KR20020028903A - 디뉴클레오티드 결정 - Google Patents
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Abstract
본 발명은 P1-(2'-데옥시시티딘 5'-)P4-(우리딘 5'-)테트라포스페이트 또는 그의 염(dCP4U)의 결정 및 그의 제조법에 관한다.
또한, 본 발명은 우리딘 5'-모노포스페이트(UMP), 2'-데옥시시티딘 5'-모노포스페이트(dCMP), 디페닐포스포클로리데이트(DPC) 및 피로포스페이트(PPi)를 반응시키는 dCP4U의 제조법에 관한다.
본 발명의 dCP4U의 결정은 고순도임과 동시에 동결건조품에 비하여 흡습성도 없고, 극히 안정하기 때문에 취급이 용이하고, 의약품 원료로서 유용하다.
또한, 본 발명의 dCP4U의 제조법에 의하면, 저렴한 원료인 UMP를 사용할 수 있고, 더욱이 고수율로 dCP4U를 제조할 수 있으며, dCP4U의 대량 합성에 매우 적합한 방법이다.
Description
하기 식[I]로 표시되는 dCP4U 또는 그의 염은 P2Y2 및/또는 P2Y4 퓨린 수용체(purine receptor)의 선택적 아고니스트(agonist)이며, 만성 기관지염(chronic bronchitis), 부비강염 등의 치료약으로서의 개발이 기대되고 있는 화합물이다 (WO98/34942 참조).
종래, dCP4U는 결정으로서는 얻어질 수 없었고, 동결건조시켜 얻은 백색 분말(white solid)로서만 조제되고 있다. 그러나, 종래의 분말품은 순도가 낮고(HPLC 순도: 82%), 특히 원료인 우리딘 5'-트리포스페이트(UTP)와 dCP4U의 분리가 어렵고, 종래 정제에 사용되어온 이온 교환 크로마토그래피법만으로는 고순도의 dCP4를 조제하는 것은 대단히 곤란한 것이었다(WO98/34942).
이러한 순도가 낮은 백색 분말품은 흡습하기 쉬운 등의 결점을 가지고 있으므로, dCP4U를 의약품으로서 제제화할 때에는 습기를 배려한 특별한 제조장치를 필요로 하거나, 제제 제조후에도 엄중한 포장을 필요로 했다. 또한, 종래의 분말품은 안정성이 나쁘기 때문에, 유효기한이 상당히 짧은 약제밖에 할 수 없으므로, 고순도의 안정 결정체의 취득이 요망되어왔다.
한편, dCP4U은 2'-데옥시시티딘 5'-모노포스페이트(dCMP)와 UTP를 출발 원료로 하고, 활성화제로서 디사이클로헥실카르보디이미드(DCC)를 이용하여 합성되고 있으나, 종래법의 합성수율은 약 9%로 극히 낮아서(WO98/34942, 실시예 20 참조), 도저히 실용적인 방법으로 될 수 없었다. 따라서, 고수율로 대량 합성에 적합한 제조법의 개발도 절실히 요망되어왔다.
본 발명은 의약품으로서 제제화하는데 적합한 dCP4U의 안정한 결정 및 그 결정의 제조법을 제공하는 것 및 dCP4U의 대량 합성에 적합한 효율 좋은 제조법을 제공하는 것을 목적으로 한다.
본 발명은 만성 기관지염, 부비강염 등의 치료약으로서 유용한 P1-(2'-데옥시시티딘 5'-)P4-(우리딘 5'-)테트라포스페이트(dCP4U) 또는 그의 약학적으로 허용되는 염(이하, 단순히 「dCP4U」라 하기도 한다)의 결정 또는 이 결정의 제조법 및 dCP4U의 효율적인 제조법에 관한 것이다.
도 1은 dCP4U·4Na 결정(3.5 수화물)의 결정구조(편광 현미경, 440배)를 나타내는 도이다. 또한, 도면중의 1 mm는 25㎛에 상당한다.
도 2는 dCP4U·4Na 결정(3.5 수화물)의 X선 회절 스펙트럼을 나타내는 것이다.
도 3은 dCP4U·4Na 결정(10수화물)의 X선 회절 스펙트럼을 나타내는 것이다.
도 4는 dCP4U의 백색 분말(동결건조품)의 X선 회절 스펙트럼을 나타내는 것이다.
도 5는 dCP4U·4Na 결정(3.5 수화물)의13C-CPMAs-NMR 스펙트럼을 나타내는 것이다.
도 6은 dCP4U·4Na결정(10 수화물)의13C-CPMAS-NMR 스펙트럼을 나타내는 것이다.
도 7은 dCP4U의 백색 분말(동결건조품)의13C-CPMAS NMR 스펙트럼을 나타내는 것이다.
[발명을 실시하기 위한 최선의 형태]
본 발명의 dCP4U의 결정은 조dCP4U를 특정의 수단으로 정제하고, 정제된 dCP4U 용액에 친수성 유기용매를 가하여 dCP4U를 결정으로 석출시킴으로서 얻어진다. 이하, ① 정제와 ② 결정화로 나누어 설명한다.
① dCP4U의 정제
dCP4U의 정제는 음이온 교환 크로마토그래피와 활성탄 크로마토그래피의 2개의 크로마토그래피를 병용함으로서 수행할 수 있다. 양 크로마토그래피를 이용한 정제는 어느 것을 먼저 하여도 좋으나, 최초로 음이온교환 크로마토그래피를 행하고, 이어서 활성탄 크로마토그래피를 행하는 것이 dCP4U의 순도 향상의 점에서 바람직하다.
여기에서 이용되는 음이온 교환 수지로서는 스티렌계 또는 아크릴계 수지를 기재로 하는 수지이면 좋고, 강알칼리성 음이온교환수지(예를 들면, 앰버라이트 IRA 402 [Rohm & Haas Co.] 다이아이온 PA-312, 다이아이온 SA-11A [Mitsubishi Chemical Co., Ltd.]) 또는 약알칼리성 음이온교환수지(예를 들면, 앰버라이트 IRA 67〔[Rohm & Haas Co.], 다이아이온 WA-30 [Mitsubishi Chemical Co., Ltd.])의 어느 것을 이용하여도 상관없다.
활성탄으로서는 파쇄상 또는 입상으로 정형된 크로마토용 활성탄을 사용하면 좋고, 예를 들면 와코쥰야쿠고교사, 후타무라카가쿠고교사제 등의 시판품을 사용할 수 있다.
각 크로마토그래피는 뱃치식, 컬럼식 등의 어느 것이어도 좋고, 컬럼크로마토그래피를 행하는 경우, 음이온교환 컬럼크로마토그래피의 용출제로서는 산(예: 염산) 수용액 또는 여기에 식염 등을 첨가하여 이온강도를 높인 것, 활성탄 컬럼크로마토그래피의 용출제로서는 물 또는 알칼리(예: 수산화나트륨) 수용액을 각각 사용할 수 있다. 각 용출제의 농도는 0.00l∼10M의 범위내에서 바람직한 것을 소규모 시험에 의해 적의 결정하면 좋다.
② dCP4U의 결정화
dCP4U의 결정화는 얻어진 정제 dCP4U 용액에 친수성 유기용매를 가하여 dCP4U를 결정으로서 석출시킴으로서 행해진다.
여기서 사용할 수 있는 친수성 유기용매으로서는 메탄올, 에탄올 등 탄소수 6이하의 알코올류, 아세톤 등의 케톤류, 디옥산 등의 에테르류, 아세토니트릴 등의 니 니트릴류, 디메틸포름아미드 등의 아미드류 등을 들 수 있고, 특히 알코올류, 에탄올이 바람직하다.
보다 구체적으로는, 정제 dCP4U 용액 또는 이를 농축하여 얻어진 슬러리액에 소망에 따라 pH를 5∼10, 바람직하기로는 6∼9로 조정한 후, 60℃이하, 바람직하기로는 20℃이하의 온도 조건하에서 친수성 유기용매를 첨가하여 dCP4U를 결정으로서 석출시킴으로서 dCP4U의 안정한 결정을 얻을 수 있다.
이렇게 하여 얻어진 본 발명의 dCP4U 결정은 적어도 dCP4U가 95%이상, UTP가 3%이하의 순도를 가지는 것이다. 이와 같은 dCP4U 결정 중에서도 더욱이 dCP4U가 97%이상, UTP가 2%이하의 순도를 갖는 것이 바람직하고, 또한 dCP4U가 98%이상, UTP가 1%이하의 순도를 갖는 것이 특히 바람직하다.
이와 같은 고순도의 dCP4U결정은 염, 수화물 또는 함수염의 형태이고도 좋고, 염으로서는 나트륨염, 칼륨염 등의 알칼리 금속염, 칼슘염, 마그네슘염 등의 알칼리토류금속염, 암모늄 염 등의 약학적으로 허용되는 염이 예시된다. 염의 치환수는 1∼4개의 금속이 치환된 것을 들 수 있다.
또, 수화물으로서는 dCP4U 1분자에 대해 1∼14분자의 물이 결합 또는 부착된 것을 예시된다. 또한, 함수염으로서는 예를 들면, dCP4U결정의 알칼리 금속염 1 분자에 1∼14분자의 물분자가 결합 또는 부착된 것을 들 수 있다.
또한, 본 발명의 dCP4U의 결정에는 호변 이성체도 포함될 수 있다.
이와 같이 하여 얻어진 dCP4U의 결정은 필요에 따라 감압건조, 통풍건조, 가열건조 등의 통상의 방법에 따라, 건조후, 용기(병, 포대, 캔, 앰플 등)에 충전한다. 용기의 봉입상태는 개방, 밀폐, 기밀, 밀봉의 어느 상태이어도 좋으나, 보존 안정성을 유지하는 관점에서 개방 상태가 아닌 쪽이 바람직하다.
본 발명의 dCP4U의 제조법은 UMP, dCMP, DPC 및 PPi를 반응시켜 dCP4U를 제조하는 것을 특징으로 한다.
보다 구체적으로는, 처음에 UMP과 DPC를 반응시켜 UMP 디페닐포스페이트(UMP-DPP)를 합성하고, 여기에 PPi를 반응시켜 반응액중에 UTP를 생성시키고, 얻어진 UTP를 분리하지 않고, DPC 존재하, UTP과 dCMP를 반응시켜 목적으로 하는 dCP4U를 제조하는 방법이다.
UMP에서 UMP-DPP의 합성은 예를 들면, 통상의 방법에 따라 조제한 UMP트리알킬아민염(예: UMP 트리부틸아민염)을 DMF, 디메틸아세트아미드(DMAC) 등의 아미드계 용매, 디옥산, 테트라히드로푸란 등의 환상 에테르계 용매, 아세톤 등의 케톤계 용매, 디메틸이미다졸리디논, 헥사메틸포스포릭트리아미드 등의 또는 혼합 용매에 용해하고, DPC와 필요에 따라 트리알킬아민을 가하고, 10∼50℃에서 30분∼5시간 정도 반응시킴으로서 실시될 수 있다.
UMP-DPP와 반응시키는 PPi로서는 PPi-유기 알칼리염이 바람직하고, 구체적으로는 PPi의 헥실아민염, 디부틸아민염, 트리에틸아민염, 트리부틸아민염 등을 들수 있다.
UMP-DPP과 PPi-유기 알카리염의 반응은 PPi-유기 알칼리염을 DMF, DMAC, 포름아미드 등의 아미드계 용매, 디옥산, 테트라히드로푸란 등의 환상 에테르계 용매, 아세톤 등의 케톤계 용매, 디메틸이미다졸리디논, 헥사메틸포스포릭트리아미드, 디메틸술폭시드, 아세토니트릴 등의 단독 또는 혼합용매에 용해하고, 이를 상기의 UMP-DPP 합성액에 첨가하고, 10∼50℃에서 30분∼5시간 정도 반응시킴으로서 행할 수 있다.
상기의 PPi-유기 알칼리염과 UMP-DPP과의 반응은 임의의 염기를 공존시켜 반응시켜도 좋고, 이러한 염기로서는, 예를 들면, 피리딘, 2,6-루티딘, 2,4-루티딘, α-피콜린, β-피콜린,γ-피콜린, 2,4-디메틸아미노피리딘, α-콜리딘, β-콜리딘, γ- 콜리딘 등의 피리딘계 염기 등을 들 수 있고, 특히 피리딘이 바람직하다. 또한, 이러한 염기가 반응용매를 겸용하여도 상관없다. 사용하는 염기의 농도는 특히 제한 되지 않고, 원료로서 사용한 UMP에 대해 6당량이상, 바람직하기로는 18당량 이상을 첨가하는 것이 바람직하다.
상기 PPi-유기 알칼리염과 UMP-DPP의 반응에 의해 반응액 중에는 UTP가 합성된다. 이 반응액중에 생성된 UTP과 dCMP를 DCP의 존재하에 반응시킴으로서 dCP4U를 합성한다.
사용하는 dCMP는 dCMP그 자체이어도 좋고, 또한 UMP와 같이, dCMP 디페닐포스페이트(d-CMP-DPP)로 변환환 후, 반응액에 첨가하여도 지장없다.
dCP4U의 합성 반응은 상기의 UTP 합성액에 원료로서 사용한 UMP에 대하여1.1당량이상의 DPC와 0.5∼1.5당량의 dCMP 또는 dcMP-DPP를 첨가하고, 10∼50℃에서 30분∼5시간 정도 반응시킴으로서 행할 수 있다.
이와 같이 하여 얻어진 dCP4U는 전술한 방법으로 정제, 결정화함으로서 본 발명의 dCP4U 결정을 얻을 수 있다.
본 발명자들은 dCP4U의 안정화에 관하여 예의 연구를 거듭한 결과, 음이온교환수지를 이용한 크로마토그래피 처리와 활성탄을 이용한 크로마토그래피 처리를 병용함으로서 순도 95%이상의 dCP4U를 조제할 수 있고, 이와 같은 고순도의 dCP4U를 조제함으로서 비로서 dCP4U의 결정화에 성공했다. 얻어진 dCP4U 결정은 종래품과 비교하여 현저하게 순도가 높고, 흡습성이 없고, 우수한 안정성을 갖는 것임을 확인했다.
또한, 본 발명자들은 고가인 UTP가 아니고, 염가의 우리딘 5'-모노포스페이트(UMP)를 이용한 dCP4U의 합성법에 관하서도 예의 연구한 결과, 디페닐포스포클로리데이트(DPC) 및 피로포스페이트(PPi)를 사용함으로서 효율 좋게 dCP4U를 제조할 수 있음을 발견하고, 이들 발견을 기초로 하여 본 발명을 완성하기에 이르렀다.
즉, 본 발명은 dCP4U의 결정을 제공하는 것이다.
또한, 본 발명은 조(粗) dCP4U를 음이온 교환 크로마토그래피와 활성탄 크로마토그래피를 이용하여 정제하고, 정제된 dCP4U 용액에 친수성 유기용매를 가하여 dCP4U를 결정으로서 석출시키는 것을 특징으로 하는 dCP4U의 결정의 제조법을 제공하는 것이다.
또한, 본 발명은 UMP, dCMP, DPC 및 PPi를 반응시켜 dCP4U를 제조하는 방법을 제공하는 것이다.
이하, 실시예를 들어 본 발명을 구체적으로 설명하나, 본 발명이 이들에 한정되는 것은 아니다.
실시예 l dCP4U·4Na결정의 제조
(1) DCC를 이용하는 방법
UTP, dCMP 및 DCC를 이용하여 20 mmole의 반응 스케일에서 dCP4U를 통상의 방법(WO98/34942)에 의해 조제했다.
얻어진 dCP4U 합성액을 물로 1000㎖로 액의 양을 조정한 후, 중염기성 아니온교환수지(앰버라이트 IRA-67[Rohm & Haas])를 충진한 컬럼에 걸고, 물, 0.18M 염산 수용액 및 0.5M 식염 함유 0.005M 염산 수용액의 순서로 용출하여 dCP4U 함유 획분을 취득했다.
얻어진 dCP4U 획분 4000㎖를 크로마토용 활성탄(Taiko 과립활성탄 SGP [후타무라 카가쿠고교(주)사제])을 충전한 컬럼에 걸고, 0.05M 수산화나트륨 수용액8000㎖를 이용하여 dCP4U를 용출했다.
상기 dCP4U획분을 농축하여 슬러리를 조제한 후, pH 6.0으로 조정하고, 교반하면서 서서히 에탄올을 첨가하고, 다시 10℃로 냉각하면서 슬러리를 교반하여 dCP4U·4Na 결정을 석출시키고, 이것을 분리하여 dCP4U·4Na결정 8.9g을 얻었다. 얻어진 결정은 약 60℃에서 약 4시간 감압 건조 후, 기기분석 등에 제공하였다.
(2) DPC를 이용하는 방법
UTP·3Na 12.8kg을 135ℓ의 물에 용해하고, 카치온교환수지(Mitsubishi Chemical Co., Ltd.)를 충전한 컬럼에 걸고, 통과액과 수용출 분획을 모으고, 교반하면서 트리부틸아민(TBA) 13.6kg을 서서히 가하여 중화했다.
얻어진 액체를 농축하고, 포름아미드 10kg을 가하고, 디옥산을 이용하여 공비탈수를 행했다. 탈수 후, 피리딘 11.6kg을 가하여 희석하여, UTP의 피리딘 용액을 조제했다.
한편, 별도의 탱크에 메탄올 18ℓ에 dCMP 7.5kg을 가하고, 교반하면서 TBA 4.5kg을 서서히 가하고, 60℃로 가온했다. 용해후, 농축하여 건고시켰다. 75℃에서 진공 건조하고, 분쇄한 후, 그 중의 10.3kg을 디메틸아세트아미드(DMAc) 16.7kg에 현탁하고, 디페닐포스포클로리데이트(DPC) 4.4kg을 가하고, 10분간 교반했다. 그 후, TBA 10.8kg을 가하고, 30분간 교반하고, dCMP-DPP 용액으로 했다.
얻어진 dCMP-DPP 용액을 먼저 조제해 놓은 UTP의 피리딘 용액에 교반하면서 첨가했다. 첨가 후, 실온에서 하룻밤 교반하고, 탈이온수를 가하여 반응을 정지시켰다.
30%수산화나트륨 수용액 31를 가하고 30분간 교반하고, 분액에 의해 유리한 TBA를 제거했다. 그런 다음, 6 mol/ℓ 염산용액으로 pH를 약 7로 조정했다. 농축하여 용매를 제거하고, 95% 에탄올을 같은 양으로 가하고, 하룻밤 정치했다. 상층의 에탄올층을 흡인 제거한 후, 물엿상의 침전에 물을 가하여 용해하고, 농축하여 용매를 제거했다.
얻어진 dCP4U 합성액을 2500ℓ로 액의 양을 조정하고, 중알칼리성 아니온 교환수지(앰버라이트 IRA-97[Rohm & Haas제])를 충전한 컬럼에 걸었다. 물, 0.1 mol/ℓ 염산수용액 및 0.4 mo1/ℓ 식염 함유 0.005 mol/ℓ 염산 수용액의 순서로 용출하고, dCP4U 함유 분획을 취득했다.
얻어진 dCP4U분획 2100ℓ를 크로마토용 활성탄(Taiko 과립 활성탄 SGP[후타무라카가쿠고교(주)사 제])을 충전한 컬럼에 걸고, 0.05mol/ℓ 수산화나트륨 수용액 1200ℓ를 이용하여 dCP4U를 용출했다.
상기 dCP4U 용출 분획을 농축하고, 30%수산화나트륨 수용액을 이용하여 pH 를 7.5로 조정하고, 교반하면서, 95% 에탄올을 가하여 dCP4U·4Na 결정을 석출시키고, 이것을 분리했다. 얻어진 결정을 60℃에서 4시간 건조하여 목적으로 하는 dCP4U·4Na 결정 4.2kg(수분 5.9%, 수율 22%)를 얻었다.
〔dCP4U·4Na 결정의 물성〕
상기 실시예의 (1) 또는 (2)로 조제한 dCP4U·4Na 결정과 WO98/34942의 실시예 20 기재의 방법과 동일 방법으로 dCP4U·4Na의 백색분말(동결건조품)과 물성을 비교했다.
(3) 기기 분석
① 순도검정
상기 실시예 (1) 및 (2)에서 얻어진 dCP4U·4Na 및 각 크로마토그래피 처리에 의한 정제후의 dCP4U획분의 순도를 고속 액체 크로마토그래피법으로 분석한 결과를 표 1 및 2에 나타낸다. 또한, 고속 액체 크로마토그래피법은 이하의 조건으로 행했다.
컬럼: HITACHIGEL #3013-N
(히타찌 계측기 서비스 주식회사 제)
용출액: 10% CH3CN, 0.18M NH4Cl, 0.03M KH2PO4, 0.03M K2HPO4
검출법: UV262nm에 의한 검출
(-)는 미측정
(-)는 미측정
② 결정형
dCP4U·4Na 결정(3.5 수화물)의 대표적인 결정의 사진을 도 l에 나타낸다.
③ 수분
칼 핏셔법에 의해 결정품의 수분함량을 측정한 결과, 건조의 정도에 따라 변동하는 것의 6.9∼17.4중량%의 수분에서 안정화하고, 계산에 의해 dCP4U 1분자에 대해 3.5∼10분자의 물분자가 결합 또는 부착하고 있는 것이 밝혀졌다.
④ 융점
통상의 방법에 의해 융점을 측정한 결과, 결정품의 융점은 202∼210℃이었다.
또한, 동결건조품의 융점은 약 195∼210℃이다.
⑤ X선회절
X선 회절장치(Rigaku Denki 제품, 모텍: RINT2500V)를 이용하여 하기 측정 조건에서 X선회절 스펙트럼을 측정했다(측정오차 ±0.1°). 도 2 및 표 3은 dCP4U·4Na 결정의 3.5 수화물의 데이터이며, 도 3 및 표 4는 dCP4U·4Na 결정의 10수화물의 데이터이다. 또한, 참고로서 동결건조품의 X선회절 스펙트럼을 도 4에 나타낸다.
(측정조건)
X선 관구: Cu-Kα
X선 출력: 50kV-300mA
주사 속도: 4.0°/분
주사 간격: 0.02°
측각 범위: 2∼40°
슬릿: DS-0.5°, RS-0.15mm, SS-0.5°
전처리: 마노 막자사발로 분쇄
⑥ 흡습성
수분 약 17.4%의 dCP4U·4Na결정(10수화물)을 (a) 온도 25℃, 상대습도 57%, (b) 온도 25℃, 상대습도 75%, (c) 온도 25℃, 상대습도 93%의 각각의 조건에서 2일간 보존한 경우, 분해, 중량 변화도 관찰되지 않았고, 안정하여 흡습성을 갖지 않는 것이 확인됐다. 또한, (d) 온도 40℃, 상대습도 75%의 가혹한 조건에서 7일간 보존해도 변화는 관찰되지 않았다.
이에 반해, 동결건조품(초기 수분 함량: 약 1%)을 (a) 온도 25℃, 상대습도 75%, (b) 온도 25℃, 상대습도 93%의 각각의 조건에서 2일간 보존한 경우, 수분 함량이 서서히 증가하고, 2일째에는 조해하여 진흙 상태로 되었다.
⑦ 안정성
dCP4U·4Na결정(10 수화물)과 동결건조품을 병에 밀봉하고, 60℃에서 13일간 보존했다(가속 시험). 그 결과, 결정품의 분해는 전혀 관찰되지 않았으나, 동결 건조품은 약 2.2%의 순도 저하가 관찰되고, 일부가 분해하여 있는 것이 명백하였다.
⑧ NMR
결정품 또는 동결건조품을 그대로 지르코니아제 로터에 충전하고,13C-CPMAS NMR의 측정을 행했다. 측정조건을 아래에 나타낸다.
13C-CPMAS-NMR
1) 장치 Chemagnetics사 제 CMX-300
2) 측정방법 CPMAS(sideband suppression)
3) 측정온도 실온
4) 관측핵13C
5) 관측 주파수 75.502MHz
6) 프로톤 여기 펄스폭 4.5μs
7) 콘택트 타임 0.5 msec.
8) 관측폭 30.03kHz
9) 관측 포인트 2048
10) 데이터 포인트 l6384
11) 관측 반복시간 15.0sec.(도 6, 도 7), 60.0sec.(도 5)
12) 화학 시프트 기준 헥사메틸벤젠(외부 표준 17.35ppm)
13) 시료 회전속도 5kHz
14) 적산 회수 256 회
도 5 및 표 5에 dCP4U·4Na결정의 3.5수화물의13CPMAS-NMR 스펙트럼을,도 6 및 표 6에 dCP4U·4Na결정의 10수화물의13C-CPMAS-NMR 스펙트럼을, 도 7 및 표 7에 dCP4U의 백색 분말 (동결건조품)의13C-CPMAS-NMR 스펙트럼을 나타낸다. 또한, 도 5∼7의 피크번호는 표 5∼7의 피크번호이다.
실시예 2: UMP로부터 dCP4U의 합성
탈수한 피롤린산의 트리에틸아민염(TEA-PPi)(10 mmo1), 포름아미드 2.5 ㎖ 및 피리딘 7.6㎖를 가하고 교반했다. 한편, 별도의 용기에 탈수한 우리딘 5-모노포스페이트의 트리부틸아민염(UMP-TBA)(10 mmol)에 DMAC 3.6 ㎖, 디옥산 3.2 ㎖ 및 트리부틸아민 3.3 ㎖를 가하여 교반하고, DPC 2.3 ㎖를 적하했다. 실온에서 1시간 교반하여 UMP-DPP를 생성시키고, 앞에서 조제해 놓은 TEA-PPi 탈수액에 가했다. 실온에서 1시간 교반하고, UTP를 생성시켰다. 다시, 별도의 용기에 2'-데옥시시티딘 5'-모노포스페이트의 트리부틸아민염(TBA-dCMP) 4.9 g(10 mmol)에 DMAC 7.2 ㎖를 가하여 현탁하고, DPC 2.2 ㎖(1.1당량)를 가하고, 40분간 교반했다. 그런 다음, 트리부틸아민(TBA) 9.5 ㎖를 가하고, 다시 20분간 교반하고, dCMP-DPP를 조제했다. 얻어진 dCMP-DPP 용액을 앞에서 조제해 놓은 UTP 합성액에 가하고, 실온에서 56시간 교반했다. 반응액에 물을 가하여 반응을 정지하고, 30% 수산화나트륨 수용액으로 pH를 11로 조정했다. 농축하여 용매를 제거한 후, 6 mol/ℓ 염산으로 pH를 7.0으로 조정하고, 에틸아세테이트로 분액을 행했다. 분액후 수층을 HPLC(272 nm)으로 분석한 결과, dCP4U의 합성수율은 37.7%이었다.
본 발명 방법에 의해 얻어진 dCP4U의 결정은 고순도임과 동시에 동결건조품에 비하여 흡습성도 없고, 극히 안정하기 때문에 다루기 쉽고, 의약품 원료로서 유용하다.
또한, 본 발명의 dCP4U의 제조법에 의하면, 저렴한 원료인 UMP를 사용할 수 있고, 더욱이 고수율로 dCP4U를 제조할 수 있으며, dCP4U의 대량 합성에 매우 적합한 방법이다.
Claims (9)
- P1-(2'-데옥시시티딘 5'-)P4-(우리딘 5'-)테트라포스페이트 또는 그의 염의 결정.
- P1-(2'-데옥시시티딘 5'-)P4-(우리딘 5'-)테트라포스페이트·4 나트륨염의 결정.
- 제 1항 또는 제 2항에 있어서, 95%이상의 순도를 갖는 결정.
- 제 1항 또는 제 2항에 있어서, 97%이상의 순도를 가지며, 우리딘 5'-트리포스페이트가 2%이하인 결정.
- 제 1항 또는 제 2항에 있어서, 98%이상의 순도를 가지며, 우리딘 5'-트리포스페이트가 1%이하인 결정.
- 조 P1-(2'-데옥시시티딘 5'-)P4-(우리딘 5'-)테트라포스페이트를 음이온 교환 크로마토그래피와 활성탄 크로마토그래피를 이용하여 정제하고, 정제된 P1-(2'-데옥시시티딘 5'-)P4-(우리진 5'-)테트라포스페이트 용액에 친수성 유기용매를 가하여 P1-(2'-데옥시시티딘 5'-)P4-(우리딘 5'-)테트라포스페이트를 결정으로서 석출 시킴을 특징으로 하는 청구항 1 기재의 결정의 제조법.
- 제 6항에 있어서, 정제가 음이온 교환크로마토그래피를 행한 후, 이어서 활성탄 크로마토그래피를 행하는 것을 특징으로 하는 제조법.
- 우리딘 5'-모노포스페이트(UMP), 2'-데옥시시티딘 5'-모노포스페이트(dCMP), 디페닐포스포클로리데이트(DPC) 및 피로포스페이트(PPi)를 반응시킴을 특징으로 하는 P1-(2'-데옥시시티딘 5'-)P4-(우리딘 5'-)테트라포스페이트(dCP4U)의 제조법.
- 제 8항에 있어서, 처음에 UMP와 DPC를 반응시켜 UMP디페닐포스페이트(UMP-DPP)를 합성하고, 여기에 PPi를 반응시켜 반응액중에 우리딘 5'-트리포스페이트(UTP)를 생성시키고, 얻어진 UTP를 분리하지 않고, DPC 존재하에 dCMP와 UTP를 반응시켜 dCP4U를 제조함을 특징으로 하는 P1-(2'-데옥시시티딘 5'-)P4-(우리딘 5'-)테트라포스페이트(dCP4U)의 제조법.
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