JP5752136B2 - スピロ−オキシインドール化合物のための合成方法 - Google Patents

Description

（関連出願への相互参照）
本願は、米国特許法第１１９条（ｅ）項の下、２００９年１０月１４日に出願された米国仮特許出願第６１／２５１，３３５号の利益を主張する。この米国仮特許出願の全体の内容は、本明細書中に参考として援用される。

（発明の分野）
本発明は、特定のスピロ−オキシインドール化合物ならびに上記化合物と関連する種々の中間体を調製するための改善された方法に関する。特に、本発明は、スピロ−オキシインドール化合物およびこれらの薬学的に受容可能な塩を調製する方法に関し、上記化合物は、ナトリウムチャネル媒介性疾患もしくは状態（例えば、疼痛）、ならびにナトリウムチャネルの媒介と関連する他の疾患および状態を処置するにあたって有用である。

（発明の背景）
ナトリウムチャネルは、正常なおよび病的な状態を媒介するにおける多様なセットの役割（電位開口型ナトリウムチャネルが異常な神経活動および神経障害疼痛もしくは病的疼痛の生成において果たす長期に認識されている役割を含む）を果たす。外傷もしくは疾患後の末梢神経に対する損傷は、ナトリウムチャネル活性に対する変化および異常な求心性活動の発生（軸索切断した求心性神経からの異所性発射および感作されたインタクトな侵害受容器の自発的活動性を含む）を生じ得る。これら変化は、通常は特に害のない刺激に対する長期間続く異常な感覚過敏、すなわち異痛症を生じ得る。神経障害性疼痛の例としては、帯状疱疹後後神経痛、三叉神経痛、糖尿病性神経障害、慢性腰痛、幻肢痛、ならびに癌および化学療法から生じる疼痛、慢性骨盤痛、複合性局所疼痛症候群および関連する神経痛が挙げられるが、これらに限定されない。

短時間の第１選択肢の（ｆｉｒｓｔ−ｌｉｎｅ）処置として、投薬法（例えば、ガバペンチン、およびより近年になって、プレガバリン）を使用することによって、神経障害性疼痛症候群を処置することにおいていくらかの進歩があった。しかし、神経障害性疼痛のための薬物療法は、一般に、成功が制限されており、一般に使用される疼痛軽減薬物（例えば、ＮＳＡＩＤＳおよびオピエート）に対する応答がほとんどない。結論として、新規な処置様式を探索することが未だにかなり必要である。

クリニックにおいて最小限の有害事象しかない強力で有効なナトリウムチャネルブロッカーの数は、制限されたままである。同様に、神経障害性疼痛および他のナトリウムチャネル関連神経学的状態を効率的に有害な副作用なく処置する、未だ満たされていない医学的必要性がある。

特許文献１、特許文献２およびＰＣＴ公開特許出願ＰＣＴ／ＵＳ２０１０／０４０１８７は、特定のスピロ−オキシインドール化合物を開示する。これら化合物は、ナトリウムチャネル媒介性疾患（好ましくは、疼痛に関連する疾患、中枢神経状態（例えば、癲癇、不安、鬱病および双極性疾患）；心血管状態（例えば、不整脈、心房細動および心室細動）；神経筋状態（例えば、むずむず脚症候群）；脳卒中（ｓｔｒｏｋｅ）、神経外傷および多発性硬化症に対する神経保護；ならびにチャネロパシー（例えば、先端紅痛症および家族性結腸疼痛症候群）の処理に有用であるとそこで開示されている。これら化合物およびこれらを含む薬学的組成物を調製するための方法はまた、特許文献１、特許文献２およびＰＣＴ特許出願ＰＣＴ／ＵＳ２０１０／０４０１８７に開示されている。

従って、特定のスピロ−オキシインドール化合物を調製するための改善された方法が必要である。

国際公開第２００６／１１０９１７号 国際公開第２０１０／０４５２５１号

（発明の要旨）
本発明は、特定のスピロ−オキシインドール化合物を、単一の立体異性体もしくは単一の鏡像異性体またはこれらの混合物として、あるいはその薬学的に受容可能な塩として調製するための方法に関する。これら化合物は、ナトリウムチャネル媒介性疾患および状態（例えば、疼痛）を処置することにおいて有用である。

よって、一局面において、本発明は、式（Ｉ）の化合物：

もしくはその薬学的に受容可能な塩を、単一の立体異性体もしくは鏡像異性体またはその混合物として調製するための方法に関し；
ここで上記方法は、式（８）の化合物：

もしくはその薬学的に受容可能な塩を、式（９）の化合物：

もしくはその薬学的に受容可能な塩で適切な条件下で処理して、上記式（Ｉ）の化合物もしくはその薬学的に受容可能な塩を、単一の立体異性体もしくは鏡像異性体またはその混合物として提供する工程を包含する。

別の局面において、本発明は、式（Ｉ−Ｓ）の化合物：

もしくはその薬学的に受容可能な塩、および式（Ｉ−Ｒ）の化合物：

もしくはその薬学的に受容可能な塩を調製する方法に関し、ここで上記方法は、式（Ｉ）の化合物：

もしくはその薬学的に受容可能な塩を、単一の立体異性体もしくは鏡像異性体またはその混合物として；適切な条件下で分離して、式（Ｉ−Ｓ）の化合物もしくはその薬学的に受容可能な塩、および式（Ｉ−Ｒ）の化合物もしくはその薬学的に受容可能な塩を得る工程を包含する。

別の局面において、本発明は、式（ＩＩ）の化合物：

もしくはその薬学的に受容可能な塩を、単一の立体異性体もしくは鏡像異性体またはその混合物として調製する方法に関し；
ここで上記方法は、式（１５）の化合物：

もしくはその薬学的に受容可能な塩を、式（１６）の化合物：

もしくはその薬学的に受容可能な塩で適切な条件下で処理して、上記式（ＩＩ）の化合物もしくはその薬学的に受容可能な塩を、単一の立体異性体もしくは鏡像異性体またはその混合物として得る工程を包含する。

別の局面において、本発明は、式（ＩＩ−Ｓ）の化合物：

もしくはその薬学的に受容可能な塩、および式（ＩＩ−Ｒ）の化合物：

もしくはその薬学的に受容可能な塩を調製する方法に関し、ここで上記方法は、式（ＩＩ）の化合物：

もしくはその薬学的に受容可能な塩を、単一の立体異性体もしくは鏡像異性体またはその混合物として適切な条件下で分離して、式（ＩＩ−Ｓ）の化合物もしくはその薬学的に受容可能な塩、および式（ＩＩ−Ｒ）の化合物もしくはその薬学的に受容可能な塩を得る工程を包含する。
例えば、本発明は、以下の項目を提供する。
（項目１）
式（Ｉ）の化合物：

もしくはその薬学的に受容可能な塩を、単一の立体異性体もしくは鏡像異性体またはその混合物として調製する方法であって、
ここで該方法は、式（８）の化合物：

もしくはその薬学的に受容可能な塩を、式（９）の化合物：

；
もしくはその薬学的に受容可能な塩で、適切な条件下で処理して、該式（Ｉ）の化合物もしくはその薬学的に受容可能な塩を、単一の立体異性体もしくは鏡像異性体またはその混合物として得る工程、
を包含する、方法。
（項目２）
式（８）の化合物の調製をさらに含む項目１に記載の方法であって、ここで該方法は、式（７）の化合物：

もしくはその薬学的に受容可能な塩を、塩基で、適切な条件下で処理して、該式（８）の化合物もしくはその薬学的に受容可能な塩を形成する工程を包含する、方法。
（項目３）
前記式（７）の化合物の調製をさらに含む項目２に記載の方法であって、ここで該方法は、式（６）の化合物：

もしくはその薬学的に受容可能な塩を、標準的な光延反応条件下で処理して、該式（７）の化合物もしくはその薬学的に受容可能な塩を形成する工程を包含する、方法。
（項目４）
前記式（６）の化合物の調製をさらに含む項目３に記載の方法であって、ここで該方法は、式（５）の化合物：

もしくはその薬学的に受容可能な塩を、アルデヒドで、適切な条件下で処理して、該式（６）の化合物もしくはその薬学的に受容可能な塩を形成する工程を包含する、方法。
（項目５）
前記式（５）の化合物の調製をさらに含む項目４に記載の方法であって、ここで該方法は、式（４）の化合物：

もしくはその薬学的に受容可能な塩を適切な条件下で処理して、該式（５）の化合物もしくはその薬学的に受容可能な塩を形成する工程を包含する、方法。
（項目６）
前記式（４）の化合物の調製をさらに含む項目５に記載の方法であって、ここで該方法は、
ａ）式（２）の化合物：

もしくはその薬学的に受容可能な塩と、式（３）のグリニャール試薬：

とを、適切な条件下で反応させて、中間生成物を形成する工程；および
ｂ）該ａ）の中間生成物と、式（１）の化合物：

もしくはその薬学的に受容可能な塩とを、適切な条件下で反応させて、該式（４）の化合物もしくはその薬学的に受容可能な塩を形成する工程を包含する、方法。
（項目７）
前記式（Ｉ）の化合物もしくはその薬学的に受容可能な塩を適切な条件下で分離して、式（Ｉ−Ｓ）の化合物：

もしくはその薬学的に受容可能な塩、および式（Ｉ−Ｒ）の化合物：

もしくはその薬学的に受容可能な塩を得る工程をさらに包含する、項目１に記載の方法。
（項目８）
式（ＩＩ）の化合物：

もしくはその薬学的に受容可能な塩を、単一の立体異性体もしくは鏡像異性体またはその混合物として調製する方法であって、ここで該方法は、式（１５）の化合物：

もしくはその薬学的に受容可能な塩を、式（１６）の化合物：

もしくはその薬学的に受容可能な塩で、適切な条件下で処理して、該式（ＩＩ）の化合物もしくはその薬学的に受容可能な塩を、単一の立体異性体もしくは鏡像異性体またはその混合物として得る工程を包含する、方法。
（項目９）
前記式（１５）の化合物もしくはその薬学的に受容可能な塩の調製をさらに含む項目８に記載の方法であって、ここで該方法は、式（１４）の化合物：

もしくはその薬学的に受容可能な塩を、アルキル化剤で適切な条件下で処理して、該式（１５）の化合物もしくはその薬学的に受容可能な塩を形成する工程を包含する、方法。
（項目１０）
前記式（１４）の化合物もしくはその薬学的に受容可能な塩の調製をさらに含む項目９に記載の方法であって、ここで該方法は、式（１３）の化合物：

もしくはその薬学的に受容可能な塩を適切な条件下で処理して、該式（１４）の化合物もしくはその薬学的に受容可能な塩を形成する工程を包含する、方法。
（項目１１）
前記式（１３）の化合物もしくはその薬学的に受容可能な塩の調製をさらに含む項目１０に記載の方法であって、ここで該方法は、
ａ）式（１２）の化合物：

と式（３）のグリニャール試薬：

とを適切な条件下で反応させて、中間生成物を形成する工程；および
ｂ）該ａ）の中間生成物と、式（１）の化合物：

もしくはその薬学的に受容可能な塩とを適切な条件下で反応させて、該式（１３）の化合物もしくはその薬学的に受容可能な塩を形成する工程を包含する、方法。
（項目１２）
前記式（１２）の化合物もしくはその薬学的に受容可能な塩の調製をさらに含む項目１１に記載の方法であって、ここで該方法は、式（１１）の化合物：

を酸化剤で適切な条件下で処理して、該式（１２）の化合物もしくはその薬学的に受容可能な塩を形成する工程を包含する、方法。
（項目１３）
前記式（１１）の化合物の調製をさらに含む項目１２に記載の方法であって、ここで該方法は、式（１０）の化合物：

を適切なアルキル化剤で適切な条件下で処理して、該式（１１）の化合物を形成する工程を包含する、項目１２に記載の方法。
（項目１４）
式（ＩＩ）の化合物を適切な条件下で分離して、式（ＩＩ−Ｓ）の化合物：

もしくはその薬学的に受容可能な塩；および式（ＩＩ−Ｒ）の化合物：

もしくはその薬学的に受容可能な塩を得る工程をさらに包含する、項目８に記載の方法。

（発明の詳細な説明）
（定義）
本明細書および添付の特許請求の範囲において使用される場合、そうでないと特定されなければ、以下の用語は、以下に示される意味を有する：
「アミノ」とは、−ＮＨ_２置換基をいう。

「シアノ」とは、−ＣＮ置換基をいう。

「ヒドロキシル」とは、−ＯＨ置換基をいう。

「イミノ」とは、＝ＮＨ置換基をいう。

「ニトロ」とは、−ＮＯ_２置換基をいう。

「オキソ」とは、＝Ｏ置換基をいう。

「トリフルオロメチル」とは、−ＣＦ_３置換基をいう。

「痛覚脱失」とは、通常は疼痛性である刺激に応じた疼痛が存在しないことをいう。

「異痛症」とは、通常は特に害のない感覚（例えば、圧力もしくは軽く触れること）が、極めて疼痛性であると知覚する状態をいう。

「安定な化合物」および「安定な構造」とは、反応混合物から有用な純度への単離、および効果的な治療剤への処方に耐えるに十分強い化合物を示すために意味される。

「哺乳動物」とは、ヒト、ならびに家畜（例えば、実験動物および家庭でのペット）（例えば、ネコ、イヌ、ブタ、ウシ、ヒツジ、ヤギ、ウマ、およびウサギ）および非家畜（例えば、野生生物など）の両方を含む。

「薬学的に受容可能な塩」とは、酸付加塩および塩基付加塩の両方を含む。

「薬学的に受容可能な酸付加塩」とは、遊離塩基の生物学的有効性および特性を保持し、生物学的に望ましくないもしくは別の点で望ましくないということではなく、そして無機酸（例えば、塩酸、臭化水素酸、硫酸、硝酸、リン酸などが挙げられるが、これらに限定されない）および有機酸（例えば、酢酸、２，２−ジクロロ酢酸、アジピン酸、アルギン酸、アスコルビン酸、アスパラギン酸、ベンゼンスルホン酸、安息香酸、４−アセトアミド安息香酸、樟脳酸、カンファー−１０−スルホン酸、カプリン酸、カプロン酸、カプリル酸、炭酸、桂皮酸、クエン酸、シクラミン酸、ドデシル硫酸、エタン−１，２−ジスルホン酸、エタンスルホン酸、２−ヒドロキシエタンスルホン酸、ギ酸、フマル酸、ガラクタル酸、ゲンチジン酸、グルコヘプトン酸、グルコン酸、グルクロン酸、グルタミン酸、グルタル酸、２−オキソ−グルタル酸、グリセロリン酸、グリコール酸、馬尿酸、イソ酪酸、乳酸、ラクトビオン酸、ラウリン酸、マレイン酸、リンゴ酸、マロン酸、マンデル酸、メタンスルホン酸、粘液酸、ナフタレン−１，５−ジスルホン酸、ナフタレン−２−スルホン酸、１−ヒドロキシ−２−ナフトエ酸、ニコチン酸、オレイン酸、オロチン酸、シュウ酸、パルミチン酸、パモ酸、プロピオン酸、ピログルタミン酸、ピルビン酸、サリチル酸、４−アミノサリチル酸、セバシン酸、ステアリン酸、コハク酸、酒石酸、チオシアン酸、ｐ−トルエンスルホン酸、トリフルオロ酢酸、ウンデシレン酸などが挙げられるが、これらに限定されない）で形成されるものに言及する。

「薬学的に受容可能な塩基付加塩」とは、遊離酸の生物学的有効性および特性を保持し、生物学的に望ましくないもしくは他の点で望ましくないということではない塩に言及する。これら塩は、上記遊離酸への無機塩基もしくは有機塩基の付加から調製される。無機塩基から得られる塩としては、ナトリウム塩、カリウム塩、リチウム塩、アンモニウム塩、カルシウム塩、マグネシウム塩、鉄塩、亜鉛塩、銅塩、マンガン塩、アルミニウム塩などが挙げられるが、これらに限定されない。好ましい無機塩は、アンモニウム塩、ナトリウム塩、カリウム塩、カルシウム塩、およびマグネシウム塩である。有機塩基から得られる塩としては、一級アミン、二級アミン、および三級アミン、天然に存在する置換されたアミンを含む置換されたアミン、環式アミンおよび塩基性イオン交換樹脂（例えば、アンモニア、イソプロピルアミン、トリメチルアミン、ジエチルアミン、トリエチルアミン、トリプロピルアミン、ジエタノールアミン、エタノールアミン、デアノール、２−ジメチルアミノエタノール、２−ジエチルアミノエタノール、ジクロロヘキシルアミン、リジン、アルギニン、ヒスチジン、カフェイン、プロカミン、ヒドラバミン、コリン、ベタイン、ベネタミン、ベンザチン、エチレンジアミン、グルコサミン、メチルグルカミン、テオブロミン、トリエタノールアミン、トロメタミン、プリン、ピペラジン、ピペリジン、Ｎ−エチルピペラジン、ポリアミン樹脂など）の塩が挙げられるが、これらに限定されない。特に好ましい有機塩基は、イソプロピルアミン、ジエチルアミン、エタノールアミン、トリメチルアミン、字シクロヘキシルアミン、コリンおよびカフェインである。

「処置する」もしくは「処置」とは、本明細書で使用される場合、上記目的の疾患もしくは状態を有する哺乳動物（好ましくは、ヒト）における上記目的の疾患もしくは状態の処置を網羅し、以下を含む：
（ｉ）哺乳動物において、特に、このような哺乳動物が、上記状態に対する素因があるが、上記状態を有すると未だ診断されていない場合に、上記疾患もしくは状態が起こらないように予防すること；
（ｉｉ）上記疾患もしくは状態を阻害すること（すなわち、その発症を抑えること）；
（ｉｉｉ）上記疾患もしくは状態を緩和すること（すなわち、上記疾患もしくは状態の退縮を引き起こすこと）；または
（ｉｖ）上記疾患もしくは状態から生じる症状を緩和すること（すなわち、上記根底にある疾患もしくは状態に対処せずに、疼痛を緩和すること）。

本明細書で使用される場合、用語「疾患」および「状態」とは、交換可能に使用されてもよいし、上記特定の疾患もしくは状態が既知の原因因子を有さない可能性があり（その結果、原因論が今までのところ機能しなかった）、従って、それが、疾患として未だ認識されておらず、望ましくない状態もしくは症候群としてのみ認識されているという点で異なっていてもよく、ここで多かれ少なかれ、特定のセットの症状が臨床医によって既に同定されている。

本明細書で調製される化合物は、１個以上の不斉中心を含み得、従って、絶対的な立体化学の観点から、アミノ酸に関して、（Ｒ）−もしくは（Ｓ）−として、または（Ｄ）−もしくは（Ｌ）−として定義され得る鏡像異性体を生じ得る。本発明は、全てのこのような考えられる鏡像異性体、ならびにそれらのラセミ形態および光学的に純粋な形態を含むために意味される。光学的に活性な（＋）異性体および（−）異性体、（Ｒ）−異性体および（Ｓ）−異性体、または（Ｄ）−異性体および（Ｌ）−異性体は、キラルシントンもしくはキラル試薬を使用して調製してもよいし、または標準的な技術（例えば、クロマトグラフィーおよび分別結晶化）を使用してもしくは本明細書で開示される技術によって分離されてもよい。個々の鏡像異性体の調製／単離のための従来技術は、適切な光学的に純粋な前駆物質からのキラル合成または例えば、キラル高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）を使用する、上記ラセミ体（もしくは塩もしくは誘導体のラセミ体）の分離を含む。

「立体異性体」とは、同じ結合によって結合されるが、交換可能でない異なる三次元構造を有する同じ原子から作られる化合物に言及する。本発明は、種々の立体異性体およびこれらの混合物を企図し、「鏡像異性体」を含み、鏡像異性体は、その分枝が互いに重ね合わせることのできない（ｎｏｎｓｕｐｅｒｉｍｐｏｓｅａｂｌｅ）鏡像である２種の立体異性体に言及する。

化学命名プロトコルおよび本明細書で使用される構造模式図は、ＡＣＤ／Ｎａｍｅ Ｖｅｒｓｉｏｎ ９．０７ソフトウェアプログラムを使用するＩ．Ｕ．Ｐ．Ａ．Ｃ．命名システムの改変形態である。ここで本発明の化合物は、本明細書で中心コア構造（すなわち、上記２−オキシインドール構造）の誘導体として命名される。本明細書で使用される複雑な化学名に関して、置換基は、これが結合される基の前に示される。例えば、シクロプロピルエチルは、シクロプロピル置換基を有するエチル骨格を含む。化学構造模式図において、全ての結合は、いくつかの炭素原子を除いて同定され、これら炭素原子は、十分な水素原子に結合されて、結合価を完成することが想定される。

従って、例えば、式（Ｉ）の化合物：

は、本明細書において、１’−｛［５−（トリフルオロメチル）−２−フリル］メチル｝スピロ［フロ［２，３−ｆ］［１，３］ベンゾジオキソール−７，３’−インドール］−２’（１’Ｈ）−オンと称される。

（本発明の実施形態）
発明の要旨において上記で記載される発明の種々の局面のうち、本明細書で開示される方法の特定の実施形態は、好ましい。

発明の要旨において上記で記載されるように、式（Ｉ）の化合物もしくはその薬学的に受容可能な塩を単一の立体異性体もしくは鏡像異性体またはその混合物として調製するための方法のうち、一実施形態は、式（８）の化合物もしくはその薬学的に受容可能な塩の調製をさらに含む上記方法であり、ここで式（７）の化合物：

もしくはその薬学的に受容可能な塩は、塩基で適切な条件下で処理されて、上記式（８）の化合物もしくはその薬学的に受容可能な塩を形成する。

この実施形態のうち、別の実施形態は、上記式（７）の化合物もしくはその薬学的に受容可能な塩の調製をさらに含む方法であり、ここで式（６）の化合物：

もしくはその薬学的に受容可能な塩は、標準的な光延反応条件下で処理されて、式（５）の化合物もしくはその薬学的に受容可能な塩を形成する。

この実施形態のうち、別の実施形態は、上記式（６）の化合物もしくはその薬学的に受容可能な塩の調製をさらに含む方法であり、ここで式（５）の化合物：

もしくはその薬学的に受容可能な塩は、アルデヒドで適切条件下で処理されて、上記式（６）の化合物もしくはその薬学的に受容可能な塩を形成する。

この実施形態のうち、別の実施形態は、上記式（５）の化合物もしくはその薬学的に受容可能な塩の調製をさらに含む方法であり、ここで式（４）の化合物：

もしくはその薬学的に受容可能な塩は、適切な条件下で処理されて、上記式（５）の化合物もしくはその薬学的に受容可能な塩を形成する。

この実施形態のうち、この実施形態は、上記式（４）の化合物もしくはその薬学的に受容可能な塩の調製をさらに含む方法であり、ここで式（２）の化合物：

もしくはその薬学的に受容可能な塩は、式（３）のグリニャール試薬：

で適切な条件下で処理されて、中間生成物を形成し；次いで、上記中間生成物は、式（１）の化合物：

もしくはその薬学的に受容可能な塩と適切な条件下で反応させられて、上記式（４）の化合物もしくはその薬学的に受容可能な塩を形成する。

発明の要旨において上記に記載されるように、式（ＩＩ）の化合物もしくはその薬学的に受容可能な塩を単一の立体異性体もしくは鏡像異性体またはその混合物として調製するための方法のうち、一実施形態は、式（１５）の化合物もしくはその薬学的に受容可能な塩の調製をさらに含む上記方法であり、ここで式（１４）の化合物：

もしくはその薬学的に受容可能な塩は、アルキル化剤で適切な条件下で処理されて、上記式（１５）の化合物もしくはその薬学的に受容可能な塩を形成する。

この実施形態のうち、この実施形態は、上記式（１４）の化合物もしくはその薬学的に受容可能な塩の調製をさらに含む方法であり、ここで式（１３）の化合物：

もしくはその薬学的に受容可能な塩は、適切な条件下で処理されて、上記式（１４）の化合物もしくはその薬学的に受容可能な塩を形成する。

この実施形態のうち、この実施形態は、上記式（１３）の化合物もしくはその薬学的に受容可能な塩の調製をさらに含む方法であり、ここで式（１２）の化合物：

は、式（３）のグリニャール試薬：

と適切な条件下で反応させられて、中間生成物を形成し；次いで、上記中間生成物は、式（１）の化合物：

もしくはその薬学的に受容可能な塩と適切な条件下で反応させられて、上記式（１３）の化合物もしくはその薬学的に受容可能な塩を形成する。

この実施形態のうち、この実施形態は、上記式（１２）の化合物もしくはその薬学的に受容可能な塩の調製をさらに含む方法であり、ここで式（１１）の化合物：

は、酸化剤で適切な条件下で処理されて、上記式（１２）の化合物もしくはその薬学的に受容可能な塩を形成する。

この実施形態のうち、この実施形態は、上記式（１１）の化合物の調製をさらに含む方法であり、ここで、式（１０）の化合物：

は、適切なアルキル化剤で適切な条件下で処理されて、上記式（１１）の化合物を形成する。

本発明の方法の具体的実施形態は、上記工程の各々に関する適切な条件を含め、本発明の方法において以下により詳細に記載される。

（本発明の方法）
本発明の方法は、本明細書に記載されるように、式（Ｉ）および式（ＩＩ）の化合物、ならびに上記式（Ｉ−Ｓ）、式（Ｉ−Ｒ）、式（ＩＩ−Ｓ）および／もしくは式（ＩＩ−Ｒ）の化合物、もしくはこれらの薬学的に受容可能な塩を調製するための方法に関する。

一般に、出発成分は、Ｓｉｇｍａ Ａｌｄｒｉｃｈ、Ｌａｎｃａｓｔｅｒ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，Ｉｎｃ．、Ｍａｙｂｒｉｄｇｅ、Ｍａｔｒｉｘ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、ＴＣＩ、およびＦｌｕｏｒｏｃｈｅｍ ＵＳＡなどのような供給元から得てもよいし、当業者に公知の出典（例えば、Ｓｍｉｔｈ，Ｍ．Ｂ． ａｎｄ Ｊ．Ｍａｒｃｈ，Ａｄｖａｎｃｅｄ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ： Ｒｅａｃｔｉｏｎｓ，Ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ，ａｎｄ Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ，５ｔｈ ｅｄｉｔｉｏｎ（Ｗｉｌｅｙ，Ｄｅｃｅｍｂｅｒ ２０００）を参照のことのこと）に従って合成されてもよいし、本明細書で記載されるようにもしくはＰＣＴ公開特許出願ＷＯ ２００６／１１０９１７、ＰＣＴ公開特許出願ＷＯ ２０１０／４５２５１およびＰＣＴ特許出願ＰＣＴ／ＵＳ２０１０／０４０１８７で開示される方法によって調製されてもよい。

（式（Ｉ）、式（Ｉ−Ｓ）および式（Ｉ−Ｒ）の化合物の調製）
式（Ｉ）、式（Ｉ−Ｓ）および式（Ｉ−Ｒ）の化合物は、反応スキーム１において以下に記載されるように調製される：

式（１）、式（２）、式（３）および式（９）の化合物は、市販されているか、または当業者に公知の方法によって調製され得る。

一般に、式（Ｉ）、式（Ｉ−Ｓ）および式（Ｉ−Ｒ）の化合物は、第１に式（２）の化合物と適切なグリニャール試薬（例えば、式（３）のもの）とを適切な条件下で（例えば、約−２５℃〜約２５℃の間の温度、好ましくは、約０℃において）反応させて、マグネシウムハライド中間生成物の形成を可能にすることによって、反応スキーム１において上記で開示される方法によって調製される。この中間生成物は、適切な条件（例えば、溶媒中で（好ましくは、テトラヒドロフランもしくはジクロロメタンが挙げられるが、これらに限定されない））下で式（１）のイサチン化合物のケト−カルボニル基での求核的付加を受けて、式（４）のオキシインドール化合物を得る。

上記式（４）の化合物におけるオキシインドール環のＣ−３位でのヒドロキシル基の除去は、上記式（４）の化合物を、酸（例えば、トリフルオロ酢酸が挙げられるが、これらに限定されない）の存在下で、適切な条件（例えば、シラン試薬（例えば、トリエチルシラン）での処理）下で処理して、上記式（５）の化合物を得ることによって、達成される。上記ヒドロキシル基の除去はまた、上記式（４）の化合物を適切な条件（例えば、ＳＯＣｌ_２／ＮＥｔ_３での処理、続いて、得られた中間体をＺｎ粉で還元）下で処理して、上記式（５）の化合物を得ることによって達成される。あるいは、上記除去は、上記式（４）の化合物をヨウ化水素酸で処理して、上記式（５）の化合物を得ることによって達成され得る。

上記式（５）の化合物は、次いで、適切な条件（例えば、塩基（好ましくは、ジイソプロピルアミン、ジイソプロピルエチルアミン、リチウムジイソプロピルアミド、水酸化リチウムもしくは水酸化ナトリウムが挙げられるが、これらに限定されない）での処理、続いて、ホルムアルデヒドもしくはパラホルムアルデヒドとの反応）下で処理されて、式（６）の上記ヒドロキシメチル中間体化合物を得る。

上記式（７）の化合物を得るための上記式（６）の化合物の分子内環化は、上記式（６）の化合物を、標準的な光延反応条件（例えば、溶媒（好ましくは、テトラヒドロフラン、ジクロロメタンもしくは酢酸エチルが挙げられるが、これらに限定されない）中での、ホスフィン試薬（好ましくは、トリフェニルホスフィンもしくはトリブチルホスフィンが挙げられるが、これらに限定されない）、およびアゾ試薬（好ましくは、ジエチルアゾジカルボキシレート、ジイソプロピルアゾ時カルボキシレート、ジ−ｔｅｒｔ−ブチルアゾジカルボキシレートもしくはテトラメチルジアゼンジカルボキサミドが挙げられるが、これらに限定されない）の使用）に処理することによって達成される。得られた式（７）の化合物は、標準的な単離技術によって上記反応混合物から単離され得るか、もしくは上記反応混合物から単離されることなく次の工程において直接使用され得る。

あるいは、分子内環化は、適切な溶媒（例えば、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミドもしくはメチルエチルケトンが挙げられるが、これらに限定されない）中、塩基（例えば、炭酸セシウムが挙げられるが、これらに限定されない）の存在下で、上記式（５）の化合物をビス−求電子剤（例えば、クロロヨードメタンが挙げられるが、これらに限定されない）で処理して、式（８）の化合物を得ることによって達成される。

上記式（７）の化合物の窒素上のヒドロキシメチル基の除去は、適切な条件下で、上記式（７）の化合物を塩基（好ましくは、水酸化ナトリウム、水酸化リチウムもしくは水酸化アンモニウムが挙げられるが、これらに限定されない）で処理して、式（８）の化合物を得ることによって達成され、次いで、上記式（８）の化合物は、標準的な単離技術によって、上記反応混合物から単離され得る。

上記式（８）の化合物は、次いで、式（９）の求電子剤と適切な条件下で（例えば、溶媒（好ましくは、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、アセトニトリル、テトラヒドロフランもしくはアセトンが挙げられるが、これらに限定されない）中、塩基（好ましくは、水素化ナトリウム、炭酸セシウムもしくは水酸化ナトリウムが挙げられるが、これらに限定されない）の存在下で）反応させられて、上記式（Ｉ）の化合物を得る。上記式（Ｉ）の化合物は、標準的な単離技術によって上記反応混合物から単離され得る。

上記式（Ｉ）の化合物は、上記（Ｓ）−鏡像異性体（すなわち、上記式（Ｉ−Ｓ）の化合物）およびその対応する（Ｒ）−鏡像異性体（すなわち、上記式（Ｉ−Ｒ）の化合物）へと、適切な条件下で、例えば、キラルクロマトグラフィーによる分離（例えば、擬似移動床式クロマトグラフィーもしくはキラルＨＰＬＣが挙げられるが、これらに限定されない）によって、分離され得る。

（式（ＩＩ）、式（ＩＩ−Ｓ）および式（ＩＩ−Ｒ）の化合物の調製）
式（ＩＩ）、式（ＩＩ−Ｓ）および式（ＩＩ−Ｒ）の化合物は、反応スキーム２において以下に詳細に記載されるように調製される：

式（１０）、式（１１）、式（１２）、式（１）、式（３）および式（１６）の化合物は、市販されるか、または当業者に公知の方法によって調製され得る。

一般に、式（ＩＩ）、式（ＩＩ−Ｓ）および式（ＩＩ−Ｒ）の化合物は、最初に、溶媒（例えば、アセトンが挙げられるが、これらに限定されない）中の塩基（例えば、炭酸カリウムが挙げられるが、これらに限定されない）の存在下で、式（１０）のジヒドロキシアルデヒドを、適切なビス−アルキル化試薬（例えば、１，２−ジブロモエタンが挙げられるが、これらに限定されない）と加熱して、式（１１）の化合物を提供することによって、反応スキーム２において上記で開示される方法によって調製される。

式（１２）の化合物は、適切な溶媒（例えば、ジクロロメタンが挙げられるが、これらに限定されない）中の塩基（例えば、炭酸水素ナトリウムが挙げられるが、これらに限定されない）の存在下で、式（１１）の化合物を、酸化剤（例えば、３−クロロペルオキシ安息香酸が挙げられるが、これらに限定されない）で処理し、続いて、水および塩基（例えば、水酸化ナトリウムが挙げられるが、これらに限定されない）で処理して、式（１２）の化合物を得ることによって、調製される。

上記式（１２）の化合物は、次いで、適切なグリニャール試薬（例えば、上記式（３）のグリニャール試薬が挙げられるが、これらに限定されない）で、適切な条件下で（例えば、約−２５℃〜約２５℃の間の温度で、好ましくは、約０℃で）処理されて、フェニルオキシマグネシウムハライド中間生成物を形成し、次いで、この中間生成物を、上記式（１）の化合物と適切な条件下で（例えば、極性非プロトン溶媒（好ましくは、ジクロロメタンもしくはテトラヒドロフランが挙げられるが、これらに限定されない）中で）反応させられて、上記式（１３）のオキシインドール化合物を得る。

上記式（１３）のオキシインドール化合物のＣ−３位における上記ヒドロキシル基の除去は、上記式（１３）の化合物を、適切な条件（例えば、酸（好ましくは、トリフルオロ酢酸が挙げられるが、これらに限定されない）の存在下での、シラン試薬（好ましくは、トリエチルシランが挙げられるが、これらに限定されない）での処理）下で処理して、上記式（１４）の化合物を得ることによって、達成される。上記式（１３）のオキシインドール化合物のＣ−３位における上記ヒドロキシル基の除去はまた、最初に、上記式（１３）の化合物を、ＳＯＣｌ_２／ＮＥｔ_３で処理して、次いで、得られた中間体をＺｎ粉で還元して、上記式（１４）の化合物を得ることによって、達成される。あるいは、上記除去は、上記式（１３）の化合物をヨウ化水素酸で処理して、上記式（１４）の化合物を得ることによって達成され得る。

分子内環化は、上記式（１４）の化合物をビス−アルキル化剤（好ましくは、クロロヨードメタンが挙げられるが、これらに限定されない）で、適切な条件下で（例えば、塩基（好ましくは、炭酸セシウムが挙げられるが、これらに限定されない）の存在下で）処理して、上記式（１５）の化合物を得ることによって達成され、上記式（１５）の化合物は、標準的な単離技術によって上記反応混合物から単離される。

上記式（１５）の化合物は、次いで、式（１６）の求電子剤と適切な条件下で（例えば、溶媒（好ましくは、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、アセトニトリル、テトラヒドロフラン、１，４−ジオキサンもしくはアセトンが挙げられるが、これらに限定されない）中、塩基（好ましくは、水素化ナトリウム、炭酸セシウムもしくは水酸化ナトリウムが挙げられるが、これらに限定されない）の存在下で）反応させられて、上記式（ＩＩ）の化合物を得、上記式（ＩＩ）の化合物は、標準的な単離技術によって上記反応混合物から単離され得る。

上記式（ＩＩ）の化合物は、上記（Ｓ）−鏡像異性体（すなわち、上記式（ＩＩ−Ｓ）の化合物）およびその対応する（Ｒ）−鏡像異性体（すなわち、上記式（ＩＩ−Ｒ）の化合物）へと、適切なキラル定常相（例えば、ＣｈｉｒａｌＰＡＫ（登録商標）−ＩＣが挙げられるが、これに限定されない）および適切な移動相（例えば、ジクロロメタン／アセトンが挙げられるが、これに限定されない）を使用する擬似移動床式クロマトグラフィーによって、クロマトグラフィーにより分離され得る。

遊離塩基もしくは遊離酸の形態で存在し得る、調製されるような上記の化合物の全ては、適切な無機塩基もしくは無機酸または有機塩基もしくは有機酸での処理によって、それらの薬学的に受容可能な塩に変換され得る。上記で調製される化合物の塩は、標準的技術によって遊離塩基もしくは遊離酸の形態へと変換され得る。式（Ｉ）および式（ＩＩ）の化合物の全ての同質異像、不定形形態、無水物、脱水物、水和物、溶媒和物および塩は、本発明の範囲内にあると意図されることが、理解される。さらに、酸もしくはエステル基を含む式（Ｉ）および式（ＩＩ）の全ての化合物は、それぞれ、その対応するエステルもしくは酸へと、当業者に公知の方法もしくは本明細書に記載される方法によって、変換され得る。

以下の具体的な合成による調製（出発物質および中間体の調製のため）および合成実施例（本発明の方法による式（Ｉ）および式（ＩＩ）の化合物の調製のため）は、本発明の実施を補助するためのガイドとして提供され、本発明の範囲に対する限定として意図されない。１回以上のＮＭＲが特定の化合物に対して行われる場合、各ＮＭＲは、単一の立体異性体、立体異性体の非ラセミ混合物または上記化合物の立体異性体のラセミ混合物を表し得る。

（合成による調製１）
（３−ヒドロキシ−３−（６−ヒドロキシ−１，３−ベンゾジオキソール−５−イル）−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−インドール−２−オンの合成）
式（４）の化合物：

６３０Ｌ 反応器に、セサモール（４２．６ｋｇ，２９９ｍｏｌ）を充填した。テトラヒドロフラン（４００ｋｇ）を添加し、得られた溶液を、１℃へと４２分間にわたって冷却した。イソピロピルマグネシウムクロリド（テトラヒドロフラン中の２Ｍ 溶液，１７３ｋｇ，３３７ｍｏｌ）を、その内部温度が０℃〜４℃の間に維持されるように２時間にわたって添加した。一旦添加が完了したら、上記内部温度を−５℃に低下させ、イサチン（３７．９ｋｇ，２５０ｍｏｌ）を４回に分けて添加した。上記反応混合物を、２．７５時間にわたって１〜３℃で攪拌した。１０００Ｌ 反応器に、塩化アンモニウム（７２ｋｇ）を充填し、続いて、脱イオン水（３５６ｋｇ）を充填した。上記混合物を、上記固体が完全に溶解するまで１５℃において攪拌し、得られた溶液を、１℃へと１時間にわたって冷却した。上記６３０Ｌ 反応器の内容物を、内部温度が３〜４℃の間で保持されるように、上記１０００Ｌ 反応器へと１時間かけて移した。上記６３０Ｌ 反応器をトルエン（１３３ｋｇ）ですすぎ、上記すすぎ溶液を、上記１０００Ｌ 反応器に添加した。上記１０００Ｌ 反応器の内容物を、２０〜２５℃へと２９分間にわたって加温し、さらに１５分にわたって攪拌した。上記攪拌をやめ、上記反応器の内容物を、２５℃で１５分間にわたって保持し、相分離させた。その水相を取り出し、脱イオン水（２１８ｋｇ）中の塩化ナトリウム（４２ｋｇ）の溶液を、２２〜２４℃の内部温度で２５分間にわたって添加した。上記攪拌をやめ、上記混合物を２５℃で１時間にわたって保持し、相分離させた。その有機相を、０．５時間にわたって窒素で脱気し、トルエン（８９ｋｇ）を添加した。３００ｍｂａｒ真空を、上記反応器に適用し、上記反応器の外部温度を、５０〜６０℃に設定した。上記混合物の揮発性成分を、１２時間の期間にわたって蒸留によって除去したところ、６７０Ｌの蒸留物が集まった。上記反応器の外部温度を２０〜２５℃に設定した。冷却したところ、橙色沈殿物が沈積した。トルエン（１１４ｋｇ）を添加し、その懸濁物を１０分間にわたって攪拌した。その固体を濾過によって集め、ｔｅｒｔ−ブチルメチルエーテル（１７１ｋｇ）およびヘプタン（８５ｋｇ）で洗浄し、５５〜６０℃において、１７０〜４ｍｂａｒの減圧下で、１０．５時間の期間にわたって乾燥させて、３−ヒドロキシ−３−（６−ヒドロキシ−１，３−ベンゾジオキソール−５−イル）−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−インドール−２−オン（７３．５ｋｇ，定量的収量）を薄桃色固体として得た：純度（３００ｎｍでのＨＰＬＣ−ＵＶ） ９９．３％ ａ／ａ；

（合成による調製２）
（３−（６−ヒドロキシ−１，３−ベンゾジオキソール−５−イル）−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−インドール−２−オンの合成）
式（５）の化合物：

１６００Ｌ 反応器に、３−ヒドロキシ−３−（６−ヒドロキシ−１，３−ベンゾジオキソール−５−イル）−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−インドール−２−オン（１１３．１ｋｇ，３９６ｍｏｌ）を充填し、空気を抜いて窒素で満たした。トリフルオロ酢酸（６７９ｋｇ）を２０分間にわたって２回に分けて添加し、その内部温度を、１０℃へと１時間にわたって低下させた。トリエチルシラン（６９．２ｋｇ，５９５ｍｏｌ）を２時間０５分間にわたって、１０〜１１℃で添加し、上記混合物をさらに０．５時間にわたって１０〜１１℃で攪拌した。１０００Ｌ 反応器に、ヘプタン（５２４ｋｇ）およびｔｅｒｔ−ブチルメチルエーテル（６３ｋｇ）を充填した。上記１０００Ｌ 反応器の内容物を、上記１６００Ｌ 反応器に、内部温度１０〜１１℃において１３分間にわたって移した。その得られた黄色〜橙色の懸濁物を、２３℃へと１時間にわたって加温した。上記固体を濾過によって集め、ヘプタン（４６４ｋｇ）で洗浄し、続いて、ｔｅｒｔ−ブチルメチルエーテル（５７ｋｇ）で洗浄し、５０℃において５８〜７ｍｂａｒの減圧下で、２５時間の期間にわたって乾燥して、３−（６−ヒドロキシ−１，３−ベンゾジオキソール−５−イル）−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−インドール−２−オン（８２．８ｋｇ，７５％）を灰白色固体として得た：純度（３００ｎｍでのＨＰＬＣ−ＵＶ） ９８．０％ ａ／ａ；

（合成による調製３）
（３−（６−ヒドロキシ−１，３−ベンゾジオキソール−５−イル）−１，３−ビス（ヒドロキシメチル）−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−インドール−２−オンの合成）
式（６）の化合物

１０００Ｌ 反応器に、３−（６−ヒドロキシ−１，３−ベンゾジオキソール−５−イル）−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−インドール−２−オン（５６．３ｋｇ，２０９ｍｏｌ）を充填し、続いて、パラホルムアルデヒド（２５．４ｋｇ，８４７ｍｏｌ）および脱イオン水（２８５ｋｇ）を充填した。上記反応混合物を、内部温度５℃へと２５分間にわたって冷却し、水酸化ナトリウム（１１３ｋｇ，８４７ｍｏｌ）の３０重量％水溶液を、５℃において４０分間にわたって添加した。上記反応混合物を、１時間にわたって５℃において拡販した。第２の１０００Ｌ 反応器に、脱イオン水（２６０ｋｇ）および３２％ 塩酸（１２４ｋｇ）を充填した。上記第１の反応器の内容物を、上記第２の反応器の内容物に、１℃において８０分間にわたって添加した。上記第１の反応器を、脱イオン水（３５ｋｇ）ですすぎ、そのすすぎ溶液を、上記第２の反応器に移した。上記得られた懸濁物を、１℃において１時間にわたって攪拌し、上記固体を濾過によって集め、濃塩酸（１１ｋｇ）および水（２０ｋｇ）の混合物で洗浄し、５５〜６０℃において、５０〜６ｍｂａｒの減圧下で２４時間の期間にわたって乾燥させて、３−（６−ヒドロキシ−１，３−ベンゾジオキソール−５−イル）−１，３−ビス（ヒドロキシメチル）−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−インドール−２−オン（６９．８ｋｇ，９９％）を淡褐色固体として得た：純度（２３０ｎｍでのＨＰＬＣ−ＵＶ） ９５．４％ ａ／ａ；

（合成による調製４）
（スピロ［フロ［２，３−ｆ］［１，３］ベンゾジオキソール−７，３’−インドール］−２’（１’Ｈ）−オンの合成）
式（８）の化合物

１０００Ｌ 反応器に、３−（６−ヒドロキシ−１，３−ベンゾジオキソール−５−イル）−１，３−ビス（ヒドロキシメチル）−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−インドール−２−オン（６５．０ｋｇ，１９７ｍｏｌ）を充填し、続いて、」テトラヒドロフラン（５８６ｋｇ）を充填した。得られた溶液を、−４℃へと２０分間にわたって冷却し、トリ−ｎ−ブチルホスフィン（４０．０ｋｇ，１９７ｍｏｌ）を６分間にわたって添加し、続いて、その内部温度を０℃未満に維持するように、テトラヒドロフラン（７５ｋｇ）中のジイソプロピルアゾジカルボキシレート（４４．８ｋｇ，１９７ｍｏｌ）の溶液を１２５分間分間にわたって添加した。上記反応混合物を、−３℃においてさらに２５分間にわたって攪拌し、上記反応器の内容物を、２５００Ｌ 反応器に移した。上記１０００Ｌ 反応器を、テトラヒドロフラン（１６ｋｇ）ですすぎ、上記すすぎ溶液を、上記２５００Ｌ 反応器に添加した。水（１１８ｋｇ）中の２５重量％アンモニア溶液を、−３〜−２℃において３０分間にわたって添加した。上記反応混合物を、２５℃へと１．２５時間にわたって加温し、さらに２時間にわたって攪拌した。脱イオン水（６５０ｋｇ）および酢酸エチル（５８５ｋｇ）を添加し、上記混合物を、４０℃へと４０分間にわたって加温した。さらに１５分間にわたって攪拌した後、上記攪拌をやめ、その相を１時間にわたって分離させた。その水相を除去し、脱イオン水（６５０ｋｇ）を添加した。上記混合物を、１５分間にわたって４０℃で攪拌した。上記攪拌をやめ、その相を、１時間にわたって分離させた。その水相を除去し、脱イオン水（３２５ｋｇ）を添加した。上記混合物を、減圧下で、内部温度２１〜３９℃および圧力３８２〜９８ｍｂａｒにおいて、９５０Ｌの蒸留物が４．５時間の期間にわたって集められるまで、蒸留によって部分的に濃縮した。メタノール（１６００ｋｇ）を添加し、上記混合物を、６０℃へと３５分間にわたって加熱した。上記混合物を、減圧下で、内部温度３２〜５８℃および圧力５３０〜１７０ｍｂａｒにおいて、１２６０Ｌの蒸留物が９．３３時間の期間にわたって集められるまで、蒸留によって部分的に濃縮した。得られた懸濁物を、２２℃へと２時間にわたって冷却し、さらに６時間にわたって攪拌した。その固体を濾過によって集め、メタノール（３４ｋｇ）および脱イオン水（１７ｋｇ）の混合物で洗浄し、５５〜６０℃において、５０〜３ｍｂａｒの減圧下で３１時間の期間にわたって乾燥させて、３５．８ｋｇの褐色固体を得、これを、４００Ｌ 反応器に移した。メタノール（１６３ｋｇ）を添加し、得られた懸濁物を、０．５時間にわたって攪拌した。上記混合物を３５分間の期間にわたって還流するまで加熱し、さらに１５分間にわたって還流下で加熱した。脱イオン水（３３ｋｇ）を添加し、上記混合物を、１５５分間にわたって還流下で加熱した。上記懸濁物を熱い間に濾過し、上記濾過ケーキをメタノール（２２ｋｇ）および脱イオン水（１１ｋｇ）の混合物で洗浄し、５５〜６０℃において５０〜４ｍｂａｒの減圧下で、８時間の期間にわたって乾燥させて、スピロ［フロ［２，３−ｆ］［１，３］ベンゾジオキソール−７，３’−インドール］−２’（１’Ｈ）−オン（３０．４４ｋｇ，４９％）を淡褐色固体として得た：純度（２３０ｎｍでのＨＰＬＣ−ＵＶ） ８９．４％；

（合成による調製５）
（２，３−ジヒドロ−１，４−ベンゾジオキシン−６−カルボアルデヒドの合成）
式（１１）の化合物

２０００Ｌ 反応器に、アセトン（４０４．５ｋｇ）を充填し、続いて、炭酸カリウム（２５６ｋｇ，１８５２ｍｏｌ）および１，２−ジブロモエタン（２４１．５ｋｇ，１２９８ｍｏｌ）を充填した。上記混合物を、還流下で加熱した。５００Ｌ 反応器に、アセトン（６０６ｋｇ）および３，４−ジヒドロキシベンズアルデヒド（１２８ｋｇ，９２６ｍｏｌ）を充填した。上記５００Ｌ 反応器の内容物を、１５０〜１８０ｋｇ／時間の速度で上記２０００Ｌ 反応器に添加し、その間に、上記反応温度を、５０〜６０℃に維持した。上記反応混合物を、５４〜６０℃において１２時間にわたって攪拌し、２０℃へと冷却し、５００Ｌ Ｎｕｔｓｃｈｅフィルタを通して濾過した。上記濾過ケーキをアセトンで洗浄した（２×２０２ｋｇ）。その濾液およびアセトン洗浄物を、２０００Ｌ 反応器中で合わせ、その得られた溶液を、減圧下で＜４０℃の温度で乾燥するまで濃縮した。上記残渣に酢酸エチル（６８３ｋｇ）を添加し、得られた溶液を炭酸カリウム（２５６ｋｇ）の５重量％水溶液で洗浄した。上記混合物を０．５時間にわたって攪拌し、０．５時間にわたって沈澱させ、その水相を除去した。この洗浄手順を、合計で３回反復した。その有機相をドラムの中に一時的にとっておいた。２０００Ｌ 反応器に、合わせた水性の洗浄物を充填し、続いて、酢酸エチル（１１３．９ｋｇ）を添加した。上記混合物を０．５時間にわたって攪拌し、０．５時間にわたって沈澱させ、その水相を除去した。上記ドラムからの有機相を上記反応器に添加し、続いて、塩化ナトリウム（１９２ｋｇ）の２８重量％ 水溶液を添加した。上記混合物を０．５時間にわたって攪拌し、０．５時間にわたって沈澱させ、その水相を除去した。上記有機相を、減圧下で＜４５℃の温度において、上記混合物の酢酸エチル含有量が１０％未満になる（ガスクロマトグラフィーによって決定される場合）まで濃縮した。石油エーテル（２６８．８ｋｇ）を８０〜９０ｋｇ／時間の速度で上記残渣に添加し、その間に、上記混合物を３５〜４５℃の温度において維持した。上記混合物を５℃へと３時間にわたって冷却し、この温度をさらに１時間にわたって保持し、その間に、沈殿物を沈積させた。得られたスラリーを遠心分離フィルタを通して濾過し、乾燥させて、２，３−ジヒドロ−１，４−ベンゾジオキシン−６−カルボアルデヒド（１１１．４ｋｇ，７３％）を灰白色固体として得た：純度（２３０ｎｍでのＨＰＬＣ−ＵＶ） ９９．３％。

（合成による調製６）
（２，３−ジヒドロ−１，４−ヘンゾジオキシン−６−オールの合成）
式（１２）の化合物

２０００Ｌ 反応器に、ジクロロメタン（１３０３．４ｋｇ）を充填し、続いて、２，３−ジヒドロ−１，４−ベンゾジオキシン−６−カルボアルデヒド（９８．０ｋｇ，５９７ｍｏｌ）を充填し、均質な溶液が得られるまで攪拌した。３−クロロペルオキシ安息香酸（１４４．３ｋｇ，８３６ｍｏｌ）を添加した。上記混合物を、８〜１０℃／時間の速度で還流するまで加熱し、さらに６時間にわたって還流下で加熱し、２０℃へと冷却した。得られた懸濁物を、５００Ｌ Ｎｕｔｓｃｈｅフィルタを通して濾過し、上記濾過ケーキを、ジクロロメタン（３９１ｋｇ）で洗浄した。その濾液および洗浄溶液を、２０００Ｌ 反応器に添加した。炭酸水素ナトリウム（２１２．７ｋｇ）の７重量％水溶液を添加し、上記混合物を０．５時間にわたって攪拌した。上記攪拌をやめ、その相を、０．５時間にわたって分離させた。その水相を除去した。上記炭酸水素ナトリウム水溶液洗浄手順を、合計で３回反復した。その有機相を乾燥するまで減圧下で＜３０℃の温度で濃縮した。メタノール（１１６．１ｋｇ）を添加し、得られた混合物を、０℃へと冷却した。水酸化ナトリウム（２３４．３ｋｇ）の１５．５重量％水溶液を、上記混合物の温度が０〜１０℃の間で維持されるように、３０〜４０ｋｇ／時間の速度で添加した。上記混合物を、この温度でさらに２．２５時間にわたって攪拌し、上記混合物のｐＨを、上記混合物の温度が０〜１０℃の間で維持されるように、４Ｎ 塩酸（２６６．５ｋｇ）を添加することによって６〜７へと調節した。上記混合物を周囲温度へと加温し、そして０．５時間にわたって攪拌し、上記攪拌をやめ、０．５時間にわたって相分離させることによって、メチルｔｅｒｔ−ブチルエーテルで合計３回抽出した（各抽出につき１４５ｋｇ）。上記合わせた有機抽出物を、０．５時間にわたって攪拌し、上記攪拌をやめ、０．５時間にわたって相分離させ、その水相を除去することによって、炭酸水素ナトリウムの７％水溶液で合計３回洗浄した（各洗浄につき２１２．７ｋｇ）。次いで、その有機相を、０．５時間にわたって攪拌し、上記攪拌をやめ、０．５時間にわたって相分離させ、その水相を除去することによって、塩化ナトリウム（２１２．７ｋｇ）の３０重量％水溶液で洗浄した。上記有機相を、減圧下で＜４５℃の温度で乾燥するまで濃縮した。テトラヒドロフラン（１７０ｋｇ）を添加し、得られた溶液を、減圧下で＜４５℃の温度で乾燥するまで濃縮した。さらに、テトラヒドロフラン（１７．１ｋｇ）を添加し、得られた溶液を、減圧下で＜４５℃の温度で乾燥するまで濃縮した。テトラヒドロフラン（１２２．５ｋｇ）を添加して、テトラヒドロフラン中の２，３−ジヒドロ−１，４−ベンゾジオキシン−６−オール（８６．３ｋｇ，９５％）の赤褐色溶液を得た。これを、さらに精製せずに次に進めた：純度（２２０ｎｍでのＨＰＬＣ−ＵＶ） ９５．７％。

（合成による調製７）
（３−ヒドロキシ−３−（７−ヒドロキシ−２，３−ジヒドロ−１，４−ベンゾジオキシン−６−イル）−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−インドール−２−オンの合成）
式（１３）の化合物

１０００Ｌ 反応器に、テトラヒドロフラン（２９６．８ｋｇ）を充填した。上記テトラヒドロフランを、１時間にわたって還流下で加熱し、周囲温度へと冷却した。マグネシウム（１５．０ｋｇ，６２５ｍｏｌ）、ヨウ素（１９．５ｇ，触媒量）およびブロモエタン（１４７．０ｇ，触媒量）を温度１５〜３０℃で添加した。得られた混合物を、５０〜５５℃において０．５時間時間にわたって加熱し、２−クロロプロパン（４．５ｋｇ，５７ｍｏｌ）を添加し、続いて、テトラヒドロフラン（７．６ｋｇ，触媒量）中のイソピロピルマグネシウムクロリドの２Ｍ 溶液を添加した。２−クロロプロパン（３９．２ｋｇ，５００ｍｏｌ）を、上記反応混合物の温度を５５〜７０℃の間で維持するように、８〜１０ｋｇ／時間の速度で添加した。上記反応混合物を、５８〜６８℃において３時間にわたって加熱し、周囲温度へと冷却し、さらに４時間にわたって攪拌した。２０００Ｌ 反応器に、テトラヒドロフラン（１２２．５ｋｇ）中の２，３−ジヒドロ−１，４−ベンゾジオキシン−６−オール（８６．３ｋｇ，５６７ｍｏｌ）の溶液を充填し、続いて、さらにテトラヒドロフラン（８０４．１ｋｇ）を充填した。得られた溶液を０℃へと冷却し、上記１０００Ｌ 反応器の内容物を、上記反応混合物の温度が０〜５℃の間で維持されるように、上記２０００Ｌ 反応器に３０〜５０ｋｇ／時間の速度で添加した。上記１０００Ｌ 反応器を、テトラヒドロフランで３回すすぎ（各すすぎにつき５ｋｇ）、上記すすぎ溶液を、上記２０００Ｌ 反応器に添加した。上記反応混合物を、７〜１３℃において１時間にわたって攪拌し、−５℃へと冷却した。イサチン（６９．５ｋｇ，４７２．５ｍｏｌ）を、０．５時間にわたって三等分して添加し、上記混合物を、０．５時間にわたって−５〜０℃において攪拌した。上記反応混合物を、５０〜５５℃において７．５時間にわたって加熱し、周囲温度へと冷却した。５０００Ｌ 反応器に、水（５７６．９ｋｇ）および塩化アンモニウム（１１８．２ｋｇ）を充填した。得られた溶液を、０〜５℃へと冷却した。上記２０００Ｌ 反応器の内容物を、上記混合物の温度が０〜５℃の間で維持されるように、上記５０００Ｌ 反応器に３００〜５００ｋｇ／時間の速度で添加した。上記混合物を、１５〜２５℃において０．５時間にわたって攪拌し、上記攪拌をやめた。上記相を、１時間にわたって分離させ、その水相を除去した。塩化ナトリウム（６９．６ｋｇ）の２７重量％水溶液を添加し、上記混合物を０．５時間にわたって攪拌した。上記攪拌をやめ、その相を１時間にわたって分離させ、その水層を除去した。上記塩化ナトリウム水溶液洗浄手順を、合計２回反復した。上記有機相を２０００Ｌ 反応器に移し、減圧下で温度４５〜５５℃において濃縮した。トルエン（３０２．３ｋｇ）を、９０〜１３０ｋｇ／時間の速度において温度４５〜５０℃で上記残渣に添加した。得られた混合物を、１５℃へと８〜１０℃／時間の速度で冷却し、１０〜１５℃においてさらに１時間にわたって攪拌した。得られたスラリーを、遠心分離フィルタを通して濾過し、その濾過ケーキを水（６９．５ｋｇ）で洗浄し、４５〜５０℃で乾燥させて、３−ヒドロキシ−３−（７−ヒドロキシ−２，３−ジヒドロ−１，４−ベンゾジオキシン−６−イル）−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−インドール−２−オン（１３０．８ｋｇ，９３％）を灰白色固体として得た：純度（２１０ｎｍでのＨＰＬＣ−ＵＶ） ９９．７％。

（合成による調製８）
（３−（７−ヒドロキシ−２，３−ジヒドロ−１，４−ベンゾジオキシン−６−イル）−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−インドール−２−オンの合成）
式（１４）の化合物

２０００Ｌ 反応器に、ジクロロメタン（４８９．４ｋｇ）を充填し、続いて、３−ヒドロキシ−３−（７−ヒドロキシ−２，３−ジヒドロ−１，４−ベンゾジオキシン−６−イル）−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−インドール−２−オン（９２．０ｋｇ，３０７ｍｏｌ）を、２３ｋｇ部分に４つに分けて１時間にわたって充填した。得られた溶液を周囲温度において１時間にわたって攪拌し、トリエチルシラン（１０７．２ｋｇ，９２１ｍｏｌ）を添加した。上記混合物を−５℃へと冷却し、トリフルオロ酢酸（１０５．１ｋｇ，９２１ｍｏｌ）を、上記反応混合物の温度を０℃未満に保持するように、２５〜３０ｋｇ／時間の速度で添加した。上記混合物を、−５〜０℃において２．５時間にわたって攪拌し、１８〜２０℃へと加温し、さらに６．５時間にわたって攪拌し、減圧下で温度＜３０℃において乾燥するまで濃縮した。メチルｔｅｒｔ−ブチルエーテル（１３９．８ｋｇ）を、１５〜２０℃において上記残渣に添加し、上記混合物を、減圧下で＜３５℃の温度でほぼ乾燥するまで濃縮した。上記混合物を、遠心分離フィルタで濾過し、２０００Ｌ 反応器に、上記濾過ケーキを充填し、続いて、メタノール（７２．７ｋｇ）を充填した。上記混合物を、１０〜１５℃において０．５時間にわたって濾過紙、遠心分離フィルタで濾過した。上記濾過ケーキを、減圧下で４０〜５０℃において乾燥させて、３−（７−ヒドロキシ−２，３−ジヒドロ−１，４−ベンゾジオキシン−６−イル）−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−インドール−２−オン（６８．０ｋｇ，７８％）を無色固体として得た：純度（２５４ｎｍでのＨＰＬＣ−ＵＶ） ９９．３％。

（合成による調製９）
（２，３−ジヒドロスピロ［フロ［２，３−ｇ］［１，４］ベンゾジオキシン−８，３’−インドール］−２’（１’Ｈ）−オンの合成）
式（１５）の化合物

２０００Ｌ ステンレス鋼晶出器に、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（１１３．７ｋｇ）およびテトラヒドロフラン（１０７０．９ｋｇ）を充填した。上記内容物を０〜５℃へと冷却し、３−（７−ヒドロキシ−２，３−ジヒドロ−１，４−ベンゾジオキシン−６−イル）−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−インドール−２−オン（１２．０ｋｇ，４２．４ｍｏｌ）を添加し、続いて、炭酸セシウム（３０．４ｋｇ，９３．３ｍｏｌ）を添加した。Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（１６．９ｋｇ）中のクロロヨードメタン（９．４ｋｇ，５３．７ｍｏｌ）の溶液を、上記反応混合物の温度が０〜５℃の間で維持されるように、３９．５ｋｇ／時間の速度で添加した。上記反応混合物を、０〜５℃において２時間にわたって攪拌し、２０〜２５℃において１８．５時間にわたって加熱した。上記混合物を濾過し、その濾過ケーキを、テトラヒドロフラン（２６．４ｋｇ）中で懸濁し、再び濾過した。上記合わせた濾液を合わせ、容積１１０Ｌへと減圧下で＜６０℃の温度において濃縮した。上記混合物を２０〜２５℃へと冷却し、精製水（１２００．８ｋｇ）を、３４３．１ｋｇ／時間の速度で添加した。上記混合物を０〜５℃へと冷却し、濾過した。上記濾過ケーキを、水（３１０．５ｋｇ）中に懸濁し、濾過し、上記水の含有量が、Ｋａｒｌ−Ｆｉｓｈｅｒ滴定によって１０．６重量％になるまで＜６０℃の温度で乾燥させた。２００Ｌ 反応器に、テトラヒドロフラン（９８．０ｋｇ）を充填した。上記部分的に乾燥させた濾過ケーキ（約１１．０ｋｇ）を、上記２００Ｌ 反応器へと固体添加漏斗によって添加した。上記混合物を、還流下で４．５時間にわたって加熱し、１０〜１５℃へと冷却し、３．５時間にわたって１０〜１５℃において攪拌した。上記混合物を濾過し、上記濾過ケーキを冷（０〜５℃）テトラヒドロフランで洗浄し（２×１０．７ｋｇ）、トレイドライヤー中、＜５５℃の温度において乾燥させて、２，３−ジヒドロスピロ［フロ［２，３−ｇ］［１，４］ベンゾジオキシン−８，３’−インドール］−２’（１’Ｈ）−オン（６．８８ｋｇ，６３％）を淡黄色固体として得た：純度（２１０ｎｍでのＨＰＬＣ−ＵＶ） ９８．３％； ｍｐ＞２５０℃；

（合成実施例１）
（１’−｛［５−（トリフルオロメチル）−２−フリル］メチル｝スピロ［フロ［２，３−ｆ］［１，３］ベンゾジオキソール−７，３’−インドール］−２’（１’Ｈ）−オンの合成）
式（Ｉ）の化合物

１００Ｌ 反応器に、スピロ［フロ［２，３−ｆ］［１，３］ベンゾジオキソール−７，３’−インドール］−２’（１’Ｈ）−オン（６．０３ｋｇ，１９．５ｍｏｌ）を充填し、続いて、炭酸セシウム（１６．０２ｋｇ，４８．７ｍｏｌ）を充填した。アセトン（４８．８ｋｇ）を添加し、得られた懸濁物を、還流するまで１時間にわたって加熱した。２−ブロモメチル−５−（トリフルオロメチル）フラン（４．９２ｋｇ，２１．２ｍｏｌ）を、上記反応混合物を還流したで維持すると同時に、２時間の期間にわたって添加漏斗によって添加した。上記反応混合物を、さらに２時間にわたって還流下で攪拌し、３７Ｌの蒸留物が集められるまで上記アセトンを周囲圧で蒸留によって除去した。トルエン（４８．８ｋｇ）を添加し、最初に周囲圧で、次いで、減圧下で、３７Ｌの蒸留物が集められるまで上記蒸留を継続した。トルエン（３６．９ｋｇ）を添加し、５４〜５５℃および圧力１５０〜１８０ｍｂａｒにおいて、３７Ｌの蒸留物が集められるまで上記蒸留を継続した。上記１００Ｌ 反応器の内容物を２５℃へと冷却し、トルエン（４０．９ｋｇ）を添加した。上記１００Ｌ 反応器の内容物を、２００Ｌ 反応器へと移し、脱イオン水（４８．８ｋｇ）を添加した。上記攪拌した混合物を３９℃へと加温し、上記攪拌をやめ、その相を１１時間にわたって分離させた。下側の相を除去し、残りのトルエン相を、１８Ｌの蒸留物が集められるまで、５５〜６４℃において１００ｍｂａｒの減圧下での蒸留に供した。得られた溶液を、トルエンで総容積９８Ｌへと希釈した。上記２００Ｌ 反応器の内容物を、シリカゲル（２０ｋｇ）およびトルエン（４０ｋｇ）を充填したクロマトグラフィーカラムに通した。上記カラムを、１０個の３０ｋｇ画分が集められるまで、トルエンで溶出した。上記カラムをアセトン（１００ｋｇ）で洗浄した。画分２〜１０を、減圧下での蒸留を続けながら２００Ｌ 反応器へと連続して移した。上記反応器の内容物を、トルエンで容積５０Ｌへと調節し、上記溶液を７９℃へと加熱した。ヘプタン（８５ｋｇ）を１５分間にわたって添加し、上記混合物を、１０℃へと３時間の期間にわたって冷却した。結晶化は、内部温度５６℃で開始した。上記固体を濾過によって集め、ヘプタン（１０．２ｋｇ）およびトルエン（５．１ｋｇ）の混合物で洗浄し、４５〜５０℃において５０ｍｂａｒの減圧下で、１５時間の期間にわたって乾燥させて、１’−｛［５−（トリフルオロメチル）−２−フリル］メチル｝スピロ［フロ［２，３−ｆ］［１，３］ベンゾジオキソール−７，３’−インドール］−２’（１’Ｈ）−オン（６．０８ｋｇ，７３％）を無色の固体として得た：純度（２３０ｎｍでのＨＰＬＣ−ＵＶ） ９９．６％；ｍｐ １３９−１４１℃；

（合成実施例２）
（キラルＨＰＬＣによる式（Ｉ）の化合物の分離）
上記式（Ｉ）の化合物を、上記式（Ｉ−Ｓ）の化合物および上記式（Ｉ−Ｒ）の化合物へと、キラルＨＰＬＣによって以下の条件下で分離した：
カラム：Ｃｈｉｒａｌｃｅｌ（登録商標） ＯＪ−ＲＨ；２０ｍｍ 内径 ×２５０ｍｍ，５ミクロン；Ｌｏｔ： ＯＪＲＨ ＣＪ−ＥＨ００１（Ｄａｉｃｅｌ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｉｎｄｕｓｔｒｉｅｓ，Ｌｔｄ）
溶出液：アセトニトリル／水（６０／４０，ｖ／ｖ，均一濃度）
流速：１０ｍＬ／分
稼働時間：６０分
装填：１ｍＬのアセトニトリル中に１００ｍｇの式（Ｉ）の化合物
温度：周囲
上記のキラルＨＰＬＣ条件下で、上記式（Ｉ−Ｒ）の化合物、すなわち、（Ｒ）−１’−｛［５−（トリフルオロメチル）フラン−２−イル］メチル｝スピロ［フロ［２，３−ｆ］［１，３］−ベンゾジオキソール−７，３’−インドール］−２’（１’Ｈ）−オンを、第１の画分として白色固体として単離した；ｅｅ（鏡像異性体過剰）＞９９％（分析ＯＪ−ＲＨ，水中に５５％ アセトニトリル）； ｍｐ １０３−１０５℃；

。上記式（Ｉ−Ｓ）の化合物、すなわち、（Ｓ）−１’−｛［５−（トリフルオロメチル）フラン−２−イル］メチル｝スピロ−［フロ［２，３−ｆ］［１，３］ベンゾジオキソール−７，３’−インドール］−２’（１’Ｈ）−オンを、第２の画分として白色固体として単離した；ｅｅ＞９９％（分析ＯＪ−ＲＨ，水中に５５％ アセトニトリル）； ｍｐ １００−１０２℃；

（合成実施例３）
（式（Ｉ）の化合物のＳＭＢクロマトグラフィーによる分離）
上記式（Ｉ）の化合物を、上記式（Ｉ−Ｓ）の化合物および上記式（Ｉ−Ｒ）の化合物へと、ＳＭＢクロマトグラフィーによって以下の条件下で分離した：
抽出：１４７．０５ｍＬ／分
ラフィネート：８６．１３ｍＬ／分
溶出液：１８３．１８ｍＬ／分
供給：５０ｍＬ／分
再循環：４０７．８８ｍＬ／分
稼働時間：０．５７分
温度：２５℃
圧力：５５ｂａｒ。

上記供給溶液（１．０Ｌの移動相（２５：７５（ｖ：ｖ）アセトニトリル／メタノールの混合物）中の２５ｇの式（Ｉ）の化合物）を、上記ＳＭＢシステム（Ｎｏｖａｓｅｐ Ｌｉｃｏｓｅｐ Ｌａｂ Ｕｎｉｔ）へと連続して注入した。上記システムは、定常相としてＣｈｉｒａｌＰＡＫ−ＡＤの１１０ｇ（カラムあたり，９．６ｃｍ，４．８ｃｍ内径）を含む２−２−２−２構成において８個の同一のカラムを備えていた。第１に溶出する鏡像異性体（上記式（Ｉ−Ｒ）の化合物）は、ラフィネートストリーム中に含まれており、上記第２に溶出する鏡像異性体（上記式（Ｉ−Ｓ）の化合物）は、抽出ストリーム中に含まれていた。上記ＳＭＢ分離から得られた上記式（Ｉ−Ｒ）の化合物および上記式（Ｉ−Ｓ）の化合物の特徴付けデータは、キラルＨＰＬＣを利用して上記で得られるものと同一であった。

上記式（Ｉ）の化合物を、Ｗａｔｅｒｓ分取用ＬＣＭＳ自動精製システム上で上記式（Ｉ−Ｒ）の化合物および上記式（Ｉ−Ｓ）の化合物へと分離した。上記キラルカラムの上記第１に溶出する鏡像異性体を、臭素処理して（立体生成中心（ｓｔｅｒｅｏｇｅｎｉｃ ｃｅｎｔｒｅ）から十分に離れた部位で）、その対応する５’−ブロモ誘導体を得た。これをその後、結晶化して、Ｘ線結晶学に適した単結晶を生成した。上記第１に溶出した鏡像異性体のこの臭素処理した誘導体の結晶構造が得られ、その絶対構成が、式（１−Ｒ）の化合物と同じであることが分かった。よって、上記キラルカラムの第２に溶出した鏡像異性体は、上記式（１−Ｓ）の化合物である。さらに、上記ＳＭＢ分離の抽出システムから得られる物質は、前述のＬＣ分離から得られる材料と同じ徴候（正の、すなわち右旋性）の具体的旋光性を有した。

（合成実施例４）
（１’−｛［３−（トリフルオロメチル）ピリジン−２−イル］メチル｝−２，３−ジヒドロスピロ［フロ［２，３−ｇ］［１，４］ベンゾジオキシン−８，３’−インドール］−２’（１’Ｈ）−オンの合成）
式（ＩＩ）の化合物

１６０Ｌ 反応器に、周囲温度において１，４−ジオキサン（４３Ｌ）を充填し、続いて、２，３−ジヒドロスピロ［フロ［２，３−ｇ］［１，４］ベンゾジオキシン−８，３’−インドール］−２’（１’Ｈ）−オン（６．８０ｋｇ，２３ｍｏｌ）を充填した。得られた懸濁物に、炭酸セシウム（１８．７ｋｇ，５８ｍｏｌ）を添加し、上記混合物を８２℃へと７２分間にわたって加熱した。容器を、１，４−ジオキサン（ｄｉｏｚａｎｅ）（７Ｌ）ですすぎ、２−（クロロメチル）−３−（トリフルオロメチル）ピリジンヒドロクロリド（５．８８ｋｇ，２５ｍｏｌ）を、３５分間にわたって少しずつ添加するために使用した。上記反応混合物の温度を、１００℃へと４３分間にわたって上げ、上記混合物を１００℃で３時間にわたって攪拌し、２０℃へと９０分間にわたって冷却し、さらに１６時間にわたって攪拌した。脱イオン水（４０Ｌ）およびジクロロメタン（４０Ｌ）を添加し、得られた混合物を、２２℃で１２分間にわたって攪拌した。上記攪拌をやめ、その相を２１分間にわたって分離させた。その水相および有機相を、ドラムへと分離した。１６０Ｌ 反応器に、上記水相を充填し、ジクロロメタン（４１Ｌ）を添加した。上記混合物を、１９℃において１０分間にわたって攪拌し、上記攪拌をやめ、その相を、１０分間にわたって分離させた。上記水相を除去し、先の工程からの上記有機相を、上記ドラムから上記反応器へ移した。脱イオン水（４０Ｌ）を添加し、上記混合物を２２℃において１０分間にわたって攪拌した。上記攪拌をやめ、その相を４３分間にわたって分離させた。その水相を除去し、その有機相を、７１２〜９７ｍｂａｒの減圧下で１９〜３８℃において乾燥するまで濃縮した。上記残渣に、メタノール（５６Ｌ）を１９分間にわたって添加した。得られた懸濁物を、３℃へと６４分間にわたって冷却し、９８分間にわたって攪拌した。上記混合物を濾過し、上記濾過ケーキを冷（０℃）メタノール（１４Ｌ）で洗浄し、９０〜９ｍｂａｒの減圧下で２１〜４６℃において１０．５時間にわたって乾燥させて、１’−｛［３−（トリフルオロメチル）ピリジン−２−イル］メチル｝−２，３−ジヒドロスピロ［フロ［２，３−ｇ］［１，４］ベンゾジオキシン−８，３’−インドール］−２’（１’Ｈ）−オン（８．００ｋｇ，８１％）を灰白色固体として得た：純度（ＨＰＬＣ−ＵＶ） ９９．８％；

（合成実施例５）
（式（ＩＩ）の化合物のＳＭＢクロマトグラフィーによる分離）
上記式（ＩＩ）の化合物を、上記式（ＩＩ−Ｓ）の化合物および上記式（ＩＩ−Ｒ）の化合物へと、ＳＭＢクロマトグラフィーによって以下の条件下で分離した：
抽出：１８２．６７ｍＬ／分
ラフィネート：６７．４４ｍＬ／分
溶出：２２４．１１ｍＬ／分
供給：２６．０ｍＬ／分
再循環：４２０ｍＬ／分
稼働時間：１．０５分
温度：２５℃
圧力：５０〜５５ｂａｒ
上記供給溶液（１．０Ｌの移動相（９７：３（ｖ：ｖ）ジクロロメタン／アセトンの混合物）中の６８．４ｇの式（ＩＩ）の化合物）を、上記ＳＭＢシステム（Ｎｏｖａｓｅｐ Ｌｉｃｏｓｅｐ Ｌａｂ Ｕｎｉｔ）へと連続して注入した。上記システムは、定常相としてＣｈｉｒａｌＰＡＫ（登録商標）−ＩＣの１１０ｇ（カラムあたり，１０．０ｃｍ，４．８ｃｍ内径）を含む２−２−２−２構成において８個の同一のカラムを備えていた。上記式（ＩＩ−Ｒ）の化合物は、ラフィネートストリーム中に含まれており、上記式（Ｉ−Ｓ）の化合物は、抽出ストリーム中に含まれていた。

合計１０．６２ｋｇの上記式（ＩＩ）の化合物を、上記の条件を使用して、ＳＭＢクロマトグラフィーによって加工処理した。キラル純度（ＨＰＬＣ）＞９９．０ ａ／ａを有する全ての抽出画分をプールし、容積２６Ｌへと減圧下で濃縮して、１００Ｌ 反応器へと移した。上記溶液を、７００〜５９０ｍｂａｒの減圧下で２６〜３７℃において、１３Ｌの蒸留物が集められるまでさらに濃縮した。メタノール（２５Ｌ）を添加し、上記混合物を、６５０〜３６０ｍｂａｒの減圧下で３０〜３８℃において、１５Ｌの蒸留物が集められるまで濃縮した。上記混合物を２０℃へと冷却し、メタノール（１５Ｌ）を添加した。上記混合物を、６５０〜３２０ｍｂａｒの減圧下で２０〜３９℃において、１５Ｌの蒸留物が集められるまで濃縮し、１℃へと５３分間にわたって冷却し、さらに７０分間にわたって攪拌した。上記懸濁物を濾過し、上記濾過ケーキを、冷（０℃）メタノール（９Ｌ）で洗浄し、周囲温度において、窒素ガス流の下で１５．５時間にわたって乾燥させた。上記固体を、４０〜１ｍｂａｒの減圧下で５０℃において１９５分間にわたってさらに乾燥させて、上記式（ＩＩ−Ｓ）の化合物、すなわち、（Ｓ）−１’−｛［３−（トリフルオロメチル）ピリジン−２−イル］メチル｝−２，３−ジヒドロスピロ［フロ［２，３−ｇ］［１，４］ベンゾジオキシン−８，３’−インドール］−２’（１’Ｈ）−オン（３．６２ｋｇ）を無色の固体として得た：純度（ＨＰＬＣ−ＵＶ） １００％；

ｅｅ（ＣＨＩＲＡＬＰＡＫ ＩＣ，ジクロロメタン／アセトン ９７／３（ｖ／ｖ）） １００％。

上記式（ＩＩ−Ｒ）の化合物、すなわち、（Ｒ）−１’−｛［３−（トリフルオロメチル）ピリジン−２−イル］メチル｝−２，３−ジヒドロスピロ［フロ［２，３−ｇ］［１，４］ベンゾジオキシン−８，３’−インドール］−２’（１’Ｈ）−オンを、標準的手順によって上記ラフィネートから単離した。

（生物学的アッセイ）
本明細書に記載される発明が、より十分に理解され得るように、以下の生物学的アッセイを、本明細書において調製される化合物の有用性を実証するために示す。この実施例は例示目的に過ぎず、本発明を限定するとしていかなる様式においても解釈されるべきでないことが理解されるべきである。

（生物学的実施例１）
（グアニジンインフラックスアッセイ（インビトロアッセイ））
この実施例は、内因性に発現された起源もしくは異種で発現された起源のいずれかの細胞において安定に発現された、ヒトもしくはラットの電位開口型ナトリウムチャネルに対する試験薬剤を試験し、かつプロファイリングするためのインビトロアッセイを記載する。このアッセイはまた、電位開口型ナトリウムチャネルを調節する（好ましくは、ブロックする）化合物のＩＣ_５０を決定するために有用である。上記アッセイは、Ｒｅｄｄｙ，Ｎ．Ｌ．，ら，Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．（１９９８），４１（１７）：３２９８−３０２によって記載されるグアニジンインフラックスアッセイに基づく。

上記グアニジンインフラックスアッセイは、ハイスループットマイクロプレートベースの形式において電位開口型ナトリウムチャネルのイオンフラックス活性を決定するために使用されるラジオトレーサーフラックスアッセイである。上記アッセイは、維持されたインフラックスを生じる種々の公知の電位開口型ナトリウムチャネル調節因子と組み合わせて^１４Ｃ−グアニジン塩酸塩を使用して、試験薬剤の有効性をアッセイするものである。有効性は、ＩＣ_５０計算によって決定される。選択性は、目的の電位開口型ナトリウムチャネルに対する上記化合物の有効性と、他の電位開口型ナトリウムチャネルに対するその有効性とを比較することによって決定される（「選択性プロファイリング」ともいわれる）。

試験薬剤の各々を、目的の電位開口型ナトリウムチャネルを発現する細胞に対してアッセイする。電位開口型ナトリウムチャネルは、ＴＴＸ感受性もしくは感受性がないとして特徴付けられる。この特性は、他の電位開口型ナトリウムチャネルとの混合集団中に目的の電位開口型ナトリウムチャネルがある場合に、目的の電位開口型ナトリウムチャネルの活性を評価するときに有用である。以下の表１は、ＴＴＸの存在下もしくは非存在下での特定の電位開口型ナトリウムチャネル活性についてのスクリーニングにおいて有用な細胞系をまとめる。

電位開口型ナトリウムチャネルを異種発現する不死化細胞系を使用することもまた、可能である。このような細胞系のクローニング、安定なトランスフェクションおよび増殖は、当業者に公知である（例えば、Ｋｌｕｇｂａｕｅｒ，Ｎら，ＥＭＢＯ Ｊ．（１９９５），１４（６）：１０８４−９０；およびＬｏｓｓｉｎ，Ｃ．ら，Ｎｅｕｒｏｎ（２００２），３４，ｐｐ．８７７−８８４を参照のこと）。

目的の電位開口型ナトリウムチャネルを発現する細胞を、供給元に従って増殖させるか、または組換え細胞の場合には、選択的増殖培地（例えば、Ｇ４１８（Ｇｉｂｃｏ／Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ））の存在下で増殖させる。上記細胞を、培養ディッシュから酵素溶液（１×）トリプシン／ＥＤＴＡ（Ｇｉｂｃｏ／Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）で分離し、血球計算板（Ｎｅｕｂａｕｅｒ）を使用して密度および生存率について分析する。分離した細胞を洗浄し、それらの培養培地中で再懸濁し、次いで、ポリ−Ｄ−リジンコーティングしたシンチプレート（Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ）へ播種し（約１００，０００細胞／ウェル）、３７℃／５％ ＣＯ_２で２０〜２４時間にわたってインキュベートする。低ナトリウムＨＥＰＥＳ緩衝化食塩溶液（ＬＮＨＢＳＳ）（１５０ｍＭ 塩化コリン（ｃｈｏｌｉｎｅ ｃｈｌｏｒｉｄｅ）、２０ｎＭ ＨＥＰＥＳ（Ｓｉｇｍａ）、１ｍＭ 塩化カルシウム、５ｍＭ 塩化カリウム、１ｍＭ 塩化マグネシウム、１０ｍＭ グルコース）で完全に洗浄した後、試験薬剤をＬＮＨＢＳＳで希釈し、次いで、所望の濃度で各ウェルに添加する（試験薬剤の種々の濃度が使用され得る）。上記活性化／放射標識混合物は、電位開口型ナトリウムチャネルを通過するフラックスを測定するために、アルカロイド（例えば、ベラトリジンもしくはアコニチン（Ｓｉｇｍａ））またはピレスロイド（例えば、デルタメトリン、サソリＬｅｉｕｒｕｓ ｑｕｉｎｑｕｅｓｔｒｉａｔｕｓ ｈｅｂｒａｅｕｓ由来の毒（Ｓｉｇｍａ））および^１４Ｃ−グアニジン塩酸塩（ＡＲＣ）を含む。

上記細胞に試験薬剤および活性化／放射標識混合物を添加した後、上記ポリ−Ｄ−リジンコーティングしたシンチプレートを、周囲温度でインキュベートする。インキュベーション後、上記ポリ−Ｄ−リジンコーティングしたシンチプレートを、グアニジン（Ｓｉｇｍａ）を補充したＬＮＨＢＳＳで完全に洗浄する。上記ポリ−Ｄ−リジンコーティングしたシンチプレートを乾燥させ、次いで、Ｗａｌｌａｃ ＭｉｃｒｏＢｅｔａ ＴｒｉＬｕｘ（Ｐｅｒｋｉｎ−Ｅｌｍｅｒ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）を使用して計数する。上記試験薬剤が電位開口型ナトリウムチャネル活性をブロックする能力を、上記異なる電位開口型ナトリウムチャネルを発現する細胞の内部に存在する^１４Ｃ−グアニジンの量を比較することによって決定する。このデータに基づいて、本明細書の他の箇所で示されるように、種々の計算が、特定の電位開口型ナトリウムチャネルに対して試験薬剤が選択的であるか否かを決定するために使用され得る。

特定の電位開口型ナトリウムチャネルに対する試験薬剤のＩＣ_５０値は、上記の一般的方法を使用して決定され得る。上記ＩＣ_５０は、１μＭ、５μＭもしくは１０μＭの出発濃度で、ナノモル濃度未満の範囲、ナノモル濃度範囲および低マイクロモル濃度範囲に達する最終濃度で連続希釈して、２連もしくは３連において３点、８点、１０点、１２点もしくは１６点の曲線を使用して決定され得る。代表的には、試験薬剤の中点濃度を１μＭで設定し、１／２希釈大きいもしくは小さい一連の濃度が、適用される（例えば、０．５μＭ；５μＭおよび０．２５μＭ；１０μＭおよび０．１２５μＭ；２０μＭなど）。上記ＩＣ_５０曲線は、４パラメーター論理モデルもしくは正弦用量−応答モデル式（適合＝（Ａ＋（（Ｂ−Ａ）／（１＋（（Ｃ／ｘ）＾Ｄ））））を使用して計算される。

倍数選択性、選択性の係数（ｆａｃｔｏｒ ｏｆ ｓｅｌｅｃｔｉｖｉｔｙ）もしくは選択性の倍数は、試験電位開口型ナトリウムチャネルのＩＣ_５０値を参照電位開口型ナトリウムチャネル（例えば、Ｎａ_Ｖ１．５）で除算することによって計算される。

よって、本明細書で開示される方法によって調製される化合物は、表２において以下に示されるように、ｈＮａ_Ｖ１．７に対する電位開口型ナトリウムチャネル遮断活性を示した：
表２

本明細書中で言及されそして／または出願データシートに列挙される上記米国特許、米国特許出願公開、米国特許出願、外国特許、外国特許出願および非特許刊行物の全ては、それらの全体が本明細書に参考として援用される。

前述の発明は、理解を促進するために幾分詳細に記載されてきたが、特定の変更および改変が、添付の特許請求の範囲の範囲内で実施され得ることは明らかである。よって、上記記載される実施形態は、限定としてではなく例示としてみなされるべきであり、本発明は、本明細書に示される詳細に限定されるべきではないが、添付の特許請求の範囲の範囲および等価物内で改変され得る。

Claims (6)

1. 式（Ｉ）の化合物：
   

   

   
   もしくはその薬学的に受容可能な塩を、単一の立体異性体もしくは鏡像異性体またはその混合物として調製する方法であって、
   ここで該方法は、
   ａ）式（７）の化合物：
   

   

   もしくはその薬学的に受容可能な塩を、塩基で、適切な条件下で処理して、式（８）の化合物：
   

   

   
   もしくはその薬学的に受容可能な塩を形成する工程、
   ｂ）該式（８）の化合物：
   

   

   
   もしくはその薬学的に受容可能な塩を、式（９）の化合物：
   

   

   もしくはその薬学的に受容可能な塩で、適切な条件下で処理して、該式（Ｉ）の化合物もしくはその薬学的に受容可能な塩を、単一の立体異性体もしくは鏡像異性体またはその混合物として得る工程、
   を包含する、方法。
2. 前記式（７）の化合物の調製をさらに含む請求項１に記載の方法であって、ここで該方法は、式（６）の化合物：
   

   

   
   もしくはその薬学的に受容可能な塩を、標準的な光延反応条件下で処理して、該式（７）の化合物もしくはその薬学的に受容可能な塩を形成する工程を包含する、方法。
3. 前記式（６）の化合物の調製をさらに含む請求項２に記載の方法であって、ここで該方法は、式（５）の化合物：
   

   

   
   もしくはその薬学的に受容可能な塩を、アルデヒドで、適切な条件下で処理して、該式（６）の化合物もしくはその薬学的に受容可能な塩を形成する工程を包含する、方法。
4. 前記式（５）の化合物の調製をさらに含む請求項３に記載の方法であって、ここで該方法は、式（４）の化合物：
   

   

   
   もしくはその薬学的に受容可能な塩を適切な条件下で処理して、該式（５）の化合物もしくはその薬学的に受容可能な塩を形成する工程を包含する、方法。
5. 前記式（４）の化合物の調製をさらに含む請求項４に記載の方法であって、ここで該方法は、
   ａ）式（２）の化合物：
   

   

   
   もしくはその薬学的に受容可能な塩と、式（３）のグリニャール試薬：
   

   

   
   
   とを、適切な条件下で反応させて、中間生成物を形成する工程；および
   ｂ）該ａ）の中間生成物と、式（１）の化合物：
   

   

   
   もしくはその薬学的に受容可能な塩とを、適切な条件下で反応させて、該式（４）の化合物もしくはその薬学的に受容可能な塩を形成する工程を包含する、方法。
6. 前記式（Ｉ）の化合物もしくはその薬学的に受容可能な塩を適切な条件下で分離して、式（Ｉ−Ｓ）の化合物：
   

   

   
   もしくはその薬学的に受容可能な塩、および式（Ｉ−Ｒ）の化合物：
   

   

   
   もしくはその薬学的に受容可能な塩を得る工程をさらに包含する、請求項１に記載の方法。