JP2003038633A

JP2003038633A - 創傷被覆材

Info

Publication number: JP2003038633A
Application number: JP2001226453A
Authority: JP
Inventors: Tatsuya Osumi; 辰也大隅; Sukehito Kurokawa; 祐人黒川; Masakazu Sugiura; 正和杉浦
Original assignee: Sanyo Chemical Industries Ltd
Current assignee: Sanyo Chemical Industries Ltd
Priority date: 2001-07-26
Filing date: 2001-07-26
Publication date: 2003-02-12

Abstract

(57)【要約】【課題】創傷の治癒において、細胞の増殖や分化が制
御良く行われ、その結果、治癒が十分に促進される創傷
被覆材を提供すること。【解決手段】細胞接着シグナルを現わす最小アミノ酸
配列を１分子中に少なくとも１個有するポリペプチド
（Ａ）と、基材（Ｂ）とからなることを特徴とする創傷
被覆材を用いる。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明は、創傷被覆材に関す
る。さらに詳しくは、創傷、褥瘡、熱傷、皮膚潰瘍等に
よる皮膚欠損部位に適用され、かかる部位を保護し、肉
芽形成・表皮再生や治癒を促進することのできる創傷被
覆材に関する。

【０００２】

【従来の技術】創傷治癒促進効果の向上のために、細胞
増殖因子として知られている特定のポリペプチドを従来
の創傷被覆材に固定化したものが提案されている（特開
平１０−３１６５８１号公報）。

【０００３】

【発明が解決しようとする課題】細胞増殖因子は細胞の
増殖には効果があり、基材上では細胞増殖が認められる
ものの、創傷被覆材として使用した場合は、創傷の治癒
促進作用が十分ではない。すなわち、本発明の目的は、
上記現状に鑑み、創傷の治癒において、細胞の増殖や分
化が制御良く行われ、その結果、治癒が十分に促進され
る創傷被覆材を提供することにある。

【０００４】

【課題を解決するための手段】上記の目的を達成すべく
本発明者らは鋭意研究を重ねてきた結果、本発明に到達
した。すなわち、本発明の創傷被覆材の特徴は、細胞接
着シグナルを現わす最小アミノ酸配列を１分子中に少な
くとも１個有するポリペプチド（Ａ）と、基材（Ｂ）と
からなる点である。

【０００５】

【発明の実施の形態】本発明において、細胞接着シグナ
ルを現わす最小アミノ酸配列とは、細胞外マトリックス
に存在する最小アミノ酸配列であって、細胞と細胞外マ
トリックスとの接着活性に関与又はその活性を維持する
最小アミノ酸配列を意味する。細胞外マトリックスとし
ては、例えば、フィブロネクチン、ラミニン、ビトロネ
クチン、フィブリノーゲン、フォンビルブラント因子、
エンタクチン、トロンボスポンディン、コラーゲンＩ
型、コラーゲンＩＶ型、アミロイドＰ、カドヘリン及び
ｇｐ８０等が挙げられる。

【０００６】細胞接着シグナルとしては、例えば、ＲＧ
ＤＳシグナル、ＣＳ１シグナル、ＣＳ５、PeptideＩ、P
eptideＩＩ、ＹＩＧＳＲシグナル、ＰＤＳＧＲシグナ
ル、Ｆ９シグナル、ＬＧＴＩＰＧシグナル、ｐ２０シグ
ナル、ＩＫＶＡＶシグナル、ＬＲＥシグナル、ＲＧＤシ
グナル、γ鎖ペプチド、ＧＰＩｂシグナル、ＶＴＸＧシ
グナル、ＤＧＥＡシグナル、ＩＶ-Ｈ１、ＨｅｐＩＩ
Ｉ、ＦＴＬＣＦＲシグナル、ＨＡＶシグナル及びＹＫＬ
ＮＶＮＤＳシグナル等が挙げられる（「大阪府立母子医
療センター雑誌、第８巻、第１号、５８〜６６頁、１９
９２年」等）。

【０００７】本発明において、細胞接着シグナルを現わ
す最小アミノ酸配列としては、接着シグナルとして働く
ものであればいずれも使用でき、例えば、株式会社永井
出版発行「病態生理」Ｖｏｌ．９，Ｎｏ．７，１９９０
年，５２７頁に記載されているもの等が使用できる。こ
れらのうち、接着する細胞が多いという点で、アミノ酸
一文字表記で現わされる、ＲＧＤ配列、ＬＤＶ配列、Ｒ
ＥＤＶ配列（１）、ＹＩＧＳＲ配列（２）、ＰＤＳＧＲ
配列（３）、ＲＹＶＶＬＰＲ配列（４）、ＬＧＴＩＰＧ
配列（５）、ＲＮＩＡＥＩＩＫＤＩ配列（６）、ＩＫＶ
ＡＶ配列（７）、ＬＲＥ配列、ＤＧＥＡ（８）配列及び
ＨＡＶ配列であり、さらに好ましいものはＲＧＤ配列、
ＹＩＧＳＲ配列（２）、ＰＤＳＧＲ配列（３）、ＬＧＴ
ＩＰＧ配列（５）、ＩＫＶＡＶ配列（７）及びＨＡＶ配
列であり、特に好ましいものはＲＧＤ配列、ＩＫＶＡＶ
配列（７）及びＨＡＶ配列である。なお、カッコ書き内
にはアミノ酸配列表における配列番号を記載した（以下
同様である。）。

【０００８】ポリペプチド（Ａ）中に有する前記最小ア
ミノ酸配列の数は、細胞接着性の観点から、１分子中に
少なくとも１個必要であり、好ましくは３〜５０個であ
り、さらに好ましくは５〜４０、特に好ましくは１０〜
３０である。この範囲外になると細胞の増殖や分化が制
御よく行われにくくなる。（Ａ）の数平均分子量は、細
胞に対する毒性及び接着性の観点から、５，０００〜
５，０００，０００が好ましく、さらに好ましくは１
０，０００〜１，０００，０００、特に好ましくは５
０，０００〜５００，０００である。なお、（Ａ）の数
平均分子量は、ＳＤＳ−ＰＡＧＥ法(Ｎａドデシルスル
フェイト−ポリアクリルアミドゲル電気泳動法)で、
（Ａ）を水中で分離し、泳動距離を標準物質と比較する
ことによって求められる（以下同じである。）。

【０００９】（Ａ）の製造方法は特に制限されず、ペプ
チドを合成する従来既知の方法と同様にして製造するこ
とができ、例えば有機合成法（固相合成法、液相合成法
等）、生化学的合成法｛遺伝子組換微生物（酵母、細
菌、大腸菌等）｝等によって合成することができる。有
機合成法に関しては、例えば、日本生化学学会編「続生
化学実験講座２、タンパク質の化学（下）」６４１〜６
９４頁（昭和６２年５月２０日；株式会社東京化学同人
発行）等に記載されている。生化学的合成法に関して
は、例えば、特表平７−５０１４４３号公報等に記載さ
れている。これらのうち、高分子量の（Ａ）を容易に合
成できる点で、遺伝子組換微生物による生化学的合成法
が好ましく、特に好ましくは遺伝子組換大腸菌を用いて
合成する方法である。

【００１０】水に対する２５℃における（Ａ）の溶解度
は、０又は１０-6〜１，０００ｍｇ／ｌが好ましく、さ
らに好ましくは０又は１０-6〜１０ｍｇ／ｌ、特に好ま
しくは０又は１０-6〜1ｍｇ／ｌである。この範囲であ
ると、（Ａ）が基材（Ｂ）と結合していなくても体液中
に溶出せず、細胞接着因子としての効能が創傷被覆材上
あるいは被覆材中で持続する結果、創傷の治癒期間がさ
らに短縮される傾向がある。

【００１１】（Ａ）は、細胞接着シグナルを現わす最小
アミノ酸配列以外のアミノ酸をさらに含有してもよい。
これらのアミノ酸としては、アミノ酸一文字表記で表す
と、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｐ、Ｉ、Ｍ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｃ、
Ｈ、Ｅ、Ｋ、Ｄ、Ｒ、Ｓ、Ｔ、Ｎ及びＱ等が挙げられ
る。これらのうち、疎水性を示すという観点から、Ｇ、
Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｐ、Ｉ、Ｍ、Ｗ及びＦが好ましく、さらに
好ましくはＧ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ及びＦである。これらの
アミノ酸を使用することにより、水に対する（Ａ）の溶
解度がさらに低くなる傾向にある。（Ａ）は、Ｇ、Ａ、
Ｖ、Ｌ、Ｉ及び／又はＦからなるアミノ酸配列を少なく
とも２個含有することが好ましく、さらに好ましくはＧ
ＡＧＡＧ配列（９）を少なくとも２個含有すること、特
に好ましくはＧＡＧＡＧ配列（９）を３〜３０個含有す
ることである。

【００１２】（Ａ）としては、天然のものとして、例え
ば、Ｉ型コラーゲン、ＩＩ型コラーゲン、ＩＩＩ型コラ
ーゲン、ＩＶ型コラーゲン、Ｖ型コラーゲン、フィブロ
ネクチン、ラミニン、ビトロネクチン、フィブロイン、
フィブリノーゲン、エンタクチン及びアミロイドＰ等の
蛋白質、並びにこれらの分解物等が挙げられる。これら
の分解物とは、細胞接着シグナルを現わす最小アミノ酸
配列が残存している分解物を意味し、酵素（コラゲナー
ゼ等）処理、酸（塩酸等）処理、アルカリ（水酸化ナト
リウム等）処理又は加水分解等の公知の蛋白質分解方法
で得ることができる（例えば、Ｉ型コラーゲンを酵素処
理することにより、テロペプチドを除いた分解物を得る
ことができる。）。これら天然のものを精製抽出する方
法に関しては、例えば、特開平４−３０５６００号公報
中で例示されている。

【００１３】また、合成のものとして、例えば、特表平
３−５０２９３５号公報中に記載されているアミノ酸一
文字表記で現される、（ＧＡＧＡＧＳ）₉配列（１０）
とＲＧＤ配列とを有するペプチド、（ＧＡＧＡＧＳ）₉
配列（１０）とＹＩＧＳＲ配列（２）とを有するペプチ
ド、（ＧＡＰ（ＧＰＰ）₄）₂配列（１１）とＲＧＤ配列
とを有するペプチド、（ＧＡＰ（ＧＰＰ）₄）₂配列（１
１）とＹＩＧＳＲ配列（２）とを有するペプチド、（Ｇ
ＡＧＡＧＳ）₉配列（１０）とＩＫＶＡＶ配列（７）と
を有するペプチド等が挙げられる。

【００１４】市販されているものとしては、例えば、三
洋化成工業（株）製プロネクチンＦ｛ＲＧＤ配列と（Ｇ
ＡＧＡＧＳ）₉配列（１０）とを１分子中に各々約１３
個づつ有する数平均分子量約１１万のポリペプチド（水
に対する２５℃における溶解度：０ｍｇ／ｌ）｝、同プ
ロネクチンＬ｛ＩＫＶＡＶ配列（７）と（ＧＡＧＡＧ
Ｓ）₉配列（１０）とを１分子中に各々約７個づつ有す
る数平均分子量約９万のポリペプチド（水に対する２５
℃における溶解度：０ｍｇ／ｌ）｝、同プロネクチンＦ
プラス｛プロネクチンＦをジメチルアミノエチルクロリ
ドで変成したもの（水に対する２５℃における溶解度：
１０，０００ｍｇ／ｌより大）｝、宝酒造（株）製Ｒｅ
ｔｒｏＮｅｃｔｉｎ（リコンビナントヒトフィブロネク
チンＣＨ−２９６）｛ヒトフィブロネクチン細胞接着シ
グナルであるＣＳ１シグナルと細胞接着ドメインＴｙｐ
ｅＩＩＩ及びヘパリン結合ドメインＩＩを１つずつ有す
る数平均分子量約6万のポリペプチド（水に対する２５
℃における溶解度：１０，０００ｍｇ／ｌより大）｝、
同ＲＧＤＳ−ＰｒｏｔｅｉｎＡ｛ＲＧＤ配列をＰｒｏ
ｔｅｉｎＡ（ＩｇＧ結合ドメイン）に挿入した数平均
分子量約３万のポリペプチド（水に対する２５℃におけ
る溶解度：１０，０００ｍｇ／ｌより大）｝等が挙げら
れる。

【００１５】本発明の創傷被覆材において、基材（Ｂ）
としては特に制限はなく、従来から用いられる各種含水
（性）ゲル、ハイドロコロイド及び固形物（粉末、フィ
ルム、不織布及びスポンジ）等を用いることができる。
（Ｂ）としては、細胞若しくは体液と直接に接していて
も変化が起りにくい生物学的難分解性材料からなる基材
（Ｂ１）及び細胞若しくは体液と直接に接しているうち
に分解吸収されやすい生物学的易分解性材料からなる基
材（Ｂ２）が使用できる。

【００１６】生物学的難分解性材料としては、創傷被覆
材として用いられている通常の材料等が使用でき、例え
ば、セルロース、ポリウレタン、シリコーン樹脂、ポリ
ジエン、ポリビニルアルコール（ケン化率４０〜１００
モル％）、ポリアクリル酸及びポリアクリル酸塩等が挙
げられる。生物学的易分解性材料としては、創傷被覆材
として用いられている通常の材料等が使用でき、例え
ば、ポリグリコール酸、ポリ乳酸、ポリグルタミン酸、
コラーゲン、ゼラチン、クルコサミノクリカン、ヒアル
ロン酸、フィブリン、アルギン酸、キチン、キトサン、
フィブロイン及びこれらの塩等が挙げられる。

【００１７】生物学的難分解性材料からなる基材（Ｂ
１）としては、例えば、生物学的難分解性材料からな
る、各種含水（性）ゲル（Ｂ１１）、ハイドロコロイド
（Ｂ１２）、粉末（Ｂ１３）、フィルム（Ｂ１４）、不
織布（Ｂ１５）及びスポンジ（Ｂ１６）等用いられる。
含水ゲル（Ｂ１１）としては、例えば、ポリアクリル酸
塩製含水ゲル及びポリビニルアルコール製含水ゲル等が
挙げられる。ハイドロコロイド（Ｂ１２）としては、例
えば、セルロース粉末からなるハイドロコロイド及びポ
リビニルアルコール架橋粒子からなるハイドロコロイド
等が挙げられる。粉末（Ｂ１３）としては、例えば、セ
ルロース粉末及びポリアクリル酸塩粉末等が挙げられ
る。

【００１８】フィルム（Ｂ１４）としては、例えば、ポ
リウレタン製フィルム、シリコーン樹脂製フィルム及び
ポリビニルアルコール製フィルム等が挙げられる。不織
布（Ｂ１５）としては、例えば、セルロース製不織布及
びポリジエン製不織布等が挙げられる。スポンジ（Ｂ１
６）としては、例えば、ポリビニルアルコール製スポン
ジ及びセルロース製スポンジ等が挙げられる。

【００１９】生物学的易分解性材料からなる基材（Ｂ
２）としては、例えば、生物学的易分解性材料からな
る、各種含水（性）ゲル（Ｂ２１）、ハイドロコロイド
（Ｂ２２）、粉末（Ｂ２３）、フィルム（Ｂ２４）、不
織布（Ｂ２５）及びスポンジ（Ｂ２６）等が用いられ
る。含水ゲル（Ｂ２１）としては、例えば、コラーゲン
製含水ゲル及びゼラチン製含水ゲル等が挙げられる。ハ
イドロコロイド（Ｂ２２）としては、例えば、キチンか
らなるハイドロコロイド及びゼラチン架橋体粒子からな
るハイドロゲル等が挙げられる。粉末（Ｂ２３）として
は、例えば、ヒアルロン酸粉末、コラーゲン粉末及びキ
チン粉末等が挙げられる。

【００２０】フィルム（Ｂ２４）としては、例えば、ポ
リグリコール酸製フィルム及びコラーゲンフィルム等が
挙げられる。不織布（Ｂ２５）としては、例えば、アル
ギン酸製不織布及びヒアルロン酸製不織布等が挙げられ
る。スポンジ（Ｂ２６）としては、例えば、アルギン酸
製スポンジ、コラーゲン製スポンジ及びヒアルロン酸製
スポンジ等が挙げられる。

【００２１】角質層から真皮の途中に至る浅い創に対し
ては、創傷の被覆が重要な機能であるため、これらの創
傷被覆材の基材としては、生物学的難分解性材料からな
る基材（Ｂ１）が好ましく、さらに好ましくは含水ゲル
（Ｂ１１）、フィルム（Ｂ１４）、不織布（Ｂ１５）及
びスポンジ（Ｂ１６）、特に好ましくはポリビニルアル
コール製含水ゲル、シリコーン樹脂製フィルム、セルロ
ース製不織布及びポリビニルアルコール製スポンジであ
る。

【００２２】一方、真皮から皮下組織に到達するような
深い創に対しては、細胞組織の増殖の足場を提供するの
が重要な機能であるため、これらの創傷被覆材の基材と
しては、生物学的易分解性材料が好ましく、さらに好ま
しくは含水（性）ゲル（Ｂ２１）、粉末（Ｂ２３）、不
織布（Ｂ２５）及びスポンジ（Ｂ２６）、特に好ましく
はコラーゲン製含水ゲル、コラーゲン粉末、ヒアルロン
酸製不織布、アルギン酸製スポンジ及びコラーゲン製ス
ポンジである。

【００２３】本発明の創傷被覆材において、ポリペプチ
ド（Ａ）の含有量は、基材（Ｂ）１００重量部に対し
て、０．０００１〜５０重量部が好ましく、さらに好ま
しくは０．０１〜１重量部、特に好ましくは０．０２〜
０．８重量部である。（Ａ）の量がこの範囲であると、
創傷の治療促進効果をさらに高めることができる。

【００２４】本発明の創傷被覆材は、（Ａ）と（Ｂ）と
からなり、（Ａ）と（Ｂ）を組合せることによって得ら
れる。その組合せる方法としては、（１）基材（Ｂ）の
原料と（Ａ）とを混合させたものを（Ｂ）として成型す
る方法、（２）基材（Ｂ）の原料と（Ａ）とを混合させ
たものを、（Ｂ）に塗工させる方法、（３）（Ａ）を
（Ｂ）に塗工又は含浸させる方法、及び（４）（Ｂ）に
（Ａ）を化学結合させる方法等が適用できる。

【００２５】なお、（１）及び（２）の方法において
は、基材（Ｂ）の原料として、ＨＬＢが１以上（好まし
くは２以上、さらに好ましくは５以上、特に好ましくは
８以上）５０未満の材料が使用できる。従って、特に生
物学的難分解性材料のうち、ポリウレタン、シリコーン
樹脂又はポリジエン等で上記ＨＬＢの値を満たさないも
のは（１）及び（２）の方法に適用できない。すなわ
ち、例えば、疎水性ポリウレタン、未変性シリコーン樹
脂及び未変性ポリジエン等は、（Ａ）と混合して用いる
ことはできない。ＨＬＢがこの範囲であると（Ｂ）と細
胞との親和性がよくなる傾向があり治療促進効果をさら
に高めることができる。ここで、ＨＬＢとは、親水性−
疎水性バランスを表す指標を意味し、小田法により算出
される値である（界面活性剤の合成と其の応用、小田
等、５０１頁、槇書店、１９５７年）。

【００２６】そして、（１）〜（３）の方法において、
物理的に接触させる方法及び化学的に結合させる方法が
適用できる。物理的に接触させる方法による場合、例え
ば、（Ａ）を水又は溶剤（例えば、エタノール、ジメチ
ルスルホキシド及び過塩素酸リチウム水溶液等）等に溶
解又は分散させた溶液（分散液）を、（Ｂ）に塗工、含
浸又は混合させた後、乾燥させることによって得ること
ができる。

【００２７】化学的に結合させる場合、例えば、Ｎ−ヒ
ドロキシコハク酸イミドあるいは水溶性カルボジイミド
存在下に、（Ｂ）に（Ａ）をエステル化又はアミド化に
より固定させ、洗浄乾燥させることによって得ることが
できる。なお、この場合、反応溶媒を使用してもよく、
反応溶媒としては公知のものが使用でき、例えば、水、
臭化リチウム水溶液、過塩素酸リチウム水溶液、アセト
ン、ジメチルアセトアミド、テトラヒドロフラン等が挙
げられる。化学的に結合させる場合、化学反応に関与す
る官能基としては、（Ａ）においてはポリペプチド末端
のカルボキシル基若しくはアミノ基又はアミノ酸単位の
側鎖に存在する水酸基等が挙げられ、（Ｂ）において
は、セルロースの水酸基、ポリウレタンの水酸基又はア
ミノ基、ポリビニルアルコールの水酸基、ポリアクリル
酸又はポリアクリル酸塩のカルボキシル基、ポリグリコ
ール酸又はポリ乳酸の水酸基又はカルボキシル基、並び
にポリグルタミン酸、コラーゲン、ゼラチン、クルコサ
ミノクリカン、ヒアルロン酸、フィブリン、アルギン
酸、キチン、キトサン又はフィブロインのカルボキシル
基、アミノ基又は水酸基等が挙げられる。

【００２８】本発明の創傷被覆材の形状については特に
制限はなく含水（性）ゲル、ハイドロコロイド、フィル
ム状、シート状、塊状、粉末状、ペレット状、管状、紐
状、繊維状、布帛状、スポンジ及び網状等の形態が可能
である。本発明の創傷被覆材は、擦過創、切創及び挫創
等の一般外傷；採皮創及び削皮創等の手術創；熱傷；潰
瘍；褥瘡；並びに前記以外の各種創傷等からなる患部に
当てて用いて、患部からの滲出液の吸収、該滲出液の保
持、患部への菌類の感染や増殖の防止して、患部の治癒
を促進させるための創傷被覆材として好適である。さら
に、骨等の生体組織の接着促進、骨の補強、軟骨の再生
促進及び神経の再生促進等の用途にも有効に使用するこ
とができる。

【００２９】

【実施例】以下に実施例を掲げて本発明を更に詳しく説
明するが、本発明はこれら実施例のみに限定されるもの
ではない。実施例１（１）アルギン酸共有結合架橋体の製造：（ｉ）２．３ｇ（２０ｍｍｏｌ）のＮ−ヒドロキシコ
ハク酸イミド（ＨＯＳｕ、株式会社ペプチド研究所製）
を酢酸エチル１５０ｍｌに溶解し、撹拌しながら１０ｍ
ｌの酢酸エチルに溶解した０．６ｇ（１０ｍｍｏｌ）の
エチレンジアミン（ＥＤＡ、和光純薬株式会社製）を２
５℃で滴下した。滴下終了後、さらに１時間撹拌を続
け、析出した結晶を濾取し、減圧下に乾燥してエチレン
ジアミン２Ｎ−ヒドロキシコハク酸イミド塩（ＥＤＡ・
２ＨＯＳｕ）２．９ｇ（収率約１００％）を得た。

【００３０】（ii）アルギン酸ナトリウム（和光純薬株
式会社製；粘度５００〜６００ｃｐ）の１重量％水溶液
５５０ｍｌ（カルボキシル基：２７５ｍｍｏｌ）に、
２．４２ｇ（８．５ｍｍｏｌ）の上記（ｉ）で得られた
ＥＤＡ・２ＨＯＳｕと、１７．６ｇ（９２ｍｍｏｌ）の
１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カル
ボジイミド塩酸塩（ＥＤＣ・ＨＣｌ、株式会社ペプチド
研究所製）とを溶解して、１５ｃｍ×２５ｃｍのポリフ
ッ化エチレン被覆アルミ製トレイ４枚に流延し、室温で
約５１時間静置し、含水ゲル（Ｂ２１−１）を得た。得
られた含水ゲル（Ｂ２１−１）を、細胞間質液と同じ濃
度（Ｃａイオン５ｍｅｑ．、Ｎａイオン１４３ｍｅ
ｑ．）になるように、ＣａＣｌ2とＮａＣｌを溶解した
水溶液（ＥＣＦ）で十分に洗浄した後、純水で十分に洗
浄し、次いで凍結乾燥してスポンジ状のアルギン酸共有
結合架橋体（Ｂ２６−１）約５ｇを得た。

【００３１】（２）細胞接着シグナル含有ポリペプチド
とアルギン酸共有結合架橋体の組合せ：（ｉ）ポリペプチドとして、三洋化成工業（株）製プ
ロネクチンF（Ａ１）を使用；プロネクチンF（Ａ１）
０．５ｍｇを過塩素酸リチウム飽和溶液０．５ｍｌに溶
解し、さらにこれを水で１０倍に希釈した溶液に、上記
（１）で得られたアルギン酸共有結合架橋体（Ｂ２６−
１）の１ｇを加え、さらに水を加えて架橋体全体を湿潤
させた後、凍結乾燥させて、加熱滅菌（１２０℃、５分
間）を施して、スポンジ状の創傷被覆材１を得た。な
お、水に対する２５℃におけるプロネクチンＦ（Ａ１）
の溶解度は、０ｍｇ／ｌである。

【００３２】実施例２ポリペプチドとして三洋化成工業（株）製プロネクチン
L（Ａ２）を使用；プロネクチンF（Ａ１）の代わりにプ
ロネクチンL（Ａ２）を用いた以外は実施例１と全く同
様にしてスポンジ状の創傷被覆材２を得た。なお、水に
対する２５℃におけるプロネクチンＬ（Ａ２）の溶解度
は、０ｍｇ／ｌである。

【００３３】比較例１細胞接着シグナル含有ポリペプチドの代わりに、増殖因
子ＫＳＩＲＶＡＶＡＰＧ（１２）を基材に固定化：プロ
ネクチンＦ（Ａ１）をアルギン酸共有結合架橋体（Ｂ２
６−１）に組み合わせる代わりに、特開平１０−３１６
５８１号公報に記載の実施例８と同様の方法で、アミノ
酸一文字表記で表されるＫＳＩＲＶＡＶＡＰＧ（１２）
からなるポリペプチドを（Ｂ２６−１）に固定化させて
スポンジ状の創傷被覆材３を得た。

【００３４】比較例２ポリペプチドを用いず、実施例１で得られたアルギン酸
共有結合架橋体（Ｂ２６−１）をそのまま用いて創傷被
覆材４とした。

【００３５】比較例３プロネクチンF（Ａ１）０．５ｍｇを過塩素酸リチウム
飽和溶液０．５ｍｌに溶解し、さらにこれを水で２倍に
希釈した溶液に、信越シリコーン（株）製硬化性シリコ
ーン樹脂ＫＭ２００２Ｔ（有効成分４０重量％のエマル
ション）７ｍｇとイオン交換水４．５ｍｌを加え、均一
化して得られた硬化性シリコーン樹脂混合液に、実施例
１で得られたアルギン酸共有結合架橋体（Ｂ２６−１）
の１ｇを加え、さらに水を加えて架橋体全体を湿潤させ
た後、凍結乾燥させて、硬化性シリコーン樹脂の硬化反
応促進を兼ねた加熱滅菌（１２０℃、５分間）を施し
て、硬化性樹脂でプロネクチンFを固定化させたスポン
ジ状の創傷被覆材５を得た。

【００３６】実施例３細胞接着シグナル含有ポリペプチドとコラーゲンの組合
せ：ポリペプチドとして、三洋化成工業（株）製プロネクチ
ンF（Ａ１）を使用；プロネクチンF（Ａ１）０.５mgを
過塩素酸リチウム飽和溶液０.５mlに溶解し、さらにこ
れを水で１０倍に希釈した溶液に、（株）高研製の０．
３重量％中性コラーゲン溶液の１ｇを加えて均一にした
後、凍結乾燥させて、γ線滅菌（２５ｋＧｙ）を施し
て、スポンジ状の創傷被覆材６を得た。

【００３７】実施例４ポリペプチドとして三洋化成工業（株）製プロネクチン
L（Ａ２）を使用；プロネクチンF（Ａ１）の代わりにプ
ロネクチンL（Ａ２）を用いた以外は実施例３と全く同
様にしてスポンジ状の創傷被覆材７を得た。

【００３８】比較例４ポリペプチドを用いず、実施例３で用いた（株）高研製
中性コラーゲン溶液をそのまま凍結乾燥させて、γ線滅
菌（２５ｋＧｙ）を施して、スポンジ状の創傷被覆材８
を得た。

【００３９】実施例５＜ポリペプチド（Ａ３）〜（Ａ７）の作成＞特表平３-
５０２９３５号公報に記載の方法でアミノ酸一文字表記
で表される、ＲＧＤ配列と（ＧＡＧＡＧＳ）₉配列（１
０）の繰り返し単位からなるポリペプチドを、遺伝子組
み替え大腸菌を増殖させ、破砕し、抽出することで作成
し、数平均分子量の違いによって精製し、以下のポリペ
プチドを単離した。いずれのポリペプチドも水に対する
２５℃における溶解度は０ｍｇ/ｍｌであった。

【００４０】ポリペプチド（Ａ３）；数平均分子量８
０，０００、１分子あたりのＲＧＤ配列の数１０個、
（ＧＡＧＡＧＳ）₉配列の数１０個。ポリペプチド（Ａ４）；数平均分子量２４０，０００、
１分子あたりのＲＧＤ配列の数３０個、（ＧＡＧＡＧ
Ｓ）₉配列の数３０個。ポリペプチド（Ａ５）；数平均分子量５０，０００、１
分子あたりのＲＧＤ配列の数６個、（ＧＡＧＡＧＳ）₉
配列の数６個。ポリペプチド（Ａ６）；数平均分子量５００，０００、
１分子あたりのＲＧＤ配列の数６０個、（ＧＡＧＡＧ
Ｓ）₉配列の数６０個。

【００４１】プロネクチンＦ（Ａ１）の代わりにポリペ
プチド（Ａ３）を用いた以外は実施例１と同様にして、
スポンジ状の創傷被覆材９を得た。なお、ポリペプチド
（Ａ４）〜（Ａ６）は実施例６〜８で用いる。

【００４２】実施例６実施例５で得たポリペプチド（Ａ４）を用いた以外は実
施例１と同様にして、スポンジ状の創傷被覆材１０を得
た。

【００４３】実施例７実施例５で得たポリペプチド（Ａ５）を用いた以外は実
施例１と同様にして、スポンジ状の創傷被覆材１１を得
た。

【００４４】実施例８実施例５で得たポリペプチド（Ａ６）を用いた以外は実
施例１と同様にして、スポンジ状の創傷被覆材１２を得
た。

【００４５】実施例９実施例５で得たポリペプチド（Ａ３）を特表平１０-５
００７０１号公報に記載の方法でジメチルアミノエチル
クロリドと反応させ、水に対する２５℃における溶解度
の違いによって精製し、溶解度が１０ｍｇ/ｌのポリペ
プチド（Ａ７）を得た。ポリペプチド（Ａ７）を用いた
以外は実施例１と同様にして、スポンジ状の創傷被覆材
１３を得た。

【００４６】実施例１０耐熱ねじ口瓶に、三洋化成工業（株）製プロネクチンＦ
（Ａ１）０．５ｍｇを過塩素酸リチウム飽和溶液０．５
mlに溶解し、さらにこれを滅菌水で２０倍に希釈した溶
液に、ポリビニルアルコール（重合度；約２０００、ケ
ン化率；９９．５モル％）１ｇを加え、密栓後、オート
クレーブ中で１２０℃で２時間加熱することで溶解させ
た。厚さ１ｍｍのスペーサーを入れ２枚のガラス板で挟
み込み固定し、１３０℃で３時間加熱滅菌した容器中に
この溶液を入れ、−８０℃の冷凍庫で２４時間かけて凍
結させたあとガラス板を１枚取り除き真空容器内に移
し、０．０５Ｐａの減圧下、２４時間保持後１２時間か
けて２５℃に昇温し、さらに２５℃で６０時間減圧乾燥
した。これを１０００mlの滅菌水が入ったビーカーに２
４時間入れて膨潤させてゲルを得、洗浄することで、ゲ
ル状の創傷被覆材１４を得た。

【００４７】実施例１１プロネクチンＦ（Ａ１）０．５ｍｇの替わりに、プロネ
クチンF（Ａ１）０．１ｍｇを用いた以外、実施例１０
と同様にして、ゲル状の創傷被覆材１５を得た。

【００４８】実施例１２プロネクチンＦ（Ａ１）０．５ｍｇの替わりに、プロネ
クチンF（Ａ１）１０ｍｇを用いた以外、実施例１０と
同様にして、ゲル状の創傷被覆材１６を得た。

【００４９】評価試験実施例１〜１２及び比較例１〜４で得られた創傷被覆材
１〜１６から１ｃｍ×１ｃｍの試験片をそれぞれ採取
し、その各々を２４穴（２４ウェル）プレートの各ウェ
ルに入れ、正常ヒト皮膚線維芽細胞を１０3個／ウェル
の割合で投入し、各ウェルに１０％ＦＣＳＥａｇｌ
ｅ’ｓＭＥＭ培地１ｍｌを加えて、５容量％の二酸化
炭素を含む空気の存在下で３７℃で１４日間培養した。
各ウェルの細胞の状態を光学顕微鏡を用いて観察するこ
とによって、各創傷被覆材の細胞増殖活性を以下の基準
で判定した。その結果を表１に示す。

【００５０】＜細胞増殖性の判定基準＞ ◎；ｗｅｌｌ全体にびっしりと細胞が広がっており、非
常に良好。 ○；ｗｅｌｌのほぼ全体に広がっており、良好。 △；細胞の増殖は認められるがｗｅｌｌの一部に留まっ
ており、不良。 ×；細胞の増殖は認められず、全く不良。

【００５１】

【表１】本発明の創傷被覆材を用いた場合、正常ヒト皮膚線維芽
細胞の増殖が促進されていることが判り、創傷被覆材と
して、創傷の治癒促進効果が非常に高いことが判る。

【００５２】

【発明の効果】本発明の創傷被覆材は、創傷の治癒促進
のために有効に使用することができる。また、生体組織
を修復するための創傷被覆材、生体組織の接着促進材
料、骨補強材、軟骨再生材、神経再生材等として有効に
使用することができ、難治性潰瘍等の難治性創傷の治療
にも非常に有用である。

【００５３】

【配列表】 <110>三洋化成工業株式会社；SANYO CHEMICAL INDUSTRIES,LTD. <120>創傷被覆材 <160>12 <210>1 <211>4 <212>PRT <213>Homo sapiens <400>1 Arg Glu Asp Val 1 <210>2 <211>5 <213>PRT <213>Homo sapiens <400>2 Tyr Ile Gly Ser Arg 1 5 <210>3 <211>5 <213>PRT <213>Homo sapiens <400>3 Pro Asp Ser Gly Arg 1 5 <210>4 <211>7 <213>PRT <213>Homo sapiens <400>4 Arg Tyr Val Val Leu Pro Arg 1 5 <210>5 <211>6 <213>PRT <213>Homo sapiens <400>5 Leu Gly Thr Ile Pro Gly 1 5 <210>6 <211>10 <213>PRT <213>Homo sapiens <400>6 Arg Asn Ile Ala Glu Ile Ile Lys Asp Ile 1 5 10 <210>7 <211>5 <213>PRT <213>Homo sapiens <400>7 Ile Lys Val Ala Val 1 5 <210>8 <211>4 <213>PRT <213>Homo sapiens <400>8 Asp Gly Glu Ala 1 <210>9 <211>5 <213>PRT <213>Homo sapiens <400>9 Gly Ala Gly Ala Gly 1 5 <210>10 <211>54 <213>PRT <213>Homo sapiens <400>10 Gly Ala Gly Ala Gly Ser Gly Ala Gly Ala Gly Ser Gly Ala Gly Ala 1 5 10 15 Gly Ser Gly Ala Gly Ala Gly Ser Gly Ala Gly Ala Gly Ser Gly Ala 20 25 30 Gly Ala Gly Ser Gly Ala Gly Ala Gly Ser Gly Ala Gly Ala Gly Ser 35 40 45 Gly Ala Gly Ala Gly Ser 50 <210>11 <211>30 <213>PRT <213>Homo sapiens <400>11 Gly Ala Pro Gly Pro Pro Gly Pro Pro Gly Pro Pro Gly Pro Pro Gly 1 5 10 15 Ala Pro Gly Pro Pro Gly Pro Pro Gly Pro Pro Gly Pro Pro 20 25 30 <210>12 <211>10 <213>PRT <213>Homo sapiens <400>12 Lys Ser Ile Arg Val Ala Val Ala Pro Gly 1 5 10

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Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】細胞接着シグナルを現わす最小アミノ酸
配列を１分子中に少なくとも１個有するポリペプチド
（Ａ）と、基材（Ｂ）とからなることを特徴とする創傷
被覆材。
【請求項２】（Ａ）が、細胞接着シグナルを現わす最
小アミノ酸配列を１分子中に３〜５０個有する請求項１
記載の創傷被覆材。
【請求項３】細胞接着シグナルを現わす最小アミノ酸
配列が、アミノ酸一文字表記で現わされる、ＲＧＤ配
列、ＬＤＶ配列、ＲＥＤＶ配列（１）、ＹＩＧＳＲ配列
（２）、ＰＤＳＧＲ配列（３）、ＲＹＶＶＬＰＲ配列
（４）、ＬＧＴＩＰＧ配列（５）、ＲＮＩＡＥＩＩＫＤ
Ｉ配列（６）、ＩＫＶＡＶ配列（７）、ＬＲＥ配列、Ｄ
ＧＥＡ配列(８)及びＨＡＶ配列からなる群から選ばれる
少なくとも１種の配列である請求項１又は２記載の創傷
被覆材。
【請求項４】（Ａ）が、遺伝子組換微生物によって合
成されるポリペプチドである請求項１〜３のいずれか記
載の創傷被覆材。
【請求項５】水に対する２５℃における（Ａ）の溶解
度が、０又は１０-6〜１，０００ｍｇ／ｌである請求項
１〜４のいずれか記載の創傷被覆材。
【請求項６】（Ａ）が、さらにアミノ酸一文字表記で
現されるＧＡＧＡＧ配列（９）を少なくとも２個有して
なる請求項１〜５のいずれか記載の創傷被覆材。
【請求項７】（Ｂ）が、セルロース、ポリウレタン、
シリコーン樹脂、ポリジエン、ポリビニルアルコール、
ポリアクリル酸及びポリアクリル酸塩からなる群から選
ばれる少なくとも１種の生物学的難分解性材料からなる
基材（Ｂ１）である請求項１〜６のいずれか記載の創傷
被覆材。
【請求項８】（Ｂ）が、ポリグリコール酸、ポリ乳
酸、ポリグルタミン酸、コラーゲン、ゼラチン、クルコ
サミノクリカン、ヒアルロン酸、フィブリン、アルギン
酸、キチン、キトサン、フィブロイン及びこれらの塩か
らなる群から選ばれる少なくとも１種の生物学的易分解
性材料からなる基材（Ｂ２）である請求項１〜６のいず
れか記載の創傷被覆材。