JPH09500394A

JPH09500394A - Ｐｎａ−ｄｎａ−ｐｎａキメラ高分子

Info

Publication number: JPH09500394A
Application number: JP7515210A
Authority: JP
Inventors: クック，フィリップ・ダン
Original assignee: Isis Pharmaceuticals Inc
Current assignee: Ionis Pharmaceuticals Inc
Priority date: 1993-11-24
Filing date: 1994-11-23
Publication date: 1997-01-14
Anticipated expiration: 2017-10-21
Also published as: EP1201676A3; KR960705834A; DE69430818D1; KR100190493B1; EP0734391B1; EP0734391A4; US5700922A; WO1995014706A1; JP3335634B2; CA2177357A1; EP0734391A1; DE69430818T2; CA2177357C; EP1201676A2; AU1186095A; ATE219095T1; AU687954B2

Abstract

(57)【要約】増加したヌクレアーゼ耐性および増加した相補鎖への結合親和性を有し、且つＲＮアーゼＨ酵素を活性化する高分子が提供される。高分子は、ＰＮＡ−ＤＮＡ−ＰＮＡ構造を持ち、式中、ＤＮＡ部分は２'-デオキシ−エリスロ−ペントフラノシルヌクレオチドのサブユニットから構成され、ＰＮＡ部分はペプチド核酸のサブユニットから構成される。その様な高分子は、診断およびその他の研究目的のために、生物におけるタンパク質の調節のために、並びに治療学的に可能なその他の状態の診断、検出および治療のために有用である。

Description

【発明の詳細な説明】ＰＮＡ−ＤＮＡ−ＰＮＡキメラ高分子関連出願のクロス・レフェレンス本出願は、「ギャップ２’修飾オリゴヌクレオチド」("Gapped 2’Modified O ligonucleotides")と称する前出願である出願番号ＵＳ９２／１１３３９（１９９２年１２月２３日提出）の一部継続出願であり、この前出願ＵＳ９２／１１３３９は、「ギャップ２’修飾／オリゴヌクレオチド」("Gapped 2’Modified/Oli gonucleotides")と称する前出願である出願番号第８１４，９６１号（１９９１年１２月２４日提出）の一部継続出願であり、両出願は、共に本出願に譲渡される。さらに、本出願は、「ペプチド核酸の高次構造および結合」("Higher Order Structure and Binding of Peptide Nucleic Acids")と称する出願番号第０８８，６５８号（１９９３年７月２日提出）に関連し、共に本出願に一部分譲渡される。この出願第０８８，６５８号は、「新しいペプチド核酸」("Novel peptid e Nucleic Acids")と称する出願番号第０５４，３６３号（１９９３年４月２６日提出）の一部継続出願であり、第０５４，３６３号はＰＣＴＥＰ／９１／０１２１９（１９９２年５月１９日提出）の一部継続出願である。これらの出願のそれぞれの開示は、参照としてここに取り入れられる。発明の分野本発明は、ＰＮＡ−ＤＮＡ−ＰＮＡ構造を持つキメラ分子の合成および使用に関し、ここで、各々の“ＰＮＡ”はペプチド核酸であり、“ＤＮＡ”はホスホジエステル、ホスホロチオエートまたはホスホロジチオエート２'-デオキシオリゴヌクレオチドである。細胞、細胞抽出物またはＲＮアーゼＨを含む診断試験システム中では、ＲＮＡ標的分子とハイブリダイズ可能な塩基配列を持つ本発明のキメラ高分子は、その標的ＲＮＡ分子と結合でき、そのＲＮＡ標的分子のＲＮアーゼＨによる鎖切断を容易にする。発明の背景大抵の疾病状態を含む哺乳類の健康状態のほとんどが、タンパク質に影響されていることは、良く知られている。その様なタンパク質は、直接作用するかまたはそれらの酵素機能を通してかのいずれかによって、動物およびヒトの多くの病気の主要な一因となっている。古典的治療学は、一般的に、病気の原因または病気の強化機能を和らげるために、その様なタンパク質との相互作用に焦点が当てられてきた。しかしながら、最近では、メッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）またはタンパク質の合成を指示するその他の細胞内ＲＮＡとの相互作用によってそれらのタンパク質の実際の生成を緩和する試みがなされている。一般的に、望ましくないタンパク質形成を導く遺伝子発現を干渉する、あるいは調整する事が、その様な治療学的研究の目的である。アンチセンス方法論は、これら細胞内核酸の正常かつ重要な機能を崩壊するように、比較的短いオリゴヌクレオチドを一本鎖ＲＮＡまたは一本鎖ＤＮＡに相補的にハイブリダイズさせることである。ハイブリダイゼーションは、ＲＮＡまたはＤＮＡとオリゴヌクレオチドの複素環式塩基とのワトソン−クリック塩基対を介しての配列特異的水素結合である。その様な塩基対は、互いに相補的であると言われる。Ｃｏｈｅｎ、オリゴヌクレオチド：遺伝子発現のアンチセンス阻害剤（Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ：ＡｎｔｉｓｅｎｓｅＩｎｈｉｂｉｔｏｒｓｏｆＧｅｎｅＥｘｐｒｅｓｓｉｏｎ）、ＣＲＣＰｒｅｓｓ，Ｉｎｃ．，ＢｏｃａＲａｔｏｎ，Ｆ１（１９８９）に記載の通り、核酸機能の崩壊を提供するような自然発生的事件には、少なくとも二つの型があると考えられる。第一の型は、ハイブリダイゼーション停止である。これは、オリゴヌクレオチド阻害剤が標的核酸に結合して、その結果、単純な立体障害によって、重要なタンパク質、たいていはリボゾームの核酸との結合を妨害するという終結反応（ｔｅｒｍｉｎａｔｉｎｇｅｖｅｎｔ）を意味する。メチルホスフェートオリゴヌクレオチド（例えば、Ｍｉｌｌｅｒら、Ａｎｔｉ−ＣａｎｃｅｒＤｒｕｇＤｅｓｉｇｎ，１９８７，２，１１７を参照の事）とα−アノマーオリゴヌクレオチドは、ハイブリダイゼーション停止によって核酸機能を崩壊させると考えられる最も広範囲にわたって研究されている２つのアンチセンス剤である。オリゴヌクレオチドのハイブリダイゼーション停止の能力を決定するために、相補的核酸と結合するオリゴヌクレオチドの相対能力を、特定のハイブリダイゼーション複合体の融解温度を測定することによって比較することができる。融解温度（Ｔｍ）は、二重らせんの特徴的物理学的性質であり、これは、らせん形（ハイブリダイズしている）対コイル形（ハイブリダイズしていない）が５０％の比率で存在する摂氏温度を意味している。Ｔｍは、ＵＶスペクトルを用いてハイブリダイゼーションの形成および崩壊（融解）を測定することによって測定される。ハイブリダイゼーションの間に生ずる塩基のスタッキングは、ＵＶ吸収の減少（淡色化）を伴う。結果的に、ＵＶ吸収の減少はより高いＴｍを示す。Ｔｍがより高くなると、鎖の結合強度はより大きくなる。非ワトソン−クリック塩基対、すなわち塩基の誤対合は、Ｔｍに強い不安定化影響を持つ。アンチセンスオリゴヌクレオチドが終結反応を起こす第２の型には、細胞内ＲＮアーゼによる標的ＲＮＡの酵素切断が関与する。その様なＲＮアーゼＨによる切断機構は、２'-デオキシリボフラノシルオリゴヌクレオチドが標的ＲＮＡにハイブリダイズすることが必要である。その結果生じたＤＮＡ−ＲＮＡデュープレックスは、ＲＮアーゼＨ酵素を活性化し；活性化された酵素はＲＮＡ鎖を切断する。ＲＮＡ鎖切断は、ＲＮＡの正常な機能を破壊する。ホスホロチオエートオリゴヌクレオチドは、この型の終結反応により作用する卓越したアンチセンス剤の一つである。ＤＮＡオリゴヌクレオチドがＲＮアーゼＨの活性化に有効であるためには、オリゴヌクレオチドは、ＲＮアーゼＨを活性化するために十分な時間、細胞内で生き残るためには、ヌクレアーゼに対して適度に安定でなければならない。Ｗａｌｄｅｒらは、最近の数報の発表で、ＲＮアーゼＨとオリゴヌクレオチドの相互作用についてさらに記載している。そのうち特に興味深いものには、（１）Ｄａｇｌｅら、ＮｕｃｌｅｉｃＡｃｉｄｓＲｅｓｅａｒｃｈ，１９９０，１８，４７５１；（２）Ｄａｇｌｅら、ＡｎｔｉｓｅｎｓｅＲｅｓｅａｒｃｈＡｎｄＤｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ，１９９１，１，１１；（３）Ｅｄｅｒら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｍ．，１９９１，２６６，６４７２；および（４）Ｄａｇｌｅら、ＮｕｃｌｅｉｃＡｃｉｄｓＲｅｓｅａｒｃｈ，１９９１，１９，１８０５：がある。これらの報告の中で、Ｗａｌｄｅｒらは、修飾されていないホスホジエステル−ヌクレオシド間結合と、修飾されたホスホロチオエート−ヌクレオシド間結合の両方を持つＤＮＡオリゴヌクレオチドが、細胞内ＲＮアーゼＨの基質になることに注目している。それらは基質であるので、それらはＲＮアーゼＨによる標的ＲＮＡの切断を活性化する。しかしながら、さらに、著者らは、アフリカツメガエルの胚では、ホスホジエステル結合およびホスホロチオエート結合の両方は、また、エキソヌクレアーゼ分解の対象でもあることに注目している。その様なヌクレアーゼ分解は、それがＲＮアーゼＨ活性化に有効なヌクレオチドを急速に涸渇させるために、好ましくない。参考文献（１）、（２）および（４）に記載されているように、ＲＮアーゼＨの活性化を提供しつつヌクレアーゼ分解に対してそれらのオリゴヌクレオチドを安定化させるために、Ｗａｌｄｅｒらは、ホスホロアミダイト、アルキルホスホネートまたはホスホトリエステル結合の区画の間に短い区画のホスホジエステル結合ヌクレオチドを配置した２'-デオキシオリゴヌクレオチドを構築した。ホスホロアミダイトを含むオリゴヌクレオチドは、エキソヌクレアーゼに対して安定化されるが、参考文献（４）に記載するように、著者らは、それぞれのホスホロアミダイト結合が、ホスホロアミダイトを含むオリゴヌクレオチドのＴｍ測定値を１．６℃減少させることに注目している。その様なＴｍ値の減少は、オリゴヌクレオチドとその標的鎖との間のハイブリダイゼーションにとって、望ましくない減少を示している。他の著者らは、アンチセンスオリゴヌクレオチドとその標的鎖との間のハイブリダイゼーションのその様な損失がもたらす影響について注釈している。Ｓａｉｓｏｎ−Ｂｅｈｍｏａｒａｓら、ＥＭＢＯＪｏｕｒｎａｌ，１９９１，１０，１１１１、は、オリゴヌクレオチドはＲＮアーゼＨの基質になりうるが、ｍＲＮＡへのハイブリダイゼーションが弱いため、ＲＮアーゼＨによる切断効率は低いことを見出だした。また、著者らは、オリゴヌクレオチドの３’末端にアクリジン置換が含まれると、オリゴヌクレオチドがエキソヌクレアーゼから保護されることに注目した。さらにまた、米国特許第５，１４９，７９７号（Ｐｅｄｅｒｓｏｎら、１９９２年９月２２日発行）は、ＲＮアーゼＨ機構によって作用するオリゴヌクレオチドについて記載している。この特許の請求の範囲のオリゴヌクレオチドは、メチルホスホネート、ホスホロモルホリデート、ホスホロピペラジデートまたはホスホロアミデートに隣接するホスホロチオエートヌクレオチドから構成される内部セグメントからなる。これらのオリゴヌクレオチドの成分、すなわち、ホスホロチオエート、メチルホスホネート、ホスホロモルホリデート、ホスホロピペラジデートまたはホスホロアミデートはすべて、オリゴヌクレオチド結合として個々に用いられた場合には、オリゴヌクレオチドとその標的鎖との間のハイブリダイゼーションを減少させるので、Ｓａｉｓｏｎ−Ｂｅｈｍｏａｒａｓらの説明は、この特許に記載されているオリゴヌクレオチドにも等しく当てはまる。アンチセンスオリゴヌクレオチドおよびＲＮアーゼＨを用いての標的ＲＮＡ鎖の切断が有効であろう事は認識されているが、オリゴヌクレオチドのヌクレアーゼ耐性およびハイブリダイゼーションの忠実度もまた非常に重要である。ハイブリダイゼーションの性質を維持または改良し、かつヌクレアーゼ耐性を提供すると同時にＲＮアーゼＨを活性化することの出来る方法または物質は長い間必要とされてきたが、これまで当該技術分野においては、その様な方法および物質は示唆されていない。従って、その様な方法および物質が切望される。発明の目的本発明の目的は、結合親和性の改善された状態で標的鎖とハイブリダイズする、キメラ高分子を提供することである。さらなる目的は、ヌクレアーゼ分解に対する安定性を持つキメラ高分子を提供することである。さらに、本発明の目的は、標的鎖を切断するためにＲＮアーゼＨを活性化するキメラ高分子を提供することである。さらに、本発明の目的は、インビトロでの細胞の状態および動物の健康状態、特に疾病状態をアッセイするための、研究および診断の方法ならびに物質を提供することである。他の目的は、標的ＲＮＡの活性を調節することを通して病気を治療するための治療および研究方法ならびに物質を提供することである。発明の簡単な説明本発明では、ペプチド核酸および２'-デオキシオリゴヌクレオチドから形成される高分子が提供される。その様な高分子は、次の構造：ＰＮＡ−ＤＮＡ−ＰＮＡ［式中、ＰＮＡ部分はペプチド核酸配列であり、ＤＮＡ部分はホスホジエステル、ホスホロチオエートまたはホスホロジチオエート２'-デオキシオリゴヌクレオチド配列である］をもつ。高分子のＰＮＡ部分は、ヌクレアーゼ耐性を増加させ、標的ＲＮＡへの高分子の結合親和性を増加させると考えられる。２'-デデオキシオリゴヌクレオチド部分は、ＲＮアーゼＨ応答およびＲＮＡ標的鎖の切断を誘発すると考えられる。本発明の高分子の２'-デオキシオリゴヌクレオチド（即ちＤＮＡ）部分は、２ '-デオキシ−エリスロ−ペントフラノシル糖部分を持つヌクレオチド単位から形成されるオリゴヌクレオチドセグメントである。それぞれのヌクレオチドは、ヌクレオチドの２'-デオキシ−エリスロ−ペントフラノシル糖部分に結合したヌクレオベース（ｎｕｃｌｅｏｂａｓｅ）を含む。ヌクレオチドは、ホスホジエステル結合、ホスホロチオエート結合および／またはホスホロジチオエート結合によって、互いにおよび／または他の部分と結合している。本発明のある望ましい高分子では、高分子の２'-デオキシオリゴヌクレオチド部分のヌクレオチドのそれぞれが、ホスホロチオエート結合によって互いに結合している。他の望ましい実施態様では、２'-デオキシオリゴヌクレオチド部分のヌクレオチドは、ホスホジエステル結合によって互いに結合しており、さらに望ましい実施態様では、ホスホジエステルおよびホスホロチオエート結合の混合物が、２’−デオキシオリゴヌクレオチドのヌクレオチド単位を互いに結合している。高分子のペプチド核酸部分は、核酸の相補鎖への高分子の結合親和性を増加させる。さらに、細胞ヌクレアーゼによる分解に対する高分子のヌクレアーゼ安定性を提供する。１つのまたはそれより多くのまたはそのすべてがホスホロチオエートまたはホスホロジチオエート結合からなる高分子の２'-デオキシオリゴヌクレオチド部分を選択することにより、本発明の高分子にさらなるヌクレアーゼ安定性が与えられる。本発明の高分子のＰＮＡ部分は、Ｎ-(2-アミノエチル)-グリシンからなるユニット、またはそのユニットのグリシン部分の窒素原子に、カルボキシメチル部分またはその類似体のようなリンカーを通してそれに結合するヌクレオベースをもつ上記のＮ-(2-アミノエチル)-グリシンの類似体からなるユニットから構成される。ユニットは、グリシン部分のカルボキシル基とアミノエチル部分のアミン基との間に形成されるアミド結合を通して互いに連結されている。ヌクレオベースは、核酸の４つの一般的なヌクレオベースのーつであることができ、また、それらは、その他の天然のまたは合成のヌクレオベースを含むこともできる。本発明の望ましい高分子では、ＰＮＡ−ＤＮＡ−ＰＮＡ構造は、それぞれのＮ −（２−アミノエチル）グリシンＰＮＡユニットとそれぞれの２'-デオキシ−エリスロ −ペントフラノシル糖ホスフェートＤＮＡユニットを互いに繋ぎ合わせることによって形成される。この様に、本発明の高分子のＰＮＡ部分のヌクレオベースは、Ｎ−（２−アミノエチル）グリシンＰＮＡユニットからなる骨格上に連なり、本発明の高分子のＤＮＡ部分のヌクレオベースは、２'-デオキシ−エリスロ −ペントフラノシル糖ホスフェートユニットからなる骨格上に連なっている。本発明の高分子のＰＮＡ部分のヌクレオベースおよびＤＮＡ部分のヌクレオベースは、共に、それらのそれぞれの骨格ユニットによって、例えば標的ＲＮＡ鎖のような相補的核酸にハイブリダイズできる順序（配列）に接続される。本発明の望ましい高分子では、ＰＮＡおよびＤＮＡ部分は互いにアミド結合でつながっている。本発明のその様な望ましい高分子では、構造：ＰＮＡ−（アミド結合）−ＤＮＡ−（アミド結合）−ＰＮＡ：の高分子である。ＰＮＡとＤＮＡ部分をつなぐのに用いることができる他の結合には、アミン結合およびエステル結合が含まれる。本発明の高分子は、望ましくは、総数約９から約３０のヌクレオベースを含有するサブユニットからなる。より望ましくは、高分子は、約１５から約２５のヌクレオベースを含有するサブユニットからなる。上記のように、ＲＮアーゼＨ応答を誘発するための、この全体配列のうちの高分子の長さは、３より大きく望ましくは５またはそれより大きい連続する２'-デオキシ−エリスロ−ペントフラノシル含有ヌクレオチドサブユニットのサブ配列であろう。ペプチド核酸と２'-デオキシヌクレオチドサブユニットの両者にとって望ましい本発明のヌクレオベースとしては、アデニン、グアニン、シトシン、ウラシル、チミン、キサンチン、ヒポキサンチン、２−アミノアデニン、６−メチルおよびその他のアルキルアデニン、２−プロピルおよびその他のアルキルアデニン、５−ハロウラシル、５−ハロシトシン、５−プロピニルウラシル、５−プロピニルシトシン、７−デアザアデニン、７−デアザグアニン、７−デアザ−７−メチル−アデニン、７−デアザ−７−メチル−グアニン、７−デアザ−７−プロピニル−アデニン、７−デアザ−７−プロピニル−グアニンおよびその他の７−デアザ−７−アルキルまたは７−アリールプリン、Ｎ２−アルキル−グアニン、Ｎ２ −アルキル−２−アミノ−アデニン、プリン６−アザウラシル、６−アザシトシンおよび６−アザチミン、５−ウラシル（シュードウラシル）、４−チオウラシル、８−ハロアデニン、８−アミノ−アデミン、８−チオールアデニン、８−チオ−ルアルキルアデニン、８−ヒドロキシルアデニンおよびその他の８−置換アデニンならびに８−ハログアニン、８−アミノグアニン、８−チオールグアニン、８−チオールアルキルグアニン、８−ヒドロキシルグアニンおよびその他の８ −置換グアニン、その他のアザおよびデアザーウラシル、その他のアザおよびデアザ−チミジン、その他のアザおよびデアザ−シトシン、アザおよびデアザ−アデニン、アザおよびデアザーグアニンまたは５−トリフルオロメチルウラシルおよび５−トリフルオロシトシンが挙げられる。また、本発明は、望ましくないタンパク質の生成を特徴とする病気をもつ生物を治療する方法を提供する。これらの方法は、生物を、核酸の相補鎖に特異的にハイブリダイズする能力を持つヌクレオベースの配列を持つ高分子と接触させることを含む。さらに、その方法は、ヌクレオベースの一部分がペプチド核酸サブユニット（ＰＮＡユニット）からなり、その残りのヌクレオベースは２'-デオキシヌクレオチドサブユニット（ＤＮＡユニット）からなることを含む。ペプチド核酸サブユニットおよびデオキシヌクレオチドサブユニットは互いに結合して、ＰＮＡ−ＤＮＡ−ＰＮＡ（ＰＮＡはペプチド核酸であり、ＤＮＡは２'-デオキシオリゴヌクレオチドである）の構造を持つ高分子を形成する。さらに、本発明では、核酸の相補鎖に特異的にハイブリダイズする能力を持つヌクレオベース配列をもつ薬学上有効な量の高分子を含む組成物が提供される。さらに、方法は、ヌクレオベースの一部分がペプチド核酸サブユニット（ＰＮＡユニット）からなり、残りのヌクレオベースは２'-デオキシヌクレオチドサブユニット（ＤＮＡユニット）からなる事を含む。ペプチド核酸サブユニット（ＰＮＡ）およびデオキシヌクレオチドサブユニット（ＤＮＡ）は互いに結合されて、ＰＮＡ−ＤＮＡ−ＰＮＡ構造の高分子を形成する。さらに、組成物は、薬剤として許容しうる希釈剤または担体を含む。さらに、本発明では、上記のように、ＲＮアーぜＨ酵素および核酸を含む試験溶液をＰＮＡ−ＤＮＡ−ＰＮＡ高分子と接触させることを含む、特定の核酸の配列をインビトロで修飾する方法が提供される。また、上記のように、生物をＰＮＡ−ＤＮＡ−ＰＮＡ高分子と接触させることを含む、生物中でのハイブリダイゼーションおよびＲＮアーゼＨ酵素の活性化を同時に増強する方法が提供される。図面の簡単な説明図１は、本発明のある化合物の固相合成法を図解する化学スキームである。図２は、本発明のある化合物の固相合成法を図解する化学スキームである。図３は、本発明のある化合物の液相合成法を図解する化学スキームである。図４は、本発明のある化合物の液相合成法を図解する化学スキームである。図５は、本発明のある化合物の固相合成法を図解する化学スキームである。図６は、本発明のある化合物の液相合成法を図解する化学スキームである。本発明の詳細な説明本発明の目的に従って、ヌクレアーゼ耐性を増加させ、同時に、相補鎖への結合親和性を増加させ、また、ＲＮアーゼＨの基質でもある、新規の高分子が提供される。本発明の高分子は、複数のペプチド核酸サブユニット（ＰＮＡサブユニット）と複数の２'-デオキシヌクレオチドサブユニット（ＤＮＡサブユニット）から組み立てられている。それらを組み立てて、構造：ＰＮＡ−ＤＮＡ−ＰＮＡの高分子とする。それぞれのペプチド核酸サブユニットおよびそれぞれの２'-デオキシヌクレオチドサブユニットは、標的ＲＮＡ分子上、またはＤＮＡ分子およびタンパク質を含むその他の標的分子上の同様のヌクレオベースと特異的にハイブリダイズする能力を持つヌクレオベースを含む。本発明の高分子のペプチド核酸部分は、本発明の高分子のヌクレアーゼ耐性を増加させる。さらに、これらの同一のペプチド核酸部分は、核酸の相補鎖への、本発明の高分子の結合親和性をも増加させる。本発明の高分子の２'-デオキシヌクレオチド部分は、それぞれ、その糖部分として２'-デオキシ−エリスロ−ペントフラノシル基を含む。上記のガイドラインに関連して、２'-デオキシヌクレオチドサブユニットの各々は、“天然”または“合成”の部分であることができる。従って、本発明の文脈では、“オリゴヌクレオチド”という用語は、第一に、複数の連結ししたヌクレオチドユニットから形成されるポリヌクレオチドをさす。ヌクレオチドユニットは、天然のヌクレオシド間ホスホジエステル結合を通して互いに連結される。ヌクレオチドユニットは、天然型の塩基および２'-デオキシ−エリスロ−ペントフラノシル糖基から形成される。従って、“オリゴヌクレオチド”という用語は、実質上、天然型の種または天然型ヌクレオチドユニットから形成される合成種を含む。オリゴヌクレオチドという用語は、天然型の構造ならびに（天然塩基と同様に機能する修飾塩基部分を含む）非天然型または“修飾された”構造を含むことを意味している。高分子の２’−デオキシオリゴヌクレオチド部分のヌクレオチドは、天然のホスホジエステル結合に加えて、その他の選ばれた合成結合で互いに連結されうる。これらのその他の結合には、ホスホロチオエートおよびホスホロジチオエート糖間結合が含まれる。更に、適当な結合として考えられるものは、ホスホロセレネートおよびホスホロジセレネート結合である。塩基部分、すなわち、２'-デオキシヌクレオチドのヌクレオベースは、天然の塩基、すなわちアデニン、グアニン、シトシン、ウラシルまたはチミジンを含みうる。あるいは、これらは、天然のプリンおよびピリミジン塩基の代わりに用いられるデアザまたはアザ−プリンおよびピリミジン；５または６位に置換基を持つピリミジン塩基；２、６または８位に改変されたまたは置き換えられた置換基を持つプリン塩基；を含みうる。それらは、また、本発明の精神に一致するその他の修飾を含んでも良い。その様な２'-デオキシオリゴヌクレオチドは、天然のオリゴヌクレオチド（または天然系に沿って合成されたオリゴヌクレオチド）と機能的に交換できるが、天然構造から一つまたはそれより多くの違いを持つものとして最もよく記載される。その様な２'-デオキシオリゴヌクレオチドは、高分子中で有効に機能して標的ＲＮＡ鎖のＲＮアーゼＨ切断を誘発するかぎり、すべて、本発明に包含される。本発明の一つの好ましい実施態様では、高分子のペプチド核酸部分によって確立される以上のヌクレアーゼ耐性が、ホスホロチオエート−ヌクレオチド間結合を用いることによって得られる。Ｗａｌｄｅｒらの報告（上記）に反して、種々の３'-エキソヌクレアーゼを含むウシ胎児血清の様な系の中では、ヌクレオシド間結合をホスホジエステル結合からホスホロチオエート結合に修飾することはヌクレアーゼ耐性を与えることが認められた。最近、Ｂｒｉｌｌら、Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．，１９９１，１１３，３９７２，は、ホスホロジチオエートオリゴヌクレオチドもまたヌクレアーゼ耐性を示すと報告している。これらの著者らは、また、ホスホロジチオエートオリゴヌクレオチドは、相補的デオキシオリゴヌクレオチドと結合し、ＲＮアーゼＨを刺激し、かつｌａｃリプレッサーおよびｃｒｏリプレッサーの結合を剌激することを報告している。この様な性質故に、本発明の高分子の２'-デオキシオリゴヌクレオチド部分にホスホロジチオエート結合を用いても良い。ホスホロジチオエートの合成方法は、Ｂｅａｔｏｎら、“オリゴヌクレオチドホスホロジチオエートの合成（Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓｏｆｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓｐｈｏｓｐｈｏｒｏｄｉｔｈｉｏａｔｅｓ）”、第５章、１０９頁、「オリゴヌクレオチドおよびその類似体（ＯｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓａｎｄＡｎａｌｏｇｓ）、実用研究法（ＡＰｒａｃｔｉｃａｌＡｐｐｒｏａｃｈＳｅｒｉｅｓ）」、Ｅｃｋｓｔｅｉｎ，Ｆ．編；ＴｈｅＰｔａｃｔｉｃａｌＡｐｐｒｏａｃｈＳｅｒｉｅｓ，ＩＲＬＰｒｅｓｓ、ＮｅｗＹｏｒｋ、１９９１、に記載されている。ホスホロチオエートまたはホスホロジチオエート−ヌクレオチド間結合を用いることによって、本発明の高分子にヌクレアーゼ耐性の増加が与えられる場合、その様な結合は，それぞれのヌクレオチド間の部位に存在するであろう。その他の実施態様では、すべてより少ないヌクレオチド間結合が、ホスホロチオエートまたはホスホロジチオエート結合で修飾されるであろう。本発明の高分子の結合親和性は、高分子のペプチド核酸部分によって増加することが見いだされた。例えば、１０ｍｅｒのホモチミジンＰＮＡをそれに相補的な１０ｍｅｒのホモアデノシンＤＮＡに結合させた場合のＴｍは７３℃であるのに対して、これに対応する１０ｍｅｒのホノチミジンＤＮＡを同様に相補的である１０ｍｅｒのホモアデノシンＤＮＡに結合させた場合のＴｍはわずか２３℃である。結合親和性はまた、本発明の２'-デオキシオリゴヌクレオチドを構成するヌクレオチドサブユニットおよびペプチド核酸サブユニットの両方にある種の修飾塩基を用いることによって増加させることもできる。その様な修飾塩基は、５−プロピニルピリミジン、６−アザピリミジン、およびＮ−２、Ｎ−６、および２− アミノプロピルアデニンを含むＯ−６位の置換されたプリンを含むであろう。その他の修飾されたピリミジンおよびプリン塩基もまた、核酸相補鎖への高分子の結合親和性を増加させることが予測される。その様な構造ユニットの製造に用いるための、適当なヌクレオベースには、アデニン、グアニン、シトシン、ウラシル、チミン、キサンチン、ヒポキサンチン、２−アミノアデニン、アデニンおよびグアニンの６−メチルならびにその他のアルキル誘導体、アデニンおよびグアニンの２−プロピルならびにその他のアルキル誘導体、５−ハロ−ウラシルおよびシトシン、６−アゾ−ウラシル、シトシンおよびチミン、５−ウラシル（シュードウラシル）、４−チオウラシル、８−ハロ、アミノ、チオール、チオールアルキル、ヒドロキシルならびにその他の８位置換のアデニンおよびグアニン、５−トリフルオロメチルおよびその他の５位置換のウラシルおよびシトシン、７−メチルグアニンおよびその他のヌクレオベースが含まれ、それらには、例えば米国特許第３，６８７，８０８号、“ＴｈｅＣｏｎｃｉｓｅＥｎｃｙｃｌｏｐｅｄｉａＯｆＰｏｌｙｍｅｒＳｃｉｅｎｃｅＡｎｄＥｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ”，Ｊ．Ｉ．Ｋｒｏｓｃｈｗｉｔｚ編、ＪｏｈｎＷｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ，１９９０，８５８−８５９、およびＥｎｇｌｉｓｃｈ，Ｕ．およびＧａｕｓｓ，Ｄ．Ｈ．，ＡｎｇｅｗａｎｄｔｅＣｈｅｍｉｅ、ＩｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌＥｄｉｔｉｏｎ１９９１、３０、６１３に開示されるものがある。標的ＲＮＡのＲＮアーゼＨ酵素切断を誘発させるために、本発明の高分子は、その中にＤＮＡ型セグメントであるセグメントまたはサブ配列を含んでいなくてはならない。他の点から言うと、本発明の高分子の少なくとも一部分は、２'-デオキシ−エリスロ−ペントフラノシル糖部分を持つヌクレオチドサブユニットでなくてはならない。３つより多くの連続して結合した２'-デオキシ−エリスロ− ペントフラノシル含有ヌクレオチドサブユニットを持つサブ配列は、標的ＲＮＡと本発明の高分子のハイブリダイゼーションによるＲＮアーゼＨ活性を誘発するために必要であるらしいことが認められた。現在のところ、本発明の高分子中には、５またはそれより多くの連続した２'-デオキシ−エリスロ−ペントフラノシル含有ヌクレオチドサブユニットのサブ配列を持つことが望ましい。少なくとも７つの連続する２'-デオキシ−エリスロ−ペントフラノシル含有ヌクレオチドサブユニットが特に望ましい。本発明の高分子の全長は、長さ３から何百のサブユニットであることができるが、標的特異性はもっと短い分子で得る事ができるので、より実用的な最大の長さは、長さ約３０から約５０のサブユニットであろう。より望ましい最大の長さは、長さ約２５サブユニットであろう。標的によって、高分子の最小の長さは、３から約１５の総サブユニットといろいろであろう。実際には、アンチセンスオリゴヌクレオチドを用いるに当たって、一般的には、ハイブリダイゼーションにおける適当な親和性を保証するためには、約１５ヌクレオチドの最小の長さが必要であることが分かった。しかし、上に記載したように、ペプチド核酸サブユニットは、標的分子に対して、ホスホロチオエート−オリゴヌクレオチドより良い親和性を持つ正常なホスホジエステル− オリゴヌクレオチドと比較してより大きいハイブリダイゼーション親和性を持つので、本発明の高分子を用いる場合には、最小の長さは通常アンチセンスオリゴヌクレオチドとのアンチセンス結合に用いられるより小さいと予測することができる。これらの因子を考慮にいれると、高分子の望ましい長さは、総数約３から約３０のサブユニットであり、より望ましい範囲は長さ約９から約２５のサブユニットであろう。本発明の高分子では、ＰＮＡユニットの間に一つあるいはそれ以上の連続するＤＮＡユニットが配置されるであろう。ＲＮアーゼＨ応答を誘発させるためには、上記のように、望ましくは、高分子のＤＮＡ部分は、少なくとも３つの２'-デオキシヌクレオチドユニットを持つであろう。ＤＮＡユニットの数の上限を決定するために、高分子の全長、用いるホスフェート結合、標的配列に対する望ましい忠実度およびその他の因子を含む幾つかの因子が考慮される。通常は、経済的考慮により、本発明の高分子では、標的分子に特異的に結合するために、また、所望するならば、ＲＮアーゼＨ応答を引き出すために必要であるよりも多いヌクレオベースを持たないことが望ましい。ＲＮアーゼＨの機能を利用するためにはこの数は一般的に約５ヌクレオチドである。さらに、ホスホロチオエートおよびホスホロジチオエート−リン酸結合はそれ自身ヌクレアーゼ耐性を示すので、これらの２つのリン酸結合を用いると、ヌクレアーゼ耐性のために高分子のＰＮＡ部分に頼らなくてはならないホスホジエステルサブユニットと比較して、より長くのびるＤＮＡサブユニットを用いることができる。これらの要素を考慮に入れると、本発明の高分子を含む特に望ましい範囲は、長さ９から約２８のサブユニットであり、２'-デオキシヌクレオチドサブユニットに続いて位置する約５から約８のその様なサブユニットを持つ。ＲＮアーゼＨの作用機構は、ＤＮＡ−ＲＮＡデュープレックスを認識し、それに次いでこのデュープレックスのＲＮＡ鎖を切断する。発明の背景の項に上記したように、この技術分野でのその他の者は、ＤＮＡ鎖にヌクレアーゼ安定性を与えるために修飾したＤＮＡ鎖を用いてきた。これを行うために、彼らは、ヌクレアーゼ安定性を増加させるが、同時にハイブリダイゼーション特性を減少させるような修飾されたリン酸結合を用いてきた。本発明者は、理論に拘束されることを望むものではないが、本発明の高分子においては、ペプチド核酸ユニットを高分子の２'-デオキシオリゴヌクレオチド部分の両端に置くことによって、高分子にヌクレアーゼ安定性を与えるであろうことを認識している。さらに、この事は、相補鎖への結合および特異性を増加させるであろう。再度、特定の理論に拘束されることを望むものではないが、本発明者は、ＲＮＡ鎖の切断を認識し誘発させるためにＲＮアーゼＨが満たさなくてはならないある種の規準を認識している。これらの第一は、ＲＮＡ鎖は切断部位で、リン酸結合を通して連結された負電荷を帯びたヌクレオシドを持っていなければならない事である。さらに、切断部位のヌクレオシドの糖は、β−ペントフラノシル糖でなければならず、また、２’エンドコンフォメーションでなくてはならない。この規準を満たすヌクレオシド（ヌクレオチド）は、２'-デオキシ−エリスロ−ペントフラノシル β−ヌクレオシドのホスホジエステル、ホスホロチオエート、ホスホロジチオエート、ホスホロセレネートおよびホスホロジセレネート−ヌクレオチドのみである。上記の規準の観点から、２’エンドコンフォーメーション（例えば、シクロペンチルヌクレオシド）で存在することが示されたある種のヌクレオシドでさえ、ペントフランノシル糖を結合していないので、ＲＮアーゼＨ活性を誘発しないであろう。モデルは、オリゴヌクレオチド４’−チオヌクレオシドはエンベロープコンフォメーションで存在するが、２’エンドコンフォメーションで存在しないので、その様なヌクレオシド残基もまたＲＮアーゼＨ活性を誘発しないであろうことを示している。さらに、α−ヌクレオシドは、β−ペントフラノシル糖とは逆の立体配座であるため、それらもまた、ＲＮアーゼＨ活性を誘発しないであろう。非糖のテザー基を通して、または非リン酸結合を通してリン酸結合に連結されるヌクレオベースもまた、２’エンドコンフォメーションでβ−ペントフラノシル糖を持つと言う規準に合わない。従って、それらは、恐らく、ＲＮアーゼＨ活性を誘発しないであろう。本発明の高分子の２'-デオキシオリゴヌクレオチド部分に取り込ませるために、ヌクレオシドは、ジメトキシトリチル基で５’位をブロックし、次いで、３’ 位をホスフィチル化（ｐｈｏｓｐｈｉｔｙｌａｔｉｏｎ）されるであろう。トリチル化およびホスフィチル化の方法は、「オリゴヌクレオチドおよびその類似体、実用的研究法（ＯｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓａｎｄＡｎａｌｏｇｓ，ＡｐｒａｃｔｉｃａｌＡｐｐｒｏａｃｈ）」、Ｅｃｋｓｔｅｉｎ，Ｆ．編、実用的研究法シリーズ（ＴｈｅＰｒａｃｔｉｃａｌＡｐｐｒｏａｃｈＳｅｒｉｅｓ）、ＩＲＬＰｒｅｓｓ，ＮｅｗＹｏｕｋ，１９９１、に報告されている。オリゴヌクレオチド中への取り込みは、ＡＢＩ３８０ＢモデルシンセサイザーのようなＤＮＡシンセサイザーを用いて、ホスホジエステル、ホスホロチオエートまたはホスホロジチオエート−リン酸結合を形成するために適当な化学を用いて、Ｅｃｈｓｔｅｉｎの前掲引用書中に説明されている合成のプロトコールにしたがって行われるであろう。本発明の高分子の２'-デオキシヌクレオチドサブユニットおよびペプチド核酸サブユニットは、共有結合で結び付けられ、高分子のサブユニットを望ましいヌクレオベース配列に固定する。望ましい長さに結び付けられた共有結合連結（ｃｏｖａｌｅｎｔｉｎｔｅｒｃｏｎｎｅｃｔｉｏｎ）は、高分子の２つの隣り合った領域のそれぞれの間で形成される。望ましくは、共有結合連結は、隣り合う領域を形成する異なる型のサブユニット部分の両方に共有結合を形成できる連結部分を選択することによって成し遂げられる。望ましくは、連結部分は、連結部分と異なる型の部分の間に得られる原子鎖が同じ長さであるように選択される。本発明の一つの望ましい実施態様では、２'-デオキシヌクレオチドとペプチド核酸サブユニットを相互連結する連結基として特に有用なものはアミド結合である。その他の実施態様では、アミンおよびエステル結合を用いることができる。本発明の高分子のペプチド核酸サブユニット部分（ＰＮＡ部分）は、一般式（Ｉ）：［式中：ｎは少なくとも２であり、Ｌ¹−Ｌⁿはそれぞれ、水素、ヒドロキシ、（Ｃ₁−Ｃ₄）アルカノイル、天然型のヌクレオベース、非天然型のヌクレオベース、芳香族部分、ＤＮＡインターカレーター、ヌクレオベース結合基、複素環式部分、およびレポーターリガンドからなる群より独立的に選択され、Ｌ¹−Ｌⁿの少なくとも１つは、天然型ヌクレオベース、非天然型ヌクレオベース、ＤＮＡインターカレーター、またはヌクレオベース結合基であり；Ｃ¹−Ｃⁿはそれぞれ、（ＣＲ⁶Ｒ⁷）_yであり、ここでＲ⁶は水素であり、Ｒ⁷は天然型のα−アミノ酸の側鎖からなる群より選択されるか、またはＲ⁶およびＲ⁷ は、水素、（Ｃ₂−Ｃ₆）アルキル、アリール、アラルキル、ヘテロアリール、ヒドロキシ、（Ｃ₁−Ｃ₆）アルコキシ、（Ｃ₁−Ｃ₆）アルキルチオ、ＮＲ³Ｒ⁴およびＳＲ⁵［ここで、Ｒ³およびＲ⁴は上に定義した通りであり、Ｒ⁵は水素、（Ｃ₁ −Ｃ₆）アルキル、ヒドロキシ−、アルコキシ−もしくはアルキルチオ−置換（Ｃ₁−Ｃ₆）アルキルである］からなる群より独立的に選択されるか、またはＲ⁶ およびＲ⁷が一緒になって脂環式または複素環式系を作り上げ；Ｄ¹−Ｄⁿはそれぞれ（ＣＲ⁶Ｒ⁷）_zであり、Ｒ⁶およびＲ⁷は上記の通りであり；ｙおよびｚはそれぞれ０または１から１０までの整数であり、ｙ＋ｚの和は２より大きいが１０以下であり；Ｇ¹−Ｇ^n-1のそれぞれは、いずれの向きでもよい−ＮＲ³ＣＯ−、−ＮＲ³ＣＳ −、−ＮＲ³ＳＯ−、または−ＮＲ³ＳＯ₂−であり、Ｒ³は上記の通りであり；Ａ¹−ＡⁿおよびＢ¹−Ｂⁿの組み合わせは、それぞれ：（ａ）Ａは式（ＩＩａ）、（ＩＩｂ）または（ＩＩｃ）の基の一つであり、ＢはＮまたはＲ³Ｎ⁺である；または（ｂ）Ａは式（ＩＩｄ）の基であり、ＢはＣＨである；［式中：Ｘは、Ｏ、Ｓ、Ｓｅ、ＮＲ³、ＣＨ₂またはＣ（ＣＨ₃）₂であり；Ｙは、単結合、Ｏ、ＳまたはＮＲ⁴であり；ｐおよびｑはそれぞれ、０または１から５までの整数であり、ｐ＋ｑの和は１０以下であり；ｒおよびｓはそれぞれ、０または１から５までの整数であり、ｒ＋ｓの和は１０以下であり；Ｒ¹およびＲ²のそれぞれは、水素、またはヒドロキシ−もしくはアルコキシ− もしくはアルキルチオで置換されていてもよい（Ｃ₁−Ｃ₄）アルキル、ヒドロキシ、アルコキシ、アルキルチオ、アミノおよびハロゲンからなる群より独立的に選択され；Ｇ¹−Ｇ^n-1はそれぞれ、いずれの向きでもよい−ＮＲ³ＣＯ−、−ＮＲ³ＣＳ− 、−ＮＲ³ＳＯ−または−ＮＲ³ＳＯ₂−であり、ここでＲ³は上記の通りであり；Ｑは、−ＣＯ₂Ｈ−、−ＣＯＮＲ'Ｒ''、−ＳＯ₃Ｈもしくは−ＳＯ₂ＮＲ'Ｒ'' または−ＣＯ₂Ｈもしくは−ＳＯ₃Ｈの活性化誘導体であり；そしてＩは、−ＮＨＲ'''Ｒ''''または−ＮＲ'''Ｃ（Ｏ）Ｒ''''であり、ここでＲ' 、Ｒ''、Ｒ'''およびＲ''''は、水素、アルキル、アミノ保護基、レポーターリガンド、インターカレーター、キレーター、ペプチド、タンパク質、炭水化物、脂質、ステロイド、ヌクレオシド、ヌクレオチド、ヌクレオチドジホスフェート、ヌクレオチドトリホスフェート、オリゴヌクレオチド、オリゴヌクレオシドならびに可溶性および不溶性ポリマーからなる群より独立的に選択される］である。望ましいペプチド核酸は、一般式（ＩＩＩａ）−（ＩＩＩｃ）：［式中：Ｌはそれぞれ、水素、フェニル、複素環式部分、天然型のヌクレオベース、および非天然型のヌクレオベースからなる基より独立的に選択され；Ｒ⁷'は、水素および天然型α−アミノ酸の側鎖からなる群より独立的に選択され；ｎは、１から６０の整数であり；ｋ、ｌ、およびｍはそれぞれ、独立的に０または１から５の整数であり；ｐは、０または１であり；Ｒ^hは、ＯＨ、ＮＨ₂または−ＮＨＬｙｓＮＨ₂であり；Ｒⁱは、ＨまたはＣＯＣＨ₃である：を持つ。特に望ましいものは、式（ＩＩＩａ）−（ＩＩＩｃ）を持つ化合物であり、式中、Ｌはそれぞれ、ヌクレオベースであるチミン（Ｔ）、アデニン（Ａ）、シトシン（Ｃ）、グアニン（Ｇ）およびウラシル（Ｕ）からなる群より独立的に選択され、ｋおよびｍは、０または１であり、ｎは１から３０、特に４から２０の整数である。本発明の高分子のペプチド核酸部分は、溶液中かまたは固相上のどちらかで、一般的には、特許出願ＰＣＴ／ＥＰ／０１２１９（ＷＯ９２／２０７０２として１９９２年１１月２６日に公開）または米国特許出願０８／０８８，６５８（１９９３年７月２日出願）、または同等の方法にしたがって合成される。これらの特許出願の内容は、参照としてここに取り入れられる。用いられたシントン（ｓｙｎｔｈｏｎ）は、モノマーのアミノ酸またはその活性化誘導体であり、標準的な保護基によって保護されている。ＰＮＡもまた、関連するジ酸およびジアミンを用いることによって合成することができる。本発明の新規のモノマーシントンは、一般式（ＩＶ）、（Ｖ）、（ＶＩ）：［式中、Ｌ、Ａ、Ｂ、ＣおよびＤは上記の通りであるが、ただしその中の任意のアミノ基がアミノ保護基で保護されていても良く；Ｅは、ＣＯＯＨ、ＣＳＯＨ、ＳＯＯＨ、ＳＯ₂ＯＨまたはその活性化誘導体であり；かつＦは、ＮＨＲ³またはＮＰｇＲ³であり、ここでＲ³は上記の通りであり、かつＰｇはアミノ保護基である］をもつアミノ酸、ジ酸およびジアミンからなる群より選択される。本発明の望ましいモノマーシントンは、式（ＶＩＩＩａ）−（ＶＩＩＩｃ）：［式中、Ｌは、水素、フェニル、複素環式部分、天然型ヌクレオベース、および非天然型ヌクレオベースからなる基より選択され；かつＲ⁷'は、水素および天然型α−アミノ酸側鎖よりなる群より選択される］またはそのアミノ保護および／または酸末端活性化誘導体をもつ。本発明の化合物は、診断、治療に、ならびに研究用試薬およびキットとして用いることができる。さらに、いったん試験システムで活性であると確認されれば、化学療法薬を含む他の活性化合物の試験システムにおいて標準として用いることができる。薬剤として許容しうる適当な希釈剤または担体とともに混合した本発明の高分子を有効量含有させることにより、薬剤組成物としても利用できる。さらに、望ましくないタンパク質生成を特徴とする疾患を持つ生物を治療するために用いることもできる。生物を、望ましくないタンパク質をコードする核酸の鎖と特異的にハイブリダイズできる配列を持つ本発明の高分子と接触させることができる。その様な治療的処置は、単細胞原核生物および真核生物から多細胞真核生物までの範囲のいろいろな生物で実施することができる。その遺伝、代謝または細胞の制御の基本部分としてＤＮＡ−ＲＮＡ転写またはＲＮＡ−タンパク質翻訳を用いるいずれの生物も、その様な治療的および／または予防的処置が可能である。細菌、酵母、原生生物、藻類、全植物および温血動物を含むすべての高等動物のように外見上は異なった生物を、この治療法で処置できる。さらに、多核真核生物の細胞の各々は、それらの細胞活性に不可欠な部分としてＤＮＡ−ＲＮＡ転写およびＲＮＡ−タンパク質翻訳の両方を含むので、その様な治療および／または診断もまた、その様な細胞集団で実施することができる。さらに、真核生物細胞の多くのオルガネラ、例えばミトコンドリアおよびクロロプラストもまた、転写および翻訳の機構を含んでいる。このように、単一の細胞、細胞集団またはオルガネラもまた、本発明の治療的または診断的オリゴヌクレオチドで治療することのできる生物の定義の内に含まれうる。ここで用いるように、“治療”とは、疾病状態の根絶、例えば細菌、原生動物類あるいはその他の伝染病の生物の殺傷、または遊走性あるいは有害な細胞の増殖または発現の制御の両方を含むことを意味する。例証の目的で、本発明の化合物を、ｒａｓ−ルシフェラーゼ−トランス活性化を用いるｒａｓ−ルシフェラーゼ融合システム中で用いた。「ｒａｓ−オンコジンのアンチセンス阻害（ＡｎｔｉｓｅｎｓｅＩｎｈｉｂｉｔｉｏｎｏｆＲＡＳＯｎｃｏｇｅｎｅ）」と称し、本出願と共に譲受された米国特許出願番号０７／７１５，１９６（１９９１年６月１４日提出）に記載されている（その全体の内容をここに参照として取り入れる）ように、ｒａｓ−オンコジンは、原形質膜の内側表面に位置する関連タンパク質をコードする遺伝子ファミリーの構成員である。ｒａｓ−タンパク質は、アミノ酸レベルで高い保存性を持ち、高い親和性および特異性でＧＴＰに結合し、かつＧＴＰアーゼ活性を持つことが示されている。ｒａｓ遺伝子生成物の細胞性機能は未知であるが、それらの生化学的性質は、ＧＴＰ結合タンパク質またはＧタンパク質として知られているシグナル伝達タンパク質の一種との明らかな配列相同性と共に、ｒａｓ遺伝子生成物は、原形質膜を通る細胞外シグナルの伝達に関する基礎的な細胞制御機能に重要な役割を演じていることを示唆する。Ｈ−ｒａｓ、Ｋ−ｒａｓおよびＮ−ｒａｓと名付けられた３種のｒａｓ遺伝子が、哺乳動物のゲノム中で同定された。哺乳類のｒａｓ遺伝子は、コード配列内の単一の点突然変異によってトランスフォーメーションを誘導する性質を獲得する。天然型ｒａｓ−オンコジンの突然変異は、コドン１２、１３および６１に位置することが見いだされている。Ｈ−ｒａｓ、Ｋ−ｒａｓおよびＮ−ｒａｓの配列は既知である。Ｃａｐｏｎら、Ｎａｔｕｒｅ，３０２、１９８３，３３−３７；Ｋａｈｎら、ＡｎｔｉｃａｎｃｅｒＲｅｓ．，１９８７，７，６３９−６５２；ＨａｌｌおよびＢｒｏｗｎ、ＮｕｃｌｅｉｃＡｃｉｄｓＲｅｓ．，１９８５，１３，５２５５−５２６８。ヒトの腫瘍中に認められる最も共通に検出される活性化ｒａｓの突然変異は、Ｈ−ｒａｓ遺伝子のコドン１２中にあり、そこでは、ＧＧＣからＧＴＣへの塩基の変化が、結果として、ｒａｓタンパク質産物のＧＴＰアーゼ制御ドメイン中にグリシンからバリンへの置換を生ずる。Ｔａｂｉｎ，Ｃ．Ｊ．ら、Ｎａｔｕｒｅ，１９８２，３００，１４３−１４９；Ｒｅｄｄｙ，Ｐ．Ｅ．ら、Ｎａｔｕｒｅ，１９８２，３００，１４９−１５２；Ｔａｐａｒｏｗｓｋｙ，Ｅ．ら、Ｎａｔｕｒｅ，１９８２，３００，７６２−７６５。この単独のアミノ酸変化は、ｒａｓ−タンパク質機能の正常な制御を妨害し、それ故、正常に制御されていた細胞タンパク質を連続的に活性なタンパク質に変えると考えられる。正常なｒａｓ−タンパク質機能のその様な脱制御は、正常な増殖から悪性増殖へのトランスフォーメーションの原因であると考えられている。Ｍｏｎｉａら、Ｊ．Ｂｉｏ．Ｃｈｅｍ．，１９９３，２６８，１４５１４−１４５２２は、最近、トランス活性化レポーター遺伝子システムにより、キメラ“Ｇａｐ”（非デオキシオリゴヌクレオチドに隣接される２'-デオキシオリゴヌクレオチドを持つ構造）が、インビトロでＨａ−ｒａｓオンコジンに対して活性であることを示している。上記のアッセイで活性である本発明の化合物は、インビトロでの化学療法薬スクリーニングテストの標準として用いることができる。本発明の化合物は、固相合成または液相合成の両方により製造することができる。両方法は、実施例に示されている。実施例に示すように、実施例１は、本発明の高分子の２'-デオキシオリゴヌクレオチド部分の一般的な合成法である。実施例２、３および４のスキームは、図１に図解している。実施例２は、固相支持体樹脂への高分子の右側ＰＮＡ部分のカルボキシ末端の固定を図解して記載している。実施例３は、高分子のこの右側ＰＮＡ部分の伸長、および３'-カルボキシヌクレオチドを通しての最初の２'-デオキシヌクレオチドへのアミド結合の形成について記載している。実施例４は、高分子の第２のＰＮＡ（左側）部分へアミド結合をもたらすための、５'-アミノヌクレオチドの付加を含む高分子の中央の２'-デオキシオリゴヌクレオチド部分の伸長を図解している。実施例５および６のスキームは、図２に示されている。実施例５は、左側ＰＮＡ部分の完成を示している。実施例６は、ブロック基の除去および樹脂からの除去を説明している。実施例７のスキームは、図３に示されている。実施例７は、５'-アミノ−３'-ヌクレオチドを５'-末端ヌクレオチドとして位置させるための液相ＤＮＡ結合の形成について説明している。実施例８および９のスキームは、それぞれ図４および５に示されている。実施例８は、本発明の高分子のＰＮＡ部分の、ＤＮＡ部分への液相結合について説明している。この実施例では、実施例７のオリゴヌクレオチドを第１の“Ｔ”ＰＮＡサブユニットと結合させ；これに対して、実施例９では、第１の“Ａ”ＰＮＡサブユニットを、高分子の２'-デオキシオリゴヌクレオチド部分に結合させる。実施例１０、１１および１２のスキームは、図６に示されている。実施例１０、１１および１２は、本発明の高分子のＤＮＡ部分のＰＮＡ部分への液相結合について説明している。以下の実施例では、サブユニットがペプチド核酸（ＰＮＡ）グループかまたは２'-デオキシヌクレオチド（ＤＮＡ）グループのどちらであるかには関係なく、サブユニットを、標準的な大文字による一文字表記、即ちＡ、Ｇ、ＣまたはＴ、を用いて表示する。その様な表記は、サブユニット中に取り込まれたヌクレオベースを示している。すなわち、“Ａ”は、２'-デオキシアデノシンヌクレオチド、並びにアデニン塩基を含むペプチド核酸サブユニットの両方を表示するために用いられる。ペプチド核酸サブユニットでは、アデニン塩基はカルボキシメチル連結基を通してＮ−（２−アミノエチル）グリシン骨格と結合する。標準的ヌクレオチド結合、即ち、ホスホジエステル、ホスホロチオエート、ホスホロジチオエートまたはホスホロセレネートは、２つの隣合う表示文字の間のハイフォン（ −）で示し、例えばＡ−Ｔは、チミジンヌクレオチドに連結したアデノシンヌクレオチドを示している。ペプチド核酸結合を示すために、（ｐ）または（ｐｎａ）のどちらかが用いられ、例えば、Ａ（ｐ）−Ｔは、チミンペプチド核酸ユニットに連結したアデニンペプチド核酸ユニットを示す。２'-デオキシヌクレオチドとペプチド核酸ユニットの間の結合の変換は、括弧（）で示される。したがって、“Ｔ−（３’−カルボキシ）−Ａ”は、アデニン−ペプチド核酸サブユニットの２−アミノエチル部分のアミン部分に結合したカルボキシ基をその３’位にもつチミジンヌクレオシドを示している。これに対して、“Ａ−（５’−アミノ）−Ｔ”は、隣り合ったチミン−ペプチド核酸サブユニットのグリシン部分のカルボキシ部分に結合したアミンを５’位に持つチミジンヌクレオチドを示している。末端基、例えば、カルボキシ、ヒドロキシル、Ｎ−アセチルグリシンおよびその類似体は、適当なシンボル表記法を用いて示される。カルボベンゾキシブロッキング基は、肩文字Ｚ、例えば^zとして示される。フェノキシアセチル保護基は、肩文字ＰＡＣ、例えば^PACとして示される。記載した標準的なポリスチレン−メリフィールド（Ｍｅｒｒｉｆｉｅｌｄ）樹脂の代わりとして、ファルマシア（Ｐｈａｒｍａｃｉａ）から購入した高架橋ポリスチレン、またはラップポリメレ（ＲａｐｐＰｏｌｙｍｅｒｅ）から購入したテンタゲル（Ｔｅｎｔａｇｅｌ）と呼ばれるポリエチレングリコール／ポリスチレングラフト共重合体を用いてもよい。本発明の高分子を都合よく除去するためには、グリシンをエステル結合を通して樹脂に結合させるべきである。以下の実施例および方法は、本発明を説明するためのものであって、制限するものではない。実施例１オリゴヌクレオチドの合成：本発明の高分子のオリゴヌクレオチド部分は、ヨウ素による酸化を用いた標準的ホスホロアミデートの化学を用いて、自動ＤＮＡシンセサイザー（ＡｐｐｌｉｅｄＢｉｏｓｙｓｔｅｍｓｍｏｄｅｌ３８０Ｂ）で合成される。ホスホロチオエートオリゴヌクレオチドのためには、標準酸化瓶を、ホスファイト結合を段階的にチエーションするために、０．２Ｍの３Ｈ−１，２−ベンゾジチオール −３−オン１，１−ジオキシド／アセトニトリル溶液に置き換える。チエーションの待ち段階は、６８秒に増加させ、次いでキャッピング段階を行った。別に指示しないかぎり、ＣＰＧカラムから切断し、濃水酸化アンモニウム中５５℃（１８時間）で脱ブロッキングした後、オリゴヌクレオチドは、２．５倍容量のエタノールで、０．５Ｍ−ＮａＣｌ溶液から２度沈殿させることによって精製する。分析用ゲル電気泳動は、２０％アクリルアミド、８Ｍ尿素、４５４ｍＭトリス −ホウ酸緩衝液、ｐＨ７．０で行った。ホスホジエステルおよびホスホロチオエートオリゴヌクレオチドは、ポリアクリルアミドゲル電気泳動からその物質の長さを判定する。実施例２低充填のｔ−ブチルオキシカルボニルグリシルメリフィールド樹脂ヒドロキシメチルポリスチレン樹脂（１ｇ、６５０μＭヒドロキシ／ｇ）は、固相のペプチド合成用容器に入れ、ジクロロメタン（ＤＣＭ、２回１０ｍｌ）、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ、２回１０ｍｌ）およびアセトニトリル（２回４０ｍｌ）で順番に（それぞれの洗浄について１分間振とうして）洗浄した。丸底フラスコに、Ｎ−ｔ−ブチロキシカルボニルグリシン（７０１ｍｇ、４ｍＭ）およびＯ−（ベンゾトリアゾール−１−イル）−１、１、３、３−テトラメチルウロニウムテトラフルオロホウ酸塩（１．１５６ｇ、３．６ｍＭ）を加えた。無水アセトニトリル（４０ｍｌ）をバイアルに加え、次いでＮ，Ｎ− ジイソプロピルエチルアミン（１．３９２ｍｌ、８ｍＭ）を加えた。フラスコは、すべての固体が溶解するまで振とうした。１分後、バイアルの内容物をペプチド合成用容器に加え、１２５分間振とうした。次いで、反応溶液を流し、支持体をアセトニトリル（１回４０ｍｌ）、ピリジン（２回４０ｍｌ）およびＤＭＦ（２回４０ｍｌ）で洗浄した。ＤＭＦ中の１０％（ｖ／ｖ）無水酢酸溶液（全４０ｍｌ）を樹脂に加え、反応は４０分間振とうして行った。反応溶液を流した後、無水酢酸キャップを上記のように繰り返した。２回目のキャッピング反応の最後に、樹脂を、ＤＭＦ（２回４０ｍｌ）、ピリジン（１回４０ｍｌ）、およびＤＣＭ（３回４０ｍｌ）で洗浄した。次いで、樹脂はアルゴンを吹き付けることによって乾燥させた。グリシン誘導体化の程度は、ニンヒドリン定量アッセイによって測定した。上の樹脂（５０ｍｇ）のアリコートを、固相ペプチド合成容器中に置き、ＤＣＭ（２回３ｍｌ）で洗浄した。次いで、樹脂は、トリフルオロ酢酸中の５％（ｖ／ｖ）のｍ−クレゾール溶液（３ｍｌ）で３回、それぞれ２分ずつ振とうして、処理した。３回目の反応溶液を流し去った後、樹脂は、ＤＣＭ（３回３ｍｌ）、ピリジン（３回３ｍｌ）およびＤＣＭ（３回３ｍｌ）で洗浄した。次いで、樹脂はアルゴンを吹き付けることによって乾燥させた。脱保護した乾燥させた樹脂のアリコート（５ｍｇ）を試験管に入れた。この樹脂に、７０％（ｖ／ｖ）水／ピリジン（８０μｌ）の溶液、カイザー試薬１（１００μｌ、２％のＨ₂Ｏ／ピリジン中の２００μＭ−ＫＣＮ）、試薬２（４０μ ｌ、ｎ−ＢｕＯＨ中の５％（ｗ／ｖ）ニンヒドリン）、および試薬３（５０μｌ、ｎ−ＢｕＯＨ中の８０％（ｗ／ｖ）フェノール）を加えた。反応は１００℃で１０分間加熱して行い、冷却し、６０％（Ｖ／Ｖ）ＥｔＯＨ（７ｍｌ）で希釈した。次いで、５７０ｎｍの吸光度は、樹脂を含まない対照反応液、およびグリシンエチルエステルの定量を元にした標準曲線と比較した。１ｇの樹脂当たり１００μ Ｍのグリシンの誘導体化レベルが得られた。実施例３５'-ヒドロキシ−Ｔ(3'-カルボキシ)-Ｔ(P)-Ｃ^z(p)-Ａ^z(p)-Ｇ^z(p)-Ｇly−−Ｏ −樹脂ｔ−ブチルオキシカルボニルグリシルメリフィールド樹脂（２００ｍｇ、１０マイクロ当量、実施例１）は、固相ペプチド合成用容器に入れる。支持体は、５０％ＤＭＦ／ＤＣＭ（４回５ｍｌ）で洗浄し、次いで、５％のｍ−クレゾール／トリフルオロ酢酸（４ｍｌ）で２回、それぞれ２分間ずつ振とうして処理する。支持体は、再び５０％ＤＭＦ／ＤＣＭ（４回５ｍｌ）で、次いでピリジン（５回５ｍｌ）で洗浄する。バイアルに、Ｎ²−ベンジルオキシカルボニル−１ −（ｔ−ブチルオキシカルボニル−アミノエチルグリシル）グアニン（８０μＭ）およびＯ−（ベンゾトリアゾール−１−イル）−１，１，３，３−テトラメチルウロニウム−テトラフルオロホウ酸塩（７２μＭ）を加える。Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（０．４ｍｌ）およびピリジン（０．４ｍｌ）を、次いで、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（１６０μＭ）をバイアルに加える。バイアルは、すべての固体が溶解するまで、振とうする。１分後、バイアルの内容物をペプチド合成用容器に加え、２０分間振とうする。次いで、反応溶液を流し、支持体をピリジン（４回５ｍｌ）で洗浄する。残った結合していないアミンは、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド中のＮ−ベンジルオキシカルボニル−Ｎ'-メチルイミダゾールトリフレートの１０％溶液（０．８ｍｌ）を加えることによってキャップする。５分間振とう後、キャッピング溶液を流し、支持体を再びピリジン（４回５ｍｌ）で洗浄する。上の段落に記載した通り、脱保護、カップリングおよびキャッピングは、さらに３種のＰＮＡモノマー：Ｎ⁶−ベンジルオキシカルボニル−１−（ｔ−ブチルオキシカルボニル−アミノエチルグリシル）アデニン、Ｎ⁴−ベンジルオキシカルボニル−１−（ｔ−ブチルオキシカルボニル−アミノエチルグリシル）シトシン、および１−（ｔ−ブチルオキシカルボニル−アミノエチルグリシン）チミン：について繰り返す。次に、脱保護、カップリングおよびキャッピングはもう一度繰り返すが、この場合に用いたモノマーは、５'-（ｔ−ブチルジフェニルシリル）−３'-カルボキシメチルチミジンである。キャッピング反応後、樹脂をピリジン（３回３ｍｌ）およびＤＭＦ（３回３ｍｌ）で洗浄する、無水ＴＨＦ（３ｍｌ）をフラスコに加え、次いで４５μｌの７０％（ｖ／ｖ）ＨＦ／ピリジンを加える。一晩振とう後、樹脂はＴＨＦ（５回３ｍｌ）、ＤＭＦ（３回、３ｍｌ）、アセトニトリル（５回３ｍｌ）およびＤＣＭ（５回３ｍｌ）で洗浄する。次いで、アルゴンを吹き付けることにより樹脂を乾燥する。実施例４Ｔ（５'-アミノ）−Ｇ^PAC−Ｃ^PAC−Ａ^PAC−Ｔ−Ｔ（３'-カルボキシ）−−Ｔ(p) -Ｃ^z(p)-Ａ^z(p)-Ｇ^z(p)-Ｇly−Ｏ−樹脂５'-ヒドロキシ−Ｔ（３'-カルボキシ）−Ｇ^z(p)-Ｃ^z(p)-Ａ^z(p)-Ｔ(p)-Ｇly −Ｏ−樹脂（１０マイクロ当量、実施例３）をＤＮＡ合成カラムに入れる。標準的なＤＮＡ合成（実施例１）を、環外アミン上にはフェノキシアセチル保護基、リン上には２−シアノエチル基、および５'-ヒドロキシル上には４，４'-ジメトキシトリチル基を含むホスホルアミダイトを用いて行う。結合させた５'-末端ホスホロアミダイトは、５'-（モノメトキシトリチルアミノ）チミジン−３'-（Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルアミノ−２−シアノエチル）ホスホルアミダイトである。モノメトキシトリチル基は、ＤＣＭ中のジクロロ酢酸を用いて標準的自動処理によって除去する。ＤＣＭで洗浄後、樹脂は減圧下で乾燥させる。実施例５Ｎ−アセチルグリシル−Ｔ(p)-Ｔ(p)-Ｃ^z(p)-Ｔ（ｐ）−Ｃ^z（ｐ）−Ｇ^z(p)-Ｃ^z (p)-ＣＯＯＨヒドロキシメチルポリスチレン樹脂（１１５ｍｇ、７４マイクロ当量）を、固相ペプチド合成用容器に入れた。支持体をＤＣＭ（３回３ｍｌ）、ＤＭＦ（３回３ｍｌ）、ピリジン（３回３ｍｌ）、さらに再びＤＭＦ（２回３ｍｌ）で洗浄した。バイアルにＮ⁴−ベンジルオキシカルボニル−１−（ｔ−ブチルオキシカルボニル−アミノエチルグリシル）シトシン（１５１ｍｇ、３００μＭ）およびＯ −（ベンゾトリアゾール−１−イル）−１，１，３，３−テトラメチルウロニウム−テトラフルオロホウ酸塩（８７ｍｇ、２７０μＭ）を加えた。Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（１．２５ｍｌ）およびピリジン（１．２５ｍｌ）をバイアルに加え、次いで、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（１０５μｌ、６００μ Ｍ）を加えた。バイアルは、すべての固体が溶解されるまで振とうした。１分後、バイアルの内容物をペプチド合成容器に加え、３０分間振とうした。次いで、反応溶液を流し去り、支持体をＤＭＦ（４回３ｍｌ）で洗浄した。Ｃモノマーのカップリングは上記のように繰り返した。次いで、樹脂は、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド中の１０％Ｎ−ベンジルオキシカルボニル−Ｎ'-メチル−イミダゾールトリフレート（２．２５ｍｌ）を加え、次いで５分間振とうすることによってキャップした。最後に、樹脂は、ピリジン（４回３ｍｌ）で洗浄し、次いで鎖伸長用に準備した。支持体は、５０％ＤＭＦ／ＤＣＭ（４回３ｍｌ）で洗浄し、次いで、トリフルオロ酢酸中の５％ｍ−クレゾール（３ｍｌ）で２回、それぞれ２分間振とうして、処理した。支持体は、再び５０％ＤＭＦ／ＤＣＭ（４回３ｍｌ）で、次いで、ピリジン（５回３ｍｌ）で洗浄した。バイアルに、Ｎ²−ベンジルオキシカルボニル−１−（ｔ−ブチルオキシカルボニル−アミノエチルグリシル）グアニン（１６３ｍｇ、３００μＭ）およびＯ−（ベンゾトリアゾ−１−リル）−１，１，３，３−テトラメチルウロニウムーテトラフルオロホウ酸塩（８７ｍｇ、２７０ μＭ）を加えた。Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（１．２５ｍｌ）およびピリジン（１．２５ｍｌ）をバイアルに加え、次いで、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（１０５μｌ、６００μＭ）を加えた。バイアルは、すべての固体が溶解するまで振とうした。１分後、バイアルの内容物をペプチド合成用容器に加え、２０分間振とうした。次いで、反応溶液を流し、支持体をピリジン（５回３ｍｌ）で洗浄した。残った非結合のアミンは、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド中のＮ −ベンジルオキシカルボニル−Ｎ'-メチルイミダゾール−トリフレートの１０％溶液（２．２５ｍｌ）を加えることによってキャップした。５分間振とうした後、キャッピング溶液を流し、支持体を再びピリジン（４回３ｍｌ）で洗浄した。上の段落に記載したように、脱保護、カップリングおよびキャッピングは、次のような順序で、ＰＮＡモノマー：Ｎ⁴−ベンジルオキシカルボニル−１−（ｔ −ブチルオキシカルボニル−アミノエチルグリシル）シトシン、および１−（ｔ −ブチルオキシカルボニル−アミノエチルグリシル）チミン、Ｎ⁴−ベンジルオキシカルボニル−１−（ｔ−ブチルオキシカルボニルアミノエチルグリシル）シトシン、１−（ｔ−ブチルオキシカルボニル−アミノエチルグリシル）チミン、１−（ｔ−ブチルオキシカルボニルアミノエチルグリシル）−チミン，さらに次にＮ−アセチルグリシン：で繰り返した。最後のカップリング反応を行った後、樹脂をピリジン（５回３ｍｌ）およびDＣＭ（４回３ｍｌ）で洗浄した。次いで、樹脂は、アルゴンを吹き付けることによって乾燥させた。樹脂の一部分（２９ｍｇ、１０マイクロ当量）を固相ペプチド合成用容器に入れ、テトラヒドロフラン（２．５ｍｌ）を加え、次いで、飽和水性炭酸水素カリウム（０．２５ｍｌ）および硫酸水素テトラブチルアンモニウム（３４ｍｇ、１００μＭ）の水溶液を加えた。次いで、反応は、１４時間、室温で振とうして行った。水（１ｍｌ）を反応液に加え、その結果、白色固体の沈殿物を得た。液体を濾過で除去し、保存した。次いで、樹脂および白色固体に、第一回目の洗浄で加えた水（１ｍｌ）をさらに加えて洗浄した。減圧下で乾燥状態にまで濃縮すると、その結果、ピンクの油の混じった白色固体が得られた。水（６ｍｌ）を加え、ｐＨを固体ＫＨＳＯ₄で２に調整した。次いで、液体および懸濁した黄色固体をエッペンドルフ（Ｅｐｐｅｎｄｏｒｆ）チューブに移し、固体を遠沈した。溶媒を除去し、残った黄色固体は、０．１％ＴＦＡを含む水中の３０％アセトニトリルに再溶解した。逆層クロマトグラフィーを行った結果、所望の生成物（２．６ｍｇ，１μＭ）を得た：分子質量＝２４９８［電気噴霧（ｅｌｅｃｔｒｏｓｐｒａｙ）マススペクトロメトリ］。実施例６Ｎ−アセチルグリシル−Ｔ(p)-Ｔ(p)-Ｃ(p)-Ｔ(p)-Ｃ(p)-Ｇ(p)-Ｃ(p)-Ｔ（５'- アミノ）−Ｇ−Ｃ−Ａ−Ｔ−Ｔ（３'-カルボキシ）−Ｔ(p)-Ｃ(p)-Ａ(p)-Ｇ(p)- Ｇly−ＣＯＯＨＴ（５'-アミノ）−Ｇ^PAC−Ｃ^PAC−Ａ^PAC−Ｔ−Ｔ（３'-カルボキシ）−Ｔ(p) -Ｃ^z(p)-Ａ^z(p)-Ｇ^z(p)-Ｇly−Ｏ−樹脂（５マイクロ当量、実施例３）を固相ペプチド合成用容器にいれる。樹脂は、ＤＣＭ（３回３ｍｌ）、ＤＭＦ（３回３ｍｌ）、およびピリジン（３回３ｍｌ）で洗浄する。バイアルにＮ−アセチルグリシル−Ｔ(p)-Ｔ(p)-Ｃ^z(p)-Ｔ(p)-Ｃ^z(p)-Ｇ^z(p)-Ｃ^z(p)-ＣＯＯＨ（１０μＭ、実施例５の様に調製される）およびＯ−（ベンソトリアゾール−１−イル）−１，１，３，３−テトラメチルウロニウム−テトラフルオロホウ酸塩（９μＭ）を加える。Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（０．３ｍｌ）およびピリジン（０．３ｍｌ）をバイアルに加え、次いで、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（２０ μＭ）を加える。バイアルは、すべての固体が溶解するまで、振とうする。１分後、バイアルの内容物を、ペプチド合成用容器に加え、４時間振とうする。次いで、反応溶液を流し、支持体をピリジンで５回洗浄する。テトラヒドロフラン（２ｍｌ）を樹脂に加え、次いで、飽和水性炭酸水素カリウム溶液（０．２ｍｌ）および硫酸水素テトラブチルアンモニウム（２７ｍｇ、８０μＭ）を加える。反応は、１４時間、室温で振とうして行った。次いで、溶液を流し、保持する。樹脂を５０％テトラヒドロフラン／水（３回１ｍｌ）および水（３回２ｍｌ）で洗浄する。洗浄溶液を反応溶液に加え、減圧下で濃縮して、有機溶媒を除去する一濃縮は最終容量が２ｍｌになった時点で停止する。無機物はゲル濾過によって除去する。粗物質を１５ｍＭの酢酸水溶液（１０ｍｌ）に溶解し、真空下での脱ガス化および窒素の逆充填を交互に４回行う。ＢａＳＯ₄ 上のパラジウム（５％，３０ｍｇ）を加え、溶液を室温で２時間攪拌する。触媒は濾過によって除去し、次いで、生成物は逆層ＨＰＬＣによって精製する。実施例７５'-アミノ−デオキシチミジリル−（３'-５’）−３'-Ｏ−ｔ−ブチルジフェニルシリル−デオキシチミジン（Ｈ₂Ｎ−Ｔ−Ｔ）３'-ｔ−ブチルジフェニルシリルデオキシチミジン（５８ｍｇ、１２０μＭ）および５'-（ｐ−メトキシトリフェニルメチルアミノ）−３'-［Ｏ−（２−シアノエチル）−Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルアミノホスホルアミジル］デオキシチミジン（７１ｍｇ、１００μＭ）を別々の１０ｍｌ丸底フラスコにいれ、それぞれ無水ピリジン（２ｍｌ）で一度、無水アセトニトリル（１．５ｍｌ）で２度、共蒸発させた。次いで、化合物はそれぞれ無水アセトニトリル（０．７５ｍｌ）中に溶解し、合わせた。反応は、無水アセトニトリル中の０．４Ｍ１Ｈ−テトラゾール溶液（１ｍｌ，４００μＭテトラゾール）を加えることによって開始した。５０分間室温で撹拌した後、反応は、酸化溶液（１０ｍｌの０．４３％Ｉ₂／９０．５４％ＴＨＦ、０．４１％ピリジンおよび９．０５％水）中に注ぐことによって急冷した。酸化反応は、さらに４０分間攪拌し、ジクロロメタン（５０ｍｌ）および水（２０ｍｌ）を含む分離用漏斗に注いだ。残ったヨウ素は、有機層を０．３％ピロ亜硫酸ナトリウム水溶液（９５ｍｌ）で洗浄することによって除去した。次いで、有機層は、減圧下で回転蒸発させることによって濃縮して黄色油状物とした。黄色油状物は、減圧下、トルエン（２×１５ｍｌ）で共蒸発させ、残留ピリジンを除去した。次いで、粗物質はジクロロメタン（６ｍｌ）に溶解し、トリチル基は、３％トリクロロ酢酸／ジクロロメタン溶液（３ｍｌ）を加えることによって除去した。１５分間、室温で攪拌した後、反応は、飽和水性冷（４℃）炭酸水素ナトリウム（１０ｍｌ）を含む分離用漏斗に注ぐことによって急冷した。さらに、ジクロロメタン（２０ｍｌ）を加え、有機層を分離した。水層に残留した乳濁液は、さらにジクロロメタン（２０ｍｌ）を加えることによって溶かした。次いで、２つの有機層を合わせて、減圧下で乾燥するまで濃縮した。所望の生成物は、得られた黄褐色の粗固体から、２０％（ｖ／ｖ）エタノール／クロロホルム、０．２％Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（４９ｍｇ、６３μＭ，６３％）中で分離用シリカＴＬＣによって、精製した。Ｒｆ［２０％（ｖ／ｖ）エタノール／クロロホルム、０．２％Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン］＝０．０５；¹ＨＮＭＲ（２００ＭＨｚ，ＭｅＯＨ−ｄ４）ｄ７．６５（ｍ，４Ｈ），７．４（ｍ，８Ｈ），６．４５（ｍ，１Ｈ），５．９５（ｍ，１Ｈ），４．６（ｍ，１Ｈ），４．１（ｍ，２Ｈ），３．９（ｍ，１Ｈ），３．６（ｍ，１Ｈ），３．２（ｍ，１Ｈ），２．９（ｍ，２Ｈ），２．５−２．０（ｍ，４Ｈ），１．８９（ｓ，６Ｈ），１．１（ｓ，９Ｈ）；³¹ＰＮＭＲ（ＭｅＯＨ−ｄ４）ｄ０．８５；ＥＳＭＳｍ／ｅ７８２。実施例８ＤＭＴ−Ｏ−Ｔ（ｐｎａ）−ＣＯＮＨ−Ｔ−ＴのＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアンモニウム塩Ｈ₂Ｎ−ＴｐＴ（２５ｍｇ、３０μＭ）を１：１のＤＭＦ／ピリジン（０．８ｍｌ）に溶解した。分離用バイアルに１−（Ｏ−４，４'-ジメトキシトリチル− ヒドロキシエチルグリシル）チミン（２３．５ｍｇ、４０μＭ）およびＯ−（ベンゾトリアゾール−１−イル）−１，１，３，３−テトラメチルウロニウムテトラフルオロホウ酸塩（１１．６ｍｇ、３６μＭ）を加えた。バイアルの内容物は、１：１のＤＭＦ／ピリジン（０．８ｍｌ）およびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（１４μｌ、８０μＭ）中に溶解した。５分後、活性化したエステル溶液を、Ｈ₂Ｎ−ＴｐＴ溶液に加えた。反応は、室温で８０分間攪拌して行い、エチルアルコール（０．５ｍｌ）を加えて急冷した。さらに１５０分後、反応混合液は、減圧下で濃縮し、乾燥させた。得られた固体は、分離用シリカＴＬＣを用いて、２０％（ｖ／ｖ）エタノール／クロロホルム、０．２％Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（２７ｍｇ、２０μＭ、６７％）で展開することによって、精製した。Ｒｆ［２０％（ｖ／ｖ）エタノール／クロロホルム、０．２％Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン）＝０．１８；¹ＨＮＭＲ（２００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）ｄ１１．３５（ｍ，３Ｈ），８．９５（ｂｒｓ，０．３Ｈ），８．７２（ｂｒｓ，０．７Ｈ），７．７９（ｍ，２Ｈ），７．６１−７．１９（ｍ，２２Ｈ），６．９１（ｍ，４Ｈ），６．３６（ｍ，１Ｈ），６．０３（ｍ，１Ｈ），４．７８（ｍ，２Ｈ），４．５９（ｓ，１Ｈ），４．４１（ｍ，３Ｈ），４．２０（ｓ，１Ｈ），３．９３（ｍ，２Ｈ），３．６５（ｓ，２Ｈ），３．１８（ｂｒｓ，３Ｈ），２．９７（ｍ，２Ｈ），３．７４（ｓ，６Ｈ），３．４２（ｍ，４Ｈ），２．０１（ｂｒｓ，４Ｈ），１．７７（ｍ，７Ｈ），１．６２（ｓ，２Ｈ），１．０３（ｍ，１５Ｈ）；¹³ＣＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：１６７．９，１６４．６，１６３．８，１５８．２，１５０．５，１４４．９，１４３．０，１３６．１，１３５．７，１３２．９，１３０．２，１２９．８，１２８．１，１２７．８，１２６．８，１２３．４，１１８．６，１１３．４，１１０．７，１１０．１，１０７．９，８６．３，８４．０，８３．０，７４．８，７４．５，６１．３，５６．２，５５．１，４７．５，２６．８，１８．７，１２．１：³¹ＰＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）ｄ −０．２，−１．０５；ＥＳＭＳｍ／ｅ１３５１．実施例９ｔＢＯＣ−Ａ^z（ｐｎａ）−ＣＯＮＨ−Ｔ−ＴのＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアンモニウム塩Ｈ₂Ｎ−ＴｐＴ（１９ｍｇ、２４μＭ）を１：１のＤＭＦ／ピリジン（０．６５ｍｌ）に溶解した。別のバイアルに、Ｎ⁶−ベンジルオキシカルボニル−１− （ｔ−ブチルオキシカルボニル−アミノエチルグリシル）−アデニン（１２．７ｍｇ、２４μＭ）およびＯ−（ベンゾトリアゾール−１−イル）−１，１，３，３−テトラメチルウロニウムテトラフルオロホウ酸塩（７．１ｍｇ、２２μＭ）を加えた。バイアルの内容物は、１：１のＤＭＦ／ピリジン（０．６５ｍｌ）およびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（８．４μｌ、４８μＭ）に溶解した。２分後、活性化されたエステル溶液を、Ｈ₂Ｎ−ＴｐＴ溶液に加えた。反応は、室温で１０５分間、攪拌して行い、エチルアルコール（０．５ｍｌ）を加えることによって急冷した。さらに１２０分後、反応混合物は、減圧下で濃縮し乾燥させた。得られた固体は、分離用シリカＴＬＣを用い、２０％（ｖ／ｖ）エタノール／クロロホルム、０．２％Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（６ｍｇ、５μＭ、２１％）で展開することによって精製した。Ｒｆ［２０％（ｖ／ｖ）エタノール／クロロホルム、０．２％Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン）＝０．０７；¹ＨＮＭＲ（２００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）ｄ１１．３７（ｓ，１Ｈ），１１．２２（ｓ，１Ｈ），１０．６４（ｂｒｓ，１Ｈ），９．１７（ｂｒｓ，０．３Ｈ），８．９０（ｂｒｓ，０．７Ｈ），８．５９（ｍ，２Ｈ），８．３０（ｍ，１Ｈ），７．８０（Ｍ，１Ｈ），７．５８（Ｓ，３Ｈ），７．３８（ｍ，１２Ｈ），７．１６（ｍ，１Ｈ），６．３６（ｍ，１Ｈ），６．０４（ｍ，１Ｈ），５．４３（ｍ，１Ｈ），５．３２（ｓ，１Ｈ），５．２３（ｓ，２Ｈ），５．１（ｓ，１Ｈ），４．４２（ｍ，３Ｈ），４．１９（ｍ，１Ｈ），３．９８（ｓ，１Ｈ），３．８７（ｍ，３Ｈ），３．７７（ｍ，１Ｈ），３．６６（ｍ，１Ｈ），３．０２（ｍ，２Ｈ），２２．６８（ｍ，１Ｈ），２．０３（ｍ，４Ｈ），１．７４（ｍ，６Ｈ），１．０２（ｍ，３０Ｈ）；¹³ＰＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）ｄ −０．０１，−０．８。実施例１０１−（ｔ−ブチルオキシカルボニル−アミノエチルグリシル）チアミン、エチルエステル１−（ｔ−ブチルオキシカルボニル−アミノエチルグリシル）チミン（３００ｍｇ、７８０μＭ）は、５０％のＤＭＦ／ピリジン（３．０ｍｌ）に溶解し、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（０．２５ｍｌ、１．４４ｍＭ）を加えた。５分間撹拌した後、Ｏ−（ベンゾトリアゾール−１−イル）−１，１，３，３− テトラメチルウロニウムテトラフルオロホウ酸塩（３５０ｍｇ、１．１ｍＭ）を加えて、薄オレンジ色の溶液を得た。反応は３０分間攪拌して行った。その後、無水エタノール（０．７５ｍｌ、４．２６ｍＭ）を加えた。さらに９０分間撹拌した後、反応混合物を減圧下で濃縮して油状物を得た。油状物は、酢酸エチル（３０ｍｌ）中に溶解し、５℃に冷却した。精製生成物は、白色固体として沈殿し、濾過によって集めた。（２８９ｍｇ、７０１μＭ、９０％）：¹ＨＮＭＲ（２００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ₃）ｄ８．３３（ｂｒｓ，１Ｈ），７．０２（ｓ，０．３Ｈ），６．９７（ｓ，０．７Ｈ），５．５８（ｍ，１Ｈ），４．５９（ｓ，１．４Ｈ），４．４３（ｓ，０．６Ｈ），４．１（ｓ，２Ｈ），３．５４（ｍ，２Ｈ），３．３３（ｍ，２Ｈ），１．９２（ｓ，３Ｈ），１．４７（ｓ，９Ｈ）。実施例１１ＴＢＤＰＳ−Ｔ−ＣＯＮＨ−Ｔ（ｐｎａ）−ＯＥｔ１−（ｔ−ブチルオキシカルボニル−アミノエチルグリシル）チミン（３０ｍｇ、７２μＭ）のエチルエステルを１．０ｍｌのトリフルオロ酢酸中に溶解し、室温で３０分間攪拌した。これを真空下で濃縮し、次いで、５ｍｌのトルエンで２回、共蒸発させた。５'-Ｏ−ｔ−ブチルジフェニルシリル−３'-カルボキシメチルデオキシリボチミジン（２５ｍｇ、４８μＭ）は、０．４００ｍｌの１：１のＤＭＦ／ピリジン溶液中に溶解した。この溶液に、ＴＢＴＵ（２１ｍｇ、６５ μＭ）およびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（２５μｌ、１４４μＭ）を加えた。反応液は、薄いオレンジ色になり、これを３０分間攪拌した。ＴＦＡ脱保護段階からのアミンを０．６ｍｌのＤＭＦ／ピリジンに溶解し、活性化カルボキシチミジン溶液に加え、室温で１時間攪拌した。ＴＬＣ分析（２０％ＭｅＯＨ／ＤＣＭ）は、すべての活性化酸が消費されたことを示した。溶液を真空下で濃縮して油状物とした。油状物は、２ｍｍの分離用ＴＬＣプレート（２０ｍｍ×２０ｍｍ）上で、溶出溶媒として２０％のＭｅＯＨ／ＤＣＭを用いて精製した。最も極性の低いフラクションが、ＰＮＡ−ＤＮＡキメラを含み、所望の生成物を白色固体（２５ｍｇ、３６μＭ、５０％）として得た。¹ ＨＮＭＲ（２００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ₃）ｄ９．８（ｂｒｓ，１Ｈ），９．６（ｂｒｓ，１Ｈ），７．７（ｍ，４Ｈ），７．３（ｍ，９Ｈ），７．０（ｄｄ，１Ｈ），６．２（ｍ，１Ｈ），４．５−３．４（１２Ｈ），２．９（ｍ，１Ｈ），２．５−２．１（ｍ，４Ｈ），１．５（ｓ，３Ｈ），１．３（ｄ，６Ｈ），１．１（ｓ，９Ｈ）；¹³ＣＮＭＲ（ＣＤＣｌ₃）：ｄ１１．７６４，１２．０８３，１２．３９１，１４．１４４，２６．７９６，２７．０５５，２９．７０８，３５．２３２，３７．１７７，３７．７８８，３８．９３２，４８．２９８，６１．４８６，６４．８５４，８４．４７６，８５．０１８，１１１．１１０，１２７．７１１，１２９．９８０，１３５．４０７，１３５．６５４，１４０．９７６，１５０．８３５，１５１．５５５，１６７．４１６，１７２．１９２；ＥＳＭＳｍ／ｅ８１７．実施例１２Ｔ−ＣＯＮＨ−Ｔ（ｐｎａ）−ＯＥｔ上記のダイマー（３０ｍｇ、０．０５８ｍＭ）は、１ｍｌの乾燥ＴＨＦ中に溶解することによって脱シリル化し、０℃に冷却した。これに、２０ｍｌの７０％のＨＦ／ピリジンを加え、１０ｍｌの１Ｍフッ化テトラブチルアンモニウム溶液を加え、反応混合液を一晩攪拌した。ＴＬＣ（１０％ＭｅＯＨ／ＤＣＭ）は、反応が完了したことを示した。溶液は、１ｍｌの飽和ＮａＨＣＯ₃を加えて急冷し、ガス蒸発が終わるまで攪拌した。水層は、さらに５ｍｌの水を加えて希釈し、３ｍｌの酢酸エチルで２回抽出した。有機層は、集めて捨てた。水層は、乾燥するまで蒸発させ、脱保護したダイマーおよびＮａＨＣＯ₃の混合物を得た。混合物をメタノール中に懸濁し、２０×２０ｃｍ、０．５ｍｍの分離用ＴＬＣプレートを２枚用い、クロロホルム中３０％エタノールで溶離することによって精製した。プレートは溶離を終えた後、乾燥させ、蛍光帯をかきとり、抽出した。抽出物を濾過し、蒸発させると、少量のフッ化テトラブチルアンモニウムの混濁した１２ｍｇの脱保護ダイマー（収率５６％）を得た。¹ Ｈ（ＣＤ₄ＯＤ）：１．０−１．５（ｍｍ，１０Ｈ）；１．５（ｍ，２Ｈ）；１．９（ｓ，６Ｈ）；２．１−２．８（ｍｍ，６Ｈ）；３．２−４．０（ｍｍ，１５Ｈ）；４．１−４．４（ｍ，４Ｈ）；４．７（ｓ，１Ｈ）；６．１（ｍ，１Ｈ）；７．３（ｓ，１Ｈ）；８．０（ｓ，１Ｈ）。実施例１３（５'-ＤＭＴ）−Ａ^z−Ｔ−（３'-カルボキシ）−Ｔ（ｐｎａ）（シアノエトキシ保護ホスホジエステル結合を含む）実施例１２の脱保護ダイマー（１２ｍｇ、０．０２０７ｍＭ）を無水ピリジンで２回、無水アセトニトリルで２回、共蒸発させた。得られた白色固体を１：１のアセトニトリル：ＤＭＦ３ｍｌ中に溶解した。この溶液に、１ｍｌの０．１Ｍ −アデノシンホスホルアミダイトおよび１ｍｌの０．４Ｍ１Ｈ−テトラゾール溶液を加えた。これを、周囲温度で１時間攪拌し、次いで、さらに１ｍｌのアミダイトを加え、攪拌をさらに１時間続けた。終了時に１０ｍｌの酸化溶液（９０．５４％ＴＨＦ、０．４１％ピリジンおよび９．０５％水中の０．４３％Ｉ₂）を加え、反応液を１時間攪拌した。反応液は２５ｍｌの１Ｍ−亜硫酸水素ナトリウム溶液を加えて急冷した。この溶液は、クロロホルム２×２０ｍｌで抽出し、集めた抽出物を別の亜硫酸水素溶液の一部分２５ｍｌで洗浄し、僅かに黄色の有機層を得た。クロロホルム溶液は、硫酸マグネシウム上で乾燥させ、濃縮して黄色油状物とした。混合物は、２０×２０ｃｍの分離用ＴＬＣプレート（２枚、０．５ｍｍコーティング）を用い、ジクロロメタン中の２０％アセトンで溶離して精製した。トリマーのジアステレオマー混合物は、９３％の収率で２５ｍｇの油状物として単離した。¹ Ｈ（ＣＤＣｌ₃）：１．２（ｍ，１３Ｈ）；２．５−３．２（ｍｍ，５Ｈ）；３．４（ｍ，４Ｈ）；３．７（ｓ，６Ｈ）；４．１（ｍ，１Ｈ）；４．４（ｍ，１Ｈ）；５．２（ｍ，１Ｈ）；６．５（ｍ，１Ｈ）；６．８（ｍ，４Ｈ）；７．３（ｍ，１０Ｈ）；７．５（ｍ，３Ｈ）；８．０（ｄ，２Ｈ）；８．２（ｄ，２Ｈ）；８．７（ｓ，１Ｈ）；９．１（ｓ，１Ｈ）；³¹Ｐ（ＣＤＣｌ₃）：８．２４７，８．１１６。実施例１４ＮＨ₄ＯＨ脱保護条件下でのＰＮＡオリゴマーの安定性第一の場合、遊離のアミノ末端を含むＰＮＡオリゴマー（Ｈ−ＴＡＴ−ＴＣＣ −ＧＴＣ−ＡＴＣ−ＧＣＴ−ＣＣＴ−ＣＡ−Ｌｙｓ−ＮＨ₂）（すべてＰＮＡ）を、７０％の濃ＮＨ₄ＯＨ中に溶解した。反応液は２３℃でインキュベートし、アリコートは以下に示す時間点に逆層ＨＰＬＣで試験した。第二の実験では、グリシルでキャップしたアミノ末端を持つＰＮＡオリゴマー（Ｈ−Ｇｌｙ−ＴＧＴ −ＡＣＧ−ＴＣＡ−ＣＡＡ−ＣＴＡ−Ｌｙｓ−ＮＨ₂）（すべてＰＮＡ）を、９０％濃ＮＨ₄ＯＨ中に溶解し、シールしたフラスコ中、５５℃に加熱した。遊離のアミノ末端を含むＰＮＡオリゴマーのＮＨ₄ＯＨ安定性は、ＰＮＡ／ＤＮＡキメラから塩基保護基を除去するには不十分であった。グリシル基でアミノ末端をキャッピングすると、水性塩基に対するＰＮＡの安定性が大きく増加した。グリシル−キャップＰＮＡは、１１時間点でほんの少し分解され、２３時間後１５％が分解された。グリシン−キャップＰＮＡは、フェノキシアセチル保護基を除去するために用いる条件下では完全に安定であり、標準的ＤＮＡ塩基保護基（ベンゾイルおよびイソブチリルアミド）に用いる条件にも比較的安定である。結果を表１に示す。実施例１５アミンおよびエステル結合を通して結合した中央の２'-デオキシホスホロチオエートオリゴヌクレオチド領域に隣接するペプチド核酸領域を持つ高分子ペプチド核酸の第一領域は、上記の実施例２により調製される。ペプチド核酸領域は、アミン基保護モノマーを用いてＣ末端からＮ末端へ向かって調製される。第一のペプチド領域が完成した後、末端アミンのブロック基を除去し、得られたアミンは、Ｖａｓｓｅｕｒら、Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．，１９９２，１１４，４００６、の方法に従って調製した３'-Ｃ−（ホルミル）−２',３'-ジデオキシ−５'-トリチルヌクレオチドと反応させる。Ｃ−ホルミルヌクレオシドのアルデヒド部分とアミンとの縮合は、Ｖａｓｓｅｕｒ、同上、の条件により行われ、イミン結合中間体を得た。イミン結合は、Ｖａｓｓｅｕｒ、同上、の還元アルキル化条件下、ＨＣＨＯ／ＮａＢＨ₃ＣＮ／ＡｃＯＨで還元して、メチルアルキル化アミン結合を通してペプチド核酸に結合させたヌクレオシドを得た。次いで、中央になる２'-デオキシホスホロチオエートヌクレオチド領域は、実施例１のプロトコールに従って、このヌクレオシドに続けて伸長した。第二のペプチド領域のためのペプチド合成は、ヌクレオチドのジメトキシトリチルブロッキング基を除去した後、ＤＮＡ領域の最後のヌクレオチドの５’ヒドロキシと、第二領域の最初のペプチド核酸のカルボキシ末端とを反応させることによって開始する。カップリングは、ピリジン中のＥＤＣを通して行われ、ペプチドとヌクレオシドの間にエステル結合が形成される。次いで、ペプチド合成が続けられ、第二のペプチド核酸領域が完成する。実施例１６中央の２'-デオキシホスホロセレネートオリゴヌクレオチド領域に隣接するペプチド核酸領域を持つ高分子高分子の２'-デオキシヌクレオチド部分にホスホロセレネート結合を導入することを除いて、実施例１５の合成を繰り返し、酸化は、Ｓｔａｗｉｎｓｋｉら、ＴｅｎｔｈＩｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌＲｏｕｎｄｔａｂｌｅ：Ｎｕｃｌｅｏｓｉｄｅｓ，ＮｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓａｎｄＴｈｅｉｒＢｉｏｌｏｇｉｃａｌＥｖａｌｕａｔｉｏｎ，Ｓｅｐｔｅｍｂｅｒ１６−２０、１９９２、ＡｂｓｔｒａｃｔｓｏｆＰａｐｅｒｓ，Ａｂｓｔｒａｃｔ８０に報告されている方法にしたがって、３Ｈ−１，２−ベンゾチアセレノ−３−オールを用いて行った。実施例１７中央の２'-デオキシホスホロジチオエ一トオリゴヌクレオチド領域に隣接するペプチド核酸領域をもつ高分子高分子の２'-デオキシヌクレオチド部分へホスホロジチオエート結合を導入することを除いて、実施例１５の合成を繰り返し、酸化は、Ｂｅａｔｏｎら、「オリゴヌクレオチドおよびその類似体」、第５章、「オリゴヌクレオチドホスホロジチオエートの合成」、１０９頁、ＡＰｒａｃｔｉｃａｌＡｐｐｒｏａｃｈ，Ｅｃｋｓｔｅｉｎ，Ｆ．編；ＴｈｅＰｒａｃｔｉｃａｌＡｐｐｒｏａｃｈＳｅｒｉｅｓ，ＩＲＬＰｒｅｓｓ，ＮｅｗＹｏｒｋ１９９１、の方法を用いて行う。方法１ｒａｓ−ルシフェラーゼレポーター遺伝子の組み立てｒａｓ−ルシフェラーゼレポーター遺伝子はＰＣＲ法を用いて組み立てた。オリゴヌクレオチドプライマーは、ヒトのＨ−ｒａｓ遺伝子の変異体（コドン１２）および非変異体（野生型）の両方のエキソン１の５’領域のＰＣＲクローニングのためのプライマーとして用いるために合成した。ｃ−Ｈ−ｒａｓ１活性化オンコジン（コドン１２、ＧＧＣ→ＧＴＣ）を含むプラスミドｐＴ２４−Ｃ３、およびｃ−Ｈ−ｒａｓプロトオンコジンを含むｐｂｃ−Ｎ１は、ＡｍｅｒｉｃａｎＴｙｐｅＣｕｌｔｕｒｅＣｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＢｅｔｈｅｓｄａＭＤ）から得た。１．９ｋｂのホタルのルシフェラーゼ遺伝子を含むプラスミドｐＴ３／Ｔ７１ｕｃは、ＣｌｏｎｔｅｃｈＬａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ（ＰａｌｏＡｌｔｏ，ＣＡ）より得た。オリゴヌクレオチドＰＣＲプライマーは、鋳型として変異体および非変異体のＨ−ｒａｓ遺伝子を用いる標準的ＰＣＲ反応に用いた。これらのプライマーは、正常および変異体のＨ−ｒａｓの（翻訳開始部位と比較して）配列−５３から＋６５に相当し、ＮｈｅＩおよびＨｉｎｄＩＩＩの制限エンドヌクレアーゼ部位に隣接する、１４５塩基対のＤＮＡ生成物を生成する。ＰＣＲ生成物は、標準法に従って、ゲル精製し、沈殿し、洗浄して、水中に再懸濁した。Ｐ．ｐｙｒａｌｉｓ（ホタル）のルシフェラーゼ遺伝子のクローニング用ＰＣＲプライマーは、ＰＣＲ生成物がアミノ末端メチオニン残基を除いて全長のルシフェラーゼタンパク質をコードするように、かつアミノ末端メチオニン残基を２つのアミノ酸、すなわちアミノ末端のリジン残基および続くロイシン残基に置き換えるように設計した。ルシフェラーゼ遺伝子のクローニングに用いるオリゴヌクレオチドＰＣＲプライマーは、ルシフェラーゼレポーター遺伝子を含む商品として入手できるプラスミド（ｐＴ３／Ｔ７−Ｌｕｃ）（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ）を鋳型として用いる標準ＰＣＲ法に用いた。これらのプライマーは、ルシフェラーゼ遺伝子に対応し、唯一のＨｉｎｄＩＩＩおよびＢｓｓＨＩＩ制限エンドヌクレアーゼ部位を両端に持つ、おおよそ１．９ｋｂの生成物を生ずる。このフラグメントは、標準法に従って、ゲル精製し、沈殿させ、洗浄し、さらに水中に再懸濁した。ｒａｓ−ルシフェラーゼ融合レポーター遺伝子の組み立てを完成させるために、ｒａｓおよびルシフェラーゼのＰＣＲ生成物を、適当な制限エンドヌクレアーゼで消化し、制限エンドヌクレアーゼＮｈｅＩ、ＨｉｎｄＩＩＩおよびＢｓｓＨＩＩを用いてステロイド誘導性マウス乳房腫瘍ウイルスプロモーターＭＭＴＶを含む発現ベクター中に３部分連結反応によってクローン化した。得られたクローンは、ホタルルシフェラーゼ遺伝子とフレームが合うように融合されたＨ−ｒａｓ５’配列（−５３から＋６５）が挿入されていた。得られた発現ベクターは、ステロイド−誘導性ＭＭＴＶプロモーターの制御下で発現するｒａｓ−ルシフェラーゼ融合生成物をコードする。これらのプラスミド構築物は、ホタルのルシフェラーゼをコードする配列とフレームが合うように融合された活性化型（ＲＡ２）または正常型（ＲＡ４）Ｈ−ｒａｓタンパク質のアミノ酸１−２２をコードする配列を含む。ｒａｓ−ルシフェラーゼ融合ｍＲＮＡの翻訳開始は、天然のＨ− ｒａｓのＡＵＧコドンに依存する。変異体および正常型のＨ−ｒａｓルシフェラーゼ融合構築物の両方を、標準法によるＤＮA配列分析によって確認した。方法２プラスミドＤＮＡの細胞へのトランスフェクショントランスフェクションは、Ｇｒｅｅｎｂｅｒｇ，Ｍ．Ｅ．，ＣｕｒｒｅｎｔＰｒｏｔｏｃｏｌｓｉｎＭｏｌｅｃｕｌａｒＢｉｏｌｏｇｙ，（Ｆ．Ｍ．Ａｕｓｕｂｅｌ，Ｒ．Ｂｒｅｎｔ，Ｒ．Ｅ．Ｋｉｎｇｓｔｏｎ，Ｄ．Ｄ．Ｍｏｏｒｅ，Ｊ．Ａ．Ｓｍｉｔｈ，Ｊ．Ｇ．ＳｅｉｄｍａｎおよびＫ．Ｓｔｒａｈｌ編、ＪｏｈｎＷｉｌｅｙａｎｄＳｏｎｓ，ＮＹ，）に記載の方法を次のように変更して行った。ＨｅＬａ細胞は、６０ｍｍの皿に５×１０⁵細胞／皿で塗布した。全量で１０μｇまたは１２μｇのＤＮＡをそれぞれの皿に加えた。この内、１μｇは、構成的ラウス肉腫ウイルス（ＲＳＶ）プロモーターの制御下でラットのグルココルチコイド受容体を発現するベクターであり、残りはｒａｓ−ルシフェラーゼレポータープラスミドである。リン酸カルシウム−ＤＮＡ共沈殿物は、１６−２０時間後に３ｍＭ−ＥＧＴＡを含むトリス緩衝食塩水［５０ｍＭトリス −塩酸（ｐＨ７．５）、１５０ｍＭ−ＮａＣｌ］で洗浄することによって除去した。次いで、１０％ウシ胎児血清を補充した新鮮な培養液を細胞に加えた。この時点で、細胞を本発明の高分子で前処理し、その後デキサメタゾンによってレポーター遺伝子の発現を活性化した。方法３細胞の処理プラスミドのトランスフェクションに次いで、細胞は、前もって３７℃に暖めておいたリン酸緩衝食塩水で洗浄し、５μｇ／ｍｌのＮ−［１−（２，３−ジオレイルオキシ）プロピル］−Ｎ，Ｎ，Ｎ−トリメチルアンモニウムクロリド（ＤＯＴＭＡ）を含むＯｐｔｉ−ＭＥＭを、それぞれのプレートに（１．０ｍｌ／穴で）加える。試験化合物は、それぞれのプレートに５０μＭのストックから加え、４時間３７℃でインキュベートする。培養液を除去し、１０％のウシ胎児血清を含むＤＭＥＭおよび指示濃度の適当な試験化合物で置き換え、細胞をさらに２時間３７℃でインキュベートし、その後、最終濃度０．２μＭのデキサメタゾンで細胞を処理することによってレポーター遺伝子の発現を活性化する。細胞を収集し、デキサメタゾン刺激後１５時間で、ルシフェラーゼ活性についてアッセイする。方法４ルシフェラーゼアッセイルシフェラーゼは、Ｇｒｅｅｎｂｅｒｇ，Ｍ．Ｅ．，ＣｕｒｒｅｎｔＰｒｏｔｏｃｏｌｓｉｎＭｏｌｅｃｕｌａｒＢｉｏｌｏｇｙ，（Ｆ．Ｍ．Ａｕｓｕｂｅｌ，Ｒ．Ｂｒｅｎｔ，Ｒ．Ｅ．Ｋｉｎｇｓｔｏｎ，Ｄ．Ｄ．Ｍｏｏｒｅ，Ｊ．Ａ．Ｓｍｉｔｈ，Ｊ．Ｇ．ＳｅｉｄｍａｎおよびＫ．Ｓｔｒａｈｌ編）、ＪｏｈｎＷｉｌｅｙａｎｄＳｏｎｓ，ＮＹ、に記載の方法に従って、界面活性剤トリトンＸ−１００で溶菌することによって、細胞から抽出する。ＤｙｎａｔｅｃｈＭＬ１０００ルミノメーターを用いて、ルシフェリン（Ｓｉｇｍａ）を６２５μＭになるように加えたときのピークの蛍光を測定した。それぞれの抽出物について、ルシフェラーゼアッセイはいろいろな時間に行い、異なる量の抽出物を用いて、データがアッセイの直線の範囲に集まることを確かめた。方法５融解曲線吸光度対温度曲線は、ＩＢＭＰＣコンピューターに接続したＧｉｌｆｏｒｄ２６０分光光度計およびＧｉｌｆｏｒｄＲｅｓｐｏｎｓｅ１１分光光度計を用いて２６０ｎｍで測定する。緩衝液は、１００ｍＭＮａ⁺、１０ｍＭホスフェートおよび０．１ｍＭ−ＥＤＴＡ、ｐＨ７を含んでいた。試験化合物濃度は、８５℃の吸光度、ならびにＰｕｇｌｉｓｉおよびＴｉｎｏｃｏ，ＭｅｃｈｏｄｓｉｎＥｎｚｙｍｏｌ．，１９８９，１８０，３０４−３２５に記載の方法に従って計算した吸光係数から測定して、それぞれの鎖あたり４μＭである。Ｔｍ値、デュープレックス形成の自由エネルギーおよび会合定数は、直線傾斜基本線を持つ二状態モデルにデータを合わせることから得られる。Ｐｅｔｅｒｓｈｅｉｍ，Ｍ．およびＴｕｒｎｅｒ，Ｄ．Ｈ．，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ１９８３，２２，２５６−２６３。報告されるパラメーターは、少なくとも３回の実験の平均である。幾つかの試験化合物では、デュープレックス形成の自由エネルギーもまた、Ｔｍ^-1対ｌｏｇ₁₀（濃度）のプロットから得られる。Ｂｏｒｅｒ，Ｐ．Ｎ．，Ｄｅｎｇｌｅｒ，Ｂ．，Ｔｉｎｏｃｏ，Ｉ．，Ｊｒ．，およびＵｈｌｅｎｂｅｃｋ，Ｏ．Ｃ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，１９７４，８６，８４３−８５３。方法６ゲルシフトアッセイ構築したｒａｓ標的転写産物である、変異コドン１２を含む４７ヌクレオチドヘアピンは、Ｌｉｍａら、Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，１９９１，３１，１２０５５−１２０６１に記載の方法に従って、調製しマッピングした。ハイブリダイゼーション反応は、１００ｍＭナトリウム、１０ｍＭリン酸塩、０．１ｍＭ−ＥＤＴＡ、１００ＣＰＭのＴ７−生成ＲＮＡ（おおよそ１０ｐＭ）、および１ｐＭから１０μＭの濃度範囲の試験化合物を含む２０μｌ中で調製される。反応は、２４時間３７℃でインキュベートして行われる。ハイブリダイゼーションに次いで、負荷緩衝液を反応物に加え、反応生成物は、４５ｍＭのトリス−ホウ酸および１ｍＭ−ＭｇＣｌ₂（ＴＢＭ）を用いて調製した２０％ポリアクリルアミドゲル上、未変性で解析する。電気泳動は１０℃で行い、ゲルはＭｏｌｅｃｕｌａｒＤｙｎａｍｉｃｓＰｈｏｓｐｈｏｒｉｍａｇｅｒを用いて定量した。方法７ＲＮアーゼＨ分析ＲＮアーゼＨ分析は、活性化された（コドン１２、Ｇ→Ｕ）Ｈ−ｒａｓｍＲＮＡの塩基＋２３から＋４７に対応する２５塩基のオリゴリボヌクレオチドの化学合成物を用いて行った。５'-末端を標識したＲＮＡは、濃度２０ｎＭで用い、１０倍モル過剰の試験化合物と共に、２０ｍＭトリス−Ｃｌ、ｐＨ７．５、１００ｍＭ−ＫＣｌ，１０ｍＭ−ＭｇＣｌ₂、１ｍＭジチオスレイトール、１０μｇ −ｔＲＮＡおよび４Ｕ−ＲＮｓｉｎを含む反応溶液中で、最終容量１０μｌでインキュベートする。反応成分は、３７℃で１５分間、プレアニールし、次いで、ゆっくり室温に冷却する。ＨｅＬａ細胞核抽出物は、啼乳動物ＲＮアーゼＨの源として用いられる。反応は、２μｇの核抽出物（５μｌ）を加えることによって開始し、３７℃で１０分間、反応を進行させる。反応は、フェノール／クロロホルム抽出によって停止させ、ＲＮＡ成分をエタノールで沈殿させる。同量のＣＰＭを、７Ｍ尿素を含む２０％ポリアクリルアミドゲルに負荷し、ＲＮＡ切断生成物を電気泳動によって解析し、視覚化し、次いで、オートラジオグラフする。切断生成物の定量は、ＭｏｌｅｃｕｌａｒＤｙｎａｍｉｃｓＤｅｎｓｉｔｏｍｅｔｅｒを用いて行う。方法８ｒａｓトランス活性化レポーター遺伝子システム発現プラスミドｐＳＶ−ｏｌｉは、構成的ＳＶ４０プロモーター制御下の活性化（コドン１２、ＧＧＣ→ＧＴＣ）Ｈ−ｒａｓｃＤＮＡ挿入物を含み、ＢｒｕｎｏＴｏｃｑｕｅ博士（Ｒｈｏｎｅ−ＰｏｕｌｅｎｃＳａｎｔｅＶｉｔｒｙＦｒａｎｃｅ）より頂いた。このプラスミドは、鋳型として用いられ、ＰＣＲによって、ステロイド誘導性マウス乳房腫瘍ウイルス（ＭＭＴＶ）プロモーターの制御下のＨ−ｒａｓ発現プラスミドを構築する。Ｈ−ｒａｓコード配列を得るために、Ｈ−ｒａｓ遺伝子の５７０ｂｐのコード領域をＰＣＲによって増幅させる。ＰＣＲプライマーは、クローニングを容易にするためにその５'-領域に唯一の制限エンドヌクレアーゼ部位を持つようにデザインされる。Ｈ−ｒａｓコドン１２突然変異オンコジンのコード領域を含むＰＣＲ生成物は、ゲル精製し、消化し、クローニングする前にもう一度ゲル精製する。この構築物は、発現プラスミドｐＭＡＭｎｅｏ（ＣｌｏｎｔｅｃｈＬａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，ＣＡ）中に挿入物をクローニングすることによって完成される。ｒａｓ−応答性レポーター遺伝子ｐＲＤＯ５３は、ｒａｓ発現を検出するために用いられる。Ｏｗｅｎら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．，Ｕ．Ｓ．Ａ．，１９９０，８７，３８６６−３８７０。方法９インビボでのｒａｓ発現のノーザンブロット分析ヒト泌尿器膀胱癌細胞株系Ｔ２４は、ＡｍｅｒｉｃａｎＴｙｐｅＣｕｌｔｕｒｅＣｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＲｏｃｋｖｉｌｌｅＭＤ）より得た。細胞は，Ｌ−グルタミン（ＧｉｂｃｏＢＲＬ，ＧａｉｔｈｅｒｓｂｕｒｇＭＤ）と共に、１０％熱不活性化ウシ胎児血清およびそれぞれ５０Ｕ／ｍｌのペニシリンおよびストレプトマイシンを補充した、ＭｃＣｏｙ'ｓ５Ａ培地中で増殖させる。細胞は、１００ｍｍプレートに接種した。細胞は、集密度が７０％達したときに、試験化合物で処理される。プレートは、１０ｍｌの前もって暖めておいたＰＢＳ、および２．５μｌ−ＤＯＴＭＡを含むＯｐｔｉ−ＭＥＭ還元血清培地５ｍｌで洗浄する。次いで、試験化合物を所望の濃度で加える。４時間処理した後、培地はＭｃＣｏｙ'ｓ培地で置き換える。細胞は試験化合物処理後４８時間で収集し、ＲＮＡを標準ＣｓＣｌ沈殿法で分離する。Ｋｉｎｇｓｔｏｎ，Ｒ．Ｅ．、ＣｕｒｒｅｎｔＰｒｏｔｏｃｏｌｓｉｎＭｏｌｅｃｕｌａｒＢｉｏｌｏｇｙ（Ｆ．Ｍ．Ａｕｓｕｂｅｌ，Ｒ．Ｂｒｅｎｔ，Ｒ．Ｅ．Ｋｉｎｇｓｔｏｎ，Ｄ．Ｄ．Ｍｏｏｒｅ，Ｊ．Ａ．Ｓｍｉｔｈ，Ｊ．Ｇ．ＳｅｉｄｍａｎおよびＫ．Ｓｔｒａｈｌ編）、ＪｏｈｎＷｉｌｅｙａｎｄＳｏｎｓ，ＮＹ。ヒトの上皮癌細胞株ＨｅＬａ２２９は、ＡｍｅｒｉｃａｎＴｙｐｅＣｕｌｔｕｒｅＣｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ）から得た。ＨｅＬａ細胞は、１０％ウシ胎児血清および１００Ｕ／ｍｌペニシリンを補充したＤｕｌｂｅｃｃｏ'ｓＭｏｄｉｆｉｅｄＥａｇｌｅ'ｓ培地（ＤＭＥＭ）中、６穴プレート上に単層で維持される。試験化合物での処理およびＲＮＡの分離は、本質的に、上記のＴ２４細胞の所に記載した通りである。ノーザンハイブリダイゼーション：それぞれ１０μｇのＲＮＡは、１．２％アガロース／ホルムアミドゲルで電気泳動し、標準法で、一晩、ＧｅｎｅＢｉｎｄ４５ナイロン膜（ＰｈａｒｍａｃｉａＬＫＢ，Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ，ＮＪ）に移した。Ｋｉｎｇｓｔｏｎ，Ｒ．Ｅ．、ＣｕｒｒｅｎｔＰｒｏｔｏｃｏｌｓｉｎＭｏｌｅｃｕｌａｒＢｉｏｌｏｇｙ，（Ｆ．Ｍ．Ａｕｓｕｂｅｌ，Ｒ．Ｂｒｅｎｔ，Ｒ．Ｅ．Ｋｉｎｇｓｔｏｎ，Ｄ．Ｄ．Ｍｏｏｒｅ，Ｊ．Ａ．Ｓｍｉｔｈ，Ｊ．Ｇ．ＳｅｉｄｍａｎおよびＫ．Ｓｔｒａｈｌ編），ＪｏｈｎＷｉｌｅｙａｎｄＳｏｎｓ，ＮＹ．。ＲＮＡは、膜にＵＶ架橋する。二本鎖の³² Ｐ−標識プローブは、ｔｈｅＰｒｉｍｅａＧｅｎｅｌａｂｅｌｉｎｇｋｉｔ（Ｐｒｏｍｅｇａ，ＭａｄｉｓｏｎＷＩ）を用いて合成する。ｒａｓプローブは、コドン１２にＧＧＣからＧＴＣへの突然変異を持つ活性化（変異体）Ｈ−ｒａｓｍＲＮＡのｃＤＮＡクローンのＳａｌＩ−ＮｈｅＩフラグメントである。対照プローブは、Ｇ３ＰＤＨである。ブロットは、ＱｕｉｃｋＨｙｂハイブリダイゼーション溶液（Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ，ＬａＪｏｌｌａ，ＣＡ）で１５分間６８℃で前ハイブリダイズする。１０ｍｇ／ｍｌのサケ精液ＤＮＡを１００μｌ混合した熱変性放射性プローブ（２．５×１０⁶カウント／２ｍｌハイブリダイゼーション溶液）を加え、膜を１時間６８℃でハイブリダイズする。ブロットは、２×ＳＳＣ／０．１％ＳＤＳ中、室温で１５分間、２度、さらに０．１ ×ＳＳＣ／０．１％ＳＤＳ中、６０℃で３０分間、一度洗浄する。ブロットは、オートラジオグラフし、シグナルの強度を、ＩｍａｇｅＱｕａｎｔＰｈｏｓｐｈｏｒｌｍａｇｅｒ（ＭｏｌｅｃｕｌａｒＤｙｎａｍｉｃｓ，Ｓｕｎｎｙｖａｌｅ，ＣＡ）を用いて定量する。ノーザンブロットは、最初、ｒａｓプローブとハイブリダイズさせ、次いで、０．１×ＳＳＣ／０．１％ＳＤＳ中で１５分間沸騰させることによって取り除き、対照としてのＧ３ＰＤＨプローブと再度ハイブリダイズさせて試料の負荷の適性を照合する。方法１０癌細胞増殖の阻害および化学療法剤試験の対照としての利用細胞は、本質的には、実施例９に記載の方法に従って、培養し、試験化合物で処理される。細胞は、６０ｍｍプレート上に接種し、集密度が７０％に達した時にＤＯＴＭＡ存在下、試験化合物で処理する。時間経過実験：第１日、細胞は、最終濃度１００ｎＭの単一用量の試験化合物で処理する。増殖培地は、３日目に一度、取り替え、細胞は、計数容器を用いて、５日間、毎日計数する。投与量応答実験：さまざまな濃度（１０，２５，５０，１００または２５０ｎＭ）の試験化合物を細胞に加え、細胞を収集し、３日後に計数する。次いで、本発明の活性な化合物は、他の化学療法剤のスクリーニングのための同様のスクリーンの標準として用いることができる。

【手続補正書】【提出日】１９９６年５月２９日【補正内容】請求の範囲１．構造：ＰＮＡ−ＤＮＡ−ＰＮＡ［式中：前記ＤＮＡは、少なくとも１つの２’−デオキシオリゴヌクレオチドを含み；かつ前記ＰＮＡのそれぞれは、式（Ｉ）：［式中：ｎは少なくとも２であり、Ｌ¹−Ｌⁿはそれぞれ、水素、ヒドロキシ、（Ｃ₁−Ｃ₄）アルカノイル、天然型のヌクレオベース、非天然型のヌクレオベース、芳香族部分、ＤＮＡインターカレーター、ヌクレオベース結合基、複素環式部分、およびレポーターリガンドからなる群より独立的に選択され、Ｌ¹−Ｌⁿの少なくとも１つは、天然型のヌクレオベース、非天然型のヌクレオベース、ＤＮＡインターカレーター、またはヌクレオベース結合基であり；Ｃ¹−Ｃⁿはそれぞれ、（ＣＲ⁶Ｒ⁷）_yであり、ここでＲ⁶は水素であり、Ｒ⁷は天然型のα−アミノ酸の側鎖からなる群より選択されるか、またはＲ⁶およびＲ⁷ は、水素、（Ｃ₂−Ｃ₆）アルキル、アリール、アラルキル、ヘテロアリール、ヒドロキシ、（Ｃ₁−Ｃ₆）アルコキシ、（Ｃ₁−Ｃ₆）アルキルチオ、ＮＲ₃Ｒ₄およびＳＲ₅［ここで、Ｒ³およびＲ⁴は上に定義した通りであり、Ｒ⁵は水素、（Ｃ₁ −Ｃ₆）アルキル、ヒドロキシ−、アルコキシ−もしくはアルキルチオ−置換（Ｃ₁−Ｃ₆）アルキルである］からなる群より独立的に選択されるか、またはＲ⁶ およびＲ⁷が一緒になって脂環式または複素環式系を作り上げ；Ｄ¹−Ｄⁿはそれぞれ（ＣＲ⁶Ｒ⁷）_zであり、Ｒ⁶およびＲ⁷は上記の通りであり；ｙおよびｚはそれぞれ０または１から１０の整数であり、ｙ＋ｚの和は２より大きいが１０以下であり；Ｇ¹−Ｇ^n-1のそれぞれは、いずれの向きでもよい−ＮＲ³ＣＯ−、−ＮＲ³ＣＳ −、−ＮＲ³ＳＯ−、または−ＮＲ³ＳＯ₂−であり、Ｒ³は上記の通りであり；Ａ¹−ＡⁿおよびＢ¹−Ｂⁿの組み合わせは、それぞれ：（ａ）Ａは式（IIａ）、（IIｂ）または（IIｃ）の基であり、ＢはＮまたはＲ³Ｎ⁺である；または（ｂ）Ａは式（IIｄ）の基であり、ＢはＣＨである；［式中：Ｘは、Ｏ、Ｓ、Ｓｅ、ＮＲ³、ＣＨ₂またはＣ（ＣＨ₃）₂であり；Ｙは、単結合、Ｏ、ＳまたはＮＲ⁴であり；ｐおよびｑはそれぞれ、０または１から５の整数であり、ｐ＋ｑの和は１０以下であり；ｒおよびｓはそれぞれ、０または１から５の整数であり、ｒ＋ｓの和は１０以下であり；Ｒ¹およびＲ²のそれぞれは、水素、ヒドロキシもしくはアルコキシもしくはアルキルチオで置換されていてもよい（Ｃ₁−Ｃ₄）アルキル、ヒドロキシ、アルコキシ、アルキルチオ、アミノおよびハロゲンからなる群より独立的に選択され；Ｇ¹−Ｇ^n-1はそれぞれ、いずれの向きでもよい−ＮＲ³ＣＯ−、−ＮＲ³ＣＳ− 、−ＮＲ³ＳＯ−または−ＮＲ³ＳＯ₂−であり、ここでＲ³は上記の通りであり；Ｑは、−ＣＯ₂Ｈ−、−ＣＯＮＲ'Ｒ''、−ＳＯ₃Ｈまたは−ＳＯ₂ＮＲ'Ｒ''、または−ＣＯ₂Ｈもしくは−ＳＯ₃Ｈの活性化誘導体であり；そしてＩは、−ＮＲ'''Ｒ''''または−ＮＲ'''Ｃ（Ｏ）Ｒ''''であり、ここでＲ'、Ｒ''、Ｒ'''およびＲ''''は、水素、アルキル、アミノ保護基、レポーターリガンド、インターカレーター、キレーター、ペプチド、タンパク質、炭水化物、脂質、ステロイド、ヌクレオシド、ヌクレオチド、ヌクレオチドジホスフェート、ヌクレオチドトリホスフェート、オリゴヌクレオチド、オリゴヌクレオシドならびに可溶性および不溶性ポリマーからなる群より独立的に選択される；ただし、少なくとも１つのＲ'は前記ＤＮＡであり、少なくとも１つのＲ''''は前記ＤＮＡである］を有する少なくとも１つのペプチド核酸サブユニットを含む］の高分子。２．前記ＰＮＡ−ＤＮＡ−ＰＮＡの高分子が、核酸鎖に特異的にハイブリダイズする能力を有する、請求項１記載の高分子。３．前記核酸鎖がＲＮＡ鎖である、請求項２記載の高分子。４．前記ＤＮＡが、互いに結合する一連の少なくとも３つの２’−デオキシヌクレオチドを含み；かつそれぞれのＰＮＡが、少なくとも２つのペプチド核酸サブユニットを含む；請求項１記載の高分子。５．前記２’−デオキシヌクレオチドが、ホスホジエステル、ホスホロチオエートまたはホスホロジチオエート−ヌクレオチドである、請求項１記載の高分子。６．前記ＤＮＡが、ホスホジエステル、ホスホロチオエートまたはホスホロジチオエート結合によって互いに結合する一連の少なくとも３つの２’−デオキシヌクレオチドを含む、請求項１記載の高分子。７．前記ＰＮＡのそれぞれが、式IIIａ、IIIｂまたはIIIｃ：［式中：Ｌはそれぞれ、水素、フェニル、複素環式部分、天然型のヌクレオベース、および非天然型のヌクレオベースからなる群より独立的に選択され；Ｒ⁷'はそれぞれ、水素および天然型α−アミノ酸の側鎖からなる群より独立的に選択され；ｎは、１から６０の整数であり；ｋ、ｌ、およびｍはそれぞれ、独立的に０または１から５の整数であり；ｐは、０または１であり；Ｒ^hは、ＯＨ、ＮＨ₂または−ＮＨＬｙｓＮＨ₂であり；そしてＲⁱは、ＨまたはＣＯＣＨ₃である］の化合物を含む、請求項１記載の高分子。８．前記ＰＮＡのそれぞれが、式（IIIａ）−（IIIｃ）を有する化合物を含み、式中、各々のＬは、ヌクレオベースであるチミン（Ｔ）、アデニン（Ａ）、シトシン（Ｃ）、グアニン（Ｇ）およびウラシル（Ｕ）からなる群より独立的に選択され、ｋおよびｍは０または１であり、ｎは１から３０、特に４から２０の整数である、請求項７記載の高分子。９．前記ＤＮＡが、互いに結合した一連の少なくとも３つの前記２’−デオキシヌクレオチドを含み：ＰＮＡのそれぞれが少なくとも２つのペプチド核酸サブユニットを含み；かつ前記２’−デオキシヌクレオチドが、ホスホジエステル、ホスホロチオエートまたはホスホロジチオエート結合を通して結合している；請求項８記載の化合物。１０．前記ＰＮＡのそれぞれが、アミド、アミンまたはエステル結合で前記ＤＮＡに共有結合している、請求項１記載の高分子。１１．構造：ＰＮＡ−（アミド結合基）−ＤＮＡ−（アミド結合基）−ＰＮＡ［式中：前記ＤＮＡは、少なくとも１つの２’−デオキシヌクレオチドを含み；前記ＰＮＡはそれぞれ、少なくとも１つのぺプチド核酸サブユニットを含み；かつ、前記アミド結合基はそれぞれ、構造： −Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ− または −ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）− のアミド結合を含む］の高分子。１２．望ましくないタンパク質生成を特徴とする疾患を有する生物を治療する方法であって、該生物を、ＰＮＡ−ＤＮＡ−ＰＮＡの構造を有し、前記タンパク質をコードする核酸鎖と特異的にハイブリダイズする能力を有するヌクレオベースの配列を含む高分子と接触させることを含み、ここで、前記ＤＮＡは、前記ヌクレオベースの１つに共有結合した２’−デオキシ−エリスロ −ペントフラノシル糖部分を有する、少なくとも１つのヌクレオチドを含み；かつ、前記ＰＮＡのそれぞれは、共有結合したヌクレオベースを有する少なくとも１つのペプチド核酸サブユニットを含む；ことを特徴とする方法。１３．前記ヌクレオチドが、ホスホロチオエートヌクレオチドである、請求項１２記載の方法。１４．前記ヌクレオチドが、ホスホロジチオエートヌクレオチドである、請求項１２記載の方法。１５．前記ヌクレオチドが、ホスホジエステルヌクレオチドである、請求項１２記載の方法。１６．薬剤として有効な量の請求項１記載の高分子および薬剤として許容される希釈剤または担体を含む薬剤組成物。１７．インビトロで配列特異的核酸を修飾する方法であって、ＲＮアーゼＨおよび前記核酸を含む試験溶液を請求項１記載の高分子と接触させることを含む方法。１８．生物におけるポリヌクレオチドハイブリダイゼーションおよびＲＮアーゼＨ活性化を強化する方法であって、該生物を請求項１記載の高分子と接触させることを含み、ここで前記高分子は、核酸の相補鎖と特異的にハイブリダイズする能力を有するヌクレオベースの配列を有し；かつ、前記ヌクレオベースの幾つかが前記高分子のＰＮＡ部分に位置し、かつ前記ヌクレオベースの幾つかが前記高分子のＤＮＡ部分に位置する；ことを特徴とする方法。１９．望ましくないタンパク質生成を特徴とする疾患を有する生物を治療する方法であって、該生物を請求項１記載の化合物と接触させることを含む方法。２０．インビトロで配列特異的核酸を修飾する方法であって、ＲＮアーゼＨおよび前記核酸を含む試験溶液を請求項９記載の化合物と接触させることを含む方法。２１．望ましくないタンパク質生成を特徴とする疾患を有する生物を治療する方法であって、該生物を請求項９記載の化合物と接触させることを含む方法。２２．薬剤として有効量の請求項９記載の化合物および薬剤として許容される希釈剤または担体を含む薬剤組成物。２３．構造：ＰＮＡ−ＤＮＡまたはＤＮＡ−ＰＮＡ［式中：前記ＤＮＡは、ホスホロチオエートヌクレオシド間結合を通して結合している複数のヌクレオチドを含み、少なくとも１つの前記ヌクレオチドは２’−デオキシヌクレオチドであり；かつ前記ＰＮＡは、式（Ｉ）：［式中：ｎは少なくとも２であり、Ｌ¹−Ｌⁿはそれぞれ、水素、ヒドロキシ、（Ｃ₁−Ｃ₄）アルカノイル、天然型のヌクレオベース、非天然型のヌクレオベース、芳香族部分、ＤＮＡインターカレーター、ヌクレオベース結合基、複素環式部分、およびレポーターリガンドからなる群より独立的に選択され、Ｌ¹−Ｌⁿの少なくとも１つは、天然型のヌクレオベース、非天然型のヌクレオベース、ＤＮＡインターカレーター、またはヌクレオベース結合基であり；Ｃ¹−Ｃⁿはそれぞれ、（ＣＲ⁶Ｒ⁷）_yであり、ここでＲ⁶は水素であり、Ｒ⁷は天然型のα−アミノ酸の側鎖からなる群より選択されるか、またはＲ⁶およびＲ⁷ は、水素、（Ｃ₂−Ｃ₆）アルキル、アリール、アラルキル、ヘテロアリール、ヒドロキシ、（Ｃ₁−Ｃ₆）アルコキシ、（Ｃ₁−Ｃ₆）アルキルチオ、ＮＲ³Ｒ⁴およびＳＲ⁵［ここで、Ｒ³およびＲ⁴は上に定義した通りであり、Ｒ⁵は水素、（Ｃ₁ −Ｃ₆）アルキル、ヒドロキシ−、アルコキシ−もしくはアルキルチオ−置換（Ｃ₁−Ｃ₆）アルキルである］からなる群より独立的に選択されるか、またはＲ⁶ およびＲ⁷が一緒になって脂環式または複素環式系を作り上げ；Ｄ¹−Ｄⁿはそれぞれ（ＣＲ⁶Ｒ⁷）_zであり、Ｒ⁶およびＲ⁷は上記の通りであり；ｙおよびｚはそれぞれ０または１から１０の整数であり、ｙ＋ｚの和は２より大きいが１０以下であり；Ｇ¹−Ｇ^n-1のそれぞれは、いずれの向きでもよい−ＮＲ³ＣＯ−、−ＮＲ³ＣＳ −、−ＮＲ³ＳＯ−、または−ＮＲ³ＳＯ₂−であり、Ｒ³は上記の通りであり；Ａ¹−ＡⁿおよびＢ¹−Ｂⁿの組み合わせは、それぞれ：（ａ）Ａは式（IIａ）、（IIｂ）または（IIｃ）の基であり、ＢはＮまたはＲ³Ｎ⁺である；または（ｂ）Ａは式（IIｄ）の基であり、ＢはＣＨである；［式中：Ｘは、Ｏ、Ｓ、Ｓｅ、ＮＲ³、ＣＨ₂またはＣ（ＣＨ₃）₂であり；Ｙは、単結合、Ｏ、ＳまたはＮＲ⁴であり；ｐおよびｑはそれぞれ、０または１から５の整数であり、ｐ＋ｑの和は１０以下であり；ｒおよびｓはそれぞれ、０または１から５の整数であり、ｒ＋ｓの和は１０以下であり；Ｒ¹およびＲ²のそれぞれは、水素、ヒドロキシもしくはアルコキシもしくはアルキルチオで置換されていてもよい（Ｃ₁−Ｃ₄）アルキル、ヒドロキシ、アルコキシ、アルキルチオ、アミノおよびハロゲンからなる群より独立的に選択され；Ｇ¹−Ｇ^n-1はそれぞれ、いずれの向きでもよい−ＮＲ³ＣＯ−、−ＮＲ³ＣＳ− 、−ＮＲ³ＳＯ−または−ＮＲ³ＳＯ₂−であり、ここでＲ³は上記の通りであり；Ｑは、−ＣＯ₂Ｈ−、−ＣＯＮＲ'Ｒ''、−ＳＯ₃Ｈまたは−ＳＯ₂ＮＲ'Ｒ''、または−ＣＯ₂Ｈもしくは−ＳＯ₃Ｈの活性化誘導体であり；そしてＩは、−ＮＲ'''Ｒ''''または−ＮＲ'''Ｃ（Ｏ）Ｒ''''であり、ここでＲ'、Ｒ''、Ｒ'''およびＲ''''は、水素、アルキル、アミノ保護基、レポーターリガンド、インターカレーター、キレーター、ペプチド、タンパク質、炭水化物、脂質、ステロイド、ヌクレオシド、ヌクレオチド、ヌクレオチドジホスフェート、ヌクレオチドトリホスフェート、オリゴヌクレオチド、オリゴヌクレオシドならびに可溶性および不溶性ポリマーからなる群より独立的に選択される；ただし、少なくとも１つのＲ'は前記ＤＮＡであり、少なくとも１つのＲ''''は前記ＤＮＡである］を有する少なくとも１つのペプチド核酸サブユニットを含む］の高分子。２４．構造ＰＮＡ−ＤＮＡを有する、請求項２３記載の高分子。２５．構造ＤＮＡ−ＰＮＡを有する、請求項２３記載の高分子。２６．前記ＰＮＡ−ＤＮＡまたはＤＮＡ−ＰＮＡの高分子が、核酸鎖に特異的にハイブリダイズする能力を有する、請求項２３記載の高分子。２７．前記核酸鎖が、ＲＮＡ鎖である、請求項２６記載の高分子。２８．前記ＤＮＡが、互いに結合する一連の少なくとも３つの２’−デオキシヌクレオチドを含み；かつそれぞれのＰＮＡが、少なくとも２つのペプチド核酸サブユニットを含む；請求項２３記載の高分子。２９．前記２’−デオキシヌクレオチドが、ホスホジエステル、ホスホロチオエートまたはホスホロジチオエート２’−デオキシヌクレオチドである、請求項２３記載の高分子。３０．前記ＤＮＡが、ホスホジエステル、ホスホロチオエートまたはホスホロジチオエート結合によって互いに結合する一連の少なくとも３つの２’−デオキシヌクレオチドを含む、請求項２３記載の高分子。３１．前記ＰＮＡが、式IIIａ、IIIｂまたはIIIｃ：［式中：Ｌはそれぞれ、水素、フェニル、複素環式部分、天然型のヌクレオベース、および非天然型のヌクレオベースからなる群より独立的に選択され；Ｒ⁷'はそれぞれ、水素および天然型α−アミノ酸の側鎖からなる群より独立的に選択され；ｎは、１から６０の整数であり；ｋ、ｌ、およびｍはそれぞれ、独立的に、０または１から５の整数であり；ｐは、０または１であり；Ｒ^hは、ＯＨ、ＮＨ₂または−ＮＨＬｙｓＮＨ₂であり；そしてＲⁱは、ＨまたはＣＯＣＨ₃である］からなる群より選択される式を有する化合物を含む、請求項２３記載の高分子。３２．前記ＰＮＡが、（IIIａ）、（IIIｂ）および（IIIｃ）からなる群より選択される式を有する化合物を含み、式中、各々のＬは、ヌクレオベースであるチミン（Ｔ）、アデニン（Ａ）、シトシン（Ｃ）、グアニン（Ｇ）およびウラシル（Ｕ）からなる群より独立的に選択され、ｋおよびｍは０または１であり、ｎは１から３０の整数である、請求項３１記載の高分子。３３．前記ＤＮＡが、互いに結合した一連の少なくとも３つの前記２’−デオキシヌクレオチドを含み：前記ＰＮＡが、少なくとも２つのペプチド核酸サブユニットを含み；かつ前記２’−デオキシヌクレオチドが、ホスホジエステル、ホスホロチオエートまたはホスホロジチオエート結合を通して結合している；請求項３２記載の化合物。３４．前記ＰＮＡが、アミド、アミンまたはエステル結合で前記ＤＮＡに共有結合している、請求項２３記載の高分子。３５．核酸ハイブリダイゼーションの方法であって、前記核酸を、前記核酸と特異的にハイブリダイズしうるヌクレオベースの配列を含み、かつ次の構造：ＰＮＡ−ＤＮＡまたはＤＮＡ−ＰＮＡ［式中：前記ＤＮＡは、少なくとも１つの２’−デオキシヌクレオチドを含み；かつ前記ＰＮＡは、式（Ｉ）：［式中：ｎは少なくとも２であり、Ｌ¹−Ｌⁿはそれぞれ、水素、ヒドロキシ、（Ｃ₁−Ｃ₄）アルカノイル、天然型のヌクレオベース、非天然型のヌクレオベース、芳香族部分、ＤＮＡインターカレーター、ヌクレオベース結合基、複素環式部分、およびレポーターリガンドからなる群より独立的に選択され、Ｌ¹−Ｌⁿの少なくとも１つは、天然型のヌクレオベース、非天然型のヌクレオベース、ＤＮＡインターカレーター、またはヌクレオベース結合基であり；Ｃ¹−Ｃⁿはそれぞれ、（ＣＲ⁶Ｒ⁷）_yであり、ここでＲ⁶は水素であり、Ｒ⁷は天然型のα−アミノ酸の側鎖からなる群より選択されるか、またはＲ⁶およびＲ⁷ は、水素、（Ｃ₂−Ｃ₆）アルキル、アリール、アラルキル、ヘテロアリール、ヒドロキシ、（Ｃ₁−Ｃ₆）アルコキシ、（Ｃ₁−Ｃ₆）アルキルチオ、ＮＲ³Ｒ⁴およびＳＲ⁵［ここで、Ｒ³およびＲ⁴は上に定義した通りであり、Ｒ⁵は水素、（Ｃ₁ −Ｃ₆）アルキル、ヒドロキシ−、アルコキシ−もしくはアルキルチオ−置換（Ｃ₁−Ｃ₆）アルキルである］からなる群より独立的に選択されるか、またはＲ⁶ およびＲ⁷が一緒になって脂環式または複素環式系を作り上げ；Ｄ¹−Ｄⁿはそれぞれ（ＣＲ⁶Ｒ⁷）_zであり、Ｒ⁶およびＲ⁷は上記の通りであり；ｙおよびｚはそれぞれ０または１から１０の整数であり、ｙ＋ｚの和は２より大きいが１０以下であり；Ｇ¹−Ｇ^n-1のそれぞれは、いずれの向きでもよい−ＮＲ³ＣＯ−、−ＮＲ³ＣＳ −、−ＮＲ³ＳＯ−、または−ＮＲ³ＳＯ₂−であり、Ｒ³は上記の通りであり；Ａ¹−ＡⁿおよびＢ¹−Ｂⁿの組み合わせは、それぞれ：（ａ）Ａは式（IIａ）、（IIｂ）または（IIｃ）の基であり、ＢはＮまたはＲ³Ｎ⁺である；または（ｂ）Ａは式（IIｄ）の基であり、ＢはＣＨである；［式中：Ｘは、Ｏ、Ｓ、Ｓｅ、ＮＲ³、ＣＨ₂またはＣ（ＣＨ₃）₂であり；Ｙは、単結合、Ｏ、ＳまたはＮＲ⁴であり；ｐおよびｑはそれぞれ、０または１から５の整数であり、ｐ＋ｑの和は１０以下であり；ｒおよびｓはそれぞれ、０または１から５の整数であり、ｒ＋ｓの和は１０以下であり；Ｒ¹およびＲ²のそれぞれは、水素、ヒドロキシもしくはアルコキシもしくはアルキルチオで置換されていてもよい（Ｃ₁−Ｃ₄）アルキル、ヒドロキシ、アルコキシ、アルキルチオ、アミノおよびハロゲンからなる群より独立的に選択され；Ｇ¹−Ｇ^n-1はそれぞれ、いずれの向きでもよい−ＮＲ³ＣＯ−、−ＮＲ³ＣＳ− 、−ＮＲ³ＳＯ−または−ＮＲ³ＳＯ₂−であり、ここでＲ³は上記の通りであり；Ｑは、−ＣＯ₂Ｈ−、−ＣＯＮＲ'Ｒ''、−ＳＯ₃Ｈまたは−ＳＯ₂ＮＲ'Ｒ''、または−ＣＯ₂Ｈもしくは−ＳＯ₃Ｈの活性化誘導体であり；そしてＩは、−ＮＲ'''Ｒ''''または−ＮＲ'''Ｃ（Ｏ）Ｒ''''であり、ここでＲ'、Ｒ''、Ｒ'''およびＲ''''は、水素、アルキル、アミノ保護基、レポーターリガンド、インターカレーター、キレーター、ペプチド、タンパク質、炭水化物、脂質、ステロイド、ヌクレオシド、ヌクレオチド、ヌクレオチドジホスフェート、ヌクレオチドトリホスフェート、オリゴヌクレオチド、オリゴヌクレオシドならびに可溶性および不溶性ポリマーからなる群より独立的に選択される；ただし、少なくとも１つのＲ'は前記ＤＮＡであり、少なくとも１つのＲ''''は前記ＤＮＡである］を有する少なくとも１つのペプチド核酸サブユニットを含む］を有する高分子と接触させることを含む方法。３６．前記核酸がＲＮＡである、請求項３５記載の方法。３７．前記ハイブリダイゼーションがＲＮアーゼＨを活性化させる、請求項３５記載の方法。３８．前記ＤＮＡが、互いに結合する連続する少なくとも３つの２’−デオキシヌクレオチドを含み；かつ前記ＰＮＡが、少なくとも２つのペプチド核酸サブユニットを含む；請求項３５記載の方法。３９．前記２’−デオキシヌクレオチドが、ホスホジエステル、ホスホロチオエートまたはホスホロジチオエート２’−デオキシヌクレオチドである、請求項３５記載の方法。４０．前記ＤＮＡが、ホスホジエステル、ホスホロチオエートまたはホスホロジチオエート結合によって互いに結合する連続する少なくとも３つの２’−デオキシヌクレオチドを含む、請求項３５記載の方法。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁶ 識別記号庁内整理番号ＦＩＣ０７Ｋ 7/06 8517−4ＨＣ０７Ｋ 7/06 // Ｃ１２Ｎ 15/09 ＺＮＡ 8310−2ＪＧ０１Ｎ 33/50 ＴＧ０１Ｎ 33/50 9162−4ＢＣ１２Ｎ 15/00 ＺＮＡＡ

Claims

【特許請求の範囲】１．構造：ＰＮＡ−ＤＮＡ−ＰＮＡ［式中：前記ＤＮＡは、少なくとも一つの２'-オリゴヌクレオチドを含み；かつ前記ＰＮＡのそれぞれは、少なくとも一つのペプチド核酸サブユニットを含む］の高分子。２．前記ＰＮＡ−ＤＮＡ−ＰＮＡの高分子が、核酸鎖に特異的にハイブリダイズする能力を持つ、請求項１記載の高分子。３．前記核酸鎖が、ＲＮＡ鎖である、請求項２記載の高分子。４．前記ＤＮＡが、順番に互いに結合する少なくとも３つの２'-デオキシヌクレオチドを含み；かつそれぞれのＰＮＡが、少なくとも２つのペプチド核酸サブユニットを含む；請求項１記載の高分子。５．前記２’−デオキシヌクレオチドが、ホスホジエステル、ホスホロチオエートまたはホスホロジチオエート−ヌクレオチドである、請求項１記載の高分子。６．前記ＤＮＡが、ホスホジエステル、ホスホロチオエートまたはホスホロジチオエート結合によって順番に互いに結合する少なくとも３つの２'-デオキシヌクレオチドを含む、請求項１記載の高分子。７．前記ＰＮＡのそれぞれが、式（Ｉ）：［式中：ｎは少なくとも２であり、Ｌ¹−Ｌⁿはそれぞれ、水素、ヒドロキシ、（Ｃ₁−Ｃ₄）アルカノイル、天然型のヌクレオベース、非天然型のヌクレオベース、芳香族部分、ＤＮＡインターカレーター、ヌクレオベース結合基、複素環式部分、およびレポーターリガンドからなる群より独立的に選択され、Ｌ¹−Ｌⁿの少なくとも１つは、天然型ヌクレオベース、非天然型ヌクレオベース、ＤＮＡインターカレーター、またはヌクレオベース結合基であり；Ｃ¹−Ｃⁿはそれぞれ、（ＣＲ⁶Ｒ⁷）_yであり、ここでＲ⁶は水素であり、Ｒ⁷は天然型のα−アミノ酸の側鎖からなる群より選択されるか、またはＲ⁶およびＲ⁷ は、水素、（Ｃ₂−Ｃ₆）アルキル、アリール、アラルキル、ヘテロアリール、ヒドロキシ、（Ｃ₁−Ｃ₆）アルコキシ、（Ｃ₁−Ｃ₆）アルキルチオ、ＮＲ³Ｒ⁴およびＳＲ⁵［ここで、Ｒ³およびＲ⁴は上に定義した通りであり、Ｒ⁵は水素、（Ｃ₁ −Ｃ₆）アルキル、ヒドロキシ−、アルコキシ−もしくはアルキルチオ−置換（Ｃ₁−Ｃ₆）アルキルである］からなる群より独立的に選択されるか、またはＲ⁶ およびＲ⁷が一緒になって脂環式または複素環式系を作り上げ；Ｄ¹−Ｄⁿはそれぞれ（ＣＲ⁶Ｒ⁷）_zであり、Ｒ⁶およびＲ⁷は上記の通りであり；ｙおよびｚはそれぞれ０または１から１０までの整数であり、ｙ＋ｚの和は２より大きいが１０以下であり；Ｇ¹−Ｇ^n-1のそれぞれは、いずれの向きでもよい−ＮＲ³ＣＯ−、−ＮＲ³ＣＳ −、−ＮＲ³ＳＯ−、または−ＮＲ³ＳＯ²−であり、Ｒ³は上記の通りであり；Ａ¹−ＡⁿおよびＢ¹−Ｂⁿの組み合わせは、それぞれ：（ａ）Ａは式（ＩＩａ）、（ＩＩｂ）または（ＩＩｃ）の基の一つであり、ＢはＮまたはＲ³Ｎ⁺である；または（ｂ）Ａは式（ＩＩｄ）の基であり、ＢはＣＨである；［式中：Ｘは、Ｏ、Ｓ、Ｓｅ、ＮＲ³、ＣＨ₂またはＣ（ＣＨ₃）₂であり；Ｙは、単結合、Ｏ、ＳまたはＮＲ⁴であり；ｐおよびｑはそれぞれ、０または１から５までの整数であり、ｐ＋ｑの和は１０以下であり；ｒおよびＳはそれぞれ、０または１から５までの整数であり、ｒ＋ｓの和は１０以下であり；Ｒ¹およびＲ²のそれぞれは、水素、ヒドロキシもしくはアルコキシもしくはアルキルチオで置換されていてもよい（Ｃ₁−Ｃ₄）アルキル、ヒドロキシ、アルコキシ、アルキルチオ、アミノおよびハロゲンからなる群より独立的に選択され；Ｇ¹−Ｇ^n-1はそれぞれ、いずれの向きでもよい−ＮＲ³ＣＯ−、−ＮＲ³ＣＳ− 、−ＮＲ³ＳＯ−または−ＮＲ³ＳＯ₂−であり、ここでＲ³は上記の通りであり；Ｑは、−ＣＯ₂Ｈ−、−ＣＯＮＲ'Ｒ''、−ＳＯ₃Ｈもしくは−ＳＯ₂ＮＲ'Ｒ'' または−ＣＯ₂Ｈもしくは−ＳＯ₃Ｈの活性化誘導体であり；そしてＩは、−ＮＨＲ'''Ｒ''''または−ＮＲ'''Ｃ（Ｏ）Ｒ''''であり、ここでＲ' 、Ｒ''、Ｒ'''およびＲ''''は、水素、アルキル、アミノ保護基、レポーターリガンド、インターカレーター、キレーター、ペプチド、タンパク質、炭水化物、脂質、ステロイド、ヌクレオシド、ヌクレオチド、ヌクレオチドジホスフェート、ヌクレオチドトリホスフェート、オリゴヌクレオチド、オリゴヌクレオシドならびに可溶性および不溶性ポリマーからなる群より独立的に選択される］の化合物を含む、請求項１記載の高分子。８．前記ＰＮＡのそれぞれが、式ＩＩＩａ、ＩＩＩｂまたはＩＩＩｃ：［式中：Ｌはそれぞれ、水素、フェニル、複素環式部分、天然型のヌクレオベース、および非天然型のヌクレオベースからなる群より独立的に選択され；Ｒ⁷'はそれぞれ、水素および天然型α−アミノ酸の側鎖からなる群より独立的に選択され；ｎは、１から６０の整数であり；ｋ、１、およびｍはそれぞれ、独立的に０または１から５の整数であり；ｐは、０または１であり；Ｒ^hは、ＯＨ、ＮＨ₂または−ＮＨＬｙｓＮＨ₂であり；Ｒ¹は、ＨまたはＣＯＣＨ₃である］の化合物を含む、請求項１記載の高分子。９．前記ＰＮＡのそれぞれが、式（ＩＩＩａ）−（ＩＩＩｃ）を持つ化合物を含み、式中、各々のＬはヌクレオベースであるチミン（Ｔ）、アデニン（Ａ）、シトシン（Ｃ）、グアニン（Ｇ）およびウラシル（Ｕ）からなる群より独立的に選択され、ｋおよびｍは０または１であり、ｎは１から３０、特に４から２０の整数である、請求項８記載の高分子。１０．前記ＤＮＡが、順番に互いに結合した少なくとも３つの前記２'-デオキシヌクレオチドを含み：ＰＮＡのそれぞれが、少なくとも２つのペプチド核酸サブユニットを含み；且つ前記２'-デオキシヌクレオチドが、ホスホジエステル、ホスホロチオエートまたはホスホロジチオエート結合を通して結合している；請求項９記載の化合物。１１．前記ＰＮＡのそれぞれが、アミド、アミンまたはエステル結合で前記ＤＮＡに共有結合している、請求項１記載の高分子。１２．構造：ＰＮＡ−（アミド結合基）−ＤＮＡ−（アミド結合基）−ＰＮＡ［式中：前記ＤＮＡは、少なくとも１つの２'-デオキシヌクレオチドを含み；前記ＰＮＡはそれぞれ、少なくとも１つのペプチド核酸サブユニットを含み；かつ、前記アミド結合基はそれぞれ、構造： −Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ− または −ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）− のアミド結合を含む］の構造の高分子。１３．望ましくないタンパク質生成を特徴とする疾患を持つ生物を治療する方法であって、該生物を、ＰＮＡ−ＤＮＡ−ＰＮＡの構造を持ち、前記タンパク質をコードする核酸鎖と特異的にハイブリダイズする能力を持つヌクレオベースの配列を含む高分子と接触させることを含み、ここで、前記ＤＮＡは、前記ヌクレオベースの１つに共有結合した２'-デオキシ−エリスロ −ペントフラノシル糖部分を持つ、少なくとも１つのヌクレオチドを含み；且つ、前記ＰＮＡのそれぞれは、共有結合したヌクレオベースを持つ少なくとも１つのペプチド核酸サブユニットを含むことを特徴とする方法。１４．前記ヌクレオチドが、ホスホロチオエートヌクレオチドである、請求項１３記載の方法。１５．前記ヌクレオチドが、ホスホロジチオエートヌクレオチドである、請求項１３記載の方法。１６．前記ヌクレオチドが、ホスホジエステルヌクレオチドである、請求項１３記載の方法。１７．薬剤として有効な量の請求項１記載の高分子および薬剤として許容される希釈剤または担体を含む薬剤組成物。１８．インビトロで配列特異的核酸を修飾する方法であって、ＲＮアーゼＨおよび前記核酸を含む試験溶液を請求項１記載の高分子と接触させることを含む方法。１９．生物におけるポリヌクレオチドハイブリダイゼーションおよびＲＮアーゼＨ活性化を強化する方法であって、該生物を請求項１記載の高分子と接触させることを含み、ここで前記高分子は、核酸の相補鎖と特異的にハイブリダイズする能力を持つヌクレオベースの配列をもち；且つ、前記ヌクレオベースの幾つかが前記高分子のＰＮＡ部分に位置し、且つ前記ヌクレオベースの幾つかが前記高分子のＤＮＡ部分に位置する；ことを特徴とする方法。２０．望ましくないタンパク質生成を特徴とする疾患をもつ生物を治療する方法であって、該生物を請求項１記載の化合物と接触させることを含む方法。２１．インビトロで配列特異的核酸を修飾する方法であって、ＲＮアーゼＨおよび前記核酸を含む試験溶液を請求項１０記載の化合物と接触させることを含む方法。２２．望ましくないタンパク質生成を特徴とする疾患をもつ生物を治療する方法であって、該生物を請求項１０記載の化合物と接触させることを含む方法。２３．薬剤として有効量の請求項１０記載の化合物および薬剤として許容される希釈剤または担体を含む薬剤組成物。