JP2012041356A5 - - Google Patents
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- ボツリヌス毒素抗原型A型(BoNT/A)を含む医薬であって、前記BoNT/Aが、
(a)APF方法から生じるボツリヌス毒素A型900kDa複合体の発酵培養物のサンプルを得て;
(b)第一のカラムによって、ボツリヌス毒素A型900kDa複合体の捕捉を可能にするために第一のクロマトカラムの樹脂を該培養物サンプルと接触させて;
(c)第一のカラムからボツリヌス毒素A型900kDa複合体を溶離して;
(d)第二のカラムクロマトのカラム樹脂に第一のクロマトカラムからの溶離液を負荷し、それにより精製したボツリヌス毒素A型900kDa複合体を得る工程を含むBoNT/Aを精製する方法であって、
工程(a)のAPF方法において、発酵培地が、加水分解された大豆:酵母エキス:グルコースを6:0〜3:1の重量パーセント比で含有するものであり、pHが発酵の間5.0〜5.5の範囲であることを特徴とするものである方法によって精製されるものである、医薬。 - 請求項1に記載のBoNT/Aの精製方法において、第一のクロマトカラムおよび第二のクロマトカラムが異なったカラムであって、2個の異なったカラムが、異なった精製機構によって、ボツリヌス毒素A型900kDa複合体を精製するように作用する、請求項1に記載の医薬。
- 請求項1に記載のBoNT/Aの精製方法において、第一のクロマトカラムが疎水性相互作用カラムである、請求項1に記載の医薬。
- 請求項1に記載のBoNT/Aの精製方法において、第二のクロマトカラムがイオン交換カラムである、請求項1に記載の医薬。
- 請求項1に記載のBoNT/Aの精製方法が、接触工程後および溶離工程前に、第一のカラムから不純物を洗い流す工程をさらに含む、請求項1に記載の医薬。
- 請求項1に記載のBoNT/Aの精製方法が、負荷工程後に第二のカラムから不純物を洗い流す工程をさらに含む、請求項1に記載の医薬。
- 請求項1に記載のBoNT/Aの精製方法が、第二のカラムから不純物を洗い流す工程後、第二のカラムからボツリヌス毒素A型900kDa複合体を溶離する工程をさらに含む、請求項6に記載の医薬。
- 請求項1に記載のBoNT/Aの精製方法で精製したボツリヌス毒素A型900kDa複合体の収量が、各10Lのボツリヌス毒素A型900kDa複合体の発酵培養物に対して、バッチあたり50mg以上である、請求項1に記載の医薬。
- 請求項1に記載のBoNT/Aの精製方法で精製したボツリヌス毒素A型900kDa複合体が、以下の特徴:
(a)白色からオフホワイトな懸濁液としての外観;
(b)溶離液のmLあたり2.0〜3.6mgのボツリヌス毒素複合体の濃度
(c)278nmの吸収に対する260nmの吸収比(A260/A278)が、0.6以下であり;
(d)精製したボツリヌス毒素のmgあたり2.4×107〜5.9×107のMLD50ユニットのMLD50ユニット/mgにおける特異的な効力;
(e)ボツリヌス神経毒タイプA複合体に対する免疫学的同一性;
(f)標準品に一致するSDS−PAGE特性;
(g)総ピークの>95%が900kDaの毒素複合体であるSEC−HPLC特性;および
(h)該方法が、頑健性があり、測定可能でバリデートされ得るcGMP適合
である、請求項1に記載の医薬。 - ボツリヌス毒素抗原型A型(BoNT/A)を含む医薬であって、前記BoNT/Aが、
(a)APF方法から生じるボツリヌス毒素A型900kDa複合体の発酵培養物のサンプルを得て;
(b)第一のカラムによってボツリヌス毒素A型900kDa複合体の捕捉を可能にするために疎水性相互作用クロマトカラムの樹脂を該培養サンプルと接触させて;
(c)疎水性相互作用クロマトカラムから不純物を洗い流し;
(d)疎水性相互作用カラムからボツリヌス毒素A型900kDa複合体を溶離し;
(e)イオン交換カラムクロマトのカラム樹脂に疎水性相互作用クロマトカラムからの溶離液を負荷し;
(f)イオン交換クロマトカラムから不純物を洗い流し;
(g)ボツリヌス毒素A型900kDa複合体をイオン交換カラムから溶離し、それによってAPF精製プロセスであるボツリヌス毒素A型900kDa複合体を精製するための方法を介して、精製したボツリヌス毒素A型900kDa複合体を得る工程を含むBoNT/Aを精製する方法であって、
工程(a)のAPF方法において、発酵培地が、加水分解された大豆:酵母エキス:グルコースを6:0〜3:1の重量パーセント比で含有するものであり、pHが、発酵の間5.0〜5.5の範囲であることを特徴とするものである方法によって精製されるものである、医薬。 - 請求項10に記載のBoNT/Aの精製方法が、ボツリヌス毒素A型900kDa複合体の発酵培養物のサンプルを得る工程後および疎水性相互作用クロマトカラムの樹脂を培養サンプルと接触する工程前に、疎水性相互作用クロマトグラフ用の精製した培養液をコンディショニングする工程をさらに含む、請求項10に記載の医薬。
- 請求項10に記載のBoNT/Aの精製方法が、疎水性相互作用カラムからボツリヌス毒素A型900kDa複合体を溶離する工程後およびイオン交換カラムクロマトのカラム樹脂に疎水性相互作用クロマトカラムからの溶離液を負荷する工程前に、イオン交換クロマトグラフ用の疎水性相互作用カラムからの溶離液をコンディショニングする工程をさらに含む、請求項10に記載の医薬。
- ボツリヌス毒素抗原型A型(BoNT/A)を含む医薬であって、前記BoNT/Aが、
(a)APF方法から生じるボツリヌス毒素A型900kDa複合体の発酵培養物のサンプルを得て;
(b)疎水性相互作用クロマトグラフに対して、精製した培養物をコンディショニングし;
(c)第一のカラムによって、ボツリヌス毒素A型900kDa複合体の捕捉を可能にするために、疎水性相互作用クロマトカラムの樹脂を該培養物サンプルに接触させて;
(d)疎水性相互作用クロマトカラムから不純物を洗い流し;
(e)疎水性相互作用カラムからボツリヌス毒素A型900kDa複合体を溶離し;
(f)イオン交換クロマトグラフ用の疎水性相互作用カラムからの溶離液をコンディショニングし;
(g)イオン交換カラムクロマトのカラム樹脂に疎水性相互作用クロマトカラムからのコンディショニングした溶離液を負荷し;
(h)該イオン交換クロマトカラムから不純物を洗い流し、および
(i)イオン交換カラムからボツリヌス毒素A型900kDa複合体を溶離し、それによってAPF精製方法であるボツリヌス毒素A型900kDa複合体を精製するための方法を介して精製したボツリヌス毒素A型900kDa複合体を得る工程を含むBoNT/Aを精製する方法であって、
工程(a)のAPF方法において、発酵培地が、加水分解された大豆:酵母エキス:グルコースを6:0〜3:1の重量パーセント比で含有するものであり、pHが、発酵の間5.0〜5.5の範囲であることを特徴とするものである方法によって精製されるものである、医薬。 - 塩化ナトリウム、賦形剤、緩衝液、担体、安定化剤、保存料および充填剤からなる群から選択される1つまたはそれ以上の成分をさらに含む、請求項1〜13のいずれか1項に記載の医薬。
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