JP2012525819A5

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Publication number: JP2012525819A5
Application number: JP2012508822A
Authority: JP
Filing date: 2010-05-03
Publication date: 2013-06-20
Anticipated expiration: 2030-05-03

Claims

野生型オプロフォルスルシフェラーゼに対して少なくとも60%のアミノ酸配列同一性を有し、配列番号1の野生型オプロフォルスルシフェラーゼのアミノ酸に対応する位置で少なくとも1つのアミノ酸置換を含む改変ルシフェラーゼポリペプチドをコードするポリヌクレオチドであって、改変ルシフェラーゼポリペプチドが、野生型オプロフォルスルシフェラーゼに対して、増大した発光、増大したシグナルの安定性、及び増大したタンパク質安定性の少なくとも１つを有することを特徴とするポリヌクレオチド。
コードされた改変ルシフェラーゼポリペプチドが、野生型オプロフォルスルシフェラーゼに対して増大した発光を有し、配列番号1に対応する位置54、90、72、166、68、115、44、33、4、11、75、124、138、2、20、23、28、34、45、51、76、77、89、92、99、104、135、139、143、144、164、167又は169の少なくとも1つでアミノ酸置換を有する、請求項１記載のポリヌクレオチド。
コードされた改変ルシフェラーゼポリペプチドが、野生型オプロフォルスルシフェラーゼに対して増大したシグナルの安定性を有し、配列番号1に対応する位置33、54、166、115、138、4、68、11、75、124、20、28又は143の少なくとも1つでアミノ酸置換を有する、請求項１又は２記載のポリヌクレオチド。
コードされた改変ルシフェラーゼポリペプチドが、野生型オプロフォルスルシフェラーゼに対して増大したタンパク質安定性を有し、配列番号1に対応する位置54、115、166、33、68、138、44、11、124、90、72、75、20、28、34、45、51、77、89、92、99、104、135、139、143、144、164、167又は169の少なくとも1つでアミノ酸置換を有する、請求項１〜３のいずれか１項に記載のポリヌクレオチド。
コードされた改変ルシフェラーゼポリペプチドが、配列番号１０の野生型オプロフォルスルシフェラーゼのＮ末端に対応するルシフェラーゼ残基の欠失をさらに含む、請求項１〜４のいずれか１項に記載のポリヌクレオチド。
野生型オプロフォルスルシフェラーゼが、オプロフォルス・グラキリロストリス、オプロフォルス・グリマルディ、オプロフォルス・スピニカウダ、オプロフォルス・フォリアケウス、オプロフォルス・ノバエゼランジアエ、オプロフォルス・チプス又はオプロフォルス・スピノウス由来である、請求項１〜５のいずれか１項に記載のポリヌクレオチド。
コードされた改変ルシフェラーゼポリペプチドが、配列番号１に対応するT2S、A4E/S/R/G/D/T/L、Q11R/V/I/L/K/T、Q20R、E23V、S28P、A33K、L34M、V44I/L、V45E、G51V、A54F/T/V/G/S/W/L/I、F68S/Y/V、L72Q、M75R/K/Q/G/T/A、I76V、F77W、V79I、K89E、I90T/V、L92S/A/G/Q、I99V、P104L、P115E/I/Q/L/V/G/H/R/S/C/A/T、Q124K、N135K、Y138V/I/N/T/L/C/R/M/K、D139E、I143L、N144K、C164S、N166R/K/A/L/P/Q/S、I167V又は169Lの少なくとも1つに対応する置換を含む、請求項１〜６のいずれか１項に記載のポリヌクレオチド。
コードされた改変ルシフェラーゼポリペプチドが、
（ｉ）配列番号１に対応する位置11、33、44、54、115、124、138及び166、
（ｉｉ）配列番号１に対応する位置２３、２８、１４３及び１６６、
（ｉｉｉ）配列番号１に対応する位置４、３４、７６及び１６６、又は
（ｉｖ）配列番号１に対応する位置51、99及び166、
でアミノ酸置換を含む、請求項１〜７のいずれか１項に記載のポリヌクレオチド。
コードされた改変ルシフェラーゼが、配列番号１に対応する位置４でアミノ酸置換をさらに含む、請求項８（ｉ）記載のポリヌクレオチド。
コードされた改変ルシフェラーゼが、配列番号１に対応する位置45、135、104、139及び167でアミノ酸置換をさらに含む、請求項８（ｉ）又は９に記載のポリヌクレオチド。
コードされた改変ルシフェラーゼが、配列番号１に対応する位置28、34、51、99及び143でアミノ酸置換をさらに含む、請求項８（ｉ）、９又は１０のいずれか１項に記載のポリヌクレオチド。
配列番号１に対応する位置20、54、68、72、77、79、89、90、92又は164で少なくとも1つのアミノ酸の置換をさらに含む、請求項９に記載のポリヌクレオチド。
請求項１〜１２のいずれかに記載のポリヌクレオチドを含むベクター。
ポリヌクレオチドが、プロモーターに作動可能に連結される、請求項１３に記載のベクター。
請求項１〜１２のいずれか１項に記載のポリヌクレオチド又は請求項１３又は１４に記載のベクターを含む細胞。
請求項１〜１２のいずれか１項に記載のポリヌクレオチドによってコードされるポリペプチド。
請求項１〜１２のいずれか１項に記載のポリヌクレオチド又は請求項１３又は１４に記載のベクターを含むキット。