KR101353748B1

KR101353748B1 - 셀 접착성 증가에 의한 피부 경도 향상용 화장용 조성물준비에의 엑스-이솔레우실-리실-바릴-알라닐-바린-와이펩타이드의 용도

Info

Publication number: KR101353748B1
Application number: KR1020067022761A
Authority: KR
Inventors: 누리아 알미나나 도메니크; 조세 마리아 가르시아 안톤; 주안 세브리안느 푸세; 아르투로 푸이그 몬티엘
Original assignee: 리포텍 에스.에이.
Priority date: 2004-04-28
Filing date: 2005-04-05
Publication date: 2014-01-21
Also published as: BRPI0510257A; ZA200608996B; CA2564312A1; RU2006137956A; ES2293753B1; EP1741421A1; US7943156B2; WO2005105029A1; CA2564312C; MXPA06012495A; AU2005237268A1; RU2371167C2; CN1964694A; AU2005237268B2; ES2293753A1; ES2501941T3; JP5384824B2; US20080085852A1; BRPI0510257B1; EP1741421B1

Abstract

본 발명은 피부 세포 상호 및 기저막과의 접착성을 증가시킴으로써 피부의 탄력을 향상시키기 위한 화장품용 조성물에 관한 것이다. 본 발명의 조성물은 도 1의 XIKVAV의 일반 화학식 X-이소부실-라이실-바릴-알라닐-바린-Y을 갖는 화장품용으로서 유효량의 펩타이드를 포함한다. 본 발명은 피부의 탄력을 향상시키는 화장품용 조성물의 제조에 있어 XIKVAV 펩타이드의 사용에 관한 것이다.

화장용 조성물

Description

셀 접착성 증가에 의한 피부 경도 향상용 화장용 조성물 준비에의 엑스-이솔레우실-리실-바릴-알라닐-바린-와이 펩타이드의 용도{USE OF XIKVAV PEPTIDES IN THE PREPARATION OF COSMETIC COMPOSITIONS WHICH ARE INTENDED TO IMPROVE THE FIRMNESS OF THE SKIN BY INCREASING CELL ADHESION}

본 발명은 피부 세포 상호 및 기저막(basal lamina)과의 접착성을 증가시킴으로써, 피부의 경도(firmness), 즉 탄력을 향상시키기 위한 화장품용 조성물에 관한 것이다. 상술한 조성물은 화장품으로서 유효량의 펩타이드, 아래 화학식 I의 일반 화학식 X-이솔레우실-리실-바릴-알라닐-바린-Y(X-isoleucyl-lysyl-valyl-alanyl-valine-Y: 이하 XIKVAV라 약칭함)를 포함한다. 일반 화학식 I에서, X는 H, 아미노산, 또는 직쇄 또는 분기형의 아실기일 수 있고(도 1 참조), Y는 아미노기, 하이드록실기 또는 티올기일 수 있으며, 이들 모두는 지방산으로 치환되거나 치환되지 않은 것이다.

(일반 화학식 I)

피부는 인체의 가장 큰 조직이다. 피부는 2개층으로 구별될 수 있다 : 표피와 진피. 이러한 2개 층이 다른 고분자 (콜라겐, 라미닌, 프로테오글리칸 등)에 의해 형성된 매트릭스인 기저막을 통하여 결합된다.

기저막은 IV형 콜라겐, 프로테오글리칸 그리고 글리코프로테인(당단백)인 엔탁틴 및 라미닌이 풍부하다

이러한 분자들은 셀 바인딩(세포 결합)을 위한 생체 접착 특성뿐만 아니라 구조상의 망상구조를 제공한다. 라미닌 시퀀스(배열)는 IV형 콜라겐, 펄레칸(perlecan: 헤파란 설페이트 프로테오글리칸, heparan sulphate proteoglycan), 엔탁틴 그리고 셀(cell) 표면에 있는 수용 기관(receptor)을 위한 여러 결합 도메인을 포함한다.

이러한 기저막은 3 층으로 형성된 분화된 세포외 매트릭스이다:

- 라미나 루시다(투명층: Lamina lucida) : 이 층은 기저 케라티노사이트(basal keratinocyte)에 직접 접촉되고 그 주요 성분은 라미닌이다.

- 라미나 덴사(치밀층: Lamina densa) : 이 층은 투명층의 라미나 루시다 아래에 위치하고 거의 비슷한 두께로 평행하게 연장된다. 이것은 IV형 콜라겐이 주성분인 부정형(不定形)의 물질이고 기저막의 큰 신축성(유연성)과 인장 강도에 관여한다.

- 망상 라미나(망상막: Reticular lamina) : 이 망상막은 전술한 층의 아래에 있지만, 그 위치가 부정확하고, 진피의 섬유아세포(fibroblast)에 유래한다. 고착 피브릴과 치밀층에 도입되는 탄성 마이크로피브릴(microfibril)에 의해 형성되고 기저막을 유지하고 피부 조직으로의 접착을 제공한다. 고착 피브릴은 Ⅳ형 콜라겐에 의해 형성되는 구조물이다.

라미닌은 전술한 라미나들, 라미나 루시다(투명층)에서 최초로 발견되고, 그의 주 조성 성분이다.

라미닌은 약 850 kDa의 글리코프로테인이고, 그것은 콜라겐 다음으로 세포외 매트릭스(ECM)에서 가장 풍부한 프로테인이다. 라미닌은 통상 기저막에서 발견되고, 크로스 형태로 분포되는 3개의 긴 폴리펩티드 사슬(알파, 베타와 감마)에 의해 형성되고, 디설파이드 가교에 의해 결합된다.

상기 3개 사슬들은 여러 라미닌 서브타입으로 존재하고, 그들 조합에 의해 12종의 다른 라미닌의 아이소폼(isoform)이 존재하며, 그중 라미닌-1이 가장 많이 연구되고 있다.

인테그린(integrin)은 라미닌의 인식에 관여하는 가장 중요한 수용체이고, 지금까지 발견된 첫번째 ECM 수용체이다. 이 수용체는 세포-세포, 그리고 세포-ECM 상호작용을 책임지고 있는, 한 그룹의 막관통세포의 표면 수용체이다.

세포는 수용체 인테그린을 통해 라미닌의 결합도메인들을 인식하고, 그 결과 라미닌이 풍부한 기저막과 결합한다. 수용체 인테그린은 또한 특정 리간드를 통하여 셀들 사이의 결합을 매개한다.

피부의 노화는 피부가 경험하는 진피의 과정 중 하나이고, 모든 살아 있는 유기체에 공통적인 생물학적인 과정이다.

피부의 노화 과정이 일어날 때, 피부의 기능적 능력이 손실됨과 동시에 건조, 주름지며 반점을 수반한 누르스름한 피부(황화), 백발과 세포조직의 느슨함(tissue slackness)이나 이완(relaxation) 등에 의해 특징 지워지는 피부의 취약성의 증가가 일반적으로 관찰된다.

기저막에 대한 표피 세포의 접착성이 30세 이후에 감소하기 시작하는 것으로 관찰되었다. 진피와 표피 사이의 접촉성의 손실은 노화 과정의 일부를 형성하는 구조적 및 기능적 변화를 일으킨다.[J. Investig. Dermatol. Symp. Proc. 1998; 3 (2):172-9].

그러므로 셀과 기저막 사이에 접착성을 증가시켜 피부 노화를 지연시킴으로써, 피부의 이완 및 탄력 손실을 방지하고 개선하는 것이 가능하다.

이러한 관점에서, 피부 탄력을 증가하고 노화를 지연시키기 위하여 화장품용 조성물에 있어서 일반 화학식 XIKVAV의 펩타이드의 사용에 관한 발명은 종래 기술에서는 아직 설명되지 않고 있다.

미국 특허 5,744,515호[내피화를 증진시키기 위한 방법과 주입(이식)가능한 물(物)]는 표면이 파이브로넥틴, 라미닌, 콜라겐과 그 도메인과 같은 점착성 분자로 표면이 코팅된 중합체, 세라믹과 금속성 물질로 만들어진 임플란트(이식물)에 관한 것이다. SIKVAV는 그 도메인들 중에 기술된 도메인의 하나로서 프로테인 파이브로넥틴의 도메인으로서 명확하게 기술되어 있다. 그 점착성 분자는 임플란트의 내피형성 및 셀에 대한 접착성을 증진시킴과 동시에 다공질의 생체 재료로 이루어지는 임플란트는 그 소재를 통하여 모세 혈관의 성장을 허용한다.

한편, 미국 특허 6,428,579호[생체 분자로 코팅된 이식가능한 인공기관]는 금으로 코팅되어, 세포 수식(cell modulating), 주화성(chemotactic), 항응혈성, 항혈전, 항종양, 항감염, 성장 촉진, 항염증 등의 여러 종류의 특성들을 갖는 생물활성 펩타이드가 부착된 이식 물질에 관한 것이다. 그 중에서 SIKVAV는 인테그린 중의 결합 펩타이드의 세포 수식 펩타이드의 예로서 언급되어 있다. 이러한 임플란트(이식물질)의 바람직한 사용은 외과수술후 뼈의 성장을 가속화시키고, 인테그린 기질 펩타이드 예를 들어 SIKVAV는 뼈조직에의 펩타이드 접착성을 향상시키기 위해 이용된다.

미국 특허 6,673,108호[미세 공극내에서 벽을 통한 동심 다층 성장 매트릭스]는 여러 합성 또는 프로테인 층을 갖는 매트릭스에 관한 것이다. 각각의 층은 특정 기능을 가진다. 펩타이드 또는 성장 계수에 의해 유도체화한 피브린층, 특히 SIKVAV와 같은 라미닌 유래 펩타이드를 가진 피브린층은 프로테인 층의 예로서 불리어진다.

이러한 특허의 어떤 것도 화장품용 조성물에 있어서 일반 화학식 XIKVAV의 펩타이드의 사용에 대해서는 언급하지 않았다.

그러므로, 본 발명의 목적은 피부의 탄력을 증가시켜 노화를 지연시킬 수 있는 화장품용 조성물을 제공하는 것이다.

일반 화학식 XIKVAV의 펩타이드는 라미닌에 케모태틱(주화성) 영역, 즉 세포를 끌어당기는 셀 친화 영역을 형성한다. 이것은 이러한 펩타이드가 셀접착, 성장 및 이동을 증진시키고 기저층의 재생을 촉진시킨다. 이들 펩타이드에 대해서는 내피세포의 증식과 분화를 촉진시키는 혈관 형성 촉진(새로운 혈관의 형성) 특성에 대해서도[셀 피지올 저널 1992.12 ; 153(3): 614-25]에 잘 알려져 있다.

XIKVAV 형태의 펩타이드들과 수용체 인테그린 사이의 상호작용은 잘 알려져 있으며, 그 용도는 EP 1 325 739호[항암 약제를 포장하는 리포좀과 악성종양의 치료에의 사용]에 기술되어 있다. 여기서, 종양 세포의 막에 있는 라미닌 수용체의 과잉발현은 종양물질을 포함하는 XIKVAV 펩타이드로 코팅된 리포좀을 향하여 이동하기 위해 사용된다.

XIKVAV 펩타이드는 피부 세포의 레벨에서 아래와 같은 화장품으로서의 적용 기능을 갖는다:

- X가 각각 H, 세릴, 또는 팔미토일 라디칼인, IKVAV, SIKVAV 또는 Pal-IKVAV와 같은 XIKVAV 펩타이드의 존재하에 케라티노사이트 접착성의 촉진(도 8 참조).

- 도 3에 관찰된 것처럼, 형광의 발생이 XIKVAV의 존재하에서 관찰되는 섬유아세포에서의 α6 인테그린 발현의 촉진. 상기 α6 인테그린이 XIKVAV가 추가되지 않은 대조 시료에서 발생되는 것을 보여주는 도 2와 대비하여 표현되어 있다.

- 섬유아세포에 있는 라미닌 V의 발현의 촉진이 XIKVAV 펩타이드의 존재하에, 도 5에 보인 것처럼, 형광의 발생에 의해 관찰된다. XIKVAV 펩타이드 없는 대조 시료는 라미닌 V의 발현 효과를 관찰하는데 사용되었다(도 4 참조).

본 발명에서는 피부의 탄력을 증가시킬 수 있어, 노화를 지연시키는 일반 화학식 XIKVAV의 펩타이드를 포함하는 화장품용 조성물이 설계된다.

케라티노사이트와 섬유아세포의 세포 접착성의 상승뿐만 아니라 인테그린, 라미닌등의 생성을 정량하기 위해 활성시험이 수행되었다.

요약하면, XIKVAV 펩타이드는 케라티노사이트 접착성을 촉진하고, 표피와 진피의 접합에 필수조직인 헤미더스모솜(半接觸班: hemidesmosome)에 관련하는 라미닌 V와 α6 인테그린(생물접착 펩타이드)의 섬유아세포에 의한 케라티노사이트의 생성을 촉진할 수 있다.

마찬가지로, 기저막의 양호한 상태에 수반하는 상술한 미소순환 자극(촉진)은 저항력과 탄력과 함께 산소와 대사물의 적당한 수송과 배설물의 소거와, 표피 세포의 기능적인 능력을 향상시키는데 조력한다.

그러므로, 국소적으로 사용하는 화장품용 조성물에 혼입되는 XIKVAV 펩타이드의 사용은 진피와 표피 사이에 접촉의 손실을 지연시키고, 피부 노화를 방지하고 노화과정의 일부를 형성하는 구조적 및 기능적 변화를 방지하는데 직접적인 효과가 있다.

본 발명의 제 1 태양은, 생물 접착 펩타이드의 발현의 증가에 의해 피부 세포의 생물 접착 촉진을 위하여 일반 화학식 XIKVAV의 펩타이드(도 1 참조)의 사용에 관한 것이다. 상기 식에서 X는 H, 아미노산, 또는 직쇄 또는 분기형의 아실기로부터 선택되고, 그리고 Y는 아미노기, 하이드록실기 또는 티올기일 수 있으며 그들 모두는 지방산으로 치환되거나 또는 치환되지 않은 것들일 수 있다.

바람직하게는, 펩타이드의 일반 화학식 XIKVAV에서, X는 수소, 세린, 팔미토일기 또는 데카노일기이며, 그리고 Y는 아미노기, 하이드록실기 또는 티올기이고, 이들은 지방산으로 치환되거나 치환되지 않은 것들이다.

바람직하게는, 일반 화학식 XIKVAV의 펩타이드에서, X는 세린이고, Y는 하이드록실기, 즉 SIKVAV 펩타이드이다.

바람직하게는, 일반 화학식 XIKVAV의 펩타이드에서, X는 수소이고, Y는 하이드록실기, 즉 IKVAV 펩타이드이다.

바람직하게, 생물접착이 촉진되는 피부의 세포는 케라티노사이트이고, 생물 접착 펩타이드는 α6 인테그린과 라미닌 V 이다.

본 발명의 두번째 태양은, 화장품에 적용가능한 매체와 생물 접착 펩타이드의 발현을 증가시킴으로써 피부의 세포의 생물 접착을 촉진시키기 위한 화장품으로서 유효량의 일반 화학식 XIKVAV의 펩타이드를 포함하는 화장품용 조성물에 관한 것이다.

상기의 조성물은 표피에 적용하는 것이 바람직하다.

바람직한 실시예에 따라서, 상기 조성물이 피부의 탄력을 증가시키고 이 효과는 피부의 세포 상호간 및 기저막과의 접착성을 증가시킴으로써 초래된다.

본 발명에서, XIKVAV 펩타이드(도 1 참조)는 화장품용 조성물 중에 12%이하의 농도로 포함되는 것이 바람직하다.

본 발명에서, XIKVAV 펩타이드(도 1 참조)는 화장품용 조성물 중에 5%의 농도로 포함되는 것도 바람직하다.

바람직한 부형제는 화장품에 일반적으로 이용되는 것들로서 물, 알코올, 렉시틴, 천연 또는 인공 폴리머, 계면 활성제 및 활성표면제, 보존제, 기타 등이다.

바람직한 화장품용으로의 형태는 일반적으로 이용되는 형태로서 크림, 로션, 에멀젼, 샴푸, 미용액(세럼:serum), 겔, 기타 등이다.

바람직한 실시예에 따르면, 조성물은 아래 성분들을 중량 백분율로 포함한다.

성분 중량%

XIKVAV 0.001-10

와셀린(Petrolatum) 0-10

트리에탄올아민 0-10

BHT(butylated hydroxytoluene) 0-10

페녹시에탄올, 메틸파라벤,

부틸파라벤, 에틸파라벤,

프로필파라벤, 이소부틸파라벤 0-10

스테아르산 0-10

밀랍 0-10

카르보머(carbomer) 0-10

디메티코놀(dimethiconol) 0-10

시클로메티콘(cyclomethicone) 0-1

글리세린 0-10

세틸스테아릭 알코올(cetylstearic alcohol) 0-10

향료 0-10

물 100까지의 나머지

화장품용 조성물의 일부로서 사용되는 다른 활성 재료는 비타민, 천연 추출물, 효소, 그리고 화장 조성물의 여러 용도용의 공통적인 성분들로서 항노화, 습윤(보습), 재생, 활력증진 성분 등이 있다.
본 발명의 또 다른 태양에 따르면, 본 발명은 피부의 탄력을 증가시키는 화장품용 조성물의 준비 내지는 제조에서의 일반 화학식 XIKVAV의 펩타이드의 사용에 관한 것이다.

삭제

세포가 라미닌을 인식하기 위해 인테그린을 사용하고, 라미닌들은 인테그린을 통하여 세포를 결합하기 때문에, 본 발명에 따른 화장품용 조성물은 세포의 접착 및 이들의 기저막으로의 결합을 개선하는데, 그것은 XIKVAV 펩타이드가 인테그린과 라미닌들의 생성을 증가시킬 수 있고, 화장품의 성분으로서 사용되는데 적합하기 때문이다.

아래의 실시예에서 반영되고 있는 바와 같이, 세포 증식의 증가가 관찰되는 가에 더하여 일반 화학식 XIKVAV의 펩타이드의 존재에 의한 피부 세포의 접착 효과에 관하여 활성시험이 실행되었다.

그러므로, 일반 화학식 XIKVAV의 펩타이드의 사용으로 획득된 접착 효과와 함께 세포 증식의 상승으로, 피부 노화의 특징인 피부 탄력의 상실을 방지하여, 보다 탄력있는 컴팩트한 표피가 얻어진다.

노화한 피부의 또 다른 특성은 세포간 접촉상실이며 이로 인해 영양상실을 유발하여, 예컨대 건조, 누르스름한 안색(황화)과, 피부 기능의 상실과 같은 피부에서의 변화가 일어난다.

본 발명에 따라 개발된 일반 화학식 XIKVAV의 펩타이드를 포함하는 화장품용 조성물의 사용은 이러한 노화 징후의 처치에 유효하다.

도 1은 본 발명의 XIKVAV 펩타이드의 일반 화학식을 나타내며,
도 2는 SIKVAV 펩타이드가 처리되지 않은 인간 섬유아세포의 α6 인테그린의 발현을 면역형광방출에 의해 표시한 도면이고,
도 3은 SIKVAV 펩타이드가 처리된 인간 섬유아세포의 α6 인테그린의 발현을 면역형광방출에 의해 표시한 도면이고,
도 4는 SIKVAV 펩타이드가 처리되지 않은 인간 섬유아세포의 라미닌 Ⅴ의 발현을 면역형광방출에 의해 표시한 도면이고,
도 5는 SIKVAV 펩타이드가 처리된 인간 섬유아세포의 라미닌 Ⅴ의 발현을 면역형광방출에 의해 표시한 도면이고,
도 6은 SIKVAV 펩타이드가 처리되지 않은 인간 섬유아세포의 세포 접착을 나타내는 도면이고,
도 7은 SIKVAV 펩타이드가 처리된 인간 섬유아세포의 세포 접착을 나타내는 도면이고,
도 8은 XIKVAV 펩타이드가 처리된 케라티노사이트의 세포 접착의 증가를 나타내는 도면이고,
도 9는 SIKVAV 펩타이드, IKVAV 펩타이드, pal-IKVAV 펩타이드가 처리된 케라티노사이트의 세포 접착의 증가를 나타내는 그래프이고,
도 10은 SIKVAV-OH 펩타이드, SIKVAV-NH₂ 펩타이드가 처리된 케라티노사이트의 세포 접착의 증가를 나타내는 그래프이다.

아래 설명된 실시예는 본 발명의 특정한 면을 지지하기 위한 것으로 설명되었지만 본 발명의 범위가 여기에 한정되지 않는다.

실시예 1 :

SIKVAV가 α6 인테그린과 라미닌 V의 발현을 촉진시키는 능력을 갖는지를 결정하기 위하여 인간 섬유아세포와 케라티노사이트에서 면역염색(immunostaining) 활성시험을 수행하였다(도 2, 3, 4, 5 참조).

세포가 라미닌들을 인식하기 위해 인테그린을 사용하고, 라미닌들이 인테그린들을 통하여 기저막과 세포들을 접착하는 경우 인테그린과 라미닌의 생성을 촉진시킬 수 있는 펩타이드는 세포 접착과 그들의 기저막으로의 접착을 촉진할 것이다.
활성시험은 (인테그린 또는 라미닌)을 검출하는 단백질과 결합하는 제1(모노클로널: monoclonal)항체, 그리고 단백질과 제1 항체의 복합체에 결합하는 제2(폴리클론: polyclonal)항체를 사용하였다. 제2 항체에는 형광 화합물(FITC-Fluorescein Isothiocyanate)이 결합하고 있다.

삭제

FITC가 필터 처리된 495 nm (흡수 파장)의 광에 의해 조사되고 색소에 의해 방출된 광은 528 nm (방출 파장)에서 검출되었다.

이러한 태양은 도 2, 3, 4 그리고 5에서 관찰될 수 있다.

SIKVAV로 처리되지 않은 인간 섬유아세포에서의 α6 인테그린의 발현을 도 2의 면역형광 방출에 의해 관찰할 수 있었다. 한편 SIKVAV로 처리된 인간 섬유아세포의 α6 인테그린의 발현의 증가를 도 3에서의 면역형광 방출에 의해 볼 수 있었다.

SIKVAV의 존재와 부존재에서의 라미닌 발현의 차이는, 같은 활성시험에서 확인할 수 있었다.

이러한 발현의 차이를 도 4와 5에서 관찰할 수 있다. SIKVAV로 처리되지 않았던 인간 섬유아세포에서의 라미닌 V의 발현을 도 4에서의 면역형광 방출에 의해 관찰할 수 있고, SIKVAV로 처리된 인간 섬유아세포에 있는 라미닌 V의 발현의 증가를 도 5의 면역형광 방출에 의해 볼 수 있었다.

결론으로서, 라미닌 V와 α6 인테그린의 상당한 증가가 SIKVAV로 처리된 섬유아세포에 관찰될 수 있지만 케라티노사이트에서는 관찰할 수 없었다. 베타 1 인테그린의 생성에서의 무변화도는 어느 쪽에서도 검출되지 않았다.

실시예 2 :

세포 레벨에서의 접착 과정은 제2 실시예의 활성 시험에서 실험실내의 섬유아세포 배양물에 의해 결정되었다.

이 사실을 도 6과 7에 나타낸다.

도 6은 처리되지 않은 인간 섬유아세포에서의 세포 접착을 나타내고, 도 7은 SIKVAV로 처리된 섬유아세포에서의 세포 접착을 나타낸다.

도 6과 7은 마이크로웰(microwell) 활성시험의 균일한 코팅(피복) 및 세포증식보다도 세포 접착에 관련하는 섬유아세포의 성장과 분화를 보여준다.

세포의 접착과 이동의 촉진에 더하여, SIKVAV를 함유하는 화장품은 혈관의 형성과 미소순환의 개선을 촉진한다.

실시예 3 :

본 실시예는 시험관에서 일반 화학식 XIKVAV의 펩타이드에 대한 케라티노사이트의 세포 접착의 평가와 이들 사이의 비교 평가를 보여준다.

본 실시예는 피부의 세포 접착이 XIKVAV 펩타이드들의 존재하에 어떻게 증가되는지와, 이들의 여러 변형체들, 즉 SIKVAV, IKVAV, Pal-IKVAV, SIKVAV-OH와 SIKVAV-NH₂들의 비교를 보여준다(도 8, 9와 10 참조).

다음 실시예에 이용된 세포 배양은 케라티노사이트의 특정한 성장 인자의 존재하의 인간 표피 케라티노사이트(human epidermal keratinocyte: HEKa)이다.

먼저, 96개의 마이크로웰들을 플레이트에 위치하고, 그들을 일반 화학식 XIKVAV의 펩타이드를 함유하는 증류수 50 mL으로 코팅하고(마이크로웰 당 0.5-250 mg/ml), 실온에서 밤새 건조하였다.

또 한편으로, 대조 활성시험은 비특정의 세포 접착을 평가하기 위해 40 μM의 BSA(보빈 세륨 알부민: bovine serum albumin)으로 코팅된 마이크로웰을 사용하여 수행하였다.

모든 마이크로웰은 200μL의 PBS(phosphate buffered saline)로 세정처리하고 37℃의 PBS에서 1% BSA와 함께 1시간 동안 고정하였다.

트립신을 인간 피부의 케라티노사이트에 추가하고, 이들을 5μM의 농도의 칼세인(calcein)-AM에서 37℃로 30분 동안 마크(mark)하였으며, 최종적으로 Epilife

배지에서 3회 세정하였다.

그렇게 하여 표식된 세포( 4.5 x 10⁴ / 마이크로웰)는 XIKVAV 펩타이드로 미리 코팅된 플레이트에 가하고 5% CO₂를 함유하는 가습된 공기 중에서 37℃로 2시간 동안 배양하였다.

세포 접착은 세정 전후 칼세인의 형광을 측정하여 평가하였다.

세포 접착의 백분율은 접착된 세포의 형광을, 각각의 마이크로웰에 가해진 세포의 전체 형광으로 나누는 것에 의해 결정된다.

XIKVAV 펩타이드에 의해 촉진된 세포 접착은 세포의 BSA로의 비특정의 접착에 대하여 연산되었다.

그 결과는 XIKVAV 펩타이드가 용량의존적(dose-dependent manner)으로 케라티노사이트 접착을 증진시킬 수 있음을 보여준다( 도 8, 9와 10 참조).

XIKVAV 펩타이드에 의해 초래된 세포 접착은 연구에서의 최고 농도에서 비특정의 접착에 대하여 65% 였다.

이러한 결과는 XIKVAV 펩타이드가 세포 표면의 특정 수용체에 의해 인식된다는 것을 보여준다.

이러한 발견은 일반 화학식 XIKVAV의 펩타이드가 피부의 탄력 증가와 재구축을 위한 화장품용 제재의 일부분을 형성하는데 양호한 후보임을 나타낸다.

도 8, 9와 10을 관찰 및 비교해 보면, 펩타이드 양이 증가함에 따라(용량의존적) 세포 접착의 증가를 관찰할 수 있다.

도 9로부터 추정되는 결과를 비교하면, 케라티노사이트 세포 접착의 큰 증가가 모든 경우에 관찰되지만, SIKVAV 펩타이드, 즉 X가 세린인 펩타이드가 보다 더 큰 접착성을 나타내는 것으로 관찰되었다.

도 10은 SIKVAV-OH와 SIKVAV-NH₂ 펩타이드의 세포 접착 레벨을 보여주며, 여기서 SIKVAV-NH₂에 의해 초래된 접착이 소량( 0.5 mg/ml )에서 더 크며, 많은 양에서는 SIKVAV-OH 펩타이드에서 더 높은 접착이 발생되는 것으로 관찰되었다.

Claims

생물 접착 펩타이드의 발현을 증가시켜 피부 세포의 생물 접착을 촉진하여서 피부 탄력을 증가하는 아래 일반 화학식 I의 XIKVAV(X-isoleucyl-lysyl-valyl-alanyl-valine-Y) 펩타이드를 포함하는 화장품용 조성물을 피부에 공급하는 것으로 이루어지는 것을 특징으로 하는 피부 탄력을 증가하는 방법.

일반 화학식 I

(상기 식에서, X는 수소, 아미노산 또는 아실기에 의해 형성된 군으로부터 선택되고, Y는 아미노기, 히드록실기 또는 티올기에 의해 형성되는 군으로부터 선택됨).
제 1항에 있어서, 상기 X는 수소 또는 세린인 것을 특징으로 하는 피부 탄력을 증가하는 방법.
제 1항에 있어서, 상기 X는 팔미토일기 또는 데카노일기인 것을 특징으로 하는 피부 탄력을 증가하는 방법.
제 1항에 있어서, 상기 Y는 아미노기인 것을 특징으로 하는 피부 탄력을 증가하는 방법.
제 1항에 있어서, 상기 Y는 하이드록실기인 것을 특징으로 하는 피부 탄력을 증가하는 방법.
제 1항에 있어서, 상기 Y는 티올기인 것을 특징으로 하는 피부 탄력을 증가하는 방법.
제 1항에 있어서, 상기 피부 세포가 케라티노사이트인 것을 특징으로 하는 피부 탄력을 증가하는 방법.
제 1항에 있어서, 생물 접착 펩타이드가 알파(α) 6 인테그린과 라미닌 V인 것을 특징으로 하는 피부 탄력을 증가하는 방법.
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제 1항에 있어서, 상기 화장품용 조성물은 겔, 에멀젼, 크림, 로션, 샴푸 및 미용액 형태로 제공되는 것을 특징으로 하는 피부 탄력을 증가하는 방법.
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제 1항에 있어서, 상기 화장품용 조성물이 피부 세포 상호 및 기저막과의 접착을 증가시킴으로써 피부 탄력을 증가시키는 것을 특징으로 하는 피부 탄력을 증가하는 방법.
제 1항에 있어서, 상기 일반 화학식 I의 XIKVAV 펩타이드가 화장품용 조성물 중에 0.001중량%∼12중량%의 양으로 함유되는 것을 특징으로 하는 피부 탄력을 증가하는 방법.
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제 1항에 있어서, 상기 일반 화학식 I의 XIKVAV 펩타이드가 화장품용 조성물 중에 0.001중량%∼5중량%의 양으로 함유되는 것을 특징으로 하는 피부 탄력을 증가하는 방법.