JP2008543868A5

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Info

Publication number: JP2008543868A5
Application number: JP2008517138A
Authority: JP
Filing date: 2006-06-16
Publication date: 2012-07-26
Anticipated expiration: 2026-06-16

Description

様々な実施形態では、Ｆｃ領域結合剤はプロテインＡおよびプロテインＧのうちの１種もしくは複数種を含有する。好ましい実施形態では、Ｆｃ結合剤は固相上に固定化される。この固相は、例えばビーズ、アガロースマトリックス、シリカ、およびそれらの混合物の１種もしくは複数種を含有しうる。

Claims

Ｆｃ領域を有する抗体を、前記抗体および１種もしくは複数種の不純物を含有するソース液体から精製するための方法であって、
前記抗体を、プロテインＡおよびプロテインＧのうちの１種もしくは複数種を含有するＦｃ結合剤に吸着させるステップと、
前記Ｆｃ結合剤を０．５Ｍ〜３Ｍの濃度のＣａＣｌ ₂を含有する緩衝溶液で洗浄し、１種もしくは複数種の不純物を除去するステップと、
前記抗体を溶出溶液中の前記Ｆｃ結合剤から回収するステップと、
を含む、方法。
前記１種もしくは複数種の不純物が、イントロンリードスルー変種（ＩＲＴ）、アンダージスルフィド結合種（ＵＤＢ）および低分子量種（ＬＭＷ）からなる群から選択される請求項１に記載の方法。
前記１種もしくは複数種の不純物がＩＲＴである請求項２に記載の方法。
前記抗体が、抗体融合体、マウス抗体、キメラ抗体、ヒト化抗体、およびヒト抗体からなる群から選択される請求項１に記載の方法。
前記抗体が抗−ＩＬ−１３抗体である請求項１に記載の方法。
前記抗体がＣＤ３、ＣＤ５２、ＶＥＧＦ、ＥＧＦＲ、ＣＤ３３、ＣＤ２０、ＨＥＲ−２、ＴＮＦα、ＣＤ２５、ＲＳＶ、ＩｇＥ、ｇｐＩｌｂ／ＩＩＩａ、ＣＤ１１ａおよびα４インテグリンからなる群から選択される抗原に結合する請求項１に記載の方法。
前記抗体が組換え生成される請求項１に記載の方法。
前記抗体がチャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞内で組換え生成される請求項７に記載の方法。
前記Ｆｃ結合剤がプロテインＡを含む請求項１に記載の方法。
前記Ｆｃ結合剤が固相上に固定化される請求項１に記載の方法。
前記固相がビーズ、ゲル、樹脂、および粒子のうちの１つもしくは複数を含有する請求項１０に記載の方法。
前記ＣａＣｌ ₂を含有する前記緩衝溶液が４〜８の範囲内のｐＨ値を有する請求項１に記載の方法。
前記ＣａＣｌ ₂を含有する前記緩衝溶液が７．３〜７．７の範囲内のｐＨ値を有する請求項１に記載の方法。
前記緩衝溶液が少なくとも１．５Ｍ〜２Ｍの濃度のＣａＣｌ₂を含有する請求項１に記載の方法。
前記緩衝溶液が２ＭのＣａＣｌ₂を含有する請求項１に記載の方法。
前記抗体をＦｃ結合剤に吸着させるステップと前記Ｆｃ結合剤を洗浄するステップとが２℃〜２４℃の範囲内の温度で行われる請求項１に記載の方法。
前記１種もしくは複数種の不純物が宿主細胞タンパク質、宿主細胞ＤＮＡおよびこれらの混合物のうちの１種もしくは複数種を含む請求項１に記載の方法。
前記１種もしくは複数種の不純物が前記抗体の望ましくない種を含む請求項１に記載の方法。
前記抗体の前記望ましくない種が、イントロンリードスルー配列を有する１種もしくは複数種の抗体鎖またはその断片、不適切なジスルフィド結合を有する１種もしくは複数種の抗体鎖またはその断片、半抗体またはその断片、軽鎖二量体またはその断片、および重鎖二量体またはその断片を含む請求項１８に記載の方法。
前記抗体を前記Ｆｃ結合剤から回収するステップが、２．０〜６．５の範囲内のｐＨを有する溶出緩衝液を用いて前記抗体を溶出させるステップを含む請求項１に記載の方法。
前記方法が、アニオン交換クロマトグラフィー、カチオン交換クロマトグラフィー、固定化金属親和性クロマトグラフィーおよび疎水性相互作用クロマトグラフィー（ＨＩＣ）からなる群から選択されるクロマトグラフィーステップをさらに含む請求項１に記載の方法。
前記方法が、ハイドロキシアパタイトクロマトグラフィー、透析、親和性クロマトグラフィー、硫酸アンモニウム沈殿、エタノール沈殿、逆相ＨＰＬＣ（ＲＰ−ＨＰＬＣ）、およびクロマトフォーカシングからなる群から選択されるさらなる精製ステップをさらに含む請求項１に記載の方法。
前記１種もしくは複数種の不純物が前記抗体の１種もしくは複数種のイントロンリードスルー変異体を含み、かつ前記抗体を含有する前記溶出溶液のイントロンリードスルー変異体のレベルが前記ソース液体中のイントロンリードスルー変異体のレベルの少なくとも１／５未満である請求項１に記載の方法。
前記溶出溶液中で回収される前記抗体を含有する溶液のイントロンリードスルー変異体のレベルが前記ソース液体中のイントロンリードスルー変異体のレベルの少なくとも１／１０未満である請求項２３に記載の方法。
前記１種もしくは複数種の不純物が前記抗体の１種もしくは複数種のイントロンリードスルー変異体を含み、かつ前記イントロンリードスルー変異体が前記溶出溶液中での前記抗体の種の１％未満、０．８％未満、０．５％未満または０．２％未満を構成する請求項１に記載の方法。
前記１種もしくは複数種の不純物が前記抗体の１種もしくは複数種の低分子量種を含み、かつ前記低分子量種が前記溶出溶液中で前記抗体の種の１％未満、０．８％未満、０．５％未満または０．２％未満を構成する請求項１に記載の方法。
前記１種もしくは複数種の不純物が前記抗体の１種もしくは複数種のアンダージスルフィド結合変異体を含み、かつ前記アンダージスルフィド結合変異体が前記溶出溶液中で前記抗体の種の１５％未満、１０％未満、５％未満または２％未満を構成する請求項１に記載の方法。
前記Ｆｃ結合剤から前記抗体を回収するステップが、ｐＨ２〜４の間の溶出緩衝溶液を用いて前記抗体を溶出させるステップを含む、請求項１〜２７のいずれか１項に記載の方法。
請求項１に記載の方法に従って精製される抗体。