JPH10512287A

JPH10512287A - 生分解性高分子ミセル−タイプ薬物組成物およびその製造方法

Info

Publication number: JPH10512287A
Application number: JP9512608A
Authority: JP
Inventors: キム、スン・チュル; チャン、ユン・オク; ソン、イン・スク; パイ、チャウル・ミン
Original assignee: サム・ヤン・カンパニー・リミテッド
Priority date: 1995-09-21
Filing date: 1996-09-21
Publication date: 1998-11-24
Anticipated expiration: 2016-09-21
Also published as: KR0180334B1; EP0854731B1; AU7098096A; KR970014759A; EP0854731A1; US6322805B1; JP3634377B2; DE69625921T2; CN1214818C; WO1997010849A1; ES2188787T3; CA2231886A1; CA2231886C; CN1197396A; AU699988B2; MX9802156A; DE69625921D1

Abstract

(57)【要約】本発明は、疎水性ブロックおよび親水性ブロックを有するブロック共重合体を具備するミセル薬物デリバリーシステムに関し、ここで疎水性ブロックは、ポリラクチド、ポリグリコリド、ポリ(ラクチド−グリコリド)、ポリカプロラクトンおよびこれらの誘導体からなる群から選ばれた生分解性疎水性高分子であり、親水性高分子はポリ（アルキレンオキシド）である。疎水性薬物を簡単な方法を用いて前記ミセル内に容易に封入し、治療学的に有効な薬物組成物が得られる。

Description

【発明の詳細な説明】共重合体ミセル薬物組成物およびその製造方法発明の分野本発明は、薬物デリバリーシステムに関し、さらに詳細には、疎水性薬物と親水性高分子成分および疎水性生分解性高分子成分を有するブロック共重合体とからなる高分子ミセル薬物組成物に関する。発明の背景多くの重要な薬物は疎水性であり、水においては制限された溶解性を有する。このような薬物の期待される治療効果を得るためには、通常、可溶化した形態の薬物が患者に投与されなければならない。このような目的のために、補助溶媒、界面活性剤、塩および溶媒化合物のような可溶性形態の薬物、プロドラックのような化学的に修飾された形の薬物、可溶性高分子−薬物複合体、リポソームのような特別な薬物担体などの使用に基づいた、多数の方法が開発された。しかし、前記方法のそれぞれが、一つ以上の固有の問題によって制限され、たとえば、疎水性薬物を可溶化するために界面活性剤ミセルを用いることに基づいた方法は、大部分の界面活性剤が比較的に毒性を有し、また、希釈の際に界面活性剤が沈澱するという問題もある。界面活性剤と関連した前述の問題を解決するために、ヨーロッパ特許公開第０５５２８０２Ａ２号は、親水性成分としてポリ（エチレンオキシド）と疎水性成分として水相で架橋結合して得られる生分解性高分子ブロックを有するミセルとを化学的に固定化することによってミセル状の高分子粒子を製造する方法を開示している。すなわち、化学的に固定化された高分子粒子は、コアを構成する疎水性成分を化学的に架橋結合することによって、安定化された高分子ミセルを模倣するように製造される。しかし、ブロック共重合体の疎水性成分に架橋結合を導入するためには、架橋結合剤、またはUVおよび加熱のような他の手段を過酸化物の存在下、または不在下で使用しなければならない。また、このように架橋結合された高分子粒子の生体適合性または安全性は、これまでには確立されていなかった。界面活性剤と類似した特性を有する生分解性ブロック共重合体ミセルに対する他の研究が報告されたが、特に注目すべきものは、共重合体の特定性質および物性によって安定化されたブロック共重合体ミセル内に疎水性薬物を封入しようとする試みである。たとえば、ヨーロッパ特許公開第０３９７３０７Ａ２号は、親水性成分としてのポリ（エチレンオキシド）および疎水性成分としてのポリ(アミノ酸)、たとえば、ポリアスパラギン酸、ポリグルタミン酸およびポリリジンを含有するＡＢタイプ二元ブロック共重合体のミセルを開示しており、ここで、治療学的に活性な薬物は高分子の疎水性成分に化学的に結合している。しかし、特定の官能基を有する高分子を製造することは困難であり、また、化学的に結合された薬物を有する当該組成物をヒトに用いることが危険である可能性があるという問題もある。ヨーロッパ特許公開第０５８３９５５Ａ２号は、ヨーロッパ特許公開第０３９７３０７Ａ２号に記述された二元ブロック共重合体ミセル内に疎水性薬物を物理的に封入する方法を開示している。したがって、この方法は、ミセルに薬物を化学的に結合させることによって発生し得る安全性の問題を解決している。しかし、ポリ（アミノ酸）部分は免疫反応を誘発する可能性があり、また製剤の製造に有機溶媒を用いることによっても問題が起り得る。さらに、ペプチド結合は体内で酵素によって切断されるため、その中に封入された薬物の放出速度を調節することは難しい。したがって、本発明者らは、前述の問題を有しない改善された薬物デリバリーシステムを開発するために努力した結果、親水性成分としてのポリ（エチレンオキシド）と疎水性成分としてのポリラクチド、ポリカプロラクトン、ポリ(ラクチド−グリコリド)、ポリグリコリドまたはこれらの混合物とからなるブロック共重合体ミセルが、その中に疎水性薬物を物理的に封入することによって、この薬物を可溶化することに非常に効果的であることを偶然発見した。生成したミセル−薬物組成物は、生体内で薬物の持続的放出に適しており、その結果、薬物の治療効果を向上させる。そのような効果は、親水性および疎水性ブロックの分子量および相対的な比率を調節することによって極大化され得る。発明の要約したがって、本発明の目的は、薬学的に有効な薬物組成物の製造に使用し得る疎水性薬物の効果的な担体を提供することである。本発明の一つの側面によって、親水性成分および疎水性成分を有するブロック共重合体のミセルと、前記ミセルに封入された少なくとも一つの疎水性薬物とを具備する高分子ミセル薬物組成物で構成される高分子ミセル薬物組成物が提供されるが、ここで疎水性成分はポリラクチド、ポリグリコリド、ポリ(ラクチド− グリコリド)、ポリカプロラクトンおよびこれらの混合物からなる群から選ばれた生分解性高分子であり、親水性成分はポリ（アルキレンオキシド）である。図面の簡単な説明図１は、ポリラクチド−ポリ（エチレンオキシド）−ポリラクチド三元ブロック共重合体（ＥＬ−３Ｌ−１）のＧＰＣ（ｇｅｌｐｅｒｍｅａｔｉｏｎｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ；ゲル透過クロマトグラフィー、カラム：ＭＴ３−ＭＴ４(Ｗａｔｅｒｓ、米国)、流速：１０ｍｌ／分、溶出剤：テトラヒドロフラン）の結果である。図２は、ポリ（エチレンオキシド）−ポリカプロラクトン二元ブロック共重合体（ＥＣ−２Ｃ−１）のＧＰＣ（ゲル透過クロマトグラフィー、カラム：ＡｓａｈｉｐａｋＧＳ５２０Ｈ、溶出剤：蒸留水）の結果である。図３は、ＥＬ−３Ｌ−２共重合体ミセルに封入されたパクリタクセル(paclita xel)およびサイクロスポリン(cyclosporin)の放出プロフィールを示す。図４は、ＥＬ−２Ｌ−２共重合体ミセルに封入されたパクリタクセルの抗癌活性を示す。発明の詳細な説明本発明の薬物デリバリーシステムは、生分解性高分子から製造されたブロック共重合体ミセルを含み、投与された際、生体内で単純加水分解または酵素の作用によって、毒性のない小分子に分解される。生分解性ブロック共重合体ミセルは平均直径が１０ないし４０ｎｍであり、水に不溶性であるか難溶性である疎水性薬物の注射剤組成物の製造に適合する。本発明のブロック共重合体ミセルは、ポリラクチド(ＰＬＡ)、ポリカプロラクトン(ＰＣＬ)、ポリ（ラクチド−グリコリド）(ＰＬＧＡ)、ポリグリコリド（ＰＧＡ）およびこれらの誘導体のような生分解性疎水性高分子をポリ（アルキレンオキシド）のような親水性高分子と結合させることによって製造できる。疎水性薬物は、本発明のブロック共重合体ミセルによって運搬される際、遥かに効果的に患者に送達され、ミセル内に貯蔵された薬物の持続的な放出が、薬物の治療効果を向上させる。本発明の薬物組成物に用いられるブロック共重合体は下記式（Ｉ）または（II ）を有する高分子であり得る：前記式で、Ｒ₁は、水素またはＣ_1-20アルキル、好ましくは、Ｃ_1-5アルキルであり、ｍは、２より大きい整数、好ましくは、１０ないし３，０００であり、Ｘは、１００以上、好ましくは、３００ないし１００，０００の分子量を有する生分解性疎水性高分子部分であって、好ましくは、ポリラクチド(ＰＬＡ)、ポリカプロラクトン(ＰＣＬ)、ポリ（ラクチド−グリコリド）(ＰＬＧＡ)、ポリグリコリド（ＰＧＡ）およびこれらの誘導体からなる群から選ばれる。本発明の薬物組成物に用いられ得るより好ましいブロック共重合体は、下記式 (III)、(IV)、（Ｖ）および（VI）を有する二元または三元ブロック共重合体である：前記式で、Ｒ₁は、水素またはＣ_1ー20アルキル、好ましくは、Ｃ_1ー5アルキルであり、ｉは、２より大きい整数、好ましくは、２ないし１，５００であり、ｊおよびｋは、独立的に１より大きい整数、好ましくは、２ないし１，０００であり、ｌは、２より大きい整数、好ましくは、２ないし７００であり、ｍは、前に定義した通りであり、ｎおよびｐは、独立的に１より大きい整数、好ましくは、２ないし５００である。前述したように、本発明のブロック共重合体の好ましい親水性成分としてはポリ（エチレンオキシド）が用いられ、本発明のブロック共重合体の疎水性成分は次のような構造を有するポリラクチド、ポリグリコリド、ポリ(ラクチドグリコリド)、ポリカプロラクトン、これらの誘導体などを含み得る：前記式で、Ｒ₂およびＲ₃は、独立的にＨまたはＣＨ₃であり、ｘおよびｙは、独立的に２より大きい整数であり、ｎは、２より大きい整数、好ましくは２ないし５００である。二元または三元ブロック共重合体（ＡＢタイプおよびＡＢＡタイプ）は、下記式（IX）および（Ｘ）に示したように、ポリ（エチレンオキシド）(ＰＥＯ)親水性成分（Ｂ）とポリラクチド（ＰＬＡ）疎水性成分（Ａ）で構成され得る：前記式で、ｉ、ｊ、ｋおよびｍは前述した通りである。本発明の二元または三元ブロック共重合体は開環重合によって製造され得る。たとえば、親水性成分（Ｂ）としてのＰＥＯと疎水性成分（Ａ）としてのＰＬＡとからなるＡＢタイプ二元ブロック共重合体は、一方の末端にメトキシ基を有し、他方の末端にヒドロキシ基を有するＰＥＯを用いて製造できる。ＡＢＡタイプ三元ブロック共重合体は、両方末端にヒドロキシ基を有するＰＥＯを用いて製造し得る。親水性成分と疎水性成分の比率を調節することによって、水に対するミセルの溶解度を調節できる。本発明のブロック共重合体ミセル内に封入され得る適当な疎水性薬物は、パクリタクセル(ｐａｃｌｉｔａｘｅｌ)、ドキソルビシン(ｄｏｘｏｒｕｂｉｃｉｎ) 、テニポサイド(ｔｅｎｉｐｏｓｉｄｅ)、エトポサイド(ｅｔｏｐｏｓｉｄｅ)、ダウノマイシン(ｄａｕｎｏｍｙｃｉｎ)、メトトレキサート(ｍｅｔｈｏｔｒｅｘａｔｅ)、マイトマイシンＣ（ｍｉｔｏｍｙｃｉｎＣ）などの抗癌剤；インドメタシン(ｉｎｄｏｍｅｔｈａｃｉｎ)、イブプロフェン（ｉｂｕｐｒｏｆｅｎ）などの消炎鎮痛剤；サイクロスポリン（ｃｙｃｌｏｓｐｏｒｉｎｅ）などの免疫抑制剤；ビフェニルジメチルカルボキシレートなどの肝臓疾患治療剤；ホルモン剤；抗生剤；化学療法剤；代謝性医薬品；消化器疾患治療剤；呼吸器疾患治療剤；抗アレルギー薬；中枢神経系疾患治療剤；末梢性疾患治療剤；循環器疾患治療剤などであるが、これらに限定されない。前述した一つ以上の薬物を、ブロック共重合体ミセルに封入するためには、下記の種々の方法を単独または組み合わせて使用できる。（１）攪拌ブロック共重合体水溶液に薬物を入れ、２ないし２４時間攪拌して薬物を含有するミセルを得る。（２）加熱薬物とブロック共重合体水溶液を混合し、４０ないし１２０℃で５分ないし２４時間攪拌した後、攪拌しながら常温に冷却して薬物を含有するミセルを得る。（３）超音波処理薬物とブロック共重合体水溶液の混合物を１秒ないし１時間超音波処理した後、室温で攪拌して薬物を含有するミセルを得る。（４）溶媒蒸発薬物を有機溶媒に溶かし、ブロック共重合体水溶液に加える。次いで、攪拌しながら有機溶媒を徐々に蒸発させた後、溶けなかった残在薬物を濾過して除く。（５）透析薬物を有機溶媒に溶かした溶液にブロック共重合体を加え、混合物を緩衝液に対して透析した後、水に対して透析する。溶媒蒸発法または透析法において、薬物を溶かすための適当な有機溶媒は、ジメチルホルムアミド(ＤＭＦ)、ジメチルスルホキシド(ＤＭＳＯ)、ジオキサン、クロロホルム、ｎ−ヘキサン、トルエン、ジクロロメタン、酢酸エチルなどである。本発明のブロック共重合体は、実施例の表１に示すように平均の大きさが１０ −６０ｎｍの安定なミセルを形成する。このような大きさ範囲のミセルは注射製剤用として適当であり、ＥＰＲ効果を示しながらＲＥＳ吸収を避けることができる。ミセル安定性は、図２に示すゲル透過クロマトグラフィーから分かるように非常に優れている。その上、疎水性薬物は、前述した方法以外の方法によって本発明のブロック共重合体ミセルに封入され得るが、ここで封入された薬物の量および物理的状態は、ブロック共重合体の組成および高分子ミセルを製造する方法によって大きく変わる（表１）。疎水性成分の緻密なコアに含有された薬物は生体内で調節された方式で放出されるため、本発明の組成物は、通常の製剤化技術には適さない薬物を製剤化するのに一部的に適する。たとえば、パクリタクセルは優れた抗癌剤であるが、主にこの薬物の低い水溶性のために製剤化することが難しい。このような理由で、補助薬として、いくつかの深刻な副作用を起こし得るクレモフォア（ｃｒｅｍｏｐｈｏｒ）ＥＬを含有するパクリタクセル製剤が現在市販されている。前記特定の製剤は他の問題も有している：すなわち、この製剤は微細な沈澱物を形成する傾向があるので注入ラインにフィルターを取付ける必要があり；また、投与に必要な時間が約２４時間と長い。これとは対照的に、本発明のブロック共重合体ミセルはパクリタクセルの溶解度を大きく向上させ、得られたミセル−パクリタクセル組成物は本質的に無毒性であり、高い抗癌治療活性を示す。表２から分かるように、特定のブロック共重合体に封入されたパクリタクセルの量が２５．１６±３．２７％である反面、サイクロスポリンの場合は２３．１３±２．３１％であった（表３）。さらに、本発明のミセル−パクリタクセル組成物は、封入されたパクリタクセルの８５％を４８時間にわたって持続的に放出しながら、癌細胞の成長を効果的に防止した。ミセル−サイクロスポリン免疫抑制組成物の場合には、活性成分の４０％が４８時間にわたって持続的に放出された。本発明の生分解性二元ブロックまたは三元ブロック共重合体は、疎水性薬物を封入し得る安定なミセルを形成することができる。従って、本発明は、疎水性薬物の通常の製剤より治療においてさらに効果的であり、毒性学的には遥かに安全なミセル−薬物組成物を提供する。下記製造例および実施例は本発明のある側面を詳細に説明するのみであり、いずれかの面でも本発明を制限すると解釈されてはならない。製造例１：ポリラクチド−ポリ（エチレンオキシド）−ポリラクチド三元ブロック共重合体（ＥＬ−３Ｌ−０）の合成２ｇのポリ（エチレングリコール）（Ｍｗ３４００）を減圧下、１２０℃で２時間乾燥し、これに、触媒として０．５９ｍｇのオクタン酸第一スズ（ｓｔａｎｎｏｕｓｏｃｔｏａｔｅ：０．１％のＤ，Ｌ−ラクチドに該当する量）を加えた。生成した混合物を１００℃で２０ないし３０分間減圧して揮発性化合物を除き、０．５８８２ｇのＤ，Ｌ−ラクチドと混合し、混合物を１３０℃で１３時間反応させた。このようにして得られたブロック共重合体を、１０ｍｌのクロロホルムに溶かした後、攪拌しながら過剰量のジエチルエーテルを加えて高分子の沈澱を誘導した。沈澱物を濾過し、ジエチルエーテルで数回洗浄した後、３０℃で一日間減圧乾燥してＥＬ−３Ｌ−０と命名された、ポリラクチド−ポリ（エチレンオキシド）−ポリラクチド三元ブロック共重合体（ＰＬＡ−ＰＥＯ−ＰＬＡ）２．４６ｇを得た（収率９３％）。このブロック共重合体の特性を表１に示し、ゲル透過クロマトグラフィー結果を図１に示す。製造例２：ポリラクチド−ポリ（エチレンオキシド）−ポリラクチド三元ブロック共重合体（ＥＬ−３Ｌ−１）の合成２ｇのポリ（エチレングリコール）（Ｍｗ３４００）および１．１８ｇのＤ，Ｌ−ラクチドを用いることを除いては、製造例１の手順を繰返してＥＬ−３Ｌ− １と命名されたポリラクチド−ポリ（エチレンオキシド）−ポリラクチド三元ブロック共重合体（ＰＬＡ−ＰＥＯ−ＰＬＡ）２．９５ｇを得た（収率９３％）。このブロック共重合体の特性を表１に示す。製造例３：ポリラクチド−ポリ（エチレンオキシド）−ポリラクチド三元ブロック共重合体（ＥＬ−３Ｌ−２）の合成２ｇのポリ（エチレングリコール）（Ｍｗ３４００）および１．７６ｇのＤ，Ｌ−ラクチドを用いることを除いては、製造例１の手順を繰返してＥＬ−３Ｌ− ２と命名されたポリラクチド−ポリ（エチレンオキシド）−ポリラクチド三元ブロック共重合体（ＰＬＡ−ＰＥＯ−ＰＬＡ）３．４６ｇを得た(収率８９％)。このブロック共重合体の特性を表１に示す。製造例４：ポリラクチド−ポリ（エチレンオキシド）−ポリラクチド三元ブロック共重合体（ＥＬ−３Ｌ−３）の合成２ｇのポリ（エチレングリコール）（Ｍｗ３４００）および２．３５ｇのＤ，Ｌ−ラクチドを用いることを除いては、製造例１の手順を繰返してＥＬ−３Ｌ− ３と命名されたポリラクチド−ポリ（エチレンオキシド）−ポリラクチド三元ブロック共重合体（ＰＬＡ−ＰＥＯ−ＰＬＡ）３．８７ｇを得た(収率９３％)。このブロック共重合体の特性を表１に示す。製造例５：ポリ（エチレンオキシド）−ポリラクチド二元ブロック共重合体（ＥＬ−２Ｌ−０）の合成２ｇのモノメトキシポリ（エチレングリコール）（Ｍｗ２０００）および０．５ｇのＤ，Ｌ−ラクチドを用いることを除いては、製造例１の手順を繰返してＥＬ−２Ｌ−０と命名されたポリ（エチレンオキシド）−ポリラクチド二元ブロック共重合体（ＰＥＯ−ＰＬＡ）２．２８ｇを得た(収率９１％)。このブロック共重合体の特性を表１に示す。製造例６：ポリ（エチレンオキシド）−ポリラクチド二元ブロック共重合体（ＥＬ−２Ｌ−１）の合成２ｇのモノメトキシポリ（エチレングリコール）（Ｍｗ２０００）および１．０ｇのＤ，Ｌ−ラクチドを用いることを除いては、製造例１の手順を繰返してＥＬ−２Ｌ−１と命名されたポリ（エチレンオキシド）−ポリラクチド二元ブロック共重合体（ＰＥＯ−ＰＬＡ）２．７０ｇを得た(収率９０％)。このブロック共重合体の特性を表１に示す。製造例７：ポリ（エチレンオキシド）−ポリラクチド二元ブロック共重合体（ＥＬ−２Ｌ−２）の合成２ｇのモノメトキシポリ（エチレングリコール）（Ｍｗ２０００）および１．５ｇのＤ，Ｌ−ラクチドを用いることを除いては、製造例１の手順を繰返してＥＬ−２Ｌ−１と命名されたポリ（エチレンオキシド）−ポリラクチド二元ブロック共重合体（ＰＥＯ−ＰＬＡ）３．２２ｇを得た(収率９２％)。このブロック共重合体の特性を表１に示す。製造例８：ポリカプロラクトン−ポリ（エチレンオキシド）−ポリカプロラクトン三元ブロック共重合体（ＥＣ−３Ｃ−１）の合成２ｇのポリ（エチレングリコール）（Ｍｗ３４００）および１．１７６５ｇのカプロラクトンを用いることを除いては、製造例１の手順を繰返してＥＣ−３Ｃ −１と命名されたポリカプロラクトン−ポリ（エチレンオキシド）−ポリカプロラクトン三元ブロック共重合体（ＰＣＬ−ＰＥＯ−ＰＣＬ）２．８６ｇを得た( 収率９０％)。このブロック共重合体の特性を表１に示す。製造例９：ポリ（エチレンオキシド）−ポリカプロラクトン二元ブロック共重合体（ＥＣ−２Ｃ−１）の合成２ｇのモノメトキシポリ（エチレングリコール）(Ｍｗ２０００)および１．５ｇのカプロラクトンを用いることを除いては、製造例１の手順を繰返してＥＣ− ２Ｃ−１と命名された、ポリ（エチレンオキシド）−ポリカプロラクトン二元ブロック共重合体（ＰＥＯ−ＰＣＬ）３．２ｇを得た(収率９１％)。このブロック共重合体の特性を表１に示す。製造例１０：高分子ミセルの製造製造例１ないし９で製造した各ブロック共重合体を、蒸留水または０．１Ｍリン酸塩緩衝溶液（ｐＨ７．４）に０．０１ないし５％（ｗ／ｖ）の濃度で溶かして高分子ミセル溶液を得た。動的光散乱法によって測定された各高分子ミセル溶液内のミセルの大きさは表１に示したように１０ないし６０ｎｍの範囲内であった。この大きさの高分子ミセルは薬物担体としての使用に適切である。高分子ミセルの形成は図２においてゲル透過クロマトグラフィーによって確認した。【表１】実施例１：パクリタクセルを含有するブロック共重合体ミセルの製造（１）攪拌によるＥＬ−３Ｌ−２、ＥＬ−２Ｌ−２およびＥＣ−３Ｃ−１内へのパクリタクセルの封入製造例３、７および８で合成したブロック共重合体ＥＬ−３Ｌ−２、ＥＬ−２Ｌ−２およびＥＣ−３Ｃ−１各々を１０ｍｇずつ３ｍｌの蒸留水に溶かし、水に極めて難溶性である抗癌剤パクリタクセル５ｍｇをこれに加えた後、２時間攪拌した。生成した溶液を０．４５μｍメンブランフィルターで濾過して不溶パクリタクセルを除き、パクリタクセルを含有するブロック共重合体ミセルの透明な溶液を得た。高分子ミセルに封入されたパクリタクセルの量をＨＰＬＣ（カラム：Ｃｕｒｏｓｉｌ−ＰＦＰ(４．６＊２５０ｍｍ、５μｍ粒子大、Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ、アメリカ)、移動相：アセトニトリル／蒸留水＝４５：５５％(ｖ／ｖ) ）を用いて測定した。その結果を表２に示す。（２）溶媒蒸発による封入製造例３で製造したＥＬ−３Ｌ−２を蒸留水に溶かし、パクリタクセル３ｍｇを含有するクロロホルム溶液をこれに徐々に加えた。生成した混合物を室温で一晩攪拌してクロロホルムを蒸発させた。生成した溶液を０．４５μｍのメンブランフィルターで濾過して不溶パクリタクセルを除き、パクリタクセルを含有するブロック共重合体ミセルの透明な溶液を得た。製造例７および８で合成したＥＬ −２Ｌ−２およびＥＣ−３Ｃ−１を用いて前記手順を繰返した。その結果を表２に示す。（３）透析による封入５ｍｇのパクリタクセルを５ｍｌのＤＭＦに溶かした。生成した溶液に製造例３で製造したＥＬ−３Ｌ−２を加え、混合物を一晩攪拌した。混合物を透析膜( ＭＷＣＯ：１２０００)を用いて、０．１Ｍリン酸塩緩衝溶液（ｐＨ７．４）で５時間透析した後、蒸留水で５時間透析した。透析した溶液を０．４５μｍメンブランフィルターで濾過して、パクリタクセルを含有するブロック共重合体ミセルの透明な溶液を得た。製造例７および８で合成したＥＬ−２Ｌ−２およびＥＣ− ３Ｃ−１を用いて前記手順を繰返した。その結果を表２に示す。前記実験は、２５．１６±３．２３％の量のパクリタクセルが、本発明の高分子ミセルに容易に封入され得ることを示す。【表２】実施例２：サイクロスポリンを含有するブロック共重合体ミセルの製造（１）溶媒蒸発法による封入水に極めて難溶性である免疫抑制剤サイクロスポリンＡ１０ｍｇを、１ｍｌのＮ，Ｎ−ジメチルアヤトアミドに溶かし、２０ｍｌの蒸留水中にＥＬ−３Ｌ− ２２０ｍｇを含有する溶液に徐々に加えた。生成した混合物を室温で一晩攪拌してＮ，Ｎ−ジメチルアセトアミドを蒸発除去した後、生成した溶液を０．４５μ ｍメンブランフィルターで濾過して、サイクロスポリンを含有するブロック共重合体ミセルの透明な溶液を得た。製造例９で合成したＥＣ−２Ｃ−１を用いて前記手順を繰返した。その結果を表３に示す。（２）透析による封入１０ｍｇのサイクロスポリンＡを５ｍｌのＤＭＦに溶かした。生成した溶液に製造例３で製造したＥＬ−３Ｌ−２２０ｍｇを加え、混合物を一晩攪拌した。混合物を透析膜（ＭＷＣＯ：１２０００）を用いて０．１Ｍリン酸塩緩衝溶液（ｐＨ７．４）で５時間透析した後、蒸留水で５時間透析した。透析した溶液を０．４５μｍメンブランフィルターで濾過して、パクリタクセルを含有するブロック共重合体ミセルの透明な溶液を得た。製造例９で合成したＥＣ−２Ｃ−１を用いて前記手順を繰返した。その結果を表３に示す。前記実験は、２３．１３±２．３１％の量のサイクロスポリンが本発明の高分子ミセルに容易に封入され得ることを示す。【表３】実施例３：放出試験実施例１および２で製造したパクリタクセル−およびサイクロスポリン−含有ＥＬ−３Ｌ−２共重合体ミセル溶液の各５ｍｌを透析袋（ＭＷＣＯ：１２，０００）に入れた。透析袋を１１のＨ₂Ｏに入れ、ミセルから放出されたパクリタクセルまたはサイクロスポリンの量を経時測定した。図３から分かるように、封入された薬物は持続的な放出プロフィールを示す。実施例４：毒性試験および効果試験１０⁶ Ｐ３８８白血病細胞を、体重２２ないし２５ｇの雌性ＢＤＦＩマウス６匹ずつからなる三つのグループのマウス各々の腹腔内に注入した。白血病細胞を注入してから２４時間後、グループＩの各マウスにベヒクル(５％ＤＭＳＯおよび５％クレモフォア食塩溶液)１２．５ｍｇ／ｋｇを２４時間間隔で４回腹腔内注入し、グループIIの各マウスは、同一な条件の下でパクリタクセルおよびベヒクル（５％ＤＭＳＯおよび５％クレモフォア食塩溶液）で同様に処理した。一方、グループIIIの各マウスには、実施例１（２）で製造したパクリタクセル−含有ＥＬ−２Ｌ−２共重合体ミセル溶液２５ｍｇ／ｋｇを、白血病細胞を投与してから２４時間および７２時間後に２回腹腔内投与した。平均生存時間および第５日の体重変化を表４に示す。【表４】パクリタクセル−含有ＥＬ−２Ｌ−２共重合体ミセルの抗癌活性は、指定された時間にグループIIIの腫瘍重さをグループＩおよびIIと比べて測定することによって決定した。図４の結果は、腫瘍の成長が本発明の高分子ミセル薬物組成物によって効果的に阻害されたことを示す。前述したように、水不溶性疎水性薬物は、親水性成分および疎水性成分を有する本発明の生分解性ブロック共重合体ミセル内に攪拌、加熱、超音波処理、溶媒蒸発、透析などによって容易に封入され得る。このようにして得られた高分子ミセル薬物組成物はより多い量の薬物を患者の体内に効果的に搬入するため非常に向上した薬学的効能を有する。

【手続補正書】特許法第１８４条の８第１項【提出日】１９９７年４月２１日【補正内容】明細書生分解性高分子ミセル−タイプ薬物組成物およびその製造方法発明の分野本発明は、親水性ポリ（アルキレンオキシド）成分および疎水性生分解性成分を有する水溶性両親媒性ブロック共重合体ミセル、およびこのミセルに封入された疎水性薬物を含む生分解性高分子ミセル−タイプ薬物組成物に関する。この組成物は水に溶解したとき透明な溶液を形成する。発明の背景多くの重要な薬物は疎水性であり、水の中では制限された溶解度を有する。このような薬物の期待される治療効果を得るためには、通常、可溶化された形態の薬物が患者に投与されなければならない。このような目的のために補助溶媒、界面活性剤、塩および溶媒和物のような可溶性形態の薬物、プロドラックのような化学的に修飾された形の薬物、可溶性高分子−薬物複合体、リポソームのような特別な薬物担体などの使用に基づいた多数の方法が開発された。しかし、前記それぞれの方法は一以上の固有の問題によって制限され、たとえば、界面活性剤ミセルの使用に基づいて疎水性薬物を可溶化する方法は、大部分の界面活性剤が比較的に毒性を有し、また、希釈の際に界面活性剤が沈澱するという問題がある。これに関連して、最近では疎水性薬物を水可溶性にし得る効果的な薬物担体として両親媒性ブロック共重合体ミセルを使用することが多くの関心を引いている。たとえば、界面活性剤に類似した特性を有する両親媒性ブロック共重合体ミセルに対する多くの研究が報告されており、特に注目すべきものは、共重合体の特定性質および物性によって安定化されたブロック共重合体ミセル内に疎水性薬物を封入しようとする試みである。たとえば、ヨーロッパ特許公開第０３９７３０７Ａ２号は、親水性成分としてのポリ（エチレンオキシド）および疎水性成分としてのポリ（アミノ酸）を含有する、ＡＢタイプ両親媒性二元ブロック共重合体の高分子ミセルを開示しており、ここでは、治療学的に活性な薬物が、高分子の疎水性成分に化学的に結合している。この高分子ミセルは疎水性薬物を投与するための手段として提供されたが、官能基をブロック共重合体内に導入しなければならないことは、不都合なことである。一方、ヨーロッパ特許公開第０５８３９５５Ａ２号は、ヨーロッパ特許公開第０３９７３０７Ａ２号に記述された両親媒性二元ブロック共重合体内に疎水性薬物を物理的に封入する方法を開示している。したがって、この方法は、化学結合タイプ高分子ミセル薬物の前記短所を解決している。しかしながら、ポリ（アミノ酸）部分は免疫反応を誘発する可能性があり、また製剤の製造に有機溶媒を用いることによっても問題が起り得る。更に、ペプチド結合は体内で酵素によって切断されるため、そこに封入された薬物の放出速度を調節することが難しい。ヨーロッパ特許公開第０５５２８０２Ａ２号は、親水性成分としてのポリ（エチレンオキシド）と水相で架橋結合して得られる疎水性成分としてのポリ（乳酸）とを有する化学的に固定化されたミセルの形成を開示している。すなわち、化学的に固定化されたミセルは、コアを構成する疎水性成分を化学的に架橋結合することによって、安定化された高分子ミセルを模倣するように製造される。しかし、ブロック共重合体の疎水性成分に架橋結合を導入するためには、架橋結合剤、またはUVおよび加熱のような他の手段を、過酸化物の存在下または不存在下で使用しなければならない。その上、そのような架橋結合された高分子粒子の生体適合性または安全性は、これまで確立はされていなかった。さらに、化学的に固定されたミセルは、水−有機溶媒乳化液において形成された両親媒性分子、すなわち、ポリ（エチレンオキシド）−疎水性共重合体であり、ミセルは、ＰＥＧの外層、疎水性高分子の二層およびＰＥＧの内層またはコアを含む。米国特許第４，７４５，１６０号は、親水性成分としてのポリエチレングリコールと疎水性成分としてのポリ（Ｄ−、Ｌ−およびＤＬ−乳酸）とを有する、薬学的または獣医学的に許容される、両親媒性の、非−架橋結合された線状、分枝状、またはグラフト状のブロック共重合体を開示している。このブロック共重合体は、疎水性薬物のための効果的な分散剤または懸濁剤であるが、分子量が５，０００以上であり、水に不溶性である。更に、疎水性成分は、ブロック共重合体の重量を基準として少なくとも５０重量％であり、疎水性成分の分子量は５，０００以下である。製造方法においては、水混和性で且つ、凍結乾燥し得る有機溶媒が用いられる。高分子の混合物、薬物および有機溶媒が水と混合されると、沈澱が形成され、その後、混合物は直ちに凍結乾燥されて粒子を形成する。したがってこの粒子が水に分散されると、親水性成分および疎水性成分が混合された微細粒子を含有するコロイド性懸濁液を形成する。米国特許第５，５４３，１５８号は、必需的にポリ（アルキレングリコール）および生分解性高分子であるポリ（乳酸）からなるブロック共重合体で形成されたナノ粒子またはマイクロ粒子を開示している。ナノ粒子またはマイクロ粒子において、共重合体の生分解性部分は、ナノ粒子またはマイクロ粒子のコアに存在し、ポリ（アルキレングリコール）部分は、網皮系(ｒｅｔｉｃｕｌｏｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌｓｙｓｔｅｍ)によるナノ粒子またはマイクロ粒子の吸収を減らすのに効果的な量でナノ粒子またはマイクロ粒子の表面に存在する。この特許において、ブロック共重合体の分子量が、あまりにも大きく水に溶けにくいので、ブロック共重合体および薬物を有機溶媒に溶解し、超音波処理または攪拌によってｏ／ｗ乳化液を形成した後、沈澱させた薬物含有のナノ粒子を収集することによって、ナノ粒子を製造する。この特許は、疎水性薬物の可溶化という概念を提供していない。この特許によって製造されたナノ粒子は、水に分散された微細粒子である。ヨーロッパ特許公開第０５２０８８８Ａ１号は、ポリ（乳酸）およびポリ（アルキレンオキシド）ブロック共重合体からなるナノ粒子を開示している。このナノ粒子は網内系による吸収率の低下を示す。高分子量ポリ（乳酸）が用いられ、ナノ粒子のコロイド性懸濁液の製造に界面活性剤が用いられる。この特許において、ナノ粒子は、ブロック共重合体および薬物を有機溶媒に溶解させ、有機溶媒を迅速に蒸発させて薬物を含有するナノ粒子を沈澱させることによって製造される。生成したナノ粒子は、親水性および疎水性成分の両方を有する微細粒子であり、水に不溶性である。前記特許は、ナノ粒子を水に分散するときの疎水性薬物の可溶化という概念は開示していない。これまで、ミセルの内部コアで疎水性薬物を物理的に捕獲する水溶性ミセルを用いることにより、そのような薬物を水に可溶化することに対する本格的な努力は行われていなかった。したがって、本発明者らは、前述した問題を伴わない、改善された水溶性可溶化剤を開発するために努力した結果、ポリ(乳酸)、ポリ(乳酸−ｃｏ−グリコール酸)、ポリ(グリコール酸)、ポリ（ε−カプロラクトン）またはこれらの混合物からなる疎水性コア成分の表面を覆っているポリ（エチレンオキシド）親水性成分で構成された両親媒性ブロック共重合体ミセルが、疎水性薬物を物理的にその中へ封入することによって、それらの薬物を可溶化する上で非常に効果的であることを偶然に発見した。生成した生分解性高分子ミセルは水溶性であり、疎水性薬物に対する効果的な可溶化剤である。生成した組成物は薬物の透明な溶液であり、生体内においては薬物の持続的な放出に適しているため、それにより、薬物の治療効果は向上される。そのような効果は、親水性および疎水性ブロックの分子量および相対的な比率を調節することによって極大化され得る。発明の要約したがって、本発明の目的は、薬学的に有効な薬物組成物の製造に使用し得る可溶化された疎水性薬物を含有する水溶性高分子ミセル−タイプ組成物を提供することである。本発明の一つの側面に従って、親水性表面成分および疎水性コア成分を有する両親媒性ブロック共重合体ミセルと、前記高分子ミセルに封入された少なくとも一つの疎水性薬物とを含有する生分解性高分子ミセルタイプの薬物組成物が提供され、ここで、疎水性成分は、ポリ(乳酸)、ポリ(グリコール酸)、ポリ(乳酸− ｃｏ−グリコール酸)、ポリ（ε−カプロラクトン）およびこれらの混合物からなる群から選ばれた生分解性高分子であり、親水性成分はポリ（アルキレンオキシド）である。本発明の両親媒性ブロック共重合体ミセルは、その中に疎水性薬物を物理的に封入することによって、それらの薬物を可溶化する上で非常に効果的である。可溶化された疎水性薬物を含有する生成された生分解性高分子ミセル組成物は水に溶けて透明な溶液を形成し、生体内においては薬物の持続的な放出に適しているため、それにより、薬物の治療効果は向上させる。そのような効果は親水性および疎水性ブロックの分子量および相対的な比率を調節することによって極大化され得る。図面の簡単な説明図１は、ポリ（乳酸）−ポリ（エチレンオキシド）−ポリ（乳酸）三元ブロック共重合体（ＥＬ−３Ｌ−１）のＧＰＣ（ゲル透過クロマトグラフィー、カラム：ＭＴ３−ＭＴ４(Ｗａｔｅｒｓ、米国)、流速：１０ｍｌ／分、溶出剤：テトラヒドロフラン）の結果である。図２は、ポリ（エチレンオキシド）−ポリカプロラクトン二元ブロック共重合体（ＥＣ−２Ｃ−１）のＧＰＣ（ゲル透過クロマトグラフィー、カラム：ＡｓａｈｉｐａｋＧＳ５２０Ｈ、溶出剤：蒸留水）の結果である。図３は、ＥＬ−３Ｌ−２共重合体ミセルに封入されたパクリタクセル（paclit axel）およびサイクロスポリンＡ(cyclosporin A)の放出プロフィールを示す。図４は、ＥＬ−２Ｌ−２共重合体ミセルに封入されたパクリタクセルの抗癌活性を示す。発明の詳細な説明本発明の生分解性高分子ミセル−タイプ薬物組成物は、生分解性両親媒性ブロック共重合体と一つ以上の疎水性薬物とから製造された生分解性高分子ミセルを含み、投与された際、生体内で単純加水分解によって毒性のない小分子に分解される。平均直径が１０ないし１００ｎｍである生分解性高分子ミセルは、特に水に不溶性であるか難溶性である疎水性薬物の可溶性注射剤組成物の製造に適合する。本発明の両親媒性ブロック共重合体の生分解性高分子ミセルは、ポリ（乳酸）、ポリ(グリコール酸)、ポリ(乳酸−ｃｏ−グリコール酸)、ポリ（ε−カプロラクトン）およびこれらの誘導体のような生分解性疎水性高分子と、ポリ（アルキレンオキシド）のような親水性高分子とを結合させることによって製造できる。疎水性薬物は、本発明の高分子ミセルによって運搬される際、遥かに効果的に患者に送達され、ミセル内に封入された薬物の持続的な放出が、薬物の治療効果を向上させる。本発明の薬物組成物に用いられるブロック共重合体は、下記式（Ｉ）または（ II）を有する高分子であり得る：前記式で、Ｒ₁は、水素またはＣ_1ー20アルキル、好ましくは、Ｃ_1ー5アルキルであり、ｍは、２より大きい整数、好ましくは、１０ないし１３６であり、Ｘは、１００以上、好ましくは、３００ないし４，０００の分子量を有する生分解性疎水性高分子部分であって、好ましくは、ポリ(乳酸)、ポリ(グリコール酸) 、ポリ(乳酸−ｃｏ−グリコール酸)、ポリ（ε−カプロラクトン）およびこれらの誘導体からなる群から選ばれる。前述したように、本発明のブロック共重合体の好ましい親水性成分としては、ポリ（エチレンオキシド）が用いられ、本発明のブロック共重合体の疎水性成分は次のような構造を有するポリ(乳酸)、ポリ(グリコール酸)、ポリ(乳酸−ｃｏ −グリコール酸)、ポリ(ε−カプロラクトン)、これらの誘導体などを含み得る：前記式で、Ｒ₂およびＲ₃は、独立的にＨまたはＣＨ₃であり、ｘ、ｙおよびｎは、独立的に２より大きい整数、好ましくは、２ないし４５である。本発明の薬物組成物に使用され得るさらに好ましいブロック共重合体は、下記式(Ｖ)、(VI)、（VII）および（VIII）を有する二元または三元ブロック共重合体である：前記式で、Ｒ₁は、水素またはＣ_1-20アルキル、好ましくは、Ｃ_1-5アルキルであり、ｉは、２より大きい整数、好ましくは、２ないし５５であり、ｊおよびｋは、独立的に１より大きい整数、好ましくは、２ないし５５であり、ｌは、２より大きい整数、好ましくは、２ないし３５であり、ｍは、前に定義した通りであり、ｎおよびｐは、独立的に１より大きい整数、好ましくは、２ないし３５である。二元または三元ブロック共重合体は(ＡＢタイプおよびＡＢＡタイプ)、下記式（IX）および（Ｘ）に示したように、ポリ（エチレンオキシド）(ＰＥＯ)親水性成分（Ｂ）とポリ（乳酸）(ＰＬＡ)疎水性成分（Ａ）で構成され得る：前記式で、ｉ、ｊ、ｋおよびｍは前述した通りである。本発明の二元または三元ブロック共重合体は、開環重合によって製造され得る。たとえば、親水性成分（Ｂ）としてのＰＥＯと疎水性成分（Ａ）としてのＰＬＡとからなるＡＢタイプ二元ブロック共重合体は、一方の末端にメトキシ基を有し、他方の末端にヒドロキシ基を有するＰＥＯを用いて製造できる。ＡＢＡタイプ三元ブロック共重合体は、両方末端にヒドロキシ基を有するＰＥＯを用いて製造し得る。親水性成分と疎水性成分との比率を調節することによって、水に疎水性薬物を可溶化するための、ブロック共重合体の溶解度を調節できる。本発明のブロック共重合体ミセル内に封入され得るのに適当な疎水性薬物は、パクリタクセル（ｐａｃｌｉｔａｘｅｌ）およびサイクロスポリンＡ（ｃｙｃｌｏｓｐｏｒｉｎＡ）である。前述した一つ以上の薬物をブロック共重合体ミセルに封入、または可溶化するためには、下記の種々の方法を単独でまたは組み合わせて使用することができる。（１）攪拌ブロック共重合体水溶液に薬物を加え、２ないし２４時間攪拌して薬物を含有するミセルを得る。（２）加熱薬物とブロック共重合体を有機溶媒に溶かし、６０℃の、窒素雰囲気下で固体マトリックスが形成されるまで溶媒を蒸発させた。固体マトリックスを６０℃に維持した水浴に入れ、ゲル状の試料が形成するまで予備加熱した。次いで、これに６０℃の水を加え、薬物を含有する高分子ミセルが形成されるまで混合物を攪拌する。（３）超音波処理薬物とブロック共重合体水溶液の混合物を、１秒ないし１時間超音波処理した後、室温で攪拌して薬物を含有するミセルを得る。（４）溶媒蒸発薬物を、水不混和性有機溶媒、たとえば、ジクロロメタン、クロロホルムなどに溶かし、ブロック共重合体水溶液に加える。次いで、攪拌しながら有機溶媒を２５−４０℃で徐々に蒸発させた後、溶けなかった残在薬物を濾過して除く。（５）透析有機溶媒に溶かした薬物の溶液にブロック共重合体を加え、その混合物を緩衝液に対して透析した後、水に対して透析する。透析法において、薬物を溶かすための適当な水混和性有機溶媒は、アセトニトリル、ジメチルホルムアミド(ＤＭＦ)、ジメチルスルホキシド(ＤＭＳＯ)、ジオキサン、クロロホルム、ｎ−ヘキサン、トルエン、ジクロロメタン、ジメチルアヤトアミド(ＤｍＡｃ)、酢酸エチル、テトラヒドロフラン（ＴＨＦ）などである。本発明の両親媒性ブロック共重合体は、実施例の表１に示すように平均の大きさが１０−６０ｎｍの安定化されたミセルを形成する。このような大きさの範囲のミセルは、注射製剤用として適当である。ミセルの安定性は、図２に示すゲル透過クロマトグラフィーから分かるように非常に優れている。更に、疎水性薬物は、前述した方法以外の方法によって本発明の生分解性高分子ミセルに封入され得るが、ここで封入された薬物の量および物理的状態はブロック共重合体の組成および高分子ミセルを製造する方法によっても大きく変わり得る(表１、２および３)。疎水性成分の緻密に詰まったコアに含有された薬物は、インビトロで調節された方式で放出されるため(図３)、本発明の組成物は通常の製剤化技術に適しないような薬物を製剤化するのに部分的に適する。たとえば、パクリタクセルは優れた抗癌剤であるが、主にこの薬物の低い水溶性のために製剤化が難しい。このような理由で、補助薬として、アレルギー反応のような深刻な副作用を起こし得る、クレモフォア（Ｃｒｅｍｏｐｈｏｒ）ＥＬを含有するパクリタクセル製剤が現在市販されている。前記特定製剤は、他の問題も有している：すなわち、この製剤は微細な沈澱物を形成する傾向があるので、注入ライン（ｉｎｊｅｃｔｉｏｎｌｉｎｅ）にフィルターを取付ける必要があり、また、投与に必要な時間が約２４時間と長い。これとは対照的に、本発明の生分解性高分子ミセルは、パクリタクセルの溶解度を大きく向上させ、得られた生分解性高分子ミセル−パクリタクセル組成物は本質的に無毒性であり、高い抗癌治療活性を示す(図４、表４)。加えて、特定生分解性高分子ミセルに封入されたパクリタクセルの量は、水に単独で溶解したパクリタクセルの量より、２５．１６±３．２７％も劇的に増加し、サイクロスポリンＡの場合は、水に単独で溶解したサイクロスポリンＡの量より２３．１３± ２．３１％も劇的に増加した（表２および３）。さらに、本発明の生分解性高分子ミセル−パクリタクセル組成物は、封入されたパクリタクセルの８５％を４８時間にわたって持続的に放出しながら、癌細胞の成長を効果的に防止した。生分解性高分子ミセル−サイクロスポリンＡ組成物の場合には、活性成分の４０％が４８時間にわたって持続的に放出された(図３)。前記結果から分かるように、本発明の生分解性高分子ミセル−パクリタクセル組成物は、毒性、副作用および効果の面で通常の製剤に比べて優れている。封入された薬物の量は、分子量が１０，０００以下である両親媒性二元／三元ブロック共重合体を用いたときに最も高く、ここで、親水性成分は、ブロック共重合体の総重量を基準として７０重量％以下の量で存在するポリ（エチレンオキシド）であり、疎水性成分は分子量８，０００以下のポリ（乳酸）であり、親水性成分および疎水性成分の分子量の比は１：０．５ないし１：３の範囲である。更に、封入されたパクリタクセルの量は、両親媒性ブロック共重合体の量が増加するほど増加する。このような条件でパクリタクセルを含有するブロック共重合体組成物は、水に分散された際に沈澱を形成しないで透明な溶液を形成する。さらに、パクリタクセルまたはサイクロスポリンＡを含有する高分子ミセル組成物は、調節された方式で薬物を放出することができる。両親媒性ブロック共重合体を用いて、本発明によって製造された生分解性高分子ミセルは、緻密に詰まった疎水性高分子コアと外部親水性高分子層とからなり、疎水性コアは、相当量の疎水性薬物を吸収することができる。本発明の生分解性高分子ミセルは、両親媒性ブロック共重合体の水溶性画分の分子量が使用される場合にも、臨界ミセル濃度（ＣＭＣ）を超える高い凝集数を有し、内部疎水性コアがきつく結合しているため、非常に安定化されている。これとは対照的に、低分子量界面活性剤では、疎水性成分が緩く結合しているために、ＣＭＣを超える低凝集数および低安定性を有する。前記のような安定化されたミセルは、薬物担体として効果的であり、実際に、本発明のミセルは、疎水性薬物をその疎水性コア内に容易に吸収して薬物の透明な溶液を作る。このように、本発明のミセルは疎水性薬物の可溶化剤として作用する。このようにして得られた透明な薬物溶液は、長期保存のために凍結乾燥され得、凍結乾燥された生分解性高分子ミセル −タイプ薬物組成物は、水または等張液を用いて元の溶液に再溶解され得る。このように、本発明は、疎水性薬物の通常の製剤に比べて物理的により安定であり、治療学的にもより効果的であり、毒性学的には遥かに安全な生分解性高分子ミセル−タイプ薬物組成物を提供する。下記製造例および実施例は、本発明の特定側面を詳細に説明するのみであり、いずれかの面でも本発明を制限すると解釈されてはならない。実施例１：パクリタクセルを含有するブロック共重合体ミセルの製造（１）攪拌法によるＥＬ−３Ｌ−２、ＥＬ−２Ｌ−２およびＥＣ−３Ｃ−１内へのパクリタクセルの封入製造例３、７および８で合成したブロック共重合体ＥＬ−３Ｌ−２、ＥＬ−２Ｌ−２およびＥＣ−３Ｃ−１各々を、１０ｍｇずつ３ｍｌの蒸留水に溶かし、水に極めて難溶性である抗癌剤パクリタクセル５ｍｇをこれに加えた後、２時間攪拌した。生成した溶液を０．４５μｍメンブランフィルターで濾過して不溶のパクリタクセルを除き、パクリタクセルを含有するブロック共重合体ミセルの透明な溶液を得た。１ｍｌの水に分散された高分子ミセルに封入されたパクリタクセルの量を、ＨＰＬＣ（カラム：Ｃｕｒｏｓｉｌ−ＰＦＰ(４．６ｘ２５０ｍｍ、５μｍ粒子大きさ、Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ、アメリカ)、移動相：アセトニトリル／蒸留水＝４５：５５(ｖ／ｖ)）を用いて測定した。その結果を表２に示す。（２）溶媒蒸発による封入製造例３で製造したＥＬ−３Ｌ−２、１０ｍｇを蒸留水に溶かし、パクリタクセル３ｍｇを含有するクロロホルム溶液をこれに徐々に加えた。生成した混合物を室温で一晩攪拌してクロロホルムを蒸発させた。生成した溶液を０．４５μｍのメンブランフィルターで濾過して不溶のパクリタクセルを除き、パクリタクセルを含有するブロック共重合体ミセルの透明な溶液を得た。製造例７および８で合成したＥＬ−２Ｌ−２およびＥＣ−３Ｃ−１を用いて前記手順を繰返した。パクリタクセル封入率は、前記（１）と同様な方法で測定した。その結果を表２に示す。（３）透析による封入５ｍｇのパクリタクセルを５ｍｌのＤＭＦに溶かした。生成した溶液に製造例３で製造したＥＬ−３Ｌ−２を加え、混合物を一晩攪拌した。混合物を透析膜（ＭＷＣＯ：１２０００）を用いて０．１Ｍリン酸塩緩衝溶液（ｐＨ７．４）で５時間透析した後、蒸留水で５時間透析した。透析した溶液を０．４５μｍメンブランフィルターで濾過してパクリタクセルを含有するブロック共重合体ミセルの透明な溶液を得た。製造例７および８で合成したＥＬ−２Ｌ−２およびＥＣ−３Ｃ−１を用いて前記手順を繰返した。パクリタクセル封入率は、前記（１）と同様な方法で測定した。その結果を表２に示す。前記実験は、パクリタクセルが、２５．１６±３．２３％の量で本発明の高分子ミセルに容易に封入され得ることを示す。【表２】実施例２：サイクロスポリンＡを含有するブロック共重合体ミセルの製造（１）溶媒蒸発による封入水に極めて難溶性である免疫抑制剤サイクロスポリンＡ１０ｍｇを、１ｍｌのＮ,Ｎ−ジメチルアヤトアミドに溶かし、２０ｍｌの蒸留水にＥＬ−３Ｌ−２２０ｍｇを含有する溶液に徐々に加えた。生成した混合物を室温で一晩攪拌してＮ，Ｎ−ジメチルアセトアミドを蒸発除去した後、生成した溶液を０．４５μｍメンブランフィルターで濾過して、サイクロスポリンＡを含有するブロック共重合体ミセルの透明な溶液を得た。製造例９で合成したＥＣ−２Ｃ−１を用いて前記手順を繰返した。サイクロスポリンＡ封入率は実施例１と同様な方法で測定した。その結果を表３に示す。（２）透析による封入１０ｍｇのサイクロスポリンＡを５ｍｌのＤＭＦに溶かした。生成した溶液に、製造例３で製造したＥＬ−３Ｌ−２２０ｍｇを加え、混合物を一晩攪拌した。混合物を透析膜（ＭＷＣＯ：１２０００）を用いて０．１Ｍリン酸塩緩衝溶液（ｐＨ７．４）で５時間透析した後、蒸留水で５時間透析した。透析した溶液を０．４５μｍメンブランフィルターで濾過して、サイクロスポリンＡを含有するブロック共重合体ミセルの透明な溶液を得た。製造例９で合成したＥＣ−２Ｃ− １を用いて前記手順を繰返した。サイクロスポリンＡ封入率は実施例１と同様な方法で測定した。その結果を表３に示す。前記実験は、サイクロスポリンＡが、２３．１３±２．３１％の量で本発明の高分子ミセルに容易に封入され得ることを示す。【表３】実施例３：放出試験実施例１および２で製造したパクリタクセル−およびサイクロスポリンＡ−含有ＥＬ−３Ｌ−２共重合体ミセル溶液各５ｍｌを、透析袋（ＭＷＣＯ：１２，０００）に入れた。透析袋を１１のＨ₂Ｏに入れ、ミセルから放出されたパクリタクセルまたはサイクロスポリンＡの量を経時測定した。図３から分かるように、封入された薬物は持続的な放出プロフィールを示す。実施例４：毒性試験および効果試験１０⁶ Ｐ３８８白血病細胞を、体重２２ないし２５ｇの雌性ＢＤＦＩマウス６匹ずつからなる三つのグループのマウスの各々に対して腹腔内に注入した。白血病細胞を注入してから２４時間後、グループＩの各マウスにベヒクル（５％ＤＭＳＯおよび５％クレモフォア食塩溶液）１２．５ｍｇ／ｋｇを２４時間の間隔で４回腹腔内注入し、グループIIの各マウスには同一な条件の下でパクリタクセルおよびベヒクル（５％ＤＭＳＯおよび５％クレモフォア食塩溶液）で同様に処理した。一方、グループIIIの各マウスには、実施例１（２）で製造したパクリタクセル−含有ＥＬ−２Ｌ−２共重合体ミセル溶液２５ｍｇ／ｋｇを、白血病細胞を投与請求の範囲１．水に溶解して透明な溶液を形成し得る、疎水性薬物を含有する高分子ミセル −タイプ薬物組成物であって、親水性ポリ（アルキレンオキシド）成分および疎水性生分解性成分を有する水溶性両親媒性ブロック共重合体のミセル薬物担体と、このミセルに物理的に捕獲された疎水性薬物とを含み、且つ前記ブロック共重合体の分子量が１０，０００ダルトン以下であり；前記親水性成分がブロック共重合体の総重量を基準として７０重量％以下であり；前記疎水性成分が、ポリ( 乳酸)、ポリ(グリコール酸)、ポリ(乳酸−ｃｏ−グリコール酸)、ポリ(ε−カプロラクトン）およびこれらの混合物からなる群から選ばれた生分解性高分子であり；前記疎水性薬物がパクリタクセルまたはサイクロスポリンＡである薬物組成物。２．前記水溶性両親媒性ブロック共重合体の親水性成分がポリ（エチレンオキシド）である、請求項１に記載の高分子ミセル−タイプ薬物組成物。３．前記水溶性両親媒性ブロック共重合体の疎水性成分がポリ（乳酸）である、請求項１に記載の高分子ミセル−タイプ薬物組成物。４．前記水溶性両親媒性ブロック共重合体の親水性成分および疎水性成分の重量平均分子量が、各々１，０００ないし６，０００ダルトンおよび１，０００ないし８，０００ダルトンである、請求項１に記載の高分子ミセル−タイプ薬物組成物。５．前記水溶性両親媒性ブロック共重合体の親水性成分と疎水性成分との重量平均分子量の比が１：０．５ないし１：３である、請求項１に記載の高分子ミセル −タイプ薬物組成物。６．前記水溶性両親媒性ブロック共重合体が二元−ブロックまたは三元−ブロック共重合体である、請求項１に記載の高分子ミセル−タイプ薬物組成物。７．前記疎水性薬物がパクリタクセルであり、前記親水性成分が重量平均分子量１，０００ないし６，０００ダルトンのポリ（エチレンオキシド）であり、前記疎水性成分が重量平均分子量１，０００ないし８，０００ダルトンのポリ（乳酸）である、請求項１に記載の高分子ミセル−タイプ薬物組成物。８．水溶性両親媒性ブロック共重合体ミセルにパクリタクセルまたはサイクロスポリンＡを封入する方法であって、ポリ(乳酸)、ポリ(グリコール酸)、ポリ(乳酸−ｃｏ−グリコール酸)、ポリ(ε−カプロラクトン)およびこれらの混合物からなる群から選ばれた生分解性疎水性高分子である疎水性成分と、ポリ（アルキレンオキシド）である親水性成分とを有する水溶性両親媒性ブロック共重合体のミセル溶液を製造するステップ；およびパクリタクセルまたはサイクロスポリンＡを前記ブロック共重合体溶液と混合し、混合物を攪拌、加熱、超音波処理、溶媒蒸発または透析するステップを含む方法。９．前記水溶性両親媒性ブロック共重合体の親水性成分および疎水性成分の重量平均分子量が、各々１，０００ないし６，０００ダルトンおよび１，０００ないし８，０００ダルトンである、請求項８に記載の方法。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者ソン、イン・スク大韓民国、デジョン 305−348、ユソン− グ、ホワアム−ドング 63−２ (72)発明者パイ、チャウル・ミン大韓民国、デジョン 305−333、ユソン− グ、オユン−ドング、ハンビット・アパートメント 101−1701

Claims

【特許請求の範囲】１．疎水性薬物を可溶化し得る高分子ミセル薬物組成物であって、親水性成分および疎水性成分を有するブロック共重合体のミセルと、このミセルに封入された疎水性薬物を含み前記疎水性成分が、ポリラクチド、ポリグリコリド、ポリ(ラクチド−グリコリド)、ポリカプロラクトンおよびこれらの混合物からなる群から選ばれた生分解性高分子であり、前記親水性成分がポリ（アルキレンオキシド）である薬物組成物。２．請求項１に記載の高分子ミセル薬物組成物であって、前記ブロック共重合体が下記式（Ｉ）または（II）の高分子である高分子ミセル薬物組成物：前記式で、Ｒ₁は、水素またはＣ_1-20アルキルであり；ｍは、２ないし３，０００の整数であり；Ｘは、１００ないし１００，０００の分子量を有する、ポリラクチド（ＰＬＡ）、ポリグリコリド(ＰＧＡ)、ポリ（ラクチド−グリコリド）(ＰＬＧＡ)、ポリカプロラクトン（ＰＣＬ）およびこれらの誘導体からなる群から選ばれた高分子断片である。３．請求項１に記載の高分子ミセル薬物組成物であって、前記ブロック共重合体が下記式（III）または（IV）の高分子である薬物組成物：前記式で、Ｒ₁は、水素またはＣ_1ー20アルキルであり；ｉ、ｊおよびｋは、独立的に２ないし１，０００の整数であり；ｍは、２ないし３，０００の整数である。４．請求項１に記載の高分子ミセル薬物組成物であって、前記ブロック共重合体が下記式（Ｖ）または（VI）の高分子である薬物組成物：前記式で、Ｒ₁は、水素またはＣ_1ー20アルキルであり；ｌは、２ないし７００の整数であり、ｍは、１０ないし３，０００の整数であり、ｎおよびｐは、独立的に２ないし５００の整数である。５．前記疎水性薬物がパクリタクセル、ドキソルビシンおよびサイクロスポリンである請求項１に記載の高分子ミセル薬物組成物。６．前記疎水性薬物がパクリタクセルであり、疎水性成分がポリラクチドまたはポリカプロラクトンである請求項１に記載の高分子ミセル薬物組成物。７．疎水性薬物を可溶化し得る高分子ミセル薬物組成物の製造方法であって、ポリラクチド、ポリグリコリド、ポリ(ラクチド−グリコリド)、ポリカプロラクトンおよびこれらの混合物からなる群から選ばれた生分解性疎水性高分子の疎水性成分と、ポリ（アルキレンオキシド）である親水性成分とを有するブロック共重合体のミセル溶液を製造するステップ；疎水性薬物を前記ブロック共重合体溶液と混合するステップ；生成した混合物を攪拌、加熱、超音波処理、溶媒蒸発または透析して疎水性薬物をブロック共重合体ミセルに物理的に封入するステップ；および混合物を濾過して高分子ミセル−疎水性薬物組成物を回収するステップを含む薬物組成物の製造方法。８．前記疎水性薬物がパクリタクセル、ドキソルビシンまたはサイクロスポリンである請求項１０に記載の方法。