JP2008543881A5

JP2008543881A5 -

Info

Publication number: JP2008543881A5
Application number: JP2008517226A
Authority: JP
Filing date: 2006-06-16
Publication date: 2012-06-21
Anticipated expiration: 2026-06-16

Description

様々な実施形態では、Ｆｃ領域結合剤はプロテインＡおよびプロテインＧのうちの１種もしくは複数種を含有する。好ましい実施形態では、Ｆｃ結合剤は固相上に固定化される。この固相は、例えばビーズ、アガロースマトリックス、シリカ、およびそれらの混合物の１種もしくは複数種を含有しうる。

Claims

Ｆｃ領域を有する抗Ａβ抗体を、前記タンパク質および１種もしくは複数種の不純物を含有するソース液体から精製するための方法であって、
前記抗Ａβ抗体を、プロテインＡおよびプロテインＧのうちの１種または複数種を含むＦｃ結合剤に吸着させるステップと、
前記抗Ａβ抗体と結合した前記Ｆｃ結合剤を濃度０．５Ｍ〜３ＭのＣａＣｌ_２を含有する緩衝溶液で洗浄し、１種もしくは複数種の不純物を低下させるステップと、
前記Ａβ結合タンパク質を溶出溶液中の前記Ｆｃ結合剤から回収するステップと、
を含む、方法。
前記１種もしくは複数種の不純物が、イントロンリードスルー変種（ＩＲＴ）、アンダージスルフィド結合種（ＵＤＢ）、高分子量種（ＨＭＷ）および低分子量種（ＬＭＷ）からなる群から選択される請求項１に記載の方法。
前記１種もしくは複数種の不純物がＩＲＴである請求項２に記載の方法。
前記抗体が、抗体融合体、マウス抗体、キメラ抗体、ヒト化抗体、およびヒト抗体からなる群から選択される請求項１に記載の方法。
前記Ａβ結合タンパク質がヒト化抗−Ａβ抗体である請求項１に記載の方法。
前記ヒト化抗Ａβ抗体が３Ｄ６、１０Ｄ５、１２Ａ１１、２６６、１５Ｃ１１および１２Ｂ４からなる群から選択される抗体のヒト化バージョンである、請求項５に記載の方法。
Ｆｃ領域を有する前記Ａβ結合タンパク質が組換え生成される請求項１に記載の方法。
Ｆｃ領域を有する前記抗Ａβ抗体がチャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞内で組換え生成される請求項１に記載の方法。
前記Ｆｃ結合剤がプロテインＡを含む請求項１に記載の方法。
前記Ｆｃ結合剤が固相上に固定化される請求項１に記載の方法。
前記固相がビーズビーズ、ゲル、樹脂、および粒子のうちの１つもしくは複数を含有する請求項１１に記載の方法。
前記ＣａＣｌ_２を含有する前記緩衝溶液が４〜８の範囲内のｐＨ値を有する請求項１に記載の方法。
前記ＣａＣｌ_２を含有する前記緩衝溶液が７．３〜７．７の範囲内のｐＨ値を有する請求項１に記載の方法。
前記緩衝溶液が０．５〜２Ｍの範囲内のＣａＣｌ_２濃度を有する請求項１に記載の方法。
前記緩衝溶液が０．５Ｍ〜２ＭのＣａＣｌ_２を含有する請求項１に記載の方法。
前記緩衝溶液が１．５Ｍ〜２ＭのＣａＣｌ_２を含有する請求項１に記載の方法。
前記抗Ａβ抗体をＦｃ結合剤に吸着させるステップと前記Ｆｃ結合剤を洗浄するステップとが２℃〜２４℃の範囲内の温度で行われる請求項１に記載の方法。
前記１種もしくは複数種の不純物が宿主細胞タンパク質、宿主細胞ＤＮＡ、細胞培養タンパク質、およびこれらの混合物のうちの１種もしくは複数種を含む請求項１に記載の方法。
前記１種もしくは複数種の不純物がＦｃ領域を有する抗Ａβ抗体の望ましくない種を含む請求項１に記載の方法。
前記抗Ａβ抗体の前記望ましくない種が、イントロンリードスルー配列を有する１種もしくは複数種の抗体鎖またはその断片、不適切なジスルフィド結合を有する１種もしくは複数種の抗体鎖またはその断片、半抗体またはその断片、軽鎖二量体またはその断片、および重鎖二量体またはその断片を含む請求項１９に記載の方法。
前記抗Ａβ抗体を前記Ｆｃ結合剤から回収するステップが、２．０〜６．５の範囲内のｐＨを有する溶出緩衝液を用いて前記抗Ａβ抗体を溶出させるステップを含む請求項１に記載の方法。
前記方法が、アニオン交換クロマトグラフィー、カチオン交換クロマトグラフィー、固定化金属親和性クロマトグラフィーおよび疎水性相互作用クロマトグラフィー（ＨＩＣ）からなる群から選択されるクロマトグラフィーステップをさらに含む請求項１に記載の方法。
前記方法が、ハイドロキシアパタイトクロマトグラフィー、透析、親和性クロマトグラフィー、硫酸アンモニウム沈殿、エタノール沈殿、逆相ＨＰＬＣ（ＲＰ−ＨＰＬＣ）、およびクロマトフォーカシングからなる群から選択されるさらなる精製ステップをさらに含む請求項１に記載の方法。
前記１種もしくは複数種の不純物が前記抗Ａβ抗体の１種もしくは複数種のイントロンリードスルー変異体を含み、かつ前記抗体を含有する前記溶出溶液のイントロンリードスルー変異体のレベルが前記ソース液体中のイントロンリードスルー変異体のレベルの少なくとも１／５未満である請求項１に記載の方法。
前記溶出溶液中で回収される前記抗体を含有する溶液のイントロンリードスルー変異体のレベルが前記ソース液体中のイントロンリードスルー変異体のレベルの少なくとも１／１０未満である請求項２４に記載の方法。
前記１種もしくは複数種の不純物が前記抗Ａβ抗体の１種もしくは複数種のイントロンリードスルー変異体を含み、かつ前記イントロンリードスルー変異体が前記溶出溶液中で前記抗体の種の１％未満を構成する請求項１に記載の方法。
前記イントロンリードスルー変異体が前記溶出溶液中で前記タンパク質の種の０．８％未満、０．５％未満または０．２％未満を構成する請求項２６に記載の方法。
前記１種もしくは複数種の不純物が前記抗Ａβ抗体の１種もしくは複数種の低分子量種を含み、かつ前記低分子量種が前記溶出溶液中で前記抗体の種の１％未満を構成する請求項１に記載の方法。
前記低分子量種が前記溶出溶液中で前記抗体の種の０．８％未満、０．５％未満または０．２％未満を構成する請求項２８に記載の方法。
前記１種もしくは複数種の不純物が前記抗Ａβ抗体の１種もしくは複数種のアンダージスルフィド結合変異体を含み、かつ前記アンダージスルフィド結合変異体が前記溶出溶液中で前記抗体の種の１５％未満を構成する請求項１に記載の方法。
前記アンダージスルフィド結合変異体が前記溶出溶液中で前記抗体タンパク質の種の１０％未満、５％未満または２％未満を構成する請求項３０に記載の方法。
ＣａＣｌ_２による洗浄後、少なくとも濃度１０ｍＭのＮａＣｌを含む緩衝溶液により、前記抗Ａβ抗体に結合したＦｃ結合剤を洗浄するステップをさらに含む、請求項１に記載の方法。
前記１種以上の不純物がイントロンリードスルー変種、アンダージスルフィド結合種、低分子量種、宿主細胞タンパク質または宿主細胞ＤＮＡのうちの１種以上を含み、かつ前記１種以上の不純物がソース液体中のレベルよりも半分以下のレベルに低下される、請求項１に記載の方法。
前記抗Ａβ抗体が、配列番号１の残基２４〜３９のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１、配列番号１の残基５５〜６１のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２、及び配列番号１の残基９４〜１０２のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３の軽鎖相補性決定領域を含み、かつ配列番号２の残基３１〜３５のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１、配列番号２の残基５０〜６５のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２、及び配列番号２の残基９９〜１０８のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３の重鎖相補性決定領域を含むヒト化３Ｄ６抗体である、請求項１〜３３のいずれか１項に記載の方法。
前記ヒト化３Ｄ６抗体が、配列番号１の残基１〜１１２のアミノ酸配列を含む軽鎖相補性決定領域、及び配列番号２の残基１〜１１９のアミノ酸配列を含む重鎖相補性決定領域を含む、請求項３４に記載の方法。
前記ヒト化３Ｄ６抗体が配列番号：１のアミノ酸配列を含むＬ鎖および配列番号：２の残基１〜４４８のアミノ酸配列を含むＨ鎖を含む、請求項３５に記載の方法。
前記抗体がアイソタイプＩｇＭ、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３またはＩｇＧ４のものである、請求項１に記載の方法。
前記抗体がアイソタイプＩｇＧ１のものである、請求項３７に記載の方法。
前記抗Ａβ抗体がｐＨ２〜４の範囲を有する溶出液中に溶出されることにより回収される、請求項１〜３８のいずれか１項に記載の方法。