JPH08224096A - 微生物検査用培地と該培地を用いた微生物検査方法 - Google Patents
微生物検査用培地と該培地を用いた微生物検査方法Info
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- JPH08224096A JPH08224096A JP7053757A JP5375795A JPH08224096A JP H08224096 A JPH08224096 A JP H08224096A JP 7053757 A JP7053757 A JP 7053757A JP 5375795 A JP5375795 A JP 5375795A JP H08224096 A JPH08224096 A JP H08224096A
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- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
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- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
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- C12Q1/04—Determining presence or kind of microorganism; Use of selective media for testing antibiotics or bacteriocides; Compositions containing a chemical indicator therefor
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- C12Q1/045—Culture media therefor
Abstract
(57)【要約】
【目的】 ＡＴＰ−ルシフェラーゼ法を使用した微生物
検査において使用される培地であって、微生物以外の物
質の発光による測定障害を引き起こすことのない培地
と、該培地を用いた、簡単でしかも精密で高度の信頼度
を備えた微生物検査方法とを提供することを目的とする
ものである。 【構成】 アデノシン三リン酸（ＡＴＰ）を含有してい
る培地成分を酸性フォスファターゼで処理してなる微生
物検査用培地、並びにＡＴＰ−ルシフェラーゼ法により
微生物検査を行うにあたり、微生物検査用培地として前
記の微生物検査用培地を用いることを特徴とする微生物
検査方法を提供する。
検査において使用される培地であって、微生物以外の物
質の発光による測定障害を引き起こすことのない培地
と、該培地を用いた、簡単でしかも精密で高度の信頼度
を備えた微生物検査方法とを提供することを目的とする
ものである。 【構成】 アデノシン三リン酸（ＡＴＰ）を含有してい
る培地成分を酸性フォスファターゼで処理してなる微生
物検査用培地、並びにＡＴＰ−ルシフェラーゼ法により
微生物検査を行うにあたり、微生物検査用培地として前
記の微生物検査用培地を用いることを特徴とする微生物
検査方法を提供する。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、微生物検査用培地と該
培地を用いた微生物検査方法に関し、詳しくはＡＴＰ−
ルシフェラーゼ法を使用した微生物検査において使用さ
れる培地であって、微生物以外の物質の発光による測定
障害を引き起こすことのない培地と、該培地を用いた、
簡単でしかも精密で高度の信頼度を備えた微生物検査方
法とに関する。本発明は、ビン詰め生ビール中の微生物
検査などのような、少ない菌数の微生物検査に有効に利
用することができる。
培地を用いた微生物検査方法に関し、詳しくはＡＴＰ−
ルシフェラーゼ法を使用した微生物検査において使用さ
れる培地であって、微生物以外の物質の発光による測定
障害を引き起こすことのない培地と、該培地を用いた、
簡単でしかも精密で高度の信頼度を備えた微生物検査方
法とに関する。本発明は、ビン詰め生ビール中の微生物
検査などのような、少ない菌数の微生物検査に有効に利
用することができる。
【０００２】
【従来の技術】アデノシン三リン酸（ＡＴＰ）は生きた
細胞に特異的にまとまって存在する。このＡＴＰを補酵
素としてルシフェリン−ルシフェラーゼ反応を行わし
め、ＡＴＰ含量に比例して発生する微少な光量を高感度
検出器で検出することによって、微生物の存在を確認す
るというＡＴＰ−ルシフェラーゼ法が、微生物の迅速検
査法として注目されている。
細胞に特異的にまとまって存在する。このＡＴＰを補酵
素としてルシフェリン−ルシフェラーゼ反応を行わし
め、ＡＴＰ含量に比例して発生する微少な光量を高感度
検出器で検出することによって、微生物の存在を確認す
るというＡＴＰ−ルシフェラーゼ法が、微生物の迅速検
査法として注目されている。
【０００３】ところで、このＡＴＰ−ルシフェラーゼ法
を用いた微生物検査においては、従来の培地では、培地
成分そのものが発光するため、メンブラン濾過法を用い
ても、例えばビン詰め生ビール中の微生物検査のよう
な、少ない菌数の微生物検査には適用することができな
かった。
を用いた微生物検査においては、従来の培地では、培地
成分そのものが発光するため、メンブラン濾過法を用い
ても、例えばビン詰め生ビール中の微生物検査のよう
な、少ない菌数の微生物検査には適用することができな
かった。
【０００４】そこで、この解決法として、ルシフェラー
ゼ処理の前に、メンブランを洗浄することで遊離ＡＴＰ
を取り除く方法が提案されている（特開平２−１６３０
９８号公報）。しかしながら、この方法は作業に手間が
かかることから、サンプルの大量処理には問題があっ
た。
ゼ処理の前に、メンブランを洗浄することで遊離ＡＴＰ
を取り除く方法が提案されている（特開平２−１６３０
９８号公報）。しかしながら、この方法は作業に手間が
かかることから、サンプルの大量処理には問題があっ
た。
【０００５】また、遊離ＡＴＰを取り除く他の一つの方
法として、アピラーゼ（ＡＴＰ分解酵素）による培地成
分の処理方法が知られている（ Neth. Milk Dairy J. 4
3, 347, 1989 )。しかしながら、アピラーゼの場合、培
地成分によってＡＴＰ分解能力にバラツキがあり、充分
に分解できない場合がある。したがって、全ての培地成
分に対して有効であるとは限らない。
法として、アピラーゼ（ＡＴＰ分解酵素）による培地成
分の処理方法が知られている（ Neth. Milk Dairy J. 4
3, 347, 1989 )。しかしながら、アピラーゼの場合、培
地成分によってＡＴＰ分解能力にバラツキがあり、充分
に分解できない場合がある。したがって、全ての培地成
分に対して有効であるとは限らない。
【０００６】従って、遊離ＡＴＰに起因する発光を充分
に抑え、バックグラウンドの発光レベルが低く、かつ菌
と誤認するような発光が起こらない培地が要望されてい
た。
に抑え、バックグラウンドの発光レベルが低く、かつ菌
と誤認するような発光が起こらない培地が要望されてい
た。
【０００７】
【発明が解決しようとする課題】本発明は、このような
従来の欠点を解消し、ＡＴＰ−ルシフェラーゼ法を使用
した微生物検査において使用される培地であって、微生
物以外の物質の発光による測定障害を引き起こすことの
ない培地と、該培地を用いた、簡単でしかも精密で高度
の信頼度を備えた微生物検査方法とを提供することを目
的とするものである。
従来の欠点を解消し、ＡＴＰ−ルシフェラーゼ法を使用
した微生物検査において使用される培地であって、微生
物以外の物質の発光による測定障害を引き起こすことの
ない培地と、該培地を用いた、簡単でしかも精密で高度
の信頼度を備えた微生物検査方法とを提供することを目
的とするものである。
【０００８】すなわち、本発明は、測定の障害となる遊
離ＡＴＰを効果的に除去し、バックグラウンドの発光レ
ベルを低くして、供試サンプル中数セルの微生物検査を
可能にし、例えばメンブランフィルター上に捕捉した微
生物のＡＴＰ−ルシフェラーゼ法による検査では、微生
物による輝点とバックグラウンドとの区別を明確にし、
検査の信頼性を確保した微生物検査方法を提供すること
をも目的とするものである。
離ＡＴＰを効果的に除去し、バックグラウンドの発光レ
ベルを低くして、供試サンプル中数セルの微生物検査を
可能にし、例えばメンブランフィルター上に捕捉した微
生物のＡＴＰ−ルシフェラーゼ法による検査では、微生
物による輝点とバックグラウンドとの区別を明確にし、
検査の信頼性を確保した微生物検査方法を提供すること
をも目的とするものである。
【０００９】
【課題を解決するための手段】すなわち、本発明は第一
に、アデノシン三リン酸（ＡＴＰ）を含有している培地
成分を酸性フォスファターゼで処理してなる微生物検査
用培地を提供するものである。
に、アデノシン三リン酸（ＡＴＰ）を含有している培地
成分を酸性フォスファターゼで処理してなる微生物検査
用培地を提供するものである。
【００１０】さらに、本発明は第二に、ＡＴＰ−ルシフ
ェラーゼ法により微生物検査を行うにあたり、微生物検
査用培地として前記本発明の第一の微生物検査用培地を
用いることを特徴とする微生物検査方法を提供するもの
である。
ェラーゼ法により微生物検査を行うにあたり、微生物検
査用培地として前記本発明の第一の微生物検査用培地を
用いることを特徴とする微生物検査方法を提供するもの
である。
【００１１】本発明の第一で用いる酸性フォスファター
ゼは、ホスホモノエステラーゼの一つであり、ＡＭＰ，
ＧＭＰ，ＴＭＰ，ＡＤＰ，ＧＤＰ等のモノヌクレオチ
ド、ジヌクレオチドやその他のリン酸エステルを加水分
解する酵素として知られている。
ゼは、ホスホモノエステラーゼの一つであり、ＡＭＰ，
ＧＭＰ，ＴＭＰ，ＡＤＰ，ＧＤＰ等のモノヌクレオチ
ド、ジヌクレオチドやその他のリン酸エステルを加水分
解する酵素として知られている。
【００１２】本発明の第一において、ＡＴＰを含有して
いる培地成分を酸性フォスファターゼで処理する際の条
件としては、酵母エキス等、ＡＴＰを含有する基質をＡ
ＴＰ含量により、０．５％から８．０％、通常は５．０
％程度の溶液とし、該溶液１００ｍｌに対して、酸性フ
ォスファターゼを１．２×１０-3Ｕ〜８．２×１０
-3Ｕ、好ましくは４．１×１０-3Ｕ程度加え、２５〜４
５℃程度の温度で、５分間〜１時間、好ましくは３５〜
３７℃程度の温度で、３０〜４５分間反応させればよ
い。
いる培地成分を酸性フォスファターゼで処理する際の条
件としては、酵母エキス等、ＡＴＰを含有する基質をＡ
ＴＰ含量により、０．５％から８．０％、通常は５．０
％程度の溶液とし、該溶液１００ｍｌに対して、酸性フ
ォスファターゼを１．２×１０-3Ｕ〜８．２×１０
-3Ｕ、好ましくは４．１×１０-3Ｕ程度加え、２５〜４
５℃程度の温度で、５分間〜１時間、好ましくは３５〜
３７℃程度の温度で、３０〜４５分間反応させればよ
い。
【００１３】本発明で用いられる培地成分は、通常使用
されている培地成分からなるものであって、酸性フォス
ファターゼで処理する前にはＡＴＰを多く含有している
ものである。このような培地として、例えば好気性一般
細菌検査用培地組成の一例を挙げれば、ＡＴＰを多量に
含有している酵母エキスの他に、ペプトン、グルコー
ス、ＭｇＳＯ4 ・７Ｈ2 Ｏ、Ｌ−リンゴ酸、マルトー
ス、Ｋ2 ＨＰＯ4 、寒天などを含む培地が挙げられる。
されている培地成分からなるものであって、酸性フォス
ファターゼで処理する前にはＡＴＰを多く含有している
ものである。このような培地として、例えば好気性一般
細菌検査用培地組成の一例を挙げれば、ＡＴＰを多量に
含有している酵母エキスの他に、ペプトン、グルコー
ス、ＭｇＳＯ4 ・７Ｈ2 Ｏ、Ｌ−リンゴ酸、マルトー
ス、Ｋ2 ＨＰＯ4 、寒天などを含む培地が挙げられる。
【００１４】このような通常よく使われる好気性一般細
菌検査用培地（Ａ培地とする。）の組成の一例を示す
と、表１の通りである。
菌検査用培地（Ａ培地とする。）の組成の一例を示す
と、表１の通りである。
【００１５】
【表１】
【００１６】また、乳酸菌等の嫌気性細菌検出に従来か
らよく用いられてきた培地組成の一例を挙げると、ＡＴ
Ｐを多量に含有している酵母エキスの他に、ペプトン、
Ｔｗｅｅｎ８０、酢酸ナトリウム、グルコース、Ｌ−リ
ンゴ酸、Ｋ2 ＨＰＯ4 、Ｌ−システィン ＨＣｌ、マル
トース、寒天などを含む培地が挙げられる。
らよく用いられてきた培地組成の一例を挙げると、ＡＴ
Ｐを多量に含有している酵母エキスの他に、ペプトン、
Ｔｗｅｅｎ８０、酢酸ナトリウム、グルコース、Ｌ−リ
ンゴ酸、Ｋ2 ＨＰＯ4 、Ｌ−システィン ＨＣｌ、マル
トース、寒天などを含む培地が挙げられる。
【００１７】このような乳酸菌等の嫌気性細菌検出に従
来からよく用いられてきた培地（Ｂ培地とする。）の組
成の一例を示すと、表２の通りである。
来からよく用いられてきた培地（Ｂ培地とする。）の組
成の一例を示すと、表２の通りである。
【００１８】
【表２】
【００１９】以上の如きＡＴＰを含有している培地成分
を酸性フォスファターゼで処理することにより、ＡＴＰ
をほぼ完全に分解させ、目的とする微生物検査用培地を
得ることができる。すなわち、上記表１に示すＡ培地の
成分である酵母エキスは、多量のＡＴＰを含有するた
め、上記の処理条件にてＡＴＰをほぼ完全に分解し、Ａ
ＴＰを含まない酵母エキスを上記酵母エキスと置換した
培地（Ａｅ培地とする。）を調製する。また、上記表２
に示すＢ培地の成分である酵母エキスは、同様に多量の
ＡＴＰを含有するため、上記の処理条件にてＡＴＰをほ
ぼ完全に分解し、ＡＴＰを含まない酵母エキスを上記酵
母エキスと置換した培地（Ｂｅ培地とする。）を調製す
る。
を酸性フォスファターゼで処理することにより、ＡＴＰ
をほぼ完全に分解させ、目的とする微生物検査用培地を
得ることができる。すなわち、上記表１に示すＡ培地の
成分である酵母エキスは、多量のＡＴＰを含有するた
め、上記の処理条件にてＡＴＰをほぼ完全に分解し、Ａ
ＴＰを含まない酵母エキスを上記酵母エキスと置換した
培地（Ａｅ培地とする。）を調製する。また、上記表２
に示すＢ培地の成分である酵母エキスは、同様に多量の
ＡＴＰを含有するため、上記の処理条件にてＡＴＰをほ
ぼ完全に分解し、ＡＴＰを含まない酵母エキスを上記酵
母エキスと置換した培地（Ｂｅ培地とする。）を調製す
る。
【００２０】次に、本発明の第二は微生物検査方法に関
し、ＡＴＰ−ルシフェラーゼ法により微生物検査を行う
にあたり、微生物検査用培地として前記本発明の第一の
微生物検査用培地を用いることを特徴とするものであ
る。前記したように、ＡＴＰ−ルシフェラーゼ法は、Ａ
ＴＰを補酵素としてルシフェリン−ルシフェラーゼ反応
を行わしめ、ＡＴＰ含量に比例して発生する微少な光量
を高感度検出器で検出することによって、微生物の存在
を確認する方法でありって、公知の方法である。
し、ＡＴＰ−ルシフェラーゼ法により微生物検査を行う
にあたり、微生物検査用培地として前記本発明の第一の
微生物検査用培地を用いることを特徴とするものであ
る。前記したように、ＡＴＰ−ルシフェラーゼ法は、Ａ
ＴＰを補酵素としてルシフェリン−ルシフェラーゼ反応
を行わしめ、ＡＴＰ含量に比例して発生する微少な光量
を高感度検出器で検出することによって、微生物の存在
を確認する方法でありって、公知の方法である。
【００２１】本発明の第二では、このようなＡＴＰ−ル
シフェラーゼ法により微生物検査を行うにあたり、微生
物検査用培地として前記本発明の第一の微生物検査用培
地を用いる。なお、培地成分としては、当業者が容易に
改変しうる範囲内で、組成を変更することは可能であ
り、またシクロヘキシミドなどの抗生物質、ホップのα
−酸やイソα−酸などを添加することも可能である。
シフェラーゼ法により微生物検査を行うにあたり、微生
物検査用培地として前記本発明の第一の微生物検査用培
地を用いる。なお、培地成分としては、当業者が容易に
改変しうる範囲内で、組成を変更することは可能であ
り、またシクロヘキシミドなどの抗生物質、ホップのα
−酸やイソα−酸などを添加することも可能である。
【００２２】前記したように、従来の培地では、培地成
分そのものが発光するため、メンブラン濾過法を用いて
も、例えばビン詰め生ビール中の微生物検査のような、
少ない菌数の微生物検査には適用することができなかっ
た。しかしながら、前記本発明の第一の微生物検査用培
地は、酵母エキスなどＡＴＰを含有している培地成分を
用いながらも、酸性フォスファターゼで処理することに
より、この酵母エキスなどに由来するＡＴＰをほぼ完全
に分解させたものである。従って、ＡＴＰ−ルシフェラ
ーゼ法を使用した微生物検査において、微生物以外の物
質の発光による測定障害を引き起こすおそれがない。従
って、本発明の第二の微生物検査方法によれば、測定の
障害となる遊離ＡＴＰが効果的に除去され、バックグラ
ウンドの発光レベルの低い培地を用いているため、供試
サンプル中数セルの微生物検査が可能になり、例えばメ
ンブランフィルター上に捕捉した微生物のＡＴＰ−ルシ
フェラーゼ法による検査では、微生物による輝点とバッ
クグラウンドとの区別が明確になり、検査の信頼性を確
保した微生物検査方法を提供することが可能である。
分そのものが発光するため、メンブラン濾過法を用いて
も、例えばビン詰め生ビール中の微生物検査のような、
少ない菌数の微生物検査には適用することができなかっ
た。しかしながら、前記本発明の第一の微生物検査用培
地は、酵母エキスなどＡＴＰを含有している培地成分を
用いながらも、酸性フォスファターゼで処理することに
より、この酵母エキスなどに由来するＡＴＰをほぼ完全
に分解させたものである。従って、ＡＴＰ−ルシフェラ
ーゼ法を使用した微生物検査において、微生物以外の物
質の発光による測定障害を引き起こすおそれがない。従
って、本発明の第二の微生物検査方法によれば、測定の
障害となる遊離ＡＴＰが効果的に除去され、バックグラ
ウンドの発光レベルの低い培地を用いているため、供試
サンプル中数セルの微生物検査が可能になり、例えばメ
ンブランフィルター上に捕捉した微生物のＡＴＰ−ルシ
フェラーゼ法による検査では、微生物による輝点とバッ
クグラウンドとの区別が明確になり、検査の信頼性を確
保した微生物検査方法を提供することが可能である。
【００２３】
【実施例】以下、実施例により本発明をさらに詳細に説
明するが、本発明はこれらの実施例によって何ら限定さ
れるものではない。
明するが、本発明はこれらの実施例によって何ら限定さ
れるものではない。
【００２４】実施例１（酵素処理） ５％濃度の各種酵母エキス１００ｍｌ（Ａ，Ｂ，Ｃ，
Ｄ，Ｅ，Ｆの６種類）を、Ｋ2 ＨＰＯ4 でｐＨ６．５に
調整したものと、Ｌ−リンゴ酸でＰＨ４．５に調整した
ものとを用意し、前者にアピラーゼ２Ｕを添加し、後者
に酸性フォスファターゼ４．１×１０-3Ｕを添加し、そ
れぞれ３７℃で３０分間反応させた。反応終了後に、マ
イクロバイアルバイオマステストキット（ルーマック社
製）とルミノメーター（日本ゼネラル社製）で発光量を
測定した。その結果を図１に示す。なお、併せて無処理
のものを示した。ＲＬＵは相対的な発光量（RelativeLi
ght Unit ）を示している。図１からは、酸性フォスフ
ァターゼによる処理が極めて効果的であることが分か
る。
Ｄ，Ｅ，Ｆの６種類）を、Ｋ2 ＨＰＯ4 でｐＨ６．５に
調整したものと、Ｌ−リンゴ酸でＰＨ４．５に調整した
ものとを用意し、前者にアピラーゼ２Ｕを添加し、後者
に酸性フォスファターゼ４．１×１０-3Ｕを添加し、そ
れぞれ３７℃で３０分間反応させた。反応終了後に、マ
イクロバイアルバイオマステストキット（ルーマック社
製）とルミノメーター（日本ゼネラル社製）で発光量を
測定した。その結果を図１に示す。なお、併せて無処理
のものを示した。ＲＬＵは相対的な発光量（RelativeLi
ght Unit ）を示している。図１からは、酸性フォスフ
ァターゼによる処理が極めて効果的であることが分か
る。
【００２５】実施例２（培地の調製） 市販酵母エキスの５％溶液を１００ｍｌ作製し、Ｌ−リ
ンゴ酸でＰＨ４．５に調整した。３７℃で２０分間加熱
後、酸性フォスファターゼを４．１×１０-3Ｕ添加し、
３７℃で３０分間反応を行った。反応液中のＡＴＰをル
ミノメーター（日本ゼネラル社製）で測定し、反応の終
了を確認した。反応終了後、溶液中の微粒子を取り除く
ためにメンブラン（ポアサイズ０．２２μｍ）濾過を行
ない、ＡＴＰフリーの酵母エキスを１００ｍｌ得た。培
地への添加方法は、全量（１００ｍｌ）を、予め計量し
ておいた２Ｌ（リットル）分の培地成分（酵母エキスを
含まないもの）（前記した如きＡ培地及びＢ培地）に添
加し、水１．９Ｌ（リットル）を加え、所定のｐＨに調
整後、寒天を加えオートクレーブし、Ａｅ培地及びＢｅ
培地を得た。
ンゴ酸でＰＨ４．５に調整した。３７℃で２０分間加熱
後、酸性フォスファターゼを４．１×１０-3Ｕ添加し、
３７℃で３０分間反応を行った。反応液中のＡＴＰをル
ミノメーター（日本ゼネラル社製）で測定し、反応の終
了を確認した。反応終了後、溶液中の微粒子を取り除く
ためにメンブラン（ポアサイズ０．２２μｍ）濾過を行
ない、ＡＴＰフリーの酵母エキスを１００ｍｌ得た。培
地への添加方法は、全量（１００ｍｌ）を、予め計量し
ておいた２Ｌ（リットル）分の培地成分（酵母エキスを
含まないもの）（前記した如きＡ培地及びＢ培地）に添
加し、水１．９Ｌ（リットル）を加え、所定のｐＨに調
整後、寒天を加えオートクレーブし、Ａｅ培地及びＢｅ
培地を得た。
【００２６】実施例３ プレートに固定した各種培地（従来使用していたＡ培
地、Ｂ培地及び実施例２で作製したＡｅ培地とＢｅ培
地）上に、メンブラン濾紙を載せ、培地成分をしみ込ま
せ、ＡＴＰ−ルシフェラーゼ法によりフィルターから発
生する一定面積当たりの発光量を測定した。図２に、各
種培地の発光量を示す。図２からは、実施例２で作製し
たＡｅ培地とＢｅ培地は、従来使用していたＡ培地、Ｂ
培地に比べて明らかに発光量が少ないことが分かる。ま
た、実施例２で作製したＡｅ培地とＢｅ培地によれば、
従来の培地でしばしば生じていた菌との判別を困難にす
る培地由来の輝点が全く生じなくなった。
地、Ｂ培地及び実施例２で作製したＡｅ培地とＢｅ培
地）上に、メンブラン濾紙を載せ、培地成分をしみ込ま
せ、ＡＴＰ−ルシフェラーゼ法によりフィルターから発
生する一定面積当たりの発光量を測定した。図２に、各
種培地の発光量を示す。図２からは、実施例２で作製し
たＡｅ培地とＢｅ培地は、従来使用していたＡ培地、Ｂ
培地に比べて明らかに発光量が少ないことが分かる。ま
た、実施例２で作製したＡｅ培地とＢｅ培地によれば、
従来の培地でしばしば生じていた菌との判別を困難にす
る培地由来の輝点が全く生じなくなった。
【００２７】実施例４（好気性菌の増殖度の比較） 前記Ａ培地とＡｅ培地とをそれぞれプレートに固定し、
それぞれにビール工場で出現し、継代されている好気性
菌を１０1 セルずつまいて好気培養し、生じたコロニー
の数と大きさを比較して、菌の増殖度の違いを評価し
た。その結果を表３に示す。但し、○は生育並、◎は生
育良好なことを示す。表３から明らかなように、Ａ培地
とＡｅ培地とには、好気性菌の増殖度にはほとんど差が
ないことが分かった。
それぞれにビール工場で出現し、継代されている好気性
菌を１０1 セルずつまいて好気培養し、生じたコロニー
の数と大きさを比較して、菌の増殖度の違いを評価し
た。その結果を表３に示す。但し、○は生育並、◎は生
育良好なことを示す。表３から明らかなように、Ａ培地
とＡｅ培地とには、好気性菌の増殖度にはほとんど差が
ないことが分かった。
【００２８】
【表３】
【００２９】実施例５（嫌気性菌の増殖度の比較） 実施例４と同様にして、前記Ｂ培地とＢｅ培地とをそれ
ぞれプレートに固定し、それぞれにビール工場で出現
し、継代されている嫌気性菌を１０1 セルずつまいて嫌
気培養し、生じたコロニーの数と大きさを比較して、菌
の増殖度の違いを評価した。その結果を表４に示す。但
し、○は生育並、◎は生育良好なことを示す。表４から
明らかなように、Ｂ培地とＢｅ培地とには、嫌気性菌の
増殖度にはほとんど差がないことが分かった。
ぞれプレートに固定し、それぞれにビール工場で出現
し、継代されている嫌気性菌を１０1 セルずつまいて嫌
気培養し、生じたコロニーの数と大きさを比較して、菌
の増殖度の違いを評価した。その結果を表４に示す。但
し、○は生育並、◎は生育良好なことを示す。表４から
明らかなように、Ｂ培地とＢｅ培地とには、嫌気性菌の
増殖度にはほとんど差がないことが分かった。
【００３０】
【表４】
【００３１】
【発明の効果】本発明の第一の微生物検査用培地は、酵
母エキスなどＡＴＰを含有している通常の培地成分を用
いながらも、酸性フォスファターゼで処理することによ
り、この酵母エキスなどに由来するＡＴＰをほぼ完全に
分解させたものであり、培地中に測定の障害となる遊離
ＡＴＰをほとんど含まない。従って、本発明の第一の微
生物検査用培地によれば、ＡＴＰ−ルシフェラーゼ法を
使用した微生物検査において、培地由来の発光が安定し
て極めて低レベルに抑えられており、微生物以外の物質
の発光による測定障害を引き起こすおそれがない。メン
ブランフィルター上に捕捉した微生物のＡＴＰ−ルシフ
ェラーゼ法による検査では、微生物による輝点とバック
グラウンドとの区別が明確になり、微生物とそれ以外の
夾雑物とを誤認するおそれがなく、検査の信頼性を確保
することが可能となった。なお、本発明の第一の微生物
検査用培地は、従来使用されている培地と比べて、ビー
ル工場などで出現し、継代されている好気性菌や嫌気性
菌の増殖度において、ほとんど差がない。
母エキスなどＡＴＰを含有している通常の培地成分を用
いながらも、酸性フォスファターゼで処理することによ
り、この酵母エキスなどに由来するＡＴＰをほぼ完全に
分解させたものであり、培地中に測定の障害となる遊離
ＡＴＰをほとんど含まない。従って、本発明の第一の微
生物検査用培地によれば、ＡＴＰ−ルシフェラーゼ法を
使用した微生物検査において、培地由来の発光が安定し
て極めて低レベルに抑えられており、微生物以外の物質
の発光による測定障害を引き起こすおそれがない。メン
ブランフィルター上に捕捉した微生物のＡＴＰ−ルシフ
ェラーゼ法による検査では、微生物による輝点とバック
グラウンドとの区別が明確になり、微生物とそれ以外の
夾雑物とを誤認するおそれがなく、検査の信頼性を確保
することが可能となった。なお、本発明の第一の微生物
検査用培地は、従来使用されている培地と比べて、ビー
ル工場などで出現し、継代されている好気性菌や嫌気性
菌の増殖度において、ほとんど差がない。
【００３２】本発明の第一の微生物検査用培地によれ
ば、測定時のバックグラウンドの発光レベルが極めて低
く抑えられており、試料１リットル中に微生物が１セル
か０セル存在するかを判別するような、非常に精密で高
度の信頼度を有する微生物検査が可能になった。本発明
の第一の微生物検査用培地によれば、アピラーゼ処理を
行った場合よりも、非常に効率良くバックグラウンドの
発光レベルを抑えることができる。また、本発明の第二
の微生物検査方法によれば、本発明の第一の微生物検査
用培地を用いたものであるため、簡単で、しかも精密で
高度の信頼度を備えた微生物検査方法となっている。従
って、本発明は、ビン詰め生ビール中の微生物検査など
のような、少ない菌数の微生物検査に有効に利用するこ
とができる。
ば、測定時のバックグラウンドの発光レベルが極めて低
く抑えられており、試料１リットル中に微生物が１セル
か０セル存在するかを判別するような、非常に精密で高
度の信頼度を有する微生物検査が可能になった。本発明
の第一の微生物検査用培地によれば、アピラーゼ処理を
行った場合よりも、非常に効率良くバックグラウンドの
発光レベルを抑えることができる。また、本発明の第二
の微生物検査方法によれば、本発明の第一の微生物検査
用培地を用いたものであるため、簡単で、しかも精密で
高度の信頼度を備えた微生物検査方法となっている。従
って、本発明は、ビン詰め生ビール中の微生物検査など
のような、少ない菌数の微生物検査に有効に利用するこ
とができる。
【図１】図１は、実施例１における各種酵母エキスの酵
素処理後の発光量を示すグラフである。
素処理後の発光量を示すグラフである。
【図２】図２は、実施例３における各種培地の発光量を
示すものである。
示すものである。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.6 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 Ｇ０１Ｎ 21/78 Ｇ０１Ｎ 21/78 Ｃ
Claims (2)
- 【請求項１】 アデノシン三リン酸（ＡＴＰ）を含有し
ている培地成分を酸性フォスファターゼで処理してなる
微生物検査用培地。 - 【請求項２】 ＡＴＰ−ルシフェラーゼ法により微生物
検査を行うにあたり、微生物検査用培地として請求項１
記載の微生物検査用培地を用いることを特徴とする微生
物検査方法。
Priority Applications (4)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP7053757A JPH08224096A (ja) | 1995-02-20 | 1995-02-20 | 微生物検査用培地と該培地を用いた微生物検査方法 |
| PCT/JP1996/000363 WO1996026290A1 (fr) | 1995-02-20 | 1996-02-19 | Milieu d'examen microbiologique et procede d'examen microbiologique a l'aide de ce milieu |
| EP96902476A EP0757104A4 (en) | 1995-02-20 | 1996-02-19 | MICROBIOLOGICAL EXAMINATION MEDIUM AND MICROBIOLOGICAL EXAMINATION METHOD USING THE SAME |
| US08/722,146 US5756303A (en) | 1995-02-20 | 1996-02-19 | Culture medium and a microbiological test method employing the same |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP7053757A JPH08224096A (ja) | 1995-02-20 | 1995-02-20 | 微生物検査用培地と該培地を用いた微生物検査方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH08224096A true JPH08224096A (ja) | 1996-09-03 |
Family
ID=12951697
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP7053757A Withdrawn JPH08224096A (ja) | 1995-02-20 | 1995-02-20 | 微生物検査用培地と該培地を用いた微生物検査方法 |
Country Status (4)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US5756303A (ja) |
| EP (1) | EP0757104A4 (ja) |
| JP (1) | JPH08224096A (ja) |
| WO (1) | WO1996026290A1 (ja) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2000031292A1 (fr) * | 1998-11-25 | 2000-06-02 | Kikkoman Corporation | Procede de comptage de cellules vivantes |
| JP2020137456A (ja) * | 2019-02-28 | 2020-09-03 | ビオフェルミン製薬株式会社 | 乳酸菌培養用培地 |
Families Citing this family (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2004027378A2 (en) * | 2002-09-20 | 2004-04-01 | Promega Corporation | Luminescence-based methods and probes for measuring cytochrome p450 activity |
| EP2778234B1 (en) * | 2005-05-31 | 2017-09-27 | Promega Corporation | Luminogenic and fluorogenic compounds and methods to detect molecules or conditions |
| AU2009273052B2 (en) | 2008-07-14 | 2015-09-17 | The University Of Tokyo | Aptamer against IL-17 and use thereof |
| WO2010021686A1 (en) * | 2008-08-18 | 2010-02-25 | Promega Corporation | Luminogenic compounds and methods to detect cytochrome p450 3a enzymes |
| WO2014163482A1 (en) * | 2013-04-04 | 2014-10-09 | Malaysian Palm Oil Board (Mpob) | Palm protein dextrose agar (ppda) for detection and enumeration of fungi and yeast |
| WO2015116867A1 (en) | 2014-01-29 | 2015-08-06 | Promega Corporation | Quinone-masked probes as labeling reagents for cell uptake measurements |
Family Cites Families (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US3745090A (en) * | 1970-08-04 | 1973-07-10 | Nasa | Method of detecting and counting bacteria in body fluids |
| US3971703A (en) * | 1974-05-31 | 1976-07-27 | The United States Of America As Represented By The Administrator Of The National Aeronautics And Space Administration | Method of detecting and counting bacteria |
| JPH02163098A (ja) * | 1988-12-14 | 1990-06-22 | Japan Organo Co Ltd | 生菌の検出法 |
-
1995
- 1995-02-20 JP JP7053757A patent/JPH08224096A/ja not_active Withdrawn
-
1996
- 1996-02-19 EP EP96902476A patent/EP0757104A4/en not_active Ceased
- 1996-02-19 WO PCT/JP1996/000363 patent/WO1996026290A1/ja not_active Application Discontinuation
- 1996-02-19 US US08/722,146 patent/US5756303A/en not_active Expired - Fee Related
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2000031292A1 (fr) * | 1998-11-25 | 2000-06-02 | Kikkoman Corporation | Procede de comptage de cellules vivantes |
| JP2020137456A (ja) * | 2019-02-28 | 2020-09-03 | ビオフェルミン製薬株式会社 | 乳酸菌培養用培地 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| US5756303A (en) | 1998-05-26 |
| EP0757104A1 (en) | 1997-02-05 |
| EP0757104A4 (en) | 1997-07-23 |
| WO1996026290A1 (fr) | 1996-08-29 |
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