JP2006298911A - 歯周病に起因する高脂血症改善剤及びスクリーニング方法 - Google Patents
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Abstract
【解決手段】ラクトフェリンと、松樹皮及びその抽出物、ローズバッツ及びその抽出物、コウボク及びその抽出物、オウバク及びその抽出物、シュクシャ及びその抽出物、ビャクシ及びその抽出物、ライチ種子及びその抽出物、黒米及びその抽出物、キャッツクロー及びその抽出物、ブルーベリー及びその抽出物、ノブドウ及びその抽出物、カシス及びその抽出物、γ−オリザノール、ならびにポリリジンから選ばれる1種又は2種以上とからなる歯周病に起因する高脂血症改善剤。
【選択図】なし
Description
[1].ラクトフェリンと、松樹皮及びその抽出物、ローズバッツ及びその抽出物、コウボク及びその抽出物、オウバク及びその抽出物、シュクシャ及びその抽出物、ビャクシ及びその抽出物、ライチ種子及びその抽出物、黒米及びその抽出物、キャッツクロー及びその抽出物、ブルーベリー及びその抽出物、ノブドウ及びその抽出物、カシス及びその抽出物、γ−オリザノール、ならびにポリリジンから選ばれる1種又は2種以上とからなる歯周病に起因する高脂血症改善剤。
[2].[1]記載の高脂血症改善剤を含有する口腔用組成物。
[3].[1]記載の高脂血症改善剤を含有する食品。
[4].歯周病による高脂血症の改善剤。
[5].歯周病原因菌の内毒素の不活化剤である[4]記載の高脂血症改善剤。
[6].脂質代謝に関する酵素又は転写因子の遺伝子の発現量を制御する化合物である[4]又は[5]記載の高脂血症改善剤。
[7].[4]〜[6]のいずれか一つの高脂血症改善剤を含有する口腔用組成物。
[8].脂質代謝に関する酵素又は転写因子の遺伝子の発現量から歯周病に起因する高脂血症の改善剤をスクリーニングする方法。
[9].歯周病に起因する高脂血症を改善する有効成分のスクリーニング方法であって、歯周病菌の内毒素及び被験物質を腹腔内に投与したマウスより摘出した肝臓の下記(A)コレステロール合成酵素、(B)コレステロール分解酵素、(C)コレステロール合成酵素の転写因子、(D)中性脂肪分解酵素、(E)脂肪酸分解酵素、及び(F)脂肪酸分解酵素の転写因子からなる群から選ばれる蛋白質の遺伝子発現量を測定し、この発現量と被験物質を投与しない場合の発現量とを比較し、歯周病菌の内毒素の投与により増加する(A)もしくは(C)遺伝子の発現量が減少する物質、又は歯周病菌の内毒素の投与により減少する(B)、(D)、(E)もしくは(F)遺伝子の発現量が増加する物質を、前記高脂血症を改善する有効成分として選択するスクリーニング方法。
(A)3−ヒドロキシ−3−メチルグルタリル−コエンザイムA シンターゼ1、3−ヒドロキシ−3−メチルグルタリル−コエンザイムA レダクターゼ、メバロネート(ジホスホ)デカルボキシラーゼ、イソペンテニル−ジホスフェート デルタ イソメラーゼ、スクワレン エポキシダーゼ、7−デヒドロコレステロール レダクターゼ
(B)シクロームP450,ファミリー7,サブファミリーA,ポリペプチド1、アルド−ケト レダクターゼ ファミリー1,メンバーD1(デルタ 4−3−ケトステロイド−5−ベータ−レダクターゼ)、アルド−ケト レダクターゼ ファミリー1,メンバーC4(クロルデコン レダクターゼ;3−アルファ ヒドロキシステロイドデヒドロゲナーゼ、タイプ1;ジヒドロジオール デヒドロゲナーゼ4)、シトクロームP450,ファミリー27,サブファミリーA,ポリペプタイド1、アシル−コエンザイムA デヒドロゲナーゼ ファミリー,メンバー8、ロイコトリエンB4 12−ヒドロキシデヒドロゲナーゼ
(C)SREBP2
(D)リソソーマル アシッド リパーゼ1、リパーゼ,エンドセリアル、リポプロテイン リパーゼ、モノグリセリド リパーゼ
(E)脂肪酸CoA リガーゼ2、カルニチン/アシルカルニチン トランスロカーゼ、アシルCoA デヒドロゲナーゼ,ロングチェーン、アシルCoA デヒドロゲナーゼ,ショートチェーン、2,4−ジエノイルCoA レダクターゼ、デルタ イソメラーゼ、エノイル−CoA ヒドラターゼ、ショートチェーン 3−ヒドロキシアシルCoA デヒドロゲナーゼ
(F)PPARα
3−ヒドロキシ−3−メチルグルタリル−コエンザイムA シンターゼ 1
3−ヒドロキシ−3−メチルグルタリル−コエンザイムA レダクターゼ
メバロネート(ジホスホ)デカルボキシラーゼ
イソペンテニル−ジホスフェート デルタ イソメラーゼ
スクワレン エポキシダーゼ
7−デヒドロコレステロール レダクターゼ
シクロームP450,ファミリー7,サブファミリーA,ポリペプチド1
アルド−ケト レダクターゼ ファミリー1,メンバーD1
(デルタ 4−3−ケトステロイド−5−ベータ−レダクターゼ)
アルド−ケト レダクターゼ ファミリー1,メンバーC4
(クロルデコン レダクターゼ;3−アルファ ヒドロキシステロイドデヒドロゲナー ゼ、タイプ1;ジヒドロジオール デヒドロゲナーゼ4)
シトクローム P450,ファミリー27,サブファミリーA,ポリペプタイド1
アシル−コエンザイムA デヒドロゲナーゼ ファミリー,メンバー8
ロイコトリエン B4 12−ヒドロキシデヒドロゲナーゼ
SREBP2
リソソーマル アシッド リパーゼ1
リパーゼ,エンドセリアル
リポプロテイン リパーゼ
モノグリセリド リパーゼ
脂肪酸CoA リガーゼ2
カルニチン/アシルカルニチン トランスロカーゼ
アシルCoA デヒドロゲナーゼ,ロングチェーン
アシルCoA デヒドロゲナーゼ,ショートチェーン
2,4−ジエノイルCoA レダクターゼ
デルタ イソメラーゼ
エノイル−CoA ヒドラターゼ
ショートチェーン 3−ヒドロキシアシルCoA デヒドロゲナーゼ
PPARα
1)歯周病菌の内毒素(LPS)の不活化剤。
2)歯周病菌の内毒素の投与により変動する脂質代謝に関する酵素、又は転写因子の遺伝子の発現量を制御する物質。
3)歯周病菌の内毒素の投与により増加する(A)コレステロール合成酵素もしくは(C)コレステロール合成酵素の転写因子の遺伝子発現量を減少させる物質、又は歯周病菌の内毒素の投与により減少する(B)コレステロール分解酵素、(D)中性脂肪分解酵素、(E)脂肪酸分解酵素もしくは(F)脂肪酸分解酵素の転写因子の遺伝子発現量を増加させる物質。
コウボク抽出物
コウボク(厚朴)は、ホオノキの樹皮を乾燥、粉砕して粗末とし、この粗末10gをエタノール100mLに浸漬し、室温で5日間抽出した。残渣をろ別して得られた抽出液を減圧濃縮して抽出物を得た。
オウバク抽出物
オウバク(黄柏)は、キハダの樹皮を乾燥、粉砕して粗末とし、この粗末10gをエタノール100mLに浸漬し、室温で5日間抽出した。残渣をろ別して得られた抽出液を減圧濃縮して抽出物を得た。
シュクシャ抽出物
シュクシャ(縮砂)は、果実を乾燥、粉砕して粗末とし、この粗末10gをエタノール100mLに浸漬し、室温で5日間抽出した。残渣をろ別して得られた抽出液を減圧濃縮して抽出物を得た。
ビャクシ抽出物
ビャクシ(白止)はヨロイグサの根を乾燥、粉砕して粗末とし、この粗末10gをエタノール100mLに浸漬し、室温で5日間抽出した。残渣をろ別して得られた抽出液を減圧濃縮して抽出物を得た。
(1)供試動物:C57BL/6Jマウス(オス、日本エスエルシー、5週齢、体重18〜20g)各群、N=5で実施した。
投与LPS種:主要な歯周病原因菌であるポルフィロモナス・ジンジバリス(P.gingivalis:P.g.菌)又はアクチノバシラス・アクチノミセテムコミタンス(A.actinomycetemcomitans:A.a.菌)から抽出したLPS(Lipopolysaccharide)を内毒素として使用した。LPSの代わりに生理食塩水を投与したものを比較対照とした。
LPS:血清総コレステロール濃度、及び血清トリグリセライド濃度を測定する際には、LPS投与量は0.1、1.0、10.0μg/匹とした。また、Gene Chip解析の際には、LPS投与量は2.0μg/匹とした。
血中の中性脂肪濃度の測定:LPS投与16時間後に、血液をサンプリングし、血清中の中性脂肪濃度を(株)昭和メディカルサイエンスに測定依頼して、その結果を血中の中性脂肪濃度とした。
遺伝子発現量の解析:LPS投与から6時間後に肝臓を摘出した。各マウスの肝臓から 90mg程度を切り分け、各群5匹分をプールし、TORIZOL法(GIBCO社)にてRNAを抽出した。抽出後、RNeasy Mini Kit(QIAGEN社)にてDNase処理及び精製を行ない、逆転写酵素によってcDNAを合成した。遺伝子発現量の解析は、Gene Chip Mouse Expression Set430(Affymetrix社)あるいは定量的RT−PCR法により行った。
歯周病原因菌のLPS投与16時間後の血中総コレステロール濃度を測定した。その結果を表2に示す。歯周病原因菌のLPS投与により、生理食塩水投与群と比較して血中の総コレステロール濃度が15〜32%増加した。
歯周病原因菌のLPS投与16時間後の血中の中性脂肪量を測定した。その結果を表3に示す。歯周病原因菌(A.a.菌)のLPSを10.0μg投与すると、生理食塩水投与群と比較して血中の中性脂肪濃度が71%増加した。
Gene Chip解析を行って得られたデータの中から、コレステロール合成に関与する酵素、コレステロール分解に関与する酵素、コレステロール合成に関与する酵素の転写を制御する遺伝子の増減を表4にまとめた。
3−ヒドロキシ−3−メチルグルタリル−コエンザイムA シンターゼ 1
3−ヒドロキシ−3−メチルグルタリル−コエンザイムA レダクターゼ
メバロネート(ジホスホ)デカルボキシラーゼ
イソペンテニル−ジホスフェート デルタ イソメラーゼ
スクワレン エポキシダーゼ
7−デヒドロコレステロール レダクターゼ
シクロームP450,ファミリー 7,サブファミリー A,ポリペプチド 1
アルド−ケト レダクターゼ ファミリー 1,メンバー D1
(デルタ 4−3−ケトステロイド−5−ベータ−レダクターゼ)
アルド−ケト レダクターゼ ファミリー 1,メンバー C4
(クロルデコン レダクターゼ;3−アルファ ヒドロキシステロイドデヒドロゲナー ゼ、タイプ1;ジヒドロジオール デヒドロゲナーゼ4)
シトクローム P450,ファミリー 27,サブファミリーA,ポリペプタイド 1
アシル−コエンザイム A デヒドロゲナーゼ ファミリー,メンバー 8
ロイコトリエン B4 12−ヒドロキシデヒドロゲナーゼ
Gene Chip解析を行って得られたデータの中から、中性脂肪の分解に関与する酵素の遺伝子の増減を表5にまとめた。
(D)中性脂肪分解酵素
リソソーマル アシッド リパーゼ1
リパーゼ,エンドセリアル
リポプロテイン リパーゼ
モノグリセリド リパーゼ
脂肪酸CoA リガーゼ2
カルニチン/アシルカルニチン トランスロカーゼ
アシルCoA デヒドロゲナーゼ,ロングチェーン
アシルCoA デヒドロゲナーゼ,ショートチェーン
2,4−ジエノイルCoA レダクターゼ
デルタ イソメラーゼ
エノイル−CoA ヒドラターゼ
ショートチェーン 3−ヒドロキシアシルCoA デヒドロゲナーゼ
脂肪酸分解酵素の転写を促進する遺伝子(PPARα)
(1)供試動物:C57BL/6Jマウス(オス、日本エスエルシー、5週齢、体重18〜20g)各群、N=5で実施した。
投与LPS種:アクチノバシラス・アクチノミセテムコミタンス(A.actinomycetemcomitans:A.a.菌)から抽出したLPS(Lipopolysaccharide)を内毒素として使用した。LPSの代わりに生理食塩水を投与したものを比較対照とした。
LPS及び被験物質投与量:LPS10μgと被験物質12mgとを混合し37℃、30分間インキュベート後、マウスの腹腔内に投与した。ラクトフェリンとラクトフェリン以外の被験物質1種とを組み合わる場合には、LPS10μg、ラクトフェリン6mg、ラクトフェリン以外の被験物質6mg、ラクトフェリンとラクトフェリン以外の被験物質2種とを組み合わる場合には、LPS10μg、ラクトフェリン4mg、ラクトフェリン以外の被験物質をそれぞれ4mgとした。被験物質は表6に示したものを使用した。
表6に示す遺伝子の遺伝子発現量を試験例1と同様の方法で、遺伝子発現量を測定した。歯周病菌の内毒素の投与により増加する(A)もしくは(C)遺伝子は式(1)、歯周病菌の内毒素の投与により減少する(B)、(D)、(E)もしくは(F)遺伝子は式(2)に基づいて、発現改善率を算出し、下記評価基準で示した。結果を表7に示す。
◎:遺伝子発現改善率70%以上
○:遺伝子発現改善率50%以上
△:遺伝子発現改善率30%以上
×:遺伝子発現改善率30%未満
試験例1と同様の方法で、血中総コレステロール濃度の測定、血中の中性脂肪濃度の測定を行った。結果を表8に示す。
本発明の口腔用組成物及び食品の処方例を示す。各処方例は組成に従い、各剤型の常法に準じて調製した。
Claims (4)
- ラクトフェリンと、松樹皮及びその抽出物、ローズバッツ及びその抽出物、コウボク及びその抽出物、オウバク及びその抽出物、シュクシャ及びその抽出物、ビャクシ及びその抽出物、ライチ種子及びその抽出物、黒米及びその抽出物、キャッツクロー及びその抽出物、ブルーベリー及びその抽出物、ノブドウ及びその抽出物、カシス及びその抽出物、γ−オリザノール、ならびにポリリジンから選ばれる1種又は2種以上とからなる歯周病に起因する高脂血症改善剤。
- 請求項1記載の高脂血症改善剤を含有する口腔用組成物。
- 請求項1記載の高脂血症改善剤を含有する食品。
- 歯周病に起因する高脂血症を改善する有効成分のスクリーニング方法であって、歯周病菌の内毒素及び被験物質を腹腔内に投与したマウスより摘出した肝臓の下記(A)コレステロール合成酵素、(B)コレステロール分解酵素、(C)コレステロール合成酵素の転写因子、(D)中性脂肪分解酵素、(E)脂肪酸分解酵素、及び(F)脂肪酸分解酵素の転写因子からなる群から選ばれる蛋白質の遺伝子発現量を測定し、この発現量と被験物質を投与しない場合の発現量とを比較し、歯周病菌の内毒素の投与により増加する(A)もしくは(C)遺伝子の発現量が減少する物質、又は歯周病菌の内毒素の投与により減少する(B)、(D)、(E)もしくは(F)遺伝子の発現量が増加する物質を、前記高脂血症を改善する有効成分として選択するスクリーニング方法。
(A)3−ヒドロキシ−3−メチルグルタリル−コエンザイムA シンターゼ1、3−ヒドロキシ−3−メチルグルタリル−コエンザイムA レダクターゼ、メバロネート(ジホスホ)デカルボキシラーゼ、イソペンテニル−ジホスフェート デルタ イソメラーゼ、スクワレン エポキシダーゼ、7−デヒドロコレステロール レダクターゼ
(B)シクロームP450,ファミリー7,サブファミリーA,ポリペプチド1、アルド−ケト レダクターゼ ファミリー1,メンバーD1(デルタ 4−3−ケトステロイド−5−ベータ−レダクターゼ)、アルド−ケト レダクターゼ ファミリー1,メンバーC4(クロルデコン レダクターゼ;3−アルファ ヒドロキシステロイドデヒドロゲナーゼ、タイプ1;ジヒドロジオール デヒドロゲナーゼ4)、シトクロームP450,ファミリー27,サブファミリーA,ポリペプタイド1、アシル−コエンザイムA デヒドロゲナーゼ ファミリー,メンバー8、ロイコトリエンB4 12−ヒドロキシデヒドロゲナーゼ
(C)SREBP2
(D)リソソーマル アシッド リパーゼ1、リパーゼ,エンドセリアル、リポプロテイン リパーゼ、モノグリセリド リパーゼ
(E)脂肪酸CoA リガーゼ2、カルニチン/アシルカルニチン トランスロカーゼ、アシルCoA デヒドロゲナーゼ,ロングチェーン、アシルCoA デヒドロゲナーゼ,ショートチェーン、2,4−ジエノイルCoA レダクターゼ、デルタ イソメラーゼ、エノイル−CoA ヒドラターゼ、ショートチェーン 3−ヒドロキシアシルCoA デヒドロゲナーゼ
(F)PPARα
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