ES2201144T3 - Procedimiento para la mejora del crecimiento y de la identificacion colorimerica de bacterias, levaduras, hongos o cocos. - Google Patents
Procedimiento para la mejora del crecimiento y de la identificacion colorimerica de bacterias, levaduras, hongos o cocos.Info
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Abstract
LA PRESENTE INVENCION TRATA DE UN PROCEDIMIENTO PARA LA MEJORA DEL CRECIMIENTO Y DE LA DETECCION DE BACTERIAS, LEVADURAS, HONGOS Y COCOS, AÑADIENDO AL MEDIO DE CULTIVO EXTRACTO DE LEVADURA ESTERILIZADO POR FILTRACION Y/O VIOLETA DE PIODONITROTETRAZOLIO.
Description
Procedimiento para la mejora del crecimiento y de
la identificación colorimérica de bacterias, levaduras, hongos o
cocos.
La presente invención se refiere a un
procedimiento para la mejora el crecimiento y de la identificación
de bacterias, levaduras, hongos o cocos, añadiéndose al medio de
cultivo extracto de levadura esterilizado por filtración y violeta
de p-yodonitrotetrazolio.
El procedimiento es apropiado en especial para la
identificación de micobacterias o gérmenes bajo condiciones de
estrés, como gérmenes del aire tras el estrés del secado al
aire.
Se describen acondicionamientos en especial del
procedimiento según la invención en las subreivindicaciones.
El crecimiento de bacterias, levaduras, hongos,
cocos, o bien gérmenes, se efectúa habitualmente en medios de
cultivo conocidos a tal efecto. Después se puede efectuar su
identificación, por ejemplo, por medio de indicadores apropiados por
vía colorimétrica.
Para bacterias, cocos y otros gérmenes se emplea
generalmente medios nutrientes, como por ejemplo Tryptic SOY Agar o
Bouillon, se pueden cultivar levaduras y hongos, como por ejemplo,
en Sabourand Agar, Bouillon o RMPI 1640 Bouillon. Los métodos
habituales para micobacterias son aquellos a base de huevo o
albúmina, como medios de Löwenstein Jensen o Stonebrink o Agar, como
Middlebrook 7H10, 7H11, o medios líquidos, como Middlebrook 7H, o
medio de Kirchner con 10 % de suero de caballo (DIN 58
943-3, Manual of Clinical Microbiology, 6th ed.,
414-416).
Como identificación del crecimiento puede servir
a tal efecto la valoración de ácido palmítico C14, que libera 14
CO2 radioactivo (Bactec, Manual of Clinical microbiology 6th ed.
415), además del consumo de oxígeno en el medio, que se indica a
través de un indicador de fluorescencia (EP-A 0 509
781 AI, nombre comercial del producto MGIT), o mediante medida
barométrica (ESP máquina para cultivo sanguíneo y micobacterias
Difco), o bien mediante indicadores redox, como resazurina/azul de
metileno (DE 4 316 394) o cloruro de tetrazolio (Dtsch. Med.
Wochenschrift 75, 1471 (1995).
El crecimiento de bacterias se efectúa de modo
relativamente lento. De este modo, las micobacterias en medios
sólidos, según cantidad de micobacterias inoculadas, requieren de 2
a 6 semanas, en medios líquidos correspondientemente 1 a 3 semanas.
La identificación del crecimiento con aparatos adicionales requiere
muchos costes, al igual que la eliminación del residuo radioactivo.
En el caso de indicadores redox colorimétricos conocidos, como
resazurina/azul de metileno o cloruro de tetrazolio, se muestra el
efecto de, por ejemplo, las cepas clínicas de micobacterias de
tuberculosis se inhiben en el caso de números de gérmenes
reducidos, y crecen de manera satisfactoria sólo en el caso de
cantidades de gérmenes más elevadas. No obstante, también se puede
identificar de modo seguro números de gérmenes más reducidos en el
material de muestra clínico. Además, estos indicadores son tóxicos
en cantidades elevadas, que son necesarias para números de gérmenes
reducidos. Si bien una reducción cuantitativa de estos indicadores
redox colorimétricos reduce la toxicidad, no obstante esta conduce a
que los productos aislados clínicos, por ejemplo de micobacterias
de tuberculosis, crecen aun pero ya no están teñidos, es decir, no
tiene lugar la identificación colorimétrica deseada.
En el caso de aislamiento y en la identificación
de gérmenes del aire de diferente tipo, como por ejemplo bacterias,
cocos, levaduras, hongos y esporas, se presentan los siguientes
problemas: los gérmenes del aire están estresados debido al secado
al aire. Además, frecuentemente se someten los medios a
esterilizado gamma para la identificación de los gérmenes, lo que
significa de nuevo estrés para el medio, y conduce, por
consiguiente, a un peor crecimiento de los gérmenes a identificar.
Ambos factores conducen a que los gérmenes de determinados tipos, en
especial de bacterias gran positivas, y cocos, ya no se pueden
identificar de modo fiable por vía habitual (colorimétrica con
resazurina).
La US-A 3 989 003 describe un
medio para la identificación de micobacterias, que contiene
extracto de levadura, y en especial ácido hialurónico. El costoso
ácido hialurónico se añade para mejorar el crecimiento
bacteriano.
En la EP-A 0 223 685 se describen
medios para la puesta en práctica del ensayo de decarboxilasa en no
fermentadores.
La EP-A 0 167 724 se refiere a un
medio para la identificación de un intercambio de malonato de
microorganismos a analizar, que presentan, entre otros, extracto de
levadura.
Por consiguiente, con el ensayo de decarboxilasa
citado anteriormente es posible sólo la identificación
positiva/negativa como diferenciación selectiva, pero no una
identificación generalmente más sensible de números de gérmenes más
reducidos.
La DE-C-43 16 394
describe un procedimiento para la identificación óptica del
crecimiento de microorganismo mediante determinación visual del
viraje de color de un sistema constituido por azul de metileno y
resazurina.
En "Mikrobieller Diagnostik", Ed. Friedrich
Burkhardt, Thieme Verlag, 1992, describe un medio para el cultivo
de micoplasmas, que contiene, además de otros componentes, extracto
de levadura. Se obtiene este extracto de levadura mediante
ebullición de 15 minutos en agua, y subsiguiente tratamiento en
autoclave a 121ºC, o esterilizado por filtración.
Por lo tanto, es tarea de la presente invención
desarrollar un procedimiento a través del cual se pueda mejorar el
crecimiento de bacterias, hongos, levaduras, cocos, y efectuar de
modo seguro y económico la identificación de las especies a
investigar.
Según la invención, se soluciona el problema
añadiendo al medio de cultivo extracto de levadura esterilizado por
filtración y violeta de p-yodonitrotetrazolio.
Sorprendentemente se mostró, que mediante la
adición según la invención de extracto de levadura esterilizado por
filtración y violeta de p-yodonitrotetrazolio, se
puede acelerar el crecimiento de bacterias, hongos, levaduras,
cocos. Si se añade el indicador redox violeta de
p-yodonitrotetrazolio (INT), se puede identificar el
crecimiento de la especie a investigar de modo sencillo mediante
colorimetría.
El procedimiento según la invención es apropiado
especialmente para la identificación de micobacterias, y en
especial productos clínicos aislados de Mikobakterien tuberculosis,
que crecen en diversos medios, como 7H9 Bouillon, 7H 1 2, 7H9 con
OADC (Oleic Acid, Albumin, Dextrose, Catalase, Trademark, véase
Difco Manual) y PANTA (Polymyxin, Amphatericin B, Nalidixic acid,
Trimethroprim, Azlocillin) en MGIT® - System Mycobacteria Growth
Indicator Tube); en medio Kirchner con suero de caballo, así como
en medios sólidos, como Löwenstein Jensen.
Incluso las bacterias deterioradas a través de
tiempo de almacenaje largos, en especial micobacterias, crecen
mejor con la adición según la invención.
El tiempo requerido a tal efecto se puede reducir
considerablemente en este caso, o bien se puede simplificar la
propia identificación.
Por ejemplo el ensayo de sensibilidad de
micobacterias, que es posible, en caso contrario, sólo bajo empleo
de un substrato radioactivo (14_{c}-ácido palmítico en el sistema
Bactec® 460 de BectoN Dickinson) en el intervalo de 1 semana, se
puede valorar mediante adición de extracto de levadura esterilizado
por filtración a 7H9 Bouillon ya visualmente como medida de turbidez
en el intervalo de 5 a 7 días, sin que sean necesarios sistemas
costosos, como la identificación de radioactividad, con los
problemas de eliminación vinculados con la misma.
La adición según la invención es apropiada
especialmente también para la identificación de gérmenes del aire,
conduciendo el aumento del número de gérmenes efectuado mediante el
extracto de levadura esterilizado por filtración a un crecimiento
más rápido generalmente, y en especial a un crecimiento más rápido
que en el caso de medios no sometidos a esterilizado gamma. Por
consiguiente, también es posible la identificación colorimétrica de
gérmenes, en especial de bacterias gramnegativas, levaduras y
hongos. Esto posibilita también el esterilizado gamma de medios,
compensando el extracto de levadura esterilizado por filtración el
deterioro de los medios con respecto a las propiedades de
crecimiento. Por lo tanto, los gérmenes en medios sometidos a
esterilizado gamma con extracto de levadura esterilizada por
filtración crecen incluso más fácilmente que con medios
convencionales no sometidos a esterilizado gamma.
A modo de ejemplo, se puede emplear como medio
básico Tryptic Soy Agar, o medios nutrientes similares.
La adición según la invención de extracto de
levadura esterilizado por filtración se efectúa preferentemente en
forma líquida en cantidades de 0,5 a 10/1, en especial
0,5-5 g/1, y de modo muy especialmente preferente
2-2,5 g/l.
El indicador violeta de yodonitrotetrazolio (INT)
se añade al medio del cultivo preferentemente en una cantidad de 1
a 30 mg/l, en especial 5-20 mg/1 y especialmente
8-15 mg/1.
El crecimiento se puede acelerar también en otros
sistemas comerciales mediante la adición complementaria de la
combinación según la invención, como se muestra en el siguiente
ejemplo 4 con MGIT® con extracto de levadura esterilizado por
filtración +INT frente al ejemplo 3 (sistema MGIT® comercial).
Por consiguiente, mediante la adición según la
invención se puede acelerar en suma el crecimiento de bacterias,
levaduras, cocos, hongos y prescindir además de instalaciones de
identificación costosas.
La invención se explica más detalladamente por
medio de los siguientes ejemplos.
I. Ejemplos
1-4
En diferentes medios conocidos (sólidos o
líquidos) se sometió a ensayo el crecimiento de micobacterias de
tuberculosis en diferentes cantidades de inoculado. En este caso,
los medios 2 y 4 contienen la adición de extracto de levadura e INT
según la invención.
En la tabla 1 se representan los resultados de
este ensayo. Como se desprende de la misma, con la adición según la
invención conforme a la muestra 2 se consigue un crecimiento más
rápido frente a 1 (sin adición) y en el caso de 4 (invención) frente
a 3 (comparación).
Medios para el aislamiento de micobacterias
(ejemplos
1-4).
| 1. Medio de | 2. Medio de | |
| Kirchner normal | Kircher con extracto | |
| de levadura e | ||
| INT | ||
| Hidrogenofosfato-12-hidrato disódico | 3,0 g | 3,0 g |
| Dihidrogenofosfato potásico | 4,0 g | 4,0 g |
| Sulfato de magnesio | 0,6 g | 0,6 g |
| Citrato sódico | 2,5 g | 2,5 g |
| L-asparagina | 0,1 g | 0,1 g |
| Aspartato potásico | 4,0 g | 4,0 g |
| D-alanina | 2,0 g | 2,0 g |
| Ovruvato sódico | 0,5 g | 0,5 g |
| Hemina (disuelta en 1 ml de NaOH) | 1,66 mg | 1,66 mg |
| Sulfato amónico de hierro (III) | 50 mg | 50 mg |
| Agua destilada | 500 ml | 80 ml |
| Glicerina tratada en autoclave por separado | 20 ml | 20 ml |
| Suero de caballo | 100 ml | 100 ml |
| (desactivado 1 h a 56ºC) | ||
| Disolución de catalasa | 5 ml | 5 ml |
| (Boehringer Mannheim 106836) | ||
| Disolución de ácido ribonucleico | 25 \mug | 25 \mug |
| 2,5 ml con 25 \mug | ||
| Extracto de levadura esterilizado por filtración | - | 2,5 g en 100 ml H_{2}O |
| INT Solution (Sigma 9405) INT = violeta de p- | - | 24 ml |
| yodonitrotetrazolio = cloruro de (2-(-yodofenil)-3-(4- | ||
| nitrofenil)-5-feniltetrazolio |
Los primeros 12 componentes se someten a
tratamiento en autoclave conjuntamente, los demás se añaden como
disoluciones estériles esterilizadas por filtración (sin tratamiento
en autoclave).
| 3. | MGIT® de Becton Dickinson |
| 4 ml 7H9 Bouillon | |
| + OADC | |
| + PANTA | |
| todos los componentes de Becton Dickinson |
| 4. | MGIT® con extracto de levadura esterilizado por filtración e INT |
| 4 ml 7H9 Bouillon | |
| + OADC | |
| + PANTA | |
| 10 mg de extracto de levadura esterilizado por filtración en 0,4 ml de H_{2}O. |
| Cantidad de disolución | Crecimiento en medio Nº en días | |||
| de inoculado | 1 | 2 | 3 | 4 |
| M. tuberculosis H37RV Mcfarland 0,5 x | ||||
| 10^{-2} | 7 | 5 lila | 8 | 5 lila |
| 10^{-3} | 11 | 8 lila | 9 | 7 lila |
| 10^{-4} | 14 | 11 d.lila | 12 | 10 d.lila |
| 10^{-5} | 16 | 12 d.lila | 14 | 12 d.lila |
| 10^{-6} | 23 | 15 d.lila | 17 | 14 d.lila |
| 10^{-7} | 28 | 19 lila | 20 | 18 d.lila |
| M. tuberculosis klin. 7 Mcfarland 0,5 x | ||||
| 10^{-2} | 9 | 6 lila | 8 | 6 lila |
| 10^{-3} | 13 | 8 lila | 12 | 9 lila |
| 10^{-4} | 17 | 10 d.lila | 16 | 11 d.lila |
| 10^{-5} | 22 | 13 d.lila | 21 | 14 d.lila |
| 10^{-6} | 25 | 16 d.lila | 25 | 17 d.lila |
| 10^{-7} | 32 | 20 d.lila | 30 | 20 d.lila |
| M. tuberculosis klin. 15 Mcfarland 0,5 x | ||||
| 10^{-2} | 8 | 5 lila | 6 | 5 lila |
| 10^{-3} | 12 | 8 lila | 9 | 8 lila |
| 10^{-4} | 15 | 11 d.lila | 12 | 11 d.lila |
| 10^{-5} | 22 | 13 d.lila | 14 | 12 d.lila |
| 10^{-6} | 26 | 16 d.lila | 18 | 15 d.lila |
| 10^{-7} | 29 | 19 d.lila | 22 | 18 d.lila |
| *en el caso de 3 valoración con fluorescencia según la prescripción de MGIT® | ||||
| en el caso de 4 valoración con fluorescencia según la prescripción de MGIT® y adicionalmente | ||||
| presencia de colonias teñidas de lila (a través de INT). | ||||
| d.lila = lila oscuro | ||||
| 2, = invención | ||||
| 1*, 3* = comparación |
\newpage
II. Ejemplos
5-6
En estos ejemplos se elaboró el ensayo de
sensibilidad para la identificación de micobacterias análogamente
al procedimiento descrito en la DIN 58943, parte 8, para medios
sólidos con los medios líquidos 5 y 6 a 6 C. La valoración se
efectúa mediante verificación de turbidez en el control de
crecimiento (así como en el caso de resistencia, también mediante
turbidez) en los medios 5.
En el caso de los medios 6 a 6 C se valoró
resistencia, o bien crecimiento, a través de la presencia de
colonias teñidas de lila.
Se emplea medio 7H9 enriquecido con ADC
(estándar) y según la invención:
medio 7H9 enriquecido con ADC + extracto de
levadura esterilizado por filtración + INT.
| 5) | Middlebrook 7H9 broth 4,7 g/l |
| tratado en autoclave | |
| + ADC enriquecido | |
| 100 ml a 900 ml | |
| medio básico 7H9 (según datos del fabricante | |
| del medio Difco) | |
| 6) | Con adición de extracto de levadura |
| esterilizado por filtración e INT Middlebrook | |
| 7H9 | |
| broth 4,7 g/l tratado en autoclave | |
| 800 ml de medio básico 7H9 | |
| 100 ml de ADC enriquecido | |
| 100 ml de H_ {2}O que contiene 2,5 g de extracto de levadura | |
| esterilizado por filtración | |
| 24 ml de disolución de INT | |
| 6.A diferente a 6: | |
| 100 ml de H_{2}O que contiene 3,0 g de extracto de levadura | |
| esterilizado por filtración | |
| 6.B diferente a 6: | |
| 100 ml de H2O que contiene 2,0 g de extracto de levadura | |
| esterilizado por filtración | |
| 6.C diferente a 6: | |
| 100 ml de H_{2}O que contiene 0,5 g de extracto de levadura | |
| esterilizado por filtración | |
| (invención). |
Los resultados se representan en la siguiente
tabla II.
| Cepa | Antituberculostático | MHK* en | MHK legible después de días en el medio | ||||
| \mug/ml | 5 Comp. | 6 inv. | 6A inv. | 6B inv. | 6C inv. | ||
| M.tb H_{37} R_{v} | Rifampicina | 2,0 | 9 | 5 | 5 | 5 | 6 |
| (RMP) | |||||||
| M.tb klin,7 | Rifampicina | 1,0 | 11 | 7 | 7 | 7 | 8 |
| (RMP) | |||||||
| M.tb klin,15 | Rifampicina | 2,0 | 9 | 5 | 5 | 5 | 6 |
| (RMP) | |||||||
| M.tb H_ {37} R_{v} | Isomiazida (INA) | 0,06 | 9 | 5 | 5 | 5 | 6 |
| M.tb klin,7 | Isomiazida (INA) | 0,03 | 11 | 7 | 7 | 7 | 8 |
| M.tb klin,15 | Isomiazida (INA) | 0,03 | 9 | 5 | 5 | 5 | 6 |
| M.tb H_{37} R_{v} | Etambutol (EMB) | 0,5 | 9 | 5 | 5 | 5 | 6 |
| M.tb klin,7 | Etambutol (EMB) | 0,25 | 11 | 7 | 7 | 7 | 8 |
| M.tb klin,15 | Etambutol (EMB) | 0,5 | 9 | 5 | 5 | 5 | 6 |
| *MHK = concentración de inhibición mínima |
Como se desprende la tabla, la muestra 6 se puede
valorar más rápidamente con la adición según la invención que en el
medio comparativo 5.
Los ejemplos 6A-6C muestran
diferentes cantidades de extracto de levadura añadido.
III. Ejemplos
7-8
En los siguientes ejemplos 7-8 se
indican medios con (ejemplo 8) y sin adición según la invención
(7), que se emplearon con (7A) y sin (7, 8) esterilizado gamma
previo (rayos gamma de 20-30 kilogray) como medio
de crecimiento para diferentes gérmenes del aire citados en la tabla
III.
| 7) | Tryptic Soy Agar |
| para la determinación del número de gérmenes. | |
| 15 g de Pancreatic Digest of Casein | |
| 5 g de Soy Bean Pepton | |
| 5 g de NaCl | |
| 0,7 g de lecitina | |
| 7 g de polisorbato 80 | |
| 17 g de agar | |
| 1000 ml de H_{2}O | |
| se trata la mezcla en autoclave. |
| 8) | Tryptic Soy Agar |
| para la determinación del número de gérmenes con extracto de levadura | |
| esterilizado por filtración e INT | |
| 15 g de Pancreatic Digest of Casein | |
| 5 g de Soy Bean Pepton | |
| 5 g de NaCl | |
| 0,7 g de lecitina | |
| 7 g de polisorbato 80 | |
| 17 g de agar | |
| 900 ml de H_{2}O | |
| se trata la mezcla en autoclave | |
| se añade en medio estéril 100 ml de H_{2}, que contiene 2,5 g de extracto | |
| de levadura esterilizado por filtración | |
| se añade en medio estéril 24 ml de disolución de INT. |
Como se desprende la tabla III, el medio 8
(invención) presenta una mejora esencial en el número de colonias
encontradas de nuevo frente a 7 (comparación).
Además, se puede ver que, mediante el estrés de
la radiación gamma (medios 7A), se reduce el número de colonias
halladas de nuevo frente a los medios no irradiados (7).
| Cantidad de cepa de | Crecimiento en el medio Nr., número de colonias después de 1 día | ||
| inoculado | 7 | 7A | 8 |
| Bacillus subtillis | |||
| 10^{2} | 80 | 11 | 58 colonias lila |
| 2x10^{2} | 10 | 1 | 0 colonias lila |
| 50 | 1 | 0 | 0 colonias lila |
| Staph. Aureus ATCC 6538 | |||
| 10^{2} | Césped | 68 | 116 colonias lila |
| 2x10^{2} | 138 | 27 | 2 colonias lila |
| 50 | 32 | 1 | 0 colonias lila |
| Candida pseudotropicalis | |||
| 10^{2} | 17 | 2 | 48 colonias lila |
| 2x10^{2} | 3 | 0 | 10 colonias lila |
| 50 | 1 | 0 | 3 colonias lila |
| Alteromonas putrefaciens | |||
| 10^{2} | Césped | 59 | Césped, lila |
| 2x10^{2} | 56 | 21 | 128 colonias lila |
| 50 | 11 | 2 | 48 colonias lila |
\newpage
IV. Ensayos
clínicos
Con diferente medio nutriente y un medio que
contenía la adición según la invención de extracto de levadura
esterilizado por filtración e INT, se llevaron a cabo ensayos
clínicos con diferentes materiales de muestra para la identificación
de Mykobacterium tuberculosum.
Los resultados se representan en la siguiente
tabla IV.
| Material de | Medio 2 según la | Bactec 12B*** | Lowenstein | Medios de |
| muestra | invención | Jensen*** | Kirchner | |
| convencionales | ||||
| *** | ||||
| Esputo* | Positivo después | Negativo | Negativo | Negativo |
| de 18 días | ||||
| Esputo | Positivo después | Positivo después | Positivo después | Positivo después |
| 18 días | 18 días** | de 28 días | de 28 días | |
| Esputo | Positivo después | Positivo después | Positivo después | Positivo después |
| de 15 días | de 15 días** | de 21 días | de 18 días | |
| Punción de pleura | Positivo después | Negativo | Positivo después | Positivo después |
| de 18 días | de 18 días | de 18 días | ||
| Lavado bronquial* | Positivo después | Negativo | Positivo después | Positivo después |
| de 20 días | de 18 días | de 18 días | ||
| Esputo | Positivo después | Negativo | Positivo después | Positivo después |
| de 16 días | de 18 días | de 18 días | ||
| * Pacientes tratados, resultado Tb asegurado ya a partir de investigaciones previas. | ||||
| ** En el caso del medio según la invención, es realizable | ||||
| inmediatamente la diferenciación de especies | ||||
| con sondas de DNA comerciales de muestra génica, en el caso de Bactec 12B | ||||
| se debe esperar 3 a 4 días más hasta la consecución de un índice de crecimiento de 500, | ||||
| para poder emplear estas sondas de modo seguro. | ||||
| *** Comparación. |
La tabla IV muestra que los gérmenes deteriorados
y estresados mediante tratamiento son aún cultivables en los medios
según la invención, mientras que esto ya no era el caso en los
medios comparativos.
Además es posible la elaboración subsiguiente
inmediata con sondas de ADN biológicas moleculares con el medio
según la invención el mismo día en el que se aumentó el resultado
positivo del crecimiento. Con ello es posible la diferenciación de
especies y el resultado inmediato en las clínicas, mientras que en
sistemas tradicionales se debería esperar aún a tener suficientes
gérmenes para la investigación con sondas de DNA comerciales.
Como se desprende claramente de estos ejemplos,
el procedimiento según la invención, de modo sencillo, económico,
conduce a resultados rápidos seguros con respecto al crecimiento y
a su identificación de las más diversas especies.
Claims (6)
1. Procedimiento para la mejora del crecimiento e
identificación de bacterias, levaduras, hongos o cocos,
caracterizado porque se añade al medio de cultivo extracto de
levadura esterilizado por filtración y violeta de
p-yodonitrotetrazolio.
2. Procedimiento según la reivindicación 1,
caracterizado porque se mejora el crecimiento y la
identificación de micobacterias.
3. Procedimiento según la reivindicación 2,
caracterizado porque se mejora el crecimiento y la
identificación de cepas de micobacterias de tuberculosis.
4. Procedimiento según la reivindicación 1,
caracterizado porque se mejora el crecimiento y la
identificación de gérmenes del aire.
5. Procedimiento según una de las
reivindicaciones 1 a 4, caracterizado porque se añade al
medio del cultivo 0,5-10 g/l de extracto de levadura
esterilizado por filtración y 1-30 mg/l de violeta
de p-yodonitrotetrazolio.
6. Procedimiento según una de las
reivindicaciones 1 a 5, caracterizado porque se emplea como
medio de cultivo 7H9 Bouillon, 7H9 con OADC (Oleic acid, Albumin,
Dextrose, Catalase) y PANTA (Polymyxin, Amphatericin B, Nalidixic
Acid, Trimethroprim, Azilocillin), medio de Kirchner con extracto
de caballo, medio de Löwenstein Jensen o Tryptic Soy Agar.
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