JP5815566B2

JP5815566B2 - 脂肪分解促進用組成物

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Publication number: JP5815566B2
Application number: JP2012553781A
Authority: JP
Inventors: 鈴木　則行; 則行鈴木; 倫明村越; 知二小野; 央子藤崎
Original assignee: Lion Corp
Current assignee: Lion Corp
Priority date: 2011-01-21
Filing date: 2012-01-20
Publication date: 2015-11-17
Anticipated expiration: 2032-01-20
Also published as: WO2012099238A1; KR101733261B1; CN103327999B; CN103327999A; JP2015205913A; JP6029718B2; JPWO2012099238A1; KR20150023884A; KR101719436B1; US9144556B2; US20130295130A1; KR20130095798A

Description

本発明は、脂肪分解促進組成物に関する。

現代社会では栄養摂取量が慢性的に多く、さらに慢性的な運動不足等で体内に脂肪を蓄積する傾向にある。内臓脂肪は、高血圧、高血糖、高脂血症などのリスクを高める悪玉のアディポサイトカインを分泌する組織である。よって、内臓脂肪を無理なく減らす機能を有する素材の開発が進められている。係る素材としては、例えば、運動と共に摂取することで効果を発揮するカテキン類（非特許文献１）、脂肪の吸収を抑制するポリフェノール類（非特許文献２）等の報告がある。

特許文献１には、ラクトフェリンと血行促進剤との組み合わせが、脂肪の蓄積を抑制することで内臓脂肪を低減する効果を発揮することが記載されている。

特開２００８−６９１２１号公報

ＩｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌＪｏｕｒｎａｌｏｆＯｂｅｓｉｔｙ（２００２）２６，１４５９−１４６４薬理と治療３２（６），３３５−３４２（２００４）

しかし、上記従来のラクトフェリンと血行促進剤との組み合わせによる内臓脂肪低減効果は、十分とはいえなかった。

本発明は、ラクトフェリンと他の成分とを含有する組成物であって、顕著な内臓脂肪分解促進効果を有する組成物を提供することを目的とする。

本発明は、以下の発明を提供する。
〔１〕（Ａ）ラクトフェリンと、（Ｂ）ダービリア抽出物、ラズベリーケトン、アーティチョーク葉抽出物、ローズマリー抽出物、イソフラボン、ブドウ種子抽出物、松樹皮抽出物、コレウス・フォルスコリ抽出物、及びカカオ抽出物からなる群より選ばれる１種以上の成分とを含有する脂肪分解促進組成物。
〔２〕医薬品である、上記〔１〕に記載の脂肪分解促進組成物。

本発明は、以下の態様であってもよい。
〔４〕（Ａ）ラクトフェリンと、（Ｂ）ダービリア抽出物、ラズベリーケトン、アーティチョーク葉抽出物、ローズマリー抽出物、イソフラボン、ブドウ種子抽出物、松樹皮抽出物、コレウス・フォルスコリ抽出物、及びカカオ抽出物からなる群より選ばれる１種以上の成分とを含有する脂肪分解促進組成物を被験者に適用して、被験者の脂肪分解を促進する方法。
〔５〕前記脂肪分解促進組成物が経口投与される、上記〔４〕に記載の脂肪分解促進方法。
〔６〕前記脂肪分解促進組成物が医薬品の形態である、上記〔５〕に記載の脂肪分解促進方法。

本発明の脂質分解促進組成物は、成分（Ａ）と成分（Ｂ）の相乗効果が発揮され、各成分単独の効果からは予想外の顕著な脂肪分解促進作用を有する。

本発明の脂肪分解促進組成物は、以下の成分（Ａ）と成分（Ｂ）を含む。
（Ａ）ラクトフェリン
（Ｂ）ラズベリーケトン、アーティチョーク葉抽出物、カカオ抽出物、ブドウ種子抽出物、松樹皮抽出物、コレウス・フォルスコリ抽出物、ダービリア抽出物、ローズマリー抽出物及びイソフラボンからなる群より選ばれる１種以上の成分

成分（Ａ）はラクトフェリンである。ラクトフェリンの例は以下の通りである；市販のラクトフェリン；哺乳類（例えば人、牛、羊、山羊、馬等）の初乳、移行乳、常乳、末期乳等又はこれらの乳の処理物である脱脂乳、ホエー等から、常法（例えば、イオン交換クロマトグラフィー）により分離したラクトフェリン；植物（トマト、イネ、タバコ）から生産されたラクトフェリン；遺伝子組み換えによって得られたラクトフェリン。ラクトフェリンは、市販品を使用してもよいし、公知の方法により調製して使用してもよい。

ラクトフェリンは１種単独で用いてもよいし、２種以上を適宜組み合わせて用いてもよい。ラクトフェリンとしては、牛由来のラクトフェリンが好ましい。

本発明の組成物における成分（Ａ）の配合量は、１日あたりのヒトの摂取量として、通常５ｍｇ〜５，０００ｍｇ／ｄａｙであり、望ましくは５０ｍｇ〜１，０００ｍｇ／ｄａｙであり、更に望ましくは１００ｍｇ〜５００ｍｇ／ｄａｙである。この範囲であることにより、脂肪分解促進効果が顕著に優れた脂肪分解促進組成物が得られる。また、該組成物のコスト、安全性等の面でも問題がない。

成分（Ｂ）は、ダービリア抽出物、ラズベリーケトン、アーティチョーク葉抽出物、ローズマリー抽出物、イソフラボン、ブドウ種子抽出物、松樹皮抽出物、コレウス・フォルスコリ抽出物、及びカカオ抽出物からなる群より選ばれる１種以上の成分である。

（Ｂ−１）ダービリア抽出物
ダービリア抽出物は、ダービリアの抽出物である。ダービリアは、ダービリア科（Ｄｕｒｖｉｌｌｅａｃｅａｅ）ダービリア属（Ｄｕｒｖｉｌｌｅａ）に属する海藻であり、Ｄｕｒｖｉｌｌｅａａｎｔａｒｃｔｉｃａ、Ｄｕｒｖｉｌｌｅａｐｏｔａｔｏｒｕｍ、ＤｕｒｖｉｌｌｅａｗｉｌｌａｎａなどはＢｕｌｌｋｅｌｐと呼ばれる。ダービリア抽出物は、ダービリアの植物体の全体及び一部のいずれからの抽出物であってもよい。抽出物の調製条件は特に限定されず、溶媒としては、アルコールを含む溶媒が好ましく、アルコール／水が０／１００〜７０／３０（Ｖ／Ｖ：体積比）の溶媒であることがより好ましく、アルコール／水が０／１００〜４０／６０の溶媒であることが更に好ましい。抽出温度は、特に制限はないが、通常５〜８０℃、好ましくは５〜５０℃である。抽出時間は、通常１〜２４時間である。抽出は撹拌しながら行なうのが好ましい。抽出ｐＨは、極端な酸性、アルカリ性に傾かなければ特に制限はない。

（Ｂ−２）ラズベリーケトン
ラズベリーケトンは、４−（４−ヒドロキシフェニル）−２−ブタノン及び／又はｐ−ヒドロキシベンジルアセトンである。ラズベリーケトンは、ラズベリーの香り成分の一つである。ラズベリーケトンは、バラ科キイチゴ属に属する植物（例：ラズベリー）の植物体（例：低木、果実）等の天然物に由来していてもよいし、化学合成等による人工的な製造物であってもよい。

天然物に由来するラズベリーケトンとしては、例えば、バラ科キイチゴ属（Ｒｕｂｕｓ）に属する植物の植物体の抽出物（以下、ラズベリー抽出物という）が挙げられる。バラ科キイチゴ属に属する植物としては、ラズベリーが好ましく挙げられる。ラズベリー（英語：ｒａｓｐｂｅｒｒｙ、フランス語：ｆｒａｍｂｏｉｓｅ（フランボワーズ））は、学名ＲｕｂｕｓｉｄａｅｕｓＬ．、Ｒｕｂｕｓｓｔｒｉｇｏｓｕｓであり、分類学的には亜属Ｉｄａｅｏｂａｔｕｓに相当する。ラズベリー抽出物を得る際の植物体の抽出部位は、植物体の全体及び一部のいずれであってもよく、低木、果実などが好ましい。抽出溶媒、抽出温度などの調製条件は特に限定されない。ラズベリー抽出物の精製度は、ラズベリーケトンを含んでいれば特に限定されない。

（Ｂ−３）アーティチョーク葉抽出物
アーティチョーク葉抽出物は、アーティチョーク（学名ＣｙｎａｒａｓｃｏｌｙｍｕｓＬ．（Ｃｏｍｐｏｓｉｔａｅ））の葉の抽出物である。アーティチョーク葉抽出物は、葉の一部及び全部のいずれからの抽出物であってもよい。抽出物の調製条件は特に限定されず、溶媒としては、アルコールが好ましく、エタノールがより好ましい。

アーティチョーク葉抽出物には、シナロピクリン（２−（ヒドロキシメチル）プロペン酸［（３ａＲ，６ａβ，９ａβ，９ｂα）−ドデカヒドロ−８α−ヒドロキシ−３，６，９−トリスメチレン−２−オキソアズレノ［４，５−ｂ］フラン］−４β−イル）が含まれており、その含有量は、通常約０．７質量％である。

（Ｂ−４）ローズマリー抽出物
ローズマリー抽出物は、ローズマリーの抽出物である。ローズマリーは、マンネンロウともいい、学名をＲｏｓｍａｒｉｎｕｓｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓＬ．といい、シソ科に属する常緑性低木である。ローズマリー抽出物は、ローズマリーの植物体の全体及び一部のいずれからの抽出物であってもよい。抽出物の調製条件は特に限定されず、溶媒としては、水、アルコール又はこれらの組み合わせが好ましく、水とエタノールの組み合わせがより好ましい。

（Ｂ−５）イソフラボン
イソフラボンは、３−フェニルクロモン（３−フェニル−４Ｈ−１−ベンゾピラン−４−オン）である。イソフラボンは、グリコシドの形態から糖を分離して得られるアグリコン（イソフラボンアグリコン）であることが好ましい。イソフラボンは、天然物に由来していてもよいし、化学合成等による人工的な製造物であってもよい。

天然物に由来するイソフラボンとしては、例えば、大豆の抽出物が挙げられ、中でも、発酵大豆の抽出物（以下、発酵大豆抽出物という）が好ましい。発酵大豆は、大豆に微生物を作用させて発酵させて得られる。発酵は、大豆に菌（例えば麹菌）を添加してその菌の発酵に最適な条件にて進めることができる。発酵大豆の抽出物の調製条件は、特に限定されず、溶媒としては、例えばアルコールが挙げられる。発酵大豆の抽出物は、イソフラボンを通常３０〜４０質量％含有する。

（Ｂ−６）ブドウ種子抽出物
ブドウ種子抽出物は、ブドウ（ブドウ科（Ｖｉｔａｃｅａｅ）のつる性低木）の種子の抽出物である。抽出物の抽出対象は、種子である。ブドウ種子抽出物の調製条件は特に限定されず、溶媒としては、水、アルコールが好ましい。溶媒として水を用いる場合には、ブドウの種子を水にて７０℃以上（好ましくは８０〜１２０℃、より好ましくは８０〜１００℃）の抽出温度範囲で抽出することが好ましい。ブドウ種子抽出物には、プロアントシアニジンが含まれ、その含有量は、通常約３８質量％である。

（Ｂ−７）松樹皮抽出物
松樹皮抽出物は、松（マツ属（Ｐｉｎｕｓ）の植物）の樹皮の抽出物である。松としては、パイナス・ラジアタ（ＰｉｎｕｓＲａｄｉａｔａ）が例示される。抽出物の調製条件は特に限定されないが、溶媒としては水が好ましい。松樹皮抽出物には、プロアントシアニジン、カテキン、フラボノイド等が含まれる。

（Ｂ−８）コレウス・フォルスコリ抽出物
コレウス・フォルスコリ抽出物は、コレウス・フォルスコリの植物体の抽出物である。コレウス・フォルスコリは、シソ科コレウス属の多年草で、学名はＣｏｌｅｕｓＦｏｒｓｋｏｈｌｉｉ，Ｃｏｌｅｕｓｂａｒｂａｔｕｓ，ＰｌｅｃｔｒａｎｔｈｕｓＢａｒｂａｔｕｓである。コレウス・フォルスコリ抽出物は、コレウス・フォルスコリの植物体の全体及び一部のいずれからの抽出物であってもよい。抽出物の調製条件は特に限定されない。コレウス・フォルスコリ抽出物には、ジテルペンの一種であるフォルスコリンが含まれる。

（Ｂ−９）カカオ抽出物
カカオ抽出物は、カカオ（アオギリ科カカオ、学名をＴｈｅｏｂｒｏｍａｃａｃａｏ）の抽出物である。カカオ抽出物は、カカオの植物体の全体及び一部のいずれからの抽出物であってもよいが、抽出部位としては例えば、果実（カカオポッド）、種子が挙げられ、種子が好ましく、外殻皮（カカオハスク）であることがより好ましい。外殻皮とは、果実の中の白いパルプ質の果肉に包まれたカカオ豆（種子）の周りの皮を意味する。カカオ抽出物の調製条件は特に限定されないが、溶媒としてはアルコールが好ましく、含水エタノール（例：エタノール５０〜８０容量％の含水エタノール）がより好ましい。

カカオ抽出物には、テオブロミン（３，７−ジメチルキサンチン）が含まれており、その含有量は、通常１０質量％である。また、カカオ抽出物には、ポリフェノールが含まれており、その含有量は通常約２０質量％である。さらに、フェニルエチルアミン（２−フェニルエチルアミン）及びγ−アミノ酪酸も、カカオ抽出物に含まれている。

成分（Ｂ）は、ダービリア抽出物、ラズベリーケトン、アーティチョーク葉抽出物、ローズマリー抽出物、イソフラボン、ブドウ種子抽出物、松樹皮抽出物、コレウス・フォルスコリ抽出物、及びカカオ抽出物からなる群より選ばれる１種以上であればよく、２種以上の組み合わせであってもよい。２種以上の場合には、コレウス・フォルスコリ抽出物、ダービリア抽出物及びローズマリー抽出物から選ばれる群の１種又は２種以上を含む組み合わせが好ましい。より好ましい組み合わせは以下の通りである：コレウス・フォルスコリ抽出物とダービリア抽出物との組み合わせ；コレウス・フォルスコリ抽出物とローズマリー抽出物との組み合わせ；ダービリア抽出物とローズマリー抽出物との組み合わせ；コレウス・フォルスコリ抽出物とダービリア抽出物とローズマリー抽出物との組み合わせ。

成分（Ｂ）の配合量は、１日あたりのヒトの摂取量として、通常０．０１ｍｇ〜５０ｇ／ｄａｙであり、望ましくは、０．１ｍｇ〜１０ｇ／ｄａｙであり、更に望ましくは、１ｍｇ〜１，０００ｍｇ／ｄａｙである。この範囲であることにより、脂肪分解促進効果が顕著に優れた脂肪分解促進組成物が得られる。また、該組成物のコスト、安全性等の面でも問題がない。なお、成分（Ｂ）を２種類以上用いる場合、２種類以上の合計の配合量が上記成分（Ｂ）の配合量である。

成分（Ａ）と成分（Ｂ）の配合比は、１日あたりのヒトの摂取量として、通常１０：１〜１：１０であり、望ましくは５：１〜１：５であり、更に望ましくは３：１〜１：３である。この範囲であることにより、脂肪分解促進効果が顕著に優れた脂肪分解促進組成物が得られる。

本発明の脂肪分解促進組成物は、脂肪の分解を促進する。本発明において脂肪の分解を促進する、とは、生体における脂肪の分解の程度（速度、量など）が通常よりも増加することを意味する。

本発明の脂肪分解促進組成物が脂肪の分解を促進することの確認は、例えば、実施例のようにして行うことができる。すなわち、ラット腸間膜組織から調製した前駆脂肪細胞に対して試料を添加し、グリセロールを定量する。定量にはＦ−キットグリセロール（ロシュ社製、製品番号：１４８２０）等の市販キットを用いてもよい。得られるグリセロールの量が試料を添加しなかった場合のグリセロールの量と比較して多い場合には、脂肪の分解を促進したことが確認できる。

本発明の脂肪分解促進組成物の対象は特には限定されない。ヒト又はヒト以外の脊椎動物に対し有用である。対象であるヒト又はヒト以外の脊椎動物の健康状態についても特に問わない。例えば、肥満気味と感じている対象者、減量を希望している対象者、高血圧、高血糖、高脂血症などの生活習慣病の予防を希望している対象者に適している。特段の問題のない対象者であっても脂肪分解促進を目的として日常的に摂取することができる。

本発明の脂肪分解促進組成物には、有効成分としての上記成分（Ａ）及び（Ｂ）のほかに、薬学的に許容される担体が配合され得る。薬学的に許容される担体としては、例えば油性成分、滑沢剤、賦形剤、結合剤、崩壊剤、コーティング剤などが挙げられる。また、甘味剤、酸味剤、香味剤、着色剤、色素、発色剤、矯味剤、酸化防止剤、防腐剤、呈味剤、強化剤、ビタミン剤、膨張剤、増粘剤、界面活性剤等の添加物を適宜、適量含有してもよい。

油性成分としては、各種脂肪酸エステル、炭化水素、高級脂肪酸、高級アルコール等が例示される。滑沢剤としては、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸、フマル酸ステアリルナトリウム、ショ糖脂肪酸エステル、ポリエチレングリコール（マクロゴール）、タルク等が例示される。

結合剤としては、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、メチルセルロース、ゼラチン、デンプン、デキストリン、アラビアゴム、アルギン酸ナトリウム、トラガント、精製ゼラチン、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、メチルセルロース、ポリビニルアルコール（部分けん化物）、エチルセルロース、プルラン、ポリエチレングリコール（マクロゴール）等が例示される。

崩壊剤としては、カルボキシメチルセルロースカルシウム（カルメロースカルシウム）、カルボキシメチルセルロースナトリウム（カルメロースナトリウム）、低置換度ヒドロキシプロピルセルロース、カルボキシメチルセルロース、カルボキシメチルスターチナトリウム、架橋型カルボキシメチルセルロースナトリウム（クロスカルメロースナトリウム）、粉末セルロース、セルロース又はその誘導体、架橋型ポリビニルピロリドン（クロスポピドン）、デンプン、カルボキシメチルスターチ、ヒドロキシプロピルスターチ、寒天等が例示される。

賦形剤としては、下記の化合物が例示される：
結晶セルロース、アルギン酸ナトリウム、キサンタンガム等の多糖類；
α化デンプン、ヒドロキシプロピルスターチ、コーンスターチ、ポテトスターチ等のスターチ及びその誘導体；
ショ糖、グルコース、キシリトール、エリスリトール、ソルビトール、ラクチトール、トレハロース、パラチノース、パラチニット（還元パラチノース）、マンニトール、マルチトール、ラクチトール、乳糖、果糖、粉末還元麦芽糖水飴等の糖類及び糖アルコール類；
粉末セルロース、部分α化デンプン、エチルセルロース等のセルロース及びその誘導体；
軽質無水ケイ酸、酸化チタン、水酸化アルミニウムゲル、合成ケイ酸アルミニウム、三ケイ酸アルミニウム、二酸化ケイ素、カオリン、カカオ脂、クエン酸又はその塩、ステアリン酸又はその塩、リン酸水素カルシウム、リン酸水素ナトリウム。

甘味料としては、アスパルテーム、アセスルファムカリウム、サッカリンナトリウム、スクラロース、ステビア、ソーマチン等が例示される。酸味料としては、クエン酸、コハク酸、酒石酸、リンゴ酸、フマル酸等が例示される。香味剤としては、メントール、カンフル、ボルネオール、リモネン等のモノテルペン類、各種香料等が例示される。

本発明の脂肪分解促進組成物の投与形態は特に限定されない。例えば、経口投与（例えば、口腔内投与、舌下投与など）、非経口投与（静脈内投与、筋肉内投与、皮下投与、経皮投与、経鼻投与、経肺投与など）などが挙げられる。これらの中でも侵襲性の少ない投与形態が好ましく、経口投与であることがより好ましい。

本発明の脂肪分解促進組成物の剤型は、特に限定されず、投与形態に応じて適宜選択され得る。経口投与される際の剤形の例としては、液状（液剤）、シロップ状（シロップ剤）錠剤（タブレットなど）、カプセル状（カプセル剤）、粉末状（顆粒、細粒）、ソフトカプセル状（ソフトカプセル剤）、液状（液剤）、シロップ状（シロップ剤）、固形状、半液体状、クリーム状、ペースト状等が挙げられる。

脂肪分解促進組成物の製造方法は、特に限定されず、剤型に合わせて適宜選択され得る。例えば剤型がタブレットの場合、ラクトフェリン及び必要に応じて配合され得る任意の成分を混合した後、得られる混合物を圧縮成形してタブレットを得る方法、さらに上記のように圧縮成形後に得られるタブレットを腸溶性成分によりコーティングする方法（腸溶剤とする方法）、が挙げられ、後者の方法が好ましい。腸溶性成分としては、シェラック、ヒドロキシメチルセルロースフタレート、カルボキシメチルセルロース、アミノアルキルメタアクリレートコポリマー、ビール酵母細胞壁（例えば、商品名イーストラップなど）、タピオカデンプン、ゼラチン、ペクチン等が挙げられ、中でもシェラックが好ましい。なお、腸溶剤であるか否かは、第１４改正日本薬局方崩壊試験法により確認可能である。

本発明の脂肪分解促進組成物は、脂肪の分解に対し優れた促進効果を示す。よって、肥満の予防、治療のために有効である。本発明の脂肪分解促進組成物によれば、内臓脂肪の減少効果が期待できるので、高血圧、高血糖、高脂血症などの生活習慣病の予防、治療を効率的に図ることができると期待される。

経口投与の場合の投与方法は、成分（Ａ）及び（Ｂ）の各配合濃度、剤型、投与対象者の年齢、体重、性別、運動前に服用する場合には運動の負荷などの条件により適宜定めることができる。例えば剤型がタブレットの場合、水等と一緒に服用することが好ましい。投与間隔は適宜定めることができ、食事の前、食事の後、及び食間のいずれであってもよい。

なお、本発明の脂肪分解促進組成物の投与の他に、１種又は２種以上の他の脂肪分解促進剤又は組成物の投与を組み合わせてもよい。或いは、本発明の脂肪分解促進組成物として、成分（Ａ）及び（Ｂ）の組み合わせ以外に、他の脂肪分解促進効果を有する成分を１種又は２種以上含めた形の組成物としてもよい。

ヒト又はヒト以外の脊椎動物に対して脂肪分解促進組成物を与えることにより、脂肪の分解が促進され得る。よって本発明の脂肪分解促進剤は医薬、医薬部外品としても有用である。

ここで、脂肪分解促進組成物の摂取時期は、特には限定されない。例えば、食事の前後に摂取することもできるし、運動の前後に摂取することもできる。

以下に、本発明を実施例に基づいて詳細に説明する。なお、これらの実施例により本発明が限定されることはない。

実験例１〜９及び比較実験例１〜４
・ラット腸間膜脂肪細胞の調製
ＳＤラット（オス、１０週齢、日本エスエルシー（株））を２匹用いた。エーテル麻酔下でラットを安楽死させて解剖し、腸間膜脂肪組織を摘出した。摘出組織を滅菌シャーレに入れ、１％の抗生物質（Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃ−ＡｎｔｉｍｙｃｏｔｉｃＳｔａｂｉｌｉｚｅｄ、シグマ社製、Ａ５９５５）を添加した氷冷生理食塩水（大塚生食注、大塚製薬（株））に浸し、血液及び毛を洗浄（毛が見えなくなるまで液を変えて数回洗浄）し、リンパの除去を行った。眼科鋏にて組織の切断（組織１ｇに対して２５回切断）を行い、１ｍｇ／ｍＬのコラゲナーゼ（放線菌由来ＣｏｌｌａｇｅｎａｓｅＳ−１、新田ゼラチン（株））を添加したＰＢＳ溶液で、３７℃４０分間、数分おきに攪拌しながら組織を分散した。目安として１匹分の組織を２０ｍＬコラゲナーゼ溶液で処理した。

１００μｍのポアサイズのセルストレーナー（ＢＤＦａｌｃｏｎ社製、ＲＥＦ３５２３６０）で濾過後，ＤＭＥＭ（Ｄｕｌｂｅｃｃｏ’ｓＭｏｄｉｆｉｅｄＥａｇｌｅ’ｓＭｅｄｉｕｍ−ｈｉｇｈｇｌｕｃｏｓｅ、シグマ社製、Ｄ５７９６）をそれぞれ２０ｍＬ添加して液の粘性を下げ、８００ｒｐｍ、１０分間遠心分離を行った。上層の油層をアスピレーターで除去後、再度懸濁し７０μｍポアサイズのセルストレーナー（ＢＤＦａｌｃｏｎ社製、ＲＥＦ３５２３５０）で濾過した。８００ｒｐｍで１５分間遠心し、上清に浮遊細胞がないこと及びペレットを確認し上清を除去した。沈殿を各々５ｍＬＤＭＥＭ（無血清）で懸濁し、８００ｒｐｍで１５分間遠心し上清を除去した。

得られた沈殿物を、５ｍＬの内臓脂肪分化用培地（ＶｉｓｃｅｒａｌＡｄｉｐｏｃｙｔｅＣｕｌｔｕｒｅＭｅｄｉｕｍ２５０ｍＬ、プライマリーセル（株）製、ｃｏｄｅ：ＶＡＣＭＲ）にて静かに懸濁した。１０倍希釈して細胞数をカウントした結果、濃度１．０１５×１０⁷ｃｅｌｌｓ／ｍＬであった。ラット１匹から、２．５４×１０⁷ｃｅｌｌｓ回収できた。６×１０⁶ｃｅｌｌｓ／２４ｗｅｌｌとなるように、それぞれの培地で５００μＬ／ｗｅｌｌで培養を開始した。翌日、培地を５００μＬ添加し、培地交換を２日ごとに行った。その後は、１日おきに培地交換を行い、開始６日後に各種サンプルを含む培地に培地交換した。添加４８時間後に培養上清を回収、培養を終了した。すべての培養において細胞障害性のないことを目視にて確認した。

・試料の調製
各実験例及び比較実験例で用いる試料を調製した。試料の成分としては、ラクトフェリン（ＤＭＶ製）、ラズベリーケトン（高砂香料工業株式会社製）、アーティチョーク葉抽出物（一丸ファルコス株式会社製、商品名バイオベネフィティＦ）、カカオ抽出物（オリザ油化製、カカオエキス−Ｐ）、ブドウ種子抽出物（キッコーマン株式会社製、商品名グラヴィノール）、松樹皮抽出物（ＥｎｚｏＮｕｔｒａｃｅｕｔｉｃａｌｓＬｉｍｉｔｅｄ製、エンゾジノール）、コレウス・フォルスコリ抽出物（ＮａｔｕｒａｌＲｅｍｅｄｉｅ社製）、ダービリア抽出物、ローズマリー抽出物（ライオン株式会社製、商品名レオミール）、大豆イソフラボンアグリコン（キッコーマン株式会社製）、ショウガエキス（日本粉末薬品株式会社製）、エピガロカテキンガレート（和光純薬工業株式会社製）、クロロゲン酸（和光純薬工業株式会社製）を用いた。アーティチョーク葉抽出物として用いたバイオベネフィティＦは、賦形剤としてデキストリンを７０質量％含むが、表１に示すアーティチョーク葉抽出物の配合量は、該賦形剤を除いて換算した数値である。

ダービリア抽出物は、以下の条件で抽出した。ダービリアの乾燥物１０ｇを２０倍量の含水エタノール（アルコール／水＝３０／７０（Ｖ／Ｖ））にて３時間撹拌し、その上澄みを溶媒留去することにより、ダービリア抽出物を得た。

ラクトフェリンの濃度を３０ｐｐｍ及び１０ｐｐｍに調整し、それぞれの濃度での単独評価用の試料とした（比較実験例１）。ラクトフェリン以外の各成分は下記のとおり単独評価用の試料として用いた。また、ラクトフェリン以外の各成分とラクトフェリンとを、それぞれ下記の濃度に調整して混合し、複合評価用の試料として用いた（実験例１〜９及び比較実験例２〜４）。
（単独評価用の試料）
・ラクトフェリン以外の各成分３０ｐｐｍ
・ラクトフェリン以外の各成分１０ｐｐｍ
（複合評価用の試料（＋ラクトフェリン３０ｐｐｍ））
・ラクトフェリン以外の各成分３０ｐｐｍ＋ラクトフェリン３０ｐｐｍ
・ラクトフェリン以外の各成分１０ｐｐｍ＋ラクトフェリン３０ｐｐｍ
（複合評価用の試料（＋ラクトフェリン１０ｐｐｍ））
・ラクトフェリン以外の各成分３０ｐｐｍ＋ラクトフェリン１０ｐｐｍ
・ラクトフェリン以外の各成分１０ｐｐｍ＋ラクトフェリン１０ｐｐｍ

・グリセロール濃度の定量
グリセロールの定量は、Ｆ−キットグリセロール（ロシュ社製、製品番号：１４８２０）を用いて行った。吸光度の測定は、ＮｏｖａｓｐｅｃＰｌｕｓ（ＡｍｅｒｓｈａｍＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ社製）で行った。蒸留水１１ｍＬに溶解した溶液Ｉ１．０ｍＬ、蒸留水２．０ｍＬ、上述した各試料０．１ｍＬ、溶液ＩＩ０．０１ｍＬを加えた。よく混和し、５分間室温で反応させ、ＡＢ３４０ｍｍの吸光度（Ｅ１）を測定した。そこに溶液ＩＩＩ０．０１ｍＬを加え、よく混和した。７分間室温で反応させ、吸光度（Ｅ２）を測定した。Ｓｔａｎｄａｒｄは、キット付属の標準液を用いた。

測定した吸光度を元に、付属の取扱説明書に従って、以下の計算式１でグリセロール濃度を計算した。

（計算式１）
グリセロール[ｇ／Ｌ]＝
Ｖ×ＭＷ／ε×ｄ×ｖ×１０００×δＥ×希釈率
δＥ＝（Ｅ２−Ｅ１）サンプル−（Ｅ２−Ｅ１）ブランク
Ｖ（反応液量）：３．０２ｍＬ
ＭＷ（分子量）：９２．１
ｄ（光路長）：１ｃｍ
ε（吸光係数）：６．３（１×ｍｍｏｌ^-１×ｃｍ^-１）
ｖ（検体量）：０．１ｍＬ

（計算式１に基づくグリセロール濃度の算出）
グリセロール［ｇ／Ｌ］
＝３．０２×９２．１／６．３×１×０．１×１０００×δＥ
＝０．４４１×δＥ×希釈率

各実験例及び比較例のグリセロール量の、無添加群のグリセロール量を０％としたときの相対値（％）を算出し、該相対値を脂肪分解促進率として表記した。各実験例及び比較実験例の脂肪分解促進率を表１−１（単独評価）、表１−２（複合評価（ラクトフェリン３０ｐｐｍとの組み合わせ））、表１−３（複合評価（ラクトフェリン１０ｐｐｍとの組み合わせ））に示す。

＜結果＞
表１に示すように、実験例１〜９における複合評価の脂肪分解促進率は、各成分の濃度に相当する単独評価における脂肪分解促進率を足し合わせた数値よりも上回っていた。

一例を挙げると、比較実験例１のラクトフェリン１０ｐｐｍの単独評価における脂肪分解促進率１２．１％（表１−１）と実験例９のイソフラボン１０ｐｐｍの単独評価における脂肪分解促進率０％とを加算した数値よりも、実験例９の複合評価（イソフラボン１０ｐｐｍ＋ラクトフェリン１０ｐｐｍ：表１−３）における脂肪分解促進率３２％が上回っていた。他の例を挙げると、ラズベリーケトン（実験例１）及び松樹皮抽出物（実験例５）は、それぞれ１０ｐｐｍの単独評価では脂肪分解をむしろ阻害するが、それぞれにラクトフェリン１０ｐｐｍを組み合わせた場合には、ラクトフェリン１０ｐｐｍ単独の場合よりも優れた、予想外の分解促進効果を示した（表１−３）。

一方、比較実験例２の各複合評価における脂肪分解促進率は、比較実験例２の単独評価における脂肪分解促進率と比較実験例１の単独評価における脂肪分解促進率を加算した数値を下回っていた。比較実験例３及び４においても、実験例１〜９のような顕著な相乗効果は観察されなかった。

これらの結果は、本発明における成分（Ａ）と成分（Ｂ）を組み合わせることにより相乗効果が発揮され、予想外に顕著な脂肪分解促進作用が発揮されることを示している。

実験例１０〜１３及び比較実験例５〜７
試料として表２に示す組み合わせを用いたほかは、実験例１と同様に脂肪分解促進率を評価した。結果を表２に示す。

表２から明らかな通り、実験例１０〜１３の脂肪分解促進率は、各実験例を構成する各成分の単独評価における脂肪分解促進率（表１−１参照）を加算した数値を大きく上回っていた。これに対し、比較実験例５〜７の脂肪分解促進率は、各実験例を構成する各成分の単独評価における脂肪分解促進率（表１−１参照）を加算した数値を下回っていた。

これらの結果は、本発明の組成物において、成分（Ｂ）は２種類以上の組み合わせであっても成分（Ｂ）が１種類の場合と同様に、成分（Ａ）及び成分（Ｂ）の相乗効果が発揮され、予想外に顕著な脂肪分解促進作用が発揮されることを示している。

Claims

（Ａ）ラクトフェリンと、
（Ｂ）ダービリア抽出物、ラズベリーケトン、アーティチョーク葉抽出物、イソフラボン、コレウス・フォルスコリ抽出物、及びカカオ抽出物からなる群より選ばれる１種以上の成分と
を含有する脂肪分解促進用組成物。
成分（Ａ）と成分（Ｂ）の含有比は１０：１〜１：１０である、請求項１に記載の脂肪分解促進用組成物。