JP2010524482A - ウイルスワクチンの生産用のアヒル胚由来幹細胞株 - Google Patents
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Abstract
Description
ワクチンは、例えばインフルエンザ、麻疹、流行性耳下腺炎、天然痘、黄熱病などの多くのウイルス感染症による死亡および疾患を効果的に軽減および予防する。
‐個々の生産キャンペーンに対して、大量の卵またはCEFの調達および品質管理を必要とする、長く煩雑でかつ資源消費する製造方法;
‐多くの場合に、高価な特定病原体不在(SPF)ニワトリ胚を使用する必要性;
‐流行感染の場合に、ドナーニワトリ群で卵の供給が不足するというリスク;
‐BSE非発生国からのウシ血清の使用に伴うインフレ傾向のコスト;
‐強毒性で、ニワトリにとって致死的なウイルスの増殖に卵を使用できないこと。
本説明の残りの部分では、下記の図面の説明文について言及する。
(図2)ニワトリValo EBv13細胞は、高レベルのテロメラーゼを発現する。継代p193代目のEBv13細胞は、継代p164代目(マスターセルバンク:MCB)または継代p184代目(ワーキングセルバンク:WCB)のニワトリEB14-O74細胞(WO03/076601を参照されたい)と同じ桁数の高レベルのテロメラーゼを発現する。マウス胚性幹細胞(mES)を陽性対照として使用し、マウス線維芽細胞(FED)を陰性対照として使用した。
(図3Aおよび3B)ポックスウイルスに対するニワトリValo EBv13の感受性を示す。EBv13(継代188代目)を、4 mMグルタミンを補充したSFM Excell培地65319またはG9916 SFM培地(SAFC) 40 ml中、100 mL F175フラスコに0.4×106個細胞/mlで播種した。細胞増殖およびMVA-GFP(MOI 10-2 TCID50/細胞)による感染は、37℃で行った。感染の1時間後に、新鮮培地60 mlを添加した。図3A:SFM Excell培地65319またはG9916 SFM培地(SAFC)における細胞密度動態。図3B:SFM Excell培地65319またはG9916 SFM培地(SAFC)における、TCID50/ml表示のMVA生産性。
(図4)アヒルEBx細胞の透過型電子顕微鏡解析を示す。dEBx細胞の透過型電子顕微鏡解析は、A Rivoire博士(フランス、リヨン)によって行われた。アヒルEBx細胞は、マウス胚性幹細胞およびWO2006/108846に記載されるVIVALIS EB14細胞の表現型と類似している、典型的な胚性幹細胞形態(すなわち、高い核-細胞質比)を示す。アヒルEBx細胞は、大きな核および核小体を有する小円形細胞であり、形質膜から伸びる短い仮足を有する。これらは代謝活性が高く、リボソームおよびミトコンドリアが豊富な細胞質を有する。
(図5Aおよび5B)アヒルEBx細胞株におけるテロメラーゼ発現を示す。アヒルEBx細胞の確立の異なる段階におけるテロメラーゼ発現を、Rocheテロメラーゼ検出キット(テロメラーゼOCR ELISA)を用いることにより調べた。図5A:テロメラーゼが、ニワトリEBv13細胞と同様に、様々な接着性アヒルEBx細胞株において高度に発現されることがわかる。陰性対照として用いたアヒル上皮細胞は、テロメラーゼを発現しない。図5B:懸濁アヒルEBx細胞の確立方法において、高レベルのテロメラーゼ発現が維持される。フィーダー欠乏中(フィーダー細胞ありまたはなし)、アヒルEB26細胞の懸濁への適合化過程中、ならびにdEB24およびdEB26の血清欠乏後のアヒルEBx細胞において、高レベルのテロメラーゼを調べた。EB24およびEB26などのアヒルEBx細胞は、ニワトリEB14細胞と同様に高レベルのテロメラーゼを発現する。アヒルEB66もまた、高レベルのテロメラーゼを発現する(データは示さず)。
(図6Aおよび6B)アヒルEBx(登録商標)細胞は、内在性逆転写酵素活性を示さない。図6A:Clean Cells(フランス)において、直接F-PERT解析(Lovatt et al., 1999, J. Virol. Methods, 82:185-200)により、内在性逆転写酵素発現が調べられた。アヒルEBx(登録商標)細胞株、EB26およびEB5-1は、内在性逆転写酵素(RT)活性を示さない。高レベルのRT活性が、ニワトリEB14細胞およびEBv13細胞の培養物(異なる継代における)において、ならびにより少ない程度に、特定病原体不在(SPF)ニワトリ株由来のニワトリ胚線維芽細胞(CEF)において検出された。RTアーゼ陰性であるCEM細胞を陰性対照として用いて、アッセイの検出限界を設定した。図6B:アヒルおよびニワトリEBx細胞の細胞培養上清中の、複製性(すなわち、複製能のある)または非複製性の内在性レトロウイルス粒子の存在を、鳥類ロイコシス主要キャプシド抗原P27を検出するELISAアッセイ法によって調べた。アヒルEBx細胞株、EB26およびEB5-1、ならびにニワトリEBv13は、ALV p27抗原を分泌しない。これとは逆に、ニワトリEB14細胞はALV P27抗原を発現する。
(図7Aおよび7B)アヒルEBx細胞は複製性鳥類ロイコシスウイルス(ALV)を分泌しない。内在性複製性アヒルウイルスの存在を検出するために、アヒルEBx細胞と、内在性および外因性ALVに感受性があることが知られているウズラQT6細胞株との同時培養アッセイがBioreliance(英国)で行われた。図7A:QT6同時培養の原理を記載した。図7B:複製性ウイルスの存在を、鳥類ロイコシス主要キャプシド抗原P27を検出するELISAアッセイ法によって検出する。このアッセイから、試験したいずれのアヒルEBx(登録商標)細胞(dEB26およびdEB51)も、複製性ALVを分泌しないことが実証される。QT6において複製することが知られているRAV-1ウイルスを、陽性対照として用いた。
(図8)アヒルEBx細胞株およびニワトリEB14細胞株における受容体SAα2-3およびSAα2-6の細胞表面発現を示す。細胞を、ジゴキシゲニン標識レクチンと共にインキュベートする:セイヨウニワトコ(Sambuca nigra)凝集素レクチンはSia2-6Galに特異的に結合し、イヌエンジュ(Maackia amurensis)凝集素レクチンはSia2-3Galに特異的に結合する。細胞に結合するレクチンを、当業者に周知の技法に従って、FITC標識抗ジゴキシゲニン抗体で明らかにする。FITC標識細胞を、蛍光セルソーター(FACS)で計数する。SAα2-3分子およびSAα2-6分子は、それぞれ鳥類およびヒトインフルエンザウイルスの受容体であることが記載されている。ほぼすべてのEBx細胞が、細胞表面受容体SAα2-3およびSAα2-6を高度に発現する。
(図9Aおよび9B)感染アヒルEBx細胞におけるMVA-GFPウイルス生産を示す。図9A:細胞増殖SFM培地中での細胞増殖中に、T175撹拌槽型フラスコにおいて、アヒルEBx(登録商標)に小さな凝集塊を形成させた。次いで凝集塊を10-2 TCID50/細胞のMVA-GFPウイルスに感染させ、混合物を生産SFM培地で希釈した。37℃での6日間のウイルス生産期間中、UV照射した感染細胞の写真を毎日撮影した。感染後(pi)4日目に、MVA感染の頂点に達した。感染後6日目に、感染細胞は死滅し始めた。図9B:3 L流加バイオリアクター中のアヒルEBx(登録商標)細胞において増殖したMVA-GFPウイルスの力価測定。(左パネル)細胞増殖期中に、アヒルEBx由来バイオマスをExcell増殖培地(SAFC)中に蓄積させた。4日目に、細胞密度は400万個細胞/mlに到達した。次いで、細胞を10-1 TCID50/細胞のMVA-GFPウイルスに感染させ、その混合物をExcell培地1.5 Lで希釈した。37℃での6日間のウイルス生産期間中、試料を毎日採取し、動態の終了時にTCID50力価測定(右パネル)を行った。感染後4日目に、収量8.5 log TCID50/mlに到達し、これは収量205 TCID50/細胞に相当する。
(図10)EBx(登録商標)細胞凝集塊の大きさに及ぼす、SFM培地中のカルシウムおよびマグネシウム濃度の影響を示す。図10A:ニワトリEBv13細胞を最初に、高濃度のカルシウムイオン(Ca2+)(約0.79 mM)およびマグネシウムイオン(Mg2+)を含む、SAFC BiosciencesによるSFM培地で培養した;この培地において、細胞は培養下で大きな凝集体を生じる。細胞培養培地を、より低濃度のCa2+(最終0.03 mM)およびMg2+(最終1.6 mM)を含む同じSFM培地に変更してから3日後に、細胞はより小さな凝集体を形成する。図10B:アヒルEB24細胞、EB26細胞、およびEB66細胞を最初に、高濃度のカルシウムイオン(Ca2+)(約0.79 mM)およびマグネシウムイオン(Mg2+)を含む、SAFC BiosciencesによるSFM培地で培養した;この培地において、細胞は培養下で大きな凝集体を生じる。細胞培養培地を、より低濃度のCa2+(最終0.03 mM)およびMg2+(最終1.6 mM)を含む同じSFM培地に変更してから3日後に、細胞はより小さな凝集体を形成する。
(図11Aおよび11B)3 LバイオリアクターでのアヒルEBx細胞におけるインフルエンザウイルスA株の生産を示す。細胞増殖期中に、アヒルEBx(登録商標)バイオマスを細胞増殖培地中に37℃で蓄積させた。次いで、細胞を10-4 TCID50/細胞のA/H1N1/北京/262/95またはA/H3N2/ニューヨーク/55/2004インフルエンザウイルスに感染させ、その混合物を、0.75 USP/mLトリプシンを補充したExcell生産培地1.5 Lで希釈し、温度を33℃に下げた。14日間のウイルス生産期間中、試料を毎日採取し、-80℃で保存した。図11A:A/H1N1/北京/262/95インフルエンザウイルス株に感染したアヒルEBx細胞の増殖動態。左パネル:細胞密度(菱形、×106個細胞.ml-1)およびlog TCID50/ml表示でのウイルス力価。右パネル:全細胞数(四角)、生存度(黒丸、%)、およびug/ml表示での血球凝集素濃度(赤丸、%)。ウイルス収量は、20 ug血球凝集素/ml培養上清に達した。図11B:A/H3N2/ニューヨーク/55/2004インフルエンザウイルス株に感染したアヒルEBx細胞の増殖動態。左パネル:細胞密度(菱形、×106個細胞.ml-1)。右パネル:全細胞数(四角)、生存度(黒丸、%)、およびug/ml表示での血球凝集素濃度(赤丸、%)。ウイルス収量は、30 ug血球凝集素/ml培養上清に達した。
(図12)アヒルEBx(登録商標)細胞におけるインフルエンザウイルスB株の生産を示す。細胞増殖期中に、アヒルEBx(登録商標)バイオマスを細胞増殖培地中に37℃で蓄積させた。次いで、細胞を10-3 TCID50/細胞のB/江蘇/10/2003インフルエンザウイルスに感染させ、その混合物を、0.75 USP/mLトリプシンを補充したExcell生産培地1.5 Lで希釈し、温度を33℃に下げた。14日間のウイルス生産期間中、試料を毎日採取し、-80℃で保存した。左パネル:細胞密度(菱形、×106個細胞.ml-1)。右パネル:全細胞数(四角)、生存度(黒丸、%)、およびug/ml表示での血球凝集素濃度(赤丸、%)。ウイルス収量は、25 ug血球凝集素/ml培養上清に達した。
(図13)懸濁アヒルEB66細胞(MOI 10-3、0.75 USP/mLトリプシン)におけるNDV生産性およびウイルスタンパク質発現の解析を示す。アヒルおよびニワトリEBx細胞は、NDV La Sota株に対して感受性があり、これを複製する。アヒルEB66細胞で生産されたNDVの力価(TCID50/ml)は、感染後0日目から2日目に増加して、平均106.83 TCID50/mLに達する(図13左パネル)。ウェスタンブロット解析(図13右パネル)から、NDVウイルスタンパク質(HN、Fo/F、NP & M)発現が示された。アヒルEB66細胞で生産されたNDVウイルスのウイルスタンパク質組成は、ニワトリEB14細胞で生産されたNDVウイルスで得られた組成と類似している。加えて、ニワトリおよびアヒルEBx細胞で生産されたウイルスの放出の動態も類似している。
(図14)組織培養フラスコ中、無血清培地中での、懸濁アヒルEB66細胞(MOI 10-1または10-2)における組換え麻疹ウイルス複製の解析を示す。アヒルEB66細胞は、麻疹ウイルスによる感染に対して、少なくともVELO細胞と同程度に感受性がある。アヒルEB66細胞で生産された、緑色蛍光タンパク質(GFP)を発現する組換え麻疹ウイルスの力価(TCID50/ml)は、感染後6日目に107 TCID50/mLに達する。
(図15Aおよび15B)アヒルEB66細胞におけるSSEA-1、EMA-1、およびテロメラーゼ発現を示す。ローラーボトルで培養したアヒルEB66の異なる継代におけるテロメラーゼ発現を、Rocheテロメラーゼ検出キット(テロメラーゼOCR ELISA)を用いることにより調べた。ローラーボトルで培養したアヒルEB66の異なる継代におけるSSEA-1およびEMA-1は、FACS解析により調べた。図15A:テロメラーゼは、異なる継代(138、144、147、150、154)における懸濁アヒルEB66細胞株において高度に発現されることがわかる。図15B:SSEA-1およびEMA-1細胞表面マーカーは、異なる継代(138、144、147、150、154)における懸濁アヒルEB66細胞株において高度に発現されることが判明した。
(図16)アヒルEB66細胞の核型分析を示す。アヒルEB66細胞の核型は、Franck教授、ENVL、リヨンによって行われた。EB66細胞は二倍体細胞である。
本発明は、鳥類胚性幹細胞(ES)に由来するEBxと命名された連続継代性二倍体鳥類細胞株を得るための方法であって、該鳥類細胞株が複製能のある内在性レトロウイルス粒子を産生しない方法を提供する。
‐「ガンカモ目」(すなわち、アヒル、ガチョウ、ハクチョウ、および近縁のもの)。ガンカモ目は、3つの科:サケビドリ科(サケビドリ)、カササギガン科(カササギガン)、およびガンカモ科内に150種類のトリを含み、ガンカモ科には140種を超える水鳥が含まれ、その中にアヒル、ガチョウ、およびハクチョウが含まれる。この目内の種はすべて、水面での水生生存に高度に適応している。いずれも、効率的に泳ぐために足に水かきがある(その後、主として陸生になったものもいる)。
‐「キジ目」(すなわち、ニワトリ、ウズラ、シチメンチョウ、キジ、および近縁のもの)。キジ目は、ニワトリ、シチメンチョウ、ウズラ、およびキジを含むトリの目である。世界中で約256種が見出されている。
‐「ハト目」(すなわち、ハトおよび近縁のもの)。トリのハト目には、広範囲に及ぶハト(doves)およびハト(pigeons)が含まれる。
‐イーストランシングUSDA家禽資源の系統0家畜ニワトリ(ELL-0株)。イーストランシング系統-0ニワトリは、ALVに関連した内在性ウイルス(ev)遺伝子座を全く含まない(Dunwiddie and Faras, 1985)。
‐国立農学研究所(Domaine de Magneraud、フランス、シュルジェール)による系統DEおよびPE11。
a) 複製能のある内在性レトロウイルス粒子、より具体的にはEAVおよび/もしくはALV-Eプロウイルス配列またはその断片を産生しやすい完全な内在性プロウイルス配列またはその断片を含まないトリ由来の胚性幹細胞の、フィーダー層の存在下におけるかつ動物血清を補充した、それら細胞の増殖を可能にする因子をすべて含む完全培地中での単離、培養、および拡大;任意に、該完全培地は、付加的アミノ酸(すなわち、グルタミン、非必須アミノ酸...)、ピルビン酸ナトリウム、β-メルカプトエタノール、ビタミン、非動物起源のタンパク質加水分解物(すなわち、イーストレート、植物加水分解物(ダイズ、コムギ、...))などの添加物を含み得る;
b) 該因子、該フィーダー層、および該血清、ならびに任意に該添加物の完全な除去を得るために培地を改変することによる継代、ならびに、複製能のある内在性レトロウイルス粒子を産生せず、外因性増殖因子、フィーダー層、および動物血清の存在しない基礎培地中で長期にわたり増殖することができる、EBx(登録商標)と命名された接着性または懸濁鳥類細胞株をさらに得る段階。
‐フィーダー層/血清/増殖因子;
‐フィーダー層/増殖因子/血清;
‐血清/増殖因子/フィーダー層;
‐血清/フィーダー層/増殖因子;
‐増殖因子/血清/フィーダー層;
‐増殖因子/フィーダー層/血清。
‐タイワンアヒル(バーバリ(Barbari)アヒルとも称される):VII期
‐ホロホロチョウ:VII〜VIII期
‐シチメンチョウ:VII〜VIII期
‐ペキンアヒル:VIII期
‐ニワトリ:X期
‐ニホンウズラ:XI期
‐ガチョウ:XI期。
a) Eyal-Giladiの分類(EYAL-GILADIの分類:EYAL-GILADI and KOCHAN, 1976, <<From cleavage to primitive streack formation : a complementary normal table and a new look at the first stages of the development in the chick>>. 「General Morphology」 Dev. Biol., 49:321-337)のおよそVI期から孵化前までを含む、好ましくは産卵あたりの発生段階にある、好ましくはアヒルまたはev-0ニワトリからトリ胚を単離する段階であって、ここで、該トリのゲノムが、複製能のある内在性レトロウイルス粒子を産生しやすい内在性プロウイルス配列を含まない、段階;
b) 段階a)の胚を分離することによって得られた鳥類胚性幹(ES)細胞を、以下を補充した基礎培地に懸濁する段階:
‐インスリン成長因子1(IGF-1)および毛様体神経栄養因子(CNTF);
‐動物血清;ならびに
‐任意に、インターロイキン6(IL-6)、インターロイキン6受容体(IL-6R)、幹細胞因子(SCF)、および線維芽細胞増殖因子(FGF)を含む群から選択される増殖因子;
c) 段階b)で得られたES細胞の懸濁液をフィーダー細胞層上に播種し、ES細胞を少なくとも1継代の間さらに培養する段階;
d) 1〜約15継代、好ましくは3〜約15継代というある範囲の何代かの継代にわたり、IL-6、IL-6R、SCF、FGFを含む群より選択される増殖因子をすべて培地から任意に除去し、鳥類ES細胞を少なくとも1継代の間さらに培養する段階。好ましくは、IL-6、IL-6R、SCF、FGFを含む群より選択される増殖因子すべての培地からの除去は、1継代の間に同時に行う。通常、IL-6、IL-6R、SCF、FGFの除去は、およそ継代10〜15代目に行う;
e) IGF-1およびCNTFを培地から除去し、鳥類ES細胞を少なくとも1継代の間さらに培養する段階。好ましくは、IGF-1およびCNTFを含む群より選択される増殖因子の培地からの除去は、1継代の間に同時に行う。通常、IGF-1およびCNTFの除去は、およそ継代15〜25代目に行う。または、IGF-1およびCNTFの除去は、何代かの継代にわたり(少なくとも2継代で、およそ15継代まで)漸進的に減少させていくことによって行う;
f) 何代かの継代後に、フィーダー層の完全な除去を得るために、培地中のフィーダー細胞の濃度を漸進的に減少させていき、細胞をさらに培養する段階;
g) 少なくとも1継代後に、添加物の完全な除去を得るために、培地中の添加物の濃度を任意に漸進的に減少させていく段階;ならびに、
h) 何代かの継代後に、動物血清の完全な除去を得るために、培地中の動物血清の濃度を任意に漸進的に減少させていく段階;ならびに、
i) 任意に動物血清および添加物を含まない、増殖因子、フィーダー層の存在しない基礎培地中で増殖することができる、ES細胞に由来するEBx(登録商標)と命名された接着性鳥類細胞株を得る段階であって、ここで該連続継代性二倍体鳥類細胞株が複製能のある内在性レトロウイルス粒子を産生しない、段階;
j) 該接着性鳥類EBx(登録商標)細胞株を懸濁培養条件に任意にさらに適合化する段階。細胞培養の懸濁への適合化の段階は、EBx(登録商標)細胞の確立方法に沿って行うことができる。例えば、タイワン胚性幹細胞に由来するアヒルEBx(登録商標)細胞では、細胞は、フィーダー層の除去前に懸濁状態での増殖に適合化させた。ペキンアヒルに由来するアヒルEB(登録商標)細胞(EB24、EB26、EB66)の場合には、細胞は、動物血清の除去前に懸濁状態での増殖に適合化させた。
k) 例えば限界希釈によって、該鳥類EBx(登録商標)細胞を任意にさらにサブクローニングする段階。
a) 産卵あたりの発生段階にあるトリ胚を単離する段階であって、該トリのゲノムが、複製能のある内在性レトロウイルス粒子を産生しやすい内在性プロウイルス配列を含まない段階;
b) 段階a)の胚を分離することによって得られた鳥類胚性幹(ES)細胞を、少なくとも以下を補充した基礎培地に懸濁する段階:
‐インスリン成長因子1(IGF-1)および毛様体神経栄養因子(CNTF);ならびに
‐ウシ胎仔血清などの哺乳動物血清;
c) 段階b)で得られたES細胞の懸濁液をフィーダー細胞層上に播種し、ES細胞を少なくとも1継代の間さらに培養する段階;
e) IGF-1およびCNTFを培地から除去し、細胞を少なくとも1継代の間さらに培養する段階;
f) 何代かの継代後に、フィーダー層の完全な除去を得るために、培地中のフィーダー細胞の濃度を漸進的に減少させていき、細胞をさらに培養する段階;
g) 何代かの継代後に、哺乳動物血清の完全な除去を得るために、培地中の該哺乳動物血清の濃度を漸進的に減少させていく段階ならびに:
h) 増殖因子、フィーダー層、および哺乳動物血清の存在しない基礎培地中で増殖することができる、ES細胞に由来する接着性鳥類EBx(登録商標)細胞株を得る段階であって、該連続継代性二倍体鳥類細胞株が複製能のある内在性レトロウイルス粒子を産生しない段階;
i) 好ましくは懸濁としての増殖を促進することにより、より好ましくは
段階h)で得られた接着性鳥類EBx(登録商標)細胞株を、最初の支持体よりも低い接着特性を有する別の支持体(すなわち、超低接着支持体など)に移すことにより、接着性鳥類EBx(登録商標)細胞株を懸濁培養条件に任意にさらに適合化する段階。
d) IL-6、IL-6R、SCF、FGFを含む群より選択される増殖因子をすべて培地から任意に除去し、ES細胞を少なくとも1継代の間さらに培養する段階
をさらに含む。
‐0.1〜0.5 mM L-グルタミン、好ましくは2〜3 mM L-グルタミン;
‐0.05〜2 mMピルビン酸ナトリウム、好ましくは0.1 mM〜1 mMピルビン酸ナトリウム;
‐0.1〜2.5%非必須アミノ酸、好ましくは約1%非必須アミノ酸;
‐0.1〜2.5%ビタミン、好ましくは約1%ビタミン;
‐0.05〜5 mM β-メルカプトエタノール、好ましくは約0.16 mM β-メルカプトエタノール;
‐非動物起源のタンパク質加水分解物。
a) 産卵(oviposition)(すなわち、産卵(egg laying))時、または産卵のわずかに前もしくは後のアヒル胚を単離する段階。任意に、成熟させるために(すなわち、タイワンアヒル)、卵を通常一晩インキュベートしてもよい;
b) 段階a)の胚を分離することによって得られたアヒル胚性幹(ES)細胞を、インスリン成長因子1(IGF-1)、毛様体神経栄養因子(CNTF)、インターロイキン6(IL-6)、インターロイキン6受容体(IL-6R)、幹細胞因子(SCF)、および線維芽細胞増殖因子(FGF)、ならびに動物血清を補充した基礎培地に懸濁する段階;
c) 段階b)で得られたES細胞の懸濁液をフィーダー細胞層上に播種し、アヒルES細胞を少なくとも1継代の間さらに培養する段階;
d) 1〜約15継代というある範囲にわたり、好ましくは1継代の間に同時に、IGF-1、CNTF、IL-6、IL-6R、SCF、FGFを含む群より選択される増殖因子をすべて培地から除去し、アヒルES細胞を少なくとも1継代の間さらに培養する段階;
f) 何代かの継代後、好ましくは約5〜約25継代後に、フィーダー層の完全な除去を得るために、ある継代から別の継代へと培地中のフィーダー細胞の濃度を漸進的に減少させていき、細胞をさらに培養する段階;
g) 何代かの継代後に、動物血清の完全な除去を得るために、培地中の動物血清の濃度を任意に漸進的に減少させていく段階;ならびに:
h) 任意に動物血清を含まない、増殖因子、フィーダー層の存在しない基礎培地中で増殖することができる、アヒルEBx(登録商標)と命名されたES細胞に由来する接着性アヒル細胞株を得る段階であって、該連続継代性二倍体アヒル細胞株が複製能のある内在性レトロウイルス粒子を産生しない段階;
i) 接着性アヒル細胞株を懸濁培養条件に任意にさらに適合化する段階。
基礎培地への添加物は、本方法中、好ましくは段階f)とg)の間または段階g)とh)の間に除去する。
a) 産卵(oviposition)(すなわち、産卵(egg laying))時、または産卵のわずかに前もしくは後のアヒル胚を単離する段階。任意に、成熟させるために(すなわち、タイワンアヒル)、卵を通常一晩インキュベートしてもよい;
b) 段階a)の胚を分離することによって得られたアヒル胚性幹(ES)細胞を、IGF-1、CNTF、IL-6、IL-6R、SCF、およびFGF、ならびに動物血清を補充した基礎培地に懸濁する段階;
c) 段階b)で得られたES細胞の懸濁液をフィーダー細胞層上に播種し、アヒルES細胞を少なくとも1継代の間さらに培養する段階;
d) 1〜約15継代というある範囲にわたり、好ましくは1継代の間に同時に、IL-6、IL-6R、SCF、FGFを含む群より選択される増殖因子をすべて培地から除去し、アヒルES細胞を少なくとも1継代の間さらに培養する段階;
e) 1〜約15継代というある範囲にわたり、好ましくは1継代の間に同時に、増殖因子IGF-1およびCNTFを培地から除去し、アヒルES細胞を少なくとも1継代の間さらに培養する段階;
f) 何代かの継代後、好ましくは約5〜約25継代後に、フィーダー層の完全な除去を得るために、培地中のフィーダー細胞の濃度を漸進的に減少させていき、細胞をさらに培養する段階;
g) 何代かの継代後に、動物血清の完全な除去を得るために、培地中の動物血清の濃度を任意に漸進的に減少させていく段階;ならびに
h) 任意に動物血清を含まない、増殖因子、フィーダー層の存在しない基礎培地中で増殖することができる、アヒルEBx(登録商標)と命名されたES細胞に由来する接着性アヒル細胞株を得る段階であって、該連続継代性二倍体アヒル細胞株が複製能のある内在性レトロウイルス粒子を産生しない段階;
i) 接着性アヒル細胞株を懸濁培養条件に任意にさらに適合化する段階。
基礎培地への添加物は、本方法中、好ましくは段階f)とg)の間または段階g)とh)の間に除去する。
a) 産卵(oviposition)(すなわち、産卵(egg laying))時、または産卵のわずかに前もしくは後のアヒル胚を単離する段階。任意に、成熟させるために(すなわち、タイワンアヒル)、卵を通常一晩インキュベートしてもよい;
b) 段階a)の胚を分離することによって得られたアヒル胚性幹(ES)細胞を、インスリン成長因子1(IGF-1)および毛様体神経栄養因子(CNTF)ならびに動物血清を補充した基礎培地に懸濁する段階;
c) 段階b)で得られたES細胞の懸濁液をフィーダー細胞層上に播種し、アヒルES細胞を少なくとも1継代の間さらに培養する段階;
d) 1〜約15継代というある範囲にわたり、好ましくは1継代の間に同時に、増殖因子IGF-1およびCNTFを培地から除去し、アヒルES細胞を少なくとも1継代の間さらに培養する段階;
f) 何代かの継代後、好ましくは約5〜約25継代後に、フィーダー層の完全な除去を得るために、培地中のフィーダー細胞の濃度を漸進的に減少させていき、細胞をさらに培養する段階;添加物の除去?
g) 何代かの継代後に、動物血清の完全な除去を得るために、培地中の動物血清の濃度を任意に漸進的に減少させていく段階;ならびに、
h) 任意に動物血清を含まない、増殖因子、フィーダー層の存在しない基礎培地中で増殖することができる、アヒルEBx(登録商標)と命名されたES細胞に由来する接着性アヒル細胞株を得る段階であって、ここで該連続継代性二倍体アヒル細胞株が複製能のある内在性レトロウイルス粒子を産生しない、段階;
i) 接着性アヒルEBx(登録商標)細胞株を懸濁培養条件に任意にさらに適合化する段階。
基礎培地への添加物は、本方法中、好ましくは段階f)とg)の間または段階g)とh)の間に除去する。
a) 産卵(oviposition)(すなわち、産卵(egg laying))時、または産卵のわずかに前もしくは後のev-0家畜ニワトリ胚を単離する段階;
b) 段階a)の胚を分離することによって得られたev-0家畜ニワトリ胚性幹(ES)細胞を、IGF-1、CNTF、IL-6、IL-6R、SCF、およびFGF、ならびに動物血清を補充した基礎培地に懸濁する段階;
c) 段階b)で得られたES細胞の懸濁液をフィーダー細胞層上に播種し、ev-0家畜ニワトリES細胞を少なくとも1継代の間さらに培養する段階;
d) 1〜約15継代というある範囲にわたり、好ましくは1継代の間に同時に、IGF-1、CNTF、IL-6、IL-6R、SCF、FGFを含む群より選択される増殖因子をすべて培地から除去し、ニワトリES細胞を少なくとも1継代の間さらに培養する段階;
f) 何代かの継代後、好ましくは約5〜約25継代後に、フィーダー層の完全な除去を得るために、培地中のフィーダー細胞の濃度を漸進的に減少させていき、細胞をさらに培養する段階;
g) 何代かの継代後に、動物血清の完全な除去を得るために、培地中の動物血清の濃度を任意に漸進的に減少させていく段階ならびに:
h) 任意に動物血清を含まない、増殖因子、フィーダー層の存在しない基礎培地中で増殖することができる、EBx ev-0と命名されたES細胞に由来する接着性ev-0家畜ニワトリ細胞株を得る段階であって、ここで、該連続継代性二倍体鳥類細胞株が複製能のある内在性ALV-Eレトロウイルス粒子を産生しない、段階;
i) 接着性鳥類細胞株EBx ev-0を懸濁培養条件に任意にさらに適合化する段階。
基礎培地への添加物は、本方法中、好ましくは段階f)とg)の間または段階g)とh)の間に除去する。
a) 産卵(oviposition)(すなわち、産卵(egg laying))時、または産卵のわずかに前もしくは後のev-0家畜ニワトリ胚を単離する段階;
b) 段階a)の胚を分離することによって得られたev-0家畜ニワトリ胚性幹(ES)細胞を、IGF-1、CNTF、IL-6、IL-6R、SCF、およびFGF、ならびに動物血清を補充した基礎培地に懸濁する段階;
c) 段階b)で得られたES細胞の懸濁液をフィーダー細胞層上に播種し、ev-0家畜ニワトリES細胞を少なくとも1継代の間さらに培養する段階;
d) 1〜約15継代というある範囲にわたり、好ましくは1継代の間に同時に、IL-6、IL-6R、SCF、FGFを含む群より選択される増殖因子すべてを培地から除去し、ニワトリES細胞を少なくとも1継代の間さらに培養する段階;
e) 1〜約15継代というある範囲にわたり、好ましくは1継代の間に同時に、増殖因子IGF-1およびCNTFを培地から除去し、ev-0家畜ニワトリES細胞を少なくとも1継代の間さらに培養する段階;
f) 何代かの継代後、好ましくは約5〜約45継代後に、フィーダー層の完全な除去を得るために、培地中のフィーダー細胞の濃度を漸進的に減少させていき、細胞をさらに培養する段階;
g) 何代かの継代後に、動物血清の完全な除去を得るために、培地中の動物血清の濃度を任意に漸進的に減少させていく段階ならびに:
h) 任意に動物血清を含まない、増殖因子、フィーダー層の存在しない基礎培地中で増殖することができる、ES細胞に由来する接着性ev-0家畜ニワトリ細胞株を得る段階であって、ここで、ニワトリEBx(登録商標)と命名された該連続継代性二倍体ev-0家畜ニワトリ細胞株が複製能のある内在性レトロウイルス粒子を産生しない、段階;
i) 接着性ev-0家畜ニワトリ細胞株を懸濁培養条件に任意にさらに適合化する段階。
基礎培地への添加物は、本方法中、好ましくは段階f)とg)の間または段階g)とh)の間に除去する。
a) 産卵(oviposition)(すなわち、産卵(egg laying))時、または産卵のわずかに前もしくは後のev-0家畜ニワトリ胚を単離する段階;
b) 段階a)の胚を分離することによって得られたev-0家畜ニワトリ胚性幹(ES)細胞を、IGF-1およびCNTFならびに動物血清を補充した基礎培地に懸濁する段階:
c) 段階b)で得られたES細胞の懸濁液をフィーダー細胞層上に播種し、ev-0家畜ニワトリES細胞を少なくとも1継代の間さらに培養する段階;
d) 1〜約15継代というある範囲にわたり、好ましくは1継代の間に同時に、増殖因子IGF-1およびCNTFを培地から除去し、ev-0家畜ニワトリES細胞を少なくとも1継代の間さらに培養する段階;
f) 何代かの継代後、好ましくは約5〜約45継代後に、フィーダー層の完全な除去を得るために、培地中のフィーダー細胞の濃度を漸進的に減少させていき、細胞をさらに培養する段階;
g) 何代かの継代後に、動物血清の完全な除去を得るために、培地中の動物血清の濃度を任意に漸進的に減少させていく段階;ならびに、
h) 任意に動物血清を含まない、増殖因子、フィーダー層の存在しない基礎培地中で増殖することができる、ニワトリEBx(登録商標) ev-0と命名されたES細胞に由来する接着性ev-0家畜ニワトリ細胞株を得る段階であって、ここで、該連続継代性二倍体ニワトリ細胞株が複製能のある内在性レトロウイルス粒子を産生しない、段階;
i) 接着性ev-0家畜ニワトリ細胞株を懸濁培養条件に任意にさらに適合化する段階。
基礎培地への添加物は、本方法中、好ましくは段階f)とg)の間または段階g)とh)の間に除去する。
‐接着細胞を細胞コンフルエンスをわずかに上回る高細胞密度で播種して、細胞を強制的に懸濁状態にする;
‐接着細胞を動物血清濃度の低い細胞培養培地で播種する;
‐接着細胞を、細菌用のディッシュおよびプレート、ならびにCorning(組織培養ディッシュおよびプレート参照3262、3473、3471、3474;フラスコ参照3814...)またはSarstedt(フラスコ参照831810502...)のような業者によって開発された超低接着プレートなどの、細胞接着を可能にしないかまたは弱い細胞接着を可能にするプラスチック製の細胞培養容器に播種する;
‐接着細胞を容器に播種し、撹拌下(約50 rpm)で培養する。
‐高い核-細胞質比、
‐内因性テロメラーゼ活性、
‐任意に、それらは、アルカリホスファターゼ、SSEA-1、EMA-1、ENS1マーカーなどの1つまたは複数のさらなるESマーカーを発現し得る。
‐37℃で約30時間またはそれ未満(好ましくは24時間)という、本発明の方法の段階a)の鳥類ES細胞の倍加時間(39℃で48時間〜72時間)よりも短い倍加時間。
該細胞は、複製能のある内在性レトロウイルス粒子を産生しない。
‐高い核-細胞質比、
‐内因性テロメラーゼ活性、
‐任意に、アヒルES細胞は、アルカリホスファターゼ、SSEA-1、EMA-1、ENS1マーカーなどの1つまたは複数のさらなるESマーカーを発現し得る。
‐37℃または39℃で約40時間よりの倍加時間(A doubling time of about around than 40 hours at 37℃ or 39℃.)。
本発明による該未分化アヒル細胞は、前述のアヒル胚性幹細胞用の細胞培養培地中でフィーダー細胞上で増殖させた場合、該幹細胞表現型を維持することができる。該未分化アヒル細胞は、キメラアヒルまたはトランスジェニックアヒルを作製するのに有用である。
a) 上記の持続性アヒルES細胞培養物を、レシピエントアヒル胚の胚下腔に導入する段階;および
b) 段階a)で得られた胚をインキュベートして、子アヒルとして孵化させる段階;
c) 子アヒルに定着した異種細胞を含むキメラの子アヒルを選択する段階。
本発明はまた、以下の段階を含む、遺伝子改変キメラアヒルを得る方法に関する:
a) 上記の遺伝子改変アヒルES細胞を、レシピエントアヒル胚の胚下腔に導入する段階;および
b) 段階a)で得られた胚をインキュベートして、子アヒルとして孵化させる段階;
c) 子アヒルに定着した遺伝子改変異種細胞を含むキメラの子アヒルを選択する段階。
本発明はまた、以下の段階を含む、該キメラの子アヒルの子孫を得る方法に関する:
a) 段階c)で得られた選択されたキメラの子アヒルを、成鳥として成熟させる段階;
b) 本明細書における異種細胞を有する該成鳥を繁殖させることにより、トリの子孫を作製する段階;
c) 子孫において関心対象のトリを選択する段階。
本発明は、該遺伝子改変アヒルES細胞内に含まれる発現ベクターによってコードされる異種ポリペプチドを発現させるさらなる段階を含み得る。好ましくは、異種ポリペプチドは、血液、精子、尿、または遺伝子改変アヒルの雌が産んだ発生鳥類卵の卵白など、アヒルの生体液中に送達される。
‐鳥類EBx(登録商標)細胞培養物を関心対象のウイルスに感染させる段階;該鳥類EBx(登録商標)細胞は、好ましくは動物血清不含培地で培養される;
‐該ウイルスを複製するために、感染鳥類EBx(登録商標)細胞を培養する段階;
‐細胞培養上清中および/または該細胞内のウイルスを回収する段階。
好ましい態様によれば、該方法は以下の段階を含む:
a) 該鳥類EBx(登録商標)を培養容器内で、無血清培地N°1中で懸濁状態で増殖させる段階;
b) 細胞密度が少なくとも150万個細胞/mlである時点で、該細胞を選択されたウイルスに感染させる段階;
c) 任意に、感染直前に、感染と同時に、または感染直後に、細胞培養物に無血清培地N°2を添加する段階;および
d) ウイルス複製を可能にするために、該感染細胞をさらに培養する段階;
e) 該ウイルスを任意に回収する段階。
本発明の該方法は、ウイルス増殖を可能にする条件において、培地中にタンパク質分解酵素を添加するさらなる段階を含み得る。タンパク質分解酵素は、トリプシン、キモトリプシン、サーモリシン、ペプシン、パンクレアチン、パパイン、プロナーゼ、サブチリシンA、エラスターゼ、フリン、およびカルボキシペプチダーゼからなる群より選択される。好ましい態様によれば、酵素はトリプシンである。好ましくは、タンパク質分解酵素は、原核生物宿主または植物で産生された組換えタンパク質(すなわち:trypzean)である。タンパク質分解酵素は、ウイルス感染前、ウイルス感染中、および/またはウイルス感染後に添加することができる。好ましくは、タンパク質分解酵素の添加は、ウイルス感染後に行う。培地中へのタンパク質酵素の添加は、ウイルス回収まで1日当たり1回、1日当たり2回以上、または1日当たり1回未満行うことができる。
a) ウイルス全体を含む細胞培養上清をデオキシリボ核酸制限酵素、好ましくはDNアーゼ(EC3.1.21およびEC3.1.22分類を参照されたい)およびヌクレアーゼ(EC3.1.30およびEC3.1.31分類を参照されたい)と共に、任意にインキュベートする段階。好ましくは、DNA消化酵素はベンゾナーゼ(ベンゾンヌクレアーゼ)またはDNアーゼIである;
b) 陽イオン界面活性剤の付加。陽イオン界面活性剤の例は、非限定的に、CTABなどのセチル-トリメチルアンモニウム塩、ミリスチル-トリメチルアンモニウム塩、リポフェクチン、DOTMA、およびTween(商標)である;
c) 抗原タンパク質の単離。この最終段階は、遠心分離または限外濾過により実現することができる。
実施例1:SPFニワトリ株VALO由来のニワトリEBv13細胞株
1.1‐原材料
卵
Valoと称される特定病原体不在(SPF)株。valo株は、ドイツのLohmannによって作製および供給される白色レグホン株である。分析の証明書と共に供給されるそれらのSPF鶏卵は、CAV、鳥類アデノウイルス(1群、血清型1〜12、および3群)、EDS、鳥類脳脊髄炎ウイルス、鳥類ロイコシスウイルス/RSV(血清型ALV-Jを含む)、鳥類腎炎ウイルス、鳥類レオウイルス、鶏痘ウイルス、伝染性気管支炎ウイルス、伝染性滑液包炎ウイルス(IBDV)、伝染性咽頭気管炎ウイルス、インフルエンザウイルスA型、マレック病ウイルス、マイコプラズマ病(Mg+Ms)、マイコバクテリウム・アビウム(Mycobacterium avium)、ニューカッスル病ウイルス、細網内皮症ウイルス、サルモネラ・プロラム(Salmonella pullorum)、他のサルモネラ感染症、鳥類鼻気管炎ウイルス(ART)、ヘモフィルス・パラガリナルム(Hemophilus paragallinarum)について検査される。Valo鶏卵は、輸送中の卵の操作に関連した汚染のリスクを回避するために、除染装置による消毒にのみ供した。
EBv13の確立方法の第1段階では、ニワトリ幹細胞の多能性を維持するために、マウス起源による細胞(STO細胞)をフィーダー層として用いた。これらのフィーダー細胞は、プラスチック上に播種する前に、γ線照射(45〜55グレイ)によって有糸分裂を不活性化する。この照射線量は、細胞周期の決定的な停止を誘導するが、非分化細胞の細胞増殖の促進に必要な増殖因子および細胞外基質の産生をなお可能にする亜致死線量である。
DMEM-ハムF12(Cambrex、カタログ番号BE04-687)
Optipro培地(Invitrogen、カタログ番号12309)
EX-CELL(商標) 65195、60947、および65319(SAFC、特注培地)
グルタミン(Cambrex、カタログ番号BE17-605E)
ペニシリン/ストレプトマイシン(Cambrex、カタログ番号BE17-602E))
非必須アミノ酸(Cambrex、カタログ番号BE13-114E)
ピルビン酸ナトリウム(Cambrex、カタログ番号BE13-115)
ビタミン(Cambrex、カタログ番号13-607C)
βメルカプトエタノール(Sigma、カタログ番号M7522)
PBS 1×(Cambrex、カタログ番号BE17-516F)
パラホルムアルデヒド4%(Sigma、カタログ番号P6148)
KCl 5.6%(Sigma、カタログ番号P9333)
メタノール/酢酸(3/1):メタノール(Merck、カタログ番号K34497209;酢酸 Sigma、カタログ番号A6283)
コルセミド、Karyomax(Gibco、カタログ番号15212-046)
ジメチルスルホキシド(DMSO)(Sigma、カタログ番号D2650)
2種類の異なる組換え因子を使用した:
□組換えヒト毛様体神経栄養因子(CNTF)(Peprotech Inc、カタログ番号450-13)
□組換えヒトインスリン様因子I(IGF1)(Peprotech Inc、カタログ番号100-11)
この2種類の因子は、大腸菌(E. Coli)で産生された。
非照射ウシ胎仔血清(FBS)(JRH、カタログ番号12103)
本プログラムにおいて用いた非照射血清は、米国において採取および生産された。採取に用いられた動物はUSDAの検査済みであり、屠殺用に容認された。鳥類幹細胞の培養中は、これを培地に添加した。このバッチは、培養中の幹細胞の維持に必須とみなされる重要なタンパク質または成分の破壊を回避するために、照射に供さなかった。
照射血清(JRH、カタログ番号12107)
本プログラムにおいて用いた照射バッチも、米国において採取された。この照射バッチは、STO細胞またはFED細胞(フィーダー細胞)の培養に用いたDMEM培地中の補充物として添加した。これらの細胞は、幹細胞のように、培養における増殖および維持のために血清の特定の品質を必要としない。培地中の高血清濃度を最小限にするため、STO細胞を4% FBSのみの存在下で増殖するように適合化した。
・プロナーゼ(Roche、カタログ番号165 921)
プロナーゼは、接着性鳥類幹細胞の分離のために用いる、Roche Diagnostics、ドイツによって製造された組換えプロテアーゼである。
・トリプシンEDTA(Cambrex、カタログ番号BE17-161E)
トリプリンは、STO細胞またはFED細胞の分離のために、および無血清培地に適合化された鳥類細胞の分離のために後期継代で用いる。ブタ起源のこの酵素は、確証された滅菌濾過法によりcGMP参照条件に従って無菌的に製造され、現在のE.Pに従って検査される。製剤化の前に照射された原材料は、9/CFR 113.53により徹底順守でブタパルボウイルスについて検査される。
・非酵素的細胞分離溶液(Sigma、カタログ番号C5914)
この分離剤は、培養容器の増殖表面から細胞を穏やかに剥離するために用いられる調製済製剤である。この処方はタンパク質を含まず、酵素を用いることなく細胞の除去を可能にする。細胞タンパク質が保存されるため、細胞表面タンパク質の認識に依存する免疫化学的研究が可能になる。この酵素は、EMA-1(上皮膜抗原1)およびSSEA1(段階特異的胎児性抗原-1)のような生物学的マーカーのFACS解析前に、細胞を剥離するために使用した。
卵を開き、開きながら卵黄を卵白から分離した。パスツールピペットを用いて直接、または予め穴開け器を用いて穴の開いた輪の形に切り抜いた小さな吸収性濾紙(Whatmann 3M紙)を用いて、卵黄から胚を除去した。穴の直径は約5 mmであった。これらの小さな輪は、オーブン中で乾熱を用いて約30分間滅菌した。この小さな紙の輪を卵黄の表面上に置き、その中心を胚に合わせて、胚を紙の輪によって取り囲む。次いで後者を小型のはさみを用いて切除し、除去した全体を、PBSまたは生理食塩水で満たしたペトリ皿に入れる。培養液中で、このようにして輪によって取り除いた胚から過剰な卵黄を除去し、よって過剰のビテリンを含まない胚盤をパスツールピペットを用いて採取する。
2.1‐原材料
卵:
ELL-0(イーストランシング系統0)と称されるニワトリ特定病原体不在(SPF)株は、鳥類の疾患および腫瘍学研究所(Avian Disease and Oncology Laboratory)(USDA-ARS-MWA、米国)によって提供された。これらのSPF鶏卵は、種々の家禽病原体に対して重点的に検査された群から産卵される。検査される疾患には、サルモネラ・プロラム、サルモネラ・ガリナルム(Salmonella gallinarum)、マイコプラズマ・ガリセプチカム(mycoplasma gallisepticum)、マイコプラズマ・シノビエ(mycoplasma synoviae)、鳥類ロイコシスウイルスA〜DおよびJ、マレック病ウイルス、細網内皮症ウイルス、鳥類アデノウイルス、伝染性気管支炎、伝染性ファブリーキウス嚢病、鳥類インフルエンザ、ニューカッスル病、鳥類脳脊髄炎、ならびに鳥類レオウイルスが含まれる。系統0鶏卵は、輸送中の卵の操作に関連した汚染のリスクを回避するために、除染装置による消毒にのみ供した。
EB系統0の確立方法の第1段階では、ニワトリ幹細胞の多能性を維持するために、マウス起源による細胞(STO細胞)をフィーダー層として用いた。これらのフィーダー細胞は、プラスチック上に播種する前に、γ線照射(45〜55グレイ)によって有糸分裂を不活性化する。この照射線量は、細胞周期の決定的な停止を誘導するが、非分化細胞の細胞増殖の促進に必要な増殖因子および細胞外基質の産生をなお可能にする亜致死線量である。
DMEM-ハムF12(Cambrex、カタログ番号BE04-687)
培地GTM-3(Sigma、カタログ番号G9916)
培地EX-CELL(商標) 66522、65788、および66444(SAFC、特注培地)
グルタミン(Cambrex、カタログ番号BE17-605E)
ペニシリン/ストレプトマイシン(Cambrex、カタログ番号BE17-602E))
非必須アミノ酸(Cambrex、カタログ番号BE13-114E)
ピルビン酸ナトリウム(Cambrex、カタログ番号BE13-115)
ビタミン(Cambrex、カタログ番号13-607C)
βメルカプトエタノール(Sigma、カタログ番号M7522)
イーストレート(SAFC、カタログ番号58902C)
PBS 1×(Cambrex、カタログ番号BE17-516F)
ジメチルスルホキシド(DMSO)(Sigma、カタログ番号D2650))
6種類の異なる組換え因子を使用した:
□組換えヒト毛様体神経栄養因子(CNTF)(Peprotech Inc、カタログ番号450-13)
□組換えヒトインスリン様因子I(IGF1)(Peprotech Inc、カタログ番号100-11)
□組換えヒトインターロイキン6(IL6)(Peprotech Inc、カタログ番号200-06)
□組換えヒト可溶性インターロイキン6受容体(sIL6r)(Peprotech Inc、カタログ番号200-06 R)
□組換えヒト幹細胞因子(SCF)(Peprotech Inc、カタログ番号300-07)
□組換えヒト塩基性線維芽細胞増殖因子(bFGF)(Peprotech Inc、カタログ番号100-18B)
IL6rを除くこれらの因子はすべて、大腸菌で産生される。可溶性IL6rは、トランスフェクトしたHEK293細胞において発現される。
非照射ウシ胎仔血清(FBS)(SAFC、カタログ番号12003)
本プログラムにおいて用いた非照射血清は、オーストラリアにおいて採取および生産された。採取に用いられた動物はUSDAの検査済みであり、屠殺用に容認された。鳥類幹細胞の培養中は、これを培地に添加した。このバッチは、培養中の幹細胞の維持に必須とみなされる重要なタンパク質または成分の破壊を回避するために、照射に供さなかった。
照射血清(JRH、カタログ番号12007)
本プログラムにおいて用いた照射バッチは、オーストラリアにおいて採取された。この照射バッチは、STO細胞またはFED細胞(フィーダー細胞)の培養に用いたDMEM培地中の補充物として添加した。これらの細胞は、幹細胞のように、培養における増殖および維持のために血清の特定の品質を必要としない。培地中の高血清濃度を最小限にするため、STO細胞を4% FBSのみの存在下で増殖するように適合化した。
・Trypzean(Sigma、カタログ番号T3449)
系統0ニワトリの卵13個からの胚を、実施例1.2に記載した方法に従って採取した。次に、系統0胚をPBS 1×を含むチューブに入れた。次いで胚を機械的に分離し、39℃で、完全培地中のフィーダーSTO細胞の層上に接種した。フィーダー細胞は、約2.7×104個細胞/cm2でディッシュに播種した。完全培地は、10%ウシ胎仔血清、最終濃度1 ng/mlのIGF1、CNTF、bFGF、IL6、IL6r、およびSCF、ならびに1%非必須アミノ酸、市販品起源のビタミンの1%混合物、最終濃度1 mMのピルビン酸ナトリウム、最終濃度0.2 mMのβ-メルカプトエタノール、最終濃度2.9 mMのグルタミン、イーストレート1×、ならびに最終濃度100 U/mlのペニシリンおよび最終濃度100μg/mlのストレプトマイシンを含む抗生物質の初期混合物を補充した基礎市販培地DMEM-ハムF12から構成される。7継代後には、培地にはもはや抗生物質の混合物を添加しない。
3.1‐原材料
アヒル卵
ペキン株GL30によるアヒル卵を、GRIMAUD FRERES SELECTION(La Corbiere、フランス、ルッセ)から入手した。親アヒルには、大腸菌(Escherichia Coli)(自家ワクチンColi 01および02)、パスツレラ・マルトシダ(Pasteurella multocida)(Landavax)、アヒルウイルス性肝炎(Hepatovax)、ブタ丹毒菌(Erysipelothrix rhusiopathiae)(Ruvax)、鳥類メタ肺炎ウイルス(Nemovac)、ネズミチフス菌(Salmonella typhimurium)およびサルモネラ・エンテリディス(Salmonella Enteridis)(自家ワクチン)、リエメレラ・アンチペステイファー(Riemerella antipestifer)(自家ワクチンリエメレラ)、鳥類メタ肺炎ウイルス(Nobilis RTV不活性)、ならびにブタ丹毒菌(Ruvax)に対するワクチン接種がなされた。受け取り後、受精ペキンアヒル卵は、殻に付着した粉塵に関連した汚染のリスクを回避するために、ヒポクロライド(hypochloryde)浴およびその後のFermacidal(Thermo)での消毒に供した。
本方法の第1段階では、アヒル幹細胞の多能性を維持するために、マウス起源による細胞(STO細胞)をフィーダー層として用いた。これらのフィーダー細胞は、プラスチック上に播種する前に、γ線照射(45〜55グレイ)によって有糸分裂を不活性化する。この照射線量は、細胞周期の決定的な停止を誘導するが、非分化細胞の細胞増殖の促進に必要な増殖因子および細胞外基質の産生をなお可能にする亜致死線量である。STO細胞株は、SIM(Sandos近交系マウス)マウス胚線維芽細胞の連続系統から、A. Bernstein、オンタリオ癌研究所、カナダ、トロントによって導出され、これはアメリカンタイプカルチャーコレクション(ATCC)(STO製品番号:CRL-1503、バッチ番号1198713)によって供給された。新鮮なフィーダー層は、週に2回調製した。対数増殖細胞を分離し、計数した。細胞の一部を生存培養物の維持のために播種し、別の一部にγ線照射した。照射のため、チューブ中に10×106個の細胞/mLの細胞懸濁液を調製した。細胞を45〜55グレイ線量に被曝させ、プラスチック上に播種した。播種後、不活化フィーダー細胞で被覆したディッシュまたはプレートは、最長5日の間に使用した。
培地EX-CELL(商標) 65788、65319、63066、および66444(SAFC、特注培地)
培地GTM-3(Sigma、カタログ番号G9916)
DMEM-ハムF12(Cambrex、カタログ番号BE04-687)
DMEM(Cambrex、カタログ番号BE 12-614F)
グルタミン(Cambrex、カタログ番号BE17-605E)
ペニシリン/ストレプトマイシン(Cambrex、カタログ番号BE17-602E))
非必須アミノ酸(Cambrex、カタログ番号BE13-114E)
ピルビン酸ナトリウム(Cambrex、カタログ番号BE13-115)
ビタミン(Cambrex、カタログ番号13-607C)
βメルカプトエタノール(Sigma、カタログ番号M7522)
イーストレート(SAFC、カタログ番号58902C)
PBS 1×(Cambrex、カタログ番号BE17-516F)
ジメチルスルホキシド(DMSO)(Sigma、カタログ番号D2650)
2種類の異なる組換え因子を使用した:
□組換えヒト毛様体神経栄養因子(CNTF)(Peprotech Inc、カタログ番号450-13)
□組換えヒトインスリン様因子I(IGF1)(Peprotech Inc、カタログ番号100-11)
これらの2種類の因子は、大腸菌で産生される。
非照射ウシ胎仔血清(FBS)(JRH、カタログ番号12003)
本プログラムにおいて用いた非照射血清は、オーストラリアにおいて採取および生産された。採取に用いられた動物はUSDAの検査済みであり、屠殺用に容認された。鳥類幹細胞の培養中は、これを培地に添加した。このバッチは、培養中の幹細胞の維持に必須とみなされる重要なタンパク質または成分の破壊を回避するために、照射に供さなかった。
照射血清(JRH、カタログ番号12107)
本プログラムにおいて用いた照射バッチは、米国において採取された。この照射バッチは、STO細胞(フィーダー細胞)の培養に用いたDMEM培地中の補充物として添加した。これらの細胞は、幹細胞のように、培養における増殖および維持のために血清の特定の品質を必要としない。培地中の高血清濃度を最小限にするため、STO細胞を4% FBSのみの存在下で増殖するように適合化した。
・プロナーゼ(Roche、カタログ番号165 921)
プロナーゼは、接着性鳥類幹細胞の分離のために用いる、Roche Diagnostics、ドイツによって製造された組換えプロテアーゼである。
・トリプシンEDTA(Cambrex、カタログ番号BE17-161E)
トリプリンは、STO細胞の分離のために、および無血清培地に適合化された鳥類細胞の分離のために後期継代で用いる。ブタ起源のこの酵素は、確証された滅菌濾過法によりcGMP参照条件に従って無菌的に製造され、現在のE.Pに従って検査される。製剤化の前に照射された原材料は、9/CFR 113.53により徹底順守でブタパルボウイルスについて検査される。
・Trypzean(Sigma、カタログ番号T3449)
Trypzean溶液は、ProdiGeneの独占的なトランスジェニック植物タンパク質発現系を利用してSigma Aldrichによって製造された、トウモロコシで発現される組換えウシトリプシンを用いて製剤化される。この製品は、無血清のおよび血清を補充した接着細胞培養物のいずれにおける細胞分離にも最適化される。
・非酵素的細胞分離溶液(Sigma、カタログ番号C5914)
この分離剤は、培養容器の増殖表面から細胞を穏やかに剥離するために用いられる調製済製剤である。この処方はタンパク質を含まず、酵素を用いることなく細胞の除去を可能にする。細胞タンパク質が保存されるため、細胞表面タンパク質の認識に依存する免疫化学的研究が可能になる。この酵素は、EMA-1(上皮膜抗原1)およびSSEA1(段階特異的胎児性抗原-1)のような生物学的マーカーのFACS解析前に、細胞を剥離するために使用した。
約360個の受精アヒル卵を開き、開きながら卵黄を卵白から分離した。予め穴開け器を用いて穴の開いた輪の形に切り抜いた小さな吸収性濾紙(Whatmann 3M紙)を用いて、卵黄から胚を除去した。穴の直径は約5 mmであった。これらの小さな輪は、オーブン中で乾熱を用いて約30分間滅菌した。実際に胚採取の段階では、小さな紙の輪を卵黄の表面上に置き、その中心を胚に合わせて、胚を紙の輪によって取り囲む。次いで後者を小型のはさみを用いて切除し、除去した全体を、PBSで満たしたペトリ皿に入れる。培養液中で、このようにして輪によって取り除いた胚から過剰な卵黄を除去し、よって過剰のビテリンを含まない胚盤をパスツールピペットを用いて採取した。
4.1‐原材料
アヒル卵、フィーダー細胞、添加物、緩衝液および固定剤、凍結保護剤、ウシ胎仔血清、ならびに分離剤(実施例3に同じ)
ペキン株GL30によるアヒル卵を使用した。
培地EX-CELL 65319、63066、および66444(SAFC、特注培地)
培地GTM-3(Sigma、カタログ番号G9916)
DMEM(Cambrex、カタログ番号BE 12-614F)
6種類の異なる組換え因子を使用した:
□組換えヒト毛様体神経栄養因子(CNTF)(Peprotech Inc、カタログ番号450-13)
□組換えヒトインスリン様因子I(IGF1)(Peprotech Inc、カタログ番号100-11)
□組換えヒトインターロイキン6(IL6)(Peprotech Inc、カタログ番号200-06)
□組換えヒト可溶性インターロイキン6受容体(sIL6r)(Peprotech Inc、カタログ番号200-06 R)
□組換えヒト幹細胞因子(SCF)(Peprotech Inc、カタログ番号300-07)
□組換えヒト塩基性線維芽細胞増殖因子(bFGF)(Peprotech Inc、カタログ番号100-18B)
IL6rを除くこれらの因子はすべて、大腸菌で産生される。可溶性IL6rは、トランスフェクトしたHEK293細胞において発現される。
EB66について前述した通りに、アヒル胚を採取した。アヒル胚を、PBS 1×を含む50 mLチューブに入れた。次いでアヒル胚を機械的に分離し、PBSで洗浄し、39℃、7.5% CO2で、完全培地中のフィーダーSTO細胞の不活化層上に播種した。フィーダー細胞は、約2.7×104個細胞/cm2で6ウェルプレートまたはディッシュに播種した。完全培地は、5%ウシ胎仔血清、最終濃度1 ng/mlのIGF1、CNTF、Il-6、Il-6R、SCF、およびFGF、ならびに1%非必須アミノ酸、市販品起源のビタミンの1%混合物、最終濃度0.1 mMのピルビン酸ナトリウム、最終濃度0.5 mMのβ-メルカプトエタノール、最終濃度2.1 mMのグルタミン、最終濃度100 U/mlのペニシリン、最終濃度100μg/mlのストレプトマイシン、ならびにイーストレート1×を補充した無血清培地GTM-3から構成される。細胞の最初の継代後は速やかに、抗生物質の混合物の培地への添加を止める。速やかにという表現は、一般に最初の3〜9継代後を意味すると理解される。アヒルES細胞を、継代9代目まで完全培地で培養した。継代9代目後、完全培地から増殖因子を部分的に枯渇させる。したがって継代10代目〜13代目に、SCF、IL6、IL6r、およびbFGFを培地から除去し、組換えIGF1およびCNTFのみを1 ng/mL濃度で維持した。継代13代目〜16代目に、IGF1およびCNTFの濃度の同時減少を次に行って、継代17代目に、組換え因子なしで増殖することができる細胞が最終的に得られた。因子の枯渇は、因子のより低い濃度への漸進的適合化により行った。ペキンアヒル胚由来のアヒルES細胞を培養皿から別の培養皿に継代する場合、培養皿の播種は、完全培地中に約7×104個/cm2〜12×104個/cm2のアヒルES細胞で行った。好ましくは、播種は、約7.3×104個/cm2(4×106個細胞/55 cm2または4×106個細胞/100 mmディッシュ)で行う。組換え因子の枯渇後、イーストレートの減少を継代23代目に行い、最終濃度0.5×に到達した。次に、継代31代目後に、何代かの継代にわたってフィーダー細胞濃度を漸進的に減少させていくことにより、フィーダー細胞の枯渇を行った。ディッシュに、最初に約2.7×104個フィーダー細胞/cm2、次に継代32代目〜38代目には約1.8×104個フィーダー細胞/cm2、次に継代39代目〜44代目には約1.4×104個細胞/cm2、次に継代45代目〜47代目には約1×104個フィーダー細胞/cm2、次に継代48代目〜50代目には約0.7×104個フィーダー細胞/cm2を播種し、最後に継代51代目からはフィーダー細胞なしで鳥類細胞のみをディッシュに播種した。フィーダー枯渇の終了時には、ディッシュに9×104個鳥類細胞/cm2〜12.7×104個鳥類細胞/cm2を播種する。フィーダー細胞の枯渇は継代32代目に開始し、継代51代目に終了した。フィーダー細胞の枯渇中は、アヒルES細胞は、段階a)よりも高い濃度、約9×104個細胞/cm2〜12.7×104個細胞/cm2で培養皿に播種する。フィーダー細胞なしでの何代かの継代後に、増殖パラメータ(集団倍加時間(PDT)および密度)を調べて、細胞の安定性および頑強さを確認し、懸濁物としての細胞増殖を開始した。PDTが約40時間よりも短く、かつ細胞密度が26×104個細胞/cm2よりも高い場合に、細胞は懸濁状態での培養に供するのに十分に頑強であるとみなされる。さらに、細胞の形態は円形で、屈折性で、非常に小さくあるべきであり、細胞はプラスチックディッシュに過度に付着すべきでない。
5.1‐原材料
アヒル卵、フィーダー細胞、添加物、緩衝液および固定剤、凍結保護剤、ウシ胎仔血清、ならびに分離剤(実施例3に同じ)
ペキン株GL30によるアヒル卵を使用した。
培地EX-CELL(商標) 65319、63066、および66444(SAFC、特注培地)
培地GTM-3(Sigma、カタログ番号G9916)
DMEM-F12(Cambrex、カタログ番号BE04-687)
DMEM(Cambrex、カタログ番号BE 12-614F)
6種類の異なる組換え因子を使用した:
□組換えヒト毛様体神経栄養因子(CNTF)(Peprotech Inc、カタログ番号450-13)
□組換えヒトインスリン様因子I(IGF1)(Peprotech Inc、カタログ番号100-11)
□組換えヒトインターロイキン6(IL6)(Peprotech Inc、カタログ番号200-06)
□組換えヒト可溶性インターロイキン6受容体(sIL6r)(Peprotech Inc、カタログ番号200-06 R)
□組換えヒト幹細胞因子(SCF)(Peprotech Inc、カタログ番号300-07)
□組換えヒト塩基性線維芽細胞増殖因子(bFGF)(Peprotech Inc、カタログ番号100-18B)
IL6rを除くこれらの因子はすべて、大腸菌で産生される。可溶性IL6rは、トランスフェクトしたHEK293細胞において発現される。
EB66について前述した通りに、アヒル胚を採取した。アヒル胚を、PBS 1×を含む50 mLチューブに入れた。次いでアヒル胚を機械的に分離し、39℃、7.5% CO2で、完全培地中のフィーダーSTO細胞の不活化層上に播種した。フィーダー細胞は、約2.7×104個細胞/cm2で6ウェルプレートまたはディッシュに播種した。完全培地は、10%ウシ胎仔血清、最終濃度1 ng/mlのIGF1、CNTF、Il-6、Il-6R、SCF、およびFGF、ならびに1%非必須アミノ酸、市販品起源のビタミンの1%混合物、最終濃度0.1 mMのピルビン酸ナトリウム、最終濃度0.5 mMのβ-メルカプトエタノール、最終濃度2.1 mMのグルタミン、最終濃度100 U/mlのペニシリン、最終濃度100μg/mlのストレプトマイシン、ならびに1×イーストレートを補充した無血清培地DMEM-ハムF12から構成される。細胞の最初の継代後は速やかに、抗生物質の混合物の培地への添加を止める。速やかにという表現は、一般に最初の3〜9継代後を意味すると理解される。
6.1‐原材料
アヒル卵:
タイワン株によるアヒルSPF卵を、Le Couvoir de Cerveloup(フランス)から入手した。これらのSPFアヒル卵は、種々の家禽病原体に対して重点的に検査された群から産卵される。検査される疾患には、サルモネラ・ガリナルム-プロラム、マイコプラズマ・シノビエ、マイコプラズマ・メレアグリディス(Mycoplasma meleagridis)、マイコプラズマ・ガリエプチカム(Mycoplasma galliepticum)、マレック病ウイルス、鳥類インフルエンザ、2型パラミクソウイルス、3型パラミクソウイルス、ニューカッスル病、3型アデノウイルス(EDS)、ガンボロ病、鳥類レオウイルス、細網内皮症ウイルス、鳥類脳脊髄炎、感染性鼻気管炎ウイルス、およびクラミジア症が含まれる。タイワンアヒル卵は、輸送中の卵の操作に関連した汚染のリスクを回避するために、除染装置による消毒にのみ供した。
培地EX-CELL(商標) 66444(SAFC、特注培地)
培地GTM-3(Sigma、カタログ番号G9916)
DMEM-ハムF12(Cambrex、カタログ番号BE04-687)
グルタミン(Cambrex、カタログ番号BE17-605E)
ペニシリン/ストレプトマイシン(Cambrex、カタログ番号BE17-602E))
非必須アミノ酸(Cambrex、カタログ番号BE13-114E)
ピルビン酸ナトリウム(Cambrex、カタログ番号BE13-115)
ビタミン(Cambrex、カタログ番号13-607C)
βメルカプトエタノール(Sigma、カタログ番号M7522)
イーストレート(SAFC、カタログ番号58902C)
PBS 1×(Cambrex、カタログ番号BE17-516F)
ジメチルスルホキシド(DMSO)(Sigma、カタログ番号D2650)
2種類の異なる組換え因子を使用した:
□組換えヒト毛様体神経栄養因子(CNTF)(Peprotech Inc、カタログ番号450-13)
□組換えヒトインスリン様因子I(IGF1)(Peprotech Inc、カタログ番号100-11)
これらの2種類の因子は、大腸菌で産生される。
非照射ウシ胎仔血清(FBS)(JRH、カタログ番号12003)
本プログラムにおいて用いた非照射血清は、オーストラリアにおいて採取および生産された。採取に用いられた動物はUSDAの検査済みであり、屠殺用に容認された。鳥類幹細胞の培養中は、これを培地に添加した。このバッチは、培養中の幹細胞の維持に必須とみなされる重要なタンパク質または成分の破壊を回避するために、照射に供さなかった。
照射血清(JRH、カタログ番号12007)
本プログラムにおいて用いた照射バッチは、オーストラリアにおいて採取された。この照射バッチは、STO細胞(フィーダー細胞)の培養に用いたDMEM培地中の補充物として添加した。これらの細胞は、幹細胞のように、培養における増殖および維持のために血清の特定の品質を必要としない。培地中の高血清濃度を最小限にするため、STO細胞を4% FBSのみの存在下で増殖するように適合化した。
・プロナーゼ(Roche、カタログ番号165 921)
・Trypzean(Sigma、カタログ番号T3449)
タイワンアヒルの受精SPF卵20個からの胚を、実施例3に記載した方法に従って採取した。アヒル胚をPBS 1×を含む50 mLチューブに入れた。次いで胚を機械的に分離し、PBSで洗浄し、フィーダーSTO細胞の不活化層で被覆した12ウェルプレートのウェルに播種した。アヒル胚細胞を完全培地中に播種し、39℃、7.5%5% CO2に移した。フィーダー細胞は、約2.7×104個細胞/cm2で播種した。使用した完全培地は、10%ウシ胎仔血清、最終濃度1 ng/mlのIGF1、CNTF、および1%非必須アミノ酸、市販品起源のビタミンの1%混合物、最終濃度0.1 mMのピルビン酸ナトリウム、最終濃度0.5 mMのβ-メルカプトエタノール、最終濃度2.1 mMのグルタミン、最終濃度100 U/mlのペニシリン、最終濃度100μg/mlのストレプトマイシン、ならびにイーストレート1×を補充したDMEM-ハムF12から構成される。継代2代目に、DMEM-ハムF12基礎培地をGTM-3基礎培地に置き換える。継代4代目後は、培地にはもはや抗生物質の混合物を添加しない。
7.1‐ニワトリVALO EBv13細胞の特徴づけ
7.1.1‐テロメラーゼ活性
供給業者のプロトコールに従って、Roche Applied Scienceによって開発されたTelo TAGGGテロメラーゼPCR ELISA(テロメアリピート増幅プロトコール(TRAP)‐カタログ番号11 854 666 910)を用いることにより、テロメラーゼ検出を行う。Telo TAGGGテロメラーゼPCR ELISAにより、テロメラーゼ媒介性の伸長産物の増幅と、ELISAプロトコールによる非放射性検出の組み合わせが可能になる。アッセイに1×103個細胞の同等物を用いた際に、陰性対照の吸光度値が0.25 A450 nm-A690 nm以下である場合、かつ陽性対照の吸光度値が1.5 A450 nm-A690 nm以上である場合に、そのアッセイは有効である。吸光度の差が0.2 A450 nm-A690 nm単位よりも高い場合に、試料はテロメラーゼ陽性とみなされる。2つの対照を使用した:陰性対照はマウス線維芽細胞(FED細胞)であり、陽性対照はFGB8細胞(129 SVマウス胚よりVivalisによって確立された胚性幹細胞)およびWO 03/076601で以前に確立されたニワトリEB14-O74である。
胚性幹細胞は、細胞膜上に発現される生物学的マーカーの発現により特徴づけられる。EBv13細胞上のEMA-1(上皮膜抗原-1)およびSSEA-1(段階特異的胎児性抗原-1)の発現を、FACS解析により評価した。PFA 4%(パラホルムアルデヒド)で10分間固定した後、細胞試料および対照をリンスし、EMA-1またはSSEA-1に特異的なモノクローナル抗体と共に前インキュベートする。選択された2種類の生物学的マーカーを発現している細胞を検出するために、FITC結合二次抗体を用いる。CoulterによるFACS(フロー活性化セルソーター)を用いてフローサイトメトリーにより、試料を解析した。
EBv13細胞の細胞二倍性および鳥類起源を確認するために、核型分析を行った。対数増殖期にある細胞を回収し、コルセミド(0.02μg/mL)により2時間処理した。洗浄および遠心分離後、KCL(0.56%)を用いて細胞に低張chocを20分間施す。続いて、EBv13細胞をメタノール/酢酸(3/1)で固定し、-20℃で一晩保存した。翌日、中期のものをガラス上にスポットし、ライト/ギムザ溶液で染色し、顕微鏡下で観察した。中期のものをいく通りも観察して、EBv13細胞がニワトリ起源であることを確認した。倍数性の証拠は認められない。
本発明者らは、EBx細胞の培養および感染に用いる無血清培地中のカルシウムおよびマグネシウムの濃度が、凝集塊の大きさに影響を及ぼすことを見出した。図10は、EBv13細胞を、Ca2+およびMg2+濃度の高い培地から低い培地に継代した場合の、凝集塊の大きさの減少を示す。
7.2.1‐アヒルEBx細胞の形態
A Rivoire博士(フランス、リヨン)によって、dEBx(登録商標)細胞の透過型電子顕微鏡解析が行われた。アヒルEBx(登録商標)細胞は、マウス胚性幹細胞およびWO2006/108846に記載されるVIVALIS EB14細胞の表現型と類似している、典型的な胚性幹細胞形態(すなわち、高い核-細胞質比)を示す。アヒルEBx(登録商標)細胞は、大きな核および核小体を有する小円形細胞(直径〜10μm)であり、形質膜から伸びる短い仮足を有する(図4)。これらは代謝活性が高く、リボソームおよびミトコンドリアが豊富な細胞質を有する。これらは、多数の細胞内空胞、高度に発達したゴルジ系、および粗面小胞体(granulous reticulum endoplasmic)を含む。
アヒルEBx(登録商標)細胞の確立の異なる段階におけるテロメラーゼ発現を、Rocheテロメラーゼ検出キット(テロメラーゼOCR ELISA)を用いることにより調べた。テロメラーゼは、接着性アヒルEBx(登録商標)細胞において、ならびにフィーダー欠乏中、アヒルEBx(登録商標)細胞の懸濁への適合化過程中、およびフィーダー欠乏中に高度に発現されることがわかる。図5は、ニワトリEB14細胞と同様に、アヒルEB24およびEB26が高レベルのテロメラーゼを発現することを示す。アヒルEB66もまた、細胞継代の全体を通じて、高レベルのテロメラーゼを発現する。EB66細胞においてこの高テロメラーゼ活性は、異なるSFMでの適合化後にも安定している(図15)。
Clean Cells(フランス)での直接F-PERT解析(Lovatt et al., 1999, J. Virol. Methods, 82:185-200)により、内在性逆転写酵素発現が調べられた。アヒルEBx(登録商標)細胞株、EB24(データは示さず)、EB66(データは示さず)、EB26、およびEB51は、内在性逆転写酵素(RT)活性を示さない(図6A)。RT活性は、ニワトリEB14細胞培養物において、およびより少ない程度に、特定病原体不在(SPF)ニワトリ株由来のニワトリ胚線維芽細胞において検出された。
内在性複製性アヒルウイルスの存在を検出するために、アヒルEBx細胞と、内在性および外因性ALVに感受性があることが知られているウズラQT6細胞株との同時培養アッセイを行った。図7Aに、QT6同時培養の原理を記載した。複製性ウイルスの存在は、鳥類ロイコシス主要キャプシド抗原P27を検出するELISAアッセイ法によって検出する。このアッセイから、試験したいずれのアヒルEBx細胞も、複製性(すなわち、複製能のある)ALVを分泌しないことが実証される(図7B)。
アヒルEBx細胞における、鳥類インフルエンザウイルスに対する受容体(Siaα2-3Gal)およびヒトインフルエンザウイルスに対する受容体(Siaα2-6Gal)の検出を、ジゴキシゲニン標識レクチン(Boehringer)を用いて、蛍光セルソーター解析により行った:
□セイヨウニワトコ(SNA)凝集素レクチンは、Siaα2-6Galに特異的に結合する;
□イヌエンジュ(MAA)凝集素レクチンは、Siaα2-3Galに特異的に結合する。
アヒルEB24細胞およびEB66細胞の細胞二倍性ならびに鳥類起源を確認するために、核型分析を行った。対数増殖期にある細胞を回収し、コルセミド(0.6 mg/mL)により3〜6時間処理した。洗浄および遠心分離後、KCL(0.56%)を用いて細胞に低張chocを20分間施す。続いて、アヒルEB24細胞およびEB66細胞をメタノール/酢酸(3/1)で固定し、-20℃で一晩保存した。翌日、中期のものをガラス上にスポットし、ライト/ギムザ溶液で染色し、顕微鏡下で観察した。
ポックスウイルスによる感染に対するEBv13細胞の感受性を、GFP遺伝子(緑色蛍光タンパク質)をコードする組換え改変ワクシニアAnkara(MVA)を用いて調べた。
ポックスウイルスによる感染に対するアヒルEBx細胞の感受性を、GFPをコードする組換え改変ワクシニアAnkaraを用いて調べた。ウイルス力価測定は、ニワトリEBv13細胞について前述した通りに行った。
アヒルEBx細胞を、凍結バイアル中、-196℃の液体窒素中に保存した(20×106個細胞/バイアル)。凍結バイアルを、+37℃の予熱した水浴中で直接融解する。細胞懸濁液を、予熱した培地30 mlの入った50 ml滅菌チューブに入れる。遠心分離(300±20 g、室温で5分)後、新鮮培地15 mLをペレットに添加し、穏やかにホモジナイズする。トリパンブルーを用いて試料を計数する。良好な培養を保証するためには、計数は≧20×106個細胞でなければならず、生存率は>70%でなければならない。
8.2.1‐3 L流加バイオリアクターにおけるアヒルEBx(登録商標)細胞の細胞増殖動態
撹拌槽型バイオリアクターにおいて、アヒルEBx(登録商標)細胞を規定通りに培養する。細胞密度5〜6.106個細胞/mLに達するまで、アヒルEBx(登録商標)由来バイオマスを細胞増殖培地中に37℃で蓄積させる。次いでその混合物を約3〜10倍希釈し、細胞増殖動態を10日間にわたり追跡する。このような条件では、通常、約5〜8日目に細胞密度1200〜2000万個細胞/mlに達する。したがってアヒルEBx(登録商標)細胞は、少なくとも10〜15倍に届く一連の分割比を示す。
本発明者らは、EBx細胞の培養および感染に用いる無血清培地中のカルシウムおよびマグネシウムの濃度が、凝集塊の大きさに影響を及ぼし得ることを見出した。アヒルEBx細胞の小さい凝集塊が存在することで、ウイルスの感染および増殖が改善され、高MVAウイルス力価がもたらされる(図9A)。
細胞増殖期中に、アヒルEBx(登録商標)由来バイオマスをExcell 66444増殖培地中に蓄積させた。次いで、細胞を10-2 TCID50/細胞のMVA-GFPウイルスに感染させ、その混合物をExcell 66444生産培地で希釈した。新鮮なExcell培地の添加後、2日目に細胞密度は低下したが、4日目には感染細胞の細胞密度は増加し、1200万個細胞/mlに達した。このような条件において、MVA-GFP生産性は高い。感染後4日目から、MVA-GFP力価は約108 TCID50/mlである(図9B)。アヒルEBx(登録商標)細胞において、205 TCID50/細胞というMVA-GFP収量が得られた。
9.1‐材料および方法
9.1.1‐インフルエンザウイルス感染アッセイ法(TCID50)
感染性インフルエンザウイルスの力価測定は、MDCK細胞で行った。簡潔に説明すると、細胞を、2.5 mM L-グルタミンを補充したUltraMDCK培地中、3×103個細胞/ウェルの密度で96平底ウェルプレートに播種した。24時間後、細胞を、6μg.mL-1トリプシン-EDTAを含むUltraMDCK中で、10倍段階希釈した試料に感染させ、加湿雰囲気中33℃、5% CO2で1週間インキュベートした。その後、ニワトリ赤血球を用いるHAアッセイ法でウイルス複製を試験し、TCID50力価をReed and Muench法(1938)*に従って算出した。*Reed L, Muench H, 1938. A simple method of estimating fifty percent endpoints. Am. J. Hyg. 27, 493-97。
インフルエンザウイルス感染EB14細胞由来の試料中の血球凝集素濃度は、Woodら*によって記載される通りに決定した。簡潔に説明すると、抗インフルエンザ血清を含む(NIBSCにより提供される推奨濃度)アガロースゲルで、ガラスプレートを被覆した。ゲルをセットした後、参照および試料の適切な希釈物10μLを、直径3 mmの穴のあいたウェルに負荷した。室温の湿室内で18〜24時間インキュベートした後、プレートを0.9% NaClに浸漬し、蒸留水で洗浄した。その後、ゲルをプレスし、乾燥させた。プレートをクマシーブリリアントブルー溶液で15分間染色し、はっきりとした染色域が目に見えるようになるまでメタノールと酢酸の混合物で2回脱染した。プレートを乾燥させた後、抗原ウェル周囲の染色域の直径を直角に2方向に測定した。表面に対する抗原希釈物の用量反応曲線を作成し、結果を標準的な傾斜比アッセイ法に従って算出した。*Wood JM. Et al. 「An improved single-radial-immunodiffusion technique for the assay of influenza haemagglutinin antigen: application for potency determinations of inactivated whole virus and subunit vaccines」 (J Biol Stand., 1977,5(3):237-47)。
SDS-PAGEを、Laemmli UK (1970, Cleavage of structural proteins during the assembly of the head of bacteriophage T4. Nature 259:680-685)によって記載されている通りに、10%ポリアクリルアミドゲルで行った。変性タンパク質(1% SDS、70 mM β-メルカプトエタノール)を、半乾燥ブロッティング手順によりフッ化ポリビニリデン膜(hybond P、Amersham)に転写した(Kyhse-Andersen J (1984) Electroblotting of multiple gels : a simple apparatus without buffer tank for rapid transfer of proteins from polyacrylamide to nitrocellulose (J Biochem Biophys Methods 10:203-209))。ブロットを、1% FCS(SAFC)を補充したTBST中の5%脂肪乾燥粉乳から構成される混合物を用いて、室温で1時間ブロッキングした。その後、ブロットを、特異的ポリクローナル抗HAヒツジ血清(1:500 (NIBSC))を補充したブロッキング溶液中で一晩インキュベートした。ブロットをTBSTで6回洗浄し、ブロッキング溶液中のhrp結合ウサギ抗ヒツジIgGポリクローナル抗体(1:5000 (Rockland))と共に室温で1時間インキュベートした。TBSTで6回洗浄した後、最後に、化学発光(ECLキット、Amersham)およびフィルム(Hyperfilm、Amersham)を用いてタンパク質-コンジュゲート複合体を明らかにした。
9.2.1‐材料および装置
細胞融解用材料
○T75 cm2フラスコ(Sarstedt、カタログ番号831813502)
○培地(無血清培地)
○L-グルタミン 200 mM(Biowhittaker、カタログ番号BE17-605E)
○オービタル撹拌機IKA KS260(Fisher Bioblock、カタログ番号F35044)
○T175 cm2フラスコ(Sarstedt、カタログ番号831812502)
○培地(無血清培地):2.5 mMグルタミンを添加したExcell 65319(JRH、カタログ番号65319-1000M1687)
○L-グルタミン 200 mM(Biowhittaker、カタログ番号BE17-605E)
○D(+)グルコース(45%)(Sigma、カタログ番号G8769)
○生産培地(無血清培地):2.5 mMグルタミンを補充したExcell 65629(JRH、カタログ番号65629)
○L-グルタミン 200 mM(Biowhittaker、カタログ番号BE17-605E)
○D(+)グルコース(45%)(Sigma、カタログ番号G8769)
○Trypzean 1×(Sigma、カタログ番号T3449)
○7.5%重炭酸ナトリウム溶液(Sigma、カタログ番号205-633-8)
○インフルエンザウイルス株(-80℃で凍結)
(MVA複製‐実施例7.1に同じ)
実験の終了時に、採取された試料すべてを用いて、ウイルス力価測定、血球凝集素アッセイ(HAU)、およびHA抗原定量化(ウェスタンブロット、SRID)を行う。
本発明者らは、アヒルEBx細胞が、インフルエンザウイルスの様々なA株およびB株を複製するための、信頼性のある効率的な細胞基材であることを実証する。インフルエンザウイルスの生産は、フラスコおよびスピナー(データは示さず)ならびにバイオリアクターなどの様々な容器で行うことができる。3 Lおよび30 L撹拌槽型バイオリアクターにおけるインフルエンザウイルス生産の再現性のある効率的な流加過程が、本発明者らによって得られた。インフルエンザウイルスのA株およびB株に関して、フラスコおよびバイオリアクターでは通常、血球凝集素15 mg/l〜最大50 mg/lを上回るウイルス収量が得られる(図11および12)。
ニューカッスル病ウイルスによる感染に対するアヒルEBx細胞の感受性を、NDVLa Sota株を用いて調べた。
アヒルEBx(登録商標)細胞を、T175フラスコ中のExcell培地(SFAC)中で、60 rpmのオービタル振盪機上、7.5% CO2雰囲気下で37℃で増殖させた。0日目に、細胞を、新鮮培地40 ml中に0.4×106個細胞/mLで播種する。細胞培養物を、振盪(60 rpm)下で37℃、7.5% CO2でインキュベートした。細胞密度が4×106個〜6×106個細胞/mlの濃度に到達するまで(通常、播種後3日目)、細胞増殖動態を追跡した。その時点で、細胞に2つの異なるMOI(10-3および10-4 TCID50/細胞)でNDV La Sota株を接種し、振盪(60 RPM)下で37℃、7.5% CO2でさらに1時間インキュベートした。次に、新鮮なウイルス生産培地60 mLを添加することにより細胞培養物を希釈し、振盪(60 rpm)下で37℃、7.5% CO2でインキュベーションを続けた。細胞増殖およびウイルス生産の動態を7日間にわたって行った。プロテアーゼの供給源として、組換えトリプシン(SAFC)を毎日培地中に添加した;2つのトリプシン濃度(0.4および0.75 USP/mL)を試験した。細胞計数、ウイルス力価測定、およびウェスタンブロッティング解析のために、一定分量を毎日採取した。
アヒルおよびニワトリEBx細胞は、NDV La Sota株に対して感受性があり、これを複製する。アヒルEBx(登録商標)細胞で生産されたNDVの力価(TCID50/ml)は、感染後0日目から2日目に増加して、平均106.83 TCID50/mLに達する(図13左パネル)。
麻疹ウイルスによる感染に対するアヒルEB66細胞の感受性を、緑色蛍光タンパク質を発現する組換え麻疹ウイルスを用いて調べた。
EB66細胞を、T175フラスコ中のExcell培地中で、60 rpmのオービタル振盪機上、7.5% CO2雰囲気下で37℃で増殖させた。0日目に、細胞を、新鮮培地40 ml中に0.4×106個細胞/mLで播種する。細胞培養物を、振盪(60 rpm)下で37℃、7.5% CO2でインキュベートした。細胞密度が4×106個〜6×106個細胞/mlの濃度に到達するまで(通常、播種後3日目)、細胞増殖動態を追跡した。その時点で、細胞に2つの異なるMOI(10-1および10-2 TCID50/細胞)で組換え麻疹ウイルスを接種し、振盪(60 RPM)下で37℃、7.5% CO2でさらに1時間インキュベートした。次に、新鮮なウイルス生産培地60 mLを添加することにより細胞培養物を希釈し、振盪(60 rpm)下で37℃、7.5% CO2でインキュベーションを続けた。細胞増殖およびウイルス生産の動態を7日間にわたって行った。細胞計数およびウイルス力価測定のために、一定分量を毎日採取した。
EB66細胞は麻疹ウイルスに対して感受性があり、これを複製する。非最適化条件において、EB66細胞で生産された麻疹の力価(TCID50/ml)は、平均107 TCID50/mLに達する(図14)。
Claims (23)
- 以下の段階を含む、鳥類胚性幹細胞(ES)に由来するEBx(登録商標)と命名された連続継代性二倍体鳥類細胞株を得るための方法であって、該鳥類細胞株が複製能のある内在性レトロウイルス粒子を産生しない方法:
a) 産卵あたりの発生段階にあるトリ胚を単離する段階であって、該トリのゲノムが、複製能のある内在性レトロウイルス粒子を産生しやすい内在性プロウイルス配列を含まない段階;
b) 段階a)の胚を分離することによって得られた鳥類胚性幹(ES)細胞を、以下を補充した基礎培地に懸濁する段階:
‐インスリン成長因子1(IGF-1)および毛様体神経栄養因子(CNTF);
‐動物血清;ならびに
‐任意に、インターロイキン6(IL-6)、インターロイキン6受容体(IL-6R)、幹細胞因子(SCF)、および線維芽細胞増殖因子(FGF)を含む群から選択される増殖因子;
c) 段階b)で得られたES細胞の懸濁液をフィーダー細胞層上に播種し、ES細胞を少なくとも1継代の間さらに培養する段階;
d) IL-6、IL-6R、SCF、FGFを含む群より選択される増殖因子をすべて培地から任意に除去し、ES細胞を少なくとも1継代の間さらに培養する段階;
e) IGF-1およびCNTFを培地から除去し、細胞を少なくとも1継代の間さらに培養する段階;
f) 何代かの継代後に、フィーダー層の完全な除去を得るために、培地中のフィーダー細胞の濃度を漸進的に減少させていき、細胞をさらに培養する段階;
g) 何代かの継代後に、動物血清の完全な除去を得るために、培地中の動物血清の濃度を任意に漸進的に減少させていく段階ならびに:
h) 任意に動物血清を含まない、増殖因子、フィーダー層の存在しない基礎培地中で増殖することができる、ES細胞に由来する接着性鳥類EBx(登録商標)細胞株を得る段階であって、該連続継代性二倍体鳥類細胞株が複製能のある内在性レトロウイルス粒子を産生しない段階;
i) 接着性アヒルEBx(登録商標)細胞株を懸濁培養条件に任意にさらに適合化する段階。 - トリがガンカモ目から選択される、請求項1記載の方法。
- トリがアヒル、好ましくはペキンアヒルである、請求項2記載の方法。
- トリがキジ目から選択される、請求項1記載の方法。
- トリがev-0家畜ニワトリである、請求項4記載の方法。
- 請求項1〜5のいずれか一項記載の方法によって得られ得る連続継代性二倍体鳥類細胞株であって、該鳥類細胞株の細胞が、以下の特徴のうちの少なくとも1つを有し、かつ、該細胞が複製能のある内在性レトロウイルス粒子を産生しない、鳥類細胞株:
‐高い核-細胞質比、
‐内因性テロメラーゼ活性、
‐直径約10μm;
‐37℃での約30時間またはそれ未満の倍加時間;
‐および任意に、該細胞が、アルカリホスファターゼ、SSEA-1、EMA-1、ENS-1を含む群から選択される1つまたは複数のさらなるマーカーを発現し得る。 - 以下の段階を含む、請求項6記載の連続継代性二倍体鳥類細胞において、または請求項1〜5のいずれか一項記載の方法によって得られ得る連続継代性二倍体鳥類細胞において、ウイルスを複製する方法:
a) 該鳥類細胞を関心対象のウイルスに感染させる段階;
b) 該ウイルスを複製するために、該感染鳥類細胞を培養する段階;
c) 細胞培養上清中および/または該細胞内のウイルスを回収する段階。 - ウイルスが、ポックスウイルス、オルトミクソウイルス、パラミクソウイルス、ヘルペスウイルス、ヘパドナウイルス、アデノウイルス、パルボウイルス、レオウイルス、サーコウイルス、コロナウイルス、フラビウイルス、トガウイルス、ビルナウイルス、およびレトロウイルスを含む群より選択される、請求項7記載の方法。
- ウイルスが、改変ワクシニアAnkara(MVA)ウイルス、Lister-Elstreeワクシニアウイルス、LC16m8ワクシニアウイルス、CVI78ワクシニアウイルス、鶏痘ウイルス(fowl pox virus)、カナリア痘ウイルス(すなわち、ALVAC)、NYVAC、ユキヒメドリ痘ウイルス(juncopox virus)、キュウカンチョウ痘ウイルス(mynah pox virus)、鳩痘ウイルス(pigeonpox virus)、オウム痘ウイルス(psittacine pox virus)、ウズラ痘ウイルス(quail pox virus)、スズメ痘ウイルス(spallowpox virus)、ムクドリ痘ウイルス(starling pox virus)、シチメンチョウ痘ウイルス(turkey pox virus)を含む群の中から選択されるポックスウイルスまたは組換えポックスルウイルスである、請求項8記載の方法。
- ウイルスが、好ましくは、麻疹ウイルス、流行性耳下腺炎ウイルス、風疹ウイルス、センダイウイルス、呼吸器合胞体ウイルス(RSV)、ヒトパラインフルエンザI型およびIII型、牛疫ウイルス、イヌジステンパーウイルス、ニューカッスル病ウイルス、アヒルパラインフルエンザウイルスを含む群の中から選択されるパラミクソウイルスまたは組換えパラミクソウイルスである、請求項7記載の方法。
- ウイルスが、ヒトインフルエンザウイルス、鳥類インフルエンザウイルス、ブタインフルエンザウイルス、ウマインフルエンザウイルス、ネコインフルエンザウイルスの中から選択されるオルトミクソウイルス、組換えオルトミクソウイルス、または再集合体オルトミクソウイルスである、請求項7記載の方法。
- ウイルスが、好ましくは、シンビスウイルス、セムリキ森林ウイルス、オニョンニョンウイルス、チクングニアウイルス、マヤロウイルス、ロスリバーウイルス、東部ウマ脳炎ウイルス、西部ウマ脳炎ウイルス、ベネズエラウマ脳炎ウイルスの中から選択されるトガウイルス、またはその組換えトガウイルスである、請求項7記載の方法。
- ウイルスが、細網内皮症ウイルス、アヒル伝染性貧血ウイルス、suck脾臓壊死ウイルスの中から選択されるレトロウイルス、またはその組換えレトロウイルスである、請求項7記載の方法。
- ウイルスが、パルボウイルス、好ましくはアヒルパルボウイルスまたはその組換えパルボウイルスである、請求項7記載の方法。
- ウイルスが、好ましくは、鶏アデノウイルス、ガチョウアデノウイルス、アヒルアデノウイルス、およびハトアデノウイルスの中から選択されるアデノウイルス、またはその組換えアデノウイルスである、請求項7記載の方法。
- ウイルスが、ビルナウイルス、好ましくは伝染性ファブリーキウス嚢病ウイルスである、請求項7記載の方法。
- ウイルスが、好ましくは、デングウイルス、日本脳炎ウイルス、およびウエストナイルウイルスの中から選択されるフラビウイルスである、請求項7記載の方法。
- 請求項7〜17のいずれか一項記載の方法よって得られたウイルス。
- 適切な場合、免疫応答を増大させる薬学的に許容される物質と組み合わせられる、請求項18に記載されるウイルスを含むワクチン。
- ウイルスが、無傷のウイルス粒子として存在するウイルス、および分解されたウイルス粒子として存在するウイルスを含む群から選択される、請求項19記載のワクチン。
- 適切な場合、免疫応答を増大させる薬学的に許容される物質と組み合わせられる、請求項18に記載されるウイルスから得られた少なくとも1つのウイルス抗原タンパク質を含むワクチン。
- 請求項6記載の鳥類細胞株、または請求項1〜5のいずれか一項記載の方法によって得られ得る鳥類細胞株に由来し、かつウイルスに感染した鳥類細胞を含むワクチン。
- 以下の段階を含む、組換えタンパク質およびペプチドを生産する方法:
a) 発現ベクターの一過性または安定的トランスフェクションにより、請求項1〜5のいずれか一項記載の方法によって得られ得るか、または請求項6記載の、連続継代性二倍体鳥類細胞株を遺伝子改変する段階;
b) 任意に、該組換えタンパク質またはペプチドを発現する該改変連続継代性二倍体鳥類細胞株を選択する段階;および
c) 該遺伝子改変連続継代性二倍体鳥類細胞株によって発現された組換えペプチドまたはタンパク質を精製する段階。
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Cited By (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2014080676A1 (ja) * | 2012-11-22 | 2014-05-30 | 旭化成メディカル株式会社 | 高感染価のパルボウイルスの生産方法 |
JP2015504659A (ja) * | 2011-12-15 | 2015-02-16 | アムジエン・インコーポレーテツド | 凝集方法 |
JP2016528905A (ja) * | 2013-08-30 | 2016-09-23 | グラクソスミスクライン バイオロジカルズ ソシエテ アノニム | 細胞培養中でのウイルスの大規模製造 |
JP2021505202A (ja) * | 2017-12-06 | 2021-02-18 | イ、ジョンボクLEE, Jung Bok | 鳥類の卵から分離した細胞である胚盤葉多能性幹細胞、神経幹細胞、胚性線維芽細胞条件培地を有効成分とする細胞の増殖、肌の再生、及びシワ改善用の培地組成物 |
Families Citing this family (94)
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FR2836924B1 (fr) | 2002-03-08 | 2005-01-14 | Vivalis | Lignees de cellules aviaires utiles pour la production de substances d'interet |
EP2054507A1 (en) * | 2006-08-09 | 2009-05-06 | Vivalis | Method of production of transgenic avian using embryonic stem cells |
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KR101445433B1 (ko) | 2008-02-25 | 2014-09-26 | 백스터 인터내셔널 인코포레이티드 | 연속 세포주 제조 방법 |
CA2741961A1 (en) * | 2008-11-05 | 2010-05-14 | Glaxosmithkline Biologicals S.A. | Novel method |
ES2539045T3 (es) | 2009-01-19 | 2015-06-25 | Innate Pharma | Anticuerpos anti-KIR3D |
EP2393922A1 (en) | 2009-02-06 | 2011-12-14 | GlaxoSmithKline Biologicals S.A. | Purification of virus or viral antigens by density gradient ultracentrifugation |
CA2760657A1 (en) * | 2009-05-08 | 2010-11-11 | Glaxosmithkline Biologicals S.A. | Method for producing virus from cell culture involving homogenization |
EP2429580A1 (en) * | 2009-05-12 | 2012-03-21 | Transgene SA | Method for orthopoxvirus production and purification |
GB0918830D0 (en) | 2009-10-27 | 2009-12-09 | Glaxosmithkline Biolog Niederl | Process |
GB0919117D0 (en) * | 2009-10-30 | 2009-12-16 | Glaxosmithkline Biolog Sa | Process |
CA3177833A1 (en) | 2009-12-15 | 2011-06-15 | University Of Saskatchewan | Vaccines for inclusion body hepatitis |
CN102120983B (zh) * | 2010-01-07 | 2013-04-03 | 中国农业科学院北京畜牧兽医研究所 | 北京鸭表皮干细胞的分离和培养方法 |
US20120309056A1 (en) | 2010-02-04 | 2012-12-06 | Leon Arnaud | Fed-batch process using concentrated cell culture medium for the efficient production of biologics in eb66 cells |
FR2956409A1 (fr) | 2010-02-15 | 2011-08-19 | Univ Claude Bernard Lyon | Procedes pour optimiser la production virale par l'inactivation ou l'inhibition du gene hipk2 et cellules modifiees pour la production virale |
EP2552490A4 (en) * | 2010-03-26 | 2013-12-18 | Emergent Product Dev Gaithersburg Inc | INFLUENZA MATRIX 2 PROTEIN ECKTOMOMAS, EXPRESSION SYSTEM THEREFOR AND USES THEREOF |
ES2562818T3 (es) | 2010-05-03 | 2016-03-08 | Glaxosmithkline Biologicals S.A. | Procedimiento de inactivación del virus de la gripe |
GB201011502D0 (en) | 2010-07-08 | 2010-08-25 | Glaxosmithkline Biolog Sa | Novel process |
NZ604510A (en) | 2010-08-17 | 2013-10-25 | Csl Ltd | Dilutable biocidal compositions and methods of use |
AU2011314630B2 (en) * | 2010-10-15 | 2016-02-04 | Km Biologics Co., Ltd. | Recombinant vaccinia virus having hemagglutinin protein genes derived from novel influenza viruses |
FR2967072B1 (fr) | 2010-11-05 | 2013-03-29 | Univ Dundee | Procede pour ameliorer la production de virus et semences vaccinales influenza |
WO2012095514A1 (en) | 2011-01-14 | 2012-07-19 | Vivalis | Recombinant protein production system |
WO2013000982A1 (en) | 2011-06-27 | 2013-01-03 | Vivalis | Method for screening cells |
WO2013044298A1 (en) | 2011-09-30 | 2013-04-04 | Cephalon Australia Pty Ltd | Antibodies against tl1a and uses thereof |
EP2771351B1 (en) | 2011-10-28 | 2017-06-14 | Patrys Limited | Pat-lm1 epitopes and methods for using same |
CN103157107A (zh) * | 2011-12-14 | 2013-06-19 | 普莱柯生物工程股份有限公司 | 用连续传代细胞系生产鸡马立克氏病疫苗及方法 |
EP2660316A1 (en) | 2012-05-02 | 2013-11-06 | Helmholtz-Zentrum für Infektionsforschung GmbH | Avian cell line and its use in production of protein |
CN105531289B (zh) | 2013-02-01 | 2019-02-22 | 树突细胞生物科技有限公司 | 抗cd83抗体及其用途 |
EP4219552A3 (en) | 2013-02-07 | 2023-09-13 | CSL Ltd. | Il-11r binding proteins and uses thereof |
FR3008992A1 (fr) * | 2013-07-25 | 2015-01-30 | Agronomique Inst Nat Rech | Procede de selection d'une lignee cellulaire permissive pour la replication de virus aviaires |
CN105177176A (zh) * | 2014-06-13 | 2015-12-23 | 亚宝药业太原制药有限公司 | 一种腺病毒滴度的检测方法 |
CA3190510A1 (en) | 2014-07-16 | 2016-01-21 | Transgene Sa | Oncolytic virus for expression of immune checkpoint modulators |
FR3025107B1 (fr) | 2014-08-29 | 2018-10-05 | Calixar | Procede de preparation d'un antigene vaccinal, antigene vaccinal obtenu et utilisations |
WO2016061632A1 (en) | 2014-10-23 | 2016-04-28 | La Trobe University | Fn14-binding proteins and uses thereof |
CA2965170A1 (en) | 2014-10-23 | 2016-04-28 | Dendrocyte Biotech Pty Ltd | Cd83 binding proteins and uses thereof |
JP6956635B2 (ja) | 2014-12-17 | 2021-11-02 | フンダシオン パラ ラ インベスティガシオン メディカ アプリカダ | ウィルソン病及び他の状態の処置に使用するための核酸構築物及び遺伝子治療ベクター |
KR102526616B1 (ko) | 2014-12-17 | 2023-04-27 | 푼다시온 파라 라 인베스티가시온 메디카 아플리카다 | 윌슨병 및 기타 병태의 치료에 사용되기 위한 핵산 구조물 및 유전자 치료용 벡터 |
WO2016131945A1 (en) | 2015-02-20 | 2016-08-25 | Transgene Sa | Combination product with autophagy modulator |
BR112018014028A2 (pt) | 2016-01-11 | 2019-02-05 | Forty Seven Inc | anticorpos monoclonais anti-cd47 humanizados, de camundongo ou quimérico |
US20190134190A1 (en) | 2016-05-04 | 2019-05-09 | Transgene Sa | Combination therapy with cpg tlr9 ligand |
CN107137704B (zh) * | 2016-08-20 | 2020-02-21 | 山东信得科技股份有限公司 | 一种鸭2型腺病毒灭活疫苗 |
WO2018060368A2 (en) | 2016-09-28 | 2018-04-05 | Bavarian Nordic A/S | Compositions and methods for enhancing the stability of transgenes in poxviruses |
US20190328869A1 (en) | 2016-10-10 | 2019-10-31 | Transgene Sa | Immunotherapeutic product and mdsc modulator combination therapy |
WO2018091680A1 (en) | 2016-11-18 | 2018-05-24 | Transgene Sa | Cowpox-based oncolytic vectors |
CN106692964A (zh) * | 2016-12-05 | 2017-05-24 | 扬州大学 | 一种血清4型禽腺病毒灭活苗及其制备方法 |
WO2018122088A1 (en) | 2016-12-28 | 2018-07-05 | Transgene Sa | Oncolytic viruses and therapeutic molecules |
CN107058243A (zh) * | 2017-03-23 | 2017-08-18 | 华南农业大学 | 一种马立克氏病毒的悬浮培养方法 |
JP7406377B2 (ja) | 2017-05-15 | 2023-12-27 | ヤンセン ファッシンズ アンド プリベンション ベーフェー | 安定なウイルス含有組成物 |
WO2018210804A1 (en) | 2017-05-15 | 2018-11-22 | Janssen Vaccines & Prevention B.V. | Stable virus-containing composition |
CA3066060A1 (en) | 2017-06-07 | 2018-12-13 | Wild Type, Inc. | Ex vivo meat production |
IL271558B2 (en) | 2017-06-21 | 2024-01-01 | Transgene | A vaccine tailored to the individual |
WO2019020543A1 (en) | 2017-07-28 | 2019-01-31 | Transgene Sa | ONCOLYTIC VIRUSES EXPRESSING AGENTS TARGETING METABOLIC IMMUNE MODULATORS |
CN107794248A (zh) * | 2017-10-24 | 2018-03-13 | 广州齐志生物工程设备有限公司 | 一种用微载体悬浮培养犬瘟热病毒的方法 |
CN108220227A (zh) * | 2017-12-27 | 2018-06-29 | 华农(肇庆)生物产业技术研究院有限公司 | 一种通过全悬浮传代细胞系悬浮培养新城疫病毒的方法 |
CN108159412A (zh) * | 2018-01-12 | 2018-06-15 | 华农(肇庆)生物产业技术研究院有限公司 | 一种生产细胞源鸡新城疫、禽流感二联灭活疫苗的方法及其产品 |
CN108261543B (zh) * | 2018-02-08 | 2019-03-08 | 华农(肇庆)生物产业技术研究院有限公司 | 传代细胞源nd、ib、ai三联灭活疫苗的制备方法及其应用 |
CN108187039A (zh) * | 2018-03-29 | 2018-06-22 | 山东信得动物疫苗有限公司 | 一种禽流感灭活疫苗生产工艺及产品 |
WO2019219649A1 (en) | 2018-05-14 | 2019-11-21 | Vivet Therapeutics | Gene therapy vectors comprising s/mar sequences |
WO2020011754A1 (en) | 2018-07-09 | 2020-01-16 | Transgene | Chimeric vaccinia viruses |
US20210275662A1 (en) | 2018-07-13 | 2021-09-09 | Valneva Se | Method for rescuing and producing a virus in avian cells |
EP3617230A1 (en) | 2018-09-03 | 2020-03-04 | BioInvent International AB | Novel antibodies and nucleotide sequences, and uses thereof |
CN108977554B (zh) * | 2018-09-05 | 2021-08-31 | 湖北省农业科学院畜牧兽医研究所 | 蛋鸭环状RNA circ_13034及其检测试剂、方法与应用 |
US20210187100A1 (en) | 2018-09-06 | 2021-06-24 | Bavarian Nordic A/S | Storage Improved Poxvirus Compositions |
KR20210086638A (ko) | 2018-10-12 | 2021-07-08 | 비베트 테라퓨틱스 | 진행성 가족성 간내 담즙정체 3형 (pfic3)의 치료를 위한 코돈-최적화 전이유전자 |
EP3877000A1 (en) | 2018-11-07 | 2021-09-15 | Vivet Therapeutics | Codon-optimized abcb11 transgene for the treatment of progressive familial intrahepatic cholestasis type 2 (pfic2) |
TW202039854A (zh) | 2018-11-16 | 2020-11-01 | 美商編碼製藥公司 | 治療威爾遜氏病的組合物和方法 |
CN113474449A (zh) * | 2018-11-23 | 2021-10-01 | 瓦尔尼瓦公司 | 包括禽类干细胞的食物产品 |
WO2020108735A1 (en) | 2018-11-26 | 2020-06-04 | Blink Biomedical Sas | Antibodies to cytomegalovirus interleukin-10 |
CN113423815A (zh) * | 2018-12-06 | 2021-09-21 | 创赏有限公司 | 非动物来源培养基上的细菌生长 |
EP3893668A4 (en) | 2018-12-12 | 2022-08-10 | Wild Type, Inc. | SYNTHETIC FOOD COMPOSITIONS |
WO2020136235A1 (en) | 2018-12-28 | 2020-07-02 | Transgene Sa | M2-defective poxvirus |
CN109593729A (zh) * | 2018-12-29 | 2019-04-09 | 肇庆大华农生物药品有限公司 | 一种禽减蛋综合征病毒培养方法及其在疫苗中的应用 |
MX2021006115A (es) * | 2019-01-17 | 2021-07-07 | Boehringer Ingelheim Animal Health Usa Inc | Medio libre de suero para produccion de vacuna aviar y usos del mismo. |
JP7212588B2 (ja) | 2019-06-20 | 2023-01-25 | オルガノ株式会社 | 水処理装置 |
AU2020299718A1 (en) | 2019-07-02 | 2022-02-24 | Fundacion Para La Investigacion Medica Aplicada | cPLA2e inducing agents and uses thereof |
BR112022017438A2 (pt) | 2020-03-12 | 2022-10-18 | Bavarian Nordic As | Composições que melhoram a estabilidade do poxvírus |
US20230256057A1 (en) | 2020-07-13 | 2023-08-17 | Transgene | Treatment of immune depression |
EP4192961A2 (en) | 2020-08-06 | 2023-06-14 | Fundacion para la Investigacion Medica Aplicada | Viral particles for use in treating tauopathies such as alzheimer's diseases by gene therapy |
US20230265456A1 (en) | 2020-08-10 | 2023-08-24 | Fundacion Para La Investigacion Medica Aplicada | Gene therapy vector expressing cyp27a1 for the treatment of cerebrotendinous xanthomatosis |
CN112094819B (zh) * | 2020-08-13 | 2022-10-14 | 浙江美保龙生物技术有限公司 | 一种鸡传染性法氏囊病毒的全悬浮培养方法 |
EP4225782A1 (en) | 2020-10-09 | 2023-08-16 | UCB Biopharma SRL | Nucleic acid constructs, viral vectors and viral particles |
CN112442486B (zh) * | 2020-11-05 | 2023-02-10 | 上海奥浦迈生物科技股份有限公司 | 一种维持体外培养cho dg44细胞后期活率的培养基及其应用 |
CN113699119A (zh) * | 2020-12-10 | 2021-11-26 | 华农(肇庆)生物产业技术研究院有限公司 | 一种新城疫病毒及疫苗的无血清全悬浮培养制备方法 |
US20240091382A1 (en) | 2020-12-23 | 2024-03-21 | Vivet Therapeutics | Minimal bile acid inducible promoters for gene therapy |
WO2022148736A1 (en) | 2021-01-05 | 2022-07-14 | Transgene | Vectorization of muc1 t cell engager |
CN113278595B (zh) * | 2021-04-28 | 2023-05-09 | 重庆永健生物技术有限责任公司 | 一种鸭腺病毒3型菌株、鸭腺病毒卵黄抗体及其制备方法和应用 |
WO2023025899A2 (en) | 2021-08-26 | 2023-03-02 | Transgene | Delivery system for targeting genes of the interferon pathway |
TW202321458A (zh) | 2021-09-22 | 2023-06-01 | 瑞典商生物創新國際公司 | 新穎抗體組合及其用途 |
CA3234666A1 (en) | 2021-10-28 | 2023-05-04 | UCB Biopharma SRL | Nucleic acid constructs, viral vectors and viral particles |
WO2023213763A1 (en) | 2022-05-02 | 2023-11-09 | Transgene | Poxvirus encoding a binding agent comprising an anti- pd-l1 sdab |
WO2023213764A1 (en) | 2022-05-02 | 2023-11-09 | Transgene | Fusion polypeptide comprising an anti-pd-l1 sdab and a member of the tnfsf |
WO2024003353A1 (en) | 2022-07-01 | 2024-01-04 | Transgene | Fusion protein comprising a surfactant-protein-d and a member of the tnfsf |
CN115449502B (zh) * | 2022-08-15 | 2023-10-20 | 广东省华晟生物技术有限公司 | 无血清全悬浮培养型bhk-21-c细胞株及其构建方法与应用 |
WO2024038175A1 (en) | 2022-08-18 | 2024-02-22 | Transgene | Chimeric poxviruses |
Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2005007840A1 (en) * | 2003-07-22 | 2005-01-27 | Vivalis | Production of poxviruses with adherent or non adherent avian cell lines |
WO2005042728A2 (en) * | 2003-11-03 | 2005-05-12 | Probiogen Ag | Immortalized avian cell lines for virus production |
Family Cites Families (26)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US534740A (en) * | 1895-02-26 | Indicating door-bell | ||
JP2740320B2 (ja) | 1988-08-04 | 1998-04-15 | アムラド・コーポレイション・リミテッド | 胚幹細胞のインビトロ増殖 |
US5162215A (en) | 1988-09-22 | 1992-11-10 | Amgen Inc. | Method of gene transfer into chickens and other avian species |
JPH05227947A (ja) | 1992-01-14 | 1993-09-07 | Rikagaku Kenkyusho | 鳥類原始生殖細胞の分離方法 |
AU3597093A (en) | 1992-01-27 | 1993-09-01 | Embrex Inc. | Gene transfer in poultry by introduction of embryo cells (in ovo) |
US5340740A (en) | 1992-05-15 | 1994-08-23 | North Carolina State University | Method of producing an avian embryonic stem cell culture and the avian embryonic stem cell culture produced by the process |
WO1994003585A1 (en) | 1992-08-04 | 1994-02-17 | Commonwealth Scientific And Industrial Research Organisation | A method for maintaining embryonic stem cells and avian factor useful for same |
US5453357A (en) | 1992-10-08 | 1995-09-26 | Vanderbilt University | Pluripotential embryonic stem cells and methods of making same |
US5589458A (en) | 1992-11-13 | 1996-12-31 | Thomas Jefferson University | Compounds that inhibit T cell proliferation and methods for using the same |
FR2726003B1 (fr) | 1994-10-21 | 2002-10-18 | Agronomique Inst Nat Rech | Milieu de culture de cellules embryonnaires totipotentes aviaires, procede de culture de ces cellules, et cellules embryonnaires totipotentes aviaires |
JPH0924997A (ja) | 1995-07-11 | 1997-01-28 | Tokico Ltd | 出荷装置 |
AU4751697A (en) | 1996-10-10 | 1998-05-05 | Douglas Danner | Animal cell culture media comprising plant-derived nutrients |
ES2224210T3 (es) | 1996-11-12 | 2005-03-01 | Pfizer Inc. | Vacuna de neospora viva atenuada. |
ES2255174T3 (es) | 1997-08-04 | 2006-06-16 | Univ. Massachusetts, A Public Inst. Higher Educ. Of Commonwealth Massach. Repr By Its Amherst Campus | Produccion de lineas de celulas germinales embrionarias (eg) aviares por cultivo prolongado de pgc, y uso de las mismas para clonacion y quimerizacion. |
EP1616943A1 (en) | 1997-08-04 | 2006-01-18 | University of Massachusetts, a Public Institution of Higher Education of The Commonwealth of Massachusetts, | Avian primordial germ cell (PGC) cell line and a method for long term culturing thereof |
US6406909B1 (en) | 1998-07-10 | 2002-06-18 | Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha | Serum-free medium for culturing animal cells |
CA2359775C (en) | 1999-02-11 | 2007-09-18 | Jae Yong Han | Avian pluripotent embryonic germ cell line |
DE19947407C2 (de) | 1999-10-01 | 2002-08-01 | Bayerische Motoren Werke Ag | Datenbussystem für Kraftfahrzeuge |
FR2836924B1 (fr) | 2002-03-08 | 2005-01-14 | Vivalis | Lignees de cellules aviaires utiles pour la production de substances d'interet |
DK2287288T3 (da) | 2002-07-09 | 2013-01-07 | Baxter Int | Medium frit for animalsk protein til dyrkning af celler |
EP1500699A1 (en) * | 2003-07-22 | 2005-01-26 | Vivalis | Production of vaccinia virus with adherent or non adherent avian cell lines |
FR2884255B1 (fr) | 2005-04-11 | 2010-11-05 | Vivalis | Utilisation de lignees de cellules souches aviaires ebx pour la production de vaccin contre la grippe |
PT1979474E (pt) * | 2006-01-05 | 2010-10-22 | Transgene Sa | Transcriptase inversa da telomerase aviária |
WO2007135133A1 (en) * | 2006-05-19 | 2007-11-29 | Vivalis | Avian cell lines derived from primordial germ cells useful for the production of substances of interest |
EP2054507A1 (en) | 2006-08-09 | 2009-05-06 | Vivalis | Method of production of transgenic avian using embryonic stem cells |
EP1985305A1 (en) | 2007-04-24 | 2008-10-29 | Vivalis | Duck embryonic derived stem cell lines for the production of viral vaccines |
-
2007
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- 2008-04-23 PT PT87364915T patent/PT2150275E/pt unknown
-
2009
- 2009-10-22 IL IL201679A patent/IL201679A/en active IP Right Grant
- 2009-11-19 ZA ZA200908152A patent/ZA200908152B/xx unknown
-
2010
- 2010-08-06 HK HK10107529.3A patent/HK1140964A1/xx unknown
-
2013
- 2013-11-01 US US14/069,423 patent/US9260694B2/en active Active
- 2013-12-17 HR HRP20131203AT patent/HRP20131203T1/hr unknown
- 2013-12-27 CY CY20131101167T patent/CY1114736T1/el unknown
-
2016
- 2016-02-02 US US15/013,079 patent/US9822345B2/en active Active
-
2017
- 2017-10-17 US US15/785,530 patent/US20180135026A1/en not_active Abandoned
Patent Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2005007840A1 (en) * | 2003-07-22 | 2005-01-27 | Vivalis | Production of poxviruses with adherent or non adherent avian cell lines |
WO2005042728A2 (en) * | 2003-11-03 | 2005-05-12 | Probiogen Ag | Immortalized avian cell lines for virus production |
Non-Patent Citations (2)
Title |
---|
JPN6013020219; J. Virol., 2003, Vol.77, No.2, p.1105-1111 * |
JPN6013020222; J. Virol., 2001, Vol.75, No.8, p.3605-3612 * |
Cited By (11)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2015504659A (ja) * | 2011-12-15 | 2015-02-16 | アムジエン・インコーポレーテツド | 凝集方法 |
JP2019022515A (ja) * | 2011-12-15 | 2019-02-14 | アムジエン・インコーポレーテツド | 凝集方法 |
JP2022000046A (ja) * | 2011-12-15 | 2022-01-04 | アムジエン・インコーポレーテツド | 凝集方法 |
JP6998853B2 (ja) | 2011-12-15 | 2022-01-18 | アムジエン・インコーポレーテツド | 凝集方法 |
JP7274547B2 (ja) | 2011-12-15 | 2023-05-16 | アムジエン・インコーポレーテツド | 凝集方法 |
WO2014080676A1 (ja) * | 2012-11-22 | 2014-05-30 | 旭化成メディカル株式会社 | 高感染価のパルボウイルスの生産方法 |
JP5980947B2 (ja) * | 2012-11-22 | 2016-08-31 | 旭化成メディカル株式会社 | 高感染価のパルボウイルスの生産方法 |
US9809800B2 (en) | 2012-11-22 | 2017-11-07 | Asahi Kasei Medical Co., Ltd. | Method for producing parvovirus having high infectivity titer |
JP2016528905A (ja) * | 2013-08-30 | 2016-09-23 | グラクソスミスクライン バイオロジカルズ ソシエテ アノニム | 細胞培養中でのウイルスの大規模製造 |
JP2021505202A (ja) * | 2017-12-06 | 2021-02-18 | イ、ジョンボクLEE, Jung Bok | 鳥類の卵から分離した細胞である胚盤葉多能性幹細胞、神経幹細胞、胚性線維芽細胞条件培地を有効成分とする細胞の増殖、肌の再生、及びシワ改善用の培地組成物 |
JP7092886B2 (ja) | 2017-12-06 | 2022-06-28 | イ、ジョンボク | 鳥類の卵から分離した細胞である胚盤葉多能性幹細胞、神経幹細胞、胚性線維芽細胞条件培地を有効成分とする細胞の増殖、肌の再生、及びシワ改善用の培地組成物 |
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