JP2007537990A - 抗体の機能活性を改善するための金属陽イオンの使用 - Google Patents
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Abstract
Description
現在の研究は、抗体の機能特性を改善するための免疫グロブリン (Ig) のFc領域に集中している。より長い期間にわたり、これは、より効果的にエフェクター細胞 (単球/マクロファージ、Bリンパ球、NKおよび樹状細胞) の受容体と結合し活性化する抗体を得られるようにするはずであった。IgG のFc領域はCH2 およびCH3 と称される2つの球状のドメインからなる。2つの重鎖はCH3 ドメインで緊密に相互作用し、CH2 ドメインではAsn 297 (Kabat番号付与) に結合したオリゴ糖が2つの鎖のそれぞれに存在して2つのCH2 ドメイン間の間隔をあけることに寄与している。また、1つの同じ鎖のCH2 およびCH3 ドメインは、2つのドメイン間の中間面を規定する可撓性領域により分かれている。
これらの抗体のFc領域の三次元構造に関する我々の検討は、結晶化溶液中の亜鉛、銅、カドミウムまたは鉄などの金属陽イオンの存在がIgG のFc領域のいわゆるオープン構造 (open conformation) (Radaev等, 2001) と常に関連していることを明らかにした。このオープン構造はFcγR 受容体、特にFcγRIII受容体への固定を促進する。従って、金属陽イオンの使用によりモノクローナル抗体またはポリクローナル抗体の機能活性を強化することができる。これに対し、亜鉛、銅、カドミウムまたは鉄などの金属陽イオンの抗体への固定が、ペプチド配列の変異体または適宜化学物質の使用により、特にCH2-CH3 中間面で損なわれると、これは機能特性が欠如するか大きく低下した抗体を生じることになる。
抗体のFc領域についての我々の三次元的検討により、亜鉛、鉄、銅またはカドミウムなどの金属陽イオンの存在は、IgG のFc領域のいわゆるオープン構造と常に関連していることが明らかになった。このオープン構造は、FcγR 受容体、特にFcγRIII受容体への抗体の固定 (結合) を促進する。従って、前記金属陽イオンによってモノクローナル抗体またはポリクローナル抗体の機能活性を強化することでできる。
従って、有利には、これらの陽イオンはこの安定化に貢献するように抗体のFc領域と相互させるのに使用される。
さらに、本発明の別の特徴によれば、金属陽イオンは、ヒスチジン268 およびヒスチジン285 残基 (Kabat 番号付与) を含む第2の固定化部位を介していくつかの抗体Fc領域を一緒に集めることを促進でき、FcγR 、より詳しくはFcγRIIIの活性化、およびこれらの受容体を介したシグナリング付与後すぐの変換を容易にする。
「生物学的系」とは、細胞株、非ヒトトランスジェニック動物または植物を意味する。細胞の中で、選択された細胞は、上記抗体をコードする遺伝子を含むベクターでトランスフェクトされた細胞株、例えば真核もしくは原核細胞、特に哺乳動物、昆虫、植物、細菌または酵母の細胞由来であってよい。より具体的には、YB 2/0などのラット骨髄腫細胞を使用できる。
場合により、亜鉛を抗体のモル濃度の少なくとも2倍、好ましくは3倍または4倍のモル濃度で添加する。
本発明の別の主題は、1または2以上のモノクローナル抗体と適宜量の2価または3価の金属陽イオン、特に、少なくとも抗体のモル濃度と等しいモル濃度の亜鉛イオンを含む溶液であり、この溶液は静脈内、皮下または筋肉内経路での注射に適合したものである。
ある特定の特徴によれば、抗体の改変は突然変異、特に2価または3価金属陽イオンに対して低い親和性を有するアミノ酸での置換である。例えば、His 310 および/またはHis 435 残基が、リジン、アラニン、グリシン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、メチオニン、トリプトファン、フェニルアラニン、セリンまたはトレオニン残基で置換できる。
これらの突然変異体は、「天然の」状態、即ち変異していない状態では、His 310 およびHis 435 残基を含む金属陽イオンのための固定化部位を有する任意の抗体から製造できる。それは特に IgG1 、IgG3、G3m(s)またはG3m(st) アロタイプ、IgG2またはIgG4でありうる。
第2の態様では、改変は、ヒスチジンを修飾する試薬であるDEPC (ピロ炭酸ジエチル) を用いて行うことができる。
従って、本発明は、IgG4に代わるか、または移植片拒絶を防止するために特に治療上興味ある、低いADCC活性を有する抗体を提供する。本発明の二重変異抗体もまた、抗破傷風、抗ジフテリア抗体、またはバイオテロの場合に特に危険であるとして挙げられている (疾患管理センター (CDC)の分類) 、特に以下の病原因子または誘導毒素に対する抗体として使用できる:炭疽病 (バチルス・アンスラシス) 、ボツリヌス中毒 (クロストリジウム・ボツリヌム) 、ペスト (エルシニア・ペスティス) 、天然痘 (バリオラ・マジョル) 、ツラレミア (フランシセラ・ツラレンシス) 、ウイルス性出血熱 (フィロウイルス関連:エボラ、マーブルグ、およびアレナウイルス関連−ラッサ、マチュポ) 、クロストリジウム・ペルフリンゲンのイプシロン毒素、ブルセラ病 (ブルセラ種) 、メリオイドーシス (ブルクホルデリア・マレイ) 、トウゴマの実の毒素 (リシヌス・コミュニス) 。
例えば、本発明に記載した抗体、特に金属陽イオンにより機能活性が改善された抗体、または機能活性が損なわれた改変抗体、または本発明の組成物または溶液は、抗-Ep-Cam,抗-KIR3DL2, 抗-EGFR,抗-VEGFR, 抗-HER1,抗-HER2,抗-GD,抗-GD2, 抗-GD3, 抗-CD20,抗-CD23,抗-CD25,抗-CD30,抗-CD33,抗-CD38,抗-CD44,抗-CD52,抗-CA125, 抗−プロテインC, 抗-HLA-DR,抗ウイルス薬:HBV, HCV, HIV および RSVの中から、より詳しくは以下の表1の抗体の中から選択できる。
抗体の名称 会社 標的 適用
および商品名 Edrecolomab Centocor 抗-Ep-CAM 結腸直腸がん
PANOREX
Rituximab Idec 抗CD20 B細胞リンパ腫
RITUXAN Genentech/ 血小板減少症
Hoffman La Roche 紫斑病
にライセンス
Trasttuzumab Genentech 抗HER2 卵巣がん
HERCEPTIN Hoffmfan La Roche/
Immunogen にライセンス
Palivizumab Medimmune RSV
SYNAGIS Abottoにライセンス
Alemtuzumab BTG 抗CD52 白血病
CAMPATH Scheringにライセンス
Ibritumomab IDEC 抗CD20 NHL
Tiuxetan Scheringにライセンス
ZEVALIN
Cetuximab Merck/BMS/ 抗EGFR がん
IMC-C225 Imclone
Bevacizumab Genentech/ 抗VEGFR がん
AVASTIN Hoffnan La Roche
Epratuzumab Immunmedics/ 抗CD22 がん:
Amgen 非ホジキンリンパ腫
Hu M195Mab Protein Design Labs 抗CD33 がん
MDX-210 Immuno-Designed ND がん
Molecules
BEC2 Imclone 抗GD3 がん
Mitunomab
Oregovomab Altarex 抗CA125 卵巣がん
OVAREX
Ecromeximab Kyowa-Hakko 抗GD3 悪性黒色腫
KW-2971
ABX-EGF Abgenix EGF がん
MDX010 Medarex 抗CD4R がん
XTL 002 XTL ND 抗ウイルス:HCV Bio-pharmaceuticals
H11SCFV Viventia Biotech ND がん
4B5 Vivantia Biotech 抗GD2 がん
XTL 001 XTL ND 抗ウィルス:HBV
Bio-pharmaceutical
MDX-070 MEDAREX 抗-PSMA 前立腺がん TNX-901 TANOX 抗IgE アレルギー
IDEC-114 IDEC プロテインC 非ホジキンリンパ腫
阻害
抗体のFc領域の構造−機能の関係についての新しいデータを得るために、出願人は亜鉛の存在下または不在下でYB2/0 細胞株において発現されたモノクローナル抗体 EMAB5のFc断片を結晶化した。結晶化したFc断片のX線回折分析 (XR) を行った:この研究の一部を以下の実施例1および2に示す。実施例3はFc活性に及ぼすヒスチジンの化学修飾の効果を示し、実施例4はヒスチジン310 および435 残基のリジンへの二重変異の影響を示す。
(実施例)
EMAB5:これは、無血清培地での培養に適応させたYB2/0 細胞株 (ラット骨髄腫、ATCC line no.CRL 1662)で産生された抗原Rh(D) に対するヒトIgG 1(κ) である。
−精製: EMAB5をセファロース−プロテインA上でのアフィニティークロマトグラフィーで精製した。
−グリカン分析:HPCE-LIFにより構造の主要部分がフコース約25%を含有するバイアンテナ型のオリゴ糖であることが示された。
−生物学的活性: EMAB5のADCC活性は少なくとも対照抗−Rh(D) ポリクローナル抗体、WinRho (Cangene)のものと等しい。
Fc断片の調製:
−加水分解条件:精製 EMAB5抗体を50mMトリス緩衝液、pH8.0 で一晩透析する。50mMCaCl2 および10mMシステインに調整した抗体溶液を37℃で30分間温置し、1/25の酵素:基質の比でトリプシン溶液 (1mg/ml)を添加する。37℃5時間の温置後、フルオロリン酸ジイソプロピルの添加 (最終1mM) により反応を止める。加水分解物を50mMイミダゾール緩衝液、pH7.8 で一晩透析する。
−Fc断片の精製:透析した加水分解物を、3.6mg 抗体当たり1mlのゲルの割合でアファロース−プロテインLに接触させる。攪拌しながら室温で4時間温置した後、ゲルをカラムに入れ50mMイミダゾール緩衝液、pH7.8 で洗浄する。Fc断片を含む溶出液および洗浄用緩衝液を集め、製造者の指示に従いVivaspin 20 で遠心分離して濃縮する。
結晶化:
試験の後、以下の結晶化条件を選ぶ:2mg/ml イミダゾール緩衝液50mM、pH7.8 中のFc断片の溶液を17℃において攪拌落下蒸気拡散により10%のモノメチルポリエチレングリコール5000、100mM カコジル酸ナトリウム、0.1mM 塩化亜鉛 (pH5.1) に入れる。
回折データの収集および構造決定:
得られた結晶をESRF (グルノーブル) でXR分析にかけ、集めたデータをDENZO およびSCLAEPACK プログラム (OtwinowskiおよびMinor, 1997)を用いて処理した。
結果
この EMAB5のFc断片の結晶は、非対称単位当たり1つの断片を有するC2221 空間群に属する。格子パラメーターは次の通りである:a=50.2Å、b=147.7 Å、c=75.6Å;α=β=γ=90℃。
この実施例において、得られた結晶はすべて非対称単位当たり2つの鎖を有する空間群P2(1)2(1)2(1) に属し、Fcオープニングは鎖AとBのプロリン329 残基間、および鎖AとBのマンノース4残基間の距離を特徴とする。
表2:空間群P2(1)2(1)2(1) のモノクローナル抗体 EMAB5のFc断片の結晶の主な特徴
ピロ炭酸ジエチル (DEPC) はタンパク質中に存在するヒスチジン残基を修飾し、その役割を調べるために広く使用されてきた試薬である(Miles, 1977) 。Firan 等 (2001)は、DEPCで処理されたヒトのIgG1は母体IgG の胎児への移行に関与するFcRn受容体を固定する能力を失うことを示した。DEPCはヒスチジンのイミダゾール環上に存在する窒素基を置換し、それによりヒスチジン残基を3-カーボエトキシヒスチジンへ変換することにより作用する。
1.DEPCによる修飾
0.1 M酢酸ナトリウム緩衝液、pH6.0 で透析したモノクローナル抗体 EMAB5を、70μgDEPC/mg IgGの割合でDEPCと接触させる。室温での30分間の温置後、反応をイミダゾールの添加 (0.2mg/ml) により停止させる。
2.CFC 試験を用いたFcγRIII受容体へ固定される抗体Fcの測定
DEPCで処理した抗体の完全さを証明するために、抗体にCFC 試験と呼ばれる試験を行う。これは第1に、抗体が向けられる抗原を固定し、第2にCD16 Jurkat 細胞株の表面に発現するFcγRIII受容体 (CD16) を固定する抗体の能力を評価する。
3.FcγRIII受容体の活性化の測定
CD16 Jurkat 細胞の活性化試験は、Fab が標的細胞上に存在する抗原に結合した後FcγRIII受容体 (CD16) への抗体のFcの固定により誘導されるインターロイキン-2 (IL-2) の分泌を測定する。CD16 Jurkat 細胞により分泌されるIL-2の割合はCD16受容体の活性化に比例する。
4.ADCC活性の測定
ADCC (抗体依存性細胞傷害) 法を、エフェクター細胞 (単核細胞またはリンパ球) の存在下でRh(D+)赤血球の溶解を引き起こす抗体の能力を評価するために用いる。
((試料のOD−0%対照のOD) ×100)
────────────────=ADCC%
(100%対照のOD−0%対照のOD)
上記条件によりDEPC処理した後、NRF を形成する約20%のモノクローナル抗体 EMAB5の分子は、セファロース−プロテインAゲルへの固定能力を失う。ヒスチジン435 がIgG をプロテインAに固定するのに必須のアミノ酸であることを考えると、NRF のIgG はHis435残基の修飾によりセファロース−プロテインAゲルに保持されたRF画分とはおそらく異なるであろう。
化学的試薬 (DEPCなど) によるヒスチジン残基の修飾は、これらの修飾の程度および位置を制御できない。従って、亜鉛陽イオンのIgG1のCH2-CH3 界面への結合に必須の役割を果たす2つのヒスチジン残基His310およびHis435は指定された突然変異誘発を介してリジン残基により置換される。
抗−Rh(D) EMAB5 抗体の重鎖のアミノ酸配列をコードするcDNAを含む発現ベクターを、 PCRにより指定された二重変異誘発 (「 PCRによる位置指定突然変異誘発」) を行うためのマトリックスとして使用した。下記の4つのヌクレオチド置換が行われた:
−His338残基をLys (Kabat番号付与による310 位) に変えるためのC1229AおよびC1301G、即ちCAC →AAG ;
−His463残基のLys (Kabat番号付与による435 位) への変異のためのC1674AおよびC1676G、即ちCAC →AAG ;
変異した配列は配列決定し、配列決定の結果は以下の表3に示す。
表3:モノクローナル抗体 EMAB5の二重変異した重鎖のオリゴヌクレオチドおよびポリヌクレオチド配列
モノクローナル抗体 EMAB5の重鎖のHis338およびHis461残基(Kabat 番号付与ではHis 310 およびHis435に相当) をリジン残基で置換する。
2.FcγRIII受容体 (CFC)に結合する抗体の測定
この試験は培養上清に対して行い、上清中のヒトIgG 含量をELISA アッセイにより決定する。
3.CD16受容体活性化の測定
96−ウェルマイクロタイトレーションプレート中に天然のおよび変異した抗-Rh(D)抗体を含む培養上清の希釈物50μl、6.105/ml の赤血球懸濁液50μl、1.106/ml のCD16 Jurkat 細胞懸濁液50μlおよび40ng/ml のPMA 溶液50μlを順次添加する。希釈物はすべて5%FCS を含有するIMDM培地中で作製する。
変異または非変異の抗-Rh(D)モノクローナル抗体を含有する培養上清に対して各種試験を行った。CFC 試験の結果は、His310-435Lys の二重変異はCD16 Jurkat 細胞株によって行われた抗体のFcγRIII受容体への固定に何ら変化を誘導しないことを示す (図7) 。非変異クローン6H11 (陰性対照) はFcγRIII受容体への低い固定を示し、変異クローン1C7, 2H11, 4G5および4H10は非変異クローン16D11 および11G5 (陽性対照) と同じようにFcγRIII受容体を固定する。
CD16 Jurkat 細胞の表面に存在するFcγRIII受容体 (CD16) への抗体の固定に対するイミダゾールの影響およびHis310-435Lys 変異の影響をフローサイトメトリーにより評価した。
0.5 %ウシアルブミン血清 (BSA)を含有するPBS 緩衝液または50mMイミダゾールを添加した0.5 %PBS-BSA 緩衝液中で希釈したモノクローナル抗体 EMAB5の各種濃度の存在下、5.105 CD16 Jurkat 細胞を30分間温置する。次いで、細胞を0.5 %PBS-BSA 緩衝液で洗浄し、FITCで標識したマウス抗−ヒトIgG (H+L)F(ab') 2 (Jackson ImmunoResearch Laboratories) の存在下に温置する。30分の温置後、細胞を上記のように洗浄し、 EMAB5抗体の固定をFACScalibur 4CA を用いたフローサイトメトリーおよびCell Quest Proプログラム (Becton Dickinson) で分析する。
0.5 %PBS-BSA 緩衝液中、培養上清に含まれるモノクローナル抗体の各種濃度の存在下、5.105 CD16 Jurkat 細胞を温置する。次いで、ウェルを0.5 %PBS-BSA 緩衝液で洗浄し、FITCで標識したマウス抗−ヒトIgG (H+L)F(ab')2の存在下に温置する。30分の温置後、細胞を上記のように洗浄し、 EMAB5抗体の固定をFACScalibur 4CA を用いたフローサイトメトリーおよびCell Quest Proプログラム (Becton Dickinson) で分析する。
細胞と抗体の温置用緩衝液へのイミダゾールの添加は、標識細胞の割合 (%) における顕著な低下として現れる抗体の固定の低下を生じる;1.5 μg/ml の抗体濃度で、イミダゾールの存在は標識細胞数の40%減少を生じる。
従って、添加した抗体の量に対する標識細胞の割合 (%) として表示される結果は、二重変異His310-435Lys を有する4G5 および4H10抗体がそれら自身をCD16 Jurkat 細胞に固定する程度は、非変異対照抗体である24G9よりも著しく低いことを示す。
Chapman TL, You I, Joseph IM, Bjorkman PJ, Morrison SL, Raghavan M. 「単純ヘルペスウイルス型 1Fc受容体と免疫グロブリンGとの相互作用の特性決定」(1999), J. Biol. Chem.; 274: 6911-9 、
Corper AL, Sohi MK, Bonagura VR, Steinitz M, Jefferis R, Feinstein A, Beale D, Taussing MJ, Sutton BJ.「自己抗原IgG Fcへ結合したヒトIgM リウマチ因子Fab の構造は抗原−抗体相互作用の新規トポロジーを現す」(1997) Nat. Struct. Biol.; 4: 374-81、
Deisenhofer J.「2.9 および2.8 Å解像度でのヒトFc断片およびそのスタフィロコッカス・アウレウス由来のタンパク質Aの断片Bとの複合体の結晶学的微細構造および原子モデル」 (1981) Biochemistry; 20: 2361-70 、
Firan M, Bawdon R, Radu C, Ober RJ, Eaken D, Antohe F, Ghetie V,Ward ES.「MHC クラス1 関連受容体FcRnはヒトにおけるγグロブリンの母児移行における必須の役割を果たす」(2001) Int. Immunol. 13, 993-1002 、
Maillard P, Lavergne JP, Siberil S, Faure G, Roohvand F, Petres S, Trillaud JL, Budkowska A. 「C型肝炎ウイルスコアタンパク質の Fc γ受容体様の活性」(2004) J. Biol. Chem. 279, 2430-7 、
Miles EW. 「ピロ炭酸ジエチルによるタンパク質のヒスチジン残基の修飾」 (1997) Methods Enzymol. 47, 431-42 、
Otwinowski Z, Minor W.「振動モードで収集したX線回折データの加工」(1997) Methods Enzymol. 276,307-26、
Sauer-Eriksson AE, Kleywegt GJ, Uhlen M, Jones TA. 「ヒトIgG のFcドメインとの複合体における連鎖球菌タンパク質GのC2断片の結晶構造」(1995) Structure. 3, 265-78 、
Shields RL, Namenuk AK, Hong K, Meng YG, Rae J, Briggs J, Xie D, Lai J, Stadlen A, Li B, Fox JA, Presta LG. 「FcγRI,Fc γRII, Fc γRIIIおよびFcRnに対するヒトIgG1上の結合部位の高解像度マッピングおよびFcγR への改善された結合を有するIgG 変異体のデザイン」(2001) J. Biol. Chem. 276, 6591-604 。
Claims (40)
- 抗体の機能活性を改善するための2価または3価の金属陽イオンの使用。
- 前記抗体がヒトIgG またはヒトFc領域を有することを特徴とする請求項1記載の使用。
- 前記陽イオンが前記抗体のFc領域と相互作用することを特徴とする請求項1または2記載の使用。
- 前記陽イオンが前記抗体のFc領域のオープニングの制御に関与することを特徴とする請求項1〜3のいずれかの項記載の使用。
- 前陽イオンが、FcγR 受容体、特にFcγR III 受容体への前記抗体の固定を促進することを特徴とする、請求項1〜4のいずれかの項記載の使用。
- 前記陽イオンが亜鉛、鉄、銅またはカドミウムであることを特徴とする、請求項1〜5のいずれかの項記載の使用。
- 前記陽イオンが亜鉛である、請求項1〜6のいずれかの項記載の使用。
- Fc領域を介して抗体の機能活性を強化する方法であり、抗体を産生する生物学的系、精製前および/もしくは後の抗体を含む溶液、保存溶液、または抗体の注射可能な溶液の形態の最終処方物に、少なくとも1種の2価または3価金属陽イオンの適宜量を添加することからなる工程を含む、前記方法。
- 前記陽イオンが亜鉛、鉄、銅またはカドミウムであることを特徴とする請求項8記載の方法。
- 少なくとも抗体のモル濃度と等しいモル濃度の亜鉛を添加することを特徴とする請求項9記載の方法。
- 分子工学により作製されたFc部位上のHis 310 およびHis 435 残基 (Kabat 番号付与) を含む、2価または3価金属陽イオンの固定化部位を有するIgG3クラス抗体。
- 前記固定化部位がAsn 434 残基および/またはHis 433 残基 (Kabat 番号付与) を含むことを特徴とする請求項11記載の抗体。
- 前記固定化部位がHis 433 残基によるAsn 434 残基の置換により作製されることを特徴とする、請求項11または12記載の抗体。
- 前記ヒスチジン残基の少なくとも1つが、システイン、アスパラギン酸およびグルタミン酸の中から選ばれる少なくとも1つの残基で置換されていることを特徴とする請求項11または12記載の抗体。
- 前記固定化部位に固定された2価または3価の金属陽イオンを有する、請求項11〜14のいずれかの項記載の抗体。
- 前記陽イオンが亜鉛、鉄、銅、またはカドミウムである請求項11〜15のいずれかの項記載の抗体。
- 前記抗体のアロタイプがG3m(b)またはG3m(g)である、請求項11〜16のいずれかの項記載の抗体。
- 天然の抗体に対して改善されたFcγRIIIのへ固定および改善された機能活性を有する、請求項11〜17のいずれかの項記載の抗体。
- 新生児溶血性疾患、ウイルス性、細菌性または寄生虫性疾患、バイオテロに関して特に危険であるとして挙げられている (疾患管理センター (CDC)の分類) 病原因子もしくは誘導毒素に関連する疾患、特に炭疽病 (バチルス・アンスラシス) 、ボツリヌス中毒 (クロストリジウム・ボツリヌム) 、ペスト (エルシニア・ペスティス) 、天然痘 (バリオラ・マジョル) 、ツラレミア (フランシセラ・ツラレンシス) 、ウイルス性出血熱 (フィロウイルス関連:エボラ、マーブルグ、およびアレナウイルス関連−ラッサ、マチュポ) 、クロストリジウム・ペルフリンゲンのイプシロン毒素、ブルセラ病 (ブルセラ種) 、メリオイドーシス (ブルクホルデリア・マレイ) 、トウゴマの実の毒素 (トウゴマ、リシヌス・コミュニス) などの疾患を治療するための、請求項11〜18のいずれかの項記載の抗体の使用。
- 2価または3価の陽イオンおよび少なくとも1種の賦形剤を含む治療用抗体の薬剤組成物。
- 前記抗体が、His 310 およびHis 435 残基 (Kabat 番号付与) 上に2価または3価の金属陽イオンを有することを特徴とする請求項20記載の組成物。
- 前記抗体が請求項11〜18のいずれかの項記載の抗体、ヒトIgG 抗体またはヒトFc領域を有することを特徴とする、請求項20または21記載の薬剤組成物。
- 金属陽イオンが亜鉛、鉄、銅もしくはカドミウム、またはこれらの複数の混合物であることを特徴とする請求項20〜22のいずれかの項記載の薬剤組成物。
- 金属陽イオンが、亜鉛、特に酢酸亜鉛、臭化亜鉛、クエン酸亜鉛、ヒドロキシ炭酸亜鉛、ヨウ化亜鉛、L-乳酸亜鉛、硝酸亜鉛、ステアリン酸亜鉛、グルコン酸亜鉛、硫酸亜鉛、塩化亜鉛または亜鉛の塩酸塩であることを特徴とする、請求項23記載の薬剤組成物。
- 少なくとも50%、60%、70%、80%、90%、または99%の抗体が、結合した2価または3価の金属陽イオン、特にHis 310 およびHis 435 残基 (Kabat 番号付与) を含む部位に結合したものを有する薬剤組成物。
- 前記部位がHis 433 および/またはAsn 434 残基 (Kabat 番号付与) を含むことを特徴とする請求項25記載の組成物。
- 前記金属陽イオンが亜鉛、鉄、銅もしくはカドミウム、またはこれらの複数の混合物であることを特徴とする請求項25または26記載の組成物。
- モノクローナル抗体またはポリクローナル抗体と適宜量の2価または3価の金属陽イオン、特に抗体濃度と少なくとも等しい濃度の亜鉛イオン、を含み、静脈内、筋肉内、または皮下経路での注射に適合させた溶液。
- 治療用抗体の結晶化を改善するための亜鉛イオンの使用。
- 図1または2に示すようなHis 310 、His 435 、His 433 および/またはAsn 434 残基 (Kabat 番号付与) を含むドメインのの3D立体構造の検討、または抗体の亜鉛含有量の分析を含む抗体の効力を評価するために使用できる試験法であり、亜鉛の存在は抗体の効力の指標である、前記試験法。
- His 310 およびHis 435 残基 (Kabat 番号付与) の少なくとも1つの改変を有する抗体。
- 前記改変が突然変異であることを特徴とする請求項31記載の抗体。
- 前記変異が前記金属陽イオンに対して低い親和性を有するアミノ酸での置換であることを特徴とする請求項32記載の抗体。
- 前記アミノ酸が、リジン、アラニン、グリシン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、メチオニン、トリプトファン、フェニルアラニン、セリンまたはトレオニン残基であることを特徴とする請求項33記載の抗体。
- His 310 およびHis 435 残基がリジン残基で置換されることを特徴とする請求項32〜34のいずれかの項記載の抗体。
- 改変がDEPCにより行われることを特徴とする請求項31記載の抗体。
- IgG1サブクラスに属することを特徴とする請求項31〜36のいずれかの項記載の抗体。
- 変異していない同種の抗体に対して機能活性が低下していることを特徴とする請求項31〜37のいずれかの項記載の抗体。
- 移植片拒絶を防止するための、または破傷風、ジフテリア、またはバイオテロの場合に特に危険であるとして挙げられている病原因子または誘導毒素による疾患 (疾患管理センター (CDC)の分類) 、特に炭疽病 (バチルス・アンスラシス) 、ボツリヌス中毒 (クロストリジウム・ボツリヌム) 、ペスト (エルシニア・ペスティス) 、天然痘 (バリオラ・マジョル) 、ツラレミア (フランシセラ・ツラレンシス) 、ウイルス性出血熱 (フィロウイルス関連:エボラ、マーブルグ、およびアレナウイルス関連−ラッサ、マチュポ) 、クロストリジウム・ペルフリンゲンのイプシロン毒素、ブルセラ病 (ブルセラ種) 、メリオイドーシス (ブルクホルデリア・マレイ) 、トウゴマの実の毒素 (トウゴマ、リシヌス・コミュニス) から選択された疾患の治療のための医薬品を製造するための、請求項31〜38のいずれかの項記載の抗体の使用。
- IgG4に代わる医薬品の製造のための請求項31〜38のいずれかの項記載の抗体の使用。
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