JPH0556959B2 - - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】 発明の背景 ［技術分野］ 本発明は微生物のフエニルアラニン利用能検査
用培地組成物に関する。さらに詳しくは、本発明
はグルコース非発酵性グラム陰性桿菌のフエニル
アラニン利用能検査用培地組成物に関するもので
ある。 細菌感染症に対して適切な治療を施すためには
病原菌を固定し、感受性試験を行い、その病原菌
に有効な薬剤を決定することが重要である。この
ような病原菌の同定に際しては多項目にわたる生
化学的性状検査が行われ、その項目の１つとして
グルコース非発酵性グラム陰性桿菌についてフエ
ニルアラニン利用能の検査が行われる。本発明の
培地組成物はこのような試験に好適に使用され
る。 ［先行技術およびその問題点］ 上記検査の培地として従来、下記の組成を有す
る寒天培地が知られている。 酵母エキス ３（ｇ） DL−フエニルアラニン ２ Na₂HPO₄ １ NaCl ５ 寒 天 12 蒸留水 1000（ml） 従来フエニルアラニン利用能の検査は上記培地
に検査菌を接種して培養するとフエニルアラニン
が菌の有する酵素によりフエニルピルビン酸に変
化し、これに、10％（ｗ／ｖ）の塩化第二鉄水溶
液を加え、緑色の錯体を生成したものを陽性と判
定することによつて行つていた。ところが、この
培地は寒天培地であるため、特に検査菌がグルコ
ース非発酵性グラム陰性桿菌である場合には反応
が遅く判定に１〜２日間の培養時間を必要とし
た。 細菌感染症の早期治療のためには、菌の同定は
できるだけ速やかに行うことが必要であり、より
短かい時間で菌の同定が可能な培地の出現が望ま
れていた。しかし、一方においては、検査作業の
都合上、判定を翌日に行なわざるを得ない場合も
生じ、このような場合には培養期間が厳格に規制
されておらず、都合により培養時間を延長しても
反応過剰になつたりせず、正確な判定が可能な培
地が望ましい。 発明の目的 本発明は短時間の培養で同定が可能であるとと
もに長時間培養しても正確な同定が可能であるグ
ルコース非発酵性グラム陰性桿菌のフエニルアラ
ニン利用能の検査用培地組成物を提供することを
目的とする。 本発明によれば、Ｌ−フエニルアラニン2.0部
（重量部、以下同じ）に対して酵母エキス1.0〜
2.5部およびリン酸一水素二アルカリ金属塩0.5〜
2.0部の組成からなり、水1000部に溶解したとき
のPHが6.8〜7.8であることを特徴とするグルコー
ス非発酵性グラム陰性桿菌のフエニルアラニン利
用能検査用培地組成物よりなる。 発明の具体的説明 本発明の培地組成物において、Ｌ−フエニルア
ラニンは基質であり、このものが検査菌によつて
分解されるとフエニルピルビン酸を生成する。生
成したフエニルピルピン酸を塩化第二鉄で呈色さ
せることによりフエニルアラニン利用能の有無を
判定する。酵母エキスは酵母反応を促進するため
のものであり、酵母エキスが多すぎると偽陰性
に、少なすぎると偽陽性になる。本発明では検査
誤差を生じさせない量が使用される。リン酸一水
素二アルカリ金属塩はPH調整剤であり、アルカリ
金属としてはカリウム、ナトリウムが使用され
る。 本発明の培地では寒天を使用しない液体培地で
あるので分解生成物であるフエニルピルビン酸が
培地中に速やかに分散する。そのため、判定に要
する時間が短縮される。また、上記組成物に、浸
透圧調整剤として、アルカリ金属塩化物、例え
ば、塩化ナトリウム、塩化カリウム等を使用する
のが望ましい。 本発明の培地組成物の前述した成分割合は臨界
的であり、Ｌ−フエニルアラニンの分解およびそ
の検出が速やかに行われ、かつ検査誤差を生じな
いように選定されている。PH調整剤は、上記組成
を1000部の水に溶解したときにPH6.8〜7.8となる
量が使用されている。 本発明の培地組成物は常法に従つて所定量の各
成分を水1000部に溶解して使用される。近年生化
学的性状検査は多数の試験を多穴プレート上で同
時に行うのが普通であり、このような場合には本
発明培地を試験用プレートのウエルに注入し、乾
燥させて乾燥培地とする。試験に際しては該ウエ
ルに試験菌の懸濁水を所定量分注し、30℃で所定
時間培養する。４〜５時間の培養で判定すること
が望まれる場合は、１ウエル当り約7.5×10⁷個の
菌を接種し、18〜22時間培養後の判定が望まれる
場合は１ウエル当り約1.5×10⁷個の菌を接種する
のが好ましい。 次に本発明の培地組成物を使用して細菌のフエ
ニルアラニン利用能を検査した実施例を示す。 実施例 表１に記載の組成を有する本発明培地組成物を
常法に従つて水１に溶解し、菌同定培地１〜３
を得た。

【表】 上記培地１〜３を多穴プレートの各ウエルに
50μずつ分注し、40℃で乾燥した。次に寒天培
地上で各種細菌を30℃で18〜24時間培養し、1.0
mlの減菌蒸留水中に４時間培養では、1.5×10⁹個
また20時間培養では、3.8×10⁸個となるように懸
濁し各ウエルに50μずつ接種した。これで、４
時間培養では１ウエル当り、7.5×10⁷個の菌が、
20時間培養では1.5×10⁷個の菌が接種された。30
℃で所定時間培養した後、10％FeCl₃水溶液を加
えた。比較試験として、前述の組名の寒天培地を
用いた従来法により培養を行なつた。培養液また
は従来法では寒天培地の色の変化によりフエニル
アラニン利用能の有無を判定した。結果を表２に
示す。

【表】 発明の具体的作用および効果 表２から明らかなように、グルコース非発酵性
グラム陰性桿菌のフエニルアラニン利用能検査に
おいて、本発明の培地を使用すると、培養時間の
長短を問わず正確な菌の同定が可能である。従つ
て検査作業の都合により即日同定、翌日同定のい
ずれも選択することができる。これに対して対照
培地は少くとも24時間の培養が必要であり、即日
判定は不可能である。例えば、対照培地を使用し
た場合は、シユードモナス・メンドシナ
ATCC25411および、シユードモナス・スタツツ
エリATCC17588は４時間培養では反応は陰性で
あり24時間培養で陽性となる。これに対して本発
明の培地を使用すると、いずれの菌においても４
時間培養で正しい判定が可能である。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １ Ｌ−フエニルアラニン2.0部（重量部、以下
   同じ）に対し酵母エキス1.0〜2.5部およびリン酸
   一水素二アルカリ金属塩0.5〜2.0部の組成からな
   り、水1000部に溶解したときのPHが6.8〜7.8であ
   ることを特徴とするグルコース非発酵性グラム陰
   性桿菌のフエニルアラニン利用能検査用培地組成
   物。 ２ リン酸一水素二アルカリ金属塩が、リン酸一
   水素二ナトリウム塩である特許請求の範囲第１項
   記載の培地。