JP2003534781A5 - - Google Patents
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【特許請求の範囲】
【請求項1】
FcγRIIIを発現するエフェクター細胞を活性化し得るモノクローナル抗体を製造する方法であって、以下の工程:
a)種々のクローンから得られたモノクローナル抗体を精製する工程であって、該種々のクローンが、ハイブリドーマ(特にヘテロハイブリドーマ)および前記抗体をコードする遺伝子を含んでなるベクターによりトランスフェクトした動物またはヒト細胞株から選択される細胞株に由来するものである、工程、
b)工程a)において得られた各抗体を、
前記抗体の標的細胞、
FcγRIII発現細胞を含んでなるエフェクター細胞、および
FcγI型受容体を飽和させるヒト治療用多価IgG
を含んでなる反応混合物にそれぞれ添加する工程、ならびに
c)標的細胞の細胞溶解の百分率を決定して、エフェクター細胞を活性化して標的細胞の有意な細胞溶解を生じさせる(FcγRIII型ADCC活性)モノクローナル抗体を選択する工程、
を含んでなる、方法。
【請求項2】
クローンが、免疫化された個体に由来するヒトBリンパ球と、ネズミ、ヒト、またはヘテロハイブリッドの骨髄腫細胞、特にK6H6−B5骨髄腫(ATCC No.CRL1823)との融合によって得られたヘテロハイブリッド細胞株に由来するものである、請求項1に記載の方法。
【請求項3】
クローンが、ヒトIgG免疫グロブリンをコードする遺伝子を含むベクターでトランスフェクトされた動物またはヒト細胞株(該株は、特に、CHO−K、CHO−Lec10、CHO Lec−1、CHO Pro−5、CHO dhfr−、Wil−2、Jurkat、Vero、Molt−4、COS−7、293−HEK、YB2/0、BHK、K6H6、NSO、SP2/0−Ag 14およびP3X63Ag8.653株から選択され得る)に由来するものである、請求項1に記載の方法。
【請求項4】
60%、70%、または80%を超える、好ましくは90%を超える、FcγRIII型ADCCレベルを示す抗体が選択される、請求項1〜3のいずれか一項に記載の方法。
【請求項5】
標的細胞が、パパインで処理された赤血球である、請求項1〜4のいずれか一項に記載の方法。
【請求項6】
一つのウェル当たりに、
濃度20〜200ng/mlの精製モノクローナル抗体100μl、
パパイン処理された赤血球25μl、すなわち、約1×106細胞、
エフェクター細胞25μl、すなわち、約2×106細胞、および
濃度1〜20mg/mlの多価IgG、特にTEGELINE(商標)、50μl、
が投入される、請求項1〜5のいずれか一項に記載の方法。
【請求項7】
標的細胞の細胞溶解量を、NH4Clなどの化学化合物およびin vivoで活性な参照抗体からなる2種の陽性対照、ならびにin vivoで不活性な抗体からなる陰性対照と比較する、請求項1〜6のいずれか一項に記載の方法。
【請求項8】
モノクローナル抗体が抗Rh(D)であり、標的細胞がRhD赤血球である、請求項1〜7のいずれか一項に記載の方法。
【請求項9】
市販のポリクローナル抗体を陽性対照として用い、in vivoクリアランスを誘導することができないモノクローナル抗体を陰性対照として用いる、請求項8に記載の方法。
【請求項1】
FcγRIIIを発現するエフェクター細胞を活性化し得るモノクローナル抗体を製造する方法であって、以下の工程:
a)種々のクローンから得られたモノクローナル抗体を精製する工程であって、該種々のクローンが、ハイブリドーマ(特にヘテロハイブリドーマ)および前記抗体をコードする遺伝子を含んでなるベクターによりトランスフェクトした動物またはヒト細胞株から選択される細胞株に由来するものである、工程、
b)工程a)において得られた各抗体を、
前記抗体の標的細胞、
FcγRIII発現細胞を含んでなるエフェクター細胞、および
FcγI型受容体を飽和させるヒト治療用多価IgG
を含んでなる反応混合物にそれぞれ添加する工程、ならびに
c)標的細胞の細胞溶解の百分率を決定して、エフェクター細胞を活性化して標的細胞の有意な細胞溶解を生じさせる(FcγRIII型ADCC活性)モノクローナル抗体を選択する工程、
を含んでなる、方法。
【請求項2】
クローンが、免疫化された個体に由来するヒトBリンパ球と、ネズミ、ヒト、またはヘテロハイブリッドの骨髄腫細胞、特にK6H6−B5骨髄腫(ATCC No.CRL1823)との融合によって得られたヘテロハイブリッド細胞株に由来するものである、請求項1に記載の方法。
【請求項3】
クローンが、ヒトIgG免疫グロブリンをコードする遺伝子を含むベクターでトランスフェクトされた動物またはヒト細胞株(該株は、特に、CHO−K、CHO−Lec10、CHO Lec−1、CHO Pro−5、CHO dhfr−、Wil−2、Jurkat、Vero、Molt−4、COS−7、293−HEK、YB2/0、BHK、K6H6、NSO、SP2/0−Ag 14およびP3X63Ag8.653株から選択され得る)に由来するものである、請求項1に記載の方法。
【請求項4】
60%、70%、または80%を超える、好ましくは90%を超える、FcγRIII型ADCCレベルを示す抗体が選択される、請求項1〜3のいずれか一項に記載の方法。
【請求項5】
標的細胞が、パパインで処理された赤血球である、請求項1〜4のいずれか一項に記載の方法。
【請求項6】
一つのウェル当たりに、
濃度20〜200ng/mlの精製モノクローナル抗体100μl、
パパイン処理された赤血球25μl、すなわち、約1×106細胞、
エフェクター細胞25μl、すなわち、約2×106細胞、および
濃度1〜20mg/mlの多価IgG、特にTEGELINE(商標)、50μl、
が投入される、請求項1〜5のいずれか一項に記載の方法。
【請求項7】
標的細胞の細胞溶解量を、NH4Clなどの化学化合物およびin vivoで活性な参照抗体からなる2種の陽性対照、ならびにin vivoで不活性な抗体からなる陰性対照と比較する、請求項1〜6のいずれか一項に記載の方法。
【請求項8】
モノクローナル抗体が抗Rh(D)であり、標的細胞がRhD赤血球である、請求項1〜7のいずれか一項に記載の方法。
【請求項9】
市販のポリクローナル抗体を陽性対照として用い、in vivoクリアランスを誘導することができないモノクローナル抗体を陰性対照として用いる、請求項8に記載の方法。
標的細胞はパパインで処理した赤血球であってもよい。この場合、一つのウェル当たりに、
約200ng/mlの精製モノクローナル抗体100μl、
パパイン処理された赤血球25μl、すなわち、約1×106細胞、
エフェクター細胞25μl、すなわち、約2×106細胞、および
濃度1〜20mg/mlの多価IgG、特にTEGELINE(商標)(LFB, France)、50μl、
が投入される。
約200ng/mlの精製モノクローナル抗体100μl、
パパイン処理された赤血球25μl、すなわち、約1×106細胞、
エフェクター細胞25μl、すなわち、約2×106細胞、および
濃度1〜20mg/mlの多価IgG、特にTEGELINE(商標)(LFB, France)、50μl、
が投入される。
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