KR100758755B1 - Ｇｌｐ-1 유사체 융합 단백질 - Google Patents
Ｇｌｐ-1 유사체 융합 단백질 Download PDFInfo
- Publication number
- KR100758755B1 KR100758755B1 KR1020057023668A KR20057023668A KR100758755B1 KR 100758755 B1 KR100758755 B1 KR 100758755B1 KR 1020057023668 A KR1020057023668 A KR 1020057023668A KR 20057023668 A KR20057023668 A KR 20057023668A KR 100758755 B1 KR100758755 B1 KR 100758755B1
- Authority
- KR
- South Korea
- Prior art keywords
- gly
- glu
- ser
- val
- glp
- Prior art date
Links
- 108020001507 fusion proteins Proteins 0.000 title claims abstract description 103
- 102000037865 fusion proteins Human genes 0.000 title claims abstract description 103
- 101100337060 Caenorhabditis elegans glp-1 gene Proteins 0.000 title 1
- 208000008589 Obesity Diseases 0.000 claims abstract description 5
- 235000020824 obesity Nutrition 0.000 claims abstract description 5
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 28
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims description 24
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 claims description 11
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 claims description 11
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 10
- 125000003295 alanine group Chemical group N[C@@H](C)C(=O)* 0.000 claims description 9
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 claims description 8
- 208000001072 type 2 diabetes mellitus Diseases 0.000 claims description 7
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 claims description 6
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 claims description 6
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 claims description 5
- 125000003588 lysine group Chemical group [H]N([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])(N([H])[H])C(*)=O 0.000 claims description 4
- 238000012217 deletion Methods 0.000 claims description 3
- 230000037430 deletion Effects 0.000 claims description 3
- 125000003630 glycyl group Chemical group [H]N([H])C([H])([H])C(*)=O 0.000 claims description 3
- 230000004580 weight loss Effects 0.000 claims description 3
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 claims description 2
- OBMZMSLWNNWEJA-XNCRXQDQSA-N C1=CC=2C(C[C@@H]3NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](NC(=O)N(CC#CCN(CCCC[C@H](NC(=O)[C@@H](CC4=CC=CC=C4)NC3=O)C(=O)N)CC=C)NC(=O)[C@@H](N)C)CC3=CNC4=C3C=CC=C4)C)=CNC=2C=C1 Chemical class C1=CC=2C(C[C@@H]3NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](NC(=O)N(CC#CCN(CCCC[C@H](NC(=O)[C@@H](CC4=CC=CC=C4)NC3=O)C(=O)N)CC=C)NC(=O)[C@@H](N)C)CC3=CNC4=C3C=CC=C4)C)=CNC=2C=C1 OBMZMSLWNNWEJA-XNCRXQDQSA-N 0.000 claims description 2
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 claims 2
- 206010033307 Overweight Diseases 0.000 claims 1
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 abstract description 21
- 239000008103 glucose Substances 0.000 abstract description 18
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 abstract description 15
- 239000012636 effector Substances 0.000 abstract description 13
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 11
- 230000001965 increasing effect Effects 0.000 abstract description 7
- 206010012601 diabetes mellitus Diseases 0.000 abstract description 6
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 abstract description 6
- 230000005847 immunogenicity Effects 0.000 abstract description 5
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 abstract description 4
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 abstract description 3
- 108010088406 Glucagon-Like Peptides Proteins 0.000 abstract description 2
- DTHNMHAUYICORS-KTKZVXAJSA-N Glucagon-like peptide 1 Chemical class C([C@@H](C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(N)=O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC=1C=CC=CC=1)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CNC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](N)CC=1N=CNC=1)[C@@H](C)O)[C@@H](C)O)C(C)C)C1=CC=CC=C1 DTHNMHAUYICORS-KTKZVXAJSA-N 0.000 abstract description 2
- 230000002496 gastric effect Effects 0.000 abstract description 2
- 230000030135 gastric motility Effects 0.000 abstract description 2
- 230000008991 intestinal motility Effects 0.000 abstract description 2
- 208000002551 irritable bowel syndrome Diseases 0.000 abstract description 2
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 abstract 1
- 230000037406 food intake Effects 0.000 abstract 1
- 235000012631 food intake Nutrition 0.000 abstract 1
- 230000000968 intestinal effect Effects 0.000 abstract 1
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 49
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 34
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 28
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 21
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 20
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 20
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 20
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 16
- 235000014680 Saccharomyces cerevisiae Nutrition 0.000 description 16
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 16
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 13
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 12
- 238000001802 infusion Methods 0.000 description 12
- NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N insulin Chemical compound N1C(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(NC(=O)CN)C(C)CC)CSSCC(C(NC(CO)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CCC(N)=O)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CSSCC(NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2C=CC(O)=CC=2)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(C)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2NC=NC=2)NC(=O)C(CO)NC(=O)CNC2=O)C(=O)NCC(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)NC(C(C)O)C(=O)N3C(CCC3)C(=O)NC(CCCCN)C(=O)NC(C)C(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(O)=O)=O)NC(=O)C(C(C)CC)NC(=O)C(CO)NC(=O)C(C(C)O)NC(=O)C1CSSCC2NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CC(N)=O)NC(=O)C(NC(=O)C(N)CC=1C=CC=CC=1)C(C)C)CC1=CN=CN1 NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- 108010086246 Glucagon-Like Peptide-1 Receptor Proteins 0.000 description 11
- 102000007446 Glucagon-Like Peptide-1 Receptor Human genes 0.000 description 11
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 11
- KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N Valine Chemical compound CC(C)C(N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- 230000006870 function Effects 0.000 description 10
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 10
- 101001100327 Homo sapiens RNA-binding protein 45 Proteins 0.000 description 9
- 102100038823 RNA-binding protein 45 Human genes 0.000 description 9
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 9
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 9
- 108091006020 Fc-tagged proteins Proteins 0.000 description 8
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 8
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 8
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 8
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 8
- 238000010254 subcutaneous injection Methods 0.000 description 8
- 239000007929 subcutaneous injection Substances 0.000 description 8
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 7
- 239000002585 base Substances 0.000 description 7
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 7
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 7
- 239000003623 enhancer Substances 0.000 description 7
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 7
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 7
- 229940090044 injection Drugs 0.000 description 7
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 7
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 7
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 7
- 150000007523 nucleic acids Chemical group 0.000 description 7
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 7
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 7
- 241000282693 Cercopithecidae Species 0.000 description 6
- 102000016622 Dipeptidyl Peptidase 4 Human genes 0.000 description 6
- 101000930822 Giardia intestinalis Dipeptidyl-peptidase 4 Proteins 0.000 description 6
- 102000004877 Insulin Human genes 0.000 description 6
- 108090001061 Insulin Proteins 0.000 description 6
- 108010076504 Protein Sorting Signals Proteins 0.000 description 6
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 6
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 6
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 6
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 6
- 229940125396 insulin Drugs 0.000 description 6
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 description 6
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 6
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 6
- -1 protoplast fusion Substances 0.000 description 6
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 6
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 6
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 6
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 6
- 239000003981 vehicle Substances 0.000 description 6
- 101800004266 Glucagon-like peptide 1(7-37) Proteins 0.000 description 5
- 108020004511 Recombinant DNA Proteins 0.000 description 5
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 5
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 5
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 5
- 230000008030 elimination Effects 0.000 description 5
- 238000003379 elimination reaction Methods 0.000 description 5
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 description 5
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 5
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 5
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 5
- GCYXWQUSHADNBF-AAEALURTSA-N preproglucagon 78-108 Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC=1C=CC=CC=1)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CNC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](N)CC=1N=CNC=1)[C@@H](C)O)[C@@H](C)O)C(C)C)C1=CC=CC=C1 GCYXWQUSHADNBF-AAEALURTSA-N 0.000 description 5
- 108091008146 restriction endonucleases Proteins 0.000 description 5
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 5
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 5
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 5
- 230000002459 sustained effect Effects 0.000 description 5
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 5
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 5
- 238000011282 treatment Methods 0.000 description 5
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 4
- 210000002237 B-cell of pancreatic islet Anatomy 0.000 description 4
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 description 4
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 4
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 4
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 4
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 4
- NYHBQMYGNKIUIF-UUOKFMHZSA-N Guanosine Chemical compound C1=NC=2C(=O)NC(N)=NC=2N1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H]1O NYHBQMYGNKIUIF-UUOKFMHZSA-N 0.000 description 4
- 101001015516 Homo sapiens Glucagon-like peptide 1 receptor Proteins 0.000 description 4
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N L-glutamic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N 0.000 description 4
- 239000005089 Luciferase Substances 0.000 description 4
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 4
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 4
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 4
- 108091033319 polynucleotide Proteins 0.000 description 4
- 102000040430 polynucleotide Human genes 0.000 description 4
- 239000002157 polynucleotide Substances 0.000 description 4
- 230000008569 process Effects 0.000 description 4
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 4
- 238000001890 transfection Methods 0.000 description 4
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241000222120 Candida <Saccharomycetales> Species 0.000 description 3
- 102100024746 Dihydrofolate reductase Human genes 0.000 description 3
- 241000233866 Fungi Species 0.000 description 3
- 102000051325 Glucagon Human genes 0.000 description 3
- 108060003199 Glucagon Proteins 0.000 description 3
- QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N L-alanine Chemical compound C[C@H](N)C(O)=O QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N 0.000 description 3
- 108060001084 Luciferase Proteins 0.000 description 3
- 241000282567 Macaca fascicularis Species 0.000 description 3
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 3
- MUBZPKHOEPUJKR-UHFFFAOYSA-N Oxalic acid Chemical compound OC(=O)C(O)=O MUBZPKHOEPUJKR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- KWYUFKZDYYNOTN-UHFFFAOYSA-M Potassium hydroxide Chemical compound [OH-].[K+] KWYUFKZDYYNOTN-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 108700008625 Reporter Genes Proteins 0.000 description 3
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 3
- 235000004279 alanine Nutrition 0.000 description 3
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 3
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 3
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N citric acid Chemical compound OC(=O)CC(O)(C(O)=O)CC(O)=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 3
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 3
- 238000011161 development Methods 0.000 description 3
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 3
- 108020001096 dihydrofolate reductase Proteins 0.000 description 3
- 231100000673 dose–response relationship Toxicity 0.000 description 3
- 238000004520 electroporation Methods 0.000 description 3
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 3
- MASNOZXLGMXCHN-ZLPAWPGGSA-N glucagon Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O)C(C)C)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC=1C=CC=CC=1)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CNC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](N)CC=1NC=NC=1)[C@@H](C)O)[C@@H](C)O)C1=CC=CC=C1 MASNOZXLGMXCHN-ZLPAWPGGSA-N 0.000 description 3
- 229960004666 glucagon Drugs 0.000 description 3
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 description 3
- 229940072221 immunoglobulins Drugs 0.000 description 3
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 3
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 3
- 230000003914 insulin secretion Effects 0.000 description 3
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 3
- 238000007911 parenteral administration Methods 0.000 description 3
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 3
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 3
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 3
- UHDGCWIWMRVCDJ-UHFFFAOYSA-N 1-beta-D-Xylofuranosyl-NH-Cytosine Natural products O=C1N=C(N)C=CN1C1C(O)C(O)C(CO)O1 UHDGCWIWMRVCDJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- GZCWLCBFPRFLKL-UHFFFAOYSA-N 1-prop-2-ynoxypropan-2-ol Chemical compound CC(O)COCC#C GZCWLCBFPRFLKL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- BMYNFMYTOJXKLE-UHFFFAOYSA-N 3-azaniumyl-2-hydroxypropanoate Chemical compound NCC(O)C(O)=O BMYNFMYTOJXKLE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- OSJPPGNTCRNQQC-UWTATZPHSA-N 3-phospho-D-glyceric acid Chemical compound OC(=O)[C@H](O)COP(O)(O)=O OSJPPGNTCRNQQC-UWTATZPHSA-N 0.000 description 2
- KDCGOANMDULRCW-UHFFFAOYSA-N 7H-purine Chemical compound N1=CNC2=NC=NC2=C1 KDCGOANMDULRCW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000013563 Acid Phosphatase Human genes 0.000 description 2
- 108010051457 Acid Phosphatase Proteins 0.000 description 2
- 229930024421 Adenine Natural products 0.000 description 2
- GFFGJBXGBJISGV-UHFFFAOYSA-N Adenine Chemical compound NC1=NC=NC2=C1N=CN2 GFFGJBXGBJISGV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108700028369 Alleles Proteins 0.000 description 2
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 125000001433 C-terminal amino-acid group Chemical group 0.000 description 2
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 2
- 108091026890 Coding region Proteins 0.000 description 2
- 108020004705 Codon Proteins 0.000 description 2
- MIKUYHXYGGJMLM-GIMIYPNGSA-N Crotonoside Natural products C1=NC2=C(N)NC(=O)N=C2N1[C@H]1O[C@@H](CO)[C@H](O)[C@@H]1O MIKUYHXYGGJMLM-GIMIYPNGSA-N 0.000 description 2
- UHDGCWIWMRVCDJ-PSQAKQOGSA-N Cytidine Natural products O=C1N=C(N)C=CN1[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O1 UHDGCWIWMRVCDJ-PSQAKQOGSA-N 0.000 description 2
- 241000701022 Cytomegalovirus Species 0.000 description 2
- NYHBQMYGNKIUIF-UHFFFAOYSA-N D-guanosine Natural products C1=2NC(N)=NC(=O)C=2N=CN1C1OC(CO)C(O)C1O NYHBQMYGNKIUIF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000012410 DNA Ligases Human genes 0.000 description 2
- 108010061982 DNA Ligases Proteins 0.000 description 2
- 108090000204 Dipeptidase 1 Proteins 0.000 description 2
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 2
- 108700028146 Genetic Enhancer Elements Proteins 0.000 description 2
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000238631 Hexapoda Species 0.000 description 2
- 102000018071 Immunoglobulin Fc Fragments Human genes 0.000 description 2
- 108010091135 Immunoglobulin Fc Fragments Proteins 0.000 description 2
- 241000235649 Kluyveromyces Species 0.000 description 2
- 241001138401 Kluyveromyces lactis Species 0.000 description 2
- ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N L-leucine Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 2
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 2
- AFVFQIVMOAPDHO-UHFFFAOYSA-N Methanesulfonic acid Chemical compound CS(O)(=O)=O AFVFQIVMOAPDHO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 2
- ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N Phenol Chemical compound OC1=CC=CC=C1 ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N Phosphoric acid Chemical compound OP(O)(O)=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 206010035226 Plasma cell myeloma Diseases 0.000 description 2
- ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N Proline Natural products OC(=O)C1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000235070 Saccharomyces Species 0.000 description 2
- MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N Serine Natural products OCC(N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 241000256248 Spodoptera Species 0.000 description 2
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N Sulfuric acid Chemical compound OS(O)(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108091008874 T cell receptors Proteins 0.000 description 2
- 102000016266 T-Cell Antigen Receptors Human genes 0.000 description 2
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 2
- 101150006914 TRP1 gene Proteins 0.000 description 2
- IQFYYKKMVGJFEH-XLPZGREQSA-N Thymidine Chemical compound O=C1NC(=O)C(C)=CN1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)C1 IQFYYKKMVGJFEH-XLPZGREQSA-N 0.000 description 2
- 206010067584 Type 1 diabetes mellitus Diseases 0.000 description 2
- ISAKRJDGNUQOIC-UHFFFAOYSA-N Uracil Chemical compound O=C1C=CNC(=O)N1 ISAKRJDGNUQOIC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- DRTQHJPVMGBUCF-XVFCMESISA-N Uridine Chemical compound O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1N1C(=O)NC(=O)C=C1 DRTQHJPVMGBUCF-XVFCMESISA-N 0.000 description 2
- 229960000643 adenine Drugs 0.000 description 2
- OIRDTQYFTABQOQ-KQYNXXCUSA-N adenosine Chemical compound C1=NC=2C(N)=NC=NC=2N1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H]1O OIRDTQYFTABQOQ-KQYNXXCUSA-N 0.000 description 2
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 2
- 210000000612 antigen-presenting cell Anatomy 0.000 description 2
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 2
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 2
- 239000004599 antimicrobial Substances 0.000 description 2
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 2
- 210000000227 basophil cell of anterior lobe of hypophysis Anatomy 0.000 description 2
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 2
- WPYMKLBDIGXBTP-UHFFFAOYSA-N benzoic acid Chemical compound OC(=O)C1=CC=CC=C1 WPYMKLBDIGXBTP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000006635 beta-lactamase Human genes 0.000 description 2
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 2
- 230000022131 cell cycle Effects 0.000 description 2
- 239000013592 cell lysate Substances 0.000 description 2
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 2
- 210000004978 chinese hamster ovary cell Anatomy 0.000 description 2
- 239000013599 cloning vector Substances 0.000 description 2
- UHDGCWIWMRVCDJ-ZAKLUEHWSA-N cytidine Chemical compound O=C1N=C(N)C=CN1[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O1 UHDGCWIWMRVCDJ-ZAKLUEHWSA-N 0.000 description 2
- OPTASPLRGRRNAP-UHFFFAOYSA-N cytosine Chemical compound NC=1C=CNC(=O)N=1 OPTASPLRGRRNAP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 2
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 2
- 239000000539 dimer Substances 0.000 description 2
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 2
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 2
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 2
- 210000003527 eukaryotic cell Anatomy 0.000 description 2
- 229940093181 glucose injection Drugs 0.000 description 2
- 229930195712 glutamate Natural products 0.000 description 2
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 2
- UYTPUPDQBNUYGX-UHFFFAOYSA-N guanine Chemical compound O=C1NC(N)=NC2=C1N=CN2 UYTPUPDQBNUYGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229940029575 guanosine Drugs 0.000 description 2
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 2
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 2
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 2
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 2
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 2
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 2
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 2
- 150000007522 mineralic acids Chemical class 0.000 description 2
- 238000010369 molecular cloning Methods 0.000 description 2
- 201000000050 myeloid neoplasm Diseases 0.000 description 2
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 2
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 2
- 210000000496 pancreas Anatomy 0.000 description 2
- 230000002093 peripheral effect Effects 0.000 description 2
- 230000003285 pharmacodynamic effect Effects 0.000 description 2
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 2
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 2
- BWHMMNNQKKPAPP-UHFFFAOYSA-L potassium carbonate Chemical compound [K+].[K+].[O-]C([O-])=O BWHMMNNQKKPAPP-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 125000001500 prolyl group Chemical group [H]N1C([H])(C(=O)[*])C([H])([H])C([H])([H])C1([H])[H] 0.000 description 2
- 238000001742 protein purification Methods 0.000 description 2
- 210000001938 protoplast Anatomy 0.000 description 2
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 2
- 230000010076 replication Effects 0.000 description 2
- 238000011160 research Methods 0.000 description 2
- 230000000241 respiratory effect Effects 0.000 description 2
- 230000004044 response Effects 0.000 description 2
- 230000003248 secreting effect Effects 0.000 description 2
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 2
- 241000894007 species Species 0.000 description 2
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 2
- RWQNBRDOKXIBIV-UHFFFAOYSA-N thymine Chemical compound CC1=CNC(=O)NC1=O RWQNBRDOKXIBIV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- JOXIMZWYDAKGHI-UHFFFAOYSA-N toluene-4-sulfonic acid Chemical compound CC1=CC=C(S(O)(=O)=O)C=C1 JOXIMZWYDAKGHI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000003151 transfection method Methods 0.000 description 2
- 230000001131 transforming effect Effects 0.000 description 2
- 230000014616 translation Effects 0.000 description 2
- 208000035408 type 1 diabetes mellitus 1 Diseases 0.000 description 2
- 241000701161 unidentified adenovirus Species 0.000 description 2
- DIGQNXIGRZPYDK-WKSCXVIASA-N (2R)-6-amino-2-[[2-[[(2S)-2-[[2-[[(2R)-2-[[(2S)-2-[[(2R,3S)-2-[[2-[[(2S)-2-[[2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2R)-2-[[(2S,3S)-2-[[(2R)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[2-[[(2S)-2-[[(2R)-2-[[2-[[2-[[2-[(2-amino-1-hydroxyethylidene)amino]-3-carboxy-1-hydroxypropylidene]amino]-1-hydroxy-3-sulfanylpropylidene]amino]-1-hydroxyethylidene]amino]-1-hydroxy-3-sulfanylpropylidene]amino]-1,3-dihydroxypropylidene]amino]-1-hydroxyethylidene]amino]-1-hydroxypropylidene]amino]-1,3-dihydroxypropylidene]amino]-1,3-dihydroxypropylidene]amino]-1-hydroxy-3-sulfanylpropylidene]amino]-1,3-dihydroxybutylidene]amino]-1-hydroxy-3-sulfanylpropylidene]amino]-1-hydroxypropylidene]amino]-1,3-dihydroxypropylidene]amino]-1-hydroxyethylidene]amino]-1,5-dihydroxy-5-iminopentylidene]amino]-1-hydroxy-3-sulfanylpropylidene]amino]-1,3-dihydroxybutylidene]amino]-1-hydroxy-3-sulfanylpropylidene]amino]-1,3-dihydroxypropylidene]amino]-1-hydroxyethylidene]amino]-1-hydroxy-3-sulfanylpropylidene]amino]-1-hydroxyethylidene]amino]hexanoic acid Chemical compound C[C@@H]([C@@H](C(=N[C@@H](CS)C(=N[C@@H](C)C(=N[C@@H](CO)C(=NCC(=N[C@@H](CCC(=N)O)C(=NC(CS)C(=N[C@H]([C@H](C)O)C(=N[C@H](CS)C(=N[C@H](CO)C(=NCC(=N[C@H](CS)C(=NCC(=N[C@H](CCCCN)C(=O)O)O)O)O)O)O)O)O)O)O)O)O)O)O)N=C([C@H](CS)N=C([C@H](CO)N=C([C@H](CO)N=C([C@H](C)N=C(CN=C([C@H](CO)N=C([C@H](CS)N=C(CN=C(C(CS)N=C(C(CC(=O)O)N=C(CN)O)O)O)O)O)O)O)O)O)O)O)O DIGQNXIGRZPYDK-WKSCXVIASA-N 0.000 description 1
- ZOBPZXTWZATXDG-UHFFFAOYSA-N 1,3-thiazolidine-2,4-dione Chemical compound O=C1CSC(=O)N1 ZOBPZXTWZATXDG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OWEGMIWEEQEYGQ-UHFFFAOYSA-N 100676-05-9 Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OCC1C(O)C(O)C(O)C(OC2C(OC(O)C(O)C2O)CO)O1 OWEGMIWEEQEYGQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OLXZPDWKRNYJJZ-RRKCRQDMSA-N 2'-deoxyadenosine Chemical compound C1=NC=2C(N)=NC=NC=2N1[C@H]1C[C@H](O)[C@@H](CO)O1 OLXZPDWKRNYJJZ-RRKCRQDMSA-N 0.000 description 1
- BFSVOASYOCHEOV-UHFFFAOYSA-N 2-diethylaminoethanol Chemical compound CCN(CC)CCO BFSVOASYOCHEOV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- YRNWIFYIFSBPAU-UHFFFAOYSA-N 4-[4-(dimethylamino)phenyl]-n,n-dimethylaniline Chemical compound C1=CC(N(C)C)=CC=C1C1=CC=C(N(C)C)C=C1 YRNWIFYIFSBPAU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- PXACTUVBBMDKRW-UHFFFAOYSA-N 4-bromobenzenesulfonic acid Chemical compound OS(=O)(=O)C1=CC=C(Br)C=C1 PXACTUVBBMDKRW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000007469 Actins Human genes 0.000 description 1
- 108010085238 Actins Proteins 0.000 description 1
- 108010088751 Albumins Proteins 0.000 description 1
- 102000009027 Albumins Human genes 0.000 description 1
- 101710187573 Alcohol dehydrogenase 2 Proteins 0.000 description 1
- 101710133776 Alcohol dehydrogenase class-3 Proteins 0.000 description 1
- 102100023635 Alpha-fetoprotein Human genes 0.000 description 1
- QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-O Ammonium Chemical compound [NH4+] QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-O 0.000 description 1
- VHUUQVKOLVNVRT-UHFFFAOYSA-N Ammonium hydroxide Chemical compound [NH4+].[OH-] VHUUQVKOLVNVRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000228212 Aspergillus Species 0.000 description 1
- 241000351920 Aspergillus nidulans Species 0.000 description 1
- 241000228245 Aspergillus niger Species 0.000 description 1
- 241000713842 Avian sarcoma virus Species 0.000 description 1
- 241000193830 Bacillus <bacterium> Species 0.000 description 1
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 1
- 239000005711 Benzoic acid Substances 0.000 description 1
- DWRXFEITVBNRMK-UHFFFAOYSA-N Beta-D-1-Arabinofuranosylthymine Natural products O=C1NC(=O)C(C)=CN1C1C(O)C(O)C(CO)O1 DWRXFEITVBNRMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-M Bicarbonate Chemical class OC([O-])=O BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 241000701822 Bovine papillomavirus Species 0.000 description 1
- 206010006187 Breast cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000026310 Breast neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 239000002126 C01EB10 - Adenosine Substances 0.000 description 1
- OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N Calcium Chemical compound [Ca] OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L Calcium chloride Chemical compound [Cl-].[Cl-].[Ca+2] UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 241000222122 Candida albicans Species 0.000 description 1
- 229920002134 Carboxymethyl cellulose Polymers 0.000 description 1
- 206010057248 Cell death Diseases 0.000 description 1
- 208000000668 Chronic Pancreatitis Diseases 0.000 description 1
- 108091062157 Cis-regulatory element Proteins 0.000 description 1
- 108020004635 Complementary DNA Proteins 0.000 description 1
- 108020004394 Complementary RNA Proteins 0.000 description 1
- 241000699802 Cricetulus griseus Species 0.000 description 1
- IVOMOUWHDPKRLL-KQYNXXCUSA-N Cyclic adenosine monophosphate Chemical compound C([C@H]1O2)OP(O)(=O)O[C@H]1[C@@H](O)[C@@H]2N1C(N=CN=C2N)=C2N=C1 IVOMOUWHDPKRLL-KQYNXXCUSA-N 0.000 description 1
- NBSCHQHZLSJFNQ-GASJEMHNSA-N D-Glucose 6-phosphate Chemical compound OC1O[C@H](COP(O)(O)=O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]1O NBSCHQHZLSJFNQ-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- QNAYBMKLOCPYGJ-UWTATZPHSA-N D-alanine Chemical compound C[C@@H](N)C(O)=O QNAYBMKLOCPYGJ-UWTATZPHSA-N 0.000 description 1
- QNAYBMKLOCPYGJ-UHFFFAOYSA-N D-alpha-Ala Natural products CC([NH3+])C([O-])=O QNAYBMKLOCPYGJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- KDXKERNSBIXSRK-RXMQYKEDSA-N D-lysine group Chemical group N[C@H](CCCCN)C(=O)O KDXKERNSBIXSRK-RXMQYKEDSA-N 0.000 description 1
- 102000053602 DNA Human genes 0.000 description 1
- 101710088194 Dehydrogenase Proteins 0.000 description 1
- 241000255581 Drosophila <fruit fly, genus> Species 0.000 description 1
- 108010042407 Endonucleases Proteins 0.000 description 1
- 102000004533 Endonucleases Human genes 0.000 description 1
- 241000206602 Eukaryota Species 0.000 description 1
- 108010087819 Fc receptors Proteins 0.000 description 1
- 102000009109 Fc receptors Human genes 0.000 description 1
- 230000025996 G0 to G1 transition Effects 0.000 description 1
- 108700039691 Genetic Promoter Regions Proteins 0.000 description 1
- VFRROHXSMXFLSN-UHFFFAOYSA-N Glc6P Natural products OP(=O)(O)OCC(O)C(O)C(O)C(O)C=O VFRROHXSMXFLSN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010073178 Glucan 1,4-alpha-Glucosidase Proteins 0.000 description 1
- 102100022624 Glucoamylase Human genes 0.000 description 1
- 102000030595 Glucokinase Human genes 0.000 description 1
- 108010021582 Glucokinase Proteins 0.000 description 1
- 208000002705 Glucose Intolerance Diseases 0.000 description 1
- 102000005731 Glucose-6-phosphate isomerase Human genes 0.000 description 1
- 108010070600 Glucose-6-phosphate isomerase Proteins 0.000 description 1
- 241001149669 Hanseniaspora Species 0.000 description 1
- 241000700721 Hepatitis B virus Species 0.000 description 1
- 108091027305 Heteroduplex Proteins 0.000 description 1
- 229920000209 Hexadimethrine bromide Polymers 0.000 description 1
- 102000005548 Hexokinase Human genes 0.000 description 1
- 108700040460 Hexokinases Proteins 0.000 description 1
- 241000701109 Human adenovirus 2 Species 0.000 description 1
- 208000013016 Hypoglycemia Diseases 0.000 description 1
- 102000001706 Immunoglobulin Fab Fragments Human genes 0.000 description 1
- 108010054477 Immunoglobulin Fab Fragments Proteins 0.000 description 1
- 108010021625 Immunoglobulin Fragments Proteins 0.000 description 1
- 102000008394 Immunoglobulin Fragments Human genes 0.000 description 1
- 206010056997 Impaired fasting glucose Diseases 0.000 description 1
- 241000235058 Komagataella pastoris Species 0.000 description 1
- FBOZXECLQNJBKD-ZDUSSCGKSA-N L-methotrexate Chemical compound C=1N=C2N=C(N)N=C(N)C2=NC=1CN(C)C1=CC=C(C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O)C=C1 FBOZXECLQNJBKD-ZDUSSCGKSA-N 0.000 description 1
- COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N L-phenylalanine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 1
- 125000000174 L-prolyl group Chemical group [H]N1C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[C@@]1([H])C(*)=O 0.000 description 1
- QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N L-tryptophane Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N 0.000 description 1
- KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N L-valine Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- 241000481961 Lachancea thermotolerans Species 0.000 description 1
- 241000235651 Lachancea waltii Species 0.000 description 1
- ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N Leucine Natural products CC(C)CC(N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000003960 Ligases Human genes 0.000 description 1
- 108090000364 Ligases Proteins 0.000 description 1
- 208000002720 Malnutrition Diseases 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-PICCSMPSSA-N Maltose Natural products O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)OC(O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-PICCSMPSSA-N 0.000 description 1
- 102000003792 Metallothionein Human genes 0.000 description 1
- 108090000157 Metallothionein Proteins 0.000 description 1
- 230000004988 N-glycosylation Effects 0.000 description 1
- 229930193140 Neomycin Natural products 0.000 description 1
- 241000221960 Neurospora Species 0.000 description 1
- 241000221961 Neurospora crassa Species 0.000 description 1
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 1
- 102000016387 Pancreatic elastase Human genes 0.000 description 1
- 108010067372 Pancreatic elastase Proteins 0.000 description 1
- 206010033645 Pancreatitis Diseases 0.000 description 1
- 206010033647 Pancreatitis acute Diseases 0.000 description 1
- 206010033649 Pancreatitis chronic Diseases 0.000 description 1
- 241001580565 Peachia Species 0.000 description 1
- 241000228143 Penicillium Species 0.000 description 1
- 102000035195 Peptidases Human genes 0.000 description 1
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 1
- 101710176384 Peptide 1 Proteins 0.000 description 1
- 108010069341 Phosphofructokinases Proteins 0.000 description 1
- 102000001105 Phosphofructokinases Human genes 0.000 description 1
- 102000012288 Phosphopyruvate Hydratase Human genes 0.000 description 1
- 108010022181 Phosphopyruvate Hydratase Proteins 0.000 description 1
- 108091000080 Phosphotransferase Proteins 0.000 description 1
- 241000235648 Pichia Species 0.000 description 1
- 241001505332 Polyomavirus sp. Species 0.000 description 1
- 108010058003 Proglucagon Proteins 0.000 description 1
- 239000004365 Protease Substances 0.000 description 1
- CZPWVGJYEJSRLH-UHFFFAOYSA-N Pyrimidine Chemical compound C1=CN=CN=C1 CZPWVGJYEJSRLH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010011939 Pyruvate Decarboxylase Proteins 0.000 description 1
- 102000013009 Pyruvate Kinase Human genes 0.000 description 1
- 108020005115 Pyruvate Kinase Proteins 0.000 description 1
- 102000004879 Racemases and epimerases Human genes 0.000 description 1
- 108090001066 Racemases and epimerases Proteins 0.000 description 1
- 230000010799 Receptor Interactions Effects 0.000 description 1
- 108091027981 Response element Proteins 0.000 description 1
- 208000017442 Retinal disease Diseases 0.000 description 1
- 206010038923 Retinopathy Diseases 0.000 description 1
- 241000223252 Rhodotorula Species 0.000 description 1
- 244000253911 Saccharomyces fragilis Species 0.000 description 1
- 241000235347 Schizosaccharomyces pombe Species 0.000 description 1
- 241001123650 Schwanniomyces occidentalis Species 0.000 description 1
- 229920005654 Sephadex Polymers 0.000 description 1
- 239000012507 Sephadex™ Substances 0.000 description 1
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000006011 Stroke Diseases 0.000 description 1
- KDYFGRWQOYBRFD-UHFFFAOYSA-N Succinic acid Natural products OC(=O)CCC(O)=O KDYFGRWQOYBRFD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940100389 Sulfonylurea Drugs 0.000 description 1
- 239000004098 Tetracycline Substances 0.000 description 1
- 229940123464 Thiazolidinedione Drugs 0.000 description 1
- 108091036066 Three prime untranslated region Proteins 0.000 description 1
- 102000006601 Thymidine Kinase Human genes 0.000 description 1
- 108020004440 Thymidine kinase Proteins 0.000 description 1
- 241001149964 Tolypocladium Species 0.000 description 1
- 101710120037 Toxin CcdB Proteins 0.000 description 1
- 241000223259 Trichoderma Species 0.000 description 1
- QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N Tryptophan Natural products C1=CC=C2C(CC(N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- IVOMOUWHDPKRLL-UHFFFAOYSA-N UNPD107823 Natural products O1C2COP(O)(=O)OC2C(O)C1N1C(N=CN=C2N)=C2N=C1 IVOMOUWHDPKRLL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 244000000188 Vaccinium ovalifolium Species 0.000 description 1
- 108020005202 Viral DNA Proteins 0.000 description 1
- IXKSXJFAGXLQOQ-XISFHERQSA-N WHWLQLKPGQPMY Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C1=CNC=N1 IXKSXJFAGXLQOQ-XISFHERQSA-N 0.000 description 1
- 241000235013 Yarrowia Species 0.000 description 1
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 230000001154 acute effect Effects 0.000 description 1
- 201000003229 acute pancreatitis Diseases 0.000 description 1
- 230000003044 adaptive effect Effects 0.000 description 1
- 229960005305 adenosine Drugs 0.000 description 1
- 102000030621 adenylate cyclase Human genes 0.000 description 1
- 108060000200 adenylate cyclase Proteins 0.000 description 1
- LFVVNPBBFUSSHL-UHFFFAOYSA-N alexidine Chemical compound CCCCC(CC)CNC(=N)NC(=N)NCCCCCCNC(=N)NC(=N)NCC(CC)CCCC LFVVNPBBFUSSHL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229950010221 alexidine Drugs 0.000 description 1
- 239000003513 alkali Substances 0.000 description 1
- 229910001854 alkali hydroxide Inorganic materials 0.000 description 1
- 229910001860 alkaline earth metal hydroxide Inorganic materials 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-PHYPRBDBSA-N alpha-D-galactose Chemical compound OC[C@H]1O[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-PHYPRBDBSA-N 0.000 description 1
- 108010026331 alpha-Fetoproteins Proteins 0.000 description 1
- 229910000147 aluminium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 125000003368 amide group Chemical group 0.000 description 1
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 1
- 239000000908 ammonium hydroxide Substances 0.000 description 1
- 238000012870 ammonium sulfate precipitation Methods 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 239000003957 anion exchange resin Substances 0.000 description 1
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 1
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 1
- 230000005875 antibody response Effects 0.000 description 1
- 239000003472 antidiabetic agent Substances 0.000 description 1
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 1
- 230000006907 apoptotic process Effects 0.000 description 1
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 235000010233 benzoic acid Nutrition 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 1
- 108010051210 beta-Fructofuranosidase Proteins 0.000 description 1
- IQFYYKKMVGJFEH-UHFFFAOYSA-N beta-L-thymidine Natural products O=C1NC(=O)C(C)=CN1C1OC(CO)C(O)C1 IQFYYKKMVGJFEH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- DRTQHJPVMGBUCF-PSQAKQOGSA-N beta-L-uridine Natural products O[C@H]1[C@@H](O)[C@H](CO)O[C@@H]1N1C(=O)NC(=O)C=C1 DRTQHJPVMGBUCF-PSQAKQOGSA-N 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-QUYVBRFLSA-N beta-maltose Chemical compound OC[C@H]1O[C@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QUYVBRFLSA-N 0.000 description 1
- 230000008827 biological function Effects 0.000 description 1
- 239000000090 biomarker Substances 0.000 description 1
- 239000002981 blocking agent Substances 0.000 description 1
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 1
- 230000003139 buffering effect Effects 0.000 description 1
- KDYFGRWQOYBRFD-NUQCWPJISA-N butanedioic acid Chemical compound O[14C](=O)CC[14C](O)=O KDYFGRWQOYBRFD-NUQCWPJISA-N 0.000 description 1
- 229910052791 calcium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011575 calcium Substances 0.000 description 1
- 239000001110 calcium chloride Substances 0.000 description 1
- 229910001628 calcium chloride Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001506 calcium phosphate Substances 0.000 description 1
- 229910000389 calcium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011010 calcium phosphates Nutrition 0.000 description 1
- BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-N carbonic acid Chemical compound OC(O)=O BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000004649 carbonic acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 239000001768 carboxy methyl cellulose Substances 0.000 description 1
- 235000010948 carboxy methyl cellulose Nutrition 0.000 description 1
- 239000008112 carboxymethyl-cellulose Substances 0.000 description 1
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 1
- 230000003197 catalytic effect Effects 0.000 description 1
- 238000005341 cation exchange Methods 0.000 description 1
- 150000001768 cations Chemical class 0.000 description 1
- 230000020411 cell activation Effects 0.000 description 1
- 230000024245 cell differentiation Effects 0.000 description 1
- 230000006037 cell lysis Effects 0.000 description 1
- 230000004663 cell proliferation Effects 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 238000011098 chromatofocusing Methods 0.000 description 1
- 230000002759 chromosomal effect Effects 0.000 description 1
- 238000000975 co-precipitation Methods 0.000 description 1
- 239000003184 complementary RNA Substances 0.000 description 1
- 239000000356 contaminant Substances 0.000 description 1
- 230000009260 cross reactivity Effects 0.000 description 1
- 229940095074 cyclic amp Drugs 0.000 description 1
- 230000001351 cycling effect Effects 0.000 description 1
- 230000009089 cytolysis Effects 0.000 description 1
- 229940104302 cytosine Drugs 0.000 description 1
- 230000034994 death Effects 0.000 description 1
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 1
- 206010061428 decreased appetite Diseases 0.000 description 1
- 230000002950 deficient Effects 0.000 description 1
- 230000000593 degrading effect Effects 0.000 description 1
- 230000001934 delay Effects 0.000 description 1
- 238000004925 denaturation Methods 0.000 description 1
- 230000036425 denaturation Effects 0.000 description 1
- 239000005549 deoxyribonucleoside Substances 0.000 description 1
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 239000008121 dextrose Substances 0.000 description 1
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 1
- 201000006549 dyspepsia Diseases 0.000 description 1
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 1
- 210000002472 endoplasmic reticulum Anatomy 0.000 description 1
- 238000012869 ethanol precipitation Methods 0.000 description 1
- 238000005194 fractionation Methods 0.000 description 1
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 1
- 229930182830 galactose Natural products 0.000 description 1
- 238000002523 gelfiltration Methods 0.000 description 1
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 1
- 238000010353 genetic engineering Methods 0.000 description 1
- 208000004104 gestational diabetes Diseases 0.000 description 1
- 102000018146 globin Human genes 0.000 description 1
- 108060003196 globin Proteins 0.000 description 1
- UKVFVQPAANCXIL-FJVFSOETSA-N glp-1 (1-37) amide Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC=1C=CC=CC=1)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CNC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CC=1NC=NC=1)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC=CC=1)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC=1NC=NC=1)[C@@H](C)O)[C@@H](C)O)C(C)C)C1=CC=CC=C1 UKVFVQPAANCXIL-FJVFSOETSA-N 0.000 description 1
- 108010063245 glucagon-like peptide 1 (7-36)amide Proteins 0.000 description 1
- 229960001031 glucose Drugs 0.000 description 1
- 238000007446 glucose tolerance test Methods 0.000 description 1
- 230000002641 glycemic effect Effects 0.000 description 1
- 102000006602 glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase Human genes 0.000 description 1
- 108020004445 glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase Proteins 0.000 description 1
- 235000011187 glycerol Nutrition 0.000 description 1
- 230000013595 glycosylation Effects 0.000 description 1
- 238000006206 glycosylation reaction Methods 0.000 description 1
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 1
- 230000036541 health Effects 0.000 description 1
- HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N histidine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000000487 histidyl group Chemical group [H]N([H])C(C(=O)O*)C([H])([H])C1=C([H])N([H])C([H])=N1 0.000 description 1
- 230000028996 humoral immune response Effects 0.000 description 1
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 description 1
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- XMBWDFGMSWQBCA-UHFFFAOYSA-N hydrogen iodide Chemical compound I XMBWDFGMSWQBCA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940071870 hydroiodic acid Drugs 0.000 description 1
- 230000002218 hypoglycaemic effect Effects 0.000 description 1
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 1
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 1
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 1
- 230000000977 initiatory effect Effects 0.000 description 1
- 150000007529 inorganic bases Chemical class 0.000 description 1
- 230000010354 integration Effects 0.000 description 1
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 description 1
- 238000007912 intraperitoneal administration Methods 0.000 description 1
- 239000001573 invertase Substances 0.000 description 1
- 235000011073 invertase Nutrition 0.000 description 1
- 230000002427 irreversible effect Effects 0.000 description 1
- 239000000644 isotonic solution Substances 0.000 description 1
- 208000017169 kidney disease Diseases 0.000 description 1
- 230000021633 leukocyte mediated immunity Effects 0.000 description 1
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 1
- 238000001638 lipofection Methods 0.000 description 1
- 210000005229 liver cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000005265 lung cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000008176 lyophilized powder Substances 0.000 description 1
- RLSSMJSEOOYNOY-UHFFFAOYSA-N m-cresol Chemical compound CC1=CC=CC(O)=C1 RLSSMJSEOOYNOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 238000013507 mapping Methods 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 230000004060 metabolic process Effects 0.000 description 1
- 229940100630 metacresol Drugs 0.000 description 1
- 229910052751 metal Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000002184 metal Substances 0.000 description 1
- 229940098779 methanesulfonic acid Drugs 0.000 description 1
- 229960000485 methotrexate Drugs 0.000 description 1
- 238000000520 microinjection Methods 0.000 description 1
- 238000002703 mutagenesis Methods 0.000 description 1
- 231100000350 mutagenesis Toxicity 0.000 description 1
- 208000010125 myocardial infarction Diseases 0.000 description 1
- 210000004897 n-terminal region Anatomy 0.000 description 1
- 230000003880 negative regulation of appetite Effects 0.000 description 1
- 229960004927 neomycin Drugs 0.000 description 1
- 201000001119 neuropathy Diseases 0.000 description 1
- 230000007823 neuropathy Effects 0.000 description 1
- 230000003472 neutralizing effect Effects 0.000 description 1
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000018343 nutrient deficiency Nutrition 0.000 description 1
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 1
- 229920002113 octoxynol Polymers 0.000 description 1
- 150000007524 organic acids Chemical class 0.000 description 1
- 235000005985 organic acids Nutrition 0.000 description 1
- 210000001672 ovary Anatomy 0.000 description 1
- 235000006408 oxalic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000006174 pH buffer Substances 0.000 description 1
- 230000036961 partial effect Effects 0.000 description 1
- 208000033808 peripheral neuropathy Diseases 0.000 description 1
- 229940021222 peritoneal dialysis isotonic solution Drugs 0.000 description 1
- COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N phenylalanine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 102000020233 phosphotransferase Human genes 0.000 description 1
- 230000036470 plasma concentration Effects 0.000 description 1
- 108010055896 polyornithine Proteins 0.000 description 1
- 229920002714 polyornithine Polymers 0.000 description 1
- 229910000027 potassium carbonate Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000003389 potentiating effect Effects 0.000 description 1
- 244000144977 poultry Species 0.000 description 1
- 201000009104 prediabetes syndrome Diseases 0.000 description 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 1
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 description 1
- 230000002035 prolonged effect Effects 0.000 description 1
- 230000000069 prophylactic effect Effects 0.000 description 1
- 238000011321 prophylaxis Methods 0.000 description 1
- 238000009163 protein therapy Methods 0.000 description 1
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 1
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 1
- 238000010188 recombinant method Methods 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 238000002271 resection Methods 0.000 description 1
- 230000000284 resting effect Effects 0.000 description 1
- 238000004007 reversed phase HPLC Methods 0.000 description 1
- 239000002342 ribonucleoside Substances 0.000 description 1
- 230000036186 satiety Effects 0.000 description 1
- 235000019627 satiety Nutrition 0.000 description 1
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 1
- 125000003607 serino group Chemical group [H]N([H])[C@]([H])(C(=O)[*])C(O[H])([H])[H] 0.000 description 1
- 210000000717 sertoli cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000000741 silica gel Substances 0.000 description 1
- 229910002027 silica gel Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000000527 sonication Methods 0.000 description 1
- 238000011895 specific detection Methods 0.000 description 1
- 230000006641 stabilisation Effects 0.000 description 1
- 238000011105 stabilization Methods 0.000 description 1
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 1
- 238000007619 statistical method Methods 0.000 description 1
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- YROXIXLRRCOBKF-UHFFFAOYSA-N sulfonylurea Chemical compound OC(=N)N=S(=O)=O YROXIXLRRCOBKF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 description 1
- 238000001356 surgical procedure Methods 0.000 description 1
- 238000004114 suspension culture Methods 0.000 description 1
- 230000008685 targeting Effects 0.000 description 1
- 229960002180 tetracycline Drugs 0.000 description 1
- 229930101283 tetracycline Natural products 0.000 description 1
- 235000019364 tetracycline Nutrition 0.000 description 1
- 150000003522 tetracyclines Chemical class 0.000 description 1
- 229940104230 thymidine Drugs 0.000 description 1
- 229940113082 thymine Drugs 0.000 description 1
- 231100000701 toxic element Toxicity 0.000 description 1
- 239000003053 toxin Substances 0.000 description 1
- 231100000765 toxin Toxicity 0.000 description 1
- 108700012359 toxins Proteins 0.000 description 1
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 1
- 238000013519 translation Methods 0.000 description 1
- QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H tricalcium bis(phosphate) Chemical compound [Ca+2].[Ca+2].[Ca+2].[O-]P([O-])([O-])=O.[O-]P([O-])([O-])=O QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H 0.000 description 1
- 241001515965 unidentified phage Species 0.000 description 1
- 241001430294 unidentified retrovirus Species 0.000 description 1
- 229940035893 uracil Drugs 0.000 description 1
- DRTQHJPVMGBUCF-UHFFFAOYSA-N uracil arabinoside Natural products OC1C(O)C(CO)OC1N1C(=O)NC(=O)C=C1 DRTQHJPVMGBUCF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940045145 uridine Drugs 0.000 description 1
- 239000004474 valine Substances 0.000 description 1
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/26—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against hormones ; against hormone releasing or inhibiting factors
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
- A61P3/04—Anorexiants; Antiobesity agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
- A61P3/08—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis
- A61P3/10—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis for hyperglycaemia, e.g. antidiabetics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P5/00—Drugs for disorders of the endocrine system
- A61P5/48—Drugs for disorders of the endocrine system of the pancreatic hormones
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/475—Growth factors; Growth regulators
- C07K14/50—Fibroblast growth factor [FGF]
- C07K14/503—Fibroblast growth factor [FGF] basic FGF [bFGF]
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/575—Hormones
- C07K14/605—Glucagons
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2319/00—Fusion polypeptide
- C07K2319/30—Non-immunoglobulin-derived peptide or protein having an immunoglobulin constant or Fc region, or a fragment thereof, attached thereto
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Endocrinology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Diabetes (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Obesity (AREA)
- Emergency Medicine (AREA)
- Child & Adolescent Psychology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Abstract
본 발명은 특정 IgG4-Fc 유도체에 융합된 특정 GLP-1 유사체를 제공한다. 이들 융합 단백질은 증가된 반감기, 감소된 면역원성, 및 감소된 이펙터 활성을 갖는다. 융합 단백질은 당뇨병, 비만, 과민성 대장 증후군, 및 혈장 글루코스를 저하시키거나 위 및(또는) 장 운동성을 저해하고 위 및(또는) 장 공복화를 저해하거나, 식품 섭취를 저해함으로써 이로울 수 있는 기타 증상을 치료하는데 유용하다.
이종 융합 단백질, 글루카곤-유사 펩티드 유사체, 생체내 반감기, 면역원성, 이펙터 활성, 당뇨병, 비만
Description
본 발명은 펩티드의 생체내 반감기를 연장시키는 효과를 갖는 단백질에 융합된 글루카콘-유사 펩티드 유사체(glucagon-like peptide analog)에 관한 것이다. 이들 융합 단백질은 다양한 다른 증상이나 장애 뿐만 아니라 당뇨병을 치료하는데 사용될 수 있다.
글루카콘-유사 펩티드-1(GLP-1) 유사체와 유도체는 2형 당뇨병 치료를 위한 임상 시험에서 유망성을 나타낸다. GLP-1은 인슐린 분비 자극, 글루카곤 분비 저해, 위 공복화 저해, 위 운동성 또는 장 운동성 저해, 및 체중 감량 유도와 같은 수많은 생물학적 효과를 유도한다. GLP-1의 중대한 특징은, 인슐린 요법이나 인슐린 발현을 증가시킴으로써 작용하는 몇몇 유형의 경구 요법을 사용할 때 저혈당증이 나타나는 부수적 위험없이 인슐린 분비를 자극하는 능력이 있다는 것이다.
GLP-1 펩티드가 관여하는 치료법의 유용성은 GLP-1(1-37)이 빈약하게 활성적이고, 자연 발생적인 2가지의 말단절단된 펩티드, 즉 GLP-1(7-37)OH와 GLP-1(7-36)NH2가 생체내에서 신속하게 제거되고 매우 짧은 생체내 반감기를 갖는다는 사실에 의해 제한되어 왔다. 내생적으로 생산된 디펩티딜-펩티다제 Ⅳ(DPP-Ⅳ)가 N-말 단 히스티딘과 알라닌 잔기를 제거함으로써 순환중인 GLP-1 펩티드를 불활성화시키고, 이것이 짧은 생체내 반감기의 주된 이유인 것으로 알려져 있다.
생물학적 활성을 유지하면서 GLP-1 펩티드의 제거 반감기를 연장시키거나 신체로부터 펩티드의 제거율을 감소시키기 위하여 다양한 접근법이 수행되어 왔다. 하나의 접근법은 면역글로불린의 Fc 부분에 GLP-1 펩티드를 융합시키는 것을 포함한다. 면역글로불린은 전형적으로 생체내에서 순환 반감기가 길다. 예를 들어, IgG 분자는 인간에서 23 일까지의 반감기를 가질 수 있다. 면역글로불린의 Fc 부분은 부분적으로 이러한 생체내 안정성에 관여한다. GLP-1-Fc 융합 단백질은 GLP-1 분자의 생물학적 활성을 보존하면서 면역글로불린의 Fc 부분에 의해 제공되는 안정성을 이용한다.
비록 이 접근법이 GLP-1 치료법에 이용가능하기는 하지만(WO 02/46227 참조), 지속된 기간에 걸쳐 반복적으로 투여될 때 다양한 융합 단백질의 항원성에 관하여 일반적인 염려가 있다. 당뇨병 환자는 일단 그 질환으로 진단되면 그의 전 생애 동안 치료되어야만 하기 때문에 이것은 특히 GLP-1-Fc 융합 치료법에 대한 염려이다. 부가적으로, Fc 부분이 원치않는 이펙터(effector) 기능을 보유하면 Fc 융합 단백질 치료법이 근심거리일 수 있다.
본 발명은 반복되고 지속된 투여 후 면역 반응을 유도하는 위험이 감소되고 더 이상 이펙터 기능을 갖지 않는 특정 GLP-1-Fc 융합 단백질을 동정함으로써 GLP-1-Fc 융합물의 투여와 관련된 잠재적 면역원성 및 이펙터 활성과 관련된 문제점을 극복하기 위한 것이다. 이들 특정 융합 단백질은 분자의 Fc 부분 뿐만 아니라 GLP-1 부분의 다양한 위치에서 치환을 갖는다. 본원에 기재된 치환은 증가된 효능, 증가된 생체내 안정성, 이펙터 기능의 제거, 및 분자가 면역계의 적응 요소에 의해 인식될 가능성의 감소를 제공한다.
본 발명의 화합물은
서열번호 7의 서열인
Ala-Glu-Ser-Lys-Tyr-Gly-Pro-Pro-Cys-Pro-Pro-Cys-Pro-Ala-Pro-
Xaa 16 -Xaa 17 -Xaa 18 -Gly-Gly-Pro-Ser-Val-Phe-Leu-Phe-Pro-Pro-Lys-Pro-
Lys-Asp-Thr-Leu-Met-Ile-Ser-Arg-Thr-Pro-Glu-Val-Thr-Cys-Val-
Val-Val-Asp-Val-Ser-Gln-Glu-Asp-Pro-Glu-Val-Gln-Phe-Asn-Trp-
Tyr-Val-Asp-Gly-Val-Glu-Val-His-Asn-Ala-Lys-Thr-Lys-Pro-Arg-
Glu-Glu-Gln-Phe-Xaa 80 -Ser-Thr-Tyr-Arg-Val-Val-Ser-Val-Leu-Thr-
Val-Leu-His-Gln-Asp-Trp-Leu-Asn-Gly-Lys-Glu-Tyr-Lys-Cys-Lys-
Val-Ser-Asn-Lys-Gly-Leu-Pro-Ser-Ser-Ile-Glu-Lys-Thr-Ile-Ser-
Lys-Ala-Lys-Gly-Gln-Pro-Arg-Glu-Pro-Gln-Val-Tyr-Thr-Leu-Pro-
Pro-Ser-Gln-Glu-Glu-Met-Thr-Lys-Asn-Gln-Val-Ser-Leu-Thr-Cys-
Leu-Val-Lys-Gly-Phe-Tyr-Pro-Ser-Asp-Ile-Ala-Val-Glu-Trp-Glu-
Ser-Asn-Gly-Gln-Pro-Glu-Asn-Asn-Tyr-Lys-Thr-Thr-Pro-Pro-Val-
Leu-Asp-Ser-Asp-Gly-Ser-Phe-Phe-Leu-Tyr-Ser-Arg-Leu-Thr-Val-
Asp-Lys-Ser-Arg-Trp-Gln-Glu-Gly-Asn-Val-Phe-Ser-Cys-Ser-Val-
Met-His-Glu-Ala-Leu-His-Asn-His-Tyr-Thr-Gln-Lys-Ser-Leu-Ser-
Leu-Ser-Leu-Gly-Xaa 230 (서열번호 7)
(여기에서,
위치 16에 있는 Xaa는 Pro 또는 Glu이고;
위치 17에 있는 Xaa는 Phe, Val 또는 Ala이며;
위치 18에 있는 Xaa는 Leu, Glu 또는 Ala이고;
위치 80에 있는 Xaa는 Asn 또는 Ala이며;
위치 230에 있는 Xaa는 Lys이거나 존재하지 않음)
을 포함하는 면역글로불린의 Fc 부분에 융합된,
a) (서열번호 1)
His-Xaa8-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Glu-
Gln-Ala-Ala-Lys-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Lys-Gly-Gly-Gly
(여기에서 Xaa8은 Gly 및 Val으로부터 선택됨);
b) (서열번호 2)
His-Xaa8-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Glu-
Gln-Ala-Ala-Lys-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Lys-Asn-Gly-Gly-Gly
(여기에서 Xaa8은 Gly 및 Val으로부터 선택됨);
c) (서열번호 3)
His-Xaa8-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Glu-
Gln-Ala-Ala-Lys-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Lys-Gly-Gly-Pro
(여기에서 Xaa8은 Gly 및 Val으로부터 선택됨);
d) (서열번호 4)
His-Xaa8-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Glu-
Gln-Ala-Ala-Lys-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Lys-Asn-Gly-Gly-Pro
(여기에서 Xaa8은 Gly 및 Val으로부터 선택됨);
e) (서열번호 5)
His-Xaa8-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Glu-
Gln-Ala-Ala-Lys-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Lys-Gly-Gly
(여기에서 Xaa8은 Gly 및 Val으로부터 선택됨);
f) (서열번호 6)
His-Xaa8-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Glu-
Gln-Ala-Ala-Lys-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Lys-Asn-Gly-Gly
(여기에서 Xaa8은 Gly 및 Val으로부터 선택됨)
으로 구성된 군으로부터 선택되는 서열을 포함하는 GLP-1 유사체를 포함하는 이종(heterologous) 융합 단백질을 포함한다.
본 발명의 이종 융합 단백질에서는 GLP-1 유사체 부분의 C-말단과 Fc 부분의 N-말단이, 바람직하게는 서열 Gly-Gly-Gly-Gly-Ser-Gly-Gly-Gly-Gly-Ser-Gly-Gly-Gly-Gly-Ser(서열번호 8)의 G-풍부 펩티드 링커의 1, 1.5 또는 2 반복물을 통해 서로 융합된다.
본 발명은 또한 본 발명의 이종 융합 단백질을 코딩하는 폴리뉴클레오티드, 및 그러한 폴리뉴클레오티드를 포함하는 벡터 및 숙주 세포를 포함한다. 본원에서 논의된 이종 융합 단백질을 투여하는 것을 포함하는, 인슐린 의존성 및 비-인슐린 의존성 당뇨병, 비만, 및 다양한 기타 장애 및 증상을 앓고 있는 환자의 치료 방법 또한 본 발명에 포함된다.
본 발명의 이종 융합 단백질은 GLP-1 유사체 부분과 Fc 부분을 포함한다. GLP-1 유사체 부분과 Fc 부분은, 인간에서 지속되고 반복된 투여 후 항체 형성을 유도할 가능성을 감소시키면서, Fc 서열에 융합되지 않은 천연 GLP-1 또는 GLP-1 유사체에 비해 증가된 효능과 생체내 안정성을 단백질에게 제공하는 천연 GLP-1 서열과 인간 IgG4 서열에 대한 치환을 각각 포함한다.
천연 GLP-1은 처음 6개의 아미노산이 분자로부터 절단되도록 생체내에서 가공된다. 따라서, 당업계에서의 관행에 의해, GLP-1의 아미노 말단은 7번으로, 카르복시-말단은 37번으로 지정된다. 폴리펩티드에 있는 다른 아미노산은 서열번호 9에 나타내어진 바와 같이 연속적으로 번호매겨진다. 예를 들어, 위치 8은 알라닌이고 위치 22는 글리신이다. 가공된 펩티드는 C-말단 글리신 잔기가 제거되고 아미드 기로 대체되도록 생체내에서 추가로 변형될 수 있다. 따라서, GLP-1(7-37)OH와 GLP-1(7-36)아미드는 분자의 두 천연 형태를 나타낸다. GLP-1(7-37)OH는 하기 서열번호 9의 아미노산 서열을 갖는다.
이종 융합 단백질의 GLP-1 유사체 부분은 천연 GLP-1(7-37)에 대해 위치 8, 22 및 36에서 3개의 주요 치환을 포함한다. 위치 8에서의 치환은 내생적 효소 디펩티딜-펩티다제 Ⅳ(DPP-Ⅳ)가 유사체를 불활성화시키는 속도를 감소시킨다. DPP-Ⅳ는 2번째와 3번째 아미노산 사이(위치 8과 9 사이)에서 천연 GLP-1을 절단하고, 그 결과로 생성된 분자는 덜 활성적이다. 따라서, 본 발명의 이종 융합 단백질은 DPP-Ⅳ에 대해 내성이 있다. 위치 22에서의 치환은 분자가 응집할 가능성을 감소시키고 분자의 효능을 증가시킨다. 전체 융합 단백질에서의 위치 36의 치환 뿐만 아니라 8 및 22가 변화된 유사체에서의 위치 36의 치환은 융합 단백질이 인간에서 반복되고 지속된 투여 후에 중화 면역 반응을 유도할 위험을 감소시킨다.
체액성 및 세포-매개성 면역 반응 둘 다의 발생에서 중추적인 사건은 T-헬퍼(TH) 세포의 활성화와 클론 확장(clonal expansion)이다. TH 세포 활성화는 항원-제시 세포(APC)의 존재 하에 클래스 Ⅱ 주요 조직적합성(MHC) 분자에 결합된 가공된 항원성 펩티드와 T-세포 수용체(TCR)-CD3 복합체의 상호작용에 의해 개시된다. 항원과 TH 세포의 상호작용은 휴지 TH 세포가 세포 주기로 진입(G0에서 G1 전이)하도록 유도하는 생화학적 사건의 연쇄반응(cascade)을 개시시킨다. 활성화된 T 세포는 세포 주기를 통해 진행하고, 증식하여, 기억 세포(memory cell)나 이펙터 세포로 분화한다.
하기 서열이 잠재적 에피토프를 동정하기 위해 분석되었다.
이 서열은 천연 서열에 대해 위치 8 및 22에서 변화된 GLP-1 유사체 서열로, 그 뒤쪽에 2 카피의 G-풍부 링커 서열이 있고, 그 뒤쪽에 인간 IgG4로부터 유래된 Fc 영역의 처음 10개의 아미노산 서열이 있다. 본원에 사용된 에피토프는 항체가 결합할 수 있는 단백질 분자의 영역을 말한다. 면역원성 에피토프는 전체 단백질이 면역원일 때 항체 반응을 유발하는 단백질의 부분으로 정의된다. 에피토프 맵핑(epitope mapping)은 이들 패턴에 함유된 정보를 추출하기 위한 진보된 통계학적 분석 기술과 결합된, 변화하는(sliding) 9개의 아미노산 윈도우를 이용한 서열의 스캐닝을 포함하였다. 에피매트릭스(EpiMatrix, 상표명)로 알려진 사유의 소프트웨어 팩키지를 이용하여, 서열을 분석하고 T-세포에게 제시될 때 면역 반응을 유발할 가능성이 매우 높은 펩티드를 동정하였다. 8개의 매우 보편적인 대립형질이 클래스 Ⅱ MHC 수용체 상호작용에 대한 분석에 사용되었다. 이들 대립형질은 DRB1*0101, DRB1*0301, DRB1*0401, DRB1*0701, DRB1*0801, DRB1*1101, DRB1*1301 및 DRB1*1501을 포함하였다.
강력한 에피토프가 GLP-1 유사체 부분의 C-말단과 링커 시작의 접합부에 위치할 것으로 예상되었다. 이 에피토프의 서열은 DRB1*0801과 상호작용하는 Trp-Leu-Val-Lys-Gly-Arg-Gly-Gly-Gly(서열번호 11)이다. 본 발명은 이 에피토프가 GLP-1 유사체 C-말단을 하기 서열 중 하나로 변화시킴으로써 제거될 수 있다는 발견을 포함한다.
본 발명의 이종 융합 단백질은 인간 IgG4로부터 유래된 Fc 부분을 함유하지만, 야생형 인간 서열에 비해 하나 이상의 치환을 포함한다. 본원에 사용된 면역글로불린의 Fc 부분은 면역학 분야에서 그 용어에 보편적으로 주어지는 의미를 갖는다. 구체적으로, 이 용어는 항체 중에서 2가지 항원 결합 부위(Fab 단편)를 함유하지 않는 항체 단편을 말한다. Fc 부분은 비공유적 상호작용 및 이황화물 결합을 통해 연결된, 2개의 중쇄로부터의 항체의 불변영역으로 이루어진다. Fc 부분은 힌지(hinge) 영역을 포함할 수 있고 항체의 C-말단으로 CH2 및 CH3 영역을 통해 연장될 수 있다. Fc 부분은 추가로 하나 이상의 글리코실화 부위를 포함할 수 있다.
상이한 이펙터 기능 및 약동학적 성질을 갖는 5가지 유형의 인간 면역글로불린이 있다. IgG는 인간에서의 혈청 반감기가 약 23 일인, 5가지 유형 중 가장 안정한 것이다. 각각 이펙터 기능으로 알려진 상이한 생물학적 기능을 갖는 4가지 IgG 서브클래스(G1, G2, G3 및 G4)가 있다. 이들 이펙터 기능은 일반적으로 Fc 수용체(FcγR)와의 상호작용을 통해서 매개되거나, C1q에 결합하고 보체를 고정함으로써 매개된다. 보체 인자에 대한 결합이 보체 매개된 세포 용해에 이르게 할 수 있는 반면, FcγR에 대한 결합은 항체 의존적 세포 매개 세포용해에 이르게 할 수 있다. Fc 부분이 반감기를 연장시키는 그의 능력만을 위해 사용되고 있는 이종 Fc 융합 단백질을 설계함에 있어서, 임의의 이펙터 기능을 최소화하는 것이 중요하다. 따라서, 본 발명의 이종 융합 단백질은 인간 IgG4 Fc 영역으로부터 유래되는데, 이는 다른 IgG 서브-타입에 비해 FcγR과 보체 인자에 결합하는 그의 감소된 능력 때문이다. 그러나, IgG4는 인간에서 표적 세포를 고갈시키는 것으로 나타났다[Issacs 등(1996) Clin. Exp. Immunol. 106: 427-433]. 본 발명의 이종 융합 단백질은 인슐린 발현을 유도하는 췌장에서의 베타 세포를 표적으로 하므로, Fc 융합 단백질에서 IgG4 유래된 영역의 사용은 췌장 베타 세포 상에 존재하는 GLP-1 수용체와 융합 단백질의 상호작용을 통해 췌장 베타 세포에 대한 면역 반응을 개시시킬 수 있다. 따라서, 본 발명의 이종 융합 단백질의 일부인 IgG4 Fc 영역은 이펙터 기능을 제거하는 치환을 함유한다. 본 발명의 융합 단백질의 IgG4 Fc 부분은 잔기 233에 있는 글루타메이트 대신 프롤린으로 치환, 잔기 234에 있는 페닐알라닌 대신 알라닌 또는 발린으로 치환, 및 잔기 235에 있는 류신 대신 알라닌 또는 글루타메이트로 치환(EU 번호매김, [Kabat, E.A. 등(1991) Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5판, U.S. Dept. of Health and Human Services, Bethesda, MD, NIH Publication no. 91-3242])중 하나 이상을 함유할 수 있다. 이들 잔기는 서열번호 7에서 위치 16, 17 및 18에 해당한다. 추가로, 서열번호 7의 위치 80에 해당하는 잔기 297(EU 번호매김)에 있는 Asn 대신 Ala으로 치환함으로써 IgG4 Fc 영역에 있는 N-연결 글리코실화 위치를 제거하는 것이, 잔존 이펙터 활성이 이종 융합 단백질에서 제거되는 것을 보장하는 또 다른 방법이다.
부가하여, 본 발명의 이종 융합 단백질의 IgG4 Fc 부분은 중쇄 다이머 형성을 안정화하고 반(half)-IgG4 Fc 쇄의 형성을 방지하는 치환을 함유한다. 본 발명의 이종 융합 단백질은 바람직하게는 이황화물 결합 및 다양한 비공유적 상호작용에 의해 서로 결합된 다이머로서 존재한다. 야생형 IgG4는 잔기 224(EU 번호매김)에서 시작하는 Pro-Pro-Cys-Pro-Ser-Cys(서열번호 18) 모티프를 함유한다. 단일 GLP-1 유사체-Fc 쇄에 있는 이 모티프는 또 다른 GLP-1 유사체-Fc 쇄에 있는 상응하는 모티프와 이황화물 결합을 형성한다. 그러나, 모티프에 세린이 존재하면 단일 쇄 융합 단백질이 형성된다. 본 발명은 228(EU 번호매김)의 위치에 있는 세린이 프롤린(서열번호 7의 아미노산 잔기 11)으로 치환되도록 IgG4 서열이 추가로 변형된 이종 Fc 융합 단백질을 포함한다.
천연 분자에 존재하는 C-말단 리신 잔기는 본원에서 논의되는 이종 융합 단백질의 IgG4 유도체 Fc 부분에서 결실될 수 있다(서열번호 7의 위치 230; 리신이 결실되어 데스-K로 언급됨). 리신이 C-말단 코돈에 의해 코딩되는 몇몇 세포 타입(예컨대, NS0 세포)에서 발현된 융합 단백질은 분자의 일부가 C-말단 아미노산으로 리신을 갖고 일부가 리신이 결실된 점에서 이질적이다. 결실은 몇몇 타입의 포유류 세포에서의 발현 동안에 프로테아제 작용에서 기인한다. 따라서, 이 이질성을 피하기 위하여, Fc 융합 발현 작제물은 리신에 대한 C-말단 코돈이 결여되어 있는 것이 바람직하다.
본원에서 논의된 GLP-1 유사체 부분의 C-말단 아미노산은 글리신-풍부 링커를 통해 IgG4 Fc 유사체 부분의 N-말단에 융합되는 것이 바람직하다. 본 발명의 이종 융합 단백질의 생체내 기능과 안정성은 잠재적으로 원치않는 도메인 상호작용을 방지하는 작은 펩티드 링커를 부가함으로써 최적화될 수 있다. 추가로, 글리신-풍부 링커는 GLP-1 유사체 부분이 췌장의 베타 세포와 같은 표적 세포 상의 GLP-1 수용체와 생산적으로 상호작용할 수 있도록 상당한 구조적 유연성을 제공한다. 그러나, 이들 링커는 융합 단백질이 생체내에서 면역원성이 될 위험을 상당히 증가시킬 수 있다. 따라서, 길이는 원치않는 도메인 상호작용을 방지하고(거나) 생물학적 활성 및(또는) 안정성을 최적화하는데 필요한 것보다 길지 않은 것이 바람직하다. 바람직한 글리신-풍부 링커는 서열 Gly-Gly-Gly-Gly-Ser-Gly-Gly-Gly-Gly-Ser-Gly-Gly-Gly-Gly-Ser(서열번호 8)을 포함한다. 이 링커의 더 많은 카피가 본 발명의 이종 융합 단백질에 사용될 수는 있지만, 지속되고 반복된 투여와 관련된 면역원성의 위험을 최소화하기 위해 이 링커의 단일 카피가 사용되는 것이 바람직하다.
본 발명의 바람직한 GLP-1-Fc 이종 융합 단백질은 하기 단백질을 포함한다.
특정 이종 융합 단백질을 언급하기 위해 본원에서 사용된 명명법은 아래와 같이 정의된다. 융합 단백질의 GLP-1 부분에 대한 특정 치환은 치환되는 특정 아미노산 다음에 잔기 번호를 사용하여 표시된다. GLP-1(7-37)은 성숙 융합 단백질의 GLP-1 부분이 위치 7에 있는 His로 시작하고 위치 37에 있는 Gly으로 끝남을 가리킨다. L은 서열 Gly-Gly-Gly-Gly-Ser-Gly-Gly-Gly-Gly-Ser-Gly-Gly-Gly-Gly-Ser(서열번호 8)을 갖는 링커를 말한다. L 바로 앞에 있는 숫자는 Fc 부분으로부터 GLP-1 부분을 분리시키는 링커의 수를 말한다. 1.5L로 특정된 링커는 서열 Gly-Ser-Gly-Gly-Gly-Gly-Ser-Gly-Gly-Gly-Gly-Ser-Gly-Gly-Gly-Gly-Ser-Gly-Gly-Gly-Gly-Ser(서열번호 19)을 말한다. IgG4는 서열번호 7로 특정된 인간 IgG4 Fc 서열의 유사체를 말한다. 이종 융합 단백질의 IgG4 Fc 부분에서의 치환은 괄호 안에 표시된다. 야생형 아미노산이 그의 보편적 약어에 의해 특정되고, 그 뒤쪽에 EU 번호매김 체계를 이용한 전체 IgG4 서열에서의 위치 번호가 있으며, 그 뒤쪽에 그 위치에서 치환되는 아미노산이 그의 보편적 약어에 의해 특정된다.
비록 본 발명의 이종 융합 단백질이 각종 상이한 방법에 의해 제조될 수는 있지만, 융합 단백질의 크기 때문에 재조합적 방법이 바람직하다. 본 발명의 목적상, 본원에 개시되고 청구된 바와 같이, 하기 일반적인 분자생물학 용어와 약어가 아래에 정의된다.
본원에 사용된 "염기 쌍" 또는 "bp"는 DNA 또는 RNA를 말한다. 약어 A, C, G 및 T는 그들이 DNA 분자에 나타날 때, 5'-모노포스페이트 형태의 데옥시리보뉴클레오시드인 (데옥시)아데노신, (데옥시)시티딘, (데옥시)구아노신 및 티미딘에 각각 해당한다. 약어 U, C, G 및 A는 그들이 RNA 분자에 나타날 때, 5'-모노포스페이트 형태의 리보뉴클레오시드인 우리딘, 시티딘, 구아노신 및 아데노신에 각각 해당한다. 이중가닥 DNA에서, 염기 쌍은 T와 A 또는 G와 C의 결합을 말할 수 있다. DNA/RNA에서, 이종이중체(heteroduplex) 염기쌍은 U와 A 또는 G와 C의 결합을 말할 수 있다(하기 "상보적"의 정의 참조).
DNA의 "분해" 또는 "제한"은 DNA에 있는 특정 서열에만 작용하는 제한효소("서열-특이적 엔도뉴클레아제")로의 DNA의 촉매적 절단을 말한다. 본원에 사용된 다양한 제한효소가 상업적으로 입수가능하고 그들의 반응 조건, 보조인자 및 기타 요구조건이 당업자에게 알려진 바와 같이 사용되었다. 특정 제한효소에 대한 적절한 완충액과 기질의 양은 제조자에 의해 특정되거나 문헌에서 쉽게 찾아볼 수 있다.
"라이게이션"은 2개의 이중가닥 핵산 단편 사이에 포스포디에스테르 결합을 형성하는 과정을 말한다. 다르게 제공되지 않으면, 라이게이션은 공지의 완충액과 T4 DNA 리가아제와 같은 DNA 리가아제를 이용하는 조건을 이용하여 달성될 수 있다.
"플라스미드"는 (대체로) 염색체 외 자가-복제 유전자 요소를 말한다.
본원에 사용된 "재조합 DNA 클로닝 벡터"는 하나 이상의 부가적 DNA 절편이 부가될 수 있거나 부가된 DNA 분자를 포함하는, 플라스미드와 파지 등을 비롯한 임의의 자가 복제성 물질을 말한다.
본원에 사용된 "재조합 DNA 발현 벡터"는 삽입된 DNA의 전사를 제어하는 프로모터가 혼입된 임의의 재조합 DNA 클로닝 벡터를 말한다.
"전사"는 DNA의 뉴클레오티드 서열에 함유된 정보가 상보적 RNA 서열로 전달되는 과정을 말한다.
"형질감염"은 임의의 코딩 서열이 사실상 발현되든 발현되지 않든 무관하게 숙주 세포가 발현 벡터를 획득하는 것을 말한다. 수많은 형질감염 방법, 예를 들어 인산칼슘 공동-침전법, 리포좀 형질감염법 및 전기천공법이 당업자에게 알려져 있다. 성공적인 형질감염은 일반적으로 이 벡터의 어떠한 작동 징후가 숙주 세포 내에서 발생할 때 인정된다.
"형질전환"은 DNA가 염색체 외 요소로서 또는 염색체 통합에 의해 복제가능하도록 유기체로 DNA를 도입하는 것을 말한다. 박테리아 및 진핵 숙주를 형질전환시키는 방법이 당업계에 잘 알려져 있고, 핵 주입, 프로토플라스트(protoplast) 융합, 또는 염화칼슘을 이용한 칼슘 처리에 의해서와 같은 그러한 방법 중 많은 것이 문헌 [J. Sambrook, 등, Molecular Cloning: A Laboratory Manual(1989)]에 요약되어 있다. 일반적으로, 효모로 DNA를 도입할 때 용어 형질전환은 용어 형질감염에 대립되는 것으로 사용된다.
본원에 사용된 "번역"은 전령 RNA(mRNA)의 유전자 정보가 폴리펩티드 쇄의 합성을 특정하고 지시하는데 사용되는 과정을 말한다.
"벡터"는 적절한 제어 서열과 결합될 때, 형질감염 및(또는) 형질전환되는 숙주 세포에게 특정 성질을 부여하는, 적절한 단백질 분자에 상응하는 폴리뉴클레오티드 서열을 갖는 유전자 조작에서 세포의 형질감염 및(또는) 형질전환을 위해 사용되는 핵산 화합물을 말한다. 플라스미드, 바이러스 및 박테리오파지가 적당한 벡터이다. 인공적 벡터가 제한효소와 리가아제를 이용하여 상이한 공급원으로부터의 DNA 분자를 절단하고 결합함으로써 제작된다. 본원에 사용된 용어 "벡터"는 재조합 DNA 클로닝 벡터와 재조합 DNA 발현 벡터를 포함한다.
본원에 사용된 "상보적" 또는 "상보성"은 이중가닥 핵산에서 수소 결합을 통해 결합하는 염기의 쌍(퓨린과 피리미딘)을 말한다. 구아닌과 시토신; 아데닌과 티민; 및 아데닌과 우라실의 염기 쌍이 상보적이다.
"프라이머"는 효소적 또는 합성적 연장을 위한 개시 기질로서 기능하는 핵산 단편을 말한다.
"프로모터"는 DNA의 RNA로의 전사를 지시하는 DNA 서열을 말한다.
"프로브"는 또 다른 핵산 화합물과 혼성화되는 핵산 화합물 또는 그의 단편을 말한다.
"리더 서열"은 관심있는 목적 폴리펩티드를 생산하기 위하여 효소적으로 또는 화학적으로 제거될 수 있는 아미노산 서열을 말한다.
"분비 신호 서열"은 일반적으로 더 큰 폴리펩티드의 N-말단 영역에 존재하는, 소포체와 같은 세포막 구획과 그 폴리펩티드의 결합, 및 그 폴리펩티드의 원형질막을 통한 분비를 개시시키는 기능을 하는 아미노산 서열을 말한다.
야생형 인간 IgG4 단백질은 다양한 공급원으로부터 수득될 수 있다. 예를 들어, 이들 단백질은 관심있는 mRNA를 검출가능한 수준으로 발현하는 세포로부터 제조된 cDNA 라이브러리로부터 수득될 수 있다. 라이브러리는 관심있는 특정 단백질에 대한 공개된 DNA 또는 단백질 서열을 이용하여 설계된 프로브로 스크리닝될 수 있다. 예를 들어, 면역글로불린 경쇄 또는 중쇄 불변영역은 문헌 [Adams 등(1980) Biochemistry 19: 2711-2719]; [Goughet 등(1980) Biochemistry 19: 2702-2710]; [Dolby 등(1980) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 77: 6027-6031]; [Rice 등(1982) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 79: 7862-7862]; [Falkner 등(1982) Nature 298: 286-288] 및 [Morrison 등(1984) Ann. Rev. Immunol. 2: 239-256]에 기재되어 있다.
선택된 프로브로의 cDNA 또는 게놈 라이브러리의 스크리닝은 문헌 [Sambrook 등, Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press, NY(1989)]에 기재된 것과 같은 표준 과정을 이용하여 수행될 수 있다. 면역글로불린 단백질을 코딩하는 유전자를 단리하는 대체 수단은 PCR 방법론을 이용하는 것이다(상기 Sambrook 등의 문헌; 문헌 [Dieffenbach 등, PCR Primer: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press, NY(1995)]). PCR 프라이머는 공개된 서열에 기초하여 설계될 수 있다.
일반적으로 특정 라이브러리로부터 클로닝된 전장 야생형 서열은, 융합 단백질의 일부인 GLP-1 유사체에 더 긴 혈장 반감기를 부여하는 능력을 보유하는 본 발명의 IgG4 Fc 유사체 단편을 생성하기 위한 기질로서 작용할 수 있다. IgG4 Fc 유사체 단편은 이 단편의 원하는 말단에 상응하는 서열과 혼성화되도록 설계된 프라이머로 PCR 기술을 이용하여 생성될 수 있다. PCR 프라이머는 또한 발현 벡터로의 클로닝을 용이하게 하는 제한 효소 부위가 생성되도록 설계될 수 있다.
본 발명의 GLP-1 유사체를 코딩하는 DNA는 화학적으로 합성된 DNA 뿐만 아니라 상기한 것들과 같은 클로닝 방법을 포함하는 각종 상이한 방법에 의해 제조될 수 있다. 짧은 길이의 코딩 펩티드이면 화학적 합성이 매력적일 수 있다. 프리프로글루카곤(preproglucagon) 유전자의 서열 뿐만 아니라 GLP-1에 대한 아미노산 서열이 공개되어 있다(문헌 [Lopez 등(1983) Proc. Natl. Acad. Sci., USA 80: 5485-5489]; [Bell 등(1983) Nature, 302: 716-718]; [Heinrich, G. 등(1984) Endocrinol, 115: 2176-2181]; [Ghiglione, M. 등(1984) Diabetologia 27: 599-600]). 따라서, 프라이머는 천연 서열에 기초하여 본원에 기재된 GLP-1 유사체를 코딩하는 DNA를 생성하도록 설계될 수 있다.
그런 다음 GLP-1 유사체를 코딩하는 DNA를, 본원에 기재된 IgG Fc 단백질을 코딩하는 DNA에 프레임에 맞게(in-frame) 라이게이션시킴으로써 융합 단백질을 코딩하는 유전자가 제작될 수 있다. 야생형 GLP-1 및 IgG4 Fc 단편을 코딩하는 DNA는 라이게이션 전, 또는 전체 융합 단백질을 코딩하는 cDNA에서 돌연변이화될 수 있다. 다양한 돌연변이유발 기술이 당업계에 잘 알려져 있다. GLP-1 유사체를 코딩하는 유전자와 IgG4 Fc 유사체 단백질을 코딩하는 유전자는 또한 G-풍부 링커 펩티드를 코딩하는 DNA를 통해 프레임에 맞게 결합될 수 있다. 본 발명의 바람직한 이종 융합 단백질 중 하나인 Gly8-Glu22-Gly36-GLP-1(7-37)-1L-IgG4(S228P, F234A, L235A, 데스K (위치 230의 리신이 결실된 것))를 코딩하는 바람직한 DNA 서열이 하기 서열번호 20으로 제공된다.
숙주세포는 이종 융합 단백질 생산을 위해 본원에 기재된 발현 또는 클로닝 벡터로 형질감염 또는 형질전환되고, 프로모터를 유도하거나, 형질전환체를 선별하거나, 원하는 서열을 코딩하는 유전자를 증폭하기 위해 적절하게 변형된 통상적인 영양 배지에서 배양된다. 배지, 온도, pH 등과 같은 배양 조건은 과도한 실험없이 당업자에 의해 선택될 수 있다. 일반적으로, 세포 배양물의 생산성을 최대화하기 위한 원리, 프로토콜 및 실제적 기술은 문헌 [Mammalian Cell Biotechnology: A Practical Approach, M. Butler, ed.(IRL Press, 1991)] 및 상기 Sambrook 등의 문헌에서 찾아볼 수 있다. 형질감염 방법, 예를 들어 CaPO4법 및 전기천공법은 당업자에게 알려져 있다. 포유류 세포 숙주 체계 형질전환의 일반적 측면은 미국특허 제4,399,216호에 기재되어 있다. 효모로의 형질전환은 전형적으로 문헌 [van Solingen 등, J Bact . 130(2): 946-7(1977)] 및 [Hsiao 등, Proc . Natl . Acad . Sci. USA 76(8): 3829-33(1979)]의 방법에 따라 수행된다. 그러나, 핵 미세주입법, 전기천공법, 무손상 세포와의 박테리아 프로토플라스트 융합법, 또는 다가 양이온(예를 들어, 폴리브렌이나 폴리오르니틴)에 의한 방법과 같은, 세포로 DNA를 도입하는 다른 방법도 이용될 수 있다. 포유류 세포를 형질전환시키기 위한 다양한 기술에 대해서는 문헌 [Keown 등, Methods in Enzymology 185: 527-37(1990)] 및 [Mansour 등, Nature 336(6197): 348-52(1988)]을 참조할 수 있다.
본원에서 벡터 중의 핵산(예를 들어, DNA)을 클로닝하거나 발현시키기 위해 적당한 숙주 세포는 효모나 고등 진핵 세포를 포함한다.
필라멘트상 진균이나 효모와 같은 진핵 미생물이 융합 단백질 벡터를 위해 적당한 클로닝 또는 발현 숙주이다. 사카로마이세스 세레비지에(Saccharomyces cerevisiae)는 보편적으로 사용되는 하등 진핵 숙주 미생물이다. 다른 것들로는 시조사카로마이세스 폼베(Schizosaccharomyces pombe)([Beach 및 Nurse, Nature 290: 140-3(1981)]; 1995년 5월 2일 공개된 EP 139,383); 예를 들어, 케이. 락티스(K. lactis)(MW98-8C, CBS683, CBS4574)[de Louvencourt 등, J. Bacteriol . 154(2): 737-42(1983)], 케이. 플라질리스(K. flagilis)(ATCC 12,424), 케이. 불가리쿠스(K. bulgaricus)(ATCC 16,045), 케이. 위커라미(K. wickeramii)(ATCC 24,178), 케이. 왈티(K. waltii)(ATCC 56,500), 케이. 드로소필라럼(K. drosophilarum)(ATCC 36,906)[Van den Berg 등, Bio/Technology 8(2): 135-9(1990)], 케이. 써모톨러란스(K. thermotolerans) 및 케이. 막시아누스(K. marxianus)와 같은 클루이베로마이세스(Kluyveromyces) 숙주(미국특허 제4,943,529호; 문헌 [Fleer 등, Bio/Technology 9(10): 968-75(1991)]); 야로위아(yarrowia)(EP 402,226); 피치아 패스토리스(Pichia pastoris)(EP 183,070)[Sreekrishna 등, J. Basic Microbiol . 28(4): 265-78(1988)]; 캔디다(Candida); 트리코더마 레에시아(Trichoderma reesia)(EP 244,234); 뉴로스포라 크라싸(Neurospora crassa)[Case 등, Proc . Natl . Acad Sci . USA 76(10): 5259-63(1979)]; 스완니오마이세스 옥시덴탈리스(Schwanniomyces occidentalis)(1990년 10월 31일 공개된 EP 394,538)와 같은 스완니오마이세스; 및 예를 들어, 뉴로스포라, 페니실리움(Penicillium), 톨리포클라디움(Tolypocladium)(1991년 1월 10일 공개된 WO 91/00357)과 같은 필라멘트상 진균; 및 에이. 니듈란스(A. nidulans)(문헌 [Ballance 등, Biochem . Biophys . Res. Comm. 112(1): 284-9(1983)]; [Tilburn 등, Gene 26(2-3): 205-21(1983)]; [Yelton 등, Proc . Natl . Acad . Sci . USA 81(5): 1470-4(1984)]) 및 에이. 나이거(A. niger)[Kelly 및 Hynes, EMBO J. 4(2): 475-9(1985)]와 같은 아스퍼질러스(Aspergillus) 숙주가 있다. 메탄올자화(methylotropic) 효모는 한세눌라(Hansenula), 캔디다, 클로에케라(Kloeckera), 피치아, 사카로마이세스, 토루롭시스(Torulopsis) 및 로도토룰라(Rhodotorula)로 구성된 속(genus)으로부터 선택된다. 이 클래스의 효모의 예시인 구체적 종의 목록은 문헌 [C. Antony, The Biochemistry of Methylotrophs, 269(1982)]에서 찾아볼 수 있다.
본 발명의 융합 단백질의 발현을 위해 적당한 숙주 세포는 다세포 유기체로부터 유래된다. 무척추 세포의 예는 식물 세포 뿐만 아니라 드로소필라 S2와 스포도프테라(Spodoptera) Sp, 스포도프테라 하이5(high5)와 같은 곤충 세포를 포함한다. 유용한 포유류 숙주 세포주의 예는 NS0 골수종 세포, 중국 햄스터 난소(CHO), SP2 및 COS 세포를 포함한다. 보다 구체적인 예는 SV40에 의해 형질전환된 원숭이 신장 CV1 주(COS-7, ATCC CRL 1651); 인간 배아 신장 주(현탁 배양에서의 성장을 위해 서브클로닝된 293 또는 293 세포, 문헌 [Graham 등, J. Gen Virol ., 36(1): 59-74(1977)]); 중국 햄스터 난소 세포/-DHFR(CHO, [Urlaub 및 Chasin, Proc . Natl. Acad . Sci . USA, 77(7): 4216-20(1980)]); 마우스 세르톨리 세포(TM4, [Mather, Biol . Reprod . 23(1): 243-52(1980)]); 인간 폐 세포(W138, ATCC CCL 75); 인간 간 세포(HepG2, HB 8065); 및 마우스 유방암 세포(MMT 060562, ATCC CCL 51)를 포함한다. 본 발명의 Fc 융합 단백질을 생산하기 위해 바람직한 세포주는 유러피언 컬렉션 오브 셀 컬쳐즈(ECACC, 카탈로그 #85110503)로부터 입수가능하고 문헌 [Galfre, G. 및 Milstein, C.(1981) Methods in Enzymology 73(13): 3-46] 및 [Preparation of Monoclonal Antibodies: Strategies and Procedures, Academic Press, N.Y., N.Y.]에 기재된 NS0 골수종 세포주이다.
본 발명의 융합 단백질은 직접 생산되거나, 또는 신호 서열이나 성숙 융합 단백질의 N-말단에서 특이적 절단 부위를 생성하는 기타 부가적인 서열을 갖는 단백질로서 재조합적으로 생산될 수 있다. 일반적으로, 신호 서열은 벡터의 성분일 수 있거나, 벡터로 삽입되는 융합 단백질-코딩 DNA의 일부일 수 있다. 효모 분비를 위해 신호 서열은 예를 들어, 효모 인버타제 리더, 알파 인자 리더(사카로마이세스 및 클루이베로마이세스 cc-인자 리더, 후자는 미국특허 제5,010,182호에 기재되어 있음), 또는 산 포스파타제 리더, 씨. 알비칸스(C. albicans) 글루코아밀라제 리더(EP 362,179), 또는 WO 90/13646에 기재된 신호일 수 있다. 포유류 세포 발현에서, 포유류 신호 서열은 단백질의 분비를 지시하는데 사용될 수 있으며, 그 예로는 바이러스 분비 리더 뿐만 아니라 동일하거나 관련된 종의 분비된 폴리펩티드로부터의 신호 서열이 있다.
발현 및 클로닝 벡터는 모두 벡터가 하나 이상의 선택된 숙주 세포에서 복제될 수 있도록 하는 핵산 서열을 함유한다. 발현 및 클로닝 벡터는 전형적으로 선별 마커로도 명명되는 선별 유전자를 함유할 것이다. 전형적인 선별 유전자는 (a) 항생제 또는 기타 독소, 예를 들어 네오마이신, 메토트렉세이트 또는 테트라사이클린에 대한 내성을 부여하거나, (b) 영양요구성 결핍을 보상하거나, (c) 복합 배지로부터 이용가능하지 않은 결정적 영영소를 제공(예를 들어, 바실러스의 경우에 D-알라닌 라세마제를 코딩하는 유전자)하는 단백질을 코딩한다.
포유류 세포를 위해 적당한 선별 마커의 예로는 DHFR이나 티미딘 키나아제와 같은, 융합 단백질-코딩 핵산을 획득할 수 있는 세포의 동정을 가능하게 하는 것들이 있다. 야생형 DHFR이 사용될 때 적절한 숙주 세포는 문헌 [Urlaub 및 Chasin, Proc. Natl . Acad . Sci . USA, 77(7): 4216-20(1980)]에 기재된 바와 같이 제조되고 증식된, DHFR 활성이 결핍된 CHO 세포주이다. 효모에서 사용하기 위해 적당한 선별 유전자는 효모 플라스미드 YRp7에 존재하는 trp1 유전자이다(문헌 [Stinchcomb 등, Nature 282(5734): 39-43(1979)]; [Kingsman 등, Gene 7(2): 141-52(1979)]; [Tschumper 등, Gene 10(2): 157-66(1980)]). trp1 유전자는 트립토판에서 성장하는 능력이 결여된 효모의 돌연변이체 균주, 예를 들어, ATCC 번호 44076 또는 PEPC1[Jones, Genetics 85: 23-33(1977)]을 위한 선별 마커를 제공한다.
발현 및 클로닝 벡터는 보통 mRNA 합성을 지시하는 융합 단백질-코딩 핵산 서열에 작동가능하게 연결된 프로모터를 함유한다. 다양한 잠재적 숙주 세포에 의해 인식되는 프로모터가 잘 알려져 있다. 효모 숙주와 사용하기에 적당한 프로모터 서열의 예는 3-포스포글리세레이트 키나아제[Hitzeman 등, J. Biol . Chem . 255(24): 12073-80(1980)] 또는 에놀라제, 글리세르알데히드-3-포스페이트 데하이드로게나제, 헥소키나아제, 피루베이트 데카르복실라제, 포스포프럭토키나아제, 글루코스-6-포스페이트 이소머라제, 3-포스포글리세레이트 뮤타아제, 피루베이트 키나아제, 트리오스 포스페이트 이소머라제, 포스포글루코스 이소머라제 및 글루코키나아제와 같은, 다른 해당 효소(문헌 [Hess 등, J. Adv . Enzyme Reg ., 7: 149(1968)]; [Holland, Biochemistry, 17(23): 4900-7(1978)])의 프로모터를 포함한다. 성장 조건에 의해 제어되는 전사의 부가적인 장점을 갖는 유도성 프로모터인 다른 효모 프로모터는 알콜 데하이드로게나제 2, 이소사이토크롬 C, 산 포스파타제, 질소 대사와 관련된 분해 효소, 메탈로티오네인, 글리세르알데히드-3-포스페이트 데하이드로게나제 및 말토스와 갈락토스 이용을 담당하는 효소의 프로모터 영역이다. 효모 발현에서 사용하기 위한 적당한 벡터와 프로모터는 EP 73,657에 추가로 기재되어 있다. 포유류 숙주 세포에서 벡터로부터의 융합 단백질-코딩 mRNA의 전사는, 예를 들어 폴리오마 바이러스, 계두 바이러스, 아데노바이러스(예컨대, 아데노바이러스 2), 소 유두종 바이러스, 조류 육종 바이러스, 사이토메갈로바이러스, 레트로바이러스, B형 간염 바이러스 및 원숭이 바이러스 40(SV40)과 같은 바이러스의 게놈으로부터 얻은 프로모터, 이종 포유류 프로모터로부터 얻은 프로모터(예컨대, 액틴 프로모터 또는 면역글로불린 프로모터), 및 열-쇼크 프로모터로부터 얻은 프로모터에 의해 제어될 수 있으며, 단 그러한 프로모터가 숙주 세포 체계와 적합성이어야 한다.
고등 진핵생물에 의한 융합 단백질 코딩 폴리뉴클레오티드의 전사는 인핸서 서열을 벡터에 삽입함으로써 증가될 수 있다. 인핸서는 DNA의 전사를 증가시키기 위하여 프로모터 상에 작용하는, 보통 약 10 내지 300 bp의 시스-작용성 요소이다. 많은 인핸서 서열이 현재 포유류 유전자(글로빈, 엘라스타제, 알부민, α-페토단백질 및 인슐린)로부터 알려져 있다. 그러나, 전형적으로는 진핵 세포 바이러스로부터의 인핸서를 사용할 것이다. 그 예로는 복제 기점의 뒤쪽편에 있는 SV40 인핸서(bp 100-270), 사이토메갈로바이러스 초기 프로모터 인핸서, 복제 기점의 뒤쪽편에 있는 폴리오마 인핸서, 및 아데노바이러스 인핸서가 포함된다. 인핸서는 융합 단백질 코딩 서열에 대해 5' 또는 3' 위치에서 벡터로 스플라이싱될 수 있지만, 바람직하게는 프로모터로부터 5' 부위에 위치한다.
진핵 숙주 세포(효모, 진균, 곤충, 식물, 동물, 인간 또는 기타 다세포 유기체로부터의 유핵 세포)에서 사용되는 발현 벡터는 또한 전사의 종결과 mRNA의 안정화에 필요한 서열을 함유할 것이다. 그러한 서열은 진핵 또는 바이러스 DNA들이나 cDNA들의 5' 및 종종 3' 비번역 영역으로부터 보편적으로 입수가능하다. 이들 영역은 융합 단백질을 코딩하는 mRNA의 비번역 부분에서 폴리아데닐화된 단편으로 전사되는 뉴클레오티드 절편을 함유한다.
다양한 형태의 융합 단백질이 배양 배지나 숙주 세포 용해물로부터 회수될 수 있다. 막-결합되어 있는 경우, 그것은 적당한 계면활성제 용액(예를 들어, 트리톤-X 100)을 이용하거나 효소 절단에 의해 막으로부터 방출될 수 있다. 융합 단백질의 발현에 사용되는 세포는 동결-해동 사이클링, 초음파처리, 기계적 파쇄 또는 세포 용해제와 같은, 다양한 물리적 또는 화학적 수단에 의해 파쇄될 수 있다.
일단 본 발명의 이종 융합 단백질이 적절한 숙주 세포에서 발현되면, 유사체는 단리되고 정제될 수 있다. 아래 과정이 적당한 정제 과정의 예시이다. 카르복시메틸 셀룰로스 상에서의 분획화; 세파덱스 G-75와 같은 젤 여과; DEAE 또는 모노-Q와 같은 음이온 교환 수지; CM 또는 모노-S와 같은 양이온 교환; 에피토프-태깅된 형태의 폴리펩티드를 결합시키는 금속 킬레이팅 칼럼; 역상 HPLC; 크로마토포커싱; 실리카 젤; 에탄올 침전; 및 황산암모늄 침전.
다양한 단백질 정제방법이 사용될 수 있으며 그러한 방법은 당업계에 알려져 있고, 예를 들어 문헌 [Deutscher, Methods in Enzymology 182: 83-9(1990)] 및 [Scopes, Protein Purification: Principles and Practice, Springer-Verlag, NY(1982)]에 기재되어 있다. 선택되는 정제 단계(들)는 사용되는 생산 방법의 성질과 생산되는 특정 융합 단백질에 의존할 것이다. 예를 들어, Fc 단편을 포함하는 융합 단백질은 단백질 A 또는 단백질 G 친화도 매트릭스를 사용하여 효과적으로 정제될 수 있다. 저 또는 고 pH 완충액이 친화도 매트릭스로부터 융합 단백질을 용출시키는데 사용될 수 있다. 온화한 용출 조건이 융합 단백질의 비가역적 변성을 방지하는데 있어서 도와줄 것이다.
본 발명의 이종 융합 단백질은 하나 이상의 부형제로 제제화될 수 있다. 본 발명의 융합 단백질은 약제학적으로 허용되는 완충제와 배합될 수 있으며, pH는 허용되는 안정성과, 비경구 투여와 같은 투여를 위해 허용되는 pH를 제공하기 위하여 조정될 수 있다. 임의로, 하나 이상의 약제학적-허용 항-미생물제가 첨가될 수 있다. 메타-크레졸과 페놀이 바람직한 약제학적-허용 항-미생물제이다. 하나 이상의 약제학적-허용 염이 이온 강도 또는 장성(tonicity)을 조정하기 위하여 첨가될 수 있다. 하나 이상의 부형제가 제제의 등장성을 추가로 조정하기 위하여 첨가될 수 있다. 글리세린은 등장성-조정 부형제의 예이다. "약제학적으로 허용되는"은 인간 또는 기타 동물에 대한 투여를 위해 적당함을 의미하고, 따라서 독성 요소나 바람직하지 않은 오염물질을 함유하지 않고 그 안에 있는 활성 화합물의 활성을 방해하지 않는다.
본 발명의 이종 융합 단백질은 용액 제제나 적당한 희석제로 재구성될 수 있는 동결건조된 분말로서 제제화될 수 있다. 동결건조된 제형은 재구성된 제품의 의도된 사용중 저장수명(in-use shelf-life)에 걸쳐 용액의 pH를 유지하는 완충 능력을 갖거나 갖지 않는 융합 단백질이 안정한 것이다. 동결건조 전 본원에 논의된 이종 융합 단백질을 포함하는 용액은 재구성 후 등장성 용액의 형성을 가능하게 하도록 실질적으로 등장성인 것이 바람직하다.
본 발명의 이종 융합 단백질의 약제학적-허용 염 형태는 본 발명의 범위 내에 있다. 산 부가염을 형성하는데 보편적으로 사용되는 산은 염산, 브롬화수소산, 요오드화수소산, 황산, 인산 등과 같은 무기산, 및 p-톨루엔설폰산, 메탄설폰산, 옥살산, p-브로모페닐-설폰산, 탄산, 숙신산, 시트르산, 벤조산, 아세트산 등과 같은 유기산이다. 바람직한 산 부가염은 염산 및 브롬화수소산과 같은 무기산으로 형성된 것들이다.
염기 부가염은 암모늄 또는 알칼리 또는 알칼리 토 금속 수산화물, 탄산염, 중탄산염 등과 같은 무기 염기로부터 유래된 것들을 포함한다. 따라서, 본 발명의 염을 제조하는데 유용한 그러한 염기는 수산화나트륨, 수산화칼륨, 수산화암모늄, 탄산칼륨 등을 포함한다.
본 발명의 이종 융합 단백질은 생물학적 활성을 갖는다. 생물학적 활성은 생체내에서 GLP-1 수용체에 결합하고 그를 활성화시키고 반응을 유발하는 융합 단백질의 능력을 말한다. 반응은 인슐린 분비, 글루카콘 억제, 식욕 저해, 체중 감량, 포만감 유도, 아팝토시스(apoptosis) 저해, 췌장 베타 세포 증식의 유도, 및 췌장 베타 세포의 분화를 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다. 대표적인 많은 GLP-1 융합 단백질을 시험관내 및 생체내 활성에 대해 시험하였다. 실시예 1 및 2는 인간 GLP-1 수용체와 상호작용하고 그를 활성화시키는 융합 단백질의 능력에 기초한 시험관내 활성을 제공한다. 2개 세트의 실험에서, 인간 GLP-1 수용체를 과잉-발현하는 HEK293 세포가 사용되었다. 이들 세포에서 GLP-1 수용체의 활성화는 차례로 사이클릭 AMP 반응 요소(CRE)에 의해 주도되는 리포터 유전자의 발현을 유도하는 아데닐릴 사이클라제 활성화를 유발한다. 실시예 1(표 1)은 리포터 유전자가 베타 락타마제인 데이터를 제공하고, 실시예 2(표 2)는 리포터 유전자가 루시퍼라제인 데이터를 제공한다. 실시예 3은 래트에게 본 발명의 이종 융합 단백질 중 하나를 투여한 후 생성된 데이터를 제공한다. 데이터를 종합하면, 융합 단백질이 GLP-1 수용체에 결합하여 그를 활성화시킬 수 있으며, Val8-GLP-1(7-37)OH보다 시험관내에서 더욱 강력한 것으로 보인다. 부가하여, 래트에서 생성된 데이터는 융합 단백질이 생체내에서 활성적이고 천연 GLP-1보다 더 긴 반감기를 가짐을 가리킨다.
이종 융합 단백질의 투여는 통상적 지식을 가진 내과의에 의해 효과적인 것으로 알려져 있는 임의의 경로를 통할 수 있다. 말초 비경구 투여가 하나의 그러한 방법이다. 비경구 투여는 멸균 주사기 또는 주입 펌프와 같은 임의의 다른 기계적 장치에 의해 체내로 제형을 주사하는 것임이 의학적 문헌에서 보편적으로 이해된다. 말초 비경구 경로는 정맥내, 근육내, 피하 및 복강내 투여 경로를 포함할 수 있다.
본 발명의 이종 융합 단백질은 또한 비경구 경로가 아닌 경구, 직장, 비강, 또는 하부 호흡기 경로에 의한 투여에 적합할 수 있다. 이들 비경구가 아닌 경로 중, 하부 호흡기 경로와 경구 경로가 바람직하다.
본 발명의 융합 단백질은 광범위하게 다양한 질환 및 증상을 치료하는데 사용될 수 있다. 본 발명의 융합 단백질은 일차적으로 "GLP-1 수용체"로 언급되는 수용체에 작용함으로써 그들의 생물학적 효과를 발휘한다. 따라서 GLP-1 수용체 자극 또는 GLP-1 화합물의 투여에 우호적으로 반응하는 질환 및(또는) 증상을 갖는 대상체는 본 발명의 GLP-1 융합 단백질로 치료될 수 있다. 이들 대상체는 "GLP-1 화합물로의 치료를 필요로 한다" 또는 "GLP-1 수용체 자극을 필요로 한다"라고 말해진다. 비-인슐린 의존성 당뇨병, 인슐린 의존성 당뇨병, 졸중(WO 00/16797 참조), 심근경색(WO 98/08531 참조), 비만(WO 98/19698 참조), 수술 후 이화 변화(미국특허 제6,006,753호 참조), 기능성 소화불량 및 과민성 대장 증후군(WO 99/64060 참조)을 갖는 대상체가 포함된다. GLP-1 화합물로의 예방적 치료를 요구하는 대상체, 예를 들어 비-인슐린 의존성 당뇨병이 발병할 위험에 있는 대상체(WO 00/07617 참조)도 포함된다. 손상된 글루코스 내성 또는 손상된 절식 글루코스를 갖는 대상체, 체중이 대상체의 신장과 체격에 대한 정상 체중의 약 25％를 상회하는 대상체, 부분적 췌장절제술을 시술받은 대상체, 한 사람 이상의 부모가 비-인슐린 의존성 당뇨병에 걸린 대상체, 임신성 당뇨에 걸렸던 대상체, 및 급성 또는 만성 췌장염에 걸렸던 대상체는 비-인슐린 의존성 당뇨병이 발병할 위험이 있다.
본원에 기재된 GLP-1-Fc 융합 단백질의 유효량은 GLP-1 수용체 자극을 필요로 하는 대상체에게 투여될 때 허용될 수 없는 부작용을 유발하지 않으면서 목적하는 치료 및(또는) 예방 효과를 가져오는 양이다. "목적하는 치료 효과"는 하기 중 하나 이상을 포함한다. 1) 질환이나 증상과 관련된 징후(들)의 경감; 2) 질환이나 증상과 관련된 징후 개시의 지연; 3) 치료하지 않은 경우와 비교하여 증가된 수명; 및 4) 치료하지 않은 경우와 비교하여 더 높은 질의 삶. 예를 들어, 당뇨병을 치료하기 위한 본 발명의 GLP-1-Fc 융합 단백질의 "유효량"은 치료하지 않은 경우에 비해 혈당 농도의 더 큰 제어를 일으킴으로써, 망막증, 신경장해 또는 신장 질환과 같은 당뇨 합병증 발병의 지연을 일으키는 양이다. 당뇨병을 예방하기 위한 GLP-1-Fc 융합 단백질의 "유효량"은 치료하지 않은 경우와 비교하여, 설포닐 우레아, 티아졸리딘디온, 인슐린 및(또는) 비스구아니딘과 같은 항-저혈당 약물로의 치료를 요구하는 상승된 혈당 수준의 발병을 지연시키는 양이다.
환자의 혈당을 정상화시키는데 유효한 융합 단백질의 투여량은 대상체의 성별, 체중 및 연령, 혈당 조절 불능의 중증도, 투여 경로 및 생체이용률, 융합 단백질의 약동학적 프로파일, 효능 및 제제 등을 비롯한 많은 인자에 의존할 것이다. 투여량은 체중 1 ㎏ 당 0.01 내지 1 ㎎의 범위, 바람직하게는 체중 1 ㎏ 당 0.05 내지 0.5 ㎎의 범위에 있을 수 있다.
본 발명의 융합 단백질은 2 주에 1회 또는 1 주에 1회 투여되는 것이 바람직하다. 치료되는 질환에 따라, 융합 단백질을 1 주일에 2 내지 3회와 같이 더 빈번하게 투여하는 것이 필요할 수 있다.
본 발명은 하기 실시예를 언급하여 단지 비-제한적 예로서 설명될 것이다.
실시예
1 - 시험관내 GLP-1 수용체 활성화 분석
CRE-BLAM 시스템을 이용하여, 인간 GLP-1 수용체를 발현하는 HEK-293 세포를 폴리-d-리신 코팅된 96 웰 검정색 투명-바닥 플레이트로 20,000 내지 40,000개의 세포/웰/10％ FBS를 갖는 100 ㎕ DMEM 배지로 접종한다. 접종 다음 날, 배지를 버리고 80 ㎕ 무-혈장 DMEM 배지를 가한다. 접종 3일째 날에, 투여량 반응 곡선을 만들기 위해 상이한 농도의 다양한 GLP-1-Fc 이종 융합 단백질을 함유하는 0.5％ BSA를 갖는 20 ㎕의 무-혈장 DMEM 배지를 각 웰에 가한다. 일반적으로, 3 나노몰 내지 30 나노몰의 이종 GLP-1 Fc 융합 단백질을 함유하는 14가지 희석액을 EC50 값이 결정될 수 있는 투여량 반응 곡선을 만드는데 사용한다. 융합 단백질로 5 시간 인큐베이션한 후, 20 ㎕의 β-락타마제 기질(CCF2/AM, PanVera LLC)을 가하고 인큐베이션을 1 시간 동안 계속하고 그 시간에 사이토플루어(cytofluor) 상에서 형광을 결정하였다. 분석은 문헌 [Zlokarnik 등(1998), Science, 278: 84-88]에 추가로 기재되어 있다. 다양한 GLP-1-Fc 융합 단백질을 시험하고, EC50 값을 표 1에 나타낸다. 값은 매 실험과 함께 내부 대조군으로서 실행하는 Val8-GLP-1(7-37)OH에 대해 결정된 값에 상대적인 것이다.
실시예
2 - 시험관내 GLP-1 수용체 활성화 분석
CRE-루시퍼라제 시스템을 이용하여, 인간 GLP-1 수용체를 발현하는 HEK-293 세포를 96 웰 플레이트로 30,000 세포/웰/80 ㎕ 저 혈청 DMEM F12 배지로 접종한다. 접종 다음 날, 0.5％ BSA에 용해된 시험 단백질의 20 ㎕ 분취액을 혼합하고 5 시간 동안 세포와 함께 인큐베이션한다. 일반적으로, 3 pM 내지 3 nM을 함유하는 12가지 희석액을 세포 첨가 전에 각 시험 단백질에 대해 5× 농도로 제조하여 EC50 값이 결정되는 투여량 반응 곡선을 만든다. 인큐베이션 후, 100 ㎕의 루시퍼라제 시약을 각 플레이트에 직접 가하고 2 분간 온화하게 혼합한다. 플레이트를 Tri-lux 루미노미터에 위치시키고 루시퍼라제 발현으로부터 초래되는 광 출력을 계산한다. 다양한 GLP-1-Fc 융합 단백질을 시험하고, EC50 값을 표 2에 나타낸다. 값은 매 실험과 함께 내부 대조군으로서 실행하는 Val8-GLP-1(7-37)OH에 대해 결정된 값에 상대적인 것이다.
실시예
3
래트에서
정맥내
글루코스
내성 시험
Fc 융합 단백질인 Gly8-Glu22-Gly36-GLP-1(7-37)-L-IgG4(S228P, F234A, L235A)를 래트에서 정맥내 글루코스 내성 시험(IVGTT)으로 평가한다. 적어도 4마리의 래트를 3개의 군 각각에 포함시킨다. Ⅰ군은 비히클을 투여받고(표 3), Ⅱ군은 단일의 피하 주사로서 1.79 ㎎/㎏의 Gly8-Glu22-Gly36-GLP-1(7-37)-L-IgG4(S228P, F234A, L235A)를 투여받고(표 4), Ⅲ군은 단일의 피하 주사로서 0.179 ㎎/㎏의 Gly8-Glu22-Gly36-GLP-1(7-37)-L-IgG4(S228P, F234A, L235A)를 투여받는다(표 5). 래트에게 1 일째 아침에 피하 주사한다. 첫번째 주사 후 24 시간에, 래트 체중 1 g 당 1 ㎕의 글루코스(D50)를 볼루스로 주입한다. 혈액 샘플을 글루코스의 볼루스 주입 후 2, 4, 6, 10, 20 및 30 분에 채취한다.
실시예
4
사이노몰거스
원숭이(
Cynomolgus
Monkey)에 대한 단일 피하 주사에 따른 약동학 연구
웅성 사이노몰거스 원숭이에게 피하(SC) 주사에 의한 0.1 ㎎/㎏으로 투여될 때, Fc 융합 단백질인 Gly8-Glu22-Gly36-GLP-1(7-37)-L-IgG4(S228P, F234A, L235A)의 약동학(PK)을 특성분석하기 위하여 연구를 수행한다. RIA 항체는 GLP의 중간 부분에 대해 특이적이다. ELISA는 N-말단 특이적 포획 항체와 Fc 특이적 검출 항체를 이용한다. ELISA와 RIA 둘 다로부터의 결과 혈장 농도를 대표적 약동학 지수 값을 결정하는데 사용한다.
결과 PK 지수 값의 표시는 표 6에 요약되어 있다. RIA로부터의 단일-투여량 SC PK는 17.3 시간의 상응하는 Tmax를 갖는 446.7 ng/㎖의 평균 Cmax와 관련되어 있다. 평균 제거 반감기는 대략 79.3 시간(3.3 일)이다. ELISA로부터의 PK는 16.7 시간의 상응하는 Tmax를 갖는 292.2 ng/㎖의 평균 Cmax와 관련되어 있다. 평균 제거 반감기는 대략 51.6 시간(2.2 일)이다.
실시예
5 반복 피하 주사에 따른 항체의 잠재적 형성의 평가
사이노몰거스 원숭이로부터의 지정된 혈청 샘플을 직접적 ELISA 포맷을 이용하여 Gly8-Glu22-Gly36-GLP-1(7-37)-L-IgG4(S228P, F234A, L235A)에 대한 항체의 형성에 대해 시험한다. 마이크로타이터 플레이트를 0.1 ㎍/㎖ 농도로 Gly8-Glu22-Gly36-GLP-1(7-37)-L-IgG4(S228P, F234A, L235A)로 코팅한다. 원숭이 혈청 샘플을 브로킹 용액(blocking solution)으로 50, 500, 1000 및 5000배 희석하고, 0.05 ㎖ 샘플/웰을 대략 1 시간 인큐베이션한다. 이차 항체인 염소<인간 Fab'2>-퍼옥시다제(인간에 대해 75％ 교차 반응성을 가짐)를 블로킹제로 10,000배 희석하고, 0.05 ㎖/웰로 가하고, 대략 1 시간 인큐베이션한다. 테트라메틸벤지딘(TMB) 기질을 이용한 발색을 450 ㎚-630 ㎚에서 판독한다. 2회 판독치를 평균한다. GLP-1 항체를 양성 대조군으로 사용하였고 염소<토끼>(H+L)-퍼옥시다제 접합체가 검출을 위해 이차적으로 사용되는 것이다. 잠재적 면역원성을 평가하기 위하여 점 혈청 샘플을 투여 전, 두번째 투여 후 24 시간, 및 첫번째 및 두번째 SC 투여 후 168 시간에 모은다. G8E22-CEX-L-hIgG4에 대한 항체 역가의 존재를 투여전 혈청 샘플과 양성 대조군을 비교하여 해석한다. 결과의 표시는 표 7에 제시되어 있다.
실시예
6 절식 상태 및 등급화된
정맥내
글루코스
주입 동안
사이노몰거스
원숭이에 대한 단일 피하 주사에 따른
약력학
연구
1기(연구 1일)에 비히클의 피하 주사를 투여한다. 그런 다음 5, 10 및 25 ㎎/㎏/분의 등급화된 정맥내 글루코스(20％ 덱스트로스) 주입을 비히클 주사 직후 투여한다. 2기(연구 3일)에, GLP-1 융합 단백질(0.1 ㎎/㎏)의 피하 주사를 투여한다. 3기에, 등급화된 정맥내 글루코스 주입을 GLP-1 융합물 주사 후 대략 96 시간에 수행한다.
등급화된 정맥내 글루코스 주입 과정을 16-시간 철야 절식 후 진정된 원숭이에서 수행한다. 2가지 정맥내 글루코스 주입에 대해, 기저선을 결정하기 위하여 기저선 샘플을 20 분간 매 10 분에 채취할 것이다. 단계적으로-증가하는 글루코스 주입을 5 ㎎/㎏/분의 속도로 +20 분에 시작한 후, 10 ㎎/㎏/분 및 25 ㎎/㎏/분으로 주입한다. 각 주입 속도를 20 분의 기간 동안 투여한다. 글루코스, 인슐린 및 글루카곤을 측정하기 위하여 혈액 샘플을 10 분 간격으로 채취한다. 1기와 3기에 대해 대략 1.0 ㎖의 혈액을 -20 분, -10 분, 0 분의 글루코스 주입 전, 및 글루코스 주입 후 10, 20, 30, 40, 50 및 60 분에 모은다.
데이터의 표시는 표 8에 나타내어져 있다.
글루카곤 수준은 비히클과 GLP-1 융합 단백질 투여된 원숭이 사이에 통계학적으로 상이하지 않았다.
실시예
7 절식 상태 및 등급화된
정맥내
글루코스
주입 동안 세 상이한 투여량의 단일 피하 주사에 따른
약력학
연구
장기간 캐뉼러를 꽂은 래트를 비히클 대조군(염수) 또는 3개의 처리군(GLP-1 융합 단백질; 0.0179 ㎎/㎏, 0.179 ㎎/㎏ 또는 1.79 ㎎/㎏) 중 하나로 지정하였다. GLP-1 융합 단백질과 비히클을 피하 주사를 통해 투여한다. 처리 후 24 시간에, 밤새 절식시킨(16 h) 래트를 등급화된 정맥내 글루코스 주입 시험한다. 등급화된 글루코스 주입 시험은 기저선 염수 주입 기간(20 분)에 이어, 각각 5 및 15 ㎎/㎏/분의 2가지 30 분 글루코스 주입기로 이루어진다. 혈장 샘플을 -20, -10 분, 0 분의 글루코스 주입 전(기저선), 및 10, 20, 30, 40, 50 및 60 분에 모은다.
데이터의 표시는 표 9에 나타내어져 있다.
서열목록 전자파일 첨부
Claims (24)
- 서열번호 7의 서열인Ala-Glu-Ser-Lys-Tyr-Gly-Pro-Pro-Cys-Pro-Pro-Cys-Pro-Ala-Pro-Xaa16 -Xaa17 -Xaa18 -Gly-Gly-Pro-Ser-Val-Phe-Leu-Phe-Pro-Pro-Lys-Pro-Lys-Asp-Thr-Leu-Met-Ile-Ser-Arg-Thr-Pro-Glu-Val-Thr-Cys-Val-Val-Val-Asp-Val-Ser-Gln-Glu-Asp-Pro-Glu-Val-Gln-Phe-Asn-Trp-Tyr-Val-Asp-Gly-Val-Glu-Val-His-Asn-Ala-Lys-Thr-Lys-Pro-Arg-Glu-Glu-Gln-Phe-Xaa80 -Ser-Thr-Tyr-Arg-Val-Val-Ser-Val-Leu-Thr-Val-Leu-His-Gln-Asp-Trp-Leu-Asn-Gly-Lys-Glu-Tyr-Lys-Cys-Lys-Val-Ser-Asn-Lys-Gly-Leu-Pro-Ser-Ser-Ile-Glu-Lys-Thr-Ile-Ser-Lys-Ala-Lys-Gly-Gln-Pro-Arg-Glu-Pro-Gln-Val-Tyr-Thr-Leu-Pro-Pro-Ser-Gln-Glu-Glu-Met-Thr-Lys-Asn-Gln-Val-Ser-Leu-Thr-Cys-Leu-Val-Lys-Gly-Phe-Tyr-Pro-Ser-Asp-Ile-Ala-Val-Glu-Trp-Glu-Ser-Asn-Gly-Gln-Pro-Glu-Asn-Asn-Tyr-Lys-Thr-Thr-Pro-Pro-Val-Leu-Asp-Ser-Asp-Gly-Ser-Phe-Phe-Leu-Tyr-Ser-Arg-Leu-Thr-Val-Asp-Lys-Ser-Arg-Trp-Gln-Glu-Gly-Asn-Val-Phe-Ser-Cys-Ser-Val-Met-His-Glu-Ala-Leu-His-Asn-His-Tyr-Thr-Gln-Lys-Ser-Leu-Ser-Leu-Ser-Leu-Gly-Xaa230 (서열번호 7)(여기에서,위치 16에 있는 Xaa는 Pro 또는 Glu이고;위치 17에 있는 Xaa는 Phe, Val 또는 Ala이며;위치 18에 있는 Xaa는 Leu, Glu 또는 Ala이고;위치 80에 있는 Xaa는 Asn 또는 Ala이며;위치 230에 있는 Xaa는 Lys이거나 존재하지 않음)을 포함하는 면역글로불린의 Fc 부분에 융합된,a) (서열번호 1)His-Xaa8-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Glu-Gln-Ala-Ala-Lys-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Lys-Gly-Gly-Gly(여기에서 Xaa8은 Gly 및 Val으로부터 선택됨);b) (서열번호 2)His-Xaa8-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Glu-Gln-Ala-Ala-Lys-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Lys-Asn-Gly-Gly-Gly(여기에서 Xaa8은 Gly 및 Val으로부터 선택됨);c) (서열번호 3)His-Xaa8-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Glu-Gln-Ala-Ala-Lys-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Lys-Gly-Gly-Pro(여기에서 Xaa8은 Gly 및 Val으로부터 선택됨);d) (서열번호 4)His-Xaa8-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Glu-Gln-Ala-Ala-Lys-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Lys-Asn-Gly-Gly-Pro(여기에서 Xaa8은 Gly 및 Val으로부터 선택됨);e) (서열번호 5)His-Xaa8-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Glu-Gln-Ala-Ala-Lys-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Lys-Gly-Gly(여기에서 Xaa8은 Gly 및 Val으로부터 선택됨);f) (서열번호 6)His-Xaa8-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Glu-Gln-Ala-Ala-Lys-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Lys-Asn-Gly-Gly(여기에서 Xaa8은 Gly 및 Val으로부터 선택됨)으로 구성된 군으로부터 선택되는 서열을 포함하는 GLP-1(글루카콘-유사 펩티드-1) 유사체를 포함하는 이종 융합 단백질.
- 제1항에 있어서, GLP-1 유사체의 C-말단 글리신 잔기가a) Gly-Gly-Gly-Gly-Ser-Gly-Gly-Gly-Gly-Ser-Gly-Gly-Gly-Gly-Ser(서열번호 8);b) Gly-Ser-Gly-Gly-Gly-Gly-Ser-Gly-Gly-Gly-Gly-Ser-Gly-Gly-Gly-Gly-Ser-Gly-Gly-Gly-Gly-Ser(서열번호 19); 및c) Gly-Gly-Gly-Gly-Ser-Gly-Gly-Gly-Gly-Ser-Gly-Gly-Gly-Gly-Ser-Gly-Gly-Gly-Gly-Ser-Gly-Gly-Gly-Gly-Ser-Gly-Gly-Gly-Gly-Ser(서열번호 21)으로 구성된 군으로부터 선택되는 서열을 포함하는 펩티드 링커를 통해 Fc 부분의 N-말단 알라닌 잔기에 융합되어 있는 이종 융합 단백질.
- 제2항에 있어서, 링커가 서열번호 8의 서열을 포함하는 것인 이종 융합 단백질.
- 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, GLP-1 유사체의 위치 8에 있는 Xaa가 Gly인 이종 융합 단백질.
- 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, GLP-1 유사체의 위치 8에 있는 Xaa가 Val인 이종 융합 단백질.
- 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, GLP-1 유사체가 서열번호 1의 서열을 포함하는 것인 이종 융합 단백질.
- a) Gly8-Glu22-Gly36-GLP-1(7-37)-1L-IgG4(S228P);b) Gly8-Glu22-Gly36-GLP-1(7-37)-1L-IgG4(S228P, F234A, L235A);c) Gly8-Glu22-Gly36-GLP-1(7-37)-1L-IgG4(S228P, N297A);d) Gly8-Glu22-Gly36-GLP-1(7-37)-1L-IgG4(S228P, F234A, L235A, N297A);e) Gly8-Glu22-Gly36-GLP-1(7-37)-1.5L-IgG4(S228P);f) Gly8-Glu22-Gly36-GLP-1(7-37)-1.5L-IgG4(S228P, F234A, L235A);g) Gly8-Glu22-Gly36-GLP-1(7-37)-1.5L-IgG4(S228P, N297A);h) Gly8-Glu22-Gly36-GLP-1(7-37)-1.5L-IgG4(S228P, F234A, L235A, N297A);i) Gly8-Glu22-Gly36-GLP-1(7-37)-2L-IgG4(S228P);j) Gly8-Glu22-Gly36-GLP-1(7-37)-2L-IgG4(S228P, F234A, L235A);k) Gly8-Glu22-Gly36-GLP-1(7-37)-2L-IgG4(S228P, N297A);l) Gly8-Glu22-Gly36-GLP-1(7-37)-2L-IgG4(S228P, F234A, L235A, N297A); 및이들의 데스-K 형태로 구성된 군으로부터 선택되며, 여기서 1L 및 2L은 각각 서열번호 8의 링커의 1 및 2 반복물을 나타내고, 1.5L은 서열번호 19의 링커를 나타내고, 데스-K는 상기 IgG4에서 위치 230의 리신이 결실된 것을 나타내는 것인 이종 융합 단백질.
- a) Val8-Glu22-Gly36-GLP-1(7-37)-1L-IgG4(S228P);b) Val8-Glu22-Gly36-GLP-1(7-37)-1L-IgG4(S228P, F234A, L235A);c) Val8-Glu22-Gly36-GLP-1(7-37)-1L-IgG4(S228P, N297A);d) Val8-Glu22-Gly36-GLP-1(7-37)-1L-IgG4(S228P, F234A, L235A, N297A);e) Val8-Glu22-Gly36-GLP-1(7-37)-1.5L-IgG4(S228P);f) Val8-Glu22-Gly36-GLP-1(7-37)-1.5L-IgG4(S228P, F234A, L235A);g) Val8-Glu22-Gly36-GLP-1(7-37)-1.5L-IgG4(S228P, N297A);h) Val8-Glu22-Gly36-GLP-1(7-37)-1.5L-IgG4(S228P, F234A, L235A, N297A);i) Val8-Glu22-Gly36-GLP-1(7-37)-2L-IgG4(S228P);j) Val8-Glu22-Gly36-GLP-1(7-37)-2L-IgG4(S228P, F234A, L235A);k) Val8-Glu22-Gly36-GLP-1(7-37)-2L-IgG4(S228P, N297A);l) Val8-Glu22-Gly36-GLP-1(7-37)-2L-IgG4(S228P, F234A, L235A, N297A); 및이들의 데스-K 형태로 구성된 군으로부터 선택되며, 여기서 1L 및 2L은 각각 서열번호 8의 링커의 1 및 2 반복물을 나타내고, 1.5L은 서열번호 19의 링커를 나타내고, 데스-K는 상기 IgG4에서 위치 230의 리신이 결실된 것을 나타내는 것인 이종 융합 단백질.
- 삭제
- 삭제
- 삭제
- 삭제
- 삭제
- 삭제
- 삭제
- 삭제
- 삭제
- 삭제
- 삭제
- 삭제
- 제1항 내지 제3항, 제7항 및 제8항 중 어느 한 항의 이종 융합 단백질을 약제학적으로 허용되는 부형제와 함께 포함하는, 비-인슐린 의존성 당뇨병을 치료하기 위한 약제학적 조성물.
- 제1항 내지 제3항, 제7항 및 제8항 중 어느 한 항의 이종 융합 단백질을 약제학적으로 허용되는 부형제와 함께 포함하는, 비만을 치료하거나 과체중 대상체에서 체중 감량을 유도하기 위한 약제학적 조성물.
- 삭제
- 삭제
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US47788003P | 2003-06-12 | 2003-06-12 | |
| US60/477,880 | 2003-06-12 | ||
| PCT/US2004/015595 WO2005000892A2 (en) | 2003-06-12 | 2004-06-10 | Glp-1 analog fusion plroteins |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| KR20060022262A KR20060022262A (ko) | 2006-03-09 |
| KR100758755B1 true KR100758755B1 (ko) | 2007-09-14 |
Family
ID=33551775
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| KR1020057023668A KR100758755B1 (ko) | 2003-06-12 | 2004-06-10 | Ｇｌｐ-1 유사체 융합 단백질 |
Country Status (29)
| Country | Link |
|---|---|
| US (2) | US7452966B2 (ko) |
| EP (2) | EP1641823B1 (ko) |
| JP (1) | JP4629047B2 (ko) |
| KR (1) | KR100758755B1 (ko) |
| CN (2) | CN101974090B (ko) |
| AR (1) | AR044776A1 (ko) |
| AT (1) | ATE525395T1 (ko) |
| AU (1) | AU2004251145C1 (ko) |
| BE (1) | BE2015C007I2 (ko) |
| BR (1) | BRPI0411132B8 (ko) |
| CA (1) | CA2528591C (ko) |
| CY (2) | CY1111991T1 (ko) |
| DK (1) | DK1641823T3 (ko) |
| EA (1) | EA008831B1 (ko) |
| ES (1) | ES2371072T3 (ko) |
| FR (1) | FR15C0010I2 (ko) |
| HK (1) | HK1149566A1 (ko) |
| HR (1) | HRP20110714T1 (ko) |
| HU (1) | HUS1500024I1 (ko) |
| IL (1) | IL171926A (ko) |
| LT (1) | LTC1641823I2 (ko) |
| MX (1) | MXPA05013565A (ko) |
| NZ (1) | NZ543292A (ko) |
| PL (1) | PL1641823T3 (ko) |
| PT (1) | PT1641823E (ko) |
| SI (1) | SI1641823T1 (ko) |
| TW (1) | TW200507870A (ko) |
| UA (1) | UA87458C2 (ko) |
| WO (1) | WO2005000892A2 (ko) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2011043530A1 (ko) * | 2009-10-09 | 2011-04-14 | (주)알테오젠 | Ｇｌｐ-1 유사체의 융합체, 및 이를 유효성분으로 함유하는 당뇨병의 예방 또는 치료용 조성물 |
Families Citing this family (165)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US7183387B1 (en) | 1999-01-15 | 2007-02-27 | Genentech, Inc. | Polypeptide variants with altered effector function |
| US7459540B1 (en) * | 1999-09-07 | 2008-12-02 | Amgen Inc. | Fibroblast growth factor-like polypeptides |
| BR0213761A (pt) * | 2001-10-25 | 2005-04-12 | Genentech Inc | Composições, preparação farmacêutica, artigo industrializado, método de tratamento de mamìferos, célula hospedeira, método para a produção de uma glicoproteìna e uso da composição |
| WO2003059934A2 (en) | 2001-12-21 | 2003-07-24 | Human Genome Sciences, Inc. | Albumin fusion proteins |
| DK1463751T3 (da) | 2001-12-21 | 2013-08-26 | Human Genome Sciences Inc | Albuminfusionsproteiner. |
| US20070161087A1 (en) * | 2003-05-29 | 2007-07-12 | Wolfgang Glaesner | Glp-1 fusion proteins |
| EA008831B1 (ru) * | 2003-06-12 | 2007-08-31 | Эли Лилли Энд Компани | Слитые белки аналогов glp-1 |
| EP1729795B1 (en) | 2004-02-09 | 2016-02-03 | Human Genome Sciences, Inc. | Albumin fusion proteins |
| EP2168982A1 (en) * | 2004-12-22 | 2010-03-31 | Eli Lilly & Company | GLP-1 analog fusion protein formulations |
| AU2006247734B2 (en) * | 2005-05-13 | 2011-06-23 | Eli Lilly And Company | GLP-1 pegylated compounds |
| US8658174B2 (en) | 2005-07-27 | 2014-02-25 | Qinghua Wang | GLP/1/exendin 4 IgG Fc fusion constructs for treatment of diabetes |
| EP1924293A4 (en) | 2005-08-06 | 2008-12-24 | Qinghua Wang | COMPOSITION AND METHOD FOR THE PREVENTION AND TREATMENT OF DIABETES TYPE I |
| DK1767545T3 (da) * | 2005-09-22 | 2010-03-15 | Biocompatibles Uk Ltd | GLP-1 (Glucagon-lignende peptid-1)-fusionspolypeptider med forøget peptidaseresistens |
| BRPI0617515A2 (pt) * | 2005-10-24 | 2011-07-26 | Centocor Inc | mimeticorpos, polipeptÍdeos, composiÇÕes, mÉtodos e usos de glp-2 |
| LT1965823T (lt) | 2005-11-04 | 2016-10-10 | Glaxosmithkline Llc | Hipoglikeminių agentų skyrimo būdai |
| EP1959986B1 (en) | 2005-11-07 | 2014-07-23 | Indiana University Research and Technology Corporation | Glucagon analogs exhibiting physiological solubility and stability |
| US8841255B2 (en) | 2005-12-20 | 2014-09-23 | Duke University | Therapeutic agents comprising fusions of vasoactive intestinal peptide and elastic peptides |
| US20130172274A1 (en) | 2005-12-20 | 2013-07-04 | Duke University | Methods and compositions for delivering active agents with enhanced pharmacological properties |
| EP1816201A1 (en) | 2006-02-06 | 2007-08-08 | CSL Behring GmbH | Modified coagulation factor VIIa with extended half-life |
| ES2495741T3 (es) | 2006-04-20 | 2014-09-17 | Amgen, Inc | Compuestos de GLP-1 |
| EP2076604A4 (en) * | 2006-08-31 | 2009-09-02 | Centocor Ortho Biotech Inc | GLP-2 MIMIC BODIES, POLYPEPTIDES, COMPOSITIONS, PROCESSES AND USES |
| CN103230598A (zh) * | 2006-09-06 | 2013-08-07 | 费斯生物制药公司 | 融合肽治疗组合物 |
| US8338376B2 (en) * | 2006-10-20 | 2012-12-25 | Biogen Idec Ma Inc. | Compositions comprising variant LT-B-R-IG fusion proteins |
| AU2007338298B2 (en) | 2006-12-22 | 2013-02-07 | Csl Behring Gmbh | Modified coagulation factors with prolonged in vivo half-life |
| JP2008169195A (ja) * | 2007-01-05 | 2008-07-24 | Hanmi Pharmaceutical Co Ltd | キャリア物質を用いたインスリン分泌ペプチド薬物結合体 |
| US20090098130A1 (en) * | 2007-01-05 | 2009-04-16 | Bradshaw Curt W | Glucagon-like protein-1 receptor (glp-1r) agonist compounds |
| CN101578102B (zh) * | 2007-01-05 | 2013-07-17 | 印第安纳大学研究及科技有限公司 | 在生理性pH缓冲液中显示增强的溶解性的胰高血糖素类似物 |
| AU2011254001B2 (en) * | 2007-01-05 | 2012-08-02 | Covx Technologies Ireland Limited | Glucagon-like protein-1 receptor (GLP-1R) agonist compounds |
| EP2109457B1 (en) | 2007-02-12 | 2016-01-06 | CSL Behring GmbH | Therapeutic application of kazal-type serine protease inhibitors |
| EP2111414B1 (en) | 2007-02-15 | 2014-07-02 | Indiana University Research and Technology Corporation | Glucagon/glp-1 receptor co-agonists |
| CN101951940A (zh) * | 2007-03-15 | 2011-01-19 | 比奥根艾迪克Ma公司 | 自身免疫病的治疗 |
| CN102015761A (zh) * | 2007-06-19 | 2011-04-13 | 大塚化学株式会社 | 附加糖链的glp-1肽 |
| US7960336B2 (en) * | 2007-08-03 | 2011-06-14 | Pharmain Corporation | Composition for long-acting peptide analogs |
| WO2009020802A2 (en) | 2007-08-03 | 2009-02-12 | Eli Lilly And Company | Treatment for obesity |
| US8563527B2 (en) * | 2007-08-20 | 2013-10-22 | Pharmain Corporation | Oligonucleotide core carrier compositions for delivery of nucleic acid-containing therapeutic agents, methods of making and using the same |
| EP2031064A1 (de) * | 2007-08-29 | 2009-03-04 | Boehringer Ingelheim Pharma GmbH & Co. KG | Verfahren zur Steigerung von Proteintitern |
| EP2217701B9 (en) | 2007-10-30 | 2015-02-18 | Indiana University Research and Technology Corporation | Glucagon antagonists |
| MX2010004298A (es) * | 2007-10-30 | 2010-05-03 | Univ Indiana Res & Tech Corp | Compuestos que exhiben actividad antagonista de glucagon y agonista de glp-1. |
| US20100317057A1 (en) * | 2007-12-28 | 2010-12-16 | Novo Nordisk A/S | Semi-recombinant preparation of glp-1 analogues |
| WO2009099763A1 (en) * | 2008-01-30 | 2009-08-13 | Indiana University Research And Technology Corporation | Ester-based peptide prodrugs |
| JOP20190083A1 (ar) | 2008-06-04 | 2017-06-16 | Amgen Inc | بولي ببتيدات اندماجية طافرة لـfgf21 واستخداماتها |
| MX2010012695A (es) * | 2008-06-17 | 2011-03-15 | Univ Indiana Res & Tech Corp | Analogos de glucagon que exhiben solubilidad y estabilidad aumentadas en soluciones reguladoras de ph fisiologico. |
| PA8830501A1 (es) | 2008-06-17 | 2010-07-27 | Univ Indiana Res & Tech Corp | Co-agonistas del receptor de glucagon/glp-1 |
| EA020326B9 (ru) * | 2008-06-17 | 2015-03-31 | Индиана Юниверсити Рисерч Энд Текнолоджи Корпорейшн | Агонисты смешанного действия на основе глюкозозависимого инсулинотропного пептида для лечения нарушений обмена веществ и ожирения |
| CN103739712B (zh) | 2008-06-24 | 2016-10-05 | 德国杰特贝林生物制品有限公司 | 具有延长的体内半衰期的因子viii、冯·维勒布兰德因子或它们的复合物 |
| EP2307038A4 (en) | 2008-06-27 | 2013-03-27 | Univ Duke | THERAPEUTIC AGENTS COMPRISING ELASTINE-LIKE PEPTIDES |
| WO2010042747A2 (en) | 2008-10-10 | 2010-04-15 | Amgen Inc. | Fgf21 mutants and uses thereof |
| RU2550696C2 (ru) | 2008-12-19 | 2015-05-10 | Индиана Юниверсити Рисерч Энд Текнолоджи Корпорейшн | Основанные на амидах пролекарства пептидов глюкагонового надсемейства |
| US9238878B2 (en) | 2009-02-17 | 2016-01-19 | Redwood Bioscience, Inc. | Aldehyde-tagged protein-based drug carriers and methods of use |
| TWI560197B (en) * | 2009-05-05 | 2016-12-01 | Amgen Inc | Fgf21 mutants and uses thereof |
| WO2010129600A2 (en) | 2009-05-05 | 2010-11-11 | Amgen Inc. | Fgf21 mutants and uses thereof |
| WO2010148089A1 (en) | 2009-06-16 | 2010-12-23 | Indiana University Research And Technology Corporation | Gip receptor-active glucagon compounds |
| MX2011013903A (es) * | 2009-06-17 | 2012-05-08 | Amgen Inc | Polipeptidos quimericos y usos de los mismos. |
| CN101993485B (zh) | 2009-08-20 | 2013-04-17 | 重庆富进生物医药有限公司 | 促胰岛素分泌肽类似物同源二聚体及其用途 |
| JP2013512672A (ja) * | 2009-12-02 | 2013-04-18 | アムジエン・インコーポレーテツド | ヒトＦＧＦＲ１ｃ、ヒトβ−クロト−、ならびにヒトＦＧＦＲ１ｃおよびヒトβ−クロト−の両方に結合する結合タンパク質 |
| UA109888C2 (uk) * | 2009-12-07 | 2015-10-26 | ІЗОЛЬОВАНЕ АНТИТІЛО АБО ЙОГО ФРАГМЕНТ, ЩО ЗВ'ЯЗУЄТЬСЯ З β-КЛОТО, РЕЦЕПТОРАМИ FGF І ЇХНІМИ КОМПЛЕКСАМИ | |
| WO2011075393A2 (en) | 2009-12-18 | 2011-06-23 | Indiana University Research And Technology Corporation | Glucagon/glp-1 receptor co-agonists |
| KR20120123443A (ko) | 2010-01-27 | 2012-11-08 | 인디애나 유니버시티 리서치 앤드 테크놀로지 코퍼레이션 | 대사 장애 및 비만 치료용 글루카곤 길항제-ｇｉｐ 항진제 콘쥬게이트 |
| EP2371857A1 (en) | 2010-04-01 | 2011-10-05 | CSL Behring GmbH | Factor XII inhibitors for treating interstitial lung disease |
| AU2011239689A1 (en) | 2010-04-15 | 2012-11-08 | Amgen Inc. | Human FGF receptor and beta-Klotho binding proteins |
| RU2012151296A (ru) | 2010-04-30 | 2014-06-10 | Санва Кагаку Кенкюсо Ко., Лтд | Пептид для улучшения биостабильности биоактивного вещества и биоактивное вещество, имеющее повышенную биостабильность |
| WO2011143209A1 (en) | 2010-05-13 | 2011-11-17 | Indiana University Research And Technology Corporation | Glucagon superfamily peptides exhibiting nuclear hormone receptor activity |
| EP2568993A4 (en) | 2010-05-13 | 2014-02-19 | Univ Indiana Res & Tech Corp | GLUCAGON SUPERFAMILY PEPTIDES EXPRESSING G PROTEIN-COUPLED RECEPTOR ACTIVITY |
| CN101891823B (zh) | 2010-06-11 | 2012-10-03 | 北京东方百泰生物科技有限公司 | 一种Exendin-4及其类似物融合蛋白 |
| CN103179979A (zh) | 2010-06-24 | 2013-06-26 | 印第安纳大学研究及科技有限公司 | 基于酰胺的胰高血糖素超家族肽前药 |
| CN103415300B (zh) * | 2010-07-20 | 2018-02-23 | 诺沃—诺迪斯克有限公司 | N‑末端修饰的fgf21化合物 |
| MA34885B1 (fr) | 2010-12-22 | 2014-02-01 | Indiana Unversity Res And Technology Corp | Analogues du glucagon presentant una ctivite de recepteur de gip |
| AU2012205301B2 (en) | 2011-01-14 | 2017-01-05 | Redwood Bioscience, Inc. | Aldehyde-tagged immunoglobulin polypeptides and method of use thereof |
| CA2829037C (en) | 2011-03-09 | 2022-05-17 | Csl Behring Gmbh | Factor xii inhibitors for the administration with medical procedures comprising contact with artificial surfaces |
| EP2497489A1 (en) | 2011-03-09 | 2012-09-12 | CSL Behring GmbH | Factor XII inhibitors for the treatment of silent brain ischemia and ischemia of other organs |
| SG193554A1 (en) | 2011-03-29 | 2013-11-29 | Roche Glycart Ag | Antibody fc variants |
| RU2014101697A (ru) | 2011-06-22 | 2015-07-27 | Индиана Юниверсити Рисерч Энд Текнолоджи Корпорейшн | Коагонисты рецепторов глюкагона/glp-1 |
| LT2723367T (lt) | 2011-06-22 | 2017-08-25 | Indiana University Research And Technology Corporation | Bendri gliukagono/glp-1 receptoriaus agonistai |
| CA2841185C (en) | 2011-07-22 | 2021-05-25 | Csl Behring Gmbh | Inhibitory anti -factor xii/xiia monoclonal antibodies and their uses |
| UY34317A (es) | 2011-09-12 | 2013-02-28 | Genzyme Corp | Anticuerpo antireceptor de célula T (alfa)/ß |
| KR20130049671A (ko) | 2011-11-04 | 2013-05-14 | 한미사이언스 주식회사 | 생리활성 폴리펩타이드 결합체 제조 방법 |
| BR112014007124A2 (pt) | 2011-11-17 | 2017-06-13 | Univ Indiana Res & Tech Corp | superfamília de peptídeos gluxagon que exibem atividade no receptor glicocorticóide |
| EP2623110A1 (en) | 2012-01-31 | 2013-08-07 | CSL Behring GmbH | Factor XII inhibitors for the treatment of neurological inflammatory disorders |
| DK2814502T3 (en) | 2012-02-15 | 2017-12-18 | Csl Behring Gmbh | Von Willebrand Factor variants with improved Factor VIII binding affinity |
| AR091477A1 (es) | 2012-06-21 | 2015-02-04 | Univ Indiana Res & Tech Corp | Analogos de glucagon que presentan actividad de receptor de gip |
| CN104428315B (zh) | 2012-07-13 | 2017-09-29 | 罗氏格黎卡特股份公司 | 双特异性抗‑vegf/抗‑ang‑2抗体及其在治疗眼血管疾病中的应用 |
| US9790268B2 (en) | 2012-09-12 | 2017-10-17 | Genzyme Corporation | Fc containing polypeptides with altered glycosylation and reduced effector function |
| PT2895513T (pt) * | 2012-09-12 | 2018-10-08 | Genzyme Corp | Polipéptidos contendo fc com glicosilação alterada e função efetora reduzida |
| HUE039334T2 (hu) | 2012-11-27 | 2018-12-28 | Biomarin Pharm Inc | Célzott terápiás lizoszómális enzim fúziós fehérjék és azok alkalmazásai |
| JP6026002B2 (ja) | 2012-11-27 | 2016-11-16 | アルテオジェン インコーポレイテッド | タンパク質とＦｃドメインを融合した融合タンパク質の安定化用組成物 |
| EP2964255B1 (en) | 2013-03-08 | 2020-11-04 | CSL Behring GmbH | Treatment and prevention of remote ischemia-reperfusion injury |
| IL275376B2 (en) | 2013-03-11 | 2024-01-01 | Genzyme Corp | Polypeptides with hyperglycosidic bonds |
| US9546203B2 (en) | 2013-03-14 | 2017-01-17 | Amgen Inc. | Aglycosylated Fc-containing polypeptides with cysteine substitutions |
| JP6538645B2 (ja) | 2013-03-14 | 2019-07-03 | インディアナ ユニバーシティー リサーチ アンド テクノロジー コーポレーションＩｎｄｉａｎａ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ａｎｄ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ | インスリン‐インクレチン複合物 |
| EP2796145B1 (en) | 2013-04-22 | 2017-11-01 | CSL Ltd. | A covalent complex of von willebrand factor and faktor viii linked by a disulphide bridge |
| EP3013366B1 (en) | 2013-06-28 | 2021-08-25 | CSL Behring GmbH | Combination therapy using a factor xii inhibitor and a c1-inhibitor |
| CN103408669B (zh) * | 2013-08-01 | 2016-01-20 | 江苏泰康生物医药有限公司 | Glp-1类似物融合蛋白，及其制备方法和用途 |
| CN104592381A (zh) * | 2013-10-31 | 2015-05-06 | 江苏万邦生化医药股份有限公司 | 一种利拉鲁肽中间体多肽的制备方法 |
| WO2015138278A1 (en) | 2014-03-11 | 2015-09-17 | Novartis Ag | Methods of treating metabolic disorders associated with lipodystrophies and defects in insulin production or signaling |
| CN116333148A (zh) | 2014-03-19 | 2023-06-27 | 建新公司 | 靶向模块的位点特异性糖工程化 |
| AU2015242657B2 (en) * | 2014-03-31 | 2020-05-21 | Hanmi Pharm. Co., Ltd. | Method for improving solubility of protein and peptide by using immunoglobulin Fc fragment linkage |
| AU2015276089B2 (en) | 2014-06-18 | 2021-03-18 | Csl Behring Gmbh | Therapy using a Factor XII inhibitor in a neurotraumatic disorder |
| DK3164150T3 (da) | 2014-07-02 | 2021-02-08 | CSL Behring Lengnau AG | Modificeret von willebrand-faktor |
| CN114133456A (zh) | 2014-07-21 | 2022-03-04 | 德里尼亚公司 | 选择性地活化调节性t细胞用于治疗自身免疫病的分子 |
| PL3482766T3 (pl) | 2014-08-11 | 2020-11-16 | Delinia, Inc. | Modyfikowane warianty il-2, które selektywnie aktywują limfocyty t regulatorowe do leczenia chorób autoimmunologicznych |
| CN108271356A (zh) | 2014-09-24 | 2018-07-10 | 印第安纳大学研究及科技有限公司 | 肠降血糖素-胰岛素缀合物 |
| CN104293834B (zh) * | 2014-10-11 | 2018-03-23 | 上海兴迪金生物技术有限公司 | GLP‑1或其类似物与抗体Fc片段融合蛋白的制备方法 |
| MX2017007458A (es) | 2014-12-23 | 2017-08-10 | Novo Nordisk As | Derivados del factor 21 de crecimiento de fibroblastos (fgf21) y sus usos. |
| KR101825048B1 (ko) * | 2014-12-31 | 2018-02-05 | 주식회사 제넥신 | GLP 및 면역글로불린 하이브리드 Fc 융합 폴리펩타이드 및 이의 용도 |
| TN2017000432A1 (en) | 2015-04-10 | 2019-04-12 | Amgen Inc | Interleukin-2 muteins for the expansion of t-regulatory cells |
| AR105616A1 (es) | 2015-05-07 | 2017-10-25 | Lilly Co Eli | Proteínas de fusión |
| US10772936B2 (en) | 2015-05-22 | 2020-09-15 | CSL Behring Lengnau AG | Methods for preparing modified von Willebrand factor |
| SG10201910896UA (en) | 2015-05-22 | 2020-01-30 | CSL Behring Lengnau AG | Truncated von willebrand factor polypeptides for treating hemophilia |
| TWI622596B (zh) | 2015-10-26 | 2018-05-01 | 美國禮來大藥廠 | 升糖素受體促效劑 |
| US11136364B2 (en) | 2015-10-28 | 2021-10-05 | Yuhan Corporation | Dual function proteins comprising FGF21 mutant protein and pharmaceutical composition comprising same |
| EP3744731A1 (en) | 2015-10-28 | 2020-12-02 | Yuhan Corporation | Long-acting fgf21 fusion proteins and pharmaceutical composition comprising same |
| KR20180108602A (ko) | 2015-12-23 | 2018-10-04 | 암젠 인크 | 위 억제 펩티드 수용체 (gipr)에 대한 결합 단백질을 glp-1 효능제와 조합하여 사용하여 대사 장애를 치료하거나 개선시키는 방법 |
| EP3184149A1 (en) | 2015-12-23 | 2017-06-28 | Julius-Maximilians-Universität Würzburg | Soluble glycoprotein v for treating thrombotic diseases |
| KR20180098404A (ko) | 2016-01-07 | 2018-09-03 | 체에스엘 베링 리컴비넌트 퍼실리티 아게 | 돌연변이된 폰 빌레브란트 인자 |
| SG10201912498YA (en) | 2016-01-07 | 2020-02-27 | CSL Behring Lengnau AG | Mutated truncated von willebrand factor |
| US20170204154A1 (en) | 2016-01-20 | 2017-07-20 | Delinia, Inc. | Molecules that selectively activate regulatory t cells for the treatment of autoimmune diseases |
| CN109071629A (zh) | 2016-04-06 | 2018-12-21 | 杰特有限公司 | 治疗动脉粥样硬化的方法 |
| CN109071634A (zh) | 2016-04-26 | 2018-12-21 | R.P.谢勒技术有限责任公司 | 抗体偶联物及其制备和使用方法 |
| US10336812B2 (en) | 2016-05-10 | 2019-07-02 | Janssen Biotech, Inc. | GDF15 fusion proteins and uses thereof |
| CN106279437B (zh) | 2016-08-19 | 2017-10-31 | 安源医药科技（上海）有限公司 | 高糖基化人凝血因子viii融合蛋白及其制备方法与用途 |
| WO2018032638A1 (zh) | 2016-08-19 | 2018-02-22 | 安源医药科技（上海）有限公司 | 用于构建融合蛋白的连接肽 |
| CN107759694B (zh) | 2016-08-19 | 2023-01-13 | 安源医药科技（上海）有限公司 | 双特异性抗体及其制备方法与用途 |
| WO2018089420A1 (en) | 2016-11-08 | 2018-05-17 | Delinia, Inc. | Il-2 variants for the treatment of autoimmune diseases |
| BR112019009581A2 (pt) | 2016-11-10 | 2019-10-08 | Yuhan Corp | composição farmacêutica para evitar ou tratar hepatite, fibrose hepática, e cirrose hepática que compreende proteínas de fusão |
| AU2017358861B2 (en) | 2016-11-11 | 2022-02-17 | CSL Behring Lengnau AG | Truncated von Willebrand Factor polypeptides for treating hemophilia |
| EP3538134B1 (en) | 2016-11-11 | 2021-12-29 | CSL Behring Lengnau AG | Truncated von willebrand factor polypeptides for extravascular administration in the treatment or prophylaxis of a blood coagulation disorder |
| EP3351262A1 (en) | 2016-12-30 | 2018-07-25 | Istanbul Universitesi Rektorlugu | Curaglutide for in treatment of prediabetes, diabetes, obesity and metabolic diseases associated thereto |
| JOP20190177A1 (ar) | 2017-01-17 | 2019-07-16 | Amgen Inc | طريقة لعلاج أو تحسين اضطرابات أيضية باستخدام مساعدات مستقبل glp-1 مقترنة بمناهضات لمستقبل ببتيد مثبط معوي (gipr) |
| BR112019021923A2 (pt) | 2017-04-21 | 2020-06-02 | Yuhan Corporation | Método para produzir proteínas de função dupla e suas derivadas |
| ES2963464T3 (es) | 2017-06-01 | 2024-03-27 | Lilly Co Eli | Dulaglutida para el tratamiento de la enfermedad renal crónica |
| WO2018234518A1 (en) | 2017-06-22 | 2018-12-27 | CSL Behring Lengnau AG | MODULATION OF IMMUNOGENICITY OF FVIII BY VWF TRONQUÉ |
| MX2020002977A (es) | 2017-09-22 | 2020-11-06 | Regeneron Pharma | Agonistas de receptor de peptido similar al glucagon tipo 1 y usos de los mismos. |
| EP3713593A2 (en) | 2017-11-21 | 2020-09-30 | Eli Lilly and Company | Methods of using and compositions containing dulaglutide |
| CN111518770B (zh) | 2017-12-19 | 2023-01-06 | 北京吉源生物科技有限公司 | 一种表达glp1和fgf21的干细胞及其用途 |
| US11491235B2 (en) | 2017-12-22 | 2022-11-08 | Kb Biomed Inc. | Oral gene carrier and use thereof |
| WO2019140021A1 (en) | 2018-01-12 | 2019-07-18 | Eli Lilly And Company | Combination therapy |
| US11679143B2 (en) | 2018-02-08 | 2023-06-20 | Sunshine Lake Pharma Co., Ltd. | FGF21 variant, fusion protein and application thereof |
| CN112912095A (zh) | 2018-07-19 | 2021-06-04 | D&D制药技术股份有限公司 | 包括多肽的药物组合物 |
| KR20200135618A (ko) | 2019-05-23 | 2020-12-03 | ㈜ 디앤디파마텍 | 폴리펩티드를 포함하는 비알코올성 지방간 질환의 예방 또는 치료용 약학 조성물 |
| CN110878127B (zh) | 2018-09-06 | 2022-06-28 | 浙江柏拉阿图医药科技有限公司 | 长效重组GLP1-Fc-CD47蛋白及其制备和用途 |
| CN111234000B (zh) * | 2018-11-28 | 2023-05-26 | 鲁南制药集团股份有限公司 | 艾塞纳肽类似物 |
| CN111269312B (zh) * | 2018-12-04 | 2023-05-09 | 鲁南制药集团股份有限公司 | 一种异源融合蛋白质 |
| CN109836486B (zh) * | 2019-01-30 | 2020-09-08 | 北京双因生物科技有限公司 | 成纤维生长因子21变体、其融合蛋白及其用途 |
| JP2022522787A (ja) * | 2019-03-05 | 2022-04-20 | サンシャイン・レイク・ファーマ・カンパニー・リミテッド | ポリペプチド分子及びその適用 |
| EP3934679A1 (en) | 2019-03-08 | 2022-01-12 | Amgen Inc. | Growth differentiation factor 15 combination therapy |
| JP2022525883A (ja) | 2019-03-15 | 2022-05-20 | イーライ リリー アンド カンパニー | 保存製剤 |
| CA3056663C (en) | 2019-04-05 | 2022-10-18 | Jeffrey S. RIESMEYER | Use of dulaglutide in reducing risk of cardiovascular events in patients with type 2 diabetes mellitus |
| SG11202112117TA (en) | 2019-05-17 | 2021-12-30 | Univ Zuerich | Haptoglobin for use in treating an adverse secondary neurological outcome following a haemorrhagic stroke |
| WO2021001522A1 (en) | 2019-07-04 | 2021-01-07 | CSL Behring Lengnau AG | A truncated von willebrand factor (vwf) for increasing the in vitro stability of coagulation factor viii |
| JP2022552323A (ja) | 2019-10-15 | 2022-12-15 | イーライ リリー アンド カンパニー | 組換え操作された、リパーゼ／エステラーゼ欠損哺乳動物細胞株 |
| WO2021094344A1 (en) | 2019-11-11 | 2021-05-20 | CSL Behring Lengnau AG | Polypeptides for inducing tolerance to factor viii |
| CN115322794A (zh) | 2020-01-11 | 2022-11-11 | 北京质肽生物医药科技有限公司 | Glp-1和fgf21的融合蛋白的缀合物 |
| US11981718B2 (en) | 2020-05-27 | 2024-05-14 | Ampsource Biopharma Shanghai Inc. | Dual-function protein for lipid and blood glucose regulation |
| MX2023002293A (es) | 2020-08-24 | 2023-05-19 | Univ Pennsylvania | Vectores virales que codifican fusiones de agonistas del receptor de glp-1 y usos de estos en el tratamiento de enfermedades metabólica. |
| CN114106194B (zh) * | 2020-08-31 | 2024-01-16 | 中国科学院天津工业生物技术研究所 | 一种用于治疗糖尿病和/或肥胖症的融合蛋白 |
| CA3198740A1 (en) | 2020-11-20 | 2022-05-27 | John Roberts | Method for treating antibody-mediated rejection |
| CN114685644A (zh) | 2020-12-29 | 2022-07-01 | 苏州康宁杰瑞生物科技有限公司 | 一种人glp-1多肽变体及其应用 |
| EP4284407A1 (en) | 2021-02-01 | 2023-12-06 | CSL Behring AG | Method of treating or preventing an adverse secondary neurological outcome following a haemorrhagic stroke |
| CA3217518A1 (en) | 2021-05-07 | 2022-11-10 | Rebecca Butcher | Expression system for producing a recombinant haptoglobin (hp) beta chain |
| TW202317607A (zh) | 2021-07-06 | 2023-05-01 | 大陸商蘇州康寧杰瑞生物科技有限公司 | 融合蛋白及其應用 |
| US20230374045A1 (en) | 2022-05-18 | 2023-11-23 | Protomer Technologies Inc. | Aromatic boron-containing compounds and related insulin analogs |
| CN114774496B (zh) * | 2022-06-21 | 2022-10-04 | 北京惠之衡生物科技有限公司 | 一种高密度发酵制备glp-1类似物的方法 |
| WO2024047219A1 (en) | 2022-09-02 | 2024-03-07 | Csl Behring Ag | Haptoglobin for use in treating or preventing exaggerated erectile response or erectile dysfunction |
| WO2024064842A1 (en) | 2022-09-21 | 2024-03-28 | Regeneron Pharmaceuticals, Inc. | Methods of treating obesity, diabetes, and liver dysfunction |
| WO2024068848A1 (en) | 2022-09-28 | 2024-04-04 | Zealand Pharma A/S | Methods for treating obesity |
Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2002046227A2 (en) * | 2000-12-07 | 2002-06-13 | Eli Lilly And Company | Glp-1 fusion proteins |
Family Cites Families (32)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4399216A (en) | 1980-02-25 | 1983-08-16 | The Trustees Of Columbia University | Processes for inserting DNA into eucaryotic cells and for producing proteinaceous materials |
| NZ201705A (en) | 1981-08-31 | 1986-03-14 | Genentech Inc | Recombinant dna method for production of hepatitis b surface antigen in yeast |
| US4943529A (en) | 1982-05-19 | 1990-07-24 | Gist-Brocades Nv | Kluyveromyces as a host strain |
| AU3145184A (en) | 1983-08-16 | 1985-02-21 | Zymogenetics Inc. | High expression of foreign genes in schizosaccharomyces pombe |
| US4879231A (en) | 1984-10-30 | 1989-11-07 | Phillips Petroleum Company | Transformation of yeasts of the genus pichia |
| GB8610600D0 (en) | 1986-04-30 | 1986-06-04 | Novo Industri As | Transformation of trichoderma |
| JP3101690B2 (ja) | 1987-03-18 | 2000-10-23 | エス・ビィ・２・インコーポレイテッド | 変性抗体の、または変性抗体に関する改良 |
| US5010182A (en) | 1987-07-28 | 1991-04-23 | Chiron Corporation | DNA constructs containing a Kluyveromyces alpha factor leader sequence for directing secretion of heterologous polypeptides |
| AU4005289A (en) | 1988-08-25 | 1990-03-01 | Smithkline Beecham Corporation | Recombinant saccharomyces |
| FR2646437B1 (fr) | 1989-04-28 | 1991-08-30 | Transgene Sa | Nouvelles sequences d'adn, leur application en tant que sequence codant pour un peptide signal pour la secretion de proteines matures par des levures recombinantes, cassettes d'expression, levures transformees et procede de preparation de proteines correspondant |
| EP0394538B1 (en) | 1989-04-28 | 1996-10-16 | Rhein Biotech Gesellschaft Für Neue Biotechnologische Prozesse Und Produkte Mbh | A yeast cell of the genus schwanniomyces |
| EP0402226A1 (en) | 1989-06-06 | 1990-12-12 | Institut National De La Recherche Agronomique | Transformation vectors for yeast yarrowia |
| FR2649120B1 (fr) | 1989-06-30 | 1994-01-28 | Cayla | Nouvelle souche et ses mutants de champignons filamenteux, procede de production de proteines recombinantes a l'aide de ladite souche et souches et proteines obtenues selon ce procede |
| NZ258697A (en) | 1992-11-13 | 1996-03-26 | Immunex Corp | Elk-l polypeptide, coding sequence and vector therefor |
| MX9700764A (es) * | 1994-07-29 | 1997-05-31 | Smithkline Beecham Plc | Compuestos novedosos. |
| GB9511935D0 (en) | 1995-06-13 | 1995-08-09 | Smithkline Beecham Plc | Novel compound |
| US5723125A (en) | 1995-12-28 | 1998-03-03 | Tanox Biosystems, Inc. | Hybrid with interferon-alpha and an immunoglobulin Fc linked through a non-immunogenic peptide |
| US6750334B1 (en) | 1996-02-02 | 2004-06-15 | Repligen Corporation | CTLA4-immunoglobulin fusion proteins having modified effector functions and uses therefor |
| US6277819B1 (en) | 1996-08-30 | 2001-08-21 | Eli Lilly And Company | Use of GLP-1 or analogs in treatment of myocardial infarction |
| US6006753A (en) | 1996-08-30 | 1999-12-28 | Eli Lilly And Company | Use of GLP-1 or analogs to abolish catabolic changes after surgery |
| UA65549C2 (uk) | 1996-11-05 | 2004-04-15 | Елі Ліллі Енд Компані | Спосіб регулювання ожиріння шляхом периферійного введення аналогів та похідних glp-1 (варіанти) та фармацевтична композиція |
| US6190909B1 (en) | 1997-04-17 | 2001-02-20 | Millennium Pharmaceuticals, Inc. | TH2-specific gene |
| SE9802080D0 (sv) | 1998-06-11 | 1998-06-11 | Hellstroem | Pharmaceutical composition for the treatment of functional dyspepsia and/or irritable bowel syndrome and new use of substances therein |
| WO2000007617A1 (en) | 1998-07-31 | 2000-02-17 | Novo Nordisk A/S | Use of glp-1 and analogues for preventing type ii diabetes |
| MY155270A (en) | 1998-09-24 | 2015-09-30 | Lilly Co Eli | Use of glp-1 or analogs in treatment of stroke |
| US6376653B1 (en) | 1998-09-28 | 2002-04-23 | Smithkline Beecham Plc | Tie2 antagonist antibodies |
| PT1180121E (pt) | 1999-05-17 | 2004-03-31 | Conjuchem Inc | Peptidos insulinotropicos de longa duracao |
| HU229108B1 (en) | 2000-06-16 | 2013-09-30 | Lilly Co Eli | Glucagon-like peptide-1 analogs |
| US6992174B2 (en) | 2001-03-30 | 2006-01-31 | Emd Lexigen Research Center Corp. | Reducing the immunogenicity of fusion proteins |
| US6900292B2 (en) | 2001-08-17 | 2005-05-31 | Lee-Hwei K. Sun | Fc fusion proteins of human erythropoietin with increased biological activities |
| DK1463751T3 (da) | 2001-12-21 | 2013-08-26 | Human Genome Sciences Inc | Albuminfusionsproteiner. |
| EA008831B1 (ru) * | 2003-06-12 | 2007-08-31 | Эли Лилли Энд Компани | Слитые белки аналогов glp-1 |
-
2004
- 2004-06-10 EA EA200600015A patent/EA008831B1/ru active Protection Beyond IP Right Term
- 2004-06-10 EP EP04752589A patent/EP1641823B1/en active Active
- 2004-06-10 SI SI200431776T patent/SI1641823T1/sl unknown
- 2004-06-10 NZ NZ543292A patent/NZ543292A/en unknown
- 2004-06-10 KR KR1020057023668A patent/KR100758755B1/ko active Protection Beyond IP Right Term
- 2004-06-10 JP JP2006533197A patent/JP4629047B2/ja active Active
- 2004-06-10 AU AU2004251145A patent/AU2004251145C1/en active Active
- 2004-06-10 WO PCT/US2004/015595 patent/WO2005000892A2/en active Application Filing
- 2004-06-10 UA UAA200511830A patent/UA87458C2/ru unknown
- 2004-06-10 DK DK04752589.4T patent/DK1641823T3/da active
- 2004-06-10 EP EP11166548A patent/EP2368909A1/en not_active Withdrawn
- 2004-06-10 PL PL04752589T patent/PL1641823T3/pl unknown
- 2004-06-10 AT AT04752589T patent/ATE525395T1/de active
- 2004-06-10 MX MXPA05013565A patent/MXPA05013565A/es active IP Right Grant
- 2004-06-10 ES ES04752589T patent/ES2371072T3/es active Active
- 2004-06-10 BR BRPI0411132A patent/BRPI0411132B8/pt active IP Right Grant
- 2004-06-10 CA CA2528591A patent/CA2528591C/en active Active
- 2004-06-10 PT PT04752589T patent/PT1641823E/pt unknown
- 2004-06-10 CN CN201010508567.1A patent/CN101974090B/zh active Active
- 2004-06-10 US US10/558,627 patent/US7452966B2/en active Active
- 2004-06-10 CN CN200480015953XA patent/CN1802386B/zh active Active
- 2004-06-11 TW TW093116970A patent/TW200507870A/zh unknown
- 2004-06-11 AR ARP040102037A patent/AR044776A1/es unknown
-
2005
- 2005-11-14 IL IL171926A patent/IL171926A/en active IP Right Grant
-
2008
- 2008-10-31 US US12/262,832 patent/US8273854B2/en active Active
-
2011
- 2011-04-06 HK HK11103498.8A patent/HK1149566A1/xx unknown
- 2011-10-05 HR HR20110714T patent/HRP20110714T1/hr unknown
- 2011-11-03 CY CY20111101059T patent/CY1111991T1/el unknown
-
2015
- 2015-01-30 FR FR15C0010C patent/FR15C0010I2/fr active Active
- 2015-01-30 CY CY2015002C patent/CY2015002I2/el unknown
- 2015-02-02 BE BE2015C007C patent/BE2015C007I2/fr unknown
- 2015-02-03 LT LTPA2015007C patent/LTC1641823I2/lt unknown
- 2015-04-20 HU HUS1500024C patent/HUS1500024I1/hu unknown
Patent Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2002046227A2 (en) * | 2000-12-07 | 2002-06-13 | Eli Lilly And Company | Glp-1 fusion proteins |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2011043530A1 (ko) * | 2009-10-09 | 2011-04-14 | (주)알테오젠 | Ｇｌｐ-1 유사체의 융합체, 및 이를 유효성분으로 함유하는 당뇨병의 예방 또는 치료용 조성물 |
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| KR100758755B1 (ko) | Ｇｌｐ-1 유사체 융합 단백질 | |
| EP1641483B1 (en) | Fusion proteins | |
| KR100942864B1 (ko) | Ｇｌｐ-1 융합 단백질 | |
| WO2011153965A1 (zh) | Exendin-4及其类似物的融合蛋白，其制备和应用 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| A201 | Request for examination | ||
| E902 | Notification of reason for refusal | ||
| E701 | Decision to grant or registration of patent right | ||
| GRNT | Written decision to grant | ||
| FPAY | Annual fee payment |
Payment date: 20120830 Year of fee payment: 6 |
|
| FPAY | Annual fee payment |
Payment date: 20130830 Year of fee payment: 7 |
|
| FPAY | Annual fee payment |
Payment date: 20140828 Year of fee payment: 8 |
|
| FPAY | Annual fee payment |
Payment date: 20150630 Year of fee payment: 9 |
|
| A101 | Application to extend term of patent right by permit | ||
| FPAY | Annual fee payment |
Payment date: 20160629 Year of fee payment: 10 |
|
| FPAY | Annual fee payment |
Payment date: 20180628 Year of fee payment: 12 |
|
| FPAY | Annual fee payment |
Payment date: 20190624 Year of fee payment: 13 |