JPH07501222A - 天然原料から核酸のような細胞成分を単離する方法及び装置 - Google Patents

天然原料から核酸のような細胞成分を単離する方法及び装置

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Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 天然原料から核酸のような細胞成分を単離する方法及び装置本発明は、試料中の 細胞又は細胞破片のような消化された天然原料を濾過によって除去することによ り、天然原料から核酸のような成分を単離するための方法、及び該方法を実施す るための装置に関する。
細胞成分、特に核酸の調製において、該成分が由来する消化された天然原料を溶 解した材料から分離する際に問題が起こることがよくある。細胞又は細胞破片の 除去は遠心分離によって行われ、これにより大きい細胞断片又は細胞は遠心管中 にペレットとして沈殿する。このとき前記細胞成分は上清中にあり、ピペットに より採取することができる。濾過法はそれ自体より単純な方法であるが、消化さ れた細胞又はその断片は大きすぎるボア径のフィルターを使用すると通過して濾 液中に濁りや不純物を生してしまい、これに対して適当な細かさのボアを存する フィルターを使用すると、結果として詰まりが避けられず、目的に合致した細胞 成分の調製が不可能になってしまい、存効てない。
従って本発明は、例えば細胞のような天然原料からの細胞成分の調製のための遠 心分離工程をより取扱いやすい濾過工程を用いて回避することができる方法を提 供し装置を作製するという課題を基本とする。
本発明が基本とする技術的課題は請求項１の構成に従った方法により解決される 。後続の従属請求項は本発明の方法の好ましい態様に関するものである。本発明 の装置は請求項ＩＯの構成を有するものである。後続の従属請求項は本発明の装 置の好ましい態様に関するものである。
従来より、成分を細胞から単離するには、最初に後者を消化する。核酸の調製に おいては、例えばプロテイナーゼＫ及びリゾチームのような酵素；　ＳＤＳ　、 　Ｂｒｉ　ｊ、トライトン−Ｘ−１ｏｏ、トウィーン２０及びＤＯＣのような洗 剤、並びに水酸化ナトリウム、塩酸グアニジン及びグアニジンイソチオシアネー トのような化学物質を用いて最初に細胞を消化しなければならない。その後、こ のように処理された試料物質を濾過にかけるか、濾過に使用されるフィルターの ボア径は、試料が流れる方向に向かって減少するものである。
好ましい態様においては、濾過の間の試料の流れは加圧又は減圧をかけることに より促進することができる。しかしながら、フィルターのボア径の配置によって は、濾過される試料を重力のみを駆動力としてフィルターを通過させることが可 能である。さらに試料のフィルター中の通過をより早くするために、遠心分離に より試料をフィルターに通過させることも可能である。
特に、本発明の方法は１〜５０　ｋｂのサイズを有するプラスミドＤＮＡ又はゲ ノムＤＮＡの調製に適している。
本発明の方法に使用できるフィルターとしては、特に、焼結ポリエチレン、ポリ プロピレン、ポリテトラフルオロエチレン、ガラス、シリカゲル、酸化アルミニ ウム、又は圧縮珪藻土、例えばセライト又はシリカゲル；ポリプロピレン、ポリ エステル、ガラス繊維及びシリカの織フリース又は不織フリース：並びに紙、加 圧された紙、紙により形成されたフリースから成るもの又はこれらの組合せから 成るものがある。
本発明の方法の好ましい態様においては、多数の試料が同時に処理され、微量滴 定（ｍＩｃｒｏｔｌｔｒａｔＪｏｎ）系に有利に使用される適当な装置を通過さ せられる。
該方法を実施するための本発明の装置は、入口及び出口開口部５０．６０を存す る好ましくは円筒形状の中空体４ｏと、中空体４ｏ中に配置された濾過ユニット ７０とからなる。濾過ユニット７ｏを固定するためには通常の固定手段、例えば 接着が使用されるが、濾過ユニット７ｏを中空体４ｏ内に詰まらせて、摩擦力に より固定するようにしてもよい。
本発明の装置は、出口開口部６ｏの方向に向がって小さくなるボア径を有する少 なくとも１つのフィルターを含む。図１は本発明の装置の特に好ましい１変形例 を示すものであり、好ましくは円筒形状の中空体４ｏ中に、濾過ユニット７゜か ３層ソートから形成されている。ここでは、最上層２ｏは好ましくは１００〜３ ００μｍのボア径を有することかでき、第２の層は３０〜１００μｍのボア径を 存することができ、第３の層は５〜３０μｍのボア径を存することができる。各 車−の層を構成する物質としては、特に、焼結ポリエチレン、ポリプロピレン、 ポリテトラフルオロエチレン、ガラス、シリカゲル、酸化アルミニウム又は圧縮 珪藻土、例えばセライト又はシリカゲル、ポリプロピレン、ポリエステル、ガラ ス繊維及びシリカの織フリース又は不織フリース；並びに紙、加圧された紙、紙 により形成されたフリース又はこれらの組合せから成るものがある。
特に好ましい態様においては、例えば、フィルター層２０．２１は特定されたボ ア径の段階的変化を存する無機部材から成るものでもよく、フィルター層２２は 紙から成るものでもよい。
別の層２３を、中空体４０中の、即ち層２０の上又は層２２の下に設け、これに より濾過される溶液のフィルター中への早すぎる侵入や、本発明の装置外への溶 液の流出を防ぐようにすると都合がよい。しかしながら、層２０又は層２２を多 孔質の疎水性層として設計することも可能である。中間層２０の上に疎水性中間 層２３が配置される場合、この中間層のボア径がその下の層２０のものよりも小 さくなければ有利である。疎水性中間層が層２０の下に配置されているその他の 配置においては、この要件はそれほど重要ではない。
図２ａ）及び図２ｂ）は、図１の好ましい装置の疎水性中間層を存する配置に対 応する。
別の好ましい態様においては、本発明の装置は核酸の製造のために必要な用具、 即ち並行した出願Ｐ４１３９６６４に記載されたものと組み合わせることができ る。
当該Ｐ４１３９６６４においては、適当な用具も記載されており、例えば膜中に 陰イオン交換体が埋め込まれたものである（３Ｍエンボア・メンブレン）。これ らの系は、ＱＩＡ−ウェルの名称て市販されている。
図３は、３層フィルター２０　、２＋、２２を含む本発明の装置がカートリッジ 上に装着されており、該カートリッジにおいては２つの装置５及び６の間に陰イ オン交換部材が存在する。分離される試料はフィルター層２０の上に載置され、 フィルターヘッドがカートリッジ（実質的に同様な円筒形中空体）＋（抽出カラ ム）上に装着される。次に、任意に軽度の高圧又は減圧を加えることによって、 分離される溶液かフィルターユニット７０を通り、陰イオン交換体１０が中に配 置されている容器（抽出カラム）中に滴下する。次に、適当なバッファー条件下 （低塩濃度）で、例えば核酸が陰イオン交換体部材に結合する。細胞破片は本発 明のフィルターヘット４０に留まり、目的の核酸はイオン交換体に吸着されて存 在する。
濾過ユニット４０中のフィルターケーキを廃棄した後、核酸を含む円筒形中空体 １をさらに処理することができる。
図４は、本発明のフィルターヘッド４０を有する図３と類似の状況を示し、疎水 性中間層２３てシールされた２層フィルターが使用されている。好ましくは、本 発明の装置の出口開口部６０は、核酸を吸着する部材の対応するカートリッジ１ 中に押し込むことができるような寸法を持ち、摩擦力により固定される。
同様に、図１．２ａ）及び２ｂ）に示された濾過ユニットは、高いイオン強度で 核酸を結合できる部材が配置されたカートリッジ上に装着することができる。特 にこれらは、ガラス、シリカゲル及びその他の無機物質のような部材である。次 に例えば、高塩濃度条件下で核酸の調製を行うことができる。適当に調製され、 消化された試料が、次に、図１．２ａ）又は２ｂ）のいずれかの配置の本発明の 濾過ユニットを通され、さらに図５に示された装置１中において、高イオン強度 条件下でシリカゲル、ガラス繊維、圧縮粉末化ガラス部材１１に吸着される。
図５は、試料が流れる方向に見てアシンメトリツクなボア径分布を持つフィルタ ー層７０を存する本発明の装置を示す。ここでは、流れの方向に向かって、約１ ００〜５００μｍから５〜３０μｍへ連続的又は非連続的にボア径が減少する。
図６は、本発明の装置が図５と同様の形態において抽出カラム上に置かれた配置 を示し、陰イオン交換体１０は図５の無機質担体Ｉ＋の上に配置されている。
この配置は、本発明の装置中で消化された試料が細胞破片から離れ、抽出カラム １に滴下し、低塩濃度条件下で陰イオン交換体物質１０に吸着されるので有利で ある。フィルターケーキを廃棄した後、イオン交換体中に結合した核酸を最初に 低イオン強度の条件下で洗浄し、その後強イオン強度の条件下で陰イオン交換体 ｌＯから溶出することができる。次に、高塩濃度条件下で陰イオン交換体から溶 出された核酸は、例えばシリカゲル又はガラス繊維のような無機質部材１１に吸 着される。さらに洗浄処理を行った後、例えば蒸留水を加えることによって該Ｒ ＮＡを脱着させ支持体１１から溶出させることができる。
図７は本発明の装置の別の好ましい態様を示すものであり、微量滴定ストリップ の形態を取ってもよい。図７に示した配置においては、例えば図３に示したよう な適当な配置に既に配置された本発明の装置４０が、直線的に連続的に配置され ている。疎水性層２３を濾過ユニットの下又は上に配置することもできる。
図８及び図９においては、それぞれが異なる吸着部材を有する対応する配置が示 されている。
以下の実施例により本発明をさらに詳細に説明する。
実施例１ プラスミド少量調製 ＬＢ培地中のｐｕｃ　＋８プラスミドＤＮＡを存するＨＢ　１０１大腸菌の培養 物１．５ｍｌを３．０００ｇで５分間遠心分離し、細胞をペレット化する。該細 胞ペレットを０．２５ｍ１の５０　ｍＭ　Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ、　１０　ｍＭ　Ｅ ＤＴＡ、　ｐＨ８，０，１００μｇ／ｍｌ　ＲＮａｓｅ　Ａに再懸濁する。
細胞を溶解するために、０．６ｍｌの０．２　Ｍ　ＮａＯＨ及び１％ＳＤＳを該 細胞懸濁液に加え、注意深く攪拌し、５分間室温に静置する。これを０．２５ｍ １の３Ｍ酢酸カリウム、２Ｍ酢酸を用いて中和し、混合して、１５分間氷上でイ ンキュへ−）・する。該溶解物を図１の濾過装置に移す。装置全体を減圧チャン バー上に装着し、細胞溶解物を２０−８００　ｍｂの圧力差で吸引して装置を通 過させ２　ｍｌのバイアル中に入れる。或いは、ピストン又は高圧を用いて試料 を加圧して濾過層を通過させてもよい。濾過後、濾過装置を取り外し、フィルタ ーケーキを細胞断片、変性蛋白及び沈殿ＳＤＳと共に廃棄する。濾液中のＤＮＡ を０．５容量のイソプロパツールで沈澱させ、該アルコール沈澱物を遠心分離に よりペレット化させる。
本発明の濾過装置を微量滴定フォーマットに設計した場合、同時に最大９６の試 料を処理できる。従って、９６の試料を調製するのに必要な時間を２４０分から １５分に短縮することができる。
実施例２ 陰イオン交換体におけるプラスミド少量調製ＬＢ培地中のｐｕｃ　＋８ブラスミ １−ＤＮＡを有するＨＢ　１０１大腸菌の培養物１．５ｍｌを３．０００ｇで５ 分間遠心分離し、細胞をペレット化する。該細胞ベレットを０．２５ｍ１の５０ ｍＭ　Ｔｒｉｓ−ＨＣＩ、１０　ｍＭ　ＥＤＴＡ、　ｐＨ８，０，１００μｇ／ ｍｌ　ＲＮａｓｅ　Ａに再懸濁する。
細胞を溶解するために、０．２５ｍ１の０．２　Ｍ　Ｎａ０１１及び１％ＳＤＳ を該細胞懸濁液に加え、注意深く攪拌し、５分間室温に静置する。これを０．２ ５ｍ１の３Ｍ酢酸カリウム、２Ｍ酢酸を用いて中和し、混合して、１５分間氷上 でインキュベートする。
該溶解物を図３の濾過装置に移す。装置全体を減圧チャンバー上に装着し、細胞 溶解物を、２０−８００　ｍｂの圧力差で吸引して本発明の装置を通過させて、 陰イオン交換体カラム上に濾過させる。或いは、ピストン又は高圧により試料を 加圧して濾過層を通過させてもよい。濾過後、濾過装置を取り外し、フィルター ケーキを細胞断片、変性蛋白及び沈殿ＳＯ３と共に廃棄する。濾液を吸引するが 又は加圧することにより該抽出カラムを完全に通し、ＤＮＡの吸着を達成する。
次に、、該抽出カラムを１ｍｌノＩ藺ＮａＣ１，１５％エタ／　−ル、　５０ｍ １Ｊ　ＭＯＰＳ　、　ｐＨ７，０１：より２回洗浄してＲＮＡ及び蛋白を除去す る。ＤＮＡを１ｍｌの１．２５　Ｍ　ＮａＣ１，１５％エタノール、５０ｍ！１ ｌＴｒｉｓ−ＨＣ１，ｐＨ８，５で溶出する。脱塩及び濃縮するため、溶出され たＤＮＡをアルコールで沈殿させ、該アルコール沈澱物を遠心分離によりペレッ ト化させる。
実施例３ フィルター中での細胞溶解によるプラスミド少量調製ＬＢ培地中のｐＵＣ１８プ ラスミドＤＮＡを存するＨＢ　１０１大腸菌の培養物１．５ｍｌを３．０００ｇ で５分間遠心分離し、細胞をペレット化する。該細胞ペレットを０．２５ｍ１の ５０ｍＭ　Ｔｒｉｓ−）１ｃ１．１０　ｍＭ　ＥＤＴＡ、　ｐＨ８，０，１００ μｇ／ｍｌ　ＲＮａｓｅ　Ａに再懸濁し、図４の濾過装置に移す。細胞を溶解す るために、０．２５ｍ１の０．２　Ｍ　ＮａＯＨ及び１％細胞懸濁液を図Ｃの濾 過装置中に入れ、装置を栓又は接着フィルムによりシールし、５分間室温に静置 する。これに０．２５ｍ１の３Ｍ酢酸カリウム、２Ｍ酢酸を中和のために加え、 装置を栓又は接着フィルムによりシールし、注意深く攪拌し、１５分間氷上でイ ンキュへ−１−する。疎水性中間層により、溶解試薬がフィルター層を通して早 く外部に流出してしまうのが避けられ、フィルターユニット中で直接に細胞を溶 解すること力呵能である。装置全体を減圧チャンバー上に装着し、細胞溶解物を ２０−８００　ｍｂの圧力差で吸引して装置を通過させる。或いは、ピストン又 は高圧により試料を加圧して濾過層を通過させてもよい。濾過後、濾過装置を取 り外し、フィルターケーキを細胞断片、変性蛋白及び沈殿ＳＯＳと共に廃棄する 。抽出カラムを０．８　ｍｌ　ｃ７）ＩＭ　ＮａＣｌ、　１５％エタノール、　 ５０ｍＭ　ＭＯＰＳ、　ｐＨ７，０て２回洗浄し、ＲＮＡ及び蛋白を除去する。
ＤＮＡを１ｍｌの１．２５Ｍ　ＮａＣｌ、　１５％エタノール。
５０ｍ１Ｊ　Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ、　ｐＨ８，５で溶出する。脱塩及び濃縮するた め、溶出されたＤＮＡをアルコールで沈殿させ、アルコール沈澱物を遠心分離に よりペレツト化させる。
実施例４ シリカゲル上でのプラスミド少量調製 ＬＢ培地中のｐｕｃ　１８プラスミドＤＮＡを有するＨＢ　１０１大腸菌の培養 物１．５ｍｌを３．０００ｇで５分間遠心分離し、細胞をペレツト化する。該細 胞ペレツトを０．２５ｍ１の５０ｍＭ　Ｔｒｉｓ−ＨＣＩ、　１０　ｍＭ　ＥＤ ＴＡ、　ｐＨ８，０，１００、ｃｚｇ／ｍｌ　ＲＮａｓｅ　Ａに再懸濁する。
細胞を溶解するために、０．２５ｍ１の０．２　Ｍ　Ｎａ１ｌ（及び１％ＳＤＳ を該細胞懸濁液に加え、注意深く攪拌し、５分間室温に静置する。これに中和の ために０．５ｍｌの４．５Ｍグアニジン−ＨＣｌ、　０．７５Ｍ酢酸カリウム、 ｐｌ（５，５を加え、混合して、１５分間氷上でインキュベ−１・する。図５の 装置全体を減圧チャンノく−１に装着し、細胞溶解物を２０−８００　ｍｂの圧 力差で吸引して装置を通過させ試験管中に入れる。該試験管中には、例えば１〜 ５μｍの粒子径を存するシリカゲル又はガラスである無機質担体１０　ｍｇが０ ．１ｍｌの４．５Ｍグアニジン−ＨＣｌ、　０．７５Ｍ酢酸カリウム、ｐＨ５， ５中に置かれており、該担体このような条件下でＤＮＡを吸着することができる 。或いは、ピストン又は高圧により試料を加圧して濾過層を通過させてもよし） 。濾過後、濾過装置を取り外し、フィルターケーキを細胞断片、変性蛋白及び沈 殿ＳＤＳと共に廃棄する。
高塩濃度中にＤＮＡを含む濾液と高塩濃度中の無機質担体を１〜５分インキュベ ートしてＤＮＡの吸着を達成する。該懸濁液を３．００Ｏｒｐｍで５分間遠心分 離し、上清を廃棄する。該懸濁物を１ｍｌの８０％エタノール川Ｏ用Ｍ　Ｔｒｉ ｓ−ＨＣｌ、　ｐＨ７，０中に再懸濁し、再度遠心分離し、結合ＤＮＡを含むベ レ・ソ１〜を室温で５分間空気蚤こより乾燥する。最後に、ＤＮＡを１００μ＋ の１０ｍ１ｉｌ　Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ、　ｐＨ８，０で溶出する。溶出されたＤＮ Ａは、例えば制限処理、ラベル化、配列決定、増幅等の酵素反応に直接使用する ことができる。
ガラス股上でのプラスミド少量調製 ＬＢ培地中ノｐＵｃ　１８プラスミドＤＮＡを有すルｌ（８１０１大腸菌の培養 物１．５ｍｌを３．０００ｇで５分間遠心分離し、細胞をペレット化する。該細 胞ベレットを０．２５ｍ１の５０ｍＭ　Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ、　１０　ｍｌＪ　Ｅ ＤＴＡ、　ｐＨ８，０，１００μｇ／ｍｌ　ＲＮａｓｅ　Ａに再懸濁する。
細胞を溶解するために、０．２５ｍ１の０．２　Ｍ　ＮａＯＨ及びＩ％ＳＤＳを 該細胞懸濁液に加えて注意深く攪拌し、５分間室温に静置する。中和のために、 ０．５ｍｌの４．５Ｍグアニジン−ＨＣｌ、　０．７５Ｍ酢酸カリウム、ｐＨ５ ，５を加え、混合して、１５分間氷上でインキュベートする。図５の装置全体を 減圧チャンバー上に装着し、細胞溶解物を２０−８００　ｍｂで吸引して装置を 通過させる。或いは、ピストン又は高圧により試料を加圧して濾過層を通過させ てもよい。濾過後、濾過装置を取り外し、フィルターケーキを細胞断片、変性蛋 白及び沈殿ＳＤＳと共に廃棄する。高塩濃度中のＤＮＡを含む濾液と高塩濃度中 の無機質担体を、例えば厚さ２ｍｍのガラス繊維膜を有するシリカゲル抽出カラ ムに、吸引又は圧力をかけることにより通し、ＤＮＡの吸着を達成する。抽出カ ラムを１ｍｌの６．５Ｍグアニジン−）ＩＣＩ、　ＩＯｍＭＴｒｉｓ−ＨＣｌ、 　ｐＨ７，０で２回洗浄し、ＲＮＡ及び蛋白を除去する。抽出カラムを１ｍｌの ８０％エタノール。
１０ｍＭ　Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ、　ｐＨ７，０で２回洗浄し、０．８ｍｌの９０％ エタノール／水で１回洗浄し、痕跡量のエタノールを吸引除去する。最後に、Ｄ ＮＡを１０μｌのｌ０ｍＭ　Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ、　ｐＨ８，０で溶出し、別の１ ．５ｍｌ試験管に取る。溶出されたＤＮＡは、例えば制限処理、ラベル化、配列 決定、増幅等の酵素反応に直接使用することができる。
実施例６ 陰イオン交換体／ガラス膜上てのプラスミド少量調製ＬＢ培地中のｐｕｃ　１８ プラスミドＤＮＡを有するＨＢ　１０１大腸菌の培養物１．５ｍｌを３．０００ ｇで５分間遠心分離し、細胞をペレッ）・化する。該細胞ベレットを０．２５ｍ １の５０ｍＭ　Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ、　１０　ｍＭ　ＥＤＴＡ、　ｐＨ８，０，１ ００μｇ／ｍｌ　ＲＮａｓｅ　Ａに再懸濁し、図６の装置に移す。細胞を溶解す るために、０．２５ａ＋ｌの０．２　Ｍ　ＮａＯＨ及び１％ＳＤＳを該細胞懸濁 液に加え、注意深く撹拌し、５分間室温に静置する。これに０．２５ｍ１の３Ｍ 酢酸カリウム、２Ｍ酢酸を中和のために加え、装置を栓又は接着フィルムにより シールし、注意深く攪拌し、１５分間氷上でインキュベートする。疎水性中間層 により、溶解試薬がフィルター層を通して早く外部に流出してしまうのが避けら れ、フィルターユニット中で直接に細胞を溶解することが可能である。
装置全体を減圧チャンバー上に装着し、細胞溶解物を、２０−８００　ｍｂの圧 力差で吸引して装置を通過させる。或いは、ピストン又は高圧により試料を加圧 して濾過層を通過させてもよい。濾過後、濾過装置を取り外し、フィルターケー キを細胞断片、変性蛋白及び沈殿ＳＯＳと共に廃棄する。該抽出カラムを０．８ ｍｌの嵐ＮａＣ１，１５％エタノール、　５０ｍＭ　ＭＯＰＳ、　ｐＨ７，０及 び０．８ｍｌのＩＭ　ＮａＣｌ０＜、１５％エタノール、ｌｏｍｌｉｌ酢酸ナト リウム、ｐ＋＋７．ｏにより洗浄し、ＲＮＡ及び蛋白を除去する。
ＤＮＡを７ＭＮａＣｌＯ４，５％エタノール、　ｌ０ｍ１ｉｌ　Ｔｒｉｓ−ＨＣ ｌ、　ｐｌ　７．０を用いて陰イオン交換体層（１０）から溶出し、これにより シリカゲル層（１１）に直接結合させる。該抽出カラムを０．８ｍｌの８０％エ タノール、　１００　ｍＭ　ＮａＣ１，１０ｍＭ酢酸ナトリウム。
ｐＨ７，０及び０．８ｍｌの９０％エタノール／水て洗浄する。抽出層中に残存 するエタノール／Ｈ２０は減圧吸引して空気を１〜２分間通すことにより蒸発さ せる。続いて、該試料をそれぞれ１００μｌの１ｍＭ　Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ、　ｐ Ｈ８，０で溶出し、別の１．５ｍｌ試験管に取る。溶出されたＤＮＡは、例えば 制限処理、ラベル化、配列決定、増幅等の酵素反応に直接使用することができる 。
実施例７ “微量滴定ストリップ”中でのプラスミド少量調製ＬＢ培地中のｐｕｃ　＋８プ ラスミドＤＮＡを有するＸＬ　Ｂｌｕｅ大腸菌の培養物８Ｘ１．５ｍ１を３，０ ００ｇで５分間遠心分離し、細胞をペレット化化する。該細胞ペレ１．トを０． ２５ｍ１の５０ｍＭ　Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ、　１０　ｍＭεＤＴＡ、　ｐＨ８，０ ，１００μｇ／ｍｌ　ＲＮａｓｅ　Ａに再懸濁し、図７の装置に移す。細胞を溶 解するために、０．２５ｍ１の０．２　Ｍ　ＮａＯＨ及び１％ＳＤＳを濾過装置 中の該細胞懸濁液に加え、装置を栓又は接着フィルムによりシールし、注意深く 攪拌し、５分間室温に静置する。これに０．２５ｍ１の３Ｍ酢酸カリウム、２Ｍ 酢酸を中和のために加え、注意深く攪拌し、１５分間氷上でインキュベートする 。装置全体を減圧チャンバー上に装着し、細胞溶解物を、２０−８００　ｍｂの 圧力差で吸引して装置を通過させる。或いは、ピストン又は高圧により試料を加 圧して濾過層を通過させてもよい。濾過後、濾過装置を取り外し、フィルターケ ーキを細胞断片、変性蛋白及び沈殿ＳＤＳと共に廃棄する。抽出カラムを０．８ ｍｌのＬＭ　ＮａＣ１，１５％エタノール、　５０ｍＭ　ＭＵＰＳ、　ｐＨ７， ０により洗浄し、ＲＮＡ及び蛋白を除去する。ＤＮＡを８刈ｍｌの１．２５Ｍ　 ＮａＣ１，１５％エタノール、５０　ｍＭ　Ｔｒｉｓ−ＨＣＩ。
ｐＨ８，５で溶出する。脱塩及び濃縮するため、溶出された［］ＮＡをアルコー ルで沈殿させ、アルコール沈澱物を遠心分離によりペレット化する。
実施例８ “微量滴定ストリップ”中でのプラスミド少量調製ＬＢ培地中のｐｕｃ　１８ブ ラスミｌ’ＤＮＡを存するＸＬブルー大腸菌の培養物８×１．５ｍｌを３．００ ０ｇで５分間遠心分離し、細胞をペレット化する。該細胞ベレットを０．２５ｍ １の５０ｍＭＴｒｉｓ−ＨＣｌ、　１０　ｍＭ　ＥＤＴＡ、　ｐＨ８，０，１０ ０μｇ／ｍｌ　ＲＮａｓｅ　Ａに再懸濁し、図８の装置中に移す。細胞を溶解す るために、０．２５ｍ１の０．２　Ｍ　ＮａＯＨ及び１％ＳＤＳを濾過装置中の 該細胞懸濁液に加え、装置を栓又は接着フィルムによりシールし、注意深く攪拌 し、５分間室温に静置する。これに中和のために、０．５ｍｌの４．５Ｍグアニ ジン−ＭＣ１，０，７５Ｍ酢酸カリウム、ｐｈｓ、ｓを加え、混合して、１５分 間氷上でインキュベートする。図９（Ｇ）の装置全体を減圧チャンバー上に装着 し、細胞溶解物を、２０−８００　ｍｂで吸引して装置を通過させる。或いは、 ピストン又は高圧により試料を加圧して濾過層を通過させてもよい。濾過後、濾 過装置を取り外し、フィルターケーキを細胞断片、変性蛋白及び沈殿ＳＯＳと共 に廃棄する。
高塩濃度中にＤＮＡを含む濾液を、シリカゲル抽出カラムに吸引又は圧力をかけ ることにより通し、ＤＮＡの吸着を達成する。抽出カラムを１ｍｌの６．５Ｍグ アニジン−ＨＣｌ、１０ｍＭ酢酸ナトリウム、ｐＨ７，０で１回洗浄し、ＲＮＡ 及び蛋白を除去する。
抽出カラムを１ｍｌの８０％エタノール、　１０ｍ１ｉｌ　Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ、 　ｐＨ７，０及び０．８ｍｌの９０％エタノール／水で２回洗浄し、痕跡量のエ タノールを吸引除去する。最後に、ＤＮＡを１００μｌのＩＯｍ！ｉｔ　Ｔｒｉ ｓ−ＨＣｌ、　ｐＨ８，０で溶出し、別の１．５ｍｌ試験管に取る。
溶出されたＤＮＡは、例えば制限処理、ラベル化、配列決定、増幅等の酵素反応 に直接使用することができる。
イオン交換体／ガラス膜を有する“微量滴定ストリップ“中でのプラスミド少量 調製 ＬＢ培地中のｐｕｃ　＋８プラスミドＤＮＡを有するＸＬブルー大腸菌の培養物 ８×１９５ｍ１を３，０００ｇで５分間遠心分離し、細胞をペレット化する。該 細胞ペレットを０．２５ｍ１の５０ｍＭ　Ｔｒｉｓ−ＨＣＩ、　１０　ｍＭ　Ｅ ＤＴＡ、　ｐＨ８，０，１００μｇ／ｍｌ　ＲＮａｓｅ　Ａに再懸濁し、図１の 装置に移す。細胞を溶解するために、０．２５ｍ１の０．２　Ｍ　ＮａＯＨ及び １％ＳＤＳを濾過装置中の該細胞懸濁液に加え、装置を栓又は接着フィルムでシ ールし、注意深く攪拌し、５分間室温に静置する。これに０．２５ｍ１の３Ｍ酢 酸カリウム、２Ｍ酢酸を中和のために加え、混合して、１５分間氷上でインキュ ベートする。
装置全体を減圧チャンバー上に装着し、細胞溶解物を、２０−８００　ｍｂの圧 力差で吸引して装置を通過させる。或いは、ピストン又は高圧により試料を加圧 して濾過層を通過させてもよい。濾過後、濾過装置を取り外し、フィルターケー キを細胞断片、変性蛋白及び沈殿ＳＯ３と共に廃棄する。抽出カラムを０．８ｍ ｌのＩＭ　ＮａＣ１゜１５％エタノール、　５０ｍＭ　ＭＯＰＳ、　ｐＨ７，０ 及び０．８ｍｌのＩＭ　ＮａＣｌ０ｔ、１５％エタノール、　１０ｍＮ酢酸ナト リウム、ｐＨ７，０により洗浄し、ＲＮＡ及び蛋白を除去する。ＤＮＡを７ＭＮ ａＣｌＯ４，５％エタノール、　ｌ０ｍＭ　Ｔｒｉｓ−ＨＣＩ、　ｐＨ７，０を 用いて陰イオン交換体層から溶出し、これによりシリカゲル層に直接結合させる 。抽出カラムを８×０．８ｍｌの８０％エタノール、　１００　ｍＭ　ＮａＣ１ ，１０ｍ！ｉｌ酢酸ナトリウム、ｐＨ７，０及び８Ｘ０．８ｍｌの９０％エタノ ール／水で洗浄する。抽出層中に残存する工う１ノール／Ｈ，０は減圧吸引して 空気を１〜２分間通すことにより蒸発させる。続いて、８個の試料をそれぞれｌ ｏμｌの１ｍ！ｉｆ　Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ、　ｐＨ８，０で溶出する。
実施例１０ ゲノムＤＮＡの調製 １００　ｍｇのラット肝組織をメスを使用してＩ　ｍｍの大きさの破片に裁断し 、１ｍｌの５００　ｍＭグアニジン−ＨＣｌ、　５０　ｍ１ｉｌ　Ｔｒｉｓ−） ＩＣ１，１０ｍＭ　ＥＤＴＡ、　ｐＨ８，０に懸濁し、０．１ｍｌのプロテイナ ーゼＫ（１０ｍｇ／ｍｌ）を加え、５０°Ｃて２時間細胞を溶解する。該溶解物 を図９の濾過装置に移す。装置全体を減圧チャンバー上に装着し、細胞溶解物を 、２０−８００　ｍｂの圧力差で吸引して装置を通過させる。或いは、ピストン 又は高圧により試料を加圧して濾過層を通過させてもよい。濾過後、濾過装置を 取り外し、フィルターケーキを細胞断片及び変性蛋白と共に廃棄する。該抽出カ ラムを、０．８ｍｌの１ＭＮａｃ１．１５％エタノール、　５０ｍＭ　ＭＯＰＳ 、　ｐＨ７，０及び０．８ｍｌのＩＭ　ＮａＣｌ０ａ。
１５％エタノール、　１０ｍＭ酢酸ナトリウム、ｐＨ７，０により洗浄し、ＲＮ Ａ及び蛋白を除去する。ＤＮＡを７１７　ＮａＣｌ０ａ、　５％エタノール、　 ｌ０ｍＭ　Ｔｒｉｓ−ＨＣＩ、　ｐＨ７，０を用いて陰イオン交換体層（ｌＯ） から溶出し、これによりシリカゲル層（１１）に直接結合させる。
抽出カラムを８　Ｘｏ、８　ｍｌの８０％エタノール、　１００　ｍｌＪ　Ｎａ Ｃ１，１０ｍ酢酸ナトリウム、ｐＨ７，０及びｓ　ｘＯ，８ｍｌの９０％エタノ ール／水で洗浄する。高塩濃度溶液を除去するために、試験管を０．８ｍｌの７ ０％エタノール、　１００　ｍｌＪ　Ｍａｉｌ、　１０　ｍｌＪ酢酸ナトリウム 、ｐＨ７，０及び８　Ｘｏ、８　ｍｌの９０％エタノール／水で洗浄する。抽出 層中に残存するエタノール／Ｈ２０は減圧吸引して空気を１〜２分通すことによ り蒸発させる。続いて、８個の試料をそれぞれ５０μｌの１　ｍｕ　Ｔｒｉｓ− ＨＣＩ、　０．１　ｍＭ　ＥＤＴＡ。
ｐＨ８，０で溶出する。
実施例１１ 濾過及びガラス膜によるゲノムＤＮＡの調製１００　ｍｇのラット肝組織をメス を使用してＩｎｕｎの大きさの破片に裁断し、１ｍｌの５００　ｍＭグアニジン −ＨＣｌ、　５０　＋ｎＭ　Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ、　１０　ｍｌＪ　ＥＤＴＡ、　 ｐＨ８，０に懸濁し、０．１ｍｌのプロテイナーゼＫ（１０ｍｇ／ｍｌ）を加え 、５０°Ｃで２時間細胞を溶解する。これに０．５ｍｌの５Ｍグアニジン−ＨＣ ｌ、　１０ｍＭ　Ｔｒｉｓ−ＨＣＩ、　ｐＨ７，０又は０．２５ｍ１のエタノー ルを加え、混合して、ガラス上への吸着条件に試料を調整する。図９の装置全体 を減圧チャンバー上に装着し、細胞溶解物を、２０−８００　ｍｂで吸引して装 置を通過させる。或いは、ピストン又は高圧により試料を加圧して濾過層を通過 させてもよい。濾過後、濾過装置を取り外し、フィルターケーキを細胞断片と共 に廃棄する。高塩濃度又はエタノール中にＤＮＡを含む濾液を、厚さ２ｍｍのガ ラス繊維膜を存するシリカゲル抽出カラムに吸引又は圧力をかけることにより通 し、ＤＮＡの吸着を達成する。抽出カラムを１ｍｌの５Ｍグアニジン−ＨＣｌ、 　ＩＯｍ！ｉｆ　Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ、　ｐＨ７，０で１回洗浄し、ＲＮＡ及び蛋 白を除去する。該抽出カラムを１ｍｌの８０％エタノール、　１０ｍＭ　Ｔｒｉ ｓ−ＨＣｌ、　ｐＨ７，０及び０．８ｍｌの９０％エタノール／水で２回洗浄し 、痕跡量のエタノールを吸引除去する。最後に、ＤＮＡをｔｏｏμｌのｌｏｍＭ 　Ｔｒｉｓ−ＨＣＩ。
ｐｕｓ、ｏで溶出し、別の１．５ｍｌ試験管に取る。溶出されたゲノムＤＮＡは 、例えば制限処理、ラベル化、配列決定、増幅等の酵素反応に直接使用すること ができる。
ＦＩＧＵＲ２ａ　ＦＩＧＵＲ２ｂ ＦＩＧＵＲ３ＦＩＧＵＲ４ 特表千７−５０１２２２　（７） 国際調査報告　ＰＣＴ／ＥＰ　９２１０２７７４ＰＣＴ／ＥＰ　９２１０２７７ ４ 国際調査報告

Claims (15)

    【特許請求の範囲】
  1. １．試料中の細胞又は細胞断片のような消化された天然原料を濾過によって除去 することにより、天然原料から核酸のような細胞成分を単離する方法であって、 試料がフィルター中を通過し、該フィルターのポア径が、フィルター中を試料が 流れる方向に向かって減少するものであることを特徴とする方法。
  2. ２．フィルター中を通る試料の流れが、高圧、減圧、重力、又は遠心分離により 高められた重力及びこれらの手段の組合せにより維持されている、請求項１に記 載の方法。
  3. ３．該核酸が１〜５０ｋｂ（キロ塩基対）のサイズを有するブラスミドＤＮＡ又 はゲノムＤＮＡである、請求項１及び／又は２に記載の方法。
  4. ４．該試料が複数層からなるフィルターを通過し、該複数の層は特定のポア径を 有するものから始まり、それに続く各層がより小さいポア径を有することを特徴 とする、請求項１〜３の少なくとも１項に記載の方法。
  5. ５．該試料が１層からなるフィルターを通過し、該フィルターのポア径が試料が 流れる方向に向かって減少するものであることを特徴とする、請求項１〜４の少 なくとも１項に記載の方法。
  6. ６．該ポア径が５〜５００μｍの範囲にあり、該フィルター層全体の厚さが０． １〜１０ｍｍであることを特徴とする、請求項１〜５の少なくとも１項に記載の 方法。
  7. ７．該試料が３層フィルターシートを通過し、最初のフィルター層が１００〜２ ００μｍのポア径を有し、第２のフィルター層が３０〜１００μｍのポア径を有 し、第３のフィルター層が５〜３０μｍ甲のポア径を有するものであることを特 徴とする、請求項１〜６の少なくとも１項に記載の方法。
  8. ８．該フィルター層又は該フィルターが、焼結ポリエチレン、ポリプロピレン、 ポリテトラフルオロエチレン、ガラス、シリカゲル、酸化アルミニウム、圧縮珪 藻土、例えばセライト又はシリカゲル、ポリプロピレン、ポリエステル、ガラス 繊維及びシリカの織フリース又は不織フリース、並びに紙、加圧された紙、紙に より形成されたフリースからなるものであることを特徴とする、請求項１〜７の 少なくとも１項に記載の方法。
  9. ９．微量滴定法に使用される装置中で複数の試料が処理される、請求項１〜８の 少なくとも１項に記載の方法。
  10. １０．請求項１〜９の少なくとも１項に記載の方法を実施するための装置であっ て、入口及び出口開口部（５０，６０）を有する好ましくは円筒形状の中空体（ ４０）中に濾過ユニット（７０）が配置されている装置。
  11. １１．該濾過ユニット（７０）が、出口開口部（６０）の方向に向かって小さく なるポア径を有するフィルターからなることを特徴とする、請求項１０に記載の 装置。
  12. １２．該濾過ユニット（７０）が多層フィルターシートからなることを特徴とす る、請求項１０及び／又は１１に記載の装置。
  13. １３．該濾過ユニットが、０．１〜１０ｍｍのフィルターシートの厚さ全体にお いて、５〜５００μｍの範囲のポア径を有することを特徴とする、請求項１０〜 １２の少なくとも１項に記載の装置。
  14. １４．円筒形状の中空体（４０）内に疎水性中間層（２３）が配置されているこ とを特徴とする、請求項１０〜１３の少なくとも１項に記載の装置。
  15. １５．該濾過ユニットが、核酸を調製するのに必要とされる別の用具、特に微量 滴定に適する用具と組み合わせられることを特徴とする、請求項１０〜１３の少 なくとも１項に記載の装置。
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Cited By (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPH08281098A (ja) * 1995-04-01 1996-10-29 Boehringer Mannheim Gmbh 核酸の単離装置
JP2003506456A (ja) * 1999-08-06 2003-02-18 キアゲン ゲゼルシャフト ミット ベシュレンクテル ハフツング マルチウェルにおける減圧濾過による自動タンパク質精製
JP2004500001A (ja) * 1998-02-02 2004-01-08 ジエントラ・システムズ・インコーポレーテツド Ｄｎａを単離するための溶解マトリックスを使用するための組成物および方法
JP2004500002A (ja) * 1998-02-02 2004-01-08 ジエントラ・システムズ・インコーポレーテツド Ｄｎａを単離するための溶出試薬、方法およびキット
JP2007124952A (ja) * 2005-11-04 2007-05-24 Hitachi High-Technologies Corp 核酸精製方法及び核酸精製器具
JP2008506932A (ja) * 2004-07-15 2008-03-06 キアゲン ゲゼルシャフト ミット ベシュレンクテル ハフツング 核酸のより効率的な単離のための器具および方法
JP2013533978A (ja) * 2010-07-14 2013-08-29 キアゲン ゲーエムベーハー 生体分子の単離および／または精製のためのデバイス
JP2015216906A (ja) * 2014-05-20 2015-12-07 昇太 中村 分離容器およびウイルスの濃縮・精製方法

Families Citing this family (203)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DE4143639C2 (de) 1991-12-02 2002-10-24 Qiagen Gmbh Verfahren zur Isolierung und Reinigung von Nukleinsäuren
DE4321904B4 (de) * 1993-07-01 2013-05-16 Qiagen Gmbh Verfahren zur chromatographischen Reinigung und Trennung von Nucleinsäuregemischen
GB9314249D0 (en) * 1993-07-09 1993-08-18 Proofname Ltd Purification method and apparatus
DE69433425T2 (de) * 1993-08-30 2004-10-07 Promega Corp Zusammensetzungen und verfahren zur reinigung von nukleinsäuren
WO1995018851A1 (de) * 1994-01-07 1995-07-13 Qiagen Gmbh Verfahren zum zerkleinern von hochmolekularen strukturen
WO1995021179A1 (de) * 1994-02-07 1995-08-10 Qiagen Gmbh Verfahren zur abreicherung oder entfernung von endotoxinen
WO1995021178A1 (de) * 1994-02-07 1995-08-10 Qiagen Gmbh Steigerung der transfektionseffizienz von nucleinsäuren durch die verwendung von isopropanol in wässrigen lösungen
US5990301A (en) * 1994-02-07 1999-11-23 Qiagen Gmbh Process for the separation and purification of nucleic acids from biological sources
DE4432654C2 (de) * 1994-09-14 1998-03-26 Qiagen Gmbh Verfahren zur Isolierung von Nukleinsäuren aus natürlichen Quellen
WO1995021849A1 (de) * 1994-02-11 1995-08-17 Qiagen Gmbh Verfahren zur trennung von doppelstrang/einzelstrangnukleinsäurestrukturen
DE59506735D1 (de) * 1994-06-14 1999-10-07 Invitek Gmbh Universelles verfahren zur isolierung und reinigung von nukleinsäuren aus extrem geringen mengen sowie sehr stark verunreinigten unterschiedlichsten ausgangsmaterialien
DE4422040A1 (de) * 1994-06-14 1995-12-21 Invitek Gmbh Verfahren zur Isolierung und Reinigung von PCR-Produkten
DE4422044A1 (de) * 1994-06-14 1995-12-21 Invitek Gmbh Verfahren zur Isolierung, Reinigung und ggf. Lagerung von Nukleinsäuren
DE4420732A1 (de) 1994-06-15 1995-12-21 Boehringer Mannheim Gmbh Vorrichtung zur Behandlung von Nukleinsäuren aus einer Probe
DE4420900A1 (de) 1994-06-15 1995-12-21 Boehringer Mannheim Gmbh Verfahren zur mehrmaligen Entnahme von Flüssigkeiten
US5834303A (en) * 1994-11-04 1998-11-10 Tomy Seiko Co., Ltd. Method and device for extraction and purification of DNA
US5660984A (en) * 1994-12-09 1997-08-26 Davis; Thomas E. DNA isolating apparatus comprising a non-porous DNA binding, anion exchange resin and methods of use thereof
US5472600A (en) * 1995-02-01 1995-12-05 Minnesota Mining And Manufacturing Company Gradient density filter
JPH11509100A (ja) * 1995-07-13 1999-08-17 イムノロジカル アソシエーツ オブ デンバー 核酸抽出、増幅および検出を統合する自己充足装置
US5783686A (en) * 1995-09-15 1998-07-21 Beckman Instruments, Inc. Method for purifying nucleic acids from heterogenous mixtures
DE19610354C1 (de) * 1996-03-15 1997-11-20 Innova Gmbh Vorrichtung, Verfahren und Einrichtung zur Isolierung von Nukleinsäuren
DE69719409T2 (de) * 1996-06-18 2004-01-15 Rikagaku Kenkyusho Verfahren zur Reinigung von DNS
US7026468B2 (en) * 1996-07-19 2006-04-11 Valentis, Inc. Process and equipment for plasmid purification
DE19731670C2 (de) * 1997-07-23 2000-06-29 Dorothea Waschk Verfahren zur Reinigung und gegebenenfalls Analyse von Nukleinsäuren aus biologischen Proben
US6495195B2 (en) 1997-02-14 2002-12-17 Arcturus Engineering, Inc. Broadband absorbing film for laser capture microdissection
FR2761373B1 (fr) * 1997-03-28 1999-05-28 Univ Angers Procede et kit pour l'extraction d'acides nucleiques d'un echantillon biologique complexe
AU745185B2 (en) * 1997-06-25 2002-03-14 Promega Corporation Method of isolating RNA
CA2294749C (en) * 1997-06-27 2007-01-02 Life Technologies, Inc. One step device and process for concentration and purification of biological molecules
US7075640B2 (en) * 1997-10-01 2006-07-11 Arcturus Bioscience, Inc. Consumable for laser capture microdissection
JP4025399B2 (ja) * 1997-10-28 2007-12-19 株式会社日立製作所 核酸の回収方法及び装置
US7473401B1 (en) * 1997-12-04 2009-01-06 Mds Analytical Technologies (Us) Inc. Fluidic extraction of microdissected samples
US6844158B1 (en) * 1997-12-22 2005-01-18 Hitachi Chemical Co., Ltd. Direct RT-PCR on oligonucleotide-immobilized PCR microplates
EP1056540B1 (en) * 1998-02-27 2005-11-02 Pall Corporation Devices for test sample preparation
DE29803712U1 (de) 1998-03-04 1998-04-23 Macherey, Nagel GmbH & Co. Handelsgesellschaft, 52355 Düren Vorrichtung zur Behandlung von Biomolekülen
JPH11266864A (ja) * 1998-03-19 1999-10-05 Hitachi Ltd 核酸の精製方法および精製用装置
JP2002516663A (ja) * 1998-04-02 2002-06-11 リー キュンジル ガラス微細繊維コラムとこれを利用したプラスミドＤＮＡ製造および精製方法（ＧｌａｓｓｍｉｃｒｏｆｉｂｅｒｃｏｌｕｍｎａｎｄｍｅｔｈｏｄｆｏｒｔｈｅｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎａｎｄｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆｐｌａｓｍｉｄＤＮＡｕｓｉｎｇｔｈｅｓａｍｅ）
US6177009B1 (en) 1998-04-03 2001-01-23 Macherey, Nagel Gmbh & Co. Apparatus for treating biomolecules
US7078224B1 (en) 1999-05-14 2006-07-18 Promega Corporation Cell concentration and lysate clearance using paramagnetic particles
US6268492B1 (en) * 1998-08-10 2001-07-31 Chiron Corporation Methods for purifying non-chromosomal nucleic acid molecules from cells
JP2000166556A (ja) * 1998-12-10 2000-06-20 Hitachi Ltd 核酸の回収方法及び装置
DE19856064C2 (de) 1998-12-04 2000-11-30 Invitek Gmbh Universelles Verfahren zur Isolierung von DNA aus beliebigen Ausgangsmaterialien
US6951762B2 (en) * 1998-12-23 2005-10-04 Zuk Jr Peter Apparatus comprising a disposable device and reusable instrument for synthesizing chemical compounds, and for testing chemical compounds for solubility
DE19900681B4 (de) * 1999-01-04 2007-04-12 Sartorius Ag Verwendung von Anionaustauschermembranen zur Entfernung von Endotoxinen aus Nukleinsäure-haltigen Lösungen
AU2862100A (en) * 1999-01-27 2000-08-18 Folim G. Halaka Materials and methods for the purification of polyelectrolytes
DE19903507A1 (de) 1999-01-29 2000-08-10 Roche Diagnostics Gmbh Verfahren zur Herstellung endotoxinfreier oder an Endotoxin abgereicherter Nukleinsäuren und deren Verwendung
US6528248B2 (en) 1999-04-29 2003-03-04 Arcturus Engineering, Inc. Processing technology for LCM samples
US20080260593A1 (en) * 2000-03-22 2008-10-23 Dewalch Norman Binz Method and apparatus for processing substances in a single container
WO2001077316A2 (en) * 2000-04-11 2001-10-18 Bureco Ag Method of nucleic acid recovery
EP1272627B1 (en) * 2000-04-13 2005-02-16 Millipore Corporation Method and apparatus for plasmid recovery involving ultrafiltration
US7776273B2 (en) 2000-04-26 2010-08-17 Life Technologies Corporation Laser capture microdissection (LCM) extraction device and device carrier, and method for post-LCM fluid processing
JP2001333763A (ja) * 2000-05-30 2001-12-04 Hitachi Koki Co Ltd 自動分離抽出装置及びその抽出方法
NZ523831A (en) * 2000-07-13 2005-10-28 Invitrogen Corp Methods and compositions for rapid protein and peptide extraction and isolation using a lysis matrix
EP1337670A4 (en) * 2000-08-16 2004-07-14 Whatman Inc LEUCOCYTAL REDUCTION FILTERING DEVICES FOR TRANSFUSION MEDICINE USED AS A SOURCE OF GENETIC MATERIAL FOR GENOTYPING STUDIES
AU2001281000A1 (en) * 2000-08-24 2002-03-04 Bio-Rad Laboratories, Inc. Flow-through system for lysate clarification and nucleic acid binding in a single step
ES2273915T3 (es) * 2000-11-13 2007-05-16 Promega Corporation Depuracion de lisado y aislamiento de acido nucleico utilizando matrices de silica silanizadas.
US20020127587A1 (en) * 2001-02-13 2002-09-12 Domenica Simms Methods and compositions for isolation of biological macromolecules
JP2002345465A (ja) * 2001-05-24 2002-12-03 Fuji Photo Film Co Ltd 核酸精製ユニット及び核酸精製方法
US6869532B2 (en) * 2001-06-04 2005-03-22 Cuno Incorporated Nucleic acid binding matrix
US7556733B2 (en) 2001-06-15 2009-07-07 Mds Analytical Technologies (Us) Inc. Low volume filtration column devices and methods of filtering therewith
US7749388B2 (en) 2001-06-15 2010-07-06 Life Technologies Corporation Low volume filtration column devices and methods of filtering therewith
US7229595B2 (en) 2001-06-15 2007-06-12 Molecular Devices Corporation Filtration column devices and methods of filtering therewith
KR100764966B1 (ko) * 2001-07-09 2007-10-08 아사히 가세이 가부시키가이샤 부직포를 이용한 핵산 정제법 및 검출법
SE0102922D0 (sv) * 2001-08-31 2001-08-31 Astrazeneca Ab Method and apparatus for sample preparation
KR100816528B1 (ko) * 2001-09-14 2008-04-10 (주)바이오니아 핵산 분리 정제용 다중층 필터
JP2002191351A (ja) * 2001-10-19 2002-07-09 Hitachi Ltd 核酸の精製用装置および核酸捕捉用チップ
US20030087293A1 (en) * 2001-10-23 2003-05-08 Decode Genetics Ehf. Nucleic acid isolation method and apparatus for performing same
US7208271B2 (en) 2001-11-28 2007-04-24 Applera Corporation Compositions and methods of selective nucleic acid isolation
CA2477017A1 (en) * 2002-02-19 2003-08-28 Choicepoint Asset Company Selective extraction of dna from groups of cells
DE10207170A1 (de) * 2002-02-20 2003-09-04 Qiagen Gmbh Verfahren zur Grobklärung von Zellaufschlüssen aus Mikroorganismen
US7214348B2 (en) * 2002-07-26 2007-05-08 Applera Corporation Microfluidic size-exclusion devices, systems, and methods
JP2005533652A (ja) * 2002-07-26 2005-11-10 アプレラ コーポレイション 微小流体サイズ排除デバイス、システム、および方法
DE10238630A1 (de) * 2002-08-19 2004-03-04 Macherey, Nagel Gmbh & Co. Handelsgesellschaft Verfahren zur Isolierung biologischer Makromoleküle sowie Vorrichtung zur Durchführung dieses Verfahrens
AU2003267175A1 (en) 2002-09-13 2004-04-30 Valentis, Inc. Apparatus and method for preparative scale purification of nucleic acids
JP3644641B2 (ja) * 2003-03-07 2005-05-11 株式会社日立ハイテクノロジーズ 核酸回収方法
EP1462519A1 (en) * 2003-03-24 2004-09-29 Boehringer Ingelheim Austria GmbH Method and devices for producing biomolecules
US8501402B2 (en) 2003-03-24 2013-08-06 Boehringer Ingelheim Rcv Gmbh & Co Kg Methods and devices for producing biomolecules
AU2004236740A1 (en) * 2003-05-02 2004-11-18 Sigma-Aldrich Co. Solid phase cell lysis and capture platform
US20040241656A1 (en) * 2003-05-29 2004-12-02 Ming-Shiung Jan High-performance bio-tube for purifying DNA and method thereof
WO2005003346A1 (en) * 2003-06-06 2005-01-13 Applera Corporation Purification device for ribonucleic acid in large volumes, and method
US20050032097A1 (en) * 2003-06-17 2005-02-10 Garvin Alex M. Method for processing samples containing sperm and non-sperm cells for subsequent analysis of the sperm DNA
US8377715B2 (en) * 2003-07-14 2013-02-19 Phynexus, Inc. Method and device for sample preparation
GB0317044D0 (en) * 2003-07-21 2003-08-27 Dna Res Innovations Ltd Nucleic acid isolation
US20050042660A1 (en) * 2003-07-31 2005-02-24 Hall Gerald Edward Devices and methods for isolating RNA
EP2311994A1 (en) * 2003-08-01 2011-04-20 Life Technologies Corporation Compositions and methods for preparing short RNA molecules and other nucleic acids
US7031802B2 (en) * 2003-08-13 2006-04-18 Hewlett-Packard Development Company, L.P. Semi-autonomous operation of a robotic device
US20070161491A1 (en) * 2003-09-30 2007-07-12 Kabushiki Kaisha Kitazato Supply Centrifuging settling tube and organic cell collection tube
EP1526176A3 (en) * 2003-10-24 2005-05-11 Agilent Technologies Inc. (a Delaware Corporation) Devices and methods for isolating RNA
EP1529840A1 (en) * 2003-11-04 2005-05-11 Qiagen GmbH A rapid and low cost method for isolating nucleic acid
JP4076978B2 (ja) * 2003-11-20 2008-04-16 ミリポア・コーポレイション プラスミドｄｎａ清浄化
US7846333B2 (en) 2003-11-24 2010-12-07 Effendorf AG Porous media
US7897378B2 (en) 2004-03-18 2011-03-01 Roche Molecular Systems, Inc. Method and device for purifying nucleic acids
JP4080462B2 (ja) * 2004-07-09 2008-04-23 株式会社日立製作所 核酸の回収方法
DE102004034433A1 (de) 2004-07-15 2006-02-02 Qiagen Gmbh Verfahren zur Reinigung und Isolierung von Nukleinsäuren unter Verwendung kationischer Detergentien
US20060099605A1 (en) * 2004-11-11 2006-05-11 Hall Gerald E Jr Devices and methods for isolating RNA
WO2006026248A1 (en) * 2004-08-25 2006-03-09 Sigma-Aldrich Co. Compositions and methods employing zwitterionic detergent combinations
JP4810164B2 (ja) * 2004-09-03 2011-11-09 富士フイルム株式会社 核酸分離精製方法
US20060057738A1 (en) * 2004-09-16 2006-03-16 Hall Gerald E Jr Device, method, system and kit, for collecting components from a biological sample
US20060223071A1 (en) * 2005-04-01 2006-10-05 Wisniewski Michele E Methods, compositions, and kits for detecting nucleic acids in a single vessel
US20060269929A1 (en) * 2005-05-26 2006-11-30 Hall Gerald E Jr Methods and kits for DNA purification on polymeric membranes at low ionic strength
US20060270843A1 (en) * 2005-05-26 2006-11-30 Hall Gerald E Jr Methods for isolation of nucleic acids
KR100673393B1 (ko) 2005-06-10 2007-01-24 (주)진올바이오테크놀러지 디옥시리보 핵산 분리 이중 필터
ES2552096T3 (es) 2005-09-26 2015-11-25 Qiagen Gmbh Método para procesar un fluido
CA2623511C (en) * 2005-09-26 2016-09-06 Qiagen Gmbh Apparatus for processing biological material
DE102005051645B4 (de) * 2005-10-26 2018-10-18 Rapid Sampling Technologies Ag Einrichtung zur Fraktionierung von mit Partikeln beladenen Flüssigkeiten
DE102005053463A1 (de) 2005-11-06 2007-05-10 Aj Innuscreen Gmbh Vorrichtung und Verfahren zur automatisierten Isolierung und Aufreinigung von Nukleinsäuren aus beliebigen komplexen Ausgangsmaterialien
RS57194B1 (sr) 2005-11-14 2018-07-31 Teva Pharmaceuticals Int Gmbh Antagonistička antitela specifična za peptid koji je u vezi sa genom za kalcitonin za lečenje klaster glavobolje
WO2007070381A2 (en) 2005-12-09 2007-06-21 Promega Corporation Nucleic acid purification with a binding matrix
US7666686B2 (en) * 2006-05-15 2010-02-23 United Chemical Technologies, Inc. Method for sample preparation by solid phase extraction
US20080102493A1 (en) * 2006-06-29 2008-05-01 Millipore Corporation Isolation of RNA and DNA from a biological sample
US7858363B2 (en) * 2006-07-22 2010-12-28 Zymo Research Corporation Plasmid DNA isolation
GB2445442A (en) 2006-09-26 2008-07-09 Ge Healthcare Bio Sciences Nucleic acid purification using anion exchange
GB2443505B (en) 2006-09-26 2008-12-31 Ge Healthcare Bio Sciences Nucleic acid purification method
GB2445441B (en) 2006-09-26 2010-06-30 Ge Healthcare Bio Sciences Nucleic acid purification method
CA2668818C (en) 2006-10-10 2018-06-26 Xenomics, Inc. Compositions, methods and kits for isolating nucleic acids from body fluids using anion exchange media
US20080121591A1 (en) * 2006-11-29 2008-05-29 Canon U.S. Life Sciences, Inc. Device for nucleic acid preparation
DE102007013099A1 (de) 2007-03-14 2008-09-18 Aj Innuscreen Gmbh Verfahren und Testkit zum schnellen Nachweis spezifischer Nukleinsäuresequenzen, insbesondere zum Nachweis von Mutationen oder SNP's
EP2024725B1 (en) * 2007-05-08 2013-11-20 Agilent Technologies, Inc. Sample preparation device and method utilizing a polyamide tube
WO2008150826A1 (en) * 2007-05-31 2008-12-11 Ge Healthcare Uk Limited Modified spin column for simple and rapid plasmid dna extraction
WO2009009113A1 (en) * 2007-07-11 2009-01-15 Program For Appropriate Technology In Health (Path) Disposable sample processing unit
US20090048438A1 (en) * 2007-08-13 2009-02-19 Taigen Bioscience Corporation. Method for washing a column and method for extracting membrane-bound target molecules
TW200907066A (en) * 2007-08-13 2009-02-16 Taigen Bioscience Corp Method for washing a column and method for extracting membrane-bound target molecules
JP4097687B2 (ja) * 2007-09-21 2008-06-11 株式会社日立製作所 核酸の回収方法
US8357296B2 (en) 2007-09-24 2013-01-22 Emd Millipore Corporation Centrifugal filter
ATE468917T1 (de) 2007-10-31 2010-06-15 Hoffmann La Roche Verfahren und vorrichtung zur reinigung von nukleinsäuren
US7759112B2 (en) * 2007-10-31 2010-07-20 Akonni Biosystems, Inc. Apparatus, system, and method for purifying nucleic acids
EP2087934A1 (de) 2008-02-07 2009-08-12 Qiagen GmbH Verfahren und Vorrichtung zur automatisierten Prozessierung einer Probe
US8067580B2 (en) 2008-02-07 2011-11-29 Ge Healthcare Bio-Sciences Corp. Isolation of DNA, RNA and protein from a single sample
EP2088196A1 (en) 2008-02-08 2009-08-12 Boehringer Ingelheim RCV GmbH & Co KG Methods and devices for producing biomolecules
DE102008009920A1 (de) 2008-02-15 2009-08-20 Aj Innuscreen Gmbh Mobiles Gerät für die Nukleinsäureisolierung
EP2163239A1 (de) 2008-05-27 2010-03-17 Qiagen GmbH Produkte, die Biopartikel enthalten, Verfahren zu ihrer Herstellung
EP2128169A1 (de) 2008-05-30 2009-12-02 Qiagen GmbH Verfahren zur Isolierung von kurzkettigen Nukleinsäuren
KR101005924B1 (ko) * 2008-06-27 2011-01-06 포항공과대학교 산학협력단 핵산 추출 장치
CN103657145A (zh) * 2008-08-01 2014-03-26 生物风险公司 用于物质的纯化、分离、脱盐或缓冲液/溶剂交换的装置和方法
EP2163621A1 (de) * 2008-09-03 2010-03-17 Qiagen GmbH Verfahren zum Isolieren und Reinigen von Nukleinsäuren
DE102008047790A1 (de) * 2008-09-17 2010-04-15 Qiagen Gmbh Verfahren zur Normierung des Gehalts von Biomolekülen in einer Probe
DE102008055120A1 (de) 2008-12-23 2010-07-01 Qiagen Gmbh Präparation und Amplifikation von Nukleinsäuren mittels magnetischer Partikel
US20110269138A1 (en) 2008-12-30 2011-11-03 Qiagen Hamburg Gmbh Method for detecting methicillin-resistant staphylococcus aureus (mrsa) strains
US9464319B2 (en) 2009-03-24 2016-10-11 California Institute Of Technology Multivolume devices, kits and related methods for quantification of nucleic acids and other analytes
US10196700B2 (en) 2009-03-24 2019-02-05 University Of Chicago Multivolume devices, kits and related methods for quantification and detection of nucleic acids and other analytes
US9447461B2 (en) 2009-03-24 2016-09-20 California Institute Of Technology Analysis devices, kits, and related methods for digital quantification of nucleic acids and other analytes
KR101796906B1 (ko) 2009-03-24 2017-11-10 유니버시티 오브 시카고 반응을 수행하기 위한 방법
US8039613B2 (en) 2009-08-28 2011-10-18 Promega Corporation Methods of purifying a nucleic acid and formulation and kit for use in performing such methods
US8222397B2 (en) 2009-08-28 2012-07-17 Promega Corporation Methods of optimal purification of nucleic acids and kit for use in performing such methods
WO2011041703A2 (en) * 2009-10-02 2011-04-07 Life Technologies Corporation Sample preparation devices and methods
US20130023655A1 (en) * 2010-04-08 2013-01-24 Qiagen Gmbh Method for precipitating anionic surfactant ions in the presence of nucleic acids
EP2395082A1 (en) * 2010-06-14 2011-12-14 QIAGEN GmbH Extraction of nucleic acids from wax-embedded samples
JP6052384B2 (ja) * 2010-07-07 2016-12-27 ソニー株式会社 核酸濃縮回収用カートリッジ、核酸濃縮回収方法、及び該カートリッジの製造方法
DE102010031404A1 (de) 2010-07-15 2012-01-19 Aj Innuscreen Gmbh Verfahren zur schnellen Bereitstellung von Inhaltsstoffen aus biologischen Proben
DE102010031401A1 (de) 2010-07-15 2012-01-19 Aj Innuscreen Gmbh Verfahren zur Anreicherung von Bakterien, Viren sowie Zellen und zur nachfolgenden Nukleinsäureisolierung
US8816064B2 (en) 2010-09-30 2014-08-26 Phynexus, Inc. Purification of nucleic acids
GB201020095D0 (en) 2010-11-26 2011-01-12 Invitrogen Dynal As Nucleic acid preparation method
US8808552B2 (en) * 2010-12-16 2014-08-19 Zenpure (Hangzhou) Co., Ltd. Stackable filter cup apparatus and method
BR112013022735A2 (pt) 2011-03-09 2016-12-06 3M Innovative Properties Co aparelho para processamento de uma amostra, aparelho para processamento de uma pluralidade de amostras, método para detectar a presença ou ausência de um analito em uma amostra e método para detectar a presença ou ausência de um analito em uma pluralidade de amostras
KR101193765B1 (ko) * 2011-05-16 2012-10-24 (주)나노헬릭스 초고속 핵산의 정제방법
CN102250876B (zh) 2011-05-18 2014-08-13 李学敬 从生物材料中分离纯化rna的方法
CN103764827B (zh) 2011-07-04 2018-04-24 恰根有限公司 可用于分离和／或纯化核酸的试剂
US9304070B2 (en) 2011-07-13 2016-04-05 Emd Millipore Corporation All-in-one sample preparation device and method
DE102011080853B4 (de) 2011-08-11 2014-03-27 Axagarius Gmbh & Co. Kg Verfahren zur Isolierung von RNA aus Volblutproben
WO2013029691A2 (en) 2011-09-04 2013-03-07 Agilent Technologies, Inc. Debris filter for fluidic measurement with recess size decreasing in fluid flow direction
US9084994B2 (en) * 2011-09-09 2015-07-21 Orochem Technologies, Inc. Apparatus and method for parallel collection and analysis of the proteome and complex compositions
US20130122496A1 (en) * 2011-09-30 2013-05-16 Blood Cell Storage, Inc. Storage of nucleic acid
CA2863121A1 (en) * 2011-12-30 2013-07-04 Abbott Molecular Inc. Microorganism nucleic acid purification from host samples
JP2015514561A (ja) * 2012-02-03 2015-05-21 マイクロソニック システムズ インク．Ｍｉｃｒｏｓｏｎｉｃ Ｓｙｓｔｅｍｓ Ｉｎｃ． 超音波を用いた流体サンプルの処理の自動化のための装置
US9933343B2 (en) * 2012-03-14 2018-04-03 Chromologic Llc Integrated membrane for preservation of biomolecules
US10717022B2 (en) 2012-03-14 2020-07-21 Chromologic Llc Integrated membrane device
US20130264286A1 (en) * 2012-04-06 2013-10-10 Cells Scientific Corporation Biological sample filtering system and method for filtering biological samples
US9428787B2 (en) 2012-06-05 2016-08-30 3M Innovative Properties Company Apparatus and method for processing a sample
WO2013184398A1 (en) 2012-06-05 2013-12-12 3M Innovative Properties Company Multiwell plate
EP2677024B1 (de) * 2012-06-22 2019-11-20 Human Med AG Vorrichtung zum Separieren von adulten Stammzellen
US9677981B2 (en) 2013-03-15 2017-06-13 3M Innovative Properties Company Sample concentrator and method of use
USD717468S1 (en) 2013-06-24 2014-11-11 Bioptic, Inc. Microwell strip
US10302534B2 (en) * 2013-09-05 2019-05-28 Merck Patent Gmbh Filter device for filtering complex fluid samples
WO2015140326A1 (en) * 2014-03-21 2015-09-24 Biotage Ab Method and apparatus for the equilibration of a packed chromatography column
WO2015159979A1 (ja) 2014-04-18 2015-10-22 凸版印刷株式会社 短鎖核酸の回収方法
US10094746B2 (en) * 2014-05-20 2018-10-09 Tecan Sp, Inc. Sample extraction apparatus with micro elution bed design
WO2016186737A1 (en) * 2015-05-20 2016-11-24 Speware Corporation Sample extraction apparatus with micro elution bed design
US9976993B2 (en) * 2014-05-20 2018-05-22 Tecan Sp, Inc. Sample extraction apparatus with micro elution bed design
US11491480B2 (en) * 2014-06-13 2022-11-08 Children's Medical Center Corporation Products and methods to isolate mitochondria
US10434508B2 (en) * 2014-07-03 2019-10-08 Abionic Sa Capsule for rapid molecular quantification of a fluid sample such as whole blood
DE102014216016A1 (de) * 2014-08-13 2016-02-18 Axagarius Gmbh & Co. Kg Vorrichtung zur Aufreinigung von Nukleinsäuren
JP6247657B2 (ja) * 2015-04-06 2017-12-13 株式会社メニコン 重合性不飽和モノマーの精製方法及び精製装置
DE102015211394B4 (de) 2015-06-19 2022-07-28 Ist Innuscreen Gmbh Vorrichtung und Verfahren zur Extraktion von Nukleinsäuren
DE102015211393A1 (de) 2015-06-19 2016-12-22 Aj Innuscreen Gmbh Vorrichtung und Verfahren zur automatisierten Extraktion von Nukleinsäuren
DE102015216558A1 (de) 2015-04-23 2016-10-27 Aj Innuscreen Gmbh Verfahren und testkit zur schnellen isolierung von nukleinsäuren mittels rauer oberflächen
JP6797185B2 (ja) * 2015-04-23 2020-12-09 エイ・ジェイ イヌスクリーン ゲゼルシャフト ミット ベシュレンクテル ハフツングＡＪ Ｉｎｎｕｓｃｒｅｅｎ ＧｍｂＨ 核酸を自動的に抽出する装置および方法
CN108136395B (zh) 2015-09-01 2022-05-13 贝克顿·迪金森公司 用于分离样本相的深度过滤装置
US20180256136A1 (en) * 2015-09-03 2018-09-13 Brian James MCCORMACK Stool collection device and stool sampling device
RU2620304C2 (ru) * 2015-11-03 2017-05-24 Общество с ограниченной ответственностью "ДжоинТекСэлл" Устройство для выделения клеточных фракций из тканей человека и животных и способ его применения
KR102143286B1 (ko) * 2015-11-03 2020-08-10 조인테크셀, 리미티드 라이어빌리티 컴퍼니 (제이티씨 엘엘씨) 인간 및 동물 조직으로부터 세포 분획을 단리하기 위한 장치 및 그 사용 방법
KR101760726B1 (ko) 2015-12-18 2017-07-24 대한민국 (식품의약품안전처장) 미생물 탈리 및 페놀-클로로포름을 이용한 동물성 식품으로부터 메타게놈 dna의 분리방법
US20180135040A1 (en) 2016-02-16 2018-05-17 Life Magnetics, Inc. Methods for separating nucleic acids with graphene coated magnetic beads
RU173796U1 (ru) * 2017-03-02 2017-09-11 Общество с ограниченной ответственностью "ДжоинТекСэлл" Устройство для фракционирования жировой ткани и выделения из нее стромально-васкулярной фракции для применения в регенеративной медицине
WO2018165635A1 (en) * 2017-03-10 2018-09-13 Hitachi Chemical Co., Ltd. Filtering device, capturing device, and uses thereof
DE102017204267B4 (de) 2017-03-14 2021-05-27 Aj Innuscreen Gmbh Verfahren zur anreicherung von zellen aus einer probe und der nachfolgenden nukleinsäureisolierung aus diesen zellen
KR102136695B1 (ko) * 2018-08-22 2020-07-22 주식회사 인퓨전텍 현장 진단용 장치를 이용한 병원체 농축 및 핵산 추출 방법
EP3875571A4 (en) * 2018-10-31 2022-08-24 Toray Industries, Inc. COLUMN FOR NUCLEIC ACID COLLECTION
GB2581489B (en) * 2019-02-15 2021-02-24 Revolugen Ltd Purification method
GB2584562B (en) * 2019-02-15 2021-07-21 Revolugen Ltd Purification method
US11618917B2 (en) * 2019-07-19 2023-04-04 Pathogendx, Inc. Methods for microbial DNA analysis
DK3906982T3 (da) 2020-05-08 2022-04-25 Axagarius Gmbh & Co Kg Fremgangsmåde til plasmidrengøring under samtidig reduktion af endotoksiner
WO2022046655A1 (en) * 2020-08-24 2022-03-03 Fluorome, Inc. Methods and compositions for exosome-based diagnostics and diagnosis of disease
DE102021130283B4 (de) 2021-11-19 2024-03-21 Ist Innuscreen Gmbh Verfahren und testkit zur preiswerten und ressourcensparenden extraktion von nukleinsäuren
CN115508475A (zh) * 2022-11-01 2022-12-23 未名环境分子诊断(广东)有限公司 一种污水中地芬诺酯含量检测方法

Family Cites Families (64)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US956832A (en) 1909-01-12 1910-05-03 Theobald Friedrich Seitz Filter.
US2114748A (en) * 1934-05-09 1938-04-19 Firm Jenaer Glaswerk Schott & Method of making porous filter bodies of particles of glass
DE1260470B (de) * 1962-07-24 1968-02-08 Roussy Inst Gustave Verfahren zur Gewinnung hochpolymerer Desoxyribonucleinsaeure
US3433782A (en) * 1965-12-27 1969-03-18 Miles Lab Separation and recovery of oligonucleotides
BE757291A (fr) * 1969-10-10 1971-04-09 Smith Kline French Lab Complexe antiviral de arn et d'un polysaccharide
US3935111A (en) * 1973-04-06 1976-01-27 Bentley Laboratories, Inc. Device for removing blood microemboli
US4033881A (en) * 1975-01-06 1977-07-05 Pall Corporation Multilayer paper sheet filter cartridges
NO760938L (ja) * 1975-03-22 1976-09-23 Biotest Serum Institut Gmbh
DE2624373C2 (de) * 1976-05-31 1983-02-03 Arnold Dr. 8782 Karlstadt Seufert Verfahren zur Herstellung von steril filtriertem Kryopräzipilat mit einer Anreicherung des Faktors VIII
JPS5312900A (en) * 1976-07-23 1978-02-04 Yamasa Shoyu Co Ltd Extraction of natural ribonucleic acid
SU638599A1 (ru) * 1977-07-11 1978-12-25 Московский Ордена Ленина И Ордена Трудового Красного Знамени Государственный Университет Им. М.В.Ломоносова Способ получени фракций нуклеиновых кислот
US4303530A (en) * 1977-10-26 1981-12-01 Medical Incorporated Blood filter
US4259187A (en) 1979-06-07 1981-03-31 Baxter Travenol Laboratories, Inc. Intravenous fluid filter
DE3211309A1 (de) * 1982-03-26 1983-09-29 Metin Dipl.-Ing. 6100 Darmstadt Colpan Chromatographisches verfahren zur isolierung von makromolekuelen
US4431545A (en) 1982-05-07 1984-02-14 Pall Corporation Microporous filter system and process
US4734192A (en) * 1982-07-01 1988-03-29 Millipore Corporation Multiwell membrane filtration apparatus
DE3308932A1 (de) * 1983-03-12 1984-09-13 Hoechst Ag, 6230 Frankfurt Verfahren zur abtrennung von ribonukleinsaeuren aus einer loesung, die desoxyribonukleinsaeuren enthaelt
US4643981A (en) 1983-11-09 1987-02-17 Akzo N.V. Pressure filtration system
GB8604497D0 (en) * 1986-02-24 1986-04-03 Connaught Lab Separation of islets of langerhans
GB8613476D0 (en) * 1986-06-04 1986-07-09 London Hospital Med Coll Method of sequencing nucleic acids
US4678545A (en) 1986-06-12 1987-07-07 Galik George M Printed circuit board fine line plating
US4828705A (en) * 1986-10-31 1989-05-09 Kingston Technologies, Inc. Pressure-dependent anisotropic-transport membrane system
DE3639949A1 (de) * 1986-11-22 1988-06-09 Diagen Inst Molekularbio Verfahren zur trennung von langkettigen nukleinsaeuren
US4935342A (en) * 1986-12-01 1990-06-19 Syngene, Inc. Method of isolating and purifying nucleic acids from biological samples
US4797260A (en) * 1987-01-27 1989-01-10 V-Tech, Inc. Antibody testing system
CA1325980C (en) * 1987-04-22 1994-01-11 Sho Kikyotani Apparatus for the treatment of biological samples and treatment methods using the same
DE3717211A1 (de) * 1987-05-22 1988-12-01 Diagen Inst Molekularbio Vorrichtung und verfahren zur trennung und reinigung von molekuelen
DE3717209A1 (de) * 1987-05-22 1988-12-01 Diagen Inst Molekularbio Mittel zur selektiven adsorption von biopolymeren
US4976861A (en) * 1987-10-20 1990-12-11 Pall Corporation Method for determining the wetting characteristic of a porous medium
US4925572A (en) 1987-10-20 1990-05-15 Pall Corporation Device and method for depletion of the leukocyte content of blood and blood components
US4923978A (en) * 1987-12-28 1990-05-08 E. I. Du Pont De Nemours & Company Process for purifying nucleic acids
US4810381A (en) * 1987-12-28 1989-03-07 Minnesota Mining And Manufacturing Company Composite chromatographic article
US4921952A (en) * 1988-01-21 1990-05-01 The United States Of America As Represented By The United States Department Of Energy Nucleic acid isolation process
CH674713A5 (en) 1988-05-13 1990-07-13 Agrogen Stiftung Filtration device for sepg. cell components from suspension - comprises modular elements, e.g. of PTFE, each retaining filter cloth and stacked together to form a column
GB8823706D0 (en) 1988-10-10 1988-11-16 Alcan Int Ltd Microfilter device
US5075430A (en) * 1988-12-12 1991-12-24 Bio-Rad Laboratories, Inc. Process for the purification of DNA on diatomaceous earth
IT1226210B (it) * 1988-12-22 1990-12-21 Claudio Schneider Procedimento per l'estrazione e la purificazione di dna
DE3913814A1 (de) 1989-01-13 1990-07-19 Max Planck Gesellschaft Verfahren zur elektrischen elution von auf trenngelen gebundenen, elektrisch geladenen substanzen und eine anordnung zur durchfuehrung des verfahrens
NL8900725A (nl) * 1989-03-23 1990-10-16 Az Univ Amsterdam Werkwijze en combinatie van middelen voor het isoleren van nucleinezuur.
US4935142A (en) * 1989-06-23 1990-06-19 Memtek Corporation Apparatus for retaining variable number of sheet membrane elements and a method for the use thereof
EP0406485A1 (en) 1989-07-03 1991-01-09 NPBI Nederlands Produktielaboratorium voor Bloedtransfusieapparatuur en Infusievloeistoffen B.V. A method for the removal of leukocytes from a leukocyte-containing suspension and filter unit for use with the method
US5185127A (en) * 1989-09-21 1993-02-09 Becton, Dickinson And Company Test device including flow control means
US5009759A (en) * 1989-09-22 1991-04-23 Board Of Regents, The University Of Texas System Methods for producing agarose gels having variable pore sizes
NO894161L (no) * 1989-10-19 1991-04-22 Flowtech A S Foeringsvaeskesystem for vaeskestroemcytofotometer.
DE3935098C2 (de) * 1989-10-21 1995-05-24 Macherey Nagel & Co Chem Chromatographisches Trägermaterial sowie seine Verwendung in einem Verfahren zur chromatographischen Trennung von Nukleinsäuren
CA2068220A1 (en) * 1989-11-08 1991-05-09 Samuel Nochumson Combined centrifuge tube and porous selection means for separation and recovery of biological materials
US4997932A (en) * 1989-11-13 1991-03-05 Boehringer Mannheim Corporation Method and kit for purifying nucleic acids
JP2978518B2 (ja) * 1989-12-06 1999-11-15 東ソー株式会社 ファージｄｎａの精製方法
US5076933A (en) * 1990-06-29 1991-12-31 Coulter Corporation Process and apparatus for removal of dna and viruses
US5221483A (en) * 1990-06-29 1993-06-22 Coulter Corporation Process and apparatus for removal of DNA, viruses and endotoxins
JPH04100505A (ja) * 1990-08-20 1992-04-02 Toto Ltd セラミックフィルタの製造方法
US5256294A (en) * 1990-09-17 1993-10-26 Genentech, Inc. Tangential flow filtration process and apparatus
DE69133218T2 (de) * 1990-09-25 2004-02-12 Asahi Medical Co. Ltd. Methode und filtersystem zur entfernung von leukozyten
US5135627A (en) * 1990-10-15 1992-08-04 Soane Technologies, Inc. Mosaic microcolumns, slabs, and separation media for electrophoresis and chromatography
DE4034036C2 (de) 1990-10-26 1994-03-03 Diagen Inst Molekularbio Vorrichtung und Verfahren zur Isolierung von Nukleinsäuren aus Zellsuspensionen
US5187083A (en) * 1990-11-13 1993-02-16 Specialty Laboratories, Inc. Rapid purification of DNA
US5078853A (en) * 1991-03-22 1992-01-07 Assay Technology, Inc. Segmented electrophoretic separation system useful for lipid profiling
US5466781A (en) * 1991-05-24 1995-11-14 Chiron Therapeutics Process for purifying bacterially produced M-CSF
DE4143639C2 (de) 1991-12-02 2002-10-24 Qiagen Gmbh Verfahren zur Isolierung und Reinigung von Nukleinsäuren
EP0555798B1 (en) * 1992-02-13 1999-05-06 Becton, Dickinson and Company Hydrated celite and purification of DNA
DE69319471T2 (de) * 1992-03-17 1999-04-15 Asahi Medical Co Filtermedium mit begrenzter negativer Oberflächenladung für die Behandlung von Blutmaterial
US5427664A (en) * 1993-07-22 1995-06-27 Stoev; Stoyan V. Free solution electrophoresis-membrane filters trapping assay apparatus and method
US5578459A (en) * 1993-11-24 1996-11-26 Abbott Laboratories Method and apparatus for collecting a cell sample from a liquid specimen
US5660984A (en) * 1994-12-09 1997-08-26 Davis; Thomas E. DNA isolating apparatus comprising a non-porous DNA binding, anion exchange resin and methods of use thereof

Cited By (12)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPH08281098A (ja) * 1995-04-01 1996-10-29 Boehringer Mannheim Gmbh 核酸の単離装置
JP2004500001A (ja) * 1998-02-02 2004-01-08 ジエントラ・システムズ・インコーポレーテツド Ｄｎａを単離するための溶解マトリックスを使用するための組成物および方法
JP2004500002A (ja) * 1998-02-02 2004-01-08 ジエントラ・システムズ・インコーポレーテツド Ｄｎａを単離するための溶出試薬、方法およびキット
JP2012157366A (ja) * 1998-02-02 2012-08-23 Qiagen North American Holdings Inc Ｄｎａを単離するための溶出試薬、方法およびキット
JP2003506456A (ja) * 1999-08-06 2003-02-18 キアゲン ゲゼルシャフト ミット ベシュレンクテル ハフツング マルチウェルにおける減圧濾過による自動タンパク質精製
JP4786094B2 (ja) * 1999-08-06 2011-10-05 キアゲン ゲゼルシャフト ミット ベシュレンクテル ハフツング マルチウェルにおける減圧濾過による自動タンパク質精製
JP2008506932A (ja) * 2004-07-15 2008-03-06 キアゲン ゲゼルシャフト ミット ベシュレンクテル ハフツング 核酸のより効率的な単離のための器具および方法
JP2007124952A (ja) * 2005-11-04 2007-05-24 Hitachi High-Technologies Corp 核酸精製方法及び核酸精製器具
JP4699868B2 (ja) * 2005-11-04 2011-06-15 株式会社日立ハイテクノロジーズ 核酸精製方法及び核酸精製器具
JP2013533978A (ja) * 2010-07-14 2013-08-29 キアゲン ゲーエムベーハー 生体分子の単離および／または精製のためのデバイス
JP2016166903A (ja) * 2010-07-14 2016-09-15 キアゲン ゲーエムベーハー 生体分子の単離および／または精製のためのデバイス
JP2015216906A (ja) * 2014-05-20 2015-12-07 昇太 中村 分離容器およびウイルスの濃縮・精製方法

Also Published As

Publication number Publication date
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DE4139664A1 (de) 1993-06-03
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