JP3421666B2 - ジヌクレオチド結晶 - Google Patents
ジヌクレオチド結晶Info
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- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
- C07H19/00—Compounds containing a hetero ring sharing one ring hetero atom with a saccharide radical; Nucleosides; Mononucleotides; Anhydro-derivatives thereof
- C07H19/02—Compounds containing a hetero ring sharing one ring hetero atom with a saccharide radical; Nucleosides; Mononucleotides; Anhydro-derivatives thereof sharing nitrogen
- C07H19/04—Heterocyclic radicals containing only nitrogen atoms as ring hetero atom
- C07H19/06—Pyrimidine radicals
- C07H19/10—Pyrimidine radicals with the saccharide radical esterified by phosphoric or polyphosphoric acids
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
- C07H21/00—Compounds containing two or more mononucleotide units having separate phosphate or polyphosphate groups linked by saccharide radicals of nucleoside groups, e.g. nucleic acids
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
- C07H1/00—Processes for the preparation of sugar derivatives
- C07H1/06—Separation; Purification
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は、慢性気管支炎、副
鼻腔炎などの治療薬として有用なＰ1−（２’−デオキ
シシチジン５’−）Ｐ4−（ウリジン５’−）テトラホ
スフェート（ｄＣＰ４Ｕ）またはその薬学的に許容され
る塩（以下、単に「ｄＣＰ４Ｕ」と称することもある）
の結晶および当該結晶の製造法に関する。
鼻腔炎などの治療薬として有用なＰ1−（２’−デオキ
シシチジン５’−）Ｐ4−（ウリジン５’−）テトラホ
スフェート（ｄＣＰ４Ｕ）またはその薬学的に許容され
る塩（以下、単に「ｄＣＰ４Ｕ」と称することもある）
の結晶および当該結晶の製造法に関する。
【０００２】
【従来の技術】下記式［Ｉ］で表されるｄＣＰ４Ｕまた
はその塩は、Ｐ２Ｙ２および／またはＰ２Ｙ２プリン受
容体（purine receptor）の選択的アゴニスト（agonis
t）であり、慢性気管支炎（chronic bronchitis）、副
鼻腔炎などの治療薬としての開発が期待されている化合
物である（例えば、特許文献１参照）。
はその塩は、Ｐ２Ｙ２および／またはＰ２Ｙ２プリン受
容体（purine receptor）の選択的アゴニスト（agonis
t）であり、慢性気管支炎（chronic bronchitis）、副
鼻腔炎などの治療薬としての開発が期待されている化合
物である（例えば、特許文献１参照）。
【０００３】
【化１】
【０００４】従来、ｄＣＰ４Ｕは結晶としては取得され
ておらず、凍結乾燥させて得た白色粉末（white soli
d）としてのみ調製されていた。しかし、従来の粉末品
は純度が低く（ＨＰＬＣ純度：８２％）、特に原料であ
るウリジン５’−トリリン酸（ＵＴＰ）とｄＣＰ４Ｕと
の分離が難しく、従来精製に使用されていたイオン交換
クロマトグラフィー法だけでは高純度のｄＣＰ４Ｕを調
製することは非常に困難なことであった（例えば、特許
文献１参照）。
ておらず、凍結乾燥させて得た白色粉末（white soli
d）としてのみ調製されていた。しかし、従来の粉末品
は純度が低く（ＨＰＬＣ純度：８２％）、特に原料であ
るウリジン５’−トリリン酸（ＵＴＰ）とｄＣＰ４Ｕと
の分離が難しく、従来精製に使用されていたイオン交換
クロマトグラフィー法だけでは高純度のｄＣＰ４Ｕを調
製することは非常に困難なことであった（例えば、特許
文献１参照）。
【０００５】かかる純度の低い白色粉末品は、吸湿しや
すい等の欠点を有することから、ｄＣＰ４Ｕを医薬品と
して製剤化する際には湿気に配慮した特別の製造装置を
必要としたり、製剤製造後も厳重な包装を必要とした。
さらに、従来の粉末品は安定性が悪いため、有効期限の
非常に短い薬剤とならざるを得ず、高純度の安定結晶体
の取得が望まれていた。一方、ｄＣＰ４Ｕは、２’−デ
オキシシチジン５’−モノリン酸（ｄＣＭＰ）とＵＴＰ
を出発原料とし、活性化剤としてジサイクロヘキシルカ
ルボジイミド（ＤＣＣ）を用いて合成されていたが、従
来法の合成収率は約９％と極めて低く（例えば、特許文
献１、実施例２０参照）、到底実用的な方法とはなり得
なかった。従って、高収率で大量合成に適した製造法の
開発も切望されていた。
すい等の欠点を有することから、ｄＣＰ４Ｕを医薬品と
して製剤化する際には湿気に配慮した特別の製造装置を
必要としたり、製剤製造後も厳重な包装を必要とした。
さらに、従来の粉末品は安定性が悪いため、有効期限の
非常に短い薬剤とならざるを得ず、高純度の安定結晶体
の取得が望まれていた。一方、ｄＣＰ４Ｕは、２’−デ
オキシシチジン５’−モノリン酸（ｄＣＭＰ）とＵＴＰ
を出発原料とし、活性化剤としてジサイクロヘキシルカ
ルボジイミド（ＤＣＣ）を用いて合成されていたが、従
来法の合成収率は約９％と極めて低く（例えば、特許文
献１、実施例２０参照）、到底実用的な方法とはなり得
なかった。従って、高収率で大量合成に適した製造法の
開発も切望されていた。
【０００６】
【特許文献１】国際公開第９８／３４９４２号
【０００７】
【発明が解決しようとする課題】本発明は、医薬品とし
て製剤化するのに適したｄＣＰ４Ｕの安定結晶及びその
結晶の製造法を提供することを目的とする。
て製剤化するのに適したｄＣＰ４Ｕの安定結晶及びその
結晶の製造法を提供することを目的とする。
【０００８】
【課題を解決するための手段】本発明者らはｄＣＰ４Ｕ
の安定化に関して鋭意研究を重ねた結果、陰イオン交換
樹脂を用いたクロマトグラフィー処理と活性炭を用いた
クロマトグラフィー処理を併用することにより純度９５
％以上のｄＣＰ４Ｕを調製することができ、このような
高純度のｄＣＰ４Ｕを調製することにより初めてｄＣＰ
４Ｕの結晶化に成功した。得られたｄＣＰ４Ｕ結晶は従
来品と比較して格段に純度が高く、吸湿性がなく、優れ
た安定性を有するものであることを確認した。すなわち
本発明は、ｄＣＰ４Ｕの結晶を提供するものである。ま
た本発明は、粗ｄＣＰ４Ｕを陰イオン交換クロマトグラ
フィーと活性炭クロマトグラフィーとを用いて精製し、
精製されたｄＣＰ４Ｕ溶液に親水性有機溶媒を加えてｄ
ＣＰ４Ｕを結晶として析出させることを特徴とするｄＣ
Ｐ４Ｕの結晶の製造法を提供するものである。
の安定化に関して鋭意研究を重ねた結果、陰イオン交換
樹脂を用いたクロマトグラフィー処理と活性炭を用いた
クロマトグラフィー処理を併用することにより純度９５
％以上のｄＣＰ４Ｕを調製することができ、このような
高純度のｄＣＰ４Ｕを調製することにより初めてｄＣＰ
４Ｕの結晶化に成功した。得られたｄＣＰ４Ｕ結晶は従
来品と比較して格段に純度が高く、吸湿性がなく、優れ
た安定性を有するものであることを確認した。すなわち
本発明は、ｄＣＰ４Ｕの結晶を提供するものである。ま
た本発明は、粗ｄＣＰ４Ｕを陰イオン交換クロマトグラ
フィーと活性炭クロマトグラフィーとを用いて精製し、
精製されたｄＣＰ４Ｕ溶液に親水性有機溶媒を加えてｄ
ＣＰ４Ｕを結晶として析出させることを特徴とするｄＣ
Ｐ４Ｕの結晶の製造法を提供するものである。
【０００９】
【発明の実施の形態】本発明のｄＣＰ４Ｕの結晶は、粗
ｄＣＰ４Ｕを特定の手段で精製し、精製されたｄＣＰ４
Ｕ溶液に親水性有機溶媒を加えてｄＣＰ４Ｕを結晶とし
て析出させることにより得られる。以下、精製と結
晶化に分けて説明する。
ｄＣＰ４Ｕを特定の手段で精製し、精製されたｄＣＰ４
Ｕ溶液に親水性有機溶媒を加えてｄＣＰ４Ｕを結晶とし
て析出させることにより得られる。以下、精製と結
晶化に分けて説明する。
【００１０】ｄＣＰ４Ｕの精製
ｄＣＰ４Ｕの精製は、陰イオン交換クロマトグラフィー
と活性炭クロマトグラフィーの２つのクロマトグラフィ
ーを併用することにより行うことができる。両クロマト
グラフィ−を用いた精製は何れを先に行ってもよいが、
最初に陰イオン交換クロマトグラフィーを行い、次いで
活性炭クロマトグラフィーを行うことが、ｄＣＰ４Ｕの
純度向上の点から好ましい。
と活性炭クロマトグラフィーの２つのクロマトグラフィ
ーを併用することにより行うことができる。両クロマト
グラフィ−を用いた精製は何れを先に行ってもよいが、
最初に陰イオン交換クロマトグラフィーを行い、次いで
活性炭クロマトグラフィーを行うことが、ｄＣＰ４Ｕの
純度向上の点から好ましい。
【００１１】ここで用いられる陰イオン交換樹脂として
は、スチレン系或いはアクリル系樹脂を基材とする樹脂
であればよく、強塩基性陰イオン交換樹脂（例えば、ア
ンバーライトＩＲＡ４０２〔ローム＆ハース社製〕、ダ
イアイオンＰＡ−３１２、ダイアイオンＳＡ−１１Ａ
〔三菱化学社製〕）、又は弱塩基性陰イオン交換樹脂
（例えば、アンバーライトＩＲＡ６７〔ローム＆ハース
社製〕、ダイアイオンＷＡ−３０〔三菱化学社製〕）の
いずれを用いてもかまわない。
は、スチレン系或いはアクリル系樹脂を基材とする樹脂
であればよく、強塩基性陰イオン交換樹脂（例えば、ア
ンバーライトＩＲＡ４０２〔ローム＆ハース社製〕、ダ
イアイオンＰＡ−３１２、ダイアイオンＳＡ−１１Ａ
〔三菱化学社製〕）、又は弱塩基性陰イオン交換樹脂
（例えば、アンバーライトＩＲＡ６７〔ローム＆ハース
社製〕、ダイアイオンＷＡ−３０〔三菱化学社製〕）の
いずれを用いてもかまわない。
【００１２】活性炭といては、破砕状或いは粒状に整形
されたクロマト用活性炭を使用すればよく、例えば和光
純薬工業社、二村化学工業社製等の市販品を使用でき
る。
されたクロマト用活性炭を使用すればよく、例えば和光
純薬工業社、二村化学工業社製等の市販品を使用でき
る。
【００１３】各クロマトグラフィーは、バッチ式、カラ
ム式等いずれの形式であってもよく、カラムクロマトグ
ラフィーを行う場合、陰イオン交換カラムクロマトグラ
フィーの溶出剤としては、酸（例：塩酸）水溶液或いは
これに食塩等を添加してイオン強度を高めたもの、活性
炭カラムクロマトグラフィーの溶出剤としては、水又は
アルカリ（例：水酸化ナトリウム）水溶液をそれぞれ使
用することができる。各溶出剤の濃度は、０．００１〜
１０Ｍの範囲内から好適なものを小規模試験により適宜
決定すればよい。
ム式等いずれの形式であってもよく、カラムクロマトグ
ラフィーを行う場合、陰イオン交換カラムクロマトグラ
フィーの溶出剤としては、酸（例：塩酸）水溶液或いは
これに食塩等を添加してイオン強度を高めたもの、活性
炭カラムクロマトグラフィーの溶出剤としては、水又は
アルカリ（例：水酸化ナトリウム）水溶液をそれぞれ使
用することができる。各溶出剤の濃度は、０．００１〜
１０Ｍの範囲内から好適なものを小規模試験により適宜
決定すればよい。
【００１４】ｄＣＰ４Ｕの結晶化
ｄＣＰ４Ｕの結晶化は、得られた精製ｄＣＰ４Ｕ溶液に
親水性有機溶媒を加えてｄＣＰ４Ｕを結晶として析出さ
せることにより行われる。
親水性有機溶媒を加えてｄＣＰ４Ｕを結晶として析出さ
せることにより行われる。
【００１５】ここで使用できる親水性有機溶媒として
は、メタノール、エタノール等炭素数６以下のアルコー
ル類、アセトン等のケトン類、ジオキサン等のエーテル
類、アセトニトリル他のニトリル類、ジメチルホルムア
ミド等のアミド類等を例示することができ、特にアルコ
ール類、エタノールが好ましい。
は、メタノール、エタノール等炭素数６以下のアルコー
ル類、アセトン等のケトン類、ジオキサン等のエーテル
類、アセトニトリル他のニトリル類、ジメチルホルムア
ミド等のアミド類等を例示することができ、特にアルコ
ール類、エタノールが好ましい。
【００１６】より具体的には、精製ｄＣＰ４Ｕ溶液或い
はこれを濃縮して得られるスラリー液に、所望によりｐ
Ｈを５〜１０、好ましくは６〜９に調整後、６０℃以
下、好ましくは２０℃以下の温度条件下で親水性有機溶
媒を添加し、ｄＣＰ４Ｕを結晶として析出させることに
よりｄＣＰ４Ｕの安定結晶を得ることができる。
はこれを濃縮して得られるスラリー液に、所望によりｐ
Ｈを５〜１０、好ましくは６〜９に調整後、６０℃以
下、好ましくは２０℃以下の温度条件下で親水性有機溶
媒を添加し、ｄＣＰ４Ｕを結晶として析出させることに
よりｄＣＰ４Ｕの安定結晶を得ることができる。
【００１７】かくして得られた本発明のｄＣＰ４Ｕ結晶
は少なくとも、ｄＣＰ４Ｕが９５％以上、ＵＴＰが３％
以下、の純度を有するものである。このようなｄＣＰ４
Ｕ結晶の中でも更に、ｄＣＰ４Ｕが９７％以上、ＵＴＰ
が２％以下、の純度を有するものが好ましく、さらにｄ
ＣＰ４Ｕが９８％以上、ＵＴＰが１％以下、の純度を有
するものが特に好ましい。
は少なくとも、ｄＣＰ４Ｕが９５％以上、ＵＴＰが３％
以下、の純度を有するものである。このようなｄＣＰ４
Ｕ結晶の中でも更に、ｄＣＰ４Ｕが９７％以上、ＵＴＰ
が２％以下、の純度を有するものが好ましく、さらにｄ
ＣＰ４Ｕが９８％以上、ＵＴＰが１％以下、の純度を有
するものが特に好ましい。
【００１８】このような高純度のｄＣＰ４Ｕ結晶は、
塩、水和物又は含水塩の形態であってもよく、塩として
はナトリウム塩、カリウム塩等のアルカリ金属塩、カル
シウム塩、マグネシウム塩等のアルカリ土類金属塩、ア
ンモニウム塩等の薬学的に許容される塩が例示される。
塩の置換数は、１〜４個の金属が置換したものが挙げら
れる。
塩、水和物又は含水塩の形態であってもよく、塩として
はナトリウム塩、カリウム塩等のアルカリ金属塩、カル
シウム塩、マグネシウム塩等のアルカリ土類金属塩、ア
ンモニウム塩等の薬学的に許容される塩が例示される。
塩の置換数は、１〜４個の金属が置換したものが挙げら
れる。
【００１９】また、水和物としてはｄＣＰ４Ｕ１分子に
対し１〜１４分子の水が結合又は付着したものが例示さ
れる。さらに、含水塩としては、例えばｄＣＰ４Ｕ結晶
のアルカリ金属塩１分子に１〜１４分子の水分子が結合
又は付着したものを挙げることができる。
対し１〜１４分子の水が結合又は付着したものが例示さ
れる。さらに、含水塩としては、例えばｄＣＰ４Ｕ結晶
のアルカリ金属塩１分子に１〜１４分子の水分子が結合
又は付着したものを挙げることができる。
【００２０】なお、本発明のｄＣＰ４Ｕの結晶には互変
異性体も包含されうる。
異性体も包含されうる。
【００２１】このようにして得られたｄＣＰ４Ｕの結晶
は、必要により減圧乾燥、通風乾燥、加熱乾燥等の通常
の方法により乾燥後、容器（ビン、袋、カン、アンプル
等）に充填する。容器における封入状態は、開放、密
閉、気密、密封のいずれの状態であってもよいが、保存
安定性を維持する観点から開放状態でない方が好まし
い。
は、必要により減圧乾燥、通風乾燥、加熱乾燥等の通常
の方法により乾燥後、容器（ビン、袋、カン、アンプル
等）に充填する。容器における封入状態は、開放、密
閉、気密、密封のいずれの状態であってもよいが、保存
安定性を維持する観点から開放状態でない方が好まし
い。
【００２２】本発明で使用するｄＣＰ４Ｕは、ＵＭＰ、
ｄＣＭＰ、ジフェニルホスホロクロリデート（ＤＰＣ）
およびピロホスフェート（ＰＰｉ）を反応させてｄＣＰ
４Ｕを製造することができる。より具体的には、最初に
ＵＭＰとＤＰＣを反応させてＵＭＰジフェニルホスフェ
ート（ＵＭＰ−ＤＰＰ）を合成し、これにＰＰｉを反応
させて反応液中にＵＴＰを生成させ、得られたＵＴＰを
単離することなく、ＤＰＣ存在下、ＵＴＰとｄＣＭＰと
を反応させてｄＣＰ４Ｕを製造する。
ｄＣＭＰ、ジフェニルホスホロクロリデート（ＤＰＣ）
およびピロホスフェート（ＰＰｉ）を反応させてｄＣＰ
４Ｕを製造することができる。より具体的には、最初に
ＵＭＰとＤＰＣを反応させてＵＭＰジフェニルホスフェ
ート（ＵＭＰ−ＤＰＰ）を合成し、これにＰＰｉを反応
させて反応液中にＵＴＰを生成させ、得られたＵＴＰを
単離することなく、ＤＰＣ存在下、ＵＴＰとｄＣＭＰと
を反応させてｄＣＰ４Ｕを製造する。
【００２３】ＵＭＰからＵＭＰ−ＤＰＰの合成は、例え
ば、常法により調製したＵＭＰトリアルキルアミン塩
（例：ＵＭＰトリブチルアミン塩）をＤＭＦ、ジメチル
アセトアミド（ＤＭＡＣ）等のアミド系溶媒、ジオキサ
ン、テトラヒドロフラン等の環状エーテル系溶媒、アセ
トン等のケトン系溶媒、ジメチルイミダゾリジノン、ヘ
キサメチルリン酸トリアミド等の単独又は混合溶媒に溶
解し、ＤＰＣと必要によりトリアルキルアミンを加え、
１０〜５０℃で３０分〜５時間程度反応させることによ
り実施できる。
ば、常法により調製したＵＭＰトリアルキルアミン塩
（例：ＵＭＰトリブチルアミン塩）をＤＭＦ、ジメチル
アセトアミド（ＤＭＡＣ）等のアミド系溶媒、ジオキサ
ン、テトラヒドロフラン等の環状エーテル系溶媒、アセ
トン等のケトン系溶媒、ジメチルイミダゾリジノン、ヘ
キサメチルリン酸トリアミド等の単独又は混合溶媒に溶
解し、ＤＰＣと必要によりトリアルキルアミンを加え、
１０〜５０℃で３０分〜５時間程度反応させることによ
り実施できる。
【００２４】ＵＭＰ−ＤＰＰと反応させるＰＰｉとして
は、ＰＰｉ−有機アルカリ塩が好ましく、具体的にはＰ
Ｐｉのヘキシルアミン塩、ジブチルアミン塩、トリエチ
ルアミン塩、トリブチルアミン塩等が挙げられる。
は、ＰＰｉ−有機アルカリ塩が好ましく、具体的にはＰ
Ｐｉのヘキシルアミン塩、ジブチルアミン塩、トリエチ
ルアミン塩、トリブチルアミン塩等が挙げられる。
【００２５】ＵＭＰ−ＤＰＰとＰＰｉ−有機アルカリ塩
との反応は、ＰＰｉ−有機アルカリ塩をＤＭＦ、ＤＭＡ
Ｃ、ホルムアミド等のアミド系溶媒、ジオキサン、テト
ラヒドロフラン等の環状エーテル系溶媒、アセトン等の
ケトン系溶媒、ジメチルイミダゾリジノン、ヘキサメチ
ルリン酸トリアミド、ジメチルスルホキシド、アセトニ
トリル等の単独又は混合溶媒に溶解し、これを上記のＵ
ＭＰ−ＤＰＰ合成液に添加し、１０〜５０℃で３０分〜
５時間程度反応させることにより行うことができる。
との反応は、ＰＰｉ−有機アルカリ塩をＤＭＦ、ＤＭＡ
Ｃ、ホルムアミド等のアミド系溶媒、ジオキサン、テト
ラヒドロフラン等の環状エーテル系溶媒、アセトン等の
ケトン系溶媒、ジメチルイミダゾリジノン、ヘキサメチ
ルリン酸トリアミド、ジメチルスルホキシド、アセトニ
トリル等の単独又は混合溶媒に溶解し、これを上記のＵ
ＭＰ−ＤＰＰ合成液に添加し、１０〜５０℃で３０分〜
５時間程度反応させることにより行うことができる。
【００２６】上記のＰＰｉ−有機アルカリ塩とＵＭＰ−
ＤＰＰとの反応は、任意の塩基を共存させて反応させて
もよく、かかる塩基としては、例えばピリジン、２，６
−ルチジン，２，４−ルチジン、α−ピコリン，β−ピ
コリン、γ−ピコリン、２−，４−ジメチルアミノピリ
ジン、α−コリジン、β−コリジン、γ−コリジン等の
ピリジン系塩基等が挙げられ、特にピリジンが好まし
い。なお、かかる塩基が反応溶媒を兼用してもかまわな
い。使用する塩基の濃度は特に制限されず、原料として
使用したＵＭＰに対して６当量以上、望ましくは１８当
量以上を添加するのが好ましい。
ＤＰＰとの反応は、任意の塩基を共存させて反応させて
もよく、かかる塩基としては、例えばピリジン、２，６
−ルチジン，２，４−ルチジン、α−ピコリン，β−ピ
コリン、γ−ピコリン、２−，４−ジメチルアミノピリ
ジン、α−コリジン、β−コリジン、γ−コリジン等の
ピリジン系塩基等が挙げられ、特にピリジンが好まし
い。なお、かかる塩基が反応溶媒を兼用してもかまわな
い。使用する塩基の濃度は特に制限されず、原料として
使用したＵＭＰに対して６当量以上、望ましくは１８当
量以上を添加するのが好ましい。
【００２７】上記ＰＰｉ−有機アルカリ塩とＵＭＰ−Ｄ
ＰＰとの反応により反応液中にはＵＴＰが合成される。
この反応液中に生成したＵＴＰとｄＣＭＰを、ＤＣＰの
存在下、反応させることによりｄＣＰ４Ｕを合成する。
用いるｄＣＭＰは、ｄＣＭＰそのものであってもよく、
またＵＭＰと同様に、ｄＣＭＰジフェニルホスフェート
（ｄＣＭＰ−ＤＰＰ）に変換後、反応液に添加してもか
まわない。
ＰＰとの反応により反応液中にはＵＴＰが合成される。
この反応液中に生成したＵＴＰとｄＣＭＰを、ＤＣＰの
存在下、反応させることによりｄＣＰ４Ｕを合成する。
用いるｄＣＭＰは、ｄＣＭＰそのものであってもよく、
またＵＭＰと同様に、ｄＣＭＰジフェニルホスフェート
（ｄＣＭＰ−ＤＰＰ）に変換後、反応液に添加してもか
まわない。
【００２８】ｄＣＰ４Ｕの合成反応は、上記のＵＴＰ合
成液に、原料として使用したＵＭＰに対して１．１当量
以上のＤＰＣと０．５〜１．５当量のｄＣＭＰまたはｄ
ＣＭＰ−ＤＰＰを添加し、１０〜５０℃で３０分〜５時
間程度反応させることにより行うことができる。
成液に、原料として使用したＵＭＰに対して１．１当量
以上のＤＰＣと０．５〜１．５当量のｄＣＭＰまたはｄ
ＣＭＰ−ＤＰＰを添加し、１０〜５０℃で３０分〜５時
間程度反応させることにより行うことができる。
【００２９】このようにして得られたｄＣＰ４Ｕは、前
述した方法で精製、結晶化することで、本発明のｄＣＰ
４Ｕ結晶を取得することができる。
述した方法で精製、結晶化することで、本発明のｄＣＰ
４Ｕ結晶を取得することができる。
【００３０】
【実施例】以下、実施例を示し本発明を具体的に説明す
るが、本発明がこれに限定されないのは明らかである。
るが、本発明がこれに限定されないのは明らかである。
【００３１】実施例１ ｄＣＰ４Ｕ・４Ｎａ結晶の製造
（１）ＤＣＣを用いる方法
ＵＴＰ、ｄＣＭＰ、およびＤＣＣを用い、２００ｍｍｏ
ｌｅの反応スケールでｄＣＰ４Ｕを常法（特許文献１）
により調製した。得られたｄＣＰ４Ｕ合成液を水で１０
００ｍｌに液量調整後、中塩基性アニオン交換樹脂（ア
ンバーライトＩＲＡ−６７［ローム＆ハース社製］）を
充填したカラムにアプライし、水、０．１８Ｍ塩酸水溶
液および０．５Ｍ食塩含有０．００５Ｍ塩酸水溶液の順
で溶出し、ｄＣＰ４Ｕ含有画分を取得した。得られたｄ
ＣＰ４Ｕ画分４０００ｍｌをクロマト用活性炭（太閤顆
粒活性炭ＳＧＰ［二村化学工業（株）社製］）を充填し
たカラムにアプライし、０．０５Ｍ水酸化ナトリウム水
溶液８０００ｍｌを用いてｄＣＰ４Ｕを溶出した。上記
ｄＣＰ４Ｕ画分を濃縮してスラリーを調製後、ｐＨ６．
０に調整し、攪拌しながら徐々にエタノールを添加し、
さらに１０℃に冷却しながらスラリーを攪拌してｄＣＰ
４Ｕ・４Ｎａ結晶を晶析させ、これを分離してｄＣＰ４
Ｕ・４Ｎａ結晶８．９ｇを得た。得られた結晶は約６０
℃で約４時間減圧乾燥後、機器分析等に供した。
ｌｅの反応スケールでｄＣＰ４Ｕを常法（特許文献１）
により調製した。得られたｄＣＰ４Ｕ合成液を水で１０
００ｍｌに液量調整後、中塩基性アニオン交換樹脂（ア
ンバーライトＩＲＡ−６７［ローム＆ハース社製］）を
充填したカラムにアプライし、水、０．１８Ｍ塩酸水溶
液および０．５Ｍ食塩含有０．００５Ｍ塩酸水溶液の順
で溶出し、ｄＣＰ４Ｕ含有画分を取得した。得られたｄ
ＣＰ４Ｕ画分４０００ｍｌをクロマト用活性炭（太閤顆
粒活性炭ＳＧＰ［二村化学工業（株）社製］）を充填し
たカラムにアプライし、０．０５Ｍ水酸化ナトリウム水
溶液８０００ｍｌを用いてｄＣＰ４Ｕを溶出した。上記
ｄＣＰ４Ｕ画分を濃縮してスラリーを調製後、ｐＨ６．
０に調整し、攪拌しながら徐々にエタノールを添加し、
さらに１０℃に冷却しながらスラリーを攪拌してｄＣＰ
４Ｕ・４Ｎａ結晶を晶析させ、これを分離してｄＣＰ４
Ｕ・４Ｎａ結晶８．９ｇを得た。得られた結晶は約６０
℃で約４時間減圧乾燥後、機器分析等に供した。
【００３２】（２）ＤＰＣを用いる方法
ＵＴＰ・３Ｎａ１２．８ｋｇを１３５Ｌの水に溶解し、
カチオン交換樹脂［三菱化学（株）］を充填したカラム
にアプライし、通過液と水溶出分画を集め、攪拌しなが
らトリブチルアミン（ＴＢＡ）１３．６ｋｇを徐々に加
えて中和した。得られた液を濃縮し、フォルムアミド１
０ｋｇを加え、ジオキサンを用いて共沸脱水を行った。
脱水後、ピリジン１１．６ｋｇを加えて希釈し、ＵＴＰ
のピリジン溶液を調製した。一方で別のタンクにメタノ
ール１８ＬにｄＣＭＰ７．５ｋｇを加え、攪拌しながら
ＴＢＡ４．５ｋｇを徐々に加え６０℃に加温した。溶解
後、濃縮を行い乾固させた。７５℃で真空乾燥し、割砕
した後、その中の１０．３ｋｇをジメチルアセトアミド
（ＤＭＡＣ）１６．７ｋｇに懸濁し、ジフェニルホスホ
クロリデート（ＤＰＣ）４．４ｋｇを加えて１０分間攪
拌した。その後、ＴＢＡ１０．８ｋｇを加えて３０分間
攪拌し、ｄＣＭＰ-ＤＰＰ溶液とした。得られたｄＣＭ
Ｐ-ＤＰＰ溶液を、先に調製しておいたＵＴＰのピリジ
ン溶液に攪拌しながら添加した。添加後、室温で一晩攪
拌し、脱イオン水を加えて反応を停止した。３０％水酸
化ナトリウム水溶液３１Ｌを加えて３０分間攪拌し、分
液により遊離したＴＢＡを除去した。その後、６ｍｏｌ
／Ｌ塩酸溶液でｐＨを約７に調整した。濃縮により溶媒
を除去し、９５％エタノールを同容量加えて一晩静置し
た。上層のエタノール層を吸引除去した後、水あめ状の
沈殿に水を加えて溶解し、濃縮により残留した溶媒を除
去した。得られたｄＣＰ４Ｕ合成液を２５００Ｌに液量
調整し、中塩基性アニオン交換樹脂（アンバーライトＩ
ＲＡ−９７［ローム＆ハース社製］）を充填したカラム
にアプライした。水、０．１ｍｏｌ／Ｌ塩酸水溶液およ
び０．４ｍｏｌ／Ｌ食塩含有０．００５ｍｏｌ／Ｌ塩酸
水溶液の順で溶出し、ｄＣＰ４Ｕ含有分画を取得した。
得られたｄＣＰ４Ｕ分画２１００Ｌをクロマト用活性炭
（太閤顆粒活性炭ＳＧＰ［二村化学工業（株）社製］）
を充填したカラムにアプライし、０．０５ｍｏｌ／Ｌ水
酸化ナトリウム水溶液１２００Ｌを用いてｄＣＰ４Ｕを
溶出した。上記ｄＣＰ４Ｕ溶出分画を濃縮し、３０％水
酸化ナトリウム水溶液を用いてｐＨを７．５に調整し、
攪拌しながら９５％エタノールを加えてｄＣＰ４Ｕ・４
Ｎａ結晶を晶析させ、これを分離した。得られた結晶を
６０℃で４時間乾燥し、目的とするｄＣＰ４Ｕ・４Ｎａ
結晶４．２ｋｇ（水分５．９％、収率２２％）を得た。
カチオン交換樹脂［三菱化学（株）］を充填したカラム
にアプライし、通過液と水溶出分画を集め、攪拌しなが
らトリブチルアミン（ＴＢＡ）１３．６ｋｇを徐々に加
えて中和した。得られた液を濃縮し、フォルムアミド１
０ｋｇを加え、ジオキサンを用いて共沸脱水を行った。
脱水後、ピリジン１１．６ｋｇを加えて希釈し、ＵＴＰ
のピリジン溶液を調製した。一方で別のタンクにメタノ
ール１８ＬにｄＣＭＰ７．５ｋｇを加え、攪拌しながら
ＴＢＡ４．５ｋｇを徐々に加え６０℃に加温した。溶解
後、濃縮を行い乾固させた。７５℃で真空乾燥し、割砕
した後、その中の１０．３ｋｇをジメチルアセトアミド
（ＤＭＡＣ）１６．７ｋｇに懸濁し、ジフェニルホスホ
クロリデート（ＤＰＣ）４．４ｋｇを加えて１０分間攪
拌した。その後、ＴＢＡ１０．８ｋｇを加えて３０分間
攪拌し、ｄＣＭＰ-ＤＰＰ溶液とした。得られたｄＣＭ
Ｐ-ＤＰＰ溶液を、先に調製しておいたＵＴＰのピリジ
ン溶液に攪拌しながら添加した。添加後、室温で一晩攪
拌し、脱イオン水を加えて反応を停止した。３０％水酸
化ナトリウム水溶液３１Ｌを加えて３０分間攪拌し、分
液により遊離したＴＢＡを除去した。その後、６ｍｏｌ
／Ｌ塩酸溶液でｐＨを約７に調整した。濃縮により溶媒
を除去し、９５％エタノールを同容量加えて一晩静置し
た。上層のエタノール層を吸引除去した後、水あめ状の
沈殿に水を加えて溶解し、濃縮により残留した溶媒を除
去した。得られたｄＣＰ４Ｕ合成液を２５００Ｌに液量
調整し、中塩基性アニオン交換樹脂（アンバーライトＩ
ＲＡ−９７［ローム＆ハース社製］）を充填したカラム
にアプライした。水、０．１ｍｏｌ／Ｌ塩酸水溶液およ
び０．４ｍｏｌ／Ｌ食塩含有０．００５ｍｏｌ／Ｌ塩酸
水溶液の順で溶出し、ｄＣＰ４Ｕ含有分画を取得した。
得られたｄＣＰ４Ｕ分画２１００Ｌをクロマト用活性炭
（太閤顆粒活性炭ＳＧＰ［二村化学工業（株）社製］）
を充填したカラムにアプライし、０．０５ｍｏｌ／Ｌ水
酸化ナトリウム水溶液１２００Ｌを用いてｄＣＰ４Ｕを
溶出した。上記ｄＣＰ４Ｕ溶出分画を濃縮し、３０％水
酸化ナトリウム水溶液を用いてｐＨを７．５に調整し、
攪拌しながら９５％エタノールを加えてｄＣＰ４Ｕ・４
Ｎａ結晶を晶析させ、これを分離した。得られた結晶を
６０℃で４時間乾燥し、目的とするｄＣＰ４Ｕ・４Ｎａ
結晶４．２ｋｇ（水分５．９％、収率２２％）を得た。
【００３３】〔ｄＣＰ４Ｕ・４Ｎａ結晶の物性〕
上記実施例の（１）または（２）で調製したｄＣＰ４Ｕ
・４Ｎａ結晶とＷＯ９８／３４９４２の実施例２０記載
の方法と同じ方法でｄＣＰ４Ｕ・４Ｎａの白色粉末（凍
結乾燥品）との物性を比較した。
・４Ｎａ結晶とＷＯ９８／３４９４２の実施例２０記載
の方法と同じ方法でｄＣＰ４Ｕ・４Ｎａの白色粉末（凍
結乾燥品）との物性を比較した。
【００３４】（３）機器分析
純度検定
上記実施例（１）および（２）で得られたｄＣＰ４Ｕ・
４Ｎａ結晶及び各クロマトグラフィー処理による精製後
のｄＣＰ４Ｕ画分の純度を高速液体クロマトグラフィー
法で分析した結果を表１および２に示す。なお、高速液
体クロマトグラフィー法は、以下の条件で行った。 カラム：ＨＩＴＡＣＨＩＧＥＬ＃３０１３−Ｎ（日立計
測器サービス株式会社製） 溶出液：１０％ＣＨ3ＣＮ、０．１８Ｍ ＮＨ4Ｃｌ、
０．０３Ｍ ＫＨ2ＰＯ4、０．０３Ｍ Ｋ2ＨＰＯ4 検出法：ＵＶ２６２ｎｍによる検出
４Ｎａ結晶及び各クロマトグラフィー処理による精製後
のｄＣＰ４Ｕ画分の純度を高速液体クロマトグラフィー
法で分析した結果を表１および２に示す。なお、高速液
体クロマトグラフィー法は、以下の条件で行った。 カラム：ＨＩＴＡＣＨＩＧＥＬ＃３０１３−Ｎ（日立計
測器サービス株式会社製） 溶出液：１０％ＣＨ3ＣＮ、０．１８Ｍ ＮＨ4Ｃｌ、
０．０３Ｍ ＫＨ2ＰＯ4、０．０３Ｍ Ｋ2ＨＰＯ4 検出法：ＵＶ２６２ｎｍによる検出
【００３５】
【表１】
【００３６】
【表２】
【００３７】結晶形
ｄＣＰ４Ｕ・４Ｎａ結晶（３．５水和物）の代表的な結
晶の写真を図１に示す。
晶の写真を図１に示す。
【００３８】水分
カールフィッシャー法により結晶品の水分含量を測定し
た結果、乾燥の程度により変動するものの、６．９〜１
７．４重量％の水分で安定化し、計算によりｄＣＰ４Ｕ
１分子に対し３．５〜１０分子の水分子が結合又は付着
していることが明らかとなった。
た結果、乾燥の程度により変動するものの、６．９〜１
７．４重量％の水分で安定化し、計算によりｄＣＰ４Ｕ
１分子に対し３．５〜１０分子の水分子が結合又は付着
していることが明らかとなった。
【００３９】融点
常法により融点を測定した結果、結晶品の融点は２０２
〜２１０℃であった。なお、凍結乾燥品の融点は約１９
５〜２１０℃である。
〜２１０℃であった。なお、凍結乾燥品の融点は約１９
５〜２１０℃である。
【００４０】Ｘ線回析
理学電機製Ｘ線回折装置ＲＩＮＴ２５００Ｖ型を用い、
下記の測定条件でＸ線回折スペクトルを測定した（測定
誤差±０．１゜）。図２及び表３はｄＣＰ４Ｕ・４Ｎａ
結晶の３．５水和物のデータであり、図３及び表４はｄ
ＣＰ４Ｕ・４Ｎａ結晶の１０水和物のデータである。ま
た、参考として凍結乾燥品のＸ線回折スペクトルを図４
に示す。 （測定条件） Ｘ線管球：Ｃｕ−Ｋα Ｘ線出力：５０ｋＶ−３００ｍＡ 走査速度：４．０゜／分 走査間隔：０．０２゜ 測角範囲：２〜４０゜ スリット：ＤＳ−０．５゜，ＲＳ−０．１５ｍｍ，ＳＳ
−０．５゜ 前処理 ：メノウ乳鉢にて粉砕
下記の測定条件でＸ線回折スペクトルを測定した（測定
誤差±０．１゜）。図２及び表３はｄＣＰ４Ｕ・４Ｎａ
結晶の３．５水和物のデータであり、図３及び表４はｄ
ＣＰ４Ｕ・４Ｎａ結晶の１０水和物のデータである。ま
た、参考として凍結乾燥品のＸ線回折スペクトルを図４
に示す。 （測定条件） Ｘ線管球：Ｃｕ−Ｋα Ｘ線出力：５０ｋＶ−３００ｍＡ 走査速度：４．０゜／分 走査間隔：０．０２゜ 測角範囲：２〜４０゜ スリット：ＤＳ−０．５゜，ＲＳ−０．１５ｍｍ，ＳＳ
−０．５゜ 前処理 ：メノウ乳鉢にて粉砕
【００４１】
【表３】
【００４２】
【表４】
【００４３】吸湿性
水分約１７．４％のｄＣＰ４Ｕ・４Ｎａ結晶（１０水和
物）を（ア）温度２５℃、相対湿度５７％、（イ）温度
２５℃、相対湿度７５％、（ウ）温度２５℃、相対湿度
９３％のそれぞれの条件下で２日間保存した場合、分
解、重量変化とも観察されず、安定で吸湿性を有しない
ことが確認された。さらに、（エ）温度４０℃、相対湿
度７５％の過酷な条件下で７日間保存しても変化は観察
されなかった。これに対し、凍結乾燥品（初発水分含
量：約１％）を（ア）温度２５℃、相対湿度７５％、
（ウ）温度２５℃、相対湿度９３％のそれぞれの条件下
で２日間保存した場合、水分含量が徐々に増加し、２日
目には潮解し、どろどろの状態となった。
物）を（ア）温度２５℃、相対湿度５７％、（イ）温度
２５℃、相対湿度７５％、（ウ）温度２５℃、相対湿度
９３％のそれぞれの条件下で２日間保存した場合、分
解、重量変化とも観察されず、安定で吸湿性を有しない
ことが確認された。さらに、（エ）温度４０℃、相対湿
度７５％の過酷な条件下で７日間保存しても変化は観察
されなかった。これに対し、凍結乾燥品（初発水分含
量：約１％）を（ア）温度２５℃、相対湿度７５％、
（ウ）温度２５℃、相対湿度９３％のそれぞれの条件下
で２日間保存した場合、水分含量が徐々に増加し、２日
目には潮解し、どろどろの状態となった。
【００４４】安定性
ｄＣＰ４Ｕ・４Ｎａ結晶（１０水和物）と凍結乾燥品を
ビンに密封し、６０℃で１３日間保存した（加速試
験）。その結果、結晶品の分解は全く観察されなかった
が、凍結乾燥品は約２．２％の純度の低下が観察され、
一部が分解していることが明らかであった。
ビンに密封し、６０℃で１３日間保存した（加速試
験）。その結果、結晶品の分解は全く観察されなかった
が、凍結乾燥品は約２．２％の純度の低下が観察され、
一部が分解していることが明らかであった。
【００４５】ＮＭＲ
結晶品または凍結乾燥品をそのままジルコニア製ロータ
に充填して13Ｃ−ＣＰＭＡＳ−ＮＭＲの測定を行った。
測定条件を以下に示す。13 Ｃ−ＣＰＭＡＳ−ＮＭＲ １）装置 Chemagnetics社製 CMX-300 ２）測定方法 CPMAS(sideband suppresion) ３）測定温度 室温 ４）観測核 13Ｃ ５）観測周波数 75.502MHz ６）プロトン励起パルス幅 4.5μs ７）コンタクトタイム 0.5msec. ８）観測幅 30.03kHz ９）観測ポイント 2048 10）データポイント 16384 11）観測繰り返し時間 15.0sec.(図６、図７),60.0sec.(図５) 12）化学シフト基準 ヘキサメチルベンゼン（外部標準17.35ppm） 13）試料回転速度 5kHz 14）積算回数 256回
に充填して13Ｃ−ＣＰＭＡＳ−ＮＭＲの測定を行った。
測定条件を以下に示す。13 Ｃ−ＣＰＭＡＳ−ＮＭＲ １）装置 Chemagnetics社製 CMX-300 ２）測定方法 CPMAS(sideband suppresion) ３）測定温度 室温 ４）観測核 13Ｃ ５）観測周波数 75.502MHz ６）プロトン励起パルス幅 4.5μs ７）コンタクトタイム 0.5msec. ８）観測幅 30.03kHz ９）観測ポイント 2048 10）データポイント 16384 11）観測繰り返し時間 15.0sec.(図６、図７),60.0sec.(図５) 12）化学シフト基準 ヘキサメチルベンゼン（外部標準17.35ppm） 13）試料回転速度 5kHz 14）積算回数 256回
【００４６】図５及び表５にｄＣＰ４Ｕ・４Ｎａ結晶の
３．５水和物の13Ｃ−ＣＰＭＡＳ−ＮＭＲスペクトル
を、図６及び表６にｄＣＰ４Ｕ・４Ｎａ結晶の１０水和
物の13Ｃ−ＣＰＭＡＳ−ＮＭＲスペクトルを、図７及び
表７にｄＣＰ４Ｕの白色粉末（凍結乾燥品）の13Ｃ−Ｃ
ＰＭＡＳ−ＮＭＲスペクトルを示す。なお、図５〜７の
ピーク番号は表５〜７のピーク番号である。
３．５水和物の13Ｃ−ＣＰＭＡＳ−ＮＭＲスペクトル
を、図６及び表６にｄＣＰ４Ｕ・４Ｎａ結晶の１０水和
物の13Ｃ−ＣＰＭＡＳ−ＮＭＲスペクトルを、図７及び
表７にｄＣＰ４Ｕの白色粉末（凍結乾燥品）の13Ｃ−Ｃ
ＰＭＡＳ−ＮＭＲスペクトルを示す。なお、図５〜７の
ピーク番号は表５〜７のピーク番号である。
【００４７】
【表５】 dCP4U・4Na結晶の3.5水和物（ppm）
(1)166.1 (2)156.2 (3)150.9 (4)141.6
(5)138.4 (6)101.3 (7) 99.2 (8) 93.2
(9) 84.9 (10)80.6 (11)76.7 (12)73.1(13)69.0 (14)67.2 (15)62.2 (16)43.9
【００４８】
【表６】 dCP4U・4Na結晶の10水和物（ppm）
(1)167.4 (2)157.8 (3)151.6 (4)139.0
(5)117.9 (6)102.6 (7) 99.3 (8) 93.3
(9) 90.1 (10)87.3 (11)80.6 (12)77.2
(13)75.0 (14)73.9 (15)72.0 (16)67.0(17)63.1 (18)60.4 (19)42.0 (20)40.8
【００４９】
【表７】 dCP4Uの白色粉末（凍結乾燥品）（ppm）
(1)166.5 (2)157.4 (3)149.9 (4)140.9
(5)103.0 (6) 99.0 (7) 96.9 (8) 85.9
(9) 73.4 (10)71.7 (11)67.1 (12)42.0(13)39.9
【００５０】参考例：ＵＭＰからのｄＣＰ４Ｕの合成
脱水したピロリン酸のトリエチルアミン塩（ＴＥＡ−Ｐ
Ｐｉ）(１0ｍｍｏｌ)、フォルムアミド２．５ｍｌ及び
ピリジン７．６ｍｌを加えて攪拌した。一方、別の容器
に脱水したウリジン５'−モノリン酸のトリブチルアミ
ン塩（ＵＭＰ−ＴＢＡ）（0ｍｍｏｌ）にＤＭＡＣ３．
６ｍｌ、ジオキサン３．２ｍｌ及びトリブチルアミン
３．３ｍｌを加えて攪拌し、ＤＰＣ２．３ｍｌを滴下し
た。室温で１時間攪拌してＵＭＰ−ＤＰＰを生成させ、
先に調製しておいたＴＥＡ−ＰＰｉ脱水液に加えた。室
温で１時間攪拌し、ＵＴＰを生成させた。更に別の容器
に２’−デオキシシチジン５'−モノリン酸のトリブチ
ルアミン塩(ＴＢＡ−ｄＣＭＰ)４．９ｇ(１0ｍｍｏｌ)
にＤＭＡＣ７．２ｍｌを加えて懸濁し、ＤＰＣ２．２ｍ
ｌ（１．１当量）を加えて４０分間攪拌した。その後、
トリブチルアミン（ＴＢＡ）９．５ｍｌを加えて更に２
０分間攪拌し、ｄＣＭＰ−ＤＰＰを調製した。得られた
ｄＣＭＰ-ＤＰＰ溶液を、先に調製しておいたＵＴＰ合
成液に加えて室温で５６時間攪拌した。反応液に水を加
えて反応を停止し、３０％水酸化ナトリウム水溶液でｐ
Ｈを１１に調整した。濃縮により溶媒を留去した後、６
ｍｏｌ／Ｌ塩酸でｐＨを７．０に調整し、酢酸エチルで
分液を行った。分液後の水層をＨＰＬＣ（２７２ｎｍ）
で分析した結果、ｄＣＰ４Ｕの合成収率は３７．７％で
あった。
Ｐｉ）(１0ｍｍｏｌ)、フォルムアミド２．５ｍｌ及び
ピリジン７．６ｍｌを加えて攪拌した。一方、別の容器
に脱水したウリジン５'−モノリン酸のトリブチルアミ
ン塩（ＵＭＰ−ＴＢＡ）（0ｍｍｏｌ）にＤＭＡＣ３．
６ｍｌ、ジオキサン３．２ｍｌ及びトリブチルアミン
３．３ｍｌを加えて攪拌し、ＤＰＣ２．３ｍｌを滴下し
た。室温で１時間攪拌してＵＭＰ−ＤＰＰを生成させ、
先に調製しておいたＴＥＡ−ＰＰｉ脱水液に加えた。室
温で１時間攪拌し、ＵＴＰを生成させた。更に別の容器
に２’−デオキシシチジン５'−モノリン酸のトリブチ
ルアミン塩(ＴＢＡ−ｄＣＭＰ)４．９ｇ(１0ｍｍｏｌ)
にＤＭＡＣ７．２ｍｌを加えて懸濁し、ＤＰＣ２．２ｍ
ｌ（１．１当量）を加えて４０分間攪拌した。その後、
トリブチルアミン（ＴＢＡ）９．５ｍｌを加えて更に２
０分間攪拌し、ｄＣＭＰ−ＤＰＰを調製した。得られた
ｄＣＭＰ-ＤＰＰ溶液を、先に調製しておいたＵＴＰ合
成液に加えて室温で５６時間攪拌した。反応液に水を加
えて反応を停止し、３０％水酸化ナトリウム水溶液でｐ
Ｈを１１に調整した。濃縮により溶媒を留去した後、６
ｍｏｌ／Ｌ塩酸でｐＨを７．０に調整し、酢酸エチルで
分液を行った。分液後の水層をＨＰＬＣ（２７２ｎｍ）
で分析した結果、ｄＣＰ４Ｕの合成収率は３７．７％で
あった。
【００５１】
【発明の効果】本発明方法により得られたｄＣＰ４Ｕの
結晶は、高純度であるとともに、凍結乾燥品に比べて吸
湿性もなく極めて安定であるため取り扱い易く、医薬品
原料として有用である。 ［図面の簡単な説明］
結晶は、高純度であるとともに、凍結乾燥品に比べて吸
湿性もなく極めて安定であるため取り扱い易く、医薬品
原料として有用である。 ［図面の簡単な説明］
【図１】ｄＣＰ４Ｕ・４Ｎａ結晶（３.５水和物）の結
晶構造（偏光顕微鏡、４４０倍）を示す図である。な
お、図中の１ｍｍは２５μｍに相当する。
晶構造（偏光顕微鏡、４４０倍）を示す図である。な
お、図中の１ｍｍは２５μｍに相当する。
【図２】ｄＣＰ４Ｕ・４Ｎａ結晶（３.５水和物）のＸ
線回折スペクトルを示したものである。
線回折スペクトルを示したものである。
【図３】ｄＣＰ４Ｕ・４Ｎａ結晶（１０水和物）のＸ線
回折スペクトルを示したものである。
回折スペクトルを示したものである。
【図４】ｄＣＰ４Ｕの白色粉末（凍結乾燥品）のＸ線回
折スペクトルを示したものである。
折スペクトルを示したものである。
【図５】ｄＣＰ４Ｕ・４Ｎａ結晶（３.５水和物）の13
Ｃ−ＣＰＭＡＳ−ＮＭＲスペクトルを示したものであ
る。
Ｃ−ＣＰＭＡＳ−ＮＭＲスペクトルを示したものであ
る。
【図６】ｄＣＰ４Ｕ・４Ｎａ結晶（１０水和物）の13Ｃ
−ＣＰＭＡＳ−ＮＭＲスペクトルを示したものである。
−ＣＰＭＡＳ−ＮＭＲスペクトルを示したものである。
【図７】ｄＣＰ４Ｕの白色粉末（凍結乾燥品）の13Ｃ−
ＣＰＭＡＳ−ＮＭＲスペクトルを示したものである。
ＣＰＭＡＳ−ＮＭＲスペクトルを示したものである。
─────────────────────────────────────────────────────
フロントページの続き
(72)発明者 野田 豊
千葉県銚子市春日町2367−14
(56)参考文献 国際公開99／05155（ＷＯ，Ａ２)
国際公開98／34942（ＷＯ，Ａ２)
(58)調査した分野(Int.Cl.7，ＤＢ名)
C07H 19/10
C07H 1/06
ＣＡｐｌｕｓ（ＳＴＮ)
ＲＥＧＩＳＴＲＹ（ＳＴＮ)
Claims (10)
- 【請求項１】 Ｐ1−（２’−デオキシシチジン５’
−）Ｐ4−（ウリジン５’−）テトラホスフェート又は
その塩の結晶。 - 【請求項２】 Ｐ1−（２’−デオキシシチジン５’
−）Ｐ4−（ウリジン５’−）テトラホスフェート・４
ナトリウム塩の結晶。 - 【請求項３】 ９５％以上の純度を有する請求項１また
は２記載の結晶。 - 【請求項４】 ９７％以上の純度を有し、ウリジン５’
−トリリン酸が２％以下である請求項１または２記載の
結晶。 - 【請求項５】 ９８％以上の純度を有し、ウリジン５’
−トリリン酸が１％以下である請求項１または２記載の
結晶。 - 【請求項６】 粗Ｐ1−（２’−デオキシシチジン５’
−）Ｐ4−（ウリジン５’−）テトラホスフェートを陰
イオン交換クロマトグラフィーと活性炭クロマトグラフ
ィーとを用いて精製し、精製されたＰ1−（２’−デオ
キシシチジン５’−）Ｐ4−（ウリジン５’−）テトラ
ホスフェート溶液に、親水性有機溶媒を加えてＰ1−
（２’−デオキシシチジン５’−）Ｐ4−（ウリジン
５’−）テトラホスフェートを結晶として析出させるこ
とを特徴とする請求項１記載の結晶の製造法。 - 【請求項７】 精製が、陰イオン交換クロマトグラフィ
ーを行った後、次いで活性炭クロマトグラフィーを行う
ものである請求項６記載の製造法。 - 【請求項８】 Ｐ1−（２’−デオキシシチジン５’
−）Ｐ4−（ウリジン５’−）テトラホスフェートまた
はその塩１分子あたり１〜１４分子の水が結合または付
着しているものである請求項１〜５のいずれか１項記載
の結晶。 - 【請求項９】 Ｐ1−（２’−デオキシシチジン５’
−）Ｐ4−（ウリジン５’−）テトラホスフェートまた
はその塩１分子あたり３．５分子の水が結合または付着
しているものである請求項１〜５のいずれか１項記載の
結晶。 - 【請求項１０】 Ｐ1−（２’−デオキシシチジン５’
−）Ｐ4−（ウリジン５’−）テトラホスフェートまた
はその塩１分子あたり１０分子の水が結合または付着し
ているものである請求項１〜５のいずれか１項記載の結
晶。
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP11-184950 | 1999-06-30 | ||
| JP18495099 | 1999-06-30 | ||
| PCT/JP2000/004336 WO2001002416A1 (fr) | 1999-06-30 | 2000-06-30 | Cristaux dinucleotidiques |
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