CN110320352A - 基于抗体依赖的细胞介导细胞毒性的抗体效价检测方法 - Google Patents

基于抗体依赖的细胞介导细胞毒性的抗体效价检测方法 Download PDF

Info

Publication number
CN110320352A
CN110320352A CN201910674187.6A CN201910674187A CN110320352A CN 110320352 A CN110320352 A CN 110320352A CN 201910674187 A CN201910674187 A CN 201910674187A CN 110320352 A CN110320352 A CN 110320352A
Authority
CN
China
Prior art keywords
cell
antibody
target cell
dependant
antibody titer
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN201910674187.6A
Other languages
English (en)
Inventor
向洋
王金涛
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Shanghai Xuanfeng Biotechnology Co Ltd
Original Assignee
Shanghai Xuanfeng Biotechnology Co Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Shanghai Xuanfeng Biotechnology Co Ltd filed Critical Shanghai Xuanfeng Biotechnology Co Ltd
Priority to CN201910674187.6A priority Critical patent/CN110320352A/zh
Publication of CN110320352A publication Critical patent/CN110320352A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/5005—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells
    • G01N33/5008—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells for testing or evaluating the effect of chemical or biological compounds, e.g. drugs, cosmetics

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)

Abstract

本发明提供了基于抗体依赖的细胞介导细胞毒性的抗体效价检测方法，包括以下内容：制备靶细胞、制备效应细胞和抗体依赖性细胞介导的细胞毒性的抗体效价测定。本发明通过反应靶细胞被杀伤的情况反应抗体结合靶细胞的情况，具有更广泛的应用性，可以通过修改靶细胞检测不同种类的抗体的效价。

Description

基于抗体依赖的细胞介导细胞毒性的抗体效价检测方法
技术领域
本发明涉及抗体效价检测领域，具体为基于抗体依赖的细胞介导细胞毒性的抗体效价检测方法。
背景技术
抗体依赖的细胞介导的细胞毒性作用又称ADCC，ADCC实验是一种检测抗体效价的有效手段，抗体对靶细胞的结合是选择性的，NK细胞攻击所有被抗体识别的细胞，这个过程是非特异性的。现有技术主要是使用试剂盒进行定量的检测抗体的效价，但试剂盒的普适性较低，只针对少数固定种类的抗体。
发明内容
本发明所解决的技术问题在于提供基于抗体依赖的细胞介导细胞毒性的抗体效价检测方法，以解决上述背景技术中的问题。
本发明所解决的技术问题采用以下技术方案来实现：基于抗体依赖的细胞介导细胞毒性的抗体效价检测方法，包括以下内容：
步骤一、制备靶细胞，所述制备靶细胞具体内容为：在BSL-3实验设施内进行实验，实验开始前48h使用A/California/04/2009(H1N1)型流感病毒感染raji细胞，MOI为2，细胞会合度为80-95％；感染后48h收集靶细胞，通过其与火鸡红细胞产生血液凝集以及与多克隆抗体结合的能力来评估其感染细胞的能力；能力评估合格后，计数2*106个靶细胞，并用PBS清洗两次；
步骤二、制备效应细胞，所述制备效应细胞具体内容为：从志愿者体内采集全血，然后使用密度梯度离心法获得单个核细胞(PBMC)；
步骤三、抗体依赖性细胞介导的细胞毒性的抗体效价测定，所述抗体依赖性细胞介导的细胞毒性的抗体效价测定具体内容为：将步骤一中获取的靶细胞接种到培养板中，每孔50ul 1640培养基、5.0×104个标记的靶细胞；向每个孔中加入50ul抗体；在37℃的CO2培养箱中孵育15分钟；将步骤二中获取的未标记的正常PBMC效应细胞悬浮为浓度2.5x107cells/ml，每个孔中加入100ul细胞悬液；在37℃的CO2培养箱中孵育2小时；再加入1ul荧光染料7-氨基-放线菌素-D；在4℃下避光孵育20分钟；使用流式细胞仪上机分析，共获取5000个细胞；分析靶细胞中死亡细胞的百分比即可反应出该抗体的效价。
优选的，所述PBS即磷酸盐缓冲液，能够提供相对稳定的离子环境和pH缓冲能力，是生物学中经常使用的缓冲盐溶液，用于分子克隆及细胞培养等，pH为7.2-7.4，与人体血液等渗，主要成分为磷酸二氢钾、磷酸氢二钠、氯化钠以及氯化钾。
优选的，所述MOI为感染复数，即感染时病毒与细胞数量的比值。
优选的，所述步骤三中的培养板为96孔圆底培养板。
与已公开技术相比，本发明通过反应靶细胞被杀伤的情况反应抗体结合靶细胞的情况，具有更广泛的应用性，可以通过修改靶细胞检测不同种类的抗体的效价。
具体实施方式
为了使本发明的技术手段、创作特征、工作流程、使用方法达成目的与功效易于明白了解，下面将结合本发明实施例，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
实施例1
基于抗体依赖的细胞介导细胞毒性的抗体效价检测方法，包括以下内容：
步骤一、制备靶细胞，所述制备靶细胞具体内容为：在BSL-3实验设施内进行实验，实验开始前48h使用A/California/04/2009(H1N1)型流感病毒感染raji细胞，MOI为2，细胞会合度为80-95％；感染后48h收集靶细胞，通过其与火鸡红细胞产生血液凝集以及与多克隆抗体结合的能力来评估其感染细胞的能力；能力评估合格后，计数2*106个靶细胞，并用PBS清洗两次；
步骤二、制备效应细胞，所述制备效应细胞具体内容为：从志愿者体内采集全血，然后使用密度梯度离心法获得单个核细胞(PBMC)；
步骤三、抗体依赖性细胞介导的细胞毒性的抗体效价测定，所述抗体依赖性细胞介导的细胞毒性的抗体效价测定具体内容为：将步骤一中获取的靶细胞接种到培养板中，每孔50ul 1640培养基、5.0×104个标记的靶细胞；向每个孔中加入50ul抗体；在37℃的CO2培养箱中孵育15分钟；将步骤二中获取的未标记的正常PBMC效应细胞悬浮为浓度2.5x107cells/ml，每个孔中加入100ul细胞悬液；在37℃的CO2培养箱中孵育2小时；再加入1ul荧光染料7-氨基-放线菌素-D；在4℃下避光孵育20分钟；使用流式细胞仪上机分析，共获取5000个细胞；分析靶细胞中死亡细胞的百分比即可反应出该抗体的效价。
实施例2
基于抗体依赖的细胞介导细胞毒性的抗体效价检测方法，包括以下内容：
步骤一、制备靶细胞，所述制备靶细胞具体内容为：在BSL-3实验设施内进行实验，实验开始前48h使用A/California/04/2009(H1N1)型流感病毒感染raji细胞，MOI为2，细胞会合度为80-95％；感染后48h收集靶细胞，通过其与火鸡红细胞产生血液凝集以及与多克隆抗体结合的能力来评估其感染细胞的能力；能力评估合格后，计数2*106个靶细胞，并用PBS清洗两次；
步骤二、制备效应细胞，所述制备效应细胞具体内容为：从志愿者体内采集全血，然后使用密度梯度离心法获得单个核细胞(PBMC)；
步骤三、抗体依赖性细胞介导的细胞毒性的抗体效价测定，所述抗体依赖性细胞介导的细胞毒性的抗体效价测定具体内容为：将步骤一中获取的靶细胞接种到培养板中，每孔50ul 1640培养基、5.0×104个标记的靶细胞；向每个孔中加入50ul抗体；在37℃的CO2培养箱中孵育15分钟；将步骤二中获取的未标记的正常PBMC效应细胞悬浮为浓度2.5x107cells/ml，每个孔中加入100ul细胞悬液；在37℃的CO2培养箱中孵育2小时；再加入1ul荧光染料7-氨基-放线菌素-D；在4℃下避光孵育20分钟；使用流式细胞仪上机分析，共获取5000个细胞；分析靶细胞中死亡细胞的百分比即可反应出该抗体的效价。
优选的，所述PBS即磷酸盐缓冲液，能够提供相对稳定的离子环境和pH缓冲能力，是生物学中经常使用的缓冲盐溶液，用于分子克隆及细胞培养等，pH为7.2-7.4，与人体血液等渗，主要成分为磷酸二氢钾、磷酸氢二钠、氯化钠以及氯化钾。
优选的，所述MOI为感染复数，即感染时病毒与细胞数量的比值。
优选的，所述步骤三中的培养板为96孔圆底培养板。
与已公开技术相比，本发明通过反应靶细胞被杀伤的情况反应抗体结合靶细胞的情况，具有更广泛的应用性，可以通过修改靶细胞检测不同种类的抗体的效价。
以上显示和描述了本发明的基本原理、主要特征及本发明的优点。本行业的技术人员应该了解，本发明不受上述实施例的限制，上述实施例和说明书中描述的只是说明本发明的原理，在不脱离本发明精神和范围的前提下，本发明还会有各种变化和改进，这些变化和改进都落入要求保护的本发明范围内。本发明的要求保护范围由所附的权利要求书及其等效物界定。

Claims (4)

1.基于抗体依赖的细胞介导细胞毒性的抗体效价检测方法，其特征在于，包括以下内容：
步骤一、制备靶细胞，所述制备靶细胞具体内容为：在BSL-3实验设施内进行实验，实验开始前48h使用A/California/04/2009(H1N1)型流感病毒感染raji细胞，MOI为2，细胞会合度为80-95％；感染后48h收集靶细胞，通过其与火鸡红细胞产生血液凝集以及与多克隆抗体结合的能力来评估其感染细胞的能力；能力评估合格后，计数2*106个靶细胞，并用PBS清洗两次；
步骤二、制备效应细胞，所述制备效应细胞具体内容为：从志愿者体内采集全血，然后使用密度梯度离心法获得单个核细胞(PBMC)；
步骤三、抗体依赖性细胞介导的细胞毒性的抗体效价测定，所述抗体依赖性细胞介导的细胞毒性的抗体效价测定具体内容为：将步骤一中获取的靶细胞接种到培养板中，每孔50ul 1640培养基、5.0×104个标记的靶细胞；向每个孔中加入50ul抗体；在37℃的CO2培养箱中孵育15分钟；将步骤二中获取的未标记的正常PBMC效应细胞悬浮为浓度2.5x107cells/ml，每个孔中加入100ul细胞悬液；在37℃的CO2培养箱中孵育2小时；再加入1ul荧光染料7-氨基-放线菌素-D；在4℃下避光孵育20分钟；使用流式细胞仪上机分析，共获取5000个细胞；分析靶细胞中死亡细胞的百分比即可反应出该抗体的效价。
2.根据权利要求1所述的基于抗体依赖的细胞介导细胞毒性的抗体效价检测方法，其特征在于：所述PBS即磷酸盐缓冲液，能够提供相对稳定的离子环境和pH缓冲能力，是生物学中经常使用的缓冲盐溶液，用于分子克隆及细胞培养等，pH为7.2-7.4，与人体血液等渗，主要成分为磷酸二氢钾、磷酸氢二钠、氯化钠以及氯化钾。
3.根据权利要求1所述的基于抗体依赖的细胞介导细胞毒性的抗体效价检测方法，其特征在于：所述MOI为感染复数，即感染时病毒与细胞数量的比值。
4.根据权利要求1所述的基于抗体依赖的细胞介导细胞毒性的抗体效价检测方法，其特征在于：所述步骤三中的培养板为96孔圆底培养板。
CN201910674187.6A 2019-07-25 2019-07-25 基于抗体依赖的细胞介导细胞毒性的抗体效价检测方法 Pending CN110320352A (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201910674187.6A CN110320352A (zh) 2019-07-25 2019-07-25 基于抗体依赖的细胞介导细胞毒性的抗体效价检测方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201910674187.6A CN110320352A (zh) 2019-07-25 2019-07-25 基于抗体依赖的细胞介导细胞毒性的抗体效价检测方法

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN110320352A true CN110320352A (zh) 2019-10-11

Family

ID=68124454

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201910674187.6A Pending CN110320352A (zh) 2019-07-25 2019-07-25 基于抗体依赖的细胞介导细胞毒性的抗体效价检测方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN110320352A (zh)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN113943751A (zh) * 2021-10-20 2022-01-18 扬州大学 一种用于h7n9亚型禽流感血清杀伤效应测定的靶细胞及鉴定方法

Citations (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP1518864A2 (fr) * 2000-04-12 2005-03-30 Laboratoire Français du Fractionnement et des Biotechnologies Anticorps monoclonaux anti-rhesus D
CN101395471A (zh) * 2006-01-04 2009-03-25 诺华公司 抗体依赖性细胞毒性检测
CN101720227A (zh) * 2007-04-30 2010-06-02 Immutep公司 细胞毒性抗lag-3单克隆抗体及其在治疗或预防器官移植排斥和自身免疫病中的用途
CN101873864A (zh) * 2007-10-05 2010-10-27 伊缪泰普公司 用于诱发单核细胞免疫应答的重组细胞lag-3或其衍生物的应用
CN105547971A (zh) * 2016-01-08 2016-05-04 王昭 细胞毒性t细胞脱颗粒的流式细胞术检测方法
CN106701823A (zh) * 2017-01-18 2017-05-24 上海交通大学 生产无岩藻糖单克隆抗体的cho细胞系建立及其应用
CN106800603A (zh) * 2017-01-24 2017-06-06 中国食品药品检定研究院 检测抗hiv抗体的adcc活性的方法

Patent Citations (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP1518864A2 (fr) * 2000-04-12 2005-03-30 Laboratoire Français du Fractionnement et des Biotechnologies Anticorps monoclonaux anti-rhesus D
CN101395471A (zh) * 2006-01-04 2009-03-25 诺华公司 抗体依赖性细胞毒性检测
CN101720227A (zh) * 2007-04-30 2010-06-02 Immutep公司 细胞毒性抗lag-3单克隆抗体及其在治疗或预防器官移植排斥和自身免疫病中的用途
CN101873864A (zh) * 2007-10-05 2010-10-27 伊缪泰普公司 用于诱发单核细胞免疫应答的重组细胞lag-3或其衍生物的应用
CN105547971A (zh) * 2016-01-08 2016-05-04 王昭 细胞毒性t细胞脱颗粒的流式细胞术检测方法
CN106701823A (zh) * 2017-01-18 2017-05-24 上海交通大学 生产无岩藻糖单克隆抗体的cho细胞系建立及其应用
CN106800603A (zh) * 2017-01-24 2017-06-06 中国食品药品检定研究院 检测抗hiv抗体的adcc活性的方法

Non-Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
KARNAIL SINGH 等: "A novel Ebola virus antibody-dependent cell-mediated cytotoxicity (Ebola ADCC) assay", 《JOURNAL OF IMMUNOLOGICAL METHODS》 *
刘春雨 等: "基于报告基因的抗HER2单克隆抗体ADCC生物学活性测定方法的建立及应用", 《药物分析杂志》 *
张敏聪: "抗流感病毒中和抗体克隆与改造新方法探索研究", 《中国优秀博硕士学位论文全文数据库(硕士)——医药卫生科技辑》 *
王光裕: "TNFR:Fc融合蛋白生物类似药质量可比性初步研究&CD22单抗效应子功能的初步探究", 《中国优秀博硕士学位论文全文数据库(硕士)——医药卫生科技辑》 *

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN113943751A (zh) * 2021-10-20 2022-01-18 扬州大学 一种用于h7n9亚型禽流感血清杀伤效应测定的靶细胞及鉴定方法

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Fraser et al. Cytology of synovial effusions in epidemic polyarthritis
US4737455A (en) Analytical utilization of phagocyte cell lines
CN113009154B (zh) 一步法新型冠状病毒中和抗体磁性微球检测试剂盒及其应用
US20050260558A1 (en) Comparative phenotype analysis of cells including testing of biologically active chemicals
EA023596B1 (ru) Способы обработки композиции эритроцитов для инактивации патогена
Pennington et al. Electric cell-substrate impedance sensing to monitor viral growth and study cellular responses to infection with alphaherpesviruses in real time
CN110320352A (zh) 基于抗体依赖的细胞介导细胞毒性的抗体效价检测方法
Li et al. Cross-species recognition and molecular basis of SARS-CoV-2 and SARS-CoV binding to ACE2s of marine animals
JP5334742B2 (ja) 水溶性アンモニウムポリマーを含有する検体前処理試薬、および検体前処理方法
CN113791212B (zh) 新型冠状病毒中和抗体磁珠荧光检测试剂盒及其检测方法
Dodson et al. Characterization of distinct biofilm cell subpopulations and implications in quorum sensing and antibiotic resistance
CN102012430B (zh) 禽流感病毒H5N1亚型Re-5株血凝抑制抗原标准物质及制备方法
Jax et al. Evaluating effects of Aiv infection status on ducks using a flow cytometry-based differential blood count
CN1664584A (zh) 一种抗原抗体稀释液及其形成的质控品
CN203535053U (zh) 用于检测nk细胞活性的试剂盒
US20230160887A1 (en) Flow Cytometry System and Methods for the Diagnosis of Infectious Disease
Boliar et al. Inability of kaolin treatment to remove nonspecific inhibitors from equine serum for the hemagglutination inhibition test against equine H7N7 influenza virus
EP2646828B1 (en) Method for determining the titre of viruses by using infectious standards
US11926861B2 (en) Utilities of stimulated whole blood culture systems
CN102608312A (zh) 一种应用于微量明胶颗粒凝集hiv-1近期感染检测法的血清或血浆样品稀释液
Bosworth Characterising the Host Response to the Emerging Ebola Virus, Makona Variant from West Africa
De Noronha et al. Virus isolation test for feline leukemia virus
EP1053474A1 (en) Method for the determination of prosthetic infections
WO2022016343A1 (zh) 一种组合物的血小板解聚用途、解聚试剂及解聚方法
CN113797200B (zh) 小分子化合物匹莫范色林在制备抗SARS-CoV-2药物中的应用

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
RJ01 Rejection of invention patent application after publication
RJ01 Rejection of invention patent application after publication

Application publication date: 20191011