JP5588970B2 - ハイブリダイゼーション組成物及び方法 - Google Patents
ハイブリダイゼーション組成物及び方法 Download PDFInfo
- Publication number
- JP5588970B2 JP5588970B2 JP2011511105A JP2011511105A JP5588970B2 JP 5588970 B2 JP5588970 B2 JP 5588970B2 JP 2011511105 A JP2011511105 A JP 2011511105A JP 2011511105 A JP2011511105 A JP 2011511105A JP 5588970 B2 JP5588970 B2 JP 5588970B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- hybridization
- polar aprotic
- composition
- aprotic solvent
- probe
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Fee Related
Links
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
- C12Q1/6876—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
- C12Q1/6813—Hybridisation assays
- C12Q1/6832—Enhancement of hybridisation reaction
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
- C12Q1/6813—Hybridisation assays
- C12Q1/6841—In situ hybridisation
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q2527/00—Reactions demanding special reaction conditions
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10T—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER US CLASSIFICATION
- Y10T436/00—Chemistry: analytical and immunological testing
- Y10T436/14—Heterocyclic carbon compound [i.e., O, S, N, Se, Te, as only ring hetero atom]
- Y10T436/142222—Hetero-O [e.g., ascorbic acid, etc.]
- Y10T436/143333—Saccharide [e.g., DNA, etc.]
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Immunology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Description
ここで、XはOであり、R1はアルキルジイルである。
ここで、Xは任意であり、存在する場合は、O又はSから選択され;
Zは任意であり、存在する場合は、O又はSから選択され;
A及びBは独立してO又はN又はS又はアルキルジイルの一部又は第1級アミンであり;
Rはアルキルジイルであり;
YはO又はS又はCである。
− 第一核酸配列を提供し、
− 第二核酸配列を提供し、
− 少なくとも一種の極性非プロトン溶媒を二本鎖ヌクレオチド配列を変性させるのに有効な量で含有する水性組成物を提供し、
− 第一及び第二核酸配列と水性組成物を、第一及び第二核酸配列をハイブリダイズさせるのに少なくとも十分な時間の間、組合せ
ることを含む方法を開示する。
一実施態様では、第一及び第二核酸をハイブリダイズさせるのに十分な量のエネルギーが提供される。
一実施態様では、第二核酸配列への第一核酸配列のハイブリダイゼーションは8時間未満、例えば6時間未満、5時間未満、4時間未満、3時間未満、2時間未満、又は1時間未満に生じる。
− 第一核酸配列を提供し、
− 第二核酸配列と少なくとも一種の極性非プロトン溶媒を、二本鎖ヌクレオチド配列を変性させるのに有効な量で含有する水性組成物を上記第一核酸配列に、第一及び第二核酸配列をハイブリダイズさせるのに少なくとも十分な時間の間、適用する
ことを含みうる。
一実施態様では、第一及び第二核酸をハイブリダイズさせるのに十分な量のエネルギーが提供される。
一実施態様では、第二核酸配列への第一核酸配列のハイブリダイゼーションは8時間未満、例えば6時間未満、5時間未満、4時間未満、3時間未満、2時間未満、又は1時間未満に生じる。
本発明の他の態様によれば、変性及びハイブリダイゼーション工程は別個に生じうる。例えば、標本は、プローブなしの溶液を用いて変性され、その後にプローブとハイブリダイズされうる。
他の態様では、本発明はハイブリダイゼーションが1時間未満で起こる方法に関する。他の実施態様では、ハイブリダイゼーションは30分未満で起こる。更に他の実施態様では、ハイブリダイゼーションは15分未満で起こる。他の実施態様では、ハイブリダイゼーションは5分未満で起こる。
また別の態様によれば、本発明はハイブリダイゼーションアッセイに使用するための本発明に記載された水性組成物を含む組成物の使用に関する。
本発明の文脈において、次の用語は次の通りに理解されなければならない:
「生物学的試料」は、一又は複数の細胞又は細胞断片の任意のインビボ、インビトロ、又はインサイツ試料として理解されなければならない。これは、例えば単細胞又は多細胞生物、組織片、細胞試料、染色体スプレッド、精製核酸配列、例えば生物学ベースのシステム又は化学合成、マイクロアレイ、又は核酸チップの他の形態によって作製された人工的に作製された核酸配列でありうる。一実施態様では、試料は哺乳動物試料、例えば ヒト、マウス、ネコ、ラット、又はイヌ試料である。
本発明に使用される適切な極性非プロトン溶媒は、そのハンセン溶解度パラメータに基づいて選択することができる。ある溶媒に対してHSPを実験的に決定し及び/又は計算するための方法は当該分野で知られており、HSPは1200を越える化学物質に対して報告されている。
式1:δP=37.4(双極子モーメント)/V1/2
ここで、Vはモル体積である。Hパラメータを計算するための式はない。その代わりに、Hパラメータは通常グループ寄与に基づいて決定される。
式2:(Ra)2=4(δD1−δD2)2+(δP1−δP2)2(δH1−δH2)2
ここで、添え字1は参照試料を示し、添え字2は試験化学物質を示し、全ての値はMPa1/2である。良好な溶解度は、Raが溶解度球の実験的に決定された半径Roよりも少ないことを必要とする。2つの溶媒間の相対的なエネルギー差、つまりRED数は、式3に示すように、Roに対するRaの比をとることによって計算することができる。
式3:RED=Ra/Ro
1.0未満のRED数は高親和性を示し;1.0に等しいか近いRED数は境界条件を示し;漸次高くなるRED数は漸次低くなる親和性を示している。
他の適切な極性非プロトン溶媒は環ウレタン基(NHCOO−)を含みうる。しかしながら、1,3−ジメチル−2−イミダゾリジノンは本発明のハイブリダイゼーション組成物において使用される場合シグナルを生じないので、必ずしも全てのかかる化合物が適切な訳ではない。当業者はここに記載の本発明の組成物及び方法に有用な化合物をスクリーニングしてもよい。本発明における使用に適していよう例示的な化学物質を以下の表2及び3に記載する。
(1)ハイブリダイゼーション溶液
伝統的なハイブリダイゼーション溶液は当該分野で知られている。かかる溶液は、例えば緩衝剤、促進剤、キレート剤、塩、洗浄剤、及びブロッキング剤を含みうる。
例えば、緩衝剤は、SSC、HEPES、SSPE、PIPES、TMAC、TRIS、SET、クエン酸、リン酸バッファー、例えばリン酸カリウム又はピロリン酸ナトリウム等を含みうる。緩衝剤は0.5xから50xの濃度で存在しうる。典型的には、緩衝剤は2xから10xの濃度で存在する。
塩は塩化ナトリウム、リン酸ナトリウム、リン酸マグネシウム等を含みうる。塩は1mMから750mMの濃度で存在しうる。典型的には、塩は10mMから500mMの濃度で存在する。
核酸ブロッキング剤は、酵母tRNA、ホモポリマーDNA、変性サケ精液DNA、ニシン精液DNA、全ヒトDNA、COT1 DNA等を含みうる。ブロッキング核酸は、0.05mg/mLから100mg/mLの濃度で存在しうる。
例えば、本発明の組成物がNaClのような塩及び/又はリン酸バッファーを含む場合、塩は、0−1200mMのNaCl及び/又は0−200mMのリン酸バッファーの濃度で存在しうる。ある実施態様では、塩の濃度は、例えば300mMのNaCl及び5mMのリン酸バッファー、又は600mMのNaCl及び10mMのリン酸バッファーでありうる。
本発明の組成物は、例えば細胞膜への非特異的結合を減少させる薬剤、例えばサケ精液又は少量の全ヒトDNAを含み得、又は例えばそれらは標的への例えば反復配列の結合をブロックするためのブロッキング剤、例えば多量の全ヒトDNA又はリピートリッチ化DNA又は特異的ブロッキング剤、例えばPNA又はLNA断片及び配列を含みうる。これらの薬剤は0.01−100μg/μL又は0.01−100μMの濃度で存在しうる。例えば、ある実施態様では、これらの薬剤は0.1μg/μLの全ヒトDNA、又は0.1μg/μLの非ヒトDNA、例えばニシン精液、サケ精液、又はウシ胸腺DNA、又は5μMのブロッキングPNAであろう。
異なった極性非プロトン溶媒は本発明の組成物に異なった性質を付与しうる。例えば、極性非プロトン溶媒の選択は、ある種の極性非プロトン溶媒は経時的に分解しうるので、組成物の安定性に寄与しうる。例えば、極性非プロトン溶媒のエチレンカーボネートは比較的安定な分子であるエチレングリコールと、水と相互作用して炭酸を形成しうる二酸化炭素に分解し、本発明の組成物の酸性を変える。理論に拘束されるものではないが、エチレンカーボネートの分解時のpH変化は本発明の組成物をハイブリダイゼーションに対して効果的ではないものにすると思われる。しかしながら、安定性は、典型的には約pH7.4で使用される伝統的なリン酸バッファーの代わりにpH6.2のバッファーとしてクエン酸を添加し、及び/又は例えば0.1%から10%、又は0.5%から5%、例えば1%、2%、3%等の濃度でエチレングリコールを添加することにより、組成物のpHを減少させることによって改善することができる。例えば、10mMのクエン酸バッファーでは、本発明の組成物はおよそ8ヶ月の間、2−8℃で安定している。安定性はまた組成物を低い温度(例えば−20℃)に保存すると、改善されうる。
他方、ある種の極性非プロトン溶媒は低濃度においてさえ二相で存在しうる。例えば、スルホラン、γ−ブチロラクトン、エチレントリチオカーボネート、グリコールサルファイト、及びプロピレンカーボネートは、室温で10、15、20、又は25%(20%のデキストラン硫酸、600mMのNaCl、10mMのクエン酸バッファー)の濃度で二相として存在する。
組成物中のデキストラン硫酸及び/又は塩の濃度を調節することにより相の数を変更することもまたできうる。一般に言えば、デキストラン硫酸濃度(伝統的な濃度が10%である)及び/又は塩濃度の低下は相の数を減少させうる。しかしながら、組成物中の特定の極性非プロトン溶媒及びその濃度に応じて、単一相をたとえ高濃度の塩及びデキストラン硫酸ででも製造できる。例えば、低量のEC(例えば15%、10%、又は5%)を含有する組成物は、デキストラン硫酸及び塩濃度を増加させることにより、一相系を尚維持しながら、良好に作用しうる。特定の実施態様では、HER2遺伝子DNAプローブ、CEN7 PNAプローブ、15%のEC、20%のデキストラン硫酸、600mMのNaCl、及び10mMのリン酸バッファーを含有する組成物は、−20℃で凍結されている。他の実施態様では、組成物は−20℃で液体である。
従って、本発明の多相系は、試料の異なった側面を簡便に検査するために使用することができる。例えば、二相系を使用して、DNAプローブで標識された試料からPNAプローブで標識された試料を分離することができよう。他には、単離された相が単一相系として使用できるようなある種のハイブリダイゼーションの利点を示す特定の相の単離が含まれる。プローブ及び/又は試料は特定の相の単離の前、又は後に加えることができる。
本発明の組成物は、特定の応用に対して結果を最適化するために変更しうる。例えば、極性非プロトン溶媒、塩、促進剤、ブロッキング剤、及び/又は水素イオン(つまりpH)の濃度を、特定の応用に対する結果を改善するために変更しうる。
例えば、極性非プロトン溶媒の濃度を、シグナル強度及びバックグラウンド染色を改善するために変更しうる。一般に、極性非プロトン溶媒の濃度が増加するにつれて、シグナル強度が増加し、バックグラウンド染色が減少する。例えば、15%のECを含有する組成物は、5%のECを含有する組成物より強いシグナルと少ないバックグラウンドを示す傾向がある。しかしながら、シグナル強度は、塩及び/又はデキストラン硫酸の濃度が増加させられる場合、低濃度の極性非プロトン溶媒(例えば0%から20%)を有する組成物に対して改善されうる。例えば、塩濃度が伝統的な塩濃度(つまり、およそ1200mMのNaCl、20mMのリン酸バッファー)のおよそ8から16倍上昇させられると、5%から10%のECで強いシグナルが観察されうる。同様に、低濃度の極性非プロトン溶媒が使用されると、高濃度のデキストラン硫酸が良好なシグナル及びバックグラウンド強度を維持するために一般に必要とされる。
また、本発明の組成物において使用されるプローブのタイプを、結果を改善するために変更しうる。例えば、本発明のある態様では、DNA/DNAプローブの組合せが、本発明の組成物におけるDNA/PNAプローブの組合せより少ないバックグラウンドを示し得、又はその逆もしかりである。他方、PNAプローブは、低塩及び/又は低極性非プロトン溶媒濃度下でDNAプローブよりも強いシグナルを示す傾向がある。実際、PNAプローブは極性非プロトン溶媒が存在しない場合にもシグナルを示す一方、DNAプローブは、極性非プロトン溶媒がないと弱いシグナルを示すかシグナルを示さない。
(1)分析試料
本発明の方法及び組成物は、細胞診、組織診断、又は分子生物学の分野における全てのタイプのハイブリダイゼーション用途において完全に又は部分的に使用されうる。一実施態様によれば、本発明の方法における第一又は第二の核酸配列が生物学的試料中に存在する。かかる試料の例は、組織試料、細胞調製物、細胞断片調製物、及び単離された又はリッチ化された細胞成分調製物を含む。試料は、様々な組織、例えば乳房、結腸直腸、前立腺、肺、頭頸部、胃、膵臓、食道、肝臓、及び膀胱、又は他の関連する組織及びその腫瘍、任意の細胞懸濁液、血液試料、細針生検、腹水、痰、腹膜洗浄液、尿、糞便、細胞掻爬、細胞スミア、サイトプシン又は細胞プレップ細胞から由来しうる。
本発明の組成物及び方法は、細胞及び組織試料に対して当該分野で知られている全てのタイプの核酸ハイブリダイゼーション技術において完全に又は部分的に使用することができる。かかる技術は、例えばインサイツハイブリダイゼーション(ISH)、蛍光インサイツハイブリダイゼーション(FISH;多色FISH、Fiber−FISH等を含む)、発色性インサイツハイブリダイゼーション(CISH)、銀インサイツハイブリダイゼーション(SISH)、比較ゲノムハイブリダイゼーション(CGH)、染色体彩色、及びアレイインサイツを含む。
細胞及び組織試料でのハイブリダイゼーションアッセイは、特異的DNA配列の数、サイズ、及び/又は位置を決定するための重要なツールである。例えば、CGHでは、全ゲノムが染色され、異常なコピー数の領域の検出に対して、正常な参照ゲノムと比較される。典型的には、患者組織及び正常なコントロール組織からのDNAが異なった色のプローブで標識される。DNAのプールが混合され、正常な染色体の分裂中期スプレッドに(又はアレイ−又はマトリックス−CGHでは、マイクロアレイチップに)加えられる。ついで、異常なコピー数を持つ領域を同定するために色の比が比較される。
本発明の方法は核酸鎖のハイブリダイゼーションにおいて極性非プロトン溶媒を使用することを含む。本発明の組成物は特に上記方法に有用である。
本発明の組成物を使用するハイブリダイゼーション方法は、殆どは二本鎖の形態である標的核酸配列を含む試料に組成物を適用することを含みうる。通常、標的配列とハイブリダイズするプローブへのアクセスを確保するために、試料及び組成物を加熱して標的核酸を変性させる。変性中、極性非プロトン溶媒は配列と相互作用し、標的の変性と標的に対するプローブの再アニーリングを容易にする。本発明において特定された極性非プロトン溶媒は、このプロセスをかなり速くし、ホルムアミドと比較してハイブリダイゼーション条件の厳しさ及び毒性を低減する。
よって、本発明の組成物及び方法は、伝統的なハイブリダイゼーション溶液及び方法に関連する問題の多くを解決する。
CISHスライドの評価は、オリンパスBX51光学顕微鏡を使用して、4x、10x、20x、40x、及び60xの対物下で実施した。
ヒト(扁桃腺、乳癌、腎臓及び結腸)由来の切断されたホルマリン固定パラフィン包埋(FFPE)複数組織アレイ片を有するスライドを、60℃で30−60分べークし、キシレン浴で脱パラフィンし、エタノール浴で再水和させ、ついで、洗浄バッファーに移した。ついで、試料を前処理溶液中で最小95℃で10分間前処理し、2×3分洗浄した。ついで、試料を37℃でペプシンRTUを用いて3分間、消化させ、2×3分洗浄し、一連のエタノール蒸発で脱水し、空気乾燥させた。ついで、試料を、個々の実験で記載されたようにして10μLのFISHプローブと共にインキュベートした。ついで、試料を65℃で10分ストリンジェントな洗浄によって洗浄した後、2×3分洗浄し、ついで一連のエタノール蒸発で脱水し、空気乾燥させた。最後に、スライドを15μLのアンチフェードマウント培地にマウントした。染色が完了したところで、染色スライドのシグナル強度、形態、及びバックグラウンドを評価するために訓練を受けた観察者がスコア付けを実施した。
分裂中期調製物のスライドを、3.7%のホルムアルデヒドに2分間固定し、2×5分洗浄し、一連のエタノール蒸発で脱水し、空気乾燥させた。ついで、試料を、個々の実験で記載されたようにして10μLのFISHプローブと共にインキュベートした。ついで、試料を65℃で10分ストリンジェントな洗浄によって洗浄した後、2×3分洗浄し、ついで一連のエタノール蒸発で脱水し、空気乾燥させた。最後に、スライドを15μLのアンチフェードマウント培地にマウントした。染色が完了したところで、染色スライドのシグナル強度及びバックグラウンドを評価するために訓練を受けた観察者が、組織片のスコア付けガイドラインに記載されたようにしてスコア付けを実施した。
シグナル強度は0−3のスケールで評価され、0はシグナルなし、3は強いシグナルとした。細胞/組織構造は0−3スケールで評価し、0は構造なしで核境界なしを意味し、3はインタクトな構造と明確な核境界とした。0と3の間には、観察者がシグナル強度、組織構造、及びバックグラウンドを評価できる0.5離れた更なるグレードがある。
0 シグナルは見られない。
1 シグナル強度は弱い。
2 シグナル強度は中程度である。
3 シグナル強度は強い。
スコア付けシステムは1/2グレードの使用を許容する。
0 組織構造及び核境界は完全に破壊されている。
1 組織構造及び/又は核境界は乏しい。このグレードは、幾つかの領域が空の核である状況を含む。
2 組織構造及び/又は核境界が見られるが、核境界は不明瞭である。このグレードは数個の核が空である状況を含む。
3 組織構造及び核境界は無傷で明瞭である。
スコア付けシステムは1/2グレードの使用を許容する。
0 見られるバックグラウンドは少しないしはない。
1 幾つかのバックグラウンド。
2 中程度のバックグラウンド。
3 高いバックグラウンド。
スコア付けシステムは1/2グレードの使用を許容する。
この実施例は、本発明の組成物又は伝統的なハイブリダイゼーション溶液で処理した試料からのシグナル強度及び細胞形態を変性温度の関数として比較する。
FISHプローブ組成物I:10%デキストラン硫酸、300mMのNaCl、5mMのリン酸バッファー、40%のホルムアミド(15515−026,Invitrogen),5μMのブロッキングPNAs(Kirsten Vang Nielsen等, PNA Suppression Method Combined with Fluorescence In Situ Hybridisation (FISH) Technique inPRINS and PNA Technologies in Chromosomal Investigation, Chapter 10 (Franck Pellestor ed.) (Nova Science Publishers, Inc. 2006)を参照)、10ng/μLのテキサスレッド標識CCND1遺伝子DNAプローブ(RP11−1143E20,サイズ192kb)。
FISHプローブ組成物II:10%デキストラン硫酸,300mMのNaCl,5mMのリン酸バッファー,40%のエチレンカーボネート(03519,Fluka),5μMのブロッキングPNAs,10ng/μLのテキサスレッド標識CCND1遺伝子DNAプローブ(RP11−1143E20,サイズ192kb)。
存在する場合、異なった粘度の相を使用前に混合した。FISHプローブを示したように5分間変性し、45℃で60分間ハイブリダイズした。
実施例2
この実施例は、本発明の組成物又は伝統的なハイブリダイゼーション溶液で処理した試料からのシグナル強度及びバックグラウンド染色をハイブリダイゼーション時間の関数として比較する。
FISHプローブ組成物I:10%のデキストラン硫酸,300mMのNaCl,5mMのリン酸バッファー,40%のホルムアミド,5μMのブロッキングPNAs,10ng/μLのテキサスレッド標識CCND1遺伝子DNAプローブ。
FISHプローブ組成物II:10%のデキストラン硫酸,300mMのNaCl,5mMのリン酸バッファー,40%のエチレンカーボネート,5μMのブロッキングPNAs,10ng/μLのテキサスレッド標識CCND1遺伝子DNAプローブ。
存在する場合、異なった粘度の相を使用前に混合した。FISHプローブを82℃で5分間、ついで45℃で14時間、4時間、2時間、60分、30分、15分、0分、インキュベートした。
この実施例は、異なった極性非プロトン溶媒を有する本発明の組成物又は伝統的なハイブリダイゼーション溶液で処理した試料からのシグナル強度を比較する。
FISHプローブ組成物I:10%のデキストラン硫酸,300mMのNaCl,5mMのリン酸バッファー,40%のホルムアミド,5μMのブロッキングPNAs,10ng/μLのテキサスレッド標識CCND1遺伝子DNAプローブ。
FISHプローブ組成物II:10%のデキストラン硫酸,300mMのNaCl,5mMのリン酸バッファー,40%のエチレンカーボネート(EC),5μMのブロッキングPNAs,10ng/μLのテキサスレッド標識CCND1遺伝子DNAプローブ。
FISHプローブ組成物III:10%のデキストラン硫酸,300mMのNaCl,5mMのリン酸バッファー,40%のプロピレンカーボネート(PC)(540013,Aldrich),5μMのブロッキングPNAs,10ng/μLのテキサスレッド標識CCND1遺伝子DNAプローブ。
FISHプローブ組成物IV:10%のデキストラン硫酸,300mMのNaCl,5mMのリン酸バッファー,40%のスルホラン(SL)(T22209,Aldrich),5μMのブロッキングPNAs,10ng/μLのテキサスレッド標識CCND1遺伝子DNAプローブ。
FISHプローブ組成物V:10%のデキストラン硫酸,300mMのNaCl,5mMのリン酸バッファー,40%のアセトニトリル(AN)(C02CIIX,Lab−Scan),5μMのブロッキングPNAs,10ng/μLのテキサスレッド標識CCND1遺伝子DNAプローブ。
FISHプローブ組成物VI:10%のデキストラン硫酸,300mMのNaCl,5mMのリン酸バッファー,40%のγ−ブチロラクトン(GBL)(B103608,Aldrich),5μMのブロッキングPNAs,7.5ng/μLのテキサスレッド標識CCND1遺伝子DNAプローブ。
存在する場合、異なった粘度の相を使用前に混合した。FISHプローブを82℃で5分間、ついで45℃で60分間、インキュベートした。
この実施例は、異なった濃度の極性非プロトン溶媒を有する本発明の組成物で処理した試料からのシグナル強度を比較する。
FISHプローブ組成物:10%のデキストラン硫酸,300mMのNaCl,5mMのリン酸バッファー,10−60%のエチレンカーボネート(標示通り),5μMのブロッキングPNAs,7.5ng/μLのテキサスレッド標識IGK−定常DNA遺伝子プローブ((CTD−3050E15,RP11−1083E8;サイズ227kb)及び7.5ng/μLのFITC標識IGK−可変遺伝子DNAプローブ(CTD−2575M21,RP11−122B6,RP11−316G9;サイズ350及び429kb)。
存在する場合、異なった粘度の相を使用前に混合した。FISHプローブを82℃で5分間、ついで45℃で60分間、インキュベートした。
この実施例は、PNAブロッキングを伴う及び伴わない組成物で処理した試料からのシグナル強度及びバックグラウンド強度を比較する。
FISHプローブ組成物:10%のデキストラン硫酸,300mMのNaCl,5mMのリン酸バッファー,40%のエチレンカーボネート,7.5ng/μLのテキサスレッド標識CCND1遺伝子DNAプローブ。
存在する場合、異なった粘度の相を使用前に混合した。FISHプローブを82℃で5分間、ついで45℃で60分間、インキュベートした。
この実施例は本発明の組成物で処理された試料からのシグナル強度をプローブ濃度及びハイブリダイゼーション時間の関数として比較する。
FISHプローブ組成物:10%のデキストラン硫酸,300mMのNaCl,5mMのリン酸バッファー,40%のエチレンカーボネート,及び10、7.5、5又は2.5ng/μLのテキサスレッド標識CCND1遺伝子DNAプローブ(標記の通り)。
存在する場合、異なった粘度の相を使用前に混合した。FISHプローブを82℃で5分間、ついで45℃で3時間、2時間及び1時間、インキュベートした。
この実施例は、本発明の組成物で処理された試料からのシグナル強度を、塩、ホスフェート、及びバッファー濃度の関数として比較する。
FISHプローブ組成物:10%のデキストラン硫酸,([NaCl],[リン酸バッファー],[TRISバッファー]結果に示した通り),40%のエチレンカーボネート,7.5ng/μLのテキサスレッド標識CCND1遺伝子DNAプローブ。
存在する場合、異なった粘度の相を使用前に混合した。FISHプローブを82℃で5分間、ついで45℃で60分間、インキュベートした。
この実施例は、本発明の組成物で処理された試料からのシグナル強度をデキストラン硫酸濃度の関数として比較する。
FISHプローブ組成物:0、1、2、5、又は10%のデキストラン硫酸(標記の通り),300mMのNaCl,5mMのリン酸バッファー,40%のエチレンカーボネート,5ng/μLのテキサスレッド標識SIL−TAL1遺伝子DNAプローブ(RP1−278O13;サイズ67kb)及び6ng/μLのFITC SIL−TAL1(ICRFc112−112C1794,RP11−184J23,RP11−8J9,CTD−2007B18,133B9;サイズ560kb)。
存在する場合、異なった粘度の相を使用前に混合した。FISHプローブを82℃で5分間、ついで45℃で60分間、インキュベートした。ブロッキングなし。
この実施例は、本発明の組成物で処理された試料からのシグナル強度を、デキストラン硫酸、塩、ホスフェート、及び極性非プロトン溶媒濃度の関数として比較する。
FISHプローブ組成物Ia:34%のデキストラン硫酸,0mMのNaCl,0mMのリン酸バッファー,0%のエチレンカーボネート,10ng/μLのテキサスレッド標識HER2遺伝子DNAプローブ(サイズ218kb)及び50nMのFITC標識CEN−7 PNAプローブ。
FISHプローブ組成物Ib:34%のデキストラン硫酸,300mMのNaCl,5mMのリン酸バッファー,0%のエチレンカーボネート,10ng/μLのテキサスレッド標識HER2遺伝子DNAプローブ(サイズ218kb)及び50nMのFITC標識CEN−7 PNAプローブ。
FISHプローブ組成物Ic:34%のデキストラン硫酸,600mMのNaCl,10mMのリン酸バッファー,0%のエチレンカーボネート,10ng/μLのテキサスレッド標識HER2遺伝子DNAプローブ(サイズ218kb)及び50nMのFITC標識CEN−7 PNAプローブ。
FISHプローブ組成物IIa:32%のデキストラン硫酸,0mMのNaCl,0mMのリン酸バッファー,5%のエチレンカーボネート,10ng/μLのテキサスレッド標識HER2遺伝子DNAプローブ(サイズ218kb)及び50nMのFITC標識CEN−7 PNAプローブ。
FISHプローブ組成物IIb:32%のデキストラン硫酸,300mMのNaCl,5mMのリン酸バッファー,5%のエチレンカーボネート,10ng/μLのテキサスレッド標識HER2遺伝子DNAプローブ(サイズ218kb)及び50nMのFITC標識CEN−7 PNAプローブ.
FISHプローブ組成物IIc:32%のデキストラン硫酸,600mMのNaCl,10mMのリン酸バッファー,5%のエチレンカーボネート,10ng/μLのテキサスレッド標識HER2遺伝子DNAプローブ(サイズ218kb)及び50nMのFITC標識CEN−7 PNAプローブ.
FISHプローブ組成物IIIa:30%のデキストラン硫酸,0mMのNaCl,0mMのリン酸バッファー,10%のエチレンカーボネート,10ng/μLのテキサスレッド標識HER2遺伝子DNAプローブ(サイズ218kb)及び50nMのFITC標識CEN−7 PNAプローブ。
FISHプローブ組成物IIIb:30%のデキストラン硫酸,300mMのNaCl,5mMのリン酸バッファー,10%のエチレンカーボネート,10ng/μLのテキサスレッド標識HER2遺伝子DNAプローブ(サイズ218kb)及び50nMのFITC標識CEN−7 PNAプローブ。
FISHプローブ組成物IIIc:30%のデキストラン硫酸,600mMのNaCl,10mMのリン酸バッファー,10%のエチレンカーボネート,10ng/μLのテキサスレッド標識HER2遺伝子DNAプローブ(サイズ218kb)及び50nMのFITC標識CEN−7 PNAプローブ.
FISHプローブ組成物IVa:28%デキストラン硫酸,0mMのNaCl,0mMのリン酸バッファー,15%のエチレンカーボネート,10ng/μLのテキサスレッド標識HER2遺伝子DNAプローブ(サイズ218kb)及び50nMのFITC標識CEN−7 PNAプローブ。
FISHプローブ組成物IVb:28%のデキストラン硫酸,300mMのNaCl,5mMのリン酸バッファー,15%のエチレンカーボネート,10ng/μLのテキサスレッド標識HER2遺伝子DNAプローブ(サイズ218kb)及び50nMのFITC標識CEN−7 PNAプローブ。
FISHプローブ組成物IVc:28%のデキストラン硫酸,600mMのNaCl,10mMのリン酸バッファー,15%のエチレンカーボネート,10ng/μLのテキサスレッド標識HER2遺伝子DNAプローブ(サイズ218kb)及び50nMのFITC標識CEN−7 PNAプローブ。
FISHプローブ参照V:ブロッキングPNAを含むHER2 PharmDxプローブミックス(K5331,Dako)の標準販売バイアル。20時間の一晩のハイブリダイゼーション。
全組成物は単一相として存在していた。FISHプローブを82℃で5分間、ついで45℃で60分間、ブロッキングなしでインキュベートしたが、FISHプローブ参照Vは、PNAブロッキングし、20時間ハイブリダイズした。
この実施例は、本発明の組成物で処理された試料からのシグナル強度を、高塩(4×正常)条件下で極性非プロトン溶媒及びデキストラン硫酸濃度の関数として比較する。
FISHプローブ組成物I:0%のエチレンカーボネート,29%のデキストラン硫酸,1200mMのNaCl,20mMのリン酸バッファー,10ng/μLのテキサスレッド標識HER2遺伝子DNAプローブ及び50nMのFITC標識CEN−7 PNAプローブ。組成物は単一相であった。
FISHプローブ組成物II:5%のエチレンカーボネート,27%のデキストラン硫酸,1200mMのNaCl,20mMのリン酸バッファー,10ng/μLのテキサスレッド標識HER2遺伝子DNAプローブ及び50nMのFITC標識CEN−7 PNAプローブ。組成物は単一相であった。
FISHプローブ組成物III:10%のエチレンカーボネート,25%のデキストラン硫酸,1200mMのNaCl,20mMのリン酸バッファー,10ng/μLのテキサスレッド標識HER2遺伝子DNAプローブ及び50nMのFITC標識CEN−7 PNAプローブ。組成物は単一相であった。
FISHプローブ組成物IV(試験せず):20%のエチレンカーボネート,21%のデキストラン硫酸,1200mMのNaCl,20mMのリン酸バッファー,10ng/μLのテキサスレッド標識HER2遺伝子DNAプローブ及び50nMのFITC標識CEN−7 PNAプローブ。組成物は二つの相を有していた。
この実施例は、本発明の組成物の異なった相で処理した試料からのシグナル強度及びバックグラウンドを比較する。
FISHプローブ組成物:10%のデキストラン硫酸,300mMのNaCl,5mMのリン酸バッファー,40%のエチレンカーボネート,8ng/μLのテキサスレッド標識HER2遺伝子DNAプローブ及び600nMのFITC標識CEN−17 PNAプローブ。FISHプローブを82℃で5分間、ついで45℃で60分間、インキュベートした。ブロッキングなし。
この実施例は前の実施例と同様であるが、異なったDNAプローブ及びECの代わりにGBLを使用している。
FISHプローブ組成物:10%のデキストラン硫酸,300mMのNaCl,5mMのリン酸バッファー,40%のGBL,10ng/μLのテキサスレッド標識CCND1遺伝子DNAプローブ及び600nMのFITC標識CEN−17 PNAプローブ。
FISHプローブを82℃で5分間、ついで45℃で60分間、インキュベートした。ブロッキングなし。
この実施例は、本発明の組成物中の相の数を、極性非プロトン溶媒及びデキストラン硫酸濃度の関数として調べる。
FISHプローブ組成物:10又は20%のデキストラン硫酸;300mMのNaCl;5mMのリン酸バッファー;0、5、10、15、20、25、30%のEC;10ng/μLのプローブ.
この実施例は、本発明の異なった組成物で処理した試料からのシグナル強度及びバックグラウンドをプローブ濃度及びハイブリダイゼーション時間の関数として比較する。
FISHプローブ組成物I:10ng/μLのHER2 TxRed標識DNAプローブ(標準濃度)及び標準濃度のCEN7 FITC標識PNAプローブ(50nM);15%のEC;20%のデキストラン硫酸;600mMのNaCl;10mMのリン酸バッファー。
FISHプローブ組成物II:5ng/μLのHER2 TxRed標識DNAプローブ(標準濃度の1/2)及び標準濃度(50nM)のFITC標識CEN7 PNAプローブ;15%のEC;20%のデキストラン硫酸;600mMのNaCl;10mMのリン酸バッファー。
FISHプローブ組成物III:2.5ng/μLのHER2 TxRed標識DNAプローブ(標準濃度の1/4)及び1/2の標準濃度(25nM)のCEN7 PNAプローブ;15%のEC;20%のデキストラン硫酸;600mMのNaCl;10mMのリン酸バッファー。
組成物I−IIIは単一相として存在していた。FISHプローブを82℃で5分間、ついで45℃で3時間、2時間及び1時間、インキュベートした。
この実施例は、本発明の組成物で処理された試料からのシグナル強度及びバックグラウンドを、ブロッキング剤の関数として比較する。
FISHプローブ組成物:15%のEC;20%のデキストラン硫酸;600mMのNaCl;10mMのリン酸バッファー;2.5ng/μLのHER2 TxRed標識DNAプローブ(標準濃度の1/4)及び標準濃度の1/2の(300nM)FITC標識CEN17 PNAプローブ。試料は、本発明の組成物を使用するハイブリダイゼーション前に、(a)なし;(b)0.1μg/μLのCOT1(15279−011,Invitrogen);(c)0.3μg/μLのCOT1;又は(d)0.1μg/μLの全ヒトDNAでブロックした。
全ての試料は単一相として存在していた。FISHプローブを82℃で5分間、ついで45℃で60分、インキュベートした。
この実験は、本発明の組成物を使用してバックグラウンド染色を除去する異なった方法を比較する。
全ての組成物は、15%のEC、20%のデキストラン硫酸、600mMのNaCl、10mMのリン酸バッファー、2.5ng/μLのHER2 DNAプローブ(標準濃度の1/4)、300nMのCEN17 PNAプローブ(標準濃度の1/2)、及び次のバックグラウンド低減剤の一つを含んでいた:
A)5mMのブロッキング−PNA(Kisrsten Vang Nielsen等, PNA Suppression Method Combined with Fluorescence In Situ Hybridisation (FISH) Technique inPRINS and PNA Technologies in Chromosomal Investigation, Chapter 10 (Franck Pellestor編) (Nova Science Publishers, Inc. 2006)を参照)
B)0.1μg/μLのCOT−1 DNA
C)0.1μg/μLの全ヒトDNA(THD)(超音波処理未標識THD)
D)0.1μg/μLの剪断サケ精液 DNA(AM9680,Ambion)
E)0.1μg/μLのウシ胸腺 DNA(D8661,Sigma)
F)0.1μg/μLのニシン精液DNA(D7290,Sigma)
G)0.5%のホルムアミド
H)2%のホルムアミド
I)1%のエチレングリコール(1.09621,Merck)
J)1%のグリセロール(1.04095,Merck)
K)1%の1,3−プロパンジオール(533734,Aldrich)
L)1%のH2O(コントロール)
全ての試料は単一相として存在していた。プローブを82℃で5分間、ついでFFPE組織片上で45℃で60分及び120分、インキュベートした。
この実験は、二つの異なった極性非プロトン溶媒を使用する上相及び下相からのシグナル強度を比較する。
FISHプローブ組成物I:10%のデキストラン硫酸,300mMのNaCl,5mMのリン酸バッファー,40%のエチレントリチオカーボネート(ET)(E27750,Aldrich),5μMのブロッキングPNAs,10ng/μLのテキサスレッド標識CCND1遺伝子DNAプローブ。
FISHプローブ組成物II:10%のデキストラン硫酸,300mMのNaCl,5mMのリン酸バッファー,40%のグリコールサルファイト(GS)(G7208,Aldrich),5μMのブロッキングPNAs,10ng/μLのテキサスレッド標識CCND1遺伝子DNAプローブ。
FISHプローブを82℃で5分間、ついで45℃で60分、インキュベートした。
この実験は一相系を形成する様々な極性非プロトン溶媒の能力を調べる。
全ての組成物は、20%のデキストラン硫酸、600mMのNaCl、10mMのリン酸バッファー、及び10、15、20、又は25%の次の極性非プロトン溶媒の一つを含んでいた:
スルホラン
γ−ブチロラクトン
エチレントリチオカーボネート
グリコールサルファイト
プロピレンカーボネート
結果: 調べた全ての濃度で極性非プロトン溶媒の全てが使用された組成物において少なくとも2相系をつくり出した。しかしながら、これは、これらの化合物が他の組成物条件下で一相系をつくることができることを排除しない。
この実験は、複数のFFPE組織切片に対する発色性インサイツハイブリダイゼーション(CISH)解析における本発明の組成物の使用を調べる。
FISHプローブ組成物I:4.5ng/μLのTCRAD FITC標識遺伝子DNAプローブ(標準濃度の1/4)(RP11−654A2,RP11−246A2,CTP−2355L21,RP11−158G6,RP11−780M2,RP11−481C14;サイズ1018kb);15%のEC;20%のデキストラン硫酸;600mMのNaCl;10mMのクエン酸バッファー,pH6.0。
FISHプローブ組成物II:4.5ng/μLのTCRAD FITC標識遺伝子DNAプローブ(標準濃度の1/4)(サイズ1018kb);15%のEC;20%のデキストラン硫酸;600mMのNaCl;10mMのクエン酸バッファー,pH6.0;0.1ug/uLの剪断サケDNA精子。
FISHプローブ組成物III:300nMの各個々のFITC標識PNA CEN17プローブ(標準濃度の1/2);15%のEC;20%のデキストラン硫酸;600mMのNaCl;10mMのクエン酸バッファー,pH6.0。
全ての試料は、Dako DuoCISHプロトコル(SK108)及びスプリットプローブの組成物を使用して分析したが、但し、ストリンジェントな洗浄を10分の代わりに20分間実施され、DuoCISHレッド色素原工程は使用しなかった。
この実施例は、二つのDNAプローブを持つ本発明の組成物で処理されたFFPE組織切片からのシグナル強度及びバックグラウンドを比較する。
FISHプローブ組成物I:9ng/μLのIGH FITC標識遺伝子DNAプローブ(RP11−151B17,RP11−112H5,RP11−101G24,RP11−12F16,RP11−47P23,CTP−3087C18;サイズ612kb);6.4ng/μLのMYC TxRed標識DNAプローブ(CTD−2106F24,CTD−2151C21,CTD−2267H22;サイズ418kb);15%のEC;20%のデキストラン硫酸;600mMのNaCl;10mMのクエン酸バッファー,pH6.0。
FISHプローブ組成物II:9ng/μLのIGH FITC標識遺伝子DNAプローブ;6.4ngのMYC TxRed標識DNAプローブ;15%のEC、20%のデキストラン硫酸;600mMのNaCl;10mMのクエン酸バッファー,pH6.0;0.1ug/uLの剪断サケ精液DNA。
この実験は細胞試料での本発明の組成物の使用を調べる。
FISHプローブ組成物:15%のEC;20%のデキストラン硫酸;600mMのNaCl;10mMのリン酸バッファー;5ng/μLのHER2 TxRed標識DNAプローブ(標準濃度の1/2)及び1/2の標準濃度のCEN7(25nM)。
FISHプローブを、全てブロッキングなしで、分裂中期染色体スプレッド上で82℃で5分間、ついで45℃で30分間、インキュベートした。
典型的にはRバンド形成を示す伝統的なISH溶液と比較して、本発明の組成物では、染色体バンド形成(Rバンド形成パターン)は観察されなかった。静止期核及び分裂中期の低い均一な赤いバックグラウンド染色が観察された。
この実施例は、細胞診試料、分裂中期スプレッド上での、ブロッキングを伴い、またブロッキングなしでの、DNAプローブからのシグナル強度及びバックグラウンドを比較する。
FISHプローブ組成物I:6ng/μLのTCRADテキサスレッド標識遺伝子DNAプローブ(標準濃度)(CTP−31666K20,CTP−2373N7;サイズ301kb)及び4.5ng/μLのFITC標識遺伝子DNAプローブ(標準濃度の1/4); 15%EC、20%デキストラン硫酸;600mMのNaCl;10mMのクエン酸バッファー,pH6.0。
FISHプローブ組成物II:6ng/μL TCRAD テキサスレッド標識遺伝子DNAプローブ(標準濃度)(サイズ301kb)及び4.5 ng/μL FITC標識遺伝子DNAプローブ(標準濃度の1/4);15%EC、20%デキストラン硫酸; 600mMのNaCl;10mMのクエン酸バッファー,pH6.0;0.1ug/uLの剪断サケ精液DNA。
FISHプローブを82℃で5分間、ついで45℃で60分、インキュベートした。
再び、染色体バンド(R−バンドパターン)は本発明の組成物では観察されなかった。加えて、静止期核又は分裂中期染色体のバックグラウンド染色は観察されなかった。
実施態様1. 少なくとも一種の核酸配列と、二本鎖ヌクレオチド配列を変性させるのに有効な量の少なくとも一種の極性非プロトン溶媒と、ハイブリダイゼーション溶液を含有し、極性非プロトン溶媒がジメチルスルホキシド(DMSO)ではない、ハイブリダイゼーション組成物。
実施態様2. 極性非プロトン溶媒の濃度が約1%から95%(v/v)である実施態様1に記載のハイブリダイゼーション組成物。
実施態様3. 極性非プロトン溶媒の濃度が5%から10%(v/v)である実施態様1又は2に記載のハイブリダイゼーション組成物。
実施態様4. 極性非プロトン溶媒の濃度が10%から20%(v/v)である実施態様1又は2に記載のハイブリダイゼーション組成物。
実施態様5. 極性非プロトン溶媒の濃度が20%から30%(v/v)である実施態様1又は2に記載のハイブリダイゼーション組成物。
実施態様6. 極性非プロトン溶媒が非毒性である実施態様1から5の何れか一に記載のハイブリダイゼーション組成物。
実施態様7. 但し、組成物がホルムアミドを含んでいない実施態様1から6の何れか一に記載のハイブリダイゼーション組成物。
実施態様8. 但し、組成物が10%未満のホルムアミドを含む実施態様6に記載のハイブリダイゼーション組成物。
実施態様9. 但し、組成物が2%未満のホルムアミドを含む実施態様8に記載のハイブリダイゼーション組成物。
実施態様10. 但し、組成物が1%未満のホルムアミドを含む実施態様9に記載のハイブリダイゼーション組成物。
実施態様11. 極性非プロトン溶媒が、ラクトン、スルホン、ニトリル、サルファイト及び/又はカーボネート官能性を有している実施態様1から10の何れか一に記載のハイブリダイゼーション組成物。
実施態様12. 極性非プロトン溶媒が、17.7から22.0MPa1/2の範囲の分散溶解度パラメータ、13から23MPa1/2の範囲の極性溶解度パラメータ、及び3から13MPa1/2の範囲の水素結合溶解度パラメータを有する実施態様1から11の何れか一に記載のハイブリダイゼーション組成物。
実施態様13. 極性非プロトン溶媒が環状塩基構造を有する実施態様1から12の何れか一に記載のハイブリダイゼーション組成物。
実施態様14. 極性非プロトン溶媒が
(ここで、XがOであり、R1がアルキルジイルである)、及び
(ここで、Xは任意であり、存在する場合は、O又はSから選択され、
Zは任意であり、存在する場合は、O又はSから選択され、
A及びBは独立してO又はN又はS又はアルキルジイルの一部又は第1級アミンであり、
Rはアルキルジイルであり、
YはO又はS又はCである)
から選択される実施態様1から13の何れか一に記載のハイブリダイゼーション組成物。実施態様15. 極性非プロトン溶媒が、アセトアニリド、アセトニトリル、N−アセチルピロリドン、4−アミノピリジン、ベンズアミド、ベンズイミダゾール、1,2,3−ベンゾトリアゾール、ブタジエンジオキシド、2,3−ブチレンカーボネート、γ−ブチロラクトン、カプロラクトン(イプシロン)、クロロ無水マレイン酸、2−クロロシクロヘキサノン、クロロエチレンカーボネート、クロロニトロメタン、無水シトラコン酸、クロトンラクトン、5−シアノ−2−チオウラシル、シクロプロピルニトリル、硫酸ジメチル、ジメチルスルホン、1,3−ジメチル−5−テトラゾール、1,5−ジメチルテトラゾール、1,2−ジニトロベンゼン、2,4−ジニトロトルエン、ジフェイニルスルホン、1,2−ジニトロベンゼン、2,4−ジニトロトルエン、ジフェイニルスルホン、イプシロン−カプロラクタム、エタンスルホニルクロリド、エチルエチルホスフィネート、N−エチルテトラゾール、エチレンカーボネート、エチレントリチオカーボネート、エチレングリコールサルフェート、グリコールサルファイト、フルフラール、2−フロニトリル、2−イミダゾール、イサチン、イソキサゾール、マロノニトリル、4−メトキシベンゾニトリル、1−メトキシ−2−ニトロベンゼン、メチルαブロモテトロネート、1−メチルイミダゾール、N−メチルイミダゾール、3−メチルイソキサゾール、N−メチルモルホリン−N−オキシド、メチルフェニルスルホン、N−メチルピロリジノン、メチルスルホラン、メチル−4−トルエンスルホネート、3−ニトロアニリン、ニトロベンズイミダゾール、2−ニトロフラン、1−ニトロソ−2−ピロリジノン、2−ニトロチオフェン、2−オキサゾリジノン、9,10−フェナントレンキノン、N−フェニルシドノン、無水フタル酸、ピコリノニトリル(2−シアノピリジン)、1,3−プロパンスルトン、β−プロピオラクトン、プロピレンカーボネート、4H−ピラン−4−チオン、4H−ピラン−4−オン(γ−ピロン),ピリダジン、2−ピロリドン、サッカリン、スクシノニトリル、スルファニルアミド、スルホラン、2,2,6,6−テトラクロロシクロヘキサノン、テトラヒドロチアピランオキシド、テトラメチレンスルホン(スルホラン)、チアゾール、2−チオウラシル、3,3,3−トリクロロプロペン、1,1,2−トリクロロプロペン、1,2,3−トリクロロプロペン、トリメチレンスルフィド−ジオキシド,及びトリメチレンサルファイトからなる群から選択される実施態様1から14の何れか一に記載のハイブリダイゼーション組成物。
実施態様16. 極性非プロトン溶媒が、
からなる群から選択される実施態様1から14の何れか一に記載のハイブリダイゼーション組成物。
実施態様17. 極性非プロトン溶媒が、
からなる群から選択される実施態様1から14の何れか一に記載のハイブリダイゼーション組成物。
実施態様18. 緩衝剤、塩、促進剤、キレート剤、洗浄剤、及びブロッキング剤からなる群から選択される少なくとも一種の更なる成分を更に含む実施態様1から17の何れか一に記載のハイブリダイゼーション組成物。
実施態様19. 促進剤がデキストラン硫酸であり、塩がNaCl及び/又はホスフェートバッファーである実施態様18に記載のハイブリダイゼーション組成物。
実施態様20. デキストラン硫酸が、5%から40%の濃度で存在し、NaClが0mMから1200mMの濃度で存在し、及び/又はホスフェートバッファーが0mMから50mMの濃度で存在する実施態様19に記載のハイブリダイゼーション組成物。
実施態様21. デキストラン硫酸が10%から30%の濃度で存在し、NaClが300mMから600mMの濃度で存在し、及び/又はホスフェートバッファーが5mMから20mMの濃度で存在する実施態様20に記載のハイブリダイゼーション組成物。
実施態様22. 促進剤が、ホルムアミド、グリセロール、プロピレングリコール、1,2−プロパンジオール、ジエチレングリコール、エチレングリコール、グリコール、及び1,3プロパンジオールからなる群から選択され、緩衝剤がクエン酸バッファーである実施態様18に記載のハイブリダイゼーション組成物。
実施態様23. ホルムアミドが0.1−5%の濃度で存在し、グリセロール、プロピレングリコール、1,2−プロパンジオール、ジエチレングリコール、エチレングリコール、グリコール、及び1,3プロパンジオールが0.1%から10%の濃度で存在し、クエン酸バッファーが1mMから50mMの濃度で存在する実施態様22に記載のハイブリダイゼーション組成物。
実施態様24. ブロッキング剤が、全ヒトDNA、ニシン精液DNA、サケ精液DNA、及びウシ胸腺DNAからなる群から選択される実施態様18に記載のハイブリダイゼーション組成物。
実施態様25. 全ヒトDNA、ニシン精液DNA、サケ精液DNA、及びウシ胸腺DNAが0.01から10μg/μLの濃度で存在する実施態様24に記載のハイブリダイゼーション組成物。
実施態様26. 40%の少なくとも一種の極性非プロトン溶媒、10%のデキストラン硫酸、300mMのNaCl、及び5mMのホスフェートバッファーを含有する実施態様1から25の何れか一に記載のハイブリダイゼーション組成物。
実施態様27. 15%の少なくとも一種の極性非プロトン溶媒、20%のデキストラン硫酸、600mMのNaCl、10mMのホスフェートバッファー、及び0.1μg/μlの全ヒトDNAを含有する実施態様1から25の何れか一に記載のハイブリダイゼーション組成物。
実施態様28. 15%の少なくとも一種の極性非プロトン溶媒、20%のデキストラン硫酸、600mMのNaCl、10mMのクエン酸バッファーpH6.2,及び0.1μg/μLのニシン精液DNA、又はサケ精液DNA、又はウシ胸腺DNA、又は0.5%のホルムアミド、又は1%のエチレングリコール、又は1%の1,3プロパンジオールを含有する実施態様1から25の何れか一に記載のハイブリダイゼーション組成物。
実施態様29. 室温で一を越える相を含む実施態様1から28の何れか一に記載のハイブリダイゼーション組成物。
実施態様30. 室温で二相を含む実施態様29に記載のハイブリダイゼーション組成物。
実施態様31. 室温で三相を含む実施態様29に記載のハイブリダイゼーション組成物。
実施態様32. 核酸配列をハイブリダイズさせる方法において、
− 第一核酸配列を提供し、
− 第二核酸配列を提供し、
− 少なくとも一種の極性非プロトン溶媒を二本鎖ヌクレオチド配列を変性させるのに有効な量で含有するハイブリダイゼーション組成物を提供し、
− 第一及び第二核酸配列とハイブリダイゼーション組成物を、第一及び第二核酸配列をハイブリダイズさせるのに少なくとも十分な時間の間、組合せ
ることを含み、
ここで極性非プロトン溶媒がジメチルスルホキシド(DMSO)ではない方法。
実施態様33. 核酸配列をハイブリダイズさせる方法において、
− インサイツ生物学的試料中に第一核酸配列を提供し、
− 第二核酸配列と少なくとも一種の極性非プロトン溶媒を、二本鎖ヌクレオチド配列を変性させるのに有効な量で含有するハイブリダイゼーション組成物を上記第一核酸配列に、第一及び第二核酸配列をハイブリダイズさせるのに少なくとも十分な時間の間、適用する
ことを含み、
ここで極性非プロトン溶媒がジメチルスルホキシド(DMSO)ではない方法。
実施態様34. 核酸配列をハイブリダイズさせる方法において、
− 第一核酸配列を提供し、
− 第二核酸配列を提供し、
− 実施態様1−31の何れかに記載のハイブリダイゼーション組成物を提供し、
− 第一及び第二核酸配列とハイブリダイゼーション組成物を、第一及び第二核酸配列をハイブリダイズさせるのに少なくとも十分な時間の間、組合せる
ことを含む方法。
実施態様35. 核酸配列をハイブリダイズさせる方法において、
− 第一核酸配列を提供し、
− 実施態様1−31の何れかに記載のハイブリダイゼーション組成物を上記第一核酸配列に、第一及び第二核酸配列をハイブリダイズさせるのに少なくとも十分な時間の間、適用する
ことを含む方法。
実施態様36. 極性非プロトン溶媒が実施態様2−6又は11−17の何れかに記載された通りである実施態様30又は31に記載の方法。
実施態様37. 第一及び第二核酸にハイブリダイズするのに十分な量のエネルギーが提供される実施態様30−36の何れか一に記載の方法。
実施態様38. エネルギーがハイブリダイゼーション組成物及び核酸配列を加熱することにより提供される実施態様37に記載の方法。
実施態様39. 加熱工程が、マイクロ波、熱浴、ホットプレート、電熱線、ペルチェ素子、誘導加熱又は加熱ランプの使用により実施される実施態様38に記載の方法。
実施態様40. 第一核酸配列が二本鎖であり、第二核酸配列が一本鎖である実施態様32−39の何れか一に記載の方法。
実施態様41. 変性及びハイブリダイゼーション工程が別個に生じる実施態様32−40の何れか一に記載の方法。
実施態様42. ハイブリダイゼーション工程がハイブリダイゼーション組成物及び核酸配列を加熱及び冷却する工程を含む実施態様32−41の何れか一に記載の方法。
実施態様43. ハイブリダイゼーション工程が8時間未満を要する実施態様32−42の何れか一に記載の方法。
実施態様44. ハイブリダイゼーション工程が1時間未満を要する実施態様43に記載の方法。
実施態様45. ハイブリダイゼーション工程が30分未満を要する実施態様44に記載の方法。
実施態様46. ハイブリダイゼーション工程が15分未満を要する実施態様45に記載の方法。
実施態様47. ハイブリダイゼーション工程が5分未満を要する実施態様46に記載の方法。
実施態様48. 冷却工程が1時間未満を要する実施態様32−47の何れか一に記載の方法。
実施態様49. 冷却工程が30分未満を要する実施態様48に記載の方法。
実施態様50. 冷却工程が15分未満を要する実施態様49に記載の方法。
実施態様51. 冷却工程が5分未満を要する実施態様50に記載の方法。
実施態様52. 第一核酸配列が生物学的試料中にある実施態様32−51の何れか一に記載の方法。
実施態様53. 生物学的試料が細胞又は組織試料である実施態様52に記載の方法。
実施態様54. ハイブリダイゼーション組成物が室温で一相を含む実施態様32−53の何れか一に記載の方法。
実施態様55. ハイブリダイゼーション組成物が室温で複数相を含む実施態様32−53の何れか一に記載の方法。
実施態様56. ハイブリダイゼーション組成物が室温で二相を含む実施態様55に記載の方法。
実施態様57. ハイブリダイゼーション組成物の相が混合される実施態様55又は56に記載の方法。
実施態様58. ブロッキング工程を更に含む実施態様32−57の何れか一に記載の方法。
実施態様59. ハイブリダイゼーションアッセイにおける1%から95%(v/v)の少なくとも一種の極性非プロトン溶媒を含むハイブリダイゼーション組成物の使用。
実施態様60. ハイブリダイゼーション組成物が実施態様1から31の何れか一に記載のものである実施態様59に記載の組成物の使用。
Claims (15)
- 前記極性非プロトン溶媒が非毒性である請求項1に記載のハイブリダイゼーション組成物。
- 但し、前記組成物が10(v/v)%未満のホルムアミドを含むか、又はホルムアミドを含まない、請求項1又は2に記載のハイブリダイゼーション組成物。
- 前記極性非プロトン溶媒が、ラクトン、スルホン、サルファイト及び/又はカーボネートである請求項1から3の何れか一項に記載のハイブリダイゼーション組成物。
- 前記極性非プロトン溶媒が、17.7から22.0MPa1/2の範囲の分散溶解度パラメータ、13から23MPa1/2の範囲の極性溶解度パラメータ、及び3から13MPa1/2の範囲の水素結合溶解度パラメータを有する請求項1から4の何れか一項に記載のハイブリダイゼーション組成物。
- 緩衝剤、塩、促進剤、キレート剤、洗浄剤、及びブロッキング剤からなる群から選択される少なくとも一種の更なる成分を更に含む請求項1から5の何れか一項に記載のハイブリダイゼーション組成物。
- 促進剤がデキストラン硫酸であり、塩がNaCl及び/又はホスフェートバッファーである請求項6に記載のハイブリダイゼーション組成物。
- デキストラン硫酸が10(w/v)%から30(w/v)%の濃度で存在し、NaClが300mMから600mMの濃度で存在し、及び/又はホスフェートバッファーが5mMから20mMの濃度で存在する請求項7に記載のハイブリダイゼーション組成物。
- 15(v/v)%の少なくとも一種の極性非プロトン溶媒、20(w/v)%のデキストラン硫酸、600mMのNaCl、及び10mMのクエン酸バッファー(pH6.2)を含有する請求項1から8の何れか一項に記載のハイブリダイゼーション組成物。
- ハイブリダイゼーションアッセイにおける請求項1から9の何れか一項に記載のハイブリダイゼーション組成物の使用。
- 前記ハイブリダイゼーション組成物が第二核酸配列を含有する、請求項11に記載の方法。
- 前記ハイブリダイゼーション組成物が請求項1から9の何れか一項に定義のものである、請求項12に記載の方法。
- 変性及びハイブリダイゼーション工程が別個に生じる請求項11から13の何れか一項に記載の方法。
- ハイブリダイゼーション工程が8時間未満、又は1時間未満、又は30分未満、又は15分未満、又は5分未満を要する請求項11から14の何れか一項に記載の方法。
Applications Claiming Priority (9)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
US5608908P | 2008-05-27 | 2008-05-27 | |
US61/056,089 | 2008-05-27 | ||
DKPA200800727 | 2008-05-27 | ||
DKPA200800727 | 2008-05-27 | ||
US15568309P | 2009-02-26 | 2009-02-26 | |
US61/155,683 | 2009-02-26 | ||
DKPA200900278 | 2009-02-27 | ||
DKPA200900278 | 2009-02-27 | ||
PCT/IB2009/005893 WO2009144581A1 (en) | 2008-05-27 | 2009-05-27 | Hybridization compositions and methods |
Publications (3)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JP2011522531A JP2011522531A (ja) | 2011-08-04 |
JP2011522531A5 JP2011522531A5 (ja) | 2014-07-24 |
JP5588970B2 true JP5588970B2 (ja) | 2014-09-10 |
Family
ID=58714504
Family Applications (2)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2011511111A Expired - Fee Related JP5592357B2 (ja) | 2008-05-27 | 2009-05-27 | 新規なハイブリダイゼーションバッファーを用いた染色体異常の検出のための組成物及び方法 |
JP2011511105A Expired - Fee Related JP5588970B2 (ja) | 2008-05-27 | 2009-05-27 | ハイブリダイゼーション組成物及び方法 |
Family Applications Before (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2011511111A Expired - Fee Related JP5592357B2 (ja) | 2008-05-27 | 2009-05-27 | 新規なハイブリダイゼーションバッファーを用いた染色体異常の検出のための組成物及び方法 |
Country Status (9)
Country | Link |
---|---|
US (4) | US9297035B2 (ja) |
EP (8) | EP2636757B1 (ja) |
JP (2) | JP5592357B2 (ja) |
CN (3) | CN102084004B (ja) |
BR (1) | BRPI0912046B1 (ja) |
CA (2) | CA2724638C (ja) |
ES (4) | ES2610588T3 (ja) |
RU (2) | RU2505609C2 (ja) |
WO (2) | WO2009144581A1 (ja) |
Families Citing this family (46)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN102084004B (zh) | 2008-05-27 | 2016-01-20 | 丹麦达科有限公司 | 杂交组合物和方法 |
WO2010097656A1 (en) | 2009-02-26 | 2010-09-02 | Dako Denmark A/S | Compositions and methods for performing a stringent wash step in hybridization applications |
EP2507391B1 (en) * | 2009-12-02 | 2016-08-17 | Dako Denmark A/S | Compositions and methods for performing hybridizations with no denaturation |
CA2798190A1 (en) | 2010-05-10 | 2011-11-17 | Abbott Laboratories | Detection of chromosomal abnormalities associated with endometrial cancer |
US9963746B2 (en) | 2010-09-16 | 2018-05-08 | Cbs Biosciences, Co., Ltd. | Composition or kit for making a prognosis of liver cancer, and method for making a prognosis of liver cancer |
AU2012209074A1 (en) | 2011-01-25 | 2013-07-11 | Almac Diagnostics Limited | Colon cancer gene expression signatures and methods of use |
CN104830972B (zh) * | 2011-09-16 | 2019-03-15 | 上海长海医院 | 前列腺癌的生物学标志物、治疗靶点及其用途 |
EP2761028A1 (en) * | 2011-09-30 | 2014-08-06 | Dako Denmark A/S | Hybridization compositions and methods using formamide |
EP3252173A1 (en) * | 2011-10-21 | 2017-12-06 | Dako Denmark A/S | Hybridization compositions and methods |
WO2013101893A1 (en) * | 2011-12-30 | 2013-07-04 | Abbott Molecular Inc. | Compositions and methods for detecting viral infection using direct-label fluorescence in situ hybridization |
KR101938699B1 (ko) | 2012-07-23 | 2019-01-16 | 삼성전자주식회사 | Lrig1의 항 c―met 항체 적용 대상 환자 선별을 위한 용도 |
CN105637097A (zh) | 2013-08-05 | 2016-06-01 | 特韦斯特生物科学公司 | 从头合成的基因文库 |
GB201319180D0 (en) * | 2013-10-30 | 2013-12-11 | Mast Group Ltd | Nucleic acid probe |
US10253353B2 (en) * | 2013-12-06 | 2019-04-09 | The Broad Institute, Inc. | Enhanced methods of ribonucleic acid hybridization |
US9587268B2 (en) * | 2014-01-29 | 2017-03-07 | Agilent Technologies Inc. | Fast hybridization for next generation sequencing target enrichment |
US9994912B2 (en) | 2014-07-03 | 2018-06-12 | Abbott Molecular Inc. | Materials and methods for assessing progression of prostate cancer |
ES2707970T3 (es) * | 2014-09-29 | 2019-04-08 | Ventana Med Syst Inc | Ensayo múltiple de detección simultánea de gen-proteína de TP53/CEN17/linfocito B y sondas excepcionalmente específicas para 19q12, INSR, ATM, DLEU2, TP53 y 13q12 |
WO2016126882A1 (en) | 2015-02-04 | 2016-08-11 | Twist Bioscience Corporation | Methods and devices for de novo oligonucleic acid assembly |
WO2016133218A1 (ja) * | 2015-02-20 | 2016-08-25 | 国立大学法人名古屋大学 | ホスファフルオレセイン化合物若しくはその塩、又はそれを用いた蛍光色素 |
WO2016172377A1 (en) | 2015-04-21 | 2016-10-27 | Twist Bioscience Corporation | Devices and methods for oligonucleic acid library synthesis |
ES2753274T5 (es) * | 2015-08-21 | 2023-05-26 | 42 Life Sciences Gmbh & Co Kg | Composición y procedimiento de hibridación |
US10844373B2 (en) | 2015-09-18 | 2020-11-24 | Twist Bioscience Corporation | Oligonucleic acid variant libraries and synthesis thereof |
CN108698012A (zh) | 2015-09-22 | 2018-10-23 | 特韦斯特生物科学公司 | 用于核酸合成的柔性基底 |
EP3400307A1 (en) * | 2016-01-08 | 2018-11-14 | Abbott Molecular Inc. | Hybridization buffers comprising guanidinium thiocyanate |
CN105755136B (zh) * | 2016-04-13 | 2017-08-25 | 武汉康录生物技术有限公司 | 一种人12号染色体着丝粒探针试剂盒及其制备方法和应用 |
CN107419001A (zh) * | 2016-05-23 | 2017-12-01 | 益善生物技术股份有限公司 | Brca1、pten基因异常检测试剂盒及检测方法 |
CN107058565A (zh) * | 2016-08-31 | 2017-08-18 | 郭军 | 肢端型黑色素瘤的诊断和治疗 |
KR102217487B1 (ko) | 2016-09-21 | 2021-02-23 | 트위스트 바이오사이언스 코포레이션 | 핵산 기반 데이터 저장 |
WO2018093777A1 (en) * | 2016-11-15 | 2018-05-24 | The Regents Of The University Of Michigan | Centromere analysis |
SG11201907713WA (en) | 2017-02-22 | 2019-09-27 | Twist Bioscience Corp | Nucleic acid based data storage |
CN107227359A (zh) * | 2017-06-19 | 2017-10-03 | 福建万科药业有限公司 | 一种亚型Ph‑likeALL的检测试剂盒及其检测方法 |
CN107312838A (zh) * | 2017-06-28 | 2017-11-03 | 广西大学 | 细胞荧光原位杂交方法 |
JP7066840B2 (ja) | 2017-10-20 | 2022-05-13 | ツイスト バイオサイエンス コーポレーション | ポリヌクレオチド合成のための加熱されたナノウェル |
KR20210013128A (ko) | 2018-05-18 | 2021-02-03 | 트위스트 바이오사이언스 코포레이션 | 핵산 하이브리드화를 위한 폴리뉴클레오타이드, 시약 및 방법 |
JP7090793B2 (ja) * | 2018-07-27 | 2022-06-24 | エフ.ホフマン-ラ ロシュ アーゲー | 次世代配列決定用途向けのホルムアミド非含有標的濃縮組成物 |
CN108998531B (zh) * | 2018-08-31 | 2021-10-01 | 昆明医科大学第一附属医院 | 肺癌下调长链非编码rna标志物及其应用 |
US20220119870A1 (en) | 2018-11-01 | 2022-04-21 | Advanced Cell Diagnostics, Inc. | Methods for digital multiplexing of nucleic acids in situ |
CN111781356A (zh) * | 2019-04-04 | 2020-10-16 | 清华大学 | 一种胃癌极早期细胞标志和胃癌前病变早期细胞标志及其在诊断试剂盒中的应用 |
CN110172511A (zh) * | 2019-05-10 | 2019-08-27 | 广州安必平医药科技股份有限公司 | 用于检测her-2基因扩增水平的探针组、试剂盒及其应用 |
CN110257483B (zh) * | 2019-07-10 | 2022-08-05 | 厦门通灵生物医药科技有限公司 | 用于原位杂交的杂交液、其制备方法及检测试剂盒 |
US11287422B2 (en) | 2019-09-23 | 2022-03-29 | Element Biosciences, Inc. | Multivalent binding composition for nucleic acid analysis |
CN116615560A (zh) | 2020-10-30 | 2023-08-18 | 元素生物科学公司 | 用于大规模平行核酸测序的试剂 |
CN112626180A (zh) * | 2020-12-30 | 2021-04-09 | 北京思尔成生物技术有限公司 | 一种dna杂交增强液及其制备方法与应用 |
CN114561449B (zh) * | 2022-02-28 | 2022-10-14 | 深圳大学 | 一种免预杂交的Northern blot杂交液及其应用 |
CN116144780A (zh) * | 2023-03-17 | 2023-05-23 | 重庆医科大学 | 一种慢性淋巴细胞白血病的细胞的遗传学检测方法 |
CN117247995A (zh) * | 2023-09-12 | 2023-12-19 | 上海新培晶医学检验所有限公司 | 一种在g-显带的玻片上进行分子荧光原位杂交处理方法 |
Family Cites Families (193)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US3151405A (en) | 1960-12-15 | 1964-10-06 | Ludwig Herbert | Ladies' slipper having a plastic bead construction |
US4652517A (en) | 1984-06-11 | 1987-03-24 | Diagnostic Research Limited Partnership | Methods for the in vitro detection and identification of unknown pathogens or genetic entities |
US5132207A (en) | 1984-07-05 | 1992-07-21 | Gen-Probe Incorporated | Accelerated nucleic acid reassociation method |
US4888278A (en) | 1985-10-22 | 1989-12-19 | University Of Massachusetts Medical Center | In-situ hybridization to detect nucleic acid sequences in morphologically intact cells |
US6475720B1 (en) | 1986-01-16 | 2002-11-05 | The Regents Of The University Of California | Chromosome-specific staining to detect genetic rearrangements associated with chromosome 3 and/or chromosome 17 |
US6344315B1 (en) | 1986-01-16 | 2002-02-05 | The Regents Of The University Of California | Chromosome-specific staining to detect genetic rearrangements associated with chromosome 3 and/or chromosome 17 |
EP0261955A3 (en) | 1986-09-26 | 1989-06-07 | E.I. Du Pont De Nemours And Company | Process for immobilization of dna |
US4886741A (en) * | 1987-12-09 | 1989-12-12 | Microprobe Corporation | Use of volume exclusion agents for the enhancement of in situ hybridization |
US4996359A (en) | 1988-03-14 | 1991-02-26 | Arco Chemical Technology, Inc. | Process for the preparation of aromatic bis dialkyl ureas |
US6203977B1 (en) | 1988-11-15 | 2001-03-20 | Yale University | Delineation of individual human chromosomes in metaphase and interphase cells by in situ suppression hybridization |
US5869237A (en) | 1988-11-15 | 1999-02-09 | Yale University | Amplification karyotyping |
US5650148A (en) | 1988-12-15 | 1997-07-22 | The Regents Of The University Of California | Method of grafting genetically modified cells to treat defects, disease or damage of the central nervous system |
US5925525A (en) | 1989-06-07 | 1999-07-20 | Affymetrix, Inc. | Method of identifying nucleotide differences |
US5633129A (en) | 1989-07-13 | 1997-05-27 | Massachusetts Institute Of Technology | Electrophoretic detection and separation of mutant DNA using replaceable polymer matrices |
US5106730A (en) * | 1989-07-24 | 1992-04-21 | Microprobe Corporation | Lactam-containing compositions and methods useful for the hybridization of nucleic acids |
WO1991002088A1 (en) | 1989-07-24 | 1991-02-21 | Microprobe Corporation | Lactam-containing compositions and methods useful for the hybridization of nucleic acids |
BR9105888A (pt) | 1990-08-30 | 1992-11-10 | Tropix Inc | 3-(adamant substituido-2'-ilideno) 1,2-dioxetanos quimiluminescentes |
GB9024005D0 (en) | 1990-11-05 | 1990-12-19 | British Bio Technology | Process for amplifying nucleic acid |
WO1992007959A1 (en) | 1990-11-05 | 1992-05-14 | Biowhittaker Inc. | Homogeneous membrane lytic immunoassay method utilizing contact sensitive liposome formulations |
US6228982B1 (en) | 1992-05-22 | 2001-05-08 | Benget Norden | Double-stranded peptide nucleic acids |
US5641625A (en) | 1992-05-22 | 1997-06-24 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Cleaving double-stranded DNA with peptide nucleic acids |
DK51092D0 (da) | 1991-05-24 | 1992-04-15 | Ole Buchardt | Oligonucleotid-analoge betegnet pna, monomere synthoner og fremgangsmaade til fremstilling deraf samt anvendelser deraf |
US5714331A (en) | 1991-05-24 | 1998-02-03 | Buchardt, Deceased; Ole | Peptide nucleic acids having enhanced binding affinity, sequence specificity and solubility |
US5539082A (en) | 1993-04-26 | 1996-07-23 | Nielsen; Peter E. | Peptide nucleic acids |
US5766855A (en) | 1991-05-24 | 1998-06-16 | Buchardt, Deceased; Ole | Peptide nucleic acids having enhanced binding affinity and sequence specificity |
US5719262A (en) | 1993-11-22 | 1998-02-17 | Buchardt, Deceased; Ole | Peptide nucleic acids having amino acid side chains |
GB9211979D0 (en) | 1992-06-05 | 1992-07-15 | Buchard Ole | Uses of nucleic acid analogues |
WO1994002638A1 (en) | 1992-07-17 | 1994-02-03 | Aprogenex, Inc. | Free radical scavengers useful for reducing autofluorescence in fixed cells |
US5521061A (en) | 1992-07-17 | 1996-05-28 | Aprogenex, Inc. | Enhancement of probe signal in nucleic acid-mediated in-situ hybridization studies |
AU5355594A (en) * | 1992-10-09 | 1994-05-09 | Oncor, Inc. | Methods for the detection of chromosome structural abnormalities by (in situ) hybridization to fixed tissue |
US5432065A (en) | 1993-03-30 | 1995-07-11 | United States Biochemical Corporation | Cycle sequencing with non-thermostable DNA polymerases |
US5382285A (en) | 1993-04-06 | 1995-01-17 | Regents Of The University Of California | Biofoam |
US5527675A (en) | 1993-08-20 | 1996-06-18 | Millipore Corporation | Method for degradation and sequencing of polymers which sequentially eliminate terminal residues |
DE4331012A1 (de) | 1993-09-13 | 1995-03-16 | Bayer Ag | Nukleinsäuren-bindende Oligomere mit N-Verzweigung für Therapie und Diagnostik |
GB2284209A (en) | 1993-11-25 | 1995-05-31 | Ole Buchardt | Nucleic acid analogue-induced transcription of RNA from a double-stranded DNA template |
US5582985A (en) | 1994-08-05 | 1996-12-10 | The Regents Of The University Of California | Detection of mycobacteria |
US5705333A (en) | 1994-08-05 | 1998-01-06 | The Regents Of The University Of California | Peptide-based nucleic acid mimics(PENAMS) |
DK0778844T3 (da) | 1994-09-02 | 2003-03-31 | Novartis Ag | Funktionelle terpyridinkomplekser, fremgangsmåder til fremstilling deraf og oligonukleotidkonjugater med terpyridinmetalkomplekser |
US5718915A (en) | 1994-10-31 | 1998-02-17 | Burstein Laboratories, Inc. | Antiviral liposome having coupled target-binding moiety and hydrolytic enzyme |
US20010011131A1 (en) | 1997-07-28 | 2001-08-02 | Luyten Frank P. | DNA molecules encoding cartilage-derived morphogenetic proteins |
US5750340A (en) * | 1995-04-07 | 1998-05-12 | University Of New Mexico | In situ hybridization solution and process |
DE19516399A1 (de) | 1995-05-04 | 1996-11-07 | Bayer Ag | Verfahren zur Herstellung von Polymeren mit wiederkehrenden Succinyleinheiten |
AU1159697A (en) | 1995-11-13 | 1997-06-05 | University Of Rochester | Production of somatic mosaicism in mammals using a recombinatorial substrate |
US5962227A (en) | 1996-07-26 | 1999-10-05 | The Regents Of The University Of California | DNA-based diagnostic test for detecting myxobolus, the cause of salmonid whirling disease |
US6582921B2 (en) | 1996-07-29 | 2003-06-24 | Nanosphere, Inc. | Nanoparticles having oligonucleotides attached thereto and uses thereof |
US6361940B1 (en) * | 1996-09-24 | 2002-03-26 | Qiagen Genomics, Inc. | Compositions and methods for enhancing hybridization and priming specificity |
ATE243761T1 (de) | 1996-10-04 | 2003-07-15 | Dako As | Sonden zur detektion von mycobakterien |
US6329197B2 (en) | 1996-10-09 | 2001-12-11 | Synaptic Pharmaceutical Corporation | DNA encoding galanin GALR3 receptors and uses thereof |
US5858671A (en) | 1996-11-01 | 1999-01-12 | The University Of Iowa Research Foundation | Iterative and regenerative DNA sequencing method |
IL131978A0 (en) | 1997-03-20 | 2001-03-19 | Univ Washington | Solvent for biopolymer synthesis solvent microdots and methods of use |
US6716625B1 (en) | 1997-04-16 | 2004-04-06 | Claude Selitrennikoff | Histidine kinases of Aspergillus and other fungal species, related compositions, and methods of use |
US6534273B2 (en) | 1997-05-02 | 2003-03-18 | Gen-Probe Incorporated | Two-step hybridization and capture of a polynucleotide |
EP0878552A1 (en) | 1997-05-13 | 1998-11-18 | Erasmus Universiteit Rotterdam | Molecular detection of chromosome aberrations |
US6107470A (en) | 1997-05-29 | 2000-08-22 | Nielsen; Peter E. | Histidine-containing peptide nucleic acids |
AU707186B2 (en) * | 1997-07-01 | 1999-07-01 | Transgene S.A. | Compositions useful for transferring therapeutically active substances into a target cell, and their use in gene therapy |
DK1005633T3 (da) | 1997-08-20 | 2008-12-15 | Univ Miami | Vævsfikserings-dehydratiserings-fedtfjernelses-imprægneringsmetode med höj kvalitet og kontinuerligt gennemlöb |
US6794499B2 (en) | 1997-09-12 | 2004-09-21 | Exiqon A/S | Oligonucleotide analogues |
EP2341058A3 (en) | 1997-09-12 | 2011-11-23 | Exiqon A/S | Oligonucleotide Analogues |
US7572582B2 (en) | 1997-09-12 | 2009-08-11 | Exiqon A/S | Oligonucleotide analogues |
US20020192659A1 (en) | 1997-09-17 | 2002-12-19 | Genentech, Inc. | Secreted and transmembrane polypeptides and nucleic acids encoding the same |
DE59802413D1 (de) | 1997-09-24 | 2002-01-24 | Infineon Technologies Ag | o-Amino(thio)phenol-carbonsäuren und deren Herstellung |
DE69824755T2 (de) * | 1997-11-26 | 2005-08-04 | Zymogenetics, Inc., Seattle | Cytokinähnliches polypeptid-10 aus säugetieren |
US5972615A (en) | 1998-01-21 | 1999-10-26 | Urocor, Inc. | Biomarkers and targets for diagnosis, prognosis and management of prostate disease |
US6043039A (en) | 1998-02-17 | 2000-03-28 | Applied Spectral Imaging | Method of and composite for in situ fluorescent hybridization |
US7396508B1 (en) | 2000-07-12 | 2008-07-08 | Ventana Medical Systems, Inc. | Automated molecular pathology apparatus having independent slide heaters |
US6405609B1 (en) | 1998-02-27 | 2002-06-18 | Ventana Medical Systems, Inc. | System and method of aspirating and dispensing reagent |
US6265168B1 (en) | 1998-10-06 | 2001-07-24 | Transgenomic, Inc. | Apparatus and method for separating and purifying polynucleotides |
US6287772B1 (en) | 1998-04-29 | 2001-09-11 | Boston Probes, Inc. | Methods, kits and compositions for detecting and quantitating target sequences |
CA2327542C (en) | 1998-05-04 | 2011-11-22 | Dako A/S | Method and probes for the detection of chromosome aberrations |
ATE327345T1 (de) | 1998-08-07 | 2006-06-15 | Cellay Llc | Gel mikrotropfen für die genetische analyse |
AU751173B2 (en) | 1998-08-24 | 2002-08-08 | Fuso Pharmaceutical Industries, Ltd. | Novel collectin |
US20080050393A1 (en) * | 1998-12-03 | 2008-02-28 | Tang Y Tom | Novel nucleic acids and polypeptides |
EP1013772A1 (en) * | 1998-12-21 | 2000-06-28 | Transgene S.A. | Method for preparing suspension of stable posiplexes |
US6331618B1 (en) * | 1999-05-13 | 2001-12-18 | Pe Corporation (Ny) | Compositions of solvents and high concentrations of nucleic acid analogs |
US6300073B1 (en) | 1999-10-01 | 2001-10-09 | Clontech Laboratories, Inc. | One step RT-PCR methods, enzyme mixes and kits for use in practicing the same |
EP1218547A4 (en) | 1999-10-15 | 2005-04-20 | Ventana Med Syst Inc | METHOD FOR DETECTING UNIQUE GENE IN SITU COPIES |
US8012471B2 (en) | 1999-11-19 | 2011-09-06 | Abbott Healthcare Products B.V. | Screening and treatment methods using IGS5 enzymes of the metalloprotease family |
US20010026919A1 (en) | 2000-02-08 | 2001-10-04 | Alex Chenchik | Nucleic acid assays employing universal arrays |
AU2001243573A1 (en) | 2000-03-09 | 2001-09-17 | Protogene Laboratories, Inc. | Methods for optimizing hybridization performance of polynucleotide probes and localizing and detecting sequence variations |
US6617131B2 (en) | 2000-03-21 | 2003-09-09 | Aventis Pharma Deutschland Gmbh | Nucleic acid molecule encoding the potassium channel protein, KCNQ5 |
US6969587B2 (en) | 2000-04-04 | 2005-11-29 | Taylor Paul D | Detection of nucleic acid heteroduplex molecules by anion-exchange chromatography |
US20040048376A1 (en) * | 2000-04-10 | 2004-03-11 | Benoit Chabot | Methods for modulating splicing and/or alternative splicing, and for identifying alternatively spliced units in genes |
WO2001079461A2 (en) | 2000-04-14 | 2001-10-25 | Novozymes A/S | Polypeptides having haloperoxidase activity |
US7482151B2 (en) | 2000-05-19 | 2009-01-27 | Aquaria, Inc. | Method of using ammonia-oxidizing bacteria |
US6511810B2 (en) | 2000-07-03 | 2003-01-28 | Applera Corporation | Polynucleotide sequence assay |
US6716829B2 (en) | 2000-07-27 | 2004-04-06 | Pharmacia Corporation | Aldosterone antagonist and cyclooxygenase-2 inhibitor combination therapy to prevent or treat inflammation-related cardiovascular disorders |
US6942970B2 (en) | 2000-09-14 | 2005-09-13 | Zymed Laboratories, Inc. | Identifying subjects suitable for topoisomerase II inhibitor treatment |
AU9454201A (en) | 2000-09-15 | 2002-03-26 | Ventana Med Syst Inc | Oligonucleotide sequence formula for labeling oligonucleotide probe and proteinsfor in-situ analysis |
US20030175852A1 (en) | 2000-09-15 | 2003-09-18 | Kalra Krishan L | Ehancement of in situ hybridization |
DE60142631D1 (de) | 2000-09-28 | 2010-09-02 | Sanyo Chemical Ind Ltd | Verwendung bestimmter metallkatalysatoren für die ringöffnende polymerisation von epoxiden |
JP2002112777A (ja) | 2000-10-03 | 2002-04-16 | Livestock Improvement Association Of Japan Inc | 新規精巣特異的遺伝子 |
DE10053047A1 (de) | 2000-10-13 | 2002-06-06 | Univ Lausanne Epalinges | Verwendung von Caveolin-1 oder des Gens desselben zur Behandlung von nichtsteroidabhängigem Karzinom |
US7309573B2 (en) | 2000-11-21 | 2007-12-18 | Stratagene California | Methods for detection of a nucleic acid by sequential amplification |
AU2002230901B2 (en) | 2000-12-14 | 2006-09-07 | Gen-Probe Incorporated | Method and kit for enhancing the association rates of polynucleotides |
TW201022287A (en) | 2001-01-03 | 2010-06-16 | Senomyx Inc | T1R taste receptors and genes encoding same |
WO2003014398A2 (en) | 2001-01-03 | 2003-02-20 | Transgenomic, Inc. | Methods and compositions for mutation detection by liquid chromatography |
US6656685B2 (en) | 2001-01-29 | 2003-12-02 | Ventana Medical Systems, Inc. | Hybridization buffers using low molecular weight dextran sulfate and methods for their use |
US6949368B2 (en) | 2001-01-30 | 2005-09-27 | The Trustees Of Princeton University | Compositions and methods for enhancing polynucleotide amplification reactions |
CN1281762C (zh) | 2001-04-26 | 2006-10-25 | 日本油脂株式会社 | 非特异杂交抑制剂、临床诊断试剂和临床分析方法 |
CN1384203A (zh) | 2001-04-30 | 2002-12-11 | 香港科技创业股份有限公司 | 具有高度延伸专一性的dna低温循环延伸反应方法 |
CA2445881C (en) | 2001-04-30 | 2010-06-22 | Ventana Medical Systems, Inc. | Reagents and methods for automated hybridization |
US7297494B2 (en) | 2001-06-25 | 2007-11-20 | Georgia Tech Research Corporation | Activatable probes and methods for in vivo gene detection |
US7297553B2 (en) | 2002-05-28 | 2007-11-20 | Nanosphere, Inc. | Method for attachment of silylated molecules to glass surfaces |
US20030108903A1 (en) | 2001-07-19 | 2003-06-12 | Liman Wang | Multiple word DNA computing on surfaces |
US20040248790A1 (en) | 2001-09-03 | 2004-12-09 | Shuji Hinuma | Novel secretory proteins and dna thereof |
EP1432826B1 (en) | 2001-09-24 | 2012-12-12 | Life Technologies Corporation | Methods, kits and compositions pertaining to the suppression of detectable probe binding to randomly distributed repeat sequences in genomic nucleic acid |
US20040106109A1 (en) | 2001-10-02 | 2004-06-03 | Belly Robert T | Detection of ras mutations |
US7132236B2 (en) | 2001-10-25 | 2006-11-07 | Agilent Technologies, Inc. | Composition and method for optimized hybridization using modified solutions |
US6783940B2 (en) | 2001-10-31 | 2004-08-31 | Applera Corporation | Method of reducing non-specific amplification in PCR |
DE10154291B4 (de) | 2001-11-05 | 2005-05-19 | Hain Lifescience Gmbh | Verfahren zum Nachweis von Nukleinsäuren in Form eines Trockenschnelltestes |
US20060270595A1 (en) | 2001-12-18 | 2006-11-30 | Denis Jullien | Nucleic acids encoding compositions of THAP-family chemokine binding domains |
US7153390B2 (en) | 2001-12-31 | 2006-12-26 | Kimberly-Clark Wordwide, Inc. | Process for manufacturing a cellulosic paper product exhibiting reduced malodor |
CN100575482C (zh) | 2002-01-18 | 2009-12-30 | 津莫吉尼蒂克斯公司 | 新的细胞因子zcytor17配体 |
US7772383B2 (en) | 2002-01-25 | 2010-08-10 | The Trustees Of Princeton University | Chemical PCR: Compositions for enhancing polynucleotide amplification reactions |
US7456219B2 (en) | 2002-03-04 | 2008-11-25 | Merck Hdac Research, Llc | Polymorphs of suberoylanilide hydroxamic acid |
US20060030541A1 (en) | 2002-04-05 | 2006-02-09 | Proskelia | Genes involved in osteogenesis, and methods of use |
AU2003247788B2 (en) | 2002-07-02 | 2007-04-19 | Nanosphere Inc. | Nanoparticle polyanion conjugates and methods of use thereof in detecting analytes |
US20040029184A1 (en) | 2002-08-09 | 2004-02-12 | Pickcell Laboratories B.V. | Method for antigen retrieval and submersion fluid compositions for use therein |
TWI228511B (en) | 2002-10-25 | 2005-03-01 | Univ Nat Cheng Kung | Genes controlling floral development in orchid |
AU2003269379A1 (en) | 2002-10-31 | 2004-05-25 | Pfizer Products Inc. | Suspension method for producing embryoid bodies, and compositions and methods related thereto |
US7517697B2 (en) * | 2003-02-05 | 2009-04-14 | Applied Biosystems, Llc | Compositions and methods for preserving RNA in biological samples |
US7601491B2 (en) | 2003-02-06 | 2009-10-13 | Becton, Dickinson And Company | Pretreatment method for extraction of nucleic acid from biological samples and kits therefor |
US20040224343A1 (en) | 2003-05-06 | 2004-11-11 | Biochain Inc. | Methods and products to enhance interactions among molecules |
US7064196B2 (en) | 2003-05-20 | 2006-06-20 | E. I. Du Pont De Nemours And Company | Genes encoding carotenoid compounds |
US20040241666A1 (en) | 2003-05-30 | 2004-12-02 | Amorese Douglas A. | Ligand array assays that include an organic fluid wash step and compositions for practicing the same |
US20050250094A1 (en) | 2003-05-30 | 2005-11-10 | Nanosphere, Inc. | Method for detecting analytes based on evanescent illumination and scatter-based detection of nanoparticle probe complexes |
US20050064472A1 (en) | 2003-07-23 | 2005-03-24 | Affymetrix, Inc. | Methods of monitoring gene expression |
WO2005033333A2 (en) | 2003-10-07 | 2005-04-14 | Dako Denmark A/S | Methods and compositions for the diagnosis of cancer |
CA2482097C (en) † | 2003-10-13 | 2012-02-21 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Methods for isolating nucleic acids |
US20050191657A1 (en) | 2003-11-18 | 2005-09-01 | Demorest David M. | Stringency modifiers in hybridization assays |
EP1711590B1 (en) | 2004-01-08 | 2016-12-14 | Dako Denmark A/S | Apparatus and methods for processing biological samples and a reservoir therefore |
JP2005300998A (ja) | 2004-04-13 | 2005-10-27 | Tokyo Ohka Kogyo Co Ltd | ポジ型レジスト組成物及びレジストパターン形成方法 |
JP2007532592A (ja) | 2004-04-15 | 2007-11-15 | エフ.ホフマン−ラ ロシュ アーゲー | ピリダジノン化合物の製造方法 |
EP1745156A2 (en) | 2004-05-04 | 2007-01-24 | Dako Denmark A/S | Methods for detecting chromosome aberrations |
US20060024751A1 (en) | 2004-06-03 | 2006-02-02 | Fluidigm Corporation | Scale-up methods and systems for performing the same |
WO2005121340A1 (ja) | 2004-06-14 | 2005-12-22 | Galpharma Co., Ltd. | 新規ガレクチン8改変体タンパク質及びその用途 |
EP1774029B1 (en) | 2004-07-16 | 2013-04-24 | DSM IP Assets B.V. | Method for detecting the risk of type 2 diabetes |
US7867443B2 (en) | 2004-07-23 | 2011-01-11 | Dako Denmark A/S | Method and apparatus for automated pre-treatment and processing of biological samples |
WO2006073504A2 (en) | 2004-08-04 | 2006-07-13 | President And Fellows Of Harvard College | Wobble sequencing |
CN101124337B (zh) | 2004-08-24 | 2010-11-17 | 康乃尔研究基金会有限公司 | 使用内切核酸酶剪切/连接酶重新密封反应和毛细管电泳或微阵列检测核酸差异 |
US20060147957A1 (en) | 2004-11-12 | 2006-07-06 | Affymetrix, Inc. | Methods for high throughput sample preparation for microarray analysis |
AR053990A1 (es) | 2004-12-15 | 2007-05-30 | Bristol Myers Squibb Co | Formas cristalinas de un compuesto de pirazolpiridina inhibidor de factor xa. composiciones farmaceuticas y procesos de obtencion. |
AU2005316449B2 (en) | 2004-12-17 | 2010-10-14 | Ventana Medical Systems, Inc. | High temperature tissue conditioning with low volatility solutions and applications |
US7402654B2 (en) * | 2004-12-30 | 2008-07-22 | Ge Healthcare Bio-Sciences Corp. | PHI 15 DNA polymerase |
AU2006219332B2 (en) | 2005-02-28 | 2010-11-11 | Eisai R & D Management Co., Ltd. | Signal amplification method |
PT103257B (pt) | 2005-04-05 | 2007-05-31 | Inst Superior Tecnico | Método de produção subcrítica de xerogéis e aerogéis monolíticos híbridos de sílica e látex modificado com grupos alcoxissilano |
ES2381279T3 (es) * | 2005-05-06 | 2012-05-24 | Gen-Probe Incorporated | Métodos y productos para la captura de ácido nucleico diana |
WO2007019432A2 (en) | 2005-08-05 | 2007-02-15 | Xm Satellite Radio Inc. | Broadcast signal interface device and method thereof |
JP5088134B2 (ja) | 2005-09-28 | 2012-12-05 | 日本電気株式会社 | 信号測定装置 |
EP1947452B1 (en) | 2005-09-29 | 2014-05-14 | Toto Ltd. | Method for specifically detecting a test substance using photocurrent |
US7851159B2 (en) * | 2005-11-17 | 2010-12-14 | Japan Science And Technology Agency | Method for detecting target nucleic acid with specific base sequence and set of nucleic acids for detection |
US20070141583A1 (en) | 2005-12-20 | 2007-06-21 | Weiwei Li | Methods of rapid chromatin immunoprecipitation |
US7807354B2 (en) | 2005-12-28 | 2010-10-05 | Agilent Technologies, Inc. | Low volume hybridization |
WO2007106837A2 (en) * | 2006-03-13 | 2007-09-20 | Ikonisys, Inc. | Method for combining immunostaining and fish using covalently binding fluorophores |
US7820883B2 (en) | 2006-03-15 | 2010-10-26 | Dow Agrosciences Llc | Resistance to auxinic herbicides |
RU2338787C2 (ru) * | 2006-03-15 | 2008-11-20 | Институт белка Российской академии наук | Обнаружение молекулярных колоний посредством гибридизации на мембранах с флуоресцентными зондами |
ES2368608T3 (es) | 2006-03-20 | 2011-11-18 | Novozymes, Inc. | Polipéptidos con actividad endoglucanasa y polinucleótidos codifcando los polipéptidos. |
ATE557559T1 (de) | 2006-03-29 | 2012-05-15 | Huawei Tech Co Ltd | Reduzierung von dienstunterbrechungen eines endgeräts während eines packetvermittelten handovers in einer mobilkommunikation |
EP1870411B1 (en) | 2006-06-21 | 2016-03-16 | Fidia Farmaceutici S.p.A. | Process for the preparation and purification of valgancyclovir |
WO2008018839A1 (en) | 2006-08-09 | 2008-02-14 | National University Of Singapore | Method for molecular biology applications |
US7846703B2 (en) | 2006-10-02 | 2010-12-07 | Takara Bio Inc. | Method for enhancing polymerase activity |
GB0701253D0 (en) | 2007-01-23 | 2007-02-28 | Diagnostics For The Real World | Nucleic acid amplification and testing |
US8686129B2 (en) | 2007-03-20 | 2014-04-01 | Agilent Technologies, Inc. | Methods for the separation of biological molecules using sulfolane |
AU2008240834B2 (en) | 2007-04-24 | 2012-08-23 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Process for HCV protease inhibitor intermediate |
US8841437B2 (en) | 2008-06-20 | 2014-09-23 | The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University | Precursor miRNA loop-modulated target regulation |
CA2699385A1 (en) | 2007-09-14 | 2009-03-19 | Ventana Medical Systems, Inc. | Prostate cancer biomarkers |
EP2235496B1 (en) | 2007-12-10 | 2015-10-14 | Dako Denmark A/S | A tissue processing apparatus |
US9409166B2 (en) | 2007-12-10 | 2016-08-09 | The Trustees Of The University Of Pennsylvania | Integrated PCR reactor for cell lysis, nucleic acid isolation and purification, and nucleic acid amplication related applications |
US9261508B2 (en) | 2008-04-25 | 2016-02-16 | Istituto Superiore Di Sanita | Antisense RNA for treating cancer and inhibition of metastasis and vectors for antisense sequestration |
CN102084004B (zh) | 2008-05-27 | 2016-01-20 | 丹麦达科有限公司 | 杂交组合物和方法 |
ITMI20081002A1 (it) | 2008-05-30 | 2009-11-30 | Kardia S R L | Dispositivo per il trattamento di occlusioni arteriose degli arti inferiori |
AU2009257663B2 (en) | 2008-06-09 | 2014-06-26 | New York Medical College | Compositions comprising cardiac stem cells overexpressing specific microRNA and methods of their use in repairing damaged myocardium |
CN102119461B (zh) | 2008-06-12 | 2016-08-03 | 麻省理工学院 | 高能量密度氧化还原液流装置 |
US7750208B2 (en) | 2008-07-09 | 2010-07-06 | National Taiwan University | Anther-specific expression promoter in plant and application thereof |
US20110287951A1 (en) | 2009-01-30 | 2011-11-24 | Emmert-Buck Michael R | Methods and systems for purifying, transferring, and/or manipulating nucleic acids |
WO2010097656A1 (en) | 2009-02-26 | 2010-09-02 | Dako Denmark A/S | Compositions and methods for performing a stringent wash step in hybridization applications |
RU2011142773A (ru) | 2009-03-24 | 2013-04-27 | Эсьюраджен, Инк. | Методы пцр для характеристики 5,-нетранслируемого участка генов fmr1 и fmr2 |
EP2507391B1 (en) | 2009-12-02 | 2016-08-17 | Dako Denmark A/S | Compositions and methods for performing hybridizations with no denaturation |
CN102933555B (zh) | 2010-05-28 | 2014-07-23 | 先正达参股股份有限公司 | 吡唑羧酰胺衍生物以及它们作为杀微生物剂的用途 |
DK2576830T3 (en) | 2010-06-03 | 2014-12-08 | Cellay Inc | Methods for in situ detection of nucleotide sequences |
JP6013376B2 (ja) | 2011-02-28 | 2016-10-25 | ダコ・デンマーク・エー/エス | 包埋生体試料の前処置のための2相非混和系 |
EP2761028A1 (en) | 2011-09-30 | 2014-08-06 | Dako Denmark A/S | Hybridization compositions and methods using formamide |
EP3252173A1 (en) | 2011-10-21 | 2017-12-06 | Dako Denmark A/S | Hybridization compositions and methods |
US9651549B2 (en) | 2012-07-13 | 2017-05-16 | Genisphere, Llc | Lateral flow assays using DNA dendrimers |
EP2914737B1 (en) | 2012-10-31 | 2017-12-06 | Cellay, Inc. | Methods and kits for performing in situ hybridization |
GB201303666D0 (en) | 2013-03-01 | 2013-04-17 | Goldsborough Andrew S | Sample fixation and stabilisation |
US9745571B2 (en) | 2013-03-07 | 2017-08-29 | Bio-Rad Laboratories, Inc. | Repetitive reverse transcription partition assay |
SG11201508460TA (en) | 2013-04-25 | 2015-11-27 | Firefly Bioworks Inc | Multiplexed analysis of target nucleic acids |
US10711311B2 (en) | 2013-12-30 | 2020-07-14 | The Henry M. Jackson Foundation For The Advancement Of Military Medicine, Inc. | Genomic rearrangements associated with prostate cancer and methods of using the same |
CN103966321A (zh) | 2014-04-24 | 2014-08-06 | 哈尔滨工业大学(威海) | 一种区域选择性抗生物污染阵列芯片的制备方法 |
WO2015184144A1 (en) | 2014-05-28 | 2015-12-03 | Siemens Healthcare Diagnostics Inc. | Rare molecule signal amplification |
CN104032033B (zh) | 2014-07-07 | 2015-09-23 | 玉峰惠仁生物医药科技(北京)有限公司 | 用于荧光原位杂交检测粪肠球菌和/或其他肠球菌的肽核酸探针组及其试剂盒、使用方法、用途 |
ES2796701T3 (es) | 2015-02-04 | 2020-11-30 | Univ Bologna Alma Mater Studiorum | Aditivo para acelerar la hibridación |
-
2009
- 2009-05-27 CN CN200980121810.XA patent/CN102084004B/zh active Active
- 2009-05-27 ES ES13164099.7T patent/ES2610588T3/es active Active
- 2009-05-27 WO PCT/IB2009/005893 patent/WO2009144581A1/en active Application Filing
- 2009-05-27 CA CA2724638A patent/CA2724638C/en active Active
- 2009-05-27 JP JP2011511111A patent/JP5592357B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 2009-05-27 ES ES09757890.0T patent/ES2668555T3/es active Active
- 2009-05-27 RU RU2010151493/10A patent/RU2505609C2/ru active
- 2009-05-27 CA CA2724552A patent/CA2724552C/en active Active
- 2009-05-27 EP EP13164099.7A patent/EP2636757B1/en active Active
- 2009-05-27 CN CN201710332220.8A patent/CN107254513B/zh active Active
- 2009-05-27 ES ES13164094T patent/ES2595031T5/es active Active
- 2009-05-27 ES ES09754209T patent/ES2613481T5/es active Active
- 2009-05-27 US US12/994,495 patent/US9297035B2/en active Active
- 2009-05-27 EP EP18165184.5A patent/EP3360973A1/en active Pending
- 2009-05-27 EP EP09757890.0A patent/EP2285982B1/en active Active
- 2009-05-27 EP EP20167307.6A patent/EP3733871A1/en active Pending
- 2009-05-27 EP EP16180119.6A patent/EP3138925B8/en active Active
- 2009-05-27 US US12/994,492 patent/US11118214B2/en active Active
- 2009-05-27 EP EP13164094.8A patent/EP2636756B2/en active Active
- 2009-05-27 JP JP2011511105A patent/JP5588970B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 2009-05-27 WO PCT/IB2009/006548 patent/WO2009147537A2/en active Application Filing
- 2009-05-27 BR BRPI0912046-7A patent/BRPI0912046B1/pt active IP Right Grant
- 2009-05-27 CN CN200980119333.3A patent/CN102046808B/zh active Active
- 2009-05-27 RU RU2010151495A patent/RU2618868C2/ru not_active Application Discontinuation
- 2009-05-27 EP EP17150792.4A patent/EP3219812B1/en active Active
- 2009-05-27 EP EP09754209.6A patent/EP2285979B2/en active Active
-
2021
- 2021-09-13 US US17/473,524 patent/US11834703B2/en active Active
-
2023
- 2023-10-25 US US18/494,603 patent/US20240124922A1/en active Pending
Also Published As
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
US11834703B2 (en) | Hybridization compositions and methods | |
US20220154263A1 (en) | Compositions and methods for performing hybridizations with separate denaturation of the sample and probe | |
US20240200124A1 (en) | Compositions and methods for performing hybridizations with no denaturation |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A521 | Written amendment |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20120525 |
|
A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20120525 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20131203 |
|
A601 | Written request for extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601 Effective date: 20140226 |
|
A602 | Written permission of extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A602 Effective date: 20140305 |
|
A601 | Written request for extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601 Effective date: 20140401 |
|
A602 | Written permission of extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A602 Effective date: 20140408 |
|
A601 | Written request for extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601 Effective date: 20140430 |
|
A602 | Written permission of extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A602 Effective date: 20140509 |
|
A524 | Written submission of copy of amendment under section 19 (pct) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A524 Effective date: 20140603 |
|
TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20140701 |
|
A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20140728 |
|
R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Ref document number: 5588970 Country of ref document: JP Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
S111 | Request for change of ownership or part of ownership |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R313113 |
|
S531 | Written request for registration of change of domicile |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R313531 |
|
S533 | Written request for registration of change of name |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R313533 |
|
LAPS | Cancellation because of no payment of annual fees | ||
R350 | Written notification of registration of transfer |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R350 |