JP2015509719A - 神経幹細胞を調製するための培養培地およびその使用 - Google Patents
神経幹細胞を調製するための培養培地およびその使用 Download PDFInfo
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Abstract
Description
まず、ヒトの尿を遠心分離し、沈殿物を得て、
次に、尿を培養するための培地を使用して沈殿物を培養し、一次ヒト尿中脱落細胞を得て、
最後に、Oct4、Sox2、Klf4およびmiR302からなる群から選択される少なくとも1つである多能性幹細胞因子をコードする核酸配列を担持するベクターを使用して、一次ヒト尿中脱落細胞を形質転換し、体細胞を得る。本発明のある実施の形態によると、当該ベクターは、Oct4、Sox2、Klf4およびmiR302をコードする核酸配列を担持する。本発明のある実施の形態によると、当該ベクターは、Oct4、Sox2、Klf4およびmiR302のそれぞれをコードする核酸配列を担持するプラスミドを含む。本発明のある実施の形態によると、一次ヒト尿中脱落細胞は、電気的形質導入の手段によって形質転換される。
まず、mTeSR1のような基礎培地を使用して神経幹細胞を前培養し、付着神経幹細胞を得て、
次に、約1%のN2サプリメント、約1%の非必須アミノ酸、約0.1%のヘパリン、約20ng/mlの塩基性線維芽細胞増殖因子および約20ng/mlの上皮成長因子が添加されたDMEM/F12培地を含む、神経幹細胞のための培地において当該付着神経幹細胞を培養する。
まず、患者から体細胞を分離し、
次に、上述の方法に従って当該体細胞を基盤とした神経幹細胞を調製し、
および、当該患者に当該神経幹細胞を導入する。
1.ヒト尿中脱落細胞の分離(尿中細胞(Urine cells、UC))
以下の工程による尿中脱落細胞の分離。
(1)ペニシリン/ストレプトマイシンを添加した滅菌容器に、尿の中流の150−200mLを収集する。
(2)尿を50mL遠心チューブの中に移し、400gで10分間遠心分離を行う。
(3)尿の約5mLを維持するように、上清を捨てる。
(4)ペニシリン/ストレプトマイシンを含む約10から30mLのPBSを、工程(3)において得た尿に加え、穏やかに混ぜた後、400gで10分間遠心分離を行う。
(5)残った液体が0.5mL未満となるまで、上清を捨てる。
(6)尿培養のための培地1mLを残った尿の液体に加え、得られた沈殿物を再懸濁し、細胞を収集する。
(8)細胞を播種した培養皿を、37℃、5%CO2のインキュベーターに3日間置いた。
(9)細胞が皿の底へ付着するかどうかを観察し、追加の尿培養のための培地1mLを穏やかに加え、細胞を播種した培養皿を、37℃、5%CO2のインキュベーターに置いて連続培養した。
(10)播種の日から5日目から7日目において培養皿内の培地を捨て、PBSで一度洗浄した後に新鮮な尿培養のための培地(抗生物質なし)を培養皿に加える。これにより、付着細胞の増殖を観察することができた。
(11)細胞増殖状況に応じて培地を添加または交換し、0.25%トリプシンを用いた継代培養ができた。
(12)第二世代から一次ヒト尿中脱落細胞を採取し、使用のために凍結液(90%FBS+10%DMSO)を用いて液体窒素中において凍結し保存する。
人工神経幹細胞の誘導の実験は、細胞調製、プラスミドの電気的形質導入、細胞播種誘導、細胞クローン選択、iNSC増幅等を含む。詳細には、
(1)凍結した一次ヒト尿中脱落細胞を解凍し、10cm皿(または6−ウェルプレート)内に播種する。
(2)付着一次ヒト尿中脱落細胞の培養集密度が10cm皿において約90%になった時、0.25%トリプシンを使用して付着細胞を消化し、そして消化された細胞を採取し、計数する。
(3)適当な細胞数(電気的形質導入機構毎において500,000から1,500,000までの範囲の細胞数)を有する消化された細胞を、1.5mLのEPチューブに移し、その後200gで5分間遠心分離する。
(4)工程(3)において得られた上清を捨てて、得られた細胞沈殿物を電気的形質導入のカップ中に回収する。
(5)プラスミドの形質転換系を調製する:哺乳類上皮細胞およびシーケンスのサプリメント1(Lonza)18μLに、Basic Nucleofector(登録商標)溶液82μLを加え、続けて穏やかに混合し、その後十分に混合しながらプラスミド5μgを加え、プラスミド形質転換系を得る。当該プラスミドは、pCEP4−O2SET2K(3μg)およびpCEP4−miR−302(2μg)を含んでいる。
(6)工程(4)において上述したカップをAmaxaエレクトロポレーター(Lonza)上に配置し、T−013(またはT−020)の手順を選択することにより電気的形質導入を実行する。
(8)尿中細胞を培養するための培地を、3μMのCHIR99021、1μMのPD0325901、0.5μMのA83−01(Tocris Bioscience)、0.5μMのチアゾビビン、および、0.2μMのDMH1(Tocris Bioscience)を含むmTeSR1培地によって、工程(7)において播種した日から2日目に(またはトランスフェクション後2日目に)交換する。当該mTeSR1培地は、本発明の神経幹細胞を調整するための培地であり、細胞培養のために使用され、2日おきに交換される。
(9)細胞クローンを選択し、機械的方法によって小片に分割し、その後、マトリゲルでコーティングされた6−ウェルプレート(または12−ウェルプレート)の中に選択した細胞を播種し、播種した細胞を通常のmTeSR1培地を用いて培養する。当該細胞クローンは、電気的形質導入から12から15日後に得られ、当該細胞クローンは適切な大きさ、明瞭なエッジ、および、電気的に形質導入された細胞から展開されるコンパクトな配列形状となっている。
(11)機械的方法によって神経幹細胞様細胞クラスターを選択し、当該神経幹細胞様細胞クラスターを、1mLピペットを用いて吸い取り、当該神経幹細胞様細胞クラスターが小片または単一細胞へとなるように、穏やかにピペッティングする。その後、得られた単一の細胞を、神経幹細胞を培養するための培地を含むT25フラスコに移す。当該神経幹細胞を培養するための培地は、1%N2サプリメント(Gibco)、1%非必須アミノ酸(NEAA、Gibco)、0.1%ヘパリン(Sigma)、20ng/ml塩基性線維芽細胞増殖因子(bFGF、Invitrogen)、および、20ng/ml上皮成長因子(EGF、R&D System)が添加されているDMEM/F12培地を含んでいる。
(12)1週間T25フラスコにおいて培養された単一細胞の懸濁物から明瞭な境界で、神経球を得る(ここでの神経球は、P1の代の神経球として規定される)。培養物の培地は、元の培地と比較して半分の量が2または3日おきに交換されていた。
(14)神経幹細胞を培養するための培地(当該神経幹細胞を培養するための培地は、1%N2サプリメント(Gibco)、1%非必須アミノ酸(NEAA、Gibco)、0.1%ヘパリン(Sigma)、20ng/ml塩基性線維芽細胞増殖因子(bFGF、Invitrogen)、および、20ng/ml上皮成長因子(EGF、R&D System)が添加されているDMEM/F12培地を含んでいる)を、上述した遠心チューブに、その中の反応系が10mLの容量を有するまで加え、その後、200gで5分間遠心分離を行う。
(15)工程(14)において得られたものの上清を捨てた後、幹細胞を培養するための少量の培地(約500μL)を加え、続けて穏やかに混合し、1mLピペットを使用して小片となるように細胞クラスターを穏やかにピペッティングし、神経幹細胞を培養するための培地1mLを遠心チューブの中へ加え、新しいフラスコの中で均一に混合された後に得られた細胞を播種し、神経球の第二世代を得る。
1.免疫蛍光法によるiNSCにおけるNSCマーカーの発現判定
(1)24−ウェルプレートにおいてマトリゲルでコーティングしたスライドを置き、スライドに対し実施例1において調製した小さい体積を有するiNSC神経球を5から10付着させ、その後、その上に神経幹細胞を培養するための培地100μLを加え、そして、翌日に、24−ウェルプレートのそれぞれのウェルの中に神経幹細胞を培養するための培地500μLを加える。その後、1から2日間培養する。
(2)工程(1)において得られた培養細胞を、4%パラホルムアルデヒド中において室温下で20分間固定する。
(3)PBSを用いて1回あたり5分間に3回固定した細胞を洗浄する。
(4)工程(3)において得られた細胞を、一次抗体(Pax6、Nestin、Sox1またはSox2)、1%BSA、10%正常ヤギ血清、0.3%Triton−Xを添加したPBS中において、4℃で一晩インキュベートする。
(5)工程(4)において得られた細胞を、PBSを用いて1回あたり5分間に3回洗浄する。
(6)工程(5)において得られた細胞を、Alexa568または488で標される二次抗体(Invitrigen)を用いて、暗所において室温下で1時間インキュベートする。
(7)工程(6)において得られた細胞を、PBSを用いて1回あたり5分間に3回洗浄する。
(8)工程(7)において得られた細胞を、DAPI(Sigma)を用いて暗所において室温下で3分間インキュベートする。
(9)工程(8)において得られた細胞を、PBSを用いて1回あたり5分間に3回洗浄する。
(10)工程(9)において得られた細胞を有するスライドを設置し、撮影によってサンプルを観察する。その結果を図5に示す。
まず、製造者の使用書に従って、実施例1において調製された人工神経幹細胞のトータルRNAを抽出するために、Trizol試薬(Takara)を使用した。その後、抽出したトータルRNAに逆転写を受けさせ、cDNAを得るために、M−MLV kit(Takara)を使用した。さらに、得たcDNAにリアルタイムPCRを受けさせ、神経幹細胞マーカー遺伝子の発現を判定するために、SYBR(登録商標) Premix Ex Taq(商標)kit(Takara)およびABI 7300蛍光定量PCR装置を使用した。その結果を図5に示す。ここで、リアルタイムPCRにおけるプライマーの配列は以下の通りである。
マトリゲルでコーティングしたスライドを24−ウェルプレートに置き、実施例1において調製したiNSC神経球(人工神経幹細胞)を24−ウェルプレートのそれぞれのウェルにおいて置かれたスライド上に付着させ、その上に神経幹細胞を培養するための培地100μLを加えた。そして、翌日に、24−ウェルプレートのそれぞれのウェルの中に神経分化用の培地1mLを加え、その後、細胞を1から2日間培養した。当該神経分化用の培地は、1%N2サプリメント(Gibco)、1%非必須アミノ酸(NEAA、Gibco)、0.1%ヘパリン(Sigma)およびニューロトロフィン(Peprotech)が添加されているDMEM/F12培地を含んでおり、当該ニューロトロフィンは10ng/mLのBDNF、10ng/mLのGDNF、10ng/mLのCNTCおよび10ng/mLのIGFから構成されている。当該神経分化培養のための培地は、元の神経分化培養のための培地の量と比較して半分の量が、2日おきに交換された。上述の培養の2週間後、人工神経幹細胞のin vitroでの分化産物が得られた。その後、Tuj、Map2、Dcx、TH、GABA、グルタミンおよびGFAPタンパク質のような、人工神経幹細胞のin vitroで得られる分化産物の発現を、免疫蛍光法によって検出した。その結果を図6に示す。詳細には、TH、GABA、グルタミンおよびGFAPタンパク質は、異なる種類のニューロンおよび神経膠細胞に固有のマーカーである。これにより、in vitroでの分化を介して人工神経幹細胞から得られた異なる種類のニューロンおよび神経膠細胞について、人工神経幹細胞のin vitroでの分化産物におけるそれぞれのTuj、Map2、Dcx、TH、GABA、グルタミンおよびGFAPタンパク質それぞれの発現を検出することにより、判定することができる。これは、さらに、in vitroでの人工神経幹細胞の分化能力を判定し得るものである。
本出願は、2012年2月29日に中華人民共和国国家知識産権局に提出された、中国特許出願第201210051095.0の優先権および利益を主張しており、その全体の内容は参照によりここに組み込まれる。
Claims (30)
- 幹細胞を培養するための基礎培地と、
GSK阻害剤、MEK阻害剤、TGF−β阻害剤、ROCK阻害剤およびBMP阻害剤からなる群から選択される少なくとも1つである阻害剤と、
を含む、神経幹細胞を調製するための培地。 - 前記基礎培地は、mTeSR1である、請求項1に記載の培地。
- 前記阻害剤は、GSK阻害剤 CHIR99021、MEK阻害剤 PD0325901、TGF−β阻害剤 A83−01、ROCK阻害剤 チアゾビビン、および、BMP阻害剤 DMH1を含む、請求項1に記載の培地。
- 前記阻害剤は、約0.3μMから約30μMのGSK阻害剤 CHIR99021、約10nmから約10μMのMEK阻害剤 PD0325901、約50nmから約5μMのTGF−β阻害剤 A83−01、約50nmから約5μMのROCK阻害剤 チアゾビビン、および、約20nmから約2μMのBMP阻害剤 DMH1を含む、請求項3に記載の培地。
- 前記阻害剤は、約3μMのGSK阻害剤 CHIR99021、約1μMのMEK阻害剤 PD0325901、約0.5μMのTGF−β阻害剤 A83−01、約0.5μMのROCK阻害剤 チアゾビビン、および、約0.2μMのBMP阻害剤 DMH1を含む、請求項3に記載の培地。
- GSK阻害剤、MEK阻害剤、TGF−β阻害剤、ROCK阻害剤およびBMP阻害剤からなる群から選択される少なくとも1つである阻害剤を含む、神経幹細胞を調製するためのキット。
- 前記阻害剤は、GSK阻害剤 CHIR99021、MEK阻害剤 PD0325901、TGF−β阻害剤 A83−01、ROCK阻害剤 チアゾビビン、および、BMP阻害剤 DMH1を含む、請求項6に記載のキット。
- 前記GSK阻害剤 CHIR99021、前記MEK阻害剤 PD0325901、前記TGF−β阻害剤 A83−01、前記ROCK阻害剤 チアゾビビン、および、前記BMP阻害剤 DMH1は、それぞれ異なる容器に収容されている、請求項7に記載のキット。
- さらに、基礎培地であるmTeSR1を含む、請求項6に記載のキット。
- 前記阻害剤は前記基礎培地中に溶解されている、請求項9に記載のキット。
- 前記阻害剤は、約3μMの濃度を有するGSK阻害剤 CHIR99021、約1μMの濃度を有するMEK阻害剤 PD0325901、約0.5μMの濃度を有するTGF−β阻害剤 A83−01、約0.5μMの濃度を有するROCK阻害剤 チアゾビビン、および、約0.2μMの濃度を有するBMP阻害剤 DMH1を含む、請求項10に記載のキット。
- 請求項1ないし5のいずれか1項に記載の培地を含む、神経幹細胞を調製するためのキット。
- 神経幹細胞の調製における、請求項6ないし12のいずれか1項に記載のキットの使用。
- 神経幹細胞の調製における、請求項1ないし5のいずれか1項に記載の培地の使用。
- 請求項1ないし5のいずれか1項に記載の培地を使用して体細胞を培養することを含む神経幹細胞を調製する方法であって、
前記体細胞は、当該体細胞から前記神経幹細胞への分化転換を誘導するための、Oct4、Sox2、Klf4およびmiR302からなる群から選択される少なくとも1つである多能性幹細胞因子をコードする核酸配列を含む、方法。 - 前記体細胞は、ヒト尿中脱落細胞である、請求項15に記載の方法。
- 前記体細胞が、
ヒトの尿を遠心分離し、沈殿物を得ることと、
尿培養のための培地を使用して前記沈殿物を培養し、一次ヒト尿中脱落細胞を得ることと、
Oct4、Sox2、Klf4およびmiR302からなる群から選択される少なくとも1つである多能性幹細胞因子をコードする核酸配列を担持するベクターを使用して、前記一次ヒト尿中脱落細胞を形質転換して、当該体細胞を得ることと、
によって得られる、請求項16に記載の方法。 - 前記ベクターは、Oct4、Sox2、Klf4およびmiR302をコードする前記核酸配列を担持する、請求項17に記載の方法。
- 前記ベクターは、Oct4、Sox2、Klf4およびmiR302のそれぞれをコードする前記核酸配列を担持するプラスミドを含む、請求項18に記載の方法。
- 前記一次ヒト尿中脱落細胞は、電気的形質導入の手段によって形質転換される、請求項17に記載の方法。
- 付着神経幹細胞を得るために基礎培地を使用して前記神経幹細胞を前培養し、
約1%のN2サプリメント、約1%の非必須アミノ酸、約0.1%のヘパリン、約20ng/mlの塩基性線維芽細胞増殖因子および約20ng/mlの上皮成長因子が添加されたDMEM/F12培地を含む、神経幹細胞のための培地において、前記付着神経幹細胞を培養することをさらに含む、
請求項15に記載の方法。 - 請求項15ないし21のいずれか1項に記載の方法によって得られる神経幹細胞、またはその分裂物・分化物。
- 神経細胞損傷によって誘発される疾患を治療するための薬剤の調製における、請求項22に記載の神経幹細胞またはその分裂物・分化物の使用。
- 請求項22に記載の神経幹細胞またはその分裂物・分化物を患者に導入することを含む、神経細胞損傷によって誘発される疾患を治療する方法。
- 請求項22に記載の神経幹細胞またはその分裂物・分化物を、分化のために適切な条件下において培養することを含む、神経細胞を調製する方法。
- 異なる種類のニューロンおよび神経膠細胞を得るために、前記神経幹細胞を、約1%のN2サプリメント、約1%の非必須アミノ酸、約0.1%のヘパリンおよびニューロトロフィンが添加されたDMEM/F12培地において培養することをさらに含み、
前記ニューロトロフィンは、約10ng/mLのBDNF、約10ng/mLのGDNF、約10ng/mLのCNTCおよび約10ng/mLのIGFで構成されている、請求項25に記載の方法。 - ヒトの尿からヒト尿中脱落細胞を分離するための分離装置と、
前記分離装置と接続されており、ヒト尿中脱落細胞を形質転換するためのOct4、Sox2、Klf4およびmiR302からなる群から選択される少なくとも1つである多能性幹細胞因子をコードする核酸配列のベクターを具備している形質転換装置と、
前記形質転換装置と接続されており、請求項1ないし5のいずれか1項に記載の培地を具備しており、体細胞から神経幹細胞へと分化転換を誘導するために、形質転換されたヒト尿中脱落細胞に分化転換を受けさせるための分化転換装置と、
を備える、神経幹細胞を調製するためのシステム。 - 請求項22に記載の神経幹細胞を候補化合物と接触させる工程と、
前記神経幹細胞を前記候補化合物と接触させる工程の前および後のそれぞれにおける神経幹細胞の多能性を判定する工程であって、前記神経幹細胞を前記候補化合物と接触させた後における多能性の減少を、前記候補化合物が神経幹細胞の分化誘導能を有する指標とする、工程と、を含む、
神経幹細胞の分化を誘導するための化合物をスクリーニングする方法。 - 患者から体細胞を分離する工程と、
請求項15ないし21のいずれか1項に記載の方法によって、前記体細胞を基盤とした神経幹細胞を調製する工程と、
前記患者に前記神経幹細胞を導入する工程とを含む、
神経変性疾患または神経細胞損傷によって誘発される疾患を治療する方法。 - 前記薬剤を請求項22に記載の神経幹細胞と接触させる工程と、
前記薬剤を前記神経幹細胞と接触させる工程の前および後における前記神経幹細胞を判定する工程と、
前記神経幹細胞の変化に基づき前記薬剤が神経系に影響を及ぼすかどうかを判定する工程と、を含む、
薬剤が神経系に影響を及ぼしているかどうかを判定する方法。
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Cited By (7)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2018516064A (ja) * | 2015-04-13 | 2018-06-21 | コリア ユニバーシティ リサーチ アンド ビジネス ファウンデーションKorea University Research And Business Foundation | 小分子化合物を利用したヒト線維芽細胞を神経幹細胞に直接転換する方法 |
JP2019502671A (ja) * | 2015-12-01 | 2019-01-31 | ▲海▼▲門▼雨霖▲細▼胞科技有限▲責▼任公司 | 小分子組成物を用いてヒト腫瘍細胞を非腫瘍形成性細胞に直接リプログラミングすることを誘導する方法 |
JPWO2017204340A1 (ja) * | 2016-05-26 | 2019-03-22 | 株式会社ニコン | 神経幹細胞の製造方法、培地、サプリメント、サプリメントセット、培地キット、及び細胞培養装置 |
JP2020074796A (ja) * | 2016-11-25 | 2020-05-21 | ジェヌーヴ インク. | 神経退行性疾患治療剤候補物質のスクリーニング方法 |
JP2022501017A (ja) * | 2018-09-07 | 2022-01-06 | チャ バイオテック カンパニー リミテッド | 多能性幹細胞由来の間葉系幹細胞直接分化用培地、それを利用して間葉系幹細胞を製造する方法、及びそれによって製造された間葉系幹細胞 |
JP2022503604A (ja) * | 2018-08-28 | 2022-01-12 | ステムラボ・インコーポレイテッド | 合成メッセンジャーrnaを用いて尿細胞を神経幹細胞へ直接逆分化する方法 |
WO2023090268A1 (ja) * | 2021-11-17 | 2023-05-25 | 武田薬品工業株式会社 | 細胞の製造方法 |
Families Citing this family (42)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US8642334B2 (en) | 2009-02-17 | 2014-02-04 | Memorial Sloan Kettering Cancer Center | Methods of neural conversion of human embryonic stem cells |
ES2779453T3 (es) | 2011-11-04 | 2020-08-17 | Memorial Sloan Kettering Cancer Center | Neuronas de dopamina (DA) del mesencéfalo para injerto |
CN102604894B (zh) | 2012-02-29 | 2014-07-30 | 中国科学院广州生物医药与健康研究院 | 用于制备神经干细胞的培养基及其用途 |
CN107400657A (zh) * | 2013-01-04 | 2017-11-28 | 广州康睿生物医药科技股份有限公司 | 一种促胰岛细胞增殖培养液及其制备方法 |
EP2989198A4 (en) | 2013-04-26 | 2016-10-26 | Sloan Kettering Inst Cancer | CORTICAL INTERNEURONES AND OTHER NEURONAL CELLS PRODUCED BY DIRECTED DIFFERENTIATION OF PLURIPOTENT AND MULTIPOTENT CELLS |
CN104894060B (zh) * | 2014-03-03 | 2018-11-06 | 中国科学院上海生命科学研究院 | 诱导体细胞转分化为神经干细胞的方法及其应用 |
CN104928246A (zh) * | 2014-03-20 | 2015-09-23 | 广州赛吉生物科技有限公司 | 一种神经干细胞的大规模制备方法 |
CN105154386B (zh) * | 2014-05-30 | 2018-04-24 | 中国人民解放军第二军医大学东方肝胆外科医院 | 人肝细胞长期维持和增殖传代培养的专用培养基和培养方法 |
CN104195108B (zh) * | 2014-07-29 | 2018-02-06 | 深圳市三启生物技术有限公司 | 蛋白激酶抑制剂在从非神经细胞制备神经细胞中的用途 |
CN105441384B (zh) * | 2014-09-26 | 2021-01-05 | 北京大学 | 一种制备动物和人类原始多潜能干细胞的方法,试剂盒及用途 |
WO2016064737A1 (en) * | 2014-10-20 | 2016-04-28 | Neuralstem, Inc. | Stable neural stem cells comprising an exogenous polynucleotide coding for a growth factor and methods of use thereof |
CN109251894B (zh) * | 2014-11-25 | 2022-10-04 | 宾州研究基金会 | 人神经胶质细胞转化成用于大脑和脊髓修复的神经细胞的化学重编程 |
US20180051249A1 (en) * | 2015-03-04 | 2018-02-22 | The University Of North Carolina At Chapel Hill | Methods for making neural stem cells and uses thereof |
CN107405428A (zh) | 2015-03-31 | 2017-11-28 | 北卡罗来纳-查佩尔山大学 | 干细胞的递送载体及其用途 |
WO2016167528A1 (ko) * | 2015-04-13 | 2016-10-20 | 고려대학교산학협력단 | 소분자 화합물을 이용한 인간 섬유아세포를 신경줄기세포로 직접 전환하는 방법 |
KR101782488B1 (ko) * | 2015-05-19 | 2017-09-28 | 주식회사 스템랩 | Oct4가 도입된 인간체세포로부터 직접적 리프로그래밍을 통한 희소돌기아교 전구세포를 유도하는 방법 |
CN105420193B (zh) * | 2015-12-07 | 2019-04-09 | 中国科学院广州生物医药与健康研究院 | 分化培养基及其在制备神经干细胞中的用途 |
US20190030083A1 (en) * | 2016-03-09 | 2019-01-31 | Aal Scientifics, Inc. | Neural stem cells and uses thereof |
WO2017170328A1 (ja) * | 2016-03-31 | 2017-10-05 | 学校法人慶應義塾 | 分化促進型多能性幹細胞及びその使用 |
KR101960497B1 (ko) * | 2016-05-09 | 2019-03-21 | 고려대학교 산학협력단 | 소변 유래 세포 배양용 배지 조성물 |
CN106479980B (zh) * | 2016-07-04 | 2019-12-31 | 上海爱萨尔生物科技有限公司 | 神经干细胞培养液及培养方法 |
CN106367390B (zh) * | 2016-10-12 | 2019-12-31 | 上海爱萨尔生物科技有限公司 | 神经元细胞培养液及培养方法 |
CN106619722A (zh) * | 2016-12-05 | 2017-05-10 | 上海安集协康生物技术股份有限公司 | 一种治疗脑部损伤类疾病的神经干细胞注射液 |
KR101966523B1 (ko) * | 2017-05-29 | 2019-04-05 | 차의과학대학교 산학협력단 | 오가노이드 배양을 위한 조성물 및 방법 |
CN107435050B (zh) * | 2017-06-20 | 2021-02-09 | 向孟清 | 一种将人或动物体细胞诱导为神经干细胞的方法 |
WO2019107485A1 (ja) | 2017-11-30 | 2019-06-06 | 国立大学法人京都大学 | 細胞の培養方法 |
CN108315301B (zh) * | 2018-02-23 | 2019-02-12 | 武汉睿健医药科技有限公司 | 一种诱导神经干细胞的无血清培养基及其应用 |
CN108103021B (zh) * | 2018-02-23 | 2019-02-12 | 武汉睿健医药科技有限公司 | 一种新型人源诱导型神经干细胞的制备方法及其应用 |
KR102099402B1 (ko) * | 2018-06-28 | 2020-04-09 | 오가노이드사이언스 주식회사 | 타액선 줄기세포의 기능 강화용 배양 조성물 및 이를 이용한 타액선 줄기세포 기능 강화 방법 |
CN109055304B (zh) * | 2018-08-16 | 2021-12-07 | 洪玥 | 一种非柱状上皮干细胞培养基及培养方法 |
CN109294991A (zh) * | 2018-11-07 | 2019-02-01 | 北京赛贝生物技术有限公司 | 神经干细胞诱导分化培养基及神经干细胞诱导分化的方法 |
JP7285591B2 (ja) * | 2019-01-02 | 2023-06-02 | セラピューティクス バイオ | 体細胞から分化した新規な神経膠様細胞、その製造方法、その製造用カクテル組成物、これを含む神経疾患の予防または治療用細胞治療剤およびこれを投与して神経疾患を予防および治療する方法 |
CN111500528A (zh) * | 2019-01-31 | 2020-08-07 | 中国科学院广州生物医药与健康研究院 | 一种淘选和扩增培养肝脏干细胞的方法及其应用 |
CN110872576A (zh) * | 2019-06-06 | 2020-03-10 | 中国科学院广州生物医药与健康研究院 | 一种将小鼠成纤维细胞转分化为多巴胺能神经元的方法 |
WO2020256162A2 (ko) * | 2019-06-17 | 2020-12-24 | (주)넥셀 | 인슐린 유사 성장인자 수용체의 억제제를 이용한 인간 전분화능 줄기세포로부터의 글루타메이트성 신경세포 분화방법 및 이를 통해 마련된 글루타메이트성 신경세포 |
CN110684735A (zh) * | 2019-11-13 | 2020-01-14 | 安徽科门生物科技有限公司 | 一种快速增殖神经干细胞培养基 |
CN112522198A (zh) * | 2020-12-17 | 2021-03-19 | 深圳先进技术研究院 | 一种工程化神经细胞及其制备方法和应用 |
CN114736864B (zh) * | 2020-12-23 | 2024-01-26 | 武汉睿健医药科技有限公司 | 一种神经干细胞诱导分化培养基及诱导分化方法 |
KR102619405B1 (ko) * | 2021-12-06 | 2023-12-28 | 한림대학교 산학협력단 | 세포 배양 시트 및 신경줄기세포의 분리 배양 방법 |
WO2023133726A1 (en) * | 2022-01-12 | 2023-07-20 | Westlake University | Human urine-derived induced presomitic mesoderm progenitor cells and uses thereof |
CN114621923A (zh) * | 2022-03-11 | 2022-06-14 | 复旦大学附属华山医院 | 一种神经干细胞或Neuro2a细胞来源线粒体的制备方法 |
CN115299434B (zh) * | 2022-08-09 | 2023-11-21 | 广州明迅生物科技有限责任公司 | 细胞冻存液、细胞冻存和复苏方法及其应用 |
Citations (10)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2002518990A (ja) * | 1997-09-05 | 2002-07-02 | サイトセラピューティックス,インコーポレイテッド | ヒトcns神経幹細胞の培養 |
JP2007174954A (ja) * | 2005-12-27 | 2007-07-12 | Tokyoto Igaku Kenkyu Kiko | 神経幹細胞の製造方法 |
US20100111914A1 (en) * | 2007-05-21 | 2010-05-06 | Yuanyuan Zhang | Stem cells from urine and methods for using the same |
WO2010063848A1 (en) * | 2008-12-05 | 2010-06-10 | INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) | Method and medium for neural differentiation of pluripotent cells |
WO2010144696A1 (en) * | 2009-06-11 | 2010-12-16 | Burnham Institute For Medical Research | Directed differentiation of stem cells |
WO2011019092A1 (en) * | 2009-08-12 | 2011-02-17 | Kyoto University | Method for inducing differentiation of pluripotent stem cells into neural precursor cells |
WO2011056971A2 (en) * | 2009-11-04 | 2011-05-12 | Cellular Dynamics International, Inc. | Episomal reprogramming with chemicals |
WO2011060100A1 (en) * | 2009-11-11 | 2011-05-19 | Sanford-Burnham Medical Research Institute | Method for generation and regulation of ips cells and compositions thereof |
CN102191221A (zh) * | 2010-03-17 | 2011-09-21 | 中国人民解放军第二军医大学东方肝胆外科医院 | 一种能无限自我更新的神经干细胞、其制备方法及其用途 |
WO2012022725A2 (en) * | 2010-08-19 | 2012-02-23 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Conversion of somatic cells to induced reprogrammed neural stem cells (irnscs) |
Family Cites Families (7)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN101063110B (zh) * | 2007-04-26 | 2011-07-20 | 上海交通大学 | 成体干细胞的培养基和培养方法 |
DK2173863T3 (en) * | 2007-06-29 | 2019-01-21 | Fujifilm Cellular Dynamics Inc | Automated method and apparatus for embryonic stem cell culture |
JP5808331B2 (ja) * | 2009-10-16 | 2015-11-10 | ザ スクリプス リサーチ インスティテュート | 多能性細胞の誘導法 |
KR102134240B1 (ko) * | 2009-10-31 | 2020-07-16 | 뉴 월드 레보러토리즈 인코포레이티드. | 세포의 재프로그램화 방법 및 이의 용도 |
CA2806858C (en) * | 2010-08-04 | 2021-06-15 | Cellular Dynamics International, Inc. | Reprogramming immortalized b cells |
WO2012034101A2 (en) * | 2010-09-09 | 2012-03-15 | The Regents Of The University Of California | Expandable cell source of neuronal stem cell populations and methods for obtaining and using them |
CN102604894B (zh) | 2012-02-29 | 2014-07-30 | 中国科学院广州生物医药与健康研究院 | 用于制备神经干细胞的培养基及其用途 |
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Patent Citations (10)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2002518990A (ja) * | 1997-09-05 | 2002-07-02 | サイトセラピューティックス,インコーポレイテッド | ヒトcns神経幹細胞の培養 |
JP2007174954A (ja) * | 2005-12-27 | 2007-07-12 | Tokyoto Igaku Kenkyu Kiko | 神経幹細胞の製造方法 |
US20100111914A1 (en) * | 2007-05-21 | 2010-05-06 | Yuanyuan Zhang | Stem cells from urine and methods for using the same |
WO2010063848A1 (en) * | 2008-12-05 | 2010-06-10 | INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) | Method and medium for neural differentiation of pluripotent cells |
WO2010144696A1 (en) * | 2009-06-11 | 2010-12-16 | Burnham Institute For Medical Research | Directed differentiation of stem cells |
WO2011019092A1 (en) * | 2009-08-12 | 2011-02-17 | Kyoto University | Method for inducing differentiation of pluripotent stem cells into neural precursor cells |
WO2011056971A2 (en) * | 2009-11-04 | 2011-05-12 | Cellular Dynamics International, Inc. | Episomal reprogramming with chemicals |
WO2011060100A1 (en) * | 2009-11-11 | 2011-05-19 | Sanford-Burnham Medical Research Institute | Method for generation and regulation of ips cells and compositions thereof |
CN102191221A (zh) * | 2010-03-17 | 2011-09-21 | 中国人民解放军第二军医大学东方肝胆外科医院 | 一种能无限自我更新的神经干细胞、其制备方法及其用途 |
WO2012022725A2 (en) * | 2010-08-19 | 2012-02-23 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Conversion of somatic cells to induced reprogrammed neural stem cells (irnscs) |
Non-Patent Citations (1)
Title |
---|
ASC CHEMICAL BIOLOGY, vol. 5, no. 2, JPN6016035401, 2009, pages 245 - 255, ISSN: 0003401504 * |
Cited By (9)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2018516064A (ja) * | 2015-04-13 | 2018-06-21 | コリア ユニバーシティ リサーチ アンド ビジネス ファウンデーションKorea University Research And Business Foundation | 小分子化合物を利用したヒト線維芽細胞を神経幹細胞に直接転換する方法 |
US10711245B2 (en) | 2015-04-13 | 2020-07-14 | Instemcare Inc. | Direct conversion method of human fibroblasts into neural stem cells using small molecules |
JP2019502671A (ja) * | 2015-12-01 | 2019-01-31 | ▲海▼▲門▼雨霖▲細▼胞科技有限▲責▼任公司 | 小分子組成物を用いてヒト腫瘍細胞を非腫瘍形成性細胞に直接リプログラミングすることを誘導する方法 |
JPWO2017204340A1 (ja) * | 2016-05-26 | 2019-03-22 | 株式会社ニコン | 神経幹細胞の製造方法、培地、サプリメント、サプリメントセット、培地キット、及び細胞培養装置 |
JP7088005B2 (ja) | 2016-05-26 | 2022-06-21 | 株式会社ニコン | 神経幹細胞の製造方法、培地、サプリメント、サプリメントセット、培地キット、及び細胞培養装置 |
JP2020074796A (ja) * | 2016-11-25 | 2020-05-21 | ジェヌーヴ インク. | 神経退行性疾患治療剤候補物質のスクリーニング方法 |
JP2022503604A (ja) * | 2018-08-28 | 2022-01-12 | ステムラボ・インコーポレイテッド | 合成メッセンジャーrnaを用いて尿細胞を神経幹細胞へ直接逆分化する方法 |
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