JP3212893B2 - 細菌、酵母、真菌類又は球菌の増殖及び比色検出の改良方法 - Google Patents
細菌、酵母、真菌類又は球菌の増殖及び比色検出の改良方法Info
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- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
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- C12Q1/04—Determining presence or kind of microorganism; Use of selective media for testing antibiotics or bacteriocides; Compositions containing a chemical indicator therefor
- C12Q1/045—Culture media therefor
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Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は、滅菌濾過された酵
母抽出物、ｐ- インドニトロテトラゾリウムヴァイオレ
ット又はこれらの混合物を培養前に培養培地に加えるこ
とによる、細菌、酵母、真菌類又は球菌の増殖及び比色
検出の改良方法に関する。この方法は、負荷条件下でマ
イコバクテリア又は細菌、たとえば大気中での脱水によ
る負荷後の気中微生物の検出に特に適する。
母抽出物、ｐ- インドニトロテトラゾリウムヴァイオレ
ット又はこれらの混合物を培養前に培養培地に加えるこ
とによる、細菌、酵母、真菌類又は球菌の増殖及び比色
検出の改良方法に関する。この方法は、負荷条件下でマ
イコバクテリア又は細菌、たとえば大気中での脱水によ
る負荷後の気中微生物の検出に特に適する。
【０００２】本発明による方法の特別な実施態様は従属
クレームに記載されている。
クレームに記載されている。
【０００３】
【従来の技術】細菌、酵母、真菌類、球菌又は病原菌の
増殖は、これに公知の培養培地上で通常行われる。その
検出は、たとえば比色方法で適する指示薬を用いて実施
することができる。細菌、球菌及びその他の病原菌に対
して、通常の栄養培地、たとえばトリプティックソイ(T
rypyic Soy) 寒天又はブイヨンを使用し、酵母及び真菌
類に対してはたとえばサブロー寒天、ブイヨン又はＲＭ
ＰＩ１６４０ブイヨン上で増殖する。マイコバクテリア
に対する通常の方法は、卵- 又は卵黄ベース、たとえば
レーベンスタインイエンセン(Loewenstein Jensen)又は
ストーンブリンク又は寒天培地、たとえばミドルブルッ
ク７Ｈ１０、７Ｈ１１、又は液状培地、たとえばミドル
ブルック７Ｈ又は１０％馬血清を有するキルヒナー培地
（ＤＩＮ５８ ９４３−３、Manual of Clinical Micro
biology 、第６版、４１４−４１６）上で行うものであ
る。
増殖は、これに公知の培養培地上で通常行われる。その
検出は、たとえば比色方法で適する指示薬を用いて実施
することができる。細菌、球菌及びその他の病原菌に対
して、通常の栄養培地、たとえばトリプティックソイ(T
rypyic Soy) 寒天又はブイヨンを使用し、酵母及び真菌
類に対してはたとえばサブロー寒天、ブイヨン又はＲＭ
ＰＩ１６４０ブイヨン上で増殖する。マイコバクテリア
に対する通常の方法は、卵- 又は卵黄ベース、たとえば
レーベンスタインイエンセン(Loewenstein Jensen)又は
ストーンブリンク又は寒天培地、たとえばミドルブルッ
ク７Ｈ１０、７Ｈ１１、又は液状培地、たとえばミドル
ブルック７Ｈ又は１０％馬血清を有するキルヒナー培地
（ＤＩＮ５８ ９４３−３、Manual of Clinical Micro
biology 、第６版、４１４−４１６）上で行うものであ
る。
【０００４】増殖分析に放射性14ＣＯ2 を遊離するＣ14
パルミチン酸の使用が役立ち(Bactec, Manual of Clini
cal Microbiology 第６版、４１５）、更に培地中の酸
素消費──これは蛍光指示薬によって検出される（ヨー
ロッパ特許公開第０，５０９，７８１号公報、Handelsn
ahme des Produkfes ＭＧＩＴ）──又は気圧測定（Ｅ
ＳＰ Automat fur Blutkultur und Mykobakterien, Di
fco)又はレドッツス指示薬、たとえばレザズリン／メチ
レンブルー（ドイツ特許第４３１６３９４号明細書）又
はテトラゾリウムクロライド(Dtsch. Med. Wochenschri
ft７５，１４７１（１９９５）によって行われる。
パルミチン酸の使用が役立ち(Bactec, Manual of Clini
cal Microbiology 第６版、４１５）、更に培地中の酸
素消費──これは蛍光指示薬によって検出される（ヨー
ロッパ特許公開第０，５０９，７８１号公報、Handelsn
ahme des Produkfes ＭＧＩＴ）──又は気圧測定（Ｅ
ＳＰ Automat fur Blutkultur und Mykobakterien, Di
fco)又はレドッツス指示薬、たとえばレザズリン／メチ
レンブルー（ドイツ特許第４３１６３９４号明細書）又
はテトラゾリウムクロライド(Dtsch. Med. Wochenschri
ft７５，１４７１（１９９５）によって行われる。
【０００５】細菌の増殖は比較的ゆっくり行われる。マ
イコバクテリアは植菌されたマイコバクテリアの量に応
じて固形培地上で約２−６週間、液状培地中で対応して
１−３週間を必要とする。更なる装置を有する増殖検出
は、極めて費用がかかり、同様に放射性廃棄物の除去が
必要である。公知の比色レドックス指示薬、たとえばレ
ザズリン／メチレンブルー又はテトラゾリウムクロライ
ドの場合、たとえばマイコバクテリアツベルキュロシス
の臨床菌株は低い細菌数で増殖が妨げられ、より大きい
細菌量で初めて満足のいく増殖をするという作用が分
る。しかし臨床サンプル中で低い細菌数でも間違いなく
検出されねばならない。更にこの指示薬は多量で──こ
れは少ない細菌数に対して必要である──毒性である。
この比色レドックス指示薬の量低下は、毒性を減少させ
るが、臨床分離株、たとえばマクロバクテリアツベルキ
ュロシスの株も増殖するがもはや呈色しない、すなわち
所望の比色検出は起らないという結果を導く。
イコバクテリアは植菌されたマイコバクテリアの量に応
じて固形培地上で約２−６週間、液状培地中で対応して
１−３週間を必要とする。更なる装置を有する増殖検出
は、極めて費用がかかり、同様に放射性廃棄物の除去が
必要である。公知の比色レドックス指示薬、たとえばレ
ザズリン／メチレンブルー又はテトラゾリウムクロライ
ドの場合、たとえばマイコバクテリアツベルキュロシス
の臨床菌株は低い細菌数で増殖が妨げられ、より大きい
細菌量で初めて満足のいく増殖をするという作用が分
る。しかし臨床サンプル中で低い細菌数でも間違いなく
検出されねばならない。更にこの指示薬は多量で──こ
れは少ない細菌数に対して必要である──毒性である。
この比色レドックス指示薬の量低下は、毒性を減少させ
るが、臨床分離株、たとえばマクロバクテリアツベルキ
ュロシスの株も増殖するがもはや呈色しない、すなわち
所望の比色検出は起らないという結果を導く。
【０００６】異なる種類の気中微生物、たとえば細菌、
連鎖球菌、酵母、真菌類及びカビの分離及び検出で、次
の問題が生じる：気中微生物に大気中での脱水によって
負荷を与える。更に細菌の検出のための培地をしばしば
ガンマ滅菌する。このことは培地に対する新たな負荷を
意味し、したがって検出すべき細菌のより悪い増殖を生
じる。この２つのファクターから、特定の種類の細菌、
特にガンマ陽性菌及び球菌は確かに常法（レザズリンで
の比色）でもはや検出することができないことが明らか
である。
連鎖球菌、酵母、真菌類及びカビの分離及び検出で、次
の問題が生じる：気中微生物に大気中での脱水によって
負荷を与える。更に細菌の検出のための培地をしばしば
ガンマ滅菌する。このことは培地に対する新たな負荷を
意味し、したがって検出すべき細菌のより悪い増殖を生
じる。この２つのファクターから、特定の種類の細菌、
特にガンマ陽性菌及び球菌は確かに常法（レザズリンで
の比色）でもはや検出することができないことが明らか
である。
【０００７】
【発明が解決しようとする課題】したがって本発明の課
題は、細菌、真菌類、酵母、球菌の増殖を改良し、検査
すべき種の検出を正確にかつ費用上好都合に行うことが
できる方法を開発することである。
題は、細菌、真菌類、酵母、球菌の増殖を改良し、検査
すべき種の検出を正確にかつ費用上好都合に行うことが
できる方法を開発することである。
【０００８】
【課題を解決するための手段】この課題は本発明によれ
ば、滅菌された酵母抽出物、ｐ- ヨードニトロテトラゾ
リウムヴァイオレット又はこれらの混合物を培養前に培
養培地に加えることによって解決される。驚くべきこと
に、滅菌された酵母抽出物又はｐ- ヨードニトロテトラ
ゾリウムヴァイオレットの本発明による添加によって、
細菌、真菌類、酵母、球菌の増殖を促進することができ
ることが分る。レドックス指示薬：ｐ-ヨードニトロテ
トラゾリウムヴァイオレット（ＩＮＴ）を加える場合、
検査すべき種の増殖を簡単な方法で比色により検出する
ことができる。この場合２つの添加物に於ける比色検出
の強度を、滅菌された酵母抽出物の添加によって相乗的
に増加させる。
ば、滅菌された酵母抽出物、ｐ- ヨードニトロテトラゾ
リウムヴァイオレット又はこれらの混合物を培養前に培
養培地に加えることによって解決される。驚くべきこと
に、滅菌された酵母抽出物又はｐ- ヨードニトロテトラ
ゾリウムヴァイオレットの本発明による添加によって、
細菌、真菌類、酵母、球菌の増殖を促進することができ
ることが分る。レドックス指示薬：ｐ-ヨードニトロテ
トラゾリウムヴァイオレット（ＩＮＴ）を加える場合、
検査すべき種の増殖を簡単な方法で比色により検出する
ことができる。この場合２つの添加物に於ける比色検出
の強度を、滅菌された酵母抽出物の添加によって相乗的
に増加させる。
【０００９】特に本発明による方法は、マクロバクテリ
ア及び特に臨床マクロバクテリアツベルキュロシス分離
株を種々の培地、たとえば７Ｈ９ブイヨン、７Ｈ１２、
ＯＡＤＣを有する７Ｈ９（（オレイン酸、オルブミン、
デキストロース、カタラーゼ、商品名、Difco Manual参
照) 及びＰＡＮＴＡ（ポリミキシン、アンホテリシン
Ｂ、ナリジキシン酸、トリメトロプリム、アズロシリ
ン）ＭＧＩＴ- 系でマクロバクテリア生長指示薬）；馬
血清を有するキルヒナー(Kirchner)培地中で並びに固形
培地、たとえばレーベンスタインイエンセン上で増殖さ
せることにより成る、上記菌株の検出に適する。
ア及び特に臨床マクロバクテリアツベルキュロシス分離
株を種々の培地、たとえば７Ｈ９ブイヨン、７Ｈ１２、
ＯＡＤＣを有する７Ｈ９（（オレイン酸、オルブミン、
デキストロース、カタラーゼ、商品名、Difco Manual参
照) 及びＰＡＮＴＡ（ポリミキシン、アンホテリシン
Ｂ、ナリジキシン酸、トリメトロプリム、アズロシリ
ン）ＭＧＩＴ- 系でマクロバクテリア生長指示薬）；馬
血清を有するキルヒナー(Kirchner)培地中で並びに固形
培地、たとえばレーベンスタインイエンセン上で増殖さ
せることにより成る、上記菌株の検出に適する。
【００１０】長い保存期間によってすら損傷を受ける細
菌、特にマイコバクテリアは、本発明による添加物と共
に増殖する。この場合このことに必要な時間は、著しく
減少するか又は検出ですら簡略化することができる。た
とえばマクロバクテリアの感度テスト──これはさらに
放射性物質(BectonDickinson の System Bactec ４６
０中での14Ｃ- パルミチン酸）の使用下でのみ１週間以
内に可能である───を、７Ｈ９ブイヨンに滅菌濾過さ
れた酵母抽出物の添加によって混濁測定として５〜７日
以内に可視的に評価することができる。この際、高価な
システム、たとえば放射性検出はこれに伴われる廃棄物
の問題と共に除かれる。更に比色物質、すなわちＩＮＴ
との組合せを使用する場合、指示薬の色強度は増加す
る。
菌、特にマイコバクテリアは、本発明による添加物と共
に増殖する。この場合このことに必要な時間は、著しく
減少するか又は検出ですら簡略化することができる。た
とえばマクロバクテリアの感度テスト──これはさらに
放射性物質(BectonDickinson の System Bactec ４６
０中での14Ｃ- パルミチン酸）の使用下でのみ１週間以
内に可能である───を、７Ｈ９ブイヨンに滅菌濾過さ
れた酵母抽出物の添加によって混濁測定として５〜７日
以内に可視的に評価することができる。この際、高価な
システム、たとえば放射性検出はこれに伴われる廃棄物
の問題と共に除かれる。更に比色物質、すなわちＩＮＴ
との組合せを使用する場合、指示薬の色強度は増加す
る。
【００１１】本発明による添加物は気中微生物の検出に
特に適する。この際生じる細菌数の増加は滅菌濾過され
た酵母抽出物によって非- ガンマ滅菌された培地に於け
るよりも急速な増殖を、特により急速な増殖を結果とし
て生じる。したがって細菌、特にグラム陰性菌、酵母及
び真菌類の比色検出も指示薬としてＩＮＴを加えた場合
に可能である。これは培地のガンマ- 滅菌も可能にす
る。この場合滅菌濾過された酵母抽出物は培地の損傷を
増殖性質の点で相殺する。したがって細菌は滅菌濾過さ
れた酵母抽出物を有するガンマ滅菌された培地上で慣用
の非ガンマ- 滅菌培地上でよりも更に容易により良好に
増殖する。
特に適する。この際生じる細菌数の増加は滅菌濾過され
た酵母抽出物によって非- ガンマ滅菌された培地に於け
るよりも急速な増殖を、特により急速な増殖を結果とし
て生じる。したがって細菌、特にグラム陰性菌、酵母及
び真菌類の比色検出も指示薬としてＩＮＴを加えた場合
に可能である。これは培地のガンマ- 滅菌も可能にす
る。この場合滅菌濾過された酵母抽出物は培地の損傷を
増殖性質の点で相殺する。したがって細菌は滅菌濾過さ
れた酵母抽出物を有するガンマ滅菌された培地上で慣用
の非ガンマ- 滅菌培地上でよりも更に容易により良好に
増殖する。
【００１２】基本培地として、たとえばトリプディック
ソイ(Tryptic Soy) 寒天又は類似の栄養培地を使用する
ことができる。滅菌濾過された酵母抽出物は、０．５〜
１０ｇ／ｌ、特に０．５〜５ｇ／ｌ及び特に好ましくは
２〜２．５ｇ／ｌの量で液状形で行われる。指示薬ヨー
ドニトロテトラゾリウムヴァイオレット（ＩＮＴ）を、
培養培地に好ましくは１〜３０ｍｇ／ｌ、特に５〜２０
ｍｇ／ｌ及び特に８〜１５ｍｇ／ｌの量で加える。
ソイ(Tryptic Soy) 寒天又は類似の栄養培地を使用する
ことができる。滅菌濾過された酵母抽出物は、０．５〜
１０ｇ／ｌ、特に０．５〜５ｇ／ｌ及び特に好ましくは
２〜２．５ｇ／ｌの量で液状形で行われる。指示薬ヨー
ドニトロテトラゾリウムヴァイオレット（ＩＮＴ）を、
培養培地に好ましくは１〜３０ｍｇ／ｌ、特に５〜２０
ｍｇ／ｌ及び特に８〜１５ｍｇ／ｌの量で加える。
【００１３】更に、本発明に従って促進される増殖を、
たとえばレザズリン／メチレンブルー系（ドイツ特許第
４３１６３９４号明細書）の少量を使用する場合、他の
方法で比色により検出することもできる。というのは促
進された増殖によって僅かな細菌数ですら検出すること
ができるからである。この系は検出の意図に応じて公知
の方法で変化させることができる。たとえば増殖コント
ロールが望まれる場合、マイクロバクテリアツベルキュ
ロスタチカ(Tuberkulostatika)の感度テストの際に加え
ることができる。この際更にレドックス安定剤を併用す
ることができる。指示薬は通常の量、たとえば１〜２０
０ｍｇ／ｌ又は５〜１００ｍｇ／ｌ栄養培地中に存在す
る。
たとえばレザズリン／メチレンブルー系（ドイツ特許第
４３１６３９４号明細書）の少量を使用する場合、他の
方法で比色により検出することもできる。というのは促
進された増殖によって僅かな細菌数ですら検出すること
ができるからである。この系は検出の意図に応じて公知
の方法で変化させることができる。たとえば増殖コント
ロールが望まれる場合、マイクロバクテリアツベルキュ
ロスタチカ(Tuberkulostatika)の感度テストの際に加え
ることができる。この際更にレドックス安定剤を併用す
ることができる。指示薬は通常の量、たとえば１〜２０
０ｍｇ／ｌ又は５〜１００ｍｇ／ｌ栄養培地中に存在す
る。
【００１４】増殖を、他の通常の系で滅菌濾過された酵
母抽出物のあとからの添加によって、たとえば後記例１
１（市販の Bactec12 Ｂシステム）に対して滅菌濾過さ
れた酵母抽出物を有する Bacted 12Ｂを用いる例１０に
於けると同様に、並びに例６，７，８によれば市販のＭ
ＧＩＴ(Becton-Dickonson)中での例５に対して滅菌濾過
された酵母抽出物、滅菌濾過された酵母抽出物＋ＩＮＴ
Ｉ又はＩＮＴを有するＭＧＩＴ中に於けると同様に示す
ことができる。
母抽出物のあとからの添加によって、たとえば後記例１
１（市販の Bactec12 Ｂシステム）に対して滅菌濾過さ
れた酵母抽出物を有する Bacted 12Ｂを用いる例１０に
於けると同様に、並びに例６，７，８によれば市販のＭ
ＧＩＴ(Becton-Dickonson)中での例５に対して滅菌濾過
された酵母抽出物、滅菌濾過された酵母抽出物＋ＩＮＴ
Ｉ又はＩＮＴを有するＭＧＩＴ中に於けると同様に示す
ことができる。
【００１５】したがって本発明による添加物によって全
体として細菌、酵母、球菌、真菌類の増殖を促進するこ
とができ、更に費用のかかる検出装置を必要としない。
尚、本発明において、「滅菌濾過」とは市販のマイクロ
フィルターを用いて通常の条件下で行われる濾過を意味
する。
体として細菌、酵母、球菌、真菌類の増殖を促進するこ
とができ、更に費用のかかる検出装置を必要としない。
尚、本発明において、「滅菌濾過」とは市販のマイクロ
フィルターを用いて通常の条件下で行われる濾過を意味
する。
【００１６】
【実施例】本発明を下記例によって詳細に説明する。 Ｉ．例１〜１２ 種々の公知培地（固形又は液状）上で、マクロバクテリ
アツベルキュロシスの増殖を種々の植菌量でテストす
る。この際培地２，３，４，６，７，１０，１２は、滅
菌濾過された酵母抽出物（２，３，６，７，１０，１
２）及び（又は）ＩＮＴ（３，４，７，８）の本発明に
よる添加物を含有する。
アツベルキュロシスの増殖を種々の植菌量でテストす
る。この際培地２，３，４，６，７，１０，１２は、滅
菌濾過された酵母抽出物（２，３，６，７，１０，１
２）及び（又は）ＩＮＴ（３，４，７，８）の本発明に
よる添加物を含有する。
【００１７】表Ｉ中に、このテストの結果を示す。これ
から明らかな様に、試料２及び３による本発明の添加物
を用いた場合は１（添加物不含）に比べて、６及び７
（本発明）は５（比較）に比べて、１０（本発明）は９
（比較）に比べて及び１０（本発明）は１１（比較）に
比べて急速な増殖が得られる。更に滅菌濾過された酵母
抽出物及びＩＮＴを添加された培地（３，７）を用いた
場合は、ＩＮＴのみの培地（４又は８）に比べてより強
い色が確認される。 マイコバクテリアの単離用培地（例１〜１２） １．キルヒ ２．キルヒ ３．キルヒ ４．キルヒ ナー培地 ナー培地 ー培地（酵 ナー培地 （標準） （酵母抽出 母抽出物 (INT含有) 物含有) INT 含有) リン酸水素ジナトリウム-12 3.0g 3.0g 3.0g 3.0g 水和物 リン酸二水素カリウム 4.0g 4.0g 4.0g 4.0g 硫酸マグネシウム 0.6g 0.6g 0.6g 0.6g クエン酸ナトリウム 2.5g 2.5g 2.5g 2.5g Ｌ- アスパラギン 0.1g 0.1g 0.1g 0.1g アスパラギン酸カリウム 4.0g 4.0g 4.0g 4.0g Ｄ- アラニン 2.0g 2.0g 2.0g 2.0g ピルビン酸ナトリウム 0.5g 0.5g 0.5g 0.5g ヘミン(1ml NaOH 中に溶解) 1.66mg 1.66mg 1.66ml 1.66mg 硫酸アンモニウム鉄（ＩＩＩ） 50mg 50mg 50ml 50mg 蒸留水 900ml 800ml 800ml 900ml 別個に加圧滅菌されたグリセ 20ml 20ml 20ml 20ml リン 馬血清 (56℃で１時間不活性) 100ml 100ml 100ml 100ml カタラーゼ溶液 (ベーリンガ 5ml 5ml 5ml 5ml ーマンハイム106836) リボ核酸溶液2.5ml(25μg) 25μg 25μg 25μg 25μg 滅菌濾過された酵母抽出物 - 100mlH2O 100mlH2O - 中2.5g 中2.5g INT 溶液 (シグマ9405) - - 24ml 24ml INT=p-ヨードニトロテトラ ゾリウムヴァイオレット=( 2-( ヨードフエニル-3-(4- ニトロフエニル-5- フエニル テトラゾリウムクロライド 最初の１２成分を一緒に加圧滅菌し、他のものを滅菌溶
液として滅菌濾過して（加圧滅菌せず）添加する。 ５．Becton DickinsonのＭＧＩＴ ４ｍｌ ７Ｈ９ ブイヨン ＋ＯＡＤＣ ＋ＰＡＮＴＡ Becton Dickinsonのすべての成分 ６．滅菌濾過された酵母抽出物含有ＭＧＩＴ ４ｍｌ ７Ｈ９ ブイヨン ＋ＯＡＤＣ ＋ＰＡＮＴＡ ＋０．４ｍｌ Ｈ2 Ｏ中に１０ｍｇ滅菌濾過された酵母
抽出物 ７．滅菌濾過された酵母抽出物及びＩＮＴ含有ＭＧＩＴ ４ｍｌ ７Ｈ９ ブイヨン ＋ＯＡＤＣ ＋ＰＡＮＴＡ ＋０．４ｍｌ Ｈ2 Ｏ中に１０ｍｇ滅菌濾過された酵母
抽出物 ８．ＩＮＴ含有ＭＧＩＴ ４ｍｌ ７Ｈ９ ブイヨン ＋ＯＡＤＣ ＋ＰＡＮＴＡ ＋０．１００ｍｌ ＩＮＴ- 溶液 ９．Bactec １２Ｂ Becton Dickinsonのブイヨン（７Ｈ９に対して） ４ｍｌ ＋ＰＡＮＴＡ １０．Bactec １２Ｂ Becton Dickinsonのブイヨン（７Ｈ９に対して） ４ｍｌ ＋ＰＡＮＴＡ ＋０．４ｍｌ Ｈ2 Ｏ中に１０ｍｇ滅菌濾過された酵母
抽出物 １１．Lowenstein Jensen 培地 Ｉ．塩溶液 リン酸水素カリウム ２．４ ｇ 硫酸マグネシウム- ７- 水和物 ０．２４ｇ トリ−クエン酸マグネシウム -１４- 水和物 ０．６ ｇ Ｌ- アスパラギン- 一水和物 ３．６ ｇ ８４−８７％グリセリンＶ／Ｎ １２．０ ｇ 蒸留水 ６００ｍｌ ＩＩ．マラカイトグリーン溶液 マラカイトグリーン ２．０ ｇ 蒸留水 全量 １００ｍｌ ＩＩＩ．ジャガイモ末エマルジョン Ｉの塩溶液 ６００ｍｌ ＩＩ．マラカイト溶液 ２０ｍｌ ジャガイモ末 ３０ ｇ エマルジョンを３０分１１２℃で滅菌する。
から明らかな様に、試料２及び３による本発明の添加物
を用いた場合は１（添加物不含）に比べて、６及び７
（本発明）は５（比較）に比べて、１０（本発明）は９
（比較）に比べて及び１０（本発明）は１１（比較）に
比べて急速な増殖が得られる。更に滅菌濾過された酵母
抽出物及びＩＮＴを添加された培地（３，７）を用いた
場合は、ＩＮＴのみの培地（４又は８）に比べてより強
い色が確認される。 マイコバクテリアの単離用培地（例１〜１２） １．キルヒ ２．キルヒ ３．キルヒ ４．キルヒ ナー培地 ナー培地 ー培地（酵 ナー培地 （標準） （酵母抽出 母抽出物 (INT含有) 物含有) INT 含有) リン酸水素ジナトリウム-12 3.0g 3.0g 3.0g 3.0g 水和物 リン酸二水素カリウム 4.0g 4.0g 4.0g 4.0g 硫酸マグネシウム 0.6g 0.6g 0.6g 0.6g クエン酸ナトリウム 2.5g 2.5g 2.5g 2.5g Ｌ- アスパラギン 0.1g 0.1g 0.1g 0.1g アスパラギン酸カリウム 4.0g 4.0g 4.0g 4.0g Ｄ- アラニン 2.0g 2.0g 2.0g 2.0g ピルビン酸ナトリウム 0.5g 0.5g 0.5g 0.5g ヘミン(1ml NaOH 中に溶解) 1.66mg 1.66mg 1.66ml 1.66mg 硫酸アンモニウム鉄（ＩＩＩ） 50mg 50mg 50ml 50mg 蒸留水 900ml 800ml 800ml 900ml 別個に加圧滅菌されたグリセ 20ml 20ml 20ml 20ml リン 馬血清 (56℃で１時間不活性) 100ml 100ml 100ml 100ml カタラーゼ溶液 (ベーリンガ 5ml 5ml 5ml 5ml ーマンハイム106836) リボ核酸溶液2.5ml(25μg) 25μg 25μg 25μg 25μg 滅菌濾過された酵母抽出物 - 100mlH2O 100mlH2O - 中2.5g 中2.5g INT 溶液 (シグマ9405) - - 24ml 24ml INT=p-ヨードニトロテトラ ゾリウムヴァイオレット=( 2-( ヨードフエニル-3-(4- ニトロフエニル-5- フエニル テトラゾリウムクロライド 最初の１２成分を一緒に加圧滅菌し、他のものを滅菌溶
液として滅菌濾過して（加圧滅菌せず）添加する。 ５．Becton DickinsonのＭＧＩＴ ４ｍｌ ７Ｈ９ ブイヨン ＋ＯＡＤＣ ＋ＰＡＮＴＡ Becton Dickinsonのすべての成分 ６．滅菌濾過された酵母抽出物含有ＭＧＩＴ ４ｍｌ ７Ｈ９ ブイヨン ＋ＯＡＤＣ ＋ＰＡＮＴＡ ＋０．４ｍｌ Ｈ2 Ｏ中に１０ｍｇ滅菌濾過された酵母
抽出物 ７．滅菌濾過された酵母抽出物及びＩＮＴ含有ＭＧＩＴ ４ｍｌ ７Ｈ９ ブイヨン ＋ＯＡＤＣ ＋ＰＡＮＴＡ ＋０．４ｍｌ Ｈ2 Ｏ中に１０ｍｇ滅菌濾過された酵母
抽出物 ８．ＩＮＴ含有ＭＧＩＴ ４ｍｌ ７Ｈ９ ブイヨン ＋ＯＡＤＣ ＋ＰＡＮＴＡ ＋０．１００ｍｌ ＩＮＴ- 溶液 ９．Bactec １２Ｂ Becton Dickinsonのブイヨン（７Ｈ９に対して） ４ｍｌ ＋ＰＡＮＴＡ １０．Bactec １２Ｂ Becton Dickinsonのブイヨン（７Ｈ９に対して） ４ｍｌ ＋ＰＡＮＴＡ ＋０．４ｍｌ Ｈ2 Ｏ中に１０ｍｇ滅菌濾過された酵母
抽出物 １１．Lowenstein Jensen 培地 Ｉ．塩溶液 リン酸水素カリウム ２．４ ｇ 硫酸マグネシウム- ７- 水和物 ０．２４ｇ トリ−クエン酸マグネシウム -１４- 水和物 ０．６ ｇ Ｌ- アスパラギン- 一水和物 ３．６ ｇ ８４−８７％グリセリンＶ／Ｎ １２．０ ｇ 蒸留水 ６００ｍｌ ＩＩ．マラカイトグリーン溶液 マラカイトグリーン ２．０ ｇ 蒸留水 全量 １００ｍｌ ＩＩＩ．ジャガイモ末エマルジョン Ｉの塩溶液 ６００ｍｌ ＩＩ．マラカイト溶液 ２０ｍｌ ジャガイモ末 ３０ ｇ エマルジョンを３０分１１２℃で滅菌する。
【００１８】 ＩＶ １０００ｍｌ卵混合物 １０００ ｍｌ ２０−２５個の卵 ６２０ｍｌのＩＩＩと均一に混合する。 １２．滅菌濾過された酵母抽出物含有 Loewenstein Jensen 培地 Ｉ．塩溶液 リン酸水素カリウム ２．４ ｇ 硫酸マグネシウム -７ -水和物 ０．２４ｇ トリ−クエン酸マグネシウム -１４- 水和物 ０．６ ｇ Ｌ- アスパラギン- 一水和物 ３．６ ｇ ８４−８７％グリセリンＶ／Ｎ １２．０ｍｌ 蒸留水 ３５０ｍｌ ＩＩ．マラカイトグリーン溶液 マラカイトグリーン ２．０ ｇ 蒸留水 全量 １００ｍｌ ＩＩＩ．ジャガイモ末エマルジョン Ｉの塩溶液 ３５０ｍｌ ＩＩのマラカイト溶液 ２０ｍｌ ジャガイモ末 ３０ ｇ ＩＶ．１０００ｍｌ卵混合物 ２０−２５個の卵 １０００ｍｌ ３７０ｍｌのＩＩＩと均一混合。 ＋４．０ｇ滅菌濾過された酵母抽出物含有Ｈ2 Ｏ １５０ｍｌ
【００１９】 表 Ｉ 前記培地上に種々の植菌量でマクロバクテリア ツベルキュロシスを増殖 菌株 下記日数の間培地Ｎｏ．上で増殖 植菌量 1 2 3 4 5' 6' 7' 8' 11 12 9 10 M. tuberculosis H37RV Mcfarland 0.5 x 10-2 7 5 5 lila 7 lila 6 5 5 lila 6 lila 10 8 5 4 10-3 11 8 8 lila 10 lila 9 7 7 lila 8 lila 14 11 6 5 10-4 14 11 11 d.lila 12 lila 12 10 10 d.lila 11 lila 18 14 9 7 10-5 16 12 12 d.lila 15 lila 14 12 12 d.lila 13 lila 22 17 11 10 10-6 23 16 15 d.lila 10 lila 17 14 14 d.lila 15 lila 28 20 13 12 10-7 28 19 19 d.lila 24 lila 20 18 18 d.lila 19 lila 33 25 17 16 M. tuberculosis Klin. 1 Mcfarland 0.5 x 10-2 9 6 6 lila 6 lila 8 6 6 lila 7 lila 11 9 5 4 10-3 13 9 8 lila 12 lila 12 9 9 lila 11 lila 15 13 9 7 10-4 17 11 10 d.lila 16 lila 16 12 11 d.lila 16 lila 20 16 11 10 10-5 22 13 13 d.lila 20 lila 21 14 14 d.lila 20 lila 25 20 14 12 10-6 26 17 16 d.lila 25 lila 25 18 17 d.lila 25 lila 30 24 17 15 10-7 32 21 20 d.lila 30 lila 30 20 20 d.lila 29 lila 36 28 19 18 M. tuberculosis Klin. 15 Mcfarland 0.5 x 10-2 8 5 5 lila 8 lila 6 5 5 lila 6 lila 11 9 5 4 10-3 12 8 8 lila 12 lila 9 8 8 lila 9 lila 14 12 7 6 10-4 15 11 11 d.lila 15 lila 12 11 11 d.lila 12 lila 18 14 10 9 10-5 22 13 13 d.lila 21 lila 14 12 12 d.lila 14 lila 25 19 12 11 10-6 26 17 16 d.lila 25 lila 18 16 15 d.lila 17 lila 30 23 15 14 10-7 29 20 19 d.lila 29 lila 22 19 18 d.lila 20 lila 35 27 18 16 ＊５及び６のＭＧＩＴに対する規定に従って蛍光による評価 ７及び８のＭＧＩＴに対する規定に従って蛍光による及び更に薄紫色に呈色し たコロニー（ＩＮＴによる）の発生による評価 lila= 薄紫色 d.lila ＝暗薄紫色 ２，３，４，６，７，８，１２，１０＝本発明 １，５，１１，９＝比較 ＩＩ．例１３−１５ この例中にマイコバクテリアの検出のための感度テスト
を、ＤＩＮ５８９４３、第８部に記載された固形培地の
ための方法と同様に液状培地１３，１４及び１５〜１５
Ｃを用いて行う。評価は、培地１３と１４で増殖コント
ロール中で混濁の確認によって（並びに耐性の場合混濁
によっても）行われる。培地１５〜１５Ｃの場合、薄紫
色呈色したコロニー耐性又は増殖の発生を評価する。
を、ＤＩＮ５８９４３、第８部に記載された固形培地の
ための方法と同様に液状培地１３，１４及び１５〜１５
Ｃを用いて行う。評価は、培地１３と１４で増殖コント
ロール中で混濁の確認によって（並びに耐性の場合混濁
によっても）行われる。培地１５〜１５Ｃの場合、薄紫
色呈色したコロニー耐性又は増殖の発生を評価する。
【００２０】ＡＤＣ含有７Ｈ９強化培地（スタンダー
ド）及び本発明によるＡＤＣ含有７Ｈ９強化培地＋滅菌
濾過された酵母抽出物並びにＡＤＣ含有７Ｈ９強化培地
＋滅菌濾過された酵母抽出物＋ＩＮＴを使用する。 １３．ミドルブルック(Middlebrook) ７Ｈ９ブロース
４．７ｇ／ｌ（加圧滅菌）＋ＡＤＣ強化。１００ｍｌ上
記添加物を９００ｍｌ７Ｈ９基本培地（培地製造 Difco
の記載による）上に添加。（比較） １４．滅菌濾過された酵母抽出物の添加。
ド）及び本発明によるＡＤＣ含有７Ｈ９強化培地＋滅菌
濾過された酵母抽出物並びにＡＤＣ含有７Ｈ９強化培地
＋滅菌濾過された酵母抽出物＋ＩＮＴを使用する。 １３．ミドルブルック(Middlebrook) ７Ｈ９ブロース
４．７ｇ／ｌ（加圧滅菌）＋ＡＤＣ強化。１００ｍｌ上
記添加物を９００ｍｌ７Ｈ９基本培地（培地製造 Difco
の記載による）上に添加。（比較） １４．滅菌濾過された酵母抽出物の添加。
【００２１】ミドルブルック７Ｈ９ブロース４．７ｇ／
ｌ（加圧滅菌）、８００ｍｌ、７Ｈ９基本培地１００ｍ
ｌ、ＡＤＣ強化滅菌濾過された酵母抽出物２．５ｇを含
有する１００ｍｌ Ｈ2 Ｏ（本発明） １５．滅菌濾過された酵母抽出物及びＩＮＴの添加。 ミドルブルック７Ｈ９ブロース４．７ｇ／ｌ（加圧滅
菌）、８００ｍｌ７Ｈ９- 基本培地、１００ｍｌＡＤＣ
強化、滅菌濾過された酵母抽出物２．．５ｇを含有する
１００ｍｌＨ2 Ｏ、２４ｍｌ ＩＮＴ- 溶液。
ｌ（加圧滅菌）、８００ｍｌ、７Ｈ９基本培地１００ｍ
ｌ、ＡＤＣ強化滅菌濾過された酵母抽出物２．５ｇを含
有する１００ｍｌ Ｈ2 Ｏ（本発明） １５．滅菌濾過された酵母抽出物及びＩＮＴの添加。 ミドルブルック７Ｈ９ブロース４．７ｇ／ｌ（加圧滅
菌）、８００ｍｌ７Ｈ９- 基本培地、１００ｍｌＡＤＣ
強化、滅菌濾過された酵母抽出物２．．５ｇを含有する
１００ｍｌＨ2 Ｏ、２４ｍｌ ＩＮＴ- 溶液。
【００２２】１５と異なる１５Ａ：滅菌濾過された酵母
抽出物３．０ｇを含有する１００ｍｌＨ2 Ｏ。１５と異
なる１５Ｂ：滅菌濾過された酵母抽出物２．０ｇを含有
する１００ｍｌＨ2 Ｏ。１５と異なる１５Ｃ：滅菌濾過
された酵母抽出物０．５ｇ／ｌを含有する１００ｍｌＨ
2 Ｏ。（本発明） 結果を下記表ＩＩ中に示す。 * MHK ＝最小阻害濃度 表から明らかな様に、本発明の添加物含有試料１４及び
１５は比較培地１３中に於けるよりも早く評価すること
ができる。
抽出物３．０ｇを含有する１００ｍｌＨ2 Ｏ。１５と異
なる１５Ｂ：滅菌濾過された酵母抽出物２．０ｇを含有
する１００ｍｌＨ2 Ｏ。１５と異なる１５Ｃ：滅菌濾過
された酵母抽出物０．５ｇ／ｌを含有する１００ｍｌＨ
2 Ｏ。（本発明） 結果を下記表ＩＩ中に示す。 * MHK ＝最小阻害濃度 表から明らかな様に、本発明の添加物含有試料１４及び
１５は比較培地１３中に於けるよりも早く評価すること
ができる。
【００２３】更に培地１５〜１５Ｃ中で比色検出はまだ
ＩＮＴ- 添加によって可能である。例１５Ａ〜１５Ｃは
添加された酵母抽出物の異なる量を示す。 ＩＩＩ．例１６〜１８ 下記例１６〜１８中、本発明の添加物含有培地（例１
７，１８）及び添加物不含培地（１６）を挙げる。これ
らを、前もってガンマ滅菌（２０〜３０Kilograyのγ-
線）して（１６Ａ，１７Ａ）及びこの滅菌せずに（１
６，１７，１８）、種々の、表ＩＩＩ中に挙げた空中微
生物に対する増殖培地として使用する。 １６．菌数測定用 Tryptic Soy寒天 １５ｇ カゼインの膵臓消化物 ５ｇ 大豆ペプトン ５ｇ ＮａＣｌ ０．７ｇレシチン ７ｇ ポリソルベート８０ １７ｇ 寒天 １０００ｍｌ Ｈ2 Ｏ 混合物を加圧滅菌する。 １７．滅菌濾過された酵母抽出物含有、菌数測定用 Try
ptic Soy寒天 １５ｇ カゼインの膵臓消化物 ５ｇ 大豆ペプトン ５ｇ ＮａＣｌ ０．７ｇレシチン ７ｇ ポリソルベート８０ ９００ｍｌ Ｈ2 Ｏ 混合物を加圧滅菌し、滅菌濾過された酵母抽出物２．５
ｇ含有Ｈ2 Ｏ１００ｍｌを滅菌して添加する。 １８．滅菌濾過された酵母抽出物及びＩＮＴ含有菌数測
定用 Trypic Soy 寒天 １５ｇ カゼインの膵臓消化物 ５ｇ 大豆ペプトン ５ｇ ＮａＣｌ ０．７ｇレシチン ７ｇ ポリソルベート８０ １７ｇ 寒天 ９００ｍｌ Ｈ2 Ｏ 混合物を加圧滅菌し、滅菌濾過された酵母抽出物２．５
ｇ含有Ｈ2 Ｏ１００ｍｌ、次いでＩＮＴ- 溶液２４ｍｌ
を滅菌して添加する。
ＩＮＴ- 添加によって可能である。例１５Ａ〜１５Ｃは
添加された酵母抽出物の異なる量を示す。 ＩＩＩ．例１６〜１８ 下記例１６〜１８中、本発明の添加物含有培地（例１
７，１８）及び添加物不含培地（１６）を挙げる。これ
らを、前もってガンマ滅菌（２０〜３０Kilograyのγ-
線）して（１６Ａ，１７Ａ）及びこの滅菌せずに（１
６，１７，１８）、種々の、表ＩＩＩ中に挙げた空中微
生物に対する増殖培地として使用する。 １６．菌数測定用 Tryptic Soy寒天 １５ｇ カゼインの膵臓消化物 ５ｇ 大豆ペプトン ５ｇ ＮａＣｌ ０．７ｇレシチン ７ｇ ポリソルベート８０ １７ｇ 寒天 １０００ｍｌ Ｈ2 Ｏ 混合物を加圧滅菌する。 １７．滅菌濾過された酵母抽出物含有、菌数測定用 Try
ptic Soy寒天 １５ｇ カゼインの膵臓消化物 ５ｇ 大豆ペプトン ５ｇ ＮａＣｌ ０．７ｇレシチン ７ｇ ポリソルベート８０ ９００ｍｌ Ｈ2 Ｏ 混合物を加圧滅菌し、滅菌濾過された酵母抽出物２．５
ｇ含有Ｈ2 Ｏ１００ｍｌを滅菌して添加する。 １８．滅菌濾過された酵母抽出物及びＩＮＴ含有菌数測
定用 Trypic Soy 寒天 １５ｇ カゼインの膵臓消化物 ５ｇ 大豆ペプトン ５ｇ ＮａＣｌ ０．７ｇレシチン ７ｇ ポリソルベート８０ １７ｇ 寒天 ９００ｍｌ Ｈ2 Ｏ 混合物を加圧滅菌し、滅菌濾過された酵母抽出物２．５
ｇ含有Ｈ2 Ｏ１００ｍｌ、次いでＩＮＴ- 溶液２４ｍｌ
を滅菌して添加する。
【００２４】表ＩＩＩから明らかな様に、培地１７（本
発明）は１６（比較）に比して再び観察されるコロニー
の数の点で著しく改善される。更にγ- 照射の刺激（培
地１６Ａ，１７Ａ）によって再び観察されるコロニーの
数は非照射培地（１６，１７）に比して減少することが
分る。１７Ａ（滅菌濾過された＋本発明の添加物）と１
６（比較）とを比較した場合、γ- 照射された培地──
これは更に滅菌濾過された酵母抽出物を含有する──は
非照射の標準培地と少なくとも同一の、しかし部分的に
改良された結果を生じることが認められる。 表 ＩＩＩ 菌株 培地Ｎｏ．上で増殖、１日後のコロニーの数 植菌数 16 16A 17 17A 18 バチルスサブチリス(Bacillus subtilis) 1O3 80 11 急増 95 58 薄紫色コロニー 2×102 10 1 52 20 0 薄紫色コロニー 50 1 0 16 4 0 薄紫色コロニー スタフィロコッカスアウレウス(Staph. aureus)AICC 6538 103 急増 68 急増 急増 116 薄紫色コロニー 2×102 138 27 急増 119 2 薄紫色コロニー 50 32 1 68 35 0 薄紫色コロニー カンジダシュードトロピカリス(Candida pseudotropicalis) 103 17 2 52 21 48 薄紫色コロニー 2×102 3 0 12 11 10 薄紫色コロニー 50 1 0 3 4 3 薄紫色コロニー アルテロモナスプトファシエンス(Alteromonas putrefaciens) 103 急増 59 急増 急増 急増、薄紫色 2×102 66 21 139 78 128 薄紫色コロニー 50 11 2 51 24 48 薄紫色コロニー ＩＶ．臨床試験 種々の栄養培地及び滅菌濾過された酵母抽出物及びＩＮ
Ｔの本発明の添加物を含有する培地によって、マクロバ
クテリア ツベルキュロスムの検出のための種々のサン
プルを用いて臨床試験を実施する。
発明）は１６（比較）に比して再び観察されるコロニー
の数の点で著しく改善される。更にγ- 照射の刺激（培
地１６Ａ，１７Ａ）によって再び観察されるコロニーの
数は非照射培地（１６，１７）に比して減少することが
分る。１７Ａ（滅菌濾過された＋本発明の添加物）と１
６（比較）とを比較した場合、γ- 照射された培地──
これは更に滅菌濾過された酵母抽出物を含有する──は
非照射の標準培地と少なくとも同一の、しかし部分的に
改良された結果を生じることが認められる。 表 ＩＩＩ 菌株 培地Ｎｏ．上で増殖、１日後のコロニーの数 植菌数 16 16A 17 17A 18 バチルスサブチリス(Bacillus subtilis) 1O3 80 11 急増 95 58 薄紫色コロニー 2×102 10 1 52 20 0 薄紫色コロニー 50 1 0 16 4 0 薄紫色コロニー スタフィロコッカスアウレウス(Staph. aureus)AICC 6538 103 急増 68 急増 急増 116 薄紫色コロニー 2×102 138 27 急増 119 2 薄紫色コロニー 50 32 1 68 35 0 薄紫色コロニー カンジダシュードトロピカリス(Candida pseudotropicalis) 103 17 2 52 21 48 薄紫色コロニー 2×102 3 0 12 11 10 薄紫色コロニー 50 1 0 3 4 3 薄紫色コロニー アルテロモナスプトファシエンス(Alteromonas putrefaciens) 103 急増 59 急増 急増 急増、薄紫色 2×102 66 21 139 78 128 薄紫色コロニー 50 11 2 51 24 48 薄紫色コロニー ＩＶ．臨床試験 種々の栄養培地及び滅菌濾過された酵母抽出物及びＩＮ
Ｔの本発明の添加物を含有する培地によって、マクロバ
クテリア ツベルキュロスムの検出のための種々のサン
プルを用いて臨床試験を実施する。
【００２５】その結果を下記表ＩＶ中に示す。 表 ＩＶ サンプル 本発明の培地３ Bactec 12B*** レーベンスタイ 市販のキルヒ ンイエンセン*** ナー培地*** 痰 18日後陽性 陰性 陰性 陰性 痰 18日後陽性 18日後陽性** 28日後陽性 21日後陽性 痰 15日後陽性 15日後陽性** 21日後陽性 18日後陽性 胸膜穿刺 18日後陽性 陰性 陰性 陰性 気管支清浄 20日後陽性 陰性 陰性 陰性 痰 16日後陽性 陰性 陰性 陰性 * 処置された患者、予備テストからすでに保証されたＴｂ- 判定 ** 本発明の培地の場合、遺伝子サンプルの慣用のＤＮＡゾンデを用いる種鑑別 を直ちに実施できるが、Bactec 12Bの場合このゾンデを確実に使用すること ができるために増殖指標５００を得るまで更に３〜４日待たねばならない。 *** 比較 表ＩＶから、処置によって損傷されかつ刺激された細菌は本発明の培地中でま だ増殖しうるが、比較培地中ではもはや増殖しないことが分る。
【００２６】更に増殖の陽性判定を調べる同一日で本発
明の培地による分子生物学的ＤＮＡ- ゾンデを用いて直
ちの再処理が可能である。したがって臨床での種鑑別及
び直ちの判定が可能であり、一方従来のシステムでは慣
用のＤＮＡ- ゾンデを用いる検査に十分な細菌を有する
ためにもうしばらく待たねばならない。この例から明ら
かな様に、本発明の方法は簡単かつ価格上好都合な方法
で種々の種の増殖及びその検出に関して確実に急速な結
果を生じる。
明の培地による分子生物学的ＤＮＡ- ゾンデを用いて直
ちの再処理が可能である。したがって臨床での種鑑別及
び直ちの判定が可能であり、一方従来のシステムでは慣
用のＤＮＡ- ゾンデを用いる検査に十分な細菌を有する
ためにもうしばらく待たねばならない。この例から明ら
かな様に、本発明の方法は簡単かつ価格上好都合な方法
で種々の種の増殖及びその検出に関して確実に急速な結
果を生じる。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (58)調査した分野(Int.Cl.7，ＤＢ名) C12Q 1/00 - 1/66 ＢＩＯＳＩＳ（ＤＩＡＬＯＧ) ＥＰＡＴ（ＱＵＥＳＴＥＬ) ＭＥＤＬＩＮＥ（ＳＴＮ)
Claims (9)
- 【請求項１】 滅菌濾過された酵母抽出物、ｐ- ヨード
ニトロテトラゾリウムヴァイオレット又はこれらの混合
物を培養前に培養培地に加えることを特徴とする、細
菌、酵母、真菌類又は球菌の増殖及び比色検出の改良方
法。 - 【請求項２】 マイコバクテリアの増殖及び検出を改良
する、請求項１記載の方法。 - 【請求項３】 マイコバクテリア ツベルキュロシス(M
ykobakterientuberculosis) 株の増殖及び検出を改良す
る、請求項２記載の方法。 - 【請求項４】 負荷条件で細菌の増殖及び検出を改良す
る、請求項１記載の方法。 - 【請求項５】 培養培地に滅菌濾過された酵母抽出物
０．５〜１０ｇ／ｌを加える、請求項１ないし４のいず
れかに記載の方法。 - 【請求項６】 培養培地にｐ- ヨードニトロテトラゾリ
ウムヴァイオレット１−３０ｍｇ／ｌを加える、請求項
１ないし４のいずれかに記載の方法。 - 【請求項７】 培養培地に滅菌濾過された酵母抽出物
０．５−１０ｇ／ｌ及びｐ- ヨードニトロテトラゾリウ
ムヴァイオレット１−３０ｍｇ／ｌを加える、請求項１
ないし４のいずれかに記載の方法。 - 【請求項８】 培養培地として７Ｈ９ブイヨン、ＯＡＤ
Ｃ及びＰＡＮＴＡを有する７Ｈ９ブイヨン、馬抽出物を
有するキルヒナー(Krichner)培地、レーベンスタインイ
エンセン(Loewenstein Jensen)- 培地又はトリプティッ
クソイ(Tryptic Soy) 寒天を使用する、請求項１ないし
７のいずれかに記載の方法。 - 【請求項９】 指示薬としてレザズリン／メチレンブル
ー系を使用する、請求項１ないし５又は８記載の方法。
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DE19602345A DE19602345C2 (de) | 1996-01-24 | 1996-01-24 | Verfahren zur Verbesserung des Wachstums und des kolorimetrischen Nachweises von Bakterien, Hefen, Pilzen oder Kokken |
| DE19602345:9 | 1996-01-24 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH09201198A JPH09201198A (ja) | 1997-08-05 |
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Family
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| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
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| JP29675496A Expired - Fee Related JP3212893B2 (ja) | 1996-01-24 | 1996-11-08 | 細菌、酵母、真菌類又は球菌の増殖及び比色検出の改良方法 |
Country Status (6)
| Country | Link |
|---|---|
| US (2) | US6168930B1 (ja) |
| EP (1) | EP0786525B1 (ja) |
| JP (1) | JP3212893B2 (ja) |
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| ES (1) | ES2201144T3 (ja) |
Families Citing this family (13)
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|---|---|---|---|---|
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