JP6703484B2 - 細胞による取り込み測定のための、標識用試薬としての、キノンでマスクされたプローブ - Google Patents

細胞による取り込み測定のための、標識用試薬としての、キノンでマスクされたプローブ Download PDF

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Description

関連出願の相互参照
本出願は、２０１４年１月２９日出願の米国仮特許出願第６１／９３３，１２２号の優先権を主張し、参照により、その全体が本明細書に組み込まれる。
本開示は、一般に、化合物、組成物、ならびに当該化合物及び組成物の標識用試薬としての使用方法に関する。より具体的には、本開示は、細胞による取り込み測定のための、標識用試薬としての、キノンでマスクされたプローブに関する。
生体試料（例えば、細胞、組織、及び臓器）における関心生体分子及び関心小分子の取り込みを定量化することは、薬物送達、治療処置の有効性、薬物動態のプロファイリング、薬物−薬物相互作用、及び薬物毒性にとって重要な部分となりつつあるが、脂肪酸及びグルコース、ならびに通常の生理学的機能を維持するための、コレステロールの恒常性維持などの細胞の代謝状態にとっての重要な指標にもなる。細胞及び組織における取り込みの定量化を目的とした蛍光標識または同位体標識された関心分子などのさまざまな技術は既に存在するが、取り込み測定を、高処理形式において、単純であり、信頼でき、そして再現可能なものとするために、新しい取り込み技術が依然として必要である。
いくつかの態様では、式（Ｉ）の化合物、またはその塩が開示され、
（Ｉ）
式中、
Ａは、レポーター部分であり；
Ｒ14は、Ｈ、アルキル、ヒドロキシアルキル、アルコキシ、カルボキシアルキル、またはアミドアルキルであり；
Ｒ9及びＲ10は、アルキルから独立に選択され；
Ｒ11、Ｒ12、及びＲ13は、Ｈ、アルキル、アルコキシ、ブロモ、クロロ、もしくはアミノから独立に選択されるか、またはＲ11及びＲ12は、融合されたフェニル環を形成でき；
Ｘは、Ｏであり；
Ｌは、−（ＣＨ2）mＣ（Ｒ17）2（ＣＨ2）n−Ｙ−Ｃ（Ｏ）−であり；
Ｒ17は、独立にＨ、アルキルであるか、または両Ｒ17は、一緒になって３〜７個の炭素を有するアルキル環を形成でき；
ｍは、０〜２の整数であり；
ｎは、０〜２の整数であり；
Ｙは、ＯまたはＮＲ15であり；
Ｒ15は、Ｈ、アルキル、ヒドロキシアルキル、アジドアルキル、シアノアルキル、ハロアルキル、アルケニル、アルキニル、−アルキル−Ｎ（Ｒ23）Ｃ（Ｏ）Ｒ24、−アルキル−ＳＯ3Ｒ25、−アルキル−ＳＯ2Ｎ（Ｒ26）（Ｒ27）、−アルキル−ＣＯＲ28、−アルキル−ＣＯ2Ｒ29、−アルキル−ＯＣ（Ｏ）Ｒ29、−アルキル−ＯＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ30）（Ｒ31）、−アルキル−ＣＯＮ（Ｒ30）（Ｒ31）、またはポリアルコキシアルキルであり、ここで、当該ポリアルコキシアルキルは、非置換であるか、または１個もしくは複数の適した置換基で置換されており；ならびに
Ｒ23、Ｒ24、Ｒ25、Ｒ26、Ｒ27、Ｒ28、Ｒ29、Ｒ30、及びＲ31は、水素、アルキル、アリール、ヘテロアリール、ヘテロシクリル、及びシクロアルキルからそれぞれ独立に選択される。
ある実施形態では、Ｒ15は、ポリアルコキシアルキルであり、ここで、当該ポリアルコキシアルキルは、−（Ｃ2−Ｃ6−アルコキシ）x−アルキル、−（Ｃ2−Ｃ6−アルコキシ）x−ハロアルキル、−（Ｃ2−Ｃ6−アルコキシ）x−ヒドロキシアルキル、−（Ｃ2−Ｃ6−アルコキシ）x−アミノアルキル、−（Ｃ2−Ｃ6−アルコキシ）x−アルキルアミノアルキル、−（Ｃ2−Ｃ6−アルコキシ）xジ（アルキル）アミノアルキル、−（Ｃ2−Ｃ6−アルコキシ）x−アジドアルキル、−（Ｃ2−Ｃ6−アルコキシ）x−シアノアルキル、−（Ｃ2−Ｃ6−アルコキシ）x−アルケニル、−（Ｃ2−Ｃ6−アルコキシ）x−アルキニル、−（Ｃ2−Ｃ6−アルコキシ）x−Ｎ（Ｒ23）Ｃ（Ｏ）Ｒ24、−（Ｃ2−Ｃ6−アルコキシ）x−ＳＯ3Ｒ25、−（Ｃ2−Ｃ6−アルコキシ）x−アルキル−ＳＯ2Ｎ（Ｒ26）（Ｒ27）、−（Ｃ2−Ｃ6−アルコキシ）x−アルキル−ＣＯＲ28、−（Ｃ2−Ｃ6−アルコキシ）x−アルキル−ＯＣ（Ｏ）Ｒ29、−（Ｃ2−Ｃ6−アルコキシ）x−アルキル−ＯＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ30）Ｒ31、−（Ｃ2−Ｃ6−アルコキシ）x−アルキル−ＣＯ2Ｒ29、及び−（Ｃ2−Ｃ6−アルコキシ）x−アルキル−ＣＯＮ（Ｒ30）（Ｒ31）であり、ここで、Ｒ23、Ｒ24、Ｒ25、Ｒ26、Ｒ27、Ｒ28、Ｒ29、Ｒ30、及びＲ31は、水素、アルキル、アリール、ヘテロアリール、ヘテロシクリル、及びシクロアルキルからそれぞれ独立に選択され；ならびにｘは、１〜２０から選択される整数である。
ある実施形態では、Ｒ15は、ポリアルコキシアルキルであり、ここで、当該ポリアルコキシアルキルは、非置換であるか、またはアルキル、アルコキシアルキル、ハロアルキル、ハロアルコキシアルキル、ヒドロキシアルキル、アミノアルキル、アルキルアミノアルキル、ジ（アルキル）アミノアルキル、アジドアルキル、シアノアルキル、アルコキシ、ハロアルコキシ、アルコキシアルコキシ、アルケニル、アルキニル、−Ｎ（Ｒ23）Ｃ（Ｏ）Ｒ24、−ＳＯ3Ｒ25、−ＳＯ2Ｎ（Ｒ26）（Ｒ27）、−ＣＯＲ28、−ＣＯ2Ｒ29、及び−ＣＯＮ（Ｒ30）（Ｒ31）からなる群から独立に選択される１〜３個の置換基で置換されており、ここで、Ｒ23、Ｒ24、Ｒ25、Ｒ26、Ｒ27、Ｒ28、Ｒ29、Ｒ30、及びＲ31は、水素、アルキル、アリール、ヘテロアリール、ヘテロシクリル、及びシクロアルキルからそれぞれ独立に選択される。
ある実施形態では、Ｒ15は、

であり、
式中、
Ｒ40は、水素、アルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、ヘテロアリール、ヘテロシクリル、及びシクロアルキルからなる群から選択され、ここで、当該アリール、ヘテロアリール、ヘテロシクリル、及びシクロアルキルは、非置換であるか、または１個もしくは複数の適した置換基で置換されており；ならびに
ｘは、１〜２０から選択される整数である。
ある実施形態では、Ｒ40は、水素である。
ある実施形態では、Ｒ40は、Ｎ、Ｏ、及びＳからなる群から独立に選択される１、２、または３個のヘテロ原子を有する、５または６員ヘテロシクリルである。
ある実施形態では、Ｒ40は、
である。
ある実施形態では、ｘは、２、３、または４である。
ある実施形態では、式（Ｉ）の化合物は、式（Ｉ−ｖｉ）を有するか、またはその塩であり、
（Ｉ−ｖｉ）

式中、
Ｒ9、Ｒ10、Ｒ11、Ｒ12、Ｒ13、Ｒ14、Ｒ40、ｘ、及びＡは、上で定義したとおりである。
いくつかの態様では、式（Ｉ）の化合物、またはその塩が開示され、
式（Ｉ）の化合物、またはその塩は、
（Ｉ）
式中、
Ａは、レポーター部分であり；
Ｒ14は、Ｈ、アルキル、ヒドロキシアルキル、アルコキシ、カルボキシアルキル、またはアミドアルキルであり；
Ｒ9及びＲ10は、アルキルから独立に選択され；
Ｒ11、Ｒ12、及びＲ13は、Ｈ、アルキル、アルコキシ、ブロモ、クロロ、もしくはアミノから独立に選択されるか、またはＲ11及びＲ12は、融合されたフェニル環を形成でき；
Ｘは、Ｏであり；
Ｌは、−（ＣＨ2）mＣ（Ｒ17）2（ＣＨ2）n−Ｙ−Ｃ（Ｏ）−であり；
Ｒ17は、独立にＨ、アルキルであるか、または両Ｒ17は、一緒になって３〜７個の炭素を有するアルキル環を形成でき；
ｍは、０〜２の整数であり；
ｎは、０〜２の整数であり；
Ｙは、ＯまたはＮＲ15であり；
Ｒ15は、Ｈ、アルキル、ヒドロキシアルキル、アジドアルキル、シアノアルキル、ハロアルキル、アルケニル、アルキニル、−アルキル−Ｎ（Ｒ23）Ｃ（Ｏ）Ｒ24、−アルキル−ＳＯ3Ｒ25、−アルキル−ＳＯ2Ｎ（Ｒ26）（Ｒ27）、−アルキル−ＣＯＲ28、−アルキル−ＣＯ2Ｒ29、−アルキル−ＯＣ（Ｏ）Ｒ29、−アルキル−ＯＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ30）（Ｒ31）、−アルキル−アミド、またはポリアルコキシアルキルであり、ここで、当該ポリアルコキシアルキル及び−アルキル−アミドは、非置換であるか、または１個もしくは複数の適した置換基で置換されており；ならびに
Ｒ23、Ｒ24、Ｒ25、Ｒ26、Ｒ27、Ｒ28、Ｒ29、Ｒ30、及びＲ31は、水素、アルキル、アリール、ヘテロアリール、ヘテロシクリル、及びシクロアルキルからそれぞれ独立に選択される。
ある実施形態では、本発明の化合物は、










またはそれらの塩からなる群から選択される。
ある実施形態では、レポーター部分は、生物発光または蛍光レポーター部分である。ある実施形態では、生物発光レポーター部分は、ルシフェリン、ルシフェリン誘導体もしくはルシフェリンアナログ、またはルシフェリン前駆体のアナログ、セレンテラジン、またはセレンテラジン誘導体もしくはセレンテラジンアナログである。
別の態様では、細胞による物質の取り込みの評価方法が開示され、当該方法は、ａ）細胞を含む試料と、標識された物質との接触であり、ここで、当該標識された物質は、物質及び式（Ｉ）の化合物から得られる接触と、ｂ）光放出の検出であり、それによって、光放出の検出が、細胞による当該物質の取り込みを示す検出と、を含む。
ある実施形態では、化合物は、プロ基質（ｐｒｏｓｕｂｓｔｒａｔｅ）であるか、またはルシフェラーゼと反応しない別のプロ基質前駆体（ｐｒｅ−ｐｒｏｓｕｂｓｔｒａｔｅ）である。
ある実施形態では、光放出は、蛍光または発光である。
ある実施形態では、光放出は、発光であり、細胞は、ルシフェラーゼを含む。
ある実施形態では、光放出は、細胞内、細胞外において検出され、例えば、細胞媒体において、または例えば血液、尿などの体液などといった、生体液において検出される。
ある実施形態では、ルシフェラーゼと反応しない化合物が、細胞において、蛍光を発する。
ある実施形態では、物質は、生体物質または非生体物質である。
ある実施形態では、物質は、タンパク質、核酸、脂質、糖、治療用薬物、小分子、ナノ粒子、抗体、及びそれらのいずれかの組み合わせからなる群から選択される。
ある実施形態では、タンパク質は、抗体またはリポタンパク質である。
ある実施形態では、細胞は、真核細胞である。
ある実施形態では、細胞は、原核細胞である。
ある実施形態では、細胞は、動物において存在する。
ある実施形態では、細胞は、培養媒体において成長している。
ある実施形態では、細胞は、生きた細胞である。
ある実施形態では、細胞は、ルシフェラーゼ酵素を発現している。
別の態様では、物質、及び式（Ｉ）による化合物から得られる標識された物質が開示される。
ある実施形態では、化合物は、細胞においてルシフェラーゼの基質であるか、またはルシフェラーゼと反応しない別の基質である。
別の態様では、式（Ｉ）の化合物、物質、物質及び式（Ｉ）による化合物から得られる標識された物質、またはそれらのいずれかの組み合わせを含むキットが開示される。
ある実施形態では、化合物は、ルシフェラーゼのプロ基質である。
ある実施形態では、キットは、検出試薬をさらに含む。検出試薬は、ルシフェラーゼ酵素を含んでいてもよい。
化合物、組成物、方法、及びプロセスが、本明細書でさらに説明される。
図１は、ＰＢＩ−５６５１を使用したトランスポーターアッセイを示す。 図２は、ＰＢＩ−５６４８を使用したトランスポーターアッセイを示す。 図３は、ＰＢＩ−５６５７を使用したトランスポーターアッセイを示す。 図４は、ＰＢＩ−５６５８を使用したトランスポーターアッセイを示す。 図５は、ＰＢＩ−５６６５を使用したトランスポーターアッセイを示す。 図６は、ＰＢＩ−５６６６を使用したトランスポーターアッセイを示す。 図７は、ＰＢＩ−５８２４を使用したトランスポーターアッセイを示す。 図８は、ＰＢＩ−５６８４を使用したトランスポーターアッセイを示す。 図９は、ＰＢＩ−５８２５を使用したトランスポーターアッセイを示す。 図１０は、ＰＢＩ−５６８３を使用したトランスポーターアッセイを示す。 図１１は、ＰＢＩ−５８２６を使用したトランスポーターアッセイを示す。 図１２は、ＰＢＩ−５６８２を使用したトランスポーターアッセイを示す。 図１３は、ＰＢＩ−５６５１をさまざまな量で使用したトランスポーターアッセイを示す。 図１４は、モノクローナル抗体（ｍＡｂ）キノン−ルシフェリン結合体(conjugate)の例を示す。 図１５は、標識された固体−液体ナノ粒子（ＳＬＮ）の例を示す。 図１６は、標識されたポリ（アミドアミン）（ＰＡＭＡＭ）デンドリマーの例を示す。 図１７は、Ｐ−糖タンパク質発現のアンチセンス阻害のための、標識されたオリゴヌクレオチド及びペプチド−オリゴヌクレオチド結合体(conjugate)の例を示す。
本明細書では、キノンでマスクされたプローブが開示され、当該プローブは、蛍光団及び／または発光団を含む。当該化合物は、細胞による取り込み測定のための標識用試薬として使用できる。こうした標識用試薬は、ペプチド、限定はされないが、抗体もしくは低密度リポタンパク質（ＬＤＬ）を含むタンパク質、ヌクレオチド、糖、脂質、トランスポーター向けの特定の基質、または限定はされないが、薬物担体を含むナノ粒子及びミクロソームなどの、さまざまな関心標的を標識するために、幅広く使用できる。標識用試薬は、界面活性剤を標識するために使用してもよい。細胞による標識された関心標的の取り込みに際して、キノンは、細胞内の還元電位によって還元され、蛍光団または発光団を遊離することができる。蛍光または発光の強度は、細胞によって取り込まれた関心標的の量と相関し得る。標識された物質(agent)もまた開示される。
開示の標識用試薬及び標識された物質(agent)は、現在の技術を上回る数々の利点を有する。すなわち、それらは、イメージングまたはプレートを使用する検出のいずれかを可能にし、細胞外の還元体（例えば、遊離のチオール、ＤＴＴ、ＧＳＨ）に対して低感度であり、細胞を固定する必要がなく、そして、従来の同位体や蛍光を使用する方法とは異なり、洗浄手順を必要としない。
１． 用語の定義
別段の定義がない限り、本明細書に記載のすべての技術及び科学用語は、当業者が一般に理解する意味と同一の意味を有する。定義を含め、相反する場合は、本明細書が優先する。好ましい方法及び材料が、以下に説明されるが、本発明を実施または試験する際は、本明細書で説明されるものと類似または同等の方法及び材料を使用できる。すべての出版物、特許出願、特許、及び本明細書でふれるその他の参考文献は、参照によりそれらの全体が組み込まれる。本明細書で開示される、材料、方法、及び実施例は、例示のみを目的とし、限定を意図するものではない。
用語「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅ（ｓ））」、「含む（ｉｎｃｌｕｄｅ（ｓ））」、「有する（ｈａｖｉｎｇ）」、「有する（ｈａｓ）」、「できる（ｃａｎ）」、「含む（ｃｏｎｔａｉｎ（ｓ））」、及びそれらの異なる型は、本明細書では、追加の行為または構造の可能性を排除しない非限定の、移行句、用語、または単語を意図する。本開示は、明示の有無を問わず、本明細書で示される実施形態または要素「を含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」、「からなる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ ｏｆ）」、及び「から実質的になる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ ｅｓｓｅｎｔｉａｌｌｙ ｏｆ）」その他の実施形態もまた企図する。
本明細書では、用語「適した置換基」は、化学的に許容可能な官能基を意図し、例えば、本発明の化合物の活性を打ち消すことのない部分である。適した置換基の例には、限定はされないが、ハロ基、パーフルオロアルキル基、パーフルオロアルコキシ基、アルキル基、アルケニル基、アルキニル基、ヒドロキシ基、ハロ基、オキソ基、メルカプト基、アルキルチオ基、アルコキシ基、ニトロ基、アジドアルキル基、アリール基またはヘテロアリール基、アリールオキシ基またはヘテロアリールオキシ基、アラルキル基またはヘテロアラルキル基、アラルコキシ基またはヘテロアラルコキシ基、ＨＯ−（Ｃ＝Ｏ）−基、ヘテロシリック（ｈｅｔｅｒｏｃｙｌｉｃ）基、シクロアルキル基、アミノ基、アルキルアミノ基及びジアルキルアミノ基、カルバモイル基、アルキルカルボニル基、アルキルカルボニルオキシ基、アルコキシカルボニル基、アルキルアミノカルボニル基、ジアルキルアミノカルボニル基、アリールカルボニル基、アリールオキシカルボニル基、アルキルスルホニル基、アリールスルホニル基、ならびに同様のものが含まれる。当該置換基は、追加の置換基で置換され得る。
本明細書では、用語「アルケニル」は、２〜１０個の炭素を含むと共に、２個の水素の除去により形成される炭素−炭素二重結合を少なくとも１つ含む、直鎖または分岐の炭化水素鎖を意味する。アルケニルの代表的な例には、限定はされないが、エテニル、２−プロペニル、２−メチル−２−プロペニル、３−ブテニル、４−ペンテニル、５−ヘキセニル、２−ヘプテニル、２−メチル−１−ヘプテニル、及び３−デセニルが含まれる。本発明のアルケニル基は、非置換であるか、または１個もしくは複数の適した置換基で置換されており、好ましくは１〜３個の適した上で定義した置換基で置換されている。
本明細書では、用語「アルコキシ」は、酸素原子を介して親分子部分に結合した、本明細書で定義されるアルキル基を意味する。アルコキシの代表的な例には、限定はされないが、メトキシ、エトキシ、プロポキシ、２−プロポキシ、ブトキシ、ｔｅｒｔ−ブトキシ、ペンチルオキシ、及びへキシルオキシが含まれる。
本明細書では、用語「アルコキシアルコキシ」は、別の本明細書で定義されるアルコキシ基を介して親分子部分に結合した、本明細書で定義されるアルコキシ基を意味する。アルコキシアルコキシの代表的な例には、限定はされないが、ｔｅｒｔ−ブトキシメトキシ、２−エトキシエトキシ、２−メトキシエトキシ、及びメトキシメトキシが含まれる。
本明細書では、用語「アルコキシアルキル」は、本明細書で定義されるアルキル基を介して親分子部分に結合した、本明細書で定義されるアルコキシ基を意味する。アルコキシアルキルの代表的な例には、限定はされないが、ｔｅｒｔ−ブトキシメチル、２−エトキシエチル、２−メトキシエチル、及びメトキシメチルが含まれる。
本明細書では、用語「アルコキシカルボニル」は、本明細書で定義されるカルボニル基を介して親分子部分に結合した、本明細書で定義されるアルコキシ基を意味する。アルコキシカルボニルの代表的な例には、限定はされないが、メトキシカルボニル、エトキシカルボニル、及びｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルが含まれる。
本明細書では、用語「アルキル」は、直鎖または分岐の炭化水素ラジカルを意味し、当該炭化水素ラジカルは、好ましくは、１〜３０個の炭素原子、１〜１０個の炭素原子、１〜６個の炭素原子、または１〜４個の炭素原子を有する。用語「Ｃ1−Ｃ6−アルキル」は、直鎖または分岐配列で１、２、３、４、５、または６個の炭素を有するアルキル基を含むと定義される。例えば、「Ｃ1−Ｃ6−アルキル」には、具体的には、メチル、エチル、ｎ−プロピル、ｉ−プロピル、ｎ−ブチル、ｔ−ブチル、ｉ−ブチル、ペンチル、及びへキシルが含まれる。本発明のアルキル基は、非置換でもよく、または１個もしく複数の適した置換基で置換されていてもよく、好ましくは、１〜３個の適した本明細書で定義される置換基で置換されていてもよい。
本明細書では、用語「アルキルアミノ」は、本明細書で定義されるアミノ基を介して親分子部分に結合した、本明細書で定義されるアルキル基を意味する。アルキルアミノの代表的な例には、限定はされないが、メチルアミノ、エチルアミノ、及びｓｅｃ−ブチルアミノが含まれる。
本明細書では、用語「アルキルアミノアルキル」は、本明細書で定義されるアミノアルキル基を介して親分子部分に結合した、本明細書で定義されるアルキル基を意味する。アルキルアミノアルキル基の代表的な例には、限定はされないが、メチルアミノエチル及びメチルアミノ−２−プロピルが含まれる。
本明細書では、用語「アルキルカルボニル」は、本明細書で定義されるカルボニル基を介して親分子部分に結合したアルキル基を意味する。アルキルカルボニルの代表的な例には、限定はされないが、アセチル、１−オキソプロピル、２，２−ジメチル−１−オキソプロピル、１−オキソブチル、及び１−オキソペンチルが含まれる。
本明細書では、用語「アルキルカルボニルアルコキシ」は、本明細書で定義されるアルコキシ基を介して親分子部分に結合した、本明細書で定義されるアルキルカルボニル基を意味する。アルキルカルボニルアルコキシの代表的な例には、限定はされないが、３−オキソペンチルオキシ、３−オキソブトキシ、及び２−オキソプロポキシが含まれる。
本明細書では、用語「アルキルカルボニルアルコキシアルキル」は、アルキル基を介して親分子部分に結合した、本明細書で定義されるアルキルカルボニルアルコキシ基を意味する。
本明細書では、用語「アルキルカルボニルオキシ」は、酸素原子を介して親分子部分に結合した、本明細書で定義されるアルキルカルボニル基を意味する。アルキルカルボニルオキシの代表的な例には、限定はされないが、アセチルオキシ、エチルカルボニルオキシ、及びｔｅｒｔ−ブチルカルボニルオキシが含まれる。
本明細書では、用語「アルキニル」は、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０個の炭素を有すると共に、１個または複数の炭素−炭素三重結合を有する直鎖または分岐の炭化水素ラジカルを意味する。本発明のアルキニル基には、限定はされないが、エチニル、プロピニル、及びブチニルが含まれる。本発明のアルキニル基は、非置換でもよく、または１個もしくは複数の適した置換基で置換されていてもよく、好ましくは、１〜３個の適した上で定義した置換基で置換されていてもよい。
本明細書では、用語「アミドアルキル」は、本明細書で定義されるアルキル基を介して親分子部分に結合したアミド基を意味する。アミドアルキルという用語には、−ＣＨ2ＣＯＮＨ2、−ＣＨ2ＣＨ2ＣＯＮＨ2、−ＣＨ2ＣＨ2ＣＨ2ＣＯＮＨ2、及び同様のものが含まれる。
本明細書では、用語「アミノ」は、−ＮＨ2基を意味する。
本明細書では、用語「アミノ酸」は、天然及び非天然アミノ酸の両方を意味する。保護された天然及び非天然アミノ酸もまた含まれる。
本明細書では、用語「アミノアルキル」は、本明細書で定義されるアルキル基を介して親分子部分に結合した、少なくとも１個の本明細書で定義されるアミノ基を意味する。アミノアルキルの代表的な例には、限定はされないが、アミノメチル、２−アミノエチル、及び２−アミノプロピルが含まれる。
本明細書では、用語「アリール」は、単環式、二環式、または三環式芳香族ラジカルを意味する。アリール基の代表的な例には、限定はされないが、フェニル、ジヒドロインデニル、インデニル、ナフチル、ジヒドロナフタレニル、及びテトラヒドロナフタレニルが含まれる。本発明のアリール基は、１個または複数の適した置換基で、任意選択で置換されていてもよく、好ましくは１〜５個の適した上で定義した置換基で、任意選択で置換されていてもよい。
本明細書では、用語「アリールアルキル」は、本明細書で定義されるアルキル基を介して親分子部分に結合した、本明細書で定義されるアリール基を意味する。アリールアルキルの代表的な例には、限定はされないが、フェニルメチル及びフェニルエチルが含まれる。
本明細書では、用語「アリールカルボニル」は、本明細書で定義されるカルボニル基を介して親分子部分に結合した、本明細書で定義されるアリール基を意味する。
本明細書では、用語「アジド」は、−Ｎ＝Ｎ+＝Ｎ-（−Ｎ3）基を意味する。
本明細書では、用語「アジドアルキル（ａｚｉｄｅａｌｋｙｌ）」または「アジドアルキル（ａｚｉｄｏａｌｋｙｌ）」は、本明細書で定義されるアルキル基を介して親分子部分に結合した、本明細書で定義されるアジド基を意味する。アジドアルキルの代表的な例には、限定はされないが、アジドメチル及びアジドエチルが含まれる。
本明細書では、用語「生物発光」または「発光」は、酵素と、光を生成する基質との反応の結果として生成する光を意味し得る。そのような酵素（生物発光酵素）の例には、フォティナス・ピラリス（Ｐｈｏｔｉｎｕｓ ｐｙｒａｌｉｓ）またはフォティナス・ペンシルバニカ（Ｐｈｏｔｕｒｉｓ ｐｅｎｎｓｙｌｖａｎｉｃａ）などのホタルルシフェラーゼ、コメツキムシルシフェラーゼ、レニラ（Ｒｅｎｉｌｌａ）ルシフェラーゼ、ウミホタルルシフェラーゼ、オプロフォラス・グラシリロストリス（Ｏｐｌｏｐｈｏｒｏｕｓ ｇｒａｃｉｌｉｒｏｓｔｒｉｓ）などのオプロフォラス（Ｏｐｌｏｐｈｏｒｕｓ）ルシフェラーゼ、アエクオリン（Ａｅｑｕｏｒｉｎ）発光タンパク質、オベリン発光タンパク質、及び同様のものが含まれる。
本明細書では、用語「誘導体」は、いくつかの化学的または物理的プロセスによって類似の化合物から得られる化合物を意味し得る。誘導体は、類似の化学構造の化合物である。誘導体は、構造的なアナログであってよい。
本明細書では、用語「レポーター部分」は、適した条件下で検出可能なシグナルを直接的または間接的に生成する部分を意味し得る。例示のレポーター部分には、限定はされないが、蛍光団、発光分子、色素、放射性標識体、及びルシフェラーゼなどの酵素の基質が含まれる。いくつかの実施形態では、例えば、レポーター部分が酵素の基質であるとき、レポーター部分は、検出可能なシグナルを間接的に生成してもよい。基質と、酵素との反応が起き、そして、蛍光または発光などの検出可能なシグナルが生成する。本明細書では、用語「生物発光レポーター部分」は、ルシフェラーゼの基質である部分を意味し得る。例えば、生物発光レポーター部分は、ルシフェリン、ルシフェリン前駆体、アミノルシフェリン、キノリル−ルシフェリン、ナフチルルシフェリン、フルオロルシフェリン、クロロルシフェリンなどのルシフェリン誘導体、ルシフェリン誘導体の前駆体、セレンテラジン、またはセレンテラジン誘導体もしくはフリマジン（ｆｕｒｉｍａｚｉｎｅ）などのセレンテラジンアナログであってよい。生成した発光シグナルは、発光測定器を使用して検出してもよい。本明細書では、用語「蛍光レポーター部分」は、蛍光を発する部分を意味し得る。例えば、蛍光レポーター部分は、クマリン、Ｒ１１０、フルオロセイン（ｆｌｕｏｒｏｓｃｅｉｎ）、ＤＤＡＯ、レゾルフィン、クレシルバイオレット、シリルキサンテン、またはカルボピロニン（ｃａｒｂｏｐｙｒｏｎｉｎｅ） などの蛍光団であってよい。蛍光は、蛍光光度計を使用して検出してもよい。
本明細書では、（アルキルカルボニル、アルキル−（Ｃ＝Ｏ）−、またはアルコキシカルボニルなどの語句において使用される）用語「カルボニル」または「（Ｃ＝Ｏ）」は、アルキル基またはアミノ基（すなわち、アミド基）などの第二の部分への＞Ｃ＝Ｏ部分の結合を意味する。アルコキシカルボニルアミノ（すなわち、アルコキシ（Ｃ＝Ｏ）−ＮＨ−）は、アルキルカルバメート基を意味する。カルボニル基は、本明細書では、（Ｃ＝Ｏ）と等価に定義される。アルキルカルボニルアミノは、アセトアミドなどの基を意味する。
本明細書では、用語「カルボキシ」は、−Ｃ（Ｏ）−ＯＨ基を意味する。
本明細書では、用語「カルボキシアルコキシアルキル」は、−アルキル−Ｏ−アルキル−ＣＯ2Ｈを意味する。
本明細書では、用語「カルボキシアルキル」は、本明細書で定義されるアルキル基を介して親分子部分に結合した、本明細書で定義されるカルボキシ基を意味する。
本明細書では、用語「シクロアルキル」は、単環式、二環式、または三環式の炭素環式ラジカル（例えば、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロへキシル、シクロヘプチル、シクロオクチル、シクロノニル、シクロペンテニル、シクロヘキセニル、ビシクロ［２．２．１］ヘプタニル、ビシクロ［３．２．１］オクタニル及びビシクロ［５．２．０］ノナニルなど）を意味し、任意選択で１個または２個の二重結合を含む。本発明のシクロアルキル基は、非置換でもよく、または１個もしく複数の適した置換基で置換されていてもよく、好ましくは、１〜５個の適した上で定義した置換基で置換されていてもよい。
本明細書では、用語「ジ（アルキル）アミノ」は、本明細書で定義されるアミノ基を介して親分子部分に結合した、本明細書で定義されるアルキル基から独立に選択される２個のアルキル基を意味する。ジ（アルキル）アミノの代表的な例には、限定はされないが、Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノ、Ｎ−エチル−Ｎ−メチルアミノ、及びＮ−イソプロピル−Ｎ−メチルアミノが含まれる。
本明細書では、用語「ジ（アルキル）アミノアルキル」は、本明細書で定義されるアルキル基を介して親分子部分に結合した、本明細書で定義されるジ（アルキル）アミノ基を意味する。ジ（アルキル）アミノアルキルの代表的な例には、限定はされないが、Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノエチル及びＮ，Ｎ−メチル（２−プロピル）アミノエチルが含まれる。
本明細書では、用語「ハロゲン」または「ハロ」は、フルオロラジカル、クロロラジカル、ブロモラジカル、またはヨードラジカルを意味する。
本明細書では、用語「ハロアルコキシ」は、１、２、３、または４個のハロゲン原子によって置換されている、本明細書で定義されるアルコキシ基を意味する。ハロアルコキシの代表的な例には、限定はされないが、クロロメトキシ、２−フルオロエトキシ、トリフルオロメトキシ、及びペンタフルオロエトキシが含まれる。
本明細書では、用語「ハロアルキル」は、１、２、３、または４個のハロゲン原子によって置換されている、本明細書で定義されるアルキル基を意味する。ハロアルキルの代表的な例には、限定はされないが、クロロメチル、２−フルオロエチル、トリフルオロメチル、ペンタフルオロエチル、２−クロロ−３−フルオロペンチル、及び４，４，４−トリフルオロブチルが含まれる。
本明細書では、用語「ヘテロアリール」は、単環式ヘテロアリールまたは二環式ヘテロアリールを意味する。単環式ヘテロアリールは、５または６員環である。５員環は、２個の二重結合を含む。５員環は、ＯもしくはＳから選択される１個のヘテロ原子を含んでいてもよく、または１、２、３、もしくは４個の窒素原子及び任意選択で１個の酸素原子もしくは硫黄原子を含んでいてもよい。６員環は、３個の二重結合及び１、２、３、または４個の窒素原子を含む。単環式ヘテロアリールの代表的な例には、限定はされないが、フラニル、イミダゾリル、イソオキサゾリル、イソチアゾリル、オキサジアゾリル、１，３−オキサゾリル、ピリジニル、ピリダジニル、ピリミジニル、ピラジニル、ピラゾリル、ピロリル、テトラゾリル、チアジアゾリル、１，３−チアゾリル、チエニル、トリアゾリル、及びトリアジニルが含まれる。二環式ヘテロアリールには、フェニルに融合した単環式ヘテロアリール、または単環式シクロアルキルに融合した単環式ヘテロアリール、または単環式シクロアルケニルに融合した単環式ヘテロアリール、または単環式ヘテロアリールに融合した単環式ヘテロアリール、単環式ヘテロシクリルに融合した単環式ヘテロアリールが含まれる。二環式ヘテロアリール基の代表的な例には、限定はされないが、ベンゾフラニル、ベンゾチエニル、ベンゾオキサゾリル、ベンゾイミダゾリル、ベンゾオキサジアゾリル、６，７−ジヒドロ−１，３−ベンゾチアゾリル、イミダゾ［１，２−ａ］ピリジニル、インダゾリル、インドリル、イソインドリル、イソキノリニル、ナフチリジニル、ピリドイミダゾリル、キナゾリニル、キノリニル、チアゾロ［５，４−ｂ］ピリジン−２−イル、チアゾロ［５，４−ｄ］ピリミジン−２−イル、及び５，６，７，８−テトラヒドロキノリン−５−イルが含まれる。本発明のヘテロアリール基は、非置換でもよく、または１個もしくは複数の適した置換基で置換されていてもよく、好ましくは、１〜５個の適した上で定義した置換基で置換されていてもよい。
本明細書では、用語「ヘテロシクル（ｈｅｔｅｒｏｃｙｃｌｅ）」または「ヘテロシクリル（ｈｅｔｅｒｏｃｙｃｌｙｌ）」は、単環式ヘテロシクル、二環式ヘテロシクル、または三環式ヘテロシクルを意味する。単環式ヘテロシクルは、酸素、窒素、リン、及び硫黄からなる群から独立に選択される少なくとも１個のヘテロ原子を含む、３、４、５、６、７、または８員環である。３または４員環は、二重結合を含まないか、または１個の二重結合を含み、酸素、窒素、リン、及び硫黄からなる群から選択される１個のヘテロ原子を含む。５員環は、二重結合を含まないか、または１個の二重結合を含み、酸素、窒素、リン、及び硫黄からなる群から選択される１、２、または３個のヘテロ原子を含む。６員環は、二重結合を含まないか、または１もしくは２個の二重結合を含み、酸素、窒素、リン、及び硫黄からなる群から選択される１、２、または３個のヘテロ原子を含む。７及び８員環は、二重結合を含まないか、または１、２、もしくは３個の二重結合を含み、酸素、窒素、リン、及び硫黄からなる群から選択される１、２、または３個のヘテロ原子を含む。単環式ヘテロシクルの代表的な例には、限定はされないが、アゼチジニル、アゼパニル、アジリジニル、ジアゼパニル、１，３−ジオキサニル、１，３−ジオキソラニル、１，３−ジチオラニル、１，３−ジチアニル、イミダゾリニル、イミダゾリジニル、イソチアゾリニル、イソチアゾリジニル、イソオキサゾリニル、イソオキサゾリジニル、モルホリニル、オキサジアゾリニル、オキサジアゾリニジニル、オキサゾリニル、オキサゾリジニル、ホスフィナン（ｐｈｏｓｐｈｉｎａｎｅ）、ピペラジニル、ピペリジニル、ピラニル、ピラゾリニル、ピラゾリジニル、ピロリニル、ピロリジニル、テトラヒドロフラニル、テトラヒドロピラニル、テトラヒドロピリジニル、テトラヒドロピリミジニル、テトラヒドロチエニル、チアジアゾリニル、チアジアゾリジニル、チアゾリニル、チアゾリジニル、チオモルホリニル、１，１−ジオキシドチオモルホリニル（チオモルホリンスルホン）、チオピラニル、トリチアニル、及び２，５−ジオキソ−ピロリジニルが含まれる。二環式ヘテロシクルは、フェニル基に融合した単環式ヘテロシクル、あるいは単環式シクロアルキルに融合した単環式ヘテロシクル、あるいは単環式シクロアルケニルに融合した単環式ヘテロシクル、あるいは単環式ヘテロシクルに融合した単環式ヘテロシクル、あるいは環の２個の非隣接原子が１、２、３、もしくは４個の炭素原子のアルキレン架橋によって連結されているか、または２、３、もしくは４個の炭素原子のアルケニレン架橋によって連結されている架橋された単環式ヘテロシクル環系である。二環式ヘテロシクルの代表的な例には、限定はされないが、ベンゾピラニル、ベンゾチオピラニル、クロマニル、２，３−ジヒドロベンゾフラニル、２，３−ジヒドロベンゾチエニル、アザビシクロ［２．２．１］ヘプチル（２−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタ−２−イルを含む）、２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドリル、イソインドリニル、オクタヒドロシクロペンタ［ｃ］ピロリル、オクタヒドロピロロピリジニル、９−ホスファビシクロ［３．３．１］ノナン、８−ホスファビシクロ［３．２．１］オクタン、及びテトラヒドロイソキノリニルが含まれる。三環式ヘテロシクルは、フェニル基に融合した二環式ヘテロシクル、あるいは単環式シクロアルキルに融合した二環式ヘテロシクル、あるいは単環式シクロアルケニルに融合した二環式ヘテロシクル、あるいは単環式ヘテロシクルに融合した二環式ヘテロシクル、あるいは二環式の環の２個の非隣接原子が、１、２、３、もしくは４個の炭素原子のアルキレン架橋によって連結されているか、または２、３、もしくは４個の炭素原子のアルケニレン架橋によって連結されている二環式ヘテロシクルによって例示される。三環式ヘテロシクルの例には、限定はされないが、オクタヒドロ−２，５−エポキシペンタレン、ヘキサヒドロ−２Ｈ−２，５−メタノシクロペンタ［ｂ］フラン、ヘキサヒドロ−１Ｈ−１，４−メタノシクロペンタ［ｃ］フラン、アザ−アダマンタン（１−アザトリシクロ［３．３．１．１3,7］デカン）、オキサ−アダマンタン（２−オキサトリシクロ［３．３．１．１3,7］デカン）、及び２，４，６−トリオキサ−８−ホスファトリシクロ［３．３．１．１３，７］デカンが含まれる。本発明のヘテロ環式基は、非置換でもよく、または１個もしくは複数の適した置換基で置換されていてもよく、好ましくは、１〜３個の適した上で定義した置換基で置換されていてもよい。本発明のヘテロ環式基は、環に結合している１個もしくは複数のオキソ基（＝Ｏ）またはチオキソ（＝Ｓ）基を含んでいてもよい。
本明細書では、用語「ヒドロキシ」は、−ＯＨ基を意味する。
本明細書では、用語「ヒドロキシアルコキシ」は、少なくとも１個のヒドロキシ基によって置換されている、本明細書で定義されるアルコキシ基を意味する。ヒドロキシアルコキシの代表的な例には、限定はされないが、ヒドロキシエトキシ、及び２−ヒドロキシプロポキシが含まれる。
本明細書では、用語「ヒドロキシアルキル」は、少なくとも１個のヒドロキシ基によって置換されている、本明細書で定義されるアルキル基を意味する。ヒドロキシアルキルの代表的な例には、限定はされないが、ヒドロキシメチル、２−ヒドロキシエチル、３−ヒドロキシプロピル、２，３−ジヒドロキシプロピル、２，３−ジヒドロキシペンチル、４−ヒドロキシブチル、２−エチル−４−ヒドロキシヘプチル、３，４−ジヒドロキシブチル、及び５−ヒドロキシペンチルが含まれる。
本明細書では、用語「ヒドロキシカルボニル」は、本明細書で定義されるカルボニル基を介して親分子部分に結合した、本明細書で定義されるヒドロキシ基を意味する。
用語「リンカー」は、基質部分を親分子部分に連結する２〜５０個の原子の鎖を意味し得る。リンカーは、１個または複数のヘテロ原子を含んでいてもよい。リンカーは、オキソ基、アミノ基、アルキル基、ハロゲン、及びニトロ基で置換されていてもよい。リンカーは、アリール基を含んでいてもよい。リンカーは、「トレースレス（ｔｒａｃｅｌｅｓｓ」リンカー、または「自己崩壊性（ｓｅｌｆ−ｉｍｍｏｌａｔｉｖｅ）」リンカーであってよい。用語「トレースレスリンカー」または「自己崩壊性リンカー」は、基質部分が開裂してリンカーから脱離すると、リンカーが自発的に開裂して親分子部分からの脱離につながるリンカーを意味する。
用語「低級シクロアルキル（ｌｏｗｅｒ ｃｙｃｌｏａｌｋｙｌ）」は、３〜６個の炭素原子を有する炭化水素化合物から水素原子を除去して得られる一価の部分を意味する。飽和低級シクロアルキル基の例には、限定はされないが、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、及びシクロへキシルなどの基が含まれる。１個または複数の炭素−炭素二重結合を有する不飽和の低級シクロアルキル基の例には、限定はされないが、シクロプロペニル、シクロブテニル、シクロペンテニル、及びシクロヘキセニルなどの基が含まれる。
本明細書で互換的に使用される用語「発光酵素」、「生物発光酵素」、または「ルシフェラーゼ」は、生物発光において使用される酸化的酵素のクラスを意味し、基質が存在するとき、当該酵素は、光を生成及び放出する。ルシフェラーゼは、ルシフェラーゼの基質に作用する、天然に存在するルシフェラーゼ、組み換えのルシフェラーゼ、または変異体のルシフェラーゼであってよい。ルシフェラーゼの基質は、ルシフェリン、ルシフェリン誘導体もしくはルシフェリンアナログ、ルシフェリン前駆体の誘導体もしくはルシフェリン前駆体のアナログ、セレンテラジン、またはセレンテラジン誘導体もしくはセレンテラジンアナログであってよい。発光酵素が、天然に存在するものであれば、生物から当業者によって容易に得ることができる。発光酵素が、天然に存在するものであるか、または例えば、天然に存在する発光酵素のルシフェラーゼ−セレンテラジン反応もしくはセレンテラジン−ルシフェリン反応における活性を保持しているものといった、組み換え酵素もしくは変異体酵素であるのなら、発光酵素をコードする核酸を発現するように形質転換された細菌、酵母、哺乳細胞、昆虫細胞、植物細胞、または同様のものを培養して容易に得ることができる。さらに、組み換え酵素または変異体酵素は、ルシフェラーゼをコードする核酸を使用して、試験管内において、細胞が存在しない系から得ることができる。適した発光酵素には、Ｏｐｌｏｐｈｏｒｏｉｄｅａ（例えば、オプロフォラス由来のルシフェラーゼ）、甲虫ルシフェラーゼ（例えば、Ｐｈｏｔｉｎｕｓ ｐｙｒａｌｉｓ、Ｐｈｏｔｕｒｉｓ ｐｅｎｎｓｙｌｖａｎｉｃａなど）、刺胞動物（例えば、レニラルシフェラーゼ）、Ａｒｉｓｔｅｉｄａｅ、Ｓｏｌｅｎｏｃｅｒｉｄａｅ、Ｌｕｃｉｆｅｒｉｄａｅ、Ｓｅｒｇｅｓｔｉｄａｅ、Ｐａｓｉｐｈｅｉｄａｅ及びＴｈａｌａｓｓｏｃａｒｉｄｉｄａｅ十脚類ファミリーなどの海洋生物由来などの、生物発光十脚類由来のルシフェラーゼ、Ｇａｕｓｓｉａ ｐｒｉｎｃｅｐｓルシフェラーゼなどのＧａｕｓｓｉａルシフェラーゼ、Ｍｅｔｒｉｄｉａ ｌｏｎｇａルシフェラーゼ及びＭｅｔｒｉｄｉａ ｐａｃｉｆｉｃａルシフェラーゼなどのＭｅｔｒｉｄｉａルシフェラーゼ、Ｖａｒｇｕｌａ ｈｉｌｇｅｎｄｏｒｆｉｉルシフェラーゼなどのＶａｒｇｕｌａルシフェラーゼ、Ｐｌｅｕｒｏｍａｍｍａ ｘｉｐｈｉａｓルシフェラーゼなどの、カイアシ類のルシフェラーゼ、ならびにＡｅｑｕｏｒｉｎなどの発光タンパク質、ならびにそれらの変異型（ｖａｒｉａｎｔ）、組み換え体、及び変異体（ｍｕｔａｎｔ）が含まれる。
「発光反応混合物」は、発光酵素が、光シグナル、すなわち、発光を生成することを可能にする材料を含む。混合物は、ルシフェラーゼ酵素またはルシフェラーゼなどの酵素も含んでいてもよい。発光シグナルの生成に必要となる材料、ならびに特定濃度及び／または量は、使用するルシフェラーゼ酵素及び実施するアッセイの型によって異なるであろう。溶液に対して他の材料が添加されることもよくあるであろう。溶液に対して添加されることが多いであろうその他の材料には、反応を適したｐＨに保つための緩衝剤、酵素活性の維持に役立つＰＲＩＯＮＥＸまたはウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）、還元剤、界面活性剤などの添加剤が含まれる。
本明細書では、用語「メチレンジオキシ」は、メチレンジオキシの酸素原子が、２個の隣接する炭素原子を介して親分子部分に結合している−ＯＣＨ2Ｏ−基を意味する。
本明細書では、用語「天然アミノ酸」は、タンパク質においてみられる一般的な、天然に存在するＬ−アミノ酸のいずれか１個を意味し、グリシン（Ｇｌｙ）、アラニン（Ａｌａ）、バリン（Ｖａｌ）、ロイシン（Ｌｅｕ）、イソロイシン（Ｉｌｅ）、リジン（Ｌｙｓ）、アルギニン（Ａｒｇ）、ヒスチジン（Ｈｉｓ）、プロリン（Ｐｒｏ）、セリン（Ｓｅｒ）、スレオニン（Ｔｈｒ）、フェニルアラニン（Ｐｈｅ）、チロシン（Ｔｙｒ）、トリプトファン（Ｔｒｐ）、アスパラギン酸（Ａｓｐ）、グルタミン酸（Ｇｌｕ）、アスパラギン（Ａｓｎ）、グルタミン（Ｇｌｕ）、システイン（Ｃｙｓ）及びメチオニン（Ｍｅｔ）が含まれる。
本明細書では、用語「非天然アミノ酸」は、上で説明した天然アミノ酸ではないすべてのアミノ酸を意味する。そのようなアミノ酸は、上で説明した２０個の天然に存在するアミノ酸のいずれかのＤ異性体も含む。非天然アミノ酸には、ホモセリン、オルニチン、ノルロイシン、及びチロキシンも含まれる。さらなる非天然アミノ酸は、当業者であれば熟知している。非天然アミノ酸は、ＤまたはＬ異性体であってよい。非天然アミノ酸は、αアミノ酸またはβアミノ酸でもよい。非天然アミノ酸は、リン酸化セリン、リン酸化スレオニン、もしくはリン酸化チロシン、アシル化リジン、またはアルキル化リジンもしくはアルキル化アルギニンなどの翻訳後修飾されたアミノ酸でもよい。翻訳後修飾されたアミノ酸の型は、多く知られている。
本明細書では、用語「保護されたアミノ酸」は、保護された官能基をさらに含む、上で説明したアミノ酸側鎖を意味する。保護基は、当該技術分野でよく知られており、合成手順中にアミノ、ヒドロキシ、チオ、またはカルボキシなどの官能基を望ましくない反応から保護することを意図するものである。保護基は、合成後に化学反応によって除去してよい。保護されたアミノ酸側鎖の例には、セリンから得られるベンジルオキシメチル、チロシンから得られる（４−メトキシフェニル）メチル、及びグルタミン酸から得られるプロパン酸ｔｅｒｔ−ブチルが含まれる。
本明細書では、用語「アミノ酸側鎖」は、アミノ酸のα炭素に結合している基を意味する。アミノ酸側鎖は、アミノ酸を特徴づけている部分であり、対応するアミノ酸からＮＨ2ＣＨＣ（Ｏ）ＯＨ部分を排除することで得られる。例えば、アラニンのアミノ酸側鎖は、メチルであり、フェニルアラニンのアミノ酸側鎖は、フェニルメチルである。アミノ酸側鎖は、天然アミノ酸の側鎖または非天然アミノ酸の側鎖であってよい。いくつかの実施形態では、アミノ酸鎖は、保護されたアミノ酸側鎖であってよい。
本明細書では、用語「アミノ保護基（ａｍｉｎｏ ｐｒｏｔｅｃｔｉｎｇ ｇｒｏｕｐ）」は、保護基が結合している窒素原子に対して起きる化学反応を阻止する部分を意味する。アミノ保護基は、化学反応で除去もしなくてはならない。そのような基は、当該技術分野でよく知られており、Ｐｒｏｔｅｃｔｉｎｇ Ｇｒｏｕｐｓ ｉｎ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，Ｔ．Ｗ．Ｇｒｅｅｎｅ ａｎｄ Ｐ．Ｇ．Ｍ．Ｗｕｔｓ，３rd ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ，１９９９にて詳細に説明されているものを含み、参照によってその全体が本明細書に組み込まれる。適したアミノ保護基には、限定はされないが、カルボベンジルオキシ（−ＮＨＣＯ−ＯＣＨ2Ｃ6Ｈ5または−ＮＨ−Ｃｂｚ）、ｔ−ブチルオキシカルボニル（−ＮＨＣＯ−ＯＣ（ＣＨ3）3または−ＮＨ−Ｂｏｃ）、９−フルオレニルメチルオキシカルボニル（−ＮＨ−Ｆｍｏｃ）、２，２，２−トリクロロエチルオキシカルボニル（−ＮＨ−Ｔｒｏｃ）、及びアリルオキシカルボニル（−ＮＨ−Ａｌｌｏｃ）が含まれる。（上記のそれぞれの場合において、−ＮＨ−は、保護されているアミノ基由来の窒素を意味する）。
本明細書では、用語「アミノブロック基（ａｍｉｎｏ ｂｌｏｃｋｉｎｇ ｇｒｏｕｐ）」は、ブロック基が結合している窒素原子に対して起きる化学反応を阻止する部分を意味する。アミノ保護基とは対照的に、アミノブロック基は、化学反応により除去することを意図していない。そのような基には、例えば、アセチル（−ＮＨＣＯ−ＣＨ3）及びスクシニル（−ＮＨ−ＣＯ−ＣＨ2−ＣＨ2−ＣＯＯ-）などのアシル基が含まれる。（上記のそれぞれの場合において、−ＮＨ−は、ブロックされているアミノ基由来の窒素を意味する）。
本明細書では、用語「アミノルシフェリン」は、（４Ｓ）−２−（６−アミノ−１，３−ベンゾチアゾール−２−イル）−４，５−ジヒドロチアゾール−４−カルボン酸、またはこの分子の置換されているアナログを意味する。
本明細書では、用語「窒素保護基」は、合成手順中にアミノ基を望ましくない反応から保護することを意図する基を意味する。代表的な窒素保護基には、アセチル、ベンゾイル、ベンジル、ベンジルオキシカルボニル（Ｃｂｚ）、ホルミル、フェニルスルホニル、ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル（Ｂｏｃ）、ｔｅｒｔ−ブチルアセチル、トリフルオロアセチル、及びトリフェニルメチル（トリチル）が含まれる。
本明細書では、用語「オキソ」は、結合相手が炭素原子である、二重結合酸素（＝Ｏ）ラジカルを意味する。そのようなラジカルは、カルボニル基であるとも考えることができる。
用語「ペプチド」または「ポリペプチド」は、少なくとも２個のアミノ酸の配列を意味する。いくつかの実施形態では、ペプチドは、８０個以下のアミノ酸、または３５個以下のアミノ酸、または１０個以下のアミノ酸を含んでいてよい。
用語「糖類」は、糖または他の炭水化物を意味し、特に単純糖を意味する。糖類は、α−及びβ−アノマーの両方を含む。糖類は、Ｃ6−ポリヒドロキシ化合物であり得、典型的には、Ｃ6−ペンタヒドロキシであり、環式グリカールであることが多い。糖類は、既知の単純糖及びその誘導体、ならびに２個以上の単糖残基を有する多糖も含む。糖類は、ヒドロキシル基に付加している保護基も含み得る。糖類のヒドロキシル基は、１個または複数のアセトアミド、ハロ、またはアミノ基で置き換えることができる。さらに、１個または複数の炭素原子は、酸化される可能性があり、例えば、酸化されてケト基またはカルボニル基になり得る。適した糖類には、ガラクトース、グルコース、グルクロン酸、及びノイラミン酸が含まれる。
本明細書では、用語「スルホニル」は、＞Ｓ（Ｏ）2基を意味する。
多成分置換基に付加される接頭語は、続いて最初にくる成分に対してのみ適用される。例えば、用語「シクロアルキルアルキル」は、アルキル及びシクロアルキルという２個の成分を含む。したがって、Ｃ1−Ｃ6−シクロアルキルアルキルに付加するＣ1−Ｃ6−接頭語は、シクロアルキルアルキルのアルキル成分が１〜６個の炭素原子を含むことを意味し、Ｃ1−Ｃ6−接頭語は、シクロアルキル成分を説明しない。さらに、例えば、用語「ハロ−Ｃ1−Ｃ6−アルキル」は、ハロメチル、ハロエチル、ハロプロピル、ハロブチル、ハロペンチル、及びハロへキシルを意味する。さらに、例えば、ハロアルコキシアルキルに付加する接頭語「ハロ」は、アルコキシアルキル置換基のアルコキシ成分のみが、１個または複数のハロゲンラジカルで置換されていることを示す。ハロゲン置換がアルキル成分に対してのみ起き得るのであれば、置換基は、代わりに「アルコキシハロアルキル」として説明されることになる。
置換基が、少なくとも１個の、１個または複数の水素原子に結合した炭素原子または窒素原子を含む場合、「置換可能」である。したがって、例えば、水素、ハロゲン、及びシアノは、本定義には入らない。さらに、硫黄原子は、そのような原子を含むヘテロシクリルにおいて、１個または２個のオキソ置換基で置換可能である。
置換基が「置換されている」と説明される場合、置換基の炭素または窒素上の水素ラジカルが非水素ラジカルで置き換えられている。したがって、例えば、置換されているアルキル置換基は、アルキル置換基上の水素ラジカルが少なくとも１個の非水素ラジカルで置き換えられているアルキル置換基である。例えば、モノフルオロアルキルは、１個のフルオロラジカルで置換されているアルキルであり、ジフルオロアルキルは、２個のフルオロラジカルで置換されているアルキルである。置換基上に複数の置換基が存在する場合、非水素ラジカルは、（別段の記載がない限り）それぞれ同一でも、異なっていてもよいことを認識されるべきである。
置換基が、「非置換」として示されるか、または「置換されている」もしくは「任意選択で置換されている」として示されないとき、当該置換基は、全く置換基を有しないことを意味する。置換基が「任意選択で置換されている」と説明される場合、当該置換基は、（１）置換されてない、または（２）置換されているのいずれかであってよい。置換基が、最大で特定数の非水素ラジカルで、任意選択で置換されていると説明される場合、その置換基は、以下の（１）または（２）のいずれかであってよい。（１）置換されてない。（２）非水素ラジカルのその特定数を最大として置換されているか、または当該置換基上の置換可能位置の最大数を最大として置換されているかの、どちらか少ない方である。したがって、例えば、置換基が、最大３個の非水素ラジカルで、任意選択で置換されているヘテロアリールであると説明されるのであれば、３個未満の置換可能位置を有する何らかのヘテロアリールが、当該ヘテロアリールが有する置換可能位置と同一数を最大数とする数の非水素ラジカルによって任意選択で置換されていることになる。例えば、テトラゾリル（１個のみ置換可能位置を有する）であれば、最大で１個の非水素ラジカルで、任意選択で置換されていることになる。さらに、例えば、アミノ窒素が、最大で２個の非水素ラジカルで、任意選択で置換されていると説明されるのであれば、１級アミノ窒素は、最大で２個の非水素ラジカルで、任意選択で置換されていることになり、一方、２級アミノ窒素は、最大で１個のみの水素ラジカルで、任意選択で置換されていることになる。
置換基が、群から「独立に選択される」として説明される場合、置換基は、その他とは独立してそれぞれ選択される。したがって、置換基は、その他の置換基と同一でも、異なっていてもよい。
２． 標識用試薬
標識用試薬であり得る化合物が開示される。ある実施形態では、式（Ｉ）の化合物は、標識用試薬である。標識用試薬は、細胞による取り込み測定に使用できる。
標識用試薬である式（Ｉ）の化合物、またはその塩が開示され、
（Ｉ）、
式中、
Ａは、レポーター部分であり；
Ｒ14は、Ｈ、アルキル、ヒドロキシアルキル、アルコキシ、カルボキシアルキル、またはアミドアルキルであり；
Ｒ9及びＲ10は、アルキルから独立に選択され；
Ｒ11、Ｒ12、及びＲ13は、Ｈ、アルキル、アルコキシ、ブロモ、クロロ、もしくはアミノから独立に選択されるか、またはＲ11及びＲ12は、融合されたフェニル環を形成でき；
Ｘは、Ｏであり；
Ｌは、−（ＣＨ2）mＣ（Ｒ17）2（ＣＨ2）n−Ｙ−Ｃ（Ｏ）−であり；
Ｒ17は、独立にＨ、アルキルであるか、または両Ｒ17は、一緒になって３〜７個の炭素を有するアルキル環を形成でき；
ｍは、０〜２の整数であり；
ｎは、０〜２の整数であり；
Ｙは、ＯまたはＮＲ15であり；
Ｒ15は、Ｈ、アルキル、ヒドロキシアルキル、アジドアルキル、シアノアルキル、ハロアルキル、アルケニル、アルキニル、−アルキル−Ｎ（Ｒ23）Ｃ（Ｏ）Ｒ24、−アルキル−ＳＯ3Ｒ25、−アルキル−ＳＯ2Ｎ（Ｒ26）（Ｒ27）、−アルキル−ＣＯＲ28、−アルキル−ＣＯ2Ｒ29、−アルキル−ＯＣ（Ｏ）Ｒ29、−アルキル−ＯＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ30）（Ｒ31）、−アルキル−ＣＯＮ（Ｒ30）（Ｒ31）、またはポリアルコキシアルキルであり、ここで、当該ポリアルコキシアルキルは、非置換であるか、または１個もしくは複数の適した置換基で置換されており；ならびに
Ｒ23、Ｒ24、Ｒ25、Ｒ26、Ｒ27、Ｒ28、Ｒ29、Ｒ30、及びＲ31は、水素、アルキル、アリール、ヘテロアリール、ヘテロシクリル、及びシクロアルキルからそれぞれ独立に選択される。
ある実施形態では、Ｒ14は、Ｈ、Ｃ1−Ｃ30−アルキル、ヒドロキシ−Ｃ1−Ｃ30−アルキル、Ｃ1−Ｃ30−アルコキシ、カルボキシ−Ｃ1−Ｃ30−アルキル、またはアミド−Ｃ1−Ｃ30−アルキルであり；Ｒ9及びＲ10は、Ｃ1−Ｃ4−アルキルから独立に選択され；Ｒ11、Ｒ12、及びＲ13は、Ｈ、Ｃ1−Ｃ4−アルキル、Ｃ1−Ｃ4−アルコキシ、ブロモ、クロロ、またはアミノから独立に選択されるか、またはＲ11及びＲ12は、融合されたフェニル環を形成でき；ＸはＯであり；Ｌは、−（ＣＨ2）mＣ（Ｒ17）2（ＣＨ2）n−Ｙ−Ｃ（Ｏ）−であり；Ｒ17は、独立にＨ、Ｃ1−Ｃ4−アルキルであるか、または両Ｒ17は、一緒になって３〜７個の炭素を有するアルキル環を形成でき；ｍは、０〜２の整数であり；ｎは、０〜２の整数であり；Ｙは、ＯまたはＮＲ15であり；Ｒ15はＨ、Ｃ1−Ｃ30−アルキル、ヒドロキシ−Ｃ1−Ｃ30−アルキル、アジド−Ｃ1−Ｃ30−アルキル、シアノ−Ｃ1−Ｃ30−アルキル、ハロ−Ｃ1−Ｃ30−アルキル、Ｃ2−Ｃ30−アルケニル、Ｃ2−Ｃ30−アルキニル、−Ｃ1−Ｃ30−アルキル−Ｎ（Ｒ23）Ｃ（Ｏ）Ｒ24、−Ｃ1−Ｃ30−アルキル−ＳＯ3Ｒ25、−Ｃ1−Ｃ30−アルキル−ＳＯ2Ｎ（Ｒ26）（Ｒ27）、−Ｃ1−Ｃ30−アルキル−ＣＯＲ28、−Ｃ1−Ｃ30−アルキル−ＣＯ2Ｒ29、−Ｃ1−Ｃ30−アルキル−ＯＣ（Ｏ）Ｒ29、−Ｃ1−Ｃ30−アルキル−ＯＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ30）（Ｒ31）、−Ｃ1−Ｃ30−アルキル−ＣＯＮ（Ｒ30）（Ｒ31）、またはポリアルコキシアルキルであり、ここで、当該ポリアルコキシアルキルは、非置換または１個もしくは複数の適した置換基で置換されており；ならびにＲ23、Ｒ24、Ｒ25、Ｒ26、Ｒ27、Ｒ28、Ｒ29、Ｒ30、及びＲ31は、水素、Ｃ1−Ｃ4−アルキル、アリール、ヘテロアリール、ヘテロシクリル、及びシクロアルキルからそれぞれ独立に選択される。
ある実施形態では、Ｒ14は、Ｈ、Ｃ1−Ｃ6−アルキル、ヒドロキシ−Ｃ1−Ｃ6−アルキル、Ｃ1−Ｃ6−アルコキシ、−Ｃ1−Ｃ6−アルキル−ＣＯ2Ｈ、または−Ｃ1−Ｃ6−アルキル−アミドである。
ある実施形態では、Ｒ14は、メチルである。
ある実施形態では、Ｒ14は、カルボキシアルキルである。ある実施形態では、Ｒ14は、−Ｃ2−Ｃ30−アルキル−ＣＯ2Ｈである。ある実施形態では、Ｒ14は、−ＣＨ2ＣＯ2Ｈ、−（ＣＨ2）2ＣＯ2Ｈ、−（ＣＨ2）3ＣＯ2Ｈ、−（ＣＨ2）4ＣＯ2Ｈ、−（ＣＨ2）5ＣＯ2Ｈ、−（ＣＨ2）6ＣＯ2Ｈ、−（ＣＨ2）7ＣＯ2Ｈ、−（ＣＨ2）8ＣＯ2Ｈ、−（ＣＨ2）9ＣＯ2Ｈ、−（ＣＨ2）10ＣＯ2Ｈ、−（ＣＨ2）11ＣＯ2Ｈ、−（ＣＨ2）12ＣＯ2Ｈ、−（ＣＨ2）13ＣＯ2Ｈ、−（ＣＨ2）14ＣＯ2Ｈ、−（ＣＨ2）15ＣＯ2Ｈ、−（ＣＨ2）16ＣＯ2Ｈ、−（ＣＨ2）17ＣＯ2Ｈ、−（ＣＨ2）18ＣＯ2Ｈ、−（ＣＨ2）19ＣＯ2Ｈ、−（ＣＨ2）20ＣＯ2Ｈ、−（ＣＨ2）21ＣＯ2Ｈ、−（ＣＨ2）22ＣＯ2Ｈ、−（ＣＨ2）23ＣＯ2Ｈ、−（ＣＨ2）24ＣＯ2Ｈ、−（ＣＨ2）25ＣＯ2Ｈ、−（ＣＨ2）26ＣＯ2Ｈ、−（ＣＨ2）27ＣＯ2Ｈ、−（ＣＨ2）28ＣＯ2Ｈ、−（ＣＨ2）29ＣＯ2Ｈ、または−（ＣＨ2）30ＣＯ2Ｈである。ある実施形態では、Ｒ14は、−（ＣＨ2）15ＣＯ2Ｈである。
いくつかの実施形態では、Ｒ9、Ｒ10、Ｒ11、Ｒ12、Ｒ13、及びＲ14はそれぞれメチルである。
ある実施形態では、可変性のＬにおいて、ｍは１であり、Ｒ17はそれぞれ水素であり、及びｎは０である。ある実施形態では、可変性のＬにおいて、ｍは１であり、Ｒ17はそれぞれ水素であり、ｎは０であり、及びＹはＮＲ15である。ある実施形態では、Ｌは、−ＣＨ2ＣＨ2−ＮＲ15−Ｃ（Ｏ）−である。
ある実施形態では、Ａは、生物発光レポーター部分である。ある実施形態では、Ａは、ルシフェリン、ルシフェリン誘導体もしくはルシフェリンアナログ、ルシフェリン前駆体もしくはルシフェリン前駆体のアナログ、セレンテラジン、またはセレンテラジン誘導体またはセレンテラジンアナログである。いくつかの実施形態では、Ａは、ルシフェリン、プロルシフェリン（ｐｒｏ−ｌｕｃｉｆｅｒｉｎ）、アミノルシフェリン、キノリル−ルシフェリン、ナフチルルシフェリン、クロロルシフェリン、セレンテラジン、フリマジン、セレンテラジン−ｎ、セレンテラジン−ｆ、セレンテラジン−ｈ、セレンテラジン−ｈｃｐ、セレンテラジン−ｃｐ、セレンテラジン−ｃ、セレンテラジン−ｅ、セレンテラジン−ｆｃｐ、ビス−デオキシセレンテラジン（「セレンテラジン−ｈｈ」）、セレンテラジン−ｉ、セレンテラジン−ｉｃｐ、セレンテラジン−ｖ、及び２−メチルセレンテラジンであり、さらには、ＷＯ２００３／０４０１００、米国特許出願公開番号２００８０２４８５１１、及び米国特許出願公開番号ＵＳ２０１２０１１７６６７にて開示されているものであり、それらの開示は、参照によって本明細書に組み込まれる。
ある実施形態では、Ａは、蛍光レポーター部分である。ある実施形態では、Ａは、クマリン、Ｒ１１０、フルオロセイン、ＤＤＡＯ、レゾルフィン、クレシルバイオレット、シリルキサンテン、またはカルボピロニンである。いくつかの実施形態では、Ａは、ローダミン１２３、ローダミンＸ、Ａｌｅｘａ色素（例えば、Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ−３５０、−４３０、−４８８、及び６６０）、ＤｙＬｉｇｈｔ５９４、、スルホローダミンＢ、スルホローダミン１０１、スルホローダミン１０１の塩化スルホニル誘導体（Ｔｅｘａｓ Ｒｅｄ）、フルオレセイン（ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｉｎ）、６−カルボキシフルオレセイン（６−ＦＡＭ）、５−カルボキシフルオレセイン（５−Ｆａｍ）、５−もしくは６−カルボキシ−４，７，２’，７’−テトラクロロフルオレセイン（ＴＥＴ）、５−もしくは６−カルボキシ−４’５’２’４’５’７’ヘキサクロロフルオレセイン（ＨＥＸ）、５’もしくは６’−カルボキシ−４’，５’−ジクロロ−２，’７’−ジメトキシフルオレセイン（ＪＯＥ）、６−ＪＯＥ、５−カルボキシ−２’，４’，５’，７’−テトラクロロフルオレセイン（ＺＯＥ）ロドール、フルオレセインイソチオシアネート、クマリン、７−アミノ−４−メチルクマリン、アミノクマリン、ヒドロキシクマリン、、シリルキサンテン、またはカルボピロニンである。ある実施形態では、Ａは、二環式アリールまたは二環式ヘテロアリールであり、それらは、それぞれ独立に非置換であるか、または１個もしくは複数の適した置換基で独立に置換されている。ある実施形態では、Ａは、二環式アリールまたは二環式ヘテロアリールであり、それらは、それぞれ独立に非置換であるか、またはアルキル、ハロアルキル、ヒドロキシアルキル、アルコキシアルキル、ハロアルコキシアルキル、アミノアルキル、アルキルアミノアルキル、ジ（アルキル）アミノアルキル、シアノアルキル、アルコキシ、ハロアルキル、シアノ、ヒドロキシ、アミノ、アルキルアミノ、ジ（アルキル）アミノ、アリール、ヘテロアリール、ヘテロシクリル、シクロアルキル、アリールアルキル、ヘテロアリールアルキル、ヘテロシクリルアルキル、及びシクロアルキルアルキルからなる群から独立に選択される、１、２、３、４、もしくは５個の置換基で独立に置換されており、ここで、当該アリール、ヘテロアリール、ヘテロシクリル、シクロアルキル、アリールアルキルのアリール、ヘテロアリールアルキルのヘテロアリール、ヘテロシクリルアルキルのヘテロシクリル、及びシクロアルキルアルキルのシクロアルキルは、それぞれ独立に非置換であるか、またはアルキル、ハロアルキル、ヒドロキシアルキル、アルコキシアルキル、ハロアルコキシアルキル、アミノアルキル、アルキルアミノアルキル、ジ（アルキル）アミノアルキル、シアノアルキル、アルコキシ、ハロアルコキシ、シアノ、ヒドロキシ、アミノ、アルキルアミノ、及びジ（アルキル）アミノから独立に選択される１、２、もしくは３個の置換基で独立に置換されている。
ある実施形態では、Ａは、ルシフェリン、ルシフェリン誘導体もしくはルシフェリンアナログ（例えば、ルシフェリンエステル）、ルシフェリン前駆体、ルシフェリン前駆体の誘導体もしくはルシフェリン前駆体のアナログ、シアノベンゾチアゾール、セレンテラジン、セレンテラジン誘導体（例えば、フリマジン）もしくはセレンテラジンアナログ、または蛍光団である。
ある実施形態では、Ａは、
からなる群から選択され；
式中、Ｒ1は、Ｈ、Ｃ1−Ｃ4−アルキル、ヒドロキシ−Ｃ1−Ｃ4−アルキル、Ｃ3−Ｃ7−シクロアルキル、アリール、ベンジルもしくは置換されているベンジル、ヘテロシクリル、ヘテロアリール、または−（ＣＨ2）q−Ｐ（Ｐｈ）3であり、ここで、ｑは、１、２、３、４、５、及び６から選択される整数であり；Ｒ2は、−ＣＨ2−アリール、または−ＣＨ2−ヘテロアリールであり；Ｒ4は、水素、ハロゲン、メチル、またはトリフルオロメチルであり；Ｒ5は、水素、ハロゲン、メチル、またはトリフルオロメチルであり；Ｒ7は、アリール（例えば、フェニル）、置換されているアリール（例えば、４−ヒドロキシフェニル）、−ＣＨ2−アリール、または−ＣＨ2−ヘテロアリールであり；ならびにＲ8は、−ＣＨ2−アリールまたは−ＣＨ2−ヘテロアリールである。ある実施形態では、−ＣＨ2−アリールは、ベンジルである。ある実施形態では、−ＣＨ2−ヘテロアリールは、フリルメチルである。
ある実施形態では、Ａは、
からなる群から選択され；
式中、Ｒ1は、Ｃ1−Ｃ4−アルキル、ヒドロキシ−Ｃ1−Ｃ4−アルキル、Ｃ3−Ｃ7−シクロアルキル、アリール、ベンジルもしくは置換されているベンジル、ヘテロシクリル、ヘテロアリール、または−（ＣＨ2）q−Ｐ（Ｐｈ）3であり、ここで、ｑは、１、２、３、４、５、及び６から選択される整数である。
ある実施形態では、Ｒ15は、Ｈ、Ｃ1−Ｃ6−アルキル、ヒドロキシ−Ｃ1−Ｃ6−アルキル、Ｃ1−Ｃ6−アルコキシ、カルボキシ−Ｃ1−Ｃ6−アルキル、アミド−Ｃ1−Ｃ6−アルキル、またはポリアルコキシアルキルであり、ここで、当該ポリアルコキシアルキルは、非置換であるか、または１個もしくは複数の適した置換基で置換されている。
ある実施形態では、Ｒ15は、１、２、３、４、５、または６個の繰り返しアルコキシ単位を有するポリアルコキシアルキルである。
ある実施形態では、Ｒ15は、ポリアルコキシアルキルであり、ここで、当該ポリアルコキシアルキルは、−（Ｃ2−Ｃ6−アルコキシ）x−Ｃ1−Ｃ6−アルキル、−（Ｃ2−Ｃ6−アルコキシ）x−Ｃ2−Ｃ6−ハロアルキル、−（Ｃ2−Ｃ6−アルコキシ）x−ヒドロキシ−Ｃ2−Ｃ6−アルキル、−（Ｃ2−Ｃ6−アルコキシ）x−アミノ−Ｃ2−Ｃ6−アルキル、−（Ｃ2−Ｃ6−アルコキシ）x−Ｃ2−Ｃ6−アルキルアミノ−Ｃ2−Ｃ6−アルキル、−（Ｃ2−Ｃ6−アルコキシ）xジ（Ｃ1−Ｃ6−アルキル）アミノ−Ｃ2−Ｃ6−アルキル、−（Ｃ2−Ｃ6−アルコキシ）x−アジド−Ｃ2−Ｃ6−アルキル、−（Ｃ2−Ｃ6−アルコキシ）x−シアノ−Ｃ1−Ｃ6−アルキル、−（Ｃ2−Ｃ6−アルコキシ）x−Ｃ2−Ｃ6−アルケニル、−（Ｃ2−Ｃ6−アルコキシ）x−Ｃ2−Ｃ4−アルキニル、−（Ｃ2−Ｃ6−アルコキシ）x−Ｎ（Ｒ23）Ｃ（Ｏ）Ｒ24、−（Ｃ2−Ｃ6−アルコキシ）x−ＳＯ3Ｒ25、−（Ｃ2−Ｃ6−アルコキシ）x−Ｃ2−Ｃ6−アルキル−ＳＯ2Ｎ（Ｒ26）（Ｒ27）、−（Ｃ2−Ｃ6−アルコキシ）x−Ｃ2−Ｃ6−アルキル−ＣＯＲ28、−（Ｃ2−Ｃ6−アルコキシ）x−Ｃ2−Ｃ6−アルキル−ＯＣ（Ｏ）Ｒ29、−（Ｃ2−Ｃ6−アルコキシ）x−Ｃ2−Ｃ6−アルキル−ＯＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ30）Ｒ31、−（Ｃ2−Ｃ6−アルコキシ）x−Ｃ2−Ｃ6−アルキル−ＣＯ2Ｒ29、または−（Ｃ2−Ｃ6−アルコキシ）x−Ｃ2−Ｃ6−アルキル−ＣＯＮ（Ｒ30）（Ｒ31）であり、ここで、Ｒ23、Ｒ24、Ｒ25、Ｒ26、Ｒ27、Ｒ28、Ｒ29、Ｒ30、及びＲ31は、水素、Ｃ1−Ｃ4−アルキル、アリール、ヘテロアリール、ヘテロシクリル、及びシクロアルキルからそれぞれ独立に選択され；ならびにｘは、１〜２０から選択される整数である。
ある実施形態では、Ｒ15は、ポリアルコキシアルキルであり、ここで、当該ポリアルコキシアルキルは、非置換であるか、またはＣ1−Ｃ6−アルキル、Ｃ1−Ｃ6−アルコキシ−Ｃ1−Ｃ6−アルキル、ハロ−Ｃ1−Ｃ6−アルキル、ハロ−Ｃ1−Ｃ6−アルコキシ−Ｃ1−Ｃ6−アルキル、ヒドロキシ−Ｃ1−Ｃ6−アルキル、アミノ−Ｃ1−Ｃ6−アルキル、Ｃ1−Ｃ6−アルキルアミノ−Ｃ1−Ｃ6−アルキル、ジ（Ｃ1−Ｃ6−アルキル）アミノ−Ｃ1−Ｃ6−アルキル、アジド−Ｃ1−Ｃ6−アルキル、シアノ−Ｃ1−Ｃ6−アルキル、Ｃ1−Ｃ6−アルコキシ、ハロ−Ｃ1−Ｃ6−アルコキシ、Ｃ1−Ｃ6−アルコキシ−Ｃ1−Ｃ6−アルコキシ、Ｃ2−Ｃ6−アルケニル、Ｃ2−Ｃ6−アルキニル、−Ｎ（Ｒ23）Ｃ（Ｏ）Ｒ24、−ＳＯ3Ｒ25、−ＳＯ2Ｎ（Ｒ26）（Ｒ27）、−ＣＯＲ28、−ＣＯ2Ｒ29、及び−ＣＯＮ（Ｒ30）（Ｒ31）からなる群から独立に選択される１〜３個の置換基で置換されており、ここで、Ｒ23、Ｒ24、Ｒ25、Ｒ26、Ｒ27、Ｒ28、Ｒ29、Ｒ30、及びＲ31は、水素、Ｃ1−Ｃ4−アルキル、アリール、ヘテロアリール、ヘテロシクリル、及びシクロアルキルからそれぞれ独立に選択される。
ある実施形態では、Ｒ15は、式
を有する置換されているポリアルコキシアルキルであり、
式中、
Ｒ40は、水素、Ｃ1−Ｃ4−アルキル、Ｃ2−Ｃ4−アルケニル、Ｃ2−Ｃ4−アルキニル、アリール、ヘテロアリール、ヘテロシクリル、及びシクロアルキルからなる群から選択され、ここで、当該アリール、ヘテロアリール、ヘテロシクリル、及びシクロアルキルは、それぞれ独立に非置換であるか、または１個もしくは複数の適した置換基で独立に置換されており；ならびに
ｘは、１〜２０から選択される整数である。
ある実施形態では、Ｒ40は、水素である。
ある実施形態では、Ｒ40は、Ｎ、Ｏ、及びＳからなる群から独立に選択される１、２、または３個のヘテロ原子を有する、５または６員ヘテロシクリルであり、ここで、当該ヘテロシクリルは、非置換であるか、またはアルキル、ハロアルキル、ヒドロキシアルキル、アルコキシアルキル、ハロアルコキシアルキル、アミノアルキル、アルキルアミノアルキル、ジ（アルキル）アミノアルキル、シアノアルキル、アルコキシ、ハロアルコキシ、シアノ、ヒドロキシ、アミノ、アルキルアミノ、ジ（アルキル）アミノから独立に選択される１、２、もしくは３個の置換基で置換されている。ある実施形態では、Ｒ40は、
である。
ある実施形態では、−ＯＲ40は、脱離基として定義される。
ある実施形態では、ｘは、２、３、または４である。
ある実施形態では、Ｒ15は、−ＣＨ2ＣＯ2Ｈ、−（ＣＨ2）2ＣＯ2Ｈ、−（ＣＨ2）3ＣＯ2Ｈ、−（ＣＨ2）4ＣＯ2Ｈ、−（ＣＨ2）5ＣＯ2Ｈ、−（ＣＨ2）6ＣＯ2Ｈ、−（ＣＨ2）7ＣＯ2Ｈ、−（ＣＨ2）8ＣＯ2Ｈ、−（ＣＨ2）9ＣＯ2Ｈ、−（ＣＨ2）10ＣＯ2Ｈ、−（ＣＨ2）11ＣＯ2Ｈ、−（ＣＨ2）12ＣＯ2Ｈ、−（ＣＨ2）13ＣＯ2Ｈ、−（ＣＨ2）14ＣＯ2Ｈ、−（ＣＨ2）15ＣＯ2Ｈ、−（ＣＨ2）16ＣＯ2Ｈ、−（ＣＨ2）17ＣＯ2Ｈ、−（ＣＨ2）18ＣＯ2Ｈ、−（ＣＨ2）19ＣＯ2Ｈ、−（ＣＨ2）20ＣＯ2Ｈ、−（ＣＨ2）21ＣＯ2Ｈ、−（ＣＨ2）22ＣＯ2Ｈ、−（ＣＨ2）23ＣＯ2Ｈ、−（ＣＨ2）24ＣＯ2Ｈ、−（ＣＨ2）25ＣＯ2Ｈ、−（ＣＨ2）26ＣＯ2Ｈ、−（ＣＨ2）27ＣＯ2Ｈ、−（ＣＨ2）28ＣＯ2Ｈ、−（ＣＨ2）29ＣＯ2Ｈ、及び−（ＣＨ2）30ＣＯ2Ｈからなる群から選択されるカルボキシアルキルである。ある実施形態では、Ｒ15は、−（ＣＨ2）16ＣＯ2Ｈである。
ある実施形態では、Ｒ15は、
であり；及び
ｘはそれぞれ独立に０〜２０である。ある実施形態では、ｘは、それぞれ独立に０、１、２、３、または４である。
ある実施形態では、式（Ｉ）の化合物は、式（Ｉ−ｉ）を有するか、またはその塩であり、
（Ｉ−ｉ）、
式中、Ｒ9、Ｒ10、Ｒ11、Ｒ12、Ｒ13、Ｒ14、Ｒ15、Ｒ17、ｍ、ｎ、及びＡは、上で定義したとおりである。ある実施形態では、Ａは、
からなる群から選択され、
式中、Ｒ200は、フェニル、４−ヒドロキシフェニル、またはフリルであり；及びＲ215は、水素またはヒドロキシである。
ある実施形態では、式（Ｉ）の化合物は、式（Ｉ−ｉｉ）を有するか、またはその塩であり、
（Ｉ−ｉｉ）、
式中、Ｒ200は、フェニル、４−ヒドロキシフェニル、またはフリルであり；Ｒ215は、水素またはヒドロキシであり；ならびにＲ9、Ｒ10、Ｒ11、Ｒ12、Ｒ13、Ｒ14、及びＲ15は、上で定義したとおりである。
ある実施形態は、式（Ｉ）の化合物は、式（Ｉ−ｉｖ）を有するか、またはその塩であり、
（Ｉ−ｉｖ）、
式中、Ｒ200は、フェニル、４−ヒドロキシフェニル、またはフリルであり；Ｒ215は、水素またはヒドロキシであり；ならびにＲ9、Ｒ10、Ｒ11、Ｒ12、Ｒ13、Ｒ14、Ｒ40、及びｘは、上で定義したとおりである。
ある実施形態では、式（Ｉ）の化合物は、式（Ｉ−ｉｉｉ）を有するか、またはその塩であり、
（Ｉ−ｉｉｉ）、
式中、Ｒ9、Ｒ10、Ｒ11、Ｒ12、Ｒ13、Ｒ14、及びＲ15は、上で定義したとおりである。
ある実施形態では、本発明の化合物は、式（Ｉ−ｖ）を有するか、またはその塩であり、
（Ｉ−ｖ）、
式中、Ｒ9、Ｒ10、Ｒ11、Ｒ12、Ｒ13、Ｒ14、Ｒ40、及びｘは、上で定義したとおりである。
ある実施形態においては、式（Ｉ）の化合物は、式（Ｉ−ｖｉ）を有するか、またはその塩であり、
（Ｉ−ｖｉ）、
式中、Ｒ9、Ｒ10、Ｒ11、Ｒ12、Ｒ13、Ｒ14、Ｒ40、ｘ、及びＡは、上で定義したとおりである。ある実施形態では、Ａは、

からなる群から選択され、
式中、Ｒ200は、フェニル、４−ヒドロキシフェニル、またはフリルであり；及びＲ215は、水素またはヒドロキシである。
ある実施形態では、式（Ｉ）の化合物は、式（Ｉ−ｖｉｉ）を有するか、またはその塩であり、
（Ｉ−ｖｉｉ）、
式中、ｚは１〜３０から選択される整数であり；ならびにＲ9、Ｒ10、Ｒ11、Ｒ12、Ｒ13、Ｒ14、及びＡは、上で定義したとおりである。特定実施形態では、ｚは、１６である。
ある実施形態では、式（Ｉ）の化合物は、式（Ｉ−ｖｉｉｉ）を有するか、またはその塩であり、
（Ｉ−ｖｉｉｉ）、
式中、ｙ及びｚは、１〜３０からそれぞれ独立に選択される整数であり；ならびにＲ9、Ｒ10、Ｒ11、Ｒ12、Ｒ13、及びＡは、上で定義したとおりである。ある実施形態では、ｙは、１５であり、ｚは１６である。
ある実施形態では、式（Ｉ）の化合物は、
５４６３：１６−（（（８−ベンジル−２−（フラン−２−イルメチル）−６−フェニルイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−３−イル）オキシ）カルボニル）−１９，２２−ジメチル−２０−オキソ−２２−（２，４，５−トリメチル−３，６−ジオキソシクロヘキサ−１，４−ジエン−１−イル）−４，７，１０，１３−テトラオキサ−１６，１９−ジアザトリコサン−１−酸；
５４７０：１３−（（（２，８−ジベンジル−６−フェニルイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−３−イル）オキシ）カルボニル）−１６，１９−ジメチル−１７−オキソ−１９−（２，４，５−トリメチル−３，６−ジオキソシクロヘキサ−１，４−ジエン−１−イル）−４，７，１０−トリオキサ−１３，１６−ジアザイコサン−１−酸；
５４７１：１０−（（（２，８−ジベンジル−６−フェニルイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−３−イル）オキシ）カルボニル）−１３，１６−ジメチル−１４−オキソ−１６−（２，４，５−トリメチル−３，６−ジオキソシクロヘキサ−１，４−ジエン−１−イル）−４，７−ジオキサ−１０，１３−ジアザヘプタデカン−１−酸；
５５０８：２，５−ジオキソピロリジン−１−イル １０−（（（２−シアノベンゾ［ｄ］チアゾール−６−イル）オキシ）カルボニル）−１３，１６−ジメチル−１４−オキソ−１６−（２，４，５−トリメチル−３，６−ジオキソシクロヘキサ−１，４−ジエン−１−イル）−４，７−ジオキサ−１０，１３−ジアザヘプタデカン−１−オエート；
（Ｓ）−２−（６−（（（２−（Ｎ，３−ジメチル−３−（２，４，５−トリメチル−３，６−ジオキソシクロヘキサ−１，４−ジエン−１−イル）ブタンアミド）エチル）（２−（２−（３−（（２，５−ジオキソピロリジン−１−イル）オキシ）−３−オキソプロポキシ）エトキシ）エチル）カルバモイル）オキシ）ベンゾ［ｄ］チアゾール−２−イル）−４，５−ジヒドロチアゾール−４−カルボン酸；
１７−（（（（２−シアノベンゾ［ｄ］チアゾール−６−イル）オキシ）カルボニル）（２−（Ｎ，３−ジメチル−３−（２，４，５−トリメチル−３，６−ジオキソシクロヘキサ−１，４−ジエン−１−イル）ブタンアミド）エチル）アミノ）ヘプタデカン酸；
５９１５：２−シアノベンゾ［ｄ］チアゾール−６−イル （２−（Ｎ，３−ジメチル−３−（２，４，５−トリメチル−３，６−ジオキソシクロヘキサ−１，４−ジエン−１−イル）ブタンアミド）エチル）（２−（２−（３−（（２−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）エチル）アミノ）−３−オキソプロポキシ）エトキシ）エチル）カルバメート；
５９１６：２−シアノベンゾ［ｄ］チアゾール−６−イル （２−（Ｎ，３−ジメチル−３−（２，４，５−トリメチル−３，６−ジオキソシクロヘキサ−１，４−ジエン−１−イル）ブタンアミド）エチル）（１５−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−１２−オキソ−３，６，９−トリオキサ−１３−アザペンタデシル）カルバメート；
５９１７：２−シアノベンゾ［ｄ］チアゾール−６−イル （２−（Ｎ，３−ジメチル−３−（２，４，５−トリメチル−３，６−ジオキソシクロヘキサ−１，４−ジエン−１−イル）ブタンアミド）エチル）（４−（（２−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）エチル）アミノ）−４−オキソブチル）カルバメート；及び
５９１８：２−シアノベンゾ［ｄ］チアゾール−６−イル （２−（Ｎ，３−ジメチル−３−（２，４，５−トリメチル−３，６−ジオキソシクロヘキサ−１，４−ジエン−１−イル）ブタンアミド）エチル）（６−（（２−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）エチル）アミノ）−６−オキソへキシル）カルバメート；またはそれらの塩からなる群から選択される。
３． 物質(agent)
開示の化合物は、細胞、組織、または臓器によって取り込まれた物質の検出を可能にする標識として使用してもよい。物質は、さまざまなものの組成物を含んでいてもよい。開示の化合物は、限定はされないが、ポリペプチドなどの生体物質または生体分子、ポリペプチドを基礎とする(polypeptide-based)毒物、アミノ酸、ヌクレオチド、ＤＮＡ及びＲＮＡなどの核酸を含むポリヌクレオチド、脂質、糖、炭水化物、界面活性剤、及び酵素基質、ならびにそれらのいずれかの組み合わせ含む、広範囲の分子を標識するために使用できる。開示の化合物は、限定はされないが、抗体、ナノボディ（ｎａｎｏｂｏｄｙ）、ハプテン、小分子、薬物、薬物化合物、金属キレート剤などのイオン複合体形成物質（ｉｏｎ−ｃｏｍｐｌｅｘｉｎｇ ａｇｅｎｔ）、微粒子、合成または天然ポリマー、細胞、ウイルス、ＦＡＭジアミンなどの他の蛍光分子または蛍光表面、及びそれらのいずれかの組み合わせを含む、生物学的な分子を標識するためにも使用できる。薬物または薬物の誘導体は、ウルソデオキシコール酸（ＵＤＣＡ）、ケノデオキシコール酸（ＣＤＣＡ）、及びリトコール酸（ＬＣＡ）、デオキシコール酸（ＤＣＡ）などの胆汁酸、ロスバスタチンなどのスタチン、またはエストラジオールグルクロニドなどのエストラジオールであってよい。物質は、抗体であってよい。得られる標識された物質は、結合体またはトレーサーと表現されてもよい。
ポリペプチドは、抗体、センチリン（ｃｅｎｔｙｒｉｎ）（Ｃｅｎｔｙｒｅｘ）などの抗体様部分、またはリポタンパク質であってよい。抗体は、多特異性抗体、ヒト抗体、ヒト化抗体（完全または部分的ヒト化）、限定はされないが、トリ（例えば、アヒルまたはガチョウ）、サメ、クジラ、及び非霊長類（例えば、ウシ、ブタ、ラクダ、ラマ、ウマ、ヤギ、ウサギ、ヒツジ、ハムスター、モルモット、ネコ、イヌ、ラット、マウスなど）または非ヒト霊長類（例えば、サル、チンパンジーなど）を含む哺乳動物などの動物抗体、組み換え抗体、キメラ抗体、単鎖Ｆｖ（「ｓｃＦｖ」）、単鎖抗体、単一ドメイン抗体、Ｆａｂ断片、Ｆ（ａｂ’）断片、Ｆ（ａｂ’）２断片、ジスルフィドで連結されたＦｖ（「ｓｄＦｖ」）及び抗イディオタイプ（「抗Ｉｄ」）抗体、二重ドメイン（ｄｕａｌ−ｄｏｍａｉｎ）抗体、二重可変ドメイン（ｄｕａｌ ｖａｒｉａｂｌｅ ｄｏｍａｉｎ）（ＤＶＤ）抗体、または三重可変ドメイン（ｔｒｉｐｌｅ ｖａｒｉａｂｌｅ ｄｏｍａｉｎ）（ＴＶＤ）抗体（二重可変ドメイン免疫グロブリン、ならびに上記のいずれかの機能的に活性のあるエピトープ結合断片であってよい。具体的には、抗体は、免疫グロブリン分子及び免疫グロブリン分子の免疫学的に活性のある断片、すなわち、分析物結合サイトを含む分子を含む。免疫グロブリン分子は、何らかの型（例えば、ＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＡ、及びＩｇＹ）、クラス（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１、及びＩｇＡ２）、またはサブクラスであってよい。抗体は、Ｔｒａｓｔｕｚｕｍａｂ（Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ）、Ａｂｃｉｘｉｍａｂ（ＲｅｏＰｒｏ）、Ａｄａｌｉｍｕｍａｂ（Ｈｕｍｉｒａ）、Ａｌｅｍｔｕｚｕｍａｂ（Ｃａｍｐａｔｈ）、Ｂａｓｉｌｉｘｉｍａｂ（Ｓｉｍｕｌｅｃｔ）、Ｂｅｌｉｍｕｍａｂ（Ｂｅｎｌｙｓｔａ）、Ｂｅｖａｃｉｚｕｍａｂ（Ａｖａｓｔｉｎ）、Ｂｒｅｎｔｕｘｉｍａｂ ｖｅｄｏｔｉｎ（Ａｄｃｅｔｒｉｓ）、Ｃａｎａｋｉｎｕｍａｂ（Ｉｌａｒｉｓ）、Ｃｅｔｕｘｉｍａｂ（Ｅｒｂｉｔｕｘ）、Ｃｅｒｔｏｌｉｚｕｍａｂ ｐｅｇｏｌ（Ｃｉｍｚｉａ）、Ｄａｃｌｉｚｕｍａｂ（Ｚｅｎａｐａｘ）、Ｄｅｎｏｓｕｍａｂ（Ｐｒｏｌｉａ、Ｘｇｅｖａ）、Ｅｃｕｌｉｚｕｍａｂ（Ｓｏｌｉｒｉｓ）、Ｅｆａｌｉｚｕｍａｂ（Ｒａｐｔｉｖａ）、Ｇｅｍｔｕｚｕｍａｂ（Ｍｙｌｏｔａｒｇ）、Ｇｏｌｉｍｕｍａｂ（Ｓｉｍｐｏｎｉ）、Ｉｂｒｉｔｕｍｏｍａｂ ｔｉｕｘｅｔａｎ（Ｚｅｖａｌｉｎ）、Ｉｎｆｌｉｘｉｍａｂ（Ｒｅｍｉｃａｄｅ）、Ｉｐｉｌｉｍｕｍａｂ（ＭＤＸ−１０１、Ｙｅｒｖｏｙ）、Ｍｕｒｏｍｏｎａｂ−ＣＤ３（Ｏｒｔｈｏｃｌｏｎｅ ＯＫＴ３）、Ｎａｔａｌｉｚｕｍａｂ（Ｔｙｓａｂｒｉ）、Ｏｆａｔｕｍｕｍａｂ（Ａｒｚｅｒｒａ）、Ｏｍａｌｉｚｕｍａｂ（Ｘｏｌａｉｒ）、Ｐａｌｉｖｉｚｕｍａｂ（Ｓｙｎａｇｉｓ）、Ｐａｎｉｔｕｍｕｍａｂ（Ｖｅｃｔｉｂｉｘ）、Ｒａｎｉｂｉｚｕｍａｂ（Ｌｕｃｅｎｔｉｓ）、Ｒｉｔｕｘｉｍａｂ（Ｒｉｔｕｘａｎ、Ｍａｂｔｈｅｒａ）、Ｔｏｃｉｌｉｚｕｍａｂ（またはＡｔｌｉｚｕｍａｂ）（Ａｃｔｅｍｒａ及びＲｏＡｃｔｅｍｒａ）、ならびにＴｏｓｉｔｕｍｏｍａｂ（Ｂｅｘｘａｒ）などの治療用抗体であってよい。抗体のさらなる例を表１にも示す。

表１
Ｃｈ：キメラ、Ｈｚ：ヒト化、Ｈｕ：完全ヒト、ＧＰＮＭＢ：糖タンパク質ＮＭＢ、ＰＳＭＡ：前立腺特異的膜抗原
ポリペプチドは、ニシンＣＣＫ−８、すなわち、ＤＹＭＧＷＭＤＦ（配列識別番号１）などのコレシストキニン（ＣＣＫ）であってよい。
リポタンパク質は、高密度リポタンパク質（ＨＤＬ）、低密度リポタンパク質（ＬＤＬ）、中間密度リポタンパク質、酸化ＬＤＬ、超低密度リポタンパク質（ＶＬＤＬ）、カイロミクロン、カイロミクロンレムナント、及び非天然リポタンパク質であってよい。
さらに、化合物は、限定はされないが、固体支持体／表面、［６０］フラーレン、コア−シェルナノ粒子、リポソーム、デンドリマー、及び金ナノ粒子などのナノ粒子、ならびに界面活性剤を含む、非生体物質を標識するために使用してもよい。界面活性剤は、薬物送達効率を試験するために任意選択で使用され得るリポソーム及び／または固体−液体ナノ粒子（ＳＬＮ）に内包されていてもよい。界面活性剤は、Ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ（登録商標）２０００またはＦｕｇｅｎｅ６などの、遺伝子導入試薬であってよい。
ａ．物質の標識方法
開示の化合物は、物質を標識するために使用してもよい。いくつかの態様では、化合物は、ヌクレオシド、ヌクレオチド、またはポリヌクレオチドと結合していてもよい。本発明の化合物は、ホスホラミダイト、活性化されたエステル、または反応性白金錯体（ｒｅａｃｔｉｖｅ ｐｌａｔｉｎｕｍ ｃｏｍｐｌｅｘ）を介するなど、当業者に知られる何らかの方法で、ヌクレオシド、ヌクレオチド、またはポリヌクレオチドと結合していてもよい。ある実施形態では、標識用化合物は、ＮＨＳエステル、ペンタフルオロベンゼンエステル、酸無水物、塩化アセチルなどの活性化されたカルボン酸を使用して物質に結合してもよく、またはカルボン酸及びアミンの直接的なカップリング反応、またはクリックケミストリー、またはマレイミド、または活性化されたカーボネート、またはホスホラミダイトを使用して物質に結合してもよい。
例えば、スキーム１に示すように、標識用試薬は、ｄＵアリルアミンホスホラミダイトに結合でき、さらに従来のホスホラミダイトケミストリーによって、関心オリゴマーにさらに取り込まれることができる。あるいは、ｄＵアリルアミン修飾された関心オリゴマーは、活性化されたエステルを介して、ポスト標識により、標識用試薬で標識できる。こうした標識されたオリゴが関心プライマーであった場合、ＰＣＲを介して関心配列を増幅するためにも使用できる。
スキーム１
ある実施形態では、標識された物質は、式（ＩＩ）を有するか、またはその塩であってよく、
（ＩＩ）、
式中、リンカーは、親化合物部分を物質に共有結合する結合または炭素鎖であり、ここで、炭素鎖は、１個もしくは複数の窒素原子、酸素原子、カルボニル基、（置換されている）芳香族環、またはペプチド結合で、任意選択で遮断されており；物質は、関心標的であり；ならびにＲ9、Ｒ10、Ｒ11、Ｒ12、Ｒ13、Ｒ14、Ｒ17、及びＡは、上で定義したとおりである。
ある実施形態では、式（ＩＩ）の標識された物質は、式（ＩＩ−ｉ）を有するか、またはその塩であってよく、
（ＩＩ−ｉ）、
式中、リンカー、物質、Ｒ9、Ｒ10、Ｒ11、Ｒ12、Ｒ13、Ｒ14、Ｒ17、及びＡは、上で定義したとおりである。
ある実施形態では、式（ＩＩ）の標識された物質は、式（ＩＩ−ｉｉ）を有しているか、またはその塩であってよく、
（ＩＩ−ｉｉ）、
式中、物質、Ｒ9、Ｒ10、Ｒ11、Ｒ12、Ｒ13、Ｒ14、ｘ、及びＡは、上で定義したとおりである。
ある実施形態では、式（ＩＩ）の標識された物質は、式（ＩＩ−ｉｉｉ）を有していてよく、
（ＩＩ−ｉｉｉ）、
式中、Ｒ9、Ｒ10、Ｒ11、Ｒ12、Ｒ13、Ｒ14、及びＡは、上で定義したとおりである。
ある実施形態では、標識された物質は、式（ＩＩＩ）を有していてよく、
（ＩＩ−ｉｖ）、
式中、Ｒは、水素、アルキル、アルケニル、及び式（ａ）の基からそれぞれ独立に選択され、
（ａ）、
式中、Ｒ9、Ｒ10、Ｒ11、Ｒ12、Ｒ13、Ｒ14、ｚ、及びＡは、上で定義したとおりであり；ここで、少なくとも１個のＲ基は、式（ａ）である。
ある実施形態では、上式中の物質は、ポリペプチド、ポリペプチドを基礎とする毒物、アミノ酸、ヌクレオチド、ＤＮＡ及びＲＮＡなどの核酸を含むポリヌクレオチド、脂質、炭水化物、ならびに酵素基質、またはそれらのいずれかの組み合わせからなる群から選択される。ある実施形態では、物質はペプチド、抗体、リポタンパク質、タンパク質、ヌクレオチド、糖、脂肪酸、界面活性剤、または脂質である。ある実施形態では、物質は抗体である。ある実施形態では、上式中の物質は、治療用薬物、小分子、及びナノ粒子、またはそれらのいずれかの組み合わせからなる群から選択される。
他の態様では、開示の標識用試薬は、アミノ酸、アミノ酸アナログ、またはポリペプチドと結合していてもよい。他の態様では、開示の標識用試薬は、薬物または薬物化合物などの小分子と結合していてもよい。いくつかの態様では、結合された小分子は、蛍光トレーサーとして使用してもよい。
４．標識された物質
ある実施形態では、本開示の化合物は、標識された物質である。当該標識された物質は、式（Ｉ）の化合物、またはその塩であり、
（Ｉ）
式中、
Ａは、レポーター部分であり；
Ｒ14は、Ｈ、アルキル、ヒドロキシアルキル、アルコキシ、カルボキシアルキル、またはアミドアルキルであり；
Ｒ9及びＲ10は、アルキルから独立に選択され；
Ｒ11、Ｒ12、及びＲ13は、Ｈ、アルキル、アルコキシ、ブロモ、クロロ、もしくはアミノから独立に選択されるか、またはＲ11及びＲ12は、融合されたフェニル環を形成でき；
Ｘは、Ｏであり；
Ｌは、−（ＣＨ2）mＣ（Ｒ17）2（ＣＨ2）n−Ｙ−Ｃ（Ｏ）−であり；
Ｒ17は、独立にＨ、アルキルであるか、または両Ｒ17は、一緒になって３〜７個の炭素を有するアルキル環を形成でき；
ｍは、０〜２の整数であり；
ｎは、０〜２の整数であり；
Ｙは、ＯまたはＮＲ15であり；
Ｒ15は、Ｈ、アルキル、ヒドロキシアルキル、アジドアルキル、シアノアルキル、ハロアルキル、アルケニル、アルキニル、−アルキル−Ｎ（Ｒ23）Ｃ（Ｏ）Ｒ24、−アルキル−ＳＯ3Ｒ25、−アルキル−ＳＯ2Ｎ（Ｒ26）（Ｒ27）、−アルキル−ＣＯＲ28、−アルキル−ＣＯ2Ｒ29、−アルキル−ＯＣ（Ｏ）Ｒ29、−アルキル−ＯＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ30）（Ｒ31）、−アルキル−アミド、またはポリアルコキシアルキルであり、ここで、当該ポリアルコキシアルキル及び−アルキル−アミドは、非置換であるか、または１個もしくは複数の適した置換基で置換されており；ならびに
Ｒ23、Ｒ24、Ｒ25、Ｒ26、Ｒ27、Ｒ28、Ｒ29、Ｒ30、及びＲ31は、水素、アルキル、アリール、ヘテロアリール、ヘテロシクリル、及びシクロアルキルからそれぞれ独立に選択される。
ある実施形態では、標識されている物質は、アリール、アリールアルキル、シクロアルキルアルキル、ヘテロアリール、ヘテロアリールアルキル、ヘテロシクル、ヒドロキシアルキル、タンパク質、ポリペプチド、ポリペプチドを基礎とする毒物、アミノ酸、ヌクレオチド、ポリヌクレオチド、脂質、糖、炭水化物、酵素基質、薬物、薬物の誘導体、ポリマー連結ナノ粒子、抗体、界面活性剤、及び色素、またはそれらの組み合わせから選択される。
ある実施形態では、ＹはＮＲ15である。
ある実施形態では、Ｒ15は、物質を含む。
ある実施形態では、Ｒ15は、Ｈ、アルキル、ヒドロキシアルキル、アジドアルキル、シアノアルキル、ハロアルキル、アルケニル、アルキニル、−アルキル−Ｎ（Ｒ23）Ｃ（Ｏ）Ｒ24、−アルキル−ＳＯ3Ｒ25、−アルキル−ＳＯ2Ｎ（Ｒ26）（Ｒ27）、−アルキル−ＣＯＲ28、−アルキル−ＣＯ2Ｒ29、−アルキル−ＯＣ（Ｏ）Ｒ29、−アルキル−ＯＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ30）（Ｒ31）、−アルキル−アミド、またはポリアルコキシアルキルであり、ここで、当該ポリアルコキシアルキル及び−アルキル−アミドは、非置換であるか、または１個もしくは複数の適した置換基で置換されており；ならびに、Ｒ23、Ｒ24、Ｒ25、Ｒ26、Ｒ27、Ｒ28、Ｒ29、Ｒ30、及びＲ31は、水素、アルキル、アリール、ヘテロアリール、ヘテロシクリル、及びシクロアルキルからそれぞれ独立に選択される。
ある実施形態では、Ｒ15は、ポリアルコキシアルキルであり、ここで、当該ポリアルコキシアルキルは、−（Ｃ2−Ｃ6−アルコキシ）x−アルキル、−（Ｃ2−Ｃ6−アルコキシ）x−ハロアルキル、−（Ｃ2−Ｃ6−アルコキシ）x−ヒドロキシアルキル、−（Ｃ2−Ｃ6−アルコキシ）x−アミノアルキル、−（Ｃ2−Ｃ6−アルコキシ）x−アルキルアミノアルキル、−（Ｃ2−Ｃ6−アルコキシ）xジ（アルキル）アミノアルキル、−（Ｃ2−Ｃ6−アルコキシ）x−アジドアルキル、−（Ｃ2−Ｃ6−アルコキシ）x−シアノアルキル、−（Ｃ2−Ｃ6−アルコキシ）x−アルケニル、−（Ｃ2−Ｃ6−アルコキシ）x−アルキニル、−（Ｃ2−Ｃ6−アルコキシ）x−Ｎ（Ｒ23）Ｃ（Ｏ）Ｒ24、−（Ｃ2−Ｃ6−アルコキシ）x−ＳＯ3Ｒ25、−（Ｃ2−Ｃ6−アルコキシ）x−アルキル−ＳＯ2Ｎ（Ｒ26）（Ｒ27）、−（Ｃ2−Ｃ6−アルコキシ）x−アルキル−ＣＯＲ28、−（Ｃ2−Ｃ6−アルコキシ）x−アルキル−ＯＣ（Ｏ）Ｒ29、−（Ｃ2−Ｃ6−アルコキシ）x−アルキル−ＯＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ30）（Ｒ31）、−（Ｃ2−Ｃ6−アルコキシ）x−アルキル−ＣＯ2Ｒ29、−（Ｃ2−Ｃ6−アルコキシ）x−アルキル−ＣＯＮ（Ｒ32）（Ｒ33）、及び−（Ｃ2−Ｃ6−アルコキシ）x−アルキル−（ＣＯ）−ＮＲ34−（ＣＲaＲb）p−ＮＲ35（ＣＯ）−Ｔからなる群から選択され、ここで、
Ｒ23、Ｒ24、Ｒ25、Ｒ26、Ｒ27、Ｒ28、Ｒ29、Ｒ30、及びＲ31は、水素、アルキル、アリール、ヘテロアリール、ヘテロシクリル、及びシクロアルキルからそれぞれ独立に選択され；
ｘは、１〜２０から選択される整数であり；
Ｒ32及びＲ33は、水素、アルキル、カルボキシ、ペプチド、薬物、生物学的に活性な部分、及び色素からそれぞれ独立に選択され；
Ｒ34及びＲ35は、水素、及びアルキルからそれぞれ独立に選択され；
Ｒa及びＲbは、水素、アルキル、及びカルボキシからそれぞれ独立に選択され；
ｐは、０〜６であり；ならびに
Ｔは、アリール、アリールアルキル、シクロアルキルアルキル、ヘテロアリール、ヘテロアリールアルキル、ヘテロシクル、ヒドロキシアルキル、タンパク質、ポリペプチド、ポリペプチドを基礎とする毒物、アミノ酸、ヌクレオチド、ポリヌクレオチド、脂質、糖、炭水化物、酵素基質、薬物、薬物の誘導体、ポリマー連結ナノ粒子、抗体、界面活性剤、及び色素、またはそれらの組み合わせから選択される。
ある実施形態では、Ｒ15は、ポリアルコキシアルキルであり、ここで、当該ポリアルコキシアルキルは、−（Ｃ2−Ｃ6−アルコキシ）x−アルキル−ＣＯＮ（Ｒ32）（Ｒ33）、または−（Ｃ2−Ｃ6−アルコキシ）x−アルキル−（ＣＯ）−ＮＲ34−（ＣＲaＲb）p−ＮＲ35（ＣＯ）−Ｔであり；
ｘは、１〜２０から選択される整数であり；
Ｒ32及びＲ33は、水素、アルキル、カルボキシ、アリール、アリールアルキル、シクロアルキルアルキル、ヘテロアリール、ヘテロアリールアルキル、ヘテロシクル、ヒドロキシアルキル、タンパク質、ポリペプチド、ポリペプチドを基礎とする毒物、アミノ酸、ヌクレオチド、ポリヌクレオチド、脂質、糖、炭水化物、酵素基質、薬物、薬物の誘導体、ポリマー連結ナノ粒子、抗体、界面活性剤、及び色素、またはそれらの組み合わせからそれぞれ独立に選択され；
Ｒ34及びＲ35は、水素、及びアルキルからそれぞれ独立に選択され；
Ｒa及びＲbは、水素、アルキル、及びカルボキシからそれぞれ独立に選択され；
ｐは、０〜６であり；ならびに
Ｔは、アリール、アリールアルキル、シクロアルキルアルキル、ヘテロアリール、ヘテロアリールアルキル、ヘテロシクル、ヒドロキシアルキル、タンパク質、ポリペプチド、ポリペプチドを基礎とする毒物、アミノ酸、ヌクレオチド、ポリヌクレオチド、脂質、糖、炭水化物、酵素基質、薬物、薬物の誘導体、ポリマー連結ナノ粒子、抗体、界面活性剤、及び色素、またはそれらの組み合わせから選択される。
ある実施形態では、Ｒ15は、
であり；
式中、
Ｔは、アリール、アリールアルキル、シクロアルキルアルキル、ヘテロアリール、ヘテロアリールアルキル、ヘテロシクル、ヒドロキシアルキル、タンパク質、ポリペプチド、ポリペプチドを基礎とする毒物、アミノ酸、ヌクレオチド、ポリヌクレオチド、脂質、糖、炭水化物、酵素基質、薬物、薬物の誘導体、ポリマー連結ナノ粒子、抗体、界面活性剤、及び色素、またはそれらの組み合わせから選択され；ならびに
ｘは、１〜２０から選択される整数である。
ある実施形態では、ｘは、１〜１０、１〜８、１〜６、１〜５、１〜４、１〜３、または１〜２である。ある実施形態では、ｘは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９または２０である。
ある実施形態では、Ｒ15は、−アルキル−アミドであり、ここで、当該−アルキル−アミドは、−アルキル−ＣＯＮ（Ｒ32）（Ｒ33）または−アルキル−（ＣＯ）−ＮＲ34−（ＣＲaＲb）p−ＮＲ35（ＣＯ）−Ｔであり、ここで、
Ｒ32及びＲ33は、水素、アルキル、カルボキシ、アリール、アリールアルキル、シクロアルキルアルキル、ヘテロアリール、ヘテロシクル、アルケン、ポリオール、アルケニルポリオール、ペプチド、薬物、薬物の誘導体、生物学的に活性な部分、及び色素からそれぞれ独立に選択され；
Ｒ34及びＲ35は、水素、及びアルキルからそれぞれ独立に選択され；
Ｒa及びＲbは、水素、アルキル、及びカルボキシからそれぞれ独立に選択され；
ｐは、０〜６であり；ならびに
Ｔは、アリール、アリールアルキル、シクロアルキルアルキル、ヘテロアリール、ヘテロアリールアルキル、ヘテロシクル、ヒドロキシアルキル、タンパク質、ポリペプチド、ポリペプチドを基礎とする毒物、アミノ酸、ヌクレオチド、ポリヌクレオチド、脂質、糖、炭水化物、酵素基質、薬物、薬物の誘導体、ポリマー連結ナノ粒子、抗体、界面活性剤、及び色素、またはそれらの組み合わせから選択される。
ある実施形態では、Ｒ15は、
であり；
式中、
Ｔは、アリール、アリールアルキル、シクロアルキルアルキル、ヘテロアリール、ヘテロアリールアルキル、ヘテロシクル、ヒドロキシアルキル、タンパク質、ポリペプチド、ポリペプチドを基礎とする毒物、アミノ酸、ヌクレオチド、ポリヌクレオチド、脂質、糖、炭水化物、酵素基質、薬物、薬物の誘導体、ポリマー連結ナノ粒子、抗体、界面活性剤、及び色素、またはそれらの組み合わせから選択され；ならびに
ｘは、０〜２０である。
ある実施形態では、ｘは、０〜１０、０〜８、０〜６、０〜５、０〜４、０〜３、または０〜２である。ある実施形態では、ｘは、０、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、または２０である。
ある実施形態では、Ｒ15は、
であり；
式中、ｘは、１〜２０であり、Ｔは、抗体である。
ある実施形態では、Ｔがモノクローナル抗体であるとき、抗体の例には、表１に示すものが含まれる。
ある実施形態では、Ｒ15は、
であり；
式中、Ｔは、Ｃ60フラーレンを含む。例えば、Ｔは、
であってよい。
ある実施形態では、Ｒ15は、−アルキル−Ｔであり、ここで、Ｔは、固体−液体ナノ粒子（ＳＬＮ）である。ＳＬＮは、室温で固相を呈する脂質、及び乳化のためのサーファクタントを主に含み、その平均径は、コロイド薬物送達用途に向けて、５０ｎｍ〜１０００ｎｍの範囲にわたる。ＳＬＮにおいて利用される固体脂質には、脂肪酸、トリグリセリド、ステロイド、及びワックスが含まれる。サーファクタントのいくつかの型は、脂質の分散を安定化する乳化剤として一般に使用される。
ある実施形態では、Ｒ15は、
であり；
式中、Ｔは、−ＮＨ−ＰＥＧ3000−金ナノ粒子、ＰＡＭＡＭデンドリマー、オリゴヌクレオチド、またはペプチド−オリゴヌクレオチド結合体である。オリゴヌクレオチドまたはペプチド−オリゴヌクレオチド結合体は、表２に示すいずれかであってよい。
表２
いくつかの実施形態では、Ｒ14は、Ｈ、Ｃ1−Ｃ30−アルキル、ヒドロキシ−Ｃ1−Ｃ30−アルキル、Ｃ1−Ｃ30−アルコキシ、カルボキシ−Ｃ1−Ｃ30−アルキル、またはアミド−Ｃ1−Ｃ30−アルキルであり；Ｒ9及びＲ10は、Ｃ1−Ｃ4−アルキルから独立に選択され；Ｒ11、Ｒ12、及びＲ13は、Ｈ、Ｃ1−Ｃ4−アルキル、Ｃ1−Ｃ4−アルコキシ、ブロモ、クロロ、もしくアミノから独立に選択されるか、またはＲ11及びＲ12は、融合されたフェニル環を形成でき；Ｘは、Ｏであり；Ｌは、−（ＣＨ2）mＣ（Ｒ17）2（ＣＨ2）n−Ｙ−Ｃ（Ｏ）−であり；Ｒ17は、独立にＨ、Ｃ1−Ｃ4−アルキルであるか、または両Ｒ17は、一緒になって３〜７個の炭素を有するアルキル環を形成でき；ｍは、０〜２の整数であり；ｎは、０〜２の整数であり；Ｙは、ＯまたはＮＲ15であり；Ｒ15は、Ｈ、Ｃ1−Ｃ30−アルキル、ヒドロキシ−Ｃ1−Ｃ30−アルキル、アジド−Ｃ1−Ｃ30−アルキル、シアノ−Ｃ1−Ｃ30−アルキル、ハロ−Ｃ1−Ｃ30−アルキル、Ｃ2−Ｃ30−アルケニル、Ｃ2−Ｃ30−アルキニル、−Ｃ1−Ｃ30−アルキル−Ｎ（Ｒ23）Ｃ（Ｏ）Ｒ24、−Ｃ1−Ｃ30−アルキル−ＳＯ3Ｒ25、−Ｃ1−Ｃ30−アルキル−ＳＯ2Ｎ（Ｒ26）（Ｒ27）、−Ｃ1−Ｃ30−アルキル−ＣＯＲ28、−Ｃ1−Ｃ30−アルキル−ＣＯ2Ｒ29、−Ｃ1−Ｃ30−アルキル−ＯＣ（Ｏ）Ｒ29、−Ｃ1−Ｃ30−アルキル−ＯＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ30）（Ｒ31）、−Ｃ1−Ｃ30−アルキル−ＣＯＮ（Ｒ30）（Ｒ31）、またはポリアルコキシアルキルであり、ここで、当該ポリアルコキシアルキルは、非置換であるか、または１個もしくは複数の適した置換基で置換されており；ならびにＲ23、Ｒ24、Ｒ25、Ｒ26、Ｒ27、Ｒ28、Ｒ29、Ｒ30、及びＲ31は、水素、Ｃ1−Ｃ4−アルキル、アリール、ヘテロアリール、ヘテロシクリル、及びシクロアルキルからそれぞれ独立に選択される。
ある実施形態では、Ｒ14は、Ｈ、Ｃ1−Ｃ6−アルキル、ヒドロキシ−Ｃ1−Ｃ6−アルキル、Ｃ1−Ｃ6−アルコキシ、−Ｃ1−Ｃ6−アルキル−ＣＯ2Ｈ、または−Ｃ1−Ｃ6−アルキル−アミドである。
ある実施形態では、Ｒ14は、メチルである。
ある実施形態では、Ｒ14は、カルボキシアルキルである。ある実施形態では、Ｒ14は、−Ｃ2−Ｃ30−アルキル−ＣＯ2Ｈである。ある実施形態では、Ｒ14は、−ＣＨ2ＣＯ2Ｈ、−（ＣＨ2）2ＣＯ2Ｈ、−（ＣＨ2）3ＣＯ2Ｈ、−（ＣＨ2）4ＣＯ2Ｈ、−（ＣＨ2）5ＣＯ2Ｈ、−（ＣＨ2）6ＣＯ2Ｈ、−（ＣＨ2）7ＣＯ2Ｈ、−（ＣＨ2）8ＣＯ2Ｈ、−（ＣＨ2）9ＣＯ2Ｈ、−（ＣＨ2）10ＣＯ2Ｈ、−（ＣＨ2）11ＣＯ2Ｈ、−（ＣＨ2）12ＣＯ2Ｈ、−（ＣＨ2）13ＣＯ2Ｈ、−（ＣＨ2）14ＣＯ2Ｈ、−（ＣＨ2）15ＣＯ2Ｈ、−（ＣＨ2）16ＣＯ2Ｈ、−（ＣＨ2）17ＣＯ2Ｈ、−（ＣＨ2）18ＣＯ2Ｈ、−（ＣＨ2）19ＣＯ2Ｈ、−（ＣＨ2）20ＣＯ2Ｈ、−（ＣＨ2）21ＣＯ2Ｈ、−（ＣＨ2）22ＣＯ2Ｈ、−（ＣＨ2）23ＣＯ2Ｈ、−（ＣＨ2）24ＣＯ2Ｈ、−（ＣＨ2）25ＣＯ2Ｈ、−（ＣＨ2）26ＣＯ2Ｈ、−（ＣＨ2）27ＣＯ2Ｈ、−（ＣＨ2）28ＣＯ2Ｈ、−（ＣＨ2）29ＣＯ2Ｈ、または−（ＣＨ2）30ＣＯ2Ｈである。ある実施形態では、Ｒ14は、−（ＣＨ2）15ＣＯ2Ｈである。
ある実施形態では、Ｒ9、Ｒ10、Ｒ11、Ｒ12、Ｒ13、及びＲ14は、それぞれメチルである。
ある実施形態では、可変性のＬにおいて、ｍは、１であり、Ｒ17は、それぞれ水素であり、ｎは、０である。ある実施形態では、可変性のＬにおいて、ｍは、１であり、Ｒ17は、それぞれ水素であり、ｎは、０であり、Ｙは、ＮＲ15である。ある実施形態では、Ｌは、−ＣＨ2ＣＨ2−ＮＲ15−Ｃ（Ｏ）−である。
ある実施形態では、Ａは、生物発光レポーター部分である。ある実施形態では、Ａは、ルシフェリン、ルシフェリン誘導体もしくはルシフェリンアナログ、ルシフェリン前駆体もしくはルシフェリン前駆体のアナログ、セレンテラジン、またはセレンテラジン誘導体もしくはセレンテラジンアナログである。いくつかの実施形態では、Ａは、ルシフェリン、プロルシフェリン、アミノルシフェリン、キノリルルシフェリン、ナフチルルシフェリン、クロロルシフェリン、セレンテラジン、フリマジン、セレンテラジン−ｎ、セレンテラジン−ｆ、セレンテラジン−ｈ、セレンテラジン−ｈｃｐ、セレンテラジン−ｃｐ、セレンテラジン−ｃ、セレンテラジン−ｅ、セレンテラジン−ｆｃｐ、ビス−デオキシセレンテラジン（「セレンテラジン−ｈｈ」）、セレンテラジン−ｉ、セレンテラジン−ｉｃｐ、セレンテラジン−ｖ、及び２−メチルセレンテラジン、さらには、ＷＯ２００３／０４０１００、米国特許出願公開番号２００８０２４８５１１、及び米国特許出願公開番号ＵＳ２０１２０１１７６６７にて開示されているものであり、それらの開示は、参照によって本明細書に組み込まれる。
ある実施形態では、Ａは、蛍光レポーター部分である。ある実施形態では、Ａは、クマリン、Ｒ１１０、フルオロセイン、ＤＤＡＯ、レゾルフィン、クレシルバイオレット、シリルキサンテン、またはカルボピロニンである。いくつかの実施形態では、Ａは、ローダミン１２３、ローダミンＸ、Ａｌｅｘａ色素（例えば、Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ−３５０、−４３０、−４８８、及び６６０）、ＤｙＬｉｇｈｔ５９４、、スルホローダミンＢ、スルホローダミン１０１、スルホローダミン１０１の塩化スルホニル誘導体（Ｔｅｘａｓ Ｒｅｄ）、フルオレセイン、６−カルボキシフルオレセイン（６−ＦＡＭ）、５−カルボキシフルオレセイン（５−Ｆａｍ）、５−もしくは６−カルボキシ−４，７，２’，７’−テトラクロロフルオレセイン（ＴＥＴ）、５−もしくは６−カルボキシ−４’５’２’４’５’７’ヘキサクロロフルオレセイン（ＨＥＸ）、５’もしくは６’−カルボキシ−４’，５’−ジクロロ−２，’７’−ジメトキシフルオレセイン（ＪＯＥ）、６−ＪＯＥ、５−カルボキシ−２’，４’，５’，７’−テトラクロロフルオレセイン（ＺＯＥ）ロドール、フルオレセインイソチオシアネート、クマリン、７−アミノ−４−メチルクマリン、アミノクマリン、ヒドロキシクマリン、、シリルキサンテン、またはカルボピロニンである。ある実施形態では、Ａは、二環式アリールまたは二環式ヘテロアリールであり、それらは、それぞれ独立に非置換であるか、または１個もしくは複数の適した置換基で独立に置換されている。ある実施形態では、Ａは、二環式アリールまたは二環式ヘテロアリールであり、それらは、それぞれ独立に非置換であるか、またはアルキル、ハロアルキル、ヒドロキシアルキル、アルコキシアルキル、ハロアルコキシアルキル、アミノアルキル、アルキルアミノアルキル、ジ（アルキル）アミノアルキル、シアノアルキル、アルコキシ、ハロアルキル、シアノ、ヒドロキシ、アミノ、アルキルアミノ、ジ（アルキル）アミノ、アリール、ヘテロアリール、ヘテロシクリル、シクロアルキル、アリールアルキル、ヘテロアリールアルキル、ヘテロシクリルアルキル、及びシクロアルキルアルキルからなる群から独立に選択される、１、２、３、４、もしくは５個の置換基で独立に置換されており、ここで、当該アリール、ヘテロアリール、ヘテロシクリル、シクロアルキル、アリールアルキルのアリール、ヘテロアリールアルキルのヘテロアリール、ヘテロシクリルアルキルのヘテロシクリル、及びシクロアルキルアルキルのシクロアルキルは、それぞれ独立に非置換であるか、またはアルキル、ハロアルキル、ヒドロキシアルキル、アルコキシアルキル、ハロアルコキシアルキル、アミノアルキル、アルキルアミノアルキル、ジ（アルキル）アミノアルキル、シアノアルキル、アルコキシ、ハロアルコキシ、シアノ、ヒドロキシ、アミノ、アルキルアミノ、及びジ（アルキル）アミノから独立に選択される１、２、もしくは３個の置換基で独立に置換されている。
ある実施形態では、Ａは、ルシフェリン、ルシフェリン誘導体もしくはルシフェリンアナログ（例えば、ルシフェリンエステル）、ルシフェリン前駆体、ルシフェリン前駆体の誘導体もしくはルシフェリン誘導体のアナログ、シアノベンゾチアゾール、セレンテラジン、セレンテラジン誘導体もしくはセレンテラジンアナログ、または蛍光団である。
ある実施形態では、Ａは、
からなる群から選択され；
式中、Ｒ1は、Ｈ、Ｃ1−Ｃ4−アルキル、ヒドロキシ−Ｃ1−Ｃ4−アルキル、Ｃ3−Ｃ7−シクロアルキル、アリール、ベンジルもしくは置換されているベンジル、ヘテロシクリル、ヘテロアリール、または−（ＣＨ2）q−Ｐ（Ｐｈ）3であり、ここで、ｑは、１、２、３、４、５、及び６から選択される整数であり；Ｒ2は、−ＣＨ2−アリールまたは−ＣＨ2−ヘテロアリールであり；Ｒ4は、水素、ハロゲン、メチル、またはトリフルオロメチルであり；Ｒ5は、水素、ハロゲン、メチル、またはトリフルオロメチルであり；Ｒ7は、アリール（例えば、フェニル）、置換されているアリール（例えば、４−ヒドロキシフェニル）、−ＣＨ2−アリール、または−ＣＨ2−ヘテロアリールであり；ならびにＲ8は、−ＣＨ2−アリールまたは−ＣＨ2−ヘテロアリールである。ある実施形態では、−ＣＨ2−アリールは、ベンジルである。ある実施形態では、−ＣＨ2−ヘテロアリールは、フリルメチルである。
ある実施形態では、Ａは、

からなる群から選択され；
式中、Ｒ1は、Ｃ1−Ｃ4−アルキル、ヒドロキシ−Ｃ1−Ｃ4−アルキル、Ｃ3−Ｃ7−シクロアルキル、アリール、ベンジルもしくは置換されているベンジル、ヘテロシクリル、ヘテロアリール、または−（ＣＨ2）q−Ｐ（Ｐｈ）3であり、ここで、ｑは、１、２、３、４、５、または６から選択される整数である。
ある実施形態では、式（Ｉ）の化合物は、式（Ｉ−ｉ）を有するか、またはその塩であり、
（Ｉ−ｉ）、
式中、Ｒ9、Ｒ10、Ｒ11、Ｒ12、Ｒ13、Ｒ14、Ｒ15、Ｒ17、ｍ、ｎ、及びＡは、上で定義したとおりである。ある実施形態では、Ａは、
からなる群から選択され、
式中、Ｒ200は、フェニル、４−ヒドロキシフェニル、またはフリルであり；及びＲ215は、水素またはヒドロキシである。
ある実施形態では、式（Ｉ）の化合物は、式（Ｉ−ｉｉ）を有するか、その塩であり、
（Ｉ−ｉｉ）、
式中、Ｒ200は、フェニル、４−ヒドロキシフェニル、またはフリルであり；Ｒ215は、水素またはヒドロキシであり；及びＲ9、Ｒ10、Ｒ11、Ｒ12、Ｒ13、Ｒ14、及びＲ15は、上で定義したとおりである。
ある実施形態では、式（Ｉ）の化合物は、式（Ｉ−ｉｖ）を有するか、またはその塩であり、
（Ｉ−ｉｉｉ）、
式中、Ｒ9、Ｒ10、Ｒ11、Ｒ12、Ｒ13、Ｒ14、及びＲ15は、上で定義したとおりである。
ある実施形態では、式（Ｉ）の化合物は、
５６５１：２−（６−（（（（２０Ｒ）−１５−カルボキシ−２０−（（３Ｒ，５Ｓ，７Ｓ，８Ｒ，９Ｓ，１０Ｓ，１３Ｒ，１４Ｓ，１７Ｒ）−３，７−ジヒドロキシ−１０，１３−ジメチルヘキサデカヒドロ−１Ｈ−シクロペンタ［ａ］フェナントレン−１７−イル）−９，１７−ジオキソ−３，６−ジオキサ−１０，１６−ジアザヘニコシル）（２−（Ｎ，３−ジメチル−３−（２，４，５−トリメチル−３，６−ジオキソシクロヘキサ−１，４−ジエン−１−イル）ブタンアミド）エチル）カルバモイル）オキシ）ベンゾ［ｄ］チアゾール−２−イル）−４，５−ジヒドロチアゾール−４−カルボン酸；
５６５７：２−（６−（（（４−（（５−カルボキシ−５−（（Ｒ）−４−（（３Ｒ，５Ｓ，７Ｒ，８Ｒ，９Ｓ，１０Ｓ，１３Ｒ，１４Ｓ，１７Ｒ）−３，７−ジヒドロキシ−１０，１３−ジメチルヘキサデカヒドロ−１Ｈ−シクロペンタ［ａ］フェナントレン−１７−イル）ペンタンアミド）ペンチル）アミノ）−４−オキソブチル）（２−（Ｎ，３−ジメチル−３−（２，４，５−トリメチル−３，６−ジオキソシクロヘキサ−１，４−ジエン−１−イル）ブタンアミド）エチル）カルバモイル）オキシ）ベンゾ［ｄ］チアゾール−２−イル）−４，５−ジヒドロチアゾール−４−カルボン酸；
５６５８：２−（６−（（（４−（（５−カルボキシ−５−（（Ｒ）−４−（（３Ｒ，５Ｓ，７Ｓ，８Ｒ，９Ｓ，１０Ｓ，１３Ｒ，１４Ｓ，１７Ｒ）−３，７−ジヒドロキシ−１０，１３−ジメチルヘキサデカヒドロ−１Ｈ−シクロペンタ［ａ］フェナントレン−１７−イル）ペンタンアミド）ペンチル）アミノ）−４−オキソブチル）（２−（Ｎ，３−ジメチル−３−（２，４，５−トリメチル−３，６−ジオキソシクロヘキサ−１，４−ジエン−１−イル）ブタンアミド）エチル）カルバモイル）オキシ）ベンゾ［ｄ］チアゾール−２−イル）−４，５−ジヒドロチアゾール−４−カルボン酸；
５６６５：２−（６−（（（４−（（５−カルボキシ−５−（（Ｒ）−４−（（３Ｒ，５Ｓ，７Ｒ，８Ｒ，９Ｓ，１０Ｓ，１３Ｒ，１４Ｓ，１７Ｒ）−３，７−ジヒドロキシ−１０，１３−ジメチルヘキサデカヒドロ−１Ｈ−シクロペンタ［ａ］フェナントレン−１７−イル）ペンタンアミド）ペンチル）アミノ）−４−オキソブチル）（２−（Ｎ，３−ジメチル−３−（２，４，５−トリメチル−３，６−ジオキソシクロヘキサ−１，４−ジエン−１−イル）ブタンアミド）エチル）カルバモイル）オキシ）ベンゾ［ｄ］チアゾール−２−イル）−４，５−ジヒドロチアゾール−４−カルボン酸；
５６６６：２−（６−（（（４−（（５−カルボキシ−５−（（Ｒ）−４−（（３Ｒ，５Ｓ，７Ｓ，８Ｒ，９Ｓ，１０Ｓ，１３Ｒ，１４Ｓ，１７Ｒ）−３，７−ジヒドロキシ−１０，１３−ジメチルヘキサデカヒドロ−１Ｈ−シクロペンタ［ａ］フェナントレン−１７−イル）ペンタンアミド）ペンチル）アミノ）−４−オキソブチル）（２−（Ｎ，３−ジメチル−３−（２，４，５−トリメチル−３，６−ジオキソシクロヘキサ−１，４−ジエン−１−イル）ブタンアミド）エチル）カルバモイル）オキシ）ベンゾ［ｄ］チアゾール−２−イル）−４，５−ジヒドロチアゾール−４−カルボン酸；
５６８３：２−シアノベンゾ［ｄ］チアゾール−６−イル （６−（（２−（３’，６’−ジヒドロキシ−３−オキソ−３Ｈ−スピロ［イソベンゾフラン−１，９’−キサンテン］−５−イルカルボキシアミド）エチル）アミノ）−６−オキソへキシル）（２−（Ｎ，３−ジメチル−３−（２，４，５−トリメチル−３，６−ジオキソシクロヘキサ−１，４−ジエン−１−イル）ブタンアミド）エチル）カルバメート；
５８２６：２−（６−（（（１−（３’，６’−ジヒドロキシ−３−オキソ−３Ｈ−スピロ［イソベンゾフラン−１，９’−キサンテン］−５−イル）−１，６−ジオキソ−９，１２−ジオキサ−２，５−ジアザテトラデカン−１４−イル）（２−（Ｎ，３−ジメチル−３−（２，４，５−トリメチル−３，６−ジオキソシクロヘキサ−１，４−ジエン−１−イル）ブタンアミド）エチル）カルバモイル）オキシ）ベンゾ［ｄ］チアゾール−２−イル）−４，５−ジヒドロチアゾール−４−カルボン酸；
５６８２：２−シアノベンゾ［ｄ］チアゾール−６−イル （１−（３’，６’−ジヒドロキシ−３−オキソ−３Ｈ−スピロ［イソベンゾフラン−１，９’−キサンテン］−５−イル）−１，６−ジオキソ−９，１２−ジオキサ−２，５−ジアザテトラデカン−１４−イル）（２−（Ｎ，３−ジメチル−３−（２，４，５−トリメチル−３，６−ジオキソシクロヘキサ−１，４−ジエン−１−イル）ブタンアミド）エチル）カルバメート；
５６４７：８−（（（２−シアノベンゾ［ｄ］チアゾール−６−イル）オキシ）カルボニル）−２３−（（Ｒ）−４−（（３Ｒ，５Ｒ，８Ｒ，９Ｓ，１０Ｓ，１３Ｒ，１４Ｓ，１７Ｒ）−３−ヒドロキシ−１０，１３−ジメチルヘキサデカヒドロ−１Ｈ−シクロペンタ［ａ］フェナントレン−１７−イル）ペンタンアミド）−２，５−ジメチル−４，１７−ジオキソ−２−（２，４，５−トリメチル−３，６−ジオキソシクロヘキサ−１，４−ジエン−１−イル）−１１，１４−ジオキサ−５，８，１８−トリアザテトラコサン−２４−酸；
５６６８：２−（６−（（（（２０Ｒ）−１５−カルボキシ−２０−（（３Ｒ，５Ｒ，８Ｒ，９Ｓ，１０Ｓ，１３Ｒ，１４Ｓ，１７Ｒ）−３−ヒドロキシ−１０，１３−ジメチルヘキサデカヒドロ−１Ｈ−シクロペンタ［ａ］フェナントレン−１７−イル）−９，１７−ジオキソ−３，６−ジオキサ−１０，１６−ジアザヘニコシル）（２−（Ｎ，３−ジメチル−３−（２，４，５−トリメチル−３，６−ジオキソシクロヘキサ−１，４−ジエン−１−イル）ブタンアミド）エチル）カルバモイル）オキシ）ベンゾ［ｄ］チアゾール−２−イル）−４，５−ジヒドロチアゾール−４−カルボン酸；
５６２５：８−（（（２−シアノベンゾ［ｄ］チアゾール−６−イル）オキシ）カルボニル）−２３−（（Ｒ）−４−（（３Ｒ，５Ｒ，８Ｒ，９Ｓ，１０Ｓ，１２Ｓ，１３Ｒ，１４Ｓ，１７Ｒ）−３，１２−ジヒドロキシ−１０，１３−ジメチルヘキサデカヒドロ−１Ｈ−シクロペンタ［ａ］フェナントレン−１７−イル）ペンタンアミド）−２，５−ジメチル−４，１７−ジオキソ−２−（２，４，５−トリメチル−３，６−ジオキソシクロヘキサ−１，４−ジエン−１−イル）−１１，１４−ジオキサ−５，８，１８−トリアザテトラコサン−２４−酸；
５６４９：２−（６−（（（（２０Ｒ）−１５−カルボキシ−２０−（（３Ｒ，５Ｒ，８Ｒ，９Ｓ，１０Ｓ，１２Ｓ，１３Ｒ，１４Ｓ，１７Ｒ）−３，１２−ジヒドロキシ−１０，１３−ジメチルヘキサデカヒドロ−１Ｈ−シクロペンタ［ａ］フェナントレン−１７−イル）−９，１７−ジオキソ−３，６−ジオキサ−１０，１６−ジアザヘニコシル）（２−（Ｎ，３−ジメチル−３−（２，４，５−トリメチル−３，６−ジオキソシクロヘキサ−１，４−ジエン−１−イル）ブタンアミド）エチル）カルバモイル）オキシ）ベンゾ［ｄ］チアゾール−２−イル）−４，５−ジヒドロチアゾール−４−カルボン酸；
５６５９：６−（６−（（（（２−シアノベンゾ［ｄ］チアゾール−６−イル）オキシ）カルボニル）（２−（Ｎ，３−ジメチル−３−（２，４，５−トリメチル−３，６−ジオキソシクロヘキサ−１，４−ジエン−１−イル）ブタンアミド）エチル）アミノ）ヘキサンアミド）−２−（（Ｒ）−４−（（３Ｒ，５Ｒ，８Ｒ，９Ｓ，１０Ｓ，１３Ｒ，１４Ｓ，１７Ｒ）−３−ヒドロキシ−１０，１３−ジメチルヘキサデカヒドロ−１Ｈ−シクロペンタ［ａ］フェナントレン−１７−イル）ペンタンアミド）ヘキサン酸；
５６６３：２−（６−（（（６−（（５−カルボキシ−５−（（Ｒ）−４−（（３Ｒ，５Ｒ，８Ｒ，９Ｓ，１０Ｓ，１３Ｒ，１４Ｓ，１７Ｒ）−３−ヒドロキシ−１０，１３−ジメチルヘキサデカヒドロ−１Ｈ−シクロペンタ［ａ］フェナントレン−１７−イル）ペンタンアミド）ペンチル）アミノ）−６−オキソへキシル）（２−（Ｎ，３−ジメチル−３−（２，４，５−トリメチル−３，６−ジオキソシクロヘキサ−１，４−ジエン−１−イル）ブタンアミド）エチル）カルバモイル）オキシ）ベンゾ［ｄ］チアゾール−２−イル）−４，５−ジヒドロチアゾール−４−カルボン酸；
５６５２：６−（４−（（（（２−シアノベンゾ［ｄ］チアゾール−６−イル）オキシ）カルボニル）（２−（Ｎ，３−ジメチル−３−（２，４，５−トリメチル−３，６−ジオキソシクロヘキサ−１，４−ジエン−１−イル）ブタンアミド）エチル）アミノ）ブタンアミド）−２−（（Ｒ）−４−（（３Ｒ，５Ｒ，８Ｒ，９Ｓ，１０Ｓ，１３Ｒ，１４Ｓ，１７Ｒ）−３−ヒドロキシ−１０，１３−ジメチルヘキサデカヒドロ−１Ｈ−シクロペンタ［ａ］フェナントレン−１７−イル）ペンタンアミド）ヘキサン酸；

５６６９：２−（６−（（（４−（（５−カルボキシ−５−（（Ｒ）−４−（（３Ｒ，５Ｒ，８Ｒ，９Ｓ，１０Ｓ，１３Ｒ，１４Ｓ，１７Ｒ）−３−ヒドロキシ−１０，１３−ジメチルヘキサデカヒドロ−１Ｈ−シクロペンタ［ａ］フェナントレン−１７−イル）ペンタンアミド）ペンチル）アミノ）−４−オキソブチル）（２−（Ｎ，３−ジメチル−３−（２，４，５−トリメチル−３，６−ジオキソシクロヘキサ−１，４−ジエン−１−イル）ブタンアミド）エチル）カルバモイル）オキシ）ベンゾ［ｄ］チアゾール−２−イル）−４，５−ジヒドロチアゾール−４−カルボン酸；
５６５３：６−（４−（（（（２−シアノベンゾ［ｄ］チアゾール−６−イル）オキシ）カルボニル）（２−（Ｎ，３−ジメチル−３−（２，４，５−トリメチル−３，６−ジオキソシクロヘキサ−１，４−ジエン−１−イル）ブタンアミド）エチル）アミノ）ブタンアミド）−２−（（Ｒ）−４−（（３Ｒ，５Ｒ，８Ｒ，９Ｓ，１０Ｓ，１２Ｓ，１３Ｒ，１４Ｓ，１７Ｒ）−３，１２−ジヒドロキシ−１０，１３−ジメチルヘキサデカヒドロ−１Ｈ−シクロペンタ［ａ］フェナントレン−１７−イル）ペンタンアミド）ヘキサン酸；
５６５６：２−（６−（（（４−（（５−カルボキシ−５−（（Ｒ）−４−（（３Ｒ，５Ｒ，８Ｒ，９Ｓ，１０Ｓ，１２Ｓ，１３Ｒ，１４Ｓ，１７Ｒ）−３，１２−ジヒドロキシ−１０，１３−ジメチルヘキサデカヒドロ−１Ｈ−シクロペンタ［ａ］フェナントレン−１７−イル）ペンタンアミド）ペンチル）アミノ）−４−オキソブチル）（２−（Ｎ，３−ジメチル−３−（２，４，５−トリメチル−３，６−ジオキソシクロヘキサ−１，４−ジエン−１−イル）ブタンアミド）エチル）カルバモイル）オキシ）ベンゾ［ｄ］チアゾール−２−イル）−４，５−ジヒドロチアゾール−４−カルボン酸；
５６６０：６−（６−（（（（２−シアノベンゾ［ｄ］チアゾール−６−イル）オキシ）カルボニル）（２−（Ｎ，３−ジメチル−３−（２，４，５−トリメチル−３，６−ジオキソシクロヘキサ−１，４−ジエン−１−イル）ブタンアミド）エチル）アミノ）ヘキサンアミド）−２−（（Ｒ）−４−（（３Ｒ，５Ｒ，８Ｒ，９Ｓ，１０Ｓ，１２Ｓ，１３Ｒ，１４Ｓ，１７Ｒ）−３，１２−ジヒドロキシ−１０，１３−ジメチルヘキサデカヒドロ−１Ｈ−シクロペンタ［ａ］フェナントレン−１７−イル）ペンタンアミド）ヘキサン酸；
５６６４：２−（６−（（（６−（（５−カルボキシ−５−（（Ｒ）−４−（（３Ｒ，５Ｒ，８Ｒ，９Ｓ，１０Ｓ，１２Ｓ，１３Ｒ，１４Ｓ，１７Ｒ）−３，１２−ジヒドロキシ−１０，１３−ジメチルヘキサデカヒドロ−１Ｈ−シクロペンタ［ａ］フェナントレン−１７−イル）ペンタンアミド）ペンチル）アミノ）−６−オキソへキシル）（２−（Ｎ，３−ジメチル−３−（２，４，５−トリメチル−３，６−ジオキソシクロヘキサ−１，４−ジエン−１−イル）ブタンアミド）エチル）カルバモイル）オキシ）ベンゾ［ｄ］チアゾール−２−イル）−４，５−ジヒドロチアゾール−４−カルボン酸；
５６６７：８−（（（２−シアノベンゾ［ｄ］チアゾール−６−イル）オキシ）カルボニル）−２３−（（Ｒ）−４−（（３Ｒ，５Ｓ，７Ｒ，８Ｒ，９Ｓ，１０Ｓ，１３Ｒ，１４Ｓ，１７Ｒ）−３，７−ジヒドロキシ−１０，１３−ジメチルヘキサデカヒドロ−１Ｈ−シクロペンタ［ａ］フェナントレン−１７−イル）ペンタンアミド）−２，５−ジメチル−４，１７−ジオキソ−２−（２，４，５−トリメチル−３，６−ジオキソシクロヘキサ−１，４−ジエン−１−イル）−１１，１４−ジオキサ−５，８，１８−トリアザテトラコサン−２４−酸；
５６５０：２−（６−（（（（２０Ｒ）−１５−カルボキシ−２０−（（３Ｒ，５Ｓ，７Ｒ，８Ｒ，９Ｓ，１０Ｓ，１３Ｒ，１４Ｓ，１７Ｒ）−３，７−ジヒドロキシ−１０，１３−ジメチルヘキサデカヒドロ−１Ｈ−シクロペンタ［ａ］フェナントレン−１７−イル）−９，１７−ジオキソ−３，６−ジオキサ−１０，１６−ジアザヘニコシル）（２−（Ｎ，３−ジメチル−３−（２，４，５−トリメチル−３，６−ジオキソシクロヘキサ−１，４−ジエン−１−イル）ブタンアミド）エチル）カルバモイル）オキシ）ベンゾ［ｄ］チアゾール−２−イル）−４，５−ジヒドロチアゾール−４−カルボン酸；
５６４８：８−（（（２−シアノベンゾ［ｄ］チアゾール−６−イル）オキシ）カルボニル）−２３−（（Ｒ）−４−（（３Ｒ，５Ｓ，７Ｓ，８Ｒ，９Ｓ，１０Ｓ，１３Ｒ，１４Ｓ，１７Ｒ）−３，７−ジヒドロキシ−１０，１３−ジメチルヘキサデカヒドロ−１Ｈ−シクロペンタ［ａ］フェナントレン−１７−イル）ペンタンアミド）−２，５−ジメチル−４，１７−ジオキソ−２−（２，４，５−トリメチル−３，６−ジオキソシクロヘキサ−１，４−ジエン−１−イル）−１１，１４−ジオキサ−５，８，１８−トリアザテトラコサン−２４−酸；
５６５４：６−（４−（（（（２−シアノベンゾ［ｄ］チアゾール−６−イル）オキシ）カルボニル）（２−（Ｎ，３−ジメチル−３−（２，４，５−トリメチル−３，６−ジオキソシクロヘキサ−１，４−ジエン−１−イル）ブタンアミド）エチル）アミノ）ブタンアミド）−２−（（Ｒ）−４−（（３Ｒ，５Ｓ，７Ｒ，８Ｒ，９Ｓ，１０Ｓ，１３Ｒ，１４Ｓ，１７Ｒ）−３，７−ジヒドロキシ−１０，１３−ジメチルヘキサデカヒドロ−１Ｈ−シクロペンタ［ａ］フェナントレン−１７−イル）ペンタンアミド）ヘキサン酸；

５６５５：６−（４−（（（（２−シアノベンゾ［ｄ］チアゾール−６−イル）オキシ）カルボニル）（２−（Ｎ，３−ジメチル−３−（２，４，５−トリメチル−３，６−ジオキソシクロヘキサ−１，４−ジエン−１−イル）ブタンアミド）エチル）アミノ）ブタンアミド）−２−（（Ｒ）−４−（（３Ｒ，５Ｓ，７Ｓ，８Ｒ，９Ｓ，１０Ｓ，１３Ｒ，１４Ｓ，１７Ｒ）−３，７−ジヒドロキシ−１０，１３−ジメチルヘキサデカヒドロ−１Ｈ−シクロペンタ［ａ］フェナントレン−１７−イル）ペンタンアミド）ヘキサン酸；
５６６１：６−（６−（（（（２−シアノベンゾ［ｄ］チアゾール−６−イル）オキシ）カルボニル）（２−（Ｎ，３−ジメチル−３−（２，４，５−トリメチル−３，６−ジオキソシクロヘキサ−１，４−ジエン−１−イル）ブタンアミド）エチル）アミノ）ヘキサンアミド）−２−（（Ｒ）−４−（（３Ｒ，５Ｓ，７Ｒ，８Ｒ，９Ｓ，１０Ｓ，１３Ｒ，１４Ｓ，１７Ｒ）−３，７−ジヒドロキシ−１０，１３−ジメチルヘキサデカヒドロ−１Ｈ−シクロペンタ［ａ］フェナントレン−１７−イル）ペンタンアミド）ヘキサン酸；
５６６２：６−（６−（（（（２−シアノベンゾ［ｄ］チアゾール−６−イル）オキシ）カルボニル）（２−（Ｎ，３−ジメチル−３−（２，４，５−トリメチル−３，６−ジオキソシクロヘキサ−１，４−ジエン−１−イル）ブタンアミド）エチル）アミノ）ヘキサンアミド）−２−（（Ｒ）−４−（（３Ｒ，５Ｓ，７Ｓ，８Ｒ，９Ｓ，１０Ｓ，１３Ｒ，１４Ｓ，１７Ｒ）−３，７−ジヒドロキシ−１０，１３−ジメチルヘキサデカヒドロ−１Ｈ−シクロペンタ［ａ］フェナントレン−１７−イル）ペンタンアミド）ヘキサン酸；
５６８４：２−シアノベンゾ［ｄ］チアゾール−６−イル （４−（（２−（３’，６’−ジヒドロキシ−３−オキソ−３Ｈ−スピロ［イソベンゾフラン−１，９’−キサンテン］−５−カルボキシアミド）エチル）アミノ）−４−オキソブチル）（２−（Ｎ，３−ジメチル−３−（２，４，５−トリメチル−３，６−ジオキソシクロヘキサ−１，４−ジエン−１−イル）ブタンアミド）エチル）カルバメート；
５８２４：２−（６−（（（４−（（２−（３−カルボキシ−４−（３，６−ジヒドロキシ−９Ｈ−キサンテン−９−イル）ベンズアミド）エチル）アミノ）−４−オキソブチル）（２−（Ｎ，３−ジメチル−３−（２，４，５−トリメチル−３，６−ジオキソシクロヘキサ−１，４−ジエン−１−イル）ブタンアミド）エチル）カルバモイル）オキシ）ベンゾ［ｄ］チアゾール−２−イル）チアゾール−４−カルボン酸；
５８２５：２−（６−（（（６−（（２−（３’，６’−ジヒドロキシ−３−オキソ−３Ｈ−スピロ［イソベンゾフラン−１，９’−キサンテン］−５−イルカルボキシアミド）エチル）アミノ）−６−オキソへキシル）（２−（Ｎ，３−ジメチル−３−（２，４，５−トリメチル−３，６−ジオキソシクロヘキサ−１，４−ジエン−１−イル）ブタンアミド）エチル）カルバモイル）オキシ）ベンゾ［ｄ］チアゾール−２−イル）−４，５−ジヒドロチアゾール−４−カルボン酸；
５８３０：２−（６−（（（２−（Ｎ，３−ジメチル−３−（２，４，５−トリメチル−３，６−ジオキソシクロヘキサ−１，４−ジエン−１−イル）ブタンアミド）エチル）（（１６Ｒ，１８Ｓ，Ｅ）−２０−（４−（４−フルオロフェニル）−６−イソプロピル−２−（Ｎ−メチルメチルスルホンアミド）ピリミジン−５−イル）−１６，１８−ジヒドロキシ−９，１４−ジオキソ−３，６−ジオキサ−１０，１３−ジアザイコス−１９−エン−１−イル）カルバモイル）オキシ）ベンゾ［ｄ］チアゾール−２−イル）−４，５−ジヒドロチアゾール−４−カルボン酸；
５８３１：２−（６−（（（２−（Ｎ，３−ジメチル−３−（２，４，５−トリメチル−３，６−ジオキソシクロヘキサ−１，４−ジエン−１−イル）ブタンアミド）エチル）（（１９Ｒ，２１Ｓ，Ｅ）−２３−（４−（４−フルオロフェニル）−６−イソプロピル−２−（Ｎ−メチルメチルスルホンアミド）ピリミジン−５−イル）−１９，２１−ジヒドロキシ−１２，１７−ジオキソ−３，６，９−トリオキサ−１３，１６−ジアザトリコサ−２２−エン−１−イル）カルバモイル）オキシ）ベンゾ［ｄ］チアゾール−２−イル）−４，５−ジヒドロチアゾール−４−カルボン酸；
５８２７：２−（６−（（（（Ｓ）−１８−（（３Ｓ，５Ｒ，７Ｓ，８Ｓ，９Ｒ，１０Ｒ，１３Ｓ，１４Ｒ，１７Ｓ）−３，７−ジヒドロキシ−１０，１３−ジメチルヘキサデカヒドロ−１Ｈ−シクロペンタ［ａ］フェナントレン−１７−イル）−９，１５−ジオキソ−３，６−ジオキサ−１０，１４−ジアザノナデシル）（２−（Ｎ，３−ジメチル−３−（２，４，５−トリメチル−３，６−ジオキソシクロヘキサ−１，４−ジエン−１−イル）ブタンアミド）エチル）カルバモイル）オキシ）ベンゾ［ｄ］チアゾール−２−イル）−４，５−ジヒドロチアゾール−４−カルボン酸；
５８２８：２−（６−（（（（Ｓ）−２１−（（３Ｓ，５Ｒ，７Ｓ，８Ｓ，９Ｒ，１０Ｒ，１３Ｓ，１４Ｒ，１７Ｓ）−３，７−ジヒドロキシ−１０，１３−ジメチルヘキサデカヒドロ−１Ｈ−シクロペンタ［ａ］フェナントレン−１７−イル）−１２，１８−ジオキソ−３，６，９−トリオキサ−１３，１７−ジアザドコシル）（２−（Ｎ，３−ジメチル−３−（２，４，５−トリメチル−３，６−ジオキソシクロヘキサ−１，４−ジエン−１−イル）ブタンアミド）エチル）カルバモイル）オキシ）ベンゾ［ｄ］チアゾール−２−イル）−４，５−ジヒドロチアゾール−４−カルボン酸；
５８２９：２−（６−（（（（Ｓ）−２４−（（３Ｓ，５Ｒ，７Ｓ，８Ｓ，９Ｒ，１０Ｒ，１３Ｓ，１４Ｒ，１７Ｓ）−３，７−ジヒドロキシ−１０，１３−ジメチルヘキサデカヒドロ−１Ｈ−シクロペンタ［ａ］フェナントレン−１７−イル）−１５，２１−ジオキソ−３，６，９，１２−テトラオキサ−１６，２０−ジアザペンタコシル）（２−（Ｎ，３−ジメチル−３−（２，４，５−トリメチル−３，６−ジオキソシクロヘキサ−１，４−ジエン−１−イル）ブタンアミド）エチル）カルバモイル）オキシ）ベンゾ［ｄ］チアゾール−２−イル）−４，５−ジヒドロチアゾール−４−カルボン酸；
５８３２：（３Ｒ，６Ｒ，９Ｒ，１５Ｒ，１８Ｒ，２１Ｒ）−９−（（１Ｈ−インドール−３−イル）メチル）−３−（（（Ｒ）−１−アミノ−１−オキソ−３−フェニルプロパン−２−イル）カルバモイル）−２１−（１０−（（（２−（４−カルボキシ−４，５−ジヒドロチアゾール−２−イル）ベンゾ［ｄ］チアゾール−６−イル）オキシ）カルボニル）−１３，１６−ジメチル−１４−オキソ−１６−（２，４，５−トリメチル−３，６−ジオキソシクロヘキサ−１，４−ジエン−１−イル）−４，７−ジオキサ−１０，１３−ジアザヘプタデカンアミド）−１８−（４−ヒドロキシベンジル）−６，１５−ビス（２−（メチルチオ）エチル）−５，８，１１，１４，１７，２０−ヘキサオキソ−４，７，１０，１３，１６，１９−ヘキサアザトリコサン−１，２３−二酸；
２−（６−（（（２−（２−（３−（（３−（（（８Ｒ，９Ｓ，１３Ｓ，１４Ｓ，１７Ｓ）−１７−（（（３Ｓ，４Ｒ，６Ｒ）−６−カルボキシ−３，４，５−トリヒドロキシテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）オキシ）−１３−メチル−７，８，９，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７−デカヒドロ−６Ｈ−シクロペンタ［ａ］フェナントレン−３−イル）オキシ）プロピル）アミノ）−３−オキソプロポキシ）エトキシ）エチル）（２−（Ｎ，３−ジメチル−３−（２，４，５−トリメチル−３，６−ジオキソシクロヘキサ−１，４−ジエン−１−イル）ブタンアミド）エチル）カルバモイル）オキシ）ベンゾ［ｄ］チアゾール−２−イル）−４，５−ジヒドロチアゾール−４−カルボン酸；

またはそれらの塩からなる群から選択される。
ある実施形態では、標識された物質は、標識された抗体であってよい。標識された抗体は、標識されたモノクローナル抗体（ｍＡｂ）であってよい（図１４参照）。標識された抗体は、ＰＢＩ−５５０８で標識されたＨｅｒｃｅｐｔｉｎであってよい。
ある実施形態では、標識された物質は、標識された治療用薬物であってよい。標識された治療用薬物は、標識された胆汁酸であってよい。標識された胆汁酸は、ＰＢＩ−５６５１、ＰＢＩ−５６５８、ＰＢＩ−５６６６、ＰＢＩ−５６４８、ＰＢＩ−５６５５、もしくはＰＢＩ−５６６２などの標識されたＵＤＣＡ、ＰＢＩ−５６５７、ＰＢＩ−５６６５、ＰＢＩ−５６６７、ＰＢＩ−５６５０、ＰＢＩ−５６５４、ＰＢＩ−５６６１、ＰＢＩ−５８２７、ＰＢＩ−５８２８、もしくはＰＢＩ−５８２９などの標識されたＣＤＣＡ、ＰＢＩ−５６４７、ＰＢＩ−５６６８、ＰＢＩ−５６５９、ＰＢＩ−５６６３、ＰＢＩ−５６５２、もしくはＰＢＩ−５６６９などの標識されたＬＣＡ、またはＰＢＩ−５６２５、ＰＢＩ−５６４９、ＰＢＩ−５６５３、ＰＢＩ−５６５６、ＰＢＩ−５６６０、もしくはＰＢＩ−５６６４などの標識されたＤＣＡであってよい。標識された薬物は、標識されたスタチンであってよい。標識されたスタチンは、ＰＢＩ−５８３０またはＰＢＩ−５８３１などの標識されたロスバスタチンであってよい。標識された薬物は、標識されたエストラジオールであってよい。標識されたエストラジオールは、
などの、標識されたエストラジオールグルクロニドであってよい。
ある実施形態では、標識された物質は、固体−液体ナノ粒子であってよい。例えば、標識された物質は、標識された金ナノ粒子（図１５参照）であってよい。標識された金ナノ粒子は、ＰＢＩ−５９０７、ＰＢＩ−５９０８、ＰＢＩ−５９０９、ＰＢＩ−５９１０、ＰＢＩ−５９１１、またはＰＢＩ−５９１２であってよい。
ある実施形態では、標識された物質は、標識されたペプチドであってよい。ペプチドは、ＣＣＫ−８などのコレシストキニン（ＣＣＫ）であってよい。標識されたペプチドは、ＰＢＩ−５８３２であってよい。
ある実施形態では、標識された物質は、標識された蛍光分子であってよい。標識された蛍光分子は、ＰＢＩ−５６８３、ＰＢＩ−５８２６、ＰＢＩ−５６８２、ＰＢＩ−５６８４、ＰＢＩ−５８２４、またはＰＢＩ−５８２５などの標識されたＦＡＭジアミンであってよい。
ある実施形態では、標識された物質は、標識されたＰＡＭＡＭデンドリマー（図１６参照）であってよい。ある実施形態では、標識された物質は、標識されたオリゴヌクレオチドまたは標識されたペプチド−オリゴヌクレオチド結合体であってよい。例えば、標識された物質は、Ｐ−糖タンパク質発現のアンチセンス阻害のための、標識されたオリゴヌクレオチドまたは標識されたペプチド−オリゴヌクレオチド結合体であってよい（図１７参照）。
５．方法
本発明の化合物は、細胞による取り込みに関するさまざまな用途に向けて、物質を共有結合で標識するための効果的なツールを提供する。標識された物質は、生体試料（例えば、細胞、組織、及び臓器）における関心生体分子の取り込みの定量化すること、薬物送達の有効性、治療処置の有効性を監視すること、薬物動態、薬物−薬物相互作用及び薬物毒性をプロファイリングすること、脂肪酸やグルコースなどの細胞内の代謝状態を監視すること、及びコレステロールの恒常性維持を検出することを可能にする。
細胞による取り込みの測定は、以下において重要な部分であることが多い。科学的な研究開発、薬物のデザイン、探索及び最適化、系統発生的分類、個人の遺伝子型判定、親子鑑定及び法医学的な鑑定、環境試験、診断、予後診断、及び／または病状の処置。
ａ．細胞による取り込みの評価方法
いくつかの態様では、細胞による物質の取り込みの評価方法が提供される。当該方法は、細胞を含む試料と上で詳細に説明した標識された物質との接触と、光放出を検出し、それによって、光放出の検出が、細胞による当該物質の取り込みを示す検出と、を含んでいてもよい。当該物質が細胞に取り込まれることで、当該化合物の還元及び遊離レポーター部分の生成をもたらす。
（１）蛍光レポーター部分
いくつかの実施形態では、レポーター部分は、蛍光レポーター部分を含んでいてもよい。蛍光レポーター部分は、蛍光団を含んでいてもよい。試料を光波長に暴露し、遊離レポーター部分が生成する蛍光を検出することで、光放出を検出する。対照試料の蛍光または蛍光波長と比較して、蛍光における増加または蛍光波長における変化があれば、細胞によって物質が取り込まれたことを示す。対照試料は、細胞を含まない試料媒体単独、細胞を含むが、実験処理は実施していない試料、または標識された物質と接触していない試料であってよい。蛍光は、細胞内または細胞外で検出されてよい。開示のキノン標識用部分の還元不能なアナログを対照標識として使用してもよい。
（２）生物発光レポーター部分
いくつかの態様では、レポーター部分は、生物発光レポーター部分を含んでいてもよい。生物発光レポーター部分は、ルシフェラーゼのプロ基質を含んでいてもよい。いくつかの実施形態では、細胞は、ルシフェラーゼを含んでいる。ルシフェラーゼは、細胞において発現していてもよい。光放出は、遊離レポーター部分を利用して、ルシフェラーゼによって生成する発光を検出することによって検出される。何らかの光放出を検出することで、細胞による物質の取り込みを示してよい。あるいは、試料の発光は、対照試料の発光と比較してよく、試料の発光が対照試料の発光より強い場合、細胞による物質の取り込みを示す。対照試料は、標識された物質と接触してない試料であってよい。発光は、細胞内または細胞外で検出されてよい。
いくつかの実施形態では、細胞はルシフェラーゼを含んでいないか、または発現しておらず、ルシフェラーゼは、試料に添加される。光放出は、遊離レポーター部分をを利用して、ルシフェラーゼによって生成される発光を検出することによって検出され、遊離したレポーター部分は、細胞外へ出てもよく、または細胞可溶化物に存在していてもよい。何らかの光放出を検出することで、細胞による物質の取り込みを示してよい。あるいは、試料の発光は、対照試料の発光と比較してよく、試料の発光が対照試料の発光より強い場合、細胞による物質の取り込みを示す。対照試料は、細胞を含まない試料媒体単独、細胞を含むが、実験処理は実施していない試料、または標識された物質と接触していない試料であってよい。発光は、細胞内または細胞外で検出されてよい。開示のキノン標識用部分の還元不能なアナログを対照標識として使用してもよい。
（３）試料
標識された物質は、生体成分を含む試料と共に使用してよい。試料は、試験管内または生体内で、細胞、組織、または臓器を含んでいてもよい。化合物は、使用する濃度内で生きた細胞及び他の生体成分に対して一般に無毒である。
細胞には、例えば、酵母細胞、トリの細胞、植物細胞、昆虫細胞、または限定はされないが、ヒト、サル、マウス、イヌ、ウシ、ウマ、ネコ、ヒツジ、ヤギもしくはブタの細胞を含む哺乳動物の細胞といった真核細胞、あるいは原核細胞、あるいは２つ以上の異なる臓器由来の細胞、あるいは細胞可溶化物、あるいはそれらの上清が含まれる。細胞は、組み換え技術を介して遺伝学的に改変されていなくてよく（非組み換え細胞）、あるいは組み換えＤＮＡで一過性にトランスフェクトされ、及び／もしくはそのゲノムが組み換えＤＮＡと共に安定的に複製される組み換え細胞であってよく、またはそのゲノムが、プロモーター、イントロンもしくはオープンリーディングフレームの阻害などのように、遺伝子を阻害するように改変された組み換え細胞であってよく、または、１つのＤＮＡ断片が別のもので置換されるように改変された組み換え細胞であってよい。組み換えＤＮＡまたは置換ＤＮＡ断片は、本発明の方法によって検出される分子をコードしていてよく、検出される分子のレベルもしくは活性を変える部分をコードしていてよく、及び／または当該分子のレベルもしくは活性を変える分子もしくは部分と関連していない遺伝子産物をコードしていてよい。細胞は、ルシフェラーゼを発現していても、していなくてもよい。
（４）接触
標識された物質は、当該化合物と、関心試料成分との接触を容易にする方法で試料と混合されてよい。典型的には、標識された物質または標識された物質を含む溶液は、単に試料に添加される。
指定の標識された物質の細胞による取り込みレベルは、エレクトロポレーション、ショック処理、または高濃度の細胞外ＡＴＰなどの細胞膜透過処理を実施して、または実施せずに監視できる。あるいは、指定の標識された物質は、加圧マイクロインジェクション、スクレープ負荷、パッチクランプ法、または食作用などによって物理的に細胞へ挿入して監視できる。
追加の検出試薬は、当業者に一般に知られる方法により、特定の細胞成分、細胞内物質、または細胞の状態が存在することで、検出可能な応答を典型的には生成する。追加の検出試薬が、対象となる標識された物質のそれとは異なる分光特性を有するか、またはそのような分光特性を有する生成物を生成するときは、多色を使用することが可能である。このことは、追加の検出試薬が、色素または色素結合体であり、標識された物質のそれとは区別して検出可能な分光特性を有している場合に、特に有用である。
ある実施形態では、開示の標識用試薬及び標識された物質を使用するとき、洗浄手順は、不要である。
（５）光の検出
標識された物質は、検出可能な光学応答または光出力が得られるように選択された条件下で、標識された物質と、細胞を含む関心試料とを上で説明したように混合することで、一般に利用される。典型的には、試料の特定の特性は、光学応答と、標準または予想される応答とを比較して決定される。試料は、光学応答を誘発するように選択された波長で照射されてよい。あるいは、試料からの光放出は、ルシフェラーゼ及び生物発光レポーター部分によって生成する光出力（発光）を測定できる読み取り装置で測定されてよく、例えば、発光測定器または光電子増倍管を使用して検出されてよい。光学応答または光出力は、継時的に測定されてもよく、例えば、同一の反応容器で、秒、分、時間などの期間で継時的に測定されてもよい。
検出可能な光学応答は、観察または機器でのいずれかによって検出可能な光学シグナルの変化または生成を意味する。典型的には、検出可能な応答は、蛍光または発光における変化であり、例えば、強度、蛍光もしくは発光の励起波長もしくは放出波長の波長分布、蛍光もしくは発光の寿命、蛍光もしくは発光の分極、またはそれらの組み合わせなどにおける変化である。シグナルの程度及び／または位置を、標準または予想される応答と比較することで、試料が所与の性質を有しているかどうか、及びどの程度有しているかが示される。
標識された物質との接触後または接触中の任意の時間に、試料は、検出可能な光学応答が得られるように選択された光波長で照射され、光学応答を検出するための手段で観察される。本発明の化合物を照射するのに有用な機器には、限定はされないが、携帯型紫外線ランプ、水銀アークランプ、キセノンランプ、レーザー、及びレーザーダイオードが含まれる。こうした照射源は、レーザースキャナー、蛍光マイクロプレートリーダー、標準もしくは小型蛍光光度計、またはクロマトグラフィーの検出器に任意選択で統合されている。
光学応答または光出力は、目視検査または以下の装置のいずれかを使用することによって、任意選択で検出されてよい。ＣＣＤカメラ、ビデオカメラ、写真フィルム、レーザー走査装置、蛍光光度計、光ダイオード、光量子計、落射蛍光顕微鏡、走査顕微鏡、フローサイトメーター、蛍光マイクロプレートリーダー、または光電子増倍管などのシグナルを増幅するための手段。試料がフローサイトメーターを使用して試験されるときは、試料の試験は、蛍光応答に応じた試料部分の選別を任意選択で含む。
６．キット
本発明の１つの態様は、上で説明した本発明の化合物のいずれかを使用して、さまざまなアッセイの実施を容易にするキットをつくることである。本発明のキットは、標識用試薬、物質、標識された物質、またはそれらのいずれかの組み合わせを含んでいてよい。キットは、１つまたは複数の緩衝物質を任意選択でさらに含み、当該緩衝物質は、典型的には、水溶液として存在する。本発明のキットは、遊離の標識された試薬を検出するための、検出試薬などの成分を、少なくとも１つ任意選択でさらに含む。検出試薬は、上で説明したルシフェラーゼ、ならびに／または緩衝剤、塩、酵素、Ｄ−システインなどの酵素の補因子、及び同様の緩衝剤などの検出アッセイを実施する上で必要になる他の試薬を含んでいてよい。例えば、検出試薬は、Ｌｕｃｉｆｅｒｉｎ Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ Ｒｅａｇｅｎｔ（Ｐｒｏｍｅｇａ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）を含んでいてよい。本発明のキットは、得られる標識された物質を精製するための精製媒体、発光及び／もしくは蛍光標準物質、酵素、酵素阻害剤、有機溶媒、関心タンパク質もしくは関心標的に融合したルシフェラーゼタンパク質を含む融合タンパク質などの融合タンパク質の発現用コンストラクト、融合タンパク質、または本発明のアッセイ実施用の説明書を任意選択でさらに含んでいてよい。他の実施形態では、キットは、遺伝子改変された細胞、または関心タンパク質もしくは関心標的に融合したルシフェラーゼタンパク質を含む融合などの遺伝子融合用のベクターを含んでいてもよい。使用のための説明書を任意選択で含んでいてよい。
７．実施例
前述の内容は、次の実施例を参照することによりさらに理解できるが、次の実施例は、例示を目的とするものであり、本発明の範囲を限定する意図はない。
実施例１
Ｎ−［（ＰＥＧ）4−ＣＯＯ−ｔ−Ｂｕ］−Ｎ’−Ｂｏｃ−Ｎ’−メチル−エチレンジアミンの合成
Ｎ−ｔ−ＢｕＯＯＣ−（ＰＥＧ）4−アミン（０．５５７ｇ、１．７３ｍｍｏｌ）を２０ｍｌのメタノール中に含む溶液に（Ｎ−メチル）−Ｎ−Ｂｏｃアセトアルデヒド（０．３ｇ、１．７３ｍｍｏｌ）を添加した。混合物を室温で３時間撹拌した。ＮａＢＨ4（０．１９６ｇ、５．２ｍｍｏｌ）を混合物に０℃で添加し、得られた混合物を０℃で１時間撹拌してから、室温で１時間撹拌した。水を５ｍｌ添加して反応を停止した。溶媒を除去後、水を５ｍｌ添加し、混合物を塩化メチレンで３回抽出した。統合した有機層をＮａ2ＳＯ4で脱水し、生成物をヘプタン／酢酸エチル、次いで塩化メチレン／メタノールを使用したフラッシュシリカクロマトグラフィーによって精製し、収率６４．５％（０．５３５ｇ）で得た。1Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、ＣＤ2Ｃｌ2）δ ｐｐｍ：３．５−３．８（ｍ，１８Ｈ，ＣＨ2）、３．４５（ｂｒ，２Ｈ，ＣＨ2）、２．９８（ｂｒ，２Ｈ，ＣＨ2）、２．８３（ｓ，３Ｈ，ＮＣＨ3）、２．４６（ｔ，２Ｈ，ＣＯＣＨ2）、１．４２（ｓ，１８Ｈ，ＣＨ3）；ＭＳ−ＥＳＩ（ｍ／ｅ）：４７９．６［Ｍ＋Ｈ］。
Ｎ−［（ＰＥＧ）4ＣＯＯ−ｔ−Ｂｕ］−Ｎ’−Ｂｏｃ−Ｎ’−メチル−エチレン−ジアミンフリマジンカルバメートの合成
フリマジン（０．２０ｇ、０．５２６ｍｍｏｌ）及びビス（ペンタフルオロフェニル）ジカーボネート（０．２７６ｇ、０．６３０ｍｍｏｌ）を１０ｍｌの脱水ＴＨＦ中に含む混合物にＴＥＡ（０．１０６ｍｇ、１．０５ｍｍｏｌ）を室温、アルゴン雰囲気下で添加した。混合物を２〜３分撹拌し、Ｎ−［（ＰＥＧ）4ＣＯＯ−ｔ−Ｂｕ］−Ｎ’−Ｂｏｃ−Ｎ’−メチル−エチレンジアミン（０．５５３ｍｇ、１．１６ｍｍｏｌ）を添加した。得られた混合物を室温で３０分撹拌した。化合物をヘプタン／酢酸エチルを溶離液として使用したフラッシュカラムクロマトグラフィーによって精製し、生成物を２５．８％（０．１２ｇ）の収率で得た。ＭＳ−ＥＳＩ（ｍ／ｅ）：８８６．６［Ｍ＋Ｈ］。
Ｎ−［（ＰＥＧ）4ＣＯＯＨ］−（Ｎ’−メチル）−エチレンジアミンフリマジンカルバメートの合成
Ｎ−［（ＰＥＧ）4ＣＯＯ−ｔ−Ｂｕ］−Ｎ’−Ｂｏｃ−Ｎ−メチル−エチレンジアミンフリマジンカルバメート（０．１２ｇ、０．１３６ｍｍｏｌ）及びトリイソプロピルシラン（５０ｕｌ）を１０ｍｌの塩化メチレン及びＴＦＡ（体積比で１：１）に溶解し、混合物を室温で２時間撹拌した。溶媒を除去後、残留物を高減圧下で一晩乾燥し、生成物を次の手順でそのまま使用した。
番号５４６３の合成
３−メチル−３−（２，４，５−トリメチル−３，６−ジオキソシクロヘキサ−１，４−ジエン−１−イル）ブタン酸（１０７ｍｇ、０．４２８ｍｍｏｌ）及びイソブチルクロロホルメート（５８．４ｍｇ、０．４２７ｍｍｏｌ）を１０ｍｌの脱水ＴＨＦ中に含む溶液にＮ−メチルモルホリン（８６．５ｍｇ、０．８５５ｍｍｏｌ）を０℃で添加した。得られた混合物を０℃で３０分撹拌してから、Ｎ’−メチル−Ｎ−［（ＰＥＧ）4ＣＯＯＨ］エチレン−ジアミン］フリマジンカルバメートを含む５ｍｌのＣＨ2Ｃｌ2を添加し、得られた混合物を１時間撹拌した。化合物は、ヘプタン及び酢酸エチルを溶離液として使用したフラッシュシリカカラムクロマトグラフィーでそのまま精製し、生成物を７６．６％（１０５ｍｇ）の収率で得た。ＭＳ−ＥＳＩ（ｍ／ｅ）：９６２．５［Ｍ＋Ｈ］。
実施例２
Ｎ−［（ＰＥＧ）3−ＣＯＯ−ｔ−Ｂｕ］−Ｎ’−Ｂｏｃ−Ｎ’−メチル−エチレン−ジアミンの合成
ｔ−Ｂｕ−（ＰＥＧ）3−アミン（１．０１ｇ、３．６４ｍｍｏｌ）を２０ｍｌのメタノール中に含む溶液に（Ｎ−メチル）−Ｎ−Ｂｏｃアセトアルデヒド（０．６３ｇ、３．６４ｍｍｏｌ）を添加した。混合物を室温で３時間撹拌した。混合物にＮａＢＨ4（０．４１２ｇ、１０．９ｍｍｏｌ）を０℃で添加し、得られた混合物を０℃で１時間撹拌してから室温で１時間撹拌した。水を５ｍｌ添加して反応を停止した。溶媒を除去後、水を５ｍｌ添加し、混合物を塩化メチレンで３回抽出した。統合した有機層をＮａ2ＳＯ4で脱水し、生成物をヘプタン／酢酸エチル、次いで塩化メチレン／メタノールを使用したフラッシュシリカクロマトグラフィーによって精製し、７２％（１．１４ｇ）の収率で得た。1Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、ＣＤ2Ｃｌ2）δ ｐｐｍ：３．６８（ｔ，２Ｈ，ＯＣＨ2）、３．５６−３．６０（ｂｒ，１０Ｈ，ＣＨ2）、３．５３（ｔ，２Ｈ，ＯＣＨ2）、３．２９（ｔ，２Ｈ，ＣＨ２）、２．８５（ｓ，３Ｈ，ＮＣＨ3）、２．７−２．８（ｍ，４Ｈ，ＮＣＨ２）、２．４７（ｔ，２Ｈ，ＣＯＣＨ2）、１．４４（ｓ，１８Ｈ，ＣＨ3）；ＭＳ−ＥＳＩ（ｍ／ｅ）：４３５．５［Ｍ＋Ｈ］。
Ｎ−［（ＰＥＧ）3ＣＯＯ−ｔ−Ｂｕ］−Ｎ’−Ｂｏｃ−Ｎ’−メチル−エチレン−ジアミンセレンテラジン−Ｈ，Ｈ−カルバメートの合成
セレンテラジンＨ，Ｈ（０．６０ｇ、１．５４ｍｍｏｌ）及びビス（ペンタ−フルオロフェニル）ジカーボネート（０．７４ｇ、１．６９ｍｍｏｌ）を３０ｍｌの脱水ＴＨＦ中に含む混合物にＴＥＡ（０．３１１ｇ、３．０７ｍｍｏｌ）を室温、アルゴン雰囲気下で添加した。混合物を２〜３分撹拌し、Ｎ−［（ＰＥＧ）3ＣＯＯ−ｔ−Ｂｕ］−Ｎ’−Ｂｏｃ−Ｎ’−メチルエチレンジアミン（１．３４ｇ、３．０７ｍｍｏｌ）を添加した。得られた混合物を室温で３０分間撹拌した。化合物をヘプタン／酢酸エチルを溶離液として使用したフラッシュカラムクロマトグラフィーによって精製し、生成物を収率７０．３％（０．９２ｇ）の収率で得た。ＭＳ−ＥＳＩ（ｍ／ｅ）：８５２．７［Ｍ＋Ｈ］。
Ｎ−（ＰＥＧ）3ＣＯＯＨ−Ｎ’−メチル−エチレンジアミンセレンテラジンＨ，Ｈ−カルバメートの合成
Ｎ−［（ＰＥＧ）3ＣＯＯ−ｔ−Ｂｕ］−Ｎ’−Ｂｏｃ−Ｎ−メチル−エチレンジアミンセレンテラジンＨ，Ｈ−カルバメート（０．９２ｇ、０．１３６ｍｍｏｌ）及びトリイソプロピルシラン（１００ｕｌ）を３０ｍｌの塩化メチレン及びＴＦＡ（体積比で１：１）に溶解し、混合物を室温で２時間撹拌した。溶媒を除去後、残留物を高減圧下で一晩乾燥し、生成物を、次の手順でそのまま使用した。
番号５４７０の合成
３−メチル−３−（２，４，５−トリメチル−３，６−ジオキソシクロヘキサ−１，４−ジエン−１−イル）ブタン酸（８１０ｍｇ、３．２４ｍｍｏｌ）及びイソブチルクロロホルメート（４４２ｍｇ、３．２４ｍｍｏｌ）を３０ｍｌの脱水ＴＨＦ中に含む溶液にＮ−メチルモルホリン（６５５ｍｇ、６．４８ｍｍｏｌ）を０℃で添加した。得られた混合物を０℃で３０分撹拌し、Ｎ’−メチル−Ｎ−［（ＰＥＧ）3ＣＯＯＨ］エチレンジアミンセレンテラジンＨ，Ｈ−カルバメート（０．９２ｇ）を含む１０ｍｌのＣＨ2Ｃｌ2を添加し、得られた混合物を１時間撹拌した。化合物は、ヘプタン及び酢酸エチルを溶離液として使用したフラッシュシリカカラムクロマトグラフィーでそのまま精製し、生成物を６１％（６１１ｍｇ）の収率で得た。ＭＳ−ＥＳＩ（ｍ／ｅ）：９２８．７［Ｍ＋Ｈ］；ＨＰＬＣ ２５４ｎｍにおいて９８．２％。
実施例３
Ｎ−［（ＰＥＧ）2−ＣＯＯ−ｔ−Ｂｕ］−Ｎ’−Ｂｏｃ−Ｎ’−メチル−エチレンジアミンの合成
Ｎ−（ＰＥＧ）2ＣＯＯ−ｔ−Ｂｕ−アミン（１．０８ｇ、４．６２ｍｍｏｌ）を５０ｍｌのメタノール中に含む溶液に（Ｎ−メチル）−Ｎ−Ｂｏｃアセトアルデヒド（０．８ｇ、４．６２ｍｍｏｌ）を添加した。混合物を室温で３時間撹拌した。混合物にＮａＢＨ4（０．５２４、１３．９ｍｍｏｌ）を０℃で添加し、得られた混合物を０℃で１時間撹拌してから、室温で１時間撹拌した。水を５ｍｌ添加して反応を停止した。溶媒を除去後、水を５ｍｌ添加してから、混合物を塩化メチレンで３回抽出した。統合した有機層をＮａ2ＳＯ4で脱水し、生成物をヘプタン／酢酸エチル、次いで塩化メチレン／メタノールを使用したフラッシュシリカクロマトグラフィーによって精製し、７７．６％（１．４０ｇ）の収率で得た。1Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、ＣＤ2Ｃｌ2）δ ｐｐｍ：３．６７（ｔ，２Ｈ，ＯＣＨ2）、３．５６−３．６０（ｂｒ，６Ｈ，ＯＣＨ2）、３．２９（ｔ，２Ｈ，ＣＨ2）、２．８５（ｓ，３Ｈ，ＮＣＨ3）、２．７−２．８（ｍ，４Ｈ，ＮＣＨ２）、２．４６（ｔ，２Ｈ，ＣＯＣＨ2）、１．４５（ｓ，１８Ｈ，ＣＨ3）；ＭＳ−ＥＳＩ（ｍ／ｅ）：３９１．４［Ｍ＋Ｈ］。
Ｎ−［（ＰＥＧ）2ＣＯＯ−ｔ−Ｂｕ］−Ｎ’−Ｂｏｃ−Ｎ’−メチル−エチレン−ジアミンセレンテラジン−Ｈ，Ｈ−カルバメートの合成
セレンテラジンＨ，Ｈ（０．６０ｇ、１．５４ｍｍｏｌ）及びビス（ペンタ−フルオロフェニル）ジカーボネート（０．７４ｇ、１．６９ｍｍｏｌ）を３０ｍｌの脱水ＴＨＦ中に含む混合物にＴＥＡ（０．３１１ｇ、３．０７ｍｍｏｌ）を室温、アルゴン雰囲気下で添加した。混合物を２〜３分撹拌し、Ｎ−［（ＰＥＧ）2ＣＯＯｔＢｕ］−Ｎ’−ＢＯＣ−Ｎ’−メチルエチレンジアミン（１．２０ｇ、３．０７ｍｍｏｌ）を添加した。得られた混合物を室温で３０分撹拌した。化合物をヘプタン／酢酸エチルを溶離液として使用したフラッシュカラムクロマトグラフィーによって精製し、生成物を７２．８％（０．９２ｇ）の収率で得た。ＭＳ−ＥＳＩ（ｍ／ｅ）：８０８．７［Ｍ＋Ｈ］。
Ｎ−［（ＰＥＧ）2ＣＯＯＨ］−Ｎ’−メチル−エチレンジアミンセレンテラジンＨ，Ｈ−カルバメートの合成
Ｎ−［（ＰＥＧ）2ＣＯＯ−ｔ−Ｂｕ］−Ｎ’−Ｂｏｃ−Ｎ−メチル−エチレンジアミンセレンテラジンＨ，Ｈ−カルバメート（０．９２ｇ、０．１３６ｍｍｏｌ）及びトリイソプロピルシラン（１００ｕｌ）を３０ｍｌの塩化メチレン及びＴＦＡ（体積比で１：１）に溶解し、混合物を室温で２時間撹拌した。溶媒を除去後、残留物を高減圧下で一晩乾燥し、生成物を次の手順でそのまま使用した。
番号５４７１の合成
３−メチル−３−（２，４，５−トリメチル−３，６−ジオキソシクロヘキサ−１，４−ジエン−１−イル）ブタン酸（８５５ｍｇ、３．４２ｍｍｏｌ）及びイソブチルクロロホルメート（４６６ｍｇ、３．４２ｍｍｏｌ）を４０ｍｌの脱水ＴＨＦ中に含む溶液にＮ−メチルモルホリン（６９１ｍｇ、６．８３ｍｍｏｌ）を０℃で添加した。得られた混合物を０℃で３０分間撹拌し、Ｎ’−メチル−Ｎ［（ＰＥＧ）2ＣＯＯＨ］エチレン−ジアミン］セレンテラジンＨ，Ｈ−カルバメート（０．９２ｇ）を含む１０ｍｌのＣＨ2Ｃｌ2を添加した。得られた混合物を１時間撹拌した。化合物は、ヘプタン及び酢酸エチルを溶離液として使用したフラッシュシリカカラムクロマトグラフィーでそのまま精製し、生成物を６８．５％（６９０ｍｇ）の収率で得た。ＭＳ−ＥＳＩ（ｍ／ｅ）：８８４．７［Ｍ＋Ｈ］；ＨＰＬＣ ２５４ｎｍにおいて９２．２％。
実施例４
Ｎ−［（ＰＥＧ）2ＣＯＯ−ｔ−Ｂｕ］−Ｎ’−Ｂｏｃ−Ｎ’−メチル−エチレン−ジアミン−２−シアノベンゾチアゾール−６−カルバメートの合成
６−ヒドロキシル−２−シアノベンゾチアゾール（１．０ｇ、５．６８ｍｍｏｌ）及びビス（ペンタ−フルオロフェニル）ジカーボネート（２．６８ｇ、１．６９ｍｍｏｌ）を１００ｍｌの脱水ＴＨＦ中に含む混合物にＴＥＡ（２．２２ｇ、５．６８ｍｍｏｌ）を室温で添加した。混合物を１０分間撹拌し、Ｎ−［（ＰＥＧ）２ＣＯＯｔＢｕ］−Ｎ’−ＢＯＣ−Ｎ’−メチルエチレンジアミン（２．２２ｇ、５．６８ｍｍｏｌ）を添加した。得られた混合物を室温で３０分間撹拌した。化合物をヘプタン／酢酸エチルを溶離液として使用したフラッシュカラムクロマトグラフィーによって精製し、生成物を１００％（３．４ｇ）の収率で得た。ＭＳ−ＥＳＩ（ｍ／ｅ）：５９３．３［Ｍ＋Ｈ］。
Ｎ−［（ＰＥＧ）2ＣＯＯＨ］−Ｎ’−メチル−エチレンジアミン−２−シアノベンゾチアゾール−６−カルバメートの合成
Ｎ−ｔ−ＢｕＯＯＣ−（ＰＥＧ）2−Ｎ’−Ｂｏｃ−Ｎ−メチル−エチレンジアミン−２−シアノベンゾチアゾール−６−カルバメート（２．０ｇ）及びトリイソプロピルシラン（１００ｕｌ）を６０ｍｌの塩化メチレン及びＴＦＡ（体積比で１：１）に溶解し、混合物を室温で４時間撹拌した。溶媒を除去後、残留物を高減圧下で一晩乾燥し、生成物を次の手順でそのまま使用した。
Ｎ−［（ＰＥＧ）2ＣＯＯＨ］−Ｎ’−メチル−Ｎ’−［３−メチル−３−（２，４，５−トリメチル−３，６−ジオキソシクロヘキサ−１，４−ジエン−１−イル）ブタン酸アミド］−エチレンジアミン−２−シアノベンゾチアゾール−６−カルバメートの合成
３−メチル−３−（２，４，５−トリメチル−３，６−ジオキソシクロヘキサ−１，４−ジエン−１−イル）ブタン酸（１．２７ｇ、５．０７ｍｍｏｌ）及びイソブチルクロロホルメート（６９１ｍｇ、５．０７ｍｍｏｌ）を５０ｍｌの脱水ＴＨＦ中に含む溶液にＮ−メチルモルホリン（９３２ｍｇ、９．２１ｍｍｏｌ）を０℃で添加した。得られた混合物を０℃で３０分間撹拌してから、Ｎ’−メチル−Ｎ［（ＰＥＧ）２ＣＯＯＨ］エチレンジアミン］−２−シアノベンゾチアゾール−６−カルバメート（１．０７ｇ、４．６１ｍｍｏｌ）を含む１５ｍｌのＣＨ2Ｃｌ2を添加し、得られた混合物を１時間撹拌した。化合物をヘプタン及び酢酸エチルを溶離液として使用したフラッシュシリカカラムクロマトグラフィーでそのまま精製してから、０．１％のギ酸／アセトニトリルを溶離液として使用したＨＰＬＣによってさらに精製した。ＭＳ−ＥＳＩ（ｍ／ｅ）：６６８．７［Ｍ＋Ｈ］；ＨＰＬＣ ３３０ｎｍにおいて９２．６％。
番号５５０８の合成
Ｎ−［（ＰＥＧ）2ＣＯＯＨ］−Ｎ’−メチル−Ｎ’−［３−メチル−３−（２，４，５−トリメチル−３，６−ジオキソシクロヘキサ−１，４−ジエン−１−イル）ブタン酸アミド］−エチレンジアミン−２−シアノベンゾチアゾール−６−カルバメート（２１０ｍｇ、０．３１４ｍｍｏｌ）及びＴＳＴＵ（４７３ｍｇ、１．５７ｍｍｏｌ）を２０ｍｌのアセトニトリル及び塩化メチレン（１：１）中に含む溶液にＤＩＰＥＡ（３２５ｍｇ、２．５１ｍｍｏｌ）を室温で添加した。混合物を３０分撹拌した。塩化メチレンを１２０ｍｌ添加し、得られた混合物をクエン酸（３０％）溶液で３回、水で２回洗浄した。有機層をＮａ2ＳＯ4で脱水した。化合物をヘプタン及び酢酸エチルで精製し、８７．３％（２１０ｍｇ）の収率で得た。ＭＳ−ＥＳＩ（ｍ／ｅ）：５９３．３［Ｍ＋Ｈ］；ＨＰＬＣ ３３０ｎｍにおいて９２．６％。ＭＳ−ＥＳＩ（ｍ／ｅ）：７６６．３［Ｍ＋Ｈ］；ＨＰＬＣ ２５４ｎｍにおいて９８．２％。
実施例５


方法３：ＵＤＣＡ−ｌｙｓＣＯＯＨの合成
リジン（２．４４ｇ、７．２０ｍｍｏｌ）及びＵＤＣＡ（１．１３ｇ、２．８８ｍｍｏｌ）の混合物に１２０ｍＬの塩化メチレン及び４−ジメチルアミノピリジン（１．０６ｇ、８．６４ｍｍｏｌ）を添加した。最後にＮ，Ｎ’−ジシクロヘキシルカルボジイミド（１．７８ｇ、８．６４ｍｍｏｌ）を添加し、室温で数日間撹拌した。その後、反応混合物をろ過してから、溶媒を除去した。その後、生成物をヘプタン／酢酸エチル勾配を使用したフラッシュシリカカラムクロマトグラフィーによって精製し、収率９０％（１．７６ｇ）で保護されたリジンを有する中間体を得た。その後、４０ｍＬの塩化メチレン及び１０％のトリイソプロピルシラン（ＴＩＰＳ）を含む３０ｍＬのＴＦＡの混合物に本化合物を溶解し、混合物を室温で５時間撹拌した。溶媒をトルエンで共蒸発させ、生成物を塩化メチレン／メタノールの勾配を使用したフラッシュシリカカラムクロマトグラフィーによって精製し、ＵＤＣＡ−ｌｙｓＣＯＯＨを６７％（９０１ｍｇ）の収率で得た。ＭＳ−ＥＳＩ（ｍ／ｅ）：５２１．５［Ｍ＋Ｈ］。
Ｎ−［（ＰＥＧ）2−ＣＯＯ−ｔ−Ｂｕ］−Ｎ’−Ｂｏｃ−Ｎ’−メチル−エチレンジアミンの合成
Ｎ−（ＰＥＧ）2ＣＯＯ−ｔ−Ｂｕ−アミン（３．１６ｇ、１３．５４ｍｍｏｌ）を１００ｍｌのメタノール中に含む溶液に（Ｎ−メチル）−Ｎ−Ｂｏｃアセトアルデヒド（２．３５ｇ、１３．５４ｍｍｏｌ）を添加した。混合物を室温で３時間撹拌した。混合物にＮａＢＨ4（１．５４ｇ、４０．６３ｍｍｏｌ）を０℃で添加し、得られた混合物を０℃で１時間撹拌してから、室温で１時間撹拌した。水を１５ｍｌ添加して反応を停止した。溶媒を除去後、水を１５ｍｌ添加し、混合物を塩化メチレンで３回抽出した。統合した有機層をＮａ2ＳＯ4で脱水し、生成物をヘプタン／酢酸エチル、次いで塩化メチレン／メタノールを使用したフラッシュシリカクロマトグラフィーによって精製し、６７％（３．５６ｇ）の収率で得た。
Ｎ−［（ＰＥＧ）2ＣＯＯ−ｔ−Ｂｕ］−Ｎ’−Ｂｏｃ−Ｎ’−メチル−エチレン−ジアミン６−ヒドロキシベンゾ［ｄ］チアゾール−２−カルボニトリル−カルバメートの合成
２−シアノ−６−ヒドロキシベンゾチアゾール（０．８０３ｇ、４．５６ｍｍｏｌ）及びビス（ペンタフルオロフェニル）カーボネート（１．９８ｇ、５．０２ｍｍｏｌ）を４０ｍｌの脱水ＴＨＦ中に含む混合物にＴＥＡ（０．２９３ｇ、２．８９ｍｍｏｌ）を室温、窒素雰囲気下で添加した。混合物を１時間撹拌してから、Ｎ−ｔ−ブチルＣＯＯ（ＰＥＧ）３−Ｎ’−ＢＯＣ−Ｎ’−メチルエチレンジアミン（３．５６ｇ、９．１２ｍｍｏｌ）を含む１８ｍＬの脱水ＴＨＦを添加した。得られた混合物を室温で３０分にわたって撹拌した後、溶媒を除去した。生成物の混合物を塩化メチレンに溶解し、飽和Ｋ2ＣＯ3溶液で３回、水で１回洗浄した後、有機層をＮａ2ＳＯ4で脱水した。化合物をヘプタン／酢酸エチルを溶離液として使用したフラッシュカラムクロマトグラフィーによって精製し、生成物を７０％（１．９０ｇ）の収率で得た。
Ｎ−［（ＰＥＧ）2ＣＯＯ−ｔ−Ｂｕ］−Ｎ’−メチル−エチレン−ジアミン−２−シアノベンゾチアゾール−６−カルバメートの合成
Ｎ−［（ＰＥＧ）2ＣＯＯ−ｔ−Ｂｕ］−Ｎ’−Ｂｏｃ−Ｎ’−メチル−エチレン−ジアミン６−ヒドロキシベンゾ［ｄ］チアゾール−２−カルボニトリル−カルバメート（１．９０ｇ、３．２１ｍｍｏｌ）を３０ｍＬのＣＨ2Ｃｌ2に氷上で溶解した後、チオアニソールを２６ｍＬ（３０％）添加した。ＴＦＡ（３０ｍＬ）を１０〜１５分にわたって氷上で徐々に添加した。その後、混合物を氷上で２０分間撹拌した後、室温で５時間撹拌した。反応後、溶媒を除去してから、生成物をヘプタン／酢酸エチルの勾配、次いで塩化メチレン／メタノールを使用したフラッシュカラムクロマトグラフィーによって精製し、５７％（０．７９７ｇ）の収率で得た。
Ｎ−［（ＰＥＧ）2ＣＯＯＨ］−Ｎ’−メチル−Ｎ’−［３−メチル−３−（２，４，５−トリメチル−３，６−ジオキソシクロヘキサ−１，４−ジエン−１−イル）ブタン酸アミド］−エチレンジアミン−２−シアノベンゾチアゾール−６−カルバメートの合成
３−メチル−３−（２，４，５−トリメチル−３，６−ジオキソシクロヘキサ−１，４−ジエン−１−イル）ブタン酸（１．３７ｇ、５．４８ｍｍｏｌ）及びイソブチルクロロホルメート（７１９ｕＬ、５．４８ｍｍｏｌ）を４０ｍｌの脱水ＴＨＦ中に含む溶液にＮ−メチルモルホリン（１．５３ｍＬ、１０．９６ｍｍｏｌ）を０℃で添加した。得られた混合物を０℃で１時間撹拌し、Ｎ−［（ＰＥＧ）2ＣＯＯ−ｔ−Ｂｕ］−Ｎ’−メチル−エチレン−ジアミン−２−シアノベンゾチアゾール−６−カルバメート（０．７９７ｇ、１．８３ｍｍｏｌ）を含む２０ｍｌの脱水ＴＨＦを添加し、得られた混合物を２時間撹拌した。その後、反応混合物を酢酸で酸性化してから、乾燥した後、塩化メチレンに溶解し、水で２回洗浄した。有機層をＮａ2ＳＯ４で脱水した後、溶媒を除去した。化合物は、ヘプタン及び酢酸エチルを溶離液として使用し、次いで１００％のＴＨＦを使用した、フラッシュシリカカラムでそのまま精製し、生成物を４８．８％（０．５９６ｇ）の収率で得た。
Ｎ−［（ＰＥＧ）2ＣＯＯＨ］−Ｎ’−メチル−Ｎ’−［３−メチル−３−（２，４，５−トリメチル−３，６−ジオキソシクロヘキサ−１，４−ジエン−１−イル）ブタン酸アミド］−エチレンジアミン−２−シアノベンゾチアゾール−６−カルバメートＮＨＳエステルの合成
Ｎ−［（ＰＥＧ）2ＣＯＯＨ］−Ｎ’−メチル−Ｎ’−［３−メチル−３−（２，４，５−トリメチル−３，６−ジオキソシクロヘキサ−１，４−ジエン−１−イル）ブタン酸アミド］−エチレンジアミン−２−シアノベンゾチアゾール−６−カルバメート（０．３１５ｇ、０．４７１ｍｍｏｌ）を７０ｍＬのアセトニトリル中に含む溶液にＴＳＴＵを７０９ｍｇ（２．３６ｍｍｏｌ）、ＤＩＰＥＡを６６０ｕＬ添加した後、室温で１時間撹拌した。生成物の混合物を大容量の塩化メチレンで希釈し、生成物の混合物を３０％のクエン酸溶液で２回洗浄した後、水で１回洗浄した。有機層をＮａ2ＳＯ4で脱水した後、ろ過してから溶媒を除去した。その後、生成物をヘプタン／酢酸エチルの勾配を使用したフラッシュカラムクロマトグラフィーによって精製し、生成物を１０９％（３９４ｍｇ）の収率で得た。
方法１：番号５６４８の合成
ＮＨＳエステル（１００ｍｇ、０．１３０ｍｍｏｌ）を２ｍＬのＤＭＦに溶解し、方法３によって合成したＵＤＣＡ−ｌｙｓＣＯＯＨ（約１３６ｍｇ、０．２６１ｍｍｏｌ）を添加した後、４５ｕＬのＤＩＰＥＡ及び３ｍＬを超える量のＤＭＦを添加した。室温で１時間撹拌して反応を続けた後、酢酸で酸性化してから乾燥した。生成物は、ヘプタン／酢酸エチルの勾配、次いで切り替えて塩化メチレン／メタノールを使用したフラッシュカラムクロマトグラフィーによって精製し、生成物を４０％（６１ｍｇ）の収率で得た。ＭＳ−ＥＳＩ（ｍ／ｅ）：１１７２．０９［Ｍ＋Ｈ］。
方法２：番号５６５１の合成
１２ｍｇのｄ−システイン（０．０７７ｍｍｏｌ）を１ｍＬの水に溶解し、ＴＥＡでｐＨを８〜８．５に調整した後、３０ｍｇ（０．０２５ｍｍｏｌ）の番号５６４８を含む１ｍＬのメタノールを添加し、室温で１時間撹拌した。生成物を酢酸で酸性化した後、塩化メチレンへ抽出した。溶媒を除去し、生成物をヘプタン／ＴＨＦの勾配、次いで塩化メチレン／メタノールを使用したフラッシュカラムクロマトグラフィーによって精製し、生成物を７０％（２２．８ｍｇ）の収率で得た。ＭＳ−ＥＳＩ（ｍ／ｅ）：１２７６．９３［Ｍ＋Ｈ］。
実施例６
番号５６６７の合成
方法１を使用して、実施例９のＮＨＳエステルと、ＣＤＣＡ−ｌｙｓＣＯＯＨ（方法３により合成）とをカップリングし、生成物を２５％（１９ｍｇ）の収率で得た。ＭＳ−ＥＳＩ（ｍ／ｅ）：１１７２．１０［Ｍ＋Ｈ］。
番号５６５０の合成
方法２を使用し、番号５６６７のルシフェリン型を合成し、生成物を５５％（８．４０ｍｇ）の収率で得た。ＭＳ−ＥＳＩ（ｍ／ｅ）：１２７５．７７［Ｍ＋Ｈ］。
実施例７
番号５６４７の合成
方法１を微修正して使用した。ＮＨＳエステル（１００ｍｇ、０．１３０ｍｍｏｌ）を１ｍＬのＤＭＦに溶解した。ＬＣＡ−ｌｙｓＣＯＯＨ（方法３により合成）（約１３１ｍｇ、０．２６１ｍｍｏｌ）を、５０％のＴＦＡを含む１５μＬのＤＭＦに溶解した後、４ｍＬのＤＭＦで希釈した。ＤＩＰＥＡを２３ｕＬ使用してｐＨを５〜６まで上昇させた後、当該溶液を上で溶解させたＮＨＳエステルに添加してから、ＤＩＰＥＡを５５ｕＬ添加した。室温で一晩撹拌して反応を続けた後、酢酸で酸性化してから、乾燥した。生成物を酢酸エチルへ抽出した後、ヘプタン／酢酸エチルの勾配、次いで塩化メチレン／メタノールを使用したフラッシュカラムクロマトグラフィーによって精製し、生成物を４５％（６８ｍｇ）の収率で得た。ＭＳ−ＥＳＩ（ｍ／ｅ）：１１５５．９４［Ｍ＋Ｈ］。
番号５６６８の合成
方法２を使用して、番号５６４７のルシフェリン型を合成し、生成物を５０％（１６．２０ｍｇ）の収率で得た。ＭＳ−ＥＳＩ（ｍ／ｅ）：１２６０．２７［Ｍ＋Ｈ］。
実施例８
番号５６２５の合成
方法１を使用して、ＤＣＡ−ｌｙｓＣＯＯＨ（方法３により合成）をＮＨＳエステルにカップリングし、生成物を１５％（２６．８ｍｇ）の収率で得た。ＭＳ−ＥＳＩ（ｍ／ｅ）：１１６９．９［Ｍ−Ｈ］。
番号５６４９の合成
方法２を使用して番号５６２５のルシフェリン型を合成し、生成物を６９％（１２ｍｇ）の収率で得た。ＭＳ−ＥＳＩ（ｍ／ｅ）：１１７６．７９［Ｍ＋Ｈ］。
実施例９

４−（（（ベンジルオキシ）カルボニル）アミノ）ブタン酸の合成
γ−アミノブタン酸（２．９０ｇ、２８．１４ｍｍｏｌ）を１５％のＮａＯＨ水溶液（１００ｍＬ）及びジオキサン（１００ｍＬ）に溶解した。混合物を０℃まで冷却後、激しく撹拌しながら、ベンジルクロロホルメート（８ｍＬ、５６．２７ｍｍｏｌ）を添加した。混合物を室温で３日間撹拌した。溶媒を除去し、生成物の混合物を少量の水に溶解し、酢酸で酸性化した。その後、生成物を塩化メチレンへ抽出（１００ｍＬで３回）し、有機層を硫酸ナトリウムで脱水してから、ろ過した後、乾燥した。生成物をヘプタン／酢酸エチルの勾配を使用したフラッシュカラムクロマトグラフィーによって精製し、生成物を５１％（３．４４ｇ）の収率で得た。
ｔｅｒｔ−ブチル４−（（（ベンジルオキシ）カルボニル）アミノ）ブタノエートの合成
４−（（（ベンジルオキシ）カルボニル）アミノ）ブタン酸（３．４４ｇ、１４．５０ｍｍｏｌ）を含む１００ｍＬの塩化メチレンに無水ｔ−ブタノール（４．２ｍＬ、４３．５０ｍｍｏｌ）を添加した後、ＤＭＡＰ（１．７７ｇ、１４．５０ｍｍｏｌ）及びＤＣＣ（８．９７ｇ、４３．５０ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を室温で２日間撹拌した後、ＤＣＵの沈殿をろ過してから、溶媒を除去した。生成物をヘプタン／酢酸エチルを使用したフラッシュカラムクロマトグラフィーによって精製し、４９％（２．０９ｇ）の収率で得た。
ｔｅｒｔ−ブチル４−アミノブタノエートの合成
ｔｅｒｔ−ブチル４−（（（ベンジルオキシ）カルボニル）アミノ）ブタノエート（２．０９ｇ、７．１２ｍｍｏｌ）及び１０％のＰｄ／Ｃ（７５．８ｍｇ、０．７１２ｍｍｏｌ）を１００ｍＬのメタノール中に含む混合物を水素雰囲気下、室温で５時間撹拌した。その後、混合物をろ過してから、溶媒を除去し、生成物を９３％（１．０６ｇ）の収率で得た。
Ｎ−［（ＣＨ2）3−ＣＯＯ−ｔ−Ｂｕ］−Ｎ’−Ｂｏｃ−Ｎ’−メチル−エチレンジアミンの合成
ｔｅｒｔ−ブチル４−アミノブタノエート（１．０６ｇ、６．６６ｍｍｏｌ）を５０ｍｌのメタノール中に含む溶液に（Ｎ−メチル）−Ｎ−ＢＯＣアセトアルデヒド（１．１５ｇ、６．６６ｍｍｏｌ）を添加した。混合物を室温で３時間撹拌した。混合物にＮａＢＨ4（０．７５５ｇ、１９．９７ｍｍｏｌ）を０℃で添加し、得られた混合物を０℃で１時間撹拌してから、室温で１時間撹拌した。水を５ｍｌ添加して反応を停止した。溶媒を除去後、水を５ｍｌ添加し、混合物を塩化メチレンで３回抽出した。統合した有機層をＮａ2ＳＯ4で脱水してから、溶媒を除去した。生成物をヘプタン／酢酸エチル、次いで塩化メチレン／メタノールを使用したフラッシュカラムクロマトグラフィーによって精製し、収率１０５％（２．２３ｇ）で得た。
Ｎ−［（ＣＨ2）3ＣＯＯ−ｔ−Ｂｕ］−Ｎ’−Ｂｏｃ−Ｎ’−メチル−エチレン−ジアミン６−ヒドロキシベンゾ［ｄ］チアゾール−２−カルボニトリル−カルバメートの合成
２−シアノ−６−ヒドロキシベンゾチアゾール（０．５８７ｇ、３．３３ｍｍｏｌ）及びビス（ペンタフルオロフェニル）カーボネート（１．４４ｇ、３．６６ｍｍｏｌ）を３０ｍｌの脱水ＴＨＦ中に含む混合物にＴＥＡ（９３０μＬ、６．６６ｍｍｏｌ）を窒素雰囲気下、室温で添加した。混合物を３０分間撹拌してから、Ｎ−［（ＣＨ2）3−ＣＯＯ−ｔ−Ｂｕ］−Ｎ’−Ｂｏｃ−Ｎ’−メチル−エチレンジアミン（２．１１ｇ、６．６６ｍｍｏｌ）を含む２０ｍＬの脱水ＴＨＦを添加した。得られた混合物を室温で２時間撹拌した。その後、反応混合物を乾燥し、生成物の混合物を塩化メチレンに溶解し、飽和Ｋ2ＣＯ3溶液で３回、水で１回洗浄した後、Ｎａ2ＳＯ4で脱水した。溶媒を除去し、化合物をヘプタン／酢酸エチルを溶離液として使用したフラッシュカラムクロマトグラフィーによって精製し、生成物を８６％（１．５ｇ）の収率で得た。
Ｎ−［（ＣＨ2）3ＣＯＯ−ｔ−Ｂｕ］−Ｎ’−メチル−エチレン−ジアミン−２−シアノベンゾチアゾール−６−カルバメートの合成
Ｎ−［（ＣＨ2）3ＣＯＯ−ｔ−Ｂｕ］−Ｎ’−Ｂｏｃ−Ｎ’−メチル−エチレン−ジアミン６−ヒドロキシベンゾ［ｄ］チアゾール−２−カルボニトリル−カルバメートを氷上で１５ｍＬの塩化メチレンに溶解した。チオアニソール（８ｍＬ、２１％）を添加した後、１５ｍＬのＴＦＡを氷上で１０〜１５分間にわたって徐々に添加した。混合物を氷上で３０分撹拌した後、室温で４時間撹拌した。その後、ＴＦＡをトルエンで共蒸発させ、ヘプタン／酢酸エチル、次いで生成物の溶出に塩化メチレン／メタノールを使用したフラッシュカラムクロマトグラフィーによって生成物を精製し、７３％（０．７６５ｇ）の収率で生成物を得た。
Ｎ−［（ＣＨ2）3ＣＯＯＨ］−Ｎ’−メチル−Ｎ’−［３−メチル−３−（２，４，５−トリメチル−３，６−ジオキソシクロヘキサ−１，４−ジエン−１−イル）ブタン酸アミド］−エチレンジアミン−２−シアノベンゾチアゾール−６−カルバメートの合成
３−メチル−３−（２，４，５−トリメチル−３，６−ジオキソシクロヘキサ−１，４−ジエン−１−イル）ブタン酸（１．５９ｇ、６．３３ｍｍｏｌ）及びイソブチルクロロホルメート（８３１ｕＬ、６．３３ｍｍｏｌ）を４０ｍｌの脱水ＴＨＦに含む溶液にＮ−メチルモルホリン（１．７６ｍＬ、１２．６７ｍｍｏｌ）を０℃で添加した。得られた混合物を０℃で１時間撹拌した後、Ｎ−［（ＣＨ2）3ＣＯＯ−ｔ−Ｂｕ］−Ｎ’−Ｂｏｃ−Ｎ’−メチル−エチレン−ジアミン６−ヒドロキシベンゾ［ｄ］チアゾール−２−カルボニトリル−カルバメートを含む１０ｍｌの脱水ＴＨＦを添加した。得られた混合物を２時間撹拌した後、酢酸で酸性化してから、乾燥した。その後、生成物をヘプタン／酢酸エチルの勾配、次いで塩化メチレン／メタノールを使用したフラッシュカラムクロマトグラフィーによって精製し、生成物を１４２％（１．７９ｇ）の収率で得た。
Ｎ−［（ＣＨ2）3ＣＯＯＨ］−Ｎ’−メチル−Ｎ’−［３−メチル−３−（２，４，５−トリメチル−３，６−ジオキソシクロヘキサ−１，４−ジエン−１−イル）ブタン酸アミド］−エチレンジアミン−２−シアノベンゾチアゾール−６−カルバメートＮＨＳエステル（Ｃ４ ＮＨＳエステル）の合成
Ｎ−［（ＣＨ2）3ＣＯＯＨ］−Ｎ’−メチル−Ｎ’−［３−メチル−３−（２，４，５−トリメチル−３，６−ジオキソシクロヘキサ−１，４−ジエン−１−イル）ブタン酸アミド］−エチレンジアミン−２−シアノベンゾチアゾール−６−カルバメート（１．２６ｇ、２．１２ｍｍｏｌ）にＴＳＴＵ（２．３ｇ、７．６４ｍｍｏｌ）を添加した後、アセトニトリルを７０ｍＬ添加した。ＤＩＰＥＡ（２．９５ｍＬ、１６．９５ｍｍｏｌ）を添加し、混合物を室温で１時間撹拌した。その後、生成物の混合物を大容量の塩化メチレンで希釈してから、３０％のクエン酸溶液で２回洗浄した後、水で１回洗浄した。有機層をＮａ2ＳＯ4で脱水してからろ過してから、溶媒を除去した。生成物をヘプタン／酢酸エチルを使用したフラッシュカラムクロマトグラフィーによって精製し、７０％（１．０３ｇ）の収率で得た。
番号５６５４の合成
方法１を使用して、Ｃ４ ＮＨＳエステルをＣＤＣＡ−ｌｙｓｉｎｅＣＯＯＨにカップリングし、生成物を４１％（６５ｍｇ）の収率で得た。ＭＳ−ＥＳＩ（ｍ／ｅ）：１０９８．４９［Ｍ＋Ｈ］。
番号５６５７の合成
方法２を使用して、番号５６５４のルシフェリン型を調製し、４０％（１７．３ｍｇ）の収率で得た。ＭＳ−ＥＳＩ（ｍ／ｅ）：１２０３．３７［Ｍ＋Ｈ］。
番号５６５５の合成
方法１を使用してＣ４ ＮＨＳエステルをＵＤＣＡ−ｌｙｓｉｎｅＣＯＯＨにカップリングし、４９％（７８ｍｇ）の収率で生成物を得た。ＭＳ−ＥＳＩ（ｍ／ｅ）：１０９８．４０［Ｍ＋Ｈ］。
番号５６５８の合成
方法２を使用して、番号５６５５のルシフェリン型を調製し、６９％（２８ｍｇ）の収率で得た。ＭＳ−ＥＳＩ（ｍ／ｅ）：１２０３．１４［Ｍ＋Ｈ］。
番号５６５２の合成
方法１を使用して、Ｃ４ ＮＨＳエステルをＬＣＡ−ｌｙｓｉｎｅＣＯＯＨにカップリングし、生成物を７８％（１７２ｍｇ）の収率で得た。ＭＳ−ＥＳＩ（ｍ／ｅ）：１０７９．７１［Ｍ−Ｈ］。
番号５６６９の合成
方法２を使用して、番号５６５２のルシフェリン型を調製し、２４％（６．５ｍｇ）の収率で得た。ＭＳ−ＥＳＩ（ｍ／ｅ）：１０８６．３０［Ｍ＋Ｈ］。
番号５６５３の合成
方法１を使用して、Ｃ４ ＮＨＳエステルをＤＣＡ−ｌｙｓｉｎｅＣＯＯＨにカップリングし、生成物を７１％（１１２ｍｇ）の収率で得た。ＭＳ−ＥＳＩ（ｍ／ｅ）：１０９５．５９［Ｍ−Ｈ］。
番号５６５６の合成
方法２を使用して、番号５６５３のルシフェリン型を調製し、９９％を超える収率（８４ｍｇ）で得た。ＭＳ−ＥＳＩ（ｍ／ｅ）：１２０２．３４［Ｍ＋Ｈ］。
実施例１０

６−（（（ベンジルオキシ）カルボニル）アミノ）ヘキサン酸の合成
６−アミノヘキサン酸（４．６１ｇ、３５．１７ｍｍｏｌ）を１５％のＮａＯＨ水溶液（１００ｍＬ）及びジオキサン（１００ｍＬ）の混合物に溶解した。混合物を０℃まで冷却後、激しく撹拌しながらベンジルクロロホルメート（１０ｍＬ、７０．３４ｍｍｏｌ）を添加した。その後、混合物を室温で２日間撹拌した。溶媒を除去してから、生成物の混合物を水に溶解し、酢酸で酸性化してから生成物を塩化メチレンへ抽出した。有機層をＮａ２ＳＯ４で脱水し、ろ過してから溶媒を除去した。生成物をヘプタン／酢酸エチルの勾配を使用したフラッシュカラムクロマトグラフィーによって精製し、８１％（７．６２ｇ）で得た。
ｔｅｒｔ−ブチル６−（（（ベンジルオキシ）カルボニル）アミノ）ヘキサノエートの合成
６−（（（ベンジルオキシ）カルボニル）アミノ）ヘキサン酸（７．６２ｇ、２８．７２ｍｍｏｌ）を２００ｍＬの塩化メチレンに溶解し、無水ｔ−ブタノール（８．２ｍＬ、８６．１６ｍｍｏｌ）を添加した後、ＤＭＡＰ（３．５１ｇ、２８．７２ｍｍｏｌ）を添加した。ＤＣＣ（１７．７８ｇ、８６．１６ｍｍｏｌ）を添加し、混合物を室温で２日間撹拌した。混合物をろ過した後、乾燥し、生成物をヘプタン／酢酸エチルを使用したフラッシュカラムクロマトグラフィーによって精製し、６３％（５．８６ｇ）の収率で得た。
ｔｅｒｔ−ブチル６−アミノヘキサノエートの合成
ｔｅｒｔ−ブチル６−（（（ベンジルオキシ）カルボニル）アミノ）ヘキサノエート（５．８６ｇ、１８．２３ｍｍｏｌ）及び１０％のＰｄ／Ｃ（１９４ｍｇ、１．８２ｍｍｏｌ）の混合物にメタノールを２５０ｍＬ添加した。混合物を水素雰囲気下、室温で５時間撹拌した後、ろ過してから溶媒を除去し、生成物を１３１％（４．４８ｇ）の収率で得た。
Ｎ−［（ＣＨ2）5−ＣＯＯ−ｔ−Ｂｕ］−Ｎ’−Ｂｏｃ−Ｎ’−メチル−エチレンジアミンの合成
ｔｅｒｔ−ブチル６−アミノヘキサノエート（３．４１ｇ、１８．２１ｍｍｏｌ）を８０ｍＬのメタノール中に含む溶液に（Ｎ−メチル）−Ｎ−ＢＯＣアセトアルデヒド（３．１５ｇ、１８．２１ｍｍｏｌ）を添加した。混合物を室温で３時間撹拌した。混合物にＮａＢＨ4（２．０７ｇ、５４．６２ｍｍｏｌ）を０℃で添加し、得られた混合物を０℃で１時間撹拌してから、室温で１時間撹拌した。水を１０ｍＬ添加して反応を停止した。溶媒を除去後、水を３０ｍＬ添加してから混合物を塩化メチレンで３回抽出した。統合した有機層をＮａ2ＳＯ4で脱水してから乾燥した。生成物をヘプタン／酢酸エチル、次いで塩化メチレン／メタノールを使用したフラッシュカラムクロマトグラフィーによって精製した。
Ｎ−［（ＣＨ2）5ＣＯＯ−ｔ−Ｂｕ］−Ｎ’−Ｂｏｃ−Ｎ’−メチル−エチレン−ジアミン６−ヒドロキシベンゾ［ｄ］チアゾール−２−カルボニトリル−カルバメートの合成
２−シアノ−６−ヒドロキシベンゾチアゾール（０．３６６ｇ、２．０８ｍｍｏｌ）及びビス（ペンタフルオロフェニル）カーボネート（０．９０２ｇ、２．２９ｍｍｏｌ）を２０ｍｌの脱水ＴＨＦ中に含む混合物にＴＥＡ（５８０ｕＬ、４．１６ｍｍｏｌ）を窒素雰囲気下、室温で添加した。混合物を３０分撹拌し、Ｎ−［（ＣＨ2）5−ＣＯＯ−ｔ−Ｂｕ］−Ｎ’−Ｂｏｃ−Ｎ’−メチル−エチレンジアミン（１．４３ｇ、４．１６ｍｍｏｌ）を含む１０ｍＬのＴＨＦを添加した。得られた混合物を室温で３０分にわたって撹拌した。溶媒を除去した後、生成物の混合物を塩化メチレンに溶解し、飽和Ｋ2ＣＯ3溶液で３回、水で１回洗浄した。有機層をＮａ2ＳＯ4で脱水してから、溶媒を除去した。化合物をヘプタン／酢酸エチルを溶離液として使用したフラッシュカラムクロマトグラフィーによって精製し、生成物を７７％（０．８７５ｇ）の収率で得た。
Ｎ−［（ＣＨ2）5ＣＯＯ−ｔ−Ｂｕ］−Ｎ’−メチル−エチレン−ジアミン−２−シアノベンゾチアゾール−６−カルバメートの合成
Ｎ−［（ＣＨ2）5ＣＯＯ−ｔ−Ｂｕ］−Ｎ’−Ｂｏｃ−Ｎ’−メチル−エチレン−ジアミン６−ヒドロキシベンゾ［ｄ］チアゾール−２−カルボニトリル−カルバメートを氷上で１０ｍＬの塩化メチレンに溶解し、チオアニソールを５ｍＬ（２０％）添加した。氷上でＴＦＡを１０ｍＬ徐々に添加した後、反応混合物を氷上で３０分撹拌してから室温で５時間撹拌した。その後、溶媒をトルエンで共蒸発してから生成物をヘプタン／酢酸エチル、次いで塩化メチレン／メタノールを使用したフラッシュカラムクロマトグラフィーによって精製し、生成物を９４％（０．５８９ｍｇ）の収率で得た。
Ｎ−［（ＣＨ2）5ＣＯＯＨ］−Ｎ’−メチル−Ｎ’−［３−メチル−３−（２，４，５−トリメチル−３，６−ジオキソシクロヘキサ−１，４−ジエン−１−イル）ブタン酸アミド］−エチレンジアミン−２−シアノベンゾチアゾール−６−カルバメートの合成
３−メチル−３−（２，４，５−トリメチル−３，６−ジオキソシクロヘキサ−１，４−ジエン−１−イル）ブタン酸（１．１３ｇ、４．５３ｍｍｏｌ）及びイソブチルクロロホルメート（５９４ｕＬ、４．５３ｍｍｏｌ）を３５ｍｌの脱水ＴＨＦ中に含む溶液にＮ−メチルモルホリン（１．２６ｍＬ、９．０５ｍｍｏｌ）を０℃で添加した。得られた混合物を０℃で１時間撹拌した後、Ｎ−［（ＣＨ2）5ＣＯＯ−ｔ−Ｂｕ］−Ｎ’−メチル−エチレン−ジアミン−２−シアノベンゾチアゾール−６−カルバメートを含む５ｍｌの脱水ＴＨＦを添加し、得られた混合物を室温で２時間撹拌した。生成物の混合物を酢酸で酸性化した後、乾燥させた。生成物をヘプタン／酢酸エチル、次いで塩化メチレン／メタノールを使用したフラッシュカラムクロマトグラフィーによって精製し、８７％（０．８１７ｇ）の収率で得た。
Ｎ−［（ＣＨ2）5ＣＯＯＨ］−Ｎ’−メチル−Ｎ’−［３−メチル−３−（２，４，５−トリメチル−３，６−ジオキソシクロヘキサ−１，４−ジエン−１−イル）ブタン酸アミド］−エチレンジアミン−２−シアノベンゾチアゾール−６−カルバメートＮＨＳエステル（Ｃ６ ＮＨＳエステル）の合成
ＴＳＴＵ（２．７６ｇ、９．１６ｍｍｏｌ）及びＮ−［（ＣＨ2）5ＣＯＯＨ］−Ｎ’−メチル−Ｎ’−［３−メチル−３−（２，４，５−トリメチル−３，６−ジオキソシクロヘキサ−１，４−ジエン−１−イル）ブタン酸アミド］−エチレンジアミン−２−シアノベンゾチアゾール−６−カルバメート（０．８１５ｇ、１．３１ｍｍｏｌ）の混合物にアセトニトリルを６０ｍＬ添加した。ＤＩＰＥＡ（１．８２ｍＬ、１０．４７ｍｍｏｌ）を添加し、反応混合物を室温で１時間撹拌した。生成物の混合物を大容量の塩化メチレンで希釈した。その後、３０％のクエン酸溶液で２回洗浄した後、水で１回洗浄し、Ｎａ2ＳＯ4で脱水してから、ろ過後に溶媒を除去した。生成物をヘプタン／酢酸エチルを使用したフラッシュカラムクロマトグラフィーによって精製し、７６％（０．７１７ｇ）の収率で得た。
番号５６６１の合成
方法１を使用して、Ｃ６ ＮＨＳエステルと、ＣＤＣＡ−ｌｙｓＣＯＯＨとをカップリングし、生成物である番号５６６１を７１％（１１１ｍｇ）の収率で得た。ＭＳ−ＥＳＩ（ｍ／ｅ）：１１２６．４８［Ｍ＋Ｈ］。
番号５６６５の合成
方法２を使用して、番号５６６１のルシフェリン型を調製し、３８％（２１ｍｇ）の収率で得た。ＭＳ−ＥＳＩ（ｍ／ｅ）：１２３０．５７［Ｍ＋Ｈ］。
番号５６６２の合成
方法１を使用して、Ｃ６ ＮＨＳエステルと、ＵＤＣＡ−ｌｙｓＣＯＯＨとをカップリングし、生成物である番号５６６１を７８％（１２２ｍｇ）の収率で得た。ＭＳ−ＥＳＩ（ｍ／ｅ）：１１２６．４８［Ｍ＋Ｈ］。
番号５６６６の合成
方法２を使用して、番号５６６２のルシフェリン型を調製し、２０％（１６ｍｇ）の収率で得た。ＭＳ−ＥＳＩ（ｍ／ｅ）：１２３０．５７［Ｍ＋Ｈ］。
番号５６６０の合成
方法１を使用して、Ｃ６ ＮＨＳエステルと、ＤＣＡ−ｌｙｓＣＯＯＨとをカップリングし、生成物である番号５６６１を３８％（５９ｍｇ）の収率で得た。ＭＳ−ＥＳＩ（ｍ／ｅ）：１１２６．６７［Ｍ＋Ｈ］。
番号５６６４の合成
方法２を使用して、番号５６６０のルシフェリン型を調製し、９８％（２７ｍｇ）の収率で得た。ＭＳ−ＥＳＩ（ｍ／ｅ）：１２３０．６２［Ｍ＋Ｈ］。
番号５６５９の合成
方法１を使用して、Ｃ６ ＮＨＳエステルと、ＬＣＡ−ｌｙｓＣＯＯＨとをカップリングし、生成物である番号５６６１を３３％（５１ｍｇ）の収率で得た。ＭＳ−ＥＳＩ（ｍ／ｅ）：１１０９．５５［Ｍ＋Ｈ］。
番号５６６３の合成
方法２を使用して、番号５６５９のルシフェリン型を調製し、３６％（１２ｍｇ）の収率で得た。ＭＳ−ＥＳＩ（ｍ／ｅ）：１２１２．３０［Ｍ−Ｈ］。
実施例１１
ＦＡＭジアミンの合成
ジエチルアミン（３１７ｍｇ、５．２８ｍｍｏｌ）を７ｍＬのＤＭＦに溶解した後、５００ｍｇのＦＡＭ ＮＨＳエステルを溶解した７ｍＬのＤＭＦを滴下して添加し、室温で３０分撹拌した。その後、溶媒を除去し、生成物の混合物をメタノール及び水に再溶解した後、０．１％のギ酸及びメタノール、ならびにＣ１８カラムを使用した逆相ＨＰＬＣによって精製し、ＦＡＭジアミンを７７％（３４２ｍｇ）の収率で得た。ＭＳ−ＥＳＩ（ｍ／ｅ）：４４２．９［Ｍ＋Ｈ］。
番号５６８２の合成
上で説明した方法１を使用して、ＰＥＧ２ ＮＨＳエステルと、ＦＡＭジアミンとをカップリングした。生成物は、０．１％のギ酸及びアセトニトリル、ならびにＣ１８カラムを使用した逆相ＨＰＬＣによって精製し、番号５６８２を４７％（１５ｍｇ）の収率で得た。ＭＳ−ＥＳＩ（ｍ／ｅ）：１０６９．８１［Ｍ＋Ｈ］。
番号５８２６の合成
上で説明した方法２を使用して、番号５６８２のルシフェリン型を調製した。その後、生成物は、０．１％のギ酸及びアセトニトリル、ならびにＣ１８カラムを使用した逆相ＨＰＬＣによって精製し、番号５８２６を８９％（４２ｍｇ）の収率で得た。ＭＳ−ＥＳＩ（ｍ／ｅ）：１１７５．２０［Ｍ＋Ｈ］。
番号５６８４の合成
上で説明した方法１を使用して、Ｃ４ ＮＨＳエステルと、ＦＡＭジアミンをカップリングした。生成物は、０．１％のギ酸及びアセトニトリル、ならびにＣ１８カラムを使用した逆相ＨＰＬＣによって精製し、番号５６８２を４６％（４１ｍｇ）の収率で得た。ＭＳ−ＥＳＩ（ｍ／ｅ）：９９５．９８［Ｍ＋Ｈ］。
番号５８２４の合成
上で説明した方法２を使用して、番号５６８４のルシフェリン型を調製した。その後、生成物は、０．１％のギ酸及びアセトニトリル、ならびにＣ１８カラムを使用した逆相ＨＰＬＣによって精製し、番号５８２４を、９９％を超える収率（６７ｍｇ）で得た。ＭＳ−ＥＳＩ（ｍ／ｅ）：１０９９．３７［Ｍ＋Ｈ］。
番号５６８３の合成
上で説明した方法１を使用して、Ｃ６ ＮＨＳエステルと、ＦＡＭジアミンとをカップリングした。生成物は、０．１％のギ酸及びアセトニトリル、ならびにＣ１８カラムを使用した逆相ＨＰＬＣによって精製し、番号５６８２を７８％（１９ｍｇ）の収率で得た。ＭＳ−ＥＳＩ（ｍ／ｅ）：１０２４．３８［Ｍ＋Ｈ］。
番号５８２５の合成
上で説明した方法２を使用して、番号５６８３のルシフェリン型を調製した。その後、生成物は、０．１％のギ酸及びアセトニトリル、ならびにＣ１８カラムを使用した逆相ＨＰＬＣによって精製し、番号５８２５を６７％（３６ｍｇ）の収率で得た。ＭＳ−ＥＳＩ（ｍ／ｅ）：１１２８．９８［Ｍ＋Ｈ］。
実施例１２

番号５９０７、番号５９０９、及び番号５９１０の合成：
Ｐｅｇ３００でコートされ、遊離アミン基で官能化された２０ｎｍの金ナノ粒子（ＧＮＰ）（ＯＤ＝５０）１ｍＬは、Ｃｙｔｏｄｙａｇｎｏｓｔｉｃｓ Ｉｎｃから購入した。小型エッペンドルフチューブにＧＮＰ溶液を１０μｌ入れ、Ｎ−［（ＰＥＧ）2ＣＯＯＨ］−Ｎ’−メチル−Ｎ’−［３−メチル−３−（２，４，５−トリメチル−３，６−ジオキソシクロヘキサ−１，４−ジエン−１−イル）ブタン酸アミド］−エチレンジアミン−２−シクロベンゾチアゾール−６−カルバメートＮＨＳエステルを１ｍｇ溶解した１０μＬのＤＭＦを添加した。ＰＢＳ緩衝液及びＤＭＦをそれぞれ５００μＬずつ添加した後、短時間超音波処理し、室温で４時間、振とう器で振とうした。反応後、ＰＢＳＴ（０．０５％のＴｗｅｅｎ８０を含むＰＢＳ緩衝液）を１ｍＬ添加し、１４，０００ｒｐｍで３０分遠心分離した。上清を除去し、メタノールを３５０μＬ添加した。ペレットを再懸濁した後、再度遠心沈降させた。メタノール洗浄を２回繰り返し実施してから、ペレットをＤＭＦで３回同様に洗浄した。
番号５９０８、番号５９１１、及び番号５９１２の合成：
１ｍｇのｄ−システインを３５０μＬのＰＢＳ緩衝液に溶解し、番号５９０７、番号５９０９、または番号５９１０で修飾されたＧＮＰを含むエッペンドルフチューブにそれぞれ添加した。メタノールを３５０μＬ添加した後、溶液を室温で３時間、振とう器で振とうした。反応後、内容物を１４，０００ｒｐｍで３０分遠心分離し、上清の大部分を除去した。ペレットを水及びメタノールを１：１で含む混合物で３回洗浄した後、ＤＭＦで三回洗浄した。
実施例１３
番号５９１５の合成
約１００ｍｇ（３９２μｍｏｌ、２当量）のマレイミドＴＦＡ塩を、２ｍＬのＤＭＦと、１５０ｍｇ（１９６μｍｏｌ、１当量）の各ＮＨＳエステルを溶解した１ｍＬのＤＭＦと共にバイアルに入れた。ＤＩＰＥＡを７０μｌ（３９２μｍｏｌ、２当量）添加した後、室温で１時間にわたって撹拌した。反応混合物を乾燥した後、塩化メチレン／メタノールの勾配を使用したフラッシュカラムクロマトグラフィーによって精製した。ＭＳ−ＥＳＩ（ｍ／ｅ）：７９１．９［Ｍ＋Ｈ］。
番号５９１６、番号５９１７、及び番号５９１８は、対応するＮＨＳエステルを使用して同様の方法で合成した。


実施例１４
ＳＬＮは、図１５に示されるスキームを介してキノンプローブに結合させてもよい。
実施例１５
抗体の標識化
本発明の化合物を使用した抗体の標識化を示すため、モノクローナル抗体であるＨｅｒｃｅｐｔｉｎをＰＢＩ−５５０８（実施例４）で標識した。凍結乾燥されたＨｅｒｃｅｐｔｉｎをｐＨ８．６の０．１Ｍの炭酸水素ナトリウムに１０ｍｇ／ｍｌで溶解した後、同一の緩衝液で、１ｍｇ／ｍｌまで希釈し、１００μｌとした。１００％ＤＭＳＯを使用してプロルシフェリンであるＰＢＩ−５５０８の５０ｍＭの保存溶液を調製した。抗体の標識化に向け、３．３μｌのＰＢＩ−５５０８（３．３ｎｍｏｌ）を１００μｌの希釈したＨｅｒｃｅｐｔｉｎ（０．６６ｎｍｏｌ）に添加し、ＰＢＩ−５５０８がモルで５倍過剰となるようにした。その後、試料をホイルで覆い、６０分間チューブ回転器で回転させながら室温でインキュベートした。遊離のＰＢＩ−５５０８を除去するため、ラベル化反応液１００μｌを平衡化したＧ−２５ Ｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇ ＭｉｃｒｏＳｐｉｎ Ｃｏｌｕｍｎ（Ａｍｅｒｓｈａｍ、２００μｌ樹脂）に負荷し、３０００ｒｐｍで３０秒遠心して溶出させた。標識されたＨｅｒｃｅｐｔｉｎは、通過液に含まれていた。標識化効率は、Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ−ＰＢＩ−５５０８分子の２８０ｎｍ及び３２０ｎｍにおける吸光度を測定する吸光度測定法によって決定した。標識化の程度は、１個のＨｅｒｃｅｐｔｉｎ抗体分子あたり２．３個のＰＢＩ−５５０８分子であった。
実施例１６
白色の３８４ウェル低用量アッセイプレートに、５μｌのＨｅｒｃｅｐｔｉｎ：ＰＢＩ−５５０８（実施例１５）、または対照として５μｌのｐＨ８．６の０．１Ｍ炭酸水素ナトリウム緩衝液を３連で、さまざまな濃度で分注した。Ｌｕｃｉｆｅｒｉｎ Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ Ｒｅａｇｅｎｔ（Ｐｒｏｍｅｇａ、Ｖ８５９／８６５）を含む５μｌの溶液、還元酵素（Ｐｒｏｍｅｇａ、ＮＡＤ（Ｐ）Ｈ−Ｇｌｏキットの推奨濃度）、５０μＭのＮＡＤＨ、及び１０ｍＭのＤ−システインをアッセイウェルに添加した。室温で４５分間インキュベートして反応させ、発光（相対発光量、ＲＬＵ）をＴｅｃａｎ Ｍ１０００Ｐｒｏで測定した。
表３の結果からＨｅｒｃｅｐｔｉｎ：ＰＢＩ−５５０８分子は、ジアホラーゼの基質であることが明らかとなった。
表３
実施例１７
ＳＫＢＲ３細胞を含むＭｃＣｏｙ培地２０μｌを１０，０００細胞／ウェルで３８４ウェルアッセイプレートに分注した。他のウェルには対照として培地のみを分注した。培地及び細胞を５％ＣＯ2雰囲気下、３７℃で２時間インキュベートした。５００ｍＭのスクロース（最終濃度）を含み、または含まず、最終濃度１５ｎｇ／μｌ、最終体積２０μｌとなるようにＨｅｒｃｅｐｔｉｎ：ＰＢＩ−５５０８を添加した。５％ＣＯ2雰囲気下、３７℃で６時間インキュベートして反応させた。その後、１０ｍＭのＤ−システインを含む４０μｌのＬｕｃｉｆｅｒｉｎ Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ Ｒｅａｇｅｎｔ（Ｐｒｏｍｅｇａ、Ｖ８６５／８５９）をすべてのウェルに添加した。室温で２０分間インキュベートして反応させてから、発光（ＲＬＵ）をＴｅｃａｎ Ｍ１０００Ｐｒｏで測定した。
表４の結果からＨｅｒｃｅｐｔｉｎ：ＰＢＩ−５５０８は、内部移行後、細胞内で還元されていることが明らかとなった。スクロースは、エンドソームからの分子の放出を増加させるために使用した。
表４
実施例１８
本明細書で説明されるさまざまな化合物を使用した取り込みトランスポーターアッセイを実証するため、本開示の実施例の開発の間に、実験を実施した。
メタノールで各化合物の１０ｍＭの保存溶液を調製した。Ｃｏｒｎｉｎｇ ＴｒａｎｓｐｏｒｔｏＣｅｌｌｓ ＯＡＴＰ１Ｂ１*１ａ、ＯＡＴＰ１Ｂ３、及び対照細胞を、細胞に基づく取り込みトランスポーターアッセイの細胞モデルとして使用した。細胞は、製造者の推奨事項に従って培養した。簡潔には、液体窒素で貯蔵された細胞を解凍し、ウシ胎児血清（ＦＢＳ）、ＭＥＭ非必須アミノ酸、及びブタン酸ナトリウムを添加したＤｕｌｂｅｃｃｏ’ｓ Ｍｏｄｉｆｉｅｄ Ｅａｇｌｅ’ｓ培地で培養した。その後、Ｃｏｒｎｉｎｇ９６ウェルｐｏｌｙ−Ｄ−Ｌｙｓｉｎｅ ｗｈｉｔｅ／ｃｌｅａｒプレートに細胞を含む１００μｌの培地を分注し、１００，０００細胞／ウェルとして、５％ＣＯ2雰囲気下、３７℃で２４時間インキュベートした。
化合物の内の１つを１０μＭで含むハンクス平衡塩溶液１００μｌをすべての細胞に添加することによって取り込みトランスポーターアッセイ実施し、３７℃で３０分間インキュベートした。ＰＢＩ−５６５１、ＰＢＩ−５６５７、ＰＢＩ−５６５８、ＰＢＩ−５６６５、ＰＢＩ−５６６６、ＰＢＩ−５８２４、ＰＢＩ−５８２５、及びＰＢＩ−５８２６で処理した細胞には、同量のＬｕｃｉｆｅｒｉｎ Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ Ｒｅａｇｅｎｔ（Ｐｒｏｍｅｇａ）を添加した。ＰＢＩ−５６４８、ＰＢＩ−５６８２、ＰＢＩ−５６８３、及びＰＢＩ−５６８４で処理した細胞には、Ｄ−システイン（Ｐｒｏｍｅｇａ）を含む同量のＬｕｃｉｆｅｒｉｎ Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ Ｒｅａｇｅｎｔ（Ｐｒｏｍｅｇａ）を添加した。室温（２０〜２５℃）で２０分インキュベートした後、発光をＧｌｏＭａｘ（登録商標）発光測定器で検出した。
図１〜１２は、本発明の化合物を使用したＴｒａｎｓｐｏｒｔｏＣｅｌｌｓ ＯＡＴＰ１Ｂ１*１ａ及びＯＡＴＰ１Ｂ３由来の発光（ＲＬＵ）が、ＴｒａｎｓｐｏｒｔｏＣｅｌｌｓ対照細胞及び細胞無しの対照を上回って増加したことを示している。
実施例１９
ＰＢＩ−５６５１をさまざまな濃度で使用した取り込みトランスポーターアッセイを実証するため、本発明の実施例の開発の間に、実験を実施した。
メタノールで１０ｍＭのＰＢＩ−５６５１の保存溶液を調製した。Ｃｏｒｎｉｎｇ ＴｒａｎｓｐｏｒｔｏＣｅｌｌｓ ＯＡＴＰ１Ｂ１*１ａ、ＯＡＴＰ１Ｂ３、及び対照細胞を、細胞に基づく取り込みトランスポーターアッセイの細胞モデルとして使用した。細胞は、製造者の推奨事項に従って培養した。簡潔には、液体窒素で貯蔵された細胞を解凍し、ウシ胎児血清（ＦＢＳ）、ＭＥＭ非必須アミノ酸、及びブタン酸ナトリウムを添加したＤｕｌｂｅｃｃｏ’ｓ Ｍｏｄｉｆｉｅｄ Ｅａｇｌｅ’ｓ培地で培養した。その後、Ｃｏｒｎｉｎｇ９６ウェルｐｏｌｙ−Ｄ−Ｌｙｓｉｎｅ ｗｈｉｔｅ／ｃｌｅａｒプレートに細胞を含む１００μｌの培地を分注し、１００，０００細胞／ウェルとして、５％ＣＯ2雰囲気下、３７℃で２４時間インキュベートした。
ＰＢＩ−５６５１をさまざまな濃度（図１３参照）で含むハンクス平衡塩溶液１００μｌをすべての細胞に添加することによって取り込みトランスポーターアッセイ実施し、３７℃で３０分インキュベートした。同量のＬｕｃｉｆｅｒｉｎ Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ Ｒｅａｇｅｎｔ（Ｐｒｏｍｅｇａ）を細胞に添加した。室温（２０〜２５℃）で２０分インキュベートした後、発光をＧｌｏＭａｘ（登録商標）発光測定器で検出した。
図１３は、ＴｒａｎｓｐｏｒｔｏＣｅｌｌｓ ＯＡＴＰ１Ｂ１*１ａ及びＯＡＴＰ１Ｂ３由来の発光（ＲＬＵ）の動的応答を示すものである。
絶対的な用語または近似の用語のいずれかにおける何らかの所与の範囲は、両方を含むことを意図し、本明細書で使用される何らかの定義は、明確化を意図とし、限定を意図するものではない。本発明の幅広い範囲を示す数値範囲及びパラメーターが近似であるかに関わらず、特定の実施例で示される数値は、可能な限り正確に報告される。しかしながら、いずれの数値もそれぞれの試験測定においてみられる標準偏差から必然的に生じる一定の誤差を本質的に含む。さらに、本明細書で開示されるすべての範囲は、その中に含まれる何らかの及びすべての部分範囲（すべての小数値及び全体値を含む）を含むと理解されることになる。
さらに、本発明は、本明細書で説明されるさまざまな実施形態のいくつかまたはすべての、何らかの及びすべての可能な組み合わせを含む。本出願で引用される何らかの及びすべての特許、特許出願、学術論文、及びその他の文献、ならびにその中で引用される何らかの文献は、それらの全体が参照によって本明細書に組み込まれる。
完全性の理由から、本開示のさまざまな態様を次に示す番号付きの条項において定める。
条項１
式（Ｉ）の化合物、またはその塩であって、
（Ｉ）
式中、
Ａは、レポーター部分であり；
Ｒ14は、Ｈ、アルキル、ヒドロキシアルキル、アルコキシ、カルボキシアルキル、またはアミドアルキルであり；
Ｒ9及びＲ10は、アルキルから独立に選択され；
Ｒ11、Ｒ12、及びＲ13は、Ｈ、アルキル、アルコキシ、ブロモ、クロロ、もしくはアミノから独立に選択されるか、またはＲ11及びＲ12は、融合されたフェニル環を形成でき；
Ｘは、Ｏであり；
Ｌは、−（ＣＨ2）mＣ（Ｒ17）2（ＣＨ2）n−Ｙ−Ｃ（Ｏ）−であり；
Ｒ17は、独立にＨ、アルキルであるか、または両Ｒ17は、一緒になって３〜７個の炭素を有するアルキル環を形成でき；
ｍは、０〜２の整数であり；
ｎは、０〜２の整数であり；
Ｙは、ＯまたはＮＲ15であり；
Ｒ15は、Ｈ、アルキル、ヒドロキシアルキル、アジドアルキル、シアノアルキル、ハロアルキル、アルケニル、アルキニル、−アルキル−Ｎ（Ｒ23）Ｃ（Ｏ）Ｒ24、−アルキル−ＳＯ3Ｒ25、−アルキル−ＳＯ2Ｎ（Ｒ26）（Ｒ27）、−アルキル−ＣＯＲ28、−アルキル−ＣＯ2Ｒ29、−アルキル−ＯＣ（Ｏ）Ｒ29、−アルキル−ＯＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ30）（Ｒ31）、−アルキル−ＣＯＮ（Ｒ30）（Ｒ31）、またはポリアルコキシアルキルであり、ここで、当該ポリアルコキシアルキルは、非置換であるか、または１個もしくは複数の適した置換基で置換されており；ならびにＲ23、Ｒ24、Ｒ25、Ｒ26、Ｒ27、Ｒ28、Ｒ29、Ｒ30、及びＲ31は、水素、アルキル、アリール、ヘテロアリール、ヘテロシクリル、及びシクロアルキルからそれぞれ独立に選択される、式（Ｉ）の化合物、またはその塩。
条項２
Ｒ15が、ポリアルコキシアルキルであって、ここで、当該ポリアルコキシアルキルは、−（Ｃ2−Ｃ6−アルコキシ）x−アルキル、−（Ｃ2−Ｃ6−アルコキシ）x−ハロアルキル、−（Ｃ2−Ｃ6−アルコキシ）x−ヒドロキシアルキル、−（Ｃ2−Ｃ6−アルコキシ）x−アミノアルキル、−（Ｃ2−Ｃ6−アルコキシ）x−アルキルアミノアルキル、−（Ｃ2−Ｃ6−アルコキシ）xジ（アルキル）アミノアルキル、−（Ｃ2−Ｃ6−アルコキシ）x−アジドアルキル、−（Ｃ2−Ｃ6−アルコキシ）x−シアノアルキル、−（Ｃ2−Ｃ6−アルコキシ）x−アルケニル、−（Ｃ2−Ｃ6−アルコキシ）x−アルキニル、−（Ｃ2−Ｃ6−アルコキシ）x−Ｎ（Ｒ23）Ｃ（Ｏ）Ｒ24、−（Ｃ2−Ｃ6−アルコキシ）x−ＳＯ3Ｒ25、−（Ｃ2−Ｃ6−アルコキシ）x−アルキル−ＳＯ2Ｎ（Ｒ26）（Ｒ27）、−（Ｃ2−Ｃ6−アルコキシ）x−アルキル−ＣＯＲ28、−（Ｃ2−Ｃ6−アルコキシ）x−アルキル−ＯＣ（Ｏ）Ｒ29、−（Ｃ2−Ｃ6−アルコキシ）x−アルキル−ＯＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ30）Ｒ31、−（Ｃ2−Ｃ6−アルコキシ）x−アルキル−ＣＯ2Ｒ29、及び−（Ｃ2−Ｃ6−アルコキシ）x−アルキル−ＣＯＮ（Ｒ30）（Ｒ31）であり、ここで、Ｒ23、Ｒ24、Ｒ25、Ｒ26、Ｒ27、Ｒ28、Ｒ29、Ｒ30、及びＲ31は、水素、アルキル、アリール、ヘテロアリール、ヘテロシクリル、及びシクロアルキルからそれぞれ独立に選択され；ならびにｘは、１〜２０から選択される整数である、請求項１に記載の化合物。
条項３
Ｒ15が、ポリアルコキシアルキルであって、ここで、当該ポリアルコキシアルキルは、非置換であるか、またはアルキル、アルコキシアルキル、ハロアルキル、ハロアルコキシアルキル、ヒドロキシアルキル、アミノアルキル、アルキルアミノアルキル、ジ（アルキル）アミノアルキル、アジドアルキル、シアノアルキル、アルコキシ、ハロアルコキシ、アルコキシアルコキシ、アルケニル、アルキニル、−Ｎ（Ｒ23）Ｃ（Ｏ）Ｒ24、−ＳＯ3Ｒ25、−ＳＯ2Ｎ（Ｒ26）（Ｒ27）、−ＣＯＲ28、−ＣＯ2Ｒ29、及び−ＣＯＮ（Ｒ30）（Ｒ31）からなる群から独立に選択される１〜３個の置換基で置換されており、ここで、Ｒ23、Ｒ24、Ｒ25、Ｒ26、Ｒ27、Ｒ28、Ｒ29、Ｒ30、及びＲ31は、水素、アルキル、アリール、ヘテロアリール、ヘテロシクリル、及びシクロアルキルからそれぞれ独立に選択される、条項１に記載の化合物。
条項４
Ｒ15が、
であって、
式中、
Ｒ40は、水素、アルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、ヘテロアリール、ヘテロシクリル、及びシクロアルキルからなる群から選択され、ここで、当該アリール、ヘテロアリール、ヘテロシクリル、及びシクロアルキルは、非置換であるか、または１個もしくは複数の適した置換基で置換されており；ならびに
ｘは、１〜２０から選択される整数である、条項１に記載の化合物。
条項５
Ｒ40が、水素である、条項４に記載の化合物。
条項６
Ｒ40が、Ｎ、Ｏ、及びＳからなる群から独立に選択される１、２、または３個のヘテロ原子を有する５または６員ヘテロシクリルである、条項４に記載の化合物。
条項７
Ｒ40が、
である、条項４に記載の化合物。
条項８
ｘが、２、３、または４である、条項４に記載の化合物。
条項９
式（Ｉ−ｖｉ）を有するか、またはその塩であって、
（Ｉ−ｖｉ）
式中、
Ｒ9、Ｒ10、Ｒ11、Ｒ12、Ｒ13、Ｒ14、Ｒ40、ｘ、及びＡが、上で定義したとおりである、条項４に記載の化合物。
条項１０

またはそれらの塩からなる群から選択される、条項１に記載の化合物。
条項１１
当該レポーター部分が、生物発光レポーター部分または蛍光レポーター部分を含む、条項１に記載の化合物。
条項１２
当該生物発光レポーター部分が、ルシフェラーゼの基質を含む、条項１１に記載の化合物。
条項１３
当該基質が、ルシフェリン、ルシフェリン誘導体もしくはルシフェリンアナログ、ルシフェリン前駆体もしくはルシフェリン前駆体のアナログ、セレンテラジン、またはセレンテラジン誘導体もしくはセレンテラジンアナログを含む、条項１２に記載の化合物。
条項１４
当該基質が、フリマジン、セレンテラジンＨ，Ｈ、またはルシフェリンである、条項１２に記載の化合物。
条項１５
当該ルシフェラーゼが、甲虫ルシフェラーゼ、レニラルシフェラーゼ、オプロフォラスルシフェラーゼ、またはそれらの変異型である、条項１２に記載の化合物。
条項１６
当該レポーター部分が、蛍光レポーター部分を含む、条項１１に記載の化合物。
条項１７
当該蛍光レポーター部分が、蛍光団を含む、条項１６に記載の化合物。
条項１８
当該蛍光団が、クマリン、Ｒ１１０、フルオロセイン、ＤＤＡＯ、レゾルフィン、クレシルバイオレット、シリルキサンテン、またはカルボピロニンである、条項１７に記載の化合物。
条項１９
細胞による物質の取り込みの評価方法であって、当該方法が、
ａ）試料と、標識された物質との接触であり、ここで、当該標識された物質は、物質及び条項１〜１８のいずれか１項に記載の化合物を含み、ここで、当該試料は、細胞を含む、接触と、
ｂ）光放出の検出であり、それによって、光放出の検出が、細胞による当該物質の取り込みを示す、検出と、
を含む、評価方法。
条項２０
細胞による当該物質の取り込みが、当該化合物の還元及び当該レポーター部分の遊離をもたらし、それによって遊離レポーター部分が生成する、条項１９に記載の方法。
条項２１
当該レポーター部分が、蛍光レポーター部分を含む、条項２０に記載の方法。
条項２２
光放出の検出が、蛍光の生成のための、当該試料の光波長への暴露と、当該試料の蛍光レベルの検出を含む光放出の検出とを含み、ここで、対照試料の蛍光レベルと比較した蛍光レベルにおける増加または蛍光波長における変化が、細胞による当該物質の取り込みを示す、条項２１に記載の方法。
条項２３
当該対照試料が、標識された物質と接触していない試料である、条項２２に記載の方法。
条項２４
当該蛍光レベルが、当該細胞内で検出される、条項２２に記載の方法。
条項２５
当該蛍光レベルが、当該細胞外で検出される、条項２２に記載の方法。
条項２６
当該レポーター部分が、生物発光レポーター部分を含む、条項２０に記載の方法。
条項２７
当該生物発光レポーター部分が、ルシフェラーゼの基質を含む、条項２６に記載の方法。
条項２８
当該細胞が、ルシフェラーゼを含む、条項２７に記載の方法。
条項２９
当該細胞が、当該ルシフェラーゼを発現している、条項２８に記載の方法。
条項３０
光放出の検出が、当該ルシフェラーゼ及び当該遊離レポーター部分によって生成される発光レベルの検出を含む、条項２８に記載の方法。
条項３１
当該試料と、ルシフェラーゼとの接触をさらに含み、ここで、光放出の検出が、当該ルシフェラーゼ及び当該遊離レポーター部分によって生成される発光レベルの検出を含む、条項２７に記載の方法。
条項３２
当該光放出が、当該細胞内で検出されるか、または当該細胞外で検出される、条項３０または３１に記載の方法。
条項３３
細胞による物質の取り込みの評価方法であって、当該方法が、
（ａ）試料と、標識された物質との接触であり、ここで、当該標識された物質は、物質及び条項１〜１１のいずれか１項に記載の化合物を含み、ここで、当該試料は、細胞を含み、ここで、細胞による当該物質の取り込みが、当該化合物の還元及び当該レポーター部分の遊離をもたらし、それによって、遊離レポーター部分が生成する接触と、
（ｂ）蛍光の生成のための、当該試料の光波長への暴露と、
（ｃ）当該試料の蛍光レベルの検出と、
（ｄ）当該試料の蛍光レベルと、対照試料の蛍光レベルとの比較であり、ここで、当該対照試料の蛍光レベルと比較した蛍光レベルにおける増加または蛍光波長における変化が、細胞による当該物質の取り込みを示す比較と、
を含む、評価方法。
条項３４
当該レポーター部分が、蛍光レポーター部分を含む、条項３３に記載の方法。
条項３５
当該蛍光レポーター部分が、蛍光団を含む、条項３４に記載の方法。
条項３６
当該蛍光団が、クマリン、Ｒ１１０、フルオロセイン、ＤＤＡＯ、レゾルフィン、クレシルバイオレット、シリルキサンテン、またはカルボピロニンである、条項３５に記載の方法。
条項３７
当該蛍光レベルが、当該細胞内で検出される、条項３３に記載の方法。
条項３８
当該蛍光レベルが、当該試料において検出される、条項３３に記載の方法。
条項３９
当該対照試料が、標識された物質を含むが、細胞は含まない試料媒体、標識された物質及び細胞は含むが、実験処理は実施していない試料、または標識された物質と接触していない試料である、条項３３に記載の方法。
条項４０
細胞による物質の取り込みの評価方法であって、当該方法が、
ａ）試料と、標識された物質との接触であり、ここで、当該標識された物質は、物質及び条項１〜１１のいずれか１項に記載の化合物を含み、ここで、当該試料は、細胞を含み、ここで、当該細胞は、ルシフェラーゼ含み、ここで、細胞による当該物質の取り込みが、当該化合物の還元及び当該レポーター部分の遊離をもたらし、それによって、遊離レポーター部分が生成する接触と、
ｂ）当該試料の発光レベルの検出と、
ｃ）当該試料の発光レベルと、対照試料の発光レベルとの比較であり、ここで、当該試料の発光レベルが、当該対照試料の発光レベルより高い、または低い場合、細胞による当該物質の取り込みが示される比較と、
を含む、評価方法。
条項４１
当該発光レベルが、当該ルシフェラーゼ及び当該遊離レポーター部分によって生成される、条項４０に記載の方法。
条項４２
当該発光が、当該細胞内で検出されるか、または当該細胞媒体において、当該細胞外で検出される、条項４０に記載の方法。
条項４３
当該対照試料が、標識された物質と接触していない試料である、条項４０に記載の方法。
条項４４
細胞による物質の取り込みの評価方法であって、当該方法が、
ａ）試料と、標識された物質との接触であり、ここで、当該標識された物質は、物質及び条項１〜１１のいずれか１項に記載の化合物を含み、ここで、当該試料は細胞及び細胞媒体を含み、ここで、細胞による当該物質の取り込みが、当該化合物の還元及び当該レポーター部分の遊離をもたらし、それによって、遊離レポーター部分が生成する接触と、
ｂ）当該試料と、ルシフェラーゼとの接触と、
ｃ）当該試料の発光レベルの検出と、
ｄ）当該試料の発光レベルと、対照試料の発光レベルとの比較であり、ここで、当該試料の発光レベルが、当該対照試料の発光レベルより高い、または低い場合、細胞による当該物質の取り込みが示される比較と、
を含む、評価方法。
条項４５
当該発光レベルが、当該ルシフェラーゼ及び当該遊離レポーター部分によって生成される、条項４４に記載の方法。
条項４６
当該発光が、当該細胞において検出されるか、または当該細胞媒体において検出される、条項４４に記載の方法。
条項４７
当該対照試料が、標識された物質を含むが、細胞は含まない試料媒体、標識された物質及び細胞は含むが、実験処理は実施していない試料、または標識された物質と接触していない試料である、条項４４に記載の方法。
条項４８
当該物質が、生体物質である、条項１９〜４７のいずれか１項に記載の方法。
条項４９
当該生体物質が、タンパク質、核酸、脂質、及び糖からなる群から選択される、条項４８に記載の方法。
条項５０
当該タンパク質が、抗体またはリポタンパク質である、条項４９に記載の方法。
条項５１
当該抗体が、Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎである、条項５０に記載の方法。
条項５２
当該物質が、非生体物質である、条項１９〜４７のいずれか１項に記載の方法。
条項５３
当該非生体物質が、治療用薬物、小分子、及びナノ粒子、またはそれらのいずれかの組み合わせからなる群から選択される、条項５２に記載の方法。
条項５４
当該細胞が、真核細胞または原核細胞である、条項１９〜５３のいずれか１項に記載の方法。
条項５５
当該細胞が、動物において存在する、条項５４に記載の方法。
条項５６
当該細胞が、培養媒体において成長している、条項５４に記載の方法。
条項５７
条項１〜１０のいずれか１項に記載の物質及び化合物から得られる、標識された物質。
条項５８
当該物質が、生体物質である、条項５７に記載の標識された物質。
条項５９
当該生体物質が、タンパク質、核酸、脂質、及び糖からなる群から選択される、条項５８に記載の標識された物質。
条項６０
当該タンパク質が、抗体またはリポタンパク質である、条項５９に記載の標識された物質。
条項６１
当該抗体が、Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎである、条項６０に記載の標識された物質。
条項６２
当該レポーター部分が、生物発光レポーター部分または蛍光レポーター部分を含む、条項５７に記載の標識された物質。
条項６３
当該物質が、非生体物質である、条項５７に記載のいずれか１つの標識された物質。
条項６４
当該非生体物質が、治療用薬物、小分子、ナノ粒子、またはそれらのいずれかの組み合わせからなる群から選択される、条項６３に記載の標識された物質。
条項６５
当該生物発光レポーター部分が、ルシフェラーゼの基質を含む、条項６２に記載の標識された物質。
条項６６
当該基質が、ルシフェリン、ルシフェリン誘導体、セレンテラジン、またはセレンテラジン誘導体を含む、条項６５に記載の標識された物質。
条項６７
当該基質が、フリマジン、セレンテラジンＨ，Ｈ、ルシフェリン、またはルシフェリン前駆体である、条項６６に記載の標識された物質。
条項６８
当該ルシフェラーゼが、甲虫ルシフェラーゼ、レニラルシフェラーゼ、またはオプロフォラスルシフェラーゼである、条項６６に記載の標識された物質。
条項６９
当該レポーター部分が、蛍光レポーター部分を含む、条項６２に記載の標識された物質。
条項７０
当該蛍光レポーター部分が、蛍光団を含む、条項６９に記載の標識された物質。
条項７１
当該蛍光団が、クマリン、ローダミン、Ｒ１１０、フルオロセイン、ＤＤＡＯ、レゾルフィン、またはクレシルバイオレットである、条項７０に記載の標識された物質。
条項７２
条項１〜１８のいずれか１項に記載の化合物、物質、またはそれらのいずれかの組み合わせを含む、キット。
条項７３
物質及び条項１〜１８のいずれか１項に記載の化合物を含む標識された物質を含む、キット。
条項７４
当該物質が生体物質である、条項７２または７３に記載のキット。
条項７５
当該生体物質が、タンパク質、核酸、脂質、及び糖からなる群から選択される、条項７４に記載のキット。
条項７６
当該タンパク質が、抗体またはリポタンパク質である、条項７５に記載のキット。
条項７７
当該物質が、非生体物質である、条項７２または７３に記載のキット。
条項７８
当該非生体物質が、治療用薬物、小分子、及びナノ粒子、またはそれらのいずれかの組み合わせからなる群から選択される、条項７７に記載のキット。
条項７９
当該化合物が、ルシフェラーゼの基質である、条項７２または７３に記載のキット。
条項８０
検出試薬をさらに含む、条項７９に記載のキット。
条項８１
当該検出試薬が、ルシフェラーゼ酵素を含む、条項８０に記載のキット。
条項８２
式（Ｉ）の化合物、またはその塩であって、
（Ｉ）
式中、
Ａは、レポーター部分であり；
Ｒ14は、Ｈ、アルキル、ヒドロキシアルキル、アルコキシ、カルボキシアルキル、またはアミドアルキルであり；
Ｒ9及びＲ10は、アルキルから独立に選択され；
Ｒ11、Ｒ12、及びＲ13は、Ｈ、アルキル、アルコキシ、ブロモ、クロロ、もしくはアミノから独立に選択されるか、またはＲ11及びＲ12は、融合されたフェニル環を形成でき；
Ｘは、Ｏであり；
Ｌは、−（ＣＨ2）mＣ（Ｒ17）2（ＣＨ2）n−Ｙ−Ｃ（Ｏ）−であり；
Ｒ17は、独立にＨ、アルキルであるか、または両Ｒ17は、一緒になって３〜７個の炭素を有するアルキル環を形成でき；
ｍは、０〜２の整数であり；
ｎは、０〜２の整数であり；
Ｙは、ＯまたはＮＲ15であり；
Ｒ15は、Ｈ、アルキル、ヒドロキシアルキル、アジドアルキル、シアノアルキル、ハロアルキル、アルケニル、アルキニル、−アルキル−Ｎ（Ｒ23）Ｃ（Ｏ）Ｒ24、−アルキル−ＳＯ3Ｒ25、−アルキル−ＳＯ2Ｎ（Ｒ26）（Ｒ27）、−アルキル−ＣＯＲ28、−アルキル−ＣＯ2Ｒ29、−アルキル−ＯＣ（Ｏ）Ｒ29、−アルキル−ＯＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ30）（Ｒ31）、−アルキル−アミド、またはポリアルコキシアルキルであり、ここで、当該ポリアルコキシアルキル及び−アルキル−アミドは、非置換であるか、または１個もしくは複数の適した置換基で置換されており；ならびに
Ｒ23、Ｒ24、Ｒ25、Ｒ26、Ｒ27、Ｒ28、Ｒ29、Ｒ30、及びＲ31は、水素、アルキル、アリール、ヘテロアリール、ヘテロシクリル、及びシクロアルキルからそれぞれ独立に選択される、式（Ｉ）の化合物、またはその塩。
条項８３
Ｒ15が、ポリアルコキシアルキルであって、ここで、当該ポリアルコキシアルキルは、−（Ｃ2−Ｃ6−アルコキシ）x−アルキル、−（Ｃ2−Ｃ6−アルコキシ）x−ハロアルキル、−（Ｃ2−Ｃ6−アルコキシ）x−ヒドロキシアルキル、−（Ｃ2−Ｃ6−アルコキシ）x−アミノアルキル、−（Ｃ2−Ｃ6−アルコキシ）x−アルキルアミノアルキル、−（Ｃ2−Ｃ6−アルコキシ）xジ（アルキル）アミノアルキル、−（Ｃ2−Ｃ6−アルコキシ）x−アジドアルキル、−（Ｃ2−Ｃ6−アルコキシ）x−シアノアルキル、−（Ｃ2−Ｃ6−アルコキシ）x−アルケニル、−（Ｃ2−Ｃ6−アルコキシ）x−アルキニル、−（Ｃ2−Ｃ6−アルコキシ）x−Ｎ（Ｒ23）Ｃ（Ｏ）Ｒ24、−（Ｃ2−Ｃ6−アルコキシ）x−ＳＯ3Ｒ25、−（Ｃ2−Ｃ6−アルコキシ）x−アルキル−ＳＯ2Ｎ（Ｒ26）（Ｒ27）、−（Ｃ2−Ｃ6−アルコキシ）x−アルキル−ＣＯＲ28、−（Ｃ2−Ｃ6−アルコキシ）x−アルキル−ＯＣ（Ｏ）Ｒ29、−（Ｃ2−Ｃ6−アルコキシ）ｘ−アルキル−ＯＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ30）（Ｒ31）、−（Ｃ2−Ｃ6−アルコキシ）x−アルキル−ＣＯ2Ｒ29、−（Ｃ2−Ｃ6−アルコキシ）x−アルキル−ＣＯＮ（Ｒ32）（Ｒ33）、及び−（Ｃ2−Ｃ6−アルコキシ）x−アルキル−（ＣＯ）−ＮＲ34−（ＣＲaＲb）p−ＮＲ35（ＣＯ）−Ｔからなる群から選択され、ここで、
Ｒ23、Ｒ24、Ｒ25、Ｒ26、Ｒ27、Ｒ28、Ｒ29、Ｒ30、及びＲ31は、水素、アルキル、アリール、ヘテロアリール、ヘテロシクリル、及びシクロアルキルからそれぞれ独立に選択され；
ｘは、１〜２０から選択される整数であり；
Ｒ32及びＲ33は、水素、アルキル、カルボキシ、ペプチド、薬物、生物学的に活性な部分、及び色素からそれぞれ独立に選択され；
Ｒ34及びＲ35は、水素、及びアルキルからそれぞれ独立に選択され；
Ｒa及びＲbは、水素、アルキル、及びカルボキシからそれぞれ独立に選択され；
ｐは、０〜６であり；ならびに
Ｔは、アリール、アリールアルキル、シクロアルキルアルキル、ヘテロアリール、ヘテロアリールアルキル、ヘテロシクル、ヒドロキシアルキル、タンパク質、ポリペプチド、ポリペプチドを基礎とする毒物、アミノ酸、ヌクレオチド、ポリヌクレオチド、脂質、糖、炭水化物、酵素基質、薬物、薬物の誘導体、ポリマー連結ナノ粒子、抗体、界面活性剤、及び色素、またはそれらの組み合わせから選択される、条項８２に記載の化合物。
条項８４
Ｒ15が、ポリアルコキシアルキルであって、ここで、当該ポリアルコキシアルキルは、−（Ｃ2−Ｃ6−アルコキシ）x−アルキル−ＣＯＮ（Ｒ32）（Ｒ33）、または−（Ｃ2−Ｃ6−アルコキシ）x−アルキル−（ＣＯ）−ＮＲ34−（ＣＲaＲb）p−ＮＲ35（ＣＯ）−Ｔであり；
ｘは、１〜２０から選択される整数であり；
Ｒ32及びＲ33は、水素、アルキル、カルボキシ、アリール、アリールアルキル、シクロアルキルアルキル、ヘテロアリール、ヘテロアリールアルキル、ヘテロシクル、ヒドロキシアルキル、タンパク質、ポリペプチド、ポリペプチドを基礎とする毒物、アミノ酸、ヌクレオチド、ポリヌクレオチド、脂質、糖、炭水化物、酵素基質、薬物、薬物の誘導体、ポリマー連結ナノ粒子、抗体、界面活性剤、及び色素、またはそれらの組み合わせからそれぞれ独立に選択され；
Ｒ34及びＲ35は、水素、及びアルキルからそれぞれ独立に選択され；
Ｒa及びＲbは、水素、アルキル、及びカルボキシからそれぞれ独立に選択され；
ｐは、０〜６であり；ならびに
Ｔは、アリール、アリールアルキル、シクロアルキルアルキル、ヘテロアリール、ヘテロアリールアルキル、ヘテロシクル、ヒドロキシアルキル、タンパク質、ポリペプチド、ポリペプチドを基礎とする毒物、アミノ酸、ヌクレオチド、ポリヌクレオチド、脂質、糖、炭水化物、酵素基質、薬物、薬物の誘導体、ポリマー連結ナノ粒子、抗体、界面活性剤、及び色素、またはそれらの組み合わせから選択される、条項８２に記載の化合物。
条項８５
Ｒ15が、
であって、
式中、
Ｔは、アリール、アリールアルキル、シクロアルキルアルキル、ヘテロアリール、ヘテロアリールアルキル、ヘテロシクル、ヒドロキシアルキル、タンパク質、ポリペプチド、ポリペプチドを基礎とする毒物、アミノ酸、ヌクレオチド、ポリヌクレオチド、脂質、糖、炭水化物、酵素基質、薬物、薬物の誘導体、ポリマー連結ナノ粒子、抗体、界面活性剤、及び色素、またはそれらの組み合わせから選択され；ならびに
ｘは、１〜２０から選択される整数である、条項８２に記載の化合物。
条項８６
Ｒ15が、−アルキル−アミドであって、ここで、当該−アルキル−アミドは、−アルキル−ＣＯＮ（Ｒ32）（Ｒ33）または−アルキル−（ＣＯ）−ＮＲ34−（ＣＲaＲb）p−ＮＲ35（ＣＯ）−Ｔであり、ここで、
Ｒ32及びＲ33は、水素、アルキル、カルボキシ、アリール、アリールアルキル、シクロアルキルアルキル、ヘテロアリール、ヘテロシクル、アルケン、ポリオール、アルケニルポリオール、ペプチド、薬物、薬物の誘導体、生物学的に活性な部分、及び色素からそれぞれ独立に選択され；
Ｒ34及びＲ35は、水素、及びアルキルからそれぞれ独立に選択され；
Ｒa及びＲbは、水素、アルキル、及びカルボキシからそれぞれ独立に選択され；
ｐは、０〜６であり；ならびに
Ｔは、アリール、アリールアルキル、シクロアルキルアルキル、ヘテロアリール、ヘテロアリールアルキル、ヘテロシクル、ヒドロキシアルキル、タンパク質、ポリペプチド、ポリペプチドを基礎とする毒物、アミノ酸、ヌクレオチド、ポリヌクレオチド、脂質、糖、炭水化物、酵素基質、薬物、薬物の誘導体、ポリマー連結ナノ粒子、抗体、界面活性剤、及び色素、またはそれらの組み合わせから選択される、条項８２に記載の化合物。
条項８７
Ｒ15が、
であって；
式中、
Ｔは、アリール、アリールアルキル、シクロアルキルアルキル、ヘテロアリール、ヘテロシクル、ヒドロキシアルキル、タンパク質、ポリペプチド、ポリペプチドを基礎とする毒物、アミノ酸、ヌクレオチド、ポリヌクレオチド、脂質、糖、炭水化物、酵素基質、薬物、薬物の誘導体、ポリマー連結ナノ粒子、抗体、界面活性剤、及び色素、またはそれらの組み合わせから選択され；ならびに
ｘは、０〜２０である、条項８２に記載の化合物。
条項８８
Ｒ15が、ポリアルコキシアルキルであって、ここで、当該ポリアルコキシアルキルは、非置換であるか、またはアルキル、アルコキシアルキル、ハロアルキル、ハロアルコキシアルキル、ヒドロキシアルキル、アミノアルキル、アルキルアミノアルキル、ジ（アルキル）アミノアルキル、アジドアルキル、シアノアルキル、アルコキシ、ハロアルコキシ、アルコキシアルコキシ、アルケニル、アルキニル、−Ｎ（Ｒ23）Ｃ（Ｏ）Ｒ24、−ＳＯ3Ｒ25、−ＳＯ2Ｎ（Ｒ26）（Ｒ27）、−ＣＯＲ28、−ＣＯ2Ｒ29、及び−ＣＯＮ（Ｒ30）（Ｒ31）からなる群から独立に選択される１〜３個の置換基で置換されており、ここで、Ｒ23、Ｒ24、Ｒ25、Ｒ26、Ｒ27、Ｒ28、Ｒ29、Ｒ30、及びＲ31は、水素、アルキル、アリール、ヘテロアリール、ヘテロシクリル、及びシクロアルキルからそれぞれ独立に選択される、条項８２に記載の化合物。
条項８９
Ｒ15が、
であって、
式中、
Ｒ40は、水素、アルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、ヘテロアリール、ヘテロシクリル、及びシクロアルキルからなる群から選択され、ここで、当該アリール、ヘテロアリール、ヘテロシクリル、及びシクロアルキルは、非置換であるか、または１個もしくは複数の適した置換基で置換されており；ならびに
ｘは、１〜２０から選択される整数である、条項８２に記載の化合物。
条項９０
Ｒ40が、水素である、条項８９に記載の化合物。
条項９１
Ｒ40が、Ｎ、Ｏ、及びＳからなる群から独立に選択される１、２、または３個のヘテロ原子を有する５または６員ヘテロシクリルである、条項８９に記載の化合物。
条項９２
Ｒ40が、
である、条項８９に記載の化合物。
条項９３
ｘが、２、３、または４である、条項８９に記載の化合物。
条項９４
式（Ｉ−ｖｉ）を有するか、またはその塩である、条項８９に記載の化合物。
（Ｉ−ｖｉ）
条項９５
Ｒ15が、


であり；及び
ｘは、それぞれ独立に０〜２０である、条項８２に記載の化合物。
条項９６











































またはそれらの塩からなる群から選択される、条項８２に記載の化合物。
条項９７
Ｔが、タンパク質、ポリペプチド、オリゴヌクレオチド、タンパク質−オリゴヌクレオチド結合体、脂質、治療用薬物、小分子、蛍光分子、ポリマー連結ナノ粒子、界面活性剤、または糖である、条項８３〜８７のいずれか１項に記載の化合物。
条項９８
Ｔが、タンパク質である、条項９７に記載の化合物。
条項９９
当該タンパク質が、抗体である、条項９８に記載の化合物。
条項１００
Ｔが、ポリペプチドである、条項９７に記載の化合物。
条項１０１
当該ポリペプチドが、ポリペプチド毒物である、条項１００に記載の化合物。
条項１０２
Ｔが、治療用薬物である、条項９７に記載の化合物。
条項１０３
当該化合物が、ＰＢＩ−５６５１、ＰＢＩ−５６５８、ＰＢＩ−５６６６、ＰＢＩ−５６４８、ＰＢＩ−５６５５、ＰＢＩ−５６６２、ＰＢＩ−５６５７、ＰＢＩ−５６６５、ＰＢＩ−５６６７、ＰＢＩ−５６５０、ＰＢＩ−５６５４、ＰＢＩ−５６６１、ＰＢＩ−５８２７、ＰＢＩ−５８２８、ＰＢＩ−５８２９、ＰＢＩ−５６４７、ＰＢＩ−５６６８、ＰＢＩ−５６５９、ＰＢＩ−５６６３、ＰＢＩ−５６５２、ＰＢＩ−５６６９、ＰＢＩ−５６２５、ＰＢＩ−５６４９、ＰＢＩ−５６５３、ＰＢＩ−５６５６、ＰＢＩ−５６６０、ＰＢＩ−５６６４、ＰＢＩ−５８３０、ＰＢＩ−５８３１、または
である、条項１０２に記載の化合物。
条項１０４
Ｔが、蛍光分子である、条項９７に記載の化合物。
条項１０５
当該蛍光分子が、ＦＡＭジアミンである、条項１０４に記載の化合物。
条項１０６
当該化合物が、ＰＢＩ−５６８３、ＰＢＩ−５８２６、ＰＢＩ−５６８２、ＰＢＩ−５６８４、ＰＢＩ−５８２４、またはＰＢＩ−５８２５である、条項１０５に記載の化合物。
条項１０７
Ｔが、ポリマー連結ナノ粒子または界面活性剤である、条項９７に記載の化合物。
条項１０８
当該ナノ粒子が、金ナノ粒子である、条項１０７に記載の化合物。
条項１０９
当該化合物が、ＰＢＩ−５９０７、ＰＢＩ−５９０８、ＰＢＩ−５９０９、ＰＢＩ−５９１０、ＰＢＩ−５９１１、またはＰＢＩ−５９１２である、条項１０８に記載の化合物。
条項１１０
当該レポーター部分が、生物発光レポーター部分または蛍光レポーター部分を含む、条項８２に記載の化合物。
条項１１１
当該生物発光レポーター部分が、ルシフェラーゼの基質を含む、条項１１０に記載の化合物。
条項１１２
当該基質がルシフェリン、ルシフェリン誘導体もしくはルシフェリンアナログ、ルシフェリン前駆体もしくはルシフェリン前駆体のアナログ、セレンテラジン、またはセレンテラジン誘導体もしくはセレンテラジンアナログである、条項１１１に記載の化合物。
条項１１３
当該基質が、フリマジン、セレンテラジンＨ，Ｈ、またはルシフェリンである、条項１１１に記載の化合物。
条項１１４
当該ルシフェラーゼが、甲虫ルシフェラーゼ、レニラルシフェラーゼ、オプロフォラスルシフェラーゼ、またはそれらの変異型である、条項１１１に記載の化合物。
条項１１５
当該レポーター部分が、蛍光レポーター部分を含む、条項１１０に記載の化合物。
条項１１６
当該蛍光レポーター部分が、蛍光団を含む、条項１１５に記載の化合物。
条項１１７
当該蛍光団が、クマリン、Ｒ１１０、フルオロセイン、ＤＤＡＯ、レゾルフィン、クレシルバイオレット、シリルキサンテン、またはカルボピロニンである、条項１１６に記載の化合物。
条項１１８
細胞による物質の取り込みの評価方法であって、当該方法が、
ａ）試料と、標識された物質との接触であり、ここで、当該標識された物質は、ｉ）物質及び条項８２〜１１７のいずれか１項に記載の化合物、またはｉｉ）条項８２〜１１７のいずれか１項に記載の化合物を含み、ここで、当該試料は、細胞を含む、接触と、
ｂ）光放出の検出であり、それによって、光放出の検出が、細胞による当該物質の取り込みを示す、検出と、
を含む、評価方法。
条項１１９
細胞による当該物質の取り込みが、当該化合物の還元及び遊離レポーター部分の生成をもたらす、条項１１８に記載の方法。
条項１２０
当該レポーター部分が、蛍光レポーター部分を含む、条項１１９に記載の方法。
条項１２１
光放出の検出が、当該試料の光波長への暴露と、当該試料における蛍光レベルの検出とを含み、ここで、対照試料の蛍光または蛍光波長と比較した、蛍光における増加または蛍光波長における変化が、細胞による当該物質の取り込みを示す、条項１２０に記載の方法。
条項１２２
当該対照試料が、標識された物質と接触していない試料である、条項１２１に記載の方法。
条項１２３
蛍光が、当該細胞内で検出される、条項１２１に記載の方法。
条項１２４
蛍光が、当該細胞外で検出される、条項１２１に記載の方法。
条項１２５
当該レポーター部分が、生物発光レポーター部分を含む、条項１１９に記載の方法。
条項１２６
当該生物発光レポーター部分が、ルシフェラーゼの基質を含む、条項１２５に記載の化合物。
条項１２７
当該細胞が、ルシフェラーゼを含む、条項１２６に記載の方法。
条項１２８
当該細胞が、当該ルシフェラーゼを発現している、条項１２７に記載の方法。
条項１２９
光放出の検出が、当該遊離レポーター部分を利用して、当該ルシフェラーゼによって生成される発光の検出を含む、条項１２７に記載の方法。
条項１３０
当該試料と、ルシフェラーゼとの接触をさらに含み、ここで、光放出の検出が、当該遊離レポーター部分を利用して、ルシフェラーゼによって生成される発光の検出を含む、条項１２６に記載の方法。
条項１３１
当該光放出が、当該細胞内または当該細胞外で検出される、条項１２９または１３０に記載の方法。
条項１３２
細胞による物質の取り込みの評価方法であって、当該方法が、
（ａ）試料と、標識された物質との接触であり、ここで、当該標識された物質は、ｉ）物質及び条項８２〜９６、１１０、もしくは１１５〜１１７のいずれか１項に記載の化合物、またはｉｉ）条項８２〜９６、１１０、もしくは１１５〜１１７のいずれか１項に記載の化合物を含み、ここで、当該試料は、細胞を含み、ここで、細胞による当該物質の取り込みは、当該化合物の還元及び遊離蛍光レポーター部分の生成をもたらす接触と、
（ｂ）蛍光の発生のための、当該試料の光波長への暴露と、
（ｃ）当該試料における蛍光の検出と、
（ｄ）当該試料の蛍光または蛍光波長と、対照試料の蛍光との比較であり、ここで、当該対照試料の蛍光または蛍光波長と比較した蛍光における増加または蛍光波長における変化が、細胞による当該物質の取り込みを示す比較と、
を含む、評価方法。
条項１３３
当該蛍光レポーター部分が、蛍光団を含む、条項１３２に記載の方法。
条項１３４
当該蛍光団が、クマリン、Ｒ１１０、フルオロセイン、ＤＤＡＯ、レゾルフィン、クレシルバイオレット、シリルキサンテン、またはカルボピロニンである、条項１３３に記載の方法。
条項１３５
当該蛍光レベルが、当該細胞内で検出される、条項１３２に記載の方法。
条項１３６
当該蛍光レベルが、当該試料において検出される、条項１３２に記載の方法。
条項１３７
当該対照試料が、標識された物質のみを含む試料媒体、標識された物質及び細胞を含むが、実験処理は実施していない試料、または標識された物質と接触していない試料である、条項１３２に記載の方法。
条項１３７
細胞による物質の取り込みの評価方法であって、当該方法が、
（ａ）試料と、標識された物質との接触であり、ここで、当該標識された物質は、ｉ）物質及び条項８２〜９６のいずれか１項に記載の化合物、またはｉｉ）条項８２〜９６のいずれか１項に記載の化合物を含み、ここで、当該試料は、細胞を含み、ここで、当該細胞は、ルシフェラーゼを含み、ここで、細胞による当該物質の取り込みは、当該化合物の還元及び遊離生物発光レポーター部分の生成をもたらす接触と、
（ｂ）当該試料における発光の検出と、
（ｃ）当該試料の発光と、対照試料の発光との比較であり、ここで、当該試料の発光が、当該対照試料の発光と比較して変化している場合、細胞による当該物質の取り込みが示される比較と、
を含む、評価方法。
条項１４９
当該発光レベルが、遊離の生物発光レポーター部分を利用して、当該ルシフェラーゼによって生成される、条項１３８に記載の方法。
条項１４０
当該生物発光レポーター部分が、ルシフェラーゼの基質を含む、条項１３９に記載の方法。
条項１４１
当該基質が、ルシフェリン、ルシフェリン誘導体、セレンテラジン、またはセレンテラジン誘導体を含む、条項１４０に記載の方法。
条項１４２
当該基質が、フリマジン、セレンテラジンＨ，Ｈ、ルシフェリン、またはルシフェリン前駆体である、条項１４１に記載の方法。
条項１４３
当該ルシフェラーゼが、甲虫ルシフェラーゼ、レニラルシフェラーゼ、オプロフォラスルシフェラーゼ、またはそれらの変異型である、条項１４１に記載の方法。
条項１４４８２
当該発光が、当該細胞内で検出されるか、または当該細胞媒体において、当該細胞外で検出される、条項１３８に記載の方法。
条項１４５
当該対照試料が、標識された物質と接触していない試料である、条項１３８に記載の方法。
条項１４６
細胞による物質の取り込みの評価方法であって、当該方法が、
（ａ）試料と、標識された物質との接触であり、ここで、当該標識された物質は、ｉ）物質及び条項８２〜９６のいずれか１項に記載の化合物、またはｉｉ）条項８２〜９６のいずれか１項に記載の化合物を含み、ここで、当該試料は、細胞及び細胞媒体を含み、ここで、細胞による当該物質の取り込みは、当該化合物の還元及び遊離生物発光レポーター部分の生成をもたらす接触と、
（ｂ）当該試料と、ルシフェラーゼとの接触と、
（ｃ）当該試料における発光の検出と、
（ｄ）当該試料の発光と、対照試料における発光との比較であり、ここで、当該試料における発光が、当該対照試料の発光と比較して変化している場合、細胞による当該物質の取り込みが示される比較と、
を含む、評価方法。
条項１４７
当該発光レベルが、遊離生物発光レポーター部分を利用して、当該ルシフェラーゼによって生成される、条項１４６に記載の方法。
条項１４８
当該生物発光レポーター部分が、ルシフェラーゼの基質を含む、条項１４７に記載の方法。
条項１４９
当該基質が、ルシフェリン、ルシフェリン誘導体、セレンテラジン、またはセレンテラジン誘導体を含む、条項１４８に記載の方法。
条項１５０
当該基質が、フリマジン、セレンテラジンＨ，Ｈ、ルシフェリン、またはルシフェリン前駆体である、条項１４９に記載の方法。
条項１５１
当該ルシフェラーゼが、甲虫ルシフェラーゼ、レニラルシフェラーゼ、オプロフォラスルシフェラーゼ、またはそれらの変異型である、条項１４９に記載の方法。
条項１５２
当該発光が、当該細胞において検出されるか、または細胞媒体において検出される、条項１４６の方法。
条項１５３
当該対照試料が、標識された物質を含むが、細胞は含まない試料媒体、標識された物質及び細胞は含むが、実験処理は実施していない試料、または標識された物質と接触していない試料である、条項１４６に記載の方法。
条項１５４
当該物質が、生体物質である、条項１１８〜１５３のいずれか１項に記載の方法。
条項１５５
当該生体物質が、タンパク質、ポリペプチド、オリゴヌクレオチド、タンパク質−オリゴヌクレオチド結合体、脂質、治療用薬物、小分子、蛍光分子、及び糖からなる群から選択される、条項１５４に記載の方法。
条項１５６
当該タンパク質が、抗体またはリポタンパク質である、条項１５５に記載の方法。
条項１５７
当該物質が、非生体物質である、条項１１８〜１５３のいずれか１項に記載の方法。
条項１５８
当該非生体物質が、ポリマー連結ナノ粒子または界面活性剤である、条項１５７に記載の方法。
条項１５９
当該細胞が、真核細胞または原核細胞である、条項１１８〜１５８のいずれか１項に記載の方法。
条項１６０
当該細胞が、動物において存在する、条項１５９に記載の方法。
条項１６１
当該細胞が、培養媒体において成長している、条項１５９に記載の方法。
条項１６２
ｉ）物質及び条項８２〜９６のいずれか１項に記載の化合物、またはｉｉ）条項８２〜１１７のいずれか１項に記載の化合物から得られる標識された物質。
条項１６３
当該物質が、生体物質である、条項１６２に記載の標識された物質。
条項１６４
当該生体物質が、タンパク質、ポリペプチド、オリゴヌクレオチド、タンパク質−オリゴヌクレオチド結合体、脂質、治療用薬物、小分子、蛍光分子、及び糖からなる群から選択される、条項１６３に記載の標識された物質。
条項１６５
当該タンパク質が、抗体またはリポタンパク質である、条項１６４に記載の標識された物質。
条項１６６
当該ポリペプチドが、ポリペプチド毒物である、条項１６４に記載の標識された物質。
条項１６７
当該蛍光分子が、ＦＡＭジアミンである、条項１６４に記載の標識された物質。
条項１６８
当該レポーター部分が、生物発光レポーター部分または蛍光レポーター部分を含む、条項１６２に記載の標識された物質。
条項１６９
当該物質が、非生体物質である、条項１６２に記載のいずれか１つの標識された物質。
条項１７０
当該非生体物質が、ポリマー連結ナノ粒子または界面活性剤である、条項１６９に記載の標識された物質。
条項１７１
当該ナノ粒子が、金ナノ粒子である、条項１７０に記載の標識された物質。
条項１７２
当該生物発光レポーター部分が、ルシフェラーゼの基質を含む、条項１６８に記載の標識された物質。
条項１７３
当該基質が、ルシフェリン、ルシフェリン誘導体、セレンテラジン、またはセレンテラジン誘導体を含む、条項１７２に記載の標識された物質。
条項１７４
当該基質が、フリマジン、セレンテラジンＨ，Ｈ、ルシフェリン、またはルシフェリン前駆体である、条項１７３に記載の標識された物質。
条項１７５
当該ルシフェラーゼが、甲虫ルシフェラーゼ、レニラルシフェラーゼ、オプロフォラスルシフェラーゼ、またはそれらの変異型である、条項１７４に記載の標識された物質。
条項１７６
当該レポーター部分が、蛍光レポーター部分を含む、条項１６８に記載の標識された物質。
条項１７７
当該蛍光レポーター部分が、蛍光団を含む、条項１７６に記載の標識された物質。
条項１７８
当該蛍光団が、クマリン、ローダミン、Ｒ１１０、フルオロセイン、ＤＤＡＯ、レゾルフィン、またはクレシルバイオレットである、条項１７７に記載の標識された物質。
条項１７９
条項８２〜１１７のいずれか１項に記載の化合物、物質、またはそれらのいずれかの組み合わせを含む、キット。
条項１８０
物質及び条項８２〜１１７のいずれか１項に記載の化合物を含む標識された物質を含む、キット。
条項１８１
当該物質が、生体物質である、条項１７９または１８０に記載のキット。
条項１８２
当該生体物質が、タンパク質、ポリペプチド、オリゴヌクレオチド、タンパク質−オリゴヌクレオチド結合体、脂質、治療用薬物、小分子、蛍光分子、及び糖からなる群から選択される、条項１８１に記載のキット。
条項１８３
当該タンパク質が、抗体またはリポタンパク質である、条項１８２に記載のキット。
条項１８４
当該物質が、非生体物質である、条項１７９または１８０に記載のキット。
条項１８５
当該非生体物質が、ポリマー連結ナノ粒子または界面活性剤である、条項１８４に記載のキット。
条項１８６
当該ナノ粒子が、金ナノ粒子である、条項１８５に記載のキット。
条項１８７
当該化合物が、ルシフェラーゼの基質である、条項１７９または１８０に記載のキット。
条項１８８
検出試薬をさらに含む、条項１８７に記載のキット。
条項１８９
当該検出試薬が、ルシフェラーゼ酵素を含む、条項１８８に記載のキット。

Claims (14)

  1. 次式（Ｉ）で示される化合物、またはその塩。
    （Ｉ）
    （式中、
    Ａは、ルシフェリン、プロルシフェリン、アミノルシフェリン、キノリル−ルシフェリン、ナフチルルシフェリン、クロロルシフェリン、セレンテラジン、フリマジン、セレンテラジン−ｎ、セレンテラジン−ｆ、セレンテラジン−ｈ、セレンテラジン−ｈｃｐ、セレンテラジン−ｃｐ、セレンテラジン−ｃ、セレンテラジン−ｅ、セレンテラジン−ｆｃｐ、ビス−デオキシセレンテラジン（「セレンテラジン−ｈｈ」）、セレンテラジン−ｉ、セレンテラジン−ｉｃｐ、セレンテラジン−ｖ、２−メチルセレンテラジン、Ｒ１１０、ＤＤＡＯ、レゾルフィン、クレシルバイオレット、シリルキサンテン、ローダミン１２３、ローダミンＸ、Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ−３５０、Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ−４３０、Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ−４８８、Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ−６６０、ＤｙＬｉｇｈｔ５９４、スルホローダミンＢ、スルホローダミン１０１、Ｔｅｘａｓ Ｒｅｄ、フルオレセイン、６−カルボキシフルオレセイン（６−ＦＡＭ）、５−カルボキシフルオレセイン（５−Ｆａｍ）、５−もしくは６−カルボキシ−４，７，２’，７’−テトラクロロフルオレセイン（ＴＥＴ）、５−もしくは６−カルボキシ−４’５’２’４’５’７’ヘキサクロロフルオレセイン（ＨＥＸ）、５’もしくは６’−カルボキシ−４’，５’−ジクロロ−２’，７’−ジメトキシフルオレセイン（ＪＯＥ）、６−ＪＯＥ、５−カルボキシ−２’，４’，５’，７’−テトラクロロフルオレセイン（ＺＯＥ）ロドール、フルオレセインイソチオシアネート、クマリン、７−アミノ−４−メチルクマリン、アミノクマリン、ヒドロキシクマリン、シリルキサンテン及びカルボピロニンの部分からなる群から選択されたレポーター部分であり；
    Ｒ14は、Ｈ、アルキル、ヒドロキシアルキル、アルコキシ、カルボキシアルキル、またはアミドアルキルであり；
    Ｒ9及びＲ10は、アルキルから独立に選択され；
    Ｒ11、Ｒ12、及びＲ13は、独立にアルキルであり；
    Ｘは、Ｏであり；
    Ｌは、−（ＣＨ2）mＣ（Ｒ17）2（ＣＨ2）n−Ｙ−Ｃ（Ｏ）−であり；
    Ｒ17は、独立にＨまたはアルキルであり；
    ｍは、０〜２の整数であり；
    ｎは、０〜２の整数であり；
    Ｙは、ＮＲ15であり；
    Ｒ15は、−アルキル−アミドであり、該−アルキル−アミドが、−アルキル−（ＣＯ）−ＮＲ34−（ＣＲaＲb）p−ＮＲ35（ＣＯ）−Ｔであり；
    Ｒ34及びＲ35は、水素及びアルキルからそれぞれ独立に選択され；
    Ｒa及びＲbは、水素、アルキル及びカルボキシからそれぞれ独立に選択され；
    ｐは、０〜６であり；
    Ｔは、アリール、アリールアルキル、シクロアルキルアルキル、ヘテロアリール、ヘテロアリールアルキル、ヘテロシクル及びヒドロキシアルキルから選択され；または
    Ｒ15が、ポリアルコキシアルキルであって、該ポリアルコキシアルキルが、−（Ｃ2−Ｃ6−アルコキシ）x−アルキル−（ＣＯ）−ＮＲ34−（ＣＲaＲb）p−ＮＲ35（ＣＯ）−Ｔであり；
    ｘは、１〜２０から選択される整数であり；
    Ｒ34及びＲ35は、水素及びアルキルからそれぞれ独立に選択され；
    Ｒa及びＲbは、水素、アルキル及びカルボキシからそれぞれ独立に選択され；
    ｐは、０〜６であり；そして
    Ｔは、アリール、アリールアルキル、シクロアルキルアルキル、ヘテロアリール、ヘテロアリールアルキル、ヘテロシクル及びヒドロキシアルキルから選択され；または
    Ｒ15は、

    であり、
    式中、
    Ｒ40は、水素、アルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、ヘテロアリール、ヘテロシクリル、及びシクロアルキルからなる群から選択され、前記アリール、ヘテロアリール、ヘテロシクリル、及びシクロアルキルが、非置換であるか、または１個もしくは複数の適した置換基で置換されており；そして
    ｘが、１〜２０から選択される整数である。）
  2. Ｒ15が、ポリアルコキシアルキルであって、該ポリアルコキシアルキルが、−（Ｃ2−Ｃ6−アルコキシ）x−アルキル−（ＣＯ）−ＮＲ34−（ＣＲaＲb）p−ＮＲ35（ＣＯ）−Ｔであり；
    ｘは、１〜２０から選択される整数であり；
    Ｒ34及びＲ35は、水素及びアルキルからそれぞれ独立に選択され；
    Ｒa及びＲbは、水素、アルキル及びカルボキシからそれぞれ独立に選択され；
    ｐは、０〜６であり；そして
    Ｔは、アリール、アリールアルキル、シクロアルキルアルキル、ヘテロアリール、ヘテロアリールアルキル、ヘテロシクル及びヒドロキシアルキルから選択される、請求項１に記載の化合物。
  3. Ｒ15が、
    であって、
    式中、
    Ｔは、アリール、アリールアルキル、シクロアルキルアルキル、ヘテロアリール、ヘテロアリールアルキル、ヘテロシクル及びヒドロキシアルキルから選択され；ならびに
    ｘは、１〜２０から選択される整数である、請求項１に記載の化合物。
  4. Ｒ15が、

    であって；
    式中、
    Ｔは、アリール、アリールアルキル、シクロアルキルアルキル、ヘテロアリール、ヘテロシクル及びヒドロキシアルキルから選択され；ならびに
    ｘは、０〜２０である、請求項１に記載の化合物。
  5. Ｔが、Ｎ、Ｏ、及びＳからなる群から独立に選択される１、２、または３個のヘテロ原子を有する５または６員ヘテロシクリルである、請求項４に記載の化合物。
  6. 式（Ｉ−ｖｉ）を有する請求項１に記載の化合物またはその塩。
    （Ｉ−ｖｉ）
















  7. からなる群から選択される請求項１に記載の化合物またはその塩。
  8. 標識化されるべき物質が標識用試薬によって標識された標識化複合体であって、前記標識用試薬が、以下の式（Ｉ）で示されることを特徴とする標識化複合体。

    （Ｉ）
    （式中、
    Ａは、ルシフェリン、プロルシフェリン、アミノルシフェリン、キノリル−ルシフェリン、ナフチルルシフェリン、クロロルシフェリン、セレンテラジン、フリマジン、セレンテラジン−ｎ、セレンテラジン−ｆ、セレンテラジン−ｈ、セレンテラジン−ｈｃｐ、セレンテラジン−ｃｐ、セレンテラジン−ｃ、セレンテラジン−ｅ、セレンテラジン−ｆｃｐ、ビス−デオキシセレンテラジン（「セレンテラジン−ｈｈ」）、セレンテラジン−ｉ、セレンテラジン−ｉｃｐ、セレンテラジン−ｖ、２−メチルセレンテラジン、Ｒ１１０、ＤＤＡＯ、レゾルフィン、クレシルバイオレット、シリルキサンテン、ローダミン１２３、ローダミンＸ、Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ−３５０、Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ−４３０、Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ−４８８、Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ−６６０、ＤｙＬｉｇｈｔ５９４、スルホローダミンＢ、スルホローダミン１０１、Ｔｅｘａｓ Ｒｅｄ、フルオレセイン、６−カルボキシフルオレセイン（６−ＦＡＭ）、５−カルボキシフルオレセイン（５−Ｆａｍ）、５−もしくは６−カルボキシ−４，７，２’，７’−テトラクロロフルオレセイン（ＴＥＴ）、５−もしくは６−カルボキシ−４’５’２’４’５’７’ヘキサクロロフルオレセイン（ＨＥＸ）、５’もしくは６’−カルボキシ−４’，５’−ジクロロ−２’，７’−ジメトキシフルオレセイン（ＪＯＥ）、６−ＪＯＥ、５−カルボキシ−２’，４’，５’，７’−テトラクロロフルオレセイン（ＺＯＥ）ロドール、フルオレセインイソチオシアネート、クマリン、７−アミノ−４−メチルクマリン、アミノクマリン、ヒドロキシクマリン、シリルキサンテン及びカルボピロニンの部分からなる群から選択されたレポーター部分であり；
    Ｒ14は、Ｈ、アルキル、ヒドロキシアルキル、アルコキシ、カルボキシアルキル、またはアミドアルキルであり；
    Ｒ9及びＲ10は、アルキルから独立に選択され；
    Ｒ11、Ｒ12、及びＲ13は、独立にアルキルであり；
    Ｘは、Ｏであり；
    Ｌは、−（ＣＨ2）mＣ（Ｒ17）2（ＣＨ2）n−Ｙ−Ｃ（Ｏ）−であり；
    Ｒ17は、独立にＨまたはアルキルであり；
    ｍは、０〜２の整数であり；
    ｎは、０〜２の整数であり；
    Ｙは、ＮＲ15であり；
    Ｒ15は、−アルキル−アミドであり、該−アルキル−アミドが、−アルキル−（ＣＯ）−ＮＲ34−（ＣＲaＲb）p−ＮＲ35（ＣＯ）−Ｔであり；
    Ｒ34及びＲ35は、水素及びアルキルからそれぞれ独立に選択され；
    Ｒa及びＲbは、水素、アルキル及びカルボキシからそれぞれ独立に選択され；
    ｐは、０〜６であり；
    Ｔは、アリール、アリールアルキル、シクロアルキルアルキル、ヘテロアリール、ヘテロアリールアルキル、ヘテロシクル及びヒドロキシアルキルから選択され；または
    Ｒ15が、ポリアルコキシアルキルであって、該ポリアルコキシアルキルが、−（Ｃ2−Ｃ6−アルコキシ）x−アルキル−（ＣＯ）−ＮＲ34−（ＣＲaＲb）p−ＮＲ35（ＣＯ）−Ｔであり；
    ｘは、１〜２０から選択される整数であり；
    Ｒ34及びＲ35は、水素及びアルキルからそれぞれ独立に選択され；
    Ｒa及びＲbは、水素、アルキル及びカルボキシからそれぞれ独立に選択され；
    ｐは、０〜６であり；そして
    Ｔは、アリール、アリールアルキル、シクロアルキルアルキル、ヘテロアリール、ヘテロアリールアルキル、ヘテロシクル及びヒドロキシアルキルから選択され；または
    Ｒ15は、

    であり、
    式中、
    Ｒ40は、水素、アルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、ヘテロアリール、ヘテロシクリル及びシクロアルキルからなる群から選択され、前記アリール、ヘテロアリール、ヘテロシクリル及びシクロアルキルが、非置換であるか、または１個もしくは複数の適した置換基で置換されており；そして
    ｘが、１〜２０から選択される整数である。）
  9. 前記標識化されるべき物質が、タンパク質、ポリペプチド、ポリペプチドを基礎とする毒物、アミノ酸、ヌクレオチド、ポリヌクレオチド、脂質、糖、炭水化物、酵素基質、薬物、ポリマー連結ナノ粒子及び抗体からなる群から選択される、請求項８に記載の標識化複合体。
  10. 試薬の細胞取り込みの評価方法であって、以下の工程、
    ａ）試料を、請求項８または９に記載の標識化複合体と接触させる工程であって、前記試料が、細胞を含む工程と、
    ｂ）光放出を検出する工程であって、それによって、光放出の検出が、前記試薬の細胞取り込みを示す工程と、
    を含むことを特徴とする評価方法。
  11. 前記試薬の細胞取り込みが、前記標識用試薬の還元及び遊離レポーター部分の生成をもたらす、請求項１０に記載の方法。
  12. 光放出の検出が、前記試料の所定波長の光への暴露と、前記試料における蛍光レベルの検出とを含み、対照試料の蛍光または蛍光波長と比較した、蛍光における増加または蛍光波長における変化が、前記試薬の細胞取り込みを示す、請求項１１に記載の方法。
  13. 前記試料と、ルシフェラーゼとの接触をさらに含み、光放出の検出が、前記遊離レポーター部分を利用して、前記ルシフェラーゼによって生成される発光の検出を含む、請求項１０に記載の方法。
  14. 前記細胞が、真核細胞または原核細胞である、請求項１０に記載の方法。
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