KR102434314B1 - 항-pd-1 항체 및 이를 이용하는 방법 - Google Patents

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Abstract

본 발명은 인간 PD-1에 특이적으로 결합하고 PD-1 기능을 길항하는 항체를 제공한다.
또한, 본 발명에서 제공되는 것은, 이들 항체를 포함하는 약학 조성물, 이들 항체를 코딩하는 핵산, 이들 항체를 제조하기 위한 발현 벡터 및 숙주세포, 및 이들 항체를 사용하여 개체를 치료하는 방법이다.

Description

항-PD-1 항체 및 이를 이용하는 방법
관련 출원
본 출원은 2015년 9월 1일자 출원된 미국가출원 62/212,851; 2015년 9월 9일자 출원된 미국가출원 62/216,043; 및 2015년 11월 18일자 출원된 미국가출원 62/257,195를 청구하는데, 이들 각각은 그들의 전문이 본 명세서에 참고자료로서 포함되어 있다.
1. 발명의 분야
본 발명은 인간 PD-1에 특이적으로 결합하는 항체 및 이의 사용 방법에 관한 것이다.
2. 배경기술
세포 사멸 단백질 1(PD-1)으로 프로그램된 단백질은 수용체의 CD28 계열의 억제 요소이다. PD-1은 활성화된 B 세포, T 세포 및 골수 세포에서 발현된다(Agata et al. (1996) Int Immunol 8:765-72; Okazaki et al. (2002) Curr. Opin. Immunol. 14: 391779-82; Bennett et al. (2003) J Immunol 170:711-8). PD-1은 Ig 유전자 수퍼 패밀리의 일부인 55 kDa 제1 형 막투과단백질이고, 막 근위부의 ITIM(immunoreceptor tyrosine inhibitory motif)와 막원위부의 ITSM(immunoreceptor tyrosine-based switch motif)을 포함한다(Thomas, M. L. (1995) J Exp Med 181:1953-6; Vivier, E and Daeron, M (1997) Immunol Today 18:286-91). PD-1에 대한 두개의 리간드인 PD-L1 및 PD-L2가 확인되었는데, 이들은 PD-1에 결합시 T 세포 활성화를 하향 조절하는 것으로 밝혀졌다(Freeman et al. (2000) J Exp Med 192:1027-34; Latchman et al. (2001) Nat Immunol 2:261-8; Carter et al. (2002) Eur J Immunol 32:634-43). PD-L1은 다양한 종류의 인간 암에서 풍부하다(Dong et al. (2002) Nat. Med. 8:787-9). PD-1과 PD-L1 간의 반응은 종양 침윤 림프구의 감소, T 세포 수용체 매개성 증식의 감소 및 암세포에 의한 면역 회피를 나타낸다(Dong et al. (2003) J. Mol. Med. 81:281-7; Blank et al. (2005) Cancer Immunol. Immunother. 54:307-314; Konishi et al. (2004) Clin. Cancer Res. 10:5094-100). 이러한 면역 억제는 PD-1과 PD-L1의 부분적 반응을 억제하여 역전될 수 있고, 상기 효과는 PD-1과 PD-L2의 반응이 차단될 때에도 나타난다(Iwai et al. (2002) Proc. Nat'l. Acad. Sci. USA 99:12293-7; Brown et al. (2003) J. Immunol. 170:1257-66).
PD-1은 면역 세포 억제 분자이다. PD-1 결핍 동물은, 자가 면역성 심근 병증(autoimmune cardiomyopathy) 및 관절염과 신염을 동반하는 루푸스 유사 증후군(lupus-like syndrome)을 포함하는 다양한 자가 면역 형질을 발생시킨다(Nishimura et al. (1999) Immunity 11:141-51; Nishimura et al. (2001) Science 291:319-22). 추가로, PD-1은 자가 면역 뇌염(autoimmune encephalomyelitis), 전신성 홍반성 루푸스(systemic lupus erythematosus), GVHD(graft-versus-host disease), 제1 형 당뇨병 및 류마티스 관절염에서 중요한 역할을 하는 것으로 확인되었다(Salama et al. (2003) J Exp Med 198:71-78; Prokunina and Alarcon-Riquelme (2004) Hum Mol Genet 13:R143; Nielsen et al. (2004) Lupus 13:510). 마우스 B 세포 종양 세포주에서, PD-1의 ITSM은 BCR-매개된 Ca2+-역전과 하류 반응기(effector) 분자의 티로신 인산화를 차단하는데 필수적임이 밝혀졌다(Okazaki et al. (2001) PNAS 98:13866-71).
면역 반응을 조절하는데 있어 인간 PD-1의 역할을 고려하면, PD-1 신호전달을 길항하도록 설계된 치료제는 PD-1-매개 면역 억제와 관련된 질병의 치료에 큰 도움이 된다.
3. 발명의 요약
본 발명은 인간 PD-1에 특이적으로 결합하고, PD-1 기능, 예를 들어, PD-1-매개된 면역 억제하는 기능을 길항하는 항체를 제공한다. 또한, 이들 항체를 포함하는 약학 조성물, 이들 항체를 코딩하는 핵산, 이들 항체를 제조하기 위한 발현 벡터 및 숙주 세포, 및 이들 항체를 사용하여 개체를 치료하는 방법을 제공한다. 본 명세서에 기재된 항체는 항원, 예를 들어, 종양 항원 또는 감염성 질환 항원에 반응하여 T 세포 활성화의 증가 및/또는 Treg-매개 면역 억제를 감소시켜, 개체에서 암을 치료하거나 또는 감염성 질환을 치료 또는 예방하는데 특히 유용하다.
이에 따라, 한 가지 양태에서, 본 발명은 상보성 결정 영역 CDRH1, CDRH2 및 CDRH3을 포함하는 중쇄 가변 영역, 및 상보성 결정 영역 CDRL1, CDRL2 및 CDRL3을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는 항체 또는 분리된 항체를 제공하는데, 이때, (a) CDRH1는 SYGMH (서열번호 1)의 아미노산 서열을 포함하고; (b) CDRH2 VIWX1DGSNX2YYADSVX3G (서열번호 32)의 아미노산 서열을 포함하며, X1은 Y 또는 F; X2는 K 또는 E; 및 X3은 K 또는 M; (c) CDRH3 NX1DX2 (서열번호 33)의 아미노산 서열을 포함하고, X1은 G 또는 V; 및 X2는 H 또는 Y; (d) CDRL1 RASQSVSSNLA (서열번호 4)의 아미노산 서열을 포함하며; (e) CDRL2 GASTRAT (서열번호 5)의 아미노산 서열을 포함하고; 및 (f) CDRL3 QQYNNWPRT (서열번호 6)의 아미노산 서열을 포함한다.
어떤 실시양태에서, CDRH2는 서열번호 2 및 34 내지 36으로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열을 포함한다.
어떤 실시양태에서, CDRH3은 서열번호 3, 7 및 37로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열을 포함한다.
어떤 실시양태에서, CDRH1, CDRH2 및 CDRH3은 각각 서열번호 1, 2 및 3; 1, 2 및 7; 1, 2 및 37; 1, 34 및 7; 1, 35 및 7; 또는 1, 36 및 7로 제시된, CDRH1, CDRH2 및 CDRH3의 아미노산 서열을 포함한다.
어떤 실시양태에서, 상기 항체는 상보성 결정 영역 CDRH1, CDRH2 및 CDRH3을 포함하는 중쇄 가변 영역, 및 상보성 결정 영역 CDRL1, CDRL2 및 CDRL3을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는데, 상기 CDRH1, CDRH2, CDRH3, CDRL1, CDRL2 및 CDRL3은 각각 서열번호 1, 2, 3, 4, 5 및 6의 아미노산 서열을 포함한다.
어떤 실시양태에서, 상기 항체는 상보성 결정 영역 CDRH1, CDRH2 및 CDRH3을 포함하는 중쇄 가변 영역, 및 상보성 결정 영역 CDRL1, CDRL2 및 CDRL3을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는데, 상기 CDRH1, CDRH2, CDRH3, CDRL1, CDRL2 및 CDRL3은 각각 서열번호 1, 2, 7, 4, 5 및 6의 아미노산 서열을 포함한다.
어떤 실시양태에서, 상기 항체는 서열번호 49의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역을 포함한다.
어떤 실시양태에서, 상기 항체는 서열번호 15, 17 및 26 내지 31로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열과 적어도 75%, 80%, 85%, 90%, 95% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역을 포함한다. 어떤 실시양태에서, 상기 중쇄 가변 영역은 서열번호 15, 17 및 26 내지 31로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열을 포함한다. 어떤 실시양태에서, 상기 중쇄 가변 영역은 서열번호 15의 아미노산 서열을 포함한다. 어떤 실시양태에서, 상기 중쇄 가변 영역은 서열번호 17의 아미노산 서열을 포함한다. 어떤 실시양태에서, 상기 중쇄 가변 영역은 서열번호 26의 아미노산 서열을 포함한다. 어떤 실시양태에서, 상기 중쇄 가변 영역은 서열번호 27의 아미노산 서열을 포함한다. 어떤 실시양태에서, 상기 중쇄 가변 영역은 서열번호 28의 아미노산 서열을 포함한다. 어떤 실시양태에서, 상기 중쇄 가변 영역은 서열번호 29의 아미노산 서열을 포함한다. 어떤 실시양태에서, 상기 중쇄 가변 영역은 서열번호 30의 아미노산 서열을 포함한다. 어떤 실시양태에서, 상기 중쇄 가변 영역은 서열번호 31의 아미노산 서열을 포함한다. 어떤 실시양태에서, 상기 항체는 서열번호 18의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄를 포함한다. 어떤 실시양태에서, 상기 항체는 서열번호 21의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄를 포함한다. 어떤 실시양태에서, 상기 항체는 서열번호 20의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄를 포함한다. 어떤 실시양태에서, 상기 항체는 서열번호 22의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄를 포함한다. 어떤 실시양태에서, 상기 항체는 서열번호 23의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄를 포함한다. 어떤 실시양태에서, 상기 항체는 서열번호 24의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄를 포함한다. 어떤 실시양태에서, 상기 항체는 서열번호 25의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄를 포함한다. 어떤 실시양태에서, 상기 항체는 서열번호 52의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄를 포함한다. 어떤 실시양태에서, 상기 항체는 서열번호 53의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄를 포함한다. 어떤 실시양태에서, 상기 항체는 서열번호 54의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄를 포함한다. 어떤 실시양태에서, 상기 항체는 서열번호 55의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄를 포함한다. 어떤 실시양태에서, 상기 항체는 서열번호 56의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄를 포함한다. 어떤 실시양태에서, 상기 항체는 서열번호 57의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄를 포함한다. 어떤 실시양태에서, 상기 항체는 서열번호 58의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄를 포함한다.
어떤 실시양태에서, 상기 항체는 인간 IGHV3-33 생식 세포(germline) 서열(예를 들어, 서열번호 50의 아미노산 서열을 갖는 IGHV3-33*01)로부터 유래된 아미노산 서열을 가지는 중쇄 가변 영역을 포함한다.
어떤 실시양태에서, 상기 항체는 서열번호 16의 아미노산 서열과 적어도 75%, 80%, 85%, 90%, 95% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함한다. 어떤 실시양태에서, 상기 경쇄 가변 영역은 서열번호 16의 아미노산 서열을 포함한다. 어떤 실시양태에서, 상기 항체는 서열번호 19의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함한다.
어떤 실시양태에서, 항체는 인간 IGKV3-15 생식 세포 서열(예를 들어, 서열번호 51의 아미노산 서열을 갖는 IGKV3-15*01)로부터 유래된 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변 영역을 포함한다.
어떤 실시양태에서, 상기 항체는 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역을 포함하는데, 상기 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역은 각각 서열번호 15 및 16; 17 및 16; 26 및 16; 27 및 16; 28 및 16; 29 및 16; 30 및 16; 또는 31 및 16으로 제시된, 아미노산 서열을 포함한다.
다른 양태에서, 본 발명은 (a) 서열번호 15의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역, 및 (b) 서열번호 16의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는 항체 또는 분리된 항체를 제공한다.
다른 양태에서, 본 발명은 (a) 서열번호 17의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역, 및 (b) 서열번호 16의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는 항체 또는 분리된 항체를 제공한다.
다른 양태에서, 본 발명은 (a) 서열번호 26의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역, 및 (b) 서열번호 16의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는 항체 또는 분리된 항체를 제공한다.
다른 양태에서, 본 발명은 (a) 서열번호 27의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역, 및 (b) 서열번호 16의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는 항체 또는 분리된 항체를 제공한다.
다른 양태에서, 본 발명은 (a) 서열번호 28의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역, 및 (b) 서열번호 16의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는 항체 또는 분리된 항체를 제공한다.
다른 양태에서, 본 발명은 (a) 서열번호 29의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역, 및 (b) 서열번호 16의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는 항체 또는 분리된 항체를 제공한다.
다른 양태에서, 본 발명은 (a) 서열번호 30의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역, 및 (b) 서열번호 16의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는 항체 또는 분리된 항체를 제공한다.
다른 양태에서, 본 발명은, (a) 인간 IGHV3-33 생식 세포 서열(예를 들어, 서열번호 50의 아미노산 서열을 갖는 IGHV3-33*01)로부터 유래된 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변 영역, 및 (b) 인간 IGKV3-15 생식 세포 서열(예를 들어, 서열번호 51의 아미노산 서열을 갖는 IGKV3-15*01)로부터 유래된 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변 영역을 포함하는 항체 또는 분리된 항체를 제공한다.
다른 양태에서, 본 발명은 (a) 서열번호 31의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역, 및 (b) 서열번호 16의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는 항체 또는 분리된 항체를 제공한다.
다른 양태에서, 본 발명은 서열번호 15, 17 및 26 내지 31로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역을 포함하는 항체 또는 분리된 항체를 제공한다.
다른 양태에서, 본 발명은 서열번호 16의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는 항체 또는 분리된 항체를 제공한다.
다른 양태에서, 본 발명은 (a) 서열번호 18의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄; 및 (b) 서열번호 19의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하는 항체 또는 분리된 항체를 제공한다.
다른 양태에서, 본 발명은 (a) 서열번호 20의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄; 및 (b) 서열번호 19의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하는 항체 또는 분리된 항체를 제공한다.
다른 양태에서, 본 발명은 (a) 서열번호 21의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄; 및 (b) 서열번호 19의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하는 항체 또는 분리된 항체를 제공한다.
다른 양태에서, 본 발명은 (a) 서열번호 22의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄; 및 (b) 서열번호 19의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하는 항체 또는 분리된 항체를 제공한다.
다른 양태에서, 본 발명은 (a) 서열번호 23의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄; 및 (b) 서열번호 19의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하는 항체 또는 분리된 항체를 제공한다.
다른 양태에서, 본 발명은 (a) 서열번호 52의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄; 및 (b) 서열번호 19의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하는 항체 또는 분리된 항체를 제공한다.
다른 양태에서, 본 발명은 (a) 서열번호 53의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄; 및 (b) 서열번호 19의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하는 항체 또는 분리된 항체를 제공한다.
다른 양태에서, 본 발명은 (a) 서열번호 54의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄; 및 (b) 서열번호 19의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하는 항체 또는 분리된 항체를 제공한다.
다른 양태에서, 본 발명은 (a) 서열번호 55의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄; 및 (b) 서열번호 19의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하는 항체 또는 분리된 항체를 제공한다.
다른 양태에서, 본 발명은 (a) 서열번호 56의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄; 및 (b) 서열번호 19의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하는 항체 또는 분리된 항체를 제공한다.
다른 양태에서, 본 발명은 상보성 결정 영역 CDRH1, CDRH2 및 CDRH3을 포함하는 중쇄 가변 영역, 및 상보성 결정 영역 CDRL1, CDRL2 및 CDRL3를 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는, 인간 PD-1에 특이적으로 결합하는, 항체 또는 분리된 항체를 제공하는데, 이때, (a) CDRH1는 SYGMH (서열번호 1)의 아미노산 서열을 포함하고; (b) CDRH2는 VIWX1DGSNX2YYADSVX3G (서열번호 32)의 아미노산 서열을 포함하며, X1은 Y 또는 F; X2는 K 또는 E; 및 X3은 K 또는 M; (c) CDRH3 NX1DX2 (서열번호 33)의 아미노산 서열을 포함하고, X1은 G 또는 V; 및 X2는 H 또는 Y; (d) CDRL1은 RASQSVSSNLA (서열번호 4)의 아미노산 서열을 포함하며; (e) CDRL2는 GASTRAT (서열번호 5)의 아미노산 서열을 포함하고; 및 (f) CDRL3은 QQYNNWPRT (서열번호 6)의 아미노산 서열을 포함한다.
어떤 실시양태에서, CDRH2는 서열번호 2 및 34 내지 36으로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열을 포함한다.
어떤 실시양태에서, CDRH3은 서열번호 3, 7 및 37로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열을 포함한다.
어떤 실시양태에서, CDRH1, CDRH2 및 CDRH3은 각각 서열번호 1, 2 및 3; 1, 2 및 7; 1, 2 및 37; 1, 34 및 7; 1, 35 및 7; 또는 1, 36 및 7로 제시된, CDRH1, CDRH2 및 CDRH3의 아미노산 서열을 포함한다.
어떤 실시양태에서, 상기 항체는 상보성 결정 영역 CDRH1, CDRH2 및 CDRH3을 포함하는 중쇄 가변 영역, 및 상보성 결정 영역 CDRL1, CDRL2 및 CDRL3을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하며, 상기 CDRH1, CDRH2, CDRH3, CDRL1, CDRL2 및 CDRL3은 각각 서열번호 1, 2, 3, 4, 5 및 6의 아미노산 서열을 포함한다.
어떤 실시양태에서, 상기 항체는 상보성 결정 영역 CDRH1, CDRH2 및 CDRH3을 포함하는 중쇄 가변 영역, 및 상보성 결정 영역 CDRL1, CDRL2 및 CDRL3을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하며, 상기 CDRH1, CDRH2, CDRH3, CDRL1, CDRL2 및 CDRL3은 각각 서열번호 1, 2, 7, 4, 5 및 6의 아미노산 서열을 포함한다.
어떤 실시양태에서, 상기 항체는 서열번호 49의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역을 포함한다.
어떤 실시양태에서, 상기 항체는 서열번호 15, 17 및 26 내지 31로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열과 적어도 75%, 80%, 85%, 90%, 95% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역을 포함한다. 어떤 실시양태에서, 상기 중쇄 가변 영역은 서열번호 15, 17 및 26 내지 31로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열을 포함한다. 어떤 실시양태에서, 상기 중쇄 가변 영역은 서열번호 15의 아미노산 서열을 포함한다. 어떤 실시양태에서, 상기 중쇄 가변 영역은 서열번호 17의 아미노산 서열을 포함한다. 어떤 실시양태에서, 상기 중쇄 가변 영역은 서열번호 26의 아미노산 서열을 포함한다. 어떤 실시양태에서, 상기 중쇄 가변 영역은 서열번호 27의 아미노산 서열을 포함한다. 어떤 실시양태에서, 상기 중쇄 가변 영역은 서열번호 28의 아미노산 서열을 포함한다. 어떤 실시양태에서, 상기 중쇄 가변 영역은 서열번호 29의 아미노산 서열을 포함한다. 어떤 실시양태에서, 상기 중쇄 가변 영역은 서열번호 30의 아미노산 서열을 포함한다. 어떤 실시양태에서, 상기 중쇄 가변 영역은 서열번호 31의 아미노산 서열을 포함한다. 어떤 실시양태에서, 상기 항체는 서열번호 18의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄를 포함한다. 어떤 실시양태에서, 상기 항체는 서열번호 21의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄를 포함한다. 어떤 실시양태에서, 상기 항체는 서열번호 20의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄를 포함한다. 어떤 실시양태에서, 상기 항체는 서열번호 22의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄를 포함한다. 어떤 실시양태에서, 상기 항체는 서열번호 23의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄를 포함한다. 어떤 실시양태에서, 상기 항체는 서열번호 24의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄를 포함한다. 어떤 실시양태에서, 상기 항체는 서열번호 25의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄를 포함한다. 어떤 실시양태에서, 상기 항체는 서열번호 52의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄를 포함한다. 어떤 실시양태에서, 상기 항체는 서열번호 53의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄를 포함한다. 어떤 실시양태에서, 상기 항체는 서열번호 54의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄를 포함한다. 어떤 실시양태에서, 상기 항체는 서열번호 55의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄를 포함한다. 어떤 실시양태에서, 상기 항체는 서열번호 56의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄를 포함한다. 어떤 실시양태에서, 상기 항체는 서열번호 57의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄를 포함한다. 어떤 실시양태에서, 상기 항체는 서열번호 58의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄를 포함한다.
어떤 실시양태에서, 상기 항체는 인간 IGHV3-33 생식 세포(germline) 서열(예를 들어, 서열번호 50의 아미노산 서열을 갖는 IGHV3-33*01)로부터 유래된 아미노산 서열을 가지는 중쇄 가변 영역을 포함한다.
어떤 실시양태에서, 상기 항체는 서열번호 16의 아미노산 서열과 적어도 75%, 80%, 85%, 90%, 95% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함한다. 어떤 실시양태에서, 상기 경쇄 가변 영역은 서열번호 16의 아미노산 서열을 포함한다. 어떤 실시양태에서, 상기 항체는 서열번호 19의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함한다.
어떤 실시양태에서, 상기 항체는 인간 IGKV3-15 생식 세포 서열(예를 들어, 서열번호 51의 아미노산 서열을 갖는 IGKV3-15*01)로부터 유래된 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변 영역을 포함한다.
어떤 실시양태에서, 상기 항체는 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역을 포함하는데, 상기 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역은 각각 서열번호 15 및 16; 17 및 16; 26 및 16; 27 및 16; 28 및 16; 29 및 16; 30 및 16; 또는 31 및 16으로 제시된, 아미노산 서열을 포함한다.
다른 양태에서, 본 발명은 (a) 서열번호 15의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역, 및 (b) 서열번호 16의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는, 인간 PD-1에 특이적으로 결합하는 항체 또는 분리된 항체를 제공한다.
다른 양태에서, 본 발명은 (a) 서열번호 17의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역, 및 (b) 서열번호 16의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는, 인간 PD-1에 특이적으로 결합하는 항체 또는 분리된 항체를 제공한다.
다른 양태에서, 본 발명은 (a) 서열번호 26의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 (b) 서열번호 16의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는, 인간 PD-1에 특이적으로 결합하는 항체 또는 분리된 항체를 제공한다.
다른 양태에서, 본 발명은 (a) 서열번호 27의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 (b) 서열번호 16의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는, 인간 PD-1에 특이적으로 결합하는 항체 또는 분리된 항체를 제공한다.
다른 양태에서, 본 발명은 (a) 서열번호 28의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 (b) 서열번호 16의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는, 인간 PD-1에 특이적으로 결합하는 항체 또는 분리된 항체를 제공한다.
다른 양태에서, 본 발명은 (a) 서열번호 29의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 (b) 서열번호 16의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는, 인간 PD-1에 특이적으로 결합하는 항체 또는 분리된 항체를 제공한다.
다른 양태에서, 본 발명은 (a) 서열번호 30의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 (b) 서열번호 16의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는, 인간 PD-1에 특이적으로 결합하는 항체 또는 분리된 항체를 제공한다.
다른 양태에서, 본 발명은 (a) 서열번호 31의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 (b) 서열번호 16의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는, 인간 PD-1에 특이적으로 결합하는 항체 또는 분리된 항체를 제공한다.
다른 양태에서, 본 발명은 (a) 인간 IGHV3-33 생식 세포 서열(예를 들어, 서열번호 50의 아미노산 서열을 갖는 IGHV3-33*01)로부터 유래된 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변 영역, 및 (b) 인간 IGKV3-15 생식 세포 서열(예를 들어, 서열번호 51의 아미노산 서열을 갖는 IGKV3-15*01)로부터 유래된 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변 영역을 포함하는, 인간 PD-1에 특이적으로 결합하는 항체 또는 분리된 항체를 제공한다
다른 양태에서, 본 발명은 서열번호 15, 17 및 26 내지 31로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역을 포함하는, 인간 PD-1에 특이적으로 결합하는 항체 또는 분리된 항체를 제공한다.
다른 양태에서, 본 발명은 서열번호 16의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는, 인간 PD-1에 특이적으로 결합하는 항체 또는 분리된 항체를 제공한다.
다른 양태에서, 본 발명은 (a) 서열번호 18의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄; 및 (b) 서열번호 19의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하는, 인간 PD-1에 특이적으로 결합하는 항체 또는 분리된 항체를 제공한다.
다른 양태에서, 본 발명은 (a) 서열번호 20의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄; 및 (b) 서열번호 19의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하는, 인간 PD-1에 특이적으로 결합하는 항체 또는 분리된 항체를 제공한다.
다른 양태에서, 본 발명은 (a) 서열번호 21의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄; 및 (b) 서열번호 19의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하는, 인간 PD-1에 특이적으로 결합하는 항체 또는 분리된 항체를 제공한다.
다른 양태에서, 본 발명은 (a) 서열번호 22의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄; 및 (b) 서열번호 19의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하는, 인간 PD-1에 특이적으로 결합하는 항체 또는 분리된 항체를 제공한다.
다른 양태에서, 본 발명은 (a) 서열번호 23의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄; 및 (b) 서열번호 19의 아미노산 서열을 포함하는, 인간 PD-1에 특이적으로 결합하는 경쇄를 포함하는 항체 또는 분리된 항체를 제공한다.
다른 양태에서, 본 발명은 (a) 서열번호 52의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄; 및 (b) 서열번호 19의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하는, 인간 PD-1에 특이적으로 결합하는 항체 또는 분리된 항체를 제공한다.
다른 양태에서, 본 발명은 (a) 서열번호 53의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄; 및 (b) 서열번호 19의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하는, 인간 PD-1에 특이적으로 결합하는 항체 또는 분리된 항체를 제공한다.
다른 양태에서, 본 발명은 (a) 서열번호 54의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄; 및 (b) 서열번호 19의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하는, 인간 PD-1에 특이적으로 결합하는 항체 또는 분리된 항체를 제공한다.
다른 양태에서, 본 발명은 (a) 서열번호 55의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄; 및 (b) 서열번호 19의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하는, 인간 PD-1에 특이적으로 결합하는 항체 또는 분리된 항체를 제공한다.
다른 양태에서, 본 발명은 (a) 서열번호 56의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄; 및 (b) 서열번호 19의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하는, 인간 PD-1에 특이적으로 결합하는 항체 또는 분리된 항체를 제공한다.
다른 양태에서, 본 발명은 인간 PD-1과의 결합에서, 본 명세서에 기재된 임의의 항체와 교차 경쟁하는 항체 또는 분리된 항체를 제공한다. 다른 양태에서, 본 발명은 본 명세서에 기재된 임의의 항체처럼, 인간 PD-1의 동일한 에피토프에 결합, 예를 들어, 특이적으로 결합하는 항체 또는 분리된 항체를 제공한다.
다른 양태에서, 본 발명은 인간 PD-1의 에피토프에 결합, 예를 들어, 특이적으로 결합하는 항체를 제공한다. 어떤 실시양태에서, 상기 항체는 서열번호 74의 107-122번 잔기를 포함하거나, 이들로 필수적으로 이루어지거나 또는 이들로 이루어진 인간 PD-1의 에피토프에 결합한다. 어떤 실시양태에서, 상기 항체는 서열번호 74의 107-122번 잔기로 이루어진 인간 PD-1의 에피토프에 결합한다. 어떤 실시양태에서, 상기 항체는 서열번호 74의 5-22번 잔기를 포함하거나, 이들로 필수적으로 이루어지거나 또는 이들로 이루어진 인간 PD-1의 에피토프에 결합한다. 어떤 실시양태에서, 상기 항체는 서열번호 74의 5-22번 잔기로 이루어진 인간 PD-1의 에피토프에 결합한다. 어떤 실시양태에서, 상기 항체는 서열번호 74의 6-15번 잔기를 포함하거나, 이들로 필수적으로 이루어지거나 또는 이들로 이루어진 인간 PD-1의 에피토프에 결합한다. 어떤 실시양태에서, 상기 항체는 서열번호 74의 6-15번 잔기로 이루어진 인간 PD-1의 에피토프에 결합한다. 어떤 실시양태에서, 상기 항체는 서열번호 74의 130-138번 잔기를 포함하거나, 이들로 필수적으로 이루어지거나 또는 이들로 이루어진 인간 PD-1의 에피토프에 결합한다. 어떤 실시양태에서, 상기 항체는 서열번호 74의 130-138번 잔기로 이루어진 인간 PD-1의 에피토프에 결합한다. 어떤 실시양태에서, 상기 항체는 서열번호 74의 106-113번 잔기를 포함하거나, 이들로 필수적으로 이루어지거나 또는 이들로 이루어진 인간 PD-1의 에피토프에 결합한다. 어떤 실시양태에서, 상기 항체는 서열번호 74의 106-113번 잔기로 이루어진 인간 PD-1의 에피토프에 결합한다.
다른 양태에서, 본 발명은 항체를 제공하는데, 수소/중수소(deuterium) 치환에 의해 결정되는 것처럼, 인간 PD-1 단백질에 항체가 결합된 후, 중수소가 부가될 때, 서열번호 74의 107-122번 잔기를 포함하는 영역에서 인간 PD-1 단백질의 수소가 중수소로의 치환이, 항체의 부재하에, 동일한 영역에서 인간 PD-1 단백질의 수소가 중수소로의 치환에 비하여, 실질적으로 감소된다. 다른 양태에서, 본 발명은 항체를 제공하는데, 수소/중수소 치환에 의해 결정되는 것처럼, 인간 PD-1 단백질에 항체가 결합된 후, 중수소가 부가될 때, 서열번호 74의 5-22번 잔기를 포함하는 영역에서 인간 PD-1 단백질의 수소가 중수소로의 치환이, 항체의 부재하에, 동일한 영역에서 인간 PD-1 단백질의 수소가 중수소로의 치환에 비하여, 실질적으로 감소된다.
다른 양태에서, 본 발명은 본 발명의 임의의 항체와 동일한 인간 PD-1 에피토프에 결합하는, 예를 들어, 특이적으로 결합하는 항체 또는 분리된 항체를 제공한다. 바람직한 실시양태에서, 상기 항체는 서열번호 74의 107-122번 잔기를 포함하거나, 이들로 필수적으로 이루어지거나 또는 이들로 이루어진 인간 PD-1의 에피토프에 결합한다. 다른 바람직한 실시양태에서, 상기 항체는 서열번호 74의 107-122번 잔기로 이루어진 인간 PD-1의 에피토프에 결합한다. 다른 바람직한 실시양태에서, 상기 항체는 서열번호 74의 5-22번 잔기를 포함하거나, 이들로 필수적으로 이루어지거나 또는 이들로 이루어진 인간 PD-1의 에피토프에 결합한다. 다른 바람직한 실시양태에서, 상기 항체는 서열번호 74의 5-22번 잔기로 이루어진 인간 PD-1의 에피토프에 결합한다. 다른 바람직한 실시양태에서, 상기 항체는 서열번호 74의 6-15번 잔기를 포함하거나, 이들로 필수적으로 이루어지거나 또는 이들로 이루어진 인간 PD-1의 에피토프에 결합한다. 다른 바람직한 실시양태에서, 상기 항체는 서열번호 74의 6-15번 잔기로 이루어진 인간 PD-1의 에피토프에 결합한다. 다른 바람직한 실시양태에서, 상기 항체는 서열번호 74의 130-138번 잔기를 포함하거나, 이들로 필수적으로 이루어지거나 또는 이들로 이루어진 인간 PD-1의 에피토프에 결합한다. 다른 바람직한 실시양태에서, 상기 항체는 서열번호 74의 130-138번 잔기로 이루어진 인간 PD-1의 에피토프에 결합한다. 다른 바람직한 실시양태에서, 상기 항체는 서열번호 74의 106-113번 잔기를 포함하거나, 이들로 필수적으로 이루어지거나 또는 이들로 이루어진 인간 PD-1의 에피토프에 결합한다. 다른 바람직한 실시양태에서, 상기 항체는 서열번호 74의 106-113번 잔기로 이루어진 인간 PD-1의 에피토프에 결합한다. 보다 바람직한 실시양태에서, 상기 항체는 서열번호 74의 6-15번 잔기를 포함하거나, 이들로 필수적으로 이루어지거나 또는 이들로 이루어진 인간 PD-1의 에피토프, 및/또는 서열번호 74의 130-138번 잔기를 포함하거나, 이들로 필수적으로 이루어지거나 또는 이들로 이루어진 인간 PD-1의 에피토프 및/또는 서열번호 74의 106-113번 잔기를 포함하거나, 이들로 필수적으로 이루어지거나 또는 이들로 이루어진 인간 PD-1의 에피토프에 결합한다. 특히 실시예에 기재된 바와 같이, 에피토프에 대한 결합은 바람직하게는 펩스칸 분석법(Pepscan analysis)에 의해 확인되었다., 예를 들어, 인간 PD-1의 상기 하나 이상의 에피토프 서열에 대한 결합은 불연속적인 에피토프의 경우에 발생할 수 있다.
다른 양태에서, 본 발명은 본 발명의 임의의 항체처럼, 인간 PD-1의 동일한 에피토프에 결합하는, 예를 들어, 특이적으로 결합하는 항체 또는 분리된 항체를 제공하는데, 상기 항체는 수소/중수소 치환에 의해 결정되는 것처럼, 인간 PD-1 단백질에 항체가 결합된 후, 중수소가 부가될 때, 서열번호 74의 107-122번 잔기를 포함하는 영역에서 인간 PD-1 단백질의 수소가 중수소로의 치환이, 항체의 부재하에, 동일한 영역에서 인간 PD-1 단백질의 수소가 중수소로의 치환에 비하여, 실질적으로 감소된다. 다른 양태에서, 본 발명은 본 발명의 임의의 항체처럼, 인간 PD-1의 동일한 에피토프에 결합하는, 예를 들어, 특이적으로 결합하는 항체 또는 분리된 항체를 제공하는데, 상기 항체는 수소/중수소 치환에 의해 결정되는 것처럼, 인간 PD-1 단백질에 항체가 결합된 후, 중수소가 부가될 때, 서열번호 74의 5-22번 잔기를 포함하는 영역에서 인간 PD-1 단백질의 수소가 중수소로의 치환이, 항체의 부재하에, 동일한 영역에서 인간 PD-1 단백질의 수소가 중수소로의 치환에 비하여, 실질적으로 감소된다. 보다 바람직한 실시양태에서, 수소/중수소 치환에 의해 결정되는 것처럼, 인간 PD-1 단백질에 항체가 결합된 후, 중수소가 부가될 때, 서열번호 74의 107-122번 잔기를 포함하는 영역에서 인간 PD-1 단백질의 수소가 중수소로의 치환이, 항체의 부재하에, 동일한 영역에서 인간 PD-1 단백질의 수소가 중수소로의 치환에 비하여, 실질적으로 감소되고, 수소/중수소 치환에 의해 결정되는 것처럼, 인간 PD-1 단백질에 항체가 결합된 후, 중수소가 부가될 때, 서열번호 74의 5-22번 잔기를 포함하는 영역에서 인간 PD-1 단백질의 수소가 중수소로의 치환이, 항체의 부재하에, 동일한 영역에서 인간 PD-1 단백질의 수소가 중수소로의 치환에 비하여, 실질적으로 감소된다. 예를 들어, 인간 PD-1의 상기 하나 이상의 에피토프 서열에 대한 결합은 불연속적인 에피토프의 경우에 발생할 수 있다.
다른 양태에서, 본 발명은 본 발명의 임의의 항체처럼, 인간 PD-1의 동일한 에피토프에 결합하는, 예를 들어, 특이적으로 결합하는 항체 또는 분리된 항체를 제공하는데, 상기 에피토프는, 특히, 실시예에 기재된 바와 같이 수소-중수소 교환(hydrogen-deuterium exchange: HDX)에 의해 또는 특히 실시예에 기재된 펩스칸 분석법(Pepscan analysis), 보다 바람직하게는 수소-중수소 교환에 의해 결정된다.
이하의 실시예는 전술한 모든 양태에 적용된다.
어떤 실시양태에서, 상기 항체는 인간 IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA1 및 IgA2로 이루어진 군으로부터 선택되는 중쇄 불변 영역을 포함한다. 어떤 실시양태에서, 상기 항체는 인간 IgG1 중쇄 불변 영역을 포함한다. 어떤 실시양태에서, 상기 항체는, EU 번호 부여 시스템에 따른 N297 위치의 글리칸 모이어티가 결여된 인간 IgG1 중쇄 불변 영역을 포함한다. 어떤 실시양태에서, 상기 항체는, EU 번호 부여 시스템에 따른 N297A 변이를 포함하는 인간 IgG1 중쇄 불변 영역을 포함한다. 어떤 실시양태에서, 상기 항체는, EU 번호 부여 시스템에 따른 N297Q 변이를 포함하는 인간 IgG1 중쇄 불변 영역을 포함한다. 어떤 실시양태에서, 상기 항체는, EU 번호 부여 시스템에 따른 D265A 변이를 포함하는 인간 IgG1 중쇄 불변 영역을 포함한다. 어떤 실시양태에서, 상기 항체는, EU 번호 부여 시스템에 따른 S228P 변이를 포함하는 인간 IgG4 중쇄 불변 영역을 포함한다.
어떤 실시양태에서, 상기 항체는, 야생형 인간 IgG 중쇄 불변 영역의 변이체인 인간 IgG 중쇄 불변 영역을 포함하고, 상기 변이체 인간 IgG 중쇄 불변 영역은 야생형 인간 IgG 중쇄 불변 영역이 인간 Fc 수용체에 결합하는 것 보다 낮은 친화력으로 인간 Fc 수용체에 결합한다. 어떤 실시양태에서, 상기 인간 Fc 수용체는 FcγR 이다. 어떤 실시양태에서, 상기 FcγR는 FcγRIIB이다. 어떤 실시양태에서, 상기 FcγR은 수지상 세포, 단핵구, 대식세포, 호중구, 과립구, B 세포 및 자연 살해 세포로 이루어진 군으로부터 선택되는 세포에서 발현된다. 어떤 실시양태에서, 상기 변이체 인간 IgG 중쇄 불변 영역은 변이체 인간 IgG1, 변이체 인간 IgG2 또는 변이체 인간 IgG4 중쇄 불변 영역이다. 어떤 실시양태에서, 상기 항체는 인간 IgGκ 및 IgGλ로 이루어진 군으로부터 선택되는 경쇄 불변 영역을 포함한다.
어떤 실시양태에서, 상기 항체는 인간 항체이다. 어떤 실시양태에서, 상기 항체는 인간 PD-1에 길항적이다. 어떤 실시양태에서, 상기 항체는 인간 PD-1의 활성을 불활성화시키거나, 감소시키거나 또는 억제한다. 어떤 실시양태에서, 상기 항체는 인간 PD-L1 또는 인간 PD-L2에 대한 인간 PD-1의 결합을 억제한다. 어떤 실시양태에서, 상기 항체는 SEA(staphylococcal enterotoxin A)로 자극된 말초 혈액 단핵 세포(peripheral blood mononuclear cell: PBMC)에 의한 IL-2 생산을 증가시킨다. 어떤 실시양태에서, 상기 항체는 인간 T 세포와 동종의 수지상 세포의 공배양(co-culture)의 IFNγ 생산을 증가시킨다. 어떤 실시양태에서, 상기 항체는 난소암 복수액과 공배양된 항-CD3-항체-자극된 CD4+ 또는 CD8+ T 세포의 증식을 증가시킨다. 어떤 실시양태에서, 상기 항체는 PD-L1-발현 표적 세포와 공배양된 PD-1-발현 NFAT-루시퍼라제 리포터 세포에서 NFAT 신호전달을 증가시킨다.
어떤 실시양태에서, 본 명세서에 기재된 항체는 세포독성 제제(cytotoxic agent), 세포증식 억제제(cytostatic agent), 독소(toxin), 방사성 핵종(radionuclide) 또는 검출 가능한 표지(detectable label)에 접합된다.
다른 양태에서, 본 발명은 본 명세서에 기재된 항체 및 약학적으로 허용가능한 담체 또는 부형제를 포함하는 약학 조성물을 제공한다.
다른 양태에서, 본 발명은 본 명세서에 기재된 항체의 중쇄 및/또는 경쇄를 코딩하는 폴리뉴클레오티드 또는 분리된 폴리뉴클레오티드를 제공한다. 다른 양태에서, 본 발명은 상기 폴리뉴클레오티드를 포함하는 벡터를 제공한다. 또 다른 양태에서, 본 발명은 상기 폴리뉴클레오티드 또는 벡터를 포함하는 재조합 숙주 세포를 제공한다. 추가적인 양태에서, 본 발명은 상기 폴리뉴클레오티드가 발현되고 항체가 생산되도록, 상기 숙주 세포를 배양하는 단계를 포함하는, 인간 PD-1에 결합하는 항체의 생산방법을 제공한다. 바람직한 일 실시양태에서, 상기 방법은 시험관 조건(in vitro)에서의 방법이다.
일 실시양태에서, 본 발명은 약물용으로 사용하기 위한, 본 발명의 항체 또는 본 발명의 약학 조성물 또는 본 발명의 폴리뉴클레오티드 또는 본 발명의 벡터 또는 본 발명의 재조합 숙주 세포에 관한 것이다.
일 실시양태에서, 본 발명은 진단용으로 사용하기 위한, 본 발명의 항체 또는 본 발명의 약학 조성물 또는 본 발명의 폴리뉴클레오티드 또는 본 발명의 벡터 또는 본 발명의 재조합 숙주 세포에 관한 것이다.
일 실시양태에서, 본 발명은 면역치료용 약학 조성물 또는 약물의 제조를 위한, 본 발명의 항체의 용도에 관한 것이다. 바람직하게는, 상기 면역치료는 선택적으로 암을 치료하거나 또는 감염성 질환을 치료 또는 예방하기 위해, T 세포의 활성을 증가시키기 위한 것이다.
다른 양태에서, 본 발명은 본 명세서에 기재된 항체 또는 약학 조성물의 유효량을 개체에게 투여하는 단계를 포함하는, 개체에서 항원에 대한 반응으로 T 세포 활성화를 증가시키는 방법을 제공한다.
다른 양태에서, 본 발명은 본 명세서에 기재된 항체 또는 약학 조성물의 유효량을 개체에게 투여하는 단계를 포함하는, 개체에서 암을 치료하는 방법을 제공한다. 어떤 실시양태에서, 상기 암은 흑색종(melanoma), 두경부암(head and neck cancer)(예를 들어, 두경부 편평암(head and neck squamous cancer)), 폐암(lung cancer)(예를 들어, 비소세포성 폐암(non-small cell lung cancer) 및 소세포성 폐암(small cell lung cancer)), 유방암(breast cancer)(예를 들어, 허셉틴 내성 유방암(herceptin resistant breast cancer) 및 T-DM1(trastuzumab-DM1) 내성 유방암), 전립선암(prostate cancer), 다형성교모세포종(glioblastoma multiforme), 결장직장암(colorectal cancer), 육종(sarcoma), 방광암(bladder cancer), 자궁경부암(cervical cancer), HPV-관련 암(HPV-associated cancer), 질암(cancer of the vagina), 외음부암(cancer of the vulva), 음경암(cancer of the penis), 항문암(cancer of the anus), 직장암(cancer of the rectum), 구강인두암(cancer of the oropharynx), 다발성 골수종(multiple myeloma), 신세포암(renal cell carcinoma), 난소암(ovarian cancer), 간세포암(hepatocellular cancer), 자궁내막암(endometrial cancer), 췌장암(pancreatic cancer), 림프종(lymphoma) 및 백혈병(leukemia)(예를 들어, 노인성 백혈병(elderly leukemia), 급성 골수성 백혈명(acute myeloid leukemia: AML) 및 노인성 AML)으로 이루어진 군으로부터 선택된다. 어떤 실시양태에서, 상기 항체 또는 약학 조성물은 피하 또는 정맥내로 투여된다. 어떤 실시양태에서, 상기 항체 또는 약학 조성물은 종양 내로 투여된다. 어떤 실시양태에서, 상기 항체 또는 약학 조성물은 종양 배수 림프절(tumor draining lymph node)로 전달된다. 어떤 실시양태에서, 상기 항체 또는 약학 조성물은 동맥내로 투여된다.
일 양태에서, 본 발명은 항원에 반응하여 T 세포 활성화를 증가시키는 방법에 사용하기 위한, 본 발명의 항체, 폴리뉴클레오티드, 벡터, 재조합 숙주 세포 및/또는 약학 조성물에 관한 것이다.
일 양태에서, 본 발명은 개체에서 항원에 반응하여 T 세포 활성화를 증가시키는 방법에 사용하기 위한, 본 발명의 항체, 폴리뉴클레오티드, 벡터, 재조합 숙주 세포 및/또는 약학 조성물에 관한 것이다.
일 양태에서, 본 발명은 개체에서 항원에 반응하여 T 세포 활성화를 증가시키기 위한 약학 조성물을 제조하기 위한, 본 발명의 항체, 폴리뉴클레오티드, 벡터, 재조합 숙주 세포 및/또는 약학 조성물의 용도에 관한 것이다.
일 양태에서, 본 발명은, 본 발명의 항체, 폴리뉴클레오티드, 벡터, 재조합 숙주 세포 및/또는 약학 조성물의 유효량을 개체에게 투여하는 단계를 포함하는, 개체의 항원에 반응하여 T 세포 활성화를 증가시키는 방법에 사용하기 위한, 본 발명의 항체, 폴리뉴클레오티드, 벡터, 재조합 숙주 세포 및/또는 약학 조성물에 관한 것이다.
일 양태에서, 본 발명은 암을 치료하기 위한 방법에 사용하기 위한, 본 발명의 항체, 폴리뉴클레오티드, 벡터, 재조합 숙주 세포 및/또는 약학 조성물에 관한 것으로서, 바람직하게 상기 암은 흑색종, 두경부암(예를 들어, 두경부 편평암), 폐암(예를 들어, 비소세포성 폐암 및 소세포성 폐암), 유방암(예를 들어, 허셉틴 내성 유방암 및 T-DM1 내성 유방암), 전립선암, 다형성교모세포종, 결장직장암, 육종, 방광암, 자궁경부암, HPV-관련 암, 질암, 외음부암, 음경암, 항문암, 직장암, 구강인두암, 다발성 골수종, 신세포암, 난소암, 간세포암, 자궁내막암, 췌장암, 림프종 및 백혈병(예를 들어, 노인성 백혈병, AML 및 노인성 AML)으로 이루어진 군으로부터 선택된다.
일 양태에서, 본 발명은 개체에서 암을 치료하기 위한 방법에 사용하기 위한, 본 발명의 항체, 폴리뉴클레오티드, 벡터, 재조합 숙주 세포 및/또는 약학 조성물에 관한 것으로서, 바람직하게는 상기 암은 흑색종, 두경부암(예를 들어, 두경부 편평암), 폐암(예를 들어, 비소세포성 폐암 및 소세포성 폐암), 유방암(예를 들어, 허셉틴 내성 유방암 및 T-DM1 내성 유방암), 전립선암, 다형성교모세포종, 결장직장암, 육종, 방광암, 자궁경부암, HPV-관련 암, 질암, 외음부암, 음경암, 항문암, 직장암, 구강인두암, 다발성 골수종, 신세포암, 난소암, 간세포암, 자궁내막암, 췌장암, 림프종 및 백혈병(예를 들어, 노인성 백혈병, AML 및 노인성 AML)으로 이루어진 군으로부터 선택된다.
일 양태에서, 본 발명은, 본 발명의 항체, 폴리뉴클레오티드, 벡터, 재조합 숙주 세포 및/또는 약학 조성물의 유효량을 개체에게 투여하는 단계를 포함하는, 개체에서 암을 치료하기 위한 방법에 사용하기 위한, 본 발명의 항체, 폴리뉴클레오티드, 벡터, 재조합 숙주 세포 및/또는 약학 조성물에 관한 것으로서, 바람직하게는 상기 암은 흑색종, 두경부암(예를 들어, 두경부 편평암), 폐암(예를 들어, 비소세포성 폐암 및 소세포성 폐암), 유방암(예를 들어, 허셉틴 내성 유방암 및 T-DM1 내성 유방암), 전립선암, 다형성교모세포종, 결장직장암, 육종, 방광암, 자궁경부암, HPV-관련 암, 질암, 외음부암, 음경암, 항문암, 직장암, 구강인두암, 다발성 골수종, 신세포암, 난소암, 간세포암, 자궁내막암, 췌장암, 림프종 및 백혈병(예를 들어, 노인성 백혈병, AML 및 노인성 AML)으로 이루어진 군으로부터 선택된다.
본 발명의 용도를 위한 항체, 폴리뉴클레오티드, 벡터, 재조합 숙주 세포 및/또는 약학 조성물의 바람직한 실시양태에서, 항체, 폴리뉴클레오티드, 벡터, 재조합 숙주 세포 및/또는 약학 조성물, 보다 바람직하게는 항체 또는 약학 조성물은 피하 또는 정맥내로 투여된다. 본 발명의 용도를 위한 항체, 폴리뉴클레오티드, 벡터, 재조합 숙주 세포 및/또는 약학 조성물의 다른 바람직한 실시양태에서, 항체, 폴리뉴클레오티드, 벡터, 재조합 숙주 세포 및/또는 약학 조성물, 보다 바람직하게는 항체 또는 약학 조성물은 종양 내 또는 동맥내로 투여된다.
어떤 실시양태에서, 상술한 방법은 개체에게 추가적 치료제를 투여하는 단계를 추가로 포함한다. 따라서, 본 발명의 방법에서 사용하기 위한 항체, 폴리뉴클레오티드, 벡터, 재조합 숙주 세포 및/또는 약학 조성물의 바람직한 일 실시양태에서, 상기 방법은 개체에 추가적 치료제를 투여하는 단계를 추가로 포함한다.
일 양태에서, 본 발명은 (a) 본 발명의 항체, 폴리뉴클레오티드, 벡터, 재조합 숙주 세포 및/또는 약학 조성물 및 (b) 약물로서 사용하기 위한 추가적 치료제에 관한 것이다.
일 양태에서, 본 발명은 (a) 본 발명의 항체, 폴리뉴클레오티드, 벡터, 재조합 숙주 세포 및/또는 약학 조성물, 및 (b) 암 치료를 위한 방법에 사용하기 위한 추가적 치료제에 관한 것이다.
일 양태에서, 본 발명은 (a) 본 발명의 항체, 폴리뉴클레오티드, 벡터, 재조합 숙주 세포 및/또는 약학 조성물 및 (b) 추가적 치료제를 포함하는, 약학 조성물, 키트 또는 부품들의 키트(kit-of-parts)에 관한 것이다.
어떤 실시양태에서, 상기 추가적 치료제는 화학치료제(chemotherapeutic agent) 또는 체크포인트 표적화 제제(checkpoint targeting agent) 이다. 어떤 실시양태에서, 상기 체크포인트 표적화 제제는 길항제 항-PD-1 항체, 길항제 항-PD-L1 항체, 길항제 항-PD-L2 항체, 길항제 항-CTLA-4 항체, 길항제 항-TIM-3 항체, 길항제 항-LAG-3 항체, 길항제 항-CEACAM1 항체, 길항제 항-TIGIT 항체, 작용제 항-CD137 항체, 작용제 항-ICOS 항체, 작용제 항-GITR 항체 및 작용제 항-OX40 항체로 이루어진 군으로부터 선택된다. 어떤 실시양태에서, 상기 추가적 치료제는 인돌레민-2,3-디옥시게나제(indoleamine-2,3-dioxygenase: IDO)의 억제제이다. 어떤 실시양태에서, 상기 억제제는 에파카도스탯(epacadostat), F001287, 인독시모드(indoximod) 및 NLG919로 이루어진 군으로부터 선택된다. 어떤 실시양태에서, 상기 추가적 치료제는 백신이다. 어떤 실시양태에서, 상기 백신은 항원 펩티드와 복합체화된 열충격 단백질을 포함하는 열충격 단백질 펩티드 복합체(heat shock protein peptide complex: HSPPC)를 포함한다. 어떤 실시양태에서, 상기 열충격 단백질은 hsc70 이고, 종양-관련 항원 펩티드(tumor-associated antigenic peptide)와 복합체화된다. 어떤 실시양태에서, 상기 열충격 단백질은 gp96 단백질이고, 종양-관련 항원 펩티드와 복합체화되며, 상기 HSPPC는 개체로부터 얻어진 종양으로부터 유래된다. 어떤 실시양태에서, 상기 추가적 치료제는 TCR을 포함한다. 어떤 실시양태에서, 상기 추가적 치료제는 가용성 TCR이다. 어떤 실시양태에서, 상기 추가적 치료제는 TCR을 발현하는 세포이다. 어떤 실시양태에서, 상기 추가적 치료제는 키메라 항원 수용체를 발현하는 세포이다. 어떤 실시양태에서, 상기 추가적 치료제는 펩티드-MHC 복합체에 특이적으로 결합하는 항체이다. 어떤 실시양태에서, 상기 추가적 치료제는 어쥬번트(adjuvant)이다. 일 양태에서, 본 발명은 (a) 본 발명의 항체, 폴리뉴클레오티드, 벡터, 재조합 숙주 세포 및/또는 약학 조성물 뿐만 아니라 약물 제조를 위한 이들의 용도, 및 (b) 약물로 사용하기 위한, 특히, 암의 치료를 위한 방법에 사용하기 위한 백신에 관한 것으로, 바람직하게는 상기 백신은 항원 펩티드와 복합체화된 열충격 단백질을 포함하는 열충격 단백질 펩티드 복합체(HSPPC)를 포함한다. 일 양태에서, 본 발명은 (a) 본 발명의 항체, 폴리뉴클레오티드, 벡터, 재조합 숙주 세포 및/또는 약학 조성물 및 (b) 백신을 포함하는 약학 조성물, 키트 또는 부품들의 키트에 관한 것으로, 바람직하게는 상기 백신은 항원 펩티드와 복합체화된 열충격 단백질을 포함하는 열충격 단백질 펩티드 복합체(HSPPC)를 포함한다.
4. 도면의 간단한 설명
도 1a, 1b, 1c 및 1d는 유세포 분석법으로 측정된, 활성화된 일차 인간 또는 원숭이(cynomolgus)의 T 세포에 대한 항-PD-1 항체의 결합을 나타내는 그래프이다. 평균 형광 강도(mean fluorescence intensity: MFI)는 다양한 항체 농도에 대해, 계산하고 표시하였다. 도 1a에서, AGEN2046w, AGEN2047w 및 인간 IgG1 이소타입 대조군은 SEA(staphylococcal enterotoxin A)로 자극된 인간 CD4+ T 세포에 대한 결합이 측정되었다. AGEN2034w 및 인간 IgG1 이소타입 대조군은 SEA로 자극된 인간 CD4+ T 세포(도 1b 및 1d) 및 SEB(Staphylococcus Enterotoxin B)로 자극된 원숭이 CD4+ T 세포(도 1c)에 대하여 테스트되었다.
도 2는 인간 PD-1-Fc, 인간 ROBO2-Fc, 인간 B7-H7-Fc 또는 SIRPγ-His에 대한 AGEN2034w의 결합을 나타내는 그래프이다. 상기 결합은 서스펜션 어레이 기술(suspension array technology)에 의해 측정되었고, 평균 형광 강도(MFI)는 항체 농도별로 표시하였다.
도 3a, 3b, 3c, 3d, 3e 및 3f는 항-PD-1 항체의 용량 적정(dose titration)하에서, PD-1 결합 비드에 결합하는 재조합 PD-L1-Fc 및/또는 PD-L2-Fc의 비율을 나타내는 그래프이다. 도 3a, 3b, 3c 및 3d에서, 테스트된 항-PD-1 항체는 각각 AGEN2033w, AGEN2034w, AGEN2046w 및 AGEN2047w이다. 도 3e 및 3f에서, AGEN2034w 및 이소타입 대조군 항체에 대해 유사한 결과가 나타났다.
도 4a, 4b, 4c, 4d, 4e 및 4f는, SEA로 자극한 후 인간 PBMC의 배양물에 대한 항-PD-1 항체의 기능적 활성을 나타내는 그래프이다. 도 4a는 항-PD-1 항체인 AGEN2033w, AGEN2034w, AGEN2046w, AGEN2047w 및 IgG1 이소타입 대조군에 의해 유도된 IL-2 생산을 나타내는 그래프이다. 분비된 IL-2의 평균값(막대)을 나타낸다. 도 4b는 이소타입 대조군과 비교하여, AGEN2034w의 용량 적정하에서 IL-2 생산을 나타내는 그래프이다. 오차 막대는 표준 편차를 나타낸다. AGEN2034w 또는 이소타입 대조군 항체는, 항-TCLA-4 항체인 이필리무맵(Ipilimumab)(도 4c), 항-TIGIT 항체 pab2197 또는 pab2196(도 4d), 항-CD137 항체 pab2225(도 4e) 또는 항-OX40 항체 pab1928(도 4f)의 존재 또는 부재하에서 테스트되었다.
도 5a, 5b 및 5c는 SEA 자극 후 인간 PBMC에 대한 항-PD-1 항체의 길항적 활성에 대한 Fc 감마 수용체(FcγR) 결합의 영향을 평가한 연구 결과이다. 도 5a는 항-CD16 항체의 존재 또는 부재하에서, 항-PD-1 레퍼런스 항체 또는 이소타입 대조군에 의해 유도된 IL-2 생산을 나타내는 그래프이다. 도 5b는 이소타입 대조군, 항-CD16 항체, 항-CD32 항체 또는 항-CD64 항체의 존재하에, AGEN2034w 또는 이소타입 대조군에 의해 유도된 IL-2 분비를 평가하는 유사한 연구의 결과이다. 도 5c는 야생형 인간 IgG1 Fc 영역, 상응하는 3개의 Fc 돌연변이(N297A, S267E/L328F 및 S239D/A330L/I332E) 및 이들 각각의 이소타입 대조군을 갖는 AGEN2047w에 의해 유도된 IL-2 생산을 나타내는 그래프이다. 분비된 IL-2의 평균값(막대)을 나타낸다.
도 6은 임의의 항체의 부재 또는 이소타입 대조군 항체 또는 항-PD-1 항체인 AGEN2034w의 존재하에, 인간 T 세포 및 동종의 수지상 세포의 공배양의 IFNγ 생산을 나타내는 그래프이다. IFNγ의 평균값(막대)을 나타낸다.
도 7a, 7b 및 7c는 AGEN2034w 또는 이소타입 대조군 항체의 존재하에, 난소암 복수액과 공배양 한 후, 항-CD3-항체-자극 T 세포의 증식을 측정하는 분석으로부터의 결과이다. 도 7a 및 7b는 각각 10㎍/㎖의 AGEN2034w 또는 이소타입 대조군 항체의 존재하에, CD4+ 및 CD8+ T 세포로부터의 CFSE 형광을 나타내는 대표적인 히스토그램이다. 도 7c는 유사한 연구의 결과를 나타내는 그래프이다. 도 7c에서, CFSE 희석에 의해 측정된 CD4+ T 세포의 증식은, 난소암 복수액의 부재하에 CD4+ T 세포의 증식으로 정상화되고, 항체 농도에 대해 표시되었다.
도 8은 항-PD-1 항체 AGEN2034w 또는 IgG4 이소타입 대조군 항체에 의해 유도된 Jurkat NFAT-루시퍼라제 리포터 분석에서의 반응을 나타내는 그래프이다. 루시퍼라제 발현에 의해 측정된 반응은, 테스트된 최저 농도(유도 배수)로 이소타입 대조군 항체의 존재하에 유도된 반응에 대해 정상화되고, 항체 농도에 대해 표시되었다.
도 9a, 9b, 9c, 9d, 9e 및 9f는 항-PD-1 항체 AGEN2001w(도 9a), AGEN2002w(도 9b), EP11_pl1_B03(도 9c), EP11_pl1_B05(도 9d), EP11_pl1_C02(도 9e) 또는 EP11_pl1_C03(도 9f)의 용량 적정하에, PD-1 결합 비드에 대한 재조합 PD-L1-Fc 및 PD-L2-Fc 결합의 비율을 나타내는 그래프이다.
도 10은 IL-2 생산에 의해 증명된 바와 같이, SEA 자극 후 인간 PBMC의 배양물에 대한 항-PD-1 항체 AGEN2002w 또는 IgG1 이소타입 대조군의 기능적 활성을 나타내는 그래프이다. 분비된 IL-2의 평균값(막대)을 나타낸다.
5. 발명의 상세한 설명
본 발명은 인간 PD-1에 특이적으로 결합하고, PD-1 기능, 예를 들어, PD-1-매개 면역 억제를 길항하는 항체를 제공한다. 또한, 이들 항체를 포함하는 약학 조성물, 이들 항체를 코딩하는 핵산, 이들 항체를 제조하기 위한 발현 벡터 및 숙주 세포, 및 이들 항체를 사용하여 개체를 치료하는 방법을 제공한다. 본 명세서에 기재된 항체는 항원(예를 들어, 종양 항원 또는 감염성 질환 항원)에 반응하여 T 세포 활성화를 증가시키고, 이에 따라 개체에서 암을 치료하거나 또는 개체에서 감염성 질환을 치료 또는 예방하는데 특히 유용하다. 본 명세서에 기재된 모든 예시의 "분리된 항체"는 분리될 수 있으나 반드시 분리될 필요는 없는 항체에 대해 추가로 고려된다. 본 명세서에 기재된 모든 예시의 "분리된 폴리뉴클레오티드"는 분리될 수 있으나 반드시 분리될 필요는 없는 폴리뉴클레오티드에 대해 추가로 고려된다. 본 명세서에 기재된 모든 예시의 "항체"는 분리될 수 있으나 반드시 분리될 필요는 없는 항체에 대해 추가로 고려된다. 본 명세서에 기재된 모든 예시의 "폴리뉴클레오티드"는 분리될 수 있으나 반드시 분리될 필요는 없는 폴리뉴클레오티드에 대해 추가로 고려된다.
5.1. 정의
본 명세서에서 사용된 바와 같이, 수치 또는 수치 범위를 변경하기 위해 사용되는 용어 "약" 및 "대략"은, 상기 수치 또는 범위의 5 % 내지 10 % 까지 이상 및 5 % 내지 10 % 까지의 이하로의 편차가 상기 인용된 수치 또는 범위의 의도된 의미 내에서 유지되는 것을 나타낸다.
본 명세서에서 사용된 바와 같이, 상기 용어 "PD-1"은 세포 사멸 단백질 1(cell death protein 1)로 프로그램된 단백질을 의미한다. PD-1 뉴클레오티드 및 아미노산 서열은 당업계에 공지되어 있다. 예시적인 인간 PD-1 아미노산 서열은 GenBank 기탁번호 GI:167857792로 제시된다.
본 명세서에 사용된 바와 같이, 상기 용어 "항체" 및 "항체들"은 전장 항체, 전장 항체의 항원-결합 단편 및 항체 CDR, VH 영역 또는 VL 영역을 포함하는 분자를 포함한다. 항체의 예로는, 단클론 항체, 재조합 방법으로 생산된 항체, 단일 특이적 항체, 다중 특이적 항체(이중 특이적 항체 포함), 인간 항체, 인간화 항체, 키메라 항체, 면역글로불린, 합성 항체, 2개의 중쇄 및 2개의 경쇄 분자를 포함하는 테트라 메릭 항체, 항체 경쇄 단량체, 항체 중쇄 단량체, 항체 경쇄 2량체, 항체 중쇄 2량체, 항체 경쇄-항체 중쇄 쌍, 인트라 바디(intrabody), 헤테로컨쥬게이트(heteroconjugate) 항체, 항체-약물 접합체(conjugate), 단일 도메인 항체, 1가 항체, 단일쇄 항체 또는 단일쇄 Fvs(scFv), 카멜화(camelized) 항체, 아피바디(affybody), Fab 단편, F (ab')2 단편, 디설파이드-결합 Fvs(sdFv), 항-이디오타입(anti-Id) 항체(예를 들어, 항-항-Id 항체 포함) 및 상술한 임의의 항원-결합 단편을 포함한다. 어떤 실시양태에서, 본 명세서에 기재된 항체는 다클론 항체 집단을 의미한다. 항체는 면역 글로불린 분자의 임의의 유형(예를 들어, IgG, IgE, IgM, IgD, IgA 또는 IgY), 임의의 클래스(예를 들어, IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA1 또는 IgA2) 또는 임의의 서브클래스(예를 들어, IgG2a 또는 IgG2b)가 될 수 있다. 어떤 실시양태에서, 본 명세서에 기재된 항체는 IgG 항체, 또는 이의 일 클래스(예를 들어, 인간 IgG1 또는 IgG4) 또는 서브클래스이다. 특정 실시양태에서, 상기 항체는 인간화된 단클론 항체이다. 다른 특정 실시양태에서, 상기 항체는 인간의 단클론 항체이다. 어떤 실시양태에서, 본 명세서에 기재된 항체는 IgG1 또는 IgG2 항체이다.
본 명세서에 사용된 바와 같이, 상기 용어 "VH 영역" 및 "VL 영역"은, 각각 FR(프레임 워크 영역) 1, 2, 3 및 4와, CDR(상보성 결정 영역) 1, 2 및 3을 포함하는 단일 항체의 중쇄 및 경쇄 가변 영역을 나타낸다(Kabat et al., (1991) Sequences of Proteins of Immunological Interest (NIH Publication No. 91-3242, Bethesda), 그 전체가 본 명세서에 참고자료로 인용되었다).
본 명세서에 사용된 바와 같이, 상기 용어 "CDR" 또는 "상보성 결정 영역"은 중쇄 및 경쇄 폴리펩티드 모두의 가변 영역 내에서 발견되는 비인접 항원 결합 부위를 의미한다. 이러한 특정 영역은 그 전체가 본 명세서에 참고자료로 인용된 문헌인 Kabat et al., J. Biol. Chem. 252, 6609-6616 (1977); Kabat et al., Sequences of protein of immunological interest. (1991); Chothia et al., J. Mol. Biol. 196:901-917 (1987); 및 MacCallum et al., J. Mol. Biol. 262:732-745 (1996)에 기재되어 있는데, 상기 정의는 서로 비교될 때 아미노산 잔기의 중첩 또는 부분 집합을 포함한다. 바람직하게는, 상기 용어 "CDR"은 서열 비교에 기반한 Kabat로 정의된 CDR이다. CDRH1, CDRH2 및 CDRH3은 중쇄 CDR을 나타내고, CDRL1, CDRL2 및 CDRL3은 경쇄 CDR을 나타낸다.
본 명세서에 사용된 바와 같이, 상기 용어 "EU 번호 부여 시스템"은 그 전체가 본 명세서에 참고자료로 인용된 문헌인 Edelman, G.M. et al., Proc. Natl. Acad. USA, 63, 78-85 (1969) 및 Kabat et al., in "Sequences of Proteins of Immunological Interest", U.S. Dept. Health and Human Services, 5th edition, 1991에 기재된 바와 같이, 항체의 불변 영역을 위한 EU 번호 부여 협약을 의미한다.
본 명세서에 사용된 바와 같이, 상기 용어 "프레임워크 (FR) 아미노산 잔기"는 면역글로불린 체인 골격 영역의 아미노산을 의미한다. 본 명세서에 사용된 바와 같이, 상기 용어 "프레임워크 영역" 또는 "FR 영역"은 가변 영역의 일부이지만 CDR의 일부가 아닌(예를 들어, CDR의 Kabat 정의를 이용하여) 아미노산 잔기를 포함한다.
본 명세서에 사용된 바와 같이, 상기 용어 "가변 영역" 및 "가변 도메인"은 상호 호환적으로 사용되고, 당해 기술 분야에서 통상적이다. 가변 영역은 전형적으로 항체의 일부, 일반적으로 경쇄 또는 중쇄의 일부, 전형적으로 성숙한 중쇄에서 대략 아미노 말단 110 내지 125번 아미노산 및 성숙한 경쇄에서 약 90 내지 115번 아미노산을 의미하는데, 이는 항체간의 서열에서 폭넓게 상이하고, 특정 항원을 위한 특정 항체의 결합 및 특이성에서 사용된다. 서열의 가변성은 상보성 결정 영역(CDR)이라는 영역에 집중되어 있는 반면, 가변 도메인에서 보다 고도로 보존된 영역은 프레임 워크 영역(FR)으로 명명된다. 어떤 실시양태에서, 상기 가변 영역은 인간의 가변 영역이다. 어떤 실시양태에서, 상기 가변 영역은 설치류 또는 쥐의 CDR 및 인간의 프레임 워크 영역(FR)을 포함한다. 특정 실시양태에서, 상기 가변 영역은 영장류(예를 들어, 비인간 영장류)의 가변 영역이다. 어떤 실시양태에서, 상기 가변 영역은 설치류 또는 쥐의 CDR 및 영장류(예를 들어, 비인간 영장류) 프레임 워크 영역(FR)을 포함한다.
상기 용어 "VL" 및 "VL 도메인"은 항체의 경쇄 가변 영역을 의미하도록 상호호환적으로 사용된다.
용어 "VH" 및 "VH 도메인"은 항체의 중쇄 가변 영역을 의미하도록 상호호환적으로 사용된다.
본 명세서에 사용된 바와 같이, 상기 용어 "불변 영역" 및 "불변 도메인"은 상호호환되며, 당업계에서 통상적이다. 상기 불변 영역은 항체 부분, 예를 들어, 항체와 항원의 결합에는 직접 관여하지 않지만, Fc 수용체(예를 들어, Fc 감마 수용체)와의 반응과 같은 다양한 작용기 기능을 나타낼 수 있는 경쇄 및/또는 중쇄의 카르복시 말단 부분이다 .
일반적으로, 면역글로불린 분자의 불변 영역은 면역글로불린 가변 도메인에 비해 보다 보존된 아미노산 서열을 갖는다.
본 명세서에 사용된 바와 같이, 상기 용어 "중쇄"는 항체와 관련하여 사용될 때 임의의 별개의 유형, 예를 들어, 불변 도메인의 아미노산 서열을 기준으로 알파(α), 델타(δ), 엡실론(ε), 감마(γ) 및 뮤(μ)를 의미할 수 있는데, 이들은 IgG의 서브클래스, 예를 들어, IgG1, IgG2, IgG3 및 IgG4를 포함하는 항체의 IgA, IgD, IgE, IgG, 및 IgM 클래스를 각각 생성한다.
본 명세서에 사용된 바와 같이, 상기 용어 "경쇄"는 항체와 관련하여 사용될 때 임의의 별개의 유형, 예를 들어, 불변 도메인의 아미노산 서열을 기준으로 카파(κ) 또는 람다(λ)를 의미할 수 있다. 경쇄 아미노산 서열은 당업계에 공지되어 있다. 특정 실시양태에서, 상기 경쇄는 인간의 경쇄이다.
일반적으로, "결합 친화도"는 분자(예를 들어, 항체)의 단일 결합 부위와 그의 결합 파트너(예를 들어, 항원) 간의 비공유 결합의 총합의 강도를 의미한다. 달리 명시하지 않는 한, 본 명세서에 사용된 바와 같이, "결합 친화도"는 결합 쌍(예를 들어, 항체 및 항원)의 구성원 간의 1:1 결합을 반영하는 내인성 결합 친화도를 의미한다. 일반적으로, 분자 X의 이의 파트너 Y에 대한 상기 친화도는 해리 상수(KD)로 표현된다. 친화도는 평형 해리 상수(KD) 및 평형 결합 상수(KA)를 포함하나, 이에 한정되지 않고, 당업계에 공지된 다양한 방법으로 측정 및/또는 표현될 수 있다. 상기 KD는 koff/kon의 지수로부터 계산되는 반면, KA는 kon/koff의 지수로부터 계산된다. kon은, 예를 들어, 항원에 대한 항체의 결합 속도 상수를 의미하고, koff는, 예를 들어, 항원에 대한 항체의 해리 속도 상수를 의미한다. 상기 kon 및 koff는 BIAcore® 또는 KinExA와 같은 당업계에 공지된 기술에 의해 결정될 수있다.
본 명세서에 사용된 바와 같이, 상기 용어 "특이적으로 결합하는"은 적어도 약 1 x 10-6M, 1 x 10-7M, 1 x 10-8M, 1x10-9M, 1x10-10M, 1x10-11M, 1x10-12M 또는 그 이하의 해리 상수(Kd)로 항원에 결합하거나 및/또는 비특이적 항원에 대한 친화도 보다 적어도 2배 이상의 친화도로 항원에 결합하는 하는 항체의 능력을 의미한다. 일 실시양태에서, 항원에 특이적으로 결합하는 분자는, 예를 들어, 면역 분석법, BIAcore®, KinExA 3000 기기(Sapidyne Instruments, Boise, ID) 또는 당업계에 공지된 다른 분석법에 의해 측정된 바와 같이, 일반적으로 더 낮은 친화도로 다른 펩티드 또는 폴리펩티드에 결합할 수 있다. 일 실시양태에서, 항원에 특이적으로 결합하는 분자는 상기 분자가 다른 항원에 비특이적으로 결합할 때 결합 상수(KA) 보다 적어도 2 로그, 2.5 로그, 3 로그, 4 로그 또는 그 이상의 KA를 가지는 항원에 결합한다. 일 실시양태에서, 항원에 특이적으로 결합하는 분자는 1 x 10-6M 이하, 1 x 10-7M 이하, 1 x 10-8M 이하, 1 x 10-9M 이하, 1 x 10-10M 이하, 1 x 10-11M 이하 또는 1 x 10-12M 이하의 Kd를 가지는 항원에 결합한다.
다른 특정 실시양태에서, 항원에 특이적으로 결합하는 분자는 유사한 결합 조건하에서 다른 단백질과 교차반응하지 않는다. 다른 특정 실시양태에서, PD-1에 특이적으로 결합하는 분자는 다른 비-PD-1 단백질과 교차반응하지 않는다. 특정 실시양태에서, 본 명세서에서 제공된 것은 다른 비관련 항원에 대한 것보다 높은 친화도로 PD-1(예를 들어, 사람 PD-1)에 결합하는 항체이다. 어떤 실시양태에서, 본 명세서에 제공된 것은, 예를 들어, 방사선면역분석(radioimmunoassay), 표면 플라스몬 공명(surface plasmon resonance) 또는 키네틱 배재 분석(kinetic exclusion assay)에 의해 측정된 바와 같이, 다른 비관련 항원에 대한 것보다 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% 또는 그 이상의 친화도를 가지는 PD-1(예를 들어, 사람 PD-1)에 결합하는 항체이다. 특정 실시양태에서, 비관련 비-PD-1 단백질에 대한 본 명세서에 기재된 항-PD-1 항체의 결합범위는, 예를 들어, 방사선면역분석에 의해 측정된 바와 같이, PD-1 단백질에 대한 항체 결합의 10%, 15%, 또는 20% 미만이다.
본 명세서에 사용된 바와 같이, "에피토프"는 당업계의 용어이며, 항체가 특이적으로 결합할 수 있는 항원에 위치한 영역을 의미한다. 에피토프는, 예를 들어, 폴리펩티드의 연속적인 아미노산(선형 또는 연속 에피토프)일 수 있거나, 또는 에피토프는, 예를 들어, 하나의 폴리펩티드의 2개 이상의 인접하지 않은 영역 또는 다수의 폴리펩티드(구조, 비선형, 불연속 또는 인접하지 않은 에피토프)로 부터 조합될 수 있다. 어떤 실시양태에서, 항체가 결합하는 상기 에피토프는, 예를 들어, NMR 분광학(NMR spectroscopy), X- 선 회절 결정학(X-ray diffraction crystallography) 연구, ELISA 분석, 질량분석법(예를 들어, 액체 크로마토 그래피 전기 분무 질량 분석법)과 결합된 수소/중수소 교환, 어레이 기반 올리고-펩티드 스캐닝 분석법(예를 들어, CLIPS(Chemical Linkage of Peptides onto Scaffolds)를 이용하여 펩티드를 제약하여, 불연속 또는 구조적 에피토프를 매핑하는) 및/또는 돌연변이유발 매핑(예를 들어, 사이트 지정 돌연변이유발 매핑)에 의해 결정될 수 있다. X-선 결정학을 위해, 결정화는 당업계에 공지된 임의의 방법을 사용하여 수행될 수 있다(예를 들어, Gieg-R et al., (1994) Acta Crystallogr D Biol Crystallogr 50(Pt 4): 339-350; McPherson A (1990) Eur J Biochem 189: 1-23; Chayen NE (1997) Structure 5: 1269-1274; McPherson A (1976) J Biol Chem 251: 6300-6303, 이들 각각은 그 전체가 본 명세서에 참고로 인용되었다). 항체:항원 결정(crystal)은 공지된 X-선 회절 기술을 사용하여 연구할 수 있고, X-PLOR와 같은 컴퓨터 소프트웨어를 사용하여 정제될 수 있다(Yale University, 1992, distributed by Molecular Simulations, Inc.; see, e.g., Meth Enzymol (1985) volumes 114 & 115, eds Wyckoff HW et al.,; U.S. 2004/0014194), 및 BUSTER (Bricogne G (1993) Acta Crystallogr D Biol Crystallogr 49(Pt 1): 37-60; Bricogne G (1997) Meth Enzymol 276A: 361-423, ed Carter CW; Roversi P et al., (2000) Acta Crystallogr D Biol Crystallogr 56(Pt 10): 1316-1323, 이들 각각은 그 전체가 본 명세서에 참고자료로 인용되었다). 돌연변이유발 지도 연구는 당업자에게 공지된 임의의 방법을 사용하여 수행될 수 있다. 알라인 스캐닝 돌연변이유발 기술을 포함하는 돌연변이유발 기술을 설명하기 위한 문헌으로, Champe M et al., (1995) J Biol Chem 270: 1388-1394 and Cunningham BC & Wells JA (1989) Science 244: 1081-1085를 참고하는데, 이들 각각은 그 전체가 본 명세서에 참고자료로 인용되었다. CLIPS(Chemical Linkage of Peptides onto Scaffolds)는 복잡한 단백질 도메인의 기능적 모방물처럼 행동하기 위해, 구조적으로 구속된 구성으로 하나 이상의 펩티드를 제공하는 기술이다. 미국공개특허 US 2008/0139407 A1 및 미국공개특허 US 2007/099240 A1, 및 미국특허 7,972,993가 참조되며, 이들 모두는 그 전체가 본 명세서에 참고자료로 인용되었다. 특정 실시양태에서, 항체의 에피토프는 알라닌 스캐닝 돌연변이유발 연구를 사용하여 결정된다. 특정 실시양태에서, 항체의 에피토프는 질량분석법과 결합된 수소/중수소 교환을 사용하여 결정된다. 특정 실시양태에서, 항체의 에피토프는 Pepscan Therapeutics의 CLIPS Epitope Mapping Technology를 사용하여 결정된다.
본 명세서에 사용된 바와 같이, 상기 용어 "T 세포 수용체" 및 "TCR"은 상호호환되고, 전장의 이종이량체(heterodimeric) αβ 또는 γδ TCR, 전장 TCR의 항원-결합 단편, 및 TCR CDR 또는 가변 영역을 포함하는 분자를 의미한다. TCR의 예는, 이에 제한되지 않으나, 전장 TCR, 전장 TCR의 항원-결합 단편, 막투과 영역 및 세포질 영역이 결여된 가용성 TCR, 가요성(flexible) 링커에 의해 부착된 TCR의 가변영역을 포함하는 단일쇄 TCR, 조작된 이황화결합으로 연결된 TCR 사슬, 단일특이적 TCR, 다중특이적 TCR(이중특이적 TCR 포함), TCR 융합체, 인간 TCR, 인간화된 TCR, 키메릭 TCR, 재조합 방법으로 생산된 TCR, 및 합성 TCR을 포함한다. 상기 용어는 야생형 TCR 및 유전적으로 조작된 TCR(예를 들어, 제1 종의 TCR 로부터의 제1 부분 및 제2 종의 TCR으로부터의 제2 부분을 포함하는 키메릭 TCR 사슬을 포함하는 키메릭 TCR)을 포함한다.
본 명세서에 사용된 바와 같이, 상기 용어 "주요 조직 적합성(major histocompatibility) 복합체" 및 "MHC"는 상호호환적으로 사용되고, MHC 클래스 I 분자 및/또는 MHC 클래스 II 분자를 의미한다.
본 명세서에 사용된 바와 같이, 상기 용어 "펩티드-MHC 복합체"는 MHC의 당해 분야에 공지된 펩티드 결합 포켓에 결합된 펩티드를 갖는 MHC 분자(MHC 클래스 I 또는 MHC 클래스 II)를 의미한다.
본 명세서에 사용된 바와 같이, 상기 용어 "치료하다", "치료하는" 및 "치료"는 본 명세서에 기재된 치료 또는 예방 행위를 의미한다. "치료"의 방법은, 질병 또는 장애 또는 반복되는 질병 또는 장애의 하나 이상의 증상을 예방, 치료, 지연, 중증도의 감소 또는 완화시키기 위하여, 또는 이러한 치료의 부재 하에서 기대했던 것 이상으로 개체의 생존을 연장시키기 위하여, 질병 또는 장애를 지니거나 그러한 질병 또는 장애를 갖는 경향이 있는 개체에 항체의 투여를 허용하는 것이다.
본 명세서에 사용된 바와 같이, 개체에게 치료제를 투여하는 것과 관련된 상기 용어 "유효량"은, 목적하는 예방 또는 치료 효과를 달성하는 치료제의 용량을 의미한다.
본 명세서에 사용된 바와 같이, 상기 용어 "개체"는 임의의 인간 또는 비-인간 동물을 포함한다. 바람직한 실시양태에서, 상기 개체는 인간 또는 비인간 포유 동물이고, 보다 바람직하게는 인간이다.
2개의 서열(예를 들어, 아미노산 서열 또는 핵산 서열) 간의 "동일성 비율(percent identity)"의 결정은 수학적 알고리즘을 사용하여 달성될 수 있다. 2개 서열의 비교를 위해 사용되는 수학적 알고리즘의 특이적이고 비-제한적인 예시는 Karlin S & Altschul SF (1993) PNAS 90: 5873-5877의 변형된 것인Karlin S & Altschul SF (1990) PNAS 87: 2264-2268,의 알고리즘으로, 이들 각각은 그 전체가 본 명세서에 참고자료로 인용되었다. 이러한 알고리즘은 Altschul SF et al., (1990) J Mol Biol 215: 403의 NBLAST 및 XBLAST 프로그램에 통합되었으며, 이는 그 전체가 본 명세서에 참고자료로 인용되었다. BLAST 뉴클레오티드 검색은 본 명세서에 기재된 핵산 분자에 상동인 뉴클레오티드 서열을 얻기 위하여, 예를 들어, 스코어=100, 단어 길이=12로 설정된 NBLAST 뉴클레오티드 프로그램 파라미터로 수행될 수 있다. BLAST 단백질 검색은 본 명세서에 기재된 단백질 분자에 상동인 아미노산 서열을 얻기 위하여, 예를 들어, 스코어 50, 단어 길이=3으로 설정된 XBLAST 프로그램 파라미터로 수행될 수 있다. 비교를 목적으로 한 갭 정렬(gapped alignment)을 얻기 위해, Gapped BLAST는 Altschul SF et al., (1997) Nuc Acids Res 25: 3389-3402에 기재된 바와 같이 사용될 수 있으며, 이는 그 전체가 본 명세서에 참고자료로 인용되었다. 대안적으로, PSI BLAST는 분자간의 먼 연관성을 검출하는 반복 검색을 수행하는데 사용될 수 있다(Id.). BLAST, Gapped BLAST 및 PSI Blast 프로그램을 사용할 때, 각 프로그램(예를 들어, XBLAST 및 NBLAST)의 기본 파라미터를 사용할 수 있다(예를 들어, ncbi.nlm.nih.gov 웹의 National Center for Biotechnology Information(NCBI) 참조). 서열 비교에 사용되는 수학적 알고리즘의 다른 특이적이고 비-제한적인 예시는, Myers and Miller, 1988, CABIOS 4:11-17의 알고리즘 인데, 이는 그 전체가 본 명세서에 참고자료로 인용되었다. 이러한 알고리즘은 GCG 서열 정렬 소프트웨어 패키지의 일부인 ALIGN 프로그램(버전 2.0)에 통합되었다. 아미노산 서열을 비교하기 위해 ALIGN 프로그램을 사용할 때, PAM120 중량 잔기 도표(PAM120 weight residue table), 12의 갭 길이 페널티, 및 4의 갭 패널티가 사용될 수 있다.
2개 서열간의 동일성 비율은 갭 허용 여부에 관계없이, 상술한 것과 유사한 기술을 사용하여 결정할 수 있다. 동일성 비율 계산에서, 전형적으로 정확하게 일치된 것만 계산된다.
5.2. 항-PD-1 항체
일 양태에서, 본 발명은 인간 PD-1에 특이적으로 결합하고 PD-1 기능을 길항하는 항체를 제공한다.
예시적인 항체의 아미노산 서열은 본 명세서의 표 1 내지 표 6에 제시되어 있다.
예시적인 항-PD-1 항체의 가변 영역, CDR 및 FR의 서열
서열번호 설명 아미노산 서열
1 AGEN2033w Kabat CDRH1 SYGMH
2 AGEN2033w Kabat CDRH2 VIWYDGSNKYYADSVKG
3 AGEN2033w Kabat CDRH3 NVDY
4 AGEN2033w Kabat CDRL1 RASQSVSSNLA
5 AGEN2033w Kabat CDRL2 GASTRAT
6 AGEN2033w Kabat CDRL3 QQYNNWPRT
7 AGEN2034w Kabat CDRH3 NGDH
8 AGEN2033w IMGT CDRH1 GFTFSSYG
9 AGEN2033w IMGT CDRH2 IWYDGSNK
10 AGEN2033w IMGT CDRH3 ASNVDY
11 AGEN2033w IMGT CDRL1 QSVSSN
12 AGEN2033w IMGT CDRL2 GAS
13 AGEN2033w IMGT CDRL3 QQYNNWPRT
14 AGEN2034w IMGT CDRH3 ASNGDH
15 AGEN2033w, AGEN2046w VH QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSSYGMHWVRQAPGKGLEWVAVIWYDGSNKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCASNVDYWGQGTLVTVSS
16 AGEN2033w, AGEN2034w, AGEN2046w, AGEN2047w VL EIVMTQSPATLSVSPGERATLSCRASQSVSSNLAWYQQKPGQAPRLLIYGASTRATGIPARFSGSGSGTEFTLTISSLQSEDFAVYYCQQYNNWPRTFGQGTKVEIK
17 AGEN2034w, AGEN2047w VH QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSSYGMHWVRQAPGKGLEWVAVIWYDGSNKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCASNGDHWGQGTLVTVSS
18 AGEN2033w 중쇄 IgG4 S228P QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSSYGMHWVRQAPGKGLEWVAVIWYDGSNKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCASNVDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK
52 AGEN2033w 중쇄 IgG4 S228P (C-말단 리신 부재) QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSSYGMHWVRQAPGKGLEWVAVIWYDGSNKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCASNVDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLG
19 AGEN2033w, AGEN2034w, AGEN2046w, AGEN2047w 경쇄 EIVMTQSPATLSVSPGERATLSCRASQSVSSNLAWYQQKPGQAPRLLIYGASTRATGIPARFSGSGSGTEFTLTISSLQSEDFAVYYCQQYNNWPRTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
20 AGEN2034w 중쇄 IgG4 S228P QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSSYGMHWVRQAPGKGLEWVAVIWYDGSNKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCASNGDHWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK
53 AGEN2034w 중쇄 IgG4 S228P (C-말단 리신 부재) QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSSYGMHWVRQAPGKGLEWVAVIWYDGSNKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCASNGDHWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLG
21 AGEN2046w 중쇄 IgG1 QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSSYGMHWVRQAPGKGLEWVAVIWYDGSNKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCASNVDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
54 AGEN2046w 중쇄 IgG1 (C-말단 리신 부재) QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSSYGMHWVRQAPGKGLEWVAVIWYDGSNKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCASNVDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG
22 AGEN2047w 중쇄 IgG1 QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSSYGMHWVRQAPGKGLEWVAVIWYDGSNKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCASNGDHWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
55 AGEN2047w 중쇄 IgG1 (C-말단 리신 부재) QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSSYGMHWVRQAPGKGLEWVAVIWYDGSNKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCASNGDHWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG
23 AGEN2047w 중쇄 IgG1 N297A QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSSYGMHWVRQAPGKGLEWVAVIWYDGSNKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCASNGDHWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYASTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
56 AGEN2047w 중쇄 IgG1 N297A (C-말단 리신 부재) QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSSYGMHWVRQAPGKGLEWVAVIWYDGSNKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCASNGDHWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYASTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG
24 AGEN2047w 중쇄 IgG1 S267E/L328F QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSSYGMHWVRQAPGKGLEWVAVIWYDGSNKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCASNGDHWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVEHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKAFPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
57 AGEN2047w 중쇄 IgG1 S267E/L328F (C-말단 리신 부재) QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSSYGMHWVRQAPGKGLEWVAVIWYDGSNKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCASNGDHWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVEHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKAFPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG
25 AGEN2047w 중쇄 IgG1 S239D/A330L/I332E QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSSYGMHWVRQAPGKGLEWVAVIWYDGSNKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCASNGDHWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPDVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPLPEEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
58 AGEN2047w 중쇄 IgG1 S239D/A330L/I332E (C-말단 리신 부재) QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSSYGMHWVRQAPGKGLEWVAVIWYDGSNKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCASNGDHWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPDVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPLPEEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG
26 AGEN2001w VH (BADD426-2614) QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSSYGMHWVRQAPGKGLEWVAVIWYDGSNKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCATNGDYWGQGTLVTVSS
27 AGEN2002w VH (BADD426-2615) QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSSYGMHWVRQAPGKGLEWVAVIWYDGSNKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCASNGDYWGQGTLVTVSS
28 EP11_pl1_B03 (BADD438-2743) QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSSYGMHWVRQAPGKGLEWVAVIWYDGSNEYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCASNGDHWGQGTLVTVSS
29 EP11_pl1_B05 (BADD438-2745) QVQLVESGGGMVQPGRSLRLSCAASGFTFSSYGMHWVRQAPGKGLEWVAVIWFDGSNKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCASNGDHWGQGTLVTVSS
30 EP11_pl1_C02 (BADD438-2746) QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSSYGMHWVRQAPGKGLEWVAVIWYDGSNKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCASNGDHWGHGTLVTVSS
31 EP11_pl1_C03 (BADD438-2747) QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSSYGMHWVRQAPGKGLEWVAVIWYDGSNKYYADSVMGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCASNGDHWGQGTLVTVSS
32 CDRH2 공통 VIWX1DGSNX2YYADSVX3G
X1은 Y 또는 F 이고;
X2는 K 또는 E 이며; 및
X3는 K 또는 M 이다.
33 CDRH3 공통 NX1DX2
X1은 G 또는 V 이고; 및
X2는 H 또는 Y 이다.
34 CDRH2 VIWYDGSNEYYADSVKG
35 CDRH2 VIWFDGSNKYYADSVKG
36 CDRH2 VIWYDGSNKYYADSVMG
37 CDRH3 NGDY
38 VH FR1 QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFS
39 VH FR1 QVQLVESGGGMVQPGRSLRLSCAASGFTFS
40 VH FR2 WVRQAPGKGLEWVA
41 VH FR3 RFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAS
42 VH FR3 RFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAT
43 VH FR4 WGQGTLVTVSS
44 VH FR4 WGHGTLVTVSS
45 VL FR1 EIVMTQSPATLSVSPGERATLSC
46 VL FR2 WYQQKPGQAPRLLIY
47 VL FR3 GIPARFSGSGSGTEFTLTISSLQSEDFAVYYC
48 VL FR4 FGQGTKVEIK
49 VH 공통서열 QVQLVESGGGX1VQPGRSLRLSCAASGFTFSSYGMHWVRQAPGKGLEWVAVIWX2DGSNX3YYADSVX4GRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAX5NX6DX7WGX8GTLVTVSS
X1은 V 또는 M 이고,
X2는 Y 또는 F 이며,
X3는 K 또는 E 이고,
X4는 K 또는 M 이며,
X5는 S 또는 T 이고,
X6는 G 또는 V 이며,
X7은 H 또는 Y 이고, 및
X8은 Q 또는 H 이다.
50 IGHV3-33*01 생식 세포 서열 QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSSYGMHWVRQAPGKGLEWVAVIWYDGSNKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAR
51 IGKV3-15*01 생식 세포 서열 EIVMTQSPATLSVSPGERATLSCRASQSVSSNLAWYQQKPGQAPRLLIYGASTRATGIPARFSGSGSGTEFTLTISSLQSEDFAVYYCQQYNNWP
59 인간 IgG1 G1m3 알로타입 (C-말단 리신 부재) ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG
60 인간 IgG1 G1m3 알로타입 ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
61 IgG1 N297A (C-말단 리신 부재) ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYASTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG
62 IgG1 N297A ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYASTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
63 IgG4 S228P (C-말단 리신 부재) ASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLG
64 IgG4 S228P ASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK
65 인간 kappa 경쇄 불변 영역 IGKC*01 Km3 알로타입 RTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
예시적인 항-PD-1 항체 1의 중쇄 CDR 서열
항체 CDRH1(서열번호) CDRH2(서열번호) CDRH3(서열번호)
AGEN2033w SYGMH(1) VIWYDGSNKYYADSVKG(2) NVDY(3)
AGEN2034w SYGMH(1) VIWYDGSNKYYADSVKG(2) NGDH(7)
AGEN2001w SYGMH(1) VIWYDGSNKYYADSVKG(2) NGDY(37)
AGEN2002w SYGMH(1) VIWYDGSNKYYADSVKG(2) NGDY(37)
EP11_pl1_B03 SYGMH(1) VIWYDGSNEYYADSVKG(34) NGDH(7)
EP11_pl1_B05 SYGMH(1) VIWFDGSNKYYADSVKG(35) NGDH(7)
EP11_pl1_C02 SYGMH(1) VIWYDGSNKYYADSVKG(2) NGDH(7)
EP11_pl1_C03 SYGMH(1) VIWYDGSNKYYADSVMG(36) NGDH(7)
1 표 2의 상기 VH CDR은 Kabat에 따라 결정되었다.
예시적인 항-PD-1 항체 2의 경쇄 CDR 서열
항체 CDRL1(서열번호) CDRL2(서열번호) CDRL3(서열번호)
AGEN2033w RASQSVSSNLA(4) GASTRAT(5) QQYNNWPRT(6)
AGEN2034w RASQSVSSNLA(4) GASTRAT(5) QQYNNWPRT(6)
AGEN2001w RASQSVSSNLA(4) GASTRAT(5) QQYNNWPRT(6)
AGEN2002w RASQSVSSNLA(4) GASTRAT(5) QQYNNWPRT(6)
EP11_pl1_B03 RASQSVSSNLA(4) GASTRAT(5) QQYNNWPRT(6)
EP11_pl1_B05 RASQSVSSNLA(4) GASTRAT(5) QQYNNWPRT(6)
EP11_pl1_C02 RASQSVSSNLA(4) GASTRAT(5) QQYNNWPRT(6)
EP11_pl1_C03 RASQSVSSNLA(4) GASTRAT(5) QQYNNWPRT(6)
2 표 3의 상기 VL CDR은 Kabat에 따라 결정되었다.
예시적인 항-PD-1 항체 3의 VH 프레임워크(FR) 서열
항체 VH FR1(서열번호) VH FR2(서열번호) VH FR3(서열번호) VH FR4(서열번호)
AGEN2033w QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFS
(38)		 WVRQAPGKGLEWVA
(40)		 RFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAS(41) WGQGTLVTVSS
(43)
AGEN2034w QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFS
(38)		 WVRQAPGKGLEWVA
(40)		 RFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAS(41) WGQGTLVTVSS
(43)
AGEN2001w QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFS
(38)		 WVRQAPGKGLEWVA
(40)		 RFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAT(42) WGQGTLVTVSS
(43)
AGEN2002w QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFS
(38)		 WVRQAPGKGLEWVA
(40)		 RFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAS(41) WGQGTLVTVSS
(43)
P11_pl1_B03 QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFS
(38)		 WVRQAPGKGLEWVA
(40)		 RFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAS(41) WGQGTLVTVSS
(43)
P11_pl1_B05 QVQLVESGGGMVQPGRSLRLSCAASGFTFS
(39)		 WVRQAPGKGLEWVA
(40)		 RFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAS(41) WGQGTLVTVSS
(43)
P11_pl1_C02 QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFS
(38)		 WVRQAPGKGLEWVA
(40)		 RFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAS(41) WGHGTLVTVSS
(44)
P11_pl1_C03 QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFS
(38)		 WVRQAPGKGLEWVA
(40)		 RFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAS(41) WGQGTLVTVSS
(43)
3 표 4에 기재된 VH 프레임워크 영역은 CDR에 대한 Kabat 번호 부여 시스템(Kabat numbering system)의 경계에 기반하여 결정된다. 즉, VH CDR은 Kabat에 의해 결정되고, 프레임워크 영역은 FR1, CDRH1, FR2, CDRH2, FR3, CDRH3, 및 FR4의 형식으로 가변 영역의 CDR을 둘러싸는 아미노산 잔기이다.
예시적인 항-PD-1 항체 4의 VL 프레임워크(FR) 서열
항체 VL FR1(서열번호) VL FR2(서열번호) VL FR3(서열번호) VL FR4(서열번호)
AGEN2033w EIVMTQSPATLSVSPGERATLSC(45) WYQQKPGQAPRLLIY
(46)		 GIPARFSGSGSGTEFTLTISSLQSEDFAVYYC(47) FGQGTKVEIK(48)
AGEN2034w EIVMTQSPATLSVSPGERATLSC(45) QQKPGQAPRLLIY
(46)		 PARFSGSGSGTEFTLTISSLQSEDFAVYYC(47) QGTKVEIK(48)
AGEN2001w EIVMTQSPATLSVSPGERATLSC(45) QQKPGQAPRLLIY
(46)		 PARFSGSGSGTEFTLTISSLQSEDFAVYYC(47) QGTKVEIK(48)
AGEN2002w EIVMTQSPATLSVSPGERATLSC(45) QQKPGQAPRLLIY
(46)		 PARFSGSGSGTEFTLTISSLQSEDFAVYYC(47) QGTKVEIK(48)
P11_pl1_B03 EIVMTQSPATLSVSPGERATLSC(45) QQKPGQAPRLLIY
(46)		 PARFSGSGSGTEFTLTISSLQSEDFAVYYC(47) QGTKVEIK(48)
P11_pl1_B05 EIVMTQSPATLSVSPGERATLSC(45) QQKPGQAPRLLIY
(46)		 PARFSGSGSGTEFTLTISSLQSEDFAVYYC(47) QGTKVEIK(48)
P11_pl1_C02 EIVMTQSPATLSVSPGERATLSC(45) QQKPGQAPRLLIY
(46)		 PARFSGSGSGTEFTLTISSLQSEDFAVYYC(47) QGTKVEIK(48)
P11_pl1_C03 EIVMTQSPATLSVSPGERATLSC(45) QQKPGQAPRLLIY
(46)		 PARFSGSGSGTEFTLTISSLQSEDFAVYYC(47) QGTKVEIK(48)
4 표 5에 기재된 VL 프레임워크 영역은 CDR에 대한 Kabat 번호 부여 시스템의 경계에 기반하여 결정된다. 즉, VL CDR은 Kabat에 의해 결정되고, 프레임워크 영역은 FR1, CDRL1, FR2, CDRL2, FR3, CDRL3, 및 FR4의 포맷으로 가변 영역의 CDR을 둘러싸는 아미노산 잔기이다.
예시적인 항-PD-1 항체의 VH 및 VL 서열
항체 중쇄 가변 영역 서열번호 경쇄 가변 영역 서열번호
AGEN2033w BADD438-2742 15 3738 16
AGEN2034w BADD438-2744 17 3738 16
AGEN2001w BADD426-2614 26 3738 16
AGEN2002w BADD426-2615 27 3738 16
P11_pl1_B03 BADD438-2743 28 3738 16
P11_pl1_B05 BADD438-2745 29 3738 16
P11_pl1_C02 BADD438-2746 30 3738 16
P11_pl1_C03 BADD438-2747 31 3738 16
PD-1의 예시적인 서열
서열번호 설명 아미노산 서열
74 전형적으로 성숙한 PD-1 서열 PGWFLDSPDRPWNPPTFSPALLVVTEGDNATFTCSFSNTSESFVLNWYRMSPSNQTDKLAAFPEDRSQPGQDCRFRVTQLPNGRDFHMSVVRARRNDSGTYLCGAISLAPKAQIKESLRAELRVTERRAEVPTAHPSPSPRPAGQFQTLVVGVVGGLLGSLVLLVWVLAVICSRAARGTIGARRTGQPLKEDPSAVPVFSVDYGELDFQWREKTPEPPVPCVPEQTEYATIVFPSGMGTSSPARRGSADGPRSAQPLRPEDGHCSWPL
75 PD-1 에피토프(107-122 잔기) SLAPKAQIKESLRAEL
76 PD-1 에피토프(5-22 잔기) LDSPDRPWNPPTFSPALL
77 PD-1 에피토프(6-15 잔기) DSPDRPWNPP
78 PD-1 에피토프(130-138 잔기) EVPTAHPSP
79 PD-1 에피토프(106-113 잔기) ISLAPKAQ
어떤 실시양태에서, 본 발명은 인간 PD-1에 특이적으로 결합하는 항체 또는 분리된 항체를 제공하는데, 하기 구성요소를 포함한다:
(a) CDRH1는 SYGMH (서열번호 1)의 아미노산 서열을 포함하고; 및/또는
(b) CDRH2는 VIWX1DGSNX2YYADSVX3G (서열번호 32)의 아미노산 서열을 포함하며, X1은 Y 또는 F; X2는 K 또는 E; 및 X3은 K 또는 M; 및/또는
(c) CDRH3은 NX1DX2 (서열번호 33)의 아미노산 서열을 포함하고, X1은 G 또는 V; 및 X2는 H 또는 Y; 및/또는
(d) CDRL1은 RASQSVSSNLA (서열번호 4)의 아미노산 서열을 포함하며; 및/또는
(e) CDRL2는 GASTRAT (서열번호 5)의 아미노산 서열을 포함하고; 및/또는
(f) CDRL3은 QQYNNWPRT (서열번호 6)의 아미노산 서열을 포함한다.
어떤 실시양태에서, 상기 항체는 상기 VH CDR 중 하나, 둘 또는 셋 모두를 포함한다. 어떤 실시양태에서, 상기 항체는 표 2의 항체 중 하나의 CDRH1을 포함한다. 어떤 실시양태에서, 상기 항체는 표 2의 항체 중 하나의 CDRH2를 포함한다. 어떤 실시양태에서, 상기 항체는 표 2의 항체 중 하나의 CDRH3을 포함한다. 어떤 실시양태에서, 상기 항체는 표 2의 항체 중 하나의 VH CDR(예를 들어, 표 2의 한 행에 있는 VH CDR, 예를 들어, AGEN2033w 또는 AGEN2034w의 VH CDR 모두) 중 하나, 둘 또는 셋 모두를 포함한다. 어떤 실시양태에서, 상기 항체는 본 명세서에 기재된 VH 프레임워크를 포함한다. 어떤 실시양태에서, 상기 항체는 표 4에 제시된, 항체의 VH 프레임워크 영역(예를 들어, 표 4의 한 행에 있는 프레임워크 영역 중 하나, 둘, 셋 또는 네 개)을 포함한다.
어떤 실시양태에서, 상기 항체는 상기 VL CDR 중 하나, 둘 또는 셋 모두를 포함한다. 어떤 실시양태에서, 상기 항체는 표 3의 항체 중 하나의 CDRL1을 포함한다. 어떤 실시양태에서, 상기 항체는 표 3의 항체 중 하나의 CDRL2를 포함한다. 어떤 실시양태에서, 상기 항체는 표 3의 항체 중 하나의 CDRL3을 포함한다. 어떤 실시양태에서, 상기 항체는 표 3의 항체 중 하나의 VL CDR(예를 들어, 표 3의 한 행에있는 VL CDR, 예를 들어, AGEN2033w 또는 AGEN2034w의 모든 VL CDR) 중 하나, 둘 또는 셋 모두를 포함한다. 어떤 실시양태에서, 상기 항체는 본 명세서에 기재된 VL 프레임워크 영역을 포함한다. 어떤 실시양태에서, 상기 항체는 표 5에 기재된 항체의 VL 프레임워크 영역(FR)(예를 들어, 표 5의 한 행에 있는 프레?恙緇? 영역 중 하나, 둘, 셋 또는 네 개)을 포함한다.
어떤 실시양태에서, 본 발명은 인간 PD-1에 특이적으로 결합하고, 상보성 결정 영역 CDRH1, CDRH2 및 CDRH3을 포함하는 중쇄 가변 영역, 및 상보성 결정 영역 CDRL1, CDRL2 및 CDRL3을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는, 항체 또는 분리된 항체를 제공하는데, 이때,
(a) CDRH1는 SYGMH (서열번호 1)의 아미노산 서열을 포함하고;
(b) CDRH2는 VIWX1DGSNX2YYADSVX3G (서열번호 32)의 아미노산 서열을 포함하며, X1은 Y 또는 F; X2는 K 또는 E; 및 X3은 K 또는 M;
(c) CDRH3은 NX1DX2 (서열번호 33)의 아미노산 서열을 포함하고, X1은 G 또는 V; 및 X2는 H 또는 Y;
(d) CDRL1은 RASQSVSSNLA (서열번호 4)의 아미노산 서열을 포함하며;
(e) CDRL2는 GASTRAT (서열번호 5)의 아미노산 서열을 포함하고; 및
(f) CDRL3은 QQYNNWPRT (서열번호 6)의 아미노산 서열을 포함한다.
어떤 실시양태에서, 상기 CDRH2는 서열번호 2 및 34 내지 36으로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열을 포함한다. 어떤 실시양태에서, 상기 CDRH3은 서열번호 3, 7 및 37로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열을 포함한다.
어떤 실시양태에서, 본 발명은 인간 PD-1에 특이적으로 결합하고, 상보성 결정 영역 CDRH1, CDRH2 및 CDRH3을 포함하는 중쇄 가변 영역을 포함하는 분리된 항체를 제공하는데, 상기 CDRH1, CDRH2 및 CDRH3은 각각 서열번호 1, 2 및 3; 1, 2 및 7; 1, 2 및 37; 1, 34 및 7; 1, 35 및 7; 또는 1, 36 및 7로 제시된, CDRH1, CDRH2 및 CDRH3의 아미노산 서열을 포함한다.
어떤 실시양태에서, 본 발명은 인간 PD-1에 특이적으로 결합하고, 상보성 결정 영역 CDRH1, CDRH2 및 CDRH3을 포함하는 중쇄 가변 영역, 및 상보성 결정 영역 CDRL1, CDRL2 및 CDRL3을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는 분리된 항체를 제공하는데, 상기 CDRH1, CDRH2, CDRH3, CDRL1, CDRL2 및 CDRL3은 각각 서열번호 1, 2, 3, 4, 5 및 6; 1, 2, 7, 4, 5 및 6; 1, 2, 37, 4, 5 및 6; 1, 34, 7, 4, 5 및 6; 1, 35, 7, 4, 5 및 6; 또는 1, 36, 7, 4, 5 및 6으로 제시된, CDRH1, CDRH2, CDRH3, CDRL1, CDRL2 및 CDRL3의 아미노산 서열을 포함한다.
어떤 실시양태에서, 본 발명은 인간 PD-1에 특이적으로 결합하는 항체 또는 분리된 항체를 제공하는데, 하기 구성요소를 포함한다:
(a) CDRH1는 SYGMH (서열번호 1)의 아미노산 서열을 포함하고; 및/또는
(b) CDRH2는 VIWYDGSNKYYADSVKG (서열번호 2)의 아미노산 서열을 포함하며; 및/또는
(c) CDRH3은 NVDY (서열번호 3) 또는 NGDH (서열번호 7)의 아미노산 서열을 포함하고; 및/또는
(d) CDRL1은 RASQSVSSNLA (서열번호 4)의 아미노산 서열을 포함하며; 및/또는
(e) CDRL2는 GASTRAT (서열번호 5)의 아미노산 서열을 포함하고; 및/또는
(f) CDRL3은 QQYNNWPRT (서열번호 6)의 아미노산 서열을 포함한다.
어떤 실시양태에서, 상기 항체는 서열번호 1, 2 및 3으로 제시된, VH CDR 중 하나, 둘 또는 셋 모두를 포함한다. 어떤 실시양태에서, 상기 항체는 서열번호 1, 2 및 7로 제시된, VH CDR 중 하나, 둘 또는 셋 모두를 포함한다. 어떤 실시양태에서, 상기 항체는 서열번호 4, 5 및 6으로 제시된, VL CDR 중 하나, 둘 또는 셋 모두를 포함한다.
어떤 실시양태에서, 본 발명은 인간 PD-1에 특이적으로 결합하고, 상보성 결정 영역 CDRH1, CDRH2 및 CDRH3을 포함하는 중쇄 가변 영역을 포함하는 분리된 항체를 제공하는데, 상기 CDRH1, CDRH2 및 CDRH3은 각각 서열번호 1, 2 및 3으로 제시된, CDRH1, CDRH2 및 CDRH3의 아미노산 서열을 포함한다.
어떤 실시양태에서, 본 발명은 인간 PD-1에 특이적으로 결합하고, 상보성 결정 영역 CDRH1, CDRH2 및 CDRH3을 포함하는 중쇄 가변 영역을 포함하는 분리된 항체를 제공하는데, 상기 CDRH1, CDRH2 및 CDRH3은 각각 서열번호 1, 2 및 7로 제시된, CDRH1, CDRH2 및 CDRH3의 아미노산 서열을 포함한다.
어떤 실시양태에서, 본 발명은 인간 PD-1에 특이적으로 결합하고, 상보성 결정 영역 CDRL1, CDRL2 및 CDRL3을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는 분리된 항체를 제공하는데, 상기 CDRL1, CDRL2 및 CDRL3은 각각 서열번호 4, 5 및 6으로 제시된, CDRL1, CDRL2 및 CDRL3의 아미노산 서열을 포함한다.
어떤 실시양태에서, 상기 항체는 CDRH1, CDRH2 및 CDRH3 영역을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 CDRL1, CDRL2 및 CDRL3 영역을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는데, 상기 CDRH1, CDRH2, CDRH3, CDRL1, CDRL2 및 CDRL3 영역은 각각 서열번호 1, 2, 3, 4, 5 및 6으로 제시된, 아미노산 서열을 포함한다.
어떤 실시양태에서, 상기 항체는 CDRH1, CDRH2 및 CDRH3 영역을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 CDRL1, CDRL2 및 CDRL3 영역을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는데, 상기 CDRH1, CDRH2, CDRH3, CDRL1, CDRL2 및 CDRL3 영역은 각각 서열번호 1, 2, 7, 4, 5 및 6으로 제시된, 아미노산 서열을 포함한다.
어떤 실시양태에서, 항체의 상기 CDR은 Chothia 번호 부여 체계(Chothia numbering scheme)에 따라 결정될 수 있는데, 이는 면역 글로불린 구조 루프의 위치를 의미한다(예를 들어, Chothia C & Lesk AM, (1987), J Mol Biol 196: 901-917; Al-Lazikani B et al., (1997) J Mol Biol 273: 927-948; Chothia C et al., (1992) J Mol Biol 227: 799-817; Tramontano A et al., (1990) J Mol Biol 215(1): 175-82; and U.S. Patent No. 7,709,226를 참조하라. 이들 모두는 그 전체가 본 명세서에 참고자료로 인용되었다). 전형적으로, 상기 Kabat 번호 부여 협약을 사용할 때, 상기 Chothia CDRH1 루프는 중쇄 아미노산 26 내지 32, 33 또는 34에 존재하고, 상기 Chothia CDRH2 루프는 중쇄 아미노산 52 내지 56에 존재하며 및 상기 Chothia CDRH3 루프는 중쇄 아미노산 95 내지 102에 존재하는 반면; 상기 Chothia CDRL1 루프는 경쇄 아미노산 26 내지 34에 존재하고, 상기 Chothia CDRL2 루프는 경쇄 아미노산 50 내지 56에 존재하며 및 상기 Chothia CDRL3 루프는 경쇄 아미노산 89 내지 97에 존재한다. 상기 Kabat 번호 부여 협약을 사용하여 번호를 부여할 때, 상기 Chothia CDRH1 루프의 끝은 루프의 길이에 의존적으로 H32 및 H34 사이에서 변화된다(Kabat 번호 부여 체계가 H35A와 H35B에 삽입되었기 때문에; 35A와 35B가 존재하지 않으면, 상기 루프는 32에서 끝나고; 35A만 존재하면, 상기 루프는 33에서 끝나며; 35A와 35B가 모두 존재하면, 상기 루프는 34에서 끝난다).
어떤 실시양태에서, 본 발명은 인간 PD-1에 특이적으로 결합하고, 본 명세서의 표 6에 기재된 항체(예를 들어, AGEN2033w 또는 AGEN2034w)의 VL의 Chothia VL CDR을 포함하는 분리된 항체를 제공한다. 어떤 실시양태에서, 본 발명은 인간 PD-1에 특이적으로 결합하고, 본 명세서의 표 6에 기재된 항체(예를 들어, AGEN2033w 또는 AGEN2034w)의 Chothia VH CDR을 포함하는 분리된 항체를 제공한다. 어떤 실시양태에서, 본 발명은 인간 PD-1에 특이적으로 결합하고, 본 명세서의 표 6에 기재된 항체(예를 들어, AGEN2033w 또는 AGEN2034w)의 Chothia VH CDR 및 Chothia VL CDR을 포함하는 분리된 항체를 제공한다. 어떤 실시양태에서, 인간 PD-1에 특이적으로 결합하는 항체는 하나 이상의 CDR을 포함하는데, 상기 Chothia 및 Kabat CDR은 동일한 아미노산 서열을 갖는다. 어떤 실시양태에서, 본 발명은 인간 PD-1에 특이적으로 결합하고, Kabat CDR과 Chothia CDRs의 조합을 포함하는 분리된 항체를 제공한다.
어떤 실시양태에서, Lefranc M-P, (1999) The Immunologist 7: 132-136 및 Lefranc M-P et al., (1999) Nucleic Acids Res 27: 209-212(이들 각각은 그 전체가 본 명세서에 참고자료로 인용되었다)에 기재된 바와 같이, 항체의 CDR은 IMGT 번호 부여 시스템에 따라 결정될 수 있다. IMGT 번호 부여 체계에 의하면, CDRH1은 26 내지 35번 위치이고; CDRH2는 51 내지 57번 위치이며; CDRH3은 93 내지 102번 위치이고; CDRL1은 27 내지 32번 위치이며; CDRL2는 50 내지 52번 위치이고; 및 CDRL3은 89 내지 97번 위치이다. 특정 실시양태에서, 본 발명은, 인간 PD-1에 특이적으로 결합하고, 예를 들어, Lefranc M-P (1999) supra and Lefranc M-P et al., (1999) supra에 기재된 바와 같이, IMGT 번호 부여 시스템에 의해 결정된 바에 따라, 본 명세서의 표 6에 기재된 항체(예를 들어, AGEN2033w 또는 AGEN2034w)의 CDR을 포함하는, 항체를 제공한다.
어떤 실시양태에서, 항체의 CDR은 그 전체가 본 명세서에 참고자료로 인용된 MacCallum RM et al., (1996) J Mol Biol 262: 732-745에 따라 결정될 수 있다., 예를 들어, 그 전체가 본 명세서에 참고자료로 인용된, Martin A. "Protein Sequence and Structure Analysis of Antibody Variable Domains," in Antibody Engineering, Kontermann and Dubel, eds., Chapter 31, pp. 422-439, Springer-Verlag, Berlin (2001)가 참고된다. 특정 실시양태에서, 본 발명은 인간 PD-1에 특이적으로 결합하고, MacCallum RM et al., (1996) supra의 방법에 의해 결정된 바와 같이 본 명세서의 표 6에 기재된 항체(예를 들어, AGEN2033w 또는 AGEN2034w)의 CDR을 포함하는, 항체를 제공한다.
어떤 실시양태에서, 항체의 CDR은 그 전체가 본 명세서에 참고자료로 인용된 Oxford Molecular's AbM antibody modeling software (Oxford Molecular Group, Inc.)에 의해 사용된, AbM 과다가변(hypervariable) 영역을 의미하고, Kabat CDR과 Chothia 구조 루프 간의 절충을 나타내는 AbM 번호 부여 체계에 따라 결정될 수 있다. 특정 실시양태에서, 본 발명은 인간 PD-1에 특이적으로 결합하고, AbM 번호 부여 체계에 의해 결정된 바와 같이, 본 명세서의 표 6에 기재된 항체(예를 들어, AGEN2033w 또는 AGEN2034w)의 CDR 을 포함하는, 항체를 제공한다.
따라서, 어떤 실시양태에서, 본 발명은 인간 PD-1에 특이적으로 결합하는 분리된 항체를 제공하는데, 상기 항체는 서열번호 15로 제시된, CDRH1, CDRH2 및 CDRH3 영역의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역과, 서열번호 16으로 제시된, CDRL1, CDRL2 및 CDRL3 영역의 아미노산 서열을 포함하고, 각 CDR은 상기 Kabat의 정의, 상기 Chothia의 정의, 상기 Kabat의 정의 및 상기 Chothia의 정의의 조합, 상기 IMGT 번호 부여 시스템, 상기 AbM의 정의, 또는 CDR에 대한 절충 정의(contact definition)에 의해 정의된다.
따라서, 어떤 실시양태에서, 본 발명은 인간 PD-1에 특이적으로 결합하는 분리된 항체를 제공하는데, 상기 항체는 서열번호 17로 제시된, CDRH1, CDRH2 및 CDRH3 영역의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역과, 서열번호 16으로 제시된, CDRL1, CDRL2 및 CDRL3 영역의 아미노산 서열을 포함하고, 각 CDR은 상기 Kabat의 정의, 상기 Chothia의 정의, 상기 Kabat의 정의 및 상기 Chothia의 정의의 조합, 상기 IMGT 번호 부여 시스템, 상기 AbM의 정의, 또는 CDR에 대한 절충 정의(contact definition)에 의해 정의된다.
어떤 실시양태에서, 본 발명은 인간 PD-1에 특이적으로 결합하고, CDRH1, CDRH2 및 CDRH3 영역을 포함하는 중쇄 가변 영역과, CDRL1, CDRL2 및 CDRL3 영역을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는 분리된 항체를 제공하는데, 상기 CDRH1, CDRH2, CDRH3, CDRL1, CDRL2 및 CDRL3 영역은 각각 서열번호 8, 9, 10, 11, 12 및 13으로 제시된, 아미노산 서열을 포함한다.
어떤 실시양태에서, 본 발명은 인간 PD-1에 특이적으로 결합하고, CDRH1, CDRH2 및 CDRH3 영역을 포함하는 중쇄 가변 영역과, CDRL1, CDRL2 및 CDRL3 영역을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는 분리된 항체를 제공하는데, 상기 CDRH1, CDRH2, CDRH3, CDRL1, CDRL2 및 CDRL3 영역은 각각 서열번호 8, 9, 14, 11, 12 및 13으로 제시된, 아미노산 서열을 포함한다.
어떤 실시양태에서, 본 발명은 서열번호 49의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역을 포함하는, 인간 PD-1에 특이적으로 결합하는 분리된 항체를 제공한다.
어떤 실시양태에서, 본 발명은 인간 IGHV3-33 생식 세포(germline) 서열로부터 유래된 아미노산 서열을 가지는 중쇄 가변 영역을 포함하는, 인간 PD-1에 특이적으로 결합하는 분리된 항체를 제공한다. 프레임워크 1, 프레임워크 2, 프레임워크 3, CDRH1 및 CDRH2(예를 들어, 이들 영역의 2개, 3개, 4개 또는 5개)로부터 선택된 하나 이상의 영역은 인간 IGHV3-33 생식 세포 서열로부터 유래될 수 있다. 일 실시양태에서, 프레임워크 1, 프레임워크 2, 프레임워크 3, CDRH1 및 CDRH2는 모두 인간 IGHV3-33 생식 세포 서열로부터 유도된다. 어떤 실시양태에서, 본 발명은 서열번호 15, 17 및 26 내지 31로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열과 적어도 75%, 80%, 85%, 90%, 95% 또는 100%(예를 들어, 적어도 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98 또는 99%) 동일한 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역을 포함하는, 인간 PD-1에 특이적으로 결합하는 분리된 항체를 제공한다. 어떤 실시양태에서, 상기 항체는 서열번호 15, 17 및 26 내지 31로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열을 가지는 중쇄 가변 영역을 포함한다. 어떤 실시양태에서, 상기 항체는 서열번호 15에 제시된, 아미노산 서열을 가지는 중쇄 가변 영역을 포함한다. 어떤 실시양태에서, 상기 항체는 서열번호 17에 제시된, 아미노산 서열을 가지는 중쇄 가변 영역을 포함한다. 어떤 실시양태에서, 상기 항체는 서열번호 26에 제시된, 아미노산 서열을 가지는 중쇄 가변 영역을 포함한다. 어떤 실시양태에서, 상기 항체는 서열번호 27에 제시된, 아미노산 서열을 가지는 중쇄 가변 영역을 포함한다. 어떤 실시양태에서, 상기 항체는 서열번호 28에 제시된, 아미노산 서열을 가지는 중쇄 가변 영역을 포함한다. 어떤 실시양태에서, 상기 항체는 서열번호 29에 제시된, 아미노산 서열을 가지는 중쇄 가변 영역을 포함한다. 어떤 실시양태에서, 상기 항체는 서열번호 30에 제시된, 아미노산 서열을 가지는 중쇄 가변 영역을 포함한다. 어떤 실시양태에서, 상기 항체는 서열번호 31에 제시된, 아미노산 서열을 가지는 중쇄 가변 영역을 포함한다. 어떤 실시양태에서, 상기 항체는 서열번호 18에 제시된, 아미노산 서열을 가지는 중쇄를 포함한다. 어떤 실시양태에서, 상기 항체는 서열번호 21에 제시된, 아미노산 서열을 가지는 중쇄를 포함한다. 어떤 실시양태에서, 상기 항체는 서열번호 20에 제시된, 아미노산 서열을 가지는 중쇄를 포함한다. 어떤 실시양태에서, 상기 항체는 서열번호 22에 제시된, 아미노산 서열을 가지는 중쇄를 포함한다. 어떤 실시양태에서, 상기 항체는 서열번호 23에 제시된, 아미노산 서열을 가지는 중쇄를 포함한다. 어떤 실시양태에서, 상기 항체는 서열번호 24에 제시된, 아미노산 서열을 가지는 중쇄를 포함한다. 어떤 실시양태에서, 상기 항체는 서열번호 25에 제시된, 아미노산 서열을 가지는 중쇄를 포함한다. 어떤 실시양태에서, 상기 항체는 서열번호 52에 제시된, 아미노산 서열을 가지는 중쇄를 포함한다. 어떤 실시양태에서, 상기 항체는 서열번호 53에 제시된, 아미노산 서열을 가지는 중쇄를 포함한다. 어떤 실시양태에서, 상기 항체는 서열번호 54에 제시된, 아미노산 서열을 가지는 중쇄를 포함한다. 어떤 실시양태에서, 상기 항체는 서열번호 55에 제시된, 아미노산 서열을 가지는 중쇄를 포함한다. 어떤 실시양태에서, 상기 항체는 서열번호 56에 제시된, 아미노산 서열을 가지는 중쇄를 포함한다. 어떤 실시양태에서, 상기 항체는 서열번호 57에 제시된, 아미노산 서열을 가지는 중쇄를 포함한다. 어떤 실시양태에서, 상기 항체는 서열번호 58에 제시된, 아미노산 서열을 가지는 중쇄를 포함한다.
어떤 실시양태에서, 본 발명은 인간 IGKV3-15 생식 세포 서열로부터 유래된 아미노산 서열을 가지는 경쇄 가변 영역을 포함하는, 인간 PD-1에 특이적으로 결합하는 분리된 항체를 제공한다. 프레임워크 1, 프레임워크 2, 프레임워크 3, CDRL1 및 CDRL2(예를 들어, 이들 영역의 2개, 3개, 4개 또는 5개)로부터 선택된 하나 이상의 영역은 인간 IGHV3-15 생식 세포 서열로부터 유래될 수 있다. 일 실시양태에서, 프레임워크 1, 프레임워크 2, 프레임워크 3, CDRL1 및 CDRL2는 모두 인간 IGHV3-15 생식 세포 서열로부터 유래된다. 어떤 실시양태에서, 본 발명은 서열번호 16으로 제시된 아미노산 서열과 적어도 75%, 80%, 85%, 90%, 95% 또는 100%(예를 들어, 적어도 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98 또는 99%) 동일한 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는, 인간 PD-1에 특이적으로 결합하는 분리된 항체를 제공한다. 어떤 실시양태에서, 상기 항체는 서열번호 16으로 제시된, 아미노산 서열을 가지는 경쇄 가변 영역을 포함한다. 어떤 실시양태에서, 상기 항체는 서열번호 19에 제시된, 아미노산 서열을 가지는 경쇄를 포함한다.
어떤 실시양태에서, 본 발명은 서열번호 15 또는 17로 제시된 아미노산 서열과 적어도 75%, 80%, 85%, 90%, 95% 또는 100%(예를 들어, 적어도 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98 또는 99%) 동일한 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열번호 16으로 제시된, 아미노산 서열과 적어도 75%, 80%, 85%, 90%, 95% 또는 100%(예를 들어, 적어도 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98 또는 99%) 동일한 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는, 인간 PD-1에 특이적으로 결합하는 분리된 항체를 제공한다. 어떤 실시양태에서, 상기 항체는 서열번호 15, 17 및 26 내지 31로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열을 가지는 중쇄 가변 영역, 및 서열번호 16으로 제시된, 아미노산 서열을 가지는 경쇄 가변 영역을 포함한다.
어떤 실시양태에서, 상기 항체는 각각 서열번호 15 및 16; 17 및 16; 26 및 16; 27 및 16; 28 및 16; 29 및 16; 30 및 16; 또는 31 및 16으로 제시된, 중쇄 가변 영역, 및 경쇄 가변 영역 아미노산 서열을 포함한다. 어떤 실시양태에서, 상기 항체는 서열번호 15로 제시된 아미노산 서열을 가지는 중쇄 가변 영역, 및 서열번호 16으로 제시된 아미노산 서열을 가지는 경쇄 가변 영역을 포함한다. 어떤 실시양태에서, 상기 항체는 서열번호 17로 제시된 아미노산 서열을 가지는 중쇄 가변 영역, 및 서열번호 16으로 제시된 아미노산 서열을 가지는 경쇄 가변 영역을 포함한다. 어떤 실시양태에서, 상기 항체는 서열번호 26으로 제시된 아미노산 서열을 가지는 중쇄 가변 영역, 및 서열번호 16으로 제시된 아미노산 서열을 가지는 경쇄 가변 영역을 포함한다. 어떤 실시양태에서, 상기 항체는 서열번호 27로 제시된 아미노산 서열을 가지는 중쇄 가변 영역, 및 서열번호 16으로 제시된 아미노산 서열을 가지는 경쇄 가변 영역을 포함한다. 어떤 실시양태에서, 상기 항체는 서열번호 28로 제시된 아미노산 서열을 가지는 중쇄 가변 영역, 및 서열번호 16으로 제시된 아미노산 서열을 가지는 경쇄 가변 영역을 포함한다. 어떤 실시양태에서, 상기 항체는 서열번호 29로 제시된 아미노산 서열을 가지는 중쇄 가변 영역, 및 서열번호 16으로 제시된 아미노산 서열을 가지는 경쇄 가변 영역을 포함한다. 어떤 실시양태에서, 상기 항체는 서열번호 30으로 제시된 아미노산 서열을 가지는 중쇄 가변 영역, 및 서열번호 16으로 제시된 아미노산 서열을 가지는 경쇄 가변 영역을 포함한다. 어떤 실시양태에서, 상기 항체는 서열번호 31로 제시된 아미노산 서열을 가지는 중쇄 가변 영역, 및 서열번호 16으로 제시된 아미노산 서열을 가지는 경쇄 가변 영역을 포함한다. 어떤 실시양태에서, 상기 항체는 서열번호 18의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄; 및 서열번호 19의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함한다. 어떤 실시양태에서, 상기 항체는 서열번호 21의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄; 및 서열번호 19의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함한다. 어떤 실시양태에서, 상기 항체는 서열번호 20의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄; 및 서열번호 19의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함한다. 어떤 실시양태에서, 상기 항체는 서열번호 22의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄; 및 서열번호 19의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함한다. 어떤 실시양태에서, 상기 항체는 서열번호 23의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄; 및 서열번호 19의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함한다. 어떤 실시양태에서, 상기 항체는 서열번호 24의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄; 및 서열번호 19의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함한다. 어떤 실시양태에서, 상기 항체는 서열번호 25의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄; 및 서열번호 19의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함한다. 어떤 실시양태에서, 상기 항체는 서열번호 52의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄; 및 서열번호 19의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함한다. 어떤 실시양태에서, 상기 항체는 서열번호 53의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄; 및 서열번호 19의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함한다. 어떤 실시양태에서, 상기 항체는 서열번호 54의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄; 및 서열번호 19의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함한다. 어떤 실시양태에서, 상기 항체는 서열번호 55의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄; 및 서열번호 19의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함한다. 어떤 실시양태에서, 상기 항체는 서열번호 56의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄; 및 서열번호 19의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함한다. 어떤 실시양태에서, 상기 항체는 서열번호 57의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄; 및 서열번호 19의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함한다. 어떤 실시양태에서, 상기 항체는 서열번호 58의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄; 및 서열번호 19의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함한다.
어떤 실시양태에서, 본 발명은 인간 PD-1에 대한 결합에 대해, 각각 서열번호 15 및 16으로 제시된, 중쇄 및 경쇄 가변 영역 아미노산 서열을 포함하는 항체와 교차 경쟁하는 분리된 항체를 제공한다
어떤 실시양태에서, 본 발명은 각각 서열번호 15 및 16으로 제시된, 중쇄 및 경쇄 가변 영역 아미노산 서열을 포함하는 항체처럼, 인간 PD-1의 동일한 에피토프에 결합하는 분리된 항체를 제공한다.
어떤 실시양태에서, 본 발명은 인간 PD-1에 대한 결합에 대해, 각각 서열번호 17 및 16으로 제시된, 중쇄 및 경쇄 가변 영역 아미노산 서열을 포함하는 항체와 교차 경쟁하는 분리된 항체를 제공한다
어떤 실시양태에서, 본 발명은 각각 서열번호 17 및 16으로 제시된, 중쇄 및 경쇄 가변 영역 아미노산 서열을 포함하는 항체처럼, 인간 PD-1의 동일한 에피토프에 결합하는 분리된 항체를 제공한다.
어떤 실시양태에서, 본 발명은 인간 PD-1에 대한 결합에 대해, 각각 서열번호 26 및 16으로 제시된, 중쇄 및 경쇄 가변 영역 아미노산 서열을 포함하는 항체와 교차 경쟁하는 분리된 항체를 제공한다.
어떤 실시양태에서, 본 발명은 각각 서열번호 26 및 16으로 제시된, 중쇄 및 경쇄 가변 영역 아미노산 서열을 포함하는 항체처럼, 인간 PD-1의 동일한 에피토프에 결합하는 분리된 항체를 제공한다.
어떤 실시양태에서, 본 발명은 인간 PD-1에 대한 결합에 대해, 각각 서열번호 27 및 16으로 제시된, 중쇄 및 경쇄 가변 영역 아미노산 서열을 포함하는 항체와 교차 경쟁하는 분리된 항체를 제공한다.
어떤 실시양태에서, 본 발명은 각각 서열번호 27 및 16으로 제시된, 중쇄 및 경쇄 가변 영역 아미노산 서열을 포함하는 항체처럼, 인간 PD-1의 동일한 에피토프에 결합하는 분리된 항체를 제공한다.
어떤 실시양태에서, 본 발명은 인간 PD-1에 대한 결합에 대해, 각각 서열번호 28 및 16으로 제시된, 중쇄 및 경쇄 가변 영역 아미노산 서열을 포함하는 항체와 교차 경쟁하는 분리된 항체를 제공한다.
어떤 실시양태에서, 본 발명은 각각 서열번호 28 및 16으로 제시된, 중쇄 및 경쇄 가변 영역 아미노산 서열을 포함하는 항체처럼, 인간 PD-1의 동일한 에피토프에 결합하는 분리된 항체를 제공한다.
어떤 실시양태에서, 본 발명은 인간 PD-1에 대한 결합에 대해, 각각 서열번호 29 및 16으로 제시된, 중쇄 및 경쇄 가변 영역 아미노산 서열을 포함하는 항체와 교차 경쟁하는 분리된 항체를 제공한다.
어떤 실시양태에서, 본 발명은 각각 서열번호 29 및 16으로 제시된, 중쇄 및 경쇄 가변 영역 아미노산 서열을 포함하는 항체처럼, 인간 PD-1의 동일한 에피토프에 결합하는 분리된 항체를 제공한다.
어떤 실시양태에서, 본 발명은 인간 PD-1에 대한 결합에 대해, 각각 서열번호 30 및 16으로 제시된, 중쇄 및 경쇄 가변 영역 아미노산 서열을 포함하는 항체와 교차 경쟁하는 분리된 항체를 제공한다.
어떤 실시양태에서, 본 발명은 각각 서열번호 30 및 16으로 제시된, 중쇄 및 경쇄 가변 영역 아미노산 서열을 포함하는 항체처럼, 인간 PD-1의 동일한 에피토프에 결합하는 분리된 항체를 제공한다.
어떤 실시양태에서, 본 발명은 인간 PD-1에 대한 결합에 대해, 각각 서열번호 31 및 16으로 제시된, 중쇄 및 경쇄 가변 영역 아미노산 서열을 포함하는 항체와 교차 경쟁하는 분리된 항체를 제공한다.
어떤 실시양태에서, 본 발명은 각각 서열번호 31 및 16으로 제시된, 중쇄 및 경쇄 가변 영역 아미노산 서열을 포함하는 항체처럼, 인간 PD-1의 동일한 에피토프에 결합하는 분리된 항체를 제공한다.
임의의 Ig 불변 영역은 본 명세서에 기재된 항체에서 사용될 수 있다. 어떤 실시양태에서, 상기 Ig 영역은 인간 IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA1 및 IgA2 중쇄 불변 영역이다. 어떤 실시양태에서, 상기 Ig 영역은 인간 IgG1이다. 어떤 실시양태에서, 상기 Ig 영역은 인간 IgG4이다. 어떤 실시양태에서, 상기 Ig(예를 들어, IgG1)는 생체 내에서 성숙한 야생형 IgG1 항체의 N297 위치(EU 번호 부여 시스템에 따른)에 정상적으로 존재하는 N-연결된 글리칸 모이어티가 결여된다. N297 글리칸의 결여는 작용기 기능의 실질적인 손실을 가져온다. N297 글리칸의 제거는 당업계에 공지된 임의의 방법을 사용하여 달성될 수 있다., 예를 들어, 어떤 실시양태에서, 상기 N297 글리칸의 제거는 글리코실화(glycosylation) 부위를 제거하기 위한, N297 잔기의 돌연변이에 의해 달성된다. 따라서, 어떤 실시양태에서, 본 명세서에 기재된 항체는 EU 번호 부여 시스템에 따른 N297A 돌연변이를 포함하는 중쇄 불변 영역(예를 들어, 인간 IgG1 중쇄 불변 영역)을 포함한다. 어떤 실시양태에서, 본 명세서에 기재된 항체는 EU 번호 부여 시스템에 따른 N297Q 돌연변이를 포함하는 중쇄 불변 영역(예를 들어, IgG1 중쇄 불변 영역)을 포함한다. 어떤 실시양태에서, 본 명세서에 기재된 항체는 EU 번호 부여 시스템에 따른 D265A 돌연변이를 포함하는 IgG1 중쇄 불변 영역(예를 들어, 인간 IgG1 중쇄 불변 영역)을 포함한다. 어떤 실시양태에서, 본 명세서에 기재된 항체는 EU 번호 부여 시스템에 따른 S228P 돌연변이를 포함하는 IgG4 중쇄 불변 영역(예를 들어, 인간 IgG4 중쇄 불변 영역)을 포함한다.
어떤 실시양태에서, 본 발명은 서열번호 59, 60, 61, 62, 63 또는 64의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 불변 영역을 포함하는, 인간 PD-1에 특이적으로 결합하는 분리된 항체를 제공한다. 어떤 실시양태에서, 본 발명은 서열번호 59의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 불변 영역을 포함하는, 인간 PD-1에 특이적으로 결합하는 분리된 항체를 제공한다. 어떤 실시양태에서, 본 발명은 서열번호 60의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 불변 영역을 포함하는, 인간 PD-1에 특이적으로 결합하는 분리된 항체를 제공한다. 어떤 실시양태에서, 본 발명은 서열번호 61의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 불변 영역을 포함하는, 인간 PD-1에 특이적으로 결합하는 분리된 항체를 제공한다. 어떤 실시양태에서, 본 발명은 서열번호 62의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 불변 영역을 포함하는, 인간 PD-1에 특이적으로 결합하는 분리된 항체를 제공한다. 어떤 실시양태에서, 본 발명은 서열번호 63의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 불변 영역을 포함하는, 인간 PD-1에 특이적으로 결합하는 분리된 항체를 제공한다. 어떤 실시양태에서, 본 발명은 서열번호 64의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 불변 영역을 포함하는, 인간 PD-1에 특이적으로 결합하는 분리된 항체를 제공한다. 어떤 실시양태에서, 본 발명은 서열번호 65의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 불변 영역을 포함하는, 인간 PD-1에 특이적으로 결합하는 분리된 항체를 제공한다.
어떤 실시양태에서, 본 명세서에 기재된 항체의 상기 IgG 영역은, 예를 들어, 야생형 Fc 영역, 예를 들어, IgG1 Fc를 갖는 항체와 비교하여, CD32B(FcγRIIB 또는 FCGR2B라고 공지)에 대한 증가된 친화도를 갖는다. 어떤 실시양태에서, 본 명세서에 기재된 항체는 CD32A(FcγRIIA) 및 CD16(FcγRIIIA)의 둘 이상으로 CD32B(FcγRIIB)에 대한 선택적으로 증가된 친화도를 갖는다. CD32B에 대한 증가된 친화도를 나타내는 서열의 변화는, 예를 들어, 이들 각각의 전체가 본 명세서에 참고자료로 인용된 Mimoto et al., Protein Engineering, Design & Selection 10: 589-598 (2013), Chu et al., Molecular Immunology 45: 3926-3933 (2008), and Strohl, Current Opinion in Biology 20: 685-691 (2009)와 같이 당업계에 공지되어 있다. 어떤 실시양태에서, 상기 항체는, 예를 들어, IgG1 불변 영역, 또는 EU 번호 부여 시스템에 따라 번호가 부여된, G236D, P238D, S239D, S267E, L328F 및 L328E, 및 이들의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택되는 돌연변이를 포함하는 그의 단편과 같은, 중쇄 불변 영역을 포함한다. 어떤 실시양태에서, 상기 항체는, 예를 들어, IgG1 불변 영역, 또는 EU 번호 부여 시스템에 따라 번호가 부여된, S267E 및 L328F 치환을 포함하는 그의 단편과 같은, 중쇄 불변 영역을 포함한다. 어떤 실시양태에서, 상기 항체는, 예를 들어, IgG1 불변 영역, 또는 EU 번호 부여 시스템에 따라 번호가 부여된, P238D 및 L328E 치환을 포함하는 그의 단편과 같은, 중쇄 불변 영역을 포함한다. 어떤 실시양태에서, 상기 항체는, 예를 들어, IgG1 불변 영역, 또는 EU 번호 부여 시스템에 따라 번호가 부여된, P238D 치환 및 E233D, G237D, H268D, P271G, A330R 및 이들의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택되는 치환을 포함하는 그의 단편과 같은, 중쇄 불변 영역을 포함한다. 어떤 실시양태에서, 상기 항체는, 예를 들어, IgG1 불변 영역, 또는 EU 번호 부여 시스템에 따라 번호가 부여된, P238D, E233D, G237D, H268D, P271G 및 A330R 치환을 포함하는 그의 단편과 같은, 중쇄 불변 영역을 포함한다. 어떤 실시양태에서, 상기 항체는, 예를 들어, IgG1 불변 영역, 또는 EU 번호 부여 시스템에 따라 번호가 부여된, 236D 및 S267E를 포함하는 그의 단편과 같은, 중쇄 불변 영역을 포함한다. 어떤 실시양태에서, 상기 항체는, 예를 들어, IgG1 불변 영역, 또는 EU 번호 부여 시스템에 따라 번호가 부여된, S239D 및 S267E를 포함하는 그의 단편과 같은, 중쇄 불변 영역을 포함한다. 어떤 실시양태에서, 상기 항체는, 예를 들어, IgG1 불변 영역, 또는 EU 번호 부여 시스템에 따라 번호가 부여된, V262E, S267E 및 L328F를 포함하는 그의 단편과 같은, 중쇄 불변 영역을 포함한다. 어떤 실시양태에서, 상기 항체는, 예를 들어, IgG1 불변 영역, 또는 EU 번호 부여 시스템에 따라 번호가 부여된, V264E, S267E 및 L328F를 포함하는 그의 단편과 같은, 중쇄 불변 영역을 포함한다.
어떤 실시양태에서, 하나, 둘 또는 그 이상의 돌연변이(예를 들어, 아미노산 치환)가 본 명세서에 기재된 EU 번호 부여 시스템에 따라 번호가 부여된, 항체의 Fc 영역(예를 들어, CH2 도메인(인간 IgG1의 231 내지 340 잔기) 및/또는 CH3 도메인(인간 IgG1의 341 내지 447 잔기)) 및/또는 힌지 영역에 삽입되어, 혈청 반감기(serum half-life), 보체 고정(complement fixation), Fc 수용체 결합(Fc receptor binding) 및/또는 항원-의존성 세포독성(antigen-dependent cellular cytotoxicity)과 같은 항체의 하나 이상의 특성을 변화시킨다.
어떤 실시양태에서, 하나, 둘 또는 그 이상의 돌연변이(예를 들어, 아미노산 치환)가, 그 전체가 본 명세서에 참고자료로 인용된 미국등록특허 5,677,425애 기재된 바와 같이, 힌지 영역의 시스테인 잔기의 갯수가 변화되는(예를 들어, 증가되거나 또는 감소되는) 것처럼, Fc 영역(CH1 도메인)의 힌지 영역으로 삽입된다. CH1 도메인의 힌지 영역 내의 시스테인 잔기의 수는, 예를 들어, 경쇄 및 중쇄의 조립을 용이하게 하거나 또는 항체의 안정성을 변화(예를 들어, 증가 또는 감소)시키기 위하여, 변화될 수 있다.
특정 실시양태에서, 하나, 둘 또는 그 이상의 아미노산 돌연변이(예를 들어, 치환, 삽입 또는 결실)가 IgG 불변 도메인, 또는 그의 FcRn-결합 단편(바람직하게는 Fc 또는 힌지-Fc 도메인 단편)에 도입되어, 생체 내에서 항체의 반감기를 변화(예를 들어, 감소 또는 증가)시킨다. 예를 들어, 생체 내에서 항체의 반감기를 변화(예를 들어, 감소 또는 증가)시킬 돌연변이의 예로, 국제공개 WO 02/060919; WO 98/23289; 및 WO 97/34631; 미국등록특허 5,869,046, 6,121,022, 6,277,375 및 6,165,745를 참조하는데, 이들 모두는 그 전체가 본 명세서에 참고자료로 인용되었다. 일부 실시양태에서, 하나, 둘 또는 그 이상의 아미노산 돌연변이(예를 들어, 치환, 삽입 또는 결실)가 IgG 불변 도메인, 또는 그의 FcRn-결합 단편(바람직하게는 Fc 또는 힌지-Fc 도메인 단편)에 도입되어, 생체 내에서 항체의 반감기를 감소시킨다. 다른 실시양태에서, 하나, 둘 또는 그 이상의 아미노산 돌연변이(예를 들어, 치환, 삽입 또는 결실)가 IgG 불변 도메인, 또는 그의 FcRn-결합 단편(바람직하게는 Fc 또는 힌지-Fc 도메인 단편)에 도입되어, 생체 내에서 항체의 반감기를 증가시킨다. 특정 실시양태에서, 상기 항체는 EU 번호 부여 시스템에 따라 번호가 부여된, 제2 불변(CH2) 도메인(인간 IgG1의 231 내지 340 잔기) 및/또는 제3 불변(CH3) 도메인(인간 IgG1의 341 내지 447 잔기)에 하나 또는 그 이상의 아미노산 돌연변이(예를 들어, 치환)를 가질 수 있다. 특정 실시양태에서, 본 명세서에 기재된 항체의 IgG1의 불변 영역은 EU 번호 부여 시스템에 따라 번호가 부여된, 252번 위치에서 메티오닌(M)의 타이로신(Y)으로의 치환, 254번 위치에서 세린(S)의 트레오닌(T)으로의 치환, 및 256번 위치에서 트레오닌(T)의 글루탐산(E)으로의 치환을 포함한다. 그 전체가 본 명세서에 참고자료로 인용된, 미국등록특허 7,658,921가 참조된다. "YTE 돌연변이체"라고 하는, 이러한 유형의 돌연변이 IgG는 동일한 항체의 야생형과 비교하여 4배 증가된 반감기를 보여주는 것으로 확인되었다(Dall'Acqua WF et al., (2006) J Biol Chem 281: 23514-24, 이는 그 전체가 본 명세서에 참고자료로 인용되었다). 어떤 실시양태에서, 항체는 EU 번호 부여 시스템에 따라 번호가 부여된, 251 내지 257번, 285 내지 290번, 308 내지 314번, 385 내지 389번, 및 428 내지 436번 위치에서 아미노산 잔기의 하나, 둘, 셋 또는 그 이상의 아미노산 치환을 포함하는 IgG 불변 도메인을 포함한다.
일부 실시양태에서, 하나, 둘 또는 그 이상의 돌연변이(예를 들어, 아미노산 치환)는 작용기 세포의 표면상의 Fc 수용체(예를 들어, 활성화된 Fc 수용체)에 대한 항체의 친화도를 증가 또는 감소시키기 위하여, EU 번호 부여 시스템에 따라 번호가 부여된, 명세서에 기재된 Fc 영역(예를 들어, CH2 도메인(인간 IgG1의 231 내지 340 잔기) 및/또는 CH3 도메인(인간 IgG1의 341 내지 447 잔기)) 및/또는 힌지 영역에 도입된다. Fc 수용체에 대한 항체의 친화도를 감소 또는 증가시키는 항체의 Fc 영역에서의 돌연변이 및 Fc 수용체 또는 그의 단편에 이러한 돌연변이를 도입하는 기술은 당업계에 공지되어 있다. Fc 수용체에 대한 항체의 친화도를 변화시키도록 제조될 수 있는 항체의 Fc 수용체에서의 돌연변이의 예시는, 예를 들어, Smith P et al., (2012) PNAS 109: 6181-6186, 미국등록특허 6,737,056, 및 국제공개특허 WO 02/060919; WO 98/23289; 및 WO 97/34631에 개시되어 있는데, 이들 모두는 그 전체가 본 명세서에 참고자료로 인용되었다.
추가 실시양태에서, 하나, 둘 또는 그 이상의 아미노산 치환이 항체의 작용기 기능을 변화시키기 위해 IgG 불변 도메인 Fc 영역으로 도입된다. 예를 들어, EU 번호 부여 시스템에 따라 번호가 부여된, 아미노산 잔기 234, 235, 236, 237, 297, 318, 320 및 322로부터 선택된 하나 이상의 아미노산은 작용기 리간드에 대한 변형된 친화력을 가지나, 고유(parent) 항체의 항원-결합능은 유지하는, 상이한 아미노산 잔기로 대체될 수 있다. 친화도가 변화될 수 있는 작용기 리간드는, 예를 들어, Fc 수용체 또는 보체의 C1 구성요소가 될 수 있다. 이러한 접근법은 미국등록특허 5,624,821 및 5,648,260에 보다 상세히 기재되어 있으며, 이들 각각은 그 전체가 본 명세서에 참고자료로 인용되었다. 일부 실시양태에서, 불변 영역 도메인의 결실 또는 불활성화(점 돌연변이 또는 다른 수단을 통한)는 순환되는 항체의 Fc 수용체 결합을 감소시켜서, 종양 부분(tumor localization)을 증가시킬 수 있다. 예를 들어, 불변 도메인을 결실 또는 불활성화시켜서, 종양 부분을 증가시키는 돌연변이에 대한 설명을 위하여, 미국등록특허 5,585,097 및 8,591,886를 참조하는데, 이들 각각은 그 전체가 본 명세서에 참고자료로 인용되었다. 어떤 실시양태에서, 하나 이상의 아미노산 치환이 본 명세서에 기재된 항체의 Fc 영역에 도입되어, Fc 수용체의 결합을 감소시킬 수 있는 Fc 영역상의 글리코실화 될 수 있는 부분을 제거할 수 있다(참조, 예를 들어, Shields RL et al., (2001) J Biol Chem 276: 6591-604, 이는 그 전체가 본 명세서에 참고자료로 인용되었다). 다양한 실시양태에서, 본 명세서에 기재된 항체의 불변 영역에서 다음 돌연변이 중 하나 이상이 제작될 수 있다: EU 번호 부여 시스템에 따라 번호가 부여된, N297A 치환; N297Q 치환; L235A 치환 및 L237A 치환; L234A 치환 및 L235A 치환; E233P 치환; L234V 치환; L235A 치환; C236 결실; P238A 치환; D265A 치환; A327Q 치환; 또는 P329A 치환. 어떤 실시양태에서, EU 번호 부여 시스템에 따라 번호가 부여된, D265A, P329A 및 이들의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택되는 돌연변이는 본 명세서에 기재된 항체의 불변 영역에서 제조될 수 있다.
특정 실시양태에서, 본 명세서에 기재된 항체는 EU 번호 부여 시스템에 따라 번호가 부여된, N297Q 또는 N297A 아미노산 치환을 갖는 IgG1의 불변 도메인을 포함한다. 일 실시양태에서, 본 명세서에 기재된 항체는 EU 번호 부여 시스템에 따라 번호가 부여된, D265A, P329A 및 이의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택되는 돌연변이를 갖는 IgG1의 불변 도메인을 포함한다. 다른 실시양태에서, 본 명세서에 기재된 항체는 EU 번호 부여 시스템에 따라 번호가 부여된, L234A, L235A 및 이들의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택되는 돌연변이를 갖는 IgG1의 불변 도메인을 포함한다. 어떤 실시양태에서, EU 번호 부여 시스템에 따라 번호가 부여된, 인간 IgG1 중쇄의 L234, L235 및 D265 위치에 상응하는 위치의 본 명세서에 기재된 항체의 불변 영역내의 아미노산 잔기는 각각 L, L 및 D가 아니다. 이러한 접근법은 그 전체가 본 명세서에 참고자료로 인용된 국제공개특허 WO 14/108483에 상세히 기재되어 있다. 특정 실시양태에서, EU 번호 부여 시스템에 따라 번호가 부여된, 인간 IgG1 중쇄의 L234, L235 및 D265 위치에 상응하는 아미노산은 각각 F, E 및 A; 또는 A, A 및 A이다.
어떤 실시양태에서, EU 번호 부여 시스템에 따라 번호가 부여된, 본 명세서에 기재된 항체의 불변 영역의 아미노산 잔기 329, 331 및 322로부터 선택된 하나 이상의 아미노산은, 상기 항체가 변화된 C1q 결합을 갖거나 및/또는 CDC(complement dependent cytotoxicity)을 감소 시키거나 또는 폐지시키도록, 다른 아미노산 잔기로 대체될 수 있다. 이러한 접근법은 그 전체가 본 명세서에 참고자료로 인용된, 미국등록특허 6,194,551(Idusogie et al)에 더 상세하게 기재되어 있다. 일부 실시양태에서, EU 번호 부여 시스템에 따라 번호가 부여된, 본 명세서에 기재된 항체의 CH2 도메인의 N-말단 영역의 아미노산 231 내지 238번 내의 하나 이상의 아미노산 잔기는 변화되어, 보체를 고정하는 항체의 능력을 변화 시킨다. 이러한 접근법은 그 전체가 본 명세서에 참고자료로 인용된, 국제공개특허 WO 94/29351에 추가로 기재되어 있다. 어떤 실시양태에서, 본 명세서에 기재된 항체의 Fc 영역은 ADCC(antibody dependent cellular cytotoxicity)를 매개하는 항체의 능력, 및/또는, 예를 들어, EU 번호 부여 시스템에 따라 번호가 부여된, 하기의 위치(238, 239, 248, 249, 252, 254, 255, 256, 258, 265, 267, 268, 269, 270, 272, 276, 278, 280, 283, 285, 286, 289, 290, 292, 293, 294, 295, 296, 298, 301, 303, 305, 307, 309, 312, 315, 320, 322, 324, 326, 327, 328, 329, 330, 331, 333, 334, 335, 337, 338, 340, 360, 373, 376, 378, 382, 388, 389, 398, 414, 416, 419, 430, 434, 435, 437, 438 또는 439)에서 하나 이상의 아미노산 돌연변이(예를 들어, 아미노산 치환을 도입하는 것과 같은)에 의한 Fcγ 수용체에 대한 항체의 친화도를 증가시키는 항체의 능력을 증가시키도록 변화된다. 이러한 접근법은 그 전체가 본 명세서에 참고자료로 인용된 국제공개특허 WO 00/42072에 추가로 기재되어 있다.
어떤 실시양태에서, 본 명세서에 기재된 항체는 IgG4 항체의 불변 영역을 포함하고, EU 번호 부여 시스템에 따라 번호가 부여된, 중쇄의 228번 아미노산 잔기인 세린이 프롤린으로 치환된다. 어떤 실시양태에서, 본 발명은 서열번호 63의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 불변 영역을 포함하는 인간 PD-1에 특이적으로 결합하는 분리된 항체를 제공한다. 어떤 실시양태에서, 본 발명은 서열번호 64의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 불변 영역을 포함하는 인간 PD-1에 특이적으로 결합하는 분리된 항체를 제공한다.
어떤 실시양태에서, 본 명세서에 기재된 임의의 불변 영역 돌연변이 또는 변형은 2개의 중쇄 불변 영역을 갖는 본 명세서에 기재된 항체의 중쇄 불변 영역 중 하나 또는 모두에 도입될 수 있다.
어떤 실시양태에서, 본 발명은 인간 PD-1에 특이적으로 결합하고 길항제로서 작용하는 분리된 항체를 제공한다.
어떤 실시양태에서, 본 발명은 인간 PD-1에 특이적으로 결합하고, 임의의 항체 부재 하 또는 비-관련 항체(예를 들어, 인간 PD-1에 특이적으로 결합하지 않는 항체) 하의 PD-1 활성에 비하여, 본 명세서에 기재되거나 및/또는 당업자에게 공지된 방법에 의해 평가된 바와 같이, 적어도 5%, 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98% 또는 99%까지 PD-1 활성을 감소시키는 분리된 항체를 제공한다. 어떤 실시양태에서, 본 발명은 인간 PD-1에 특이적으로 결합하고, 임의의 항체 부재 하 또는 비-관련 항체(예를 들어, 인간 PD-1에 특이적으로 결합하지 않는 항체) 하의 PD-1 활성에 비하여, 본 명세서에 기재되거나 및/또는 당업자에게 공지된 방법에 의해 평가된 바와 같이, 적어도 약 1.2 배, 1.3 배, 1.4 배, 1.5 배, 2 배, 2.5 배, 3 배, 3.5 배, 4 배, 4.5 배, 5 배, 6 배, 7 배, 8 배, 9 배, 10 배, 15 배, 20 배, 30 배, 40 배, 50 배, 60 배, 70 배, 80 배, 90 배, 또는 100 배 까지 PD-1 활성을 감소시키는 분리된 항체를 제공한다. PD-1의 비-제한적인 예시는 PD-1 신호 전달, PD-1 리간드(예를 들어, PD-L1 또는 PD-L2)에 대한 PD-1 결합, 사이토카인(예를 들어, IL-2 또는 IFNγ) 생성 억제, 및 T 세포 증식의 억제를 포함할 수 있다. 어떤 실시양태에서, 본 발명은 인간 PD-1에 특이적으로 결합하고, PD-1 활성을 불활성화시키거나, 감소시키거나 또는 억제하는 분리된 항체를 제공한다. 특정 실시양태에서, 하기 실시예에 기재된 바와 같이 PD-1 활성의 감소가 평가된다.
특정 실시양태에서, 본 발명은 인간 PD-1에 특이적으로 결합하고, 임의의 항체 부재 하 또는 비-관련 항체(예를 들어, 인간 PD-1에 특이적으로 결합하지 않는 항체) 하의 그의 리간드(예를 들어, PD-L1 또는 PD-L2)에 대한 PD-1의 결합에 비하여, 본 명세서에 기재되거나(하기 실시예 참조) 및/또는 당업자에게 공지된 방법에 의해 평가된 바와 같이, 적어도 약 5%, 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98% 또는 99%까지 그의 리간드(예를 들어, PD-L1 또는 PD-L2)에 대한 PD-1의 결합을 감소시키는 분리된 항체를 제공한다. 특정 실시양태에서, 본 발명은 인간 PD-1에 특이적으로 결합하고, 임의의 항체 부재 하 또는 비-관련 항체(예를 들어, 인간 PD-1에 특이적으로 결합하지 않는 항체) 하의 그의 리간드(예를 들어, PD-L1 또는 PD-L2)에 대한 PD-1의 결합에 비하여, 본 명세서에 기재되거나(하기 실시예 참조) 및/또는 당업자에게 공지된 방법에 의해 평가된 바와 같이, 적어도 약 1.2 배, 1.3 배, 1.4 배, 1.5 배, 2 배, 2.5 배, 3 배, 3.5 배, 4 배, 4.5 배, 5 배, 6 배, 7 배, 8 배, 9 배, 10 배, 15 배, 20 배, 30 배, 40 배, 50 배, 60 배, 70 배, 80 배, 90 배, 또는 100 배 까지 그의 리간드(예를 들어, PD-L1 또는 PD-L2)에 대한 PD-1의 결합을 감소시키는 분리된 항체를 제공한다.
특정 실시양태에서, 본 발명은 인간 PD-1에 특이적으로 결합하고, 임의의 항체 부재 하 또는 비-관련 항체(예를 들어, 인간 PD-1에 특이적으로 결합하지 않는 항체) 하의 사이토카인 생산에 비하여, 본 명세서에 기재되거나(하기 실시예 참조) 및/또는 당업자에게 공지된 방법에 의해 평가된 바와 같이, 적어도 약 5%, 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98% 또는 99%까지 사이토카인(예를 들어, IL-2 또는 IFNγ) 생산을 증가시키는 분리된 항체를 제공한다. 특정 실시양태에서, 본 발명은 인간 PD-1에 특이적으로 결합하고, 임의의 항체 부재 하 또는 비-관련 항체(예를 들어, 인간 PD-1에 특이적으로 결합하지 않는 항체) 하의 사이토카인 생산에 비하여, 본 명세서에 기재되거나(하기 실시예 참조) 및/또는 당업자에게 공지된 방법에 의해 평가된 바와 같이, 적어도 약 1.2 배, 1.3 배, 1.4 배, 1.5 배, 2 배, 2.5 배, 3 배, 3.5 배, 4 배, 4.5 배, 5 배, 6 배, 7 배, 8 배, 9 배, 10 배, 15 배, 20 배, 30 배, 40 배, 50 배, 60 배, 70 배, 80 배, 90 배, 또는 100 배 까지 사이토카인(예를 들어, IL-2 또는 IFNγ) 생산을 증가시키는 분리된 항체를 제공한다.
특정 실시양태에서, 본 발명은 인간 PD-1에 특이적으로 결합하고, 임의의 항체 부재 하 또는 비-관련 항체(예를 들어, 인간 PD-1에 특이적으로 결합하지 않는 항체) 하의 IL-2 생산에 비하여, 본 명세서에 기재되거나(하기 실시예 참조) 및/또는 당업자에게 공지된 방법에 의해 평가된 바와 같이, 단독으로 또는 항-CTLA-4 항체(예를 들어, 이필리무맵(ipilimumab) 또는 트레멜리무맵(tremelimumab)), 항-TIGIT 항체, 항-CD137 항체(예를 들어, 우렐루맵(urelumab) 또는 우토밀루맵(utomilumab)) 또는 항-OX40 항체(예를 들어, 포갈리주맵(pogalizumab) 또는 타볼릭시주맵(tavolixizumab))와의 조합으로 적어도 약 1.2 배, 1.3 배, 1.4 배, 1.5 배, 2 배, 2.5 배, 3 배, 3.5 배, 4 배, 4.5 배, 5 배, 6 배, 7 배, 8 배, 9 배, 10 배, 15 배, 20 배, 30 배, 40 배, 50 배, 60 배, 70 배, 80 배, 90 배, 또는 100 배 까지 SEA(Staphylococcus Enterotoxin A) 자극에 반응하여 인간의 PBMC(peripheral blood mononuclear cell)에서 IL-2 생산을 증가시키는 분리된 항체를 제공한다.
어떤 실시양태에서, 인간 PD-1에 특이적으로 결합하는 본 명세서에 기재된 항체 단독 또는 항-CTLA-4 항체(예를 들어, 이필리무맵(ipilimumab) 또는 트레멜리무맵(tremelimumab)), 항-TIGIT 항체, 항-CD137 항체(예를 들어, 우렐루맵(urelumab) 또는 우토밀루맵(utomilumab)) 또는 항-OX40 항체(예를 들어, 포갈리주맵(pogalizumab) 또는 타볼릭시주맵(tavolixizumab))와의 조합의 존재하에, SEA로 자극된 인간의 PBMC는, 본 명세서에 기재되거나(하기 실시예 참조) 및/또는 당업자에게 공지된 방법에 의해 평가된 바와 같이, 임의의 항체 부재 하 또는 비-관련 항체(예를 들어, 인간 PD-1에 특이적으로 결합하지 않는 항체) 하의 SEA에 의해 단독으로 자극된 PBMC에 비하여, 적어도 약 1.2 배, 1.3 배, 1.4 배, 1.5 배, 2 배, 2.5 배, 3 배, 3.5 배, 4 배, 4.5 배, 5 배, 6 배, 7 배, 8 배, 9 배, 10 배, 15 배, 20 배, 30 배, 40 배, 50 배, 60 배, 70 배, 80 배, 90 배, 또는 100 배 까지 IL-2 생산을 증가시켰다.
특정 실시양태에서, 본 발명은 인간 PD-1에 특이적으로 결합하고, 임의의 항체 부재 하 또는 비-관련 항체(예를 들어, 인간 PD-1에 특이적으로 결합하지 않는 항체) 하의 인간 T 세포와 동종의 수지상 세포의 공배양물의 IFNγ 생산에 비하여, 본 명세서에 기재되거나(하기 실시예 참조) 및/또는 당업자에게 공지된 방법에 의해 평가된 바와 같이, 적어도 약 1.2 배, 1.3 배, 1.4 배, 1.5 배, 2 배, 2.5 배, 3 배, 3.5 배, 4 배, 4.5 배, 5 배, 6 배, 7 배, 8 배, 9 배, 10 배, 15 배, 20 배, 30 배, 40 배, 50 배, 60 배, 70 배, 80 배, 90 배, 또는 100 배 까지 인간 T 세포와 동종의 수지상 세포의 공배양물의 IFNγ 생산을 증가시키는 분리된 항체를 제공한다.
어떤 실시양태에서, 인간 PD-1에 특이적으로 결합하는, 본 명세서에 기재된 항체의 존재하에 인간 T 세포 및 동종의 수지상 세포의 공배양물은, 본 명세서에 기재되거나(하기 실시예 참조) 및/또는 당업자에게 공지된 방법에 의해 평가된 바와 같이, 임의의 항체 부재 하 또는 비-관련 항체(예를 들어, 인간 PD-1에 특이적으로 결합하지 않는 항체) 하의 인간 T 세포와 동종의 수지상 세포의 공배양물에 비하여, 적어도 약 1.2 배, 1.3 배, 1.4 배, 1.5 배, 2 배, 2.5 배, 3 배, 3.5 배, 4 배, 4.5 배, 5 배, 6 배, 7 배, 8 배, 9 배, 10 배, 15 배, 20 배, 30 배, 40 배, 50 배, 60 배, 70 배, 80 배, 90 배, 또는 100 배 까지 IFNγ 생산을 증가시켰다.
특정 실시양태에서, 본 발명은 인간 PD-1에 특이적으로 결합하고, 임의의 항체 부재 하 또는 비-관련 항체(예를 들어, 인간 PD-1에 특이적으로 결합하지 않는 항체) 하의 T 세포 증식에 비하여, 본 명세서에 기재되거나(하기 실시예 참조) 및/또는 당업계에 공지된 방법에 의해 평가된 바와 같이, 적어도 약 5%, 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98% 또는 99%까지 T 세포 증식을 증가시키는 분리된 항체를 제공한다. 특정 실시양태에서, 본 발명은 인간 PD-1에 특이적으로 결합하고, 임의의 항체 부재 하 또는 비-관련 항체(예를 들어, 인간 PD-1에 특이적으로 결합하지 않는 항체) 하의 T 세포 증식에 비하여, 본 명세서에 기재되거나(하기 실시예 참조) 및/또는 당업자에게 공지된 방법에 의해 평가된 바와 같이, 적어도 약 1.2 배, 1.3 배, 1.4 배, 1.5 배, 2 배, 2.5 배, 3 배, 3.5 배, 4 배, 4.5 배, 5 배, 6 배, 7 배, 8 배, 9 배, 10 배, 15 배, 20 배, 30 배, 40 배, 50 배, 60 배, 70 배, 80 배, 90 배, 또는 100 배 까지 T 세포 증식을 증가시키는 분리된 항체를 제공한다.
특정 실시양태에서, 본 발명은 인간 PD-1에 특이적으로 결합하고, 임의의 항체 부재 하 또는 비-관련 항체(예를 들어, 인간 PD-1에 특이적으로 결합하지 않는 항체) 하의 난소암 복수액으로 공배양된 항-CD3-항체-자극된 CD4+ 또는 CD8+ T 세포의 증식에 비하여, 본 명세서에 기재되거나(하기 실시예 참조) 및/또는 당업자에게 공지된 방법에 의해 평가된 바와 같이, 적어도 약 1.2 배, 1.3 배, 1.4 배, 1.5 배, 2 배, 2.5 배, 3 배, 3.5 배, 4 배, 4.5 배, 5 배, 6 배, 7 배, 8 배, 9 배, 10 배, 15 배, 20 배, 30 배, 40 배, 50 배, 60 배, 70 배, 80 배, 90 배, 또는 100 배 까지 난소암 복수액으로 공배양된 항-CD3-항체-자극된 CD4+ 또는 CD8+ T 세포의 증식을 증가시키는 분리된 항체를 제공한다.
특정 실시양태에서, 본 발명은 인간 PD-1에 특이적으로 결합하고, 임의의 항체 부재 하 또는 비-관련 항체(예를 들어, 인간 PD-1에 특이적으로 결합하지 않는 항체) 하의 PD-L1-발현 표적 세포와 공배양된 PD-1-발현 NFAT-루시퍼라제 리포터 세포에서의 NFAT 신호전달에 비하여, 본 명세서에 기재되거나(하기 실시예 참조) 및/또는 당업자에게 공지된 방법에 의해 평가된 바와 같이, 적어도 약 1.2 배, 1.3 배, 1.4 배, 1.5 배, 2 배, 2.5 배, 3 배, 3.5 배, 4 배, 4.5 배, 5 배, 6 배, 7 배, 8 배, 9 배, 10 배, 15 배, 20 배, 30 배, 40 배, 50 배, 60 배, 70 배, 80 배, 90 배, 또는 100 배 까지 PD-L1-발현 표적 세포와 공배양된 PD-1-발현 NFAT-루시퍼라제 리포터 세포에서의 NFAT 신호전달을 증가시키는 분리된 항체를 제공한다.
5.3. 약학 조성물
본 명세서는 원하는 정도의 순도를 갖는 생리학적으로 허용되는 담체, 부형제 또는 안정화제(Remington's Pharmaceutical Sciences (1990) Mack Publishing Co., Easton, PA)를 가지는 본 명세서에 기재된 항-PD-1 항체를 포함하는 조성물을 제공한다. 허용되는 담체, 부형제 또는 안정제는 사용된 용량 및 농도에서 수혜자에게 비독성이고, 인산염, 시트르산염, 및 기타 유기산과 같은 완충제; 아스코르빈산 및 메티오닌을 포함하는 항산화제; 보존제(옥타데실디메틸벤질 암모늄 클로라이드; 헥사메토니움 클로라이드; 벤즈알코니움 클로라이드, 벤즈에토니움 클로라이드; 페놀, 부틸 또는 벤질 알코올; 메틸 또는 프로필 파라벤과 같은 알킬 파라벤; 카테콜; 레소시놀; 사이클로헥사놀; 3-펜타놀; 및 m-크레졸과 같은); 저분자량(10개 잔기 미만) 폴리펩티드; 혈청 알부민, 젤라틴 또는 면역글로불린과 같은 단백질; 폴리비닐피롤리돈과 같은 친수성 고분자; 글리신, 글루타민, 아스파라긴, 히스티딘, 아르기닌 또는 리신과 같은 아미노산; 모노사카라이드, 다이사카라이드 및 글루코스, 만노오스 또는 덱스트린을 포함하는 다른 탄수화물; EDTA와 같은 킬레이트제; 수크로스, 만니톨, 트레할로스 또는 솔비톨과 같은 당류; 나트륨과 같은 염-형성 반대-이온; 금속 복합체(예를 들어, Zn-단백질 복합체); 및/또는 TWEEN™, PLURONICS™ 또는 PEG(polyethylene glycol)와 같은 비이온성 계면활성제를 포함한다.
특정 실시양태에서, 약학 조성물은 약학적으로 허용가능한 담체내에, 본 명세서에 기재된 항-PD-1 항체 및 선택적으로 하나 이상의 추가적인 예방 또는 치료용 제제를 포함한다. 특정 실시양태에서, 약학 조성물은 약학적으로 허용 가능한 담체내에, 본 명세서에 기재된 항체 및 선택적으로 하나 이상의 추가적인 예방 또는 치료용 제제의 유효량을 포함한다. 일부 실시양태에서, 상기 항체는 상기 약학 조성물에 포함된 유일한 유효성분이다. 본 명세서에 기재된 약학 조성물은 PD-1 활성을 억제하고 암 또는 감염성 질환과 같은 증상을 치료하는데 유용할 수 있다. 바람직한 실시양태에서, 본 발명은 약물로서 사용하기 위한 본 발명의 항 PD-1 항체를 포함하는 본 발명의 약학 조성물에 관한 것이다. 다른 바람직한 실시양태에서, 본 발명은 암 또는 감염성 질환의 치료 방법에 사용하기 위한 본 발명의 약학 조성물에 관한 것이다. 다른 바람직한 실시양태에서, 본 발명은 암 또는 감염성 질환 치료용 약학 조성물을 제조하기 위한 본 발명의 항-PD-1 항체의 용도에 관한 것이다.
비경구 제제에 사용되는 약학적으로 허용 가능한 담체는, 수용성 비히클, 비수용성 비히클, 항균제, 등장성 제제, 완충제, 항산화제, 국소 마취제, 현탁 및 분산제, 유화제, 격리제 또는 킬레이트제 및 기타 약학적으로 허용 가능한 물질을 포함한다. 수용성 비히클의 예시는 염화나트륨 주사, 링거 주사, 등장성 덱스트로스 주사, 멸균수 주사, 덱스트로스 및 락테이트 링거 주사를 포함한다. 비수용성 비경구 제제는 식물 유래의 고정유, 면실유, 옥수수 기름, 참기름 및 땅콩 기름을 포함한다. 정균성 또는 진균성 농도의 항균제는, 페놀 또는 크레졸, 수은, 벤질 알코올, 클로로부탄올, 메틸 및 프로필 p-하이드록시 벤조산 에스터, 티메로살, 벤즈알코니움 클로라이드 및 벤즈에토니움 클로라이드를 포함하는 다회 용량으로 포장된 비경구 제제에 첨가될 수 있다. 등장성 제제는 염화나트륨 및 덱스트로스를 포함한다. 완충제는 인산염과 시트르산염을 포함한다. 항산화제는 소듐 바이설페이드를 포함한다. 국소 마취제는 프로카인 하이드로클로라이드를 포함한다. 현탁 및 분산제는 소듐 카르복시메틸셀룰로오스, 히드록시프로필 메틸셀룰로즈 및 폴리비닐피롤리돈을 포함한다. 유화제는 Polysorbate 80(TWEEN® 80)을 포함한다. 금속 이온의 격리제 또는 킬레이트제는 EDTA를 포함한다. 약학적 담체는 수분 혼화성(water miscible) 비히클용 에틸 알코올, 폴리에틸렌 글리콜 및 프로필렌 글리콜; 및 pH 조정용 소듐 하이드록사이드, 염산, 시트르산 또는 젖산을 포함한다.
약학 조성물은 개체에 임의의 투여 경로용으로 제형화될 수 있다. 투여 경로의 특정 예시는 비강내, 경구, 폐, 경피, 피내 및 비경구를 포함한다. 피하, 근육내 또는 정맥내 주사에 의해 특정되는 비경구 투여 또한 본 명세서에서 고려된다. 주사제는 다음과 같은 액체 용액 또는 현탁액, 주사전 액체상의 용액 또는 현탁액에 적합한 고체 형태 또는 유화액 중의 하나와 같은 통상적인 형태로 제조될 수 있다. 주사제, 용액 및 유화액 역시 하나 이상의 부형제를 포함한다. 적합한 부형제는, 예를 들어, 물, 식염수, 덱스트로스, 글리세롤 또는 에탄올이다. 추가로, 원한다면, 투여될 약학 조성물은 습윤제 또는 유화제, pH 완충제, 안정화제, 용해도 증강제와 같은 비독성 보조물질 및, 예를 들어, 소듐 아세테이트, 솔비탄 모노라우레이트, 트리에탄올아민 올레에이트 및 사이클로덱스트린과 같은 다른 성분을 소량 포함할 수 있다.
항체의 비경구 투여용 제제는 주사준비된 멸균 용액, 동결 건조 분말과 같은 피하정제를 포함하는 사용직전에 용매에 조합 준비된 멸균 건조 가용성 제제, 주사준비된 멸균 현탁액, 사용 직전에 비히클과 조합 준비된 멸균 건조 비수용성 제제 및 멸균 유화액을 포함한다. 상기 용액은 수용성 또는 비수용성 중 어느 하나일 수 있다.
정맥 내 투여되는 경우, 적합한 담체는 생리 식염수 또는 인산염 완충된 식염수(PBS), 및 글루코스, 폴리에틸렌 글리콜 및 폴리 프로필렌 글리콜 및 이들의 혼합물과 같은 증점제 및 가용화제를 포함하는 용액을 포함한다.
항체를 포함하는 국소 혼합물은 국소 및 전신 투여용으로 기재된 바와 같이 제조된다. 생성된 혼합물은 용액, 현탁액, 유화액 등이 될 수 있고, 크림, 겔, 연고, 유화액, 용액, 엘릭서, 로션, 현탁액, 팅크, 페이스트, 거품, 에어로졸, 관류, 스프레이, 좌제, 붕대, 피부 패치 또는 국소 투여에 적합한 임의의 기타 제제로서 제형화될 수 있다.
본 명세서에 기재된 항-PD-1 항체는 흡입과 같은 국소 적용을 위한 에어로졸로서 제제화 될 수 있다(예를 들어, 미국등록특허 4,044,126, 4,414,209 및 4,364,923를 참조하는데, 이들은 염증성 질환 특히 천식의 치료에 유용한 스테로이드의 전달을 위한 에어로졸이 기재되어 있고, 이들은 그 전체가 참고자료로 인용되었다). 호흡관으로 투여하기 위한 이들 제형는 분무기용 에어로졸 또는 용액의 형태이거나, 또는 단독으로 또는 락토오스와 같은 불활성 담체와 조합하여 주입용 미세 분말의 형태가 될 수 있다. 이러한 경우, 상기 제형의 입자는 일 실시예에서 50 마이크론 미만, 일 실시예에서는 10 마이크론 미만의 직경을 가질 것이다.
본 명세서에 기재된 항-PD-1 항체는 겔, 크림 및 로션 형태의 눈과 같이 피부 및 점막으로의 국소 도포와 같은 국소 또는 국소 적용 및 안구내 적용 또는 대장내 또는 척추내 적용을 위해 제제화될 수 있다. 국소 투여는 경피 전달 및 눈 또는 점막 투여 또는 흡입 요법을 위하여 고려된다. 또한, 항체의 단독 또는 다른 약학적으로 허용 가능한 부형제와의 조합의 비강 용액이 투여될 수 있다.
이온 삼투 요법 및 전기 영동 장치를 포함하는 경피 패치는 당업자에게 잘 알려져 있으며, 항체를 투여하는데 사용될 수 있다. 예를 들어, 이러한 패치는 미국등록특허 6,267,983, 6,261,595, 6,256,533, 6,167,301, 6,024,975, 6,010,715, 5,985,317, 5,983,134, 5,948,433, 및 5,860,957호에 개시되어 있는데, 이들 모두는 그 전체가 본 명세서에 참고자료로 인용되었다.
어떤 실시양태에서, 본 명세서에 기재된 항체를 포함하는 약학 조성물은 동결건조 분말이고, 이는 용액, 유화액 및 다른 혼합물로서 투여하기 위해 재구성될 수 있다. 또한, 그것은 고체 또는 젤로 재구성 및 제형화 될 수 있다. 상기 동결건조 분말은 적합한 용매에 본 명세서에 기재된 항체 또는 그의 약학적으로 허용되는 유도체를 용해시켜서 제조된다. 일부 실시양태에서, 상기 동결건조 분말은 멸균된 것이다. 상기 용매는 분말로부터 제조된 분말 또는 재생성된 용액의 안정성 또는 다른 약리학적 성분을 개선시키는 부형제를 포함할 수 있다. 사용될 수 있는 부형제는, 이에 제한되지 않으나, 덱스트로스, 솔비톨, 프럭토스, 옥수수 시럽, 자일리톨, 글리세린, 글루코스, 수크로스 또는 다른 적합한 제제를 포함한다. 또한, 일 실시양태에서, 상기 용매는 중성 pH에서 시트르산염, 소듐 또는 포타슘 포스페이트와 같은 완충제 또는 당업자에게 공지된 다른 완충제를 포함할 수 있다. 당업자에게 공지된 표준조건 하에서, 동결 건조시킨 후 용액을 멸균 여과하여 목적하는 제제를 제공한다. 일 실시양태에서, 상기 생성된 용액은 동결건조용 바이알(vial)에 분배될 것이다. 각각의 바이알은 화합물의 단일 용량 또는 다중 용량이 포함된다. 상기 동결건조 분말은 약 4℃ 내지 실온과 같은 적절한 조건하에 저장될 수 있다. 주사용 수를 사용한 이러한 동결건조 분말의 재구성은 비경구 투여에 사용하기 위한 제형을 제공한다. 재구성을 위해, 상기 동결건조 분말이 멸균수 또는 다른 적합한 담체에 부가된다. 정확한 양은 선택된 화합물에 의존적이다. 이러한 향은 경험적으로 결정될 수 있다.
본 명세서에 기재된 항-PD-1 항체 및 본 명세서에서 제공되는 다른 조성물 역시 치료하고자 하는 개체의 신체의 특정 조직, 수용체 또는 다른 영역을 표적으로 하도록 제형화될 수 있다. 많은 그러한 표적화 방법은 당업자에게 공지되어 있다. 모든 그러한 표적화 방법은 본 발명의 조성물에 사용하기 위해 본 명세서에서 고려된다. 표적화 방법의 비 제한적인 예시로서, 예를 들어, 미국등록특허 6,316,652, 6,274,552, 6,271,359, 6,253,872, 6,139,865, 6,131,570, 6,120,751, 6,071,495, 6,060,082, 6,048,736, 6,039,975, 6,004,534, 5,985,307, 5,972,366, 5,900,252, 5,840,674, 5,759,542, 및 5,709,874를 참조하는데, 이들 모두는 그 전체가 본 명세서에 참고자료로 인용되었다. 특정 실시양태에서, 본 명세서에 기재된 항체는 종양을 표적으로 한다.
생체내 투여에 사용되는 조성물은 멸균된 것일 수 있다. 이는, 예를 들어, 멸균 여과막을 통한 여과에 의해 용이하게 달성된다.
5.4. 사용방법 및 용도
다른 양태에서, 본 발명은 본 명세서에 기재된 항-PD-1 항체를 사용하여 개체를 치료하는 방법을 제공한다. PD-1 기능 억제로부터 이익을 얻을 수 있는 임의의 질환 또는 장애는 본 명세서에 기재된 항-PD-1 항체를 사용하여 치료될 수 있다. 본 명세서에 기재된 항-PD-1 항체는 종양에 대한 면역계 내성을 억제하는데 특히 유용하며, 이에 따라 암을 가진 개체에 대한 면역치료법으로서 사용될 수 있다. 예를 들어, 어떤 실시양태에서, 본 발명은 개체의 항원에 반응하여 T 세포 활성화를 증가시키는 방법을 제공하는데, 상기 방법은 본 명세서에 기재된 바와 같이 항-PD-1 항체 또는 이의 약학 조성물의 유효량을 개체에 투여하는 단계를 포함한다. 어떤 실시양태에서, 본 발명은 개체의 암을 치료하는 방법을 제공하는데, 상기 방법은 본 명세서에 기재된 바와 같이 상기 항-PD-1 항체 또는 약학 조성물의 유효량을 개체에 투여하는 단계를 포함한다. 본 명세서에 기재된 항-PD-1 항체 또는 약학 조성물로 치료될 수 있는 암은, 이에 제한되지 않으나, 흑색종, 두경부암(예를 들어, 두경부 편평암), 폐암(예를 들어, 비소세포성 폐암 및 소세포성 폐암), 유방암(예를 들어, 허셉틴 내성 유방암 및 T-DM1 내성 유방암), 전립선암, 다형성교모세포종, 결장직장암, 육종, 방광암, 자궁경부암, HPV-관련 암, 질암, 외음부암, 음경암, 항문암, 직장암, 구강인두암, 다발성 골수종, 신세포암, 난소암, 간세포암, 자궁내막암, 췌장암, 림프종 및 백혈병(예를 들어, 노인성 백혈병, AML 및 노인성 AML)을 포함한다. 따라서, 본 발명은 일 실시양태에서 약물로서 사용하기 위한 본 발명의 항체 및/또는 약학 조성물에 관한 것이다. 바람직한 실시양태에서, 본 발명은 개체에서 암을 치료하는 방법에 사용되는 약물을 제조하거나, 및/또는 종양에 대한 면역계 내성을 억제하기 위하여 사용되거나, 및/또는 암이 발병된 개체의 면역치료를 위해 사용되거나, 및/또는 개체에서 항원에 반응하여 T 세포 활성화를 증가시키는 방법에 사용하기 위한, 본 발명의 항체 및/또는 약학 조성물의 용도에 관한 것이다. 바람직한 실시양태에서, 상기 암은 흑색종, 두경부암(예를 들어, 두경부 편평암), 폐암(예를 들어, 비소세포성 폐암 및 소세포성 폐암), 유방암(예를 들어, 허셉틴 내성 유방암 및 T-DM1 내성 유방암), 전립선암, 다형성교모세포종, 결장직장암, 육종, 방광암, 자궁경부암, HPV-관련 암, 질암, 외음부암, 음경암, 항문암, 직장암, 구강인두암, 다발성 골수종, 신세포암, 난소암, 간세포암, 자궁내막암, 췌장암, 림프종 및 백혈병(예를 들어, 노인성 백혈병, AML 및 노인성 AML)으로 이루어진 군으로부터 선택된다.
본 명세서에 기재된 항-PD-1 항체 또는 약학 조성물로 치료될 수 있는 추가적인 암은, 이에 제한되지 않으나, 흑색종(예를 들어, 전이성 악성 흑색종(metastatic malignant melanoma) 및 피부 또는 안구내성 악성 흑색종(cutaneous or intraocular malignant melanoma)), 신장암(예를 들어, 투명 세포 암종(clear cell carcinoma)), 전립선암(예를 들어, 호르몬 불응성 전립샘 선암(hormone refractory prostate adenocarcinoma)), 유방암, 대장암, 폐암(예를 들어, 비소세포성 폐암), 골암, 췌장암, 피부암, 두경부암, 자궁암(uterine cancer), 난소암, 직장암, 항문부위 암, 위암, 고환암, 자궁암, 난관암(carcinoma of the fallopian tubes), 자궁 내막암, 자궁 경부암, 질암, 외음부암, 호지킨 병(Hodgkin's Disease), 비-호지킨 림프종(non-Hodgkin's lymphoma), 식도암(cancer of the esophagus), 소장암, 내분비계 암, 갑상선 암, 부갑상선 암, 부신 암, 연조직의 육종, 요도암(cancer of the urethra), 음경암, 급성 골수성 백혈병을 포함하는 만성 또는 급성 백혈병, 만성 골수성 백혈병, 급성 림프구성 백혈병, 만성 림프구성 백혈병, 소아의 고형암, 림프구성 림프종, 방광암, 신장 또는 요관암, 신장골반 암(carcinoma of the renal pelvis), 중추신경계(CNS) 신생물, 원발성 CNS 림프종(primary CNS lymphoma), 종양 혈관신생, 척추종양, 뇌간신경교종(brain stem glioma), 신경교종, 뇌하수체 선종(pituitary adenoma), 카포시 육종(Kaposi's sarcoma), 표피암(epidermoid cancer), 편평세포암, T-세포 림프종, 석면에 의해 유발된 암을 포함하는 환경적으로 유발된 암, 식도암(esophageal cancer), 간암, 난치성 또는 재발성 악성 종양(refractory or recurrent malignancies), 전이암, PD-L1이 발현되는 암 및 상기 암들의 조합을 포함한다.
어떤 실시양태에서, 본 발명은 본 명세서에 기재된 바와 같이, 항-PD-1 항체 또는 이의 약학 조성물의 유효량을 개체에 투여하는 단계를 포함하는, 개체에서 감염성 질환을 예방 또는 치료하는 방법을 제공한다. 일 실시양태에서, 본 명세서에서 제공하는 것은 감염(예를 들어, 바이러스 감염, 세균 감염, 진균 감염, 원충 감염 또는 기생충 감염)을 예방 및/또는 치료하는 방법이다. 상기 방법에 따라 예방 및/또는 치료된 감염은 본 명세서에서 확인된 감염 인자(infectious agent)에 의해 유발될 수 있다. 특정 실시양태에서, 본 명세서에 기재된 항-PD-1 항체 또는 이의 조성물은 개체에 투여되는 유일한 활성제이다. 일부 실시양태에서, 본 명세서에 기재된 항-PD-1 항체 또는 그의 조성물은 감염성 질환의 치료를 위한 항-감염 치료제(예를 들어, 항 바이러스제, 항균제, 항진균제 또는 항기생충제)와 조합하여 사용된다. 따라서, 바람직한 실시양태에서, 본 발명은 감염성 질환의 예방 및/또는 치료 방법에 사용하기 위한 본 발명의 항체, 약학 조성물의 제조를 위한 상기 항체의 용도 및/또는 약학 조성물에 관한 것이고, 보다 바람직하게는, 상기 항체 또는 약학 조성물은 개체에 투여되는 유일한 활성제이거나 또는 상기 항체 또는 약학 조성물은 항-감염 치료제와 조합하여 사용된다.
본 명세서에 기재된 항-PD-1 항체 또는 약학 조성물에 의해 치료 및/또는 예방될 수 있는 감염성 질환은 세균, 기생충, 진균, 원생 동물 및 바이러스를 포함하는 감염 인자에 의해 유발되나, 이에 제한되지 않는다. 특정 실시양태에서, 본 명세서에 기재된 항-PD-1 항체 또는 약학 조성물에 의해 치료 및/또는 예방되는 감염성 질환은 바이러스에 의해 유발된다. 본 명세서에 기재된 방법에 따라 예방 및/또는 치료될 수 있는 바이러스성 질환 또는 바이러스성 감염은, 이에 제한되지 않으나, A형 간염, B형 간염, C형 간염, 인플루엔자(예를 들어, A형 인플루엔자 또는 B형 인플루엔자), 수두(varicella), 아데노 바이러스, HSV-I(herpes simplex type I), HSV-II(herpes simplex type II), 우역(rinderpest), 라이노 바이러스, 에코 바이러스, 로타 바이러스, 호흡기 세포 융합 바이러스(respiratory syncytial virus), 유두종 바이러스(papilloma virus), 파포바 바이러스, 사이토 메갈로 바이러스, 에키노 바이러스(echinovirus), 아보 바이러스, 헌터 바이러스, 코크사키 바이러스, 유행성 이하선염 바이러스(mumps virus), 홍역 바이러스(measles virus), 풍진 바이러스(rubella virus), 소아마비 바이러스(polio virus), 천연두(small pox), 엡스타인 바 바이러스(Epstein Barr virus), 바이러스성 수막염(meningitis), 뇌염(encephalitis), 뎅기열(dengue) 또는 천연두과 같은 바이러스성 질환의 인자에 의해 유발된 것을 포함한다.
예방 및/또는 치료될 수 있는 세균성 감염은 대장균, 폐렴간균(Klebsiella pneumoniae), 황색포도상구균(Staphylococcus aureus), 엔테로코커스 패칼리스(Enterococcus faecalis), 프로테우스 불가리스(Proteus vulgaris), 녹색연쇄상구균(Staphylococcus viridans), 및 녹농균(Pseudomonas aeruginosa)에 의한 감염을 포함한다. 본 명세서에 기재된 방법에 따라 예방 및/또는 치료될 수 있는 세균(예를 들면, 대장균, 폐렴간균, 황색포도상구균, 엔테로코커스 패칼리스, 프로테우스 불가리스, 녹색연쇄상구균 및 녹농균)에 의해 유발된 세균성 질환은 이에 제한되지 않으나, 마이코박테리아 리케치아(Mycobacteria rickettsia), 마이코플라즈마(Mycoplasma), 나이세리아(Neisseria), 폐렴 원인균(S. pneumonia), 보렐리아 부르그도르페리(라임병)(Borrelia burgdorferi(Lyme disease)), 바실러스 안트락시스(탄저병)(Bacillus antracis(anthrax)), 파상풍(tetanus), 연쇄상구균(Streptococcus), 포도상구균(Staphylococcus), 마이코박테리움(mycobacterium), 페르티수스(pertissus), 콜레라(cholera), 흑사병(plague), 디프테리아(diptheria), 클라미디아(chlamydia), 황색포도상구균(S. aureus), 및 레지오넬라(legionella)를 포함한다.
본 명세서에 기재된 방법에 따라 예방 및/또는 치료될 수 있는 원생 동물에 의해 유발되는 원생 질환 또는 원충 감염은 리슈만(leishmania), 콕시듐증(coccidiosis), 트리파소노마(trypanosoma) 주름종 또는 말라리아를 포함하나, 이에 제한되지 않는다. 본 명세서에 기재된 방법에 따라 예방 및/또는 치료될 수 있는 기생충에 의해 유발되는 기생충 질환 또는 기생충 감염은 클라미디아 및 리케치아를 포함하나, 이에 제한되지 않는다.
본 명세서에 기재된 방법에 따라 예방 및/또는 치료될 수 있는 진균성 질환 또는 진균 감염은 칸디다 감염(Candida infections), 접합자 유선염(zygomycosis), 칸디다 유방염(Candida mastitis), 잠복성 트리코스포론 혈증을 동반한 진행성 전파포진(progressive disseminated trichosporonosis with latent trichosporonemia), 파종성 칸디다증(disseminated candidiasis), 폐 파라콕시디오이데스 진균증(pulmonary paracoccidioidomycosis), 폐 아스퍼질러스 증(pulmonary aspergillosis), 주폐 포자충 폐렴(Pneumocystis carinii pneumonia), 크립토 뇌막염(cryptococcal meningitis), 코시디오이달 수막뇌염 및 뇌척수액 혈관염(coccidioidal meningoencephalitis and cerebrospinal vasculitis), 아스퍼질러스 니제르 감염(Aspergillus niger infection), 푸사리움 각막염(Fusarium keratitis), 부비동 진균증(paranasal sinus mycoses), 아스퍼질러스 푸미가투스의 심내막염(Aspergillus fumigatus endocarditis), 경골 연골이형성(tibial dyschondroplasia), 칸디다 글라브라 질염(Candida glabrata vaginitis), 구강인두 칸디다증(oropharyngeal candidiasis), X 연관 만성 육아 종성 질환(X-linked chronic granulomatous disease), 무좀(tinea pedis), 피부 칸디다증(cutaneous candidiasis), 진균성 태반염(mycotic placentitis), 전파된 트리코스포라놉시스(disseminated trichosporonosis), 알레르기성 기관지 폐 아스퍼질러스증(allergic bronchopulmonary aspergillosis), 진균 각막염(mycotic keratitis), 크립토코커스 네오포르만스 감염(Cryptococcus neoformans infection), 곰팡이성 복막염(fungal peritonitis), 커불라리아 제니쿨라타 감염(Curvularia geniculata infection), 포도상구균 안내염(staphylococcal endophthalmitis), 포자증(sporotrichosis) 및 진피증(dermatophytosis)을 포함하나, 이에 제한되지 않는다.
어떤 실시양태에서, 이들 방법은 개체에게 추가적 치료제를 투여하는 단계를 추가로 포함한다. 어떤 실시양태에서, 상기 추가적 치료제는 화학치료제(chemotherapeutic agent), 방사선치료제(radiotherapeutic agent), 또는 체크포인트 표적화 제제(checkpoint targeting agent) 이다. 어떤 실시양태에서, 상기 체크포인트 표적화 제제는 길항제 항-PD-1 항체, 길항제 항-PD-L1 항체, 길항제 항-PD-L2 항체, 길항제 항-CTLA-4 항체, 길항제 항-TIM-3 항체, 길항제 항-LAG-3 항체, 길항제 항-CEACAM1 항체, 길항제 항-TIGIT 항체, 작용제 항-CD137 항체, 작용제 항-ICOS 항체, 작용제 항-GITR 항체 및 작용제 항-OX40 항체로 이루어진 군으로부터 선택된다. 어떤 실시양태에서, 본 명세서에 기재된 항-PD-1 항체는 길항제 항-CTLA-4 항체 및 작용제 항-ICOS 항체와 조합하여 개체에 투여된다. 어떤 실시양태에서, 본 명세서에 기재된 항-PD-1 항체는 길항제 항-CTLA-4 항체와 조합하여 개체에게 투여된다. 어떤 실시양태에서, 본 발명은 개체에서 암을 치료하는 방법을 제공하는데, 상기 방법은 길항제 항-CTLA-4 항체 또는 그의 약학 조성물과 조합하여, 본 명세서에 기재된 항-PD-1 항체 또는 그의 약학 조성물을 개체에 투여하는 단계를 포함하고, 상기 암은 폐암(예를 들어, 비소세포성 폐암(NSCLC), 예를 들어, 제1 선 NSCLC), 흑색종(예를 들어, 제1 선 흑색종) 및 두경부암(예를 들어, 두경부 편평암(SCCHN), 예를 들어, 제1 선 SCCHN)으로 이루어진 군으로부터 선택된다.
바람직한 실시양태에서, 본 발명은, 본 발명의 방법에 사용하기 위한 본 발명의 항체, 약학 조성물 제조를 위한 항체의 용도 및/또는 약학 조성물에 관한 것인데, 상기 방법은 개체에 추가적 치료제를 투여하는 단계를 추가로 포함한다. 다른 바람직한 실시양태에서, 본 발명은 (a) 본 발명의 항체 및/또는 약학 조성물, 및 (b) 약물로서 사용하기 위한 추가적 치료제에 관한 것이다. 다른 바람직한 실시양태에서, 본 발명은 (a) 본 발명의 항체 및/또는 약학 조성물, 및 (b) 암 치료방법에 사용하기 위한 추가적 치료제에 관한 것이다. 추가 실시양태에서, 본 발명은 (a) 본 발명의 항체 및/또는 약학 조성물 및 (b) 추가적 치료제를 포함하는, 약학 조성물, 키트 또는 부품들의 키트에 관한 것이다. 하나의 보다 바람직한 실시양태에서, 상기 추가적 치료제는 화학치료제, 방사선치료제 또는 체크포인트 표적화 제제 이다.
어떤 실시양태에서, 항-CTLA-4 항체가 본 명세서에 기재된 방법에서 사용된다. 어떤 실시양태에서, 상기 항-CTLA-4 항체는 Bristol-Myers Squibb에 의해 개발된 이필리무맵(Ipilimumab)이다. 어떤 실시양태에서, 상기 항-CTLA-4 항체는 화이자(Pfizer) 및 메두이뮨(Medimmune)에 의해 개발된 트레멜리무맵(Tremelimumab) 이다. 어떤 실시양태에서, 상기 항-CTLA-4 항체는 CytomX 및 Bristol-Myers Squibb에 의해 개발된 CTLA-4를 표적으로하는 프로바디(Probody) 이다.
본 명세서에 기재된 치료 방법에 사용될 수 있는 항-CTLA-4 항체의 비제한적인 예시는, 이들 모두 그 전체가 본 명세서에 참고자료로 인용된 하기 특허 또는 특허출원건에 개시되어 있다: 미국등록특허 6,984,720; 미국등록특허 7,411,057; 미국등록특허 7,034,121; 미국등록특허 8,697,845; 미국등록특허 8,518,404; 미국공개특허 2009/0123477 A1; 미국공개특허 2014/0105914 A1; 미국공개특허 2013/0267688 A1; 미국공개특허 2016/0145355 A1; 국제공개특허 2014/207064 A1; 및 국제공개특허 2016/015675 A1.
어떤 실시양태에서, 본 명세서에 기재된 항-PD-1 항체는 IDO(indoleamine-(2,3)-dioxygenase) 및/또는 TDO(tryptophan 2,3-dioxygenase)와 같은 면역조절 효소를 표적으로 하는 화합물과 조합하여 개체에 투여된다. 따라서, 다른 보다 바람직한 실시양태에서, 상기 추가적 치료제는 면역조절 효소를 표적으로 하는 화합물, 더욱 바람직하게는 IDO의 억제제를 표적으로 하는 화합물이다. 어떤 실시양태에서, 상기 화합물은 에파카도스탯(epacadostat)(Incyte Corp;, 예를 들어, 그 전체가 본 명세서에 참고로 인용 된 WO 2010/005958 참조), F001287(Flexus Biosciences / Bristol-Myers Squibb), 인독시모드(indoximod)(NewLink Genetics) 및 NLG919(NewLink Genetics)로 이루어진 군으로부터 선택된다. 일 실시양태에서, 상기 화합물은 에파카도스탯이다. 다른 실시양태에서, 상기 화합물은 F001287이다. 다른 실시양태에서, 상기 화합물은 인독시모드이다. 다른 실시양태에서, 상기 화합물은 NLG919이다.
어떤 실시양태에서, 본 명세서에 기재된 항-PD-1 항체는 백신과 조합하여 개체에게 투여된다. 상기 백신은, 예를 들어, 펩티드 백신, DNA 백신 또는 RNA 백신이 될 수 있다. 어떤 실시양태에서, 상기 백신은 열충격 단백질성 종양 백신 또는 열충격 단백질성 병원체 백신이다. 특정 실시양태에서, 본 명세서에 기재된 항-PD-1 항체는 열충격 단백질성 종양-백신과 조합하여 개체에 투여된다. 열충격 단백질(HSP)은 모든 종에 편재하는 매우 보존된 단백질 패밀리이다. 그들의 발현은 열충격 또는 독소에 노출, 산화 스트레스 또는 포도당 결핍을 포함하는 다른 형태의 스트레스의 결과로서, 훨씬 더 높은 수준으로 강력하게 유도될 수 있다. 5가지 분류군이 분자량에 따라 분류되었다: HSP-110, -90, -70, -60 및 -28 HSP는 T 세포 활성화를 인도하여, 대식세포 및 수지상 세포(DC)와 같은 항원 제시 세포(APC)의 교차 제시 경로를 통해 면역 원성 펩티드를 전달한다. HSP는 종양-특이적 면역을 유도할 수 있는 복합체를 형성하는 종양-관련 항원 펩티드의 샤페론 담체(chaperone carrier)로서 역할을 수행한다. 죽어가는 종양 세포에서 방출되면, 상기 HSP-항원 복합체는 항원 제시 세포(APCs)에 의해 흡수되고, 상기 항원은 항-종양 CD8+ 및 CD4+ T 세포의 활성화를 인도하는 MHC 클래스 I 및 클래스 II 분자에 결합하는 펩티드로 가공된다. 종양 제제로부터 유래된 HSP 복합체에 의해 유도된 면역은 특이적으로 각 개체의 암에 의해 발현되는 독특한 항원 펩티드 레퍼토리에 대한 것이다. 따라서, 추가적인 바람직한 실시양태에서, 본 발명은 (a) 본 발명의 항체 및/또는 약학 조성물, 및 (b) 특히, 암 치료방법에 사용하기 위한, 약물로서 사용하기 위한 백신에 관한 것이다. 다른 바람직한 실시양태에서, 본 발명은 (a) 본 발명의 항체 및/또는 약학 조성물, 및 (b) 백신을 포함하는, 약학 조성물, 키트 또는 부품들의 키트이다. 추가적인 바람직한 실시양태에서, 상기 백신은 열충격 단백질성 종양 백신 또는 열충격 단백질성 병원체 백신이고, 보다 바람직하게는 열충격 단백질성 종양 백신이다.
열충격 단백질 펩티드 복합체(HSPPC)는 항원 펩티드와 비공유적으로 복합체화된 열충격 단백질로 이루어진 단백질 펩티드 복합체이다. HSPPC는 태생적 면역 반응과 적응성 면역 반응 모두를 유도한다. 특정 실시양태에서, 상기 항원 펩티드는 치료되는 암을 위한 항원성을 나타낸다. HSPPC는 막 수용체(주로 CD91)를 통한 APC 또는 Toll-유사 수용체에 대한 결합에 의해 효과적으로 결합된다. HSPPC 내재화는 자연 살해 세포(NK), 단핵구 및 Th1 및 Th-2-매개성 면역 반응의 활성화를 인도하는 케모카인 및 사이토카인 생산과 함께 APCs의 기능적 성숙을 초래한다. 어떤 실시양태에서, 본 명세서에 기재된 방법에서 사용되는 HSPPC는 항원성 펩티드와 복합체화된 스트레스 단백질의 hsp60, hsp70 또는 hsp90 패밀리로부터의 하나 이상의 열충격 단백질을 포함한다. 어떤 실시양태에서, HSPPC는 hsc70, hsp70, hsp90, hsp110, grp170, gp96, 칼레티큘린(calreticulin) 또는 이들의 둘 이상의 조합을 포함한다.
특정 실시양태에서, 열충격 단백질 펩티드 복합체 (HSPPC)는 재조합 항원 펩티드와 복합체를 이루는 재조합 열충격 단백질(예를 들어, hsp70 또는 hsc70) 또는 이의 펩티드 결합 도메인을 포함한다. 재조합 열충격 단백질은 재조합 DNA 기술, 예를 들어, Dworniczak 및 Mirault, Nucleic Acids Res. 15 : 5181-5197 (1987) 및 GenBank 수탁 번호. P11142 및/또는 Y00371에 기술되어 있으며, 이들 각각은 전체가 본 명세서에 참고로 인용된다. 어떤 실시양태에서, Hsp70 서열은 문헌 [Hunt and Morimoto Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 82 (19), 6455-6459 (1985) 및 GenBank accession no. P0DMV8 및/또는 M11717 (이들 각각은 그 전체가 본 명세서에 참고로 인용됨)에 기재되어 있다. 항원성 펩티드는 또한 당업계에 공지된 재조합 DNA 방법에 의해 제조될 수 있다.
어떤 실시양태에서, 상기 항원성 펩티드는 변형된(modified) 아미노산을 포함한다. 어떤 실시양태에서, 상기 변형된 아미노산은 번역후 변형을 포함한다. 어떤 실시양태에서, 상기 변형된 아미노산은 번역후 변형의 모방물을 포함한다. 어떤 실시양태에서, 상기 변형된 아미노산은 측쇄 하이드록실 또는 아민상에서 인산화된 타이로신(Tyr), 세린(Ser), 트레오닌(Thr), 아르기닌(Arg), 리신(Lys), 또는 히스티딘(His) 이다. 어떤 실시양태에서, 상기 변형된 아미노산은 측쇄 하이드록실 또는 아민상에서 인산화된 타이로신(Tyr), 세린(Ser), 트레오닌(Thr), 아르기닌(Arg), 리신(Lys), 또는 히스티딘(His) 아미노산의 모방물이다.
특정 실시양태에서, 본 명세서에 개시된 항-PD-1 항체는 암을 치료하기 위하여 열충격 단백질 펩타이드 복합체(HSPPC), 예를 들어, 열충격 단백질 펩타이드 복합체-96(HSPPC-96)과 조합하여 개체에 투여된다. HSPPC-96은 항원 펩티드와 복합체를 이루는 96 kDa 열충격 단백질 (Hsp), gp96을 포함한다. HSPPC-96은 피험자의 종양에서 제조된 암 면역 요법으로 암의 항원성 "지문"을 포함한다. 어떤 실시양태에서, 이 지문은 특정 대상의 특정 암세포에만 존재하는 독특한 항원을 함유하고, 백신의 주사는 대상 암의 면역계가 특정 암 지문을 가진 모든 세포를 인식하고 공격하도록 자극하기 위한 것이다. 따라서, 또 다른 바람직한 실시양태에서, 본 발명은 약물로서 사용하기 위한 열충격 단백질 펩티드 복합체(HSPPC)와 조합되거나, 및/또는 암 치료를 위한 방법에 사용하기 위한 본 발명의 항체 및/또는 약학 조성물에 관한 것이다.
어떤 실시양태에서, 상기 HSPPC, 예를 들어, HSPPC-96은 개체의 종양 조직으로부터 생산된다. 특정 실시양태에서, 상기 HSPPC(예를 들어, HSPPC-96)는 치료하고자 하는 암 또는 이의 전이형태의 종양으로부터 생산된다. 다른 특정 실시양태에서, 상기 HSPPC(예를 들어, HSPPC-96)는 치료되는 개체에 대한 자가유래이다. 어떤 실시양태에서, 상기 종양 조직은 비-괴사성(non-necrotic) 종양 조직이다. 어떤 실시양태에서, 비-괴사성 종양 조직의 적어도 1g(예를 들어, 적어도 1, 적어도 2, 적어도 3, 적어도 4, 적어도 5, 적어도 6, 적어도 7, 적어도 8, 적어도 9 또는 적어도 10g)은 백신 요법(vaccine regimen)을 생산하는데 사용된다. 어떤 실시양태에서, 외과적 절제술 후, 비-괴사성 종양 조직은 백신 제조에 사용되기 전에 냉동된다. 일부 실시양태에서, 상기 HSPPC, 예를 들어, HSPPC-96은 정제 기술에 의해 종양 조직으로부터 분리, 여과 및 주사 가능한 백신으로 제조된다. 어떤 실시양태에서, 개체에 HSPPC, 예를 들어, HSPCC-96을 6 내지 12 용량으로 투여한다. 이러한 실시양태에서, 상기 HSPPC, 예를 들어, HSPPC-96 용량은 최초 4 용량(first 4 dose)으로 매주 투여될 수 있고, 이후 2 내지 8 추가 용량(2-8 additional dose)으로 격주로 투여될 수 있다.
본 명세서에 기재된 방법에 따라 사용될 수있는 HSPPC의 추가적 예시는 이하 특허 및 특허출원에 개시되어 있다: 미국등록특허 6,391,306, 6,383,492, 6,403,095, 6,410,026, 6,436,404, 6,447,780, 6,447,781, 및 6,610,659, 이들 모두는 그 전체가 본 명세서에 참고자료로 인용되었다.
어떤 실시양태에서, 본 명세서에 기재된 항-PD-1 항체는 어쥬번트와 조합하여 개체에 투여된다. 다양한 어쥬번트가 치료 정황에 따라 사용될 수 있다. 적절한 어쥬번트의 비제한적 예시는, 이에 제한되지 않으나, CFA(Complete Freund's Adjuvant), IFA(Incomplete Freund's Adjuvant), 몬타니드(montanide) ISA(incomplete Seppic adjuvant), 리비 어쥬번트 시스템(the Ribi adjuvant system, RAS), 타이터 맥스(Titer Max), 무라밀 펩티드(muramyl peptides), SAF(Syntex Adjuvant Formulation), 알룸(alum, aluminum hydroxide 및/또는 aluminum phosphate), 알루미늄염 어쥬번트(aluminum salt adjuvants), Gerbu® 어쥬번트, 니트로셀룰로스 흡착 항원(nitrocellulose absorbed antigen), 캡슐화되거나 포집된 항원(encapsulated or entrapped antigen), 3 D-MPL(3 De-O-acylated monophosphoryl lipid A), 면역자극성 올리고펩티드, TLR(toll-like receptor) 리간드, MBL(mannan-binding lectin) 리간드, STING 작용제, 사포닌과 같은 면역자극성 복합체, Quil A, QS-21, QS-7, ISCOMATRIX, 및 기타를 포함한다. 다른 어쥬번트는 CpG 올리고뉴클레오티드 및 폴리(A) 및 폴리(U)와 같은 이중가닥 RNA 분자를 포함한다. 상기 어쥬번트의 조합 역시 사용될 수 있다. 예를 들어, 미국등록특허 6,645,495; 7,029,678; 및 7,858,589를 참고하는데, 이들 모두는 그 전체가 본 명세서에 참고자료로 인용되었다. 일 실시양태에서, 본 명세서에서 사용된 어쥬번트는 QS-21 STIMULON이다.
어떤 실시양태에서, 본 명세서에 기재된 항-PD-1 항체는 TCR을 포함하는 추가적 치료제와 조합하여 개체에 투여된다. 어떤 실시양태에서, 상기 추가적 치료제는 가용성 TCR이다. 어떤 실시양태에서, 상기 추가적 치료제는 TCR을 발현하는 세포이다. 따라서, 다른 바람직한 실시양태에서, 본 발명은 약물로서 사용하거나 및/또는 암의 치료방법에 사용하기 위한 TCR을 포함하는 추가적 치료제와 조합된 본 발명의 항체, 및/또는 약학 조성물에 관한 것이다.
어떤 실시양태에서, 본 명세서에 기재된 항-PD-1 항체는 키메릭 항원 수용체(car)를 발현하는 세포와 조합하여 개체에게 투여된다. 어떤 실시양태에서, 상기 세포는 T 세포이다.
어떤 실시양태에서, 본 명세서에 기재된 항-PD-1 항체는 TCR 모방 항체와 조합하여 개체에 투여된다. 어떤 실시양태에서, 상기 TCR 모방 항체는 펩티드-MHC 복합체에 특이적으로 결합하는 항체이다. TCR 모방 항체의 비제한적 예시로서, 예를 들어, 미국등록특허 9,074,000 및, 미국공개특허 2009/0304679 A1 및 2014/0134191 A1을 참조하는데, 이들 모두는 그 전체가 본 명세서에 참고자료로 인용되었다.
항-PD-1 항체 및 추가적 치료제(예를 들어, 화학 치료제, 방사선 요법 제, 체크 포인트 표적제, IDO 억제제, 백신, 면역 보조제, 가용성 TCR, TCR을 발현하는 세포, 키메라 항원 수용체를 발현하는 세포 , 및/또는 TCR 모방 항체)는 별도의 투여 형태로서 개별적으로, 순차적으로 또는 동시에 투여될 수 있다. 일 실시양태에서, 항-PD-1 항체는 비경구로 투여되고, IDO 억제제는 경구 투여된다.
본 명세서에 기재된 항체 또는 약학 조성물은 다양한 경로에 의해 개체에게 전달될 수 있다. 이들은 비경구, 비강내, 기관내, 경구, 피내, 국소, 근육내, 복강내, 경피, 정맥내, 종양내, 결막내, 동맥내 및 피하 경로를 포함하나, 이에 제한되지 않는다. 폐 투여 역시, 예를 들어, 흡입기 또는 분무기의 사용 및 스프레이로서 사용하기 위한 에어로졸 화제를 포함하는 제형에 의해 사용될 수 있다. 어떤 실시양태에서, 본 명세서에 기재된 항체 또는 약학 조성물은 피하 또는 정맥내로 전달된다. 어떤 실시양태에서, 본 명세서에 기재된 항체 또는 약학 조성물은 동맥내로 전달된다. 어떤 실시양태에서, 본 명세서에 기재된 항체 또는 약학 조성물은 종양내로 전달된다. 어떤 실시양태에서, 본 명세서에 기재된 항체 또는 약학 조성물은 종양 배수 림프절(tumor draining lymph node)로 전달된다.
증상의 치료 및/또는 예방에 효과적일 항체 또는 조성물의 함량은 질환의 성질에 의존적일 것이고, 표준 임상 기술에 의해 결정될 수 있다.
조성물에 사용되는 정확한 용량은 역시 투여 경로 및 이로 인한 감염 또는 질병의 심각성에 의존적일 것이며, 개업의사의 판단 및 각 개체의 상황에 따라 결정되어야 한다. 예를 들어, 유효량 역시 투여수단, 표적 부위, 환자의 생리학적 상태(연령, 체중 및 건강수준 포함), 환자가 사람인지 동물인지, 투여된 다른 약물 또는 치료가 예방인지 여부에 따라 달라질 수 있다. 일반적으로, 상기 환자는 인간이지만, 형질도입 포유동물을 포함하는 비인간 포유 동물도 치료될 수 있다. 치료 용량은 안전성과 효능을 최적화하기 위해 최적으로 적정된다.
본 명세서에 기재된 항-PD-1 항체는 또한 ELISA(enzyme linked immunosorbent assay), 면역침전 또는 웨스턴블럿과 같은 면역분석법을 포함하는 당업자에게 공지된 고전적인 면역조직학적 방법을 사용하여 생물학적 시료에서 PD-1 단백질 수준을 분석하는데 사용될 수 있다. 적합한 항체 분석 표지는 당업계에 공지되어 있으며, 글루코오스 옥시다아제와 같은 효소 표지; 요오드(125I, 121I), 탄소(14C), 황(35S), 삼중 수소(3H), 인듐(121In) 및 테크네튬(99Tc)과 같은 방사성 동위 원소; 루미놀과 같은 발광 표지; 및 플루오레신 및 로다민과 같은 형광 표지 및 바이오틴을 포함한다. 이러한 표지는 본 명세서에 기재된 항체를 표지하는데 사용될 수 있다. 대안적으로, 본 명세서에 기재된 항-PD-1 항체를 인식하는 2차 항체가, PD-1 단백질 수준을 검출하기 위하여 항-PD-1 항체와 조합하여 표시되고 사용될 수 있다. 따라서, 일 실시양태에서, 본 발명은 생물학적 시료에서 인간 PD-1 단백질의 시험관 조건에서 검출하기 위한 본 발명의 항체의 용도에 관한 것이다. 추가 실시양태에서, 본 발명은 시험관 조건에서 생물학적 시료에서 인간 PD-1 단백질 수준을 분석 및/또는 검출하기 위한, 본 발명의 항-PD-1 항체의 용도에 관한 것이고, 바람직하게는 상기 항-PD-1 항체는 방사성 핵종 또는 검출 가능한 표지에 접합되거나, 및/또는 본 명세서에 기재된 표지를 지니며, 및/또는 면역조직학적 방법이 사용된다.
PD-1 단백질의 발현 수준을 분석하는 것은, 첫 번째 생물학적 시료에서 PD-1 단백질의 수준을 직접적으로(예를 들어, 절대적인 단백질 수준을 결정 또는 추정함에 의해) 또는 상대적으로(예를 들어, 두 번째 생물학적 시료에서 질병 관련 단백질 수준과 비교함에 의해), 정성적으로 또는 정량적으로 측정 또는 추정하는 단계를 포함하기 위한 것이다. 첫 번째 생물학적 시료에서의 PD-1 폴리 펩티드 발현 수준은 측정하거나 또는 추정하고, 표준 PD-1 단백질 수준과 비교할 수 있는데, 상기 표준은 장애를 가지지 않은 개체로부터 얻어진 두 번째 생물학적 시료로부터 수득하거나 또는 장애를 가지지 않은 개체군의 평균 수준에 의해 결정된다. 당업계에서 인식되는 바와 같이, 일단 "표준" PD-1 폴리펩티드 수준이 알려지면, 이는 비교를 위한 표준으로서 반복적으로 사용될 수 있다. 따라서, 추가 실시양태에서, 본 발명은 생물학적 시료에서 PD-1 단백질 수준, 특히 인간 PD-1 단백질 수준을 분석 및/또는 검출하기 위한 시험관 조건에서의 방법에 관한 것으로, 면역조직학적 방법에 의해 생물학적 시료에서, PD-1 단백질 특히 인간 PD-1 단백질의 수준을 정성적 또는 정량적으로 측정 또는 추정하는 단계를 포함한다.
본 명세서에 사용된 바와 같이, 용어 "생물학적 시료"는 PD-1을 잠재적으로 발현하는 개체, 세포주, 조직 또는 다른 세포의 원천으로부터 수득한 임의의 생물학적 시료를 의미한다. 동물(예를 들어, 사람)로부터 조직 생검 및 체액을 수득하는 방법은 당업계에 잘 알려져 있다. 생물학적 시료는 말초 단핵 혈구 세포를 포함한다.
본 명세서에 기재된 항-PD-1 항체는 당업자에게 공지되고 표준이며, 본 명세서에 기초한 시험관 조건 및 생체내 적용을 포함하는, 예후, 진단, 모니터링 및 스크리닝을 위해 사용될 수 있다. 면역계 상태 및/또는 면역반응의 시험관 조건에서의 평가 및 감정을 위한 예후, 진단, 모니터링 및 스크리닝 분석과 키트는, 면역계 장애를 갖거나 또는 갖는 것으로 의심되거나 또는 예상되거나 또는 원하는 면역계 반응, 항원 반응 또는 백신 반응과 관련된 것으로 알려진 것을 포함하는, 환자의 시료를 평가하기 위하여 예측, 진단 및 모니터링 하는데 사용될 수 있다. 또한, 면역계 상태 및/또는 면역반응의 시험관 조건에서의 평가 및 감정은 약물의 임상시험 또는 특히 화학치료제, 방사선치료제 또는 항체(다른 제제 또는 항체와 비교하여 이들의 조합을 포함하는)의 투여를 위한, 환자의 적합성을 결정하는데 유용하다. 이러한 유형의 예후 및 진단 모니터링과, 평가는 유방암(HercepTestTM, Dako)에서 HER2 단백질에 대한 항체를 활용하여 이미 실시되고 있는데, 상기 분석은 Herceptin®을 사용하는 항체 치료를 위하여 환자를 평가하는데에도 사용된다. 생체내 적용에는 직접 세포치료 및 면역계 조절 및 면역 반응의 전파상(radio imaging)을 포함한다. 따라서, 일 실시양태에서, 본 발명은 진단용으로 사용하기 위한 본 발명의 항-PD-1 항체, 약학 조성물을 제조하기 위한 상기 항체의 용도 및/또는 약학 조성물에 관한 것이다. 바람직한 실시양태에서, 본 발명은, 면역계 장애를 갖거나 또는 갖는 것으로 의심되거나, 및/또는 예상되거나 또는 원하는 면역계 반응, 항원 반응 또는 백신 반응과 관련된, 개체의 예측, 진단 및/또는 모니터링용 방법에 사용하기 위한, 본 발명의 항-PD-1 항체, 약학 조성물을 제조하기 위한 상기 항체의 용도 및/또는 약학 조성물에 관한 것이다. 다른 실시양태에서, 본 발명은, 시험관 조건에서 개체의 생물학적 시료에서 인간 PD-1 단백질 수준을 분석 및/또는 검출함에 의하여, 면역계 장애를 갖거나 또는 갖는 것으로 의심되거나, 및/또는 예상되거나 또는 원하는 면역계 반응, 항원 반응 또는 백신 반응과 관련된, 개체의 예측, 진단 및/또는 모니터링을 위한, 본 발명의 항 PD-1 항체의 용도에 관한 것이다.
일 실시양태에서, 항-PD-1 항체는 생검 시료의 면역조직화학분석에 사용될 수 있다. 바람직하게는, 상기 방법은 시험관 조건에서의 방법이다. 다른 실시양태에서, 항 PD-1 항체는 PD-1의 수준 또는 PD-1을 그의 막 표면에 포함하는 세포의 수준을 검출하는데 사용될 수 있는데, 수준은 특정 질병의 증상과 연관될 수 있다. 본 명세서에 기재된 항-PD-1 항체는 검출 가능하거나 또는 기능적 표지를 지닐 수 있고 및/또는 방사성 핵종 또는 검출 가능한 표지에 접합될 수 있다. 형광 표지가 사용될 때, 현재 이용가능한 현미경 및 형광-활성화 유세포 분석기(FACS) 또는 당업계에 공지된 두 방법의 조합이 특정 결합 구성원을 동정하고 정량하는데 이용될 수 있다. 본 명세서에 기재된 항-PD-1 항체는 형광 표지를 지니거나 또는 이에 접합될 수 있다. 예시적인 형광 표지는, 예를 들어, 반응성 및 접합된 프로브, 예를 들어, 아미노쿠마린(Aminocoumarin), 플루오레신 및 텍사스 레드(Fluorescein and Texas red), 알렉사 플루오 염료(Alexa Fluor dye), Cy 염료(Cy dye) 및 DyLight 염료(DyLight dye)를 포함한다. 항-PD-1 항체는 방사성 동위원소 3H, 14C, 32P, 35S, 36Cl, 51Cr, 57Co, 58Co, 59Fe, 67Cu, 90Y, 99Tc, 111In, 117Lu, 121I, 124I, 125I, 131I, 198Au, 211At, 213Bi, 225Ac, 및 186Re과 같은, 방사성 표지 또는 방사성 핵종을 지니거나 또는 이에 접합될 수 있다. 방사성 표지가 사용될 때, 당업계에 공지된 현재 이용가능한 카운팅 방법이, PD-1(예를 들어, 인간 PD-1)에 대한 항-PD-1 항체의 특이적 결합을 확인하고 정량화하기 위해, 사용될 수 있다. 상기 표지가 효소인 경우, 검출은 당업계에 공지된 현재 이용되는 비색분석(colorimetric) 기술, 분광 광도 측정(spectrophotometric) 기술, 형광 분광 측정(fluorospectrophotometric) 기술, 전류 측정(amperometric) 기술 또는 가스 측정(gasometric) 기술 중 임의의 기술에 의해 수행될 수 있다. 이는, 상기 항체와 PD-1 사이에 복합체의 형성을 허용하는 조건에서, 항-PD-1 항체로 시료 또는 대조군 시료에 접촉함으로써, 달성될 수 있다. 상기 항체와 PD-1로 형성된 임의의 복합체는 시료 및 대조군에서 검출 및 비교된다. PD-1에 대한 본 명세서에 기재된 항체의 특이적 결합에 비추어, 상기 항체는 세포 표면에서의 PD-1 발현을 특이적으로 검출하는데 사용될 수 있다. 본 명세서에 기재된 상기 항체는 면역친화성 정제를 통해 PD-1을 정제하는데에도 사용될 수 있다. 또한, 본 명세서에 포함된 것은, 예를 들어, PD-1 또는 PD-1/PD-1 리간드 복합체의 존재수준을 정량 분석하기 위한 시험 키트, 키트 또는 부품들의 키트의 형태로 제조될 수 있는 분석 시스템이다. 상기 시스템, 시험 키트, 키트 또는 부품들의 키트는 표지된 성분, 예를 들어, 표지된 항체 및 하나 이상의 추가적 면역화학 시약을 포함할 수 있다.
5.5. 폴리뉴클레오티드, 벡터 및 항-PD-1 항체 생산방법
다른 양태에서, 본 명세서에서 제공된 것은 PD-1(예를 들어, 인간 PD-1) 항원에 특이적으로 결합하는 본 명세서에 기재된 항체를 코딩하는 뉴클레오티드 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드, 또는 그(예를 들어, 경쇄 가변 영역 및/또는 중쇄 가변 영역)의 단편, 및 벡터, 예를 들어, 숙주세포(예를 들어, 대장균 및 포유동물 세포)에서 재조합 발현을 위한 그러한 폴리뉴클레오티드를 포함하는 벡터이다. 본 명세서에서 제공된 것은, 본 명세서에서 제공된 임의의 항체의 중쇄 및/또는 경쇄를 코딩하는 뉴클레오티드 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드 뿐만 아니라, 그러한 폴리뉴클레오티드 서열을 포함하는 벡터, 예를 들어, 숙주 세포, 예를 들어, 포유 동물 세포에서 그의 효과적인 발현을 위한 발현 벡터이다.
본 명세서에 사용된 바와 같이, "분리된" 폴리뉴클레오티드 또는 핵산 분자는 핵산 분자의 천연 공급원(예를 들어, 마우스 또는 인간)에 존재하는 다른 핵산 분자로부터 분리된 것이다. 또한, cDNA 분자와 같은 "분리된" 핵산 분자는 재조합 기술에 의해 제조될 때 다른 세포 물질 또는 배양 배지가 실질적으로 존재하지 않거나, 또는 화학적으로 합성될 때 화학 전구 물질 또는 다른 화학 물질이 실질적으로 존재하지 않을 수 있다. 예를 들어, 상기 "실질적으로 존재하지 않는다"라는 용어는, 다른 물질, 예를 들어, 세포 물질, 배양 배지, 다른 핵산 분자, 화학 전구 물질, 및/또는 다른 화학 물질을 약 15%, 10%, 5%, 2%, 1%, 0.5% 또는 0.1% 미만(특히 약 10% 미만)으로 가지는 폴리뉴클레오티드 또는 핵산 분자의 생산물을 포함한다. 특정 실시양태에서, 본 명세서에 기재된 항체를 코딩하는 핵산 분자는 분리되거나 정제된다.
특정 양태에서, 본 명세서에서 제공된 것은 PD-1 폴리펩티드(예를 들어, 인간 PD-1)에 특이적으로 결합하고 본 명세서에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 항체를 코딩하는 뉴클레오티드 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드 뿐만 아니라, PD-1 폴리펩티드에 대한 결합(예를 들어, 용량 의존적인 방식으로)을 위한 이러한 항체와 경쟁하고, 이러한 항체의 것과 동일한 에피토프에 결합하는 항체이다.
특정 양태에서, 본 명세서에서 제공된 것은, 본 명세서에 기재된 항체의 경쇄 또는 중쇄를 코딩하는 뉴클레오티드 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드이다.
상기 폴리뉴클레오티드는, 본 명세서에 기재된 항체(예를 들어, 표 3 및 5 참조)의 VL FR 및 CDR을 포함하는 경쇄를 코딩하는 뉴클레오티드 서열 또는 본 명세서에 기재된 항체(예를 들어, 표 2 및 4 참조)의 VH FR 및 CDR을 포함하는 중쇄를 코딩하는 뉴클레오티드 서열을 포함할 수 있다.
또한, 본 명세서에서 제공된 것은, 예를 들어, 코돈/RNA 최적화, 이종 신호서열로의 대체 및 mRNA 불안정성 요소의 제거에 의해 최적화된 항-PD-1 항체를 코딩하는 폴리뉴클레오티드이다. 코돈 변화를 도입하거나 및/또는 mRNA에서 억제 영역을 제거함에 의한 재조합 발현을 위한 항 PD-1 항체 또는 이의 단편(예를 들어, 경쇄, 중쇄, VH 도메인 또는 VL 도메인)을 코딩하는 최적화된 핵산을 생성하는 방법은, 예를 들어, 미국등록특허 5,965,726; 6,174,666; 6,291,664; 6,414,132; 및 6,794,498에 기재된 최적화 방법을 적용함으로써 수행될 수 있는데, 이들 모두는 그 전체가 본 명세서에 참고자료로 인용되었다. 예를 들어, RNA 내의 잠재적 절단 부위 및 불안정성 요소(예를 들어, A/T 또는 A/U 풍부 요소)는 재조합 발현을 위한 RNA의 안정성을 증가시키기 위해 핵산 서열에 의해 코딩되는 아미노산을 변화하지 않고 돌연변이될 수 있다. 상기 변화는, 예를 들어, 동일한 아미노산에 대한 대체 코돈을 사용한 유전 코드의 축퇴(degeneracy)를 이용한다. 일부 실시양태에서, 보존적 돌연변이체, 예를 들어, 유사한 화학적 구조 및 원래의 아미노산과 같은 특성 및/또는 기능을 갖는 유사한 아미노산을 코딩하는 하나 이상의 코돈을 변화시키는 것이 바람직할 수 있다. 이러한 방법은, 최적화되지 않은 폴리뉴클레오티드에 의해 코딩되는 항-PD-1 항체의 발현에 비하여, 항 PD-1 항체 또는 그의 단편의 발현을 적어도 1배, 2배, 3배, 4배, 5배, 10배, 20배, 30배, 40배, 50배, 60배, 70배, 80배, 90배, 또는 100배 또는 그 이상으로 증가시킬 수 있다.
어떤 실시양태에서, 본 명세서에 기재된 항-PD-1 항체 또는 이의 단편(예를 들어, VL 도메인 및/또는 VH 도메인)을 코딩하는 최적화된 폴리뉴클레오티드 서열은 본 명세서에 기재된 항-PD-1 항체 또는 그의 단편(예를 들어, VL 도메인 및/또는 VH 도메인)을 코딩하는 최적화되지 않은 폴리뉴클레오티드 서열의 안티센스(예를 들어, 상보적인) 폴리뉴클레오티드에 혼성화될 수 있다. 특정 실시양태에서, 본 명세서에 기재된 항-PD-1 항체 또는 이의 단편을 코딩하는 최적화된 뉴클레오티드 서열은, 높은 수준의 엄격한 조건하에서, 본 명세서에 기재된 항-PD-1 항체 또는 그의 단편을 코딩하는 최적화되지 않은 폴리뉴클레오티드 서열의 안티센스 폴리뉴클레오티드와 혼성화한다. 특정 실시양태에서, 본 명세서에 기재된 항-PD-1 항체 또는 이의 단편을 코딩하는 최적화된 뉴클레오티드 서열은, 높은 수준, 중간수준 또는 낮은 수준의 엄격한 혼성화 조건하에서, 본 명세서에 기재된 항-PD-1 항체 또는 그의 단편을 코딩하는 최적화되지 않은 뉴클레오티드 서열의 안티센스 폴리뉴클레오티드와 혼성화한다. 혼성화 조건에 관한 정보는, 예를 들어, 미국공개특허 2005/0048549(예를 들어, 72 내지 73문단)에 기재되었는데, 이는 그 전체가 본 명세서에 참고자료로 인용되었다.
당업계에 공지된 임의의 방법에 의해, 상기 폴리뉴클레오티드를 수득할 수 있고, 상기 폴리뉴클레오티드의 뉴클레오티드 서열을 결정할 수 있다. 본 명세서에 기재된 항체, 예를 들어, 표 1 내지 6에 기재된 항체 및 이들 항체의 변형된 버전을 코딩하는 뉴클레오티드 서열은, 당업계에 널리 공지된 방법을 사용하여 결정할 수 있는데, 즉, 특정 아미노산을 코딩하는 것으로 알려된 뉴클레오티드 코돈은 상기 항체를 코딩하는 핵산을 생성시키는 방식으로 조립된다. 상기 항체를 코딩하는 이러한 폴리뉴클레오티드는 화학적으로 합성된 올리고뉴클레오티드(예를 들어, 그 전체가 본 명세서에 참고자료로 인용된, Kutmeier G et al., (1994), BioTechniques 17: 242-6에 기재된 바와 같이)로부터 조립될 수 있는데, 대략적으로 이는 항체를 코딩하는 서열 부분을 포함하는 중첩 올리고뉴클레오티드의 합성, 이들 올리고뉴클레오티드의 어닐링 및 연결, 및 이후의 PCR에 의한 상기 연결된 올리고뉴클레오티드의 증폭을 포함한다.
대안적으로, 본 명세서에 기재된 항체를 코딩하는 폴리뉴클레오티드는 당업계에 공지된 방법(예를 들어, PCR 및 다른 분자 클로닝방법)을 사용하여 적합한 공급원(예를 들어, 하이브리도마)의 핵산으로부터 생성될 수 있다. 예를 들어, 공지된 서열의 3' 및 5'말단에 혼성화될 수 있는 합성 프라이머를 사용하는 PCR 증폭은 관심 항체를 생산하는 하이브리도마 세포로부터 수득한 게놈 DNA를 사용하여 수행될 수 있다. 이러한 PCR 증폭방법은 항체의 경쇄 및/또는 중쇄를 코딩하는 서열을 포함하는 핵산을 수득하는데 사용될 수 있다. 이러한 PCR 증폭방법은 항체의 경쇄 가변 영역 및/또는 중쇄 가변 영역을 코딩하는 서열을 포함하는 핵산을 수득하는데 사용될 수 있다. 상기 증폭된 핵산은 숙주세포 내 발현 및 추가적 클로닝, 예를 들어, 키메릭 및 인간화 항체를 생성하기 위한 벡터내로 클로닝될 수 있다.
특정 항체를 코딩하는 핵산을 포함하는 클론이 이용 가능하지 않지만, 상기 항체 분자의 서열이 알려져 있다면, 상기 서열의 3' 및 5'에 혼성화될 수 있는 합성 프라이머를 사용한 PCR 증폭 또는 식별하기 위한 특정 유전자 서열, 예를 들어, 항체를 코딩하는 cDNA 라이브러리로부터의 cDNA 클론에 특이적인 올리고뉴클레오티드 프로브를 사용한 클로닝에 의해, 면역 글로불린을 코딩하는 핵산은 화학적으로 합성되거나 또는 적절한 공급원(예를 들어, 항체 cDNA 라이브러리 또는 본 명세서에 기재된 항체를 발현하도록 선택된 하이브리도마 세포와 같은 항체를 발현하는 임의의 조직 또는 세포로부터 분리된 핵산, 바람직하게는 폴리 A+ RNA 또는 이로부터 생성된 cDNA 라이브러리)로부터 수득할 수 있다. 그런 다음, PCR에 의해 생성된 증폭된 핵산은 당업계에 공지된 임의의 방법을 사용하여 복제 가능한 클로닝 벡터내로 클로닝될 수 있다.
본 명세서에 기재된 항-PD-1 항체를 코딩하는 DNA는 통상적인 절차(예를 들어, 항-PD-1 항체의 중쇄 및 경쇄를 코딩하는 유전자에 특이적으로 결합할 수 있는 올리고 뉴클레오티드 프로브를 사용함에 의하여)를 사용하여 용이하게 분리되고, 서열이 결정될 수 있다. 하이브리도마 세포는 그러한 DNA의 원천으로서 제공할 수 있다. 일단 분리된 상기 DNA는 발현 벡터내에 위치될 수 있는데, 이어 달리 면역 글로불린 단백질을 생산하지 않는 대장균 세포, 시미언 COS 세포, CHO(Chinese hamster ovary) 세포(예를 들어, CHO GS System™ (Lonza)로부터 얻어진 CHO 세포), 또는 골수종 세포와 같은 숙주세포 내로 전달되어, 재조합 숙주세포 내에서 항-PD-1 항체의 합성을 수득한다.
전장 항체를 생성하기 위해, VH 또는 VL 뉴클레오티드 서열, 제한 부위 및 제한 부위를 보호하기 위한 인접 서열을 포함하는 PCR 프라이머는 scFv 클론에서 VH 또는 VL 서열을 증폭시키는데 사용될 수 있다. 당업자에게 공지된 클로닝 기술을 이용하여, PCR 증폭된 VH 도메인은 중쇄 불변 영역, 예를 들어, 인간 감마 4 불변 영역을 발현하는 벡터에 클로닝될 수 있고, PCR 증폭된 VL 도메인은 경쇄 불변 영역, 예를 들어, 인간 카파 또는 람다 불변 영역을 발현하는 벡터에 클로닝 될 수 있다. 어떤 실시양태에서, 상기 VH 또는 VL 도메인을 발현하기 위한 벡터는 EF-1α 프로모터, 분비 신호, 가변 영역을 위한 클로닝 부위, 불변 도메인 및 네오마이신과 같은 선택 마커를 포함한다. 또한, 상기 VH 및 VL 도메인은 필수적인 불변 영역을 발현하는 하나의 벡터내로 클로닝될 수 있다. 이어, 상기 중쇄 전환 벡터 및 경쇄 전환 벡터는 세포주 내로 공동 형질 도입되어, 당업자에게 공지된 기술을 사용하여 전장 항체, 예를 들어, IgG를 발현하는 안정하거나 또는 일시적인 세포주를 생성한다.
또한, 상기 DNA는, 예를 들어, 마우스의 서열 대신에 인간 중쇄 및 경쇄 불변 도메인을 위한 코딩 서열을 치환하거나 또는 비-면역 글로불린 폴리펩티드용 코딩 서열의 전체 또는 일부를 면역 글로불린 코딩 서열에 공유 결합시킴으로써 변형될 수 있다.
또한, 제공된 것은 높은 수준, 중간수준 또는 낮은 수준의 엄격한 혼성화 조건하에서 본 명세서에 기재된 항체를 코딩하는 폴리뉴클레오티드에 혼성화하는 폴리뉴클레오티드이다. 특정 실시양태에서, 본 명세서에 기재된 폴리뉴클레오티드는 높은 수준, 중간수준 또는 낮은 수준의 엄격한 혼성화 조건하에서 본 명세서에 제공된 VH 도메인 및/또는 VL 도메인을 코딩하는 폴리뉴클레오티드에 혼성화한다.
혼성화 조건은 당업계에 기재되어 있고 당업자에게 공지되어 있다. 예를 들어, 엄격한 조건에서의 혼성화는 약 45℃에서 6x SSC(sodium chloride/sodium citrate)에서 필터-결합된 DNA에 혼성화된 후, 약 50 내지 65℃에서 0.2x SSC/0.1% SDS로 1회 이상 세척하는 단계를 포함할 수 있고; 고도로 엄격한 조건에서의 혼성화는 약 45℃에서 6x SSC에서 필터-결합된 핵산에 혼성화된 후, 약 68℃에서 0.1x SSC/0.2% SDS로 1회 이상 세척하는 단계를 포함할 수 있다. 다른 엄격한 혼성화 조건에서의 혼성화는 당업자에게 공지되어 있고, 예를 들어, Ausubel FM et al., eds., (1989) Current Protocols in Molecular Biology, Vol. I, Green Publishing Associates, Inc. and John Wiley & Sons, Inc., New York at pages 6.3.1-6.3.6 and 2.10.3에 기재되어 있는데, 이는 그 전체가 본 명세서에 참고자료로 인용되었다.
어떤 양태에서, 본 명세서에서 제공된 것은 PD-1(예를 들어, 인간 PD-1)에 특이적으로 결합하는 본 명세서에 기재된 항체를 발현하는(예를 들어, 재조합적으로) 세포(예를 들어, 숙주 세포), 및 관련 폴리뉴클레오티드 및 발현 벡터이다. 본 명세서에서 제공된 것은 항-PD-1 항체를 코딩하는 뉴클레오티드 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드 또는 숙주 세포, 바람직하게는 포유 동물 세포에서 재조합 발현을 위한 단편를 포함하는, 벡터(예를 들어, 발현 벡터)이다. 또한, 본 명세서에서 제공된 것은 본 명세서에 기재된 항-PD-1 항체(예를 들어, 인간 또는 인간화 항체)를 재조합적으로 발현시키기 위한 벡터를 포함하는, 숙주 세포이다. 특정 양태에서, 본 명세서에서 제공된 것은 숙주 세포로부터 이러한 항체를 발현시키는 단계를 포함하는, 본 명세서에 기재된 항체를 생산하는 방법이다.
PD-1(예를 들어, 사람 PD-1)에 특이적으로 결합하는 본 명세서에 기재된 항체(예를 들어, 전장 항체, 항체의 중쇄 및/또는 경쇄 또는 본 명세서에 기재된 단일 사슬 항체)의 재조합 발현은, 상기 항체를 코딩하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 발현 벡터의 제작을 포함한다. 일단, 본 명세서에 기재된 항체 분자, 항체의 중쇄 및/또는 경쇄 또는 이의 단편(예를 들어, 중쇄 및/또는 경쇄 가변 영역)을 암호화하는 폴리뉴클레오티드가 수득되면, 상기 항체 분자 생산용 벡터는 당업계에 공지된 기술을 사용한 재조합 DNA 기술에 의해 생산될 수 있다. 따라서, 뉴클레오티드 서열을 코딩하는 항체 또는 항체 단편(예를 들어, 경쇄 또는 중쇄)을 포함하는 폴리뉴클레오티드를 발현함으로써 단백질을 제조하는 방법이 본 명세서에 기재되어 있다. 당업자에게 공지된 방법은 항체 또는 항체 단편(예를 들어, 경쇄 또는 중쇄) 코딩 서열 및 적절한 전사 및 번역 조절 신호를 포함하는 발현 벡터를 제작하는데 사용될 수 있다. 이들 방법은, 예를 들어, 시험관 조건에서 재조합 DNA 기술, 합성 기술 및 생체내 유전자 재조합을 포함한다. 또한, 본 명세서에서 제공된 것은, 프로모터에 작동가능하게 연결된, 본 명세서에 기재된 항체 분자, 항체의 중쇄 또는 경쇄, 항체의 중쇄 또는 경쇄 가변 영역 또는 이의 단편, 또는 중쇄 또는 경쇄 CDR을 코딩하는 뉴클레오티드 서열을 포함하는 복제가능한 벡터이다. 이러한 벡터는, 예를 들어, 항체 분자의 불변 영역(예를 들어, 그 전체가 본 명세서에 참고자료로 인용된 국제특허공개 WO 86/05807 및 WO 89/01036; 및 미국등록특허 5,122,464 참조)을 코딩하는 뉴클레오티드 서열을 포함할 수 있고, 항체의 가변 영역은 전체 중쇄, 전체 경쇄, 또는 전체 중쇄 및 경쇄의 발현용 이러한 벡터 내로 클로닝될 수 있다.
발현 벡터는 통상적인 기술에 의해 세포(예를 들어, 숙주 세포)에 도입될 수 있고, 이후 생성된 세포는 통상적인 기술에 의해 배양되어 본 명세서에 기재된 항체 또는 그의 단편을 생산할 수 있다. 따라서, 본 명세서에서 제공된 것은, 숙주세포에서 발현하기 위하여 프로모터에 작동가능하게 연결된, 본 명세서에 기재된 항체 또는 그의 단편, 또는 이의 중쇄 또는 경쇄 또는 이의 단편, 또는 본 명세서에 기재된 단일 사슬 항체를 코딩하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 숙주세포이다. 어떤 실시양태에서, 이중 사슬 항체의 발현을 위해, 상기 중쇄 및 경쇄 모두를 개별적으로 코딩하는 벡터는, 이하에서 설명되는 바와 같이 전체 면역글로불린 분자의 발현을 위해 숙주세포에서 공동 발현될 수 있다. 어떤 실시양태에서, 숙주 세포는 본 명세서에 기재된 항체의 중쇄 및 경쇄 또는 그의 단편 모두를 코딩하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 벡터를 포함한다. 특정 실시양태에서, 숙주 세포는 두 개의 상이한 벡터인, 본 명세서에 기재된 항체의 중쇄 또는 중쇄 가변 영역을 코딩하는 폴리뉴클레오티드 또는 이의 단편을 포함하는 제1 벡터 및 본 명세서에 기재된 항체의 경쇄 또는 경쇄 가변 영역을 코딩하는 폴리뉴클레오티드 또는 이의 단편을 포함하는 제2 벡터를 포함한다. 다른 실시양태에서, 제1 숙주세포는 본 명세서에 기재된 항체의 중쇄 또는 중쇄 가변 영역을 코딩하는 폴리뉴클레오티드 또는 그의 단편을 포함하는 제1 벡터를 포함하고, 제2 숙주세포는 본 명세서에 기재된 항체의 경쇄 또는 경쇄 가변 영역을 코딩하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 제2 벡터를 포함한다. 특정 실시양태에서, 제1 세포에 의해 발현되는 중쇄/중쇄 가변 영역은 제2 세포의 경쇄/경쇄 가변 영역과 연관되어, 본 명세서에 기재된 항-PD-1 항체를 형성한다. 어떤 실시양태에서, 본 명세서에서 제공된 것은 이러한 제1 숙주세포 및 이러한 제2 숙주세포를 포함하는 숙주세포의 군집이다.
특정 실시양태에서, 본 명세서에 제공된 것은, 본 명세서에 기재된 항-PD-1 항체의 경쇄/경쇄 가변 영역을 코딩하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 제1 벡터 및 본 명세서에 기재된 항-PD-1 항체의 중쇄/중쇄 가변 영역을 코딩하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 제2 벡터를 포함하는 벡터의 군집이다.
다양한 숙주-발현벡터 시스템은 본 명세서에 기재된 항체 분자를 발현시키는데 사용될 수 있다(예를 들어, 그 전체가 본 명세서에 참고자료로 인용된 미국등록특허 5,807,715 참조). 이러한 숙주-발현 시스템은 관심있는 코딩 서열이 생성되어 순차적으로 정제될 수 있는 운반체를 나타내지만, 적절한 뉴클레오티드 코딩 서열로 형질전환되거나 또는 형질도입될 때, 본래의 위치에서 본 명세서에 기재된 항체 분자를 발현할 수 있는 세포를 나타낸다. 이들은 이에 제한되지 않으나, 항체 코딩 서열을 포함하는 재조합 박테리오파지 DNA, 플라스미드 DNA 또는 코스미드 DNA 발현벡터로 형질전환된 박테리아(예를 들어, 대장균 및 바실러스균); 항체 코딩 서열을 포함하는 재조합 효모 발현벡터로 형질전환된 효모(예를 들어, 사카로마이세스 피치아); 항체 코딩 서열을 포함하는 재조합 바이러스 발현벡터(예를 들어, 배큘로 바이러스)로 감염된 곤충 세포 시스템; 재조합 바이러스 발현벡터(예를 들어, 콜리플라워 모자이크 바이러스, CaMV; 담배 모자이크 바이러스, TMV)로 감염되거나 또는 항체 코딩 서열을 포함하는 재조합 플라스미드 발현벡터(예를 들어, Ti 플라스미드)로 형질전환된 식물 세포 시스템(예를 들어, 클라미도모나스 레인하르드티(Chlamydomonas reinhardtii)와 같은 녹조류); 또는, 포유동물 세포의 게놈(예를 들어, 메탈로티오네인 프로모터)으로부터 유래되거나 또는 포유동물 바이러스(예를 들어, 아데노바이러스 후기 프로모터; 백시니아 바이러스 7.5K 프로모터)로부터 유래된 프로모터를 포함하는 재조합 발현 구조물을 보유하는 포유 동물 세포 시스템(예를 들어, COS(예를 들어, COS1 또는 COS), CHO, BHK, MDCK, HEK 293, NS0, PER.C6, VERO, CRL7O3O, HsS78Bst, HeLa 및 NIH 3T3, HEK-293T, HepG2, SP210, R1.1, B-W, L-M, BSC1, BSC40, YB/20 및 BMT10 세포)와 같은 미생물을 포함한다. 특정 실시양태에서, 본 명세서에 기재된 항체를 발현시키기 위한 세포는 CHO 세포, 예를 들어, CHO GS System ™(Lonza)의 CHO 세포이다. 특정 실시양태에서, 본 명세서에 기재된 항체를 발현하기 위한 세포는 인간 세포, 예를 들어, 인간 세포주이다. 특정 실시양태에서, 포유류 발현벡터는 pOptiVEC ™ 또는 pcDNA3.3이다. 특정 실시양태에서, 특히 전체 재조합 항체 분자의 발현을 위한 대장균 또는 진핵 세포(예를 들어, 포유류 세포)와 같은 박테리아 세포가 재조합 항체 분자의 발현에 사용된다. 예를 들어, 인간의 사이토메갈로 바이러스로부터의 주요 중간 조기 유전자 프로모터 요소와 같은 벡터와 함께, CHO(Chinese hamster ovary) 세포와 같은 포유 동물 세포는 항체를 위한 효과적인 발현 시스템이다(Foecking MK & Hofstetter H (1986) Gene 45: 101-5; 및 Cockett MI et al., (1990) Biotechnology 8(7): 662-7, 이들 각각은 그 전체가 본 명세서에 참고자료로 인용되었다). 어떤 실시양태에서, 본 명세서에 기재된 항체는 CHO 세포 또는 NS0 세포에 의해 생산된다. 특정 실시양태에서, PD-1(예를 들어, 인간 PD-1)에 특이적으로 결합하는 본 명세서에 기재된 항체를 코딩하는 뉴클레오티드 서열의 발현은 구성성 프로모터, 유도성 프로모터 또는 조직특이적 프로모터에 의해 조절된다.
박테리아 시스템에서, 다수의 발현벡터는 발현되는 항체 분자를 위해 의도된 용도에 따라 유리하게 선택될 수 있다. 예를 들어, 항체 분자의 약학 조성물의 생성을 위해 이러한 항체가 대량으로 생성될 때, 용이하게 정제된 높은 수준의 융합 단백질 생산물의 발현을 지시하는 벡터가 바람직할 수 있다. 이러한 벡터는, 이에 제한되지 않으나, 항체 코딩 서열이 lacZ 코딩 영역의 프레임 내에서 상기 벡터에 개별적으로 연결되어 융합 단백질이 생산될 수 있는 대장균 발현벡터 pUR278(Ruether U & Mueller-Hill B (1983) EMBO J 2: 1791-1794); pIN 벡터(Inouye S & Inouye M (1985) Nuc Acids Res 13: 3101-3109; Van Heeke G & Schuster SM (1989) J Biol Chem 24: 5503-5509); 및 이의 유사체를 포함하는데, 이들 모두는 그 전체가 본 명세서에 참고자료로 인용되었다. 예를 들어, pGEX 벡터 역시 GST(glutathione 5-transferase)와의 융합 단백질로서, 외래 폴리 펩티드를 발현하는데 사용될 수 있다. 일반적으로, 이러한 융합 단백질은 가용성이며, 매트릭스 글루타티온 아가로스 비드에 흡착 및 결합한 후, 유리된 글루타티온의 존재 하에서 용출됨에 의하여 파쇄된 세포로부터 용이하게 정제될 수 있다. 상기 pGEX 벡터는 트롬빈 또는 인자 Xa 프로테아제 절단 부위를 포함하도록 설계되어, 복제된 표적 유전자 산물이 GST 모이어티로부터 해리될 수 있다.
곤충 시스템에서, AcNPV(Autographa californica nuclear polyhedrosis virus)는 외래 유전자를 발현하는 벡터로 사용될 수 있다. 상기 바이러스는 스포돕테라 프루지페르다(Spodoptera frugiperda) 세포에서 성장한다. 상기 항체 코딩 서열은 상기 바이러스의 비-필수 영역(예를 들어, 폴리헤드린 유전자)에 개별적으로 클로닝되고, AcNPV 프로모터(예를 들어, 폴리헤드린 프로모터)하에 위치할 수 있다.
포유류 숙주세포에서, 다수의 바이러스-기반 발현 시스템이 이용될 수 있다. 아데노 바이러스가 발현벡터로 사용되는 경우, 관심있는 항체 코딩 서열은 아데노 바이러스 전사/번역 조절 복합체, 예를 들어, 후기 프로모터 및 3가지로 이루어진 리더 서열에 연결될 수 있다. 이어, 이러한 키메라 유전자는 시험관 조건 또는 생체내 재조합에 의해 아데노바이러스 게놈에 삽입될 수 있다. 바이러스 게놈의 비-필수 영역(예를 들어, E1 또는 E3 영역)으로의 삽입은 감염된 숙주에서 생존하고, 항체 분자를 발현 할 수있는 재조합 바이러스를 생성할 것이다(예를 들어, 그 전체가 본 명세서에 참고자료로 인용된 Logan J & Shenk T (1984) PNAS 81(12): 3655-9 참조). 특이적인 개시 신호 역시 삽입된 항체 코딩 서열의 효율적인 번역을 위해 요구될 수 있다. 이들 신호는 ATG 개시코돈 및 인접서열을 포함한다. 또한, 상기 개시 코돈은 전체 삽입물의 번역을 보장하기 위해 원하는 코딩 서열의 판독 프레임과 동등해야 한다. 이러한 외인성 번역 조절 신호 및 개시 코돈은 천연 및 합성의 다양한 원천이 될 수 있다. 발현 효율은 적절한 전사 인핸서 요소, 전사 종결자 등을 포함시킴으로써 향상될 수 있다(예를 들어, 그 전체가 본 명세서에 참고자료로 인용된 Bitter G et al., (1987) Methods Enzymol. 153: 516-544 참조).
부가적으로, 숙주세포는 삽입된 서열의 발현을 조절하거나 또는 원하는 특정 방식으로 유전자 산물을 변형 및 가공하도록 선택될 수 있다. 단백질 산물의 그러한 변형(예를 들어, 당화) 및 가공(예를 들어, 절단)은 단백질의 기능에 중요것이 될 수 있다. 상이한 숙주세포는 단백질 및 유전자 산물의 번역 후 가공 및 변형을 위한 특성 및 특이적 작용기작을 갖는다. 적절한 세포주 또는 숙주 시스템이 발현된 외래 단백질의 정확한 변형 및 가공을 보장하기 위해 선택될 수 있다. 이를 위해서, 유전자 산물의 일차 전사, 당화 및 인산화의 적절한 가공을 위한 세포질 성분(cellular machinery)을 보유하는 진핵생물 숙주세포가 사용될 수 있다. 이러한 포유 동물 숙주세포는, 이에 제한되지 않으나, CHO, VERO, BHK, Hela, MDCK, HEK 293, NIH 3T3, W138, BT483, Hs578T, HTB2, BT2O 및 T47D, NS0(어떠한 면역글로불린 사슬도 내재적으로 생산하지 않는 마우스의 골수종 세포주), CRL7O3O, COS(예를 들어, COS1 또는 COS), PER.C6, VERO, HsS78Bst, HEK-293T, HepG2, SP210, R1.1, B-W, L-M, BSC1, BSC40, YB/20, BMT10 및 HsS78Bst 세포를 포함한다. 어떤 실시양태에서, 본 명세서에 기재된 항-PD-1 항체는 포유동물 세포, 예를 들어, CHO 세포에서 생산된다.
특정 실시양태에서, 본 명세서에 기재된 상기 항체는 푸코스 함량을 감소시키거나 또는 푸코스를 포함하지 않는다. 이러한 항체는 당업자에게 공지된 기술을 사용하여 제조 할 수 있다. 예를 들어, 상기 항체는 푸코실레이트 능력이 불완전하거나 또는 결핍된 세포에서 발현될 수 있다. 특정 실시예에서, α1,6-푸코실전이효소의 대립 유전자 모두가 결실된 세포주는 감소된 푸코즈 함량을 갖는 항체를 생산하는데 사용될 수 있다. Potelligent® 시스템(Lonza)은 푸코스 함량이 감소된 항체를 생산하는 데 사용할 수 있는 시스템의 예시이다.
재조합 단백질의 장기간, 고-수율 생산을 위해, 안정한 발현 세포를 생성할 수 있다. 예를 들어, 본 명세서에 기재된 항-PD-1 항체를 안정하게 발현하는 세포주가 조작될 수 있다. 특정 실시양태에서, 본 명세서에서 제공된 세포는, 본 명세서에 기재된 항체를 형성하기 위해 연관되는 경쇄/경쇄 가변 영역 및 중쇄/중쇄 가변 영역을 안정하게 발현한다.
어떤 양태에서, 바이러스 복제 기원을 포함하는 발현벡터를 사용하기 보다는, 숙주세포가 적절한 발현 조절 요소(예를 들어, 프로모터, 인핸서, 서열, 전사 종결자, 폴리아데닐화 부위 등)에 의해 조절된 DNA 및 선택가능한 마커로 형질 전환될 수 있다. 외래 DNA/폴리뉴클레오티드를 도입한 후, 조작된 세포는 농축 배지에서 1 내지 2일 동안 성장시킨 다음, 선택 배지로 전환시킬 수 있다. 재조합 플라스미드의 선택 마커는 선택에 대한 내성을 부여하고, 세포가 플라스미드를 염색체에 안정적으로 도입하고, 성장하여 차례로 클로닝되어 세포주로 확대될 수 있는 초점(foci)을 형성하게 한다. 이러한 방법은 본 명세서에 기재된 항-PD-1 항체 또는 이의 단편을 발현하는 세포주를 조작하는데 유리하게 사용될 수 있다. 이러한 조작된 세포주는 항체 분자와 직접적 또는 간접적으로 반응하는 조성물의 스크리닝 및 평가에 특히 유용할 수 있다.
다수의 선택 시스템은, 이에 제한되지 않으나, tk-, hgprt- 또는 aprt-세포에서 각각 허피스 심플렉스 바이러스 티미딘 키나제(Wigler M et al., (1977) Cell 11(1): 223-32), 하이포잔틴구아닌 포스포리보실트랜스퍼라제(Szybalska EH & Szybalski W (1962) PNAS 48(12): 2026-2034) 및 아데닌 포스포리보실트랜스퍼라제(Lowy I et al., (1980) Cell 22(3): 817-23) 유전자에 사용될 수 있는데, 이들 모두는 그 전체가 본 명세서에 참고자료로 인용되었다. 또한, 대사 길항물질(antimetabolite) 저항성은 하기 유전자의 선택기반으로서 사용될 수 있는데: 메토트렉세이트에 대한 내성을 부여하는 dhfr(Wigler M et al., (1980) PNAS 77(6): 3567-70; O'Hare K et al., (1981) PNAS 78: 1527-31); 마이코페놀산에 대한 내성을 부여하는 gpt(Mulligan RC & Berg P (1981) PNAS 78(4): 2072-6); 아미노글리코시드 G-418에 대한 내성을 부여하는 neo(Wu GY & Wu CH (1991) Biotherapy 3: 87-95; Tolstoshev P (1993) Ann Rev Pharmacol Toxicol 32: 573-596; Mulligan RC (1993) Science 260: 926-932; 및 Morgan RA & Anderson WF (1993) Ann Rev Biochem 62: 191-217; Nabel GJ & Felgner PL (1993) Trends Biotechnol 11(5): 211-5); 및 하이그로마이신에 대한 내성을 부여하는 hygro(Santerre RF et al., (1984) Gene 30(1-3): 147-56), 이들 모두는 그 전체가 본 명세서에 참고자료로 인용되었다. 재조합 DNA 기술의 분야에서 일반적으로 공지된 방법은 원하는 재조합 클론을 선택하기 위해 일상적으로 적용될 수 있으며, 그러한 방법은, 예를 들어, Ausubel FM et al., (eds.), Current Protocols in Molecular Biology, John Wiley & Sons, NY (1993); Kriegler M, Gene Transfer and Expression, A Laboratory Manual, Stockton Press, NY (1990); and in Chapters 12 and 13, Dracopoli NC et al., (eds.), Current Protocols in Human Genetics, John Wiley & Sons, NY (1994); Colb-re-Garapin F et al., (1981) J Mol Biol 150: 1-14에 기재되어 있는데, 이들은 그 전체가 본 명세서에 참고자료로 인용되었다.
항체 분자의 발현 수준은 벡터 증폭에 의해 증가될 수 있다(그 전체가 본 명세서에 참고자료로 인용된 Bebbington CR & Hentschel CCG, The use of vectors based on gene amplification for the expression of cloned genes in mammalian cells in DNA cloning, Vol. 3(Academic Press, New York, 1987) 참조). 항체를 발현하는 벡터 시스템에서 마커가 증폭될 수 있을 때, 숙주세포의 배양물에 존재하는 억제제 수준의 증가는 마커 유전자의 복제수를 증가시킬 것이다. 증폭된 영역이 항체 유전자와 관련되기 때문에, 항체의 생산 또한 증가할 것이다(그 전체가 본 명세서에 참고자료로 인용된 Crouse GF et al.,(1983) Mol Cell Biol 3: 257-66 참조).
상기 숙주세포는 본 명세서에 기재된 2 개 이상의 발현벡터, 중쇄 유래된 폴리펩티드를 코딩하는 제1 벡터 및 경쇄 유래된 폴리펩티드를 코딩하는 제2 벡터로 동시-형질 도입될 수 있다. 상기 2개 벡터는 중쇄 및 경쇄 폴리펩티드의 동일한 발현을 가능하게하는 동일한 선택가능한 마커를 포함할 수 있다. 상기 숙주세포는 둘 이상의 발현벡터의 서로 다른 양으로 동시-형질 도입될 수 있다. 예를 들어, 숙주세포는 제1 벡터 및 제2 벡터의 하기 비율 중의 어느 하나로 형질도입될 수 있다: 1:1, 1:2, 1:3, 1:4, 1:5, 1:6, 1:7, 1:8, 1:9, 1:10, 1:12, 1:15, 1:20, 1:25, 1:30, 1:35, 1:40, 1:45, 또는 1:50.
대안적으로, 단일 벡터가 중쇄 및 경쇄 폴리펩티드 모두를 암호화하는데 사용될 수 있고, 이들을 발현할 수 있다. 이러한 경우, 상기 경쇄는 독성을 갖는 자유 중쇄가 과다하게 발현되는 것을 방지하기 위하여, 상기 중쇄 앞쪽에 위치하여야 한다(Proudfoot NJ (1986) Nature 322: 562-565; 및 Kohler G (1980) PNAS 77: 2197-2199, 이들 각각은 그 전체가 본 명세서에 참고자료로 인용되었다). 상기 중쇄 및 경쇄용 코딩 서열은 cDNA 또는 게놈 DNA를 포함 할 수 있다. 상기 발현벡터는 모노시스트로닉(monocistronic) 또는 멀티시스트로닉(multistronic) 일 수 있다. 멀티시스트론 핵산 구조물은 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 또는 그 이상, 또는 2 내지 5, 5 내지 10 또는 10 내지 20 범위의 유전자/뉴클레오티드 서열을 코딩할 수 있다. 예를 들어, 바이시스트론 핵산 구조물은 프로모터, 제1 유전자(예를 들어, 본 명세서에 기재된 항체의 중쇄) 및 제2 유전자 및(예를 들어, 본 명세서에 기재된 항체의 경쇄)를 순서대로 포함할 수 있다. 이러한 발현벡터에서, 상기 두 유전자의 전사는 프로모터에 의해 유도될 수 있는 반면, 제1 유전자로부터의 mRNA의 번역은 캡-의존적 스캐닝 작용기작에 의해 이루어질 수 있고, 제2 유전자로부터의 mRNA의 번역은, 예를 들어, IRES에 의한 캡-비의존적 작용기작에 의해 이루어질 수 있다.
본 명세서에 기재된 항체 분자가 재조합 발현에 의해 생산되면, 이는, 면역글로불린 분자의 정제를 위한 당업계의 공지된 임의의 방법, 예를 들어, 크로마토그래피(예를 들어, 이온 교환, 친화성, 특히 특이적 항원과 단백질 A에 대한 친화성에 의해 및 크기 컬럼크로마토그래피), 원심분리, 용해도 차이 또는 단백질 정제를 위한 임의의 다른 표준 기술에 의해 정제될 수 있다. 또한, 본 명세서에 기재된 항체는, 정제를 촉진하기 위해 본 명세서에 기재되거나 또는 당업계에 공지된 이종 폴리펩티드 서열에 융합될 수 있다.
특정 실시양태에서, 본 명세서에 기재된 항체는 분리되거나 정제된다. 일반적으로, 분리된 항체는 분리된 항체와 상이한 항원 특이성을 갖는 다른 항체가 실질적으로 존재하지 않는 항체이다. 예를 들어, 특정 실시양태에서, 본 명세서에 기재된 항체의 제작물은 세포 물질 및/또는 화학적 전구 물질을 실질적으로 포함하지 않는다. "세포 물질이 실질적으로 존재하지 않는다"는 용어는 항체가 분리되거나 재조합적으로 생산된 세포의 세포성분으로부터 분리된 항체의 제작물을 포함한다. 따라서, 세포 물질이 실질적으로 존재하지 않는 항체는 이종 단백질(또는 본 명세서에서 "오염 단백질"이라고도 함)을 약 30%, 20%, 10%, 5%, 2%, 1%, 0.5% 또는 0.1%(건조 중량 기준) 미만으로 가지는 항체 제작물 및/또는 항체 변이체, 예를 들어, 항체의 상이한 번역 후 변형된 형태 또는 항체의 다른 상이한 버젼(예를 들어, 항체 단편)을 포함한다. 항체가 재조합적으로 생산될 때, 또한, 일반적으로 배양 배지가 실질적으로 없는, 즉, 배양 배지는 단백질 제작물 부피의 약 20%, 10%, 2%, 1%, 0.5% 또는 0.1% 미만을 나타낸다. 항체가 화학합성에 의해 생산될 때, 일반적으로 화학 전구물질 또는 다른 화학물질이 실질적으로 없는, 즉, 단백질의 합성에 관여하는 화학 전구물질 또는 다른 화학물질로부터 분리된다. 따라서, 항체의 그러한 제작물은 관심있는 항체가 아닌 화학 전구물질 또는 화합물의 약 30%, 20%, 10% 또는 5%(건조 중량 기준) 미만을 갖는다. 특정 실시양태에서, 본 명세서에 기재된 항체는 분리되거나 정제된다.
PD-1(예를 들어, 인간 PD-1)에 특이적으로 결합하는 항체 또는 그의 단편은, 예를 들어, 화학적 합성 또는 재조합 발현 기술에 의해 항체의 합성을 위한 당업계에 공지된 임의의 방법에 의해 제조될 수 있다. 본 명세서에 기재된 방법은, 달리 명시되지 않는 한, 분자 생물학, 미생물학, 유전 분석, 재조합 DNA, 유기 화학, 생화학, PCR, 올리고뉴클레오티드 합성 및 변형, 핵산 혼성화 및 당해 기술 분야의 관련 분야에서 통상적인 기술을 사용한다. 이들 기술은, 예를 들어, 본 명세서에 인용된 참고 문헌에 기재되어 있고, 상기 문헌에서 충분히 설명되어 있다. 예를 들어,Maniatis T et al., (1982) Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press; Sambrook J et al., (1989), Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Second Edition, Cold Spring Harbor Laboratory Press; Sambrook J et al., (2001) Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY; Ausubel FM et al., Current Protocols in Molecular Biology, John Wiley & Sons (1987 and annual updates); Current Protocols in Immunology, John Wiley & Sons (1987 and annual updates) Gait (ed.) (1984) Oligonucleotide Synthesis: A Practical Approach, IRL Press; Eckstein (ed.) (1991) Oligonucleotides and Analogues: A Practical Approach, IRL Press; Birren B et al., (eds.) (1999) Genome Analysis: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press를 참조하는데, 이들 모두는 그 전체가 본 명세서에 참고자료로 인용되었다.
특정 실시양태에서, 본 명세서에 기재된 항체는 생성, 예를 들어, DNA 서열의 유전 공학을 통한 합성을 포함하는 임의의 수단에 의해, 제조(예를 들어, 재조합 항체), 발현, 생성 또는 분리된 항체이다. 어떤 실시양태에서, 이러한 항체는 생체내에서 동물 또는 포유류(예를 들어, 인간)의 항체 생식선 레퍼토리 내에 자연적으로 존재하지 않는 서열(예를 들어, DNA 서열 또는 아미노산 서열)을 포함한다.
일 양태에서, 본 명세서에서 제공된 것은, 본 명세서에 기재된 세포 또는 숙주세포를 배양하는 단계를 포함하는, PD-1(예를 들어, 인간 PD-1)에 특이적으로 결합하는 항체를 제조하는 방법이다. 바람직하게는, 상기 방법은 시험관 조건에서 수행된다. 어떤 양태에서, 본 명세서에서 제공된 것은, 본 명세서에 기재된 세포 또는 숙주세포(예를 들어, 본 명세서에 기재된 항체를 코딩하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 세포 또는 숙주세포)를 사용하여 상기 항체를 발현(예를 들어, 재조합적으로 발현)시키는 단계를 포함하는, PD-1(예를 들어, 인간 PD-1)에 특이적으로 결합하는 항체를 제조하는 방법이다. 특정 실시양태에서, 상기 세포는 분리된 세포이다. 특정 실시양태에서, 상기 외인성 폴리뉴클레오티드는 세포 내로 도입되었다. 특정 실시양태에서, 상기 방법은 세포 또는 숙주세포로부터 수득한 항체를 정제하는 단계를 추가로 포함한다.
다클론 항체를 생산하는 방법은 당업계에 공지되어있다(예를 들어, Chapter 11 in: Short Protocols in Molecular Biology, (2002) 5th Ed., Ausubel FM et al., eds., John Wiley and Sons, New York 참조, 이는 그 전체가 본 명세서에 참고자료로 인용되었다).
단클론 항체는 하이브리도마, 재조합 및 파지 디스플레이 기술 또는 이들의 조합의 사용을 포함하는 당업계에 공지된 다양한 기술을 사용하여 제조될 수 있다. 예를 들어, 단클론 항체는 당업계에 공지되어 있고, 예를 들어, Harlow E & Lane D, Antibodies: A Laboratory Manual,(Cold Spring Harbor Laboratory Press, 2nd ed. 1988); Hammerling GJ et al., in: Monoclonal Antibodies and T-Cell Hybridomas 563 681(Elsevier, N.Y., 1981)에 기재되어 있는 것을 포함하는 하이브리도마 기술을 이용하여 생산될 수 있는데, 이들 각각은 그 전체가 본 명세서에 참고자료로 인용되었다. 본 명세서에서 사용된 용어 "단클론 항체"는 하이브리도마 기술을 통해 생산된 항체에 제한되지 않는다. 예를 들어, 단클론 항체는 본 명세서에 기재된 항체 또는 이의 단편, 예를 들어, 이러한 항체의 경쇄 및/또는 중쇄를 외인성으로 발현시키는 숙주세포로부터 재조합적으로 생산될 수 있다.
특정 실시양태에서, 본 명세서에 사용된 바와 같이, "단클론 항체"는, 단일 세포(예를 들어, 재조합 항체를 생산하는 하이브리도마 또는 숙주세포)에 의해 생산되는 항체인데, 상기 항체는, 예를 들어, 당업계에 공지되거나 또는 본 명세서에서 제공된 실시예의 ELISA 또는 다른 항원-결합 또는 경쟁적 결합 분석법에 의해 결정된 바와 같이, PD-1(예를 들어, 인간 PD-1)에 특이적으로 결합한다. 특정 실시양태에서, 단클론 항체는 키메라 항체 또는 인간화 항체일 수 있다. 어떤 실시양태에서, 단클론 항체는 1가(monovalent) 항체 또는 다가(예를 들어, 2가) 항체이다. 특정 실시양태에서, 단클론 항체는 단일특이적 또는 다중특이적 항체(예를 들어, 이중특이적 항체)이다. 본 명세서에 기재된 단클론 항체는, 예를 들어, 그 전체가 본 명세서에 참고자료로 인용된 Kohler G & Milstein C (1975) Nature 256: 495에 기재된 하이브리도마 방법에 의해 제조될 수 있거나, 또는, 예를 들어, 본 명세서에 기재된 기술을 이용한 파지 라이브러리로부터 분리될 수 있다. 클론 세포주 및 이에 의해 발현된 단클론 항체의 생산을 위한 다른 방법은 당업계에 공지되어 있다((예를 들어, Chapter 11 in: Short Protocols in Molecular Biology, (2002) 5th Ed., Ausubel FM et al., supra 참조).
하이브리도마 기술을 사용하여 특이적 항체를 생산하고 스크리닝하는 방법은 일상적이고 당업계에 공지되어 있다. 예를 들어, 하이브리도마 방법에서, 마우스 또는 양, 염소, 토끼, 래트, 햄스터 또는 원숭이와 같은 다른 적절한 숙주동물은, 면역화를 위해 사용된 상기 단백질(예를 들어, PD-1(예를 들어, 사람 PD-1))에 특이적으로 결합할 항체를 생산하거나 또는 생산할 수 있는 림프구를 유도하도록 면역화된다. 대안적으로, 림프구는 시험관 조건에서 면역화될 수 있다. 이어, 림프구는 폴리에틸렌 글리콜과 같은 적절한 융합제를 사용하여 골수종 세포와 융합되어, 하이브리도마 세포를 형성한다(그 전체가 본 명세서에 참고자료로 인용된 Goding JW (Ed), Monoclonal Antibodies:Principles and Practice, pp.59-103 (Academic Press, 1986)). 또한, RIMMS(repetitive immunization multiple sites) 기술은 동물을 면역화하는데 사용될 수 있다(그 전체가 본 명세서에 참고자료로 인용된 Kilpatrick KE et al., (1997) Hybridoma 16:381-9)
일부 실시양태에서, 마우스(또는 랫트, 원숭이, 당나귀, 돼지, 양, 햄스터 또는 개와 같은 다른 동물)는 항원(예를 들어, PD-1(예를 들어, 인간 PD-1))으로 면역화될 수 있고, 면역반응이 검출되는데, 예를 들어, 항원에 특이적인 항체가 마우스 혈청에서 검출되고, 상기 마우스 비장을 적출하며, 비장세포는 분리된다. 그런 다음, 상기 비장세포는 공지된 방법에 의해, 임의의 적합한 골수종 세포, 예를 들어, ATCC®(American Type Culture Collection)(Manassas, VA)로부터 입수가능한 세포주 SP20로부터의 세포에 하이브리도마를 형성하도록 융합된다. 하이브리도마는 제한 희석(limited dilution)에 의해 선택되고 클로닝된다. 어떤 실시양태에서, 면역화된 마우스의 림프절이 적출되고, NS0 골수종 세포와 융합되었다.
이렇게 제조된 하이브리도마 세포는 바람직하게는 융합되지 않은, 모체 골수종 세포의 성장 및 생존을 억제하는 하나 이상의 물질을 포함하는 적절한 배지에 접종되고 성장된다. 예를 들어, 모체 골수종 세포에 효소 HGPRT(hypoxanthine guanine phosphoribosyl transferase) 또는 HPRT)가 결핍되면, 상기 하이브리도마용 배양 배지는 HGPRT 결핍 세포의 성장을 예방하는 하이포잔틴, 아미노프테린 및 티미딘을 포함할 것이다(HAT 배지).
특정 실시양태는 효율적으로 융합하고, 선택된 항체-생산 세포에 의한 항체의 안정한 고-수준 생산을 지원하며 및 HAT 배지와 같은 배지에 민감한 골수종 세포를 사용한다. 이들 골수종 세포주 중에서 NS0 세포주와 같은 마우스의 골수종 세포주 또는 미국 캘리포니아주 샌디에고의 Sark Institute Cell Distribution Center 로부터 입수가능한 MOPC-21 and MPC-11 마우스 조양으로부터 유래된 것 및 미국 메릴랜드주, 로크빌의 American Type Culture Collection 에서 입수가능한 SP-2 또는 X63-Ag8.653 세포이다. 또한, 인간 골수종 및 마우스-인간 헤테로 골수종 세포주는 인간 단클론 항체의 생산을 위해 기재되어있다(Kozbor D (1984) J Immunol 133: 3001-5; Brodeur et al., Monoclonal Antibody Production Techniques and Applications, pp. 51-63 (Marcel Dekker, Inc., New York, 1987), 이들 각각은 그 전체가 본 명세서에 참고자료로 인용되었다).
하이브리도마 세포가 성장하는 배양 배지가 PD-1(예를 들어, 인간 PD-1)에 대한 단클론 항체의 생산을 위해 분석된다. 하이브리도마 세포에 의해 생산된 단클론 항체의 결합 특이성은 당업계에 공지된 방법, 예를 들어, 면역침전 또는 RIA(radioimmunoassay) 또는 ELISA(enzyme-linked immunoabsorbent assay)과 같은 시험관 조건에서의 결합 분석법에 의해 결정된다.
하이브리도마 세포가 원하는 특이성, 친화도 및/또는 활성의 항체를 생산하는 것으로 확인한 후, 상기 클론은 한계 희석 과정에 의해 서브클로닝될 수 있고, 표준 방법으로 성장할 수 있다(Goding JW (Ed), Monoclonal Antibodies: Principles and Practice, supra). 이러한 목적을 위한 적절한 배양 배지는, 예를 들어, D-MEM 또는 RPMI 1640 배지를 포함한다. 또한, 상기 하이브리도마 세포는 동물에서 복수 종양으로서 생체내에서 성장할 수 있다.
서브클론에 의해 분비된 상기 단클론 항체는, 예를 들어, 단백질 A-세파로스, 히드록시아파타이트 크로마토그래피, 겔전기영동, 투석 또는 친화도 크로마토그래피와 같은 통상적인 면역글로불린 정제과정에 의해 배양배지, 복수액 또는 혈청으로부터 적절하게 분리된다.
본 명세서에 기재된 항체는 특정 PD-1(예를 들어, 인간 PD-1)을 인식하고, 당업자에게 공지된 임의의 기술에 의해 생성될 수 있는 항체 단편을 포함한다. 예를 들어, 본 명세서에 기재된 Fab 및 F(ab')2 단편은 파파인(Fab 단편을 생성하기 위한) 또는 펩신(F(ab')2 단편을 생성하기 위한)과 같은 효소를 사용하여 면역글로불린 분자의 단백질분해 절단에 의해 생산될 수 있다. Fab 단편은 항체 분자의 두 개의 동일한 암(arm) 중 하나에 상응하고, 중쇄의 VH 및 CH1 도메인과 쌍을 이루는 완전한 경쇄를 포함한다. F(ab')2 단편은 힌지영역에서 이황화결합에 의해 연결된 항체 분자의 2 개의 항원-결합 암을 포함한다.
추가로, 본 명세서에 기재된 상기 항체는 또한 당업계에 공지된 다양한 파지 디스플레이 방법을 사용하여 생성될 수 있다. 파지 디스플레이 방법에서, 기능성 항체 도메인은 그들을 코딩하는 폴리뉴클레오티드 서열을 갖는 파지 입자의 표면 상에 나타난다. 특히, VH 및 VL 도메인을 코딩하는 DNA 서열은 동물의 cDNA 라이브러리(예를 들어, 감염된 조직의 인간 또는 마우스의 cDNA 라이브러리)로부터 증폭된다. VH 및 VL 도메인을 코딩하는 상기 DNA는 PCR에 의해 scFv 링커와 함께 재조합되고 파지미드 벡터에 클로닝된다. 상기 벡터는 대장균에 전기충격법으로 도입되고 상기 대장균은 도우미 파지로 감염된다. 이러한 방법에 사용되는 파지는 전형적으로 fd 및 M13을 포함하는 섬유상의 파지이고, 상기 VH 및 VL 도메인은 통상적으로 상기 파지 유전자 III 또는 유전자 VIII 중 어느 하나에 재조합적으로 융합된다. 특정 항원에 결합하는 항원 결합 도메인을 발현하는 파지는 항원, 예를 들어, 표지 항원 또는 고체 표면 또는 비드에 결합되거나 포획된 항원을 사용하여 항원으로 선택되거나 동정될 수 있다. 본 명세서에 기재된 항체의 제조방법에 사용될 수 있는 파지 디스플레이 방법의 예시는 Brinkman U et al., (1995) J Immunol Methods 182: 41-50; Ames RS et al., (1995) J Immunol Methods 184: 177-186; Kettleborough CA et al., (1994) Eur J Immunol 24: 952-958; Persic L et al., (1997) Gene 187: 9-18; Burton DR & Barbas CF (1994) Advan Immunol 57: 191-280; PCT 출원번호 PCT/GB91/001134; 국제공개특허 WO 90/02809, WO 91/10737, WO 92/01047, WO 92/18619, WO 93/1 1236, WO 95/15982, WO 95/20401 및 WO 97/13844; 및 미국등록특허 5,698,426, 5,223,409, 5,403,484, 5,580,717, 5,427,908, 5,750,753, 5,821,047, 5,571,698, 5,427,908, 5,516,637, 5,780,225, 5,658,727, 5,733,743, 및 5,969,108에 기재된 것을 포함한다.
상기 참고 문헌에 기재된 바와 같이, 파지 선택 후, 상기 파지의 항체 코딩 영역은 분리되고, 인간 항체 또는 임의의 다른 원하는 항원 결합 단편을 포함하는 전체 항체를 생성하기 위해 사용될 수 있고, 포유동물 세포, 곤충세포, 식물세포, 효모 및 세균, 예를 들어, 하기에 기재된 것을 포함하는 임의의 원하는 숙주에서 발현될 수 있다. Fab, Fab' 및 F(ab')2 단편과 같이 항체 단편을 재조합적으로 생산하는 기술은, PCT 출원번호 WO 92/22324; Mullinax RL et al.,(1992) BioTechniques 12(6): 864-9; Sawai H et al.,(1995) Am J Reprod Immunol 34: 26-34; 및 Better M et al.,(1988) Science 240: 1041-1043 에 기재된 것과 같이, 당업계에 공지된 방법을 사용는 것이 사용될 수 있는데, 이들 모두는 그 전체가 본 명세서에 참고자료로 인용되었다.
어떤 실시양태에서, 전체 항체를 생성하기 위해, VH 또는 VL 뉴클레오티드 서열, 제한효소 부위 및 상기 제한효소 부위를 보호하기 위한 플랭킹 서열을 포함하는 PCR 프라이머가 주형, 예를 들어, scFv 클론으로부터 VH 또는 VL 서열을 증폭시키기 위해 사용될 수 있다. 당업자에게 공지된 클로닝 기술을 이용하여, 상기 PCR 증폭된 VH 도메인은 VH 불변 영역을 발현하는 벡터에 클로닝될 수 있고, 상기 PCR 증폭된 VL 도메인은 VL 불변 영역, 예를 들어, 인간 카파 또는 람다 불변 영역을 발현하는 벡터에 클로닝될 수 있다. 상기 VH 및 VL 도메인은 또한 필수 불변 영역을 발현하는 하나의 벡터에 클로닝될 수 있다. 이어, 상기 중쇄 전환 벡터 및 경쇄 전환 벡터는, 당업자에게 공지된 기술을 사용하여 전장 항체, 예를 들어, IgG를 발현하는 안정적 또는 일시적 세포주를 생성하기 위해 세포주에 공통 형질도입될 수 있다.
키메라 항체는 상기 항체의 상이한 부분이 상이한 면역 글로불린 분자로부터 유래된 분자이다. 예를 들어, 키메라 항체는 인간 항체의 불변 영역에 융합된 마우스 또는 래트 단클론 항체의 가변 영역을 포함할 수 있다. 키메라 항체를 생산하는 방법은 당업계에 공지되어있다. 예를 들어, Morrison SL (1985) Science 229: 1202-7; Oi VT & Morrison SL (1986) BioTechniques 4: 214-221; Gillies SD et al., (1989) J Immunol Methods 125: 191-202; 및 미국등록특허 5,807,715, 4,816,567, 4,816,397, 및 6,331,415를 참조하는데, 이들 모두는 그 전체가 본 명세서에 참고자료로 인용되었다.
인간화 항체는 미리 결정된 항원에 결합할 수 있고, 인간 면역글로불린의 아미노산 서열을 실질적으로 가지는 프레임워크 영역 및 비-인간 면역글로불린(예를 들어, 마우스의 면역글로불린)의 아미노산 서열을 실질적으로 가지는 CDR을 포함한다. 특정 실시양태에서, 인간화 항체는 또한 면역글로불린 불변 영역(Fc), 전형적으로 인간 면역글로불린의 적어도 일부를 포함한다. 상기 항체는 또한 중쇄의 CH1, 힌지, CH2, CH3 및 CH4 영역을 포함할 수 있다. 인간화 항체는 IgM, IgG, IgD, IgA 및 IgE 및, IgG1, IgG2, IgG3 및 IgG4를 포함하는 임의의 이소타입을 포함하는, 면역글로불린의 임의의 클래스로부터 선택될 수 있다. 인간화 항체는, 이에 제한되지 않으나, CDR-이식(유럽등록특허 EP 239400; 국제공개특허 WO 91/09967; 및 미국등록특허 5,225,539, 5,530,101, 및 5,585,089), 축성(veneering) 또는 표면치환(resurfacing)(유럽등록특허 EP 592106 및 EP 519596; Padlan EA (1991) Mol Immunol 28(4/5): 489-498; Studnicka GM et al., (1994) Prot Engineering 7(6): 805-814; and Roguska MA et al., (1994) PNAS 91: 969-973), 사슬 셔플링(chain shuffling)(미국등록특허 5,565,332), 및, 예를 들어, 미국등록특허 6,407,213, 미국등록특허 5,766,886, 국제공개특허 WO 93/17105; Tan P et al., (2002) J Immunol 169: 1119-25; Caldas C et al., (2000) Protein Eng. 13(5): 353-60; Morea V et al., (2000) Methods 20(3): 267-79; Baca M et al., (1997) J Biol Chem 272(16): 10678-84; Roguska MA et al., (1996) Protein Eng 9(10): 895 904; Couto JR et al., (1995) Cancer Res. 55 (23 Supp): 5973s-5977s; Couto JR et al., (1995) Cancer Res 55(8): 1717-22; Sandhu JS (1994) Gene 150(2): 409-10 and Pedersen JT et al., (1994) J Mol Biol 235(3): 959-73, 에 기재된 기술을 포함하는 당업계의 다양한 공지된 방법을 사용하여 생산될 수 있는데, 이들 모두는 그 전체가 본 명세서에 참고자료로 인용되었다. 또한, 그 전체가 본 명세서에 참고자료로 인용된 미국공개특허 2005/0042664 A1(2005년 2월 24일)을 참조한다.
다중 특이성(예를 들어, 이중특이적 항체)을 제작하는 방법은, 예를 들어, 미국등록특허 7,951,917; 7,183,076; 8,227,577; 5,837,242; 5,989,830; 5,869,620; 6,132,992; 및 8,586,713에 기재되어 있는데, 이들 모두는 그 전체가 본 명세서에 참고자료로 인용되었다.
단일 도메인 항체, 예를 들어, 경쇄가 결여된 항체는 당업계에 널리 공지된 방법에 의해 제조될 수 있다. Riechmann L & Muyldermans S (1999) J Immunol 231: 25-38; Nuttall SD et al., (2000) Curr Pharm Biotechnol 1(3): 253-263; Muyldermans S, (2001) J Biotechnol 74(4): 277-302; 미국등록특허 6,005,079; 및 국제공개특허 WO 94/04678, WO 94/25591 및 WO 01/44301를 참조하는데, 이들 모두는 그 전체가 본 명세서에 참고자료로 인용되었다.
추가로, PD-1 항원에 특이적으로 결합하는 항체는, 결과적으로, 당업자에게 공지된 기술을 사용하여 항원을 "모방(mimic)"하는 항-이디오타입 항체를 생성하는데 이용될 수 있다. 예를 들어, Greenspan NS & Bona CA (1989) FASEB J 7(5): 437-444; and Nissinoff A (1991) J Immunol 147(8): 2429-2438를 참조하는데, 이들 각각은 그 전체가 본 명세서에 참고자료로 인용되었다.
특정 실시양태에서, 본 명세서에 기재된 항-PD-1 항체처럼, PD-1(예를 들어, 인간 PD-1)의 동일한 에피토프에 결합하는 본 명세서에 기재된 항체는 인간 항체이다. 특정 실시양태에서, PD-1(예를 들어, 인간 PD-1)에 대한 결합으로부터 본 명세서에 기재된 항체 중 어느 하나를 경쟁적으로 차단(예를 들어, 용량 의존적 방식으로)하는 본 명세서에 기재된 항체는 인간 항체이다. 인간 항체는 당업계에 공지된 임의의 방법을 사용하여 생산될 수 있다. 예를 들어, 기능적 내인성 면역글로불린을 발현할 수는 없으나, 인간 면역글로불린 유전자는 발현할 수 있는, 트랜스제닉 마우스가 사용될 수 있다. 특히, 상기 인간 중쇄 및 경쇄 면역글로불린 유전자 복합체는 무작위로 또는 상동재조합에 의해 마우스 배아줄기세포에 도입될 수 있다. 대안적으로, 상기 인간 중쇄 및 경쇄 유전자 이외에, 상기 인간 가변 영역, 불변 영역 및 다양성 영역이 마우스 배아줄기세포에 도입될 수 있다. 상기 마우스 중쇄 및 경쇄 면역글로불린 유전자는, 상동 재조합에 의한 인간 면역글로불린 유전자좌로의 도입과는 별도로 또는 동시에 비-기능적으로 표현될 수 있다. 특히, 상기 JH 영역의 동형 접합체 결실은 내인성 항체 생산을 방해한다. 상기 변형된 배아줄기세포는 증식되고, 배반포에 미세주입되어, 키메라 마우스를 생산한다. 그런 다음, 상기 키메라 마우스는 사육되어, 인간 항체를 발현하는 동형 접합체 자손을 생산한다. 상기 트랜스제닉 마우스는 선택된 항원, 예를 들어, 항원(예를 들어, PD-1)의 전부 또는 일부로 정상적인 방식으로 면역화된다. 상기 항원에 대한 단클론 항체는 통상적인 하이브리도마 기술을 사용하여 면역화된 트랜스제닉 마우스로부터 수득할 수 있다. 상기 트랜스제닉 마우스에 의해 보유된 인간 면역글로불린 형질전환 유전자(transgene)는 B 세포 분화동안 재배열하고, 이어 클래스 전환 및 체세포 돌연변이를 경험한다. 따라서, 이러한 기술을 사용하여, 치료에 유용한 IgG, IgA, IgM 및 IgE 항체를 생산하는 것이 가능하다. 인간 항체를 생산하기 위한 이러한 기술의 개요에 대해서는, 본 명세서에 참고자료로 인용된 Lonberg N & Huszar D (1995) Int Rev Immunol 13:65-93을 참조한다. 인간 항체 및 인간 단클론 항체를 생산하는 이러한 기술 및 그러한 항체를 생산하기 위한 프로토콜에 대한 상세한 설명은, 예를 들어, 국제공개특허 WO 98/24893, WO 96/34096 및 WO 96/33735; 및 미국등록특허 5,413,923, 5,625,126, 5,633,425, 5,569,825, 5,661,016, 5,545,806, 5,814,318 및 5,939,598를 참조하는데, 이들 모두는 그 전체가 본 명세서에 참고자료로 인용되었다. 인간 항체를 생산할 수 있는 마우스의 예시는, Xenomouse™(Abgenix, Inc.; 미국등록특허 6,075,181 및 6,150,184), HuAb-Mouse™(Mederex, Inc./Gen Pharm; 미국등록특허 5,545,806 및 5,569, 825), Trans Chromo Mouse™(Kirin) 및 KM Mouse™(Medarex/Kirin)를 포함하는데, 이들 모두는 그 전체가 본 명세서에 참고자료로 인용되었다.
PD-1(예를 들어, 인간 PD-1)에 특이적으로 결합하는 인간 항체는 인간 면역 글로불린 서열로부터 유래된 항체 라이브러리를 사용하는 상기 기재된 파지 디스플레이 방법을 포함하는 당업계에 공지된 다양한 방법에 의해 제조될 수 있다. 또한, 미국등록특허 4,444,887, 4,716,111, 및 5,885,793; 및 국제공개특허 WO 98/46645, WO 98/50433, WO 98/24893, WO 98/16654, WO 96/34096, WO 96/33735, 및 WO 91/10741를 참조하는데, 이들 모두는 그 전체가 본 명세서에 참고자료로 인용되었다.
일부 실시양태에서, 인간 항체는 마우스-인간 하이브리도마를 사용하여 생산될 수 있다. 예를 들어, EBV(Epstein-Barr virus)로 형질전환된 사람 말초혈액 림프구는 마우스 골수종 세포와 융합되어, 인간 단클론 항체를 분비하는 마우스-인간 하이브리도마를 생산할 수 있고, 이들 마우스-인간 하이브리도마는 표적 항원(예를 들어, PD-1(예를 들어, 사람 PD-1))에 특이적으로 결합하는 인간 단클론 항체를 분비하는 것으로 결정하도록 스크리닝 될 수 있다. 이러한 방법은 당업계에 공지되어 있고 기술되어 있고, 예를 들어, Shinmoto H et al., (2004) Cytotechnology 46: 19-23; Naganawa Y et al., (2005) Human Antibodies 14: 27-31를 참조하는데, 이들 각각은 그 전체가 본 명세서에 참고자료로 인용되었다.
5.6. 키트
또한, 본 명세서에서 제공된 것은, 본 명세세에 기재된 하나 이상의 항체 또는 약학 조성물 또는 이의 접합체를 포함하는 키트이다. 특정 실시양태에서, 본 명세서에서 제공된 것은, 본 명세서에서 제공된 하나 이상의 항체와 같은, 본 명세서에 기재된 약학 조성물의 유효성분 중 하나 이상으로 채워진 하나 이상의 용기를 포함하는 약제 팩 또는 키트이다. 일부 실시양태에서, 상기 키트는 본 명세서에 기재된 약학 조성물 및 본 명세서에 기재된 것과 같은 임의의 예방 또는 치료용 제제를 포함한다. 어떤 실시양태에서, 상기 키트는, 예를 들어, PHA(phytohaemagglutinin) 및/또는 PMA(phorbol myristate acetate)와 같은 T 세포 유사분열물(mitogen) 또는 항-CD3 항체 및 항-CD28 항체와 같은 TCR 복합체 자극 항체를 포함할 수 있다. 이들 용기와 선택적으로 관련된 것은, 의약품 또는 생물 의약품의 제조, 사용 또는 판매를 규제하는 정부 기관이 정한 양식의 고지가 될 수 있는데, 상기 고지는 인간 투여를 위한 제조, 사용 또는 판매에 관한 기관의 승인을 반영한다.
또한, 본 명세서에서 제공된 것은, 상술한 방법에 사용될 수 있는 키트이다. 일 실시양태에서, 키트는 하나 이상의 용기에 담겨진, 본 명세서에 기재된 항체, 바람직하게는 정제된 항체를 포함한다. 특정 실시양태에서, 본 명세서에 기재된 키트는 대조군으로서 실질적으로 분리된 PD-1 항원(예를 들어, 사람 PD-1)을 포함한다. 다른 특정 실시양태에서, 본 명세서에 기재된 키트는 PD-1 항원과 반응하지 않는 대조 항체를 추가로 포함한다. 다른 특정 실시양태에서, 본 명세서에 기재된 키트는 PD-1 항원에 대한 항체의 결합을 검출하는 하나 이상의 구성요소를 포함한다(예를 들어, 상기 항체는 형광 화합물, 효소 기질, 방사성 화합물 또는 발광 화합물과 같은 검출가능한 기질에 접합될 수 있거나 또는 상기 제1 항체를 인식하는 제2 항체는 검출가능한 기질에 접합될 수 있다). 특정 실시양태에서, 본 명세서에 제공된 키트는 재조합적으로 생산되거나 화학적으로 합성된 PD-1 항원을 포함할 수 있다. 또한, 상기 키트에 제공된 PD-1 항원은 고체 지지체에 부착될 수 있다. 보다 구체적인 실시양태에서, 앞서 기재된 키트의 검출 수단은 PD-1 항원이 부착된 고체 지지체를 포함한다. 또한, 이러한 키트는 부착되지 않은 리포터-표지된 항-인간 항체 또는 항-마우스/래트 항체를 포함할 수 있다. 이러한 실시양태에서, 상기 PD-1 항원에 대한 항체의 결합은 상기 리포터-표지된 항체의 결합에 의해 검출될 수 있다. 일 실시양태에서, 본 발명은 생물학적 시료에서 PD-1 항원(예를 들어, 인간 PD-1)을 시험관 조건에서 분석 및/또는 검출하기 위한 본 발명의 키트의 용도에 관한 것이다.
6. 실시예
본 섹션(즉, 섹션 6)의 실시예는 설명을 위해 제공되는 것이고, 이에 제한되지 않는다.
6.1. 실시예 1: 항-PD-1 항체의 특성결정
본 실시예는 인간 PD-1에 특이적으로 결합하는 항체, 특히, AGEN2033w, AGEN2034w, AGEN2046w 및 AGEN2047w로 명명된 항체의 특성을 설명한다. AGEN2033w 및 AGEN2046w는 동일한 중쇄 가변 영역 아미노산 서열(서열번호 15) 및 동일한 경쇄 가변 영역 아미노산 서열(서열번호 16)을 공유한다. AGEN2034w 및 AGEN2047w는 동일한 중쇄 가변 영역 아미노산 서열(서열번호 17) 및 동일한 경쇄 가변 영역 아미노산 서열(서열번호 16)을 공유한다. AGEN2033w 및 AGEN2034w는 EU 번호 부여 시스템에 따라 S228P 돌연변이(즉, 야생형 IgG4 불변 영역에 비해 228 위치에서 프롤린으로 세린의 치환)를 포함하는 인간 IgG4 항체인 반면, AGEN2046w 및 AGEN2047w는 인간 IgG1 항체이다. 또한, AGEN2047w의 3 가지 Fc 돌연변이체 역시 특성이 결정되었다: EU 번호 부여 시스템에 따라 번호가 부여된, N297A 돌연변이체, S267E/L328F 이중 돌연변이체 및 S239D/A330L/I332E 삼중 돌연변이체.
6.1.1. 활성화된 T 세포에 의해 발현된 PD-1에 결합하는 항체
항-PD-1 항체 AGEN2046w, AGEN2047w 및 AGEN2034w는 유세포분석법에 의해 활성화된 PBMC(peripheral blood mononuclear cell)에 대한 결합을 검사하였다. 96-웰 NUNCLON 델타 서피스 플레이트(NUNC™)에 담겨진 Normocin™(InvivoGen, Cat# ant-nr-1) 및 10% 열처리-불활성화된 FBS(Gibco, Cat# 16140063)가 보충된 RPMI1640 배지에, 정제되지 않은 버피 코트(Research Blood Components, Catalog number (Cat#) 002) 또는 동결보존된 원숭이 PBMC(Worldwide Primates Inc., customer order)로부터 제조된 동결보존 인간 PBMC를 105 세포수/웰로 분주하였다. 상기 세포는 100 ng/㎖의 SEA(Staphylococcus Enterotoxin A; 사람 PBMC용)(Toxin Technologies, Cat# at101red) 또는 SEB(Staphylococcus Enterotoxin B; 원숭이 PBMC용)(Toxin Technology, Cat# bt202red)의 존재하에, 37℃, 5% CO2 및 97% 습도조건에서 5일 동안 배양되었다. 이어, 상기 세포를 시료 완충액(PBS + 2% FBS + 0.09% 소듐 아자이드)으로 한번 세척하고, 100 ㎕의 연속적으로 희석된 항체 또는 이소타입 대조군(10, 1, 0.1, 0.01, 0.001 및 0.0001 ㎍/㎖의 AGEN2046w, AGEN2047w 또는 인간 IgG1 이소타입 대조군(LifeTein LLC, Cat# LT12031); 또는 25, 5, 1, 0.2, 0.04, 0.008, 0.0016, 0.00032 및 0.000064 ㎍/㎖의 AGEN2034w 또는 인간 IgG4 이소타입 대조군(LifeTein LLC, Cat# LT12034))을 가한 후, 얼음위의 암소에서 반응시켰다. 45분이 경과된 후, 상기 세포를 시료 완충액으로 2회 세척한 다음, LIVE/DEAD® Fixable Near-IR Dead Cell Stain(Life Technologies, Cat# L10119), CD4-BV421(Biolegend, Cat# 317434) 및 염소의 F(ab')2 항-인간 IgG+A+M, R-PE(Life Technologies, Cat# AHI1707)를 처리하고, 30분동안 반응시켰다. 상기 세포를 시료 완충액으로 2회 세척한 다음, 시료 완충액에 재현탁시키고, FACS Fortessa cytometer(Becton Dickinson)를 사용하여 분석하였다. CD4+ T 세포를 게이팅하고, MFI(mean fluorescence intensity)를 기록하였다.
상기 항-PD-1 항체인 AGEN2046w 및 AGEN2047w는 활성화된 인간 CD4+ T 세포에 결합하였다(도 1a). AGEN2034w는 활성화된 인간 및 원숭이 CD4+ T 세포에 결합하였다(도 1b 및 1c).
활성화된 1차 인간 T 세포에 대한 상기 AGEN2034w의 결합을 유사한 분석법으로 다시 측정하였다. 대략적으로, 인간 PBMC에 100 ng/㎖의 SEA 펩티드를 처리하고, 5일 동안 배양한 다음, 연속 희석된(50, 10, 2, 0.4, 0.080, 0.016, 0.0032, 0.00064, 0.000128, 0.0000256, 0.00000512 및 0.000001024 ㎍/㎖) AGEN2034w 또는 인간 IgG4 이소타입 대조군으로 염색하였다. 세포를 FACS Fortessa cytometer(Becton Dickinson)를 사용하여 분석하였다. CD4+ T 세포를 게이팅하고, AGEN2034w-양성 세포의 MFI(mean fluorescence intensity)를 결정하였다.
도 1d에서 보듯이, AGEN2034w는 활성화된 일차 인간 CD4+ T 세포에 결합하였다.
6.1.2. PD-1 항체 선택성 분석
PD-1에 대한 AGEN2034w의 선택성은 현탁 어레이 기술을 사용하여 동종 단백질에 대해 평가되었다.
PD-1과의 아미노산 서열 상동성에 기초하여, Ig 수퍼패밀리 단백질인 ROBO2(roundabout homolog 2), B7-H7(B7 homolog 7) 및 SIRPγ(signal regulatory protein gamma)가 현탁 어레이 분석을 사용한 AGEN0234w에 의한 결합을 평가하기 위하여 선택되었다. ROBO2, B7-H7 및 SIRPγ는 BLAST(Basic Local Alignment Search Tool; NCBI)를 적용한 단백질 정렬에 의해 PD-1의 동족체로 동정되었다. 그의 동족체에 대한 인간 PD-1의 서열 상동성은 다음과 같다: 인간 PD-1 대(vs) 인간 ROBO2: 27.9 %; 인간 PD-1 대 인간 SIRPγ(SIRPG_HUMAN): 24.8 %; 인간 PD-1 대 인간 B7-H7: 22.6 %.
재조합 단백질인, 인간 ROBO2-Fc 키메라(R&D systems, Cat# 3147-RB-050), 인간 B7-H7-Fc 키메라(R&D systems, Cat# 8084-B7-050), 인간 SIRPγ-His 키메라(Sino Biologicals, Cat# 11828-H08H) 및 인간 PD-1-Fc 키메라(R&D systems, Cat# 1086-PD)를 NHS(N-hydroxysuccinimide) 에스터 화합물을 사용하여 Luminex® 미세구체(Luminex Corp, Cat# LC10005-01, LC10022-01, LC10046-01, LC10048-01 및 LC10059-01)에 결합시키고, AGEN2034w의 용량 적정(7.5, 2.5, 0.833, 0.277, .0.0926, .0.0309, 0.0103, 0.0034, 0.0011, 0.0004, 0.0001 및 0.00004 ㎍/㎖)을 처리한 후, 반응시켰다. 이어, PE(phycoerythrin)으로 표지된 항-인간 IgG 항체를 첨가하여 AGEN2034w를 검출하였다. 결합은 Luminex® 200 검출 시스템에 의해 분석되었다.
상기 항체 AGEN2034w는 인간 PD-1에 대한 특이적인 결합을 나타내었고, 시험 농도에서 ROBO2, B7-H7 또는 SIRPγ와의 유의한 결합은 관찰되지 않았다(도 2).
6.1.3. 현탁 어레이 기술에 의해 결정된 리간드 차단 활성
항-PD-1 항체가 리간드 PD-L1 및 PD-L2의 결합을 차단하는지의 여부를 결정하기 위해, 현탁 어레이 기술을 사용하여 랭킹 분석 설정을 수행하였다. 5㎕ 분석 완충액(Luminex Corp, Cat # 48 LC10014-48)에 포함된 1200 개의 Luminex® 비드를 96-웰 반 영역 플레이트(Corning, Inc., Cat # 3884)의 각 웰에 부가하였다. 상기 비드는 COOH 비드 표면의 아민 커플링을 통해 PD-1 항원 PD-1-Fc 키메라(R&D systems, Cat# 1086-PD)와 결합되었다. 상기 커플링 반응은 50㎍/㎖의 PD-1 항원과 ㎖당 1 x 107 개의 Luminex 비드를 사용하여 수행되었다. 표준 NHS 에스터 화합물은 상기 항원의 1차 아민 그룹과 상기 비드 표면의 카르복실 그룹간의 카르보디이미드 결합을 형성하는데 사용되었다(Luminex Xmap cookbook chapter 3).
단백질에 대한 항원결합은 Sulfo-NHS(N-hydroxysulfosuccinimide)의 존재하에 EDC(1-Ethyl-3-[3-dimethylaminopropyl]carbodiimide hydrochloride) 시약을 사용하여 미세구체의 카르복실 그룹을 먼저 활성화시킨 후, 설포-NHS-에스터 중간체를 형성하는 간단한 2단계 카르보디이미드 과정이다. 이어, 상기 반응성 중간체는 표적 분자(항체, 단백질 또는 펩티드)의 1차 아민과의 반응으로 대체되어 공유결합된 아미드 결합을 형성한다. 상기 결합된 비드에 3배수의 서로 다른 농도(웰당 7.5 ㎍/㎖ 내지 0.01 ㎍/㎖의 최종 농도)의 항-PD-1 항체를 가하고, 20℃ 및 650 rpm으로 1시간 동안 반응시켰다. 시험된 상기 항체는 AGEN2033w, AGEN2034w, AGEN2046w 및 AGEN2047w, IgG1 이소타입 대조군 및 IgG4 이소타입 대조군이었다. 이후, 1 nM 농도의 R-PE 표지된 PD-L1-Fc(R&D Systems, Cat# 156-B7) 또는 PD-L2-Fc(R&D Systems, Cat# 1224-PL) 30 ㎕를 각 웰에 가하여, 웰의 최종 부피를 60 ㎕로 하였다(웰당 1200개의 비드 및, 표지된 PD-L1 또는 PD-L2의 최종 농도 0.5 nM). 상기 리간드의 표지는, 제조사의 프로토콜에 따라, R-PE 표지된 키트(AbDSerotec, LYNX Rapid RPE Antibody Conjugation Kit, Cat# LNK023RPE)를 사용하여 수행되었다. Luminex® 200 시스템(Millipore)을 사용하여 플레이트를 분석하였다. 100개의 비드를 50 ㎕의 동일 부피에서 웰당 계수하였다. 리간드 차단 잠재력은 리간드 단독 대조군의 비-경쟁적 신호(100 % 결합)의 MFI 값을 사용하여 산출되었다. PE 검출가능 신호는 항원에 결합하는 리간드를 나타내었다.
시험된 모든 항-PD-1 항체는 PD-1에 대한 PD-L1 및 PD-L2의 결합을 억제하였다(도 3a 내지 3d).
AGEN2034w의 리간드 차단 활성의 측정은 유사한 분석법으로 반복되었다. 대략적으로, 재조합 PD-1-Fc 키메라(R&D systems, Cat# 1086-PD)는 NHS(N-hydroxysuccinimide) 에스터 화합물을 사용하여 Luminex® 미세구체(Luminex Corp, Cat# LC10048-01)에 결합되었다. 상기 PD-1 결합 비드에 AGEN2034w 또는 이소타입 대조군 항체의 용량 적정(4.0 x 10-5 내지 7.5 ㎍/㎖)을 처리하여 반응시킨 다음, 형광 표지된 PD-L1-Fc(R&D Systems, Cat# 156-B7) 또는 PD-L2-Fc (R&D Systems, Cat# 1224-PL)과 반응시켰다. 이어, PD-1-결합된 비드에 대한 PD-L1 또는 PD-L2의 결합은 Luminex® 200 검출 시스템을 사용하여 평가되었고, MFI(median fluorescent intensity)가 기록되었다.
항체 AGEN2034w는 PD-1과 그의 리간드인 PD-L1(도 3e) 및 PD-L2(도 3f)의 결합을 효과적으로 차단하였다.
6.1.4. SEA(Staphylococcus Enterotoxin A) 자극 후, 인간 PBMC에 대한 항-PD-1 항체의 영향
일차 인간 T 세포에 대한 항-PD-1 항체의 기능적 활성을 SEA 자극 후에 평가 하였다. 96-웰 NUNCLON 델타 서피스 플레이트(NUNC™)에 담겨진 Normocin™(InvivoGen, Cat# ant-nr-1) 및 10% 열처리-불활성화된 FBS(Gibco, Cat# 16140063)가 보충된 RPMI1640 배지에, 정제되지 않은 버피 코트(Research Blood Components, Catalog number (Cat#) 002)로부터 제조된 동결보존 인간 PBMC를 105 세포수/웰로 분주하였다. 상기 세포에 고정농도(10 ㎍/㎖) 또는 용량-범위(50, 10, 2, 0.4, 0.08, 0.016 및 0.0032 ㎍/㎖)의 항체 및 고정농도(100 ng/ml)의 SEA(Toxin Technology, Cat# at101red)를 가하고, 37℃, 5% CO2 및 97% 습도에서 5일간 배양하였다. 시험된 상기 항체는 AGEN2033w, AGEN2034w, AGEN2046w, AGEN2047w 및 IgG1 이소타입 대조군이었다. 상등액을 수집하고, 분석할 때까지 -80℃에서 보관하였다. IL-2의 역가는 MSD(electrochemiluminescence)에 의해 측정되었다.
도 4a 및 4b에서 보듯이, 항-PD-1 항체인 AGEN2033w, AGEN2034w, AGEN2046w 및 AGEN2047w는, SEA 자극의 존재하에, 이소타입 대조군에 비해 PBMC의 IL-2 생산을 증가시켰다.
추가로, AGEN2034w의 길항 활성은 상술한 1차 PBMC 분석법에서, 단독으로 또는 항-CTLA-4, 항-TIGIT, 항-CD137 또는 항-OX40 항체와 조합하여 시험되었다. 대략적으로, 정제되지 않은 버피코트(Research Blood Components, Cat # 002)로부터 제조된 냉동보존된 인간 PBMC는, 5 ㎍/㎖의 항-CTLA-4 항체 이필리무맵(Myoderm)(도 4d), 10 ㎍/㎖의 항-TIGIT 항체 pab2197 또는 pab2196(도 4d), 5 ㎍/㎖의 항-CD137 항체 pab2225(도 4e) 또는 용량범위(12, 6, 3, 0.3, 0.03, 0.003, 0.0003, and 0.0001 ㎍/㎖)의 항-OX40 항체 pab1928의 처리 또는 비처리 조건하에서, SEA 수퍼항원(Toxin Technology, Cat# at101red)(도 4c, 4d 및 4f에서 100 ng/㎖; 도 4e에서 200 ng/㎖) 및 AGEN2034w(도 4c 및 4e에서 10 ㎍/㎖; 도 4d에서 5 ㎍/㎖; 거 4f에서 12, 6, 3, 0.3, 0.03, 0.003, 0.0003 및 0.0001 ㎍/㎖의 용량범위) 또는 이소타입 대조군 항체를 처리하여 5일 동안 배양되었다. 상등액을 수집하고, IL-2의 역가를 AlphaLISA (Perkin Elmer, Cat# AL221C)를 사용하여 측정하였다. 항-TIGIT 항체인 pab2197 및 pab2196는 각각 미국공개특허 US2013/0251720(그 전체가 본 명세서에 참고자료로 인용됨)에서 제공된 항체 10A7 및 1F4의 가변 영역 서열에 기초하여 생성되었다. 항-CD137 항체인 pab2225는 미국등록특허 8,137,667(그 전체가 본 명세서에 참고자료로 인용됨)에서 제공된 항체 20H4의 가변 영역 서열에 기초하여 생성되었다. 항-OX40 항체인 pab1928은 미국공개특허 US2003/0280275(그 전체가 본 명세서에 참고자료로 인용됨)에서 제공된 항체 Hu106-122의 가변 영역 서열에 기초하여 생성되었다. 항-TIGIT, 항-CD137 및 항-OX40 항체의 서열은 표 8에 나열되었다.
항-TIGIT, 항-CD137 및 항-OX40 항체의 서열
서열번호 설명 아미노산 서열
66 pab2197 중쇄 EVQLVESGGGLTQPGKSLKLSCEASGFTFSSFTMHWVRQSPGKGLEWVAFIRSGSGIVFYADAVRGRFTISRDNAKNLLFLQMNDLKSEDTAMYYCARRPLGHNTFDSWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG
67 pab2197 경쇄 DIVMTQSPSSLAVSPGEKVTMTCKSSQSLYYSGVKENLLAWYQQKPGQSPKLLIYYASIRFTGVPDRFTGSGSGTDYTLTITSVQAEDMGQYFCQQGINNPLTFGDGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
68 pab2196 중쇄 EVQLQQSGPELVKPGTSMKISCKASGYSFTGHLMNWVKQSHGKNLEWIGLIIPYNGGTSYNQKFKGKATLTVDKSSSTAYMELLSLTSDDSAVYFCSRGLRGFYAMDYWGQGTSVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG
69 pab2196 경쇄 DVVLTQTPLSLSVSFGDQVSISCRSSQSLVNSYGNTFLSWYLHKPGQSPQLLIFGISNRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISTIKPEDLGMYYCLQGTHQPPTFGPGTKLEVKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
70 pab2225 중쇄 QVQLQQWGAGLLKPSETLSLTCAVYGGSFSGYYWSWIRQSPEKGLEWIGEINHGGYVTYNPSLESRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARDYGPGNYDWYFDLWGRGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG
71 pab2225 경쇄 EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYDASNRATGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCQQRSNWPPALTFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
72 pab1928 중쇄 QVQLVQSGSELKKPGASVKVSCKASGYTFTDYSMHWVRQAPGQGLKWMGWINTETGEPTYADDFKGRFVFSLDTSVSTAYLQISSLKAEDTAVYYCANPYYDYVSYYAMDYWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG
73 pab1928 경쇄 DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCKASQDVSTAVAWYQQKPGKAPKLLIYSASYLYTGVPSRFSGSGSGTDFTFTISSLQPEDIATYYCQQHYSTPRTFGQGTKLEIKRSVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
상기 항-PD-1 항체인 AGEN2034w는, 단독으로 또는 항-CTLA-4 항체인 이필리무맵(도 4c), 항-TIGIT 항체인 pab2197 또는 pab2196(도 4d), 항-CD137 항체인 pab2225(도 4e) 또는 항-OX40 항체인 pab1928(도 4f)과 조합하여, SEA 슈퍼 항원의 존재하에 인간 PBMC에서 IL-2 생산을 증가시켰다.
6.1.5. 항-PD-1 항체의 길항 활성에 대한 Fc 감마 수용체 결합 효과
본 실시예에서, 항-PD-1 항체의 길항 활성에 대한 FcγR 결합 효과를 시험하였다.
먼저, 항-PD-1 참고 항체의 길항 활성은 FcγR 차단제의 처리 또는 비처리 조건하에서 시험되었다. 96-웰 NUNCLON 델타 서피스 플레이트(NUNC™)에 담겨진 Normocin™(InvivoGen, Cat# ant-nr-1) 및 10% 열처리-불활성화된 FBS(Gibco, Cat# 16140063)가 보충된 RPMI1640 배지에, 정제되지 않은 버피 코트(Research Blood Components, Catalog number (Cat#) 002)로부터 제조된 동결보존 인간 PBMC를 105 세포수/웰로 분주하였다. 상기 세포는, 항-CD16 항체(1 ㎍/㎖, R&D systems, Cat# AF1330) 및 무관한 IgG1(25 ㎍/㎖, LifeTein, Cat# LT12031)을 포함하는 고정농도의 Fc 수용체 차단용액을 처리하거나 또는 처리하지 않고, 100 ng/㎖의 SEA 펩티드(Toxin Technology, Cat# at101red) 및 10 ㎍/㎖의 항-PD-1 참고 항체 또는 이소타입 대조군을 처리하여 37℃, 5% CO2 및 97% 습도의 조건하에서 5일 동안 배양되었다. 상등액을 수집하고, 분석할 때까지 -80℃에서 보관하였다. IL-2의 역가는 MSD(electrochemiluminescence)에 의해 측정되었다.
이러한 1차 인간 PBMC 분석에서, 항-CD16 항체를 사용한 FcγR 차단은 IL-2 분비를 유도하는 항-PD-1 참고 항체의 능력을 향상시켰다(도 5a).
유사한 연구가, AGEN2034w의 길항 활성에 대한 FcγR 차단의 영향을 조사하기 위해 수행되었다. 대략적으로, 인간 PBMC에 100 ng/㎖의 SEA 펩티드(Toxin Technology, Cat# at101red), 10 ㎍/㎖의 AGEN2034w 또는 이소타입 대조군 항체(HEL IgG1, LifeTein, Cat# LT12031), 및 20 ㎍/㎖의 항-CD16 항체(Biolegend, Cat# 302013), CD32A 및 CD32B 모두에 결합하는 항-CD32 항체(eBioscience, Cat# 16-0329-81), 항-CD64 항체(Biolegend, Cat# 305016), 또는 이소타입 대조군(Biolegend, Cat# 400543)를 처리하고 37℃, 5% CO2 및 97% 습도조건하에서 5일 동안 배양되었다. 상등액을 수집하고, 분석할 때까지 -80℃에서 보관하였다. IL-2의 역가는 MSD(electrochemiluminescence)에 의해 측정되었다.
도 5a의 결과와 일치하여, 이러한 인간 PBMC 분석에서, 항-CD16 항체, 항-CD32 항체 또는 항-CD64 항체를 사용한 FcγR의 차단은 AGEN2034w에 의해 유도된 IL-2 분비를 증가시켰다(도 5b).
다음으로, AGEN2047w의 3가지 IgG1 Fc 돌연변이체(EU 번호 부여 시스템에 따라 번호가 부여된, N297A 돌연변이체, S267E/L328F 이중 돌연변이체 및 S239D/A330L/I332E 삼중 돌연변이체)을 생성하고, 상술한 인간 PBMC SEA 분석에서 야생형 IgG1 불변 영역을 포함하는 AGEN2047w와 비교하였다. 대략적으로, 야생형 또는 돌연변이체 Fc를 각각 처리한 조건하에서, 냉동보존된 인간 PBMC에 100 ng/㎖의 SEA 및 10 ㎍/㎖의 항-PD-1 항체인 AGEN2047w, AGEN2047w-N297A, AGEN2047w-S267E/L328F, AGEN2047w-S239D/A330L/I332E 또는 이소타입 대조군 항체를 처리하여 반응시켰다.
도 5c에서 보듯이, 감소된 FcγR 결합을 갖는 상기 N297A 변이체는 IL-2 분비를 추가로 증가시켰다. 대조적으로, 증가된 FcγR 결합을 갖는 상기 S267E/L328F 이중 돌연변이체 및 상기 S239D/A330L/I332E 삼중 돌연변이체는 야생형 AGEN2047w보다 낮은 수준으로 IL-2 생산을 유도 하였다.
6.1.6. 혼합된 림프구 반응에서 항 PD-1 항체의 효과
다음으로, 상기 항-PD-1 항체인 AGEN2034w를 혼합 림프구 반응에서 시험하였다. 수지상 세포는 냉동보존된 HLA-A2+ 인간 PBMC로부터 얻어지고, 우선 500 U/㎖ IL-4 (Peprotech, Cat# 200-04-20UG) 및 1000 U/㎖ GM-CSF(Peprotech, Cat# 300-03-20UG)를 24시간 동안 처리한 다음, 1000 U/㎖ TNFα(Peprotech, Cat# 300-01A-50UG), 10 ng/㎖ IL-1β(Peprotech, Cat# 200-01B-10UG), 10 ng/㎖ IL-6(Peprotech, Cat# 200-06-20UG) 및 1 μM PGE2(Sigma, Cat# P0409-5MG)를 24시간 동안 추가하여 분화된 분리된 CD14+ 세포(Stemcell Technologies, Cat# 18058)로부터 유래되었다. MACS 컬럼 정제(Miltenyi Biotec, Cat # 130-096-535) 방법으로 동종이계 HLA-A2-인간 PBMC 공여체로부터 정제된 50,000개의 팬 T 세포는 임의의 항체를 처리하지 않거나 또는 5% 인간 AB 혈청(Corning, Cat# 35-060-CI) 및 페니실린/스트렙토마이신(Gibco, Cat# 15140-122)을 포함하는 RPMI(Corning, Cat# 10-040-CM) 배지에 포함된 10 ㎍/㎖의 인간 IgG4 이소타입 대조군 항체(Biolegend, Cat# 403402) 또는 10 ㎍/㎖ AGEN2034w를 처리한 조건하에서, 10,000개의 수지상 세포와 공배양되었다. 배양물은 37℃, 5% CO2 조건에서 5일 동안 배양되었다. 상등액은 AlphaLISA(Perkin Elmer, Cat # AL217C)를 사용하여 IFNγ의 정상-상태 농도를 위해 평가되었다.
도 6에서 보듯이, AGEN2034w는 정제된 인간 T 세포와 시험관 조건에서 유도된 동종이계 수지상 세포의 공배양에서 IFNγ 생산을 유도하였다.
6.1.7. 복수액 억제 분석에서 항-PD-1 항체의 효과
본 실시예에서, 항-PD-1 항체인 AGEN2034w는 난소암 복수액에 의해 유도된 T 세포 증식의 억제를 완화시키는 능력에 대해 시험되었다. 대략적으로, 1차 인간 PBMC를 CFSE(Biolegend, Cat # 423801)로 표지한 다음, 증가된 농도(0.00000102 내지 50 ㎍/㎖)의 AGEN2034w 또는 IgG4 이소타입 대조군 항체(Biolegend, Cat# 317434)를 처리한 조건에서, 1㎍/㎖ 항-CD3 항체(eBioscience, Cat # 16-0037-85) 및 50% (v/v)의 난소암 복수액으로 4 내지 5일 동안 자극하였다. 상기 세포는 항-인간 CD4 항체(Biolegend, Cat # 317434) 또는 항-인간 CD8 항체(Biolegend, Cat # 344710) 및 LIVE-DEAD 생존성 염료(Life Technologies, Cat# L10119)로 면역염색되었다. CFSE 희석에 의해 도시된 바와 같이, CD4+ 또는 CD8+ T 세포의 증식은 BD Fortessa(Becton Dickinson)를 사용한 유세포 분석법에 의해 측정되었다.
도 7a 내지 7c에서 보듯이, 난소암 복수액을 사용한 공배양은 항-CD3-항체-자극된 T 세포의 증식을 감소시키고, 이러한 감소는 항-PD-1 항체인 AGEN2034w에 의해 부분적으로 완화될 수 있다.
6.1.8. Jurkat NFAT - 루시퍼라제 리포터 분석에서 항-PD-1 항체의 효과
추가로, 리포터 분석법이 AGEN2034w의 길항 활성을 탐지하기 위해 이용되었다. 특히, 이러한 리포터 분석법에서, PD-L1-발현 표적 세포 및 PD-1-발현 리포터 세포의 공배양은 상기 리포터 세포에서 NFAT-루시퍼라제 리포터 유전자의 발현을 억제하였다. 항-PD-1 항체에 의한 PD-1/PD-L1 반응의 봉쇄는 억제 신호를 완화시켜서, 루시퍼라제 발현을 인도할 수 있다.
대략적으로, PD-L1+ CHOK1 표적세포(Promega, Cat# CS187108)는, 2% 열처리-불활성화된 FBS(Gemini, Cat# 100-106)가 보충된 RPMI-1640 배지(Corning, Cat# 21-040-CV)에 포함된 증가된 농도(0 내지 50 ㎍/㎖)의 AGEN2034w 또는 이소타입 대조군 항체를 처리한 조건에서, GloResponse™ NFAT-luc2/PD-1 Jurkat 리포터 세포(Promega, Cat# CS187102)와 공배양되었다. 배양 6 시간 후, PD-1에 결합한 PD-L1에 의해 유도된 리포터 유전자의 억제를 완화시키는 AGEN2034w의 효과는 Bio-Glo™ Luciferase Assay System(Promega, Cat # G7941)을 사용하여 루시퍼라제를 측정함으로써 결정되었다.
도 8에서 보듯이, 이러한 Jurkat NFAT-루시퍼라제 리포터 분석에서, 상기 항-PD-1 항체인 AGEN2034w는 용량-의존적으로 TCR 신호전달을 증가시켰다.
6.2. 실시예 2: 추가적 항-PD-1 항체의 특성결정
본 실시예에서, 하기의 6개의 추가적 항-PD-1 항체의 특성을 확인하였다: AGEN2001w, AGEN2002w, EP11_pl1_B03, EP11_pl1_B05, EP11_pl1_C02 및 EP11_pl1_C03. 이들 항체의 가변 중쇄 및 가변 경쇄 서열은 표 6에 개시되어있다.
6.2.1. 항-PD-1 항체의 결합 및 리간드 차단 분석
상기 기재된 6개 항-PD-1 항체의 친화도를 표면 플라스몬 공명에 의해 분석하였다. 6 가지 항체 모두 재조합 인간 PD-1에 결합 하였다(데이터는 나타내지 않음).
6.1.3 절에서 설명한 것과 유사한 분석법으로, 6개의 항-PD-1 항체의 리간드 차단 활성은 현탁 어레이 기술을 사용하여 시험되었다. 상기 결합된 비드는 2배수의 서로 다른 농도(7.5㎍/㎖ 내지 0.01㎍/㎖의 최종 농도)의 항-PD-1 항체를 처리하고, 20℃ 및 650 rpm의 조건에서 1시간 동안 반응시켰다. 이어, R-PE 표지된 PD-L1-Fc(R & D Systems, Cat # 156-B7) 또는 PD-L2-Fc(R & D Systems, Cat # 1224-PL)를 추가하였다. 시험된 상기 항-PD-1 항체는 AGEN2001w, AGEN2002w, EP11_pl1_B03, EP11_pl1_B05, EP11_pl1_C02 및 EP11_pl1_C03 이었다. 도 9a 내지 9f에서 보듯이, 시험된 모든 항-PD-1 항체는 용량-의존적으로 PD-L1 및 PD-L2에 대한 PD-1의 결합을 차단하였다.
6.2.2. SEA(Staphylococcus Enterotoxin A) 자극 후, 인간 PBMC에 대한 항-PD-1 항체의 효과
6.1.4 절에서 설명한 것과 유사한 분석법으로, 인간 PBMC에 대한 항-PD-1 항체인 AGEN2002w의 기능적 활성을 시험하였다. 대략적으로, 정제되지 않은 버피코트(Research Blood Components, Cat # 002)로부터 제조된 냉동보존된 인간 PBMC에 10 ㎍/㎖의 항-PD-1 항체인 AGEN2002w 또는 이소타입 대조군 항체(HEL IgG1, LifeTein, Cat# LT12031)와 100 ng/㎖의 SEA 펩티드(Toxin Technologies, Cat # at101red)를 처리하고, 37℃, 5% CO2 및 97% 습도의 조건하에서 4일동안 배양하였다. 상등액을 수집하고, 분석할 때까지 -80℃에서 보관하였다. IL-2의 역가는 MSD(electrochemiluminescence)에 의해 측정되었다.
도 10에서 보듯이, 상기 항-PD-1 항체인 AGEN2002w는 SEA 자극의 존재하에 1차 인간 PBMC의 IL-2 생성을 증가시켰다.
6.3. 실시예 3: 항-PD-1 항체의 에피토프 맵핑
상기 항-PD-1 항체 AGEN2034w의 에피토프는 HDX(hydrogen-deuterium exchange) 질량분석법 및 Pepscan 분석법을 사용하여 특성이 확인되었다.
6.3.1. HDX (hydrogen-deuterium exchange) 질량분석법을 이용한 항-PD-1 Fab 의 에피토프 맵핑
AGEN2034w(AGEN2034w-Fab)의 Fab 단편과 인간 PD-1의 세포외 도메인의 반응은 HDX(hydrogen-deuterium exchange) 질량분석법에 의해 연구되었다.
재조합 His-표지된 인간 PD-1은 Sino Biological Inc(Cat # 10377-H08H)로부터 수득하였다. 사용된 경우, 탈글리코실화된 PD-1은, 37℃에서 4시간 동안 6 ㎕의 PNGase F와 반응된 300 ㎍의 재조합 His-표지된 인간 PD-1로부터 제조되었다. 항-PD-1 항체의 Fab 단편은 단백질 분해효소 처리에 의해 AGEN2034w로부터 제조되었다.
펩신/프로테아제 XVIII 분해를 위해, 125 ㎕의 대조군 완충액(50 mM phosphate, 100 mM sodium chloride at pH 7.4)에 포함된 4.0 ㎍dml 천연의 또는 탈글리코실화된 인간 PD-1은, 135 ㎕의 4 M 구아니딘 하이드로클로라이드, 0.85 M TCEP 완충액(최종 pH 2.5)을 부가하고, 상기 혼합물을 11℃에서 3분간 반응시켜서, 변성되었다. 이어, 상기 혼합물은 내부 팩킹된 펩신/프로테아제 XVIII 칼럼을 사용한 온-칼럼 펩신/프로테아제 XVIII 분해에 적용되고, 그 결과 얻어진 펩티드는 Q Exactive™ Hybrid Quadrupole-Orbitrap Mass Spectrometer(Thermo)에 결합된 Waters Acquity UPLC를 포함하는 UPLC-MS 시스템을 이용하여 분석되었다. 상기 펩티드는, 2 내지 27% 솔루션 B(0.2% 포름산을 포함하는 아세토니트릴)로부터 19분의 구배를 이용한 50mm × 1mm C8 컬럼에서 분리되었다. 펩티드 동정은 마스코트로 인간 PD-1 서열에 대한 MS/MS 데이터 검색을 통해 수행되었다. 전구체 및 생성물 이온에 대한 질량 내성은 각각 10 ppm 및 0.05 Da를 나타내었다.
10 ㎕의 인간 PD-1(4.0 ㎍) 또는 10 ㎕의 인간 PD-1과 Fab의 혼합물(4.0 ㎍: 4.0 ㎍)은 125 ㎕의 듀테륨 옥사이드 표지 완충액(50 mM 소듐 포스페이트, 100 mM 소듐 클로라이드, pD 7.4)과 함께 11℃에서 0초, 60초, 600초 및 3600초 동안 반응시켰다. 수소/중수소 교환은 135㎕의 4M 구아니딘 하이드로클로라이드, 0.85M TCEP 완충액(최종 pH 2.5)의 첨가에 의해 종료되었다. 이어, 반응이 종료된 시료는 상술한 온-컬럼 펩신/프로테아제 XVIII 분해 및 LC-MS 분석법에 적용되었다. 상기 질량 스펙트럼은 MS 전용 모드로 기록하였다.
기초적인 MS 데이터는 H/D 교환 MS 데이터용 소프트웨어인 HDX WorkBench(J. Am. Soc. Mass Spectrom. 2012, 23 (9), 1512-1521, 그 전체가 본 명세서에 참고자료로 인용됨)를 사용하여 가공되었다. 상기 중수소 수준은 중수소화된 펩티드와 그 원래 형태(t0) 사이의 평균 질량 차이를 사용하여 산출되었다.
85.4%의 서열 범위는 His-표지없이 탈글리코실화된 인간 PD-1에 대해 달성되었다. 대부분의 PD-1 펩티드는 항-인간 PD-1 Fab 존재여부에 관계없이 동일하거나 유사한 중수소 수준을 나타내었다. 그러나, 몇몇 펩티드 단편은 Fab 결합시 중수소 도입을 유의하게 감소시키는 것으로 확인되었다. 이 단락의 모든 잔기는 서열번호 74에 따라 번호가 부여되었다. 탈글리코실화된 인간 PD-1은 107 내지 122번 잔기(SLAPKAQIKESLRAEL)(서열번호 75)에서 항-인간 PD-1 Fab에 결합시 중수소 흡수에서 강한 감소를 나타내었다. 또한, 항-인간 PD-1 Fab에 대한 결합시, 중수소 흡수의 감소는 5 내지 22번 잔기(LDSPDRPWNPPTFSPALL)(서열번호 76)에서 확인되었다.
6.3.2. Pepscan 분석을 이용한 항-PD-1 항체의 에피토프 맵핑
항-PD-1 항체인 AGEN2034w의 결합은 칩-결합된 펩티드 어레이로서 제조된 합성된 PD-1 펩티드 단편에 대해 측정되었다. 분석은 Pepscan Presto BV, Lelystad, Netherlands에 의해 수행되었다. 대략적으로, 인간 PD-1의 에피토프를 재구성하기 위해, 펩티드 라이브러리가 합성되었다. 아미노 기능화된 폴리프로필렌 지지체는, 독점적인 친수성 고분자 제재를 이식한 다음, HOBt(Nhydroxybenzotriazole)와 함께 DCC(dicyclohexylcarbodiimide)를 사용하여 BocHMDA(t-butyloxycarbonyl-hexamethylenediamine)와 반응시키고, 이후, TFA(trifluoroacetic acid)를 사용한 Boc-그룹의 절단에 의해 수득하였다. 표준 Fmoc-펩티드 합성은, 맞춤형 변형된 JANUS 액체 처리 스테이션(Perkin Elmer)에 의해. 아미노-기능화된 고체 지지체상에서 펩티드를 합성하는데 사용되었다. 구조적 모방물의 합성은 Pepscan의 독점적인 CLIPS(Chemically Linked Peptides on Scaffolds) 기술을 사용하여 수행되었다. CLIPS 기술은 펩티드를 단일 루프, 이중 루프, 삼중 루프, 시트형 폴드, 나선형 폴드 및 이들의 조합으로 구조화 할 수 있게 한다. 각각의 합성된 펩티드에 대한 항체의 결합은 PEPSCAN-기반 ELISA에서 시험되었다. 상기 펩티드 어레이는 1차 항체 용액과 함께 4℃에서 하룻밤 동안 반응시켰다. 세척 후, 상기 펩티드 어레이를 염소 항-인간 HRP 접합체(Southern Biotech, Cat # 2010-05)와 함께 25℃에서 1시간 동안 반응시켰다. 세척 후, 퍼옥시다아제 기질인 ABTS(2,2'-azino-di-3-ethylbenzthiazoline sulfonate) 및 20 ㎕/㎖의 3% H2O2가 부가되었다. 1 시간 후, 상기 발색은 CCD(charge coupled device) - 카메라 및 이미지 처리 시스템으로 측정되고, 정량화되었다.
Pepscan 연구는, 상기 항-PD-1 항체인 AGEN2034w가 서열번호 74에 따라 번호가 부여된, 6 내지 15번 잔기(DSPDRPWNPP)(서열번호 77), 130 내지 138번 잔기(EVPTAHPSP)(서열번호 78) 및 106 내지 113번 잔기(ISLAPKAQ)(서열번호 79)를 포함하는 인간 PD-1의 신축(stretch)을 인식함을 보여주었다.
본 발명은 본 명세서에 기재된 특정 실시양태에 의해 범위가 제한되지 않는다. 실제로, 이들 설명에 추가된 다양한 변형이, 전술한 설명 및 첨부된 도면으로부터 당업자에게 명백하게 될 것이다. 이러한 변형은 첨부된 청구범위의 범위내에 속한다.
본 명세서에 인용된 모든 참조문헌(예를 들어, 공보 또는 특허 또는 특허 출원)은, 각각의 개별적 참조문헌(예를 들어, 공보 또는 특허 또는 특허 출원)이 전체로서 모든 목적을 위해 참조로 포함되는 것으로 구체적이고, 개별적으로 명시된 것과 동일한 정도로, 전체로서 모든 목적을 위해 본 명세서에서 참조로 포함된다. 다른 실시예는 다음의 청구범위 내에 있다.
<110> Agenus Inc. Ludwig Institute for Cancer Research Ltd Memorial Sloan Kettering Cancer Center <120> ANTI-PD-1 ANTIBODIES AND METHODS OF USE THEREOF <130> IPA180114-US <150> US 62/212,851 <151> 2015-09-01 <150> US 62/216,043 <151> 2015-09-09 <150> US 62/257,195 <151> 2015-11-18 <160> 79 <170> KopatentIn 2.0 <210> 1 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> AGEN2033w Kabat CDRH1 <400> 1 Ser Tyr Gly Met His 1 5 <210> 2 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> AGEN2033w Kabat CDRH2 <400> 2 Val Ile Trp Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys 1 5 10 15 Gly <210> 3 <211> 4 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> AGEN2033w Kabat CDRH3 <400> 3 Asn Val Asp Tyr 1 <210> 4 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> AGEN2033w Kabat CDRL1 <400> 4 Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Asn Leu Ala 1 5 10 <210> 5 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> AGEN2033w Kabat CDRL2 <400> 5 Gly Ala Ser Thr Arg Ala Thr 1 5 <210> 6 <211> 9 <212> PRT <213> 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Asn Leu Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln 35 40 45 Ser Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Tyr Ala Ser Ile Arg Phe Thr Gly Val 50 55 60 Pro Asp Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Leu Thr 65 70 75 80 Ile Thr Ser Val Gln Ala Glu Asp Met Gly Gln Tyr Phe Cys Gln Gln 85 90 95 Gly Ile Asn Asn Pro Leu Thr Phe Gly Asp Gly Thr Lys Leu Glu Ile 100 105 110 Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp 115 120 125 Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn 130 135 140 Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu 145 150 155 160 Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp 165 170 175 Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr 180 185 190 Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser 195 200 205 Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210 215 220 <210> 68 <211> 448 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> pab2196 heavy chain <400> 68 Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser 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Ser Lys Asp Ser 165 170 175 Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu 180 185 190 Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser 195 200 205 Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210 215 <210> 70 <211> 450 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> pab2225 heavy chain <400> 70 Gln Val Gln Leu Gln Gln Trp Gly Ala Gly Leu Leu Lys Pro Ser Glu 1 5 10 15 Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Val Tyr Gly Gly Ser Phe Ser Gly Tyr 20 25 30 Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln Ser Pro Glu Lys Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Glu Ile Asn His Gly Gly Tyr Val Thr Tyr Asn Pro Ser Leu Glu 50 55 60 Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu 65 70 75 80 Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala 85 90 95 Arg Asp Tyr Gly Pro Gly Asn Tyr Asp Trp Tyr Phe Asp Leu Trp Gly 100 105 110 Arg Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser 115 120 125 Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala 130 135 140 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85 90 95 Ala Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val 100 105 110 Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys 115 120 125 Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg 130 135 140 Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn 145 150 155 160 Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser 165 170 175 Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys 180 185 190 Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr 195 200 205 Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210 215 <210> 72 <211> 451 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> pab1928 heavy chain <400> 72 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ser Glu Leu Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr 20 25 30 Ser Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Lys Trp Met 35 40 45 Gly Trp Ile Asn Thr Glu Thr Gly Glu Pro Thr Tyr Ala Asp Asp Phe 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Val Phe Ser Leu Asp Thr Ser Val Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Ile Ser Ser Leu Lys Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Asn Pro Tyr Tyr Asp Tyr Val Ser Tyr Tyr Ala Met Asp Tyr Trp 100 105 110 Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro 115 120 125 Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr 130 135 140 Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr 145 150 155 160 Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro 165 170 175 Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr 180 185 190 Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn 195 200 205 His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys Ser 210 215 220 Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu 225 230 235 240 Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu 245 250 255 Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser 260 265 270 His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu 275 280 285 Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr 290 295 300 Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn 305 310 315 320 Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro 325 330 335 Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln 340 345 350 Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val 355 360 365 Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val 370 375 380 Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro 385 390 395 400 Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr 405 410 415 Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val 420 425 430 Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu 435 440 445 Ser Pro Gly 450 <210> 73 <211> 214 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> pab1928 light chain <400> 73 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp Val Ser Thr Ala 20 25 30 Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Ser Ala Ser Tyr Leu Tyr Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Phe Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln His Tyr Ser Thr Pro Arg 85 90 95 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg Ser Val Ala Ala 100 105 110 Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly 115 120 125 Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala 130 135 140 Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln 145 150 155 160 Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser 165 170 175 Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr 180 185 190 Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser 195 200 205 Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210 <210> 74 <211> 268 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 74 Pro Gly Trp Phe Leu Asp Ser Pro Asp Arg Pro Trp Asn Pro Pro Thr 1 5 10 15 Phe Ser Pro Ala Leu Leu Val Val Thr Glu Gly Asp Asn Ala Thr Phe 20 25 30 Thr Cys Ser Phe Ser Asn Thr Ser Glu Ser Phe Val Leu Asn Trp Tyr 35 40 45 Arg Met Ser Pro Ser Asn Gln Thr Asp Lys Leu Ala Ala Phe Pro Glu 50 55 60 Asp Arg Ser Gln Pro Gly Gln Asp Cys Arg Phe Arg Val Thr Gln Leu 65 70 75 80 Pro Asn Gly Arg Asp Phe His Met Ser Val Val Arg Ala Arg Arg Asn 85 90 95 Asp Ser Gly Thr Tyr Leu Cys Gly Ala Ile Ser Leu Ala Pro Lys Ala 100 105 110 Gln Ile Lys Glu Ser Leu Arg Ala Glu Leu Arg Val Thr Glu Arg Arg 115 120 125 Ala Glu Val Pro Thr Ala His Pro Ser Pro Ser Pro Arg Pro Ala Gly 130 135 140 Gln Phe Gln Thr Leu Val Val Gly Val Val Gly Gly Leu Leu Gly Ser 145 150 155 160 Leu Val Leu Leu Val Trp Val Leu Ala Val Ile Cys Ser Arg Ala Ala 165 170 175 Arg Gly Thr Ile Gly Ala Arg Arg Thr Gly Gln Pro Leu Lys Glu Asp 180 185 190 Pro Ser Ala Val Pro Val Phe Ser Val Asp Tyr Gly Glu Leu Asp Phe 195 200 205 Gln Trp Arg Glu Lys Thr Pro Glu Pro Pro Val Pro Cys Val Pro Glu 210 215 220 Gln Thr Glu Tyr Ala Thr Ile Val Phe Pro Ser Gly Met Gly Thr Ser 225 230 235 240 Ser Pro Ala Arg Arg Gly Ser Ala Asp Gly Pro Arg Ser Ala Gln Pro 245 250 255 Leu Arg Pro Glu Asp Gly His Cys Ser Trp Pro Leu 260 265 <210> 75 <211> 16 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 75 Ser Leu Ala Pro Lys Ala Gln Ile Lys Glu Ser Leu Arg Ala Glu Leu 1 5 10 15 <210> 76 <211> 18 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 76 Leu Asp Ser Pro Asp Arg Pro Trp Asn Pro Pro Thr Phe Ser Pro Ala 1 5 10 15 Leu Leu <210> 77 <211> 10 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 77 Asp Ser Pro Asp Arg Pro Trp Asn Pro Pro 1 5 10 <210> 78 <211> 9 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 78 Glu Val Pro Thr Ala His Pro Ser Pro 1 5 <210> 79 <211> 8 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 79 Ile Ser Leu Ala Pro Lys Ala Gln 1 5

Claims (86)

  1. 인간 PD-1에 특이적으로 결합하고, 하기 상보성 결정 영역 CDRH1, CDRH2 및 CDRH3을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 하기 상보성 결정 영역 CDRL1, CDRL2 및 CDRL3을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는, 단리된 항체:
    (a) CDRH1은 SYGMH (서열번호 1)의 아미노산 서열을 포함하고;
    (b) CDRH2는 VIWX1DGSNX2YYADSVX3G (서열번호 32)의 아미노산 서열을 포함하고 (여기서 X1은 Y 또는 F이고; X2는 K 또는 E이고; X3은 K 또는 M임);
    (c) CDRH3은 NX1DX2 (서열번호 33)의 아미노산 서열을 포함하고 (여기서 X1은 G 또는 V이고; X2는 H 또는 Y임);
    (d) CDRL1은 RASQSVSSNLA (서열번호 4)의 아미노산 서열을 포함하고;
    (e) CDRL2는 GASTRAT (서열번호 5)의 아미노산 서열을 포함하고;
    (f) CDRL3은 QQYNNWPRT (서열번호 6)의 아미노산 서열을 포함한다.
  2. 제1항에 있어서,
    (a) CDRH2는 서열번호 2 및 34 내지 36으로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열을 포함하거나;
    (b) CDRH3은 서열번호 3, 7 및 37로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열을 포함하거나;
    (c) CDRH2는 서열번호 2 및 34 내지 36으로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열을 포함하고, CDRH3은 서열번호 3, 7 및 37로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열을 포함하거나;
    (d) CDRH1, CDRH2 및 CDRH3은 각각 서열번호 1, 2 및 3; 서열번호 1, 2 및 7; 서열번호 1, 2 및 37; 서열번호 1, 34 및 7; 서열번호 1, 35 및 7; 또는 서열번호 1, 36 및 7로 제시된 아미노산 서열을 포함하는 것인, 단리된 항체.
  3. 제1항에 있어서,
    (a) CDRH1, CDRH2, CDRH3, CDRL1, CDRL2 및 CDRL3은 각각 서열번호 1, 2, 3, 4, 5 및 6으로 제시된 아미노산 서열을 포함하거나; 또는
    (b) CDRH1, CDRH2, CDRH3, CDRL1, CDRL2 및 CDRL3은 각각 서열번호 1, 2, 7, 4, 5 및 6으로 제시된 아미노산 서열을 포함하는 것인, 단리된 항체.
  4. 제1항에 있어서, CDRH1, CDRH2, CDRH3, CDRL1, CDRL2 및 CDRL3은 각각 서열번호 1, 2, 7, 4, 5 및 6으로 제시된 아미노산 서열을 포함하는 것인, 단리된 항체.
  5. 제1항에 있어서, 상기 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역은 각각 서열번호 15 및 16; 서열번호 17 및 16; 서열번호 26 및 16; 서열번호 27 및 16; 서열번호 28 및 16; 서열번호 29 및 16; 서열번호 30 및 16; 또는 서열번호 31 및 16으로 제시된 아미노산 서열을 포함하는 것인, 단리된 항체.
  6. 제5항에 있어서, 상기 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 각각 서열번호 15 및 16; 서열번호 17 및 16; 서열번호 26 및 16; 서열번호 27 및 16; 서열번호 28 및 16; 서열번호 29 및 16; 서열번호 30 및 16; 또는 서열번호 31 및 16으로 제시된 아미노산 서열로 구성되는 것인, 단리된 항체.
  7. 제1항에 있어서, 상기 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역은 각각 서열번호 17 및 16으로 제시된 아미노산 서열을 포함하는 것인, 단리된 항체.
  8. 제1항에 있어서, 상기 항체는 하기로부터 선택된 하나 이상의 특징을 갖는, 단리된 항체:
    (a) 상기 항체는, EU 번호 부여 시스템에 따른 N297 위치의 글리칸 모이어티가 결여된 인간 IgG1 중쇄 불변 영역을 포함함;
    (b) 상기 항체는, EU 번호 부여 시스템에 따른 N297A 또는 N297Q 변이를 포함하는 인간 IgG1 중쇄 불변 영역을 포함함;
    (c) 상기 항체는, EU 번호 부여 시스템에 따른 D265A 변이를 포함하는 인간 IgG1 중쇄 불변 영역을 포함함; 및
    (d) 상기 항체는, EU 번호 부여 시스템에 따른 S228P 변이를 포함하는 인간 IgG4 중쇄 불변 영역을 포함함.
  9. 제1항에 있어서, 중쇄 및 경쇄를 포함하고, 상기 중쇄 및 경쇄의 아미노산 서열은 각각 서열번호 15 및 16; 서열번호 17 및 16; 서열번호 18 및 19; 서열번호 20 및 19; 서열번호 21 및 19; 서열번호 22 및 19; 서열번호 23 및 19; 서열번호 52 및 19; 서열번호 53 및 19; 서열번호 54 및 19; 서열번호 55 및 19; 또는 서열번호 56 및 19로 제시된 아미노산 서열을 포함하는 것인, 단리된 항체.
  10. 제9항에 있어서, 상기 중쇄 및 경쇄의 아미노산 서열은 각각 서열번호 18 및 19; 서열번호 20 및 19; 서열번호 21 및 19; 서열번호 22 및 19; 서열번호 23 및 19; 서열번호 52 및 19; 서열번호 53 및 19; 서열번호 54 및 19; 서열번호 55 및 19; 또는 서열번호 56 및 19로 제시된 아미노산 서열로 구성되는 것인, 단리된 항체.
  11. 제1항에 있어서, 중쇄 및 경쇄를 포함하고, 상기 중쇄 및 경쇄의 아미노산 서열은 각각 서열번호 53 및 19로 제시된 아미노산 서열을 포함하는 것인, 단리된 항체.
  12. 제1항에 있어서, 상기 항체는 하기로부터 선택된 하나 이상의 특징을 갖는, 단리된 항체:
    (a) 상기 항체는 인간 항체임;
    (b) 상기 항체는 인간 PD-1에 길항적임;
    (c) 상기 항체는 인간 PD-1의 활성을 불활성, 감소 또는 억제시킴;
    (d) 상기 항체는 인간 PD-L1 또는 인간 PD-L2에 대한 인간 PD-1의 결합을 억제시킴;
    (e) 상기 항체는 SEA(staphylococcal enterotoxin A)로 자극된 말초 혈액 단핵 세포(peripheral blood mononuclear cell: PBMC)에 의한 IL-2 생산을 증가시킴;
    (f) 상기 항체는 인간 T 세포와 동종(allogenic) 수지상 세포의 공배양물(co-culture)의 IFNγ 생산을 증가시킴;
    (g) 상기 항체는 난소암 복수액과 공배양된 항-CD3-항체-자극된 CD4+ 또는 CD8+ T 세포의 증식을 증가시킴; 및
    (h) 상기 항체는 PD-L1-발현 표적 세포와 공배양된 PD-1-발현 NFAT-루시퍼라제 리포터 세포에서 NFAT 신호전달을 증가시킴.
  13. 제1항 내지 제12항 중 어느 한 항의 항체 및 약학적으로 허용가능한 담체 또는 부형제를 포함하는, 암 또는 감염성 질환의 치료에 사용하기 위한 약학 조성물.
  14. 제1항 내지 제12항 중 어느 한 항의 항체의 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역을 인코딩하는 단리된 폴리뉴클레오티드.
  15. 제14항의 폴리뉴클레오티드를 포함하는 단리된 재조합 숙주 세포.
  16. 폴리뉴클레오티드가 발현되고 항체가 생산되도록 제15항의 숙주 세포를 배양하는 단계를 포함하는, 인간 PD-1에 결합하는 항체의 생산방법.
  17. 제1항 내지 제12항 중 어느 한 항에 있어서, 하기로부터 선택된 하나 이상에 사용하기 위한 것인, 단리된 항체:
    (a) 개체에서 항원에 반응하는 T 세포 활성화의 증가;
    (b) 암의 치료; 및
    (c) 감염성 질환의 치료.
  18. 하기를 포함하는 단리된 재조합 숙주 세포:
    (a) 제1항 내지 제12항 중 어느 한 항의 항체의 중쇄 가변 영역을 인코딩하는 제1 단리된 폴리뉴클레오티드, 및 제1항 내지 제12항 중 어느 한 항의 항체의 경쇄 가변 영역을 인코딩하는 제2 단리된 폴리뉴클레오티드; 또는
    (b) 제1항 내지 제12항 중 어느 한 항의 항체의 중쇄를 인코딩하는 제1 단리된 폴리뉴클레오티드, 및 제1항 내지 제12항 중 어느 한 항의 항체의 경쇄를 인코딩하는 제2 단리된 폴리뉴클레오티드.
  19. 제1 폴리뉴클레오티드 및 제2 폴리뉴클레오티드가 발현되고 항체가 생산되도록 제18항의 숙주 세포를 배양하는 단계를 포함하는, 인간 PD-1에 결합하는 항체의 생산방법.
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Families Citing this family (156)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2012088446A1 (en) 2010-12-22 2012-06-28 Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University Superagonists and antagonists of interleukin-2
EP3049445A4 (en) 2013-09-24 2017-10-25 Medicenna Therapeutics, Inc. Interleukin-2 fusion proteins and uses thereof
US10150802B2 (en) 2014-04-24 2018-12-11 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University Superagonists, partial agonists and antagonists of interleukin-2
KR20180040138A (ko) 2015-07-13 2018-04-19 싸이톰스 테라퓨틱스, 인크. 항pd-1 항체, 활성화 가능한 항pd-1 항체, 및 이들의 사용 방법
EA201890630A1 (ru) * 2015-09-01 2018-10-31 Эйдженус Инк. Антитела против pd-1 и способы их применения
BR112018006237A2 (pt) 2015-09-29 2018-10-09 Celgene Corp proteínas de ligação a pd-1 e métodos de uso das mesmas
PL3370768T3 (pl) 2015-11-03 2022-06-13 Janssen Biotech, Inc. Przeciwciała specyficznie wiążące pd-1 i ich zastosowania
EP3377531A2 (en) 2015-11-18 2018-09-26 Merck Sharp & Dohme Corp. Pd1 and/or lag3 binders
AU2016369519B2 (en) 2015-12-16 2023-04-20 Gritstone Bio, Inc. Neoantigen identification, manufacture, and use
JP7261379B2 (ja) 2016-06-20 2023-04-20 カイマブ・リミテッド 抗ｐｄ－ｌ１抗体
US10751414B2 (en) 2016-09-19 2020-08-25 Celgene Corporation Methods of treating psoriasis using PD-1 binding antibodies
EP3515943A4 (en) 2016-09-19 2020-05-06 Celgene Corporation METHODS OF TREATING VITILIGO WITH PD-1 BINDING PROTEINS
EP3532504A1 (en) 2016-10-28 2019-09-04 Bristol-Myers Squibb Company Methods of treating urothelial carcinoma using an anti-pd-1 antibody
MX2019004775A (es) 2016-11-03 2019-08-05 Squibb Bristol Myers Co Anticuerpos anti antigeno 4 del linfocito t citotoxico (ctla-4) activables y sus usos.
AU2017373944B2 (en) 2016-12-07 2022-02-03 Agenus Inc. Anti-CTLA-4 antibodies and methods of use thereof
CN110300599A (zh) 2016-12-07 2019-10-01 艾吉纳斯公司 抗体和其使用方法
TWI674261B (zh) 2017-02-17 2019-10-11 美商英能腫瘤免疫股份有限公司 Nlrp3 調節劑
PE20200735A1 (es) 2017-02-28 2020-07-23 Sanofi Sa Arn terapeutico
WO2018175279A2 (en) * 2017-03-20 2018-09-27 The General Hospital Corporation MITIGATING Fc-Fc RECEPTOR INTERACTIONS IN CANCER IMMUNOTHERAPY
SG11201908396PA (en) 2017-03-31 2019-10-30 Bristol Myers Squibb Co Methods of treating tumor
TWI788340B (zh) 2017-04-07 2023-01-01 美商必治妥美雅史谷比公司 抗icos促效劑抗體及其用途
MX2019012223A (es) * 2017-04-13 2019-12-09 Agenus Inc Anticuerpos anti-cd137 y metodos de uso de los mismos.
EP3618863B1 (en) 2017-05-01 2023-07-26 Agenus Inc. Anti-tigit antibodies and methods of use thereof
WO2018209270A1 (en) 2017-05-11 2018-11-15 Northwestern University Adoptive cell therapy using spherical nucleic acids (snas)
MX2019012076A (es) 2017-05-30 2019-12-09 Bristol Myers Squibb Co Composiciones que comprenden un anticuerpo anti gen-3 de activacion del linfocito (lag-3) o un anticuerpo anti-lag-3 y un anticuerpo anti muerte celular programada 1 (pd-1) o anti ligando 1 de muerte celular programada (pd-l1).
CA3060989A1 (en) 2017-05-30 2018-12-06 Bristol-Myers Squibb Company Compositions comprising a combination of an anti-lag-3 antibody, a pd-1 pathway inhibitor, and an immunotherapeutic agent
EP4306542A3 (en) 2017-05-30 2024-04-17 Bristol-Myers Squibb Company Treatment of lag-3 positive tumors
KR20200014363A (ko) 2017-06-01 2020-02-10 브리스톨-마이어스 스큅 컴퍼니 항-pd-1 항체를 사용하여 종양을 치료하는 방법
CA3064331A1 (en) 2017-06-01 2018-12-06 Compugen Ltd. Triple combination antibody therapies
CR20190550A (es) 2017-06-05 2020-04-05 Janssen Biotech Inc Anticuerpos que se unen específicamente a pd-1 y métodos de uso
CA3067909A1 (en) 2017-06-19 2018-12-27 Medicenna Therapeutics Inc. Uses and methods for il-2 superagonists, agonists, and fusions thereof
CA3069524A1 (en) 2017-07-14 2019-01-17 Innate Tumor Immunity, Inc. Nlrp3 modulators
CR20200099A (es) 2017-08-03 2020-07-24 Amgen Inc Muteínas de interleucina 21 y métodos de tratamiento
CN107383174B (zh) * 2017-08-21 2019-01-18 生工生物工程（上海）股份有限公司 一种能与pd-1特异性结合的肿瘤抑制肽及其用途
JP2020532537A (ja) 2017-08-31 2020-11-12 アイオー セラピューティクス インコーポレイテッド がん免疫治療法のための免疫調節物質と併せたｒａｒ選択的アゴニスト
AU2018348165A1 (en) 2017-10-10 2020-05-21 Gritstone Bio, Inc. Neoantigen identification using hotspots
EP3694884A1 (en) 2017-10-15 2020-08-19 Bristol-Myers Squibb Company Methods of treating tumor
JP2021502344A (ja) 2017-11-06 2021-01-28 ブリストル−マイヤーズ スクイブ カンパニーＢｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂ Ｃｏｍｐａｎｙ 腫瘍を処置する方法
RU2754131C1 (ru) 2017-11-14 2021-08-27 Пфайзер Инк. Комбинированная терапия ингибитором ezh2
CA3083097A1 (en) 2017-11-22 2019-05-31 Gritstone Oncology, Inc. Reducing junction epitope presentation for neoantigens
UY38049A (es) 2018-01-12 2019-07-31 Amgen Inc Anti-pd-1 anticuerpos y métodos de tratamiento
US20210363242A1 (en) 2018-01-16 2021-11-25 Bristol-Myers Squibb Company Methods of treating cancer with antibodies against tim3
US20210038559A1 (en) 2018-01-22 2021-02-11 Thomas Richard Gadek Cannabinoids and derivatives for promoting immunogenicity of tumor and infected cells
MX2020007526A (es) 2018-01-22 2020-09-09 Bristol Myers Squibb Co Composiciones y metodos para tratar el cancer.
CA3090552A1 (en) * 2018-02-07 2019-08-15 Imugene Limited A vaccine composition and uses thereof
KR102608723B1 (ko) 2018-02-23 2023-12-01 유큐(베이징) 바이오파마 코., 엘티디 항―ｐｄ－１ 항체 및 그의 용도
FR3078536A1 (fr) * 2018-03-05 2019-09-06 Peptinov Sas Composition vaccinale anti-pd-1
WO2019183551A1 (en) 2018-03-23 2019-09-26 Bristol-Myers Squibb Company Antibodies against mica and/or micb and uses thereof
JP2021519771A (ja) 2018-03-30 2021-08-12 ブリストル−マイヤーズ スクイブ カンパニーＢｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂ Ｃｏｍｐａｎｙ 腫瘍を処置する方法
US20210155703A1 (en) 2018-04-04 2021-05-27 Bristol-Myers Squibb Company Anti-cd27 antibodies and uses thereof
WO2019195621A1 (en) * 2018-04-04 2019-10-10 Immutics, Inc. Methods and compositions for blocking interaction between non-glycosylated pd-1 polypeptides
PE20210160A1 (es) 2018-04-25 2021-01-26 Innate Tumor Immunity Inc Moduladores de nlrp3
IL307925A (en) 2018-05-07 2023-12-01 Genmab As Combination of an antibody against 1-PD and conjugation of a drug with an antibody against TF for use in the treatment of cancer
US20210238287A1 (en) 2018-07-26 2021-08-05 Bristol-Myers Squibb Company LAG-3 Combination Therapy for the Treatment of Cancer
CN112996567A (zh) 2018-08-16 2021-06-18 先天肿瘤免疫公司 咪唑并[4,5-c]喹啉衍生的nlrp3-调节剂
WO2020037091A1 (en) 2018-08-16 2020-02-20 Innate Tumor Immunity, Inc. Imidazo[4,5-c]quinoline derived nlrp3-modulators
SG11202101486RA (en) 2018-08-16 2021-03-30 Innate Tumor Immunity Inc Substitued 4-amino-1h-imidazo[4,5-c]quinoline compounds and improved methods for their preparation
CN112839962A (zh) 2018-10-09 2021-05-25 百时美施贵宝公司 用于治疗癌症的抗mertk抗体
CN113166262A (zh) * 2018-10-11 2021-07-23 英伊布里克斯公司 Pd-1单结构域抗体及其治疗组合物
CN113286611A (zh) 2018-10-19 2021-08-20 百时美施贵宝公司 用于黑色素瘤的组合疗法
JP2022505647A (ja) 2018-10-23 2022-01-14 ブリストル－マイヤーズ スクイブ カンパニー 腫瘍の処置方法
US20210380694A1 (en) * 2018-11-07 2021-12-09 Merck Sharp & Dohme Corp. Stable formulations of programmed death receptor 1 (pd-1) antibodies and methods of use thereof
WO2020102375A1 (en) * 2018-11-14 2020-05-22 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Intralesional administration of pd-1 inhibitors for treating skin cancer
MX2021005708A (es) 2018-11-16 2021-09-21 Bristol Myers Squibb Co Anticuerpos anti grupo 2a del receptor inhibidor de células asesinas naturales (anti-nkg2a) y usos de los mismos.
AU2019382505A1 (en) 2018-11-19 2021-05-27 Biocytogen Pharmaceuticals (Beijing) Co., Ltd. Anti-PD-1 antibodies and uses thereof
KR20210098504A (ko) 2018-12-04 2021-08-10 브리스톨-마이어스 스큅 컴퍼니 다중 동위원소체 반응 모니터링에 의한 샘플내 보정 곡선을 사용한 분석 방법
EP3666905A1 (en) 2018-12-11 2020-06-17 Sanofi E. coli positive for pks island as marker of positive response to anti-pd1 therapy in colorectal cancer
JP2022514698A (ja) 2018-12-21 2022-02-14 オーエスイー・イミュノセラピューティクス 二機能性抗ｐｄ－１／ｓｉｒｐａ分子
US20230071889A1 (en) 2018-12-21 2023-03-09 Ose Immunotherapeutics Bifunctional anti-pd-1/il-7 molecule
CN113228190B (zh) 2018-12-23 2024-06-11 豪夫迈·罗氏有限公司 分类和/或鉴定癌症亚型的系统和方法
JP7335341B2 (ja) 2019-01-14 2023-08-29 イネイト・テューマー・イミュニティ・インコーポレイテッド Ｎｌｒｐ３モジュレーター
CN113286787A (zh) 2019-01-14 2021-08-20 先天肿瘤免疫公司 Nlrp3调节剂
WO2020150113A1 (en) 2019-01-14 2020-07-23 Innate Tumor Immunity, Inc. Substituted quinazolines as nlrp3 modulators, for use in the treatment of cancer
CN113301962A (zh) 2019-01-14 2021-08-24 先天肿瘤免疫公司 用于治疗癌症的杂环nlrp3调节剂
SG11202107396RA (en) 2019-01-21 2021-08-30 Sanofi Sa Therapeutic rna and anti-pd1 antibodies for advanced stage solid tumor cancers
WO2020165374A1 (en) 2019-02-14 2020-08-20 Ose Immunotherapeutics Bifunctional molecule comprising il-15ra
JP2022527177A (ja) 2019-03-28 2022-05-31 ブリストル－マイヤーズ スクイブ カンパニー 腫瘍を処置する方法
EP3946628A1 (en) 2019-03-28 2022-02-09 Bristol-Myers Squibb Company Methods of treating tumor
US20220233691A1 (en) 2019-05-30 2022-07-28 Bristol-Myers Squibb Company Cell localization signature and combination therapy
CN114174538A (zh) 2019-05-30 2022-03-11 百时美施贵宝公司 适合于免疫肿瘤学疗法的多肿瘤基因特征
KR20220016155A (ko) 2019-05-30 2022-02-08 브리스톨-마이어스 스큅 컴퍼니 면역-종양학 (i-o) 요법에 적합한 대상체를 확인하는 방법
EP3982997A4 (en) * 2019-06-14 2023-09-13 Dana-Farber Cancer Institute, Inc. ANTIBODIES TO PD-1 AND METHOD OF USE THEREOF
EP3990492A1 (en) * 2019-06-27 2022-05-04 F. Hoffmann-La Roche AG Novel icos antibodies and tumor-targeted antigen binding molecules comprising them
TWI809286B (zh) 2019-07-05 2023-07-21 日商小野藥品工業股份有限公司 以pd-1/cd3雙特異性蛋白質所進行之血液性癌症治療
WO2021024020A1 (en) 2019-08-06 2021-02-11 Astellas Pharma Inc. Combination therapy involving antibodies against claudin 18.2 and immune checkpoint inhibitors for treatment of cancer
JPWO2021025140A1 (ko) 2019-08-08 2021-02-11
EP4031873A1 (en) 2019-09-22 2022-07-27 Bristol-Myers Squibb Company Quantitative spatial profiling for lag-3 antagonist therapy
CA3152263A1 (en) 2019-09-25 2021-04-01 Julia SANTUCCI PEREIRA DEL BUONO Composite biomarker for cancer therapy
JP2022553821A (ja) 2019-11-05 2022-12-26 ブリストル－マイヤーズ スクイブ カンパニー Ｍ－タンパク質アッセイおよびその使用
WO2021092220A1 (en) 2019-11-06 2021-05-14 Bristol-Myers Squibb Company Methods of identifying a subject with a tumor suitable for a checkpoint inhibitor therapy
WO2021092221A1 (en) 2019-11-06 2021-05-14 Bristol-Myers Squibb Company Methods of identifying a subject with a tumor suitable for a checkpoint inhibitor therapy
MX2022005474A (es) 2019-11-08 2022-06-02 Bristol Myers Squibb Co Tratamiento de melanoma con antagonistas del gen 3 de activacion de linfocitos (lag-3).
WO2021097256A1 (en) 2019-11-14 2021-05-20 Cohbar, Inc. Cxcr4 antagonist peptides
US20230057899A1 (en) 2019-12-05 2023-02-23 Compugen Ltd. Anti-pvrig and anti-tigit antibodies for enhanced nk-cell based tumor killing
AU2020406083A1 (en) 2019-12-17 2022-06-16 Ose Immunotherapeutics Bifunctional molecules comprising an IL-7 variant
JP2023510108A (ja) 2019-12-19 2023-03-13 ブリストル－マイヤーズ スクイブ カンパニー Ｄｇｋ阻害剤およびチェックポイントアンタゴニストの組み合わせ
CN115244052A (zh) 2020-01-10 2022-10-25 先天肿瘤免疫公司 Nlrp3调节剂
US20230063625A1 (en) * 2020-01-12 2023-03-02 Vanderbilt University Human antibodies to rift valley fever virus
US20230090446A1 (en) 2020-01-28 2023-03-23 Universite De Strasbourg Antisense oligonucleotide targeting linc00518 for treating melanoma
US20230086099A1 (en) 2020-01-30 2023-03-23 Ona Therapeutics, S.L. Combination therapy for treatment of cancer and cancer metastasis
EP4100426A1 (en) 2020-02-06 2022-12-14 Bristol-Myers Squibb Company Il-10 and uses thereof
KR20220151195A (ko) 2020-03-06 2022-11-14 오엔에이 테라퓨틱스 에스.엘. 항-cd36 항체 및 암을 치료하기 위한 이의 용도
AU2021230575A1 (en) 2020-03-06 2022-10-20 Celgene Quanticel Research, Inc. Combination of an LSD-1 inhibitor and nivolumab for use in treating SCLC or sqNSCLC
IL296673A (en) 2020-03-23 2022-11-01 Bristol Myers Squibb Co Anti-ccr8 antibodies for cancer treatment
JP2023525082A (ja) 2020-05-07 2023-06-14 アンスティテュ・クリー 免疫抑制線維芽細胞集団のバイオマーカーとしてのａｎｔｘｒ１及び免疫療法に対する応答を予測するためのその使用
CN116234568A (zh) 2020-07-07 2023-06-06 生物技术公司 用于hpv阳性癌症的治疗性rna
EP4204095A1 (en) 2020-08-28 2023-07-05 Bristol-Myers Squibb Company Lag-3 antagonist therapy for hepatocellular carcinoma
JP2023538955A (ja) 2020-08-31 2023-09-12 ブリストル－マイヤーズ スクイブ カンパニー 細胞局在シグネチャーおよび免疫療法
US20230374064A1 (en) 2020-10-05 2023-11-23 Bristol-Myers Squibb Company Methods for concentrating proteins
WO2022076596A1 (en) 2020-10-06 2022-04-14 Codiak Biosciences, Inc. Extracellular vesicle-aso constructs targeting stat6
EP4226377A1 (en) 2020-10-09 2023-08-16 Worldwide Innovative Network Novel prediction method and gene signatures for the treatment of cancer
KR20230093282A (ko) 2020-10-23 2023-06-27 브리스톨-마이어스 스큅 컴퍼니 폐암에 대한 lag-3 길항제 요법
EP4236960A1 (en) 2020-10-28 2023-09-06 Ikena Oncology, Inc. Combination of an ahr inhibitor with a pdx inhibitor or doxorubicine
CA3200671A1 (en) 2020-11-17 2022-05-27 Seagen Inc. Methods of treating cancer with a combination of tucatinib and an anti-pd-1/anti-pd-l1 antibody
WO2022112198A1 (en) 2020-11-24 2022-06-02 Worldwide Innovative Network Method to select the optimal immune checkpoint therapies
WO2022120179A1 (en) 2020-12-03 2022-06-09 Bristol-Myers Squibb Company Multi-tumor gene signatures and uses thereof
CA3201729A1 (en) 2020-12-17 2022-06-23 Nicolas Poirier Bifunctional anti-pd1/il-7 molecules
TW202245808A (zh) 2020-12-21 2022-12-01 德商拜恩迪克公司 用於治療癌症之治療性ｒｎａ
WO2022135666A1 (en) 2020-12-21 2022-06-30 BioNTech SE Treatment schedule for cytokine proteins
WO2022135667A1 (en) 2020-12-21 2022-06-30 BioNTech SE Therapeutic rna for treating cancer
IL303648A (en) 2020-12-28 2023-08-01 Bristol Myers Squibb Co Antibody preparations and methods of using them
JP2024501029A (ja) 2020-12-28 2024-01-10 ブリストル－マイヤーズ スクイブ カンパニー Ｐｄ１／ｐｄ－ｌ１抗体の皮下投与
WO2022148781A1 (en) 2021-01-05 2022-07-14 Institut Curie Combination of mcoln activators and immune checkpoint inhibitors
US20240076373A1 (en) 2021-01-28 2024-03-07 Compugen Ltd. Combination therapy with anti-pvrig antibodies formulations and anti-pd-1 antibodies
EP4284516A1 (en) 2021-01-28 2023-12-06 Compugen Ltd. Anti-pvrig antibodies formulations and uses thereof
TW202304506A (zh) 2021-03-25 2023-02-01 日商安斯泰來製藥公司 涉及抗claudin 18.2抗體的組合治療以治療癌症
US20240181052A1 (en) 2021-03-29 2024-06-06 Juno Therapeutics, Inc. Methods for dosing and treatment with a combination of a checkpoint inhibitor therapy and a car t cell therapy
JP2024514530A (ja) 2021-04-02 2024-04-02 ザ リージェンツ オブ ザ ユニバーシティ オブ カリフォルニア 切断型ｃｄｃｐ１に対する抗体およびその使用
JP2024515263A (ja) 2021-04-09 2024-04-08 オーエスイー・イミュノセラピューティクス 改善された特性を有する二機能性分子のための新規足場構造
WO2022214652A1 (en) 2021-04-09 2022-10-13 Ose Immunotherapeutics Scaffold for bifunctioanl molecules comprising pd-1 or cd28 and sirp binding domains
AR125753A1 (es) 2021-05-04 2023-08-09 Agenus Inc Anticuerpos anti-tigit, anticuerpos anti-cd96 y métodos de uso de estos
GB202107994D0 (en) 2021-06-04 2021-07-21 Kymab Ltd Treatment of cancer
KR20240046323A (ko) 2021-07-13 2024-04-08 비온테크 에스이 암에 대한 병용 요법에 있어서 cd40 및 cd137에 대한 다중특이 결합제
KR20240042476A (ko) 2021-07-30 2024-04-02 오엔에이 테라퓨틱스 에스.엘. 항-cd36 항체 및 암을 치료하기 위한 이의 용도
WO2023051926A1 (en) 2021-09-30 2023-04-06 BioNTech SE Treatment involving non-immunogenic rna for antigen vaccination and pd-1 axis binding antagonists
CA3234647A1 (en) 2021-10-06 2023-04-13 Genmab A/S Multispecific binding agents against pd-l1 and cd137 in combination therapy
TW202333802A (zh) 2021-10-11 2023-09-01 德商拜恩迪克公司 用於肺癌之治療性rna(二)
CA3224890A1 (en) 2021-10-29 2023-05-04 Bristol-Myers Squibb Company Lag-3 antagonist therapy for hematological cancer
WO2023083439A1 (en) 2021-11-09 2023-05-19 BioNTech SE Tlr7 agonist and combinations for cancer treatment
WO2023147371A1 (en) 2022-01-26 2023-08-03 Bristol-Myers Squibb Company Combination therapy for hepatocellular carcinoma
WO2023164638A1 (en) 2022-02-25 2023-08-31 Bristol-Myers Squibb Company Combination therapy for colorectal carcinoma
WO2023168404A1 (en) 2022-03-04 2023-09-07 Bristol-Myers Squibb Company Methods of treating a tumor
WO2023170606A1 (en) 2022-03-08 2023-09-14 Alentis Therapeutics Ag Use of anti-claudin-1 antibodies to increase t cell availability
WO2023178329A1 (en) 2022-03-18 2023-09-21 Bristol-Myers Squibb Company Methods of isolating polypeptides
WO2023196987A1 (en) 2022-04-07 2023-10-12 Bristol-Myers Squibb Company Methods of treating tumor
US20230326022A1 (en) 2022-04-08 2023-10-12 Bristol-Myers Squibb Company Machine Learning Identification, Classification, and Quantification of Tertiary Lymphoid Structures
WO2023218046A1 (en) 2022-05-12 2023-11-16 Genmab A/S Binding agents capable of binding to cd27 in combination therapy
WO2023235847A1 (en) 2022-06-02 2023-12-07 Bristol-Myers Squibb Company Antibody compositions and methods of use thereof
WO2024003360A1 (en) 2022-07-01 2024-01-04 Institut Curie Biomarkers and uses thereof for the treatment of neuroblastoma
EP4310197A1 (en) 2022-07-21 2024-01-24 Fundación para la Investigación Biomédica del Hospital Universitario Puerta de Hierro Majadahonda Method for identifying lung cancer patients for a combination treatment of immuno- and chemotherapy
WO2024023740A1 (en) 2022-07-27 2024-02-01 Astrazeneca Ab Combinations of recombinant virus expressing interleukin-12 with pd-1/pd-l1 inhibitors
WO2024023246A1 (en) * 2022-07-28 2024-02-01 Philogen S.P.A. Antibody binding to pd1
WO2024069009A1 (en) 2022-09-30 2024-04-04 Alentis Therapeutics Ag Treatment of drug-resistant hepatocellular carcinoma
WO2024105180A1 (en) 2022-11-16 2024-05-23 Boehringer Ingelheim International Gmbh Predictive efficacy biomarkers for anti-sirpa antibodies
WO2024116140A1 (en) 2022-12-01 2024-06-06 Medimmune Limited Combination therapy for treatment of cancer comprising anti-pd-l1 and anti-cd73 antibodies
WO2024115725A1 (en) 2022-12-01 2024-06-06 BioNTech SE Multispecific antibody against cd40 and cd137 in combination therapy with anti-pd1 ab and chemotherapy

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20140356363A1 (en) 2013-05-31 2014-12-04 Sorrento Therapeutics, Inc. Antigen Binding Proteins that Bind PD-1
US20150203579A1 (en) 2014-01-23 2015-07-23 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Human Antibodies to PD-1

Family Cites Families (287)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
GB1429184A (en) 1972-04-20 1976-03-24 Allen & Hanburys Ltd Physically anti-inflammatory steroids for use in aerosols
US4044126A (en) 1972-04-20 1977-08-23 Allen & Hanburys Limited Steroidal aerosol compositions and process for the preparation thereof
US4444887A (en) 1979-12-10 1984-04-24 Sloan-Kettering Institute Process for making human antibody producing B-lymphocytes
US4716111A (en) 1982-08-11 1987-12-29 Trustees Of Boston University Process for producing human antibodies
GB8308235D0 (en) 1983-03-25 1983-05-05 Celltech Ltd Polypeptides
US4816567A (en) 1983-04-08 1989-03-28 Genentech, Inc. Recombinant immunoglobin preparations
US5807715A (en) 1984-08-27 1998-09-15 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University Methods and transformed mammalian lymphocyte cells for producing functional antigen-binding protein including chimeric immunoglobulin
WO1986005807A1 (en) 1985-04-01 1986-10-09 Celltech Limited Transformed myeloma cell-line and a process for the expression of a gene coding for a eukaryotic polypeptide employing same
GB8601597D0 (en) 1986-01-23 1986-02-26 Wilson R H Nucleotide sequences
GB8607679D0 (en) 1986-03-27 1986-04-30 Winter G P Recombinant dna product
US5225539A (en) 1986-03-27 1993-07-06 Medical Research Council Recombinant altered antibodies and methods of making altered antibodies
US5869620A (en) 1986-09-02 1999-02-09 Enzon, Inc. Multivalent antigen-binding proteins
DE3883899T3 (de) 1987-03-18 1999-04-22 Sb2 Inc Geänderte antikörper.
GB8717430D0 (en) 1987-07-23 1987-08-26 Celltech Ltd Recombinant dna product
US5677425A (en) 1987-09-04 1997-10-14 Celltech Therapeutics Limited Recombinant antibody
US5223409A (en) 1988-09-02 1993-06-29 Protein Engineering Corp. Directed evolution of novel binding proteins
DE68927933T2 (de) 1988-09-02 1997-08-14 Dyax Corp Herstellung und auswahl von rekombinantproteinen mit verschiedenen bindestellen
US5530101A (en) 1988-12-28 1996-06-25 Protein Design Labs, Inc. Humanized immunoglobulins
US5413923A (en) 1989-07-25 1995-05-09 Cell Genesys, Inc. Homologous recombination for universal donor cells and chimeric mammalian hosts
GB8928874D0 (en) 1989-12-21 1990-02-28 Celltech Ltd Humanised antibodies
US5585112A (en) 1989-12-22 1996-12-17 Imarx Pharmaceutical Corp. Method of preparing gas and gaseous precursor-filled microspheres
US5780225A (en) 1990-01-12 1998-07-14 Stratagene Method for generating libaries of antibody genes comprising amplification of diverse antibody DNAs and methods for using these libraries for the production of diverse antigen combining molecules
WO1991010737A1 (en) 1990-01-11 1991-07-25 Molecular Affinities Corporation Production of antibodies using gene libraries
US6075181A (en) 1990-01-12 2000-06-13 Abgenix, Inc. Human antibodies derived from immunized xenomice
SG48759A1 (en) 1990-01-12 2002-07-23 Abgenix Inc Generation of xenogenic antibodies
IT1246382B (it) 1990-04-17 1994-11-18 Eurand Int Metodo per la cessione mirata e controllata di farmaci nell'intestino e particolarmente nel colon
US5427908A (en) 1990-05-01 1995-06-27 Affymax Technologies N.V. Recombinant library screening methods
GB9015198D0 (en) 1990-07-10 1990-08-29 Brien Caroline J O Binding substance
US5661016A (en) 1990-08-29 1997-08-26 Genpharm International Inc. Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies of various isotypes
US5625126A (en) 1990-08-29 1997-04-29 Genpharm International, Inc. Transgenic non-human animals for producing heterologous antibodies
US5633425A (en) 1990-08-29 1997-05-27 Genpharm International, Inc. Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies
US5545806A (en) 1990-08-29 1996-08-13 Genpharm International, Inc. Ransgenic non-human animals for producing heterologous antibodies
KR100272077B1 (ko) 1990-08-29 2000-11-15 젠팜인터내셔날,인코포레이티드 이종 항체를 생산할 수 있는 전이유전자를 가진 인간이외의 동물
US5814318A (en) 1990-08-29 1998-09-29 Genpharm International Inc. Transgenic non-human animals for producing heterologous antibodies
US5698426A (en) 1990-09-28 1997-12-16 Ixsys, Incorporated Surface expression libraries of heteromeric receptors
US5543390A (en) 1990-11-01 1996-08-06 State Of Oregon, Acting By And Through The Oregon State Board Of Higher Education, Acting For And On Behalf Of The Oregon Health Sciences University Covalent microparticle-drug conjugates for biological targeting
ATE164395T1 (de) 1990-12-03 1998-04-15 Genentech Inc Verfahren zur anreicherung von proteinvarianten mit geänderten bindungseigenschaften
WO1992018619A1 (en) 1991-04-10 1992-10-29 The Scripps Research Institute Heterodimeric receptor libraries using phagemids
DE69233482T2 (de) 1991-05-17 2006-01-12 Merck & Co., Inc. Verfahren zur Verminderung der Immunogenität der variablen Antikörperdomänen
JP4124480B2 (ja) 1991-06-14 2008-07-23 ジェネンテック・インコーポレーテッド 免疫グロブリン変異体
CA2110799A1 (en) 1991-06-14 1992-12-23 Arnold H. Horwitz Microbially-produced antibody fragments and their conjugates
US5637481A (en) 1993-02-01 1997-06-10 Bristol-Myers Squibb Company Expression vectors encoding bispecific fusion proteins and methods of producing biologically active bispecific fusion proteins in a mammalian cell
ES2136092T3 (es) 1991-09-23 1999-11-16 Medical Res Council Procedimientos para la produccion de anticuerpos humanizados.
PT1696031E (pt) 1991-12-02 2010-06-25 Medical Res Council Produção de auto-anticorpos a partir de reportórios de segmentos de anticorpo e exibidos em fagos
US5766886A (en) 1991-12-13 1998-06-16 Xoma Corporation Modified antibody variable domains
GB9203459D0 (en) 1992-02-19 1992-04-08 Scotgen Ltd Antibodies with germ-line variable regions
GB9206422D0 (en) 1992-03-24 1992-05-06 Bolt Sarah L Antibody preparation
US5733743A (en) 1992-03-24 1998-03-31 Cambridge Antibody Technology Limited Methods for producing members of specific binding pairs
US6174666B1 (en) 1992-03-27 2001-01-16 The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services Method of eliminating inhibitory/instability regions from mRNA
US6010715A (en) 1992-04-01 2000-01-04 Bertek, Inc. Transdermal patch incorporating a polymer film incorporated with an active agent
US6024975A (en) 1992-04-08 2000-02-15 Americare International Diagnostics, Inc. Method of transdermally administering high molecular weight drugs with a polymer skin enhancer
AU4116793A (en) 1992-04-24 1993-11-29 Board Of Regents, The University Of Texas System Recombinant production of immunoglobulin-like domains in prokaryotic cells
US6005079A (en) 1992-08-21 1999-12-21 Vrije Universiteit Brussels Immunoglobulins devoid of light chains
DK1087013T3 (da) 1992-08-21 2009-05-11 Univ Bruxelles Immunoglobuliner uden lette kæder
US5639641A (en) 1992-09-09 1997-06-17 Immunogen Inc. Resurfacing of rodent antibodies
US5837242A (en) 1992-12-04 1998-11-17 Medical Research Council Multivalent and multispecific binding proteins, their manufacture and use
US6274552B1 (en) 1993-03-18 2001-08-14 Cytimmune Sciences, Inc. Composition and method for delivery of biologically-active factors
US5523092A (en) 1993-04-14 1996-06-04 Emory University Device for local drug delivery and methods for using the same
US5985307A (en) 1993-04-14 1999-11-16 Emory University Device and method for non-occlusive localized drug delivery
US6838254B1 (en) 1993-04-29 2005-01-04 Conopco, Inc. Production of antibodies or (functionalized) fragments thereof derived from heavy chain immunoglobulins of camelidae
CA2163345A1 (en) 1993-06-16 1994-12-22 Susan Adrienne Morgan Antibodies
US6004534A (en) 1993-07-23 1999-12-21 Massachusetts Institute Of Technology Targeted polymerized liposomes for improved drug delivery
JPH09506262A (ja) 1993-12-08 1997-06-24 ジェンザイム・コーポレイション 特異的抗体の製造方法
GB9326253D0 (en) 1993-12-23 1994-02-23 Smithkline Beecham Biolog Vaccines
US5997873A (en) 1994-01-13 1999-12-07 Mount Sinai School Of Medicine Of The City University Of New York Method of preparation of heat shock protein 70-peptide complexes
DE69534347T2 (de) 1994-01-31 2006-05-24 Trustees Of Boston University, Boston Bibliotheken aus Polyklonalen Antikörpern
IL108501A (en) 1994-01-31 1998-10-30 Mor Research Applic Ltd Antibodies and pharmaceutical compositions containing them
US5516637A (en) 1994-06-10 1996-05-14 Dade International Inc. Method involving display of protein binding pairs on the surface of bacterial pili and bacteriophage
US5759542A (en) 1994-08-05 1998-06-02 New England Deaconess Hospital Corporation Compositions and methods for the delivery of drugs by platelets for the treatment of cardiovascular and other diseases
US5660854A (en) 1994-11-28 1997-08-26 Haynes; Duncan H Drug releasing surgical implant or dressing material
US5869046A (en) 1995-04-14 1999-02-09 Genentech, Inc. Altered polypeptides with increased half-life
US6121022A (en) 1995-04-14 2000-09-19 Genentech, Inc. Altered polypeptides with increased half-life
US5983134A (en) 1995-04-23 1999-11-09 Electromagnetic Bracing Systems Inc. Electrophoretic cuff apparatus drug delivery system
KR100654645B1 (ko) 1995-04-27 2007-04-04 아브게닉스, 인크. 면역화된 제노마우스 유래의 인간 항체
CA2219486A1 (en) 1995-04-28 1996-10-31 Abgenix, Inc. Human antibodies derived from immunized xenomice
US6316652B1 (en) 1995-06-06 2001-11-13 Kosta Steliou Drug mitochondrial targeting agents
US6167301A (en) 1995-08-29 2000-12-26 Flower; Ronald J. Iontophoretic drug delivery device having high-efficiency DC-to-DC energy conversion circuit
US5935576A (en) 1995-09-13 1999-08-10 Fordham University Compositions and methods for the treatment and prevention of neoplastic diseases using heat shock proteins complexed with exogenous antigens
GB9601081D0 (en) 1995-10-06 1996-03-20 Cambridge Antibody Tech Specific binding members for human transforming growth factor beta;materials and methods
CN1173878A (zh) 1995-10-16 1998-02-18 尤尼利弗公司 双功能或双价抗体片段类似物
US6039975A (en) 1995-10-17 2000-03-21 Hoffman-La Roche Inc. Colon targeted delivery system
JP2978435B2 (ja) 1996-01-24 1999-11-15 チッソ株式会社 アクリロキシプロピルシランの製造方法
WO1997034631A1 (en) 1996-03-18 1997-09-25 Board Of Regents, The University Of Texas System Immunoglobin-like domains with increased half lives
TW345603B (en) 1996-05-29 1998-11-21 Gmundner Fertigteile Gmbh A noise control device for tracks
US6027947A (en) 1996-08-20 2000-02-22 Ramtron International Corporation Partially or completely encapsulated top electrode of a ferroelectric capacitor
US5985317A (en) 1996-09-06 1999-11-16 Theratech, Inc. Pressure sensitive adhesive matrix patches for transdermal delivery of salts of pharmaceutical agents
CA2266629C (en) 1996-10-01 2002-04-16 Cima Labs Inc. Taste-masked microcapsule compositions and methods of manufacture
US5916771A (en) 1996-10-11 1999-06-29 Abgenix, Inc. Production of a multimeric protein by cell fusion method
US6131570A (en) 1998-06-30 2000-10-17 Aradigm Corporation Temperature controlling device for aerosol drug delivery
WO1998023289A1 (en) 1996-11-27 1998-06-04 The General Hospital Corporation MODULATION OF IgG BINDING TO FcRn
KR20080059467A (ko) 1996-12-03 2008-06-27 아브게닉스, 인크. 복수의 ｖｈ 및 ｖｋ 부위를 함유하는 사람 면역글로불린유전자좌를 갖는 형질전환된 포유류 및 이로부터 생성된항체
US5860957A (en) 1997-02-07 1999-01-19 Sarcos, Inc. Multipathway electronically-controlled drug delivery system
US6017540A (en) 1997-02-07 2000-01-25 Fordham University Prevention and treatment of primary and metastatic neoplastic diseases and infectious diseases with heat shock/stress protein-peptide complexes
US6277375B1 (en) 1997-03-03 2001-08-21 Board Of Regents, The University Of Texas System Immunoglobulin-like domains with increased half-lives
US6120751A (en) 1997-03-21 2000-09-19 Imarx Pharmaceutical Corp. Charged lipids and uses for the same
KR100663319B1 (ko) 1997-04-14 2007-01-02 마이크로메트 에이지 인간 17-1에이항원에 대해 특이성을 갖는 인간항체 및 그용도
US6060082A (en) 1997-04-18 2000-05-09 Massachusetts Institute Of Technology Polymerized liposomes targeted to M cells and useful for oral or mucosal drug delivery
US20020062010A1 (en) 1997-05-02 2002-05-23 Genentech, Inc. Method for making multispecific antibodies having heteromultimeric and common components
US7951917B1 (en) 1997-05-02 2011-05-31 Genentech, Inc. Method for making multispecific antibodies having heteromultimeric and common components
US6235883B1 (en) 1997-05-05 2001-05-22 Abgenix, Inc. Human monoclonal antibodies to epidermal growth factor receptor
US5948433A (en) 1997-08-21 1999-09-07 Bertek, Inc. Transdermal patch
ES2500490T3 (es) 1997-08-29 2014-09-30 Antigenics Inc. Composiciones que comprenden el adyuvante QS-21 y polisorbato o ciclodextrina como excipiente
KR100719273B1 (ko) 1997-10-28 2007-05-18 반도 카가쿠 가부시키가이샤 피부 패치 시트 및 그것을 위한 베이스 시트의 제조 방법
US5948646A (en) 1997-12-11 1999-09-07 Fordham University Methods for preparation of vaccines against cancer comprising heat shock protein-peptide complexes
US6194551B1 (en) 1998-04-02 2001-02-27 Genentech, Inc. Polypeptide variants
US6048736A (en) 1998-04-29 2000-04-11 Kosak; Kenneth M. Cyclodextrin polymers for carrying and releasing drugs
DE69929444T2 (de) 1998-08-10 2006-09-28 Antigenics Inc., Woburn Cpg-zusammensetzungen, saponin-adjuvantien und verfahren zu deren verwendung
US7109003B2 (en) 1998-12-23 2006-09-19 Abgenix, Inc. Methods for expressing and recovering human monoclonal antibodies to CTLA-4
KR101077001B1 (ko) 1999-01-15 2011-10-26 제넨테크, 인크. 효과기 기능이 변화된 폴리펩티드 변이체
US6737056B1 (en) 1999-01-15 2004-05-18 Genentech, Inc. Polypeptide variants with altered effector function
IL129299A0 (en) 1999-03-31 2000-02-17 Mor Research Applic Ltd Monoclonal antibodies antigens and diagnosis of malignant diseases
US6271359B1 (en) 1999-04-14 2001-08-07 Musc Foundation For Research Development Tissue-specific and pathogen-specific toxic agents and ribozymes
US6256533B1 (en) 1999-06-09 2001-07-03 The Procter & Gamble Company Apparatus and method for using an intracutaneous microneedle array
WO2001014557A1 (en) 1999-08-23 2001-03-01 Dana-Farber Cancer Institute, Inc. Pd-1, a receptor for b7-4, and uses therefor
US7605238B2 (en) 1999-08-24 2009-10-20 Medarex, Inc. Human CTLA-4 antibodies and their uses
CN1371416B (zh) 1999-08-24 2012-10-10 梅达里克斯公司 人ctla-4抗体及其应用
DE60042789D1 (de) 1999-11-29 2009-10-01 Bac Ip B V Immobilisierte antigenbindende moleküle aus einer domäne
EP1261376A1 (en) 2000-01-27 2002-12-04 Genetics Institute, LLC Antibodies against ctla4(cd152), conjugates comprising same, and uses thereof
EP1125905A1 (en) 2000-02-16 2001-08-22 Pepscan Systems B.V. Segment synthesis
US6261595B1 (en) 2000-02-29 2001-07-17 Zars, Inc. Transdermal drug patch with attached pocket for controlled heating device
PT2281843T (pt) * 2000-06-16 2017-01-02 Human Genome Sciences Inc Anticorpos que se ligam imunoespecificamente a blys
EP1197755A1 (en) 2000-10-11 2002-04-17 Pepscan Systems B.V. Identification of protein binding sites
EP1355919B1 (en) 2000-12-12 2010-11-24 MedImmune, LLC Molecules with extended half-lives, compositions and uses thereof
US7658921B2 (en) 2000-12-12 2010-02-09 Medimmune, Llc Molecules with extended half-lives, compositions and uses thereof
NZ527460A (en) 2001-02-16 2006-07-28 Pepscan Systems B Arrays for determining binding of biomolecules
AR036993A1 (es) 2001-04-02 2004-10-20 Wyeth Corp Uso de agentes que modulan la interaccion entre pd-1 y sus ligandos en la submodulacion de respuestas inmunologicas
EP2298809A3 (en) 2001-07-12 2012-02-15 FOOTE, Jefferson Super humanized antibodies
JP4249013B2 (ja) 2001-07-31 2009-04-02 佑 本庶 Ｐｄ−１に対し特異性を有する物質
US20040014194A1 (en) 2002-03-27 2004-01-22 Schering Corporation Beta-secretase crystals and methods for preparing and using the same
IL149820A0 (en) 2002-05-23 2002-11-10 Curetech Ltd Humanized immunomodulatory monoclonal antibodies for the treatment of neoplastic disease or immunodeficiency
PT2206517T (pt) 2002-07-03 2023-11-07 Tasuku Honjo Composições de imunopotenciação contendo anticorpos anti-pd-l1
ES2367430T3 (es) 2002-12-23 2011-11-03 Wyeth Llc Anticuerpos contra pd-1 y sus usos.
US9068234B2 (en) 2003-01-21 2015-06-30 Ptc Therapeutics, Inc. Methods and agents for screening for compounds capable of modulating gene expression
EP1591527B1 (en) 2003-01-23 2015-08-26 Ono Pharmaceutical Co., Ltd. Substance specific to human pd-1
AU2004280333A1 (en) 2003-08-22 2005-04-21 Medimmune, Llc Humanization of antibodies
US7288638B2 (en) 2003-10-10 2007-10-30 Bristol-Myers Squibb Company Fully human antibodies against human 4-1BB
GB0400440D0 (en) 2004-01-09 2004-02-11 Isis Innovation Receptor modulators
US20090304679A1 (en) 2004-05-27 2009-12-10 Weidanz Jon A Antibodies as T cell receptor mimics, methods of production and uses thereof
WO2006042237A2 (en) 2004-10-06 2006-04-20 Mayo Foundation For Medical Education And Research B7-h1 and methods of diagnosis, prognosis, and treatment of cancer
PL1838733T3 (pl) * 2004-12-21 2012-02-29 Medimmune Ltd Przeciwciała skierowane przeciwko angiopoetynie-2 i ich zastosowania
DE102004063494A1 (de) 2004-12-23 2006-07-13 Tegenero Ag Antikörper
US20060240006A1 (en) 2005-04-20 2006-10-26 Chishih Chu Novel antibody structures derived from human germline sequences
ES2427646T5 (es) 2005-05-09 2017-08-22 Ono Pharmaceutical Co., Ltd. Anticuerpos monoclonales humanos contra muerte programada 1 (PD1) y métodos para el tratamiento del cáncer mediante el uso de anticuerpos anti-PD-1 solos o combinados con otros agentes inmunoterapéuticos
KR101600225B1 (ko) 2005-06-08 2016-03-04 다나-파버 캔서 인스티튜트 인크. 예정 세포사 1(ｐｄ-1) 경로를 억제함으로써 지속 감염 및 암을 치료하기 위한 방법 및 조성물
TW200813091A (en) * 2006-04-10 2008-03-16 Amgen Fremont Inc Targeted binding agents directed to uPAR and uses thereof
AU2007331672A1 (en) 2006-12-15 2008-06-19 Ablynx N.V. Amino acid sequences that modulate the interaction between cells of the immune system
JP5623747B2 (ja) 2006-12-27 2014-11-12 エモリー ユニバーシティ 感染症および腫瘍を処置するための組成物および方法
RS53072B (en) 2007-06-18 2014-04-30 Merck Sharp & Dohme B.V. HUMAN RECEPTOR ANTIBODIES PROGRAMMED DEATH PD-1
JP5932217B2 (ja) 2007-07-12 2016-06-08 ジーアイティーアール， インコーポレイテッド Ｇｉｔｒ結合分子を使用する併用療法
WO2009024531A1 (en) 2007-08-17 2009-02-26 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Method for treating and diagnosing hematologic malignancies
RS56743B1 (sr) * 2007-08-21 2018-03-30 Amgen Inc Humani c-fms antigen vezujući proteini
CA2697032C (en) 2007-08-22 2021-09-14 The Regents Of The University Of California Activatable binding polypeptides and methods of identification and use thereof
SG187477A1 (en) * 2007-09-26 2013-02-28 U3 Pharma Gmbh Heparin-binding epidermal growth factor-like growth factor antigen binding proteins
US8227577B2 (en) 2007-12-21 2012-07-24 Hoffman-La Roche Inc. Bivalent, bispecific antibodies
EP2262837A4 (en) 2008-03-12 2011-04-06 Merck Sharp & Dohme PD-1 BINDING PROTEINS
US20090258013A1 (en) 2008-04-09 2009-10-15 Genentech, Inc. Novel compositions and methods for the treatment of immune related diseases
WO2010003118A1 (en) * 2008-07-02 2010-01-07 Trubion Pharmaceuticals, Inc. Tgf-b antagonist multi-target binding proteins
AU2009268739B2 (en) 2008-07-08 2014-05-08 Incyte Holdings Corporation 1,2,5-oxadiazoles as inhibitors of indoleamine 2,3-dioxygenase
AR072999A1 (es) 2008-08-11 2010-10-06 Medarex Inc Anticuerpos humanos que se unen al gen 3 de activacion linfocitaria (lag-3) y los usos de estos
US9181342B2 (en) 2008-09-12 2015-11-10 Isis Innovation Limited PD-1 specific antibodies and uses thereof
AU2009290544B2 (en) 2008-09-12 2015-07-16 Oxford University Innovation Limited PD-1 specific antibodies and uses thereof
PL2342226T3 (pl) 2008-09-26 2017-01-31 Dana-Farber Cancer Institute, Inc. Ludzkie przeciwciała anty-PD-1, PD-L1 i PD-L2 oraz ich zastosowania
KR101050829B1 (ko) 2008-10-02 2011-07-20 서울대학교산학협력단 항 ｐｄ-1 항체 또는 항 ｐｄ-ｌ1 항체를 포함하는 항암제
US8741295B2 (en) 2009-02-09 2014-06-03 Universite De La Mediterranee PD-1 antibodies and PD-L1 antibodies and uses thereof
GB0903325D0 (en) 2009-02-26 2009-04-08 Univ Aberdeen Antibody molecules
WO2010102278A1 (en) 2009-03-06 2010-09-10 President And Fellows Of Harvard College Methods and compositions for the generation and maintenance of regulatory t cells
WO2010108153A2 (en) * 2009-03-20 2010-09-23 Amgen Inc. Carrier immunoglobulins and uses thereof
RU2522002C2 (ru) 2009-06-26 2014-07-10 Ридженерон Фармасьютикалз, Инк. Легковыделяемые биспецифические антитела с природным иммуноглобулиновым форматом
EP2545078A1 (en) 2010-03-11 2013-01-16 UCB Pharma, S.A. Pd-1 antibody
TW201134488A (en) 2010-03-11 2011-10-16 Ucb Pharma Sa PD-1 antibodies
US9163087B2 (en) 2010-06-18 2015-10-20 The Brigham And Women's Hospital, Inc. Bi-specific antibodies against TIM-3 and PD-1 for immunotherapy in chronic immune conditions
MY171312A (en) 2010-08-23 2019-10-08 Univ Texas Anti-ox40 antibodies and methods of using the same
GB201103955D0 (en) 2011-03-09 2011-04-20 Antitope Ltd Antibodies
WO2012129520A1 (en) 2011-03-24 2012-09-27 Texas Tech University System Tcr mimic antibodies as vascular targeting tools
LT2691112T (lt) 2011-03-31 2018-07-25 Merck Sharp & Dohme Corp. Stabilios antikūnų kompozicijos prieš žmogaus programuojamos mirties receptorių pd-1 ir susiję gydymo būdai
JP6082997B2 (ja) 2011-04-01 2017-02-22 メモリアル スローン−ケタリング キャンサー センター Ｈｌａ−ａ２により提示されるｗｔ１ペプチドへのｔ細胞受容体様抗体
MX338353B (es) 2011-04-20 2016-04-13 Medimmune Llc Anticuerpos y otras moleculas que se unen a b7 - h1 y pd - 1.
AU2012273182A1 (en) 2011-06-21 2014-01-16 The Johns Hopkins University Focused radiation for augmenting immune-based therapies against neoplasms
EP3939613A1 (en) 2011-08-11 2022-01-19 ONO Pharmaceutical Co., Ltd. Therapeutic agent for autoimmune diseases comprising pd-1 agonist
EP2850102A1 (en) 2012-05-15 2015-03-25 Bristol-Myers Squibb Company Cancer immunotherapy by disrupting pd-1/pd-l1 signaling
CN104736174B (zh) 2012-07-06 2019-06-14 根马布私人有限公司 具有三重突变的二聚体蛋白质
EP2892558B1 (en) 2012-09-07 2019-04-10 The Trustees Of Dartmouth College Vista modulators for diagnosis and treatment of cancer
KR102229873B1 (ko) 2012-10-12 2021-03-19 더 브리검 앤드 우먼즈 하스피털, 인크. 면역 반응의 향상
CA2889182A1 (en) 2012-10-26 2014-05-01 The University Of Chicago Synergistic combination of immunologic inhibitors for the treatment of cancer
EA201590396A1 (ru) 2012-12-13 2015-12-30 Адуро Биотек, Инк. Композиция, содержащая циклические пуриновые динуклеотиды с определенной стереохимией, и способ ее получения и применения
ES2721168T3 (es) 2013-01-11 2019-07-29 Dingfu Biotarget Co Ltd Agentes para tratar tumores, uso y método de los mismos
EP3292873B1 (en) 2013-02-22 2019-05-01 CureVac AG Combination of vaccination and inhibition of the pd-1 pathway
US9974845B2 (en) 2013-02-22 2018-05-22 Curevac Ag Combination of vaccination and inhibition of the PD-1 pathway
EP2968985A2 (en) * 2013-03-15 2016-01-20 Amgen, Inc. Human antigen binding proteins that bind to proprotein convertase subtilisin kexin type 9
US10047137B2 (en) 2013-04-05 2018-08-14 Versitech Limited Antibodies against novel PD1 isoforms and uses thereof
CN105339389B (zh) * 2013-05-02 2021-04-27 安奈普泰斯生物有限公司 针对程序性死亡-1(pd-1)的抗体
WO2014209804A1 (en) 2013-06-24 2014-12-31 Biomed Valley Discoveries, Inc. Bispecific antibodies
CN104250302B (zh) 2013-06-26 2017-11-14 上海君实生物医药科技股份有限公司 抗pd‑1抗体及其应用
GB201311487D0 (en) 2013-06-27 2013-08-14 Alligator Bioscience Ab Bispecific molecules
RS60826B1 (sr) 2013-07-16 2020-10-30 Hoffmann La Roche Postupci lečenja kancera upotrebom antagonista vezivanja pd-1 ose i tigit inhibitora
AR097306A1 (es) 2013-08-20 2016-03-02 Merck Sharp & Dohme Modulación de la inmunidad tumoral
KR20160055819A (ko) 2013-08-22 2016-05-18 더 카운실 오브 더 퀸즐랜드 인스티튜트 오브 메디컬 리서치 암 및 바이러스 감염을 치료하기 위한 면역수용체 조절
US10077305B2 (en) 2013-09-10 2018-09-18 Medimmune Limited Antibodies against PD-1 and uses thereof
JP6623353B2 (ja) 2013-09-13 2019-12-25 ベイジーン スウィッツァーランド ゲーエムベーハー 抗ｐｄ−１抗体並びにその治療及び診断のための使用
EP3049442A4 (en) 2013-09-26 2017-06-28 Costim Pharmaceuticals Inc. Methods for treating hematologic cancers
IL292510A (en) 2013-11-05 2022-06-01 Cognate Bioservices Inc Combinations of checkpoint inhibitors and cancer drugs
US9580504B1 (en) 2013-11-07 2017-02-28 Curetech Ltd. Pidilizumab monoclonal antibody therapy following stem cell transplantation
CN105744955B (zh) 2013-11-25 2020-03-20 希凯姆生物治疗有限公司 用于癌症治疗的包含抗ceacam1抗体和抗pd抗体的组合物
CN105026428B (zh) 2013-12-12 2018-01-16 上海恒瑞医药有限公司 PD‑l抗体、其抗原结合片段及其医药用途
US9067998B1 (en) 2014-07-15 2015-06-30 Kymab Limited Targeting PD-1 variants for treatment of cancer
KR20160099092A (ko) 2013-12-17 2016-08-19 제넨테크, 인크. Ox40 결합 효능제 및 pd-1 축 결합 길항제를 포함하는 조합 요법
US11708411B2 (en) 2013-12-20 2023-07-25 Wake Forest University Health Sciences Methods and compositions for increasing protective antibody levels induced by pneumococcal polysaccharide vaccines
CN106456724A (zh) 2013-12-20 2017-02-22 博德研究所 使用新抗原疫苗的联合疗法
PT3083694T (pt) 2013-12-20 2024-02-01 Intervet Int Bv Anticorpos murinos caninizados anti-pd-1 canino
WO2015103602A1 (en) 2014-01-06 2015-07-09 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Pd1 and pdl1 antibodies and vaccine combinations and use of same for immunotherapy
JOP20200094A1 (ar) * 2014-01-24 2017-06-16 Dana Farber Cancer Inst Inc جزيئات جسم مضاد لـ pd-1 واستخداماتها
JOP20200096A1 (ar) 2014-01-31 2017-06-16 Children’S Medical Center Corp جزيئات جسم مضاد لـ tim-3 واستخداماتها
CN106255510A (zh) 2014-03-05 2016-12-21 百时美施贵宝公司 使用抗pd‑1抗体与另一抗癌剂的组合治疗肾癌
US9394365B1 (en) 2014-03-12 2016-07-19 Yeda Research And Development Co., Ltd Reducing systemic regulatory T cell levels or activity for treatment of alzheimer's disease
AU2015249374A1 (en) 2014-04-24 2016-12-01 Dana-Farber Cancer Institute, Inc. Tumor suppressor and oncogene biomarkers predictive of anti-immune checkpoint inhibitor response
KR20170003692A (ko) 2014-05-15 2017-01-09 브리스톨-마이어스 스큅 컴퍼니 항-pd-1 항체 및 또 다른 항암제의 조합물을 사용한 폐암의 치료
AU2015265859A1 (en) 2014-05-29 2016-12-15 Medimmune Limited Antagonists of PDL-1 and PD-1 for the treatment of HPV-negative cancers
US10092645B2 (en) 2014-06-17 2018-10-09 Medimmune Limited Methods of treatment with antagonists against PD-1 and PD-L1 in combination with radiation therapy
TWI687438B (zh) 2014-07-03 2020-03-11 英屬開曼群島商百濟神州生物科技有限公司 抗ｐｄ-ｌ１抗體及其作為治療及診斷之用途
EP3166975A1 (en) 2014-07-07 2017-05-17 Dana-Farber Cancer Institute, Inc. Methods of treating cancer
US10428146B2 (en) 2014-07-22 2019-10-01 Cb Therapeutics, Inc. Anti PD-1 antibodies
CN105330740B (zh) 2014-07-30 2018-08-17 珠海市丽珠单抗生物技术有限公司 抗pd-1抗体及其应用
EP3936145A1 (en) 2014-07-31 2022-01-12 The University Of Western Australia A method for the identification of immunotherapy-drug combinations using a network approach
CN105296433B (zh) 2014-08-01 2018-02-09 中山康方生物医药有限公司 一种ctla4抗体、其药物组合物及其用途
US9982052B2 (en) 2014-08-05 2018-05-29 MabQuest, SA Immunological reagents
WO2016024228A1 (en) 2014-08-11 2016-02-18 Acerta Pharma B.V. Therapeutic combinations of a btk inhibitor, a pi3k inhibitor, a jak-2 inhibitor, a pd-1 inhibitor and/or a pd-l1 inhibitor
JP6920194B2 (ja) 2014-08-19 2021-08-18 メルク・シャープ・アンド・ドーム・コーポレーションＭｅｒｃｋ Ｓｈａｒｐ ＆ Ｄｏｈｍｅ Ｃｏｒｐ． 抗ｔｉｇｉｔ抗体
WO2016029073A2 (en) 2014-08-22 2016-02-25 Bristol-Myers Squibb Company Treatment of cancer using a combination of an anti-pd-1 antibody and an anti-cd137 antibody
US20170209574A1 (en) 2014-10-03 2017-07-27 Novartis Ag Combination therapies
UY36351A (es) 2014-10-14 2016-06-01 Novartis Ag Moléculas de anticuerpo que se unen a pd-l1 y usos de las mismas
GB201419084D0 (en) 2014-10-27 2014-12-10 Agency Science Tech & Res Anti-PD-1 antibodies
US10822414B2 (en) 2014-11-11 2020-11-03 Sutro Biopharma, Inc. Anti-PD-1 antibodies, compositions comprising anti-PD-1 antibodies and methods of using anti-PD-1 antibodies
CN113694193A (zh) 2014-11-13 2021-11-26 约翰·霍普金斯大学 检查点阻断和微卫星不稳定性
TWI595006B (zh) 2014-12-09 2017-08-11 禮納特神經系統科學公司 抗ｐｄ－１抗體類和使用彼等之方法
JP2018500332A (ja) 2014-12-16 2018-01-11 ブリストル−マイヤーズ スクイブ カンパニーＢｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂ Ｃｏｍｐａｎｙ 中枢神経系新生物における免疫チェックポイント阻害剤の使用
DK3237446T3 (en) 2014-12-22 2021-07-26 Pd 1 Acquisition Group Llc Anti-PD-1-antistoffer
MA40662B1 (fr) 2014-12-23 2020-12-31 Bristol Myers Squibb Co Anticorps contre tigit
EA201791768A1 (ru) 2015-02-06 2018-07-31 КАДМОН КОРПОРЕЙШН, ЭлЭлСи Иммуномодулирующие агенты
NZ733854A (en) 2015-02-26 2022-07-01 Merck Patent Gmbh Pd-1 / pd-l1 inhibitors for the treatment of cancer
AR103726A1 (es) 2015-02-27 2017-05-31 Merck Sharp & Dohme Cristales de anticuerpos monoclonales anti-pd-1 humanos
WO2016149387A1 (en) 2015-03-18 2016-09-22 The Johns Hopkins University Androgen deprivation with immune checkpoint blockade delays the development of castration resistant prostate cancer
WO2016168143A1 (en) 2015-04-14 2016-10-20 Bristol-Myers Squibb Company IMMUNOASSAY FOR SOLUBLE PROGRAMMED DEATH-1 (sPD-1) PROTEIN
WO2016172624A1 (en) 2015-04-22 2016-10-27 Agenus Inc. Methods for treating cancer
KR20170140316A (ko) 2015-04-28 2017-12-20 브리스톨-마이어스 스큅 컴퍼니 항-pd-1 항체를 사용한 pd-l1-양성 흑색종의 치료
JP2018514550A (ja) 2015-04-28 2018-06-07 ブリストル−マイヤーズ スクイブ カンパニーＢｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂ Ｃｏｍｐａｎｙ 抗ｐｄ−１抗体および抗ｃｔｌａ−４抗体を使用するｐｄ−ｌ１陰性黒色腫の処置
MA42043A (fr) 2015-05-07 2018-03-14 Agenus Inc Anticorps anti-ox40 et procédés d'utilisation de ceux-ci
WO2016183469A1 (en) 2015-05-13 2016-11-17 Robert Kirken Anti-ctla-4 blockade
US20160347836A1 (en) 2015-05-28 2016-12-01 Bristol-Myers Squibb Company Treatment of hodgkin's lymphoma using an anti-pd-1 antibody
WO2016196389A1 (en) 2015-05-29 2016-12-08 Bristol-Myers Squibb Company Treatment of renal cell carcinoma
EP3303394B1 (en) 2015-05-29 2020-04-08 Agenus Inc. Anti-ctla-4 antibodies and methods of use thereof
CN105061597B (zh) 2015-06-09 2016-04-27 北京东方百泰生物科技有限公司 一种抗pd-1的单克隆抗体及其获得方法
CA2986263A1 (en) 2015-06-17 2016-12-22 Genentech, Inc. Methods of treating locally advanced or metastatic breast cancers using pd-1 axis binding antagonists and taxanes
AU2016281641B2 (en) 2015-06-23 2022-01-20 Eureka Therapeutics, Inc. Novel PD-1 immune modulating agents
KR20180040138A (ko) 2015-07-13 2018-04-19 싸이톰스 테라퓨틱스, 인크. 항pd-1 항체, 활성화 가능한 항pd-1 항체, 및 이들의 사용 방법
RS61532B1 (sr) 2015-07-14 2021-04-29 Bristol Myers Squibb Co Postupak lečenja kancera primenom inhibitora imunološke kontrolne tačke; antitelo koje se vezuje za receptor programirane smrti-1 (pd-1) ili ligand programirane smrti-1 (pd-l1)
CN106699888B (zh) 2015-07-28 2020-11-06 上海昀怡健康科技发展有限公司 一种pd-1抗体及其制备方法和应用
DK3328419T3 (da) 2015-07-30 2021-10-11 Macrogenics Inc Pd-1-bindingsmolekyler og fremgangsmåder til anvendelse deraf
WO2017024465A1 (en) 2015-08-10 2017-02-16 Innovent Biologics (Suzhou) Co., Ltd. Pd-1 antibodies
WO2017024515A1 (en) 2015-08-11 2017-02-16 Wuxi Biologics (Cayman) Inc. Novel anti-pd-1 antibodies
EA201890630A1 (ru) 2015-09-01 2018-10-31 Эйдженус Инк. Антитела против pd-1 и способы их применения
RU2732591C2 (ru) 2015-09-25 2020-09-21 Дженентек, Инк. Анти-tigit антитела и способы применения
MX2018003306A (es) 2015-09-28 2018-05-16 Suzhou Suncadia Biopharmaceuticals Co Ltd Preparacion farmaceutica de anticuerpo anti-pd-1 estable y aplicacion del mismo en medicina.
CA3000638C (en) 2015-09-29 2024-02-27 Asia Biotech Pte. Ltd. Pd-1 antibodies and uses thereof
BR112018006237A2 (pt) 2015-09-29 2018-10-09 Celgene Corp proteínas de ligação a pd-1 e métodos de uso das mesmas
CN108368176B (zh) 2015-10-01 2022-06-07 波滕扎治疗公司 抗tigit抗原结合蛋白及其使用方法
JP6875385B2 (ja) 2015-10-02 2021-05-26 シムフォゲン・アクティーゼルスカブＳｙｍｐｈｏｇｅｎ Ａ／Ｓ 抗ｐｄ−１抗体および組成物
PE20181092A1 (es) 2015-10-02 2018-07-09 Hoffmann La Roche Anticuerpos anti-pd1 y metodos de uso
WO2017079303A1 (en) 2015-11-02 2017-05-11 The Cleveland Clinic Foundation Sequentially orchestrated immune checkpoint therapy for the treatment and prevention of cancer
WO2017079080A1 (en) 2015-11-02 2017-05-11 The Johns Hopkins University Method of preventing organ transplant rejections using agonists to the pd-1 checkpoint pathway
WO2017087280A1 (en) 2015-11-16 2017-05-26 Genentech, Inc. Methods of treating her2-positive cancer
CN106699889A (zh) 2015-11-18 2017-05-24 礼进生物医药科技（上海）有限公司 抗pd-1抗体及其治疗用途
CN109152798B (zh) 2015-12-02 2022-10-21 斯特库比股份有限公司 特异于糖基化的pd-1的抗体及其使用方法
GB201522311D0 (en) 2015-12-17 2016-02-03 Photocure Asa Use
US10392442B2 (en) 2015-12-17 2019-08-27 Bristol-Myers Squibb Company Use of anti-PD-1 antibody in combination with anti-CD27 antibody in cancer treatment
CN105669864B (zh) 2015-12-23 2018-10-16 杭州尚健生物技术有限公司 抗人程序性死亡受体1抗体及其制备方法和用途
EP3402520A4 (en) 2016-01-14 2019-01-02 BPS Bioscience, Inc. Anti-pd-1 antibodies and uses thereof
EP3964529A1 (en) 2016-01-22 2022-03-09 Mabquest SA Non-blocking pd1 specific antibodies
CN108602892A (zh) 2016-01-27 2018-09-28 百时美施贵宝公司 使用抗-pd-1抗体和另一种抗癌剂的组合治疗肺癌
US10918737B2 (en) 2016-01-28 2021-02-16 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Methods and pharmaceutical composition for the treatment of cancer
WO2017129763A1 (en) 2016-01-28 2017-08-03 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Methods and pharmaceutical compositions for the treatment of signet ring cell gastric cancer
AU2017211383A1 (en) 2016-01-28 2018-08-16 Indiana University Research & Technology Corporation Use of histone deacetylase inhibitors for enhancing immunotherapies
WO2017132827A1 (en) 2016-02-02 2017-08-10 Innovent Biologics (Suzhou) Co., Ltd. Pd-1 antibodies
WO2017147368A1 (en) 2016-02-24 2017-08-31 Oncomed Pharmaceuticals, Inc. Redirecting immune responses
WO2017151517A1 (en) 2016-02-29 2017-09-08 Foundation Medicine, Inc. Methods of treating cancer
AU2017225854B2 (en) 2016-02-29 2020-11-19 Foundation Medicine, Inc. Therapeutic and diagnostic methods for cancer
WO2017160975A1 (en) 2016-03-16 2017-09-21 Bristol-Myers Squibb Company Methods of diagnosing and treating lupus
CN110300599A (zh) * 2016-12-07 2019-10-01 艾吉纳斯公司 抗体和其使用方法

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20140356363A1 (en) 2013-05-31 2014-12-04 Sorrento Therapeutics, Inc. Antigen Binding Proteins that Bind PD-1
US20150203579A1 (en) 2014-01-23 2015-07-23 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Human Antibodies to PD-1

Also Published As

Publication number Publication date
WO2017040790A1 (en) 2017-03-09
US10323091B2 (en) 2019-06-18
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US10450373B2 (en) 2019-10-22
US11345755B2 (en) 2022-05-31
MA48579A (fr) 2020-03-18

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