JPH0574357B2 - - Google Patents
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- JPH0574357B2 JPH0574357B2 JP28917885A JP28917885A JPH0574357B2 JP H0574357 B2 JPH0574357 B2 JP H0574357B2 JP 28917885 A JP28917885 A JP 28917885A JP 28917885 A JP28917885 A JP 28917885A JP H0574357 B2 JPH0574357 B2 JP H0574357B2
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Landscapes
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Description
【発明の詳細な説明】
発明の背景
技術分野
本発明は微生物のDNA（デオキシリボ核酸）利
用能検査用培地組成物に関する。さらに詳しく
は、本発明はグルコース非発酵性グラム陰性桿菌
のDNA利用能検査用培地組成物に関するもので
ある。 細菌感染症に対して適切な治療を施すためには
病原菌を同定し、感受性試験を行い、その病原菌
に有効な薬剤を決定することが重要である。この
ような病原菌の同定に際しては多項目にわたる生
化学的性状検査が行われ、その項目の１つとして
グルコース非発酵性グラム陰性桿菌について
DNA利用能の検査が行われる。これは、上記菌
が有するDNA分解能を利用し、菌の同定を行う
ものである。本発明の培地組成物はこのような試
験に好適に使用される。 先行技術およびその問題点 上記検査の培地として従来、下記の組成を有す
る寒天培地が知られている。 従来培地組成 トリプチカーゼ 15ｇ フイトン ５ｇ DNA ２ｇ NaCl ５ｇ １％トルイジンブルー水溶液 10ml 寒 天 15ｇ 蒸留水 990ml PH7.3 上記培地は寒天培地であるため反応速度が遅
く、判定に１〜２日を要する。 細菌感染症の早期治療のためには、菌の同定は
できるだけ速やかに行うことが必要であり、より
短かい時間で菌の同定が可能な培地の出現が望ま
れていた。しかし、一方においては、検査作業の
都合上、判定を翌日に行なわざるを得ない場合も
生じ、このような場合には培養期間が厳格に規制
されておらず、都合により培養時間を延長しても
反応過剰になつたりせず、正確な判定が可能な培
地が望ましい。 発明の目的 本発明は短時間の培養で同定が可能であるとと
もに長時間培養しても正確な同定が可能であるグ
ルコース非発酵性グラム陰性桿菌のDNA利用能
の検査用培地組成物を提供することを目的とす
る。 本発明はさらに、呈色反応が明瞭であり、判定
が容易な上記検査用培地組成物を提供することを
目的とする。 上記の本発明の目的は、DNA1.0部（重量部、
以下同じ）に対し、ペプトン12〜40部、および発
色指示薬0.1〜0.3部の組成よりなるグルコース非
発酵性グラム陰性桿菌のDNA利用能検査用培地
組成物によつて達成される。 発明の具体的説明 本発明の培地組成物において、DNAは基質で
あり、これが検査菌によつて加水分解されるとメ
タクロマジーを起こし、発色指示薬の色調が変化
する。この色調の変化によつて検査菌のDNA利
用能を判定する。ここで発色指示薬としては、
DNAの加水分解によりメタクロマジーを起こす
ものなら何でもよい。具体的にはトルイジンブル
ー、メチルグリーン等がある。例えば、トルイジ
ンの場合は色調が青から紫、ピンクへと変化す
る。ペプトンは養分として使用される。また、養
分としてさらにウシ心筋抽出物等を用いるのが望
ましい。本発明の培地組成物にはさらに浸透圧調
整剤としてアルカリ金属塩２〜９部を添加するの
が望ましく、塩化ナトリウム、塩化カリウムのよ
うなアルカリ金属塩化物が好適である。本発明の
培地組成物の前述した成分割合は臨界的であり、
特にDNA量とトルイジンブルー量は正しい判定
を得るための最適な比率となつている。本発明の
培地のPHは、概ね7.2〜7.4であり、菌の発育に適
している。 本発明の培地組成物は常法に従つて所定量の各
成分を水に溶解して使用される。近年生化学的性
状検査は多数の試験を多穴プレート上で同時に行
うのが普通であり、このような場合には本発明培
地を試験用プレートのウエルに注入し、乾燥させ
て乾燥培地とする。試験に際しては該ウエルに試
験菌の懸濁水を所定量分注し、30℃で所定時間培
養する。４〜５時間の培養で判定することが望ま
れる場合は、液体培地50μ当り約7.5×107個の
菌を接種し、18〜22時間培養後の判定が望まれる
場合は約1.5×107個の菌を接種するのが好まし
い。このように接種菌数を調整することにより、
短時間でもまた翌日でも検査が行える。 次に本発明の培地組成物を使用して細菌の
DNA利用能を検査した実施例を示す。 実施例 表１に記載の組成を有する本発明培地組成物を
常法に従つて水１に溶解し、菌同定用培地１〜
３を得た。
用能検査用培地組成物に関する。さらに詳しく
は、本発明はグルコース非発酵性グラム陰性桿菌
のDNA利用能検査用培地組成物に関するもので
ある。 細菌感染症に対して適切な治療を施すためには
病原菌を同定し、感受性試験を行い、その病原菌
に有効な薬剤を決定することが重要である。この
ような病原菌の同定に際しては多項目にわたる生
化学的性状検査が行われ、その項目の１つとして
グルコース非発酵性グラム陰性桿菌について
DNA利用能の検査が行われる。これは、上記菌
が有するDNA分解能を利用し、菌の同定を行う
ものである。本発明の培地組成物はこのような試
験に好適に使用される。 先行技術およびその問題点 上記検査の培地として従来、下記の組成を有す
る寒天培地が知られている。 従来培地組成 トリプチカーゼ 15ｇ フイトン ５ｇ DNA ２ｇ NaCl ５ｇ １％トルイジンブルー水溶液 10ml 寒 天 15ｇ 蒸留水 990ml PH7.3 上記培地は寒天培地であるため反応速度が遅
く、判定に１〜２日を要する。 細菌感染症の早期治療のためには、菌の同定は
できるだけ速やかに行うことが必要であり、より
短かい時間で菌の同定が可能な培地の出現が望ま
れていた。しかし、一方においては、検査作業の
都合上、判定を翌日に行なわざるを得ない場合も
生じ、このような場合には培養期間が厳格に規制
されておらず、都合により培養時間を延長しても
反応過剰になつたりせず、正確な判定が可能な培
地が望ましい。 発明の目的 本発明は短時間の培養で同定が可能であるとと
もに長時間培養しても正確な同定が可能であるグ
ルコース非発酵性グラム陰性桿菌のDNA利用能
の検査用培地組成物を提供することを目的とす
る。 本発明はさらに、呈色反応が明瞭であり、判定
が容易な上記検査用培地組成物を提供することを
目的とする。 上記の本発明の目的は、DNA1.0部（重量部、
以下同じ）に対し、ペプトン12〜40部、および発
色指示薬0.1〜0.3部の組成よりなるグルコース非
発酵性グラム陰性桿菌のDNA利用能検査用培地
組成物によつて達成される。 発明の具体的説明 本発明の培地組成物において、DNAは基質で
あり、これが検査菌によつて加水分解されるとメ
タクロマジーを起こし、発色指示薬の色調が変化
する。この色調の変化によつて検査菌のDNA利
用能を判定する。ここで発色指示薬としては、
DNAの加水分解によりメタクロマジーを起こす
ものなら何でもよい。具体的にはトルイジンブル
ー、メチルグリーン等がある。例えば、トルイジ
ンの場合は色調が青から紫、ピンクへと変化す
る。ペプトンは養分として使用される。また、養
分としてさらにウシ心筋抽出物等を用いるのが望
ましい。本発明の培地組成物にはさらに浸透圧調
整剤としてアルカリ金属塩２〜９部を添加するの
が望ましく、塩化ナトリウム、塩化カリウムのよ
うなアルカリ金属塩化物が好適である。本発明の
培地組成物の前述した成分割合は臨界的であり、
特にDNA量とトルイジンブルー量は正しい判定
を得るための最適な比率となつている。本発明の
培地のPHは、概ね7.2〜7.4であり、菌の発育に適
している。 本発明の培地組成物は常法に従つて所定量の各
成分を水に溶解して使用される。近年生化学的性
状検査は多数の試験を多穴プレート上で同時に行
うのが普通であり、このような場合には本発明培
地を試験用プレートのウエルに注入し、乾燥させ
て乾燥培地とする。試験に際しては該ウエルに試
験菌の懸濁水を所定量分注し、30℃で所定時間培
養する。４〜５時間の培養で判定することが望ま
れる場合は、液体培地50μ当り約7.5×107個の
菌を接種し、18〜22時間培養後の判定が望まれる
場合は約1.5×107個の菌を接種するのが好まし
い。このように接種菌数を調整することにより、
短時間でもまた翌日でも検査が行える。 次に本発明の培地組成物を使用して細菌の
DNA利用能を検査した実施例を示す。 実施例 表１に記載の組成を有する本発明培地組成物を
常法に従つて水１に溶解し、菌同定用培地１〜
３を得た。
【表】
上記培地１〜３の多穴プレートの各ウエルに
50μずつ分注し、40℃で乾燥した。次に寒天培
地上で各種細菌を30℃で18〜24時間培養し、1.0
mlの滅菌蒸留水中に培養時間が４時間の場合は
1.5×109個／mlまた20時間の場合３×108個／ml
となるように懸濁し各ウエルに50μずつ接種
し、30℃で所定時間培養した。比較試験として、
下記組成のDNA寒天培地を用いた従来法により
培養を行なつた。培養液の色の変化によりDNA
利用能の有無を判定した。結果を表２に示す。 DNA寒天培地組成 トリプチカーゼ 15ｇ フイトン ５ｇ DNA ２ｇ NaCl ５ｇ １％トルイジンブルー水溶液 10ml 寒 天 15ｇ 蒸留水 990ml PH7.3
50μずつ分注し、40℃で乾燥した。次に寒天培
地上で各種細菌を30℃で18〜24時間培養し、1.0
mlの滅菌蒸留水中に培養時間が４時間の場合は
1.5×109個／mlまた20時間の場合３×108個／ml
となるように懸濁し各ウエルに50μずつ接種
し、30℃で所定時間培養した。比較試験として、
下記組成のDNA寒天培地を用いた従来法により
培養を行なつた。培養液の色の変化によりDNA
利用能の有無を判定した。結果を表２に示す。 DNA寒天培地組成 トリプチカーゼ 15ｇ フイトン ５ｇ DNA ２ｇ NaCl ５ｇ １％トルイジンブルー水溶液 10ml 寒 天 15ｇ 蒸留水 990ml PH7.3
【表】
他の実施例として表１からウシ心筋抽出物を除
いた培地組成物で前記実施例と同じ培養実験を行
なつたが同様の傾向が観られた。 発明の具体的作用および効果 表２から明らかなように、グルコース非発酵性
グラム陰性桿菌のDNA利用能検査において、本
発明の培地を使用すると、培養時間の長短を問わ
ず正確な菌の同定が可能である。従つて検査作業
の都合により即日同定、翌日同定のいずれも選択
することができる。これに対して対照培地は少く
とも20時間の培養が必要であり、即日判定が不可
能である。例えば、対照培地を使用した場合は、
キサントモナス・マルトフイリアATCC12637、
アルテロモナス・プトレフアシエンスATCC8071
およびフラボバクテリウム・オドラタム
ATCC4651は４時間培養では反応は陰性であり20
時間培養で陽性となる。これに対して本発明の培
地を使用すると、いずれの菌においても４時間培
養で正しい判定が可能である。
いた培地組成物で前記実施例と同じ培養実験を行
なつたが同様の傾向が観られた。 発明の具体的作用および効果 表２から明らかなように、グルコース非発酵性
グラム陰性桿菌のDNA利用能検査において、本
発明の培地を使用すると、培養時間の長短を問わ
ず正確な菌の同定が可能である。従つて検査作業
の都合により即日同定、翌日同定のいずれも選択
することができる。これに対して対照培地は少く
とも20時間の培養が必要であり、即日判定が不可
能である。例えば、対照培地を使用した場合は、
キサントモナス・マルトフイリアATCC12637、
アルテロモナス・プトレフアシエンスATCC8071
およびフラボバクテリウム・オドラタム
ATCC4651は４時間培養では反応は陰性であり20
時間培養で陽性となる。これに対して本発明の培
地を使用すると、いずれの菌においても４時間培
養で正しい判定が可能である。
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １ DNA（デオキシリボ核酸）1.0部（重量部、
以下同じ）に対し、ペプトン12〜40部、および
DNAの加水分解により変色する発色指示薬0.1〜
0.3部の組成よりなるグルコース非発酵性グラム
陰性桿菌のDNA利用能検査用培地組成物。 ２ 前記発色指示薬がトルイジンブルーである特
許請求の範囲第１項記載の培地組成物。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP28917885A JPS62151198A (ja) | 1985-12-24 | 1985-12-24 | Ｄｎａ利用能検査用培地組成物 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP28917885A JPS62151198A (ja) | 1985-12-24 | 1985-12-24 | Ｄｎａ利用能検査用培地組成物 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS62151198A JPS62151198A (ja) | 1987-07-06 |
| JPH0574357B2 true JPH0574357B2 (ja) | 1993-10-18 |
Family
ID=17739777
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP28917885A Granted JPS62151198A (ja) | 1985-12-24 | 1985-12-24 | Ｄｎａ利用能検査用培地組成物 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS62151198A (ja) |
Families Citing this family (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US10253357B2 (en) | 2014-04-24 | 2019-04-09 | Diassess Inc. | Colorimetric detection of nucleic acid amplification |
| US11080848B2 (en) | 2017-04-06 | 2021-08-03 | Lucira Health, Inc. | Image-based disease diagnostics using a mobile device |
| US10146909B2 (en) * | 2017-04-06 | 2018-12-04 | Diassess Inc. | Image-based disease diagnostics using a mobile device |
| US10549275B2 (en) | 2017-09-14 | 2020-02-04 | Lucira Health, Inc. | Multiplexed biological assay device with electronic readout |
| USD962470S1 (en) | 2020-06-03 | 2022-08-30 | Lucira Health, Inc. | Assay device with LCD display |
-
1985
- 1985-12-24 JP JP28917885A patent/JPS62151198A/ja active Granted
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPS62151198A (ja) | 1987-07-06 |
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Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| LAPS | Cancellation because of no payment of annual fees |