KR101189959B1 - 삼백초 추출물을 유효성분으로 포함하는 신장암 예방 또는 치료용 조성물 - Google Patents
삼백초 추출물을 유효성분으로 포함하는 신장암 예방 또는 치료용 조성물 Download PDFInfo
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Abstract
본 발명은 신장암의 예방 또는 치료용 조성물에 관한 것으로, 보다 구체적으로는 삼백초 추출물을 유효성분으로 포함하는 신장암 예방 또는 치료용 조성물 및 삼백초 추출물을 유효성분으로 포함하는 신장암 예방 또는 개선용 건강기능식품에 관한 것이다. 본 발명에 따른 삼백초 추출물은 암세포의 세포사멸을 유도하는 활성 또는 세포침투 또는 세포부착을 억제하여 암 전이를 억제하는 활성을 통해 신장암에 대해 우수한 항암효과를 갖는다. 또한, 본 발명의 삼백초 추출물은 천연물질로부터 추출된 것을 사용하여 생체 안정성이 우수하기 때문에 종래의 신장암 치료제들에 비해 독성으로 인한 각종 부작용을 유발하지 않으므로 신장암을 예방 또는 치료할 수 있는 치료제 및 기능성 식품의 제조에 유용하게 사용할 수 있다.
Description
본 발명은 삼백초 추출물을 유효성분으로 포함하는 신장암 예방 또는 치료용 조성물 및 삼백초 추출물을 유효성분으로 포함하는 신장암 예방 또는 개선용 건강보조식품에 관한 것이다.
신장은 생체의 항상성(homestasis)을 유지하는 중요한 장기로, 약 100만개의 네프론(nephron)이라는 기본구조로 이루어지며 하나의 네프론은 사구체라고 불리는 미세한 모세혈관 덩어리와 세뇨관으로 구성된다. 사구체에서의 여과, 세뇨관에서의 재흡수와 분비 과정을 통해 노폐물과 불필요하게 많은 수분 및 무기염류를 오줌으로 만들어 내보냄으로써, 체내 체액량, 혈액 내의 이온 농도와 pH를 조절하고, 대사성 노폐물, 독소, 약물 등의 노폐물을 배설하며, 혈압 조절 및 기타 대사성, 내분비 기능을 수행한다. 또한, 비타민 D를 활성화시켜서 소장에서 칼슘이 흡수되도록 도와주며 여러 가지 호르몬의 합성에도 관여한다.
한편, 신장암은 대부분 신장의 실질(신장에서 소변을 만드는 세포들이 모여 있는 부분으로 수질과 피질로 구성됨)에서 발생하는 신장세포 암을 말한다. 신장암은 60 ~ 70대의 노년층에서 주로 발생하고 지속적인 증가 추세를 보이고 있으며, 우리나라에서도 남성에서 발생하는 암 중 2.0%로 10위, 여성에서는 1.2%로 15위를 차지하고 있다.
신장암 발생의 위험인자는 환경적 요인, 기존 질병, 유전적 요인으로 나누어 볼 수 있다. 환경적 요인으로는 흡연 및 고혈압 등이 있으며, 특히 흡연은 적게는 30%, 많게는 2배 정도 암 발생률을 증가시키며 금연하면 발생률이 감소하는 것으로 알려져 있다. 또한 일반적으로 동물성 단백질과 지방은 적게, 과일과 채소는 많이 섭취함으로써 신장암을 예방할 수 있다고 알려져 있다.
또한, 기존 질병 요인으로는 장기간의 혈액투석 환자에서 암 발생 위험이 높아지며, 유전적 요인에는 몇 가지 염색체의 이상으로 인해 신장암이 발생하는 경우가 있다.
신장암은 종양의 크기가 작을 때는 증상이 거의 없으며, 종양이 어느 정도 커져서 장기를 밀어낼 정도가 되어야 비로소 증상이 나타난다. 따라서 진단이 늦어지는 경우가 많아 처음 진단될 때 환자의 30% 정도는 이미 전이된 상태로 나타나게 된다. 가장 흔한 증상은 혈뇨(hematuria)이지만 이것도 환자의 60%에서만 나타난다. 오히려 전이된 부위에 따라 호흡곤란, 기침, 두통 등의 증상이 나타나 이러한 전이 증상 때문에 신장암을 진단하게 되는 경우도 전체 환자의 30%에 이른다. 신장암은 특별히 암세포가 생산하는 특정 호르몬 때문에 고혈압, 고칼슘혈증, 간기능 이상 등을 일으킬 수 있기 때문에 이런 다른 증상을 검사하던 중 종양이 발견되는 경우도 있다. 그러나 최근에는 아무 증상 없이 건강진단을 받던 중 우연히 영상검사상에서 발견되는 경우가 많은데, 이런 경우는 주로 초기에 발견되기 때문에 치료 결과가 비교적 좋다.
한편, 신장암이 다른 기관으로 전이되지 않은 경우에는 신장과 그 주위 정상 조직을 광범위하게 절제하는 수술을 통해 치료하며, 종양이 크지 않은 경우에는 복강경을 이용하여 절제 수술을 하는 경우도 있다. 특별히 신장암이 다른 한 장기로만 전이된 경우에는 종양만을 제거하는 것이 도움이 되는 경우도 있다. 그 외의 치료 방법으로는 면역요법, 호르몬요법, 항암 화학요법, 방사선요법 등이 있지만, 치료 효과는 아직까지 크지 않은 것으로 알려져 있다.
이에 본 발명자들은 삼백초 추출물이 인간 신세포암 세포주에 대해서 항암활성이 있음을 확인함으로써 상기 삼백초 추출물을 신장암 예방 또는 치료제로 사용할 수 있음을 규명하였다.
따라서 본 발명의 목적은 삼백초 추출물을 유효성분으로 포함하는 신장암 예방 또는 치료용 조성물을 제공하는 것이다.
또한, 본 발명의 다른 목적은 삼백초 추출물을 유효성분으로 포함하는 신장암 예방 또는 개선용 건강보조식품을 제공하는 것이다.
상기 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 삼백초 추출물을 유효성분으로 포함하는 신장암 예방 또는 치료용 조성물을 제공한다.
본 발명의 일실시예에 있어서, 상기 삼백초 추출물은 물 또는 유기용매로 추출하여 수득한 것일 수 있다.
본 발명의 일실시예에 있어서, 상기 삼백초 추출물은 암세포의 세포사멸을 유도하는 활성 또는 세포침투 또는 세포부착을 억제하여 암 전이를 억제하는 활성을 갖는 것일 수 있다.
본 발명의 일실시예에 있어서, 상기 삼백초 추출물은 1 ~ 100 ㎍/㎖의 농도로 사용될 수 있다.
본 발명의 일실시예에 있어서, 상기 신장암은 신장세포암(kindney cell cancer), 그라비츠종양(Grawitz's tumor), 빌름스종양(Wilms tumor), 육종(sarcoma) 및 이행상피암(transitional cell carcinoma)으로 이루어진 군 중에서 선택될 수 있다.
또한, 본 발명은 삼백초 추출물을 유효성분으로 포함하는 신장암 예방 또는 개선용 건강기능식품을 제공한다.
본 발명에 따른 삼백초 추출물은 암세포의 세포사멸을 유도하는 활성 또는 세포침투 또는 세포부착을 억제하여 암 전이를 억제하는 활성을 통해 신장암에 대해 우수한 항암효과를 갖는다. 또한, 본 발명의 삼백초 추출물은 천연물질로부터 추출된 것을 사용하여 생체 안정성이 우수하기 때문에 종래의 신장암 치료제들에 비해 독성으로 인한 각종 부작용을 유발하지 않으므로 신장암을 예방 또는 치료할 수 있는 치료제 및 기능성 식품의 제조에 유용하게 사용할 수 있다.
도 1은 본 발명에 따른 일실시예에서 신세포암 유래 A498 세포주를 대상으로 본 발명의 삼백초 추출물을 처리하였을 때, 삼백초 추출물의 농도에 따른 세포생존률을 나타낸 것이다.
도 2는 본 발명에 따른 일실시예에서 신세포암 유래 A498 세포주를 대상으로 본 발명의 삼백초 추출물을 0, 25, 50㎍/㎖로 처리하였을 때, 세포의 수를 현미경으로 관찰한 결과를 나타낸 것이다.
도 3은 본 발명에 따른 일실시예에서 전이성 신세포암 유래 ACHN 세포주를 대상으로 본 발명의 삼백초 추출물을 처리하였을 때, 삼백초 추출물의 농도에 따른 세포생존률을 나타낸 것이다.
도 4는 본 발명에 따른 일실시예에서 전이성 신세포암 유래 ACHN 세포주를 대상으로 본 발명의 삼백초 추출물을 0, 25, 50㎍/㎖로 처리하였을 때, 세포의 수를 현미경으로 관찰한 결과를 나타낸 것이다.
도 5는 본 발명에 따른 일실시예에서 A498 세포주를 대상으로 본 발명의 삼백초 추출물을 0, 25, 50㎍/㎖로 처리하였을 때, 세포사멸(apoptosis) 분석 결과를 나타낸 것이다.
도 6은 본 발명에 따른 일실시예에서 ACHN 세포주를 대상으로 본 발명의 삼백초 추출물을 0, 25, 50㎍/㎖로 처리하였을 때, 세포사멸(apoptosis) 분석 결과를 나타낸 것이다.
도 7은 본 발명에 따른 일실시예에서 A498 세포주를 대상으로 본 발명의 삼백초 추출물을 0, 25, 50㎍/㎖로 처리하였을 때, 세포침투(cell invasion) 능력의 분석 결과를 나타낸 것이다.
도 8은 본 발명에 따른 일실시예에서 ACHN 세포주를 대상으로 본 발명의 삼백초 추출물을 0, 25, 50㎍/㎖로 처리하였을 때, 세포침투(cell invasion) 능력의 분석 결과를 나타낸 것이다.
도 2는 본 발명에 따른 일실시예에서 신세포암 유래 A498 세포주를 대상으로 본 발명의 삼백초 추출물을 0, 25, 50㎍/㎖로 처리하였을 때, 세포의 수를 현미경으로 관찰한 결과를 나타낸 것이다.
도 3은 본 발명에 따른 일실시예에서 전이성 신세포암 유래 ACHN 세포주를 대상으로 본 발명의 삼백초 추출물을 처리하였을 때, 삼백초 추출물의 농도에 따른 세포생존률을 나타낸 것이다.
도 4는 본 발명에 따른 일실시예에서 전이성 신세포암 유래 ACHN 세포주를 대상으로 본 발명의 삼백초 추출물을 0, 25, 50㎍/㎖로 처리하였을 때, 세포의 수를 현미경으로 관찰한 결과를 나타낸 것이다.
도 5는 본 발명에 따른 일실시예에서 A498 세포주를 대상으로 본 발명의 삼백초 추출물을 0, 25, 50㎍/㎖로 처리하였을 때, 세포사멸(apoptosis) 분석 결과를 나타낸 것이다.
도 6은 본 발명에 따른 일실시예에서 ACHN 세포주를 대상으로 본 발명의 삼백초 추출물을 0, 25, 50㎍/㎖로 처리하였을 때, 세포사멸(apoptosis) 분석 결과를 나타낸 것이다.
도 7은 본 발명에 따른 일실시예에서 A498 세포주를 대상으로 본 발명의 삼백초 추출물을 0, 25, 50㎍/㎖로 처리하였을 때, 세포침투(cell invasion) 능력의 분석 결과를 나타낸 것이다.
도 8은 본 발명에 따른 일실시예에서 ACHN 세포주를 대상으로 본 발명의 삼백초 추출물을 0, 25, 50㎍/㎖로 처리하였을 때, 세포침투(cell invasion) 능력의 분석 결과를 나타낸 것이다.
본 발명은 삼백초 추출물의 신규 용도에 관한 것으로서, 삼백초 추출물을 유효성분으로 포함하는 신장암의 예방 또는 치료용 조성물을 제공함에 그 특징이 있다.
본 발명의 “삼백초(Saururus chinensis)”는 쌍떡잎식물 후추목 삼백초과(Saururaceae)에 속하는 다년생초본으로서, 울릉도와 제주도 서북 지역의 물가나 습지에서 서식하며, 국외로는 일본, 중국, 필리핀에 분포한다. 뿌리줄기는 흰색이고 진흙 속에서 옆으로 벋어나가며, 줄기는 높이가 50 ～ 100cm이다. 잎은 어긋나고 달걀 모양의 타원형이며 길이가 5 ～ 15cm이고 끝이 뾰족하며 밑 부분이 심장 모양이고 5 ～ 7개의 맥이 있으며 가장자리가 밋밋하다. 잎 표면은 녹색이고 뒷면은 연한 흰색이지만, 줄기 윗부분에 있는 2 ～ 3개의 잎은 표면이 흰색이다. 꽃이 필 때 윗부분의 2 ~ 3개의 잎, 꽃 및 뿌리가 희기 때문에 삼백초라고 한다. 전초에는 정유가 함유되어 있으며, 그 주성분은 퀘르세틴(quercetin), 퀘르시트린(quercitrin), 이소퀘르시트린(isoquercitrin), 루틴(rutin) 및 수용성 탄닌(tannin) 등이며, 해독, 소종, 소변불리, 간염, 황달 등의 치료에 이용된다. 삼백초의 주성분인 퀘르세틴 및 퀘르시트린은 플라보노이드(flavonoid)의 일종으로 플라보놀(flavonol) 계통에 속하며, 이는 과일이나 채소류에 많이 들어있는 성분으로 알려져 있다. 퀘르세틴의 약리작용으로는 과산화지질 형성 억제작용, 항바이러스, 항 돌연변이 작용, 발암성 물질의 활성감소, 변이 암세포의 생육저해, 혈압 강하, 모세혈관 강화 작용 등이 알려져 있으며, 퀘르시트린은 항염증 및 진통 효과, 항산화 효과가 있다고 알려져 있다.
또한, 삼백초의 연구결과와 관련하여 삼백초 유래 항암활성 물질 동정 및 항암작용 메커니즘 규명과 삼백초로부터 간세포 보호 활성을 갖는 성분의 분리 및 동정 등과 같은 연구 결과가 있으나, 삼백초 잎 추출물의 신장암 치료 효과에 대해서는 전혀 개시되거나 보고된 바 없다.
이에 본 발명자들은 생체에 부작용이 없으면서도 우수한 항암 활성을 갖는 삼백초 추출물을 제조하여 약리학적 효과를 실험한 결과, 삼백초 추출물이 암세포의 세포사멸을 유도하는 활성과 세포침투 또는 세포부착을 억제하여 암 전이를 억제하는 활성을 통해 신장암을 예방 또는 치료할 수 있다는 사실을 최초로 규명하였다.
따라서 본 발명은 삼백초 추출물을 유효성분으로 포함하는 신장암의 예방 또는 치료용 조성물을 제공할 수 있다.
본 발명에 따른 삼백초 추출물은 당업계에 공지된 추출 및 분리하는 방법을 사용하여 천연으로부터 추출 및 분리하여 수득한 것을 사용할 수 있으며, 본 발명에서 정의되는“추출물”은 적절한 용매를 이용하여 삼백초로부터 추출한 것이며, 예를 들어, 삼백초의 조추출물, 극성용매 가용 추출물 또는 비극성용매 가용 추출물을 모두 포함한다. 바람직하게는 삼백초의 잎에서 추출한 추출물일 수 있다.
상기 삼백초로부터 추출물을 추출하기 위한 적절한 용매로는 약학적으로 허용되는 유기용매라면 어느 것을 사용해도 무방하며, 물 또는 유기용매를 사용할 수 있으며, 이에 제한되지는 않으나, 예를 들어, 정제수, 메탄올(methanol), 에탄올(ethanol), 프로판올(propanol), 이소프로판올(isopropanol), 부탄올(butanol) 등을 포함하는 탄소수 1 내지 4의 알코올, 아세톤(acetone), 에테르(ether), 벤젠(benzene), 클로로포름(chloroform), 에틸아세테이트(ethyl acetate), 메틸렌클로라이드(methylene chloride), 헥산(hexane) 및 시클로헥산(cyclohexane) 등의 각종 용매를 단독으로 혹은 혼합하여 사용할 수 있다. 보다 바람직하게는 에탄올(주정)을 사용할 수 있다.
추출 방법으로는 열수추출법, 냉침추출법, 환류냉각추출법, 용매추출법, 수증기증류법, 초음파추출법, 용출법, 압착법 등의 방법 중 어느 하나를 선택하여 사용할 수 있다. 또한, 목적하는 추출물은 추가로 통상의 분획 공정을 수행할 수도 있으며, 통상의 정제 방법을 이용하여 정제될 수도 있다. 삼백초 추출물의 제조방법에는 제한이 없으며, 공지되어 있는 어떠한 방법도 이용될 수 있다.
본 발명의 일실시예에 따른 삼백초 추출물을 제조하는 방법을 조금 더 구체적으로 살펴보면 다음과 같다.
본 발명에서는 삼백초를 건조시키고 분말화한 후, 삼백초 시료 중량의 약 5 ~ 15배에 달하는 탄소수 1 내지 4의 저급 알코올, 바람직하게는 에탄올(주정)로 20 ~ 25℃에서 10 ~ 15시간 동안 추출한다. 이때, 삼백초로는 삼백초 잎을 동결 건조하여 마쇄한 분말을 사용하는 것이 바람직하다.
상기와 같은 주정 추출물을 감압 여과하여 추출액과 잔사를 분리하고, 다시 삼백초 시료 중량의 약 1 ~ 10배에 달하는 탄소수 1 내지 4의 저급 알코올, 바람직하게는 에탄올(주정)로 20 ~ 25℃에서 4 ~ 8시간 동안 추출한다. 다음으로 여과 및 감압 농축과정을 거쳐 삼백초 추출물을 획득한다.
본 발명에서는 2번의 추출 과정을 통해 항암 효과가 우수한 삼백초의 용매추출 분획을 제조하는 것을 특징으로 한다.
상기 삼백초는 오랫동안 생약 및 식용으로 사용되어 오던 약재로서 이들로부터 추출된 본 발명의 추출물 역시 독성 및 부작용 등의 문제가 없다.
또한, 본 발명의 삼백초 추출물은 1 ~ 100 ㎍/㎖의 농도로 사용될 수 있다.
한편, 본 발명에서 상기“신장암”이란, 신장에서 발생하는 종양을 모두 의미하며, 이에 제한되는 것은 아니나 본 발명에서 신장에 발생하는 종양의 종류로는 성인에게서 주로 발생하는 신장세포암(kindney cell cancer) 및 그라비츠종양(Grawitz's tumor), 소아에게서 주로 발생하는 빌름스종양(Wilms tumor), 드물게 발생하는 육종(sarcoma), 신우에 생기는 암으로서 이행상피암(transitional cell carcinoma) 등을 포함할 수 있다.
상기 그라비츠종양(Grawitz's tumor)은 성인에게서 발생하는 대표적인 신장에 생기는 악성종양으로, 부신종 또는 부신상종이라고도 하며, 병리조직학적으로 부신피질과 흡사한 구조를 보이는 것이 보통이다. 60 ~ 70세에 호발하며 남녀의 발생비는 3:1로 남자에게서 많은 것으로 보고되고 있다. 주요 증세는 혈뇨, 신장의 종창(腫脹), 신장부의 동통인데, 장년기 이후에 발생하여 혈행성(血行性)으로 간 ?폐 ?골 등으로 전이한다. 조기에 발견하여 완전히 절제하면 경과는 좋지만 대개의 경우 전이되기 때문에 생명을 잃기가 쉽다.
상기 빌름스종양(Wilms tumor)은 1 ~ 4세의 소아에게서 주로 발생하는 대표적인 신장의 태아성 암으로, 간혹 양쪽 신장에 발병하는 경우도 있고 반신비대 등의 기형을 합병하는 일도 있다. 신경아세포종 다음으로 많이 발병한다. 악성도가 강하고 흔히 양측성으로 나타나며 발육도 매우 빠르다. 종양이 진행되면 폐에 대한 원형침윤현상이 나타나는 것이 특징이다. 치료는 외과적으로 종양을 적출하고 방사선요법과 화학요법을 실시한다. 항종양제로는 악티노마이신 D, 아드리아마이신?빈크리스틴(vincristine:VCR) 등이 쓰인다. 양쪽성인 경우는 신장이식을 한다.
본 발명의 일실시예에서는 신장세포암 유래 세포주인 A498 및 전이성 신장세포암 유래 세포주인 ACHN을 대상으로 여러 농도의 삼백초 추출물을 처리하여 세포독성, 세포침투 억제활성, 세포부착 억제활성을 측정함으로써 신장암에 유효한 효과를 갖는 생약재임을 확인하였다. 그 결과, 본 발명의 삼백초 추출물은 암세포의 세포사멸을 유도하는 활성과(실험예 1 및 2 참조), 세포침투 또는 세포부착을 억제하여 암 전이를 억제하는 활성(실험예 3 및 4 참조)이 있음을 알 수 있었다. 이러한 작용을 통해 본 발명의 삼백초 추출물이 신장암을 예방 또는 치료할 수 있다는 사실을 확인하였다.
그러므로 본 발명에 따른 삼백초 추출물을 유효성분으로 함유하는 신장암의 예방 또는 치료용 조성물은 약학적 조성물로 사용될 수 있다.
상기 “치료”란, 달리 언급되지 않는 한, 상기 용어가 적용되는 질환 또는 질병, 또는 상기 질환 또는 질병의 하나 이상의 증상을 역전시키거나, 완화시키거나, 그 진행을 억제하거나, 또는 예방하는 것을 의미하며, 본원에서 사용된 상기 “치료”란 용어는“치료하는”이 상기와 같이 정의될 때 치료하는 행위를 말한다. 따라서 포유동물에 있어서 신장암 “치료”또는 “치료요법”은 하기의 하나 이상을 포함할 수 있다:
(1) 신장암의 성장을 저해함, 즉, 그 발달을 저지시킴,
(2) 신장암의 확산을 예방함, 즉, 전이를 예방함,
(3) 신장암을 경감시킴.
(4) 신장암의 재발을 예방함, 및
(5) 신장암의 증상을 완화함(palliating)
본 발명에 따른 신장암의 예방 또는 치료용 조성물은 약학적으로 유효한 양의 삼백초 추출물을 단독으로 포함하거나 하나 이상의 약학적으로 허용되는 담체, 부형제 또는 희석제를 포함할 수 있다. 상기에서 약학적으로 유효한 양이란 신장암의 증상을 예방, 개선 및 치료하기에 충분한 양을 말한다.
본 발명에 따른 삼백초 추출물의 약학적으로 유효한 양은 0.5 ~ 100 mg/day/체중kg, 바람직하게는 0.5 ~ 5 mg/day/체중kg이다. 그러나 상기 약학적으로 유효한 양은 신장암 증상의 정도, 환자의 연령, 체중, 건강상태, 성별, 투여 경로 및 치료기간 등에 따라 적절히 변화될 수 있다.
또한, 상기에서약학적으로 허용되는이란 생리학적으로 허용되고 인간에게 투여될 때, 통상적으로 위장 장애, 현기증과 같은 알레르기 반응 또는 이와 유사한 반응을 일으키지 않는 조성물을 말한다. 상기 담체, 부형제 및 희석제의 예로는, 락토즈, 덱스트로즈, 수크로즈, 솔비톨, 만니톨, 자일리톨, 에리스리톨, 말티톨, 전분, 아카시아 고무, 알지네이트, 젤라틴, 칼슘 포스페이트, 칼슘 실리케이트, 셀룰로즈, 메틸 셀룰로즈, 폴리비닐피롤리돈, 물, 메틸하이드록시벤조에이트, 프로필하이드록시벤조에이트, 탈크, 마그네슘 스테아레이트 및 광물유를 들 수 있다. 또한, 충진제, 항응집제, 윤활제, 습윤제, 향료, 유화제 및 방부제 등을 추가로 포함할 수 있다.
또한, 본 발명의 조성물은 포유동물에 투여된 후 활성 성분의 신속, 지속 또는 지연된 방출을 제공할 수 있도록 당업계에 공지된 방법을 사용하여 제형화될 수 있다. 제형은 분말, 과립, 정제, 에멀젼, 시럽, 에어로졸, 연질 또는 경질 젤라틴 캅셀, 멸균 주사용액, 멸균 분말의 형태일 수 있다.
본 발명에 따른 신장암의 예방 또는 치료용 조성물은 경구, 경피, 피하, 정맥 또는 근육을 포함한 여러 경로를 통해 투여될 수 있으며, 활성 성분의 투여량은 투여 경로, 환자의 연령, 성별, 체중 및 환자의 중증도 등의 여러 인자에 따라 적절히 선택될 수 있다.
또한, 본 발명의 신장암의 예방 또는 치료용 조성물은 신장암의 증상을 예방, 개선 또는 치료하는 효과를 가지는 공지의 화합물과 병행하여 투여할 수 있다.
따라서 본 발명은 삼백초 추출물을 유효성분으로 포함하는 조성물을 포함하는 신장암의 증상을 예방 및 치료할 수 있는 약제를 제공할 수 있다.
나아가 본 발명에 따른 신장암의 예방 또는 치료용 조성물은 상기 기술한 바와 같이 신장암의 증상을 예방 및 개선하기 위한 약학적 조성물로 사용할 수 있을 뿐만 아니라, 신장암을 예방 또는 개선할 수 있는 건강기능식품의 제조를 위한 식품용 조성물로도 사용할 수 있다.
그러므로 본 발명은 삼백초 추출물을 유효성분으로 포함하는 신장암을 예방 또는 치료하기 위한 식품용 조성물을 제공할 수 있다.
본 발명에 따른 상기 식품용 조성물은 신장암의 예방 및 개선에 효과가 있는 식품, 예컨대, 식품의 주원료, 부원료, 식품 첨가제, 기능성 식품 또는 음료로 용이하게 활용할 수 있다.
본원에서 상기 “식품”이란, 영양소를 한 가지 또는 그 이상 함유하고 있는 천연물 또는 가공품을 의미하며, 바람직하게는 어느 정도의 가공 공정을 거쳐 직접 먹을 수 있는 상태가 된 것을 의미하며, 통상적인 의미로서, 식품, 식품 첨가제, 기능성 식품 및 음료를 모두 포함하는 것을 말한다.
본원발명에 따른 삼백초 추출물을 유효성분으로 함유하는 신장암 개선을 위한 식품용 조성물을 첨가할 수 있는 식품으로는 예를 들어, 각종 식품류, 음료, 껌, 차, 비타민 복합제, 기능성 식품 등이 있다. 추가로, 본원발명에서 식품에는 특수영양식품(예, 조제유류, 영,유아식 등), 식육가공품, 어육제품, 두부류, 묵류, 면류(예, 라면류, 국수류 등), 빵류, 건강보조식품, 조미식품(예, 간장, 된장, 고추장, 혼합장 등), 소스류, 과자류(예, 스넥류), 캔디류, 쵸코렛류, 껌류, 아이스크림류, 유가공품(예, 발효유, 치즈 등), 기타 가공식품, 김치, 절임식품(각종 김치류, 장아찌 등), 음료(예, 과실 음료, 채소류 음료, 두유류, 발효음료류 등), 천연조미료(예, 라면 스프 등)을 포함하나 이에 한정되지 않는다. 상기 식품, 음료 또는 식품첨가제는 통상의 제조방법으로 제조될 수 있다.
또한, 상기 “기능성 식품”이란 식품에 물리적, 생화학적, 생물공학적 수법 등을 이용하여 해당 식품의 기능을 특정 목적에 작용, 발현하도록 부가가치를 부여한 식품군이나 식품 조성이 갖는 생체방어리듬조절, 질병방지와 회복 등에 관한 체내조절기능을 생체에 대하여 충분히 발현하도록 설계하여 가공한 식품을 의미하며, 구체적으로는 건강 기능성 식품일 수 있다. 상기 기능성 식품에는 식품학적으로 허용 가능한 식품 보조 첨가제를 포함할 수 있으며, 기능성 식품의 제조에 통상적으로 사용되는 적절한 담체, 부형제 및 희석제를 더욱 포함할 수 있다.
또한, 본원발명에서 상기“음료”란 갈증을 해소하거나 맛을 즐기기 위하여 마시는 것의 총칭을 의미하며 기능성 음료를 포함한다. 상기 음료는 지시된 비율로 필수 성분으로서 상기 신장암의 증상을 예방 및 개선하기 위한 조성물을 포함하는 것 외에 다른 성분에는 특별한 제한이 없으며 통상의 음료와 같이 여러 가지 향미제 또는 천연 탄수화물 등을 추가 성분으로서 함유할 수 있다.
나아가 상기 기술한 것 이외에 본원발명의 신장암을 예방 및 치료하기 위한 조성물을 함유하는 식품은 여러 가지 영양제, 비타민, 광물(전해질), 합성 풍미제 및 천연 풍미제 등의 풍미제, 착색제 및 충진제(치즈, 초콜릿 등), 펙트산 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알코올, 탄산 음료에 사용되는 탄산화제 등을 함유할 수 있으며, 상기 성분은 독립적으로 또는 조합하여 사용할 수 있다.
따라서 본 발명은 신장암 예방 또는 개선 효과를 나타내는 삼백초 추출물 및 식품학적으로 허용 가능한 식품보조 첨가제를 포함하는 건강보조식품을 제공할 수 있다.
상기 건강보조식품의 종류로는 이에 제한되지는 않으나, 분말, 과립, 정제, 캡슐 또는 음료 형태 일 수 있다.
또한, 본원발명의 신기능 개선을 위한 식품용 조성물을 함유하는 식품에 있어서, 상기 본 발명에 따른 조성물의 양은 전체 식품 중량의 0.001중량% 내지 90중량%로 포함할 수 있으며, 바람직하게는 0.1중량% 내지 40중량%로 포함할 수 있고, 음료의 경우, 100㎖를 기준으로 0.001g 내지 2g, 바람직하게는 0.01g 내지 0.1g의 비율로 포함할 수 있으나, 건강 및 위생을 목적으로 하거나 건강 조절을 목적으로 하는 장기간 섭취의 경우에는 상기 범위 이하일 수 있으며, 유효성분은 안전성 면에서 아무런 문제가 없기 때문에 상기 범위 이상의 양으로 사용될 수 있으므로 상기 범위에 한정되는 것은 아니다.
이하, 본 발명을 실시예 및 도면을 참조하여 상세히 설명하기로 한다. 그러나 이들 실시예는 본 발명을 보다 구체적으로 설명하기 위한 것으로서, 본 발명의 범위가 이들 실시예에 한정되는 것은 아니다.
<
실시예
1>
<1-1> 삼백초 추출물의 제조
삼백초 추출물을 제조하기 위하여, 먼저 삼백초 잎을 동결 건조하여 마쇄한 분말을 삼백초 잎 시료 중량의 10배에 해당하는 주정으로 12시간 동안 추출하였다. 감압여과하여 추출액과 잔사를 분리한 다음 얻어진 잔사에 추출시작 당시의 삼백초 잎 시료 중량의 5배에 해당하는 주정으로 6시간 추출한 다음, 여과하고 회전 진공 농축기(BUCHI Labo-ratoriums Technik AG, Rotavapor RE-111, Germany)로 감압 농축하여 삼백초 주정 추출물을 수득하였다. 이때, 삼백초 주정 추출물의 수득율은 10.2%이었다.
<1-2> 시료준비
상기 <1-1>에서 제조한 삼백초 주정 추출물을 DMEM에 녹여 각각 0 ~ 50㎍/㎖의 농도로 만든 후 stock solution을 -70℃에서 보관하여 실험에 사용하였다.
<1-3> 세포주 준비
본 실험에 사용된 암 세포주로 인간 신세포암에서 유래한 세포주인 ACHN, A498을 ATCC(American Type Culture Collection)에서 구입하여 기존에 알려진 방법, 예를 들어, 10% FBS와 1% 페니실린/스트렙토마이신을 배지에 첨가하여 37℃, 5% CO2 배양기에서 배양하여 사용하였다.
<
실험예
1>
세포독성 분석
본 발명자들은 삼백초 추출물의 신세포암 세포에 대한 세포독성을 확인하기 위하여 MTT 분석을 이용하여 하기와 같이 실험을 수행하였다.
먼저, 신세포암 세포주를 96웰 플레이트에서 웰당 2×104개씩 넣고 0 ~ 50㎍/㎖의 삼백초 추출물을 첨가한 후 각각 24시간, 48시간, 72시간 동안 배양하였다. 이후 각 웰에 500㎍/㎖의 농도로 MTT(Sigma, St. Louis, MO, USA)를 배양 배지에 추가한 후 플레이트를 37℃애소 4시간 동안 배양하였다. 산성(acidic) 이소프로필 알코올을 웰에 넣고 섞은 후, 540㎚의 파장에서 흡광도를 측정하였다.
그 결과, A498 세포주에 삼백초 추출물을 농도별로 처리할 경우, 시간과 농도에 비례하여 생존 세포의 비율이 감소함을 확인하였으며, 이는 통계적으로 유의하였다(p<0.05)(도 1 참조).
또한, A498 세포주에 삼백초 추출물을 0, 25, 50㎍/㎖로 처리하고 현미경으로 세포를 관찰하였는데, 삼백초 추출물의 농도에 비례하여 정상적인 형태를 유지하는 세포의 수가 감소함을 현미경적 소경으로도 확인할 수 있었다(도 2 참조).
한편, 전이성 신세포암 세포주인 ACHN 세포주에 삼백초 추출물을 농도별로 처리할 경우, A498 세포주와 마찬가지로 시간과 농도에 비례하여 생존 세포의 비율이 감소함을 확인하였다(p<0.05)(도 3 참조).
또한, ACHN 세포주에 삼백초 추출물을 0, 25, 50㎍/㎖로 처리하고 현미경으로 세포를 관찰하였는데, 삼백초 추출물의 농도에 비례하여 정상적인 형태를 유지하는 세포의 수가 감소함을 현미경적 소경으로도 확인할 수 있었다(도 4 참조).
상기와 같은 MTT 결과를 토대로 이후의 신세포암 세포주에 대한 실험은 대조군, 25㎍/㎖, 50㎍/㎖의 농도에서 진행하기로 하였다.
<
실험예
2>
아넥신
(
Annexin
) Ⅴ-
FITC
염색에 의한 세포고사(
apoptosis
) 측정
본 발명자들은 삼백초 추출물의 신세포암 세포에 대한 세포사멸 정도를 확인하기 위하여 아넥신 Ⅴ-FITC 세포사멸 검출 키트(BD Bioscience, San Jose, CA, USA)를 사용하여 측정하였다.
아넥신 V-FITC와 PI로 염색한 세포를 유세포 분석기(flow cytometry)로 분석하였고, 공초점 현미경(confocal microscopy)으로 관찰하여 초기 세포고사세포(아넥신 V+/PI-), 후기 세포고사세포(아넥신 V+/PI+), 그리고 생존세포(아넥신V-/-PI-)로 분류하였다.
그 결과, A498 세포주에 삼백초 추출물을 0, 25, 50㎍/㎖로 처리한 후, 아넥신 V-FITC 염색을 시행하였을 때, 삼백초 추출물의 농도 및 시간에 비례하여 초기 및 후기 고사세포가 증가하는 것을 확인할 수 있었으며, 이는 통계적으로 유의하였다(표 1 및 도 5 참조).
| (%) | 24시간 | 48시간 | ||||||
| 0㎍/㎖ | 25㎍/㎖ | 50㎍/㎖ | p-value | 0㎍/㎖ | 25㎍/㎖ | 50㎍/㎖ | p-value | |
| 초기 고사 | 4.36 | 10.26 | 12.34 | <0.05 | 2.68 | 9.48 | 12.8 | <0.05 |
| 후기 고사 | 2.24 | 2.22 | 4.4 | >0.05 | 2.96 | 3.56 | 6.74 | <0.05 |
| 합계 | 6.6 | 12.48 | 16.74 | <0.05 | 5.64 | 13 | 19.54 | <0.05 |
한편, ACHN 세포주에 삼백초 추출물을 0, 25, 50㎍/㎖로 처리한 후, 아넥신 V-FITC 염색을 시행하였을 때, A498 세포주에서와 마찬가지로 삼백초 추출물의 농도 및 시간에 비례하여 초기 및 후기 고사세포가 증가하는 것을 확인할 수 있었으며, 이는 통계적으로 유의하였다(표 2 및 도 6 참조).
| (%) | 24시간 | 48시간 | ||||||
| 0㎍/㎖ | 25㎍/㎖ | 50㎍/㎖ | p-value | 0㎍/㎖ | 25㎍/㎖ | 50㎍/㎖ | p-value | |
| 초기 고사 | 0.68 | 2.26 | 4.18 | <0.05 | 3.62 | 7.98 | 12.78 | <0.05 |
| 후기 고사 | 2.16 | 4.96 | 4.98 | >0.05 | 1.10 | 4.14 | 17.16 | <0.05 |
| 합계 | 2.84 | 7.22 | 9.16 | <0.05 | 4.72 | 12.12 | 29.94 | <0.05 |
<
실험예
3>
세포 침투(
invasion
) 억제활성 측정
본 발명자들은 삼백초 추출물이 암세포 전이에 어떠한 영향을 주는지를 확인하기 위하여, 암세포의 침투 정도를 측정하였다.
Microchemotaxis chamber(Costar, Bodenheim, Germany) 윗면에 6㎍/㎖의 피브로넥틴(fibronectin)을 덮어준 후 각 농도별 삼백초 추출물로 처리한 신세포암 세포주 3×105/㎖를 윗면의 chamber에 넣고 12시간 동안 배양하였다. 폴리카보네이트 막을 통과하지 못한 세포를 PBS로 세척해 제거한 후, 막을 30분간 공기 중 건조하고 메탄올을 이용하여 고정하였다. 세포를 hemacolor(Merck, Darmstadt, Germany)로 염색한 후 아랫면까지 침투(invasion)한 세포의 수를 측정하였다. 각 실험은 3회 반복하여 수행하였다.
그 결과, A498 세포주 및 ACHN 세포주에 삼백초 추출물을 0, 25, 50㎍/㎖로 처리한 경우 삼백초 추출물의 농도 및 시간에 비례하여 세포의 침투능력을 억제하는 것을 현미경적 관찰(도 7 및 도 8 참조) 및 10% 아세트산을 사용하여 측정한 OD 차이로 확인할 수 있었으며, 이는 통계적으로 유의하였다(표 3 및 표 4 참조).
| OD(650㎚) | 24시간 | 48시간 | ||||||
| 0㎍/㎖ | 25㎍/㎖ | 50㎍/㎖ | p-value | 0㎍/㎖ | 25㎍/㎖ | 50㎍/㎖ | p-value | |
| 1회 | 0.54 | 0.49 | 0.09 | - | 0.58 | 0.36 | 0.05 | - |
| 2회 | 0.40 | 0.36 | 0.11 | - | 0.59 | 0.43 | 0.08 | - |
| 3회 | 0.41 | 0.39 | 0.12 | - | 0.47 | 0.22 | 0.04 | - |
| 평균 | 0.45 | 0.41 | 0.11 | <0.05 | 0.55 | 0.34 | 0.06 | <0.05 |
| OD(650㎚) | 24시간 | 48시간 | ||||||
| 0㎍/㎖ | 25㎍/㎖ | 50㎍/㎖ | p-value | 0㎍/㎖ | 25㎍/㎖ | 50㎍/㎖ | p-value | |
| 1회 | 0.60 | 0.37 | 0.06 | - | 0.66 | 0.09 | 0.06 | - |
| 2회 | 0.44 | 0.05 | 0.04 | - | 0.52 | 0.16 | 0.09 | - |
| 3회 | 0.59 | 0.06 | 0.04 | - | 0.58 | 0.15 | 0.04 | - |
| 평균 | 0.54 | 0.16 | 0.05 | <0.05 | 0.59 | 0.13 | 0.06 | <0.05 |
<
실험예
4>
세포 부착(
adhesion
) 억제활성 측정
본 발명자들은 삼백초 추출물이 암세포 전이에 어떠한 영향을 주는지를 확인하기 위하여, 암세포의 부착 정도를 측정하였다.
신세포암 세포가 삼백초 추출물 처리 후 endothelial monolayer에 부착하는 능력의 변화 정도를 확인하기 위하여, 1.5mg/cm2의 젤라틴으로 덮인 96-웰 플레이트에 웰당 1.5×104개의 인간 제대정맥 내피세포(human umbilical vein endothelial cells; HUVECs)를 넣고 3일간 배양하였다. 10μM의 bromodeoxyuridine(BrdU)으로 표지된 신세포암 세포 부유액을 첨가한 후 37℃에서 배양하였다. 2시간 후 HUVECs에 부착하지 못한 세포들은 PBS로 세척하여 제거한 후 웰당 BrdU의 발현 정도를 정량화하여 세포 부착 정도를 확인하였다. 각 실험은 3회 반복하여 수행하였다.
그 결과, A498 세포주 및 ACHN 세포주에 삼백초 추출물을 0, 25, 50㎍/㎖로 처리한 경우, 삼백초 추출물의 농도 및 시간에 비례하여 기질(젤라틴)에 대하여 암세포의 부착 활성을 억제하는 것으로 나타났다(표 5 및 표 6 참조).
| 24시간 | 48시간 | |||||||
| 0㎍/㎖ | 25㎍/㎖ | 50㎍/㎖ | p-value | 0㎍/㎖ | 25㎍/㎖ | 50㎍/㎖ | p-value | |
| 1회 | 100 | 85.3 | 45.9 | - | 100 | 77.8 | 27.3 | - |
| 2회 | 100 | 70.8 | 53.2 | - | 100 | 79.8 | 35.5 | - |
| 3회 | 100 | 76.5 | 36.8 | - | 100 | 72.8 | 19.8 | - |
| 평균 | 100 | 77.5 | 45.3 | <0.05 | 100 | 76.8 | 27.5 | <0.05 |
| 24시간 | 48시간 | |||||||
| 0㎍/㎖ | 25㎍/㎖ | 50㎍/㎖ | p-value | 0㎍/㎖ | 25㎍/㎖ | 50㎍/㎖ | p-value | |
| 1회 | 100 | 31.2 | 16.8 | - | 100 | 26.7 | 9.2 | - |
| 2회 | 100 | 28.6 | 18.2 | - | 100 | 15.8 | 7.8 | - |
| 3회 | 100 | 34.3 | 12.5 | - | 100 | 19.4 | 6.5 | - |
| 평균 | 100 | 31.4 | 15.8 | <0.05 | 100 | 20.6 | 7.8 | <0.05 |
이상의 결과들을 종합해보면, 본 발명의 삼백초 추출물이 신세포암에 대하여 항암 효과를 가지고 있음을 알 수 있었다.
이제까지 본 발명에 대하여 그 바람직한 실시예들을 중심으로 살펴보았다. 본 발명이 속하는 기술 분야에서 통상의 지식을 가진 자는 본 발명이 본 발명의 본질적인 특성에서 벗어나지 않는 범위에서 변형된 형태로 구현될 수 있음을 이해할 수 있을 것이다. 그러므로 개시된 실시예들은 한정적인 관점이 아니라 설명적인 관점에서 고려되어야 한다. 본 발명의 범위는 전술한 설명이 아니라 특허청구범위에 나타나 있으며, 그와 동등한 범위 내에 있는 모든 차이점은 본 발명에 포함된 것으로 해석되어야 할 것이다.
Claims (6)
- 삼백초 추출물을 유효성분으로 포함하는 신장암 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
- 제1항에 있어서,
상기 삼백초 추출물은 물 또는 유기용매로 추출하여 수득한 것임을 특징으로 하는 신장암 예방 또는 치료용 약학적 조성물. - 제1항에 있어서,
상기 삼백초 추출물은 암세포의 세포사멸을 유도하는 활성 또는 세포침투 또는 세포부착을 억제하여 암 전이를 억제하는 활성을 갖는 것을 특징으로 하는 신장암 예방 또는 치료용 약학적 조성물. - 제1항에 있어서,
상기 삼백초 추출물은 1 ~ 100 ㎍/㎖의 농도로 사용되는 것을 특징으로 하는 신장암 예방 또는 치료용 약학적 조성물. - 제1항에 있어서,
상기 신장암은 신장세포암(kindney cell cancer), 그라비츠종양(Grawitz's tumor), 빌름스종양(Wilms tumor), 육종(sarcoma) 및 이행상피암(transitional cell carcinoma)으로 이루어진 군 중에서 선택되는 것을 특징으로 하는 신장암 예방 또는 치료용 약학적 조성물. - 삼백초 추출물을 유효성분으로 포함하는 신장암 예방 또는 개선용 건강기능식품.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| KR1020100067017A KR101189959B1 (ko) | 2010-07-12 | 2010-07-12 | 삼백초 추출물을 유효성분으로 포함하는 신장암 예방 또는 치료용 조성물 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| KR1020100067017A KR101189959B1 (ko) | 2010-07-12 | 2010-07-12 | 삼백초 추출물을 유효성분으로 포함하는 신장암 예방 또는 치료용 조성물 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| KR20120006341A KR20120006341A (ko) | 2012-01-18 |
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ID=45612102
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| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
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| KR1020100067017A KR101189959B1 (ko) | 2010-07-12 | 2010-07-12 | 삼백초 추출물을 유효성분으로 포함하는 신장암 예방 또는 치료용 조성물 |
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| KR (1) | KR101189959B1 (ko) |
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|---|---|---|---|---|
| CN103566008B (zh) * | 2013-10-12 | 2015-07-15 | 中山大学 | 一种三白草提取物及其制备方法和应用 |
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2010
- 2010-07-12 KR KR1020100067017A patent/KR101189959B1/ko not_active IP Right Cessation
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|---|---|
| KR20120006341A (ko) | 2012-01-18 |
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