис(2-(2,2-диметил-1,3-диоксолан-4-ил)этокси)бензальдегид
- 77 030650
В колбу, содержащую Интермедиат 91а (8,92 г, 29,7 ммоль), добавляли 3,5-дигидроксибензальдегид (1,9 г, 13,8 ммоль) и ДМФ (50 мл). Добавляли карбонат калия (5,7 г, 41,3 ммоль) и реакционную смесь нагревали до 80°C в течение ночи. Реакционную смесь охлаждали и добавляли воду. Полученный продукт экстрагировали EtOAc и объединенные органические слои высушивали над сульфатом натрия. Летучие вещества удаляли при пониженном давлении, и полученный остаток очищали с помощью хроматографии на силикагеле с использованием смеси гептан/EtOAc в качестве элюента с получением 1,9 г целевого продукта.
'H ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ 9,89 (с, 1Н), 7,02-6,99 (м, 2Н), 6,72-6,68 (м, 1Н), 4,36-4,26 (м, 2Н), 4,184,07 (м, 6Н), 3,68-3,62 (м, 2Н), 2,10-2,02 (м, 4Н), 1,43 (с, 3Н), 1,37 (с 3Н) м.д.
Интермедиат 91с: 1 -(3,5-бис(2-(2,2-диметил-1,3-диоксолан-4-ил)этокси)фенил)-N,N-диметилметанамин
Интермедиат 91b (1,4 г, 3,55 ммоль) перемешивали в DCE (35 мл). Добавляли диметиламин (7,10 мл, 2M в ТГФ, 14,2 ммоль) с последующим добавлением уксусной кислоты (0,20 мл, 3,6 ммоль) и затем триацетоксиборгидрида натрия (1,88 г, 8,87 ммоль). Реакционную смесь закрывали и оставляли перемешиваться при комнатной температуре в течение ночи. Реакционную смесь гасили насыщенным водным раствором бикарбоната натрия и полученную смесь экстрагировали EtOAc. Объединенные органические слои высушивали над сульфатом натрия и концентрировали при пониженном давлении до 1,34 г неочищенного продукта, который использовали без дополнительной очистки.
Интермедиат 91d: 4,4'-((5-((диметиламино)метил)- 1,3-фенилен)бис(окси))бис(бутан-1,2-диол)
Интермедиат 91с (1,34 г, 3,16 ммоль) перемешивали в MeOH (20 мл). Добавляли концентрированный водный раствор HCl (0,19 мл, 6,33 ммоль) и реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. Летучие вещества удаляли при пониженном давлении и продукт использовали без дополнительной очистки.
ЭР-МС m/z=344,2 (MH+).
Соединение примера 91: 4,4'-((5-((диметиламино)метил)-1,3-фенилен)бис(окси))бис(бутан-1,2диил)тетраоктаноат
Интермедиат 91d (1,0 г, 2,63 ммоль) перемешивали в ДМФ (6 мл) до полного растворения. Добавляли ДХМ (6 мл) с последующим добавлением пиридина (1,7 мл, 21 ммоль) и ДМАП (0,096 мг, 0,79 ммоль). К перемешиваемой реакционной смеси медленно добавляли октаноилхлорид (2,14 г, 13,16 ммоль) и полученную смесь перемешивали в течение 3 дней при комнатной температуре. Реакционную смесь разбавляли водой и насыщенным водным раствором бикарбоната натрия и полученную смесь экстрагировали ДХМ и EtOAc. Объединенные органические слои высушивали над сульфатом натрия и летучие вещества удаляли при пониженном давлении. Продукт очищали с использованием силикагеля, который был предварительно промыт 1% уксусной кислотой (по объему) в ДХМ. Соединение элюировали смесью EtOAc/гептан и фракции, содержащие продукт, промывали насыщенным водным раствором бикарбоната натрия. Полученные органические слои высушивали над сульфатом натрия и затем концентрировали при пониженном давлении. Полученный продукт очищали второй раз на силикагеле с использованием смеси гептан/EtOAc в качестве элюента с получением 1,65 г целевого продукта
1H ЯМР (400 МГц, CDCls) δ 6,59 (уш.с, 2Н) 6,36 (уш.с, 1Н) 5,25-5,37 (м, 2Н) 4,35 (дд, J=12,05, 3,26 Гц, 2Н) 4,12 (дд, J=11,92, 6,15 Гц, 2Н) 3,91-4,09 (м, 4Н), 3,58 (уш.с, 2Н), 2,25-2,55 (м, 14Н) 2,01-2,13 (м,
- 78 030650
4Н) 1,49-1,70 (м, 8Н) 1,13-1,39 (м, 32Н) 0,77-0,99 (м, 12Н) м.д.
ЭР-МС m/z=848,6 (MH+).
Примеры 92-94 могут быть получены с использованием способов, аналогичных тем, которые применяются для получения примера 91.
Пример 92: (R)-4-(3 -((S)-3,4-бис(октаноилокси)бутокси)-5-((диметиламино)метил)фенокси)бутан1,2-диилдиоктаноат
1H ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ 0,74-0,97 (м, 12Н) 1,14-1,40 (м, 32Н) 1,51-1,71 (м, 8Н) 2,07 (к, J=5, 94 Гц, 4Н) 2,21-2,46 (м, 14Н) 3,44 (с, 2Н) 3,89-4,07 (м, 4Н) 4,12 (дд, J=11,92, 6,15 Гц, 2Н) 4,34 (дд, J=12,05, 3,26 Гц, 2Н), 5,20-5,40 (м, 2Н) 6,32 (т, J=2,26 Гц, 1Н) 6,49 (д, J=2,01 Гц, 2Н) м.д.
ЭР-МС m/z=848,3 (MH+).
Пример 93: ^)-4-(3-(^)-3,4-бис(октаноилокси)бутокси)-5-((диметиламино)метил)фенокси)бутан1,2-диилдиоктаноат
''Ν'"
1H ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ 0,87 (м, 12Н) 1,14-1,38 (м, 32Н) 1,48-1,72 (м, 8Н) 2,07 (к, J=6,19 Гц, 4Н)
2,22-2,41 (м, 14Н) 3,44 (с, 2Н), 3,87-4,07 (м, 4Н) 4,12 (дд, J=11,92, 6,15 Гц, 2Н) 4,34 (дд, J=12,05, 3,26 Гц, 2Н) 5,20-5,40 (м, 2Н) 6,32 (т, J=2,26 Гц, 1Н) 6,49 (д, J=2,01 Гц, 2Н) м.д.
ЭР-МС m/z=848,3 (MH+).
Пример 94: ^)-4-(3-(^)-3,4-бис(октаноилокси)бутокси)-5-((диметиламино)метил)фенокси)бутан1,2-диилдиоктаноат
1H ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ 0,87 (м, 12Н) 1,12-1,40 (м, 32Н) 1,47-1,71 (м, 8Н) 2,07 (к, J=6,44 Гц, 4Н) 2,18-2,38 (м, 14Н) 3,47 (с, 2Н), 3,85-4,06 (м, 4Н) 4,12 (дд, J=11,92, 6,15 Гц, 2Н) 4,34 (дд, J=11,92, 3,39 Гц, 2Н) 5,20-5,40 (м, 2Н) 6,33 (т, J=2,26 Гц, 1Н) 6,49 (д, J=2,01 Гц, 2Н) м.д.
ЭР-МС m/z=848,3 (MH+).
Синтез примера 95: Интермедиат 95а: 3,4,5-трис((9Z,12Z)-октадека-9,12-диен-1илокси)бензальдегид
н
3,4,5-тригидроксибензальдегид (600 мг, 3,89 ммоль), LinOMs (4427 мг, 12,85 ммоль) и карбонат калия (2690 мг, 19,47 ммоль) перемешивали в ДМФ (30 мл) и нагревали до 80°С в течение ночи. Реакционную смесь выливали в воду со льдом (100 мл) и экстрагировали диэтиловым эфиром (100 млх2). Органическую фазу собирали и высушивали над сульфатом натрия и летучие вещества удаляли при пониженном давлении. Остаток очищали с помощью хроматографии на силикагеле с использованием смеси гептан/EtOAc в качестве элюента с получением 2,76 г целевого продукта.
1H ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ 9,84 (с, 1Н), 7,72 (дд, J=5,77, 3,26 Гц, 1Н), 7,50-7,58 (м, 1Н), 7,09 (с, 2Н),
5.22- 5,47 (м, 13Н), 4,23 (т, J=6,02 Гц, 1Н), 3,94-4,12 (м, 7Н), 2,78 (т, J=6,40 Гц, 7Н), 2,06 (к, J=6,69 Гц, 13Н), 1,78-1,91 (м, 5Н), 1,73-1,78 (м, 2Н), 1,70 (дд, J=11,42, 5,40 Гц, 1Н), 1,58 (с, 1Н), 1,42-1,55 (м, 8Н)
1.22- 1,42 (м, 51Н) 0,82-0,98 (м, 13Н) м. д.
Соединение примера 95: N,N-диметил-1-(3,4,5-трис((9Z,12Z)-октадека-9,12-диен-1-илокси)фенил)метанамин
- 79 030650
Пример 95 может быть получен из Интермедиата 95 а с использованием условий реакции, аналогичных тем, которые применяются для получения примера 33.
1H ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ 6,50 (с, 2Н), 5,44-5,29 (м, 12Н), 4,00-3,91 (м, 6Н), 3,32 (с, 2Н), 2,81-2,75 (м, 6Н), 2,24 (с, 6Н), 2,10-2,01 (м, 12Н), 1,85-1,65 (м, 8Н), 1,52-1,24 (м, 50Н), 0,92-0,86 (м, 9Н) м.д.
13С ЯМР (100 МГц, CDCb) δ 152,9, 137,5, 134,1, 130,2, 130,1, 130,1, 128,0, 127,9, 107,3, 73,3, 69,0, 64,7, 45,4, 31,3, 30,3, 29,7, 29,7, 29,6, 29,6, 29,5, 29,4, 29,4, 29,3, 29,3, 27,3, 27,2, 27,2, 26,1, 25,6, 22,6, 14,1 м.д. Синтез примера 96: Интермедиат 96а: 4-гидроксибутилдеканоат
К раствору бутандиола (3,54 г, 39,3 ммоль) в ДХМ (80 мл) добавляли пиридин (1,65 мл, 20,4 ммоль) и ДМАП (0,38 г, 3,2 ммоль). Добавляли деканоилхлорид (3,0 г, 15,7 ммоль) и реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 1 ч. Летучие вещества удаляли при пониженном давлении и полученный продукт очищали с помощью хроматографии на силикагеле с использованием смеси гептан/EtOAc в качестве элюента с получением 3,3 г целевого продукта.
1H ЯМР (400 МГц, CDCb) δ 4,1 (м, 2Н), 3,7 (м, 2Н), 2,3 (м, 2Н), 1,7 (м, 2Н), 1,6 (м, 4Н), 1,3 (м, 12Н), 0,9 (м, 3Н) м.д.
Интермедиат 96b: 4-(деканоилокси)бутановая кислота
Интермедиат 96b может быть получен из Интермедиата 96а с использованием условий, аналогичных тем, которые применяются в синтезе Интермедиата 84а.
1H ЯМР (400 МГц, CDCb) δ 4,1 (м, 2Н), 2,5 (м, 2Н), 2,3 (м, 2Н), 2,0 (м, 2Н), 1,6 (м, 2Н), 1,3 (м, 12Н), 0,9 (м, 3Н) м.д.
Интермедиат 96с: 4-(3-гидроксипропокси)-4-оксобутилдеканоат
Интермедиат 96с может быть получен из Интермедиата 96b и 1,3-пропандиола с использованием условий, аналогичных тем, которые применяются для получения Интермедиата 18а.
1H ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ 4,3 (м, 2Н), 4,1 (м, 2Н), 3,7 (м, 2Н), 2,4 (м, 2Н), 2,3 (м, 2Н), 2,0 (м, 2Н),
1,9 (м, 3Н), 1,6 (м, 2Н), 1,3 (м, 12Н), 0,9 (м, 3Н) м.д.
Интермедиат 96d: ((((5-формил-1,3-фенилен)бис(окси))бис(пропан-3,1 -диил))бис(окси))бис(4оксобутан-4,1 -диил)бис(деканоат)
Интермедиат 96d может быть получен из Интермедиата 96с с использованием условий, аналогичных тем, которые применяются в синтезе Интермедиата 18b.
1H ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ 9, 9 (с, 1Н), 7,0 (с, 2Н), 6,7 (с, 1Н), 4,3 (м, 4Н), 4,1 (м, 8Н), 2,4 (м, 4Н), 2,3 (м, 4Н), 2,2 (м, 4Н), 2,0 (м, 4Н), 1,6 (м, 4Н), 1,3 (м, 24Н), 0,9 (м, 6Н) м.д.
Соединение примера 96: ((((5-((диметиламино)метил)-1,3-фенилен)бис(окси))бис(пропан-3,1диил))бис(окси))бис(4-оксобутан-4,1 -диил)бис(деканоат)
Пример 96 может быть получен из Интермедиата 96d с использованием условий реакции, аналогичных тем, которые применяются в синтезе примера 33.
1H ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ 0,81-0,92 (м, 6Н) 1,18-1,37 (м, 24Н) 1,53-1,67 (м, 4Н) 1,96 (кв, J=6,90 Гц, 4Н) 2,09 (кв, J=6,27 Гц, 4Н) 2,23 (с, 6Н) 2,28 (т, J=7,53 Гц, 4Н) 2,40 (т, J=7,53 Гц, 4Н) 3,33 (с, 2Н), 4,02 (т, J=6, 02 Гц, 4Н) 4,09 (т, J=6,00 Гц, 4Н) 4,26 (т, J=6,27 Гц, 4Н) 6,33 (т, J=2,26 Гц, 1Н) 6,47 (д, J=2,26 Дж Гц, 2Н) м.д.
ЭР-МС m/z=764,5 (MH+).
Синтез примера 97: Интермедиат 97а: этил-3-октилундец-2-еноат
- 80 030650
Раствор 9-гептадеканона (15 г, 59 ммоль) и триэтилфосфоноацетата (13,2 г, 59 ммоль) перемешивали в ТГФ (100 мл). К данной реакционной смеси добавляли NaOEt (26,4 мл, 21% в EtOH, 70,7 ммоль) и полученный раствор нагревали с обратным холодильником в течение 48 ч. Реакционную смесь подкисляли 1М HCl и затем разбавляли EtOAc. Органический слой собирали и промывали насыщенным водным раствором бикарбоната натрия. Полученный органический продукт высушивали над сульфатом натрия, и летучие вещества удаляли при пониженном давлении с получением неочищенного продукта, который очищали с помощью хроматографии на силикагеле с использованием смеси гептан/EtOAc в качестве элюента, обеспечивая 11,7 г целевого продукта.
1H ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ 5,62 (с, 1Н), 4,01-4,26 (м, 2Н) 2,49-2,68 (м, 2Н) 2,13 (м, 2Н) 1,44 (дд, J=7,33, 4,80 Гц, 4Н) 1,17-1,35 (м, 23Н) 0,83-0,98 (м, 6н) м.д.
Интермедиат 97b: этил-3-октилундеканоат
Интермедиат 97а (11,75 г, 36,2 ммоль) перемешивали в ДХМ (16,5 мл) и MeOH (165 мл). Добавляли Pd/C (3,85 г, 10% Pd) и реакционную колбу оснащали баллоном, наполненным водородом. Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 24 ч. Реакционную смесь дегазировали азотом и отфильтровывали через целит с промыванием ДХМ и MeOH. Фильтрат собирали, и летучие вещества удаляли при пониженном давлении с получением 10,6 г продукта, который использовали без дополнительной очистки.
1H ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ 4,13 (к, J=7,16 Гц, 2Н) 2,39 (т, J=7,45 Гц, 2Н) 2,22 (д, J=6,82 Гц, 2Н) 1,84 (уш.с, 1Н) 1,56 (т, J=7,20 Гц, 2Н) 1,19-1,36 (м, 27Н) 0,81-0,95 (м, 6н) м.д.
Интермедиат 97с: 3-октилундекановая кислота
Интермедиат 97b (10,6 г, 32,5 ммоль) перемешивали с NaOH (9,74 мл, 10 М, 97,4 ммоль) в MeOH (100 мл) и ДХМ (10 мл). Реакционную смесь нагревали с обратным холодильником в течение ночи. Водную HCl добавляли для нейтрализации раствора, летучие вещества удаляли при пониженном давлении и полученный продукт возвращали в ДХМ. Органические слои промывали водным насыщенным раствором бикарбоната натрия и полученный водный слой экстрагировали ДХМ. Объединенные органические слои высушивали над сульфатом магния, отфильтровывали и концентрировали при пониженном давлении. Продукт очищали с помощью хроматографии на силикагеле с использованием смеси гептан/EtOAc в качестве элюента. Полученный продукт переносили в ДХМ и загружали в NH2функционализированную колонку. Колонку промывали ДХМ и затем ДХМ/MeOH. Продукт элюировали подкисленным метанолом, и элюент концентрировали при пониженном давлении. Остаток помещали в ДХМ и промывали насыщенным водным раствором бикарбоната натрия, высушивали над сульфатом магния, отфильтровывали и концентрировали при пониженном давлении с получением 6,5 г целевого продукта.
1H ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ 2,28 (д, J=7,07 Гц, 2Н) 1,86 (уш.с, 1Н) 1,15-1,44 (м, 28Н) 0,82-0,97 (м, 6Н) м.д.
Интермедиат 97d: 3,5-бис(3-((тетрагидро-2Н-пиран-2-ил)окси)пропокси)бензальдегид
Раствор 3,5-дигидроксибензальдегида (3 г, 22 ммоль) и 2-(3-бромпропокси)тетрагидро-2Н-пирана (8,11 мл, 47,8 ммоль) перемешивали в ДМФ (100 мл). Добавляли карбонат калия (15 г, 109 ммоль) и реакционную смесь нагревали до 80°C в течение ночи. Реакционную смесь разбавляли солевым раствором и EtOAc с последующим добавлением насыщенного водного раствора бикарбоната натрия. Полученную смесь отфильтровывали, и органический слой собирали, высушивали над сульфатом натрия, и летучие вещества удаляли при пониженном давлении. Полученный продукт очищали с помощью хроматографии на силикагеле с использованием смеси гептан/EtOAc в качестве элюента с получением 3,8 г целевого продукта.
1H ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ 9,88 (с, 1Н) 6,84-7,12 (м, 2Н) 6,68 (т, J=2,40 Гц, 1Н) 4,52-4,76 (м, 1Н)
- 81 030650
4,13 (т, J=6,32 Гц, 2Н) 3,78-4,05 (м, 2Н) 3,44-3,73 (м, 2Н) 1,97-2,27 (м, 2Н) 1,79-1,92 (м, 1Н) 1,67-1,79 (м, 1Н) 1,41-1,67 (м, 4Н) м.д.
Интермедиат 97е: 3,5-бис(3-гидроксипропокси)бензальдегид
Интермедиат 97d (2,6 г, 6,15 ммоль) перемешивали в MeOH (40 мл), и ТГФ (40 мл), и HCl (24,6 мл, 1 N в воде, 24,6 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 4 ч. Добавляли насыщенный водный раствор бикарбоната натрия и реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении. Полученную смесь экстрагировали дихлорметаном и объединенные органические слои высушивали над сульфатом натрия. Летучие вещества удаляли при пониженном давлении и полученный продукт очищали с помощью хроматографии на силикагеле с использованием смеси гептан/EtOAc в качестве элюента с получением 1,4 г целевого продукта.
1H ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ 9,90 (с, 1Н) 7,03 (д, J=2,27 Гц, 2Н) 6,73 (т, J=2,27 Гц, 1Н) 4,17 (т, J=6,06 Гц, 4Н) 3,88 (т, J=5,81 Гц, 4Н) 1,98-2,20 (м, 4Н) м.д.
Интермедиат 97f: 3-(3-формил-5-(3-гидроксипропокси)фенокси)пропил-3-октилдодеканоат
Интермедиат 97е (1,0 г, 3,93 ммоль), кислоту из Интермедиата 97с (1,41 г, 4,72 ммоль), EDC (0,90 г, 4,7 ммоль), ДИЭА (2,06 мл, 11,8 ммоль) и ДМАП (0,48 г, 3,93 ммоль) растворяли в DCE (20 мл) и полученный раствор делили на две порции. Каждую часть нагревали в микроволновом реакторе в течение 20 мин при 70°C. Полученные смеси объединяли и очищали непосредственно с помощью хроматографии на силикагеле с использованием смеси гептан/EtOAc в качестве элюента с получением 68 0 мг целевого продукта.
1H ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ 9,90 (с, 1Н) 7,02 (ддд, J=7,83, 2,27, 1,26 Гц, 1Н) 6,72 (т, J=2,27 Гц, 1Н)
4,22-4,35 (м, 2Н) 4,13-4,22 (м, 2Н) 4,09 (т, J=6,06 Гц, 1Н) 3,88 (к, J=5,81 Гц, 2Н) 2,25 (д, J=6,82 Гц, 2Н) 1,99-2,19 (м, 4Н) 1,84 (уш.с, 1Н) 1,14-1,38 (м, 30Н) 0,89 (тд, J=6,95, 3,54 Гц, 6Н) м.д.
Интермедиат 97g: (92,122)-3-(3-формил-5-(3-((3-октилдодеканоил)окси)пропокси)фенокси)пропилоктадека-9,12-диеноат
Интермедиат 97g может быть получен из Интермедиата 97f с использованием условий, применяемых для получения Интермедиата 18а.
1H ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ 9,90 (с, 1Н) 7,01 (д, J=2,27 Гц, 2Н) 6,70 (т, J=2,27 Гц, 1Н) 5,28-5,44 (м, 4Н) 4,27 (т, J=6,32 Гц, 4Н) 4,02-4,17 (м, 4Н) 2,78 (т, J=6,44 Гц, 2Н) 2,32 (т, J=7,45 Гц, 2Н) 2,25 (д, J=6, 82 Гц, 2Н) 2,14 (кв, J=6,19 Гц, 4Н) 1,98-2,09 (м, 4Н) 1,84 (уш.с, 1Н) 1,58-1,70 (м, 2Н) 1,18-1,41 (м, 42Н) 0,770,99 (м, 9Н) м.д.
Соединение примера 97: (9Z, 12Z)-3 -(3-((диметиламино)метил)-5-(3 -((3 -октилундеканоил)окси)про-
Пример 97 может быть получен из Интермедиата 97g с использованием условий, аналогичных тем, которые применяются для получения примера 39.
1H ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ 6,49 (уш.с, 2Н) 6,27-6,43 (м, 1Н) 5,29-5,46 (м, 4Н) 4,26 (т, J=6,32 Гц, 4Н) 4,03 (т, J=6,19 Гц, 4Н) 3,36 (уш.с, 2Н) 2,78 (т, J=6,57 Гц, 2Н) 2,18-2,39 (м, 10H) 1,96-2,18 (м, 8Н) 1,84 (уш.с, 1Н) 1,48-1,73 (м, 4Н) 1,17-1,47 (м, 40Н) 0,74-1,03 (м, 9Н) м.д.
ЭР-МС m/z=826,3 (MH+).
Синтез примера 98: Интермедиат 98а: 1-(3-гидроксипропил)-8-нонилоктандиоат
- 82 030650
Интермедиат 98а может быть получен из Интермедиата 79а с использованием условий, аналогичных тем, которые применяются для получения Интермедиата 18 а.
ТСХ (силикагель, 5% MeOH в ДХМ): Rf=0,51.
Соединение примера 98: O1,O1-(((5-((диметиламино)метил)-1,3-фенилен)бис(окси))бис(пропан-3,1диил))-9-диоктилдинонандиоат
Пример 98 может быть получен из Интермедиата 98а с использованием условий, аналогичных тем, которые описаны для получения примера 33.
1H ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ 6,47 (с, 2Н), 6,34 (с, 1Н), 4,25 (т, J=6,3 Гц, 4Н), 4,07-4,01 (м, 8Н), 3,34 (с, 2Н), 2,29 (к, J=7,2 Гц, 8Н), 2,24 (с, 6Н), 2,09 (кв, J=6,2 Гц, 4Н), 1,65-1,58 (м, 12Н), 1,31-1,28 (м, 32Н), 0,88 (т, J=6,8 Гц, 6Н) м.д.
ЭР-МС m/z=848,5 (MH+).
Синтез примера 99: Интермедиат 99а: 10-гидроксидецилоктаноат
Получают из 1,10-декандиола и октаноилхлорида с использованием условий, аналогичных тем, которые применяются для получения Интермедиата 96а.
1H ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ 4,06 (т, J=6,65 Гц, 2Н), 3,64 (т, J=6,65 Гц, 2Н), 2,29 (т, J=7,65 Гц, 2Н), 1,50-1,70 (м, 5Н), 1,18-1,41 (м, 19Н), 0,88 (т, J=7,28 Гц, 3Н) м.д.
Интермедиат 99b: 10-((метилсульфонил)окси)децилоктаноат
Смесь Интермедиата 99а (3,34 г, 11,1 ммоль) и триэтиламина (6,2 мл, 44 ммоль) в ДХМ (40 мл) перемешивали на ледяной бане и добавляли MsCl (1,04 мл, 13,3 ммоль). Реакционную смесь оставляли нагреваться до комнатной температуры и перемешивали в течение ночи. Затем реакционную смесь выливали в воду со льдом. Полученную органическую фазу собирали, высушивали над сульфатом натрия и концентрировали при пониженном давлении с получением 4,2 г продукта, который использовали без дополнительной очистки.
1H ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ 4,23 (т, J=6,57 Гц, 1Н), 4,06 (т, J=6,82 Гц, 2Н), 3,15 (с, 1Н), 3,01 (с, 1Н), 2,30 (т, J=7,58 Гц, 2Н), 1,75 (дд, J=8,08, 6,82 Гц, 1Н), 1,62 (т, J=6,95 Гц, 5Н), 1,40 (т, J=7,33 Гц, 4Н), 1,181,34 (м, 17Н), 0,89 (т, J=7,10 Гц, 3Н) м.д.
Соединение примера 99: ((5-((диметиламино)метил)бензол-1,2,3-триил)трис(окси))трис(декан-10,1диил)триоктаноат
Конечное соединение затем получали из Интермедиата 99b, следуя методикам, аналогичным тем, которые применяются для получения Интермедиата 97d и примера 33.
1H ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ 6,51 (с, 2Н), 4,03-4,12 (м, 6Н), 3,89-4,03 (м, 6Н), 3,33 (с, 2Н), 2,31 (т, J=7,53 Гц, 6Н), 2,25 (с, 6Н), 1,69-1,87 (м, 6Н), 1,55-1,69 (м, 12Н), 1,42-1,55 (м, 6Н), 1,21-1,42 (м, 54Н), 0,82-0,96 (м, 9Н) м.д.
ЭР-МС m/z=1030,7 (MH+).
Пример 100: ((5 -((диэтиламино)метил)бензол-1,2,3-триил)трис(окси))трис(декан-10,1- диил)триоктаноат
Пример 100 может быть получен с использованием способов, аналогичных тем, которые применяются для получения примера 99.
- 83 030650
1H ЯМР (400 МГц. CDClз) δ 6.55 (с. 2Н). 4.02-4.12 (м. 6Н). 3.90-4.02 (м. 6Н). 3.48 (с. 2Н). 2.53 (к. J=7.ll Гц. 4Н). 2.31 (т. J=7.53 Гц. 6Н). 1.69-1.87 (м. 6Н). 1.57-1.69 (м. 12Н). 1.41-1.54 (м. 6Н). 1.23-1.41 (м. 54Н). 1.05 (т. J=7.03 Гц. 6Н). 0.84-0.96 (м. 9Н) м.д.
ЭР-МС m/z=1058.7 (MH+).
Пример 101: 3 -((диметиламино)метил)-5-(((8-(октаноилокси)октаноил)окси)метил)бензил-3октилундеканоат
Пример 101 может быть получен из Интермедиата 77b. кислоты. полученной подобно методике Интермедиата 79а. и Интермедиата 97с с использованием способов. аналогичных тем. которые применяются для получения примера 77.
1H ЯМР (400 МГц. CDClз) δ 7.27 (с. 2Н). 7.24 (с. 1Н). 5.11 (с. 4Н). 4.06 (т. J=6.8 Гц. 2Н). 3.44 (с. 2Н). 2.37 (т. J=7.5 Гц. 2Н). 2.32-2.29 (м. 4Н). 2.26 (с. 6Н). 1.88 (м. 1Н). 1.70-1.59 (м. 6Н). 1.35-1.26 (м. 42Н). 0.89 (т. J=6.8 Гц. 9Н) м.д.
ЭР-МС m/z=7 4 4.4 (MH+).
Синтез примера 102:
Интермедиат 102а: метил-2-(3.5-бис((9Z. 12Z)-октадека-9.12-диен-1 -илокси)фенил)ацетат
К суспензии карбоната калия (12.1 г. 88 ммоль) в диметилформамиде (100 мл) добавляли метил-2(3.5-дигидроксифенил)ацетат (4.0 г. 22 ммоль) и линолеилмезилат (16.6 г. 48 ммоль). Реакционную смесь нагревали на бане при 100°С в течение 4 ч. затем оставляли охлаждаться до температуры окружающей среды. Добавляли воду (100 мл) и реакционную смесь экстрагировали этилацетатом (3x100 мл). Объединенные органические слои промывали солевым раствором. высушивали над сульфатом натрия и концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали с помощью хроматографии на силикагеле с использованием этилацетата и н-гексана в качестве элюента с получением целевого соединения.
ЭР-МС m/z=680 (MH+).
Интермедиат 102b: 2-(3 .5-6u^(9Z. 12Z)-октадека-9.12-диен-1 -илокси)фенил)этанол
К суспензии литийалюминийгидрида (671 мг. 17.6 ммоль) в тетрагидрофуране (50 мл) медленно добавляли раствор Интермедиата 104а (6 г. 8.8 ммоль) в ТГФ (38 мл). Затем реакционную смесь перемешивали при температуре окружающей среды в течение 3 ч. после этого времени реакционную смесь охлаждали на бане при 0°С и гасили водой (5 мл) и этилацетатом (5 мл). Реакционную смесь перемешивали в течение 10 мин. затем отфильтровывали через целит. Фильтрат концентрировали при пониженном давлении с получением целевого соединения.
ЭР-МС m/z=652 (MH+).
Интермедиат 102с: 2-(3.5-бис((9Z.12Z)-октадека-9.12-диен-1-илокси)фенил)ацетальдегид
К раствору Интермедиата 102b (5.3 г. 8.1 ммоль) в дихлорметане (86 мл) добавляли периодинан Десса-Мартина (10.3 г. 24 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при температуре окружающей среды в течение 2 ч. после этого времени реакционную смесь гасили с помощью добавления водного раствора бикарбоната натрия. Реакционную смесь экстрагировали дихлорметаном. объединенные органические слои высушивали над сульфатом натрия и концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали с помощью хроматографии на силикагеле с использованием этилацетата и н-гексана в качестве элюента с получением целевого соединения.
ЭР-МС m/z=64 9 (MH+).
Соединение примера 102: 2-(3.5-6u^(9Z. 12Z)-октадека-9.12-диен-1 -илокси)фенил)-Н^диметилэтанамин
- 84 030650
К раствору Интермедиата 102с (2,5 г, 3,8 ммоль) в этаноле (10 мл) и тетрагидрофуране (10 мл) добавляли гидрохлорид диметиламина (627 мг, 5,7 ммоль) с последующим добавлением триэтиламина (1,1 мл, 7,7 ммоль) и изопропоксида титана (IV) (2,1 г, 7,7 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при температуре окружающей среды, после чего добавляли боргидрид натрия (216 мг, 5,7 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при температуре окружающей среды в течение дополнительных 10 ч. Реакционную смесь гасили с помощью медленного добавления воды (2 мл) и полученную смесь отфильтровывали через целит. Остаток промывали тетрагидрофураном, и объединенные фильтраты концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали с помощью хроматографии на силикагеле, используя метанол в дихлорметане с 0,1% гидроксида аммония в качестве элюента, с получением целевого соединения.
Ή ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ 6,36 (д, J=2,3 Гц, 2Н); 6,32 (т, J=2,0 Гц, 1Н); 5,44-5,32 (м, 8Н), 3,93 (т, J=6,5 Гц, 4Н); 2,81-2,74 (м, 6Н); 2,62-2,58 (м, 2Н); 2,36 (с, 6Н); 2,08 (т, J=6,9 Гц, 4Н); 2,06 (т, J=6,9 Гц, 4Н); 1,78 (кв, J=7,0 Гц, 4Н); 1,48-1,27 (м, 32Н), 0,90 (т, J=7,0 Гц, 6Н).
ЭР-МС m/z=678,7 (MH+).
Синтез примера 103:
Интермедиат 103 а: метил-3-(3,5-бис((9Z, 12Z)-октадека-9,12-диен-1 -илокси)фенил)акрилат
К суспензии гидрида натрия (60% дисперсия, 18 ммоль) в тетрагидрофуране (50 мл), охлаждаемой на бане при 0°C, добавляли триметилфосфоноацетат (1,0 г, 18 ммоль). Реакционную смесь перемешивали в течение 10 мин, затем медленно добавляли раствор альдегида, полученного с использованием условий, аналогичных тем, которые указаны в примере 1а, (7,5 г, 12 ммоль) в тетрагидрофуране (25 мл). Реакционную смесь перемешивали в течение дополнительного 1 ч, затем добавляли воду со льдом (5 мл). Реакционную смесь экстрагировали этилацетатом (3x100 мл), объединенные органические фазы высушивали над сульфатом натрия и концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали с помощью хроматографии на силикагеле с использованием этилацетата и н-гексана в качестве элюента с получением целевого соединения.
ТСХ (силикагель, 10% EtOAc в гексане): Rf=0,77.
Интермедиат 103b: 3-(3,5-6u^(9Z, 12Z)-октадека-9,12-диен-1 -илокси)фенил)пропан-1 -ол
К раствору Интермедиата 103а (7,7 г, 11,1 ммоль) в ТГФ (100 мл), охлаждаемому на бане при 0°С, добавляли литийалюминийгидрид (927 мг, 24 ммоль). Реакционную смесь перемешивали в течение 45 мин, затем медленно добавляли воду со льдом. Полученную смесь отфильтровывали через целит и фильтрат концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали с помощью хроматографии на силикагеле с использованием этилацетата и н-гексана в качестве элюента с получением целевого соединения.
ТСХ (силикагель, 10% EtOAc в гексане): Rf=0,21.
Интермедиат 103с: 3 -(3,5-6u^(9Z, 12Z)-октадека-9,12-диен-1 -илокси)фенил)пропаналь
Раствор Интермедиата 105b (2,0 второму 5 г, 3,8 ммоль) в тетрагидрофуране (40 мл) добавляли к раствору 2-иодоксибензойной кислоты (2,3 г, 8,3 ммоль) в ДМСО (8 мл). Реакционную смесь перемешивали при температуре окружающей среды в течение 2 ч. Реакционную смесь разбавляли эфиром и отфильтровывали через целит. Добавляли воду и реакционную смесь экстрагировали дихлорметаном. Объединенные органические слои высушивали над сульфатом натрия и концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали с помощью хроматографии на силикагеле с использованием этилацетата и нгексана в качестве элюента с получением целевого соединения.
ТСХ (силикагель, 10% EtOAc в гексане): Rf=0,75.
Соединение примера 103: 3-(3,5-бис((9Z,12Z)-октадека-9,12-диен-1-илокси)фенил)-N,Nдиметилпропан-1-амин
К раствору Интермедиата 103 с (2,0 г, 3,0 ммоль) в этаноле (40 мл) добавляли гидрохлорид диметиламина (742 мг, 9,0 ммоль), триэтиламин (913 мг, 9,0 ммоль) и изопропоксид титана (IV) (2,5 г, 9,0 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при температуре амина в течение 10 ч, после чего добавляли боргидрид натрия (172 мг, 4,5 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при температуре окружающей
- 85 030650
среды в течение дополнительных 10 ч, после чего добавляли воду (2 мл). Реакционную смесь отфильтровывали через целит и остаток промывали тетрагидрофураном. Фильтрат концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали с помощью хроматографии на силикагеле с использованием элюента метанола и дихлорметана, модифицированного 0,1% гидроксидом аммония, с получением целевого соединения.
1H ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ 6,26 (д, J=2,0 Гц, 2Н), 6,21 (т, J=2,3 Гц, 1Н), 5,22-5,35 (м, 8Н), 3,84 (т, J=6,7 Гц, 4Н), 2,71 (т, J=6,3 Гц, 4Н), 2,49 (т, J=7,8 Гц, 2Н), 2,22 (т, J=7,3 Гц, 2Н), 2,15 (с, 6Н), 1,98 (к, J=6,9 Гц, 8Н), 1,65-1,74 (м, J=7,0 Гц, 6Н), 1,33-1,42 (м, 5Н), 1,15-1,33 (м, 33Н), 0,82 (т, J=6,8 Гц, 6Н) м.д.
ЭР-МС m/z=692,5 (MH+).
Синтез примера 104:
Интермедиат 104а: диэтил-2-(3-(бензилокси)пропил)малонат
К суспензии гидрида натрия (1,05 г, 26 ммоль) в тетрагидрофуране (40 мл) добавляли диэтилмалонат (7 г, 44 ммоль). После прекращения выделения газа добавляли ((3-бромпропокси)метил)бензол (5 г, 22 ммоль). Реакционную смесь нагревали на бане при 90°C в течение 6 ч, затем охлаждали до температуры окружающей среды. Реакционную смесь разбавляли диэтиловым эфиром (100 мл) и промывали водой (100 мл). Водный слой отделяли и экстрагировали диэтиловым эфиром (2x100 мл). Объединенные органические слои высушивали над сульфатом магния и концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали с помощью хроматографии на силикагеле с использованием этилацетата и гептана в качестве элюента с получением целевого соединения.
1H ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ 7,31-7,38 (м, 4Н), 7,25-7,31 (м, 1Н), 4,50 (с, 2Н), 4,10-4,27 (м, 7Н), 3,50 (т, J=6,3 Гц, 2Н), 3,32-3,41 (м, 2Н), 1,93-2,08 (м, 2Н), 1,60-1,73 (м, 2Н), 1,20-1,38 (м, 10H) м.д.
Интермедиат 104b: 2-(3-(бензилокси)пропил)пропан-1,3-диол
К раствору Интермедиата 104а (7 г, 23 ммоль) в тетрагидрофуране (100 мл), охлаждаемому на бане при 0°C, добавляли литийалюминийгидрид (2,58 г, 68 ммоль). Охлаждающую баню удаляли и смесь перемешивали при температуре окружающей среды в течение ночи. В реакционную смесь добавляли лед и смесь экстрагировали этилацетатом. Органическую фазу высушивали над сульфатом натрия и концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали с помощью хроматографии на силикагеле с использованием этилацетата и гептана в качестве элюента с получением целевого соединения.
1H ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ 7,27-7,39 (м, 5Н), 4,51 (с, 2Н), 3,75-3,88 (м, 2Н), 3,60-3,73 (м, 2Н), 3,413,55 (м, 2Н), 2,39 (т, J=5,1 Гц, 2Н), 1,76 (дт, J=7,2, 3,5 Гц, 1Н), 1,59-1,71 (м, 3Н), 1,32-1,45 (м, 2Н)
Интермедиат 104с: 2-(3-(бензилокси)пропил)пропан-1,3-диилдигексаноат
К смеси Интермедиата 104b (600 мг, 2,7 ммоль), пиридина (466 мг, 5,9 ммоль) и 4-(диметиламино) пиридина (16 мг, 0,13 ммоль) в дихлорметане (30 мл) добавляли гексаноилхлорид (792 мг, 5,9 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при температуре окружающей среды в течение 1 ч, затем выливали в 6 М водный HCl (20 мл). Смесь экстрагировали диэтиловым эфиром (2x4 0 мл).
Объединенные органические фазы высушивали над сульфатом натрия и концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали с помощью хроматографии на силикагеле с использованием этилацетата и гептана в качестве элюента с получением целевого соединения.
1H ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ 7,27-7,39 (м, 5Н), 4,43 (с, 2Н), 3,96-4,06 (м, 4Н), 3,39-3,42 (т, 2Н), 2,202,24 (т, 4Н), 1,94 (м, 1Н), 1,52-1,60 (м, 8Н), 1,39 (м, 2Н), 1,17-1,26 (м, 10H), 0,80-0,85 (т, 6Н) м.д.
Интермедиат 104d: 2-(3-гидроксипропил)пропан-1,3-диилдигексаноат
Интермедиат 104с (1 г, 2,4 ммоль) и палладий (10 мас.% на угле, 20 мг) помещали в метанол (10 мл). В реакционной смеси повышали давление с помощью водорода до 54 фунт/кв. дюйм и перемешивали при температуре окружающей среды в течение ночи. Давление снижали и реакционную смесь отфильтровывали. Фильтрат концентрировали при пониженном давлении с получением целевого соедине- 86 030650
ния.
1H ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ 4,06-4,14 (м, 4Н), 3,66-3,70 (м, 2Н), 2,03-2,06 (м, 1Н), 1,59-1,69 (м, 6Н), 1,46-1,48 (м, 2Н), 1,29-1,36 (м, 10H), 0,89-0,93 (м, 6Н) м.д.
Интермедиат 104е: 5-(гексаноилокси)-4-((гексаноилокси)метил)пентановая кислота
о о
К раствору Интермедиата 104d (760 мг, 2,3 ммоль) в ацетоне (10 мл), охлаждаемому на ледяной бане, добавляли реактив Джонса (2 М, 1,8 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при температуре окружающей среды в течение 2 ч. Добавляли метанол (1 мл) и реакционную смесь перемешивали в течение 5 мин, затем концентрировали при пониженном давлении. Остаток помещали в этилацетат (50 мл) и воду (540 мл) и органическую фазу собирали, высушивали над сульфатом натрия и концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали с помощью хроматографии на силикагеле с использованием этилацетата и гептана в качестве элюента с получением ожидаемого продукта.
ЭР-МС m/z=343 (M-H).
Интермедиат 104f: 4-((тетрагидро-2Н-пиран-2-ил)окси)бутилметансульфонат
К смеси ТНР-защищенного 1,4-бутандиола (9,2 г, 53 ммоль) и метансульфонилхлорида (7,26 г, 63 ммоль) в дихлорметане (50 мл), охлаждаемой на ледяной бане, добавляли триэтиламин (16,0 г, 158 ммоль). Охлаждающую баню удаляли и реакционную смесь перемешивали при температуре окружающей среды в течение 30 мин. Реакционную смесь выливали в воду со льдом. Органическую фазу отделяли, высушивали над сульфатом натрия и концентрировали при пониженном давлении с получением целевого соединения.
1H ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ 4,49-4,51 (м, 1Н), 4,22 (т, 2Н), 3,69-3,80 (м, 2Н), 3,33-3,47 (м, 2Н), 2,95 (с, 3Н), 1,44-1,83 (м, 11Н) м.д.
Интермедиат 104g: 4-((тетрагидро-2Н-пиран-2-ил)окси)бутил-3-гидрокси-4-метил-5-(4-((тетрагид-
Смесь Интермедиата 104f (20,4 г, 81 ммоль), 3,5-дигидрокси-4-метилбензойной кислоты (4,12 г, 25 ммоль) и карбоната калия (13,55 г, 98 ммоль) в диметилформамиде (100 мл) нагревали на бане при 80°C в течение ночи. Реакционную смесь охлаждали до температуры окружающей среды и выливали в воду со льдом (150 мл). Смесь экстрагировали диэтиловым эфиром (2x150 мл), объединенные органические фазы высушивали над сульфатом натрия и концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали с помощью хроматографии на силикагеле с использованием этилацетата и гептана в качестве элюента с получением целевого соединения.
ЭР-МС m/z=479 (M-H).
Интермедиат 104h: 4-((тетрагидро-2Н-пиран-2-ил)окси)бутил-4-метил-3-((92,122)-октадека-9,12диен-1-илокси)-5-(4-((тетрагидро-2Н-пиран-2-ил)окси)бутокси)бензоат
Смесь Интермедиата 104g (2,07 г, 4,3 ммоль), линолеилмезилата (1,78 г, 5,2 ммоль) и карбоната калия (2,38 г, 17,2 ммоль) в диметилформамиде (20 мл) нагревали на бане при 80°C в течение ночи. Реакционную смесь охлаждали до температуры окружающей среды и выливали в воду со льдом (150 мл). Смесь экстрагировали диэтиловым эфиром (2x100 мл). Органические фазы объединяли, высушивали над сульфатом натрия и концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали с помощью хроматографии на силикагеле с использованием этилацетата и гептана в качестве элюента с получением целевого продукта.
1H ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ 7,20 (с, 2Н), 5,34-5,42 (м, 4Н), 4,60-4,63 (м, 2Н), 4,36 (т, 2Н), 4,00-4,08 (м, 4Н), 3,83-3,86 (м, 4Н), 3,47-3,51 (м, 4Н), 2,80 (т, 2Н), 2,16 (с, 3Н), 2,06-2,08 (м, 5Н), 1,73-1,84 (м, 14Н), 1,51-1,60 (м, 20Н), 1,29-1,37 (м, 18Н), 0,90 (м, 4Н) м.д.
Интермедиат 104i: (4-метил-3-((92,122)-октадека-9,12-диен-1-илокси)-5-(4-((тетрагидро-2Н-пиран2-ил)окси)бутокси)фенил)метанол
- 87 030650
К раствору Интермедиата 104h (1,55 г, 2,1 ммоль) в тетрагидрофуране (25 мл), охлаждаемому на ледяной бане, добавляли литийалюминийгидрид (89 мг, 2,3 ммоль). Охлаждающую баню удаляли и реакционную смесь перемешивали в течение ночи. Добавляли лед и смесь экстрагировали этилацетатом. Органическую фазу отделяли, высушивали над сульфатом натрия и концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали с помощью хроматографии на силикагеле с использованием этилацетата и гептана в качестве элюента с получением целевого соединения.
1H ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ 6,54 (с, 2Н), 5,34-5,44 (м, 4Н), 3,97-4,03 (м, 4Н), 3,85-3,87 (м, 2Н), 3,493,52 (м, 2Н), 2,80 (т, 2Н), 2,11 (с, 3Н), 2,07-2,08 (м, 4Н), 1,72-1,90 (м, 18Н), 1,26-1,35 (м, 16Н), 0,91 (т, 4Н)
м.д.
Интермедиат 104j: 4-метил-3-((9Z,12Z)-октадека-9,12-диен-1-илокси)-5-(4-((тетрагидро-2Н-пиран-2ил)окси)бутокси)бензилметансульфонат
К смеси Интермедиата 104i (580 мг, 1,0 ммоль) и метансульфонилхлорида (143 мг, 1,2 ммоль) в дихлорметане (20 мл), охлаждаемой на ледяной бане, добавляли триэтиламин (420 мг, 4,2 ммоль). Охлаждающую баню удаляли и реакционную смесь перемешивали при температуре окружающей среды в течение 30 мин, после чего реакционную смесь выливали в воду со льдом. Органическую фазу собирали, высушивали над сульфатом натрия и концентрировали при пониженном давлении с получением целевого соединения, которое использовали без дополнительной очистки.
Интермедиат 104k: N, N-диме'пи ι-1 -(4-метил-3-((9Z, 12Z)-октадека-9,12-диен-1 -илокси)-5-(4((тетрагидро-2Н-пиран-2-ил)окси)бутокси)фенил)метанамин
Интермедиат 104j (660 мг, 1,0 ммоль), иодид натрия (600 мг, 4,0 ммоль) и диметиламин (2М в тетрагидрофуране, 2 мл) помещали в диметилформамид (5 мл). Реакционную смесь герметично закрывали и нагревали до 120°C с помощью микроволнового излучения в течение 40 мин. Реакционную смесь охлаждали до температуры окружающей среды и концентрировали при пониженном давлении. Остаток растворяли в этилацетате (50 мл) и промывали водой (50 мл). Органическую фазу собирали, высушивали над сульфатом натрия и концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали с помощью хроматографии на силикагеле с использованием дихлорметана и метанола в качестве элюента с получением целевого соединения.
ЭР-МС m/z=586,3 (MH+).
Интермедиат 1041: 4 - (5 -((диметиламино)метил)-2-метил-3 -((9Z,12Z)-октадека-9,12-диен-1 -илокси)фенокси)бутан-1-ол
К раствору Интермедиата 104k (520 мг, 0,89 ммоль) в метаноле (10 мл) добавляли водный HCl (2 М, 2 мл). Реакционную смесь перемешивали при температуре окружающей среды в течение 30 мин, затем концентрировали при пониженном давлении. Остаток растворяли в толуоле (3 мл) и концентрировали при пониженном давлении с получением целевого соединения в виде соли гидрохлорида.
ЭР-МС m/z=502,3 (MH+).
Соединение примера 104: 2-(3-(4-(5-((диметиламино)метил)-2-метил-3-((9Z,12Z)-октадека-9,12-
К раствору Интермедиата 104е (250 мг, 0,73 ммоль) добавляли EDCI (167 мг, 0,871 ммоль), диизопропилэтиламин (0,190 мл, 1,1 ммоль) и 4- (диметиламино) пиридин (1,8 мг, 0,015 ммоль). Реакционную
- 88 030650
смесь перемешивали в течение 1 ч при температуре окружающей среды, затем добавляли спирт Эксперимента 1041 (480 мг, 0,892 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при температуре окружающей среды в течение ночи и затем концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали с помощью хроматографии на силикагеле с использованием дихлорметана и метанола с модификатором 1% уксусной кислотой. Фракции, содержащие продукт, промывали раствором бикарбоната натрия и концентрировали при пониженном давлении. Остаток повторно очищали с помощью хроматографии на силикагеле с использованием этилацетата и гептана в качестве элюента с получением целевого соединения.
Ή ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ 6,48 (с, 1Н), 6,47 (с, 1Н), 5,32-5,44 (м, 4Н), 3,95-4,19 (м, 10H), 3,37 (с, 2Н), 2,80 (т, J=8 Гц, 2Н), 2,42 (т, J=8 Гц, 2Н), 2,32 (т, J=8 Гц, 4Н), 2,25 (с, 6Н), 2,10 (с, 3Н), 2,08 (дд, J=8
Гц, 4Н), 1,86 (к, J=5 Гц, 4Н), 1,64 (м, 4Н), 1,27-1,48 (м, 24Н), 0,91 (т, J=8 Гц, 9Н) м.д.
ЭР-МС m/z=828,4 (MH+).
Синтез примера 105:
Интермедиат 105а: 8-деканамидооктановая кислота о
К раствору деканоилхлорида (3,73 г, 20 ммоль) и пиридина (3,10 г, 39 ммоль) в дихлорметане (50 мл) добавляли 8-аминокаприловую кислоту (3,27 г, 21 ммоль). Смесь перемешивали при температуре окружающей среды в течение 2 ч. Смесь разбавляли водой и дихлорметаном и водную фазу доводили до рН от 4 до 6 с помощью растворов 1 N водной HCl и бикарбоната натрия. Органическую фазу отделяли и промывали водой. Органическую фазу высушивали над сульфатом магния и концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали с помощью хроматографии на силикагеле с использованием этилацетата и гептана в качестве элюента с получением целевого соединения.
ТСХ (силикагель, 5% MeOH в ДХМ): Rf=0,25.
Соединение примера 105: (5-((диметиламино)метил)-1,3-фенилен)бис(метилен)бис(8-деканамидооктаноат)
Пример 105 может быть получен из Интермедиата 105а с использованием условий, аналогичных тем, которые описаны для синтеза примера 77.
1H ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ 7,21 (с, 2Н), 7,18 (с, 1Н), 5,90 (т, J=5,4 Гц, 2Н), 5,05 (с, 4Н), 3,38 (с, 2Н),
3,17 (к, J=6,9 Гц, 4Н), 2,31 (т, J=7,5 Гц, 4Н), 2,20 (с, 6Н), 2,11 (т, J=7,7 Гц, 4Н), 1,62-1,53 (м, 8Н), 1,46-1,39 (м, 4Н), 1,27-1,21 (м, 36Н), 0,82 (т, J=6,9 Гц, 6Н) м.д.
ЭР-МС m/z=7 8 6,5 (MH+).
Синтез примера 106:
Интермедиат 106а: трет-бутил-6-(((нонилокси)карбонил)окси)гексаноат
о
о
К раствору 4-нитрофенилхлорформиата (3,75 г, 19 ммоль), 4-(диметиламино)пиридина (0,65 г, 5,3 ммоль) и пиридина (3,15 г, 40 ммоль) в дихлорметане (30 мл) добавляли трет-бутил-6-гидроксигексаноат (2,5 г, 13 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при температуре окружающей среды в течение ночи. Добавляли нонанол (5,75 г, 40 ммоль) и смесь перемешивали при температуре окружающей среды в течение ночи. Смесь концентрировали при пониженном давлении, и остаток очищали с помощью хроматографии на силикагеле с использованием этилацетата и гептана в качестве элюента с получением целевого соединения.
ТСХ (силикагель, 20% EtOAc в гептане): Rf=0,58.
Интермедиат 106b: 6-(((нонилокси) карбонил) окси) гексановая кислота
Раствор Интермедиата 106a (2,42 г, 6,7 ммоль) в трифторуксусной кислоте (3,0 мл) перемешивали при вращении в течение 1 мин, затем концентрировали при пониженном давлении. Остаток растворяли в дихлорметане (10 мл) и концентрировали при пониженном давлении с получением целевого соединения.
1H ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ 10,20 (уш.с, 1Н), 4,18-4,13 (м, 4Н), 2,45 (т, J=7,3 Гц, 2Н), 1,76-1,64 (м, 6Н), 1,50-1,27 (м, 14Н), 0,89 (м, 3Н) м.д.
Соединение примера 106: (5-((диметиламино)метил)-1,3-фенилен)бис(метилен)бис(6-(((нонилокси)карбонил)окси)гексаноат)
- 89 030650
Пример 106 может быть получен из Интермедиата 106b с использованием условий, аналогичных тем, которые применяются для синтеза примера 77.
1H ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ 7,26 (с, 2Н), 7,23 (с, 1Н), 5,10 (с, 4Н), 4,12 (т, J=6,7 Гц, 8Н), 3,43 (с, 2Н),
2,38 (т, J=7,5 Гц, 4Н), 2,25 (с, 6Н), 1,73-1,62 (м, 12Н), 1,46-1,27 (м, 28Н), 0,88 (м, 6Н) м.д.
ЭР-МС m/z=7 64,3 (MH+).
Синтез примера 107: Интермедиат 107а: 4-((1,3-бис(октаноилокси)пропан-2-ил)окси)-4оксобутановая кислота
он о
К раствору 1,3-дикаприлина (1,0 г, 2,9 ммоль) в толуоле (12 мл) добавляли янтарный ангидрид (0,320 г, 3,2 ммоль). Реакционную смесь герметично закрывали и нагревали при микроволновом облучении при 140°C в течение 40 мин. Реакционную смесь охлаждали до температуры окружающей среды и концентрировали при пониженном давлении. Остаток суспендировали в ДХМ и отфильтровывали через целит. Фильтрат концентрировали при пониженном давлении с получением целевого соединения.
1H ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ 13,26 (уш.с, 1Н), 5,32-5,26 (м, 1Н), 4,35-4,28 (м, 2Н), 4,23-4,15 (м, 2Н), 2,70-2,65 (м, 4Н), 2,38-2,31 (м, 4Н), 1,70-1,55 (м, 4Н), 1,40-1,20 (м, 16Н), 0,91-0,88 (м, 6Н) м.д.
Соединение примера 107: бис(1,3-бис(октаноилокси)пропан-2-ил)-O,O'-((5-((диметиламино)метил)1,3-фенилен)бис(метилен))дисукцинат
Пример 107 может быть получен из Интермедиата 107а с использованием условий, аналогичных тем, которые описаны для синтеза примера 77.
1H ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ 7,27 (с, 2Н), 7,23 (с, 1Н), 5,30-5,25 (м, 2Н), 5,13 (с, 4Н), 4,34-4,28 (м, 4Н), 4,21-4,13 (м, 4Н), 3,43 (с, 2Н), 2,70-2,67 (м, 8Н), 2,35-2,30 (м, 8Н), 2,25 (с, 6Н), 1,65-1,58 (м, 8Н), 1,321,27 (м, 32Н), 0,88 (м, 12Н) м.д.
ЭР-МС m/z=1048,5 (MH+).
Синтез примера 108:
Интермедиат 108а: (9Z,12Z)-4-(3-формил-5-(4-гидроксибутокси)фенокси)бутилоктадека-9,12диеноат
н
К раствору линолевой кислоты (2,33 г, 8,3 ммоль) в дихлорэтане (21 мл) добавляли EDCI (2,41 г, 12,6 ммоль), ДИПЭА (1,63 г, 12,6 ммоль) и ДМАП (0,10 г, 0,84 ммоль). Добавляли диол, полученный с использованием условий, аналогичных тем, которые описаны в примере 99е, и реакционную смесь герметично закрывали, и нагревали при микроволновом облучении при 80°C в течение 20 мин. Реакционную смесь охлаждали до температуры окружающей среды и концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали с помощью хроматографии на силикагеле с использованием этилацетата и гептана в качестве элюента с последующим использованием метанола и дихлорметана в качестве элюента с получением целевого соединения.
1H ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ 9,90 (с, 1Н), 7,00 (д, J=2,3 Гц, 1Н), 6,69 (д, J=2,3 Гц, 1Н), 5,22-5,47 (м, 4Н), 4,15 (т, J=6,1 Гц, 2Н), 3,97-4,10 (м, 2Н), 2,77 (т, J=6,5 Гц, 2Н), 2,31 (т, J=7,7 Гц, 2Н), 1,97-2,14 (м, 4Н), 1,72-1,97 (м, 5Н), 1,46-1,70 (м, 4Н), 1,23-1,45 (м, 15Н), 0,89 (т, J=6,8 Гц, 3Н) м.д.
Интермедиат 108b: (9Z,12Z)-4-(3-(4-((Z)-додец-8-еноилокси)бутокси)-5-формилфенокси)бутилоктадека-9,12-диеноат
- 90 030650
К раствору додец-8-еновой кислоты (60,1 мг 0,30 ммоль) в дихлорэтане (690 мкл) добавляли EDCI (79 мг 0,41 ммоль), диизопропилэтиламин (53 мг, 0,41 ммоль) и 4-(диметиламино)пиридин (3,4 мг, 0,03 ммоль). Добавляли Интермедиат 110а (150 мг, 0,28 ммоль) и реакционную смесь герметично закрывали и нагревали при микроволновом облучении при 80°C в течение 20 мин. Реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали с помощью хроматографии на силикагеле с использованием этилацетата и гептана в качестве элюента с последующим использованием метанола и дихлорметана в качестве элюента с получением целевого соединения.
Ή ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ 9,90 (с, 1Н), 7,00 (д, J=2,3 Гц, 2Н), 6,69 (т, J=2,3 Гц, 1Н), 5,23-5,45 (м, 6Н), 4,15 (т, J=6,1 Гц, 4Н), 4,03 (т, J=5,9 Гц, 4Н), 2,77 (т, J=6,5 Гц, 2Н), 2,31 (т, J=7,7 Гц, 4Н), 1,94-2,12 (м, 8Н), 1,75-1,94 (м, 8Н), 1,51-1,72 (м, 6Н), 1,21-1,45 (м, 23Н), 0,79-1,02 (м, 6Н) м.д.
Пример 108 может быть получен из Интермедиата 108b с использованием условий, аналогичных тем, которые применяются для синтеза примера 33.
1H ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ 6,48 (д, J=2,26 Гц, 2Н) 6,35 (т, J=1,00 Гц, 1Н) 5,37 (д, J=4,77 Гц, 5Н) 4,15 (с, 4Н) 3,98 (с, 4Н) 3,36 (с, 2Н), 2,74-2,83 (м, 2Н) 2,32 (т, J=7,53 Гц, 4Н) 2,25 (с, 6Н) 1,96-2,11 (м, 8Н) 1,771,91 (м, 8Н) 1,60 (с, 8Н) 1,27-1,43 (м, 23Н) 0,88-0,95 (м, 6Н) м.д.
ЭР-МС m/z=754,5 (MH+).
Пример 109: (9Z, 12Z)-4 - (3 -((диметиламино)метил-5 -(4-((3-октилундеканоил)окси)бутокси)фенокси)бутилоктадека-9,12-диеноат
Пример 109 может быть получен с использованием способов, аналогичных тем, которые применяются для получения Интермедиата 97с и примера 108.
'll ЯМР (400 МГц, CDCls) δ 6,49 (д, J=2,01 Гц, 2Н) 6,36 (т, J=4,30 Гц, 1Н) 5,37 (д, J=5,77 Гц, 4Н) 4,11-4,19 (м, 4Н) 3,98 (т, J=5,65 Гц, 4Н) 3,40 (с, 2Н) 2,79 (т, J=6,65 Гц, 2Н) 2,23-2,34 (м, 10H) 2,07 (д, J=7,78 Гц, 5Н) 1,79-1,90 (м, 9Н) 1,23-1,40 (м, 44Н) 0,86-0,94 (м, 9Н) м.д.
ЭР-МС m/z=854,5 (MH+).
Синтез примера 110:
Интермедиат 110а: 2-(4-гидроксибутил)пропан-1,3-диилдиоктаноат
Интермедиат 110а может быть получен с использованием условий, аналогичных тем, которые применяются в синтезе Интермедиата 104d. Данный интермедиат использовали непосредственно на следующей стадии без очистки.
Интермедиат 110b: (((5-формил-1,3-фенилен)бис(окси))бис(бутан-4,1-диил))бис(пропан-3,2,1триил)тетраоктаноат
Интермедиат 110b может быть получен из Интермедиата 110а с использованием условий, анало- 91 030650
гичных тем, которые применяются в синтезе Интермедиата 104f и Интермедиата 104g.
1H ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ 9,87 (с, 1Н), 6,97 (с, 2Н), 6,67 (с, 1Н), 3,96-4,11 (м, 12Н), 2,29 (т, 8Н),
2,00 (м, 2Н), 1,76-1,82 (м, 4Н), 1,58-1,61 (м, 12Н), 1,41-1,45 (м, 4Н), 1,25-1,27 (м, 34Н), 0,87 (т, 12Н) м.д. Соединение примера 110: (((5-((диметиламино)метил)-1,3-фенилен)бис(окси))бис(бутан-4,1диил))бис(пропан-3,2,1 -триил)тетраоктаноат
Пример 110 может быть получен из Интермедиата 110с с использованием условий, аналогичных тем, которые описаны для получения примера 33.
1H ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ 6,49-6,44 (м, 2Н), 6,35-6,31 (м, 1Н), 4,14-4,01 (м, 8Н), 3,97-3,90 (м, 4Н), 3,35 (с, 2Н), 2,34-2,27 (м, 8Н), 2,25 (с, 6Н), 2,08-1,98 (м, 2Н), 1,82-1,71 (м, 4Н), 1,68-1,38 (м, 16Н), 1,361,19 (м, 32Н), 0,93-0,84 (м, 12Н) м.д.
ЭР-МС m/z=932,6 (MH+).
Синтез примера 111:
Интермедиат 111а: 2-(гидроксиметил)пропан-1,3-диилдиоктаноат
о
К раствору октаноилхлорида (12,3 г, 75 ммоль) в дихлорметане (50 мл) добавляли ДМАП (1,84 г, 15 ммоль) и пиридин (11,9 г, 150 ммоль). Смесь перемешивали при температуре окружающей среды в течение 5 мин, затем добавляли 2-(гидроксиметил)-1,3-пропандиол (4,0 г, 38 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при температуре окружающей среды в течение ночи, затем концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали с помощью хроматографии на силикагеле с использованием этилацетата и гептана с получением целевого продукта.
ТСХ (силикагель, 20% EtOAc в гептане): Rf=0,21.
Интермедиат 111b: (((5-формил-1,3-фенилен)бис(окси))бис(метилен))бис(пропан-3,2,1-триил)тетраоктаноат
Интермедиат 111b может быть получен из Интермедиата 111 а с использованием условий, аналогичных тем, которые применяются для получения Интермедиата 18b.
ТСХ (силикагель, 20% EtOAc в гептане): Rf=0,44.
Соединение примера 111: (((5-((диметиламино)метил)-1,3-фенилен)бис(окси))бис(метилен))бис(пропан-3,2,1-триил)тетраоктаноат
Пример 111 может быть получен из Интермедиата 111b с использованием условий, аналогичных тем, которые применяются для получения примера 33.
1H ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ 6,51 (с, 2Н), 6,37 (с, 1Н), 4,25-4,22 (м, 8Н), 4,00-3,98 (м, 4Н), 3,52 (уш.с, 2Н), 2,53-2,50 (м, 2Н), 2,34-2,30 (м, 14Н), 1,65-1,58 (м, 8н), 1,31-1,25 (м, 32Н), 0,87 (м, 12Н) м.д.
ЭР-МС m/z=848,4 (MH+).
Пример 112: (9Z,9'Z, 12Z, 12^)-((5-(пирролидин-1 -илметил)- 1,3-фенилен)бис(окси))бис(бутан-4,1 диил)бис(октадека-9,12-диеноат)
- 92 030650
Пример 112 может быть получен из Интермедиата 38b с использованием условий, аналогичных тем, которые применяются для получения примера 38.
1H ЯМР (400 МГц, CDCls) δ 6,52 (с, 2Н), 6,35 (с, 1Н), 5,44-5,32 (м, 8Н), 4,15 (т, J=5, 6 Гц, 4Н), 3,98 (т, J=5,1 Гц, 4Н), 3,57 (с, 2Н), 2,79 (т, J=6,4 Гц, 4Н), 2,54 (уш.с, 4Н), 2,32 (т, J=7,5 Гц, 4Н), 2,07 (к, J=6,7 Гц, 8Н), 1,79-1,90 (м, 12Н), 1,68-1,59 (м, 5Н), 1,42-1,27 (м, 27Н), 0,91 (т, J=6,8 Гц, 6Н) м.д.
ЭР-МС m/z=862,8 (MH+).
Синтез примера 113: Интермедиат 113а: метил-3-гексилнон-2-еноат
К суспензии гидрида натрия (60% в парафиновом масле, 14,16 г, 335 ммоль) в ТГФ (500 мл), охлаждаемой на ледяной бане, медленно добавляли триметилфосфоноацетат (50,74 г, 278,8 ммоль). Через 2 ч медленно добавляли тридекан-7-он (6,5 г, 32,8 ммоль) и реакционную смесь нагревали до температуры окружающей среды. Через 1 ч реакционную смесь нагревали с обратным холодильником. После 4 дней реакционную смесь охлаждали и добавляли для гашения реакционной смеси 1 N HCl (водн.). Реакционную смесь экстрагировали этилацетатом (3x200 мл). Объединенные органические экстракты высушивали над сульфатом натрия, отфильтровывали и концентрировали при пониженном давлении. Концентрат очищали на силикагеле, используя смесь этилацетат/гексан в качестве элюента, с получением 8,0 г целевого продукта.
ТСХ (силикагель, 10% этилацетата в гексане): Rf=0,72.
Интермедиат 113b: 3-гексилнон-2-ен-1-ол
К раствору Интермедиата 113а (8,1 г, 31,9 ммоль) в ТГФ (100 мл), охлаждаемому на ледяной бане, добавляли гидрид диизобутилалюминия (25% в толуоле, 54,4 мл, 95,6 ммоль). Через 30 мин реакционную смесь доводили до температуры окружающей среды. После 6 ч реакционную смесь охлаждали на ледяной бане и гасили водой со льдом (50 мл) и 1N HCl (водн., 15 мл). Реакционную смесь экстрагировали этилацетатом (2x50 мл). Объединенные органические экстракты промывали водой (2x60 мл) и солевым раствором (60 мл). Органический экстракт высушивали над сульфатом натрия, отфильтровывали и концентрировали при пониженном давлении. Концентрат очищали на силикагеле, используя смесь этилацетат/гексан в качестве элюента, с получением 6,8 г целевого продукта.
ТСХ (силикагель, 20% этилацетата в гексане): Rf=0,29.
Интермедиат 113с: 3-гексилнон-2-еналь Η
К перемешиваемой суспензии IBX (21,0 г, 75,12 ммоль) в ДМСО (30 мл), нагреваемой до 30°C, добавляли Интермедиат 113b в ТГФ (100 мл). Реакционную смесь выдерживали при 25-30°C в течение 2 ч. Реакционную смесь разбавляли диэтиловым эфиром и отфильтровывали через целит с промыванием диэтиловым эфиром. Фильтрат промывали водой (2x200 мл) и солевым раствором (200 мл). Органический экстракт высушивали над сульфатом натрия, отфильтровывали и концентрировали при пониженном давлении с получением 6,0 г целевого продукта, который использовали без дополнительной очистки.
ТСХ (силикагель, 10% этилацетата в гексане): Rf=0,50.
Интермедиат 113d: 7-гексилтридека-4,6-диеновая кислота
К суспензии (3-карбоксипропил)трифенилфосфония бромида (19,09 г, 44,6 ммоль) в ТГФ (80 мл) и ГМФА (5 мл), охлаждаемой на ледяной бане, добавляли NaHMDS (1,0 М в ТГФ, 111 мл, 111 ммоль). Медленно добавляли Интермедиат 113с (5,0 г, 22,3 ммоль) в ТГФ (20 мл) и реакционную смесь нагревали до 30°C. После 16 ч реакционную смесь разбавляли 200 мл воды и подкисляли 2N HCl (воды.). Реакционную смесь экстрагировали этилацетатом (3x100 мл). Объединенные органические экстракты высушивали над сульфатом натрия, отфильтровывали и концентрировали при пониженном давлении. Концентрат очищали на силикагеле с использованием смеси этилацетат/гексан в качестве элюента с получением 4,0 г целевого продукта.
ТСХ (силикагель, 30% EtOAc в н-гексане): Rf=0,21.
- 93 030650
Интермедиат 113е: 7-гексилтридекановая кислота
К суспензии Интермедиата 113d (4,0 г, 13,6 ммоль) в метаноле (100 мл) в сосуде шейкере Paar добавляли Pd/C (10% Pd/C, 2,0 г). Реакционную смесь помещали на устройство шейкера и создавали давление до 60 фунт/кв. дюйм водородом. Через 2 ч реакционную смесь отфильтровывали через целит с промыванием метанолом (2x50 мл). Фильтрат концентрировали при пониженном давлении, и концентрат очищали на силикагеле с использованием смеси этилацетат/н-гексан в качестве элюента с получением 3,9 г целевого продукта.
ТСХ (силикагель, 30% EtOAc в н-гексане): Rf=0,21.
Соединение примера 113: ((5-((диметиламино)метил)-1,3-фенилен)бис(окси))бис(бутан-4,1диил)бис(7-гексилтридеканоат)
Пример 113 может быть получен из Интермедиата 38d и Интермедиата 113е с использованием способов, аналогичных тем, которые применяются для получения примера 38.
1H ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ 6,58 (уш.с, 2Н), 6,38 (уш.с, 1Н), 4,08-4,19 (м, 4Н), 3,93-4,08 (м, 4Н), 3,56 (уш.с, 2Н), 2,41 (уш.с, 6Н), 2,23-2,35 (м, 4Н), 1,75-1,93 (м, 8Н), 1,51-1,73 (м, 6Н), 1,13-1,41 (м, 52Н), 0,751,02 (м, 12Н) м.д.
13С ЯМР (101 МГц, CDCl3) δ 174,03 (2С), 160,29 (2С), 107,85 (ЗС), 101,26, 67,46 (2С), 63,89 (ЗС), 44,26 (2С), 37,37 (2С), 34,40 (2С), 33,63 (4С), 33,51 (2С), 31,98 (4С), 29,85 (4С), 29,71 (2С), 26,66 (4С),
26,38 (2С), 25,84, 25,80, 25,48 (2С), 25,07 (2С), 22,74 (4С), 14,18 (4С) м.д.
Пример 114: ((5-((диметиламино)метил)-1,3-фенилен)бис(окси))бис(бутан-4,1-диил)бис(9пентилтетрадеканоат)
Пример 114 может быть получен из Интермедиата 38d с использованием способов, аналогичных тем, которые применяются для получения примера 113.
‘и ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ 6,49 (уш.с, 2Н), 6,35 (с, 1Н), 4,09-4,23 (м, 4Н), 3,98 (т, J=5,56 Гц, 4Н),
3,38 (уш.с, 2Н), 2,19-2,37 (м, 10H), 1,75-1,94 (м, 8Н), 1,48-1,75 (м, 10H), 1,14-1,39 (м, 48Н), 0,89 (т, J=7,07 Гц, 12Н) м.д.
ЭР-МС m/z=872,9 (MH+).
Синтез примера 115: Интермедиат 115а: 3-гептилдец-2-еналь
Интермедиат 115а может быть получен с использованием способов, аналогичных тем, которые применяются для получения Интермедиата 113с в синтезе примера 113.
ТСХ (силикагель, 10% EtOAc в гексане): Rf=0,63.
Интермедиат 115b: метил-5-гептилдодека-2,4-диеноат
К суспензии гидрида натрия (55% в парафиновом масле, 3,5 г, 74,3 ммоль) в ТГФ (70 мл), охлаждаемой на ледяной бане, добавляли триметилфосфоноацетат (9,6 мл, 59,5 ммоль). Через 10 мин добавляли Интермедиат 115а (7,5 г, 29,7 ммоль) в ТГФ (10 мл) и реакционную смесь оставляли нагреваться до температуры окружающей среды. Через 2 ч реакционную смесь гасили с помощью медленного добавления воды со льдом (20 мл). Реакционную смесь экстрагировали этилацетатом (2x100 мл). Органические экстракты промывали водой и солевым раствором. Органический слой высушивали над сульфатом натрия, отфильтровывали и концентрировали при пониженном давлении с получением 8,0 г целевого продукта.
ТСХ (силикагель, 10% EtOAc в гексане): Rf=0,75.
Интермедиат 115с: метил-5-гептилдодеканоат
К раствору Интермедиата 115b (8,0 г, 25,95 ммоль) в метаноле (350 мл) добавляли палладий на угле (10% Pd/C, 1,0 г). Реакцию проводили под давлением 1 атм водорода, поставляемого с помощью баллона.
- 94 030650
После 14 ч реакционную смесь отфильтровывали через целит с промыванием метанолом. Фильтрат концентрировали при пониженном давлении с получением 7,7 г целевого продукта.
ТСХ (силикагель, 5% метанола в дихлорметане): Rf=0,63.
Интермедиат 115d: 5-гептилдодекановая кислота
К смеси 5N гидроксида натрия (воды., 125 мл) и метанола (350 мл) добавляли Интермедиат 115с (7,7 г, 24,7 ммоль) и реакционную смесь нагревали с обратным холодильником. После 16 ч реакционную смесь охлаждали на ледяной бане и гасили с помощью добавления концентрированного водного HCl до кислого. Смесь экстрагировали этилацетатом (2x250 мл). Органические экстракты высушивали над сульфатом натрия, отфильтровывали и концентрировали при пониженном давлении. Концентрат очищали на силикагеле с использованием смеси этилацетат/гексан в качестве элюента с получением 7,0 г целевого продукта.
ТСХ (силикагель, 50% EtOAc в гептане): Rf=0,82.
Соединение примера 115: ((5-((диметиламино)метил)-1,3-фенилен)бис(окси))бис(бутан-4,1диил)бис(5-гептилдодеканоат)
Пример 115 может быть получен из Интермедиата 38d и Интермедиата 115d с использованием способов, аналогичных тем, которые применяются для получения примера 38.
1H ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ 6,48 (д, J=1,76 Гц, 2Н), 6,35 (т, J=2,13 Гц, 1Н), 4,14 (т, J=5,90 Гц, 4Н), 3,97 (т, J=5,52 Гц, 4Н), 3,38 (уш.с, 2Н), 2,19-2,36 (м, 10H), 1,76-1,93 (м, 8Н), 1,60 (дт, J=15,31, 7,65 Гц, 4Н), 1,15-1,40 (м, 54Н), 0,79-0,95 (м, 12Н) м.д.
ЭР-МС m/z=873,0 (MH+).
Пример 116: ((5-((диметиламино)метил)-1,3-фенилен)бис(окси))бис(бутан-4,1-диил)бис(3октилундеканоат)
Пример 116 может быть получен из Интермедиата 38d и Интермедиата 97 с с использованием способов, аналогичных тем, которые применяются для получения примера 38.
1H ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ 6,63-6,82 (м, 2Н), 6,38-6,52 (м, 1Н), 4,09-4,23 (м, 4Н), 4,02 (т, J=5,56 Гц, 4Н), 2,49-2,84 (м, 6Н), 2,24 (д, J=7,07 Гц, 4Н), 1,75-1,98 (м, 10H), 1,49-1,69 (м, 2Н), 1,16-1,39 (м, 56Н), 0,79-0,94 (м, 12Н) м.д.
ЭР-МС m/z=872,3 (MH+).
Пример 117: (5-((диметиламино)метил)-1,3-фенилен)бис(метилен)бис(5-гептилдодеканоат)
Пример 117 может быть получен из Интермедиата 77b и Интермедиата 115d с использованием способов, аналогичных тем, которые применяются для получения примера 77.
1H ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ 7,35 (уш.с, 2Н), 7,29 (уш.с, 1Н), 5,12 (с, 4Н), 3,62 (уш.с, 2Н), 2,35 (т, J=7,58 Гц, 10H), 1,62 (дт, J=15,16, 7,58 Гц, 4Н), 1,14-1,43 (м, 54Н), 0,80-0,99 (м, 12Н) м.д.
ЭР-МС m/z=756,7 (MH+).
Пример 118: (5-((диметиламино)метил)-1,3-фенилен)бис(метилен)бис(7-гексилтридеканоат)
Пример 118 может быть получен из Интермедиата 77b и Интермедиата 113е с использованием способов, аналогичных тем, которые применяются для получения примера 77.
1H ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ 7,30 (с, 2Н), 7,22-7,29 (м, 1Н), 5,11 (с, 4Н), 3,55 (уш.с, 2Н), 2,23-2,46 (м, 10H), 1,65 (кв, J=7,40 Гц, 4Н), 1,18-1,41 (м, 54Н), 0,79-0,94 (м, 12Н) м.д.
- 95 030650
13С ЯМР (101 МГц, CDCl3) δ 173,70 (2С), 136,83 (2С), 128,86 (3С), 127,01, 65,67 (2С), 63,60, 45,01 (2С), 37,38 (2С), 34,34 (2С), 33,63 (4С), 33,53 (2С), 31,97 (4С), 29,85 (4С), 29,70 (2С), 26,66 (4С), 26,40 (2С), 25,02 (2С), 22,74 (4С), 14,17 (4С) м.д.
Пример 119: (5-((диметиламино)метил)-1,3-фенилен)бис(метилен)бис(9-пентилтетрадеканоат)
Пример 119 может быть получен из Интермедиата 77b с использованием способов, аналогичных тем, которые применяются для получения примера 118.
1H ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ 7,24-7,34 (м, 3Н), 5,11 (с, 4Н), 3,55 (уш.с, 2Н), 2,23-2,43 (м, 10H), 1,64 (кв, J=7,28 Гц, 4Н), 1,11-1,41 (м, 54Н), 0,88 (т, J=7,03 Гц, 12Н) м.д.
ЭР-МС m/z=756,5 (MH+).
Синтез примера 120: Интермедиат 120а: 4-((трет-бутилдиметилсилил)окси)бутилметансульфонат
К раствору 4-((трет-бутилдиметилсилил)окси)бутан-1-ола (10,0 г, 49,0 ммоль) в дихлорметане (100 мл) добавляли триэтиламин (20,4 мл, 147 ммоль) и метансульфонилхлорид (4,93 мл, 63,7 ммоль). После 5 ч реакционную смесь гасили водой (150 мл) и экстрагировали дихлорметаном (2x150 мл). Объединенные слои ДХМ промывали солевым раствором (100 мл), высушивали над сульфатом натрия и отфильтровывали. Фильтрат концентрировали при пониженном давлении с получением целевого соединения. ТСХ (силикагель, 20% этилацетат в гексане): Rf=0,42
Интермедиат 120b: 3,5-бис(4-((трет-бутилдиметилсилил) окси)бутокси)бензальдегид
К раствору 3,5-дигидроксибензальдегида (2,5 г, 18,1 ммоль) в ДМФ (50 мл) добавляли карбонат калия (12,50 г, 90,5 ммоль) с последующим добавлением Интермедиата 120а (12,76 г, 45,3 ммоль). Реакционную смесь нагревали до 80°C и перемешивали в течение 24 ч. Реакционную смесь охлаждали, гасили водой (200 мл) и экстрагировали этилацетатом (2x200 мл). Объединенные органические слои промывали солевым раствором (150 мл), высушивали над сульфатом натрия и отфильтровывали. Фильтрат концентрировали при пониженном давлении и полученный остаток очищали на силикагеле с использованием этилацетата и гексана в качестве элюента с получением целевого соединения.
ТСХ (силикагель, 30% этилацетата в гексане): Rf=0,71
Интермедиат 120с: метил-3-(3,5-бис(4-((трет-бутилдиметилсилил) окси)бутокси)фенил)акрилат
К раствору триметилфосфоноацетата (3,0 мл, 20,6 ммоль) в ТГФ (70 мл), охлаждаемому на ледяной бане, добавляли гидрид натрия (898 мг, 55% дисперсия, 20,6 ммоль). Реакционную смесь перемешивали в течение 30 мин, затем добавляли раствор Интермедиата 120b (7,0 г, 13,7 ммоль) в ТГФ (30 мл). Охлаждающую баню удаляли и реакцию продолжали в течение дополнительных 90 мин. Реакционную смесь гасили водой (100 мл) и экстрагировали этилацетатом (2x200 мл). Объединенные органические экстракты промывали солевым раствором (200 мл), высушивали над сульфатом натрия и отфильтровывали. Фильтрат концентрировали при пониженном давлении и остаток очищали на силикагеле с использованием этилацетата и гексана в качестве элюента с получением целевого соединения.
ЭР-МС m/z=567,5 (MH+).
Интермедиат 120d: 3-(3,5-бис(4-((трет-бутилдиметилсилил)окси)бутокси)фенил)пропан-1-ол
К раствору Интермедиата 120с (7,0 г, 12,4 ммоль) в ТГФ (100 мл), охлаждаемому на ледяной бане, добавляли литийалюминийгидрид (1,88 г, 49,4 ммоль) и реакционную смесь перемешивали в течение 3 ч. Реакционную смесь гасили холодной водой и отфильтровывали через целит. Фильтрат экстрагировали
- 96 030650
этилацетатом (2x200 мл) и объединенные органические экстракты промывали солевым раствором (200 мл), высушивали над сульфатом натрия и отфильтровывали. Фильтрат концентрировали при пониженном давлении с получением целевого продукта, который использовали без дополнительной очистки.
ЭР-МС m/z=541,4 (MH+).
Интермедиат 120е: 1-(3-(3,5-бис(4-((трет-бутилдиметилсилил)окси)бутокси)фенил)пропил)пиперидин
К раствору тозилангидрида (Ts2O, 1,81 г, 5,55 ммоль) в дихлорметане (25 мл) добавляли триэтиламин (1,03 мл, 7,40 ммоль) с последующим добавлением Интермедиата 120d (2,0 г, 3,70 ммоль) в ДХМ (15 мл). Через 1 ч добавляли пиперидин (3,15 г, 18,50 ммоль) и реакционную смесь герметично закрывали. После дополнительных 15 ч реакционную смесь разбавляли водой (100 мл) и экстрагировали дихлорметаном (2x100 мл). Объединенные экстракты дихлорметана промывали солевым раствором (200 мл), высушивали над сульфатом натрия и отфильтровывали. Фильтрат концентрировали при пониженном давлении и остаток очищали на силикагеле с использованием смеси метанол: дихлорметан в качестве элюента с получением целевого соединения.
ЭР-МС m/z=608,3 (MH+).
Интермедиат 120f: 4,4'-((5 -(3-(пиперидин-1 -ил) пропил)- 1,3-фенилен)бис(окси))бис(бутан-1 -ол)
N ^'^xAyOv/xXxoh
К раствору Интермедиата 120е (1,3 г, 2,14 ммоль) в диэтиловом эфире (10 мл) добавляли HCl в диоксане (20 мл). Через 2 ч реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении и промывали диэтиловым эфиром. Остаток разбавляли насыщенным водным раствором бикарбоната натрия и экстрагировали этилацетатом (2x50 мл). Объединенные органические экстракты высушивали над сульфатом натрия и отфильтровывали. Фильтрат концентрировали при пониженном давлении с получением целевого соединения, которое использовали без дополнительной очистки.
ЭР-МС m/z=380,1 (MH+).
Соединение примера 120: (9Z,9'Z,12Z,12'Z)-((5-(3-(пиперидин-1-ил)пропил)-1,3-фенилен)бис(окси))бис(бутан-4,1 -диил)бис(октадека-9,12-диеноат)
Пример 120 может быть получен из Интермедиата 120f с использованием способов, аналогичных тем, которые применяются для получения примера 38.
1H ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ 6,33 (д, J=2,01 Гц, 2Н), 6,21-6,31 (м, 1Н), 5,22-5,51 (м, 8Н), 4,07-4,22 (м, 4Н), 3,95 (т, J=5,52 Гц, 4Н), 2,78 (т, J=6,65 Гц, 4Н), 2,56 (т, J=7,53 Гц, 2н), 2,35-2,54 (м, 4н), 2,26-2,35 (м, 4Н), 2,05 (к, J=6,61 Гц, 8Н), 1,77-1,98 (м, 10H), 1,55-1,76 (м, 8Н), 1,42-1,55 (м, 2Н), 1,20-1,42 (м, 30Н), 0,85-0,99 (м, 6Н) м.д.
13С ЯМР (101 МГц, CDCl3) δ 173,98 (2С), 160,07 (2С), 130,24 (2С), 130,07 (2С), 128,05 (2С), 127,91 (2С), 106,92 (ЗС), 98,74 (1С), 67,21 (2С), 63,91 (2С), 58,48, 54,34 (2С), 34,36 (2С), 34,02, 31,55 (2С), 29,63
(2С), 29,37 (2С), 29,21 (2С), 29,17 (2С), 29,15 (2С), 27,22 (4С), 25,90 (2С), 25,64 (2С), 25,47 (2С), 25,00
(2С), 24,21 (2С), 22,61 (2С), 14,12 (2С) м.д. ЭР-МС m/z=904,9 (MH+).
Пример 121: (9Z,9'Z, 12Z,12'Z)-(( 5- (3 -(диметиламино)пропил)- 1,3-фенилен)бис(окси))бис(бутан-4,1 диил)бис(октадека-9,12-диеноат)
о
Пример 121 может быть получен из Интермедиата 120d с использованием способов, аналогичных тем, которые применяются для получения примера 120.
'H ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ 6,33 (д, J=2,02 Гц, 2Н) 6,25-6,31 (м, 1Н) 5,26-5,47 (м, 8Н) 4,07-4,22 (м, 4Н), 3,96 (т, J=5,56 Гц, 4Н) 2,78 (т, J=6,57 Гц, 4Н) 2,62 (т, J=7,33 Гц, 4Н) 2,52 (уш.с, 6Н) 2,30 (т, J=7,58 Гц, 4Н) 2,05 (к, J=6,65 Гц, 10H) 1,76-1,94 (м, 8Н) 1,55-1,70 (м, 4Н) 1,21-1,46 (м, 28Н) 0,81-0,98 (м, 6Н) м.д.
ЭР-МС m/z=8 64,6 (MH+).
Пример 122: (9Z,9'Z,12Z,12'Z)-((5-(3-морфолинопропил)-1,3-фенилен)бис(окси))бис(бутан-4,1- 97 030650
диил)бис(октадека-9,12-диеноат)
Пример 122 может быть получен из Интермедиата 120d с использованием способов, аналогичных тем, которые применяются для получения примера 120.
1H ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ 6,33 (д, J=2,26 Гц, 2Н), 6,23-6,30 (м, 1Н), 5,23-5,48 (м, 8Н), 4,07-4,22 (м, 4Н), 3,95 (т, J=5,52 Гц, 4Н), 3,75 (уш.с, 4Н), 2,78 (т, J=6,53 Гц, 4Н), 2,56-2,64 (м, 2Н), 2,35-2,51 (м, 4Н), 2,30 (т, J=7,65 Гц, 4Н), 2,05 (д, J=6,78 Гц, 8Н), 1,75-1,97 (м, 10H), 1,53-1,72 (м, 6Н), 1,16-1,44 (м, 28Н), 0,79-1,01 (м, 6Н) м.д.
ЭР-МС m/z=906,9 (MH+).
Пример 123: ((5-(((3-(диметиламино)пропаноил)окси)метил)-1,3-фенилен)бис(окси))бис(октан-8,1диил)бис(деканоат)
Пример 123 может быть получен с использованием способов, аналогичных тем, которые применяются для получения примера 18 и примера 52.
1H ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ 6,47 (д, J=2,2 Гц, 2Н), 6,40 (т, J=2,2 Гц, 1H), 5,07 (с, 2H), 4,05 (т, J=6,7 Гц, 4Н), 3,92 (т, J=6,5 Гц, 4Н), 3,00 (т, J=7,0 Гц, 2Н), 2,71 (т, J=7,1 Гц, 2Н), 2,56 (с, 6Н), 2,29 (т, J=7,6 Гц, 4Н), 2,07 (с, 2Н), 1,76 (к, J=6,7 Гц, 4Н), 1,61 (тд, J=7,4, 7,0, 3,9 Гц, 8Н), 1,43 (д, J=7,9 Гц, 4Н), 1,39-1,11 (м, 34Н), 0,91-0,83 (м, 6Н).
ЭР-МС m/z=805,0 (MH+)
Пример 124: ((5-(((4-(диметиламино)бутаноил)окси)метил)-1,3-фенилен)бис(окси))бис(октан-8,1диил)бис(деканоат)
Пример 124 может быть получен с использованием способов, аналогичных тем, которые применяются для получения примера 18 и примера 52.
1H ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ 6,46 (д, J=2,2 Гц, 2Н), 6,39 (т, J=2,2 Гц, 1Н), 5,04 (с, 2Н), 4,05 (т, J=6,7 Гц, 4Н), 3,92 (т, J=6,5 Гц, 4Н), 2,62 (с, 6Н), 2,51 (т, J=6,9 Гц, 2Н), 2,29 (т, J=7,5 Гц, 4Н), 1,95 (к, J=7,0 Гц, 2Н), 1,80-1,71 (м, 4Н), 1,61 (дк, J=7,2, 3,9 Гц, 8Н), 1,44 (т, J=7,7 Гц, 4Н), 1,40-1,20 (м, 38Н), 0,87 (т, J=6,7 Гц, 6Н).
ЭР-МС m/z=819,0 (MH+)
Пример 125:
Интермедиат 125а: 2,2,3,3,9,9,10,10-октаметил-4,8-диокса-3,9-дисилаундекан-6-ол
Суспензию глицерина (5 г, 54,3 ммоль), имидазола (8,1 г, 119 ммоль) и трет-бутилхлордиметилсилана (16,37 г, 109 ммоль) в ТГФ (40 мл) перемешивали в течение 15 ч. Реакционную смесь гасили водой (300 мл) и экстрагировали этилацетатом. Объединенные органические экстракты промывали солевым раствором, высушивали над сульфатом магния и отфильтровывали.
Фильтрат концентрировали при пониженном давлении, и остаток очищали на силикагеле с использованием этилацетата и гептана в качестве элюента с получением целевого соединения.
1H ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ 3,55-3,76 (м, 4Н), 2,47 (уш.с, 1Н), 1,61 (уш.с, 1Н), 0,79-1,06 (м, 18Н), -0,06-0,21 (м, 12Н) м.д.
Интермедиат 125b: 6-(((трет-бутилдиметилсилил)окси)метил)-2,2,3,3-тетраметил-4,7,12-триокса-3силатетрадец-13-ен
К раствору Интермедиата 38а (2 г, 10,3 ммоль) и Интермедиата 125 а (3,30 г, 10,3 ммоль) в ТГФ (20 мл), охлаждаемому на бане сухой лед/ацетон, добавляли гидрид натрия (0,618 г, 60% дисперсия, 15,44 ммоль). Через 1 ч охлаждающую баню удаляли и реакционную смесь оставляли нагреваться до темпера- 98 030650
туры окружающей среды в течение 4 ч с последующим нагреванием с обратным холодильником в течение 1 ч. Смесь охлаждали до температуры окружающей среды и гасили водой со льдом. Реакционную смесь экстрагировали этилацетатом (100 мл). Органический экстракт высушивали над сульфатом магния, отфильтровывали и фильтрат концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали на силикагеле с использованием этилацетата и гептана в качестве элюента с получением целевого соединения.
'и ЯМР (400 МГц, CDCI3) δ 6,47 (дд, J=14,31, 6,78 Гц, 1Н), 4,11-4,22 (м, 1Н), 3,98 (дт, J=7,03, 2,01 Гц, 1Н), 3,56-3,76 (м, 6Н), 3,42-3,56 (м, 2Н), 3,30-3,42 (м, 1Н), 1,60-1,81 (м, 4Н), 0,80-1,01 (м, 18Н), 0,000,12 (м, 12Н) м.д.
Интермедиат 125с: 2-(4-(винилокси)бутокси)пропан-1,3-диол /ОН
он
К раствору Интермедиата 125b (1,4 г, 3,34 ммоль) в ТГФ (10 мл) добавляли фторид тетрабутиламмония (10 мл, 1M В ТГФ, 10 ммоль). Через 2 ч реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении. Остаток разбавляли этилацетатом и промывали водой и солевым раствором, высушивали над сульфатом магния и отфильтровывали. Фильтрат концентрировали при пониженном давлении и остаток очищали на силикагеле с использованием этилацетата и гексана в качестве элюента с получением целевого продукта.
ТСХ (силикагель, 50% этилацетата в гексане): Rf=0,10.
Интермедиат 125d: 2-(4-(винилокси)бутокси)пропан-1,3-диилдиоктаноат
К раствору октановой кислоты (584 мг, 4,05 ммоль), Интермедиата 125с (350 мг, 1,84 ммоль), ДМАП (22,5 мг, 0,184 ммоль) и диизопропилэтиламина (713 мг, 5,52 ммоль) в дихлорметане (10 мл), охлаждаемому на ледяной бане, добавляли EDCI (846 мг, 4,42 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при температуре окружающей среды в течение ночи, после чего реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали на силикагеле с использованием этилацетата и гептана в качестве элюента с получением целевого соединения.
ТСХ (силикагель, 50% этилацетата в гептане): Rf=0,85
Интермедиат 125е: 2-(4-гидроксибутокси)пропан-1,3-диилдиоктаноат
о
К раствору Интермедиата 125d (520 мг, 1,18 ммоль) в дихлорметане (10 мл) добавляли трифторуксусную кислоту (0,181 мл, 2,35 ммоль). Через 1 ч реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении, и остаток очищали на силикагеле с использованием этилацетата и гептана в качестве элюента с получением целевого соединения.
ЯМР (400 МГц, CDCI3) δ 4,23 (дд, J=11,54, 5,02 Гц, 2Н), 4,12 (дд, J=11,54, 5,52 Гц, 2Н), 3,71 (кв, J=5,14 Гц, 1Н), 3,64 (дт, J=15,43, 5,83 Гц, 4Н), 2,34 (т, J=7,00 Гц, 4Н), 1,56-1,73 (м, 8Н), 1,19-1,41 (м, 16Н), 0,81-1,01 (м, 6Н) м.д.
Соединение примера 125: ((((5-((диметиламино)метил)-1,3-фенилен)бис(окси))бис(бутан-4,1-
Пример 125 может быть получен из Интермедиата 125е с использованием способов, аналогичных тем, которые применяются для получения примера 39 или примера 52.
ЯМР (400 МГц, CDCI3) δ 6,49 (с, 2Н), 6,34 (т, J=2,01 Гц, 1Н) 4,17-4,26 (м, 4Н) 4,08-4,17 (м, 4Н) 3,95 (т, J=6,15 Гц, 4Н) 3,71 (кв, J=5,14 Гц, 2Н) 3,63 (т, J=6,27 Гц, 4Н) 3,42 (уш.с, 2Н) 2,24-2,40 (м, 14Н) 1,79-1,90 (м, 4Н) 1,69-1,79 (м, 4Н) 1,62 (кв, J=7,34 Гц, 8Н) 1,21-1,38 (м, 32Н) 0,83-0,94 (м, 12Н) м.д.
- 99 030650
ЭР-МС m/z=964,7 (MH+).
Синтез примера 126: Интермедиат 12ба: 4,4-бис(октилокси)бутаннитрил
К смеси 4,4-диэтоксибутаннитрила (15 г, 95 ммоль) и октанола (37,3 г, 286 ммоль) добавляли птолуолсульфонат пиридиния (1,2 г, 4,77 ммоль) и смесь нагревали до 105°C. Через 72 ч реакционную смесь охлаждали и очищали на силикагеле с использованием смеси этилацетат/гептан в качестве элюента с получением 9,34 г целевого продукта.
1H ЯМР (400 МГц, CDCl3) : δ 4,56 (т, J=5,40 Гц, 1Н), 3,61 (дт, J=9,16, 6,59 Гц, 2Н), 3,44 (дт, J=9,22, 6,68 Гц, 2Н), 2,43 (т, J=7,28 Гц, 2Н), 1,95 (тд, J=7,34, 5,40 Гц, 2Н), 1,50-1,66 (м, 4Н), 1,17-1,44 (м, 20Н), 0,80-0,95 (м, 6Н) м.д.
Интермедиат 126b: 4,4-бис(октилокси)бутан-1-ол
К раствору Интермедиата 126а (5 г, 15,4 ммоль) в дихлорметане (60 мл), охлаждаемому на бане сухой лед/ацетон, добавляли DIBAL-H (1,0 М в толуоле, 15,4 мл, 15,4 ммоль). После 1,5 ч охлаждающую баню удаляли и реакционную смесь нагревали до температуры окружающей среды. Реакционную смесь гасили насыщенным водным раствором хлорида аммония (20 мл) и водой (10 мл) и экстрагировали дихлорметаном. Экстракты ДХМ промывали солевым раствором, высушивали над сульфатом магния и отфильтровывали. Фильтрат концентрировали и остаток повторно растворяли в метаноле (20 мл). Добавляли боргидрид натрия (0581 г, 15,4 ммоль). Через 1 ч реакционную смесь гасили водой и реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении для удаления метанола. Полученную смесь экстрагировали этилацетатом, и экстракты этилацетата промывали насыщенным водным раствором бикарбоната натрия, высушивали над сульфатом натрия и отфильтровывали. Фильтрат концентрировали при пониженном давлении, и остаток очищали на силикагеле с использованием этилацетата и гептана в качестве элюента.
1H ЯМР (400 МГц, ДМСОЩ6) δ 4,34-4,46 (м, 2Н), 3,47 (дт, J=9,03, 6,53 Гц, 2Н), 3,28-3,41 (м, 6Н), 1,35-1,58 (м, 8Н), 1,13-1,35 (м, 18Н), 0,79-0,91 (м, 6Н) м.д.
Соединение примера 126: 1-(3,5-бис(4,4-бис(октилокси)бутокси)фенил)-Л,№диметилметанамин
Пример 126 может быть получен из Интермедиата 126b с использованием способов, аналогичных тем, которые применяются для получения примера 39 или примера 52.
1H ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ 6,48 (д, J=2,01 Гц, 2Н), 6,35 (т, J=2,13 Гц, 1Н), 4,48-4,58 (м, 2Н), 3,96 (т, J=5, 90 Гц, 4Н), 3,58 (дт, J=9,29, 6,65 Гц, 4Н), 3,33-3,49 (м, 6Н), 2,28 (с, 6Н) 1,73-1,92 (м, 8Н), 1,57 (кв, J=6,96 Гц, 8Н), 1,18-1,42 (м, 40н), 0,79-0,97 (м, 12Н) м.д.
ЭР-МС m/z=792,8 (MH+).
Липидные композиции
Липидные наночастицы (ЛНЧ) получали смешиванием равных объемов липидов, растворенных в спирте, с киРНК, растворенной в цитратном буфере, с помощью способа истекающей струи. Раствор липида содержит соединение катионного липида изобретения, хелперный липид (холестерин), необязательный нейтральный липид (ДСФХ) и ПЭГ (ПЭГ) липид при концентрации 8-16 мг/мл с целью 12 мг/мл в спирте. Относительные молярные соотношения каждого липидного компонента в составах данного изобретения представлены в табл. 4 и 5. Соотношение киРНК к общему количеству липидов представляет собой приблизительно 0,05 (мас./мас.). Где состав ЛНЧ содержит четыре липидных компонента, молярные соотношения соответствуют типу липидов, как видно в первых четырех столбцах таблицы, в том порядке, в котором они появляются. Соотношение липидов находится в диапазоне от 20 до 70 мол.% для катионных липидов с целью 40-60, молярный процент хелперных липидов находится в диапазоне от 20 до 70 с целью от 30 до 50, молярный процент нейтральных липидов находится в диапазоне от 0 до 30, молярный процент липидов ПЭГ находится в диапазоне от 1 до 6 с целью от 2 по 5. Концентрация раствора киРНК находится в диапазоне от 0,7 до 1,0 мг/мл с целью от 0,8 до 0,9 мг/мл в цитрате натрия: буфер хлорида натрия рН 4-6 с целью 4,5-5.5. ЛНЧ получают смешиванием равных объемов раствора липидов в этаноле с киРНК, растворенной в цитратном буфере, с помощью способа истекающей струи при использовании смесительного устройства с ВД в диапазоне от 0,25 до 2,0 мм при скорости потока от 10 до 640 мл/мин. Смешанный раствор ЛНЧ выдерживают при комнатной температуре в течение 0-24 ч до проведения стадии разбавления. Затем раствор концентрируют и подвергают диафильтрации с помощью
- 100 030650
подходящего буфера путем способа ультрафильтрации с использованием мембран с диафрагмой MW от 30 до 500 кДа. Конечный продукт отфильтровывают в стерильных условиях и хранят при 4°С.
киРНК
киРНК, используемую в липидных наночастицах, описанных выше, получали из двухцепочечных последовательностей киРНК, специфичных к последовательности целевой мРНК.
1. FVII киРНК двухцепочечная последовательность
5' UUu AAU UGA AAC сАА GAc Auu 3' (SEQ ID N0:1)
5' uGu cuu GGu uuc AAu uAA Auu 3' (SEQ ID N0:2)
2. PLK1-424 киРНК двухцепочечная последовательность
5' UAU UUA AgG AGG GUG AuC Uuu 3' (SEQ ID N0:3)
5' AGA Uca cCC Ucc uuA AAU auu 3' (SEQ ID N0:4)
Следующие сокращения используют в данных последовательностях:
A=аденозин
и=уридин
О=гуанозин
С=цитозин
а=2'-О-метил-аденозин
и=2'-О-метил-уридин
д=2'-О-метил-гуанозин
с=2'-О-метил-цитозин
Измерения рКа
Если не указано иное, все рКа, упомянутые в настоящем описании, измеряли при стандартной температуре и давлении. Кроме того, если не указано иное, все ссылки на рКа представляют собой ссылки на рКа, измеренные с помощью следующей методики.
2 мМ раствор липидов в этаноле получали с помощью взвешивания липидов и затем растворения их в этаноле. 0,3 мМ раствор флуоресцентного образца TNS в смеси этанол: метанол 9:1 получали с помощью сначала создания 3 мМ раствора TNS в метаноле и затем разбавления до 0,3 мМ этанолом.
Получали водный буфер, содержащий 200 мМ двухосновного фосфата натрия и 100 мМ лимонной кислоты. Буфер разделяли на двенадцать частей и pH доводили или с помощью 12N Hd, или 6N NaOH до 4,21-4,33, 4,86-4,99, 5,23-5,37, 5,46-5,54, 5,65-5,74, 5,82-5,89, 6,09-6,18, 6,21-6,32, 6,45-6,52, 6,66-6,72, 6,83-6,87, 7,19-7,28. 400 мкл 2мМ раствора липидов и 800 мкл 0,3 мМ раствора TNS смешивали.
При использовании устройства с высокой пропускной способностью жидкости Hamilton Microlab Star и управляющего программного обеспечения Hamilton 7,5 мкл образца/смеси липидов добавляли в 242,5 мкл буфера в 1 мл 96-луночный планшет (модель NV^ 260252, Nalgae Nunc International). Это было сделано со всеми двенадцатью буферами.
После перемешивания в 1 мл 96-луночном планшете 100 мкл каждой смеси образец/липид/буфер переносили в 250 мкл черный с прозрачным дном 96-луночный планшет (модель TOSTAR 3904, ^ming).
Измерения флуоресценции проводят на спектрофотометре SpectraMax M5 с использованием программного обеспечения SoftMax pro 5,2 и следующих параметров:
Режим считывания: Флуоресценция, верхнее считывание
Длины волн: Ex 322 нм, Em 431 нм, Auto ditolY On 420 нм
Чувствительность: Считывание 6, ФЭУ: Авто
Автоматическое смешивание: Сначала: Положение "Выключено"
Автоматическая калибровка: Положение "Включено"
Тип исследуемого планшета: 96-луночный стандартный clrbtm
Лунки для считывания: Считывание всего планшета
Время установления: Положение "Выключено"
Колонка Wav. приоритет: приоритет колонки
Скорость каретки: Нормальная
Автосчитывание: Положение "Выключено"
После измерения значение фоновой флуоресценции пустой лунки 96-луночного планшета вычитали из каждого значения для смеси образец/липид/буфер. Значения интенсивности флуоресценции затем нормировали к значению при самом низком pH. Приведенные интенсивности флуоресценции по отношению к значениям pH затем наносили на график в программном обеспечении Microsoft Excel. Двенадцать точек соединяли линией с равномерно распределенными постоянными.
Была обнаружена точка на линии, при которой приведенная интенсивность флуоресценции была равной 0,5. Было обнаружено значение pH, соответствующее приведенной интенсивности флуоресценции, равной 0,5, и считалось рКа липида.
рКа, определенное с помощью данного способа, является точным до приблизительно 0,1 единиц
рКа.
- 101 030650
Измерения индекса полидисперсности (PDI)
Если не указано иное, все PDI, упомянутые в настоящем описании, представляют собой PDI полностью образованной наночастицы, как измерено с помощью метода динамического рассеяния света на Malvern Zetasizer. Образец наночастиц разбавляли в фосфатно-солевом буферном растворе (ФСБ), так что интенсивность представляла собой приблизительно 200-400 кимп. Данные представлены в табл. 4 и 5 как средневзвешенное значение измерения интенсивности.
Размер частиц липидных наночастиц
Если не указано иное, все измерения размеров частиц, указанные в табл. 4 и 5, представляют собой Z-средний размер частицы полностью образованной наночастицы, как измерено с помощью метода динамического рассеяния света на Malvern Zetasizer. Образец наночастиц разбавляли в фосфатно-солевом буферном растворе (ФСБ), так что интенсивность представляет собой приблизительно 200-400 кимп.
Биологические анализы Дозирование фактора VII мышам
Мышей-самок CD-1 получали от Harlan Labs и содержали в стандартных лабораторных условиях без ограничения корма и воды. Животные весили приблизительно 25 г на момент дозирования. Составленный фактор VII киРНК вводили в виде разовой дозы внутривенно через боковую хвостовую вену. Через приблизительно 48 ч после инъекции мышей умерщвляли с помощью ингаляции CO2 с последующим кровоизвлечением через полую вену. Кровь собирали в пробирки, содержащие антикоагулянт 0,105М цитрат натрия, для анализа активности Фактора VII в плазме.
Анализ активности фактора VII
Собранную плазму от инъецированных мышей анализировали на ферментную активность фактора VII с использованием набора Biophen FVII от Hyphen Biomedical (каталожный номер 221304). Градуировочную кривую испытания получали, используя объединенные аликвоты плазмы от контрольных животных, получающих носитель. Все образцы разбавляли, чтобы находиться в пределах линейного диапазона градуировочной кривой и сообщали об активности фактора VII по сравнению с контрольной плазмой.
Липидные наночастицы, содержащие липидные соединения формулы (I) и FVII киРНК двухцепочечную последовательность, перечисленные выше, исследовали в анализе активности фактора VII. Результаты данного анализа приведены в табл. 4 ниже как процентная самая низкая ферментативная активность фактора VII плазмы при дозе 0,3 и 0,03 мг/кг.
Таблица 4. Результаты анализа активности фактора VII с использованием FVTI киРНК липидных наночастиц
Катионный липид формулы (I) Хелперный липид Нейтральный липид Скрытый липид 1Молярное соотношение липидов Размер (нм) PDI 2рКа KD FVII 0,3 мг/кг KD FVII 0,03 мг/кг
Пр. 1 Хол ДСФХ S010 45/44/9/2 87,16 0, 124 5, 59 — 30, 8
Пр. 1 Хол ДСФХ ПЭГ-DMG 45/44/9/2 98,2 0, 05 5, 59 75, 1 —
Пр. 2 Хол ДСФХ S010 45/44/9/2 92,85 0, 067 5, 57 — 55
Пр. 2 Хол ДСФХ ПЭГ-DMG 45/44/9/2 97,4 0, 04 5,46 95, 5 —
Пр. 14 Хол ДСФХ S010 45/44/9/2 81,74 0, 059 6, 11 — —
Пр. 2 6 Хол ДСФХ S010 45/44/9/2 121, 6 0, 046 6, 45 — —
Пр. 2 6 Хол ДСФХ ПЭГ-DMG 45/44/9/2 104,3 0, 04 6, 45 58,1 —
Пр. 31 Хол ДСФХ S010 45/44/9/2 81,16 0, 049 6, 01 — —
Пр. 33 Хол ДСФХ S010 45/44/9/2 79, 15 0, 042 5, 85 — —
Пр. 33 Хол ДСФХ ПЭГ-DMG 45/44/9/2 107,8 0, 06 5, 75 90,4 —
Пр. 34 Хол ДСФХ S010 45/44/9/2 113, 8 0, 036 5, 95 — —
Пр. 34 Хол ДСФХ ПЭГ-DMG 45/44/9/2 126, 0 0, 06 5, 61 0 —
Пр. 3 8 Хол ДСФХ S010 45/44/9/2 120 0, 04 5, 93 — 43, 6
Пр. 3 8 Хол ДСФХ ПЭГ-DMG 45/44/9/2 108,0 0, 02 5, 9 99 —
Пр. 3 9 Хол ДСФХ S010 45/44/9/2 122,9 0, 044 5, 91 — —
- 102 030650
Пр. 4 0 Хол ДСФХ S010 45/44/9/2 94,28 0, 062 6, 17 ___ 8,2
Пр. 4 0 Хол ДСФХ ПЭГ-DMG 45/44/9/2 110, 9 0, 02 6, 17 89, 8 ___
Пр. 41 Хол ДСФХ S010 45/44/9/2 170,7 0, 119 5, 83 ___ ___
Пр. 42 Хол ДСФХ S010 45/44/9/2 120 0,084 5, 93 ___ 92,8
Пр. 4 3 Хол ДСФХ S010 45/44/9/2 121,9 0, 066 5, 85 ___ ___
Пр. 4 3 Хол ДСФХ ПЭГ-DMG 45/44/9/2 157,8 0, 08 5, 85 97,4 ___
Пр. 4 4 Хол ДСФХ S010 45/44/9/2 172,9 0, 077 5, 66 ___ ___
Пр. 4 5 Хол ДСФХ S010 45/44/9/2 102,8 0, 072 5, 57 ___ ___
Пр. 4 6 Хол ДСФХ S010 45/44/9/2 102,4 0, 135 6, 18 ___ ___
Пр. 4 7 Хол ДСФХ S010 45/44/9/2 125, 9 0, 035 6, 07 ___ ___
Пр. 4 7 Хол ДСФХ ПЭГ-DMG 45/44/9/2 109, 3 0,0 6 6, 07 99 ___
Пр. 4 8 Хол ДСФХ S010 45/44/9/2 152,3 0, 105 5, 93 ___ ___
Пр. 4 9 Хол ДСФХ S010 45/44/9/2 111,1 0, 046 5, 99 ___ ___
Пр. 50 Хол ДСФХ S010 45/44/9/2 126 0, 056 5, 92 ___ ___
Пр. 51 Хол ДСФХ S010 45/44/9/2 103,2 0, 052 5, 91 ___ ___
Пр. 52 Хол ДСФХ S010 45/44/9/2 145, 4 0, 052 5, 96 ___ 73,5
Пр. 52 Хол ДСФХ ПЭГ-DMG 45/44/9/2 109, 4 0, 1 5, 96 ___ 72,5
Пр. 53 Хол ДСФХ S010 45/44/9/2 113,3 0, 079 6, 03 ___ ___
Пр. 53 Хол ДСФХ ПЭГ-DMG 45/44/9/2 129, 1 0, 1 5, 84 96, 6 ___
Пр. 55 Хол ДСФХ S010 45/44/9/2 106, 9 0, 043 6, 37 ___ ___
Пр. 55 Хол ДСФХ ПЭГ-DMG 45/44/9/2 101,9 0, 10 6, 03 98,0 ___
Пр. 5 6 Хол ДСФХ S010 45/44/9/2 99, 47 0, 114 5, 93 ___ ___
Пр. 5 6 Хол ДСФХ ПЭГ-DMG 45/44/9/2 110, 1 0, 01 5,71 71,0 —
Пр. 57 Хол ДСФХ S010 45/44/9/2 123, 8 0, 059 5, 94 — —
Пр. 57 Хол ДСФХ ПЭГ-DMG 45/44/9/2 108,4 0, 03 5, 94 96,7 —
Пр. 58 Хол ДСФХ S010 45/44/9/2 138,9 0, 022 5, 9 — 15, 25
Пр. 58 Хол ДСФХ ПЭГ-DMG 45/44/9/2 120, 6 0,06 6, 02 78,1 —
Пр. 59 Хол ДСФХ S010 45/44/9/2 92,56 0, 064 6, 09 — 48,24
Пр. 60 Хол ДСФХ S010 45/44/9/2 95, 55 0, 098 6,21 — 49, 75
Пр. 61 Хол ДСФХ S010 45/44/9/2 81,79 0, 076 5, 82 — 0
Пр. 62 Хол ДСФХ S010 45/44/9/2 102,5 0, 066 5, 9 — 85, 8
Пр. 63 Хол ДСФХ S010 45/44/9/2 91, 66 0, 057 5, 92 — 75
Пр. 69 Хол ДСФХ S010 45/44/9/2 98,13 0, 053 5, 3 — —
Пр. 77 Хол ДСФХ S010 45/44/9/2 154,1 0, 014 6, 09 — —
Пр. 7 8 Хол ДСФХ S010 45/44/9/2 178,2 0, 043 6, 02 — —
Пр. 7 9 Хол ДСФХ S010 45/44/9/2 6,48 — —
Пр. 82 Хол ДСФХ S010 45/44/9/2 119, 2 0, 064 6, 03 — —
Пр. 8 3 Хол ДСФХ S010 45/44/9/2 128,5 0, 005 6, 15 — —
Пр. 8 5 Хол ДСФХ S010 45/44/9/2 5, 72 — —
Пр. 8 6 Хол ДСФХ S010 45/44/9/2 120,3 0, 058 5, 84 — 0
Пр. 8 6 Хол ДСФХ ПЭГ-DMG 45/44/9/2 128,7 0, 05 5, 81 55,3 —
Пр. 8 7 Хол ДСФХ S010 45/44/9/2 159, 2 0, 089 6, 07 — —
103 030650
Пр. 8 8 Хол ДСФХ S010 45/44/9/2 152,4 0, 046 5, 99 — —
Пр. 8 9 Хол ДСФХ S010 45/44/9/2 101,5 0, 076 6, 02 — —
Пр. 90 Хол ДСФХ S010 45/44/9/2 87,54 0, 073 5, 81 — —
Пр. 91 Хол ДСФХ S010 45/44/9/2 111,9 0, 053 6, 01 — —
Пр. 91 Хол ДСФХ ПЭГ-DMG 45/44/9/2 124,3 0, 06 6, 01 99, 0 ___
Пр. 92 Хол ДСФХ S010 45/44/9/2 117,3 0, 065 5, 92 ___ 89, 4
Пр. 93 Хол ДСФХ S010 45/44/9/2 121,5 0, 071 6, 00 ___ 89,71
Пр. 94 Хол ДСФХ S010 45/44/9/2 116, 4 0, 073 6,16 ___ 90
Пр. 9 6 Хол ДСФХ S010 45/44/9/2 197,3 0, 14 5,71 ___ ___
Пр. 97 Хол ДСФХ S010 45/44/9/2 98,01 0, 106 5, 82 ___ ___
Пр. 98 Хол ДСФХ S010 45/44/9/2 164, 6 0, 096 5, 94 ___ ___
Пр. 99 Хол ДСФХ S010 45/44/9/2 96, 61 0, 061 5, 75 ___ ___
Пр. 100 Хол ДСФХ S010 45/44/9/2 105, 9 0, 121 6, 17 ___ 26, 9
Пр. 100 Хол ДСФХ ПЭГ-DMG 45/44/9/2 106, 4 0, 07 5, 69 94,0 ___
Пр. 101 Хол ДСФХ S010 45/44/9/2 ___ ___ 6, 32 ___ ___
Пр. 104 Хол ДСФХ S010 45/44/9/2 ___ ___ 6, 02 ___ ___
Пр. 106 Хол ДСФХ S010 45/44/9/2 149, 3 0, 083 6, 04 ___ ___
Пр. 107 Хол ДСФХ S010 45/44/9/2 191,7 0, 071 6, 11 ___ ___
Пр. 109 Хол ДСФХ S010 45/44/9/2 91,98 0, 09 5, 98 ___ 68,97
Пр. 110 Хол ДСФХ S010 45/44/9/2 183,3 0, 071 5, 66 ___ ___
Пр. 111 Хол ДСФХ S010 45/44/9/2 161,9 0, 048 6, 27 ___ ___
Пр. 112 Хол ДСФХ ПЭГ-DMG 45/44/9/2 96, 1 0, 1 6, 08 — 86
Пр. 113 Хол ДСФХ ПЭГ-DMG 45/44/9/2 87,5 0, 132 6, 03 — 57, 6
Пр. 114 Хол ДСФХ ПЭГ-DMG 45/44/9/2 94,9 0, 1 5, 97 — 44
Пр. 115 Хол ДСФХ ПЭГ-DMG 45/44/9/2 89, 0 0, 1 5, 87 — 78
Пр. 116 Хол ДСФХ ПЭГ-DMG 45/44/9/2 87,5 0, 094 5, 67 — 29
Пр. 117 — — — — — — 5,46 — —
Пр. 118 Хол ДСФХ ПЭГ-DMG 45/44/9/2 84,8 0, 058 5, 67 — 46, 3
Пр. 119 Хол ДСФХ ПЭГ-DMG 45/44/9/2 85, 3 0, 073 5, 84 — 7,8
Пр. 120 Хол ДСФХ ПЭГ-DMG 45/44/9/2 96, 5 0, 056 6, 31 — 83,7
Пр. 121 — — — — — — — —
Пр. 122 — — — — — — 5, 06 — —
Пр. 123 — — — — — — 6, 08 — —
Пр. 124 — — — — — — 7,11 — —
Пр. 125 Хол ДСФХ ПЭГ-DMG 45/44/9/2 194,7 0, 086 5, 75 — —
Пр. 126 Хол ДСФХ ПЭГ-DMG 45/44/9/2 95, 2 0, 075 5, 54 — 31,7
1Порядок типов липидов, как они появляются в молярном соотношении, соответствует порядку, при котором липиды появляются в первых четырех столбцах таблицы.
2рКа относится к рКа катионного липида формулы (I).
Анализ ксенотрансплантата LS411N
Мышам-самкам Nu/Nu (6-8 недель) подкожно имплантировали 5x106 LS411N клетки. Рост опухоли контролировали с помощью измерения штангенциркулем до начала лечения. Мыши, имеющие 150-250 мм3 подкожные опухоли, были рандомизированы и включены в исследование. Составы основной киРНК разбавляли до 0,3 м/мл ФСБ для дозирования. Животные, включенные в различные группы, получали однократную суточную болюсную инъекцию IV 3 мг/кг киРНК в течение трех дней. Опухоли отбирали для исследования через 24 ч после последней инъекции, чтобы оценить регулирование целевого гена с помощью ПЦР в реальном времени (qRT-PCR).
Липидные наночастицы, содержащие липидные соединения формулы (I) и PLK1-424 киРНК двухцепочечную последовательность, перечисленные выше, исследовали в анализе ксенотрансплантата LS411N. Результаты данного анализа приведены в табл. 5 ниже как процентная самая низкая PLK-1 мРНК по сравнению с контролем при введении в виде единичной суточной дозы в течение трех дней при дозе 3 мг/кг.
- 104 030650
Таблица 5. Липидные наночастицы, содержащие PLK1-424 киРНК, и результаты анализа ксенотрансплантата LS411N
Катионный липид Нейтральный липид Хелперный липид Скрытый липид 3Молярное соотношение липидов Размер (нм) PDI 4рКа LS411 KD 3x3 мг/кг
формулы (I)
Пример 1 Хол ДСФХ S010 45/44/9/2 74,56 0, 152 5, 59 —
Пример 2 Хол ДСФХ son 45/44/9/2 88,19 0, 1 5, 57 —
Пример 38 Хол ДСФХ S010 45/44/9/2 116, 8 0, 036 5, 93 60
Пример 38 Хол ДСФХ ПЭГ-DSG 45/44/9/2 116, 8 0, 036 5, 93 58
Пример 39 Хол ДСФХ S010 45/44/9/2 114,3 0, 039 5, 91 55
Пример 42 Хол ДСФХ S010 45/44/9/2 181,1 0, 06 5, 93 50
Пример 43 Хол ДСФХ S010 45/44/9/2 150,7 0, 046 5, 85 40
Пример 52 Хол ДСФХ S010 45/44/9/2 132,2 0, Об 5, 96 50
Пример 52 Хол ДСФХ ПЭГ-DSG 45/44/9/2 132,2 0, 06 5, 96 69
Пример 57 Хол ДСФХ S010 45/44/9/2 116, 3 0, 038 5, 94 60
Пример 63 Хол ДСФХ n3r_DSG 45/44/9/2 108, б 0, 047 5, 9 бб
Пример 91 Хол ДСФХ S010 45/44/9/2 136, 1 0, 032 6, 01 45
3Порядок типов липидов, как они появляются в молярном соотношении, соответствует порядку, при котором липиды появляются в первых четырех столбцах таблицы.
4рКа относится к рКа катионного липида формулы (I).
Исследования иммунизации
Популяцию мышей BALB/c иммунизировали липосомами, содержащими ДСФХ, холестерин и различные липиды по изобретению (или для сравнения катионный липид 1,2-дилинолеилокси-№^-диметил3-аминопропан или "DLinDMA"). Липосомы инкапсулировали 0,1 мкг "vA317" самореплицирующегося репликона РНК, который кодирует F-белок респираторно-синцитиального вируса (см. WO2012/031043). В качестве отрицательного контроля мыши получали 1 мкг "голого" репликона. Дозы давали или в дни 0 & 21, или дни 0 & 42. Иммунные ответы оценивали через 2 недели после каждой дозы (2wp1, 2wp2) и в некоторых случаях также через 4 недели после второй дозы (4wp2). Проводили четыре серии экспериментов, каждый со своим собственным "голым" контролем. Во всех экспериментах сыворотки оценивали в двух пулах, и анти-PCB-F титры показаны в табл. 6 ниже.
Таблица 6. Иммунизационные титры в отношении F-белка РСВ
Катионный липид Формулы (I) Курс 2wpl пул 1 2wpl пул 2 2wp2 пул 1 2wp2 пул 2 4wp2 пул 1 4wp2 пул 2
Голый А 115 264 692 5371 - -
DLinDMA А 819 954 18318 21731 - -
Пример 2 А 217 259 12785 8232 - -
Пример 13 А 495 620 7157 12316 - -
Пример 14 А 1234 2089 44059 45246 - -
Пример 9 А 1832 1352 29707 18788 - -
Голый В 155 48 3264 1440 4747 1954
DLinDMA В 13 4 18290 5538 13936 7020
Пример 12 В 88 128 4550 4828 4787 3972
Голый А 219 255 855 1052 1157 1726
DLinDMA А 4336 6460 19155 19141 26504 28008
Пример 2 6 А 4 4 10 10 10 10
Пример 14 А 3098 3539 12785 14582 13687 18851
Пример 25 А 1217 1883 1611 1156 2850 1767
Голый А 2699 905 5253 5491 4323 5008
DLinDMA Пример 14 Пример 66 Пример 68 Пример 81 А А А А А 4585 1192 75 1031 1779 3390 1206 75 494 1553 60395 34906 75 11315 24648 56229 28736 75 7800 15304 50799 21375 75 12963 41921 35992 21347 75 17734 34684
Пример 2 9 А 2101 3584 12529 18669 23930 37278
Пример 7 0 А 1416 3110 31550 20124 18779 18358
Пример 69 А 2853 4481 23851 20793 19075 21504
Курс: А=дней 0 & 21; В=дней 0 & 42.
- 105 030650
Протокол транскрипции мРНК
Строили кольцевую плазмидную ДНК-матрицу, которая содержала транскрипционную кассету мРНК, состоящую из следующих характерных черт: консенсусного промотора ДНК-зависимой РНКполимеразы бактериофага Т7, 5'-нетранслируемой области (UTR), последовательности Козака и открытой рамки считывания, и 3' UTR, и 120 нуклеотидов длиной полиаденозинового (полиА120) хвоста. Плазмидную ДНК-матрицу репродуцировали в E.coli, выделяли и линеаризовали с помощью расщепления рестрикционными ферментами непосредственно 3' поли 120 хвоста. Плазмидную ДНК объединяли с Т7 РНК-полимеразой, рибонуклеотидными трифосфатами, ингибитором РНазы, ферментом пирофосфатазой, дитиотреитолом, спермидином и ферментным реакционным буфером и инкубировали в течение 1 ч при 37°C. Добавляли фермент ДНКазу I для расщепления плазмидной ДНК-матрицы и инкубировали в течение 0,5 ч при 37°C. мРНК выделяли с помощью последовательного осаждения хлоридом лития, промывания осадка в 70% этаноле, повторного суспендирования осадка мРНК в воде, повторного осаждения изопропанолом и ацетатом натрия и промывания осадка снова в 70% этаноле. Конечный осадок мРНК повторно суспендировали в воде.
Реагент Концентрация Примечания
Вода, свободная от Оставшийся
нуклеаз объем
Трис-НС1 pH 8,0 (мМ) 40
МдС12 (мМ) 20
АТФ, ЦТФ, ГТФ, УТФ (мМ) 4
Псевдоуридин (мМ) 4 Для создания 100% PsU мРНК не включают УТФ в реакцию. Для создания 100%
ДТТ (мМ) 10 немодифицированной мРНК не включают PsU в реакцию
Спермидин (мМ) 2
Линеаризованная 0, 05
плазмидная ДНК (мкг/мкл)
Пирофосфатаза (ед/мкл) 0, 004
Ингибитор РНазы (ед/мкл) 1
Т7 РНК полимераза (ед/мкл) ДНаза I (ед/мкл) 5 0, 04
TEV-h-лептин-GAopt-2xhBG-120A (SEQ ID NO: 5)
Особенности последовательности:
Вирус гравировки табака (ВГТ) 5' UTR: 14-154
Оптимальная последовательность Козака: 155-163
Человеческий лептин, кодирующий аминокислоты 1-167 белка доступа # NP 000221, последовательность кодонов, оптимизированная GeneArt: 164-664 2 стоп-кодона: 665-670 2 копии человеческого бета-глобина 3'UTR: 689-954 120 нуклеотидов полиА хвоста: 961-1080
GGGAGACGCGUGUUAAAUAACAAAUCUCAACACAACAUAUACAAAACAAACGAAUCUC
AAGCAAUCAAGCAUUCUACUUCUAUUGCAGCAAUUUAAAUCAUUUCUUUUAAAGCAAAAGCAA
UUUUCUGAAAAUUUUCACCAUUUACGAACGAUAGCCGCCACCAUGCACUGGGGAACCCUGUGC
- 106 030650
GGAUUCCUGUGGCUGUGGCCCUACCUGUUCUAUGUGCAAGCCGUGCCCAUCCAGAAGGUGCAG
GAC GACAC CAAGAC C CUGAUCAAGAC CAUC GUGAC С C GGAUCAAC GACAUCAGC CACAC C CAG
AGCGUGUCCAGCAAGCAGAAAGUGACCGGCCUGGACUUCAUCCCCGGCCUGCACCCUAUCCUG
ACCCUGUCCAAGAUGGACCAGACCCUGGCCGUGUACCAGCAGAUCCUGACCAGCAUGCCCAGC
CGGAACGUGAUCCAGAUCAGCAACGACCUGGAAAACCUGCGGGACCUGCUGCACGUGCUGGCC
UUCAGCAAGAGCUGCCAUCUGCCUUGGGCCAGCGGCCUGGAAACCCUGGAUUCUCUGGGCGGA
GUGCUGGAAGCCAGCGGCUACUCUACAGAGGUGGUGGCCCUGAGCAGACUGCAGGGCAGCCUG
CAGGAUAUGCUGUGGCAGCUGGAUCUGAGCCCCGGCUGCUAAUAGCGGACCGGCGAUAGAUGA
AGCUCGCUUUCUUGCUGUCCAAUUUCUAUUAAAGGUUCCUUUGUUCCCUAAGUCCAACUACUA
AACUGGGGGAUAUUAUGAAGGGCCUUGAGCAUCUGGAUUCUGCCUAAUAAAAAACAUUUAUUU
UCAUUGCAGCUCGCUUUCUUGCUGUCCAAUUUCUAUUAAAGGUUCCUUUGUUCCCUAAGUCCA
ACUACUAAACUGGGGGAUAUUAUGAAGGGCCUUGAGCAUCUGGAUUCUGCCUAAUAAAAAACA
UUUAUUUUCAUUGCGGCCGCTWWWWWWWWWWkAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAA
AAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAA
AAAAAAAAAAAAAA (SEQ ID N0:5)
Упаковка мРНК
Все оборудование и расходные материалы одноразового применения были удостоверены как не обладающие активностью РНКазы производителем или очищались от РНКазы с помощью использования реагента RNaseZap (LifeTechnologies). мРНК инкапсулировали в катионный липидный амин к мРНК фосфату (N:P) молярное соотношение 4:1. Липиды (катионный липид, ДСФХ, холестерин и липидированный ПЭГ или скрытый липид) растворяли в этаноле. Молярные соотношения представляли собой 40:10:38:2, соответственно. Смесь недолго обрабатывали ультразвуком, затем осторожно перемешивали в течение 5 мин и затем выдерживали при 37°C до использования. мРНК заменяли в цитратном буфере pH 5,8-6,0 с использованием центрифужных концентраторов Amicon Ultra-15, конечную концентрацию доводили до 0,5 мг/мл и выдерживали при 37°C до использования. Равные объемы липидов в этаноле, мРНК в цитратном буфере и отдельно цитратного буфера втягивали в шприцы одноразового применения. Вводные трубки шприцов, содержащих липиды и мРНК, прикрепляли Т-образному разветвлению и вводная трубка шприца, содержащего отдельно цитратный буфер, составляла пару с трубкой, выходящей из Т-образного разветвления через сосуд для сбора, содержащий магнитную мешалку на активной пластине для смешивания. Шприцы помещали в шприцевой насос, установленный, чтобы изгнать содержимое при скорости потока 1 мл/мин.
Насос активировали, и собранные мРНК в липидных наночастицах переносили в диализную трубку SnakeSkin (10000 MWCO, Thermo Scientific). Материал подвергали диализу в отношении РНазы и апирогенного 1 х фосфатно-солевого буферного раствора в течение ночи при 4°C.
Измерение инкапсуляции мРНК
Процент инкапсуляции мРНК в липидных наночастицах определяли с использованием набора Quant-iT Ribogreen RNA Assay (Life Technologies). ЛНЧ-мРНК суспензию анализировали в буфере (мРНК вне частицы) и буфере плюс детергент Тритон Х-100 (общее количество мРНК). Вычисленная разница представляла собой мРНК внутри частицы. 1000 нг/мл основного материала из полученной РНК в наборе получали и использовали для образования градуировочной кривой (0 нг/мл, 15,63-1000 нг/мл) в ТЕ и ТЕ + 0,75% Тритона Х-100. Образцы ЛНЧ-мРНК в ТЕ-буфере и ТЕ-буфере + 0,75% Тритона Х-100 получали с помощью соответствующего разбавления, так что считывание было в диапазоне градуировочной кривой (400-2000-кратное). В 384-луночный планшет (Costar необработанный # 3573) 0,04 мл стандарта (в двух повторностях) или образца (в трех повторностях) добавляли в каждую лунку. Реагент Ribogreen разбавляли в 240 раз буфером ТЕ и добавляли 0,06 мл в лунку. Содержимое лунок смешивали и измеряли флуоресценцию (возбуждение=480 нм, эмиссия=520 нм). Фоновые значения (не РНК) вычитали из значений стандартного и исследуемого образцов и концентрации РНК определяли в образцах, используя градуировочные кривые. Процент инкапсуляции образца определяли с помощью деления разницы в концентрациях между образцом + тритоном и образцом в буфере отдельно на концентрацию образца + тритона.
h-Лептин
Внутривенная инъекция в хвостовую вену мыши модифицированного синтетического лептина мРНК.
Перед инъекцией в хвостовую вену массы тела мышей записывали и взвешивали питание с мышами, сгруппированными в соответствии с их массой тела. Мышей готовили с помощью нагревания их под нагревательной лампой в течение ~2 мин, с мышами приблизительно 12 дюймов от лампы для обогрева.
Для метода проведения инъекции в хвостовую вену мышей помещали в фиксатор и хвосты очищали 70% спиртом. Иглу размера 27 (Becton Dickinson, каталожный # 305109), соединенную с 1 мл шприцом (Becton Dickinson, каталожный # 309659), вставляли в хвостовую вену поверхностью скоса вверх и
- 107 030650
поршень шприца вытаскивали в обратном направлении, чтобы обеспечить попадание крови в шприц. Желаемый объем модифицированного синтетического лептина мРНК вводили вручную с умеренным давлением и скоростью. Иглу затем вынимали, и кровотечение останавливали с помощью надавливания на место инъекции марли.
Расположенных по одному 8-9 недельных мышей-самцов C57BL/6 использовали для исследования in vivo. ЖЭХБ-очищенный модифицированный синтетический лептин мРНК (SEQ ID NO: 5), в котором уридины были замещены псевдоуридинами, упаковывали в катионный липид (N:P молярное соотношение=8:1) и затем разбавляли в инъекционном солевом растворе до дозы 10 мкг на среднюю массу тела группы.
В день 0 животных взвешивали и распределяли в соответствии со средней массой тела. Мышам вводили дозы, и потребление пищи (FI) записывали для каждого из дней 1-7 и дней 9, 11 и 16.
Подкожная инъекция мышам модифицированного синтетического лептина мРНК
До подкожной инъекции массы тела мышей записывали и взвешивали питание с мышами, сгруппированными в соответствии с их массой тела. Мышей зажимали руками и помещали на рабочую поверхность. Их вытаскивали за загривок и поднимали подлежащую мышцу, пространство, в которое вставляли иглу размера 25, соединенную с 1 мл шприцом. Поршень шприца вытаскивали в обратном направлении таким образом, чтобы обеспечить, чтобы жидкость не попала в шприц, и затем желаемый объем лептина мРНК вводили вручную при умеренном давлении и скорости. Иглу затем извлекали и мышей возвращали в их клетки.
8-9 недельных мышей-самцов C57BL/6 использовали для исследования in vivo. ЖЭХБ-очищенный модифицированный синтетический лептин мРНК (SEQ ID NO: 5), в котором уридины были замещены псевдоуридинами (N:P молярное соотношение=8:1), упакованный в несколько катионных липидов, разбавляли в инъекционном солевом растворе до дозы 10 мкг на среднюю массу тела группы.
В день 0 животных взвешивали и распределяли в соответствии со средней массой тела. Мышам вводили дозы в 9 утра и кровь брали в 9 утра в день 0. Кровь также брали в 9 утра в каждый из дней 1 и 2 и оценивали уровни белка лептина. Массу тела и потребление пищи также записывали.
Человеческий лептин в плазме мышей измеряли с помощью ELISA. Антитела, приобретенные в R&D Systems duoset (Cat# DY398E, part# 840279 для иммобилизованного антитела и part# 840280 для детекторного антитела), восстанавливали с помощью ФСБ и титровали, снова используя ФСБ. Иммобилизованное антитело наносили в 4 мкг/мл в 30 мкл/лунка на белый 384-луночный планшет Nunc® Maxisorp (Кат. # 4 60372). После инкубирования в течение ночи при комнатной температуре иммобилизованное антитело отсасывали и планшет блокировали в течение 2 ч при комнатной температуре 90 мкл/лунка KPL молочным блокатором (Кат. # 50-82-00). После завершения инкубирования планшет отсасывали и рекомбинантные стандарты и образцы добавляли в планшет 30 мкл/лунка в течение 2 ч при 37°C при встряхивании при 600 об/мин. Разбавления образца/стандарта проводили с использованием разбавителя образца на основе казеина. Промывание/отсасывание 3 раза 100 мкл/лунка проводили с использованием раствора для промывки планшета Teknova (Кат. # Р1192). Далее, детекторное антитело разбавляли с помощью разбавителя для детекции антител на основе казеина 12,5 нг/мл и добавляли в 30 мкл/лунка в течение 2 ч при комнатной температуре. После данного инкубирования планшет снова промывали и добавляли раствор поли-стрептавидин-HRP (Кат. # 21140) в разведении 1:1250 в HRP буфере для разведения в каждую лунку (30 мкл/лунка) и инкубировали в течение 30 мин при комнатной температуре. Окончательное промывание/отсасывание удаляло раствор HRP, и добавляли хемилюминесцентный субстрат 30 мкл/лунка (Кат. # 1859678 & 1859679). Планшет быстро прочитывали с помощью планшет-ридера SpectramaxM5 со временем интеграции 50 мс. Динамический диапазон ELISA представляет собой от 100 до 2000 пг/мл (6,25-125 рМ) человеческого лептина. Анализ применим к плазме мышей, крыс и макаккрабоедов.______
Номер примера % инкапсуляции Размер (нм) PDI Экспрессия лептина IV- С57В1/6, 24 ч (нг/мл) Экспрессия лептина SC- С57В1/6, 24 ч (нг/мл)
38 90, 9 142,3 0, 083 17,21 0, 99
39 73, 1 156, 0 0, 090 10,47 0,79
43 71,1 176, 0 0, 042 13,56 0, бб
52 95, 1 143, 9 0, 109 21,18 0, 85
57 96, 0 127,8 0, 102 9, 17
59 87,0 134,7 0, 106 8,08 1,16
78 71,1 164,0 0, 150 0, 96
79 91, б 140,5 0,116 1,36 (бч)
85 93, 1 134,8 0, 125 1,78
90 80, 9 164,7 0, 090 0,74
92 72,5 134,2 0, 073 1,34
- 108 030650
Пронумерованные варианты осуществления
Вариант осуществления 1.
Настоящее изобретение предоставляет соединение формулы (I):
где
L представляет собой С1-6алкилен, С2-6алкенилен, С2-6алкинилен, -(CH2)s-C3-7циклоалкилен-(CH2)s-, -(CH2)s-C3-7циклоалкенилен-(CH2)s-, -(CH2)s-C3-7циклоалкинилен-(CH2)s-, *-С1-4алкилен-Ь2-, *-С1-4алкиК ХЬХ S ГН
лен-Ь2-С1.4алкилен-, * u или ^τ'-γγ,'ιι - ,
* обозначает присоединение фрагмента к NR1R2 группе;
L2, присоединенный в любом направлении, представляет собой -O-, -S-, -С(О)-, -С(О)О-, -OC(O)O-, -CONH-, S(O)2NH-, NHCONH-или -NHCSNH-;
каждый s представляет собой независимо 0,1 или 2; каждый t представляет собой независимо 0, 1, 2, 3 или 4; u представляет собой 0, 1, 2, 3, 4, 5 или 6;
R1 и R2 представляют собой каждый независимо необязательно замещенный С1-6алкил, необязательно замещенный С2-6алкенил, необязательно замещенный ^-6алкинил, необязательно замещенный C37циклоалкил- (CH2)s-, необязательно замещенный C3-7циклоалкенил-(CH2)s-, необязательно замещенный C3-7циклоалкинил- (CH2)s- или необязательно замещенный фенил- (CH2)s-; где указанный C1-6алкил, C26алкенил, ^-6алкинил, ^щиклоалкил, ^щиклоалкенил, С3-7циклоалкинил и фенил необязательно замещены одним или двумя заместителями, каждый независимо выбран из группы, состоящей из: QH, C13алкокси, СООН и СОО01-4алкила, или
R 1 и
R2 соединены вместе, образуя необязательно замещенное 4-12-членное гетероциклическое кольцо, причем указанное гетероциклическое кольцо необязательно замещено одним-тремя заместителями, каждый независимо выбран из группы, состоящей из: QH, гало, C1-3алкила, C1-3алкокси, диметиламино, -COO-C1-4алкила, фенила, пиперидинила и морфолинила;
R3 и R4 представляют собой каждый независимо:
(a) -Z1-Ra,
(b) -Z1-Rb-Z2-Ra,
(c) -Z1-Rb-Z2-Rb-Z3-Ra,
(d) -Z1-Rb-Z2-Rb-Z3-Rb-Z4-Ra,
(e) -Rb-Z1-Ra,
(f) -Rb-Z1-Rb-Z2-Ra,
(g) -Rb-Z1-Rb-Z2-Rb-Z3-Ra,
(h) -Rb-Z1-Rb-Z2-Rb-Z3-Rb-Z4-Ra,
(i) -Rc,
(j ) -Z1-Rb-Rc или (k) -Rb-Z1-Rb-Rc;
где Z1, Z2, Z3 и Z4, присоединенные в любом направлении, представляют собой каждый независимо -O-, -C(O)O-, -ОС(О)О- или -CONH-;
Ra представляет собой C2-22алкил, Q-малкенил или С2.22алкинил;
каждый Rb представляет собой независимо C1_20алкилен, С2-20алкенилен или C2-20алкинилен;
Rc представляет собой
- 109 030650
- 110 030650
- 111 030650
R представляет собой С5-22алкил, ^^алкенил или С5-22алкинил; n представляет собой 0-12;
m, p и q представляют собой каждый независимо 0, 1, 2, 3 или 4;
при условии, что цепи (а)-(Ъ.) имеют 12-30 атомов углерода и цепи (i)-(k) имеют 12-70 атомов углерода; 6
X представляет собой CR6 или N и R6 представляет собой Н, гало, ^^алкил или R4; или его фармацевтически приемлемую соль.
Вариант осуществления 2.
Соединение по варианту осуществления 1, в котором X представляет собой CR6; или его фармацевтически приемлемая соль.
Вариант осуществления 3.
Соединение по варианту осуществления 2, в котором R6 представляет собой Н, хлор, бром или C1-3-
алкил,
или его фармацевтически приемлемая соль.
Вариант осуществления 4. Соединение по варианту осуществления 3, в котором R6 представляет собой Н;
или его фармацевтически приемлемая соль.
Вариант осуществления 5. Соединение по варианту осуществления 4, в котором L представляет со...jY
бой С1-6алкилен, *-С1-4алкилен^2-, *-С1-4алкилен^2-С1-4алкилен-, 11 < или
его фармацевтически приемлемая соль.
Вариант осуществления 6. Соединение по варианту осуществления 5, в котором R1 и R2 представляют собой каждый независимо необязательно замещенный б^алкил или R1 и R2 соединены вместе, образуя необязательно замещенное 4-7-членное гетероциклическое кольцо; или его фармацевтически приемлемая соль.
Вариант осуществления 7. Соединение по варианту осуществления 6, в котором L представляет собой метилен, этилен, или пропилен, или L представляет собой *-С1-3алкилен-O-С (О) -, или L представляет собой *-С1-4алкилен^2-С1-2алкилен, где L2, присоединенный в любом направлении, представляет собой С(О)О или ОС(О)О; или его фармацевтически приемлемая соль.
Вариант осуществления 8. Соединение по варианту осуществления 7, в котором R1 и R2 представляют собой каждый независимо необязательно замещенный метил или необязательно замещенный этил; или его фармацевтически приемлемая соль.
Вариант осуществления 9. Соединение по варианту осуществления 4, в котором L-NR1R2-группу формулы (I) выбирают из группы, состоящей из
- 112 030650
- 113 030650
/ л О о ν' ζ °γ° °Α \ N—0 Α Ο 'ο г
л ΗΝ^ ο -4 '-Η ) 0 у и
где пунктирная линия указывает на точку присоединения к формуле (I); или его фармацевтически приемлемая соль.
Вариант осуществления 10. Соединение по варианту осуществления 9, в котором R3 и R4 представляют собой каждый независимо:
(a) -Z1Ra,
(b) -Z1-Rb-Z2-Ra,
(c) -Z1-Rb-Z2-Rb-Z3-Ra,
(e) -Rb-Z1-Ra,
(f) -Rb-Z1-Rb-Z2-Ra,
(g) -Rb-Z1-Rb-Z2-Rb-Z3-Ra, (i) -Rc или (j) -Z1-Rb-Rc;
или его фармацевтически приемлемая соль.
Вариант осуществления 11. Соединение по варианту осуществления 10, в котором R3 и R4 представляют собой каждый независимо:
(a) -ZxRa,
(b) -Zx-Rb-Z2-Ra или (f) -Rb-Zx-Rb-Z2-Ra;
или его фармацевтически приемлемая соль.
Вариант осуществления 12. Соединение по варианту осуществления 11, в котором R3 и R4 представляют собой каждый независимо (b) -Zx-Rb-Z2-Ra; или его фармацевтически приемлемая соль.
Вариант осуществления 13. Соединение по варианту осуществления 12, в котором Z1 представляет собой -О-; Rb представляет собой ^щалкилен; Z2 представляет собой -ОС(О)-; и Ra представляет собой С5-18алкил или C0 идачкенил, содержащий от одной до трех двойных связей; или его фармацевтически приемлемая соль.
Вариант осуществления 14. Соединение по варианту осуществления 10, в котором R3 и R4 представляют собой каждый независимо (i) -Rc; Rc представляет собой c1 или с3; n представляет собой 1 или 2; m представляет собой 0 или 1 и p представляет собой 1; или его фармацевтически приемлемая соль.
Вариант осуществления 15. Соединение по любому из вариантов осуществления 1-14, в котором R4=R3; или его фармацевтически приемлемая соль.
Вариант осуществления 16. Соединение по варианту осуществления 1, имеющее следующую формулу:
или его фармацевтически приемлемая соль.
Вариант осуществления 17. Соединение по варианту осуществления 1, имеющее следующую формулу:
- 114 030650
или его фармацевтически приемлемая соль.
Вариант осуществления 18. Липидная композиция, содержащая соединение по любому из вариантов осуществления 1-17 или его фармацевтически приемлемую соль.
Вариант осуществления 19. Липидная композиция по варианту осуществления 18, дополнительно содержащая биологически активный агент.
Вариант осуществления 20. Липидная композиция по варианту осуществления 19, в которой биологически активный агент представляет собой киРНК.
Вариант осуществления 21. Липидная композиция по варианту осуществления 20, дополнительно
Липидная композиция по варианту осуществления 21, дополнительно
Липидная композиция по варианту осуществления 22, дополнительно
содержащая хелперный липид.
Вариант осуществления 22. содержащая нейтральный липид.
Вариант осуществления 23. содержащая скрытый липид.
Вариант осуществления 24. Липидная композиция по варианту осуществления 23, в которой хелперный липид представляет собой холестерин, нейтральный липид представляет собой ДСФХ и скрытый липид представляет собой ПЭГ-DMG, S010 или S011.
Вариант осуществления 25. Липидная композиция по варианту осуществления 24 в форме липидной наночастицы.
Вариант осуществления 26. Липидная композиция по варианту осуществления 25, имеющая молярное соотношение приблизительно 44/приблизительно 45/приблизительно 9/приблизительно 2 соединения формулы (1)/холестерина/ДСФХО10 или S011.
Вариант осуществления 27. Фармацевтическая композиция, содержащая липидную композицию по любому из вариантов осуществления 19-26 и фармацевтически приемлемый носитель или эксципиент.
Вариант осуществления 28. Способ лечения заболевания или состояния, включающий стадию введения терапевтически эффективного количества липидной композиции по любому из вариантов осуществления 19-26 пациенту, нуждающемуся в таком лечении.
Вариант осуществления 29. Способ лечения заболевания или состояния, включающий стадию введения терапевтически эффективного количества фармацевтической композиции по варианту осуществления 27.
Вариант осуществления 30. Липидная композиция по варианту осуществления 19, в которой биологически активный агент представляет собой мРНК.
Вариант осуществления 31. Липидная композиция по варианту осуществления 30, дополнительно содержащая хелперный липид.
Вариант осуществления 32. содержащая нейтральный липид.
Вариант осуществления 33. содержащая скрытый липид.
Вариант осуществления 34. Липидная композиция по варианту осуществления 33, в которой хелперный липид представляет собой холестерин, нейтральный липид представляет собой ДСФХ и скрытый липид представляет собой ПЭГ-DMG, S010, S011 или S024.
Вариант осуществления 35. Липидная композиция по варианту осуществления 34 в форме липидной наночастицы.
Вариант осуществления 36. Липидная композиция по варианту осуществления 35, имеющая молярное соотношение приблизительно 40/приблизительно 38/приблизительно 10/приблизительно 2 соединения формулы (1)/холестерина/ДСФХО10, S011 или S024 соответственно.
Вариант осуществления 37. Фармацевтическая композиция, содержащая липидную композицию по любому из вариантов осуществления 30-36 и фармацевтически приемлемый носитель или эксципиент.
Вариант осуществления 38. Способ лечения заболевания или состояния, включающий стадию введения терапевтически эффективного количества липидной композиции по любому из вариантов осуществления 30-36 пациенту, нуждающемуся в таком лечении.
Вариант осуществления 39. Способ лечения заболевания или состояния, включающий стадию введения терапевтически эффективного количества фармацевтической композиции по варианту осуществления 37.
Вариант осуществления 40. Соединение по варианту осуществления 11, в котором R3 и R4 представляют собой каждый независимо (a) -Z1-Ra, в которой Z1 представляет собой -O-, ОСО- или -CONH- и Ra представляет собой С12-18алкенил, содержащий от одной до трех двойных связей; или его фармацевтически приемлемая соль.
Липидная композиция по варианту осуществления 31, дополнительно Липидная композиция по варианту осуществления 32, дополнительно
- 115 030650
Вариант осуществления 41. Соединение по варианту осуществления 13, в котором R1 и R2 представляют собой оба метил и L представляет собой метилен; или его фармацевтически приемлемая соль.
Вариант 42. Соединение по варианту осуществления 41, в котором R3 и R4 равны; Rb представляет собой ^^алкилен и Ra представляет собой С16-18алкенил, содержащий две двойные связи; или его фармацевтически приемлемая соль.
Вариант осуществления 43. Соединение по варианту осуществления 41, в котором R3 и R4 равны; Rb представляет собой ^^алкилен и Ra представляет собой С7-цалкил; или его фармацевтически приемлемая соль.
Вариант осуществления 44. Соединение по вариантам осуществления 10 и 11, в котором Ra представляет собой С2-22алкил или С2-22алкенил; или его фармацевтически приемлемая соль.
Вариант осуществления 45. Соединение по варианту осуществления 44, в котором R3 и R4 представляют собой каждый независимо: (a) -Z1-Ra, в которой Ra представляет собой ^^алкенил; или его фармацевтически приемлемая соль.
Вариант осуществления 46. Соединение по варианту осуществления 45, в котором R3 и R4 представляют собой каждый независимо: (a) -Z1-Ra, в которой Ra представляет собой ^^алкенил; или его фармацевтически приемлемая соль.

Claims (38)

ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ
1. Соединение формулы (I)
где L представляет
* X ^'S % Ху^
S'-Ο ί-|_Τπ г А-г/ \
собой ^^алкилен, *-С1-4алкилен^2-, *-С1-4алкилен^2-С1-4алкилен-,
где * обозначает присоединение фрагмента к NR1R2 группе;
L2, присоединенный в любом направлении, представляет собой -C(O)O-, -ОС(О)О- или -CONH-; каждый s представляет собой независимо 0, 1 или 2; каждый t представляет собой независимо 0, 1, 2, 3 или 4; u представляет собой 0, 1, 2, 3, 4, 5 или 6;
R1 и R2 представляют собой, каждый независимо, необязательно замещенный О^алкил; где указанный О^алкил необязательно замещен одним или двумя заместителями, каждый независимо выбран из группы, состоящей из ОН, СООН и СОО-С1-4алкила, или
R1 и R2 соединены вместе, образуя необязательно замещенное 4-7-членное гетероциклическое кольцо, содержащее 1-2 гетероатома, выбранные из N и О, причем указанное гетероциклическое кольцо необязательно замещено одним-тремя заместителями, каждый независимо выбран из группы, состоящей из ОН;
R3 и R4 представляют собой, каждый независимо, цепь (b): -Z1-Rb-Z2-Ra, где Z1 и Z2, присоединенные в любом направлении, представляют собой, каждый независимо, -О-, -С(О)О-, -ОС(О)О- или -CONH-;
Ra представляет собой ^^алкил, ^^алкенил или ^^алкинил;
каждый Rb представляет собой независимо ^^алкилен, ^^алкенилен или ^^ал^нилен; при условии, что цепь (b) имеет 12-30 атомов углерода;
X представляет собой CR6 или N;
R6 представляет собой Н, гало, Cl-6алкил или R4; или его фармацевтически приемлемая соль.
2. Соединение по п.1, в котором X представляет собой CR6; или его фармацевтически приемлемая
соль.
3. Соединение по п.2, в котором R6 представляет собой Н, хлор, бром или Ci-залкил, или его фармацевтически приемлемая соль.
4. Соединение по п.3, в котором R6 представляет собой Н; или его фармацевтически приемлемая
соль.
((5-(((4-(диметиламино)бутаноил)окси)метил)-1,3-фенилен)бис(окси))бис(октан-8,1-диил)бис(деканоат);
или его фармацевтически приемлемая соль.
((5-(((3-(диметиламино)пропаноил)окси)метил)-1,3-фенилен)бис(окси))бис(октан-8,1-диил)бис(деканоат);
((5-((диметиламино)метил)-1,3-фенилен)бис(окси))бис(бутан-4,1 -диил)бис(7-гексилтридеканоат); ((5-((диметиламино)метил)-1,3-фенилен)бис(окси))бис(бутан-4,1-диил)бис(9-пентилтетрадеканоат); ((5-((диметиламино)метил)-1,3-фенилен)бис(окси))бис(бутан-4,1-диил)бис(5-гептилдодеканоат); ((5-((диметиламино)метил)-1,3-фенилен)бис(окси))бис(бутан-4,1 -диил)бис(3 -октилундеканоат); (9Z,9'Z,12Z,12'Z)-((5-(3 -(пиперидин-1 -ил)пропил)-1,3-фенилен)бис(окси))бис(бутан-4,1 -ди- 120 030650
ил)бис(октадека-9,12-диеноат);
(9Z,9'Z,12Z,12'Z)-((5-(3-(диметиламино)пропил)-1,3-фенилен)бис(окси))бис(бутан-4,1-диил)бис(октадека-9,12-диеноат);
(9Z,9'Z,12Z,12'Z)-((5-(3-морфолинопропил)-1,3-фенилен)бис(окси))бис(бутан-4,1-диил)бис(октадека-9,12-диеноат);
((5-((диэтиламино)метил)бензол-1,2,3-триил)трис(окси))трис(декан-10,1-диил)триоктаноат;
(9Z,12Z)-4-(3-((диметиламино)метил)-5-(4-((Z)-додец-8-еноилокси)бутокси)фенокси)бутилоктадека9,12-диеноат;
(9Z,12Z)-4-(3-((диметиламино)метил)-5-(4-((3-октилундеканоил)окси)бутокси)фенокси)бутилоктадека-9,12-диеноат;
(9Z,9'Z,12Z,12'Z)-((5-(пирролидин-1-илметил)-1,3-фенилен)бис(окси))бис(бутан-4,1-диил)бис(октадека-9,12-диеноат);
((5-((диметиламино)метил)бензол-1,2,3-триил)трис(окси))трис(декан-10,1-диил)триоктаноат;
((5-((диметиламино)метил)-1,3-фенилен)бис(окси))бис(пропан-3,1-диил)бис(3-октилундеканоат); дидецил-8,8'-((5-((диметиламино)метил)-1,3-фенилен)бис(окси))диоктаноат; ((5-((диметиламино)метил)-1,3-фенилен)бис(окси))бис(гексан-6,1 -диил)дидодеканоат; ^)-((5-((диметиламино)метил)-1,3-фенилен)бис(окси))бис(бутан-4,1-диил)диолеат; ((5-((диметиламино)метил)-1,3-фенилен)бис(окси))бис(бутан-4,1 -диил)дитетрадеканоат; (9Z,9'Z,12Z,12'Z,15Z,15'Z)-((5-((диметиламино)метил)-1,3-фенилен)бис(окси))бис(бутан-4,1-диил)бис(октадека-9, 12, 15-триеноат);
(9Z,12Z)-4-(3-((диметиламино)метил)-5-(4-(олеоилокси)бутокси)фенокси)бутилоктадека-9,12-диеноат;
(9Z,12Z,15Z)-4-(3-((диметиламино)метил)-5-(4-((9Z,12Z)-октадека-9,12-диеноилокси)бутокси)фенокси)бутилоктадека-9,12,15-триеноат;
ди((9Z,12Z)-октадека-9,12-диен-1-ил)-5,5'-((5-((диметиламино)метил)-1,3-фенилен)бис(окси))дипентаноат;
дидодецил-6,6'-((5-((диметиламино)метил)-1,3-фенилен)бис(окси))дигексаноат;
(9Z,12Z)-3-(3-((диметиламино)метил)-5-(3-((3-октилундеканоил)окси)пропокси)фенокси)пропилоктадека-9,12-диеноат;
((5-((диметиламино)метил)-1,3-фенилен)бис(окси))бис(октан-8,1-диил)бис(деканоат); ((5-((диметиламино)метил)-1,3-фенилен)бис(окси))бис(октан-8,1 -диил)дидодеканоат; (9Z,9'Z,12Z,12'Z)-((5-((диэтиламино)метил)-2-метил-1,3-фенилен)бис(окси))бис(бутан-4,1диил)бис(октадека-9,12-диеноат);
((5-((диметиламино)метил)-1,3-фенилен)бис(окси))бис(гексан-6,1-диил)бис(деканоат); ((5-((диметиламино)метил)-1,3-фенилен)бис(окси))бис(гексан-6,1 -диил)диоктаноат; (9Z,9'Z,12Z,12'Z)-((5-((3 -гидроксиазетидин-1-ил)метил)-1,3-фенилен)бис(окси))бис(бутан-4,1 -диил)бис(октадека-9,12-диеноат);
((5-((диметиламино)метил)-1,3-фенилен)бис(окси))бис(октан-8,1 -диил)дигексаноат; ((5-((диметиламино)метил)-1,3-фенилен)бис(окси))бис(октан-8,1 -диил)диоктаноат; ((5-((диметиламино)метил)-1,3-фенилен)бис(окси))бис(декан-10,1-диил)диоктаноат; ((5-((диметиламино)метил)-1,3-фенилен)бис(окси))бис(декан-10,1-диил)дигексаноат; (9Z,9'Z,12Z,12'Z)-((5-((диметиламино)метил)-1,3-фенилен)бис(окси))бис(гексан-6,1-диил)бис(октадека-9,12-диеноат);
(9Z,9'Z,12Z,12'Z)-((5-((диметиламино)метил)-1,3-фенилен)бис(окси))бис(октан-8,1-диил)бис(октадека-9,12-диеноат);
5. Соединение по п.4, в котором
L представляет собой метилен, этилен или пропилен, или
L представляет собой *-С1-3алкилен-О-С(О)-, или
L представляет собой *-С1-4алкилен^2-С1-2алкилен, где L2, присоединенный в любом направлении, представляет собой С(О)О или ОС(О)О;
или его фармацевтически приемлемая соль.
- 116 030650
6. Соединение по п.5. в котором R1 и R2 представляют собой. каждый независимо. метил или этил. необязательно замещенный одним или двумя заместителями. каждый независимо выбран из группы. состоящей из ОН. СООН и СОО-С1-4алкила; или его фармацевтически приемлемая соль.
7. Соединение по п.4. в котором L-NR1R2-группу формулы (I) выбирают из группы. состоящей из:
Структура Структура Структура ) и ) е но он ^1\Г \ ,...... у у УМ У к V у Z ν г1 °ку° ... у 'У' °т° с но 0 "У ) ! У γ У )
- 117 030650
/ V А ^NH О °γ° А ОН А V А / А °ч о V 1 А' V V У А А ΗΝ^ °γ° А О 0 и
где пунктирная линия указывает на точку присоединения к формуле (I); или его фармацевтически приемлемая соль.
(^,8^)-((5-((диметиламино)метил)-1,3-фенилен)бис(окси))бис(гексан-6,1-диил)бис(додец-8-еноат);
(9Z,9'Z,12Z,12'Z)-((5-((диметиламино)метил)-2-метил-1,3-фенилен)бис(окси))бис(бутан-4,1-диил)бис(октадека-9,12-диеноат);
8. Соединение по п.7, в котором Z1 представляет собой -O-; Rb представляет собой Cl-l0алкилен; Z2 представляет собой -ОС(О)- и Ra представляет собой С5-18алкил или ^^алкенил, содержащий от одной до трех двойных связей; или его фармацевтически приемлемая соль.
9. Соединение по п.8, в котором R1 и R2 представляют собой, оба, метил и L представляет собой метилен; или его фармацевтически приемлемая соль.
10. Соединение по п.9, в котором R3 и R4 равны; Rb представляет собой ^^алкилен и Ra представляет собой ^^алкенил, содержащий две двойные связи; или его фармацевтически приемлемая соль.
11. Соединение по п.9, в котором R3 и R4 равны; Rb представляет собой ^^алкилен и Ra представляет собой С7-цалкил; или его фармацевтически приемлемая соль.
12. Соединение по любому из пп.1-9, в котором R4=R3; или его фармацевтически приемлемая соль.
13. Соединение по п.1, которое представляет собой ((5-((диметиламино)метил)-1,3фенилен)бис(окси))бис(октан-8,1-диил)бис(деканоат), имеющее следующую формулу:
или его фармацевтически приемлемая соль.
14. Соединение по п.1, которое представляет собой (9Z,9'Z,12Z,12'Z)-((5-((диметиламино)метил)1,3-фенилен)бис(окси))бис(бутан-4,1-диил)бис(октадека-9,12-диеноат), имеющее следующую формулу:
- 118 030650
или его фармацевтически приемлемая соль.
15. Липидная композиция, содержащая соединение по любому из пп.1-14 или его фармацевтически приемлемую соль.
16. Липидная композиция по п.15, дополнительно содержащая биологически активный агент.
17. Липидная композиция по п.16, в которой биологически активный агент представляет собой киРНК,.
18. Липидная композиция по п.17, дополнительно содержащая хелперный липид.
19. Липидная композиция по п.18, дополнительно содержащая нейтральный липид.
20. Липидная композиция по п.19, дополнительно содержащая скрытый липид.
21. Липидная композиция по п.20, в которой хелперный липид представляет собой холестерин, нейтральный липид представляет собой ДСФХ и скрытый липид представляет собой ПЭГ-DMG, S010 или S011.
22. Липидная композиция по п.21 в форме липидной наночастицы.
23. Липидная композиция по п.22, имеющая молярное соотношение 45/44/9/2 соединения формулы (1)/холестерина/ДСФХ^010 или S011 соответственно.
24. Фармацевтическая композиция, содержащая липидную композицию по любому из пп.16-23 и фармацевтически приемлемый носитель или эксципиент.
25. Способ лечения заболевания или состояния, включающий стадию введения терапевтически эффективного количества липидной композиции по любому из пп.16-23 пациенту, нуждающемуся в таком лечении.
26. Способ лечения заболевания или состояния, включающий стадию введения терапевтически эффективного количества фармацевтической композиции по п.24.
27. Липидная композиция по п.16, в которой биологически активный агент представляет собой мРНК.
28. Липидная композиция по п.27, дополнительно содержащая хелперный липид.
29. Липидная композиция по п.28, дополнительно содержащая нейтральный липид.
30. Липидная композиция по п.29, дополнительно содержащая скрытый липид.
31. Липидная композиция по п.30, в которой хелперный липид представляет собой холестерин, нейтральный липид представляет собой ДСФХ и скрытый липид представляет собой ПЭГ-DMG, S010, S011 или S024.
32. Липидная композиция по п.31 в форме липидной наночастицы.
33. Липидная композиция по п.32, имеющая молярное соотношение 40/38/10/2 соединения формулы (1)/холестерина/ДСФХО10, S011 или S024 соответственно.
34. Фармацевтическая композиция, содержащая липидную композицию по любому из пп.27-33 и фармацевтически приемлемый носитель или эксципиент.
35. Способ лечения одного или нескольких заболеваний из: пролиферативного заболевания, рака, воспалительного заболевания, отторжения трансплантата, отторжения ткани, аутоиммунного заболевания, связанного с возрастом заболевания, неврологического заболевания, нейродегенеративного заболевания, респираторного заболевания, сердечно-сосудистого заболевания, глазного заболевания, метаболического заболевания, дерматологического заболевания, слухового заболевания, заболевания печени, заболевания почек или почечной недостаточности, включающий стадию введения терапевтически эффективного количества липидной композиции по любому из пп.27-33 пациенту, нуждающемуся в таком лечении.
36. Способ лечения одного или нескольких заболеваний из: пролиферативного заболевания, рака, воспалительного заболевания, отторжения трансплантата, отторжения ткани, аутоиммунного заболевания, связанного с возрастом заболевания, неврологического заболевания, нейродегенеративного заболевания, респираторного заболевания, сердечно-сосудистого заболевания, глазного заболевания, метаболического заболевания, дерматологического заболевания, слухового заболевания, заболевания печени, заболевания почек или почечной недостаточности, включающий стадию введения терапевтически эффективного количества фармацевтической композиции по п.34.
37. Соединение по п.1, которое представляет собой
(9Z,9'Z,12Z,12'Z)-((5-(((3-(диметиламино)пропаноил)окси)метил)-1,3-фенилен)бис(окси))бис(этан2,1-диил)бис(октадека-9,12-диеноат);
(9Z,9'Z,12Z,12'Z)-((5-(((3-(диметиламино)пропаноил)окси)метил)-1,3-фенилен)бис(окси))бис(пропан-3,1-диил)бис(октадека-9,12-диеноат);
- 119 030650
(9Z,9'Z,12Z,12'Z)-((5-((2-(диметиламино)ацетокси)метил)-1,3-фенилен)бис(окси))бис(пропан-3,1диил)бис(октадека-9,12-диеноат);
(9Z,9'Z,12Z,12'Z)-((5-((2-(диметиламино)ацетокси)метил)-1,3-фенилен)бис(окси))бис(бутан-4,1диил)бис(октадека-9,12-диеноат);
(9Z,9'Z,12Z,12'Z)-((5-(((3-(диметиламино)пропаноил)окси)метил)-1,3-фенилен)бис(окси))бис(бутан4.1- диил)бис(октадека-9,12-диеноат);
(9Z,9'Z,12Z,12'Z)-((5-(((4-(диметиламино)бутаноил)окси)метил)-1,3-фенилен)бис(окси))бис(этан2.1- диил)бис(октадека-9,12-диеноат);
(9Z,9'Z,12Z,12'Z)-((5-((диметиламино)метил)-1,3-фенилен)бис(окси))бис(бутан-4,1-диил)бис(октадека-9,12-диеноат);
(9Z,9'Z,12Z,12'Z)-((5-((диметиламино)метил)-1,3-фенилен)бис(окси))бис(пропан-3,1-диил)бис(октадека-9,12-диеноат);
(9Z,9'Z,12Z,12'Z)-((5-((диметиламино)метил)-1,3-фенилен)бис(окси))бис(этан-2,1-диил)бис(октадека-9,12-диеноат);
38. Липидная композиция по п.22, имеющая молярное соотношение 55-40/55-40/15-5/10-1 соединения формулы (Г)/холестерина/ДСФХО10 или S011 соответственно.
О
EA201591662A 2013-03-08 2014-03-06 Липиды и липидные композиции для доставки активных агентов EA030650B1 (ru)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201361774759P 2013-03-08 2013-03-08
US201361918162P 2013-12-19 2013-12-19
PCT/IB2014/059503 WO2014136086A1 (en) 2013-03-08 2014-03-06 Lipids and lipid compositions for the delivery of active agents

Publications (2)

Publication Number Publication Date
EA201591662A1 EA201591662A1 (ru) 2016-02-29
EA030650B1 true EA030650B1 (ru) 2018-09-28

Family

ID=50391230

Family Applications (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
EA201591662A EA030650B1 (ru) 2013-03-08 2014-03-06 Липиды и липидные композиции для доставки активных агентов
EA201891018A EA201891018A1 (ru) 2013-03-08 2014-03-06 Липиды и липидные композиции для доставки активных агентов

Family Applications After (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
EA201891018A EA201891018A1 (ru) 2013-03-08 2014-03-06 Липиды и липидные композиции для доставки активных агентов

Country Status (13)

Country Link
US (2) US10124065B2 (ru)
EP (2) EP2964608B1 (ru)
JP (2) JP6352950B2 (ru)
KR (1) KR102255108B1 (ru)
CN (2) CN105164102B (ru)
AU (2) AU2014224205C1 (ru)
BR (1) BR112015021791B1 (ru)
CA (1) CA2904184C (ru)
EA (2) EA030650B1 (ru)
ES (1) ES2887254T3 (ru)
MX (1) MX2015011955A (ru)
TW (1) TW201442999A (ru)
WO (1) WO2014136086A1 (ru)

Families Citing this family (121)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN105164102B (zh) * 2013-03-08 2017-12-15 诺华股份有限公司 用于传递活性成分的脂质和脂质组合物
WO2015051366A2 (en) 2013-10-04 2015-04-09 Novartis Ag Novel formats for organic compounds for use in rna interference
KR102298475B1 (ko) 2013-10-04 2021-09-06 노파르티스 아게 ＲＮＡ 간섭에 사용하기 위한 ＲＮＡｉ 작용제를 위한 3' 말단 캡
US10519446B2 (en) 2013-10-04 2019-12-31 Novartis Ag Organic compounds to treat hepatitis B virus
US20160367638A1 (en) * 2013-12-19 2016-12-22 Crystal BYERS LEPTIN mRNA COMPOSITIONS AND FORMULATIONS
CA3177878A1 (en) 2014-04-23 2015-10-29 Modernatx, Inc. Nucleic acid vaccines
EP3169309B1 (en) * 2014-07-16 2023-05-10 Novartis AG Method of encapsulating a nucleic acid in a lipid nanoparticle host
EP3200792A4 (en) * 2014-10-03 2018-05-09 The Institute for Cancer Research d/b/a The Research Institute of Fox Chase Cancer Center Poly (adp-ribose) polymerase 1 inhibitors structurally unrelated to nad
US10264976B2 (en) 2014-12-26 2019-04-23 The University Of Akron Biocompatible flavonoid compounds for organelle and cell imaging
US20180002702A1 (en) 2014-12-26 2018-01-04 Nitto Denko Corporation Methods and compositions for treating malignant tumors associated with kras mutation
US10792299B2 (en) 2014-12-26 2020-10-06 Nitto Denko Corporation Methods and compositions for treating malignant tumors associated with kras mutation
TW201718638A (zh) 2015-07-21 2017-06-01 現代治療公司 傳染病疫苗
US10822357B2 (en) 2015-08-28 2020-11-03 Sekisui Medical Co., Ltd. Benzyl compound
GB201518172D0 (en) * 2015-10-14 2015-11-25 Cantab Biopharmaceuticals Patents Ltd Colloidal particles for use in medicine
EP3718565B1 (en) 2015-10-22 2022-04-27 ModernaTX, Inc. Respiratory virus vaccines
EP3364980A4 (en) * 2015-10-22 2019-07-10 ModernaTX, Inc. NUCLEIC ACID VACCINES AGAINST VARICELLA-ZONA VIRUS (VZV)
KR20180103923A (ko) 2015-12-28 2018-09-19 노파르티스 아게 혈색소병증의 치료를 위한 조성물 및 방법
CA3018978A1 (en) * 2016-03-30 2017-10-05 Intellia Therapeutics, Inc. Lipid nanoparticle formulations for crispr/cas components
WO2017185054A1 (en) 2016-04-22 2017-10-26 Intellia Therapeutics, Inc. Compositions and methods for treatment of diseases associated with trinucleotide repeats in transcription factor four
AU2017268399B2 (en) 2016-05-18 2023-01-12 Modernatx, Inc. mRNA combination therapy for the treatment of cancer
CA3024470A1 (en) 2016-05-18 2017-11-23 Modernatx, Inc. Polynucleotides encoding interleukin-12 (il12) and uses thereof
US10967057B2 (en) 2016-06-02 2021-04-06 Glaxosmithkline Biologicals S.A. Zika viral antigen constructs
US11878060B2 (en) 2016-08-07 2024-01-23 Novartis Ag mRNA-mediated immunization methods
BE1024774B1 (fr) 2016-09-29 2018-07-02 Glaxosmithkline Biologicals Sa Compositions et procedes de traitement
GB201616904D0 (en) 2016-10-05 2016-11-16 Glaxosmithkline Biologicals Sa Vaccine
BE1025121B1 (fr) 2016-11-17 2018-11-05 Glaxosmithkline Biologicals Sa Constructions antigeniques du virus zika
CN110198707A (zh) * 2016-11-28 2019-09-03 赛力克斯生物私人有限公司 用于治疗口腔感染性疾病的组合物和方法
AU2017385977B2 (en) * 2016-12-26 2022-03-17 Cellix Bio Private Limited Compositions and methods for the treatment of chronic pain
TW201839136A (zh) 2017-02-06 2018-11-01 瑞士商諾華公司 治療血色素異常症之組合物及方法
WO2018170260A1 (en) 2017-03-15 2018-09-20 Modernatx, Inc. Respiratory syncytial virus vaccine
US11576961B2 (en) 2017-03-15 2023-02-14 Modernatx, Inc. Broad spectrum influenza virus vaccine
US11905525B2 (en) 2017-04-05 2024-02-20 Modernatx, Inc. Reduction of elimination of immune responses to non-intravenous, e.g., subcutaneously administered therapeutic proteins
EP3461497A1 (en) 2017-09-27 2019-04-03 GlaxoSmithKline Biologicals S.A. Viral antigens
WO2019067999A1 (en) 2017-09-29 2019-04-04 Intellia Therapeutics, Inc. IN VITRO METHOD OF ADMINISTERING MRNA USING LIPID NANOPARTICLES
CN111405912A (zh) 2017-09-29 2020-07-10 因特利亚治疗公司 用于基因组编辑的多核苷酸、组合物及方法
AR113031A1 (es) 2017-09-29 2020-01-15 Intellia Therapeutics Inc Composiciones de nanopartículas lipídicas (lnp) que comprende arn
CA3077251A1 (en) 2017-09-29 2019-04-04 Intellia Therapeutics, Inc. Compositions and methods for ttr gene editing and treating attr amyloidosis
MA54676A (fr) 2018-01-29 2021-11-17 Modernatx Inc Vaccins à base d'arn contre le vrs
CA3109165A1 (en) 2018-08-17 2020-02-20 Glaxosmithkline Biologicals Sa Immunogenic compositions and uses thereof
KR20210093871A (ko) 2018-10-02 2021-07-28 인텔리아 테라퓨틱스, 인크. 이온화 가능한 아민 지질
CA3116132A1 (en) 2018-10-16 2020-04-23 Intellia Therapeutics, Inc. Compositions and methods for immunotherapy
JP2022505381A (ja) 2018-10-18 2022-01-14 インテリア セラピューティクス，インコーポレーテッド アルファ１アンチトリプシン欠乏症を治療するための組成物及び方法
CA3116580A1 (en) 2018-10-18 2020-04-23 Intellia Therapeutics, Inc. Nucleic acid constructs and methods of use
EP3867380A2 (en) 2018-10-18 2021-08-25 Intellia Therapeutics, Inc. Compositions and methods for expressing factor ix
JP2022505402A (ja) 2018-10-18 2022-01-14 インテリア セラピューティクス，インコーポレーテッド アルブミン遺伝子座からの導入遺伝子発現のための組成物及び方法
JP2022514214A (ja) 2018-12-05 2022-02-10 インテリア セラピューティクス，インコーポレーテッド 修飾されたアミン脂質
AU2020248337A1 (en) 2019-03-28 2021-11-04 Intellia Therapeutics, Inc. Compositions and methods for ttr gene editing and treating ATTR amyloidosis comprising a corticosteroid or use thereof
EA202192636A1 (ru) 2019-03-28 2022-03-17 Интеллиа Терапьютикс, Инк. Композиции и способы, содержащие гидовую рнк ttr и полинуклеотид, кодирующий днк-связывающий агент, гидируемый рнк
MA55527A (fr) 2019-03-28 2022-02-09 Intellia Therapeutics Inc Polynucléotides, compositions et procédés d'expression de polypeptides
CA3137956A1 (en) 2019-04-25 2020-10-29 Intellia Therapeutics, Inc. Ionizable amine lipids and lipid nanoparticles
WO2021016075A1 (en) 2019-07-19 2021-01-28 Flagship Pioneering Innovations Vi, Llc Recombinase compositions and methods of use
CN114206909A (zh) 2019-07-21 2022-03-18 葛兰素史克生物有限公司 治疗性病毒疫苗
ES2961245T3 (es) 2019-12-04 2024-03-11 Orna Therapeutics Inc Composiciones y métodos de ARN circular
WO2021123920A1 (en) 2019-12-18 2021-06-24 Novartis Ag Compositions and methods for the treatment of hemoglobinopathies
WO2021209970A1 (en) 2020-04-16 2021-10-21 Glaxosmithkline Biologicals Sa Sars cov-2 spike protein construct
AU2021263745A1 (en) 2020-04-28 2022-12-08 Intellia Therapeutics, Inc. Methods of in vitro cell delivery
CA3179420A1 (en) 2020-05-20 2021-11-25 Avak Kahvejian Coronavirus antigen compositions and their uses
US20230193311A1 (en) 2020-05-20 2023-06-22 Flagship Pioneering Innovations Vi, Llc Immunogenic compositions and uses thereof
CA3179051A1 (en) 2020-05-22 2021-11-25 Chandra Vargeese Double stranded oligonucleotide compositions and methods relating thereto
CA3182026A1 (en) 2020-05-29 2021-12-02 Flagship Pioneering Innovations Vi, Llc. Trem compositions and methods relating thereto
AU2021278984A1 (en) 2020-05-29 2022-11-17 Flagship Pioneering Innovations Vi, Llc Trem compositions and methods relating thereto
EP4161570A1 (en) 2020-06-05 2023-04-12 GlaxoSmithKline Biologicals S.A. Modified betacoronavirus spike proteins
WO2022002783A1 (en) 2020-06-29 2022-01-06 Glaxosmithkline Biologicals Sa Adjuvants
AU2021336976A1 (en) 2020-09-03 2023-03-23 Flagship Pioneering Innovations Vi, Llc Immunogenic compositions and uses thereof
CZ2020529A3 (cs) * 2020-09-23 2022-03-30 Ăšstav organickĂ© chemie a biochemie AV ÄŚR, v. v. i. Lipidoidy pro transfekci nukleových kyselin a jejich použití
TW202237845A (zh) 2020-12-11 2022-10-01 美商英特利亞醫療公司 用於涉及去胺作用之基因體編輯之多核苷酸、組合物及方法
CA3206285A1 (en) 2020-12-23 2022-06-30 Flagship Pioneering, Inc. Compositions of modified trems and uses thereof
EP4267593A2 (en) 2020-12-23 2023-11-01 GlaxoSmithKline Biologicals SA Self-amplifying messenger rna
EP4271799A1 (en) 2020-12-30 2023-11-08 Intellia Therapeutics, Inc. Engineered t cells
CN116963729A (zh) * 2021-01-20 2023-10-27 比姆医疗股份有限公司 包括可电离脂质的纳米材料
IL303846A (en) * 2021-01-20 2023-08-01 Beam Therapeutics Inc Nanomaterials
EP4032546A1 (en) 2021-01-20 2022-07-27 GlaxoSmithKline Biologicals S.A. Therapeutic viral vaccine
CA3206923A1 (en) * 2021-02-05 2022-08-11 Zihao Wang Ionizable lipid molecule, preparation method therefor, and application thereof in preparation of lipid nanoparticle
CN112961065B (zh) * 2021-02-05 2023-03-14 嘉晨西海(杭州)生物技术有限公司 一种可电离脂质分子及其制备方法及其在制备脂质纳米颗粒的应用
CN117377491A (zh) 2021-03-26 2024-01-09 葛兰素史克生物有限公司 免疫原性组合物
JP2024512669A (ja) 2021-03-31 2024-03-19 フラグシップ パイオニアリング イノベーションズ ブイ，インコーポレーテッド タノトランスミッションポリペプチド及び癌の処置におけるそれらの使用
WO2022215758A1 (ja) 2021-04-09 2022-10-13 相互薬工株式会社 脂質および組成物
KR20240017793A (ko) 2021-04-17 2024-02-08 인텔리아 테라퓨틱스, 인크. 지질 나노입자 조성물
CA3216877A1 (en) 2021-04-17 2022-10-20 Intellia Therapeutics, Inc. Lipid nanoparticle compositions
BR112023021429A2 (pt) 2021-04-17 2024-01-23 Intellia Therapeutics Inc Inibidores de proteína quinase dependente de dna e composições e usos dos mesmos
EP4346894A1 (en) 2021-05-24 2024-04-10 GlaxoSmithKline Biologicals S.A. Adjuvants
WO2022259191A1 (en) 2021-06-09 2022-12-15 Glaxosmithkline Biologicals Sa Release assay for determining potency of self-amplifying rna drug product and methods for using
TW202317764A (zh) 2021-06-10 2023-05-01 美商英特利亞醫療公司 用於基因編輯之包含內部連接子之經修飾引導rna
WO2022269518A2 (en) 2021-06-23 2022-12-29 Novartis Ag Compositions and methods for the treatment of hemoglobinopathies
WO2023009547A1 (en) 2021-07-26 2023-02-02 Flagship Pioneering Innovations Vi, Llc Trem compositions and uses thereof
WO2023020993A1 (en) 2021-08-16 2023-02-23 Glaxosmithkline Biologicals Sa Novel methods
WO2023021427A1 (en) 2021-08-16 2023-02-23 Glaxosmithkline Biologicals Sa Freeze-drying of lipid nanoparticles (lnps) encapsulating rna and formulations thereof
WO2023020992A1 (en) 2021-08-16 2023-02-23 Glaxosmithkline Biologicals Sa Novel methods
WO2023020994A1 (en) 2021-08-16 2023-02-23 Glaxosmithkline Biologicals Sa Novel methods
WO2023021421A1 (en) 2021-08-16 2023-02-23 Glaxosmithkline Biologicals Sa Low-dose lyophilized rna vaccines and methods for preparing and using the same
WO2023031855A1 (en) 2021-09-03 2023-03-09 Glaxosmithkline Biologicals Sa Substitution of nucleotide bases in self-amplifying messenger ribonucleic acids
WO2023044006A1 (en) 2021-09-17 2023-03-23 Flagship Pioneering Innovations Vi, Llc Compositions and methods for producing circular polyribonucleotides
WO2023069397A1 (en) 2021-10-18 2023-04-27 Flagship Pioneering Innovations Vi, Llc Compositions and methods for purifying polyribonucleotides
WO2023077053A2 (en) 2021-10-28 2023-05-04 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Crispr/cas-related methods and compositions for knocking out c5
WO2023081689A2 (en) 2021-11-03 2023-05-11 Intellia Therapeutics, Inc. Polynucleotides, compositions, and methods for genome editing
TW202334080A (zh) 2021-11-08 2023-09-01 美商歐納醫療公司 用於遞送環狀聚核苷酸之脂質奈米粒子組合物
WO2023097003A2 (en) 2021-11-24 2023-06-01 Flagship Pioneering Innovations Vi, Llc Immunogenic compositions and their uses
WO2023096963A1 (en) 2021-11-24 2023-06-01 Flagship Pioneering Innovations Vi, Llc Varicella-zoster virus immunogen compositions and their uses
WO2023096990A1 (en) 2021-11-24 2023-06-01 Flagship Pioneering Innovation Vi, Llc Coronavirus immunogen compositions and their uses
WO2023102364A1 (en) * 2021-12-02 2023-06-08 Ecole Polytechnique Federale De Lausanne (Epfl) Antiviral compounds, compositions and uses thereof
WO2023102550A2 (en) 2021-12-03 2023-06-08 The Broad Institute, Inc. Compositions and methods for efficient in vivo delivery
TW202340461A (zh) 2021-12-22 2023-10-16 美商旗艦先鋒創新有限責任公司 用於純化多核糖核苷酸之組成物和方法
TW202342064A (zh) 2021-12-23 2023-11-01 美商旗艦先鋒創新有限責任公司 編碼抗融合多肽之環狀多核糖核苷酸
WO2023150623A2 (en) 2022-02-02 2023-08-10 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Anti-tfr:gaa and anti-cd63:gaa insertion for treatment of pompe disease
WO2023148303A1 (de) * 2022-02-02 2023-08-10 Mslsolutions Gmbh Verfahren zur medikament- und impfstoffherstellung
WO2023178065A2 (en) * 2022-03-15 2023-09-21 Broadpharm Inc. Lipid compounds and lipid nanoparticles
WO2023183616A1 (en) * 2022-03-25 2023-09-28 Senda Biosciences, Inc. Novel ionizable lipids and lipid nanoparticles and methods of using the same
WO2023196634A2 (en) 2022-04-08 2023-10-12 Flagship Pioneering Innovations Vii, Llc Vaccines and related methods
WO2023220603A1 (en) 2022-05-09 2023-11-16 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Vectors and methods for in vivo antibody production
WO2023220083A1 (en) 2022-05-09 2023-11-16 Flagship Pioneering Innovations Vi, Llc Trem compositions and methods of use for treating proliferative disorders
WO2023220729A2 (en) 2022-05-13 2023-11-16 Flagship Pioneering Innovations Vii, Llc Double stranded dna compositions and related methods
WO2023245113A1 (en) 2022-06-16 2023-12-21 Intellia Therapeutics, Inc. Methods and compositions for genetically modifying a cell
WO2023242817A2 (en) 2022-06-18 2023-12-21 Glaxosmithkline Biologicals Sa Recombinant rna molecules comprising untranslated regions or segments encoding spike protein from the omicron strain of severe acute respiratory coronavirus-2
WO2023250112A1 (en) 2022-06-22 2023-12-28 Flagship Pioneering Innovations Vi, Llc Compositions of modified trems and uses thereof
WO2024006955A1 (en) 2022-06-29 2024-01-04 Intellia Therapeutics, Inc. Engineered t cells
CN117486738A (zh) * 2022-07-15 2024-02-02 中国科学院基础医学与肿瘤研究所(筹) 一种脂质分子及其组合物
WO2024026474A1 (en) 2022-07-29 2024-02-01 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Compositions and methods for transferrin receptor (tfr)-mediated delivery to the brain and muscle
US20240042021A1 (en) 2022-08-01 2024-02-08 Flagship Pioneering Innovations Vii, Llc Immunomodulatory proteins and related methods
WO2024035952A1 (en) 2022-08-12 2024-02-15 Remix Therapeutics Inc. Methods and compositions for modulating splicing at alternative splice sites
WO2024068545A1 (en) 2022-09-26 2024-04-04 Glaxosmithkline Biologicals Sa Influenza virus vaccines
CN116535381B (zh) * 2023-07-06 2023-10-17 北京悦康科创医药科技股份有限公司 具有五元环缩醛结构的阳离子脂质化合物、包含其的组合物及用途

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP0064158A1 (de) * 1981-04-10 1982-11-10 BASF Aktiengesellschaft Omega-Cyan-1, omega-diphenyl-azaalkan-derivate, ihre Herstellung und diese enthaltende Arzneimittel
EP0225543A1 (de) * 1985-12-05 1987-06-16 BASF Aktiengesellschaft Basisch substituierte Phenylacetaldehyde, ihre Herstellung und diese enthaltende Arzneimittel

Family Cites Families (50)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4987071A (en) 1986-12-03 1991-01-22 University Patents, Inc. RNA ribozyme polymerases, dephosphorylases, restriction endoribonucleases and methods
WO1994013791A1 (en) 1992-12-04 1994-06-23 Innovir Laboratories, Inc. Regulatable nucleic acid therapeutic and methods of use thereof
EP1195442A3 (en) 1992-12-04 2002-07-31 Innovir Laboratories, Inc. Ribozyme amplified diagnostics
US5871914A (en) 1993-06-03 1999-02-16 Intelligene Ltd. Method for detecting a nucleic acid involving the production of a triggering RNA and transcription amplification
JPH09504517A (ja) 1993-09-27 1997-05-06 スミスクライン・ビーチャム・コーポレイション カンプトテシン処方物
US5849902A (en) 1996-09-26 1998-12-15 Oligos Etc. Inc. Three component chimeric antisense oligonucleotides
US6958239B2 (en) 1996-11-21 2005-10-25 Oligos Etc Inc. Three component chimeric antisense oligonucleotides
US5837282A (en) 1996-10-30 1998-11-17 University Of British Columbia Ionophore-mediated liposome loading
EP0958303A4 (en) 1996-12-19 2004-03-31 Univ Yale BIOREACTIVE ALLOSTERIC POLYNUCLEOTIDES
AU1623499A (en) 1997-12-05 1999-06-28 Duke University Nucleic acid mediated rna tagging and rna revision
US6506559B1 (en) 1997-12-23 2003-01-14 Carnegie Institute Of Washington Genetic inhibition by double-stranded RNA
IL126731A0 (en) 1998-10-23 1999-08-17 Intelligene Ltd A method of detection
WO2000026226A1 (en) 1998-11-03 2000-05-11 Yale University Multidomain polynucleotide molecular sensors
DE19956568A1 (de) 1999-01-30 2000-08-17 Roland Kreutzer Verfahren und Medikament zur Hemmung der Expression eines vorgegebenen Gens
AU1086501A (en) 1999-10-15 2001-04-30 Carnegie Institution Of Washington Rna interference pathway genes as tools for targeted genetic interference
US20040005667A1 (en) 2000-07-03 2004-01-08 Giuloi Ratti Immunisation against chlamydia pneumoniae
CA2425303A1 (en) 2000-10-27 2002-05-02 John Telford Nucleic acids and proteins from streptococcus groups a & b
CA2458854A1 (en) 2001-08-31 2003-03-06 Chiron Srl Helicobacter pylori vaccination
US20040006061A1 (en) 2001-10-04 2004-01-08 Wolfgang Haap Alkoxybenzylamine
BRPI0411857A (pt) 2003-06-26 2006-05-23 Chiron Corp composições imunogênicas para chlamydia trachomatis
CA2532369C (en) 2003-07-31 2016-07-26 Chiron Corporation Immunogenic compositions for streptococcus pyogenes
GB0410866D0 (en) 2004-05-14 2004-06-16 Chiron Srl Haemophilius influenzae
DE602005018043D1 (de) 2004-05-17 2010-01-14 Tekmira Pharmaceuticals Corp Liposomale formulierungen mit dihydrosphingomyelin und verfahren zu ihrer verwendung
WO2006007712A1 (en) 2004-07-19 2006-01-26 Protiva Biotherapeutics, Inc. Methods comprising polyethylene glycol-lipid conjugates for delivery of therapeutic agents
US7404969B2 (en) * 2005-02-14 2008-07-29 Sirna Therapeutics, Inc. Lipid nanoparticle based compositions and methods for the delivery of biologically active molecules
JP2008530245A (ja) 2005-02-18 2008-08-07 ノバルティス ヴァクシンズ アンド ダイアグノスティクス， インコーポレイテッド 尿路病原性菌株由来の抗原
WO2006089264A2 (en) 2005-02-18 2006-08-24 Novartis Vaccines And Diagnostics Inc. Proteins and nucleic acids from meningitis/sepsis-associated escherichia coli
NZ591415A (en) 2005-03-30 2012-10-26 Novartis Vaccines & Diagnostic Haemophilus influenzae type B
EP1891096A2 (en) 2005-05-12 2008-02-27 Novartis Vaccines and Diagnostics, Inc. Immunogenic compositions for chlamydia trachomatis
US7776336B2 (en) 2005-10-25 2010-08-17 Novartis Vaccines And Diagnostics Srl Compositions comprising Yersinia pestis antigens
JPWO2007122847A1 (ja) 2006-03-24 2009-09-03 Jitsubo株式会社 有機合成用試薬、及び当該試薬を用いた有機合成反応方法
US20100166788A1 (en) 2006-08-16 2010-07-01 Novartis Vaccines And Diagnostics Immunogens from uropathogenic escherichia coli
JP2008105961A (ja) * 2006-10-23 2008-05-08 Japan Science & Technology Agency アリールメチルアミン誘導体およびその塩ならびにそれを構成成分とする薬物担体
WO2008103276A2 (en) * 2007-02-16 2008-08-28 Merck & Co., Inc. Compositions and methods for potentiated activity of biologicaly active molecules
GB0714963D0 (en) 2007-08-01 2007-09-12 Novartis Ag Compositions comprising antigens
GB0717187D0 (en) 2007-09-04 2007-10-17 Novartis Ag Compositions comprising yersinia pestis antigens
ITMI20081249A1 (it) 2008-07-09 2010-01-09 Novartis Vaccines & Diagnostic Immunogeni di escherichia coli con solubilità migliorata.
US20110110857A1 (en) 2008-03-06 2011-05-12 Roberto Petracca Mutant forms of chlamydia htra
US20110224447A1 (en) 2008-08-18 2011-09-15 Bowman Keith A Novel Lipid Nanoparticles and Novel Components for Delivery of Nucleic Acids
EP3207944B1 (en) * 2008-11-10 2020-01-15 Arbutus Biopharma Corporation Novel lipids and compositions for the delivery of therapeutics
SG175092A1 (en) 2009-04-14 2011-11-28 Novartis Ag Compositions for immunising against staphylococcus aerus
EP2451475A2 (en) 2009-07-06 2012-05-16 Novartis AG Self replicating rna molecules and uses thereof
MX348474B (es) 2009-12-23 2017-06-14 Novartis Ag * Lipidos, composiciones de lipido, y metodos de uso de los mismos.
AU2011245987B2 (en) * 2010-04-28 2016-12-15 Kyowa Hakko Kirin Co., Ltd Cationic lipid
WO2011150347A2 (en) 2010-05-28 2011-12-01 Pharmatrophix Non-peptide bdnf neurotrophin mimetics
US9770463B2 (en) 2010-07-06 2017-09-26 Glaxosmithkline Biologicals Sa Delivery of RNA to different cell types
MX2013000164A (es) 2010-07-06 2013-03-05 Novartis Ag Liposomas con lipidos que tienen valor de pka ventajoso para suministro de arn.
MX2013002336A (es) 2010-08-31 2013-03-18 Novartis Ag Liposomas pegilados para la liberacion de arn de codificacion de inmunogeno.
CN105164102B (zh) * 2013-03-08 2017-12-15 诺华股份有限公司 用于传递活性成分的脂质和脂质组合物
US9504747B2 (en) 2013-03-08 2016-11-29 Novartis Ag Lipids and lipid compositions for the delivery of active agents

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP0064158A1 (de) * 1981-04-10 1982-11-10 BASF Aktiengesellschaft Omega-Cyan-1, omega-diphenyl-azaalkan-derivate, ihre Herstellung und diese enthaltende Arzneimittel
EP0225543A1 (de) * 1985-12-05 1987-06-16 BASF Aktiengesellschaft Basisch substituierte Phenylacetaldehyde, ihre Herstellung und diese enthaltende Arzneimittel

Non-Patent Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
GEORGE R. PETTIT, DAVID S. BLONDA, ERNEST C. HARRINGTON: "ANTINEOPLASTIC AGENTS: IX. N-BENZYL-N-BIS(2-HALOETHYL)AMINES", CANADIAN JOURNAL OF CHEMISTRY, NATIONAL RESEARCH COUNCIL CANADA, vol. 41, no. 12, 1 December 1963 (1963-12-01), pages 2962 - 2968, XP055129119, ISSN: 00084042, DOI: 10.1139/v63-435 *
HUSSEIN, I.A. ; ALI, S.K.A. ; SULEIMAN, M.A. ; UMAR, Y.: "Rheological behavior of associating ionic polymers based on diallylammonium salts containing single-, twin-, and triple-tailed hydrophobes", EUROPEAN POLYMER JOURNAL., PERGAMON PRESS LTD. OXFORD., GB, vol. 46, no. 5, 1 May 2010 (2010-05-01), GB, pages 1063 - 1073, XP027011621, ISSN: 0014-3057 *
SHINICHI MOCHIZUKI, YUMI KAMIKAWA, KOICHI NISHINA, SHOTA FUJII, EMI HAMADA, SHOTA KUSUKI, TAKUMA MATSUO, KAZUO SAKURAI: "Relationship between DNA-Transfection Efficiency and Chemical Structures of Aromatic Cationic Lipids", BULLETIN OF THE CHEMICAL SOCIETY OF JAPAN, CHEMICAL SOCIETY OF JAPAN, TOKYO., JP, vol. 85, no. 3, JP, pages 354 - 359, XP008170665, ISSN: 0009-2673, DOI: 10.1246/bcsj.20110296 *
SHOTA FUJII, TOMOKI NISHIMURA, KAZUO SAKURAI: "Thermodynamics of Lipoplex Formation: Relationship between the Lipid Alkyl Tail Length and Thermodynamic Functions", CHEMISTRY LETTERS, CHEMICAL SOCIETY OF JAPAN, vol. 41, no. 5, 1 January 2012 (2012-01-01), pages 501 - 503, XP055128221, ISSN: 03667022, DOI: 10.1246/cl.2012.501 *
Tan Ren and Dexi Liu: "Synthesis of targetable cationic amphiphiles", Tetrahedron Letters, vol. 40, 1 January 1999 (1999-01-01), pages 7621-7625, XP055129209, Retrieved from the Internet:URL:http://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S0040403999015580/pdf?md5=f245d 84e6e2fc57194356f225be5684e&pid=1-s2.0-S00 40403999015580-main.pdf [retrieved on 2014-07-16] Scheme 1 and 2 *
TAN REN, GUISHENG ZHANG, YOUNG K. SONG AND DEXI LIU: "Synthesis and Characterization of Aromatic Ring-Based Cationic Lipids for Gene Delivery In Vitro and In Vivo", JOURNAL OF DRUG TARGETING, TAYLOR & FRANCIS, GB, vol. 7, no. 4, 1 January 1999 (1999-01-01), GB, pages 285 - 292, XP008170628, ISSN: 1061-186X, DOI: 10.3109/10611869909085511 *

Also Published As

Publication number Publication date
CN105164102A (zh) 2015-12-16
CN107879960B (zh) 2021-06-22
AU2014224205C1 (en) 2019-04-04
WO2014136086A1 (en) 2014-09-12
TW201442999A (zh) 2014-11-16
EP3608308A1 (en) 2020-02-12
KR102255108B1 (ko) 2021-05-24
JP2016514109A (ja) 2016-05-19
EA201591662A1 (ru) 2016-02-29
US20160106842A1 (en) 2016-04-21
CN107879960A (zh) 2018-04-06
EP3608308B1 (en) 2021-07-21
AU2018279005B2 (en) 2020-06-25
EP2964608B1 (en) 2019-08-28
JP6781202B2 (ja) 2020-11-04
ES2887254T3 (es) 2021-12-22
US10792361B2 (en) 2020-10-06
US10124065B2 (en) 2018-11-13
AU2014224205B2 (en) 2018-10-04
EP2964608A1 (en) 2016-01-13
US20180369386A1 (en) 2018-12-27
MX2015011955A (es) 2016-04-07
JP2018184402A (ja) 2018-11-22
EA201891018A1 (ru) 2018-09-28
BR112015021791A2 (pt) 2017-07-18
CN105164102B (zh) 2017-12-15
AU2014224205A1 (en) 2015-10-01
AU2018279005A1 (en) 2019-01-17
JP6352950B2 (ja) 2018-07-04
CA2904184C (en) 2021-09-07
KR20150126015A (ko) 2015-11-10
BR112015021791B1 (pt) 2022-08-30
CA2904184A1 (en) 2014-09-12

Similar Documents

Publication Publication Date Title
AU2018279005B2 (en) Lipids and lipid compositions for the delivery of active agents
US10729775B2 (en) Lipids and lipid compositions for the delivery of active agents
US11420933B2 (en) Lipids and lipid compositions for the delivery of active agents
US10844002B2 (en) Lipids and lipid compositions for the delivery of active agents
US20160317458A1 (en) Lipids and Lipid Compositions for the Delivery of Active Agents
EA040257B1 (ru) Липиды и липидные композиции для доставки активных агентов

Legal Events

Date Code Title Description
MM4A Lapse of a eurasian patent due to non-payment of renewal fees within the time limit in the following designated state(s)

Designated state(s): AM AZ BY KZ KG TJ TM