JPH0526478B2 - - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】 発明の背景 技術分野 本発明は、微生物の生化学的性状検査用培地に
関する。さらに詳しくは、本発明は腸内細菌等微
生物の生化学的性状同定法でクエン酸分解試験に
用いられる改良された培地に関するものである。 感染症に対して適切な治療を施すためには病原
菌を同定し、感受性試験を行ない、その病原菌に
有効な薬剤を決定することが重要である。このよ
うな病原菌の同定に際しては多項目にわたる生化
学的性状検査が行なわれ、その項目の１つとして
クエン酸分解試験が行なわれる。本発明の培地は
このようなクエン酸分解試験に好適に使用され
る。 先行技術および問題点 クエン酸分解試験は、クエン酸を炭素源として
利用できるかどうかを判定する試験であつて現在
ではもつとも重要な菌の生化学的性状検査の一つ
である。この試験は菌をクエン酸及びPH指示薬を
主要組成として含有する培地で培養することによ
つて実施される。この試験で使用する培地とし
て、細菌酵母エキス、クエン酸ナトリウム、グル
コース、グルタチオン（還元型）、ニコチンアデ
ニンジヌクレオチド、塩化ナトリウム、リン酸一
水素二ナトリウム、ブロムチモールブルーおよび
精製水の組成からなるものが提案されている（特
公昭58−20263）。この培地は、培養時間が従来の
ものにくらべて大巾に短縮されている。即ち、従
来の培地においては培養期間が１〜２日間であつ
たのに対してこの培地では培養期間が４〜５時間
に短縮されており、即日判定が可能である。しか
しながらこの培地においても菌の種類によつては
４〜５時間の培養では反応が不十分であり判定が
困難なものもあり、そのような場合には、培養時
間を長くし、翌日に判定せざるをえない場合があ
つた。従つて全ての菌について４〜５時間の培養
で反応の陽性、陰性を明瞭に判定できる培地が要
望されている。 また早期治療のためには菌の同定はできるだけ
速やかに行なわれるのが望ましいが他方、検査作
業の都合上、判定を翌日に行なわざるを得ない場
合も生ずる。このような場合には培養期間が厳格
に規定されておらず、作業上の都合で培養期間を
延長しても反応過剰になつたりせず正確な判定が
可能な培地が望ましい。 さらに生化学的性状検査は作業の効率上多数の
試験を多穴培養プレートを用いて一度に行なうこ
とが多いので各試験の培養期間をそろえることが
必要となる。このような場合にも培養期間に厳格
な制限のない培地が望ましい。 発明の目的 本発明は培養期間が特に制限されず、即日同定
および翌日同定が可能なクエン酸分解試験用培地
を提供することを目的とする。 本発明はさらに呈色反応が明瞭であり判定が容
易なクエン酸分解試験用培地を提供することを目
的とする。 本発明によれば、クエン酸塩２ｇ；リン酸一水
素二アルカリ金属塩0.35ｇ；リン酸二水素一アル
カリ金属塩0.7ｇ；マグネシウム１ｇ；塩化ナト
リウム５ｇ；およびブロムチモールブルーからな
るPH指示薬0.12ｇの割合の組成よりなり、水１
に溶解したときのPHが6.4であるクエン酸分解試
験用培地が提供される。 発明の具体的説明 本発明の培地は、クエン酸塩、リン酸一水素二
アルカリ金属塩、リン酸二水素一アルカリ金属
塩、マグネシウム塩、塩化ナトリウムおよびPH指
示薬からなる。 本発明の培地はPH調節成分として、リン酸一水
素二アルカリ金属塩およびリン酸二水素一アルカ
リ金属塩を用いて培地の緩衝能を調節することに
特長を有する。短時間の培養で反応を出現しやす
くするため、緩衝能を抑制すると、翌日判定の場
合に偽陽性となり易い。これを避けるために緩衝
能を強めると短時間で反応が出現しにくくなる。
リン酸一水素二アルカリ金属塩およびリン酸二水
素一アルカリ金属塩におけるアルカリ金属塩とし
てはカリウムまたはナトリウムが好ましい。マグ
ネシウム塩としては硫酸マグネシウム、塩化マグ
ネシウム、硝酸マグネシウム等が好適に使用され
る。クエン酸塩としてはクエン酸のナトリウム塩
等のアルカリ金属塩、アンモニウム塩が使用され
る。PH指示薬として特にブロムチモールブルーを
0.12ｇ／水の量使用するのが好ましい。本発明
の培地における前述した成分割合は臨界的であ
り、特にリン酸一水素二アルカリ金属塩およびリ
ン酸二水素一アルカリ金属塩の量はPHが6.4とな
り、呈色反応が明瞭に現れるように設定されてい
る。またクエン酸塩の量も培養期間を短縮可能な
ように設定されている。 本発明の培地においては、PH指示薬およびマグ
ネシウム塩の量も菌濃度が低くても反応の陽性、
陰性が明瞭に判定できるような量に設定されてい
る。 本発明の培地は常法に従つて所定量の各成分を
水に溶解することによつて使用される。近年生化
学的性状検査は多数の試験を多穴プレート上で同
時に行うのが普通であり、このような場合には本
発明培地を試験用プレートのウエルに注入し、乾
燥させて乾燥培地とする。試験に際しては該ウエ
ルに試験菌の懸濁水を分注し、所定時間培養す
る。培養液の色の変化により、クエン酸分解反応
の陽性、陰性を判定する。 発明の具体的作用および効果 本発明の培地は、従来のクエン酸分解試験用培
地と全く同様にして使用される。培養時間は３〜
５時間に短縮可能であるが特に制限はされず、長
時間培養も可能であり、即日同定、翌日同定のい
ずれも適している。また呈色が明瞭であり、反応
の陽性、陰性の判定が容易である。 次に本発明の培地を使用してクエン酸分解試験
を行なつた実施例を示す。

【表】

【表】 培養条件 上記の組成の本発明の培地および対照培地を多
穴プレートの各穴に、50μずつ分注し、40℃で
乾燥した。次に寒天平板培地上で各種微生物を35
〜37℃で18〜24時間培養し、1.0mlの滅菌蒸留水
中に４〜５時間培養の場合は約６〜９×10⁸／ml、
16〜20時間培養の場合は約１〜２×10⁸／mlにな
るように懸濁して各穴に50μずつ接種後蓋を
し、35〜37℃で所定時間培養し、培養液の色の変
化によりクエン酸分解反応の有無を判定した。結
果を第１表に示す。

【表】 第１表の結果から明らかなように、クエン酸分
解試験において本発明の培地を使用するときは培
養時間の長短を問わず正確な菌の同定が可能であ
る。従つて検査作業の都合により即日同定、翌日
同定のいずれをも選択できる。 これに対して、対照培地を使用するときは、菌
によつては４〜５時間の培養では呈色が不十分で
あり即日同定は困難な場合がある。 また、本発明の培地のように培養時間に厳格な
制限を受けないことは多数の生化学的試験を同時
に実施する場合に極めて好都合である。

Claims (1)

【特許請求の範囲】
1. １ クエン酸塩２ｇ；リン酸一水素二アルカリ金
   属塩0.35ｇ；リン酸二水素一アルカリ金属塩0.7
   ｇ；マグネシウム１ｇ；塩化ナトリウム５ｇ；お
   よびブロムチモールブルーからなるPH指示薬0.12
   ｇの割合の組成よりなり、水１に溶解したとき
   のPHが6.4であるクエン酸分解試験用培地。