JPH09508525A - エネルギー転移連結の色素によりラベルされたプローブ - Google Patents

エネルギー転移連結の色素によりラベルされたプローブ

Info

Publication number
JPH09508525A
JPH09508525A JP7520679A JP52067995A JPH09508525A JP H09508525 A JPH09508525 A JP H09508525A JP 7520679 A JP7520679 A JP 7520679A JP 52067995 A JP52067995 A JP 52067995A JP H09508525 A JPH09508525 A JP H09508525A
Authority
JP
Japan
Prior art keywords
donor
acceptor
different
individual
labels
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Granted
Application number
JP7520679A
Other languages
English (en)
Other versions
JP3895369B2 (ja
Inventor
エー． マシース，リチャード
グレーザー，アレキサンダー
ジュ，ジンギュー
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
THE REGENTS OF THE UNIVERSITY OF CARIFORNIA
Original Assignee
THE REGENTS OF THE UNIVERSITY OF CARIFORNIA
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by THE REGENTS OF THE UNIVERSITY OF CARIFORNIA filed Critical THE REGENTS OF THE UNIVERSITY OF CARIFORNIA
Publication of JPH09508525A publication Critical patent/JPH09508525A/ja
Application granted granted Critical
Publication of JP3895369B2 publication Critical patent/JP3895369B2/ja
Anticipated expiration legal-status Critical
Expired - Lifetime legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/58—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving labelled substances
    • G01N33/582—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving labelled substances with fluorescent label
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
    • C12Q1/6813—Hybridisation assays
    • C12Q1/6816—Hybridisation assays characterised by the detection means
    • C12Q1/6818—Hybridisation assays characterised by the detection means involving interaction of two or more labels, e.g. resonant energy transfer
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/536—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with immune complex formed in liquid phase
    • G01N33/542—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with immune complex formed in liquid phase with steric inhibition or signal modification, e.g. fluorescent quenching
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
    • Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10S435/00—Chemistry: molecular biology and microbiology
    • Y10S435/81—Packaged device or kit

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
  • Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
  • Investigating Or Analysing Materials By The Use Of Chemical Reactions (AREA)
  • Inks, Pencil-Leads, Or Crayons (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Steroid Compounds (AREA)
  • Investigating Or Analyzing Non-Biological Materials By The Use Of Chemical Means (AREA)
  • Nitrogen Condensed Heterocyclic Rings (AREA)
  • Thermal Transfer Or Thermal Recording In General (AREA)

Abstract

(57)【要約】 ドナー及び受容体色素分子の対を担持する螢光ラベルの組を含んで成る組成物が提供されており、前記組成物は、単一の波長でドナーの効果的な励起及び異なった波長で前記個々の対における受容体からの発光のために企画されている。異なったドナー−受容体対を有する異なった分子は、与えられた対におけるドナーと受容体との間の距離を変えることによって、分離条件下で実質的に同じ移動性を有するように変性され得る。特に、螢光組成物は、核酸の配列決定においてラベルとして使用される。

Description

【発明の詳細な説明】 エネルギー転移連結の色素によりラベルされたプローブ 技術分野 本発明の分野は螢光標識及びそれらの使用に関する。 背景 混合物の構成成分を同定し、そして定量するための需要が増々増大している。 混合物の複雑性が高まるほど、存在する多くの成分を同時に検出できる興味が高 まる。この情況の例として、DNA配列決定が存在し、この場合、多くの個別の波 長で螢光シグナル発光を提供しながら、単一の波長でレーザー源により１〜４種 の螢光標識された成分を効果的に励起することが望ましい。この情況においては 、異なったラベルは、それらが結合される配列の電気泳動移動性に悪影響を及ぼ すべきではない。 現在、自動化された DNA配列決定のために使用される次の４種の方法が存在す る：（１）DNAフラグメントが１つの螢光団によりラベルされ、そして次に、そ のフラグメントが隣接する配列決定レーンで実験され（Ansorge et al.，Nuclei c Acids Ros．15，4593-4602(1987)；（２）DNAフラグメントが４種の異なった 螢光団によりラベルされ、そしてすべてのフラグメントが電気泳動的に分離され 、そして単一のレーンで検出され（Smith et al.，Nature 321，674-679(1986) ；（３）終結反応における個々のジデオキシヌクレオシドが異なった螢光団によ りラベルされ、そして４組のフラグメントが同じレーンにおいて実験され（Prob er et al.，Science 238，336-341(1987)；あるいは（４）DNAフラグメントの組 が２種の異 なった螢光団によりラベルされ、そして DNA配列が色素比を伴ってコードされる （Huang et al.，Anal．Chem．64，2149-2154(1992)）。 そられの技法のすべてはかなりの欠点を有する。方法１は、移動性におけるレ ーンからレーンの変動及び低い処理量の潜在的な問題を有する。方法２及び３は 、４種の色素が１つのレーザー源により十分に励起され、そしてそれらが明確に 異なった発光スペクトルを有することを必要とする。実際、単一のレーザーによ り効果的に励起され得、そして十分に分離された螢光シグナルを発光する複数の 色素を見出すことはひじょうに困難である。 特有の赤色シフトされた発光スペクトルを有する色素を選択できるので、それ らの吸光最大値もまた、赤色に移動し、そしてすべての色素は同じレーザー源に よりもはや効果的に励起され得ない。また、より異なった色素が選択されるので 、色素がラベルされた分子の同じ移動性シフトを引き起こすようなすべての色素 を選択することはより困難になる。 従って、多くの構成成分が同じシステム及び一回の実施で決定され得るように 、サンプルの多重化を可能にする改良された方法を提供することが実質的な興味 の対象である。また、個々のラベルが、共通する波長で強い吸光性を有し、螢光 のために高い収量を有し、発光の大きなストークスシフトを有し、種々の発光が 個別であり、そしてラベルが同じ移動性シフトを導びくことが望まれる。単一色 素により分子を単純にラベルすることによってそれらの矛盾する目的を達成する ことは困難である。 発明の要約 本発明は、多くの螢光ラベルを用いて混合物を分析するための組 成物及び方法を提供する。ラベルを生ぜしめるためには、螢光団の対又は種類が 主鎖、特に核酸主鎖に結合され、ここで前記種類のメンバーの１つがほぼ同じ波 長で励起される。エネルギー転移の現象を開発することによって、前記個々の種 類の他のメンバーが検出的に異なった波長で発光することが見出された。ドナー 及び受容体発色団との間の距離の範囲が、効果的なエネルギー転移を確保するた めに選択される。さらに、結合して使用されるラベルが別のシステムにおいてほ ぼ同じ移動性を有するように選択される。これは、螢光団の種類の複数のメンバ ー間の距離を変えることによりラベルされた存在物の移動性を変え、そして同じ 移動性を有するラベルを選択することによって達成される。本発明は特に配列決 定に適用され、ここで螢光団がユニバーサルプライマー又は他のプライマー及び 異なったジデオキシヌクレオシドのために使用される異なった螢光団組合せに結 合され得る。ラベルの組合せのキットもまた提供される。 図面の簡単な説明 図１は、１×TBE における FAM-3-TAMの吸光及び発光スペクトルのグラフであ る。 図２は、FAM-3-TAMのCEエレクトロフェログラムである。サンプルは 488nmの 励起を有する典型的な細管電気泳動 DNA配列決定条件により分析された。緑の痕 跡は緑のチャネルに検出される螢光シグナルであり（525nm）、そして赤の痕跡 は赤のチャネルに検出される螢光シグナルである（590nm）。両チャネルは同時 に検出される。 図３は、１×TBE における FAM-4-ROXの吸光及び発光スペクトルのグラフであ る。 図４は、FAM-4-ROXのCEエレクトロフェログラムである。サンプ ルは、488nmの励起を有する典型的な細管電気泳動 DNA配列決定条件により分析 される。緑の痕跡は緑のチャネルに検出される螢光シグナルであり（525nm）、 そして赤の痕跡は赤のチャネルに検出される螢光シグナルである（590nm）。両 チャネルは同時に検出される。 図５は、FAM-4-ROX及び ROXプライマーのCEエレクトロフェログラムである。 同じ濃度での２種のプライマーが80％ホルムアミドにおいて一緒に混合され、そ して細管中に注入された。螢光シグナルが 476nmでの励起を伴って緑及び赤のチ ャネルにおいて同時に検出された。 図６は、ドナーと受容体との間の距離に対しての移動性の依存性を示す、FAM- 3-ROX，FAM-4-ROX及びFAM-10-ROX混合物のCEエレクトロフェログラムである。サ ンプルは、488nmの励起を有する典型的な細管電気泳動 DNA配列決定条件により 分析される。 図７は、Ｍ13mp18Ａ フラグメント DNAサンプルに対しての異なった色素プラ イマーの移動シフトの比較である。 特定の態様の記載 新規螢光ラベル、そのラベルの組合せ、及び多くの成分の分離を包含する分離 システムへのそれらの使用が提供される。特に、螢光ラベルは、複数対の螢光団 を含んで成り、その１種を除いて、螢光団は同じであり、オーバーラップするス ペクトルを有する異なった螢光団を含み、ここでドナー発光が受容体吸光とオー バーラップし、その結果、励起された螢光団から他の対のメンバーへのエネルギ ー転移が存在する。励起された螢光団が実際に螢光を発することは必須ではなく 、励起された螢光団がその励起エネルギーを効果的に吸収でき、そしてそれを発 光性螢光団に効果的に転移することで十分である。 螢光団の異なった種類におけるドナー螢光団は、同じであっても又は異なって いても良いが、しかし狭いバンド幅の単一光源、特にレーザー源により効果的に 励起され得るべきである。ドナー螢光団は、有意な吸光性、すなわち、お互い20 nm以内、普通10nm以内、より普通には５nm以内で、吸収最大値(absorption moxi ma)の少なくとも約10％、好ましくは少なくとも約20％の吸光性を有するであろ う。発光性又は受容性螢光団は、ドナー螢光団からのエネルギーを受け、そして 光を発することができるように選択され、それらは明確且つ検出できるほど異る であろう。従って、異なったラベルが結合されている混合物の成分間を区別する ことができるであろう。通常、ラベルは、少なくとも10nm、好ましくは少なくと も15nm及びより好ましくは少なくとも20nmだけ分離された発光最大値（emission moxima）で発光するであろう。 通常、ドナー螢光団は、約 350〜 800nmの範囲で、より通常には約 350〜 600 nm又は 500〜 750nmの範囲で吸光し、そして受容体螢光団は、約 450〜1000nmの 範囲で、通常約 450〜 800nmの範囲で光を発するであろう。続いて論ずるように 、一対よりも多くの吸収性分子を有することができ、その結果、３種又はそれ以 上の分子を有することができ、ここで、吸光と観察される発光との間での波長の 差異を高度に増加させるために、エネルギーはより高い波長で１つの分子から次 の分子に転移される。 ２種の螢光団が、主鎖又は鎖、通常重合鎖により連結され、ここで前記２種の 螢光団間の距離は変えられ得る。ラベルの企画の背後にある物理学は、ドナーか ら受容体への光学的励起の転移は１／Ｒ6（ここでＲは２種の螢光団間の距離で ある）に依存するということである。従って、前記距離は、良く知られたFoerst er機構を通してドナーから受容体への効果的なエネルギー転移を提供するように 選択されるべきである。従って、２種の螢光団を分離する鎖における原子の数に より決定されるような、２種の螢光団間の距離は、鎖の性質に従って変えられ得 る。種々の鎖又は主鎖、たとえば核酸、DNA及び RNAの両者、修飾された核酸、 たとえば酸素が硫黄、炭素又は窒素により置換されているもの、ホスフェートが スルフェート又はカルボキシレート等により置換されていのもの、ポリペプチド 、多糖類、段階的に付加され得る種々の基、たとえば二官能基、たとえばハロア ミン、又は同様のものが使用され得る。螢光団は、適当であれば種々の構築ブロ ックの適切な官能価により置換され得、ここで螢光団はラベルの形成の間、その 構築ブロック上に存在し、又は適切であれば、続いて付加され得る。種々の従来 の化学が、２種の螢光団間に適切な空間が得られることを確保するために使用さ れ得る。 ラベル（螢光団＋それらが結合される主鎖）の分子量は一般的に、少なくとも 約250Dal（ドルトン）でありそして約5,000Dalよりも高くなく、通常、約2,000D alよりも高くないであろう。螢光団の分子量は一般的に約 250〜1,000Dalの範囲 であり、ここで一緒に使用されるべき異なったラベル上の受容体−ドナー対の分 子量は通常、約20％以上、異ならないであろう。螢光団は、中央部で鎖に、両末 端で鎖に、又は一端で鎖に及び内部部位で他の鎖に結合され得る。螢光団は、類 似する化学物質の種類、たとえばシアニン色素、キサンテン又は同様のものから であるように選択される。従って、同じ化学物質の種類からのドナー、同じ化学 物質の種類からの個々のドナー−受容体対又は同じ化学物質の種類からの個々の 受容体を有することができる。 本発明のラベルは、種々の分離技法、たとえば電気泳動、クロマトグラフィー 又は同様のものに特に適用され得、ここで最適化され た分光特性、高い感受性及び分析される成分の移動性向に対してのラベルの比較 できる影響を有することが望まれる。特に、電気泳動、たとえばゲル、細管、等 の電気泳動が興味の対象である。クロマトグラフィー技法の中には、HPLC、アフ ィニティークロマトグラフィー、薄層クロマトグラフィー、紙クロマトグラフィ ー及び同様のものがある。 ２種の螢光団間の空間はラベルの移動性に影響を及ぼすであろうことが見出さ れた。従って、異なった色素対を使用することができ、そして良好なエネルギー 転移を可能にする範囲内で、異なった色素対間の距離を変えることによって、ラ ベルのために実質的に一定した移動性を提供することができる。その移動性は特 定の空間に関係されず、その結果、特定のラベルの移動性に対するその空間の効 果を経験的に決定できるであろう。しかしながら、ラベルにおける螢光団の空間 の柔軟性のために、異なった空間及び異なった色素対を有する数種類の異なった ラベルを合成することによって、強く且つ明確な発光及び実質的に共通する移動 性を有する、通常の励起を共有する螢光ラベルの種類を提供することができる。 通常、移動性は、特別な分離に使用される場合、お互い約20％以下、好ましくは お互い約10％以下、及びより好ましくは、お互い約５％以内で異なるであろう。 移動性は通常、単独でラベルの分離を、又は特定の分離に関連する共通の分子、 たとえば配列決定に興味ある場合、適切な大きさの核酸分子に結合されるラベル の分離を実施することによって決定され得る。 広範囲の種類の螢光色素が使用れ得る。それらの色素は、種々のクラスに分け られ、ここで色素の組合せが同じクラス内に又は異なったクラス間に使用され得 る。それらのクラス内には、色素、たとえばキサンテン色素、たとえばフルオレ セイン及びローダミン、ク マリン、たとえばウンベリフェロン、ベンズイミド色素、たとえばHuechest 332 58、フェナントリジン色素、たとえば Texas Red、及びエチジウム色素、アクリ ジン色素、シアニン色素、たとえばチアゾールオレンジ、チアゾールブルー、Cy ５及びCyfr、カルバゾニル色素、フェノキサジン色素、ポルフィリン色素、キノ リン色素、又は同様のものが包含される。従って、色素は紫外線、可視又は赤外 線範囲で吸収することができる。多くの場合、螢光分子は、約２KDal以下、一般 的には約 1.5KDal以下の分子量を有するであろう。 エネルギードナーは、所望する励起波長で強い吸光度係数、望ましくは約104 以上、好ましくは約105cm 1Ｍ-1以上の吸光度係数を有すべきである。ドナーの 励起最大値及び受容体（螢光体）の発光最大値は、少なくとも15nm又はそれ以上 分離されるであろう。ドナー発色団の発光スペクトルと受容体発色団の吸光性ス ペクトルとの間のスペクトルオーバーラップ全体及び発色団間の距離は、ドナー から受容体へのエネルギー転移の効率が20％〜 100％の範囲になるように存在す るであろう。 鎖中の原子の数に基づいてのドナー及び受容体の分離は、主鎖の性質、硬質か 又は柔軟か、たとえば環構造か又は非環状構造か、又は同様の性質に依存して変 化するであろう。一般的に、鎖中の原子の数（環構造中の原子は鎖に包含される 環の片側のまわりの原子の最低数として計数されるであろう）は、約 200以下、 通常約 150以下、好ましくは約 100以下であり、ここで主鎖の性質がドナーと受 容体との間のエネルギー転移の効率に影響を及ぼすであろう。 ほとんどの場合、螢光団の対が使用されるが、４種までの異なった、通常、３ 種よりも多くない異なった、同じ主鎖に結合される螢光団が使用され得る情況が 存在する。多くの螢光団を用いることによって、ストークスシフトを非常に拡張 することができ、その結果 、可視波長範囲で励起することができ、そして通常、約1000nm以下、より通常に は約 900nm以下の赤外線波長範囲で発光することができる。赤外線波長範囲での 光の検出は多くの利点を有する。なぜならば、励起光に起因するラマン及びレイ リー光からの障害を受けやすくないであろうからである。移動性の恒常性を維持 するためには、大きなストークスシフトのために異なった螢光団を有するラベル 上の螢光団の数を調和するために多数の同じ螢光団を有するラベル上に同じ数の 螢光団を用いることができる。 本発明は、核酸鎖に特に適用でき、ここで前記核酸鎖は配列決定、特にサイジ ングのためのポリメラーゼ鎖反応、又はプライマーが核酸拡張のために使用され 、そして特定のラベルに関する混合物の種々の成分間を区別したい場合の他のシ ステムにおいて、プライマーとして使用される。たとえば、異なった対の螢光団 が配列決定の間、拡張のために使用される異なった個々のジデオキシヌクレオシ ドのために使用される配列決定においては、ユニバーサルプライマーが使用され 得る。 官能化される多数のヌクレオシドが利用でき、そしてポリヌクレオチドの合成 に使用され得る。対象の核酸ラベルを合成することによって、螢光団が存在する 特定部位を定義できる。市販の合成機が従来の手法に従って使用され得、その結 果、適切な空間を有する螢光団の対を有するいづれかの配列が達成され得る。 異なったプライマーが PCRに使用される場合、個々のプライマーが本発明に従 ってラベルされ、その結果、異なったプライマーの個々に対して相補的な標的配 列の存在を容易に検出することができる。使用される他の用途は、特定の抗体を 用いてのアイソザイムの同定、異なった多糖類を用いてのレクチンの同定、及び 同様の同定を包含する。 すでに指摘されたように、本発明のラベルは特に配列決定に使用される。たと えば、プライマーへの２種の螢光団の結合により修飾されている、ユニバーサル プライマーのいづれかの１種であり得るユニバーサルプライマーが調製され得る 。従って、種々の商業的プライマー、たとえば pUC／M13，λgt10，λgt11，及 び同様のものからのプライマーが利用できる。Sambrook et al.，Molecular Clo ning:A Laboratory Manual，2nd ed.，CSHL，1989，Section13を参照のこと。DN A配列が、配列決定されるべき配列に連結されるプライマー配列を有する適切な ベクターでクローン化される。異なった２′，３′ddNTP が使用され、その結果 、終結が、鎖拡張に存在する特定の ddNTPに依存して、異なった部位で生じる。 本発明のプライマーを用いることによって、個々の ddNTPは特定のラベルに関連 するであろう。クレノウフラグメントによる拡張の後、その得られるフラグメン トは、電気泳動による単一のレーンにおいて、又は電気泳動による単一の細管に おいて分離され、ここでラベルの螢光により終結ヌクレオチドを検出することが できる。 本発明のラベルを免疫複合体と共に使用することもでき、ここでリガンド又は 受容体、たとえば抗体が異なった複合体又は複合体のメンバーを検出するために ラベルされ得る。リガンドが分離方法において同じ移動性向を有する場合、１又 は複数のそのようなリガンドの存在を検出するために、分離における組成のオー バーラップが存在する場合でさえ、検出できるように、異なった抗体が異なった 波長で螢光を発する異なったラベルによりラベルされ得る。 ラベルの組合せ、通常少なくとも２種のラベルを有するキットが提供される。 個々のラベルは、通常比較しうる主鎖と共に受容体−ドナー対を有し、ここでラ ベルは使用される分離方法において比較しうる移動性を与えるために主鎖にそっ て分離される。一緒に使用 されるグループにおける個々のラベルは、ほぼ同じ波長で吸光し、そして異なっ た波長で発光する。グループにおける個々のラベルは、主鎖にそっての異なった 螢光団の配置の変動の結果として、分離方法における移動性に対してほぼ同じ効 果を有するであろう。 キットは、マッチする約６種までの、通常約４種までの異なったラベルを有す るが、しかし２〜６種の異なったラベルを有する、複数組のマッチするラベルを 有することができる。 核酸主鎖を含んで成るラベルが特に興味の対象であり、ここで前記ラベルは一 般的に、少なくとも約10個のヌクレオチドそして約50個よりも多くないヌクレオ チド、通常約30個よりも多くないヌクレオチドを有するであろう。ラベルは、相 補的配列にハイブリダイズするヌクレオチド上に存在し、又はそれらのヌクレオ チドから分離され得る。螢光団は通常、鎖に約２〜20個、通常４〜16個の原子を 有する便利な結合アームによりヌクレオチドに連結されるであろう。前記鎖は多 くの官能基、特に非−オキソカルボニル、より特定にはエステル及びアミド、ア ミノ、オキソ及び同様のものを有する。鎖は、通常、炭素、窒素、酸素、硫黄又 は同様のものを鎖に含んで成る、脂肪族、脂環式、芳香族、複素環式炭化水素、 又はそれらの組合せであり得る。 完全な核酸配列は、５′プライマー配列に対して相補的であり、又はその配列 の３′部分に対してのみ相補的であり得る。通常、コピーされるべき配列に対し て相補的である、少なくとも約４個のヌクレオチド、より通常には少なくとも約 ５個のヌクレオチドが存在するであろう。プライマーは、コピーされるべき鎖の ３′端でプライマー配列を有する適切なプラスミドにおいてコピーされるべき配 列、及び少量の適切な ddNTPと共に添加されるdNTPと共に組合される。拡張の後 、DNAは単離され、そして分離のためにゲル又は細管 に移される。 使用されるキットは少なくとも２種の対象ラベルを有し、これはドナー分子の ために実質的に同じ吸光度、別個の発光スペクトル及び実質的に同じ移動性を有 することによってマッチするであろう。一般的に、一本鎖核酸のためには、分離 は螢光団間で約１〜15個、より通常には１〜12個、好ましくは約２〜10個のヌク レオシドからであろう。 次の例は例示的であって、本願発明を限定するものではない。 実験 遺伝子分析のための、エネルギー転移螢光色素により標識されたオリゴヌクレ オチドラベルの設計及び合成 Ｍ13ユニバーサルプライマーから選択された、配列５′−GTTTTCCCAGTC−３′ を有するデオキシオリゴヌクレオチド（12塩基の長さ）を、異なった距離により 分離されたドナー−受容体螢光団対により合成した。特に、前記12ーマーは、Ｃ −５位置で第一アミンリンカーアームを有する、下記の５′ジメトキシトリチル −５−〔Ｎ−（トリフルオロアセチルアミノヘキシ）−３−アクリルイミド〕− ２′−デオキシウリジン、３′−〔（２−シアノエチル）−（Ｎ，Ｎ−ジイソプ ロピル）〕−ホスホラミジット（Amino-Modifier C6dT）（構造体１）の使用に より導入される修飾された塩基を含む： ドナー色素はオリゴマーの５′側に結合され、そして受容体色素は修飾された Ｔ上の第１アミン基に結合される。ドナーと受容体との間の距離は、オリゴマー 上の修飾されたＴの位置を変えることによって変えられた。プライマーはＤ−Ｎ −Ａ（ここでＡはドナーであり、Ａは受容体であり、そしてＮはＤとＡとの間の 塩基の数である）とに示される。調製されるすべてのプライマーにおいては、Ｄ はApplied Biosystems Inc.（“ABI”）製の色素 FAM、すなわちフルオレセイン 誘導体であり、Ａは ABI色素 TAM又は ROX（両者ともロダミン誘導体である）で ある。代表的な例として、FAM-3-TAMの構造体が下記に示される（構造体２）： 本明細書に記載されるエネルギー転移アプローチの利点は、（１）488nmで励 起する場合、大きなストークスシフト及びより強い螢光シグナルが生成され得、 そして（２）プライマーの移動性が同じ移動性を達成するためにドナーと受容体 との間の距離を変えることにより調整され得ることである。FAM-3-TAMの可視ス ペクトルはFAM(495nm)及びTAM(560nm)の両者の吸光性を有するが、しかしながら 、488nmでの励起に関しては、ほぼすべての発光は 579nmで最大であるＴから発 生する（図１）。これは FAMから TAMへの効果的な螢光エネルギー転移を示す。 これはまた、細管電気泳動（CE）カラム下にプライマーを負荷し、そして赤及び 緑色のチャネルに検出することによっても見られ得る。FAM-及びTAM-ラベルされ たプライマーにより、ほぼすべての発光が赤色のチャネル(590nm)に見られる（ 図２）、これはドナー FAMからのエネルギーが受容体 TAMにほとんど完全に転移 され、91nmのストークスシフトを生成することを示唆する。単一のピークの観察 は、プライマーが純粋であることを示す。同じ結果が、114nmの大きなストーク スシフトを付与する FAM-4 -ROXに関して見られる（図３及び４）。単一の色素によりラベルされたプライマ ーに比較してエネルギー転移プライマーの螢光シグナルの増強が見られ、ここで は FAM-4-ROXの濃度と同じ濃度（UVにより測定される）での ABI ROXプライマー が同じ細管に注入されている。FAM-4-ROXのその得られる螢光シグナルは、ROXプ ライマーのシグナルよりも10倍以上高いことが見出された（図５）。 DNA配列決定へのドナー受容体螢光団によりラベルされたプライマーの好結果 をもたらす適用のためには、プライマーは DNAフラグメントの同じ移動性シフト を生成し、そして明確な螢光シグナルを示すことが不可欠である。プライマーの 移動性はドナーと受容体との間の距離に依存することが見出された（図６）。FA M-4-ROX，FAM-3-ROX及びFAM-10-ROXが細管から分離され、そして赤及び緑色のチ ャネルに検出された。FAM-10-ROXに関しては、色素間の距離の増加がエネルギー 転移の量を減じ、２つのチャネルにほとんど等しいシグナルをもたらす。低下し た相対的な緑色のシグナルにより示されるように、分離距離が減じられるにつれ て、エネルギー転移の量は増加する。FAM-3-ROX及び FAM-4-ROXの両者は卓越し たエネルギー転移を示すが、しかしそれらの移動性は明白に異なっており、すな わち距離を変えることにより移動性シフトを調整する可能性を提供する。明確に 異なった発光スペクトルを有する２種のプライマーの移動性の正確な整合を得る ために、FAM-3-FAM，FAM-4-FAM及びFAM-10-FAMもまた調製された。調製されたプ ライマー（FAM-N-FAM，FAM-N-TAM，FAM-N-ROX）のライブラリー間で、Sequenase ２を用いてFAM-10-FAM及び FAM-3-ROXにより生成される、Ａで終結する配列決定 フラグメントがひじょうに類似する移動性シフトを有する（図７）ことが見出さ れており、これは DNA配列の分析のための可能性を示す。FAM-10-FAM及びFAM-3- ROXの発光は、それぞれ 525nm及び 605 nmに存在する。水のラマンシグナルは、それらの２種の波長において、とるにた らない。従って、シグナル：ノイズの比は劇的に高められる。 Ｉ．修飾されたＴ及び５′位での FAMラベルを含む12ーマーのオリゴヌクレオチ ドの調製 次の３種のプライマーを、0.2μモル規模でABI Model394 DNA合成機上で調製 した： アミノリンカーアームを含む修飾された塩基Ｔ*が、Amino-Modifier C6 dTホ スホラミジット（Glen Research）を用いることにより、定義された位置に導入 され、そして FAMが合成の最後の段階で6-FAM アミジット(ABI)を用いて導入さ れた。塩基配列が完結された後、オリゴヌクレオチドを、１mlの濃NH4OH により 固体支持体(CPG)から切断した。塩基上のアミノ保護基（Ａ，Ｇ，Ｃ及びＴ*）を 、55℃で４時間、NH4OH 溶液を加熱することによって除去した。細管電気泳動分 析は、オリゴマーが約80％の純度であり、そしてそれらが次の色素カップリング 段階に直接使用されることを示唆した。 II．オリゴマー１，２及び３のアミノリンカーアームへの第２螢光色素の結合 代表的な例として、オリゴマー１に第２色素(TAM)を結合せしめる反応スキー ムが下記に示される： 0.5ＭのNa4CO3／NaHCO3緩衝液40μｌ中、FAM-ラベルのオリゴヌクレオチド（ １，２及び３）を、12μｌのDMSO中、約 150倍過剰量の TAM-NHSエステル又は R OX-NHSエステル又は FAM-NHSエステルと共に室温で一晩インキュベートした。反 応しなかった色素を、Sephadex G-25カラム上でのサイズ排除クロマトグラフィ ーにより除去した。次に、２種の色素ラベルのオリゴヌクレオチドを、６Ｍ尿素 −TBE，20 ％アクリルアミドゲル電気泳動(40cm×0.8cm)により精製した。純粋 なプライマーをゲルから除去し、そしてOligonucleotide Purification Cartrid ge により脱塩した。プライマーの純度は、細管ゲルクロマトグラフィーにより9 9％以上であることが示された。 III． FAM-3-ROX及びFAM-10-FAMによる DNA配列決定フラグメントの調製 Ａで終結されるＭ13mp18の DNA配列決定フラグメントを、Sequenase2.0(USB) を用いて製造した。次の２種のアニーリング溶液を 600μｌのバイアルに調製し た：（１）10μｌの反応緩衝液、40μｌのＭ13mp18一本鎖 DNA及び６μｌの FAM -3-ROX；（２）６μｌの反 応緩衝液、20μｌのM13mp18一本鎖 DNA及び３μｌのFAM-10-FAM。個々のバイア ルを65℃で５分間加熱し、そして室温に30分間冷却し、そして次に、20分間、氷 上に置き、短いプライマーが鋳型に完全にハイブリダイズしたことを確認した。 ３μｌの DTT，20μｌの ddA終結混合物及び12μｌの希釈されたSequenase2.0を 、氷上の個々のバイアルに添加した。その反応混合物を20℃で20分間、及び次に 、37℃でさらに20分間インキュベートした。反応を、50mMのEDTA 10 μｌ，４Ｍ のNH4OH 40μｌ及び95％EtOH 300μｌの添加により停止した。前記溶液を十分に 混合し、そして次に、氷上に20分間、置いた。フラグメントを75％冷EtOHにより ２度脱塩し、真空下で乾燥せしめ、そして95％（ｖ／ｖ）ホルムアミド４μｌ及 び50mMのEDTAに溶解した。サンプルを３分間、加熱し、DNAを変性し、そして次 に、細管電気泳動装置上へのサンプルの注入まで、氷上に置いた。電気運動学的 注入は、10KVで30秒間実施された。 実質的に同じ励起−吸光性及び移動性を有すると共に、異なった発光波長及び 高い発光量子量を付与するために、関連する組成物、たとえば２種の螢光団によ り官能化されたポリヌクレオチドを調製できることは、上記結果から明らかであ る。この手段においては、組成物の混合物は独立して分析され、ここで異なった 成分が異なった螢光発光バンドを有するラベルにより特異的にラベルされ得る。 さらに、前記組成物は容易に調製され得、広範囲の種類の内容物に使用され得、 そして増強された螢光性質及び良好な安定性を有する。 引用されるすべての出版物及び特許出願は、それぞれ個々の出版物又は特許出 願が引用により組込まれていることを特異的且つ個々に示されているかのように 、引用により本明細書に組込まれている。 前述の発明は一層の理解のために例示的且つ例的にいくらか詳細に記載されて 来たけれども、一定の変更及び修飾が本発明の範囲内で行なわれ得ることは明ら かである。
【手続補正書】特許法第１８４条の８ 【提出日】１９９５年１１月３０日 【補正内容】 請求の範囲 １．注目の少なくとも２種の構成成分を検出するために異なる螢光ラベルを用 いて複数成分の混合物中の構成成分を同定し、そして検出するための方法であっ て、前記個々のラベルが、 （１）主鎖に結合されるドナー−受容体螢光対を有し、ここで前記ドナーから前 記受容体への効果的なエネルギー転移が生ずるものであり；そして （２）前記個々のラベルが実質的に同じ波長で吸光し、そして異なる波長で発光 する、 ことによって特徴づけられており； 前記複数成分の混合物の異なった成分に異なった発光波長を有する異なったラ ベルを結合し； 前記ドナーの吸光波長において共通の光源により照射することにより前記ラベ ルされた個々の成分を検出し、そして前記個々のラベルの螢光を検出することを 含んで成る方法。 ２．前記ドナー−受容体対の個々のドナーが 350〜 800nmの波長範囲で光を吸 収し、そして前記ドナー−受容体対の受容体が 450〜1000nmの波長範囲で光を発 する請求の範囲第１項記載の方法。 ３．前記ドナー−受容体対が９−フェニルキサンテンである請求の範囲第２項 記載の方法。 ４．注目の少なくとも２種の構成成分を検出するために異なる螢光ラベルを用 いて複数成分の混合物中の構成成分を同定し、そして検出するための方法であっ て、前記個々のラベルが、 （１）オリゴヌクレオチド鎖に結合されたドナー−受容体螢光対を有し、ここで 前記ドナーから前記受容体への効果的なエネルギー転移が生ずるものであり；そ して （２）前記個々のラベルが実質的に同じ波長で吸光し、そして異なった波長で発 光する、 ことによって特徴づけられており； 前記複数成分の混合物の異なる成分に異なる発光波長を有する異なるラベルを 結合し； 前記ドナーの吸光波長において共通の光源により照射することにより前記ラベ ルされた個々の成分を検出し、そして前記個々のラベルの螢光を検出することを 含んで成る方法。 ５．前記ドナー−受容体対の個々のドナーが 350〜 800nmの波長範囲で光を吸 収し、そして前記ドナー−受容体対の受容体が 450〜1000nmの波長範囲で光を発 する請求の範囲第４項記載の方法。 ６．前記ドナー−受容体対が９−フェニルキサンテンである請求の範囲第５項 記載の方法。 ７．複数成分の混合物の構成成分を分離するための方法であって、注目の個々 の異なる成分が異なるラベルによりラベルされ、前記ラベルが、 （１）オリゴヌクレオチド鎖に結合されたドナー−受容体螢光対を有し、ここで 前記ドナーから前記受容体への効果的なエネルギー転移が生ずるものであり； （２）前記個々のラベルが実質的に同じ波長で吸光し、そして異なった波長で発 光し；そして （３）前記個々の異なるラベルが、前記オリゴヌクレオチド鎖にそって前記ドナ ー−受容体対のスペーサーを変えることの結果として前記分離において実質的に 同じ移動性を有する、 ことによって特徴づけられており、 前記複数成分の混合物の異なる成分に異なる発光波長を有する異なったラベル を結合し； 前記成分を個々の画分に分離し；そして 前記受容体の吸光波長において共通の光源により照することにより前記ラベル された個々の成分を検出し、そして前記個々のラベルの螢光を検出することを含 んで成る方法。 ８．前記分離が電気泳動によるものである請求の範囲第７項記載の方法。 ９．前記ドナー−受容体対の個々のドナーが 350〜 800nmの波長範囲で光を吸 収し、そして前記ドナー−受容体対の受容体が 450〜1000nmの波長範囲で光を発 する請求の範囲第７項記載の方法。 10．前記ドナー−受容体対が９−フェニルキサンテンである請求の範囲第９項 記載の方法。 11．一本鎖核酸をコピーするためのプライマー及び特定のヌクレオチドで前記 コピーに起因する鎖を終結するためのジデオキシヌクレオシドを用いて核酸配列 を配列決定するための方法であって、 配列決定されるべき核酸フラグメントを、プライマーに結合する前記フラグメ ントの５′側配列を含んで成るベクターでクローンニングし； 異なる反応容器において、前記プライマー、dNTP及び少量の異なった１種のジ デオキシヌクレオチドの存在下で DNAポリメラーゼにより前記フラグメントをコ ピーし；そして 一本鎖 DNAフラグメントの得られる混合物を分離し、そしてゲル上に存在する バンドにより配列を決定することを含んで成り、 ここで、（１）前記プライマー結合配列に対して相補的な核酸鎖に結合される ドナー−受容体螢光対を有し、ここで前記ドナーが前記受容体の螢光のために前 記受容体にエネルギーを効果的に転移し、（２）前記個々のプライマーが実質的 に同じ波長で吸光し、そして異なった波長で発光し；そして（３）前記個々のプ ライマーが、 前記核酸鎖にそって前記ドナー−受容体対の空間及び螢光団を変えることに起因 する、前記分離において実質的に同じ移動性を有することにより特徴づけられる プライマーを用いることを特徴とする方法。 12．前記ドナー−受容体螢光対のメンバーの１つが前記プライマーの５′末端 に結合される請求の範囲第11項記載の方法。 13．異なったドナー−受容体対を有する４種のプライマーが存在し、個々は異 なった発光波長を有することによって異なっている請求の範囲第11項記載の方法 。 14．前記ドナー−受容体螢光対が10よりも多くないヌクレオチドにより分離さ れる請求の範囲第11項記載の方法。 15．少なくとも２つのドナー−受容体螢光対がキサンテン化合物である請求の 範囲第11項記載の方法。 16．前記キサンテン化合物がフルオレセイン及びローダミンを含んで成る請求 の範囲第15項記載の方法。 17．少なくとも２種の螢光化合物を含んで成るキットであって、前記個々の螢 光化合物が、 （１）主鎖に結合されたドナー−受容体螢光対を有し、ここで前記ドナーが前 記受容体の螢光のために前記受容体にエネルギーを効果的に転移し；（２）個々 のラベルが実質的に同じ波長で吸光し、そして異なった波長で発光し；そして（ ３）個々のラベルが、前記主鎖にそって前記ドナー−受容体対の空間及び螢光団 を変えることに起因する、電気泳動による核酸の分離において実質的に同じ移動 性を有することを特徴とするキット。 18．前記主鎖が核酸鎖であり、そして前記ドナー−受容体螢光対が約10個より も多くないヌクレオチドにより分離される請求の範囲第17項記載のキット。 19．前記ドナー−受容体螢光対の前記ドナーが 350〜 800nmの波長範囲で光を 吸光し、そして前記ドナー−受容体対の受容体が 450〜1000nmの波長範囲で光を 発する請求の範囲第17項記載のキット。 20．少なくとも２つのドナー−受容体螢光対がキサンテン化合物である請求の 範囲第19項記載のキット。 21．前記キサンテン化合物がフルオレセイン又はローダミンである請求の範囲 第20項記載のキット。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (81)指定国 ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＤＥ， ＤＫ，ＥＳ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，Ｍ Ｃ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ， ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＫＥ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＺ)，ＡＭ， ＡＴ，ＡＵ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ，Ｃ Ｎ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＥ ，ＨＵ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＫ， ＬＲ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＮ，ＭＷ，Ｍ Ｘ，ＮＬ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ ，ＳＥ，ＳＩ，ＳＫ，ＴＪ，ＴＴ，ＵＡ，ＵＺ，ＶＮ (72)発明者 グレーザー，アレキサンダー アメリカ合衆国，カリフォルニア 94563, オリンダ，キャノン ドライブ 135 (72)発明者 ジュ，ジンギュー アメリカ合衆国，カリフォルニア 94704, バークレー，ヒルドブランド 329，デパ ートメント オブ ケミストリー，ユニバ ーシティ オブ カリフォルニア

Claims (1)

  1. 【特許請求の範囲】 １．注目の少なくとも２種の構成成分を検出するために異なる螢光ラベルを用 いて複数成分の混合物中の構成成分を同定し、そして検出するための方法であっ て、前記ラベルが、 （１）主鎖に結合されるドナー−受容体螢光対を有し、ここで前記ドナーから前 記受容体への効果的なエネルギー転移が生ずるものであり；そして （２）前記個々のラベルが実質的に同じ波長で吸光し、そして異なる波長で発光 すること、 によって特徴づけられており； 前記複数成分の混合物の異なった成分に異なったラベルを結合し； 前記受容体の吸光波長において共通の光源により照射することにより前記ラベ ルされた個々の成分を検出し、そして前記個々のラベルの螢光を検出することを 含んで成る方法。 ２．前記ドナーが 350〜 800nmの波長範囲で光を吸収し、そして前記受容体が 450〜1000nmの波長範囲で光を発する請求の範囲第１項記載の方法。 ３．前記受容体−ドナー対が９−フェニルキサンテンである請求の範囲第２項 記載の方法。 ４．注目の少なくとも２種の構成成分を検出するために異なる螢光ラベルを用 いて複数成分の混合物中の構成成分を同定し、そして検出するための方法であっ て、前記ラベルが、 （１）オリゴヌクレオチド鎖に結合されたドナー−受容体螢光対を有し、ここで 前記ドナーから前記受容体への効果的なエネルギー転移が生ずるものであり；そ して （２）前記個々のラベルが実質的に同じ波長で吸光し、そして異なる波長で発光 する、 ことによって特徴づけられており； 前記複数成分の混合物の異なる成分に異なるラベルを結合し； 前記受容体の吸光波長において共通の光源により照射することにより前記ラベ ルされた個々の成分を検出し、そして前記個々のラベルの螢光を検出することを 含んで成る方法。 ５．前記ドナーが 350〜 800nmの波長範囲で光を吸収し、そして前記受容体が 450〜1000nmの波長範囲で光を発する請求の範囲第４項記載の方法。 ６．前記受容体−ドナー対が９−フェニルキサンテンである請求の範囲第５項 記載の方法。 ７．複数成分の混合物の構成成分を分離するための方法であって、注目の個々 の異なる成分が異なるラベルによりラベルされ、前記ラベルが、 （１）オリゴヌクレオチド鎖に結合されたドナー−受容体螢光対を有し、ここで 前記ドナーから前記受容体への効果的なエネルギー転移が生ずるものであり； （２）前記個々のラベルが実質的に同じ波長で吸光し、そして異なった波長で発 光し；そして （３）前記個々の異なるラベルが、前記オリゴヌクレオチド鎖にそって前記ドナ ー−受容体対のスペーサーを変えることの結果として前記分離において実質的に 同じ移動性を有する、 ことによって特徴づけられており、 前記複数成分の混合物の異なる成分に異なるラベルを結合し； 前記成分を個々の画分に分離し；そして 前記受容体の吸光波長において共通の光源により照することによ り前記ラベルされた個々の成分を検出し、そして前記個々のラベルの螢光を検出 することを含んで成る方法。 ８．前記分離が電気泳動によるものである請求の範囲第７項記載の方法。 ９．前記ドナーが 350〜 800nmの波長範囲で光を吸収し、そして前記受容体が 450〜1000nmの波長範囲で光を発する請求の範囲第７項記載の方法。 10．前記受容体−ドナー対が９−フェニルキサンテンである請求の範囲第９項 記載の方法。 11．一本鎖核酸をコピーするためのプライマー及び特定のヌクレオチドで前記 コピーに起因する鎖を終結するためのジデオキシヌクレオシドを用いて核酸配列 を配列決定するための方法であって、 配列決定されるべき核酸フラグメントを、プライマーに結合する前記フラグメ ントの５′側配列を含んで成るベクターでクローンニングし； 異なる反応容器において、前記プライマー、dNTP及び少量の異なる１種のジデ オキシヌクレオチドの存在下で DNAポリメラーゼにより前記フラグメントをコピ ーし；そして 一本鎖 DNAフラグメントの得られる混合物を分離し、そしてゲル上に存在する バンドにより配列を決定することを含んで成り、 ここで、（１）前記プライマー結合配列に対して相補的な核酸鎖に結合される 受容体−ドナー螢光対を有し、ここで前記ドナーが前記受容体の螢光のために前 記受容体にエネルギーを効果的に転移し、（２）前記個々のプライマーが実質的 に同じ波長で吸光し、そして異なった波長で発光し；そして（３）前記個々のプ ライマーが、前記核酸鎖にそって前記ドナー−受容体対の空間及び螢光団を変え ることに起因する、前記分離において実質的に同じ移動性を有する ことにより特徴づけられるプライマーを用いることを特徴とする方法。 12．前記受容体−ドナー螢光対のメンバーの１つが前記プライマーの５′末端 に結合される請求の範囲第11項記載の方法。 13．異なった受容体−ドナー対を有する４種のプライマーが存在する請求の範 囲第11項記載の方法。 14．前記受容体−ドナー螢光対が10よりも多くないヌクレオチドにより分離さ れる請求の範囲第11項記載の方法。 15．少なくとも２つの受容体−ドナー螢光対がキサンテン化合物である請求の 範囲第11項記載の方法。 16．前記キサンテン化合物がフルオレセイン及びローダミンを含んで成る請求 の範囲第15項記載の方法。 17．少なくとも２種の螢光化合物を含んで成るキットであって、前記個々の螢 光化合物が、 （１）主鎖に結合された受容体−ドナー螢光対を有し、ここで前記ドナーが前 記受容体の螢光のために前記受容体にエネルギーを効果的に転移し；（２）個々 のラベルが実質的に同じ波長で吸光し、そして異なった波長で発光し；そして（ ３）個々のラベルが、前記主鎖にそって前記ドナー−受容体対の空間を変えるこ とに起因する、前記分離において実質的に同じ移動性を有することを特徴とする キット。 18．前記主鎖が核酸鎖であり、そして前記受容体−ドナー螢光対が約10個より も多くないヌクレオチドにより分離される請求の範囲第17項記載のキット。 19．前記ドナーが 350〜 800の波長範囲で光を吸光し、そして前記受容体が 4 50〜1000の波長範囲で光を発する請求の範囲第17項記載のキット。 20．少なくとも２つの受容体−ドナー螢光対がキサンテン化合物である請求の 範囲第19項記載のキット。 21．前記キサンテン化合物がフルオレセイン又はローダミンである請求の範囲 第20項記載のキット。
JP52067995A 1994-02-01 1995-01-30 エネルギー転移連結の色素によりラベルされたプローブ Expired - Lifetime JP3895369B2 (ja)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US08/189,924 1994-02-01
US08/189,924 US5654419A (en) 1994-02-01 1994-02-01 Fluorescent labels and their use in separations
PCT/US1995/001205 WO1995021266A1 (en) 1994-02-01 1995-01-30 Probes labelled with energy transfer coupled dyes

Related Child Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
JP2006257134A Division JP4602956B2 (ja) 1994-02-01 2006-09-22 エネルギー転移連結の色素によりラベルされたプローブ

Publications (2)

Publication Number Publication Date
JPH09508525A true JPH09508525A (ja) 1997-09-02
JP3895369B2 JP3895369B2 (ja) 2007-03-22

Family

ID=22699330

Family Applications (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
JP52067995A Expired - Lifetime JP3895369B2 (ja) 1994-02-01 1995-01-30 エネルギー転移連結の色素によりラベルされたプローブ
JP2006257134A Expired - Lifetime JP4602956B2 (ja) 1994-02-01 2006-09-22 エネルギー転移連結の色素によりラベルされたプローブ

Family Applications After (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
JP2006257134A Expired - Lifetime JP4602956B2 (ja) 1994-02-01 2006-09-22 エネルギー転移連結の色素によりラベルされたプローブ

Country Status (9)

Country Link
US (3) US5654419A (ja)
EP (1) EP0743987B1 (ja)
JP (2) JP3895369B2 (ja)
AT (1) ATE236994T1 (ja)
AU (1) AU692230B2 (ja)
CA (1) CA2182516C (ja)
DE (3) DE69530286T2 (ja)
ES (1) ES2197193T3 (ja)
WO (1) WO1995021266A1 (ja)

Cited By (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2003334097A (ja) * 2002-03-12 2003-11-25 Enzo Life Sciences Inc リアルタイム核酸検出法と組成物
JP2004043819A (ja) * 1996-05-03 2004-02-12 Applera Corp 硬質リンカ―を有するエネルギ―転移色素
JP2004510144A (ja) * 2000-09-18 2004-04-02 メディミューン，インコーポレイテッド ワクチンの免疫原性を測定する試験管内検定
JP2006521092A (ja) * 2003-04-04 2006-09-21 エフ．ホフマン−ラ　ロシュ　アーゲー マルチカラーリアルタイムｐｃｒ用の改良されたシステム
JP2014502496A (ja) * 2010-12-16 2014-02-03 バイオ−ラッド ラボラトリーズ インコーポレーティッド 定量的増幅のためのユニバーサルリファレンス色素

Families Citing this family (279)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US7081226B1 (en) 1996-06-04 2006-07-25 University Of Utah Research Foundation System and method for fluorescence monitoring
US7273749B1 (en) 1990-06-04 2007-09-25 University Of Utah Research Foundation Container for carrying out and monitoring biological processes
US5935522A (en) * 1990-06-04 1999-08-10 University Of Utah Research Foundation On-line DNA analysis system with rapid thermal cycling
US6238931B1 (en) * 1993-09-24 2001-05-29 Biosite Diagnostics, Inc. Fluorescence energy transfer in particles
US5538848A (en) 1994-11-16 1996-07-23 Applied Biosystems Division, Perkin-Elmer Corp. Method for detecting nucleic acid amplification using self-quenching fluorescence probe
US6821727B1 (en) 1993-11-15 2004-11-23 Applera Corporation Hybridization assay using self-quenching fluorescence probe
US5654419A (en) * 1994-02-01 1997-08-05 The Regents Of The University Of California Fluorescent labels and their use in separations
US6028190A (en) 1994-02-01 2000-02-22 The Regents Of The University Of California Probes labeled with energy transfer coupled dyes
US6426190B1 (en) 1995-04-20 2002-07-30 Carnegie Mellon University Difference detection methods using matched multiple dyes
US6127134A (en) * 1995-04-20 2000-10-03 Carnegie Mellon University Difference gel electrophoresis using matched multiple dyes
US6008373A (en) 1995-06-07 1999-12-28 Carnegie Mellon University Fluorescent labeling complexes with large stokes shift formed by coupling together cyanine and other fluorochromes capable of resonance energy transfer
US5994063A (en) * 1995-06-23 1999-11-30 Metzker; Michael L. Substituted 4,4-difluoro-4-bora-3A,4A-diaza-s-indacene compounds for homogenous amplification/detection assays
US5861287A (en) * 1995-06-23 1999-01-19 Baylor College Of Medicine Alternative dye-labeled primers for automated DNA sequencing
US5728528A (en) * 1995-09-20 1998-03-17 The Regents Of The University Of California Universal spacer/energy transfer dyes
US6214555B1 (en) * 1996-05-01 2001-04-10 Visible Genetics Inc. Method compositions and kit for detection
US5945526A (en) * 1996-05-03 1999-08-31 Perkin-Elmer Corporation Energy transfer dyes with enhanced fluorescence
US5863727A (en) * 1996-05-03 1999-01-26 The Perkin-Elmer Corporation Energy transfer dyes with enhanced fluorescence
US7388092B2 (en) * 1996-05-03 2008-06-17 Applera Corporation Oligonucleotides and analogs labeled with energy transfer dyes
US7825237B2 (en) * 1996-05-03 2010-11-02 Applied Biosystems, Llc Oligonucleotides and analogs labeled with energy transfer dyes
US5736333A (en) * 1996-06-04 1998-04-07 The Perkin-Elmer Corporation Passive internal references for the detection of nucleic acid amplification products
ATE295427T1 (de) 1996-06-04 2005-05-15 Univ Utah Res Found Überwachung der hybridisierung während pcr
NZ333137A (en) * 1996-06-04 2000-03-27 Univ Utah Res Found System and method for carrying out thermal cycling for biological processes such as the polymerase chain reaction
US6117635A (en) * 1996-07-16 2000-09-12 Intergen Company Nucleic acid amplification oligonucleotides with molecular energy transfer labels and methods based thereon
US5853992A (en) * 1996-10-04 1998-12-29 The Regents Of The University Of California Cyanine dyes with high-absorbance cross section as donor chromophores in energy transfer labels
US5840879A (en) * 1996-12-06 1998-11-24 Wang; Edge R. Reagents and solid supports for improved synthesis and labeling of polynucleotides
US5804386A (en) * 1997-01-15 1998-09-08 Incyte Pharmaceuticals, Inc. Sets of labeled energy transfer fluorescent primers and their use in multi component analysis
CA2281205A1 (en) 1997-02-12 1998-08-13 Eugene Y. Chan Methods and products for analyzing polymers
US6403311B1 (en) 1997-02-12 2002-06-11 Us Genomics Methods of analyzing polymers using ordered label strategies
AU9476298A (en) * 1997-09-11 1999-03-29 Seq, Ltd. Method for dna sequencing analysis
US7745142B2 (en) * 1997-09-15 2010-06-29 Molecular Devices Corporation Molecular modification assays
US7632651B2 (en) * 1997-09-15 2009-12-15 Mds Analytical Technologies (Us) Inc. Molecular modification assays
US20050227294A1 (en) * 1997-09-15 2005-10-13 Molecular Devices Corporation Molecular modification assays involving lipids
JPH1189598A (ja) * 1997-09-18 1999-04-06 Hitachi Software Eng Co Ltd 蛍光標識プローブ及びハイブリダイゼーション検出方法
US6008379A (en) * 1997-10-01 1999-12-28 The Perkin-Elmer Corporation Aromatic-substituted xanthene dyes
US6485901B1 (en) 1997-10-27 2002-11-26 Boston Probes, Inc. Methods, kits and compositions pertaining to linear beacons
US6355421B1 (en) 1997-10-27 2002-03-12 Boston Probes, Inc. Methods, kits and compositions pertaining to PNA molecular beacons
US5936087A (en) 1997-11-25 1999-08-10 The Perkin-Elmer Corporation Dibenzorhodamine dyes
US6583168B1 (en) 1997-11-25 2003-06-24 Applera Corporation Sulfonated diarylrhodamine dyes
US6080868A (en) 1998-01-23 2000-06-27 The Perkin-Elmer Corporation Nitro-substituted non-fluorescent asymmetric cyanine dye compounds
WO1999039203A1 (en) * 1998-02-03 1999-08-05 Amersham Pharmacia Biotech, Inc. Energy transfer dyes
EP1057020A2 (de) * 1998-02-14 2000-12-06 GMD Forschungszentrum Informationstechnik GmbH Fluoreszenz-energie-transfer für die aufklärung der 3d-struktur von biomakromolekülen
DE19811729C2 (de) * 1998-03-18 2000-05-18 November Ag Molekulare Medizin Verfahren und Vorrichtung zum Nachweis einer Nukleotidsequenz
DE19811730A1 (de) * 1998-03-18 1999-09-23 November Ag Molekulare Medizin Verfahren und Vorrichtung zum Identifizieren einer Markierung
WO1999049293A2 (en) 1998-03-24 1999-09-30 Boston Probes, Inc. Methods, kits and compositions pertaining to detection complexes
US7875440B2 (en) 1998-05-01 2011-01-25 Arizona Board Of Regents Method of determining the nucleotide sequence of oligonucleotides and DNA molecules
US6780591B2 (en) 1998-05-01 2004-08-24 Arizona Board Of Regents Method of determining the nucleotide sequence of oligonucleotides and DNA molecules
US6037130A (en) * 1998-07-28 2000-03-14 The Public Health Institute Of The City Of New York, Inc. Wavelength-shifting probes and primers and their use in assays and kits
US6210896B1 (en) 1998-08-13 2001-04-03 Us Genomics Molecular motors
US6967250B1 (en) * 1998-08-31 2005-11-22 Amersham Biosciences Corp Energy transfer dyes
WO2000028090A2 (en) 1998-11-12 2000-05-18 Nyxis, Inc. Diagnostic assay for cancer
WO2001027150A2 (en) 1999-10-14 2001-04-19 Clontech Laboratories Inc. Anthozoa derived chromo/fluoroproteins and methods for using the same
GB9827908D0 (en) * 1998-12-19 1999-02-10 Univ Manchester Nucleic acid sequencing method
US7033753B1 (en) 1999-01-15 2006-04-25 University Of Rochester Compositions and methods for nonenzymatic ligation of oligonucleotides and detection of genetic polymorphisms
US20040111219A1 (en) * 1999-02-22 2004-06-10 Sandeep Gulati Active interferometric signal analysis in software
US6245511B1 (en) 1999-02-22 2001-06-12 Vialogy Corp Method and apparatus for exponentially convergent therapy effectiveness monitoring using DNA microarray based viral load measurements
US6136541A (en) * 1999-02-22 2000-10-24 Vialogy Corporation Method and apparatus for analyzing hybridized biochip patterns using resonance interactions employing quantum expressor functions
US6573047B1 (en) 1999-04-13 2003-06-03 Dna Sciences, Inc. Detection of nucleotide sequence variation through fluorescence resonance energy transfer label generation
US7655443B1 (en) * 1999-05-07 2010-02-02 Siemens Healthcare Diagnostics, Inc. Nucleic acid sequencing with simultaneous quantitation
US7056661B2 (en) * 1999-05-19 2006-06-06 Cornell Research Foundation, Inc. Method for sequencing nucleic acid molecules
US6472141B2 (en) 1999-05-21 2002-10-29 Caliper Technologies Corp. Kinase assays using polycations
US6287774B1 (en) * 1999-05-21 2001-09-11 Caliper Technologies Corp. Assay methods and system
US6818395B1 (en) 1999-06-28 2004-11-16 California Institute Of Technology Methods and apparatus for analyzing polynucleotide sequences
AU7627100A (en) * 1999-07-27 2001-02-13 University Of Utah Research Foundation Homogeneous fluorescence method for assaying structural modifications of biomolecules
US7138254B2 (en) 1999-08-02 2006-11-21 Ge Healthcare (Sv) Corp. Methods and apparatus for performing submicroliter reactions with nucleic acids or proteins
US6358684B1 (en) * 1999-08-27 2002-03-19 Pe Corporation UV excitable fluorescent energy transfer dyes
US6218124B1 (en) 1999-08-27 2001-04-17 Pe Corporation Method for detecting oligonucleotides using UV light source
WO2001016375A2 (en) * 1999-08-30 2001-03-08 The Government Of The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services High speed parallel molecular nucleic acid sequencing
US6982146B1 (en) 1999-08-30 2006-01-03 The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services High speed parallel molecular nucleic acid sequencing
US6221600B1 (en) * 1999-10-08 2001-04-24 Board Of Regents, The University Of Texas System Combinatorial oligonucleotide PCR: a method for rapid, global expression analysis
ES2283324T3 (es) 1999-11-02 2007-11-01 Drk-Blutspendedienst Baden-Wurttemberg-Hessen Gemeinnutzige Gmbh Estructura molecular del locus rhd negativo.
US6191278B1 (en) 1999-11-03 2001-02-20 Pe Corporation Water-soluble rhodamine dyes and conjugates thereof
US6372907B1 (en) * 1999-11-03 2002-04-16 Apptera Corporation Water-soluble rhodamine dye peptide conjugates
JP2003517309A (ja) 1999-12-02 2003-05-27 ディーエヌエー サイエンシーズ インコーポレーテッド 単一ヌクレオチドの変異及びジェノタイピングの決定方法
US6221604B1 (en) 2000-02-07 2001-04-24 Pe Corporation Electron-deficient nitrogen heterocycle-substituted fluorescein dyes
US6436641B1 (en) * 2000-04-17 2002-08-20 Visible Genetics Inc. Method and apparatus for DNA sequencing
US6465644B1 (en) 2000-05-02 2002-10-15 Applera Corporation Sulfonated [8,9] benzophenoxazine dyes and the use of their labelled conjugates
US6355433B1 (en) 2000-06-02 2002-03-12 Dna Sciences, Inc. Determination of nucleotide sequence variations through limited primer extension
US7846733B2 (en) 2000-06-26 2010-12-07 Nugen Technologies, Inc. Methods and compositions for transcription-based nucleic acid amplification
US20070172866A1 (en) * 2000-07-07 2007-07-26 Susan Hardin Methods for sequence determination using depolymerizing agent
DE60131194T2 (de) * 2000-07-07 2008-08-07 Visigen Biotechnologies, Inc., Bellaire Sequenzbestimmung in echtzeit
US6984522B2 (en) 2000-08-03 2006-01-10 Regents Of The University Of Michigan Isolation and use of solid tumor stem cells
US20060057565A1 (en) * 2000-09-11 2006-03-16 Jingyue Ju Combinatorial fluorescence energy transfer tags and uses thereof
US6627748B1 (en) 2000-09-11 2003-09-30 The Trustees Of Columbia University In The City Of New York Combinatorial fluorescence energy transfer tags and their applications for multiplex genetic analyses
CA2421582A1 (en) * 2000-09-11 2002-03-21 The Trustees Of Columbia University In The City Of New York Combinatorial fluorescence energy transfer tags and uses thereof
AU2001296645A1 (en) 2000-10-06 2002-04-15 The Trustees Of Columbia University In The City Of New York Massive parallel method for decoding dna and rna
EP1356104A2 (en) 2000-10-06 2003-10-29 Nugen Technologies, Inc. Methods and probes for detection and/or quantification of nucleic acid sequences
US9708358B2 (en) 2000-10-06 2017-07-18 The Trustees Of Columbia University In The City Of New York Massive parallel method for decoding DNA and RNA
US6448407B1 (en) 2000-11-01 2002-09-10 Pe Corporation (Ny) Atropisomers of asymmetric xanthene fluorescent dyes and methods of DNA sequencing and fragment analysis
US20020115092A1 (en) * 2000-11-08 2002-08-22 The Scripps Research Institute Energy transfer labels with mechanically linked fluorophores
AU2002227156A1 (en) * 2000-12-01 2002-06-11 Visigen Biotechnologies, Inc. Enzymatic nucleic acid synthesis: compositions and methods for altering monomer incorporation fidelity
US20020072053A1 (en) * 2000-12-08 2002-06-13 Mcnally Alan J. Immunoassay based on DNA replication using labeled primer
ATE475720T1 (de) 2000-12-13 2010-08-15 Nugen Technologies Inc Methoden und zusammensetzungen zur generierung einer vielzahl von kopien von nukleinsäuresequenzen und methoden zur detektion derselben
DE60220025T2 (de) 2001-03-09 2008-01-17 Nugen Technologies, Inc., San Carlos Methoden und zusammensetzungen zur vervielfältigung von rna sequenzen
JP2004523243A (ja) 2001-03-12 2004-08-05 カリフォルニア インスティチュート オブ テクノロジー 非同期性塩基伸長によってポリヌクレオチド配列を分析するための方法および装置
US20020177157A1 (en) * 2001-05-24 2002-11-28 Yuling Luo Pairs of nucleic acid probes with interactive signaling moieties and nucleic acid probes with enhanced hybridization efficiency and specificity
US7668697B2 (en) * 2006-02-06 2010-02-23 Andrei Volkov Method for analyzing dynamic detectable events at the single molecule level
US20030087309A1 (en) * 2001-08-27 2003-05-08 Shiping Chen Desktop drug screening system
US6972173B2 (en) * 2002-03-14 2005-12-06 Intel Corporation Methods to increase nucleotide signals by raman scattering
US6852492B2 (en) * 2001-09-24 2005-02-08 Intel Corporation Nucleic acid sequencing by raman monitoring of uptake of precursors during molecular replication
US6982165B2 (en) * 2001-09-24 2006-01-03 Intel Corporation Nucleic acid sequencing by raman monitoring of molecular deconstruction
US7238477B2 (en) * 2001-09-24 2007-07-03 Intel Corporation Methods to increase nucleotide signals by Raman scattering
WO2003042697A1 (en) * 2001-11-14 2003-05-22 Genospectra, Inc. Biochemical analysis system with combinatorial chemistry applications
ES2329666T3 (es) * 2001-12-19 2009-11-30 The University Of Chicago Proteinas fluorescentes de maduracion rapida y procedimientos de uso de las mismas.
US9353405B2 (en) 2002-03-12 2016-05-31 Enzo Life Sciences, Inc. Optimized real time nucleic acid detection processes
US7118871B2 (en) * 2002-04-22 2006-10-10 Lawler Joseph F Reagents for monitoring nucleic acid amplification and methods of using same
AU2003238796A1 (en) * 2002-05-28 2003-12-12 U.S. Genomics, Inc. Methods and apparati using single polymer analysis
US20070059690A1 (en) * 2002-05-31 2007-03-15 Amirul Islam "Met/fret based method of target nucleic acid detection whereby the donor/acceptor moieties are on complementary strands"
US7115370B2 (en) 2002-06-05 2006-10-03 Capital Genomix, Inc. Combinatorial oligonucleotide PCR
EP1539728A2 (en) * 2002-07-01 2005-06-15 Guava Technologies, Inc. Fluorescent dyes, energy transfer couples and methods
US7074597B2 (en) * 2002-07-12 2006-07-11 The Trustees Of Columbia University In The City Of New York Multiplex genotyping using solid phase capturable dideoxynucleotides and mass spectrometry
EP1389638A1 (en) * 2002-08-06 2004-02-18 Roche Diagnostics GmbH Improved fluorescent resonance energy transfer probes
US20070184453A1 (en) * 2002-10-02 2007-08-09 Roche Molecular Systems, Inc Fret process
US7226414B2 (en) * 2002-10-09 2007-06-05 Biotex, Inc. Method and apparatus for analyte sensing
US7951923B2 (en) 2002-11-12 2011-05-31 Zakrytoe Aktsionernoe Obschestvo ‘Evrogen’ Fluorescent proteins and chromoproteins from non-Aequorea hydrozoa species and methods for using same
WO2004055160A2 (en) * 2002-12-13 2004-07-01 The Trustees Of Columbia University In The City Of New York Biomolecular coupling methods using 1,3-dipolar cycloaddition chemistry
WO2004058973A1 (en) 2002-12-26 2004-07-15 Zakrytoe Aktsionernoe Obschestvo 'evrogen' Fluorescent proteins from copepoda species and methods for using same
US7166458B2 (en) * 2003-01-07 2007-01-23 Bio Tex, Inc. Assay and method for analyte sensing by detecting efficiency of radiation conversion
WO2004092418A2 (en) 2003-04-14 2004-10-28 Nugen Technologies, Inc. Global amplification using a randomly primed composite primer
WO2004101709A1 (en) 2003-05-09 2004-11-25 Applera Corporation Phenyl xanthene dyes
EP1627025B1 (en) * 2003-05-09 2016-10-12 Applied Biosystems, LLC Fluorescent polymeric materials containing lipid soluble rhodamine dyes
US7236812B1 (en) 2003-09-02 2007-06-26 Biotex, Inc. System, device and method for determining the concentration of an analyte
US7169560B2 (en) 2003-11-12 2007-01-30 Helicos Biosciences Corporation Short cycle methods for sequencing polynucleotides
JP2007534308A (ja) * 2003-11-19 2007-11-29 アレロジック・バイオサイエンシズ・コーポレーション 複数のフルオロフォアで標識したオリゴヌクレオチド
JP2007524407A (ja) 2003-12-29 2007-08-30 ニューゲン テクノロジーズ， インコーポレイテッド 核酸のメチル化状態を分析するための方法、ならびに核酸の断片化、標識化および固定化のための方法
US7977048B2 (en) 2004-01-13 2011-07-12 Pathogenetix, Inc. Detection and quantification of analytes in solution using polymers
US10337054B2 (en) 2004-02-02 2019-07-02 Quantum-Si Incorporated Enrichment of nucleic acid targets
US20050202484A1 (en) 2004-02-19 2005-09-15 The Governors Of The University Of Alberta Leptin promoter polymorphisms and uses thereof
WO2005080605A2 (en) 2004-02-19 2005-09-01 Helicos Biosciences Corporation Methods and kits for analyzing polynucleotide sequences
CA2557818A1 (en) * 2004-03-03 2005-09-15 The Trustees Of Columbia University In The City Of New York Photocleavable fluorescent nucleotides for dna sequencing on chip constructed by site-specific coupling chemistry
JP2007529758A (ja) * 2004-03-19 2007-10-25 ユー．エス． ジェノミクス， インコーポレイテッド 単一分子の検出のための組成物および方法
US7250298B2 (en) * 2004-04-07 2007-07-31 The University Of Chicago Monomeric red fluorescent proteins
WO2006073436A2 (en) * 2004-04-29 2006-07-13 The Trustees Of Columbia University In The City Of New York Mass tag pcr for multiplex diagnostics
US8883486B2 (en) 2004-05-04 2014-11-11 Universite De Montreal Arrestin biosensor
US7476734B2 (en) 2005-12-06 2009-01-13 Helicos Biosciences Corporation Nucleotide analogs
DE602005027700D1 (de) 2004-05-25 2011-06-09 Helicos Biosciences Corp Verfahren zur nukleinsäureimmobilisierung
US20090087848A1 (en) * 2004-08-18 2009-04-02 Abbott Molecular, Inc. Determining segmental aneusomy in large target arrays using a computer system
US20060057618A1 (en) * 2004-08-18 2006-03-16 Abbott Molecular, Inc., A Corporation Of The State Of Delaware Determining data quality and/or segmental aneusomy using a computer system
US8484000B2 (en) * 2004-09-02 2013-07-09 Vialogy Llc Detecting events of interest using quantum resonance interferometry
AU2005296200B2 (en) * 2004-09-17 2011-07-14 Pacific Biosciences Of California, Inc. Apparatus and method for analysis of molecules
US7170050B2 (en) * 2004-09-17 2007-01-30 Pacific Biosciences Of California, Inc. Apparatus and methods for optical analysis of molecules
EP1828220A4 (en) * 2004-11-12 2009-02-25 Transgenomic Inc METHODS AND COMPOSITIONS FOR HIGH-SENSITIVITY FLUORESCENT MUTATION DETECTION COMPRISING DNA-ENDONUCLEASE DIFFERENCE CUTTING
US7220549B2 (en) 2004-12-30 2007-05-22 Helicos Biosciences Corporation Stabilizing a nucleic acid for nucleic acid sequencing
US7482120B2 (en) 2005-01-28 2009-01-27 Helicos Biosciences Corporation Methods and compositions for improving fidelity in a nucleic acid synthesis reaction
WO2006113915A2 (en) * 2005-04-20 2006-10-26 Board Of Regents, The University Of Texas System Ultrasensitive detection of prions by automated protein misfolding cyclic amplification
DK2463386T3 (en) 2005-06-15 2017-07-31 Complete Genomics Inc Nucleic acid analysis using random mixtures of non-overlapping fragments
US9169510B2 (en) 2005-06-21 2015-10-27 The Trustees Of Columbia University In The City Of New York Pyrosequencing methods and related compositions
US7666593B2 (en) 2005-08-26 2010-02-23 Helicos Biosciences Corporation Single molecule sequencing of captured nucleic acids
US20070134685A1 (en) * 2005-09-06 2007-06-14 Invitrogen Corporation Control of chemical modification
US7939258B2 (en) 2005-09-07 2011-05-10 Nugen Technologies, Inc. Nucleic acid amplification procedure using RNA and DNA composite primers
US7405281B2 (en) * 2005-09-29 2008-07-29 Pacific Biosciences Of California, Inc. Fluorescent nucleotide analogs and uses therefor
JP4843044B2 (ja) * 2005-10-05 2011-12-21 エフ．ホフマン−ラ ロシュ アーゲー 非蛍光性エネルギー移動
EP1951900B1 (en) 2005-10-07 2016-06-15 Callida Genomics, Inc. Self-assembled single molecule arrays and uses thereof
WO2007056250A2 (en) * 2005-11-04 2007-05-18 U.S. Genomics, Inc. Heterogeneous assay of analytes in solution using polymers
RU2412250C2 (ru) * 2005-11-04 2011-02-20 Закрытое акционерное общество "ЕВРОГЕН" Модифицированные зеленые флуоресцентные белки и способы их использования
AU2006318462A1 (en) * 2005-11-21 2007-05-31 The Trustees Of Columbia University In The City Of New York Multiplex digital immuno-sensing using a library of photocleavable mass tags
US8703734B2 (en) 2005-12-12 2014-04-22 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Nanoprobes for detection or modification of molecules
US7871777B2 (en) * 2005-12-12 2011-01-18 The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services Probe for nucleic acid sequencing and methods of use
US8563703B2 (en) 2006-01-25 2013-10-22 Evrogen IP Joint Stock Company Fluorescent proteins and methods for using same
DK1994149T3 (da) 2006-01-25 2011-01-17 Evrogen Ip Nye fluorescerende proteiner og fremgangsmåder til anvendelse deraf
SG170028A1 (en) 2006-02-24 2011-04-29 Callida Genomics Inc High throughput genome sequencing on dna arrays
CA2643700A1 (en) 2006-02-24 2007-11-22 Callida Genomics, Inc. High throughput genome sequencing on dna arrays
US7397546B2 (en) 2006-03-08 2008-07-08 Helicos Biosciences Corporation Systems and methods for reducing detected intensity non-uniformity in a laser beam
EP2020988B1 (en) 2006-04-28 2017-08-16 Children's Hospital Medical Center Compositions comprising fusogenic proteins or polypeptides derived from prosaposin for application in transmembrane drug delivery systems
EP2074222A4 (en) * 2006-09-06 2010-03-03 Univ Texas METHODS AND COMPOSITIONS FOR DETECTION OF PROTEIN FOLDING DISORDERS
US8680235B2 (en) * 2006-09-22 2014-03-25 Stowers Institute For Medical Research Branchiostoma derived fluorescent proteins
US7910354B2 (en) 2006-10-27 2011-03-22 Complete Genomics, Inc. Efficient arrays of amplified polynucleotides
US20090111706A1 (en) 2006-11-09 2009-04-30 Complete Genomics, Inc. Selection of dna adaptor orientation by amplification
GB2457402B (en) 2006-12-01 2011-10-19 Univ Columbia Four-color DNA sequencing by synthesis using cleavable fluorescent nucleotide reversible terminators
US7881933B2 (en) * 2007-03-23 2011-02-01 Verizon Patent And Licensing Inc. Age determination using speech
US7816135B2 (en) 2007-07-05 2010-10-19 Becton, Dickinson And Company Method of analyzing lymphocytes
US20110014611A1 (en) * 2007-10-19 2011-01-20 Jingyue Ju Design and synthesis of cleavable fluorescent nucleotides as reversible terminators for dna sequences by synthesis
EP3431615A3 (en) 2007-10-19 2019-02-20 The Trustees of Columbia University in the City of New York Dna sequencing with non-fluorescent nucleotide reversible terminators cleavable label modified nucleotide terminators
US8679749B2 (en) * 2007-11-01 2014-03-25 The University Of Chicago Red fluorescent proteins with enhanced bacterial expression, increased brightness and reduced aggregation
US20090203531A1 (en) 2008-02-12 2009-08-13 Nurith Kurn Method for Archiving and Clonal Expansion
GB2470672B (en) 2008-03-21 2012-09-12 Nugen Technologies Inc Methods of RNA amplification in the presence of DNA
US7973146B2 (en) * 2008-03-26 2011-07-05 Pacific Biosciences Of California, Inc. Engineered fluorescent dye labeled nucleotide analogs for DNA sequencing
BRPI0909212A2 (pt) 2008-03-28 2015-08-18 Pacific Biosciences California Composições e método para sequeciamento de ácido nucléico
JP5924937B2 (ja) 2008-07-25 2016-05-25 エックス−ボディ インコーポレイテッド タンパク質スクリーニング法
US8252910B2 (en) 2008-11-19 2012-08-28 Pacific Biosciences Of California, Inc. Modular nucleotide compositions and uses therefor
US8603792B2 (en) 2009-03-27 2013-12-10 Life Technologies Corporation Conjugates of biomolecules to nanoparticles
WO2010117420A2 (en) 2009-03-30 2010-10-14 Pacific Biosciences Of California, Inc. Fret-labeled compounds and uses therefor
US8632975B2 (en) * 2009-06-05 2014-01-21 Life Technologies Corporation Nucleotide transient binding for sequencing methods
US9566335B1 (en) 2009-09-25 2017-02-14 The Governing Council Of The University Of Toronto Protein sequencing method and reagents
US8518643B2 (en) * 2010-02-04 2013-08-27 Pacific Biosciences Of California, Inc. Method to improve single molecule analyses
US20120034603A1 (en) 2010-08-06 2012-02-09 Tandem Diagnostics, Inc. Ligation-based detection of genetic variants
US20130261003A1 (en) 2010-08-06 2013-10-03 Ariosa Diagnostics, In. Ligation-based detection of genetic variants
US8669374B2 (en) 2010-08-25 2014-03-11 Gene Shen Functionalized cyanine dyes (PEG)
WO2012090073A2 (en) 2010-12-30 2012-07-05 The Netherlands Cancer Institute Methods and compositions for predicting chemotherapy sensitivity
WO2012103031A2 (en) 2011-01-25 2012-08-02 Ariosa Diagnostics, Inc. Detection of genetic abnormalities
US10131947B2 (en) 2011-01-25 2018-11-20 Ariosa Diagnostics, Inc. Noninvasive detection of fetal aneuploidy in egg donor pregnancies
US20120219950A1 (en) 2011-02-28 2012-08-30 Arnold Oliphant Assay systems for detection of aneuploidy and sex determination
AU2012240240A1 (en) 2011-04-04 2013-05-09 Netherlands Cancer Institute Methods and compositions for predicting resistance to anticancer treatment with protein kinase inhibitors
WO2012138789A2 (en) 2011-04-04 2012-10-11 Netherlands Cancer Institute Methods and compositions for predicting resistance to anticancer treatment
JP6407714B2 (ja) 2011-04-25 2018-10-17 アドヴァンスド バイオサイエンス ラボラトリーズ インコーポレイテッド 短縮型ｈｉｖエンベロープタンパク質（ｅｎｖ）、前記に関連する方法及び組成物
JP6316185B2 (ja) * 2011-05-06 2018-04-25 キアゲン ゲーエムベーハー 内部標識プライマーを含む核酸の配列決定、増幅および検出のための方法
WO2012162429A2 (en) 2011-05-23 2012-11-29 The Trustees Of Columbia University In The City Of New York Dna sequencing by synthesis using raman and infrared spectroscopy detection
WO2013039883A1 (en) 2011-09-12 2013-03-21 Abbvie Biotherapeutics Inc. Artificial nk cells and uses thereof
US10501791B2 (en) 2011-10-14 2019-12-10 President And Fellows Of Harvard College Sequencing by structure assembly
WO2013056841A1 (en) 2011-10-19 2013-04-25 Inra (Institut National De La Recherche Agronomique) A method for diagnosing tse
EP2769007B1 (en) 2011-10-19 2016-12-07 Nugen Technologies, Inc. Compositions and methods for directional nucleic acid amplification and sequencing
GB2533882B (en) 2012-01-26 2016-10-12 Nugen Tech Inc Method of enriching and sequencing nucleic acids of interest using massively parallel sequencing
WO2013123258A1 (en) 2012-02-15 2013-08-22 Pacific Biosciences Of California, Inc. Polymerase enzyme substrates with protein shield
EP2850086B1 (en) 2012-05-18 2023-07-05 Pacific Biosciences Of California, Inc. Heteroarylcyanine dyes
US9315864B2 (en) 2012-05-18 2016-04-19 Pacific Biosciences Of California, Inc. Heteroarylcyanine dyes with sulfonic acid substituents
CN109082462B (zh) 2012-05-21 2022-10-28 斯克利普斯研究所 样品制备方法
WO2013184754A2 (en) 2012-06-05 2013-12-12 President And Fellows Of Harvard College Spatial sequencing of nucleic acids using dna origami probes
US9957549B2 (en) 2012-06-18 2018-05-01 Nugen Technologies, Inc. Compositions and methods for negative selection of non-desired nucleic acid sequences
US20150011396A1 (en) 2012-07-09 2015-01-08 Benjamin G. Schroeder Methods for creating directional bisulfite-converted nucleic acid libraries for next generation sequencing
HUE036166T2 (hu) 2012-07-20 2018-06-28 Harvard College Sejtalapú minõségellenõrzõ bioassay-k gyógyhatású élelmiszerekhez és gyógyszertermékekhez
US9476089B2 (en) 2012-10-18 2016-10-25 President And Fellows Of Harvard College Methods of making oligonucleotide probes
CA2901513C (en) 2013-03-12 2020-12-29 Ventana Medical Systems, Inc. Proximity assay for in situ detection of targets
WO2014139979A1 (en) 2013-03-12 2014-09-18 Ventana Medical Systems, Inc. Quantum dot in situ hybridization
US9540685B2 (en) 2013-03-15 2017-01-10 President And Fellows Of Harvard College Methods of identifying homologous genes using FISH
US9822408B2 (en) 2013-03-15 2017-11-21 Nugen Technologies, Inc. Sequential sequencing
US10648026B2 (en) 2013-03-15 2020-05-12 The Trustees Of Columbia University In The City Of New York Raman cluster tagged molecules for biological imaging
US9849198B2 (en) 2013-07-02 2017-12-26 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University Discrete imaging of hepatic oxidative and nitrosative stress with two-channel nanoparticles for in vivo drug safety screening
EP3030683B1 (en) 2013-08-05 2022-03-02 Pacific Biosciences of California, Inc. Protected fluorescent reagent compounds
WO2015073711A1 (en) 2013-11-13 2015-05-21 Nugen Technologies, Inc. Compositions and methods for identification of a duplicate sequencing read
WO2015131107A1 (en) 2014-02-28 2015-09-03 Nugen Technologies, Inc. Reduced representation bisulfite sequencing with diversity adaptors
WO2016028843A2 (en) 2014-08-19 2016-02-25 President And Fellows Of Harvard College Rna-guided systems for probing and mapping of nucleic acids
CA2960821A1 (en) 2014-09-09 2016-03-17 Igenomx International Genomics Corporation Methods and compositions for rapid nucleic acid library preparation
AU2015349870B2 (en) 2014-11-21 2019-09-26 Nanostring Technologies, Inc. Enzyme- and amplification-free sequencing
AU2015352625B2 (en) 2014-11-25 2019-07-25 Ventana Medical Systems, Inc. Proximity assays using chemical ligation and hapten transfer
US10302972B2 (en) 2015-01-23 2019-05-28 Pacific Biosciences Of California, Inc. Waveguide transmission
WO2016126941A1 (en) 2015-02-04 2016-08-11 Pacific Biosciences Of California, Inc. Multimeric protected fluorescent reagents
US11130986B2 (en) 2015-05-20 2021-09-28 Quantum-Si Incorporated Method for isolating target nucleic acid using heteroduplex binding proteins
US10174363B2 (en) 2015-05-20 2019-01-08 Quantum-Si Incorporated Methods for nucleic acid sequencing
US10781483B2 (en) 2015-11-20 2020-09-22 Pacific Biosciences Of California, Inc. Labeled nucleotide analogs, reaction mixtures, and methods and systems for sequencing
US10676788B2 (en) 2015-11-20 2020-06-09 Pacific Biosciences Of California, Inc. Modified nucleotide reagents
EP3376996B1 (en) 2015-11-20 2022-09-07 Pacific Biosciences of California, Inc. Protected dye-labeled reagents
AU2017268257B2 (en) 2016-05-16 2023-09-07 Nanostring Technologies, Inc. Methods for detecting target nucleic acids in a sample
EP3475446A1 (en) 2016-06-27 2019-05-01 Juno Therapeutics, Inc. Method of identifying peptide epitopes, molecules that bind such epitopes and related uses
MA45491A (fr) 2016-06-27 2019-05-01 Juno Therapeutics Inc Épitopes à restriction cmh-e, molécules de liaison et procédés et utilisations associés
WO2018057648A1 (en) 2016-09-20 2018-03-29 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University Peptide regulators of mitochondrial fusion and methods of use
KR102187291B1 (ko) 2016-11-21 2020-12-07 나노스트링 테크놀로지스, 인크. 화학적 조성물 및 이것을 사용하는 방법
CA3047321A1 (en) 2016-12-19 2018-06-28 Quantum-Si Incorporated Polymerizing enzymes for sequencing reactions
US11760733B2 (en) 2017-04-23 2023-09-19 Washington University Small molecule regulators of mitochondrial fusion and methods of use thereof
AU2018261007A1 (en) 2017-05-05 2019-11-07 Quantum-Si Incorporated Substrates having modified surface reactivity and antifouling properties in biological reactions
WO2018223055A1 (en) 2017-06-02 2018-12-06 Affymetrix, Inc. Array-based methods for analysing mixed samples using differently labelled allele-specific probes
WO2018223053A1 (en) 2017-06-02 2018-12-06 Affymetrix, Inc. Array-based methods for analysing mixed samples using differently labelled allele-specific probes
KR102626317B1 (ko) 2017-07-24 2024-01-18 퀀텀-에스아이 인코포레이티드 고강도 표지된 반응물 조성물 및 서열분석 방법
GB201715684D0 (en) 2017-09-28 2017-11-15 Univ Gent Means and methods for single molecule peptide sequencing
US11099202B2 (en) 2017-10-20 2021-08-24 Tecan Genomics, Inc. Reagent delivery system
WO2019089982A1 (en) 2017-11-01 2019-05-09 Juno Therapeutics, Inc. Method of assessing activity of recombinant antigen receptors
WO2019104070A1 (en) 2017-11-21 2019-05-31 Nanostring Technologies, Inc. O-nitrobenzyl photocleavable bifunctional linker
JP2021523723A (ja) 2018-05-14 2021-09-09 ナノストリング テクノロジーズ，インコーポレイティド 化学的組成物とそれを利用する方法
BR112021008098A2 (pt) 2018-11-15 2021-08-10 Quantum-Si Incorporated métodos e composições para o sequenciamento de proteínas
WO2020154546A1 (en) 2019-01-23 2020-07-30 Quantum-Si Incorporated High intensity labeled reactant compositions and methods for sequencing
KR20220029708A (ko) 2019-06-28 2022-03-08 퀀텀-에스아이 인코포레이티드 서열분석 반응을 위한 중합 효소
AU2020364058A1 (en) 2019-10-11 2022-05-26 Quantum-Si Incorporated Surface modification in the vapor phase
KR20220100589A (ko) 2019-10-18 2022-07-15 더 보드 오브 트러스티스 오브 더 리랜드 스탠포드 쥬니어 유니버시티 임상 및 산업 규모의 온전한 조직 시퀀싱
AU2021210878A1 (en) 2020-01-21 2022-09-15 Quantum-Si Incorporated Compounds and methods for selective C-terminal labeling
WO2021178893A2 (en) 2020-03-06 2021-09-10 Singular Genomics Systems, Inc. Linked paired strand sequencing
EP4153606A2 (en) 2020-07-13 2023-03-29 Singular Genomics Systems, Inc. Methods of sequencing complementary polynucleotides
US20230366012A1 (en) 2020-09-16 2023-11-16 Nanostring Technologies, Inc. Chemical compositions and methods of using the same
US20220228200A1 (en) 2021-01-19 2022-07-21 10X Genomics, Inc. Methods and compositions for internally controlled in situ assays
WO2022170212A1 (en) 2021-02-08 2022-08-11 Singular Genomics Systems, Inc. Methods and compositions for sequencing complementary polynucleotides
WO2022192671A1 (en) 2021-03-12 2022-09-15 Singular Genomics Systems, Inc. Nanoarrays and methods of use thereof
US11884977B2 (en) 2021-03-12 2024-01-30 Singular Genomics Systems, Inc. Nanoarrays and methods of use thereof
US11578320B2 (en) 2021-04-27 2023-02-14 Singular Genomics Systems, Inc. High density sequencing and multiplexed priming
WO2022256324A1 (en) 2021-06-01 2022-12-08 10X Genomics, Inc. Methods and compositions for analyte detection and probe resolution
EP4347880A1 (en) 2021-06-02 2024-04-10 10X Genomics, Inc. Sample analysis using asymmetric circularizable probes
US20230026886A1 (en) 2021-07-13 2023-01-26 10X Genomics, Inc. Methods for preparing polymerized matrix with controllable thickness
WO2023015192A1 (en) 2021-08-03 2023-02-09 10X Genomics, Inc. Nucleic acid concatemers and methods for stabilizing and/or compacting the same
EP4326898A1 (en) 2021-08-16 2024-02-28 10X Genomics, Inc. Probes comprising a split barcode region and methods of use
US20230242974A1 (en) 2021-12-27 2023-08-03 10X Genomics, Inc. Methods and compositions for rolling circle amplification
US20230279475A1 (en) 2022-01-21 2023-09-07 10X Genomics, Inc. Multiple readout signals for analyzing a sample
WO2023164570A1 (en) 2022-02-23 2023-08-31 Insitro, Inc. Pooled optical screening and transcriptional measurements of cells comprising barcoded genetic perturbations
WO2023172665A2 (en) 2022-03-10 2023-09-14 Singular Genomics Systems, Inc. Nucleic acid delivery scaffolds
WO2023192616A1 (en) 2022-04-01 2023-10-05 10X Genomics, Inc. Compositions and methods for targeted masking of autofluorescence
WO2023215612A1 (en) 2022-05-06 2023-11-09 10X Genomics, Inc. Analysis of antigen and antigen receptor interactions
US20240026427A1 (en) 2022-05-06 2024-01-25 10X Genomics, Inc. Methods and compositions for in situ analysis of v(d)j sequences
WO2023220300A1 (en) 2022-05-11 2023-11-16 10X Genomics, Inc. Compositions and methods for in situ sequencing
US20240035071A1 (en) 2022-06-17 2024-02-01 10X Genomics, Inc. Catalytic de-crosslinking of samples for in situ analysis
WO2024036304A1 (en) 2022-08-12 2024-02-15 10X Genomics, Inc. Puma1 polymerases and uses thereof
US20240084373A1 (en) 2022-08-16 2024-03-14 10X Genomics, Inc. Ap50 polymerases and uses thereof
WO2024081869A1 (en) 2022-10-14 2024-04-18 10X Genomics, Inc. Methods for analysis of biological samples
WO2024102736A1 (en) 2022-11-08 2024-05-16 10X Genomics, Inc. Immobilization methods and compositions for in situ detection
WO2024107887A1 (en) 2022-11-16 2024-05-23 10X Genomics, Inc. Methods and compositions for assessing performance of in situ assays

Family Cites Families (14)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CA1273552A (en) * 1985-12-23 1990-09-04 Michael J. Heller Fluorescent stokes shift probes for polynucleotide hybridization assays
US4996143A (en) * 1985-12-23 1991-02-26 Syngene, Inc. Fluorescent stokes shift probes for polynucleotide hybridization
US4855225A (en) * 1986-02-07 1989-08-08 Applied Biosystems, Inc. Method of detecting electrophoretically separated oligonucleotides
US4868103A (en) * 1986-02-19 1989-09-19 Enzo Biochem, Inc. Analyte detection by means of energy transfer
JP2901004B2 (ja) * 1989-04-12 1999-06-02 株式会社日立製作所 Ｄｎａの塩基配列決定法
US5188934A (en) * 1989-11-14 1993-02-23 Applied Biosystems, Inc. 4,7-dichlorofluorescein dyes as molecular probes
US5342789A (en) * 1989-12-14 1994-08-30 Sensor Technologies, Inc. Method and device for detecting and quantifying glucose in body fluids
CA2033692A1 (en) * 1990-01-25 1991-07-26 Wilhelm Bannwarth Energy transfer systems
US5401847A (en) * 1990-03-14 1995-03-28 Regents Of The University Of California DNA complexes with dyes designed for energy transfer as fluorescent markers
US5326692B1 (en) * 1992-05-13 1996-04-30 Molecular Probes Inc Fluorescent microparticles with controllable enhanced stokes shift
WO1992014845A1 (en) * 1991-02-26 1992-09-03 Worcester Foundation For Experimental Biology Diagnosing cystic fibrosis and other genetic diseases using fluorescence resonance energy transfer (fret)
JP3097205B2 (ja) * 1991-09-05 2000-10-10 株式会社日立製作所 電気泳動分離検出方法
DE69231853T2 (de) * 1991-11-07 2001-09-13 Nanotronics Inc Hybridisierung von mit chromophoren und fluorophoren konjugierten polynukleotiden zur erzeugung eines donor-zu-donor energietransfersystems
US5654419A (en) * 1994-02-01 1997-08-05 The Regents Of The University Of California Fluorescent labels and their use in separations

Cited By (9)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2004043819A (ja) * 1996-05-03 2004-02-12 Applera Corp 硬質リンカ―を有するエネルギ―転移色素
JP2004068023A (ja) * 1996-05-03 2004-03-04 Applera Corp 硬質リンカ―を有するエネルギ―転移色素
JP2004510144A (ja) * 2000-09-18 2004-04-02 メディミューン，インコーポレイテッド ワクチンの免疫原性を測定する試験管内検定
JP2003334097A (ja) * 2002-03-12 2003-11-25 Enzo Life Sciences Inc リアルタイム核酸検出法と組成物
JP2010017196A (ja) * 2002-03-12 2010-01-28 Enzo Life Sciences Inc リアルタイム核酸検出法と組成物
JP4547698B2 (ja) * 2002-03-12 2010-09-22 エンゾ ライフ サイエンシズ、インコーポレイテッド リアルタイム核酸検出法と組成物
JP2006521092A (ja) * 2003-04-04 2006-09-21 エフ．ホフマン−ラ　ロシュ　アーゲー マルチカラーリアルタイムｐｃｒ用の改良されたシステム
JP2009232871A (ja) * 2003-04-04 2009-10-15 F Hoffmann La Roche Ag マルチカラーリアルタイムｐｃｒ用の改良されたシステム
JP2014502496A (ja) * 2010-12-16 2014-02-03 バイオ−ラッド ラボラトリーズ インコーポレーティッド 定量的増幅のためのユニバーサルリファレンス色素

Also Published As

Publication number Publication date
EP0743987A4 (en) 1998-04-15
AU692230B2 (en) 1998-06-04
US5654419A (en) 1997-08-05
EP0743987A1 (en) 1996-11-27
US5688648A (en) 1997-11-18
DE69530286T2 (de) 2004-04-01
DE19581489B4 (de) 2004-07-15
JP4602956B2 (ja) 2010-12-22
CA2182516A1 (en) 1995-08-10
ES2197193T3 (es) 2004-01-01
WO1995021266A1 (en) 1995-08-10
DE29521620U1 (de) 1997-11-13
DE69530286D1 (de) 2003-05-15
DE19581489T1 (de) 1997-01-02
ATE236994T1 (de) 2003-04-15
JP2007000151A (ja) 2007-01-11
EP0743987B1 (en) 2003-04-09
JP3895369B2 (ja) 2007-03-22
US5707804A (en) 1998-01-13
CA2182516C (en) 2003-11-25
AU1736795A (en) 1995-08-21

Similar Documents

Publication Publication Date Title
JPH09508525A (ja) エネルギー転移連結の色素によりラベルされたプローブ
US6028190A (en) Probes labeled with energy transfer coupled dyes
WO1995021266A9 (en) Probes labelled with energy transfer coupled dyes
US5869255A (en) Probes labeled with energy transfer couples dyes exemplified with DNA fragment analysis
US6150107A (en) Methods of sequencing and detection using energy transfer labels with cyanine dyes as donor chromophores
JP3066984B2 (ja) 汎用スペーサー／エネルギー遷移染料
US6200748B1 (en) Tagged extendable primers and extension products
US6579704B2 (en) Modified nucleotides and methods useful for nucleic acid sequencing
US5171534A (en) Automated DNA sequencing technique
WO1998014612A9 (en) Cyanine dyes with high-absorbance cross section as donor chromophores in energy transfer labels
JP2001509271A (ja) 標識されたエネルギー移送蛍光性プライマーのセット及び複合成分分析におけるその使用
Berti et al. Energy transfer cassettes for facile labeling of sequencing and PCR primers
JP3992079B2 (ja) 核酸分析用プローブおよび検出方法
JPH0560698A (ja) 核酸断片分子量分離パターンの検出法
JP3186753B2 (ja) 核酸断片試料及び一本鎖ｄｎａオリゴマー
JP3264276B2 (ja) 核酸断片分子量分離パターンの検出方法
USRE43096E1 (en) Tagged extendable primers and extension products

Legal Events

Date Code Title Description
A601 Written request for extension of time

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601

Effective date: 20050607

A602 Written permission of extension of time

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A602

Effective date: 20050610

A521 Request for written amendment filed

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523

Effective date: 20060922

A521 Request for written amendment filed

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523

Effective date: 20061020

A61 First payment of annual fees (during grant procedure)

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61

Effective date: 20061214

R150 Certificate of patent or registration of utility model

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150

FPAY Renewal fee payment (event date is renewal date of database)

Free format text: PAYMENT UNTIL: 20091222

Year of fee payment: 3

FPAY Renewal fee payment (event date is renewal date of database)

Free format text: PAYMENT UNTIL: 20101222

Year of fee payment: 4

FPAY Renewal fee payment (event date is renewal date of database)

Free format text: PAYMENT UNTIL: 20111222

Year of fee payment: 5

FPAY Renewal fee payment (event date is renewal date of database)

Free format text: PAYMENT UNTIL: 20121222

Year of fee payment: 6

FPAY Renewal fee payment (event date is renewal date of database)

Free format text: PAYMENT UNTIL: 20121222

Year of fee payment: 6

FPAY Renewal fee payment (event date is renewal date of database)

Free format text: PAYMENT UNTIL: 20131222

Year of fee payment: 7

R250 Receipt of annual fees

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250

R250 Receipt of annual fees

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250

EXPY Cancellation because of completion of term